ES2227542T3

ES2227542T3 - Parche hemostatico.

Info

Publication number: ES2227542T3
Application number: ES95901740T
Authority: ES
Inventors: Thaddeus P. Pruss; James A. Will
Original assignee: Clarion Pharmaceuticals Inc
Current assignee: Clarion Pharmaceuticals Inc
Priority date: 1993-11-03
Filing date: 1994-11-03
Publication date: 2005-04-01
Anticipated expiration: 2014-11-03
Also published as: DE69433939T2; WO1995012371A1; DE69433939D1; EP0726749A1; EP0726749A4; EP0726749B1; AU1086795A; CA2175203A1; US5645849A; JPH09504719A; ATE273035T1; US5643596A

Abstract

SE PRESENTA UN PARCHE HEMOSTATICO QUE ES VENTAJOSAMENTE SEGURO Y BARATO QUE COMPRENDE UNA MATRIZ BIODEGRADABLE TAL COMO UNA ESPONJA DE GELATINA ABSORBIBLE, Y UNA CANTIDAD EFECTIVA DE ACIDO AMINOCAPROICO EPSILON PARA INHIBIR LA FIBRINOLISIS. EL ACIDO AMINOCAPROICO EPSILON ES UN AGENTE HEMOSTATICO QUE INHIBE LA FIBRINOLISIS, ACELERA LA ACTIVIDAD DE LA TROMBINA Y POSEE PROPIEDADES ANTIBACTERIANAS. EL PARCHE QUE CONTIENE EACA Y CLORURO DE CALCIO ES EFECTIVO PARA HACER DESCENDER EL SANGRADO DE ORGANOS PARENQUIMALES, ASI COMO PARA USO TOPICO, PARTICULARMENTE EN FORMA DE VENDAJE. EL PARCHE ADEMAS PUEDE CONTENER TROMBINA, EGD Y SULFATO DE PROTAMINA.

Description

Parche hemostático.

Antecedentes de la invención

Una hemorragia de un vaso sanguíneo, tejido corporal, órgano o hueso puede resultar en una pérdida de sangre que lleva a un shock hipovolémico y a la muerte. En los hemofílicos y en los pacientes que reciben medicación anticoagulante, tal como la que a menudo se prescribe después de la operación en cirugía cardíaca, el problema de pérdida rápida de sangre es incluso más agudo.

Se han hecho intentos para encontrar un procedimiento más rápido, eficaz y barato para frenar la pérdida de sangre, incluyendo pastas que contienen factores de incremento de coagulación. Una de dichas sustancias que incrementa la coagulación utilizada para ayudar al cese del sangrado o "hemostasia" es fibrinógeno humano, más comúnmente utilizado como "cola de fibrina".

La cola de fibrina se compone de una mezcla de fibrinógeno humano y trombina bovina. Se comercializa como un equipo que contiene viales separados de soluciones de fibrinógeno y de trombina. Estas soluciones se mezclan juntas y se aplican a la herida de diversas maneras, que incluyen una pasta, un pulverizador o sobre un parche.

La cola de fibrina, sin embargo, es una terapia inconsistente e ineficaz para la hemostasia. La mezcla, empapado, y recubrimiento de un parche con cola de fibrina requiere procedimientos que consumen tiempo y son engorrosos. Cada una de las etapas de preparación introduce errores potenciales y de este modo su eficacia varía según la experiencia del personal operario de habitación. Además, durante la preparación de tal solución, ocurre adicionalmente hemorragia y las soluciones se arrastran mediante un sangrado intenso. A pesar del progreso realizado en composiciones de fibrinógeno y técnicas quirúrgicas, estas dificultades para conseguir hemostasia subrayan la necesidad del desarrollo de un producto adecuado.

Una mejora sobre la cola de fibrina, comercializada en Europa, consiste en un parche de colágeno biodegradable sobre el que se impregna la trombina bovina, aprotinina y fibrinógeno humano (el parche "TAF"). Un ejemplo de parche "TAF" es el parche TachoComb® comercializado en Europa por Hafslund Nycomed Pharma, Alemania. El parche contiene, asimismo, cloruro de calcio para incrementar la coagulación. Para su utilización, se extrae el parche del envase, se sumerge en la solución salina y se aplica al órgano que sangra con una ligera presión durante por lo menos cinco minutos. Cuando cesa el sangrado, el cirujano deja el parche en el lugar y cierra la cavidad.

Una gran desventaja para la utilización de la cola de fibrina y del parche TAF es que ambos contienen fibrinógeno humano, una proteína purificada de la sangre humana. A causa del elevado riesgo de contaminación de VIH y hepatitis vírica, la Food and Drug Administration revocó la utilización de fibrinógeno humano en Estados Unidos en 1978. Además de los aspectos de seguridad, el fibrinógeno humano purificado a partir del plasma humano es muy caro.

Un parche TAF requiere asimismo refrigeración para estabilizar los agentes incrementadores de coagulación que contiene el parche. Este requisito prohíbe ciertas aplicaciones de campo del parche, donde no se dispone de instalaciones de refrigeración. Otro problema que los cirujanos citan con un parche TAF es su inflexibilidad, es decir, el parche no se amolda fácilmente a la forma de la superficie del cuerpo sobre la que se aplica.

Una hemorragia de un órgano parenquimal, tal como el bazo, hígado, pulmón o páncreas, que puede resultar de un trauma o de una cirugía, es particularmente difícil de tratar. Los órganos parenquimales son difíciles de ligar porque el tejido se desgarra, pulveriza o se quiebra fácilmente. Como resultado, los cirujanos recurren a menudo a la utilización del electrocauterio, que puede llevar a una destrucción adicional de los tejidos del paciente.

De este modo, se desea un parche hemostático eficaz que resulte seguro ante la contaminación vírica mortal e incluso pare el sangrado en las hemorragias problemáticas de los órganos parenquimales. Adicionalmente se desea un parche que sea barato, fácil de utilizar y que se amolde fácilmente a los contornos del cuerpo. Asimismo existe la necesidad de un parche que resista temperaturas elevadas sin requerir refrigeración y que retenga la eficacia hemostática.

Sumario de la invención

La presente invención proporciona la utilización de una composición que comprende ácido épsilon aminocaproico en la fabricación de un parche hemostático, siendo dicho ácido épsilon aminocaproico capaz de promover la activación acelerada de trombina y de este modo acelerar la formación de coágulo en la interfase entre la superficie de la herida y el parche hemostático. La presente invención proporciona la utilización de una composición en la fabricación de un parche hemostático, siendo dicha composición eficaz para aumentar el pH en el lugar de aplicación del parche, a un pH comprendido entre 7,0 y 9,0 p.ej., 7,62 y 8,02 inclusive, acelerando de este modo la activación de trombina y acelerando de este modo la formación de coágulo en la interfase entre la superficie de la herida y el parche hemostático. Además, la presente invención proporciona la utilización de una matriz biodegradable, libre de fibrinógeno, estable al almacenamiento, estéril y seca, que contiene un agente hemostático, cuyo agente hemostático comprende una cantidad de trombina, opcionalmente trombina bovina, eficaz para promover una hemostasia acelerada y una cantidad de ácido épsilon aminocaproico efectiva para inhibir la fibrinólisis en la fabricación de un parche de medicamento que posee un nivel acelerado de activación de trombina. Los parches fabricados según la presente invención no requieren como ingrediente ninguna proteína humana exógena, tal como fibrinógeno, evitando de ese modo la introducción de virus contaminantes inseguros. El presente parche hemostático es barato, fácil de utilizar, térmicamente estable, antibacteriano, y asimismo puede proporcionarse en forma de vendaje para uso tópico.

Breve descripción de los dibujos

La Figura 1 presenta un experimento de control que muestra la activación de trombina a 37ºC y a un pH fisiológico.

La Figura 2A y la Figura 2B demuestra los efectos del pH en la activación de trombina a 37ºC.

La Figura 3A y la Figura 3B muestra cada una la inhibición mediante EACA del crecimiento de Staph. aureus en presencia de diversas concentraciones de EACA.

La Figura 4A y la Figura 4B muestra cada una la inhibición mediante EACA del crecimiento de E. coli en presencia de diversas concentraciones de EACA.

La Figura 5 muestra un parche TachoComb® ("T"), dos parches Hemarrest™, y un parche de espuma de gelatina "B" ciego, que se comparan en el Ejemplo 3.

La Figura 6 muestra fotográficamente un estudio de una lesión de hígado en la que el parche TachoComb® (en el medio) se compara con dos parches GT (Ca++)E fabricados según la presente invención.

La Figura 7 muestra una fotografía del mismo hígado mostrado en la Figura 6 habiendo sacado los parches de las lesiones.

La Figura 8 muestra fotográficamente un parche Hemarrest™ fabricado según la presente invención, que contiene 100 mg/cm^{2} de ácido épsilon aminocaproico, aplicado a un riñón.

La Figura 9 muestra fotográficamente el polo opuesto del mismo riñón de la Figura 8, habiendo aplicado un parche TachoComb®.

La Figura 10 muestra fotográficamente una comparación entre los parches GE y GTE fabricados según la presente invención.

La Figura 11 muestra fotográficamente una comparación entre matrices de alginato de calcio/sodio; colágeno y espuma de gelatina. Se muestran los parches CVAT(Ca++)EF, "Cal-Alg"; CVCT(Ca++)EF, "colágeno"; y GT(CA++)EFP, "espuma de gelatina" fabricados según la presente invención.

La Figura 12A muestra fotográficamente un grupo de control de parches sin utilizar GT(Ca++)EF, CT(Ca++)EF y GT(Ca++)EFP fabricados según la presente invención, mientras la Figura 12B muestra estos parches aplicados al bazo.

La Figura 13A muestra una vista lateral del vendaje, que incluye un parche fabricado según la presente invención, mientras la Figura 13B muestra una vista elevada del vendaje.

