JP4348528B2 - 組織表面用羊膜カバーおよび膜の固定を容易にする装置 - Google Patents
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Description
本出願は、2002年3月14日に出願の米国仮出願第60/365356号の出願日の利益を享受するものであり、その教示の内容のすべては、参照により本願明細書に援用したものとする。
政府からの援助
本出願は、援助許可番号EY06819のもとに米国国立保健研究所(National Institutes of Health)からの援助を全面的または部分的に受けたものである。この発明の特定の権利は、政府に帰属するものである。
羊膜組成物、例えば哺乳類、例えばヒト、ブタ、またはウマ由来の羊膜組織から得られる羊膜および羊膜抽出物は生体成長因子を含む。羊膜は生体膜であり、これは羊膜腔の内側表面に整列し、単層立方上皮、厚い基底膜、およびヒアルロン酸含有の駆血性の間充織層を含む。羊膜組成物は、動物モデルにおいて、炎症、線維血管内殖を減少させ、ならびに上皮化を促進することで既知である。羊膜は胎児における瘢痕を残さない創傷治癒プロセスに役割を担うと考えられる(Tseng, S.-C.-G., et al.,「羊膜マトリクスによる、培養ヒト角膜および輪部線維芽細胞におけるトランスフォーミング成長因子-ベータイソ型、TGF-β受容体II型の抑制および筋線維芽細胞分化(Suppression of Transforming Growth Factor-Beta Isoforms, TGF-β Receptor Type II, and Myofibroblast Differentiation in Cultured Human Corneal and Limbal Fibroblasts by Amniotic Membrane Matrix)」J. Cell. Physiol., 179: 325-335 (1999))。
本発明はとりわけ以下のものを単独でまやは組み合わせて含む。一実施形態では、羊膜を装置または支持体上に固定するが、この装置または支持体は、例えば角膜表面の部分、角膜表面、または眼球表面全体に適合してこれをカバーするコンフォーマ(conformer)の形状であってもよい。支持体はリング形状であってよい。自身に結合した羊膜を有する支持体を一時的パッチとして使用してもよく、炎症および瘢痕を減少させ、これにより創傷治癒を促進し、快適さおよび視覚を回復させることができる。
発明の詳細な記述
本発明の好ましい実施形態を以下に説明する。本発明の具体的な実施形態は例示的に示すものであり、本発明を制限するものではないことが理解されよう。初めに、本発明のその最も広い全体側面を説明した後、より詳細に説明する。本発明の組成物および方法の特徴および他の詳細は特許請求の範囲でさらに指摘する。
本発明の方法の一実施形態では、膜を支持体、例えば第一リング上に配置し、これにより第一リングをこの膜で完全にカバーする。図1A-1Dおよび図2に描写されるように、放射状弾性バンド(24)は、円錐形エキスパンダ(20)の先端部上に配置し、このエキスパンダは先端部(27)、底部(28)、およびその先端部から底部へ向かって増加する直径の外側表面を有し、この底部は肩部(26)を有する。実施形態での使用に適した円錐形エキスパンダは図1A-1Dおよび図2に示される。エキスパンダの底部(28)は第二リングと接触して配置し、このリングはバンドを受けるための周辺部環状溝を有する。例えば、図4Cおよび4Dを参照のこと、これは周辺部環状溝(23)を有する支持体リング(22)を示す。バンド(24)は次いで、エキスパンダの先端部(27)からエキスパンダの外側表面にわたってエキスパンダの底部(28)の肩部(26)への方向へ偏らせ、これによりバンドを伸ばし、放射状に拡張した状態を形成させる。このバンドはエキスパンダの肩部(26)を超えて、第二リング上の周辺部環状溝内へさらに偏らせ、これによりエキスパンダからバンドを制御して解放し、バンドを第二リングに結合させる。自身に結合したバンドを有する第二リングは次いで、第一リング上の膜と接触させ;バンドを第二リングから制御して解放し、このバンドを第二リングから第一リングへ移し、これによりバンドを膜上に固定し、膜を第一リングに固定する。
図4A-図4Dに示される本発明の別の実施形態は、穴の輪郭を示す内側表面と少なくとも1つの、Oリング(24)を受けるサイズの環状溝(23)を有するリング(22)に膜を固定することから構成される装置およびこの装置を作成する方法である。この装置は以下の工程を含む方法によって形成する:固定用の膜をリング(22)と接触させる工程;リング(22)上で膜(35)を配置し、これによりリング(22)を膜で完全にカバーする工程;Oリング(24)を環状溝内へ挿入し、これにより膜をリングに固定する工程。したがって本発明の複合物は培養挿入物であって、穴の輪郭を示す内側表面を有し、かつ少なくとも1つの、Oリング(24)を受けるサイズの環状溝(23)を有するリング(22)を含む培養挿入物である;リング(22)にマウントされた膜(35)、この膜(35)はリング(22)を完全にカバーする;Oリング(24)、これは組立て時に環状溝(23)内に挿入され、膜をリング(22)に固定する、を含む培養挿入物である。
