RS50866B - Nosač sa čvrstim fibrinogenom i čvrstim trombinom - Google Patents

Abstract

Čvrsta kompozicija koja se, u suštini, sastoji oda) jednog kolagenskog nosača koji ima bar dva od sledećih fizičkih svojstava: modul elastičnosti u opsegu od 10-50 N/cm2,gustinu od 1-10 mg/cm3,prečnik komore veći od 0,75 mm a manji od 4 mm i/ili koji ima prosečan prečnik komore ispod 3 mmi ravnomerno raspoređenu i fiksiranu na pomenutom nosaču mešavinub) čvrstog humanog fibrinogena, ic) čvrstog humanog trombina. Prijava sadrži još 5 nezavisnih i 12 zavisnih patentnih zahteva.

Description

OBLAST U KOJU SPADA PRONALAZAK

Ovaj se pronalazak odnosi na gotove apsorbljive kompozicije za lepljenje tkiva, za hermetično zatvaranje tkiva i za zaustavljanje krvarenja, a koje se sastoje u suštini od jednog nosača pokrivenog solidno fiksiranim čovečijim komponentama fibrinskog lepka: čovečijim fibrinogenom i čovečijim trombinom. Takva se fiksirana kombinacija može primeniti neposredno na, recimo, površinu neke rane. Po ostvarivanju dodira sa krvlju, telesnim fluidima ili fiziološkim rastvorom, mehanizam ovog sistema podražava koagulacionu kaskadu u kojoj trombin katalizuje pretvaranje fibrinogena u fibrin i aktiviranje faktora XIII da bi se dobio XIIIa. Faktor XIIIa, kada se jednom obrazuje, stabilizuje fibrinski ugrušak kovalentnim zgrušavanjem.

Slično dvokomponentnom lepku, površina rane i nosač slepljuju se polimerizacijom. Tokom ovog procesa, koji traje oko 3 do 5 minuta, poželjno je da se kompozicija prema pronalasku pritisne na područje rane. Komponente prema pronalasku enzimski se razlazu za oko 4 do 6 meseci posle nanošenja.

POZNATO STANJE TEHNIKE

Komercijalni lepkovi koji podražavaju poslednji stepen koagulacione kaskade, sastoje se od veoma koncentrovanog rastvora fibrinogena koji treba da se pomeša sa jednim trombinskim rastvorom pre no što nastane potreba da se postavi na hiruršku ranu. Te smeše sadrže jedan inhibitor fibrinolize, npr., aprotinin ili s-aminokaproikacid, da bi se sprečilo prevremeno rastvaranje fibrinskog ugruška fibrinolitičkim plazminskim enzimom. Ovi su dvokomponentni fibrinski lepkovi korisni kod raznih hirurških procedura, ali mogu biti isprani pre no što je ostvaren prekid krvarenja ukoliko je krvarenje intenzivno. Pored toga, dvokomponentni fibrinski lepkovi zahtevaju nekoliko pripremnih stepena, uključujući odmrzavanje ili rastvaranje. Zbog toga su oni prilično nepraktični i nezgodni za rad a potrebno je i iskustvo za uspešnu primenu tih fibrinskih lepkova.

Poslednjih desetak godina brojna su fibrinska sredstva za zaptivanje postala izabrana sredstva u hirurgiji za veći broj indikacija. Međutim, u većini proba sa fibrinskim lepkovima, dodatno je korišćen kolagenski meki povoj radi popravljanja hemostatičkih svojstava i svojstava lepljenja, ukazujući na njihove nedostatke i na njihovu ograničenu primenu od strane hirurga.

Kolagen je korišćen kao sredstvo za zaustavljanje krvarenja od kraja šezdesetih godina. Kolagen je najčešći strukturni protein kod svih sisara. Monomerni protein od oko 300 kDa (tropokolagen) kovalentno je umrežen na specifičnim mestima. Zbog toga je zreo protein nerastvorljiv i obrazuje karakteristične tanke žilice, fibrile, velike jačine na istezanje. Opisane su brojne subklase kolagena, pri čemu je najčešći kolagen tipa I, glavna vrsta kolagena u koži, žilama, kostima i rožnjači. Kolagen je jedan vlaknasti protein koji se sastoji od jedne trostruke zavojnice dužine oko 290 nm. Pet od ovih trostrukih zavojnica (tropokolagenski molekuli) stepenasto su poredani da bi obrazovali jedno mikrovlakno prečnika od oko 3,6 nm. Ovi mikro fibrili imaju polarne i nepolarne segmente koji su lako pristupačni za specifična unutarfibrilna i međufibrilna međusobna delovanja. Mikrofibrili su pakovani u četvorougaone rešetke radi obrazovanja subfibrila prečnika od oko 30 nm. Ovi se potfibrili potom sklapaju u kolagenski fibril, osnovnu jedinicu veznog tkiva, koja ima prečnik od nekoliko stotina nm pa je zbog toga vidljiva u svetlosnom mikroskopu kao tanka linija.

Kolagen se može koristiti kao kao materijal za zaptivanje rana, eventualno obložen fibrinskim lepkom. Fibrinski lepkovi, kao što je kombinacija fibrinogena, trombina i aprotinina, uspešno se koriste u terapeutske svrhe već mnogo godina za lepnjenje tkiva i živaca i za zaptivanje površina kod manjih krvarenja. Nedostatak fibrinogenskih lepkova je što se kod većih krvarenja lepak obično ispere pre nego što je došlo do dovoljne polimerizacije. Da bi se prevazišao ovaj problem hirurzi su počeli ručno da nanose tečne fibrinske lepkove na nosače koji se mogu apsorbovati, kao što je kolagenski meki povoj.

Uprkos impresivnog uspeha ovih kombinovanih primena, taj postupak nije primenjivan u nekoj većoj meri zbog nekih nedostataka. Priprema je relativno teška, postupak zahteva iskustvo i kvalifikovan personal, a preprat nije lako primenjiv u slučaju nužde, pošto mu je vreme za pripremanje u opsegu od 10 do 15 min. Ove su činjenice podstakle razvoj jednog poboljšanog proizvoda koji je rezultovao u razvoju jedne fiksirane kombinacije jednog kolagenskog nosača pokrivenog oblogom od čvrstog fibrinogena, čvrstog trombina i čvrstog aprotinina, kako je prikazano u EP 0 059 265.

Funkcija kolagenskog nosača objavljenog u EP 0 059 265 uglavnom je funkcija nosača koji adsorbuje i prenosi mehaničku stabilnost na koagulacioni preparat kojim je obložen.

Proizvod koji kombinuje hemostatička svojstva fibrinskog lepka sa preimućstvima kolagena kao nosača razvijen je i proizvođen pod trgovačkim nazivom TachoComb<®.>TachoComb® je gotova i lako primenljiva fiksirana kombinacija jednog kolagenskog flastera sa sledećim aktivnim komponentama fibrinskog lepka: čovečiji fibrinogen, goveđi trombin i goveđi aprotinin.

Nvcomed Pharma prodaje TachoComb<®>od početka devedesetih i korišćen je u kliničkim ispitivanjima u Evropi na više od 2500 pacijenata. Pored toga je korišćen kod više od 700 pacijenata u japanskom kliničkom programu kod veoma različitih indikacija, kao što su resekcije jetre i pluća, hirurgija žučnog trakta, hirurgija slezine, bubrega i pankreasa, hirurgija uva, nosa i grla, ginekološka hirurgija i vaskularna hirurgija. Utvrđeno je da je TachoComb efikasan i bezbedan.

U toku vršenih kliničkih isptivanja nije bilo kliničkih komplikacija povezanih sa pnmenom TachoComb -a. Međutim, u tri japanske studije pojavila su se antitela protiv aprotinina.

Tokom više godina kliničke upotrebe hiljada TachoComb<®>flastera prijavljeno je ukupno svega 37 spontanih nepovoljnih reagovanja na lek (ADR). Šesnaest od tih slučajeva može se teoretski pripisati komponentama TachoComb -a (groznica, pireksija, eozinofilija. produženo protrombinsko stanje, preosetljivost, imunološke ili alergijske reakcije). Jedan je ADR (imunološko reagovanje) očigledno bio povezan sa lečenjem pomoću TachoComb<®->a.

U W097/37694 (Irnmuno France S.A.) opisano je u referentnom primeru 4 da, kada je primenjen jedan kolagenski proizvod ili TachoComb<®>, nije bilo homeostaze što je dovelo do krvarenja do smrti kada je korišćen TachoComb<®>, za razliku od homeostaze u roku od 5 minuta kada je primenjen jedan kolagenski proizvod bez sadržaja trombina pripremljen prema W097/37694.

U WO96/40033 naglašeni su nedostaci goveđeg trombina u TachoComb<®->u zbog toga što primena trombina od goveda ili od drugih vrsta može izazvati štetno virusno zagađenje i eventualno prenošenja oboljenja od goveda, kao što je sunđerasto zapaljenje mozga kod goveda.

DETALJAN OPIS

Ovaj se pronalazak odnosi na jednu čvrstu kompoziciju koja se u suštini sastoji od jednog kolagenskog nosača koji ima bar dva od sledećih fizičkih svojstava: modul elastičnosti u opsegu od 10-50 N/cm2;

gustinu od 1-10 mg/cm<3>;

prečnik komore veći od 0,75 mm a manji od 4 mm i/ili da ima prosečan prečnik komore ispod 3 mm

i ravnomerno raspoređenu i fiksiranu na pomenutom nosaču mešavinu

b) čvrstog humanog fibrinogena, i

c) čvrstog humanog trombina.

Kompozicija može imati dva, tri ili sva od napred navedenih svojstava. U trenutno

preporučljivom izvođenju, materijal je nosača proizveden kako je opisano u danskoj patentnoj prijavi DK PA 2001 00135 i potom u prijavi pod naslovom "Postupak za pripremanje kolagenskog sunđera, uređaj za izvlačenje dela kolagenske pene i jedan duguljast kolagenski sunđer" koju je podnela Nvcomed Pharma AS 25. januara 2002, tražeći prioritet od napred pomenute prijave. U ovom kontekstu, izraz "prečnik komore" treba shvatiti kao najveće pravolinijsko odstojanje od zida do zida u nekoj komori, tj. Najveće dijagonalno pravolinijsko rastojanje u jednoj komori. Komore mogu imati višeugaoni oblik, na primer oblik osmougaonika. Tako su, kada se nosač preseče, komore podeljene i pretvorene u šupljine. Čvrsti fibrinogen i čvrsti trombin su pričvršćeni na nosač i njihov je najveći deo u šupljinama, tako da se dobija jedna u suštini ravnomerna raspodela čvrstog trombina i čvrstog fibrinogena. Zahvaljujući tome i fiksiranju, moguće je na nosač naneti znatne količine fibrinogena i trombina, nasuprot situaciji kada se tečne kombinacije trombina i fibrinogene sipaju ili raspršuju na materijal.

