JPS58501817A - 細胞を接種した繊維格子 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

繊維格子を含む細胞接種法 政府の支持 ここに記、哉する発明は、ナ／ヨナル・インスチチューツ・オブｅヘルス（Ｎａ ＴＪｌｏｎａｉ　工ｒ＋冗ｊｔｕ−，ｅ、；　ａ：Ｈｓａｌ九ｈ）からの許可ン こより全一、−、また：ま一部分が支持てれている。 技術分野 本発明は、医薬、外科、生′吻学、生化学で５よび十すマ皮膚への損傷またはそ の損失）ま、極端な痛み、奇形、断簡、および死を生ずる、非常（（重大な傷で ある二とがある。ひどく火傷をした人の薬剤；３よび外科の処置は、非常に時間 を消費しかつ費用が）・かり、複雑な麦啜と高度に熟練した人員を必要とする。 広範・用の帝痕および傷の拘福は、生理学的、感情的および社会的な損傷）て導 びくことかある。 皮膚の損失または傷）ま、火または熱湯により、−幾娘的または化学的ケ１＆゛ τより、あるいパま皮膚の病変；Ｃより、最も普通に引き起こされる。火傷、ま 皮膚の最も普通の原因であるので、火傷；でついてここで述べる。しかしないら 、この分野の専門家にとって起こりうる小さい例外を除いて何らかの布類の湯ま たは病気（・Ｃより生イる皮膚の損失または損傷の処置を本発明により実癩でセ ることを理解すべきで・ある。 火・し、傷、病気、６Ｋ）い５主・２１′イまたは４−自ノ）全部上た：土一部 外の除去をソげた人ｊＪＩＩ上たは動物そ二こで「患番」と呼−・。組織が失、 ・月９・し、損′易され、病気となり、あるいは外相的）て除去された体の区域 な、ここで「創傷」または［−創偏床」と吋、；、。ｊａｉｌ胞をノリ入れる無 傷の皮膚または器官？）区域、細胞張付あろい；文−１（１胞をパｌり入れまた は他の方力で１ｆｖ、ろ（＋１１条培養物を、ここで［供与点−（とい−）。（ ５，ＩＩ　Ｉ易１ニの１ｆｉ１・＋Ｐ２の成長で１つ再生さ杆ろ徂哉を、こ二で 「新春皮」、［新表皮］−！：た・は「新器官−１の組織上い旧常の、損傷を受 、すなし・皮膚１主、いくつかの％す・ら嘴ＩＪＸ２されて（・珊、Ｃ１’：］ 、タ１層、通常上皮と呼、イねる、はいくつかの種類の十皮−ｔｉｔ胞科ら構成 さねろ　そＪＦ：’ｆ、神経１）フィブリルを含有す２）が、血管を含有しない 。上皮の最外層、通常角質層ｓｔｒａｔｕｍ　ｃｏｒｒｉｅｕｍと呼ば＋Ｌる、 はＡ″ｌｉ！Ｉ的は増殖速度が低い扁平（すなわち、比較的平らな）細胞からす よＺ５０これらの−、佃、狙・、主摩耗により徐々に脱ぎ落ち下層からの細胞と 置喚さ才する。次ぎの層は通常淡明層旧汀ａ　ｊｕｍ　１．ｕｃ　ｉ、ｄｕｍと 呼ばれ、これはある区域賃おいて存在し７ないことがある。扁平細胞の最下層は 、通常顆泣５ｔｒａｔ、℃〕ｒ、）ｇｒａｎｕ　ｌｏｓｕｍ　と呼ばれる。そ才 １より下に２層の非扁＋−補）旭すなわちマルビ゛ギーｊｇ（３壮ｒａｔｕ＋ｎ 　ｍｌｐｉｇｈｉｉ）（また粉夜網ｒｅ　ｔ＋、’、　ｍｕｃ　０８１１ｍ）お よび芽！＠　ｓｔｒａｔｕｍ　ｇｅｒｍｌ−ｎａ、　ｔ、ｉ、Ｖ’ＬＨ１１が存 在する。 表、ｉのＪ−電（真皮：ｒ）　、ｆ＝を近）　＋７Ｚ　ｊたはそＪ）付近く・二 でｒイ■三−４−るＦ七１ｊ＠は、しばしば隻底紬弛と呼：だれる　これりは” ７タ直速度カー比較的高く、そして池・９清底細嘱ヤ生（Ｌることがあり、ある いは引竺−′売□、・て増殖しない成軌−Ｆ皮邪胞ヤ生じうる。上皮細胞：まケ ラチン、すなわち７口１胞壁中、て分泌されあるいは含有され５るタン・？り質 を産生するうこのタンパク質）ま比較的昭１く、皮膚に靭・注と強さを付与する 。 上皮の下には、真皮と呼ばねる。ｆｌｌｌ胞および結合組織の層が存在するっこ の層は間葉を田；向からｆＨす、線維芽細Ｉ包と血管および脈管の細胞を含む。 毛包、脂肪腺および汗腺は真皮から皮膚表面へ延びろ。このような腺および毛包 は、上皮でライニングされている。 間葉細Ｙ＠：まコラーゲンずなわら線百ｔのタンパク質を産生じかつ分泌する。 このようなコラーゲン：まこ１胞を取り囲みかつ含有する構造マトリックスを形 成し、これは組織の強さを増加する。 真皮との間の界面は、平らであるよりはむしろ、折りたたまれ、小突起状ケなし ている。したがって、比較的平らな火陥は上皮の全部と多数り位置における真皮 の一部分を除去するが、損傷区域５二お（・て散在する無傷の上皮細胞の群を残 す。多少深い火傷は上皮細胞の表面のすべて（および同様に真皮細胞の一部分） を除去するカー、毛包、脂肪腺および汗腺をライニングする上皮細胞を破壊する 。これが起こった場合、毛包−粘１び腺からの」１皮細胞は創傷より上方におい て増殖しかつ移動することが不規則′７：、’Ｂ）りが−）ｔく、ヒして創傷１ 月、しυな冶、ｐヶ妨害する：とかルベ）１、・キ１）−リｙ）火傷の゛、・ず れも１、第２度の火傷と分類される。上皮と真皮の全厚さを破壊する火傷は、毛 むＬ（・ＳよＣ腺をライニング−する−１−皮を含−′７、［一完全な〃ざの− １−４−なわが・：［゛５度の火・７秒、として分類さ、ｌする〔２〕。 火傷の処置 広範な皮＠　、ｙ）損失または傷な受けた患者、′！、、感染おｔび体夜の扉し 度の損失：・二よ１つ、直ち（・こ危険；′こさらさＪ′Ｆるっこれらの要求の 両苫を解決するため１゛（は、ひどい皮膚のＭｌｌｌ易はある種の膜で速やか尾 閉じなくてはならない。この要求を満たすために便々の弐）くがなさ＋１てきた 。パヒ。 ルスまヲ５−は動力の皮膚に−）℃・ては、西暦紀元前約１５０口年：ｒｃまで さかのほる二とかて・きる。特別：（連＠　！ｌｉｉさＪしたブタの皮膚１４１ 、商業的（・こ入手薄易であるため、今日々［（１医にｔりしばしば使用されて いる。これらの異陣惇ＩＴｉ、；”＋１（すなわち、人間以外り源の膜）をｆｉ ｌｌ隔の」−：・Ｃ約ろ〜５日’＋４５　（６第６うとどかできる。しかしなが ら、それは患者（・こよ１ツ拒否され、開いたｉ′１ｉ１１［易っ・残る。した が０て、そｊｔｉま数日後ｌｌＴｌ常１滲去または交々され、患者の皮膚がぽっ くり冶ゆする・１１の間；（二合わぜの段別をする〔５〕っ同干移殖片、Ｗ−Ｆ ’＋ｊｌ埴片とも呼ばれる、は人間の死体つ・１）１（ド、二とかできξ）３、 しがしＩよがら、ぞ柱は供袷゛・二欠乏し、そして醍種移値片と同・・り：じ、 短期、゛１後・１＠常拒絶さねる。免疫抑制・Ｉｒ物を使用して、異種移植１１ また（工同重移丁直昌−の１巨、絶を数少５、こ才ｃ：二ｊ、りぞれらカ・ｔｌ ｌ易をお村う二とｎ・てざる１す１間を別１にする二とができユし。しり・しな がら１、免疫抑制薬物の使用は患者のへ染（（ぺする発病性を増加ずろ〔４〕。 自己ｌ多＋直Ｊ」は、患者υ、Ｊｊ′易？・ジげない区域あるいは可能ならば患 者の一卵性双子がち除去した（　ｆｆ　ｉＱり入れた″）皮膚の部分的厚さの断 片である。異腫移凍片または同陣移偵片にイυず、自、２移植片：よ患者Ｙこよ り拒絶さ第１ず、七の代わり、創・劾へ永久的・（付着し、増殖ずろようになり これにより創烏を閉じる上皮およびＡ皮の新らしい層を提供する〔５〕 取り入れ（ｈａ、Ｉ”Ｊｅｓｊｌｎｇ）　手術は、皮膚切余器と呼ばれる器はを 用いて通常実施される。皮膚切除署は、振動する刃と、カットの深さオＳよび１ −を調整する調節装置を含有ずろ〔６〕。角質層Ｓ　ｔｒａｔｕｌＴＩ　ＣＯｒ ｌｌｅＬ１ｍ中の冊］胞は通常急速：ζ再生しないので、事実上すべての・伎り 入れ手術は顆ｋ　Ｓ　ｔ　ｒ　ａも１１：＋Ｉｇｒａｎｕ］、Ｏ８ｕｍから細胞 を除去する。皮膚・つ小炎起伏の・性質のため、はとんどの取り入れ手術はまｆ コマルビ゛キ一層ｓｊｒａｔｕｍ　！１〕ａｌｐｉｇｈｌｉ−Ｆ６よび芽層５ｔ ｒａ、ｔｕｍ　ｇｅｒｍｌｎａｔｉＶＬｌ、Ｉｎから細胞ならびに有意な間の真 皮を除去する。 取り入れ手術：ま痛く、侵略的プロセスであ１）、傷跡を生ずるゆしたかつて、 それは最小に保つべきて飄る。さら（こ、ひどい傷を受けた患者は体のほと・℃ と全部上の皮膚を失なうかあるいは損潟することがある。こ才１は自己６ 移植）ご有効、”ｆ、健東−無楊の皮ｒイをきつ？Ｌ＜列１：恨しうる。 これが起こったとさ、異種移植片または同種移植片を創傷の表面全体に配置して 感染と脱水を抑制する。それらの移植Ｈ＋ｉ、自己移植片が入手できるようにな る＋（つれて、徐々に交換する。自己移植片は、供与点から反復して双り入れる ことができろ。このような手術において、異種移植片または同種移植片のある区 域を除去しかつ廃棄し、自己移植片と交換する。各供与点は、他の自己移植片を それから取る前に、治・少させなくてはならない。 これには実質的な遅延を要し、そして患者の回復を延長する。 自己移植法の１つの重要な変法（でおいて、あるパターンのスリットを取り入れ た皮膚の片において切る。これにより皮膚を伸長して網にし、これによりその皮 膚片によりおおうことができる創傷の面積を増加する〔７〕。 移種後、オートローガス細暉は移動し、増殖し、スリットで生じたすき間を満た す。究極的に、自己移植片の助けにより、全創傷区域は再生した皮膚の層により おおわれろうこの層は、種々の問題、たとえば、肥大した傷跡不快、および収縮 不能、にされされる。 