BRPI0206708B1 - Composição sólida, composição para hemostasia, vedação de tecido e colagem de tecido, e, usos de um veículo de colágeno - Google Patents

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“COMPOSIÇÃO SÓLIDA, COMPOSIÇÃO PARA HEMOSTASIA, VEDAÇÃO DE TECIDO E COLAGEM DE TECIDO, E, USOS DE UM VEÍCULO DE COLÁGENO.” CAMPO DA INVENÇÃO A presente invenção refere-se a uma composição absorvível pronta para o uso para a colagem de tecido, vedação de tecido e hemostasia, que consiste essencialmente de um veículo revestido com componentes humanos solidamente fixados de cola de fibrina: fibrinogênio humano e trombina humana. Esta combinação fixa pode ser aplicada diretamente a, por exemplo, uma superfície de ferida. Mediante contato com o sangue, fluidos corpóreos ou solução salina fisiológica, o mecanismo deste sistema simula o estágio final da cascata de coagulação, na qual a trombina catalisa a conversão de fibrinogênio para fibrina e a ativação do fator XIII para fornecer XHIa. O fator XHIa, uma vez formado, estabiliza o coágulo de fibrina através de reticulação covalente.

Do mesmo modo que um adesivo de dois componentes, a superfície da ferida e o veículo são colados, de modo conjunto, através de polimerização. Durante este processo, que dura aproximadamente 3 a 5 minutos, a composição da invenção é preferivelmente pressionada sobre a área da ferida. Os componentes da composição da invenção são enzimaticamente degradados em cerca de 4- 6 meses, após a aplicação. TÉCNICA ANTECEDENTE

Colas de fibrina comerciais, que simulam o último estágio da cascata de coagulação, consistem de uma solução de fibrinogênio altamente concentrada para ser misturada com uma solução de trombina antes da aplicação è ferida cirúrgica existente. Estas misturas contêm um inibidor de fibrinólise, por exemplo, aprotinina ou ácido ε-aminocapróico, para evitar a dissolução prematura do coágulo de fibrina pela plasmina de enzima fibrinolítica. Estas colas de fibrina de dois componentes são valiosas em vários procedimentos cirúrgicos, mas podem ser lavadas antes que a hemostasia seja alcançada se a sangria for pesado. Além disso, as colas de fibrina de dois componentes requerem alguns estágios preparatórios, que incluem o descongelamento ou a dissolução. Deste modo, elas não são bastante práticas e são incômodas para trabalhar e é necessário experiência para o uso bem sucedido destas colas de fibrina.

Durante a última década, numerosos agentes de vedação de fibrina tomaram-se os métodos de escolha em cimrgia em uma quantidade de indicações. Entretanto, na maioria dos ensaios com colas de fibrina, uma lã cirúrgica de colágeno foi adicionalmente usada para aperfeiçoar as características hemostáticas e adesivas, indicando as suas desvantagens e o seu uso restrito pelos cirurgiões.

Colágeno em sido usado como um agente hemostático desde os últimos anos sessenta. O colágeno é a proteína estrutural mais freqüente em todos os mamíferos. A proteína monomérica de aproximadamente 300 kDa (tropocolágeno) é covalentemente reticulada em sítios específicos. A proteína madura é portanto insolúvel e forma fibrilas características com alta resistência à tração. Numerosas subclasses de colágeno foram descritas, a mais comum das quais é o colágeno tipo I, o principal tio de colágeno na pele, tendões, ossos e córnea. O colágeno é uma proteína fibrosa, que consiste de uma hélice tripla com um comprimento de aproximadamente 290 mm. Cinco destas hélices triplas (moléculas de tropocolágeno) são escalonados para formar uma microfibrila com um diâmetro de aproximadamente 3, 6 nm. As microfibrilas possuem segmentos polares e não- polares, que são prontamente acessíveis para interações interfibrilares e intrafibrilares. Microfibrilas são compactadas em uma treliça tetragonal para formar subfibrilas com um diâmetro de cerca de 30 nm. Estas subfibrilas são então reunidas na fibrila de colágeno, a unidade básica do tecido conectivo, que possui um diâmetro de várias centenas de nm e é portanto visível à luz do microscópio como uma linha delgada. O colágeno pode ser usado como um material para a vedação de feridas, possivelmente com um revestimento, que compreende uma cola de fibrina. Colas de fibrina, isto é a combinação de fibrinogênio, trombina e aprotinina, tem sido sucessivamente usados terapeuticamente durante muitos anos para a colagem de tecidos e nervos e para a vedação de superfícies quando existe uma sangria menor. Uma desvantagem das colas de fibrina tem sido a de que, no caso de sangria maior, a cola é usualmente lavada antes que polimerização de fibrina suficiente tenha ocorrido. Para superar este problema, os cirurgiões começaram a aplicar manualmente colas de fibrina líquida a veículos absorvíveis, tais que lã cirúrgica de colágeno. A despeito do notável sucesso destas aplicações combinadas, este método não tem sido aplicado em uma larga escala, devido a algumas desvantagens. A preparação é relativamente trabalhosa, o método requer experiência e pessoal habilitado, e a preparação não está prontamente disponível em casos de emergência, o tempo requerido para a preparação estando na faixa de 10 a 15 minutos. Estes fatores estimularam o desenvolvimento de um produto aperfeiçoado, resultando no desenvolvimento de uma combinação fixa de um veículo de colágeno coberto com um revestimento de fibrinogênio sólido, trombina sólida e aprotinina sólida, conforme exposto na EP 0 059 265. A função do veículo de colágeno exposto na EP 0 059 265 é principalmente aquela de um veículo, que adsorve e confere estabilidade mecânica à preparação de coagulação, que é revestida.

Um produto que combina as características hemostáticas da cola de fibrina com os recursos de colágeno como um veículo foi desenvolvido e manufatura sob a marca registrada TachoComb®. TachoComb® é uma combinação fixa prontamente aplicável pronta para o uso de um adesivo de colágeno revestido com os seguintes componentes ativos de cola de fibrina: fibrinogênio humano, trombina bovina e aprotinina bovina.

TachoComb® tem sido vendido desde os primeiros anos da década de 1990 por Ntcomed Pharma e foi usado em ensaios clínicos na Europa em mais do que 2500 pacientes. O produto foi, além disso, usado em mais do que 700 pacientes no programa clínico japonês em uma ampla variedade de indicações, tais que ressecções de fígado e pulmão, cirurgia do trato biliar, do baço, renal e cirurgia pancreática, cirurgia de ENT, cirurgia ginecológica, e cirurgia vascular. Foi verificado que TachoComb® é eficaz e seguro. Não foram relatadas complicações clínicas relacionadas à aplicação de TachoComb® no curso de ensaios clínicos realizados. Entretanto, anticorpos contra aprotinina ocorreram em três estudos japoneses.

Um total de apenas 37 reações à droga adversas espontâneas (ADR) foram relatadas durante anos de uso clínico de milhares de adesivos TachoComb®. Dezesseis destas ADRs poderíam estar teoricamente relacionadas a rações contra componente de TachoComb® (febre, pirexia, eosinofilia, tempo de protrombina prolongado, hipersensibilidade, reações imunológicas ou alérgicas. Uma ADR (resposta imunológica) estava aparentemente relacionada ao tratamento com TachoComb®.

Na WO 97/37694 (Immuno France S. A) é exposto, no exemplo de referência 4, que quando um produto de colágeno ou TachoComb® foi usado, não houve hemostasia, conduzindo à sangria até a morte; TachoComb® foi usado em contraste com hemostasia dentro de 5 minutos quando um produto de colágeno sem um teor de trombina, preparado de acordo com a WO 97/37694, foi preparado.

Na W096/40033, as desvantagens da trombina bovina usada em TachoComb® são enfatizadas pelo fato de que o uso da espécie bovina ou de outras espécies de trombina podem introduzir contaminação viral danosa e possível transmissão de doenças bovinas, tais como encefalite espongiforme bovina.

DESCRIÇÃO DETALHADA A presente invenção refere-se a uma composição sólida, que consiste essencialmente de um veículo, que possui pelo menos uma das seguintes propriedades. módulo de elasticidade na faixa de 5-100 N/cm2, tal como de 10-50 N/cm2; densidade de 1-10 mg/cm3, tal como de 2-7 mg/cm2; diâmetro de câmara maior que 0,75 mm e menor que 4 mm e/ou tendo um diâmetro de câmara médio inferior a 3 mm; e uniformemente distribuído e fixado sobre o referido veículo, b) fibrinogênio sólido, e c) trombina sólida. A composição pode ter duas, três ou todas as propriedades físicas acima mencionadas. Nas modalidades presentemente preferidas, o material do veículo é produzido conforme descrito em DK PA 2001 00135 e, além disso no pedido intitulado “A method of preparing a collagen sponge” depositado por Nycomed Pharma AS em 25 de janeiro de 2002, que reivindica prioridade a partir do referido pedido. No presente contexto, o termo “ diâmetro da câmara” deve ser entendido como a distância parede a parede em linha reta mais longa em uma câmara, isto é a maior distância em linha reta diagonal de uma câmara. As câmaras podem ser de uma forma poligonal, tal como de uma forma octagonal. Deste modo, quando o veículo é cortado, as câmaras são divididas e cortadas em cavernas. O fibrinogênio sólido e a trombina sólida são fixados no veículo e a maior parte do mesmo está presente nas cavernas, deste modo provendo uma distribuição substancialmente uniforme da trombina sólida e do fibrinogênio sólido. Devido a isto e à fixação, é possível introduzir quantidades substanciais de fibrinogênio e de trombina sobre o veículo, em contraste coma situação, em que as composições líquidas de trombina e fibrinogênio são, por exemplo, aplicas em gotas ou pulverizadas sobre o material.

