MX2014005088A - Composiciones hemostaticas. - Google Patents

Abstract

La presente invención describe una composición hemostática que comprende una gelatina reticulada en forma de partículas adecuada para utilizarse en hemostasis, en donde la composición está presente en forma de pasta que contiene del 15.0 al 19.5% (p/p), preferentemente del 16.0 al 19.5% (p/p), del 16.5 al 19.5% (p/p), del 7.0 al 18.5% (p/p) o del 17.5 al 18.5% (p/p), más preferentemente del 16.5 al 19.0% (p/p) o del 16.8 al 7.8% (p/p), especialmente preferido del 16.5 al 17.5% (p/p), y en donde, la composición comprende un agente de mejoramiento de extrusión.

Description

COMPOSICIONES HEMOSTÁTICAS Campo de la Invención La presente invención se refiere a composiciones hemostáticas y procesos para elaborar dichas composiciones.

Antecedentes de la Invención Las composiciones hemostáticas en forma de almacenamiento estable que comprenden material en gránulos biocompatible, biodegradable estable seco, son conocidas por ejemplo de los documentos WO98/008550A o WO2003/007845A. Estos productos han sido aplicados con éxito en la materia para la hemostasis. Floseal® es un ejemplo para un agente hemostático altamente efectivo que consiste en una matriz de gelatina granular dilatada en una solución que contiene trombina para formar una pasta que puede fluir.

Debido a que dichos productos tienen que ser aplicados en humanos, es necesario proporcionar los estándares de seguridad más altos para calidad, estabilidad de almacenamiento y esterilidad de los productos finales y los componentes de los mismos. Adicionalmente, la fabricación y manejo deben realizarse de la mantea más conveniente y eficiente posibles.

Un producto exitoso en este campo (el producto Floseal® mencionado anteriormente) utiliza una matriz de gelatina utilizada en conjunto con una solución de trombina liofilizada reconstituida. La matriz de gelatina es aplicada como una forma de gránulo que puede fluir de gelatina y trombina con un contenido de gelatina desde aproximadamente el 11 hasta el 14.5%. El contenido menor de gelatina tiene como resultado un producto demasiado líquido con desempeño disminuido debido a las dificultadas para hacer que el producto permanezca en el sitio de tratamiento, especialmente bajo condiciones de flujo alto de sangre. La concentración de partículas de gelatina superiores conduce a un producto que es difícil de administrar mediante los medios comunes de administración, tales como jeringas o catéteres, debido a la resistencia superior al flujo. La inclusión de plastificadores en la composición, por ejemplo, polietileno, glicoles, sorbitol, glicerol y los similares, han sugerido (EP0927053B 1 ) y pueden disminuir la fuerza de extrusión, aunque la inclusión de estos materiales no necesariamente mejora el desempeño.

Es un objeto de la presente invención proporcionar una composición hemostática con base en una gelatina reticulada con propiedades de adherencia y hemostáticas mejoradas en comparación con los productos de gelatina, tales como Floseal, de acuerdo con la técnica anterior y los métodos para elaborar dichas composiciones hemostáticas. Las composiciones también deben ser provistas en una forma conveniente y útil, particularmente como una pasta que puede fluir útil en cirugía endoscópica y microcirugía. Los productos deben tener una fuerza de extrusión de 40 N o inferior, preferentemente inferior a 35 N, especialmente preferido por debajo de 20 N. Los producto, preferentemente deben ser productos en formatos de producto que permiten una provisión conveniente de las composiciones hemostáticas "listas para utilizarse", las cuales pueden ser aplicadas directamente a una lesión sin pasos de reconstitución algunos que consumen tiempo.

Breve Descripción de la Invención Por consiguiente, la presente invención proporciona una composición hemostática que comprende una gelatina reticulada en forma de partículas adecuada para utilizarse en hemostasis, en donde la composición está presente en forma de pasta que contiene del 15.0 al 19.5% (p/p) gelatina reticulada, preferentemente del 16.0 al 19.5% (p/p), del 16.5 al 19.5% (p/p), del 17.0 al 18.5% (p/p) o del 17.5 al 18.5% (p/p), más preferentemente del 16.5 al 19.0% (p/p) o del 16.8 al 17.8% (p/p), especialmente preferido del 16.5 al 17.5% (p/p), y en donde, la composición comprende un agente de mejoramiento de extrusión, especialmente albúmina.

La presente invención, también se refiere al uso de esta composición hemostática para el tratamiento de una lesión seleccionada del grupo que consiste en una herida, una hemorragia, tejido dañado y/o tejido sangrante que comprende la administración de dicha composición hemostática y los paquetes que integran dicha composición hemostática para el tratamiento de dicha lesión.

Descripción Detallada de la Invención La presente invención proporciona una composición hemostática que comprende una gelatina reticulada en forma de partículas adecuada para utilizarse en hemostasis, en donde la composición está presente en forma de pasta que contiene del 15.0 al 19.5% (p/p) de gelatina reticulada (= peso de gelatina reticulada seca por peso de la composición final), preferentemente del 16.0 al 19.5% (p/p), del 16.5 al 19.5% (p/p), del 17.0 al 18.5% (p/p) o del 17.5 al 18.5% (p/p), más preferentemente del 16.5 al 19.0% (p/p) o del 16.8 al 17.8% (p/p), especialmente preferido del 16.5 al 17.5% (p/p), y en donde, la composición comprende un agente de mejoramiento de extrusión.

Se ha descubierto de modo sorprendente dentro del curso de la presente invención que la provisión de agentes de mejoramiento de extrusión, tales como albúmina en la cantidad adecuada, permiten el uso de concentraciones superiores de gelatina y que el uso de concentraciones superiores de gelatina mejora las propiedades hemostáticas de dichos productos. Este es un efecto, el cual, son se sugirió en la técnica anterior. Además, fue sorprendente que la concentración superior de la gelatina reticulada tiene como resultado mejores propiedades adhesivas (en contraste con los resultados conocidos en la técnica anterior (por ejemplo, figura 4 del documento Para habilitar las propiedades preferidas debido a concentraciones superiores de gelatina en la pasta de acuerdo con la presente invención, es necesario proporcionar los agentes de mejoramiento de extrusión en cantidades adecuadas. Las cantidades deben ser lo suficientemente altas, para obtener el efecto de extrusión, es decir, permitir una pasta que puede fluir incluso para cantidades del 15 al 19.5% de gelatina reticulada, de manera que la composición hemostática puede ser aplicada, por ejemplo, en microcirugía; por otra parte, las cantidades deben ser tan bajas que eviten las propiedades funcionales negativas de la composición hemostática, por ejemplo, adherencia a heridas o desempeño hemostático. Por ejemplo, si el agente de mejoramiento de extrusión es albúmina (la cual es especialmente preferida, especialmente albúmina de suero humano), se debe proporcionar en una cantidad de entre el 0.5 hasta el 5.0% (p/p) (= peso de agente de mejoramiento de extrusión por peso de la composición final), preferentemente del 2.0 al 4.5% (p/p), más preferido del 1.5 al 5.0% (p/p), especialmente preferido de aproximadamente el 1.5% (p/p).

Otra clase preferida de agentes de mejoramiento de extrusión de acuerdo con la presente invención son los fosfolípidos, tales como fosfatidilcolina y -serina o mezclas complejas, tales como lecitinas o aceites de frijol de soya.

En otra modalidad preferida, la presente invención proporciona una composición hemostática que comprende una gelatina reticulada en forma de partículas adecuada para utilizarse en hemostasis, en donde la composición está presente en forma de pasta que contiene del 16.0 al 19.5% (p/p) preferentemente del 16.5 al 19.5% (p/p), del 17.0 al 18.5% (p/p) o del 17.5 al 18.5% (p/p), más preferentemente del 16.5 al 19.0% (p/p) o del 16.8 al 17.8% (p/p), especialmente preferido del 16.5 al 17.5% (p/p), y en donde, la composición comprende un agente de mejoramiento de extrusión. Preferentemente, el agente de mejoramiento de extrusión es albúmina de suero humano.

En otra modalidad preferida, la presente invención proporciona una composición hemostática que comprende una gelatina reticulada en forma de partículas adecuada para utilizarse en hemostasis, en donde la composición está presente en forma de pasta que contiene del 15.0 al 19.5% (p/p) de gelatina reticulada, preferentemente del 16.0 al 19.5% (p/p), del 16.5 al 19.5% (p/p), del 17.0 al 18.5% (p/p) o del 17.5 al 18.5% (p/p), más preferentemente del 16.5 al 19.0% (p/p) o del 16.8 al 17.8% (p/p), especialmente del 16.5 al 17.5% (p/p), y en donde, la composición comprende un agente de mejoramiento de extrusión en una concentración de más del 0.8% (p/p), preferentemente de aproximadamente el 3.3% (p/p). Preferentemente, el agente de mejoramiento de extrusión es albúmina de suero humano, por ejemplo, en las concentraciones mencionadas anteriormente.

Las composiciones hemostáticas de acuerdo con la presente invención, especialmente aquellas que utilizan albúmina como un agente de mejoramiento de extrusión, tienen ventajas específicas sobre las composiciones que utilizan cantidades menores de gelatina reticulada (del 13 al 14.5%), especialmente tienen una eficacia mejorada, in vivo. Se reveló en forma inesperada dentro del curso de la presente invención, que una formulación con una concentración superior de partículas de gelatina, tiene como resultado un desempeño hemostático mayor tanto en los métodos de prueba ex vivo que utilizan sangre humana completa como en los experimentos pre-clínicos en animales. Los productos de acuerdo con al presente invención permiten un tiempo de aproximación quirúrgico reducido y un tiempo más rápido para la hemostasis.