Pripremanje obloženog nosača

Pripremanje obloženog nosača sastoji se u suštini od

- pripremanja jedne suspenzije aktivnih sastojaka

- ravnomeme raspodele suspenzije po nosaču

- sušenja obloženog nosača do čvrste kompozicije/fiksiranja aktivnih sastojaka na

nosač.

Pripremanje suspenzije sa fibrinogenom i trombinom obuhvata:

- obezbeđenje fibrinogenske mešavine od fibrinogena i nekog alkohola, na pri-

mer etanola

- obezbeđenje trombinske mešavine od trombina i nekog alkohola, na primer

etanola

- mešanje fibrinogenske mešavine i trombinske mešavine da bi se dobila

suspenzija.

Kod stepena obezbeđivanja mešavina, mešavina se može homogenizovati ili procediti tako da se dobije suspenzija koja sadrži čestice fibrinogena i čestice trombina, pri čemu je prosečni prečnik čestica, prema Folk Ward-u, 25 - 100 um. Temperatura je između 0°C i 12°C.

Nosač može biti jedan kolagenski sunđer. Kolagenski sunđer može da ispuni bar jedan, a poželjno je više od sledećih kriterijuma:

- pH vrednost između 5,0 i 6,0,

- sadržaj mlečne kiseline ne više od 5%,

- sadržaj amonijuma ne više od 0,5%,

- sadržaj rastvorljivih proteina, uračunat kao sadržaj albumina, ne više od 0,5%,

- sadržaj sulfatnog pepela ne više od 1,0%,

- sadržaj teških metala ne više od 20 ppm,

- mikrobiološka čistoća najviše IO<3>CFU/g,

- sadržaj kolagena od 75 do 100%,

- gustina 1 do 10 mg/cm ,

- modul elastičnosti u opsegu od 5-100 N/cm.

Kod jednog trenutno preporučljivog izvođenja, kolagenski nosač proizvodi se kako je opisano u DK PA 2001 00135. Fizička svojstva tri primera kolagenskog nosača prikazana su u sledećoj tabeli:

Ravnomerna raspodela suspenzija vrši se bilo primenom nekog uređaja za nakapavanje, kako je navedeno u američkim patentima br. 5,942,278 i 6,177,126, ili se može koristiti jedna štrcaljka, koja ima bar jednu mlaznicu, za nanošenje suspenzije na nosač. Štrcaljka izbacije suspenziju kroz mlaznicu dok se nosač i mlaznica pomeraju jedno u odnosu na drugo. Štrcaljka može da obuhvata ili da bude postavljena uz jednu transportersku traku, jednu mešalicu priključenu na neku pumpu ili sistem pumpi ili neku drugu opremu za snabdevanje, kao i jednu mlaznicu, ili sistem mlaznica koji se kreće poprečno, npr. pod pravim uglom u odnosu na traku transportera. U zavisnosti od specifičnih karakteristika medijuma, mlaznica ili sistem mlaznica mogu biti raznih oblika i veličina. Mlaznica ili sistem mlaznica može biti priključena na opremu za snabdevanje preko cevi. Oprema za snabdevanje može dostavljati medij um za oblaganje od mešalice do sistema mlaznica. Tokom procesa nanošenja obloge, sistem mlaznica može da se kreće preko nosača. U svom položaju čekanja može se držati na jednoj sirani trake transportera. Proces nanošenja obloge može se pokrenuti jednom svetlosnom barijerom koja registruje prisustvo nosača na traci transportera, a može se na isti način prekinuti jednim signalom svetlosne barijere. Takav uređaj stvara relativno male gubitke materijala za oblaganje i lak je za rukovanje, uključujući lako čišćenje. Pored toga, ima mogućnost da prekine proces oblaganja u bilo kom trenutku, primenljiv je za relativno širok opseg viskoznosti, i nanosi homogenu oblogu.

Oba sistema nanose zapreminu od 0,08 - 0,12 ml suspenzije po cm nosača.

Važan je stepen sušenje suspenzije fibrinogena, trombina i nekog alkohola koja je naneta kao vlažna obloga na površinu oblaganja nosača. Jedan primer postupka obuhvata stepen podvrgavanja obloženog nosača pritisku ispod 1000 mbar tako da se dobije osušena površina oblaganja na nosaču i da se fiksira osušena obloga na površinu oblaganja. Primenom vakuuma i korišćcnjem vakuuma u procesu sušenja, može se održavati niska temperatura (2 - 10°C) i visoka relativna vlažnost (80 - 95%), pri čemu se mogu održati strukturna i fizička svojstva nosača, posebno nosača u obliku nekog kolagena, kao što je kolagenski sunđer, kao i fibrinogena i trombina.

Pod izrazom "koji se u suštini sastoji od" podrazumeva se da su tri komponente sve bitne i neophodne za pronalazak. Međutim, u kompoziciji se mogu nalaziti i nebitni aditivi kao što su joni kalcijuma i markeri za obeležavanje u boji, kao stoje riboflavin. Kompozicija može dalje da sadrži druge korisne sastojke kao što je jedna ili više farmaceutskih ktivnih supstanci koje se mogu, na primer, birati iz grupe koju čine neki antibiotik, kao što je neki protivbakterijski ili protivgljivični antibiotik, i protivtumorska sredstva.

Mada je materijal nosača, poželjno, neki kolagenski sunđer koji sadrži materijal tipa kolagena tipa I, iz sisarskih, transgenskih ili rekombinantnih izvora, nosač se može proizvesti od drugih vrsta kolagena, tj. kolagena tipa I, II, 111, IV, VII i X. Međutim, predviđa se da nosač može biti neki biološki razgradljiv polimer, kao što je neka polihijaluronska kiselina, polioksi kiselina, npr. mlečna kiselina, glukolska kiselina, hidroksibutanojska kiselina, neka celuloza ili želatin.

