CN115697265A - 使用脐带产物治疗眼部表面病症的方法 - Google Patents

使用脐带产物治疗眼部表面病症的方法 Download PDF

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Abstract

本文公开了治疗眼部表面疾病、病症或伤口的方法，该方法包括将脐带片和/或受控释放制剂施加于对象的眼睛的组织或周围组织，诸如下穹窿、上穹窿和/或角膜。本文还公开了用于治疗眼部表面疾病、病症或伤口的试剂盒，该试剂盒包括脐带片和/或受控释放制剂以及用于向对象的眼睛递送和施加所述脐带片和/或受控释放制剂的装置。

Description

使用脐带产物治疗眼部表面病症的方法
交叉引用
本申请要求2020年4月3日提交的美国临时专利申请号63/004,987的权益，所述美国临时专利申请通过引用全文并入本文中。
发明内容
重链-透明质酸/正五聚蛋白3(HC-HA/PTX3)复合物发现于胎儿支持组织诸如羊膜和脐带中，具有抗炎性、抗瘢痕性和伤口愈合特性。
本文公开了一种治疗眼部表面疾病、病症和/或伤口的方法，所述方法包括将脐带片放置于患有眼部表面疾病、病症和/或伤口的对象的眼睛的下穹窿、上穹窿或二者中。在一些实施方案中，所述方法包括将脐带片放置于患有眼部表面疾病、病症和/或伤口的对象的眼睛的仅下穹窿中。在一些实施方案中，所述方法包括在放置所述脐带片之前使所述对象的上眼睑、下眼睑或二者缩回以暴露下穹窿、上穹窿或二者。在一些实施方案中，所述方法包括对闭合的眼睛进行贴敷(patching)或贴扎(taping)。在一些实施方案中，所述方法包括向所述眼睛施用选自以下的胎儿支持组织产物：胎盘羊膜、胎盘、绒毛膜、脐带、脐带羊膜及其组合。在一些实施方案中，所述方法包括向所述眼睛施用选自以下的治疗剂：类固醇、抗细菌剂、抗炎剂、干眼治疗剂、抗真菌剂、抗病毒剂、抗青光眼剂及其任何组合。在一些实施方案中，将所述治疗剂或所述胎儿支持组织产物施用于所述眼睛的下穹窿、上穹窿或二者、上穹窿、所述眼睛的角膜表面和/或围绕所述眼睛的组织。在一些实施方案中，在放置所述脐带片之前施用所述治疗剂或所述胎儿支持组织产物。在一些实施方案中，所述脐带片包括脐带羊膜和华顿氏胶。在一些实施方案中，所述脐带片来自冷冻的或先前冷冻的脐带。在一些实施方案中，所述脐带片不包含具有代谢活性的细胞，或者基本上不含具有代谢活性的细胞。在一些实施方案中，所述脐带片包含全部死亡的、基本上全部死亡的或大多数死亡的细胞。在一些实施方案中，所述脐带片基本上不含红细胞。在一些实施方案中，所述脐带片被冷冻保藏、最终灭菌或二者兼施。在一些实施方案中，所述脐带片是基本上平的。在一些实施方案中，所述脐带片是半圆形的。在一些实施方案中，所述脐带片是圆形的。在一些实施方案中，所述脐带片是矩形的。在一些实施方案中，所述脐带片是约1.0–2.0cm乘约0.1–0.5cm。在一些实施方案中，所述脐带片是约1.5cm乘约0.3cm。在一些实施方案中，所述脐带片基本上不含静脉或动脉。在一些实施方案中，所述脐带片是水合的。在一些实施方案中，所述脐带片促进所述对象的眼睛中的神经再生。在一些实施方案中，所述脐带片具有抗炎性、抗瘢痕性、抗血管生成性、抗粘连、减轻疼痛、促进伤口愈合或其组合。在一些实施方案中，眼部疾病或病症选自干眼病、复发性角膜糜烂(RCE)、角膜溃疡、单纯疱疹性角膜炎(HSK)、顽固性点状角膜炎、变应性结膜炎、翼状胬肉、感染性疾病和炎性疾病。在一些实施方案中，所述伤口是手术伤口。在一些实施方案中，所述伤口来自光学屈光性角膜切削术(PRK)、LASIK、角膜胶原交联(CXL)、角膜移植、白内障手术、视网膜手术和/或青光眼引流装置或滤过泡。在一些实施方案中，所述伤口来自损伤、烧伤、裂伤、切口或擦伤。
在一些实施方案中，本文公开了一种用于治疗有需要的对象的眼部表面疾病、病症或伤口的试剂盒，所述试剂盒包括a)脐带片；和b)用于将所述脐带片放置于所述对象的角膜表面上、下穹窿、上穹窿中或者围绕所述对象的眼睛的组织上的装置，所述装置包括：i)贮存单元，其被配置成含有处于溶液中的所述脐带片；和ii)与所述贮存单元可操作地耦合的通道，所述通道被配置为使得所述脐带片从所述贮存单元通过所述通道并且通过所述通道中的开口，所述开口被配置成将所述脐带片递送至所述角膜表面、下穹窿、上穹窿或围绕所述眼睛的组织上。在一些实施方案中，所述装置还包括与所述通道可操作地耦合的施用构件，其中所述施用构件被配置成将所述脐带片推过所述开口。在一些实施方案中，所述通道包括包含一个或多个孔的多孔屏障，其中所述一个或多个孔中的至少一个孔的尺寸被设置为抑制所述脐带片从其中通过。在一些实施方案中，所述脐带片不包含具有代谢活性的细胞，或者基本上不含具有代谢活性的细胞。在一些实施方案中，所述脐带片是基本上平的。在一些实施方案中，所述脐带片是半圆形的。在一些实施方案中，所述脐带片是圆形的。在一些实施方案中，所述脐带片是矩形的。在一些实施方案中，所述脐带片包括脐带羊膜和华顿氏胶。在一些实施方案中，所述脐带片来自冷冻的或先前冷冻的脐带。在一些实施方案中，所述脐带片包含基本上全部死亡的细胞。在一些实施方案中，所述脐带片是水合的。在一些实施方案中，所述脐带片促进所述对象的眼睛中的神经再生。在一些实施方案中，所述脐带片在与外源性活细胞接触时具有抗炎性、抗瘢痕性、抗血管生成性、抗粘连、减轻疼痛和/或促进伤口愈合。在一些实施方案中，试剂盒还包括选自以下的治疗剂：类固醇、抗细菌剂、抗炎剂、干眼治疗剂、抗真菌剂、抗病毒剂、抗青光眼剂及其任何组合。在一些实施方案中，试剂盒还包括选自以下的胎儿支持组织产物：胎盘羊膜、胎盘、绒毛膜、脐带、脐带羊膜及其组合。
在一些实施方案中，本文公开了一种治疗有需要的对象的眼部表面疾病、病症或伤口的方法，所述方法包括向所述对象的眼睛的下穹窿、上穹窿或角膜表面施用组合物，所述组合物包含分离的HC-HA/PTX3以及用于HC-HA/PTX3的受控释放的赋形剂。在一些实施方案中，用于受控释放的赋形剂包括可生物降解的聚合物。在一些实施方案中，用于受控释放的赋形剂包括胶原、纤维素、壳聚糖、PEG、聚(N-异丙基丙烯酰胺)、聚(乳)酸、聚乳酸-羟基乙酸共聚物或其组合。在一些实施方案中，所述组合物与下穹窿、上穹窿或角膜表面相合。在一些实施方案中，所述组合物是固体或半固体。在一些实施方案中，所述组合物包括开口。在一些实施方案中，所述组合物是半圆形的。在一些实施方案中，所述组合物是圆形的。在一些实施方案中，所述组合物是矩形的。在一些实施方案中，所述组合物是约1.0–2.0cm乘约0.1–0.5cm。在一些实施方案中，所述组合物是约1.5cm乘约0.3cm。在一些实施方案中，所述方法还包括向所述眼睛施用选自以下的治疗剂：类固醇、抗细菌剂、抗炎剂、干眼治疗剂、抗真菌剂、抗病毒剂、抗青光眼剂及其任何组合。在一些实施方案中，所述方法还包括向所述眼睛施用选自以下的胎儿支持组织产物：胎盘羊膜、胎盘、绒毛膜、脐带、脐带羊膜及其组合。在一些实施方案中，将所述治疗剂或所述胎儿支持组织施用于所述眼睛的下穹窿、上穹窿、或所述眼睛的角膜表面，和/或围绕所述眼睛的组织。在一些实施方案中，在所述组合物之前施用所述治疗剂或所述胎儿支持组织产物。
在一些实施方案中，本文公开了一种组合物，其包含分离的HC-HA/PTX3复合物以及用于受控释放的赋形剂，其中所述组合物与角膜表面相合或适配在人眼睛的下穹窿或上穹窿中。在一些实施方案中，所述组合物具有抗炎性、抗瘢痕性、抗血管生成性、抗粘连、减轻疼痛、促进伤口愈合或其组合。在一些实施方案中，用于受控释放的赋形剂包括可生物降解的聚合物。在一些实施方案中，用于受控释放的赋形剂包括胶原、纤维素、壳聚糖、PEG、聚(N-异丙基丙烯酰胺)、聚(乳)酸、聚乳酸-羟基乙酸共聚物或其组合。在一些实施方案中，所述组合物是透明的或半透明的。在一些实施方案中，所述组合物是固体或半固体。在一些实施方案中，所述组合物是平的或基本上平的。在一些实施方案中，所述组合物包括开口。在一些实施方案中，所述组合物是半圆形的。在一些实施方案中，所述组合物是圆形的。在一些实施方案中，所述组合物是矩形的。在一些实施方案中，所述组合物是约1.0–2.0cm乘约0.1–0.5cm。在一些实施方案中，所述组合物是约1.5cm乘约0.3cm。
在一些实施方案中，本文公开了一种用于治疗对象的眼部表面疾病、病症或伤口的试剂盒，所述试剂盒包括：a)组合物，其包含分离的HC-HA/PTX3以及用于HC-HA/PTX3的受控释放的赋形剂；和b)用于将所述组合物放置于所述对象的角膜表面上、下穹窿中、上穹窿中或者围绕所述对象的眼睛的组织上的装置，所述装置包括：i)贮存单元，其被配置成含有处于溶液中的所述组合物；和ii)与所述贮存单元可操作地耦合的通道，所述通道被配置为使得所述组合物从所述贮存单元通过所述通道并且通过所述通道中的开口，所述通道被配置成将所述组合物递送至角膜表面、下穹窿、上穹窿或围绕所述眼睛的组织上。在一些实施方案中，所述装置还包括与所述通道可操作地耦合的施用构件，其中所述施用构件被配置成将脐带片推过所述开口，从而放置于所述眼睛的组织和/或周围组织上。在一些实施方案中，所述通道包括包含一个或多个孔的多孔屏障，其中所述一个或多个孔中的至少一个孔的尺寸被设置为抑制脐带片从其中通过。在一些实施方案中，所述组合物是固体或半固体。在一些实施方案中，所述组合物是半圆形的。在一些实施方案中，所述组合物是圆形的。在一些实施方案中，所述组合物是矩形的。在一些实施方案中，所述组合物促进所述对象的眼睛中的神经再生。在一些实施方案中，试剂盒还包括选自以下的治疗剂：类固醇、抗细菌剂、抗炎剂、滴眼剂、干眼治疗剂；抗真菌剂、抗病毒剂或任何组合。在一些实施方案中，试剂盒还包括选自以下的胎儿支持组织产物：胎盘羊膜、胎盘、绒毛膜、脐带、脐带羊膜或其组合。
本文公开了一种治疗眼部表面疾病、病症和/或伤口的方法，所述方法包括：将约0.75–2.5cm乘约0.05–0.75cm的脐带片放置于患有眼部表面疾病、病症和/或伤口的对象的眼睛的下穹窿、上穹窿或二者中。在一些实施方案中，所述方法包括在放置所述脐带片之前使所述对象的上眼睑、下眼睑或二者缩回以暴露下穹窿。在一些实施方案中，所述方法包括对闭合的眼睛进行贴敷或贴扎。在一些实施方案中，所述方法包括向所述眼睛施用选自以下的胎儿支持组织产物：胎盘羊膜、胎盘、绒毛膜、脐带、脐带羊膜及其组合。在一些实施方案中，所述方法包括向所述眼睛施用选自以下的治疗剂：类固醇、抗细菌剂、抗炎剂、干眼治疗剂、抗真菌剂、抗病毒剂、抗青光眼剂及其任何组合。在一些实施方案中，将所述治疗剂或所述胎儿支持组织产物施用于所述眼睛的下穹窿、所述眼睛的角膜表面和/或围绕所述眼睛的组织。在一些实施方案中，在放置所述脐带片之前施用所述治疗剂或所述胎儿支持组织产物。在一些实施方案中，所述脐带片包括脐带羊膜和华顿氏胶。在一些实施方案中，所述脐带片来自冷冻的或先前冷冻的脐带。在一些实施方案中，所述脐带片不包含具有代谢活性的细胞，或者基本上不含具有代谢活性的细胞。在一些实施方案中，所述脐带片包含全部死亡的、基本上全部死亡的或大多数死亡的细胞。在一些实施方案中，所述脐带片基本上不含活细胞。在一些实施方案中，所述脐带片基本上不含红细胞。在一些实施方案中，所述脐带片基本上不含静脉或动脉。在一些实施方案中，所述脐带片被冷冻保藏、最终灭菌或二者兼施。在一些实施方案中，所述脐带片是基本上平的。在一些实施方案中，所述脐带片是半圆形的。在一些实施方案中，所述脐带片是圆形的。在一些实施方案中，所述脐带片是矩形的。在一些实施方案中，所述脐带片是约1.0–2.0cm乘约0.1–0.5cm。在一些实施方案中，所述脐带片是约1.5cm乘约0.3cm。在一些实施方案中，所述脐带片是水合的。在一些实施方案中，所述脐带片促进所述对象的眼睛中的神经再生。在一些实施方案中，所述脐带片具有抗炎性、抗瘢痕性、抗血管生成性、抗粘连、减轻疼痛、促进伤口愈合或其组合。在一些实施方案中，眼部疾病或病症选自干眼病、复发性角膜糜烂(RCE)、角膜溃疡、单纯疱疹性角膜炎(HSK)、顽固性点状角膜炎、变应性结膜炎、翼状胬肉、感染性疾病和炎性疾病。在一些实施方案中，所述伤口是手术伤口。在一些实施方案中，所述伤口来自光学屈光性角膜切削术(PRK)、LASIK、角膜胶原交联(CXL)、角膜移植、白内障手术、视网膜手术，或青光眼引流装置或滤过泡。在一些实施方案中，所述伤口来自损伤、烧伤、裂伤、切口或擦伤。
本文公开了一种治疗眼部表面疾病、病症和/或伤口的方法，所述方法包括：将脐带片放置于患有眼部表面疾病、病症和/或伤口的对象的眼睛的仅下穹窿中。在一些实施方案中，所述方法包括在放置所述脐带片之前使所述对象的上眼睑、下眼睑或二者缩回以暴露下穹窿。在一些实施方案中，所述方法包括对闭合的眼睛进行贴敷或贴扎。在一些实施方案中，所述方法包括向所述眼睛施用选自以下的胎儿支持组织产物：胎盘羊膜、胎盘、绒毛膜、脐带、脐带羊膜及其组合。在一些实施方案中，所述方法包括向所述眼睛施用选自以下的治疗剂：类固醇、抗细菌剂、抗炎剂、干眼治疗剂、抗真菌剂、抗病毒剂、抗青光眼剂及其任何组合。在一些实施方案中，所述脐带片是约1.5cm乘约0.3cm。
本文公开了一种治疗复发性角膜糜烂(RCE)、角膜溃疡、单纯疱疹性角膜炎(HSK)或者伴有顽固性点状角膜炎的OSD的方法，所述方法包括：将脐带片放置于患有复发性角膜糜烂(RCE)、角膜溃疡、单纯疱疹性角膜炎(HSK)或者伴有顽固性点状角膜炎的OSD的对象的眼睛的下穹窿或上穹窿中。在一些实施方案中，所述方法包括在放置所述脐带片之前使所述对象的上眼睑、下眼睑或二者缩回以暴露下穹窿或上穹窿。在一些实施方案中，所述方法包括对闭合的眼睛进行贴敷或贴扎。在一些实施方案中，所述方法包括向所述眼睛施用选自以下的胎儿支持组织产物：胎盘羊膜、胎盘、绒毛膜、脐带、脐带羊膜及其组合。在一些实施方案中，所述方法包括向所述眼睛施用选自以下的治疗剂：类固醇、抗细菌剂、抗炎剂、干眼治疗剂、抗真菌剂、抗病毒剂、抗青光眼剂及其任何组合。在一些实施方案中，将所述治疗剂或所述胎儿支持组织产物施用于所述眼睛的下穹窿或上穹窿、所述眼睛的角膜表面和/或围绕所述眼睛的组织。在一些实施方案中，在放置所述脐带片之前施用所述治疗剂或所述胎儿支持组织产物。在一些实施方案中，所述脐带片是约1.0–2.0cm乘约0.1–0.5cm。在一些实施方案中，所述脐带片是约1.5cm乘约0.3cm。
