ES2587380T3 - Procedimientos para la preparación de apósitos para heridas, y un banco de apósitos para heridas - Google Patents

Abstract

Un procedimiento de preparación de un apósito para heridas, comprendiendo el procedimiento: (a) proporcionar un volumen de sangre entera recogida; (b) coagular dicha sangre entera para formar un coágulo ex vivo; y (c) formar un apósito para heridas que comprende el coágulo.

Description

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

DESCRIPCION

Procedimientos para la preparacion de apositos para heridas, y un banco de apositos para heridas Campo de la invencion

La presente invencion se refiere a procedimientos para la produccion de apositos para heridas, y a un banco de apositos para heridas.

Antecedentes de la invencion

La piel es el organo mas grande del cuerpo de los mairnferos y desempena diversas funciones cnticas. En algunos casos, la piel se ve alterada por un trauma (por ejemplo, laceracion, abrasion, quemaduras o puncion) o una ulceracion (por ejemplo, ulceras de pie diabetico). Las alteraciones en la piel que no se curan, o que se repiten de forma espontanea, se conocen como heridas cronicas (Fowler (1990) en Chronic wounds: an overview. En: Krasner D, editor. Chronic wound care: a clinical source book for healthcare professionals. King of Prussia, PA: Health Management Publications, Inc; pag. 12-8 y Singh et al (2004) Asian J Surg 27:326-32).

Aproximadamente el 1% y el 2% de los individuos se veran afectados por la ulceracion de la pierna durante su vida, y esta cifra probablemente aumentara a medida que la poblacion envejece (Rees y Hirshberg (1999). Adv Wound Care 1999; 12:4-7 y Callam M. (1992) Phlebology 7:S6-S12). Los gastos globales para el cuidado de heridas alcanza hasta a $ 13 a $ 15 mil millones al ano (Walmsley (2002) En: Clinica reports. London: PJB Publications, Ltd.).

Los grupos de pacientes que sufren heridas cronicas incluyen, pero no se limitan a, pacientes diabeticos, pacientes geriatricos y pacientes con problemas circulatorios. Ademas, las heridas cronicas pueden aparecer como resultado de un trauma agudo o como un smtoma despues de la cirugfa.

Las heridas cronicas pueden variar en tamano, profundidad y estadio de curacion. Las heridas pueden contener tejido necrotico, infeccion, costras, o exudados (purulenta, cerotico).

Las heridas cronicas se pueden clasificar por su causa, tal como presion, diabetico, isquemica, venosa, y desgaste y/o por la naturaleza de la propia herida como su profundidad y/o estadio de curacion y/o descarga y/o infecciones. Las quemaduras son otro tipo de herida que es diffcil de tratar.

El tratamiento de quemaduras convencional se basa normalmente en una crema topica de antibioticos (por ejemplo, sulfadiazina de plata) seguido de un aposito antiadherente y gasa. El uso de apositos biologicos basados en los injertos de celulas cultivadas y/o productos sangumeos fraccionados tambien se ha sugerido. De acuerdo con diferentes estrategias de manipulacion de quemaduras, la frecuencia de los cambios del aposito puede variar de dos veces por dfa a aproximadamente una vez por semana.

Se han propuesto una serie de estrategias de tratamiento de quemaduras no convencionales. Una descripcion no exhaustiva de algo de la tecnica sigue a continuacion.

El documento WO/2001/021195 describe un aposito que incluye fibrina preformada que funciona como una cubierta no adhesiva de una superficie de la piel quemada, funcionando del mismo modo como un vehfculo de administracion de compuestos farmaceuticos que estan atrapadas dentro del coagulo de fibrina.

J. Travis (Science News Online 155 (25); 19de junio de, de 1999) describe vendajes de fibrina producidos por Martin MacPhee en el Laboratorio Holland de la Cruz Roja Norteamericana en Rockville, Md. Los vendajes emplean una tela hecha de material biodegradable saturado con trombina, fibrinogeno, y el factor de 13 purificado a partir de sangre humana. Los vendajes son fragiles hasta que se mojan, y luego se vuelven flexibles

El documento US 2002/0146446 describe un aposito quirurgico medico que utiliza un sandwich de dos matrices extracelulares cultivadas en un material compuesto, compuesto de sulfato de gelatina-fibronectina-heparan. El medio de cultivo utilizado para cultivar los dos tipos de celulas (fibroblastos dermicos y celulas endoteliales microvasculares dermicas que forman la segunda matriz extracelular) es el medio acondicionado (CM) obtenida a partir de celulas endoteliales umbilicales humanas utilizadas para formar la primera matriz extracelular. Todas las celulas del cultivo de tejidos se separan dejando su matriz acelular secretada detras e intacta. Este CM puede neutralizar tambien la enzima DISPASA utilizada comercialmente para separar laminas epiteliales cultivadas ("autoinjertos epiteliales cultivados '(CEA)) a partir de la matriz en la que las celulas epidermicas humanas, que forman las laminas se cultivan. Los CEA se utilizan clmicamente en la manipulacion de heridas y quemaduras.

Henderson L. et al, divulga la curacion de quemaduras superficiales en la piel con un aposito de gel de plaquetas autologo. (Ear, Nose & Throat Journal, 2003).

El documento US 3723244 describe un procedimiento de produccion de fibrina en forma de laminas mediante la centrifugacion de una dispersion acuosa de fibrina en la que moleculas de fibrina monomericas se combinan mediante la polimerizacion para formar hebras de fibrina. La etapa de centrifugacion se realiza en un recipiente que

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

tiene una pared para la interceptacion de las partmulas sometidas a aceleracion centnfuga en su interior y a una velocidad que granula en dicha pared las hebras de fibrina resultantes de la polimerizacion, de modo que las hebras granuladas se interbloquean para formar una lamina que se recupera de la pared. La dispersion acuosa puede ser plasma sangumeo y las laminas de fibrina resultantes se describen como utiles como un vendaje para quemaduras.

El documento US 6.521.265 describe un procedimiento de promocion de la curacion de una herida sangrante que incluye mezclar un compuesto sustancialmente anhidro de un ferrato de sal, que se hidrata en presencia de agua para producir Fe+++ y oxfgeno, en combinacion con un material de intercambio cationico insoluble, con una cantidad de un medio acuoso tal como sangre entera tomada directamente de la herida con agua desionizada; cloruro de sodio acuoso; gelatina disuelta acuosa; metacel carboxi acuosa; y una solucion acuosa de hidratos de carbono para formar una pasta untable. La pasta se aplica a la herida en un tiempo de trabajo corto para promover la coagulacion de la sangre. De acuerdo con la descripcion, la presencia de oxfgeno, reduce sustancialmente el nivel de bacterias, virus y hongos en la herida a medida que se forma una capa protectora sobre la herida.

El documento US 4.347.841 describe un aposito biologico para heridas de quemaduras formadas mediante la eliminacion de la hemoglobina libre de un concentrado de globulos rojos que se somete a hemolisis. El aposito contiene estroma, elementos subcelulares y protema precipitada a partir del concentrado de globulos rojos humano liberado de la hemoglobina y que se puede utilizar en una forma en forma de polvos o capa con, si se desea, un soporte apropiado.

El documento US 2007/0275461 y el documento US 2004/0171145 describen dermis artificial obtenida a partir del plasma con plaquetas y fibroblastos humanos. El plasma con plaquetas se obtiene del fraccionamiento de la sangre entera del paciente por centrifugacion liviana, y los fibroblastos humanos se obtienen de una biopsia de piel. La coagulacion se obtiene mediante la adicion de calcio. La dermis artificial se describe como para proporcionar el crecimiento rapido de los queratinocitos sembrados en su superficie para construir una piel artificial que puede ser facilmente trasplantada. Grandes areas de dermis artificial se describen como obteniendose a partir de una pequena biopsia de la piel y cantidades mmimas de plasma con plaquetas. La piel artificial se describe como util para el tratamiento de grandes quemaduras, ulceras cronicas de la piel, o para utilizarse con celulas alteradas geneticamente, como un vehmulo para la terapia genica.

El documento US 2004/0124564 describe un procedimiento para la preparacion de una lamina compuesta de protemas de fibrina-fibrilar modificadas qmmicamente (FFP) de uso medico y el material compuesto de FFP preparado de esta manera. De acuerdo con la descripcion, la lamina de FFP encuentra uso potencial como una ayuda de aposito en el tratamiento de diversas heridas externas, incluyendo heridas de quemaduras.

Tambien se describe el uso de componentes sangumeos purificados o fraccionados en otros contextos medicos. Una descripcion no exhaustiva algo de la tecnica sigue a continuacion. El documento US4035483 divulga composiciones antisepticas quirurgicamente activas para el control de heridas obtenidas mediante la mezcla de una protema y una solucion acuosa de un hipoclorito. Preferentemente, el producto de reaccion de ambos se impregna en o se reviste sobre un soporte de lamina. La protema utilizada puede ser sangre entera.

Khalafi et al. (Eur J Surg Cardiothoracic 2008; 34: 360-364.) describe la aplicacion de plasma rico en plaquetas y obre en plaquetas para reducir significativamente los casos de infeccion de heridas en el pecho, de drenaje toracico, y de drenaje de heridas en las piernas en injertos coronarios.

Medtronic, Inc., Minneapolis, MV; Estados Unidos produce dispositivos para el procesamiento de sangre autologa para concentrar el plasma rico en plaquetas en un gel de plaquetas autologas para su uso en la cirugfa para mejorar la curacion del tejido.

Algunos de los productos de cuidado de heridas disponibles en el mercado utilizan fracciones de la sangre y/o factores aislados de sangre.

Por ejemplo, se han encontrado que una variedad de factores de crecimiento desempenan un papel en el procedimiento de curacion de heridas, incluyendo el factor de crecimiento derivado de plaquetas (PDGF), factor de crecimiento epidermico, factores de crecimiento de fibroblastos, factores de crecimiento de transformacion, y el factor crecimiento similar a la insulina. Diversas tecnologfas de curacion de heridas basadas en sangre fraccionada o factores de crecimiento derivados de la sangre estan disponibles en el mercado.

Una de las tecnologfas disponibles en el mercado emplea tecnicas de ADN recombinante para crear factores de crecimiento purificados. El Gel REGANEX™ (fabricado por Systagenix Wound Management) es un gel topico, que contiene el ingrediente activo becaplermina con una actividad similar a la de las plaquetas humanas derivadas del factor de crecimiento (PDGF). Este factor de crecimiento recombinante se produce mediante tecnologfa de ADN recombinante mediante la insercion del gen para la cadena B del factor de crecimiento derivado de plaquetas (PDGF) en Saccharomyces cerevisiae.

Otra tecnologfa disponible en el mercado emplea plasma rico en plaquetas (PRP). El PRP se afsla de la sangre entera por centrifugacion. El PRP autologo contiene una mezcla de los factores de crecimiento activados citocinas y quimiocinas, con potencial reducido para la respuesta inmune. La exposicion de PRP a una solucion de trombina y

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

cloruro de calcio da como resultado la polimerizacion de fibrina a partir de fibrinogeno, creando un gel de plaquetas que se puede aplicar a las heridas. El PRP ofrece a la herida factores de crecimiento, citocinas y quimiocinas que promueven la angiogenesis y regulan el crecimiento celular y la formacion de nuevo tejido. AutoloGel™ (fabricado por Cytomedix, Inc.) y SafeBlood® (fabricado por SafeBlood Technologies) son dos productos derivados de la sangre autologa que se pueden preparar a pie de cama para su aplicacion inmediata. Tanto el AutoloGel™ como el SafeBlood® se han comercializado espedficamente para la curacion de heridas.

Otra tecnologfa disponible en el mercado emplea pegamentos o sellantes de fibrina con hemostasia y propiedades de pegado que mejoran la curacion de heridas. Los pegamentos de fibrina comerciales se crean a partir de donantes humanos homologos agrupados. Tisseel™ (fabricado por Baxter) es un ejemplo de sellante de fibrina disponible en el mercado. La accion de este producto simula supuestamente las caractensticas clave del procedimiento fisiologico de cierre de la herida. El producto contiene una solucion de fibrinogeno aprotinina altamente concentrado, que entre otros ingredientes contiene Factor XIII, y una solucion de trombina y cloruro de calcio se aplica al area de la herida, donde la mezcla se coagula. La presencia de Factor XIII hace que la fibrina se reticule, lo que da al coagulo resistencia adicional.

