RU2673806C1 - Способ оперативного лечения ожоговых ран - Google Patents
Способ оперативного лечения ожоговых ран Download PDFInfo
- Publication number
- RU2673806C1 RU2673806C1 RU2018108163A RU2018108163A RU2673806C1 RU 2673806 C1 RU2673806 C1 RU 2673806C1 RU 2018108163 A RU2018108163 A RU 2018108163A RU 2018108163 A RU2018108163 A RU 2018108163A RU 2673806 C1 RU2673806 C1 RU 2673806C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- wound
- skin
- gal
- wounds
- burn wounds
- Prior art date
Links
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 title claims abstract description 147
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 title claims abstract description 139
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 32
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 claims abstract description 34
- 241000282887 Suidae Species 0.000 claims abstract description 28
- 238000000576 coating method Methods 0.000 claims abstract description 24
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 claims abstract description 22
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 claims abstract description 11
- 230000008105 immune reaction Effects 0.000 claims abstract description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 abstract description 24
- 230000035876 healing Effects 0.000 abstract description 15
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 8
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 3
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 50
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 26
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 21
- 206010063560 Excessive granulation tissue Diseases 0.000 description 19
- 210000001126 granulation tissue Anatomy 0.000 description 19
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 19
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 19
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 17
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 13
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 13
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 description 13
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 13
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 13
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 12
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 11
- 230000008569 process Effects 0.000 description 10
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 9
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 8
- 238000011161 development Methods 0.000 description 8
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 8
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 8
- 206010072170 Skin wound Diseases 0.000 description 7
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 7
- 210000004207 dermis Anatomy 0.000 description 7
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 6
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 6
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 6
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 6
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 5
- 230000002421 anti-septic effect Effects 0.000 description 5
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 5
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 5
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 5
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 5
- 238000011160 research Methods 0.000 description 5
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 5
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 4
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 description 4
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 210000002615 epidermis Anatomy 0.000 description 4
- 210000000416 exudates and transudate Anatomy 0.000 description 4
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 4
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 4
- 230000029663 wound healing Effects 0.000 description 4
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 3
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 3
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 3
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 3
- 229940064004 antiseptic throat preparations Drugs 0.000 description 3
- 238000004500 asepsis Methods 0.000 description 3
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 3
- 230000036760 body temperature Effects 0.000 description 3
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 3
- 230000036541 health Effects 0.000 description 3
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 3
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 3
- 230000003448 neutrophilic effect Effects 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 3
- 231100000041 toxicology testing Toxicity 0.000 description 3
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 3
- BPICBUSOMSTKRF-UHFFFAOYSA-N xylazine Chemical compound CC1=CC=CC(C)=C1NC1=NCCCS1 BPICBUSOMSTKRF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000012422 Collagen Type I Human genes 0.000 description 2
- 108010022452 Collagen Type I Proteins 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 102000009123 Fibrin Human genes 0.000 description 2
- 108010073385 Fibrin Proteins 0.000 description 2
- BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N Fibrin monomer Chemical compound CNC(=O)CNC(=O)CN BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N Haematoxylin Chemical compound C12=CC(O)=C(O)C=C2CC2(O)C1C1=CC=C(O)C(O)=C1OC2 WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010030113 Oedema Diseases 0.000 description 2
- 206010037569 Purulent discharge Diseases 0.000 description 2
- 210000000577 adipose tissue Anatomy 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 210000001367 artery Anatomy 0.000 description 2
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 2
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 2
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 2
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 2
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 229950003499 fibrin Drugs 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 2
- 239000007943 implant Substances 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 2
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 2
- 230000000302 ischemic effect Effects 0.000 description 2
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 2
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 2
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 2
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 2
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 2
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 2
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 2
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 2
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000035699 permeability Effects 0.000 description 2
- 210000004180 plasmocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 2
- 230000001698 pyrogenic effect Effects 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 1
- 108010081589 Becaplermin Proteins 0.000 description 1
- 206010006802 Burns second degree Diseases 0.000 description 1
- GHXZTYHSJHQHIJ-UHFFFAOYSA-N Chlorhexidine Chemical compound C=1C=C(Cl)C=CC=1NC(N)=NC(N)=NCCCCCCN=C(N)N=C(N)NC1=CC=C(Cl)C=C1 GHXZTYHSJHQHIJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010010904 Convulsion Diseases 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- 206010016654 Fibrosis Diseases 0.000 description 1
- 102000030902 Galactosyltransferase Human genes 0.000 description 1
- 108060003306 Galactosyltransferase Proteins 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 1
- 206010070834 Sensitisation Diseases 0.000 description 1
- 206010053615 Thermal burn Diseases 0.000 description 1
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 description 1
- 241001454727 Xenos Species 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 230000000172 allergic effect Effects 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000007640 basal medium Substances 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 230000001851 biosynthetic effect Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 238000004820 blood count Methods 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 238000007705 chemical test Methods 0.000 description 1
- 229960003260 chlorhexidine Drugs 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 238000004590 computer program Methods 0.000 description 1
- 210000002808 connective tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000036461 convulsion Effects 0.000 description 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 1
