ES2238569T3

ES2238569T3 - Vehiculo con fibrinogeno solido y trombina solida.

Info

Publication number: ES2238569T3
Application number: ES02724554T
Authority: ES
Inventors: Dagmar Stimmeder
Original assignee: Nycomed Pharma AS
Current assignee: Takeda AS
Priority date: 2001-01-25
Filing date: 2002-01-25
Publication date: 2005-09-01
Anticipated expiration: 2022-01-25
Also published as: JP2007190399A; EG24589A; EA200300823A1; HUP0400768A3; IS6885A; BG108121A; CN1246047C; AU2002249528B2; AR032400A1; IL157095A0; NO20033295L; KR100847417B1; HK1058319A1; JP2004520124A; EA200401463A1; DK1368419T3; DE60203364D1; MXPA03006689A; ME00587B; MXPA03006687A

Abstract

Una composición sólida, que consta esencialmente de: a) un vehículo que tiene al menos una de las siguientes propiedades físicas: - módulo de elasticidad en el intervalo de 10-50 N/cm2, - densidad de 1-10 mg/cm3, - diámetro de cámara mayor que 0, 75 mm y menor que 4 mm y/o que tiene un diámetro medio de cámara inferior a 3 mm y distribuido uniformemente y fijado sobre dicho vehículo una mezcla de: b) fibrinógeno humano sólido, y c) trombina humana sólida.

Description

Vehículo con fibrinógeno sólido y trombina sólida.

Campo de la invención

La presente invención se refiere a una composición absorbible lista para usar para pegar tejidos, sellar tejidos y hemostasis, que consta esencialmente de un vehículo revestido con componentes humanos sólidamente fijados de pegamento de fibrina: fibrinógeno humano y trombina humana. Esta combinación fija se puede aplicar directamente, por ejemplo, a la superficie de una herida. En contacto con la sangre, fluidos corporales o solución salina fisiológica, el mecanismo de este sistema mimetiza la etapa final de la cascada de coagulación, en la que la trombina cataliza la conversión de fibrinógeno en fibrina y la activación del factor XIII para dar XIIIa. El factor XIIIa, una vez formado, estabiliza el coágulo de fibrina por reticulación covalente.

Como un adhesivo de dos componentes, la superficie de la herida y el vehículo se pegan entre sí por polimerización. Durante este procedimiento, que dura aproximadamente de 3 a 5 minutos, la composición de la invención preferiblemente se aprieta sobre la zona de la herida. Los componentes de la composición de la invención se degradan enzimáticamente en aproximadamente 4 - 6 meses después de la aplicación.

Técnica anterior

Los pegamentos de fibrina comerciales, que mimetizan la última etapa de la cascada de coagulación, constan de una solución de fibrinógeno altamente concentrada que se tiene que mezclar con una solución de trombina antes de aplicarla a la herida quirúrgica. Esta mezclas contienen un inhibidor de fibrinolisis, por ejemplo la aprotinina o ácido \varepsilon-aminocaproico, para prevenir la disolución prematura del coágulo de fibrina por la enzima fibrinolítica denominada plasmina. Estos pegamentos de fibrina de dos componentes son valiosos en diferentes procedimientos quirúrgicos, pero se pueden quitar antes de alcanzar la hemostasis si la hemorragia es importante. Además los pegamentos de fibrina de dos componentes necesitan algunas etapas de preparación que incluyen descongelación o disolución. Por lo tanto, son bastante poco prácticas y es engorroso trabajar con ellas, y se necesita experiencia para el uso con éxito de estos adhesivos de fibrina.

Durante la última década numerosos selladores de fibrina se convirtieron en los métodos preferidos en cirugía en una serie de indicaciones. Sin embargo, en la mayoría de los ensayos con pegamentos de fibrina, se usaba adicionalmente una especie de muletón (tela gruesa suave y afelpada) de colágeno para mejorar las características hemostáticas y adhesivas, indicando los cirujanos sus desventajas y restricciones de uso.

Desde finales de la década de 1970 el colágeno se ha usado como agente hemostático. El colágeno es la proteína estructural más frecuente en todos los mamíferos. La proteína monómera de aproximadamente 300 kDa (tropocolágeno) está reticulada covalentemente en sitios específicos. Por lo tanto, la proteína madura es insoluble y forma fibrillas características con una alta resistencia a la tracción. Se han descrito numerosas subclases de colágeno, cuyo tipo más común es el colágeno de tipo I, el tipo de colágeno principal en la piel, tendones, huesos y córnea. El colágeno es una proteína fibrosa que consta de una triple hélice con una longitud de aproximadamente 290 nm. Cinco de estas triple hélices (moléculas de tropocolágeno) se alternan para formar una microfibrilla con un diámetro de aproximadamente 3,6 nm. Estas microfibrillas tienen segmentos polares y no polares que son fácilmente accesibles para interacciones inter- e intra-fibrilares específicas. Las microfibrillas se empaquetan en una red tetragonal para formar subfibrillas con un diámetro de aproximadamente 30 nm. Estas subfibrillas después se ensamblan en la fibrilla de colágeno, la unidad básica del tejido conjuntivo, que tiene un diámetro de varios cientos de nm, y por lo tanto es visible en el microscopio óptico como una línea delgada.

El colágeno se puede usar como un material para sellar heridas, posiblemente con un revestimiento que comprende un pegamento de fibrina. Los pegamentos de fibrina, es decir, la combinación de fibrinógeno, trombina y aprotinina, se ha usado con éxito terapéuticamente durante muchos años para pegar tejidos y nervios y para sellar superficies cuando hay una hemorragia poco importante. Un inconveniente de los adhesivos de fibrina ha sido que en caso de hemorragia importante, normalmente el pegamento es arrastrado antes de que se produzca suficiente polimerización de la fibrina. Para superar este problema los cirujanos han empezado a aplicar manualmente adhesivos de fibrina líquida en vehículos absorbibles tales como muletón de colágeno.

A pesar del éxito admirable de estas aplicaciones combinadas, este método no se ha aplicado a una gran escala, debido a algunas desventajas. La preparación es relativamente pesada, el método requiere experiencia y personal técnico, y la preparación no está fácilmente disponible en casos de emergencia, siendo el tiempo de preparación en el intervalo de 10 a 15 minutos. Estos factores estimularon el desarrollo de un producto mejorado que dio como resultado el desarrollo de una combinación fija de un vehículo de colágeno recubierto con un revestimiento de fibrinógeno sólido, trombina sólida y aprotinina sólida como se describe en la patente europea 00059265.

La función del vehículo de colágeno descrito en la patente europea 0059265 es principalmente la de un vehículo que absorbe y confiere estabilidad mecánica a la preparación de coagulación con la cual se reviste.

Se ha desarrollado y fabricado un producto con la marca registrada TachoComb® que combina las características hemostáticas del pegamento de fibrina con la ventaja del colágeno como vehículo. TachoComb® es una combinación fija fácil de aplicar y lista para usar de un parche de colágeno revestido con los siguientes componentes activos del pegamento de fibrina: fibrinógeno humano, trombina bovina y aprotinina bovina.

TachoComb® ha sido vendido desde principios de 1990 por Nycomed Pharma y se ha usado en ensayos clínicos en Europa en más de 2500 pacientes. Además, el producto se ha usado en más de 700 pacientes en el programa clínico japonés en una gran variedad de indicaciones, tales como resección de hígado y pulmón, cirugía del tracto biliar, cirugía del bazo, renal y pancreática, cirugía en la zona del oído, nariz y garganta (abreviadamente ENT por sus iniciales en inglés ear, nose and throat), cirugía ginecológica, y cirugía vascular. Se ha encontrado que TachoComb® es eficaz y seguro.

No se han descrito complicaciones clínicas relacionadas con la aplicación de TachoComb® en el transcurso de los ensayos clínicos realizados. Sin embargo, en tres estudios japoneses se encontraron anticuerpos contra la aprotinina.

Se han descrito solamente un total de 37 reacciones adversas medicamentosas (RAM) espontáneas durante años de uso clínico de miles de parches de TachoComb®. Dieciséis de estas RAM teóricamente se podían relacionar con reacciones frente a los componentes de TachoComb® (fiebre, pirexia, eosinofilia, tiempo de la protrombina prolongado, hipersensibilidad, reacciones inmunitarias o alérgicas). Una RAM (respuesta inmunitaria) al parecer estaba relacionada con el tratamiento con TachoComb®.

En el documento WO97/37694 (Immuno France S.A.) se describe en el ejemplo de referencia 4, que cuando se usó un producto de colágeno o TachoComb®, no hubo hemostasis, lo que llevó a una hemorragia mortal cuando se usó TachoComb®, en contraste con hemostasis en 5 minutos cuando se preparó un producto de colágeno sin un contenido de trombina preparado de acuerdo con el documento WO97/37694.

En el documento WO96/40033 se pone énfasis en las desventajas de la trombina bovina usada en TachoComb®, en cuanto que el uso de trombina bovina o de otras especies puede introducir contaminación vírica y posible transmisión de enfermedades bovinas, tales como la encefalitis espongiforme bovina.

Descripción detallada

La presente invención se refiere a una composición sólida que consta esencialmente de un vehículo de colágeno que tiene al menos dos de las siguientes propiedades físicas:

módulo de elasticidad en el intervalo de 10-50 N/cm^{2};

densidad de 1-10 mg/cm^{3};

diámetro de cámara de más de 0,75 mm y menos de 4 mm y/o siendo el diámetro medio de cámara inferior a 3 mm

y distribuido uniformemente y fijado sobre dicho vehículo una mezcla de:

b) fibrinógeno humano sólido, y

c) trombina humana sólida.