Kod jednog preporučljivog izvođenja, kompozicija sadrži nosač koji ima jednu ili više aktivnih strana u kojima se fibrinogen nalazi u količini od 2-10 mg/cm<2>, na primer 4,3-6,7 mg/cm<2>, najbolje oko 5,5 mg<2>, dok se trombin nalazi u količini od 1,0-5,5 ILVcm<2>, najbolje oko 2,0 lU/cm*. Fibrinogen i/ili trombin su humanog porekla, npr. prečišćeni iz nekog prirodnog izvora postupcima poznatim stručnjacima, ili transgenski ili rekombinovan humani fibrinogen i/ili trombin proizveden postupcima poznatim stručnjacima. ;Poznati proizvodi kao što su TachoComb<®>, Beriplast<®>i TissueSeal<®>svi sadrže aprotinin ili slično kao antifibrinolitičko sredstvo. Aprotinin se može dobiti samo od goveda. Zbog toga je jedan cilj pronalazača, autora ovog pronalaska, da se razvije kompozicija sa poboljšanim materijalom nosača i samo sa komponentama čovečijeg, rekombinantnog ili transgenskog porekla. Zbog toga je razvoj ostvaren u pogledu materijala nosača i ispitivano je da li je moguće zameniti goveđi trombin čovečijim trombinom i izostaviti aprotinin. Pronalazači su se usmerili ka tom cilju preko jednog dvostepenog procesa. ;Kao prvo, razvijen je TachoComb H kao razvojni proizvod od TachoComb<®->a, pri čemu je trombin goveđeg porekla zamenjen čovečijim trombinom. Kliničko iskustvo sa TachoComb H sakupljeno je prema jednom broju terapeutski potvrdnih (faza lila) kliničkih ispitivanja u okviru indikacija hemostaza, lepljenje tkiva i hermetično zatvaranje tkiva. Još neobjavljeni rezultati dobijeni u toku tih studija potvrđuju efikasnost i bezbednost TachoComb H u regulisanju curenja krvi i vazduha, tako da služe kao dopunska terapija ušivanju rana kod hemostaze, lepljenja tkiva i hermetičnog zatvaranja tkiva tokom hirurške intervencije. Posebno se efikasnost TachoComb H ubedljivo pokazala kod postizanja lokalne hemostaze, izražena kao značajno smanjenje vremena do hemostaze u poređenju sa kontrolnim uzorcima, kod vaskularne hirurgije i kod hirurgije jetre. ;Takođe se pokazalo da je TachoComb H možda u stanju da smanji veličinu plućnih ošetećenja, što dovodi do bržeg uklanjanja curenja vazduha i može biti od koristi kod zatvaranja ozbiljnih plućnih curenja i kod emfizematoznih plućnih krila. ;Međutim, i TachoComb<®>i TachoComb H sadrže aprotinin kao integralan deo proizvoda. Smatra se da je aprotinin neophodan da suzbije eventualno pretvaranje malih količina plazminogena u plazmin u fibrinogenskoj komponenti i da spreči prerano razlaganje fibrinskog ugruška, naročito u fibrinolitičkim uslovima. ;Pronalazači su projektovali nove eksperimente da bi proverili hipoteze daje aprotinin neophodan. Eksperimenti in vitro pokazali su da antifibrinolitička zaštita koju vrši aprotinin u ugrušku i da se TachoComb (ft) bez aprotinina (TachoComb S) nije rastvorio za vrlo kratko vreme. Zbog toga su projektovana stresna ispitivanja na životinjama pa je poređen TachoComb S sa TachoComb H da bi se dokazala slična efikasnost. Kod svih ispitivanja TachoComb H ili S korišćen je kao jedino sredstvo za hemostazu. ;Četiri obimne serije eksperimenata izvedene su da se proveri efikasnost i histopatološka šema trenutno preporučljivog izvođenja ovog pronalaska TachoComb S u ;poređenju sa TachoComb H. TachoComb S ili Tachokomb H primenjivani su na organima kao što je jetra, slezina, pankreas ili mozak/ meningesi kod pasa, svinja ili kunića. Eksperimenti su tako projektovani da predstavljaju normalne hirurške uslove, ozbiljne stresne uslove i hiperfibrinolitičkc uslove. ;Rezultati dobijem" u te četiri studije nisu pokazali neku značajniju razliku između TachoComb S i Tachokomb H. Oba su se proizvoda ponašala slično u pogledu hemostatičke efikasnosti i efikasnosti hermetičkog zatvaranja rana, uključujući ozbiljne stresne uslove kao što je povećan unutarorganski pritisak ili hiperfibrinoliza izazvana lokalnom primenom r-tPA (aktivator plazminogena rekombinantnog tkiva). ;Može se zaključiti da je predklinički program, projektovan da proceni opštu potrebu da se aprotinin koristi kao komponenta Tachokomb H, pokazao sličnu efikasnost Tachokomb H i Tachokomb S. Oba su proizvoda uspešno primenjena kao jedino sredstvo za homeostazu, lepljenje tkiva i hermetično zatvaranje tkiva pod svim eksperimentalnim uslovima. U toku ispitivanja na životinjama nije bilo neželjenih reagovanja tkiva. Zbog toga je aprotinin isklju-čen iz kompozicije prema pronalasku. ;Od kompozicije prema pronalasku očekuje se da će klinički pokazati ista svojstva u pogledu hemostaze, lepljenja tkiva i hermetičkog zatvaranja tkiva kao i njeni prethodnici i da će imati isti ili čak bolji sigurnosni profil. Izostavljanje aprotinina koji se trenutno može dobiti samo od goveda doprinosi sigurnosti protiv preosetljivog reagovanja. S tim u vezi, treba napomenuti da su se antitela protiv aprotinina pojavila u tri japanske studije. Takvo se imunološko reagovanje ne očekuje od neke kompozicije bez aprotinina. ;Kod jednog sada preporučljivog izviđenja, pronalazak se odnosi na jednu čvrstu kompoziciju za hemostazu, zaptivanje tkiva i lepljenje tkiva koja se, u suštini, sastoji od jednog savitljivog kolagenskog nosača koji ima bar dva od sledećih fizičkih svojstava: modul elastičnosti u opsegu od 10-50 N/cm<2>; ;gustinu od 1-10 mg/cm3; ;prečnik komore veći od 0,75 mm a manji od 4 mm ili da bude prosečan prečnik komore ispod 3 mm ;i koja dalje obuhvata mešavinu ;čvrsog humanog fibrinogena, i ;čvrsog humanog trombina, ;a ne obuhvata nijedno antifibrinolitičko sredstvo kao što je aprotinin, e-amino-kaproinska kiselina ili ot2-antiplazmin ;pri čemu su čvrst humani fibrinogen i čvrst humani trombin fiksirani na nosač tako da je abrazija manja od 1,0 mg/cm<2>kada se uzorak obloženog materijala vibrira na jednom "Vibrofix" vibratoru na frekvenciji od oko 1000 m"<1>tokom 2 minuta i ;ako se obložen materijal nosača umetne u neki endoskopski instrument pa se potom izvadi, materijal ostaje u suštini nepromenjen i ima gubitak na Ijuštenje manji od 20% kao indikaciju savitljivosti nosača i solidnog prianjanja čvrstog humanog fibrinogena i čvrstog humanog trombina, i ;pomenuti je materijal u suštini nepropustljiv i za vazduh i za tečnosti i ima koeficijent elastičnosti od najmanje 1,25, određen ispitivanjem koje obuhvata fiksiranje obloženog nosača za jedan list lateksa, širenje lateksa pod pritiskom tri puta pri čemu se treći put meri površina obloženog nosača na najvišoj tački širenja lista lateksa i poređenja povećane površine obloženog nosača sa polaznom površinom obloženog nosača. ;Kompozicija prema pronalasku kod koje su fibrinogen i trombin humanog porekla, npr. prečišćeni iz nekog prirodnog izvora ili transgenski ili rekombinantni humani fibrinogen i trombin, jedini je raspoloživ fibrinski zaptivač koji nije poreklom od goveda, sa fiksiranom kombinacijom aktivnih komponenata nanetih na jedan savitljiv nosač, i ima nekoliko prednosti: ;Gotov proizvod, ne zahteva vreme za odmrzavanje ili za pripremanje ;Lako se nanosi na najveći deo površina tkiva i organa ;Moguća primena kod endoskopije ;Nema problema sa oticanjem ili spiranjem hemostatika sa ciljnog područja ;Kombinacija đejstva lepljenja fibrinskog ugruška i mehaničkog oslanjanja savitljivog nosača Veoma savitljiv i izdržava veliko istezanje i sabijanje ;Efikasna hemostaza i zaptivanje tkiva u roku od 3-5 minuta ;Pogodan bezbednosni profil, tj. bez komponenata od goveda ;Biološki razloživ, ostavlja samo neznatne ožiljke na tkivu ;Može se skladištiti na +2°C do +8°C i ima očekivani vek trajanja na skladištu od 36 meseci, ili na sobnoj temperaturi u trajanju od najmanje 2 godine. ;Razlog za razvijanje kompozicije prema pronalaslu proizilazi iz želje da se oslobodi od poslednje komponente od goveda kako bi se sprečio svaki, pa i teoretski, rizik prenošenja oboljenja od krava na ljude, uključujući prenosive spongiformne encelopatije (TSEs). Zbog toga su aktivne komponente fibrinogen i trombin humanog porekla, a uklonjen je aprotinin, inhibitor fibrinolitičkog enzima plazmina. Zato je prednost preporučljive kompozicije prema pronalasku koja ne sadrži komponente poreklom od goveda ta, što je otklonjen rizik od prenošenja oboljenja preko goveđeg materijala, uključujući goveđu spongi-fonnnu encefalopatiju (BSE). ;Slično drugim fibrinskim lepkovima, kompozicija prema pronalasku radi tako što reprodukuje poslednji stepen koagulacione kaskade krvi. Mešavina fibrinogena i trombina obrazuje čvrst sloj na površini savitljivog nosača. Po dodiru sa fluidima, npr. površinom koja krvari, telesnim fluidima ili fiziološkim rastvorom, komponente sloja se rastvaraju, difunduju u šupljine rane i počinju da reaguju. ;Polimerizacioni proces proizvodi jaku adheziju između površine rane i nosećeg llastera. Tokom vremena potrebnog za lepljenje, t.j. 3 do 5 minuta, poželjno je da kompozicija prema pronalasku bude nežno pritisnuta na površinu rane. Noseći flaster obezbeđuje mehaničko oslanjanje što omogućuje zaustavljaje krvarenja rane tamponom. Flaster drži na mestu kolaguacione komponente kada rane obimno krvare i sprečava ponovno krvarenje. Mehanizam delovanja obuhvata pretvaranje fibrinogena u fibrin pod dejstvom trombina odvajanjem peptida. Fibrinski monomeri spontano polimerizuju u fibrinske trake koje obrazuju viskozan i elastičan ugrušak, koji ugrušak lepi noseći flaster na površinu rane. Fibrinska matrica potom služi kao skela za kretanje fibrinoblasta (slika 8). ;Slično nekom dvokomponentnom lepku, površina rane i nosač slepljuju se međusobno polimerizacijom. Mehanička stabilnost nosećeg llastera dodaje efekt zaustavljanja krvarenja tamponom hcmostatićkom dclovanju fibrinskog zgrušavanja. Pored toga, aktivne se supstance nalaze samo na površini okrenutoj povređenom području i zahvaljujući efektu zaustavljanju krvarenja tamponom i lakom pritiskivanju one ne difunduju kroz nosač. Rezultat je, da nasuprot situaciji kada se koristi najveći deo fibrinskih lepkova, nema adhezije između povredenog područja pokrivenog kompozicijom prema pronalasku i drugih organa ili njihovih delova kada se koristi kompozicija prema pronalasku. ;Za razliku od cijanoakrilatnih i želatin-rezorcin-forrnaldehidnih (GRF) lepkova, koji su veoma histotoksični za parenhimatozna tkiva, čvrste kompozicije prema ovom pronalasku su fiziološki razložive i zamenjuje ih tkivo za nekoliko nedelja ili meseci posle primene, i to uglavnom preko dva mehanizma: ;1. Fibrinski ugrušak se razlaže delom fibrinolizom i delom ćelijskom fagocitozom. ;2. Nosač se razlaže sloj po sloj apsorbljivim granulacionim tkivom i prevodi se u jednu pseudo-kapsulu koja se sastoji od endogenog veznog tkiva. ;Kompozicija prema pronalasku korisna je za hemostazu, lepljenje tkiva i zaptivanje tkiva, naročito kod hirurških intervencija