Las composiciones de acuerdo con la presente invención tienen una fuerza de extrusión media (que emplea el método de prueba descrito en el ejemplo 1) de 40 N o menor, preferentemente por debajo de 35 N, especialmente preferido por debajo de 20 N.

De acuerdo con la modalidad preferida de la presente invención, la composición hemostática comprende gelatina reticulada por glutaraldehído o genipina de gelatina reticulada por (Metil (1R.2R, 6S)-2-hidroxi-9-(hidroximetil)-3-oxa biciclo[4.3.0]nona-4, 8-dieno-5-carboxilato), preferentemente gelatina tipo B, más preferentemente gelatina tipo B de origen oculto.

Preferentemente, la gelatina reticulada está presente como un material granular.

La composición hemostática de acuerdo con la presente invención, comprende preferentemente un polímero de gelatina, el cual especialmente es un polímero de gelatina tipo B. La gelatina tipo B ha demostrado ser especialmente ventajosa para utilizarse en agentes hemostáticos ya que el tratamiento base es altamente efectivo en la generación de gelatina de propiedades adecuadas y en riesgo de mitigar la infección viral y zoonótica. Una preparación de gelatina específicamente preferida puede prepararse mediante el procesamiento de piel de ganado bovino joven con 2N NaOH durante aproximadamente 1 hora a temperatura ambiente, neutralizando a un pH de 7-8, y calentando a una temperatura de 70°C. La piel entonces es solubilizada por completa a gelatina con del 3 al 10% (p/p), preferentemente del 7 al 10% (p/p) de gelatina en solución. Esta solución puede ser colada, seca y molida para proporcionar el polvo de gelatina tipo B.

Preferentemente, la gelatina tiene una fuerza de Bloom de 200 a 400, especialmente una gelatina tipo B con una fuerza de Bloom de 200 a 400. Bloom es una prueba para medir la fuerza de la gelatina. La prueba determina el peso (en gramos) necesarios por una sonda (normalmente con un diámetro de 1.27 centímetros) para desviar la superficie del gel 4 mm sin romperla. El resultado se expresa en Bloom (grados). Para realizar la prueba Bloom en gelatina, una solución de gelatina al 6.67% se mantiene durante un período de 17 a 18 horas a una temperatura de 10°C antes de ser probados.

La composición hemostática de acuerdo con la presente invención, contiene preferentemente la gelatina reticulada en la forma de partículas, especialmente como un material en gránulos. Este material granular puede dilatarse rápidamente cuando es expuesto a un fluido (es decir, el diluyente) y en su forma dilatada tiene la capacidad de contribuir a una pasta que puede fluir que puede aplicarse a un sitio con sangrado. De acuerdo con una modalidad preferida, la gelatina reticulada es provista a partir de una gelatina reticulada seca. Este polvo de gelatina reticulada seca puede prepararse para volverse a hidratar rápidamente si se pone en contacto con un diluyente farmacéuticamente aceptable. Los gránulos de gelatina, especialmente en la forma de un polvo de gelatina, comprenden preferentemente partículas relativamente grandes, también denominadas como fragmentos o subunidades, como las que se describen en los documentos WO98/08550A y WO2003/007845A. Un tamaño de partícula preferido (mediana) estará dentro del rango desde 10 hasta 1,000 µ??, preferentemente desde 200 hasta 800 µ?p, pero los tamaños de partícula fuera de este rango preferido pueden encontrarse útiles en muchas circunstancias.

Normalmente, las partículas de gelatina tienen un diámetro de partícula medio ("diámetro de partícula medio" es el tamaño mediando medido por difractometría láser; "tamaño mediano (o diámetro de partícula mediano de masa) es el diámetro de partícula que divide la distribución de frecuencia por la mitad; cincuenta por ciento de las partículas de una preparación determinada tienen un diámetro más grande, y cincuenta por ciento de las partículas tienen un diámetro más pequeño) desde 10 hasta 1000 pm, preferentemente de 50 hasta 700µ??, desde 200 hasta 700pm, desde 300 hasta 550pm, especialmente preferido desde 350 hasta 550µ?? (tamaño mediano). Aunque los términos de polvo y gránulos (o granulados) en algunas ocasiones son utilizados para distinguir las clases separadas de material, los polvos son definidos en la presente como una sub-clase especial de materiales granulares. En particular, los polvos se refieren a aquellos materiales granulares que tienen los tamaños de grano más finos, y que por consiguiente, tienen una mayor tendencia a formar aglomeraciones cuando fluyen. Los gránulos incluyen materiales granulares más toscos que no tienden a formar aglomeraciones excepto cuando están mojados.

La gelatina reticulada presente en forma de partículas adecuada para utilizarse en hemostasis puede incluir formas dimensionalmente isotrópicas y no isotrópicas. Por ejemplo, la gelatina reticulada en el paquete de acuerdo con la presente invención puede estar en gránulos o fibras; y puede estar presente en estructuras discontinuas, por ejemplo, en forma de polvos.

La composición de gelatina seca absorbe el líquido. Por ejemplo, al contacto con los líquidos, por ejemplo, soluciones acuosas o suspensiones (especialmente un amortiguador o sangre) la gelatina reticulada absorbe el líquido y desplegará un grado de dilatación, dependiendo del alcance de la hidratación. El material, preferentemente absorbe desde por lo menos el 400%, preferentemente aproximadamente el 500% hasta aproximadamente el 2000%, especialmente desde aproximadamente el 500% hasta aproximadamente el 1300% de agua o amortiguador acuoso por peso, que corresponde a un incremento nominal en diámetro o ancho de una partícula individual de subunidad en el rango desde, por ejemplo, aproximadamente el 50% hasta aproximadamente el 500%, normalmente desde aproximadamente el 50% hasta aproximadamente el 250%. Por ejemplo, si las partículas en gránulos (secas) tienen un rango de tamaño preferido de 0.01 mm hasta 1.5 mm, especialmente de 0.05 mm hasta 1 mm, la composición completamente hidratada (por ejemplo, después de la administración en una herida o después de poner en contacto con una solución de amortiguador acuoso) puede tener un rango de tamaño desde 0.05 mm hasta 3 mm, especialmente desde 0.25 mm hasta 1.5 mm.

Las composiciones secas también desplegarán un "equilibrio de dilatación" significativo cuando son expuestas a un medio de rehidratación acuoso ( = diluyente farmacéuticamente aceptable, también denominado como un medio de reconstitución). Preferentemente, la dilatación estará dentro del rango desde 400% hasta 1300%, preferentemente 400% hasta 1000%, más preferido 500% hasta 1100%, especialmente preferido desde 500% hasta 900%, dependiendo de su uso pretendido. Dicho equilibrio de dilatación puede controlarse, por ejemplo (para un polímero reticulado) variando el grado de reticulación, el cual a su vez se logra variando las condiciones de reticulación, tales como la duración de exposición de un agente de reticulación, concentración de un agente de reticulación, temperatura de reticulación y los similares. Los materiales que tienen valores de equilibrio de dilatación diferentes se desempeñan de diferente manera en aplicaciones diferentes. La capacidad para controlar la reticulación y el equilibrio de dilatación permite que las composiciones de la presente invención sean optimizadas para una variedad de usos. Además del equilibrio de dilatación, también es importante controlar la hidratación del material inmediatamente antes de la administración a un sitio objetivo. La hidratación y equilibrio de dilatación están, desde luego, conectados de forma íntima. Un material con una hidratación del 0% no se dilatará. Un material con una hidratación del 100% estará en su equilibrio de contenido de agua. Las hidrataciones entre el 0% y el 100% corresponderán a la dilatación entre las cantidades mínimas y máximas. "El equilibrio de dilatación" puede determinarse sustrayendo el peso seco del polvo de hidrogel de gelatina de su peso cuando está hidratado por completo y por consiguiente, está dilatado por completo. La diferencia es entonces dividida entre el peso y multiplicada por 100 para dar la medida de dilatación. El peso seco debe ser medido después de la exposición del material a una temperatura elevada durante un tiempo suficiente para remover substancialmente toda la humedad residual, por ejemplo, dos horas a una temperatura de 120°C. El equilibrio de hidratación del material puede lograrse sumergiendo el material seco en un diluyente farmacéuticamente aceptable, tal como solución salina acuosa, durante un período de tiempo suficiente para que el contenido de agua se vuelva constante, normalmente desde 18 hasta 24 horas a temperatura ambiente.

La gelatina reticulada puede ser provista en la forma de una película, la cual puede entonces ser molida para formar un material granular. La mayoría de las partículas contenidas en un material granular (por ejemplo más del 90% p/p) preferentemente tienen tamaños de partícula de 10 a 1,000pm, preferentemente de 50 hasta 700µ??, desde 200 hasta 700µ??, desde 300 hasta 550µ??, especialmente preferido desde 350 hasta 550µ??.

Preferentemente, la forma que puede fluir de la composición hemostática contiene partículas que son de más del 50% (p/o) con un tamaño desde 100 hasta 1000 µ?t?, preferentemente más del 80% (p/p) con un tamaño desde 100 hasta 1000 µ??.