La composición debe tener dos, tres o todas las propiedades físicas antes mencionadas. En las realizaciones actualmente preferidas, el material vehículo se prepara como se describe en el documento DK PA 2001 00135 y además en la solicitud de patente PCT titulada "A method of preparing a collagen sponge, a device for extracting part of the collagen foam and an elongated collagen sponge" (Un método para preparar una esponja de colágeno, un dispositivo para extraer parte de la espuma de colágeno y una esponja de colágeno alargada) presentada por Nycomed Pharma AS el 25 de Enero de 2002 que reivindica la prioridad de dicha solicitud. En el contexto presente, la expresión "diámetro de cámara" se debe entender como la distancia de pared a pared en línea recta más larga en una cámara, es decir, la distancia en línea recta en diagonal más larga de una cámara. Las cámaras pueden tener una forma poligonal, tal como una forma octogonal. Por lo tanto, cuando se corta el vehículo, las cámaras se dividen y cortan en cavidades. El fibrinógeno sólido y la trombina sólida se fijan al vehículo, y la mayor parte de él está presente en las cavidades, proporcionando así una distribución sustancialmente uniforme de la trombina sólida y fibrinógeno sólido. Debido a esto y a la fijación, se pueden introducir cantidades sustanciales de fibrinógeno y trombina en el vehículo, en contraste con la situación en la que las composiciones líquidas de trombina y fibrinógeno, por ejemplo, se aplicaban por goteo o pulverización sobre el material.

Preparación del vehículo revestido

La preparación del vehículo revestido consta esencialmente de:

-: preparación de una suspensión de los ingredientes activos

-: distribución uniforme de la suspensión en el vehículo

-: secado del vehículo revestido hasta formar una composición sólida/fijación de los ingredientes activos al vehículo.

La preparación de una suspensión con fibrinógeno y trombina comprende:

-: proporcionar una mezcla de fibrinógeno y un alcohol, tal como etanol

-: proporcionar una mezcla de trombina y un alcohol, tal como etanol

-: mezclar la mezcla de fibrinógeno y la mezcla de trombina para obtener así dicha suspensión.

En la etapa de preparar las mezclas, la mezcla se debe homogeneizar o tamizar, obteniendo una suspensión que contiene fibrinógeno y partículas de trombina siendo el diámetro medio de Folk Ward de las partículas de 25 - 100 \mum. La temperatura está entre 0ºC y 12ºC.

El vehículo puede ser un vehículo de colágeno, tal como una esponja de colágeno. La esponja de colágeno debe cumplir al menos una y preferiblemente una pluralidad de los siguientes criterios:

-: valor de pH entre 5,0 y 6,0,

-: contenido de ácido láctico, como máximo 5%,

-: contenido de amoniaco, como máximo 0,5%,

-: contenido de proteína soluble, calculada como contenido de albúmina, como máximo 0,5%,

-: contenido de cenizas sulfatadas, como máximo 1,0%,

-: contenido de metales pesados, como máximo 20 ppm,

-: pureza microbiológica, como máximo 10^{3} UFC/g,

-: contenido de colágeno de 75 a 100%,

-: densidad de 1 a 10 mg/cm^{3},

-: módulo de elasticidad en el intervalo de 5-100 N/cm^{2}.

En una realización actualmente preferida, el vehículo de colágeno se prepara como se describe en el documento DK PA 2001 00135. En la siguiente tabla se proporcionan las propiedades físicas de los tres ejemplos de vehículos de colágeno:

1

La distribución uniforme de las suspensiones se lleva a cabo usando un dispositivo por goteo como se describe en las patentes de EE.UU. nº 5.942.278 y 6.177.126, o se puede usar un aplicador que comprende al menos un chorro para aplicar la suspensión sobre el vehículo. El aplicador de chorro fuerza la suspensión a través del chorro, mientras el vehículo y el chorro se mueven uno con respecto al otro. El aplicador puede comprender o estar dispuesto cerca de una cinta transportadora, una unidad agitadora conectada a una bomba o a un sistema de bombas, u otro equipo de suministro, y un chorro o sistema de chorros que se mueve transversalmente, por ejemplo, en ángulos rectos con la cinta transportadora. Dependiendo de las características específicas de los medios, el chorro o el sistema de chorros puede tener diferentes formas y tamaños. El chorro o sistema de chorros puede estar conectado al equipo de suministro mediante tubos. El equipo de suministro puede promover el medio de revestimiento de la unidad de agitación al sistema de chorros. Durante el procedimiento de revestimiento el sistema de chorro se puede mover a través del vehículo. En su posición de espera puede mantenerse a un lado de la cinta transportadora. El proceso de revestimiento se puede iniciar con una barrera de luz que percibe la presencia de un vehículo en la cinta transportadora, y se puede detener igualmente con una señal de barrera de luz. Dicho aplicador confiere un volumen muerto relativamente pequeño, y es fácil de manejar, incluyendo fácil de limpiar. Además, confiere la posibilidad de interrumpir el proceso de revestimiento en cualquier momento, es aplicable en un intervalo de viscosidades relativamente amplio, y confiere un revestimiento homogéneo.

Ambos sistemas aplican un volumen de 0,08 ml-0,12 ml de suspensión por cm^{2} de vehículo.

Una etapa importante es el secado de una suspensión de fibrinógeno, trombina y un alcohol, aplicada como un revestimiento húmedo en una superficie de revestimiento de un vehículo. Un ejemplo de un método comprende la etapa de someter el vehículo revestido a una presión por debajo de 1000 milibares, para obtener una superficie de revestimiento seca sobre el vehículo y fijar el revestimiento seco a la superficie de revestimiento. Aplicando vacío y usando el vacío en el proceso de secado, se puede mantener una temperatura baja (2 - 10ºC) y una humedad relativa alta (80 - 95%), de forma que se pueda mantener la estructura y las propiedades físicas del vehículo, en particular un vehículo en forma de un colágeno, tal como una esponja de colágeno, así como del fibrinógeno y la trombina.

Por la expresión "que consta esencialmente de" se entiende que los tres componentes son esenciales y necesarios para la invención. Sin embargo, también puede haber en la composición aditivos no esenciales, tales como iones calcio y un marcador colorante tal como riboflavina. La composición puede comprender además otros ingredientes útiles, tales como una o más sustancias farmacéuticas activas que se pueden seleccionar, por ejemplo, del grupo que consta de antibióticos, tal como agentes antibacterianos o antimicóticos, y agentes antineoplásicos.

Aunque el material vehículo preferiblemente es una esponja de colágeno que comprende material de colágeno de tipo I de mamíferos, fuentes transgénicas o recombinantes, se puede preparar mediante otros tipos de colágeno, es decir, colágeno de tipo I, II, III, IV, VII y X. Sin embargo, también se prevé que el vehículo pueda ser un polímero biodegradable, tal como un poli(ácido hialurónico), polihidroxi-ácido, por ejemplo ácido láctico, ácido glucólico, ácido hidroxibutanoico, una celulosa o gelatina.

En una realización preferida de la invención, la composición comprende un vehículo que tiene una o más caras activas, en las que el fibrinógeno está presente en una cantidad de 2-10 mg/cm^{2}, tal como 4,3-6,7 mg/cm^{2}, preferiblemente aproximadamente 5,5 mg/cm^{2}, y la trombina está presente en una cantidad de 1,0-5,5 U.I./cm^{2}, preferiblemente aproximadamente 2,0 U.I./cm^{2}. El fibrinógeno y/o la trombina son preferiblemente humanos, por ejemplo, purificados de una fuente natural por métodos conocidos por los expertos en la técnica, o fibrinógeno y/o trombina humanos transgénicos o recombinantes preparados por métodos conocidos por los expertos en la técnica.

Los productos de la técnica anterior tales como TachoComb®, Beriplast® y TissueSeal® contienen todos aprotinina o agentes antifibrinolíticos similares. La aprotinina sólo se puede proporcionar de una fuente bovina. Un objetivo de los autores de la invención ha sido desarrollar una composición con un material vehículo mejorado y sólo componentes humanos de origen recombinante o transgénico. Por lo tanto, se ha desarrollado el material vehículo, y se ha investigado si podía sustituir la trombina bovina por trombina humana y evitar la aprotinina. Los autores de la presente invención han trabajado hacia este objetivo por un procedimiento de dos etapas.

En primer lugar, se ha desarrollado TachoComb H como un producto de desarrollo de TachoComb®, sustituyendo, por ejemplo, la trombina bovina por trombina humana. Se han llevado a cabo experimentos clínicos con TachoComb H en relación con una serie de ensayos clínicos terapéuticos de confirmación (fase IIIa) dentro de las indicaciones de pegado de tejidos y sellado de tejidos. Los resultados todavía no publicados alcanzados en estos estudios confirmaron la eficacia y seguridad de TachoComb H en el control de pérdida de sangre y aire, sirviendo por lo tanto como una terapia adyuvante para suturar en hemostasis, pegado de tejidos y sellado de tejidos durante la cirugía. En particular se mostró convincentemente la eficacia de TachoComb H para lograr la hemostasis local, expresada como una reducción significativa del tiempo de hemostasis comparado con testigos, tanto en cirugía vascular como de hígado.

También se ha encontrado que TachoComb H puede reducir el tamaño de los defectos pulmonares, dando como resultado una resolución más rápida de la fuga de aire y puede ser útil para sellar fugas pulmonares graves y en pulmones enfisematosos.

Sin embargo, tanto TachoComb® como TachoComb comprenden aprotinina como una parte integral del producto. La aprotinina se ha considerado necesaria para inhibir la posible conversión de pequeñas cantidades de plasminógeno en plasmina en el componente fibrinógeno, y para prevenir la lisis prematura del coágulo de fibrina especialmente en condiciones hiperfibrinolíticas.

Los autores de la presente invención concibieron nuevos experimentos con el fin de ensayar esta hipótesis de que era necesaria la aprotinina. Los experimentos in vitro mostraron la protección antifibrinolítica de la aprotinina en el coágulo, y que TachoComb® sin aprotinina (TachoComb S) no se disolvía en un periodo de tiempo muy corto. Después se diseñaron modelos animales estresantes y se comparó TachoComb S con TachoComb H para probar la eficacia similar. En todos los modelos TachoComb H o S, respectivamente, se usaron como el único medio de hemostasis.

Se han llevado a cabo cuatro series experimentales extensivas, con el fin de investigar la eficacia y el modelo histopatológico de la realización actualmente preferida de la presente invención TachoComb S comparado con TachoComb H. Se aplicó TachoComb S o TachoComb H en los órganos hígado, bazo, páncreas o cerebro/meninges de perros, cerdos o conejos. Los experimentos se diseñaron de forma que parecieran condiciones normales de cirugía, condiciones muy estresantes y condiciones hiperfibrinolíticas.

