CN103889447B

CN103889447B - 止血组合物

Info

Publication number: CN103889447B
Application number: CN201280052762.5A
Authority: CN
Inventors: J·麦科伊; J·F·德怀尔; 杨子平
Original assignee: Baxter Healthcare SA; Baxter International Inc
Current assignee: Baxter Healthcare SA; Baxter International Inc
Priority date: 2011-10-27
Filing date: 2012-10-25
Publication date: 2015-11-25
Anticipated expiration: 2032-10-25
Also published as: CO6970594A2; US9833541B2; PL2771027T3; JP6038164B2; KR101975624B1; TWI548417B; UY34414A; HK1194968A1; CL2014001063A1; SG11201401878SA; US20130108671A1; BR112014009986A2; JP2014530889A; NZ623908A; MX347623B; CA2853356C; CA2853356A1; WO2013060770A1; EP2771027A1; RU2014121232A

Abstract

本发明公开了一种止血组合物，其包含适用于止血的呈颗粒形式的交联明胶，其中该组合物呈软膏形式存在，含有15.0-19.5％(w/w)交联明胶、优选16.0-19.5％(w/w)、16.5-19.5％(w/w)、7.0-18.5％(w/w)或17.5-18.5％(w/w)、更优选16.5-19.0％(w/w)或者16.8-17.8％(w/w)、尤其优选16.5-17.5％(w/w)；并且其中该组合物包含挤压增强剂。

Description

止血组合物

技术领域

本发明涉及止血组合物和制备这些组合物的方法。

背景技术

由例如WO98/008550A或者WO2003/007845A可知包含生物相容的、生物可降解的、干燥稳定的粒状材料的呈干燥储存稳定形式的止血组合物。这些产品已经成功地应用于现有技术，用于止血。是一个高度有效的止血试剂的实例，其由可在含有凝血酶的溶液中溶胀从而形成可流动软膏的粒状明胶基质组成。

因为这种产品要应用于人类，有必要为最终产品和其组分的质量、储存稳定性和无菌程度提供最高安全标准。另外，制造和处理应该尽可能便利和有效。

在该领域，一种成功的产品(如上所述产品)采用与重构(reconstituted)的冻干凝血酶溶液联合使用的明胶基质。明胶基质作为可流动的颗粒形式的明胶和凝血酶被应用，其中明胶的含量是大约11-14.5％。较低的明胶含量会导致松软的产品，由于难以在处理位点保留产品而使性能减低，尤其在较高血流量的条件下。较高的明胶颗粒浓度会导致产品由于较高的流动阻力难以通过普通的给药手段比如注射器或导管被释放。已经建议(EP0927053B1)在组合物中包含增塑剂例如聚乙二醇、山梨糖醇、甘油等，能够减低挤压力，但是包含这些材料不能必然改善性能。

本发明的一个目的在于提供一种止血组合物，其以交联明胶(即交联后的明胶)为基础，与根据现有技术的明胶产品比如相比，具有改善粘附和止血特性。本发明的目的还在于提供制造这种止血组合物的方法。该组合物还将以便利的和适于使用的方式被提供，换句话说，提供为可在内窥镜外科和显微外科中使用的可流动软膏。该产品必须具有40N以下、优选35N以下、尤其优选20N以下的挤压力。该产品将优选被提供为如下产品形式：能够方便地提供“即用型”止血组合物，其能够被直接地施用于损伤处而不涉及任何耗时的重构(reconstitution)步骤。

发明内容

因此，本发明提供了一种止血组合物，其包含适用于止血的呈颗粒形式的交联明胶，其中该组合物呈软膏形式存在，含有15.0-19.5％(w/w)的交联明胶、优选16.0-19.5％(w/w)、16.5-19.5％(w/w)、17.0-18.5％(w/w)或17.5-18.5％(w/w)、更优选16.5-19.0％(w/w)或者16.8-17.8％(w/w)、尤其优选16.5-17.5％(w/w)的交联明胶；并且其中该组合物包含挤压增强剂，尤其是白蛋白。

本发明还涉及该止血组合物用于处理损伤的用途，包括给药这样的止血组合物和试剂盒，所述试剂盒可制造用于处理这种损伤的止血组合物，所述损伤选自下组：伤口、出血、受损组织和/或出血组织。

具体实施方式

本发明提供了一种止血组合物，其包含适用于止血的呈颗粒形式的交联明胶，其中该组合物呈软膏形式存在，含有15.0-19.5％(w/w)交联明胶(＝干交联明胶重量/最终组合物重量)、优选16.0-19.5％(w/w)、16.5-19.5％(w/w)、17.0-18.5％(w/w)或17.5-18.5％(w/w)、更优选16.5-19.0％(w/w)或者16.8-17.8％(w/w)、尤其优选16.5-17.5％(w/w)交联明胶；并且其中该组合物包含挤压增强剂。

已经意外地发现，在本发明的提供适当含量挤压增强剂比如白蛋白的过程中，能够采用较高的明胶浓度，并且采用较高的明胶浓度可改善这种产品的止血特性。这是在现有技术中未曾建议的效果。此外，令人惊讶的是，较高浓度的交联明胶导致更好的粘附特性(这与现有技术(例如WO2008/076407A2的图4)中已知结果相反)。

为了达到根据本发明的由于软膏中较高的明胶浓度而具有的优选的特性，有必要以适当的含量提供挤压增强剂。所述含量应该高到足以得到挤压效果，即，能够得到交联明胶含量为15-19.5％的可流动软膏，使得止血组合物能够在例如显微外科中使用；另一方面，所述含量应该低到可防止出现止血组合物的负面功能特性，例如粘附于伤口或者止血性能。例如，如果挤压增强剂是白蛋白(具体地讲，其尤其优选人血清白蛋白)，则必须将含量设置在0.5-5.0％(w/w)(＝挤压增强剂重量/最终组合物重量)之间、优选1.0-5.0％(w/w)、优选2.0-4.5％(w/w)、更优选1.5-5.0％(w/w)、尤其优选大约1.5％(w/w)。

另一个优选类别的根据本发明的挤压增强剂是磷脂，比如磷脂酰胆碱和丝氨酸、或者复合混合物比如卵磷脂或者大豆油。

在另一个优选的实施方式中，本发明提供了一种止血组合物，其包含适用于止血的呈颗粒形式的交联明胶，其中该组合物呈软膏形式存在，含有16.0-19.5％(w/w)、优选16.5-19.5％(w/w)、17.0-18.5％(w/w)、或17.5-18.5％(w/w)、更优选16.5-19.0％(w/w)或者16.8-17.8％(w/w)、尤其优选16.5-17.5％(w/w)；并且其中该组合物包含挤压增强剂。优选挤压增强剂是人血清白蛋白。

在另一个优选的实施方式中，本发明提供了一种止血组合物，其包含适用于止血的呈颗粒形式的交联明胶，其中该组合物呈软膏形式存在，含有15.0-19.5％(w/w)交联明胶、优选16.0-19.5％(w/w)、16.5-19.5％(w/w)、17.0-18.5％(w/w)或17.5-18.5％(w/w)、更优选16.5-19.0％(w/w)或者16.8-17.8％(w/w)、尤其优选16.5-17.5％(w/w)；并且其中该组合物包含浓度超过0.8％(w/w)、优选大约3.3％(w/w)的挤压增强剂。优选挤压增强剂是例如上述浓度的人血清白蛋白。