援引并入
本说明书中提及的所有出版物、专利和专利申请都通过引用并入本文中，在程度上就如同每个单独的出版物、专利或专利申请被明确地且单独地指明通过引用而并入。如果通过引用并入的出版物和专利或专利申请与本说明书中包含的公开内容相矛盾，则本说明书旨在取代和/或优先于任何这种矛盾的材料。
附图说明
本发明的新颖特征在所附权利要求书中具体地阐述。通过参考以下详细描述和附图将获得对本发明的特征和优点的更好理解，所述详细描述阐述了其中利用了本发明的原理的说明性实施方案，在附图中：
图1描绘了用于将脐带片和/或受控释放制剂递送和放置于对象的眼睛的内穹窿、角膜表面或围绕眼睛的组织中的装置的非限制性示例。
图2A描绘了在多孔屏障下游通过通道的脐带片和/或受控释放制剂的非限制性示例。
图2B描绘了配置成有助于将脐带片和/或受控释放制剂递送通过通道开口的施用构件的非限制性示例。
图3A描绘了作为脐带片制备过程的部分，测量框架背衬纸上铺平的脐带组织的非限制性示例。
图3B描绘了纵切脐带组织的非限制性示例。
图3C描绘了在纵切后较短切割后的脐带组织的非限制性示例。
图4描绘了放置于对象眼睛的下穹窿中的脐带片的非限制性示例。
图5A描绘了在放置当天放置于下穹窿中的脐带片的非限制性示例，该脐带片使用荧光显示。
图5B描绘了在放置后一天位于下穹窿中的脐带片的非限制性示例，该脐带片使用荧光显示。
图5C描绘了在放置后两天位于下穹窿中的脐带片的非限制性示例，该脐带片使用荧光显示。
图6描绘了用于贮存脐带片并将脐带片放置于眼睛的下穹窿中的包装设计。
图7描绘了用于贮存脐带片并将脐带片放置于眼睛的下穹窿中的替代包装设计。
图8描绘了使用图7的包装将脐带片放置于眼睛的下穹窿中的方法。
图9描绘了用于贮存脐带片并将脐带片放置于眼睛的下穹窿中的另一替代包装设计。
图10A-10E描绘了来自使用用于轻度/中度或严重适应证的UC条的患者的调查数据。调查了耐受性、易于插入性、产品保持性、临床益处、患者满意度和医师满意度。
具体实施方式
重链-透明质酸/正五聚蛋白3(HC-HA/PTX3)复合物，发现于胎儿支持组织诸如羊膜和脐带中，具有抗炎性、抗瘢痕性和伤口愈合特性。本文提供了用于将HC-HA/PTX3受控释放至眼睛的泪膜中的方法和系统，从而在患有眼部疾病、病症或伤口的对象中促进伤口愈合、减少炎症、减轻瘢痕、减轻疼痛或其组合。在一些实施方案中，所述方法和受控释放系统包括基本上平的脐带片、脐带条或脐带块，其被放置于对象的下穹窿、上穹窿、泪点中、放置于角膜表面上或者放置于围绕对象的眼睛的组织上，从而将HC-HA/PTX3受控释放到该对象的泪膜中。在一些实施方案中，所述方法和受控释放系统包括基本上平的脐带片、脐带条或脐带块，其被放置于对象的眼睛的仅下穹窿中，从而将HC-HA/PTX3受控释放到该对象的泪膜中。
在一些实施方案中，HC-HA/PTX3通过受控释放制剂进行释放，所述受控释放制剂包含HC-HA/PTX3复合物和赋形剂，被放置于下穹窿、上穹窿、泪点中、放置于角膜表面上或者放置于围绕眼睛的组织上。在一些实施方案中，赋形剂使得HC-HA/PTX3能够受控释放在下穹窿、上穹窿、泪点中、角膜表面上或者围绕眼睛的组织上。如本文中使用，受控释放是指HC-HA/PTX3持续释放到对象的下穹窿中、上穹窿中、泪点上、角膜表面上或围绕对象的眼睛的组织上。持续释放可以是在一段时间中HC-HA/PTX3的均一释放速率或变化的释放速率。如本文中使用，术语施加和放置是可互换的。
脐带片的制备
在一些实施方案中，脐带组织采集自任何适合的供体源(例如，医院或组织库)以制备脐带片。在一些实施方案中，脐带组织获自任何哺乳动物诸如人、非人灵长类动物、牛或猪。
所有加工都遵循良好组织规范(GTP)进行以确保污染物不被引入脐带片中。在一些实施方案中，利用FDA许可的筛查试验对采集的脐带测试HIV-1、HIV-2、HTLV-1、乙型和丙型肝炎、西尼罗病毒、巨细胞病毒、人传染性海绵状脑病(例如，克雅氏病)和/或梅毒螺旋体。组织受HIV-1、HIV-2、HTLV-1、乙型和丙型肝炎、西尼罗病毒或巨细胞病毒污染的任何指示可以导致对组织样本的立即检疫和后续破坏。
在一些实施方案中，对供体的医疗记录检查乙型肝炎、丙型肝炎或HIV感染的风险因素和临床证据。供体具有HIV-1、HIV-2、HTLV-1、乙型和丙型肝炎、西尼罗病毒、巨细胞病毒、人传染性海绵状脑病(例如，克雅氏病)和/或梅毒螺旋体的风险因素和/或临床证据、感染的任何指示可以导致对组织样本的立即检疫和后续破坏。
在一些实施方案中，脐带被冷冻。在一些实施方案中，脐带未被冷冻。如果脐带未被冷冻，则它可以立即如下所述进行加工。
在一些实施方案中，将基本上全部血液从脐带中去除。在一些实施方案中，在将脐带冷冻之前将基本上全部血液从脐带中去除。在一些实施方案中，将基本上全部血液从脐带的动脉和静脉中去除。在一些实施方案中，血液未从UC中去除。在一些实施方案中，在脐带被冷冻之前血液未从脐带中去除。在一些实施方案中，将脐带组织在搅拌下用缓冲液洗涤以去除多余的血液和组织。在一些实施方案中，在搅拌下洗涤缩短了洗涤时间。在一些实施方案中，使脐带组织与缓冲液接触以去除基本上全部红细胞。在一些实施方案中，将脐带组织冻干、冷冻保藏、粉碎和/或最终灭菌。
在一些实施方案中，将脐带用高渗性缓冲液或组织培养基洗涤。在一些实施方案中，将脐带用低渗性缓冲液或组织培养基洗涤。在一些实施方案中，将脐带用等渗性缓冲液或组织培养基洗涤。在一些实施方案中，将脐带用盐水洗涤。在一些实施方案中，将脐带用PBS洗涤。在一些实施方案中，将脐带用PBS 1X洗涤。在一些实施方案中，将脐带用TRIS缓冲盐水洗涤。在一些实施方案中，将脐带用HEPES缓冲盐水洗涤。在一些实施方案中，将脐带用林格氏溶液洗涤。在一些实施方案中，将脐带用哈特曼氏溶液洗涤。在一些实施方案中，将脐带用EBSS洗涤。在一些实施方案中，将脐带用HBSS洗涤。在一些实施方案中，将脐带用台氏盐溶液洗涤。在一些实施方案中，将脐带用Gey平衡盐溶液洗涤。在一些实施方案中，将脐带用Eagle氏最低必需培养基(DMEM)洗涤。在一些实施方案中，将脐带用Eagle氏最低必需培养基(EMEM)洗涤。在一些实施方案中，将脐带用Glasgow最低必需培养基(GMEM)洗涤。在一些实施方案中，将脐带用Roswell Park Memorial Institute(RPMI)1640培养基洗涤。
在一些实施方案中，然后将脐带的切片(例如，使用手术刀或剪刀)纵切。在一些实施方案中，未将脐带的切片对半切开。在一些实施方案中，将脐带的切片对半切开。
在一些实施方案中，任选地用缓冲液再次洗涤切割的脐带组织以进一步去除多余的血液和组织。
在一些实施方案中，使用任何适合的方法(例如，它被针或钉(例如，T形钉)紧固)将脐带紧固于基材(例如，聚苯乙烯泡沫板)上。在一些实施方案中，将脐带用基材(例如，吸收性毛巾织物、布帘)稳定。在一些实施方案中，将脐带进行定向，使得脐带的内侧面(例如，包含华顿氏胶的面)面向上而外侧面(即，包含UCAM的面)面向基材。任选地，在一些实施方案中，脐带的一端是自由的。如果脐带的一端是自由的，在一些实施方案中，则将脐带的自由端(例如，用夹钳、止血器或一组镊子(例如，宽锯齿状尖镊子))固持，同时将部分或全部的华顿氏胶去除。可替代地，在一些实施方案中，脐带的两端都是自由的。
如果脐带没有平铺贴靠着基材，在一些实施方案中，则在华顿氏胶中做出额外切割。
在一些实施方案中，将部分或全部的华顿氏胶从UCAM中去除。该片的期望厚度决定去除多少华顿氏胶。在一些实施方案中，将华顿氏胶(例如，使用一组镊子、止血器)从脐带中分层地剥离。在一些实施方案中，将华顿氏胶从脐带中分片地切去(例如，刮去)。在一些实施方案中，利用旋转研磨器(rotoblator)(即，与具有金刚石包覆的毛刺的钻机附接的导管)去除华顿氏胶。在一些实施方案中，利用吸脂机去除华顿氏胶。在一些实施方案中，施加处于高压力下的液体以去除华顿氏胶。在一些实施方案中，利用刷子去除华顿氏胶(例如，高速旋转的机械化刷子)。
脐带包括两条动脉(脐动脉)和一条静脉(脐静脉)。在一些实施方案中，将静脉和动脉从脐带中去除。在一些实施方案中，将静脉和动脉去除，与此同时通过任何以下方法来去除部分或全部的华顿氏胶。在一些实施方案中，将静脉和动脉(例如，使用一组镊子)从脐带中剥离(或抽出)。在一些实施方案中，将静脉和动脉从脐带中分片地切去(例如，刮去)。在一些实施方案中，旋转研磨器去除静脉和动脉。在一些实施方案中，利用吸脂机去除静脉和动脉。在一些实施方案中，利用静脉剥除器去除静脉和动脉。在一些实施方案中，处于高压力下的液体同时去除静脉和动脉。在一些实施方案中，刷子去除静脉和动脉。在一些实施方案中，手术皮刀去除静脉和动脉。
在一些实施方案中，将脐带弄平并且铺展在基材(例如，框架背衬纸)上。在一些实施方案中，基材包括抗水性涂层或材料。在一些实施方案中，该材料是聚酯。在一些实施方案中，将脐带定向，使得脐带的内侧面(例如，包含华顿氏胶的面)面向上而外侧面(即，包含羊膜的面)接触基材。在一些实施方案中，使用镊子来使脐带定向。
在一些实施方案中，如果脐带没有平铺贴靠着基材，则在华顿氏胶中做出额外切割。在一些实施方案中，将部分或全部的华顿氏胶从脐带中去除。在一些实施方案中，组织移植物的期望厚度决定去除多少华顿氏胶。在一些实施方案中，将华顿氏胶(例如，使用一组镊子、止血器)从脐带中分层地剥离。在一些实施方案中，将华顿氏胶从脐带中分片地切去(例如，刮去)。在一些实施方案中，利用旋转研磨器(即，与具有金刚石包覆的毛刺的钻机附接的导管)去除华顿氏胶。在一些实施方案中，利用吸脂机去除华顿氏胶。在一些实施方案中，施加处于高压力下的液体以去除华顿氏胶。在一些实施方案中，利用刷子去除华顿氏胶(例如，高速旋转的机械化刷子)。
在一些实施方案中，将脐带切割并制备形成脐带片。在一些实施方案中，将脐带(例如，使用手术刀)切成多个切片。在一些实施方案中，然后将脐带的切片(例如，使用手术刀或剪刀)纵切。在一些实施方案中，未将脐带的切片对半切开。在一些实施方案中，将脐带的切片对半切开。在一些实施方案中，将脐带片切成条或丝。
可以将脐带切割，同时在层流罩下实施无菌技术。在一些实施方案中，使用尺子作为指导用手术刀将脐带切成期望的形状和尺寸。在一些实施方案中，使用手术刀和具有格子的尺子将脐带切成约1.5cm乘约0.3cm。在一些实施方案中，将脐带切成约0.5cm x约0.1cm、0.5cm x约0.25cm、约0.5cm x约0.5cm、约0.5cm x约0.75cm、约0.5cm x约1cm、约0.5cm x约2cm、约0.5cm x约3cm、约0.5cm x约4cm、约0.5cm x约5cm或更大。在一些实施方案中，脐带片为约1cm x约0.1cm、1cm x约0.25cm、约1cm x约0.5cm、约1cm x约0.75cm、约1cm x约1cm、约1cm x约2cm、约1cm x约3cm、约1cm x约4cm、约1cm x约5cm或更大。在一些实施方案中，使用手术刀和具有格子的尺子使脐带片成为约1.5cm x约0.1cm、1.5cm x约0.25cm、约1.5cm x约0.5cm、约1.5cm x约0.75cm、约1.5cm x约1cm、约1.5cm x约2cm、约1.5cm x约3cm、约1.5cm x约4cm、约1.5cm x约5cm或更大。
在一些实施方案中，将切割的脐带在-20℃下贮存。在一些实施方案中，通过任何合适的(例如，医学上可接受的)方法对脐带进一步进行最终灭菌，包括但不限于γ辐射、电子束辐射、X-射线辐射和UV辐射。在一些实施方案中，在干冰下使用辐射。在一些实施方案中，在无干冰下使用辐射。在一些实施方案中，将脐带在干冰下暴露于辐射第一时间段并且在无干冰下暴露于辐射第二时间段。在一些实施方案中，将脐带暴露于γ辐射进行足以将脐带灭菌的时间段。在一些实施方案中，将脐带暴露于电子束(E-束)灭菌进行足以将脐带灭菌的时间段。在一些实施方案中，将脐带暴露于电子束(E-束)灭菌进行足以将脐带灭菌的时间段。在一些实施方案中，通过约25至约43kGy的γ-辐射对脐带进行进一步灭菌。在一些实施方案中，通过约10至约75kGy的γ-辐射对脐带进行进一步灭菌。在一些实施方案中，通过约10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70或大于70kGy的γ-辐射对脐带进行进一步灭菌。在一些实施方案中，将脐带暴露于电子束(E-束)灭菌进行足以将脐带灭菌的时间段。在一些实施方案中，通过约25至约43kGy的E-束辐射对脐带进行进一步灭菌。在一些实施方案中，通过约10至约75kGy的E-束辐射对脐带进行进一步灭菌。在一些实施方案中，通过约10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70或大于70kGy的E-束辐射对脐带进行进一步灭菌。在一些实施方案中，任选地再次用缓冲液洗涤切割的脐带组织以进一步去除多余的血液和组织。
在一些实施方案中，脐带片包含全部死亡的、基本上全部死亡的或大多数死亡的细胞。在一些实施方案中，脐带片不含具有代谢活性的细胞。在一些实施方案中，脐带片包括脐带羊膜和/或华顿氏胶。在一些实施方案中，脐带片部分地或完全地不含华顿氏胶。在一些实施方案中，脐带片部分地或完全地不含静脉或动脉。在一些实施方案中，脐带片是水合的。在一些实施方案中，脐带片获得自冷冻的或先前冷冻的脐带。
