CZ20032199A3

CZ20032199A3 - Suspenze obsahující fibrinogen, trombin a alkohol, způsob přípravy této suspenze, způsob pokrytí nosiče touto suspenzí, způsob vysušení pokrytí nosiče a pokrytá kolagenová houba

Info

Publication number: CZ20032199A3
Application number: CZ20032199A
Authority: CZ
Inventors: Alfred Schaufler
Original assignee: Nycomed Pharma As
Priority date: 2001-01-25
Filing date: 2002-01-25
Publication date: 2003-12-17
Also published as: JP2007190399A; EG24589A; EA200300823A1; HUP0400768A3; IS6885A; BG108121A; CN1246047C; AU2002249528B2; AR032400A1; IL157095A0; NO20033295L; KR100847417B1; HK1058319A1; JP2004520124A; EA200401463A1; DK1368419T3; DE60203364D1; MXPA03006689A; ME00587B; MXPA03006687A

Description

Hotový výrobek

Přidaní složky studMni ethanol vodí pr® Injekci přípravek Udského fibrinogeou přípravek Kdskéko trombinu apraiixla rltoflavia proulb)- Uolagtnovt beobj vnitřní baleni: (Mutofcottleei potysyrcnoviíótie), rilikaxtJový pytlík, vntjií obal (alotialem vy/tuřeni filie)

Mik k bílení, umopřllnitř «ílqiky, sktidscíkrablce

Suspenze obsahující fíbrinogen, trombin a alkohol, způsob přípravy této suspenze, způsob pokrytí nosiče touto suspenzí, způsob vysušení pokrytí nosiče a pokrytá kolagenová houba

Oblast techniky

Předložený vynález se týká suspenze obsahující fíbrinogen, trombin a alkohol a případně alkohol. Vynález se dále týká způsobu přípravy takovéto suspenze a způsobu pokrytí tohoto nosiče touto suspenzí. Nosičem může být kolagenový nosič, jako je kolagenová houba. Vynález se dále týká způsobu vysušení pokrytého nosiče, konkrétně kolagenového nosiče pokrytého suspenzí podle tohoto vynálezu, a tak získám pokrytého kolagenového nosiče majícího aktivní látky pevně zakotvené k nosiči.

Pokrytý kolagenový nosič lze použít jako k použití připravený absorbovatelný prostředek pro lepení tkáně, utěsnění tkáně a k zástavě krvácení, který vpodstatě zahrnuje nosič pokrytý pevně zakotvenými složkami fibrinového lepidla: fíbrinogen a trombin. Tuto zakotvenou kombinaci lze aplikovat přímo na například povrch poranění. Při kontaktu s krví, tělesnými tekutinami nebo fyziologickým roztokem napodobuje mechanismus tohoto systému konečnou fázi koagulační kaskády, ve které trombin katalyzuje přeměnu fíbrinogenu na fibrin a aktivaci faktoru XIII za zisku faktoru XlIIa. Jakmile vznikne faktor XlIIa, tak pomocí kovalentního sesíťování stabilizuje fibrinovou sraženinu.

Povrch poranění a nosič se navzájem slepí prostřednictvím polymerizace, jako u dvousložkového lepidla. Během tohoto procesu, který trvá asi 3 až 5 minut, se pokrytý kolagenový nosič tohoto vynálezu na plochu poranění s výhodou přitlačuje. Složky prostředku tohoto vynálezu se enzymaticky odbourají během 4 až 6 měsíců po jeho aplikaci.

i • · • ·

Dosavadní stav techniky

Existují komerční fibrinová lepidla, která napodobují poslední krok koagulační kaskády a která zahrnují vysoce koncentrovaný fibrinogenový roztok určený ke smíchání s trombinovým roztokem, a to ještě před aplikací na operační poranění. Tyto směsi obsahují inhibitor fibrinolýzy, například aprotinin nebo ε-aminokapronovou kyselinu, aby se předešlo předčasnému rozpuštění fibrinové sraženiny fibrinolytickým enzymem plasminem. Tato dvoj složková fibrinová lepidla jsou cenná při různých operačních postupech, ale je-li krvácení silné, mohou být předtím, než dojde k zastavení krvácení, odplavena. Dvoj složková fibrinová lepidla navíc vyžadují udělat některé přípravné kroky, v to zahrnujíc rozehřátí nebo rozpuštění. Proto jsou pro práci poněkud nepraktická a těžkopádná a nepohodlná a pro úspěšné použití těchto fíbrinových lepidel je nutná zkušenost.

Během poslední dekády se použití mnohých fíbrinových lepidel stalo v chirurgii při mnoha indikacích metodami volby. Ve většině pokusů s fibrinovými lepidly se však navíc použila kolagenová pletenina, aby se zlepšily hemostatické a adhezivní vlastnosti, což indikuje jejich nevýhody a jejich omezené použití chirurgy.

Kolagen se jako hemostatické činidlo používá již od konce šedesátých let minulého století. Kolagen je u všech savců nejběžnějším strukturním proteinem. Monomemí protein s asi 300 kDa (tropokolagen) se v určitých místech kovalentně sesíťuje. Hotový protein je proto nerozpustný a vytváří charakteristická vlákénka s vysokou pevností v tahu. Byly popsány mnohé podtřídy kolagenu, přičemž nejběžnějším je kolagen typu 1, hlavní kolagenový typ v kůži, šlachách, kostech a rohovce. Kolagen je vláknitý protein zahrnující trojšroubovici o délce asi 290 nm. Pět těchto trojšroubovic (tropokolagenových molekul) je uspořádáno do • · • · ·· ·· ·· mikrovlákénka s průměrem asi 3,6 nm. Tato mikrovlákénka mají polární a nepolární segmenty, které jsou snadno dostupné pro specifické interfibrilámí a intrafibrilámí interakce. Mikrovlákénka jsou sbalena do tetragonální mřížky a tvoří subfibrily o průměru asi 30 nm. Tyto subfibrily se poté uspořádají do kolagenového vlákénka, čili základní jednotky pojivové tkáně, která má průměr několika stovek nanometrů a která je proto viditelná ve světle mikroskopu jako tenká čárka.

Kolagen lze použít jako materiál pro utěsnění poranění, eventuálně s pokrytím obsahujícím fibrinové lepidlo. Fibrinová lepidla, to jest kombinace fibrinogenu, trombinu a aprotininu, se úspěšně terapeuticky používají po mnoho let k lepení tkání a nervů a pro utěsnění povrchů, které slabě krvácejí. Jednou z nevýhod fibrinového lepidla je, že v případě většího krvácení se lepidlo obvykle odplaví již před tím, než dojde k dostatečné polymerizaci fibrinu. K překonání tohoto problému začali chirurgové manuálně aplikovat kapalná fibrinová lepidla na absorbující nosiče, jako je kolagenová pletenina.

Navzdory značnému úspěchu těchto kombinovaných aplikací nebyl tento způsob kvůli některým nevýhodám použit v širokém měřítku. Příprava je totiž relativně těžkopádná, způsob provedení vyžaduje zkušenost a zručný personál a přípravek není ve stavech nouze pohotově k dispozici a doba pro připravuje v rozmezí 10 až 15 minut. Tyto faktory stimulovaly vývoj zlepšeného výrobku, což vedlo k vývoji pevného kombinovaného prostředku kolagenového nosiče pokrytého potahem pevného fibrinogenu, pevného trombinu a pevného aprotininu, jak je popsáno v patentu EP 0 059 265.

Funkce kolagenového nosiče popsaná v EP 0 059 265 tkví především v roli nosiče, který adsorbuje a který dodává mechanickou stabilitu koagulačnímu přípravku, jímž je pokryt.

Tak byl vyvinut výrobek, který kombinuje hemostatické vlastnosti fibrinového lepidla s přínosem kolagenu coby nosiče a tento výrobek se vyrábí pod obchodním

názvem TachoComb®. TachoComb® je k použití připravená a snadno aplikovatelná pevná kombinace kolagenové náplasti pokryté následujícími aktivními složkami fibrinového lepidla - lidským fibrinogenem, hovězím trombinem a hovězím aprotininem.

TachoComb® je prodáván od počátku 90. let 20. století firmou Nycomed Pharma a byl použit v klinických pokusech v Evropě u více než 2500 pacientů. Výrobek byl navíc použit u více než 700 pacientů v japonském klinickém programu při mnoha různých indikacích, jako resekcích jater a plic, operacích žlučovodu, operacích sleziny, ledvin a slinivky břišní, ORL operacích, gynekologických operacích a cévních operacích. O produktu TachoComb® bylo zjištěno, že je účinný a bezpečný.

V průběhu provedených klinických pokusů nebyly ohlášeny žádné klinické komplikace spojené s aplikací výrobku TachoComb®.

Ve WO 97/37 694 (Immuno France S.A.) je ve srovnávacím příkladu 4 popsáno, že když byl použit kolagenový výrobek nebo výrobek TachoComb®, tak když se použil TachoComb®, nedošlo k zastavení smrtelného krvácení, a to v protikladu k zastavení krvácení během 5 minut, když byl připraven kolagenový výrobek podle WO 97/37 694, který neobsahoval trombin.

Ve WO 96/40 033 jsou zdůrazněny nevýhody hovězího trombinu použitého ve výrobku TachoComb®, a tyto jsou v tom, že použití hovězích nebo jiných druhů trombinu může způsobit škodlivou virovou kontaminaci a možný je i přenos hovězích nemocí, jako je bovinní spongiformní encefalopatie.

US patent Č.6 177 126B1 popisuje zařízení a způsob výroby materiálu pro utěsnění a léčení poranění. Zařízení obsahuje nádobu, která má na své spodní části dva perforované talíře, které jsou vůči sobě navzájem pohyblivé tak, že umožňují suspenzi obsažené v nádobě odkapávat na nosič, který se pohybuje podél nádoby pod její spodní částí.

• · · ·

Podstata vynálezu

Předmět tohoto vynálezu se týká zlepšené suspenze, která je vhodná například pro použití jako pokrytí kolagenového nosiče s cílem získání k použití připraveného absorbovatelného prostředku pro slepení tkáně, utěsnění tkáně a zástavu krvácení. Další předmět tohoto vynálezu se týká zlepšeného způsobu pokrytí nosiče jako je kolagenová houba, a to suspenzí obsahující fibrinogen a trombin. Další předmět předloženého vynálezu se týká způsobu sušení mokrého potahu suspenze aplikované na nosič s cílem zajištění dostatečného zakotvení pokrytí na nosiči.

Ještě další předmět tohoto vynálezu se týká pokryté kolagenové houby s pokrytím fibrinogenu a trombinu, které účinně napodobují konečnou fázi koagulační kaskády, kdy se pokrytá kolagenová houba dostane do kontaktu s krví, tělesnými těkutinami nebo fyziologickým roztokem. Další předmět tohoto vynálezu se týká pokryté kolagenové houby s výše uvedeným pokrytím, které má dostatečné zakotvení potahu ke kolagenové houbě, to jest uspokojivě malou abrazi pokrytí, když se toto vystaví mechanickému působení.