Preparação de um veículo revestido: A preparação de um veículo revestido consiste essencialmente de: preparação de uma suspensão dos ingredientes ativos, distribuição uniforme da suspensão no veículo, secagem do veículo revestido em uma composição/fixação sólida dos ingredientes ativos no veículo. A preparação de uma suspensão com fibrinogênio e trombina compreende: prover uma mistura de fibrinogênio de fibrinogênio e de um álcool, tal como etanol, prover uma mistura de trombina de trombina e de um álcool, tal como etanol, misturar a mistura de fibrinogênio e a mistura de trombina, de modo a obter a referida suspensão.

No estágio de fornecimento das misturas, a mistura pode ser homogeneizada ou peneirada, obtendo uma suspensão contendo partículas de fibrinogênio e de trombina com o diâmetro médio de Folk Ward das partículas sendo de 25- 200 pm. A temperatura está entre 0°C e 12°C. O veículo pode ser um veículo de colágeno, tal como uma esponja de colágeno. A esponja de colágeno pode preencher pelo menos um e preferivelmente uma pluralidade dos seguintes critérios: valor de pH entre 5,0 e 6,0, teor de ácido láctico de, no máximo, 5%, teor de amônio de, no máximo, 0,5%, teor de proteína solúvel, calculado como teor de albumina de, no máximo, 0,5%, teor de cinzas de sulfato de, no máximo, 1,0%, teor de metal pesado de, no máximo, 20 ppm, pureza microbiológica de, no máximo, IO3 CFU/g, teor de colãgeno de 75 a 100%, densidade de 1 a 10 nig/ern3, módulo de elasticidade na faixa de 5-100 N/cnr.

Em uma modalidade presente mente preferida, o veículo de eolágeno é produzido conforme descrito na DK PA 2001 00135. As propriedades físicas dos três exemplos de veículos de colãgeno são providas na tabela abaixo: A distribuição uniforme das suspensões é executada ou usando um dispositivo de gotejamento, conforme exposto nas patentes U.S. N°s. 5.942.278 e 6.177.126, ou um dispositivo de aplicação, que compreende pelo menos um jato, pode ser usado para a aplicação da suspensão ao veículo. O dispositivo de aplicação de jato força a suspensão através do jato, enquanto o veículo e o jato são movidos, um em relação ao outro. O dispositivo de aplicação pode compreender ou ser disposto próximo a uma correia transportadora, uma unidade de agitação conectada a uma bomba ou um sistema de bombas ou outro equipamento de suprimento, e um jato ou sistema de jatos que se move transversal mente, por exemplo, em ângulos retos para a correia transportadora. Dependendo das características específicas dos meios, o jato ou sistema de jatos pode possuir várias formas e tamanhos. O jato ou sistema de jatos pode ser conectado ao equipamento de suprimento através de tubos. O equipamento de suprimento pode promover o meio de revestimento a partir da unidade de agitação para os sistemas de jato. Durante o processo de revestimento, o sistema de jato pode ser mover transversalmente ao veículo. Em sua posição de espera, ele pode ser retido sobre um lado da correia transportadora. O processo de revestimento pode ser iniciado por uma barreira luminosa, que detecta a presença do veículo sobre a correia transportadora e pode ser igualmente interrompida por um sinal de barreira luminosa. Um tal dispositivo de aplicação confere um volume morto relativamente pequeno e é fácil de ser manipulado, inclusive fácil de limpar. Além disto, ele confere a possibilidade de interromper o processo de revestimento a qualquer tempo, é aplicável em uma faixa de viscosidade relativamente ampla, e ele confere um revestimento homogêneo.

Ambos os sistemas aplicam um volume de 0,08 ml - 0,12 ml de suspensão por cm2 de veículo.

Um estágio importante é a secagem de uma suspensão de fibrinogênio, trombina e um álcool, aplicada como um revestimento úmido sobre uma superfície de revestimento de um veículo. Um exemplo de um método compreende o estágio de submeter o veículo revestido a uma pressão abaixo de 1000 mbar, de modo a que seja obtida uma superfície de revestimento seca sobre o veículo e que o revestimento seco seja fixado à superfície de revestimento. Pela aplicação de um vácuo e pelo uso do vácuo no processo de secagem, uma baixa temperatura (2- 10°C) e uma umidade relativamente alta (80- 95%) podem ser mentidas, pelo que a estrutura e as propriedades físicas do veículo, em particular de um veículo sob a forma de um colágeno, tal como uma esponja de colágeno, assim como de fibrinogênio e trombina, podem ser mantidas.

Pelo termo “consistindo essencialmente de” é compreendido que os três componentes são todos essenciais e necessários à invenção. Entretanto, aditivos não essenciais, tais que íons de cálcio e um marcador colorido, tal como riboflavina, podem estar também presentes na composição. A composição pode, além disso, compreender outros ingredientes úteis, tais como uma ou mais substâncias ativas farmacêuticas, que podem, por exemplo, ser selecionadas a partir do grupo, que consiste de antibiótico, tais que antibacterianos ou antimicóticos, e agentes antineoplásticos.

Embora o material do veículo seja preferivelmente uma esponja de colágeno, que compreende material de colágeno do tipo I a partir de fontes de mamíferos, transgênicas ou recombinantes, ele pode ser produzido através de outros tipos de colágeno, isto é colágeno do tipo I, II, III, IV, VII e X. Entretanto, pode ser também considerado que o veículo pode ser um polímero biodegradável, tal como um ácido poliialurônico, ácido poliidróxi, por exemplo, ácido láctico, ácido glucólico, ácido hidroxibutanóico, uma celulose, ou gelatina.

Em uma modalidade preferida da invenção, a composição compreende um veículo, que possui um ou mais lados ativos, em que fibrinogênio está presente em uma quantidade de 2-10 mg/cm2, tal como de 4,3 - 6,7 mg/cm2, preferivelmente de cerca de 5,5 mg/cm2, e trombina está presente em uma quantidade de 1,0 -5,5 IU/cm2, preferivelmente de cerca de 2,0 IU/cm2. O fibrinogênio e/ou trombina é preferivelmente humano, por exemplo, em forma purificada a partir de uma fonte natural por métodos conhecidos para aquele versado na técnica, ou fibrinogênio e/ou trombina humano transgênico ou recombinante, produzido por métodos conhecidos daquele versado na técnica.

Os produtos da técnica antecedente, tais que TachoComb®, Beriplast® e TissueSeal® contêm todos aprotinina ou agentes antifibrinolíticos similares. Aprotinina apenas pode ser provida a partir de uma fonte bovina. Foi o objeto dos presentes inventores desenvolver uma composição com um material veículo aperfeiçoado e apenas componentes de origem humana, recombinante ou transgênica. Portanto, foram realizados aperfeiçoamentos com relação ao material de veículo e foi investigado se seria possível substituir a trombina bovina por trombina humana e evitar a aprotinina. Os presentes inventores trabalharam em direção a este objetivo através de um processo de dois estágios.

Antes de tudo, TachoComb H foi desenvolvido como um produto de acompanhamento de TachoComb®, por exemplo, a trombina bovina sendo substituída por trombina humana. A experiência clínica com TachoComb H foi realizada com relação a uma quantidade de ensaios clínicos (fase II) de confirmação terapêutica dentro de indicações de hemostasia, colagem de tecido e vedação de tecido. Os resultados ainda não publicados obtidos nestes estudos confirmaram a eficácia e a segurança de TachoComb H no controle de vazamento de sangue e de ar, servindo deste modo como uma terapia adjuvante à sutura em hemostasia, colagem de tecido e vedação de tecido durante a cirurgia. Em particular, a eficácia de TachoComb H em alcançar a hemostasia local, expressada como uma redução significativa no tempo para a hemostasia comparado a controles, foi mostrado de modo convincente em cirurgia do fígado e vascular e similares.

Além disso, foi verificado que TachoComb H pode ser capaz de reduzir defeitos pulmonares em tamanho, resultando em uma resolução mais rápida no vazamento de ar e pode ser útil na vedação de vazamentos pulmonares severos e em pulmões afetados por enfisema.

Entretanto, TachoComb® e TachoComb H compreendem ambos aprotinina como uma parte integral do produto. Aprotinina tem sido considerada necessária para inibir a possível conversão de pequenas quantidades de plasminogênio para plasmina no componente plasminogênio e para evitar a lise prematura do coágulo de fibrina, especialmente sob condições hiperfibrinolíticas.

Novos experimentos foram projetados de modo a testar esta hipótese de que aprotinina era necessária. Os experimentos in vitro demonstraram que a proteção antifibrinolítica da aprotinina no coágulo e de que TachoComb® sem aprotinina (TachoComb S) não era dissolvido dentro de um período de tempo muito curto. Portanto, modelos de animal exaustivos foram designados e TachoCombS foi comparado a TachoComb H para comprovar eficácia similar. Em todos modelos TachoComb H ou S, respectivamente, foi usado apenas meio de hemostasia.

Quatro séries experimentais extensivas foram executadas de modo a investigar a eficácia e o padrão histopatológico da modalidade presentemente preferida da presente invenção. TachoComb S comparado a TachoComb H. TachoComb S ou TachoComb H foram aplicados aos órgãos fígado, baço, pâncreas ou cérebro/meninges de cachorros, pombos ou coelhos. Os experimentos foram projetados de um modo a serem similares a condições cirúrgicas normais, a condições severamente exaustivas e a condições hiperfibrinolíticas.

