BG108121A

BG108121A - Но'и'...л ' 'върд "ибриног...н и 'върд 'ромбин

Info

Publication number: BG108121A
Application number: BG108121A
Authority: BG
Inventors: Dagmar Stimmeder
Original assignee: Nycomed Pharma As
Priority date: 2001-01-25
Filing date: 2003-08-21
Publication date: 2004-08-31
Also published as: PL205181B1; SK10342003A3; CN1487843A; CA2434964A1; AR032400A1; BRPI0206705B8; DE60203364T2; DK1368419T3; SK10362003A3; PL366932A1; BR0206705B1; CL2015003111A1; AU2002307809B2; EG26417A; HRP20030648A2; EA200401463A1; MXPA03006689A; EE200300341A; ES2253523T3; CA2435159A1

Description

ПРЕДХОДНО НИВО НА ТЕХНИКАТА

Търговските фибринови лепила, които имитират последната стъпка на коагулационната каскада, се състоят от силно концентриран ч«»<

фибриногенов разтвор, смесен с разтвор на тромбин преди прилагането му върху съществуваща хирургична рана. Тези смеси съдържат инхибитор на фибринолизиса, напр. апротинин или εаминокапроева киселина за предотвратяване на преждевременното разтваряне на фирбиновото покритие от фирбинолитичния ензим плазмин. Тези двукомпонентни фибринови лепила са безценни при различни хирургични процедури, но могат да се отмиват преди настъпване на спиране на кръвотечението, ако кървенето е силно. Двукомпонентните фибринови лепила в допълнение изискват някои подготвителни стъпки, включващи топене или разтваряне. По този начин те са твърде непрактични и тромави за работа и е необходим опит за успешната употреба на тези лепила.

През последното десетилетие множество техники с фибринови лепила станаха предпочитани методи в хирургията при редица показания. Обаче, в болшинството от случаите с фибринови лепила допълнително се прилага колагенов мъх за подобряване на спиране на кръвотечението и прилепващите качества, което показва техните недостатъци и ограничената им употреба от хирурзите.

Колагенът е употребяван като кръвоспиращ агент от края на шестдесетте. Колагенът е най-често срещащият се структурен белтък във всички бозайници. Мономерният белтък от около 300 kDa (тропоколаген) е ковалентно напречно свързан на специфични места. Зрелият белтък следователно, е неразтворим и образува характерни влакна с висока якост на скъсване. Описани са многобройни подкласове колаген, между които най-често срещащият се е колаген тип I, основният тип колаген на кожата, сухожилията, костите и роговицата. Колагенът е фибрилен белтък, състоящ се от тройна спирала с дължина от около 290 nm. Пет такива тройни спирали (тропоколагенови молекули), разположени зигзагообразно, образуват микрофибрила с диаметър от около 3.6 nm. Тези микрофибрили имат полярни и неполярни сегменти, които са лесно достъпни за специфични интер- и интраспецифични ' взаимодействия. Микрофибрилите се пакетират в тетрагонална решетка и образуват субфибрили с диаметър от около 30 nm. Тези субфибрили след това се опаковат в колагенова фибрила, основната едница на съединителната тъкан, която има диаметър от няколко стотин nm и следователно е видима със светлинен микроскоп като тънка линия, виж литературен източник 1. Колагеновият гел и * колагеновата пореста маса, получавани при производствения процес, се състоят от такива фибрили като най-малки градивни елементи, както се доказва от микроскопирането.

Колагенът може да се използва като материал за затваряне на рани, възможно с покритие, характеризиращо се с това, че се състои от фибриново лепило. Фибриновите лепила, т.е. комбинация от фибриноген, тромбин и апротинин, успешно се прилагат за терапевтични цели от много години за залепяне на тъкан и нерви и за затваряне на повърхности, когато има малко кървене. Един недостатък на фибриновите лепила е, че в случай на обилно кървене лепилото обикновено се отмива преди да се извърши достатъчна полимеризация на фибрина. За преодоляване на проблема хирурзите ръчно прилагат течни фибринови лепила върху абсорбиращи носители, такива като колагенов мъх.

Независимо от забележителния успех на тези комбинирани приложения този метод все още не се прилага в голям мащаб поради някои недостатъци. Препаратът е относително обременителен, методът изисква опитен и умел персонал и препаратът не е лесно наличен при спешни случаи - времето за доставяне на препарата е 10 до 15 мин. Тези фактори стимулират разработването на подобрен продукт, като резултатът е получаването на фиксирана смес от колагенов носител, покрит с покритие от твърд фибриноген, твърд тромбин и твърд апротинин, като е описано в ЕР 0 059 265.

Функцията на колагеновия носител, представена в ЕР 0 059 265, е основно такава, че това е носител, който адсорбира и придава механична стабилност на коагулационния препарат, с който е покрит.

Разработен е един продукт, който комбинира кръвоспиращите характеристики на фибриновото лепило с качествата на колагена като носител, и се произвежда под търговската марка TachoComb®. TachoComb® е готов за употреба и представлява лесно прилагаща се стабилна комбинация от колагенов пластир, покрит със следните активни компоненти на фибриново лепило: човешки фибриноген, говежди тромбин и говежди апротинин.

TachoComb® се продава от началото на 90те години на миналия век от Nycomed Pharma и е използван за клинични случаи в Европа при над 2500 пациенти. Продуктът допълнително е използван от над 700 пациента в Японската клинична програма при голямо разнообразие на случаи, като разрези на черен и бял дроб, хирургични операции на жлъчка, далак, бъбреци панкреас, УНГ хирургични намеси, гинекологични операции и съдова хирургия. Установено е, че TachoComb® е ефективен и безопасен.

Не са докладвани клинични усложнения, свързани с приложението на TachoComb®, по време на проведените клинични изпитания.

Обаче, в три от случаите в Япония се регистрират антитела срещу апротинина.

Докладвани са общо 37 спонтанни сериозни Странични Лекарствени Реакции (СЛР) през годините на клинична употреба на хиляди партиди TachoComb®. Шестнадесет от тези СЛР могат теоретично да се свържат с реакции срещу компоненти на TachoComb® (възпаления, треска, еозинофилия, удължено протромбиново време, свръхчувствителност, имунологични или алергични реакции). Една СЛР (имунологичен отговор) очевидно е свързана с лечението с TachoComb®.

В WO97/37694 (Immuno France S.A.) е включен пример 4, при който когато се употребява колагенов продукт на TachoComb® не се наблюдава достигане на спиране на кръвотечението, водещо до смъртоносно кървене, за разлика от достигането на спиране на кръвотечението 5 минути след прилагането на колагенов продукт без съдържание на тромбин, изготвен съгласно WO97/37694.

В W096/40033 недостатъците на говеждия тромбин, използван в TachoComb®, са показани с това, че употребата на тромбин от говежди или други източници може да доведе до сериозна вирусна зараза и възможно пренасяне на говежди заболявания, като напр. говеждия спонгиоформен енцефалит.

ДЕТАЙЛНО ОПИСАНИЕ

Настоящето изобретение се отнася до твърд състав, характеризиращ се с това, че се състои основно от носител, който притежава поне едно от следните физически качества коефициент на еластичност в обхвата 5 - 100 N/cm, напр. 10 - 50 N/cm;

плътност от 1 - 10 mg/cm , напр. 2-7 mg/cm ;

диаметър на камерата по-голям от 0.75 mm и по-малък от 4 mm и/или среден диаметър под 3 mm и равномерно разпределен и стабилизиран върху въпросния носител

б) твърд фибриноген и

в) твърд тромбин.

Съставът може да притежава две, три или всичките гореспоменати физически характеристики. В предпочитани понастоящем варианти материалът на носителя се произвежда както е описано в DK РА 2001 00135 и още в заявката озаглавена «Метод за изготвяне на колагенова пореста маса, устройство за екстрахиране на част от колагенова пяна и изтеглена колагенова пореста маса», подадена от Nycomed Pharma AS на 25 Януари, 2002 с приоритет на въпросната заявка. В настоящия контекст терминът “диаметър на камерата” трябва да се подразбира като най-дългото по права линия разстояние от стена до стена в камерата, т.е. като най-дългото по права линия диагонално разстояние в камерата. Камерата може да бъде с полигонална форма, напр. с октогонална форма. По този начин, когато носителят се среже, камерите се разделят и срязват до получаване на каверни. Твърдият фибриноген и твърдият тромбин са фиксирани към носителя и по-голямата част от тях е в каверните, като главно по този начин се осигурява равномерното разпределение на твърдия тромбин и твърдия фибриноген. Благодарение на това и на фиксирането е възможно да се вкарат основни количества фибриноген и тромбин в носителя за разлика от ситуацията, където течни смеси от тромбин и фибриноген се внасят на капки или като шпрей в материала.

Изготвяне на покрития носител

Изготвянето на покрития носител се състои главно от

- изготвяне на суспензия от активните съставки

- равномерно разпределение на суспензията върху носителя

- изсушаване на покрития носител до твърда смес / фиксиране на активните съставки към носителя.

Изготвянето на суспензията с фибриноген и тромбин се състои от:

- осигуряване на фибриноагенна смес от фибриноген и алкохол, напр.етанол

- осигуряване на тромбинова смес от тромбин и алкохол, напр. етанол

- смесване на фибриногенната смес и тромбиновата смес за получаване на въпросната суспензия.

На стъпката на осигуряване на смесите, сместа може да бъде хомогенизирана или пресята за получаване на суспензия, съдържаща частици от фибриноген и тромбин със среден диаметър на частиците по Folk Ward от 25 - 100 pm. Температурата е между 0°С и 12°С.

Носителят може да бъде колагенов носител, като напр. колагенова пореста маса. Колагеновата пореста маса може да отговаря на поне един и за предпочитане на болшинството от следните критерии:

- pH стойност между 5.0 и 6.0,

- съдържание на млечна киселина най-много 5 %,

- съдържание на амоняк най-много 0.5 %,

- съдържание на разтворим белтък, изчислено като съдържание на албумин, най-много 0.5 %,

- съдържание на сулфатна пепел най-много 1.0 %,

- съдържание на тежки метали най-много 20 ppm,

- микробиологична чистота, най-много 10³ CFU/g,

- съдържание на колаген от 75 % до 100 %,

- плътност от 1- 10 mg/cm³,

- коефициент на еластичност в обхвата на 5 - 100 N/cm.