Prvý předmět tohoto vynálezu se týká suspenze obsahující fibrinogen, trombin a alkohol, kde se tato suspenze získá způsobem obsahujícím získání fíbrinogenové směsi fibrinogenu a alkoholu, získání trombinové směsi trombinu a alkoholu, smícháním fíbrinogenové směsi a trombinové směsi tak, že se získá uvedená suspenze obsahující částice fibrinogenu a trombinu se středním průměrem částic podle Folka a Warda 25 až 100 pm, jako 35 až 80 pm, jako 40 až 78 pm, jako 40 až 75 pm, jako 45 až 60 pm, jako 47 až 55 pm nebo jako 60 až 100 pm, jako 60 až 80 pm, jako 65 až 75 pm, s výhodou v rozmezí ± 5 pm, jako v rozmezí ± 4 pm, jako v rozmezí ±3,5 pm, jako v rozmeziv ± 2 pm, jako v rozmezí ±1,5 pm, jako v rozmezí ± 1 pm, jako v rozmezí ± 0,8 pm, jako v rozmezí ± 0,6 pm, jako v rozmezí • · • · · · ± 0,5 pm. Bylo zjištěno, že když se touto suspenzí pokryje nosič jako je kolagenová houba, tak tato suspenze je účinná pro zisk k použití připraveného prostředku pro lepení tkáně, utěsnění tkáně a zástavu krvácení. Suspenze může případně obsahovat aprotinin přidaný k fíbrinogenové směsi jako koncentrovaný vodný roztok. Jako barvící značkovač lze přidat riboflavin, takže suspenzi lze snadno identifikovat, když jí byl pokryt nosič a zaschla.

Vzhledem k fyzikální vlastnosti suspenze, zvláště sedimentačnímu chování dosti velikých částic v alkoholu, není možné nadefinovat žádné standardní měřítko viskozity kapaliny pro uvedenou suspenzi. Proto byl použit alternativní způsob získám hodnoty viskozity. Podle tohoto způsobu může mít suspenze takovou viskozitu, že když na objem 90 až 120 ml suspenze působí pouze gravitace, projde otvorem na dně nádoby mající cylindrickou část s vnitřním průměrem 40 až 50 mm a vnitřní výškou 55 až 65 mm a konickou spodní část s výškou 17 až 23 mm, kde otvor na dně je na nižším konci kónické části kruhového otvoru o průměru 2 až 3 mm za 25 až 75 sekund.

V případě z oceli vyrobené nádoby má tato nádoba a její otvor následující rozměry:

vnitřní průměr cylindrické části je 46 mm, vnitřní výška cylindrické části je 60 mm, vnitřní výška kónického dna je 20,5 mm, vnitřní průměr otvoru ve dně je 2,6 mm, délka spojovací části připojené k otvoru ve dně je 9 mm nebo v případě plastové nádoby má tato nádoba následující rozměry:

vnitřní průměr cylindrické části je 50 mm, vnitřní výška cylindrické části je 41 mm, vnitřní výška kónického dna je 24 mm, vnitřní průměr otvoru ve dně je 2,5 mm,

·..· .:. ·..*· délka spojovací části připojené k otvoru ve dně je menší než 5 mm, přičemž výše uvedená doba úniku suspenze může být 25 až 60 s, jako 25 až 50 s, jako 30 až 50 s, jako 32 až 44 s, jako 34 až 38 s.

Níže popsané parametry a vlastnosti suspenze ve spojem se způsobem druhého předmětu vynálezu také platí pro suspenzi prvého předmětu vynálezu.

Druhý předmět vynálezu se týká způsobu přípravy suspenze s fibrinogenem a trombinem, která zahrnuje:

přípravu fibrinogenové směsi fibrinogenu a alkoholu, přípravu trombinové směsi trombinu a alkoholu, smíchání fibrinogenové směsi a trombinové směsi tak, že se získá uvedená suspenze obsahující částice fibrinogenu a trombinu se středním průměrem částic podle Folka a Warda 25 až 100 jum. Parametry a vlastnosti popsané výše ve spojení se suspenzí podle prvého předmětu vynálezu také platí pro způsob druhého předmětu vynálezu.

V kroku získávání fibrinogenové směsi lze fibrinogen předem upravit vhodným způsobem na mikrometrové velikosti, např. prosátím, aby se získaly částice se středním průměrem podle Folka a Warda 25 až 100 μηι. Fibrinogen o mikrometrových velikostech částic lze například vmíchat do alkoholu, aby se získala uvedená fibrinogenová směs. V kroku získání směsi lze fibrinogen také přímo homogenizovat v alkoholu, s výhodou při teplotě 0 až 12 °C, jako při 2 až 8 °C. Během homogenizace se teplota může snížit. Krok smísení fibrinogenové směsi a trombinové směsi lze provést při míchání suspenze, kde míchání lze provést při teplotě 0 až 12 °C, jako při 2 až 8 °C.

Trombin může být lidský, hovězí nebo rekombinantní a fibrinogen může být lidský nebo rekombinantní. Alkoholem může být organický alkohol jako je methanol, ethanol, propanol, isopropanol, jako je bezvodý organický alkohol, bezvodý ethanol, bezvodý propanol nebo bezvodý isopropanol. Lidský fibrinogen může být dodán v pevné lyofilizované formě.

: ·: ·: : : : : :: : ·

.. ........ ·· ··

Třetí předmět vynálezu se týká způsobu pokrytí nosiče suspenzí obsahující fibrinogen a trombin, kde suspenze vznikne způsobem obsahujícím kroky: přípravy fibrinogenové směsi fibrinogenu a alkoholu, přípravy trombinové směsi trombinu a alkoholu, smíchání fibrinogenové směsi a trombinové směsi tak, že se získá uvedená suspenze obsahující částice fibrinogenu a trombinu se středním průměrem částic podle Folka a Warda 25 až 100 pm, způsob pokrytí obsahuje:

přípravu suspenze fibrinogenu, trombinu a alkoholu v místě blízkém nosiči, aplikaci uvedené suspenze na potahovací povrch nosiče.

Nosičem může být kolagenový nosič, jako je kolagenová houba. Kolagenová houba splňuje alespoň jedno a s výhodou řadu následujících kriterií, jako je hodnota pH 5,0 až 6,0, obsah mléčné kyseliny maximálně 5 %, obsah amoniaku maximálně 0,5 %, obsah rozpustného proteinu vypočteného jako obsah albuminu maximálně 0,5 %, obsah síranového popelu maximálně 1,0 %, obsah těžkých kovů maximálně 20 ppm, mikrobiologická čistota s maximálně 10³ CFU/g, obsah kolagenu 75 až 100 %, hustota 1 až 10 mg/cm³, modul pružnosti v rozmezí 5 až 100 N/cm.

Kolagenovou houbu lze připravit způsobem obsahujícím kroky přípravy kolagenového gelu, vmíchání vzduchu do kolagenového gelu tak, aby se získala kolagenová pěna, vysušení kolagenové pěny tak, aby se získal suchý blok nosiče majícího uvnitř dutiny, oddělení částí houby z bloku kolagenové houby s průměrem dutiny větším než 0,75 mm a menším než 4 mm nebo se středním diagonálním rozměrem dutin 3 mm.

V tomto kontextu by termínu průměr dutiny mělo být porozuměno jako nej delší přímé vzdálenosti od stěny ke stěně dutiny, to jest nej delší diagonální přímé vzdálenosti v dutině. Dutiny mohou mít polygonální tvar, jako je oktogonální tvar. Bylo zjištěno, že průměr dutiny větší než 0,75 mm a menší než 4 mm nebo střední průměr dutiny maximálně 3 mm, dává kolagenovou houbu zvláště vhodnou ·· ♦ ··· k pokrytí suspenzí obsahující fíbrinogen a trombin. Dále bylo zjištěno, že pokrytá kolagenová houba připravená výše uvedeným způsobem je vzduchotěsná a kapalinotěsná v tom smyslu, že když se pokrytá kolagenová houba použije na poranění, nedovolí vzduchu nebo kapalině prosakovat kolagenovou houbou.

Krok aplikace suspenze na nosič lze provést při okolní teplotě 0 až 12 °C, jako při 1 až 10 °C, jako při 2 až 8 °C. Krok aplikace suspenze na nosič lze dále provést v okolní atmosféře s relativní vlhkostí 75 až 99 %, jako je 85 až 95 %. Na nosič se s výhodou aplikuje 0,08 až 0,12 ml suspenze najeden cm² pokrývacího povrchu. K zajištění stejnoměrné účinnosti konečného pokrytého nosiče po celém jeho povrchu se suspenze s výhodou rovnoměrně distribuuje na danou šířku pokrývaného povrchu tak, že hmotnost fíbrinogenu na jednotku plochy pokrývaného povrchu se různí o maximálně 25 %, jako maximálně o 20 %, jako maximálně o 15 %, jako maximálně o 10 %.

K nanesení suspenze na nosič lze použít aplikátoru majícího alespoň jednu trysku, kde suspenze je tlačena tryskou, přičemž nosič a tryska se vůči sobě navzájem relativně pohybují. Aplikátor může obsahovat nebo může být umístěn v blízkosti dopravního pásu, míchací jednotky připojené k pumpě nebo systému pump nebo jiného zásobního zařízení a trysky nebo systému trysek, jež se pohybuje napříč, například v pravých uhlech k dopravnímu pásu. V závislosti na konkrétních charakteristikách prostředí může mít tryska nebo systém trysek různé tvary a velikosti. Trysku nebo systém trysek lze připojit k zásobnímu zařízení pomocí trubic. Zásobní zařízení může přivádět nanášené médium z míchací jednotky k systému trysek. Během procesu nanášení se systém trysek může pohybovat napříč nosičem. Ve své pohotovostní poloze může být držen na jedné straně dopravního pásu. Nanášecí proces může být iniciován světelným čidlem indikujícím přítomnost nosiče na dopravním pásu a podobně může být zastaven i signálem tohoto čidla. Takovýto aplikátor má relativně malý mrtvý objem a snadno se s ním pracuje, • · snadno se čistí. Navíc má i možnost v kterémkoliv okamžiku přerušit nanášecí proces, je použitelný v relativně širokém rozmezí viskozit a jeho výsledkem je homogenní pokrytí.

Alternativně nebo doplňkově lze pro aplikaci suspenze na nosič použít aplikátor obsahující nádobu s množstvím oddělených vývodů, kde suspenze se tlačí vývody z nádoby na nosič. Tento druhý typ aplikátoru ve formě nádoby mající pohyblivé talíře na svém dně je popsán v US patentu č. 6 177 126 B1 a která je zde ve své úplnosti zahrnuta v odkazech. Pro svou rovnoměrnou distribuci, jíž se vyznačují zařízení patentu US č. 6 177 126 Bl, je jedno z těchto zařízení použito ve zvýhodněném provedení tohoto vynálezu. Nosič a aplikátor se s výhodou vůči sobě relativně pohybují ve směru pohybu, zatímco se na nosič nanáší suspenze, kdy rychlost pohybu může být 0,025 až 0,05 m/s, jako 0,03 až 0,04 m/s. Průtoková rychlost suspenze nanášené aplikátorem na nosič je 400 až 600 ml/min, jako 470 až 550 ml/min, jako 495 až 505 ml/min.

Čtvrtý předmět vynálezu se týká způsobu vysušení suspenze fibrinogenu, trombinu a alkoholu nanesené jako mokrý potah na pokrývaný povrch nosiče, přičemž tento způsob obsahuje vystavení pokrývaného nosiče tlaku pod 100 kPa (1000 mbar) tak, že se získá vysušený pokrytý povrch nosiče, aby se vysušený potah na pokrývaném povrchu zakotvil. V sušícím procesu lze udržovat snížený tlak, nízkou teplotu 2 až 10 °C a vysokou relativní vlhkost 80 až 95 %, čímž lze zachovat strukturní a fýzikální vlastnosti nosiče, konkrétně nosiče ve formě kolagenu jako je kolagenová houba, stejně jako fibrinogenu a trombinu.

Suspenzi lze připravit z fibrinogenové směsi fibrinogenu a alkoholu, z trombinové směsi trombinu a alkoholu, smícháním fibrinogenové směsi a trombinové směsi tak, že se získá uvedená suspenze a nosičem může být kolagenová houba, která se získá způsobem obsahujícím přípravu kolagenového gelu, vmíchání vzduchu do kolagenového gelu tak, že se získá kolagenová pěna, ·· ··· · vysušení kolagenové pěny tak, že se získá suchý blok kolagenové houby mající uvnitř dutiny, oddělení částí houby z bloku kolagenové houby s průměrem dutiny větším než 0,75 mm a menším než 4 mm nebo se středním diagonálním rozměrem dutiny 3 mm a pokrytí kolagenové houby lze provést suspenzí fíbrinogenu, trombinu a alkoholu na místě blízkém kolagenové houbě, nanesením suspenze na pokrývači povrch kolagenové houby.