Os resultados obtidos nestes quatro estudos não demonstraram qualquer diferença relevante entre TachoComb S e TachoComb H. Ambos os produtos se comportaram de modo similar com relação à Hemostasia e à eficácia de vedação de ferida, incluindo condições severamente exaustivas, tais como a pressão interna do órgão aumentada ou a hiperfibrinólise induzida por aplicação de r-tPA local.

Pode ser concluído que o programa pré-clínico projetado para avaliar a necessidade total de aprotinina como um componente de TachoComb H comprovou eficácia similar a TachoComb H e a TachoComb S. Ambos os produtos foram usados com sucesso apenas como meio de hemostasia, colagem de tecido e vedação de tecido sob condições experimentais. No curso de experimentos com animais, não houver reações de tecido indesejáveis. Em conseqüência disto, a aprotinina foi eliminada da composição da invenção. É esperado que a composição da invenção exerça clinicamente as mesmas propriedades de hemostasia, colagem de tecido e vedação de tecido que as suas predecessoras e que tenha o mesmo ou um perfil de segurança ainda mais satisfatório. A ausência de aprotinina, que presentemente apenas está disponível a partir de fontes bovinas, aumenta a segurança contra reações de hipersensibilidade. A este respeito, deve ser notado que anticorpos contra aprotinina ocorreram em três estudos japoneses. Não é prevista tal resposta imunológica com uma composição sem aprotinina.

Em uma modalidade presentemente preferida, a invenção refere-se a uma composição para a hemostasia, vedação de tecido e colagem de tecido, que compreende um veículo flexível, que possui pelo menos uma das seguintes propriedades físicas: módulo de elasticidade na faixa de 5-100 N/cm2, tal como de 10-50 N/cm2; densidade de 1-10 mg/cm3, tal como de 2-7 mg/cm3, diâmetro de câmara maior que 0, 75 mm e menor que 4 mm e/ou tendo um diâmetro de câmara médio abaixo de 3 mm, e que compreende ainda: fibrinogênio sólido, e trombina sólida, e não compreende qualquer agente antifibrinolítico, tal como aprotinina, ácido ε-aminocapróico ou oc2-antiplasmina. o fibrinogênio sólido e a fibrina sólida sendo fixados no veículo em um modo tal como a abrasão seja menor que 1,0- mg/cm2 quando uma amostra do material revestido é agitada em um agitador Vibrofix, em uma freqüência de cerca de 1000 rpm por 2 minutos, e se o material do veículo revestido for inserido em um equipamento endoscópico e depois disso removido, o material permanece substancialmente inalterado e apresenta fusão do material de revestimento inferior a 20% como uma indicação da flexibilidade do veículo e da adesão de sólido do fibrinogênio sólido e da trombina sólida, e o referido material sendo substancialmente vedado contra ar e vedado contra líquido e tendo um fator de elasticidade de pelo menos 1,25 conforme determinado por um teste compreendendo a fixação do veículo revestido a uma folha de látex, a expansão do látex por pressão três vezes e na terceira vez efetuando a medição da área do veículo revestido no ponto mais alto de expansão da folha de látex e comparação da área expandida do veículo revestido com a área de partida da área revestida. A composição preferida da invenção, em que o fibrinogênio e a trombina são humanos, por exemplo, purificados a partir de uma fonte natural de trombina e fibrinogênio humano transgênico ou recombinante, é o único agente de vedação de fibrina não-bovino com uma combinação fixa de componentes ativos revestidos sobre um veículo flexível e possui várias vantagens: pronto para o uso, não requerendo procedimento de preparação ou descongelamento demorado; facilmente aplicado diretamente sobre a maior parte de superfícies de tecido e órgãos; possível aplicação endoscópica; sem problemas com o vazamento de hemostasia ou sendo enxaguado a partir da área alvo; combinação do efeito de colagem do coágulo de fibrina e do suporte mecânico do veículo flexível; estiramento e compressão que suportam peso e altamente flexível; hemostasia efetiva e vedação do tecido dentro de 3-5 minutos; perfil de segurança favorável, isto é sem componentes bovinos; biodegradável, deixando apenas cicatrizes de tecido menores; pode ser armazenado a de + 2°C a + 8°C e terá uma vida m prateleira esperada de 36 meses, ou em temperatura ambiente durante um período de até, pelo menos, 2 anos. A razão para o desenvolvimento da composição preferida da invenção deriva de um desejado para que seja descartado o último componente bovino, de modo a evitar qualquer risco, mesmo teórico, de transmissão de doenças a partir de vacas para seres humanos, incluindo encefalopatias espongiformes transmissíveis (TSEs). Os componentes ativos fibrinogênio e trombina são assim de natureza humana, e a aprotinina bovina, o inibidor de plasmina de enzima fibrinolítica, foi removido. Deste modo, a vantagem da composição preferida da invenção, que não contém componentes bovinos, é a de que o risco de transmissão de doenças, incluindo a encefalopatia espongiforme bovina (BSE), através de material bovino, foi eliminada.

De modo similar a outras colas de fibrina, a composição da invenção opera através da reprodução do último estágio da cascata de coagulação sangüínea. Uma mistura de fibrinogênio e trombina forma uma camada sólida fixa sobre a superfície do veículo flexível. Mediante contato com fluidos, por exemplo, uma superfície de sangria, fluidos corpóreos ou solução salina fisiológica, os componentes da camada se dissolvem, se difundem ao interior das cavidades da ferida e começam a reagir. O processo de polimerização produz uma forte adesão entre a superfície da ferida e o adesivo do veículo. Durante o tempo requerido para a colagem, isto é, 3 a 5 minutos, a composição da presente invenção deve preferivelmente ser pressionada, de modo suave, sobre a superfície da ferida. O adesivo de veículo provê o suporte mecânico, que permite o tamponamento da ferida. O adesivo mantém os componentes de coagulação no local quando as feridas estão sangrando profiisamente e evita um novo sangria potencial. O mecanismo de ação envolve a conversão através de trombina de fibrinogênio em fibrina pela divisão de peptídeos. Os monômeros de fibrina são espontaneamente polimerizados em fios de fibrina formando um coágulo viscoso e elástico, que cola o adesivo de veículo à superfície da ferida. A matriz da fibrina serve subseqüentemente como armação para a migração do fibrinoplastro (Figura 8) Do mesmo modo que um adesivo de dois componentes, a superfície da ferida e o veículo são colados, de modo conjunto, por polimerização. A estabilidade mecânica do adesivo do veículo acrescenta um efeito de tamponamento ao efeito de hemostasia do coágulo de fibrina. Além disso, as substâncias ativas apenas estão presentes sobre ao superfície do veículo voltada para a área ferida e, em virtude do efeito de tamponamento e da pressão suave, elas não são difundidas através do veículo. Em conseqüência disto e em contraste com a situação quando do uso da maioria das colas de fibrina, não há adesão entre a área ferida coberta com a composição e invenção e outros órgãos ou partes da mesma quando a composição da invenção foi usada.

Diferentemente das colas de cianoacrilato de gelatina-resorcina-formaldeído (GRF), que são altamente histotóxicas para o tecido parenquimatoso, a composição sólida da presente invenção é fisiologicamente degradada e substituída por tecido dentro de semanas ou meses após a aplicação, principalmente através de dois mecanismos: 1. O coágulo de fibrina é parcialmente degrado por fibrinólise e parcialmente por fagocitose celular. 2. O veículo é degradado, camada por camada, pelo tecido de granulação de absorção e convertido em uma pseudocápsula, que consiste de tecido conectivo endógeno. A composição da invenção é útil para a hemostasia, colagem de tecido e vedação de tecido, em particular em intervenção cirúrgica no sistema gastrointestinal, tal como o esôfago, estômago, intestino delgado, intestino grosso, reto, órgãos parenquimais, tais que fígado, baço, pâncreas, rins, pulmões, glândulas adrenais, tireóide e nodos linfáticos, cirurgia cardiovascular, cirurgia torácica incluindo cirurgia na traquéia, brônquios ou pulmões, intervenções cirúrgicas na área dos ouvidos, nariz e garganta (ENT), incluindo cirurgia dental, ginecológica, urológica, óssea (por exemplo ressecção esponjosa), e cirurgia de emergência, cirurgia neurológica, linfática, biliar, e fístulas cérebro- espinhais (CSF), e vazamentos de ar durante cirurgia torácica e pulmonar. A presente invenção refere-se também ao uso das composições descritas para os propósitos acima.

Deve ser enfatizado que a composição da invenção é substancialmente vedada ao ar e vedada a líquido, razão pela qual o produto é particularmente útil para tratar fístulas linfáticas, biliares, e cérebro- espinhais (CSF) e vazamentos de ar durante cirurgia pulmonar e torácica. Além disso, devido ao fato de que o produto é substancialmente vedado ao ar, ele é altamente útil em cirurgia de órgãos de alta sangria, tais que o fígado e o baço, e para a cirurgia, por exemplo, no canal gastrointestinal. O produto da invenção deve ser aplicado quando a sangria, ou o vazamento linfático, biliar, de ar ou CSF não pode ser controlado por métodos convencionais, ou quanto estes métodos forneceríam resultados desfavoráveis. O veículo é preferivelmente uma esponja de colágeno, lã cirúrgica ou adesivo, cujos termos são usados de forma sinônima na presente especificação e reivindicações. Os componentes colágeno, fibrinogênio e trombina são preferivelmente de origem mamífera. Preferivelmente, os componentes sólidos são de origem humana. O colágeno, fibrinogênio e trombina podem ser ou purificados a partir de uma fonte natural ou de trombina e/ou fibrinogênio humano recombinante ou transgênico.