Los ejemplos de materiales de gelatina adecuados para reticulación están descritos, por ejemplo, en los ejemplos 1 y 2 de EP1803417B1 y el ejemplo 14 del documento US 6,066,325A y US 6,063,061A. La gelatina también puede utilizarse con auxiliares de procesamiento, tales como PVP, PEG y/o dextrano como auxiliares de nueva hidratación.

En un aspecto particular de la presente invención, las composiciones comprenderán polvos de gelatina reticulada que tienen un contenido de humedad del 20% (p/p) o menos, en donde el polvo se retículo en la presencia de un auxiliar de re-hidratación de manera que el polvo tiene un índice de re-hidratación acuoso, el cual es por lo menos el 5% superior que el índice de re-hidratación de un polvo similar preparado sin el auxiliar de re-hidratación. El "índice de re-hidratación" es definido de acuerdo con el documento EP1803417B1 para tener el significado de la cantidad de una solución acuosa, normalmente del 0.9% (p/p) de solución salina que es absorbida por un gramo del polvo (base de peso seco) dentro de un período de treinta segundos, expresado como g/g. El índice de re-hidratación se mide mezclando la gelatina reticulada con la solución salina durante 30 segundos y depositando la gelatina húmeda sobre una membrana de fibra bajo vacío para remover la solución acuosa libre. Entonces se registra el peso de la gelatina húmeda retenido en el filtro, se seca (por ejemplo, 2 hora a una temperatura de 120°C), entonces se registra el peso seco de la gelatina y se calcula el peso de la solución que fue absorbido por gramo de gelatina seca.

Las composiciones preferidas de la presente invención tendrán un índice de re-hidratación de por lo menos 3 g/g, preferentemente por lo menos 3.5 g/g, y con frecuencia de 3.75 g/g o superior. Los índices de re-hidratación de los polvos similares preparados sin los auxiliares de re-hidratación normalmente están por debajo de tres, y un porcentaje de incremento en el índice de re-hidratación normalmente será de por lo menos el 5%, preferentemente siendo de por lo menos el 10%, y más preferentemente siendo de por lo menos el 25% o superiores.

La reticulación puede realizarse sin reticulador adecuado alguno, por ejemplo, glutaraldehído, tal como, por ejemplo, el que se describió en los documentos WO98/08550A y WO2003/007845A La reticulación también puede ser realizada con un reticulador no tóxico, tal como genipina y los similares.

El costo de producción es menor para un producto de gelatina reticulado de genipina de acuerdo con la presente invención que un glutaraldehído reticulado, debido a que los costos son menores para el reactivo, la energía y tiempo. La reacción de gelatina reticulada de genipina puede realizarse en agua a un pH neutral a temperatura ambiente durante = 16 horas. El producto puede ser limpiado mediante un lavado de etanol y/o agua, el cual no únicamente es más económico, sino de manera más importante, es más seguro para el operador.

El método preferentemente aplica la gelatina como estando presente en la forma seca antes del paso de reticulación .

El reticular tipo genipina preferido de acuerdo con la presente invención es, desde luego, genipina (Metil (1R,2R,6S)-2-hidroxi-9-(hidroximetil)-3-oxabiciclo[4.3.0]nona-4,8-dieno-5-carboxilato); sin embargo, también otros reticuladores de tipo iridoide o secoiridoide se pueden utilizar, tales como oleuropeína. Las concentraciones preferidas de genipina para reticulación, están dentro del rango de 0.5 hasta 20 mM, preferentemente desde 1 hasta 15 mM, especialmente desde 2 hasta 10 mM.

De acuerdo con una modalidad preferida de la presente invención, la gelatina reticulada de genipina es sometida a un paso de apagado/oxidación sin agentes oxidantes tales como blanqueador, tBuhidroperóxido, etc., preferentemente para un tratamiento con percarbonato de sodio, hipoclorito de sodio, agua clorada o peróxido de hidrógeno (H202), especialmente se prefiere un tratamiento con percarbonato de sodio o H202, el más preferido es un tratamiento con percarbonato.

Las concentraciones preferidas de H202 son del 0.5 al 20% (p/p), especialmente del 1 al 15% (p/p), más preferidas de aproximadamente el 5 % (p/p). En una modalidad especialmente preferida, la concentración de genipina está entre 5 y 10 mM, el tiempo de reacción de la gelatina con genipina está entre 3 y 10 horas, especialmente de 6 horas, la concentración de H202 está entre el 3 al 5% (p/p) y el tiempo de reacción de la gelatina reticulada por genipina con H202 es de aproximadamente 20 horas.

Las concentraciones preferidas de percarbonato están entre el 1 hasta el 10 % (p/p), especialmente desde el 1 hasta el 5% (p/p), más preferidas desde el 1 hasta el 4% (p/p). En una modalidad especialmente preferida, la concentración de genipina está entre 5 a 10 mM (especialmente de aproximadamente 8 nM), el tiempo de reacción de la gelatina con genipina está entre 3 hasta 10 horas (especialmente aproximadamente 5 horas), la concentración de percarbonato está entre el 1 hasta el 10% (p/p), especialmente preferido entre el 1% hasta el 4% p/p, y el tiempo de reacción de la gelatina reticulada por genipina con percarbonato está entre 1 hasta 20 horas, preferentemente entre 1 hasta 5 horas (por ejemplo, 1, 2 o 3 horas).

El apagado también puede realizarse en la presencia de antioxidantes, tales como ascorbato de sodio o controlando el potencial del ambiente de reacción, tal como realizar el apagado y/o reacción de genipina en una atmósfera inerte, tal como nitrógeno o argón.

Las condiciones de reacción de reticulación preferidas incluyen el desempeño en solución acuosa, preferentemente en una solución salina amortiguada por fosfato (PBS/amortiguador de etanol, especialmente a un pH de 4 a 12, preferentemente de 5.0 a 10.0, especialmente de 6 a 8, o en agua desionizada u otros amortiguadores acuosos, los cuales pueden contener entre el 0 hasta el 50% de un solvente orgánico que se puede mezclar en agua. Un amortiguador PBS contiene cantidades fisiológicas de NaCI y KCI en un amortiguador de fosfato a un pH fisiológico. Un ejemplo para un amortiguador PBS contiene 137 mM de NaCI, 2.7 mM de KCI, 10 m de Na2HP04 · 2 H20, 1.76 mM de KH2P04 (pH = 7.4). Otro ejemplo de un amortiguador PBS consiste en 137 mM de NaCI, 2.7 mM de KCI, 4.3 mM de Na2HP04 y 1.4 mM de KH2P04 (pH = 7.5).

La reacción también puede ser realizada en un regulador acuoso que contiene hasta el 50% de un solvente orgánico que se disuelve en agua y/o auxiliares de procesamiento tales como PEG, PVP, manitol, percarbonato de sodio, lactato de sodio, citrato de sodio, ascorbato de sodio, etc.

Preferentemente, el paso de reticulación se realiza a una temperatura desde 4°C hasta 45°C, preferentemente desde 15 hasta 45°C, especialmente desde 20 hasta 40°C.

El paso de reticulación puede ser seguido por un paso de apagado, especialmente con un grupo amino que contiene el apagador, preferentemente un aminoácido, especialmente, glicina. Con el apagador, los reticuladores tipo genipina todavía sin reaccionar son inactivados (por ejemplo, mediante la reacción con el apagador en exceso) para evitar la reticulación adicional. El apagado también puede realizarse elevando el pH de la solución a un valor entre 8 y 14, o utilizando compuestos nucleófilos, que contienen grupo amino, tiol o hidroxilo y también una combinación de elevación de pH y el uso de compuestos nucleófilos. El paso de apagado después de la reacción de reticulación de gelatina de genipina de acuerdo con la presente invención puede dirigirse en forma activa para impartir el desempeño físico deseado, tal como la dilatación y TEG, los cuales son determinantes importantes de la actividad hemostática sobre y por debajo de la reticulación por genipina sola .

La gelatina reticulada, preferentemente es lavada después del paso de reticulación, preferentemente mediante metanol, etanol o agua, especialmente mediante agua desionizada. Otro paso de lavado preferido aplica en un amortiguador acuoso que contiene hasta el 50% (v/v) de solvente orgánico que se disuelve en agua y/o uno o más auxiliares de procesamiento.

De acuerdo con una modalidad preferida, la gelatina reticulada está seca. En dicho estado seco, la composición hemostática es estable en almacenamiento durante un período de tiempo largo incluso a temperatura elevadas (por ejemplo, más de 20°C, más de 30°C o incluso más de 40°C). Las condiciones de sequedad preferidas incluyen polímeros biocompatibles reticulados, los cuales son secados para tener un contenido de humedad por debajo del 15% (p/p), preferentemente por debajo del 10%, más preferido por debajo del 5%, especialmente por debajo del 1%. En otra modalidad preferida, el producto puede ser suministrado en un estado hidratado o húmedo, en donde la solución de hidratación puede ser un amortiguador biocompatible o solución. Un producto Glu-Gel tiene una tendencia para ser camuflado rodeando un tejido, debido a que su color ligeramente amarillo se mezcla con éste. Este realiza una evaluación visual de la problemática de aplicación deseada. Los productos de gelatina reticulada de genipina de acuerdo con la presente invención tienen una apariencia de color variable desde amarillo pálido hasta azul o verde oscuro con base en el grado de las condiciones de reacción de reticulación y los pasos de procesamiento y acabado subsiguientes. Esta capacidad de afinar el color y la capacidad de obtener el color deseado en el producto terminado tiene la ventaja agregada de proporcionar a los médicos una indicación visual de la aplicación adecuada del producto en sitios de heridas, debido a que este color se diferencia del tejido circundante, en lugar de ser camuflado potencialmente por el mismo. Esta es otra característica novedosa de la presente invención. Por otra parte, el color puede ser removido para obtener un producto sin color, dependiendo de las necesidades con respecto a los productos finales.