Způsoby přípravy kolagenové houby a přípravy suspenze jsou výše diskutovány v souvislosti se způsoby druhého a třetího předmětu tohoto vynálezu.

Během sušení může být pokrytý nosič vystaven uvedenému tlaku při teplotě 0 až 12 °C, jako při 1 až 10 °C, jako při 2 až 8 °C a/nebo relativní vlhkosti okolní atmosféry 75 až 99 %, jako 85 až 95 %. Přes pokrytý nosič může během sušení procházet proud vzduchu tak, že odvádí páru pryč od pokrytého nosiče.

Aby bylo vysušení úplné, pokrytý nosič se s výhodou udržuje při uvedených podmínkách po dobu alespoň 1 hodiny, jako jsou alespoň 2 hodiny, jako jsou alespoň 4 hodiny.

Plochy vysušeného pokrytého povrchu je vzhledem ke smršťování menší, než velikost plochy vlhkého pokrývacího povrchu. Ve způsobu podle tohoto vynálezu je plocha vysušeného pokrytého povrchu alespoň 75 % z velikosti plochy vlhkého pokrývacího povrchu, jako je alespoň 80 %.

Pro udržení stability aktivních složek během skladování pokrytého nosiče mají s výhodou nosič a vysušený pokrývači povrch dohromady obsah vody nepřevyšující 12 % hmotn., jako nepřevyšující 8 % hmota.

Jakékoliv parametry a vlastnosti suspenze a kolagenové houby, v to zahrnujíc způsoby výroby diskutované v souvislosti s dalšími předměty tohoto vynálezu se také vztahují na způsob čtvrtého předmětu tohoto vynálezu.

·· ····

Pátý předmět tohoto vynálezu se týká pokryté kolagenové houby s potahem fibrinogenu a trombinu, kde se pokrytá kolagenová houba získá způsobem obsahujícím získání kolagenové houby obsahujícím přípravu kolagenového gelu, vmíchání vzduchu do kolagenového gelu tak, že se získá kolagenová pěna, vysušení kolagenové pěny tak, že se získá suchý blok kolagenové houby mající uvnitř dutiny, oddělení částí houby z bloku kolagenové houby s průměrem dutiny větším než 0,75 mm a menším než 4 mm nebo se středním diagonálním rozměrem 3 mm, nanesení suspenze fibrinogenu, trombinu a alkoholu na pokrývači povrch kolagenové houby a vystavení pokrytého nosiče tlaku pod 100 kPa (1000 mbar) tak, že se získá vysušený potažený povrch na nosiči tak, že se vysušený potah na pokrývacím povrchu zakotví, pokrytá kolagenová houba má alespoň jednu z následujících vlastností, jimiž je rovnoměrná distribuce suspenze po dané šířce pokrývaného povrchu tak, že hmotnost fibrinogenu na jednotku plochy pokrytého povrchu se liší o maximálně 25 %, abraze potahuje menší než 2,0 mg/cm², když se vzorek pokrytého materiálu 2 minuty třepe na třepačce Vibrofix s frekvencí 800 až 1200 otáček za minutu.

Rovnoměrná distribuce suspenze po pokrývaném povrchu zlepšuje účinnost pokrytého povrchu, když je tento prostředek použit k například lepení tkáně, utěsnění tkáně nebo k zástavě krvácení. Nízká abraze potahu zajišťuje, že pokrytá kolagenová houba může být transportována, uchopena rukama chirurga a/nebo chirurgickým nástrojem a jinak manipulována beze ztráty vysušené suspenze, to jest potahu. Fibrinogenový přípravek může tvořit asi 60 až 90 % celkové hmotnosti pokryté kolagenové houby. Přípravek obvykle obsahuje 50 až 60 % hmotn. následujících látek: solí, aminokyselin a albuminu. Samotný fíbrinogen obvykle tvoří 40 až 50 % přípravku.

Suspenze má obvykle obsah vody 20 až 80 mg/ml, jako 24 až 32 mg/ml.

Obsah trombinu v suspenzi může být 20 až 40 IU/ml, jako 24 až 33 IU/ml. V ·· *··· ·· · »·· · · · · ·· ··· ··· ·· ♦· ** průměru může být obsah trombinu po pokrytí 2 až 4 IU/cm² pokrytého povrchu, jako 2,3 až 3,3 IU/cm². Žádoucí může být, aby obsah trombinu nepřevýšil 5 IU/cm²na jakémkoliv místě pokrytého povrchu nebo aby nepřevýšil 3,8 IU/cm² na jakémkoliv místě pokrytého povrchu.

Mikrobiologická čistota pokrytého nosiče je s výhodou do maximálně 4 CFU/cm², jako do maximálně 2,25 CFU/cm².

Další nezávislý předmět vynálezu se týká použití výše uvedené pokryté kolagenové houby pro lepení tkáně, utěsnění tkáně a zástavu krvácení.

Stručný popis obrázků

Obrázky 1 až 7 popisují pokryté nosiče a nástroje k jejich aplikaci, jak je diskutováno v příkladu VIII.

Obrázek 8 je vývojovým diagramem popisujícím řetězec podprocesů od výroby suspenze po balení pokryté kolagenové houby, obrázek 9 je ilustrací zařízení použitých při měření viskozity suspenze, obrázky 10 a 11 obsahují vývojový diagram popisující způsob získání kolagenové houby.

Podrobný popis obrázků

Níže jsou popsána zvýhodněná provedení způsobů a výrobků předloženého vynálezu, srovnej také obr. 8.

Suspenzi obsahující fíbrinogen, trombin a alkohol lze vyrobit způsobem výroby suspenze podle tohoto vynálezu, a to následujícím způsobem:

Fíbrinogen se homogenizuje ve 100% ethanolu při 2 až 8 °C, čímž vznikne směs fíbrinogenu a alkoholu, směs tvoří asi 80 % objemu z konečného objemu suspenze. Poté se přidá riboflavin. Směs se následně míchá v uzavřené nádobce, a to až do jejího dalšího zpracování.

·· ·· ···· ··

• e ··

Ve vodě pro injekci se rozpustí lidský nebo hovězí trombin. Roztok se přidá k 35násobnému množství 100% ethanolu při 0 až 8 °C. Takto získaná trombinová suspenze se homogenizuje při 0 až 8 °C po dobu 80 až 100 sekund.

Před tím, než se smísí fibrinogenová a trombinová směs, tak se k fibrinogenové směsi přidá roztok aprotininu a voda. Poté se k fibrinogenové směsi přidá trombinová směs. Výsledný objem suspenze se získá přidáním 100% ethanolu při 2 až 8 °C.

Způsoby obsahující výše uvedené kroky jsou dále odkazovány jako způsoby skupiny I.

Alternativní způsob výroby suspenze podle tohoto vynálezu, která obsahuje fibrinogen, trombin a alkohol, obsahuje následující kroky:

Fibrinogenová směs se připraví přidáním předpřipraveného fibrinogenu se středním průměrem velikosti částic 25 až 80 μπι podle Folka a Warda a riboflavinu za míchání k 94 až 97% ethanolu při 2 až 8 °C. Výsledná směs riboflavinu a ethanolu tvoří asi 70 až 80 % konečného objemu suspenze. Fibrinogenová směs se dále míchá v uzavřené nádobce až do dalšího zpracování.

Trombinová směs se získá přidáním trombinu k 94 až 97% ethanolu při -30 °C. Takto získaná trombinová směs se 80 až 100 sekund homogenizuje. Alternativně se trombinová směs připraví rozpuštěním trombinu ve vodě pro injekci a následně se takto získaný trombinový roztok pomalu přidá k 17 až 35násobnému množství 100% ethanolu při -30 °C. Suspenze se 80 až 100 sekund homogenizuje. Jako homogenizační zařízení lze použít vybavení UltraTurrax od firmy IKA. Trombinová směs se přidá ke směsi obsahující fibrinogen a riboflavin. Přidá se 94 až 97% ethanol při 2 až 8 °C.

Způsoby obsahující výše uvedené kroky jsou dále odkazovány jako způsoby skupiny II.

·· ·«··

Způsoby výše uvedené skupiny I a skupiny II se získá suspenze podle tohoto vynálezu, která má s výhodou následující vlastnosti:

Obsah ethanolu je 94 až 97 %, doba výtoku měřená přístrojem znázorněným vlevo na obrázku 9 je 31,5 až 48 s. Sedimentační chování: objem pevných částic v procentech celkového objemu: 5 minut od začátku testuje větší než 85 %, hodin od začátku testuje 50 až 80 %, střední průměr velikost částice podle Folka a Warda je 35 až 80 μιη.

V jednom provedení sušení podle tohoto vynálezu se proužky kolagenové houby inkubují při 2 až 8 °C při relativní vlhkosti 80 až 91 % po dobu 2 až 30 hodin, a to před pokrytím nosiče ve formě kolagenové houby. Aplikátor pro nanesení suspenze na kolagenovou houbu je popsán výše. Po pokrytí se proužky kolagenové houby inkubují při 2 až 8 °C a relativní vlhkosti 80 až 90 % po dobu 8 až 60 minut. Proužky pokryté kolagenové houby se vysuší za sníženého tlaku v sušící komoře při teplotě vzduchu 2 až 8 °C, relativní vlhkosti 80 až 90 %. Přes kolagenové proužky prochází pomocí odsávacího ventilu proud vzduchu, a to s průtokovou rychlostí vzduchu 1,2 až 40 m³ za hodinu. Použije se tlak 3 až 6 kPa (30 až 60 mbar), to jest absolutní tlak asi 97 kPa (970 mbar) v závislosti na atmosferickém tlaku a pokryté kolagenové proužky se suší po dobu 2 až 54 hodin.

Odhad viskozity suspenze se získá použiím jednoho ze zařízení znázorněných na obr. 9 a toto je popsáno výše. Zařízení znázorněné v levé části obr. 9 je vyrobeno z oceli a jeho nádoba a otvor ve dně mají následující rozměry: vnitřní průměr cylindrické části je 46 mm, vnitřní výška cylindrické části je 60 mm, vnitřní výška kónického dna je 20,5 mm, vnitřní průměr otvoru ve dně je 2,6 mm, délka spojovací části připojené k otvoru na dně je 9 mm.

zařízení znázorněné v pravé části obr. 9 je z plastového materiálu a nádoba a otvor ve dně mají následující rozměry:

vnitřní průměr cylindrické části je 50 mm, vnitřní výška cylindrické části je 41 mm, vnitřní výška kónického dna je 24 mm, vnitřní průměr otvoru ve dně je 2,5 mm, délka spojovací části připojené k otvoru ve dně je menší než 5 mm.