u gastrintestinalnom sistemu, kao što je jednjak, želudac, tanko crevo, debelo crevo, rectum, na parenhimalnim organima kao što je jetra, slezina, pankreas, bubrezi, pluća, adrenalne žlezde, tiroidni i limfni čvorovi, kardiovaskularna hirurgija, grudna hirurgija uključujući hirurške intervencije na dušniku, bronhijalna ili plućima, hirurške intervencije u području uva, nosa ili grla (ENT), uključujući dentalnu hirurgiju, ginekološku i urološku hirurgiju, hirurgiju kosti (npr. isecanje sunđerastog dela kosti), hirurške intervencije u hitnim slučajevima, neurološke hirurgije, limfne, bilijarne i cerebrospinalne (CSF) fistule, i prodor vazduha tokom grudne i plućne hirurgije. Ovaj se pronalazak isto tako odnosi na primenu opisanih kompozicija za navedene svrhe. ;Treba naglasiti daje kompozicija prema pronalasku u suštini nepropustljiva za vazduh i za tečnosti, što je razlog da je proizvod posebno pogodan za obradu limfnih, bilijarnih i cerebrospinalnih (CSF) fistula, i prodora vazduha tokom grudne i plućne hirurgije. Dalje je, zbog toga što je u suštini nepropustljiv za tečnosti, proizvod izuzetno primenljiv u hirurgiji organa koji mnogo krvare kao što su jetra i slezina, kao i u hirurgiji npr. u gastrointestinalnom kanalu. ;Proizvod prema pronalasku treba da se primenjuje kada se krvarenje, ili limfno, bilijarno, vazdušno ili CSF curenje ne može kontrolisati konvencionalnim postupcima ili kada bi ti postupci dali nepovoljne rezultate. ;Nosač je poželjno jedan kolagenski sunđer, meki povoj ili flaster, koji se izrazi koriste podjednako, sinonimno u ovoj specifikaciji i zahtevima. Komponente kolagen, fibrinogen i trombin poželjno su sisarskog porekla. Poželjno je da su čvrste komponente čovečijeg porekla. Kolagen, fibrinogen i trombin mogu biti ili prečišćeni iz nekog prirodnog izvora ili rekombinantnog ili transgenskog čovečijeg fibrinogena i/ili trombina. ;Trenutno najpreporučljivi je izvor kolagena od konja. Da bi se sprećilo prenošenje virusa zbog kontaminacije konjskim virusima koji su patogeni za ljude, odgovarajući izbor izvornog materijala i dezaktiviranje patogenih agenasa u procesu proivodnje važna je mera predohrane. ;LEGENDA UZ SLIKE ; ;PRIMERI ;Sledeći Primeri I-rV prikazuju različite procedure za pripremanje obloženog kolagenskog sunđera sa raznim fibrinogenskim i trombinskim sirovinama. ;Fibrinogenske sirovine ; Trombinske sirovine ;PRIMER I ;U ovom primeru, suspenzija sadrži čovečiju fibrinogensku formulaciju B i čovečiju trombinsku formulaciju B. ;Krajnja je zapremina suspenzije od 3500 ml dobijena primenom sledećih količina i parametara: ;Fibrinogenska mešavina: ;- 2800 ml etanola (94% na 2°C-8°C) ;- 492,5 g čovečijeg fibrinogena formulacije B ;- 493,5 mg riboflavina ;Fibrinogenska je mešavina držana, uz mešanje, 8-16 časova na 2-8°C. ;Trombinska mešavina: ;- 100 ml etanola (100% na -30°C) ;- 12,27 g čovečijeg trombina formulacije B ;Trombinska je mešavina držana 8-16 časova na -30°C. ;Suspenzija: ;- 157 ml trombinske mešavine dodano je fibrinogenskoj mešavini. ;Dodan je 94% etanol na 2 - 8°C da se krajnja zapremina suspenzije dopuni do 3500 ml. ;Karakteristike suspenzije: ;1. Koncentracija etanola: 94,3% ;2. Kretanje sedimentacije: ;a) sedimentacijska zapremina 5 minuta posle početka: 98% ispitivane zapremine, ;b) sedimentacijska zapremina 24 časa posle početka: 64% ispitivane zapremine. ;3. Veličina čestica (srednji prečnik po Folk Ward-u): 56,4 +/- 1,3 u.m ;Nosači u obliku kolagenskih traka bili su obloženi suspenzijom. Kao prvo, 48 kolagenskih sunđerastih traka bilo je prethodno inkubirano u rashladnoj komori pod sledećim uslovima: ;- Temperatura: 5,2°C ;- Apsolutna vlažnost: 4,8 g vode po kg vazduha ;- Vreme inkubacije: 18,5 časova ;Obložene su kolagenske sunđeraste trake sušene na sledeći način: ;Obložene su trake inkubirane 15 minuta na temperaturi od 5,2°C i pri apsolutnoj vlažnosti od 4,8 g vode po kg vazduha. ;Obložene su trake potom sušene u jednoj vakuumskoj komori za sušenje pri sledećim uslovima sušenja: ;- Stanje vazduha: temperatura 5,2°C, apsolutna vlažnost 4,8 g vode /kg vazduha ;- Protok vazduha kroz usisni ventil: 23 m<3>na čas ;- Vakuum: 59 mbar ;- Vreme sušenja: 4 časa. ;Abrazija dobijene obloge na kolagenskim sunđerastim trakama bila je oko 0,2 mg/cm<2>kada su vibrirane 2 minuta najednom "Vibrofix" vibratoru pri frekvenciji od 800 - 1200 min"<1>. ;PRIMER II ;U ovom primeru, suspenzija sadrži čovečiju fibrinogensku formulaciju C i čovečiju trombinsku formulaciju C. ;Krajnja je zapremina suspenzije od 3500 ml dobijena primenom sledećih količina i parametara: ;Fibrinogenska mešavina: ;- 2252 ml etanola (94% na 2°C-8°C) ;- 370,7 g čovečijeg fibrinogena formulacije C ;- 493,5 mg riboflavina ;Fibrinogenska je mešavina držana, uz mešanje, 8-16 časova na 2-8°C. ;Trombinska mešavina: ;- 188 ml etanola (100% na -30°C) ;- 12 ampula čovečijeg trombina formulacije C (10650 RJ/ampula)/12 ml vode za injekcije Trombinska je mešavina držana 8-16 časova na -30°C. ;Suspenzija: ;- 164,5 ml trombinske mešavine dodano je fibrinogenskoj mešavini. ;- Dodan je 94% etanol na 2 - 8°C da se krajnja zapremina suspenzije dopuni do 3500 ml. Karakteristike suspenzije: ;1. Koncentracija etanola: 94,1% ;2. Kretanje sedimentacije: ;a) sedimentacijska zapremina 5 minuta posle početka: 94% ispitivane zapremine, ;b) sedimentacijska zapremina 24 časa posle početka: 71% ispitivane zapremine. ;3. Veličina čestica (srednji prečnik po Folk Ward-u): 49,2 +/- 0,93 um ;Nosači u obliku kolagenskih traka bili su obloženi suspenzijom. Kao prvo, 48 kolagenskih sunđerastih traka bilo je prethodno inkubirano u rashladnoj komori pod sledećim uslovima: ;- Temperatura: 4,8°C ;- Relativna vlažnost: 90,3% ;- Vreme inkubacije: 22,25 časova ;Obložene su kolagenske sunđeraste trake sušene na sledeći način: ;Obložene su trake inkubirane 13 minuta na temperaturi od 4,9°C i pri apsolutnoj vlažnosti od 4,8 g vode po kg vazduha. ;Obložene su trake potom sušene u jednoj vakuumskoj komori za sušenje pri sledećim uslovima sušenja: ;- Stanje vazduha: temperatura 5,2°C, apsolutna vlažnost 4,9 g vode po kg vazduha ;- Protok vazduha kroz usisni ventil: 25 m<3>na čas ;- Vakuum: 60 mbar ;- Vreme sušenja: 4 časa. ;Abrazija dobijene obloge na kolagenskim sunđerastim trakama bila je oko 0,3 mg/cm<2>kada su vibrirane 2 minuta najednom "Vibrofix" vibratoru pri frekvenciji od 800 - 1200 min"<1>. ;PRIMER III ;U ovom primeru, suspenzija sadrži čovečiju fibrinogensku formulaciju C i čovečiju trombinsku formulaciju C. ;Krajnja je zapremina suspenzije od 780 ml dobijena primenom sledećih količina i parametara: Fibrinogenska mešavina: ;- 700 ml etanola (94% na 2°C-8°C) ;- 84.42 g čovečijeg fibrinogena formulacije C ;- 110 mg riboflavina ;Fibrinogenska je mešavina držana, uz mešanje, 8-16 časova na 2-8°C. ;Trombinska mešavina: ;- 35 ml etanola (100% na -30°C) ;- 0,54 g čovečijeg trombina formulacije C ;Trombinska je mešavina držana 8-16 časova na -30°C. ;Suspenzija: ;- 23,0 ml trombinske mešavine dodano je fibrinogenskoj mešavini. ;- Dodan je 94% etanol na 2 - 8°C da se krajnja zapremina suspenzije dopuni do 780 ml. ;Karakteristike suspenzije: ;1. Koncentracija etanola: 94% ;2. Kretanje sedimentacije: ;a) sedimentacijska zapremina 5 minuta posle početka: 92% ispitivane zapremine, ;b) sedimentacijska zapremina 24 časa posle početka: 72%) ispitivane zapremine. ;3. Veličina čestica (srednji prečnik po Folk Ward-u): 60,5 +/- 0,5 pm ;Nosači u obliku kolagenskih traka bili su obloženi suspenzijom. Kao prvo, 8 kolagenskih sunđerastih traka bilo je prethodno inkubirano u rashladnoj komori pod sledećim uslovima: ;- Temperatura: 6,0°C ;- Relativna vlažnost: 85% ;- Vreme inkubacije: 18,5 časova ;Obložene su kolagenske sunđeraste trake sušene na sledeći način: ;Obložene su trake inkubirane 45 minuta na temperaturi od 5°C i pri relativnoj vlažnosti od 85%. ;Obložene su trake potom sušene u jednoj vakuumskoj komori za sušenje pri sledećim uslovima sušenja: ;- Stanje vazduha: temperatura 5°C, relativna vlažnost 85% ;- Protok vazduha kroz usisni ventil: 1,2 m<3>na čas ;- Vakuum: 35 mbar ;- Vreme sušenja: 4 časa. ;Abrazija dobijene obloge na kolagenskim sunđerastim trakama bila je oko 0,3 mg/cm<2>kada su vibrirane 2 minuta najednom "Vibrofix" vibratoru pri frekvenciji od 800 - 1200 min 1. ;PRIMER IV ;U ovom primeru, suspenzija sadrži čovečiju fibrinogensku formulaciju A i čovečiju trombinsku formulaciju A. ;Krajnja je zapremina suspenzije od 3120 ml dobijena primenom sledećih količina i parametara: ;Fibrinogenska mešavina: ;- 2540 mi etanola (94% na 2°C-8°C) ;- 311,6 g čovečijeg fibrinogena formulacije A ;- 440 mg riboflavina ;- Fibrinogenska je mešavina držana, uz mešanje, 8-16 časova na 2-8°C. ;Trombinska mešavina: ;- 210 ml etanola (100% na -30°C) ;- 229 g čovečijeg trombina formulacije A ;Suspenzija: ;- 87,3 ml vode za injekcije dodano je fibrinogenskoj mešavini. ;Trombinska je mešavin dodata fibrinogenskoj mešavini. ;Dodan je 100% etanol na 2 - 8°C da se dopuni do krajnje zapremina suspenzije. Karakteristike suspenzije: ;1. Koncentracija etanola: 97% ;2. Kretanje sedimentacije: ;a) sedimentacijska zapremina 5 minuta posle početka: 95,6% ispitivane zapremine, ;b) sedimentacijska zapremina 24 časa posle početka: 63,5% ispitivane zapremine. ;3. Veličina čestica (srednji prečnik po Folk Ward-u): 51,8 +/- 0,8 pm ;Nosači u obliku kolagenskih traka bili su obloženi suspenzijom. Kao prvo, 48 kolagenskih sunđerastih traka bilo je prethodno inkubirano u rashladnoj komori pod sledećim uslovima: ;- Temperatura: 6,5°C ;- Relativna vlažnost: 90% ;- Vreme inkubacije: 22,5 časova ;Obložene su kolagenske sunđeraste trake sušene na sledeći način: ;Obložene su trake inkubirane 10 minuta na temperaturi od 6,5°C i pri relativnoj vlažnosti od 90%. ;Obložene su trake potom sušene u jednoj vakuumskoj komori za sušenje pri sledećim uslovima sušenja: ;- Stanje vazduha: temperatura 6,5<H>C, relativna vlažnost 95% ;- Protok vazduha kroz usisni ventil: 21 m<3>na čas ;- Vakuum: 58 mbar ;- Vreme sušenja: 4 časa. ;Abrazija dobijene obloge na kolagenskim sunđerastim trakama bila je manja od 0,1 mg/cm<2>kada su vibrirane 2 minuta najednom "Vibrofix" vibratoru pri frekvenciji od 800 - 1200 min"<1>;PRIMER 1 ;Aprotinin kao komponenta TachoComb<®>;In vitro ispitivanja antifibrinolitičkog delovanja u uslovima ispiranja sličnim jednoj in vivo;situaciji;Cilj je ovog ispitivanja da se prikaže efikasnost aprotinina kao komponente TachoComb H u hiperfibrinolitičkim uslovima koristećiin vitroispitne modele. ;TachoComb S je jedan beličast, obložen sunđerast flaster. Flaster od penastog suvog kolagena korišćen je kao nosač aktivnih, čvrstih komponenata. Veličina flastera je 9,5 x 4,8 x 0,5 cm. Aktivna