UA43827C2 - Спосіб одержання генетично трансформованих рослин з підвищеним вмістом крохмалю, рекомбінантна дволанцюгова днк-молекула - Google Patents

Спосіб одержання генетично трансформованих рослин з підвищеним вмістом крохмалю, рекомбінантна дволанцюгова днк-молекула Download PDF

Info

Publication number
UA43827C2
UA43827C2 UA93070740A UA93070740A UA43827C2 UA 43827 C2 UA43827 C2 UA 43827C2 UA 93070740 A UA93070740 A UA 93070740A UA 93070740 A UA93070740 A UA 93070740A UA 43827 C2 UA43827 C2 UA 43827C2
Authority
UA
Ukraine
Prior art keywords
azr
sto
biu
sat
sas
Prior art date
Application number
UA93070740A
Other languages
English (en)
Russian (ru)
Inventor
Мерфі Кішор Ганеш
Original Assignee
Монсанто Компані
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Монсанто Компані filed Critical Монсанто Компані
Publication of UA43827C2 publication Critical patent/UA43827C2/uk

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/10—Transferases (2.)
    • C12N9/12—Transferases (2.) transferring phosphorus containing groups, e.g. kinases (2.7)
    • C12N9/1241—Nucleotidyltransferases (2.7.7)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • C12N15/8216—Methods for controlling, regulating or enhancing expression of transgenes in plant cells
    • C12N15/8222—Developmentally regulated expression systems, tissue, organ specific, temporal or spatial regulation
    • C12N15/823—Reproductive tissue-specific promoters
    • C12N15/8235—Fruit-specific
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
    • C12N15/8242—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with non-agronomic quality (output) traits, e.g. for industrial processing; Value added, non-agronomic traits
    • C12N15/8243—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with non-agronomic quality (output) traits, e.g. for industrial processing; Value added, non-agronomic traits involving biosynthetic or metabolic pathways, i.e. metabolic engineering, e.g. nicotine, caffeine
    • C12N15/8245—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with non-agronomic quality (output) traits, e.g. for industrial processing; Value added, non-agronomic traits involving biosynthetic or metabolic pathways, i.e. metabolic engineering, e.g. nicotine, caffeine involving modified carbohydrate or sugar alcohol metabolism, e.g. starch biosynthesis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
    • C12N15/8242—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with non-agronomic quality (output) traits, e.g. for industrial processing; Value added, non-agronomic traits
    • C12N15/8243—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with non-agronomic quality (output) traits, e.g. for industrial processing; Value added, non-agronomic traits involving biosynthetic or metabolic pathways, i.e. metabolic engineering, e.g. nicotine, caffeine
    • C12N15/8247—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with non-agronomic quality (output) traits, e.g. for industrial processing; Value added, non-agronomic traits involving biosynthetic or metabolic pathways, i.e. metabolic engineering, e.g. nicotine, caffeine involving modified lipid metabolism, e.g. seed oil composition

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Reproductive Health (AREA)
  • Pregnancy & Childbirth (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Fertilizers (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Inks, Pencil-Leads, Or Crayons (AREA)
  • Fats And Perfumes (AREA)
  • Solid-Sorbent Or Filter-Aiding Compositions (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)
  • Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)

Abstract

Пропонуються промотори для посилення експресії АДФ-глюкозопірофосфорилази в картоплі і фруктах, наприклад у томатах, і спосіб використання згаданого промотора, а також відповідні молекули ДНК і клітини рослин, що містять ці молекули ДНК. Пропонується також спосіб пониження вмісту олії в насінні за допомогою АДФ-глюкозопірофосфорилази.