Fibrinogenové základní materiály

Složka	% z celkového obsahu látek
Přípravek A	Přípravek B	Přípravek C
Lidský fibrinogen	36 až 52	42 až 47	36 až 52
Lidský albumin	16 až 24	20 až 24	16 až 24
Celkový protein	52 až 76	62 až 71	52 až 76
Chlorid sodný	8 až 14	0	8 až 14
Citrát trisodný	2 až 4	1 až 3	2 až 4
Arginin (hydrochlorid)	15 až 26	15 až 21	15 až 26
Glycin	0	6 až 9	1 až 2
Histidin	0	3 až 5	0
Sacharosa	0	0	1 až 2
Zbytková vlhkost	<2	2 až 4	<1,5

Trombinové základní materiály

Přípravek	Aktivita (IU/mg látky)	Zbytková vlhkost	Další látky, aditiva
Lidský trombin A	360 až 540	<3%	Lidský albumin, chlorid sodný, citrát sodný

·

999·

Hovězí trombin A	>400	<3%	Hovězí albumin, chlorid sodný, citrát sodný
Lidský trombin B	7 až 10	<3%	Lidský albumin, chlorid sodný, citrát sodný
Lidský trombin C	35 až 60	<3%	Lidský albumin, chlorid sodný, octan sodný, glycin

Níže uvedené příklady I až VI popisují různé postupy přípravy pokryté kolagenové houby s pokrytím fibrinogenem a trombinem podle tohoto vynálezu. Postupy zahrnují způsoby přípravy suspenze podle tohoto vynálezu, které rezultují v níže popsaných provedeních, v suspenzích podle tohoto vynálezu. Dále jsou použity způsoby pokrytí podle tohoto vynálezu a způsoby sušení podle tohoto vynálezu.

Příklady provedení vynálezu

Příklad I

V tomto příkladu obsahuje suspenze lidský fibrinogenový přípravek B a lidský trombinový přípravek B.

Způsobem skupiny II se použitím následujících množství a parametrů získal výsledný objem suspenze 3500 ml:

Fibrinogenová směs: 2800 ml ethanolu (94% při 2 až 8 °C), 492,5 g lidského fibrinogenového přípravku B s částicemi o velikosti mikrometrů, 493,5 mg riboflavinu. Fibrinogenová směs byla udržována za míchání 20 hodin při 2 až 8 °C. Trombinová směs: 100 ml ethanolu (100% při -30 °C), 12,27 g lidského trombinového přípravku B. Trombinová směs byla udržována 18 hodin při -30 °C.

·· ···* • ·

Suspenze: 157 ml trombinové směsi se přidalo k fibrinogenové směsi. K doplnění na výsledný objem suspenze 3500 ml se přidal 94% ethanol při 2 až 8 °C.

Vlastnosti suspenze:

1. Koncentrace ethanolu: 94,3 %

2. Doba výtoku měřená v ocelovém zařízení znázorněném v levé části obr. 9: 36,5 s

3. Sedimentační chování:

a) sedimentační objem po 5 minutách od počátku: 98 % testového objemu

b) sedimentační objem po 24 hodinách od počátku: 64 % testového objemu

4. Velikost částice (střední průměr podle Folka a Warda): 56,4 ±1,3 pm

Nosiče ve formě kolagenových proužků se pokryly suspenzí. Za následujících podmínek se v chladící komoře nejprve preinkubovalo 48 proužků kolagenové houby: Teplota 5,2 °C, absolutní vlhkost 4,8 g vody na kg vzduchu, inkubační doba

18,5 hodiny.

Pro pokrytí proužků kolagenové houby suspenzí se použil aplikátor popsaný v US patentu č. 6 177 126 Bl.

Pokryté proužky kolagenové houby se vysušily následujícím způsobem: Pokryté proužky se inkubovaly 15 minut při teplotě 5,2 °C a absolutní vlhkosti 4,8 g vody na kg vzduchu.

Poté se za sníženého tlaku pokryté proužky vysušily v sušící komoře za následujících podmínek sušení:

Vzduchové podmínky: teplota 5,2 °C, absolutní vlhkost 4,8 g vody na kg vzduchu, průtok vzduchu odsávacím ventilem 23 m³ za hodinu, tlak 5,9 kPa (59 mbar), doba sušení 4 hodiny.

Když se vzorky o rozměrech 1 cm x 5 cm 2 minuty třepalo v testovací zkumavce na třepačce Vibrofix při frekvenci 800 až 1200 otáček za minutu, došlo k abrazi získaného pokrytí proužků kolagenové houby o asi 0,2 mg/cm².

Příklad II

V tomto příkladu obsahuje suspenze lidský fíbrinogenový přípravek C a lidský trombinový přípravek C.

Fibrinogenová směs: 2252 ml ethanolu (94% při 2 až 8 °C), 370,7 g lidského fíbrinogenového přípravku C s mikrometrovou velikostí částic, 493,5 mg riboflavinu. Fibrinogenová směs se udržovala za míchání 20 hodin při 2 až 8 °C. Trombinová směs: 188 ml ethanolu (100% při -30 °C), 12 vialek lidského trombinového přípravku C/12 ml vody pro injekci. Trombinová směs se udržovala 18 hodin při -30 °C.

Suspenze: 164,5 ml trombinové směsi se přidalo k fíbrinogenové směsi. K doplnění na výsledný objem suspenze 3500 ml se při 2 až 8 °C přidal 94% ethanol.

Vlastnosti suspenze:

1. Koncentrace ethanolu: 94,1 %

2. Doba výtoku měřená ocelovým zařízením znázorněným na obr. 9: 32,8 s

3. Sedimentační chovám:

a) sedimentační objem po 5 minutách od počátku: 94 % testového objemu

b) sedimentační objem po 24 hodinách od počátku: 71 % testového objemu

4. Velikost částice (střední průměr podle Folka a Warda): 49,2 ± 0,93 μηι

Nosiče ve formě kolagenových proužků se pokryly suspenzí. Za následujících podmínek se v chladící komoře nejprve preinkubovalo 48 proužků kolagenové houby: Teplota 4,8 °C, relativní vlhkost 90,3 %, inkubační doba 22,25 hodiny.

Pokryté proužky kolagenové houby se vysušily následujícím způsobem: Pokryté proužky se inkubovaly 13 minut při teplotě 4,9 °C a absolutní vlhkosti 4,8 g vody na kg vzduchu.

Poté se za následujících podmínek sušení pokryté proužky vysušily za sníženého tlaku v sušící komoře:

Vzduchové podmínky: teplota 5,2 °C, absolutní vlhkost 4,9 g vody na kg vzduchu, průtok vzduchu odsávacím ventilem 25 m³ za hodinu, tlak 6 kPa (60 mbar), doba sušení 4 hodiny.

Když se vzorky o rozměrech 1 cm x 5 cm 2 minuty třepalo v testovací zkumavce na třepačce Vibrofíx při frekvenci 800 až 1200 otáček za minutu, došlo k abrazi získaného pokrytí proužků kolagenové houby o asi 0,2 mg/cm².

Příklad III

V tomto příkladu obsahuje suspenze lidský fibrinogenový přípravek B a lidský trombinový přípravek B a aprotinin.

Způsobem skupiny II se použitím následujících množství a parametrů získal výsledný objem suspenze 1000 ml:

Fibrinogenová směs: 820 ml ethanolu (100% při 2 až 8 °C), 39,4 ml vody pro injekci a 10,6 ml aprotininu, 90,67 g lidského fibrinogenového přípravku B s mikrometrovou velikostí částic, 141 mg riboflavinu. Fibrinogenová směs se udržovala za míchání 20 hodin při 2 až 8 °C.

Trombinová směs: 50 ml ethanolu (100% při -30 °C), 3,75 g lidského trombinového přípravku B. Trombinová směs se udržovala 16 hodin při -30 °C.

Suspenze: K fibrinogenové směsi se přidal celý objem trombinové směsi. K doplnění na výsledný objem suspenze 1000 ml se přidal 100% ethanol při 2 až 8 °C.

• ·· · ·· · · ·· ·· • · · · · · · · ·· ··· · · · · · • · · ·····*· ·· ··· ··· ·· ·· ··

Suspenzní charakteristiky:

1. Koncentrace ethanolu: 95 %

2. Doba výtoku měřená plastovým zařízením znázorněným vpravo na obr. 9::35 s

3. Sedimentační chování:

a) sedimentační objem po 5 minutách od počátku: 89 % testového objemu

b) sedimentační objem po 24 hodinách od počátku: 76 % testového objemu

4. Velikost částice (střední průměr podle Folka a Warda): 74,4 ± 3,5 pm

Nosiče ve formě kolagenových proužků se pokryly suspenzí. Za následujících podmínek se v chladící komoře nejprve preinkubovalo 16 proužků kolagenové houby: Teplota 5,0 °C, relativní vlhkost 85 %, inkubační doba 17 hodin.

Pokryté proužky kolagenové houby se vysušily následujícím způsobem: Pokryté proužky se inkubovaly 35 minut při teplotě 5 °C a relativní vlhkosti 85 %. Poté se za následujících podmínek sušení pokryté proužky vysušily za sníženého tlaku v sušící komoře:

Vzduchové podmínky: teplota 5 °C, relativní vlhkost 85 %, průtok vzduchu odsávacím ventilem 1,2 m³ za hodinu, tlak 3,5 kPa (35 mbar), doba sušení 4 hodiny.

Příklad IV

V tomto příkladu obsahuje suspenze lidský fibrinogenový přípravek C a lidský trombinový přípravek C.

Způsobem skupiny II se použitím následujících množství a parametrů získal výsledný objem suspenze 780 ml:

Fibrinogenová směs: 700 ml ethanolu (94% při 2 až 8 °C), 84,42 g lidského fibrinogenového přípravku C s mikrometrovou velikostí částic, 110 mg riboflavinu. Fibrinogenová směs byla udržována za míchání 20 hodin při 2 až 8 °C.

Trombinová směs: 35 ml ethanolu (100% při -30 °C), 0,54 g lidského trombinového přípravku C.

Trombinová směs se udržovala 16 hodin při -30 °C.

Suspenze: 23,0 ml trombinové směsi se přidalo k fíbrinogenové směsi.

K doplnění na výsledný objem suspenze 780 ml se při 2 až 8 °C přidal 100% ethanol.

Vlastnosti suspenze:

1. Koncentrace ethanolu: 94 %

2. Doba výtoku měřená plastovým zařízením znázorněným vpravo na obr. 9: 33,5 s

3. Sedimentační chování:

a) sedimentační objem po 5 minutách od počátku: 92 % testového objemu

b) sedimentační objem po 24 hodinách od počátku: 72 % testového objemu

4. Velikost částice (střední průměr podle Folka a Warda): 60,5 ± 0,5 μιη

Nosiče ve formě kolagenových proužků se pokryly suspenzí. Za následujících podmínek se v chladící komoře nejprve preinkubovalo 8 proužků kolagenové houby: Teplota 6,0 °C, relativní vlhkost 85 %, inkubační doba 18,5 hodiny.

Pro pokrytí proužků kolagenové houby suspenzí se použil aplikátor popsaný v US patentuě. 6 177 126 Bl.

Pokryté proužky kolagenové houby se vysušily následujícím způsobem: Pokryté proužky se inkubovaly 45 minut při teplotě 5 °C a relativní vlhkosti 85 %. Poté se za následujících podmínek sušení pokryté proužky vysušily za sníženého tlaku v sušící komoře:

• · ·· · · φφφφ • φφφ · φφφφ· • · φ φ · · φ φ φφφφ φφ Φ· ··

Když se vzorkem o rozměrech 1 cm x 5 cm 2 minuty třepalo v testové zkumavce na třepačce Vibrofix při frekvenci 800 až 1200 otáček za minutu, došlo k abrazi získaného pokrytí proužků kolagenové houby o asi 0,2 mg/cm².

Příklad V

V tomto příkladu obsahuje suspenze lidský fíbrinogenový přípravek A a lidský trombinový přípravek A.

Způsobem skupiny I se použitím následujících množství a parametrů se získal výsledný objem suspenze 3120 ml:

Fibrinogenová směs: 2540 ml ethanolu (100% při 2 až 8 °C), 311,6 g lidského fíbrinogenového přípravku A, 440 mg riboflavinu. Fibrinogenová směs byla udržována za míchání 18 hodin při 2 až 8 °C.

Trombinová směs: 210 ml ethanolu (100% při -30 °C), 229 g lidského trombinového přípravku A.

Suspenze: 87,3 ml vody pro injekci se přidalo k fíbrinogenové směsi.