二重層の膜 出願人は、皮膚の損失または損傷の処置に有用である合成多層＠（以後、二層の 膜）の共同発明者（他の人を含む）である。米国持許第４．０６Ｃ１，（３８１ 号（Ｙａｎｎａｓｅｔａｔ　、　１９７７　）および米国博許第４．２８　ＣＩ 、９５４号７　特表昭５８−５８−５０１８１７ （４）（、ｎ、〔そ↑、ａ４　、ｌ　９８１　）、それら・υ教示を引用乙／二 よってここにリロえる、参至っ簡単１（言えば、この膜の上１・りは−７１Ｊコ ーンエラストマーのようなポリマーからなる。 この層はいくつかの所望の物理的１牛ゴ、たとえば引張り強さ、縫合可能性、水 分束の抑〈５１１、′３．−ｊよび・ごクチリアおよびウィルス：（対する不透 過江を嘆で付与する。下層；：！−コラーゲンおよびグリコサミノグリカン（Ｇ ＡＧ、ムコポリサッカライドとしても呼ばれろ）から作られた、高度に多孔質の 格子からなる。この材料中の演用に適しうるＧＡＧの腫々の形態は、コ／ト８０ イチン６−サルフェート、コントゝロイチン４−サルフェート、ヘパリン、ヘノ ξラン　サルフェート、ケラタン　サルフェート、テルマタンサルフエート、チ チンおよびチトサンを包含する。 コラーゲン／ＧＡＧ格子は、支持構造物らしくは「骨組み」構造物として効果的 に作用し、火傷からの上皮細胞および間葉細胞はその内部または上部で生成しか つ増殖することができる。その組成および構造は、移植片受容体による実質的な 免疫応答を誘発しないように調整され、そしてそれは体（・こより利用または排 除される無毒の物質（ｃ生分解される。 コラーゲン／ＧＡＧ格子の見・くつかの・ξラメーター（主として橋かけ密度、 多孔度およびＧＡＧ含量）を・１ｉｌｊ御して、格子がコラゲナーゼおよび他の 酵素で生分解される速度を調整することが可能である。過度に急速に生分解する 格子は十分な治ゆが起こる前（で消失し、一方過度、こゆ一つくり生分解する烙 １、よ士ｌ胞り移動を妨害しかつ格子を収り囲む細胞の線准形成層を形成する・ 頃回っ′Ｉある。 はぼ６０日後：こ生分解する格子を火傷の患者に使用することが好ましいと、信 じられる。 火傷は患者が病院、＼入Ｉｔられるとご、完全：′ｒｃ破壊されあるいはひどく 損傷した皮膚の区域は死んだ皮膚または損傷した皮膚、いわゆる「焼澗」をしば しば含有する。 焼・茄を通常外科的に除去して、それが冶ゆ過程を妨害することを防ぐ。損傷し た皮膚および死んだ皮膚を切除しこれによって無傷の上皮細胞が創傷の笥辺て存 在するようにする。前述の二層の膜で創傷表面を注意して包み、創傷と嘆との川 に空気ポケットが捕捉されることを防ぐ。。 膜）ｉ通常、常用の技術（Ｃより、無傷の皮膚へ縫合する。 次いで、移植した区域を包帯でおおう。 コラーゲン／ＧＡＣ，格子は創傷の収縮を減小することを、出願人は観測した。 −股に、創傷の収廂は、創傷中に存在する細胞および創１易の周辺の水平方向の 動きからなる。それは実質的な変形および傷跡を生ずるので、その）正てた゛工 吠少は非常ＩＣ望ましい。 数日の期間Ｉ〕で、創（易床からの健康な細胞は膜のコラーグ゛ン／ＧＡＣ，格 子中に移動しかつその内部で増殖し始める。間葉（胸および微小血管は、膜の平 面て対して垂直の方向に移動する。皮膚表面はここで水平と見なされるので、間 葉皮膚の成長方何はここで垂直と呼ぶ。上皮旧刊は格子表面を水平方向に（すな わち、膜平面に沿つて）移動する。火Ｓおよび１也の、・皮膚ノ）ム１１傷４比 咬的浅“・傾向をもつので、間葉ｌ１１１′ｌ胞は新４反をつくるためこ非常に 遠くまで移動する必要はない。しかしなから、上皮細胞は、新上皮をつくりかつ 創傷を４゛」じるためて、大きい距離を移動することが必要であろう。 ６０日以内：（、上皮畑、弛は約：）、７５Ｃ７ｎの距離を水平方向に移動しか つ増殖することかできる。したがって、約１．５Ｃｒｎより大きくなし・水平方 向の小さい寸法をもつ創傷は、上皮細胞がすべての側面から創傷を閉」ると仮定 すると、約６０日以内疋上皮移動により閉１こられうるであ向に１５傭を越える 。たとえば、ひどく火傷を受げた患者：・ま、肩より下方における皮膚の事実上 すべてを失な（とは異常ではない。したがって、上皮ａ胞は数１００日を越える 期間の間：乞正常の移動により太き（・ａｌｌ傷の中央区域へ到達することがで きない。非１當に大きい創傷のとき、生分解速度が約６０日であるコラ−ダン／ 　Ｇ　Ａ　Ｇ格子は、上皮細唯が創傷を閉゛Ｌることかてきるだ礼・ぷ前１Ｃ完 全に生分解されるであろう。 本発明の開示 本発明は、火傷における細胞の成長または徂哉の発生を促進するため：Ｃ１線雉 質格子中・＼の“細胞の導入（Ｖ関する。本発明（・こよる細胞の導入は、外科 的技芸、力を用いる方力またはその他の手法により行えるか、本明細、外ではこ れらをｔべて接種”　ｓｅｅｄｉｎｇ″と呼ぷことにする。 １０ ｉｔ；、　十Ｂ　；Ｅ、生物ｊ的；こ梢はト−ｒ）　３、ろ′づ１テを火１嶌゛ つ近傍−オＳ鬼、・へ二」易合；Ｑ第５ンニる！′１１１１ｉ！！−１）自Ｉ入 浸、１−５泳動δよＣミ古生とし本異、′［る。本発明方法：、による接庫（ζ 適したーっの型の線維質格子（よ、グリコサミノグリカンで架橋されたコラーゲ ゛ンかりなる。、 細Ｉｌ＠１ｔ−１本発明方去゛５−よｌ）、付椎質各子中の任意のこ寺定の所望 （同所中（看導人でき、かつ線１准質名子の任意の所望区域に均一（ζ分配でき る。接神プロセスを生と残った各＋ｉ＋胞′ま再生し増殖して細胞の群落′でな る。格子内の各群落・土合体するまて成長して、再生された疑イ１す真皮組織、 疑似表皮１咀織または疑似器官組戦力・らなる均一層ないし均一体を形成する。 かような許容を発生１−うる縄（包を適ｆ；７Ｊに、Ｉあ］桿することにより回 復期間を大巾に短・宿できる３加えて、コラーノ・−ン／′グリコザミノグリカ ン区接種干る本発明方法を用いて再′トシた組哉は、普通の火傷′／ル１６１− なわち従来の自己植皮法により再生された組織よりも、より滑らかで１．より均 一で、線維４■織の増殖が少く、帝痕となりに（く、かつより可撓性である。 図・（］の説明 第１ｊ、；ｊま、皮、阿°〕一部の簡略斜視間である。 第２図は、本発明＋５法（・こよる細胞接種７℃適切な、米国′侍１Ｆｌ第４． ０６０．０８１号記載の二層膜の斜視図である。 第ろ図の、本発明にしたがう自己植皮区域上の工８″百を示すフローチャートで ある。 第４図は、本発・ザｊにしたがいコラーゲ゛）格子上に＠胞の軟叶懸、蜀・夜ｆ ぐ分所１するの、こ：・＋１−１１−ごヂろ′、専壬ＬすＴヘー「１？示すフロ ーチャートである。 第５図は、本発明パ・こしたがい細胞の水性懸濁液をコラーゲン格子上’ｒＣ撒 布するの：ａ使用できる隻・役の斜視ｊ／ｌで多孔化のコラーゲン格子に細胞を 接陣する：（は、多くの好ましい実施態様がある。かような実、怖態ｔｉ（Ｑ・ ５・くつかを説明する。便宜上いろいろな見出しをつげたか、それらの実施態様 をそのような見出しに１根定するものではない。 各実施］！昇：ては一長一短ある。それ故、各実ｒ＠態様゛１ま一つまたはそれ 以−Ｈの特定の梨の火傷または処理目的（こ１１゛−特７こ母当であることにな る。加えて、一つの実施態様を他の−っまたはそれ［ソ、上の実施態様と組７４ 合すぜることにより、治療の間に患者の状態または回復の進度に応じて変更でき る多面的な融通性のある治療計画をたて本発明の一つの好ましい実施態様：ｉ、 二層膜の１灼１１を含む。使用のしかたは、キセノクラフト（外来植皮）または アログラフト（異物植皮）を含むオートクラフト（自己植皮）技法と若干似ては いるが、明瞭トシ異なる。 既述のとおり、この二層膜の一つの層はコラーゲン、′ＧＡＧ格子よりなり、他 方の層はシリコーンゴム透水′Ａ１１ｊ２ （ｉｌ＋　・、’＋　□’＋・’）’４：’に−Ｚ＞　、Ｌｍ　”ｌ　ｆ’、ｉ ｌ　”ｉ　弓り、４　’、Ｃｆｇ　上　７Ｌ　”、）　ｌ　Ｇ　”Ｖ：ｒ　Ｙ　 第　５　（４のフローチャート：・こ７Ｊりす。 この￥：怖態様では、区・甥なら、焼痴その他の傷んだ皮膚を外［［的に除去す る二とにより火傷部の下漁嘴をする。 接：Φしてな℃・模片を・、必要なｌｌ′−）鋏また：まスカルペルで襟とりを して適当Ｌ、［犬きご；／こしＬこ後、注５音深く傷ｓ二かぶせる。膜の曲７− １′向１１１牛が充分に低いなら、効果的な接゛ｌ！！およびエア汁Ｙり′ソト の彷ｙｌＢと達成でき、これ：ま膜！！への・１，１１１゜ある種のベラメータ ーを調流することにより達成できる。 膜よ、当初は縫合゛・こより所定位置に保持する。火傷膜界面の表面エネルギー が火烏−空気界面の表ｊＩ」ｉエネルギーよりも小さいので、細胞および血管が 浸潤する間、膜：：′ｌ：火イ易と効果的７″、ｆ接・巾を１呆つ。浸潤速度は 、火傷の深さ、火傷部に露出させた・１１１．１の型および状態、１らびに嘆の イ１孔度厚さおよびＧＡＧ含量を含むいろいろな要因！、Ｃ依存−ｒる。 現在の技術の状態では、インビボおよびインビトロ：Ｃおける上皮１咄１泡の１ 戊長：ま、線イ芽４曲胞、内皮−″田１包およびその他のｒｇ＋　筋？