[0069] さらに別の実施形態(図6A-6Fに図示)では、膜(35)は、この膜(35)を図6Bに示される下部支持体リング上に配置し、次いでこのリングはかみ合い適合を有し、膜(35)を図6Bのリングと図6Aのリングとの間にはさむか、あるいはサンドイッチすることにより、かみ合い適合を有する両リングをともにプレスすることにより、支持体に結合可能である。これは図6C-6Fに示す通りである。本明細書で使用する用語「かみ合い適合(snap together fit)」とは、第一リング(図6B)が第二の同心性リング(6A)内に適合することを表し、この場合2つのリングは、図6Cに描写する通り、第一リング(図6B)の周辺部環状エッジが第二リング(図6A)の内側環状エッジと固定されてかみ合うことにより、互いに結合できる。本明細書中で使用する用語「かみ合いリング(snap together rings)」とは、かみ合い適合する2つの同心性リングを表す。例えば、図6Dは2つのかみ合いリングの遠近断面図であり、これらリングは眼球表面のような組織表面用の羊膜カバーの一実施形態の支持体を含む。羊膜(35)が2つのかみ合いリングの間に固定されているカバーは図6Fに平面図として示され、これは眼の化学的熱傷または温熱性熱傷に対する包帯(a bandage or dressing)として使用することができる。図6Dはこのカバーの全断面図であり、これは図6A-6Cのかみ合いリングの間に締め付けられた羊膜(35)を示す。
本発明の別の実施形態は、ファスナーシステムを使用する装置および方法であり、このファスナーシステムはハードウェアまたは接着剤を要さずに膜を2つの支持体メンバー、例えば2つのリングと結合できる。ファスナーは支持体メンバーの胴と連続していてよく、これは以下の2つのメンバーを含む:ファスナーポスト、これは「雄性スナップピン」と称されることもあり、ファスナーポスト孔、これはファスナーポストに対する受けとして働く。ファスナーポスト孔はまた、「雌性スナップホール」と称される。ファスナーポストは、支持体片またはかみ合いリングのうち一方の表面上のとがった部分または突き出し領域の輪郭を示す。一方の支持体片の表面上ファスナーポスト孔は、間隔をとって配置され、ファスナーポストと接合し、またはこれと固定されてかみ合うように構成される。図7A-7Cで説明される実施形態では、膜は第一かみ合いリング(39)(図7C)と第二かみ合いリング(41)(図7A)との間に固定される。一実施形態では、第一かみ合いリング(39)は多数の、間隔をとって配置されたファスナーポスト(40)を含む表面を含み、第二かみ合いリング(41)は多数の、間隔をとって配置されたファスナーポスト孔(42)の輪郭を示す表面を含む。別の実施形態では、第一および第二スナップリングの各々は、ファスナーポスト孔の間に、間隔をとって配置されたファスナーポストを含む表面を含む。
図8A-8Eおよび図9A-9Dで説明する本発明の別の実施形態は、リング(46)に膜を固定することから構成される装置であって、このリングが周辺部環状表面、内側環状表面、上面および底面を有し、ここに少なくとも1つの表面がその上に少なくとも1つのカットスリット(45)の輪郭を示す装置とこの装置を作成する方法である。図8Aに描写するように、この方法は以下の工程を含む:固定用の膜をリング(46)と接触させる工程;リング(46)の上面または底面上に膜(35)を配置し、これによりリング(46)を膜(35)でカバーする工程;膜(35)をカットスリット(45)内へ挿入し、これにより膜(35)をリング(46)に固定する工程。特定の実施形態では、膜は上面または底面上の少なくとも1つのカットスリット内へ挿入される。別の実施形態では、膜は周辺部環状表面上のカットスリット内へ挿入される。
本発明の装置および方法についての別の実施形態では、組織表面用生体高分子カバーを作成するが、これは以下の工程による:生体高分子膜を第一リングの表面と接触させる工程、この第一リングは外側環状エッジを有し、内側環状エッジを有する第二リングの内径内にスナップ適合するサイズの外径を有する;第一リング上で膜を配置し、これにより第一リングを膜で完全にカバーし、第一リングの外側環状エッジを覆って膜で包む工程;第一リングを覆って、これと同軸上に並べて第二リングを配置する工程;第一リングを第二リングと固定してかみ合わせ、これにより第一リングと第二リングとの間に膜を固定し、組織表面用生体高分子カバーまたは培養挿入物を作成する工程。
本発明の一実施形態では、第一リングと第二リングとの間に固定された羊膜は組織表面用生体高分子カバーである。本明細書中で使用する用語「組織表面用生体高分子カバー」、「生体高分子カバー」、または「カバー」には、例えば包帯(a dressing, a bandage)、ドレープ、例えば包帯コンタクトレンズ、組織を保護する組成物またはカバー、接着を予防し、細菌を排除し、細菌活性を阻害し、または治癒または組織の成長を促進するカバーが含まれる。
組織表面用生体高分子カバーは、羊膜を伸展させ、または支持体リングを体組織表面の輪郭に適合させるように修飾可能である。例えば一実施形態では、第一リングおよび第二リングをそれぞれ、眼の外側表面に配置するためのサイズおよび輪郭に成形する。
一実施形態では、第一リングと第二リングは生分解性である。別の実施形態では、第一リングまたは第二リングのいずれかが生分解性である。本明細書中で使用する用語「生分解性物質」とは、天然の生物学的プロセスによって分解可能な物質である。本発明の特定の実施形態では、生体高分子カバー内の支持体が生分解性であり、かつこのカバーが外科的移植片として使用されるならば、この支持体は、崩壊し、溶解するか、あるいは吸収され、この移植片を外科的に除去する必要を排除する。
別の実施形態に基づくグリップ表面を有するかみ合いリング