K fíbrinogenové směsi se přidala trombinová směs.

K doplnění na výsledný objem suspenze se při 2 až 8 °C přidal 100% ethanol. Vlastnosti suspenze:

1. Koncentrace ethanolu: 97 %

2. Doba výtoku měřená ocelovým zařízením znázorněným na obr. 9 vlevo: 40,8 s

3. Sedimentační chování:

a) sedimentační objem po 5 minutách od počátku: 95,6 % testového objemu

b) sedimentační objem po 24 hodinách od počátku: 63,5 % testového objemu

4. Velikost částice (střední průměr podle Folka a Warda): 51,8 ± 0,8 pm

Nosiče ve formě kolagenových proužků se pokryly suspenzí. Za následujících podmínek se v chladící komoře nejprve preinkubovalo 48 proužků kolagenové houby: Teplota 6,5 °C, relativní vlhkost 90 %, inkubační doba 22,5 hodiny.

Pokryté proužky kolagenové houby se vysušily následujícím způsobem: Pokryté proužky se inkubovaly 10 minut při teplotě 6,5 °C a relativní vlhkosti 90 %. Poté se za následujících podmínek sušení pokryté proužky vysušily za sníženého tlaku v sušící komoře:

Vzduchové podmínky: teplota 6,5 °C, relativní vlhkost 90 %, průtok vzduchu odsávacím ventilem 21 m³ za hodinu, tlak 5,8 kPa (58 mbar), doba sušení 4 hodiny.

Když se vzorkem o rozměrech 1 cm x 5 cm 2 minuty třepalo na třepačce Vibrofíx při frekvenci 800 až 1200 otáček za minutu, došlo k abrazi získaného pokrytí proužků kolagenové houby o asi 0,2 mg/cm².

Příklad VI

V tomto příkladu obsahuje suspenze lidský fibrinogenový přípravek A a hovězí trombinový přípravek a aprotinin.

Způsobem skupiny I se použitím následujících množství a parametrů se získal výsledný objem suspenze 16 720 ml:

Fibrinogenová směs: 13 600 ml ethanolu (100% při 2 až 8 °C), 1750,5 g lidského fibrinogenového přípravku A, 2361 mg riboflavinu. Fibrinogenová směs byla udržována za míchání 21 hodin při 2 až 8 °C.

Trombinová směs: 420 ml ethanolu (100% při -30 °C), 1229 g hovězího trombinového přípravku.

Suspenze: 162,3 ml aprotininového roztoku se přidalo k fibrinogenové směsi. 304,7 ml vody pro injekci se přidalo k fibrinogenové směsi.

K fibrinogenové směsi se přidala trombinová směs.

1. Koncentrace ethanolu: 97 %

2. Doba výtoku měřená ocelovým zařízením znázorněným na obr. 9 vlevo: 36,8 s

3. Velikost částice (střední průměr podle Folka a Warda): 58,6 ± 0,6 pm

Nosiče ve formě kolagenových proužků se pokryly suspenzí. Za následujících podmínek se v chladící komoře nejprve preinkubovalo 288 proužků kolagenové houby: Teplota 6,5 °C, relativní vlhkost 89 %, inkubační doba 25 hodin.

Pokryté proužky kolagenové houby se vysušily následujícím způsobem: Pokryté proužky se inkubovaly 10 minut při teplotě 6,5 °C a relativní vlhkosti 89 %. Poté se za následujících podmínek sušení pokryté proužky vysušily za sníženého tlaku v sušící komoře:

Vzduchové podmínky: teplota 6,5 °C, relativní vlhkost 89 %, průtok vzduchu odsávacím ventilem 22,5 m³ za hodinu, tlak 5,9 kPa (59 mbar), doba sušení 4 hodiny.

Příklad VII • ·

V tomto příkladu se testovala stabilita krycí suspenze obsahující lidský fíbrinogen, hovězí trombin a aprotinin na pokryté kolagenové houbě, a to po dobu trvání pokrývacího procesu 7 hodin za okolních podmínek výrobních místností, např. 2 až 8 °C.

Každá aktivní složky byla zkoumána v různých vzorkovacích časech. Výsledky jsou znázorněny v níže uvedené tabulce I.

Tabulka I

	Lidský fíbrinogen (mg/ml)	Hovězí trombin (IU/ml)	Aprotinin (Ph.Eur.U./ml)
Na začátku pokrývání	50,0	21,8	0,59
Po 4,5 hodinách	49,7	23,3	0,59
Po 7 hodinách (konec procesu pokrývání)	49,1	20,4	0,56

Výsledky ukazují uspokojivou stabilitu všech tří složek.

Příklad VIII

Odkazovány jsou obrázky 1 až 7, kde tyto obrázky představují:

Obrázek 1

1.1 Opraskin®: nepokrytý/pokrytý

1.2 Pokrytý Opraskin®: ponoření do endoskopického zařízení

1.3 Pokrytý Opraskin®: rozvinut po ponoření do endoskopického zařízení Obrázek 2

2.1 Willospon® forte: nepokrytý/pokrytý

2.2 Pokrytý WiUospon® forte: ponoření do endoskopického zařízení

2.3 Pokrytý WiUospon® forte: rozvinut po ponoření do endoskopického zařízení

Obrázek 3

3.1 WiUospon® Spezial: nepokiytý/pokrytý

3.2 Pokrytý WiUospon® Spezial: ponoření do endoskopického zařízení

3.3 Pokrytý WiUospon® Spezial: rozvinut po ponoření do endoskopického zařízení

Obrázek 4

4.1 Ethisorb® Patch: nepokrytý/pokrytý

4.2 Pokrytý Ethisorb® Patch: ponoření do endoskopického zařízení

4.3 Pokrytý Ethisorb® Patch: rozvinut po ponoření do endoskopického zařízení

Obrázek 5

5.1 Tabotamp®NU Knit: nepokrytý/pokrytý

5.2 Pokrytý Tabotamp® NU Knit: ponoření do endoskopického zařízení

5.3 Pokrytý Tabotamp® NU Knit: rozvinut po ponoření do endoskopického zařízení

Obrázek 6

6.1 Houba Nycomed: nepokrytá/pokrytá (laboratorní vzorek)

6.2 Pokrytá houba Nycomed (laboratorní vzorek): ponoření do endoskopického zařízení

6.3 Pokrytá kolagenová houba Nycomed (laboratorní vzorek): rozvinuta po ponoření do endoskopického zařízení

6.3 Pokrytá kolagenová houba Nycomed (výrobní vzorek = TachoComb®): rozvinuta po ponoření do endoskopického zařízení

Obrázek 7

endoskopický nástroj: Endodock®

Porovnání pokryté houby Nycomed (TachoComb S) s jinými nosičovými výrobky pokrytými identicky jako TachoComb S Přilnutí vrstvy

Postup

1. Pokrytí různých nosičů

Obchodní jméno	Materiál	Vyrobeno/Dodáváno
Opraskin®	Kolagenová houba	Lohmami, Postfach 2343, D-56513 Neuwied
Willospon® forte	Kolagenová houba (telecí)	Will-Pharma, Postbus 30, NL 1160 AA Zwanenburg
Willospon® Spezial	v Zelatmová houba	Will-Pharma, Postbus 30, NL 1160 AA Zwanenburg
Ethisorb® Patch	Polyglactin910/Polydioxanon	Johnson/Johnson (výrobce) Ethicon, Robert-Koch-Str. 1 D-22851 Norderstedt
Tabotamp® NU Knit	Oxidovaná regenerovaná celulosa	Johnson/Johnson (výrobce) Ethicon, Robert-Koch-Str. 1 D-22851 Norderstedt
Collagen sponge Nycomed	Koňská kolagenová houba	Nycomed Austria Sankt-Peter-Str. 25 A-4021 Linec

Pokrývači suspenzí TachoComb S byla potažena plocha o rozměrech 2 cm x 4,5 cm. Množství suspenze pro pokrytí odpovídalo popisu pro TachoComb (5,5 mg fibrinogenu/cm²). Vzorky se vysušily.

2. Z každého pokrytého nosiče byl připraven vzorek o rozměrech 1 cm x 4 cm.

3. Přilnutí vrstvy bylo testováno následujícím způsobem.

Popis způsobu

Přístrojové vybavení

Analytické váhy (přesnost měření ± 0,5 mg)

Třepačka Vibrofix kombinovaná s upevňovacím zařízením

Pravítko s milimetrovým dělením

Stopky, skalpel, zkumavky s vnitřním průměrem 2 cm opatřené uzávěrem Postup

Postup a výpočet pro určení abraze jsou uvedeny výše.

Výsledky

Nosič	Látka	Abraze (mg/cm²)
Opraskin®	lyofilizovaný kolagen	2,1
Willospon® forte (3 mm)	lyofilizovaný kolagen	1,2
Willospon® Spezial (1 mm)	želatina	2,1
Ethisorb® Patch (ZVP609)	polyglactin/dioxanon	14,3
Tabotamp® NU Knit	oxidovaná celulosa	9,2
Collagen sponge Nycomed	kolagen, pěnový	0,15

Komentář

Žádný nosič kromě kolagenové houby Nycomed není po pokrytí pružný. Vzorek se musí vyříznout velmi opatrně. Když je vystřihnut pomocí nůžek, dojde k odloupnutí velkého množství potahového materiálu, neboť vrstva je sama o sobě neohebná. Mezi potahovým materiálem a nosičem Ethisorb® Patch nebylo téměř žádné spojení. Když se trochu zatřepalo, veškeré pokrytí se odlouplo jako koberec. Rozdíl mezi kolagenovou houbou Nycomed a ostatními nosičovými materiály je zcela jasný.

Pružnost zvlhčeného pokrytého nosiče ·· ·»·· • · · ··· ···· ·· »·· ··· ·* ·· ··

Postup

1. Pokrytí různých nosičů

Krycí suspenzí TachoComb S se pokryla plocha o rozměrech 2 cm x 4,5 cm každého nosiče. Množství pokrývači suspenze odpovídalo popisu pro TachoComb (5,5 mg fibrinogenu/cm²). Vzorky se vysušily.

2. Z každého pokrytého nosiče se připravil vzorek o ploše 5 až 7 cm². Byla určena přesná výchozí plocha vysušeného vzorku.

3. Vzorek se zvlhčil a položil na elastickou latexovou fólii upevněnou ke speciálnímu zařízení, jak je podrobně popsáno pod nadpisem Postup. Poté se na latexovou fólii vyvinul tlak, při kterém se roztáhla. Po dvou roztaženích a uvolněních se fólie roztáhla potřetí. Plocha nosiče se změřila v bodě nejvyššího roztažení.

Popis způsobu

Přístrojové vybavení/Chemikálie

Peristaltická pumpa (IKA PA-SF)

Nádobka na vyrovnání tlaku (3 výstupy)

Tlakoměr VDO (0 až 25 kPa (0 až 250 mbar))

Skleněná nálevka (průměr otvoru 1: 30 mm, otvoru 2: 15 mm

Silikonové trubičky a sponky, latexové rukavice (Semper med), skalpel, pravítko s milimetrovým dělením, nůžky Fyziologický roztok

Postup

Ke třem výstupům tlakové vyrovnávací nádobky se pomocí silikonových trubiček vzduchotěsně připojilo následující vybavení:

a) peristaltická pumpa

Φ· ·*··

b) tlakoměr

c) skleněná nálevka/otvor 2

Z latexové rukavice se vyřízl dvojitý proužek a rozměrech 8 cm x 8 cm. Tento proužek se vzduchotěsně upevnil ke skleněné nálevce/otvor 1.

Skalpelem se vyřízla plocha asi 5 až 7 cm² pokryté plochy pokrytého nosiče. Změřila se plocha vzorku (výchozí plocha). Pokrytí vzorku se zvlhčilo fyziologickým roztokem a vzorek se položil na latexovou fólii. Poté se na latexovou fólii vzorek ručně asi 1 minutu přitlačoval.