- 238000005138 cryopreservation Methods 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000007857 degradation product Substances 0.000 description 1
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 1
- 210000001840 diploid cell Anatomy 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N eosin Chemical compound [Na+].OC(=O)C1=CC=CC=C1C1=C2C=C(Br)C(=O)C(Br)=C2OC2=C(Br)C(O)=C(Br)C=C21 YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004744 fabric Substances 0.000 description 1
- 210000003195 fascia Anatomy 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 230000004761 fibrosis Effects 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 238000003209 gene knockout Methods 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 238000005469 granulation Methods 0.000 description 1
- 230000003179 granulation Effects 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 229920001477 hydrophilic polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920001600 hydrophobic polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000003780 keratinization Effects 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- 230000005226 mechanical processes and functions Effects 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 229940127554 medical product Drugs 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 244000005706 microflora Species 0.000 description 1
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 1
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 1
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000037023 motor activity Effects 0.000 description 1
- 229920005615 natural polymer Polymers 0.000 description 1
- 210000004493 neutrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 1
- 230000036407 pain Effects 0.000 description 1
- 206010033675 panniculitis Diseases 0.000 description 1
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 1
- 235000010987 pectin Nutrition 0.000 description 1
- 229920001277 pectin Polymers 0.000 description 1
- 239000001814 pectin Substances 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 230000002980 postoperative effect Effects 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 229940024999 proteolytic enzymes for treatment of wounds and ulcers Drugs 0.000 description 1
- 239000002510 pyrogen Substances 0.000 description 1
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 1
- 238000012827 research and development Methods 0.000 description 1
- 230000029058 respiratory gaseous exchange Effects 0.000 description 1
- 230000000250 revascularization Effects 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 231100000241 scar Toxicity 0.000 description 1
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 1
- 230000008313 sensitization Effects 0.000 description 1
- 231100000161 signs of toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 229920005573 silicon-containing polymer Polymers 0.000 description 1
- 210000001626 skin fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 210000004872 soft tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000000392 somatic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 1
- 230000007480 spreading Effects 0.000 description 1
- 238000003892 spreading Methods 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 210000004304 subcutaneous tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 239000002344 surface layer Substances 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 229920002994 synthetic fiber Polymers 0.000 description 1
- 230000028016 temperature homeostasis Effects 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 230000036575 thermal burns Effects 0.000 description 1
- 230000008354 tissue degradation Effects 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002110 toxicologic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000027 toxicology Toxicity 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 210000000264 venule Anatomy 0.000 description 1
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 1
- 210000001835 viscera Anatomy 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/36—Skin; Hair; Nails; Sebaceous glands; Cerumen; Epidermis; Epithelial cells; Keratinocytes; Langerhans cells; Ectodermal cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Virology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Materials For Medical Uses (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Abstract
Изобретение относится к медицине, а именно к хирургии и комбустиологии, и может быть использовано в ходе лечения ожоговых ран для временного закрытия ран различной этиологии. Способ оперативного лечения ожоговых ран включает хирургическую обработку раны и временное наложение биологического раневого покрытия с последующим проведением аутотрансплантации. При этом покрытие, выдержанное при температуре минус 65-70°С и стерилизованное γ- или β-излученим дозой от 12 до 18 кГр, охлаждают при 180-190°С 6-8 часов и накладывают на рану на срок не более 14 дней. В качестве биологического раневого покрытия используют лоскуты кожи трансгенных свиней линии GAL-KO, не содержащие альфа-1,3-галактозу, обеспечивающие отсутствие иммунной реакции отторжения раневого покрытия. Изобретение позволяет сократить сроки заживления ожоговых ран кожи человека при одновременной биологической безопасности используемого материала. 3 ил., 1 табл., 4 пр.
Description
Изобретение относится к медицине, а именно к хирургии и комбустиологии, и может быть использовано в ходе лечения ожоговых ран для временного закрытия ран различной этиологии.
Урбанизация способствует концентрации на относительно небольших площадях значительного количества людей и мощных производственных комплексов, запасов химических и горючих материалов, энергоресурсов. При внезапном возникновении природных и антропогенных катастроф уязвимость городских жителей и численность пострадавших среди них резко повышаются.
В 1975 г. в Женеве создано Международное общество медицины катастроф. В его задачи входят: координация разработки проблем медицины катастроф в международном масштабе; научные исследования и разработка программ по проблемам медицинской помощи пострадавшим при катастрофах и их лечения в условиях массовых поражений. Наиболее часто встречаются термические ожоги (до 80-90% случаев), которые являются результатом воздействия на кожу пламени, раскаленных газов, пара, горячих жидкостей и раскаленных предметов (Герасимова Л.И. Ожоги - проблемы медицины катастроф. Военная медицина. 1990, с. 66-68). В подобных условиях зачастую складывается ситуация «один врач - множество больных», в отличие от остальной медицины, где обычной является практика «один врач - один больной».
Ожоговая рана сразу после травмы практически стерильна, но в дальнейшем ее микробное обсеменение нарастает. Денатурация дермы в результате воздействия высоких температур сопровождается мощным выбросом протеолитических ферментов, продуктов деградации ткани, что способствует размножению бактерий и приводит к углублению раны, лечение которой в этот период возможно только с помощью пересадки кожи. Тяжесть течения и длительность лечения пострадавших от термических поражений делает актуальными такие задачи, как разработка новых покрытий, ускоряющих эпителизацию аутотрансплантированных лоскутов. Пересадка кожи в сочетании с использованием предварительного покрытия является эффективным способом восстановления обожженных участков.
Покрытие раны необходимо отличать от закрытия раны. Материалы для закрытия ран являются биологически приемлемыми для раневого ложа и постепенно включаются в заживающую раневую область. В то время, как материалы для раневого покрытия основаны на включении в раневой коагулят и врастании гранулезных тканей с целью прикрепления. Материал для покрытия ран обычно не является биологически разрушаемым и, следовательно, может являться лишь временным замещением эпидермиса. Затем он должен быть заменен на кожу пациента, либо могут быть использованы методы по пересадке кожи.
В случае использования временного покрытия рана не должна быть обсеменена бактериями и должна быть достаточно неглубокой, чтобы можно было ожидать ее полного заживления в течение 3-х недель. Эпителиальные клетки из эпидермальных дериватов растут и замещают разрушенный эпидермис, и постепенно материал раневого покрытия вытесняется. Следовательно, исходной целью использования материалов для покрытия ран в случае неглубоких ожогов второй степени является сокращение микробного обсеменения раневого ложа (создание микробного барьера), обеспечивающее предотвращение инфекции, а также сокращение доступа воздуха, что тем самым ослабляет боль. Материалы для покрытия ран также используют и для глубоких повреждений III и IV степени перед окончательным закрытием раны собственной кожей больных с обширными ожоговыми повреждениями.