在一些实施方案中，脐带片是基本上平的。在一些实施方案中，脐带片是半圆形、圆形、矩形或管状的。在一些实施方案中，脐带片是丝。在一些实施方案中，脐带片是条。在一些实施方案中，脐带片被配置成保持位于下穹窿中。在一些实施方案中，脐带片被配置成保持位于上穹窿中。在一些实施方案中，脐带片被配置成保持位于下穹窿和上穹窿中。在一些实施方案中，脐带片被配置成随着时间而溶解。在一些实施方案中，该片在约2天、约3天、约4天、约5天、约6天、约7天、约10天、约2周、约3周、约1个月或约2个月的时间段中溶解。
在一些实施方案中，脐带片是约0.5cm x约0.1cm、0.5cm x约0.25cm、约0.5cm x约0.5cm、约0.5cm x约0.75cm、约0.5cm x约1cm、约0.5cm x约2cm、约0.5cm x约3cm、约0.5cmx约4cm、约0.5cm x约5cm或更大。在一些实施方案中，脐带片是约1cm x约0.1cm、1cm x约0.25cm、约1cm x约0.5cm、约1cm x约0.75cm、约1cm x约1cm、约1cm x约2cm、约1cm x约3cm、约1cm x约4cm、约1cm x约5cm或更大。在一些实施方案中，脐带片是约1.5cm x约0.1cm、1.5cm x约0.25cm、约1.5cm x约0.5cm、约1.5cm x约0.75cm、约1.5cm x约1cm、约1.5cm x约2cm、约1.5cm x约3cm、约1.5cm x约4cm、约1.5cm x约5cm或更大。在一些实施方案中，脐带片是约2cm x约0.1cm、2cm x约0.25cm、约2cm x约0.5cm、约2cm x约0.75cm、约2cm x约1cm、约2cm x约2cm、约2cm x约3cm、约2cm x约4cm、约2cm x约5cm或更大。在一些实施方案中，脐带片是约2.5cm x约0.1cm、2.5cm x约0.25cm、约2.5cm x约0.5cm、约2.5cm x约0.75cm、约2.5cm x约1cm、约2.5cm x约2cm、约2.5cm x约3cm、约2.5cm x约4cm、约2.5cm x约5cm或更大。在一些实施方案中，脐带片是约3cm x约0.1cm、3cm x约0.25cm、约3cm x约0.5cm、约3cmx约0.75cm、约3cm x约1cm、约3cm x约2cm、约3cm x约3cm、约3cm x约4cm、约3cm x约5cm或更大。在一些实施方案中，脐带片是约1.0–2.0cm乘约0.1–0.5cm。在一些实施方案中，脐带片是约1.5cm乘约0.3cm。
在一些实施方案中，将脐带片用手术刀切成指定的尺寸。在一些实施方案中，手术刀是一次性的。在一些实施方案中，手术刀是可重复使用的。在一些实施方案中，手术刀与尺子组合以获得对脐带的笔直切割。在一些实施方案中，将脐带片放置于衬纸(例如，PES衬纸)上，从而降低脐带在被切割时滑动的倾向。在一些实施方案中，将脐带片用剪刀切割。在一些实施方案中，剪刀是可重复使用的。在一些实施方案中，剪刀是一次性的。
HC-HA/PTX3复合物的制备
在一些实施方案中，受控释放系统包括分离的HC-HA/PTX3复合物和用于受控释放的赋形剂，其被放置于下穹窿、上穹窿中，放置于角膜表面、泪点上或者放置于围绕对象的眼睛的组织上，从而将HC-HA/PTX3受控释放至对象的泪膜中。在一些实施方案中，受控释放系统包括分离的HC-HA/PTX3复合物和用于受控释放的赋形剂，其被放置于对象的眼睛的仅下穹窿中，从而将HC-HA/PTX3受控释放至对象的泪膜中。
在一些实施方案中，分离的HC-HA/PTX3是从胎儿支持组织中纯化的天然HC-HA/PTX3。在一些实施方案中，分离的HC-HA/PTX3由其组分在体外重构(称为重构的HC-HA/PTX2或rcHC-HA/PTX3)。在一些实施方案中，分离的HC-HA/PTX3复合物包括天然HC-HA/PTX3(nHC-HA/PTX3)和重构的HC-HA/PTX3(rcHC-HA/PTX3)。
产生分离的nHC-HA/PTX3复合物的方法
在一些实施方案中，在本文提供的方法中使用分离的天然HC-HA/PTX3(nHC-HA/PTX3)复合物。
在一些实施方案中，分离的nHC-HA/PTX3复合物分离自羊膜组织。在一些实施方案中，分离的nHC-HA/PTX3复合物分离自羊膜或脐带。在一些实施方案中，分离的nHC-HA/PTX3复合物分离自新鲜、冷冻或先前冷冻的胎盘羊膜(PAM)，新鲜、冷冻或先前冷冻的脐带羊膜(UCAM)，新鲜、冷冻或先前冷冻的胎盘，新鲜、冷冻或先前冷冻的脐带，新鲜、冷冻或先前冷冻的绒毛膜，新鲜、冷冻或先前冷冻的羊膜-绒毛膜或其任何组合。此类组织可获自任何哺乳动物，例如但不限于人、非人灵长类动物、牛或猪。
在一些实施方案中，通过任何合适的方法纯化nHC-HA/PTX3。在一些实施方案中，通过离心(例如，超速离心、梯度离心)、色谱(例如，离子交换、亲和、尺寸排阻和羟磷灰石色谱)、正切流动过滤(TFF)、凝胶过滤或差异溶解度、乙醇沉淀或任何其他可用的蛋白质纯化技术来纯化nHC-HA/PTX3复合物(参见，例如，Scopes,Protein Purification Principlesand Practice第2版,Springer-Verlag,New York,1987；Higgins,S.J.和Hames,B.D.(编著),Protein Expression:A Practical Approach,Oxford Univ Press,1999；和Deutscher,M.P.,Simon,M.I.,Abelson,J.N.(编著),Guide to Protein Purification:Methods in Enzymology(Methods in Enzymology Series,第182卷),Academic Press,1997，均通过引用并入本文)。
在一些实施方案中，nHC-HA/PTX3从提取物分离。在一些实施方案中，提取物从羊膜提取物制备。在一些实施方案中，提取物从脐带提取物制备。在一些实施方案中，脐带提取物包含脐带基质和/或华顿氏胶。在一些实施方案中，nHC-HA/PTX3复合物包含在通过超速离心制备的提取物中。在一些实施方案中，nHC-HA/PTX3复合物包含在通过使用CsCl/4-6M盐酸胍梯度超速离心制备的提取物中。在一些实施方案中，提取物通过至少2轮的超速离心制备。在一些实施方案中，提取物通过多于2轮的超速离心制备(即nHC-HA/PTX3第2)。在一些实施方案中，提取物通过至少4轮的超速离心制备(即nHC-HA/PTX3第4)。在一些实施方案中，nHC-HA/PTX3复合物包含小的富含亮氨酸的蛋白聚糖。在一些实施方案中，nHC-HA/PTX3复合物包含HC1、HA、PTX3和/或小的富含亮氨酸的蛋白聚糖。
在一些实施方案中，对通过在等渗溶液中提取制备的提取物进行超速离心。在一些实施方案中，等渗溶液是PBS。例如，在一些实施方案中，组织在PBS中均质化以产生均质化样品。然后通过离心将匀质化的样品分离成可溶部分和不溶部分。在一些实施方案中，对PBS提取组织的可溶部分进行超速离心。在这样的实施方案中，通过对PBS提取的组织进行超速离心而纯化的nHC-HA/PTX3称为nHC-HA/PTX3可溶性复合物。在一些实施方案中，nHC-HA可溶性复合物包含小的富含亮氨酸的蛋白聚糖。在一些实施方案中，nHC-HA/PTX3可溶性复合物包含HC1、HA、PTX3和/或小的富含亮氨酸的蛋白聚糖。
在一些实施方案中，对通过羊膜和/或脐带组织的直接盐酸胍提取(例如4-6MGnHCl)制备的提取物进行超速离心。在一些实施方案中，然后将GnHCl提取物组织离心以产生GnHCl可溶部分和GnHCl不溶部分。在一些实施方案中，对GnHCl可溶部分进行超速离心。在这样的实施方案中，通过对盐酸胍提取的组织进行超速离心而纯化的nHC-HA/PTX3被称为nHC-HA/PTX3不溶性复合物。在一些实施方案中，nHC-HA不溶性复合物包含小的富含亮氨酸的蛋白聚糖。在一些实施方案中，nHC-HA/PTX3不溶性复合物包含HC1、HA、PTX3和/或小的富含亮氨酸的蛋白聚糖。
在一些实施方案中，对通过PBS提取组织的不溶部分的进一步盐酸胍提取而制备的提取物进行超速离心。例如，在一些实施方案中，组织在PBS中均质化以产生均质化样品。然后通过离心将匀质化的样品分离成可溶部分和不溶部分。然后在盐酸胍(例如4-6MGnHCl)中进一步提取不溶部分并离心以产生盐酸胍可溶部分和不溶部分。在一些实施方案中，对盐酸胍可溶部分进行超速离心。在这样的实施方案中，通过对盐酸胍提取的组织进行超速离心而纯化的nHC-HA/PTX3被称为nHC-HA/PTX3不溶性复合物。在一些实施方案中，nHC-HA不溶性复合物包含小的富含亮氨酸的蛋白聚糖。在一些实施方案中，nHC-HA/PTX3不溶性复合物包含HC1、HA、PTX3和/或小的富含亮氨酸的蛋白聚糖。
在一些实施方案中，纯化分离的nHC-HA/PTX3提取物的方法包括：(a)将分离的提取物(例如通过本文所述的可溶性或不溶性方法制备的)溶解在初始密度为1.35g/ml的CsCl/4-6M盐酸胍中以生成CsCl混合物，(b)在15℃下以125,000x g离心CsCl混合物48小时以生成第一纯化提取物，并将含有HA的级分汇集/调整至初始密度为1.40g/ml，在15℃下以125,000x g进行48小时的第二超速离心，(c)汇集纯化的级分并用蒸馏水透析以去除CsCl和盐酸胍，产生透析液。在一些实施方案中，纯化分离的提取物的方法进一步包括(d)将透析液与3体积的含有1.3％(w/v)乙酸钾的95％(v/v)乙醇在0℃混合1小时，以产生第一透析液/乙醇混合物，(e)以15,000x g离心第一透析液/乙醇混合物，以产生第二纯化提取物，和(f)提取第二纯化提取物。在一些实施方案中，纯化分离的提取物的方法进一步包括：(g)用乙醇(例如，70％乙醇)洗涤第二纯化提取物，以产生第二纯化提取物/乙醇混合物；(h)离心第二纯化提取物/乙醇混合物，以产生第三纯化提取物；(i)提取第三纯化提取物。在一些实施方案中，纯化分离的提取物的方法进一步包括：(j)用乙醇(例如，70％乙醇)洗涤第三纯化提取物，以产生第三纯化提取物/乙醇混合物；(k)离心第三纯化提取物/乙醇混合物，以产生第四纯化提取物；以及(l)提取第四纯化提取物。在一些实施方案中，纯化提取物包含nHC-HA/PTX3复合物。
在一些实施方案中，nHC-HA/PTX3复合物通过免疫亲和色谱纯化。在一些实施方案中，产生抗HC1抗体、抗HC2抗体或两者并固定到固定支持物上。在一些实施方案中，未纯化的HC-HA复合物(即流动相)通过支持物。在某些情况下，HC-HA复合物与抗体结合(例如，通过(a)抗HC1抗体和HC1，(b)抗HC2抗体和HC2，(c)抗PTX抗体和PTX3，(d)抗SLRP抗体和SLRP，或(e)其任何组合的相互作用)。在一些实施方案中，洗涤支持物(例如，用PBS)以去除任何未结合或松散结合的分子。在一些实施方案中，然后用能够从支持物洗脱nHC-HA/PTX3复合物的溶液(例如，1％ SDS、6M盐酸胍或8M尿素)洗涤支持物。
在一些实施方案中，通过亲和色谱纯化nHC-HA/PTX3复合物。在一些实施方案中，产生HABP并将其固定到固定支持物上。在一些实施方案中，未纯化的nHC-HA/PTX3复合物(即流动相)通过支持物。在某些情况下，nHC-HA/PTX3复合物与HABP结合。在一些实施方案中，洗涤支持物(例如，用PBS)以去除任何未结合或松散结合的分子。在一些实施方案中，然后用能够从支持物洗脱HC-HA复合物的溶液洗涤支持物。
在一些实施方案中，通过HABP亲和色谱，和使用抗HC1抗体、抗HC2抗体、抗PTX3抗体、抗SLRP或SLRP的组合的抗体或其任何抗体组合的免疫亲和色谱纯化nHC-HA/PTX3复合物。
在一些实施方案中，使用一种或多种抗体从如本文所述的不溶性级分中纯化nHC-HA/PTX3复合物。在一些实施方案中，使用抗SLRP抗体从如本文所述的不溶性级分中纯化nHC-HA/PTX3复合物。
在一些实施方案中，从如本文所述的可溶性级分中纯化nHC-HA/PTX3复合物。在一些实施方案中，使用抗PTX3抗体从如本文所述的可溶性级分中纯化nHC-HA/PTX3复合物。
在一些实施方案中，nHC-HA/PTX3复合物包含小的富含亮氨酸的蛋白聚糖(SLRP)。在一些实施方案中，nHC-HA/PTX3复合物包含I类、II类或III类SLRP。在一些实施方案中，小的富含亮氨酸的蛋白聚糖选自I类SLRP，例如核心蛋白聚糖和双糖链蛋白聚糖。在一些实施方案中，小的富含亮氨酸的蛋白聚糖选自II类SLRP，例如纤调蛋白聚糖、基膜聚糖、PRELP(末端富含脯氨酸精氨酸的富亮氨酸蛋白质)、角蛋白聚糖和骨黏附蛋白聚糖。在一些实施方案中，小的富含亮氨酸的蛋白聚糖选自III类SLRP，例如表聚糖(epipycan)和骨甘蛋白聚糖。在一些实施方案中，小的富含亮氨酸的蛋白聚糖选自bikunin、核心蛋白聚糖、双糖链蛋白聚糖和骨黏附蛋白聚糖。在一些实施方案中，小的富含亮氨酸的蛋白质包含糖胺聚糖。在一些实施方案中，小的富含亮氨酸的蛋白聚糖包含硫酸角质素。
产生重构的HC-HA/PTX3复合物的方法
在一些实施方案中，rcHC-HA/PTX3复合物用于本文提供的方法中。这种重构的HC-HA/PTX3复合物可以含有或不含SLRP。
在一些实施方案中，用于产生重构的HC-HA/PTX3复合物的方法包括(a)使高分子量透明质酸(HMW HA)与IαI和TSG-6接触以形成预结合TSG-6的HC-HA复合物，和(b)在合适的条件下使HC-HA复合物与正五聚蛋白3(PTX3)接触以形成rcHC-HA/PTX3复合物。本文提供了通过这种方法产生的rcHC-HA/PTX3复合物。在一些实施方案中，IαI的HC1与HA形成共价键。在一些实施方案中，所述方法的步骤(a)和(b)按顺序依次进行。在一些实施方案中，所述方法包括使与TSG-6预结合的HC-HA复合物与PTX3接触。
