ES2957842T3

ES2957842T3 - Método de elaboración de composiciones hemostáticas

Info

Publication number: ES2957842T3
Application number: ES19706149T
Authority: ES
Inventors: Shuang Chen; Aibin Yu; Jianping Yu; Yufu Li
Original assignee: Guangzhou Bioseal Biotech Co Ltd; Ethicon Inc
Current assignee: Guangzhou Bioseal Biotech Co Ltd; Ethicon Inc
Priority date: 2018-02-13
Filing date: 2019-02-06
Publication date: 2024-01-26
Anticipated expiration: 2039-02-06
Also published as: US20190247474A1; EP3752212B1; CN110152054A; JP2021513431A; AU2019222506B2; AU2019222506A1; EP3752212A1; CN111954545A; JP7204784B2; US11413335B2; CA3090935A1; WO2019160717A1

Abstract

La presente invención está dirigida a composiciones hemostáticas que comprenden al menos parcialmente fibras ORC aglomeradas, fibrinógeno y trombina y a métodos para formar una composición hemostática en polvo, que comprende las etapas de: formar una suspensión de una mezcla que comprende partículas de fibrinógeno, trombina, fibras ORC. en un disolvente no acuoso de bajo punto de ebullición, agitar y cizallar dicha suspensión en un reactor mezclador de alto cizallamiento, añadir agua para permitir que las partículas se aglomeren, permitir que el disolvente no acuoso se evapore, secar y tamizar la composición; y formando así la composición hemostática en polvo. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN

Método de elaboración de composiciones hemostáticas

CAMPO DE LA INVENCIÓN

La presente invención se refiere de manera general a métodos de formación de agentes y materiales para promover la hemostasis y el sellado de tejidos y, más particularmente, a partículas hemostáticas reabsorbibles con eficacia mejorada, en particular agregados de partículas hechos de fibrinógeno, trombina y celulosa regenerada oxidada. La invención se refiere además a las composiciones hemostáticas formadas por estos métodos para su uso en el tratamiento de una herida y para su uso en el tratamiento de una fuga de aire en un pulmón.

ANTECEDENTES

En una amplia variedad de circunstancias, los animales, incluyendo los humanos, pueden sufrir hemorragias debidas a heridas o durante procedimientos quirúrgicos. En algunas circunstancias, la hemorragia es relativamente leve y basta con aplicar los primeros auxilios y las funciones normales de coagulación de la sangre. En otras circunstancias pueden producirse hemorragias importantes. Estas situaciones habitualmente requieren equipos y materiales especializados, así como personal formado para administrar la ayuda adecuada.

La hemorragia durante los procedimientos quirúrgicos puede manifestarse de muchas formas. Puede ser discreta o difusa a partir de una gran superficie. Puede ser de vasos grandes o pequeños, arteriales (alta presión) o venosos (baja presión) de alto o bajo volumen. Puede ser fácilmente accesible o puede originarse en lugares de difícil acceso. El control de la hemorragia es esencial y crítico en los procedimientos quirúrgicos para minimizar la pérdida de sangre, para reducir las complicaciones posquirúrgicas y para acortar la duración de la intervención en el quirófano. La selección de los métodos o productos adecuados para el control de las hemorragias depende de muchos factores, que incluyen, entre otros, la gravedad de la hemorragia, la localización anatómica de la fuente y la proximidad de estructuras críticas adyacentes, si la hemorragia procede de una fuente discreta o de un área superficial más amplia, la visibilidad y la identificación precisa de la fuente y el acceso a la misma.

Los métodos convencionales para lograr la hemostasis incluyen el uso de técnicas quirúrgicas, suturas, ligaduras o clips, y la coagulación o cauterización basada en la energía. Cuando estas medidas convencionales son ineficaces o poco prácticas, se utilizan típicamente técnicas y productos hemostáticos complementarios.

Para hacer frente a los problemas descritos anteriormente, se han desarrollado materiales para controlar las hemorragias excesivas o como complementos de la hemostasis. Los hemostáticos absorbibles tópicos (TAH) se usan ampliamente en aplicaciones quirúrgicas. Los TAH abarcan productos en varias formas, como los basados en telas tejidas o no tejidas o esponjas, y típicamente están hechos de materiales por lo menos parcialmente reabsorbibles, que van desde los polímeros naturales a los sintéticos y combinaciones de los mismos, incluyendo los copolímeros a base de lactida-glicolida, como la poliglactina 910, la celulosa oxidada, la celulosa regenerada oxidada (ORC), la gelatina, el colágeno, la quitina, el quitosano, el almidón, etc. La gelatina se usa en varias formas con o sin una solución tópica de trombina. También se usan ampliamente productos hemostáticos tópicos biológicamente activos (soluciones tópicas de trombina, sellantes de fibrina, etc.) y una variedad de sellantes tópicos sintéticos.

Para mejorar el rendimiento hemostático, los andamiajes basados en los materiales de TAH mencionados anteriormente pueden combinarse con factores de coagulación de origen biológico, como la trombina y el fibrinógeno.

Debido a su biodegradabilidad y a sus propiedades bactericidas y hemostáticas, se ha usado la celulosa oxidada, así como la celulosa regenerada oxidada, durante mucho tiempo como apósito hemostático tópico para heridas en una variedad de procedimientos quirúrgicos, como la neurocirugía, la cirugía abdominal, la cirugía cardiovascular, la cirugía torácica, la cirugía de cabeza y cuello, la cirugía pélvica y los procedimientos de la piel y el tejido subcutáneo. Se conocen muchos métodos para formar varios tipos de hemostáticos basados en materiales de celulosa oxidada, ya sea en polvo, tejidos, no tejidos, de punto y otras formas. Los apósitos hemostáticos para heridas utilizados actualmente incluyen tejidos de punto o no tejidos que comprenden celulosa regenerada oxidada (ORC), que es celulosa oxidada con una mayor homogeneidad de la fibra de celulosa.

La ORC se introdujo en la década de 1960 y ofrece una hemostasis segura y eficaz para muchos procedimientos quirúrgicos. Se cree que el mecanismo de acción de los hemostáticos de ORC comienza cuando el material absorbe agua y luego se hincha ligeramente para proporcionar taponamiento en el lugar de la hemorragia. Las fibras de ORC atrapan inicialmente líquido, proteínas sanguíneas, plaquetas y células formando un "pseudocoágulo" similar a un gel que actúa como barrera al flujo sanguíneo y, posteriormente, como matriz para la formación de un coágulo sólido de fibrina. La tela de ORC tiene una estructura matricial de punto suelto y se adapta rápidamente a su entorno inmediato y es más fácil de manejar que otros agentes absorbibles porque no se pega a los instrumentos quirúrgicos y su tamaño puede recortarse fácilmente. Esto permite al cirujano mantener la celulosa firmemente en su sitio hasta que cese toda hemorragia.

Uno de los agentes hemostáticos tópicos más usados es el hemostático absorbible SURGICEL® Original, fabricado de una Celulosa Regenerada Oxidada (ORC). El hemostático absorbible SURGICEL® se usa como complemento en procedimientos quirúrgicos para ayudar en el control de hemorragias capilares, venosas y arteriales pequeñas cuando la ligadura u otros métodos convencionales de control son poco prácticos o ineficaces. La familia de hemostáticos absorbibles SURGICEL® consiste en cuatro grupos principales de productos, y todos los apósitos hemostáticos están disponibles comercialmente de Johnson & Johnson Wound Management Worldwide, una división de Ethicon, Inc., Somerville, N.J., una empresa de Johnson & Johnson:

El hemostático SURGICEL® Original es una tela blanca con un tinte amarillo pálido y tiene un aroma tenue, como a caramelo. Es resistente y puede suturarse o cortarse sin deshilacharse.

El hemostático absorbible SURGICEL® NU-KNIT® es similar pero tiene un tejido más denso y, por tanto, una mayor resistencia a la tracción. Está especialmente recomendado para su uso en traumatología y cirugía de trasplantes, ya que puede envolverse o suturarse para controlar la hemorragia.

La forma de hemostático absorbible SURGICEL® FIBRILLAR™ del producto tiene una estructura en capas que permite al cirujano despegar y agarrar con fórceps cualquier cantidad de hemostático SURGICEL® FIBRILLAR™ necesaria para lograr la hemostasis en un punto de hemorragia concreto. La forma del hemostático® SURGICEL FIBRILLAR™ puede ser más conveniente que la forma tejida para zonas de hemorragia de difícil acceso o de forma irregular. Se recomienda especialmente su uso en cirugía ortopédica/espinal y neurológica.

La forma de hemostático absorbible SURGICEL® SNoW™ es una tela no tejida estructurada. El hemostático SURGICEL® SNoW™ puede ser más conveniente que otras formas de SURGICEL® para uso endoscópico debido a la tela no tejida estructurada. Es muy adaptable y se recomienda tanto en procedimientos abiertos como mínimamente invasivos.

Otros ejemplos de hemostáticos reabsorbibles comerciales que contienen celulosa oxidada incluyen el apósito quirúrgico de celulosa reabsorbible GelitaCel® de Gelita Medical BV, Amsterdam, Países Bajos. Los hemostáticos de celulosa oxidada disponibles comercialmente mencionados anteriormente son telas de punto o no tejidas que tienen una estructura porosa para proporcionar hemostasis.

El fibrinógeno y la trombina son proteínas críticas implicadas en la consecución de la hemostasis tras una lesión vascular y esenciales para la formación de coágulos sanguíneos. El fibrinógeno y la trombina pueden combinarse en forma de polvo o en una suspensión no acuosa, sin iniciar una reacción típica de coagulación, impidiendo por tanto la formación de un coágulo de fibrina hasta que las proteínas se hidraten en un medio acuoso u otro medio líquido en el que las proteínas sean solubles. Una mezcla de estas proteínas en forma de polvo tiene una variedad de aplicaciones biomédicas potenciales que incluyen la hemostasis tópica, la reparación de tejidos, la administración de fármacos, etc. Además, una mezcla de estas proteínas puede cargarse en un soporte o sustrato, u otro dispositivo médico, en forma de polvo para formar un producto que puede usarse, por ejemplo, como dispositivo hemostático.