je strana obojena u žuto. 1 cm<2>TachoComb S flastera (debljine 0,5 cm) sastoji se od sledećih sastojaka: ;Eksperimentalna ispitivanja in vivo za određivanje doze potvrdila su da napred navedene koncentracije trobina i fibrinogena daju maksimalnu jačinu lepljenja (videti Primer 3). ;Tachocomb H koji sadrži čovečiji trombin, čovečiji fibrinogen i aprotinin poređen je sa TachoComb S koji sadrži samo čovečiji trombin i čovečiji fibrinogen kao aktivne komponente. ;Pripremljena su dva ispitna modela za kvantitativno određivanje efikasnosti pod hiperfibrinolitičkim uslovima za koje se može smatrati da su relevantni za hirurške uslove i koji omogućuju da se izvrši serija ispitivanja potrebna za prikazivanje jednog značajnog delovanja. ;Kod ispitnog modela 1, ispitivani uzorak je nanet na sintetičku tkaninu kao na adhezionu površinu. Jedan tačno određen otvor isečen je u tkanini da simuliše, npr. perforaciju nekog krvnog suda. Zaptivanje je izloženo delovanju dvaju različitih fibrinolitičkih rastvora (inkubacioni rastvori) kroz otvor. Jedan je od tih rastvora dodatno sadržao antfibrinolitičku komponentu a,2-antiplazmin. ;Sastav inkubacionih rastvora: ;Sve su supstance bile rastvorene u puferu 1: 50 mM Trometamola, 100 mM NaCl, 2,5 mM CaCh, 2 mg/ml BSA (bez proteaze), 0,5 mg/ml Na-azid/ml) ;Inkubacioni rastvor I (1 umolarni plazminogen, 1 nmolarni aktivator plazminogena tkiva (tPA), 1 umolarni a2-antiplazmin) ;49 ul puferal.pH 7,4 ;51 ul plazminogenskog rastvora (konc. 4,9 umolarna Coachrom čovečija plazminogena aktivna smeša) ;50 ul rastvora tPA (50 nmolarni) ;100 ul rastvora a2-antiplazmin (2,5 umolarni) ;Inkubacioni rastvor II (1 umolarni plazminogen, 1 nmolarni aktivator plazminogena tkiva) ;49 ul pufera l,pH7,4 ;51 ul plazminogenskog rastvora (konc. 4,9 pmolarna Coachrom čovečija plazminogena aktivna smeša) ;50 ul rastvora tPA (50 nmolarni) ;Inkubacioni je rastvor menjan svaka 2 časa da bi se simulisalo dejstvo ispiranja. Tom prilikom je kontrolisana adhezija. Na uzorku je bio ostvaren pritisak od 50 mbar. Registrovano je vreme kada je uzorak odvojen na pritisku od =50 mbar. ;Ispitni je model 2 trebalo da pokaže fibrinolitičko delovanje oštećenog crevnog tkiva. Ispitni je model bio nanet na svinjska creva( ex vivo)kao na adhezionu površinu. Jedna tačno određena perforacija načinjena je u crevu da omogući inkubacionom rastvoru da dođe u dodir sa fibrinskim ugruškom i da simulira dejstvo ispiranja. Inkubacioni je rastvor menjan u određeno vreme i tada je na uzorku uspostavljen pritisak od 50 mbar. Registrovano je vreme kada je uzorak odvojen na pritisku od =50 mbar. ;Rezultati su otkrili znatne razlike između TachoComb H koji sadrži aprotinin i TachoComb S bez aprotinina. ;Kod ispitnog modela 1, koji koristi inkubacioni rastvor koji sadrži aktivator plazminigena tkiva, plazminogen i ct2-antiplazmin vreme fibrinolize bilo je 41,2±7,3 časa za TachoComb H u poređenju sa 12,8±2,8 za TachoComb S. ;Kod ispitnog modela 1, koji koristi inkubacioni rastvor koji sadrži samo aktivator plazminogena tkiva i plazminogen vreme fibrinolize bilo je 31,6±5,3 časa za TachoComb H u poređenju sa 8,3±1,8 za TachoComb S. ;Kod ispitnog modela 2, vreme odvajanja za TachoComb H bilo je 78,4±16,3 časova u poređenju sa 6,5±1,8 časova za TachoComb S. ;Dosta fibrina se i dalje moglo primetiti na ispitivanom uzorku. Uzorak se, međutim odvojio pod pritiskom od površine creva zbog toga što je jačina adhezije između fibrinskog ugruška i površine creva oslabila. ;Kod oba je modela antifibrinolitičko delovanje aprotinina kao aktivne komponente u TachoComb H moglo biti veoma jasno demonstrirano. ;Kod ispitnog modela 1 produženje vremena odvijanja fibrinolize zbog prisustva aprotinina kao aktivne komponente TachoComb H iznosilo je 320% za inkubacioni rastvor 1 koji je sadržao a2-antiplazmin, a 380% za inkubacioni rastvor rastvor II bez ct2-antiplazmina. ;Ispitni je model takođe pokazao dodatno antifibrinolitičko delovanje a2-antiplazmina preko produžavanja vremena odvijanja fibrinolize za TachoComb H od 31,6 do 41,2 časa (130%) a za TachoComb S od 8,3 do 12,8 časova (154%). ;PRIMER 2 ;Poređenje obloženog Nycomed sunđera ( TachoComb S) sa drugim proizvedenim nosačima;obloženim na identičan način kao i TachoComb S.;Prianjanje slojeva;Procedura ;1. Oblaganje različitih nosača ; ;Površina od 2x4,5 cm<2>svakog od nosača bila je obložena TachoComb S suspenzijom za oblaganje. Količina suspenzije odgovara TachoComb specifikaciji (5,5 mg fibrinogena/cm<2>). Uzorci su sušeni. ;2. Pripremljen je jedan uzorak od 1x4 cm<2>od svakog obloženog nosača. ;3. Prianjanje sloja ispitivano je na sledeći način: ;Opis postupka;Uređaji;Analitička vaga (tačnost merenja ±0,5 mg) ;"Vibrofix" vibrator kombinovan sa napravom za fiksiranje ;Lenjir sa milimetarskom podelom ;Sekundomer, skalpel, epruvete unutrašnjeg prečnika 2 cm, sa zapušačem ;Procedura;Skalpelom su iz obloženih nosača isecane obložene površine veličine 4x1 cm<2>. ;Uzorak je stavljen u uravnoteženu epruvetu sa zapušačem. Potom je vibriran na "Vibrofix" vibratom (frekvencija: oko 1000 m"<1>) tokom 2 min. ;Isečak se vadi a preostala količina materijala obloge (abrazija: mg/cm<2>) ponovo se meri. ;Proračun: ; Rezultati ;Komentar;Svi nosači osim Nvcomed kolagenskog sunđera nisu elastični posle oblaganja. ;Uzorak se mora šeći veoma pažljivo. Ako se seče makazama, veliki će se deo materijala obloge raspasti jer je sloj sam po sebi krut. Ethisorb patch (flaster) pokazao je da skoro uopšte nema veze sa materijalom obloge. Čim se malo protrese, cela se obloga odvaja slično tepihu. ;Razlika između Nvcomed kolagenskog sunđera i drugih materijala nosača može se sasvim jasno sagledati. ;Elastičnost ovlafenog obloženog nosača;Procedura;1. Oblaganje različitih nosača ;Površina od 2x4,5 cm<2>svakog od nosača bila je obložena TachoComb S suspenzijom za oblaganje. Količina suspenzije odgovara TachoComb specifikaciji (5,5 mg fibrinogena/cm<2>). Uzorci su sušeni. 2. Uzorak od oko 5-7 cm<2>pripremljen je od svakog od obloženih nosača. Utvrđena je tačna polazna površina za svaki od suvih uzoraka. 3. Uzorak je nakvašen i postavljen na elastičan list lateksa pričvršćen na specijalnu opremu koja je detaljnije opisana pod naslovom "procedura". Lateks je stavljen pod pritisak tako da se rastegao. Posle dva širenja i otpuštanja, list je rastezan po treći put. Površina nosača merena je u tački najvećeg rastezanja. ;Opis postupka;Aparati/ Hemikalije;Peristaltička pumpa (IKA PA-SF) ;Boca za puferovanje pod pritiskom (3 izlazna otvora) ;VDO manometar (0-250 mbar) ;Stakleni levak (prečnik otvora 1: 30 mm, otvora 2: 15 mm) ;Silikonske cevi i stezaljke, rukavice od lateksa (Semper med), skalpel, lenjir sa milimetarskom podelom, makaze ;Fiziološki rastvor ;Procedura;Sledeći se pribor hermetički povezuje silikonskim cevima sa tri izlaza boce za puferovanje pod pritiskom: ;a) peristaltička pumpa ;b) manometar ;c) stakleni levak/otvor 2 ;Dvostruki sloj veličine oko 8x8 cm<2>iseče se od jedne rukavice od lateksa. Taj se komad ;hermetično pričvrsti na otvor 1 staklenog levka. ;Skalpelom se iseče iz obloženog nosača komad površine veličine 5-7 cm . ;Meri se površina uzorka (polazna površina). Obloga uzorka se nakvasi slanim rastvorom pa se postavi na zategnuti lateks. Rukom se pritisne na list lateksa u trajanju od oko 1 min. Koristeći peristaltičnu pumpu, list lateksa se rasteže pod pritiskom od oko 70 mbar. To se ponovi dva puta uz otpuštanje lista lateksa. Kod trećeg rastezanja meri se površina (dužina i širina) obloženog nosača u najvišoj tački širenja lista lateksa. ;Proračun: ; Rezultati ;Komentar:;Elastičnost nakvašenog kolagenskog sunđera Nvcomed (TachoComb S) jedna je od važnih karakteristika proizvoda. Elastičnost je važna u hirurgiji stomaka i grudi. Posle lepljenja nosač ;treba da bude u stanju da prati, na primer, kretanje pri širenju i opuštanju pluća ili creva. Naročito Ethisorb nije uopšte pokazao nikakvu elastičnost. Trenutno se odvojio od obloge. Obloženi Willospon<®>Spezial i Opraskin<®>pokazali su strukturne defekte tokom ispitivanja. ;Primena obloženog nosača u endoskopskoj hirurgiji;Procedura:;1. Oblaganje raznih nosača ;Površina veličine 2x4 cm svakog od nosača obložena je TachoComb S suspenzijom za oblaganje. Količina suspenzije za oblaganje odgovarala je TachoComb specifikaciji (5,5 mg fibrinogen/cm<2>). Uzorci su sušeni. 2. Rukovanje obloženih uzoraka nosača za primenu u endoskopskoj hirurgiji i gubitak obloge zbog ovog rukovanja dokumentovani su opremom za digitalno fotografisanje. ;Opis postupka;Uređaj;Endodock: Endoskopsko oruđe projektovano za primenu TachoComb<®>u endoskopskoj hirurgiji (videti sliku 7). Digitalna foto oprema ;Spisak ispitivanih nosača; ;Procedura;Snimljen je niz fotografija za svaki od nosača. ;1. Slika: Dokumentacija neobloženih i obloženih uzoraka nosača. ;2. Slika: Obloženi su uzorci stavljani u endoskopsku opremu (Endodock). Uzorci su morali biti poravnavani ručno da bi se mogli omotati oko vodeće "čivije", Potom su uzorci pažljivo umetani u čeličnu cev prečnika 10 mm. ;Dokumentacija uzorka je delimično umetnuta u Endodock cev. ;3. Slika: Uzorak je pažljivo istisnut iz cevi. Posle toga je uzorak morao da se razvije. Obloga koja se odvojila sa nosača zbog opisanog rukovanja sakupljena je pored nosača. Dokumentovani su razvijen uzorak posle umetanja u endoskopsku opremu i gubitak obloge zbog ovakvog rukovanja. ;Komentar;TachoComb S (obložen sunđer od konjskog kolagena/Nvcomed) u endoskopskoj hirurgiji najzahtevnijaje primena proizvoda. TachoComb S se umeće ujedan endoskopski aparat. Cev tog aparata je obično prečnika 10-13 mm. Da bi se umetnuo u cev, TachoComb S se poravna a potom se omota oko jedne vodeće "čivije" i potom pažljivo umetne u cev. Zbog toga veza obloge i nosača mora biti sama po sebi jaka, ali proizvod mora ostati dovoljno savitljiv u suvom stanju da se može saviti i namotati. Kada se prinese mestu gde se vrši operacija, TachoComb S se pažljivo izvuče iz cevi. Potom se mora razviti i postaviti na površinu rane. To često zahteva izvesna podešavanja. Zbog toga prianjanje sloja za nosač treba da bude dovoljno jako da izdrži to rukovanje. ;Rezultati;Rezultati se vide sa priloženih slika 1-6. Procena otpalog materija obloge je sledeća: ; ;Kako je Ethisorb<®>veoma krut nosač, prianjanje je obloge veoma loše. Zbog toga je Ethisorb<*>izgubio skoro celokupnu oblogu u toku ovog ispitivanja. U poređenju sa obloženim kolagenskim sunđerom Nycomed-a, svi drugi ispitivani nosači imaju ravnu površinu koja se oblaže. Zbog toga obloga leži na nosaču kao "ravan tepih". To dovodi da prilično nesavitljive strukture na suvim obloženim nosačima. Savijanje ili uvijanje često lomi samu oblogu.