Ｈ１胞の （ｆ在により促憩さ第１ると信りられゼいる〔８〕。 この現÷邊を利、−１１する４、二めＫ、この夫施態）ｋの自己表皮移植操作を 、上皮細５抱−り成長を促進するの：で充分な数の間葉ａｆｔオｄよび面前か膜 中に成長するまで、または充分な無傷の、１ｔ８１胞ケト゛ナ一部から採取でき るまで、数日ないし数暎）１１遅らぜる二とかできべ）Ｊ この段階：こなったｒ）Ｗ者を麻酔し、ゲルマドームまたはその１也の（Ｊ月所 に置な）月）・で、トナー・′−１′、つ・：、ｆ−ｒ牙−ｆｉｔ胞（＋づよび 十、ｊぞ］）＜は間葉」旧抱）を含・′１．たに皮のガ層を除取する。常用の技 法を用いて表皮片な−扛Ｍ１に挾むことによりその表面前を拡大してもよい。患 者に移植しておいたコラーτノ、／ＧＡＧ膜から滴埼な犬ぎこのシリコーン層を 除去する。シリコーン除去・ズ、自已植皮丁べき区域０周用に切りこみを入れ、 そして格子を火傷部からはずずことなく注意深く７リコーンをその下にあるコラ ーゲン／ＧＡＧ格子から剥ぐことなより達成できる。次いで採取した表皮片を露 出したコラーゲン格子の上滅乗せ縫合する。しかる後、水分フラックス速度すな わち水分吸収速度か適当な任意のカバリングないし包帯を、自己植皮区域上ｖｔ ｈと゛こして感染および説、・ｋの防止に介する。 自己植皮した表皮片内の細胞（ま、群落が合体するまで泳動し再生１−て、疑似 表皮となる。コラーゲン格子は究極的１にま生物学的に分′：イし、格子内で成 長する細胞が５１１り出ず新しいコラ−ダンがこれに代わる。疑似表皮が火傷な ふさいだ後包計をとる。 このような自己表皮移植技法は、従来の自已植皮技人と次に列部する点をバ々多 くのへで顕著に異なる。 １、　従来の自己植皮法では、ドナ一部から表皮オｓよび真皮を比較的厚い層で 採取する必要がある。たとえ°イ、従来の採取操作の間にオ・Ｓげるデルマトー ム上の設定深度は、通常的０．０１０ないし約１１１］、０２０インチ（約Ｊ２ ５ないし０．５　ｍｍ　）である。このように厚いと採取の際患者１４ の苦痛および血液損失っ−増し、がっド１一部には永久的な雫痕が残るのが洸涌 である。これに対し二層膜２用いる自己植皮法でのデルマトーム設定深夜ハ、約 ０．００２ないし０．００４インチ（０，０５ないし０．１　ｍ＊　）である二 とができる３したがって極めて専い層で表皮を採取することになり、採敗忙よる 損傷は強い日焼げに近いものでしかない。それ故、採取：こよる苦痛は少く、患 者の血゛夜損失およびドナ一部の永久的な＠適化はないかまたは減少する。 ２、供試動物および臨床実検における本発明による植皮操作の結果は、二層膜を 用いた自己植皮法は従来の自己植皮法を用いて再生される皮膚より本実質的によ り滑らかでより軟かくより柔軟でかつ組織組繊の増殖がより少い皮膚の再生を促 進することを示すものである。これらの結果はすべて極めて望ましいものであり 、火傷区域の回復、外観および機能を着るしく改善するものである。 ６、強度の火傷をした患者の自己植皮に際しては自己植皮のドナ一部が得られる ようになるまでキセノグラフトまたはアログラフトを利用することは稀ではない 。キセノクラフトおよびアログラフトは、炎症および免疫感応をひきおこし、患 者の体が拒絶反応をおこす。キセノグラフトやアログラフトは一時的な保護被覆 として作用するだけで、それらを取去れ；ｆ後に何も残らない。だがそれらの使 用期間馨のばすために免疫抑制剤を用いると患者は感染しやすくなる。ところが 、二層膜、ま、適正に１５　１表明５８−５０１８１’／　（５）調製するなら 、炎症や拒絶反応をお二さな（・ので、免疫抑′３１１剤を用いる２甥がなくな るかまた：１少なくなる、シリコーン層を除去した場合、コラーゲ゛ン／ＧＡＧ 格子は火傷部に接咄したまま残り、その中に細胞および血管が成長し増殖した生 物学的：（相容性のある枠組を与えると共：（表皮細胞成長のための適切な表面 を与える。 ４、キセノグラフトおよびアログラフトには、しばしば脱水収縮だよびしわ発生 の欠点があり、患者：ζ不火感をおこすと共に火傷の端部を感染の危険：でさら す。ところが二層膜は、適正に調製するなら、脱水、収縮またはしわ発生の欠截 がない。 ５、二層膜はまた、火傷の収縮およびその結果おこる最適化を防止、遅延または 蟻少する。 細胞の水性懸濁液の製造 本発明の〜・（つかの好まし℃・実施態様では、皮Ｉ’１１つ凝集片を解“推し て、生きている繁殖力のある細胞が溶液中に分散した懸濁液にする一つまたはそ れ以上の公知の技法

〔９〕を活用する。普通のそのような技法の一つ（よ、採取 した皮膚片をトリジシン、コラ−ゲナーゼまたは細胞を池の細胞からもしくは固 体表面から引きはなすその他の酵素で処理することを含む。皮膚片を一部または それ以上の酵素で処理した後、表皮層を除去し棄却する。 残った組織は、比較的高速で繁殖する基本的細胞を含有するものであるカー、こ れを、細胞をこわすことな（分離するの蹟充分な力でかきまぜる。この目的のた めには、６ 低速−！川、渦流：こ付十二と、ヒベット処１および七の匝の混合１去を活用で きる。細胞：よ、体液中足みられる物質ご（似たいろ（・ろな塩を含む水溶液中 に懸濁させるのが普通である。この型の溶液はしばしば生理温水と呼ばれる。 ｐＨを略々生理的レベルに維持するため二てリン駿塩またはその他の非毒性物質 で緩衝してもよ（・し、また動物もしくは人の血清またはその他の蛋白源や栄蓋 源を加えてもよい。液の密度は、細胞の密度よりも小さくなるようにコントロー ルできる。 細胞の水性懸濁液を用゛、・る二との重要な利点は、限られた数の細胞の増殖り よって閉鎖できる火傷の面積ないし容積を太巾疋拡大できることである。その結 果次のような利益う１ある。第一に、自己植皮のために無傷の組織をｊめで限ら れた量しか得られな（・のであれｆ、その限られた数の細胞を接種できるコラー ゲン格子の面積ないし容積を格段に増加するべく、いろいろな懸濁液を駆使する ことができる。第二に、与えられた面積ないし容積のコラ−ダン格子に細胞を接 種する必要があるなら、トゝナ一部から採取すべき無傷の組織の量を大巾に減少 できる。特定の場合の最適接種密度は、予備実験により当業者が決定できる。 コラーゲン格子中または格子上に接種される細胞の数または濃度は、懸濁液中の ａ胞の濃度をかえることにより、または与えられた面積ないし容積のコラーゲン 格子上に分配する懸濁液の量をかえることにより変化できる４遠Ｏ１去 本発明の好ましい一つの実施曵嘩；、膜を忍者、こ怖１」する前に、遠心力を用 いて、接種すベサ冊胞をコラーゲン格子中に着床することを含む、この方法は、 工、■。 Ｙａｎｎａｓ　、Ｊ、Ｆ、Ｂｕｒｋｑ　、Ｄ１Ｐ＋○ｒｇｌｉｚ第５よびＥ、’ ５ｋｒａ：＋ｕ’ｕの共同発明・Ｃよるもので、本領と同時【こ出願−た特頭昭 号の主題であるので、その；己改を参照された接種すべき細胞を含有する懸濁液 ）まいろいろな技法たとえば撒布、噴霧、塗布、点滴その他により、コラ−ダン 格子上に分配できる。これらの技去宅使用できる工桿順をフローチャートとして 第４図に示す。 火傷部、（焼伽があればこれを外科的に除去した後、二層膜の片を必要なら縁ど りをして火傷部：（縫合する。数日内に間葉４＠および血管が火傷部からコラー ゲン／ＧＡＧ格子内に鉛直に成長してくる。上皮細胞の成長を促進するの疋充分 な数の開業細胞および血管がコラーゲン格子内て成長した時報で、患者のトゝす 一部から無傷の皮題の薄層を採取する。かような皮＠は、閉鎖すべき火傷部の面 積よりも実質的１（小さな面積から採取すれば足りる。採取した皮膚は前記の方 法によって処理し、生きた上皮＠喉の水性懸濁液を調製する。シリコーン層、こ 切りこみを（・れ、シリコーン層をコラーグ８ン、’ＧＡＧ、ＩＪから注意深く 剥がすことにより、膜のある区域フッ・らシリコ１８ 一ノ層の片を乍去する。次いで溶液中、こ懸蜀して−・る上皮綱泡Ｘ′Ｙ−露出 したコラーゲン格子上に下記の任意の方法によりランダムに接種するっ １、撒布　この実施態様は、第５図に示す装置のような撒布を用℃・る。細胞の 水性溶濁夜：よチューブ２からこの装置（はいるが、チューブ２４通常の手段に より部材４に連結されている。懸濁液・：工、部材４から略々三角形をなす平板 ６上に流出し、保持縁８：（より平板６上に保持される。懸濁液は、平板６上を 流れるにつれ、広い浅い流れとなって平板６の下端を通り、露出したコラーゲン ／ＧＡＧ格子上に比較的均等に分配される。板６をシュ配することもできる。 この撒布装置は、プラスチックまたは金１のような任意の通常の材料で作製でき る。シリコーンのような物質で一装置を被覆して、装置表面における液の流れを 制御かつ懸濁液と装置との親和性すなわち粘ばつきを低減することもできる。ま た部材４に弁を設けて装置を通る懸濁液の流れを制御してもよい。 ２、噴霧　懸濁液は、液体を小さな空輸液滴：Ｃかえる任意のノズルから噴霧し てもよい。だが、この実施態様には２つの制約がある。その一つは、溶液中の細 胞を、大多数の細胞をこわしたり殺したりする力や圧力の作用に付してはならな （・ことである−第二には、細胞の懸濁液を、細胞や火傷部に対し有毒または有 害な流体発進剤と１９　？！