Los sellantes de fibrina, también conocidos como pegamento de fibrina, se han usado en la práctica clínica durante décadas. A menudo, los sellantes de fibrina consisten en dos componentes líquidos, un componente que comprende fibrinógeno y otro que comprende trombina, que se almacenan congelados debido a su inestabilidad inherente. A veces, los productos sellantes de fibrina consisten en dos componentes liofilizados, que requieren reconstitución inmediatamente antes de su uso y administración mediante una jeringuilla unida u otro dispositivo de administración de doble cilindro. Las formulaciones liofilizadas típicamente son estables, pero el componente fibrinógeno es difícil de reconstituir. Muchas formulaciones hemostáticas actualmente disponibles en el mercado o en desarrollo utilizan fibrinógeno liofilizado, frecuentemente en combinación con trombina liofilizada, con formulaciones hemostáticas aplicadas en forma de polvo seco, pasta semilíquida, formulación líquida, u opcionalmente dispuestas sobre un andamiaje de soporte como un andamiaje de tela absorbible.

Para proporcionar apósitos con propiedades hemostáticas y de sellado y adherencia de tejidos mejoradas, se han combinado agentes terapéutico, incluyendo, entre otros, trombina, fibrina y fibrinógeno, con portadores o sustratos de apósitos, incluyendo portadores a base de gelatina, portadores a base de polisacáridos, portadores a base de ácido glicólico o ácido láctico y una matriz de colágeno. Los ejemplos de tales apósitos se divulgan en la Patente de Estados Unidos N° 6,762,336 Hemostatic sandwich bandage, la Patente de Estados Unidos N° 6,733,774 P Carrier with solid fibrinogen and solid thrombin, la publicación de PCT WO2004/064878 Hemostatic Materials, y la Patente Europea EP1809343B1 A reinforced absorbable multilayered hemostatic wound dressing and method of making.

La Patente Europea N° EP1493451B1 "Haemostatic devices and compositions comprising oxidized cellulose particles and a polysaccharide binder" divulga que es problemático utilizar la celulosa oxidada carboxílica como portadora de especies sensibles a los ácidos, como la trombina y el fibrinógeno, así como otros agentes biológicos y farmacéuticos sensibles a los ácidos. Además, divulga una composición hemostática, que consiste en: partículas de celulosa oxidada biocompatibles que tienen un tamaño de partícula nominal designado medio de 0,035 a 4,35mm; un componente aglutinante de polisacárido biocompatible, poroso y soluble en agua distinto del quitosano; y opcionalmente, un agente hemostático seleccionado entre trombina, fibrinógeno o fibrina, en donde la proporción en peso de dicho polisacárido soluble en agua con respecto a dichas partículas de celulosa oxidada es de 3:97 a 15:85, y en donde dicha composición es una esponja de espuma porosa que puede obtenerse mediante un proceso que comprende los pasos de: proporcionar una solución de polímero que tenga dicho componente aglutinante de polisacárido disuelto en un solvente adecuado, proporcionar dichas partículas de celulosa oxidada biocompatibles, poner en contacto dicha solución de polímero con dichas partículas de celulosa oxidada en condiciones efectivas para dispersar dichas partículas de celulosa oxidada de forma sustancialmente homogénea en dicha solución de polímero para formar una dispersión sustancialmente homogénea, someter dicha solución de polímero que tiene dichas partículas dispersas en condiciones efectivas para solidificar dicha dispersión sustancialmente homogénea; y eliminar dicho solvente de la dispersión solidificada, formando de este modo dicha composición hemostática.

La Publicación de Patente Rusa RU2235539C1 "Method for preparing powder-like material for cessation bleeding" divulga un método para preparar material en polvo con efecto hemostático que implica mezclar celulosa parcialmente oxidada como base en un medio acuoso con trombina y fibrinógeno. A las sustancias indicadas se añaden adicionalmente gelatina, ácido épsilon-aminocaproico y lisozima, y como celulosa parcialmente oxidada se utiliza celulosa dialdehídica como tela, es decir, el contenido de grupos aldehídos es del 4 al 6% en la siguiente proporción de componentes: celulosa dialdehídica, 1 g; fibrinógeno, 18-22 mg; gelatina, 27-33 mg; ácido épsilonaminocaproico, 45-55 mg; lisozima, 9,5-10,5 mg; trombina, 350 U; agua, 6,5 ml. El método implica preparar una solución que contenga fibrinógeno, ácido épsilon-aminocaproico en la mitad del contenido total de gelatina y la mitad del contenido total de agua, y por separado preparar una solución de trombina, lisozima y la cantidad restante de gelatina en la cantidad restante de agua. En las soluciones preparadas, la mitad de la cantidad de celulosa dialdehído se mantiene durante 3-4 horas, los productos semiacabados se exprimen, se secan al aire y se someten a la molienda combinada.

La publicación de patente de Estados Unidos N° 20060159733A1 "Method of providing hemostasis to a wound" divulga que la naturaleza ácida del sustrato de celulosa oxidada carboxílica podría desnaturalizar e inactivar rápidamente las proteínas sensibles a los ácidos, incluyendo la trombina o el fibrinógeno, al entrar en contacto. Gran parte de la actividad enzimática de la trombina y del Factor XIII podría perderse durante la reacción. Esto dificulta el uso de la celulosa oxidada carboxílica como portadora de trombina, fibrinógeno, fibrina u otros agentes biológicos y farmacéuticos sensibles a los ácidos. Además, divulga que se conocen apósitos hemostáticos para heridas que contienen celulosa oxidada carboxílica neutralizada y agentes hemostáticos basados en proteínas, como trombina, fibrinógeno y fibrina. Los materiales celulósicos oxidados carboxílicos neutralizados se preparan tratando la celulosa oxidada carboxílica ácida con una solución de agua o alcohol de una sal básica de un ácido orgánico débil para elevar el pH del material celulósico a entre 5 y 8 neutralizando los grupos de ácido de la celulosa antes de añadir la trombina para hacerla compatible con la trombina. Se divulgó un parche hemostático de trombina, en donde se añadía trombina a una celulosa regenerada oxidada carboxílica ácida u otro material en presencia de un agente neutralizador de ácidos, ácido épsilon aminocaproico (EACA), para elevar el pH del material a una región donde la trombina pudiera actuar como hemostático. Aunque esta celulosa carboxílica oxidada neutralizada puede ser compatible con la trombina, ya no es bactericida, porque la actividad antimicrobiana de la celulosa oxidada se debe a su naturaleza ácida.

La Patente de Estados Unidos N° 7094428B2 "Hemostatic compositions, devices and methods" divulga una composición hemostática que comprende por lo menos un ion metálico procoagulante, como plata (I) o mercurio (II), y por lo menos un biopolímero procoagulante, como colágeno, trombina, protrombina, fibrina, fibrinógeno, heparinasa, Factor VIIa, Factor VIII, Factor IXa, Factor Xa, Factor XII, Factor de von Willebrand, una selectina, un veneno procoagulante, un inhibidor del activador del plasminógeno, una glicoproteína IIb-IIIa, una proteasa o plasma. Puede proporcionarse la composición en forma de pasta, masa, pegamento, líquido, polvo liofilizado o espuma, para su aplicación a una herida. Una composición hemostática que comprende por lo menos un biopolímero procoagulante en combinación con un ion metálico procoagulante, dicho ion metálico procoagulante presente en dicha composición a un nivel inferior a su concentración hemostática efectiva en ausencia de dicho biopolímero procoagulante, en donde la composición hemostática se selecciona del grupo que consiste en plata (I) y colágeno, plata (I) y trombina, plata (I) y protrombina, plata (I) y fibrina, plata (I) y fibrinógeno, plata (I) y heparinasa, plata (I) y Factor VIIa, plata (I) y Factor VIII, plata (I) y Factor IXa, plata (I) y Factor Xa, plata (I) y Factor XII, plata (I) y Factor de von Willebrand, plata (I) y una selectina, plata (I) y un veneno procoagulante, plata (I) y un inhibidor del activador del plasminógeno, plata (I) y glicoproteína IIb-IIIa, plata (I) y una proteasa, plata (I) y plasma, mercurio (II) y colágeno, mercurio (II) y trombina, mercurio (II) y protrombina, mercurio (II) y fibrina, mercurio (II) y fibrinógeno, mercurio (II) y heparinasa, mercurio (II) y Factor VIIa, mercurio (II) y Factor VIII, mercurio (II) y Factor IXa, mercurio (II) y Factor Xa, mercurio (II) y Factor XII, mercurio (II) y Factor de von Willebrand, mercurio (II) y una selectina, mercurio (II) y un veneno procoagulante, mercurio (II) y un inhibidor del activador del plasminógeno, mercurio (II) y glicoproteína IIb-IIIa, mercurio (II) y una proteasa, y mercurio (II) y plasma. La composición hemostática de la invención también puede incluir un portador como, pero no limitado a, polietilenglicol, ácido hialurónico, celulosa, celulosa oxidada, metilcelulosa o albúmina. Estos pueden usarse para proporcionar una matriz, una viscosidad adecuada, capacidad de administración, adherencia u otras propiedades que se desee impartir a las composiciones para facilitar su aplicación en una herida.

La Patente de Estados Unidos N° 6162241A "Hemostatic tissue sealants" divulga un sellante tisular hemostático, que comprende: un sellante tisular de hidrogel biocompatible y biodegradable que comprende grupos reticulables que tienen incorporada en el mismo una cantidad eficaz de un agente hemostático para detener el flujo de sangre del tejido en un período de tiempo médicamente aceptable.

La Patente de Estados Unidos N° 6177126B1 " "Process for the production of a material for sealing and healing wounds" divulga un proceso para la producción de un material para sellar y/o curar heridas, que comprende: i) llenar una composición líquida en un recipiente que tiene dos o más placas, por lo menos dos de dichas placas estando perforadas con uno o más orificios de paso y por lo menos una de dichas placas perforadas siendo móvil con respecto a otra de dichas placas perforadas, ii) transportar un portador por debajo del recipiente en una dirección de transporte, y iii) mover continuamente las placas perforadas una con respecto a la otra para permitir que la composición líquida gotee sobre el portador que está siendo transportado por debajo del recipiente, por lo que la composición líquida se aplica sustancialmente de manera uniforme sobre el portador.