Оптимальный материал раневого покрытия пока не был установлен. Однако требования к современному временному покрытию следующие:
- создать нетоксичный, антисептический, непровоспалительный и неантигенный барьер для бактерий и других микробов;
- обеспечить нормальную передачу тепла, воды и кислорода;
- обеспечить непосредственное, однообразное прикрепление к раневому ложу;
- обеспечить поддержание механизмов нормального местного иммунитета и заживления раны.
В известном уровне техники: либо покрытие, выполняющее только механическую функцию закрытия раны, требующая регулярной замены (менее 7 дней), либо биологическое покрытие на основе выращенных аутологичных клеток, создание которого требует времени - более 7 дней, не говоря уже о нерешенных вопросах по применению биомедицинского клеточного продукта (ФЗ-180), имеется проблема поиска способов улучшения заживления ран и материалов для раневых покрытий. Настоящее изобретение восполняет указанную потребность в данной области техники.
Известен способ лечения ожоговых ран с использованием биологического раневого покрытия, изготовленного способом, включающим стадии отбора ткани животного, содержащей субстрат, поперечного сшивания и фиксации субстрата, минимизации активности антигенов субстрата и присоединения активного слоя к субстрату [RU 2438713 С2, опублик. 10.01.2012], Однако, ткани животного могут быть переносчиками заболеваний или инфекций, а также могут вызывать неблагоприятный иммунный ответ у донора. При использовании алло- или ксенокожи на 9-14 день происходит активная форма отторжения включая активные лимфоциты, и лоскут разрушается из-за тромбоза сосудов и ишемического некроза.
Известен способ лечения ожоговых ран с использованием биосинтетического раневого покрытия БИОКОЛ - 1, представляющего собой эластичную, пористую пленку, состоящую из смеси синтетических и натуральных, гидрофильных и гидрофобных полимеров. Лечение с помощью раневого покрытия БИОКОЛ - 1 приводит к ускорению заживления раны, однако оно не обладает выраженным антибактериальным эффектом, который необходим при лечении инфицированных ожоговых ран. Такие многокомпонентные пленки на основе синтетического материала имеют улучшенную совместимость с тканями, но обладают слабой проницаемостью для газов и ухудшают процесс регенерации клеток.
Известен способ лечения ожоговых ран на основе применения культивированных клеток. В качестве исходного материала для культивирования клеток используют штамм диплоидных клеток легкого эмбриона человека ЛЭЧ-4(81) [RU 2230500 С2, опублик. 20.06.2004]. Однако клетки легкого эмбриона человека могут вызывать неблагоприятный иммунный ответ у донора.
Известен способ лечения ожоговых ран, включающий туалет раны и наложение на ее поверхность биологической повязки, состоящей из полимерного основания, покрытого коллагеном, и живых аллогенных фибробластов человека [RU 2373944 С1, опублик. 27.11.2009]. Фибробласты - это волокнистые клетки, имеющиеся в каждом человеческом теле, представляющие собой малодифференцированные клетки человека. Недостатком этого способа является использование первичных культур аллогенных фибробластов без надлежащего обследования, что не позволяет исключить наличия вирусных и микроплазменных контаминаций культур, способных инфицировать пациента. В процессе культивирования соматические клетки человека, в том числе фибробласты, способны претерпевать спонтанную трансформацию к неограниченному росту, что определяет необходимость изучения кариотипа клеток в процессе культивирования для оценки стабильности их генома.
Известно, что у трансгенных свиней линии GAL-KO супрессирован иммунологический барьер - реакция отторжения немедленного типа (гиперактивное отторжение), в результате чего они не имеют генов 1,3-a-galactosyltransferase (a-gal), кодирующих фермент, ответственный за выработку на поверхности клеток свиньи углеводных антигенов, приводящих к гиперактивному отторжению [Wong BS, Yamada K, Okumi М, Weiner J, 
РЕ, Tseng YL, Dor FJ, Cooper DK, Saidman SL, Griesemer A, and Sachs DH, Allosensitization does not increase the risk of xenoreactivity to alpha 1,3 galactosyltransferase gene-knockout miniature swine in patients on transplantation waiting lists. Transplantation 82: 314-319, 2006]. Из уровня техники (генная инженерия) известны способы получения трансгенных свиней и возможности их использования для решения проблемы нехватки внутренних органов, тканей и клеток для пересадки человеку [Н.А. Зиновьева, и др. Использование трансгенных GAL-KO свиней в ксенотрансплантации. Проблемы и перспективы. «Сельскохозяйственная биология», 2014, №2, с. 42-49], [US 6482404 В1, опублик. 19.11.2002; US 2005120400 А1, опублик. 02.06.2005; US 2006242722 А1, опублик. 26.10.2006].
Наиболее близким изобретением является способ лечения инфицированных ожоговых ран IIIA степени, включающий хирургическую обработку раны и временное наложение раневого покрытия. На ожоговую рану IIIA степени, поверхность которой очищена от поврежденных тканей и серозно-гнойного отделяемого, наносят на 2-4 дня покрытие, представляющее собой конструкцию из кремнийорганического полимера, покрытого коллагеном типа I человека с тромбоцитарным фактором роста - PDGF-BB и пектином. Коллаген приводит к ускорению заживления раны, однако не обладает выраженным антибактериальным эффектом, который необходим при лечении инфицированных ожоговых ран. При этом коллаген типа I человека может быть переносчиком заболеваний или инфекций, а также может вызывать неблагоприятный иммунный ответ у донора. Это ограничивает использование данного способа. [RU 2455 997 С2, опублик. 20.07.2012].
Задачей изобретения является сокращение сроков заживления ожоговых ран кожи субдермального уровня при одновременной биологической безопасности используемого материала.