Uma fonte presentemente preferida de colágeno é a eqüina. De modo a evitar a transmissão de vírus devido à contaminação com vírus eqüinos, que são patogênicos para humanos em virtude do adesivo de colágeno, a seleção apropriada do material de origem e a desativação de agentes potencialmente patogênicos pelo processo de manufatura são importantes como medidas de precaução. EXEMPLOS: Os Exemplos I-IV ilustram vários procedimentos para a preparação de uma esponja de colágeno revestida com diferentes matérias-primas de fibrinogênio e trombina.

Matérias-primas de fibrinogênio: Matérias-primas de Trombina: EXEMPLO I: No presente exemplo, a suspensão contém a formulação de fibrinogênio humano B e a formulação de trombina humana B.

Um volume de suspensão final de 3500 ml foi obtido pela aplicação das seguintes quantidades e parâmetros: Mistura de fibrinogênio: - 2800 ml de etanol (94% a 2°C-8°C) 492,5 g da formulação de fibrinogênio humano B 493, 5 mg de riboflavina A mistura de fibrinogênio foi armazenada por 8-16 horas a de 2-8°C, enquanto sob agitação.

Mistura de trombina: - 100 ml de etanol (100% a - 30°C) 12, 27 g da formulação de trombina humana B A mistura de trombina foi armazenada por 8-16 horas a - 30°C.

Suspensão: 157 ml da mistura de trombina foram adicionados à mistura de fibrinogênio.

Etanol a 94% a de 2-8°C foi adicionado para preencher o volume de suspensão final de 3500 ml.

Características da Suspensão: 1. Concentração de etanol: 94,3% 2. Comportamento de sedimentação: a) volume de sedimentação 5 minutos após o início: 98% do volume de teste, b) volume de sedimentação 24 horas após o início: 64% do volume de teste. 1. Tamanho da partícula (diâmetro médio Folk Ward): 56, 4 +/-1,3 pm Veículos sob a forma de tiras de colágeno foram revestidos com a suspensão. Primeiro, 48 tiras de esponja de colágeno foram previamente incubadas em uma câmara de resfriamento, nas seguintes condições: Temperatura: 5,2 °C

Umidade absoluta : 4,8 g de água por kg de ar Tempo de incubação: 18,5 horas As tiras de esponja de colágeno revestidas foram secadas como se segue: As tiras revestidas foram incubadas durante 15 minutos em uma temperatura de 5,2°C e uma umidade absoluta de 4, 8 g de água por kg de ar.

As tiras revestidas foram então secadas em uma câmara de secagem a vácuo nas seguintes condições de secagem: Condição do ar: temperatura de 5,2°C, umidade absoluta de 4,8 g de água por kg de ar Fluxo de ar através da válvula de aspiração: 23 m3 por hora -Vácuo: 59 mbar Tempo de secagem: 4 horas A abrasão do revestimento obtido sobre as tiras de esponja de colágeno foi aproximadamente de 0,2 mg/cm2, quando agitadas em um agitador Vibrofix em uma freqüência de 800- 1200 rpm durante 2 minutos. EXEMPLO II: No presente exemplo, a suspensão contém a formulação de fibrinogênio humano Cea formulação de trombina humana C.

Um volume de suspensão final de 3500 ml foi obtido pela aplicação das seguintes quantidades e parâmetros: Mistura de fibrinogênio: - 2252 ml de etanol (94% a de 2°C - 8 °C) 370, 7 g da formulação de fibrinogênio humano C 493,5 mg de riboflavina A mistura de fibrinogênio foi armazenada por 8-16 horas a de 2-8°C, enquanto sob agitação.

Mistura de trombina: - 188 ml de etanol (100% a -30°C) 12 frascos da formulação de trombina humana C (10650 I.U./frasco )/12 ml de água para injeção. A mistura de trombina foi armazenada por 8-16 horas a - 30°C. Suspensão: 164,5 ml da mistura de trombina foram adicionados à mistura de fibrinogênio.

Etanol a 94% a de 2- 8°C foi adicionador para preencher o volume da suspensão final de 3500 ml.

Características da suspensão: 1. Concentração de etanol: 94, 1% 2. Comportamento de sedimentação: a) volume de sedimentação 5 minutos após o início: 94% do volume de teste, b) volume de sedimentação 24 horas após o início: 71% do volume de teste. 3. Tamanho da partícula (diâmetro médio Folk Ward) : 49,2 +/- 0,93 pm.

Veículos sob a forma de tias de colágeno foram revestidos com a suspensão. Primeiro, 48 tiras de esponja de colágeno foram previamente incubados em uma câmara de resfriamento, nas seguintes condições: Temperatura: 4,8°C Umidade relativa: 90,3% Tempo de incubação : 22, 25 horas As tiras da esponja de colágeno revestida foram secadas como se segue: As tiras revestidas foram incubadas durante 13 minutos em uma temperatura de 4,9°C e uma umidade absoluta de 4, 8 g de água por kg de ar.

As tiras revestidas foram então secadas em uma câmara de secagem a vácuo nas seguintes condições de secagem: Condição do ar: temperatura de 5,2°C, umidade absoluta de 4,9 g de água por kg de ar Fluxo de ar através da válvula de aspiração: 25 m3 por hora Vácuo: 60 mbar Tempo de secagem: 4 horas A abrasão do revestimento obtido sobre as tiras da esponja de colágeno foi aproximadamente de 0,3 mg/cm2 quando agitadas em um agitador Vibrofix em uma ffeqüência de 800 -1200 rpm durante 2 minutos. EXEMPLO III: No presente exemplo, a suspensão contém a formulação de fibrinogênio humano Cea formulação de trombina humana C.

Um volume de suspensão final de 780 ml foi o método obtido pela aplicação das seguintes quantidades e parâmetros: Mistura de fibrinogênio: 700 ml de etanol (94% a de 2°C - 8°C) 84, 42 g da formulação de fibrinogênio humano C 110 mg de riboflavina A mistura de fibrinogênio foi armazenada por 8- 16 horas a de 2-8°C enquanto sob agitação.

Mistura de trombina: 35 ml de etanol (100% a -30°C) 0,54 g da formulação de trombina humana C

Suspensão: 23,0 ml da mistura de trombina foram adicionados à mistura de fibrinogênio 100% de etanol a de 2-8°C foi adicionado para preencher o volume da suspensão final de 780 ml.

Características da suspensão: 1. Concentração de etanol: 94% 2. Comportamento de sedimentação: a) volume de sedimentação 5 minutos após o início: 92% do volume de teste, b) volume de sedimentação 24 horas após o início: 72% do volume de teste.

Tamanho de partícula (diâmetro médio Folk Ward) : 60,5 +/- 0,5 pm Veículos sob a forma de tiras de colágeno foram revestidos com a suspensão. Primeiro, 8 tiras de esponja de colágeno foram previamente incubadas em uma câmara de resfriamento, nas seguinte condições: Temperatura: 6,0 °C Umidade Relativa : 85 % Tempo de incubação: 18,5 horas As tiras de esponja de colágeno revestidas foram secadas como se segue: As tiras revestidas foram incubadas durante 45 minutos em uma temperatura de 5°C e uma umidade relativa de 85%.

As tiras revestidas foram então secadas em uma câmara de secagem a vácuo nas seguintes condições de secagem: Condição do ar: temperatura de 5°C, umidade relativa 85% Fluxo de ar através da válvula de aspiração: 1,2 m3 por hora Vácuo: 35 mbar Tempo de secagem: 4 horas A abrasão do revestimento obtido sobre as tiras da esponja de colágeno foi aproximadamente de 0,3 mg/cm2 quando agitadas em um agitador Vibrofix em uma freqüência de 800-1200 rpm durante 2 minutos. EXEMPLO IV: No presente exemplo, a suspensão contém a formulação de fibrinogênio humano A e a formulação de trombina humana A.

Um volume de suspensão final de 3120 ml foi obtido pela aplicação das seguintes quantidades e parâmetros: Mistura de fibrinogênio: 2540 ml de etanol (100 % a de 2°C - 8°C) 311,6 g da formulação de fibrinogênio humano A 440 mg de riboflavina A mistura de fibrinogênio foi armazenada por 8- 16 horas a de 2-8°C enquanto sob agitação.

Mistura de trombina: 210 ml de etanol (100% a -30°C) 229 g da formulação de trombina humana A Suspensão: 87,3 ml de água para injeção foram adicionados à mistura de fibrinogênio. A mistura de trombina foi adicionada à mistura de fibrinogênio. 100% de etanol a de 2-8°C foi adicionado para preencher o volume da suspensão final.

Características da suspensão: 1. Concentração de etanol: 97% 2. Comportamento de sedimentação: a) volume de sedimentação 5 minutos após o início: 95,6 % do volume de teste, b) volume de sedimentação 24 horas após o início: 63,5 % do volume de teste.

Tamanho de partícula (diâmetro médio Folk Ward) : 61,8 +/- 0,8 μιη Veículos sob a forma de tiras de colágeno foram revestidos com a suspensão. Primeiro, 48 tiras de esponja de colágeno foram previamente incubadas em uma câmara de resfriamento, nas seguintes condições: Temperatura: 6,5 °C Umidade Relativa : 90 % Tempo de incubação: 22,5 horas As tiras de esponja de colágeno revestidas foram secadas como se segue: As tiras revestidas foram incubadas durante 10 minutos em uma temperatura de 6,5 °C e uma umidade relativa de 90 %.