Sumario de la invencion

La invencion proporciona un procedimiento de preparacion de un aposito para heridas como se reivindica en la reivindicacion 1, un procedimiento para producir un aposito biologico para heridas de acuerdo con la reivindicacion 4, y un banco de apositos biologicos para heridas de acuerdo con la reivindicacion 7.

En la presente memoria se describe un tratamiento de lesiones de la piel utilizando sangre coagulada. La sangre coagulada se forma de modo que se puede aplicar sobre una lesion en la piel.

La expresion "sangre entera" se debe entender como refiriendose a (i) la sangre tomada de la circulacion venosa o arterial; (ii) (ii) la sangre que no ha sido modificada excepto por la adicion de un anticoagulante u otros qrnmicos o sustancias biologicas o por la eliminacion de uno o mas componentes de la sangre (por ejemplo, una porcion del plasma), donde dicha modificacion no afecta a sus caractensticas ffsicas o qrnmicas generales; o (iii) la sangre que contiene todos sus componentes, como los globulos rojos y blancos, plaquetas y mas en particular, todos los componentes necesarios para la formacion de coagulos. Cabe senalar que la expresion "sangre entera" no significa necesariamente que la sangre que se utiliza como fuente para la sangre coagulada es identica a la sangre extrafda de un individuo. A veces, la sangre retirada podra ser objeto de procedimientos tales como dialisis, paso a traves de una columna, etc., para eliminar ciertos componentes, por ejemplo, aquellos indeseados, antes de su uso en la terapia de las lesiones de la piel de acuerdo con la invencion (un ejemplo es el la eliminacion de ciertos componentes inmunogenicos o anti-sueros en el caso de la utilizacion de sangre no autologa). Tambien, de acuerdo con algunas realizaciones ejemplares de la invencion la sangre entera se complementa con uno o mas aditivos. Los aditivos incluyen, pero no se limitan a aditivos que influyen la coagulacion, aditivos que cambian las propiedades ffsicas y aditivos medicamente activos.

Las lesiones de la piel que pueden tratarse de acuerdo con la invencion incluyen todo tipo de lesiones de la piel donde se pierde piel o donde los objetivos de la terapia son, entre otros, el re-crecimiento de la piel. Estas incluyen tanto heridas no hemorragicas (por ejemplo, quemaduras y ulceras) y heridas sangrantes (por ejemplo, abrasiones).

Los aditivos que influyen la coagulacion incluyen, pero no se limitan a anticoagulantes, anti-anticoagulantes y/o aceleradores de coagulacion (tales como fosfoffpidos cargados negativamente (PL) y agentes de contacto superficial como Caolm). Para evitar la coagulacion incontrolada de la sangre, uno o mas anticoagulantes (por ejemplo EDTA) se pueden anadir a la sangre inmediatamente despues de la extraccion desde un individuo. Los anticoagulantes se incluyen, de hecho, normalmente en tubos de ensayo u otros recipientes donde se recolecta la sangre. Ademas, la sangre almacenada en un banco de sangre incluye normalmente uno o mas anticoagulantes. De acuerdo con algunas realizaciones ejemplares de la invencion para contrarrestar el anticoagulante en toda la preparacion de sangre, se anade un anti-anticoagulante para permitir la coagulacion de la sangre. Por ejemplo, iones de Ca2+ se pueden utilizar para contrarrestar la actividad de EDTA. Estos iones se pueden anadir como una solucion de una sal de calcio soluble. Puesto que el tipo y la cantidad de anticoagulante que se ha anadido a una unidad de sangre entera son normalmente conocidos, es posible seleccionar un anti-anticoagulante adecuado y calcular una cantidad apropiada para su uso.

Los adictivos que cambian las propiedades ffsicas incluyen, pero no se limitan a, diluyentes (por ejemplo, soluciones salinas), endurecedores (por ejemplo, minerales), plastificantes y elastizadores.

Los aditivos medicamente activos incluyen pero no se limitan a los antibioticos, antisepticos, analgesicos, factores de crecimiento, citoquinas, enzimas, hormonas, celulas, agentes anti-inflamatorios y muchos otros que puedan proporcionarse por los expertos en la materia del cuidado de heridas.

El uso de aditivos medicamente activos y que cambian las propiedades ffsicas se describe en los documentos US 2004/0147024, US 5.610.148 y US 5.629.287.

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

Algunos ejemplos divulgados en la presente memoria se basan en la comprension de que un coagulo de sangre contiene naturalmente las propiedades ffsicas, qmmicas y funcionales que lo convierten en un aposito efectivo para cubrir la herida y promover la curacion.

Sin desear estar limitado por la teona, se cree que la sangre entera coagulada debe abordar necesariamente todos los requisitos basicos de un aposito para heridas. Opcionalmente, mediante el uso de un coagulo de sangre autologo (un coagulo de la sangre entera extrafda del paciente) cualquier posibilidad de una respuesta inmune se reduce en gran medida. Opcionalmente, cuando se utiliza un coagulo de sangre homologa (es decir, un coagulo de la sangre entera extrafda de un individuo diferente, por ejemplo obtenida a partir de un banco de sangre), el potencial para la respuesta inmune se puede reducir mediante la tipificacion serologica.

Un aspecto de algunas realizaciones de la invencion se refiere a la formacion de una capa o lamina de sangre entera coagulada en una estructura de soporte. De acuerdo con algunas realizaciones ejemplares de la invencion la estructura de soporte se incrusta dentro de la sangre entera coagulada. Como alternativa o adicionalmente, la estructura de soporte es externa al coagulo. De acuerdo con algunas realizaciones ejemplares de la invencion, la estructura de soporte ayuda en la transferencia de la sangre entera coagulada de un lugar a otro y/o contribuye a un cambio en el comportamiento de contraccion durante la coagulacion y/o contribuye a un cambio en las propiedades ffsicas del coagulo de sangre entera resultante (por ejemplo, aumento de la resistencia). Un ejemplo de una estructura de soporte es una capa de un material fibroso tal como gasa.

Se divulga la formacion simultanea de una pluralidad de coagulos de sangre entera esteriles de una fuente de sangre entera. De acuerdo con algunas realizaciones ejemplares de la invencion se forman los coagulos en laminas de un espesor deseado. Opcionalmente, las laminas de la pluralidad tienen un espesor comun. Opcionalmente, las laminas se forman en una estructura de soporte.

Se divulga una lamina esteril de sangre entera coagulada que incluye un anticoagulante y suficiente anti- anticoagulante para permitir la coagulacion. La lamina esteril de sangre coagulada se puede proporcionar en un paquete o envoltorio que mantiene su esterilidad durante el almacenamiento y/o de transito. Tambien el coagulo de sangre se forma normalmente como una lamina, la invencion no se limita a los coagulos de sangre formados en una forma tan espedfica.

Se divulga la aplicacion de la sangre entera coagulada a una superficie de la piel de un sujeto. La sangre entera coagulada se puede aplicar como parte de un aposito humedo o un aposito seco. La superficie de la piel incluye una herida (por ejemplo, ulcera o laceracion) y/o una superficie de piel quemada.

Opcionalmente, la sangre entera coagulada se aplica con un soporte interno y/o externo, como se ha descrito anteriormente en la presente memoria y a continuacion. La sangre entera coagulada se puede cubrir con un aposito convencional. La expresion "aposito convencional" como se utiliza en la presente memoria descriptiva y en las reivindicaciones adjuntas se refiere a una cubierta que incluye una o mas capas, cada una seleccionada independientemente de una capa no adhesiva, una capa absorbente (por ejemplo, gasa y/o tela no tejida o malla similar) y una capa de adhesivo (por ejemplo, cinta).

Un aspecto de algunas realizaciones de la invencion se refiere a un banco de apositos preparados a partir de unidades de sangre entera coagulada. De acuerdo con algunas realizaciones ejemplares de la invencion, los apositos son catalogados por identificadores unicos correspondientes a las unidades. Opcionalmente, los identificadores unicos se utilizan para hacer coincidir un sujeto con uno o mas apositos biologicos espedficos.

De manera opcional, la informacion correspondiente se proporciona como datos legibles por maquina asociados con dicho identificador unico en una tabla de consulta en una memoria de un ordenador. Los datos legibles por maquina incluyen, pero no se limita a, los datos relacionados con el tipo de sangre, datos de compatibilidad cruzada, datos de haplotipos HLA y otros datos geneticos. Como alternativa o adicionalmente, la informacion correspondiente se ofrece como una alfcuota de sangre sin coagular reservada de cada una de dichas unidades de sangre entera a partir de las que se prepara cada una de dichas placas en dicha pluralidad, cada alfcuota asociada catalogada por dicho identificador unico. "Tipo de sangre" como se utiliza en la presente memoria se refiere a cualquier caracterizacion de antfgenos y/o anticuerpos y no se limita a A; B; AB; O y Rh+/-.

Un aspecto de algunas realizaciones de la invencion se refiere a la difusion de una cantidad, por ejemplo, una unidad de sangre entera obtenida de un donante o banco de sangre sobre un area, por ejemplo, 50-10.000 cm2, y que permite que la sangre forme un coagulo. La esterilidad de la sangre se puede mantener durante la coagulacion. Como facilmente se puede entender, las medidas del area indicadas anteriormente son ejemplares y que pueden ser mas pequenas o mas grandes. Puede, a veces, ser un intercambio entre la resistencia de la lamina resultante a coagular la sangre y el area, con areas mas grandes produciendo la formacion de coagulos debiles. Una capa de soporte contribuye a la resistencia que permite la difusion de la sangre en un area mayor. En general, el espesor de la sangre se reduce durante la formacion de coagulos por la supuracion o sudoracion de plasma del coagulo durante y/o despues de la formacion. Por ejemplo, una capa de 3 mm de sangre entera produce un coagulo con un espesor de aproximadamente 1,2 mm despues de 1 dfa in vitro. De acuerdo con algunas realizaciones ejemplares de la invencion se anade un iniciador de coagulacion antes de la difusion. Opcionalmente, se selecciona el iniciador de

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

coagulacion para neutralizar la actividad de un anticoagulante en la sangre.

Un aspecto de algunas realizaciones de la invencion se refiere al uso de la sangre entera fraccionada en la fabricacion de un aposito de sangre para heridas.

En la presente memoria se describe la aplicacion de la sangre entera a un area de piel en necesidad de tratamiento para formar un coagulo de sangre sobre la misma. El area se puede cubrir por una capa absorbente. Opcionalmente, la capa absorbente incluye una malla tal como una gasa y/o de la tela no tejida. Opcionalmente, el coagulo se cubre despues de la formacion. La piel quemada se puede tratar. Opcionalmente, la esterilidad de la sangre se mantiene durante la aplicacion.

Un aspecto de algunas realizaciones de la invencion se refiere a cortar rodajas o laminas de sangre entera coagulada de un bloque de sangre entera coagulada. La expresion "bloque", como se utiliza en la presente memoria descriptiva se debe interpretar en sentido amplio para incluir todas las formas tridimensionales.

Tal como se utiliza en la presente memoria, el adjetivo "retirable" indica que el objeto descrito se ha disenado para permitir su retirada por un usuario medio sin un esfuerzo excesivo. Retirable incluye tanto los elementos que se retiran sin herramientas, como los que requieren el uso de una herramienta (por ejemplo tijeras, cuchillos o abridores). En algunas realizaciones ejemplares de la invencion, las herramientas para la retirada se proporcionan con sus partes retirables coincidentes en la forma de una lata de sardinas con una "llave" adjunta.

Se divulga un dispositivo para la coagulacion de sangre entera y que forma la misma en un coagulo para su uso en el tratamiento de una lesion de la piel. El dispositivo tiene un receptaculo de sangre para recibir la sangre, el receptaculo se forma de una manera para impartir una forma final deseada, por ejemplo, plana, en el coagulo de sangre formado.

De manera opcional, la informacion de compatibilidad cruzada se ofrece como datos legibles por maquina asociados con el identificador unico en una tabla de consulta en una memoria de un ordenador.

De manera opcional, la informacion de compatibilidad cruzada se ofrece como una alfcuota de sangre sin coagular reservada de cada una de las unidades de sangre entera a partir de las que se preparo cada una de las placas en la pluralidad, cada alfcuota asociada catalogada por el identificador unico.

Opcionalmente, al menos algunas de las placas esteriles de la sangre entera coagulada comprenden una estructura de soporte externo en contacto con la placa.

Opcionalmente, al menos algunas de las placas esteriles de la sangre entera coagulada comprenden una malla incrustada en la placa.

