JPH0199565A

JPH0199565A - フィブリン糊調製用キット

Info

Publication number: JPH0199565A
Application number: JP62257000A
Authority: JP
Inventors: Hideo Nishimaki; 西槙　秀雄; Kazuo Takechi; 武智　和男; Yutaka Hirao; 平尾　豊; Yatsuhiro Kamimura; 上村　八尋
Original assignee: Green Cross Corp Japan
Current assignee: Mitsubishi Tanabe Pharma Corp
Priority date: 1987-10-12
Filing date: 1987-10-12
Publication date: 1989-04-18

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】〔利用分野〕本発明はフィブリノゲン、トロンビンおよび特定量のフ
ィブロネクチンからなるフィブリン糊調製用キットに関
する。

〔従来技術〕

フィブリン糊（ａｄｈｅｎｓ　１ｖｅ）は、ヒト血漿か
ら精製したフィブリノゲンを溶解し、これにヒト血漿か
ら精製させて生じるフィブリンが組織膠着性を存するこ
とを利用している。

血液に含まれるフィブリノゲンは組織が創傷を受けたと
き他の血液成分と共に創傷面の毛細血管から流出して組
織間を充填し、血液中のトロンビンと作用し合って不溶
性のフィブリンとなり、これが創傷面を膠着させる働き
をもっている。この膠着作用により創傷面に繊維芽細胞
が発生しやすくなり、これがやがて繊維細胞となって組
織が固定し、創傷面は治癒する。

フィブリン糊は下記の如き特性を有している。

・生理的機作を応用した接着剤である。

・接着が迅速である。

・接着に過度の熱および圧力を必要としない。

・接着部位の水分とは無関係に接着が可能である。

このため、フィブリン糊は次の如き用途に有用である。

・出血している創傷のシール・神経、肘、血管などの接着または縫合補強・骨切片の
固定より具体的適用範囲としては次の如きものが挙げられる
。

・硬膜接着・神経吻合・微小血管吻合・血管縫合の保全・外傷性鼓膜欠損の閉鎖・代用血管の封鎖および縫合部位の保全・肝臓破壊、肝
試験切開部および胆嚢切開部の接着・腎臓部分切除、腎臓破壊および前立腺切除時の創傷処
方・腸吻合の保全・裂皮膚弁の接着・骨および軟骨部創傷腔の閉鎖（特に出血の危険性のあ
る患者）・°軟骨および骨部接着・朧縫合の補強・気胸時の胸膜の接着・出血の恐れのある場合、抜歯後歯槽封鎖・コラーゲン
線維束を用いる扁桃窩の封鎖時（特に出血の危険性のあ
る患者）フィブリン糊としては、従来フイブリノゲンおよびトロ
ンビンを主成分とするものが知られている。

〔発明が解決しようとする問題点〕

ところが、上記公知のフィブリン瑚は、フィブロブラス
トなどへの浸潤が必ずしも良好でない、ワウンド−ヒー
リング（ｗｏｕｎｄ−ｈｅａｌｉｎｇ）が早いとはいえ
ない、接着力の持続性が良好でない等の問題点を有して
おり、従って創傷治癒において必ずしも満足しうるちの
ではない。

本発明の目的は、フィブロブラストなどへの浸潤が良好
、ワウンド−ヒーリングが早く、接着力が持続する等の
特徴を有し創傷治癒効果にさらに優れたフィブリン糊調
製用キットを提供することである。

〔問題点を解決するための手段〕

本発明者らは、上記目的を達成べく種々研究を行った結
果、従来のフィブリン糊の主要組成であるフィブリノゲ
ンおよびトロンビンに、特定量のフィブロネクチンを添
加することにより、所期の目的を達成できることを見出
し、本発明を完成し即ち、本発明はフィブリノゲンおよ
びトロンビンからなるフィブリン糊調製用キットにおい
て、さらにフィブロネクチンをフィブリノゲン１００重
量部当たり５〜５０重量部の割合で添付してなることを
特徴とするキットに関する。

（フィブリノゲン）本発明で使用されるフィブリノゲンは、通常ヒトまたは
動物の血漿から得られる。生体適合性の観点からヒトを
対象とする場合にはヒトの血漿から得られるフィブリノ
ゲンを、また動物を対象とする場合にはその動物の血漿
から得られるフイブリノゲンを原料として用いる方こと
が好ましい。