В настоящия предпочитан вариант колагеновият носител се изготвя както е описано в DK РА 2001 00135. Физическите качества на три примера за колагенови носители са представени в таблицата подолу:

Пример	I	II	III
pH стойност	5.3	5.1	5.4
Съдържание на млечна киселина	2.3 %	2.8 %	2%
Съдържание на амоняк	0.1 %	0.2 %	0.1 %
Съдържание на разтворим белтък	0.04%	0.05%	0.08%
Съдържание на сулфатна пепел	0.3 %	0.3 %	0.3 %
Микробиологична чистота (CFU/g)	< 12-345	< 18-124	< 11-33
Съдържание на колаген по отношение на сухата маса	95%	95%	98%
Съдържание на вода	14%	15%	16%
Коефициент на еластичност	10.4-42.1 N/cm	15-50 N/cm	12.3-41.0 N/cm
Размер на камерата (диаметър; средна стойност)	2.9 mm	2.1 mm	2.9 mm
Плътност	2.9-5.3 mg/cm³	2.9-5.9 mg/cm³	2.4-5.0 mg/cm³

Равномерното разпределение на суспензиите се извършва или чрез устройство за разпръскване на капки, както е описано в US патент № 5,942,278 и 6,177,126 или може да се използва апликатор, е поне един кран, за полагане на суспензията върху носителя. Апликаторът с един кран форсира суспензията през крана, докато носителят и крана се местят един спрямо друг. Апликаторът може да се съдържа или да се прикрепи към конвейерен ремък, действаща единица свързана с помпа или система от помпи, или друго спомагателно оборудване и кран или система от кранове, които се движат в срещуположни посоки, напр. под прав ъгъл към конвейерния ремък. Процесът на покриване може да се инициира от светлинна бариера, сензорно регистрираща наличието на носител върху конвейерния ремък и по същия начин може да се спре от светлинен бариерен сигнал. Такъв апликатор притежава относително малък мъртъв обем и е лесен за употреба, включително лесен за почистване. Нещо повече, той притежава способността да прекъсва покриването по всяко време, приложим е в относително широк обхват на вискозитети и осигурява равномерно покритие.

И двете системи прилагат обем от 0.08 ml - 1.12 ml суспензия на cm²А носител.

Важна стъпка е изсушаването на суспензията от фибриноген, тромбин и алкохол, положена като мокро покритие върху повърхността за покриване от носителя. Пример за един метод е този, характеризиращ се с това, че включва стъпка на подлагане на покрития носител на налягане под 1000 mbar, така че да се получи изсушена повърхност с покритие върху носителя и фиксиране на изсушеното покритие към повърхността за покриване. Прилагайки вакуум и използвайки вакуум в процеса на изсушаване трябва да се поддържа ниска температура (2 - 10°С) и висока относителна влажност (80 - 95 %) за поддържане на структурата и физическите качества на носителя, по-специално на носителя под формата на колаген, напр. колагенова пореста маса, и на фибриногена и тромбина.

Терминът “състои се основно от” означава, че всичките три компонента са незаменими и необходими за изобретението. Обаче, несъществени добавки като калциеви йони и оцветяващ маркер, напр. рибофлавин, могат също така да се включат в състава. Съставът допълнително може да съдържа други полезни съставки като една или повече фармацевтично активни субстанции, които могат напр. да се подберат измежду група, състояща се от антибиотици като антибактериални или антимикотични, и антинеопластични агенти.

Въпреки, че материалът на носителя за предпочитане е колагенова пореста маса, която се състои от колаген тип I от бозайници, трансгенни или рекомбинантни източници, той може да се изработва и от други типове колаген, напр. колаген тип I, II, III, IV, VII и X. Обаче, предвижда се също така носителят да бъде биоразградим полимер, като напр. полихиалуронова киселина, полихидрокси киселина, напр. млечна киселина, глюконова киселина, хидроксибутаноева киселина, целулоза или желатин.

В предпочитан вариант на изобретението, съставът съдържа носител, който притежава един или повече активни места, в който фибриногенът присъства в количества от 2 - 10 mg/cm², напр. 4.3 6.7 mg/cm², за предпочитане около 5.5 mg/cm² и тромбинът присъства в количество от 1.0 - 5.5 IU/cm , за предпочитане около 2.0 IU/cm . Фибриногенът и/или тромбинът за предпочитане е човешки, напр. пречистен от природни източници чрез методи, известни на тези е опит в тази област на техниката, или трансгенен или рекомбинантен човешки фибриноген и/или тромбин, произведен по методи, известни на тези с опит в тази област на техниката.

Известните продукти TachoComb®, Beriplast® и TissueSeal® съдържат апротинин или подобни антифибринолитични агенти. Апротининът може да се осигури само от говежди източник. Задача на настоящите изобретатели е да се разработи състав с подобрен материал за носител и компоненти само от човешки, рекомбинантен или трансгенен произход. Ето защо, извършват се разработки по отношение на материала на носителя и се проучва дали е възможно заместването на говеждия тромбин е човешки тромбин и избягване на апротинина. Изобретателите работят за постигане на тази цел прилагайки един двустъпален процес.

Първо, TachoComb Н се разработва като се използва продукта TachoComb®, в който говеждият тромбин се заменя е човешки тромбин. Натрупан е клиничен опит е TachoComb Н при редица терапевтично потвърдени (фаза Ша) клинични изпитания е индикации спиране на кръвотечението, залепяне на тъкан и затваряне на такива. Все още непубликуваните резултати, получени при тези изследвания, потвърждават ефикасността и безопасността на TachoComb Н при контролиране на кървенето и непропускането на въздух, като по този начин той като спомагателен терапевтичен агент при шиене по време на спиране на кръвотечението, залепяне на тъкан и затваряне на такива при хирургична интервенция. Поспециално, ефикасността на TachoComb Н при достигане на локално спиране на кръвотечението, изразяваща се в значително намаление на времето за достигането му в сравнение с контролите, беше убедително показана при съдова и чернодробна хирургия.

Освен това, установено е, че TachoComb Н може да редуцира белодробни дефекти по големина, което редуциране води до побързо преодоляване на изпускането на въздух и може да е полезно при затварянето на сериозни белодробни течове и при емфиземни бели дробове.

Обаче TachoComb® и TachoComb Н съдържат апротинин като интегрална част от продукта. Апротининът се счита за необходим за инхибиране на възможната конверсия на малки количества от плазминоген в плазмин във фибриногенния компонент и като предотвратяващ преждевременния лизис на фибриновото покритие, особено при хиперфирбинолитични условия.

Настоящите изобретатели са аранжирали нови експерименти с цел да изследват хипотезата за необходимостта от апротинин. In Vitro експериментите показват антифибринолитична защита от апротинина в покритие и, че TachoComb® без апротинин (TachoComb S) не се разтваря за кратък период от време. Следователно, стресирани животински модели бяха използвани и TachoComb S беше сравняван с TachoComb Н за доказване на подобната ефикасност. Във всички модели TachoComb Н или S, съответно бяха използвани като единствено средство за достигане на спиране на кръвотечението.

Бяха проведени четири обширни експериментални серии с цел проучване на ефикасността и хистопатологичния модел, съгласно настоящия предпочитан вариант на изобретението, на TachoComb S сравнен с този на TachoComb Н. TachoComb S или TachoComb Н бяха прилагани върху черен дроб, далак, панкреас или мозък/менинги от кучета, прасета или зайци. Експериментите бяха аранжирани по такъв начин, че да наподобяват нормални хирургични условия, силно стресиращи условия и хиперфибринолитични условия.

Резултатите, получени при тези четири изследвания не показаха съществени разлики между TachoComb S и TachoComb Н. И двата продукта имаха подобно поведение по отношение на ефикасността на спиране на кръвотечението и тази за затваряне на рани, включително при стресиращи условия като повишено вътрешноорганно налягане или хиперфибринолизис, индуциран от локално приложение на r-tPA.

Може да се заключи, че предклиничната програма, аранжирана да оцени цялостната необходимост от апротинин като компонент на TachoComb Н, доказва подобна ефикасност на TachoComb S и TachoComb Н. И двата продукта се използват успешно като единствени средства за достигане на спиране на кръвотечението, за залепяне на тъкан и затваряне на същите при всички експериментални условия. В хода на експериментите с животни не се наблюдаваха нежелани тъканни реакции. Следователно, апротиниът бе елиминиран от състава, съгласно изобретението.

Съставът, съгласно изобретението, се очаква клинично да засили спирането на кръвотечението, залепящите и затварящи качества на своите предшественици и да притежава същия или по-задоволителен профил на безопасност. Липсата на апротинин, който понастоящем е наличен само от говежди източник, допринася за допълнителна безопасност срещу реакции на хиперчувствителност. В това отношение трябва да се отбележи откриването на антитела срещу апротинин в три от изследваните случаи в Япония. При състава без апротинин такъв имунологичен отговор не се очаква.

В настоящия предпочитан вариант изобретението се отнася до състав за спиране на кръвотечението, за залепяне на тъкан и затваряне на такива, който се характеризира с това, че включва гъвкав носител, който притежава поне едно от следните физически качества:

коефициент на еластичност в обхвата 5-100 N/cm, напр. 10-50 N/cm;

плътност от 1 - 10 mg/cm³, напр. 2-7 mg/cm³;

диаметър на камерата по-голям от 0.75 mm и по-малък от 4 mm и/или среден диаметър под 3 mm и който допълнително съдържа твърд фибриноген и твърд тромбин и не съдържа никакъв антифибринолитичен агент като напр. апротинин, ε-аминокапровона кисели или а2-антиплазмин като твърдият фибриноген и твърдият тромбин са прикрепени към носителя по такъв начин, че абразията е по-малка от 1.0 mg/cm , когато проба от покрития материал се разтърси на Vobrofix шейкър с честота от около 1000 грт за 2 минути и ако покритият материал се постави в ендоскопично оборудване и след това се отстрани, материалът остава основно непроменен и търпи отнемане на покриващия материал по-малко от 20 %, което е индикация за гъвкавост на носителя и за здравото адхезиране на твърдия фибриноген и твърдия тромбин и въпросният материал е основно непропусклив за въздух и течност и притежава фактор на еластичност от най-малко 1.25, както е определено от теста, представляващ фиксиране на покрития носител към лист от Latex, трикратно разширяване на листа чрез налягане и измерване на площта на покрития носител в най-високата точка на ч» разширяване на листа и сравняване на разширената площ от покрития носител с началната площ на покритата област.

Предпочитаният вариант на изобретението, характеризиращ се с това, че фибриногенът и тромбинът са човешки, напр. пречистени от природен източник, трансгенен или рекомбинантен човешки фибриноген и тромбин, е единственият наличен не-говежди фибрин с фиксирана комбинация от активни компоненти, покрити върху гъвкав носител, притежаващ следните предимства:

ч Готов за употреба, не е необходимо време за разтапяне или процедура по изготвяне

Лесно приложим директно върху повечето тьканни или органни повърхности

Възможност за ендоскопско приложение

Без проблеми по отношение на спиране на кръвотечение като изтичане или отмиване от целевата площ

Комбиниране на залепящия ефект на фибриновото покритие и механичната подпора на гъвкавия носител

Висока гъвкавост и устойчивост на тежки опъвания и компресии Ефективно спиране на кръвотечениено и затваряне на тъкан за 3 - 5 минути

Предпочитан профил на безопасност, т.е. няма говежди компоненти Биоразградимост, оставяща само леки тьканни белези

Може да се съхранява при +2°С до +8°С с очакван период на съхранение от 36 месеца, или при стайна температура за период от най-малко 2 години.

Причината за разработване на предпочитания вариант на изобретението се корени в желанието да се отстрани поне говеждия компонент с цел да се предотврати всеки, дори теоретичен, риск от предаване на болести от говеда на хора, включително предаването на спонгиоформни енцефалопатии (TSE). По този начин активните компоненти фибриноген и тромбин са от човешки произход и говеждия апротинин, инхибитор на фибринолитичния ензим плазмин, е отстранен. Така, предимство на предпочитания състав съгласно изобретението несъдържащ говежди компонети е, че рискът от пренасяне на болести, включително говежди спонгиоформен енцефалит (BSE) чрез говежди материал, се елиминира.