En una modalidad preferida, el polímero biocompatible, por ejemplo, gelatina, reticulado con un reticulador tipo genipina, por ejemplo, genipina, es un polímero reticulado en forma homogénea (de manera uniforme) como puede mostrarse, por ejemplo, mediante mediciones de fluorescencia como las descritas en el Ejemplo 3 de la presente solicitud. En una modalidad especialmente preferida, el polímero biocompatible, tal como gelatina, está presente como un polímero biocompatible reticulado de genipina en forma homogénea, tal como gelatina, en forma de partículas.

Una composición hemostática de acuerdo con la presente invención es preferida, en donde los excipientes, tales como lubricantes, por ejemplo ácido hialurónico, están presentes.

En otra modalidad de la presente invención, los excipientes, tales como lubricantes, por ejemplo, ácido hialurónico, están excluidos.

El diluyente farmacéuticamente aceptable preferentemente es una solución acuosa y puede contener una sustancia seleccionada del grupo que consiste en NaCI, CaCI2 y acetato de sodio. Por ejemplo, un diluyente farmacéuticamente aceptable comprende agua para inyección, e independientemente uno del otro- de 50 a 200 m de NaCI, preferentemente (150 mM),de 10 hasta 80 mM de CaCI2 (preferentemente 40 mM) y de 1 hasta 50 mM de acetato de sodio (preferentemente 20 mM). En otra modalidad, el diluyente farmacéuticamente aceptable contiene menos de 35 g/l de manitol, preferentemente menos de 25 g/l, más preferentemente menos de 10 g/l, especialmente preferido, el diluyente farmacéuticamente aceptable es esencialmente libre de manitol.

De acuerdo con una modalidad preferida, el diluyente farmacéuticamente aceptable comprende trombina, preferentemente de 10 a 1000 I.U. de trombina/ml, especialmente de 250 hasta 700 I.U. de trombina/ml. Preferentemente, la composición hemostática en su forma lista para utilizarse, contiene de 10 a 100,000 Unidades internacionales (I.U.) de trombina, más preferentemente de 100 a 10,000 I.U., especialmente de 500 a 5,000 I.U. La trombina (o cualquier otro agente que induce la coagulación, tal como veneno de serpiente, un activador de plaquetas, un receptor de trombina que activa péptidos y un agente de precipitación de fibronógeno) puede derivarse de cualquier preparación de trombina, la cual es adecuada para utilizarse en humanos (es decir, farmacéuticamente aceptable). Las fuentes adecuadas de trombina incluyen sangre, plasma y suero de humano o bobino (trombina de otras fuentes animales puede ser aplicada si no se anticipan reacciones inmunes adversas) y la trombina de origen recombinante (por ejemplo, trombina recombinante humana); y la trombina humana autóloga puede ser preferida para algunas aplicaciones.

El diluyente farmacéuticamente aceptable se utiliza en una cantidad para lograr la concentración final deseada en la composición lista para utilizarse. La preparación de trombina puede contener otro componente útil, tal como iones, amortiguadores, excipientes, estabilizadores, etc.

Preferentemente, la preparación de trombina contiene albúmina humana como un agente de mejoramiento de extrusión. Las sales preferidas son NaCI y/o CaCI2, ambas utilizadas en las cantidades y concentraciones comunes aplicadas para trombina (por ejemplo, de 0.5 hasta 1.5% de NaCI (por ejemplo, del 0.9%) y/o de 20 hasta 80 mM de CaCI2 (por ejemplo, 40 mM)). En una modalidad adicional, el diluyente también puede incluir un regulador o sistema de regulador, de manera que regule el pH de la composición seca reconstituida, preferentemente a un pH de desde 3.0 hasta 10,0, más preferido de 6.4 hasta 7.5, especialmente a un pH de 6.9 a 7.1.

El establecimiento de las cantidades adecuadas de gelatina reticulada, diluyente y agente de mejoramiento de extrusión pueden integrarse en el paquete de acuerdo con los prerrequisitos mencionados anteriormente: Por ejemplo, a) un frasco con de 0.736 hasta 0.995 g de gelatina reticulada seca (que corresponde a desde el 15.0 hasta el 19.5% (p/p) en el producto final) puede proporcionarse y b) un segundo frasco con 4 mi de diluyente con desde 60 hasta 240 mg de albúmina, y opcionalmente, trombina a una concentración de 500 I.U./ml y/o 40 mM de CaCI2. De manera alternativa, la albúmina puede ser agregada en forma liofilizada al componente de gelatina seca a) del paquete. Por ejemplo, a) un frasco con de 0.573 hasta 0.775 g de gelatina reticulada seca (que corresponde a desde el 15.0 hasta el 19.5% (p/p) en el producto final) del mismo 48 a 92 mg de albúmina puede proporcionarse y b) un segundo frasco con 3.2 mi de diluyente y, opcionalmente, trombina a una concentración de 500 I.U./ml y/o 40 mM de CaCI2.

El componente de gelatina reticulado del paquete de acuerdo con la presente invención, preferentemente se proporciona como una composición seca, en donde la gelatina reticulada está presente en forma seca.

Una composición de gelatina reticulada "substancialmente seca" de acuerdo con la presente invención tiene un contenido residual de humedad, el cual puede corresponder aproximadamente al contenido de humedad de productos disponibles comparables, tales como Floseal® (Floseal, por ejemplo, tiene aproximadamente del 8 al 12% de humedad en la forma de un producto seco).

La gelatina reticulada seca en forma de partículas adecuada para utilizarse en la hemostasis en el paquete de acuerdo con la presente invención, preferentemente es gelatina en forma de polvo, especialmente en donde las partículas de polvo tiene un tamaño de partícula mediano de 10 a 1000 µ?t?, preferentemente de 50 hasta 700µ?t?, desde 200 hasta 700µ?t?, desde 300 hasta 550pm, especialmente preferido desde 350 hasta 550pm. Una "preparación en gránulos seca de gelatina reticulada" de acuerdo con la presente invención, en principio es conocida, por ejemplo, del documento WO98/08550A. Preferentemente, la gelatina reticulada es un material granular estable seco, biocompatible, biodegradable.

De acuerdo con otro aspecto, la presente invención se refiere a una composición hemostática de acuerdo con la presente invención para utilizarse en el tratamiento de una lesión seleccionada del grupo que consiste en una herida, una hemorragia, tejido dañado, tejido sangrante y/o defectos óseos.

Otro aspecto de la presente invención es un método para el tratamiento de una lesión seleccionada del grupo que consiste en una herida, una hemorragia, tejido dañado y/o tejido sangrante que comprende administrar una composición hemostática de acuerdo con la presente invención al sitio de la lesión.

De acuerdo con otro aspecto, la presente invención también proporciona un método para administrar una composición hemostática de acuerdo con la presente invención a un sitio objetivo en un cuerpo del paciente, dicho método comprende administrar una composición hemostática producida mediante el procedimiento de acuerdo con la presente invención al sitio objetivo. Aunque también la composición seca puede ser aplicada directamente al sitio objetivo (y, opcionalmente ponerse en contacto con un diluyente en el sitio objetivo, si es necesario), se prefiere poner en contacto la composición hemostática seca con un diluyente farmacéuticamente aceptable antes de la administración al sitio objetivo, de manera que obtiene una composición hemostática de acuerdo con la presente invención en forma de pasta.

En dicho método, un paquete para elaborar una pasta que puede fluir de gelatina reticulada para el tratamiento de una lesión seleccionada del grupo que consiste en una herida, una hemorragia, tejido dañado y/o tejido sangrante, se puede aplicar, este paquete comprende a) una composición hemostática seca que comprende gelatina reticulada en forma de partículas para ser reconstituida a una pasta que puede fluir que contiene del 15.0 al 19.5% (p/p) de gelatina reticulada ( = peso de la gelatina seca al peso de la composición final), preferentemente del 16.0 al 19.5% (p/p), del 16.5 al 19.5% (p/p), del 17.0 al 18.5% (p/p) o del 17.5 al 18.5% (p/p), más preferido del 16.5 al 19.0% (p/p) o del 16.8 al 17.8% (p/p), especialmente preferido del 16.5 al 17.5% (p/p), de gelatina reticulada y b) un diluyente farmacéuticamente aceptable para la reconstitución de la composición hemostática, en donde ya sea la composición o el diluyente comprende un agente de mejoramiento de extrusión, especialmente albúmina, en una cantidad adecuada, por ejemplo (para albúmina, en una cantidad que conduce a una concentración de albúmina en la pasta reconstituida de entre el 0.5 hasta el 5.0% (p/p) (= peso de agente de mejoramiento de extrusión por peso de la composición final), preferentemente del 1.0 al 5.0 % (p/p), preferentemente del 2.0 al 4.5% (p/p), más preferido del 1.5 al 5.0% (p/p), especialmente preferido del 1.5% (p/p).