上記、ファスナーポストおよびファスナーポスト孔の輪郭を示す領域を有する支持体リングを含む本発明の実施形態に加えて、別の実施形態では、2つの支持体片上の他のタイプのグリップ表面を使用する。例えば図10A-10Cに示されるように、本発明の一実施形態は組織表面用生体高分子カバーとして、または培養挿入物として有用な装置である。図10Dに示される、かみ合いリングの間にサンドイッチされた膜(35)を有する装置は、かみ合いリング(54, 58)を含み、ここに内側リング(54)の外側環状エッジ(56)は第一グリップ表面(56)を含み、外側リング(58)の内側環状エッジ(60)は第二グリップ表面(60)を含む。図10Dのカバーの平面図に示されるように、膜、例えば羊膜(35)は、リング54および58の2つのグリップ表面の間に締め付けて固定する。特定の実施形態では、その部分的な断面遠近図が図10A-10Cに示されるが、外側リングおよび内側リングのかみ合い適合は、先細化(tapering)または角度付けにより、リング(64)の内側環状エッジ(66)を例えば90°またはそれより大きくし、リング(68)のエッジ(70)を90°またはそれより小さくし、互いに接触するエッジ(66および70)が互いにグリップし、固定されてかみ合うことによって、しっかりと固定できる。
本発明の別の実施形態では、グリップ表面はいがであるグリップ装置を含む。
本発明の方法および組成物の一実施形態では、図11-12に示されるように、例えば、膜は支持体に接着される。図11Aに示される実施形態では、平滑エッジを有する支持体リング(72)の少なくとも1つに接着組成物(84)を加える。次に、図11Bに示されるように、支持体(72)表面上の接着組成物(84)を羊膜(35)と接触させ、ここにこの膜(35)は支持体(72)の外径より大きい直径を有する表面を持っている。支持体(72)を膜(35)上に配置し、支持体(72)を覆って内向きに膜(76)を折りたたむことを可能にする。次いで図11Cに示されるように、支持体(72)を覆って膜(35)を折りたたみ、これにより支持体(72)は膜(35)でカバーされ、そして接着組成物(84)によって膜(35)と接着し、これにより組織表面用羊膜カバー(78)を作成する。組織表面用羊膜カバーの一実施形態では、支持体はリングである。このカバーの別の実施形態では、支持体はディスクである。このカバーの別の実施形態では、支持体はコンフォーマ、例えば図19Aの(134)である。別の実施形態では、上記工程を繰り返し、第二羊膜片を組織表面用羊膜カバー下に配置し、このカバーを覆って折りたたむことによって二重層カバーが形成される。
上記のように、羊膜は以下の2つの面を有する:厚い基底膜および無血管性間質。羊膜の間質側は、スポンジ、例えばWECK-CEL(登録商標)スポンジ(Edward Weck, Incorporated, Princeton, NJ)と接触させることによって基底膜側から識別可能である。間質側は粘着性であり、スポンジと接着する。羊膜の間質側の接着性質を図14AおよびBに示される本発明の別の実施形態に基づく複合物を作成することに使用可能である。この実施形態では、組織表面用の羊膜カバー(100)は以下を含む:外径を有する支持体(96);支持体(96)の外径より大きい直径の表面を有する羊膜(35)、しかもこの羊膜は間質側(94)を有する;膜(35)の間質側(94)の中央部分に接して配置された支持体(96)、この膜(35)は組立て時に支持体(96)を覆って内向きに折りたたまれ、その支持体(96)は膜(35)でカバーされ、そして折りたたまれた膜の間質側(94)の部分は間質の粘着性によって、この膜(35)の間質側(94)の別の部分と接着し、これにより支持体(96)を適所で保持し、組織表面用の羊膜カバーを作成する。図14Bでは、非間質側(98)が見えており、羊膜は支持体(96)を覆って折り返されている。一実施形態では、この支持体はリングまたはディスクまたはコンフォーマである。
図16A-16Bは組織表面用羊膜カバーまたは培養挿入物の他の実施形態を描写する。図16Aに示される実施形態では、羊膜(35)は、周辺部環状溝を含む支持体リング(96)を覆って配置される;縫合糸(106)は溝内に配置され、結び目(108)で膜(35)周りにくくられ、膜(35)を支持体(96)に固定する。別の実施形態では、支持体リングは周辺部環状溝を有さない。別の実施形態では膜は直接支持体に縫合される。
図17AおよびBは本発明の実施形態を示し、ここでは羊膜(35)と接触する支持体リング(114)の表面がスリット(117)または空洞(cavity)の輪郭を示す。図17Aは、リング(114)の部分の遠近断面図である。羊膜(35)はリング(114)を覆って配置され、減圧を使用して膜(35)をスリット(117)内へ引き込む。別法では、膜(35)はスリット(117)内へ押し込まれる。
組織表面用生体高分子カバー、例えば本発明の実施形態に記載の組織表面用羊膜カバーは、これを標的組織表面に配置して組織を治療処置できる。実施形態に記載されるカバーは、組織の症状に目立った改善を生じさせるのに十分な期間、組織表面の適所で保持される。本発明は、患部組織の表面に組織表面用羊膜カバーを適用することによって組織を処置し、熱傷および傷害の疼痛を緩和し、炎症、膨潤、瘢痕を減少させ、治癒を促進し、罹患または傷害組織を別の様式で処置するための複合物および方法を提供する。
本発明の実施形態に記載のキットは、本発明の組成物または装置、例えば膜、フィルム、弾性バンド、支持体、リング、組織接着剤、縫合糸、締め付けリング、クリップ、びょう、円錐形エキスパンダ、エキスパンダの先端部上に配置された放射状弾性バンドを摩擦によってかみ合わせるための装置の任意の組み合わせを含むことができる。