Latexová fólie se pomocí peristaltické pumpy roztáhla tlakem 7 kPa (70 mbar). To se dvakrát opakovalo, vždy s následným uvolněním tlaku na latexovou fólii. Při třetím roztažení se změřila plocha (délka a šířka) pokrytého nosiče, a to v bodě největšího roztažení latexové fólie.

Výpočet plocha nosiče při třetím roztažení Faktor pružnosti =výchozí plocha vzorku

Výsledky

Nosič	Látka	Faktor pružnosti
Opraskin®	lyofilizovaný kolagen	1,78
Willospon® forte (3 mm)	lyofilizovaný kolagen	1,53
Willospon® Spezial (1 mm)	želatina	1,79
Ethisorb® Patch (ZVP609)	polyglactin/dioxanon	1,0
Tabotamp® NU Knit	oxidovaná celulosa	1,15
Collagen sponge Nycomed	kolagen, pěnový	1,55

• *

Komentář

Pružnost zvlhčené kolagenové houby Nycomed (TachoComb S) je jednou z důležitých vlastností výrobku. Pružnost je nezbytná v chirurgii hrudníku a břišní dutiny. Po přilepení by měl být nosič schopný sledovat například roztahovací a stahovací pohyby plic nebo střev. Zvláště Ethisorb® nevykazoval pružnost vůbec žádnou. Z pokrytí se uvolňoval okamžitě. Pokrytý Willospon® Spezial a Opraskin® vykazovaly během testu strukturní defekty.

Použití pokrytého nosiče v endoskopické chirurgii

Postup

1. Pokrytí různých nosičů

Krycí suspenzí TachoComb S se pokryla plocha o rozměrech 2 cm x 4 cm každého nosiče. Množství krycí suspenze odpovídalo popisu pro TachoComb (5,5 mg fibrinogenu/cm²). Vzorky se vysušily.

2. Zacházení se vzorky pokrytého nosiče pro použití v endoskopické chirurgii a ztráta pokrytí v důsledku tohoto zacházení se zdokumentovaly prostřednictvím digitálního fotografického vybavení.

Popis způsobu

Přístrojové vybavení

Endodock: Endoskopický nástroj uzpůsobený pro použití prostředku TachoComb® v endoskopické chirurgii (viz obrázek 7). Digitální fotografické vybavení.

Seznam studovaných nosičů

Nosič	Nosičový materiál
Opraskin®	lyofilizovaný kolagen
Willospon® forte (3 mm)	lyofilizovaný kolagen
Willospon® Spezial (1 mm)	želatina
Ethisorb® Patch (ZVP609)	polyglactin/dioxanon

·· Mfl

Tabotamp® NU Knit	oxidovaná celulosa
Collagen sponge Nycomed	kolagen, pěnový

Postup

Sejmuté obrázky všech nosičů

1. obrázek: Dokumentace nepokrytých a pokrytých nosičových vzorků.

2. obrázek: Pokryté vzorky se ponoří do endoskopického zařízení (Endodock). Vzorek se musí ručně zploštit, aby ho bylo možno obalit kolem vodícího „kolíku“. Poté se vzorek opatrně ponoří do ocelové trubičky o průměru 10 mm.

Dokumentace vzorku částečně ponořeného do trubičky zařízení Endodock.

3. obrázek: Vzorek se opatrně vyndá ven. Poté se vzorek rozvine. Pokrytí, které se v důsledku tohoto zacházení se vzorkem oddělí, se shromáždí vedle vzorku. Rozvinutý vzorek po ponoření do endoskopického zařízení a úbytek pokrytí v důsledku tohoto zacházení se vzorkem se zdokumentují.

Komentář

Použití prostředku TachoComb S (pokrytá koňská kolagenová houba/Nycomed) v endoskopické chirurgii je nejnáročnější aplikací výrobku. TachoComb S se ponoří do endoskopického zařízení. Trubička tohoto vybavení má obvykle průměr 10 až 13 mm. Pro ponoření do trubičky se TachoComb S zploští a poté obalí kolem vodícího „kolíku“ a poté se opatrně ponoří do trubičky. Proto musí být spojení potahu s nosičem a i vlastní spojení silné, ale aby výrobek zůstal dostatečně ohebný v suchém stavu, aby se mohl ohýbat a rolovat. Když se TachoComb S vnáší do operovaného místa, opatrně se vyjme z trubičky. Poté se musí rozvinout a umístit na povrch poranění. To často vyžaduje nějaké úpravy. Proto by přilnutí vrstvy k nosiči mělo být dostatečně silné, aby toto zacházení vydrželo.

Výsledky «99 *9 • 9

9 • 9 • · 9 9

9

9 • · · ·

9999 9 9

9 • *

9 9

9* 9 9

Výsledky jsou k vidění na připojených obrázcích 1 až 6. Odhad odpadlého krycího materiálu je následující:

Opraskin®	30 až 40 %
Willospon® forte (3 mm)	60 až 70 %
Willospon® Spezial (1 mm)	50%
Tabotamp® NU Knit	60 až 70 %
Ethisorb® Patch	95%
Collagen sponge Nycomed	<5%

Protože Ethisorb® je velmi neohebný nosič, je přilnutí potahu velmi špatné. Proto při tomto průzkumu ztratil pokrytý Ethisorb® téměř veškeré pokrytí. Ve srovnání s pokrytou kolagenovou houbou od firmy Nycomed měly všechny ostatní studované nosiče pokrývaný povrch hladký. Proto pokrytí leží na nosiči jako rovný koberec. To vede k poněkud neohebné struktuře suchých pokrytých nosičů. Ohýbání nebo rolování v něm často způsobuje praskliny.

Po ponoření pokrytých nosičů do trubičky endoskopického zařízení a poté rozvinutí vzorku ztratily všechny nosiče vyjma kolagenové houby firmy Nycomed poměrně hodně z pokrytí, takže velké plochy zůstaly bez pokrývacího materiálu.

Struktura a zrnitost kolagenové houby firmy Nycomed je základem vysoké ohebnosti výrobku TachoComb S za podmínek vysušení nebo zvlhčení.

Kolagenová houba firmy Nycomed je pěnová a má uvnitř mnohoúhelníkové dutiny. Na povrchu jsou tyto dutiny přeříznuty a vznikají kaverny. Tyto kaverny zvětšují povrch k pokrytí. Během pokrývání se pokrývači suspenze distribuuje rovnoměrně na strukturovaný povrch. Během sušení se roztok obsahující jak fibrinogen, tak trombin, zakotví jako pevné látky do těchto kaveren. Proto se může TachoComb S • · nařezat do žádaných velikostí a lze ho ponořit do endoskopického vybavení s pouze malou ztrátou pokrývacího materiálu nebo zcela beze ztrát.

Ve srovnání se všemi ostatními studovanými nosiči je velkou výhodou suchého prostředku TachoComb S jeho vysoká ohebnost.

Výroba kolagenové houby

Kolagenová houba odkazovaná v tomto textu lze vyrobit způsobem obecně znázorněným na obrázcích 10 a 11 a popsaným níže:

Bylo zjištěno, že úspěšné pokrytí kolagenové houby přípravkem fibrinového lepidla závisí na struktuře kolagenové houby. Je tak žádoucí získat způsob výroby kolagenové houby s určitou strukturou a konkrétním cílem je vyrobení kolagenové houby vhodné pro pokrytí přípravkem fibrinového lepidla tak, aby se získal materiál pro hojení a uzavírání poranění. Dále je žádoucí získat způsob výroby kolagenové houby mající ve vztahu k houbám z předchozích děl v oboru zlepšené fyzikální vlastnosti, a to ve smyslu zlepšené vlhkosti, pružnosti, hustoty a modulu pružnosti. Dále je žádoucí získat způsob přípravy kolagenové houby, která je vzduchotěsná a kapalinotěsná v tom smyslu, že když se kolagenová houba aplikuje na poranění, nedovolí vzduchu nebo kapalině prosakovat kolagenovou houbou.

Způsob přípravy kolagenové houby tak může obsahovat přípravu kolagenového gelu, vmíchání vzduchu do kolagenového gelu tak, aby se získala kolagenová pěna, vysušení kolagenové pěny tak, aby se získal suchý blok kolagenové houby mající uvnitř dutiny, oddělení částí houby z bloku kolagenové houby s průměrem dutiny větším než 0,75 mm a menším než 4 mm nebo se středním průměrem dutiny maximálně 3 mm.

Termínu průměr dutiny by v tomto kontextu mělo být porozuměno jako největší přímé vzdálenosti od stěny ke stěně dutiny, to jest největší diagonální přímé vzdálenosti v dutině. Dutiny mohou mít polygonální tvar, jako je oktogonální tvar.

Bylo zjištěno, že průměr dutiny větší než 0,75 mm a menší než 4 mm nebo střední průměr dutiny maximálně 3 mm dává kolagenovou houbu zvláště vhodnou k pokrytí přípravkem fibrinového lepidla. Kolagenový gel má s výhodou hmotnost sušiny v rozmezí 2 až 20 mg sušiny na 1 g gelu, jako je 4 až 18 mg, jako je 5 až 13 mg, jako je 6 až 11 mg na 1 g gelu. Dynamická viskozita kolagenového gelu je s výhodou 2 až 20 N.cm, jako je 4 až 10 N.cm, jako je 6 až 8 N.cm. Kolagenová houba má s výhodou takový obsah vody, který není větší než 20 %, jako je 10 až 15 %, jako je 18 %. Modul pružnosti kolagenové houby je s výhodou v rozmezí 5 až 100 N/cm, jako je 10 až 50 N/cm a hustota houby je s výhodou 1 až 10 mg/cm³, jako je 2 až 7 mg/cm³.

Bylo zjištěno, že kolagenová houba připravená způsobem podle tohoto vynálezu je vzduchotěsná v tom smyslu, že když se kolagenová houba aplikuje na poranění, tak nedovolí vzduchu nebo kapalině projít kolagenovou houbou. Kapaliny se do houby absorbují. Tohoto efektu se primárně dosáhne v důsledku té skutečnosti, že krok vmíchání vzduchu do kolagenového gelu poskytne kolagenovou houbu, která má trojrozměrnou strukturu s nahromaděnými oddělenými dutinami a vpodstatě zcela uzavřenými stěnami kolagenového materiálu, a to v protikladu ke známým kolagenovým houbám, které mají strukturu vláknitou.

Kolagenový gel může obsahovat materiál různých typů, jako je kolagen typu I, II nebo III ze savčích, transgenních nebo rekombinantních zdrojů, ale lze použít i všechny další typy kolagenu. Kolagen může obsahovat materiál ze šlach vybraných ze skupiny sestávající z koňských šlach, lidských šlach a hovězích šlach. Kolagenový gel může dále nebo alternativně obsahovat rekombinantní kolagenový materiál.

Obsah kolagenu izolovaných částí houby je ve vztahu k sušině houby s výhodou 50 až 100 %, jako 75 až 100 %, jako 80 až 100 %, jako 85 až 100 %, jako 90 až 100 %, jako 92 až 100 %, jako 92 až 98 %, jako 93 až 97 %, jako 94 až 96 %.

Krok přípravy kolagenového gelu s výhodou obsahuje kroky skladování šlach při teplotě -10 až -30 °C a sloupnutí šlach, odstranění cizího proteinu ze šlach, snížení obsahu choroboplodných zárodků ve šlachách, nabobtnání šlach, homogenizace nabobtnaných šlach.

Kroky skladování, sloupnutí, odstranění proteinu, snížení obsahu choroboplodných zárodků a bobtnám mají za cíl přečistit surový materiál, kdežto krok homogenizace má za cíl získání kolagenu ve formě gelu.