在一些实施方案中，IαI蛋白和TSG-6蛋白以约1:1、2:1、3:1、4:1、5:1、6:1、7:1、8:1、9:1、10:1、15:1或20:1(IαI:TSG-6)的摩尔比与HMW HA接触。在一些实施方案中，IαI:TSG-6的比率范围是约1:1至约20:1，例如约1:1至约10:1，例如约1:1至5约:1，例如约1:1至约3:1。在一些实施方案中，IαI:TSG-6的比率是3:1或更高。在一些实施方案中，IαI:TSG-6的比率是3:1。
在某些情况下，TSG-6与IαI相互作用并与IαI的HC1和HC2形成共价复合物(例如，HC1·TSG-6和HC2·TSG-6)。在某些情况下，在HA存在的情况下，HC转移至HA以形成rcHC-HA。
在一些实施方案中，使高分子量透明质酸(HMW HA)与IαI和TSG-6接触的步骤发生至少10分钟、至少30分钟、至少1小时、至少2小时、至少3小时、至少4小时、至少5小时、至少6小时、至少12小时或至少24小时或更久。在一些实施方案中，使HMW HA与IαI和TSG-6接触的步骤发生至少2小时或更久。在一些实施方案中，使HMW HA与IαI和TSG-6接触的步骤发生至少2小时。在一些实施方案中，使HMW HA与IαI和TSG-6接触的步骤发生在37℃。在一些实施方案中，使固定的HMW HA与IαI和TSG-6接触的步骤发生在PBS中的5mM MgCl2中。
在一些实施方案中，使PTX3与HC-HA复合物接触的步骤发生至少10分钟、至少30分钟、至少1小时、至少2小时、至少3小时、至少4小时、至少5小时、至少6小时、至少12小时或至少24小时或更久。在一些实施方案中，使PTX3与HC-HA复合物接触的步骤发生至少2小时或更久。在一些实施方案中，使PTX3与HC-HA复合物接触的步骤发生至少2小时。在一些实施方案中，使PTX3与HC-HA复合物接触的步骤发生在37℃。在一些实施方案中，使PTX3与HC-HA复合物接触的步骤发生在PBS中的5mM MgCl2中。
在一些实施方案中，所述方法包括使高分子量透明质酸(HMW HA)与正五聚蛋白3(PTX3)蛋白、包含重链1(HC1)和重链2(HC2)的间-α-抑制剂(IαI)蛋白和肿瘤坏死因子α刺激基因6(TSG-6)在合适的条件下同时接触形成HC-HA/PTX3复合物。在一些实施方案中，HMWHA与PTX3、IαI和TSG-6的接触发生至少10分钟、至少30分钟、至少1小时、至少2小时、至少3小时、至少4小时、至少5小时、至少6小时、至少12小时或至少24小时或更久。在一些实施方案中，使HMW HA、PTX3、IαI和TSG-6接触的步骤发生在37℃。在一些实施方案中，使HMW HA、PTX3、IαI和TSG-6接触的步骤发生在PBS中的5mM MgCl2中。
在一些实施方案中，所述方法包括使高分子量透明质酸(HMW HA)与正五聚蛋白3(PTX3)蛋白、包含重链1(HC1)和重链2(HC2)的间-α-抑制剂(IαI)蛋白和肿瘤坏死因子α刺激基因6(TSG-6)在合适的条件下以任何顺序依次接触形成HC-HA/PTX3复合物。在一些实施方案中，HMW HA与PTX3、IαI和TSG-6的接触发生至少10分钟、至少30分钟、至少1小时、至少2小时、至少3小时、至少4小时、至少5小时、至少6小时、至少12小时或至少24小时或更久。在一些实施方案中，使HMW HA、PTX3、IαI和TSG-6接触的步骤发生在37℃。在一些实施方案中，使HMW HA、PTX3、IαI和TSG-6接触的步骤发生在PBS中的5mM MgCl2中。
在一些实施方案中，产生rcHC-HA/PTX3复合物的方法进一步包括添加一种或多种小的富含亮氨酸的蛋白聚糖(SLRP)。在一些实施方案中，用于产生重构的HC-HA/PTX3复合物的方法包括(a)使高分子量透明质酸(HMW HA)与IαI和TSG-6和HA接触以形成预结合TSG-6的HC-HA复合物，(b)使HC-HA复合物与正五聚蛋白3(PTX3)接触，以及(c)在合适的条件下使HC-HA复合物与一种或多种SLRPS接触以形成rcHC-HA/PTX3复合物。本文提供了通过这种方法产生的rcHC-HA/PTX3复合物。在一些实施方案中，IαI的HC1与HA形成共价键。在一些实施方案中，所述方法包括使预结合TSG-6的HC-HA复合物与PTX3接触。在一些实施方案中，所述方法的步骤(a)、(b)和(c)按顺序依次执行。在一些实施方案中，所述方法的步骤(a)、(b)和(c)同时执行。在一些实施方案中，执行所述方法的步骤(a)，然后按顺序依次执行所述方法的步骤(b)和(c)。在一些实施方案中，执行所述方法的步骤(a)，然后同时执行所述方法的步骤(b)和(c)。
在一些实施方案中，SLRP选自I类、II类或II类SLRP。在一些实施方案中，SLRP选自I类SLRP，例如核心蛋白聚糖和双糖链蛋白聚糖。在一些实施方案中，小的富含亮氨酸的蛋白聚糖选自II类SLRP，例如纤调蛋白聚糖、基膜聚糖、PRELP(末端富含脯氨酸精氨酸的富亮氨酸蛋白质)、角蛋白聚糖和骨黏附蛋白聚糖。在一些实施方案中，小的富含亮氨酸的蛋白聚糖选自III类SLRP，例如表聚糖和骨甘蛋白聚糖。在一些实施方案中，小的富含亮氨酸的蛋白聚糖选自bikunin、核心蛋白聚糖、双糖链蛋白聚糖和骨黏附蛋白聚糖。在一些实施方案中，小的富含亮氨酸的蛋白质包含糖胺聚糖。在一些实施方案中，小的富含亮氨酸的蛋白聚糖包含硫酸角质素。
PTX3
在一些实施方案中，用于所述方法中的PTX3分离自一个细胞或多个细胞(例如，组织提取物)。适合于表达PTX3的示例性细胞包括但不限于动物细胞和植物细胞，其中动物细胞包括但不限于哺乳动物细胞、灵长类动物细胞、人细胞、啮齿动物细胞、昆虫细胞、细菌和酵母，其中植物细胞包括但不限于藻类、被子植物、裸子植物、蕨类植物和苔藓植物。在一些实施方案中，用于所述方法中的PTX3分离自人细胞。在一些实施方案中，用于所述方法中的PTX3分离自用一种或多种促炎细胞因子刺激以上调PTX3表达的细胞。在一些实施方案中，促炎细胞因子是IL-1或TNF-α。
在一些实施方案中，用于所述方法中的PTX3分离自羊膜细胞。在一些实施方案中，用于所述方法中的PTX3分离自来自脐带的羊膜细胞。在一些实施方案中，用一种或多种促炎细胞因子刺激羊膜细胞以上调PTX3表达。在一些实施方案中，促炎细胞因子是IL-1或TNF-α。
在一些实施方案中，用于所述方法中的PTX3分离自脐带细胞。在一些实施方案中，用一种或多种促炎细胞因子刺激脐带细胞以上调PTX3表达。在一些实施方案中，促炎细胞因子是IL-1或TNF-α。
在一些实施方案中，用于所述方法中的PTX3分离自羊膜上皮细胞。在一些实施方案中，用于所述方法中的PTX3分离自脐带上皮细胞。在一些实施方案中，用一种或多种促炎细胞因子刺激羊膜上皮细胞或脐带上皮细胞以上调PTX3表达。在一些实施方案中，促炎细胞因子是IL-1或TNF-α。
在一些实施方案中，用于所述方法中的PTX3分离自羊膜基质细胞。在一些实施方案中，用于所述方法中的PTX3分离自脐带基质细胞。在一些实施方案中，用一种或多种促炎细胞因子刺激羊膜基质细胞或脐带基质细胞以上调PTX3表达。在一些实施方案中，促炎细胞因子是IL-1或TNF-α。
在一些实施方案中，用于所述方法中的PTX3是从细胞中分离的天然PTX3蛋白。在一些实施方案中，用一种或多种促炎细胞因子刺激细胞以上调PTX3表达。在一些实施方案中，促炎细胞因子是IL-1或TNF-α。
在一些实施方案中，通过重组技术制备PTX3。在一些实施方案中，由重组表达载体表达PTX3。在一些实施方案中，编码PTX3的核酸可操作地连接至组成型启动子。在一些实施方案中，编码PTX3的核酸可操作地连接至诱导型启动子。在一些实施方案中，PTX3在转基因动物中表达。在一些实施方案中，PTX3是重组蛋白。在一些实施方案中，PTX3是从细胞分离的重组蛋白。在一些实施方案中，PTX3是在无细胞提取物中产生的重组蛋白。
在一些实施方案中，从羊膜、脐带、脐带羊膜、绒毛膜、羊水或其组合中纯化PTX3。在一些实施方案中，从羊膜细胞中纯化PTX3。在一些实施方案中，羊膜细胞是羊膜上皮细胞。在一些实施方案中，羊膜细胞是脐带上皮细胞。在一些实施方案中，羊膜细胞是羊膜基质细胞。在一些实施方案中，羊膜细胞是脐带基质细胞。在一些实施方案中，用一种或多种促炎细胞因子刺激羊膜细胞以上调PTX3表达。在一些实施方案中，促炎细胞因子是IL-1或TNF-α。
在一些实施方案中，PTX3并非分离自一个细胞或多个细胞(例如，组织提取物)。
在一些实施方案中，PTX3包含足以促进形成rcHC-HA/PTX3复合物的PTX3片段。用于所提供方法中的PTX3变体包括具有氨基酸修饰的变体，所述氨基酸修饰是氨基酸置换(取代)、缺失或插入。在一些实施方案中，此类修饰改善了PTX3多肽的一种或多种特性，例如改善rcHC-HA/PTX3复合物的一个或多个治疗特性(例如，抗炎、抗免疫、抗血管生成、抗瘢痕形成、抗粘连、再生或本文所述的其他治疗活性)。
在一些实施方案中，PTX3蛋白获自商业来源。PTX3的示例性商业来源是但不限于PTX3(目录号1826-TS；R&D Systems，Minneapolis，MN)。
在一些实施方案中，用于所述方法中的PTX3蛋白是多聚体蛋白。在一些实施方案中，用于所述方法中的PTX3蛋白是同多聚体。在一些实施方案中，同多聚体是二聚体、三聚体、四聚体、六聚体、五聚体或八聚体。在一些实施方案中，PTX3同多聚体是三聚体、四聚体或八聚体。在特定实施方案中，PTX3同多聚体是八聚体。在一些实施方案中，修饰多聚化结构域以改善PTX3蛋白的多聚化。在一些实施方案中，多聚化结构域被异质多聚化结构域(例如，Fc多聚化结构域或亮氨酸拉链)替换，其当与PTX3融合时改善PTX3的多聚化。
TSG-6
在一些实施方案中，用于所述方法中的TSG-6分离自一个细胞或多个细胞(例如，组织提取物)。适合于表达TSG-6的示例性细胞包括但不限于动物细胞和植物细胞，其中动物细胞包括但不限于哺乳动物细胞、灵长类动物细胞、人细胞、啮齿动物细胞、昆虫细胞、细菌和酵母，其中植物细胞包括但不限于藻类、被子植物、裸子植物、蕨类植物和苔藓植物。在一些实施方案中，用于所述方法中的TSG-6分离自人细胞。在一些实施方案中，用于所述方法中的TSG-6分离自用一种或多种促炎细胞因子刺激以上调TSG-6表达的细胞。在一些实施方案中，促炎细胞因子是IL-1或TNF-α。
在一些实施方案中，用于所述方法中的TSG-6分离自羊膜细胞。在一些实施方案中，用于所述方法中的TSG-6分离自来自脐带的羊膜细胞。在一些实施方案中，用于所述方法中的TSG-6分离自用一种或多种促炎细胞因子刺激以上调TSG-6表达的羊膜细胞。在一些实施方案中，促炎细胞因子是IL-1或TNF-α。
在一些实施方案中，用于所述方法中的TSG-6分离自脐带细胞。在一些实施方案中，用于所述方法中的TSG-6分离自用一种或多种促炎细胞因子刺激以上调TSG-6表达的脐带细胞。在一些实施方案中，促炎细胞因子是IL-1或TNF-α。
在一些实施方案中，用于所述方法中的TSG-6分离自羊膜上皮细胞。在一些实施方案中，用于所述方法中的TSG-6分离自脐带上皮细胞。在一些实施方案中，用于所述方法中的TSG-6分离自用一种或多种促炎细胞因子刺激以上调TSG-6表达的羊膜上皮细胞或脐带上皮细胞。在一些实施方案中，促炎细胞因子是IL-1或TNF-α。
在一些实施方案中，用于所述方法中的TSG-6分离自羊膜基质细胞。在一些实施方案中，用于所述方法中的TSG-6分离自脐带基质细胞。在一些实施方案中，用于所述方法中的TSG-6分离自用一种或多种促炎细胞因子刺激以上调TSG-6表达的羊膜基质细胞或脐带基质细胞。在一些实施方案中，促炎细胞因子是IL-1或TNF-α。
在一些实施方案中，用于所述方法中的TSG-6是从细胞中分离的天然TSG-6蛋白。在一些实施方案中，用一种或多种促炎细胞因子刺激细胞以上调TSG-6表达。在一些实施方案中，促炎细胞因子是IL-1或TNF-α。
在一些实施方案中，通过重组技术制备TSG-6。在一些实施方案中，由重组表达载体表达TSG-6。在一些实施方案中，编码TSG-6的核酸可操作地连接至组成型启动子。在一些实施方案中，编码TSG-6的核酸可操作地连接至诱导型启动子。在一些实施方案中，TSG-6在转基因动物中表达。在一些实施方案中，TSG-6是重组蛋白。在一些实施方案中，TSG-6是从细胞分离的重组蛋白。在一些实施方案中，TSG-6是在无细胞提取物中产生的重组蛋白。
在一些实施方案中，从羊膜、羊膜、绒毛膜、羊水或其组合中纯化TSG-6。在一些实施方案中，从羊膜细胞中纯化TSG-6。在一些实施方案中，羊膜细胞是羊膜上皮细胞。在一些实施方案中，羊膜上皮细胞是脐带上皮细胞。在一些实施方案中，羊膜细胞是羊膜基质细胞。在一些实施方案中，羊膜细胞是脐带基质细胞。在一些实施方案中，用一种或多种促炎细胞因子刺激羊膜细胞以上调TSG-6表达。在一些实施方案中，促炎细胞因子是IL-1或TNF-α。
在一些实施方案中，TSG-6并非分离自一个细胞或多个细胞(例如，组织提取物)。
在一些实施方案中，TSG-6包含足以促进或催化IαI的HC1向HA转移的TSG-6片段。在一些实施方案中，TSG-6包括TSG-6的连接模块。
在一些实施方案中，TSG-6包含亲和标签。示例性亲和标签包括但不限于血凝素标签、聚组氨酸标签、myc标签、FLAG标签、谷胱甘肽-S-转移酶(GST)标签。此类亲和标签在本领域中用于纯化是众所周知的。在一些实施方案中，此类亲和标签作为融合蛋白或通过化学接头掺入TSG-6多肽中。在一些实施方案中，TSG-6包含亲和标签，并且通过亲和纯化从rcHC-HA/PTX3复合物中去除未结合的TSG-6。
在一些实施方案中，TSG-6蛋白获自商业来源。TSG-6的示例性商业来源是但不限于TSG-6(目录号2104-TS R&D Systems，Minneapolis，MN)。