Подобно на други фибринови лепила, съставът съгласно изобретението, работи чрез репродуциране на последната стъпка от кръвосъсирващата каскада. Смес от фибриноген и тромбин образува смесен твърд слой върху повърхността на гъвкав носител. При контакт с течност, напр. кървяща повърхност, телесни течности или физиологичен разтвор, компонентите на слоя се разтварят, дифундират в кухините на раната и започват да реагират.

Полимеризационният процес води до силна адхезия между повърхността на раната и парчето носител. През времето, необходимо за залепянето, напр. 3-5 минути, съставът, съгласно изобретението, трябва за предпочитане да се притиска внимателно върху наранената повърхност. Парчето носител осигурява механична поддръжка, която позволява тампониране на раната. Парчето поддържа коагулационните компоненти на място, когато раните са силно кървящи и предотвратява потенциалното повторно кървене. Механизмът на действие включва конверсия чрез тромбина на фибриногена във фибрин посредством разцепване на пептидите. Фибриновите мономери спонтанно полимеризират във фибринови вериги, образувайки вискозно и еластично покритие, което залепя парчето носител към повърхността на раната. Фибриновият матрикс следователно служи като скеле за мигрирането на фибринобласта (Фиг. 8).

Като двукомпонентен адхезив повърхността на раната и носителя се слепват заедно чрез полимеризация. Механичната стабилност на парчето носител добавя ефект на тампониране към ефекта на спиране на кръвотечението на фибриновото покритие. Нещо повече, активните съставки присъстват само върху повърхността на носителя, с лице към раната и благодарение на тампониращия ефект и лекото притискане те не дифундират през носителя. Следователно, и за разлика от ситуацията, когато се прилагат повечето фибринови лепила, няма адхезия между наранената област, покрита със състава, съгласно изобретението, и другите органи или техни части, когато се употребява състава, съгласно изобретението.

За разлика от цианоакрилатното и желатин-резорцин-формалдехид (ЖРФ) лепила, които са силно хистотоксични към паренхимната тъкан, твърдият състав, съгласно настоящето изобретение, се разгражда физиологично и замества от тъкан в рамките на няколко седмици или месеца след прилагането, главно по два механизма:

1. Фибриновото покритие се разгражда частично чрез фибринолизис и частично чрез клетъчна фагоцитоза.

2. Носителят се разгражда слой след слой чрез абсорбционна гранулационна тъкан и превръща в псевдокапсула, състояща се от ендогенна съединителна тъкан.

Съставът, съгласно изобретението, е полезен за кръвоспиране, залепяне на тъкан, затваряне на тъкан, по-специално при хирургична интервенция в стомашно чревния тракт, като езофагус, стомах, тънки черва, дебели черва, право черво, паренхимни органи като черен дроб, далак, панкреас, бъбреци, бели дробове, надбъбречни жлези, тиреоидни и тимусни възли, сърдечносъдова хирургия, торакална хирургия включително хирургична намеса в трахеята, бронхите или белите дробове, хирургична интервенция в областта на ухото, носа и гърлото (УНГ) включително зъбна хирургия, гинекологични, урологични, костни (напр. спонгиозна резекция на) операции и спешна медицинска помощ, неврологична хирургия, лимфатични, жлъчни и цереброспинални фистули (ЦСФ) и изпускане на въздух по време на торакална и белодробна хирургия. Настоящето изобретение се отнася също така и до употреба на този състав за гореспоменатите цели.

Трябва да се отбележи, че съставът, съгласно изобретението, е главно непропусклив за въздух и течност, което е причина продуктът да е особено полезен за лечение на лимфатични, жлъчни и цереброспинални фистули и изпускане на въздух по време на белодробни и торакални хирургични намеси. В допълнение, поради факта, че продуктът е особено непропусклив за течности, той е особено полезен в хирургични операции на силно кървящи органи като черен дроб и далак и за операции в стомашночревния тракт.

Продуктът, съгласно изобретението, е приложим когато кървенето или изпускането на въздух, лимфа, жлъчен и ЦСФ секрет не може да се контролира по конвенционален начин или когато тези методи могат да доведат до нежелани резултати.

Носителят за предпочитане е колагенова пореста маса, мъх или парче, които термини се използват като синоним в настоящата спецификация и претенции. Компонентите колаген, фибриноген и тромбин за предпочитане са от бозайници. За предпочитане твърдите компоненти са с човешки произход. Колагенът, фибриногенът и тромбинът могат или да се пречистят от природен източник или рекомбинант или трансгенен човешки фибриноген и/или тромбин.

Понастоящем предпочитан източник на колаген е конския. С цел да ч се предотврати трансмисията на вируси, дължаща се на контаминация с конски вируси, които са патогенни за хората, чрез колагеновото парче, важна предохранителна мярка е подходящата селекция на източника на материал и инактивирането на потенциални патогенни агенти по време на производствения процес.

ЛЕГЕНДА КЪМ ФИГУРИТЕ

Фигура 1

1.1 Opraskin®: не-покрит/покрит

1.2 Покрит Opraskin®: вкарване в ендоскопично оборудване

1.3 Покрит Opraskin: разгънат след вкарването в ендоскопичния прибор.

Фигура 2

2.1 Willospon® forte: не-покрит/покрит

2.2 Покрит Willospon® forte: вкарване в ендоскопично оборудване

2.3 Покрит Willospon® forte: разгънат след вкарването в ендоскопичния прибор.

Фигура 3

3.1 Willospon® Spezial: не-покрит/покрит

3.2 Покрит Willospon® Spezial: вкарване в ендоскопично оборудване

3.3 Покрит Willospon® Spezial: разгънат след вкарването в ендоскопичния прибор.

Фигура 4

4.1 Ethisorb® Patch: не-покрит/покрит

4.2 Покрит Ethisorb® Patch: вкарване в ендоскопично оборудване

4.3 Покрит Ethisorb® Patch: разгънат след вкарването в ендоскопичния прибор.

Фигура 5

5.1 Tabotamp® NU Knit: не-покрит/покрит

5.2 Покрит Tabotamp® NU Knit: вкарване в ендоскопично оборудване

5.3 Покрит Tabotamp® NU Knit: разгънат след вкарването в ендоскопичния прибор.

Фигура 6

6.1. Пореста маса Nycomed: не-покрита/покрита

6.2 Покрита пореста маса Nycomed [лабораторна проба]: вкарване в

ендоскопично оборудване

6.3 Покрита пореста маса Nycomed [лабораторна проба]: разгъната след вкарването в ендоскопичния прибор

6.3 Покрита пореста маса Nycomed [производствена проба = TachoComb®]: разгъната след вкарването в ендоскопичния прибор Фигура 7

Ендоскопичен прибор: Endodock®

Фигура 8

Коагулация на кръв и деградация на покритието и парчето носител. Активните компоненти от покритието на носителя са показани в сиво оцветените блокове.

ПРИМЕРИ

Примери I - IV по-долу илюстрират различните процедури по изготвяне на покритието от колагенова пореста маса е различни сурови източници на фибриноген и тромбин.

Сурови източници на фибриноген

Компонент	% от общата съставка
	Състав А	Състав Б	Състав В
Човешки фибриноген	36-52	42-47	36-52
Човешки албумин	16-24	20-24	16-24
Общ белтък	52-76	62-71	52-76
Натриев хлорид	8-14	0	8-14
Тринатриев цитрат	2-4	1-3	2-4

Аргинин (хидрохлорид)	15-26	15-21	15-26
Глицин	0	6-9	1-2
Хистидин	0	3-5	0
Захароза	0	0	1-2
Остатъчна влажност	<=2	2-4	<= 1.5

Сурови източници на тромбин

Смес	Активност (i.U./mg съставка)	Остатъчна влажност	Добавка на допълнителни съставки
Човешки тромбин А	360-540	<=3%	Човешки албумин, натриев хлорид, натриев цитрат
Човешки тромбин Б	7-10	<=3%	Човешки албумин, натриев хлорид, натриев цитрат
Човешки тромбин В	35-60	<=3%	Човешки албумин, натриев хлорид, натриев ацетат, глицин

ПРИМЕР I

В настоящия пример суспензията съдържа човешки фибриноген, състав Б и човешки тромбин, състав Б.

Получава се суспензия с краен обем 3500 ml чрез прилагане на следните количества и параметри:

Фирбиногенна смес:

- 2800 ml етанол (94 % при 2оС - 8°С)

- 492.5 g човешки фирбиноген, състав Б

- 493.5 mg рибофлавин фибриногенната смес се съхранява за 8 - 16 часа при 2 - 8°С при разбъркване.

• Тромбинова смес:

- 100 ml етанол (100 % при-30°С)

- 12.27 g човешки тромбин, състав Б

Тромбиновата смес се съхранява за 8 - 16 часа при -30°С.

_г Суспензия:

- 157 ml от тромбиновата смес се добавят към фибриногенната смес.

- 94 % етанол при 2 - 8°С се добавя за довеждане на обема на суспензията до 3500 ml.

Характеристики на суспензията:

1. Концентрация на етанол: 94.3 %

2. Седиментационно поведение:

а) седиментационен обем 5 мин след началото: 98 % от тест обема,

б) седиментационен обем 24 часа след началото: 64 % от тест обема.

'йща#¹ 3. Размер на частиците (среден диаметър по Folk Ward): 56.4 + 1.3 pm.

Носителите под формата на колагенови ивици се покриват със суспензия. Първо, 48 ивици от колагенова пореста маса предварително се инкубират в охладителна камера при следните условия:

Температура: 5.2°С

Абсолютна влажност: 4.8 g вода за kg въздух

Време на инкубиране: 18.5 часа

Покритите ивици от колагенова пореста маса се изсушават както следва:

Покритите ивици се инкубират за 15 минути при температура от 5.2°С и абсолютна влажност от 4.8 g вода на kg въздух.

Покритите ивици след това се изсушават във вакуумна сушилня при следните условия на изсушаване:

- Овлажняване: температура 5.2°С, абсолютна влажност от 4.8 g вода на kg въздух

- Въздушен поток през аспирационната клапа: 23 ш³ на час

- Вакуум: 59 mbar

- Време на изсушаване: 4 часа

Абразията на полученото покритие върху колагеновата пореста маса е приблизително 0.2 mg/cm², при разтърсване на шейкър Vibrofix с честота от 800 - 1200 rpm за 2 минути.

ПРИМЕР II

В настоящия пример суспензията съдържа човешки фибриноген, състав В и човешки тромбин, състав В.

Фирбиногенна смес:

- 2252 ml етанол (94 % при 2°С - 8°С)

- 370.7 g човешки фирбиноген, състав В

- 493.5 mg рибофлавин

Фибриногенната смес се съхранява за 8 - 16 часа при 2 - 8°С при разбъркване.

Тромбинова смес:

- 188 ml етанол (100 % при -30°С)

- 12 ампули човешки тромбин, състав В (10650 I.U./vial)/12 ml вода за впръскване.

Тромбиновата смес се съхранява за 8 - 16 часа при -30°С. Суспензия:

- 164.5 ml от тромбиновата смес се добавят към фибриногенната смес.

- 94 % етанол при 2 - 8°С се добавя за довеждане на обема на V суспензията до 3500 ml.

Характеристики на суспензията:

1. Концентрация на етанол: 94.1 %

2. Седиментационно поведение:

а) седиментационен обем 5 мин след началото: 94 % от тест обема,

б) седиментационен обем 24 часа след началото: 71 % от тест обема.