Description

Настоящее описание служит отчасти продолжением созаявки на патент США с серийнь!м Ме07/539763, поданной 18 июня 1990г под заглавием " Повьішенное содержание крахмала в растениях".
Последние достижения в области генной инженерии создают предпосьлки для получения растений, имеющих в своем составе инородньсе геньі. Теперь можно вьіводить сорта с уникальньми с точки зрения агрономии, сбора и переработки урожая характеристиками. Одним из найболее желательньїх признаков является, разумеется, повьиишенное содержание и качество крахмала в различньїх сельскохозяйственньх культурах.
Крахмал представляет собой полисахарид, которьй исходно образован молекулами глюкозь, соединенньіми между собой альфа -- 1 - 4 и альфа - 1 - 6 связями. Он присутствует в растительньх клетках в форме нерастворимьх в воде зерен или гранул. Образующийся в процессе фотосинтеза крахмал локализуется и хранится в хлоропластах. Кроме того, крахмал синтезируется в корнях и таких резервньх органах, как клубни и семена. В зтих тканях, где фотосинтез отсутствует, крахмал находится в пластидах, назьшваемьїх амилопластами. Также как в хлоропластах, крахмал амилопластов сохраняєтся в форме гранул. Размер последних варьирует в зависимости от вида растений.
Фактически крахмал состоит из амилозьй и амилопектина - двух разньїх типов полимеров глюкозь!.
Амилоза образована, в основном, линейньмми цепями из молекул глюкозьії, связанньїх альфа - 1 - 4 связями. Длина амилозной цепи составляет в среднем 1000 молекул глюкозьії. Амилопектин содержит более короткие цепи, в которьїх молекуль! глюкозь! связаньі альфа - 1 - 6 связями. Средняя длина таких цепей равна примерно 20 - 25 молекулам глюкозь!.:.
До последнего времени не существовало единого мнения относительно роли АДФ-глюкозь! и УДФ - глюкозь! в качестве субстратов биосинтеза крахмала. После вьіделения мутантньїх форм Агарідорвів, у которьїх отсутствует АДФ-Глюкозопирофосфорилаза, общепризнанно, что в качестве субстрата биосинтеза крахмала растения используют АДФф - глюкозу. Все биосинтетические реакции зтого процесса происходят в хлоропластах или амилопластах. Различают три стадии биосинтеза крахмала. На первой стадиий из глюкозо - 1 - фосфата и АТФ под воздействием АДФ-глюкозопирофосфорилазь (ЕС 2. 7. 7. 27) образуется
АДФ-глюкоза. На втором зтапе АДф-глюкоза используется синтетазой крахмала (ЕС 2. 4. 1. 21) для формирования линейньїх цепей крахмала, содержащих альфа - 1 - 4 связи. На третьей стадиий фермент (ь), разветвляющие прямую цепь (ЕС 2. 4. 1. 18), вводят альфа - 1 - б связь, что приводит к формированию молекуль! амилопектина.
Лимитирующая стадия биосинтеза крахмала в растениях остаєтся предметом разногласий.
Предполагают, что такой стадией служит образование АДФф-глюкозьії при участий АДФф- глюкозопирофосфорилазь, однако доказательства в пользу такого предположения отсутствуют. В опубликованной заявке на Европейский патент Ме0368506 Аг, которая касаєтся АДФф- глюкозопирофосфорилазьї, ставится под сомнение роль зтого фермента в качестве ключевого фактора биосинтеза крахмала. Аргумент, опровергающий возможность контролирующего воздействия АДФф- глюкозопирофосфорилазьі в процессе биосинтеза крахмала, можно опочерпнуть из результатов исследований с мутантньм штаммом Агарідорзіз (7іп, 1988а,в). Установлено, что зтот мутант (ТІ 46) содержит только приблизительно 595 АДФф-глюкозопирофосфорилазной активности, обнаруживаеємой в диких штаммах. Тем не менее, мутантнье растения все же продуцируют крахмал в количестве около 40965 его общего биосинтеза в диких разновидностях. Если АДф-глюкозопирофосфорилаза действительно является лимитирующим процесс ферментом, то придется принять, что снижение ферментативной активности на 9595 должно приводить к более чем 6095 - ному уменьшению накопления крахмала. Сходньм образом, определение зкстрагируемой активности в опьтах ин витро позволяет сделать вьвод, что указанньій фермент может лимитировать скорость реакции лишь в том случає, если его активность ин виво значительно понижена аллостерическими регуляторами ферментативной активности.
Краткое описание изобретения.
Настоящееє изобретение ообеспечивает получение молекул ДНК, кодирующих АДФ- глюкозопирофосфорилазу (АОРОРР), которье можно использовать при вьшведении растений с повьишенньм содержанием крахмала. Показано таюке, что АЮОРОРР - ферментативная активность в растительньїх клетках и тканях является лимитирующим фактором биосинтеза крахмала.
Получение указанньїх молекул позволило в качестве одного из аспектов изобретения, предложить способ генетической трансформации растений для повьшения содержания крахмала. Способ предполагает следующие стадии: а. введениеє в геном растительной клетки рекомбинантной двунитевой молекуль! ДНК, содержащей ниже перечисленнье структурнье злементь!: 1. промотор, функционирующий в растениях, таким образом, которьій обеспечиваєт образование последовательностей РНК в растительньх тканях - мишенях, 2. структурную последовательность ДНК, которая индуцирует формирование РНК, кодирующей слитьй полипептид, в состав которого входят М. концевой транспортньйй пептид пластид и фермент АДФ- глюкозопирофосфорилаза, 3. 3 не транслируемую последовательность ДНК, действие которой в растительньїх клетках состоит в прекращений транскрипции и присоединений полиаденилированньх нуклеотидов к 3 - концу последовательности РНК. б. получение трансформированньїх растительньїх клеток, и в. регенерация из трансформированньх клеток генетически измененньх растений с повьішенньім содержанием крахмала.
Другой аспект изобретения позволяєт получить рекомбинантную двунитевую молекулу ДНК, имеющую в своем составе ниже перечисленнье злементь!: а. промотор, функция которого в растениях состоит в продукции РНК в тканях - мишенях, б. структурную последовательность ДНК, которая индуцирует образование РНК, кодирующей слитьй полипептид, состоящий из М. концевого транспортного пептида пластид и фермента АДФ - глюко- зофосфорилацзьї, и в. 3' не транслируемую область, функция которой в растительньїх клетках состоит в прекращений транскрипции и присоединениий полиаденилированньїх нуклеотидов к 3' - концу последовательности РНК, причем указанньй промотор гетерологичен по отношению к структурной ДНК.
В соответствии с еще одним аспектом изобретения получают бактериальнье и трансформированнье растительньсе клетки, которне соответственно содержат ДНК, имеющую в своем составе вьішеупомянутье злементь! (а), (б) и (в).
Еще .один аспект настоящего изобретения обеспечиваеєет получение дифференцированньх растений с повьішенньім содержанием крахмала.
Краткое описание рисунков:
На рисунке 1 показана нуклеотидная последовательность (5ЕО І Мо : 1) и внведенная аминокислотная последовательность (5ЕО ІЮ Мо : 2) для гена АДФ-глюкозопирофосфорилазь (д9ІдсС) из
Б. сої.
На рисунке 2 показана нуклеотидная последовательность (5ЕО І Мо : З) и внведенная аминокислотная последовательность (5ЕБЕО І Мо 4) для мутантного гена АДФф- глюкозопирофосфорилазь (дІдс 16 ) из Е. сої.
На рисунке З показана нуклеотидная последовательность (5ЕО ІЮ Мо : 5) и соответствующая аминокислотная последовательность (5ЕО ІЮ Мо : 6) для модифицированного транспортного пептида хлоропластов из гена 55808І5СО ІА Агабрідорзів ІНайапа
На рисунке 4 представлена плазмидная карта для трансформирующего вектора РМОМ 530.
На рисунке 5 показана нуклеотидная последовательность (5ЕО ІЮ Мо : 7) и соответствующая аминокислотная последовательность (5ЕБЕО ІЮ Мо : 8) собранной малой субьединиць гена АДФф- глюкозопирофосфорилазьї картофеля.
На рисунке 6 представлена практически полная нуклеотидная последовательность (5ЕО ІЮ Мо :9)и соответствующая аминокислотная последовательность (5ЕО ІЮ Мо : 10) практически полной большой субьединицьї гена АДФ-глюкозопирофосфорилазьї картофеля.
На рисунке 7 представлена карта плазмидьі для трансформирующего вектора РМО М 20113.
На рисунке 8 представлена карта плазмидьі для трансформирующего вектора РМО М 16938.
На рисунке 9 представлена карта плазмидьі для трансформирующего вектора РМО М 977.
На рисунке 10 представлена карта плазмидь!ї для трансформирующего вектора РМО М 16950.
На рисунке ІІ представлена карта плазмидь! для трансформирующего вектора РМО М 10098.
Подробное описание изобретения
Зкспрессия растительного гена, существующего в форме двунитевой ДНК, предполагаєет транскрипцию информационной РНК (мРНК) с одной из нитей ДНК РНК - полимеразой и последующий процессинг первичного транскрипта мРНК в ядре. Такой процессинг охватьіваєт 3' нетранслирумую область, которая обеспечивает присоединение полиаденилированньмх нуклеотидов к 3" - концу РНК.
Транскрипция мРНК с ДНК регулируется одной из областей ДНК, которую обьічно назьвают "промотором". Промотор включает последовательность оснований, которая служит сигналом для РНК - полимеразьі ассоциироваться с ДНК и инициировать транскрипцию мРНК с одной из нитей ДНК, которая является матрицей для соответствующей комплиментарной нити РНК.
В литературе описано множество промоторов, проявляющих активность в растительньх клетках. К их числу относятся нопалинсинтетазньй (МОБ) и октопинсинтетазньй (005) промоторь (их несут индуцирующие опухоль плазмидь! (Адгобасієййт іШтеїасіеєпе) промоторьї колимовирусов (например, вируса мозаийки цветной капусть, СамуУ 195 и 355 и 355 - промоторьї вируса норичниковой мозаийки) светочувствительньй промотор из малой субьединиць рибулозо - 1,5 - бис - фосфаткарбоксилазь! (в65АОВІЗСО - широко о распространенного растительного полипептида), промотор гена белка,связьвающего хлорофилль а и в, и т. п. Все зти промоторьї использовались для получения разнообразньїх типов рекомбинированньїх ДНК, обладающих способностью к зкспрессии в растениях (см., например, публикацию РСТ под шифром УУО 84/029/13 (НКодег» с соавторами, Мопзапіо).
Настоящее изобретение допускает использование промоторов, для которьїх известна или установлена способность вьізьївать транскрипцию РНК в растительньїх клетках. Такие промоторь! получают из самьх разнообразньїх источников, включая растения и растительнье вирусь. К их числу относятся активированньйй промотор СамуУ 355 и промоторь), вьіделеннье из генов растений, таких как гень 55Айбрізсо. Набор пригодньїх для целей изобретения промоторов не ограничиваеєется перечисленньми разновидностями. Ниже будет показано, что предпочтительно вьбирать промоторь), способнье индуцировать достаточно вьісокую степень зкспрессии, с тем чтобьї получить зффективное количество
АДФф-глюкозопирофосфорилазьї, необходимой для желаеємого увеличения содержания крахмала. Кроме того, предпочтительно, чтобь! зкспрессия гена АОРОРР имела место в таких специфических растительньх тканях, как ткани листьев, корней, клубней, семян, плодов и т.п., и чтобь! вьібранньйй промотор обладал желаемой тканевой и стадийной специфичностью. Специалистам известно, что количество АДФ - глюкозопирофосфорилазь), необходимое для индукции образования требуемого количества крахмала, может )изменяться в зависимости от типа растения; известно таюже, что избьточная АДФ - глюкозопирофосфорила зная активность может стать губительной для растений. В связи с зтим действие промотора можно оптимизировать, вьібирая его с учетом требуемого уровня зкспрессии в растительной ткани и такой его активности, которая необходима для получения трансформантов, которне обеспечивают желаемую АДФ - глюкозопирофисфорилазную активность в тканях - мишенях. Такой подход к подбору трансформантов применяется в повседневной практике для зкспрессии гетерологичньїх структурньїх генов в растениях, поскольку трансформанть, содержащие один и тот же гетерологичньій ген отличаются в зависимости от места вставки гена в растительньйй геном (з3то явление обьічно назьівают "зффектом положения").
Желательно, чтобьі промоторь, используемье в составе молекул двунитевой ДНК согласно настоящему изобретению, характеризовались относительно вьісоким уровнем зкспрессии в тканях, где требуется повьиішение содержания крахмала, например в клубнях картофеля или в плодах томата. В зтом отношений найболее предпочтительньм промотором для картофеля является пататин, которьй более подробно описан в нижеследующих примерах. Зкспрессию молекул двунитевой ДНК по данному изобретению конститутивньмм промотором (которьій индуцирует зкспрессию молекул ДНК во всех или в большинстве растительньїх тканей) редко признают предпочтительньім способом, а в некоторьїх случаях она может оказаться губительной для растений.
Показано, что используемьй в данном исследований промотор из пататинов класса 1, индуцирующий зкспрессию АЮРОРР БЕ. соїї обладаєт как вьісокой активностью, так и специфичностью по отношению к тканям клубней (Вемап еї аї., 1986; Уепйегзоп еї а!., 1990). МИзвестньй и другие геньї, обладающие специфической для клубней или повьішенной способностью к зкспрессии, в том числе геньі АЮОРОДРР из картофельньх клубней (Миїег еї а!., 1990), сахарозосинтетазь! (ЗаІапошцваї и ВеїПага, 1987, 1989) основньх клубневьїх белков, включая белковье комплексь! с молекулярной массой 22кДа и ингибиторь! протеиназь! (Наппареї, 1990) и другие пататинь! классов 1 и 2 (Роспа - 5овза вї а)., 1989; Мідпегу єї а!., 1988).
Помимо зндогенньїх промоторов растительной АДФ-глюкозопирофосфорилазь! для зкспрессии гена
Мф - глюкозопирофосфорилазь в таких индивидуальньїх тканях, как ткани листьев, семян или плодов, можно использовать и другие промоторь!. Одним из основньх резервньїх белков сои (Сіусіпе мах) является бета - конглицинин, известньій также как белок с константной седиментации 75 (Тіегпеу, 1987). Промотор бета - конглицинина можно использовать для суперзкспрессии гена АДф - глюкозопирофосфорилазь Е сої или любого другого организма в семенах для увеличения содержания в них крахмала. Использование зндогенного промотора позволило, в частности, добиться зкспрессии бета - субьединиць! бета - конглицинина в семенах трансгенньїх петунии и табака, что свидетельствует о специфической природе действия промотора в семенах различньх видов растений (Вгау, 1987).
Зеиньї представляют собой группу резервньїх белков, которье имеются в зндосперме кукурузь!.
Полученьї геномнье клонь! генов зеина (Редеггеп, 1982), показано, что промоторь! из зтих клонов также пригодньї для зкспрессии генов АДФ-ГгГлюкозопирофосфорилазь в семенах кукурузь! и других растений.
Содержание крахмала в плодах томатов можно повьісить посредством зкспресии гена АДФф- глюкозопирофосфорилазьї с помощью специфического для плодов промотора. Показана индукция гена
АДФ-глюкозопирофосфорилазь! в плодах томатов промотором из геномного клона 2АЇ! (Реаг ,1989) или промотором Е8 (Оєіктап, 1988). Кроме того, вьіделеньї новье специфичнье для плодов промоторь, которне обладают вьтураженньм и специфическим действием на зкспрессию в процессе формирования плодов томатов. С целью вьіявления клонов кКДНК, пригодньїх для специфической зкспрессии в незрельмх плодах, биіл применен метод дифференциального скрининга с использованием библиотеки кКДНК плодов томатов. Для зтой цели служили зондь! КДНК, приготовленнье из мРНК, которую зкстрагировали на ранних или поздних стадиях развития плодов, из обьединенньїх проб тканей листьев и стеблей и из корневой ткани томатов. После зтого идентифицировали клонь, характеризовавшиеся вьісокой степенью зкспрессий в зеленьх плодах, и клоньі, которше практически не проявляли аналогичной активности в листьях
Геномньїй саутерн - анализ продемонстрировал наличие небольшого числа генньїх копий (І - 2). Затем, путем скрининга банка геномньїх клонов томата, бьіли вьіделеньї промоторьії для зтих клонов кДНК.
Указанньйй характер действия зтих промоторов на зкспрессию бьіл подтвержден слиянием с геном бета - глюкуронидазь (ГУЗ) и наблюдениями за зкспрессией ГУЗ в трансгенньїх плодах. После зтого производили слияние промоторов, индуцировавших зкспрессию в большинстве клеток плодов, с СТР - дідсСІЄ и другими 9ідС аллелями или генами АОРОРР из водорослей или вьісших растений. ЇЇ
Содержание крахмала в корневой ткани можно повьісить посредством зкспрессии гена АДФф- глюкозопирофосфорилазьї с помощью специфических для нее промоторов. Промотор гена кислой хитиназьі (Замас еї аї., 1990) вьізьвает зкспрессию АДФф-глюкозопирофосфорилазь в корневой ткани.
Можно добиться зкспрессии зтого фермента в корневой ткани и путем применения специфичньїх для корней подобластей промотора СамуУ 355, которне уже известнь! (Вепієу єї а! , 1989). Для увеличения содержания крахмала в листьях путем зкспрессии гена АДФ-глюкозопирофосфорилазь! (в частности, гена 9ІдсС) может бьіть использован специфичньй для листовой ткани промотор типа 55ВИВІЗСО или промотор гена, кодирующего белок, которьйй обеспечиваєт связьнвание хлорофиллова й й в.
РНК, получаемая на матрице ДНК согласно настоящему изобретению, также содержит 5 нетранслируемую лидирующую последовательность. Зту последовательность можно получить из промотора, индуцирующего генную зкспрессию, с последующей ее модификацией, направленной на усиление трансляции мРНК. Равньїм образом, 5' не транслируемье участки можно получать из вирусньх
РНК, из подходящих генов зукариот и из синтетических генньїх последовательностей. Настоящее изобретение не лимитируется конструкциями, которье описань! в нижеследующих примерах, в которьх не транслируемье участки получают из 5 не транслируемой последовательности, сопутствующей последовательности промотора. Помимо прочего, не транслируемую лидирующую последовательность можно получить из промотора или кодирующей последовательности иной природьї, как описано вьіше.
Искусственнье ДНК согласно настоящему изобретению содержат также кодирующую структурную последовательность в виде двунитевой ДНК, которая кодирует слитьій полипептид, состоящий из М. Ко- нцевого транспортного пептида пластидьй и фермента АДР - глюкозопирофосфорилазь. АДФ- глюкозопирофосфорилаза, используемая в соответствии с данньм изобретением, предпочтительно должна слабо поддаваться аллостерическому контролю в растениях. Такую нерегулируемую АДФф- глюкозопирофосфорилазу отбирают из числа известньх ферментов, обладающих нерегулируемой биологической активностью, или получают посредством мутагенеза онативньх АДФ о - глю- козопирофосфорилаз из бактерий, водорослей и вьісших растений, как подробно описано ниже. В некоторьїх случаях, существеннье различия природьй регуляторов, модулирующих активность АДф- глюкозопирофосфорилаз дикого типа (АОРОРР), позволяют применять непосредственно ген дикого типа.
При зтом концентрация регуляторов в органеллах растений благоприятствует проявлению более вираженной ферментативной активности.
Бактериальнье АДФ-глюкозопирофосфорилазь
Хорошо известна вьіраженная чувствительность АДФ-глюкозопирофосфорилазь Е. соїї к регуляторньім воздействиям. Показана способность фруктозо - 1,6 - дифосфата активировать зтот фермент посредством увеличения максимальной скорости реакции (Утах) и повьішения его сродства к субстратам (Ргевз, 1966 и
Сепіпег, 1966). Кроме того, фруктозо - 1,6 - дифосфат (ФДФ) может изменять чувствительность фермента к таким ингибиторам, его активности, как аденозин - 5 монофосфат (АМФ) и неорганический фосфат (Рі) (Сепіег, 1968).
В 1981 г бьло произведено клонирование гена (дІдС) АДфФ-глюкозопирофосфорилазьі из Е.соїї К12, наряду с генами гликогенсинтетазьі и разветвляющего фермента. Полученная плазмида бьла обозначена как роР'112 (Окіїа, 1981). Ген діІдС, секвенированньй в 1983г, содержит 1293 пар оснований (ЗЕО ІЮ Мо : 1) и кодируєт 431 аминокислоту (5ЕО І М О : 2) с расчетной молекулярной массой 48762 (Ваєскег", 1983), как показано на рисунке 1.
Ген дІдС16 получали методом химического мутагенеза Е. Соїї.К (штамм РА 601), используя обработку
М. метил - М нитрозогуанидином (Сацапео, 1969 и Стейгеї - біда), 1972). Мутантьі, синтезирующие гликоген, били идентифицированьії окрашиванием подвергавшихся мутагенному воздействию колоний йодом. Установлено, что бактерии с мутантньім дідС16 в стационарной фазе накапливают 4895 гликогена по сравнению с 2095 у исходного штамма. При сопоставлениий кинетики АДФ-глюкозопирофосфорилазь! в мутантном и родительском штаммах обнаружено, что фосфорилаза, кодируемая геном дідС16, обладаєт более вьісоким сродством к АДФф - глюкозе в отсутствие активатора - фруктозо - 1,6 - дифосфата (ФДФ), а концентрация ФДФ, необходимая для полумаксимальной активации фермента в клетках с модифицированньм геном д9ІдСб16 уменьшается. Установлено также снижение ингибирования АДф- глюкозопирофосфорилазной активности под воздействием 5' - АМФ (АМФ) в мутантньх клетках.
Ї ешпа (1986) сообщил о клонирований гена дІдС16 из штамма 618 БЕ. сої К - 12. Бьіли получень! два клона противоположной ориентации. Зти клоньї, обозначеннье как рЕВІ І и рЕВІ 3, содержат как ген 99016, так и ген ді9ЯВ (ген разветвляющего фермента). Обе плазмидь! бьли трансформировань! в мутантньїх штаммах Е. сої, не обладавших АДФ-глюкозопирофосфорилазной активностью. У Е. соїї К - 12 отсутствуют гень! дід, тогда как штамм АС7ТОВІ - 504 характеризуется наличием дефектного гена АДФ- глюкозопирофосфорилазь и проявляет в 5 - 7 раз меньшую активность других ферментов, участвующих в биосинтезе гликогена. Обе плазмидьі, рЕВІ І и рЕВІ 3, продуцируют АДФ-глюкозопирофосфорилазу в обоих мутантньїхх штаммах. Клонированную АДФ-глюкозопирофосфорилазу частично очищали из штамма
АСТОВІ Б. соїї, трансформированного плазмидой рЕВІ 3. Его АДф-глюкозопирофосфорилаза по кинетическим свойствам бьла сопоставима с частично очищенньм ферментом из исходного мутантного штамма (Б. соїї К - 12 618) и частично очищенньм ферментом из штамма 356 БЕ. соїї К - 12, которьй представляет собой дикий тип родительской формь! штамма 618. Проведено также сопоставление уровня активации и ингибирования ферментов дикого и мутантного типа. АДф-глюкозопирофосфорилаза родительского штамма 356 под воздействием фруктозо - 1,6 - дифосфата активировалась примерно в 45 раз по сравнению с первоначальной величиной. Сигмоидальная кривая активации характеризовалась крутизной Хилла порядка 1,7, а полумаксимальное стимулирование достигалось в присутствиий 62 мкМ
ФДФ. АДф-глюкозопирофосфорилаза мутантного штамма 618 бьіла более активна в отсутствие ФДФ, а в присутствиий последнего активировалась не более чем в 1,8 - 2 раза. Кривая активации последнего фермента имела гиперболическую форму при крутизне Хилла 1,0 и полумаксимальной стимуляции при 15 ї- 3,1мкМ. Фермент, зкспрессия которого происходила при использованиий плазмидь рЕВІ 3, имел те же кинетические константь! ФДФ, что и АДФ-глюкозопирофосфорилаза из мутантного штамма 618.
В настоящее время установлена последовательность ДНК в гене дідС16 (5ЕО ІЮ Мо : З) (Китаї, 1989). На рисунке 2 представляющем вьведенную аминокислотную последовательность, кодируемую геном дідС16 (5ЕО ІЮ Мо: 4), можно отметить две заменьї! аминокислотньїх остатков по сравнению с последовательности из неизогенной формь! ЕЕ. соїї К - 12 (штамм 3000), а именно: замену лизина глютаминовой кислотой в положений 296 и замену глицина на аспарагиновую кислоту в положениий 336.
Среди Е. соїї, бьло ообнаружено известное число других мутантов с измененной АДФф- глюкозопирофосфорилазной активностью. Зкспрессия отих и других бактериальньхх АДФф- глюкозопирофосфорилаз дикого или мутантного типов также может бьть использована для усиления продукции крахмала в растениях.
В клетках штамма 6047 Е. сої) К - І2 (дІідчС47) накапливаєтся примерно такое же количество гликогена в стационарной фазе, как и в штамме 618 (ді9С16). Штамм 6047, подобно штамму 618, характеризуется повьішенньім сродством к ФДФ и более вьісокой активностью в отсутствие ФДф. Тем не менеє, фермент из штамма 6047 более чувствителен к иясгибирующему действию АМФ по сравнению с ферментом из штамма 618 (І ай! - Сатоце, 1977).
Мутант 595 Е. соїї обладает более вьсоким сродством к своим аллостерическим активаторам и пониженньм сродством по отношению к аллостерическому ингибитору нежели родительский штамм (Сомоп5, 1969; Сбомоп5, 1973 и Ргеєїв5, 1973). Одни зти изменения делают фермент более активнь!м в физиологических условиях, что позволяєт бактериям накапливать в 2 - З раза больше гликогена по сравнению с родительской формой. Мутантная АДф-глюкозопирофосфорилаза из штамма 595, как и фермент дикого типа, существует в форме гомотетрамера. Однако, в отличие от фермента дикого типа, мутантний фермент под воздействием ФДФ преобразуєтся в олигомерьії большего молекулярного веса (Сапвоп, 1976).
АДФф-глюкозопирофосфорилаза из мутантного штамма Сі 1136 - 504 Е. соїї В также характеризуется повьішенньм сродством к активаторам и пониженньім сродством к ингибиторам (Карреї, 1981 и Ргеєїв5, 1973). Зтот мутант накапливаєт в 3 - 4 раза больше гликогена чем клетки Е. соїї дикого типа. В условиях активации очищеннье ферментьі из штамма Сі 1136 - 504 и из дикого штамма (АС7ОВІ) обладали сопоставимой специфической активностью. Однако при полном отсутствий активаторов фермент из мутантного штамма проявлял очень вьсокую активность, тогда как у фермента дикого типа такое повьішение отсутствовало.
Ген дідС из ЗаІтопеїа їУрпітигішт І Т2 бьл клонирован и секвенирован І еипд апа Ргеєїз5(1987а). Зтот ген кодирует аминокислотную последовательность из 431 остатка с расчетной молекулярной массой 45580. дІдС ген из ЗаІтопеїа г уУрпітипит І Т2 и аналогичньй ген из Е. сої К - 12 характеризуются 9095 - ной гомологичностью аминокисотньхх последовательностей и 8095 - ной гомологичностью на уровне ДНК.
Подобно АДФ-глюкозопирофосфорилазе Е. соїї, тот же фермент ЗаІтопеїІа їуУрпітигішт І Т2 активируется
ФДФ и дингибируется АМР Їеципа и Ргеїв5, 19878в). Столь вьсокая степень консервативности аминокислотньїх последовательностей предполагает, что введение мутаций, сопровождающихся усилением активности АОРОРР у БЕ. Соїї, в ген АОРОДРР 5.ЛУрНітигішт приведет к сходному изменению активности соответствующего фермента у зтого организма.
Известньі и другие АДФ - глюкозофосфорилазьі, охарактеризованнье по их реакции на воздействиє активаторов и ингибиторов(см. обзор Ргєїз5, 1973). Установлено, что подобно АДФф- глюкозопирофосфорилазе ЕзсПепісніа сої, АДФф-глюкозопирофосфорилазь! из Аегорасіег аегодепев, Аегобасієг сіоасає, Сігорасієг Мейпаїс и Езспепіспіа апгезсепз также активируются под влиянием
ФДФ и ингибируются в присутствимй АМФ. АДФф-глюкозопирофосфорилаза из Аеготопаз /оптісап5 активируєется фруктозо - 6 - фосфатом и ФДфФ и ингибируется АДФ. В то же время АДФ- глюкозопирофосфорилаза из бе!їтайа тагсезсепе не активировалась ни одним из испьттанньмх м т болитов.
В фотосинтезирующих АПподовріпйПит гпибгит обнаружена АДф-глюкозопирофосфорилаза, которая активируется пируватом, но ни одно из изученньїх соединений, в том числе Рі, АМФ или АДФ, не оказьівало на зтот фермент ингибирующего действия. Изученьї также АДФ-глюкозопирофосфорилазьї из нескольких видов водорослей, причем оказалось, что их регуляция осуществляется тем же образом, что и регуляция соответствующих ферментов вьісших растений. Очевидно, что для усиления биосинтеза крахмала и его накопления в растениях можно использовать АДФ - глюкозопирофосфорилазь! из самьїх разнообразньх организмов.
В дополнение к Е. соїї и растительньм АЮОРОДРР в качестве источников генов АОРОДРР могут служить цианобактерии, водоросли, другие прокариотнье и зукариотньєе клетки. Зтот перечень не исчерпьіваєт всех возможньх источников. Так например, гень АОРОРР могут бьть вьіделеньі из бупеспосузіїв и
Апабаєпа с помощью олигонуклеотидов, соответствующих сайту - активатору АОРОРР БЕ. соїї (аминокислотньсе остатки 25 - 42 на рисунке 1), которьій отличаєется вьісокой степенью консервативности у самьх разнообразньхх организмов. Олигонуклеотидьі, соответствующие указанной области, помогают вьіделить искомьй ген в случає их применения в качестве зондов для скрининга геномньїх библиотек. По альтернативной методике, для амплификации сегментов гена АОРОРР 5" праймерами, соответствующими активаторному сайту БЕ. соїї, и 3 праймерами, соответствующими каталитическим участкам БЕ. сої (например, связь вающим местам АДф-глюкозь! в Е. соїї), может бьїть использована ПЦР - реакция (см.
Пример 1) Продуктьї зтой реакции пригодньі в качестве зондов геномньїх библиотек при получений соответствующего полноразмерного гена.
Растительнье АДФ-Гглюкозопирофосфорилазь!
Бьгло время, когда УДФ - глюкозу считали основньїм субстратом при биосинтезе крахмала в растениях.
Однако, позднееє бьіло установлено, что АДфФ-глюкоза является более зффективньм субстратом зтого процесса (Несопао, 1961). Тот же автор показал, что в растительном материале присутствует АДФ- глюкозопирофосфорилазная активность.
Частично очищенная АДФ-глюкозопирофосфорилаза бьіла получена из листьев шпината, показана ее активация З - фосфоглицератом (З - ФГА) и ингибирование неорганическим фосфатом (дновн еї аї., 1966).
Зти авторьї предположили, что биосинтез крахмала в листьях регулируется концентрацией АДФф-глюкозь.
Первичньмм продуктом фиксации СО» в процессе фотосинтеза является 3 - ФГА. Концентрация3-ФГАво время фотосинтеза увеличиваєется, что приводит к активациий АДФ-глюкозопирофосфорилазь. В то же время, концентрация неорганического фосфата уменьшается в результате фотофосфорилирования, что сопровождается ингибированием АДФ-глюкозопирофосфорилазной активности. Зти изменения в конечном итоге приводят к усилению продукции АДф-глюкозьі и биосинтеза крахмала. В темноте концентрация3-
ФГАуменьшаеєтся, а концентрация неорганического фосфата возрастаєт, вьізьвая снижение АДф-
глюкозопирофосфорилазной активности с последующим уменьшением биосинтеза АДФф-глюкозь и крахмала (дпо5н, 1966).
Впоследствии, АДФ-глюкозопирофосфорилаза из листьев шпината бьіла очищена до гомогенного состояния, в ней бьіло установлено присутствие субьєдиниц с молекулярньїми массами 51 и 54 кДа (Могеї,, 1987). Используя антитела к обеим субьединицам, показали гомологичность белка с молекулярньїм весом 51кДа как АДФ-глюкозопирофосфорилазе из зндосперма кукурузьї, так и соответствующему ферменту из клубней картофеля. Однако гомологичность белка шпината с молекулярной массой 54кДа обоим зтим ферментом не установлена.
Последовательность клонированной кДНК субьединицьй АДф-глюкозопирофосфорилазь из зндосперма риса бьіла установлена Апаегзоп(1989а). Полученньій им клон кодирует белок, состоящий из 483 аминокислотньїх остатков. Сопоставление АДФ-Гглюкозопирофосфорилазьї из зндосперма риса и АДФ- глюкозопирофосфорилазь Е. соїї вніявило примерно 3090 - ную идентичность их первичной структурьі. В 1989г бьло проведено секвенированиеє почти полной последовательности клонированной кДНК из зндосперма пшениць (Оіїме, 1989). Оказалось, что аминокислотная последовательность АДФф- глюкозопирофосфорилазьі из зндосперма пшениць приблизительно на 2495 идентична последовательности АДФ-глюкозопирофосфорилазь! из Е. соїї. В то же время, последовательность зтих ферментов из пшениць и риса характеризуется 4095 - ной гомологичностью.
Дополнительное подтверждение существования дерегулируемьтмх растительньх АДФ- глюкозопирофосфорилаз дикого типа содержится в работе Оїме с соавторами (Оїїме, 1989). Они установили, что АДф-глюкозопирофосфорилазьії из листьев и зндосперма пшениць отличаются по характеру аллостерической регуляции. АДФ-глюкозопирофосфорилаза зндосперма не активируется З -
ФГА, а для снижения ее активности на 5095 требуется в 10 раз больше ингибитора ортофосфата чем в случае аналогичного фермента из листьев пшениць.
АДФф-глюкозопирофосфорилаза из озндосперма кукурузьй после очистки обладала такими же каталитическими и регуляторними свойствами, как другие растительнье АДФ-глюкозопирофосфорилазь (Ріахюп, 1987). Молекулярная масса нативного фермента из зндосперма кукурузь! составляла 230000, он имел четьіре субьединиць! примерно одинакового размера.
Молекулярная масса нативной АДф-глюкозопирофосфорилазьї картофельньїх клубней составляеєт 200000, при массе субьединиц 50000 (ЗожокКіпоз, 1982). Активность АДФ-глюкозопирофосфорилазь! из зтого источника практически полностью определяется концентрацией3-ФГАи, также как активность других растительньїх АДФ-глюкозопирофосфорилаз, ингибируется неорганическим фосфатом. Показано, что
АДФф-глюкозопирофосфорилазьї из клубней и листьев картофеля обладают сходньми физическими, каталитическими и аллостерическими свойствами (Апаегзоп 1989в).
Получение измененньїх генов АДФ-глюкозопирофосфорилазьї посредством мутагенеза
Специалистам известно, что усиление продукции крахмала может, помимо прочего, бьіть достигнуто применением генов АДФ-глюкозопирофосфорилазь, которне слабо поддаются аллостерической регуляции ("дерегулируемьсе гень") или, что более предпочтительно, в значительной мере нечувствительнь! к аллостерической регуляции ("нерегулируемье гень") при сохраненимй требуемой каталитической активности. Кодирующая структурная последовательность для бактериальньїх или растительньїх АДф- глюкозопирофосфорилаз из Е. соїї или другого подходящего хозяина может бьіть подвергнута мутагенному воздействию, а затем скринингу с целью вьіявления случаеєв повьішенной продукции гликогена, как зто описано для гена дідС16б БЕ. соїї. Следуєт помнить, что использование гена, кодирующего АДФф- глюкозопирофосфорилазу, которьій поддаєтся модификации только соответствующими модуляторами (активаторами и ингибиторами), присутствующими в данной растительной ткани в концентрациях, которье не оказьвшают существенного воздействия на каталитическую активное т не требует какой - либо модификации фермента (гена). Такие " нерегулируемье " или " дерегулируемье " геньї АДФф- глюкозопирофосфорилазь! могут бьіть внедрень! в растительньй геном, как описано в данной заявке, для получения трансгенньїх растений, содержащих повьішенное количество крахмала.
В качестве примера можно указать, что любой ген АДФ-Глюокозопирофосфорилазьї! можно клонировать в Б. сої В (штамм АСТ7ТОНВІ - 504) (Гецпа, 1986). Зтот штамм имеет дефектньй ген АДФф- глюкозопирофосфорилазь и отличается тем, что активность других гликоген - синтезирующих ферментов понижена в нем в 5 - 7 раз по сравнению с нормальной величиной кКДНК гена АДФ - глюко- зопирофосфорилазьї может бьть локализована в плазмиде после промотора дідС Е. соїї или любого другого бактериального промотора. Полученную конструкцию подвергают направленному или неупорядоченному мутагенному воздействию, после чего наслайвают клетки на обогащенную среду, содержащую 195 глюкозьі. После развития колоний культуру погружают в йодньй раствор, содержащий Іі? и
КІ при процентном соотношений веса к обьему водьі соответственно 0,2 и 0,4 (Стейгеї - Біда! 1972).
Колонии, синтезирующие повьшенное количество гликогена, идентифицируются по более темному окрашиванию при сопоставлений с аналогичньіми культурами не модифицированньмх клеток.
Поскольку в процессе мутагенеза может произойти изменение и самого промотора, после первого же скрининга на наличие мутантной АДФ-глюкозопирофосфорилазь! требуется повторное клонирование гена зтого фермента в не модифицированном векторе; после зтого тем же способом проводят скрининг полученной плазмидьі. Мутанть), отобраннье в течение обоих раундов скрининга тестируют на АДФф- глюкозопирофосфорилазную активность в присутствий активаторов и ингибиторов и без них. Новьйй мутант характеризуют путем сравнения реакции модифицированной и не о модифицированной АДФф- глюкозопирофосфорилаз на действие активаторов и ингибиторов.
В работе Ріахію и Ргеїіз5(1987) показано, что АДФ-глюкозопирофосфорилаза из зндосперма кукурузь регулируется таким же образом, как другие растительнье АДф-глюкозопирофосфорилазь! (Ріахіоп апа
Ргєїзв, 1987). Одновременно зти авторь! установили, что более ранние сообщения, согласно которьім активность АДФ-ГгГлюкозопирофосфорилазьї из зндосперма кукурузь! повьішается в отсутствие активатора
(З - ФГА) и характеризуется пониженной чувствительностью к неорганическому фосфату, бьіли связань с протеолитическим расщеплением фермента в процессе его вьіделения. Мзменяя ген АДФф- глюкозопирофосфорилазьі таким образом, чтобьй получать белок, аналогичньй протеолитически расщепляеємой АДф-глюкозопирофосфорилазе из зндосперма кукурузь, наблюдали снижение аллостерической регуляции.
При анализе жидкой культурьї Е. сої на АДф-глюкозопирофосфорилазную активность, клетки подвергают центрифугированию, а затем ресуспендируют приблизительно в 2мл зкстрагирующего буферного раствора (0,05М глицилглицина рн 7,0, 5,0мМ ДТЗ и 1,0мММ ЗДТА) на грамм клеточной массь.
Затем клетки лизируют, дваждь! помещая под пресс. Полученнье клеточньсе зкстракть! на Змин помещают в микроцентрифугу, надосадочную жидкость обессоливают, пропуская через спиновую колонку 49 - 50.
Оценку ферментативной активности при биосинтезе АДФ-глюкозьі проводят с помощью одной из модификаций общепринятой методики (Найдеп, 1976). В аналитическом обьеме 100мкл содержится 10мкмолей Нерез рН 7,7, 50 мкг бьічьего сьвороточного альбумина, 0, 05мкмоля СЯ - глюкозо - 1 - фосфата, 0, 15микромоля АТФ, 0,5микромоля МасСіг, О,мкг неорганического фосфата из дрожжей (кристаллического), 1ММ молибдата аммония, фермент, активаторьй и ингибиторь (в соответствии с задачами исследования) и вода. Смесь указанного состава инкубируют на протяжении 1Омин при 37", реакцию прекращают кипячением в течение босекунд. Затем смесь помещают в микроцентрифугу, а 40мкл полученной надосадочной жидкости вводят в анионо - обменную колонку 5упспгот Зупспгорак АХ - 100 для вьісокозффективной жидкостной хроматографии. Для злюирования используют 6б5мМ КРІ рН 5,5.
Вьїход не прореагировавшего С!" - глюкозо - 1 - фосфата регистрируют примерно через 7 - вминут после начала злюции, а вьїход С!? - АДФф-глюкозьі через 1Зминут. О ферментативной активности судят по содержанию радиосактивности в пике АДФ-гГЛлЮюКОЗьЬ.
Активность растительньїх АОРДРР строго регулируется как положительньми (3 - фосфоглицерат, З -
ФГА), так и отрицательньми (неорганический фосфат,Рі) зффекторами (днові апа Ргеєїз5, 1966); Сореїай апа Ргєїзв, 1981; божоКіпо5 апа Ргеєїзв, 1982; Моєвї! еї аї., 1987: Ріахюп апа Ргеєїв5, 1987; Ргеїв5, 1988), а соотношениез-ФГАи Рі имеет первостепенное значение для регуляции биосинтеза крахмала посредством модуляции активности АОРОДРР (Запіапив апа Небрег, 1965; Неї еї аї., 1977: Каїзег апа Вазепат, 1979).
Растительнье АДФф-глюкозопирофосфорилазьї представляют собой гетеротетрамерьй двух крупньх /"стянутьїх" и двух мальїх/ "нестабильньїх" субьединиц (Могеї! єї аї., 1987; І іп єї аї!., 1988а; 1988в; Кіізппап еї аї!., 1986: Окіїа єї а!., 1990). Имеются убедительньсе доказательства, что гетероте трамерь! представляют собой наийболее активную форму АЮОРОРР. Зто подтверждаєтся обнаружением мутантньх "бескрахмальньх" растений, в которьїх отсутствует одна или обе субьединиць (Тзаії апа Меї5оп, 1966;біскіпвоп апа Ргеїзз5, 1969; Гіп еї аїІ., 1988а, 1988в) и свойствами гомотетрамера "АОРДРР" мальх субьединиц, коториій обладаєт лишь незначительной ферментативной активностью (іп еї аї., 1988в).
Кроме того, обе субьединицьй обнаруживали способность к взаймодействию с предполагаемьми зффекторами (Могеї! єї а!., 1988).
Нерегулируемье ферментнье разновидности растительньх АОРОРР бьли идентифицировань! и охарактеризованьь теми же методами, с помощью которьх бьли полученьі! дідС16 Е.соїї и сходнье мутанть. Имеются сообщения о клонированиий из однодольньїх и двудольньїх растений разнообразньх
КДНК АОРОРР или фрагментов таких кКДНК для больших и мальх субьединиц (Апаегзоп еї а!., 1989а Оїїме еї аі., 1989; МиПег еї аї., 1990;ВПпаме еї аЇ., 1990; ди Сага апа Веїпіп, 1991). Белки, кодируемье растительньми кКДНК, равно как и ДНК бактериального происхождения, отличаются вьісокой степенью консервативности (Впаме єї аї., 1990). В частности, вьісоко консервативная область, в состав которой входят также некоторье остатки, ответственнье за функцию фермента и его взаймодействиєе с зффекторами, бьіла обнаружена Могеї! єї а!., (1988) и ди Сагаїп апа Ветпіп (1991). Вьіделень клонь! генов субьединиц АЮОРОРР. картофельньїх клубней. Среди них полньій ген малой субьединиць, образованньй путем соединения последовательностей первого зкзона геномного клона с почти полноразмерной клонированной кДНК того же гена, и почти полньїй ген большой субьединиць. Нуклеотидная (5ЕО ІЮ М о: 7)и аминокислотная (5ЕО ІО Мо : 8) последовательности собранного таким образом гена малой субьединицьї представлень! на рисунке 5. Показанная нуклеотидная последовательность отличается от последовательности исходно вьіделенного гена следующим образом: в кодон АТО бьл введен сайт Вді2 --
Мсо! для более успешного клонирования гена в Е. соїї и растительньїх векторов зкспрессии, для чего применяли сайт направленньй мутагенез с использованием олигонуклеотидной затравки с последовательностью аТТ9АТААСААДАТСТЯаТТААССАТЯДЯСЯЯСТТоС (ЗО ЛО Мо: 11)
Сайт бас! интродуцировали в стоп - кодон, используя олигонуклеотидньй праймер с последовательностью
ССАдТТААААСЯдАдСТСАТСАДАТЯАТоЯАТТСО (ЗЕ ЛО Мо: 12)
В качестве 3 - клонирующего сайта служил сайт бас1і. Внутренний сайт Вді 2 удаляли, используя олигонуклеотидньйй праймер с последовательностью
СІТаТоАдААСАТАААТСТТОДАТАТЯТТАС (ЗЕ Мо: 13)
Зкспрессию собранного таким образом гена осуществляли в Е. соїї под контролем промотора гесА в кассете РгесА - ген ОЇ (Уу/опд єї аї., 1988) для получения поддающегося измерению количества белка.
Инициирующий метиониновьй кодон внедряли посредством сайт - налравленного мутагенеза, используя для зтой цели олигонуклеотидную затравку с последовательностью 9ААТТСАСАдЯдЯССАТЯЯСТСТАдАССС (ЗО ЛО Мо: 14), что обеспечивало зкспрессию зрелого гена.
Нуклеотидная (5ЕО ІЮ Мо: 9) и аминокислотная (5ЕО ІЮ Мо: 10) последовательности для практически полноразмерной большой субьединицьі гена представлень на рисунке 6. Инициирующий метиониновьй кодон внедряли посредством сайт - направленного мутагенеза, используя олигонуклеотидньйй праймер с последовательностью
ААДАТСАААССТЯАССАТЯд9СТТАСТСТДТЗАТСАСТАСТЯ (ЗО О Мо: 15) на сформированном М. конце.
Назначение инициирующего метионинового кодона состоит в повиішениий зффективности зкспрессий гена зтой большой субьединицьі в Е. сої. Сайт Ніпа З локализован на расстояний 103 пар оснований после стоп - кодона и служит в качестве 3' - клонирующего сайта. Полньійй ген АОРДРР вьіделен с помощью методики бьістрой амплификаций концов кКДНК (5 - ВАСЕ метод, описанньій Егоптап, 1990; Есоптап егаї., 1988 и Топ еїаІ. 1988 и гоп ейаІ. 1989). Для зтой цели использовали олигонуклеотиднье затравки с последовательностями 1) ЧдФЧФААТТСААУСТТЯЯАТСССодоаССоСсоСоССососс (ЗО ПО Мо: 16), 2) дЧФдОФААТТСААХЯСТТЯчЯАТССС ода (ЗЕОЮ Мо: 17) й 3) ССТСТАдАСАдТСЯАТСАддАдСАдАТЯТАСЯ (ЗЕ Мо: 18).
Первьсе из двух зтих последовательностей зквивалентнь! соответственно АМроїус и АМ праймерам, описанньм Гой еї а!., (1989), а третья представляет собой ревертивньйй комплемент последовательности, локализованной в крупном гене АОРОРР после сайта Рзії с последовательностью, показанной на рисунке 6.
Продуктьі полимеразной цепной реакции (ПЦР) 5 - опраймера клонируются как фрагменть
Есові/Нніпаз/Вамні - Рв І и легко соединяются с уже имеющейся частью гена.
Слабо регулируемье мутантнье формьї АОРОДРР идентифицируют, скачала подсчетом колоний в подвергшейся мутагенному воздействию культуре Е. соїї, которье характеризуются повьшенной продукцией гликогена, затем окрашиванием колоний в возрасте 24 - 48часов на пластинах из Лурия-агара, содержащего 195 глюкозь, и, наконец, анализом реакции ферментов АЮОРОДРР из зтих изолятов на положительнье и отрицательнье зффекторьї ферментативной активности (Сайапео еї аї., 1969; Ргеївв5 єї а!.,, 1971). Аналогичньійй подход применяют при вьіделениий вариантов растительньх АОРОРР ферментов.