根据本发明的止血组合物、尤其是使用白蛋白作为挤压增强剂的止血组合物，与使用较低含量(13-14.5％)交联明胶的组合物相比，具有特定的优点，尤其是增强的体内功效。出乎意料地，本发明的过程显示，不仅在使用全人血的活体外(exvivo)试验方法中、而且在临床前动物试验中，具有较高明胶颗粒浓度的配方都取得了较大的止血性能。根据本发明的产品能够减少外科手术时间，并且加快止血时间。

根据本发明的组合物具有40N以下、优选35N以下、尤其优选20N以下的平均挤压力(使用实施例1中描述的试验方法)。

根据本发明的优选实施方式，止血组合物包含戊二醛交联的明胶或者京尼平(甲基(1R,2R,6S)-2-羟基-9-(羟甲基)-3-氧杂二环[4.3.0]-壬-4,8-二烯-5-羧酸酯)交联的明胶、优选B型明胶、更优选畜皮来源的B型明胶。

优选地，交联明胶呈现为粒状材料。

根据本发明的止血组合物优选包含明胶聚合物，尤其是B型明胶聚合物。已经证明B型明胶用于止血剂是特别有利的，因为该基质处理在产生具有适当特性的明胶方面、以及在减轻病毒的和动物传染病的感染方面是高度有效的。特别优选的明胶制品能够通过下述方法制备：在室温下用2NNaOH加工小牛的真皮大约1小时，中和至pH7-8，并且加热至70℃。然后使真皮完全增溶成明胶，在溶液中具有3-10％(w/w)、优选7-10％(w/w)的明胶。该溶液能够被铸塑、干燥并且磨碎，从而提供B型明胶粉末。

优选地，明胶具有200至400的勃鲁姆强度(Bloomstrength)，尤其优选B型明胶具有200至400的勃鲁姆强度。勃鲁姆是测量明胶强度的测试值。该测试值可确定通过探针(通常直径为0.5英寸)来使凝胶的表面倾斜4mm而不断裂所需要的重量(以克计)。该结果被表示为勃鲁姆(等级)。为了在明胶上进行勃鲁姆试验(Bloomtest)，在测试之前，6.67％的明胶溶液在10℃下被保持17-18个小时。

根据本发明的止血组合物优选含有呈颗粒形式的交联明胶、尤其是粒状材料。当暴露于的液体的(即稀释剂)时，该粒状材料能够迅速地溶胀，并且呈这种溶胀形式使得能够有助于能够涂敷于出血位点的可流动软膏。根据一种优选的实施方式，由干燥交联明胶提供交联明胶。如果与药学可接受的稀释剂相接触，该干燥交联明胶粉末能够被迅速地制备成再水合物(re-hydrate)。明胶颗粒、特别是呈明胶粉形式的明胶颗粒，优选包含相对大的颗粒、也称作碎片或者亚单位的颗粒，如同在WO98/08550A和WO2003/007845A中描述的那样。优选的(中值)粒度将是10至1.000μm的范围、优选200至800μm，但在该优选范围之外的粒度可以在许多环境中获得应用。

通常，明胶颗粒具有10-1000μm、优选50-700μm、200-700μm、300-550μm、尤其优选350-550μm(平均粒径)的平均粒径(“平均粒径”是通过激光衍射法测量的平均粒径；“中值粒度”(或者质量中值粒子直径)是将频率分布分割一半的粒子直径；百分之五十的给定制品的颗粒具有较大直径，百分之五十的颗粒具有较小直径)。尽管术语“粉(末)”和“粒状(或者粒子)”有时被用于区别不同种类的材料，粉(末)在此被限定为粒状材料的特殊亚类。特别地，粉末是指具有较细粒径、因此当流动时具有更大的形成结块倾向的粒状材料。颗粒包括不会倾向于形成结块的粗团粒材料，除非当湿润时。

本发明的适用于止血的呈颗粒形式的交联明胶可以包括在尺寸上各向同性的或者非各向同性的形式。例如，在根据本发明的试剂盒中的交联明胶可以是颗粒或者纤维；并且可以以不连续的结构、例如呈粉末形式存在。

干燥的明胶组合物是液体吸收性的。例如，一旦与液体例如水溶液或悬浮液(尤其是缓冲液或者血液)相接触，交联明胶就吸收液体，并且将取决于水化程度而显示出一定程度的溶胀。材料优选可吸收至少400wt％、优选大约500wt％至大约2000wt％、尤其优选大约500wt％至大约1300wt％的水或者缓冲水溶液，对应于亚单位的单个颗粒的直径或宽度的名义提高范围是例如大约50％至大约500％、通常是大约50％至大约250％。例如，如果(干燥)颗粒具有优选0.01mm至1.5mm、尤其优选0.05mm至1mm的粒度范围，完全水化的组合物(例如在给药于伤口后或者在与缓冲水溶液接触后)可以具有0.05mm至3mm、尤其优选0.25mm至1.5mm的粒度范围。

当暴露于含水的再水合物介质(＝药学可接受的稀释剂，也称作重构介质)时，干燥组合物还将显示出显著的“平衡溶胀”。优选地，取决于使用意图，溶胀度将在400％至1300％、优选400％至1000％、更优选500％至1100％、尤其优选500％至900％的范围内。该平衡溶胀可以例如(对于交联聚合物)通过改变交联程度而被控制，这反过来通过改变交联条件比如交联剂的暴露时间、交联剂的浓度、交联温度等而实现交联程度改变。在不同的应用中，具有不同平衡溶胀值的材料表现不同。控制交联和平衡溶胀的能力容许本发明的组合物为多种用途进行优化。除了平衡溶胀之外，在释放至靶位点之前立即控制材料的水合也是重要的。水合和平衡溶胀当然是密切相关的。0％水合的材料是不溶胀的。100％水合的材料将是其处于平衡水分含量。在0％和100％之间的水合将对应于在最小与最大含量之间的溶胀。可以通过由当明胶水凝胶粉末完全水化并且因此完全溶胀时的重量减去明胶水凝胶粉末的干重来确定“平衡溶胀”。该差值然后除以干重、并且乘以100，得到溶胀测量值。应该在将材料暴露于升高的温度持续足以基本上除去所有残留水分的时间例如120℃、两个小时后测量干重。通过将干燥材料浸没在药学可接受的稀释剂比如盐水中保持足以使含水量变成常数的时间周期、典型地在室温下保持18到24小时，能够实现材料的平衡水合。

交联明胶可以作为胶片被提供，然后能够被磨碾，从而形成粒状材料。粒状材料中包含的大部分颗粒(例如超过90％w/w)优选具有10-1.000μm、优选50-700μm、200-700μm、300-550μm、尤其优选350-550μm的粒度。

优选地，可流动形式的止血组合物含有超过50％(w/w)的尺寸为100-1000μm的颗粒、优选含有超过80％(w/w)的尺寸为100至1000μm的颗粒。

用于交联的合适的明胶材料的例子在EP1803417B1的实施例1和2中、以及在US6,066,325A的实施例14中和US6,063,061A中被描述。明胶也可以与加工助剂比如作为再水合助剂的PVP、PEG和/或葡聚糖一起使用。