Los resultados obtenidos en estos cuatro estudios no mostraron ninguna diferencia relevante entre TachoComb S y TachoComb H. Ambos productos se comportaron igual en relación con la eficacia hemostática y de sellado de herida. incluyendo condiciones muy estresantes como mayor presión interna de órgano o hiperfibrinolisis inducida por aplicación local de r-tPA.

Se puede concluir que el programa preclínico diseñado para evaluar la necesidad global de la aprotonina como componente de TachoComb H, ha probado una eficacia similar de TachoComb H y TachoComb S. Ambos productos han tenido éxito como el único medio de hemostasis, pegado de tejidos y sellado de tejidos en todas las condiciones experimentales. En el transcurso de los experimentos con animales, no hubo reacciones no deseables de los tejidos. Por consiguiente, se la eliminado la aprotinina de la composición de la invención.

Se espera que la composición de la invención clínicamente ejerza las mismas propiedades hemostáticas, de pegado de tejidos y sellado de tejidos que sus predecesores, y que tengan el mismo perfil de seguridad o incluso más satisfactorio. La ausencia de aprotinina que realmente sólo se puede disponer de fuentes bovinas, añade seguridad frente a reacciones de hipersensibilidad. En relación con esto, hay que señalar que se encontraron anticuerpos frente a la aprotinina en tres estudios japoneses. No se anticipa una respuesta inmunitaria como esta con una composición sin aprotinina.

En una realización actualmente preferida, la invención se refiere a una composición sólida para la hemostasis, sellado de tejidos y pegado de tejidos, que consta esencialmente de un vehículo de colágeno flexible que tiene al menos dos de las siguientes propiedades físicas:

-: módulo de elasticidad en el intervalo de 10-50 N/cm^{2};

-: densidad de 1-10 mg/cm^{3};

-: diámetro de cámara de más de 0,75 mm y menos de 4 mm y/o que tenga un diámetro medio de cámara inferior a 3 mm

y que además comprende una mezcla de

fibrinógeno humano sólido,

y trombina humana sólida,

y no comprende ningún agente antifibrinolítico tal como aprotinina, ácido \varepsilon-aminocaproico o \alpha2-antiplasmina,

estando fijado el fibrinógeno humano sólido y la fibrina humana sólida en el vehículo, de forma que la abrasión es menos de 1,0 mg/cm^{2} cuando una muestra del material revestido se agita en un agitador Vibrofix con una frecuencia de aproximadamente 1000 rpm durante 2 minutos, y

si el material vehículo revestido se inserta en un equipo endoscópico y después se retira, el material sustancialmente no ha cambiado y ha perdido menos de 20% del material de revestimiento como una indicación de la flexibilidad del vehículo y la adherencia al sólido del fibrinógeno humano sólido y trombina humana sólida, y

y siendo dicho material sustancialmente estanco al aire y estanco a los líquidos, y teniendo un factor de elasticidad de al menos 1,25 determinado por un ensayo que comprende fijar el vehículo revestido a una lámina de látex, expandir el látex por presión tres veces, y la tercera vez medir el área del vehículo revestido en el punto más alto de la expansión de la lámina de látex, y comparar el área expandida del vehículo revestido con el área inicial del área
revestida.

La composición de la invención en la que el fibrinógeno y la trombina son humanos, por ejemplo, purificados de una fuente natural, o trombina y fibrinógeno humanos transgénicos o recombinantes, es el único sellador de fibrina no bovino con una combinación fija de componentes activos en un revestimiento sobre un vehículo flexible, y tiene varias ventajas:

Listo para el uso, no es necesario un procedimiento de preparación o descongelación que consume tiempo.

Se aplica directamente fácilmente en la mayoría de tejidos y superficies de órganos.

Es posible la aplicación endoscópica

No hay problemas con el arrastre o aclarado hemostático de la zona diana

Combinación del efecto de pegado de la coagulación de la fibrina y soporte mecánico del vehículo flexible

Altamente flexible y que aguanta fuertes tensiones y compresiones

Hemostasis eficaz y sellado de tejido en 3-5 minutos

Perfil de seguridad favorable, es decir, no hay componentes bovinos

Biodegradable, dejando sólo cicatrices en el tejido poco importantes

Se puede conservar de +2ºC a +8ºC, y tendrá un periodo de validez esperado de 36 meses, o a temperatura ambiente
{}\hskip0.4cm durante un periodo de hasta al menos 2 años.

La razón para desarrollar la composición de la invención, deriva de un deseo de deshacerse del último componente bovino con el fin de prevenir cualquier riesgo, incluso teórico, de transmisión de enfermedades de las vaca a los seres humanos, incluyendo encefalopatías espongiformes transmisibles (EET). Por lo tanto, los componentes activos fibrinógeno y trombina son de origen humano, y se ha eliminado la aprotinina bovina, el inhibidor de la enzima fibrinolítica plasmina. Por lo tanto, la ventaja de la composición preferida de la invención que no contiene componentes bovinos, es que se ha eliminado el riesgo de transmitir enfermedades, incluyendo la encefalopatía espongiforme bovina (EEB), mediante material bovino.

De la misma forma que otros pegamentos de fibrina, la composición de la invención funciona reproduciendo la última etapa de la cascada de coagulación de la sangre. Una mezcla de fibrinógeno y trombina forman una capa sólida fija en la superficie del vehículo flexible. Por contacto con fluidos, por ejemplo, una superficie que sangra, fluidos corporales o solución salina fisiológica, los componentes de la capa se disuelven, se difunden en las cavidades de la herida y empiezan a reaccionar.

El proceso de polimerización produce una fuerte adherencia entre la superficie de la herida y el parche de vehículo durante el tiempo necesario para pegar, es decir de 3 a 5 minutos, la composición de la invención preferiblemente se debe presionar suavemente sobre la superficie de la herida. El parche de vehículo proporciona soporte mecánico que permite el tamponamiento de la herida. El parche mantiene los componentes de la coagulación en el sitio cuando las heridas sangran profusamente, y previene el potencial re-sangrado. El mecanismo de acción implica la conversión por la trombina del fibrinógeno en fibrina por escindiendo péptidos. Los monómeros de fibrina polimerizan espontáneamente en hebras de fibrina formando un coágulo viscoso y elástico, que pega el parche de vehículo a la superficie de la herida. La matriz de fibrina posteriormente sirve como andamiaje para la migración de fibrinoblastos (Fig. 8).

Como un adhesivo de dos componentes, la superficie de la herida y el vehículo se pegan entre si por polimerización. La estabilidad mecánica del parche de vehículo añade un efecto de tamponamiento al efecto hemostático de la coagulación de la fibrina. Además, las sustancias activas sólo están presentes en la superficie del vehículo de cara a la zona herida, y en virtud del efecto de tamponamiento y la suave presión, no se difunden por el vehículo. Por consiguiente, y en contraste con la situación cuando se usan la mayoría de los adhesivos de fibrina, no hay adherencia entre la zona herida cubierta con la composición de la invención y otros órganos o sus partes, cuando se ha usado la composición de la invención.

A diferencia de los adhesivos de cianoacrilato y gelatina-resorcina-formaldehído (GRF), que son muy histotóxicos para el tejido parenquimatoso, la composición sólida de la presente invención es degradada fisiológicamente y sustituida por tejido en semanas o meses después de la aplicación, principalmente por dos mecanismos:

1. El coágulo de fibrina es degradado parcialmente por fibrinolisis y parcialmente por fagocitosis celular.

2. El vehículo es degradado capa por capa por tejido de granulación de absorción y es convertido en una seudo-cápsula que consta de tejido conjuntivo endógeno.

La composición de la invención es útil para hemostasis, pegado de tejidos y sellado de tejidos, en particular en intervención quirúrgica en el sistema gastrointestinal, tal como esófago, estómago, intestino delgado, intestino grueso, recto, u órganos parenquimales, tales como hígado, bazo, páncreas, riñones, pulmones, glándulas suprarrenales, tiroides y nódulos linfáticos, cirugía cardiovascular, cirugía torácica, incluyendo cirugía de la tráquea, bronquios o
pulmones, intervenciones quirúrgicas en zona de oído, nariz y garganta (ENT) incluyendo cirugía dental, ginecológica, urológica, ósea (por ejemplo, resección espongiosa), y cirugía de urgencia, cirugía neurológica, fístulas linfática, biliar y cefalorraquídea (CSF), y fugas de aire durante la cirugía torácica o pulmonar. Por lo tanto, la presente invención también se refiere al uso de las composiciones descritas para los fines anteriores.

De ponerse énfasis en que la composición de la invención es sustancialmente estanca al aire y estanca a líquidos, que es la razón de que el producto sea particularmente útil para tratar fístulas linfáticas, biliares y cefalorraquídeas (CSF), y fugas de aire durante la cirugía pulmonar y torácica. Además, debido a que el producto es sustancialmente estanco a líquidos, es muy útil en cirugía de órganos con mucha hemorragia tal como el hígado o bazo, y para cirugía, por ejemplo, en el canal gastrointestinal.

El producto de la invención se aplica cuando no se puede controlar la hemorragia, o pérdida linfática, biliar, de aire o CSF, por métodos convencionales o cuando estos métodos darían resultados desfavorables.

El vehículo preferiblemente es esponja de colágeno, muletón o parche, cuyos términos se usan como sinónimos en la presente memoria descriptiva y reivindicaciones. Los componentes colágeno, fibrinógeno y trombina preferiblemente son de origen mamífero. Preferiblemente, los componentes sólidos son de origen humano. El colágeno, fibrinógeno y la trombina se pueden purificar de una fuente natural o de fibrinógeno y/o trombina humanos recombinante o transgénico.

Una fuente actualmente preferida de colágeno es equina. Con el fin de prevenir transmisión vírica debido a contaminación con virus equinos que son patógenos para los seres humanos en virtud del parche de colágeno, es importante la selección adecuada de la fuente de material y la inactivación de agentes potencialmente patógenos por el procedimiento de fabricación, como medidas precautorias.

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Ejemplos

Los Ejemplos I - IV siguientes ilustran diferentes procedimientos para preparar una esponja de colágeno revestida con diferentes materias primas de fibrinógeno y trombina.