Opcionalmente, el procedimiento comprende la adicion de un iniciador de coagulacion antes de la difusion. Opcionalmente, se selecciona el iniciador de coagulacion para neutralizar una actividad de un anticoagulante en la unidad.

Opcionalmente, la difusion se produce en un recipiente revestido con una capa que evita el contacto entre la sangre entera y el receptaculo.

Opcionalmente, la difusion es en una malla que queda oculta en el coagulo.

Opcionalmente, la matriz se adhiere al coagulo y contribuye a una transferencia de la misma.

Opcionalmente, la matriz se construye de al menos un material seleccionado del grupo que consiste en nylon, un poliuretano, una tela tejida, una tela no tejida, silicio, caucho y organosilicona.

Algunas realizaciones ejemplares de la invencion se refieren al uso de sangre entera no fraccionada en la fabricacion y/o preparacion de un aposito para heridas.

Se divulga un procedimiento para preparar placas de sangre entera coagulada, comprendiendo el procedimiento: (a) proporcionar un bloque de sangre entera coagulada en un aparato de corte; (b) hacer avanzar el bloque progresivamente; (c) cortar una porcion del bloque; y (d) repetir como alternativa (b) y (c).

Opcionalmente, el procedimiento incluye cortar una porcion del coagulo de dimensiones adecuadas para colocar un aposito sobre una herida espedfica.

Opcionalmente, el procedimiento incluye proporcionar una estructura de soporte sobre la que se forma dicho coagulo.

A menos que se defina lo contrario, todas las expresiones tecnicas y cientfficos utilizados en la presente memoria tienen el mismo significado que se entiende comunmente por un experto ordinario en la materia a la que pertenece la presente invencion. Aunque se describen a continuacion procedimientos y materiales adecuados, los

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

procedimientos y materiales similares o equivalentes a los descritos en la presente memoria se pueden utilizar en la implementacion de la presente invencion. En caso de conflicto, la memoria descriptiva de la patente, incluyendo las definiciones, prevalecera. Todos los materiales, procedimientos, y ejemplos son solo ilustrativos y no pretenden ser limitantes.

Tal como se utiliza en la presente memoria, las expresiones "que comprende(n)" y "que incluye(n)" o variantes gramaticales de los mismos se deben tomar como especificando la inclusion de las caractensticas, numeros enteros, acciones o componentes indicadas sin perjuicio de la adicion de una o mas caractensticas, numeros enteros, acciones, componentes o grupos de los mismos. Esta expresion es mas amplia e incluye las expresiones "que consiste en y" que consiste esencialmente en tal como se define por el Manual del Procedimiento de Examen de Patentes de la Oficina de Patentes y Marcas de Estados Unidos.

La frase "que consiste esencialmente en" o variantes gramaticales de la misma cuando se utilizan en la presente memoria se deben tomar como especificando las caractensticas, numeros enteros, etapas o componentes mencionados, pero no excluyen la adicion de una o mas caractensticas, numeros enteros, etapas, componentes o grupos de los mismos, pero solo si las caractensticas, numeros enteros, etapas, componentes o grupos de los mismos no alteran materialmente las caractensticas basicas y nuevas de la composicion, dispositivo o procedimiento reivindicado.

El termino "procedimiento" se refiere a las maneras, medios, tecnicas y procedimientos para realizar una tarea dada incluyendo, pero no limitado a, modales, medios, tecnicas y procedimientos bien conocidos por, o facilmente desarrollados a partir de formas, medios, tecnicas y procedimientos conocidos por los profesionales de la arquitectura y/o informatica.

Los porcentajes (%) de los productos qmmicos suministrados normalmente como polvos o cristales (por ejemplo, EDTA y sales de calcio) son W/V (peso por volumen) a menos que se indique lo contrario. Los porcentajes (%) de los productos qmmicos suministrados normalmente como lfquidos (por ejemplo, soluciones y/o diluyentes de citrato) son V/V (volumen por volumen) a menos que se indique lo contrario.

Breve descripcion de los dibujos

Para entender la invencion y para ver como se puede llevar a la practica, se describiran a continuacion realizaciones, a modo de ejemplo no limitativo, con referencia a las figuras adjuntas. En las figuras, estructuras identicas y similares, elementos o partes de los mismos que aparecen en mas de una Figura se etiquetan generalmente con referencias iguales o similares en las figuras en las que aparecen. Las dimensiones de los componentes y caractensticas mostradas en las figuras se escogen principalmente por conveniencia y claridad de presentacion y no estan necesariamente a escala. Las figuras adjuntas son:

la Figura 1A es un diagrama esquematico de un paciente tratado;

la Figura 1B es un diagrama de flujo simplificado que ilustra un procedimiento de tratamiento ejemplar; la Figura 1C es un diagrama de flujo simplificado que ilustra la adaptacion de procedimientos de tratamiento ejemplares a las modalidades de tratamiento existentes;

la Figura 2 es un diagrama de flujo simplificado que ilustra otro procedimiento de tratamiento ejemplar;

la Figura 3 es un diagrama esquematico que ilustra un artfculo de fabricacion;

la Figura 4 es una representacion esquematica de un banco de coagulos de acuerdo con algunas realizaciones ejemplares de la invencion;

la Figura 5 es un diagrama de flujo simplificado que ilustra un procedimiento de fabricacion ejemplar de acuerdo con algunas realizaciones ejemplares de la invencion;

las Figuras 6A y 6B son diagramas esquematicos que ilustran un aparato para la formacion de coagulos en dos estados de operacion diferentes;

la Figura 7 es un diagrama esquematico que ilustra otro aparato para la formacion de coagulos;

la Figura 8 es un diagrama esquematico que ilustra otro aparato para la formacion de coagulos;

la Figura 9 es un diagrama de flujo simplificado que ilustra un procedimiento ejemplar de preparacion de placas

de sangre entera coagulada de acuerdo con algunas realizaciones ejemplares de la invencion;

la Figura 10 es una fotograffa de una lamina ejemplar de sangre entera coagulada en un receptaculo;

la Figura 11 es una fotograffa de una lamina ejemplar de sangre entera coagulada con estructura de soporte

integrada soportada por la estructura de soporte;

la Figura 12 es una fotograffa de laminas ejemplares de sangre entera coagulada con estructura de soporte

integrada que representa el drenaje de lfquido de las placas;

la Figura 13 es una fotograffa de una lamina ejemplar de sangre entera coagulada;

la Figura 14 es una fotograffa que ilustra la lamina de la Figura 13 aplicada a una superficie de la piel;

la Figura 15 es una fotograffa que ilustra la exudacion de lfquidos de la lamina de la Figura 13 despues de la

aplicacion a la superficie de la piel en la Figura 14; y

las Figuras 16A, 16B y 16C son una serie de fotograffas que ilustran la adhesion de la lamina completamente seca a la piel (Figura l6A) y su retirada por desprendimiento (Figuras 16B y 16C);

las Figuras 17A, 17B, 18A, 18B, 19A, 19B, 20A, 20B, 21A, 21B, 22A, 22B, 23A y 23B son una serie de fotograffas que ilustran heridas antes del tratamiento (panel A en cada Figura) y despues del tratamiento con un

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

aposito para heridas (panel B en cada Figura).

Descripcion detallada de realizaciones ejemplares

En la presente memoria se describen anticoagulantes y anti-anticoagulantes que contienen sangre entera, la preparacion de sangre entera coagulada y/o el uso de sangre entera coagulada en el tratamiento y/o preparacion medica de apositos para heridas y/o el almacenamiento de sangre entera coagulada para su uso como un aposito para heridas y/o aparato para la preparacion de sangre entera coagulada y/o la aplicacion de sangre entera a la piel para la formacion in situ de coagulos.

En concreto, los apositos para heridas se pueden utilizar para quemaduras y/u otras lesiones de la piel (por ejemplo, ulceras cronicas).

Los principios de la preparacion y el uso de apositos biologicos para heridas y/o el aparato para producirlos y/o los bancos para almacenarlos y/o los procedimientos de tratamiento medico que se basan en los mismos se pueden entender mejor con referencia a los dibujos y descripciones adjuntas.

Antes de explicar al menos una realizacion de la invencion en detalle, se ha de entender que la invencion no se limita en su aplicacion a los detalles expuestos en la siguiente descripcion o ejemplificados por los Ejemplos. La invencion es capaz de otras realizaciones o de implementarse o realizarse de diversas maneras. Ademas, se debe entender que la fraseologfa y terminologfa empleada en la presente memoria tiene la finalidad de describir y no se debe considerar como limitantes.

Vision general:

La Figura 1A representa un ejemplo 100 en el que una porcion de una superficie 110 de la piel de un sujeto se cubre con placas 120 de sangre entera coagulada preparada espedficamente para ese fin. Las placas 120 se pueden proporcionar en combinacion con una estructura 130 de soporte y/o cubrirse con un aposito 140 convencional. La porcion de la superficie 110 de la piel de la materia cubierta por las placas 120 se selecciona debido a que requiere tratamiento (por ejemplo, una superficie de la piel quemada).

Las placas 120 dispuestas en la superficie 110 de la piel forman un aposito biologico, si se preparan con antelacion, o pueden formarse in situ en el area de tratamiento. Los diversos ejemplos que se describen a continuacion estan unidos por la idea de que las heridas no sangrantes (por ejemplo, ulceras y/o quemaduras) se ven privadas de los beneficios curativos naturales de una costra formada por la coagulacion de la sangre.

Procedimiento de tratamiento ejemplar:

La Figura 1B es un diagrama de flujo simplificado de un procedimiento de tratamiento que se representa generalmente con el numero de referencia 102. El procedimiento 102 de tratamiento ejemplar incluye la preparacion 122 una o mas placas de sangre entera coagulada y la aplicacion 132 de la placa o placas a un area de piel de un sujeto en necesidad de la misma (por ejemplo, un area quemada o ulcerada).

Una capa de soporte se puede adherir 142 a la lamina o laminas. Opcionalmente, la adhesion 142 puede ocurrir durante o despues de la preparacion 122. La capa de soporte se puede construir para ser permeable a gases y/o impermeable a lfquidos.

Como alternativa o adicionalmente, el procedimiento 102 incluye la incorporacion de una malla 152 dentro de la placa. Por lo general, la incrustacion se realiza poniendo en contacto la sangre entera lfquida con la malla y permitiendo que la sangre se coagule en la malla. Las mallas adecuadas para este fin incluyen, pero no se limitan a las mallas de tejido (por ejemplo, una gasa o tejidos de gasa o no tejido). Opcionalmente, la malla contiene fibras de algodon y/o de celulosa.

Como alternativa o adicionalmente, el procedimiento 102 incluye cubrir la lamina 162 con un aposito convencional. El aposito convencional puede servir para mantener la placa en su lugar y/o preservar la integridad de la lamina y/o absorber los exudados que emanan de la lamina y/o evitar la fuerza de contacto indeseada (por ejemplo, de colocacion y/o retirada de ropa). Opcionalmente, el aposito convencional se cambia con una misma frecuencia o mayor frecuencia que la propia lamina.

La esterilidad de la lamina se puede mantener desde la formacion de la misma hasta su aplicacion a la superficie de la piel. La esterilidad se puede mantener por cualquier medio conocido en la tecnica.

Las laminas se pueden preparar mediante la difusion de la sangre entera en una capa con un espesor de 1 mm, opcionalmente 2 mm, opcionalmente 3. mm o espesores intermedios o mayores o menores. Una lamina de sangre coagulada sera normalmente menos gruesa que la capa original de la sangre lfquida.

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

La Figura 1C es un diagrama 104 de flujo simplificado que ilustra la adaptacion de los procedimientos 102 de tratamiento ejemplares a las modalidades de tratamiento 170 en humedo y tratamiento 170 en seco existentes.

En algunos usos ejemplares, un modo 170 de tratamiento en humedo se aplica y la lamina se mantiene humeda 124 despues de la preparacion 124. La lamina humeda se aplica 132 despues a un area de piel en necesidad de tratamiento. Opcionalmente, la lamina se cubre 134 con un aposito humedo y/o se cubre 136 con una barrera de retencion de humedad.

En algunos usos ejemplares, se aplica un modo 180 de tratamiento en seco y la lamina se seca 126 despues de la preparacion 124. La lamina seca se aplica 132 despues a un area de piel en necesidad de tratamiento. Opcionalmente, la lamina se cubre 133 con un aposito absorbente que opcionalmente se puede cambiar para que el fluido 135 continue siendo extrafdo de la lamina.