Un componente adicional preferido de dicho paquete es -específicamente si la composición hemostática está contenida en forma seca- un diluyente para reconstitución (= medio de re-hidratación) de la composición hemostática. Los componentes adicionales del equipo pueden ser los medios de administración, tales como jeringas, catéteres, cepillos, etc. (si las composiciones no son provistas ya en el medio de administración) u otros componentes necesarios para utilizar en la práctica médica (quirúrgica), tales como agujas substituto o catéteres, frascos adicionales o medios de cubiertas para heridas adicionales. Preferentemente, el paquete de acuerdo con la presente invención comprende un alojamiento de jeringa de la composición hemostática seca y estable y una jeringa que contiene el diluyente (o es provista para tomar el diluyente de otro contenedor de diluyente).

En una modalidad preferida, el diluyente farmacéuticamente aceptable es provisto en un contenedor separado. Éste, preferentemente puede ser una jeringa. El diluyente en la jeringa puede entonces ser aplicado fácilmente al contenedor final para la reconstitución de las composiciones hemostáticas secas de acuerdo con la presente invención. Si el contenedor final también es una jeringa, ambas jeringas pueden ser terminadas juntas en un paquete. Por consiguiente, es preferido proporcionar las composiciones hemostáticas secas de acuerdo con la presente invención en una jeringa, la cual es terminada con una jeringa de diluyente con un diluyente farmacéuticamente aceptable para reconstituir dicha composición hemostática seca y estable.

De acuerdo con una modalidad preferida, el contenedor final contiene adicionalmente una cantidad de un estabilizador efectiva para inhibir la modificación del polímero cuando es expuesto a radiación de esterilización, preferentemente ácido ascórbico, ascorbato de sodio, otras sales de ácido ascórbico o un antioxidante.

Con dicho diluyente farmacéuticamente aceptable, una forma lista para utilizarse de la presente composición hemostática puede proporcionarse, la cual puede entonces ser aplicada directamente al paciente. Por consiguiente, también se proporciona un método para proporcionar una forma lista para utilizarse de una composición hemostática de acuerdo con la presente invención, en donde la composición hemostática se proporciona en una primera jeringa y un diluyente para reconstitución se proporciona en una segunda jeringa, la primera y segunda jeringas están conectadas entre sí, y el fluido se lleva a la primera jeringa para producir una forma que puede fluir de la composición hemostática; y regresando de manera opcional la forma que puede fluir de la composición hemostática a la segunda jeringa por lo menos una vez. Preferentemente, las preparaciones "listas para utilizarse" están presentes o se proporcionan en la forma de hidrogel. Los productos de este tipo son conocidos en principio en la materia, todavía en un formato diferente. Por consiguiente, un método para proporcionar una forma lista para utilizarse de una composición hemostática de acuerdo con la presente invención, en donde la composición hemostática se proporciona en una primera jeringa y un diluyente para reconstitución se proporciona en una segunda jeringa, la primera y segunda jeringas están conectadas entre sí, y el diluyente se lleva a la primera jeringa para producir una forma que puede fluir de la composición hemostática; y regresando de manera opcional la forma que puede fluir de la composición hemostática a la segunda jeringa por lo menos una vez, es una modalidad preferida de la presente invención. Este proceso (también denominado como "zumbando") proporciona una forma lista para utilizarse adecuada de las composiciones de acuerdo con la presente invención, la cual puede ser elaborada de manera fácil y eficiente también dentro de períodos cortos, por ejemplo, en situaciones de emergencia durante una cirugía. Esta forma que puede fluir de la composición hemostática provista por dicho método, es adecuada de manera específica para utilizarse en el tratamiento de una lesión seleccionada del grupo que consiste en una herida, una hemorragia, tejido dañado, tejido sangrante y/o defectos óseos.

Por razones de estabilidad, dichos productos (así como también los productos de acuerdo con la presente invención) normalmente son provistos en una forma seca en un contenedor final y se lleva a la forma lista para utilizarse (la cual normalmente es en la forma de un (hidro)gel, suspensión o solución) inmediatamente antes del uso, que necesitan la adición de diluyentes farmacéuticamente aceptables (= medio de rehidratación).

De acuerdo con otro aspecto, la presente invención se refiere a un método para proporcionar una forma lista para utilizarse de una composición hemostática de acuerdo con la presente invención, en donde la composición hemostática se proporciona en una primera jeringa y un diluyente para reconstitución se proporciona en una segunda jeringa, la primera y segunda jeringas están conectadas entre sí, y el fluido se lleva a la primera jeringa para producir una forma que puede fluir de la composición hemostática; y regresando de manera opcional la forma que puede fluir de la composición hemostática a la segunda jeringa por lo menos una vez.

Preferentemente, la forma que puede fluir de la composición hemostática de acuerdo con la presente invención, contiene más del 50% (p/o) con un tamaño desde 100 hasta 1000 µ?t?, preferentemente más del 80% (p/p) de partículas con un tamaño desde 100 hasta 1000 pm.

El polímero reticulado hemostático biocompatible de acuerdo con la presente invención -una vez aplicado a una herida- forma una matriz eficiente, la cual puede formar una barrar para el flujo de sangre. De manera específica, las propiedades de dilatación del polímero hemostático pueden hacerlo una barrera mecánica efectiva contra sangrado y procesos de nuevo sangrado.

La presente composición pude contener adicionalmente un componente polimérico hidrófilo (también denominado como un "componente hidrófilo reactivo" o reticulador hidrófilo (polimérico)", el cual mejora adicionalmente las propiedades adhesivas de la presente composición. Este componente polimérico hidrófilo de la composición hemostática de acuerdo con la presente invención, actúa como un reticulador hidrófilo, el cual tiene la capacidad de reaccionar con sus grupos reactivos una vez que la composición hemostática es aplicada a un paciente (por ejemplo, a una herida de un paciente u otro sitio en donde el paciente necesita una actividad hemostática). Por consiguiente, es importante para la presente invención que los grupos reactivos del componente polimérico hidrófilo sean reactivos cuando son aplicados al paciente. Por lo tanto, es necesario fabricar la composición hemostática de acuerdo con la presente invención, de manera que los grupos reactivos del componente polimérico, los cuales deben reaccionar una vez que son aplicados a una herida, son retenidos durante el proceso de fabricación.

Para los reticuladores poliméricos hidrófilos cuyos grupos reactivos se pueden hidrolizar, el contacto prematuro con agua o líquidos acuosos tiene que evitarse antes de la administración de la composición hemostática al paciente, especialmente durante la fabricación. Sin embargo, el procesamiento del componente polimérico hidrófilo durante la fabricación puede ser posible también en un medio acuoso en condiciones en donde las reacciones de los grupo reactivos son inhibidas (por ejemplo, aun pH bajo). Si los componentes poliméricos hidrófilos pueden ser disueltos, los componentes poliméricos hidrófilos disueltos pueden ser rociados o impresos sobre la matriz de gelatina reticulada. También es posible mezclar una forma seca (por ejemplo, un polvo) del componente polimérico hidrófilo con una forma seca de la gelatina reticulada. Si es necesario, entonces puede aplicarse un incremento de la temperatura para disolver el componente polimérico hidrófilo salpicado con la gelatina reticulada para lograr un recubrimiento permanente de la composición hemostática. De manera alternativa, estos componentes poliméricos hidrófilos pueden ser ocupados en solventes orgánicos inertes (inertes cara a cara de los grupos reactivos de los componentes poliméricos hidrófilos) y llevados sobre la matriz de la gelatina reticulada. Los ejemplos de dichos solventes orgánicos son etanol seco, acetona seca o diclorometano seco (los cuales son, por ejemplo, inertes para los componentes poliméricos hidrófilos, tales como PEGS sustituidos de NHS-éster). De manera alternativa, los grupos nucleófilos también pueden ser agregados (por ejemplo, PEG-SH).

En una modalidad preferida, el componente polimérico hidrófilo es un componente polimérico hidrófilo único y es un polímero de óxido de polialquileno, preferentemente un polímero que comprende PEG. Los grupos reactivos de este polímero reactivo preferentemente son grupos electrófilos.

El componente hidrófilo reactivo puede ser un polímero de óxido de polialquileno multi-electrófilo, por ejemplo, un PEG multi-electrófilo. El componente hidrófilo reactivo puede incluir dos o más grupos electrófilos, preferentemente un PEG que comprende dos o más grupos reactivos seleccionados de ésteres de succinimidilo (-CON(COCH2C)2), aldehidos (-CHO) y isocianatos (N= C = 0), por ejemplo, un componente como los descritos en el documento WO2008/016983 A (incorporada en la presente descripción como referencia en su totalidad).

Los grupos electrófilos preferidos del reticulador polimérico hidrófilo de acuerdo con la presente invención son grupos reactivos al grupo de proteínas amino-, carboxi-, tiol- e hidroxi- o mezclas de los mismos.