Поставленная задача решается тем, что в предложенном способе оперативного лечения ожоговых ран, включающем хирургическую обработку раны и временное наложение биологического раневого покрытия с последующим проведением аутотрансплантации, согласно изобретению, в качестве биологического раневого покрытия используют лоскуты кожи трансгенных свиней линии GAL-KO, не содержащие альфа-1,3-галактозу, обеспечивающие отсутствие иммунной реакции отторжения раневого покрытия, при этом покрытие, выдержанное при температуре минус 65-70°С и стерилизованное γ- или β-излученим дозой от 12 до 18 кГр, дополнительно охлаждают при 180-190°С 6 - 8 ч и накладывают на рану на срок не более 14 дней.
Согласно изобретению в период до 14 дней с даты получения ожоговой травмы лечебные действия предлагаемого биологического покрытия, в соответствии с предложенным способом, направлены на образование здоровых грануляций, подавление микрофлоры и стимуляцию репаративных процессов. Это способствует благоприятному созданию условий для последующего проведения аутотрансплантации.
Обеспечивается бактериальное торможение за счет врожденных природных качеств кожи трансгенных свиней и при предварительной ее обработке.
Обеспечивается тесное прилипание ожогового покрытия к иссеченной ране, что является важной характеристикой, т.к. с плотно прилегающим покрытием бактерии не могут проникать в рану и, в то же время, предотвращают потерю жизненно необходимых богатых протеинами жидкостей в результате роста фибробласта. За счет отсутствия в лоскутах кожи трансгенных свиней линии GAL-KO пирогенных веществ не вызывается повышение температуры тела и других нежелательных реакций организма больного. Это касается биологически активных веществ экзогенного (бактериального и вирусного), а также эндогенного (клеточно-тканевого) происхождения.
Не происходит активной формы отторжения (HAR) покрытия за счет действия активных лимфоцитов из-за сосудистой закупорки и ишемического некроза (при аллокоже или ксенокоже) и покрытие прослужит дольше (до 14 дней). Это объясняется тем, что трансгенные свиньи линии GAL-KO не имеют генов 1,3-a-galactosyltransferase (a-gal), кодирующихфермент, ответственный за выработку на поверхности клеток свиньи углеводных антигенов, приводящих к гиперактивному отторжению.
Ускоряется заживление в процессе эпитализации в результате анатомической и физиологической совместимости кожи трансгенных свиней линии GAL-KO с человеческим организмом (гистосовместимость) при биологической безопасности используемого материала, что благоприятно влияет на метаболические процессы в ране за счет следующего:
- жидкость в достаточном количестве просачивается из раны для предотвращения образования экссудата;
- происходит хороший газообмен (газопроницаемость) раны с внешней средой, что обеспечивает высокую скорость транспорта кислорода.
При наложении временного покрытия в течение 24 часов после ожоговой травмы на срок 14 дней создаются условия реваскуляризации со стороны раны. Происходит образование новых сосудов аутокожи путем разрастания и ветвления старых сосудов с учетом отсутствия сенсибилизации (фиг. 2, 3). При этом известно, что продолжительность приживления чужеродных тканей, выдержанных при сверхнизких температурах (минус 68-70°С) [Музыка В. И., 1970; Атясов Н.И., 1985] и охлажденных при 180-190°С 6-8 ч увеличивается (до 14 дней)
Согласно изобретению, биологическое раневое покрытие (кожа трансгенной свиньи линии GAL-KO) при наложении на рану временно прилипает, но никогда не васкуляризируется по-настоящему. Глубокие ожоговые раны, с повреждением дермы заживают путем эпителизации, но это более затяжной процесс. Эпителизация начинается с первого дня образования раны, но усиливается на 4-6 день. Начинается она с края раневой поверхности, постепенно направляясь к центру. Заживление проходит в два этапа - миграция клеток эпителия и их пролиферация. Клетки базального слоя начинают интенсивно двигаться (мигрировать) и, начиная от края раны и до центра, формировать мембрану и заполнять образовавшийся дефект. Через два - три дня переместившиеся клетки базального слоя эпидермиса начинают усиленно делиться. Этот процесс идет до той поры, пока дерма полностью не восстановится. В новых клетках процесс ороговения вначале идет медленно. После завершения эпителизации молодая грануляционная ткань начинает превращаться в соединительнотканный рубец, который раневое покрытие оберегает от механического воздействия.
Наложение временного покрытия из кожи трансгенных свиней линии GAL-KO по предлагаемому способу лечения ожоговых ран способствует легкому, безболезненному ее удалению при перевязке без повреждения сформировавшегося на поверхности раны регенерировавшего слоя неоэпителия.
Таким образом, в известном уровне техники (применение медицинских изделий из материала, созданного на основе кожи трансгенных свиней) отсутствуют сведения, в которых раскрыта вся совокупность признаков относительно данного изобретения.
Совокупность известных и новых признаков позволяет получить новый технический результат - сокращение сроков заживления ожоговых ран кожи субдермального уровня при одновременной биологической безопасности используемого материала.
Изобретение поясняется графическими изображениями.
На фиг. 1 изображено кольцо для фиксации ожоговой раны животного.
На фиг. 2 представлено изображение фибробластов грануляционной ткани.
На фиг. 3 изображены коллагеновые волокна по Ван-Гизону.
Изобретение подтверждается следующим конкретным примером.
Ткани (лоскуты кожи) выделяют из трансгенных свиней, не содержащих альфа-1,3-галактозу. В качестве биологического раневого покрытия используют лоскуты кожи трансгенных свиней линии GAL-KO.
Помещают их в искусственную питательную среду для поддержания исходных естественных условий. Среда состоит из определенного соотношения аминокислот, витаминов, солей, глюкозы, гормонов, поддерживает буферную систему и осмотическое давление. Используют среду DMEM (
Modified 
Medium), представляющую собой модификацию среды ВМЕ (Basal Medium Eagle) или среду F-12.
Обеспечивают герметизацию лоскутов кожи, помещают в холодильную камеру при температуре минус 68°С до использования в качестве раневого покрытия. Срок хранения не более 24 мес.
Осуществляют стерилизацию γ-излучением дозой 15 кГр.
До наложения раневое покрытие охлаждают при минус 190°С в течение 7 ч.