La publicación de PCT N° WO2014135689A2 "Powder formulation" divulga una composición en polvo estéril adecuada para uso médico que comprende trombina y fibrinógeno, en donde el polvo de trombina se produce a partir de una materia prima líquida, en donde la materia prima comprende una solución o una suspensión de trombina, preferiblemente una solución, en donde el polvo se produce por eliminación de líquido mediante un proceso seleccionado entre secado aséptico por pulverización o secado aséptico en lecho fluido, y en donde el polvo resultante de la eliminación de líquido de la materia prima presenta por lo menos el 80% de la potencia o actividad de trombina de la materia prima líquida, y en donde el fibrinógeno en polvo se produce mediante la eliminación de líquido de una materia prima, en donde la materia prima comprende una solución o una suspensión de fibrinógeno, preferiblemente una solución, mediante secado aséptico por pulverización o secado aséptico en lecho fluido, y en donde dicha composición se envasa como un producto farmacéutico final estéril para uso médico.

La Publicación de Patente de Estados Unidos N° 2010/0119563 "SOLID FIBRINOGEN PREPARATION" divulga una preparación de fibrinógeno sólido que comprende fibrinógeno y que comprende además: (a) albúmina; (b) un surfactante no iónico; (c) un aminoácido básico o una sal del mismo; y (d) por lo menos dos aminoácidos o una sal de los mismos seleccionados del grupo que consiste en un aminoácido ácido, una sal del mismo, un aminoácido neutro y una sal del mismo.

Documentos de patente adicionales relacionados con la formulación de formulaciones hemostáticas incluyen:

US9717821B2 Formulations for wound therapy

US7052713B2 Carrier with solid fibrinogen and solid thrombin

US9724213B2 Nanocrystalline cellulose materials and methods for their preparation

US8840877B2 Polysaccharide-protein conjugates reversibly coupled via imine bonds

US6200587B1 Tissue sealant containing fibrinogen, thrombin and carboxymethyl cellulose or salt thereof US8846105B2 Dry powder fibrin sealant

US20160015792A1 POWDER FORMULATION COMPRISING THROMBIN AND FIBRINOGEN US6596318B2 Fibrin tissue adhesive formulation and process for its preparation

KR1624625B1 Improved absorbable hemostatic material and method for preparing the same

KR1588633B1 Composition and kit for forming gel for hemostasis and adhesion inhibition |

KR804434B1 Fibrin-based glue granulate and corresponding production method | Fibrin-based glue granulate and a method of manufacturing the same.

US9795773B2 Medicament unit dose cartridge and delivery device

US7351422B2 Hemostatic soluble cellulose fibers containing coagulating protein for treating wound and process for producing the same

CN101716383A Preparation method of bleeding stopping and adherence preventing material | Preparation method for stanching and anti-blocking material

US5484913A Calcium-modified oxidized cellulose hemostat

EP918548B1 USE OF OXIDIZED CELLULOSE AND COMPLEXES THEREOF FOR CHRONIC WOUND HEALING

Se necesitan formas y materiales hemostáticos mejorados que faciliten la aplicación y el inicio rápido de la hemostasis.

SUMARIO DE LA INVENCIÓN

El alcance de la protección se define en las reivindicaciones.

La presente invención está dirigida a un método de formación de un material hemostático en polvo que comprende agregados que comprenden fibrinógeno, trombina y fibras celulósicas regeneradas oxidadas de acuerdo con la reivindicación 1. El material hemostático formado por la invención incluye además el aditivo Lisina o Tris. En algunos aspectos, el material hemostático formado por la invención incluye además aditivos, como cloruro de calcio. La presente invención está dirigida a un método de elaboración de los materiales hemostáticos descritos anteriormente que comprende los pasos de formar una suspensión de una mezcla que comprende partículas de fibrinógeno, trombina y fibras de ORC en un solvente no acuoso, en donde dicha suspensión comprende además Lisina o Tris; agitar y cizallar dicha suspensión en un reactor de mezcla de alto cizallamiento; añadir agua para permitir que las partículas se aglomeren; permitir que el solvente no acuoso se evapore; secar y tamizar la composición; y formar por tanto la composición hemostática en polvo.

En otro aspecto más, la presente invención está dirigida a composiciones hemostáticas para su uso en el tratamiento de una herida mediante la aplicación de los materiales hemostáticos descritos anteriormente sobre y/o en la herida de un paciente. En otro aspecto más, la presente invención está dirigida a composiciones hemostáticas para su uso en el tratamiento de una fuga de aire en un pulmón aplicando los materiales hemostáticos descritos anteriormente sobre y/o en el pulmón.

Se proporciona a título informativo un método alternativo de formación de una composición hemostática en polvo no recitado por la redacción de las reivindicaciones, pero considerado útil para comprender la invención, en donde el método consiste en formar una suspensión de una mezcla que comprende partículas de fibrinógeno, trombina, fibras de ORC en un solvente no acuoso de bajo punto de ebullición en donde la suspensión comprende además Lisina o Tris; pulverizar la suspensión a través de una boquilla sobre un sustrato, permitiendo que el solvente no acuoso se evapore; separar la composición del sustrato y tamizar la composición; y formar, por tanto, la composición hemostática en polvo. El solvente no acuoso de bajo punto de ebullición puede ser hidrofluoroéter C<4>F<9>OCH<3>como, pero no limitado a, HFE7100. La suspensión incluye además Lisina o Tris. La suspensión puede incluir además cloruro de calcio. La suspensión líquida puede contener un polvo sellante de fibrina que comprende aproximadamente un 90% de fibrinógeno, aproximadamente un 8% de trombina y aproximadamente un 2,5% de cloruro cálcico en peso. La composición hemostática en polvo suspendida puede tener una proporción de polvo sellante de fibrina a ORC de aproximadamente 1:1a aproximadamente 10:1 en peso. La composición hemostática en polvo suspendida puede estar en forma de un polvo que tiene un tamaño de partícula medido predominantemente en el intervalo de aproximadamente 250 a aproximadamente 850 micras, más preferentemente de aproximadamente 355 a aproximadamente 850 micras. La composición hemostática en polvo resultante comprende, por lo menos parcialmente, fibras ORC aglomeradas integradas, fibrinógeno, trombina y lisina o Tris, y puede comprender además cloruro cálcico.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS CIFRAS

La Figura 1 es un diagrama esquemático de un proceso de fabricación ilustrativo proporcionado a título informativo. La Figura 2 es una fotografía que muestra viales de prueba que evalúan la gelificación de composiciones ilustrativas y comparativas en agua.

La Figura 3 es una fotografía que muestra viales de prueba que evalúan la coagulación de la sangre en contacto con composiciones ilustrativas y comparativas.

La Figura 4 es una fotografía que muestra viales de prueba que evalúan la coagulación de la sangre en contacto con composiciones ilustrativas y comparativas.

La Figura 5 es una fotografía compuesta que muestra los resultados de las pruebas de solubilización de las composiciones comparativas.

La Figura 6 es una fotografía compuesta que muestra los resultados de las pruebas de solubilización de composiciones ilustrativas.

La Figura 7 es una fotografía compuesta que muestra los resultados de las pruebas de solubilización de las composiciones comparativas.

La Figura 8 es una fotografía compuesta que muestra los resultados de las pruebas de solubilización de composiciones ilustrativas con distintos tamaños de partícula.

La Figura 9 muestra imágenes SEM de una de las composiciones ilustrativas.

La Figura 10 es un diagrama esquemático de un proceso ilustrativo de fabricación de HSM proporcionado a título informativo.

La Figura 11 es un diagrama esquemático del reactor de fabricación de HSM.

La Figura 12 muestra el polvo hemostático inventivo preparado por el método HSM del Ejemplo 9.

La Figura 13 muestra un gráfico de la resistencia del gel en kPa.

La Figura 14 muestra los resultados de las pruebas en modelo animal de los polvos hemostáticos elaborados usando diferentes solventes/aglutinantes.

La Figura 15 muestra un diagrama de bloques esquemático del proceso de fabricación de HSM para la preparación de polvos hemostáticos usando acetona y el polímero RG502.

La Figura 16 muestra un diagrama de bloques esquemático del proceso de fabricación de HSM para la preparación de polvos hemostáticos usando acetona y agua.

La Figura 17 muestra un diagrama de bloques esquemático del proceso de fabricación de HSM para la preparación de polvos hemostáticos usando etanol al 96%.

La Figura 18 muestra un diagrama de bloques esquemático del proceso de fabricación de HSM para la preparación de polvos hemostáticos usando HFE/agua.

La Figura 19 muestra las propiedades de densidad de los polvos hemostáticos obtenidos con distintos solventes/aglutinantes.

La Figura 20 muestra las propiedades de resistencia de gel de los polvos hemostáticos obtenidos con distintos solventes/aglutinantes.

La Figura 21 muestra el modelo de fuga pulmonar con una incisión de 1,2 cm de longitud.

La Figura 22 muestra el polvo hemostático inventivo formando un gel (contado durante 2 min) en el pulmón desinflado.

La Figura 23 muestra el polvo hemostático inventivo formando un gel que sella la fuga pulmonar a 30 cm H<2>O. La Figura 24 muestra el modelo de fuga pulmonar con una incisión de 1 cm de longitud.

La Figura 25 muestra el polvo hemostático inventivo formando un gel que sella la fuga pulmonar a 30 cm H<2>O. La Figura 26 muestra el polvo hemostático inventivo formando un gel parcialmente delaminado a 40 cm H<2>O de presión (la flecha indica la zona de delaminación).

DESCRIPCIÓN DETALLADA

Los inventores han descubierto un método para formar materiales hemostáticos, los materiales hemostáticos proporcionados tienen propiedades sorprendentes y altamente beneficiosas para la hemostasis.