Materias primas de fibrinógeno

4

Materias primas de trombina

5

Ejemplo I

En este ejemplo, la suspensión contiene formulación B de fibrinógeno humano y formulación B de trombina humana.

Se obtuvo un volumen final de suspensión de 3500 ml aplicando las siguientes cantidades y parámetros:

Mezcla de fibrinógeno:

-: 2800 ml de etanol (94% a 2ºC-8ºC)

-: 492,5 g de formulación B de fibrinógeno humano

-: 493,5 mg de riboflavina

La mezcla de fibrinógeno se conservó durante 8 - 16 horas, a 2-8ºC mientras se agitaba.

Mezcla de trombina:

-: 100 ml de etanol (100% a -30ºC)

-: 12,27 g de formulación B de trombina humana

La mezcla de trombina se almacenó durante 8 - 16 horas a -30ºC.

Suspensión:

-: Se añaden 157 ml de mezcla de trombina a la mezcla de fibrinógeno.

-: Se añadió etanol al 94% a 2 - 8ºC para alcanzar el volumen final de suspensión de 3500 ml.

Características de la suspensión:

1. Concentración del etanol: 94,3%

2. Comportamiento de sedimentación:

a): Volumen de sedimentación 5 minutos después de empezar: 98% del volumen de ensayo,

b): Volumen de sedimentación 24 horas después de empezar: 64% del volumen de ensayo.

3. Tamaño de partículas (diámetro medio de Folk Ward): 56,4 +/- 1,3 \mum

Se revistieron con la suspensión vehículos con forma de tiras de colágeno. Primero, se incubaron previamente 48 tiras de esponja de colágeno en una cámara de enfriamiento, en las siguientes condiciones:

-: Temperatura: 5,2ºC

-: Humedad absoluta: 4,8 g de agua por kg de aire

-: Tiempo de incubación: 18,5 horas

Las tiras de esponja de colágeno revestidas se secaron como sigue:

Las tiras de colágeno se incubaron durante 15 minutos a una temperatura de5,2ºC y una humedad absoluta de 4,8 g de agua por kg de aire.

Después las tiras revestidas se secaron en una cámara de secado a vacío en las siguientes condiciones de secado:

-: Condiciones del aire: temperatura de 5,2ºC, humedad absoluta de 4,8 g de agua por kg de aire

-: Caudal de aire por la válvula de aspiración: 23 m^{3} por hora

-: Vacío: 59 milibares

-: Tiempo de secado: 4 horas

La abrasión del revestimiento obtenido sobre las tiras de esponja de colágeno era aproximadamente 0,2 mg/cm^{2} cuando se agitaba en un agitador Vibrofix a una frecuencia de 800 - 1200 rpm durante 2 minutos.

Ejemplo II

En este ejemplo, la suspensión contiene formulación C de fibrinógeno humano y formulación C de trombina humana.

Se obtuvo un volumen final de suspensión de 3500 ml, aplicando las siguientes cantidades y parámetros:

Mezcla de fibrinógeno:

-: 2252 ml de etanol (94% a 2ºC-8ºC)

-: 370,7 g de formulación C de fibrinógeno humano

-: 493,5 mg de riboflavina

La mezcla de fibrinógeno se conservó durante 8 - 16 horas a 2-8ºC mientras se agitaba.

Mezcla de trombina:

-: 188 ml de etanol (100% a -30ºC)

-: 12 viales de formulación C de trombina humana (10650 U.I./vial)/12 ml de agua para inyección

La mezcla de trombina se conservó durante 8 - 16 horas a -30ºC.

Suspensión:

-: Se añadieron 164,5 ml de mezcla de trombina a la mezcla de fibrinógeno.

-: Se añadió etanol al 94% a 2 - 8ºC para llegar al volumen final de suspensión de 3500 ml.

Características de la suspensión:

1. Concentración de etanol: 94,1%

2. Comportamiento de sedimentación:

a): Volumen de sedimentación 5 minutos después de empezar: 94% del volumen de ensayo,

b): Volumen de sedimentación 24 horas después de empezar: 71% del volumen de ensayo.

3. Tamaño de partículas (diámetro medio de Folk Ward): 49,2 +/- 0,93 \mum

-: Temperatura: 4,8ºC

-: Humedad relativa: 90,3%

-: Tiempo de incubación: 22,25 horas

Las tiras de esponja de colágeno revestidas se secaron como sigue:

Las tiras de colágeno se incubaron durante 13 minutos a una temperatura de 4,9ºC y una humedad absoluta de 4,8 g de agua por kg de aire.

-: Condiciones del aire: temperatura de 5,2ºC, humedad absoluta de 4,9 g de agua por kg de aire

-: Caudal de aire por la válvula de aspiración: 25 m^{3} por hora

-: Vacío: 60 milibares

-: Tiempo de secado: 4 horas

La abrasión del revestimiento obtenido sobre las tiras de esponja de colágeno era aproximadamente 0,3 mg/cm^{2} cuando se agitaba en un agitador Vibrofix a una frecuencia de 800 - 1200 rpm durante 2 minutos.

Ejemplo III

Se obtuvo un volumen final de suspensión de 780 ml, aplicando las siguientes cantidades y parámetros:

Mezcla de fibrinógeno:

-: 700 ml de etanol (94% a 2ºC-8ºC)

-: 84,42 g de formulación C de fibrinógeno humano

-: 110 mg de riboflavina

Mezcla de trombina:

-: 35 ml de etanol (100% a -30ºC)

-: 0,54 g de formulación C de trombina humana

La mezcla de trombina se almacenó durante 8 - 16 horas a -30ºC.

Suspensión:

-: Se añadieron 23,0 ml de mezcla de trombina a la mezcla de fibrinógeno.

-: Se añadió etanol al 100% a 2 - 8ºC para llegar al volumen final de suspensión de 780 ml.

Características de la suspensión:

1. Concentración de etanol: 94%

2. Comportamiento de sedimentación:

a): Volumen de sedimentación 5 minutos después de empezar: 92% del volumen de ensayo,

b): Volumen de sedimentación 24 horas después de empezar: 72% del volumen de ensayo.

3. Tamaño de partículas (diámetro medio de Folk Ward): 60,5 +/- 0,5 \mum

Se revistieron con la suspensión vehículos con forma de tiras de colágeno. Primero, se incubaron previamente 8 tiras de esponja de colágeno en una cámara de enfriamiento, en las siguientes condiciones:

-: Temperatura: 6,0ºC

-: Humedad relativa: 85%

-: Tiempo de incubación: 18,5 horas.

Las tiras de esponja de colágeno revestidas se secaron como sigue:

Las tiras de colágeno se incubaron durante 45 minutos a una temperatura de 5ºC y una humedad relativa de 85%

-: Condiciones del aire: temperatura de 5ºC, humedad relativa 85%

-: Caudal de aire por la válvula de aspiración: 1,2 m^{3} por hora

-: Vacío: 35 milibares

-: Tiempo de secado: 4 horas

Ejemplo IV

En este ejemplo, la suspensión contiene formulación A de fibrinógeno humano y formulación A de trombina humana.

Se obtuvo un volumen final de suspensión de 3120 ml, aplicando las siguientes cantidades y parámetros:

Mezcla de fibrinógeno:

-: 2540 ml de etanol (100% a 2ºC-8ºC)

-: 311,6 g de formulación A de fibrinógeno humano

-: 440 mg de riboflavina

Mezcla de trombina:

-: 210 ml de etanol (100% a -30ºC)

-: 229 g de formulación A de trombina humana

Suspensión:

-: Se añadieron 87,3 ml de agua para inyección en la mezcla de fibrinógeno.

La mezcla de trombina se añadió a la mezcla de fibrinógeno.

Se añadió etanol a 2 - 8ºC al 100% para llegar al volumen final de suspensión.

Características de la suspensión:

1. Concentración de etanol: 97%

2. Comportamiento de sedimentación:

a): Volumen de sedimentación 5 minutos después de empezar: 95,6% del volumen de ensayo,

b): Volumen de sedimentación 24 horas después de empezar: 63,5% del volumen de ensayo.

3. Tamaño de partículas (diámetro medio de Folk Ward): 51,8 +/- 0,8 \mum.

-: Temperatura: 6,5ºC

-: Humedad relativa: 90%

-: Tiempo de incubación: 22,5 horas

Las tiras de esponja de colágeno revestidas se secaron como sigue:

Las tiras de colágeno se incubaron durante 10 minutos a una temperatura de 6,5ºC y una humedad relativa de 90%

-: Condiciones del aire: temperatura de 6,5ºC, humedad relativa 90%

-: Caudal de aire por la válvula de aspiración: 21 m^{3} por hora

-: Vacío: 58 milibares

-: Tiempo de secado: 4 horas

La abrasión del revestimiento obtenido sobre las tiras de esponja de colágeno era menos de 0,1 mg/cm^{2} cuando se agitaba en un agitador Vibrofix a una frecuencia de 800 - 1200 rpm durante 2 minutos.

Ejemplo 1 Aprotinina como un componente de tachoComb® Investigación in vitro de la actividad antifibrinolítica en condiciones de arrastre similares a una situación in vivo

El objetivo de la presente investigación era mostrar la eficacia de un componente de TachoComb H en condiciones hiperfibrinolíticas usando modelos de ensayo in vitro.

TachoComb S es un parche de tipo esponja blancuzco revestido. El parche de colágeno seco espumado se usa como vehículo de los componentes activos sólidos. El tamaño del parche es 9,5 x 4,8 x 0,5 cm. La cara activa es de color amarillo. Un parche de TachoComb S de 1 cm^{2} (grosor de 0,5 cm) consta de:

Colágeno de origen equino	2,1 mg
revestido con:
fibrinógeno humano	5,5 mg
trombina humana	2,0 U.I.
riboflavina (color amarillo como
marcador de la zona revestida)	16,5 \mug

Los ensayos experimentales in vivo para encontrar la dosis, han confirmado que las concentraciones anteriores de trombina y fibrinógeno dan como resultado una resistencia adhesiva máxima (véase Ejemplo 3).

Se comparó TachoComb H que contenía trombina humana, fibrinógeno humano y aprotinina con TachoComb S que contenía sólo trombina humana y fibrinógeno humano como componentes activos.