プロトタイプ1は図1A-1Dおよび図2、3A、3Bに示される一組の装置から構成された。この装置は以下を含む:図1A-1Dおよび図2に示される円錐形エキスパンダ(20);弾性バンド(24)をかみ合わせるための装置(30)、エキスパンダ(20)の底部で弾性バンドを挿入物へ移すためのリング(図1A-1Dに示される)。これらの装置の本来の目的は、培養挿入物表面への羊膜の固定を容易にし、これにより細胞は羊膜基質上で培養可能である。したがってプロトタイプ1は、羊膜を弾性バンドによって固形支持体、すなわち培養挿入物上に固定した方法について説明する。プロトタイプ1を作成するこれらの装置の操作は図1A-1Dに描写される以下の工程を含むものであった。
プロトタイプ2は図4A-4Dおよび図5A-5Dに描写されている。このプロトタイプは二組のリングを含み、一方は固形支持体であり、他方は弾性Oリング(図4Aおよび5A)である。このプロトタイプでは、羊膜(35)を固形支持体(22)、すなわち固形リングに固定したが、この固形リングはリング(22)の内側または外側に環状溝(21または23)を有し、この溝は弾性Oリング(24または25)を受けるサイズで成形できる。この操作は図4および5に描写される以下の工程を含むものであった。
プロトタイプ3は図8A-8Dおよび図9A-9Dに説明されている。このプロトタイプは、図8中(45)および図9中(50)のカットスリットを有するポリマーリングの組立てを含むものであった。この操作は図8A-8Eに描写される以下の4工程を含むものであった。
目的1:眼球表面用羊膜カバー、または「包帯コンタクトレンズ」を開発することであり、角膜表面および眼球表面全体をそれぞれカバーするように適合させるコンフォーマの形状に基づく既存のプロトタイプを修飾することによる。
発明者らの予備実験では、羊膜を数種類の固形支持体に固定できることが示されている。したがって発明者らは、以下に提唱される実験設計に基づき、角膜表面または眼球表面全体をカバーするように適用することができるように固体支持体を修飾することによって、無縫合の「包帯コンタクトレンズ」を開発することがまた可能であると考える。
本発明の包帯コンタクトレンズの設計には、以下3つの重要な課題を解決することが必要である。
上述の実験設計は、予備実験に記載される発明者らの経験に基づき、日常的な実験法のみを用いて完全に達成可能である。発明者らは、羊膜を、角膜表面および眼球表面両用途の固形支持体に密接に固定することを見込む。また発明者らの考えでは、固定の強度は膜に加えられる伸張に耐えるほど十分に強くなくてはならない。包帯コンタクトレンズの強度をインビトロで定量化するために、発明者らはひずみ計装置を使用し、この装置は製造された本発明の包帯コンタクトレンズをその外側輪郭エッジで保持し、また膜上に加えられる圧力を膜がOリングから脱離するまで変化させる装備を含む。応力・ひずみ関係をPCで記録し、破断点を求める。この装置を用いて、上記の種々の変数によって製造した各包帯コンタクトレンズの強度を比較する。
眼表面への配置後、組織が及ぼすゆがみ圧(deflection pressure)はかなり小さく、おそらく10グラムより小さい。上記のように評価されたゆがみ力が羊膜を時期尚早にシリコーンOリングから分離する場合、発明者らはまずOリングのデュロメーターを50から75に変化させ、Oリングとスカートとの間の結合を改良する。
1)理論的根拠:
角膜表面および眼球表面両用途用および包帯コンタクトレンズを首尾良く製造した後、発明者らは、保存媒体中、温度−80℃で一定期間凍結保存した後のその耐久性および安定性を検査することを要する。この保存方法は、現在Bio-Tissueが製造するAmnioGraftTMの調製についての、権利化済み方法(引用により本明細書中に包含されるU.S.P.N. 6,152,142を参照のこと)に記載されたものである。羊膜の抗炎症性および抗瘢痕作用の効力は、AmnioGraftTMがエンドユーザ、すなわち眼科外科医に流通した場合、上記権利化済み保存方法下で維持される。AmnioGraftTMに関して、凍結保存期間、すなわち有効期間は少なくとも1年であることが決定されている。したがって発明者らは、可撓性スカートが上記保存条件下でその完全性を依然維持するかどうかを決定することを要する。事実そうであれば、発明者らはまた、(破断点圧力によって測定される)固定強度が凍結保存の種々の期間後に依然として維持されるかどうかを決定することを要する。支持体に固定された羊膜の凍結保存は随意である。
発明者らは、選択されたOリングおよび製造ずみの包帯コンタクトレンズ(固定済み羊膜を有す)の完全性が長期凍結保存後に依然保存されているかどうかを試験する。発明者らは、一連の(異なった材料製の)Oリングおよびこれら同一のOリングの構成材料をAmnioGraftsTMの保存に通常使用される保存媒体を含有する個別のガラスビン中に置く。発明者らはこれらのビンを超低温フリーザー中−80℃で保存する。種々の期間の保存後、発明者らは装置の完全性を解剖顕微鏡下で検査し、任意のひびまたは欠損が存在するかどうかを調べ、破断点圧力試験を使用して元の材料の性質を評価し、それぞれ非凍結膜と比較する。凍結保存期間は1年間継続するが、データポイントはこの期間内毎週である(製造過程の進行中−目的1)。
発明者らは、自らが実行した予備試験、すなわち3つのタイプのシリコーンゴムOリング(純粋PDMS、VITON、およびフルオロシリコーンゴム)の−80℃での完全性試験から、包帯コンタクトレンズの可撓性支持体が1年の凍結保存期間中安定であり、固定強度が十分な強度を維持すると考える。発明者らはまた、培養中の上皮成長を支持するその能力を試験する(方法参照)ことによって上記固定された羊膜の、保存後の生理学的作用を試験し、凍結保存期間と同一期間後のAmnioGraftTM未凍結保存コントロールと比較する。