Opcionalmente, se emplea una mezcla de las modalidades de tratamiento 170 en humedo y tratamiento 170 en seco. En algunos usos ejemplares, la lamina se mantiene humeda 124, se aplica 132 y cubre 133 con un aposito absorbente. En algunas realizaciones ejemplares de la invencion, la lamina se seca 126, se aplica 132 y cubre con un aposito 136 humedo.

Procedimiento de tratamiento ejemplar adicional:

La Figura 2 es un diagrama de flujo simplificado de otro procedimiento de tratamiento que se representa generalmente con el numero de referencia 200. El procedimiento 200 ejemplar representado incluye la aplicacion 210 de un absorbente que cubre un area de piel de un sujeto en necesidad de tratamiento (por ejemplo, un area quemada). Opcionalmente, se enmascaran los bordes de la cubierta absorbente. Opcionalmente, la cubierta absorbente incluye una malla tal como, por ejemplo, una gasa o una estopilla. Opcionalmente la malla contiene fibras de algodon y/o celulosa.

El procedimiento 200 representado incluye la aplicacion 220 de sangre entera a la cubierta absorbente y permitir 230 que la sangre entera se coagule para formar una lamina de sangre entera coagulada. Si opcionalmente; se ha empleado enmascaramiento, el mismo puede servir para dirigir la sangre aplicada preferentemente hacia la cubierta absorbente aplicada.

En algunos procedimientos ejemplares, el procedimiento 200 incluye cubrir la lamina con un material permeable a gases (por ejemplo, nylon y/o algodon y/o poliuretano).

En algunos procedimientos ejemplares, el procedimiento 200 incluye cubrir la lamina con un aposito convencional como se ha descrito anteriormente para el procedimiento 102 y/o para mantener la esterilidad de la sangre durante la aplicacion 220.

Articulo de fabricacion ejemplar:

La Figura 3 es una representacion esquematica de un artfculo de fabricacion representado en general con el numero de referencia 300 visto en seccion transversal. El artfculo de fabricacion ejemplar representado incluye una lamina 120 esteril de sangre entera coagulada. La lamina 120 incluye un material anticoagulante dispersado a traves de la lamina y una cantidad suficiente de inhibidor de anticoagulante para permitir la formacion de la lamina a pesar de la presencia del anticoagulante. Los anticoagulantes e inhibidores adecuados para su uso en diversas realizaciones de la invencion se describen a continuacion.

La lamina 120 se proporciona en el material 350 de envasado. El material 350 de envasado ejemplar representado incluye un sello 355 rasgable que permite la eliminacion de la lamina 120 sin necesidad de herramientas. El material 350 de envasado se puede proporcionar como un sobre, una envoltura retractil, un envase de burbujas, un tubo sellado, un frasco, un bote o cualquier otra forma de envase conocido en la tecnica.

De acuerdo con diversas disposiciones ejemplares, artfculo de fabricacion 300 se puede proporcionar a la temperatura ambiente, o proporcionarse bajo refrigeracion. Las temperaturas de refrigeracion adecuadas incluyen 12, 8, 4, 0, -20, -70 y -170 grados centfgrados y temperaturas intermedias.

De acuerdo con diversas disposiciones ejemplares, la lamina 120 puede incluir un soporte interno (por ejemplo, malla 330) y/o un soporte 340 externo. Opcionalmente, este soporte o soportes se pueden utilizar para facilitar la retirada de la lamina 120 de material 350 de envasado y/o la transferencia de la lamina 120 a un lugar de tratamiento deseado y/o la colocacion de la lamina 120 en el lugar deseado.

Como alternativa o adicionalmente, el soporte interno (por ejemplo, malla 330) y/o el soporte 340 externo pueden contribuir a las propiedades estructurales de la lamina 120. Las propiedades estructurales incluyen resistencia a la traccion, resistencia a la compresion y elasticidad.

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

La Figura 4 es una representacion esquematica de una instalacion de almacenamiento representada generalmente con el numero de referencia 400. La instalacion 400 de almacenamiento ejemplar representada sirve como un banco de apositos biologicos. La instalacion 400 incluye una pluralidad de laminas 120 esteriles de sangre entera coagulada, cada lamina catalogada por un identificador unico (representado como un codigo 450 de barras) que indica una unidad de sangre entera de la que se deriva la lamina. En el ejemplo representado, las placas 120 se almacenan en grupos de 5 dentro de recipientes 410 de almacenamiento. En la realizacion representada, 5 laminas preparadas a partir de una sola unidad de sangre entera se almacenan juntas y se tratan opcionalmente como un unico elemento de inventario o 5 artfculos de inventario separados. Un recipiente 410 de almacenamiento unico se representa en la insercion en detalle. En otras realizaciones de la invencion, las laminas 120 se almacenan y catalogan individualmente.

La instalacion 400 de almacenamiento incluye un compartimento 440 refrigerado que contiene laminas 120. En la realizacion representada, 8 recipientes 410 se representan en el compartimiento 440 de manera que un total de 40 laminas se almacenan. Esta representacion simplificada es unicamente en aras de la claridad de la presentacion. En la practica, el numero de laminas 120 almacenadas, rondana probablemente los miles, decenas de miles o incluso cientos de miles.

De manera opcional, la temperatura de almacenamiento y el numero de laminas almacenadas se relacionan entre sf. Por ejemplo, las temperaturas de almacenamiento mas bajas pueden contribuir a una mayor "vida util" de las laminas 120 lo que, a su vez, contribuye a una capacidad de acumular un mayor numero de laminas antes de que se deban desechar.

Opcionalmente, el almacenamiento de un mayor numero de laminas contribuye a una mayor probabilidad de encontrar una coincidencia adecuada para un sujeto en necesidad de tratamiento.

La instalacion 400 de almacenamiento ejemplar representada incluye informacion de compatibilidad cruzada para cada una de las unidades de sangre entera de la que se forman las laminas 120.

En algunas realizaciones ejemplares de la invencion, se proporciona informacion de compatibilidad cruzada como datos legibles por maquina asociados con dicho identificador unico (por ejemplo, codigo 450 de barras) en una tabla de consulta en una memoria 474 de un ordenador 470. Opcionalmente, el usuario introduce informacion compatibilidad cruzada de un sujeto en necesidad de tratamiento a traves de una interfaz de usuario adecuada (por ejemplo, el teclado 472) y se le presenta una lista de ubicaciones (por ejemplo, en la pantalla 480) en el compartimento 440 refrigerado, donde las laminas adecuadas 120 se pueden encontrar. Las laminas adecuadas en este caso son "teoricamente adecuadas" basandose en un panel de marcadores. Opcionalmente, un lector de codigo de barras (no mostrado) se utiliza para verificar la identidad de las laminas 120 en recipientes 410 espedficos.

Como alternativa o adicionalmente, la informacion de compatibilidad cruzada se ofrece como una alfcuota 430 se sangre sin coagular reservada de cada una de dichas unidades de sangre entera de las que se ha reparado de cada una de las laminas 120. Las alfcuotas 430 se pueden asociar con el identificador 450 unico. En la realizacion representada, la asociacion es la asociacion ffsica resultante del almacenamiento en un mismo recipiente 410 como laminas 120 correspondientes. De acuerdo con estas realizaciones, la compatibilidad cruzada se comprueba practicamente mediante la mezcla de sangre sin coagular a partir de un receptor potencial de una muestra extrafda de la alfcuota 430 como se conoce en la tecnica.

Opcionalmente, las laminas teoricamente adecuadas se comprueban practicamente antes de su uso real en un sujeto.

Opcionalmente, al menos algunas laminas 120 se proporcionan en una estructura de soporte externo en contacto con la lamina y/o al menos algunas de las laminas 120 incluyen una estructura de soporte interno (por ejemplo, una malla incrustada en la lamina 120).

Procedimiento de fabricacion ejemplar:

La Figura 5 es un diagrama de flujo simplificado de un procedimiento de produccion de un aposito biologico representado generalmente con el numero de referencia 500. El procedimiento 500 ejemplar representado incluye la difusion 510 de una unidad estandar de sangre entera para cubrir un area de al menos 0,02 (por ejemplo 0,1 o mas) metros cuadrados en tanto se mantiene 520 la esterilidad y se permite 530 que la sangre forme un coagulo. De acuerdo con diversas realizaciones ejemplares de la invencion, el area puede ser de 0,15, 0,2 metros cuadrados o areas mayores o intermedias.

En algunas realizaciones ejemplares de la invencion, el procedimiento 500 incluye la adicion de un iniciador de coagulacion de la sangre entera antes de la difusion 510. De acuerdo con diversas realizaciones ejemplares de la invencion, el iniciador de coagulacion se selecciona para neutralizar una actividad de un anticoagulante en la unidad de la sangre entera.

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

Opcionalmente, la difusion 510 se produce en un receptaculo revestido con una capa de soporte que evita el contacto entre la sangre entera y el receptaculo, como se describira en mayor detalle a continuacion. Opcionalmente, la capa de soporte es permeable a gases e/o impermeable a lfquidos.

En algunas realizaciones ejemplares de la invencion, la difusion 510 se realiza sobre una malla que queda oculta en el coagulo.

En resumen, las realizaciones ejemplares de la invencion abarcan cualquier uso de sangre entera no fraccionada en la fabricacion de un aposito para heridas.

Aparato ejemplar para la produccion de coagulos:

Las Figuras 6A y 6B son diagramas esquematicos que ilustran un dispositivo para la coagulacion de sangre entera ex-vivo en dos estados operativos diferentes representados generalmente con los numeros de referencia 600 y 601.

En la Figura 6A, el dispositivo se representa en un estado 600 operativo totalmente ensamblado en el que se conecta a una fuente 610 de sangre externa por un conector 612. El dispositivo ejemplar representado incluye una entrada 614 que comprende un canal de comunicacion fluida a un interior del dispositivo y un receptaculo 650 de muestra adaptado para difundir una muestra dispuesta en su interior para producir una capa 620. La adaptacion puede incluir, por ejemplo, la seleccion de un material adecuado para la construccion para mantener la tension superficial de la sangre en un valor que promueva la difusion. Como alternativa o adicionalmente, una superficie de contacto con la sangre se puede tratar con un agente tensioactivo y/o texturizado para fomentar la difusion. El receptaculo 650 contiene una cantidad suficiente de un anti-anti-coagulante para causar la coagulacion de la sangre introducida en el receptaculo.

La disposicion representada incluye al menos una estructura 640 de soporte desplegada en el receptaculo 650 de manera que la capa 620 uniforme se formas sobre la estructura 640. La estructura 640 de soporte se representa como una capa externa que se adhiere a un coagulo de sangre formado sobre la misma. Opcionalmente, la capa es permeable a gases e/o impermeable a lfquidos.

Opcionalmente, un espacio 642 esta previsto entre el receptaculo 650 y la capa 640 para la acumulacion de lfquidos.

Como alternativa o adicionalmente, la estructura 640 de soporte incluye una malla incrustada en la capa 620 y la lamina 120 de coagulo resultante de la misma.

En la disposicion representada, una cubierta 630 retirable adaptada para mantener la esterilidad de la capa 620 cubre el receptaculo 650.

En algunas disposiciones ejemplares, el interior del dispositivo se encuentra bajo presion de vacfo. El volumen interior del dispositivo y/o el volumen de llenado deseado relativo y/o la flexibilidad de los materiales se consideran cuando se calcula un montaje de vacfo a aplicar. Opcionalmente, vacfo aplicado colapsa, o colapsa parcialmente el dispositivo.

Aparato ejemplar para la produccion simultanea de multiples coagulos:

La Figura 7 es un diagrama esquematico que ilustra un dispositivo representado generalmente con el numero de referencia 700 para la coagulacion de sangre entera ex-vivo para formar simultaneamente diversas laminas. El dispositivo 700 ejemplar representado incluye una entrada 710 que comprende un canal de comunicacion fluida a un interior del dispositivo y una pluralidad de receptaculos 750 de muestra (cinco se representan, aunque otros numeros de receptaculos pueden emplearse) interconectados para permitir un flujo concurrente desde una fuente comun. Cada uno de los receptaculos 750 se adapta para difundir una muestra dispuesta en su interior para producir una capa uniforme como se ha descrito anteriormente en la presente memoria.

El dispositivo 700 ejemplar representado incluye un protector 730 de esterilidad adaptado para mantener la esterilidad de la capa en cada uno de los receptaculos 750 apilados. En la realizacion representada, los receptaculos 750 se configuran como cajones de manera que la retirada de un receptaculo 750 no afecta la esterilidad de dicho cajon en cualquier otro receptaculo 750. Por tanto, al menos algunos de los receptaculos 750 sirven como protectores de esterilidad para otro de los receptaculos 750.