IαI
在一些实施方案中，IαI包含HC1链。在一些实施方案中，IαI包含HC1和HC2链。在一些实施方案中，IαI包含HC1、HC2链和bikunin。在一些实施方案中，IαI包含通过硫酸软骨素链连接的HC1和HC2链和bikunin。
在一些实施方案中，从生物样品中分离IαI。在一些实施方案中，生物样品是来自哺乳动物的生物样品。在一些实施方案中，哺乳动物是人。在一些实施方案中，生物样品是血液、血清、血浆、肝脏、羊膜、绒毛膜或羊水样品。在一些实施方案中，生物样品是血液、血清或血浆样品。在一些实施方案中，生物样品是血液样品。在一些实施方案中，生物样品是血清样品。在一些实施方案中，生物样品是血浆样品。在一些实施方案中，从人血液、血浆或血清纯化IαI。在一些实施方案中，IαI分离自人血清。在一些实施方案中，IαI并非分离自血清。在一些实施方案中，用于所述方法中的IαI在羊膜细胞中产生。在一些实施方案中，用于所述方法中的IαI在脐带细胞中产生。在一些实施方案中，用于所述方法中的IαI在来自脐带的羊膜细胞中产生。在一些实施方案中，用于所述方法中的IαI在羊膜上皮细胞中产生。在一些实施方案中，用于所述方法中的IαI在脐带上皮细胞中产生。在一些实施方案中，用于所述方法中的IαI在羊膜基质细胞中产生。在一些实施方案中，用于所述方法中的IαI在脐带基质细胞中产生。在一些实施方案中，用于所述方法中的IαI在肝细胞中产生。在一些实施方案中，通过重组技术制备IαI。
在一些实施方案中，IαI的HC1分离自生物样品。在一些实施方案中，生物样品是来自哺乳动物的生物样品。在一些实施方案中，哺乳动物是人。在一些实施方案中，生物样品是血液、血清、血浆、肝脏、羊膜、绒毛膜或羊水样品。在一些实施方案中，生物样品是血液、血清或血浆样品。在一些实施方案中，生物样品是血液样品。在一些实施方案中，生物样品是血清样品。在一些实施方案中，生物样品是血浆样品。在一些实施方案中，从人血液、血浆或血清纯化IαI的HC1。在一些实施方案中，IαI分离自人血清。在一些实施方案中，IαI的HC1并非从血清纯化。在一些实施方案中，通过重组技术制备IαI的HC1。在一些实施方案中，从肝细胞纯化IαI的HC1。在一些实施方案中，从羊膜细胞纯化IαI的HC1。在一些实施方案中，从羊膜上皮细胞或脐带上皮细胞纯化IαI的HC1。在一些实施方案中，从羊膜基质细胞或脐带基质细胞纯化IαI的HC1。
在一些实施方案中，从生物样品分离IαI的HC2。在一些实施方案中，生物样品是来自哺乳动物的生物样品。在一些实施方案中，哺乳动物是人。在一些实施方案中，生物样品是血液、血清、血浆、肝脏、羊膜、绒毛膜或羊水样品。在一些实施方案中，生物样品是血液、血清或血浆样品。在一些实施方案中，生物样品是血液样品。在一些实施方案中，生物样品是血清样品。在一些实施方案中，生物样品是血浆样品。在一些实施方案中，从人血液、血浆或血清纯化IαI的HC2。在一些实施方案中，IαI的HC2分离自人血清。在一些实施方案中，IαI的HC2分离自人血清。在一些实施方案中，IαI的HC2并非分离自血清。在一些实施方案中，通过重组技术制备IαI的HC2。在一些实施方案中，从肝细胞纯化IαI的HC2。在一些实施方案中，从羊膜细胞纯化IαI的HC2。在一些实施方案中，从羊膜上皮细胞或脐带上皮细胞纯化IαI的HC2。在一些实施方案中，从羊膜基质细胞或脐带基质细胞纯化IαI的HC2。
HA
在一些实施方案中，从细胞、组织或流体样品纯化HA。在一些实施方案中，HA获自商业供应商(例如，Sigma Aldrich或Advanced Medical Optics，Irvine，CA(例如，Healon))。在一些实施方案中，HA作为粉末获自商业供应商。在一些实施方案中，HA在细胞中表达。适合于表达HA的示例性细胞包括但不限于动物细胞和植物细胞，其中动物细胞包括但不限于哺乳动物细胞、灵长类动物细胞、人细胞、啮齿动物细胞、昆虫细胞、细菌和酵母，其中植物细胞包括但不限于藻类、被子植物、裸子植物、蕨类植物和苔藓植物。在一些实施方案中，HA在人细胞中表达。在一些实施方案中，HA在转基因动物中表达。在一些实施方案中，HA获自表达透明质酸合酶(例如HAS1、HAS2和HAS3)的细胞。在一些实施方案中，细胞含有表达HA合酶的重组表达载体。在某些情况下，当新生多糖通过细胞膜挤压到细胞外空间时，HA合酶通过反复添加葡糖醛酸和N-乙酰葡糖胺至新生多糖来延长透明质酸。
用于所述方法中的HA通常是高分子量(HMW)HA。在一些实施方案中，HMW HA的重均分子量大于约500千道尔顿(kDa)，例如在约500kDa和约10,000kDa之间、在约800kDa和约8,500kDa之间、在约1100kDa和约5,000kDa之间、或在约1400kDa和约3,500kDa之间。在一些实施方案中，HMW HA的重均分子量为约3000kDa。包含分离的HC-HA/PTX3复合物的受控释放制剂的制备
在一些实施方案中，受控释放制剂包含与用于HC-HA/PTX3的持续释放的赋形剂混合的分离的HC-HA/PTX3复合物。在一些实施方案中，分离的HC-HA/PTX3复合物包括天然HC-HA/PTX3(nHC-HA/PTX3)和/或重构的HC-HA/PTX3(rcHC-HA/PTX3)。在一些实施方案中，用于HC-HA/PTX3的持续释放的赋形剂是聚合物。在一些实施方案中，用于HC-HA/PTX3的持续释放的赋形剂是可生物降解的聚合物。在一些实施方案中，用于受控释放制剂的赋形剂包括胶原、纤维素、壳聚糖、PEG、聚(N-异丙基丙烯酰胺)、聚(乳)酸、聚乳酸-羟基乙酸共聚物或其组合。在一些实施方案中，用于HC-HA/PTX3的持续释放的赋形剂被配置成缓慢地和/或以受控的方式随着时间释放分离的HC-HA/PTX3复合物。
在一些实施方案中，本文公开的nHC-HA/PTX3或rcHC-HA/PTX3复合物与一种或多种天然聚合物一起配制。在一些实施方案中，本文公开的nHC-HA/PTX3或rcHC-HA/PTX3复合物与天然聚合物一起配制，所述天然聚合物是纤连蛋白、胶原、层粘连蛋白、角蛋白、纤维蛋白、纤维蛋白原、透明质酸、硫酸类肝素、硫酸软骨素或其组合。在一些实施方案中，本文公开的nHC-HA/PTX3或rcHC-HA/PTX3复合物与由天然聚合物配制的聚合物凝胶一起配制。在一些实施方案中，本文公开的nHC-HA/PTX3或rcHC-HA/PTX3复合物与由天然聚合物配制的聚合物凝胶一起配制，例如，但不限于，纤连蛋白、胶原、层粘连蛋白、角蛋白、纤维蛋白、纤维蛋白原、透明质酸、硫酸类肝素、硫酸软骨素及其组合。在一些实施方案中，本文公开的nHC-HA/PTX3或rcHC-HA/PTX3复合物与交联聚合物一起配制。在一些实施方案中，本文公开的nHC-HA/PTX3或rcHC-HA/PTX3复合物与非交联聚合物一起配制。在一些实施方案中，本文公开的nHC-HA/PTX3或rcHC-HA/PTX3复合物与非交联聚合物和交联聚合物一起配制。在一些实施方案中，本文公开的nHC-HA/PTX3或rcHC-HA/PTX3复合物与交联透明质酸凝胶一起配制。在一些实施方案中，本文公开的nHC-HA/PTX3或rcHC-HA/PTX3复合物与不溶性交联HA水凝胶一起配制。在一些实施方案中，本文公开的nHC-HA/PTX3或rcHC-HA/PTX3复合物与非交联透明质酸凝胶一起配制。在一些实施方案中，本文公开的nHC-HA/PTX3或rcHC-HA/PTX3复合物与胶原基质一起配制。在一些实施方案中，本文公开的nHC-HA/PTX3或rcHC-HA/PTX3复合物与纤维蛋白基质一起配制。在一些实施方案中，本文公开的nHC-HA/PTX3或rcHC-HA/PTX3复合物与纤维蛋白/胶原基质一起配制。
在一些实施方案中，本文公开的nHC-HA/PTX3或rcHC-HA/PTX3复合物经配制用于施用于眼睛或其相关组织。适合施用于眼睛的制剂包括但不限于溶液、悬浮液(例如，水性悬浮液)、软膏、凝胶、乳膏、脂质体、类脂囊泡(niosome)、药质体(pharmacosome)、纳米颗粒或其组合。在一些实施方案中，用于局部施用于眼睛的本文公开的nHC-HA/PTX3或rcHC-HA/PTX3复合物通过喷雾、洗涤或其组合来施用。
在一些实施方案中，本文公开的制剂是一种剂型。在一些实施方案中，剂型是液体、固体、半固体或其任何组合。在一些实施方案中，半固体剂型是例如乳膏、凝胶、软膏、洗剂、香膏、栓剂、局部形式或其组合。在一些实施方案中，固体剂型是例如片剂、胶囊剂、颗粒剂、粉剂、囊剂、可复原的粉剂、咀嚼片、锭剂或其任何组合。
在一些实施方案中，本文公开的nHC-HA/PTX3或rcHC-HA/PTX3复合物的微囊化基质(也称为微囊化基质)在可生物降解的聚合物中形成。在一些实施方案中，本文公开的nHC-HA/PTX3或rcHC-HA/PTX3复合物被包埋在脂质体或微乳液中。
用于施用于眼睛的制剂具有眼科可接受的渗透性。在某些情形中，泪液具有与0.9％氯化钠溶液相当的等渗值。在一些实施方案中，约0.6％至约l.8％氯化钠相当的等渗值适合局部施用于眼睛。在一些实施方案中，本文公开的用于施用于眼睛的制剂具有约200至约600mOsm/L的克分子渗透压浓度。在一些实施方案中，本文公开的用于施用于眼睛的制剂是低渗性，并且因此需要添加任何适合以达到适当的渗透性范围。调节渗透性的眼科可接受的物质包括但不限于氯化钠、氯化钾、硫代硫酸钠、亚硫酸氢钠和硫酸铵。
用于施用于眼睛的制剂具有眼科可接受的澄清度。眼科可接受的澄清剂的示例包括但不限于聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯80或其组合。
在一些实施方案中，用于施用于眼睛的制剂包括眼科可接受的增粘剂。在一些实施方案中，增粘剂增加本文公开的制剂保留在眼睛中的时间。在一些实施方案中，增加本文公开的制剂保留在眼睛中的时间允许更大的药物吸收和效果。粘膜粘附性聚合物的非限制性示例包括羧甲基纤维素、卡波姆(丙烯酸聚合物)、聚甲基丙烯酸甲酯、聚丙烯酰胺、聚卡波非、丙烯酸/丙烯酸丁酯共聚物、藻酸钠和葡聚糖。
在一些实施方案中，受控释放制剂被配置成放置于下穹窿、上穹窿、泪点中，放置于角膜表面上，或放置于围绕对象的眼睛的组织上。在一些实施方案中，受控释放制剂被配置成放置于对象的眼睛的仅下穹窿中。在一些实施方案中，受控释放制剂被配置为膜和/或涂层。在一些实施方案中，受控释放制剂是平的或基本上平的。在一些实施方案中，受控释放制剂被配置成与角膜表面的形状相合。在一些实施方案中，受控释放制剂被配置成保持偶联于角膜表面。在一些实施方案中，受控释放制剂被配置成保持位于下穹窿、上穹窿或二者中。在一些实施方案中，受控释放制剂被配置成随着时间溶解。在一些实施方案中，受控释放制剂被配置为透明的或半透明的，从而使患者能够看见受控释放制剂放置于角膜上。
在一些实施方案中，受控释放制剂是半圆形、圆形、矩形或管状的。在一些实施方案中，受控释放制剂是约0.5cm x约0.1cm、0.5cm x约0.25cm、约0.5cm x约0.5cm、约0.5cmx约0.75cm、约0.5cm x约1cm、约0.5cm x约2cm、约0.5cm x约3cm、约0.5cm x约4cm、约0.5cmx约5cm或更大。在一些实施方案中，受控释放制剂是约1cm x约0.1cm、1cm x约0.25cm、约1cm x约0.5cm、约1cm x约0.75cm、约1cm x约1cm、约1cm x约2cm、约1cm x约3cm、约1cm x约4cm、约1cm x约5cm或更大。在一些实施方案中，受控释放制剂是约1.5cm x约0.1cm、1.5cmx约0.25cm、约1.5cm x约0.5cm、约1.5cm x约0.75cm、约1.5cm x约1cm、约1.5cm x约2cm、约1.5cm x约3cm、约1.5cm x约4cm、约1.5cm x约5cm或更大。在一些实施方案中，受控释放制剂是约2cm x约0.1cm、2cm x约0.25cm、约2cm x约0.5cm、约2cm x约0.75cm、约2cm x约1cm、约2cm x约2cm、约2cm x约3cm、约2cm x约4cm、约2cm x约5cm或更大。在一些实施方案中，受控释放制剂是约2.5cm x约0.1cm、2.5cm x约0.25cm、约2.5cm x约0.5cm、约2.5cm x约0.75cm、约2.5cm x约1cm、约2.5cm x约2cm、约2.5cm x约3cm、约2.5cm x约4cm、约2.5cm x约5cm或更大。在一些实施方案中，受控释放制剂是约3cm x约0.1cm、3cm x约0.25cm、约3cmx约0.5cm、约3cm x约0.75cm、约3cm x约1cm、约3cm x约2cm、约3cm x约3cm、约3cm x约4cm、约3cm x约5cm或更大。在一些实施方案中，受控释放制剂是约1.0–2.0cm乘约0.1–0.5cm。在一些实施方案中，受控释放制剂是约1.5cm乘约0.3cm。
使用方法
在一些实施方案中，本文公开了用于治疗眼部表面疾病、眼部病症、眼部伤口或其任何组合的方法。在一些实施方案中，所述方法包括将脐带片放置于下穹窿、上穹窿、泪点中，放置于角膜表面上或放置于围绕患有眼部表面疾病、病症或伤口的对象的眼睛的组织上。在一些实施方案中，所述方法包括将脐带片放置于患有眼部表面疾病、病症或伤口的对象的眼睛的仅下穹窿中。在一些实施方案中，本文还公开了用于治疗复发性角膜糜烂(RCE)、角膜溃疡、单纯疱疹性角膜炎(HSK)或伴有顽固性点状角膜炎的OSD的方法。如本文公开的，术语放置和施加是可互换的。在一些实施方案中，所述方法包括将本文公开的受控释放制剂放置于眼睛的下穹窿、上穹窿、泪点中，放置于角膜表面上或放置于围绕眼睛的组织上。在一些实施方案中，所述方法包括将本文公开的受控释放制剂放置于眼睛的仅下穹窿中。在一些实施方案中，所述方法还包括在放置脐带片和/或受控释放制剂之前使对象的下眼睑缩回以暴露下穹窿、上穹窿或二者。在一些实施方案中，所述方法还包括在放置脐带片和/或受控释放制剂之前使对象的上眼睑缩回以暴露下穹窿、上穹窿或二者。在一些实施方案中，所述方法还包括在放置脐带片和/或受控释放制剂之前使对象的上眼睑和下眼睑缩回以暴露下穹窿、上穹窿或二者。参见图4。在一些实施方案中，所述方法包括在施加脐带片和/或受控释放制剂之后对闭合的对象的眼睛进行贴敷和/或贴扎。在本文公开的任何方法中，将包含与HC-HA/PTX3混合的赋形剂的脐带条、脐带片、受控释放制剂或其任何组合放置于下穹窿、上穹窿、泪点中，放置于角膜表面上或放置于围绕眼睛的组织上以治疗眼部表面疾病、病症或伤口。