При наличии системь зкспрессии гена каждой субьединицьі, мутагенез таких генов осуществляют раздельно, используя любой из многочисленньїх методов, имеющихся для зтой цели, как физических, так и химических (МіїІег, 1972), в культурах, которне содержат ген или очищенную ДНК. Другой подход состоит в использований методики ПЦР полного гена в присутствия ингибирующих ионов Мп". В зтих условиях вьсока частота ненаправленного включения нуклеотидов (ЕНіпїсп, 1989). Реакцию ПЦР можно применять таюке в случає, когда праймер непосредственно примькает к специфическому участку гена, после чего подвергшийся мутагенезу фрагмент реклонируют в неизмененньсе сегменть! гена. Для получения короткой области гена с вьісокой степенью мутагенной модификации используют также ненаправленное введение олигонуклеотидов, смешивая их в условиях синтетической реакции, которая завершаєется их рандомизированньм включением во все положения указанной области. Зта короткая область фланкируется ре-стрикционньмми сайтами, которне применяют для повторной вставки ее в остальную часть гена. Полученнье таким образом культурь или трансформантьі подвергают скринингу по стандартной йодной методике с целью вьявления культур или трансформантов с повьішенньім по сравнению с контролем содержанием гликогена. Такой скрининг предпочтительно проводят в Е. соїї с недо- статочностью только АОРОДРР активности (например, Е. соїї І С618' - спонтанном мутанте І Сб618, описанном
Сацапеєо еї аї!., 1969 и Сгеигеї-5ідаї! єї аї., 1972), т.е.в бактеріях. с гликоген минусовьмм фенотипом, которье комплементарньі гликоген положительньм организмам по дідС. Е. соїї должнь сохранять другие ферментативнье активности, необходимье для биосинтеза гликогена. Зкспрессия ообоих генов осуществляєтся одновременно в одном и том же хозяйине (Е. соїї),, куда их вводят в составе совместимьмх плазмид, имеющих, кроме того, сходное количество копий в бактериальном хозяине с целью обеспечения максимальной продукции гетеротетрамеров. К числу совместимьїх плазмид относятся плазмидь! серии рваАЗ2г2/рвн/З27/рОС (отбор по реакции на ампициллин), конструирование которьх базируется на использований репликона СоїЕЇ, и плазмида рАСУС177 (отбор по реакции на канамицин), конструирование которой базируется на репликоне різА (Спапа апа Сопеп, 1978). Применение отдельньїх плазмид даеєт возможность проводить скриниг двух модифицированньїх, мутантньїх популяции, после их введения в одного хозяина. После повторного вьуіделения плазмидной ДНК из колоний с более интенсивньм окрашиванием йодньм раствором кодирующие последовательности АЮРдрр реклонируют в векторах зкспрессии, оценивают фенотип и определяют активность АЮРОРР, а также ее изменения под воздействием зффекторньїх молекул. Улучшеннье варианть! характеризуются более вьісоким показателем уУутах, пониженной степенью ингибирования отрицательньм зффектором (Рі) и слабой зависимостью максимальной активности от положительного активатора (3-ФГА). При анализе зтих улучшенньїх свойств активность АЮРОДРР оценивают в присутствиий Рі при концентрации 0,045мМ (Іов - 0,045мММ) или в присутствий 3-ФГА при концентрации 0,075мМ (Аов - 0,075мМ). При зтих концентрациях Рі, и 3-ФГА улучшеннье варианть! характеризуются соответственно снижением активности менее чем на 4095 и ее увеличением более чем на 5095. После вьделения улучшенньх вариантов и идентификации обусловливающей активность субьединиць (или субьединиц), проводят секвенирование нуклеотидов для внявления мутации (й). Наличие последней подтверждают., воссоздавая соответствующую модификацию посредством сайт-направленного мутагенеза с повторньм определением активности АОРОРР в присутствий активатора и ингибитора. После зтого мутацию переносят в зквивалентньій ген КДНК АОРДРР посредством реклонирования области, содержащей мутацию, из измененной бактериальной формьї зкспрессии в растительную форму, где имеется, транспортная последовательность амилопластов, или путем сайт-направленного мутагенеза полноразмерного нативного гена растительной АОРОРР.
Зкспрессия АДФ-глюкозопирофосфорилазной активности в хлоропластах и амилопластах
Известно, что биосинтез крахмала происходит в хлоропластах и амилопластах растений (в дальнейшем изложениий зти структурь обобщенно именуются "пластидами"). В пластидах изученньх к настоящему моменту видов растений локализуется АДФ-глюкозопирофосфорилаза. В проростках гороха локализация зтого фермента ограничена хлоропластами (І емі, 1978).
В листьях шпината в хлоропластах же локализуются все формь! АДФ-глюкозопирофосфорилазной активности, вместе с крахмало-синтазой (Магез, 1978 и Окіїа, 1979). Иммуноцитохимическими методами установлено, что АДФ-глюкозопирофосфорилаза картофельньїх клубней присутствует исключительно в амилопластах (Кіт, 1989). Мсследования зндосперма риса также вьявили преимущественную локализацию АДФ-глюкозопирофосфорилазной активности в амилопластах (Макатига, 1989).
Зкспрессия многих локализованньїх в хлоропластах белков обеспечиваєтся генами клеточньїх ядер, откуда они в качестве предшественников переносятся в хлоропластьь специфичньм для последних транспортньвм белком (СТР), которьій отделяєтся от них в процессе включения. В качестве примеров связанньїх с хлоропластами белков можно назвать рибулезо-1,5-дифосфат карбоксилазу (55880ВІ5СО,
ЗБ), 5-знолпируватшикимат-3З-фосфат синтазу (ЕРБР5), ферродоксин, ферродоксин-оксидоредуктазу, светопоглощающие белковье комплексь! 1 и 2, а также тиоредоксин Е. Установлено, что в условиях іп мімо и іп міо обьчно не связаннье с хлоропластами белки могут бьїть перенесеньі в них после слияния с последовательностями СТР, что вполне достаточно для обеспечения такого транспорта. Точно также, зкспрессия белков амилопластов в форме предшественников осуществляєтся ядерньми генами, после чего они перекосятся в амилопластьь специфичньми для последних транспортньми белками (АТР).
Считаєтся также, что хлоропласть и амилопластьь формируются из одних и тех же пластид, а единственное функциональноеє различив между ними, состоит в том; что первье локализуются в фотосинтетических клетках, а последние - в клетках, неспособньїх к фотосинтезу. Более того, в таких растениях, как Рісеа авіе5 наблюдали взаймопревращение обейх органелл (бепзег, 1975). Имеются также сообщения, согласно которьм геном амилопластов и хлоропластов данного растения практически неотличимь! (5соїї, 1984, Маспегеєї, 1985; Сайєу, 1987). Показано также, что транспортньй белок амилопластов может переносить связанньє с ним белки на хлоропласть (Кібздеп, 1989).
В соответствии с одной из методик используют последовательность СТР, источником которой служит гене ВОВІЗСО ІА из Агарідорвзіз (паапа (5510 АЇ) (ТІмко, 1988). Зту последовательность СТР (СТР 1) конструируют, комбинируя не сколько сайт-направленньїх мутагенних воздействий. Последовательность нуклеотидов в СТР 1 (5ЕО ІЮ Мо : 5) и соответствующая аминокислотная последовательность (5ЕО ІЮ
М О: 6) показань! на рисунке 3. СТР 1 формируется из 55ЇІА СТР (аминокислотньсєе остатки І - 55); первьх 23 аминокислотньїх остатков зрелого белка 55МІА (56 - 78); серинового остатка (аминокислотньй остаток в положений 79); нового фрагмента, повторяющего аминокислотную последовательность 50 - 56 СТР и двух первьїх фрагментов зрелого белка (аминокислотнье остатки 80 - 87); аланинового и метионинового ос- татков в положениях 88 и 89. Рестрикционньій сайт М сої локализуеєтся на 3'-конце (перекрьвваєт Меї- кодон), что обеспечиваєет точное слияние с 5'-фрагментом гена АДФ-глюкозопирофосфорилазь. На более поздней стадии вверх от М -концевой последовательности 55ЦІА вводят сайт Воді 2, что облегачет вста- вку слитьїх фрагментов в трансформирующие векторьі. Слитье фрагменть! собирают между структурами
ДНК, кодирующими СТР 1, СТР и ген 9І9С16 из Е. соїї, в результате чего образуеєется полная последовательность структурной ДНК, которая кодирует слитьій полипептид, состоящий из транспортного пептида пластид и АДФ-глюкозопирофосфорилазь! .
Понятно, что если в соответствии с настоящим описанием необходимо использовать либо одну из
КДНК растительной АДФф-глюкозопирофосфорилазь, кодирующих стянутую и/или нестабильную субьединиць, либо обе КДНК растительной АОРОРР, кодирующих стянутую и нестабильную субьединицьї, проще всего и предпочтительнее использовать СТР или АТР. В связи с зтим, для целей настоящего изобретения термин "транспортнье пептидьії пластид" должен обозначать транспортнье пептидь и хлоропластов, и амилопластов. Столь же очевидно, что, используя функциональнье свойства данного вида транспортного белка пластид для введения соответствующей АДФф-глюкозопирофосфорилазной активности в хлоропластьь и/или амилопластьь растительной клетки, в зависимости от тканевой специфичности промотора, можно получать и другие химернье конструкции. Функциональнье свойства слитого полипептида оценивают с помощью описанной ниже методики в условиях ин витро.
Анализ включения в пластидь
Интактнье хлоропластьі вьделяют из салата (Іашса Заїїма, маг. Іоподіюйа) посредством центрифугирования в градиенте перколла/фиколла, пользуясь модифицированной методикой Вапйіеї еї аї. (1982). Полученньй осадок из интактньсх хлоропластов суспендируют в 0,5мл стерильного сорбитола (330мМ) в 50мМ Нерев5-КОН буфере рН 7,7 с известньм содержанием хлорофилла, которое доводят до конечной величинь! 4мг/мл, используя вьішеуказанньй буферньй раствор. Определение хлорофилла проводят, как описано Агпоп (1949). Вьіїход интактньїх хлоропластов из одной головки салата в пересчете на хлорофилл составляет З - бмг.
В типичном случає в З00мкл содержится 5мММ АТФ, 8,3ММ немеченого метионина, 322мМ сорбитола, 58,3ММ Нерез-КОН буфера (рН 8,0), Хомкл трансляционньїх продуктов лизата ретикулоцитов и интактнье хлоропласть! І.Займа (200мкг хлорофилла). Реакционную смесь помещают в стеклянную пробирку размером 10 х 75мм и слегка встряхивают при комнатной температуре непосредственно перед считьявающим устройством спектроскопа на оптических волокнах при максимальной освещенности (150Ватт). В разнье сроки отбирают аликвотьї реакционной смеси обьемом по 50мкл и подвергают их фракционированию посредством центрифугирования в силиконсю-масляном градиенте (100мкл в полизтиленовьх пробирках на 150мкл) при 11000 х д в течение ЗОсекунд. В зтих условиях интактнье хлоропластьі осаждаются ниже силиконово-масляного слоя, а инкубационная среда (содержащая лизат ретикулоцитов) остаєтся на поверхности градиента. Сразу после центрифугирования силиконово- маслянькй градиент замораживают на сухом льду. После зтого осадок хлоропластов ресуспендируют в 50 - 100мкл лизисного буфера (10мМ Нерев5-КОН рН7,5, 1мМ фетопротейина сьіворотки жеребой кобьль!, 1мММ бензамидина, 5мММ Е-амино-п-калроевой кислотьії и ЗОмкг/мл апротинина) и центрифугируют в течение 20мин при 15000 х д для осаждения мембран тилакоидов. Прозрачньій супернатант (белки стромь!), полученньй в результате центрифугирования, и инкубационную среду, содержащую лизированнье ретикулоцить!, полученнье в каждом зксперименте, обьединяют с равньім обьеемом 2Х Маброа5зоОо4-буфера для злектрофореза в полиакриламидном геле, которьій осуществляют в соответствий с нижеследующим описанием.
Злектрофорез в полиакриламидном геле с додецилсульфатом натрия проводят, как описано І аеттії (1970), в 3 - 1795 (вес/обьем) вязком акриламидном геле (60 х 1,5мм) с 395 (вес/обьем) рьхлого акриламидного геля (5мм х 1,5мм). Гель фиксируют в течение 20 - ЗОминут в растворе, содержащем 4095 метанола и 1095 уксусной кислотьі. После зтого его насьщщают ЕМУНАМСЕ" (ОиРопі) погружая на 20 -
ЗОминут, а затем вьісушивают в гелевой сушилке. С помощью аутографической методики, используя усиливающий зкран в условиях зкспозиции на протяженийи ночи, оценивают включение АДФ-глюкозопиро- фосфорилазь в изолированнье хлоропласти.
Альтернативньй способ повьишения содержания АДф-глюкозьі в растительньїх клетках состоит в вьіделении генов, кодирующих факторьй транскрипции, которне взаймодействуют с локализованньми вьіше их регуляторньіми злементами гена(ов) растительной АДФ-глюкозопирофисфорилазьі. Повьішенная зкспрессия зтих факторов транскрипции в растительньх клетках может сопровождаться усилением зкспрессии гена АДФ-глюкозопирофосфорилазьі. В зтих условиях сохраняеєется повьішенное содержание крахмала благодаря увеличению активности АДф-глюкозопирофосфорилазь, хотя механизм такого повьішения носит иной характер. Методь! вьіделения факторов транскрипции описань! Каїадігі (1989).
Полиаденилирующий сигнал
З нетранслируемая область химерного растительного гена имеет в своем составе полиаденилирующий сигнал, назначение которого в растениях состоит в присоединениий полиаденилатньх нуклеотидов к 3'-концу РНК. В качестве примеров подходящих для зтой цели 3'-областей можно привести:
І) З транскрибируемьсе, не транслируемье области, включающие полиаденилирующий сигнал из плазмидньх генов Адгобасієгішт, индуцирующих опухоли (Ті), в частности гена нопалин-синтазь! (МОБ), и 2) растительньсе геньї типа генов резервного белка сои и малая субьединица гена рибулезо-1,5-дифосфат карбоксилазь! (5580ВІЗСО). Примером предпочтительной 3'-области может служить соответствующая область гена МОБ, которая более подробно описана в ниже.
Трансформация/регенерация растений
К числу растений, в которьіх с помощью описанного изобретения можно увеличить содержание крахмала, относятся кукуруза, пшеница, рис, морковь, лук, горох, томат, картофель, батат, арахис, различнье разновидности рапса, ячмень, сорго, маниок, банан, соя, салат, яблоня, орешник. Зтот перечень не является исчерпьивающим.
Двунитевая молекула ДНК согласно настоящему изобретению, содержащая функционально-активньй ген растительной АДФ-глюкозопирофосфорилазьї, может бьіть внедрена в растительньій геном любь/м из используемьїх для зтой цели способов. Для зтой цели пригодньї трансформирующие векторь, получаеємье из Ті-плазмид Адгобрасієпйцт Штеїасієп5, а также описаннье, Не!тега-ЕвігеМйа (1983), Вемап (1983), Ківе (1985) и в изданий ЕРО 120,516 (5спірегоогі єї аІ.). Помимо применения трансформирующих векторов из Ті -плазмид или корневьїх плазмид (Ні) Адгорасієпййт, используют альтернативнье способь! внедрения полученньїх в соответствии с данньім изобретением ДНК-конструкций в растительньсе клетки. К их числу относятся, например, применение липосом, злектроперфорации химических агентов, облегчающих включение ДНК, введение свободной ДНК посредством микро бомбардировки и трансформация с использованием вирусов или пьІльць.
Плазмидньій вектор зкспрессии, необходимьй для зкспрессии гена дідС16б Е.соїї и других АОРДРР генов в однодольньїх растениях, состоит из следующих компонентов: промотора, характеризующегося специфичностью или повьішенной зкспрессией в аккумулирующих крахмал тканях однодольньх растений (обьічно в зндосперме), в частности промотора гена зеийнов, присутствующего в зндосперме кукурузь (Редегзеп еї аї., 1982); интрона, по которому происходит расщепление для облегчения зкспрессии гена, например АДН 1-интрона (Саїйаз еї аї, 1987); и 3-аденилирующей последовательности, такой как последовательность 3" нопалин-синтазь! (МОЗ - 3", ЕгаІєу еї а, 1983). Такой вектор зкспрессии может бьть собран на репликонах, обеспечивающих большое число копий и пригодньїх для получения значительного количества ДНК.
Плазмидньй вектор рМОМ 530 (Нодегез, 5.9, 1987) может бьть особенно полезньм трансформирующим вектором на основе Адгобасіейцт для использования с целью трансформации дву-
дольньїх растений. Плазмида РМОМ 530 (см. рисунок 3) является производной плазмидьі РІМОМ 505, полученной путем переноса фрагмента 5ШІ-Ніпа З длиной 2,З3килооснования из плазмидьї РМОМ 316 (Водегв, 5.9., 1987) в плазмиду РМОМ 526. Последняя представляет собой простую производную плазмидь! рРМОМ 505, в которой сайт 5ти! злиминирован посредством переваривания Хмаї, обработкой полимеразой
Кіеєпом'а и последующим легированием. Плазмида РМОМ 530 сохраняєт все свойства плазмида РМОМ 505 и вектора зкспресси Самму355-МО5 и содержит уникальньй расщепляемьй сайт для Зта! между промотором и полиаденилирующим сигналом.
Бинарньй вектор РМОМ 505 представляєт собой производное плазмидьі РМОМ 200 (Нодегв, 5.9., 1987), в котором область, гомологичная плазмиде Ті (І ІН) заменена фрагментом Ніпа 3-5таї! длиной 3,8 килосонования (ртУу5 75) миниплазмидь! ВК2 (Зсптіанаєизег апа Неїїпекі, 1985). Зтот фрагмент содержит точку инициации репликации НАКАЗ (огім) и точку инициации переноса (огіт) для коньюгации в Адгобасіелйит посредством процедурь! тройственного скрещивания (Ногеспй апа Кісе, 1986). Плазмида рМОТ 505 сохраняет все важнье свойства плазмидьї РМОМ 200, в том числе синтетический мультилинкер для вставки желаеємого фрагмента ДНК; химерньй ген МОБ/МРТПЛМО5, обусловливающий устойчивость растительньх клеток к канамицину; участок, определяющий устойчивость к спектиномицину/стрептомицину при селекции БЕ. сої и А. Штеїасієпе; интактньй ген нопалин-синтазь для упрощения подсчета трансформантов и оценки наследования в потомстве; точку инициации репликациий рвА 322 для обеспечения получения больших количеств вектора в Е. сої. Плазмида РМОМ 505 содержит только один край Т-ДНК, имеющий своим происхождением правьїй конец Т-ДНК нопалинового типа из ртіт 37. Саутерн- анализ показал, что плазмида РМОМ 505 и любая имеющаяся в ней ДНК могут бьїіть интегрировань в геном растительной клетки; иньіми словами, цельная плазмида представляет собой Т-ДНК, внедренную в геном растительной клетки. Один из концов интегрированной ДНК локализован между правой краевой последовательностью и геном нопалин-синтазь, а другой - между краеєвой последовательностью и последовательностями рвА 322.
В случає получения требуемого количества клеток (или протопластов), содержащих ген АдДф- глюкозопирофосфорилазьі или соответствующую кДНК, зти клетки (или протопласть) могут бьть регенерировань! в цельное растение. Вьібор способа регенерации не является лимитирующим фактором, и для различньїх растений-хозяев имеются апробированнье зкспериментальньсе протокольі, в том числе для видов из семейства бобовьїх (люцернь, сои, клевера и других), зонтичньїх (моркови, укропа, сельдерея), крестоцветньїх (капустьі, редиса, рапса и т.п.), тьиіквенньіїх (дьінь и огурцов), злаковьїх (пшениць, риса, кукурузьї и других) пасленовьх (картофеля, табака, томатов, перца) и многих других культур (см., например, Аммігай, 1984; 5пітатою, 1989; Еготт, 1990; Мавії, 1990).
Нижеследующие примерь имеют целью лучше проиллюстрировать настоящее изобретение и не должнь! рассматриваться как ограничивающие сферу его применения. Разумеется, допустимь! разнообразнье модификации, упрощения и другие изменения предлагаемьх методов и генньх конструкций при условий следования духу и рамкам изобретения.
Примерь!
Пример 1
Для зкспрессии гена дІдС16 Е. соїї в растительньїх клетках и переноса фермента на пластидь, ген подлежит слиянию с ДНК, кодирующей специфичньй для пластид транспортньй пептид (именуемой в последующем геном СТР/АДФ-глюкозопирофосфорилазь) и с соответствующими регуляторними областями. Зто достигаєтся клонированием гена дід С16 в наборе плазмидньїх векторов, содержащих требуемьне последовательности.
Плазмида рі Р 226 содержит ген дідС16 на фрагменте Ніпс 2, которьій клонируют в вектор рОС 8 в сайте Ніпс 2 (Гешпо еї а!., 1986). Плазмиду рі Р 226 получали от д-ра Прейса (Саск Ргеїз5) из Мичиганского
Университета и трансформировали ее в замороженнье, компетентньюе клетки Е. соїї (СМ 101, соответствующим образом подготовленнье обработкой хлористьмм кальцием, как описано батбгоок с соавторами (1989). Трансформированньсе таким образом клетки наслаивали на пластиньії 2ХУТ (инфра), в составе которьїх имелся ампициллин в концентрациий 100мкг/мл. Очистку плазмидь рі Р 226 производили методом бьістрой щелочной зкстракции (БЩОЗ) из 5мл культурьі после ее зкспозиции в течение ночи (Вітпроїт апа о/їу, 1979).
Для слияния гена дідС16 с ДНК, кодирующей транспортньй пептид хлоропластов, необходимо наличие на 5-конце гена сайта МсоЇ. В равной мере, необходим сайт басі, локализованньй в нисходящем от кодона-терминатора направлений, для перемещения гена СТР/АДФфФ-глюкозопирофосфорилазь! в следующий вектор. Для того чтобь! ввести зти сайтьії, использовали полимеразную цепную реакцию (513), в которой матрицей служила плазмида ріР 226, очищенная методом бьістрой щелочной зкстракции, в количестве примерно 20Онг. Реакцию осуществляли в соответствий с рекомендациями компаний- производителя (Реїкіп ЕІтег Сей5). Праймерами служили О5РЗ и О5Р7. Первьй из них предназначался для вставки сайта Мсої, включающего стартовьй кодон для гена дІдС16. Праймер О5Р7 гибридизировали в 3 нетранслируемой области гена д9ІдС16 и добавляли сайт Засі. Термоциклизатор бьіл запрограммирован на 30 циклов со следующими стадиями: денатурированиеє при 947 в течение 1 минуть, отжиг при 50" в течение 2 минут и развертка при 72" в течение З минут. Продолжительность последней стадии после каждого цикла увеличивали на 15 секунд.
Праймер О5Р 3: 5--яХаттАЯССАТОЯЯТТАЯТТТАдАа-3! (ЗЕ ЛО Мо: 19)
Праймер О5Р 7: 5-давсСдАдСстСдТСААСЯаССатСТаСо9АТТТаТОс-3" (ЗЕ Мо: 20)
В качестве вектора для клонирования продукта полимеразной цепной реакции использовали раєМ321-- (полученньій от Рготеда Мздисон, Висконсин), которьій переваривали Засі и Ніпа 3. Он имел ДНК для модифицированной малой субединиць СТР 1 Агарідорсіз легированную по сайту Ніпа 3.
Последовательность ДНК (5ЕО І Мо : 5) и аминокислотная последовательность (5ЕО І Мо : 6) представлень на рисунке 3.
Развернутьйй в линию вектор обрабатьшали 5ед щелочной фосфатазь! из кишечника телят в течение
ЗОмин при 56". Затем вектор и фрагмент, полученньій в ПЦР-реакции (753) и содержавший ген дІдс16 с новьіми сайтами Місої и Засі, наслаивали на агарозньй гель и очищали фрагменть! связьванием на ДЗАЗ мембранах. Протокол, использовавшийся, для очистки фрагментов связьванием на ДЗАЗ мембранах займствован у 5співєїспег и 5спцеїЇ и известен под названием "Связьшвание и обнаружение ДНК и РНК с помощью 5 и 5-ДЗАЗ мембран".
Лигирование (55) приводило к слиянию гена дідчС16 и ДНК для модифицированного 550) СТР
Агарідорзіз с РрдЕМЗ321--. Продукт легирования содержал Змкг вектора переваренного Мсої и Засі, вместе с
Змкг продукта ПЦР 513, которьй также бьіл усечен Місої и Засі и повторно очищен на геле. 5мкл (из общего количества 20мкл) продукта легирования 55 трансформировали в замороженнье компетентнье клетки
СМІОЇ, которне затем наслайивали на пластиньі 2ХУТ (16г/л бактотриптона, 10г/л дрожжевого зкстракта и 10г/л масі рн7,3, отвержденньх 1,595 агаром), содержавшие ампициллин.
Образец 1 извлекали из пластинь! 1 после инкубации в течение ночи. Его помещали в 4мл средьі 2ХУТ и продолжали инкубирование на протяжениий еще одной ночи при 37". Ллазмиду вьіделяли методом бьістрой щелочной зкстракции, ДНК переваривали ЕсоВіІ,Мсо! или их смесью. Переваренньй материал фракционировали на агарозном геле, вьіделяя ожидавшиеся фрагменть». Плазмиду, полученную из образца 1, обозначали как РМОМ20100. Она состояла из роЕМЗ32ії-, ДНК модифицированного 550 СТР
Агарідорзіз и гена дідС16. Слияние происходило таким образом, которьій обеспечивал транскрипцию с промотора 5Рб6 полимеразь.
Для тестирования способности зтой конструкции переносить АДФф-глюкозопирофосфорилазу в изолированнье плазмидьй салата, спайку СТР/АДф-глюкозопирофосфорилаза транскрибировали и транслировали с целью получения меченной 355 АДФ-глюкозопирофосфорилазь!і. Для получения матриць
ДНК для транскрипциий 5Рб полимеразой, область, кодирующую СТР/АДФ-глюкозопирофосфорилазу плазмидьї РМОМ 20100, амплифицировали посредством ПЦР-реакции, генерируя большое количество линейной ДНК. С зтой целью методом бьістрой щелочной зкстракции получали 0,їмкл очищенной РМОМ 20100, используя ее в качестве матриць! в ПЦР-реакции 580. Затравкой служили коммерческий праймер промотора 5РБб и (Ргомеда) и олиго О5Р7. Праймер 5Рб гибридизировался с промотором 5Рб в векторе и включал полную последовательность промотора 5Рб. По зтой причине продукт полимеразной цепной реакции при использований в качестве праймера указанного олигонуклеотида должен содержать последовательность, узнающую 5Рб полимеразу. Праймер О5Р7 образует гибрид с 3' не транслируемой областью гена д9і9С16. Зто тот же самьй праймер, которьій применяли для введения сайта 5асі в нисходящем направлений от кодона-терминатора дідС16. Термический циклизатор бьіл запрограммирован на 30 циклов с денатурацией при 94" в течение 1 минуть, отжигом при 55" в течение 2 мин и разверткой при 72" в течение З минут. После каждого цикла продолжительность стадии развертки увеличивалась на секунд.
Праймер промотора 5Рб 5-ДАТТТАдоаТЯАСАСТАТАО-3! (ЗО О Мо: 21)
Полимеразную цепную реакцию (ПЦГ Ж580) проводили на агарозном геле в обьеме 5мкл очисткой связьіванием на мембране ДЗАЗ. После злюции ДНК ее разводили в 20мкл ТЗ. 2мкл очищенного на геле продукта реакции использовали в реакции транскрипции 5Рб РНК-полимеразой ин витро. При постановке реакции следовали указаниям изготовителя (Рготеда) для синтеза больших количеств РНК (реакция в обьеме 100мкл). РНК, полученную в ПЦР-реакции 4580 с ДНК, использовали для трансляции ин витро в системе лизированньхх кроличьих ретикулоцитов (Рготеда). Меченньй 355 белок, полученньй в ПЦР- реакции (27480) с плазмидой РМОМ 20100, использовали при тестирований включения в хлоропласти ин витро, как описано ранее. После процессинга проб из зтой тест-системь! их подвергали злектрофорезу в полиакриламидном геле с додецилсульфатом натрия (3 - 1795 градиент). Гель в течение 20 - 30 минут фиксировали в растворе, содержащем 40905 метанол и 1095 уксусную кислоту. После зтого его насьщщали
ЕМУНАМСЕ"М в течение 20 - 30 минут с последующим подсушиванием в гелевой сушилке. Результать ауторадиографии получали после зкспозиции в течение ночи с применением усиливающего зкрана.
Полученнье даннье свидетельствуют о включений слитого белка в изолированнье хлоропласть!.
Затем бьіла получена плазмида РМОМ 20100 для слияния с промоторомЕп-Самт355 (Кау, В, 1987), а из плазмида рРМОМ 999 вьіделяли 3З'-конец МОБ (Вемап, М., 1983). Реакция ПЦРА114 проходила в присутствий плазмидьії РОМОМ 20100 в качестве матриць, а в качестве праймеров использовали ОЗМІЇ и
О5МІО. Первая ренатурировала до ДНК для модифицированного 550 СТР Агарідор-СТР и формировала сайт Во3 длиной 7 пар оснований вверх от стартового кодона АТуд. Плазмида О5МІО ренатурировала до 3'- конца гена 9ІдС16 и добавляла сайт Хва! непосредственно после кодона-терминатора, а также сайт Бас! длиной 5 пар оснований. Сайт Засі, ранеєе добавленньйй к гену 9дІдДС16, локализовался на расстояний примерно 100 пар оснований вниз от кодона-терминатора. Термоциклизатор бьіл запрограммирован на 25 циклов со стадией денатурации при 947" продолжительностью 1 минута, стадией ренатурации при 55" продолжительностью 2 минуть и стадией развертки при 727" продолжительностью З минуть!і. После каждого цикла продолжительность последней стадии увеличивали на 15 секунд.
О5МІ! праймер
5-АдАдАдАТСТАЯдААСААТЯЯСТТОСТСТАТЯОСТТСТСТТоС9с-3 (ЗО О Мо: 22)
О5МІО праймер 5-двчсСдАдСТСТАдАТТАТСЯСТОСТатТТТАТЯСССТААС-З! (ЗО О Мо:23) 95 из общего обьема 100мкл полимеразной цепной реакции 2114 осаждали озтанолом и ресуспендировали в 20мкл ТЗ. 5мкл полученного материала переваривали ВоЗ (4 единицьї) и Засі (10 единиц) в течение ночи при 37". 5мкл (5мкг) вектора РМОМ 999, содержащего промотор Еп-Саму355 и 3-
МОБ, переваривали аналогичньм способом. После переваривания рестриктивньми ферментами, ДНК помещали на агарозньй гель и очищали связьванием на мембранах ДЗАЗ. Каждую ДНК разводили в 20мкл ТЗ. Один (1)мкл материала из реакционной средь! 7114 легировали с Змкл вектора в общем обьеме 20мкл. Смесь для легирования инкубировали при 147 в течение 7 часов. Десять (10)мкл продуктов легирования трансформировали в замороженнье компетентнье клетки ММ294 и наслаивали их на пластинь І В (10г/ л бактотриптона, 5г/л дрожжевого зкстракта, 10г/л Масі и 1,595 агара до отверждения) вместе с 100мкг/мл ампициллина. Колонии собирали и инокулировали в пробирки, содержащие 5мл средьї
І В с 100мкг/мл ампициллина, оставлял их для инкубации на ночь. По окончанийи инкубации 5мл культурь использовали для изоляции плазмидной ДНК методом бьстрой щелочной озкстракции. Зти ДНК переваривали ЕсоВі, отдельнье аликвоть! переваривали Мої). После анализа зтих проб на агарозном геле получали подтверждение присутствия фрагмента ЕсоВІ длиной 497 пар оснований в плазмиде рРМоОМ 20102, что характерно для гена д9І9С16. Зта плазмида содержала также фрагмент Мої! длиной 2,5килооснования, в составе которого имелся промотор Еп-СамУ355, ДНК для модифицированного 551
СТР Агабрідорзів, ген дідС16 и 3і-конец МОБ.
После зтого кассету Мої! длиной 2,5килооснования переносили в трансформирующий вектор РМОМ 530 (рисунок 4). Зтот вектор имеет уникальньй сайт МоїЇ в области ВК2, на расстояний ровно 600 пар оснований от сайта Ніпаз. Вектор РМОМ 530 описан Нодеге с соавторами (1987). Двадцать (20)мкг зтого вектора переваривали 40 единицами МоїЇ в течение ночи при 37". После зтого переваренньйй вектор дефосфорилировали 22 единицами щелочной фосфатазьй из кишечника телят при 37" в течение приблизительно часа. Вектор рМОМ 530 озктрагировали смесью фенола с хлороформом, потом хлороформом и, наконец, осаждали зтанолом. Десять (10)мкг плазмидьї РМОМ 20102 также переваривали в течение ночи при 37", добавляя 40 единиц Мої. Переваренньй Мої! вектор РМОМ 530 легировали с кассетой МоїїЇ из плазмидьй рМОМ 20102 при 15" на протяжении ночи. Продукт легирования трансформировали в замороженнье компетентньюе клетки СМ 101 Е.соїї, а трансформированнье таким образом клетки наслайвали на пластиньй со средой ІВ, содержавшей стрептомицин в концентрации 75мкг/мл.
Девять колоний, собранньїхх с пластиньї, виращивали на среде І В (5мл) для скрининга. Плазмидь! из культурь обьемом 5мл получали методом бьстрой щелочной зкстракции. Для скрининга ДНК сначала использовали переваривание Заї! продуктьї реакции разделяли на 195 агарозном геле. Сопоставляя полученнье даннье с результатами переваривания .ЗаїЇ исходной плазмидьй рМОМ 530, вьіделяли требуемую конструкцию, которую обозначали как РМОМ 20104. Ее ориентацию устанавливали посредством переваривания Реї 1 и двойного переваривания Мсо!/В93. Промотор Еп-СамУЗ355 управляющий геном
СТР/АДФ глюкозопирофосфорилазь, имеет ту же ориентацию что и промотор СамуУ355 ,уже присутствующий в плазмиде РМОМ 530.
В порядке подготовки к трансформации клеток табака плазмиду рМОМ 20104 посредством тройственного скрещивания вводили в АБЕ Адгобасіейцт, используя плазмиду-хелпер РАК 2013. Микро организмь! вьіращивали в среде ІВ, содержащей 25мкг/мл хлорамфеникола и 50мкг/мл канамицина, на протяжений 1,5 дней при 30" Е. соїї, содержащих рАК 2013, в течение ночи культивировали с канамицином (5Омкг/мл). Источником зтой культурь! служили несколько колоний, снятьїх с пластинь!. Е. соїї содержавших рМОМ 2014, культивировали в среде І В с 75мкг/мл стрептомицина. После виіращивания всех зтих культур в пробирки добавляли по 4мл средь І В вместе с АБЕ Адгобасієгішт, рАК 2013 и рРМОМ 20104 (по 100мкл каждого из компонентов). Смесь помещали в микроцентрифугу на 5мин, надосадочную жидкость отбрасьівали, а осадок ресуспендировали в оставшейся жидкости и пипеткой переносили в центр пластинь со средой І В. После инкубации при 30" в течение ночи петлей переносили клетки на другую пластину со средой І В, содержавшей стрептомицин и хлора феникол в концентрациях соответственно 75 и 25мкг/мл.
После дополнительной зкспозиции при 30" продолжительностью 1 - 2 дня на пластине для тройственного скрещивания РМОМ 20104, АБЕ Адгобасієгшт и рАК 2013 развивались колонии, тогда как на контрольньїх пластинах для скрещивания РМОМ 20104 и АБЕ (в отсутствие рАК 2013, необходимой для мобилизации) они отсутствовали. По завершений тройственного скрещивания с пластинь! отбирали две колонии, которне инокулировали в жидкую среду, содержавшую 75мкг/мл стрептомицина, 25мкг/мл хлорамфеникола и 50мкг/мл канамицина. Инкубация происходила при 30". Обе зти культурь! использовали для трансформации в клетки табака.
Протоколом трансформации в диски лиственной ткани табака предполагаєтся использование здоровьїх листьев в возрасте приблизительно 1 месяц. Спустя 15 - 20 минут после стерилизации поверхности листьев 1095 раствором клорокса с сурфактантом их триждь! ополаскивали в стерильной воде, с помощью стерильного пробойника для бумаги получали дискообразнье фрагменть! листьев и помещали их в среду М5І04 (соли М5 4,Зг/л, сахароза З0г/л, витамин В5 500Х 2мл/л, нафтилуксусная кислота 0,1мг/л, сьівороточньйй альбумин крупного рогатого скота 1,О0мг/л) нижней поверхностью вверх для преинкубации в течение 1 дня.
После зтого диски переносили в культуру Адгобрасіеєїйшт АБЕ/рМОМ 20104, предварительно инкубировавшуюся в течение ночи и разведенную 1 : 5 (т.е. примерно до 0,бед оптической плотности).
Перенос состоял в помещений дисков в центрифужнье пробирки, в которьхх находилась культура. Спустя
ЗО - 60 секунд жидкость сливали, а диски помещали между стерильной и фильтровальной бумагой. После зтого их переносили на пластину со средой М5І04, по прежнему верхней поверхностью вниз, для одновременного культивирования с бумажньм диском.
Через 2 - З дня совместного культивирования диски, в том же положении, переносили на селективнье пластинь!ї со средой М5І04. Спустя еще 2 - З недели наблюдали образование каллюса, которьій отделяли от листовьїх дисков. Проростки аккуратно срезали с каллюса после того как они приобретали достаточно большие размерьі, чтобьі отличать их от стебля, а затем помещали на безгормональную селективную среду для укоренения (М5О : М5-соли 4,3г/л, сахароза З0г/л, витамин В5 500Х 2мл/л). Корни развивались спустя 1 - 2 недели. Укоренившиеся проростки переносили в почву и продолжали виіращивать в условиях повьішенной влажности (например, в пластмассовьх контейнерах или мешках). Закаливание проростков производили постепенной зкспозицией в условиях влажности окружающей средь!.
Содержание крахмала в трансформированной ткани каллюса определяли с помощью модифицированной методики і іп, с соавторами (1988а). Каллюс извлекали из средьі, тщательно отделяя агар. Затем его помещали в центрифужнье пробирки на 1,5мл и вьісушивали под вакуумом в аппарате
ЗРЕЕО УАС"м (бБамапіу).
Спустя несколько часов после начала сушки пробирки с содержимьм взвешивали на аналитический весах с точностью до 0,1мг. Затем пробирки снова переносили в аппарат 5РЕЕО УАС" еще на несколько часов и повторно взвешивали, чтобь! установить, достиг ли вес сухого вещества постоянной величинь.
Сухой каллюс измельчали в пробирке и тщательно перемешивали материал для получения гомогенной смеси. Пробьй каждого из вьісушенньїх образцов каллюса помещали в предварительно взвешенньє пробирки для микроцентрифугирования обьемом 1,5мл. Зти нове пробирки с сухим материалом также взвешивали, рассчитьвая, таким образом, вес сухого каллюса. Вес отдельньїх образцов колебался от 9 до
Замг.
В каждую пробирку добавляли приблизительно по їмл 8095-ного зтанола после чего помещали их в водяную баню при 70" для инкубации в течение 10 - 20 минут. После центрифугирования сливали отделившийся зтанол, дваждьії промьшвали пробь! его новьіми порциями, а после последней промьнвки вьісушивали пробь! в аппарате ЗБРЕЕО МАС" и в каждую пробирку добавляли по 200мкл 0,2н КОН. Затем пробьї встряхивали для полного перемешивания и нагревали при 100" в течение 30 минут. Перед нагреванием в пробках иглой прокальшали несколько дьрочек, чтобьї предупредить самооткрьівание пробирок и потерю анализируемого вещества. За процедурой нагревания следовало добавление в про- бирки 40мкл тн уксусной кислоть! (к каждому из образцов), а после нее - З5мкл (7,4 единиц) альфа- амилазь! (панкреатической). Затем пробирки оставляли при 37" на 30 минут. На следующей стадийи в них добавляли по пять единиц (в 5мкл) амилоглюкозидазь! Азрепіїше підег вместе со 160мкл 100мМ ацетата натрия рН 4,6. Пробь! нагревали при 55" на протяжений часа, затем кипятили в течение 2 - З минут и сразу же центрифугировали в микроцентрифуге. После зтого пробь! снова вьісушивали в аппарате ФБРЕЕБО МАСтм и повторно суспендировали в 1000мкл 100мМ трис-СІ буфера рн 7,5.
Затем определяли содержание в пробах глюкозь, используя для зтой цели коммерческую тест-систему компаний Сигма (5 16 - 10). Методика основана на превращений присутствующей в пробах глюкозь (АТФ) в глюкозо-6-фосфат и АДФ под воздействием гексокиназь. После зтого глюкозо-б-фосфат (НАД) превращаєется в 6-фосфоглюконат -НАДН. Измеряемое увеличение поглощения при длине волньі 34Онм, обусловленное присутствием НАДН, прямо пропорционально концентрации глюкозьі. Все процедурь и расчеть! осуществляли в соответствии с рекомендациями компаний-изготовителя. Реакция проходила, как описано в "Альтернативной методике" компаний Сигма, при комнатной температуре в обьеме 10мкл или при обьеме пробьії 5мкл с добавлением 5мкл 100мМ трис-СІ буфера рН 7,5. Процентное содержание крахмала рассчитьівали делением количества (веса) глюкозь! на сухой вес каллюса.
Для иммунологического анализа часть вьісушенного и гомогенизированного каллюса из каждой из 12 проб и двух контрольньїх образцов ресуспендировали в 200мкл зкстракционного буферного раствора (100мММ трис-СІ рН 7,1, 1мМ ЗДТА, 1095 глицерин, 5;мМ ДТТ и 1мМ бензамидин). Каждьй из образцов перемешивали встряхиванием, подвергали микроцентрифугированию в течение 5 минут при максимальной скорости и переносили надосадочную жидкость в нове пробирки. Концентрацию белка в каждой пробе определяли по методу Гомту с соавторами (1951), используя наборь! Віо-Найд, а в качестве стандарта - сьівороточньій альбумин крупного рогатого скота. Двадцать пять (25)мкг из каждой пробьі наносили на полиакриламидньй гель с додецилсульфатом натрия (7 - 1795 градиент). Материал одной пробь распределяли на два градиента, также поступали с контрольньми образцами каллюса, а также с контрольньіми пробами, содержавшими 1Онг очищенной АДФ-глюкозопирофосфорилазь Е сої.
После злектрофореза гели переносили на нитроцеллюлозу, используя аппарат Роїу-Віої"м (Амегісап
Віопеїїс5). Процессинг перенесенного материала осуществляли в соответствии с протоколом компаний
Рготеда. Фильтрование блокировали раствором сьівороточного альбумина крупного рогатого скота в трис- натриевом буфере (10мМ трис-СІ рн 8,0, 150мМ Масі и 0,0595 твина-20) в течение 30 минут. Десять (10)мл зтого буфера перемешивали с 1,3мкл первичньїх кроличьих антител к АДФ-глюкозопирофосфорилазе Е. соїї после чего фильтрь! инкубировали с зтими антителами на протяжений 30 минут. После зтого фильтрь! триждь! промьявали примерно 5О0мл буфера при продолжительности каждой промьівки 5 минут. Десять (10)мл зтого же буфера, содержавшего 1,3мкл вторичньх антител (козьи антитела к кроличьим антителам, коньюгированньім с щелочной фосфатазой, фирмь! Рготеда) также инкубировали с фильтрами в течение мин с последующей трехкратной промьвкой. О наличии сигналов судили по цветньм реакциям щелочной фосфатазь, которне количественно оценивали с помощью лазерного денситометра.
Результать!:
Процентное
Пробькаллюса содержание Площади пиков крахмала 1 26,9 0,573 2 4,6 0,170
З 6,4 0,0 4 12,3 0,344 15,3 0,376 б 11,1 0,314
Контроль 2 х- 1Онг щ 0,369 7 5,5 не определ. 8 5,6 0,117 9 9,7 0,095 6,6 0,0 11 11,4 0,376 12 13,3 0,342
Контроль 2 «ж 10нг ж
Контроль 1 3,0
Контроль 2 3,7 тспайковье пробьї, использовавшиеся только для иммунологического анализа
Приведеннье результатьй показьівают содержание крахмала и площадь пиков, установленнье в процессе иммунологического анализа. Содержание крахмала представлено как его процентное отношение к сухому весу каллюса, а площадь пиков как обобщенньїйй показатель денситометрического сканирования соответствующего образца. Пробьі 1 - б анализировали в одном геле, а пробь 7 - 12 - в другом.
Контрольнье пробьі (контроль 2) анализировали в обоих гелях, в присутствий 1Онг очищенной ДЦФ- глюкозопирофосфорилазь Е. сої и без нее. Спайковье пробьї имели указаннье площади пиков.
Посторонниє полосьі при анализе неспайковьїх проб в обоих гелях отсутствовали. Приведеннье результать! показьвают, что повьиишение продукции АДф-глюкозьі приводит к увеличению содержания крахмала в растительньх клетках.
Пример2
Описанную в Примере 1 плазмиду РМОН 20104 трансформировали в картофель сорта Дезире, следуя известному протоколу Зпеєптап и Вемап (1988) для дисковой трансформации клубней. Свободнье от вирусной инфекции клубни боіїапит Шрегозит маг.ЮОевігеє очищали от кожурь!), бьістро промьвали в дистиллированной воде и в течение 15мин стерилизовали их поверхность 10906 гипохлоридом натрия, в которьій добавляли несколько капель твина-20. Затем клубни б раз промьшвали стерильной водой и погружали в жидкую среду М5. Стерильньм буравом диаметром їсм извлекали кусочки клубней и скальпелем разрезали их на диски толщиной | - 2мм. Диски помещали в плавающем состоянии в 20мл средьі М5, содержащей АБЕ:РМОМ 20104 Адгорасієпйт., 1ї0мл культури АБЕрРМОМ2014 Адгобрасієепит осаждали центрифугированием, осадок ресуспендировали в 20мл средьі М5 и только потом разливали по чашкам Петри перед помещением в неєе дисков. Чашки с культурой и листьями слегка встряхивали. Спустя 20мин диски переносили на пластинь! с табачной питательной средой 30528, которая состояла из солей
М5, 1мг/л тиамина НСІ, 0,5мг/л никотиновой кислоть, 0,5мг/л НСІ пиридоксина, 395 сахарозьі, змкМ зеатин- рибозида и ЗмкМ ИУК аспарагиновой кислоть рН 5,9).
Спустя 48 часов инфицированнье диски помещали на новье пластинь! с той же средой, но лишеннье питательного слоя, в присутствий 500мкг/мл карбенициллина и 10Омкг/мл канамицина. Пластинь! покрьівали парафилмом и инкубировали в течение 16-часового светового дня при 25". Культивирование дисков каждье З недели проводили в свежей среде, однако через 4 недели после его начала концентрацию в ней карбенициллина уменьшали с 500 до 200мкг/мл. Развивающиеся побеги отделяли и помещали в большие пробирки для тестирования, содержавшие соли М5 и витамин РАВз (Імг/л НСІ-ти- амина, 0,5мг/л никотиновой кислоть, 0,5мг/л НСІ-пиридоксина) в сочетаний с 200мкг/мл карбенициллина и 100мкг/мл канамицина. После формирования корней растения переносили в почву и постепенно закаливали.
Описаннье предварительньюе зксперименть! показьшвают, что возможность регенерации трансгенньх растений, способньїх зкспрессировать ген АЮОРДРР под контролем промотора Еп-СаМмМмУ355 вьглядит весьма проблематичной. На обогащенной сахарозой среде удалось получить одно растение картофеля, однако оно погибло после переноса в почву. Такой результат не явился неожиданньм. Промотор Еп-
Саму355 является конститутивньм промотором и индуцирует зкспрессию гена АОРОРР во всех тканях растения. Конститутивная зкспрессия гена АОРОДРР по всей вероятности нарушаєет поступление сахарозь к растущим частям вследствиє опосредуемого через АЮОРОРР превращения сахарозьй в крахмал в продуцирующих сахара клетках и тканях растений. Таким образом, зтот пример иллюстрирует зкспрессию
АОРДРР в растительньхх клетках и предпочтительность, в большинстве случаєв, специфической зкспрессии фермента в таких тканях-мишенях, как клубни картофеля или плодьй томатов. Зто дает возможность специалистам отбирать из имеющегося набора растений, трансформированньїх промотором
Еп-СамуУз355, формьї, в которьїх зкспрессия АОРДРР происходит в желаемом диапазоне.
Пример З
Ткани картофеля подвергали трансформации также с целью добиться зкспрессии слитого пептида
СТР/АДФ-глюкозопирофосфорилазьі под контролем промотора пататина. Последний индуцирует специфическую зкспрессию АОРОРР в клубнях картофеля и повьішаєт в них содержание крахмала.