しかしながら、可撓性支持体の完全性が凍結保存によっておびやかされることを発見した場合、発明者らはまず、この有害作用が時間依存的であるかどうかを決定し、その組立物が無傷である状態を依然として保持できる最短期間を見出す。
1)理論的根拠:
目的1および2の完了後、角膜表面および眼球表面両用途用の満足な包帯コンタクトレンズを得た発明者らは次いで、そのような包帯コンタクトレンズがウサギの眼表面で安全に使用可能であるかどうかを検査する。目的3は目的1の完了後、目的2と平行して開始できる。
このプロトコルはトータルで25匹のNZWウサギ眼(10%損耗率を見込んで27匹のウサギが必要である)で実行し、製造済み本発明の包帯コンタクトレンズの安全性を試験する。発明者らは、ウサギ角膜表面および眼球表面用途に適合するように製造された包帯コンタクトレンズを使用する。サイズ、湾曲、および輪郭に関する包帯コンタクトレンズの設計は、ウサギ眼のサイズが加齢とともに増加するという知見に基づく。ウサギは体重2-3 kgであり、両性別である。ウサギ包帯コンタクトレンズをウサギ眼表面に挿入後(他方の眼はコントロールとして使用)、各ウサギ眼を3週間、毎日二回の手動光検査、毎週の細隙灯検査によって検査し、レンズ装着に対する任意の有害反応が生じているかどうかを調べる。詳細には、発明者らは細隙灯下、眼球表面、瞼および皮膚を含む外部付属器の組織膨潤、発赤、粘膜発達に関して炎症を調査する。さらに研究の最後に、角膜上皮完全性をフルオレセイン染色によってモニターし、必要であれば組織学的にモニターする。
発明者らは、ウサギ眼はウサギ包帯コンタクトレンズを首尾良く装着し、合併症をまったく伴わず、膜の完全性は少なくとも1週間、好ましくは3週間まで持続するであろうと考えるが、これは従来の縫合AmnioGraftsTMを使用してヒト眼球表面疾患を処置するのに十分であることが見出されている期間である。発明者らはこの期間中に、包帯コンタクトレンズ(角膜表面および眼球表面の両用途に関して)、またはウサギ眼球表面組織および付属器の完全性にいかなる適合問題も生じないと考える。
ウサギ眼はヒトの眼と異なり、低いまばたき速度を有し、鼻球(nasal bulbar)結膜内に追加の瞬膜を有する。前者のせいで眼表面の露出時間が長くなり、ウサギ眼表面の膜が乾燥する可能性がある。発明者らは、露出問題を患うヒト患者において、AmnioGraftsTMの早期、すなわち1週間より短期の溶解を観察した。ウサギのこのような露出問題が望ましくない試験環境を実際に生じる場合、発明者らはまず、包帯コンタクトレンズ挿入前後のウサギのまばたき速度を測定することによってこの問題を検証する。確認後、小縫合性の瞼板縫合、すなわち縫合による上部および下部眼瞼の閉鎖を行ってこの問題に対処し、これが膜の望ましくない時期尚早の膜溶解を減少させるかどうかを調べる。
. 主要な方法
1.羊膜の調製:
研究使用のためのヒト羊膜は、IRBプロトコル(# 01/554A、マイアミ大学医学部研究におけるヒト被験者保護のための医学小委員会(the Medical Science Subcommittee for the Protection of Human Subjects in Research of the University of Miami School of Medicine)承認、2002年2月1日)にしたがって獲得し、権利化済みの手法(U.S.P.N. 6,152,142参照、この教示内容は引用により本明細書中に包含される) にしたがって調製するが、この手法は上記の権利化済みの方法を使用するBio-Tissueが確立したものである。Bio-Tissueはドナー情報の守秘義務を守り、この権利申請に関与する人員を一切開示せず、この研究から作成されるいかなる報告においても使用しない。
この方法は必要に応じて羊膜の生理学的作用を試験するために使用する方法であり、発明者らの以前の刊行物に報告済みである(33-35)。簡単には、従来の角膜移植用のトレフィンでの手術後に各ドナー角膜を角鞏膜残留物から輪部外植体を取得する。輪部内0.5 mmおよび輪部を超えて0.5 mmを含む1-2 mm3の外植体を調製し、培養皿に置き、Dispase II (Mg2+およびCa2+を含まないハンクス平衡塩類溶液(HBSS)中1.2 U/ml)中、加湿5% CO2下、37℃で15〜30分インキュベートし、10% FBS含有DMEMですすぐ。追加の凍結保存工程を伴うか、または伴わない羊膜を固定した固形支持体を基質として使用し、基底膜表面を上向きにして輪部外植体を培養し、外植体を一滴のFBSとともに一晩膜の中央に配置し、適度に接着させた後、等容量のHEPES緩衝化DMEM、炭酸水素塩およびハムF12を含有し、以下を補充する:0.5%ジメチルスルホキシド、2 ng/mlマウスEGF、5 mg/mlインシュリン、5 mg/mlトランスフェリン、5 ng/mlセレン、0.5 mg/mlヒドロコルチゾン、30 ng/mlコレラ毒素Aサブユニット、5% FBS、50 mg/mlゲンタマイシン、1.25 mg/mlアンホテリシンB(包括的に、SHEM培地と称される)からなる培地中で培養する。この培養物を5% CO2および95%空気下37℃でインキュベートし、培地を2-3日毎に変える。
この動物プロトコルはマイアミ大学で承認済みである(No. 02-142、2002年7月11日)。使用される主要な動物はウサギである。この動物は、そのサイズおよびレンズ挿入操作が容易であることから選択する。広範なMedline、Agricola、Altweb検索により以下キーワードに適合する参考文献を示した:羊膜、コンタクトレンズ、眼球表面、動物。しかしこれらは発明者らの論題に関連しない。したがってウサギは、目的3に記載される包帯コンタクトレンズの前臨床安全性 試験において使用するのに最良の動物である。