3. Размер на частиците (среден диаметър по Folk Ward): 49.2 + 0.93 pm.

w· Носителите под формата на колагенови ивици се покриват със суспензия. Първо, 48 ивици от колагенова пореста маса предварително се инкубират в охладителна камера при следните условия:

- Температура: 4.8°С

- Относителна влажност: 90.3 %

- Време на инкубиране: 22.25 часа

Покритите ивици се инкубират за 13 минути при температура от 4.9°С и абсолютна влажност от 4.8 g вода на kg въздух.

- Овлажняване: температура 5.2°С, абсолютна влажност от 4.9 g вода на kg въздух

- Въздушен поток през аспирационната клапа: 25 ш³ на час

- Вакуум: 60 mbar

- Време на изсушаване: 4 часа

Абразията на полученото покритие върху колагеновата пореста маса е приблизително 0.3 mg/cm² при разтърсване на шейкър Vibrofix с честота от 800 - 1200 rpm за 2 минути.

ПРИМЕР III

Получава се суспензия с краен обем 780 ml чрез прилагане на следните количества и параметри:

Фирбиногенна смес:

- 700 ml етанол (94 % при 2°С - 8°С)

- 84.42 g човешки фирбиноген, състав В

- 110 mg рибофлавин

Тромбинова смес:

- 35 ml етанол (100 % при-30°С)

- 0.54 g човешки тромбин, състав В

Тромбиновата смес се съхранява за 8 - 16 часа при -ЗО°С.

Суспензия:

- 23 ml от тромбиновата смес се добавят към фибриногенната смес.

- 100 % етанол при 2 - 8°С се добавя за довеждане на обема на суспензията до 780 ml.

<

Характеристики на суспензията:

1. Концентрация на етанол: 94 %

2. Седиментационно поведение:

а) седиментационен обем 5 мин след началото: 92 % от тест обема,

б) седиментационен обем 24 часа след началото: 72 % от тест обема.

3. Размер на частиците (среден диаметър по Folk Ward): 60.5 + 0.5 pm.

Носителите под формата на колагенови ивици се покриват със суспензия. Първо, 8 ивици от колагенова пореста маса предварително се инкубират в охладителна камера при следните условия:

Температура: 6.0°С γ - Относителна влажност: 85 %

Време на инкубиране: 18.5 часа

Покритите ивици се инкубират за 45 минути при температура от 5°С и относителна влажност от 85 %.

- Овлажняване: температура 5°С, относителна влажност от 85 %.

- Въздушен поток през аспирационната клапа: 1.2 т³ на час

- Вакуум: 35 mbar

- Време на изсушаване: 4 часа

Абразията на полученото покритие върху колагеновата пореста маса

Λ е приблизително 0.3 mg/cm при разтърсване на шейкър Vibrofix е честота от 800 - 1200 гргп за 2 минути.

ПРИМЕР IV

В настоящия пример суспензията съдържа човешки фибриноген, състав А и човешки тромбин, състав А.

Получава се суспензия с краен обем 3120 ml чрез прилагане на следните количества и параметри:

Фирбиногенна смес:

- 2540 ml етанол (100 % при 2°С - 8°С)

- 311.6 g човешки фирбиноген, състав А

- 440 mg рибофлавин

Тромбинова смес:

- 210 ml етанол (100 % при-30°С)

- 229 g човешки тромбин, състав А

Суспензия:

87.3 ml вода за впръскване се добавя към фибриногеновата смес.

Тромбиновата смес се добавя към фибриногеновата смес.

Добавят се и 100 % етанол при 2 - 8°С за довеждане до обема на крайната суспензия

Характеристики на суспензията:

1. Концентрация на етанол: 97 %

2. Седиментационно поведение:

а) седиментационен обем 5 мин след началото: 95.6 % от тест обема,

б) седиментационен обем 24 часа след началото: 63.5 % от тест обема.

3. Размер на частиците (среден диаметър по Folk Ward): 51.8 + 0.8 pm.

- Температура: 6.5°С

- Относителна влажност: 90 %

- Време на инкубиране: 22.5 часа

Покритите ивици от колагенова пореста маса се изсушават както

4^*»*· следва:

Покритите ивици се инкубират за 10 минути при температура от 6.5°С и относителна влажност от 90 %.

- Овлажняване: температура 6.5°С, относителна влажност от 90 %.

- Въздушен поток през аспирационната клапа: 21 т³ на час

- Вакуум: 58 mbar

- Време на изсушаване: 4 часа

Абразията на полученото покритие върху колагеновата пореста маса е приблизително 0.1 mg/cm при разтърсване на шейкър Vibrofix с честота от 800 - 1200 rpm за 2 минути.

ПРИМЕР 1

Апротинин като компонент на TachoComb®

In vitro изследване на антифибринолитичната активност при условия на отмиване, подобни на ситуацията in vivo

Целта на настоящето изследване беше да се покаже ефикасността на апротинина като компонент на TachoComb® Н в хиперфибринолитични условия с използването на in vitro тест модели.

TachoComb® S е бяло оцветено отвън, покрито, подобно на пореста маса парче. Парчето от пенообразен сух колаген се използва като носител на активните твърди компоненти. Размерът на парчето е 9.5 х 4.8 х 0.5 cm. Активната страна е оцветена в жълто. Едно парче TachoComb® S с площ 1 cm² (дебелина 0.5 cm) се състои от:

Колаген от конски произход 2.1 mg покрит с:

човешки фибриноген 5.5 mg човешки тромбин 2.01.U.

рибофлавин (придаващ жълтия цвят на покритата площ) 16.5 pg

In vivo тестове за определяне на дозата потвърждават, че горепосочените концентрации на тромбин и фибриноген водят до максимална адхезивна сила (виж Пример 3).

TachoComb H, съдържащ човешки тромбин, човешки фибриноген и апротинин, беше сравнен с TachoComb, съдържащ само човешки тромбин и човешки фибриноген като активни съставки.

Два тест модела бяха разработени за определяне на ефикасността при хиперфибринолитични условия, които могат да се приемат като адекватни на хирургичните условия и които позволяват да се провеждат редица тестове, необходими за демонстриране на значим ефект.

В тестови модел 1 тестовата проба се прилага на синтетичен материал като адхезираща повърхност. В този материал се изрязва дупка с определени размери, която симулира напр. перфориране на кръвоносен съд. Затварянето се подлага на действието на два различни фибринолитични разтвора (инкубационни разтвори) през дупката. Единят от тези разтвори допълнително съдържа антифибринолитичния компонент а₂-антиплазмин.

Състав на инкубационните разтвори:

Всички съставки се разтварят в буфер 1: (50 тМ Трометол, 100 тМ NaCl, 2.5 тМ СаС1₂, 2 mg/ml BSA (свободен от протеази), 0.5 mg/ml Na-азид / ml)

Инкубационен разтвор I (1 μηιοΐ-арен плазминоген, lnmol-арен тъканен активатор на плазминоген (tPA), 1 цто1-арен а₂антиплазмин) μΐ буфер 1, pH 7.4 μΐ разтвор на tPA (50 nmol-арен)

100 μΐ разтвор на а₂-антиплазмин (2.5 μπιοΐ-арен)

Инкубационен разтвор II (1 pmol-арен плазминоген, lnmol-арен тъканен активатор на плазминоген, 149 μΐ буфер 1, pH 7.4, 51 μΐ плазминогенен разтвор (конц. 4.9 μηιοΐ-арен Coachrom човешки плазминоген - активност) μΐ разтвор на tPA (50 nmol-арен)

Инкубационният разтвор беше заменян през 2-часови периоди за симулиране на отмиване. В този случай адхезията беше контролирана. На пробата беше приложено налягане от 50 mbar. Беше регистрирано времето, за което пробата се отделяше, при налягане <50 mbar.

Тест модел 2 беше за демонстриране на фибринолитичния ефект върху увредена тъкан на червата. Тестваната проба беше приложена върху черва на прасе (ex. vivo) като адхезираща повърхност. В червата беше направена перфорация с определен размер, за да може инкубационният разтвор да влезе в контакт с фибриновото покритие и да симулира ефект на отмиване. Инкубационният разтвор беше сменят през определени интервали и в тези моменти налягане от 50 mbar беше упражнявано върху пробата. Определяше се момента, в който пробата се отделя при налягане <50 mbar.

Резултатите показаха значителни разлики между TachoComb Н, съдържащ апротинин, и TachoComb S без апротинин.

В тест модел 1, с използването на инкубационен разтвор, съдържащ тъканен плазминогенен активатор, плазминоген и а₂-антиплазмин, времето за фибролизис на TachoComb Н беше 41.2 + 7.3 часа в сравнение с 12.8 + 2.8 часа за TachoComb S.

В тест модел 1, с използването на инкубационен разтвор, съдържащ тъканен плазминогенен активатор и плазминоген, времето за фибролизис на TachoComb Н беше 31.6 + 5.3 часа в сравнение с 8.3 + 1.8 часа за TachoComb S.

В тест модел 2 времето за отделяне на TachoComb Н беше 78.4 + 16.3 часа в сравнение с 6.5 + 1.8 часа за TachoComb S.

Върху тестваната проба все още можеше за се забележи доста фибриново покритие. Но пробата се отделяше при налягане от повърхността на червата, тъй като силата на адхезията между фибриновото покритие и повърхността на червата ставаше по-слаба.

И в двата модела антифибринолитичният ефект на апротинина като активен компонент в TachoComb Н може да се демонстрира много ясно.

В тест модел 1 удължаването на времето за фибринолизис, дължащо се на апротинина като активен компонент на TachoComb Н, беше 320 % за инкубационен разтвор I, съдържащ а₂-антиплазмин и 380 % за инкубационен разтвор II без а₂-антиплазмин.

Тест модел 1 показа също така допълнителен антифибринолитичен ефект на а₂-антиплазмин чрез удължаване на времето за фибринолизис на TachoComb Н от 31.6 на 41.2 часа (130 %) и за TachoComb S от 8.3 на 12.8 часа (154 %).

ПРИМЕР 2

Сравнение на покрита Nycomed пореста маса (ТachoComb S) с други продукти - носители, покрити идентично с TachoComb S.

Адхезия на слоя

Процедура

1. Покриване на различни носители

Търговска марка	Материал	Производител / Разпространител
Opraskin®	Колагенова пореста маса	Lohmann, Postfach 2343, D-56513 neuwied
Willospon® forte	Колагенова пореста маса (телешка)	Will-Pharma, Postbus 30, NL1160 AA Zwanenburg
Willospon® Special	Желатинова пореста маса	Will-Pharma, Postbus 30, NL 1160 AA Zwanenburg
Ethisorb®Patch	Полиглактин 910 / полидиоксанон	Johnson/Johnson (manufacturer) Ethicon, Robert-KochStr. 1 D-22851 Norderstedt
Tabotamp®NU Knit	Окислена регенерирана целулоза	Johnson/Johnson (manufacturer) Ethicon, Robert-KochStr. 1 D-22851 Norderstedt
Nycomed колагенова пореста маса	Конска колагенова пореста маса	Nycomed Austria Sankt- Peter-Str. 25 A-4021 LINZ

2. Проба 1 х 4 cm беше изготвена от всеки покрит носител.

3. Адхезията на слоя беше тествана както следва

Описание на метода

Апарат

Аналитична везна (прецизност на измерването + 0.5 mg)

Vibrofix шейкър, комбиниран с устройство за фиксиране Разграфена линия с милимитрова скала

Хронометър, скалпел, епруветки с 2 cm вътрешен диаметър с капаче

Процедура

4x1 cm2 покрита площ се изрязва от покрития носител с помощта на скалпел.