Se desarrollaron dos modelos de ensayo para la determinación cuantitativa de la eficacia en condiciones hiperfibrinolíticas que se podían considerar que eran importantes para las condiciones quirúrgicas y que permitían llevar a cabo una serie de ensayos necesarios para demostrar un efecto significativo.

En el modelo de ensayo 1, la muestra de ensayo se aplicó a una tela sintética como superficie de adherencia. Se cortó un agujero definido en la tela para simular, por ejemplo, la perforación de un vaso sanguíneo. Lo que se iba a sellar se expuso a dos soluciones fibrinolíticas diferentes (soluciones de incubación) a través del agujero. Una de estas soluciones adicionalmente contenía el componente antifibrinolítico \alpha2-antiplasmina.

Composición de las soluciones de incubación

Todas las sustancias se diluyen en tampón 1: Trometamol 50 mM, NaCl 100 mM, CaCl_{2} 2,5 mM, BSA (sin proteasa) 2 mg/ml, aziduro de Na/ml 0,5 mg/ml)

Solución de incubación I (plasminógeno 1 \mumolar, activador de plasminógeno tisular (tPA) 1 nmolar, \alpha_{2}-antiplasmina 1 \mumolar)

49 \mul de tampón 1, pH 7,4

51 \mul de solución de plasminógeno (conc. 4,9 \mumolar actividad de plasminógeno humano Coachrom)

50 \mul de solución de tPA (50 nmolar)

100 \mul de solución de \alpha_{2}-antiplasmina (2,5 \mumolar)

Solución de incubación II (plasminógeno 1 \mumolar, activador de plasminógeno tisular 1 nmolar)

149 \mul de tampón 1, pH 7,4, 51 \mul de solución de plasminógeno (conc. 4,9 \mumolar actividad de plasminógeno humano Coachrom)

50 \mul de solución de tPA (50 nmolar)

La solución de incubación se sustituyó en periodos de 2 horas para estimular el efecto de arrastre. En esta ocasión se controlaba la adhesión. Se puso una presión de 50 milibares sobre la muestra. Se registró el tiempo en el que la muestra se separó a una presión de \leq 50 milibares.

El modelo de ensayo 2 era para demostrar el efecto fibrinolítico del tejido de intestino dañado. La muestra de ensayo se aplicó en intestino de cerdo (ex vivo) como superficie de adhesión. Se había cortado en el intestino una perforación definida para permitir que la solución de incubación entrara en contacto con el coágulo de fibrina y simular un efecto de arrastre. La solución de incubación se cambió en periodos de tiempo registrados y en ese momento se puso una presión de 50 milibares sobre la muestra. Se registró el tiempo en el que la muestra se despegaba a una presión de \leq 50 milibares.

Los resultados revelaron diferencias considerables entre TachoComb H que contenía aprotinina y TachoComb sin aprotinina.

En el modelo de ensayo 1 usando la solución de incubación que contiene activador de plasminógeno tisular, plasminógeno y \alpha_{2}-antiplasmina, el tiempo de fibrinolisis para TachoComb H era 41,2 \pm 7,3 horas, comparado con 12,8 \pm 2,8 horas para TachoComb S.

En el modelo de ensayo 1 usando la solución de incubación que contenía sólo activador de plasminógeno tisular y plasminógeno, el tiempo de fibrinolisis para TachoComb H era 31,6 \pm 5,3 horas comparado con 8,3 \pm 1,8 horas para TachoComb S.

En el modelo de ensayo 2, el tiempo de despegado para TachoComb H era 78,4 \pm 16,3 horas comparado con 6,5 \pm 1,8 horas para TachoComb S.

Se podía observar todavía mucha fibrina en la muestra de ensayo. Pero la muestra se despegó bajo presión de la superficie del intestino porque la resistencia a la adhesión entre el coágulo de fibrina y la superficie del intestino se hizo más débil.

En ambos modelos se podía demostrar muy claramente el efecto antifibrinolítico de la aprotinina como un componente activo en TachoComb H.

En el modelo de ensayo 1, la prolongación del tiempo de fibrinolisis debido a la aprotinina como componente activo de TachoComb H era 320% para la solución de incubación I que contenía \alpha_{2}-antiplasmina y 380% para la solución de incubación II sin \alpha_{2}-antiplasmina.

El modelo de ensayo 1 también mostró el efecto antifibrinolítico adicional de \alpha_{2}-antiplasmina, por prolongación del tiempo de fibrinolisis para TachoComb H de 31,6 a 41,2 horas (130%) y para TachoComb S de 8,3 a 12,8 horas (154%).

Ejemplo 2 Comparación de esponja revestida nycomed (TachoComb S) con otros productos vehículo revestidos de forma idéntica a TachoComb S Adherencia de la capa Procedimiento

1. Revestimiento de diferentes vehículos

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Se revistió una superficie de 2 x 4,5 cm^{2} de cada vehículo con suspensión de revestimiento TachoComb S. La cantidad de suspensión de revestimiento correspondía a la especificación de TachoComb (5,5 mg fibrinógeno/cm^{2}). Las muestras se secaron.

2. Se preparó una muestra de 1x4 cm^{2} de cada vehículo revestido.

3. La adherencia de la capa se ensayó como sigue.

Descripción del método Aparatos

: Balanza analítica (precisión de la medición \pm 0,5 mg)

: Agitador Vibrofix combinado con dispositivo de fijación

: Regla con graduación de milímetros

: Cronómetro, escalpelo, tubos de 2 cm de diámetro interno con

Procedimiento

Se cortan superficies revestidas de 4 x 1 cm^{2} del vehículo revestido usando un escalpelo.

La muestra se pone en un tubo pesado con tapón. Después se agita en un agitador Vibrofix (frecuencia: aproximadamente 1000 rpm) durante 2 minutos.

Se saca la lámina y se vuelve a pesar la cantidad residual de material de revestimiento (abrasión: mg/cm^{2}).

Cálculo

Abrasión \ (mg/cm^{2}) = \frac{\text{peso del residuo (mg) - tara (mg)}}{4 \ cm^{2}}

Resultados

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Comentario

Ninguno de los vehículos, excepto la esponja de colágeno Nycomed, es flexible después de revestimiento.

Hay que recortar la muestra con mucho cuidado. Si se recorta usando unas tijeras, se desprenderá mucho material de revestimiento debido a que la propia capa es rígida. El parche Ethisorb® casi no mostró conexión con el material de revestimiento en absoluto. Cuando se agita un poco, se deshace como una "alfombra".

La diferencia entre la esponja de colágeno Nycomed y otros materiales de vehículo se muestra bastante claramente.

Elasticidad del vehículo revestido humedecido Procedimiento

1. Revestimiento de diferentes vehículos

Se revistió una superficie de 2 x 4,5 cm^{2} de cada vehículo con suspensión de revestimiento TachoCombS.

La cantidad de suspensión de revestimiento correspondía a la especificación de TachoComb (5,5 mg fibrinó-
geno/cm^{2}). Las muestras se secaron.

2. Se preparó una muestra de 5-7 cm^{2} de cada vehículo revestido. Se determinó la superficie exacta inicial de la muestra seca.

3. La muestra se humedeció y se puso en una lámina de látex fijada en un equipo especial como se describe con detalle en "procedimiento". Se puso presión sobre la lámina de látex que se expandió. Después de 2 veces de expansión y relajación, la lámina se expande por tercera vez. La superficie del vehículo se midió en el punto mayor de expansión.

Descripción del método Aparatos/productos químicos

: Bomba peristáltica (IKA PA-SF)

: Frasco de tampón a presión (3 salidas)

: Manómetro VDO (0-250 milibares)

: Embudo de vidrio (\diameter abertura: 30 mm, abertura 2: 15 mm)

: Tubos de silicona y pinzas, guantes de Látex (Semper med), escalpelo, regla con graduación de milímetros, tijeras

Solución salina fisiológica Procedimiento

El siguiente equipo se conecta estanco al aire a tres salidas del frasco de tampón a presión mediante tubos de silicona:

a) bomba peristáltica

b) manómetro

c) embudo de vidrio/abertura 2

Se corta una lámina doble de aproximadamente 8 x 8 cm^{2} de un guante de látex. Esta lámina se fija al embudo de vidrio/abertura 1, estanco al aire.

Se corta una superficie de aproximadamente 5-7 cm^{2} del vehículo revestido usando un escalpelo.

Se mide la superficie de la muestra (superficie inicial). El revestimiento de la muestra se humedece con solución salina y se pone sobre la lámina de látex. Después se presiona contra la lámina de látex manualmente durante aproximadamente 1 minuto.

Usando la bomba peristáltica, la lámina de látex se expande mediante una presión de aproximadamente 70 milibares. Esto se repite dos veces con relajación de la lámina de látex cada vez. En la tercera expansión se mide la superficie (longitud y anchura) del vehículo revestido en el punto más alto de la expansión de la lámina de látex.

Cálculo

\text{Factor de "Elasticidad"} = \frac{\text{Superficie del vehículo en la tercera expansión}}{\text{Sperficie inicial de la muestra}}

Resultados

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Comentario

La elasticidad de la esponja de colágeno Nycomed humedecida (TachoComb S) es una de las características importantes del producto. La elasticidad es esencial en la cirugía torácica y abdominal. Después del pegado, el vehículo debe poder seguir, por ejemplo, los movimientos de expansión relajación de los pulmones o intestinos. Especialmente Ethisorb® no mostró elasticidad en absoluto. Se despegó del revestimiento inmediatamente. El revestimiento Willospon® Spezial y Opraskin® mostraron defectos estructurales durante el ensayo.

Uso de vehículo revestido en cirugía endoscópica Procedimiento

1. Revestimiento de diferentes vehículos

Se revistió una superficie de 2 x 4 cm^{2} de cada vehículo con suspensión de revestimiento TachoComb S. La cantidad de suspensión de revestimiento correspondía a la especificación de TachoComb (5,5 mg de fibrinógeno/cm^{2}). Las muestras se secaron.

2. La manipulación de las muestras de vehículo revestidas para usar en cirugía endoscópica, y la pérdida de revestimiento debido a esta manipulación se documentan por un equipo de fotografía digital.