Descripción detallada de las formas de realización preferidas

La presente invención proporciona la fabricación de un parche hemostático que comprende un elemento estructural conformado que es una matriz biodegradable, tal como esponja de gelatina absorbible de alginato de calcio, a la que se le aplica un agente hemostático que contiene el ácido épsilon aminocaproico, "EACA". EACA es un inhibidor de la degradación de coágulo. En el cuerpo, la formación de coágulo y la rotura de coágulo son procedimientos que compiten. EACA inhibe la producción de plasmina, una enzima que degrada los coágulos. La plasmina degrada los coágulos mediante la solubilización de la fibrina, un componente importante de los coágulos, en un procedimiento denominado fibrinólisis. Mediante la inhibición de la formación de la plasmina que rompe los coágulos, EACA inhibe la fibrinólisis y dirige las condiciones de reacción en el parche/interfase biológica a favor de la formación del coágulo. Un parche hemostático según la presente invención comprende de este modo una cantidad de EACA efectiva para inhibir la fibrinólisis.

En una forma de realización preferida, se proporciona la fabricación de un parche hemostático conteniendo EACA que comprende una matriz flexible, lisa, que es biodegradable y absorbible. Adicionalmente, la matriz presenta un espesor no comprimido de aproximadamente 4 a 10 mm, o un espesor comprimido de aproximadamente 2 a 10 mm, ventajosamente de 2 a 5 mm, y una longitud aproximadamente de 1 a 2 a 20 cm, más preferentemente entre 4 y 10 cm. La matriz, por supuesto se puede cortar a una longitud deseada. Preferentemente, EACA se aplica solo sobre un lado de la matriz, la superficie de contacto con la herida, en cantidades comprendidas entre 10 y 100 mg/cm^{2}, más ventajosamente entre 60 y 70 mg/cm^{2}. Opcionalmente, se aplican a esa superficie uno o más aditivos, incluyendo una fuente de iones de calcio, péptido RGD, péptido RGDS, sulfato de protamina y regulador de pH. Adicionalmente, se aplican a la superficie de contacto con la herida aproximadamente entre 1 y 1000 IU/cm^{2}, ventajosamente entre 1 y 100 IU/cm^{2}, y más ventajosamente entre 1 y 4 IU/cm^{2}. Una cantidad preferida aplicada en este contexto es 1,25 IU/cm^{2} de trombina.

Mediante la aplicación de agente(s) hemostático y aditivo(s) según se ha definido en la presente memoria en un único lado de un parche liso, es decir, la superficie de contacto con la herida, el parche es mucho menos susceptible de formar adhesiones no deseadas entre superficies de tejidos. Dichas adhesiones resultan particularmente problemáticas con los parches hemostáticos diseñados para la utilización interna/quirúrgica. Las adhesiones anormales resultan cuando el tejido normal, no herido, de los alrededores próximos a la herida se pone en contacto con el parche cubriendo la superficie herida, y a continuación une de forma estable o "cura" la herida anormalmente. Por ejemplo, un intestino ulceroso al cual se aplica un parche de competidor puede adherirse anormalmente a un segmento normal del intestino que lo recubre. Como resultado, disminuye la movilidad normal de ese segmento intestinal.

Las secciones histológicas de un parche preferido, tal como el parche "Hemarrest™" según se ha definido en la presente memoria, mostraron que cuando se dejó durante un periodo de tiempo suficiente in situ como para permitir hemostasia, ventajosamente no se formaron adhesiones entre el tejido normal, no herido y el parche. Se contempla que otros parches, tales como los listados en la Tabla 1 a continuación, evitarían, asimismo, lesiones.

El evitar las adhesiones anormales demostradas por un parche que contiene EACA es una característica importante, porque, sorprendentemente, se ha descubierto que EACA funciona como un agente hemostático en un parche de manera que se aproxima a la eficacia del fibrinógeno, un factor de coagulación. El fibrinógeno, en solución, se convierte en fibrina en presencia de trombina, y es un ingrediente activo hallado en otros parches hemostáticos. Sin embargo EACA, está desprovisto de los peligros que acompañan la utilización de fibrinógeno.

Además, según la presente invención, se ha determinado, sorprendentemente que EACA en la matriz de un parche proporciona un medio alcalino que acelera la activación de la trombina. En comparación con la activación de la trombina medida en ausencia de EACA (Figura 1, cajas cerradas), EACA incrementa en gran medida la actividad de la trombina (Figura 2). Este fenómeno es cierto si EACA actúa sobre la trombina presente en la sangre endógenamente o sobre la trombina que se suministra externamente en un parche. De este modo, se ha descubierto que un parche que comprende EACA ejerce una acción hemostática dual mediante (1) disminuyendo la degradación del coágulo mediante la inhibición de la formación de plasmina y (2) acelerando la formación del coágulo mediante la activación de la trombina.

Por lo tanto, se proporciona un procedimiento para acelerar la actividad de la trombina mediante el incremento del pH del medio local de un parche fabricado según la presente invención. Dicho parche comprende una matriz y un "compuesto incrementador de trombina" capaz de aumentar el pH en una solución en el medio local del parche suficiente para incrementar la activación de la trombina. Dicho compuesto puede aumentar el pH del medio local hasta un pH en el intervalo comprendido entre 7,0 y 9,0 inclusive, más ventajosamente entre pH 7,02 y 8,02 inclusive, e incluso más ventajosamente, entre pH 7,62 y 8,02, inclusive.

Se crea una solución alcalina en el medio local del parche fabricado según la presente invención, a medida que el compuesto incrementador de trombina se solubiliza tras el contacto con la sangre. A continuación, la trombina presente en la sangre, opcionalmente, trombina proporcionada como un ingrediente exógeno del parche se mezcla con la solución alcalina en el medio local del parche y se activa de ese modo.

Ventajosamente, el compuesto incrementador de trombina proporcionado en el parche para incrementar el pH es EACA. Un "regulador estéril" que es aceptable farmacéuticamente y capaz de regular el pH local en el parche a condiciones alcalinas, (es decir, entre un pH entre 7,0 y 9,0, más ventajosamente pH entre 7,02 y 8,02, e incluso más ventajosamente entre 7,62 y 8,02), es adecuado también como un compuesto incrementador de trombina. Por ejemplo, el regulador Tris es un regulador estéril incrementador de trombina eficaz, según se muestra en la Figura 2, línea de gráfico en forma de diamante abierto. Se contemplan otros reguladores estériles que regulan el pH en este intervalo, tales como el regulador Hepes, por ejemplo. En consecuencia, en un parche más ventajoso, EACA y el regulador Tris (u otro) se proporcionan a la vez en la matriz del parche.

Se ha descubierto otra ventaja sorprendente de EACA. EACA posee propiedades antibacterianas. Según la presente invención, se ha demostrado que EACA ejerce la inhibición dependiente de la dosis tanto del crecimiento de S. aureus como de E. coli (Figuras 3A, 3B y 4A, 4B respectivamente). Por lo tanto, EACA/parche de matriz fabricado según la presente invención es muy deseable por sus efectos antibacterianos sobre los microorganismos presentes en el lugar de la herida donde se aplica el parche.

Otra ventaja de EACA es que no contiene péptidos ajenos al animal de origen. Por ejemplo, en algunos humanos un agente hemostático fibrinógeno no humano provocará una respuesta inmune o una reacción alérgica similar. De este modo, un parche fabricado según la presente invención puede contener como agente hemostático único EACA dispersado dentro de una matriz o aplicado a una superficie de una matriz en una cantidad efectiva para inhibir la fibrinólisis y estimular de este modo la formación de coágulo. Una "matriz" biodegradable según se refiere en la presente memoria, y según se utiliza en la fabricación del parche hemostático según cualquiera de las formas de realización de la presente invención, se selecciona de entre, pero no se limita a, el grupo constituido por una esponja de gelatina absorbible, alginato de calcio, alginato de calcio/sodio, colágeno, y celulosa oxidasa regenerada. Se contempla una matriz de otras formas de colágeno, tales como colágeno entrecruzado, colágeno esterificado o colágeno modificado químicamente según se describe en la patente U.S. nº 4.390.519 de Sawyer, y en otras matrices convencionales utilizadas en parches hemostáticos, para utilizar con EACA según la presente invención. Cuatro matrices que resultan ventajosas para utilizar con EACA incluyen esponja de gelatina absorbible, alginato de calcio, alginato de calcio/sodio, y colágeno.

Una primera forma de realización de la presente invención proporciona la fabricación de un parche que comprende una matriz de esponja de gelatina absorbible "G" y un agente hemostático, EACA "E.". Esta forma de realización, "GE", preferentemente puede contener, asimismo, calcio, "G(Ca++)E". Ventajosamente, el parche GE o G(Ca++)E necesita no contener trombina o fibrinógeno para funcionar eficazmente. Como resultado, tanto GE como G(Ca++)E, presentan buena estabilidad térmica y se pueden almacenar durante un periodo comprendido entre meses y pocos años sin refrigeración y sin perder eficacia. Los parches GE y G(Ca++)E resultan útiles para utilizar en el campo y en una urgencia, ya que cada uno puede ser almacenado en un estado listo para ser utilizado durante un periodo de tiempo largo, incluso en ausencia de refrigeración. Ambos son mucho menos caros que producir un parche que contiene fibrinógeno.

Se hace referencia más fácilmente a los muchos parches representativos fabricados según la presente invención en la presente memoria mediante acrónimos, p.ej., GE. Estos acrónimos son indicativos de los componentes individuales (Tabla 1) encontrados en los parches creados según la presente invención.