El material hemostático formado de acuerdo con el método de la presente invención está hecho de polvo de celulosa regenerada oxidada, polvo de fibrinógeno y polvo de trombina. El material hemostático formado de acuerdo con el método de la presente invención representa por lo menos parcialmente fibras de ORC integradas, fibrinógeno y trombina en forma de polvo.

En referencia a la Figura 1, se proporciona a título informativo un diagrama de bloques esquemático de un proceso ilustrativo de elaboración de material hemostático no contemplado en la redacción de las reivindicaciones, pero que se considera útil para comprender la invención, y que comprende los pasos de:

• Preparar polvos secos de fibrinógeno, trombina y ORC

• Suspender una mezcla de polvos de fibrinógeno, trombina y ORC en un solvente no acuoso capaz de evaporarse rápidamente en condiciones ambientales.

• Pulverizar la suspensión a través de una boquilla sobre un sustrato

• Dejar evaporar el solvente no acuoso y secar el material hemostático resultante.

• Retirar/separar el material hemostático del sustrato y tamizarlo, formando por tanto fibras de ORC, fibrinógeno y trombina, por lo menos parcialmente integradas, en forma de polvo.

En una realización, se añade Tris, o tampón de Tris(hidroximetil)aminometano en forma de polvo a la mezcla de fibrinógeno, trombina y ORC para ajustar el pH. Luego la composición mezclada se añade al HFE para formar una suspensión.

De acuerdo con un aspecto de la presente invención, la proporción de mezcla de fibrinógeno/trombina y polvo de ORC en el material hemostático preparado mediante el método inventivo es de aproximadamente 1:1 a aproximadamente 10:1 en peso.

De acuerdo con un aspecto de la presente invención, el material hemostático preparado mediante el método inventivo comprende partículas que tienen un tamaño de 250-850 micras.

De acuerdo con un aspecto de la presente invención, el material hemostático preparado mediante el método inventivo comprende fibras de ORC, fibrinógeno y trombina distribuidos de manera sustancialmente uniforme, por lo menos parcialmente integrados, en forma de polvo.

De acuerdo con un aspecto de la presente invención, el material hemostático preparado mediante el método inventivo tiene alta uniformidad, integración, rápida gelificación/coagulación y fuerte fuerza de adhesión.

La presente invención está dirigida a un método de formación de un material hemostático que comprende agregados que comprenden fibrinógeno, trombina y fibras celulósicas regeneradas oxidadas, en donde el material hemostático comprende además un tampón Tris y/o Lisina. En algunos aspectos, el material hemostático comprende además aditivos, como cloruro de calcio.

En otro aspecto, la presente invención está dirigida a un método de elaboración de los materiales hemostáticos descritos anteriormente suspendiendo una mezcla de fibrinógeno, trombina y polvos de ORC en un solvente no acuoso en un aparato de mezclado de alto cizallamiento (HSM) en donde la suspensión comprende además Lisina o Tris, y realizar un mezclado de alto cizallamiento y un mezclado y/o agitación regular, a la vez que se permite que el solvente no acuoso volátil se evapore a través de cualquier puerto o puertos adecuados como a través de los sellos de aire de las palas/impulsores de mezclado y/o a través de un tubo de vacío. Se introduce una pequeña cantidad de agua o solución acuosa en el reactor durante el mezclado para ayudar a la unión/agregación/aglutinación de partículas. El solvente no acuoso de bajo punto de ebullición puede ser un hidrofluoroéter C<4>F<9>OCH<3>, como el HFE7100, entre otros.

De acuerdo con una realización de la presente invención, un polvo agregado hemostático formado por el método inventivo comprende fibras finas o polvo de ORC, trombina, fibrinógeno, lisina (como agente tampón/ajustador del pH), sal de calcio.

De acuerdo con una realización de la presente invención, un proceso de elaboración de dicho producto hemostático en polvo comprende los pasos de mezclar los componentes individuales en forma de polvo con HFE, crear una suspensión en HFE (solvente volátil no acuoso) en un reactor de mezclado/alto cizallamiento, que tiene una pala de mezclado de baja velocidad y una pala de cizallamiento de alta velocidad. A medida que se realiza el mezclado, el HFE puede evaporarse a través de los sellos de aire de las palas de mezclado y/o del tubo de vacío. Se introduce una pequeña cantidad de agua en el reactor para ayudar a la unión/agregación/aglomeración de las partículas.

De acuerdo con una realización de la presente invención, un método de elaboración de polvo hemostático, que comprende los pasos de: formar una suspensión de polvo de ORC, trombina, fibrinógeno, lisina, sal de calcio en HFE (solvente volátil no acuoso), agitando la suspensión con pala de cizallamiento de alta velocidad (y opcionalmente mezclar continuamente los componentes simultáneamente con un mezclador de baja velocidad); añadir una pequeña cantidad de agua al reactor para ayudar a la unión/agregación/aglutinación de partículas; permitir que el<h>F<e>se evapore completamente del reactor; formando así el polvo hemostático.

Los ejemplos 1-8 y 12-14 son ilustrativos y comparativos.

EJEMPLO 1. PREPARACIÓN DE COMPOSICIONES HEMOSTÁTICAS

Los componentes individuales usados en el método inventivo de formación de composiciones hemostáticas se prepararon como se describe a continuación.

Fibrinógeno. Puede usarse cualquier método de preparación de fibrinógeno en polvo, incluyendo liofilización, secado por congelación, etc. En el presente ejemplo, el polvo de fibrinógeno se preparó mediante el método de secado por pulverización (fabricante del secador por pulverización: ProCepT, Modelo: 4M8-TriX). La solución de fibrinógeno es una formulación disponible comercialmente de Bioseal Biotech CO. LTD, ubicada en Guangzhou, China, y que comprende fibrinógeno, albúmina y otros reactivos necesarios en WFI. La solución de fibrinógeno se atomizó primero a través de una boquilla de pulverización en un flujo de aire caliente, y luego se secó instantáneamente. Los parámetros del secado por pulverización fueron los que se indican en la Tabla 1

Tabla 1

Trombina. Puede utilizarse cualquier método de preparación del polvo de trombina, incluyendo liofilización, secado por congelación, etc. En el presente ejemplo, el polvo de trombina se preparó mediante el método de secado por pulverización con una solución de formulación de trombina. La solución de trombina era la formulación comercialmente disponible en Bioseal Biotech CO. LTD, ubicada en Guangzhou, China, y que comprendía trombina, albúmina y otros reactivos necesarios en WFI. Los parámetros de secado por pulverización fueron los que se indican en la Tabla 2

T l 2

Luego, los polvos de trombina y fibrinógeno se mezclaron para preparar el compuesto mediante la proporción de 89,7% de fibrinógeno 7,8% de trombina y 2,5% de cloruro cálcico en peso, formando así el polvo sellante de fibrina.

La fuente de fibrinógeno y trombina fue el plasma sanguíneo porcino, que se fraccionó para obtener fibrinógeno y trombina, y fue suministrado por Bioseal Biotech CO. LTD, ubicada en Guangzhou, China

El polvo de ORC puede obtenerse procesando el tejido original Surgicel. Se hace referencia a la Solicitud de Patente Provisional de Estados Unidos N° 62/251773 de Yi-Lan Wang, presentada el 06 de noviembre de 2015, publicada como US2017128618 y titulada "Compacted Hemostatic Cellulosic Aggregates".

Brevemente, el polvo de ORC se obtuvo mediante el procesamiento del tejido original Surgicel en el siguiente proceso:

1) dividir y cortar la tela en trozos de aproximadamente 2" x 8",

2) moler las telas hasta obtener el tamaño de partícula de polvo (D50 inferior a 94 micras) usando métodos de molienda conocidos. Uno de los métodos usados en las preparaciones es el del molino de bolas: se colocan -100 gramos de tejido en un frasco de 500 ml de circonio, a continuación se colocan de 12 a 13 trozos de bolas de circonio de 20 mm (ágatas) en el mismo frasco, se tapa y se fija el frasco en un molino planetario de bolas Retsch (modelo PM100), se muele el tejido a 450 rpm durante 20 minutos, se transfieren los polvos molidos a un tamiz de 8" de diámetro y 300 - micras de abertura, se separan las ágatas y los polvos agitando ligeramente y recoger los polvos.

Las composiciones hemostáticas ilustrativas se prepararon de la siguiente manera usando métodos de copulverización. Se combinó 1 parte de fibra de ORC con 1 parte, o 2 partes, o 5 partes, o 10 partes de polvos de sellante de fibrina, en peso. Por tanto, a modo de ejemplo, se combinaron 10 g de polvo de ORC con 10 g, 20 g, 50 g, o 100 g de polvos mezclados de sellante de fibrina, para producir 20 g, 30 g, 50 g, o 100 g de mezcla.

Se añadió una pequeña cantidad de Tris para ajustar el pH a 7,0 para cada proporción respetada de ORC: sellante de fibrina. El pH se ajustó colocando el polvo sobre una superficie humectante y midiendo el pH resultante y evaluando la cantidad de Tris necesaria para obtener un pH neutro de 7. Luego se descartó la muestra. Luego, se añadió una cantidad proporcional correspondiente de polvo seco de Tris a la mezcla de polvo, antes de la copulverización.

La ORC no se neutraliza per se al añadir Tris en forma seca. La ORC se neutraliza cuando toda la formulación en polvo se humedece durante la aplicación y se disuelve el Tris. Se utilizó un solvente no acuoso de bajo punto de ebullición para elaborar una suspensión de los polvos de FS y ORC. Se usó hidrofluoroéter C4F90CH3, obtenido como HFE 7100, por ejemplo suministrado por 3M como Novec 7100 Engineered Fluid, que tiene un punto de ebullición de 61 DC. El solvente HFE7100 se añadió a las composiciones en polvo y se filtró a través de un tamiz de 150 μm. La suspensión uniformemente distribuida se creó agitando constantemente a 90 rpm/min en el depósito a 20±5° C de temperatura. Los componentes en suspensión se pulverizaron a través de una boquilla de 0,7 mm de diámetro. El tipo de boquilla usada fue B1/8VAU-316SS+SUV67-316SS fabricada por Spraying Systems Co. El flujo a través de la boquilla fue a un caudal de 130 ml/min, sobre una tela no tejida o un sustrato de acero inoxidable a 20±5° C de temperatura.