Descripción del método Aparatos

: Endodock: Herramienta endoscópica diseñada para el uso de TachoComb® en cirugía endoscópica (véase la Figura 7). Equipo de fotografía digital.

Lista de vehículos investigados

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Procedimiento

Serie de fotografías tomadas de cada vehículo:

1. Fotografía: Documentación de muestras de vehículos no revestidos y revestidos.

2. Fotografía: Las muestras revestidas se insertan en el equipo endoscópico (Endodock). La muestra se debe aplanar manualmente para que se pueda envolver alrededor de una "vastago" de guía. Después la muestra se inserta cuidadosamente en el tubo de acero de 10 mm de diámetro.

Documentación de la muestra parcialmente insertada en el tubo de Endodock.

3. Fotografía: La muestra se empuja con cuidado. Después la muestra debe estar no plegada. El revestimiento que se ha desprendido del vehículo debido a la manipulación se recoge al lado del vehículo. Se documenta la muestra no plegada después de insertar en el equipo endoscópico y la pérdida de revestimiento debido a esta manipulación.

Comentario

TachoComb S (esponja de colágeno equino revestida/Nycomed) en cirugía endoscópica es la aplicación más exigente del producto. TachoComb S se inserta en un equipo endoscópico. El tubo de este equipo generalmente tiene un diámetro de 10-13 mm. Para insertarlo en el tubo, TachoComb S se aplana y después se envuelve alrededor de una "vástago" de guía y después se inserta cuidadosamente en el tubo. Por lo tanto, la conexión del revestimiento al vehículo y consigo mismo debe ser fuerte, pero el producto debe permanecer suficientemente flexible en condiciones secas para doblarse y enrollarse. Cuando se sitúa en el sitio de la cirugía TachoComb S se extrae cuidadosamente del tubo. Después se tiene que desenrollar y poner en la superficie de la herida. Esto a menudo requiere algunos ajustes. Por lo tanto la adhesión de la capa al vehículo debe ser bastante fuerte para aguantar esta manipulación.

Resultados

Los resultados se ven en las Figuras 1-6. Un cálculo de la pérdida de material de revestimiento es la siguiente:

Opraskin®	30-40%
Willospon® forte	60-70%
Willospon® Spezial	50%
Tejido de punto Tacotamp® NU	60-70%
Parche Ethisorb®	95%
Esponja de colágeno Nycomed	< 5%.

Puesto que Ethisorb® es un vehículo muy rígido la adherencia del revestimiento es muy mala. Por lo tanto Ethisorb® revestido pierde casi todo el revestimiento en esta investigación. Comparado con la esponja de colágeno revestida de Nycomed, todos los demás vehículos investigados tienen una superficie plana que hay que revestir. Por lo tanto, el revestimiento se deposita como una "alfombra plana" sobre el vehículo. Esto conduce a una estructura bastante inflexible de los vehículos revestidos secos. El doblado o enrollado a menudo rompe el propio revestimiento.

Después de insertar los vehículos revestidos en el tubo del equipo endoscópico y después de la extensión de la muestra, todos los vehículos excepto la esponja de colágeno de Nycomed perdieron bastante revestimiento, de forma que quedaron grandes zonas sin material de revestimiento.

La estructura y textura de la esponja de colágeno de Nycomed es la base de la gran flexibilidad de TachoComb S en estado seco o húmedo. La esponja de colágeno Nycomed está espumada y tiene cámaras poligonales en el interior. En la superficie estas cámaras se cortan en cavidades. Estas cavidades aumentan la superficie de revestimiento. Durante el revestimiento, la suspensión de revestimiento se distribuye uniformemente sobre la superficie estructurada. Durante el secado la solución que contiene tanto fibrinógeno como trombina se fija en forma de sólidos en las cavidades. Por lo tanto TachoComb S se puede cortar en los tamaños deseados y se puede insertar en equipo endoscópico con sólo una pequeña pérdida de material de revestimiento o sin pérdida en absoluto.

La gran flexibilidad de TachoComb S seco es una gran ventaja comparado con todos los demás vehículos investigados.

Ejemplo 3 Ensayos para encontrar la dosis de componentes activos

La dosis de los componentes activos se ha encontrado por dos modelos experimentales distintos, en los que se ha medido la resistencia a la adherencia: resistencia a la tracción en hígado de rata, resistencia a la adherencia frente a elevada presión en tejido de riñón de rata.

A. Resistencia a la tracción en hígado de rata

Se hizo una herida de 1 x 1 cm y aproximadamente 1 mm de profundidad en el lóbulo izquierdo del hígado de ratas anestesiadas, con el fin de producir una hemorragia que rezuma. La herida se selló con un trozo de TachoComb S que se había conectado a una balanza de resorte. Se midió la tracción a la que TachoComb S se desprende.

B. Resistencia a la adherencia frente a presión elevada en tejido de riñón de rata

Se produjo una herida de fuerte hemorragia de nivel liso en el riñón izquierdo de ratas anestesiadas, cortando aproximadamente un cuarto de su masa. La herida se selló con láminas de ensayo TachoComb S. La presión en el tejido se aumentó cerrando el drenaje venoso y bombeando una solución isotónica de sal de citrato (pH 7,2) en el riñón. Se midió la presión a la que TachoComb S empezó a despegarse.

TABLA 1 Resistencia a la adherencia de TachoComb S que contiene diferentes cantidades de fibrinógeno

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TABLA 2 Resistencia a la adherencia de TachoComb S que contiene diferentes cantidades de trombina

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Los resultados obtenidos revelaron diferencias considerables entre diversas variaciones. El intervalo óptimo para trombina humana era 0,9 a 10 U.I./cm^{2} con un contenido de fibrinógeno humano constante de aproximadamente 5 mg/cm^{2}. El intervalo óptimo de fibrinógeno humano era 2,9 a 7,2 mg/cm^{2} con un contenido de trombina humana constante de 2 U.I./cm^{2}.

Estos ensayos in vivo confirmaron que tanto la concentración de fibrinógeno (4,3 - 6,7 mg/cm^{2}) como la concentración de trombina (1,5 - 2,5 U.I./cm^{2}), que se usan en otras formulaciones de TachoComb (TachoComb® y TachoComb H) también dieron como resultado máxima resistencia a la adherencia para TachoComb S.

Ejemplo 4 Eficacia de TachoComb S para sellar lesiones en bazo e hígado de perros

El objetivo de esta investigación era comparar la eficacia hemostática de TachoComb H (que contiene aprotinina) con TachoComb S (sin aprotinina) en un modelo canino de lesiones de bazo e hígado. Se escogieron incisiones y pinchazos (0,5 cm de profundidad) para mimetizar la hemorragia que rezuma. Se llevó a cabo la resección del extremo del lóbulo craneal del hígado para mimetizar una herida de superficie con fuerte hemorragia (de 2 a 3 cm^{2}). Se aplicó un parche TachoComb H o TachoComb S como único medio de hemostasis de las heridas (se usó el mismo lote para la lesión de bazo e hígado en el mismo perro). Se hizo la necropsia 48 horas después de cirugía, ya que este es el periodo con mayor riesgo de resangrado en la práctica clínica.

Se logró la hemostasis completa con ambos productos. No se observaron casos de hemorragia secundaria en la necropsia a las 48 horas ni por observación a simple vista ni por examen histológico.

Histológicamente tampoco había diferencias entre los perros a los que se aplicó TachoComb H o TachoComb S, cuando se evaluaron las lesiones del bazos y del hígado cubiertas con los parches respectivos en relación con la hemostasis y curación de la herida. No se observó ningún caso de hemorragia secundaria después de cirugía.

Los datos de recuento sanguíneo revelaron resultados similares para ambos grupos de tratamiento con una ligera subida del recuento de glóbulos blancos 48 horas después de cirugía. No había diferencias entre los grupos o entre el tiempo, relativo a cualquiera de los otros parámetros evaluados. Los ensayos de coagulación tampoco revelaron diferencias en relación con la presencia o ausencia de aprotinina. Fue evidente un aumento del contenido de fibrinógeno en la sangre en ambos grupos de tratamiento a las 48 horas después de cirugía. El aumento del recuento de glóbulos blancos y contenido de fibrinógeno se puede atribuir a una respuesta inflamatoria al trauma quirúrgico, y no se consideran efectos secundarios tóxicos de TachoComb H o S.

Se concluye que TachoComb S (sin aprotinina) ejerce la misma eficacia que TachoComb H (que contiene aprotinina) en el tratamiento de heridas parenquimales con fuerte hemorragia y rezumado en perros. En la estabilidad del coágulo en las condiciones elegidas no influía la presencia o ausencia de aprotinina.

Ejemplo 5 Comparación del efecto hemostático, de sellado de herida y resistencia de TachoComb S y TachoComb H: Estudio experimental en el cerdo Fin del estudio

El ensayo se diseñó para evaluar la eficacia inmediata y resistencia a corto plazo de un muletón hemostático en una lesión de bazo inducida en el cerdo.

Material y métodos

En este estudio se usaron 24 cerdos hembras. Se ensayaron aleatoriamente 2 grupos de muletones hemostáticos: TachoComb H con aprotinina y TachoComb S sin aprotinina.

El día de la cirugía el animal recibía un muletón que obturaba directamente una lesión de 2 x 3 cm normalizada creada en la parte central del bazo.

Se evaluó el efecto hemostático e inmediato, contando el número de ampollas y midiendo el tiempo necesario para parar la hemorragia. Se observó la adherencia de TachoComb H y S.

Después de 72 horas, se investigó el comportamiento a corto plazo y la resistencia de ambos materiales, aumentando la presión en el interior del bazo (pinzado de los vasos venosos).

Cuando la presión llegó a un estado casi estacionario, se administró por vía IV un bolo de adrenalina (0,02 mg ó 0,04 mg) para aumentar la presión arterial, asociada o no de acuerdo con una infusión de hidrocloruro de dobutamina.

Mediante estas sustancias farmacológicas, se anotó para cada animal la rotura de la presión de sangrado de la lesión reparada por TachoComb H y S.

Resultados

No se detectó diferencia del efecto hemostático entre los tratamientos en el momento de la cirugía de la lesión del bazo.

En una segunda observación, después de 72 horas, el aspecto macroscópico de ambas muletones era idéntico.