TABLA 1

	CÓDIGOS DE COMPONENTE DE PARCHE:
G	= parche de espuma de gelatina sola, p.ej., Gelfoam®
CA	= alginato de calcio
CVA	= alginato de calcio/sodio, p.ej., Kaltostat®
C o CVC	= colágeno o colágeno (Helistat®), respectivamente
E	= EACA
(Ca++)	= calcio
T	= trombina
R	= péptido RGD
P	= sulfato de protamina
F	= fibrinógeno
(f)	= compuesto recién aplicado (Ejemplo 7)
GT(Ca++)E	= parche "Hemarrest™"

En otros parches, un parche GE o G(Ca++)E comprende adicionalmente una cantidad de trombina efectiva para estimular la hemostasia y de este modo se designa como "GTE" o "GT(Ca++)E". Una molécula de trombina es más estable a temperaturas comprendidas entre 2 y 8ºC. Sin embargo, estos parches se pueden almacenar durante un periodo de tiempo limitado a temperatura ambiente. De hecho, dado que la adición de trombina aumenta la eficacia de los parches GE y G(Ca++)E, estos parches resultan muy útiles fuera de la clínica para uso de campo, tal como objetivos de urgencia o militares.

Aunque se entiende que la exposición a condiciones ambientales extremas puede dar trombina presente en el parche parcial o totalmente inactiva, la actividad del resto del parche GE o G(Ca++)E no quedaría afectada sustancialmente. Los parches GTE y G(Ca++)E pueden contener adicionalmente fibrinógeno y se designan como GTEF y GT(Ca++)EF, respectivamente.

En los parches GE y GE(Ca++), y todos los parches descritos en la presente memoria que utilizan una esponja^{USP} de gelatina absorbible como matriz, la matriz es ventajosamente una capa lisa de espuma de gelatina, más ventajosamente, Gelfoam®, e incluso más ventajosamente, espuma de gelatina comprimida o Gelfoam® comprimido. La eficacia de los parches fabricados según la presente invención para promover la formación del coágulo se incrementa por la estructura reticular de la espuma de gelatina, que promueve las interacciones del sustrato de la enzima. En particular, la estructura de espuma de gelatina incrementa el contacto entre la trombina proporcionada exógenamente en el parche con fibrinógeno endógeno presente en la sangre que exuda de la herida.

Se pueden aplicar agentes hemostáticos adicionales al parche GE en cantidades efectivas para estimular la hemostasia, incluyendo, pero no limitándose a: trombina "T", una enzima que convierte fibrinógeno a fibrina; calcio, sodio, magnesio u otros iones que estimulan la hemostasia; y opcionalmente, fibrinógeno, "F".

En términos de aditivos iónicos, el cloruro de calcio es un aditivo preferido generalmente para la introducción de un ión de calcio en el parche, particularmente donde ese parche no contiene fibrinógeno exógeno. Sin embargo, en un parche que contiene fibrinógeno, el cloruro de calcio y el cloruro de sodio funcionan aproximadamente igual además de aditivos hemostáticos en promover la formación del coágulo.

Los "análogos de EACA" o compuestos que presentan una actividad hemostática similar y una estructura química similar a la de EACA, se pueden utilizar en lugar de, o además de EACA en la fabricación de parches según la presente invención. Los posibles análogos de EACA contemplados para la adición a una matriz incluyen derivados de EACA que poseen grupos funcionales bioisoestéricos. El grupo ácido carboxílico de EACA se puede sustituir, por ejemplo, mediante ácido sulfónico o sulfínico (-SO_{2}H y -SO_{3}H) o grupos de ácido fosfónico. Ejemplos de análogos incluyen, pero no se limitan a, ácido 5-aminopentanoico, ácido 7-aminoheptanoico, ácido 8-aminooctanoico, a condición de que estos compuestos no ejerzan una actividad hemostática.

Las moléculas "trombina" y "fibrinógeno" según se ha definido en la presente memoria quieren significar que incluyen moléculas de trombina natural y de fibrinógeno derivadas de origen animal o humano, una forma sintética o una forma recombinante de las moléculas, incluyendo análogos funcionalmente activos que mantienen eficazmente la actividad promotora de coágulo de la enzima en un animal o humano. Las especies de animal a partir de las cuales se deriva la molécula pueden variar y dependen de la utilización pretendida del parche. Por ejemplo, un parche destinado a la utilización humana contiene trombina no humana y fibrinógeno no humano por razones de seguridad, y en este contexto se prefiere trombina bovina y fibrinógeno bovino. Evitando la utilización de fibrinógeno humano, se minimizan los riesgos asociados con la contaminación vírica de productos de sangre purificados (particularmente con fibrinógeno). De hecho, los ingredientes EACA, trombina y Gelfoam® están todos aprobados por la Food and Drug Administration de Estados Unidos para su utilización humana.

En otra forma de realización de la presente invención, se fabrica un parche que presenta una matriz compuesta de alginato de calcio/sodio "CVA" o alginato de calcio "CA", y una capa hemostática de EACA "E". Se entiende que el alginato de calcio se puede sustituir por alginato de calcio/sodio en la explicación y ejemplos a continuación, sin diferencias sustanciales en los resultados.

El parche, "CVAE", contiene ventajosamente también ión calcio y trombina. Asimismo es menos caro cuando se compara con un parche que contiene fibrinógeno. Similar al parche GE, el parche CAE puede incluir agentes hemostáticos adicionales que incluyen, pero no se limitan a, trombina, calcio, sodio u otros iones en cantidades que son eficaces para estimular o acelerar la hemostasia. Opcionalmente también, se puede añadir el fibrinógeno en cantidades suficientes para estimular o acelerar la hemostasia. Estos parches también pueden contener adicionalmente aditivos según se describe en la presente memoria.

En otro parche, se añade una cantidad efectiva del péptido activo, RGD, "R" o RGDS efectivo para estimular la curación de la herida a un parche que comprende GE o CAE, y de este modo tal parche se designa como GER o CAER. El tripéptido RGD está compuesto de arginina, glicina y ácido aspártico, y opcionalmente serina "RGDS", y es el sitio activo de fibrinógeno y fibronectina. RGD acelera la curación de la herida y se cree que estimula la migración de fibroblasto.

Asimismo el aditivo RGD es mucho menos caro que el fibrinógeno. RGD se puede sintetizar fácilmente utilizando química de fase sólida convencional a una fracción del coste de la obtención de fibrinógeno, que actualmente se debe obtener mediante purificación a partir de una fuente natural.

En otro parche, se añade una cantidad del agente sulfato de protamina "P" efectiva para neutralizar la heparina presente en el medio local del parche a cualquiera de los parches mencionados anteriormente que comprenden EACA y una matriz. El sulfato de protamina neutraliza la heparina o los antagonistas de la vitamina K que están presentes en la sangre de ciertos pacientes o animales que se tratan con un parche hemostático. Un parche que comprende GEP o CAEP, por ejemplo, se prescribe a personas a las que se les está administrando terapia parenteral con heparina. En particular, un parche que contiene adicionalmente trombina sería eficaz en pacientes que tomasen dicumarol. Un parche que contiene sulfato de protamina se almacena preferentemente a temperaturas refrigeradas comprendidas entre 2 y 8 grados Celsius para mantener la actividad del sulfato de protamina.

Una ventaja adicional de los parches fabricados según la presente invención es que las matrices, tales como la esponja de gelatina absorbible o el alginato de calcio, y los agentes hemostáticos, especialmente EACA y trombina, y el aditivo, RGD, son todos relativamente baratos. Se estima que la producción de un parche rectangular de "tamaño estándar" de aproximadamente 9,5 x 4,8 cm, que presenta un espesor aproximadamente de 2,5 mm costaría sustancialmente menos que un parche TAF del mismo tamaño.

Los parches fabricados según la presente invención resultaron ser eficaces en la inducción de la hemostasia en lesiones sangrantes recién hechas del bazo, hígado y riñón de un cerdo anestesiado. Las lesiones quirúrgicas inducidas en los órganos parenquimales de cerdos proporcionan un buen sistema modelo para la hemostasia en los órganos humanos análogos según se ha evidenciado en estudios preclínicos realizados en cerdos y en perros para el parche TachoComb®. Schiele et al., Clinical Materials 9:169 en la página 172 (1992). Ver asimismo, SWINE AS MODELS IN BIOMEDICAL RESEARCH, Swindle, M., Iowa State Univ. Press (1992). De hecho, sorprendentemente, los parches fabricados según la presente invención dieron mejores resultados que el TachoComb® en el hígado, mientras en los riñones, el parche que contiene una matriz de Gelfoam®, trombina y 100 mg/cm^{2} de EACA funcionó igualmente que el parche TachoComb®. Los resultados de este experimento comparativo se presentan en el Ejemplo 3 en la presente memoria.

Otra ventaja importante de la presente invención es su flexibilidad, es decir, se fabrica un parche que se amolda fácilmente a los contornos de un órgano o superficie biológica, haciendo más rápida de realizar la manipulación de la aplicación del parche. Como resultado, existe menos pérdida de sangre en conjunto para el paciente y se gasta menos tiempo en la cirugía.

Un parche hemostático fabricado según la presente invención se utiliza para aplicar una superficie de "contacto con la herida" del parche, una superficie destinada a poner en contacto la herida y el agente(s) hemostático y opcionalmente los aditivos que contiene, con una herida sangrante. A continuación, el parche se mantiene en contacto con la herida durante un periodo de tiempo suficiente para que ocurra la coagulación en la interfase entre el parche hemostático y la herida y para que el sangrado se detenga sustancialmente. Preferentemente, el parche se mantiene en contacto con la superficie de la herida durante un periodo aproximadamente entre 3 y 20 minutos, ventajosamente entre 3 y 10 minutos, y más ventajosamente entre 3 y 5 minutos. Cuando EACA, la trombina, y el cloruro de calcio están todos presentes sobre/en la matriz, el periodo de tiempo es preferentemente aproximadamente de 5 minutos. El parche se mantiene en el lugar contra la superficie biológica preferentemente con una ligera presión, preferentemente por medio de una esponja empapada en salino estéril. Alternativamente, el parche se puede mantener en el lugar simplemente mediante la aplicación de presión al parche por medio de una gasa o de otro material estéril seco. Dependiendo de la situación de la herida, se puede enrollar alrededor del parche, un vendaje, incluyendo un vendaje elástico, de forma que se proporcione una ligera presión en el lugar de la herida.