Пробата се поставя в тарирана епруветка с капаче. След това се разклаща на Vibrofix шейкър (честота: около 1 000 rpm) за 2 минути. Листът се отстранява и остатъчното количество от покриващ материал (абразия: mg/cm ) се измерва.

Изчисления:

Теглото на остатъка (mg) - тарата (mg)

Абразия (mg/cm²) =-----------------------------------------------------------4 cm²

Резултати

Носител	Материал	Абразия (mg/cm²)
Opraskin®	Лиофилизиран колаген	2.1

Willospon® forte (3 mm)	Лиофилизиран колаген	1.2
Willospon® Spezial (1 mm)	Желатин	2.1
Ethisorb®Patch (ZVP609)	Полиглактин/полидиоксанон	14.3
Tabotamp®NU Knit	Окислена целулоза	9.2
Nycomed колагенова пореста маса	Колаген, пяна	0.15

Коментар

Всички носители с изключение на Nycomed колагеновата пореста маса не са гъвкави след покриването.

Пробите трябва да се изрязват много внимателно Ако срязването става с помощта на ножици много покриващ материал ще се отлюспи, тъй като слоят сам по себе си е ригиден. Ethisorb® Patch не показва почти никаква връзка с покриващия материал. Когато се разтърси леко цялото покритие се изхлузва като “килим”.

Разликата между Nycomed колагеновата пореста маса и материалите на другите носители се изявява доста ясно.

Еластичност на намокрения покрит носител

Процедура

1. Покриване на различни носители

Площ от 2 х 4.5 cm² от всеки носител беше покрита с TachoComb S суспензия за покриване. Количество от покриващата суспензия, съответстваше на спецификациите на TachoComb (5.5 mg фибриноген/cm²). Пробите бяха изсушавани.

2. От всеки покрит носител беше изготвена проба от около 5-7 cm². Определена бе точната начална площ на изсушените проби.

3. Пробата бе навлажнена и поставена върху еластичен лист Latex, прикрепен към специално оборудване, както е описано в детайли в частта «процедура». След това върху листа бе упражнено налягане, и листът се разшири. След двукратно разширяване и отпускане листът бе разширен за трети път. Площта на носителя бе измерена в точката на най-голямо разширяване.

Описание на метода

Апарати/химикали

Перисталтична помпа (IKA PA-SF)

Бутилка за буфериране на налягането (3 отвора)

VDO манометър (0 - 250 mbar)

Стъклена фуния (0 първи отвор: 30 mm, втори отвор: 15 mm) Силиконови тръбички и скоби, латексови ръкавици (Semper med), скалпел, градуирана линия с милиметрова скала, ножици Физиологичен разтвор

Процедура

Следното оборудване бе свързано здраво (без изпускане на въздух) към трите отвора на бутилката за буфериране на налягането чрез силиконови връзки:

а) перисталтична помпа

б) манометър

в) стъклена фуния/отвор 2

Двоен лист от около 8x8 cm² бе изрязан от латексова ръкавица. Този лист бе прикрепен неподвижно към стъклената фуния/отвор 1. От покрития носител бе изрязана с помощта на скалпел около 5-7 cm² покрита площ. Площта на пробата бе измерена (начална площ).

Покритието на пробата бе навлажнено с физиологичен разтвор и поставено върху латексовия материал. След това бе притиснато към латексовия лист ръчно за около 1 мин.

С помощта на перисталтична помпа латексовият лист бе разширен чрез прилагане на налягане от около 70 mbar. То бе замествано двукратно с отпускане на латексовия материал. На третото разширяване площта (по дължина и ширина) на покрития носител бе измерено в точката на най-силно разширяване на латексовия лист.

Изчисления:

площ на носителя след третото разширяване “Фактор на еластичност”-------------------------------------------------------начална площ на пробата

Резултати

Носител	Материал	Фактор на еластичност
Opraskin®	Лиофилизиран колаген	1.78
Willospon® forte (3 mm)	Лиофилизиран колаген	1.53
Willospon® Spezial (1 mm)	Желатин	1.79
Ethisorb®Patch (ZVP609)	Полиглактин/полидиоксанон	1.0
Tabotamp®NU Knit	Окислена целулоза	1.15
Nycomed колагенова пореста маса	Колаген, пяна	1.55

Коментар:

Еластичността на навлажнената Nycomed колагенова пореста маса (TachoComb S) е една от най-важните характеристики на продукта. Еластичността е особено важна в торакалната и коримна хирургия. След залепяне носителят трябва да може да понесе примерното разширяване и отпускане на белите дробове и червата. Специално Ethisorb® не показва никаква еластичност. Той се отлепя от покритието мигновено. Покритите Wilospon®Spezial и Opraskin® показват структурни дефекти по време на теста.

Употреба на покрития носител в ендоскопичната хирургия

Процедура

1. Покриване на различни носители

Площ от 2 х 4.5 cm от всеки носител беше покрита с TachoComb S суспензия за покриване. Количество от покриващата суспензия, съответстваше на спецификациите на TachoComb (5.5 mg фибриноген/cm ). Пробите бяха изсушавани.

2. Манипулирането на пробите от покрития носител за употреба в ендоскопичната хирургия и загубата на покритието в резултат на манипулирането бяха документирани чрез оборудване за дигитални снимки.

Описание на метода

Апарати

Endodock: ендоскопичен апарат, конструиран за употреба с TachoComb® в ендоскопичната хирургия (виж фигура 7). Дигитален фотоапарат.

Списък на изследваните носители

Носител	Материал на носителя
Opraskin®	Лиофилизиран колаген
Willospon® forte (3 mm)	Лиофилизиран колаген
Willospon® Spezial (1 mm)	Желатин
Ethisorb®Patch (ZVP609)	Полиглактин/полидиоксанон
Tabotamp®NU Knit	Окислена целулоза
Nycomed колагенова пореста маса	Колаген, пяна

Процедура

Серия от снимки, правени на всеки носител:

1. Снимка: документиране на серия от не-покрити и покрити носители.

2. Снимка: покритите проби се вкарват в ендоскопично оборудване (Endodock). Пробите трябва да се направят плоски, ръчно, за да могат да се обвият около насочваща “игла”. След това пробата се вкарва внимателно в метална тръба с 10 mm в диаметър. Документиране на проба, частично вкарана н тубата на Endodock.

3. Снимка: пробата се изкарва внимателно. След това пробата трябва да се разгърне. Разгърнатата проба след вкарването в ендоскопичното оборудване и загубата на покритие в резултат на манипулирането се документират.

Коментар

TachoComb S (покрита конска колагенова пореста маса / Nycomed) в ендоскопичната хирургия е най-показателното приложение на продукта. TachoComb S се вкарва в ендоскопичното оборудване. Тръбата на това оборудване обикновено е с 10-13 mm диаметър. За да се вкара в тръбата TachoComb S се сплесква и след това обвива около насочваща “игла” и след това се вкарва внимателно в тръбата. Следователно, връзката между покритието с носителя и вътре в него трябва да бъде здрава, но продуктът трябва да остане достатъчно гъвкав в сухо състояние, за да се извива и търкаля. Когато достигне мястото на хирургичната намеса TachoComb S внимателно се изтегля от тръбата. След това трябва да се отгърне и постави върху нараненото място. Това често изисква известни нагласявания. Следователно, адхезията към слоя на носителя трябва да бъде достатъчно силна, за да издържи манипулирането.

Резултати w Резултатите са видни от приложените фигури 1-6. Една примерна класация на покриващите материали е както следва:

Opraskin®	30 - 40 %
Willospon® forte (3 mm)	60 - 70 %
Willospon® Spezial (1 mm)	50%
Ethisorb®Patch (ZVP609)	60 - 70 %
Tabotamp®NU Knit	95%
Nycomed колагенова пореста маса	<5%

Тъй като Ethisorb® е много ригиден носител адхезията на покритието е много лоша. Следователно Ethisorb® губи почти изцяло покритието по време на проучването. В сравнение с Nycomed колагенова пореста маса всички останали изследвани носители имат плоска повърхност, която трябва да се покрива. Следователно, покритията лежат като “плосък килим” върху носителя. Това води до доста негъвкава структура на твърдите покрити носители. Извиването или търкалянето често чупят самото покритие.

След вкарване на покрити носители в тръбата на ендоскопичното оборудване и разгъването на пробата всички носители с изключение на Nycomed колагеновата пореста маса губят голяма част от покритието си, така че големи области остават без покриващ материал.

Структура и текстуратата на Nycomed колагеновата пореста маса са в основата на високата гъвкавост на TachoComb S в сухи или овлажнени условия. Nycomed колагеновата пореста маса е пенеста и има полигонални камери вътре в себе си. На повърхността тези камери са сряззани до кухини. Тези кухини уголемяват покриващата повърхност. По време на покриването покриващата суспензия се разпределя равномерно върху структурираната повърхност. По време на изсушаването разтворът, съдържащ както фибриноген, така и тромбен, се прикрепя върху носителя в кухините. Следователно, TachoComb S може да се срязва до желани размери и може да се вкарва в ендоскопично оборудване с много малка загуба на покриващ материал или дори без загуба.

Високата гъвкавост на сухия TachoComb S е голямо предимство в сравнение с всички други изследвани носители на покритие.

ПРИМЕР 3

Тестове за определяне на дозата от активни компоненти

Дозата от активните компоненти беше определена чрез два различни експериментални модела, в които беше измерена силата на адхезииране: издръжливост на опън на черен дроб от плъх, силата на адхезия срещу повишени нива на налягане в бъбреци от плъх.

А. Издръжливост на опън на черен дроб от плъх

Рана с размери 1 х 1 cm и дълбочина около 1 mm беше направена в левия лоб на черен дроб на упоени плъхове с цел образуване на сълзящ кръвоизлив. Раната беше затворена с парче от TachoComb S с големина lxl cm, което беше свързано с пружинна везна. Беше измерен опъна, при който TachoComb S се скъсва.

Б. Сила на адхезия срещу повишени нива на налягане в бъбреци от плъх

Беше направена гладка, силно кървяща рана в левия бъбрек на упоен плъх чрез отрязване на около една четвърт от неговата маса. Раната беше затворена с тест лист от TachoComb S. Налягането на тъканта в бъбрека беше повишено чрез затваряне на венозния дренаж и помпане на изотоничен солеви разтвор на цитрат (pH 7.2). Беше измерено налягането, при което TachoComb S се отлепя.

ТАБЛИЦА 1

Сила на адхезиране на TachoComb S, съдържащ различни количества от фибриноген.

Състав на слоя	Сила на адхезия (средна стойност + CO)
Фибриноген mg/cm²	Тромбин IU/cm²	Издръжливост на опън на черен дроб от плъх N/cm² п = 5	Сила на адхезия срещу повишени нива на налягане в бъбрек от плъх, mbar п = 5

0	0	0.20 ± 0.02	47 ±9
0	2.40	0.20 ± 0.03	63 ±16
1.30	1.73	0.30 + 0.06	81 ± 12
2.92	1.85	0.39 + 0.05	101 ± 13
5.10	1.87	0.39 + 0.03	110 ± 13
7.22	1.82	0.38 ±0.02	97 ± 13
10.02	1.75	0.40 + 0.07	87 ± 10

ТАБЛИЦА 2

Сила на адхезия на TachoComb S, съдържащ различни количества от тромбин.