Tras pulverizar la suspensión, la mayor parte del solvente HFE 7100 se evaporaba. Los residuos de solvente HFE 7100 y la humedad ambiental absorbida en el polvo, si la había, podían evaporarse en un horno de secado al vacío durante 24h±5h a 20±5° C.

La composición hemostática resultante se retiró con una cuchara, se peló o se separó de otro modo del sustrato, y se pasó secuencialmente a través de tamices que tenían aberturas de 850 μm, 355 μm y 250 μm.

La Tabla 3 muestra los parámetros usados para la copulverización de las composiciones

Tabla 3. PARÁMETROS PARA LA COPULVERIZACIÓN DE LA COMPOSICIÓN

Como ejemplos comparativos, también se preparó una composición de mezcla de sellante de fibrina pura sin ORC ni Tris mediante el mismo método de pulverización HFE7100.

EJEMPLO 2. COMPARACIÓN DE GELIFICACIÓN DE COMPOSICIONES HEMOSTÁTICAS MEZCLADAS MECÁNICAMENTE FRENTE A MEZCLADAS POR PULVERIZACIÓN

La gelificación rápida y la formación de geles fuertes son importantes para los materiales hemostáticos.

La composición hemostática ilustrativa se preparó como se ha descrito anteriormente mediante el método de copulverización.

La composición comparativa mezclada mecánicamente se preparó agitando manualmente polvos secos, es decir, polvos de FS y ORC obtenidos como se ha descrito anteriormente, agitándolos manualmente en un recipiente hasta una composición mezclada uniformemente, sin realizar ninguna copulverización. Las composiciones incluían todas los mismos componentes, incluyendo Tris, con la diferencia de los métodos de mezclado.

Las proporciones de polvo de sellante de fibrina a ORC probadas fueron: sellante de fibrina (FS): ORC -1:1; 2:1; 5:1; 10:1 (en peso). Por tanto, para la proporción de 1:1 FS/ORC, se combina 1 parte de polvo sellante de fibrina (que comprende fibrinógeno, trombina, cloruro cálcico) con 1 parte de polvo ORC (en peso).

Luego la composición mezclada mecánicamente comparativa y la composición mezclada por pulverización ilustrativa se añadieron a 20 ml de agua en un vial de 50 ml en una cantidad de 200 mg en la parte superior de la superficie del agua. Después de 2 min de gelificación, se dio la vuelta al vial y se observó si se había formado una capa gelificada de composición, en cuyo caso se observó que el agua estaba sellada por la capa gelificada y se mantenía en el fondo del vial por la capa de gel formada.

En referencia ahora a la Figura 2, que muestra una imagen de los viales de prueba volteados al final de la prueba, con

• vial de prueba 1 que muestra composición comparativa mezclada mecánicamente proporción 1:1 FS/ORC • vial de prueba 2 que muestra composición comparativa mezclada mecánicamente proporción 2:1 FS/ORC • vial de prueba 3 que muestra composición comparativa mezclada mecánicamente proporción 5:1 FS/ORC • vial de prueba 4 que muestra composición comparativa mezclada mecánicamente proporción 10: 1 FS/ORC • vial de prueba 5 que muestra composición comparativa mezclada mecánicamente sin polvo ORC (sólo polvo sellante de fibrina)

• vial de prueba 6 que muestra composición hemostática mixta de pulverización ilustrativa proporción 1:1 FS/ORC

El análisis de los resultados mostrados en la Fig. 2 indica que en los viales de prueba la gelificación 1-5 fue insuficiente para mantener el líquido y éste es visible en la parte inferior del vial. En el vial de prueba 6, el líquido es visible en la parte superior del vial, es decir, el agua es retenida por la capa gelificada y se impide que se desplace a la parte inferior del vial por la fuerza gravitacional. Por tanto, para las composiciones mezcladas mecánicamente en todas las proporciones y para la composición sellante de fibrina sin ORC la gelificación fue insuficiente, mientras que la composición hemostática mezclada por pulverización ilustrativa preparada en proporción 1:1 mostró una gelificación sorprendentemente fuerte.

EJEMPLO 3. PRUEBAS IN VITRO DE COAGULACIÓN SANGUÍNEA

La coagulación in vitro de la sangre por varias composiciones ilustrativas y comparativas se probó de la siguiente manera.

Se añadieron 20 ml de sangre total citratada (porcina) a un vial de 50 ml. Se añadieron 200 mg de las composiciones hemostáticas sometidas a pruebas sobre la superficie de la sangre. Tras 2 minutos de coagulación, se dio la vuelta al vial y se observó la coagulación de la sangre. En caso de coagulación completa, la sangre coagulada permanece en la parte superior del vial volteado. En caso de coagulación incompleta, la sangre permanece fluida y drena hacia la parte inferior del vial debido a la fuerza gravitatoria.

Los excipientes comparativos añadidos al polvo de sellante de fibrina en lugar del ORC fueron trehalosa, PEG4000, manitol y alfa-celulosa (a-celulosa). Todos los excipientes se adquirieron de Aladdin Industrial Corporation. Las mezclas de polvo de sellante de fibrina con trehalosa, PEG 4000, Manitol o Alfa-celulosa se prepararon mediante el método de pulverización descrito anteriormente en proporción 10:1, es decir, con 10 partes de polvo de sellante de fibrina (FS) combinadas con 1 parte del excipiente respectivo. La cantidad total de composiciones ilustrativas y comparativas añadidas a 20 ml de sangre fue de 200 mg.

En referencia ahora a la Figura 3, que muestra una imagen de los viales de prueba volteados al final de la prueba, con

• vial de prueba 8 que muestra la composición hemostática ilustrativa con una proporción de FS/ORC de 2:1 • vial de prueba 9 que muestra la composición hemostática ilustrativa con una proporción de FS/ORC de 5:1 • vial de prueba 10 con la composición hemostática ilustrativa con una proporción de FS/ORC de 1:1

• vial de prueba 11 que muestra la composición comparativa que comprende sólo polvo sellante de fibrina sin ORC hecho por copulverización

• vial de prueba 12 que muestra la composición comparativa que comprende polvo sellante de fibrina con adición de a-celulosa en proporción de Fs / a-celulosa de 10:1 en peso

• vial de prueba 13 que muestra la composición comparativa que comprende polvo sellante de fibrina con adición de trehalosa en proporción de FS/trehalosa de 10:1 en peso

• vial de prueba 14 que muestra la composición comparativa que comprende polvo sellante de fibrina con adición de PEG4000 en proporción de FS/ PEG4000 de 10:1 en peso

• vial de prueba 15 que muestra la composición comparativa que comprende polvo sellante de fibrina con adición de manitol en proporción de FS/manitol de 10:1 en peso

El análisis de los resultados presentados en la Fig.3 indica que en los viales de prueba 8-10 que contienen las composiciones hemostáticas ilustrativas la sangre se ha coagulado, con el coágulo de sangre visible en la parte superior del vial volteado con la sangre coagulada impedida de moverse a la parte inferior del vial bajo la fuerza gravitatoria. Por tanto, las composiciones hemostáticas ilustrativas preparadas en las proporciones 2:1; 5:1; 1:1 de FS/ORC mostraron una coagulación sorprendentemente fuerte de la sangre. Además, la muestra comparativa que contiene a-celulosa en el vial 12 muestra coagulación de la sangre. Los ejemplos comparativos en el vial 11 (sólo polvo sellante de fibrina sin ORC); vial 13 (polvo sellante de fibrina con adición de trehalosa); vial 14 (polvo sellante de fibrina con adición de PEG4000); vial 15 (polvo sellante de fibrina con adición de manitol) no muestran coagulación o coagulación insuficiente, por lo que la coagulación fue insuficiente para retener el fluido y el fluido es visible en la parte inferior del vial, es decir, la sangre permanece fluida y drena hacia la parte inferior del vial debido a la fuerza gravitatoria. Las composiciones hemostáticas ilustrativas preparadas en las proporciones 2:1; 5:1; 1:1 de FS/ORC mostraron una coagulación de la sangre sorprendentemente fuerte.

Usando los mismos métodos de prueba, se realizaron pruebas adicionales de coagulación sanguínea in vitro para la composición hemostática ilustrativa y las composiciones comparativas mezcladas mecánicamente preparadas agitando manualmente los polvos secos en un recipiente, así como para el polvo sellante de fibrina únicamente sin ORC.