Además de inducir hemostasia, un parche fabricado según la presente invención es útil para cerrar herméticamente el tejido corporal. Por ejemplo, cuando hay una pérdida de aire a partir de una herida en los pulmones se aplica un parche en la superficie de alrededor de la herida, se mantiene en el lugar con una ligera presión durante un periodo de tiempo adecuado para inducir hemostasia, según se ha discutido anteriormente. Durante ese tiempo, además de la hemostasia, se forma un cierre hermético.

Antes de la aplicación del parche, es preferible empapar el parche en una solución salina estéril. Dicha etapa no se requiere, sin embargo. La utilización de un parche hemostático fabricado según la presente invención, sin empapar primero en solución salina permite la aplicación rápida y fácil del parche en las situaciones de campo, tales como las que se pueden encontrar un técnico médico de urgencias o un trabajador sanitario militar.

El parche puede estar contenido dentro de un envase estéril cerrado que facilita su extracción sin contaminación. Dicho envase por ejemplo, puede ser una bolsa de lámina de aluminio o de otro material convencional que se esterilice fácilmente. La radiación, ventajosamente la radiación gamma, se aplica para esterilizar el parche y el material del envase juntos.

Asimismo se puede proporcionar un recipiente que presenta compartimientos duales. Un primer compartimiento contiene agua destilada, salino estéril o regulador estéril, mientras que el segundo compartimiento contiene un parche, fabricado según la presente invención. En la utilización de campo, el parche del segundo compartimiento se puede sumergir fácilmente dentro de un primer compartimiento abierto y posteriormente aplicarse a la herida. Una utilización preferida del parche fabricado según la presente invención consiste en inhibir o parar completamente el sangrado de un órgano parenquimal, tal como el hígado, riñón, bazo, páncreas o pulmones. Las utilizaciones adicionales de dicho parche incluyen frenar el sangrado de tejidos durante los tipos de cirugía tales como, pero sin limitarse a, cirugías interna/abdominal, vascular (particularmente para anastomosis), urológica, ginecológica (particularmente para una episiotomía), tiroidea, neurológica, ENT, utilizaciones de transplante de tejidos, y dentales.

Otra utilización de un parche hemostático incluye tratamiento tópico, tal como para transplantes de quemados o de tejidos. Un parche destinado a la utilización tópica, según la presente invención contiene preferentemente aditivos, tales como medicamentos antiinfección. Se pueden añadir bactericidas, fungicidas y agentes de curación de heridas, también. La neomicina y bacitracina son ejemplos de ciertos aditivos que se incorporan a un parche destinado a la utilización tópica, además de las propiedades antibacterianas de EACA discutidas anteriormente.

Un parche hemostático fabricado según la presente invención resulta asimismo útil para tratar animales, preferentemente personas u otros mamíferos. De este modo, se pueden tratar con un parche hemostático tanto animales de compañía, de granja o salvajes.

Un parche del tamaño y forma según la utilización pretendida. Además, un parche rectangular de tamaño estándar, 9,5 x 4,8 cm, que presenta un espesor no comprimido aproximadamente entre 4 y 10 mm, o un espesor comprimido aproximadamente entre 2 y 10 mm, ventajosamente entre 2 y 5 mm, se puede cortar al tamaño con un par de tijeras.

Un ejemplo de una matriz ventajosa a la que se aplican EACA y agentes hemostáticos y/u otros aditivos según la presente invención, incluye espuma de gelatina, preferentemente proporcionada en una forma comprimida. Más preferentemente, una matriz de Gelfoam® que se comprime hasta por lo menos una mitad de su espesor original.

Asimismo, un parche puede ser de forma esférica, cónica, cuboide o cilíndrica o prefabricado en cuadrados pequeños, tales como para que quepan en una cavidad corporal. Tal forma de realización es útil por ejemplo, para una cavidad dental que resulta de una extracción dental. Adicionalmente, el parche se puede configurar en un tampón, por ejemplo, para epistaxis (sangrado profuso de las fosas nasales) u otro hueco.

Un parche destinado a aplicaciones tópicas se puede aplicar adicionalmente con una cinta adhesiva, como una forma de banda auxiliar, en la que el parche se adhiere a un refuerzo adhesivo. Preferentemente el adhesivo utilizado para sujetar el parche es poroso en las áreas que están en contacto con la piel. Se puede asimismo utilizar un apósito o vendaje de herida de película delgada para la aplicación a las superficies de la piel para proporcionar una barrera mecánica estéril a todos los tipos de agentes infecciosos.

Preferentemente, el "vendaje" mostrado en la Figura 13, comprende un miembro de refuerzo 10 situado contiguo a una superficie exterior del parche 20, que es opuesta a la de la superficie de contacto de la herida 30. El refuerzo puede servir para prevenir el paso del agente(s) hemostático, aditivo(s) opcional y otros exudantes biológicos a través de la superficie exterior 30, además de proporcionar una barrera a la entrada de microorganismos infecciosos en el parche y en la herida que está debajo. El refuerzo proporciona asimismo soporte físico y protección para el parche y la herida que está debajo, y preferentemente se fija con seguridad al lado exterior del parche, por ejemplo, con un adhesivo aceptable médicamente.

Se pueden utilizar diversos miembros de refuerzo oclusivos y no oclusivos, flexibles o no flexibles en el vendaje adhesivo fabricado según la presente invención. Es preferible para la utilización en este contexto diversas películas de poliuretano que se han adaptado específicamente a los apósitos de herida y a otras utilizaciones médicas. Estas películas se utilizan típicamente en espesores inferiores a 2 mm y permiten la libre difusión del oxígeno, vapor de agua y otros gases a través de sus matrices moleculares. Además, estas películas son impermeables a ambos líquidos y a todos los vectores de enfermedad microbiana.

Otros refuerzos adecuados incluyen polietileno, acrílico, silicona, celofán, acetato de celulosa, etilcelulosa, copolímeros de vinilacetato-vinilcloruro plastificado, tereftalato de polietileno, nilón, polietileno, polipropileno, polivinilidencloruro, papel, ropa, película de aluminio y otros materiales de refuerzo convencionales. Preferentemente, se utiliza un material de refuerzo flexible para permitir que el vendaje se amolde fácilmente al contorno del miembro del cuerpo del paciente al cual se va a aplicar el parche.

Proporcionando un vendaje fabricado según la presente invención, se extiende un ala 15 desde el miembro de refuerzo, más allá de la región del parche. Alternativamente, el ala (s) se fija bien segura al parche mismo, preferentemente en los lados del parche.

Ventajosamente, se proporcionan por lo menos dos alas que se extienden desde el miembro de refuerzo, en lados opuestos de su longitud, o de la anchura del miembro del parche. Alternativamente, se puede extender una pluralidad de alas contiguas en forma saliente hacia afuera desde el miembro de refuerzo más allá del parche, tal como se muestra en la Figura 13.

Cuando un ala se extiende hacia fuera desde un lado único del miembro de refuerzo, el ala preferentemente es suficientemente largo como para permitir envolverse en un apéndice, tal como un dedo, y adherirse al miembro de refuerzo sobre el lado opuesto del parche.

Un adhesivo médicamente aceptable 25 se aplica sobre el ala(s), para permitir la adherencia entre el miembro de refuerzo y la piel del paciente. Preferentemente, el ala(s) y el miembro de refuerzo están compuestos de un material que permite respirar a la piel. El material de refuerzo y del ala puede ser el mismo o materiales diferentes.

Una "lengüeta de tracción" de quita y pon 40, que comprende una capa de celofán, plástico o similar, se aplica al ala(s) para evitar que se pegue(n) a otras superficies antes de su utilización. Para utilizar el vendaje adhesivo tópico fabricado según la presente invención, la capa(s) de la lengüeta de tracción se despega fácilmente justo antes de la aplicación del vendaje al cuerpo. A continuación el vendaje se aplica a la superficie de contacto con la herida colocándola de cara hacia abajo en contacto directo con la herida. El ala(s) preferentemente no se pone en contacto con la herida, pero en su lugar se aplica a una región(s) de tejido normal adyacente a la herida para fijar el miembro del parche en el lugar.

Se puede aplicar al parche una o más capas adicionales de material para recubrir la herida, preferentemente la capa que ayuda a la absorción de sangre y de otros exudantes. Dicha capa adicional puede estar realizada como una parte integral del parche, creando un parche más espeso. Alternativamente, la capa puede aplicarse como suplemento del reverso (superficie que no está en contacto con la herida) de un parche fabricado según la presente invención. Particularmente para el uso tópico, la capa(s) puede contener superabsorbentes para eliminar la solución exudante en el lugar de la herida. Se recomienda que los parches destinados a aplicaciones de cirugía interna, en los que una superficie(s) es integral con el parche, la superficie(s) deberían ser tanto biodegradables como farmacéuticamente aceptables.

El parche puede diseñarse para facilitar su aplicación en los bordes de la anastomosis o de la fusión de un vaso sanguíneo o de otro lumen del cuerpo que haya sido tratado quirúrgicamente de manera grave o de otro modo. Para aplicar un parche para anostomosis, un parche GETR rectangular, por ejemplo, se envuelve alrededor de los bordes del injerto Dacron®. Cuando el injerto se coloca en el lugar, el parche acelera el crecimiento de fibrina en el injerto para fijar el injerto en el el lugar que le corresponde (hemostática y herméticamente).

Preferentemente, la superficie de contacto con la herida del parche está recubierta con un indicador de color para ayudar al usuario, tal como Vitamina B_{2}en amarillo (riboflavina) o un colorante adecuado, como por ejemplo, hemina. Mediante la codificación con color del parche, el usuario evitará conscientemente tocar o contaminar de otro modo la superficie de contacto con la herida del parche.