在一些实施方案中，眼部表面疾病或病症是干眼病、复发性角膜糜烂(RCE)、角膜溃疡、单纯疱疹性角膜炎(HSK)、浅层点状角膜炎(SPK)、顽固性点状角膜炎、变应性结膜炎、红眼、翼状胬肉、炎性疾病、感染性疾病或其任何组合。在一些实施方案中，眼部伤口是手术伤口。在一些实施方案中，眼部伤口来自光学屈光性角膜切削术(PRK)、激光辅助原位角膜磨削术(LASIK)、角膜交联(CXL)、角膜移植、白内障手术、视网膜手术和/或青光眼引流装置或滤过泡。在一些实施方案中，眼部伤口来自损伤、烧伤和/或裂伤。
在一些实施方案中，眼部表面疾病或病症是浅层点状角膜炎(SPK)、轻度或中度干眼病(DED)、慢性眼表面破裂、上皮愈合、持续性角膜炎、角膜炎、严重干眼病(DED)、穿透性角膜移植术(PKP)、类天疱疮、角膜缘干细胞缺陷(LSCD)、史蒂文斯-约翰逊综合征(SJS)、角膜擦伤、神经营养性角膜、浅层角膜切削术伴有上皮基底膜营养不良(EBMD)、角膜溃疡、复发性角膜糜烂、移植物抗宿主病(GVHD)、丝状角膜炎、甲氧西林抗性金黄色葡萄球菌(MRSA)、持续性角膜上皮缺陷(PED)、复发性上皮缺陷或炎性间质性角膜炎。在一些实施方案中，眼部表面疾病或病症是浅层点状角膜炎(SPK)、轻度或中度干眼病(DED)、慢性眼表面破裂、上皮愈合、持续性角膜炎或角膜炎。在一些实施方案中，眼部表面疾病或病症是严重干眼病(DED)、穿透性角膜移植术(PKP)、类天疱疮、角膜缘干细胞缺陷(LSCD)、史蒂文斯-约翰逊综合征(SJS)、角膜擦伤、神经营养性角膜、浅层角膜切削术伴有上皮基底膜营养不良(EBMD)、角膜溃疡、复发性角膜糜烂、移植物抗宿主病(GVHD)、丝状角膜炎、甲氧西林抗性金黄色葡萄球菌(MRSA)、持续性角膜上皮缺陷(PED)、复发性上皮缺陷或炎性间质性角膜炎。
在一些实施方案中，使用任何合适的方法将脐带片和/或受控释放制剂保持在眼睛中。在一些实施方案中，使用任何合适的方法将脐带片和/或受控释放制剂保持在眼睛的下穹窿、上穹窿或二者中。在一些实施方案中，使用缝合、胶、粘合剂或其组合保持脐带片和/或受控释放制剂。在一些实施方案中，粘合剂包括氰基丙烯酸酯、纤维蛋白、聚乙二醇、改性的硫酸软骨素、丙烯酸共聚物、生物树枝状大分子或其组合。
在一些实施方案中，脐带片和/或受控释放制剂通过HC-HA/PTX3的受控释放而促进对象的眼睛中的神经再生。在一些实施方案中，脐带片和/或受控释放制剂具有抗炎性、抗瘢痕性、抗血管生成性、抗粘连、减轻疼痛和/或促进伤口愈合。
在一些实施方案中，所述方法还包括将一种或多种附加的治疗剂和/或胎儿支持组织产物施加于下穹窿、上穹窿或二者、角膜表面和/或对象的眼睛的周围组织。在一些实施方案中，附加的治疗剂是类固醇、抗青光眼剂、抗细菌剂、抗真菌剂、抗病毒剂、抗炎剂、任何滴眼剂、用于干眼治疗的药剂(例如，环孢菌素)或其任何组合。在一些实施方案中，在将脐带片和/或受控释放制剂放置于组织和/或眼睛的周围组织例如下穹窿和/或角膜表面之前，将治疗剂施加于眼睛例如，下穹窿、上穹窿、泪点、角膜表面和/或眼睛的周围组织。在一些实施方案中，附加的胎儿支持组织产物获自胎盘羊膜、胎盘、绒毛膜、脐带、脐带羊膜或其任何组合。在一些实施方案中，附加的胎儿支持组织产物是片、条、丝、凝胶、匀浆、提取物、复原粉剂或其任何组合。在一些实施方案中，放置于下穹窿、上穹窿、泪点中、放置于角膜表面上或放置于围绕眼睛的组织上的脐带片和/或受控释放制剂被配置成允许治疗性生物剂在泪膜中更久的保持性。
在一些实施方案中，所述方法包括使用本文公开的脐带片和/或受控释放制剂，包括本文公开的任何尺寸、形状、构造。
在一些实施方案中，脐带片包含全部死亡的、基本上全部死亡的或大多数死亡的细胞。在一些实施方案中，脐带条不含具有代谢活性的细胞。在一些实施方案中，脐带条包括脐带羊膜和/或华顿氏胶。在一些实施方案中，脐带条部分地或完全地不含华顿氏胶。在一些实施方案中，脐带条部分地或完全地不含静脉或动脉。在一些实施方案中，脐带条是水合的。在一些实施方案中，脐带条获自冷冻的或先前冷冻的脐带。
在一些实施方案中，脐带条和/或受控释放制剂是基本上平的。在一些实施方案中，脐带条和/或受控释放制剂是任何形状的。在一些实施方案中，脐带条和/或受控释放制剂是半圆形、圆形、矩形或管状的。在一些实施方案中，脐带条是丝。在一些实施方案中，脐带条是片。
在一些实施方案中，脐带条和/或受控释放制剂是约0.5cm x约0.1cm、0.5cm x约0.25cm、约0.5cm x约0.5cm、约0.5cm x约0.75cm、约0.5cm x约1cm、约0.5cm x约2cm、约0.5cm x约3cm、约0.5cm x约4cm、约0.5cm x约5cm或更大。在一些实施方案中，脐带条是约1cm x约0.1cm、1cm x约0.25cm、约1cm x约0.5cm、约1cm x约0.75cm、约1cm x约1cm、约1cmx约2cm、约1cm x约3cm、约1cm x约4cm、约1cm x约5cm或更大。在一些实施方案中，脐带条是约1.5cm x约0.1cm、1.5cm x约0.25cm、约1.5cm x约0.5cm、约1.5cm x约0.75cm、约1.5cm x约1cm、约1.5cm x约2cm、约1.5cm x约3cm、约1.5cm x约4cm、约1.5cm x约5cm或更大。在一些实施方案中，脐带条是约2cm x约0.1cm、2cm x约0.25cm、约2cm x约0.5cm、约2cm x约0.75cm、约2cm x约1cm、约2cm x约2cm、约2cm x约3cm、约2cm x约4cm、约2cm x约5cm或更大。在一些实施方案中，脐带条是约2.5cm x约0.1cm、2.5cm x约0.25cm、约2.5cm x约0.5cm、约2.5cm x约0.75cm、约2.5cm x约1cm、约2.5cm x约2cm、约2.5cm x约3cm、约2.5cmx约4cm、约2.5cm x约5cm或更大。在一些实施方案中，脐带条是约3cm x约0.1cm、3cm x约0.25cm、约3cm x约0.5cm、约3cm x约0.75cm、约3cm x约1cm、约3cm x约2cm、约3cm x约3cm、约3cm x约4cm、约3cm x约5cm或更大。在一些实施方案中，脐带条是约1.0–2.0cm乘约0.1–0.5cm。在一些实施方案中，脐带条是约1.5cm乘约0.3cm。
在一些实施方案中，本文公开了用于通过将本文所述的脐带片放置于患有眼部表面疾病、病症或伤口的对象的下穹窿、上穹窿、泪点中，角膜表面上或围绕眼睛的组织上治疗眼部表面疾病、眼部病症、眼部伤口或其任何组合的方法。在一些实施方案中，本文所述的方法利用本文所述的脐带片产生改进的益处。在一些实施方案中，改善了耐受性、临床益处、患者舒适度或其组合。在一些实施方案中，耐受性、临床益处、患者舒适度或其组合改进至少或约5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或大于95％。在一些实施方案中，临床益处包括但不限于提高的视力、减弱的症状、减低的体征和改善的舒适度。在一些实施方案中，对于轻度适应证、中度适应证或严重适应证，改善了耐受性、临床益处、患者舒适度或其组合。
用于治疗眼部表面疾病、病症和/或伤口的试剂盒
在一些实施方案中，本文公开了一种用于治疗眼部表面疾病、眼部病症和/或眼部伤口的试剂盒。在一些实施方案中，所述试剂盒包括脐带片以及用于将要放置的脐带片递送至下穹窿、上穹窿、泪点中、角膜表面上或围绕对象的眼睛的组织上的装置。在一些实施方案中，所述试剂盒包括脐带片以及用于将要放置的脐带片递送至对象的眼睛的仅下穹窿中的装置。在一些实施方案中，所述试剂盒包括受控释放制剂以及用于将要放置的受控释放制剂递送至下穹窿、上穹窿中、角膜表面上或围绕对象的眼睛的组织上的装置。在一些实施方案中，试剂盒包括脐带片和受控释放制剂，其中一个或多个装置用于将要放置的脐带片和受控释放制剂递送至下穹窿、上穹窿、泪点中、角膜表面上或围绕眼睛的组织上。在一些实施方案中，包括在试剂盒内的装置包括至少一个贮存单元，该贮存单元配置成容纳脐带片和/或受控释放制剂。在一些实施方案中，脐带片和/或受控释放制剂被贮存在贮存单元内的溶液中。
在一些实施方案中，所述装置还包括与至少一个贮存单元可操作地耦合的至少一个通道，其中该通道被配置为使得脐带片或受控释放制剂从至少一个贮存单元通过该通道。在一些实施方案中，每个通道还包括开口，使得脐带片/或受控释放制剂通过通道并且通过开口，并随后放置于下穹窿、上穹窿、泪点中，放置于角膜表面上或放置于围绕对象的眼睛的组织上。在一些实施方案中，每个通道还包括开口，使得脐带片/或受控释放制剂通过通道并且通过开口，并随后放置于对象的眼睛的仅下穹窿中。在一些实施方案中，脐带片或受控释放制剂与溶液一起通过开口。在一些实施方案中，脐带片或受控释放制剂在通过开口之前基本上从相应溶液中分离(如下文进一步所述)。
在一些实施方案中，用于贮存和施加脐带片或受控释放制剂的装置或包装示于图6中。如图6中所示，包装包括两层包装材料(例如，上层和下层)，脐带片或受控释放制剂布放置于两层之间的空间中。在一些实施方案中，溶液诸如盐水使组织保持就位。在一些实施方案中，包装的一层包括凹陷。在一些实施方案中，将上层去除以暴露脐带片，将包装下层中的凹陷从下层之下推动，使得包装与指尖相合，使脐带片暴露在指尖上。然后用指尖将脐带片施加于穹窿。
在一些实施方案中，用于贮存和施加脐带片或受控释放制剂的装置或包装示于图7中。如图7中所示，包装包括硅酮岛(silicone island)，其具有将脐带片保持就位的微结构或凸出物或立柱。硅酮岛可以被折叠以暴露脐带片，其可以被直接施加于下穹窿(图8)。
在一些实施方案中，用于贮存和施加脐带片或受控释放制剂的装置或包装示于图9中。如图9中所示，包装包括处于贮存溶液的浅孔中的脐带片。包装包括撕裂设计或穿孔，使得包装可以被打开而暴露脐带片的一端，脐带片可以被施加于下穹窿，并且保留在包装中的组织部分可以被推出。
在一些实施方案中，包装用于贮存脐带片并由医师在无另一工具的情况下将脐带片直接递送至下穹窿、上穹窿或二者中。在一些实施方案中，包装是澄清/透明的，不可生物降解的，持久的，不可浸透的，通过γ-辐射可灭菌的，生物相容性，并且满足USP 87和/或ISO10993以在室温或低冷藏温度下包装(具有密封机构)和贮存一个或两个脐带条，各自具有1.5x 0.3cm的尺寸和约200μl的盐水。在一些实施方案中，包装材料被设计为提供：(1)开口，以允许包装和密封，(2)可挤压或可操纵，以使脐带条而非赋形剂能够从贮存隔室中通过出口。
在一些实施方案中，试剂盒还包括附加治疗剂，其中一个或多个装置用于将脐带片、受控释放制剂和/或附加治疗剂放置于下穹窿、上穹窿、泪点中，放置于角膜表面上或放置于围绕眼睛的组织上。在一些实施方案中，所述装置被配置成在施加脐带片和/或受控释放制剂之前将治疗剂放置于下穹窿、上穹窿、泪点中，放置于角膜表面上或放置于围绕眼睛的组织上。在一些实施方案中，治疗剂是类固醇、抗青光眼剂、抗细菌剂、抗真菌剂、抗病毒剂、抗炎剂、任何滴眼剂、用于干眼治疗的药剂(例如，环孢菌素)或其任何组合。
图1描绘了装置100的实施方案的非限制性示例，其作为试剂盒的部分，用于将脐带片或受控释放制剂递送至下穹窿、上穹窿、泪点、角膜表面或围绕对象的眼睛的组织。在一些实施方案中，装置100包括用于贮存脐带片或受控释放制剂的贮存单元101。在一些实施方案中，贮存单元101可操作地耦合至通道103，从而使脐带片或受控释放制剂能够从贮存单元101进入和通过通道103。在一些实施方案中，通道103具有开口105，该开口配置成使得脐带片或受控释放制剂通过所述开口105并被递送以供放置于下穹窿、上穹窿、泪点中，放置于角膜表面上或围绕对象的眼睛的组织上。在一些实施方案中，脐带片或受控释放制剂从开口105滑出。在一些实施方案中，脐带片或受控释放制剂从开口105流出。
在一些实施方案中，贮存单元101是囊袋。在一些实施方案中，贮存单元101是透明的以允许其中内容物可见。在一些实施方案中，贮存单元101没有孔、裂缝、皱褶或使贮存单元101完整性受损的任何其他缺陷。在一些实施方案中，贮存单元101包含聚己酸内酯、聚乙醇酸、聚(L-交酯)、聚(乳)酸、乙烯丙烯、烯烃型热塑性弹性体、聚酰胺热塑性弹性体、硅酮、聚苯乙烯、聚氨酯、氯三氟乙烯、氟化乙烯丙烯、全氟烷氧基、四氟乙烯、聚氟乙烯、聚偏二氟乙烯、聚砜、聚酯、聚对苯二甲酸丁二醇酯和/或聚对苯二甲酸乙二醇酯。在一些实施方案中，贮存单元101包含与最终Γ-辐射相容的材料。在一些实施方案中，贮存单元101的尺寸设置为容纳指定量的缓冲溶液和脐带片和/或受控释放制剂。在一些实施方案中，贮存单元101的尺寸设置为容纳约100μL至约1000μL的缓冲溶液和切成本文公开的尺寸的脐带片。在一些实施方案中，贮存单元101的尺寸设置为容纳约150μL至约500μL的缓冲溶液和切成本文公开的尺寸的脐带片。在一些实施方案中，贮存单元101的尺寸设置为容纳约200μL至约300μL的缓冲溶液和切成本文公开的尺寸的脐带片。