En referencia ahora a la Figura 4, que muestra una imagen de los viales de prueba volteados al final de la prueba, con

• vial de ensayo 1 que muestra una composición comparativa mezclada mecánicamente a una proporción 1:1 de FS/ORC

• vial de ensayo 2 que muestra una composición comparativa mezclada mecánicamente a una proporción 2:1 de FS/ORC

• vial de ensayo 3 que muestra una composición comparativa mezclada mecánicamente a una proporción 5:1 de FS/ORC

• vial de ensayo 4 que muestra una composición comparativa mezclada mecánicamente a una proporción 10:1 de FS/ORC

• vial de prueba 5 que muestra la composición comparativa (200 mg) que comprende agregados de polvo de ORC compactados preparados como se describe en la Solicitud de Patente Provisional de Estados Unidos N° 62/251773 de Yi-Lan Wang, presentada el 06 de noviembre de 2015 y titulada "Compacted Hemostatic Cellulosic Aggregates"

• vial de prueba 6 que muestra la composición comparativa que comprende sólo polvo sellante de fibrina sin ORC preparado por el método de copulverización

• vial de prueba 7 que muestra una composición hemostática mixta de pulverización ilustrativa a una proporción 1:1 de FS/ORC

• vial de prueba 8 que muestra una composición hemostática mixta de pulverización ilustrativa a una proporción 2:1 de FS/ORC

• vial de prueba 9 que muestra una composición hemostática mixta de pulverización ilustrativa a una proporción 5:1 de FS/ORC

• vial de prueba 10 que muestra una composición hemostática mixta de pulverización ilustrativa a una proporción 10:1 de FS/ORC

El análisis de los resultados presentados en la Fig.4 indica que los ejemplos comparativos en los viales de prueba 1-6, que contienen composiciones mezcladas mecánicamente en todas las proporciones; sólo polvo ORC; y polvo de sellante de fibrina sin ORC, no muestran coagulación o coagulación insuficiente, por lo que la coagulación fue insuficiente para retener el fluido y el fluido es visible en la parte inferior del vial, es decir, la sangre permanece fluida y drena hacia la parte inferior del vial debido a la fuerza gravitatoria. Por el contrario, y al igual que los resultados presentados en la Fig. 3, en los viales de prueba 7-10, que contienen composiciones hemostáticas mezcladas por pulverización ilustrativas, la sangre se ha coagulado, el coágulo de sangre siendo visible en la parte superior del vial dado la vuelta, impidiéndose que la sangre coagulada se desplace hacia la parte inferior del vial debido a la fuerza gravitatoria. Por tanto, las composiciones hemostáticas mezcladas por pulverización ilustrativas preparadas en proporciones 1:1 -10:1 de FS/o Rc mostraron una coagulación sorprendentemente fuerte de la sangre.

EJEMPLO 4. SOLUBILIZACIÓN DE LA COMPOSICIÓN

La rápida solubilización o solubilidad de una composición hemostática en polvo cuando entra en contacto con fluidos corporales puede ayudar a establecer una hemostasis rápida e indica una rápida interacción con los fluidos. La prueba visual de solubilización se realizó de la siguiente manera: se aplicó uniformemente 1 gramo de la composición hemostática en polvo probada a un área de un sustrato humectante que comprendía una tela no tejida colocada encima de un material esponjoso que se colocó en una bandeja con agua pura. Después de aplicar la composición hemostática en polvo probada a la superficie del sustrato humectante, se realizó una observación visual de la solubilidad de la composición y se registraron los resultados en el momento cero (inmediatamente después de aplicar la composición, 1 min y 2 min después de aplicar la composición probada).

En referencia ahora a la Figura 5, se muestra una imagen compuesta que representa los resultados de las pruebas de la composición comparativa mezclada mecánicamente preparada agitando manualmente polvos secos en un recipiente. Las imágenes se tomaron a 0, 1 y 2 min para las proporciones de FS/ORC -1:1; 2:1; 5:1; 10:1, así como para el polvo de FS sin ORC. Los resultados indican una solubilización deficiente incluso en el punto de tiempo de 2 minutos para los ejemplos comparativos.

En referencia ahora a la Figura 6, se muestra una imagen compuesta que representa los resultados de las pruebas de la composición hemostática ilustrativa preparada por el método de pulverización. Las imágenes se tomaron a 0, 1 y 2 min para las proporciones de FS/ORC - 1:1; 2:1; 5:1; 10:1, así como para el polvo de FS comparativo sin ORC. Los resultados indican una buena solubilización incluso en el punto de tiempo de 1 minuto y una muy buena solubilización en el punto de tiempo de 2 minutos, observándose una rápida solubilización completa para las proporciones de 1:1 y 2:1 ya en el 1 minuto y una buena solubilización observada para todas las proporciones a los 2 minutos. El FS puro muestra una solubilización pobree incluso a los 2 minutos en el ejemplo comparativo.

En referencia ahora a la Figura 7, se muestra una imagen compuesta que representa los resultados de las pruebas de las composiciones comparativas que comprenden FS con excipientes añadidos al polvo de sellante de fibrina en lugar de ORC, así como para el polvo comparativo de FS sin ORC. Los excipientes fueron trehalosa, PEG4000, manitol. Las mezclas de polvo de sellante de fibrina con trehalosa, PEG 4000, manitol, se prepararon mediante el método de pulverización descrito anteriormente en una proporción de 10:1 de FS/excipiente. Se muestran las imágenes tomadas a los 0, 1 y 2 min. Los resultados indican una solubilización pobre incluso en el punto de tiempo de 2 min para los ejemplos comparativos.

La solubilidad de la composición hemostática ilustrativa preparada mediante el método de pulverización se vio afectada por la concentración del componente de ORC. Incluso a bajas concentraciones de ORC, la solubilidad de la composición ha mejorado.

EJEMPLO 5. EFECTOS DEL TAMAÑO DE LAS PARTÍCULAS

Se evaluaron los efectos del tamaño de las partículas sobre el rendimiento de las composiciones hemostáticas mezcladas por pulverización ilustrativas. El tamaño de las partículas se controló haciendo pasar secuencialmente la composición por tamices con aberturas de 850 μm, 355 μm y 250 μm. Los polvos ilustrativos de la composición mezclada por pulverización se separaron en grupos de tamaño predominantemente por encima de 850 μm, predominantemente 355-850 μm, predominantemente 250-355 μm y predominantemente por debajo de 250 μm. Se comprobó la solubilidad de las composiciones hemostáticas mezcladas por pulverización ilustrativas hechas con una proporción de FS/ORC de 5:1.

En referencia ahora a la Figura 8, se muestra una imagen compuesta que representa los resultados de las pruebas de la composición hemostática ilustrativa preparada mediante el método de pulverización. Las imágenes se tomaron a 0, 1 y 2 min para diferentes intervalos de tamaño de polvo. Los resultados indican una solubilización particularmente excelente en el punto de 2 min para composiciones predominantemente de 355-850 μm y una buena solubilización para composiciones predominantemente de 250-355 μm, con una solubilización menos eficaz para composiciones predominantemente por encima de 850 μm, y predominantemente por debajo de 250 μm. Por tanto, el intervalo de predominantemente 250-850 μm muestra una buena solubilización y es el intervalo preferido para el tamaño de las partículas, prefiriéndose particularmente partículas predominantemente en el intervalo de 355-850 μm. El polvo resultante es un aglomerado de fibrinógeno, trombina y o Rc , y tiene muchas partículas con un tamaño mayor que el tamaño de partículas de los materiales de partida.

EJEMPLO 6. EFECTOS DE LA ADICIÓN DE TRIS

Se realizó un ensayo de pelado de las composiciones ilustrativas mezcladas por pulverización con Tris añadido y de las composiciones comparativas sin Tris añadido. Las adiciones de Tris se titularon para alcanzar un pH=7. Se molió el polvo de Tris y se pasó por un tamiz de 150 |jm. Se recogió el polvo de menos de 150 jm y se añadió la cantidad predeterminada a la mezcla seca para ajustar el pH de la composición, antes de la copulverización.

La prueba de pelado se realizó de la siguiente manera. Se aplicaron 0,5 g de la composición ilustrativa al tejido del corion, cubierto por una matriz bicapa compuesta que se presionó sobre el polvo durante 3 minutos, la fuerza de separación muestra-tejido se midió con una máquina de prueba de tracción Instron y se registró como fuerza por unidad de anchura (N/m). La matriz bicapa compuesta comprendía una capa de tela no tejida absorbible sintética de poli(glicolida-co-lactida) (PGL, 90/10 mol/mol) punzonada en una tela de punto de celulosa regenerada oxidada carboxílica (ORC), tal como se describe en la Patente de Estados Unidos N° 7.666.803 de D. Shetty y otros, titulada "Reinforced absorbable multilayered fabric for use in medical devices".

En referencia ahora a la Tabla NN, se muestran las fuerzas de adhesión de las formulaciones ilustrativas en función de la adición de ORC. Mientras que la adhesión es menor a mayor contenido de ORC incluso 1:1 de polvo FS: La formulación de fibra ORC 1:1 tiene una fuerza de pelado apreciable.

En referencia ahora a la Tabla 4, se muestran las fuerzas de adhesión de formulaciones ilustrativas con Tris y formulaciones comparativas sin Tris para diferentes proporciones de FS/ORC junto con los valores de pH correspondientes. Se añadió Tris en los porcentajes en peso indicados para ajustar el pH a 7,0. Aunque todas las composiciones han mostrado altas fuerzas de pelado, la presencia de Tris resultó claramente en mayores fuerzas de pelado para las mismas proporciones de FS/ORC, con algunas mostrando una fuerza de pelado 2-4 veces mayor.

Tabla 4. Fuerzas de adhesión de las formulaciones inventivas con sin Tris

El análisis de los datos indica mejoras sorprendentes en la fuerza adhesiva o de pelado para la composición ilustrativa con pH neutro logrado mediante la adición de Tris. Aunque la fuerza es algo inferior

EJEMPLO 7. CARACTERIZACIÓN DE PARTÍCULAS

En referencia ahora a la Figura 9, que muestra imágenes ampliadas de SEM de la composición ilustrativa 5:1 de FS/ORC, es evidente que los componentes de la composición están por lo menos parcialmente integrados, es decir, adheridos o recubiertos entre sí, y no se encuentran en una simple mezcla mecánica.

El examen de la composición ilustrativa en forma de polvo muestra que los componentes estaban bien mezclados y que los productos biológicos estaban estrechamente adheridos a las fibras ORC.

EJEMPLO 8. PRUEBA DE HEMOSTASIS

Se realizó una prueba in vivo de la eficacia hemostática en un modelo de abrasión hepática usando las composiciones hemostáticas mezcladas por pulverización ilustrativas de la siguiente manera. Se creó un modelo de abrasión hepática creando un área de exudación de 3 cm x 3 cm en la superficie del hígado porcino. Se aplicaron 0,5 g de la composición hemostática mezclada por pulverización ilustrativa con una proporción FS/ORC de 5:1 para cubrir la zona de exudación sin aplicar ningún taponamiento. La hemostasis se logró en menos de 2 min.