表昭５８−５０１８１７　（７）混合する二とが２ 便で込って）まならないことである。通常入手できる天尻のノズルは二の両１１ ｊ約を満たす。かようなノズルを任意の通常の方法で細胞懸濁！夜の貯槽に連結 できる。 ３、塗布　酬、泡の水性懸濁液中にプランを浸し、ブラシを取出し、そして懸濁 液を舎弟だブラシでコラ−ケン格子をふ（ことにより、懸濁・夜を格子上に分配 できろ。この方法には、実質的な数の二佃胞がノラ／ｌＬ＜つついて格子に適用 されない不利がある。だが、それでも、懸濁液を分配する格子のパターンないし 区別な注意深く制御卸したい場合には特にこの手法が有用である。 ４．１バット点滴　この実施態様では、ピペット、柊通の点眼器、その他同様な 装置を用いて少数の！！ＩＩ胞懸濁液をコラーゲン格子上に分与する。液は多孔 性格子を透過し、液中の細胞は格子線維の網にかかり格子上または格子内１（保 持される。 ５、注射器注入　本発明の一つの好ましい実施態様では中空の針またはその他の 導管を肩えた皮下注射器１テより細胞の水：゛ト懸濁液を多孔性のコラーダン格 子内υＧ接種する。細胞忍濁：夜を注射器のシリンダーにとり、針をコラーゲン 格子中に挿入する。注射器のプランジャーな押圧して一定号の液をシリンダーか ら押出し、針を経て格子内：／ｃ注入する。 注射器注入法の一つの利薇は、米国特許第４．０６０．０８１号に記載された多 層嘆の透水側ｆ（４）層のような、コラーダ０ ／洛子を取囲むヘテロ力・・リンクを取除くことなく、貫通するのに使用できる ことである。ヘテロカバリングはそれとは異なる目的たとえば器官補綴に用いら れるコラーゲン格子に形状、強度、流体一体性またはその他の特性を付与するの に用いられることもある。 細胞の分ｙが完了したら、接種した格子を包帯でカバーして保護する。 本発明のその他の実施態様 細胞は、本発明の方法により、実際上任意の化学組成をもった多孔性格子中に接 種できる。米国特許第４．０６０．０８１号（ＹａｎｎａＳ等１９７７）および 同第４−２８０．９５４号（Ｙａ＝ｎａｓ等１９８１　’）に記載されたコラー ダン／ＧＡＧ格子シま、コラーゲンの生物学的相客性および物理的性質を改善す る観点から、比較的小百分率のグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）を含有するもの であるが、コラーゲン格子内にＣＴＡＧまたはその他の物質と存在させることは 、本発明の目的に対し必要ではない。 また、本発明に到った研究過程ではコラーゲンを用いたが１本発明の細胞接種法 はコラ−ダンを接種する方法に限定されるものではない。今後の研究によってそ の他の線維質蛋白、その他の重合体分子または焼結セラミックスもまた補綴材ま たはその他の医療目的に対し適切であることが明らかになるかもしれない。もし そのようなその他の分子を多孔性格子に形成し、これを本発明方法によって接種 するなら、そのような接ｒ（法およびそのような等連された格子は、本発明の範 １司内でＣ）うつ本明訓１では「格子」なる語を広義に用いるものであり、高度 に多孔性でかつ透過性である構造物の形態にあり、白波構造物中で細胞が泳動し 増殖できる任意の材料を含む。 １線維質烙子」と：よ、マクロ的、ミクロ的中たは分子レベルにおいて線維状で ある材料を含むあらゆる格子を含むものと広義に解釈さ扛るべきである。たとえ ば、多くの重合体発泡体は、多数の側鎖や高度の架橋をもつことがある長い有機 分子からなる。また、焼結セラミック材シま、多数の粒子からなり、形の上でま たは質的にも線維質であるとみなすことができる、か°ような材桐はいずれも、 本発明の方法によって細胞を接種できる格子に形成されるなら１本発明の樋囲内 である。 任意の形状または形態の格子中に細胞を接種することが可能である。たとえば、 顔、手またはその他の不規則表面の形（Ｃ鋳型１−だ二層膜を製造することが可 能である。 かような格子シま、本発明方法によって細胞を接種することができ、本発明の範 囲内である。 本発明のいろいろな方法を相互に組みあわせて使用できる。たとえば、火傷をし た患者が最初に病院に運びこまれたとき、接種すべき細胞を患者から採取し、水 性懸濁液中に解稚しそして遠心力により二層膜中に接種し、その二１ｉ寝を違初 の手術で患者に適用する。利用できる健康な上皮４Ｉ、＠の数が不充分なら、ま たは遠心的に４種２２ した細−包のいくらが何らかの理由で群落と発生するに到らなかったなら、遠心 接Ｃ重した細・厄からできる。凝似表皮によって閉鎖されない火傷の区域がある かもし虹ない。 閉鎖されない火傷の区域は、膜の透明なシリコーン層を眼で１−らべることたよ り同定できろ。かような区域は本発明の一つまたはそれ以上のその他の犬施態様 により再接種できる。たとえば、上皮被覆中の大きな間隙は、シリコーン層の部 分を除去し露出１．たコラーゲン格子上に細胞懸濁液を噴霧または撒布すること により接種できる。 また上皮被覆中の小さな空隙：ま、細胞懸濁液を注射器注入することにより接種 できる。 線維質格子：ま、多くの型の細胞、たとえば体のいろいろな器官つ・もの細胞、 骨からの細胞および収縮または連結組織からのａ１胞の成長を支持できる。全部 てたは一部が体から取出さｎる器官または骨の代りに用（・られる線維質補層は 、すべての方向が何センチもの厚さをもつ。 厚い補綴の内部・ζ細胞と接種するには、注射器注入または還Ｂカの使用が極め て有用である。加えて、細胞懸濁液は多孔性格子を透過でき、格子は濾過疋似た 作用もでより細胞を保持する。 既述の如く、接種する！　泡は、患者からまたは患者の双子の兄弟から採取した 細胞に限定してきた。これ）ま植皮技法の現在の状態を反映したものである。現 在の技術による限りこれら以外の細胞に対しては火傷部が拒絶反応をおこす傾向 がある。だが、細胞の分類寸６よび選出、２：３　特表昭５８−５０１８１７（ ８）表面も１−＜は分泌された抗ｇもしくはその匝つり汁ぞを冷去または不活化 する細胞処理、免疫抑：間剤およびその也の技法における今後の進歩が前記の問 題を低減または解決して、前記以外のイ冊胞でも失った組織、骨または器官の再 構成に適切で男るよう（（なろう・もしれなし・０このよつ１（シて選出され処 理さ肚た細胞ばいずｒしも本発明の方法；・こより線維質格子中に接種するの（ Ｃ適切であろう。かような細：包は不発明の範・川内である。 いろいろな・烈の７腺推質各子が、体の多くｒ同所、たとえば皮嘆、血管、骨、 連請組載、収櫃組熾て６よび器官におし・て−次的な補綴具として適切に使用で きる。かような格子、求、殆んどあらゆる型の、；細胞がその中で成長し、泳動 ）−かつ増殖できる構造系を与える。格子は体の実質上任意の個所疋外科的に施 用でき、適当な型の細胞を適正に接種するなら、新しい組織の再生が可能である 。たとえば患者のある器官が損傷したり病気に犯されたなら。 その器官の一部を除去する必要がある。器官の一部を除去した場所に線維質格子 を適用する。その器官の別の同所から相δ性のあるドナーから採取した充分な数 の健康な細胞を本発明の方法；（より格子中に接種するなら、器官の回復および 再生を大いに促進することが可能である。 かような使用は、本発明の範囲内である。 採取した組峨または懸濁した細胞を数日間比較的滑たい（たとえば４　’Ｃ）水 溶、夜中１で保存することが０Ｔ指である。このようにすれば、ドす一部からの 組織の採取を好１ ましい時こ？イえるーたとえば、火［易っ・っ痴デ除去千るまたはコラーゲ゛ン ＧＡＧ膜を火傷：て適用する予肉手術の際に健康な表皮を採取できる。いずれの 場合も患者ンこは全身麻酔を施しておくのが普通である。採取した表皮は保存し ておき、上皮増殖をＤＺ進するのに充分な開業刑胞および血管がコラーグ゛ン格 子中二Ｃ成畏した後に、コラーゲン格子疋適用する。 細、泡？採取後コラーゲン格子に接種する前だこれをインビトロで培養すること も可能である。細胞培養７Ｃはいくつかの明白な利点がある。たとえば、接種に 供し得る細胞の数を増加させ、ひいては火傷被覆のために採取［−なげればなら ない組織の量を少（できる。加えて細胞バンクの使用も考えられる。たとえば、 危険度が高い職業の人は、インビトロで培養できる細胞を供与しておくことがで き、事故または傷害がおこった際（′−その細胞を線維質格子中に接種するのに 使用できるようにするのである。保存１または培養した細胞を本発明方法により 線維質格子に準腫することは本発明の範・川内である。細胞バンクおよび接種の ため：て所望の種類の細胞を取上す組姶培養′ｌ／Ｊは、本発明の目的に対し「 ドナ一部」なる語１τ含まれる。 ｗｒ胞と、ある種の細胞の増殖速度を増加するいろいろな物質と接触させる技法 は数多（知られている。たとえば、表皮成長因子〔１０〕、フィブロネクチン〔 １１〕、環状ヌクレオチドゝ〔１２〕、クロレラトキンン〔１６〕、血・］・坂 から５導゛−た６ｙ長、−ξ子〔１４〕、組織脈′？