在一些实施方案中，贮存单元101包含等渗性缓冲液和/或培养基以促进脐带片或受控释放制剂的移动和/或以防止脐带片或受控释放制剂干燥。在一些实施方案中，缓冲液是盐水溶液。在一些实施方案中，缓冲液和/或培养基是PBS、TRIS缓冲盐水、HEPES缓冲盐水、林格氏溶液、哈特曼氏溶液、EBSS、HBSS、台氏盐溶液、Gey平衡盐溶液、DMEM、EMEM或GMEM。在一些实施方案中，培养基是保藏培养基。
在一些实施方案中，将贮存单元101定向，使得脐带片或受控释放制剂通过通道并通过开口。在一些实施方案中，贮存单元101定位在对象的眼睛周围，使得脐带片或受控释放制剂通过通道开口并进入下穹窿中、进入上穹窿、泪点中，至角膜表面上或围绕眼睛的组织上。在一些实施方案中，贮存单元101从眼睛的一侧向另一侧侧向地移动，使得脐带片或受控释放制剂正确地定位在下穹窿、上穹窿、泪点内，角膜表面上或围绕眼睛的组织上。
在一些实施方案中，所述装置还包括与通道可操作地连接的施用构件，其中所述施用构件被配置成将脐带片或受控释放制剂移动或推动通过通道开口，从而将脐带片或受控释放制剂递送至下穹窿、上穹窿、泪点、角膜表面或围绕对象的眼睛的组织。在一些实施方案中，通道被配置成限制脐带片或受控释放制剂的移动，从而限制向眼睛递送脐带片或受控释放制剂和对应的缓冲液和/或培养基。在一些实施方案中，通道被配置成从对应的脐带片或受控释放制剂中部分地或完全地分离缓冲液和/或培养基。在一些实施方案中，通道被配置成在脐带片或受控释放制剂递送至下穹窿、上穹窿、泪点、角膜表面或围绕眼睛的组织之前或期间从脐带片或受控释放制剂中分离缓冲液和/或培养基。在一些实施方案中，通道包括例如过滤器内的多孔屏障，其配置成使得缓冲液和/或培养基通过，而抑制脐带片或受控释放制剂通过。在一些实施方案中，设置于多孔屏障上的孔的一个或多个孔尺寸被选择为小于脐带片或受控释放制剂的最小预期尺寸。
在一些实施方案中，所述装置包括施用构件，所述施用构件被配置成通过通道插入，从而递送脐带片或受控释放制剂以供放置于下穹窿、上穹窿、泪点中，放置于角膜表面上或围绕对象的眼睛的组织上。图2A描绘了具有更易于操作所述装置的指环201的通道202的非限制性示例。通道202包括具有一个或多个孔203的屏障，所述孔配置成限制和控制脐带片或受控释放制剂和对应缓冲液和/或培养基移动通过通道并通过开口207。在一些实施方案中，一个或多个孔203中的至少一个孔被配置和/或其尺寸被设置为抑制或防止脐带片或受控释放制剂通过所述孔。在一些实施方案中，一个或多个孔抑制脐带片或受控释放制剂通过通道。图2B描绘了施用构件209的非限制性示例，其通过通道202插入并配置成将脐带片或受控释放制剂205从开口207推出以供递送和放置于下穹窿、上穹窿、泪点中，放置于角膜表面上或围绕对象的眼睛的组织上(未示出)。在一些实施方案中，施用构件被配置成将脐带片或受控释放制剂推过通道内的任何孔，从而使脐带片或受控释放制剂能够通过通道开口。
在一些实施方案中，所述装置是包括蒸气针的注射器。在一些实施方案中，注射器包括用于容纳脐带片和/或受控释放制剂的外壳。在一些实施方案中，所述装置是注射器敷料器、移植物注射器器械和/或可挤压管。在一些实施方案中，移植物注射器是牙骨移植器。在一些实施方案中，所述装置包括用于将脐带片和/或受控释放制剂放置于下穹窿、上穹窿、泪点、角膜表面或围绕对象的眼睛的组织上的镊子。
在一些实施方案中，本文公开的试剂盒包括如本文公开的脐带片和/或受控释放制剂，包括任何尺寸、形状、构造等。在一些实施方案中，试剂盒包括胎儿支持组织粉末或凝胶制剂。
在一些实施方案中，脐带组织包含全部死亡的、基本上全部死亡的或大多数死亡的细胞。在一些实施方案中，脐带组织不含具有代谢活性的细胞。在一些实施方案中，脐带组织包括脐带羊膜和/或华顿氏胶。在一些实施方案中，脐带组织部分地或完全地不含华顿氏胶。在一些实施方案中，脐带组织基本上不含静脉或动脉。在一些实施方案中，脐带组织是水合的。在一些实施方案中，脐带组织获自冷冻的或先前冷冻的脐带。
在一些实施方案中，脐带组织和/或受控释放制剂是基本上平的。在一些实施方案中，脐带组织和/或受控释放制剂具有任何形状。在一些实施方案中，脐带组织和/或受控释放制剂是半圆形、圆形、矩形或管状的。在一些实施方案中，脐带组织是条。在一些实施方案中，脐带组织是丝。在一些实施方案中，脐带组织是片。
在一些实施方案中，脐带组织和/或受控释放制剂是约0.5cm x约0.1cm、0.5cm x约0.25cm、约0.5cm x约0.5cm、约0.5cm x约0.75cm、约0.5cm x约1cm、约0.5cm x约2cm、约0.5cm x约3cm、约0.5cm x约4cm、约0.5cm x约5cm或更大。在一些实施方案中，脐带片是约1cm x约0.1cm、1cm x约0.25cm、约1cm x约0.5cm、约1cm x约0.75cm、约1cm x约1cm、约1cmx约2cm、约1cm x约3cm、约1cm x约4cm、约1cm x约5cm或更大。在一些实施方案中，脐带片是约1.5cm x约0.1cm、1.5cm x约0.25cm、约1.5cm x约0.5cm、约1.5cm x约0.75cm、约1.5cm x约1cm、约1.5cm x约2cm、约1.5cm x约3cm、约1.5cm x约4cm、约1.5cm x约5cm或更大。在一些实施方案中，脐带片是约2cm x约0.1cm、2cm x约0.25cm、约2cm x约0.5cm、约2cm x约0.75cm、约2cm x约1cm、约2cm x约2cm、约2cm x约3cm、约2cm x约4cm、约2cm x约5cm或更大。在一些实施方案中，脐带片是约2.5cm x约0.1cm、2.5cm x约0.25cm、约2.5cm x约0.5cm、约2.5cm x约0.75cm、约2.5cm x约1cm、约2.5cm x约2cm、约2.5cm x约3cm、约2.5cmx约4cm、约2.5cm x约5cm或更大。在一些实施方案中，脐带片是约3cm x约0.1cm、3cm x约0.25cm、约3cm x约0.5cm、约3cm x约0.75cm、约3cm x约1cm、约3cm x约2cm、约3cm x约3cm、约3cm x约4cm、约3cm x约5cm或更大。在一些实施方案中，脐带片是约1.0–2.0cm乘约0.1–0.5cm。在一些实施方案中，脐带片是约1.5cm乘约0.3cm。
包括脐带的试剂盒可以用于治疗对象的眼部表面疾病、病症或伤口。眼部表面疾病或病症可以选自干眼病、复发性角膜糜烂(RCE)、角膜溃疡、单纯疱疹性角膜炎(HSK)、浅层点状角膜炎(SPK)、顽固性点状角膜炎、变应性结膜炎、红眼、翼状胬肉和炎性疾病。伤口可以是手术伤口。伤口可以是手术伤口。在一些实施方案中，伤口可以来自光学屈光性角膜切削术(PRK)、激光辅助原位角膜磨削术(LASIK)、角膜交联(CXL)或青光眼引流装置和/或滤过泡。在一些实施方案中，伤口来自损伤、烧伤和/或裂伤。在一些实施方案中，眼部表面疾病或病症是浅层点状角膜炎(SPK)、轻度或中度干眼病(DED)、慢性眼表面破裂、上皮愈合、持续性角膜炎、角膜炎、严重干眼病(DED)、穿透性角膜移植术(PKP)、类天疱疮、角膜缘干细胞缺陷(LSCD)、史蒂文斯-约翰逊综合征(SJS)、角膜擦伤、神经营养性角膜、浅层角膜切削术伴有上皮基底膜营养不良(EBMD)、角膜溃疡、复发性角膜糜烂、移植物抗宿主病(GVHD)、丝状角膜炎、甲氧西林抗性金黄色葡萄球菌(MRSA)、持续性角膜上皮缺陷(PED)、复发性上皮缺陷或炎性间质性角膜炎。在一些实施方案中，眼部表面疾病或病症是浅层点状角膜炎(SPK)、轻度或中度干眼病(DED)、慢性眼表面破裂、上皮愈合、持续性角膜炎或角膜炎。在一些实施方案中，眼部表面疾病或病症是严重干眼病(DED)、穿透性角膜移植术(PKP)、类天疱疮、角膜缘干细胞缺陷(LSCD)、史蒂文斯-约翰逊综合征(SJS)、角膜擦伤、神经营养性角膜、浅层角膜切削术伴有上皮基底膜营养不良(EBMD)、角膜溃疡、复发性角膜糜烂、移植物抗宿主病(GVHD)、丝状角膜炎、甲氧西林抗性金黄色葡萄球菌(MRSA)、持续性角膜上皮缺陷(PED)、复发性上皮缺陷或炎性间质性角膜炎。
在一些实施方案中，脐带片可以促进对象的眼睛中的神经再生。在一些实施方案中，脐带片在与外源性活细胞接触时具有抗炎性、抗瘢痕性、抗血管生成性、抗粘连、减轻疼痛和/或促进伤口愈合。在一些实施方案中，脐带片具有同源用途。
在一些实施方案中，脐带产物试剂盒还包括一种或多种治疗剂和/或胎儿支持组织产物。治疗剂可以是类固醇、抗青光眼剂、抗细菌剂、抗真菌剂、抗病毒剂和/或抗炎剂。胎儿支持组织产物可以取自胎盘羊膜、胎盘、绒毛膜、脐带、脐带羊膜或其任何组合。胎儿支持组织产物可以是片、条或丝。
某些术语
如本文和随附权利要求中所用，除非上下文另有明确规定，否则单数形式“一个”、“一种”和“所述”包括复数所指物。
另外，除非另有说明，否则“和”的使用意指“和/或”。类似地，“包含”和“包括”是可互换的并非旨在限制。
如本文所用，术语“约”是指与陈述量接近(例如10％、5％或1％，包括其中的增量)的量。
术语“对象”和“个体”可互换地使用。如本文中所用，两个术语意指任何动物，优选哺乳动物，包括人或非人类。术语患者、对象和个体可互换地使用。所述术语均不应被解释为需要医学专业人员(例如，医生、护士、医师助理、护工、临终关怀医院工作者)的监督。
如本文中所用，“胎盘羊膜”(PAM)意指源于胎盘的羊膜。在一些实施方案中，PAM是基本上分离的。
如本文中所用，术语“治疗”包括缓解、减轻或改善疾病或病况症状，预防额外的症状，改善或预防症状的潜在代谢起因，抑制疾病或病况，例如，阻滞疾病或病况的发展，缓解疾病或病况，引起疾病或病况的消退，缓解由疾病或病况所致的病况，或者预防性地和/或治疗性地阻止疾病或病况的症状。
如本文所用，“脐带羊膜”(UCAM)意指源于脐带的羊膜。UCAM是半透明膜。UCAM具有多层，即上皮层、基底膜；致密层；成纤维细胞层；和海绵层。它缺乏血管或直接的血液供给。在一些实施方案中，UCAM是基本上分离的。在一些实施方案中，UCAM包括华顿氏胶。在一些实施方案中，UCAM包括血管和/或动脉。在一些实施方案中，UCAM包括华顿氏胶和血管和/或动脉。
实施例
实施例1：脐带条的制备
获取冷冻的脐带组织块并将其在环境温度下解冻约5min。将脐带组织在层流罩下转移至无菌托盘。将脐带的基质侧面向下放置于框架背衬纸上并且弄平。使用一对镊子来操纵组织。执行无菌技术，以尺子作为测量指导使用手术刀将组织切割而形成脐带片。参见图3A-3C。在干冰下通过25-43kGy的γ辐射对脐带片进行灭菌。
实施例2：用脐带条治疗PRK后
制备约1.5cm乘0.25cm的脐带片。使已接受光学屈光性角膜切削术(PRK)的人类对象的下眼睑缩回并将脐带条放置于下穹窿中。将脐带条在对象的眼睛中保留18天并去除。由医师检查角膜的治愈进程。
实施例3：用脐带条治疗眼睛PRK后的病例研究
患者在5月30日进行光学屈光性角膜切削术(PRK)。在PRK后，将脐带片放置于双眼的下穹窿中以帮助促进神经再生并预防对于经受PRK的患者而言普遍的干眼病。具体地，在第0天，使用无菌技术将脐带片(NEOX CORD RT产品)切割成测得大约1.5cm乘0.25cm的条。首先对患者的眼睛施加局部麻醉。随后，将脐带条放置于患者的每只眼睛的下穹窿中。患者表示没有不适、疼痛或异物感。在第1天，脐带条从患者的右眼中脱落。随后，将两个脐带条放置于史密斯右眼的下穹窿中。在第2天，在脐带条放置于眼睛中的情况下，患者表示没有疼痛、不适或异物感，但是表示他可能主观地检测到1条在他左眼中与2条在他右眼中之间的差异。在第15天，对患者的眼睛进行评价，并且注意到角膜显得清澈而无任何混浊并且眼睛已经从PRK手术恢复。使用裂隙灯摄影和荧光素染色来测量上皮形成和角膜表面完整性。图5A-5C描绘了使用荧光查看位于下穹窿上的脐带片的第0-2天。
实施例4：UC条用于干眼病(DED)
将UC条施加于患有难治性DED的患者的一只眼的下穹窿。在一个月时由医师对眼睛进行评价并且与未经治疗的眼睛进行比较。
实施例5：UC条用于眼部疾病
将UC条用于患有轻度/中度和严重适应证的对象，所述轻度/中度和严重适应证包括浅层点状角膜炎(SPK)、轻度或中度干眼病(DED)、慢性眼表面破裂、上皮愈合、持续性角膜炎、角膜炎、严重干眼病(DED)、穿透性角膜移植术(PKP)、类天疱疮、角膜缘干细胞缺陷(LSCD)、史蒂文斯-约翰逊综合征(SJS)、角膜擦伤、神经营养性角膜、浅层角膜切削术伴有上皮基底膜营养不良(EBMD)、角膜溃疡、复发性角膜糜烂、移植物抗宿主病(GVHD)、丝状角膜炎、甲氧西林抗性金黄色葡萄球菌(MRSA)、持续性角膜上皮缺陷(PED)、复发性上皮缺陷或炎性间质性角膜炎。
与实施例3类似地制备和使用UC条。对UC条评价用于轻度/中度和严重适应证的耐受性、临床益处、使用容易性、保持性、患者满意度和医师满意度。来自使用UC条的患者的调查数据参见图10A-10E。对于轻度/中度干眼病，发现UC条是临床上有效的、易于插入、眼睛中可耐受的，具有良好的患者/医师满意度，并且改善患者呈现的所有关键属性(减弱的视力、症状、体征)(图10A-10B)。观察到在29％病例中UC条在眼睛中持续小于一天(图10A)。对于严重适应证，观察到类似的结果(图10C-10E)。
该实施例表明UC条易于使用并且是临床上有效的。
虽然在本文中已经显示和描述了本发明的优选实施方案，但是对于本领域技术人员而言显而易见的是此类实施方案仅仅作为示例而提供。在不脱离本发明的情况下，本领域技术人员可想到许多变化、改变和替代。应理解本文所述的本发明的实施方案的各种替代方案可以用于实施本发明。以下权利要求旨在界定本发明的范围并且由此涵盖这些权利要求的范围内的方法和结构及其等同方案。

Claims (98)

1.一种治疗眼部表面疾病、病症和/或伤口的方法，该方法包括：
将约0.75–2.5cm乘约0.05–0.75cm的脐带片放置于患有眼部表面疾病、病症和/或伤口的对象的眼睛的下穹窿、上穹窿或二者中。