Krok snížení obsahu choroboplodných zárodků s výhodou obsahuje přidání kyseliny, jako je organická kyselina, jako je mléčná kyselina, ke šlachám. Ke šlachám se navíc s výhodou přidá organické rozpouštědlo, jako je alkohol, jako je ethanol. Krok nabobtnání šlach dále s výhodou obsahuje přidání mléčné kyseliny ke šlachám. Použitá mléčná kyselina může být 0,40 až 0,50% mléčná kyselina, jako je 0,45% mléčná kyselina.

Krok bobtnání šlach může obsahovat udržování šlach při teplotě 4 až 25 °C, jako při teplotě 10 až 20 °C, po dobu 48 až 200 hodin, jako po dobu 100 až 200 hodin.

Krok homogenizace nabobtnaných šlach se s výhodou provede tak, aby se získala velikost částice fragmentů kolagenového gelu, to jest kuliček vláken, o průměru 0,8 až 1,2 cm, jako je 1 cm. Fyzikální vlastnosti kolagenového gelu jsou navíc s výhodou takové, jak je uvedeno výše. Vhodných vlastností může být například dosaženo provedením kroku homogenizace nabobtnaných šlach prostřednictvím ozubeného kotoučového mlýnku nebo odpovídajícím homogenizačním zařízením.

Krok vmíchání vzduchu do kolagenového gelu s výhodou obsahuje kroky vmíchání okolního vzduchu do gelu prostřednictvím mixeru tak, aby vznikla kolagenová pěna, vedení promíchané gelové pěny do frakcionačního kanálku, oddělení kolagenového gelu a kolagenové pěny ve frakcionačním kanálku.

Alespoň část kolagenového gelu odděleného od kolagenové pěny ve frakcionačním kanálku se může vést zpět do mixeru. V tomto případě poměr mezi množstvím kolagenového gelu, který se vede zpět do mixeru z frakcionačního kanálku a množstvím čerstvého kolagenového gelu vedeného do mixeru, je s výhodou 0,1 až 0,5. Krok oddělení kolagenového gelu a kolagenové pěny s výhodou zahrnuje kroky oddělení vybrané části kolagenové pěny obsažené ve frakcionačním kanálku, vedeni vybrané části kolagenové pěny ven z frakcionačního kanálku k jejímu vysušení.

Ve zvýhodněném provedení tohoto způsobu se udržuje ve frakcionačním kanálku teplota 15 až 40 °C, jako je 20 až 25 °C.

Po vmíchání vzduchu do kolagenového gelu se kolagenová pěna může po dobu 2 až 4 minut homogenizovat.

Před krokem sušení kolagenové pěny a po kroku vmíchání vzduchu do kolagenového gelu se ke kolagenové pěně může přidat neutralizační činidlo, přičemž kolagenová pěna se s výhodou neutralizuje proto, aby se z hodnoty pH obvykle 2,5 až 3,5 dosáhlo hodnoty pH kolagenové pěny 6,5 až 8,5. Lze použít neutralizační činidlo obsahující roztok amoniaku, přičemž kolagenová pěna se s výhodou neutralizuje po dobu 5 až 30 hodin, jako 10 až 20 hodin, jako 24 hodin.

Před krokem sušení kolagenové pěny se kolagenová pěna s výhodou naplní do sušícího kontejneru, a to takovým způsobem, že během plnění se do pěny nedostane vpodstatě žádný vzduch.

Krok sušení s výhodou obsahuje sušení při teplotě 15 až 60 °C, jako při 20 až 40 °C, po dobu 50 až 200 hodin, jako 100 až 150 hodin tak, aby se získala vysušená kolagenová pěna. Sušení lze provést při lehce sníženém atmosférickém tlaku, jako při tlaku 70 až 90 kPa (700 až 900 mbar), jako 80 kPa (800 mbar).

Kolagenová houba vyrobená způsobem podle tohoto vynálezu s výhodou splňuje alespoň jedno z následujících kriterií:

hodnota pH 5,0 až 6,0, obsah mléčné kyseliny maximálně 5 %, obsah amoniaku maximálně 0,5 %, obsah rozpustného proteinu vypočteného jako obsah albuminu maximálně 0,5 %, obsah síranového popele maximálně 1,0 %, obsah těžkých kovů maximálně 20 ppm, mikrobiologická čistota s maximálně 10³ CFU/g, obsah kolagenu 75 až 100 %, hustota 1 až 10 mg/cm³, jako 2 až 7 mg/cm³, modul pružnosti 5 až 10 N/cm, jako 10 až 50 N/cm.

Krok oddělení částí kolagenové houby může obsahovat rozdělení kolagenové houby na množství částí pomocí rozřezání. Získané části lze tvarovat do jakékoliv žádoucí formy, jako je kónická, cylindrická, v to zahrnujíc cylindrickou s prstencovým průřezem, obdélníková, polygonální, krychlová a ploché proužky nebo může být vhodnou granulační metodou převedena granulát atd.

Z výše uvedeného textuje zřejmé, že kolagenovou houbu lze připravit způsobem obsahujícím přípravu kolagenového gelu, vmíchání vzduchu do kolagenového gelu tak, aby se získala kolagenová pěna, vysušení kolagenové pěny tak, aby se získal vysušený blok kolagenové houby s dutinami, oddělení částí houby z bloku kolagenové houby, které mají následující vlastnosti: modul pružnosti v rozmezí 5 až 10 N/cm, hustotu v rozmezí 1 až 10 mg/cm³, průměr dutiny větší než 0,75 mm a menší než 4 mm nebo střední průměr dutiny maximálně 3 mm.

Dl-íř^

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Suspenze fíbrinogenu, trombinu a alkoholu, vyznačující se tím, že se získá způsobem obsahujícím přípravu fibrinogenové směsi fíbrinogenu a alkoholu, přípravu trombinové směsi trombinu a alkoholu, smíchání fibrinogenové směsi a trombinové směsi tak, že se získá uvedená suspenze, která obsahuje fibrinogenové a trombinové částice se středním průměrem částic podle Folka a Warda 25 až 100 pm.
2. Suspenze podle nároku 1,vyznačující se tím, že obsahuje částice se středním průměrem částic podle Folka a Warda 35 až 80 pm.
3. Suspenze podle nároku 1 nebo 2, vyznačující se tím, že její viskozita je taková, že objem 90 až 120 ml suspenze, na kterou působí pouze gravitace, vyteče za 25 až 75 sekund otvorem ve dně nádoby mající cylindrickou část s vnitřním průměrem 40 až 50 mm a výškou 55 až 65 mm a kónickou spodní část s výškou 17 až 23 mm, kde otvor ve dně je na spodním konci kónické části jako kruhový otvor o průměru 2 až 3 mm.
4. Suspenze podle nároku 3, vyznačující se tím, že její objem 90 až 120 ml vyteče otvorem ve dně za 30 až 50 sekund.
5. Suspenze podle kteréhokoliv z nároků 1 až 4, v y z n a č u j í c í se tím, že dále obsahuje aprotinin.
6. Způsob přípravy suspenze s fíbrinogenem a trombinem, vyznačující se tím, že se připraví fibrinogenová směs fibrinogenu a alkoholu, trombinová směs trombinu a alkoholu, smísí se fibrinogenová směs a trombinová směs tak, že se získá suspenze tak, že tato suspenze obsahuje fibrinogenové a trombinové částice se středním průměrem částic podle Folka a Warda 25 až 100 pm.
7. Způsob podle nároku 6,vyznačující se tím, že při přípravě fibrinogenové směsi se fíbrinogen předem upraví na mikrometrovou velikost částic tak, že se získají částice se středním průměrem podle Folka a Warda 25 až 100 pm.
8. Způsob podle nároku 6 nebo 7, vyznačující se tím, že fíbrinogen o mikrometrové velikosti částic se vmíchá do alkoholu tak, že se získá fibrinogenová směs.
9. Způsob podle kteréhokoliv z nároků 6až 8, vyznačující se tím, že směs se při přípravě zhomogenizuje.
10. Způsob podle nároku 9, vy z n a č uj i c í se tím, že směs se zhomogenizuje při teplotě 0 až 12 °C.
11. Způsob podle nároku 10, vyznačuj i cí se tím, že směs se zhomogenizuje při teplotě 2 až 8 °C.
12. Způsob podle nároku 11, vy zn a c uj í c í se tím, že během homogenizace se sníží teplota.
13. Způsob podle kteréhokoliv z nároků 6ažl 2, vyznačující se tím, že se použije alespoň jeden z druhů trombinu, jímž je lidský trombin, hovězí trombin nebo rekombinantní trombin.
14. Způsob podle kteréhokoliv z nároků 6ažl3, vyznačující se tím, že se použije alespoň jeden z druhů fibrinogenu, jímž je lidský fibrinogen nebo rekombinantní fibrinogen.
15. Způsob podle kteréhokolivz nároků 6 až 14, vy z n a č uj i c i se tím, že se použije suspenze, která dále obsahuje aprotinin.
16. Způsob podle kteréhokoliv z nároků 6 až 15, vyznačující se tím, že se použije alkohol, jímž je ethanol.
17. Způsob podle nároku 16, vyznačující se tím, že se použije ethanol, jímž je bezvodý ethanol.
18. Způsob podle kteréhokoliv z nároků 6 až 17, vy z n a č uj i c i se tím, že smísení fibrinogenové směsi a trombinové směsi se provede za míchání suspenze.
19. Způsob podle nároku 18, vyznačující se tím, že míchání se provede při teplotě 0 až 12 °C.
20. Způsob podle nároku 19, vyznačuj ící se t i m, že míchání se provede při teplotě 2 až 8 °C.
21. Způsob pokrytí nosiče suspenzí obsahující fíbrinogen a trombin, kde suspenze se získá z fíbrinogenové směsi fíbrinogenu a alkoholu, trombinové směsi trombinu a alkoholu, smísením fíbrinogenové směsi a trombinové směsi tak, že se získá uvedená suspenze obsahující fíbrinogenové a trombinové částice se středním průměrem částic podle Folka a Warda 25 až 100 Lim, vyznačující se tím, že suspenze fíbrinogenu, trombinu a alkoholu se připraví v místě blízkém nosiči a suspenze se nanese na pokrývaný povrch nosiče
22. Způsob podle nároku 21,vyznačující se tím, že jako nosič se použije kolagenový nosič.
23. Způsob podle nároku 22, vyznačující se tím, že jako kolagenový nosič se použije kolagenová houba.
24. Způsob podle nároku 23,vyznačující se tím, že se použije kolagenová houba, která splňuje alespoň jedno z následujících kriterií, jimiž je hodnota pH 5,0 až 6,0, obsah mléčné kyseliny maximálně 5 %, obsah amoniaku maximálně 0,5 %, obsah rozpustného proteinu vypočteného jako obsah albuminu maximálně 0,5 %, obsah síranového popele maximálně 1,0 %, obsah těžkých kovů maximálně 20 ppm, mikrobiologická čistota s maximálně 10³ CFU/g, obsah kolagenu 75 až 100 %, hustota 1 až 10 mg/cm³, modul pružnosti 5 až 10 N/cm.
25. Způsob podle nároku 23 nebo 24, vyznačující se tím, že jako nosič se použije kolagenová houba, která se připraví způsobem obsahujícím přípravu kolagenového gelu, vmíchání vzduchu do kolagenového gelu tak, že se získá kolagenová pěna, vysušení kolagenové pěny tak, že se získá suchý blok nosiče majícího uvnitř dutiny, oddělení částí houby z bloku kolagenové houby s průměrem dutiny větším než 0,75 mm a menším než 4 mm nebo dutinami se středním diagonálním rozměrem 3 mm.
26. Způsob podle kteréhokoliv z nároků 21 až 25,vyznačující se tím, že nanesení suspenze na nosič se provede při teplotě okolí 0 až 12 °C.
27. Způsob podle nároku 26, vyznačující se tím, že nanesení suspenze na nosič se provede při teplotě okolí 1 až 10 °C.
28. Způsob podle nároku 27,vyznačující se tím, že nanesení suspenze na nosič se provede při teplotě okolí 2 až 8 °C.
29. Způsob podle kteréhokoliv z nároků 21 až 28, vyznačující se tím, že nanesení suspenze na nosič se provede v okolní atmosféře s relativní vlhkostí 75 až 99 %.
30. Způsob podle nároku 29, vyznačující se tím, že nanesení suspenze na nosič se provede v okolní atmosféře s relativní vlhkostí 85 až 95 %.
31. Způsob podle kteréhokoliv z nároků 21 až 30, v y z n a č u j i c i se t i m, že na nosič se nanese objem 0,08 až 0,12 ml suspenze na cm² pokrývaného povrchu.
32. Způsob podle kteréhokoliv z nároků 21 až 31, vy z n a ě uj í c i se tím, že suspenze se ditribuuje rovnoměrně po dané šířce pokrývaného nosiče tak, že hmotnost fíbrinogenu na jednotku plochy pokrývaného povrchu se liší maximálně o 25 %.
33. Způsob podle kteréhokoliv z nároků 21 až 32, vyznačující se tím, že pro nanesení suspenze na nosič se použije aplikátor s alespoň jednou tryskou, kde suspenze je vytlačována tryskou, přičemž nosič a tryska se navzájem relativně pohybují.
34. Způsob podle kteréhokoliv z nároků 21 až 32, vyznačujícíse tím, že pro nanesení suspenze na nosič se použije aplikátor obsahující nádobu s množstvím oddělených otvorů a kde suspenze se na nosič vytlačuje z nádoby skrz otvory.
35. Způsob podle nároku 34, vyznačující se tím, že nosič a aplikátor se během nanášení suspenze na nosič navzájem relativně pohybují ve směru pohybu.
36. Způsob podle nároku 35, vyznačující se tím, že se použije rychlost pohybu 0,025 až 0,05 m/s.
37. Způsob podle nároku 36, vyznačující se tím, že se použije rychlost pohybu 0,03 až 0,04 m/s.
38. Způsob podle kteréhokoliv z nároků 34 až 37, v y z n a č u j í c í se t í m, že se použije průtoková rychlost 400 až 600 ml/min suspenze nanášené aplikátorem na nosič.
39. Způsob podle nároku 38, vyznačující rychlost 470 až 550 ml/min.