Подготовленное таким образом раневое покрытие доставляют в клинику в герметичном термоконтейнере.
После ожоговой травмы у больного проводят хирургическую обработку раны -очищение от поврежденных тканей и серозно-гнойного отделяемого с помощью тампонов, смоченных антисептическими растворами (например, раствором хлоргексидина).
На подготовленную таким образом раневую поверхность ожогов IIIA степени накладывали на 14 дней биологическое раневое покрытие.
В течение данного периода пациента доставляют в специализированные ожоговые центры или в общехирургические стационары. Отсутствие васкуляризации между поверхностью раны и раневым покрытием способствует легкому, безболезненному ее удалению без повреждения сформировавшегося на поверхности раны регенерировавшего слоя неоэпителия.
Изобретение подтверждается также конкретным примером при стерилизации β-излученим дозой от 15 кГр при соблюдении вышеприведенных параметров способа.
Примеры испытаний.
Для подтверждения эффективности предлагаемого способа лечения ожоговых ран IIIA степени был проведен анализ результатов использования раневого покрытия из кожи трансгенной свиньи линии GAL-KO в течение 14 дней.
Пример 1.
Для подтверждения эффективности предлагаемого оперативного способа лечения ожоговых ран IIIA степени были проведены испытания в Государственном бюджетном учреждении здравоохранения г. Москвы «Научно-исследовательский институт скорой помощи им. Н.В. Склифосовского Департамента здравоохранения г. Москвы» (ГБУЗ «НИИ СП им. Н.В. Склифосовского ДЗМ»).
Испытания проведены с использованием раневого покрытия на основе кожи трансгенных свиней линии GAL-KO для медицинских изделий, применяемых при лечении ожоговых ран.
Цель испытания: токсикологические исследования раневого покрытия при лечении ожоговых ран.
Описание материала:
Раневое покрытие представляет собой кожные лоскуты трансгенных свиней линии GAL-KO, не содержащие альфа-1,3-галактозу, размером 4,0-4,5 на 5,0-5,5 см, толщиной до 1,0 мм, заготовленные в условиях стерильной операционной с соблюдением правил асептики и антисептики. До проведения испытаний материал хранился в течении 8 часов при сверхнизких температурах (минус 190°С) в среде содержащей 10% ДМСО.
а) Экспериментальные объекты - диплоидные фибробласты кожи человека.
Исследование токсичности in vitro проводили с диплоидными фибробластами кожи человека. Для этого материал помещали в лунки, содержавшие суспензию клеток, и отмечали время адгезии и распластывания клеток, а через трое суток - количество живых клеток. В присутствии образцов раневого покрытия на основе кожи трансгенных свиней линии GAL-KO после криохранения в клетках культуры фибробластов кожи человека не наблюдали признаков токсичности в течение всего периода наблюдения (трое суток): клетки сохранялись прозрачными, были четко очерчены, имели характерную морфологию, не содержали включений. Образцы раневого покрытия, полученного из кожи трансгенных свиней линии GAL-KO, не вызывали снижение индекса пролиферации.
б) Экспериментальные животные - мыши.
Исследование токсичности in vivo оценивали по выживаемости животных после применения раневого покрытия с учетом распространенных клинических признаков (ГОСТ РИСО 10993-11-2009). При исследовании in vivo из 24 прооперированных животных, которым трансплантировали раневое покрытие на основе кожи трансгенных свиней линии GAL-KO, выжили 23. При этом мышь погибла в результате массивной кровопотери. У выживших животных на протяжении всего исследования не отмечено конвульсий, нарушений двигательной активности, дыхания, мышечного тонуса, деятельности желудочно-кишечного тракта.
На основании оценки, проведенной in vitro, раневое покрытие на основе кожи трансгенных свиней линии GAL-KO является нетоксичным. По данным исследования in vivo каких либо токсических реакций у мышей, которым применяли раневое покрытие на основе кожи трансгенных свиней линии GAL-KO, не отмечено.
Пример 2.
Для подтверждения эффективности предлагаемого способа оперативного лечения ожоговых ран IIIA степени были проведены испытания в Государственном бюджетном учреждении здравоохранения г. Москвы «Научно-исследовательский институт скорой помощи им. Н.В. Склифосовского Департамента здравоохранения г. Москвы» (ГБУЗ «НИИ СП им. Н.В. Склифосовского ДЗМ»).
Цель испытания: исследование раневого покрытия на отсутствие иммуногенности.
Описание материала.
Раневое покрытие представляет собой кожные лоскуты трансгенных свиней линии GAL-KO, не содержащие альфа-1,3-галактозу, размером 4,0-4,5 на 5,0-5,5 см, толщиной до 1,0 мм, заготовленные в условиях стерильной операционной с соблюдением правил асептики и антисептики. До проведения испытаний раневое покрытие, стерилизованное γ-излучением дозой 15 кГр, выдержано в течение 8 час при сверхнизкой температуре минус 190°С в среде, содержащей 10% ДМСО.
Экспериментальные животные - мыши.
Иммуногенность раневого покрытия оценивали по развитию реакции отторжения покрытия, по выраженности воспалительной реакции в ране и окружающих мягких тканях и характеру клеточной инфильтрации на основании данных гистологического исследования мышей.
В опытной группе мышей морфологическая картина соответствовала нормальному течению раневого процесса. Особо отметим, что инфильтрации клетками воспаления раневого покрытия на основе кожи трансгенных свиней линии GAL-KO не наблюдалось. На 7 сутки на материал на основе кожи трансгенных свиней линии GAL-KO морфологических признаков развития реакции отторжения у мышей не выявлено. К 14 суткам у животных опытной группы отмечалась инфильтрация тканей иммунокомпетентными клетками, что отражало развитие иммунного воспаления на чужеродную ткань. У животных опытной группы интенсивность восстановления целостности кожных покровов на 21 сутки была несколько снижена, что выражалось в незавершенности процесса эпителизации у половины животных в группе. Инфильтрация тканей свидетельствовала о продолжении реакции отторжения раневого покрытия.