Вектор, использовавшийся для трансформации картофеля, представляєт собой производное трансформирующего вектора РМОМ 886, действиє которого опосредуется через Адгобасіейцт. Плазмиду рРМОМ 886 конструируют из хорошо известньїх фрагментов ДНК. Фрагмент длиной 0,9Зкилооснования, вьіделенньій из транспосона Тп7, которьй кодирует резистентность бактерий к спектиномицину /стрептомицину (5ре/5її), служит детерминантом при селекции Е. соїї и Адгобасіепйут Шштегасієпв (Ріїпо єї аі., 1985). Его соединяют с химерньім геном резистентности к канамицину, полученному для регуляции зкспрессии в растительньїхх клетках с целью селекции трансформированньх тканей. Химерньй ген состоит из промотора 355 (Р-355) вируса мозайики цветной капусть! длиной 0,35килооснований (Оавї! еї аї., 1985), гена неомицин-фосфотрансферазь 2 типа (МРТ 2) длиной 0О,8Зкилооснований и 3' не транслируемой области гена нопалин-синтазьь длиной 0,2бкилооснований (МО5 3)(Егаієу єї аї., 1983). Следующий фрагмент представлен инициатором репликации длиной 0,75килооснований из плазмидьі! АК2 (5іаїКег єї а!., 1981). Его присоединяют к фрагменту длиной 3,1 килооснований (от ЗаїЇ до Рмиї) плазмидь рвА 322, которая имеет точку инициации репликации для поддержания культурь Е. соїї (оті - 322) и сайт ВОМ для коньюгационного транспорта в клетки Адгобасієгйт (шШтегїасієп5. Наконец, фрагмент Руці длиной 0О,Збкилооснований из плазмидь ртІТЗ37, которьій содержит правую краевую область Т-ДНК нопалинового типа (Егаїєу еї аї., 1985).
Ген 9І9С16 бьіл сконструирован главньім образом для зкспрессии в клубнях после помещения его под контроль специфичного для зтих органов промотора. Поступлениеє белка 9ІдС16 в плазмидь! обе- спечивалось его синтезом в форме С-концевого слияния с М -концевьм белковьм фрагментом, кодирующим транспортную последовательность (СТР), которая имеет своим источником ген ЗЗМШІА из
Агарідорвзів (Ппаійапа (Тімко еї аІ., 1989). Последовательность СТР отделяется в процессе включения, освобождая фермент 9916. Другие сигнальй зкспрессии в растительной ткани также содержат 3- полиаденилирующие последовательности, источником которьїх служат последовательности МО53, локализованнье в нисходящем направлений от кодирующего участка вектора зкспрессии. Последний собирали следующим образом. Пататиновьй промотор вьрезали из плазмидьй рВ1241.3 в форме фрагмента Ніпаз-Вамні и легировали его со слитой последовательностью СТРІ-дІдДС16 (фрагмент Ваі2-
Засі из РМОМ 20102, см. Пример 1) и плазмидньім вектором типа рис, вьірезанньім Ніпаз и бас!1 (зти клонирующие сайтьї в векторе фланкированьії узнающими сайтами Мої). (Плазмида рВ1241.3 содержит промотор пататин-1, охвать вающий область от сайта Ассі в положений 1323 до сайта Ога! в положений 2289/3ти положения соответствуют последовательности, описанной Вемап с соавторами в 1986г/, с линкером Ніпаз, добавленньм в первом из указанньїх положений, и линкером Вамні, добавленньім в последнем положениий.)
Зту кассету внедряли в виде сайта Мої! в плазмиду РМОМ 886 таким образом, что зкспрессия гена 9І9С16 имела место в той же ориентации, что и зкспрессия гена МРТП, кодирующего устойчивость к канамицину. Зто производное получило обозначение РМОМ 20113 и представлено на рисунке 7.
Вектор РМОМ 20113 мобилизовали в аттенуированньйй штамм Адгобасієгішт Штегасієп5, используя тройственную систему коньюгации и плазмиду-хелпер рАК 2013 (Піца єї аї., 1980). Штамм АВІ, несущий плазмиду Ті, аттенуировали злиминированием генов фитогормона, вьізь вавших корневой рак растений.
Зтот штамм представляет собой модифицированньй вариант Адгобрасієгпт Шптеї?їасіеєпе А2О8, несущий инактивированную плазмиду ртіС 58-производную плазмидьй рМР 90А8К (Копе2 апа ЗсепеїІ, 1986).
Инактивированная плазмида Ті обладаеєт функциями гена ША, которьій необходим для автономной репликации вектора рМОМ после коньюгации в штамм АВІ. При инкубации растительной ткани с коньюгатом АВІ: рМОМ,вектор переносится в растительнье клетки под контролем аттенуированной плазмидь! РМРООНАК Ті, кодирующей соответствующие функции.
После вьішеописанной процедурьї плазмиду РМОМ 20113 трансформируют в картофель сорта Россет
Бербанк. Для трансформации растений зтого сорта стерильную культуру проростков вніращивают в чашках со средой РМ, обогащенной аскорбиновой кислотой (25мг/л)упри общем обьеме средьі мл. Последняя содержит также неорганические соли Мигавніде и 5Коса (М5), Због/л сахарозь, 0,17г/л МангРОх4.НегО, 0,4мг/л
НеСі-тиамина и 100мг/л миоинозитола с 2г/л гелрита рН 6,0 для отверждения. По достижений проростками длиньї примерно 5см вьрезают отрезки междоузлий длиной З - 5мм и помещают в десятикратно разведенную культуру Адгобрасіегійт (штеїасіеєп5, которую получают из маточной 4-дневной культурь микроорганизмов на пластинах и предварительно инкубируют в течение ночи. Участки междоузлий совместно инкубируют в бактериальной культуре на протяжении 2 дней при 20". Для зтой цели культуральную систему помещают на стерильную фильтровальную бумагу, которую, в свою очередь, подстилает питательньй слой клеток табака на разведенной в 10 раз среде Р (десятикратно разведеннье неорганические соли М5 с органическими добавками в отсутствиє казейина, как описано Саїтеї еї а). (1980) при концентрациях сахарозьй и агара соответственно ЗОг/л и 8,0г/лу. По завершений совместного культивирования зксплантать! переносят в неразбавленную среду Р - 1 для индукции роста каллюса, в состав которой входят неорганические соли М5 , органические добавки согласно Саїтеї еї аї. (1980) в отсутствие казеина, а также 5,0мг/л зеатин-рибозида (7А) и 0,1О0мг/л нафтален-уксусной кислоть(МАА) (Са!теї єї аї., 1980а, 1980в). Для ингибирования роста бактерий в культуральную среду вводили также карбенициллин и цефотаксим в концентрациях соответственно 500мг/л и 10Омг/л. Для селекции трансформированньїх клеток использовали канамицин в концентрации 100мг/л. Трансформированньсе таким образом растения картофеля обладали способностью Кк зкспрессии комплекса пататиновьй промотор-СТР/АДФ-глюкозопирофосфорилаза-ген МО5 и характеризовались повьішенньмм содержанием крахмала в клубнях.
Спустя 4 недели после начала культивирования зксплантать! переносили в среду того же состава, в которой МАА бьіла заменена гибберелловой кислотой (дАЗ) в концентрации 0,Змг/л (Саїтеї еї а!., 1981) для стимуляции формирования проростков. Последние начинали развиваться приблизительно через 2 недели после переноса в стимулирующую рост среду. Зти проростки виірезали и помещали во флаконь! со средой
РМ для укоренения. Спустя примерно 4 недели растения переносили в почву и постепенно закаливали.
Для оценки устойчивости проростков к действию канамицина, которая сособщалась ферментом неомицин- фосфотрансферазой 2, их помещали в среду РМ для укоренения, содержавшую канамицин в концентрации 50мг/л,и отбирали трансформированньє клетки.
Регенерированньсєе в культуре растения картофеля сорта Рассет Бербанк трансплантировали в горшки (б дюймов или приблизительно 15,24см), где вьіращивали до полной зрелости в условиях теплиць!
Собраннье клубни помещали на 2 дня при комнатной температуре для затвердевания кожурь, после чего отбирали все клубни размером более 2см и хранили при 9" в условиях вьісокой влажности.
Для определения удельного веса (УВ) спустя З дня после сбора клубней использовали самье крупнье из них (по 2 - З от каждого растения), абсолютньй вес которьїх обьчно составлял 20 - 40г. Удельньй вес рассчитьівали как разность между весом на воздухе и в воде с помощью формульі УВ - вес на воздухе/вес на воздухе - вес в воде). Расчет процентного содержания крахмала и сухого вещества на оснований удельного веса производили с помощью формул, предложенньїх 5спевеіет (1937): процентное содержание крахмала - 17,546 з (199,07) (УВ - 1,0988) процентное содержание сухого вещества - 24,182 я (211,04) (УВ - 1,0988)
Для иммунологического анализа использовали белок, зкстрагированньй из свежей ткани сердцевинь! клубней, и проводили его, как описано для листьев томатов. Анализ содержания крахмала в свежих срезах клубней производили по методу І іп (1988а) Для зтого приблизительно Зб0Омг ткани из сердцевинь! клубней помещали в центрифужную пробирку на 1,5мл и замораживали на сухом льду. Затем ее подсушивали до постоянного веса в вакуумном концентраторе 5РЕЕО МАС (Замапі) и определяли его конечную величину.
Содержание крахмала определяли примерно в бОмг сухого материала из отдельньїх клубней. Сначала удаляли растворимье сахара, зкстрагируя материал мл 8095-ного зтанола при 70" в течение 20 минут. По завершений инкубации оставшийся зтанол упаривали в вакуумном концентраторе, твердьй остаток ресуспендировайи, в 400мкл 0,2М гидроокиси калия, измельчали и снова инкубировали в течение 30 минут при 1007 для солюбилизации крахмала. Раствор охлаждали и нейтрализовали добавлением 8О0мкл їн уксусной кислотьі. Крахмал разлагали до глюкозьї обработкой 14,8 единицами панкреатической альфа- амилазь! (бЗідта Спетіса!, 9 оців) при 37" на протяжении ЗОмин с последующей обработкой 10 едини- цами амилоглюкозидазь (бідта Спетісаї, 9. оціз) в течение 60 минут при 55". Глюкозу виіделяли методом ферментативного переваривания, используя гексокиназньй набор компании бідта Спетісаї (5. оців).
Для иммунологического анализа и количественного определения крахмала использовали ткань сердцевинь! клубней, витращенньмх в условиях обьічной теплиць. Клубни растений, в которьїх происходила зкспрессия АОРОРР Е. соїї, содержали в среднем на 26,495 больше крахмала, чем клубни контрольньх растений. Существеннье различия содержания крахмала в индивидуальньх растениях свидетельствуют о наличии двух популяций картофеля. Одна из них, представленная контрольной разновидностью, характеризуется содержанием крахмала от 10,2 до 1595 (в среднем 12,6790). Вторая популяция представлена растениями, в которьїх происходит зкспрессия АОРОРР БЕ. соїї, при содержаний крахмала от 12,1 до 19,195 (в среднем 1695). Наблюдавшееся увеличение содержания крахмала коррелировало с интенсивностью зкспрессии АОРОРР БЕ. соїї. 9то свидетельствуєт о том, что именно зта зкспрессия служит причине повьішения содержания крахмала в картофельньх клубнях.
Удельньй вес определяли для 2 или З самьх крупньїх клубней от каждого из 36 независимо полученньїх трансформантов, используя методику сопоставления веса клубней на воздухе и в воде (КіІе- іпкорі, 1987). Полученнье результать! показьшвают, что клубни, в которьїх происходила зкспрессия гена
АОРРОРР Е. соїї, характеризовались значительньмм увеличением удельного веса по сравнения с клубнями контрольньїх растений. В среднем удельньй вес возрастал с 1,068 у контрольньїх клубней до 1,088 в клубнях трансгенньїх растений (Таблица та). У найболее продуктивньїх из полученньїх разновидностей удельньй вес клубней достигал 1,100. Отдельнье клубни одного и того же растения отличались по удельному весу. Аналогичнье различия бьіли свойственнь!ї клубням от отдельньїх растений. Тем не менее, клубни с повьиішенньм удельньм весом бьли полученьй только от растений, в которьїх происходила зкспрессия АОРОРР Б. соїї, причем зто повьішение в целом коррелировало с уровнем зкспрессии гена 9916. Содержание крахмала и сухого вещества в клубнях растений, в которьїх имела место зкспрессия
АОРРОРР БЕ. соїії, составляло соответственно 35,0 и 23,995, а наиболее продуктивнье разновидности имели зти показатели на уровне 59,3 и 40,695.
Содержание крахмала, определявшееся по освобождению глюкозьі, во всех 26 полученньїх линиях сопоставляли с его расчетньм содержанием в тех же клубнях по результатам определения удельного веса. Полученнье последним способом даннье хорошо согласовьвались с результатами непосредственной оценки (таблица 1в). В частности, клубни, в которьїх имела место зкспрессия АОРОРР Е. соїї, содержали 16,01956 крахмала при определений методом количественного анализа по сравнению с 16,3295 при расчете по удельному весу. При оценке повьішения содержания крахмала в отдельньмх мутантньїх линиях установлена достоверная корреляция между показателями содержания сухого вещества по данньмм прямого определения и расчетов, а также корреляция между обойми зтими показателями и интенсивностью зкспрессии гена 9ІдС16. Таким образом, наблюдавшееся увеличение содержания сухого вещества в клубнях растений, способньїх к зкспрессим АОРОРР Е. соїї, обусловлено прейимущественно отложением крахмала.
Таблица та - Среднее содержание Среднее содержание
Средний уд. вес крахмала, 90 сухого в-ва, до
Е. сої АДОРОРР х (15) 1,088 (0,012) 15,40 21,90
Контроли (21) 1,068 (0,010) 11,41 17,68
Примечание:
В скобках указано число растений, от каждого из которьїх взвешивали по 2 или З клубня. После показателя удельного веса приведеньі величиньії стандартного отклонения (в скобках). Процентное содержание крахмала и сухого вещества рассчитьівали на оснований средних показателей удельного веса, как описано вьіше. Контролями служили обьединеннье ткани клубней, трансформированньїх посредством введения векторной ДНК, но не содержавших гена дід9дС16, и клубней с геном 9іІд9С16, в которьх отсутствовала зкспрессия АОРОРР БЕ. сої.
Таблица 1в
Среднее содержание Среднее содержание крахмала (95), расчитанное крахмала (95), по данньіїм по уд. весу ферментативного анализа
Е. сої АОРОРР 5 (11) 16,32 (1,47) 16,01 (2,00)
Контроля (15) 11,96 (1,37) 12,67 (1,33)
Примечание:
Средние показатели процентного содержания крахмала определяли зкспериментально методом ферментативной деградации и рассчитьвали на оснований измерений удельного веса. В скобках приведеньії величиньй стандартного отклонения. Различия между разновидностями картофеля с зкспрессией АОРОРР БЕ. соїї и контролями, установленнье при расчетах по удельному весу или определениий ферментативньм методом бьіли статистически достоверньі (р « 0,005 при использований критерия Стьюдента).
Пример 4
Фермент АОРОРР БЕ. соїї кодируется единственньїм геном дідС а его активная форма функционирует в виде гомотетрамера (Ргеївв, 1984). В то же время растительньй фермент является гетеротетрамером и кодируется по меньшей мере двумя различньми генами (Сореїапа апа Ргеєїзв5,,1981). Ферментьї АОРОРР из обоих источников являются строго регулируемьми белками, причем бактериальньй фермент активируется фруктозо-1,6-дифосфатом и ингибируєтся АМФ (Ргеїзв, 1984), а растительньй фермент активируется 3- фосфоглицератом и ингибируется Рі (Сореїапа апа Ргеїз5, 1981; Ргєїз5, 1984). К настоящему времени получено несколько хорошо охарактеризованньх мутантньх АОРОРР Б. соїї, кинетические свойства которьїх суммировань; и сопоставленьї в таблице 2 (Комео, Т.апа Ргеїіз5, С., 1989).
Таблица 2
Накопление гликогена Фруктозо-1,6-дифосфат,
Штамм (мг/г клетою) Ао» (МКМ) АМФ То5 (МКМ) дикий тип 20 68 75 95 Зб 22 270
СІ 1136 74 5.2 680 618 70 15 860
Показано, что зкспрессия варианта дідС16, обнаруженного в Е. сої, (штамм 618), приводит к усилению биосинтеза крахмала в растительньїх клетках. Зкспрессия других бактериальньх ферментов АОРОРР в растительньх клетках также стимулирует образование крахмала.
Точно также, зкспрессия дикого типа гена дідС сопровождаєтся усиленньім накоплением крахмала. Ген 9ІдС дикого типа, имеющийся в геномном клоне Е. сої, которьй бьіл обозначен как роР 12 (Окіїа еї аї., 1981), бьіл вьіделен тем же методом, что и ген 9ІдС16, как описано в Примере 1. Вкратце, сайт МесоЇ! вводили в 5'-сайт, инициирующий трансляцию, а сайт Засі - в 3-кодон-терминатор посредством полимеразной цепной реакции с использованием праймеров О5Р З и О5М 10, как описано в Примере 1.
Полученньій фрагмент Мсо!І-ЗасіІ лигировали в вектор РМОМ 20102 (описанньй в примере 1), которьй предварительно переваривали Мсо! и Засі; зто приводило к формированию плазмидьй РМОМ 16937.
Химерньй ген А5зи-дідС конструировали посредством легирования ре-стрикционного фрагмента Хпо1-Ва 2, содержащего промотор 55Щ1А (Тімко еї а!., 1985); фрагмента Ваді 2-5асі из РМОМ 16937, содержащего ген
СТРІ-дІдС; трансформирующего вектора РМОМ 977, переваренного Хпої и Засі. Таким образом получали, плазмиду рМОМ 16938 (рисунок 8). Плазмида рмоОМ 977 содержит следующие хорошо охарактеризованнье сегментьі ДНК (рисунок 9). Во-первьїх, фрагмент длиной 0,9Зкилооснований, вьіделенньй из транспосона Тп7, которьй кодирует резистентность бактерий Кк спектиномицину/стрептомицину (Зрс/5ії) и служит детерминантом при селекции Е. соїї и Адгорбасіеййт
Штегасієпв (Ріїпо еї аіІ.,1985). Зтот фрагмент присоединяли к химерному гену, кодирующему устойчивость к канамицину, которьй бьл сконструирован для зкспрессии в растительньїх клетках с целью отбора трансформированньіх тканей. В состав химерного гена входят промотор 355 (Р-355) вируса мозаийки цветной капусть! длиной 0,35килооснований (Оавеї! єї аї!., 1985), ген неомицин-фосфотрансферазь 2 типа длиной 0,8Зкилосонований (МРТ 2) и 3' не транслируемая область гена нопалин-синтазьі (МО5 3) длиной 0,2бкилооснований (Егаїєу еї а!., 1983). Следующий сегмент - зто участок инициации репликации длиной 0,75килооснований из плазмидьі АК (огі-М) (ЗіаїКег єї аї!., 1981). Его присоединяли к фрагменту длиной 33,Ікилооснований между сайтами ба! 1 и Рми. 1 из плазмидьйрвА 322, которьій служит участком инициации репликации для Е. соїї (огі-322), и к сайту ВОМ для коньюгационного переноса в клетки
Адгобасіепит Шптеїасіеєп5. Еще один сегмент представляєт собой фрагмент длиной 0,3бкилооснований, локализованньй между сайтами Рми 1 и Всі 1 плазмида ртіт 37 и содержащий правую краевую область Т-
ДНК нопалинового типа (Ргаїєу єї аІ., 1985). Последний сегмент представляет собой вектор зкспрессии, имеющий в своем составе 355 промотор вируса мозайки цветной капусть! (0,65килооснований) (Саму)
амплифицированньй дупликацией промоторной последовательности (Р-ЕЗ55) (Кау сеї аї., 1987); синтетический мультилинкер с несколькими уникальньми клонирующими последовательностями и 3'-не транслируемую область гена гВс5-Е9 гороха (Е9-3) длиной 0,7килооснований (Согиг7і єї а!., 1984: МогеїЇї єї а!., 1985). Плазмиду внедряли в Адгорасіегпйт Шптеїасієп5 (штамм АВІ), используя систему тройственного скрещивания, и применяли для трансформации Гусорегвісоп езсшепішт (разновидность ОС82В).
Клетки растений томата трансформировали, используя вьишеописаннье в общем виде штаммь
Адгорасіегійт с помощью методики МеСогміск єї а). (1986). Семядоли получали из 7 - 8-дневньїх сеянцев.
Поверхность семян в течение 20 минут стерилизовали 3095-ньім раствором клорокса и проращивали их в ящиках Ріапіоп5 на среде Дзвиса. В состав последней входили М соли (4,Зг/л), сахароза (20г/л) и витаминньй раствор МіїзсН (1Омл/л) при рН 5,8. Раствор витаминов содержал 100мг/л миоинозитола, 5мг/л никотиновой кислоть, 0,5мг/л НСІ-пиридоксина 0,5мг/л НСІ-тиамина, О0,05мг/л фолевой кислоть!, 0,05мг/л биотина и 2мг/л глицина. Семена проращивали в течение 7 - 8 дней в ростовьїх камерах при температуре 257 и влажности 4095 при освещениий бельми люминесцентньми лампами (80 Зйнштейн/м2/сек).
Продолжительность светового дня составляла 16 часов.
После прорастания семян из семядолей готовили зксплантать, прямоугольной формь!, срезая апикальную меристему и гипокотиль тонким лезвием (515). Зти срезьі на коротких концах прорастающих семядолей увеличивали инфицируемую поверхность. Зксплантатьь промьвали стерильной регенерационной жидкостью Дозвиса, чтобьї предотвратить вьіськххание ткани. Регенерационная среда
Дзвиса имела в своем составе ІХ М5 соли, 395 сахарозу,ЇХ витаминь и 2,0мг/л зеатина при рН 5,8. Зтот раствор перед употреблением автоклавировали о 0,895 Мовіе-агаром.
Семядоли предварительно культивировали на "питательньїх пластинах", покрьітьїх средой СаїЇдепе, содержащей антибиотики. В состав зтой средьй входили 4,3г/л солей М5 , З0г/л сахарозь, 0,1г/л миоинозитола, 0,2г/л КНогРОх, 1,45мл/л раствора НСіІ-тиамина (исходная концентрация 0,9мг/мл), 0,2мл раствора кинетина (исходная концентрация 0,5мг/мл) и 0, мл раствора дихлорофеноксиуксусной кислоть (исходная концентрация 0,2мг/мл). рН доводили до 6,0 добавлением КОН. На пластиньі! наслайвали суспензию клеток табака (ТХД), а сверху покривали стерильной фильтровальной бумагой, пропитанной средой 2С005К. Последняя состояла из смеси солей М5 дівсо (4,3г/л), витаминов В5 1000 Х (мл), сахарозь! (З0г/л), ПХФК (2мл/л при концентрации исходного раствора 2мг/мл) и кинетина (1Омкл/л при концентрации исходного раствора 0,Биг/мл). Культивирование семядолей в ростовьїх камерах продолжалось в течение суток при 257 и освещенности бельми люминесцентньми лампами (40 - 50
Зйнштейн/м?/сек) в условиях непрерьівного светового дня.
После культивирования семядоли переносили в раствор Адгобрасієпйцйт в лаг фазе. Концентрация бактерий, содержавших плазмиду рМОМ 6938, составляла в зтом растворе приблизительно 5 х 108клеток/мл. Семядоли оставляли в бактериальном растворе для насьіщения в течение 6 минут, затем помещали на диски из стерильной фильтровальной бумаги для удаления избьттка влаги и переносили на пластину, покрьтую питательнь!м слоем, где оставляли для инкубации еще на 2 дня. По истечений зтого срока семядоли переносили на селекционнье пластинь! с регенерационной средой Дзвиса, содержавшей 2мг/л зеатин-рибозида, 500мкг/мл карбе-нициллина и 100мкг/мл канамицина. Спустя 2 - З недели семядоли со сформировавшимися каллюсом и/или проростками помещали в свежую регенерационную среду Дзвиса, содержавшую карбенициллин и канамицин в указанньх вьше концентрациях. Сразу после зтого производили подсчет трансформированньх колоний. Ткань каллюса продолжали культивировать с регулярньіми трехнедельньіми интервалами, причем все аномально развивающиеся образования удаляли, чтобьі обеспечить продолжение регенерации зачаточньхх проростков. Последние формировались в течение З - 4 месяцев.
После появления достаточно сформировавшихся проростков их аккуратно отрезали от каллюса и помещали на селекционнье пластинь! для укоренения. Зти пластинь! бьіли покрьіть! средой 0,5 х М5О, содержавшей 5Омкг/мл канамицина и 50О0мкг/мл карбенициллина. Корни проростков в такой среде развивались в течение 2 недель после начала культивирования. Если зтого не происходило, проростки отделяли от средьй и пересаживали в селекционную среду, где продолжали культивирование при 22".
Проростки с корнями пересаливали в горшки по достижении корнями длинь! 2см. После зтого растения закаливали при 217 и продолжительности светового дня 18 часов на протяжениий 2 - З недель, а затем переносили в теплицу. В теплице растения содержали при температуре 26" в дневное время и 21" в темное время суток при продолжительности светлого и темного времени соответственно 13 и 11 часов, до полного созревания.
Трансгеннье растения томатов - носители плазмидьй рМОМ 16938 тестировали методом иммунологического анализа на наличие продуктов зкспрессии гена дідсС. С зтой целью из ткани листьев и стеблей, измельченньх в соотношении 1 : 1 в 100мМ трис-буфере рН 7,5,зкстрагировали белки. Буферньй раствор содержал также 35мММ КСІ, 5Мм дитиотритола, 5мММ аскорбата, 1мММ ЗДТА, 1 Мм бензаглидина и 2095 глицерина. Концентрацию белка в зкстрактах определяли методом Рієгсє. Разделение белков производили в 3 - 1795 градиенте полиакриламидного геля с додецил-сульфатом натрия. Фермент
АОРОРР БЕ. соїї идентифицировали с помощью козьих антител к очищенному АЮРОРР из того же бактериального источника и комплексов щелочной фосфатазьй с кроличьими антителами (Ргомеда,
Мадізоп, Висконсин). В большинстве растений, в которьїх происходила зкспрессия АОРОРР Е. соїї дикого типа, содержание зтого фермента составляло 0,196 общего зкстрагируемого белка. Для проведения анализа содержания крахмала из З или 4 разньх молодьх, но полностью развернувшихся листьев тепличньїх растений во второй половине дня с помощью пробойника получали фрагменть ткани. Пробь от каждого растения обьединяли и с помощью аналитических весов МешШег определяли их сьрой вес, которьй составлял 60 - вОмг/проба. Затем удаляли растворимьсе сахара, триждь! зкстрагируя пробьі! 1мл 8095-ного зтанола при 70", всякий раз на протяжений 20 минут. После последней зкстракции весь оставшийся зтанол упаривали в вакуумном концентраторе бреєа. Твердьй материал ресуспендировали в 400мкл 0,2М гидроокиси калия измельчали и инкубировали на протяжениий 30 минут при 1007" для солюбилизации крахмала. Полученньій раствор охлаждали и нейтрализовали добавлением 8Омкл ін уксусной кислоть.
Крахмал разлагали до глюкозьї обработкой панкреатической альфа-амилазой (14,8 единиц, бідта
Спетіса!, 5 опів) в течение ЗОмин при 37"; затем обработку продолжали амилоглюкозидазой (б5ідта
Спетіса!, З опіз ) на протяжений еще боОминут при 55". Количество глюкозьї, освобождавшейся в результате ферментативного переваривания, оценивали с помощью гексокиназного набора компаний
Зідта Спетісаї, (БК опіз), а результать! определения использовали для расчета содержания крахмала.
Листья с растений томатов, в которьїх имела место зкспрессия гена дідС, индуцированная промотором
З5и, в среднем содержали на 2995 больше крахмала по сравнению с листьями контрольньїх растений, причем в самьїх продуктивньїх разновидностях зто повьішение достигало 10790 (таблица 3)
Таблица З с/ о Стандартноеє
Среднее содержание крахмала, 9590 отклонение
Б. соїї АОРОРР -- (7) 4,54 21
Контроли (8) 3,52 1,9 (Число изученньїх разновидностей приведено в скобках)
Полученнье результать! показьвают, что ферментьї АОРОРР с разньмми кинетическими свойствами усиливают биосинтез крахмала в трансгенньїх растениях. Следует отметить, что вьісокая интенсивность зкспрессии нерегулируемьх мутантньх форм АОРОДРР в ткани листьев нежелательна, поскольку может отрицательно сказаться на росте и развитиий растений. Так использование гена дідС16 вместо дідС в вьішеописанньїх зкспериментах не сопровождалось регенерацией трансформантов с повьшенньм уровнем зкспрессии продуктов гена дідС16.
Для зкспрессии гена дідС промотором пататином тот же самьй фрагмент Ваі 2 - Засі гена СТР-І- ЯЇдС из плазмидьї РМОМ 16937 и фрагмент Ніпа 3-Вам НІ, содержащий зтот промотор, из плазмидь! рв1241.3 легировали в бинарньй вектор РМОМ 10098 (рисунок 2 ), переваренньй Ніпа З и Засі для формирования плазмидьї РМОМ 16950 (рисунок 10). Плазмида рВ1241.3 имеет промоторньй участок пататина-1, простирающийся от сайта АссіІ в положении 1323 до сайта Ога 1 в положении 22389 (зти положения соответствуют последовательности, описанной Вемап еї аї., 1986) с линкером Ніпа 3, добавленньім в последнее положение. В плазмиде РМОМ 10098 содержаться следующие участки ДНК (в порядке движения по часовой стрелке на рисунке 2. 1). Химерньй ген, кодирующий устойчивость к канамицину , которьй конструировали для зкспрессии в растительньїх клетках с целью селекции трансформированной ткани.
Химерньй ген построен из промотора 355 вируса мозаийки цветной капустьї длиной 0,35килооснований (Оаеї! еї аї., 1985), гена неомицин-фосфотрансферазьі 2 типа (КАМ) длиной 0,8Зкилооснований и 3' нетрансдируемой области гена нопалин-синтазь! (МОБ 3) длиной 0,2бкилооснований. (Егаїєу еї аї., 1983). 2) Фрагмент длиной 0,45килооснований от Сіа 1 до Ога 1 из октопиновой Ті плазмидь ртії 5955, содержащий левую краевую область Т-ДНК (Вагкег еї аї., 1983), 3) сегмент длиной 0,75килооснований, содержащий точку инициации репликации, из плазмидь! ВКА (огі-М) (зіаїКег єї аї., 1981), 4) Сегмент длиной
З,бкилооснований локализованньійй между сайтами ба! 1 и Реї 1 в плазмиде рВА 322 которьй содержит точку инициации репликации для поддержания культурь Е. соїї (ог - 322) и сайт ВОМ для коньюгационного переноса в клетки Адгобасієгйт (Штегасієп5, 5) фрагмент длиной 0,9З3килооснований, вьіделенньій из транспосона 17, которьій кодирует устойчивость бактерий к спектиномицину/стрептомицину (Зре/5ій) (Ріїпа еї а!., 1985) и служит детерминантом при селекции БЕ. соїї и Адгорасієпит Штегасієпв, 6) фрагмент длиной
О,Збкилооснований, заключенньій между Рми 1 и Всі 1 плазмидь ртії 37 и содержащий правую краевую область Т-ДНК нопалинового типа (Егаієу еї аї., 1985), 7) последний сегмент, представляющий собой вектор зкспрессии, которьйй состоит из промотора вируса мозаики цветной капусть! (СаМУ ) длиной 0,6б5ки- лооснований, амплифицированньй дупликацией промоторной последовательности (Р-Е355) (Кау еї аї., 1987), синтетического мультилинкера с несколькими уникальньми клонирующими сайтами и 3- нетранслируемой области гена гВс5-Е9 гороха (Е9 3) длиной 0,7килооснований (Согиг7і єї а!., 1984; МогеїЇ еї аі,, 1985). Плазмиду включали в Адгорасієгйцт (Штеїасієпзе (штамм АВІ), используя систему тройственного скрещивания, и применяли для трансформации клеток картофеля сорта Россет Бербанк (линии Уильямс 82). Зкспрессия гена дідС пататиновьмм промотором (РМОМ 16950) в растениях картофеля сопровождалась увеличением содержания крахмала в клубнях. При зкспрессии мутантного гена дідОо-595 тем же способом, что описан для гена дідС дикого типа и мутантного гена дідДС16 также наблюдали повьішение содержания крахмала.
Перечень литературь
ВІВНОСААРНУ
Аттігай, Р.М., є аІ. Напарсок ої Ріапі Сеїї Сийите - Стор Зресієз. Мастіїап Рибі. Со. (1984).
Апдегзоп, дозеріп М., датез Нпію, Наутопа І агзоп, Тпотаз МУ. ОКна, Манпем МогеїЇ, апа даск Ргеїзв. (1989а) ). Віої. Спет. 264 (21): 12238 - 12242.
Апдегзоп, дозерп М., Тпотаз МУ. Окна, М/осо Таєек Кіт, Чатеї Нпію, дховерп ЗожоКіпоз, Майкпем Могеї!, апа даск Ргеївв (19896) Рігаї Іпіегпайопа! Зутровішт оп Ше Моіесшіаг Віоіоду ої Ше Роїайю, Ваг Нагбог, Маїпе.
Агпоп, 0.1. (1949) Ріапі РНузіо!ї. 24,1 - 15
Ваєскег, Ргевзюп А., Сієтепі Б. Ешпіопо, апа аск Ргеєївзз (1983) 9. Вії Спет. 258 (8) : 5084 - 5087.
Вапшейн, 5. С., А. А. Стозвтап, 5 М. Н. Спиа. (1982) Іп Меїподвз іп Спіогоріазі МоїІесшіаг Віоіоду. ЕІбвемієг
Віотеадіса! Ргезв, Мем ХогК, рр 1081 - 1091.
Веск, Епміп, апа Раш! Аедієг. (1989) Віозупіпезів апа ЮОеєдгадайоп ої Зіагсн іп Ніднег Ріапів. Іп Аппиаї!
НАемієм ої Ріапі Рпувзіоіоду апа Ріапі МоіІесшаг Віоіоду. 95 - 117.
Вепієу, Р., Реп, І.., апа Спица, М. Н. (1989) Тне ЕМВО доитгпаї, Мої. 5, по. 8, рр 2195 - 2202.
Вемап, М. (1984) Мисівїс Асіаз Нев. 12 (22): 8711 - 8721.
Вемап, М., В. Вагкег, А. Соїазргоцдп, М. дагміє, Т. Камападі, апа с. Кигпада. (1986) Мисієїс Асіаз Рез. 14 (11): 4625 - 4638.
Впаме, М. В., 3. І амтепсе, С. Вапоп, апа ГІ. С. Наппай. (1990) Ріапі Сеї!/ 2 : 581 - 588.
Вітброїт, Н. С., апа у. Юоуу. (1979) Мисівїс Асіаз Нев. 7 : 1513 - 1523.
Вгау, Еїгареїйй А., Заюзні Майо, Маі-5ці Рап, Едміп Апдегзоп, РПйїр Юибе, апа Водег М. Веасну. (1987)
Ріапіа 172 364 - 370.
Саїйав, 9., Еготт, М. апа Умаїрої, М. (1987) Сепев апа ОємеІортепі 1 : 1183 - 1200.
Сапізоп, Сигпіів А., Ппотаз Р. Рагзопв, апа даск Ргеїв5. (1976) 9. Віої. Спет. 251 (24): 7886 - 7892.
Сайеу, М. А., С. МУ. Вожтап, М. М. Вауїезз апа М. 0. Саї!є. (1987) Ріапіа 171 :416 - 421.
Сацапео, у)., М. Юатойце, М. БідаІ, Р. Запспег-Меаїпа, апа у. Риїд. (1969) Віоснет. Віорпуз. Нев.
Соттип. 34 (5): 694 - 701.
Спапо, А. С. ХУ. апа 5. М. Сонеп. (1978) 9. Васіепо!. 134; 1141 - 1156.
Сореїапа, Г.. апа .). Ргеївз (1981) Ріапі Рпузіо!. 68 : 996 - 1001.
Стеигеї-біда!, М., М. І айі-ОСатойне, у. Сацапео, апа 9. Риїд. (1972) Сепеїййс Апаїузіз апа Віоспетісаї
СПагасієгігайоп ої Миїапів Ітраїйпод Сіусодеп Меїароїївт іп ЕвсПегісніа соїї К12. Іп ріоспетівігу ої Ше
Спусозідіс І іпкаде: Ап Іпіедгаїед Міему. Еайїеа Бу В. Рігаз5 апа Н. а. Ропіїз. 647 - 680. Мем Могк: Асадетіс
Ргезз Іпс.
Оєїктап, .). апа В. І. Різспег. (1988) Тне ЕМВО доитгпаї 7, 11, 3315 - 3320.
ОісКіпзоп, 0. В. апа у. Ргеївв (1969) Ріапі РПпузіо!. 44 : 1058 - 1062. ріна, с, єїапів!а, 5., Согбіп, О., апа НеїїпекКі, 0. В. (1980). Вгова позі гапде ОМА сіопіпд зувієт ог Схгат-
Медаїйме Басіепа: сопвігисіоп ої а депе Брапк ої Впігобіт пеїйоїї. Ргос Маї! Асай 5сі ОА 77, 7347 - 7351.
Ентпіси, Н. А. (1989) Ед. РСА ТесНпоіоду-Рііпсірієз апа Арріїсайопв ог ОМА Атрійісаноп. Зіоскюп Ргезв,
Мем Хогк.
Ріїпо, М. Е., Корі, ., апа Віснагавз, С. (1985). МисіІєоїййде зедиепсе ої пе ігапгрозоп Тп7 депе епсодіпд ап атіподіусозіде-тоаїйїуїпуд епгуте, З" (9) - 0- писіеойаунгапетегазе. Мисієїс Асіа5 Незеагсі 13 по. 19, 7095 - 7106.
Егаїєу, В. Т., Водегв, 5. Сх., Ногзс, В. В., Запаегз, Р. В., РіїскК, 9. 5., Адатв, 5. Р., Війпег, М. І.., Вгапа, Ії.
А., Ріпк, С. Г.., Егу, у. 5., СаїйПррі, с. В., СоїІдбего, 5. В., Нойтапп, М. І.., апа МУоо, 5.0. (1983). Ехргезвіоп ої
Басієтіа! депез іп ріапі сеїї5. Ргос Маї! Асай 5сі ОБА 80, 4803 - 4807.
ЕгаїІєу, ВА. Т., Водегв, 5. (3., Ногесп, В. В., Еісппої, О. А., РіїсК, 9. 5., Ріпк, С. І., Нойтапп, М. Ї.., апа
Запаегз, Р. В. (1985). Тне ЗЕМ зувієт: а пем/ аізаптей Ті ріаєтій месіог зузієт ог ріапі ігапзіоптайоп.
Віо/Тесппоіоду 3, 629 - 635.
ЕгаІєу, В., ВНодеїв, 5., апа Ноїзсі, В. (1986). Сепейс (гапегоптайоп іп підпег ріапів. Спііса! ВНеміємув іп
Ріапі Зсієпсез 4, Мо. 1, 1 - 46.
Егоптап, М. А., М. К. Аизи, апа а. В. Мапіп. (1988) Ргос. Май). Асай. Зсі. ОБА 85 : 8998 - 9002.
Еготт, М., (1990) ОСА Зутровзійт оп МоїІесшаг бігаїедієз г Стор Ітргометепі, АріїЇ 16 - 22,1990.
Кеузюпе, СО.
Сепіпег, Могтап, апа даск Ргеїв5. (1967) Віосп. Віорнуз. Вез. Соттип. 27 (3) : 417 - 423.
Сепіпег, Могтап, апа даск Ргеїв5. (1968) 9. Вісі. Снет. 243 (22) : 5882 - 5891. сов, Нага Ргазад, апа даск Ргеїзв. (1966) у. Вісі. Спет. 241 (19) : 4491 - 4504.
Сомопз, Зуапеу, Могтап Сепіпег, ЕІаіпе Стеепрего, апа аск Ргеївв. (1973) 9. Вісі. Спет. 243 (5) : 1731 - 1740.
Сомопз, 5уапеу, НКобегі Міпораї, донп Іпдтанат, апа даск Ргеївв. (1969) 9. Васі. 92 (2) : 970 - 972.
Наппареїі, 0. у. (1990) Оійегепіа! ехргезвіоп ої роїаю шрег ргоївіп депев. Ріапі Рпувіо!. 94 : 919 - 925.
Нацадеп, Т.Н., А. Ізпадиє апа .). Ргеїєе (1976) 9. Віої. Снет. 251. (24) 7880 - 7885
Неїаї, Н. МУ., б. У. Споп, 0. Магопає, А. Негоїа, 7. 5. ЄапкКкоміс, О. УМаїКег, А. Кгатіпег, М. В. Кік, апа |.
Небег. (1977) Ріапі Рнузіої. 59 : 1146 - 1155.
Не!ттега-ЕзігепПа, Г.., еї а. (1983) Машге 303 : 209
Ногзсн, В. В. апа Н. Кіее. (1986) Ргос. Маї)!. Асад. 5сі. 0. 5. А. 83 : 4428 - 32.
Уаїтеї, В. Г., Назедама, Р. М., апа Епсквоп, Н. Т. (1980а) Рпузіо!. Ріапі 49: 177 - 184.
Уаїтеї, В. Г., Назедама, Р. М., апа Епскзоп, Н. Т. (198060) 3. Атег. бос. Ногпі 5бві. 105: 238 - 242.
Уаїтеї, В. Г.., Назедама, Р. М., апа Вгеззап, Н. А. (1981) Іп Міко 17 : 825 - 830.
Каїзег, М. М. апа у). А. Ваз5пат (1979) Ріапі Рнпузіої. 63 :109 - 113.
Карреї, Мат К., апа даскК Ргеєїв5. (1981) Агой!. Віоспет. Віорпмв5. 209 (1):15 - 28.
Каїадіїй, Р., Е. ат апа М. Спца. (1989) Машге 340 :727 - 730.
Кау, В., А. Спап, М. Пбаїу апа у. МеРНегзоп. (1987) 5сіепсе 236 : 1299 - 1302.
Кіт, М/оо Таек, Міпсепі А. Егапсевсні, Тпотаз МУ. ОКіга, Міпа Г. НКобіпзоп, Майпемж МогеїЇ, апа даск
Ргеїзв. (1989) ЕІапі Римвіої. 91: 217 - 220.
КіІеє, Н. »., еї аї. (1985) Віо/Тесппоіоду З : 637 - 42.
КіІве, Н. у., апа Родеїв, 5. С. (1989). Ріапі депе месюг5 апа депеїййс ігапвзіогтайоп: ріапі (гапзогтайоп зувівтв5 разей оп Ше изе ої Адгорасіепцт Штеїасієпв. СеїЇ Сийшге апа б5отаїййс СеїІ, Сепеїйсз ої Ріапів 6,1 - 23.
КіІвіпкорі, сх. Е., Мезієгтапп, 0. Т., Уміє, М. 9., апа КіІвіпесптіаї, сх. 0. (1987) бресійс дгаміу ої Виззеї ригбапк роїаюез. Ат. Роїаю .. 64: 579 - 587.
КІОздеп, К. В., Н. Запаїег апа 9.Н. УмеїІ. (1989) Мої. Сеп Сепеї 217 : 155 - 166.
Кіізппап, Н. В., С. 0. Веємез, апа Т. М. Окіга (1986) Ріапі Рпузіо!. 81 : 642 - 645.
Китаг, А., Р. Спо5, М. Хоипо, М. НІЇЇ апа .). Ргєївзв. (1989), У Віої. Снет. 264, 18, 10464 - 10471.
Ї ані-Сатоце, М., апа С. І агев. (1977) Мої. Сеп. Сепеї. 150 : 325 - 329.
Ї еє, Хоипд Моо, Апії Китаг, апа учаск Ргеєївв5. (1987) Мисівїс Асіаз Неа. 15 (24) : 10603.
Ї енпд, Раїгіск, Моипд-Моо І ее, ЕІаіпе Сгеєепрего, Кейп Евсі, ЗНнагоп Воуїап, апа даск Ргеїв5. (1986) ..
Васі. 167 (1): 82 - 88.
Ї енпд, Райіск 5. С., апа даск Ргєїзз. (1987а) Віозупіпезіз ої Васіейа! Суіусодеп: Ріїтагу Біписіште ої
ЗаІтопеїа їурпітигішт АОРдіисозе Зупіпеїазе аз Оєдисей їот їШйе Мисієоїде Зедиепсе ої пе дід С Сепе. 9.
Васі. 169 (9) : 4355 - 4360.
Ї енпд, Раїпск 5. С., апа даск Ргєїзв. (19875). Сіопіпд ої Ше АОРдіисозе Ругорпозрпогуїазе (дід С) апа
СпПусодеп бупіпазе (дід А) Біписішга! Ссепев їгот ЗаІтопеїПа гурпітигіт І Т2. 9. Васі. 169 (9) : 4349 - 4354.
І емі, Сагс. уп, апа даск Ргеївв. (1978) Ріапі Рімзіої!. 61: 218 - 220.
Мп, Твап-Ріасо, Тітоїну Сазраг, Спгіз ЗХотегмПе, апа даск Ргеєївв. (1988а) ріапі Ріузіоі!. 86 : 1131 - 1135.
Шп, Твап-Ріао, ТітоїШйу Саграг, Спів В. ботегІе, апа даск Ргєїзв. (198865) Ріапі РНимвіо!. 88 : 1175 - 1181.
І оп, Е. Х., 9. РЕ. ЕПоїй, 5. Сміпа, І. І. І апієг, апа М. М. Оаміз (1989) бсієпсе 243: 217 - 220.
Ї ому, ОХ. Н., М. У). Козергоцон, А. І. Раїг, апа В. у. Напааї|. (1951) 9. ВісІ. Спет. 193 : 265.
Маснегеї, О., Н. Корауавзні апа Т. Акагама. (1985) Віоспет. Віорнм5. ВНез. Соттип. 133 : 140 - 146.
Магез, 0. 9., у. 5. Нам/кег, апа .). М. Роззіпопат. (1978) 9. ої Ехрегітепіа! Воїапу 29 (111) : 829 - 835.
МесСогтіск, 5., у. Міеєдептеуєетг", у. Егу, А. Вагпазоп, В. Нозгсн, апа В. ЕгаІєу (1986) Ріапі Сеї! Нерогів 5: 80 - 84.
Мідпегу, Стгедогу А., Стаїд 5. Рікаага, апа УМіПат 0. Раїк. (1988) Сепе 62: 27- 44.
МіПег, 9. Н. (1972) Ехрегітепів іп МоІесшаг Сепеїййсв. Соїй Зргіпд Нагбог І арогаїюгу, Соїа 5рііпд Нагбог,
Мем Хогк.
Могеї, М. К., М. Вісот, апа .. Ргеїзв. (1988) 9. Віої. Спет. 263 : 633 - 637.
МогеїЇ, Машем К., Мак Віоот, Міскі Кпомев, апа даск Ргеївв. (1987) Ріапі РПмвіої!. 85: 182 - 187.
Мипег, В. Т., У. Козсптапп, І. б. Наппанй, І. УМіІтіетг, апа 0. Зоппемжаїй (1990) Мої. Сеп. Сепеї. 224: 136 - 146.
МаКкатига, Мазипогі, Кагипіго микі, Зпіп-Хоипд Рак, апа Тозпініде ОпНуа. (1989) Ріапі Сеї! Рпузіо! 30 (6): 833 - 839.
Оавеї, 9. Т., Маду, Р., апа Спиа, М. Н. (1985). Ідепійсайоп ої ОМА зедиєпсез гедцігей ог асіїмну ої Те сашйомег тозаїс міги5 355 рготоїег. Маїиге 313, 810 - 812.
Ока, Тпотавз МУ., ЕІдіпе Стгеєпрего, Юамій М. Кипп, апа даск Ргеїів5. (1979) Ріапі Рпузіо!. 64 : 187 - 192.
Ока, Тпотаз МУ., Наутопа Г.. Водіідиєг, апа даск Ргеїівв. (1981) 9. Віо!. Спет. 256 (13) : 6944 - 6952.
Ока, Т. МУ., Р. А. МакКаїйа, 9. М. Апаегзоп, У. БомокКіпов, М. Могеї|, апа у. Ргеївв. (1990) 93 : 785 - 790.
Оїїме, Маїк В., В. донп ЕП, апа УУоїдапд 5списн МУ. (1989) Ріапі Мої. Віої. 12 : 525 - 538.
Реаг, дише В., Меаї! Нідде, ВІК Назтиззеп, Нопаїа Е. Розе, апа Саїпеїгпе М. Ноисп. (1989) Ріапі Мої. Віо|. 13: 639 - 651.
Редегзеп, Кап, Чуойп Оемегеих, Оероган В. УМівоп, Едмага ЗнНеїІдоп, апа Вгап А. І агкіпв. (1982) СеїЇ 29: 1015 - 1026.
Рікаага, Стаїд 5., Уопп 5. Вгивса, Юаміа 9. Наппареї, апа Уміїат 0. Рак. (1987) Мисієїс Асіа5 Нев. 15 (5): 1979 - 1994.
Ріахюп, М/Шат С., апа даск Ргеєївв5. (1987) Ріапі Рімзіо!. 83 : 105 - 112.
Ргеїзв, Часк. (1973) Адеповіпе бірпозрпогу! Сіисозе, Рмгорпогрпогуїазе. Іп Суоцир Тгапвіег. Едіеа Бу Р. 0.
Воуег. 73 - 119. Мем Хоїк: Асадетіс Ргезв.
Ргеївзв5, 9. (1984) Васіепла! діусодеп зупіпевіз апа їїз гедшайкноп. Аппи. Нем. Місгобіо!. 38 : 419 - 458.
Ргеїзв, УЧаск. (1988) Віозупіпевзіз ої Єгагоп апа 5 Ведшіайоп. Іп Тне Віоспетівзігу ої Ріапів. Еаїеа бу 9.
Ргеївв. 184 - 249. Опапао, РІ: Асадетіс Ргезв.
Ргеївзв, Часк, І ашга ЗНеп, ЕІдіпе Сгеепрего, апа Моптап Сепіпег. (1966) Віоспет. 5 (6) : 1833 - 1845.
Ргеївв, у., А. Забгаму, апа Е, Сстгеерегоа. (1971) Віоспет. Віорпувз. Не5. Соттип. 42 : 180 - 186.
Весопао, Едпиагао, апа ців Р. І єіоїг. (1961) Віосі. Віорпма. Нез. Соттип. 6 (2) : 85 - 88.
Воспа-5оза, Мага, Шмие Зоппемаїд, УМоїї Еготтег, Магіпа Зігайтапп, дей зепнеїЇ, апа Гоїтаг УМіІтіїгег. (1989) ЕМВО .. 8 (1) 23 - 29.
Водегз, 5. С., Н. у. КіІее, А.В. Ногзгси, апа В. Т. ЕгаІєу. (1987) Ітргомедй Месюгз ог Ріапі Тгтапеогтайоп:
Ехргезвіоп Саззеце Месіоїз апа пем/ ЗеІесіабіє Маїгкегв. Іп Меїнод» іп Епгутоіоду. Еаїеа Бу ВА. УУм апа Ії.
Сігоз5тап. 253 -277. Зап Оіедо: Асадетіс Ргевв.
Водегз, 5., єї а). (1987) Іп 153 МеїШод35 іп Еп2итоіоду. Еадіїейа Бу Н. М/еіззрасії апа А. М/візврасі. 253:
Асадетіс Ргезв.
Водегз, 5., апа Кіее, Н. (1987). Раїпулауз тю депеїїс тапіршіайоп етрісуїпд Адгобасіепит. Ріапі Сепе
Везеагсіи, Ріапі ОМА Іпгесійсиз Адепів, Мо! ІМ. Нопп, Т. апа у. ЗепеїІ, дв. Зргіпдег-Мепад, Міеппа, 179 - 203.
ВКотео, Т. апа Ргеївв, у. (1939) Адмапсез іп Місгобріа! Рпузіоіоду, Мої. З0, р. 210.
Возанпі, Забіпе, Непайе 5сптіаї, Уей Зспеї!, апа Гоїтаг УМіІтіїгег. (1986) Мої. Сеп. Сепеї. 203: 214 - 220. зЗатас, 0. А., С. М. Нігопака, Р.Е. МаїІау апа 0. м. 5нан (1990) Ріапі Рнузіо!. 93 : 907 - 914.
Запіапив, К. А. апа ). Небрег (1965) Віоспіт. Віорпув. Асіа 102 : 39 - 54.
Зептіанаизег, Т. у. апа 0. В. Неїїп5кКі. (1985) 9. Васісгіої. 164 - 155.
ЗСОЇ, М. 5., М. У. Туттв апа у). М. Роззіпанат (1984) Ріапіа 161: 12 - 19.
Зепзеїг, М., Р. Зспоїх апа Е. Веск. (1975) Ріапіа 126:1 -10.
Зпеегтап, 5., апа М.МУ. Вемап. (1988) Ріапі Сеї! Верогів 7:13 - 16.
Зпітатоїй, К. евї а. (1989) Майте 338 : 274 - 276.
ЗоЇіапоцраї, М. апа сх. ВеїЇага (1987) МоїІесшаг сіопіпд апа зедиепсіпд ої зисгозе зупіпазе СОМА їот роїаю (оїапит шрегозит 1..): ргеїїтіпагу спагасіегігайоп ої зисгозе зупіпазе тАМА аївігршіоп. Сепе 60: 47 - 56.
БоІапоцибраї, М. апа с. ВеїПага (1989) Тпе зіегвау зіайе Іемеї! ої роїаю зисгозе зупіпазе тАМА із аерепаєпі оп моипаїпо, апаєгобіовіз апа зисгозе сопсепігайоп. Сепе 84: 181 - 185.
Зоппемаїд, Шме, Оапієї Бішаег, Майо НКосна-5оза, апа І оїпаг УМіІтіїгег. (1989) Ріапіа 178 : 76 - 83.
Зомокіпов, дозері В., апа даск Ргеєїзв. (1982) Ріапі РНмзіо!. 69 : 1459 - 1466.
ЗіаїКкег, О. М., Тпотазв, С. М., апа Неїїп:кі, О.В. (1981). МисіІеоїйде зедиепсе ої пе гедіоп ої Ше огідіп ої геріїсайоп ої пе ргоай пові гапде ріазтій АК2. Мої Сеп Сіепеї 181, 8 - 12.
Тієгпеу, Магу Г.., ЕІгабреїй Вгау А., Напау 0. Аїеп, Ми Ма, Нодег Р. Огопо, Уегу Біїднют, апа ВРодег М.
Веасну. (1987) Ріапіа 172 : 356 - 363.
Тітко, М. Р., Г. Негаїєх, Е. ЮОеАїІтеїда, А. А. Савзптогеє, у). І еетап5 апа Е. Ктеррегв. (1988) Сіепеїс
Епдіпеегпуд ої Мисієаг Епсодей Сотропепів ої Ше РПпоїозупіпеїйс Аррагайше, іп Агарідорвів. Іп Ітрасі ої
Спетівігу оп Віоїесппоіоду-А Миїкаївсіріїпагми Оізсиззіоп. Едіеа ру М. Рийірз, 5. Зпоетакег, А. М. Обепрпїе,
В.О. міадіекації. 279 - 295. Мавпіпдюп ОС: АС5 Воокзв.
Тітко, М. Р., Каизси, А. Р., Савігезапа, С., Еаввієг, у., Нетега-Езігеїа, Ї., Мап деп Вгоеск, СО., Мап
Мопіади, М., 5епеї|, уУ., апа Сазптоге, А. В. (1985) Гідні гедшайоп ої ріапі депе ехргезвіоп Бу ап ирзігеат еппапсе!-ІїКе еіетепі. Машге (Гопадоп) 318 : 579 - 582.
Тваї, С. У. апа 0. Е. Меїзоп. (1966) бсієпсе 151 : 341 - 343.
Мавії, М., РЕ. Ведмжау апа І. Мазії. (1990) Віо/Тесппоіоду 8 : 429 - 434.
Моп Зспее!е, С. (1937) Оіе Везіїттипад дез Зіаїконеїїв5 ипа дег ТтосКепзирзіапа дег Капокйе! тії нібе дез
Зресіїзспеп дем/іспіє. І апаж/ Мег Біп 127: 67 - 96.
М/опо, Е.У., Зееіпагат, В., Коїйв, С. Е., Неегеп, В. А., Кієїп, В. К., Вгагога, 5. В., Маїйів, К. ., Візпор, В.
Е., Зієдеї, М. А., тій, С. Е. апа Тасоп, МУ. С. (1988) Сепе 68: 193 - 203.
Список последовательностей (І) Общие сведения 1. Заявитель: Кізпоге, дапезп М. 2. Название изобретения: Повьішенное содержание крахмала в растениях 3. Количество последовательностей: 23 4. Адрес для переписки (А) округ: Монсанто (Б) улица: 700 Спевіепівій Міаде Рагкмуеу (В) город: Сент-Луис (Г) штат: Миссури (Д) страна: США (Е) код: 63198 5. Доступная для компьютера форма (А) тип носителя: мягкий диск (Б) компьютер: совместимьй с ІВМ РС (В) операторная система: РО-ЮО5/М5-0О5 (ГІ) программа: публикуемьй патент 21,0, вариант 51,25 6. Сведения о заявке (А) номер заявки: (Б) дата представления: (В) классификация: 8. Даннье о посреднике/доверенном лице (А) имя: МеВігіде, Тпотав Р. (Б) регистрационньй Ме: 32706 (В) номер для справок/по реестру: 38 - 21 (10530А 9. Номера для телесвязи (А) телефон: (314) 537-7357 (Б) факс: (314) 537 - 6047 (2) Сведения о последовательности 5ЕО ІЮ М 0:11 1. Характеристика последовательности (А) длина: 1296 пар оснований (Б) тип: нуклеиновая кислота (В) количество нитей: две (Г) топология: линейная 2. Молекулярньй тип: ДНК (геномная) 9. (А) найменование/код: СД5О (Б) локализация: 1...1293 2. состав последовательности 5ЕО ІЮ М 0:11 далее следуют 15 стр. для ксерокопирования, на которьїх дан перевод сопутствующих текстов (подписей) й
АТО ОТтТ АСТ ТТА ба ААб ДА САТ САС ТТА АТО тт сб соб бло сто 15
Мет Маї Бест Івиш 010 Гуз дзп взр Нія Те Меб це А)а Аг бій 18) 1 5 12 15
СсСА ТО ААА ТСТ ОТ ОСС СТО АТА СТО Осо ссА ОбА СОТ бот АС Ссос З6
Рго їеч пуз бЗег чаї Аіа їв І16 їсєу А1з біу біу Ахг9 біу ТЬт Агд
СТО ААб САТ ТТА АСС ААТ ААб СА ОСА ААА ССО ОСС Ота САС тт с 144 це цуз Азр цей Тлх Азп о буз Ах Аіа йуз Рго Аза Ма! Ніз Рне б1іу
ОСТ ААС ТТ СОС АТТ АТС АС ТЇТТ бСо СТО ТСТ ААС ТО АТС ААС ТСС 1932 біу цуз Рпе Ахт9 116 І1е Азр Ре діа Іеч бек Азп Суз І18а Азп 5ег бо бо АТС СОТ СбТ АТО СОС ОТО АТС АСС САЛО ТАС САС ТОС САС АСТ сто 240 біу ч11е Ах Аку Мет біу Маї І1е Тпх біп Тут біп бег Ніз Тпх їеч 65 70 15 80 сто СА САС АТТ САб СОС бос 790 ТА ТС ТС АХА АХА САА АТО лАС 288 чаї біп Ніз Іїе біп Асг9д біу Тгр бек Рпе Ре Азп 019 біц Мек Азп 85 50 95 сАб ТТТ б7С бАТ СТО СТО ССА ОСА СА САб КАСА АТО АЛЛА 000 бАА АС 336 01з Рве Маї Азр іїви їви Рго Аіа біп біп Ахг9 Месє Пуз біу біч Аза 100 105 110