As tiras revestidas foram então secadas em uma câmara de secagem a vácuo nas seguintes condições de secagem: Condição do ar: temperatura de 6,5 °C, umidade relativa 90% Fluxo de ar através da válvula de aspiração: 21 m3 por hora Vácuo: 58 mbar Tempo de secagem: 4 horas A abrasão do revestimento obtido sobre as tiras da esponja de colágeno foi inferior a 0,1 mg/cm2 quando agitadas em um agitador Vibrofix em uma freqüência de 800-1200 rpm durante 2 minutos. EXEMPLO 1: Aprotinona como um componente de TachoComb® A investigação in vitro da atividade antifibrinolítica sob condições de lavagem similares a uma situação in vitro. O objetivo da presente investigação foi o de demonstrar a eficácia de aprotinina como um componente de TachoComb H sob condições hiperfibrinolíticas através do uso de modelos de teste in vitro.

TachoComb S é um adesivo tipo esponja, revestido, bege. O adesivo de colágeno seco espumado é usado como um veículo dos componentes sólidos, ativos. O tamanho do adesivo é de 9,5 x 4,8 x 0,5. O lado ativo é colorido de amarelo. 1 cm2 do adesivo TachoComb S (espessura de 0, 5 cm) consiste de: Colágeno de origem eqüina 2,1 mg revestido com: fibrinogênio humano 5,5 mg trombina humana 2,0 I.U. riboflavina (cor amarela como um marcador da área revestida) 16,5 pg Testes de verificação de dose in vivo experimentais confirmaram que as concentrações acima de trombina e fibrinogênio resultam em uma resistência adesiva máxima (vide Exemplo 3).

TachoComb H contendo trombina humana, fibrinogênio humano e aprotinina foi comparado a TachoComb S contendo apenas trombina humana e fibrinogênio humano como os componentes ativos.

Dois modelos de teste foram desenvolvidos quanto a uma determinação quantitativa da eficácia sob condições hiperfibrinolíticas, que poderíam ser consideradas como sendo relevantes para condições cirúrgicas e que permitiram realizar a quantidade de testes necessários para demonstrar um efeito significativo.

No modelo de teste 1, a amostra de teste foi aplicada a um tecido sintético como uma superfície de adesão. Um orifício definido havia sido cortado no tecido para simular, por exemplo, a perfuração de um vaso sangüíneo. A vedação foi exposta a duas diferentes soluções fibrinolíticas (soluções de incubação) através do orifício. Uma destas soluções continha adicionalmente o componente antifibrinolítico oc2-antiplasmina.

Composição das soluções de incubação: Todas as substâncias são diluídas em tampão 1: Trometamol 50 mM, NaCl 100 mM, CaCl2 2, 5 mM, 2 mg/ml BS A (isenta de protease), 0,5 mg/ml Na-azida/ml.

Solução de Incubação I: (plasminogênio 1 pmolar, ativador de plasminogênio de tecido (tPA) 1 nmolar, a2-antiplasmina)l pmolar. 49 μΐ de tampão 1, pH 7,4 51 μΐ de solução de plasminogênio (atividade de plasminogênio humano Coachrom conc. 4,9 pmolar) 50 μΐ de solução tPA (50 nmolar) 100 μΐ de solução de ct2-antiplasmina (2,5 pmolar) Solução de incubação II (plasminogênio 1 pmolar, ativador de plasminogênio do tecido 1 nmolar) 140 μΐ de tampão 1, pH 7,4, 51 μΐ de solução de plasminogênio (atividade de plasminogênio humano Coachrom conc. 4,9 pmolar) 50 μΐ de solução de tPA (50 mmolar) A solução de incubação II foi substituída em períodos de 2 horas para simular um efeito de lavagem. Naquela ocasião, a adesão foi controlada. Uma pressão de 50 mbar foi aplicada sobre a amostra. O período de tempo em que a amostra foi destacada em uma pressão de < 50 mbar foi registrado. O modelo de teste 2 destinou-se a demonstrar o efeito fibrinolítico do tecido intestinal danificado. A amostra de teste foi aplicada ao intestino de porco (ex vivo) como uma superfície de adesão. Uma perfuração definida havia sido cortada no interior do intestino para permitir com que a solução de incubação fosse colocada em contato com o coágulo de fibrina e simulasse um efeito de lavagem. A solução de incubação foi alterada em períodos de tempo registrados e naquele momento uma pressão de 50 mbar foi aplicada sobre a amostra. O período de tempo em que a amostra foi destacada em uma pressão de < 50 mbar foi registrada.

Os resultados revelaram diferenças consideráveis entre TachoCOmb H contendo aprotinina e TachoComb S sem aprotinina.

No modelo de teste 1 usando a solução de incubação contendo ativador de plasminogênio do tecido, plasminogênio e a2-antiplasmina, o tempo de fibrinólise para TachoComb H foi de 41,2 ± 7,3 horas comparado a 12,8 ± 2,8 horas para TachoComb S.

No modelo de teste 1 usando a solução de incubação contendo apenas ativador de plasminogênio do tecido e plasminogênio, o tempo de fibrinólise para TachoComb H foi de 31, 6 ± 5,3 horas comparado a 8,3 ± 1,8 horas para TachoComb S.

No modelo de teste 2, o período de tempo para o destacamento de TachoComb H foi de 78,4 ± 16, 3 horas, comparado a 6,5 ±1,8 horas para TachoComb S.

Uma quantidade de fibrina pôde ainda ser observada sobre a amostra de t este. Mas a amostra foi destacada mediante pressão a partir da superfície do intestino, porque a resistência de adesão entre o coágulo de fibrina e a superfície intestinal se tomou mais fraca.

Em ambos os modelos, o efeito antifibrinolítico de aprotinina como um componente ativo em TachoComb H pôde ser demonstrado muito claramente.

No modelo de teste 1, o prolongamento do tempo de fibrinólise devido à aprotinina como um componente ativo de TachoComb H foi de 320% da solução de incubação I contendo a2-antiplasmina e 380% para a solução de incubação II sem a2-antiplasmina. O modelo de teste 1 também demonstrou o efeito antifibrinolítico adicional de 0C2- antiplasmina pelo prolongamento do tempo de fibrinólise para TachoComb H de 31, 6 para 41,2 horas (130%) e para TachoComb S de 8,3 para 12,8 horas (154%). EXEMPLO 2 Comparação de esponja Nycomed revestida (TachoComb S) com outros produtos de veículo revestidos de modo idêntico a TachoComb S. Adesão da Camada Procedimento Uma área de 2 x 4,5 cm2 de cada veículo foi revestida com suspensão de revestimento TachoComb S. A quantidade de suspensão de revestimento correspondeu à especificação TachoComb (5,5 mg fibrinogênio/cm2). As amostras foram secadas. 1. Uma amostra de 1 x 4 cm2 foi preparada de cada veículo revestido. 2. A adesão da camada foi testada como se segue.

Descrição do Método: Aparelho: Balança analítica (precisão de medição ± 0,5 mg) Agitador Vibrofíx combinado com dispositivo de fixação Regra com graduação milimétrica Cronômetro, bisturi, tubos de 2 cm de diâmetro interno com tampa.

Procedimento r Areas de 4 x 1 cm2 são cortadas a partir do veículo revestido usando um bisturi. A amostra é colocada em um tubo balanceado com tampa. Então ela é agitada no agitador Vibrofix (freqüência: cerca de 1000 rpm) durante 2 minutos. A folha é removida e a quantidade residual de material de revestimento (abrasão : mg/cm2) é pesada novamente. Cálculo: Abrasão (mg/cm2) = peso de resíduo fmg) - tara (mg) 4 cm2 Resultados: Comentários: Todos os veículos, exceto a esponja de colágeno Nycomed, não são flexíveis após o revestimento. A amostra tem que ser cortada com muito cuidado. Se ela for cortada através do uso de um par de tesouras, uma quantidade do material de revestimento será lascada, porque a camada em si mesma é rígida. O adesivo Ethisorb® quase não demonstrou conexão com o material de revestimento. Quando agitado apenas um pouco, todo o revestimento é desgarrado, como um “tapete”. A diferença entre a esponja de colágeno Nycomed e os outros materiais de veículo é demonstrada de modo bastante evidente.

Elasticidade do veículo revestido umedecido Procedimento 1. Revestimento de diferentes veículos: Uma área de 2 x 4,5 cm2 de cada veículo foi revestida com suspensão de revestimento tachoComb S. A quantidade de suspensão de revestimento correspondeu à especificação de TachoComb (5,5 mg de fibrinogênio/cm2). As amostradas foram secadas. 2. Uma amostra de cerca de 5-7 cm2 foi preparada de cada veículo revestido. Foi determinada a área inicial exata de cada amostra seca. 3. A amostra foi umedecida e colocada sobre uma folha de Látex elástica, fixada a um equipamento especial conforme descrito em detalhe sob o título “ procedimento”. Foi então aplicada pressão sobre a folha de látex, que se expandiu. Após 2 períodos de expansão e relaxamento, a folha é expandida por um terceiro período de tempo. A área do veículo foi medida no ponto de expansão mais alto.

Descrição do Método Aparelho/Substâncias Químicas Bomba peristáltica (IKA PA-SF) Garrafa de compensação de pressão (3 saídas) Manômetro VDO (0 - 250 mbar) Funil de vidro (0 abertura 1: 30 mm, abertura 2: 15 mm) Tubos e grampos de silicone, luvas de látex (Semper Med), bisturi, régua com graduação milimétrica, tesouras Solução salina fisiológica Procedimento O seguinte equipamento é conectado vedado a ar às três saídas da garrafa de compensação de pressão através de tubos de silicone: a) bomba peristáltica b) monômetro c) funil de vidro/abertura 2 Uma folha dupla de cerca de 8 x 8 cm2 é cortada a partir de uma luva de Látex. Esta folha é fixada, vedada a ar, ao funil de vidro/abertura 1.