Състав на слоя	Сила на адхезия (средна стойност ± CO)
Фибриноген mg/cm²	Тромбин IU/cm²	Издръжливост на опън на черен дроб от плъх N/cm² η = 5	Сила на адхезия срещу повишени нива на налягане в бъбрек от плъх, mbar η = 5
0	0	0.20 ± 0.02	47 ±9
6.15	0	0.27 ±0.01	57 ±10
4.72	0.92	0.39 ±0.02	84 ±9
5.10	1.87	0.39 ±0.03	110 ± 13
4.78	4.95	0.35 ± 0.02	97 ±9
4.70	9.63	0.30 ±0.02	109 ±13
4.75	19.83	0.27 ±0.03	91 ±20

Получените резултати показват значителни разлики между отделните варианти. Оптималният обхват на човешки тромбин беше между 0.9 до 10 I.U./cm² е постоянно съдържание на човешки фибриноген от около 5 mg/cm². Оптималният обхват за човешки фибриноген беше 2.9 до 7.2 mg/cm² с постоянно съдържание на човешки тромбин от около 2 I.U./cm .

Тези тестове in vivo потвърдиха, че концентрацията на фибриногена (4.3 - 6.7 mg/cm ) и концентрацията на тромбина (1.5 - 2.5 Ш/cm ), които се употребяват в други състави на TachoComb S (TachoComb® и TachoComb Н) също водят до максимална сила на адхезия на TachoComb S.

ПРИМЕР 4

Ефикасност на TachoComb S при затваряне на наранявания на далак и черен дроб в кучета

Целта на изследването беше да се сравни кръвоспиращата ефикасност на TachoComb Н (съдържащ апротинин) е TachoComb S (без апротинин) в кучешки модел на наранявания на далак и черен дроб. Изрязване и пробождане (дълбочина 0.5 cm) на далака бяха избрани като имитация на сълзящ кръвоизлив. Резекция на върха на краниалния лоб на черния дроб беше извършена за имитиране на обилно кървяща повърхностна рана (2 до 3 cm). Парчета TachoComb Н или TachoComb S бяха приложени като единствено средство за спиране на кръвотечението на раните (една и съща партида беше използвана за раните в далака и черния дроб в едно и също куче). На 48 час след хирургичната намеса беше извършена некроскопия, тъй като това е периода с най-висок риск от повторно кървене в клиничната практика.

Пълно спиране на кръвотечението беше постигнато и с двата продукта. Не беше наблюдаван нито един случай на повторно кървене на 48 час нито при визуално наблюдение, нито при хистологичния анализ.

Освен това, хистологично не бяха отбелязани разлики между кучетата, на които е прилаган TachoComb Н и тези с TachoComb S, когато бяха преценявани раните в далака и черния дроб, покрити със съответните парчета, по отношение на кръвоспирането и зарастването на раните. След хирургичната намеса не беше отбелязан ните един случай на вторично кървене.

Данните от кръвните преброявания показаха подобни резултати и в двете третирани групи с леко повишаване на белите кръвни телца 48 часа след хирургичната намеса. Не се отбелязаха разлики между групите и във времето по отношение на който и да е от оценяваните параметри. Освен това коагулационните тестове не показаха разлики по отношение наличието или отсъствието на апротинин. Повишаване съдържанието на кръвния фибриноген беше очевидно и при двете третирани групи, 48 часа след хирургичната намеса. Повишаването на белите кръвни телца и на съдържанието на кръвния фибриноген може да се дължи на възпалителния отговор на хирургичната травма и не се приема като токсичен страничен ефект на TachoComb Н или S.

Може да се заключи, че TachoComb S (без апротинин) проявява същата ефикасност като TachoComb Н (съдържащ апротинин) при третирането на сълзящи или силно кървящи паренхимни рани в кучета. Стабилността на покритието при избраните условия не се повлиява от наличието или отсъствието на апротинин.

ПРИМЕР 5

Сравнително изследване на кръвоспиращия и затварящ ефек, и устойчивост на адсорбируеми TachoComb S и TachoComb Н: експериментален анализ в прасета

Цел на изследването

Тестът беше подбран за оценка на непосредствената ефикасност и кратковременна устойчивост на кръвоспиращ мъх върху нараняване на далак, индуцирано в прасе.

Материали и методи женски прасета бяха използвани с това изследване. 2 групи от кръвоспиращ мъх бяха изследвани на принципа на случайността: TachoComb Н с апротинин и TachoComb S баз апротинин.

В деня на хирургичната намеса животните получиха директно мъха, зашивайки с него стандартизирана 2 х 3 cm рана, хирургично направена във вентралната част на далака.

Непосредственият кръвоспиращ ефект на мъха беше определен чрез преброяване на мехурите и измерване на времето, необходимо за спиране на кръвоизлива. Прилепването на TachoComb Н и S беше отбелязвано.

След 72 часа, кратковременното поведение и устойчивост на двата материала беше изследвано чрез увеличаване на налягането в далака (клампирайки венозните съдове).

Когато налягането достигна почти равновесно състояние беше приложен адреналин IV като еднократна доза (0.02 mg или 0.04 mg) за увеличаване на артериалното налягане, свързано или не с инфузия на добутамин хлорхидрат.

Чрез тези фармакологични субстанции пробивът на кървенето под налягане в зоните, репарирани с TachoComb Н и S, беше отчитан за всяко животно.

Резултати

Не бяха установени никакви разлики при третиранията по време на хирургичната намеса в далака и кръвоспиращия ефект. При втория преглед, след 72 часа, макроскопският външен вид и на двата мъха беше идентичен.

Прецизни измервания на налягането и устойчивостта на пробив не показаха значими различия в двете експериментални групи.

Не се наблюдаваше скъсване на материала. Кървене на раната беше наблюдавано в 4 животни с TachoComb S и в 2 животни с TachoComb Н (с по един допълнителен мехур в група 4).

Хистологичният анализ предполага, че апротининът може да упражнява положителен ефект върху структурата на мъха, като апротининът изглежда модифицира микроскопския вид чрез намаляване на деградацията на мъха. Не беше наблюдаван никакъв специфичен клетъчен модел.

Заключение

Непосредствената кръвоспираща активност на 2 състава TachoComb S и Н, беше изследвана в стандартизирани моделни рани в далак на 24 прасета.

И двата материала имаха еднакво поведение по отношение на ефикасност, прилепване към раната и съвместимост с паренхима. Тяхната ефикасност беше забележителна.

Тяхната устойчивост на биоразградимост и протеолизис беше изследвана на 72 час след хирургичната намеса чрез увеличаване на налягането в далака (чрез механични и фармакологични средства) и отчитане на местната устойчивост на мъха от TachoComb Н и S. Не беше доказана никаква значима разлика в устойчивостта на двата материала.

Хистопатологичните находки показаха обаче, че протеолитичното деградиране на TachoComb S беше в слаба степен по-добре изразено, в сравнение с TachoComb Н.

TachoComb S или TachoComb Н бяха използвани като единствени средства за кръвоспиране при затварянето на силно кървящи рани в далак на прасета (повърхностни наранявания с размер 2 cm х 3 cm, 3 - 5 mm дълбочина; η = 12 за група). След 72 часа налягането в далака беше увеличено чрез лигатура на далачната вена(и). След това налягането в далака беше допълнително увеличено чрез инжектиране на адреналин. Прасетата бяха наблюдавани за признаци на повторно кървене или поява на кървави мехури под парчетата. След некроскопия беше проведена хистопатология на пробите (мястото на раната, покрито с TachoComb Н и S).

TachoComb S и TachoComb H упражняваха подобна ефикасност, прилепване към раната и съвместимост с паренхима.

ПРИМЕР 6

Сравнително изследване на кръвоспиращия и затварящ ефект, и устойчивост на адсорбируеми TachoComb S и TachoComb Н: експериментален анализ в прасета на модел остър панкреатит

Цел на изследването

Тестът беше подбран за оценка на непосредствената ефикасност и

- кратковременна устойчивост на кръвоспиращ мъх върху нараняване на далак, индуцирано в прасе на модел остър панкреатит.

Материали и методи женски прасета бяха използвани с това изследване. 2 групи от кръвоспиращ мъх бяха изследвани на принципа на случайността: TachoComb Н с апротинин и TachoComb S без апротинин.

След това с помощта на стерилна спринцовка, жлъчният мехур беше пробит, жлъчният сок беше събран и 10 ml от него - инжектирани чрез канала на Wirsung за индуциране на панкреатит. Нивата на кръвните ензими бяха проследявани преди и ежедневно след хирургичната намеса (нива на липаза и амилаза).

Малки парчета от TachoComb Н и S бяха поставени върху паренхима на панкреаса на мястото на свързване със стомаха.

След 72 часа, кратковременното поведение и устойчивост на ензимна деградация на TachoComb Н и S бяха изследвани чрез увеличаване на налягането в далака (клампирайки венозните съдове и чрез фармакологични средства).

/'

Ш*'

Когато налягането достигна почти равновесно състояние беше приложен адреналин IV като еднократна доза (0.02 mg или 0.04 mg), последван от преливане на норадреналин при 0.02 до 0.04 mg/min за увеличаване на артериалното налягане, свързано или не с перфузия на 0.3 - 0.6 mg/min добутамин хлорхидрат.

Резултати

Върху далака и двата материала показаха подобно поведение по отношение на ефикасността на непосредственото кръвоспиране, прилепване към раната и съвместимост с паренхима. Тяхната ефикасност беше забележителна.

И двата мъха не бяха променени при макроскопско наблюдение на третия ден, въпреки че ензимните условия бяха много строги, особено на ден 2 в кръвта и все още на ден 4 в перитонеалната течност.

На 72 час никакви значими различия в устойчивостта на двата материала не бяха доказани след увеличаване на налягането в далака.

Едно разкъсване на материала беше регистрирано в групата на TachoComb S. Кървене на раната беше наблюдавано в 1 животно с TachoComb S и в 2 животни с TachoComb Н (с по един допълнителен мехур в групата на TachoComb Н).

Хистопатологичните находки не показаха значими различия в деградацията на TachoComb S в сравнение с TachoComb Н. Не беше наблюдаван специфичен клетъчен модел в далака. Дори в панкреатитните проби, парчетата от TachoComb Н и S в близък контакт с високи концентрации на панкреатични ензими не показаха никакви големи промени.

Заключение

В заключение, никаква ясна разлика не се наблюдаваше между TachoComb S и TachoComb Н по отношение на тяхната устойчивост на скъсване в условия на повишени нива на панкреатични ензими.

Не се откриха никакви специфични макроскопски и микроскопски доказателства за модифициране, както на мъха от TachoComb S, така и на този от TachoComb Н.

Кръвоспиращата ефикасност на TachoComb S и TachoComb Н беше изследвана на стандартизиран модел на нараняване на далак (повърхностни наранявания с размер 2 cm х 3 cm, 3-5 mm дълбочина; η = 12 за група) в прасета с остър панкреатит, индуциран чрез ретроградно инжектиране на жлъчен сок в канала на Wirsung и последваща лигатура на панкреатичния канал. Малки парчета от TachoComb Н и S бяха приложени върху панкреаса на мястото на лигатурата. 72 часа след хирургичната интервенция налягането в далака беше увеличено чрез лигатура на далачната вена и интравенозно инжектиране на адреналин.