ТО ТАТ СОС Ос АСС ОСА бАТ ОС ІС АСС САА КАС СТО ОАС АТТ АТС 384
ТІр Тук Агу біу ТІ А1їа Азр Аія Маї Тс біл Азл їеч Азр 118 Ії і15 120. ії25
СОТ СОТ ТАТ ААА ССО САА ТАС ОТО ОТО АТС СТО ОС БОС БАС САТ АТС 432
Аг АкЧ Тухк Зуз А1а біз Туг Маї УМаї І1е Ппеп Аза біу Азр Кіз Іїв 130 135 140
ТАС АЛ САА ЗАС ТАС ТОб СОТ АТО СТТ АТС бАТ САС ОТ АХА ААА СОТ 480
Тук цуз біп Авр Тут беї: Ах9 Ме І»и І16 Азр Ніз Маї бі цуз біу 145 159 155 160
СТА СОТ ТОТ АСС ОТІ СТ? тот АТО ССА СТА ССО АТТ БАА бал оС тСс 528
Уаї Акд Суз Твжх МУМаї Уа) Суз Ме Рго Маї Рхо І1е6 Січ бі Аїа 5ег 165 170 175 бСА ТТТ бос ст АТО 0СО ОТТ САТ САС ЛАС САТ ААА АСТ АТС БАХА ТтС 576
А1а Рпе біу Маї Мас діа Уаї Азр біз Азп Азр уз Тік І12 бі Рпа 180 185 190
СТО САА АЛА ССТ ОСТ ААС ССО СС СА АТО СС ААС бАТ ССО АбО ААА 624
Уаї біз цуз Рко Аіа Азп Рго ?го 5еї Меї Рго Азп Азр Рго Зег Буз 195 Я 299 205
ТСТ СТО СО АбТ АТО СОТ АТС ТАС СТС ТТ САС ОСС САС ТАТ СТО ТАТ 672
Бех їеч А1а бег Мек біу Ії Тут Уа1ї Ре ХАзр Аза Азр Тут Іївци Тут 210 215 229
САД СТО СТО САА бАА САС АТ СОС САТ САС ААС ТСС АБС САС САС ТТТ 720 біч це ам 015 бі Азр Азр Агуд Азр бів Аал бег бек Ніз Азр Ре 225 230 215 240
СОС ААА САТ ТТО АТТ ССС ААб АТО АСС бАА ОСС бот сто ОСС ТАТ осо 768
С1у цуз Азр їви 116 Ркго уз Ії Тік біч лів 01у їв Ліа Тує ХАіїа 245 250 255
САС ССО тт ССО Сто ТсСтТ ТОсС СТА САА ТОС ОАС СС САТ ОСС бАб сс 816
Ніз Рго РБе Ртго Іа бек Суз Маії біп бетг Азр Рго Азр А1а б19 Рго 250 255 270 :
ТАС ТО СОС бАТ ОТО ОТ АСо СТО бАА ОСТ ТАС ТО АЛЛА Осо КАС СТ 864
Тук Тер Ак Авр Уаї біу ТпЕ цем біч лів Тут ТІр Цуз Аїа Азп Твц 215 280 285 бАтТ сто ОСС тост сто ото ССб ААА СТО САТ АТО ТАС САТ СОС ЛАТ 705 912
Азр цеч А1їа бег Маї Маї Рго цЦуз Геч Азр Меє Тут Азр Аг Азп ТІр 299 235 300
ССА АТТ СОС АСС ТАС ААТ САА ТСА ТТА ССО ССА Со АЛА То ото СА 960
Рго І18е Агу ТБЕ Тух Азп біц бек цем Рго Рго А1з Муз Ре Маї біп 305 310 315 329 бат соСс тост АС САС ббо АТО АСС СТТ ААСОТСА Сто ст тоб 1008
Азр Ат Зег біу бег Ніз біу Мес Тпг Пец Аза беї Гец Маї бег сіу 325 339 335 бот тот Ото АТС тосС бот 7со ото сто ото САб ТоС оТтІ Сто тІС тоб 1056 б1іу Суз Маї І1ї6 Зек біу Зет Маї Уаї Маї біб б5еї Маї ї0ч Ра бе: 340 345 350
СОС отТтТ СОС Ото ААТ ТСА ТС ТОС ААС АТ АТ тес ОСС ОТА ТТо ТТА 1104
Аг Уаї Аку Маї Азп Зак Рпа Суз Азп Ії Азр 5еї А1іа Маї їз їеч 355 360 365
ССО сСАА СТА тоб СТА бот сос тс тосС сот сто сСос Сас то сто АТ 1152
РІО бі УМа1ї Тгр Уа! біу Аг бек Суз Аг їач Агу Агу Суз Уаї ІЇ118 370 375 380
САТ СОТ ОСТ тот ОТТ АТІ ССО бАА СОС АТО ОТО АТТ ОТ САА АС ОСА 1200
Азр Ах А1а Суз Уа1ї 116 Рхто бі сіу Мес Уаї Ії с1у б1у Азп ліва 385 390 395 490
САС САА САТ ОСА СОТ СбТ ТТС ТАТ СОТ ТСА бАА бАА СОС АТС сто сто 1248 біч бій Азр Аза Аг Агу РФ Тук Аг бек біз бі біу І116 Уаї Ів 405 410 415
СТА АСО СОС САА АТО СТА СО АЛЛО ТТА бо САТ АЛА САС бАб СбА 1293
Уаії ТпІ Акд бі Мек Те Акгу Гуз еп біу Ніз цуз біп бі Аг9 420 425 130
ТАХ 1296 (2) Сведения о последовательности.. характеристика последовательности длина: 431 аминокислота тип: аминокислотная последовательность топология: линейная молекулярньй тип: белок состав последовательности...
Меї Чаї бет Пе» 015 Цуз Азп Азр НіЗз Пес Меї Тем Аіз Агу біл Твеч 1 5 10 15
РІО Газ Буз беї Ма1ї А1їа ї6и І16є Тез Аза біу біу Аху біу Так Ахд 20 25 30 їемз цуз Азр Те ТВг Азп о Буз Агу А1а Цуз Ріо Аїяа Маї Ніз РБе біу біу цуз Ре Ахуд Ії1а 116 Азр Ре Аїа Пец бег Азп Суз І1е Азп 5ег 80 бін біч Азр Аза Аку Аг Ре Тут Аг бек бі» 513 біу І16 Уа) їв 405 410 415
Уаї ТІ Агу січ Меб 1ац Агу уз без біу Ніа цуз біп біз Аг9 420 1425 430 (2) Сведения о последовательности..
Характеристика последовательности длина: 1296 пар оснований тип: нуклеиновая кислота количество нитей: две топология: линейная молекулярньй тип: ДГК (геномная) признаки: найменование/код локализация: 1...1293 состав последовательности...
АТО СТТ АСТ ТТА ОАб ААС ААС бАТ САС ТТА АТО тт осо СОС сАб сто 418
Мек Уаії 5ег Печ біз Пцуз Азп Азр Ніз їз Меб Тез А1а Аху Сіл 12 1 5 10 15
ССА ТТО ААА ТСТ СТІ ОСС СТО АТА СТО ССО ОА ОбА сот от СС са 56
Рхо цечз цуз бЗет Узі Аі1а цечз Ії6є цем Аїа біу біу Агу біу ТІ Аху 29 25 30
СТО ААО САТ ТТА АС ААТ ААС СО ОСА ААА ССО ОСС СТА САС ІТС СОС 144
Ів цуз Азр Тез ТІ Азп уз АкдФ А1а пуз Рго Аза Уаї Ніз Ра с1у
ОСТ ААб ТТ СОС АТТ АТС БАС ІТТ осо СТО ТСТ ААС ТО АТС ААС тес 1932 біу йуз Ре Акуд І16 І1ї16 Азр РБе Аїа ї12у бек Азп Суз І18 Азп 5ех 60 бо АТО СОТ СОТ АТО бос ОТ АТС АСС САб ТАС СА ТС САС АСТ сто 240 біу ч11е Ак Ак Мес біу Уаї Ії Тнх біпй Тук біп бег Ніз Тлх їз 65 76 175 80 бТО СА САС АТТ САС СОС бос ТО ТСА ТТ ТС ААТ САА САА АТО АС 288
Маї зіп Ніз Ії біл Ак біу Тер бег Ре Ре Азп бів бі Мес лап 85 50 55
САС ТТ СТО бАТ СТО СТО ССА ОСА САС САС АСА АТО АЛА ббО бАА АС 336 б19 рРнзе Маї Азр їеч їв Рго Аза біп біб Аг Мес цуз біу біч дзп 160 105 110
ТО ТАТ СОС БОС АСС ОСА САТ Осо СТО АСС САА АС Сто САС АТТ АТС 384
Тер Туї Аг біу ТБтх Аза Азр Аіа Уаї Тйх біл Азп їзс Азр І16 І1ї6 115 120 125
ССТ СОТ ТАТ АЛА ССб бАА ТАС СТО ото АТС Сто Осо СОС САС САТ АТС 432
Агу Агу Тук Пцуз Аїа біб Туг Уаії Маї І1їее їв Аза біу Азр Ніз ІЗ! 130 135 140
ТАС КАС САА САС ТАС ТСО СТ АТО СТТ АТС САТ САС ОТО бАА АЛА СОТ 480
Тут цуз біп Азр Тут бек Аг Мес їец Ії Азр Ніз Уаї біч уз сі1у 145 159 155 160
СТА СОТ тот МО ОТ? СТТ ТОТ АТО ССА СТА ССО АТТ САЛА СА осс тес 528 чаї Аг Суз ТЕ Уаї Уаії Суз Меб Рко Уаї Рго 116 біч б1іч Аза 5Зег 155 1709 15
ОСА ТТТ бос СТ АТО СО бТТ САТ САС ААС САТ АЛЛА АСТ АТС САА ТТ 576 діа Рпе біу Уаї Меї А1іа Маї лар біч Азл Азр уз Так ЇІ16 біш Ре 1890 185 190 бТО САА ААА ССТ ОСТ ААС ССО ССО ТСА АТО ССО ААС ООАТ ССО АОС КАХ 524
Чаї біч цЦуз Ріо Аі1а Азп Рго Рго бек Меб Рхо Азп Азр Ркго бесг Цуз 195 209 205
ТСТ Сто ОСО АТ АТО ОСТ АТС ТАС ОТО ТТТ АС ОСС бАС ТАТ СТО ТАТ 572 5Беї Пем А1їа бех Мес біу Іїе Тух Чаї Ре Азр А1а Азр Тух Пе Туг 210 215 229 бАА СТО СТО БАХА бАА САС САТ СОС САТ ОА ААС ТОС АОС САС БАС ТТ 720 бі» Тез Ів біз 613 Азр Азр Аг Азр біз Азп Зег бЗех Ніз Азр Ре 225 230 235 249
СОС ААА САТ ОТТО АТТ СОС ААб АТС АСС САА бСС ОТ СТО ОСС ТАТ сб 768 біу цуз Азр Іви І)ї Рго Цуз І1є Тпг бі Аза біу їви А1їа Тут ліа 245 250 255
САС о ссо ТС ССО СТ тТСТ ТОсС ОтТА САА То бАС СС АТ ОСС баб ссо 816
Ніз Рго Ре Рго Ге Бех Суз Маі1 біп б5ег Азр Рго Азр Аїа біч Рго 260 265 279
ТАС тоб СОС ОА ото ОТ АСО СТО бАА ОСТ ТАС ТО ААА осо АС СТ 864
Тук ТІр АкФ Азр Маї Сб1іу Тс ї2гу біу Аза Тук Тгр Гуз А1а Азп 18) 275 280 285
САТ СТО ОСС ТСТ ото бтО ССО СА СТО бАТ АТО ТАС АТ СОС АлАТ То 312
Азр Геч А1а бек Уа! Маї Рго б1іч Пец Азр Меб Тут Азр Аху Азп Тгр 290 295 300
ССА АТТ СОС АОС ТАС ААТ САА ТСА ТТА ССО ССА СО ААА ТС ТО САб 960
РІо І1е Аг9 ТВі Тут Азп січ 5еї Івги Ріо Рто Аіїій уз Ре Уаї біп 305 310 315 329
САТ СОС ТС ОО ЛО САС ОО АТО АСС СТІ ААС ТСА СТО ОТТ ТоС бАСс 1008
Азр Аг бЗет 01у беї Кіз біу Ме ТЬІ їеч Азп баг Пе маї Зах Аз» 325 330 335 бот 97 79 А ТоС бот тТСо ото сто ото САб ТоС бтт сто ттс тоб 1056 біу Суз Уаї І1є 5ег біу бек Чаї Чаї чаї б)іп 5Зек Маї Їх Ре Зег 340 345 350
СОС ОоТтТ СОС То ААТ ТСА ТТС ТОС ААС АТТ САТ ТСС ОСС СТА ТО ТТА 1104
Аг Маї Ак Уаї Азп бек Ріє Суз Азп 118 Азр Зег Аі1іа Маї їви Тез 355 360 365
ССО БАА ОТА тб ста бот сос то тос сот сто СОС СОС ТОс оТо АТС 1152
Рго бі Маї Тгр Уаії б1у Агу бег Суз Ак їеш Акг9 Аху Суз чаї І16в 370 375 389
САТ СОТ ОСТ ТОЇ бІТ АТТ ССО ОАА БОС АТО СТО АТТ ОСТ САА ААС ОСА 1200
Азр Ах А1їа Суз Уаі Іі Рго біс біу Мет Узі 116 бі1у біч Аз Аза заз 390 3935 400
САб БАА САТ ОСА СсСТ СОТ ТТС ТАТ СОТ ТСА САА бАА бос АТС бто сто 1248 біш біз Азр Аза Агу Аг Рпе Тут Аху бег біч б1з біу 1146 Маії Те 405 410 415 бтТА АСО СОС ОАА АТО СТА СОб ЛА ТА боб САТ ААА САб бАб СбА 1293
Уаї Тк Аг бій Мес Іву АгФф Цуз Пез біу Ніз цув біп б1іц Агу 420 425 430
ТА 1296
Сведения о последовательности..
Характеристика последовательности длина: 431 аминокислота тип: аминокислотная последовательность топология: линейная молекулярньй тип: белок состав последовательности...
Меї Маї бек цем піз уз Азп Азр Ніз цез Меб це А1іа лгд біп Тео 1 5 10 15
Рхо цем Гуз бек Уаї Аїа Тез І16 Це Аза біу біу Аху б1іу Твх Агд ем цуз Азр Геч ТВ Азп уз Аг Аза пу Ро А1а Маї Ніз Ре біу біу Туз Ре Ат 118 116 Азр РпФе Аїа Іво бек Азп Суз 116 Аза 5ег 9 53 63 сб1у І11е ХА: Ак мес біу Уаї Ії Трх біп Тук біп бек Ніз Тпг їв 65 760 75 80
Уаї біп Ніз І16 біп Ах біу Тгр Зег Рі Ре Азп біч біц Меї Азп 85 30 53 615 Ре МУаї Азр їм їз Рго А1а біл біп Ахуд Меє цуз біу бі) Азп 100 . 105 110
Тгр Тут Аг біу Таг Алі дар А1а Уаї Тік біп Азп їви лзр 116 Іїв 115 129 125 ккд Аг тує Пуз А1іа бі Тут Маї Уаї І16є Пец Аза біу Азр Ніз 116 130 135 140
Тут цСуз біп Азр Тут Зеї АФ Меї це Ії Азр Ніз Уаї біз уз б1у 145 150 155 160
Уаї Асу Суз Твг Маї чаї Суз Мебс ?то Узі Ріо Іїє Січ біз Аїа 5ехг 165 170 175
А1а Ре біу Маї Мек Аіа Узі Азр бі Аза Азр Цуз ТВг І16 бі) Ре 180 185 1930
Чаї біз цуз Рто Аіа Азп Рго Ртго Зеї Ме Рко Азп Азр Рго бег Туз 1935 200 205 бек це А1їа бек Меї біу Ії Тук Уаії Ре Азр А1іа ХАзр Туг ви Туг 210 215 220 біш Тец цем біс бій Азр Азр АгФ Азр бі Азп о бет бег Ніз Азр Рле 225 230 235 240 біу йуз Азр цез І1є Рко уз І16 ТП біш Аїіа біу цед А1а Тує Лія
245 250 255
Ніз Рго Рпе Ркго Ти 5еї Суз мМмаі б1п бег Азр Рго Азр Аїа бі рРго 250 265 210
Туг Тгр Аху Азр Маї біу ТБкЕ Пе біз Аїа Туг Ткр цуз А1їа Азп їеч 275 280 285
Хзр Пец А1їа бег Маії Чаї Рко бі Гцеч Азр Ме Туг Азр Акуд Аза ТІр 2за 295 300
Тбго І16 Ак ТПг Тук Азл біз бег Гей Рко Рго А1а цуз Рпе Уаії сіп 305 310 315 320
Азр Агуд Бех б1у Зег Ніз біу Меї ТІ Тез Азп бег Печ Уаї бег Азр 325 330 335 б1іу Суз Маї І1їє Зекх б1іу баг Маї Маї Уаї біл беїг Уаї Гей Ріе бех 340 345 350
Ах Маїії Агу Маі Азп Зак Рі Суз Азп Ії Азр бег Аізіа Маї Тем ги 335 360 365
РЕо біз Уаї Тер Маї біу Ак бег Суз Аг їз Аг Агу Суз Уаї 116 370 375 380
Азр АгЯ А1а Суз Ма1і 116 Рго бі біу Мек МУаії 116 б5іу біц Азп Аіа 385 399 395 400 біз бі Азр А1а Ах Агу Рпе Тух Аку беї біш бі біу 116 Уаії Гви 105 410 4115
Уаї ТІ Агу біз Мес це Агу уз вза біу Ніз уз біп біцш Ахд 120 425 . 430
Сведения о последовательности...
Характеристика последовательности длина: 355 пар оснований тип: нуклеиновая кислота число нитей: две топология: линейная молекулярньй тип: ДНК (геномная) признаки наийменование/код: локализация: 88 - 354
ААбСТТОТТС ТСАТТОІТОТ ТАТСАТТАТА ТАТАСАТОАС САЛАОСАСТА САССАЛАССТ 50
САСТСАСАСА ААСАСТАААС ААСААСА АТО ОСТ ТоС ТСТ АТО СТО тТстТ тос 111
Мес А1а б5еї бек Меб Іва 5Зетг 5ехг 1 З
ОСТ АСТ АТО бтТтТ ОСС Ст сССб ОСТ САб ОСС АСТ АТО ото ост сст то 159
А1іа Тит Меб Маї Аїа бе: Рто Аїа біп діа Тлю Месє Маї Аза Рго Ра
КАС ОСОА СТТ АЛ То ТоС ОСТ ОСС ТТ ССА ОСС АСС СОС ЛАВ ОСТ АС 20 кзп біу Геч ПЦуз Зег бег А1а Аіїв Ра Рко діа Тіг Агу Буз Аїа Ап
МАС САС АТТ АСТ ТСС АТС АС АОС ААС БОС ОСА АбА СТТ ААС ТОС АТО 255
Азп Азр І1їе ТІ бег І)е ТЬг 5ег Азп біу біу Ату Уа1ї Азп Суз Мех
САб сто тоб ССТ ССО АТТ ССА ААб ААб АЛ ТТТ САС АСТ СТО тТСтТ ТАС 303 біп Маї Тер Рго Рко І16є Сбіу уз уз Цуз Ре біз ТІ Ге 5ег Тут 60 55 70
СТТ ССТ бАС СТТ АС ОАТ ТОС бот обтТ СОС СТ ААС ТОС АТО сСАб сс 351
Гей Ргто Азр цем Тпг Азр Зек біу біу АкФф Уа) Азп Суз Мек бій ліз 75 во 85
АТО б 355 мес
Сведения о последовательности..
Характеристика последовательности длина: 89 аминокислот тип: аминокислотная последовательность топология: линейная молекулярньй тип: белок
Состав последовательности...
Мес Аі1іа Бег бе Меб їец бег беї Аіїа ТвВІ МНеб Маї діа 5ех Ркго діа 1 5 10 15 біп А1їа ТВі Меб Маї А1а Рго Ре Азп біу їац пуз бег Зетх Аїа діа 39
Рпе Рго Аіа Тих Ат уз А1а Азп Азп Азр 116 ТБх бек І18 Тс 5ег 4145
Азп біу б1у Агд Уаї Азп Суз Мебс біп Уві Тер Рко Рко І116е б1у уз 6о цуз руз Рпе біз Трх Печ бек Тут Те Рго Азр Теч Так Азр Зек біу 65 70 75 80 біу Ас Чаї Аза суз Мес б1п А1а Мех
Сведения о последовательности...
Характеристика последовательности длина: 1575 пар оснований тип: нуклеиновая кислота число нитей: две топология: линейная молекулярная форма: КДНК признаки: наийменование/код: локализация:
Состав последовательности...
СС АТ осо ОСТ ТоС АТІ ОА ОСС ТТА ААА ТСТ ТСА ССТ ТСТ СТ Ас 47
Мес А1іа Аїа бех І1а 015 А1їа Іїви уз Зет 5еї Рхо бек бек Азп 1 5 16 15
ЛАТ ТОС АТС ААТ САС АСА АСА МАТ САТ ТСТ АСА СОТ ОСТ ОТА ТС АОС 95
Азп Суз І18 Азп біз Ак згу Азп о Азр о бег Тлх Аг Аза Маї бек 5ег
АСА ДАТ СТО ТСА ТІТ ТСб ТСТ ТСТ САТ СТ ОС СОА САС ААо ТО АТО 143
АгЯ Азп Пен бЗеї Ріе бехї Заг бЗеї Ніяз Тїецй А1а Сіу Азр Муз їз Меб
ССтТ СТА тоб ТоС ТТА СОТ ТС САА ОСА ОТС СА ТС ААТ ОТО АбА АбА 191
Рго Чаї бек БбБег Гео Ахту бесг сіп біу Ма1ї Аг9 Ре Азп Уаї Аку АхгуУ 60
АСТ ССА АТО АТТ СТО Т2о ССА Ал ОСТ ОТТ ТСТ АТ ТСО СА ААТ ТСА 239
Беїг Рго Меї І1е Уаї Тег Рго Цуз Аіїіза Маї 5ег Азр бег біп Азп бег 65 79 15
САС АСА ТОТ СТА БАС ССА бАТ ОСТ АОС Сб АТ СТІ ТО ОБА АТТ АТТ 287 бій тТлЕ Суз Ів Мар Ртго Азр А)їа Зег Аг бак Маї Тез біу 118 118 80 85 90 95
СТТ ООА СОТ ОСА ОСТ ОО АСС СА СТІ ТАТ ССТ СТА АСТ АЛА АЛЛА АСА 335 іо біу біу біу А1з біу Тпг Агу їец Тук Рко їв Тлх Цуз цуз Аг9 109 105 110
ССА АЛЛО ССА ОСТ ст ССА СТТ ОБА ОСА ААТ ТАТ СОТ СТО АТТ БАС АТТ 383
А1їа пПуз Рго Аіа Уа1ї РІо їез біу А1а Азп Тух Аху їаз Т1в Азр І16 115 120 125
ССТ ОТА АОС ААС ТОС То ААС АСТ ААТ АТА ТСС АЛ АТТ ТАТ СТІ Сто 431
Рко Маї б5ех Азп Суз їеч Азп бек Азп Ії бег Гуз т116 Тус Узі ївхч 130 135 140
АСА САА ТО ААПОТСТ ОСС СТ СТО ААТ СОС САС СТІ ТСА СбА ОСА ТАТ 479
ТаЕ б1п Ре Аза б5ек Аїа Зак їв Азп Ак Ніз Тез бек Агху Аза Туг 145 150 155
ОСТ ЛОС ААС АТО ОСА ОСА ТАС АЛЛА ААС САС СОС ТТ 070 САЛА СТІ СІ 521
Кіа бег Азл Кес бі1у біу Тут Пуз Азп б1ш біу РМйе Маї біу Маі їви 160 165 170 175
ОСТ ОСТ САА САА АБТ ССА САС ЛАС ССС о бАТ тоб ТтТс о саб бос Со ост 515
Азїа Аіа Сіп 5іп 5ех Рго бі Азл Рео Азр Тгр Ріє біп біу ТВхг Аіа 180 185 130 бАТ ОСТ ТС АбА САА ТАТ СТО ТОО ТТО ТТТ СА САС САТ АСТ ОоТтТ СттТ 623
Азр А1а Уаї Акуд біл Тук їв Тер їси Рпе бі біз ніз ТпхІ Уаї це 195 200 205
САА ТАС СТТ АТА СТТ ОСТ ОСА САТ САТ СТО ТАТ СА АТО САТ ТАТ АХ 671 біз Тут цец І1їв їеч Аза Сіу Азр Ніз їец Туг АгФ Меї Азр Тук бі 210 215 220
КАС ТТТ АТТ САА ОСС САС АСА САА АСА САТ ОСІ САТ АТТ АСС ОТ ос 719 цПуз рве І1а біп ліа Ніз Агд б1іо ТЬг Азр ліа Азр І16 ТВпх Уаї А1а 225 230 235
ССА СТО ССА АТО САС САС АЛ СОТ ССС АСТ бСА ТТ от Сто АТО Ада 167
Аза пвезч Рхо Ме Азр біч Пуз Ах Ліва ТВг Лів Ре б1у Пас Маї уз 240 2415 259 255
АТТ САС САА ОСАА ОСА СОС АТТ АТТ САА ТІТ ОСА СА АЛЛА ССО САА ОА 815
Іїв Азр 010 бі б1у Аху І1в І16 бій Ре Ліва біз пуз Рго біп 01у 260 265 270
САС СУА ТТО САА ОСА АТО ААА СТО САТ АСТ АСС АТТ ТТА СОТ СТТ САТ 863 бі Сбіп о Пцеч біп дія Меб Пуз Маї Азр Тлг ТЕ Т116 їв біу їв Азр 215 280 285
САС А З АБА ОСТ ААА бАА АТО ССТ ОТТО АТТ ОСС АСТ АТО ОСТ АТА ТАТ 9311 зр ї.з зАгу Аза цуз бі Ме Рко Рпе Ії А1із бек Мес біу 11е Туг -50 295 300
СТО АТтТ А ААА САС ОМ АТО ТТА ААС СТА СТТ СОТ сАС о ААС ТТ СстТ 959 чаї І1 тет Пцуз Азр Уаї Меї їви Азп ївч їач Агу Азр Буз Рне Рго 30: 3109 315 соб СС ААТ бАТ ТТ ОСТ АбТ САА ОТ АТТ ССТ ОТ ОСА АСТ ТСА СТТ 1007 сіу Аїа Азп Азр Рпе б1у бої біп Ма1і 114 Рко біу Аіїіа Тпх б5ех їви 320 325 3309 335 59 АТС АСА СТО САА ОСТ ТАТ ТТА ТАТ САТ 000 ТАС То САА САТ АТТ 1055 біу Меї Агу Ма1ї біп ліз Тут Її Тук Азр б1у Тух ТІр с1ч Азр І16 340 345 350
ОСТ АСС АТТ ОА ОСТ ТІС ТАС ААТ ОСС ААТ ТТО 002; АТТ АСА ААА АХ 1103 біу Тпг Ії6 біз Аза Ра Ту: Азп Аза Азп а біу І116 ТЬї уз уз 355 369 365
ССО Тс ССА АТ ТТТ АОС ТТТ ТАС САС СбА ТСА ОСС ССА АТС ТАС АСС 1151
Рго Уаї Рко Азр Ре бак Ре Тук Азр Агу Зек А1а Рго І1є Тут ТА: 379 375 зво
САА ССТ СОА ТАТ СТА ССА ССА ТСА АЛА АТО СТТ САТ ОСТ САТ СТ АсСА 1139 біп Рто Ак Тут це Ркео Ртхо бех Цуз Меб Гец Азр Аза Азр Маї ТАх 385 390 395
САТ АСТ ЗТ АТТ ОТ БАЛА ОТ ТТ ОТО АТС ААб ААС ТОТ АЛ АТТ САТ 1247
Азр 5ех МУаї Іі1іе біу біз біу Суз Уа1і І1е цуз Азп Суз Пуз І16 Ніз 400 405 416 415
САТ ТСС ото бТтТ ОбА СТ АбА ТСА тос АТА ТСА бАб ОбА ОСА А?І АТА 1235
Ніз Зет Уа1ї Узаї біу це Агд 5еїх Суз І1а 5ег Січ б1іу Аіа І16 І16 4120 425 430
САА САС ТСА СТТ ОТТО АТО 00 ССА САТ ТАС ТАТ бАб АСТ САТ ОСТ САС 1343 біз Азр бЗет Пец їви Ммеї біу Аіїа Азр Тут Тут біз Тр Азр А1їа Азр 435 440 445
АБО ААб ТТОо СТО ОСТ ОСА ААС ОС АСТ ОТС ССА АТТ СОС АТС ОС АС 1391
Ак уз ца ївен Аза Аза пуз біу бек Маї Рго Ііїіє біу 116 біу уз 450 455 450
ЛАТ ТОТ САС АТТ АХА АбА ОСС АТТ АТС САС АЛ ААТ ОСС СОТ АТА бсо 1439
Азп Суз Ніз І1е Цуз Агу Аіа Ії І16 Азр уз Азп А1з3 Ах Іїва біу 165 470 475
САС ААТ СТО ААС АТС АТТ ААС АКА САС ААС ОТТ САА БАХА Осо ОСТ Або 1487
Азр Азп Маї Цуз Ії І16 Азп ЦцПуз Азр Азп Уаї біп біз Аза діа А:г4 480 485 4930 4195
САА АСА САТ ОСА ТАС ТІС АТС АКА АСТ боб АТТ ОТ АСС ОТО АТС ААб 1535 біч Так Азр б1у Тут Ро І16 цуз Зак біу І16 Маї Тк Хаї 116 цуз 300 505 510
САТ ОСТ ТТО АТТ ССА АТ О0А АТС АТО АТС ТСАТОАОСТе 1575 кзр Аїа їм І16 Ркго Зех біу 116 116 116 315 520
Сведения о последовательности..
Характеристика последовательности длина: 521 аминокислота тип: аминокислотная последовательность топология: линейная молекулярньй тип: белок состав последовательности...
Мет Аїа А1іа баг Ії бі1у А1їа цеч Пуз бек бек Рго бак бек Азп Азп 1 5 16 15
Суз 116 Азп бі Агу Агу Азп о Адзр бех ТІ Аг Аза Ма) бек бет АгдФ , 25 30
Азп оїец беї РПпеа б5еї беїг б5ег Ніз Те А1іа біу Азр цуз Тез Мекї Рко 415
Уа1 бек Зеї Ге Акд Зех біп біу Уаії Агу Ре Азп Уаї Ахд Аку Зег 60
РІо мес І16 Чаї бек Рто уз діа Маї Зевс Азр ЗекЕ сіп Азп б5ег біп 65 79 75 во
ТВхІ Суз Гцез Азр Ріо Азр А1а 56: Аху бЗеї Уа! їез 91у І16 118 їви 85 30 35 біу біу б1у Аза біу ТЕ Агд Твс Тут РтІо їз ТЕ ПЦуз уз Аг9 діа 1909 195 119 цуз Рко Аза Уаї Рхо їец 5Зіу Аїа Азп Тут Аху Га І16 Азр 116 Рго 115 120 125 чаї Зек Азп Суз їем Азп бЗег Азп І1е баг уз 116 Тусг Маї ви Тв: 130 135 140 біп Рпе Азп бек А1а Зек їв Азп Агу Ніз Тез бек Аку А1а Тук Аїа 145 159 155 159
Бек Азп Мей біу біу Тут Буз Азп біш біу Ре Уаії бій Маї їги Хіа 155 170 175
Кіа біп біп Зег Рго біч Азп Рго Азр ТІір Ре біп б5іу Тпг Аза Азр 180 185 1950
Кіа Уаї Аг біп Тут йеу Тер 12 РБе біч біз Ніз Так Уаї ї2г)и січ 1955 200 205
Тут цем І16е ви Аза біу Азр ніз Без Тук Ахуд Меб Азр Тут бі Муз 210 215 2-20
Рпе І1е біп Аза Нніз Аг9 01 Тпх Азр Аіїіа Азр І1є ТПх Уаїії Аїа діа 225 230 235 240 рез Рто Меї Азр б1іч Буз Аг Аїа ТлЛт Аіїа Рпе біу їв Меб Цуз І16 245 250 255
Азр бі біз біу Аг 118 116 Сб19 РНе діа 619 цуз Рго біп Фу біч 2650 265 216 біп те біп А1іа Мехс МПЦуз Маї Азр ТК ТБг Іїв ач біу Те Азр Азр 215 280 285
Буз Ак Аіа Пуз 015 Меб Рго Рпе Ії А1іа Зеї Меб біу І16 Тут Маї 239 235 300 116 бек Пуз Азр Уаії Меї їІвю Азп їв Тез Ату Азр о Суз Ріє Рхо 01у 305 319 315 320
Аза Азп Азр Ре біу бек бі УМаії Ії Рхо б1іу діа тТВпЕ беї їв біу 325 330 335
Меє Агу маі1ї бЗіп діа Туг їв Туї Азр біу Тук Тер 513 Азр Ії біу 340 345 350
ТпЕ Ії біч А1а Рле Тут Азп А1а Азп Пец б1у 116 ТЬБІ Цуз цуз Рего 355 360 365
Ууаї Рго Азр РП. бЗетх Ре Тут Азр Аху бек А1а Рго І1є Туг ТтВг біп 370 375 380
РІО Агу тус Ге Рго Рго б5еї Пцуз Мебс Тез Азр Аз1а Азр Уаії ТлпЕ Азр 385 399 395 400 беї чаї Ії біу біз біу Суз Маї1ї І16 Щуз Азп Суз цуз 116 ніз Ніз 405 410 115 беї Маї Маї сіу цей А:9д Зеї Суз І1е 5екх бі) б1іу Аза І16 І18 бі 420 425 430
Азр б5еї їем Тез Меб біу А1а Азр Тут Тут б1ц ТВпг Азр А1а Азр Ах9 135 449 445 цуз тех їех Аїа Аіа, уз 51іу бЗеї Уаї Рхо І16 біу І16 біу цуз Аза 450 455 460
Суз Ніз Ізїе Пцуз Аку Аі1їа І1а І16 Азр Пцуз Азп А1а Агу І16 біу Азр 465 470 475 480
Азп Уаї цуз І1е Ії Азп цуз Азр Азпл УМаї біл бі Аїа Аіа Аго Зі 485 490 1935
Тпг Азр обіу Тут Рпе І1е Туз беї б1у 116 Маї ТнІ Ма1ї 11а цуз Азр 590 505 510
Азїа цеч І1є Рго бек біу Іїв Іза 112 515 5329
Сведения о последовательности..
Характеристика последовательности длина: 1519 пар оснований тип: нуклеиновая кислота число нитей: две топология: линейная молекулярньй тип: кКДНК признаки наийменование/код: локализация: 1...1410
ААС ААС АТС ААА ССТ боб ТТ ОСТ ТАС ТС? СТО АТС АСТ АСТ САА ХАТ 48
Азп Муз Ії Муз Рго біу Ма1ї А1їз Тух беї Маї 116 ТІ ТІ біо Азп 1 5 10. 15
САС АСА САС АСТ СТО ТІС СТА САТ АТО ССА СОТ СТТ баб АбА СОС со 36
Азр Тпх біп ТЬх Маї Ре Маї Азр Меб Рго Аг9 Тез біз Аг9 Аг9 Аг9
ССА ААТ ССА ДАС САТ ОТО ОСІ ССА Сто АТА СТО ОЗА ОБА БОА бАА ОЗ 144
А1іа Азп РтІо Муз АЛзр Уаї ліва Аій Уаї І16 їв біу біу біу біз 91у 10 15
АСС ААО ТТА ТТС ССА СТТ АСА АТ АСА АСТ ОСА АС ССТ ОСТ бот сс 192
ТЕ цуз цей Рі. Рго Те ТВг беї Агу Тк Аїа ТЬБтг Рго Аїа Уаї РІО 60
СТТ ОСА ОСА ТОС ТА Або СТА АТА САС АТС ССА АТО АОС ААС ТОТ АТС 240
Чаї 5з1у біу Суз Тук Акуд їем 1194 Азр І116 Рхо Ме; бек Азп Суз Ії 65 70 15 во
ААС АСТ ОСТ АТТ ААС АЛ АТТ ТІТ ото СТО АСА САС ТАС ААТ ОТСТ ОСТ 288
Азп Зет А1а 116 Азп уз І1е Ре Уаї Тез ТІ біп Тут Азп бет Х1а 85 90 95
ССС СТО ААТ СОТ САС АТТ ОСТ ССА АСА ТАТ ТТТ ОС АлАТ бої ото Ас 336 ?то Пец Азп Агу Ніз 116 А1іа Ак ТвІ Тут Рпе біу Азп біу Уаї 5ег 100 105 110
ТІТ ОБА бАТ ОА ТТ ТС БАС ОТА СТА ОСТ ОСА АСТ САС АСА ССС боб 384
Рпе Сіу Азр біу гла Уаї біч Уаії те) Аїіа Аїа ТІ біл ТВє Рго б1у 115 126 125
СА ОСА ОСА КАХ АКА ТО ТТ САА ОСА АСА ОСА САТ ОСТ ОТ АбА АХА 432 біз Аїа біу цуз цуз ТІр Ре біп Сіу Тплг А14а Азр А1а Уаї Агу Буз 130 135 140 .
ТТТ АТА ТО0 ОТТ ТТ САС САС ОСТ ААб ААС ААб ААТ АТТ АХА ДАТ АТС 480
Рпе І16 Тер Маї Рпе біч Азр Аїа цуз Азл о Буз Азп 118 біз Азп 116 145 150 155 160
СТТ СТА СТА ТСТ 00 САТ САТ СТТ ТАТ АСО АТО САТ ТАТ АТО бАб ТТ 52
Уаї Уаї їв бех біу лар ніз 1243 Туї Ак Меї Азр Туг Меб біч їй 165 170 175
СТО САб ААС САТ АТТ САС АСО ААТ ОСТ САТ АТТ АСТ СТІ ТСА ТОЇ ОСА 575
Маї біп Азп Нів І1їе Азр Акуд Азп А1а Азр 110 Тк Тем бЗег Суз Аїа 180 185 196
ССА ОСТ САС САС АОС СА ОСА ТСА бАТ ТІ 005 СТО ОТО ААО АТІ САС 624
Рго А1а біч Азр Зет Агу А1а б5ет Азр Ре б1у Пай Маї Буз І1їе Азр 135 200 205
АСС АСА СОС АСА СТА ОТО САС ТТТ ОСТ САА ААА ССА ААА ОТ ТТ САТ 572 5еїсг Ак біу Аг Маії Маї біп Рбе Аіа біз цуз Рго Буз біу Рпе Азр 210 215 220
СТТ АлА ОСА АТО САА ОТА бАТ АСТ АСТ СТТ ОТ ОА ТТА ТСТ ССА СХ 120 тем уз Аїа Мехї біп Маї Хяр ТІ Тпг Тв о Уаї біу ви Зек Рхо біп 225 239 235 249
БАТ Осо ААО АлЛА ОТОС ССС ТАТ АТТ ОСТ ТСА АТО ОбА ОТ ТАТ ОТА тт 768 кар о Аїа цуз Гуз бЗег Рко Тук І16 ліа Зехг неї біу Уаї Тут Маії Рле 245 250 255
АЛ АСА САТ ОТА ТТО ТТО АЛо СТС ОТТО ААА ОТО АС ТАТ ССС АСТ ТСТ 816
Туз ТвВт Азр о Ма1ї Ццво пез уз Те Тез Буз Тгро5ех Тут Рко ТВПг 5ег 259 265 | 276
ААТ САТ ТТТ СОС ТСТ САА АТТ АТА ССА ОСА ОСТ АТТ САС САТ ТАС ААТ ве4
Азп Азр Ре Сіу Зек б19 Ії І1а Ртго Аза дій 116 Азр Азр Тух Азп 275 289 285
СТ САХ ОСА ТАС АТТ ТІС КАХ САС ТАТ ТО САА САС АТТ ОА АСА АТТ 312
Ууаї сіп А1їа Тух Ії6 Рпе уз Азр Тут ТІр б1ч Азр І1а О01у ТЕ І16 290 295 300
АЛЛА ТСО ТТТ ТАТ ААТ ОСТ АОС ТО ОСА СТО АСА САА ОАб ТТТ ССА Ав 960
ШПуз бек Рпе Тут Азп А14 беї це А1а їац Тк біп біз РБа Рго біз 305 310 315 3290
ТТС САА ТТТ ТАС бАТ ССА ААА АСА ССТ ТТТ ТАС АСА ТСТ ССТ АСо Тс 1098
Рие біп Рпе Тук Азр Рго Муз Таг Рко РМБе Туг Тпжх бек Ркго Агу Ріє 325 330 335
СТТ ССА ССА АСС ААб АТА САС ААТ ТОС ААб АТІ ЛА САТ ОСС АТА АТС 1056
Печ РІО Рто ТІ МБуз Іїв Азр Азп Суз Пуз 116 Туз Азр Аїа Ії І1їв 340 345 350
ТСТ САТ ОбА ТОТ ТТС ТтТОо СОА САТ ТТ ТСТ СТО САА САС ТОС АТА ото 1104
Зект Ніз біу Суз Рпе Тез Аку Азр Суз Зеїг Узі біцш ніз Зег 116 Уаї 355 360 365
СОТ БАЛА АСА ТО СОС ТІА САТ ТОТ ОСТ ОТТ ОАА СТО ЛА бАТ АСТ ТТ 1152 сіу б1іч Аг 5еї Агу ца азр о Суз зіу Маї біз Із уз Азр ТВг Ре 370 375 380
АТО АТО ОСА ОСА САС ТАС ТАС САА АСА САА ТСТ СА АТ? оС оС сто 12009
Месє Ме біу Хіа Азр Туг Тус біп ТЕ біз Заг біш І16 А1а бег Гви 385 399 395 400
ТТА ОСА САб ОС ААА СТА ССС АТТ ОСА АТТ боб САА ААТ АСА ААА АТА 1249 їм Аїа біз біу цуз Маї Рхо 116 сіу І1в Сіу б1ч Азп Тік уз І1е 405 416 "415
АОС ААА ТОТ АТС АТТ САС ААб ААС ОСА АЛ АТА СС АЛ ААТ СТ ТСА 1296
Ах Пуз Суз І1е Ії Азр цЦуз Азп А1а Ццуз 116 біу Цуз Азп Уа1ї бек 420 425 435
АТС АТА ААТ ААА САС СОТ ОТТ САЛА САС ОСА САС СА ССА бай бАА ОбА 1344
І1е 116 Азп цуз Азр біу Маії біп бі Аїа Азр Аг Рто біз бі б1у 435 149 4145
ТТС ТАС АТА ССА ТСА бо АТА АТС АТТ АТА ТТА САС ААА ОСС АСА АТТ 1392
Рпе Тухк Ії Ак бек біу І1е І16 112 І16 еп бі Туз Аїа Тк 116 450 455 460
АСА САТ ОБА АСА СТО АТС ТОААСТАСОС ААССАССТСТ ТОТТОААСТА 1440 Й
Аг9д Азр бзіу тах Маі1 118 465 470
СТОСАБАТОС АЛАТСТСААС ТТОААСААСС ТСААСОСТОА ТОСТАССАСО ТТСАССАСТТ 1500
САСТССССОА АОСААОСТТ 1519
Сведения о последовательности...
Характеристика последовательности длина: 470 аминокислот тип: аминокислотная последовательность топология: линейная молекулярньй тип: белок состав последовательности...
Азп Буз Іїв Цуз Різ зіу Маї Аіа Тук бег Уаї І16є Тл ТпЕ бі Аза і 5 10 15
Азр тТпх біп ТІ Уа1 Ра Уаії Азр Меї Рго Ахг9 їви бі Аг Ах Ах
А1а Азп Рго Бфуз 3узр Уаї Аза Аіа Маї І16є їви біу біу біу бі 51у 15
ТпІ цуз цеч РБпе Рто Ти ТІ беї Ату ТлЕ Аїа Тік Рко Аза Уаії Рго (19
Уа1ї1 біу 51у Суз Тукг Аку цеч І16 Азр І16 Рто Мес Зах Азп Суз Іїв 65 70 75 80
Азп бек А1а ІЧе Азп Цуз Ії Рпе Уа1 їео ТрІ біп Тух Азп бек А1їа 85 39 95
Рго Пец Азп лгд Ніз 118 Аїа АкФ ТЬх Тук Рпе біу Азп біу Маї 5ег -00 105 110 рве 5іу Азр біу Рпе Уаії бі Уаї1ї цем Аза Аза Твпг о біп ТК Рко 01у 115 Я 126 125 б1іш А1а віу цуз ПцПуз Тір Ре біп біу Тік Аїа Азр А1іа Маї Агу цуз 139 135 140
Ттпе І16 Тгр Маії Ре біз Азр Аїа Цуз Азлп о Пуз Азп ї1і6є біз Азп 116 145 150 155 169
Уаї чаї їм бех біу Азр із По Туг Агу Меб Азр Тує Меї 012 їв 165 170 175
Уаї біп 3ізп Ніз І16 Азр Ак Азп ліва Азр 118 Тлг Тем бек Суз А1а / 189 185 139
Рго діа бій Азр беї Атд4 А1іа беї Азр Ре біу ци УМаії Цуз І1е Азр 195 296 205
Зек Аху б1у АкФ Уаї Чаї бій Ріє А1а біз уз Рго уз біу Ре дзр 213 215 229 це із А1їа Мес біп Уаї Азр ТВхІ ТІ їз Маї біу еп бег Рго бЗіп 225 230 235 240 хзр йіа цуз цуз бет Рго Тух 118 Аїа бек Ме Сіу Маї Тук Маї Рпе 245 250 255 уз Тптг Азр Уві Се Сех цуз їв їз уз Тгробет Тух Рто Тпх бек 260 265 270
Аза Азр Рпе с1у Зек біз 116 І16 Рго Аза Аза 116 Азр Азр Ту Азп 215 289 285
Ммаї біп Аі1іа Тук Іїє Рпє буз Азр Туг Тгр біц Азр І1е біу Тл І16 290 295 309
Туз бек Ре Туг Азп Аіа бек їеш А1а цез Тв бій біз Рпе Рго січ 305 310 315 320
Рпе сіп Рбе Тук Азр Рго Цуз ТЬг Рго Ра Тук ТІ Зег Рго Аг Ріє 325 330 335
Іва Ркго Ріо Так Пуз 116 Азр Аза Суз Туз І16 Буз Азр Аїа 116 116 3460 345 350 бак Нніз біу Суз Рпе Теч Акуд Азр Суз бех Маї біз Ніз бек 118 Маї 355 360 3655 й сіу бі Ахку бек Ак їеч Азр Суз б1у Маї 5іч Ів ПЦуз, Азр Тпг пе 370 375 зво
Ме Мехє біу Аза Азр Тук Тух біп ТпІ бі бек бі 116 Аїа 5еї Іс» 385 399 395 400 цем А1а бі біу уз Маї Рго 116 бі1у ї116 біу бій Азп ТВі Муз І1їе . 405 410 415 мг Буз Суз І18 І1е Азр Цуз Азп Аіа цуз 116 б1у Цуз Азп Уаї 5ег 420 425 439
Іїв І1в Азб Ццуз Азр Сіу Уаї біп біз лів Азр АкдФ Рго бі біо Сіу 435 440 4145
Рпе Тук І1е Акд Бек б1у І16 І18 І16 Ії ем біш Цуз Аіа ТЕ І1їе 450 455 460
Ах4 Азр сіу ТВх Уві Іїв 465 470 й - (2) Сведения о последовательности 5ЕО ІЮ М 0:11 1. Характеристика последовательности (А) длина: 35 пар оснований (Б) тип: нуклеиновая кислота (В) число нитей: одна (Г) топология: линейная 2. молекулярньй тип: ДНК (синтетическая) 2. Состав последовательности 5ЕО ІЮ М 0:11 9ТТ9АТААСА АДАТСТЯТТА АССАТЯЯСоЯЯ Стос (2) Сведения о последовательности 5ЕО ІЮ М 0:12 1. Характеристика последовательности (А) длина: 33 парьї оснований (Б) тип: нуклеиновая кислота (В) число нитей: одна (Г) топология: линейная 2. молекулярньй тип: ДНК (синтетическая) 2. Состав последовательности 5ЕО ІЮ М 0:12
ССАДдТАААА СоддАЯСТСАТ САДАТЯАТЯА ТТО (2) Сведения о последовательности 5ЕО ІЮ М 0:13 1. Характеристика последовательности (А) длина: 30 пар оснований (Б) тип: нуклеиновая кислота (В) число нитей: одна (Г) топология: линейная 2. молекулярньй тип: ДНК (синтетическая) 2. Состав последовательности 5ЕО ІЮ М 0:13 дТатТЯАдААС. АТАААТСТТЯ 9АТАТОТТАС (2) Сведения о последовательности 5ЕО ІЮ М 0:14 1. Характеристика последовательности
(А) длина: 28 пар оснований (Б) тип: нуклеиновая кислота (В) число нитей: одна (Г) топология: линейная 2. молекулярньй тип: ДНК(синтетическая) 2. Состав последовательности 5ЕО ІЮ М МО : 14 9ААТТСАСЯ д9ССАТЯЯСТ СТАдАССС (2) Сведения о последовательности 5ЕО ІЮ М О:15 1. Характеристика последовательности (А) длина: 40 пар оснований (Б) тип: нуклеиновая кислота (В) число нитей: одна (Г) топология: линейная 2. молекулярньй тип: ДНК (синтетическая) 2. Состав последовательности 5ЕО ІЮ М О:15
ААДдАТСАААС СТоССАТЯЯС ТТАСТСТОТ9 АТСАСТАСТа (2) Сведения о последовательности 5ЕО ІЮ М 0:16 1. Характеристика последовательности (А) длина: 39 пар оснований (Б) тип: нуклеиновая кислота (В) число линий: одна (Г) топология: линейная 2. молекулярньй тип: ДНК (синтетическая) 2. Состав последовательности 5ЕО ІЮ М 0:16 да9ААТТСАА Я9СТТЯЯАТОС СодддассСосоо СОС (2) Сведения о последовательности 5ЕО ІЮ М 0:17 1. Характеристика последовательности (А) длина: 24 парьї оснований (Б) тип: нуклеиновая кислота (В) число нитей: одна (Г) топология : линейная 2. молекулярньй тип: ДНК (синтетическая) 2. Состав последовательности 5ЕО ІЮ М 0:17 да9ААТТСАА ЯСТТоЧ9АТОС Сода (2) Сведения о последовательности 5ЕО ІЮ М 0:18 1. Характеристика последовательности (А) длина: 32 парьї оснований (Б) тип: нуклеиновая кислота (В) число нитей: одна (Г) топология: линейная 2. молекулярньй тип: ДНК (синтетическая) 2. Состав последовательности 5ЕО ІЮ М 0:18
ССТСТАдАСА аТСЯАТСАда АдсСАдАТОТА Са (2) Сведения о последовательности 5ЕО ІЮ М 0:19 1. Характеристика последовательности (А) длина: 25 пар оснований (Б) тип: нуклеиновая кислота (В) число нитей: одна (Г) топология; линейная 2. молекулярньй тип: ДНК (синтетическая) 2. Состав последовательности 5ЕО ІЮ М 0:19 чдчаАаттАдСС АТоааТТАЧТТ ТАдАд (2) Сведения о последовательности 5ЕО ІЮ М О:20 1. Характеристика последовательности (А) длина: 34 парьї оснований (Б) тип: нуклеиновая кислота (В) число нитей: одна (Г) топологич: линейная 2. молекулярньй тип: ДНК (синтетическая) 2. Состав последовательности 5ЕО ІЮ М О:20 чдаССЯаАЯСтТо дТСААСЯССЯ ТСтТаСоАТТТ 9Т9с
(2) Сведения о последовательности 5ЕО ІЮ М О:21 1. Характеристика последовательности (А) длина: 19 пар оснований (Б) тип: нуклеиновая кислота (В) число нитей: одна (Г) топология: линейная 2. молекулярньй тип: ДНК (синтетическая) 2. Состав последовательности 5ЕО ІЮ М О:21 9АТТТАдоТЯ АСАСТАТАЗд (2) Сведения о последовательности 5ЕО ІЮ М О:22 1. характеристика последовательности (А) длина: 42 парьї оснований (Б) тип: нуклеиновая кислота (В) число нитей: одна (Г) топология: линейная 2. молекулярньй тип: ДНК (синтетическая) 2. Состав последовательности 5ЕО ІЮ М О:22
АдАДдАЯАТСТ АДААСААТЯЯ СТТОСТСТАТ ЯСТоТСтТТос (2) Сведения о последовательности 5ЕО ІЮ М Оо:23 1. Характеристика последовательности (А) длина: 39 пар оснований (Б) тип: нуклеиновая кислота (В) число нитей: одна (Г) топология: линейная 2. молекулярньй тип: ДНК (синтетическая) 2. Состав последовательности 5ЕО ІЮ М Оо:23 дОоССЯдАЯСТо ТАдАТТАТСЯ СТОСТОТТТА ТЯСССТААС
ТТ АТООТТАСТТТАСАСНАВААССАТСАЄТТААТЬТТООСОСОССАССТОССАТТОАААТСТ рони КУ ЗІ КИ НІ ні авт
БТТоСССтТоАТАСТООСООБАСВАСЬТОПТАСССЕСТОААОВАТ ТААССААТААСССА
Кур атеввткіювітькю
ПСААААДСОСССТАСАСТ ТСООБТААОТ ТССССАТТАТОВБАСТТТОСОСТОІСТАДС с уфрРаАунтЄСКЕВІТ ІА
ТиСвтсААСТеСоОсА ТеССТСОТАТССОСОТ АТС ССАВТАССАВТСССАСАСТСТ п оутініствиансу титан
СТОСАВСАСАТ ТСАССОСОБСТООТСАТТСТТ САД ОААПАДАТОВАСОАСТТ ТОТСОАТ о уднІвсиРАКЕЄННЕК
СТОСТОССАВСАСАОСАОАОВАТОАААСОВОАВААСТОСТАТССССБСАССССАСАТОСО
"о (Рааавиксоенутвстаи
СТСАССТРААААССТССАСАТТАТСССТССТ ТА ТААДОСОСсААТАСОТОСТОАКССТОКО
М УтакіоііваткАкЕтТУуУ ІТИ
СОБССАССАТАТСТАСААМАВОАСТАСТЕОССТАТОСТТАТСВАТСАССТСБАААААООТ
Є увиттукавтттніі;нуУЄКИ
СТАС ТОТАССБТТ ТТ ТОТАТОССАСТАССВАТТоДАпААСОСТОСССАТТТООСОТ в УкСТУуСИРУРІЕБЕААОЯУ
ВТБбСОбО ТТ бАТОАСВАССАТАДААСТАТСОААТТОВТОБААНААССТОСТАМССОСОо
М УНК ЕРУЕХРАНРР
ТСААТОСССААССАТССОАССАААКСТСТОБССАЄТАТОБОТАТСТАСОТ СТ ТТ ОАСОСО
М яву РІХІІ АІТИІТИР ОК
САСТАТСТОТАТОААСТОСТОВААСААСАССАТ ССО АБОАСТССАБССАССАСТТІ
БОС Ук акеваковніІ Но
Фиг А
СОСАААСАТЕТОА ТТ ТСССАДОАТСАССпАДВССО Стос СТАТ ОСС АССССТ ТСССо т ок ІРКІТЕАСІ ТАН
СТСТСТТОССТАСААТОСОАСССССАТоССОАОССОТАСТЬОСОСВАТОТОВОГАСОСТо оре уаптутааевтутут
ПАВССТТАСТОсААДОСОААССТОВАТСТОВССТС ТИ ТО ТССССАААСТОВАТАТСТАС
Метан аАтуУтРКІВИІ
ВАТСОСААТТВОССААТТОССАССТАСААТСААТСАТТАСССССАСССАААТ ТС ТОоСАО уник ТкКЕІАРАКТИ
САТ СС ТАССТАСПОСАТОАСССТТААСТСАЄТЬСТ ТСБОоСоСТТОТтоАТС
М уві И тесобттооотовтоотосАотосЬт сто сторо ТоосотоААТТСАТСТОС
М евбитчох ті тітку
ВАСАТТСАТТССоССОТАТТОТАССооВАСТАТоооТтАСОТСВСТ Тео ССО С уза тикчиябиїсвік
СОоСТоСОТСАТЕСАТССТОСТТОЗОТТАТ ССО ААСВСАТОВ Той ОО тТСАДААСОСА
УС уУТкасЖТвЕСИТІсЕНА
САСОовАСАТОСАСОТСОТТ ТСТАТСОТТСАСААбААСоСАТоСТ ОСТ оотАВСОСОССВА в ОутфАВЕР КЕТІ ТК
АТОСТАСОВААН ТТ АООБСАТАВАСАССАОССАТАА ук анковаю
Фиг.1В
На АТООТ ТАТ ЕТАСАСААаААССАТСАЄТТАА ТТ ТОБСБСОССАОСТОГСА ПОодААТСТ моевя ут км
ВТТОСЕСТбАТАСТОВСООСАСВАСОТОСТАССССССТОЛАВОСАТ ТТ ААССААТАВССЬА пики ин
ВСАДААСССОВССОТАСАСТ СБС ТАВОТТССОСАТТАТСОАСТТТОСССТОТСТАДС еутиіжнтв секти
ТОСАТСАВСТОССОСАТОСОТОСТАТ ОБО САТСАСССАоТАССВОТСССАСАСТСТО тя ттиинеті тити
СТОСАССАСАТТСАОСОСЬВСТОС ТАТІ ТСААТВААЛАЛАТОВАСОоВОТ ТТ ОТ САТ мити ажєатииититти
СТОоЕТОССАВСАСАОСАСАСТА ТОАЛАООВОААААЄТЬСТАТСОСБОСАСТОСАСАТЬСЬ митника
ОТСАСССАЛААССТОСАСАТ ТАТО ГАТАААОСОДАТАСИ ТТ ТС По м тануть утєтуєтю
ББСБАССАТАТСТАСААВСААСАСТАЄТОСЬТАТОСТ ТАТ СоАТСАСБТССАДАВАСОТ еови уки иутии
МАСОТТОТАСССТТО КТ ТОТАТОСЕАСТАСССАТТОвАВААОСЕТОСОСЬТ ТОЖ оч м мі ни чи
АТ БОС ТЕОАТОАСЛАССАТААААСТАТСПААТ ТЕТ ОодААДАССТОСТААСССОССЬ мухи иттьтиютиити
ТСВАТОСССААСОАТОСОАССЗААТСЕСТЬОСОАОТАТООСТАТСТАСВТСТ ГП ВАСООС уки тки
БАСТАТСТЬТАТВААСТОСТООААОВАСАСОАТСОССАТЕАОААСТССАОССАССАСТЕТ вкрав нк г ОоСКАААТ ТОК ТО СКАВАААВвАНК
ПТ фа д я СТСТСТТОСОТАСААТСССАСССССАТОССВАССССТАСТООСССОВТОТОббТАСОСТо "зсувами ЄТт
БАЛОСТТАСТОВАААОСТААССТОВАТСТОСССТСТОТОбТОССоСААСТОСАТАТОТАС м иахчукаКнтівтатктттиин
БАТСОСААТТООССААТТСОСАССТАСААТОААТСАТТАССОССАСССАААТТСОТОСАО
М ОЕКУРІКІТНЕІРР КАК
ВАТСОСТССОТАОССАСОСОАТОАСССТТААСТСАСТОСТТТССОАСОоСТтТСтОоТОАТе бук нактіиїі ти тесосттеостовТоотосАстосоттототтстовсосот т соСетоААТТСАТТСТоС їжак кн
МАСАТТСАТТССОССОТАТТОТТАССОБААСТАТОобоТАобТооСстеотоСеСтстоСоС
В УТА ІРЕМУТОВІСТІ КЕ
СоСТОСОТСАТССАТССТОСТТОТОТТАТТССОБААСОСАТООТСАТТООТОААААСОСА
По ДсСУуТаАСУТР.ЕСИХУІСЕНА
САСОААСАТОСАСОТСОТ ТТСТАТСОТ ГСАСААСААООбСАТСОТОСТООТААСОСЬСОАА
Б ЕЕТАЖЕТТИЗЕЕСІТІ ТА
АТОСТАСОСААСТ ТАСОБСАТАДАСАБОСАЛОССАТ АХА
В уіувкіІбикоєи.
Фиг. 28
Н і п а
І
І
І ведсттдєтстсо туї То го сота ото тодо дассавадсосіадассавосся ннанінннннн Попіннінінтьнон ніннннивінінанннй Нннінінінннннні Пнінонінінннаннннй Пнів садїсососовододтааоооодаасво досі сстсто гост ст їссостосто 9 61 ------ || няння | о
МА 55 Мі 5 5АТ КК
Є тосстстссодстсадоссо сто содїсостостсоосодостабдїсстссосі
Мересянитняя || тиф сн
У А 5 Р А 0 АТ МИ М АРЕ Мі Кк А дсестсссодссосссосоадостассоасдасо Єтосіїсса Есасовдсоосодсода 181 --------- || ||| няня
АЕРАТЕКАНКВІТ51т15б6о адоо Є австосо єосодо во одсстссоо стодовадосова є довостстстсї
Ранній Витіннетннитьня ення Пнікітинтьвініньнй Ппінітолітініннтн ніна
Б У МС МОХУ МРРІБбКККЕЕТ 5
М с о
І тассіксстдасстассоо т іссдотодісосоїсоастосо єдсадоссо 99 301-133
У РЕ ТО 5опоекУМСМОАМ
Фиг.З
Воі2 333
Есок! 360
Ніпі3 643
Мсої 11154 Ід дир сеь ую, Мо! 1243 де Р-355 ! ХУ (У МО5 З ХУ о Г-МО5 і
Ко, МО5-МРТІ хх їе, вка у
Гу га
Ї й т) я и ї
РІЇ та? бре/бі, В й
З Р РМОМбЗО е « 12023 Бр в їй Я Мксої заті іх ді
Мох КУ М сої 3971 з І , 6, йх МО5 ртіТ37 огі 7-2 де йезх У оз -5-
Михлваснннивих
Мсо!ї 6940
Фиг. 4
І ССАТООСБОСТТССАТТОВАБССТТААААТСТТСАССТТСТТСТААСААТТОСАТСААТО 60
МетА(одіабеєПебіуА ої гц устегзегРгобег ЗегазпАзпсув І | ей 61 АбАСААбАЛАТОАТТСТАСАСОТОСТОТАТССАВСАСАААТСТСТСАТТТТООТСТТСТС 120
ІГийкойковспАзруег Те йгов оМа (ХегЗегВиоволі еибегРнеХег Зегзег
Іг1 АТСТСоССобАСАСААОТ ТбАТОССТОТАТСОТОСТТАСОТТСССААССАСТЕССАТТСА 180 і5Гешйабіуйорі узі еиМеїРгома ІХекбегі еийкобего (п б1уМо 1 АеоР ей 181 АТОТСАбААСААСТССААТОАТТеТатСоССАААСоСТОТТТСТОАТТСБСАСААТТСАС 240 зпуа (АкойеобегРгоМе І ема (ХегРиоГ уза оМа (ЗегАврбегбіпАзпбего 241 АБАСАТОТСТАБАСССАВАТОСТАСССССАОТОТ т ТТОббААТТАТТСТТОоСАССТоСАЄ 300 (яТииСуві емАєрггодері а5егАгозегмо І еибіу! ет 1егембіубіуєтуй 301 СТОбОАССССАСТТТАТЕСТСТААСТААЛААААСАССАААСССАЄСТОТ ТССАСТТОСАС 360
СабіутТиклиді еитуєРиої еутийі узі усАгой бі узРгой ато (Реобеобуй 361 САААТтатСОотСтвАТТеАСАТТОСТОТААССААСТОСТТОААСАСТААТАТАТССААСА 420 (адзпТугАг о ем (ейзрі (еРгохо | ЗегазпСузі еийзпЗегавп І (ебегі ув 421 ТЕТАТОТТСТСАСАСААТТСААСТСТОССТСТСТОААТСОССАССТТТСАСОАССАТАТо 480
ІТеТуєУо Ц еиТвеб (пРіейзпбегй о5егі еийзпАеоНі зі ецзегАк А отТуєй 481 СТАБСААСАТОООАОСАТАСАААААСТАОСОСТ ТТ ТооААСТТСТТоСТОСТСААСААА 540 (о5егазпМето(убіуТуй узахпо бі урпехуа 10 Мо ей аа обіпбіл 541 БТССАСАСААСССССАТТООТ ТеСАСОбСАСОобСТоАТОСТОТСАСАСААТАТСТОоТОвТ 600 вгреобішйспРиоврТерепебіпо (уТиий (оАзрА ото (Або іл Тук! емТері. 601 ТОТТТОАБбАССАТАСТОТТСТТОААТАССТТАТАСТТОСТОСАСАТСАТСТОТАТССАА 660 еиРпей ці ЧНІ ТИйкУо еибіиТук ем! Геї ей (об(уАерНІ 5І еиТугАКоМ 661 ТОбАТТАТоААААСТТТАТТСААССССАСАСАСАДАСАСАТОСТОАТАТТАССОТТОССо 720 етА5рТугб( ші уєРпе П ебіпА(аНі зАкобішТикАзрА ГоАзрі Ге ТикУа ТА Той 721 САСТОССААТОСАССАСААОССТОССАСТОСАТТСООТСТСАТОААСАТТОАСОоААСААВ 789
Іс ецбгоМетАврб і уза ой І аТнив (арпеб (у еиМек ув | (евербішбуо 781 БАСОСАТТАТТОААТТТОСАСАБАВАССССААССАСАССААТТССААССААТОАААСТОС 849
ІуАко! те ебішрпей таб убРгобіпбіубіобіпеибіпй (оМет умо А
Фиг.5А 841 АТАСТАССАТТТТАОБТСТТОАТСАСААСАСАВСТАААСАДАТОССТТТСАТТОССАСТА 900 ре Те егецб у еиАбзрахрі узАгоА а! у5б оМетРиоРре І Гей (обегМ 901 ТОБОТАТАТАТОТСАТТАССАААСАСОТСАТОТТАААССТАСТТСВТСАСААСТТСЕСТО 960 е1тб1уПетугМо / (еЗегі узАсруа Неї еийепі еці емАгойзрі узРнеРгоб 961 бОбССААТОАТТТТОбТАСТСААОТТАТТССТВОТОоСААСТТСАСТТОббАТСАСАСТОС 1020
ІувівАбпазррнебіузего (яМе 11 ергобіудісТикхегі гибіуметАномо 16 1021 ААБСТТАТТТАТАТОАТОбоТАСТОбОААСАТАТТОбТАССАТТОААОСТТТСТАСААТО 1080 (пАатТуйсештуєАхро утуєТирбіоАзрІ Теб1уТик І (ебіцв (оРНеТугазпй 1081 ССААТТТООБСАТТАСАААЛААОССЬСТОССАВАТТТТАБСТТТТАССАСССАТСАСССС 1140
Іайелі еибі 1 (еТАкі уві узРиома ІРиодзрРпезегРпеТуєверакобег (ор 1141 СААТСТАСАСССААССТОСАТАТСТАССАССАТСАДАВАТОСТТСАТОСТОАТОТСАСАб 1209 "ої 1еГукТиибІпРеойидТуєі еиРгоРиобегі узМе й еийера (Ар І ТикА 1201 АТАОТОТСАТТООТСААСОТТОТОТОАТСААСААСТОТААСАТТСАТСАТТССОТОСТТо 1260 зроегуа ебіубІшбіусуєма | еі уйзпсузі уз еНІЗНі 55ег о (Мо 16 1251 ПАСТСАБАТСАТОСАТАТСАСАбОСАССТАТТАТАСААСАСТСАСТТ ТТсАТОбОоСоСАЄ 1320 (й емйкдзегсув І е5егбішіуА о еї себіцАзріегі еці гиМето (у ва
ІЗ21 АТТАСТАТОАОАСТВАТОСТОАСАСОААОТТоСТеССТоСАААСОССАОСТОТСССААТТО 1380 5рТуєТукбіиТНиАерА ГоАзракої узі еці ей (ой Гог узо(|ухеемо ІРко! (ей
І381 бСАТСбОСААСААТТОТСАСАТТАДААСАВССАТТАТСОАСААСААТОСССОТАТАСОСО 1440 (у Пебіу усаепсувНІ в І (і узАкой іа Те ейзрі узвзпА аАио ебтуд 1441 АСВАТОТОААОАТСАТТААСАЛАСАСААСОТ ТСААСААССОБСТАСОСАДАСАСАТОСАТ 1500 5равпуа ПК ус Геї (ейолі узАзраАвпуо (б 1пбішйіоА(олеобіТиийхро ут
І501 АСТТСАТСААСАСТОООАТ ТОТСАСССТСАТСААСбАТОСТТТбАТТССААОТОСААТСА 1960 угРпеї ві у5егб у! Гео (ТииУс 11 сі узйзраА ве ТеРеозекбіу Те 1561 ТСАТСТОАТОАССТО 1575
Те еєваєло
Фиг.58
1. ААСААСАТСВААССТОВООТТОСТТАСТСТОТСАТСАСТАСТОАЛАААТОСАСАСАСАСАСТ 60
Ап узі (ві убРкобтумо А сотуєзегма (1 (етТрк Тис цаопА5рТйеб (п Те 61 СТоТТСбТАбАТАТОССАСОТСТТСАСАСАСОССООБСАААТССАААССАТОТОССТОСА 120
Ма (РнеХа (АєрМеїРеоАеді еиб (ийиойиойгой оАвпРкої узАврмоі А ой а 121 ОТСАТАСТОВОАОбАСбАСААСССАССААСТ ТАТ ТСССАСТТАСААСТАВААСТОСААСС 180
Уа 1 еї ембі1убтує убіибіутигі узі гир перкої готи ЗегАиотииА али 181 СстоСтоттесобтТобАББАТОСТАСАСССТААТАБАСАТСССААТСАССААСТОТАТС 240
РговісУв ГРеоУа (бу уСує ГуєбАк де (ейорі еРеоМеї5евАзпСуєе 241 ААСАОТОСТАТТААСААВАТТТ ТТ ОТОСТОАСАСАСТАСААТТСТОСТССССТоААТСОТ 300
АспзегА 101 ейзпі уз І (ерпеУа СешТииб пл ТукАза екв оРгоїЇ еийзпАед 301 САСАТТОСТОбААСАТАТТТТОбСААТОСТоТОАССТТТОБАСАТОБАТТТОТСОАБСТА 360
Ніз НПей ТайеотиеТукРНеб удо умо ї5егРиеб уА5рбіуРнеМа (Тим і 361 СТАбСТОСААСТСАСАСАССССОООААВБСАССАААВАААТОСТ ТТСААССААСАССАСАТ 420
І еид ай Танк (п ТиеРкобіубТай Гебтусує ух ТирРпебівбіутний (аАгр 421 ОСТОТТАСАЛААТТТАТАТОСВТ ТТ ТОАББАСОСТААСААСААСААТАТТОААААТАТС 489
АТоМма Ак ої узРее ПеТеруаіРееб! царі (ої узАзпі уз І ебТивоп І Це 481 ОТТОТАСТАТСТОбОбАТСАТСТТ ТАТАБСАТОБАТТАТАТОоОАСТТОСТОСАБААССАТ 540
Ус (Мо (С ецбего уАрНІ з еотТугАиоМетАзртТуєМе 50 І ці ецМа (б ІпАспНі 5 541 АТТОАСАОСААТОСТОАТАТТАСТСТТТСАТОТОСАССАОСТОАОбАСАССССАССАТСА БО
Цедзракодопа (сАзрі (еТлиі еизегсувй оРгой об ий5рзегвгов абег 601 бАТТТТОбОСТООТСААВАТТОАСАОГСАСАСОСАВАСТАСТССАСТТТОСТОАААААССА 660
Аерепеб ус ешма ЦП у ейбрзесйкобіулиома (Мо (б пРНей аб ухРео 661 АААООТТТТОАТСТТАААССААТОСААСТАСАТАСТАСТСТТОТТОСАТТАТСТССАСАА 720
Гуз 1уРпедері. еці уз А аМеїб (по (АзртТйе Тйгі ейус Су еизегРкоб (п
Фиг,бА 721 БАТОСВААСАЛАТСССССТАТАТТОСТТСААТОбСАСТТ ТАТОТАТТСААСАСАСАТСТА 780
АзрАТасуві уєзегРиоТуг І (ейобегне бі ухо (ТукУо | Риєї уз ТикАврув 781 ТТОТТОААбСТСТТОАААТОбАССТАТСССАСТТСТААТСАТТТТСОСТСТОАААТТАТА 840
І еміеці.узі-еці ви ух Тирбег ТугРкоТпеЗегазлАЗреней уЗегбі ие е 841 ССАБСАССТАТТОАСВАТТАСААТОТССААССАТАСАТТТТСАДАСАСТАТТОССААСАС 900
Реся Тай ої ТейерАзрітуєАвп Ма 0 (па оТук І ГеРнеї узА5рТує Тер (ийзр 901 АТТОБААСААТТАДАТеОТЕТТАТААТОСТАВСТТООСАСТСАСАСААОАСТТТССАСАЄ 960
ЦебіутТиеі ес уззегРпетТукавпА о5егі вий в еиТкбіпбіиРлеркобін 961 ТТССААТТТТАССАТССАААААСАССТТТ ТТАСАСАТСТОСТАСОТТОСТТССАССААСС 1020
Рпеб'пРиетТугАєрриаі ус ТиеРгоРпеТук Тік ЗекРгодгдрпеї еибгоРгоТне 1021 ДАбАТАбАСААТТОСААСАТТААОСАТОССАТААТСТСТСАТОбАТОоТТТСТТОСОАСАТ 1080
Гуз (едзраАспсузі уз Пе узАзраА (а (ее) езекНізб1уСуєРиеї еле одер 1091 ТОТТеТОТОбААСАСТССАТАСТОбОТбАААСАТСОСОСТТАСАТТОТОбТОТТбААСТо 1149
СуззегувІб1ШНіз5ек І еУа | біубішвиозег йно ецАзрсузо (умо (бід ей 1141 ААОбАТАСТТТСАТОАТОСОАССАСАСТАСТАССАААСАВААТСТОАСАТТОоССТОССТо 1200 узАзрТпеРпеМеїМеїб1уА ГоАзрТугєТукб іп Тикбіи5егб( ші ей азегі. ви
І20Е ТТАБСАСАСООбААДАОТАСССАТТОПААТ ТОобСВАААТАСАДАААТААССАВАТОТАТС 1260
ГемА оби узуаРео! ес у) Теб1убі ис Те! уз Гейко усу (е
І251 АТТОАСААСААСОСАААСАТАССВААСААТОТ ТТ СААТСАТАААТАААСАСОСТоТТСВА 1320
ІІедері узАвла ої ув (ебіуї узазп о (5егі (е1ейопі узворбіума бій 1321 БАОБСАВАСССАССАВАОСВАССОА ТТ ТСТАСАТАССАТСАСОСАТААТСАТТАТАТТАСАЄ 1380
Ша оАбракоргойт обіти уРиетТук! (ейкдзеио у (ей (ее) (Ге еибіи
І381 / АЛАБССАСААТТАСАПАТОБААСАСТСАТСТОЛАСТАСОБААОСАССТСТТОТТОААСТА 1440
ГузА Ток ейкодзрб у ТиМо | 1 еєпо 1441 СТОбАСАТССАААТСТСААСТТОВАСААСОТСААСОСТОАТССТАОСАСОТТСАССАСТТ 1500
ІЗ0ОІ бАСТССССОААОСААОСТІ 1519
Фиг.6В
Мо! 7818
Ніпаз тво уд р, я Ди М Яся й дя
М. Р-роївіїп Кк сх
Мсої 6535-х МУ гро
Дух. СТРІ сх з с 2, а
В пед
А Ї діостє :
Ніпаз. 5690 5-5 пев : з Кідп! Вогдег Я бос! 5235 о уко з в б хо і-м брс/біг и
Мої! 4936 с нос є т,
УКР. і «я : й нега нка у. дух
Вплив
Меої оо фиг. 7
Ніта3 10596
Ватні 10566
Хної 9 спри и ех ря ет й зро бі, с -- Меоі 1460
Ніла3 8955-04 в. дек - МО5 З їх вні? ват з Р-Дгаб -55ЩА У
Мсої 8600... М КАМ ОКО
Криї 8515 МИ -ю. Агаб-З ЛА - їсопзії хх
Вотні 8405-77; ї
Ї Р-355 1 В сів! 8120--йЙ ї й 10596 Ь -
Ніпаз 7757-7704 Р ї
ДА Я Мей! 2987
Єсоі 753147 / З і/
Св! 74507 /КУ ' М
МЕЯЗ З г; б5асІ 7502 У ри
Вотні тав -Відні Вогде 4
ЗУ. огі-322 сор й (з ри ее сррр я
Фиг. 8 що дра --- Ж за МОЗ в
Ніпі 3-4 Ки роси МРТ У
У чх ли в: т Р-355
Вде і
Фо17 7 Р-ез55 В ос Я огі-М А а у и р они г : ' р а я Е9 З ї м М
З," Відні Вогег й ях А
СУ й хо ле з І-322 й хо огі- -х тов ня
Фіг. З
Ру! 7428
Руш! 6827 , (Ніпд3 7796 роса чо чес» хх Віом Вогіб а й Зре/ біг , чо "Хвої 8799 ю, рероіаів «У я Нсої 9070 й // Атоб-З5ЛА-Ігапвії ХХ Краї 9163
Л/ К/ огі-322 ХК Ватні 9265 її Сів 9532
Я, Ц- Есок! 9642 7.1 гор дід | До Рма! 9764 ' РМОМІБ95О ЯК Ніпаз 9915 ті юЗВя вр ДК Раш 9974 т ДГ ХУЕсоні 10139
З А Мав 10222
У Е9 3/7 ( УРмиї 10226
З РАБИ Я (во юзіє
АОМ о5 у КАН их ди Краї 10382
Шо де ду ци ши чи ша ЩА М, о! 691
Хної 700
Риш 2189 Риш 1067
СІ! 2185 Мсої 1636
Хпої 2168 Руш 1904 еру. ІТе.
Руші 1067. Мсої 1636
ВХ 704 вовна міт ще ри ло 700
ЕсовІ ВабО РЕ ТЯ А нт Сі сів и тя Бу! 2189
Хрої 8457 Клин я ДТ сібрв452с ди Ре КАМ,
Всі2 8445 М ко з Мо53 с
ЕсойУу 8330 -уу ще ду Гей Вогоег мяч ще ій
Рей 7806, ВИ / 272555 ог 8
Ніва43 7796-78 віові вого ІВ
Я Кюпі Вогоег ЕЕ Руш) 3403
Ра! 7428-78 емо Е
Рон 730377Д Тс. я й у хореї У рий 6827-х ся о с ка оіЗ22 пора
С. і пи» щі
РИ 6564 дн тити
Ммагї 5049
Фіг. 11