Cerca de 5-7 cm2 de área revestida são cortados a partir do veículo revestido usando um bisturi. A área da amostra é medida (área inicial). O revestimento da amostra é umedecido com solução salina e aplicado sobre a folha de Látex. Ele é então pressionado manualmente à folha de Látex por cerca de 1 minuto.

Usando a bomba peristáltica, a folha de Látex é expandida pela aplicação de uma pressão de cerca de 70 mbar. Isto é repetido duas vezes com relaxamento da folha de Látex posteriormente. Na terceira expansão, a área (comprimento e largura) do veículo revestido é medida no ponto mais alto da expansão da folha de Látex. Cálculo: Fator de “elasticidade” = área do veículo na terceira expansão Área inicial da amostra Resultados: Comentários: A elasticidade da esponja de colágeno Nycomed umedecida (TachoComb S) é uma das características importantes do produto. A elasticidade é essencial em cirurgia torácica e abdominal. Após a colagem, o veículo de ser capaz de seguir, por exemplo, os movimentos de expansão e relaxamento dos pulmões ou intestinos. Ethisorb®, em especial, não demonstrou nenhuma elasticidade. Destacou-se a partir do revestimento imediatamente. Wilospon®Spezial revestido e Opraskin® apresentaram defeitos estruturais durante o teste.

Uso do veículo revestido em cirurgia endoscópica Procedimento: 1. Revestimento de diferentes veículos: Uma área de 2 x 4 cm2 de cada veículo foi revestida com suspensão de revestimento TachoComb S. A quantidade da suspensão de revestimento correspondeu à especificação TachoComb (5,5 mg fibrinogênio/cm2). As amostras foram secadas. 2. A manipulação das amostras de veículo revestidas para uso em cimrgia endoscópica e a perda de revestimento devido a esta manipulação estão documentados em um equipamento fotográfico digital.

Descrição do Método Aparelho Endodock: ferramenta endoscópica designada para o uso de TachoComb® em cirurgia endoscópica (vide Figura 7). Equipamento fotográfico digital.

Lista dos veículos investigados: Procedimento Séries de ilustrações tomadas de cada veículo: 1. Ilustração : Documentação das amostras de veículo revestidas e não-revestidas. 2. Ilustração : As amostras revestidas são inseridas no interior do equipamento endoscópico (Endodock). A amostra tem que ser aplainada manualmente, de modo a que seja capaz de ser enrolada em tomo de um “pino” guia. Então, a amostra é cuidadosamente inserida no tubo de aço de 10 mm de diâmetro. 3. Ilustração: A amostra é puxada para fora com cuidado. Depois disso, a amostra tem que ser desdobrada. O revestimento, que foi salpicado a partir do veículo devido à sua manipulação é reunido junto ao veículo. A amostra desdobrada após a inserção no interior do equipamento endoscópico e a perda de revestimento devido a esta manipulação são documentados.

Comentários TachoComb S (esponja de colágeno eqüino revestida/Nycomed) em cirurgia endoscópica é a aplicação mais exigente do produto. TachoComb S é inserido no interior de um equipamento endoscópico. O tubo deste equipamento possui geralmente de 10-13 mm de diâmetro. De modo a que seja inserido no interior do tubo, TachoComb S é aplainado e então enrolado em tomo de um “pino” guia e então inserido cuidadosamente no interior do tubo. Portanto, a conexão do revestimento com o veículo e consigo mesmo tem que ser forte, mas o produto tem que ser mantido flexível em condição seca para que possa ser curvado e enrolado. Quando colocado no sítio de cirurgia, TachoComb S é cuidadosamente extraído a partir do tubo. Então, ele tem que ser desenrolado e aplicado na superfície da ferida. Isto requer freqüentemente alguns ajustes. Portanto, a adesão da camada ao veículo deve ser suficientemente forte para que possa resistir a esta manipulação.

Resultados Os resultados são observados a partir das Figuras 1-6 anexas. Uma estimativa da fusão de materiais de revestimento é a que se segue: Opraskin® 30-40% Wilospon®forte 60-70% Wilospon®Spezial 50% Tacotamp® NU Knit 60-70% Ethisorb® Patch 95% Esponja de colágeno Nycomed <5% Como Ethisorb® é um veículo muito rígido, a adesão do revestimento é muito fraca. Portanto, o Ethisorb® revestido perdeu quase todo o revestimento nesta investigação. Comparado à esponja de colágeno revestida de Nycomed, todos os outros veículos investigados possuíam uma superfície plana a ser revestida. Portanto, o revestimento repousa como um “tapete plano” sobre o veículo. Isto conduz a uma estrutura preferivelmente flexível dos veículos revestidos secos. A curvatura e o enrolamento muitas vezes causa a ruptura o revestimento em si próprio.

Após a inserção dos veículos revestidos no interior do tubo, o equipamento endoscópico e o desdobramento da amostra subseqüente, todos os veículos exceto a esponja de colágeno Nycomed perderam bastante do revestimento, de tal modo que grandes áreas são deixadas sem o material de revestimento. A estrutura e a textura da esponja de colágeno Nycomed é a base da alta flexibilidade de TachoComb S em condições úmidas ou secas. A esponja de colágeno Nycomed é espumada e possui câmaras poligonais em seu interior. Sobre a superfície destas câmaras são cortadas cavernas. Estas cavernas aumentam a superfície de revestimento. Durante o revestimento, a suspensão de revestimento é distribuída de modo uniforme sobre a superfície estruturada. Devido à secagem, a solução contendo tanto fibrinogênio como trombina é fixada como sólidos no interior das cavernas. Portanto, TachoComb S pode ser cortado nos tamanhos desejados e pode ser inserido no interior do equipamento endoscópico apenas com uma pequena perda do material de revestimento, ou até mesmo sem nenhuma perda. A alta flexibilidade de TachoComb S seco é uma grande vantagem, comparado a todos os outros veículos revestidos investigados. EXEMPLO 3 Teste de Verificação de Dose de Componentes Ativos A dose dos componentes ativos foi verificada através de dois modelos experimentais diferentes, nos quais a resistência à adesão foi medida : a resistência à tração em fígado de rato, a resistência de adesão contra pressão de tecido elevada em rim de rato. A. Resistência à tração em fígado de rato Uma ferida de 1 x 1 cm e cerca de 1 mm de profundidade foi produzida no lóbulo esquerdo do fígado de ratos anestesiados, de modo a produzir uma hemorragia gotejante. A ferida foi vedada com uma peça de 1 x 1 cm de TachoComb S, que foi conectado a uma balança de mola. A tensão em que TachoComb S foi rompido foi medida. B. Resistência de adesão contra pressão de tecido elevada em rim de rato Uma ferida sangrando fortemente em nível uniforme foi produzida no rim esquerdo de ratos anestesiados pelo corte de cerca de um quarto de sua massa. A ferida foi vedada com folhas de teste de TachoComb D. A pressão do tecido foi elevada pelo fechamento da drenagem venosa e bombeamento de uma solução de sal de citrato isotônica (pH 7,2) ao interior do rim. A pressão em que TachoComb S começou a se destacar foi medida. TABELA 1 A resistência de adesão de TachoComb S contendo diferentes quantidades de fibrinogênio. TABELA 2 Resistência de adesão de TachoComb S contendo diferentes quantidades de trombina.

Os resultados obtidos revelaram diferenças consideráveis entre diversas variações. A faixa ótima para a trombina humana foi de 0,9 a 10 I.U./cm2 com um teor de flbrinogênio humano constante de cerca de 5 mg/cm2. A faixa ótima para o fibrinogênio humano foi de 2,9 a 7,2 mg/cm2 com um teor de trombina humana constante de cerca de 2 I.U./cm2.

Estes testes in vivo confirmaram que ambas a concentração de fibrinogênio (4,3 - 6,7 mg/cm2) e a concentração de trombina (1,5 - 2,5 IU/cm2), que são usadas em outras formulações de TachoComb (TachoComb® e TachoComb H) resultam também em resistência adesiva máxima para TachoComb S. EXEMPLO 4 Eficácia de TachoComb S na vedação de lesões em baço e fígado em cachorros O objetivo desta investigação é o de comparar a eficácia de hemostasia de TachoComb H (contendo aprotinina) com TachoComb S (sem aprotinina) em um modelo canino de lesões de baço e fígado. A incisão e a perfuração (0,5 cm de profundidade) do baço foram selecionadas de modo a simular uma hemorragia gotejante. A ressecção da ponta do lobo do fígado cranial foi executada de modo a simular uma ferida superficial sangrando fortemente (2 a 3 cm2). Um adesivo de TachoComb H ou de TachoComb S foi aplicado como o único meio de hemostasia às feridas (a mesma batelada foi usada para a lesão do baço e do fígado no mesmo cachorro). A necropsia foi executada 48 horas após a cirurgia, pois este é o período com o maior risco de recorrência de sangria na prática clínica. A hemostasia completa foi alcançada com ambos os produtos. Não foi observado caso de hemorragia secundária em 48 horas, nem a grosso modo, nem mediante exame histológico.

Também não foram verificadas diferenças histológicas mediante aplicação de TachoComb H ou TachoComb S quando da avaliação de lesões de baço e hepáticas com os respectivos adesivos em relação à hemostasia e cura da ferida. Não ocorreu nenhum caso de hemorragia secundária após cirurgia.

Os dados da contagem sangüínea revelaram resultados similares para ambos os grupos de tratamento com um ligeiro aumento na contagem de glóbulos brancos 48 horas após a cirurgia. Não ocorreram diferenças entre grupos, ou entre o período de tempo com relação aos outros parâmetros avaliados. Além disto, os teste de coagulação não revelaram diferenças relacionadas à presença ou à ausência de aprotinina. Uma elevação do teor de fibrinogênio sangüíneo foi evidente em ambos os grupos de tratamento 48 horas após a cirurgia. A elevação da contagem de glóbulos brancos e do teor de fibrinogênio pode ser atribuída a uma resposta inflamatória ao trauma cirúrgico e não são considerados um efeito colateral tóxico de TachoComb H ou S.