Posle umetanja obloženih nosača u cev endoskopskog aparata i potonjeg razvijanja uzorka, svi su nosači osim kolagenskog sunđera Nycomed-a izgubili znatan deo obloge tako da su velike površine ostale bez materijala obloge.

Struktura i tekstura Nvcomed kolagenskog sunđera čine osnovu velike savitljivosti TachoComb S u suvim ili u vlažnim uslovima. Nvcomed kolagenski sunđer je penušav tako da iznutra ima višeugaone komore. Na površini su te komore rasečene i obrazuju šupljine. Te šupljine povećavaju površinu oblaganja. Tokom oblaganja se suspenzija za oblaganje ravnomerno raspoređuje po strukturisanoj površini. U toku sušenja rastvor za oblaganje koji sadrži i fibrinogen i trombin fiksira se kao čvrsta materija u šupljinama. Zbog toga se TachoComb S može šeći na željene veličine i može sc umetnuti u endoskopski aparat sa veoma malim gubitkom materijala za oblaganje ili bez ikakvog gubitka.

Velika je savitljivost suvog TachoComb S velika prednost u poređenju sa svim ostalim ispitivanim obloženim nosačima.

PRIMER 3

Ispitivanja za određivanje doza aktivnih komponenata

Doze aktivnih komponenata utvrđene su pomoću dva različita eksperimentalna modela u kojima je merena jačina prianjanja: jačina na istezanje na jetri pacova, jačina prianjanja nasuprot podignutom pritisku u tkivu bubrega pacova.

A. Jačina na istezanje na jetri pacova

Rana veličine 1 x 1 cm i dubine oko 1 mm načinjena je na levom režnju jetre anesteziranog pacova da bi se izazvalo lagano krvarenje. Rana je zatvorena sa komadom veličine 1x1 cm

TachoComb S koji je bio povezan sa jednom opružnom vagom. Izmerena je sila istezanja pri kojoj je TachoComb S otkinut.

B. Jačina prianjanja nasuprot podignutom pritisku u tkivu bubrega pacova

Na levom bubregu anesteziranih pacova načinjena je ravna rana koja je jako krvarila tako što je odsečeno oko četvrtine njegove mase. Rana je zatvorena TachoComb S opitnim uzorcima. Pritisak u tkivu podizan je zatvaranjem venskog isticanja i pumpanjem jednog izotoničnog rastvora soli citrata (pH 7,2) u bubreg. Izmeren je pritisak na kome je TachoComb počeo da se odvaja.

Dobijeni rezultati su ukazali na znatne razlike između nekoliko varijacija. Optimalni opseg za čovečiji trombin bio je 0,9 do 10 I.U./cm<2>sa konstantnim sadržajem čovečijeg fibrinogena od oko 5 mg/cm 2 . Optimalni opseg za čovečiji fibrinogen bio je 2,9 do 7,2 mg/cm 2 sa konstantnim sadržajem čovečijeg trombina od oko 2 I.U./cm .

Ova in vivo ispitivanja potvrdila su da i koncentracija fibrinogena (4,3 - 6,7 mg/cm<2>) i koncentracija trombina (1,5 - 2,5 IU/cm<2>) koje se koriste u drugim TachoComb formulacijama (TachoComb<®>i TachoComb H) takođe daju maksimalnu silu prianjanja za TachoComb S.

PRIMER 4

Efikasnost TachoComb S kod zatvaranja povreda slezine i jetre kod pasa

Cilj ovog ispitivanja bio je da se poredi hemostatička efikasnost TachoComb H (koji sadrži aprotinin) sa TachoComb S (bez aprotinina) kod povreda slezine i jetre pasa. Isecanje i bušenje (dubine 0,5 cm) slezine izabrano je da simulira manje krvarenje. Rasecanje vrha gornjeg režnja jetre izvršeno je da imitara površinsku ranu koja jako krvari (2 do 3 cm2). TachoComb H ih TachoComb S pokrivač primenjen je kao jedino sredstvo za zaustavljanje krvarenja na rane (ista partija je korišćena na ranama slezine i jetre kod istog psa). Autopsija je izvršena 48 časova posle hirurške intervencije pošto je to u kliničkoj praksi period sa najvećim rizikom od ponovnog krvarenja.

Potpun prekid krvarenja ostvaren je sa oba proizvoda. Ni jedan slučaj sekundarnog krvarenja nije zapažen kod autopsije posle 48 časova, ni pri vizuelnom pregledu ni kod histološkog ispitivanja.

Histološki, nije bilo razlike između pasa na koje je primenjen TachoComb H ni kod onih na koje je primenjen TachoComb S kada su ocenjivane rane na slezini i jetri pokrivene pripadajućim pokrivačima, a u pogledu zaustavljanja krvarenja i zarastanja rana. Posle operacije nije zapažen ni jedan jedini slučaj sekundarnog krvarenja.

Podaci iz krvne slike pokazali su slične rezultate za obe obrađene grupe sa blagim porastom broja belih krvnih zmaca 48 h posle operacije. Nije bilo nikakve razlike između grupa ili između vremena kada je reč o bilo kom od ocenjivanih parametara. Isto tako ispitivanja koagulacije nisu pokazale nikakve razlike povezane sa prisustvom ili odsustvom aprotinina. Povećanje sadržaja fibrinogena u krvi zapaženo je u obe obrađene grupe 48 časova posle operacije, Povećanje broja belih krvnih zrnaca i sadržaja fibrinogena u krvi može se pripisati zapaljenjskom reagovanju na hiruršku traumu i ne smatra se kao toksično sporedno delovanje TachoComb-a H ili S.

Zaključeno je da TachoComb S (bez aprotinina) pokazuje istu efikasnost kao i TachoComb H (koji sadrži aprotinin) pri lečenju parenhimalnih rana kod pasa kod kojih se javlja manje i jako krvarenje. Na stabilnost ugrušavanja pod izabranim uslovima nije uticalo prisustvo ili odsustvo aprotinina.

PRIMER 5

Uporedno hemostatičko delovanje i delovanje na zatvaranje rana i otpornost apsorbljivog

TachoComb S i Tachocomb H: Eksperimetalna studija na svinjama

Svrha studije

Ispitivanje je projektovano đa se proceni trenutna efikasnost i kratkotrajna otpornost jednog hemostatičkog mekog materijala, ili povoja, na jednoj rani na slezini izazvanoj na svinji.

Materijal i postupci

Za studiju je uzeto 24 svinja, ženki. 2 grupe hemostatičkih povoja ispitivane su proizvoljno: TachComb H sa aprotininom i TachoComb S bez aprotinina.

Na dan su hirurške intervencije životinje primile meke povoje koji su začepili standardizovanu ranu veličine 2 x 3 cm obrazovanu hirurškim putem na prednjem delu slezine.

Trenutno i hemostatičko delovanje povoja bilo je ocenjeno brojanjem broja mehurića i merenjem vremena potrebnog da se zaustavi krvarenje. Prianjanje je TachoComb-a H i S zabeleženo.

Posle 72 časa kratkotrajno ponašanje i otpornopst oba materijala ispitivani su povećanjem unutarslezinskog pritiska (stezanjem venskih krvnih sudova).

Kada se dostignut pritisak skoro ustalio, jedna injekcija adrenalina rV (0,02 mg ili 0,04 mg) data je da se poveća arterijski pritisak, zajedno ili ne sa infuzijom dobutarnin hlorhidrata.

Pomoću ovih farmakoloških supstanci, probijanje usled pritiska od krvarenja rana sondiranih pomoću TachoComb-a H i S navedeno je za svaku od životinja.

Rezultati

Nije otkrivena nikakva razlika između lečenja u momentu hirurške obrade slezine na hemostatičko delovanje.

Prilikom sledećeg pregleda, posle 72 časa, makroskopski izgled oba povoja bio je identičan.

Merenja akutnog pritiska i otpornosti na kidanje nisu bila značajnije različita između te dve ispitivane grupe.

Nije došlo do kidanja materijala. Krvarenje rane zapaženo je kod 4 životinje sa TachoComb S i 2 životinje sa TachoComb H (sa dodatnim mehurićem u grupi 4).

Histološko je ispitivanje sugerisalo da aprotinin može zaštitno delovati na strukturu povoja, čini se da aprotinin modifikuje mikroskopsku šemu smanjenjem razlaganja povoja. Nije zapažena nikakva specifična ćelijska šema.

Zaključak

Trenutno hemostatičko delovanje dvaju formulacija TachoComba-a, S i H, bilo je istraživano na standardizovanom modelu lezije slezine kod 24 svinje.

Oba su se materijala ponašala slično u pogledu efikasnosti, prianjanja na ranu i prilagođavanja na parenhim. Njihova je efikasnost bila impresivna.