Claims (20)

1. Способ получения генетически трансформированньїх растений с повьішенньм содержанием крахмала, отличающийся тем, что осуществляют следующие стадии: (а) введение в геном клетки растения рекомбинантной двухцепочечной ДНК-молекуль, состоящей из; () промотора, действие которого в растениях вьізьвает продуцирование РНК-последовательности в целевьмх тканях растения; (ї) структурной ДНК-последовательности, вьізь'вающей продуцирование РНК-последовательности, которая кодируеєт слитьій полипептид, включающий амино-концевой пластидньй транзитньй пептид и фермент АДФф- глюкозо-пирофосфорилазу; (ії) 3 -четранслируемой ДНК-области, действие которой в клетках растения вьізьівает терминацию транскрипции и присоединение подиаденилированньх нуклеотидов к 3' -концу РНК-последовательности; (Б) продуцирование трансформированньх клеток растения; и (с) регенерацию из трансформированньїх клеток растения генетически трансформированньїх растений с повьішенньім содержанием крахмала.
2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что в нем указанньім растением является картофель.
3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что в нем указанньіїм растением является томат.
4. Способ по п. 1, отличающийся тем, что в нем фермент АДФ-глюкозо-пирофосфорилаза разрегулирован с понижением аллостерической регуляции при сохранений адекватной каталитической активности.
5. Способ по п. 4, отличающийся тем, что в нем указанньім растением является картофель.
6. Способ по п. 4, огличающийся тем, что в нем указанньїм растением является томат.
7. Способ по п. 4, отличающийся тем, что в нем источником структурной ДНК-последовательности являются бактерии.
8. Способ по п. 7, отличающийся тем, что в нем указанньім растением является картофель.
9. Способ по п. 7, отличающийся тем, что в нем указанньіїм растением является томат.
10. Способ по п. 4, отличающийся тем, что источником структурной ДНК-последовательности являются растения или водоросли.
11. Рекомбинантная двухцепочечная ДНК-молекула, включающая последовательности в следующем порядке: () промотор, действие которого в растениях вьізь'вает продуцирование РНК-последовательности в целевьмх тканях растения; (ї) структурная ДНК-последовательность, вьізьївающая продуцирование РНК-последовательности, которая кодируеєт слитьій полипептид, включающий амино-концевой пластидньй транзитньй пептид и фермент АДФф- гдюкозо-пирофосфорилазу; (ії) 3'-нетранслируемая ДНК-область, действиєе которой в клетках растения вьізьівает терминацию транскрипции и присоединениеє полиаденилированньх нуклеотидов к 3-концу РНК-последовательности; причем указанньй промотор является гетерологичньі!м по отношению к структурной ДНК.
12. ДНК-молекула по п. 11, отличающаяся тем, что указанньй фермент АДФ-глюкозо-пирофосфорилаза разрегулирован с понижением аллостерической регуляции при сохранениий адекватной каталитической активности.
13. ДНК-молекула по п. 11, отличающаяся тем, что указанньій промотор является гетерологичньім по отношению к источнику структурной ДНК АДФ-глюкозо-пирофосфорилазь.
14. ДНК-молекула по п. 11, отличающаяся тем, что источником указанной структурной ДНК-последовательности являются бактерии.
15. ДНК-молекула по п. 11, отличающаяся тем, что включает Е.соїї-дід С, которая имеет последовательность: МОМ АТ А СМ; Мо Ме ОМ СМ ТА А ТО, Со Со СА Ст ЩІ Ме Угі) бат 10 01ч Суз дз Азр НІЗ во Меб Ше) Дій су 1 Тео 1 5 М Що ССА ТО АЛ ТС? СТ? 00 СТО МТА СТО сб ОСА ОСА сот ОСТ Ж СС ЩІ Тго Івч уз заг Маї ліа їво 116 ч ків біу біу Аг віу Тве АкФ СТО ААС АТ ТТА АСС ААТ ЛАВ СОА ОСА ААА СС ОСС ОТА САС ТтТе бос 144 їси Гуз Ме їеч Тпг Аза бух ме Аза фуз Рхо іа кі ніз рРна с1у ОТ ЛАб ТТС СОС АТТ АТО АС тт Осо сто ТСтТ о ААС ТОС АТС ААС ОТеС 192 віу чу Ре Агу їІ16 І16 в бло Аза тез бек що Суз 116 Азп бек осо АТС СбтТ СбІ АТО бос ОТО АТС АСС САС ТАС САб ТОС САС АСТ сто 240 віу 116 Ак Аг Нет ву Маї І1їв тих біл тут біп Зак нНіз так їси ото СА САС АТТ САС СОС Ос То ТСА ТС ТТ ААТ САХ ОАА АТО ЛАС 288 Уаї біб Ніз ї11вє вав МІФ біу Тгр Зек що ?пе Азп біз біш "35 Аза бАб тТтТтТ ТС САТ СТО СТО ССА ОСА СА САС АСА АТО АЛЛА 000 бАА ААС 336 біо Рпе Уаї Азр 160 18 Рго Аліа біл біп Аг Мес Муз біу біо Азп 100 105 110 ТО ТАТ СОС БОС АСС ОСА САТ СО ОТ АСС САА КАС СТО САС АТТ АТС 384 Тгр Тут АкФ біу ТЕ АЛій Азр Аза Уаї тТпг о Сіп Азп їси Азр 11 І19 115 120 є 125 СОТ СОТ ТАТ АЛЛА ОС САА ТАС сто сто АТО СТО ССО СОС САС САТ АТО 432 йгФ Мід Тух Вуз Кіа бі» Тут Уаї Маї Ії8є вч Аіа біу Азр Яіз І18 130 135 110 ТАС АЛЛО СКА САС ТАС ТО СОТ АТО СТТ АТО САТ САС ОТО САА ААА саТ 480 Тук цуз біп Азр Тут бЗехг АгФ Меб Іо І)19 Азр Кіз Маї біз цуз біу 115 150 155 160 СТА СОТ ТОТ АСС о отТТ бТТ тот АТО ССА СТА СС АТТ бАА сАА ОоОсс То 528 Маї Ах9 Суз ТВх Маї Ма1ї Суз мес ?Рго Маїі Рто 116 б1з бі лі1а 5ех 165 170 175 ОСА ТТТ бос бТт АТО Со т? САТ САС ЛАС САТ ААА АСТ АТС САА ТІ 576 Кіа Рре Сіу Маї Мес ліз уаї Азр б1з Азп Азр Муз ТВХ ІЗ б1з РФ 130 185 190 СТО ОАА АЛА ССТ ОСТ ЛАС ССО ССО ТСА АТО ССО ААС САТ ССО АОС А 624 Маї біз уз Рго Аїа Азп Рко Рго Зек Мес Рго Азп Азр Рго бЗек Гуз 135 200 205 ТСТ Сто Осо АТ АТО СОТ АТС ТАС ОТ ТТТ САС ОСС БАС ТАТ СТО ТАТ 672 5ег Із Аіа бег Меї біу Ії Ту Ма) РМє Азр Аіа Азр Тує Ів Тус 210 215 220 САА СТО СТО ОАА САА САС бАТ СОС САТ ОА МАС ТОС АОС САС САС ТТТ 720 51 їсч во бі 010 кв Азр Агу Азр біз м бег бат Ніз Азр бле СОС ААА бАТ ТТО АТТ ССС ААб АТС АСС ОбАА ОСС бот СТО ОСС ТАТ Осо 768 сіу цуз Азр 121 І16 Рко цЦуз І16 Таж біз Аза О1у їжи лів Тухк Аза 245 250 255 САС сСсо ТтТо сСсб сто тТсСтТ ТоС СтТА САА ТСС БАС ССО АТ ОСС бАо ССО 816 Ніз Рко Рпе Рго Гаеч бег Суз Уаї біл б5ек Азр РтІо Азр А1а бі го 260 255 270 ТАС ТО СОС САТ СТО ОСТ АСб СТО САА ОСТ ТАС То АЛА осо лАС Сто 864
Тут гр Ахф Мер Ма) б1у 7йг ех б1м Аа Туг Ттр був Аза Ха їв 25 280 255 САТ Сто бос СТ ОТО СТО СС. АЛА СТО САТ АТО ТАС АТ СОС ЛАТ ТО 312 Кар ієч Аїа Зег Угі Уаї го цуз Цеч Азр о Кеб ТугоАзр Ах Аза тер 250 2955; хо ССА АТ? СОС АСС ТАС ЛАТ СА ТСА ТТА ССО ОСА бсо МА ТС 070 С 960 То 116 Асф Тс Тут Азп бід бепг іш Рго Рто Азії цу РМ Ма) бій 305 мо . 35 320 САТ СбС ТО об? лоС САС боб АТО АОС СТТ ЛАС ТСА Сто бтт ТОС бос 108 Хзр Атд бет б1у бех Ніз біу Мет ТЛІ 10 АЛзп бет ач Узі 5вх б1у 3 330 335 Ост тот сто АТС ТС 007 700 079 670 ото СА ТОСТИ сто с тоб 1056 б1у Суз Маії І1в Зек б)у 5ес Маї Уа1! Укі біп Зес Уа! це Рів бег 30 35 Ую сбс стт обс ОТО ЛАТ СА ТС ТОС ААС АТТ САТ 7ОС СС СТА ТО ТТ по. АгФ Уаї Агд Угі Азп 5ес РМе Суз Азп 116 Азр бет А1а Уві Мо 129 355 360 365 ССо сАА СТА ТОб СТА ОТ СОС ТО ТОС сот СТО СОС Сбс тос сто АТС 1152 Рто бі Ма Тгр Узі б1іу Аг9 бег Суз Агу їв М Агу Суз Маї 116 з з 30 САТ СС? ОСТ ТОТ СТІ ММ ССб САА СОС АТО ОТО ММ? СОТ СА АЛ ОСЬ 1200 Хор Аг із Суз Ма) І1а Рго 023 біу Мек Уаї І16 біу біб ля Ха 365 У КО 400 І Сб бАА САТ ОСА СОТ ССТ ТС ТАТ СбТ СА САА бАА бос АТС СТО Сто па біз 619 Азр Ма Лід АФ Рйє Тут Лтд бет 015 015 0)у 116 Узі їво «5 40 а , СТА АСб СОС СА АТО СТА СОб МАС ТТА 605 САТ АЛАА САС САС СОА 12933 Уаї Твх Аг біз Мехієт Агд буз їв б1у Ніз цуз біп бі Аг ГИ 1255 1ю 7 1296
16. ДНК-молекула по п. 11. отличающаяся тем, что включаеєт Е.соїі-дід С16, которая имеет последовательность: АБС А ТА МАМ МК б смт ММ ос ос ЩІ Моб уаІ бек 16» 01) 1уз дов Мор Віз оо Мек Ту Ма лку 01 мо 1 , й го САТ МА МТМ Ж СМ МА СМ б ОК обА С т МО С М Рго їви 0уз бег У) Ма Мо Пе м Ма біу бу му бу 7 му НІ 5 | КІ «Мб ОМ МА МО МТ А СА ОСА Ам СО С СТА С ТОК 1 12 цуз Мер Іво Тй: Хол буз лід За буз Рго Ма Уа) із ле 01у Ух І ій 5 ; Мб ТК ОК МТ Ме б ТО СМ Км й Ме Се 1: бу буз РМ леф 116 119 Мор ре Лія мо баг два Су; 116 Ма б Ні В ІТ бю ММК ОО М ж сю М Мо см тА См Ко С АС С НТ Фу Пе Асу Агу Ме бу Уа) 16 ТЕ б1п Тук біп бог Кіз Те у ЩІ ТЕ м СМ СА САС тт САС СОС бос о ТА МК МВА Та) За Кіз пе бій леу 01у гр бог Ре бю доп б)о б) Ме Кл ЇМ М 6» бАб ТМ б БАР СТО СТ СА ОСА СМ СМ АБА М МА б б Ме 15 біо РМ Ма) Лор мо іа го Кіа б)п б)п Агу Мої цу б1у б)х МА то ТТ Сб б Ме ос Ат боб оте АС СА АС СТ АС МИ Ме КІ Тер тут му біу тк Азію Мер ма Уа) ве бій зп му зр Пе Це 15 1 15 СОР Ст ТАТ АКА ОСб СХ ТАС б б ММ СМ б ЯК б ММС де Мф лгд тус був Мія б) ух Уа) Уа) Це мо ліз 01у Мр Кіз Це 15 1 16 ТМ Мб САХ б ТА Мо СТ АТ СМ М САТ САС б АХ МА б чо Туг був бій Мер тук бек Аеф Мех їмх 11е Азр із Уа) 01м уз б1у 15 Й 15 М
СТА СОТ тот МСС ТТ ОТТ ТОТ АТО ССА СТА ССО АТТ ОЛА ЛА бсС ТС з2в Угії Аг Суз Пот Уа! Маї Суз Мек Рто Уаї Рко І19 Ф1й 019 Аїа ех 65 170 з 175 ОСА ТТтТ бос от? АТО бСо СТТ САТ САб ААС САТ АЛЛА АСТ АТО САА ТТ 576 Кіа гне С1у Угі Меє Лія Уаї АЗр б1ч Азп Азр Шуз їйк І1Ф Січ РМЄ 120 185. 180 ОТ СА АКА ССТ ОСТ ААС ССО ССО ТСА АТО ССО ЛАЄ ООАТ ССО АС ЛА 5214 Маї бішоцуз Рто Ліза ХЛал Ро Рто Зет Ме РО Азп Азр Ро бег Муз 195 200 205 тТСтІ Сто Осо АСТ АТО СОТ АТС ТАС ОТО ТТТ САС ОСС САС ТАТ Сто ТАТ 672 Зек іїєи А1а бек Мес б1у Іі Тук Уа1ї Ріє Азр Аіа Азр Тух ївч Туг 210 215 220 сл сто СТО ОЛА САЛО ОАС САТ СОС САТ бЛО ЛАС ТОС АОС САС САС ТТ 720 біз їм їв біз б19 Азр Азр Ак Азр 01 лап Зек Зк Ніз Азр Ре 225 230 235 240 бос ААА САТ ТТ АТТ ССС лАС АТС АСС бАА бос бот Сто бос ТАТ осо, 768 сіу груз Азр їФи 116 Рго їуз І14 Твг бі Аіз Сіу їх лЛіа Тук ЛІа 215 250 и 255 САС соб о ттТс соб СтТС ТСТ ТосС СоТА САА ТОС бАС Особ бАТ сосС соло сс 816 Мніз Рго Ре Рто ії2з Зех Суз Маї Сіп Зех Азр Рго Азр Аїа 010 Рго 250 265 270 ТАС ТО СОС САТ Ото ОТ АСО СТО ОАА ОСТ ТАС ТО ААХ Осо КАС Сто 864 Тут Тр АгФ Азр узі С1у ТРх Те 015 Лія Тут Тгр уз Аза Азп Ії . 275 240 285 сАТ Сто ОСС ТСТ СТО ОТО ССО САЛА СТО САТ АТО ТАС САТ СОС АлАТ тоб 912 АЗр 12ч діа бек уаї Маї Рко Сі їец Азр Мес Тукг Азр Аг Аза ТІр 290 295 300 : сСА АТТ СОС АОС ТАС ЛАТ САД ТСА ТТА ССО ССА Осо АЛА ТТС сто САб 960 Рсо Ії. АгФ ТВІ Тук Азп біз 5Зег І Рго Рхо Аіа Буа Рпє Уугі біп 395 310 315 320 бАТ СОС ТС ОбІ АОС САС ОО АТО АСС СТ лЛАС ТСА СТО бтт Тос АС 1008 Хзр АгФ Зег б1у бех Ніз б1іу Мес ТІ Це Хап Зег їм Маї Зег Аз? 325 330 335 бот тот сто АТС тос бот тсо бто бто ото сла тососттТ сто тто тоб 1056 Сіу Суз Уа1 І16 бек с1у бек Уаї Уаї Маї біп 5Зек Уаї іч Ре Зег зе 345. 350 СОС отт СОС Ото ААТ ТСА ТТС ТО МАС АТТ САТ ТСС бСС бтТА То ТА 1104 Ак: Уаї Ак Маї Азп 5етг РпФ Суз Азп 216 Азр бек ліа Маї 12; 189 355 зво 365 Ссо СА СТА тоб бТА сот СОС тс тос сот сто СОС сСосС тосС ото АТ 1152 Рго біз Маї Тгр Уаї б1іу АЛгу б5ехг Суз АЛкгФ Ізи Акд Ах Суз уаї 116 зт 375 340 сАтТ СОТ ОСТ от ОТ АТТ ССО ОА ОбС АТО СТО АТ? бот СА АМС ОСА 1200 Азр Агу Аіа Суз Уаї І1є Ро біз О1у Мес Уаї Іі б1у біз Азп А1а 385 390 395 400 СА САА САТ ОСА СОТ СОТ ТТС ТАТ СОТ ТСА ОДА САХА бос АТС бо Сто 12468 біз бін Азр Аіз Агу Аг РпФ Туг АгФ бек біш 019 б1у 119 Угі їй 405 40 415 ОТА АСО СОС ЛА АТО СТА СОб АЛО ТТА 008 САТ КАХ САС МО СсА 1293 Уаї Тл АгФ'Ф1ій Мебс їв Аг Буз ї2о біу Кіз Цуг біп біз Ах 420 Й 425 «30 ТАК й . 1296
17. ДНК-молекула по п. 11, отличающаяся тем, что включаеєт І Т2-919 С.
18. ДНК-молекула по п. 11, отличающаяся тем, что включаєт малую субьединицу АДФ-глюкозо-пирофосфорилазь картофеля, которая имеет последовательность: СС АТО.ОСО ОСТ ОС АТТ 00) 00С ТА АЛЛА ТСТ ТСА ОСТ ТСТ ТТ лАС " Меб Аіа А)з бог 110 615 М Мїаз цуз бег беї Рко бек Зег Азп 1 5 " 10 Щ 15 ААТ ТОС АТС АКТ ЛО МА МАСА ЛАТ АТ ТС? КАСА Сб ост ТА С АК 95 АзпоСуз І1е Аза біо Аг заг Азп Кер Зх Твт Лід А1а Уаі бас Заг й 20 й зо КАСА ЛАТ СТО ТСА ТТТ ТОб ТСТ ТСТ САТ СТС ОСС ОО САС АЛ 79 АТО 13 Агд Азп їв бег Рбе бет 5ег Зек Ніз їси Аа біу Азр.цуз 12 Мес 35 40 45 ССТ СТА ТО ОС ТА СОТ ТОС САХ ОбА СТО ССА ТС ЛАТ СТО АбА АбА 141 Рго чаї Зег бег Іа» А:9 5ех бій біу Мгі Асу РМе Азп Угі Ах М Й 50 55 6 СТ ССА АТО АТ СТО 120 ССА АЛЛО ОСТ СТ ТСТ АТ ТС САС АТ ТА 239 бег Рго Мес І1 Ма! Гех Рго цуз А1а Уаії Зех Азр бег біп Азп бег 65 7 КА САС АСА ТОТ СТА САС ССА бАТ ОСТ АОС СО МОТО ОТ То БА АТ АТ 27 бій Тк Суз Із лзр Рто Азр Х1з Зег Агу бег Уа! їм біу 116 116 о 15 50 35 СТТ ббА бот бо ОСТ 000 СС СА СТІ тат ССТ СТА АСТ АХА АХА ХА 335 ім біу б1у біу А11 біу Тлг Агф 14 Тух Рго 125 Тах уз цуз мг 19 195 1ю Й ОСА ЛАБ ССА ОСТ бгТ ССА СТ ОСА ОСА АЛТ ТАТ Сб? СТО АТТ САС АТ 33 Ма цуз Рго Аіа Уа! Рго 12 біу Аїа Хзп Тук Агу 1420 ІЗ Ар 116 115 120 125 Й ССТ ТА АОС ХААС ТОС ТО МАС МОТ ЛАТ АТА ТС ХАб АТ ТАТ б? сте 431 ?го Уа) бек Азп Суз а Азп баг Азп 116 бетх цуз Ті Тус Маї (2ч 130 135 10 АСА САА ТС АМС ОСТ ОСС СТ СТО ААТ СОС САС СТ? ТА ОбА ОСА ТАТ 49 ТАх біб РлЛФ зл Зек А1а бек їв Аза Ах Ніз 14 Зег Аг Лів Тух 150 15 ОСТ М ААС КАМ ООА ОА ТАС АЛА. МАС ОА 0ОС 777 079 ЛА БТ СТ 521 Кіа бег Азп кет біу б1у Тут уз Азп 01 б1у РБе Уа! 610 Ма! 18 160 165 10 15 бСТ ОСТ САА сАА ЛОТ ССА СА ЛАС ССС бАТ ТО Тс САС бос АС ОСТ 575 Ха Ма біп бій Зетх Ріо б1іч лап Рго Лзр ?гр РМє біп біу Тйе Ма . 10 185 120 бАТ ОСТ СТС АбА САА ТАТ СТО 700 То 77Т СА ОА САТ АСТ сТТ СТт 423 Азр лів Уа! Агд 61 Тут їз Тхр 12 РБе б15 біз Ніз Тр Уаї Мох 135 200 й 205 САА ТАС СТ? АТА СТ? ОСТ ОА бАТ САТ СТО ТАТ СА АТО бА? ТАТ АХА 1 біо тує 149 116 1ги Аза біу лер Ніз Іви Туг Агд Мей Лор Тух б1ч 210 213 220 МАб ТТ АТТ СА БОС САС АСА САА АСА САТ ОСТ бАТ АТТ АС СТ 00 713 цуз РМме 116 біл Аіа Ніз Аг біз Тйг Азр А1а Азр І1є тах уаї лій 225 230 235 ОСА СТО ссСА ММ бас сАб ЛАб Сбт бос АСТ бСА ТТ бот СМ А М ти
Ма си Ріо Мек Хзробіш їухє Лу Лів Тіт Аа Ре б1у їди Ко уз 1 15 250 255 АТ СМС ОАА ОА ОСА Об; АРТ АТТ САЛА ТТ? ОСА СА АХА Сб СХ ОСА 15 116 Азр бін 615 біу Мгд Т1є 11 02) РМ дів бію уз Рео бів б1у ж 265 й 2 САС СЬА ТТО САЛА ОСА АТФ ААА СТО САТ АСТ АОС АТ? ТТА 607 С АТ 363 біз С.п цеч біп А)а Мехс цуз Ма! Лзр Тл ТАх І)е їв біу (49 Азр й 25 200 15 САС А З БА ОСТ ЛА бМ М ССТ т МОСС АСТ АТО СОТ АТ ТАТ з Кор 0,3 Му АЇя уз біз Мес Рго Ре І1е Ма бег Меб С1у 11е Туг 1 255 0 ТС МТ АОС АХ БАС ОМ МО ТТА МАС СТА СТ? СбтТ АС АЛ М СС 353 М8і 11) 5ах Щуз дар Узі) Мех 19 Азп 10м 10у Агу Азр цух РМ Ро М: з У 000 ОСС ЛАТ САТ ТТ 007 МТ ОАА ТТ АТТ ОСТ ОСТ ОСА АСТ ТС СТ 1007 б1іу А1а зп Азр Рпе біу бег біш Ха! 114 Рго біу Аза Тв Зег ви 320 35 330 335 - ОО АТС АОА СТО САЛ ОСТ ТАТ ТТА ТАТ САТ бОО ТАС ТО БАЛА САТ АТ 1055 біу Ме Ас Уа) біп Ліз Тух їв Тух Хар біу Тук Тір б1у зр 116 340 345 150 ОТ АСС АТ? АХ ОСТ ТМ ТАС ААТ ОСС ЛАТ ТО бос АТ АСА МА ЛА 1103 б1іу тп 116 біб лій РМ Тух лап лій леп їаи б1у 116 Тв уз суз 353 360 365 ССо ТС ССА САТ ТТ? АОС ТТ ТАС САС СбА ТОК ОСС ССА М ТАС СС 151 Тго Уа: Ріо Азр РМе бек Рлє Туг Азр Аг бег Аіа Рто І18 Тут Т7лх 3 375 380 САА ССТ СОА ТМ СТА ОСА ССА ТСА АЛА АТО СТІ бАТ ОСТ бАТ б АСК КО бій Рго Агд Тук Цех Ро Рго бех Цуз Ме; ач Азр 1 Азр Уаї Тіт 385 30 395 САТ АСТ ТС М 00Т бАХ 007 То7 07 АТС ЛА АС ТО? ЛАБ МТ САТ пи Й Мар Зет Уа! 116 біу бі біу Суз Ма) 119 цуз Аза Суз цуз 116 Кіз 100 405 чо 115 САТ ТС бтб ОТ 0ОбА СТ МСА ТА те УТА ТСА бАб об ОСА ХМ МА 1235 Ніз Зет Уа! Уа! б1у їєч Агу 5ег Сує 116 Бех б15 б1у А1а 116 Це 120 125 130 САА САС ТС СТІ ТО АТО 000 ОСА бАТ ТАС ТАТ бАб СТ бАТ ОСТ АС 133 біз Азр 5ег ем їеу Мет біу Ліз Хар Тут Тут 015 Тлх Азр А) Азр 155 10 45 МАЛО ТО СМ ОСТ ОСА ААб БОС АСТ ОТО ОСА АТ? бос АТС б МО 1381 Аг9 цуз це іо Ліа Аіа уз біу Зех Ма) Рго 116 б1у 116 61у Суз 4150 15 190 МАТ ТТ САС АТ? АЛА МА БОС АТТ АТС бАС ЛАБ МАТ ОСС СОТ АТА 000 1015 АзпоСуз Ніз І1є цуз Аг Аа 11 116 зро буз Азл лів лід 11е бу 170 15 САС ЛАТ ОТ АЛ АТС АТ АЛ АЛ САС КАС ОТ САА БАХ 0С6 бС7 ци Азр Азп Уаі уз 1) 116 Азп бух Хзр Азп Узі б)8 615 Ага Ма го 480 чо 490 195 САД АСА бАТ ОбА ТАС ТС АТС АЛО АТ бо АТ? бо АСС СТ Ме МО 1355 тм у віх тях Мор 01У Тут Ре 116 у» баг біу Ше Узі ТМ: УК) чок кор Ку КЕ 5 5 ; 1575 смт ост Мо АТ ОСА Мото АТО МО Мо ТбАТОЛОСТО 3 Хзр Ма їмо Пе рго Заг б1у Де Цю Те 515 7": 32
19. ДНК-молекула по п. 11, где АДФ-глюкозо-пирофосфорилазой является АДФ-глюкозо-пирофосфорилаза зндосперма пшениць.
20. ДНК-молекула по п. 11, где АДФ-глюкозо-пирофосфорилазой является АДФ-глюкозо-пирофосфорилаза зндосперма риса.
UA93070740A 1990-06-18 1991-07-06 Спосіб одержання генетично трансформованих рослин з підвищеним вмістом крохмалю, рекомбінантна дволанцюгова днк-молекула UA43827C2 (uk)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US53976390A 1990-06-18 1990-06-18
US70966391A 1991-06-07 1991-06-07
PCT/US1991/004036 WO1991019806A1 (en) 1990-06-18 1991-06-07 Increased starch content in plants