在本发明的一个特定方面，组合物包含含水量为20％(w/w)以下的交联明胶粉末，其中该粉末在再水合助剂存在的条件下被交联，以致该粉末的再水合速率相比不使用再水合助剂而制备的类似粉末的再水合速率高出至少5％。根据EP1803417B1定义“再水合速率”，意思指1克粉末(干重组成)在30秒内所吸收的水溶液、典型地0.9％(w/w)盐水的数量，表示为g/g。通过下述方法测量再水化速率：将交联明胶与盐水溶液混合30秒，并且在真空下将湿明胶沉积在滤膜上以便除去游离水溶液。然后记录保留在过滤器上的湿明胶的重量，干燥(例如在120℃下干燥2hr)，然后记录明胶的干重，计算被每克干燥明胶吸收的溶液的重量。

本发明的优选组合物具有至少3g/g、优选至少3.5g/g、通常3.75g/g以上的再水合速率。不使用再水合助剂而制备的类似粉末的再水合率典型地低于3，并且再水合速率增加百分数通常是至少5％、优选是至少10％、更优选是至少25％以上。

能够使用任何合适的交联剂例如WO98/08550A和WO2003/007845A中所述的戊二醛进行交联。还可以使用无毒的交联剂比如京尼平等进行交联。

因为试剂、能耗、以及时间成本较低，所以根据本发明的京尼平交联的明胶产品的生产成本低于戊二醛交联产品的生产成本。京尼平交联明胶反应能够在水中、在中性pH、室温下进行<16小时。产品能够通过乙醇和/或水洗涤而被净化，其不仅比较便宜，而且更重要的是，对操作者是安全的。

该方法优选使用在交联步骤之前呈干燥形式存在的明胶。

根据本发明的优选京尼平类型的交联剂当然是京尼平(甲基(1R,2R,6S)-2-羟基-9-(羟甲基)-3-氧杂二环[4.3.0]壬-4,8-二烯-5-羧酸酯)。然而，还可以使用其它环烯醚萜类型或者裂环烯醚苷(secoiridoid)类型的交联剂，比如橄榄苦苷。用于交联的京尼平的优选浓度在0.5-20mM的范围内、优选1-15mM、尤其2-10mM。

根据本发明的优选实施方式，用氧化剂比如漂白剂、tBu氢过氧化物等使京尼平交联明胶进行猝灭/氧化步骤，优选进行过碳酸钠、次氯酸钠、氯水或者过氧化氢(H₂O₂)处理，尤其优选用过碳酸钠或者H₂O₂进行处理，最优选用过碳酸盐进行处理。

优选H₂O₂浓度是0.5-20％(w/w)、尤其优选1-15％(w/w)、更优选大约5％(w/w)。在一个尤其优选的实施方式中，京尼平浓度是在5至10mM之间，明胶与京尼平的反应时间是在3至10小时之间、尤其优选6小时，H₂O₂浓度是在3至5％(w/w)之间，京尼平交联明胶与H₂O₂的反应时间是大约20小时。

优选过碳酸盐浓度是在1-10％(w/w)之间、尤其优选1-5％(w/w)、更优选1-4％(w/w)。在一个尤其优选的实施方式中，京尼平浓度是在5-10mM之间(尤其优选大约8mM)，明胶与京尼平的反应时间是在3至10小时(尤其大约5小时)之间，过碳酸盐浓度是在1-10％(w/w)之间、尤其优选在1至4％w/w之间，并且京尼平交联明胶与过碳酸盐的反应时间是在1至20小时之间、优选在1至5小时之间(例如1、2或3小时)。

还可以当抗氧化剂比如抗坏血酸钠存在时进行猝灭，或者通过控制反应环境的氧化势进行猝灭，比如在惰性环境比如氮气或者氩中进行猝灭和/或京尼平反应。

优选交联反应条件包括在水溶液内进行，优选在磷酸盐缓冲盐水(PBS)/乙醇缓冲液、尤其是pH4-12、优选5.0-10.0、尤其优选6-8的缓冲液中进行，或者在去离子水中或者其它可以含有0-50％可与水混容的有机溶剂的缓冲水溶液中进行。PBS缓冲液含有在生理学pH的磷酸盐缓冲液中的生理学含量的NaCl和KCl。PBS缓冲液的实例含有137mMNaCl、2.7mMKCl、10mMNa₂HPO₄·2H₂O、1.76mMKH₂PO₄(pH＝7.4)。PBS缓冲液的另一个实例由137mMNaCl、2.7mMKCl、4.3mMNa₂HPO₄和1.4mMKH₂PO₄(pH＝7.5)组成。

反应还可以在缓冲水溶液中进行，所述缓冲水溶液含有直至50％可与水混溶的有机溶剂和/或加工助剂比如PEG、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、甘露醇、过碳酸钠、乳酸钠、柠檬酸钠、抗坏血酸钠等等。

优选地，交联步骤在4℃-45℃、优选15-45℃、尤其20-40℃的温度下进行。

交联步骤可以后面可以有猝灭步骤，尤其是使用含有氨基的猝灭剂、优选氨基酸、尤其是甘氨酸进行猝灭步骤。通过使用猝灭剂，还未反应的京尼平型交联剂被钝化(例如，通过与过量猝灭剂进行反应)以便抑制进一步的交联。还可以通过提高溶液的pH至8-14之间、或者通过使用含有氨基、硫醇基、或者羟基的亲核化合物、以及提高pH和使用亲核化合物的组合进行猝灭。在根据本发明的京尼平-明胶交联反应后进行猝灭步骤，能够积极地赋予预期的物理学性能，比如作为止血活性重要决定因素的溶胀和TEG，其优于普通的单独京尼平交联。

优选在交联步骤后洗涤交联明胶，优选用甲醇、乙醇或者水洗涤，尤其优选用去离子水洗涤。另一个优选的洗涤步骤采用缓冲水溶液，所述缓冲水溶液含有直至50％(v/v)可与水混溶的有机溶剂和/或一种或多种加工助剂。

根据一种优选实施方式，交联明胶被干燥。在这样一种干燥状态，止血组合物甚至在升高的温度(例如超过20℃、超过30℃或者甚至超过40℃)下也可长久地稳定储存。优选的干燥条件包括交联的生物相容的聚合物，其被干燥成具有低于15％(w/w)、优选低于10％、更优选低于5％、尤其优选低于1％的含水量。在另一种优选的实施方式中，产品可以被提供呈水合的或者湿润状态，该状态中，水解溶液可以是生物相容的缓冲液或者溶液。

谷氨酸-凝胶产品具有被周围组织掩饰的倾向，因为其呈淡黄色，与周围组织相混同。这使得预期应用的视觉评价不确定。以交联反应条件的程度、以及后续的加工和完成步骤为基础，根据本发明的京尼平交联明胶产品显示出从浅黄色至深蓝色或者绿色的可变色彩。该色彩调整能力和在最终产品中获得预期色彩的能力，具有在伤口位点应用适当产品时为医生提供目测指示的附加优点，因为该色彩可将其与周围组织区分开，而不是可能被周围组织掩饰。这是本发明的另一个新颖的特征。另一方面，取决于最终产品的需要，色彩能够被除去，以得到无色产品。

在优选的实施方式中，生物相容的聚合物例如用京尼平型交联剂例如京尼平交联的明胶是均匀地交联的聚合物，能够例如通过荧光性测量被显示，如同在本申请实施例3中描述的那样。在一个尤其优选的实施方式中，生物相容的聚合物比如明胶作为呈微粒形式的被京尼平均匀地交联的生物相容的聚合物比如明胶存在。