Como alternativa o adicionalmente, el protector 730 de esterilidad comprende una cubierta asociada con al menos algunos de los receptaculos 750.

En algunos ejemplos, el interior de la carcasa 720 se proporciona al vacfo.

La Figura 8 es un diagrama esquematico que ilustra un dispositivo representado generalmente con el numero de referencia 800 para la coagulacion de sangre entera ex-vivo para formar simultaneamente diversas laminas. El dispositivo 800 ejemplar representado incluye una entrada 810 que proporciona comunicacion fluida a un interior de la carcasa 820.

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

El interior del alojamiento 820 esta dividido en una pluralidad de receptaculos de muestra interconectados para permitir el flujo concurrente desde una fuente comun por separadores 840. En el ejemplo representado la interconexion es en paralelo, aunque una disposicion alternativa de los separadores se puede utilizar para proporcionar receptaculos en series. Series/combinaciones paralelas tambien son posibles en las realizaciones adicionales de la invencion.

Cada receptaculo se adapta para difundir una muestra dispuesta en su interior para producir una capa uniforme como se ha descrito anteriormente.

La cubierta 820 de la carcasa 821 sirve como un protector de esterilidad adaptado para mantener la esterilidad de la capa en cada uno de los receptaculos.

Durante su uso, la sangre entera se carga a traves de la entrada 810 y procede a traves del lumen 830 en el que esta en comunicacion fluida con espacios los entre los separadores 840.

En el ejemplo representado, los separadores 840 sirven como estructura de soporte externa dispuesta en los receptaculos. Una capa de sangre entera de lfquido se forma en cada una de las estructuras 840 de soporte que sirven como capas externas a las que se adhiere un coagulo de sangre a medida que se forma sobre las mismas.

En el ejemplo representado, se proporcionan capas 330 de malla entre los espacios 840. Las capas 330 de malla funcionan como estructura de soporte interna incrustada en la capa de sangre entera lfquida, y el coagulo de sangre resultante de la misma.

En el ejemplo representado, el dispositivo 800 incluye una valvula 811 de salida que proporciona comunicacion fluida entre el interior de la carcasa 820 y un entorno ambiental. Opcionalmente, la valvula 811 permite que el gas salga del dispositivo, a medida que se llena de sangre. En algunas realizaciones ejemplares de la invencion, la valvula 811 es unidireccional y/o filtra de modo que no se pone en peligro la esterilidad.

En algunos ejemplos, el interior de la carcasa 820 se proporciona al vacfo.

En los dispositivos representados en las Figuras 7 y 8, cada uno de los recipientes puede contener opcionalmente una cantidad suficiente de un anti-anti-anticoagulante para causar la coagulacion de la sangre introducida en su interior.

Procedimiento ejemplar para producir laminas de sangre coagulada a partir de un bloque:

La Figura 9 es un diagrama de flujo simplificado que ilustra un procedimiento 900 ejemplar de preparacion de laminas de sangre entera coagulada. El procedimiento 900 ejemplar representado incluye proporcionar un bloque de sangre entera coagulada en un aparato de corte y hacer avanzar el bloque 920 progresivamente. Despues del avance incremental, el bloque se corta 930 para formar una porcion que se convierte en una "lamina" como se ha descrito anteriormente en la presente memoria. El avance 920 y el corte 930 se pueden repetir 940 progresivamente para producir laminas adicionales.

El espesor de lamina se puede controlar mediante el ajuste del incremento de avance 920.

Opcionalmente, el bloque a cortar se congela para aumentar la dureza.

En algunos ejemplos, un volumen relativamente pequeno de la sangre (por ejemplo, 10, 20, 30, 40 o 50 ml o volumenes intermedios) se recoge y coagula en un recipiente disponible (por ejemplo, tubo de ensayo o cilindro de jeringa). Opcionalmente, las piezas, en forma de porciones o laminas se cortan de este coagulo utilizando cualquier herramienta disponible (por ejemplo, una lamina de bistun o navaja. En algunas realizaciones ejemplares de la invencion, el corte se realiza sobre una superficie marcada (por ejemplo, papel de grafico) para mantener porciones relativamente uniformes en espesor. Este tipo de procedimiento se puede emplear para tratar ulceras con tamanos pequenos (por ejemplo 1, 2, 3, 4 o 5 centimetres cuadrados).

Materiales ejemplares:

Capas de soporte externas (por ejemplo, 340 y/o 640) se pueden construir de uno o mas materiales que incluyen, pero no se limitan a nylon, poliuretano, algodon, un silicio y caucho. Opcionalmente, los materiales se seleccionan para ser permeable a gases e/o impermeables al agua.

Los receptaculos de formacion de laminas (por ejemplo, 650 y/o 750) se pueden construir de uno o mas materiales que incluyen, pero no se limitan a vidrio, poliuretano, cloruro de polivinilo, policarbonato, celulosa, poliestireno y un caucho.

En general, se seleccionaran materiales para la construccion de dispositivos de coagulacion descritos anteriormente que sean de bajo coste, ligeros en peso y esterilizables. Todos estos factores contribuyen a la viabilidad de la produccion de productos medicos de "un solo uso" o "desechables".

5

10

15

20

25

30

35

40

En algunas realizaciones ejemplares de la invencion, los soportes internos (por ejemplo, 330) se proporcionan como mallas. Las mallas adecuadas para este fin incluyen, pero no se limitan a las mallas de tejido (por ejemplo, gasa de algodon o estopilla). En otras realizaciones ejemplares de la invencion, las telas no tejidas se sustituyen por mallas. En otras realizaciones ejemplares de la invencion, los soportes internos se proporcionan como otros tipos de matrices o disposiciones. Opcionalmente, la malla incluye fibras de algodon y/o de celulosa.

Dimensiones ejemplares:

En algunas realizaciones ejemplares de la invencion, los receptaculos tienen un tamano de aproximadamente 15 x 20 cm. Si una capa de lfquido de sangre entera de 3 mm de profundidad se coloca en los recipientes de este tamano, una unidad estandar de sangre entera llena 5 receptaculos. El area agregada de los 5 receptaculos es de 0,15 metros cuadrados, lo que corresponde al 10 % de la superficie de la piel de un individuo promedio. Un conjunto de cinco receptaculos dispuestos como se representa en la Figura 7 se puede preparar con una altura total de aproximadamente 5 a 8 cm y una base de aproximadamente 16 x 21 cm o menos.

Si se desean areas de cobertura mas grandes, capas mas finas de sangre entera y/o un mayor numero de recipientes se pueden emplear. Opcionalmente, la cobertura de mas de 0,15 metros cuadrados implica el uso de mas de 1 unidad de sangre entera.

En otros ejemplos, tales como ulceras, areas de cobertura mas pequenas son suficientes. Opcionalmente, la recogida de pequenos volumenes de sangre (por ejemplo, 3, 5, 10, 20 o 30 cc o volumenes mas pequeno o intermedios) es suficiente para preparar un coagulo para cubrir una ulcera. Correspondientemente, se emplean bandejas de coagulacion mas pequenas y/o coagulos mas finos.

Anticoagulantes ejemplares e inhibidores de anticoagulante:

Los anticoagulantes adecuados para su uso en el contexto de la presente invencion incluyen, pero no se limitan a EDTA (acido etilendiaminotetraacetico), EGTA (acido tetraacetico etilenglicol), citrato (citrato de sodio o dextrosa citrato acido), heparina y oxalato.

Los inhibidores de anticoagulantes adecuados para su uso en el contexto de la presente invencion incluyen, pero no se limitan a Ca2+, Mg2+, caolm, fosfolfpido (PL) cargado negativamente y sulfato de protamina. La Tabla 1 resume las formas ejemplares en las que el tiempo de coagulacion se puede controlar para obtener una ventana de trabajo deseada (por ejemplo, para la preparacion de laminas 120).

Tabla 1: tiempos de coagulacion in vitro ejemplares

Material probado

Tiempo de coagulacion

Sangre entera

4-8 min

Sangre entera + EDTA o citrato

Infinito

Sangre entera citrada + Ca++

2-4 min

Sangre entera citrada + PL (fosfolfpidos cargados negativamente) + Ca++

60-85 seg

Sangre entera citrada + caolm + PL + Ca++

21-32 seg (aPTT)

Sangre entera citrada + tromboplastina + Ca++

11-12 seg (PT)

La sangre entera con un anticoagulante anadido se puede obtener a partir de un banco de sangre y se anade suficiente inhibidor de anticoagulante para lograr un tiempo de coagulacion de 2 a 8, opcionalmente de 4 a 8 minutos. Esta vez se considera suficiente para permitir la distribucion de la unidad de sangre en receptaculos como un lfquido para la coagulacion posterior en su interior como se ha descrito anteriormente.

Procedimiento ejemplar adicional

En algunas realizaciones ejemplares de la invencion, un procedimiento de preparacion de un aposito para heridas incluye la recogida de un volumen de sangre y la coagulacion de la sangre ex vivo para formar un coagulo. Opcionalmente, el volumen recogido es pequeno (por ejemplo, 5, 10, 15 o 20 ml o volumenes mas pequenos o intermedios). En algunas realizaciones ejemplares de la invencion, el volumen a ser recogido se determina en consideracion del area de una herida a tratar. Opcionalmente, el procedimiento incluye cortar una porcion del coagulo a las dimensiones y/o forma adecuados para colocar un aposito sobre una herida espedfica. El corte puede, por ejemplo, ser con unas tijeras. Opcionalmente, el procedimiento incluye proporcionar una estructura de soporte sobre la que se forma dicho coagulo. Las estructuras de soporte pueden ser internas y/o externas, como se ha descrito anteriormente en la presente memoria.

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

Se describen algunos kits ejemplares para la preparacion de un aposito para heridas que incluye sangre entera coagulada. Opcionalmente, el kit incluye un recipiente esteril o esterilizable, adaptado para recibir un volumen de sangre y suficiente anticoagulante para evitar que el volumen de la sangre se coagule. El recipiente puede ser, por ejemplo, una jeringa, una bolsa o tubo de ensayo (por ejemplo, un tubo de ensayo lleno al vado).

En algunos ejemplos del kit, el anticoagulante se proporciona en el recipiente. Opcionalmente, el kit incluye suficiente anti-anticoagulante para hacer que el volumen de sangre se coagule en presencia del anticoagulante. La adicion de anti-anticoagulante a la sangre con anticoagulante da inicio a una ventana de tiempo durante la que se produce la coagulacion. Durante esta ventana de tiempo, la sangre se transfiere a una bandeja adaptada para difundir el volumen de sangre hasta un espesor deseado. Los espesores adecuados incluyen 1, 2, 3, 4 y 5 mm y espesores intermedios o mas grandes.

De manera opcional, la bandeja contiene una estructura de soporte sobre la que se forma dicho coagulo. Las estructuras de soporte pueden ser internas y/o externas, como se ha descrito anteriormente en la presente memoria.

Los kits de este tipo se pueden utilizar por individuos y/o por medicos. Opcionalmente, un usuario prepara diversos apositos a la vez y almacena todos o algunos de ellos para su uso futuro.

Ventajas ejemplares:

De acuerdo con diversas realizaciones ejemplares de la invencion el uso de laminas 120 de sangre entera coagulada como se ha descrito anteriormente en la presente memoria promueve la curacion de heridas y/o reduce la incidencia de infeccion y/o contribuye a una reduccion en la frecuencia de desbridamiento y/o reduce la formacion de cicatrices. Se cree que estas ventajas se consiguen mas significativamente en heridas no sangrantes, tales como quemaduras y ulceras cronicas (por ejemplo, ulceras de pie diabetico). Estas ventajas se cree que estan disponibles, al menos hasta cierto grado, sin tener en cuenta la fuente de la sangre para las laminas 120.

Fuentes de sangre ejemplares

La sangre utilizada para formar las laminas 120 puede ser de sangre autologa, sangre entera homologa recibida de un banco de sangre o sangre entera homologa agrupada o sangre entera heterologa combinada. Es generalmente aceptado en la practica medica que un individuo sano pueda donar 1 unidad de sangre entera cada 6 a 8 semanas sin efectos adversos. Como alternativa, una sola persona puede donar cantidades mas pequenas de sangre en una frecuencia mas alta.