Анализ результатов исследования показал, что при применении раневого покрытия на основе кожи трансгенных свиней линии GAL-KO признаки развития реакции отторжения отмечены только начиная с 14 суток послеоперационного периода.
Раневое покрытие на основе кожи трансгенных свиней линии GAL-KO является сл абоиммуногенным.
Пример 3.
Цель испытания: изучение эффективности ускорения заживления кожных ран большого объема и глубины.
Испытания проведены с использованием экспериментальной модели полнослойной плоскостной раны (Л.И. Слуцкий, 1969, A.B. Shekhteretal., 2005).
Экспериментальные животные - крысы.
Эффективность заживления оценивалась количественно по 4-х бальной системе по следующим трем признакам:
- наличие воспалительного процесса (содержание нейтрофильных лейкоцитов, отек ткани, микроциркуляторные нарушения);
- общее количество сосудов в ткани;
- зрелость грануляционной ткани (количество фибробластов, их соотношение с новообразованными коллагеновыми волоконами).
При величине балла, равной 0, оценивают отсутствие данного (каждого) признака, по величине балла 1 оценивают как очень слабую выраженность, по величине балла 2 -как умеренную, по величине балла 3 - как сильную, а по величине балла 4 - максимальную выраженность признака в образце материала.
Испытания по оценке эффективности заживления кожных ран выполнены на 80 белых лабораторных крысах с массой тела 120-140 г.
Животных наркотизировали внутримышечным введением раствора золетила (Zoletil 100, Virbac S.A., Italia) из расчета 6 мг действующего вещества на кг массы тела животного в комбинации с рометаром (Rometar, Spofa, Praha) из расчета 0,5 мл на кг массы тела. На предварительно депилированной коже спины в межлопаточной области иссекали концентрический (диаметром 8-10 мм) лоскут кожи с подкожной клетчаткой вплоть до собственной фасции. В образовавшийся дефект вводили муфтообразное кольцо (фиг. 1). Таким образом, у всех животных получали раны стандартного размера, площадью 300 мм2. Затем на рану накладывали раневое покрытие.
В качестве раневого покрытия использовали отсепарированную тонким слоем кожу свиней линии GAL-KO, в качестве сравнительного контроля - вариант аллогенной кожи в качестве положительного контроля и вариант с нелеченной раной в качестве отрицательного контроля.
Результат испытания оценивали на 4 сутки, что соответствует времени начала эпителизации в норме.
После 4 суток изымали образец ткани дна раны, выдерживали в 10% формалине, заливали парафином, срезы глубиной 4-5 мкм окрашивали гематоксилином и эозином, пикрофуксином по Ван-Гизону на коллагеновые волокна для дальнейшего проведения микроскопии и фотофиксации. Препараты с образцами просматривались на микроскопе CarlZeiss и фотографировались с помощью видеокамеры.
Морфометрически по компьютерной программе оценивалась толщина слоя грануляционной ткани в образце.
1) Результат испытания без применения раневого покрытия (нелеченная рана -отрицательный контроль).
Раневая поверхность покрыта относительно тонким фибринозно-лейкоцитарным слоем. Он состоит из сплетения тонких фибриновых нитей и нейтрофильных лейкоцитов с немногочисленными макрофагами. Под ним располагается сравнительно толстый слой созревающей грануляционной ткани, в которой видны фрагменты оставшейся жировой ткани.
Грануляционная ткань состоит из многочисленных сосудов, которые местами формируют вертикальные петли, и многочисленных веретеновидных фибробластов (фиг. 2). Фибробласты ориентируются горизонтально к поверхности, хотя часть их имеет неопределенное расположение. Воспалительные процессы в грануляционной ткани минимальны: отек отсутствует, нейтрофильная инфильтрация слабая, появляются макрофаги и лимфоциты. Сосуды представлены в основном капиллярами, реже артериалами и венулами, еще реже мелкими артериями мышечного типа. Коллагеновые волокна фуксинофильны по Ван-Гизону, что свидетельствует об их зрелости (фиг. 3).
В глубокой части грануляционной ткани количество сосудов и клеток уменьшено, а количество коллагеновых волокон увеличено. Это свидетельствует о начале фиброзирования глубокой части грануляционной ткани.
Оценка эффективности заживления по 4-х бальной системе: воспаление - 2 балла, содержание сосудов - 4 балла, зрелость грануляционной ткани - 3 балла.
2) Результат испытания с использованием раневого покрытия на основе кожи свиней линии GAL-KO.
Испытания проведены с использованием раневого покрытия, представляющего собой кожные лоскуты трансгенных свиней линии GAL-KO, не содержащие альфа-1,3-галактозу. До проведения испытаний раневое покрытие, стерилизованное γ-излучением дозой 15 кГр, выдержано в течение 7-8 час при сверхнизкой температуре минус 190°С в среде, содержащей 10% ДМСО.
Гистологически отмечается, что покрытие состояло из поверхностного слоя кожи - эпидермиса и сосочкового слой дермы. Фибринозно-лейкоцитарный слой относительно толстый, без признаков инфицирования. Глубокая часть этого слоя состоит из уплотненного фибрина. Ткань умеренно зрелая, богата сосудами, часть которых приобретает вертикальную ориентацию. Среди веретеновидных фибробластов остаются еще нейтрофильные лейкоциты, макрофаги, лимфоциты и плазматические клетки. Коллагеновые волокна тонкие и не всегда фуксинофильны, что указывает на их незрелость.
При использовании образцов, состоящих из нижних слоев дермы, в препарате оставался виден имплантат (дерма, покрывающая рану). Структура коллагеновых волокон практически не нарушена. При окраске по Ван-Гизону они сохраняют отчетливую фуксинофилию. Между имплантатом и дефектом кожи располагается сравнительно тонкий слой фибринозно - лейкоцитарного экссудата, причем лейкоциты на небольшое расстояние инфильтрирует имплантированную дерму. Глубже экссудата располагается грануляционная ткань с разной степенью созревания.