Publications (1)

Publication Number Publication Date
UA43827C2 true UA43827C2 (uk) 2002-01-15

Family

ID=27066202

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
UA93070740A UA43827C2 (uk) 1990-06-18 1991-07-06 Спосіб одержання генетично трансформованих рослин з підвищеним вмістом крохмалю, рекомбінантна дволанцюгова днк-молекула

Country Status (12)

Country Link
US (1) US6538178B1 (uk)
EP (1) EP0536293B1 (uk)
JP (1) JP3325022B2 (uk)
AT (1) ATE212670T1 (uk)
AU (1) AU644203B2 (uk)
CA (1) CA2081885C (uk)
DE (1) DE69132916T2 (uk)
FI (1) FI925228A0 (uk)
IE (1) IE912059A1 (uk)
RU (1) RU2148081C1 (uk)
UA (1) UA43827C2 (uk)
WO (1) WO1991019806A1 (uk)

Families Citing this family (463)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6013861A (en) * 1989-05-26 2000-01-11 Zeneca Limited Plants and processes for obtaining them
AU644619B2 (en) 1989-12-21 1993-12-16 Advanced Technologies (Cambridge) Limited Modification of plant metabolism
US5498830A (en) * 1990-06-18 1996-03-12 Monsanto Company Decreased oil content in plant seeds
CA2146998A1 (en) * 1992-10-14 1994-04-28 Colin Roger Bird Novel plants and processes for obtaining them
GB9223454D0 (en) * 1992-11-09 1992-12-23 Ici Plc Novel plants and processes for obtaining them
GB9307408D0 (en) * 1993-04-08 1993-06-02 Danisco Transgenic plants
DE4317596A1 (de) * 1993-05-24 1994-12-01 Schering Ag DNA-Sequenzen und Plasmide zur Herstellung von Zuckerrüben mit veränderter Saccharose-Konzentration
WO1994028146A2 (en) * 1993-05-24 1994-12-08 Hoechst Schering Agrevo Gmbh Dna sequences and plasmids for the preparation of sugar beet with changed sucrose concentration
PL180247B1 (pl) * 1993-05-28 2001-01-31 Monsanto Co Rekombinantowa, dwuniciowa czasteczka DNA PL PL
US5498831A (en) * 1993-07-23 1996-03-12 Dna Plant Technology Corporation Pea ADP-glucose pyrophosphorylase subunit genes and their uses
GB9412018D0 (en) * 1994-06-16 1994-08-03 Cambridge Advanced Tech Modification of starch content in plants
US5750876A (en) * 1994-07-28 1998-05-12 Monsanto Company Isoamylase gene, compositions containing it, and methods of using isoamylases
US5536653A (en) * 1994-11-04 1996-07-16 Monsanto Company Tomato fruit promoters
US5716837A (en) 1995-02-10 1998-02-10 Monsanto Company Expression of sucrose phosphorylase in plants
WO1998058069A1 (en) * 1997-06-17 1998-12-23 Monsanto Company Expression of fructose 1,6 bisphosphate aldolase in transgenic plants
US6716474B2 (en) 1997-06-17 2004-04-06 Monsanto Technology Llc Expression of fructose 1,6 bisphosphate aldolase in transgenic plants
US6441277B1 (en) 1997-06-17 2002-08-27 Monsanto Technology Llc Expression of fructose 1,6 bisphosphate aldolase in transgenic plants
AU9197298A (en) * 1997-08-07 1999-03-01 Washington State University Research Foundation Regulatory mutants of adp-glucose pyrophosphorylase and related compositions andmethods
US6887708B1 (en) 1998-03-20 2005-05-03 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Plant control genes
IL125425A (en) * 1998-07-20 2008-12-29 Israel State ADPGPPase CONTROL OF STARCH SYNTHESIS IN TOMATOES
DE19836660A1 (de) 1998-08-13 2000-02-17 Hoechst Schering Agrevo Gmbh Herbizide Mittel für tolerante oder resistente Sojakulturen
EP2319315B2 (de) 1998-08-13 2018-02-21 Bayer CropScience AG Herbizide Mittel für tolerante oder resistente Maiskulturen
DE19836673A1 (de) 1998-08-13 2000-02-17 Hoechst Schering Agrevo Gmbh Herbizide Mittel für tolerante oder resistente Zuckerrübenkulturen
DE19836659A1 (de) 1998-08-13 2000-02-17 Hoechst Schering Agrevo Gmbh Herbizide Mittel für tolerante oder resistente Baumwollkulturen
BR9914299A (pt) 1998-08-19 2001-11-27 Cambridge Advanced Tech Uma nova sequência de ácido nucléico de umplastìdio-alvo, uma nova sequência ß-amilase, umpromotor susceptìvel a estìmulo e uso das mesmas
WO2000028018A1 (en) * 1998-11-10 2000-05-18 Maxygen, Inc. Modified adp-glucose pyrophosphorylase for improvement and optimization of plant phenotypes
AU7647000A (en) * 1999-08-20 2001-03-19 Basf Plant Science Gmbh Increasing the polysaccharide content in plants
US7517975B2 (en) 2000-09-26 2009-04-14 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Nucleotide sequences mediating male fertility and method of using same
EP2206703A1 (de) 2008-12-30 2010-07-14 Bayer CropScience AG Pyrimidinderivate und ihre Verwendung zur Bekämpfung unerwünschten Pflanzenwachstums
DE10135642A1 (de) 2001-07-21 2003-02-27 Bayer Cropscience Gmbh Herbizid-Kombinationen mit speziellen Sulfonylharnstoffen
EP1521770B1 (en) 2002-06-14 2008-11-26 Monier Tadros Method for the production of protamine
EP1534843A4 (en) * 2002-08-02 2007-04-25 Basf Plant Science Gmbh SUGAR AND LIPID METABOLISM REGULATORS IN PLANTS IV
AU2003271583B2 (en) 2002-09-10 2008-11-20 Sungene Gmbh & Co. Kgaa Transgenic expression cassettes for expressing nucleic acid sequences in sink tissues of plants that store carbohydrate
EP1604027A2 (de) 2003-01-20 2005-12-14 Sungene GmbH & Co. KGaA Expressionskassette mit promotoren der stärkesynthase 3 zur expression von nukleinsäuren in stärkehaltigen geweben von pflanzen
MXPA05008295A (es) 2003-02-05 2005-09-20 Bayer Cropscience Gmbh Amino-1,3,5-triazinas sustituidas en n con radicales biciclicos quirales, procedimiento para su preparacion, composiciones de las mismas, y su uso como herbicidas y reguladores del crecimiento de las plantas.
WO2005059121A2 (en) 2003-12-16 2005-06-30 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Dominant gene suppression transgenes and methods of using same
KR20060115904A (ko) * 2003-12-24 2006-11-10 바이엘 크롭사이언스 게엠베하 식물 성장 조절
ATE516295T1 (de) 2004-01-20 2011-07-15 Monsanto Technology Llc Chimäre promotoren zur verwendung in pflanzen
WO2008090048A2 (en) 2007-01-26 2008-07-31 Basf Se 3-amino-1,2-benzisothiazole compounds for combating animal pest ii
DE102004011007A1 (de) 2004-03-06 2005-09-22 Bayer Cropscience Ag Suspensionskonzentrate auf Ölbasis
AU2005226872B2 (en) 2004-03-27 2010-10-14 Bayer Cropscience Ag Herbicide combination
DE102004016496A1 (de) 2004-04-03 2005-10-20 Bayer Cropscience Gmbh Herbizid wirksame 3-Amino-2-thiomethyl-benzoylpyrazole
US8030540B2 (en) * 2004-04-21 2011-10-04 Basf Plant Science Gmbh Transgenic corn having enhanced nutritional qualities
EP2039252B1 (en) 2005-02-22 2011-08-03 Basf Se Composition and method for improving plant health
EP1728430A1 (de) 2005-06-04 2006-12-06 Bayer CropScience GmbH Herbizide Mittel
DE102005057250A1 (de) 2005-11-29 2007-06-06 Bayer Cropscience Gmbh Wirkstoffe zur Steigerung der Stressabwehr in Pflanzen gegenüber abiotischem Stress und Methoden zu ihrer Auffindung
EP2361986A1 (en) 2006-05-16 2011-08-31 Monsanto Technology LLC Use of non-agrobacterium bacterial species for plant transformation
US7666677B2 (en) 2006-07-05 2010-02-23 Luis Fabricio Medina-Bolivar Production of stilbenes in plant hairy root cultures
UA110598C2 (uk) 2006-11-10 2016-01-25 Басф Се Спосіб одержання кристалічної модифікації фіпронілу
CA2667117C (en) 2006-11-10 2016-04-26 Basf Se Crystalline modification of fipronil
WO2008055883A1 (en) 2006-11-10 2008-05-15 Basf Se Crystalline modification of fipronil
MX2009004323A (es) 2006-11-10 2009-05-05 Basf Se Nueva modificacion cristalina.
EP1925203A1 (de) 2006-11-13 2008-05-28 Bayer CropScience AG Herbizid-Kombinationen enthaltend Amidosulfuron und ein Pyridinherbizid
EP2164323A1 (en) 2006-12-15 2010-03-24 Rohm and Haas Company Mixtures comprising 1-methylcyclopropene
DE102006059941A1 (de) 2006-12-19 2008-06-26 Bayer Cropscience Ag Substituierte 2,4-Diamino-1,3,5-triazine, Verfahren zu deren Herstellung und deren Verwendung als Herbizide und Pflanzenwachstumsregulatoren
UA96178C2 (uk) 2007-01-19 2011-10-10 Басф Се Фунгіцидна суміш, засіб на її основі, спосіб одержання засобу, спосіб боротьби з фітопатогенними грибами та посівний матеріал
EP1952690A3 (en) 2007-01-31 2009-04-22 Basf Se Pesticidal mixtures based on triazolopyrimidines and insecticides
EP1952691A3 (en) 2007-01-31 2008-09-17 Basf Se Method for improving plant health by application of a triazolopyrimidine derivative
EP2131652A2 (de) 2007-02-06 2009-12-16 Basf Se Insektizide als safener für fungizide mit phytotoxischer wirkung
DE102007008528A1 (de) 2007-02-21 2008-08-28 Bayer Cropscience Ag Herbizid-Kombinationen mit speziellen Pyrazolyloxyphenyl-Derivaten
US7838729B2 (en) 2007-02-26 2010-11-23 Monsanto Technology Llc Chloroplast transit peptides for efficient targeting of DMO and uses thereof
EP2450448B1 (en) 2007-03-09 2014-09-17 Monsanto Technology LLC Methods for plant transformation using spectinomycin selection
DE102007029603A1 (de) 2007-06-27 2009-01-08 Bayer Cropscience Ag Verwendung von N2-Phenylamidinen als Herbizide
DE102007012168A1 (de) 2007-03-12 2008-09-18 Bayer Cropscience Ag 2-[Heteroarylalkyl-sulfonyl]-thiazol-Derivate und 2-[Heteroarylalkyl-sulfinyl]-thiazol-Derivate, Verfahren zu deren Herstellung, sowie deren Verwendung als Herbizide und Pflanzenwachstumsregulatoren
EP2114163B1 (en) 2007-04-12 2017-05-10 Basf Se Pesticidal mixtures comprising a cyanosulfoximine compound
EP1980150A1 (en) 2007-04-13 2008-10-15 Basf Se Fungicidal mixtures based on triazolopyrimidine compounds
US8288315B2 (en) 2007-04-25 2012-10-16 Basf Se Fungicide mixtures
DE102007026875A1 (de) 2007-06-11 2008-12-24 Bayer Cropscience Ag 3-Cyclopropyl-4-(3-thiobenzoyl)pyrazole und ihre Verwendung als Herbizide
EP2014169A1 (de) 2007-07-09 2009-01-14 Bayer CropScience AG Wasserlösliche Konzentrate von 3-(2-Alkoxy-4-chlor-6-alkyl-phenyl)-substituierten Tetramaten und ihren korrespondierenden Enolen
DE102007036702A1 (de) 2007-08-03 2009-02-05 Bayer Cropscience Ag Synergistische kulturpflanzenverträgliche herbizide Kombinationen enthaltend Herbizide aus der Gruppe der Pyrazolyloxyphenyl-Derivate
CN101802201A (zh) 2007-08-03 2010-08-11 先锋高级育种国际公司 影响植物雄性生育力的msca1核苷酸序列以及使用其的方法
WO2009037242A2 (en) 2007-09-20 2009-03-26 Basf Se Combinations comprising a fungicidal strain and an active compound
EP2052607A1 (de) 2007-10-24 2009-04-29 Bayer CropScience AG Herbizid-Kombination
EP2052613A1 (de) 2007-10-24 2009-04-29 Bayer CropScience AG Herbizid-Kombination
EP2052611A1 (de) 2007-10-24 2009-04-29 Bayer CropScience AG Herbizid-Kombination
EP2052603A1 (de) 2007-10-24 2009-04-29 Bayer CropScience AG Verwendung des 2-lodo-N-[(4-methoxy-6-methyl-1,3,5-triazin-2-yl)carbamoyl] benzolsulfonamids und/oder dessen Salze zur Bekämpfung von unerwünschtem Pflanzenwuchs in ausgewählten Nutzpflanzenkulten oder Nichtkulturland
EP2052605A1 (de) 2007-10-24 2009-04-29 Bayer CropScience AG Herbizid-Kombination
EP2052609A1 (de) 2007-10-24 2009-04-29 Bayer CropScience AG Herbizid-Kombination
EP2052608A1 (de) 2007-10-24 2009-04-29 Bayer CropScience AG Herbizid-Kombination
EP2052610A1 (de) 2007-10-24 2009-04-29 Bayer CropScience AG Herbizid-Kombination
EP2052604A1 (de) 2007-10-24 2009-04-29 Bayer CropScience AG Salz des 2-lodo-N-[(4-methoxy-6-methyl-1,3,5-triazin-2-yl)carbamoyl] benzolsulfonamids,Verfahren zu deren Herstellung, sowie deren Verwendung als Herbizide und Pflanzenwachstumregulatoren
EP2052615A1 (de) 2007-10-24 2009-04-29 Bayer CropScience AG Herbizid-Kombination
EP2052606A1 (de) 2007-10-24 2009-04-29 Bayer CropScience AG Herbizid-Kombination
EP2052614A1 (de) 2007-10-24 2009-04-29 Bayer CropScience AG Herbizid-Kombination
EP2052612A1 (de) 2007-10-24 2009-04-29 Bayer CropScience AG Herbizid-Kombination
EP2064953A1 (de) 2007-11-29 2009-06-03 Bayer CropScience AG Herbizid-Azol-Kombination
EP2065373A1 (de) 2007-11-30 2009-06-03 Bayer CropScience AG Chirale 3-(Benzylsulfinyl)-5,5-dimethyl-4,5-dihydroisoxazol-Derivate und 5,5-Dimethyl-3-[(1H-pyrazol-4-ylmethyl) sulfinyl]-4,5-dihydroisoxazol-Derivate, Verfahren zu deren Herstellung sowie deren Verwendung als Herbizide und Pflanzenwachstumsregulatoren
EP2065374A1 (de) 2007-11-30 2009-06-03 Bayer CropScience AG 2-(Benzyl- und 1H-pyrazol-4-ylmethyl)sulfinyl-Thiazol-Derivate als Herbizide und Pflanzenwachstumsregulatoren
EP2072512A1 (de) 2007-12-20 2009-06-24 Bayer CropScience AG Herbizide Verbindungen auf Basis von N-Azinyl-N'-pyridylsulfonyl-harnstoffen
DE102008006005A1 (de) 2008-01-25 2009-07-30 Bayer Cropscience Ag Herbizide Verbindungen auf Basis von N-Azinyl-N'-pyridylsulfonyl-harnstoffen
US20100311582A1 (en) 2008-01-25 2010-12-09 Syngenta Crop Protection, Inc. Chemical compounds
EP2092825A1 (de) 2008-02-21 2009-08-26 Bayer CropScience Aktiengesellschaft Herbizid-Kombinationen enthaltend ein Herbizid der Klasse der Diamino-s-triazine
EP2095711A1 (de) 2008-02-27 2009-09-02 Bayer CropScience AG Herbizid-Kombinationen enthaltend Diflufenican
EP2095712A1 (de) 2008-02-27 2009-09-02 Bayer CropScience AG Herbizid-Kombinationen enthaltend Diflufenican
EP2095710A1 (de) 2008-02-27 2009-09-02 Bayer CropScience AG Herbizid-Kombinationen enthaltend Diflufenican
EP2103216A1 (de) 2008-03-19 2009-09-23 Bayer CropScience AG Ausgewählte Salze des 3-(5,6-dihydro-1,4,2-dioxazin-3-yl)-N-[(4,6-dimethoxypyrimidin-2-yl)carbamoyl] pyridin-2-sulfonamids, Verfahren zur deren Herstellung, sowie deren Verwendung als Herbizide und Pflanzenwachstumsregulatoren
EP2105437A1 (de) 2008-03-26 2009-09-30 Bayer CropScience Aktiengesellschaft Herbizid wirksame 4-(3-Aminobenzoyl)-5-cyclopropylisoxazole
EP2262896B1 (en) 2008-04-07 2014-01-22 Monsanto Technology LLC Plant regulatory elements and uses thereof
EP2110019A1 (de) 2008-04-19 2009-10-21 Bayer CropScience AG Herbizide Verbindungen auf Basis von N-Azinyl-N'-phenylsulfonylharnstoffen
EP2112143A1 (de) 2008-04-22 2009-10-28 Bayer CropScience AG 2-(Benzylsulfonyl)-Oxazol-Derivate, chirale 2-(Benzylsulfinyl)-Oxazol-Derivate 2-(Benzylsulfanyl-Oxazol Derivate, Verfahren zu deren Herstellung sowie deren Verwendung als Herbizide und Pflanzenwachstumsregulatoren
EP2112149A1 (de) 2008-04-22 2009-10-28 Bayer CropScience Aktiengesellschaft 2-[(1h-Pyrazol-4-ylmethyl)-sulfonyl]-Oxazol-Derivate, 2-[(1H-Pyrazol-4-ylmethyl)-sulfanyl]-Oxazol-Derivate und chirale 2-[(1H-Pyrazol-4-ylmethyl)-sulfinyl]-Oxazol-Derivate, Verfahren zu deren Herstellung sowie deren Verwendung als Herbizide und Pflanzenwachstumsregulatoren
EP2127521A1 (de) 2008-05-29 2009-12-02 Bayer CropScience Aktiengesellschaft Herbizid wirksame 4-(3-Alkylsulfinylbenzoyl)pyrazole
EP2135865A1 (de) 2008-06-17 2009-12-23 Bayer CropScience AG Substituierte 1-(Diazinyl) pyrazol-4-yl-essigsäuren, Verfahren zu deren Herstellung und deren Verwendung als Herbizide und Pflanzenwachstumsregulatoren
CN102083315B (zh) 2008-07-04 2014-07-16 巴斯夫欧洲公司 包含取代的1-甲基吡唑-4-基甲酰苯胺的杀真菌混合物
EP2145537A1 (en) 2008-07-09 2010-01-20 Bayer CropScience AG Plant growth regulator
EP2147919A1 (de) 2008-07-24 2010-01-27 Bayer CropScience Aktiengesellschaft Heterocyclisch substituierte Amide, Verfahren zu deren Herstellung und deren Verwendung als Herbizide
CN102105053B (zh) 2008-07-24 2014-10-15 拜耳作物科学股份公司 用于可分散于水中的植物相容浓缩物的增稠剂
DE102008037622A1 (de) 2008-08-14 2010-02-25 Bayer Cropscience Ag Herbizid-Kombination mit Dimethoxytriazinyl-substituierten Difluormethansulfonylaniliden
DE102008037631A1 (de) 2008-08-14 2010-02-18 Bayer Cropscience Ag Herbizid-Kombination mit Dimethoxytriazinyl-substituierten Difluormethansulfonylaniliden
DE102008037630A1 (de) 2008-08-14 2010-02-18 Bayer Cropscience Ag Herbizid-Kombination mit Dimethoxytriazinyl-substituierten Difluormethansulfonylaniliden
DE102008037627A1 (de) * 2008-08-14 2010-02-18 Bayer Cropscience Ag Herbizid-Kombination mit Dimethoxytriazinyl-substituierten Difluormethansulfonylaniliden
DE102008037632A1 (de) 2008-08-14 2010-02-18 Bayer Cropscience Ag Herbizid-Kombination mit Dimethoxytriazinyl-substituierten Difluormethansulfonylaniliden
DE102008037626A1 (de) * 2008-08-14 2010-02-18 Bayer Cropscience Ag Herbizid-Kombination mit Dimethoxytriazinyl-substituierten Difluormethansulfonylaniliden
DE102008037628A1 (de) * 2008-08-14 2010-02-18 Bayer Crop Science Ag Herbizid-Kombination mit Dimethoxytriazinyl-substituierten Difluormethansulfonylaniliden
DE102008037621A1 (de) 2008-08-14 2010-02-18 Bayer Cropscience Ag Herbizid-Kombination mit Dimethoxytriazinyl-substituierten Difluormethansulfonylaniliden
DE102008037625A1 (de) 2008-08-14 2010-02-18 Bayer Cropscience Ag Herbizid-Kombination mit Dimethoxytriazinyl-substituierten Difluormethansulfonylaniliden
DE102008037624A1 (de) 2008-08-14 2010-02-18 Bayer Cropscience Ag Herbizid-Kombination mit Dimethoxytriazinyl-substituierten Difluormethansulfonylaniliden
DE102008037629A1 (de) * 2008-08-14 2010-02-18 Bayer Cropscience Ag Herbizid-Kombination mit Dimethoxytriazinyl-substituierten Difluormethansulfonylaniliden
US8367873B2 (en) 2008-10-10 2013-02-05 Bayer Cropscience Ag Phenyl-substituted bicyclooctane-1,3-dione derivatives
DE102008058642A1 (de) 2008-11-22 2010-05-27 Bayer Cropscience Ag Herbizid-Kombinationen enthaltend Diflufenican und ALS-Inhibitoren
EP2210492A1 (de) 2008-11-29 2010-07-28 Bayer CropScience AG Herbizid-Safener-Kombination
EP2191720A1 (de) 2008-11-29 2010-06-02 Bayer CropScience AG Herbizid-Safener-Kombination
EP2191719A1 (de) 2008-11-29 2010-06-02 Bayer CropScience AG Herbizid-Safener-Kombination
EP2191716A1 (de) 2008-11-29 2010-06-02 Bayer CropScience AG Herbizid-Safener-Kombination
US8846946B2 (en) 2008-12-02 2014-09-30 Bayer Cropscience Ag Germinal alkoxy/alkylspirocyclic substituted tetramate derivatives
US8389443B2 (en) 2008-12-02 2013-03-05 Bayer Cropscience Ag Geminal alkoxy/alkylspirocyclic substituted tetramate derivatives
EP2194052A1 (de) 2008-12-06 2010-06-09 Bayer CropScience AG Substituierte 1-(Thiazolyl)- und 1-(Isothiazolyl)pyrazol-4-yl-essigsäuren, Verfahren zu deren Herstellung und deren Verwendung als Herbizide und Pflanzenwachstumsregulatoren
DE102008063561A1 (de) 2008-12-18 2010-08-19 Bayer Cropscience Ag Hydrazide, Verfahren zu deren Herstellung und deren Verwendung als Herbizide und Insektizide
EP2204366A1 (de) 2008-12-19 2010-07-07 Bayer CropScience AG Herbizid und insektizid wirksame phenylsubstituierte Pyridazinone
EP2210879A1 (de) 2008-12-30 2010-07-28 Bayer CropScience AG Pyrimidinderivate und ihre Verwendung zur Bekämpfung unerwünschten Pflanzenwachstums
US20120277117A1 (en) 2009-02-27 2012-11-01 Adel Zayed Hydroponic apparatus and methods of use
HUE035166T2 (en) 2009-03-11 2018-05-02 Bayer Ip Gmbh Halogenalkylmethyleneoxyphenyl substituted ketoenols
EP2229813A1 (de) 2009-03-21 2010-09-22 Bayer CropScience AG Pyrimidin-4-ylpropandinitril-derivate, Verfahren zu deren Herstellung sowie deren Verwendung als Herbizide und Pflanzenwachstumsregulatoren
EP2245935A1 (de) 2009-05-02 2010-11-03 Bayer CropScience AG Herbizide Verbindungen auf Basis von N-Azinyl-N-pyridylsulfonyl-harnstoffen
CN102439013B (zh) 2009-05-19 2015-03-18 拜尔农作物科学股份公司 螺杂环特窗酸衍生物
MX2012001155A (es) 2009-07-29 2012-02-13 Bayer Cropscience Ag 2-(3-alquiltiobenzoil)ciclohexanodionas y su uso como herbicidas.
BR112012001943B1 (pt) 2009-07-29 2017-11-14 Bayer Intellectual Property Gmbh 4- (3-alkyltibenzoyl) pyrazoles, herbicide composition, method for control of undesired plants and use of 4- (3-alkyltybenzoyl) pyrazoles
WO2011012248A2 (de) 2009-07-29 2011-02-03 Bayer Cropscience Ag 2-(3-aminobenzoyl)-3-cyclopropyl-3-oxopropannitrile und ihre verwendung als herbizide
CA2769385C (en) 2009-07-30 2017-10-17 Merial Limited Insecticidal 4-amino-thieno[2,3-d]-pyrimidine compounds and methods of their use
WO2011035878A1 (de) 2009-09-25 2011-03-31 Bayer Cropscience Ag Herbizid wirksame phenylsubstituierte pyridazinone
WO2011039276A1 (de) 2009-10-01 2011-04-07 Bayer Cropscience Ag Oxathiazinyl-(het)arylsulfonylharnstoffe, verfahren und zwischenprodukte zu ihrer herstellung und ihre verwendung als planzenschutzmittel und pflaznenwachstumsregulatoren
WO2011045271A1 (de) 2009-10-15 2011-04-21 Bayer Cropscience Ag Herbizid wirksame heterocyclylsubstituierte pyridazinone
WO2011050271A1 (en) 2009-10-23 2011-04-28 Monsanto Technology Llc Methods and compositions for expression of transgenes in plants
WO2011057942A1 (en) 2009-11-12 2011-05-19 Basf Se Insecticidal methods using pyridine compounds
EP2327700A1 (de) 2009-11-21 2011-06-01 Bayer CropScience AG Dialkyl-Triazinamine und ihre Verwendung zur Bekämpfung unerwünschten Pflanzenwachstums
WO2011064188A1 (en) 2009-11-27 2011-06-03 Basf Se Insecticidal methods using nitrogen-containing heteroaromatic compounds
CA2782902C (en) 2009-12-04 2017-10-17 Merial Limited Pesticidal bis-organosulfur compounds
WO2011069955A1 (en) 2009-12-07 2011-06-16 Basf Se Sulfonimidamide compounds for combating animal pests
WO2011073098A1 (de) 2009-12-15 2011-06-23 Bayer Cropscience Ag 1-(heteroaryl)-pyrazol-4-yl-essigsäuren, verfahren zu deren herstellung und deren verwendung als herbizide und pflanzenwachstumsregulatoren
WO2011082956A2 (de) 2009-12-17 2011-07-14 Bayer Cropscience Ag Herbizide mittel enthaltend flufenacet
WO2011082959A2 (de) 2009-12-17 2011-07-14 Bayer Cropscience Ag Herbizide mittel enthaltend flufenacet
WO2011082954A2 (de) 2009-12-17 2011-07-14 Bayer Cropscience Ag Herbizide mittel enthaltend flufenacet
WO2011082953A2 (de) 2009-12-17 2011-07-14 Bayer Cropscience Ag Herbizide mittel enthaltend flufenacet
WO2011082957A2 (de) 2009-12-17 2011-07-14 Bayer Cropscience Ag Herbizide mittel enthaltend flufenacet
WO2011082964A1 (de) 2009-12-17 2011-07-14 Bayer Cropscience Ag Herbizide mittel enthaltend flufenacet
ES2589047T3 (es) 2009-12-17 2016-11-08 Bayer Intellectual Property Gmbh Agentes herbicidas que contienen flufenacet
PT2515658T (pt) 2009-12-17 2016-09-13 Bayer Ip Gmbh Composições herbicidas contendo flufenacet
PT2512248T (pt) 2009-12-17 2016-11-14 Bayer Ip Gmbh Agentes herbicidas contendo flufenacet
WO2011082968A2 (de) 2009-12-17 2011-07-14 Bayer Cropscience Ag Herbizide mittel enthaltend flufenacet
WO2011082955A2 (de) 2009-12-17 2011-07-14 Bayer Cropscience Ag Herbizide mittel enthaltend flufenacet
AR079882A1 (es) 2009-12-23 2012-02-29 Bayer Cropscience Ag Plantas tolerantes a herbicidas inhibidores de las hppd
AR079883A1 (es) 2009-12-23 2012-02-29 Bayer Cropscience Ag Plantas tolerantes a herbicidas inhibidores de las hppd
UY33140A (es) 2009-12-23 2011-07-29 Bayer Cropscience Ag Plantas tolerantes a herbicidas inhibidores de las hppd
ES2658990T3 (es) 2009-12-23 2018-03-13 Bayer Intellectual Property Gmbh Plantas tolerantes a herbicidas inhibidores de HPPD
UY33141A (es) 2009-12-23 2011-07-29 Bayer Cropscience Ag Plantas tolerantes a herbicidas inhibidores de las hppd
EP2524045B1 (en) 2010-01-14 2015-12-02 Monsanto Technology LLC Plant regulatory elements and uses thereof
JP2013518084A (ja) 2010-02-01 2013-05-20 ビーエーエスエフ ソシエタス・ヨーロピア 有害動物を駆除するための置換されたケトン性イソオキサゾリン化合物および誘導体
ES2700996T3 (es) 2010-02-10 2019-02-20 Bayer Cropscience Ag Cetoenoles cíclicos sustituidos con bifenilo
CN103068825A (zh) 2010-02-10 2013-04-24 拜耳知识产权有限责任公司 螺杂环取代的特特拉姆酸衍生物
BR112012020709B1 (pt) 2010-02-19 2017-12-19 Bayer Intellectual Property Gmbh Benzoylcyclohexanodions replaced by 3-aminocarbonyl, composition as comprehending and method for the control of undesired plants
BR112012021495B1 (pt) 2010-02-26 2018-08-28 Bayer Ip Gmbh combinação herbicida contendo os hidratos de saflufenacil e glifosato ou glufosinato e seus usos
WO2011107445A1 (de) 2010-03-04 2011-09-09 Bayer Cropscience Ag Hydrat und wasserfreie kristallform des natriumsalzes des 2-iodo-n-[(4-methoxy-6-methyl-1,3,5-triazin-2-yl)carbamoyl]benzolsulfonamids, verfahren zu deren herstellung, sowie deren verwendung als herbizide und pflanzenwachstumsregulatoren
WO2011117184A1 (de) 2010-03-24 2011-09-29 Bayer Cropscience Ag Fludioxonil-derivate
EP2371823A1 (de) 2010-04-01 2011-10-05 Bayer CropScience AG Cyclopropyl-substituierte Phenylsulfonylamino(thio)carbonyltriazolinone, ihre Herstellung und Verwendung als Herbizide und Pflanzenwachstumsregulatoren
WO2011138280A2 (de) 2010-05-04 2011-11-10 Bayer Cropscience Ag Herbizid-safener-kombinationen enthaltend arylpyridazinone und safener
CA2799692A1 (en) 2010-05-21 2011-11-24 Bayer Intellectual Property Gmbh Herbicidal agents for tolerant or resistant grain cultures
EP2571363A1 (de) 2010-05-21 2013-03-27 Bayer Intellectual Property GmbH Herbizide mittel für tolerante oder resistente rapskulturen
CN103025167A (zh) 2010-05-21 2013-04-03 拜耳知识产权有限责任公司 用于耐受性或抗性稻栽培种的除草剂
US20110294663A1 (en) 2010-05-21 2011-12-01 Bayer Cropscience Ag Herbicidal composition for tolerant or resistant corn crops
EP2582243A2 (en) 2010-06-16 2013-04-24 Basf Se Aqueous active ingredient composition
EP2584888A4 (en) * 2010-06-25 2015-08-19 Agrivida Inc PLANT LEVEL MODIFIED PLANT STARCH PLANTS
WO2012007426A1 (en) 2010-07-13 2012-01-19 Basf Se Azoline substituted isoxazoline benzamide compounds for combating animal pests
JP2013537523A (ja) 2010-07-21 2013-10-03 バイエル・インテレクチユアル・プロパテイー・ゲー・エム・ベー・ハー （４−トリフルオロメチル−３−チオベンゾイル）シクロヘキサンジオン類およびその除草剤としての使用
DK2595963T3 (en) 2010-07-21 2015-02-16 Bayer Ip Gmbh 4- (4-haloalkyl-3-thiobenzoyl) pyrazoles and their use as herbicides
EP2595955B1 (de) 2010-07-21 2016-11-30 Bayer Intellectual Property GmbH (4-halogenalkyl-3-thiobenzoyl)cyclohexandione und ihre verwendung als herbizide
US8785612B2 (en) 2010-08-30 2014-07-22 Agrigenetics, Inc. Sugarcane bacilliform viral (SCBV) enhancer and its use in plant functional genomics
AU2011298424B2 (en) 2010-09-01 2015-05-21 Bayer Cropscience Aktiengesellschaft N-(Tetrazol-5-yl)- and N-(Triazol-5-yl)arylcarboxamides and use thereof as herbicides
WO2012028580A1 (de) 2010-09-01 2012-03-08 Bayer Cropscience Ag Herbizid wirksame pyridyl-ketosultame
EP2611801B1 (de) 2010-09-01 2016-05-04 Bayer Intellectual Property GmbH Herbizid wirksame ketosultame und diketopyridine
EP2443923A1 (de) 2010-10-25 2012-04-25 Basf Se Zusammensetzung umfassend ein Pestizid und ein Polycarboxylatether
CN103179853A (zh) 2010-10-11 2013-06-26 巴斯夫欧洲公司 包含农药和聚羧酸化物醚的组合物
CN103220911B (zh) 2010-10-15 2017-02-15 拜耳知识产权有限责任公司 Als抑制剂除草剂用于在对als抑制剂除草剂耐受的甜菜植物中防治不想要的植物的用途
WO2012052408A2 (de) 2010-10-22 2012-04-26 Bayer Cropscience Ag Herbizid-kombination mit einem dimethoxytriazinyl-substituierten difluormethansulfonylanilid
CN103270034B (zh) 2010-10-22 2016-07-06 拜耳知识产权有限责任公司 取代的2-吡啶甲酸及其盐和酸衍生物，及其作为除草剂的用途
DE102010042786A1 (de) 2010-10-22 2012-04-26 Bayer Cropscience Ag Herbizid- Kombination mit einem Dimethoxytriazinyl-substituierten Difluormethansulfonylanilid
CA2816415A1 (en) 2010-11-02 2012-05-10 Bayer Intellectual Property Gmbh Phenyl-substituted bicyclooctane-1,3-dione-derivatives
BR112013014931A2 (pt) 2010-12-16 2016-07-19 Bayer Ip Gmbh 6 - (2-aminofenil) - picolinatos e sua utilização como herbicidas
EP4059342A1 (en) 2010-12-17 2022-09-21 Monsanto Technology LLC Methods for improving competency of plant cells
EP2654424A1 (en) 2010-12-20 2013-10-30 Basf Se Pesticidal active mixtures comprising pyrazole compounds
EP2471776A1 (de) 2010-12-28 2012-07-04 Bayer CropScience AG Pyridin-2-ylpropandinitrile und deren Verwendung als Herbizide
US20130052682A1 (en) 2011-02-14 2013-02-28 Xyleco, Inc. Processing biomass
US9000026B2 (en) 2011-02-17 2015-04-07 Bayer Intellectual Property Gmbh Substituted 3-(biphenyl-3-yl)-8,8-difluoro-4-hydroxy-1-azaspiro[4.5]dec-3-en-2-ones for therapy
CN103415504B (zh) 2011-03-01 2016-04-20 拜耳知识产权有限责任公司 2-酰氧基吡咯啉-4-酮类化合物
EA023797B1 (ru) 2011-03-15 2016-07-29 Байер Интеллектуэль Проперти Гмбх Композиции, состоящие из гербицида и защитного вещества
JP6008881B2 (ja) 2011-03-15 2016-10-19 バイエル・インテレクチュアル・プロパティ・ゲゼルシャフト・ミット・ベシュレンクテル・ハフツングＢａｙｅｒ Ｉｎｔｅｌｌｅｃｔｕａｌ Ｐｒｏｐｅｒｔｙ ＧｍｂＨ Ｎ−（１，２，５−オキサジアゾール−３−イル）ピリジンカルボキサミド類及び除草剤としてのそれらの使用
ES2532486T3 (es) 2011-03-15 2015-03-27 Bayer Intellectual Property Gmbh Amidas de ácidos N-(1,2,5-oxadiazol-3-il)-, N-(tetrazol-5-il)- y N-(triazol-5-il) bicicloarilcarboxílico y su uso como herbicidas
US8648230B2 (en) 2011-03-18 2014-02-11 Ms Technologies, Llc Regulatory regions preferentially expressing in non-pollen plant tissue
EP2693878B8 (de) 2011-03-18 2018-08-29 Bayer CropScience Aktiengesellschaft Substituierte (3r,4r)-4-cyan-3,4-diphenylbutanoate, verfahren zu deren herstellung und deren verwendung als herbizide und pflanzenwachstumsregulatoren
CN103814009A (zh) 2011-03-18 2014-05-21 拜耳知识产权有限责任公司 取代的4-氰基-3-(2,6-二氟苯基)-4-苯基丁酸酯、其制备方法及其作为除草剂和植物生长调节剂的用途
ES2588999T3 (es) 2011-03-22 2016-11-08 Bayer Intellectual Property Gmbh Amidas del ácido N-(1,3,4-oxadiazol-2-il)arilcarboxílico y su uso como herbicidas
CA3004022C (en) 2011-03-25 2020-07-28 Monsanto Technology Llc Plant regulatory elements and uses thereof
MX350825B (es) 2011-03-31 2017-09-22 Bayer Ip Gmbh 3-fenilisoxazolin-5-carboxamidas y 3-fenilisoxazolin-5-tioamidas de accion herbicida y fungicida.
WO2012136724A1 (en) 2011-04-06 2012-10-11 Basf Se Substituted pyrimidinium compounds for combating animal pests
AR085872A1 (es) 2011-04-08 2013-10-30 Basf Se Derivados heterobiciclicos n-sustituidos utiles para combatir parasitos en plantas y/o animales, composiciones que los contienen y metodos para combatir dichas plagas
EA024737B1 (ru) 2011-04-21 2016-10-31 Басф Се Новые пестицидные соединения пиразола
AU2012251597B2 (en) 2011-05-04 2015-11-05 Bayer Intellectual Property Gmbh Use of ALS inhibitor herbicides for control of unwanted vegetation in ALS inhibitor herbicide tolerant Brassica, such as B. napus, plants
AR086365A1 (es) 2011-05-13 2013-12-11 Monsanto Technology Llc Elementos reguladores de las plantas y sus usos
EP2524602A1 (de) 2011-05-20 2012-11-21 Bayer CropScience AG Herbizide Mittel für tolerante oder resistente Sojakulturen
WO2013010882A2 (de) 2011-07-15 2013-01-24 Bayer Intellectual Property Gmbh 2,3-diphenyl-valeronitrilderivate, verfahren zu deren herstellung und deren verwendung als herbizide und pflanzenwachstumsregulatoren
EA201400138A1 (ru) 2011-07-15 2014-06-30 Басф Се Пестицидные способы применения замещенных 3-пиридилтиазольных соединений и производных для борьбы с животными-вредителями ii
AU2012288895A1 (en) 2011-07-27 2014-02-20 Bayer Intellectual Property Gmbh Substituted picolinic acids and pyrimidine-4-carboxylic acids, method for the production thereof, and use thereof as herbicides and plant growth regulators
DE102011080007A1 (de) 2011-07-28 2012-09-13 Bayer Cropscience Ag Verwendung von Saatgutbehandlungs-Wirkstoffen aus den Gruppen der Conazole- und Triazol-Fungizide als Safener
EP2486797A1 (de) 2011-07-28 2012-08-15 Bayer CropScience AG Verwendung von Saatgutbehandlungs-Wirkstoffen aus der Gruppe der Carbamat-Insektizide als Safener bei Oxadiazolon-Herbiziden
DE102011080020A1 (de) 2011-07-28 2012-09-13 Bayer Cropscience Ag Verwendung von Saatgutbehandlungs-Wirkstoffen aus der Gruppe der Dicarboximid-Fungizide als Safener
EP2486795A1 (de) 2011-07-28 2012-08-15 Bayer Cropscience AG Verwendung von Saatgutbehandlungs-Wirkstoffen aus der Gruppe der Nicotinoid-Insektizide als Safener bei Oxadiazolon-Herbiziden
DE102011079991A1 (de) 2011-07-28 2012-09-13 Bayer Crop Science Ag Verwendung von Saatgutbehandlungs-Wirkstoffen aus der Gruppe der Nicotinoid-Insektizide als Safener
DE102011079997A1 (de) 2011-07-28 2012-09-13 Bayer Corpscience Ag Verwendung von Saatgutbehandlungs-Wirkstoffen aus der Gruppe der Pyrazol-Insektizide als Safener
EP2486796A1 (de) 2011-07-28 2012-08-15 Bayer CropScience AG Verwendung von Saatgutbehandlungs-Wirkstoffen aus der Gruppe der Pyrazol-Insektizide als Safener bei Oxadiazolon-Herbiziden
DE102011080010A1 (de) 2011-07-28 2012-10-25 Bayer Cropscience Ag Verwendung von Saatgutbehandlungs-Wirkstoffen aus den Gruppen der Anilid- und Thiazol-Fungizide als Safener
DE102011080001A1 (de) 2011-07-28 2012-10-25 Bayer Cropscience Ag Verwendung von Saatgutbehandlungs-Wirkstoffen aus der Gruppe der Carbamat-Insektizide als Safener
DE102011080016A1 (de) 2011-07-28 2012-10-25 Bayer Cropscience Ag Verwendung von Saatgutbehandlungs-Wirkstoffen aus der Gruppe der Strobilurin-Fungizide als Safener
DE102011080004A1 (de) 2011-07-28 2012-09-13 Bayer Cropscience Ag Verwendung von Saatgutbehandlungs-Wirkstoffen aus der Gruppe der Carbamat-Fungizide als Safener
BR112014002191B1 (pt) 2011-08-03 2018-07-17 Bayer Ip Gmbh Amidas de ácido n-(tetrazol-5-il)- ou n-(triazol-5-il) arilcarboxílico, seu uso, composição herbicida, e processo para combate de plantas indesejadas
JP6042433B2 (ja) 2011-08-11 2016-12-14 バイエル・インテレクチュアル・プロパティ・ゲゼルシャフト・ミット・ベシュレンクテル・ハフツングＢａｙｅｒ Ｉｎｔｅｌｌｅｃｔｕａｌ Ｐｒｏｐｅｒｔｙ ＧｍｂＨ １，２，４−トリアゾリル置換されたケトエノール類
CN103842336B (zh) 2011-08-12 2017-05-31 巴斯夫欧洲公司 苯胺类型化合物
US20140179519A1 (en) 2011-08-12 2014-06-26 Basf Se N-thio-anthranilamide compounds and their use as pesticides
US20140162875A1 (en) 2011-08-12 2014-06-12 Basf Se N-Thio-Anthranilamide Compounds and Their Use as Pesticides
CN103889955A (zh) 2011-08-12 2014-06-25 巴斯夫欧洲公司 N-硫代邻氨基苯甲酰胺化合物及其作为农药的用途
IN2014CN00981A (uk) 2011-08-12 2015-04-10 Basf Se
US20140171316A1 (en) 2011-08-12 2014-06-19 Basf Se Anthranilamide compounds and their use as pesticides
EP2742037B1 (en) 2011-08-12 2015-10-14 Basf Se N-thio-anthranilamide compounds and their use as pesticides
CN103889959A (zh) 2011-08-18 2014-06-25 巴斯夫欧洲公司 用于防治无脊椎动物害虫的氨基甲酰基甲氧基-和氨基甲酰基甲硫基-及氨基甲酰基甲基氨基苯甲酰胺
BR112014003646A2 (pt) 2011-08-18 2017-03-07 Basf Se composto de fórmula (i), método para preparar um composto de fórmula (i), composição agrícola ou veterinária, método para combater ou controlar pragas invertebradas do grupo de insetos, aracnídeos ou nematoides, método para proteger plantas, método para a proteção de semente, semente e método para tratar um animal infestado ou infectado por parasitas
BR112014003595A2 (pt) 2011-08-18 2017-03-01 Basf Se compostos, método de preparação de um composto, composição agrícola, método de combate ou controle de pestes invertebradas, métodos de proteção do crescimento de plantas e de proteção de sementes, semente, uso de um composto e método de tratamento de animal infestado
CN104023535A (zh) 2011-09-02 2014-09-03 巴斯夫欧洲公司 农药活性的3-芳基喹唑啉-4-酮衍生物在土壤施用方法中的用途
US20140200136A1 (en) 2011-09-02 2014-07-17 Basf Se Agricultural mixtures comprising arylquinazolinone compounds
CN103763922A (zh) 2011-09-02 2014-04-30 巴斯夫欧洲公司 包含芳基喹唑啉酮化合物的杀虫活性混合物
IN2014CN03169A (uk) 2011-10-31 2015-08-14 Bayer Ip Gmbh
EP2589293A1 (de) 2011-11-03 2013-05-08 Bayer CropScience AG Herbizid-Safener-Zusammensetzungen enthaltend N-(Tetrazol-5-yl)- und N-(Triazol-5-yl)arylcarbonsäureamide
CN104024235B (zh) 2011-11-03 2016-04-13 拜耳知识产权有限责任公司 除草活性的肟醚取代的苯甲酰胺类化合物
EP2589598A1 (de) 2011-11-03 2013-05-08 Bayer CropScience AG 5-Phenylsubstituierte N-(Tetrazol-5-yl)- und N-(Triazol-5-yl)arylcarbonsäureamide und ihre Verwendung als Herbizide
UA116532C2 (uk) 2011-12-13 2018-04-10 Байєр Інтеллектуал Проперті Гмбх Аміди n-(1,2,5-оксадіазол-3-іл)-, n-(1,3,4-оксадіазол-2-іл)- або n-(тетразол-5-іл)арилкарбоксильної кислоти й застосування їх як гербіцидів
AR089249A1 (es) 2011-12-19 2014-08-06 Bayer Ip Gmbh 4-ciano-3-fenil-4-(piridin-3-il)butanoatos sustituidos, procedimientos para su preparacion y su uso como herbicidas y como reguladores del crecimiento de plantas
WO2013092868A1 (en) 2011-12-21 2013-06-27 Basf Se N-thio-anthranilamide compounds and their use as pesticides
AU2012356947A1 (en) 2011-12-23 2014-07-10 Basf Se Isothiazoline compounds for combating invertebrate pests
JP6126626B2 (ja) 2012-01-11 2017-05-10 バイエル・インテレクチュアル・プロパティ・ゲゼルシャフト・ミット・ベシュレンクテル・ハフツングＢａｙｅｒ Ｉｎｔｅｌｌｅｃｔｕａｌ Ｐｒｏｐｅｒｔｙ ＧｍｂＨ テトラゾール−５−イル−およびトリアゾール−５−イル−アリール化合物ならびに除草剤としてのそれの使用
WO2013113789A1 (en) 2012-02-02 2013-08-08 Basf Se N-thio-anthranilamide compounds and their use as pesticides
EP2816896B1 (de) 2012-02-21 2016-09-07 Bayer Intellectual Property GmbH Herbizid wirksame sulfinimidoyl- und sulfonimidoylbenzoylderivate
CA2864965C (en) 2012-02-21 2020-06-16 Bayer Intellectual Property Gmbh Herbicidally-effective sulfinyl aminobenzamides
BR112014020123B8 (pt) 2012-02-21 2021-02-09 Bayer Ip Gmbh composto 3-(sulfin/sulfonimidoil) – benzamida, composição herbicida, seus usos e método para o controle de plantas indesejadas
CN104125948A (zh) 2012-02-21 2014-10-29 拜耳知识产权有限责任公司 具有除草活性的4-硝基-取代的n-(四唑-5-基)芳基羧酸酰胺、n-(三唑-5-基)芳基羧酸酰胺以及n-(1,3,4-噁二唑-2-基)芳基羧酸酰胺
WO2013124246A1 (de) 2012-02-22 2013-08-29 Bayer Intellectual Property Gmbh Herbizid wirksame 4-dialkoxymethyl-2-phenylpyrimidine
US20150089682A1 (en) 2012-02-29 2015-03-26 Bayer Cropscience Nv ALS Inhibitor Herbicide Tolerant B. Napus Mutants
CA2865977A1 (en) 2012-02-29 2013-09-06 Dow Agrosciences Llc Sugarcane bacilliform viral (scbv) enhancer and its use in plant functional genomics
WO2013144228A1 (en) 2012-03-29 2013-10-03 Basf Se Pesticidal methods using heterocyclic compounds and derivatives for combating animal pests
EP2831050B1 (de) 2012-03-29 2016-03-23 Bayer Intellectual Property GmbH 5-amino-pyrimidinderivate und deren verwendung zur bekämpfung unerwünschten pflanzenwachstums
WO2013144223A1 (en) 2012-03-30 2013-10-03 Basf Se N-substituted pyrimidinylidene compounds and derivatives for combating animal pests
WO2013144213A1 (en) 2012-03-30 2013-10-03 Basf Se N-substituted pyridinylidene compounds and derivatives for combating animal pests
US20150065343A1 (en) 2012-04-02 2015-03-05 Basf Se Acrylamide compounds for combating invertebrate pests
MX2014011995A (es) 2012-04-03 2015-09-04 Basf Se Compuestos de furanona heterobicíclicos n-sustituidos y derivados para combatir plagas de animales.
WO2013150115A1 (en) 2012-04-05 2013-10-10 Basf Se N- substituted hetero - bicyclic compounds and derivatives for combating animal pests
US9663793B2 (en) 2012-04-20 2017-05-30 Monsanto Technology, Llc Plant regulatory elements and uses thereof
HUE042768T2 (hu) 2012-05-03 2019-07-29 Bayer Cropscience Ag 2-Klór-3-(metilszulfanil)-N-(1-metil-1H-tetrazol-5-il)-4-(trifluormetil)benzamid nátriumsója és ennek herbicidként történõ alkalmazása
MX2014013430A (es) 2012-05-04 2015-04-14 Basf Se Compuestos que contienen pirazol sustituido y su uso como plaguicidas.
BR112014027133A2 (pt) 2012-05-09 2017-06-27 Basf Se compostos, composição agrícola ou veterinária, método para o controle das pragas de invertebrados, material de propagação dos vegetais e método para o tratamento ou proteção de um animal.
WO2013174645A1 (en) 2012-05-24 2013-11-28 Basf Se N-thio-anthranilamide compounds and their use as pesticides
CN104487426B (zh) 2012-05-24 2017-02-22 拜尔农作物科学股份公司 N‑(四唑‑5‑基)和n‑(三唑‑5‑基)芳基羧酸硫代酰胺及其作为除草剂的用途
JP6158315B2 (ja) 2012-05-24 2017-07-05 バイエル・クロップサイエンス・アクチェンゲゼルシャフト Ｎ−（テトラゾール−５−イル）−またはｎ−（トリアゾール−５−イル）アリールカルボキサミド類を含む除草剤組成物
WO2013186089A2 (en) 2012-06-14 2013-12-19 Basf Se Pesticidal methods using substituted 3-pyridyl thiazole compounds and derivatives for combating animal pests
BR122019015134B1 (pt) 2012-06-20 2020-04-07 Basf Se mistura pesticida, composição, composição agrícola, métodos para o combate ou controle das pragas de invertebrados, para a proteção dos vegetais em crescimento ou dos materias de propagação vegetal, para a proteção de material de propagação vegetal, uso de uma mistura pesticida e métodos para o combate dos fungos fitopatogênicos nocivos e para proteger vegetais de fungos fitopatogênicos nocivos
RU2629663C2 (ru) 2012-06-27 2017-08-31 Байер Кропсайенс Аг Гербицидные средства, содержащие флуфенацет
WO2014001361A1 (de) 2012-06-27 2014-01-03 Bayer Cropscience Ag Herbizide mittel enthaltend flufenacet
WO2014001357A1 (de) 2012-06-27 2014-01-03 Bayer Cropscience Ag Herbizide mittel enthaltend flufenacet
WO2014001248A1 (de) 2012-06-27 2014-01-03 Bayer Cropscience Ag Herbizide mittel enthaltend flufenacet
EP2684879A1 (en) 2012-07-09 2014-01-15 Basf Se Substituted mesoionic compounds for combating animal pests
BR112015004648A2 (pt) 2012-09-05 2017-07-04 Bayer Cropscience Ag amidas de ácidos bicicloaril carboxílicos com atividade herbicida
MX354745B (es) 2012-09-25 2018-03-16 Bayer Cropscience Ag 3-fenilisoxazolin-5-carboxamidas 5-oxi-sustituidas y 3-fenilisoxazolin-5-tioamidas 5-oxi-sustituidas herbicidas y fungicidas.
WO2014053407A1 (en) 2012-10-01 2014-04-10 Basf Se N-thio-anthranilamide compounds and their use as pesticides
WO2014053401A2 (en) 2012-10-01 2014-04-10 Basf Se Method of improving plant health
US20150250175A1 (en) 2012-10-01 2015-09-10 Basf Se Pesticidally active mixtures comprising anthranilamide compounds
CN104768377A (zh) 2012-10-01 2015-07-08 巴斯夫欧洲公司 包含邻氨基苯甲酰胺类化合物的农药活性混合物
WO2014053406A1 (en) 2012-10-01 2014-04-10 Basf Se Method of controlling ryanodine-modulator insecticide resistant insects
WO2014053403A1 (en) 2012-10-01 2014-04-10 Basf Se Method of controlling insecticide resistant insects
JP6182215B2 (ja) 2012-10-04 2017-08-16 バイエル・クロップサイエンス・アクチェンゲゼルシャフト １，２，４−トリアジン−３，５−ジオン−６−カルボキサミドおよび除草剤としてのその使用
US9598707B2 (en) 2012-11-26 2017-03-21 Arkansas State University-Jonesboro Method to increase the yield of products in plant material
EP2928887B1 (de) 2012-12-06 2016-11-16 Bayer CropScience AG N-(oxazol-2-yl)-arylcarbonsäureamide und ihre verwendung als herbizide
WO2014086737A1 (de) 2012-12-06 2014-06-12 Bayer Cropscience Ag Kondensierte 2-pyridon-3-carboxamide und ihre verwendung als herbizide
UA115577C2 (uk) 2012-12-13 2017-11-27 Байєр Кропсайєнс Акцієнгезелльшафт Застосування гербіцидів на основі інгібітору als для контролю небажаної рослинності в посівах, стійких до гербіцидів, на основі інгібітору als рослин beta vulgaris
AU2013357564A1 (en) 2012-12-14 2015-07-02 Basf Se Malononitrile compounds for controlling animal pests
AR094006A1 (es) 2012-12-18 2015-07-01 Bayer Cropscience Ag Agentes herbicidas que contienen aclonifeno
AR093998A1 (es) 2012-12-18 2015-07-01 Bayer Cropscience Ag Agentes herbicidas que contienen aclonifeno
AR093997A1 (es) 2012-12-18 2015-07-01 Bayer Cropscience Ag Agentes herbicidas que contienen aclonifeno
KR102156719B1 (ko) 2012-12-19 2020-09-16 몬산토 테크놀로지 엘엘씨 식물 조절 요소 및 그의 용도
KR20150100808A (ko) 2012-12-21 2015-09-02 바스프 에스이 무척추동물 해충의 방제를 위한 시클로클라빈 및 이의 유도체
CN105189489A (zh) 2012-12-27 2015-12-23 巴斯夫欧洲公司 用于防除无脊椎动物害虫的带有亚胺或亚胺衍生取代基的2-(吡啶-3-基)-5-杂芳基噻唑化合物
WO2014128136A1 (en) 2013-02-20 2014-08-28 Basf Se Anthranilamide compounds and their use as pesticides
US9783817B2 (en) 2013-03-04 2017-10-10 Arkansas State University Methods of expressing and detecting activity of expansin in plant cells
MX370800B (es) 2013-03-14 2020-01-07 Monsanto Technology Llc Elementos reguladores de plantas y sus usos.
KR102270069B1 (ko) 2013-03-14 2021-06-28 몬산토 테크놀로지 엘엘씨 식물 조절 성분 및 이의 용도
EP2986598B1 (en) 2013-04-19 2017-03-29 Basf Se N-substituted acyl-imino-pyridine compounds and derivatives for combating animal pests
AR096517A1 (es) 2013-06-07 2016-01-13 Bayer Cropscience Ag Derivados de 5-hidroxi-2,3-difenilpentanonitrilo sustituido, procedimientos para su preparación y su uso como herbicidas y/o reguladores del crecimiento de las plantas
WO2015004242A1 (en) 2013-07-12 2015-01-15 Bayer Cropscience Nv Als inhibitor herbicide tolerant mutant plants
AR097138A1 (es) 2013-07-15 2016-02-24 Basf Se Compuestos plaguicidas
UA118765C2 (uk) 2013-08-09 2019-03-11 Байєр Кропсайєнс Акцієнгезелльшафт Третинні гербіцидні комбінації, що містять дві сульфонілсечовини
AR097362A1 (es) 2013-08-16 2016-03-09 Cheminova As Combinación de 2-metilbifenil-3-ilmetil (z)-(1r)-cis-3-(2-cloro-3,3,3-trifluorprop-1-enil)-2, 2-dimetilciclopropanocarboxilato con por lo menos un insecticida, acaricida, nematicida y/o fungicida
AU2014323072B2 (en) 2013-09-19 2018-01-18 Basf Se N-acylimino heterocyclic compounds
EA201600326A1 (ru) 2013-10-18 2016-10-31 Басф Агрокемикэл Продактс Б.В. Применение пестицидного активного производного карбоксамида в способах применения и обработки семян и почвы
AU2014339010B9 (en) 2013-10-25 2018-02-08 Bayer Cropscience Aktiengesellschaft Herbicidal compositions containing N-(1,3,4-oxadiazol-2-yl)-aryl carboxylic acid amides
US9072298B2 (en) 2013-11-01 2015-07-07 Rotam Agrochem Intrnational Company Limited Synergistic herbicidal composition
US20160326135A1 (en) 2013-11-15 2016-11-10 Bayer Cropscience Aktiengesellschaft 2-hetaryl-pyridazinone derivatives and their use as herbicides
WO2015091645A1 (en) 2013-12-18 2015-06-25 Basf Se Azole compounds carrying an imine-derived substituent
BR112016014171A2 (pt) 2013-12-18 2017-08-08 Basf Se Composto, composição agrícola, utilização de um composto, métodos para o combate ou controle das pragas, para a proteção dos vegetais e para a proteção do material de propagação dos vegetais e método de tratamento
WO2015104422A1 (en) 2014-01-13 2015-07-16 Basf Se Dihydrothiophene compounds for controlling invertebrate pests
US9714429B2 (en) 2014-01-28 2017-07-25 Arkansas State University Regulatory sequence of cupin family gene
EP2918582A1 (de) 2014-03-11 2015-09-16 Bayer CropScience AG 5-(Azindionyl)-Pyridazinonderivate und ihre Verwendung als Herbizide
EP2918581A1 (de) 2014-03-11 2015-09-16 Bayer CropScience AG 2-(Azindionyl)-Pyridazinonderivate und ihre Verwendung als Herbizide
JP2017522268A (ja) 2014-05-21 2017-08-10 バイエル・クロップサイエンス・アクチェンゲゼルシャフト ２−（ヘテロ）アリール−ピリダジノン類及び除草剤としてのそれらの使用
AR100448A1 (es) 2014-05-21 2016-10-05 Bayer Cropscience Ag 5-(hetero)aril-piridazinonas y su uso como herbicida
WO2016034615A1 (en) 2014-09-02 2016-03-10 BASF Agro B.V. Aqueous insecticide formulation containing hyperbranched polymer
BR112017019733B1 (pt) 2015-03-17 2021-11-30 Bayer Cropscience Aktiengesellschaft Sais de amidas de n-(1,3,4-oxadiazol-2-il) aril ácido carboxílico e seu uso como herbicidas
EP3274462A4 (en) 2015-03-26 2018-12-26 The Texas A&M University System Conversion of lignin into bioplastics and lipid fuels
EP3111763A1 (en) 2015-07-02 2017-01-04 BASF Agro B.V. Pesticidal compositions comprising a triazole compound
EP3316692B1 (en) 2015-07-02 2021-03-17 BASF Agro B.V. Pesticidal compositions comprising a triazole compound
CA2990985A1 (en) 2015-07-03 2017-01-12 Bayer Cropscience Aktiengesellschaft N-(tetrazole-5-yl)- and n-(triazole-5-yl)aryl carboxamide derivatives with herbicidal action
MX2018000306A (es) 2015-07-03 2018-03-14 Bayer Cropscience Ag Derivados de n-(1,3,4-oxadiazol-2-il)aril carboxamida con accion herbicida.
EP3118199A1 (de) 2015-07-13 2017-01-18 Bayer CropScience AG Herbizid wirksame n-(tetrazol-5-yl)-, n-(triazol-5-yl)- und n-(1,3,4-oxadiazol-2-yl)arylcarboxamid-derivate
US10785979B2 (en) 2015-08-25 2020-09-29 Bayer Cropscience Aktiengesellschaft Substituted ketoxime benzoylamides
WO2017040343A1 (en) 2015-08-28 2017-03-09 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Ochrobactrum-mediated transformation of plants
WO2017053433A1 (en) 2015-09-21 2017-03-30 Modern Meadow, Inc. Fiber reinforced tissue composites
JP6932125B2 (ja) 2015-09-28 2021-09-08 バイエル・クロップサイエンス・アクチェンゲゼルシャフト アシル化ｎ−（１，２，５−オキサジアゾール−３−イル）−、ｎ−（１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）−、ｎ−（テトラゾール−５−イル）−およびｎ−（トリアゾール−５−イル）−アリールカルボキサミド、および除草剤としてのそれらの使用
US11732269B2 (en) 2015-10-02 2023-08-22 Monsanto Technology Llc Recombinant maize B chromosome sequence and uses thereof
WO2017059902A1 (en) 2015-10-07 2017-04-13 Biontech Rna Pharmaceuticals Gmbh 3' utr sequences for stabilization of rna
CN105399674B (zh) 2015-12-31 2017-02-15 青岛清原化合物有限公司 吡唑类化合物或其盐、制备方法、除草剂组合物及用途
US11286354B2 (en) 2016-02-15 2022-03-29 Modern Meadow, Inc. Method for making a biofabricated material containing collagen fibrils
BR112018016864A2 (pt) 2016-02-18 2019-02-05 Bayer Cropscience Ag derivados de quinazolinodiona-6-carbonil e seu uso como herbicidas
UY37137A (es) 2016-02-24 2017-09-29 Merial Inc Compuestos antiparasitarios de isoxazolina, formulaciones inyectables de acción prolongada que los comprenden, métodos y usos de los mismos
WO2017144402A1 (de) 2016-02-24 2017-08-31 Bayer Cropscience Aktiengesellschaft N-(5-halogen-1,3,4-oxadiazol-2-yl)arylcarbonsäureamide und ihre verwendung als herbizide
EP3426041B1 (de) 2016-03-07 2020-09-23 Bayer CropScience Aktiengesellschaft Herbizide zusammensetzung enthaltend einen hppd-inhibitor, isoxadifen-ethyl und metribuzin
CN115125253A (zh) 2016-03-11 2022-09-30 孟山都技术公司 植物调控元件及其用途
AU2017269292B2 (en) 2016-05-24 2021-07-22 Monsanto Technology Llc Plant regulatory elements and uses thereof
EP3475273B1 (de) 2016-06-24 2021-02-24 Bayer CropScience Aktiengesellschaft 3-amino-1,2,4-triazinderivate und deren verwendung zur bekämpfung unerwünschten pflanzenwachstums
WO2018005589A1 (en) 2016-06-28 2018-01-04 Cellectis Altering expression of gene products in plants through targeted insertion of nucleic acid sequences
US11732268B2 (en) 2016-06-28 2023-08-22 Monsanto Technology Llc Methods and compositions for use in genome modification in plants
CA3046044A1 (en) 2016-12-07 2018-06-14 Bayer Cropscience Aktiengesellschaft Herbicidal combination containing triafamone and indaziflam
BR112019014797A2 (pt) 2017-01-19 2020-02-27 Monsanto Technology Llc Elementos reguladores de planta e usos dos mesmos
AU2018219470A1 (en) 2017-02-13 2019-08-22 Bayer Aktiengesellschaft Substituted benzyl-4-aminopicolinic esters and pyrimidino-4-carboxylic esters, methods for the production thereof, and use thereof as herbicides and plant growth regulators
EP3360872A1 (de) 2017-02-13 2018-08-15 Bayer CropScience Aktiengesellschaft Unsubstituierte benzyl-4-aminopicolinsäureester und pyrimidin-4-carbonsäureester, verfahren zu deren herstellung sowie deren verwendung als herbizide und pflanzenwachstumsregulatoren
EP3378315A1 (de) 2017-03-24 2018-09-26 Bayer CropScience Aktiengesellschaft Herbizide mischungen enthaltend 2-[2,4-dichlorphenyl)methyl]-4,4-dimethyl-3-isoxazolidinon
EP3378316A1 (de) 2017-03-24 2018-09-26 Bayer Aktiengesellschaft Herbizide mischungen
EP3601242A1 (de) 2017-03-30 2020-02-05 Bayer CropScience Aktiengesellschaft Substituierte n-(1,3,4-oxadiazol-2-yl)arylcarbonsäureamide und ihre verwendung als herbizide
CN110461833A (zh) 2017-04-05 2019-11-15 拜耳作物科学股份公司 2-氨基-5-氧基烷基嘧啶衍生物及其用于防治不希望的植物生长的用途
EP3618620A1 (de) 2017-05-04 2020-03-11 Bayer CropScience Aktiengesellschaft Herbizid-safener-zusammensetzungen enthaltend chinazolindion-6-carbonylderivate
UA126239C2 (uk) 2017-05-04 2022-09-07 Байєр Кропсайєнс Акцієнгезелльшафт 4-дифторметилбензоїламіди з гербіцидною дією
DK3638665T3 (da) 2017-06-13 2021-10-11 Bayer Ag Herbicidt virksomme 3-phenylisoxazolin-5-carboxamider af tetrahydro- og dihydrofurancarboxylsyrer og -estere
WO2018228986A1 (de) 2017-06-13 2018-12-20 Bayer Aktiengesellschaft Herbizid wirksame 3-phenylisoxazolin-5-carboxamide von tetrahydro- und dihydrofurancarbonsäureamiden
US20200214293A1 (en) 2017-06-23 2020-07-09 Basf Se Pesticidal Mixtures Comprising A Pyrazole Compound
CA3008850A1 (en) 2017-06-29 2018-12-29 Modern Meadow, Inc. Yeast strains and methods for producing collagen
TWI771440B (zh) 2017-08-04 2022-07-21 德商拜耳廠股份有限公司 3-醯基苯甲醯胺類及其作為除草劑之用途
BR112020003266A2 (pt) 2017-08-17 2020-10-13 Bayer Aktiengesellschaft 3-fenil-5-trifluorometilisoxazolina-5-carboxamidas herbicidamente ativas de ésteres e ácidos ciclopentilcarboxílicos
CA3080669A1 (en) 2017-10-27 2019-05-02 Xyleco, Inc. Processing biomass
EP3360417A1 (de) 2017-11-02 2018-08-15 Bayer CropScience Aktiengesellschaft Verwendung von sulfonylindol als herbizid
AU2018253595A1 (en) 2017-11-13 2019-05-30 Modern Meadow, Inc. Biofabricated leather articles having zonal properties
JP7220713B2 (ja) 2017-11-20 2023-02-10 バイエル アクチェンゲゼルシャフト 除草活性二環式ベンズアミド
BR112020011214A2 (pt) 2017-12-04 2020-11-17 Bayer Cropscience Aktiengesellschaft derivados de 3-amino-[1,2,4]-triazol e seu uso para controlar o crescimento indesejado de plantas.
AU2018389763B2 (en) 2017-12-20 2023-02-23 Pi Industries Ltd. Pyrazolopyridine-diamides, their use as insecticide and processes for preparing the same.
WO2019123194A1 (en) 2017-12-20 2019-06-27 Pi Industries Ltd. Anthranilamides, their use as insecticide and processes for preparing the same.
US20200332311A1 (en) 2018-01-12 2020-10-22 The Texas A&M University System Increasing plant bioproduct yield
WO2019145245A1 (de) 2018-01-25 2019-08-01 Bayer Aktiengesellschaft Herbizid wirksame 3-phenylisoxazolin-5-carboxamide von cyclopentenylcarbonsäurederivaten
US20210363134A1 (en) 2018-01-30 2021-11-25 Pi Industries Ltd. Novel anthranilamides, their use as insecticide and processes for preparing the same
WO2019148850A1 (zh) 2018-02-02 2019-08-08 青岛清原化合物有限公司 吡啶环取代的哒嗪醇类化合物及其衍生物、制备方法、除草组合物和应用
BR112020015620A2 (pt) 2018-02-02 2021-01-05 Qingdao Kingagroot Chemical Compound Co., Ltd. Composto de piridazinol com anel de cinco membros substituído e seus derivados, método de preparação, composição herbicida, e aplicação
WO2019149260A1 (zh) 2018-02-02 2019-08-08 青岛清原化合物有限公司 哒嗪醇类化合物及其衍生物、制备方法、除草组合物和应用
AR115088A1 (es) 2018-05-15 2020-11-25 Bayer Ag Espirociclohexilpirrolin-2-onas y su uso como herbicidas
WO2019219588A1 (de) 2018-05-15 2019-11-21 Bayer Aktiengesellschaft Speziell substituierte 2-alkyl-6-alkoxyphenyl-3-pyrroliin-2-one und deren verwendung als herbizide
CA3100089A1 (en) 2018-05-15 2019-11-21 Bayer Aktiengesellschaft 2-bromo-6-alkoxyphenyl-substituted pyrrolin-2-ones and their use as herbicides
WO2019219585A1 (de) 2018-05-15 2019-11-21 Bayer Aktiengesellschaft Neue 3-(4-alkinyl-6-alkoxy-2-chlorphenyl)-3-pyrrolin-2-one und deren verwendung als herbizide
WO2019228787A1 (de) 2018-05-29 2019-12-05 Bayer Aktiengesellschaft Speziell substituierte 2-alkyl-6-alkoxyphenyl-3-pyrrolin-2-one und deren verwendung als herbizide
WO2019228788A1 (de) 2018-05-29 2019-12-05 Bayer Aktiengesellschaft 2-brom-6-alkoxyphenyl-substituierte pyrrolin-2-one und deren verwendung als herbizide
EP3802521A1 (de) 2018-06-04 2021-04-14 Bayer Aktiengesellschaft Herbizid wirksame bizyklische benzoylpyrazole
AU2019307127A1 (en) 2018-07-16 2021-01-28 Bayer Aktiengesellschaft Herbicidal mixtures containing aclonifen and cinmethylin
ES2959616T3 (es) 2018-09-19 2024-02-27 Bayer Ag Hidrazidas de fenilpirimidina sustituidas con efecto herbicida
BR112021003324A2 (pt) 2018-09-19 2021-05-11 Basf Se misturas de pesticidas, composições, métodos de combate ou controle de pragas invertebradas, de proteção de plantas em crescimento e de proteção de material de propagação vegetal, uso de mistura de pesticidas e semente
BR112021004526A2 (pt) 2018-09-28 2021-06-08 Basf Se uso do composto, métodos de proteção de plantas, de controle ou combate a pragas invertebradas e de tratamento de sementes e semente
CN111253333A (zh) 2018-11-30 2020-06-09 青岛清原化合物有限公司 N-(1,3,4-噁二唑-2-基)芳基甲酰胺类或其盐、制备方法、除草组合物和应用
BR112021009734B1 (pt) 2018-12-07 2023-12-19 Bayer Aktiengesellschaft Composição herbicida, seu uso, agente herbicida, e método para controlar plantas daninhas ou para regular o desenvolvimento de plantas
AU2019392518A1 (en) 2018-12-07 2021-06-24 Bayer Aktiengesellschaft Herbicidal compositions
WO2020133092A1 (zh) 2018-12-27 2020-07-02 青岛清原化合物有限公司 吡啶氧基羧酸酯衍生物及其制备方法、除草组合物和应用
JP2022515285A (ja) 2018-12-27 2022-02-17 チンタオ、キングアグルート、ケミカル、コンパウンド、カンパニー、リミテッド Ｒ－ピリジルオキシカルボン酸、その塩、そのエステル誘導体、その調製方法、その除草組成物及びその用途
EP3892618B1 (en) 2019-01-14 2024-04-10 Qingdao KingAgroot Chemical Compound Co., Ltd. 4-pyridinyl formamide compound or derivative thereof, preparation method therefor, herbicidal composition and use thereof
CN113286864A (zh) 2019-01-17 2021-08-20 现代牧场股份有限公司 层状胶原材料及其制备方法
WO2020169509A1 (de) 2019-02-20 2020-08-27 Bayer Aktiengesellschaft Herbizid wirksame 4-(4-trifluormethyl-6-cycloropylpyrazolyl)pyrimidine
AR118243A1 (es) 2019-03-07 2021-09-22 Pi Industries Ltd Compuestos heterocíclicos fusionados y su uso como agentes de control de plagas
CN113631038B (zh) 2019-03-12 2023-06-30 拜耳公司 除草活性的含s环戊烯基羧酸酯的3-苯基异噁唑啉-5-甲酰胺
EP3938349A1 (de) 2019-03-15 2022-01-19 Bayer Aktiengesellschaft Speziell substituierte 3-(2-alkoxy-6-alkyl-4-propinylphenyl)-3-pyrrolin-2-one und deren verwendung als herbizide
CA3133194A1 (en) 2019-03-15 2020-09-24 Bayer Aktiengesellschaft 3-(2-brom-4-alkynyl-6-alkoxyphenyl)-substituted 5-spirocyclohexyl-3-pyrrolin-2-ones and their use as herbicides
EP3938348A1 (de) 2019-03-15 2022-01-19 Bayer Aktiengesellschaft Neue 3-(2-brom-4-alkinyl-6-alkoxyphenyl)-3-pyrrolin-2-one und deren verwendung als herbizide
JP2022524861A (ja) 2019-03-15 2022-05-10 バイエル・アクチエンゲゼルシヤフト 具体的に置換された３－フェニル－５－スピロシクロペンチル－３－ピロリン－２－オン類及び除草剤としてのその使用
US20220151230A1 (en) 2019-03-15 2022-05-19 Bayer Aktiengesellschaft Specifically substituted 3-(2-halogen-6-alkyl-4-propinylphenyl)-3-pyrrolin-2-ones and to the use thereof as herbicides
AR119067A1 (es) 2019-06-03 2021-11-24 Bayer Ag Combinaciones de adyuvantes como aceleradores de absorción en hojas para composiciones herbicidas
MX2021014794A (es) 2019-06-03 2022-01-18 Bayer Ag Acidos 1-fenil-5-azinilpirazolil-3-oxialquilicos y su uso para combatir el crecimiento no deseado de plantas.
AR119140A1 (es) 2019-06-13 2021-11-24 Pi Industries Ltd Compuestos heterocíclicos fusionados y su uso como agentes de control de plagas
EP4378314A3 (de) 2019-07-04 2024-08-14 Bayer AG Herbizide zusammensetzungen
WO2021033141A1 (en) 2019-08-20 2021-02-25 Pi Industries Ltd. Fused heterocyclic compounds and their use as pest control agents
AR119790A1 (es) 2019-08-29 2022-01-12 Pi Industries Ltd Compuestos de isoxazolina y su uso como agentes para el control de plagas
CN116803993A (zh) 2019-10-23 2023-09-26 青岛清原化合物有限公司 一种含手性硫氧化物的芳基甲酰胺类化合物或其盐、制备方法、除草组合物和应用
EP4056567A4 (en) 2019-11-07 2023-12-20 Qingdao KingAgroot Chemical Compound Co., Ltd. SUBSTITUTED AROMATIC COMPOUND CONTAINING ISOXAZOLINE, METHOD FOR THE PRODUCTION THEREOF, HERBICIDAL COMPOSITION AND USE THEREOF
US20230066946A1 (en) 2019-12-19 2023-03-02 Bayer Aktiengesellschaft 1,5-diphenylpyrazolyl-3-oxyalkyl acids and 1-phenyl-5-thienylpyrazolyl-3-oxyalkyl acids and the use thereof for control of unwanted plant growth
PE20221831A1 (es) 2020-01-11 2022-11-29 Qingdao Kingagroot Chemical Compound Co Ltd Compuesto de iminoarilo sustituido con derivado de acido carboxilico, metodo de preparacion, composicion herbicida y uso del mismo
BR112021023672A2 (pt) 2020-01-16 2022-08-02 Qingdao Kingagroot Chemical Compound Co Ltd Um composto aromático substituído por anel fundido, método de preparação, composição herbicida e uso dos mesmos
AR121344A1 (es) 2020-02-18 2022-05-11 Pi Industries Ltd Compuestos heterocíclicos fusionados y su uso como agentes para el control de plagas
WO2021204665A1 (de) 2020-04-07 2021-10-14 Bayer Aktiengesellschaft Substituierte isophtalsäurediamide
EP4132916B1 (de) 2020-04-07 2024-01-24 Bayer Aktiengesellschaft Substituierte isophtalsäurediamide und ihre verwendung als herbizide
WO2021204669A1 (de) 2020-04-07 2021-10-14 Bayer Aktiengesellschaft Substituierte isophtalsäurediamide
WO2021204667A1 (de) 2020-04-07 2021-10-14 Bayer Aktiengesellschaft Substituierte isophtalsäurediamide
WO2021204884A1 (de) 2020-04-09 2021-10-14 Bayer Aktiengesellschaft 3-(4-alkenyl-phenyl)-3-pyrrolin-2-one und deren verwendung als herbizide
WO2021209486A1 (de) 2020-04-15 2021-10-21 Bayer Aktiengesellschaft Speziell substituierte pyrrolin-2-one und deren verwendung als herbizide
EP4143181A1 (de) 2020-04-29 2023-03-08 Bayer Aktiengesellschaft 1-pyrazinylpyrazolyl-3-oxyalkylsäuren sowie deren derivate und deren verwendung zur bekämpfung unerwünschten pflanzenwachstums
US20230180758A1 (en) 2020-05-27 2023-06-15 Bayer Aktiengesellschaft Substituted pyrroline-2-ones and their use as herbicides
AR122854A1 (es) 2020-07-02 2022-10-12 Pi Industries Ltd Compuestos de isoxazolina y su uso como agentes para el control de plagas
JP2023533007A (ja) 2020-07-06 2023-08-01 ピーアイ インダストリーズ リミテッド チエタニルオキシ化合物、その酸化物または塩を含む殺有害生物活性混合物
AR123052A1 (es) 2020-07-27 2022-10-26 Pi Industries Ltd Una mezcla pesticidamente activa que comprende el compuesto de pirazolopiridina antranilamida, sus óxidos o sales de los mismos
AU2021367046A1 (en) 2020-10-23 2023-06-08 Bayer Aktiengesellschaft 1-(pyridyl)-5-azinylpyrazole derivatives, and their use for control of undesired plant growth
CN116568137A (zh) 2020-12-01 2023-08-08 拜耳公司 包含甲基二磺隆和tehp的组合物
WO2022117515A1 (en) 2020-12-01 2022-06-09 Bayer Aktiengesellschaft Compositions comprising iodosulfuron-methyl and tehp
AR124298A1 (es) 2020-12-11 2023-03-15 Pi Industries Ltd Compuestos de isoxazolina y su uso como agentes de control de plagas
EP4026833A1 (de) 2021-01-12 2022-07-13 Bayer Aktiengesellschaft Herbizid wirksame 2-(het)arylmethylpyrimidine
WO2022152728A1 (de) 2021-01-15 2022-07-21 Bayer Aktiengesellschaft Herbizide zusammensetzungen
CA3212998A1 (en) 2021-03-12 2022-09-15 Bayer Aktiengesellschaft Chiral n-(1,3,4-oxadiazole-2-yl)phenyl carboxylic acid amides and their use as herbicides
TW202300650A (zh) 2021-03-26 2023-01-01 美商旗艦先鋒創新有限責任（Ｖｉｉ）公司 真核系統中環狀多核糖核苷酸的產生
AR125217A1 (es) 2021-03-26 2023-06-28 Flagship Pioneering Innovations Vii Llc Producción de polirribonucleótidos circulares en un sistema procariota
WO2022204466A1 (en) 2021-03-26 2022-09-29 Flagship Pioneering Innovations Vii, Llc Production of circular polyribonucleotides in a prokaryotic system
TW202304919A (zh) 2021-03-31 2023-02-01 印度商皮埃企業有限公司 稠合雜環化合物及其作為害蟲控制劑之用途
WO2022253700A1 (de) 2021-06-01 2022-12-08 Bayer Aktiengesellschaft Speziell substituierte pyrrolin-2-one und deren verwendung als herbizide
IL309032A (en) 2021-06-03 2024-02-01 Mazen Animal Health Inc Oral administration of coronavirus spike protein to alter cytokine levels and provide passive immunity to newborn pigs
AU2022296784A1 (en) 2021-06-25 2024-01-18 Bayer Aktiengesellschaft (1,4,5-trisubstituted-1h-pyrazole-3-yl)oxy-2-alkoxy alkyl acids and their derivatives, their salts and their use as herbicidal agents
WO2023274869A1 (de) 2021-06-29 2023-01-05 Bayer Aktiengesellschaft 3-(4-alkenyl-phenyl)-3-pyrrolin-2-one und deren verwendung als herbizide
US20240284906A1 (en) 2021-07-02 2024-08-29 Bayer Aktiengesellschaft Herbicidal compositions containing cinmethyline and ethofumesate
AR126252A1 (es) 2021-07-08 2023-10-04 Bayer Ag Amidas de ácido benzoico sustituidas
WO2023037253A1 (en) 2021-09-08 2023-03-16 Pi Industries Ltd Isoxazoline compounds and their use as pest control agents
WO2023037249A1 (en) 2021-09-08 2023-03-16 Pi Industries Ltd. Sulfoximines/ sulfilimine containing aromatic caboxamide compounds and their use therof
MX2024005239A (es) 2021-11-01 2024-07-22 Flagship Pioneering Innovations Vii Llc Polinucleotidos para modificar organismos.
AU2022388884A1 (en) 2021-11-15 2024-05-30 Pi Industries Ltd. Bicyclic heteroaromatic compounds and their use as pest control agents
AU2022400175A1 (en) 2021-12-01 2024-07-18 Bayer Aktiengesellschaft (1,4,5-trisubstituted-1h-pyrazole-3-yl)oxy-2-alkoxythio alkyl acids and derivatives thereof, their salts and their use as herbicidal active agents
WO2023141540A2 (en) 2022-01-20 2023-07-27 Flagship Pioneering Innovations Vii, Llc Polynucleotides for modifying organisms
WO2023218484A1 (en) 2022-05-11 2023-11-16 Pi Industries Ltd. Bicyclic compounds and their use as pest control agents
WO2024013015A1 (en) 2022-07-11 2024-01-18 Bayer Aktiengesellschaft Herbicidal compositions
WO2024013016A1 (en) 2022-07-11 2024-01-18 Bayer Aktiengesellschaft Herbicidal compositions
WO2024041926A1 (de) 2022-08-25 2024-02-29 Bayer Aktiengesellschaft Herbizide zusammensetzungen
WO2024041925A1 (de) 2022-08-25 2024-02-29 Bayer Aktiengesellschaft Herbizide zusammensetzungen
US20240093220A1 (en) 2022-09-09 2024-03-21 Friedrich Alexander Universität Erlangen-Nürnberg Plant regulatory elements and uses thereof
WO2024078871A1 (de) 2022-10-14 2024-04-18 Bayer Aktiengesellschaft 1-pyridyl-5-phenylpyrazolyl-3-oxy- und -3-thioalkylsäuren und derivate und deren verwendung zur bekämpfung unerwünschten pflanzenwachstums
EP4353082A1 (en) 2022-10-14 2024-04-17 Bayer Aktiengesellschaft Herbicidal compositions
WO2024170472A1 (en) 2023-02-16 2024-08-22 Bayer Aktiengesellschaft Herbicidal mixtures