Un parche que contiene EACA fabricado según la presente invención se realiza mediante la aplicación en una matriz, de una cantidad de EACA efectiva para inhibir la fibrinólisis en el entorno local de la matriz. Ventajosamente, se aplica una cantidad de EACA comprendida entre aproximadamente 10 y 100 mg/ cm^{2}a la superficie de contacto de la herida de la matriz, más ventajosamente entre 60 y 70 mg/ cm^{2}.

Se pueden aplicar a la matriz mediante cualquiera de los diversos procedimientos que mejor funcionan ventajosamente bajo condiciones estériles una o más capas adicionales de material de apósito de herida, preferentemente una capa que ayude en la absorción de EACA, además de otros agentes hemostáticos o aditivos descritos como componentes de un parche fabricado según la presente invención. Se entiende que se pueden realizar también los procedimientos convencionales de aplicación de los agentes hemostáticos y aditivos a una matriz que comprende EACA además de los descritos en la presente memoria.

Ventajosamente, EACA se aplica como una capa a una superficie particular o lado de la matriz, cuya superficie se diseña a continuación como la superficie de contacto con la herida. Esto se puede llevar a cabo mediante la pulverización de EACA en forma de polvo sobre el parche. Alternativamente, se puede recubrir con una solución de EACA una matriz y secarla por liofilización o por medios convencionales. En otro procedimiento de aplicación de EACA, una matriz se sumerge completa o parcialmente en una solución estéril de EACA tal que una cantidad suficiente de EACA se acumule dentro de la matriz eficaz para inhibir la fibrinólisis en un mamífero, tal que se demuestra la eficacia similar al parche Hemarrest. En la preparación de un parche destinado a su utilización interna, la matriz preferentemente no se sumerge completamente o si no se satura con EACA; mejor dicho, EACA se aplica a un único lado mediante cualquiera de las formas alternativas descritas anteriormente.

Después de la aplicación de EACA a una matriz, la matriz/EACA se recubre con una capa de proteína que facilita la adherencia de EACA a la matriz. Ventajosamente, esta proteína es trombina, aunque se podrían utilizar también otros compuestos proteináceos o de gelatina que faciliten tal adherencia. Más ventajosamente, la matriz se recubre con una capa de proteína antes de la aplicación de EACA. Más ventajosamente, la matriz se trata antes y después de la adición de EACA con una proteína, preferentemente que está en solución con un aditivo iónico tal como calcio (es decir, solución de cloruro de calcio).

Por ejemplo, los parches tales como GT(Ca++)E o CT(Ca++)E se preparan mediante la aplicación a una superficie de contacto con la herida de una matriz de espuma de gelatina o colágeno, una primera solución de trombina disuelta en cloruro de calcio, la trombina presente en una cantidad, por ejemplo, entre 1 y 1000 IU/cm^{2}, ventajosamente entre 1 y 100 IU/cm^{2}, y más ventajosamente entre 1 y 4 IU/cm^{2}, o 1,25 IU/cm^{2}. La trombina se disuelve en 20 a 60 mM de cloruro de calcio, preferentemente aproximadamente 40 mM, tal que una cantidad entre 25 y 150 microgramos/cm^{2}, preferentemente entre 50 y 100 microgramos/cm^{2}, se deposite sobre esa superficie. La etapa siguiente comprende la aplicación de entre 10 y 100 mg/cm^{2} de ácido épsilon aminocaproico, preferentemente entre 60 y 70 mg/cm^{2}, y preferentemente en forma de polvo a la superficie de la matriz recubierta de trombina; a continuación, aplicar una segunda solución de trombina en cloruro de calcio, que, por ejemplo contiene las cantidades de trombina y de calcio según se ha descrito en la primera solución; y a continuación secar la trombina, cloruro de calcio y ácido épsilon aminocaproico sobre el parche. La cantidad de trombina aplicada en la primera y segunda soluciones puede variar, o, se puede aplicar una sola etapa de cierre de la solución de trombina después de la adición de EACA. Preferentemente, la cantidad total de trombina aplicada a la superficie de contacto con la herida del parche mediante las dos etapas es 2-10 IU/cm^{2}.

La etapa de secado se lleva a cabo mediante liofilización, preferentemente. Se pueden emplear asimismo otros procedimientos de secado adecuados para un material que contiene un ingrediente de proteína activo, siempre que el tratamiento de secado no desnaturalice las proteínas o las haga inactivas cuando se exponen a sangre animal. Alternativamente, el parche se seca convencionalmente, manteniéndolo a temperatura ambiente durante un periodo de 1-3 horas, seguido de una refrigeración durante una noche.

En otros parches, por ejemplo, GT(Ca++)EF o CT(Ca++)EF, una cantidad de fibrinógeno efectiva para acelerar la hemostasia en el medio local del parche. Preferentemente, se añade una cantidad de fibrinógeno entre 2-10 mg/cm^{2} como un agente a una matriz que contiene adicionalmente EACA, trombina, y cloruro de calcio.

En todavía otra forma de realización, un agente añadido a la matriz, además de EACA, trombina, cloruro de calcio y opcionalmente, fibrinógeno, incluye una cantidad de sulfato de protamina efectiva para neutralizar la heparina en el medio local del parche. El sulfato de protamina se añade en una cantidad de entre 1-15 mg/cm^{2} de dicha matriz, preferentemente en una cantidad entre 2-5 mg/cm^{2} de una superficie de contacto con la herida de la matriz.

Igualmente, los péptidos RGD o RGDS se pueden disolver en agua doblemente destilada y pulverizar sobre una superficie de contacto con la herida del parche. Un parche contiene ventajosamente una cantidad de RGD efectiva para aumentar la formación de coágulo. RGD o RGDS se aplican ventajosamente a un parche en una cantidad entre 110 y 130 mg/cm^{2}. De este modo, un parche de tamaño estándar contendría aproximadamente entre 1 y 10 mg/parche o aproximadamente entre 5 y 7 mg/parche de RGD o RGDS.

Se debería observar que, como EACA, los agentes hemostáticos o aditivos descritos en los párrafos anteriores se pueden aplicar a una matriz como una capa, por ejemplo, pulverizándolos sobre la superficie de contacto con la herida de la matriz en forma seca. Alternativamente, una matriz se puede sumergir o recubrir con una solución que contiene el agente hemostático/aditivo. Se desea que la matriz y agente estén próximos, particularmente cuando el parche se expone a un fluido corporal tal como la sangre, que permite que los agentes secantes se solubilicen y se mezclen. De este modo, se puede proporcionar un parche en el que el agente hemostático o mezcla de los agentes hemostáticos se absorban en los poros o intersticios de la matriz, o, los agentes se puedan poner en forma de capa sobre una superficie de la matriz y conseguir la aproximación deseada tras la solubilización de los agentes mediante la adición de fluido corporal.

La matriz se puede recubrir con agentes hemostáticos apropiados en los parches descritos anteriormente sobre una o sobre todas las superficies. En un parche preferido, los agentes hemostáticos y aditivos se recubren en solo una superficie (la superficie de contacto con la herida). Dicha disposición evita inducir la hemostasia entre la herida y un tejido no herido en la proximidad del parche. En un parche destinado a caber en un hueco en el tejido corporal, por ejemplo, el parche se recubre con agente(s) hemostático/aditivo(s) en todas las superficies.

La presente invención se describe adicionalmente con referencia a los ejemplos ilustrativos siguientes. A menos que se defina lo contrario, todos los términos técnicos y científicos utilizados en la presente memoria poseen el mismo significado que comúnmente entiende el experto en la técnica de la presente invención. Aunque se pueden utilizar cualquiera de los procedimientos y materiales similares o equivalentes a los descritos en la presente memoria, se han descrito los procedimientos y materiales preferidos. A menos que se indique lo contrario, las técnicas utilizadas o contempladas en la presente memoria son metodologías estándar bien conocidas por cualquiera de los expertos en la técnica. Los materiales, procedimientos y ejemplos son solo ilustrativos y no limitativos.

Ejemplo 1 Los efectos de EACA sobre la activación de la trombina

Se diseñó un experimento de dos partes para probar si la activación de trombina en presencia de EACA (A) se acelera y (B) si depende del pH.

A. Efecto del tiempo de incubación a 37ºC

La primera parte de este estudio examinó la activación de trombina y su degradación en H_{2}O después de la incubación a 37ºC. El ensayo utilizado consistió en una segmentación colorimétrica de un tripéptido, TFA-phe-pro-arg-AFC, en el que el AFC es el marcador colorimétrico. Se disolvieron diecisiete mg de este sustrato en 200 \mul de DMSO. La trombina se preparó como 10 unidades/ml. La solución de "PRUEBA" contenía 100 \mul de sustrato y 200 \mul de la solución de trombina; un ciego contenía la misma cantidad de sustrato y 200 \mul de H_{2}O.

La Figura 1 etiquetada como "ACTIVACIÓN DE LA SOLUCIÓN DE TROMBINA A 37ºC" muestra los resultados de este experimento. La densidad óptica en todos estos experimentos es una indicación del color y por lo tanto de la cantidad de segmentación de la enzima que ha tenido lugar.

La pendiente de la línea de caja negra indica que la activación de trombina de la trombina disuelta en H_{2}O tiene lugar durante un periodo de tiempo de 172 minutos. El ciego, que contenía sustrato y H_{2}O, no muestra cambio en la densidad óptica, indicando que no ha ocurrido activación o segmentación del péptido.

B. Activación de trombina mediante EACA: un efecto del pH

En este experimento, se probó la hipótesis que la activación de trombina mediante EACA se debió al efecto de EACA de incrementar el pH.