Върху далака TachoComb S и TachoComb Н имаха подобно поведение по отношение на ефикасността на непосредственото кръвоспиране, прилепването към раната и устойчивост на повишено налягане в далака, независимо от забележимото повишаване на нивата на панкреатичните ензими (20 - 100 пъти увеличение на амилазата и липазата в кръвта и 10 - 100 кратно повишаване на панкреатичните ензими в перитонеалната течност в сравнение с основните нива). Хистопатологичните находки не показаха значими разлики в деградацията на TachoComb S и TachoComb Н. Не беше наблюдаван и специфичен клетъчен модел в далака. Дори в панкреатичните проби, след близък контакт на TachoComb Н и S с високи концентрации на панкреатични ензими, прилепването на TachoComb Н и S и хистопатологията не показаха никакви големи W различия.

По този начин никакви макроскопски или микроскопски различия между TachoComb S и TachoComb Н не се регистрират в този силно стресиран модел на остър панкреатит в прасета.

ПРИМЕР 7

Сравнително изследване на реакцията на мозъчна тъкан и ефективността на резорбируем TachoComb Н и TachoComb S: експериментален анализ в заешки модел при нормална коагулация и по време на локален хиперфибринолизис

Целта на изследването беше да се сравни ефикасността на TachoComb S и TachoComb Н при приложение в неврохирургията. Наранявания на мозъка бяха предизвикани в зайци при нормална коагулация (реакция на мозъчната тъкан = РМТ, η = 12 зайци, приемливи η = 10) и при хиперфибринолитични условия (ХФ) чрез локално прилагане на r-tPA (η = 10 зайци). Бяха направени три кортикални наранявания за хемисфера (общо 6 наранявания на животно; прободна мозъчна рана с 3 mm дълбочина и 4 mm в диаметър).

Сериите РМТ

Две от трите наранявания на хемисфера бяха третирани с TachoComb S или TachoComb Н, съответно и едно нараняване на хемисфера беше оставено свободно като контрола. След затваряне на нараняванията с TachoComb Н или S беше измерено времето на кървене при силно увеличение и непрекъснат слаб поток, напояващ с физиологичен разтвор. След спиране на кървенето във всички наранявания, беше индуцирано артериално свръх налягане чрез интравенозно инжектиране на адреналин (0.01 mg/kg адреналин), като по този начин се увеличи средното артериално налягане (САН) до най-малко 120 mmHg. По време на тази процедура наблюденията за повторно кървене продължиха. След намаляване на САН до нормални стойности кожата беше затворена. Времето за некроскопия беше от 3 до 7 дни (п = 5 зайци). В три от животните магнитният резонанс беше проведен преди некроскопията на ден 3.

По време на некроскопията беше проведено обстойно наблюдение на наранените места и бяха взети проби за хистопатологичен анализ.

Сериите ХФ

След извършване на нараняванията, както беше описано в сериите РМТ, върху нараняванията беше поставен r-tPA (0.3 mg r-tPA в 0.5 ml физиологичен разтвор за нараняване), преди всички наранявания да бъдат залепени с TachoComb S или TachoComb Н, съответно. Беше измерено времето на кървене при силно увеличение и постоянен поток, напояващ с физиологичен разтвор. Беше проведена обща некроскопия на ден 1 (п = 7) и на ден 3 (п = 3). За сравнителен анализ беше проведена хистопатология на проби, взети на 3 ден.

По време на цялостното изучаване на TachoComb S или TachoComb Н стана ясно, че няма съществени разликите нито по отношение на залепящата ефикасност, толерираното повишено САН и продължителност на времето на кървене, нито по отношение на хистопатологията. Силни кръвоизливи бяха регистрирани във всички животни от серията ХФ, не само на мястото на нараняването, но също така и подкожни по цялото лице. Независимо от тези сурови условия отново TachoComb S показа ефикасност, подобна на тази на TachoComb Н.

ПРИМЕР 8

Неврохирургично приложение на TachoComb S и TachoComb Н: реакция на мозъчна тъкан и ефективност на кръвоспирането

Течни фибринови планти се използват за широко мащабно кръвоспиране в неврохирургията. До сега не са публикувани представителни данни по реакция на мозъчната тъкан на TachoComb® и употребата на антифибринолитични агенти (напр. апротинин) е все още противоречива.

Цели

Изследването беше фокусирано върху два основни пункта: оценка на кратковременната реакция на мозъчна тъкан след прилагане на TachoComb Η (ТНТ) и TachoComb S (THS) върху кортикални наранявания, в сравнение с нетретирани контролни наранявания (КН), използвайки хистологични методи и съвременна техника за снемане на образи.

Втора цел беше изучаването на ефикасността на кръвоспиране на TachoComb Н и S продуктите при нормална коагулация (РМТ Група) и след локално индуциран силен хиперфибринолизис (ХФ Група) и да се оцени дали апротининът има някакво влияние върху кръвоспиращите качества и сила на прилепване на препарата.

Материали и методи

В серия от 22 млади зайци, три кортикални наранявания бяха направени във всяка хемисфера. Дванадесет животни бяха * предназначени за изучаване на реакция на мозъчната тъкан (РМТ) и

К,, 10 - към хиперфибринолизисната група (ХФ).

В РМТ животните две от нараняванията бяха запълнени с TachoComb Н и TachoComb S, съответно докато третата беше оставена празна като контрола. Беше измерено времето на кървене и беше проследявана появата на повторно кървене, поради индуцирано артериално свръхналягане. Животните бяха умъртвявани на ден 3 и 7 след хирургична намеса и беше проведен хистологичен анализ. В три от РМТ животните беше проведен ядрено магнитен резонанс за оценка на мозъчната едема на ден 3, точно преди еутаназията.

В ХФ животните, в които предварително беше индуциран остър хиперфибрнолизис е рекомбинантен тъканен плазминогенен активатор (rt-PA), всичките три наранявания в една от хемисферите бяха третирани е TachoComb Н и в другата хемисфера - е TachoComb S. Беше измерено времето на кървене и в три от животните беше проведен хистологичен анализ на ден 3.

Резултати

При нормална коагулация (РМТ животни) кръвоспирането е ТСН и TCS беше значително по-бързо (р<0.001) в сравнение със ситуацията, когато не се прилага кръвоспиращ агент. Беше показано, че няма разлика между времето на кървене и на двата продукта (р = 0.294), но тези времена са значително по-кратки от тези на контролните наранявания (рО.001).

По време на индуцираното артериално свръхналягане повторно кървене се появи в 1 от 24 ТСН наранявания, 3 от 24 TCS и 19 от 24 контролни наранявания. Наличието на кръвоспиращ агент последователно предотвратява повторното кървене по време на сериозно повишено артериално налягане (Chi square = 16.3; р>0.001). Липсата на ТНС или TCS по време на повишаването на артериалното налягане от своя страна показва 80 % риск от поява на повторно кървене.

Статистическият анализ на времето за кървене в хиперфибринолизосната група (ХФ животни) не показва разлика между времената на кървене за двата продукта (sign-rank test: р = 0=927 и Т test: р = 0.4102).

Най-накрая, беше определен интервал на достоверност 99.73 % (D<3sd D = ns) значими разлики между кръвоспиращата ефикасност на един и същ продукт в двата вида условия на коагулация.

Заключение

TachoComb Н и TachoComb S не индуцират никакви специфични хистологични промени в мозъчните тъкан. И двата продукта имат добра съвместимост с мозъчния паренхим, тъй като не индуцират повече реакции на мозъчната тъкан, отколкото индуцира самото нараняване. Морфологично не се доказват никакви странични ефекти, свързани с комбинираните продукти. Хистологичният анализ не показва разлики между двата продукта, нито при нормална, нито при остро нарушена коагулация. TachoComb Н и S притежават еднаква кръвоспираща ефективност и сила на адхезия, както при нормална коагулация, така при хиперфибринолизис. Има силни доказателства, че апротининът не оказва влияние върху кръвоспиращите качества и сила на адхезия, дори при силно нарушена коагулация.

^v В сравнение с литературните данни TachoComb Н и S показват много по-бързо кръвоспиране от окислената целулоза и колагеновия мъх.

Claims

ПАТЕНТНИ ПРЕТЕНЦИИ

1. Твърд състав, характеризиращ се с това, че се състои основно от

а) носител, който притежава поне едно от следните физически качества:

коефициент на еластичност в обхвата 5-100 N/cm, плътност от 1 - 10 mg/cm³, диаметър на камерата по-голям от 0.75 mm и по-малък от 4 mm и/или среден диаметър под 3 mm и равномерно разпределен и стабилизиран върху въпросния носител

б) твърд фибриноген и

в) твърд тромбин.
2. Състав, съгласно Претенция 1, характеризиращ се с това, че носителят е биоразградим полимер, като полихиалуронова киселина, полихидрокси киселина, целулоза, желатин или колаген, като колагенова пореста маса, напр. колагенова пореста маса, състояща се основно от колагенови влакна тип I.
3. Носител, съгласно Претенция 2, характеризиращ се с това, че носителят е колагенова пореста маса, която представлява материал от колаген тип I от бозайник, трансгенен или рекомбинантен източник.
4. Състав, съгласно всяка една от Претенции 1-3, характеризиращ се с това, че носителят притежава едно или повече активни места, в които присъства фибриноген в количества от 2 - 10 mg/cm², напр.

Ί Ο

4.3 - 6.7 mg/cm , за предпочитане около 5.5 mg/cm и тромбинът присъства в количества от 1.5 - 5.5 IU/cm , за предпочитане около 2.0 IU/cm².
5. Състав, съгласно всяка една от Претенции 1-4, характеризиращ се с това, че фибриногенът е човешки, пречистен от природен източник, или трансгенен или рекомбинантен фибриноген.
6. Състав, съгласно всяка една от Претенции 1-5, характеризиращ се с това, че фибриногенът е пречистен от природен източник.
7. Състав, съгласно всяка една от Претенции 1-5, характеризиращ се с това, че фибриногенът е трансгенен или рекомбинантен.
8. Състав, съгласно всяка една от Претенции 1-7, характеризиращ се с това, че тромбинът е човешки, пречистен от природен източник, или трансгенен или рекомбинантен човешки тромбин.
9. Състав, съгласно всяка една от Претенции 1-8, характеризиращ се с това, че тромбинът е пречистен от природен източник.
10. Състав, съгласно всяка една от Претенции 1-8, характеризиращ се с това, че тромбинът е трансгенен или рекомбинантен.
11. Материал за спиране на кръвотечение, затваряне на тъкан и залепяне на тъкан, който съдържа гъвкав носител, който притежава поне едно от следните физически качества:

коефициент на еластичност в обхвата 5-100 N/cm, плътност от 1 - 10 mg/cm³, диаметър на камерата по-голям от 0.75 mm и по-малък от 4 mm и/или среден диаметър под 3 mm и който допълнително включва твърд фибриноген и твърд тромбин.