根据本发明的止血组合物优选在其中含有赋形剂，比如润滑剂，例如透明质酸。

在本发明的另一个实施方式中，不含赋形剂，比如润滑剂例如透明质酸。

所述药学可接受的稀释剂优选是水溶液，并且可以含有选自下组的物质：NaCl、CaCl₂和醋酸钠。

例如，药学可接受的稀释剂包含注射用水，并且彼此独立地包含50-200mMNaCl(优选150mM)、10-80mMCaCl₂(优选40mM)、以及1-50mM醋酸钠(优选20mM)。在另一个实施方式中，药学可接受的稀释剂含有小于35g/L的甘露醇、优选小于25g/L、更优选小于10g/L的甘露醇，尤其优选药学可接受的稀释剂基本上不含甘露醇。

根据优选的实施方式，药学可接受的稀释剂含有凝血酶，优选10-1000I.U.凝血酶/mL、尤其优选250-700I.U.凝血酶/mL。优选呈即用型的止血组合物中含有10-100,000国际单位(I.U.)的凝血酶、更优选100-10,000IU、尤其优选500-5,000I.U.的凝血酶。凝血酶(或者任何其它的凝血诱导剂，比如蛇毒、血小板活化剂、凝血酶受体活化肽和纤维蛋白原沉淀剂)能够来源自于任何适合用于人类的(即药学可接受的)的凝血酶制品。合适的凝血酶来源包括人的和牛的血液、血浆或者血清(如果没有预见到相反的免疫反应，能够使用其它动物来源的凝血酶)，重组来源的凝血酶(例如人重组凝血酶)和自体的人凝血酶能够被优选用于一些应用。

药学可接受的稀释剂的使用量在即用型组合物中应达到预期的终浓度。凝血酶制品可以含有其它的有用组分，比如离子、缓冲液、赋形剂、稳定剂等。优选地，凝血酶制品含有人白蛋白作为挤压增强剂。优选的盐是NaCl和/或CaCl₂、两者以普通的用量和浓度被应用于凝血酶(例如0.5-1.5％NaCl(例如0.9％)和/或20-80mMCaCl₂(例如40mM))。

在另一种实施方式中，稀释剂还可以包括缓冲液或者缓冲系统，以便缓冲重构的干燥组合物的pH，优选pH3.0-10.0、更优选pH6.4-7.5、尤其优选pH6.9-7.1。

可以在根据上述先决条件的试剂盒确立交联明胶、稀释剂和挤压增强剂的合适用量：例如，可以提供a)具有0.736-0,995g干燥交联明胶(对应于在最终产品中15.0-19.5％(w/w))的小瓶和b)具有含有60-240mg白蛋白的4mL稀释剂和可选的500I.U./ml浓度的凝血酶和/或40mMCaCl₂的第二个小瓶。作为另一种选择，白蛋白可以呈冷干形式被加至试剂盒的a)中的干燥明胶组分中。例如，可以提供：a)具有0.573-0.775g干燥交联明胶(对应于在最终产品中15.0-19.5％(w/w))的小瓶，其中含有48-192mg白蛋白；和b)具有3.2mL稀释剂和可选的浓度为500I.U./ml的凝血酶和/或40mMCaCl₂的第二个小瓶。

根据本发明的试剂盒中的交联明胶组分优选被提供为干燥组合物，其中交联明胶以干燥形式存在。

根据本发明的基本干燥的交联明胶组合物的残余水分含量可以大约相当于可比较的市售产品比如(Floseal例如具有占干燥产品大约8-12％的水分)中的含水量。

在根据本发明的试剂盒中，适用于止血的呈颗粒形式的干燥交联明胶优选是呈粉末形式的明胶，尤其优选粉末颗粒的中值粒度为10-1000μm、优选50-700μm、200-700μm、300-550μm、尤其优选350-550μm。根据本发明的“干燥的交联明胶粒状制品”是一般公知的，例如在WO98/08550A中有描述。优选地，交联明胶是生物相容的、生物可降解的、干燥稳定的粒状材料。

根据另一个方面，本发明涉及一种根据本发明的止血组合物，其用于处理选自下组的损伤：伤口、出血、受损组织、出血组织和/或骨损伤。

本发明的另一个方面是处理选自下组损伤的方法：伤口、出血、受损组织和/或出血组织，所述处理包括将根据本发明的止血组合物给药于损伤位点。

根据另一个方面，本发明还提供了一种用于将根据本发明的止血组合物释放至病人身体中靶位点的方法，所述方法包含将根据本发明的方法制造的止血组合物释放至靶位点。尽管干燥组合物也能够被直接地施用于靶位点(并且可选择地必要时在靶位点和稀释剂接触)，但优选在给药于靶位点之前使干燥的止血组合物与药学可接受的稀释剂相接触，以便得到呈软膏形式的根据本发明的止血组合物。

在这样一种方法中，可以使用用于制造可流动的交联明胶软膏的试剂盒，用于处理选自下组的损伤：伤口、出血、受损组织和/或出血组织，该试剂盒包含：

a)一种待重构成可流动软膏的干燥的止血组合物，其包含呈颗粒形式的交联明胶，该可流动软膏含有15.0-19.5％(w/w)交联明胶(＝干明胶重量/最终组合物重量)、优选16.0-19.5％(w/w)、16.5-19.5％(w/w)、17.0-18.5％(w/w)或17.5-18.5％(w/w)、更优选16.5-19.0％(w/w)或者16.8-17.8％(w/w)、尤其优选16.5-17.5％(w/w)交联明胶；以及

b)用于重构止血组合物的药学可接受的稀释剂，

其中组合物或者稀释剂包含适量的挤压增强剂、尤其是白蛋白，例如挤压增强剂的用量(对于白蛋白)可致使在重构的软膏中白蛋白浓度在0.5-5.0％(w/w)(＝挤压增强剂重量/最终组合物重量)之间、优选1.0-5.0％(w/w)、优选2.0-4.5％(w/w)、更优选1.5-5.0％(w/w)、尤其优选大约1.5％(w/w)。

这样一种试剂盒中的优选的其他组分，具体地讲，如果止血组合物呈干燥形式被包含，所述组分是用于重构止血组合物的稀释剂(＝再水合介质)。试剂盒中的其他组分可以是给药工具比如注射器、导管、刷子等(如果组合物不是在给药工具中提供的话)，或者为用于医疗实践(外科手术)所必需的其它组分比如替换针或导管、额外的小瓶或者别的伤口覆盖手段。优选地，根据本发明的试剂盒包含容纳干燥的和稳定的止血组合物的注射器、以及含有稀释剂的注射器(或者提供用于从另一个稀释剂容器中取出稀释剂)。

在优选的实施方式中，药学可接受的稀释剂被设置在单独容器中。其能够优选是注射器。在注射器中的稀释剂然后能够容易地涂敷于最终的容器，用于重构根据本发明的干燥的止血组合物。如果最终容器也是注射器，则两个注射器能够在一个包装中一起完成。因此优选在一个注射器中提供根据本发明的干燥止血组合物，该注射器与具有药学可接受的稀释剂的稀释剂注射器一起完成，用于重构所述干燥的和稳定的止血组合物。