Un sujeto en necesidad de tratamiento (por ejemplo, una vfctima de quemaduras con quemaduras en mas del 8 % de su superficie corporal) dona una unidad de sangre entera que se utiliza posteriormente para formar las laminas 120 mediante el uso de procedimientos y/o dispositivos como se ha descrito anteriormente en la presente memoria. Esta estrategia de tratamiento puede contribuir a una reduccion de los riesgos asociados con la incompatibilidad entre donantes de sangre y el sujeto tratado. Sin embargo, hay una limitacion practica en cuanto a la cantidad de superficie de la piel que se puede tratar con una donacion autologa y/o si una donacion autologa posterior estara disponible para la continuacion del tratamiento. Cada uno de estos factores se ve, a su vez, influenciado por el espesor de las laminas 120 como se describe en mayor detalle a continuacion.

Un sujeto en necesidad de tratamiento (por ejemplo, una vfctima de quemaduras con quemaduras en mas del 16 % de su superficie corporal) se trata con laminas 120 preparados a partir de sangre homologa (por ejemplo, humana) utilizando los procedimientos y/o dispositivos como se ha descrito anteriormente en la presente memoria. Esta estrategia de tratamiento puede aumentar ligeramente los riesgos asociados con la incompatibilidad entre donantes de sangre y el sujeto tratado. Sin embargo, es menos limitado con respecto a cuanta superficie de la piel se puede tratar y/o la disponibilidad de laminas adicionales para la continuacion de la terapia.

La sangre homologa (por ejemplo, humana) de muchas unidades se agrupa para formar un gran volumen que se utiliza posteriormente para formar las laminas 120 para tratar sujetos en necesidad de las mismas como se ha descrito anteriormente en la presente memoria. Esta estrategia de tratamiento es muy susceptible a escala industrial y reduce el tiempo y el trabajo asociado con la deteccion de compatibilidad cruzada. Sin embargo, un cierto grado de riesgo asociado con la incompatibilidad entre el donante o donantes de sangre y el sujeto tratado no se ha evaluado. Esta estrategia de tratamiento es practicamente ilimitada con respecto a cuanta superficie de la piel se puede tratar y/o la disponibilidad de laminas adicionales para la continuacion de la terapia. Hay una posibilidad de que la agrupacion de un gran numero de diferentes tipos de sangre antes de la coagulacion para formar laminas 120 pueda resultar en una situacion de "donante universal" puesto que los anticuerpos y antfgenos se unen y se neutralizan los unos a los otros antes de la formacion de coagulos.

La sangre heterologa (por ejemplo, porcina o equina) de muchas unidades se agrupa para formar un gran volumen que se utiliza posteriormente para formar laminas 120 para tratar sujetos en necesidad de las mismas como se ha descrito anteriormente en la presente memoria. Como alternativa o adicionalmente, un poco de sangre humana se puede extender mediante su mezcla con sangre heterologa. Esta estrategia de tratamiento es tambien muy

5

10

15

20

25

30

35

40

45

susceptible a escala industrial y reduce el tiempo y el trabajo asociado con la deteccion de compatibilidad cruzada. Sin embargo, un cierto grado de riesgo asociado con la incompatibilidad entre los coagulos derivados de una o mas especies heterologas y sujetos tratados no se ha evaluado. Esta estrategia de tratamiento tambien es practicamente ilimitada con respecto a cuanta superficie de la piel se puede tratar y/o la disponibilidad de laminas adicionales para la continuacion de la terapia. Al igual que con la sangre homologa agrupada, hay una posibilidad de que la acumulacion de sangre de multiples especies no relacionadas (por ejemplo, sangre porcina, ovina y equina y canina) antes de la coagulacion para formar las laminas 120 pueda resultar en una situacion de "donante universal" puesto que los anticuerpos y antfgenos se unen y se neutralizan los unos a los otros antes de la formacion de coagulos.

Explicacion del espesor de lamina como una limitacion del tratamiento

En algunas realizaciones ejemplares de la invencion, una unidad de sangre entera se extiende sobre una superficie de 0,1 metros cuadrados o mas y se deja coagular como se ha descrito anteriormente. El area que se puede cubrir depende del espesor de coagulo deseado despues de la coagulacion. La Tabla 2 resume las areas de cobertura ejemplares (% del area total del cuerpo) de una sola unidad estandar de sangre entera en terminos del espesor de capa inicial y espesor del coagulo resultante.

Tabla 2: % de cobertura de superficie corporal como una funcion del espesor de la capa de sangre entera

liquida

Ejemplo

Espesor de sangre lfquida (mm) Espesor del coagulo (mm) Area total (M2) % de Superficie corporal

1

3 1,2 0,15 10

2

2

0,8 0,23 15

3

1,5 0,6 0,30 20

4

1 0,4 0,45 30

5

0,5 0,2 0,90 60

El resumen en la Tabla 2 deja claro que hay una relacion lineal entre la cantidad de superficie corporal que se puede cubrir por una unidad de sangre entera y el espesor inicial de toda la capa de sangre utilizado para preparar las laminas 12. En algunas realizaciones ejemplares de la invencion, las capas de soporte internas (por ejemplo, malla 330) y/o capas de soporte externas (por ejemplo, 130 y/o 640) y/o el aposito convencional (por ejemplo 140) contribuyen a una reduccion del espesor de sangre lfquida y/o del espesor de coagulos que son compatibles con la eficacia de la terapia.

En el contexto del tratamiento de quemaduras, el logro de areas de cobertura mas grandes puede ser cntico. En el contexto de tratamiento de ulceras, una gran area de cobertura es menos importante, aunque la relacion entre el area de cobertura y espesor permanece.

General

Tal como se utiliza en la presente memoria la expresion "aproximadamente" se refiere a un 10 %.

Aunque la invencion se ha descrito junto con realizaciones espedficas de la misma, es evidente que muchas alternativas, modificaciones y variaciones seran evidentes para los expertos en la materia.

En concreto, se ha utilizado una variedad de indicadores numericos. Se debe entender que estos indicadores numericos podnan variar incluso aun mas basandose en una variedad de principios de ingeniena, materiales, uso previsto y disenos incorporados en la invencion. Ademas, los componentes y/o acciones atribuidas a realizaciones ejemplares de la invencion y representados como una sola unidad se pueden dividir en subunidades. Por el contrario, los componentes y/o acciones atribuidas a realizaciones ejemplares de la invencion y representadas como sub-unidades/acciones individuales se pueden combinar en una sola unidad/accion con la funcion descrita/representada.

Como alternativa, o adicionalmente, las funciones utilizadas para describir un procedimiento se puede utilizar para caracterizar un vendaje para heridas, un aparato o un kit o artfculo de fabricacion y las caractensticas utilizadas para describir un vendaje para heridas, un aparato o un kit o artfculo de fabricacion se pueden utilizar para caracterizar un procedimiento.

Los ejemplos anteriores se proporcionan unicamente para propositos de ilustracion y no pretenden limitar el alcance de la invencion que se define unicamente por las siguientes reivindicaciones. Espedficamente, la invencion se ha descrito en el contexto de tratamiento de ulceras cronicas y/o quemaduras, pero tambien se podna utilizar para tratar otros tipos de heridas de la piel.

5

10

15

20

25

30

35

40

45

Las expresiones "induir", y "tener" y sus conjugados como se utilizan aqu significa "incluyendo, pero no necesariamente limitado a".

Los objetos, ventajas y caractensticas novedosas adicionales de la presente invencion seran evidentes para alguien de experiencia ordinaria en la tecnica tras el examen de los siguientes ejemplos, que no pretenden ser limitantes. Ademas, diversas realizaciones y aspectos de la presente invencion tal como se expone anteriormente y como se reivindica en la seccion de reivindicaciones a continuacion encuentran soporte experimental en los siguientes ejemplos.

Ejemplos

A continuacion se hace referencia a los siguientes ejemplos, que junto con las descripciones anteriores, ilustran la invencion de una manera no limitante.

MATERIALES Y PROCEDIMIENTOS

Los siguientes materiales y procedimientos se utilizan en la realizacion de los experimentos descritos en los siguientes ejemplos:

Bandejas de coagulacion se construyeron a partir de laminas de servicio de comida de plastico desechables con dimensiones de tamano de 1 cm X 12 cm X 8 cm con fines de experimentacion. En la practica real, se pueden emplear otros tamanos y/o materiales. En algunas realizaciones ejemplares de la invencion, se emplean polfmeros plasticos biocompatibles y/o esterilizables.

Envoltura de Saran (cloruro de polivinilideno [PVDC] fabricado por SC Johnson & Son.; Estados unidos) se utilizo para cubrir las bandejas de coagulacion para reducir la tendencia de los coagulos que atenerse a las bandejas.

Gasa quirurgica (malla 24x20, fabricada por M.Feingresh & Co. Ltd) fue empleada como una estructura de soporte incorporado ejemplar. Una doble capa de gasa de algodon se corto a 9 cm X 13 cm o mas grande para las bandejas de coagulacion descritas.

Gluconato de calcio (B. Braun Melsungen AG, Alemania) se refiere a ampollas de 10 ml cuyo 10% contiene 940 mg gluconato de calcio H2O; 50 mg calcio D-sacarato 4 H2O y agua para la inyeccion. Cada 1 ml proporciona 0,23 mol e Ca++.

Caolin (Imerys Minerals; Australia PTY) se utilizo como un polvo.

Sangre se recogio de un voluntario humano utilizando bolsas disponibles comercialmente de donacion de sangre con citrato anticoagulante incluido. Para los controles no citrados, se recogio sangre en unajeringa desechable. Los volumenes indicados se colocaron en vasos y se mezclaron con inhibidores anticoagulantes como se indica a continuacion agitandose y vertiendose despues inmediatamente en bandejas de coagulacion.

Bolsas de donacion de sangre eran conjuntos de infusion esteriles de un solo uso no pirogenicas (MacoPharma; Francia) que conteman 63 ml de CPDA1 (Formula para 1L: 3.27g de Monohidr. de Acido dtrico; 26,3 g de Natr. citras dihydr.; 2,51 g de Mononatr. fosphas dihidr.; 31,9 g de Dextr. Monohidr.; 0,349 g Adenin HCL y Agua en 1000 ml [Ph 5,6 +-0,3; 285 mmol de Na/L]).

Ejemplo 1:

Impacto de coagulantes y anticoagulantes en la formacion de coagulos

Para analizar los efectos de los anticoagulantes y los antagonistas basados en citratos de los mismos en la formacion de coagulos, se ensayaron diversas combinaciones. Sangre entera no citrada (bandeja 2) sirvio como control negativo. Sangre entera citrada sin antagonista (bandeja 1) sirvio como control positivo. Las combinaciones experimentales de las bandejas 3, 4, 5 y 6 se detallan en la Tabla 3. Los ingredientes antagonistas fueron brevemente mezclado en un vaso de plastico por agitacion y se vertieron sobre gasa quirurgica pre-cortada colocada en bandejas de coagulacion alineadas con una envoltura de saran a una profundidad de 4 mm. La Figura 10 es una fotograffa 1000 de un coagulo ejemplar en una bandeja de coagulacion con estructura de soporte integrada que sobresale de los bordes 7 minutos despues de la adicion de gluconato de calcio. En este punto de tiempo, no hubo ninguna diferencia perceptible visualmente entre las bandejas 3, 4, 5 y 6.

Tabla 3: combinaciones de coagulantes/anticoagulantes experimentales

Bandeja

Volumen de sangre (ml) Citrada Gluconato de calcio (ml) Caolrn

1

44 Si ninguno ninguno

2

44 NO ninguno ninguno

3

40 Si 4 ninguno

5

10

15

20

25

30

35

40

45

(continuacion)

Bandeja

Volumen de sangre (ml) Citrada Gluconato de calcio (ml) Caolm

4

40 Si 8 ninguno

5

40 Si 4 20 mg

6

40 Si 8 40 mg

Despues de la formacion del coagulo, cada coagulo se transfirio por medio de su estructura de soporte incorporada a una bandeja angular mas grande. La Figura 11 es una fotograffa 1100 de uno de los coagulos que se transfiere. Se observaron los coagulos en color y textura. El fluido exudado se caracterizo con respecto al volumen y la apariencia. La bandeja 1 de control negativo se mantuvo sin coagular y no estuvo involucrada en la manipulacion y/u observacion adicional.

La Figura 12 es una fotograffa 1200 de los coagulos representativos en bandejas en angulo. El exudado de fluido es claramente visible en diversas bandejas.