Se prepararon todas las soluciones a la misma concentración tal como se indicaba en la parte A anteriormente mencionada, excepto EACA que se preparó a una concentración de 50 mg/ml. Se prepararon las muestras siguientes:

1.: 50 \mul de trombina + 925 \mul de H_{2}O + 25 \mul de sustrato

2.: 50 \mul de trombina + 925 \mul de regulador Tris @ ph 7,02 + 25 \mul de sustrato

3.: 50 \mul de trombina + 925 \mul de regulador Tris @ ph 7,62 + 25 \mul de sustrato

4.: 50 \mul de trombina + 925 \mul de regulador Tris @ ph 7,80 + 25 \mul de sustrato

5.: 50 \mul de trombina + 925 \mul de regulador Tris @ ph 8,01 + 25 \mul de sustrato

6.: 50 \mul de trombina + 425 \mul de sol. de EACA + 500 \mul de H_{2}O + 25 \mul de sustrato

7.: 50 \mul de trombina + 425 \mul de sol. de EACA + 500 \mul de regulador Tris @ ph 7,02 + 25 \mul de sustrato

8.: 50 \mul de trombina + 425 \mul de sol. de EACA + 500 \mul de regulador Tris @ ph 7,62 + 25 \mul de sustrato

9.: 50 \mul de trombina + 425 \mul de sol. de EACA + 500 \mul de regulador Tris @ ph 7,80 + 25 \mul de sustrato

10.: 50 \mul de trombina + 425 \mul de sol. de EACA + 500 \mul de regulador Tris @ ph 8,01 + 25 \mul de sustrato

Cada tubo se colocó en un baño de agua a 37ºC, y se sacaron periódicamente para ser leídos cada 5' durante un total de 60'. Los resultados se resumen en la Figura 2. En la leyenda, las muestras 1-10 listadas verticalmente en la leyenda corresponden a las muestras 1 a 10 inmediatamente anteriores, mientras "T" representa trombina.

Los resultados indican claramente que la acción de EACA es un efecto del pH y que las soluciones ajustadas con el regulador Tris poseían un efecto similar a medida que el pH incrementaba. En todos los casos, la meseta no puede ser exacta ya que la saturación del instrumento ocurre cerca de la densidad óptica máxima registrada.

A 37ºC, los resultados indicaron claramente que la acción de EACA es un efecto del pH. El ión calcio parece aumentar esta activación mediada por el pH.

Ejemplo 2 EACA ejerce un efecto antibacteriano

EACA mostró mediante el procedimiento siguiente que inhibe tanto en Staph. aureus como en E. coli de una forma que depende de la dosis.

Las placas de cultivo y los discos EACA se prepararon como sigue: se colocaron en vasos de precipitados de casi el mismo diámetro, discos de papel de filtro Whatman de 5,4 cm de diámetro y 22,9 cm^{2} de área. Se disolvió EACA (229 mg) en 250 \mul de H_{2}O doblemente destilada y se utilizó para preparar las concentraciones finales. Se aplicaron todas las concentraciones de EACA en 250 \mul de H_{2}O. Se prepararon las concentraciones de 0, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 y 100 mg/cm^{2}. Tras la aplicación de las soluciones de EACA, los discos se dejaron secar y se congelaron para asegurar la estabilidad.

Los discos para la aplicación a placas de agar se realizaron con una troqueladora de papel, de un tamaño aproximadamente de 6,35 mm. Las placas de agar se vertieron en dos incrementos.

Se preparó un primer incremento de 1,5% de infusión de agar cerebro corazón y se esterilizó en un autoclave. Tras enfriarlo aproximadamente a 55ºC, se añadieron 12 ml a cada disco de Petri de 100 mm x 15 mm. Las placas se dejaron enfriar a temperatura ambiente, se envolvieron en parafilm y se refrigeraron. Se preparó el caldo de infusión de cerebro corazón y se esterilizó en un autoclave. Cuando la temperatura se enfrió a temperatura ambiente, se añadió una alícuota de 1 ml de Staph. aureus o E. coli y el caldo se incubó toda la noche a 37ºC.

El día siguiente, se preparó un segundo incremento de 1,2% de infusión de agar cerebro corazón y cuando se enfrió a 48ºC después del autoclave, se añadieron 2 ml de cada cultivo en matraces de agar separados y se añadió 1 ml de estas mezclas a cada placa de cultivo. Se dejó que esta capa superior se endureciese a temperatura ambiente. Se añadieron dos grupos de cinco discos que contenían EACA a diversas concentraciones a cada placa, además de un disco de control que contenía cero mg/cm^{2} de EACA. Los resultados completos se listan en la Tabla 2. La Figura 3A y la Figura 3B cada una muestra gráficamente la inhibición mediante EACA del crecimiento de Staph. aureus, para cada grupo de diversas concentraciones de EACA, mientras la Figura 4A y la Figura 4B cada una muestra inhibición mediante EACA del crecimiento de E. coli para cada grupo de diversas concentraciones de EACA.

Los resultados de la observación y de la medición de la zona de inhibición revelan que en casi todos los casos, existe un cambio incremental en esta zona de inhibición relacionada con la concentración de EACA. Las excepciones son que la de 60 mg/cm^{2} no siguió la tendencia, pero fue igual o disminuyó en relación a la de 40 mg/cm^{2}. Las zonas de 90 y 100 mg/cm^{2} no incrementaron siempre. La consistencia de estas variaciones parece estar relacionada con la preparación del disco más que con una variación biológica.

TABLA 2 Resultados: Inhibición del crecimiento de Staph. aureus (placas 1-6) y de E. coli (placas 7-12) mediante EACA

1

2

Ejemplo 3 Comparación entre G(Ca++)TE y TACHOCOMB® A. Condiciones experimentales 1. Preparación del parche

Se obtuvo una esponja de gelatina absorbible, es decir una matriz de espuma de gelatina (Gelfoam®, UpJohn Co.). Physician's Desk Reference 2451, 47ª edición, Dowd (Ed.). Medical Economics Data (1993). A continuación, se aplicaron 1,25 IU/cm^{2} de trombina bovina a una superficie de espuma de gelatina. A continuación, se aplicaron 10 mg/cm^{2} o 100 mg/cm^{2} de EACA a la misma superficie, seguida de una aplicación de otros 1,25 IU/cm^{2} de trombina bovina. Se dejaron secar los parches y se colocaron en una nevera toda la noche. Se probó, asimismo, en el riñón un parche de espuma de gelatina "ciego", que no se había tratado con trombina o EACA.

Se obtuvieron los parches TachoComb® y se aplicaron según las instrucciones del fabricante. Es decir, antes de la preparación, los parches TachoComb® se sumergieron en un salino estéril y se aplicaron a los órganos sangrantes con ligera presión durante cinco minutos.

2. Preparación del órgano

Se aisló quirúrgicamente un lóbulo de hígado de cerdo y se crearon tres lesiones de aproximadamente de 1 x 1,5 cm de tamaño. La sangre fluyó libremente de cada una de las lesiones. Se aplicaron cada uno de los parches citados en la parte A (anterior), y se mantuvieron bajo presión mediante una esponja empapada en salino durante cinco minutos y se liberó la presión. Los parches se evaluaron por su capacidad para controlar la hemorragia en términos de (a) pérdida, (b) capacidad para resistir la presión vascular incrementada, (c) la resistencia ofrecida cuando se intenta despegar el parche de la lesión, y (d) casos de formación del coágulo en la lesión.

Para el hígado, las pruebas de presión se llevaron a cabo mediante el aumento de la presión arterial inyectando 0,2 ml 1/1000 de epinefrina.

Para los estudios renales, se eliminaron quirúrgicamente ambos polos (extremos) del riñón hasta una profundidad de 0,5 cm, mientras se sujetaba con una grapa la arteria renal. La grapa se sacó después de que se colocaran los parches de prueba y se ejerciera presión con una esponja quirúrgica empapada en salino durante cinco minutos.

B. Sumario de resultados

En el hígado, cuando se eliminó la presión y después de cinco minutos, ambos parches según la presente invención mostraron un buen control de la hemorragia, con solo un pequeño sangrado del extremo en el parche de 100 mg y sin sangrado en el parche de 10 mg. Después de 9-13 minutos, el parche TachoComb® fue el único parche con pérdida o sangrante del extremo.

Los resultados se muestran en las Figuras 6 y 7, que muestran un parche Hemarrest™ que contiene 100 mg/cm^{2} (lado izquierdo) o 10 mg/cm^{2} (lado derecho) de ácido épsilon aminocaproico, respectivamente. En la Figura 6, la sangre está presente a lo largo del extremo inferior del parche TachoComb® y entre ese parche y el parche de 100 mg/cm^{2}. Este sangrado se originó a partir del parche TachoComb®. Una pequeña cantidad de sangre está presente sobre la superficie del parche de 100 mg, mientras no hay nada en el parche de 10 mg.

La Figura 7 muestra los parches extraídos del mismo hígado mostrado en la Figura 6. Hay sangre libre que procede de las lesiones de 100 mg y de TachoComb®. Se observa un gran flujo que procede del parche TachoComb®. La mayor parte del coágulo del lado TachoComb® se queda en el parche cuando se despega. Un trozo del parche de espuma de gelatina se incorpora en el lugar de 10 mg.

Cuando se inyectó la epinefrina, el parche TachoComb® todavía goteaba sangre de los extremos después de 18 minutos. La prueba de despegado después de 20 minutos mostró el parche TachoComb® con adhesión mínima, el coágulo se pegó al parche, y la herida continuó sangrando. En la lesión con el parche de 100 mg, la sangre fluyó asimismo, pero no tanta como con el parche TachoComb®. El parche de 10 mg tuvo el menor sangrado de todos los parches y tuvo tanto una buena incorporación del parche en la lesión como una buena formación de coágulo, con adhesión mínima a la periferia.