根据优选的实施方式，最终容器进一步含有有效量的稳定剂，以便抑制当暴露于灭菌辐射时聚合物的改变，稳定剂优选是抗坏血酸、抗坏血酸钠、抗坏血酸的其它盐、或者抗氧化剂。

借助这样一种药学可接受的稀释剂，可以提供本发明的即用型的止血组合物，其然后能够被直接地应用于病人。因此，还提供了一种方法，其用于提供根据本发明的即用型的止血组合物，其中该止血组合物被提供在第一注射器中，用于重构的稀释剂被提供在第二注射器中，第一注射器和第二注射器彼此相连通，并且液体被带进第一注射器来产生可流动形式的止血组合物；并且可选将可流动形式的止血组合物至少返回至第二注射器一次。优选地，即用型制品呈水凝胶存在、或者作为水凝胶被提供。这种产品一般是本技术领域已知的，呈不同的形式。因此，本发明的优选实施方式还提供了一种方法，其用于提供根据本发明的即用型的止血组合物，其中该止血组合物被提供在第一注射器中，用于重构的稀释剂被提供在第二注射器中，第一注射器和第二注射器彼此相连通，并且稀释剂被带进第一注射器来产生可流动形式的止血组合物；并且可选将可流动形式的止血组合物至少返回至第二注射器一次。该方法(也称作“涡动(swooshing)”)提供了一种合适的即用型的根据本发明的组合物，其能够容易地并且有效地在短时间内被制造，例如在手术期间紧急情况下制造。通过这样一种方法提供的该可流动形式的止血组合物特别适用于处理选自下组的损伤：伤口、出血、受损组织、出血组织和/或骨损伤。

出于稳定性原因，这些产品(以及根据本发明的产品)通常呈干燥形式被提供在最终容器中，并且在使用之前立即形成即用型形式(其通常呈(水)凝胶、悬浮液或者溶液形式)，使加入药学可接受的稀释剂(＝再水合介质)成为必要。

根据另一个方面，本发明涉及一种方法，其用于提供根据本发明的即用型的止血组合物，其中该止血组合物被提供在第一注射器中，用于重构的稀释剂被提供在第二注射器中，第一注射器和第二注射器彼此相连通，并且液体被带进第一注射器来产生可流动形式的止血组合物；并且可选将可流动形式的止血组合物至少返回至第二注射器一次。

优选地，可流动形式的根据本发明的止血组合物含有超过50％(w/w)的尺寸为100-1000μm的颗粒、优选含有超过80％(w/w)的尺寸为100-1000μm的颗粒。

一旦将根据本发明的生物相容的止血的交联聚合物施用于伤口，就形成能够形成血流屏障的有效基质。具体地讲，止血聚合物的溶胀特性能够使其成为有效的抑制流血和反复出血过程的机械屏障。

本发明组合物可以附加地含有亲水性聚合组分(也称作“反应性亲水性组分”或者“亲水性(聚合)交联剂”)，其可进一步增强本发明组合物的粘附特性。根据本发明的止血组合物中的该亲水性聚合组分起到亲水性交联剂的作用，一旦将止血组合物施用于病人(例如，施用于病人的伤口处或者病人身上另一个需要止血活性的地方)，该亲水性交联剂就能够与它的反应基团起反应。因此，对于本发明而言，重要的是，当施用于病人时，亲水性聚合组分中的反应基团是反应性的。因此，制造根据本发明的止血组合物时，必须使得在制造工艺期间聚合组分中的反应基团被保留，一旦将止血组合物施用于伤口，该反应基团应该发生反应。

由于亲水性聚合交联剂的反应基团是可水解的，所以在将止血组合物给药于病人之前、尤其在制造期间，必须防止止血组合物与水或水溶液过早接触。然而，在制造期间，亲水性聚合组分的加工还可能是在反应基团的反应被抑制的条件下(例如处于低pH下)在含水介质中进行。如果亲水性聚合组分能够被熔化，则能够将熔化后的亲水性聚合组分喷到、或者印刷到交联明胶的基质上面。也有可能将干燥形式(例如粉末)的亲水性聚合组分与干燥形式的交联明胶相混合。如有必要，则能够将温度的升高应用于熔化被撒到交联明胶上的亲水性聚合组分，以便得到止血组合物的持久涂层。可选地，这些亲水性聚合组分能够被加入到惰性有机溶剂(同亲水性聚合组分的反应基团相比为惰性的)中，并且加到交联明胶的基质上。这些有机溶剂的例子有干燥的乙醇、干燥的丙酮或者干燥的二氯甲烷(它们对于亲水性聚合组分例如是惰性的、比如用NHS-酯取代的PEGs)。可选地，还可以加入亲核基团(例如PEG-SH)。

在一种优选的实施方式中，亲水性聚合物组分是单一的亲水性聚合物组分，并且是多亚烷基氧化物聚合物，优选包含聚合物的PEG。该反应性聚合物中的反应基团优选是亲电基团。

反应性亲水性组分可以是多亲电性多亚烷基氧化物聚合物，例如多亲电性的PEG。反应性亲水性组分能够包括两个以上亲电基团，优选PEG包含两个以上选自琥珀酰亚胺酯(-CON(COCH₂)₂)、醛(-CHO)和异氰酸酯(-N＝C＝O)的反应基团，例如在WO2008/016983A(通过引用将其全部内容并入本文)中公开的组分。

根据本发明的亲水性聚合交联剂中优选的亲电基团是基团可与蛋白质中的氨基、羧基、硫醇基和羟基、或者它们的混合物发生反应的基团。

在碳二亚胺异氰酸酯、或THPP(β-[三(羟甲基)膦基]丙酸)存在的条件下，优选的对氨基特异的反应基团是NHS-酯基、亚氨酯基、醛基、羧基，尤其优选得是季戊四醇聚(乙二醇)醚四琥珀酰亚胺戊二酸酯(＝季戊四醇四[1-1’-氧-5’-琥珀酰亚胺戊酸酯-2-聚氧代乙二醇]醚(＝NHS-PEG，MW10,000)。

优选的对羧基特异的反应基团是在碳二亚胺存在下的氨基。

优选的对硫醇基特异的反应基团是顺丁烯二酰亚胺或者卤代乙酰基。

优选的对羟基特异的反应基团是异氰酸酯基。

在亲水性交联剂上的反应基团可以相同(功能性同型)或者不同(功能性异型)。亲水性聚合组分可能具有两种反应基团(同型双功能的基团或者异型双功能的基团)或更多种反应基团(同型/异型三功能的基团)。

在具体的实施方式中，材料是合成聚合物，优选包含PEG。该聚合物可以是PEG的衍生物，该衍生物包含适合于交联并且粘附至组织的活性侧基。

借助这些反应基团，亲水性反应性聚合物具有交联血液蛋白质、以及组织表面蛋白质的能力。与交联后的明胶交联也是可能的。

所述多亲电性多亚烷基氧化物可以包括两个以上琥珀酰亚胺基。所述多亲电性多亚烷基氧化物可以包括两个以上马来酰亚胺基。

优选地，所述多亲电性多亚烷基氧化物可以是聚乙二醇或其衍生物。

在最优选的实施方式中，亲水性聚合组分是季戊四醇聚(乙二醇)醚戊二酸四琥珀酰亚胺酯(＝COH102，亦即，季戊四醇四[1-1’-氧代-5'-琥珀酰亚胺戊酸酯-2-聚氧代乙二醇]醚)。