形成−・ｊ子〔１５〕およ び各種のその他の物質〔１６〕か、一種またはそれ以上の型の細胞の増殖速朗お よび／または表面粘着性を増フロできることは知られている１本発明方法によっ て細胞をコラーゲン格子上に接−屯する前て、力ような訓咽の増殖速度を増加す る二とが従来知られているまたは今後知られるであろう任意の・物流：（細、泡 を接を虫させる二とが可能である。かような−１接種赤理、工、接種に利用でき る細胞の微を増すために、または震種後細胞がより迅速！で増殖するようにする ために活用できる。かような前接種処理や１疑似真皮表面処理は本発明の範囲内 である。 接・看したコラーゲン格子の特性 本発明は、線維質格子中よたは各子上に細胞を接種するいくつかの方法に関する 。本発明はまた、本発明方法により細胞を接種した線維質格子である組成物に関 する。 この組成物をさらに明らかにする目的で、コラーゲン格子に関する参考文献とし て既に引用した米国特許第４．０６０，０８１号（Ｙａｎｎａｓ等１９７７）お よび同第４．２８０，９５４号（Ｙａｎｎａｓ等１９８１）を指摘する。 適用したコラーゲン格子に対する火１％の生理学的応答は、独立の因子として作 用する格子の単一の特注よりもむしろ格子の緒特性の組みあわせに依存する。そ れ攻、単一の特１についての最適数値は特定しないのがよい。 かわりに多くの特性Ｖこついてはその他の゛待姓がすべて同２６ 時゛こ商！−ＩＪ　【・７・し１」内てあ乙と仮定した場、１・つ牧′直范・川 を費定できる。−まだパラメーターと特ｉ牛との）１１．つ−”・１１記の相関 関係はすべてではなく、最も直接的な相関関係の、７人を言及したものであるこ とは了解されたい。 ｉ′ｉｌｌ　ｉ易（而と生１′ヒ学的１（接触された場合、コラーゲン格子−は コラｒナービまたは他の天然の酵素によって無毒性″吻質、こ生物分確さ、！１ 、この物質、末通常の身体作用によって消化され、利用されまた消失される。こ の格子は、失われ除去された組織を再生するのに十分な数の細胞が再生イされる まで構造上の一体性を保つ。もしも格子がこれよりもｖく生物分解されるならば 、創傷が治ゆされる、１１ｆに液状化し、役、こ立たなくなってしまう。一方、 発明者等の研究ｌＣよれ１了、格子があまりにゆっくり生物分解されるならば、 格子を取囲む緻密なサックの形成が促進されがちであることが判っている。 二層膜の研究によれば、理想的な生物分解速度は′よＦｉ２５〜６０日であるこ とが判っている、このことは格子全体が５０３以内尾生物分奔されなげればなら ない、ということを意味しない。むしろ、相当な量の生物分解が約６０日以内ｊ ・Ｃ始まり、格子の残りが数ケ月またはそれ以上残存しても良い、ということを 示すものである。当猶者の日常的実験、・ζよれば、この生物分解速度は、細胞 を移植した格子または人工皮膚以外の目的１こ使用される格子に関しては若干変 更しなげｔｂばならないことか判つて（・る。 コラーゲン格子の生物分解速度：ま、コラーゲンの架橋重度を増大させ、コラー ケ゛ンと架橋されているＧ　Ａ　Ｇの含量を増１川させ、または格子の気孔率を 城ｉこることによって、ｌ成じる二とかてざる。すなわち、創傷トに癩用後より 長時間格子が維持される５、 二層膜のうちシリコン層を工生物分解性ではない。しかしながら、このこと）１ 間・、貝ではなく、むしろり了し見・ことである。何故、”【らば、シリコン層 （ｉ附だな上皮組織ごノーその層の下に再生された後；′こ、外科的除去を必要 とせずに自発的に排除さ肚る。 ２　非抗京性および非炎症性 同種異系または同種同系移植昌−および移植された器官、主、思４の免疫系でよ り異物として認識さ：？する細胞を普通含有している。典型的な免疫応答では、 抗体およびリンパ球のようなある種の細胞は、免疫抑制剤を使用して抗体または 防卸用細胞の形成を抑制しない限り、異種細胞を認識し、政事する。しかしなが ら、そのような薬剤の使用により、患者は感染に対して発病しやすくなる。 もし、移植された物質が抗原四または炎症−特性を持たなければ、そのような薬 剤の使用を不要：Ｃできる。 本発明者等ンＣよって共同で発明さｌしたコラーゲ゛ン／ＧＡＧ格モは、該コラ ーゲンおよびＧＡＧ分子の化合物含量と交叉結合講義を調節する二とによって抗 原：１飄るいは炎症特性を有しないものを製造することができる。 ８ ）、〜切ｊ・Ｃ棟“λさ？し才しＹ、上、記・各ｆ５ま患者：亡よる拒絶なしに 受傷ｆ＜・吊′・Ｃ−１７い；こ受４：ｆされる、。 コラーゲン格子−は受漏衣面１（ン１して充分な親和性を有して効果的（・こ核 表面を湿潤ぜしめ該表面との接独を維持しなげれ了ならな℃・０この現用性；工 通常Ｗ面の表面２長力または１（Ｒ１工不ルギートこよって表わされ、これは力 ／面積として測定される。受鶴邪分とコラーゲン格子とのＷ光の表面エネルギー は、核受傷部分と雰囲気との間の表面エネルギーより低くなけλ１ばならない。 この基準は本発明者等・こよって共同で発明されたコラーデン／ＧＡＧ格子で（ １満たされている。 ４　引張り強さ 補綴装置の合成膜：ま、裂けることなしに縫合できて包帯を巻いたり医療にの処 置あるいは怠者の動キ：（よって生じる偶発的圧迫にさらされた場合裂けるのを 防１にあるいは制限するに充分な程強靭でなげればならない。格子の強さのもつ とも重要な２つの示標は引張り強さく既知の横断面積を有する標本を引き裂くの に要する力）および裂壊エネルギー（一定の大きさの裂は目をつくるに要する仕 事量）である、コラーダン／ＧＡＧ膜は約５０な。 いし１０００　ｐｓｉの引張り強さ叉び約１×１０　ないし約５×１０エルグ／ 　ｃｒＩの要壊エイ、ルギーを何する。この格−「の強さ：工文叉結合密度を増 大させるか格子の多孔性を低ドさせることによって増大せしめることができる。 ｊ没こ、”組ユ哉”とは格子内の１玉、准ノ）犬部さと′空１）１１配−１′ｉ ｆに関する。それ自体：よ、格子内の一誠維間グ〕開［］の大きさ、形および空 間配置に関する”多孔性”の反対であると児なされる。 補綴装・置として役立つ合成コラーゲン格子：ま、再生されるタイプの組哉内に 天然に存在するコラーゲンマトリックス：Ｃ（ＬＪていなければならない。この 空間配置でよって損傷を受けていない組織に似た秩序上しいパターンで細胞成長 を促し帝痕ｆヒを減らし再生された組織の本来の機能を促進することができよう 。 多孔（牛コラーゲン格子の重装な組織峙哩は次のとおりである： （ａ）繊堆ノ）ｆ子漬分数 これは・、裁惟こよって占められる芥積を格子の全容積で割ったものでヤ、ろ。 この分数は多孔性：こ反比例し、この点（ま後述の如く検討する。 （ｂ）平均アスペクト比 これはソ”■の平均長さ対平均「Ｄの比である。長く薄い繊維う・ら構成されろ 格子は平均アスペクト比が高い。 （Ｃ）繊維軸の平均配向 これは、繊−吊がすべての方間、ででたら、め（で配向しているのか、それとも 大部）のＪ　惟が格子内・′）１つ十たはそれ以上の軸に沿って大体平行に配向 しているのかを示す・ ３０ ｆｄｉ　線維＠間の平均距離（これは、隣壊する線維がどれだけはなれているか を示す）。 この特性は気孔の大きさに直重関係する。出願人ら（（よって共同発明された多 孔性コラーゲン／ＧＡＧ格子は通常、補元動物の真皮中に存在するコラーゲンマ トリックス（（似た形態学的特徴を有すると思われる、従って、前記の格子は毀 損あるいは損傷皮膚の再生を促進させる補綴材料として極めて好適である。研究 によれば、その他のタイプの組織も同様な形態学的特徴を有することが確認され ているので、前記のコラ−ダン／　Ｇ　Ａ　Ｇ格子による再生は十分に可能であ ろう。更に、研究によれば、その他のタイプの４Ｊ１．ｌ中に存在するコラ−ダ ンマトリックスに似たコラーゲン格子の形態学的特徴を変更する方法が示唆され た。このような格子に、本発明の方法により細胞を移植した場合、該格子も本発 明の範囲内！′ｒｃ含ま多孔度の四種類の相関的側面は細胞移動速度およびコラ ーゲン格子中の再生速度を左右する：α、多孔度（気孔率ともいう）。これは、 格子の容量に等しい１よりも小さい値である。この値を１００倍することによっ て百分率にかえることができる。多孔度は高い方が望ましい。なぜなら、多孔度 が高ければ＠胞が生長し、そして、増殖できる空間がそれだけ大きくなるからで ある。多孔度をかえることによって生分解速度お３１　特表昭５８−５［１１８ １７θのよびコラーゲン格子の曲げ即１・住をコントロールすることができる。 二層膜に関する研究によれば、細胞移動および格子の表面中または表面上におけ る再生を促進するには多孔度は少な（とも約９０％であることが望ましいことが 示された一出顆人による別の研究では、多孔度が少な（とも約２５％である場合 、上皮雌胞はコラーゲン／ＧＡＧ格子と膜のシリコーン層最上部間を移動しやす いことが判明した。このことは極めて望ましい。なぜなら、新生表皮がシリコー ン層の下に再生される場合、シリコーン層は自然に排除されてしまうからである 。 ｂ、気孔形状および分布−これ１ま、気孔の形状および線維の配回に関連する。 Ｃ０気孔の大きさ。これは平均または中間気孔の直径を示す。