トータル25匹のニュージーランド白色ウサギ(および損耗を見込んで追加2匹のウサギを使用)、両性別、体重2-3 Kgを用いる。これらをフィルタカバーケージ内、温度、湿度、光(12時間光サイクル;午前7.00点灯)制御条件下で飼育し、標準固形試料および水を自由に与える。
以下の文献は医者および臨床研究者にとって有用な背景知識であり得るものである。
1. Kim JC, Tseng SCG.「重度損傷ウサギ角膜表面への保存ヒト羊膜の移植(Transplantation of preserved human amniotic membrane for surface reconstruction in severely damaged rabbit corneas.)」Cornea 1995;14:473-84.
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3. Kruse FE, Rohrschneider K, Voelcker HE.「角膜表面を再構築するための羊膜の移植(Transplantation von amnio-membran zur rekonstruktion der hornhautoberflache.)」Ophthalmologe 1999;96:673-8.
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7. Trelford JD, Trelford-Sauder M.「外科手術における羊膜、過去と現在(The amnion in surgery, past and present.)」Am J Obstet Gynecol 1979;134:833-45.
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10. Sorsby A, Symons HM.「眼の苛性熱傷における羊膜移植(Amniotic membrane grafts in caustic burns of the eye.)」Br J Ophthalmol 1946;30:337-45.
11. Sorsby A, Haythorne J, Reed H.「眼の苛性熱傷における羊膜移植を用いるさらなる実験(Further experience with amniotic membrane grafts in caustic burns of the eye.)」Br J Ophthalmol 1947;31:409-18.
12. Koizumi N, Inatomi T, Sotozono C, et al.「保存ヒト羊膜中の成長因子mRNAおよびタンパク質(Growth factor mRNA and protein in preserved human amniotic membrane.)」Curr Eye Res 2000;20:173-7.
13. Hao Y, Ma DH-K, Hwang DG, et al.「ヒト羊膜中の抗血管新生および抗炎症性タンパク質の同定(Identification of antiangiogenic and antiinflammatory proteins in human amniotic membrane.)」Cornea 2000;19:348-52.
14. Na BK, Hwang JH, Kim JC, et al.「不応性角膜炎の治療物質開発のための、プロテイナーゼ阻害剤としてのヒト羊膜成分の分析(Analysis of human amniotic membrane components as proteinase inhibitors for development of therapeutic agent of recalcitrant keratitis.)」Trophoblast Res 1999;13:459-66.
15. Solomon A, Rosenblatt M, Monroy DC, et al.「羊膜マトリクス上で培養されたヒト角膜上皮細胞におけるインターロイキン-1aおよびインターロイキン-1bの抑制(Suppression of Interleukin-1a and Interleukin-1b in the human corneal epithelial cells cultured on the amniotic membrane matrix.)」Br J Ophthalmol 2001;85:444-9.
16. Park WC, Tseng SCG.「PRKにおける縫合、血液および羊膜による急性炎症および角膜実質細胞死の調節(Modulation of acute inflammation and keratocyte death by suturing, blood and amniotic membrane in PRK.)」Invest Ophthalmol Vis Sci 2000;41:2906-14.
17. Wang MX, Gray TB, Parks WC, et al.「ウサギにおけるエキシマーレーザ光切除において角膜混濁およびアポトーシスは羊膜マトリクスによって減少する(Corneal haze and apoptosis is reduced by amniotic membrane matrix in excimer laser photoablation in rabbits.)」J Cat Refract Surg 2001;27:310-9.