かようなフィブリノゲンとしては、たとえば厚生省薬務
局監修の生物学的製剤基準（１９７９年第２０１〜２０
３頁）に従って製造された医療用乾燥フィブリノゲンを
使用することができる。

（トロンビン）トロンビンは、通常トロンビンとしての生物活性または
生理活性を有するもの、たとえば血漿蛋白を分画して得
られるものなどが使用される。

すなわち、たとえばヒトまたはウシの血漿から精製した
プロトロンビンにＣａ”″の存在下で、トロンボプラス
チン、ヘビ毒などを作用させて調製したものを用いるこ
とができる。また、市販の薬局方収載品を用いてもよい
。

（フィブロネクチン）フィブロネクチンは腺維芽細胞膜蛋白（ｆｉｂｒｏ−ｎ
ｅｃｔｉｎ）と呼ばれており、血漿の他腺維芽細胞など
の開票系細胞や表皮などの基底膜に存在する糖蛋白であ
る。

血液凝固に際しては、血液凝固筒■因子のトランスグル
タミネーションの作用によりフィブリンのγ鎖間結合が
促進され、フィブリンの架橋が形成される。この際、同
じ第■因子の触媒作用により、フィブロネクチンを通じ
てフィブリンのα鎖間の架橋が形成され、これにより血
液凝固はより完全なものとなる。フィブロネクチンはま
た細胞間、細胞支持組織間を粘着あるいは結合させる作
用があり、創傷治癒促進の薬理効果がある。

フィブロネクチンとしては、一般に血漿蛋白の分画、線
維芽細胞、その培養液等から分離することによって得ら
れたものなどが使用される。

本発明で使用されるフィブロネクチンは、医薬品として
提供しうる程度に精製されておればよい。

その調製法としては、特開昭５７−１４０７２４号公報
、特開昭５８−１２１２２０号公報、特開昭５９−６７
２２８号公報などに記載の方法が挙げられる。

（その他の成分）本発明のキットには、必要に応じて安定化剤、線溶阻害
剤、溶解剤等を追加添付することもできる。

本発明で用いられる安定化剤としては、糖、糖アルコー
ル、アミノ酸、非イオン系界面活性剤などが挙げられる
。

糖としては、単糖類（グルコース、ガラクトース、フル
クトースなど）、二Ｆ’ｆｆ１（ショ糖、ラクトース、
マルトースなど）、多ＩＪ！Ｗ（テンプン、デキストリ
ン、セルロースなど）が挙げられる。

塘アルコールとしては、ソルビトール、マンニトール、
キシリトールなどが挙げられる。

アミノ酸としては、中性アミノ酸（グリシン、アラニン
、セリン、スレオニンなど）、酸性アミノ酸（アスパラ
ギン酸、グルタミン酸など）、塩基性アミノ酸（アルギ
ニン、リジンなど）などが挙げられる。

非イオン系界面活性剤としては、ポリオール脂肪酸エス
テル（Ｓｐａｎ等）、そのポリエチレングリコール縮合
物（Ｔｗｅｅｎ等）、ポリエチレングリコール、ポリオ
キシエチレン−ポリオキシプロピレン共重合体（Ｐｌｕ
ｒｏｎｉｃ等）、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（Ｈ
ＣＯ等）などが挙げられる。

安定化剤は二種以上を併用することができる。

また、フィブリノゲン、トロンビン、フィブロネクチン
のいずれかまたは全てに添加することもできる。

これらの安定化剤の添加量としては、フィブリノデフ１
重量部に対して０．５〜５重量部、好ましくは１〜２重
量部、トロンビン５０〜１０００単位（ｕ）に対して１
０〜１００■、フィ、プロネクチン１〜１００重量部に
対して１０〜１００重量部程度が例示される。

線溶阻害剤としては、ε−アミノカプロン酸、アプロチ
ニン、アンチトロンビン■、尿由来トリプシン阻害剤等
を用いることができる。

なお、線溶阻害剤は二種以上を併用することができる。

また、フィブリノゲン、トロンビン、フィブロネクチン
、溶解剤のいずれか一つに添加しておくこともできる。

溶解剤としては、注射用蒸留水、注射用生理食塩水、ｐ
ｌ＋５〜８の緩衝液（リン酸系、クエン酸系など）など
が用いられる。また、キットを粉末製剤として用いる場
合、当該溶解液は不要となる。