Despues de 12 minutos desde el momento en que se anade el gluconato de calcio (y caolm en su caso) a la sangre tratada con citrato:

La bandeja 2 contema un coagulo que era de color rojo oscuro, suave y mas fino que la profundidad original de lfquido de 4 mm. Aproximadamente de 10 ml-13 ml de exudados de fluido de color rojo se recogieron en la bandeja angular y se coagularon.

La bandeja 3 contema un coagulo que era menos rojo oscuro y mas solido y mas grueso que la profundidad del lfquido original de 4 mm. Aproximadamente 0,5 ml de fluido de color rojo se exudo y no se coagulo.

La bandeja 4 fue similar a la bandeja 3.

La bandeja 5 fue similar a las bandejas 3 y 4, pero el coagulo fue mas solido y mas grueso que las bandejas 3 y 4. Habfa menos volumen de fluido rojo que en las bandejas 3 y 4.

La bandeja 6 contema un coagulo que era mas oscuro, mas ngida y mas grueso que el observada en otras bandejas. Habfa fluido menos rojo exudado que en todas las demas bandejas, y el color del fluido era mas ligero que el observado en las otras bandejas.

Despues de 23 minutos desde el momento en que se anade el gluconato de calcio (y caolm en su caso) a la sangre tratada con citrato, cada coagulo se transfirio a traves de su estructura de soporte integrada a una bandeja angular mas grande limpia. Todos los coagulos fueron facilmente retirables de sus bandejas y mantuvieron su forma durante la transferencia.

La bandeja 2 contema un coagulo de color rojo oscuro que no era ngido y tema aproximadamente 2 mm o menos de espesor. Este coagulo continuo exudando fluido de color rojo a una velocidad de aproximadamente 1 ml/5 minutos. Este coagulo exhibio traslacion axial con respecto a la estructura de soporte integrada indicando un grado insuficiente de adherencia.

En las bandejas 3, 4, 5 y 6 los coagulos eran de un color rojo mas claro que en la bandeja 2 y eran muy solidos y mas gruesos que la profundidad del lfquido original de 4 mm. Pequenas cantidades de fluido de color rojo palido continuaron exudandose.

La bandeja 6 contema un coagulo con el mejor rendimiento en terminos de retencion de forma, mantenimiento de espesor, rigidez y retencion de fluidos.

Despues de 37 minutos cada uno coagulo se transfirio a traves de su estructura de soporte integrada a una balanza para su pesaje. Los coagulos citrados de las bandejas 3, 4, 5 y 6 pesaron aproximadamente un 30 % mas que el coagulo de control positivo de la bandeja 2.

En base a estas observaciones, 8 cc de gluconato de calcio no parece mejorar las propiedades de coagulos en relacion con mas de 4cc de gluconato de calcio.

El caolm, en cualquier cantidad, parece mejorar las propiedades de los coagulos.

En este experimento, las propiedades del coagulo de sangre entera fresca (Bandeja 2) se consideraron inferiores a las de los coagulos de sangre entera coagulada citrada.

Aproximadamente 42 minutos despues de la adicion de los antagonistas de anticoagulantes:

La Figura 13 es una fotograffa 1300 del coagulo de la bandeja 6. Este coagulo se coloco en un congelador estandar (-20 grados C) durante 5 dfas, se saco y coloco en la piel del muslo y se fijo en su lugar con adhesivo medico, y se cubrio con capas de algodon.

La Figura 14 es una fotograffa 1400 del coagulo de la bandeja 3 que se coloco posteriormente en la piel del muslo y se fijo en su lugar con capas de gasa sujetadas con cinta adhesiva y se cubrio con capas de algodon

5

10

15

20

25

30

35

40

45

retenidas con cinta adhesiva adicional.

El resto de los coagulos se dejaron secar al aire libre.

La prueba preliminar de sangre entera coagulada como un material de aposito para heridas se describe a continuacion en los Ejemplos 2 y 3.

Los resultados presentados en este ejemplo indican que la estructura de soporte integrada era util en la conservacion de la integridad y/o forma de coagulos y/o para facilitar su transferencia y/o manipulacion.

Este ejemplo ilustra que es factible preparar laminas de sangre entera coagulada en tamanos y formas deseadas para su uso en diversas realizaciones ejemplares de la invencion como se ha descrito anteriormente en la presente memoria.

Ejemplo 2:

Uso ejemplar de una lamina de sangre recien coagulada en la preparacion de un aposito para heridas

Para evaluar la posibilidad de utilizar laminas de sangre entera coagulada como parte de un aposito para heridas, el coagulo de la bandeja 3 se coloco sobre la piel (Figura 14) del muslo y se cubrio con capas de gasa quirurgica y despues capas de algodon retenidas en su lugar con cinta adhesiva.

Despues de 12 horas, se elimino el algodon. La Figura 15 es una fotograffa 1500 que muestra que los exudados del coagulo se han impregnado a traves de la gasa quirurgica colocada sobre el coagulo. Parece que los exudados de coagulo impregnados en la gasa superpuesta hicieron de este material pate de la capa de coagulos.

Este ejemplo ilustra que la sangre entera coagulada se adhiere bien a la piel intacta. La piel intacta se utiliza como modelo para heridas no sangrantes (por ejemplo, quemaduras y/o ulceras) por lo que los resultados confirman la viabilidad de utilizar sangre entera coagulada como un aposito para heridas no sangrantes. Opcionalmente, los apositos de acuerdo con realizaciones ejemplares de la invencion se pueden aplicar a heridas sangrantes tambien.

Ejemplo 3:

Efecto del coagulo de sangre aplicado a la superficie de la piel intacta

Siguiendo el ejemplo 2, el coagulo se separo manualmente de la superficie de la piel intacta a la que se habfa aplicado. La Figura16A es una fotograffa 1600 que muestra el coagulo seco adherido a la piel. La Figura 16B es una fotograffa 1602 done se desprende el coagulo seco de la piel. La Figura 16C es una fotograffa 1604 que muestra que la retirada del coagulo seco de la piel no ha causado ninguna irritacion perceptible. La retirada fue manual desprendiendo ytirando suavemente como se observa en la Figura 16C.

El coagulo era fino y completamente seco en esta etapa. Se observaron pequenos defectos en forma de orificios en el coagulo. Los orificios paredan corresponder a los lugares donde la estructura de soporte interna (gasa) se habfa roto o rasgado.

Este ejemplo ilustra que el uso de laminas de sangre entera coagulada en el contexto de tratamiento de quemaduras proporciona una alternativa a los procedimientos convencionales. Opcionalmente, laminas de sangre entera coagulada contribuyen a una reduccion en el desbridamiento de heridas.

Ejemplo 4:

Uso ejemplar de una lamina de sangre coagulada congelada en la preparacion de un aposito para heridas

Para demostrar que los coagulos se pueden preparar por adelantado y almacenarse para su uso posterior como apositos para heridas, el coagulo de la bandeja 6 (Figura 13) se almaceno congelado durante 5 dfas y despues se descongelo a temperatura ambiente. El coagulo se utilizo para preparar un aposito para heridas como en el Ejemplo 3. Los resultados fueron sustancialmente los mismos que en el Ejemplo 3.

Este ejemplo ilustra que el almacenamiento de coagulos de sangre antes de su uso como apositos para heridas de acuerdo con realizaciones ejemplares de la invencion es factible.

Ejemplo 5:

Observaciones adicionales en coagulos de sangre de secado al aire

Para evaluar el potencial de almacenar sangre entera coagulada en condiciones ambientales, los coagulos de las bandejas 2, 4 y 5 se dejaron secar al aire libre durante 25 horas. En comparacion con los coagulos vendados, los coagulos de secado al aire eran mas gruesos, a pesar de que se secaron completamente. Estos coagulos se caracterizan por un color rojo muy oscuro y no presentaron defectos (orificios). Estos coagulos estaban libres de olores.

El Ejemplo 5 ilustra que es factible almacenar la sangre entera coagulada a temperatura ambiente durante al menos 1 dfa. La ausencia de olor sugiere que no hay putrefaccion. No esta claro si la falta de orificios es el resultado de una disminucion en su manipulacion o de otros factores.

En general, los coagulos de secado al aire eran mas gruesas y mantuvieron mas elementos de la sangre que los 5 aplicados como vendas (Ejemplos 3 y 4).

Ejemplo 6:

Tratamiento de heridas reales en sujetos humanos

Para confirmar que se pueden emplear eficazmente como un aposito para heridas de sangre entera coagulada, sujetos humanos con heridas reales de diversos tipos fueron reclutados y tratados utilizando los apositos preparados 10 sustancialmente como se ha descrito anteriormente.

Los pacientes consecutivos referidos a la unidad de cuidados paliativos y a los departamentos de enfermena del Centro Medico Geriatrico Shoham (Pardes-Hanna; Israel) fueron seleccionados para su reclutamiento entre junio de 2009 y diciembre de 2009. Todos los sujetos potenciales ya estaban en tratamiento por sus heridas con la norma previamente aceptada de tratamiento de cuidados. El estudio fue aprobado por la junta de revision institucional. Un 15 total de 7 heridas con estadios de etiologfa 2-3 en 6 pacientes (2 hombres y 4 mujeres) fueron vendados con apositos de sangre entera coagulada de acuerdo con las realizaciones ejemplares de la invencion. Los sujetos o sus representantes legales firmaron los formularios de consentimiento informados antes de su inclusion en el estudio. Los criterios de seleccion fueron 18-100 edad, estadios de heridas 2-3 y consentimiento informado. Los criterios de exclusion fueron heridas mas grandes que 8 cm por 8 cm, heridas cancerosas, incapacidad para proporcionar 30 cc 20 de sangre por semana y una sepsis comprobada establecida por un cultivo de sangre en las ultimas 2 semanas. Todos los tratamientos de cuidados localizados de heridas en curso se detuvieron antes de iniciar el tratamiento de acuerdo con una realizacion ejemplar de la invencion. Las caractensticas de la herida se resumen en la tabla 4. La tipologfa y estadificacion fue de acuerdo con los criterios previamente publicados (estadificacion de ulcera por presion NPUAP 2007, [npuap.org]; Prevention and treatment of skin tears K. Leblanc et al, Wound Care Canada, 25 Volumen 6, Numero 1, 2008).

Tabla 4: Caractensticas de heridas

Herida

Edad/Genero Tipo/etiologfa Ubicacion Tamano cm2 Estadio

1

93/M Herida por desgarro Pierna inferior izquierdo 28,1 3

2

88/M Ulcera venosa y fistula Parte posterior del pie derecho s 3,12 NA

3

88/M Ulcera venosa Empeine superior izquierdo 1,6 NA

4

48/M Ulcera de presion Talon derecho 3,61 3

5

32/H Punta del dedo amputado Dedo medio 0,89 3

6

90/H Ulcera de presion Talon izquierdo 4,7 3

7

65/M Herida traumatica Espinilla derecha 2,8 2

Los apositos basados en sangre entera coagulada se prepararon utilizando un kit de acuerdo con una realizacion ejemplar de la invencion. El kit ejemplar contiene 3 tamanos de bandejas de coagulacion esteriles, de un solo uso, 30 pequeno (14,5 cm2), mediano (26,4 cm2) y grande (64 cm2). Cada bandeja de coagulacion esta equipada con gasa de algodon medica extendida a traves de la parte inferior de la bandeja. Como se ha explicado anteriormente la gasa se incrusta en el coagulo que se forma. Opcionalmente, la gasa contribuye a la robustez del aposito y/o simplifica la transferencia del aposito a la herida y/o hace que el recorte sea mas facil.

Para cada tratamiento de heridas, se determino el tamano de la herida midiendo la longitud maxima entre dos 35 puntos en los bordes de la herida. De acuerdo con el tamano determinado, se ha seleccionado una bandeja adecuada (por ejemplo, por la enfermera). La bandeja de coagulacion se selecciona para que sea mas grande que la herida para garantizar que todo el aposito de sangre coagulada pueda cubrir toda el area de la herida y mas alla de, al menos 0,5 cm de la piel intacta alrededor de la herida. Las instrucciones espedficas para la cantidad de CPDA1, sangre entera y mezcla de calcio y caolm de activacion de coagulacion se proporcionan como parte del kit 40 para cada uno de los tres tamanos de bandejas de coagulacion: pequeno, mediano y grande. Las cantidades ejemplares son CPDA1 (1,5 ml, 2 ml y 4 ml), la cantidad de sangre entera que se extrae (10 ml, 13 ml y 30 ml) y la cantidad de activador de coagulacion, la mezcla de calcio y caolm (2 ml, 2,5 ml y 5 ml).