Местами ткань зрелая с большим количеством фуксинофильных коллагеновых волокон, но сохраняется увеличенное количество лимфоцитов и макрофагов. Сосуды многочисленны, часть из них сохраняют и имеют вертикальную ориентацию. В других участках отмечается значительно повышенное содержание макрофагов, лимфоцитов и плазматических клеток.
Все это свидетельствует о том, что нет принципиальных различий в заживлении ран под кожей свиньи линии GAL-KO, срезанной на различной толщине.
Оценка эффективности заживления по 4-х бальной системе: воспаление - 1-2 балла, содержание сосудов 2-3 балла, зрелость грануляционной ткани - 2-3 балла.
3) Результат испытания с использованием раневого покрытия на основе аллогенной крысиной кожи.
Раневая поверхность представлена относительно толстым фибринозно- лейкоцитарным слоем. Грануляционная ткань также сравнительно тонкая и в основном незрелая, хотя в отдельных участках она созревает, и там увеличивается количество коллагеновых волокон и вертикальных сосудов. На некоторых участках фибринозно-лейкоцитарный слой покрыт трансплантированной крысиной кожей, коллагеновые волокна которой остаются фуксинофильны.
В одном случае наблюдается различная структура раневых тканей. В одних участках под фибринозно-лейкоцитарном слоем грануляционная ткань практически отсутствует, и экссудат непосредственно соприкасается с жировой клетчаткой. В других участках слой грануляционной ткани состоит из относительно незрелой грануляционной ткани с малым количеством коллагеновых волокон, но многочисленными фибробластами и сосудами, без вертикальной ориентации. Коллагеновые волокна очень тонкие и в основном не фуксинофильные.
Оценка эффективности заживления по 4-х бальной системе: воспаление 1-2 балла, содержание сосудов - 2 балла, зрелость грануляционной ткани - 1 балл.
В ходе проведенных исследований, было выявлено на основе контрольных сравнений, что кожа свиньи линии GAL-KO является эффективным раневым покрытием при заживлении кожных ран вследствие полученных допустимых значений 4-х бальной системы по признакам - наличия воспалительного процесса, общего количества сосудов и зрелости грануляционной ткани.
Пример 4.
Для подтверждения эффективности предлагаемого способа оперативного лечения ожоговых ран IIIA степени были проведены испытания в Автономной некоммерческой организации «Институт медико-биологических исследований и технологий» (АНО «ИМБИИТ).
Испытания проведены с использованием раневого покрытия на основе кожи трансгенных свиней линии GAL-KO для медицинских изделий, применяемых при лечении ожоговых ран.
Цель испытания: проверка показателей апирогенности образцов раневого покрытия. Касается биологически активных веществ экзогенного (бактериального и вирусного), а также эндогенного (клеточно-тканевого) происхождения, которые обладают свойством вызывать перестройку уровня регуляции температурного гомеостаза, что обуславливает развитие лихорадки и повышение температуры тела.
Испытания проводились при следующих климатических условиях: температура воздуха плюс 25°С; относительная влажность воздуха 54%; атмосферное давление 749 мм.рт.ст.
Нормативные документы:
ГОСТ Р 51148-98. Государственный стандарт Российской Федерации. «Изделия медицинские. Требования к образцам и документации, представляемым на токсикологические, санитарно-химические испытания, испытания на стерильность и пирогенность».
Описание материала:
Раневое покрытие представляет собой кожные лоскуты трансгенных свиней линии GAL-KO, не содержащие альфа-1,3-галактозу, размером 4,0-4,5 на 5,0-5,5 см, толщиной до 1,0 мм, заготовленные в условиях стерильной операционной с соблюдением правил асептики и антисептики. До проведения испытаний материал хранился в течении 7 часов при сверхнизких температурах (минус 190°С) в среде содержащей 10% ДМСО.
Экспериментальные животные - мыши.
Выполнены эксперименты на 5 белых лабораторных мышах.
В соответствии с Европейской конвенцией (Страсбург, 1986) и Хельсинкской декларацией Всемирной медицинской ассоциации о гуманном обращении с животными (2000), а также с требованиями приказа №267 МЗ РФ от 19.06.2003 «Правила по обращению, содержанию, обезболиванию и умерщвлению экспериментальных животных» животные содержались в стандартных условиях вивария, по 1 особи в клетке, получали кормление комплексным гранулированным лабораторным кормом при постоянном доступе к воде.
В качестве экспериментальной модели использована модель полнослойной плоскостной раны (Л.И. Слуцкий, 1969, A.B. Shekhter et al., 2005). Животных наркотизировали внутримышечным введением раствора золетила с рометаром.
В течение 8 суток животным измеряли температуру тела. Предельно допустимые значения температуры животных: 37,5-39,5°С.
В ходе испытания температура крыс варьировалась от плюс 37,5 до плюс 39,2°С.
Результаты испытания.
Объекты испытаний не являются пирогенными, что соответствует требованиям технического задания и ГОСТ Р 51148-98.
Учитывая выявленную в ходе экспериментов возможность получения стерильных опытных образцов раневого покрытия, а также принадлежность разрабатываемого медицинского изделия по степени потенциального риска к классу 2а, проведение исследования по оценке апирогенности не представляется необходимым.
Экспериментально установлено, что лоскуты кожи трансгенной свиньи линии GAL-KO временно прилипают во второй фазе, но никогда не васкуляризируются по-настоящему, т.е. после наложения покрытия на иссеченную рану происходит образование новых сосудов путем разрастания и ветвления старых сосудов. Новые сосуды аутокожи экспериментального животного не внедряются в материал покрытия и не происходит сцепление с кожей трансгенной свиньи.
Выводы.