コラーゲン格子中 の気孔は細胞が該気孔中で生長し、そして、該気孔中を移動するのに十分な大き さでなげればならない。出願人の研究では、平均気孔サイズが約５０μｍであれ ば細胞の移動および再生を促すのに申し分のないことが確認された。当業者によ る日常的試験では、平均サイズ、およびできれば、平均憶付近の気孔サイズの分 布を変化させて、コラーゲン格子の様々な用途について細胞移動および再生を高 めなければならないことが示された。 ｄ、結合比（通気性ともいつ）（気孔が独立していようと、あるいは連続してい ようと間わな℃・）。独立気泡２ フオーム：よ流体、力るいはその他の材料が、亥フオームを通して移動すること を不可能にするっ各気泡はとらえられている。このタイプの格子は！＠胞移動に は適さないであろう。これに対して、通気性格子は連続した気孔を有する。この 気孔は、流体または細胞が気孔間を移動することを可能にする。コラーゲンの線 維性および本発明で使用される格子を創成するのに使用される凍結乾燥法は、該 格子を、細胞が移動できるのに十分なほど通気性にする。 Ｚ　傷収縮の減少 傷収縮は普通傷の円周の内部および円周上のセルの移動を含む。例えばもし皮膚 の受片は動物又は人間から失なわれ又は除去されるならば、まわりの皮膚：ま、 その傷を閉鎖するために筋嘆をわたって動く傾向する。これは傷のついた区域を ゆがみを生じさせそして普通の機能に正確にもどるのに非常に有害である。適用 者ン・ζよる研究は、その二層膜の適当な削岩および定置が傷“又縮を遅ら七そ して減少さぜる項目にあることを示し、二層膜＋１、収縮変形を減少させ、新生 表面皮膚の再生および適当な機能を増進させる。 ８、たわみの硬直 傷表面と接触させた時、コラ−ダン格子は、その傷のついた床およびその格子間 でトラッピングか１”っ空気のボ゛ケットを防ぐために十分：でたわみ性である 。同年された空気のこのようなポケット（工、しばしば死の空間と呼ばれ、ぞし −（原藻で充ださｒし、しくしば・・クチリアの増殖ｆ６よび感染の部位内に生 （つ、ぞニーでそれがためそのようなポケットは避けるべきでキ）る。効果的な 湿りは、比較的に低い硬直性を持った格子の使用を８沙とする。 たわみの硬直性はその洛頂の説さのす良能であり、そしてその物質の弾力性のモ ジュラスである。人工の皮膚として知られた膜の硬さ、：ｉ、その膜の厚さを減 少させることに減少できる。しかしながら、臓゛得オ６よび骨の充填は特別な形 に押し込められる。弾性モジュラス（しばしばヤング　モジュラスと呼″下れる ））まコラーゲン格子のたわみ性の硬さを受けられる水車まで減少させるために 十分（て低くなければならず、しかしゆがみなしに普通の圧縮強さに耐えるため 十分１ｃ　ａ　＜なげればならない。約１〜１００間のヤングモジュラス（その 格子の厚さおよび形に依存する）を持った物質：ま、好ましい。そのコラーゲン 格子のヤングモジュラスはその架橋密度を増加させるか又は孔を減少させること によって増１１７０できる。 ９　水分流れ 水分流１ｔは、ｇｍ／ｃｒＡ、’ｈｒ　又は同様な用語で表わさノまた与えられ た期間与えられた膜の区域を通る水および他の′ｏ、体の量に関する。合成皮膚 として使用された膜の水分流れが高すぎるならば、多すぎる流体がその堪し℃残 りそしてその揚床およびその膜は悦水さユ、その膜の収縮およびカールを起す。 一方もしその膜の水分流れが低すぎるならば、流体：まその膜の下て蓄積し、所 望な生理≠３１ 的な処、１１３を分裂さぜる、このような流体の蓄積：よ通常浸出又は浮腫と呼 ばれる。両極端を縫′１するため・°こ、合成皮膚として使用した膜の水分流れ は普市の皮膚の水分流れに近接すべきである。 そのコラーゲン／　Ｃ＝　Ａ　Ｇ、摸の水分流ノ１：まそのシリコーン層の厚さ を変性させることによって容易ＩＣコントロールできる。約０．１〜１．０朋の シリコーン層が適当な範囲内に入る水分流れを提供することが発見された。 「Ｊ＋Ａｒｎｅｒ、Ｌｅｔｈｅｒ　Ｃｈｅｍｉｓｔｓ　Ａｓ５ｎ、ｊ　６９．　 ＆　９　＋１〕４１０−４２２（１９７４）のＭ、コマノウスキイ等によって発 表された方力で調製１−たウシ皮革コラーケ゛ンを用いた。このものは、米国ペ ンシルベニア州フィラデルフィアの米国濃務省東部地区研究センターから寄贈さ れた。これを、液体窒素で冷却１−だウイリイ（Ｗｉｌｅｙ’）ミル（米国ペン シルベニア州フィラデルフィアのＡ、Ｈ−トーツス・カン・Ｓニイ製）で２０メ ツシユのスクリーンをＩ■ｌ　１．・て磨砕した。各膜を調製するために、０５ ５ｇ（水和重量）の磨砕コラーゲ゛ンク、０．０５Ｍ酢酸水溶液２　Ｄ　Ｑ　ｍ ｌに加えた。この溶液を、高速の方にセットして（１１袷電圧を６０ボルトにま で下げた２速式電カニニット（コネクチカット州ハートフォートゝのワーリング ・カンバニイ）に連結した水冷ジャケット付きブレングー（ミンガン州アン・ア ーバーのエバーバック・コーポレー／ヨン）で６０分間攪拌した。 ザメ軟骨から得た０、０４１（水和重量）のコンドロイチン６−サルフェート（ ナトリクム塩形：ミズリイ州セントルイスのシグマ・ケミカル社のタイプＣ）を 、４０、Ｖｌｌの口Ｑ５Ｍ酢實に溶解した。５分間にわたり、このＣ６Ｓ溶液？ 、上記攪拌中のコラーゲン分散液に加えた。この琵合物をさらＩＣ１０分間檗せ 合せた後、４°Ｃに維持した冷却遠心分雅′幾（ミネソタタ（」ニーグム・・・ イツのインターナショナル・エクイノプメノト社、モデルＣＩＲＵ−５００口） で１時間１５００Ｃ，で遠心分推した。分散、夜ン遠心分誰幾から取り、遠心分 雅済の分散夜の各２４０ｍ１につき１４［］ｄの上澄液をデカンテーションで取 り除いた。この濃縮された分散夜を、次いで、上記の高速にセットして６０ボル トのエバーバック製ブレングーで１５分間攪拌した。次いでこの分散液を凍結用 皿に注ぎ込んだが、その際シて皿の表面１平方インチ当り２ｍｌの分散液を施用 した。それらの皿を、−４５°Ｃに維持した予備冷却連結棚にューヨーク州カー ドナーのバーチス・カンパニイ、モテル１０−ＭＲ−ＲＣ）’Ｌ置いた。これあ の皿を約１時間で凍結させ、凍結棚温度と平衡化させた。 その凍結棚室中の圧力を次いで１０　ミＩ＋　）−ル以下に減圧し、皿を１時間 放置した。凍結棚温度を０℃にまで」−昇させた。それらの試料を２４〜４８時 間凍結乾燥］−だ。 得られた発泡体を取り出し、アルミニウム箔で包入、１０５℃および５０ミリト ールに維持した真−空炉中に約３６ ２４時ｌｉｕ人才］て首いた。二の・：Ｐ−っ・ら′（−）　ｊ１出した陵、発 泡体を、ノ／ケー７ター中；亡保存するか、あるい、１１伸１−、シリコーン接 着剤を被覆するかした。 シリコーン接着剤（ミシガン州ミドランドミカル・カン／ミニイの医薬縁Ｄす１ ，・ｔ　Ｓｊ．ｌａｓｔ．ｉ（　カタ（１ダ扁８９１）を、上記冷却発泡体の表 向全体□・こわたって塗布した。シリコーン）１、凍結用皿と接触したかった発 泡体表面に塗布゛−た。シリコーンは、ス・ξチュラを用いてはノ・−ｔ　ｏ． 　ｉ〜０５朋の厚さに施用した。この二層嘆ヤ、Ｑ，　Ｑ　Ｍ酢酸中にそのシリ コーン側を下にして、室温で２４時１１４１人れて置きシリンーンを硬化させた 。次いで膜を裏返えしにしてシリコーン側７上にして、０．０５Ｍ酢酸中で室温 において２４時間にわたり再水和させた。その酢酸を除き、その代りに０．　２ 　’５容隆′佑のグルタルアルデヒドにュージャージイ州フイリプスパークのＪ ．Ｔ。 ペイカー・ケミカルＧｏ，，　商業機、カタログ＆　３　−　Ｍ７５２）を含む ０．０５Ｍ酢酸を置き換えた。こσ）グルタルアルデヒド架橋結合処理を室温で ２４時間・売げた。そのグルタルマルデヒド溶液を取り除き、その膜材を蒸留説 イオン水で２回すすぎ洗いした。この発泡体を室温で２４時間７に中に保存して から貯９ｇ器へ移した。それは使用直前まで７０％イソプロパツール水溶液中に 貯蔵したコ これらの方法で１凋製した各膜の典型的な特ｅｔを表１に子くず。 表　１ 引張り強さ Ｇ／ＧＡＧ洛子　２〜５×１０　ニュートン／ー二層膜　７〜１０Ｘ１０　ニュ ートン／７７？平均気孔直径 Ｃ／ＧＡＧ格子 湿潤前　８０ミクロン 湿潤前　９６％ 水分透過 二層膜　１　〜１　０　”９／ｃａ／時１Ｃｍ巾片の曲げ剛性 Ｃ／ＧＡＧ格子　５〜１５０×１０　ニュートン・−二層膜　１０〜５００ｘ１ ０　ニュートン・ｍ゛抗　原　性　極めて低い 増　殖　性　検出さ才１ず 顕著な生分項　２５〜６０日 、穢維軸の平均配回　ランダ〃 実施例２：人ＩＣ対する自己移植法 体表面積（ＢＳＡ）の５０％乃至９０％・にわたって焼傷深度６度の焼傷を受け ている年令ろ才、υ・ら６０才までの範囲の患者づ０人を実施例１で述べたよう にして調刈した二層膜を用いて治療゛−た。６人の患者についてはマサ３８ チューセツソージエイ・ラル病院（ｌｖｉａｓｓａｒ：’ｒ＋ｕ＝ｅｌ、ｔ：； 　Ｇ’ｎｅｒａｌＨａｓｐ１ｔａ、１　）で、また４人の患者はボストン（Ｂａ ｓｔｏｎ）　７）シュライナーズ・バーン・インステイチュート（Ｓｈｒｌ−ｎ ｅｒ’ｓ　Ｂｕｒｎ　Ｉｎ５ｔｉｔｕｔｅ）で治療した。 全患者とも治療は儂皮を即座ＩＣ切除して行ったが、その切除は必要によっては 段階的に行った。