Las mediciones de presión aguda y resistencia a la rotura no eran significativamente diferentes entre ambos grupos experimentales.

No se produjo rotura del material. Se observó hemorragia de la lesión en 4 animales con TachoComb S y en 2 animales con TachoComb H (con una ampolla adicional en el grupo 4).

El examen histológico sugería que la aprotonina puede ejercer un efecto protector en la estructura del muletón, parecía que la aprotonina modificaba el modelo microscópico disminuyendo la degradación del muletón. No se observó un modelo celular específico.

Conclusión

Se investigó la actividad hemostática inmediata de 2 formulaciones deTachoComb, S y H, en modelo de lesión de bazo normalizada patrón en 24 cerdos.

Ambos materiales se comportan de forma similar en cuanto a la eficacia, adherencia a la lesión y adaptabilidad al parénquima. Esta eficacia era admirable.

Se investigó la resistencia a la biodegradación y proteolisis a las 72 horas después de cirugía, aumentando la presión en el interior del bazo (por medios mecánicos y farmacológicos), y se registró la resistencia local de los muletones TachoComb H y S. No se pusieron en evidencia diferencias significativas de la resistencia de los 2 materia-
les.

Sin embargo, las investigaciones histopatológicas indicaban que la degradación proteolítica de TachoComb S era ligeramente más pronunciada que la de TachoComb H.

Se usaron TachoComb S o TachoComb H como único medio de hemostasis para sellar lesiones esplénicas con fuerte hemorragia en cerdos (superficie de la lesión 2 cm x 3 cm, profundidad 3 - 5 mm; n = 12 por grupo). Después de 72 horas, se aumentó la presión en el interior del bazo ligando las venas del bazo. Después se aumentó la presión en el interior del bazo adicionalmente por inyección de adrenalina. Se observó en los cerdos señales de resangrado o de aparición de ampollas de sangre bajo el parche. Se realzaron la histopatología de muestras (sitio de la lesión cerrado con TachoComb H y S) después de necropsia.

TachoComb S y H ejercieron una eficacia similar, de adherencia a la lesión y adaptabilidad a la parénquima.

Ejemplo 6 Comparación del efecto de sellado de herida hemostático y resistencia de TachoComb S y TachoComb H absorbibles: estudio experimental en el cerdo en un modelo de pancreatitis aguda Fin del estudio

El ensayo se diseñó para evaluar la eficacia inmediata y resistencia a corto plazo de un muletón hemostático e una lesión de bazo inducida en el cerdo en un modelo de pancreatitis aguda.

Materiales y métodos

En este estudio se usaron 20 cerdos hembras. Se ensayaron aleatoriamente 2 grupos de muletones hemostáticos: TachoComb H con aprotinina y TachoComb sin aprotinina.

El día de la cirugía los animales recibieron un muletón que obturaba directamente una lesión de 2 x 3 cm normalizada creada quirúrgicamente en la parte ventral del bazo.

Se evaluó el efecto hemostático inmediato del muletón, contando el número de ampollas y midiendo el tiempo necesario para parar la hemorragia. Se observó la adherencia de TachoComb H y S.

Después, usando una jeringuilla estéril, se pinchó la vesícula biliar, se recogió la bilis, y se inyectaron 10 ml de bilis por el conducto de Wirsung, para inducir pancreatitis. Se controlaron los niveles de enzimas en la sangre antes y diariamente después de la cirugía (niveles de lipasa y amilasa).

Se depositaron trozos pequeños de TachoComb H y S sobre el parénquima del páncreas en su conexión al intestino.

Después de 72 horas, se investigó el comportamiento a corto plazo y la resistencia a la degradación enzimática de TachoComb H y S, aumentando la presión en el interior del bazo (pinzado de los vasos venosos y medios farmacológicos).

Cuando la presión llegó a un estado casi estacionario, se administró por vía iv un bolo de adrenalina (0,02 mg ó 0,04 mg) seguido de una infusión de noradrenalina de 0,02 a 0,04 mg/min para aumentar la presión arterial, asociada o no a una perfusión de hidorocloruro de dobutamina de 0,3-0,6 mg/min.

Mediante estas sustancias farmacológicas, se anotó la rotura de la presión de sangrado de la lesión reparada por TachoComb H y S para cada animal.

Resultados

En el bazo, ambos materiales se comportan de forma similar en cuanto a la eficacia hemostática inmediata, adherencia a la lesión y adaptabilidad al parénquima. Su eficacia era admirable.

Por examen macroscópico ambas muletones estaban inalteradas, el día 3 aunque las condiciones enzimáticas eran graves, especialmente el día 2 en la sangre, y todavía el día 4 en el fluido peritoneal.

A las 72 horas, no se podía poner de manifiesto diferencias significativas de la resistencia de ambos materiales después de aumentar la presión en el bazo.

Se produjo una rotura del material en el grupo de TachoComb S. Se observó hemorragia de la lesión en 1 animal con TachoComb S y en 2 animales con TachoComb H (con una ampolla adicional en el grupo de TachoComb H).

Las investigaciones histopatológicas no indicaban diferencias significativas en la degradación de TachoComb S comparado con TachoComb H. No se observó un modelo celular específico en el bazo. Incluso en las muestras pancreáticas, los trozos de TachoComb H y S en contacto cercano con las enzimas pancreáticas no mostraron ningún cambio principal.

Conclusión

En conclusión, no aparecían diferencias claras entre TachoComb S y TachoComb H en relación con su resistencia a la rotura en condiciones de un entorno con las enzimas pancreáticas aumentadas.

No se podía detectar evidencia macroscópica o microscópica específica de modificación tanto de los muletones TachoComb H como S.

Se estudió la eficacia hemostática de TachoComb S y TachoComb H en un modelo de lesión de bazo normalizado (superficie de la lesión 2 cm x 3 cm, profundidad aproximadamente 3 mm; n = 10 por grupo) en cerdos con pancreatitis aguda inducida por inyección retrógrada de bilis en el conducto de Wirsung y posterior ligación del conducto pancreático. También se aplicaron pequeños trozos de TachoComb H y S sobre el páncreas en el sitio de ligación del conducto pancreático. Después de 72 horas, se aumentó la presión en el interior del bazo ligando las venas del bazo y por inyección por vía IV de adrenalina.

En el bazo TachoComb S y H se comportaron de forma similar en relación con la eficacia hemostática inmediata, adherencia a la lesión y resistencia a la mayor presión en el interior del bazo a pesar del marcado aumento de los niveles de enzimas pancreáticas (aumento de 20-100 veces de amilasa y lipasa en la sangre, y aumento de 10-100 veces de las enzimas pancreáticas en el fluido peritoneal comparado con los niveles basales). Las investigaciones histopatológicas no indicaron diferencias significativas en la degradación de TachoComb S y TachoComb H. No se observó modelo celular específico en el bazo. Incluso en las muestras pancreáticas después de contacto cercano de TachoComb H y S con altas concentraciones de enzimas pancreáticas, la adherencia de TachoComb H y S y la histopatología no revelaron diferencias importantes.

Por lo tanto, no aparecieron diferencias macroscópicas o microscópicas específicas entre TachoComb S y H en este modelo altamente estresante de pancreatitis aguda en cerdos.

Ejemplo 7 Comparación de reacción del tejido cerebral y eficacia de TachoComb H y S reabsorbible: estudio experimental en un modelo de conejo con coagulación normal y durante hiperfibrinolisis local

El objetivo de esta estudio era comparar la eficacia de TachoComb S y TachoComb H después de aplicación neuroquirúrgica. Se indujeron lesiones cerebrales en conejos en condiciones normales de coagulación (reacción del tejido cerebral = RTC, n = 12 conejos, con requisitos adecuados n = 10) y en condiciones hiperfibrinolíticas (HF) por aplicación local de r-tPA (n = 10 conejos). Se hicieron tres lesiones corticales por hemisferio (total de 6 lesiones por animal; lesión cerebral perforada de 3 mm de profundidad y 4 mm de diámetro).

Las series RTC

Dos de cada tres lesiones por hemisferio se trataron con TachoComb H o TachoComb S respectivamente, y una lesión por hemisferio se dejó vacía como testigo. Después de cerrar las lesiones con TachoComb H o S, se midió el tiempo de hemorragia con gran aumento con irrigación de bajo flujo continuo con solución salina. Después de lograr la hemostasis en todas las lesiones, se indujo hipertensión arterial por inyección por vía IV de adrenalina (0,01 mg/kg de adrenalina), aumentando así la presión arterial media (PAM) a al menos 12 mm de Hg. Durante este procedimiento se continuó la observación del resangrado. Después de disminuir la PAM a valores normales, se cerró otra vez la piel. El momento de la necropsia era los días 3 y 7 (n = 5 conejos cada uno). En tres animales se llevó a cabo la formación de imágenes por resonancia magnética nuclear antes de la necropsia el día 3. En la necropsia se llevó a cabo una observación a simple vista de los sitios de las lesiones y se tomaron muestras para la histopatología.

Las series HF

Después de fijar las lesiones descritas en las series RTC, se dejó gotear r-tPA sobre la lesión (0,3 mg de r-tPA en 0,5 ml de solución salina por lesión) antes de sellar todas las lesiones alternativamente con TachoComb S o TachoComb H. Se midió el tiempo de hemorragia con un gran aumento y se llevó a cabo la irrigación baja continua con solución salina. Se observó la necropsia por a simple vista el día 1 (n = 7) y día 3 (n = 3). Se llevó a cabo la histopatología de las muestra tomadas el día 3 por razones de comparación.

Durante el transcurso del estudio completo, no fueron evidentes diferencias entre TachoComb S y TachoComb H, ni con respecto a la eficacia de sellado, mayor PAM tolerada y duración del tiempo de hemorragia, ni en relación con la histopatología. Era evidente la hemorragia grave en animales de las series HF no sólo en el sitio de la lesión si no bajo la piel de toda la cara. A pesar de estas condiciones graves TachoComb S ejerció una eficacia similar comparado con TachoComb H.

Ejemplo 8 Aplicación neuroquirúrgica de TachoComb H y TachoComb S: reacción del tejido cerebral y eficacia hemostática

Se usan selladores de fibrina fluidos a gran escala para la hemostasis en neurocirugía. Existen datos publicados no exhaustivos de la reacción del tejido cerebral a TachoComb® y el uso de agentes antifibrinolíticos (por ejemplo aprotinina) todavía es controvertido.