Njihova je otpornost na biološko razlaganje i na proteolizu ispitivana 72. časa posle hirurške intervencije povećanjem unutarslezinskog pritiska (mehaničkim i farmakološkim sredstvima) i beleženjem lokalnog otpora u TachoComb H i S mekom materijalu. Nije mogla biti zapažena bilo kakva značajna razlika u otpornosti ova dva materijala.

Histološki nalazi su, međutim, ukazali da je proteolitička degradacija TachoComb-a S bila nešto malo više izražena nego kod Tach-Comb-a H.

TachoComb S ili TachComb H korišćeni su kao jedino sredstvo hemostaze da se zapuše lezije slezine kod svinja koje su intenzivno krvarile (površinska lezija 2 cm x 3 cm, dubine 3-5 mm, n=12 po grupi). Posle 72 časa unutarslezinski pritisak povećan je podvezivanjem vene (ili vena) slezine. Posle toga je unutarslezinski pritisak dodatno povišen ubrizgavanjem adrenalina. Svinje su praćene na pojavu znakova ponovnog krvarenja ili pojave mehura krvi ispod flastera. Histopatologija uzoraka (mesta lezija pokrivena sa TachoComb-om H i S) izvršena je posle autopsije.

TachoComb S i TachoComb H pokazali su sličnu efikasnost, prianjanje na ranu i prilagođavanje mekom tkivu.

PRIMER 6

Uporedno dejstvo hemostatičkog zatvaranja rane i otpornost apsorbljivog TachoComb S i

TachoComb H: Eksperimentalno ispitivanje na prasadi jednog modela akutnog

pankreatitisa.

Svrha studije

Ispitivanje je projektovano da se oceni trenutna efikasnost i kratkotrajna otpornost jednog hemostatičkog mekog materijala (povoja) na ranu na slezini izazvanu kod prasadi kod jednog modela akutnog zapaljenja pankreasa.

Materijali i postupci

20 ženske prasadi korišćeno je u studiji. Dve grupe hemostatičkih mekih materijala proizvoljno su ispitivane: TachoComb H sa aprotininom i TachoComb S bez aprotinina.

Na dan hirurške intervencije životinje su dobile mek nosač (povoj) koji je neposredno začepio standardizovanu ranu veličine 2x3 cm hirurški načinjenu na prednjem delu slezine.

Trenutno delovanje povoja ocenjeno je brojanjem mehurića i merenjem vremena potrebnog da se zaustavi krvarenje. Zabeleženo je prianjanje TachoComb-a H i S.

Potom je, koristeći sterilnu brizgalicu, probušena žučna kesa, prikupljena je žuč, pa je 10 ml žuči ubrizgano kroz Wirsung-ov kanal da se izazove zapaljenje pankreasa. Nivoi enzima u krvi praćeni su pre i svaki dan posle operacije (nivoi lipaze i amilaze).

Mali komadići TachComb-a H i S stavljeni su na meko tkivo gušterače na njenom priključku na crevo.

Posle 72 časa kratkotrajno ponašanje i otpornost oba materijala ispitivani su povećanjem unutarslezinskog pritiska (stezanjem venskih krvnih sudova i farmakološkim sredstvima).

Kada se dostignut pritisak skoro ustalio, jedna injekcija adrenalina IV (0,02 mg ili 0,04 mg) data je posle infuzije nordrenalina od 0,02 do 0,04 mg/min. da se poveća arterijski pritisak, zajedno ili ne sa perfuzijom dobutamin hlorhidrata od 0,3-0,6 mg/min.

Pomoću ovih farmakoloških supstanci, probijanje usled pritiska od krvarenja rana sondiranih pomoću TachoComb-a H i S zabeleženo je za svaku od životinja.

Rezultati

Na slezini su se oba materijala ponašala slično u pogledu neposredne hemostatičke efikasnosti, prianjanja na ranu i prilagođavnja na meko tkivo. Njihova je efikasnost bila veoma impresivna.

Oba su materijala bila nepromenjena na makroskopskoj proveri dana 3, mada su enzimatski uslovi bili teški, posebno dana 2 u krvi, a takođe dana 4 u peritonalnoj tečnosti. 72. časa nije evidentirana nikakva značajna razlika u otpornosti oba materijala posle povećanja pritiska u slezini.

Jedno probijanje materijala dogodilo se u TachoComb S grupi. Krvarenje rane primećeno je kod 1 životinje sa TachoComb S i kod 2 životinje sa TachoComb H (sa jednim mehurićem u TachoComb H grupi).

Histopatološki nalazi nisu ukazivali ni na kakvu značajniju razliku u razlaganju TachoComb S u poređenju sa TachoComb H. Nije zapažena nikakva specifična ćelijska šema na slezini. Čak i na uzorcima pankreasa, komadi TachoComb-a H i S u bliskom dodiru sa velikom koncentracijom pankreasnih enzima nisu pokazali neku veću promenu.

Zaključak

Kao zaključak, nije se javila neka dovoljno jasna razlika između TachoComb-a S i TachoComb-a H u pogledu njihove otpornosti na kidanje u uslovima povećanog okruženja pankreasnim enzimima.

Nikakvi specifični makroskopski ni mikroskopski dokazi modifikovanja materijala nisu utvrđeni ni kod TachoComb-a H ni kod TachoComb-a S.

Hemostatička efikasnost TachoComb-a S i TachoComb-a H ispitana je na jednom stađardizovanom modelu rane na slezini (površina rane 2 cm x 3 cm, dubine oko 3 mm; n=10/po grupi) svinja sa akutnim pankreatitisom izazvanim retrogradnim ubrizgavanjem žuči u Wirsung-ov kanal i potonjim podvezivanjem pankreasnog kanala. Mali komadi TachoComb-a H i S bili su takođe naneti na pnkreas na strani podvezivanja pankreasnog kanala. Na 72 časa posle hirurške intervencije unutarslezinski pritisak je povećan podvezivanjem slezinske vene i intravenskom injekcijom adrenalina.

Na slezini su se TachoComb S i TachoComb H ponašali slično u pogledu neposredne hemostatičke efikasnosti, prianjanja na ranu i otpora na unutarslezinski pritisak uprkos značajnog povećanja nivoa pankreasnih enzima (povećanje od 20-100 puta amilaze i lipaze u krvi i povećanje od 10-100 puta pankreasnih enzima u peritonalnoj tečnosti, poređeno sa osnovnim nivoima). Histopatološki nalazi nisu ukazali ni na kakvu značajniju razliku kod razlaganja ni TachoComb-a S ni TachoComba H. Nikakva specifična slika ćelija nije zapažena na slezini. Čak ni na pankreasnim uzorcima posle bliskog dodira TachoComb-a H i S sa visokim koncentracijama pankreasnih enzima, prianjanje TachoComb-a H i S i histopatologija nisu pokazali neke veće razlike.

Prema tome, nije zapažena nikakva ni makroskopska ni mikroskopska razlika između TachoComb-a S i TachoComb-a H kod ovog visokostresnog modela akutnog pankreatitisa kod svinja.

PRIMER 7

Uporedno reagovanje moždanog tkiva i efikasnost resorbentnog TachoComb- a H i

TachoComb- a S: Eksperimentalna studija na kunićima pri normalnoj koagulaciji i tokom

lokalne hiperfibrinolize.

Cilj je ove studije bio da se poredi efikasnost TachoComb S i TachoComb H posle neurohirurške intervencije. Povrede mozga izazvane su kod kunića pod uslovima normalne koagulacije (reakcija moždanog tkiva = BTR (brain tissue reaction), n=12 kunića, kvalifikovano n=10) i pod hiperfibrinolitičkim (HF) uslovima pri lokalnoj primeni r-tPA (n=T0 kunića). Tri kortikalne lezije načinjene su na svakoj hemisferi (ukupno 6 lezija po životinji; povrede mozga bušenjem do dubine od 3 mm i prečnika 4 mm).

BTR serije

Dve od tri rane po hehisferi bile su lečene sa TachoComb H ili TachoComb S, a po jedna rana po hemisferi ostavljena je prazna kao kontrola. Posle zatvaranja rana sa TachoComb H ili S, vreme krvarenja mereno je uz veliko uvećanje i uz kontinualno kvašenje malim protokom slanog rastvora. Nakon što je na svim ranama prestalo krvarenje, izazvana je arterijska hipertenzija intravenskom injekcijom adrenalina (0,01 mg/kg adrenalina), tako daje povišen srednji arterijski pritisak (MAP) bar na 120 mmHg. Tokom se ove procedure nastavlja posmatranje da nema ponovnog krvarenja. Posle vraćanja MAP na normalne vrednosti koža je ponovo zatvorena. Vreme do ubijanja životinja bilo je 3 i 7 dana (n= 5 kunića svaki put). Kod tri životinje vršeno je snimanje magnetnom rezonancom pre ubijanja na dan 3. Pri autopsiji je izvršen opšti pregled mesta gde su bile povrede i uzeti su uzorci za histopatologiju.

HF serije

Posle izvođenja lezija kako je opisano u BTR serijama, r-tPA je sipan na rane (0,3 mg r-tPA u 0,5 ml slanog rastvora po leziji) pre no što su sve rane bile zatvorene alternativno sa TachoComb S ili TachoComb H. Vreme krvarenja mereno je uz veliko uvećanje i uz kontinualno kvašenje malim protokom slanog rastvora. Autopsija sa opštim pregledom vršena je dana 1 (n=7) i dana 3 (n=3). Histopatologija je vršena na uzorcima uzetim dana 3 radi poređenja.

Tokom cele studije nisu zapažene nikakve razlike između TachoComb-a S i TachComb-a H, ni u pogledu efikasnosti zatvaranja, tolerisanja povećanog MAP i trajanja vremena krvarenja, ni u pogledu histopatoligije. Ozbiljna krvarenja su zapažena kod svih životinja iz HF serija ne samo na mestima rana, već ispod kože celog lica. Uprkos ovih ozbiljnih stanja, TachoComb S je pokazao sličnu efikasnost u poređenju sa TachoComb H.

PRIMER 8

Neurokirurška primena TachoComb- a H i TachoComb- a S: Reagovanje moždanog tkiva i

hemostatičko efikasnost

Fibrinski zatvarači fluida koriste se u velikoj količini za sprečavanje krvarenja u neurohirurgiji. Ne postoje neki obimniji podaci o reagovanju moždanog tkiva na TachoComb<®>a primena antifibrinolitičkih agenasa (tj. aprotinina) još uvek je kontroverzna).

Ciljevi

Studija projekta bila je usmerena na dva glavna činioca: Procena kratkotrajne lokalne reakcije moždanog tkiva posle primene TachComb-a H (TCH) i TachoComb-a S (TCS) kortikalne lezije poređeno sa neobrađenim kontrolnim lezijama (CL), koristeći histološke postupke i savremene tehnike prikazivanja,

Drugi je cilj bio da se prouči hemostatička efikasnost proizvedenih TachoComb-a H i TachoComb-a S u uslovima normalne koagulacije (BTR grupa) i posle lokalno izazvane ozbiljne hiperfibrinolize (HF grupa) i da se proceni da li aprotinin uopšte ima bilo kakav uticaj na hemostatički kvalitet i na silu prianjanja preparata.