En el riñón, no hubo mucha diferencia entre las lesiones del parche TachoComb® y del parche de 100 mg. No hubo sangrado antes o después de las inyecciones de epinefrina. Cuando se despegaron los parches a los 20 minutos, el parche TachoComb® tuvo muy buenas cualidades adhesivas, buena formación de coágulo, pero algo de sangre libre. El parche de 100 mg no tuvo una buena adherencia, pero tuvo una buena formación de coágulo y sin hemorragia. Cuando se compararon un parche de gelatina ciego y un parche de 10 mg según la presente invención, el parche de 10 mg fue definitivamente mejor. Cinco minutos después de que se liberara la presión, había sangre libre bajo el parche de 100 mg mientras que había algo de sangrado alrededor del extremo del parche de 10 mg. Esto no cambió después de la epinefrina, sino cuando se realizó una prueba de despegado experimental sacando el parche y observando la formación de coágulo, el coágulo no estaba bien formado bajo el parche ciego. Además, estaba presente sangre libre, y hubo una mancha coloreada oscura con sangre en la esponja quirúrgica seca mantenida contra el parche para detectar sangre o suero que penetrase en el parche. Hubo una buena adhesión del parche de 100 mg a la superficie incluso cuando se sacó el parche. El parche de 10 mg tuvo una adhesión aceptable alrededor de los extremos y algo de sangre libre. Cuando el parche se levantó no hubo evidencia de buena formación de coágulo y de no sangrado, proporcionando de ese modo una prueba de mancha ligeramente rosada medida mediante la esponja quirúrgica seca mantenida contra el parche.

La Figura 8 ilustra un parche aplicado a un riñón, conteniendo el parche 2,5 IU/cm^{2} de trombina y 100 mg/cm^{2} de ácido épsilon aminocaproico. El color ligeramente rosado indica que virtualmente no penetra sangre libre a través del parche. No hay sangre presente en la esponja que mantiene el parche hemostático contra el órgano.

La Figura 9 muestra el polo opuesto del mismo riñón de la Figura 8, cubierto con un parche TachoComb®. Este último parche es más oscuro, lo que indica que proviene más sangre a través de la matriz del parche. Los extremos inferiores de ese parche están sueltos cuando se compara con el parche de la Figura 7. La sangre fresca se pudo ver sobre una esponja seca mantenida contra el órgano con el objetivo de ayudar en la detección de sangre fresca.

Ejemplo 4 Eficacia hemostática conseguida por el parche GE(Ca++)

1) Se crearon lesiones en un bazo de cerdo según se ha mencionado en el Ejemplo 3. Como se ve en la Figura 10, no se observó pérdida en el parche GE(Ca++), mientras se observó algo en el parche GT(Ca++)E. Al cabo de 10 minutos, había una ligera pérdida a partir de los centros de ambos, que paró en 15 minutos. Cuando se sacaron los parches, no hubo diferencia en una prueba de mancha realizada en la superficie del parche, ya que ambas pruebas de manchas fueron ligeramente rosadas. Se observó muy buena adhesión para ambos parches, además de coágulos bien formados, grandes. En el parche GE(Ca++), el coágulo se adhirió al parche pero no a la lesión.

2) En el hígado, ninguno mostró sangrado en ninguna de las observaciones. Cuando se despegaron, ambos parches tenían buena adhesión, pero el parche GE(Ca++) sangró libremente después de que se sacara el parche. En contraste, el parche GT(Ca++)E tuvo alguna incorporación y un buen coágulo. El GE(Ca++) no pareció tener un buen coágulo.

3) En los riñones hubo descubrimientos inesperados. El parche GE(Ca++) no tuvo pérdida evidente mientras que el GT(Ca++)E perdió fácilmente. A los 10 minutos, la pérdida había disminuido en el parche GT(Ca++)E, y a los 15 minutos, no hubo pérdida en ninguno. Cuando se sacaron los parches, ambos tuvieron buena adhesión, alguna incorporación del parche GT(Ca++)E, pero ambos sangraron en ausencia del parche.

La conclusión de este experimento sugiere que existe una pequeña diferencia entre los tratamientos aunque la formación de coágulo parece ser mejor con la adición de trombina. Esto significa que un vendaje de primeros auxilios que sea estable bajo una exposición más severa al calor puede ser eficaz sin la presencia de trombina.

Ejemplo 5 Comparación de CVA(Ca++)TE ("alginato de calcio/sodio") y otros parches

1) Se aplicaron de la manera habitual los parches CVAT(Ca++)EF, CVCT(Ca++)EF y GT(Ca++)EF a las lesiones de bazo y cada uno contenía 2,5 mg/cm^{2} de fibrinógeno. Como se muestra en la Figura 11, los resultados demuestran que GT(Ca++)EF, CVAT(Ca++)EF y CVC(Ca++)EF sangraron del extremo en la liberación de la presión a los 5 minutos. A los 10 minutos, el sangrado paró excepto en la parte no cubierta de la lesión. A los 15 minutos, paró toda la hemorragia. Cuando se extrajeron los parches: GT(Ca++)EF empezó a sangrar cuando la lesión se estiró pero tuvo una buena formación de coágulo y una buena adhesión dentro de la herida; CVAT(Ca++)EF tuvo una buena adhesión dentro de la herida, algo de formación de coágulo y sangre libre bajo el parche; y CVC(Ca++)EF tuvo una buena adhesión, y un coágulo bien formado en la lesión, este fue el más eficaz de los tres parches. Una evaluación aproximadamente 50 minutos más tarde mostró que (1) CVAT(Ca++)EF tuvo la mejor adhesión, (2) GT(Ca++)EF se adhirió a la lesión, y (3) CVCT(Ca++)EF estaba suelto pero tampoco sangró.

Se realizaron estudios similares en el hígado y en el riñón, sacando la conclusión de que no había mucha diferencia entre los parches probados, aunque CVAT(Ca++)EF superó ligeramente a los otros dos parches.

Ejemplo 6 El parche GT(Ca++)EFP ("protamina")

Se realizó este estudio para examinar la protamina, un antagonista de la heparina, en la combinación de compuestos aplicados a los parches. La protamina resulta ventajosa para favorecer los pacientes que están anticoagulados para enfermedades del miocardio, pulmonares, vasculares u otras enfermedades en las que la prevención o prolongación de la coagulación sea una ventaja.

Para probar el parche de protamina, se heparinizó un cerdo con una dosis de 2000 unidades antes de que se iniciara el estudio y otra de 1000 unidades una hora después y 45 minutos antes de la finalización del estudio. Los parches GT(Ca++)EF "espuma de gelatina", CT(Ca++)EF "colágeno" y GT(Ca++)EFP ("protamina") utilizados en este estudio se muestran en la Figura 12A. Dos protaminas se aplicaron al Parche de Protamina en una cantidad de 5 mg/cm^{2}. El fibrinógeno y EACA se molieron hasta un polvo fino antes de la aplicación a los parches en las cantidades descritas anteriormente.

1) En el bazo, todas las lesiones continuaron sangrando tras eliminar la presión, pero la lesión con un parche de protamina fue la que menos sangró. La fotografía mostrada en la Figura 12B se tomó 35 segundos después de la liberación de la presión. La presión se aplicó otra vez de 7,5 a 10 minutos. A los 10 minutos, la presión se eliminó otra vez y se evaluó el sangrado. Todas las lesiones continuaron sangrando.

La presión se aplicó otra vez durante aproximadamente 4 minutos más. Ahora, GT(Ca++)EF tuvo controlada la hemorragia; CT(Ca++)EF sangró solo de una parte expuesta de la lesión en la que el parche se había resbalado; y, GT(Ca++)EFP fue similar a CT(Ca++)EF.

La presión se aplicó otra vez durante 45 segundos. Se sacaron los parches de las lesiones 3 minutos más tarde. GT(Ca++)EF no tuvo sangrado, tuvo buena incorporación y adhesión, pero poco coágulo; CT(Ca++)EF todavía sangraba de la parte expuesta a la lesión, tuvo buena adhesión y un buen coágulo, pero sangraba todavía bajo el parche; y, GT(Ca++)EFP continuó sangrando de la porción expuesta a la lesión, tuvo buena adhesión, incorporación, y formación de coágulo. El bazo se ligó. La cavidad abdominal tuvo un gran coágulo de la sangre de la hemorragia.

2) El protocolo fue similar para el hígado. El parche GT(Ca++)EF sangró fuertemente de los extremos; el CT(Ca++)EF sangró de los extremos; y, GT(Ca++)EFP tuvo solo un ligero sangrado de los extremos. La presión se aplicó otra vez durante 15 segundos y a continuación ninguno de los parches mostró hemorragia a los 10 minutos de la mancha. Esto fue cierto a los 15 minutos, también.

A los 20 minutos, se despegaron los parches. GT(Ca++)EF tuvo buena adhesión pero sangre libre bajo el parche; CT(Ca++)EF tuvo menos adhesión pero buena formación de coágulo; y GT(Ca++)EFP tuvo buena adhesión y formación de coágulo bajo el parche.

3) En el riñón, los resultados fueron similares. Después de la liberación de la presión, el parche GT(Ca++)EF tenía pérdida en el centro; CT(Ca++)EF sangraba lentamente desde el fondo del parche; y, GT(Ca++)EFP sangraba lentamente desde el medio y empapado en apariencia. A los 10 minutos, GT(Ca++)EF tuvo una ligera pérdida si la hubo; y, CT(Ca++)EF y GT(Ca++)EFP no sangraron.

Se inyectó epinefrina. GT(Ca++)EF empezó a perder; CT(Ca++)EF empezó a perder del extremo; y, GT(Ca++)EFP no tuvo pérdida. Cuando se extrajeron los parches, el GT(Ca++)EF tuvo una adhesión aceptable, algo de sangre libre y sangraba lentamente desde la superficie; CT(Ca++)EF tuvo muy poca adhesión, más sangre libre, pero buena formación de coágulo; y, GT(Ca++)EFP tuvo adhesión aceptable, un buen coágulo y sin hemorragia.