（キットの調製）本発明のキットはフィブリノゲン単独または他の成分よ
りなる組成物（Ａ成分）、フィブロネクチン単独または
他の成分よりなる組成物（Ｂ成分）およびトロンビン単
独または他の成分よりなる組成物（Ｃ成分）のそれぞれ
（好ましくはその乾燥粉末）の成分を、単独に、または
これらのＡ−Ｃ成分の二種または全成分の混合物として
提供される。キットには、通常さらに溶解剤が添付され
、通常用時溶解剤に溶解して使用されるが、予め各成分
を溶媒で溶解しておいてもよい。

本発明キットないしは当該キットを使用して得られるフ
ィブリン糊組成物におけるフィブリノゲン、トロンビン
およびフィブロネクチンの量的割合は通常フィブリノケ
ン１０〜１００■当たり、トロンビン１〜５００単位（
Ｕ）、フィブリノデフ１００重量部当たりフィフ゛ロネ
クチン５〜５０重量部である。

本発明キットを、たとえばＡ成分、Ｂ成分およびＣ成分
それぞれを別個に包装したキットとする場合には、その
各包装単位における各成分の割合は上記量比に特定され
ず任意の割合として包装してもよく、その場合フィブリ
ン糊の調製時に、上記の割合となるように各成分を配合
すればよい。

なお、Ａ成分、Ｂ成分およびＣ成分を予め配合したキッ
トにおいては、Ａ成分、Ｂ成分およびＣ成分の混合物の
みよりなる変則キットとなり、またその場合には溶解剤
を添付してもよい。

たとえばＡ成分、Ｂ成分およびＣ成分それぞれを別個に
包装したキットを使用するフィブリン瑚の具体的な調製
方法としては、たとえばフィブリノデフ１００重量部当
たり５〜５０重量部のフィブロネクチンを添加し、この
水溶液（フィブリノゲンとして１〜Ｌｏｗ／ｖ％程度）
にトロンビン１〜５００単位Ｃｕｂ／ｍｌを加えてフィ
ブロネクチン含有フィブリン糊を作成する方法が例示さ
れる。

〔効果〕

本発明により、従来の組成のフィブリン糊と比べてフィ
ブロブラストなどへの浸潤が良好、ワウンド−ヒーリン
グ（ｗｏｕｎｄ−ｈｅａｌｉｎｇ）が早い、接着力が維
持する、などの特徴を有し創傷治癒効果にさらに優れた
フィブリン糊を提供することができる。

〔実施例・実験例〕

本発明をより詳細に説明するために、実施例および実験
例を挙げるが、本発明はこれらによって何ら限定される
ものではない。

実施例１（り使用製剤・乾燥人フィブリノゲン（フィブリノゲンーミドリ、ミドリ十字社製、−瓶中凝
固製蛋白１ｇ含有、ＨＢｓ抗原陽性のものを除外した健
康人血漿のみを用いて、Ｃｏｈｎの低温エタノール分画
法により得られたフィブリノゲン画分を除菌濾過の後紫
外線照射処理を施し、小分後真空凍結乾燥した型剤）・局方トロンとン（トロンビンーミドリ、ミドリ十字社製、−瓶中トロン
ビン５００単位含有、ＨＢｓ抗原陽性（ＲＰ　ＨＡ法）
のものを除外したヒト血漿よりプロトロンビンを分離精
製した後、カルシウムイオンの存在下でトロンボプラス
チンを作用させて製し、滅菌して凍結乾燥したもの）・フィブロネクチン（参考例により調製）・塩化カルシ
ウム液・アプロチニン注射液・注射用蒸留水（局方品）（２）調製方法乾燥人フィブリノゲン１ｇにフィブロネクチン１００■
を添加し、注射用蒸留水１２成を加えて溶解する（Ａ液
）。

別に、トロンビン４μ／ｄ、アプロチニン３０００Ｋ　
Ｉ　Ｅ／ｄ、塩化カルシウム４０ｍＭからなるン容液を
調製する（Ｂ液）。

Ａ液とＢ液を混合し、直ちにＭｉ織に塗布する。

参考例１プールした正常成人血漿よりエタノール分画して得られ
る画分−１より適当な方法でＣＯＧを精製する。たとえ
ば検出ら（Ａｎｎ、　Ｎ、Ｙ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｊ、
。