и не притежава никакъв фибринолитичен агент, като апротинин, εаминокапронова киселина или а2-антиплазмин, като твърдият фибриноген и твърдият тромбин са прикрепени към w носителя по такъв начин, че абразията е по-малка от 1.0 mg/cm², когато проба от покрития материал се разтърси на Vobrofix шейкър с честота от около 1000 rpm за 2 минути и ако покритият материал се постави в ендоскопично оборудване и след това се отстрани, материалът остава основно непроменен и търпи загуба на покриващия материал по-малко от 20 %, което е индикация за гъвкавост на носителя и за здравото адхезиране на твърдия фибриноген и твърдия тромбин и w- въпросният материал е основно непропусклив за въздух и течност и притежава фактор на еластичност от най-малко 1.25, както е определено от теста, представляващ фиксиране на покрития носител към лист от Latex, трикратно разширяване на листа чрез налягане и измерване на площта от покрития носител в най-високата точка на разширяване на листа и сравняване на разширената площ от покрития носител с началната площ на покритата област.
12. Употреба на носител, притежаващ поне едно от следните физически качества:

коефициент на еластичност в обхвата 5-100 N/cm, плътност от 1 - 10 mg/cm , диаметър на камерата по-голям от 0.75 mm и по-малък от 4 mm и/или среден диаметър под 3 mm и достатъчно количество от фибриноген и достатъчно количество от тромбин за изготвяне на продукта за затваряне на тъкан.
13. Употреба на носител, притежаващ поне едно от следните физически качества:

коефициент на еластичност в обхвата 5-100 N/cm, плътност от 1 - 10 mg/cm³, диаметър на камерата по-голям от 0.75 mm и по-малък от 4 mm и/или среден диаметър под 3 mm и достатъчно количество от фибриноген и достатъчно количество от тромбин за изготвяне на продукта за спиране на кръвотечение.

W
14. Употреба на носител, притежаващ поне едно от следните физически качества:

коефициент на еластичност в обхвата 5-100 N/cm, плътност от 1 - 10 mg/cm³, диаметър на камерата по-голям от 0.75 mm и по-малък от 4 mm и/или среден диаметър под 3 mm и достатъчно количество от фибриноген и достатъчно количество от тромбин за изготвяне на продукта за затваряне на тъкан.
15. Употреба, съгласно всяка една от Претенции 12 - 14 за хирургични интервенции в стомашно чревния тракт, като езофагус, стомах, тънки черва, дебели черва, право черво, паренхимни органи като черен дроб, далак, панкреас, бъбреци, бели дробове, надбъбречни жлези, тиреоидни и тимусни възли, сърдечносъдова хирургия, торакална хирургия включително хирургична намеса в трахеята, бронхите или белите дробове, хирургична интервенция в областта на ухото, носа и гърлото (УНГ) включително зъбна хирургия, гинекологични, урологични, костни (напр. спонгиозна резекция на) операции и спешна медицинска помощ, неврологична хирургия, лимфатични, жлъчни и цереброспинални фистули (ЦСФ) и изпускане на въздух по време на торакална и белодробна хирургия.
16. Употреба, съгласно всяка една от Претенции 12 - 15, характеризираща се с това, че носителят е биоразградим полимер, като полихиалуронова киселина, полихидрокси киселина, напр. млечна киселина, глюконова киселина, хидроксибутаноева киселива, целулоза, желатин или колаген, като колагенова пореста мас, напр. колагенова пореста маса, състояща се от влакна от колаген тип I.
17. Употреба, съгласно всяка една от Претенции 12 - 16, характеризираща се с това, че носителят притежава и едно или повече активни места, в които присъства фибриноген в количества от 2 - 10 mg/cm², напр. 4.3 - 6.7 mg/cm², за предпочитане около 5.5 mg/cm² и тромбинът присъства в количества от 1.5 - 5.5 IU/cm², за предпочитане около 2.0 IU/cm .
18. Употреба, съгласно всяка една от Претенции 12 - 17, характеризираща се с това, че фибриногенът е човешки, пречистен от природен източник, или трансгенен или рекомбинантен фибриноген.
19. Употреба, съгласно всяка една от Претенции 12 - 18, характеризираща се с това, че фибриногенът е пречистен от природен източник.
20. Употреба, съгласно всяка една от Претенции 12 - 18, w характеризираща се е това, че фибриногенът е трансгенен или рекомбинантен.
21. Употреба, съгласно всяка една от Претенции 12 - 20, характеризираща се с това, че тромбинът е човешки, пречистен от природен източник, или трансгенен или рекомбинантен човешки тромбин.
22. Употреба, съгласно всяка една от Претенции 12 - 21, характеризираща се с това, че тромбинът е пречистен от природен f' източник.
23. Състав, съгласно всяка една от Претенции 12 - 21, характеризиращ се с това, че тромбинът е трансгенен или рекомбинантен.

ПАТЕНТНИ ПРЕТЕНЦИИ

Ь М£/ /у. ον

1. Твърд състав, характеризиращ се с това, че се състои основно от

а) носител, който притежава поне две от следните физически качества:

коефициент на еластичност в обхвата 5-100 N/cm, плътност от 1 - 10 mg/cm , диаметър на камерата по-голям от 0.75 mm и по-малък от 4 mm и/или среден диаметър под 3 mm и равномерно разпределен и стабилизиран върху въпросния носител

б) твърд фибриноген и

в) твърд тромбин.

2. Носител, съгласно Претенция 2, характеризиращ се с това, че носителят е колагенова пореста маса, която представлява материал от колаген тип I от бозайник, трансгенен или рекомбинантен източник.

3. Състав, съгласно Претенции 1 или 2, характеризиращ се с това, че носителят притежава едно или повече активни места, в които присъства фибриноген в количества от 2 - 10 mg/cm , напр. 4.3 - 6.7 mg/cm², за предпочитане около 5.5 mg/cm² и тромбинът присъства в количества от 1.5 - 5.5 Ш/cm , за предпочитане около 2.0 Ш/cm .

4. Състав, съгласно всяка една от Претенции 1-3, характеризиращ се с това, че фибриногенът е човешки.

5. Състав, съгласно Претенция 4, характеризиращ се с това, че фибриногенът е пречистен от природен източник.

6. Състав, съгласно Претенция 4, характеризиращ се с това, че фибриногенът е трансгенен или рекомбинантен.

7. Състав, съгласно всяка една от Претенции 1-6, характеризиращ се с това, че тромбинът е човешки.

8. Състав, съгласно Претенция 7, характеризиращ се с това, че тромбинът е пречистен от природен източник.

9. Състав, съгласно Претенция 7, характеризиращ се с това, че тромбинът е трансгенен или рекомбинантен.

10. Материал за спиране на кръмотечение, затваряне на тъкан и залепяне на тъкан, който съдържа гъвкав носител, който притежава поне две от следните физически качества:

коефициент на еластичност в обхвата 5-100 N/cm, плътност от 1 - 10 mg/cm , диаметър на камерата по-голям от 0.75 mm и по-малък от 4 mm и/или среден диаметър под 3 mm и който допълнително включва смес от твърд фибриноген и твърд тромбин и не притежава никакъв фибринолитичен агент, като апротинин, εаминокапронова киселина или а2-антиплазмин, като твърдият фибриноген и твърдият тромбин са прикрепени към носителя по такъв начин, че абразията е по-малка от 1.0 mg/cm², когато проба от покрития материал се разтърси на Vobrofix шейкър с честота от около 1000 rpm за 2 минути и ако покритият материал се постави в ендоскопично оборудване и след това се отстрани, материалът остава основно непроменен и търпи загуба на покриващия материал по-малко от 20 %, което е индикация за гъвкавост на носителя и за здравото адхезиране на твърдия фибриноген и твърдия тромбин и .А'·'··· въпросният материал е основно непропусклив за въздух и течност и притежава фактор на еластичност от най-малко 1.25, както е определено от теста, представляващ фиксиране на покрития носител към лист от Latex, трикратно разширяване на листа чрез налягане и измерване на площта от покрития носител в най-високата точка на разширяване на листа и сравняване на разширената площ от покрития носител с началната площ на покритата област.

11. Употреба на носител, притежаващ поне две от следните С физически качества:

коефициент на еластичност в обхвата 5-100 N/cm, плътност от 1 - 10 mg/cm³, диаметър на камерата по-голям от 0.75 mm и по-малък от 4 mm и/или среден диаметър под 3 mm и достатъчно количество от фибриноген и достатъчно количество от тромбин за изготвяне на продукта за затваряне на тъкан.

12. Употреба на носител, притежаващ поне две от следните физически качества:

коефициент на еластичност в обхвата 5-100 N/cm, плътност от 1 - 10 mg/cm³, диаметър на камерата по-голям от 0.75 mm и по-малък от 4 mm и/или среден диаметър под 3 mm и достатъчно количество от фибриноген и достатъчно количество от тромбин за изготвяне на продукта за спиране на кръвотечението.

13. Употреба на носител, притежаващ поне две от следните физически качества:

коефициент на еластичност в обхвата 5-100 N/cm, плътност от 1 - 10 mg/cm , диаметър на камерата по-голям от 0.75 mm и по-малък от 4 mm и/или среден диаметър под 3 mm и достатъчно количество от фибриноген и достатъчно количество от тромбин за изготвяне на продукта за затваряне на тъкан.

14. Употреба, съгласно всяка една от Претенции 11 - 13 за хирургични интервенции в стомашно чревния тракт, като езофагус, стомах, тънки черва, дебели черва, право черво, паренхимни органи като черен дроб, далак, панкреас, бъбреци, бели дробове, надбъбречни жлези, тиреоидни и тимусни възли, сърдечносъдова хирургия, торакална хирургия включително хирургична намеса в трахеята, бронхите или белите дробове, хирургична интервенция в областта на ухото, носа и гърлото (УНГ) включително зъбна хирургия, гинекологични, урологични, костни (напр. спонгиозна резекция на) операции и спешна медицинска помощ, неврологична хирургия, лимфатични, жлъчни и цереброспинални фистули (ЦСФ) и изпускане на въздух по време на торакална и белодробна хирургия.

15. Употреба, съгласно всяка една от Претенции 11 - 14, характеризираща се с това, че носителят е биоразградим полимер, като полихиалуронова киселина, полихидрокси киселина, напр. млечна киселина, глюконова киселина, хидроксибутаноева киселива,

Ά целулоза, желатин или колаген, като колагенова пореста маса, напр.

колагенова пореста маса, състояща се от влакна от колаген тип I.

16. Употреба, съгласно всяка една от Претенции 11 - 15, характеризираща се с това, че носителят притежава и едно или повече активни места, в които присъства фибриноген в количества от 2 - 10 mg/cm², напр. 4.3 - 6.7 mg/cm², за предпочитане около 5.5 mg/cm² и тромбинът присъства в количества от 1.5 - 5.5 IU/cm², за предпочитане около 2.0 IU/cm .

17. Употреба, съгласно всяка една от Претенции 11 - 16, характеризираща се с това, че фибриногенът е човешки, пречистен от природен източник, или трансгенен или рекомбинантен фибриноген.

18. Употреба, съгласно всяка една от Претенции 11 - 17, характеризираща се с това, че фибриногенът е пречистен от природен източник.

19. Употреба, съгласно всяка една от Претенции 11 - 18, характеризираща се е това, че фибриногенът е трансгенен или рекомбинантен.

20. Употреба, съгласно всяка една от Претенции 11 - 19, характеризираща се с това, че тромбинът е човешки, пречистен от . природен източник, или трансгенен или рекомбинантен човешки тромбин.

21. Употреба, съгласно всяка една от Претенции 11 - 20, характеризираща се с това, че тромбинът е пречистен от природен

Y източник.

22. Състав, съгласно всяка една от Претенции 11 - 21, характеризиращ се с това, че тромбинът е трансгенен или рекомбинантен.