En resumen, se realizó una comparación entre los parches de espuma de gelatina y de colágeno preparados con trombina, EACA, y fibrinógeno, con un parche de espuma de gelatina que contenía los mismos compuestos más protamina, un antagonista de la heparina. Mientras se tardó más tiempo en efectuar la hemostasia, la presión tuvo que ser aplicada diversas veces entre observaciones y el control de sangrado tardó más tiempo, los resultados de todos los experimentos indicaron que la adición de sulfato de protamina resultó en una detención más temprana del flujo de sangre, mejor formación de coágulo y mejor adhesión por lo general que los parches sin sulfato de protamina. Los resultados predijeron que cuando un paciente se hepariniza o recibe dicumarol, es aconsejable aplicar presión a un parche de protamina durante 20 minutos, y preferentemente por lo menos 10 minutos.

Ejemplo 7 El parche ("RGD")

El estudio tiene ambas partes I y II.

Parte I

Se aplicaron los parches CTR, CTE(f), GT(f)E(f) y un parche de espuma de gelatina (G) liso a lesiones realizadas en el bazo de un cerdo anestesiado. El símbolo "(f)" indica el compuesto inmediatamente anterior como un compuesto acabado de aplicar. Esto es, E(f) indica que EACA se acaba de aplicar a un parche hace muy poco (menos de aproximadamente tres horas) después de que se ha fabricado.

1) Pérdida: cuando se sacó la presión de la esponja de los parches, el parche G no tuvo pérdida virtualmente. Esto fue cierto en el parche CTE(f)R también, pero el parche CTR mostró mucho sangrado. Brevemente a continuación, los resultados se guardaron como similares.

2) Despegado/Adhesión: los tres parches se pegaron a las esponjas empapadas en salino y la presión de la esponja se eliminó cuidadosamente para evitar su eliminación de la lesión; de este modo la adhesión en todos los parches fue mínima en ese tiempo. El parche G mostró algo de adhesión, pero CTR y CTE(f)R mostraron buena adhesión incluso aunque cada uno tuvo algo de formación de coágulo, mejor en CTE(f)R. Aproximadamente 6 minutos tras la eliminación de la presión, la espuma de gelatina mostró muy buena adherencia y pobre formación de coágulo. Ninguno de los otros parches mostró buenas cualidades de adhesión, mientras que CTR mostró algo de coágulo y CTE(f)R tuvo un coágulo excelente, grande.

Parte II

Se crearon más lesiones en el bazo y se compararon todos los resultados. Los parches aplicados fueron CTE(f) y GT(f)E(f).

1) Pérdida: ninguno de los parches CTE ni GT(f)E(f) mostraron pérdida cuando se eliminó la presión de la esponja. Cinco minutos después, la vena se ocluyó y la presión intravascular aumentó y se evaluaron las lesiones provocadas en ambas partes. El tiempo para la prueba de presión incrementada realizada después de que se eliminase la esponja en la Parte I es 27 minutos y en la Parte II, solo 5 minutos. El parche sólo de espuma de gelatina (G) no tuvo pérdida en absoluto; ni tampoco CTR, **CTE(f)R. Comparando los dos parches con T y EACA utilizando la espuma de gelatina o la matriz de colágeno, el parche de espuma de gelatina, GT(f)E(f), mostró menos pérdida que el parche basado en colágeno, CTE. De hecho, el parche CTE tuvo más pérdida a medida que aumentó la presión venosa.

2) Despegado/Adhesión: dos minutos tras eliminar la presión de esponja y cuando se comparan CTE(f), colágeno + T + EACA y GT(f)E(f), el parche basado en espuma de gelatina tratado similarmente mostró muy buena adhesión tanto en la lesión como en el tejido circundante. El parche CTE con la base de colágeno tuvo poca o ninguna adhesión. 10 minutos después de eliminar la presión de la esponja (parte II parches GT(f)E(f) y CTE(f)) y con la presión intravascular todavía elevada, se evaluaron juntos todos los parches de la Parte I y de la Parte II. El intervalo de tiempo fue aproximadamente 32 minutos después de la eliminación inicial de la presión de la esponja para estos parches de la Parte I (CTR, G, y CTE(f)R). Los resultados fueron los siguientes: parche G) fuerte adhesión al tejido circundante, no adhesión a la lesión, mucha pérdida. Parche CTE(f)R) no adhesión, buena formación de coágulo, pérdida pequeña. Parche CTR) no adhesión, buena formación de coágulo y pérdida pequeña. Parche GT(f)E(f)) buena adhesión a la lesión, buena formación de coágulo, pérdidas pequeñas. Parche CTE(f) no adhesión, buena formación de coágulo, pérdida pequeña.

3) Se realizó una evaluación adicional de las lesiones del bazo (Parte I) 58 minutos después de la eliminación inicial de la presión de la esponja, Parte II, -36 minutos después de la eliminación inicial de la presión. Se sacaron los parches en este momento. Los resultados de esta evaluación son: Parche TR) formación moderada de coágulo, poca pérdida, si la hay. Parche G) pérdida, pero queda espuma de gelatina pegada a la lesión. Parche CTE(f)R) coágulo excelente, sin pérdida. Parche GT(f)E(f)) buena formación de coágulo, poca pérdida, si la hay. Parche CTE(f) buena formación de coágulo, virtualmente seco.

4) Se realizó una evaluación de estas lesiones de bazo 37 minutos más tarde. Parche CTR) seco a la prueba de la mancha (colocando una esponja quirúrgica seca sobre la lesión), se desarrolla el coágulo, no se incorpora colágeno a la lesión. Parche G) seco a la prueba de la mancha, espuma de gelatina incorporada a la lesión. Parche CTE(f)R) absolutamente no hay elementos de sangre sobre la esponja después del manchado; coágulo es excelente, llenando la lesión y extendiéndose en el área normal circundante. Parche GT(f)E(f)) mancha de suero en la esponja, pero buen coágulo y esponja de gelatina incorporada a la lesión. Parche CTE(f) seco a la prueba de la mancha; similar a CTE(f)R.

Claims

1. Utilización de una composición que comprende ácido épsilon aminocaproico en la fabricación de un parche hemostático, siendo capaz dicho ácido épsilon aminocaproico de promover la activación acelerada de trombina acelerando de este modo la formación del coágulo en la interfase entre una superficie de la herida y el parche hemostático.

2. Utilización según la reivindicación 1, en la que dicho parche hemostático se adapta para detener el sangrado rápidamente y sin humectación previa de una lesión en un órgano parenquimal, y está en forma de una lámina flexible libre de fibrinógeno, estable al almacenamiento, estéril y seca de una matriz biodegradable que contiene un agente hemostático sobre sólo una cara de la misma, cuyo agente hemostático comprende una cantidad de trombina, opcionalmente trombina bovina, que resulta efectiva para promover la hemostasia acelerada y una cantidad de ácido épsilon aminocaproico efectiva para inhibir la fibrinólisis y para acelerar la activación de la trombina cuando el parche se aplica a la lesión sangrante;

conteniendo dicho parche opcionalmente una o más de una fuente de iones de calcio, péptido RGD, péptido RGDS, sulfato de protamina y regulador.

3. Utilización según la reivindicación 2, en la que la matriz biodegradable es:

(a): una espuma, opcionalmente espuma de gelatina absorbible; o

(b): seleccionada de entre gelatina absorbible, alginato de calcio, alginato de calcio/sodio, colágeno y celulosa oxidasa regenerada.

4. Utilización según la reivindicación 2 ó 3, en la que:

(a): el ácido épsilon aminocaproico está presente en una cantidad comprendida aproximadamente entre 10 y100 mg/cm^{2} de la superficie de contacto con la herida de la matriz, p.ej., entre 60 y 70 mg/cm^{2} de la superficie de contacto con la herida de la matriz; y/o

(b): la trombina está presente en una cantidad comprendida entre 1 y 4 IU/cm^{2} de la superficie de contacto con la herida de la matriz; y/o

(c): los iones de calcio están presentes en una cantidad equivalente comprendida entre 25 y 150 microgramos de CaCl_{2}/cm^{2} de la superficie de contacto con la herida de la matriz.

5. Utilización de una composición en la fabricación de un parche hemostático, siendo eficaz dicha composición para aumentar el pH en el lugar de aplicación del parche, en un pH comprendido en el intervalo entre 7,0 y 9,0 p.ej., 7,62 a 8,02 inclusive, acelerando de este modo la activación de la trombina y acelerando de este modo la formación de coágulo en la interfase entre una superficie herida y el parche hemostático.

6. Utilización según la reivindicación 5, en la que dicho parche hemostático es un parche hemostático libre de fibrinógeno estable al almacenamiento, estéril y seco, comprendiendo una matriz biodegradable que contiene una cantidad promotora de hemostasia de trombina, opcionalmente trombina bovina.

7. Utilización según la reivindicación 5 ó 6, en la que dicho pH se incrementa por acción del ácido épsilon aminocaproico en dicha composición.

8. Utilización según la reivindicación 5, en la que la matriz biodegradable es una lámina flexible de una espuma de gelatina absorbible, en la que el parche opcionalmente contiene una o más de una fuente de péptido RGD, péptido RGDS, sulfato de protamina y regulador; en la que el ácido épsilon aminocaproico está presente en ésta en una cantidad comprendida entre 60 y 70 mg/cm^{2} de la superficie de contacto con la herida de la matriz; en la que la trombina está presente en una cantidad comprendida entre 1 y 4 IU/cm^{2} de la superficie de contacto con la herida de la matriz; y en la que los iones de calcio están presentes en una cantidad equivalente comprendida entre 25 y 150 microgramos de CaCl_{2}/cm^{2} de la superficie de contacto con la herida de la matriz.

9. Utilización de una matriz biodegradable libre de fibrinógeno, estable al almacenamiento, estéril, seca que contiene un agente hemostático, cuyo agente hemostático comprende una cantidad de trombina, opcionalmente trombina bovina, que resulta eficaz para promover la hemostasia acelerada y una cantidad de ácido épsilon aminocaproico eficaz para inhibir la fibrinólisis en la fabricación de un parche de medicamento que posee un nivel acelerado de activación de trombina.