Objetivos

El diseño del estudio se centraba en dos problemas principales: La evaluación de la reacción del tejido cerebral local a corto plazo después de aplicar TachoComb H (TCH) y TachoComb S (TCS) en lesiones corticales comparado con lesiones testigo (LT), usando métodos histológicos y las modernas técnicas de formación de imágenes.

El segundo objetivo era el estudio de la eficacia hemostática de los productos TachoComb H y S en condiciones de coagulación normal (Grupo RTC) y después de inducir localmente hiperfibrinolisis grave (Grupos HF), y evaluar si la aprotinina tiene alguna influencia en las cualidades hemostáticas y fuerza de adherencia de la preparación.

Material y método

En una serie de 22 conejos jóvenes, se hicieron tres lesiones corticales en cada hemisferio. Se asignaron doce animales al grupo de reacción de tejido cerebral (RTC) y 10 al grupo de hiperfibrinolisis (HF).

En los animales RTC dos de las lesiones se llenaron con TachoComb H y TachoComb S, respectivamente, mientras que la tercera se dejó vacía como testigo. Se midió el tiempo de hemorragia y se controló la aparición de resangrado debido a la hipertensión arterial inducida. Los animales se sacrificaron los días 3 y 7 después de la cirugía y se llevó a cabo el examen histológico. En tres animales RTC se llevó a cabo la formación de imágenes por resonancia magnética nuclear para la evaluación de edema cerebral, el día 3, justo antes de la eutanasia.

En los animales HF, en los que se había inducido previamente un estado hiperfibrinolítico local grave con un activador de plasminógeno tisular recombinante (r-tPA), las tres lesiones de un hemisferio se trataron con TachoComb H y el otro hemisferio con TachoComb S. Se midió el tiempo de hemorragia, y en tres animales se llevó a cabo el examen histológico el día 3.

Resultados

En condiciones de coagulación normales (animales BTR), la hemostasis con TCH y TCS era significativamente más rápida (p<0,001) que sin agente hemostático. Se demostró que no había diferencia entre los tiempos de hemorragia de ambos productos (p = 0,294), pero que estos tiempos eran más cortos que los de las lesiones testigo (p<0,001).

Durante la hipertensión arterial, se produjo resangrado en 1 de 24 lesiones TCH, 3 de 24 TCS, y 19 de 24 lesiones testigos. La presencia de agente hemostático prevenía consistentemente el resangrado durante la presión arterial aumentada gravemente (Chi cuadrado = 16,3; p>0,001). A su vez, la ausencia de TCH o TCS durante la mayor presión arterial, mostró un riesgo de aparición de resangrado de 80%.

El análisis estadístico de los tiempos de resangrado en el grupo de hiperfibrinolisis (animales HF) demostró que no había diferencias entre los tiempos de hemorragia de ambos productos (ensayo de: orden con signo p = 0,927 y ensayo T p = 0,4102).

Finalmente, dentro de n intervalo de seguridad de 99,73% (D < 3 sd D=ns) se descartó una diferencia significativa entre la eficacia hemostática del mismo producto en ambas situaciones de coagulación.

Conclusión

TachoComb H and TachoComb S no indujeron cambios histológicos específicos en el tejido cerebral. Ambos productos tienen una buena biocompatibilidad perénquimal, puesto que no inducen más reacción en el tejido que la lesión. No eran morfológicamente evidentes efectos adversos asociados a la combinación de productos. El examen histológico no reveló diferencias entre ambos productos no en condiciones de coagulación normales y gravemente cambiadas. TachoComb H y S tienen la misma eficacia hemostática y resistencia a la adherencia tanto en coagulación normal como hiperfibrinolisis. Hay una fuerte evidencia de que la aprotonina no influye en las calidades hemostáticas y fuerza de adherencia, incluso en condiciones de coagulación gravemente modificadas.

Comparado con la bibliografía, TachoComb H y S establecen hemostasis mucho más rápidamente que la celulosa oxidada y el muletón de colágeno.

Claims

1. Una composición sólida, que consta esencialmente de:

a) un vehículo que tiene al menos una de las siguientes propiedades físicas:

-: módulo de elasticidad en el intervalo de 10-50 N/cm^{2},

-: densidad de 1-10 mg/cm^{3},

-: diámetro de cámara mayor que 0,75 mm y menor que 4 mm y/o que tiene un diámetro medio de cámara inferior a 3 mm

y distribuido uniformemente y fijado sobre dicho vehículo una mezcla de:

b) fibrinógeno humano sólido, y

c) trombina humana sólida.

2. Una composición de acuerdo con la reivindicación 1, en el que el vehículo de colágeno es una esponja de colágeno que comprende material de colágeno de tipo I de fuentes de mamíferos, transgénicos o recombinantes.

3. Una composición de acuerdo con la reivindicación 1 ó 2, en la que el vehículo tiene uno o más lados activos en los que el fibrinógeno está presente en una cantidad de 2-10 mg/cm^{2}, tal como 4,3-6,7 mg/cm^{2}, preferiblemente aproximadamente 5,5 mg/cm^{2}, y la trombina está presente en una cantidad de 1,5-5,5 U.I./cm^{2}, preferiblemente aproximadamente 2,0 U.I./cm^{2}.

4. Una composición de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-3, en la que el fibrinógeno es purificado de una fuente natural.

5. Una composición de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-3, en la que el fibrinógeno es transgénico o recombinante.

6. Una composición de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-5, en la que la trombina es purificada de una fuente natural.

7. Una composición de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-5, en la que la trombina es transgénica o recombinante.

8. Una composición sólida para hemostasis, sellar tejidos y pegar tejidos que consta de un vehículo flexible, que al menos tiene una de las siguientes propiedades físicas:

-: módulo de elasticidad en el intervalo de 10-50 N/cm^{2},

-: densidad de 1-10 mg/cm^{3},

-: diámetro de cámara mayor que 0,75 mm y menor que 4 mm y/o que tiene un diámetro medio de cámara inferior a 3 mm,

y que además comprende una mezcla de:

-: fibrinógeno humano sólido, y

-: trombina humana sólida

y no comprende ningún agente antifibrinolítico, tal como aprotinina, ácido \varepsilon-amino-caproico o \alpha_{2}-antiplasmina,

-: estando fijado el fibrinógeno humano sólido y la trombina humana sólida al vehículo de manera que la abrasión es menor que 1,0 mg/cm^{2} cuando una muestra del material revestido se agita en un agitador Vibrofix a una frecuencia de aproximadamente 1000 rpm durante 2 minutos y

-: si el material revestido se inserta en un equipo endoscópico y después se quita, el material está sustancialmente inalterado y tiene una perdida de material de menos de 20%, como una indicación de la flexibilidad del vehículo y la adherencia del sólido del fibrinógeno humano sólido y la trombina humana sólida

-: siendo dicho material sustancialmente estanco al aire y estanco a los líquidos, y con un factor de elasticidad de al menos 1,25, determinado por un ensayo que comprende fijar el vehículo revestido en una lámina de látex, expansión del látex por presión tres veces, y la tercera vez medición de la superficie del vehículo revestido en el punto más alto de la expansión de la lámina de látex, y comparación de la superficie expandida del vehículo revestido con la superficie inicial de la superficie revestida.

9. Uso de un vehículo de colágeno que tiene al menos dos de las siguientes propiedades físicas:

-: un módulo de elasticidad en el intervalo de 10-50 N/cm^{2},

-: una densidad de 1-10 mg/cm^{3},

y una cantidad suficiente de fibrinógeno humano y una cantidad suficiente de trombina humana para preparar un producto para sellar de tejidos.

10. Uso de un vehículo que tiene al menos dos de las siguientes propiedades físicas:

-: un módulo de elasticidad en el intervalo de 10-50 N/cm^{2},

-: una densidad de 1-10 mg/cm^{3},

y una cantidad suficiente de fibrinógeno humano y una cantidad suficiente de trombina humana para preparar un producto para hemostasis.

11. Uso de un vehículo de colágeno que tiene al menos dos de las siguientes propiedades físicas:

-: un módulo de elasticidad en el intervalo de 10-50 N/cm^{2},

-: una densidad de 1-10 mg/cm^{3},

y una cantidad suficiente de fibrinógeno humano y una cantidad suficiente de trombina humana para preparar un producto para pegar tejidos.

12. Uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 9-11, para intervenciones quirúrgicas en el sistema en el sistema gastrointestinal, tal como esófago, estómago, intestino delgado, intestino grueso, recto, en órganos parenquimales, tales como hígado, bazo, páncreas, riñones, pulmones, glándulas suprarrenales, tiroides y nódulos linfáticos, cirugía cardiovascular, cirugía torácica incluyendo cirugía de la tráquea, bronquios o pulmones, intervenciones quirúrgicas en la zona de oído, nariz y garganta (ENT) incluyendo cirugía dental, ginecológica, urológica, vascular, ósea (por ejemplo, resección de esponjosa), y cirugía de urgencia, cirugía neurológica, fístulas linfáticas, biliarw y cefalorraquídeas (CSF), y fugas de aire durante la cirugía torácica o pulmonar.

13. Uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 9 -12, en el que el vehículo de colágeno es una esponja de colágeno, por ejemplo una esponja de colágeno que consta esencialmente de fibras de colágeno de tipo I.

14. Uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 9-13, en el que el vehículo tiene uno o más lados activos en los que el fibrinógeno está presente en una cantidad de 2 - 10 mg/cm^{2}, tal como 4,3 - 6,7 mg/cm^{2}, preferiblemente alrededor de 5,5 mg/cm^{2}, y la trombina está presente en una cantidad de 1,5 - 5,5 U.I./cm^{2}, preferiblemente 2,0 U.I./cm^{2}.

15. Uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 9 - 14, en el que el fibrinógeno se purifica de una fuente natural.

16. Uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 9 - 15, en el que el fibrinógeno es transgénico o recombinante.

17. Uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 9 - 16, en el que el la trombina se purifica de una fuente natural.

18. Uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 9 - 17, en la que la trombina es transgénica o recombinante.