18. Kim JS, Kim JC, Na BK, et al.「急性角膜アルカリ熱傷後の創傷治癒に関して、羊膜パッチは治癒を促進し、プロテアーゼ活性を阻害する(Amniotic membrane patching promotes healing and inhibits protease activity on wound healing following acute corneal alkali burns.)」Exp Eye Res 1998;70:329-37.
19. Shimmura S, Shimazaki J, Ohashi Y, Tsubota K.「眼球表面障害における羊膜移植の抗炎症性作用(Antiinflammatory effects of amniotic membrane transplantation in ocular surface disorders.)」Cornea 2001;20:408-13.
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21. Tseng SCG, Li D-Q, Ma X.「培養ヒト角膜および輪部線維芽細胞での羊膜マトリクスによるトランスフォーミング成長因子イソ型、TGF-b受容体II、および筋線維芽細胞分化の抑制(Suppression of Transforming Growth Factor isoforms, TGF-b receptor II, and myofibroblast differentiation in cultured human corneal and limbal fibroblasts by amniotic membrane matrix.)」J Cell Physiol 1999;179:325-35.
22. Lee S-B, Li D-Q, Tan DTH, et al.「正常結膜線維芽細胞および翼状体線維芽細胞両者での羊膜によるTGF-bシグナル伝達の抑制(Suppression of TGF-b signaling in both normal conjunctival fibroblasts and pterygial body fibroblasts by amniotic membrane.)」Curr Eye Res 2000;20:325-34.
23. Choi TH, Tseng SCG.「角膜実質細胞の上皮細胞誘導性筋線維芽細胞分化および羊膜による阻害作用のインビボおよびインビトロでの証明(In vivo and in vitro demonstration of epithelial cell-induced myofibroblast differentiation of keratocytes and an inhibitory effect by amniotic membrane.)」Cornea 2001;20:197-204.
24. Choi YS, Kim JY, Wee WR, Lee JH.「エキシマーレーザフォトリフラクティブ角膜切除後のウサギ角膜創傷治癒に関するヒト羊膜適用の作用(Effect of the application of human amniotic membrane on rabbit corneal wound healing after excimer laser photorefractive keratectomy.)」Cornea 1998;17:389-95.
25. Woo H-M, Kim MS, Kweon O-K, et al.「ウサギ角膜におけるエキシマーレーザ角膜切除後の上皮創傷治癒および間質再構築に関する羊膜の作用(Effects of amniotic membrane on epithelial wound healing and stromal remodelling after excimer laser keratectomy in rabbit cornea.)」Br J Ophthalmol 2001;85:345-9.
26. Meller D, Pires RTF, Mack RJS, et al.「急性化学的または温熱性熱傷に対する羊膜移植(Amniotic membrane transplantation for acute chemical or thermal burns.)」Ophthalmology 2000;107:980-90.
27. Sridhar MS, Bansal AK, Sangwan VS, Rao GN.「急性化学的および温熱性損傷における羊膜移植(Amniotic membrane transplantation in acute chemical and thermal injury.)」Am J Ophthalmol 2000;130:134-7.
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30. Shields CL, Shields JA, Armstrong T.「外科手術による切除、羊膜同種移植、および局所化学療法を用いる結膜および角膜メラノーマについての対処(Management of conjunctival and corneal melanoma with surgical excision, amniotic membrane allograft, and topical chemotherapy.)」Am J Ophthalmol 2001;132:576-8.
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同等物
本発明をその好ましい実施形態を参照して具体的に示し、説明してきたが、特許請求の範囲に包含される本発明の範囲から逸脱することなく、本発明の形式および詳細について種々の変化を施すことができることが当業者には理解されよう。
Claims (27)
- 組織表面カバーであって、
a)環状形状を有したスナップ結合式の第一支持体と、
b)環状形状を有したスナップ結合式の第二支持体と、
c)前記第一支持体と前記第二支持体との間で固定された羊膜と、
を含んで成る組織表面カバー。 - 第一支持体は眼球表面と接触するように立体形状化された内面を有した形状一致体であり、第二支持体は前記形状一致体のエッジの溝にフィットするサイズで提供され、スナップ結合式着脱具で該形状一致体に取り付けられていることを特徴とする請求項1記載の組織表面カバー。