Se realizó una prueba in vivo de la eficacia hemostática en un modelo de resección hepática usando las composiciones hemostáticas ilustrativas. Se creó un modelo de resección hepática usando la maniobra de Pringle, que es una maniobra quirúrgica usada en algunas operaciones abdominales en la que se aplica un hemostático atraumático grande. Primero se aplicó la maniobra de Pringle para controlar la hemorragia, luego se realizó un corte de 5 cm de largo y 5 cm de ancho en el tejido hepático a lo largo del borde del hígado para exponer el conducto biliar. Inmediatamente después, se aplicó el polvo de composición hemostática ilustrativo para cubrir el plano de transección, pulverizando solución salina simultáneamente hasta detener la hemorragia. A continuación se soltó la pinza de Pringle para examinar los resultados. Se observó que se conseguía la hemostasis y se evitaba la fuga biliar tras soltar la pinza de Pringle. La hemostasis se logró en 2 min.

EJEMPLO 9. MÉTODO DE FABRICACIÓN EN REACTOR DE ALTO CIZALLAMIENTO

De acuerdo con una realización de la presente invención, un proceso de elaboración de producto hemostático en polvo comprende los pasos de mezclar los componentes individuales en forma de polvo con HFE, creando una suspensión en HFE (solvente volátil no acuoso) en un reactor de mezclado/cizallamiento de alta velocidad, que tiene una pala de mezclado de baja velocidad y una pala de cizallamiento de alta velocidad. A medida que se realiza el mezclado, el HFE puede evaporarse a través de los sellos de aire de las palas de mezclado y/o del tubo de vacío. Se introduce una pequeña cantidad de agua en el reactor para ayudar a la unión/agregación/aglomeración de las partículas. La cantidad de agua es suficiente para que una pequeña parte de los productos biológicos reaccionen y formen partículas, pero no es suficiente para que todos los productos biológicos, es decir, la trombina y el fibrinógeno, reaccionen completamente, de tal manera que todo el fibrinógeno se convierta en fibrina. La porción de fibrinógeno convertida en fibrina es de aproximadamente el 0,1% a aproximadamente el 50%, más preferiblemente del 1% al 25%, incluso más preferiblemente del 2% al 10%. Siempre hay una cantidad de fibrinógeno coagulable contenida en los polvos hemostáticos preparados de acuerdo con la presente invención, disponible para la reacción cuando el polvo se usa sobre o en una herida.

De acuerdo con una realización de la presente invención, un método de elaboración de polvo hemostático, que comprende los pasos de: Formar una suspensión de polvo de ORC, trombina, fibrinógeno, lisina, sal de calcio en HFE (solvente volátil no acuoso), agitar la suspensión con la pala de cizallamiento de alta velocidad (y opcionalmente mezclando continuamente los componentes simultáneamente con un mezclador de baja velocidad); Añadir una pequeña cantidad de agua al reactor para ayudar a la unión/agregación/aglutinación de partículas; permitir que el HFE se evapore completamente del reactor; Formando por tanto el polvo hemostático.

En referencia a la Figura 10, se proporciona a título informativo un diagrama de bloques esquemático de un proceso ilustrativo de elaboración del material hemostático, que comprende los pasos de:

• Preparar mezcla de polvos secos de fibrinógeno, trombina, ORC, opcionalmente cloruro de calcio, y opcionalmente compuesto tampón como Tris y/o lisina;

• Suspender la mezcla de polvos secos en un solvente no acuoso capaz de evaporarse rápidamente en condiciones ambientales en un reactor mezclador de alto cizallamiento.

• Agitar la suspensión con una pala de cizallamiento de alta velocidad y, opcionalmente, mezclar continuamente los componentes simultáneamente con una pela mezcladora de baja velocidad.

• Introducir una pequeña cantidad de agua en el reactor para ayudar en la aglutinación/agregación/aglomeración de las partículas.

• Dejar que el solvente no acuoso se evapore del reactor secando el material hemostático resultante.

• Retirar el material hemostático resultante del reactor y, opcionalmente, tamizarlo, formando por tanto fibras de ORC, fibrinógeno y trombina, por lo menos parcialmente integrados, en forma de polvo agregado.

Se añade lisina o Tris en forma de polvo a la mezcla de fibrinógeno, trombina y ORC para ajustar el pH.

De acuerdo con un aspecto de la presente invención, el material hemostático comprende fibras de ORC, fibrinógeno y trombina distribuidos de manera sustancialmente uniforme, por lo menos parcialmente integrados, en forma de polvo.

La presente invención, el material hemostático inventivo tiene alta uniformidad, integración, rápida gelificación/coagulación, y fuerte fuerza de adhesión.

En referencia ahora a la Figura 11, se muestra una representación esquemática de un reactor de mezclado de alto cizallamiento (HSM), con un recipiente o cuenco 5, un impulsor 1 para mezclar y suspender las materias primas (mezclador de baja velocidad); una pala de cizallamiento de alta velocidad o pala picadora 2; una boquilla pulverizadora 3 para las adiciones de agua (aglutinante); un respiradero 4 para eliminar el fluido volátil de HFE; vías 6 para la entrada de aire o gas opcional para purgar el fluido volátil de h Fe a través de los sellos de las palas de mezclado y/o cizallamiento. Alternativamente, puede proporcionarse una entrada de aire dedicada (no mostrada). Alternativamente, puede conectarse un vacío al respiradero 4.

Los reactores HSM están disponibles comercialmente. El reactor usado en los presentes ejemplos fue el HSM modelo Mini-CG, disponible de Chuangzhi Electrical and Mechanical Co., Ltd. (China). Ltd. (China).

EJEMPLO 10. PRUEBAS COMPARATIVAS DE POLVOS HEMOSTÁTICOS ELABORADOS MEDIANTE LOS MÉTODOS DE PULVERIZACIÓN DEL EJEMPLO 1 Y LOS MÉTODOS DE HSM DEL EJEMPLO 9

Los inventores compararon las partículas del método HSM (Ejemplo 9) frente a las partículas elaboradas mediante pulverización a través de una boquilla de suspensión de HFE (Ejemplo 1). Los resultados de las pruebas mostraron que los polvos hemostáticos elaborados mediante el método HSM tenían propiedades fisicoquímicas y rendimiento funcional comparables, como resistencia a la tracción y resistencia a la adhesión, y tenían una eficacia hemostática comparable en el estudio con animales a los polvos elaborados mediante el método de pulverización del Ejemplo 1.

La comparación de los polvos del Ejemplo 1 formulados con tampón Tris para los polvos formulados en el Ejemplo 9 (método HSM) usando Lisina como compuesto tampón no mostró diferencias sustanciales en el rendimiento del polvo hemostático.

Ventajosamente, el método HSM de preparación de granulaciones de polvo hemostático tiene la ventaja de proporcionar un equipo HSM que es un sistema sustancialmente sellado, de tal manera que el polvo puede granularse en un entorno sellado, y no se pierde material durante el proceso. La carga biológica podría minimizarse en comparación con el método de pulverización del Ejemplo 1.

En referencia a la Figura 12 se muestra un polvo hemostático preparado mediante el método HSM del ejemplo 9.

EJEMPLO 11. PREPARACIÓN DE COMPOSICIONES HEMOSTÁTICAS USANDO EL MÉTODO HSM: COMPARACIÓN DE VARIOS SOLVENTES/AGLUTINANTES

Los inventores usaron el método HSM (Ejemplo 9) para fabricar polvos hemostáticos usando varios solventes/aglutinantes diferentes. En referencia a la Figura 13, se muestra un gráfico de la fuerza de gel en kPa, con el gel formado por los polvos hemostáticos de la presente invención, mediante los cuales dichos polvos se elaboraron usando uno de cuatro solventes y/o aglutinantes diferentes. La fuerza del gel se muestra para varios puntos de prueba diferentes. El primer segmento del gráfico muestra la fuerza de gel para la acetona como solvente de suspensión volátil y el polímero RG502 (D, L-lactida-co-glicolida) como aglutinante. El segundo segmento muestra la fuerza de gel para la combinación etanol/agua como solvente volátil y aglutinante. El tercer segmento muestra la fuerza de gel para la combinación acetona/agua como solvente volátil y aglutinante. El cuarto segmento muestra la fuerza de gel de la combinación HFE/agua como solvente volátil y aglutinante. Como puede verse en el gráfico de la Figura 13, la combinación HFE/agua muestra la mayor fuerz de gel.

En referencia ahora a la Fig. 14, se presentan los resultados de las pruebas en modelos animales de los polvos hemostáticos elaborados usando diferentes solventes/aglutinantes (Pruebas de hemostasis en modelo de superficie hepática dermatómica). Como puede observarse en la Figura 14, las combinaciones de acetona/RG502; etanol/agua; acetona/agua muestran hemorragias a los 3 minutos de la aplicación. Por el contrario, la combinación HFE/agua inventiva muestra el cese de la hemorragia después de sólo 1 minuto.

EJEMPLO 12. PREPARACIÓN DE COMPOSICIONES HEMOSTÁTICAS USANDO EL MÉTODO HSM Y EL POLÍMERO RG502/ACETONA

Se prepararon 200 g de polvo de materia prima que incluía polvo de fibrinógeno/polvo de trombina/polvo de ORC/polvo de cloruro cálcico y Tris, de acuerdo con la formulación mostrada en la Tabla 5. La solución de aglutinante/suspensión se preparó a partir de 74,7 g de acetona y 8,3 g de polímero RG502(D, L-lactida-co-glicolida), con el polímero totalmente disuelto y mezclado exhaustivamente.

T l . F rm l i n r l E m l 12

En la Figura 16 se muestra el diagrama de bloques esquemático del proceso de fabricación. Todo el material seco se transfirió al cuenco del HSM, se premezcló durante 5 minutos usando la velocidad del impulsor de la pala mezcladora a 75 rpm y la velocidad del picador de la pala de alto cizallamiento a 1.000 rpm. Luego, se pulverizó la solución de aglutinante/suspensión (RG502/acetona) sobre los materiales secos mediante una bomba peristáltica y una boquilla de pulverización, con el caudal de alimentación a 60 g/min. La solución de polímero/acetona empieza a aglutinar las partículas de materia prima para formar polvo.