se t í m, že se použije průtoková
40. Způsob podle nároku 39, v y z n a č uj í c í se t í m, že se použije průtoková rychlost 495 až 505 ml/min.
41. Způsob vysušení suspenze fíbrinogenu, trombinu a alkoholu nanesené jako mokrý potah na pokrývaný povrch nosiče, vyznačující se tím, že pokrytý nosič se vystaví tlaku pod 100 kPa tak, že se získá vysušený pokrytý povrch nosiče tak, že se vysušený potah na pokrytém povrchu zakotví.
42. Způsob podle nároku 41,vyznačující se tím, že suspenze se získá z fíbrinogenové směsi fíbrinogenu a alkoholu, trombinové směsi trombinu a alkoholu, smícháním fíbrinogenové směsi a trombinové směsi tak, že se získá tato suspenze a nosičem je kolagenová houba, která se získá způsobem obsahujícím přípravu kolagenového gelu, vmíchání vzduchu do kolagenového gelu tak, že se získá kolagenová pěna, vysušení kolagenové pěny tak, že se získá suchý blok kolagenové houby mající uvnitř dutiny, oddělení částí houby z bloku kolagenové houby s průměrem dutiny větším než 0,75 mm a menším než 4 mm nebo dutinami se středním diagonálním rozměrem 3 mm a kde se na kolagenovou houbu nanese potah suspenze fíbrinogenu, trombinu a alkoholu připravené na místě v blízkosti kolagenové houby a nanesením suspenze na pokrývaný povrch kolagenové houby.
43. Způsob podle nároku 41 nebo 42, vy z n a ě uj í c i se t i m, že se pokrytý nosič vystaví tlaku pod 100 kPa při teplotě 0 až 12 °C.
44. Způsob podle nároku 43, vy z n a ě uj i c í se t í m, že se pokrytý nosič vystaví tlaku pod 100 kPa při teplotě 1 až 10 °C.
45. Způsob podle nároku 43, vy z n a ě uj i c i se t i m, že se pokrytý nosič vystaví tlaku pod 100 kPa při teplotě 2 až 8 °C.
46. Způsob podle kteréhokoliv z nároků 41 až 45, vy z n a č uj í c i se tím, že se pokrytý nosič vystaví tlaku pod 100 kPa při relativní vlhkosti okolní atmosféry 75 až 99 %.
47. Způsob podle kteréhokoliv z nároků 41 až 46, vyznačující se tím, že se pokrytý nosič vystaví tlaku pod 100 kPa při relativní vlhkosti okolní atmosféry 85 až 95 %.
48. Způsob podle kteréhokolivz nároků 41 až 47, vy z n a č u j i c i se tím, že během sušení se použije proudění vzduchu přes pokrytý nosič.
49. Způsob podle kteréhokoliv z nároků 43 až 48, v y z n a č u j i c í se t i m, že pokrytý nosič se udržuje při uvedené teplotě po dobu alespoň 1 hodiny.
50. Způsob podle kteréhokoliv z nároků 43 až 48, v y z n a č u j i c i se t i m, že pokrytý nosič se udržuje při uvedené teplotě po dobu alespoň 2 hodin.
51. Způsob podle kteréhokoliv z nároků 43 až 48, vyznačující se tím, že pokrytý nosič se udržuje při uvedené teplotě po dobu alespoň 4 hodin.
52. Způsob podle kteréhokoliv z nároků 41až51,vyznačující se tím, že plocha vysušeného pokrytého povrchu je alespoň 75 % z velikosti plochy mokrého pokrytého povrchu.
53. Způsob podle kteréhokoliv z nároků 41 až 51,vyznačující se tím, že plocha vysušeného pokrytého povrchu je alespoň 80 % z velikosti plochy mokrého pokrytého povrchu.

·· » · ·· ·· ···· ···· · · · · · · · • · ♦ ······ • * ··*··♦· ·· ··· ·♦· ·· ·· ··
54. Způsob podle kteréhokoliv z nároků 41 až 53, vyznačující se tím, že nosič a vysušený pokrytý povrch mají obsah vody nepřevyšující 12 % hmotn.
55. Způsob podle kteréhokoliv z nároků 41 až 53, vy z n a č u j i c i se tím, že nosič a vysušený pokrytý povrch mají obsah vody nepřevyšující 8 % hmotn.
56. Způsob podle kteréhokoliv z nároků 41 až 55, vyznačující se tím, že se použije suspenze dále obsahující aprotinin.
57. Pokrytá kolagenová houba s potahem fíbrinogenu a trombinu, kde pokrytá kolagenová houba se získá přípravou kolagenového gelu, vmícháním vzduchu do kolagenového gelu tak, že se získá kolagenová pěna, vysušením kolagenové pěny tak, že se získá suchý blok kolagenové houby mající uvnitř dutiny, oddělení částí houby z bloku kolagenové houby s průměrem dutiny větším než 0,75 mm a menším než 4 mm nebo dutinami se středním diagonálním rozměrem 3 mm, nanesením suspenze fíbrinogenu, trombinu a alkoholu na pokrývaný povrch kolagenové houby a vystavením pokrytého nosiče tlaku pod 100 kPa tak, že se získá vysušený pokrytý povrch nosiče tak, že se vysušený potah na pokrytém povrchu zakotví, v y z n a č u jící se t i m, že pokrytá kolagenová houba má alespoň jednu z následujících vlastností, a to rovnoměrnou distribuci suspenze po dané šířce pokrytého povrchu tak, že hmotnost fíbrinogenu na jednotku plochy pokrytého povrchu se různí o maximálně 25 %, abraze pokrytí je menší než 2,0 mg/cm², když se vzorek pokrytého materiálu o rozměrech 1 cm x 5 cm 2 minuty třepe v testové zkumavce na třepačce Vibrofix při frekvenci 800 až 1200 otáček za minutu.

9*9 9
58. Pokrytá kolagenová houba podle nároku 57, vyznačující se tím, že k jejímu pokrytí se použije suspenze s obsahem vody 20 až 80 mg/ml.
59. Pokrytá kolagenová houba podle nároku 57, vy zn a č uj i c i se tím, že k jejímu pokrytí se použije suspenze s obsahem vody 24 až 32 mg/ml.
60. Pokrytá kolagenová houba podle kteréhokoliv z nároků 57 až 59, vyznačující se t i m, že obsah trombinu v suspenzi pro pokrytí je 20 až 40 IU/ml.
61. Pokrytá kolagenová houba podle kteréhokoliv z nároků 57 až 59, vyznačující se tím, že obsah trombinu v suspenzi k pokrytí je 24 až 33 IU/ml.
62. Pokrytá kolagenová houba podle kteréhokoliv z nároků 57 až 61, vyznačující se tím, že má v průměru obsah trombinu 2 až 4 IU/cm²pokrytého povrchu.
63. Pokrytá kolagenová houba podle kteréhokoliv z nároků 57 až 61, vyznačující se tím, že má v průměru obsah trombinu 2,3 až 3,3 IU/cm²pokrytého povrchu.
64. Pokrytá kolagenová houba podle kteréhokoliv z nároků 57 až 63, vyznačující se tím, že obsah trombinu na kterémkoliv místě pokrytého povrchu nepřevýší 5 IU/cm².
65. Pokrytá kolagenová houba podle kteréhokoliv z nároků 57 až 63, • · ·· • » ·99 ♦ • · · • · · vyznačující se tím, že obsah trombinu na kterémkoliv místě pokrytého povrchu houby nepřevýší 3,8 IU/cm².
66. Pokrytá kolagenová houba podle kteréhokoliv z nároků 57 až 65, vyznačující se tím, že má mikrobiologickou čistotu s maximálně 4 CFU/cm².
67. Pokrytá kolagenová houba podle kteréhokoliv z nároků 57 až 65, vyznačující se tím, že má mikrobiologickou čistotu s maximálně 2,25 CFU/cm².
68. Použití pokryté kolagenové houby pro lepení tkáně, utěsnění tkáně a zástavu krvácení, kde kolagenová houba má pokrytí s fibrinogenem a trombinem, kde pokrytá kolagenová houba se získá způsobem obsahujícím přípravu kolagenového gelu, vmíchání vzduchu do kolagenového gelu tak, že se získá kolagenová pěna, vysušení kolagenové pěny tak, že se získá suchý blok kolagenové houby mající uvnitř dutiny, oddělení částí houby z bloku kolagenové houby s průměrem dutiny větším než 0,75 mm a menším než 4 mm nebo dutinami se středním diagonálním rozměrem 3 mm, nanesení suspenze fibrinogenu, trombinu a alkoholu na pokrývaný povrch kolagenové houby a vystavení pokrytého nosiče tlaku pod 100 kPa tak, že se získá vysušený pokrytý povrch nosiče tak, že se vysušený potah na pokrytém povrchu zakotví, přičemž pokrytá kolagenová houba má alespoň jednu z následujících vlastností, a to rovnoměrnou distribuci suspenze po dané šířce pokrytého povrchu tak, že hmotnost fibrinogenu na jednotku plochy pokrytého povrchu se různí o maximálně 25 %, abraze pokrytí je menší než 2,0 mg/cm², když se vzorek pokrytého materiálu o rozměrech 1 cm x 5 cm 2 minuty třepe v testové zkumavce na třepačce Vibrofix při frekvenci 800 až 1200 otáček za minutu.