Conclui-se que TachoComb S (sem aprotinina) exerce a mesma eficácia que TachoComb H (contendo aprotinina) no tratamento de feridas parenquimais com sangria gotejante e forte em cachorros. A estabilidade do coágulo sob as condições selecionadas não foi influenciada pela presença ou ausência de aprotinina. EXEMPLO 5 Efeito de Vedação de Ferida Hemostático Comparativo e Resistência de TachoComb S e TachoComb H; Estudo Experimental em Porco.

Propósito para o estudo O teste foi projetado para avaliar a eficácia imediata e a resistência a curto prazo de lã cirúrgica hemostática sobre uma lesão de baço induzida no porco.

Material e Métodos 24 porcos fêmeas foram usados no estudo. 2 grupos de lãs cirúrgicas hemostáticas foram testados aleatoriamente. TachoComb H com aprotinina e TachoComb S sem aprotinina.

No dia da cirurgia o animal recebeu uma lã cirúrgica, que obturou diretamente uma lesão de 2 x 3 cm usual, criada cirurgicamente na parte ventral do baço. O efeito de hemostasia e imediato da lã cirúrgica foi estimado pela contagem do número de bolhas e medição do período de tempo necessário para deter a hemorragia. Foi observada a aderência de TachoComb HeS.

Após 72 horas, o comportamento de curto prazo e a resistência de ambos os materiais foram investigados pelo aumento da pressão interna do baço (grampeamento dos vasos venosos).

Quando a pressão alcançou um estado quase estável, um bolo de adrenalina IV (0,02 mg ou 0,04 mg) foi administrado para aumentar a pressão arterial, associada ou não de acordo com uma infusão de cloridrato de dobutamina.

Através destas substâncias farmacológicas, a ruptura da pressão de sangria da lesão reparada com TachoComb H e S foi cotada para cada animal.

Resultados Não foi detectada diferença entre os tratamentos no momento da cirurgia de lesão do baço sobre o efeito de hemostasia.

No segundo exame, após 72 horas, a aparência macroscópica de ambas as lãs cirúrgicas era idêntica. A medição de pressão aguda e a resistência à ruptura não foram significativamente diferentes entre ambos os grupos experimentais. Não houve ruptura do material. A sangria da lesão foi observado em 4 animais com TachoComb S e 2 animais com TachoComb H (com uma bolha adicional no grupo 4). O exame histológico sugeriu que a aprotinina pode exercer um efeito protetor sobre a estrutura da lã cirúrgica, a aprotinina parece modificar o padrão microscópico pela diminuição da degradação da lã cirúrgica. Não foi observado padrão celular específico.

Conclusão A atividade hemostática imediata de 2 formulações de TachoComb, S e H, foi investigada em um modelo de lesão de baço padronizado em 24 porcos.

Ambos os materiais se comportam de modo similar quanto à eficácia, aderência à lesão e resiliência ao parênquima. A sua eficácia foi notável. A sua resistência à biodegradação e à proteólise foi investigada 72 horas seguindo-se à cirurgia pelo aumento da pressão interna do baço (através de meios mecânicos ou farmacológicos) e pelo registro da resistência local das lãs cirúrgicas TachoComb H e S. Não pôde ser evidenciada diferença da resistência dos 2 materiais.

Verificações histopatológicas indicaram, entretanto, que a degradação proteolítica de TachoComb S era ligeiramente mais pronunciada do que para TachoComb H.

TachoComb S ou TachoComb H foram usados apenas como meios de hemostasia para vedar fortemente lesões de baço com forte sangria em porcos (lesão superficial de 2 cm x 3 cm, 3-5 mm de profundidade; n= 12 por grupo). Após 12 horas, a pressão interna do baço foi aumentada pela ligação das veias do baço. Depois disso, a pressão interna do baço foi adicionalmente aumentada pela injeção de adrenalina. Os porcos foram observados quanto a sinais de recorrência de sangria ou a ocorrência de bolhas de sangue sob o adesivo. A histopatologia das amostras (sítio da lesão vedado com TachoComb H e S) foi realizada após a necropsia.

TachoComb S e tachoComb H exerceram eficácia similar, aderência á lesão, e resiliência ao parênquima. EXEMPLO 6 Efeito de Vedação de Ferida Hemostàtico Comparativo e Resistência de TachoComb S e TachoComb H absorvíveis; Estudo Experimental no Porco em um Modelo de Pancreatite Aguda.

Propósito para o estudo O teste foi projetado para avaliar a eficácia imediata e a resistência a curto prazo de uma lã cirúrgica hemostática sobre uma lesão de baço induzida no porco em um modelo de pancreatite aguda.

Materiais e Métodos 20 porcos fêmeas foram usados no estudo, 2 grupos de lãs cirúrgicas hemostáticas foram testados aleatoriamente; TachoComb H com aprotinina e TachoComb S sem aprotinina.

No dia da cirurgia os animais receberam uma lã cirúrgica obturando diretamente uma lesão de 2 x 3 cm padronizada, criada cirurgicamente na parte ventral do baço. O efeito de hemostasia imediato da lã cirúrgica foi avaliado, pela contagem do número de bolhas e mediação do tempo necessário para deter a hemorragia. A aderência de TachoComb H e S foi observada.

Então, usando uma seringa estéril, a vesícula biliar foi perfurada, o bile foi coletado e 10 ml de bile foram injetados através do duto de Wirsung, para induzir pancreatite. Os níveis de enzima sangüínea foram monitorados antes e diariamente após a cirurgia (níveis de lipase e amilase).

Pequenas peças de TachoComb H e S foram depositadas sobre o parênquima do pâncreas em sua conexão intestinal.

Após 72 horas, o comportamento de curto prazo e a resistência à degradação enzimática de TachoComb H e S foram investigados pelo aumento da pressão interna do baço (grampeamento dos vasos venosos e de meios farmacológicos).

Quando a pressão alcançou um estado quase estável, um bolo de adrenalina IV (0,02 mg ou 0,04 mg), seguindo-se a uma infusão de noradrenalina de 0,02 a 0,04 mg/min., foi administrado para aumentar a pressão arterial, associado ou não a uma perfusão de cloridrato de Dobutamina de 0,3 - 0, 6 mg/min..

Através destas substâncias farmacológicas, a ruptura da pressão de sangria da lesão reparada com TachoComb H e S foi observada para cada animal.

Resultados No baço, ambos os materiais se comportam de modo similar quanto à eficácia de hemostasia imediata, aderência á lesão e resiliência ao parênquima. A sua eficácia foi notável.

Ambas as lãs cirúrgicas permaneceram inalteradas sob exame macroscópico, no terceiro dias, embora as condições enzimáticas fossem severas, especialmente no segundo dia no sangue, e ainda no quarto dia no fluido peritonial.

Após 72 horas, não pôde ser evidenciada diferença ou resistência significativa de ambos os materiais após aumento da pressão do baço.

Uma ruptura do material ocorreu no grupo de TachoComb S. A sangria da lesão foi observada em um animal com TachoComb S e em 2 animais com TachoComb H (com uma bolha no grupo de TachoComb H).

Verificações histopatológicas não indicaram diferença significativa na degradação de TachoComb S comparado a TachoComb H. Nenhum padrão celular específico foi observado no baço. Mesmo em amostras pancreáticas, as peças de TachoComb H e S em contato próximo com alta concentração de enzimas pancreáticas não apresentaram qualquer alteração principal.

Conclusão Em conclusão, não foi observada diferença evidente entre TachoComb S e TachoComb H, no que se refere à sua resistência à ruptura em condições de ambiente de enzimas pancreáticas aumentadas. Não pôde ser detectada evidência microscópica ou macroscópica de modificação tanto em lãs cirúrgicas de TachoComb H e de TachoComb S. A eficácia de hemostasia de TachoComb S e de TachoComb H foi investigada em um modelo de lesão de baço padronizado (lesão superficial de 2cm x 3 cm, cerca de 3 mm de profundidade; n = 10/grupo) em porcos com pancreatite aguda induzida pela injeção retrógrada de bile no duto de Wirsung e ligação subseqüente do duto pancreático. Pequenas peças de TachoComb H e S foram também aplicadas sobre o pâncreas, no sítio da ligação do duto pancreático. Em 72 horas após a cimrgia, a pressão interna do baço foi aumentada pela ligação da veia do baço e injeção de adrenalina intravenosa.

No baço, TachoComb S e TachoComb H se comportaram de modo similar com relação à eficácia de hemostasia imediata, aderência à lesão e resistência à pressão interna do baço aumentada, a despeito de um aumento acentuado dos níveis de enzima pancreática (aumento de amilase e lipase no sangue de 20 a 100 vezes e aumento de 10- 100 vezes de enzimas pancreáticas no fluido peritonial, se comparado a níveis basais). Verificações histopatológicas não indicaram diferença significativa na degradação de TachoComb S e TachoComb H. Nenhum padrão celular específico foi observado no baço. Mesmo em amostras pancreáticas seguindo-se ao contato próximo de TachoComb H e S com altas concentrações de enzimas pancreáticas, a aderência de TachoComb H e S e a histopatologia não revelaram quaisquer diferenças principais.