Opcionalmente, la preparacion del lecho de la herida para el aposito se realizo de acuerdo con los procedimientos aceptados, por ejemplo, lavado con solucion salina y/o desbridamiento esteril dependiendo del tipo de herida y/o 45 estadio. El paciente y su estado clmico actual y pasado de la herida se documentaron y la herida fue fotografiada mientras se sujetaba una regla junto a los bordes de la herida como un medio para monitorear el progreso del

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

tratamiento.

Una jeringa (jeringa de 20 ml o 50 ml de acuerdo con la bandeja seleccionada) se lleno con la cantidad apropiada de CPDA1 y se utilizo para extraer sangre venosa del paciente. La extraccion de sangre y la manipulacion se realizo de acuerdo a las directrices de precauciones del hospital.

En paralelo, 5 ml de gluconato de calcio (B. Braun, Alemania) se mezclo en un vial esteril con 35 mg de polvo blanco de caolm esteril (Merck). La cantidad deseada (como se ha descrito anteriormente) de la mezcla de activacion de coagulacion se extrajo del vial con la jeringa que contema la mezcla de sangre/anticoagulante. El contenido de la jeringa se mezclo uniformemente durante 10 segundos para inducir la coagulacion.

En este punto, la sangre de coagulacion se transfirio a la bandeja de coagulacion pre-seleccionada y la bandeja se coloco sobre una superficie horizontal plana. La enfermera espero despues (por ejemplo, aproximadamente 10 minutos) para colocar el aposito que inclrna una lamina de sangre entera coagulada para darle forma. En esta etapa, la bandeja de coagulacion se abre utilizando guantes esteriles y el aposito basado en sangre entera coagulada se transfirio a la herida, colocandolo en la herida de modo la almohadilla integrada quedo orientada hacia arriba. A continuacion, el aposito de acuerdo con una realizacion ejemplar de la invencion se fijo a la herida cubriendolo cubre con una almohadilla no adhesiva, a continuacion, de gasa y envolviendolo despues con una venda elastica o mediante el uso de una banda Aid™ (Johnson & Johnson, Somerville, Nueva Jersey).

Despues del tratamiento inicial, se puso en practica un programa de seguimiento que inclrna dos tipos de visitas. En un primer tipo "de seguimiento" de visita, todo el aposito basado en coagulos de sangre entera ejemplar no se ha retirado de la herida. En una segunda visita de "re-aplicacion" todo el aposito basado en coagulos de sangre entera ejemplar se retiro y un nuevo aposito basado en coagulos de sangre entera se ha creado y aplicado como se ha descrito anteriormente.

Las visitas de seguimiento se realizaron cada 2 dfas. En estas sesiones no se ha retirado el aposito de acuerdo con una realizacion ejemplar de la invencion, sino solo las almohadillas de gasa por encima del coagulo. La visita incluyo la inspeccion visual de la superficie expuesta del aposito de acuerdo con una realizacion ejemplar de la invencion para documentar la adherencia del coagulo a la herida, la inspeccion visual de la periferia de la herida para eventos adversos y la inspeccion olfativa para monitorear la posible infeccion.

Las visitas de re-aplicacion regulares se programaron cada 6 a 8 dfas dependiendo de la disponibilidad de personal. Los cambios de apositos fueron pre-programados para documentar el procedimiento de curacion de la herida por debajo. En las dos heridas por trauma tratadas, el aposito sangre entera coagulada fue dejado en la herida hasta que se cayo de forma natural. Estas heridas no eran ulceras cronicas. Las visitas de re-aplicacion incluyeron documentacion, fotograffa (del aposito existente y de la herida que esta tratada) y retirada y sustitucion del aposito basado en sangre entera coagulada de acuerdo con una realizacion ejemplar de la invencion. La visita de re- aplicacion incluyo tambien la preparacion del lecho de la herida de acuerdo con los procedimientos estandar utilizando gasa y solucion salina.

En este estudio, el tratamiento continuo hasta la curacion completa de la herida o hasta la determinacion clmica de que la herida no podfa mejorar aun sin procedimientos invasivos adicionales, tales como cirugfa de fistula, procedimientos que no se realizan en el centro geriatrico.

Todos los componentes y materiales del kit se suministraron como elementos esteriles de un solo uso con materias reguladas y pre-medidas. Todo el kit es desechable y fue desechado de acuerdo con las normas del hospital. A lo largo del estudio se tomaron medidas para evitar que el coagulo se mojara (por ejemplo, utilizando envoltura de plastico tales como CLING-FILM™ o SARAN WRAP™ para envolver las extremidades y almohadillas adhesivas impermeables especialmente dedicados a proteger la herida durante el bano).

Las heridas fueron fotografiadas durante el procedimiento de curacion usando una camara digital (Cannon Power Shot A590) utilizando un flash, a una distancia definida de 50 cm de la herida, hacia la parte frontal de la herida. En cada fotograffa una regla de referencia desechable se coloco en estrecha proximidad a los bordes de la herida. La regla inclrna la fecha, el numero del paciente y el numero del estudio de la herida segun se habfa rellenado por el personal de investigacion.

Las imagenes de la herida se analizaron mediante el uso de software de analisis de imagen NIH "ImageJ" (Instituto Nacional de Salud, Bethesda, MD, Estados unidos), que esta disponible para su descarga en
http://rsb.info.nih.gov/ii/download.html. Este software es de dominio publico. De acuerdo con otras realizaciones ejemplares de la invencion, los productos comerciales del software de analisis de imagen se emplearon en lugar de Image J.

El analisis de imagenes, en este caso incluyo:

a. medicion de la cantidad de pfxeles en 10 mm tal como se presenta en la regla de referencia de la imagen.

b. delineaciones de los bordes de la herida y documentacion del area de pixeles automatico que sale de la imagen.

5

10

15

20

25

30

35

40

c. repetir la etapa b tres veces.

d. calcular el area de pfxeles promedio de las 3 delineaciones separadas,

e. transformacion del area de pfxeles a un area de 2 mm por los pfxeles medidos por 10 mm,

f. documentacion del resultado final en los pacientes con CRF para la fecha espedfica la foto fue tomada.

Opcionalmente, otras estrategias de analisis de imagen se pueden sustituir por esta estrategia.

Los resultados clmicos de curar las heridas con apositos de sangre entera coagulada de acuerdo con las realizaciones ejemplares de la invencion se presentan en la tabla 5. Cinco de las siete heridas se curaron completamente y las dos restantes sanaron en mas del 80%. Cinco de las siete heridas eran moderadamente a fuertemente exudativas al inicio del tratamiento con apositos de acuerdo con las realizaciones ejemplares de la invencion. En todas las heridas exudativas, se documento la extraccion de los exudados a traves del aposito basado en sangre entera coagulada y su absorbancia en las almohadillas de cubierta. Esto demuestra que los apositos de acuerdo con las realizaciones ejemplares de la invencion no son oclusivos. En promedio habfa una aplicacion de aposito cada 8,8 dfas. Los casos se presentan a continuacion.

La Figura 18 ilustra un caso de una herida vascular diagnosticada con una fistula exudativa de 1 cm al lado de la herida principal, que requiere intervencion quirurgica antes del tratamiento (Figura 18A) y despues del tratamiento (Figura 18B). Las fotografias indican que la herida principal mostro curacion completa y buena, mientras que la fistula exudativa no sano completamente aunque estaba cubierta con el mismo aposito de acuerdo con una realizacion ejemplar de la invencion durante el mismo penodo de tiempo. Por lo tanto, se calculo la herida total incluyendo la fistula como curada solo en un 80 %.

La Figura 19 ilustra un caso de una ulcera venosa en la parte superior del pie izquierdo antes del tratamiento (Figura 19A), que fue completamente curada (Figura 19B) en 11 dfas de tratamiento con un aposito de acuerdo con una realizacion ejemplar de la invencion.

La Figura 20A muestra una ulcera por presion en la que se detuvo el tratamiento despues del 82 % del cierre (Figura 20B), debido a la re-apertura de la herida que resulto de la presion directa recurrente sobre la herida cuando no estaba cubierta con el aposito de acuerdo con una realizacion ejemplar de la invencion.

Las dos heridas por trauma, un caso de laceracion de la espinilla izquierda (herida por desgarro) en una mujer de 93 anos de edad (Figura 17A antes del tratamiento) y una amputacion de la punta del dedo medo de la mano derecha de un varon de 34 anos de edad (pre-tratamiento Figura 21A) tuvieron una sola aplicacion del aposito de acuerdo con una realizacion ejemplar de la invencion, que duro 21 dfas (laceracion) y 19 dfas (amputacion), hasta que el aposito se cayo, la curacion se logro sin la necesidad de un aposito adicional (veanse Figuras 17B y 21B respectivamente).

Hubo dos casos de ulceras en pacientes con diabetes, una ulcera por presion en el talon izquierdo (pre-tratamiento Figura 22A) y la otra una herida traumatica en la espinilla derecha (Figura 23A), la curacion de las ulceras en pacientes diabeticos fue similar a la curacion en pacientes no diabeticos (veanse Figuras 22B y 23B respectivamente).

Tabla 5: Resultados del tratamiento

Herida

Tamano (cm2) pretratamiento Tamano (cm2) post- tratamiento Dfas (aplicaciones) * Figura

1

28,1 0 21 (1) 17

2

3,12 0,71 61 (7) 18

3

1,09 0 11 (1) 19

4

3,61 0,64 36 (5) 20

5

0,89 0 19 (1) 21

6

4,7 0 49 (7) 22

7

2,8 0 7(1) 23

* Dfas de vendaje con aposito de sangre entera coagulada (numero de aplicaciones de apositos)

Los resultados presentados en este ejemplo demuestran claramente que un profesional sanitario puede preparar de manera eficaz y segura un aposito de sangre entera coagulada de acuerdo con las realizaciones ejemplares de la invencion, opcionalmente a partir de un kit proporcionado en el punto de cuidado y que contiene componentes y/o herramientas pre-medidas asociadas con la preparacion del aposito.

Como alternativa o adicionalmente, los resultados presentados en este ejemplo demuestran claramente que curar las heridas con un aposito que incluye un coagulo de sangre autologa es seguro para su uso en heridas cronicas de diversas etiolog^as. No se observo retraso en la curacion de heridas y no se observaron acontecimientos adversos (por ejemplo, sepsis y/o inflamacion) durante el estudio. Los resultados resumidos en la Tabla 5 sugieren que los 5 apositos de acuerdo con realizaciones ejemplares de la invencion en realidad aceleran la curacion de heridas con relacion al estandar disponible anteriormente en apositos para el cuidado.

Como alternativa o adicionalmente, los resultados presentados en este ejemplo demuestran claramente que en las 7 heridas tratadas con un aposito de sangre entera coagulada de acuerdo con realizaciones ejemplares de la invencion, el aposito promueve la curacion.

10

Claims (6)

1. REIVINDICACIONES

   1. Un procedimiento de preparacion de un aposito para heridas, comprendiendo el procedimiento:

   (a) proporcionar un volumen de sangre entera recogida;

   (b) coagular dicha sangre entera para formar un coagulo ex vivo; y

   5 (c) formar un aposito para heridas que comprende el coagulo.
2. 2. Un procedimiento de acuerdo con la reivindicacion 1, que comprende cortar una porcion de dicho coagulo en dimensiones adecuadas para colocar un aposito sobre una herida espedfica.
3. 3. Un procedimiento de acuerdo con la reivindicacion 1, que comprende proporcionar una estructura de soporte sobre la que se forma dicho coagulo.

   10 4. Un procedimiento de produccion de un aposito biologico para heridas que comprende,

   (a) difundir una unidad de sangre entera sobre una malla para cubrir un area; y

   (b) permitir la coagulacion de la sangre entera para formar con ello una lamina de sangre coagulada con la malla incrustada en dicho coagulo.
4. 5. Un procedimiento de acuerdo con la reivindicacion 4, que comprende la adicion de un iniciador de coagulacion 15 antes de dicha difusion.
5. 6. Un procedimiento de acuerdo con la reivindicacion 5, en el que dicho iniciador de coagulacion se selecciona para neutralizar una actividad de un anticoagulante en dicha unidad.
6. 7. Un banco de apositos biologicos para heridas, comprendiendo el banco:

   una pluralidad de laminas esteriles de sangre entera coagulada; y 20 informacion de compatibilidad cruzada para cada una de dichas laminas.