Los grupos reactivos específicos de grupo amino son los grupos NHS-éster, grupo imidoéster, grupos aldehido, grupos carboxi en la presencia de carbodiimidas, isocianatos, o THPP (ácido beta-[tris(hidroximetil)fosfino]propiónico), el especialmente preferido es pentaeritritolpoli(etilénglicol)éter tetrasuccinimidil glutarato ( = pentaeritritol tetrakis[1-1 '-???-5'-succinimidilpentanoato-2-poli-oxoetilénglicol]éter (= un NHS-PEG con un MW 10,000).

Los grupos reactivos específicos del grupo carboxi preferido son los grupos amino en la presencia de carbodiimidas.

Los grupos reactivos específicos del grupo tiol preferidos son maleimidas o haloacetilos.

El grupo reactivo específico del grupo hidroxi preferido es el grupo isocianato.

Los grupos reactivos en el reticulador hidrófilo pueden ser idénticos (homofuncionales) o diferentes (heterofuncionales). El componente polimérico hidrófilo puede tener dos grupos reactivos (homo-bifuncional o hetero- bifuncional) o más (homo/hetero-trifuncional o más).

En las modalidades especiales, el material es un polímero sintético, preferentemente que comprende PEG. El polímero puede ser un derivado de PEG que comprende grupos laterales activos adecuados para la reticulación y adherencia a un tejido.

Por grupos reactivos, el polímero reactivo hidrófilo tiene la capacidad de reticular las proteínas de la sangre y también las proteínas de superficie del tejido. La reticulación para la gelatina reticulada también es posible.

El óxido de polialquileno multi-electrófilo puede incluir dos o más grupos succinimidilo. El óxido de polialquileno multi-electrófilo puede incluir dos o más grupos maleimidilo.

Preferentemente, el óxido de polialquileno multi-electrófilo es un polietilénglicol o un derivado del mismo.

En una modalidad más preferida, el componente polimérico hidrófilo es pentaeritritolpoli( etilénglicol)éter tetrasuccinimidil glutarato ( = COH102, también pentaeritritol tetrakis[1-1'-oxo-5'-succinimidilpentanoato-2-poli-oxoetiléneglicoljéter).

El componente polimérico hidrófilo es un reticulador hidrófilo. De acuerdo con una modalidad preferida, este reticulador tiene más de dos grupos reactivos para reticulación ("barras"), por ejemplo, tres, cuatro, cinco, seis, siete, ocho o más barras con grupos reactivos para reticulación. Por ejemplo, NHS-PEG-NHS es un reticulador hidrófilo efectivo de acuerdo con la presente invención. Sin embargo, para algunas modalidades, un polímero de cuatro barras (por ejemplo, p-NPPEG de cuatro barras puede ser el más preferido; con base en el mismo raciocinio, un poliéter de 8 barras (por ejemplo, NHS-PEG de 8 barras) puede incluso ser más preferido para aquellas modalidades en donde la reticulación multi-reactiva es benéfica. Además, el reticulador hidrófilo es un polímero, es decir, una molécula grande (macromolécula) compuesta de unidades estructurales repetitivas, las cuales normalmente están conectadas mediante enlaces químicos covalentes. El componente polimérico hidrófilo debe tener un peso molecular de por lo menos 1000 Da (para servir en forma adecuada como el reticulador en la composición hemostática de acuerdo con la presente invención); preferentemente, los polímeros de reticulación de acuerdo con la presente invención tiene un peso molecular de por lo menos 5000 Da, especialmente de por lo menos 8000 Da.

Para algunos reticuladores hidrófilos, la presencia de las condiciones de reacción básicas (por ejemplo, en el sitio de administración), se prefiere o es necesaria para el desempeño funcional (por ejemplo, para una reacción de reticulación más rápida en el sitio de administración). Por ejemplo, los iones de carbonato o bicarbonato (por ejemplo, como un amortiguador con un pH de 7.6 o superior, preferentemente de 8.0 o superior, especialmente de 8.3 y superior) pueden ser provistos adicionalmente en el sitio de la administración (por ejemplo, como una solución de amortiguador o como una tela o almohadilla empapada con dicho regulador), de manera que permite un desempeño mejorado de la composición hemostática de acuerdo con la presente invención o para permitir el uso eficiente como material hemostático y/o adherente en heridas.

La reactividad del componente polimérico hidrófilo (el cual, como se mencionó, actúa como un reticulador) en la composición de acuerdo con la presente invención, es retenido en la composición. Esto significa que los grupos reactivos del reticulador todavía no se han hecho reaccionar con la composición hemostática y no son hidrolizados mediante agua (o por lo menos no en una cantidad significativa, lo cual tiene consecuencias negativas sobre la funcionalidad hemostática de las composiciones presentes). Esto puede lograrse combinando la gelatina reticulada con el reticulador hidrófilo en una forma que no conduce a la reacción de los grupos reactivos del reticulador con el polímero hemostático o con agua. Normalmente, esto incluye la omisión de las condiciones acuosas (o de mojado), especialmente el mojado sin la presencia de condiciones ácidas (si los reticuladores no son reactivos bajo condiciones ácidas). Esto permite la provisión de materiales hemostáticos reactivos.

Las proporciones preferidas de la gelatina reticulada al componente polimérico hidrófilo en la composición hemostática de acuerdo con la presente invención son desde el 0.1 hasta el 50% (p/p), preferentemente desde el 5 hasta el 40% (p/p).

Los componentes adicionales pueden estar presentes en la composición hemostática de acuerdo con la presente invención. De acuerdo con las modalidades preferidas, las composiciones hemostáticas de acuerdo con la presente invención pueden comprender adicionalmente una sustancia seleccionada del grupo que consiste en antifibrinolíticos, procoagulante, activador de plaquetas, antibióticos, vasoconstrictores, tintes, factores de crecimiento, proteínas morfogenéticas óseas y analgésicos.

La presente invención, también se refiere a un contenedor final terminado que contiene la composición hemostática de acuerdo con la presente invención. Este contenedor terminado contiene la composición hemostática de acuerdo con la presente invención en una forma estéril, estable para almacenamiento y que se puede comercializar. El contenedor final puede ser cualquier contenedor adecuado para alojamiento (y almacenamiento) de compuestos que se pueden administrar farmacéuticamente. Las jeringas, frascos, tubos, etc., pueden utilizarse; sin embargo, se prefiere de manera específica proporcionar las composiciones hemostáticas de acuerdo con la presente invención en una jeringa Las jeringas han sido un medio de administración preferido para las composiciones hemostáticas, como se describió en la técnica anterior, debido a las ventajas de manejo de las jeringas en la práctica médica. Las composiciones pueden entonces ser aplicadas de manera preferida (después de la reconstitución) por medio de agujas específicas de la jeringa o por medio de los catéteres adecuados. Las composiciones hemostáticas reconstituidas (las cuales son reconstituidas preferentemente para formar un hidrogel) también se puede aplicar mediante otros medios diversos, por ejemplo, mediante una espátula, un cepillo, rocío, manualmente por presión, o mediante cualquier otra técnica convencional. La administración de la composición hemostática reconstituida a un paciente por medios endoscópicos (laparoscópica) es preferida de manera específica. Normalmente, las composiciones hemostáticas reconstituidas de acuerdo con la presente invención se aplicarán utilizando una jeringa o aplicador similar que tiene la capacidad de extrudir la composición reconstituida a través de un orificio, abertura, aguja, tubo u otro pasaje para formar un lecho, capa o porción similar de material. La alteración mecánica de las composiciones puede realizarse mediante extrusión a través de un orificio en la jeringa u otro aplicador, que normalmente tiene un tamaño dentro del intervalo desde 0.01 mm hasta 5.0 mm, preferentemente desde 0.5 mm hasta 2.5 mm. Preferentemente, sin embargo, la composición hemostática será preparada inicialmente a partir de una forma seca que tiene un tamaño de partícula deseado (el cual, a partir de la reconstitución, especialmente por hidratación, produce sub-unidades del tamaño de requisito (por ejemplo, sub-unidades de hidrogel)) o será alterada mecánicamente ya sea de manera parcial o total al tamaño requisito antes de un paso de extrusión final u otra aplicación. Esto es, desde luego evidente, que estos componentes mecánicos tienen que ser provistos en forma estéril (dentro y fuera) con el objeto de cumplir con los requerimientos de seguridad para uso en humanos.

La composición hemostática de acuerdo con la presente invención es aplicada preferentemente en su forma de pasta a un paciente desde un contenedor como se describió en el Ejemplo 1 con una fuerza de extrusión de 40 N o menor, tal como menor a 30N o menor a 20N, preferentemente dentro del rango de 15 a 30 N .

Otro aspecto de la presente invención se refiere a un método para proporcionar una composición hemostática lista para utilizarse que comprende poner en contacto una composición hemostática de acuerdo con la presente invención.

Breve Descripción de las Figuras La presente invención se describe adicionalmente en los ejemplos que se encuentran a continuación y en las figuras de los dibujos, sin estar restringida a los mismos.

La figura 1, muestra la fuerza de extrusión media de pastas de gelatina reticulada de glutaraldehído que contienen el 17.5% de gelatina reticulada (p/p) con albúmina de suero en el componente de trombina (fuerza de extrusión necesaria para empujar el producto fuera de la jeringa a una velocidad de compresión de 250 mm/min, calculada a 35 mm de distancia; todos los productos incubados durante 30 minutos a temperatura ambiente, el nuevo zumbido rápido, poco tiempo después de la medición de la fuerza de extrusión). El eje x muestra la concentración de albúmina de suero humano en el componente de trombina en [g/l], el eje y muestra la fuerza de extrusión media en [N].