肌７４．１９７８年）の方法に従い両分−１を０．０５
５Ｍクエン酸ナトリウム緩衝液、ｐＨ６，０に溶解し、
これにプラスミンによるＣＩＧの分解を防ぐために０．
０１　ＭのＥＡＣＡ　（イプシロン・アミン・アミノカ
プロン酸）およびアプロチニン１０単位／ｄを加え、更
に臭化シアンで活性化させたセファロースにリジンをカ
ップルさせたりジン−セファロースによりプラスミンお
よびプラスミノゲンを除去したのち、ヘパリン１０単位
／　ｍｌを加えてＯ〜２　’Ｃに４８時間静置して沈澱
を集める。沈澱は０．０５Ｍリン酸緩衝液、ｐｌ！６．
０と１Ｍグリシンおよび６．５％エタノールを含乞−０
．０５５Ｍクエン酸緩衝ン夜とでそれぞれ洗浄して可溶
製蛋白を除去したのち、０．０５５Ｍクエン酸緩衝液、
ｐ）１６．３５を加えて室温にもたらし、沈澱を溶解さ
せる。これを初めと同様Ｏ〜２°Ｃに放置後沈澱を分け
とり洗浄する操作を３回繰り返し行い、最後に沈澱とし
てフィブロネクチンを含有する画分クリオプレシピテー
トを得る。

クリオプレシピテート（沈澱）をクリオプレシピテート
を集めるのに用いた原料画分−１の重量の２倍量の０．
０５Ｍ　ｌ−リス−リン酸緩衝液、ｐＨ７，０に溶解し
、これを０．０５　Ｍ　Ｉ−リス−リン酸緩衝液、ｒ＋
）１７．０で平衡化したＤＥＡＥ−セファデックスに吸
着させ、同一緩衝液および０．０９　Ｍ　）リス−リン
酸緩衝液、ρ１１７．０で洗浄して夾９＃蛋白を除去し
たのち、０．”２Ｍ）リス−リン酸緩衝液、ｐＨ７，０
でフィブロネクチンの溶出を行う。

実験例１ウィスター系ラットの背部に■度熱傷を作成（■背部を
削毛■直径４ｃｍの金属管をラットに接触■金属管中に
８０度の熱湯を１５秒間入れ熱傷惹起）、本発明のキッ
トを使用して得られたフィブリン糊（実施例１）、従来
組成のフィブリン糊（実施例１の組成からフィブロネク
チンを除いたもの）を各々、熱傷面に塗布した上に、大
腸菌含有家兎便を塗布して、５日後に上皮化の程度を観
察、比較した。その結果、本発明のものの場合、術後５
日で９０％の上皮化率を示したが、従来組成では６５％
であった。従って、本発明のキットを使用して得られた
フィブリン糊は従来品に較べて接着性・熱傷創保護等の
何れの点においても優れていることが判明した。

手続（甫正凹（自発）昭和６３年１月２５日昭和６２年特許願第２５７０００号２、発明の名称フィブリン糊調製用キット３、補正をする者事件との関係　特許出願人氏名（名称）　株式会社　ミドリ十字４、代理人■５４１住所　大阪市東区平野町４丁目５６番地（場末ビル）置　　（０６）　２２７−１１５６明細書の「発明の詳細な説明」の欄６、補正の内容（１）明細書第４頁第６行および第１１行の「ワウンド
」を「ウーンド」に訂正する。

（２）明細書第４頁第１６行の「達成」の後に「す」を
加入する。

（３）明細書第５頁第１３行の「方」を削除する。

（４）明細書第１１頁第１３〜１４行の「ワウンド」を
「ウーンド」に訂正する。

（５）明細書第１３頁第６行の「μ」を「単位」に訂正
する。

（６）明細書第１３頁第１８行の「単位」をｒＫＩＥＪ
に訂正する。

Claims

【特許請求の範囲】

フィブリノゲンおよびトロンビンからなるフィブリン糊
調製用キットにおいて、さらにフィブロネクチンをフィ
ブリノゲン１００重量部当たり５〜５０重量部の割合で
添付してなることを特徴とするキット。