Таким образом, применение биологического покрытия в виде лоскутов кожи трансгенной свиньи линии GAL-KO на срок до 14 дней после получения травмы при последующем лечении известными методами в условиях специализированных ожоговых центров и в общехирургических стационарах имеет следующие преимущества:
- увеличивается в последующем средняя приживляемость аутотрансплантатов на 10-20%;
- нормализуется развитие грануляционной ткани и активизирование процесса краевой эпителизации;
- отсутствует аллергическое действие;
- не оказывается отрицательное влияние на реакцию тканей (биологическая безопасность);
- обеспечивается более быстрая по сравнению с другими покрытиями эпителизация ран.
Изобретение позволяет обеспечить улучшение и сокращение сроков заживления ран путем обеспечения четырех основных важных характеристик покрытия ожоговой раны: просачиваемость пара, газа, прилипания, бактериального торможения и васкуляризации при биологической безопасности и создает условия подготовки ожоговой раны к аутотрансплантации. Материалы для покрытия ран, следовательно, должны быть заменены на кожу пациента, либо должны быть использованы методы по пересадке кожи.
Claims (1)
- Способ оперативного лечения ожоговых ран, включающий хирургическую обработку раны и временное наложение биологического раневого покрытия с последующим проведением аутотрансплантации, отличающийся тем, что в качестве биологического раневого покрытия используют лоскуты кожи трансгенных свиней линии GAL-KO, не содержащие альфа-1,3-галактозу, обеспечивающие отсутствие иммунной реакции отторжения раневого покрытия, при этом покрытие, выдержанное при температуре минус 65-70°С и стерилизованное γ- или β-излучением дозой от 12 до 18 кГр, дополнительно охлаждают при 180-190°С 6-8 ч и накладывают на рану на срок не более 14 дней.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2018108163A RU2673806C1 (ru) | 2018-03-06 | 2018-03-06 | Способ оперативного лечения ожоговых ран |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2018108163A RU2673806C1 (ru) | 2018-03-06 | 2018-03-06 | Способ оперативного лечения ожоговых ран |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2673806C1 true RU2673806C1 (ru) | 2018-11-30 |
Family
ID=64603647
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2018108163A RU2673806C1 (ru) | 2018-03-06 | 2018-03-06 | Способ оперативного лечения ожоговых ран |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2673806C1 (ru) |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2455997C2 (ru) * | 2010-08-12 | 2012-07-20 | Государственное учреждение здравоохранения Научно-исследовательский институт скорой помощи имени Н.В. Склифосовского Департамента здравоохранения | Способ лечения инфицированных ожоговых ран iiia степени |
| CN103356705B (zh) * | 2005-03-31 | 2015-09-30 | 斯丹姆涅恩有限公司 | 制备用以治疗烧伤伤口的药物的方法 |
-
2018
- 2018-03-06 RU RU2018108163A patent/RU2673806C1/ru active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103356705B (zh) * | 2005-03-31 | 2015-09-30 | 斯丹姆涅恩有限公司 | 制备用以治疗烧伤伤口的药物的方法 |
| RU2455997C2 (ru) * | 2010-08-12 | 2012-07-20 | Государственное учреждение здравоохранения Научно-исследовательский институт скорой помощи имени Н.В. Склифосовского Департамента здравоохранения | Способ лечения инфицированных ожоговых ран iiia степени |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Зиновьева Н.А. и др. Использование трансгенных GAL-KO свиней в ксенотрансплантации: проблемы и перспективы Сельскохозяйственная биология, no. 2, 2014, pp. 42-49. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP4348528B2 (ja) | 組織表面用羊膜カバーおよび膜の固定を容易にする装置 | |
| Supp et al. | Human dermal microvascular endothelial cells form vascular analogs in cultured skin substitutes after grafting to athymic mice | |
| ES2326873T3 (es) | Dispositivo quirurgico para tratamiento o analisis de la piel. | |
| EP2211922B1 (en) | Anisotropic implant and its method of production | |
| JP6469655B2 (ja) | 代用皮膚および毛包新生の方法 | |
| US20080113007A1 (en) | Sheet-Shaped Composition Utilizing Amnion and Method of Preparing the Same | |
| CN1638822A (zh) | 用于治疗皮肤失调的含有未分化的胎儿细胞的组合物 | |
| CN1185019C (zh) | 应用中和脱乙酰壳多糖海绵或中和脱乙酰壳多糖/胶原混合海绵的皮肤支架 | |
| BR102019014873A2 (pt) | Processo de obtenção de um substituto dérmico funcional a partir de membrana amniótica descelularizada proveniente de placenta em combinação com queratinócitos e seu uso como agente de regeneração tissular de pele | |
| CN100368534C (zh) | 生物衍生羊膜、复合生物衍生羊膜及其制备方法 | |
| Boyce | Methods for the Serum-Free Culture of Keratinocytes and Transplantation of Collagen—GAG-Based Skin Substitutes | |
| JP2019529015A (ja) | 生着率を増加させた移植用真皮層及びその製造方法 | |
| JP2010500335A (ja) | 皮膚創傷を治療する方法 | |
| US20030202965A1 (en) | Methods and compositions for the preparation of cell transplants | |
| RU2673806C1 (ru) | Способ оперативного лечения ожоговых ран | |
| CN1297324C (zh) | 组织工程自体复合皮肤及其制备方法 | |
| RU2372922C1 (ru) | Способ лечения глубокого ожога кожи | |
| Kierski et al. | Novel extracellular matrix wound dressing shows increased epithelialization of full-thickness skin wounds in dogs | |
| RU2373944C1 (ru) | Способ лечения ожоговой раны | |
| WO2023039833A1 (zh) | 胶原蛋白颗粒于促进毛囊生成或血管生成的用途 | |
| RU2385744C1 (ru) | Способ лечения глубоких ран | |
| TWI791290B (zh) | 膠原蛋白顆粒於促進毛囊生成或血管生成之用途 | |
| Ramesh | DEVELOPMENT AND OPTIMIZATION OF A BIOCOMPATIBLE HYDROGEL FOR SKIN REGENERATION COMPOSITES. | |
| RU2342163C1 (ru) | Средство для заместительной клеточной терапии | |
| US20170080127A1 (en) | Biologically active graft for skin replacement therapy |