La figura 2, muestra la consistencia de las pastas de gelatina reticuladas que contienen el 17.5% (p/p) de gelatina reticulada dependiendo de la concentración de albúmina de suero humano.

La figura 3, muestra la fuerza de extrusión media de pastas de gelatina reticulada que contienen el 17-5% (p/p) de gelatina con concentraciones diversas de albúmina de suero humano en el componente de trombina. El eje x muestra la concentración de albúmina de suero humano en el componente de trombina en [g/l], el eje y muestra la fuerza de extrusión media en [N].

La figura 4, muestra la evaluación de severidad de sangrado posterior a la aplicación y aproximación del artículo de prueba.

Las figuras 5 a 8, muestran la eficacia hemostática en el modelo de Perforación-Biopsia de hígado porcino de preparaciones diferentes. El eje x muestra el tiempo después de la aplicación en [segundos], el eje y muestra el porcentaje de éxito hemostático (definido como "no sangrado" en la figura 5 y como "no sangrado" o "escurrimiento" en la figura 6).

En las figuras 5 y 6, los símbolos significan: gelatina reticulada de glutaraldehído con 50 g/l de albúmina de suero humano en la solución de trombina (n = 8) gelatina reticulada de glutaraldehído con 75 g/l de albúmina de suero humano en la solución de trombina (n = 8) En las figuras 7 y 8, los símbolos significan: s 17.5% (p/p) de gelatina reticulada de glutaraldehído ~ 14.5% (p/p) gelatina reticulada de glutaraldehído s 17.5%(p/p) de gelatina reticulada de glutaraldehído más el 2.5% de PEG 10.000 en solución de trombina EJEMPLOS Ejemplo 1: Determinación de la Fuerza de Extrusión (EF): Un probador mecánico Instron modelo 5544 equipado con una celda de carga de 100 N que opera a una velocidad de rayo cruzado de 250 mm/min se utilizó para medir las fuerzas de extrusión necesarias para extrudir el producto desde una jeringa. Las fuerzas de extrusión necesarias fueron medidas durante el desplazamiento de rayo cruzado completo (34 mm de desviación) el cual corresponde a una distancia que se mueve el émbolo de la jeringa con el objeto de extrudir casi la totalidad del producto fuera de la jeringa. A partir de estas fuerzas, se calcularon las fuerzas de extrusión media de la siguiente manera: Total de Energía (mJ) = Fuerza Media (N) Desviación Máx. (mm) Las muestras para estas pruebas fueron preparadas de la siguiente manera: Una jeringa estándar de 5 mi (con un cuerpo cilindrico que tiene un diámetro interior de 12.2 mm) con un sistema de cierre macho Luer (el diámetro del lumen de boquilla interior en donde está unido el adaptador mide 2.54 mm) se llena con 0.704 g de masa seca de la muestra sólida (aproximadamente 0.5 g que toma la humedad residual de aproximadamente el 12% en cuenta). Se utilizó como un diluyente, 3.2 mi de una solución de trombina que contiene 500 lU/ml de trombina en 40 mM de cloruro de calcio, y cualquiera de 0, 5, 15, 25, 50, o 75 mg/ml de albúmina de suero humano. El diluyente y el componente sólido fueron mezclados conectando la jeringa que tiene el diluyente (una jeringa estándar de 5 mi con un sistema de cierre luer hembra) y la jeringa que contiene el componente seco y empujando el contenido hacia atrás y adelante por lo menos 10 veces (esta técnica de mezclado se llama "zumbido"). Después de lo cual, la muestra fue incubada durante 30 minutos a temperatura ambiente antes de la medición. Después de la incubación de cada muestra, se hizo "zumbar nuevamente" dos veces y la jeringa que contiene el producto (la jeringa que anteriormente contenía el componente seco como se mencionó anteriormente) se conectó a un aplicador maleable (sistema de conector luer hembra, diámetro de tubo interior de 2.29 que contiene dos cables y que tiene una longitud total de 141.5 mm). La jeringa se ensambló al aplicador y se colocó en la configuración Instron y se inició la prueba.

Las jeringas y el aplicador están disponibles comercialmente como partes del producto de Matriz Hemostática Floseal de Baxter.

Los resultados para una gelatina reticulada de glutaraldehído como en Floseal se representan en la figura 1, y aquellas para una gelatina reticulada de genipina como la que se describe más adelante se representan en la figura 3 y también son mostradas en la Tabla 1 y Tabla 2 correspondientes.

La consistencia de las pastas de gelatina reticuladas que contienen el 17.5% (p/p) de gelatina reticulada dependiendo de la concentración de albúmina se muestra en la figura 2 (con 0, 25, 50 y 75 g/l de albúmina de suero humano provisto en el componente de trombina).

Tabla 1: Tabla 2: Preparación de gelatina reticulada de genipina: El colágeno derivado de bovino se proceso por medio de tratamiento alcalino y se enjuagó de forma subsiguiente con agua de proceso desionizada (DIW) para remover las sales residuales. La gelatina se extrajo mediante tratamiento de calor y se secó en hojas. Las hojas fueron molidas hasta un polvo que fue procesado utilizando genipina como un agente de reticulación. 1 kg de gránulos de gelatina se agregó a 20I de una solución de 10 mM genipina en DIW. La reacción se realizó a un pH neutral (7.2) en un tanque de temperatura controlada cubierto a una temperatura de 23°C. El mezclado se realizó durante 6 horas y la solución se drenó, reteniendo los sólidos dentro de una malla, y se enjuagó con DIW para lavar la genipina restante. El material se suspendió nuevamente en una solución de H202 al 5% durante 20 horas. El material fue enjuagado con DIW para remover el H202. Los sólidos fueron secados previamente en papel de filtro al vacío y posteriormente horneados en horno durante 2.5 días. La matriz seca se molió hasta un polvo y se llenó en jeringas de plástico individuales antes de la exposición a irradiación gamma.

Ejemplo 2: Determinación de Eficiencia Hemostática Materiales y Métodos: Modelo Animal Para este modelo, se realizó una línea media de laparotomía, seguida por la cauterización eléctrica para detener el sangrado de una incisión quirúrgica. El hígado es expuesto y un lóbulo es aislado. Una biopsia de perforación de 10 mm de diámetro se utiliza para crear una serie de 2, lesiones de espesor no completas, aproximadamente 5 mm de profundidad con el núcleo de tejido removido. Una evaluación previa al tratamiento se realizó sobre la lesión, la cual incluye recolectar la sangre que fluye desde cada lesión durante 10 segundos con una gasa previamente pesada.

Los artículos de prueba son aleatorizados y presentados al cirujano quien es ciego al tratamiento de la muestra. Aproximadamente 1.0 mi del artículo de prueba asignado es aplicado en forma tópica a una lesión. La gasa humedecida en solución salina se utiliza para ayudar a aproximar los artículos de prueba a sus lesiones designadas, y el cronómetro se encendió. La gasa de aproximación de solución salina humedecida se removió después de 30 segundos.

El grado de sangrado es evaluado 30, 60, 90, 120, 300 y 600 segundos, después de que los artículos de prueba son aplicados a sus lesiones designadas como en las representaciones en la figura 3 (clasificación de sangrado: 0: sin sangrado (producto saturado con sangre; 1: escurrimiento (sangre fuera del producto pero ninguna gota de sangre); 2: muy suave (gotas de sangre sobre el producto); 3: suave (las gotas de sangre corren hacia abajo); 4: moderado (cantidad pequeña de sangre que escurre hacia abajo); 5: severa (gran cantidad de sangre que escurre hacia abajo)).

Producto saturado con sangre, pero son sangrando activo se clasifica como "0" (cero). La solución salina se utiliza para irrigar el exceso de los artículos de prueba lejos de las lesiones después de 300 segundos de evaluación. El procedimiento es repetido y realizado en los lóbulos de hígado múltiples. Un cirujano único crea, trata y realiza las evaluaciones de observación.

Síntesis del Artículo de Prueba Los artículos de prueba para la evaluación in vivo en el modelo de hígado porcino se realizaron mediante la preparación de las pastas de gelatina reticulada (en concentraciones del 14.5% y 17.5% con 25 o 50 g/l de albúmina de suero humano en la solución de trombina (con y sin el 2.5% adicional de PEG)).

Los resultados se representan en las figuras 5 a 8, que muestran un desempeño mejorado con el 17.5% de gelatina y menos efectividad en la presencia de plastificadores (PEG).

Ejemplo 3: Los muestras de gelatina fueron formuladas por el inserto de paquete para Floseal con un par de excepciones clave. Primer, se utilizó cloruro de sodio en lugar de cloruro de calcio y la gelatina se formuló al 125% de sólidos en lugar de al 100%. Las formulaciones de gelatina/trombina se dejaron permanecer durante 25 minutos y posteriormente se descartó la preparación. El otro 1 mi de material se aplicó al sistema de hemostasis tópica (THS). El aparato THS se cebó previamente con plasma con deficiencia de plaquetas.