各切除手術はＢＳＡの１５〜２０％に限った。各手術１（おい て、傷は手術中り採取したメツシュ状自己移植用片で閉鎖′−た。 利用可能の移植用片を全部使用してから、切除された傷を切除に続いて直ちに二 層膜で閉鎖した。二層膜？・ま４×６インチのシートにして与えた。二層膜は存 在する傷；Ｃ合うように作られ、かつ５−０の三酸化クロム酸処理腸線の断続縫 合線を用いて適所に縫合した。細心の注意をはらって咬傷を受けていない皮膚、 と二層膜の間シ４縫合線を作り、−次閉鎖を達成した。膜はしわが寄らないよう にわずかな張力をかけて縫合した。もし術後期間中にしわができたら、しわの隆 線を辺縁切除し、そしてその下に集まった漿液を抜き出した。はとんどの膜（・ まキルテイング法を用いて仕上げた。多数のステイフナが膜と基床（ｖｏｕｎｄ ｂｅｄ　）との間のずれ運動を減少させるように深い筋膜に延びていた。 コラーゲン／ＧＡＧ格子は開業細胞（線維芽細胞および血管をきむ）の浸潤を支 持してネオエルミス（ｎｅｏｅｒｍｌｓ）を合成する型としての働きをした。こ の格子の血管化は３〜５日後に指圧を加えるときに生ずる白化によって明らかに された。 自己移植出片供与部位が再採取に適しているときは、患者を手術室に戻し、そし て供与部位を深さ０００４インチの皮膚節のセットで再採取した。これで真皮の 小さな不規則斑点を持つ表皮を主として含む非常に薄い植接用片を得た。次に、 コラーゲン／ＧＡＧ格子からシリコーン層を剥ぎ取った。毛管出血は食塩パンク を用いて制御した。コラーゲン／ＧＡＧ格子を次に表皮自己移、植片で被覆した 。シートと６対１のメツシュ状植接用片の両者を使用した。これら植接用片を縫 合し、常法で仕上げた。 これら手術の結果を第２表に示す。二層膜の助げで再生された再形成皮膚は傷の 縮小で、または常用の自己移植で再生された組織よりなめらかで、均一で、また 柔軟である一方、線維症が少なく、また傷痕も少なかった。 コラーゲン／ＧＡＧ格子に適用されたメツシュ状自己移植用片で治療された傷に おいて、間質組織の生長は表皮だけでなく、実質的な真皮も含む普通に採取され たメツシュ状自己移植用片から期待される速度で進んだ。しかしながら、二層膜 を利用している自己移植用片は初期表皮閉鎖後にメツシュパターンの徴候をごく わずかしか示さなかった。数カ月後に非常に注意深（観察してメツシュパターン が検出できるに過ぎなかった。さらｆＣ。 非洛に薄い表皮層の採取は繰り返して採取された領ＬＡ、！Ｌおいても供与部位 の速やかな回復、通常は採取後１週間０ 以内でのＩＩ］］腹を兄込めるよう１ＣＩ−た。 第２表 自己移植の態様を用いての人工皮膚植接用片の特性患　者　数　男性７人文性３ 人 焼届のタイプ　火　傷 咬傷全体の大きさ　ＢＳＡの５０〜９５％（平均７７％）三度の咬傷の大きさ　 ＢＳＡの５０〜９０％（平均６４％）人工皮膚で被覆された総面積　ＢＳＡの１ ５〜６０％（平均２７％）感染に対する二次の膜損失　な　し 血腫に対する二次の膜損失　１人の患者のＢＳＡの６％実施例３：水性細胞質ザ ス投ンジョンの製造本発明の種々の態様の幾つかを使用するため、オートロガス 細胞の水性サスはンジョンを製造する必要がある。 かかる細胞はデルマトームを使用゛−てモルモットのを又は人体から又はモルモ ットの耳のへりから採取される。 採取された皮膚をカルシウムあるいはマグネシウムを含有しない冷（４°Ｃ）リ ン酸バッファー塩水（ＰＢＳ）（カタログ＃１７−５１５８．　Ｍ、Ａ、Ｂｉｏ ｐｒＱｄｕｃｔｓ　。 Ｗａｌｋｅｒｓｖｉｌｌｅ　、　ＭＤ）　ｙツける。皮ＪＩＫ　ヲ）　’）　ズ シンテ処理する前に、１ｌＪｊＰＢｓ　（約６０℃）に移す。ついで、この皮フ を、ＰＢＳで０．２５％トリプシン、ご稀沢さ肚たカルシウム又）まマグネシウ ムを含まなし・Ｈａａ−の均合塩溶液（カタログ＃１７−１６０Ｈ，Ｍ−Ａ−Ｂ ｉｏｐｒｏｄ＋］ｃｔｓ’）の２．５％トリプシン溶液中で３７゛Ｃで４０分間 イノキュベーンヨンする。インキュベーションについ℃、比較的多数の再生産性 基礎細胞を含む外皮を組織培養媒地（使用直前に１０％の牛の胎児の血清および Ｌ−グルタミンが補充されたＤｕｌｂｃｃｏ　の変ａ　制媒地カタログ＃１２− ７３７　Ｂ、　Ｍ　、Ａ　−Ｂｉｏｐｒｄｕｃｔｓ　）に移す。ついで、この溶 液を１．５分間攪拌して組織から基礎細胞を除去する。ついでサスＲンジョンを 無菌ガーゼを通してイ濾過して大きな組織片を除去する。 細胞濃度は細胞計数チェンバー又は電子粒子カウンターを使用して定量した。細 胞生存能力はトリ・ξンブルー（Ｇｒａｎｄ　工５ｌａｎｄ　Ｂｉｏｌｏｇｉｃ ａｌ　Ｃａｎｐａｎｙ　、　Ｇｒａｎａ　ｌ５ｌａｎｄ　。 ＮＹ）　で細胞のアリコートを着色して決定する。細胞密度は組織培養媒地を添 加して約１ｏ　生存能カ可能刊胞／　ｍｌに調製する。 実施例４：細胞懸濁液を移植する方法 損傷床に縫い合わせたコラーゲン／ＣＡＣ，烙子に水性懸濁液を分散させる種々 の方法は、総計約ろ０匹のてんじくねずみと約ろ０匹のねずみＬＣ使用された。 代表的な操（νにおいて、表皮および真皮から・ξニクラスカルノサスまでを含 む裂は目あるいは全層の動物皮膚を動物の背中のある部分から除去する。はとん どの二の切除は１．５１２ ×６０（１）であった。皮’＋’ｆを外科的こ除ぎ、実施例１　：、Ｉ：記」・ 父されたよう（（作り）れた−片の二層膜で飼換した。その膜を傷に合わさるよ うに、従来技術を用いてわずカ・の張力下でその場所に縫い合わせる。目視観察 すると、コラーケ゛ン／　Ｇ　Ａ　Ｇ格子：ま約５ないし７日間以内に血管状と なった。７ないし１０日の期１Ｊ４１後、シリコン層を注意深（損１易仄から剥 ぎ、血管状のコラーゲン／ＧＡＧ格子ハ区域を暴露した。実施例３　Ｋ記載され たように調翌された自己細胞の水性懸濁液を以下の（・ずれかの技術により暴露 Ｉ−だ格子に施用した： α。第４図に示したシリコン被覆プラスチック手段により、格子疋わたっである 量の懸濁液を散布すること；ｂ、小び・ｃ上に位置するバネ負荷手段（、・Ｃよ り、格子てわたっである量の懸濁液を噴霧すること；Ｃ０格子上にある量の懸濁 液を移し、液体を格子内１で浸透させること； ｄ、皮下注射器を用いである量の懸濁液を水分制御層を経てコラーゲ゛ン／ＧＡ Ｇ格子へ注入すること。 ｉ１４記全ての技術は、細胞のコロニーへと増殖した上皮細胞を植え付けること に成功した。細眠のコロニーが完全に傷口をふさぐＭに、はとんどの動物は組織 学研究のための犠牲にした。しかし、傷口がふさぐまで犠牲とされなかったこれ らの動物に関し、細胞のコロニーはＩ成長じて集合し、永久的かつ機能的な新表 皮層を形成した。 この新人皮層域は毛嚢、皮脂腺、あるいは汗腺に欠ける１川箔］つ一ン）うたが 、傷の収縮あういは意図しない治療、こより生成（７た新エビエルミスよりイ９ 、新と皮層、よよりな′７）らがで、傷跡があまり残らず、およびあまり繊維状 でなかった。適当に移植したコラーグ゛ン／ＧＡＧ格子により助成された堪：ま 通常的１０ないし１４日シ、内にふさがっ本発明は細胞および組織の夜長を併重 するための・ヌ維質蛋白質洛子を使用することに産業上の利１用性がある。 同等の方法 当業者であれば通常の実験操作′・′こより、ここで特定された手法に対して多 数の同等の方法およびここに記載された移植された格子を確認し、また突き止め ることができる。このような同等の方法は本発明の範囲Ｉこあるものとみなされ 、次の特許請求の範囲の記載はそれらを権利範囲内にあるものとする。 参考文献 １、Ｒ＋Ｈ０Ｓｉｍｓ等著″Ａｎ　工ｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ｔｏ　ｔｈｅＢ ｉｏｌｏｇｙ　ｏｆ　ｔｈｅ　５ｋｌｎ”、Ｆ、Ａ＋Ｄａｖｉｓ社、ｐＨｉ１ａ 　、　。 １９７０　；ＷｌＭｏｎｔ、ａｇｎａ等著″Ｔｈｅ　５ｔｒｕ、ｃｔ、・ａｒｅ 　ａｎｄＦｕｎｃｔｉｏｎ　ｏｆ　５ｋｉｎ″第６版（Ａｂａｄｓ＋ｈｉ＋ｒ　 Ｐｒ５ｓｓ　。 Ｎｅｉ　Ｙｏｒｋ　、１９７４　）　：Ｈ，ＧｒａＹ著、”　Ａ！１ａｔ、ｏｍ ｖ　。 Ｄｅｓｃｒｉｐｔｉｖｅ　ａｎｄ　Ｓｕｒｇ、１ｃａ１″　第１５版工）、１１ ３５等（Ｂｏｕｎｔｙ　Ｂｏｏｋｓ　、　Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ　、　１９７７　） ２、Ｈ＋Ｃ，Ｐｏ１．ｋ　Ｊｒ等編著″（Ｃｏｎｔｅｍｐｏｒａｒｙ　Ｂｕｒｎ Ｍａ：し＋１＊：ｒ＋ｅｒ１Ｌ　）Ｐ＋　６４５等（Ｌｌｆｆｌｅ　、Ｂｒ０〃 ｒｉ　社、Ｂ−）：バ、ｏｎ、ＭＡ、１９７１） ろ、Ｐｏｌｋ等著″５ｕｐｒａ、　ｎｏｔｅ２″Ｐ、４１２　等４、Ｊ、Ｆ、Ｂ ｕｒｋｅ等著″Ａ！−１ｎ、Ｓ、、１ｒ、ｇ、１８２（３）Ｐ、１８３−１９５ （１９’７５） ５、Ｐｏ１．