2.根据权利要求1所述的方法，还包括在放置所述脐带片之前使所述对象的上眼睑、下眼睑或二者缩回以暴露所述下穹窿、所述上穹窿或二者。
3.根据权利要求1或2所述的方法，还包括对闭合的眼睛进行贴敷或贴扎。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，还包括向所述眼睛施用选自以下的胎儿支持组织产物：胎盘羊膜、胎盘、绒毛膜、脐带、脐带羊膜及其组合。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，还包括向所述眼睛施用选自以下的治疗剂：类固醇、抗细菌剂、抗炎剂、干眼治疗剂、抗真菌剂、抗病毒剂、抗青光眼剂及其任何组合。
6.根据权利要求4或5所述的方法，其中将所述治疗剂或所述胎儿支持组织产物施用于所述眼睛的所述下穹窿、所述眼睛的角膜表面和/或围绕所述眼睛的组织。
7.根据权利要求4或5所述的方法，其中在放置所述脐带片之前施用所述治疗剂或所述胎儿支持组织产物。
8.根据权利要求1-7中任一项所述的方法，其中所述脐带片包括脐带羊膜和华顿氏胶。
9.根据权利要求1-8中任一项所述的方法，其中所述脐带片来自冷冻的或先前冷冻的脐带。
10.根据权利要求1-9中任一项所述的方法，其中所述脐带片不包含具有代谢活性的细胞，或者基本上不含具有代谢活性的细胞。
11.根据权利要求1-9中任一项所述的方法，其中所述脐带片包含全部死亡的、基本上全部死亡的或大多数死亡的细胞。
12.根据权利要求1-9中任一项所述的方法，其中所述脐带片基本上不含活细胞。
13.根据权利要求1-12中任一项所述的方法，其中所述脐带片基本上不含红细胞。
14.根据权利要求1-13中任一项所述的方法，其中所述脐带片基本上不含静脉或动脉。
15.根据权利要求1-14中任一项所述的方法，其中所述脐带片被冷冻保藏、最终灭菌或二者兼施。
16.根据权利要求1-15中任一项所述的方法，其中所述脐带片是基本上平的。
17.根据权利要求1-16中任一项所述的方法，其中所述脐带片是半圆形的。
18.根据权利要求1-16中任一项所述的方法，其中所述脐带片是圆形的。
19.根据权利要求1-16中任一项所述的方法，其中所述脐带片是矩形的。
20.根据权利要求1-19中任一项所述的方法，其中所述脐带片是约1.0–2.0cm乘约0.1–0.5cm。
21.根据权利要求1-19中任一项所述的方法，其中所述脐带片是约1.5cm乘约0.3cm。
22.根据权利要求1-21中任一项所述的方法，其中所述脐带片是水合的。
23.根据权利要求1-22中任一项所述的方法，其中所述脐带片促进所述对象的所述眼睛中的神经再生。
24.根据权利要求1-23中任一项所述的方法，其中所述脐带片具有抗炎性、抗瘢痕性、抗血管生成性、抗粘连、减轻疼痛、促进伤口愈合或其组合。
25.根据权利要求1-24中任一项所述的方法，其中所述眼部疾病或病症选自干眼病、复发性角膜糜烂(RCE)、角膜溃疡、单纯疱疹性角膜炎(HSK)、顽固性点状角膜炎、变应性结膜炎、翼状胬肉、感染性疾病和炎性疾病。
26.根据权利要求1-24中任一项所述的方法，其中所述伤口是手术伤口。
27.根据权利要求1-24中任一项所述的方法，其中所述伤口来自光学屈光性角膜切削术(PRK)、LASIK、角膜胶原交联(CXL)、角膜移植、白内障手术、视网膜手术，或者青光眼引流装置或滤过泡。
28.根据权利要求1-24中任一项所述的方法，其中所述伤口来自损伤、烧伤、裂伤、切口或擦伤。
29.一种用于治疗有需要的对象的眼部表面疾病、病症或伤口的试剂盒，该试剂盒包括：
脐带片；和
用于将所述脐带片放置于所述对象的角膜表面上、下穹窿、上穹窿中或者围绕所述对象的眼睛的组织上的装置，所述装置包括：
贮存单元，其被配置成含有处于溶液中的所述脐带片；和
与所述贮存单元可操作地耦合的通道，所述通道被配置为使得所述脐带片从所述贮存单元通过所述通道并且通过所述通道中的开口，所述开口被配置成将所述脐带片递送至所述角膜表面、下穹窿、所述上穹窿或围绕所述眼睛的组织上。
30.根据权利要求29所述的试剂盒，其中所述装置还包括与所述通道可操作地耦合的施用构件，其中所述施用构件被配置成将所述脐带片推过所述开口。
31.根据权利要求29-30中任一项所述的试剂盒，其中所述通道包括包含一个或多个孔的多孔屏障，其中所述一个或多个孔中的至少一个孔的尺寸被设置为抑制所述脐带片从其中通过。
32.根据权利要求29-31中任一项所述的试剂盒，其中所述脐带片不包含具有代谢活性的细胞，或者基本上不含具有代谢活性的细胞。
33.根据权利要求29-32中任一项所述的试剂盒，其中所述脐带片包含基本上全部死亡的细胞。
34.根据权利要求29-33中任一项所述的试剂盒，其中所述脐带片是基本上平的。
35.根据权利要求29-34中任一项所述的试剂盒，其中所述脐带片是半圆形的。
36.根据权利要求29-34中任一项所述的试剂盒，其中所述脐带片是圆形的。
37.根据权利要求29-34中任一项所述的试剂盒，其中所述脐带片是矩形的。
38.根据权利要求29-37中任一项所述的试剂盒，其中所述脐带片包括脐带羊膜和华顿氏胶。
39.根据权利要求29-38中任一项所述的试剂盒，其中所述脐带片来自冷冻的或先前冷冻的脐带。
40.根据权利要求29-39中任一项所述的试剂盒，其中所述脐带片是水合的。
41.根据权利要求29-40中任一项所述的试剂盒，其中所述脐带片促进所述对象的所述眼睛中的神经再生。
42.根据权利要求29-41中任一项所述的试剂盒，其中所述脐带片具有抗炎性、抗瘢痕性、抗血管生成性、抗粘连、减轻疼痛、促进伤口愈合或其组合。
43.根据权利要求29-42中任一项所述的试剂盒，还包括选自以下的治疗剂：类固醇、抗细菌剂、抗炎剂、干眼治疗剂、抗真菌剂、抗病毒剂、抗青光眼剂及其任何组合。
44.根据权利要求43所述的试剂盒，还包括选自以下的胎儿支持组织产物：胎盘羊膜、胎盘、绒毛膜、脐带、脐带羊膜及其组合。
45.一种治疗有需要的对象的眼部表面疾病、病症或伤口的方法，该方法包括：
向所述对象的眼睛的下穹窿、上穹窿、角膜表面施用组合物，所述组合物包含分离的HC-HA/PTX3，以及用于所述HC-HA/PTX3的受控释放的赋形剂。
46.根据权利要求45所述的方法，其中用于受控释放的所述赋形剂包括可生物降解的聚合物。
47.根据权利要求46所述的方法，其中用于受控释放的所述赋形剂包括胶原、纤维素、壳聚糖、PEG、聚(N-异丙基丙烯酰胺)、聚(乳)酸、聚乳酸-羟基乙酸共聚物或其组合。
48.根据权利要求45-47中任一项所述的方法，其中所述组合物与所述下穹窿、所述上穹窿或所述角膜表面相合。
49.根据权利要求45-48中任一项所述的方法，其中所述组合物是透明的或半透明的。
50.根据权利要求45-49中任一项所述的方法，其中所述组合物是固体或半固体。
51.根据权利要求50所述的方法，其中所述组合物包括开口。
52.根据权利要求50或51所述的方法，其中所述组合物是半圆形的。
53.根据权利要求50或51所述的方法，其中所述组合物是圆形的。
54.根据权利要求50或51所述的方法，其中所述组合物是矩形的。
55.根据权利要求50-54中任一项所述的方法，其中所述组合物是约1.0–2.0cm乘约0.1–0.5cm。
56.根据权利要求50-54中任一项所述的方法，其中所述组合物是约1.5cm乘约0.3cm。
57.根据权利要求45-56中任一项所述的方法，还包括向所述眼睛施用选自以下的治疗剂：类固醇、抗细菌剂、抗炎剂、干眼治疗剂、抗真菌剂、抗病毒剂、抗青光眼剂及其任何组合。
58.根据权利要求45-56中任一项所述的方法，还包括向所述眼睛施用选自以下的胎儿支持组织产物：胎盘羊膜、胎盘、绒毛膜、脐带、脐带羊膜及其组合。
59.根据权利要求57或58所述的方法，其中将所述治疗剂或胎儿支持组织施用于所述眼睛的所述下穹窿、所述眼睛的所述上穹窿、所述眼睛的角膜表面，和/或围绕所述眼睛的组织。
60.根据权利要求57-59中任一项所述的方法，其中在所述组合物之前施用所述治疗剂或所述胎儿支持组织产物。
61.一种组合物，包含：
分离的HC-HA/PTX3复合物以及用于受控释放的赋形剂，其中所述组合物被配置成与角膜表面相合或适配在人眼睛的下穹窿、上穹窿或二者中。
62.根据权利要求61所述的组合物，其中所述组合物具有抗炎性、抗瘢痕性、抗血管生成性、抗粘连、减轻疼痛、促进伤口愈合或其组合。
63.根据权利要求61或62所述的组合物，其中用于受控释放的所述赋形剂包括可生物降解的聚合物。
64.根据权利要求63所述的组合物，其中用于受控释放的所述赋形剂包括胶原、纤维素、壳聚糖、PEG、聚(N-异丙基丙烯酰胺)、聚(乳)酸、聚乳酸-羟基乙酸共聚物或其组合。
65.根据权利要求61-64中任一项所述的组合物，其中所述组合物是透明的或半透明的。
66.根据权利要求61-65所述的组合物，其中所述组合物是固体或半固体。
67.根据权利要求66所述的组合物，其中所述组合物是平的或基本上平的。
68.根据权利要求66或67所述的组合物，其中所述组合物包括开口。
69.根据权利要求66-68中任一项所述的组合物，其中所述组合物是半圆形的。
70.根据权利要求66-68中任一项所述的组合物，其中所述组合物是圆形的。
71.根据权利要求66-68中任一项所述的组合物，其中所述组合物是矩形的。
72.根据权利要求66-71中任一项所述的组合物，其中所述组合物是约1.0–2.0cm乘约0.1–0.5cm。
73.根据权利要求66-71中任一项所述的组合物，其中所述组合物是约1.5cm乘约0.3cm。
74.一种用于治疗对象的眼部表面疾病、病症或伤口的试剂盒，该试剂盒包括：
组合物，其包含分离的HC-HA/PTX3以及用于HC-HA/PTX3的受控释放的赋形剂；和
用于将所述组合物放置于所述对象的角膜表面上、下穹窿中、上穹窿中或者围绕所述对象的眼睛的组织上的装置，所述装置包括：
贮存单元，其被配置成含有处于溶液中的所述组合物；和
与所述贮存单元可操作地耦合的通道，所述通道被配置为使得所述组合物从所述贮存单元通过所述通道并且通过所述通道中的开口，所述开口被配置成将所述组合物递送至所述角膜表面、下穹窿、所述上穹窿或围绕所述眼睛的组织上。
75.根据权利要求74所述的试剂盒，其中所述装置还包括与所述通道可操作地耦合的施用构件，其中所述施用构件被配置成将所述脐带片推过所述开口，从而放置于所述角膜表面、下穹窿、所述上穹窿或围绕所述眼睛的组织上。
76.根据权利要求74或75所述的试剂盒，其中所述通道包括包含一个或多个孔的多孔屏障，其中所述一个或多个孔中的至少一个孔的尺寸被设置为抑制所述脐带片从其中通过。
77.根据权利要求74-76中任一项所述的试剂盒，其中所述组合物是固体或半固体。
78.根据权利要求77所述的试剂盒，其中所述组合物是半圆形的。
79.根据权利要求77所述的试剂盒，其中所述组合物是圆形的。
80.根据权利要求77所述的试剂盒，其中所述组合物是矩形的。
81.根据权利要求74-80中任一项所述的试剂盒，其中所述组合物促进所述对象的所述眼睛中的神经再生。
82.根据权利要求74-81中任一项所述的试剂盒，还包括选自以下的治疗剂：类固醇、抗细菌剂、抗炎剂、干眼治疗剂、抗真菌剂、抗病毒剂、抗青光眼剂和任何组合。
83.根据权利要求74-82中任一项所述的试剂盒，还包括选自以下的胎儿支持组织产物：胎盘羊膜、胎盘、绒毛膜、脐带、脐带羊膜或其组合。
84.一种治疗眼部表面疾病、病症和/或伤口的方法，该方法包括：
将约1.0–2.0cm乘约0.1–0.5cm的脐带片放置于患有眼部表面疾病、病症和/或伤口的对象的眼睛的仅下穹窿中。
85.根据权利要求84所述的方法，还包括在放置所述脐带片之前使所述对象的上眼睑、下眼睑或二者缩回以暴露所述下穹窿。
86.根据权利要求84或85所述的方法，还包括对闭合的眼睛进行贴敷或贴扎。
87.根据权利要求84-86中任一项所述的方法，还包括向所述眼睛施用选自以下的胎儿支持组织产物：胎盘羊膜、胎盘、绒毛膜、脐带、脐带羊膜及其组合。
88.根据权利要求84-87中任一项所述的方法，还包括向所述眼睛施用选自以下的治疗剂：类固醇、抗细菌剂、抗炎剂、干眼治疗剂、抗真菌剂、抗病毒剂、抗青光眼剂及其任何组合。
89.根据权利要求84-88中任一项所述的方法，其中所述脐带片是约1.5cm乘约0.3cm。
90.一种治疗复发性角膜糜烂(RCE)、角膜溃疡、单纯疱疹性角膜炎(HSK)或者伴有顽固性点状角膜炎的OSD的方法，该方法包括：
将脐带片放置于患有复发性角膜糜烂(RCE)、角膜溃疡、单纯疱疹性角膜炎(HSK)或者伴有顽固性点状角膜炎的OSD的对象的眼睛的下穹窿、上穹窿或二者中。
91.根据权利要求90所述的方法，还包括在放置所述脐带片之前使所述对象的上眼睑、下眼睑或二者缩回以暴露所述下穹窿、所述上穹窿或二者。
92.根据权利要求90或91所述的方法，还包括对闭合的眼睛进行贴敷或贴扎。
93.根据权利要求90-92中任一项所述的方法，还包括向所述眼睛施用选自以下的胎儿支持组织产物：胎盘羊膜、胎盘、绒毛膜、脐带、脐带羊膜及其组合。
94.根据权利要求90-93中任一项所述的方法，还包括向所述眼睛施用选自以下的治疗剂：类固醇、抗细菌剂、抗炎剂、干眼治疗剂、抗真菌剂、抗病毒剂、抗青光眼剂及其任何组合。
95.根据权利要求93或94所述的方法，其中将所述治疗剂或所述胎儿支持组织产物施用于所述眼睛的所述下穹窿、所述上穹窿、所述眼睛的角膜表面和/或围绕所述眼睛的组织。
96.根据权利要求93或94所述的方法，其中在放置所述脐带片之前施用所述治疗剂或所述胎儿支持组织产物。
97.根据权利要求90-96中任一项所述的方法，其中所述脐带片是约1.0–2.0cm乘约0.1–0.5cm。
98.根据权利要求90-96中任一项所述的方法，其中所述脐带片是约1.5cm乘约0.3cm。
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