- 形状一致体は眼球表面と瞼との間のスペースにフィットするように形状化されており、縫合せずに該スペース内に残ることを特徴とする請求項2記載の組織表面カバー。
- 形状一致体は瞼球癒着リングであり、スナップ結合式の支持体はOリング、ポリメチルメタクリレートスカート片、シリコーン、ポリテトラフルオロエチレン、ポリウレタン、生分解物質およびそれらの組合せから選択されることを特徴とする請求項2記載の組織表面カバー。
- 第一支持体は第一グリップ表面を含み、第二支持体は第二グリップ表面を含んでいることを特徴とする請求項1記載の組織表面カバー。
- 第一グリップ表面と第二グリップ表面は、いが、ファスナーポストおよびファスナーポスト孔を形成する領域から選択されるグリップ部を含んでいることを特徴とする請求項5記載の組織表面カバー。
- 第一グリップ表面はファスナーポスト孔を形成する領域を含み、第二グリップ表面は該ファスナーポスト孔と空間的に整合するファスナーポストを含んでいることを特徴とする請求項5記載の組織表面カバー。
- 第一グリップ表面はファスナーポストを含み、第二グリップ表面は該ファスナーポストと空間的に整合するファスナーポスト孔を形成する領域を含んでいることを特徴とする請求項5記載の組織表面カバー。
- 第一グリップ表面または第二グリップ表面はファスナーポストを含み、羊膜はファスナーポストと空間的に整合するファスナーポスト孔を形成する領域を含み、該第一グリップ表面と該第二グリップ表面との間で該羊膜を固定していることを特徴とする請求項5記載の組織表面カバー。
- 組織表面カバーであって、
a)外側環状エッジを有し、所定の外径である第一リングと、
b)該第一リングを完全にカバーする膜であって、該第一リングの前記外側環状エッジ上で包まれている膜と、
c)内側環状エッジを有し、所定の内径である第二リングと、
を含んで成り、
前記第二リングの前記内径は前記第一リングの前記外径上でスナップ式にフィットするサイズであり、該第一リングと同軸整合するように該第一リング上に配置されており、前記膜は本組織表面カバーの製造時に前記第一リングを前記第二リングとロック式に係合させることで該第一リングと該第二リングとの間に固定されることを特徴とする組織表面カバー。 - 膜は生体高分子膜であることを特徴とする請求項10記載の組織表面カバー。
- 膜は羊膜であることを特徴とする請求項10記載の組織表面カバー。
- 第一リングと第二リングとは生分解性であることを特徴とする請求項10記載の組織表面カバー。
- 第一リングと第二リングの少なくとも一方は少なくとも一種の生物活性分子を含んでいることを特徴とする請求項10記載の組織表面カバー。
- 膜、第一リングおよび第二リングはそれぞれ眼の表面に配置できるサイズであることを特徴とする請求項10記載の組織表面カバー。
- 膜、第一リングおよび第二リングはそれぞれ、真皮組織、消化器組織、呼吸管組織、生殖系組織、泌尿器系組織、循環系組織および骨組織から選択される組織の表面に配置できるサイズであることを特徴とする請求項10記載の組織表面カバー。
- 第一リングの外側環状エッジは第一グリップ表面を含み、第二リングの内側環状エッジは第二グリップ表面を含んでいることを特徴とする請求項10記載の組織表面カバー。
- 炎症軽減、脈管形成軽減、傷治癒促進、傷跡軽減、痛感軽減、潰瘍化角膜上皮欠損治癒促進、水泡漏出治癒、角膜除去術あるいはエキシマーレーザー手術に起因する角膜混濁軽減、角膜補綴移植補助、バンド角膜症再発防止、傷口カバー並びに手術での癒着防止から選択される目的で利用することを特徴とする請求項1から10のいずれかに記載の組織表面カバー。
- 組織表面をカバーする生体高分子カバーを製造する方法であって、
a)生体高分子膜を、外側環状エッジを有した第一リングであって、内側環状エッジを有した第二リングの内径の内部でスナップ式にフィットするサイズの外径を有している第一リングの表面と接触させるステップと、
b)前記生体高分子膜を前記第一リング上に配置し、該第一リングを該生体高分子膜で完全にカバーし、該第一リングの前記外側環状エッジ上で該生体高分子膜を包むステップと、
c)前記第一リング上に前記第二リングを配置し、同軸整合させるステップと、
d)前記第一リングを前記第二リングとロック式に係合させ、該第一リングと該第二リングとの間で前記生体高分子膜を固定し、組織表面をカバーする生体高分子カバーを製造するステップと、
を含んで成ることを特徴とする製造法。 - 生体高分子膜は羊膜であることを特徴とする請求項19記載の製造法。
- 生体高分子膜は少なくとも1つの細胞であることを特徴とする請求項19記載の製造法。
- 第一リングの表面に生体高分子膜を接触させるステップに先立って、細胞は該生体高分子膜上で培養され、あるいは該生体高分子膜に接着されることを特徴とする請求項21記載の製造法。
- 生体高分子膜は第一リングと第二リングとの間で固定され、細胞は該生体高分子膜上で培養され、あるいは該生体高分子膜に接着されることを特徴とする請求項21記載の製造法。
- 細胞は遺伝子治療用に予備加工されていることを特徴とする請求項21記載の製造法。
- 生体高分子膜、第一リングおよび第二リングはそれぞれ眼の外面に配置するサイズであることを特徴とする請求項19記載の製造法。
- 生体高分子膜、第一リングおよび第二リングはそれぞれ、真皮組織、消化器組織、呼吸管組織、生殖系組織、泌尿器系組織、循環系組織および骨組織から選択される組織の表面に配置できるサイズであることを特徴とする請求項19記載の製造法。
- スナップ結合式の第一リングと、スナップ結合式の第二リングとの間で膜を固定する方法であって、該第一リングは間隔が開けられた複数のファスナーポストを有した表面を含んでおり、該第二リングは間隔が開けられた複数のファスナーポスト孔を形成する表面を含んでおり、本方法は、
a)固定させる膜を前記第一リングの前記表面と接触させるステップと、
b)前記膜を前記第一リング上に配置し、該第一リングを該膜で完全にカバーするステップと、
c)前記第一リング上に前記第二リングを配置し、少なくとも1つの前記ファスナーポストを少なくとも1つの前記ファスナーポストポスト孔と整合させるステップと、
d)前記第一リングを前記第二リングとロック式に係合させ、該第一リングと該第二リングとの間で前記膜を固定するステップと、
を含んで成ることを特徴とする固定法。
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