该亲水性聚合组分是亲水性交联剂。根据一种优选的实施方式，该交联剂具有超过两个用于交联的反应基团(“臂”)，例如具有3个、4个、5个、6个、7个、8个、或更多个具有用于交联的反应基团的臂。例如，NHS-PEG-NHS是有效的根据本发明的亲水性交联剂。然而，对于一些实施方式，可以更优选4臂聚合物(例如4臂-p-NP-PEG)；基于相同的原理，对于那些其中多个反应性交联为有利的实施方式，甚至可以更优选8臂聚合物(例如8臂-NHS-PEG)。另外，亲水性交联剂是聚合物，即，由重复结构单元组成的大分子(巨分子)，所述结构单元典型地通过共价化学键相连接。亲水聚合物组分应该具有至少1000Da的分子量(以便适当地用作根据本发明的止血组合物中的交联剂)；优选根据本发明的交联聚合物的分子量为至少5000Da、尤其优选至少8000Da。

对于一些亲水性交联剂，碱性反应条件的存在(例如在给药位点处)是优选的，或者对于功能特性是必需的(例如对于在给药位点处更快的交联反应而言)。例如，碳酸盐或者碳酸氢盐离子(例如，作为pH7.6以上、优选8.0以上、尤其是8.3以上的缓冲液)可以在给药位点处被额外地提供(例如作为缓冲溶液、或者作为用这样一种缓冲液浸渍的织物或衬垫)，从而允许改进根据本发明的止血组合物的性能、或者允许有效地用作止血材料和/或伤口粘附材料。

在根据本发明的组合物中的亲水性聚合组分的反应性(如上所述，起交联剂作用)被保留在组合物中。这意味着交联剂的反应基团还没有与止血组合物起反应，并且未被水进行水解(或者至少水解量不显著，不会对本发明组合物的止血功能产生消极后果)。这能够通过将交联明胶与亲水性交联剂进行组合而实现，所述组合的方式不会导致交联剂中的反应基团与止血聚合物、或者与水发生反应。通常，这包括省略含水环境(或者润湿)、尤其是无酸性条件下(假如交联剂在酸性条件下无反应性)的润湿。这允许得到反应性止血材料。

优选根据本发明的止血组合物中，交联明胶对于亲水性聚合组分的比率是0.1-50％(w/w)、优选5-40％(w/w)。

根据本发明的止血组合物中还可以存在其他组分。根据优选的实施方式，根据本发明的止血组合物可以进一步包含选自下组的物质：抗纤维蛋白溶解剂、促凝剂、血小板活化剂、抗生素、血管收缩剂、色素、生长因子、骨形态发生蛋白质和止痛药。

本发明还涉及一种完备的最终容器，其含有根据本发明的止血组合物。该最终容器含有呈无菌、储存稳定并且可销售形式的根据本发明的止血组合物。该最终容器能够是任何适合于容纳(并储存)药学可给药的化合物的容器。可以使用注射器、小瓶、试管等；然而，特别优选将根据本发明的止血组合物提供在注射器中。注射器已经是优选的用于止血组合物的给药工具，如同本技术领域公开的那样，还因为在医疗实践中注射器的处理优点。然后可以优选通过特定的注射器针或者通过合适的导管(在重构后)施涂组合物。重构的止血组合物(其优选被重构，以便形成水凝胶)还可以通过多种其它的手段、例如通过刮铲、刷子、喷涂、手工加压、或通过任何其它的常规技术被施涂。通过内窥镜(腹腔镜手术)手段将重构的止血组合物给药于病人是特别优选的。通常，通过使用注射器或者类似的涂药器来施涂根据本发明的重构的止血组合物，所述涂药器能够通过孔口、开口、针、试管、或其它途径挤出重构的组合物，从而形成珠粒、层、或类似的部分材料。通过挤压注射器或者其它涂药器中的孔口，能够进行组合物的机械解离，所述孔口典型地具有在0.01mm至5.0mm、优选0.5mm至2.5mm范围内的尺寸。然而，优选出从具有预期粒度的干燥形式初始地制备出止血组合物(刚一重构就制备出，尤其是通过水合，产生必需尺寸的亚单位(例如水凝胶亚单位))，或者在最终的挤压或施涂步骤之前部分地或全部地机械解离成必需的尺寸。显而易见，这些机械的组分需要呈无菌形式(在内部和外部)被提供，以便满足用于人类使用的安全要求。

根据本发明的止血组合物优选从如实施例1中描述的容器中呈膏状形式被施涂于病人，所述容器具有40N以下、比如30N以下、或20N以下、优选15-30N范围内的挤压压力。

本发明的另一个方面涉及一种用于提供即用型止血组合物的方法，包括接触根据本发明的止血组合物。

结合下述实施例和附图，进一步描述本发明，本发明并不限于这些实施例和附图。

图1显示了戊二醛交联的明胶软膏的平均挤压力(将产品以250mm/分钟的压缩速度推出注射器所需要的挤压力，以35mm距离计；所有的产品在室温下保温30分钟，在挤压力测量之前不久快速地“再涡动(re-swooshing)”，该软膏含有17.5％(w/w)的交联明胶，该交联明胶具有在凝血酶组分中不同浓度的人血清白蛋白。X轴显示了在凝血酶组分中的人血清白蛋白浓度[g/L]，Y轴显示了平均挤压力[N]。

图2显示了含有17.5％(w/w)(取决于人血清白蛋白浓度的)交联明胶的交联明胶软膏的稠度。

图3显示了含有17.5％(w/w)具有在凝血酶组分中不同浓度的人血清白蛋白的明胶的京尼平交联明胶软膏的平均挤压力。X轴显示了在凝血酶组分中的人血清白蛋白浓度[g/L]，Y轴显示了平均挤压力[N]。

图4显示了在测试物品施用后出血严重程度的评价和近似值。

图5至图8显示了不同制品在猪肝穿孔-活体解剖做模型中的止血效力。X轴显示了在施用后的时间[秒]，Y轴显示了止血成绩的百分比(图5中限定为“没有出血”，图6中限定为“没有出血”或“渗出”)。

在图5和6图中，符号是指：

_____具有在凝血酶溶液中50g/L人血清白蛋白的戊二醛交联明胶(n＝8)

---------具有在凝血酶溶液中75g/L人血清白蛋白的戊二醛交联明胶(n＝8)

在图7和8图中，符号是指：

_____≈17.5％(w/w)戊二醛交联明胶

--------≈14.5％(w/w)戊二醛交联明胶

……..≈17.5％(w/w)戊二醛交联明胶+凝血酶溶液中2.5％PEG10,000

实施例

实施例1：挤压力(EF)的测定

使用配备有100N测力传感器的5544型Instron(拉伸强度试验机)机械测试器，以250mm/分钟的大梁速度(cross-beamspeed)进行操作，测量将产品从注射器挤出所需要的挤压力。在完全的大梁位移(34mm偏移)期间测量需要的挤压力，该位移相当于注射器柱塞移动从而将几乎全部产品挤出注射器之外时的距离。由这些压力根据下式计算出平均挤压力：