Materijal i postupak

U grupi od 22 mlada kunića, tri su kortikalne lezije načinjene na svakoj od hemisfera. Dvanaest životinja je uzeto u grupu za reakciju moždanog tkiva (BTR) a 10 za hiperfibrinoliznu (HF) grupu.

Kod BTR životinja dve su od rana ispunjene sa TachoComb H, odnosno sa TachoComb S, dok je treća ostavljena prazna kao kontrola. Mereno je vreme krvarenja, a praćena je pojava ponovnog krvarenja usled izazvane arterijske hipertenzije. Životinje su ubijene dana 3 i dana 7 posle hirurške intervencije i izvršeno je histološko ispitivanje. Kod tri BTR životinje izvršeno snimanje magnetskom rezonancom radi procene edema mozga na dan 3, neposredno pre ubijanja životinja.

Kod HF životinja, kod kojih ozbiljno lokalno hiperfibrinolitičko stanje prethodno izazvano plazminogenskim aktivatorom rekombinantnog tkiva (r-tPA), sve su tri rane na jednoj hemisferi obrađene sa TachoComb H, dok su na drugoj hemisferi obrađene sa TachoComb S. Mereno je vreme krvarenja a kod tri životinje je histološko ispitivanje vršeno na dan 3.

Rezultati

Kod životinja normalne koagulacije (BTR životinje), zaustavljanje krvarenja sa TCH i TCS bili je značajno brže (p<0,001) nego bez sredstva za zaustavljanje krvarenja. Pokazalo se da nema razlike između vremena krvarenja oba proizvoda (p=0,294), ali i da su ta vremena konzistentno kraća od onih kod neobrađenih lezija (0,001).

U toku izazvane arterijske hipertenzije ponovno krvarenje se javilo u jednoj od 24 TCH lezija, 3 od 24 TCS lezija i u 19 od 24 kontrolne lezije. Prisustvo hemostatičkog sredstva konzistentno je sprečavalo ponovno krvarenje kod ozbiljno povećanog arterijskog pritiska (Chi kvadrat=16,3; p>0,001). S druge strane, odsutnost TCH ili TCS tokom povećanja arterijskog pritiska pokazala je da postoji 80% rizik od pojave ponovljenog krvarenja.

Statistička analiza vremena krvarenja u hiperfibrinoliznoj grupi (HF životinje) pokazala je da nema razlike između vremena krvarenja za oba proizvoda ("signed-rank" test: p=0,927 i T test: p=0,4102).

Na kraju, u sigurnosnom intervalu od 99,73% (D<3sdD=ns) neka je značajnija razlika u hemostatičkoj efikasnoti istog proizvoda u obe koagulacione situacije isključena.

Zaključak

TachoComb H i Tachocomb S ne izazivaju nikakve specifične histološke promene u moždanom tkivu. Oba proizvoda imaju dobru biokompatibilnost prema moždanom parenhimu, pošto ne izazivaju više reagovanja tkiva nego same lezije. Nikakvi nepovoljni uticaji povezani sa kombinovanim proizvodima nisu morfološki zapaženi. Histološko ispitivanje nije pokazalo nikakve razlike između oba proizvoda, ni pod normalnom, ni pod ozbiljno poremećenom koagulacijom. TachoComb H i S imaju istu hemostatičku efikasnost i jačinu prianjanja i pri normalnoj koagulaciji i pri hiperfibrinolizi. Postoje jaki dokazi da aprotinin nema nikakav uticaj na hemostatički kvalitet i na silu prianjanja, čak i pri ozbiljno poremećenoj koagulaciji.

Poređenjem sa literaturom, TachoComb H i S uspostavljaju mnogo brže hemostaziju nego oksidisana celuloza i kolagenski meki češljani materijal.

Claims (17)

1. Čvrsta kompozicija koja se, u suštini, sastoji od a) jednog kolagenskog nosača koji ima bar dva od sledećih fizičkih svojstava: modul elastičnosti u opsegu od 10-50 N/cm<2>, gustinu od 1-10 mg/cn<r>\prečnik komore veći od 0,75 mm a manji od 4 mm i/ili koji ima prosečan prečnik komore ispod 3 mm i ravnomemo raspoređenu i fiksiranu na pomenutom nosaču mešavinu b) čvrstog humanog fibrinogena, i c) čvrstog humanog trombina.

2. Kompozicija prema zahtevu 1, naznačena time, što je kolagenski nosač jedan kolagenski sunđer koji sadrži materijal kolagena tipa I od sisarskih, trasgenskih ili rekombinantnih izvora.

3. Kompozicija prema zahtevu 1 ili 2, naznačena time, što kalogenski nosač ima jednu ili više aktivnih strana, pri čemu se fibrinogen nalazi u količini od 2-10 mg/cm<2>, na primer 4,3-6,7 mg/cm2, najbolje oko 5,5 mg/cm<2>, dok se trombin nalazi u količini od 1,5-5,5 IU/cm<2>, najbolje oko 2,0 IU/cm<2>.

4. Kompozicija prema bilo kom od zahteva 1-3, naznačena time, što je fibrinogen prečišćen od nekog prirodnog izvora.

5. Kompozicija prema bilo kom od zahteva 1-3, naznačena time, što je fibrinogen transgenski ili rekombinantni.

6. Kompozicija prema bilo kom od zahteva 1-5, naznačena time, što je trombin prečišćen od nekog prirodnog izvora.

7. Kompozicija prema bilo kom od zahteva 1-5, naznačena time, što je trombin transgenski ili rekombinantni.

8. Čvrsta kompozicija za hemostazu, za zatvaranje tkiva i za lepljenje tkiva koja se, u suštini, sastoji od jednog savitljivog kolagenskog nosača koji ima bar dva od sledećih fizičkih svojstava: modul elastičnosti u opsegu od 10-50 N/cm<2>, gustinu od 1-10 mg/cm<3>, prečnik komore veći od 0,75 mm a manji od 4 mm i/ili koji ima prosečan prečnik komore ispod 3 mm i koji dalje obuhvata mešavinu čvrstog humanog fibrinogena, i čvrstog humanog trombina, a ne obuhvata ni jedan antifibrinolitički agens kao što je aprotinin, c-amino-kapronska kiselina ili a2-antiplazmin, pri čemu su čvrsti humani fibrinogen i čvrsti humani trombin pričvršćeni na nosač tako daje abrazija manja od 1,0 mg/cm<2>kada se uzorak obloženog materijal vibrira na jednom "Vibrofix" vibratoru na frekvenci od oko 1000 rjV<1>u trajanju od 2 minuta i kada se obložen materijal nosača umetne ujedan endoskopski aparat i potom iz njega izvadi, materijal je u suštini nepromenjen i ima gubitak materijala obloge manji od 20% kao indikaciju savitljivosti nosača i čvrstog prianjanja čvrstog humanog fibrinogena i čvrstog humanog trombina, i navedeni materijal je u suštini nepropustljiv za vazduh i nepropustljiv za tečnosti i ima koeficijent elastičnosi od najmanje 1,25 što se određuje eksperimentom koji obuhvata pričvršćivanje obloženog nosača na list lateksa, širenje lateksa pritiskom tri puta i merenjem trećeg puta površine obloženog nosača na najvišoj tački širenja lista lateksa i poređenjem proširene površine obloženog nosača sa početnom veličinom obložene površine.

9. Primena kolagenskog nosača koji ima bar dva od sledećih fizičkih svojstava: modul elastičnosti u opsegu od 10-50 N/cm<2>, gustinu od 1-10 mg/cm<3>, prečnik komore veći od 0,75 mm a manji od 4 mm i/ili koji ima prosečan prečnik komore ispod 3 mm i dovoljnu količinu humanog fibrinogena i dovoljnu količinu humanog trombina za pripremanje proizvoda za zatvaranje tkiva.

10. Primena kolagenskog nosača koji ima bar jeđael od sledećih fizičkih svojstava: modul elastičnosti u opsegu od 10-50 N/cm<2>, gustinu od 1-10 mg/cm\ prečnik komore veći od 0,75 mm a manji od 4 mm i/ili koji ima prosečan prečnik komore ispod 3 mm i dovoljnu količinu humanog fibrinogena i dovoljnu količinu humanog trombina za pripremanje proizvoda za hemostazu.

11. Primena nosača koji ima bar dva od sledećih fizičkih svojstava: modul elastičnosti u opsegu od 10-50 N/cm<2>, gustinu od 1-10 mg/cm<3>, prečnik komore veći od 0,75 mm a manji od 4 mm i/ili koji ima prosečan prečnik komore ispod 3 mm i dovoljnu količinu humanog fibrinogena i dovoljnu količinu humanog trombina za pripremanje proizvoda za lepljenje tkiva.

12. Primena prema ma kom od zahteva 9-11 kod hirurških intervencija u gastrointestinalnom sistemu, kao što je jednjak, želudac, tanko crevo, debelo crevo, rectum, na parenhimalnim organima kao što je jetra, slezina, pankreas, bubrezi, pluća, adrenalne žlezde, tiroidni i limfni čvorovi, kardiovaskularna hirurgija, grudna hirurgija uključujući hirurške intervencije na đušniku, bronhijama ili plućima, hirurške intervencije u području uva, nosa ili grla (ENT), uključujući dentalnu hirurgiju, ginekološku, urološku hirurgiju, hirurgiju krvnih sudova, hirurgiju kosti (npr. isecanje sunđerastog dela kosti), hirurške intervencije u hitnim slučajevima, neurološke hirurgije. limfne, bilijarnc i cerebrospinalne (CSF) fistule, i prodor vazduha tokom grudne i plućne hirurgije.

13. Primena prema bilo kom od zahteva 9-12, naznačena time, što je nosač jedan kolagenski sunđer, npr. kolagenski sunđer koji se u suštini sastoji od vlakana kolagena tipa I.

14. Primena prema bilo kom od zahteva 9-13, naznačena time, što nosač ima jednu ili više aktivnih strana, pri čemu se fibrinogen nalazi u količini od 2-10 mg/cm2, na primer 4,3-6,7 mg/cm<2>, najbolje oko 5,5 mg/em<2>, dok se trombin nalazi u količini od 1,5-2,5 IU/cm<2>, najbolje oko 2,0 IU/cm<2>.

15. Primena prema bilo kom od zahteva 9-14, naznačena time, stoje fibrinogen prečišćen od nekog prirodnog izvora.

16. Primena prema bilo kom od zahteva 9-15, naznačena time, što je fibrinogen trangenski ili rekombinantni.

17. Primena prema bilo kom od zahteva 9-16, naznačena time, što je trobin prečišćen od nekog prirodnog izvora.

1 8. Primena prema bilo kom od zahteva 9-17, naznačena time, što je trombin trangenski ili rekombinantni