Luego, se aumentó la velocidad del impulsor a 150 rpm y la del picador a 3000 rpm, continuando el proceso de postgranulación durante 5 minutos.

Después de la granulación, se usó un tamiz (el tamaño de los poros es de 1,7 mm) para tamizar los materiales y recoger el polvo resultante bajo el tamiz. El polvo se transfirió a una caja de secado al vacío y se secó durante 1 hora. Luego, se usaron dos tamices (con un tamaño de poro de 106 y 425 |jm) para tamizar el producto. La fracción de polvo final se recogió entre los dos tamices.

EJEMPLO 13. PREPARACIÓN DE COMPOSICIONES HEMOSTÁTICAS USANDO EL MÉTODO HSM Y AGUNACETONA

Se prepararon 200 g de polvo de materia prima que incluía polvo de Fibrinógeno/polvo de trombina/polvo de ORC/polvo de cloruro cálcico y Tris de acuerdo con la formulación mostrada en la Tabla 6. La solución de aglutinante/suspensión se preparó a partir de 68 g de acetona y 17 g de agua purificada, mezclados exhaustivamente.

T l . F rm l i n r l E m l 1

En la Figura 18 se muestra el diagrama de bloques esquemático del proceso de fabricación. Todo el material seco se transfirió al cuenco de HSM, se premezcló durante 5 minutos usando una velocidad de impulsor de la pala de mezclado de 75 rpm y una velocidad de picadora de pala de alto cizallamiento de 1000 rpm. Luego, se pulverizó la solución de aglutinante/suspensión (agua/acetona) sobre los materiales secos mediante una bomba peristáltica y una boquilla de pulverización, con un caudal de alimentación de 60 g/min. La solución empieza a aglutinar las partículas de materia prima para formar polvo.

Luego, se aumentó la velocidad del impulsor a 120 rpm y la velocidad del picador a 3000 rpm, continuando el proceso de postgranulación durante 3 minutos.

Después de la granulación, se usó un tamiz (con un tamaño de poro de 1,7 mm) para tamizar los materiales y recoger el polvo resultante bajo el tamiz. El polvo se transfirió a una caja de secado al vacío y se secó durante 1 hora al vacío. Luego, se utilizaron dos tamices (con un tamaño de poro de 106 y 425 jm ) para tamizar el producto. La fracción de polvo final se recogió entre los dos tamices

EJEMPLO 14, PREPARACIÓN DE COMPOSICIONES HEMOSTÁTICAS USANDO EL MÉTODO HSM Y ETANOL AL 96%

Se prepararon 150 g de polvo de materia prima que incluía polvo de fibrinógeno/polvo de trombina/polvo de ORC/polvo de cloruro cálcico y Tris, de acuerdo con la formulación indicada en la Tabla 7. La solución de aglutinante/suspensión se preparó a partir de 60 g de etanol al 96%.

T l 7. F rm l i n r l E m l 14

En la Figura 20 se muestra el diagrama de bloques esquemático del proceso de fabricación. Todo el material seco se transfirió al cuenco del HSM, se premezcló durante 3 minutos usando una velocidad de impulsor de la pala de mezclado de 75 rpm y una velocidad de picador de pala de alto cizallamiento de 1000 rpm. A continuación, se pulverizó la solución de aglutinante/suspensión (etanol al 96%) sobre los materiales secos mediante una bomba peristáltica y una boquilla pulverizadora, con un caudal de alimentación de 4 g/min. La solución empieza a aglutinar las partículas de materia prima para formar polvo.

A continuación, se aumentó la velocidad del impulsor a 120 rpm y la velocidad del picador se aumentó a 1500 rpm, continuando el proceso de postgranulación durante 3 minutos.

Después de la granulación, se usó un tamiz (con un tamaño de poro de 710 jm ) para tamizar los materiales y recoger el polvo resultante bajo el tamiz. El polvo se transfirió al horno de bandejas para su secado y se secó a 45° C durante 0,5 h.

Luego, se usaron dos tamices (tamaño de poro 100 y 315 |jm) para tamizar el producto. La fracción de polvo final se recogió entre los dos tamices

EJEMPLO 15. PREPARACIÓN DE COMPOSICIONES HEMOSTÁTICAS USANDO EL MÉTODO HSM Y HFE/AGUA Se prepararon 100 g de polvo de materia prima que incluía polvo de fibrinógeno/polvo de trombina/polvo de ORC/polvo de cloruro cálcico y Tris de acuerdo con la formulación mostrada en la Tabla 8. Se utilizaron 500 g de HFE7100.

T l . F rm l i n r l E m l 1

En la Figura 22 se muestra el diagrama de bloques esquemático del proceso de fabricación. Todo el material seco se transfirió al cuenco de HSM y se añadieron 500 g de HFE7100. La composición se premezcló durante 3 minutos para formar una suspensión, usando una velocidad de impulsor de pala de mezclado de 200 rpm. Luego, se pulverizaron 9 g de agua en la suspensión mediante una bomba peristáltica y una boquilla pulverizadora, con un caudal de alimentación de 4,5 g/min. La solución empieza a aglutinar las partículas de materia prima para formar polvo.

Luego, se ajustó la velocidad del impulsor a 100-300 rpm y la velocidad del picador se estableció a 150-1000 rpm, continuando el proceso de granulación durante 10 minutos. La presión de sellado del impulsor y del picador se ajustó a 0,02 MPa para soplar el HFE y secar la composición.

Después de la granulación, se usó un tamiz (con un tamaño de poro de 710 jm ) para tamizar los materiales y recoger el polvo resultante bajo el tamiz. El polvo se transfirió a una caja de vacío para su secado y se secó durante 12-24 horas a un vacío de 0-10 Pa.

Luego, se usaron dos tamices (tamaño de poro 106 y 355 jm ) para tamizar el producto. La fracción de polvo final se recogió entre los dos tamices.

EJEMPLO 16. COMPARACIÓN DE LAS FORMULACIONES HEMOSTÁTICAS EN POLVO OBTENIDAS EN LOS EJEMPLOS 12, 13, 14, 15

Se comparó el rendimiento de los polvos hemostáticos obtenidos como se describe en los Ejemplos 12, 13, 14 y 15. El contenido de agua se probó mediante el método de Karl Fischer; la potencia de la trombina se probó basándose en el tiempo de coagulación; la proteína coagulable se probó cuantificando el fibrinógeno; el tamaño de las partículas se probó mediante un analizador de tamaño de partículas por láser; la densidad se midió como densidad aparente; la fuerza del gel se midió mediante una prueba de resistencia a la tracción. Los resultados de las pruebas se muestran en la Tabla 9 y en las Figuras 19, 20.

T l . Pr i l lv h m i ni n v ri lv n l in n

Ventajosamente, las propiedades volátiles del HFE aumentan potencialmente la porosidad del producto en polvo hemostático final, lo que llevará a una disminución de la densidad del producto final, y acelera el tiempo de disolución o redispersión. La densidad de los polvos del Ejemplo 15 es menor, mientras que la fuerza del gel formado es mayor en comparación con otros métodos. El rendimiento hemostático también fue mejor, como se muestra en la Figura 14.

EJEMPLO 17. PRUEBAS DEL POLVO HEMOSTÁTICO INVENTIVO EN MODELO DE SELLADO PULMONAR Se realizaron dos estudios para probar la función de sellado de los polvos hemostáticos de la presente invención en un modelo de fuga pulmonar. Ambos estudios mostraron que a una presión de 30 cm de H2O, el presente polvo formaba un gel que se adhería firmemente al tejido pulmonar y sellaba muy bien la fuga. Cuando la presión era de 40 cm de H2O, el gel empezaba a delaminarse, pero aún podía sellar la fuga.

La Figura 21 muestra el modelo de fuga pulmonar con una incisión de 1,2 cm de longitud;

La Figura 22 muestra el polvo hemostático inventivo formando un gel (contado durante 2 min) en el pulmón desinflado;

La Figura 23 muestra el polvo hemostático inventivo formando un gel que sella la fuga pulmonar a 30 cm H2O;

La Figura 24 muestra el modelo de fuga pulmonar con una incisión de 1 cm de longitud;

La Figura 25 muestra el polvo hemostático inventivo formando un gel que sella la fuga pulmonar a 30 cm H2O;

La Figura 26 muestra el polvo hemostático inventivo formando un gel parcialmente delaminado a 40 cm H2O de presión (la flecha indica la zona de delaminación).

Ventajosamente, el polvo hemostático inventivo ha demostrado ser capaz de sellar fugas pulmonares.

Claims

REIVINDICACIONES

1. Un método para formar una composición hemostática en polvo, que comprende los pasos de:

a) formar una suspensión de una mezcla que comprende partículas de fibrinógeno, trombina, fibras de ORC en un solvente no acuoso de bajo punto de ebullición, en donde dicha suspensión comprende además Lisina o Tris; b) agitar y cizallar dicha suspensión en un reactor de mezclado de alto cizallamiento

c) añadir agua para que las partículas se aglomeren;

d) dejar evaporar el solvente no acuoso;

e) secar y tamizar la composición; y

formar por tanto la composición hemostática en polvo.

2. El método de la reivindicación 1, en donde dicho solvente no acuoso de bajo punto de ebullición comprende hidrofluoroéter C<4>F<9>OCH<3>.

3. El método de la reivindicación 1 o 2, en donde dicha suspensión comprende además cloruro cálcico.

4. El método de cualquiera de las reivindicaciones 1-3, en donde dicha agua se añade en una cantidad que evita la coagulación completa del fibrinógeno.

5. El método de cualquiera de las reivindicaciones 1-4, en donde dicha agua se añade en una cantidad que resulta en menos del 50% de conversión de fibrinógeno en fibrina.

6. La composición hemostática formada mediante el método de cualquiera de las reivindicaciones 1-5 para su uso en el tratamiento de una herida aplicando la composición hemostática sobre y/o dentro de la herida.

7. La composición hemostática formada mediante el método de cualquiera de las reivindicaciones 1-5 para su uso en el tratamiento de una fuga de aire en un pulmón aplicando la composición hemostática sobre y/o dentro del pulmón.