用于该测试的样品制备如下：用0.704g干物质的固体样品(吸取大约12％的残留水分，经计算为大约0.8g)填充具有雄锁紧接口(maleluerlock)系统(其中附接有转换接头的内注口管腔直径测量为2.54mm)的5mL标准注射器(具有内径为12.2mm的圆筒体)。而稀释剂，使用3.2mL的凝血酶溶液，其含有在40mM氯化钙中500I.U./mL凝血酶和0、5、15、25、50或75mg/ml人血清白蛋白。通过连通持有稀释剂的注射器(具有雌锁紧接口(femaleluerlock)系统的标准的5ml注射器)和注射器持有干组分，并且将内容物前后推至少10次(该混合物技术被称作“涡动”)，稀释剂和固体组分被混合。此后在测量以前，样品在室温下保温30分钟。在保温后，每个样品被“再涡动”两次，并且持有产品的注射器(预先持有如上所述干燥组分的注射器)被连通至涂药器(雌锁紧连接器系统，内管直径2.29mm，持有双线，总长141.5mm)。该注射器被组装至涂药器，并且置于设定好的Instron中，开始测试。

注射器和涂药器是市售的巴克斯特公司的Floseal止血基质产品的一部分。

在Floseal中的戊二醛交联明胶的测试结果被描述在图1中，京尼平交联明胶的测试结果被描述在如下图3中，这些结果还显示在对应的表1和表2中。

含有17.5％(w/w)取决于白蛋白浓度的交联明胶的交联明胶软膏的稠度如图2所示(在凝血酶组分中提供0、25、50和75g/L人血清白蛋白)。

表1：

在凝血酶组分中的白蛋白浓度[g/L]	挤压力[N]	标准偏差
			0	40	2,4
5	38	1,5
			15	30	2,6
25	25	2,2
			50	19	1,5
60	19	1,0

表2：

在凝血酶组分中的白蛋白浓度[g/L]	挤压力[N]	标准偏差
			0	54	1.9
15	29	3.6
			50	17	2.2

京尼平交联明胶的制备：

通过碱处理来加工来源于牛的胶原，接着用去离子工艺用水(DIW)冲洗，以便除去残留的盐。通过热处理提取明胶，干燥成片材。将片材磨碎成粉末，使用作为交联剂的京尼平进行处理。

将1kg明胶颗粒加至20L的10mM京尼平DIW溶液中。在夹套温度控制槽中23℃下，在中性pH(7.2)进行反应。进行混合6小时，排掉溶液，固体保留在网格内，用DIW冲洗，洗去残留的京尼平。将材料再悬浮在5％H₂O₂溶液中20小时。材料用DIW冲洗，除去H₂O₂。固体在真空下在滤纸上预先干燥，然后烘干2.5天。将干燥后的基质磨碎成粉末，在曝光至_γ照射之前，填入各个塑料注射器中。

实施例2：止血效力的测定

材料和方法：

动物模型

对于该模型，进行中线剖腹手术，接着进行电烙术以便终止从外科手术切割处的出血。肝脏被暴露，并且分离出叶瓣。使用10mm直径穿孔活体解剖，产生连续2个大约5mm深的非完全厚度的伤痕，核组织被除去。在伤痕上进行预处理测试，包括使用预先称重的纱布收集从每个伤痕流出的血液用于10秒。

测试物品被随机化，并且提供给不知道该样品处理的外科医生。把大约1.0mL指定的测试物品局部地施加于伤痕。盐水润湿的纱布被用于帮助估计指定的伤痕处的测试物品，启动计时器。在30秒后移去盐水润湿的估计用纱布。

根据图3中的描述，在将测试物品施加于它们的指定伤痕处后30、60、90、120、300、以及600秒，评价出血程度(出血分数：0：没有出血(产品用血液饱和)；1：渗出(产品之外有血液，但没有血滴)；2：很轻微(产品上有血滴)；3：轻微(血滴流下)；4：中等(少量血液流下)；5：严重(大量血液流下))。

用血液饱和的产品，但没有活动性出血，打分为“0”(零)。在300秒测试后，用盐水冲洗过量的测试物品，离开伤痕。在多个肝叶中重复并进行该程序。一个外科医生产生、处理、并且进行该观察测试。

测试物品合成

通过制备交联明胶软膏(浓度为14.5％和17.5％，具有在凝血酶溶液(有或者没有附加的2.5％PEG)中25或者50g/L人血清白蛋白)，制备出用于在猪肝模型中体内评价的测试物品。

结果被描述在图5至图8中，显示具有17.5％明胶的改善的性能，而在增塑剂(PEG)存在的条件下效力很小。

实施例3

按照Floseal包装说明书配制明胶样品，偶联关健(couplekey)除外。首先，使用氯化钠代替氯化钙，并且以125％固体代替100％来配制明胶。使明胶/凝血酶配方静置25分钟，然后弃去1mL的制品。将另一个1ml的材料施加于局部的止血系统(THS)。THS设备被预先加注有缺乏血小板的血浆。

THS是一种被设计用于模拟流血伤口的装置。该人工伤口是在硅酮基材中的圆柱形孔穴。硅酮圆柱的表面包覆有一层纤维蛋白原。注射泵排出凝结液体(全血、血浆等)，在该情况下为缺乏血小板的血浆，同时记录反压力。在该实验中，血浆以0.25ml/分钟的固定速率流动，穿过在圆柱形伤口底部中心的小孔。在施用止血基质之前，立即用纱布吸取过量的血浆。随着血浆持续流动，将1ml的止血基质涂敷于圆柱形伤口。立即用湿润的纱布覆盖伤口，并且施加固定的压力。在30秒后，除去重量，并且血浆持续流动8-10分钟，在该点处，流动被终止，并且在湿度试验容器中使凝块固着在旁侧，停留超过2小时。在两个小时的末尾，凝块被安装到8℃的振动切片机上，从凝块切出大约500μm厚的切片。这些切片被浸入PBS缓冲液中。当不用时，切片被储存在5℃冰箱中。将切片放置到盖玻片上，并且用NikonA1R共焦显微镜照像，该显微镜运行NIS-ElementsAdvancedResearchv3.22.00Build710软件。为了收集显微照片，使用平面荧光10x物镜，激光激发488nm光，并且发射收集窗口为500-550nm。同时使用透射光检测器收集透射光图像。借助这些图像参数，通过软件进行的自动缝合被用于产生肉眼可见的样品图谱。样品的较小面积也通过收集3Dz-层叠的图像进行表征，这些图像带有5.125μm的光学切片厚度。复合共焦图谱被用于识别位于表面并且被切片的明胶颗粒。这对于在原子压力显微镜(AFM)中的弹性测定的定位很重要。凝块切片被安装在VeecoMultimodeAFM内。该多模式(multimode)安装有Nanoscope(毫微秒示波器)V控制器和JV压电扫描器。使用载有4.5μm聚苯乙烯泡沫塑料球的NovascanAFM悬臂进行压力测量。悬臂的压力常数通过热协调方法(thermaltunemethod)被测定为0.779N/m。悬臂被设置于明胶颗粒中心的上方，然后进行16×16阵列的压力测量。每个压力曲线都涉及到将明胶颗粒向上移动与聚苯乙烯泡沫塑料球相接触，并且持续移动颗粒直到悬臂偏移到达2伏特的预置触发器数值，在该点，明胶被从触发器位置缩回1.00微米的距离。