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ATE93542T1 (de) * 1984-12-28 1993-09-15 Plant Genetic Systems Nv Rekombinante dna, die in pflanzliche zellen eingebracht werden kann.
US4940835A (en) * 1985-10-29 1990-07-10 Monsanto Company Glyphosate-resistant plants
WO1988002402A1 (en) * 1986-09-26 1988-04-07 Calgene, Inc. Intracellular directed delivery of expression products
US4801540A (en) * 1986-10-17 1989-01-31 Calgene, Inc. PG gene and its use in plants
US4971908A (en) * 1987-05-26 1990-11-20 Monsanto Company Glyphosate-tolerant 5-enolpyruvyl-3-phosphoshikimate synthase
GB8826356D0 (en) * 1988-11-10 1988-12-14 Ici Plc Adp glucose-pyrophosphorylase
AU644619B2 (en) * 1989-12-21 1993-12-16 Advanced Technologies (Cambridge) Limited Modification of plant metabolism

Also Published As

Publication number Publication date
RU2148081C1 (ru) 2000-04-27
FI925228A (fi) 1992-11-18
ATE212670T1 (de) 2002-02-15
US6538178B1 (en) 2003-03-25
DE69132916D1 (de) 2002-03-14
JPH05508774A (ja) 1993-12-09
AU644203B2 (en) 1993-12-02
AU8220291A (en) 1992-01-07
JP3325022B2 (ja) 2002-09-17
FI925228A0 (fi) 1992-11-18
CA2081885C (en) 2000-10-31
IE912059A1 (en) 1991-12-18
WO1991019806A1 (en) 1991-12-26
DE69132916T2 (de) 2002-10-31
EP0536293B1 (en) 2002-01-30
EP0536293A1 (en) 1993-04-14
CA2081885A1 (en) 1991-12-19

Similar Documents

Publication Publication Date Title
UA43827C2 (uk) Спосіб одержання генетично трансформованих рослин з підвищеним вмістом крохмалю, рекомбінантна дволанцюгова днк-молекула
Wang et al. Re-creation of a key step in the evolutionary switch from C3 to C4 leaf anatomy
CN108135235B (zh) 马铃薯栽培品种x17
JP5695422B2 (ja) デンプン代謝改変植物
EP0812917B1 (en) Cold-inducible promoter sequences
CN1886507B (zh) 淀粉中具有增加了直链淀粉含量的水稻及水稻制品
Wang et al. Differentially and developmentally regulated expression of three rice sucrose synthase genes
CN108347894A (zh) 马铃薯栽培品种y9
CN101220358A (zh) 植物中细胞分裂素活性的调节
UA48104C2 (uk) Фрагмент днк, який містить послідовність,що кодує інсектицидний протеїн, оптимізовану для кукурудзи,фрагмент днк, який забезпечує направлену бажану для серцевини стебла експресію зв'язаного з нею структурного гена в рослині, фрагмент днк, який забезпечує специфічну для пилку експресію зв`язаного з нею структурного гена в рослині, рекомбінантна молекула днк, спосіб одержання оптимізованої для кукурудзи кодуючої послідовності інсектицидного протеїну, спосіб захисту рослин кукурудзи щонайменше від однієї комахи-шкідника
CZ366896A3 (en) Method of increasing efficiency of enzyme in plants
CN102978236A (zh) 精确育种
CN102428186B (zh) 包含编码烯醇丙酮酸磷酸羧激酶和/或丙酮酸正磷酸双激酶的构建体的转基因植物
BR112016003671B1 (pt) Célula recombinante, processo para determinar se um polipeptídeo confere resistência ou a suscetibilidade a um ou mais patógenos fúngicos biotróficos, vetor quimérico, método para produzir uma planta transgênica, método para identificar uma planta compreendendo um polinucleotídeo que codifica um polipeptídeo, método para produzir farinha, farinha integral, amido ou outro produto obtido de semente, produto e seu método de preparação, método para preparar malte e uso de uma planta
EP3337901B1 (en) Atypical cys his rich thioredoxin 4 (acht4) blockers and methods of use thereof
HU221515B (en) Transgenic plants with improved biomass production
Cao et al. BT1, a possible adenylate translocator, is developmentally expressed in maize endosperm but not detected in starchy tissues from several other species
KR20110092148A (ko) 식물의 노화 지연 기능 및 스트레스 내성 기능을 갖는 ａｔｈｇ１ 단백질과 그 유전자 및 이들의 용도
CN1423520B (zh) 调节植物细胞分裂的组合物和方法
JP4189636B2 (ja) アミノ酸含量の増大した植物、窒素含量が増大した植物、窒素制限下での成育抑制が解除された植物、およびそれらの作製法
JPWO2006095749A1 (ja) 植物でのペプチドの発現・集積方法
EA037570B1 (ru) Ген резистентности к стеблевой ржавчине
KR101785101B1 (ko) ＯｓＤＷＤ1 유전자 및 이의 용도
KR20150003099A (ko) 식물의 생산성 증대 기능, 스트레스 내성 기능 및 노화 지연 기능을 갖는 atpg6 단백질과 그 유전자 및 이들의 용도
CN104725494B (zh) 水稻基因OsARC促进水稻抗干旱与抗盐胁迫中的应用