に１著”５ｕｐｒａ　ｎ０ｔｅ　２″Ｐ、３６２等６、Ｐｏｌｋ等 著”　５ｕｐｒａ　ｎｏｔｅ　２”Ｐ、３８５　等７、Ｐｏｌｋ等著”　５ｕｐ ｒａ　ｎｏｔｅ　２″Ｐ、６８′５　等３、　Ｒ，Ｆｌｅｉ、ｓｃｈｍａ−ｊｅ ｒ　１著　”　Ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ　ＭｅｓｅｎｃｈｙｍａｌＩｎｔｅｒａｃ ｔｉｏｎ”（Ｗｌｌｌｉａｍ、ｓ　ａｎｄ　Ｗｉｌｋｉｎｓ　＋Ｂａｌｔｉｍｏ ｒｅ　、　１９６Ｂ　）　；　Ｒ、Ｈ、Ｋａｈｎ等著”　工１１　Ｖｉ　ｔｒｏ 　８″４５１（１９７ろ）；Ｒ，Ｈ，Ｋａｈｎ等著”Ｊ、Ｎａｔ’ｌ　Ｃａ−ｎ ｃｅｒ　Ｉｎ５ｔ。 ５３”１４７１（１９７４）；　Ｍ−Ｒｅｇｎｉｅｒ″Ａｃｔａ−Ｄｅｒｍａｔ −ｏｖｅｎｅｒ　（Ｓｔｏｃｋｈｏｌｎ）　５３″２４？１等（１９７３）；９ 、Ｍ＋Ｐｒｕｎｉ　ｅｒａｓ″Ｊ　、工ｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｖｅ　Ｄｅｒｍａ ｔｏｌｏｇｙ６７″Ｐ、　５８（Ｗｉｌｌｉａｍ　＆　Ｗｉｌｋｊ、ｎ　Ｂａ１ ｔｉｒｎｏｒｅ　、　１９７６）１０、Ｒ，Ｏ＋Ｇｒｅｐｐ　”Ｒｅｃｅｎｔ　 Ｐｒｏｇｒｅｓｓ　ｉｎ　ＨｏｒｍｏｎｅＲｅｓｅａｒｃｈ　ろ口″５ろろ　等 （Ａｃａｄ９ｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ　、ＮｅｗＹｏｒｋ　、１９７４）　；ＲｌＨ ，５ｔａｒｋｅｙ等著”５ｃｉｅｎｃｅ１８９″　８００（１９７５） ｉ　１．　Ｌ、Ｂ、Ｃｈｅｎ等”　５ｃｉｅｎｃｅ　１９７″７７６（１９７７ ）１２、ＤＪ、Ｐｒｅｓｃｏｔ、を編著”　Ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ　 Ｅｕ、ｋａｒｙｏｔｉｃＧｅ　ｌ　１．　ｓ　Ｐ、１０７　等（Ａｃａｃｌｅｍ ｉｃ　Ｐｒｅｓｓ　、　Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋｌ　９７５　） １ろ　Ａ＋Ｗ＋Ｂｅｒｎｈｅｉｍｅｒ編著　ＭｅＣｈａｎｉｓｍｓ　ｉｎＢ、つ ｒｔｑ　ｒｉ、ｉｌ　Ｔｏ？ｓ　Ｌ＞ｈ　Ｏで、、−’ｐ、　５　ろ−８４（Ｗ ｉｌｅｙ　、　Ｎ９ＷＹＯｒ：＜　、１９７６　）　：Ｄ−Ｍ−Ｇｉｌｌ著”　 Ａｄ−Ｉ、Ｃｙｃｌ、Ｎ＋＝ｑＬ、Ｒ−！ｓ、８”８５（１９７７） １　４、　Ｈ＋Ｎ　＋Ａｎｔｏｎｉａ、：ｉａｓ　等″　Ｐｒ０ｃ　＋Ｎａｔｌ 　、Ａｒａｄ　、Ｓｃｉ　−７６″１８０９−ＩＥＮろ（１９７９）１５、Ｊ　 、Ｆｏｌｋｍａｎ等著”　Ｊ　、　ＥＸＩ）　−Ｍｅｄ　、　１ろろ”６７５（ ２９７１） １６、　Ｈ、Ｇｒｅｅｎ　１者”Ｃｅ１ｌ　１５″８０１，８０５（１９７８） 浄書（内容に変更なし） 第１図 汗轍 手続補正書（方式） 昭和（８年　２月／８日 特許昨長官若杉和夫殿 １、事件の表示 Ｓハ　４イｔオ６　”ｊ’　−Ｌ　’ｉ≧　ｔ、ｈｎ３　ｎ’ｌ’　）４　’； を子　７７　へろ補正をする者 事件との関係　出　願　人 住所 久叡　マプフｘ　ｆ、７’／　イ°７λアテエート　オフ５補正命令の日付　昭 和ニー８年　７月　７７日（発送日）Ｃ３）タイツ“Ｌ　ｔ：　”ｎ訃・鷹　− ５工４１こＩｊｌ／８１・１フラＴフイ２１゛友国際調査報告

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １　次工程かＬ−）なる、火傷部での組織紙生を併託する方法。 ａ、繊維格］−を該火傷部と接触させて固定する：い、該火傷部でＣ５徂織１友 長な促進する洲］胞を選択する；Ｃ０該坩胞を該格子上か中足接種する。 ２、次工程からなる、火傷部での組織発生を促進する方法。 ａ、　（Ｉ）　身体酵素の存在下でコントロール可能の主群性り付し； （２］　火傷部中へ植皮即ち移植された時：０実質−トの免疫反応ないし炎症は 全く誘発しない；（３）細胞の移動、再生を可能・１こするに充分な高度の孔質 度、孔径、透過性を有する； （４）火傷部上に植皮されたならば裂け、破壊、・こ耐える充分に高い強度を持 つ； 繊維格子を創生ずる； ｂ、該格子を該火傷部と接触させて固定する；Ｃ０該火傷部での組織成長を促進 する細胞を選択する；ｄ、該格子上又は中に該細胞を接種する。、６、次工程か らなる、火傷部での組織発生を促進する方法。 ａ、該火傷部位の健康な組伐内に通常存在する細胞間１ビ白マトリツクスの形態 上の特徴に実質−ヒ似た形態」二の特徴を持つ繊維（各子をａｌｌ生ずる；Ｌ） 、該格子を亥火：易部と接とさせて固定する；Ｃ１該火傷部での組織成長を促進 する細胞を選択する；ｄ、該細胞を該格子上か中に接種する。 ４　次工程からなる手段により該細胞を該格子トか中へ接種する、請求の範囲１ ，２又はろ記２Ｉ夕の方法。 ａ、供与部位から一片の組゛哉を除く。 ｂ、該１組織片を該格子上に同定するっ５　次工程からなる手段により該細胞を 該格子上か中へ接種する、請求の範囲１，２又は６記敗の方法、ａ、細胞を含む 水性サスはンションを作る：ｂ。一定量の該水１生サスにンションを該格子上か 中へ分与する。 ６　ブラシを該サスペンションに浸漬し、該ブラシを該サス投ンションから取り 出し、該ブラシを該格子上に塗り付けることにより該水性サス（ンションを該格 子上又は中に分与する、請求の範囲５記載の方法。 Ｚ　一定量の該サスペンションをむき出しの該格子に施用し、該サスペンション を該格子中に浸潤させることにより該水性サスペンションを該格子上又は中に分 与する、請求の範囲５記載の方法。 ８　該水性サス又ンションを、該サスペンションヲ該格子上に噴霧することによ り該格子上又は中に分与する請求の範囲５記載の方法。 ９　該水性サスにンションを、一定量の該サスＲンノヨンを該格子に施用し、該 格子表面にそって塗付装置を４８ 動ｎ・すことにより液量のサスベノ／ヨンを該格子に全村することにより、該格 子上又は中に分与する、請求の範囲５記載の方法。 １０、該水性サスはンションを、中空導管と通液している容器に該サス投ンショ ンを入れ、該導管を該格子に注入し、該容器から該サスペンションを該導管を通 じ該格子中に放出することにより、該格子上又は中に分与する、請求の範囲５記 載の方法。 １１、火焼部での組織発生を促進するために繊維格子を使用する方法において、 細胞を該格子中に接種することにより組織発生速度を高めることが特徴である方 法。 １２　火焼部での組織発生を促進するためｌ′Ｃ繊推格子を使用する方法（、（ おいて、 細胞を該格子中に接種することにより該組織表面に存在する帝痕の量を凍らすこ とが特徴である方法。 １６　ａ、身体酵素の存在下でコントロール可能の主群性を持つ： ｂ、火傷部中へ植皮ｉ２Ｄち移植された時；（実質上の免疫反応ないし炎症な全 く誘発しない；Ｃ８細胞の移動、再生を可能にするに充分高い孔□　負度、孔径 、透過性を有す； ｄ、火焼部上に植皮されたならば裂けと破壊に酎える充分て高い強度を持つ； 繊維格子を使用する方法Ｈ，ｃおいて、該格子に一４１泡を接・オすることを特 徴とする方糺１４、健康な組哉内；（通常存在−ｒる組胞内−叶白マトリックス の形態的特徴に似た形態的特徴をｊ÷つ―、４１ｒ洛子を使用Ｊ−る方法におい て、 細胞を該格子中に接種することを特徴とする方法。 １５、該格子が、グリコースアミノグリカン疋架橋、共有結合されたコラーゲン 分子からなる、請求の範囲１゜２、ろ、１１，１２．１３又は１４記載の方法。 １６　該グリコサミノグリカンが次群：コンドロイチン６−サルフエート、コン ドロイチン４−サルフェート。 ヘパリン、ヘパランサルフェート、ケラタンサルフェート、デルマタンサルフエ ート、キチン、キトサンから選択される、請求の範囲１５記載の方法。 １Ｚ　細胞を該格子中へ接種する前に、該細胞を、該細胞の再生速度を高める物 質で収縮させる、を請求の範囲１．２．ろ、１１，１２，１３又は１４記載の方 法。 １８　該物質が次群：表皮成長因子、フィブロネクチン、環状ヌクレオチド、コ レラ毒素、血小板由来成長１月子、組織脈管形成因子から選択される、請求の範 囲１７記載の方法。 １９　該細胞が自然に存在する細胞、ツ・らなる、請求の範囲１，２，３．１１ 又は１２記載の方法。 ２０、該格子が該火暁部と接触して固定され、細胞を該格子中又は上に移植する 前に間葉＠１＠を該火傷部から該格子中へ浸潤させるに充分な時間経過させる、 請求０ のミ１凱用１，２．ろ、１１又は１２ｇ己載の方法。 ２１、該格子を、該格子が該火傷床と接触して固定されている時に透水制御層に 固定する、請求の範囲１．２．３゜１１又は１２記載の方法。 ２２、グリコサミノグリカンに架橋、共有結合され、細胞が接種されているコラ −ダン分子がら本質的になる繊維格子。 ２６　ａ、身体酵素の存在下でコントロール可能の主群性を有する； ｂ、火傷部へ植皮即ち移植された時に実質上の免疫反応ないし炎症を全く誘発し ない； Ｃ１細砲の移動、再生を可能にするに充分高度の孔負度、孔径、透過性を有する ； ｄ、火焼部上に植皮さ肚たならば突上、破壊（、Ｃ面子える充分に高い強度を有 し； 細胞が接種されている、繊維格子。 ２４、該火傷部位の健康組織内：・ご通常存在する細胞内蛋白マトリックスの形 態的特徴に実質上匍た形態的ｃ？Ｒを有し、細胞が接種されている繊維格子。 浄書（内８１″−変更なし） 繊准名子？含む−・！胞桜種方云