讨论

荧光数据显示，戊二醛交联明胶是不均匀地交联的。取而代之的是，颗粒边缘附近的交联密度似乎更高，颗粒的中央部的交联显著地比边缘更少。相反，京尼平交联明胶在整个颗粒中似乎均匀地(均一地)交联。对于荧光强度，没有实质上的边缘效果。因为归因于交联剂本身的可能荧光差异，京尼平交联的材料和戊二醛交联的材料的荧光强度不能直接地比较。然而，AFM测量的弹性模量测量值显示，京尼平交联明胶比戊二醛交联明胶硬，戊二醛交联明胶现得较软(更柔韧)。

Claims

1.止血组合物，其包含适用于止血的呈颗粒形式的交联明胶，其中该组合物呈软膏形式存在，含有15.0-19.5％(w/w)交联明胶；并且其中该组合物包含挤压增强剂，所述挤压增强剂是白蛋白，其含量为0.5-5.0％(w/w)。

2.如权利要求1所述的止血组合物，其特征在于，所述组合物含有16.0-19.5％(w/w)交联明胶。

3.如权利要求1所述的止血组合物，其特征在于，所述组合物含有16.5-19.5％(w/w)交联明胶。

4.如权利要求1所述的止血组合物，其特征在于，所述组合物含有17.0-18.5％(w/w)交联明胶。

5.如权利要求1所述的止血组合物，其特征在于，所述组合物含有17.5-18.5％(w/w)交联明胶。

6.如权利要求1所述的止血组合物，其特征在于，所述组合物含有16.5-19.0％(w/w)交联明胶。

7.如权利要求1所述的止血组合物，其特征在于，所述组合物含有或16.8-17.8％(w/w)交联明胶。

8.如权利要求1所述的止血组合物，其特征在于，所述组合物含有16.5-17.5％(w/w)交联明胶。

9.如权利要求1所述的止血组合物，其特征在于，所述挤压增强剂是白蛋白，其含量为1.0-5.0％(w/w)。

10.如权利要求1所述的止血组合物，其特征在于，所述白蛋白的含量为2.0-4.5％(w/w)。

11.如权利要求1所述的止血组合物，其特征在于，所述白蛋白的含量为1.5-5.0％(w/w)。

12.如权利要求1所述的止血组合物，其特征在于，所述白蛋白的含量为1.5％(w/w)。

13.如权利要求1或9所述的止血组合物，其特征在于，所述交联明胶是戊二醛交联明胶或者京尼平交联明胶。

14.如权利要求1或9所述的止血组合物，其特征在于，所述交联明胶是B型明胶。

15.如权利要求1或9所述的止血组合物，其特征在于，所述交联明胶作为粒状材料存在。

16.如权利要求1或9所述的止血组合物，其特征在于，所述交联明胶的粒度为100-1000μm。

17.如权利要求1或9所述的止血组合物，其特征在于，所述交联明胶的粒度为200-800μm。

18.如权利要求1或9所述的止血组合物，其特征在于，所述交联明胶的粒度为350-550μm。

19.如权利要求1或9所述的止血组合物，其特征在于，所述组合物含有凝血酶。

20.如权利要求1或9所述的止血组合物，其特征在于，所述组合物含有凝血酶，其浓度为10-1000I.U.凝血酶/mL。

21.如权利要求1或9所述的止血组合物，其特征在于，所述组合物含有凝血酶，其浓度为250-700I.U.凝血酶/mL。

22.如权利要求1或9所述的止血组合物，其用于处理选自下组的损伤：伤口、受损组织、出血组织、和/或骨损伤。

23.如权利要求1至21中任一项所述的止血组合物在制备处理损伤的药物中的应用，所述处理损伤包括将如权利要求1至21中任一项所述的止血组合物给药于损伤位点，所述损伤选自下组：伤口、受损组织、和/或出血组织。

24.用于制造可流动的交联明胶软膏的试剂盒，所述试剂盒用于处理选自下组的损伤：伤口、受损组织、和/或出血组织，所述试剂盒包含：

a)干燥的止血组合物，其包含待被重构成可流动软膏的呈颗粒形式的交联明胶，该可流动软膏含有15.0-19.5％(w/w)交联明胶；以及

b)用于重构止血组合物的药学可接受的稀释剂，

其中所述组合物或者所述稀释剂包含白蛋白，白蛋白的量致使重构的软膏中白蛋白浓度为0.5-5.0％(w/w)。

25.如权利要求24所述的试剂盒，其特征在于，所述组合物含有16.0-19.5％(w/w)交联明胶。

26.如权利要求24所述的试剂盒，其特征在于，所述组合物含有16.5-19.5％(w/w)交联明胶。

27.如权利要求24所述的试剂盒，其特征在于，所述组合物含有17.0-18.5％(w/w)交联明胶。

28.如权利要求24所述的试剂盒，其特征在于，所述组合物含有17.5-18.5％(w/w)交联明胶。

29.如权利要求24所述的试剂盒，其特征在于，所述组合物含有16.5-19.0％(w/w)交联明胶。

30.如权利要求24所述的试剂盒，其特征在于，所述组合物含有16.8-17.8％(w/w)交联明胶。

31.如权利要求24所述的试剂盒，其特征在于，所述组合物含有16.5-17.5％(w/w)交联明胶。

32.如权利要求24所述的试剂盒，其特征在于，所述白蛋白的量致使重构的软膏中白蛋白浓度为1.0-5.0％(w/w)。

33.如权利要求24所述的试剂盒，其特征在于，所述白蛋白的量致使重构的软膏中白蛋白浓度为2.0-4.5％(w/w)。

34.如权利要求24所述的试剂盒，其特征在于，所述白蛋白的量致使重构的软膏中白蛋白浓度为1.5-5.0％(w/w)。

35.如权利要求24所述的试剂盒，其特征在于，所述白蛋白的量致使重构的软膏中白蛋白浓度为1.5％(w/w)。

36.如权利要求24所述的试剂盒，其特征在于，所述药学可接受的稀释剂包含缓冲液或者缓冲体系。

37.如权利要求24所述的试剂盒，其特征在于，所述药学可接受的稀释剂包含缓冲液或者缓冲体系，其pH为3.0-10.0。

38.如权利要求24或36所述的试剂盒，其特征在于，所述药学可接受的稀释剂含有凝血酶。

39.如权利要求24或36所述的试剂盒，其特征在于，所述药学可接受的稀释剂含有凝血酶，其浓度为10-1000I.U.凝血酶/mL。

40.如权利要求24或36所述的试剂盒，其特征在于，所述药学可接受的稀释剂含有凝血酶，其浓度为250-700I.U.凝血酶/mL。

41.如权利要求24或36所述的试剂盒，其特征在于，所述药学可接受的稀释剂含有选自下组的物质：NaCl、CaCl₂和醋酸钠。

42.如权利要求38所述的试剂盒，其特征在于，所述药学可接受的稀释剂含有选自下组的物质：NaCl、CaCl₂和醋酸钠。

43.一种用于提供即用型的如权利要求1至21中任一项所述的止血组合物方法，其中该止血组合物提供在第一注射器中，用于重构的稀释剂提供在第二注射器中，第一注射器和第二注射器彼此相连通，并且液体被带进第一注射器来产生可流动形式的止血组合物；并且可选将可流动形式的止血组合物至少返回至第二注射器一次。

44.如权利要求43所述的方法，其特征在于，可流动形式的止血组合物含有超过50％(w/w)的尺寸为100-1000μm的颗粒。

45.如权利要求43所述的方法，其特征在于，可流动形式的止血组合物含有超过80％(w/w)的尺寸为100至1000μm的颗粒。