El THX es un aparato diseñado para simular una herida sangrante. La herida artificial es un orificio cilindrico en un sustrato de silicón. La superficie del cilindro de silicón se cubrió con una capa de fibrinógeno. Una bomba de jeringa expulsó el fluido coagulado (sangre entera, plasma, etc.) en esta caso, el plasma con deficiencia de plaquetas, mientras que se registró la presión posterior. En este experimento, el plasma se hizo fluir a un índice fijo de 0.25 ml/min a través de un orificio pequeño en el centro inferior de la herida cilindrica. El exceso de plasma se absorbió con una gasa inmediatamente antes de la aplicación de la matriz hemostática. A medida que continuó el flujo de plasma, 1 mi de la matriz hemostática se aplicó a la herida cilindrica. Esta se cubrió en forma inmediata con la gasa mojada y se aplicó una presión fija. Después de 30 segundos, se removió el peso y el plasma continuó fluyendo durante 8 a 10 minutos, en cuyo punto, el flujo se detuvo y el coágulo se hizo a un lado en una cámara de humedad en donde permaneció durante más de 2 horas. Al final de las dos horas, el coágulo se montó sobre un vibratomo a una temperatura de 8°C, en donde se seccionaron del coágulo bloques de aproximadamente 500 de espesor. Estas secciones se sumergieron en el amortiguador PBS. Los bloques se almacenaron a una temperatura de 5°C en el refrigerador cuando no estuvieron en uso. El bloque se colocó sobre una cubierta de vidrio y se formaron imágenes con un microscopio confocal A1 R Nikon que ejecuta el software NIS-Elements Advanced Research v3.22.00 Build 710. Para recolectar las micrografías, un objetivo de fluorita plano 10x se utilizó con luz de excitación láser a 488 nm y una ventana de recolección de emisión de 500 a 550 nm. Una imagen de luz transmitida se recolectó en forma simultánea utilizando un detector de luz transmitida. Con estos parámetros de formación de imagen, la sutura automatizada realizada por el software se utilizó para generar mapas microscópicos de las muestras. Las áreas más pequeñas de las muestras también se caracterizaron por la recolección de pilas z 3D de imágenes con un espesor de rebanada óptica de 5.125 pm. El mapa confocal compuesto se utilizó para identificar los gránulos de gelatina que están localizados en la superficie, y los cuales fueron seccionados. Esto fue importante para posicionar la medición de elasticidad en el microscopio de fuerza atómica (AFM). El bloque de coágulo se montó en un AFT Veeco Multimode. El multimode se equipó con un controlador Nanoscope V y un explorador digital piezoeléctrico JV. Las mediciones de fuerza se realizaron en un Novascan AFM en cantilever, el cual soportó una esfera de poliestireno de 4.5 pm. La fuerza del Cantilever constante se determinó ser de 0.779 N/m mediante el método de sintonización térmica. El cantilever fuer posicionado sobre el centro del gránulo de gelatina, y posteriormente se realizó un arreglo de 16x16 de mediciones de fuerza. Cada curva de fuerza involucró el movimiento del gránulo de gelatina en contacto con la esfera de poliestireno, y continuó movimiento el gránulo hacia arriba hasta que la desviación de cantilever alcanzó un valor de disparo previamente establecido de 2 voltios, en cuyo punto, la gelatina se retrajo una distancia de 1.00 mieras desde la ubicación de disparo.

Planteamiento Los datos de fluorescencia muestran que la gelatina reticulada de glutaraldehído no es reticulada de manera uniforme. En su lugar, la densidad de reticulación parece superior alrededor de los bordes de los gránulos, con la porción central del gránulo siendo significativamente menos reticulada que los bordes. En contraste, la gelatina reticulada de genipina parece reticulada de manera uniforme (en forma homogénea) en todos los gránulos. No existen efectos de borde sustancial para la intensidad de fluorescencia. La intensidad de fluorescencia de los materiales reticulados de genipina y glutaraldehído no puede ser comparada directamente, debido a las diferencias de fluorescencia potenciales atribuidas a los reticuladores mismos. Sin embargo, la medición de módulo elástico medido AFM muestran que la gelatina reticulada de genipina es más rígida que la gelatina reticulada de glutaraldehído, y la cual parece ser más suave (más flexible).

Claims (15)

REIVINDICACIONES

1. Una composición hemostática que comprende una gelatina reticulada en forma de partículas adecuada para utilizarse en hemostasis, en donde la composición está presente en forma de pasta que contiene del 15.0 al 19.5% (p/p) gelatina reticulada, preferentemente del 16.0 al 19.5% (p/p), del 16.5 al 19.5% (p/p), del 17.0 al 18.5% (p/p) o del 17.5 al 18.5% (p/p), más preferentemente del 16.5 al 19.0% (p/p) o del 16.8 al 17.8% (p/p), especialmente preferido del 16.5 al 17.5% (p/p), y en donde, la composición comprende un agente de mejoramiento de extrusión.

2. La composición hemostática tal y como se describe en la reivindicación 1, caracterizada además porque el agente de mejoramiento de extrusión es albúmina en una cantidad del 0.5 al 5.0% (p/p), preferentemente desde el 1.0 hasta el 5.0% (p/p), preferentemente desde el 2.0 hasta el 4.5% (p/p), más preferido desde el 1.5 hasta el 5.0% (p/p), especialmente preferido de aproximadamente el 1.5% (p/p).

3. La composición hemostática tal y como se describe en la reivindicación 1 a 2, caracterizada además porque la gelatina reticulada es gelatina reticulada de glutaraldehído o gelatina reticulada de genipina.

4. La composición hemostática tal y como se describe en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizada además porque la gelatina reticulada es gelatina tipo B.

5. La composición hemostática tal y como se describe en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizada además porque la gelatina reticulada está presente como un material en gránulos.

6. La composición hemostática tal y como se describe en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, caracterizada además porque la gelatina reticulada tiene un tamaño de partícula desde 100 hasta 1000 µ?t?, preferentemente desde 200 hasta 800 pm, más preferido desde 350 hasta 550pm.

7. La composición hemostática tal y como se describe en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, caracterizada además porque la composición contiene trombina, preferentemente desde 10 hasta 1000 I.U. de trombina/ml, especialmente desde 250 hasta 700 I.U. de trombina/ml.

8. La composición hemostática tal y como se describe en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, caracterizada además porque se utiliza para el tratamiento de una lesión seleccionada del grupo que consiste en una herida, una hemorragia, tejido dañado, tejido sangrante y/o defectos óseos.

9. Un método para el tratamiento de una lesión seleccionada del grupo que consiste en una herida, una hemorragia, tejido dañado y/o tejido sangrante que comprende administrar una composición hemostática tal y como se describe en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 al sitio de la lesión.

10. Un paquete para elaborar una pasta que puede fluir de gelatina reticulada para el tratamiento de una lesión seleccionada del grupo que consiste en una herida, una hemorragia, tejido dañado y/o tejido sangrante, que comprende a) una composición hemostática que comprende una gelatina reticulada en forma de partículas para ser reconstituida hasta una pasta que puede fluir que contiene del 15.0 al 19.5% (p/p) gelatina reticulada, preferentemente del 16.0 al 19.5% (p/p), del 16.5 al 19.5% (p/p), del 17.0 al 18.5% (p/p) o del 17.5 al 18.5% (p/p), más preferentemente del 16.5 al 19.0% (p/p) o del 16.8 al 17.8% (p/p), especialmente preferido del 16.5 al 17.5% (p/p), y b) un diluyente farmacéuticamente aceptable para reconstitución de la composición hemostática, en donde ya sea la composición o el diluyente comprende albúmina en una cantidad que conduce a una concentración de albúmina en la pasta reconstituida de entre el 0.5 hasta el 5.0% (p/p), preferentemente desde 1.0 hasta el 5.0 % (p/p), preferentemente desde 2.0 hasta el 4.5% (p/p), más preferido desde el 1.5 hasta el 5.0% (p/p), especialmente preferido de aproximadamente el 1.5% (p/p).

11. El paquete tal y como se describe en la reivindicación 10, caracterizado además porque el diluyente farmacéuticamente aceptable comprende un amortiguador o sistema amortiguador, preferentemente a un pH de 3.0 hasta 10.0.

12. El paquete tal y como se describe en la reivindicación 10 u 11, caracterizado además porque el diluyente farmacéuticamente aceptable comprende trombina, preferentemente de 10 a 1000 I.U. de trombina/ml, especialmente de 250 hasta 700 I.U. de trombina/ml.

13. El paquete tal y como se describe en cualquiera de las reivindicaciones 10 a 12, caracterizado además porque el diluyente farmacéuticamente aceptable contiene una sustancia seleccionada del grupo que consiste en NaCI, CaCI2 y acetato de sodio.

14. Un método para proporcionar una forma lista para utilizarse de una composición hemostática tal y como se describe en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, caracterizado además porque la composición hemostática se proporciona en una primera jeringa y un diluyente para reconstitución se proporciona en una segunda jeringa, la primera y segunda jeringas están conectadas entre sí, y el fluido se lleva a la primera jeringa para producir una forma que puede fluir de la composición hemostática; y regresando de manera opcional la forma que puede fluir de la composición hemostática a la segunda jeringa por lo menos una vez.

15. El método tal y como se describe en la reivindicación 14, caracterizado además porque la forma que puede fluir de la composición hemostática contiene partículas que son de más del 50% (p/o) con un tamaño desde 100 hasta 1000 pm, preferentemente más del 80% (p/p) con un tamaño desde 100 hasta 1000 µ??.