Deste modo, não foi constatada diferença microscópica ou macroscópica específica entre TachoComb S e TachoComb H neste modelo altamente exaustivo de pancreatite aguda em porcos. EXEMPLO 7 Reação de Tecido Cerebral Comparativa e Eficácia de TachoComb H e TachoComb S Reabsorvíveis; Estudo Experimental em um Modelo de Coelho Sob Coagulação Normal e Durante Hiperfibrinólise Local. O objetivo deste estudo foi o de comparar a eficácia de TachoComb S e de TachoComb H seguindo-se à aplicação neurocirúrgica. Lesões cerebrais foram induzidas em coelhos sob condições de coagulação normal (reação do tecido cerebral - BTR, n= 12 coelhos, elegível n= 10) e sob condições hiperfibrinolíticas (HF) através de aplicação de r-tPA local (n = 10 coelhos). Foram feitas três lesões corticais por hemisfério (total de 6 lesões por animal; lesão de cérebro perfurado de 3 mm de profundidade e 4 mm de diâmetro).

A série BTR

Duas de três lesões por hemisfério foram tratadas com TachoComb H ou TachoComb S respectivamente e uma lesão por hemisfério foi deixada vazia como controle. Após a vedação das lesões com TachoComb H ou S o tempo de sangria foi medido por alta ampliação com baixa irrigação de fluxo contínua com solução salina. Após e hemostasia ter sido alcançada em todas as lesões, a hipertensão arterial foi induzida por injeção de adrenalina intravenosa (0,01 mg/kg de adrenalina), deste modo aumentando a pressão arterial média (MAP) para pelo menos 120 mmHg. Durante este procedimento, a observações quanto à recorrência de sangria continuou. Após a redução do MAP para valores normais, a pele foi novamente fechada. O tempo para a necropsia foi de 3 e 7 dias (n = 4 coelhos cada). Em tr~es animais, a formação de imagem por ressonância magnética foi executada antes da necropsia no terceiro dia. Na necropsia, uma observação a groso modo dos sítios de lesão foi efetuada e foram tomadas amostras para a histopatologia.

A série HF

Após a preparação das lesões conforme descrito na série BTR, r-tpA foi gotejado sobre a lesão (0,3 mg de r-tPA em 0,5 ml de solução salina por lesão) antes que todas as lesões fossem vedadas altemativamente com TachoComb S ou TachoComb Η. O tempo de sangria foi medido sob alta ampliação e baixa irrigação contínua com solução salina. A necropsia com observação a grosso modo ocorreu no dia 1 (n= 7) e no dia 3 (n= 3). A histopatologia foi efetuada em espécimes tomados no dia 3 por razões comparativas.

Durante o curso de todo o estudo não foram evidenciadas diferenças entre TachoComb S e TachoComb H, nem com relação à eficácia, tolerando MAP aumentado e duração do tempo de sangria, nem com relação à histopatologia. Hemorragia severa foi evidente em animais da série HF, não apenas no sítio de lesão, mas sob a pele de toda a face. A despeito destas condições severas, TachoComb S exerceu eficácia similar comparado a TachoComb H. EXEMPLO 8 Aplicação neurocirúrgica de TachoComb H e TachoComb S: reação do tecido cerebral e de eficácia hemostática.

Agentes de vedação de fibrina fluida são usados em uma larga escala para a hemostasia em neurocirurgia. Não existem dados publicados abrangentes com referência à reação do tecido cerebral para TachoComb® e o uso de agentes antifíbrinolíticos (isto é, aprotinina) é ainda controverso.

Objetivos O projeto de estado foi focalizado em dois problemas principais: A avaliação da reação do tecido cerebral local a curto prazo após a aplicação de TachoComb H (TCH) e TachoComb S (TCS) sobre lesões corticais se comparado a lesões de controle neutras (CL) usando métodos histológicos e técnicas de formação de imagem modernas. O segundo objetivo foi o de estudar a eficácia de hemostasia dos produtos TachoComb H e S sob coagulação normal (grupo BTR) e após hiperfibrinólise severa induzida localmente (grupo HF), e para avaliar se aprotinina possui qualquer influência sobre as qualidades hemostáticas e a força de aderência da preparação.

Material e Método Em uma série de 22 coelhos jovens, foram produzidas três lesões corticais em cada hemisfério. Doze animais foram destinados ao grupo de reação de tecido cerebral (BTR) e 10 ao grupo de hiperfibrinólise (HF).

Nos animais do BTR, duas das lesões foram enchidas com TachoComb H e tachoComb S, respectivamente, enquanto que a terceira foi deixada vazia como um controle. O tempo de sangria foi medido, e a ocorrência de sangria novamente, devido à hipertensão arterial, foi monitorada. Os animais foram sacrificados nos Dias 3 e 7 após a cirurgia e o exame histológico foi realizado. Nos três animais de BTR, foi executada a formação de imagem por ressonância magnética para a avaliação de edema cerebral no Dia 3, justo antes da eutanásia.

Nos animais do HF, nos quais um estado hiperfibrinolítico local severo foi previamente induzido com um ativador de plasminogênio de tecido recombinante (rt-PA), todas as três lesões de um hemisfério foram tratadas com TachoComb H e o outro hemisférico com TachoComb S. O tempo de sangria foi medido e nos três animais o exame histológico foi executado no Dia 3.

Resultados Sob coagulação normal (animais BTR), a hemostasia com TCH e TCS foi significativamente mais rápida (p < 0,001) do que com o agentes hemostático. Foi demonstrado que não existe diferença entre os tempos de sangria de ambos os produtos (p = 0,294), mas que estes tempos são consistentemente mais curtos do que aqueles das lesões neutras (p < 0,001).

Durante a hipertensão arterial induzida, a recorrência de sangria ocorreu em 1 de 24 lesões de TCH, 3 de 24 de TCS e 19 de 24 lesões de controle. A presença do agente de hemostasia evitou, de modo consiste, a recorrência de sangria durante a pressão arterial severamente aumentada (Chi quadrato = 16, 3; p< 0,001). Por sua vez, a ausência de TCH ou TCS durante o aumento da pressão arterial, apresentou 80% de risco de ocorrência de nova sangria. A análise estatística dos tempos de sangria no grupo de hiperfibrinólise (animais HF) não demonstrou diferença entre os tempos de sangria para ambos os produtos (teste de fileira assinalada : p = 0,927 e teste Tp = 0,4101).

Finalmente, com um intervalo de segurança de 99, 73# (D < 3sdD= ns) uma diferença significativa entre a eficácia de hemostasia do mesmo produto sob ambas as situações de coagulação foi descartada.

Conclusão TachoComb H e TachoComb S não induzem quaisquer alterações histológicas específicas no tecido cerebral. Ambos os produtos possuem uma boa biocompatibilidade do parênquima cerebral, pois eles não induziram mais reação de tecido do que a lesão isoladamente. Não foram evidenciados morfologicamente efeitos adversos associados aos produtos de combinação. O exame histológico não revelou diferenças entre ambos os produtos, nem sob coagulação normal, nem sob coagulação severamente alterada. TachoComb H e S possuem a mesma eficácia de hemostasia e resistência adesiva tanto sob coagulação normal como hiperfibrinólise. Existe forte evidência de que aprotinina não possui influência sobre as qualidades de hemostasia e a força de aderência, mesmo sob coagulação severamente alterada.

Como comparado na literatura, TachoComb H e S estabelecem hemostasia muito mais rápido do que celulose oxidada e lã cirúrgica de colágeno.

Claims (15)

1. Composição sólida, caracterizada pelo fato de que consiste essencial mente de: a) um veículo de eolãgeno, que possui pelo menos duas das seguintes propriedades físicas: módulo de elasticidade na faixa de 10-50 N/cnf, densidade de 1-10 mg/em3, diâmetro de câmara maior que 0,75 mm e menor que 4 mm d ou tendo um diâmetro de câmara médio abaixo de 3 mm, e uniformemente distribuída e fixada sobre o referido veículo uma mistura de b) fíbrinogênio humano sólido, e c) trombina humana sólida, em que dito eolãgeno, fíbrinogênio e trombina são de origem mamífera.

2. Composição de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que o veículo de colágeno é uma esponja de eolãgeno, que compreende material de eolãgeno tipo 1 a partir de fontes de mamífero.

3. Composição de acordo com qualquer das reivindicações 1 ou 2, caracterizada pelo fato de que o veículo de eolãgeno possui um ou mais lados ativos, em que o fíbrinogênio está presente em uma quantidade de 2-10 mg/cni2, tal como de 4,3-6,7 mg/ern2, preferivelmente de cerca de 5,5 mg/cm2, e trombina está presente em uma quantidade de 1,5-5,5 IU/cm2, preferivelmente de cerca de 2,0 IU/cm2.

4. Composição de acordo com as reivindicações 1 a 3, caracterizada pelo fato de que o fíbrinogênio é purificado a partir de uma fonte natural,

5. Composição de acordo com as reivindicações 1 a 4, caracterizada pelo fato de que a trombina é purificada a partir de uma fonte natural.

6. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizada pelo fato de que a composição não compreende qualquer agente antifibrinolítico tal como aprotinina, ácido ε-aminocapróico ou a2-antiplasmina.

7. Composição de acordo com a reivindicação 6, caracterizada pelo fato de que dita composição não compreende aprotinina.

8. Composição para hemostasia, vedação de tecido e colagem de tecido, caracterizado pelo fato de que contém um veículo flexível de colágeno, que possui pelo menos duas das seguintes propriedades físicas: módulo de elasticidade na faixa de 10-50 N/cm2, densidade de 1-10 mg/cm3, diâmetro de câmara maior que 0,75 mm e menor que 4 mm e/ ou tendo um diâmetro de câmara abaixo de 3 mm, e que compreende ainda uma mistura de: fibrinogênio humano sólido e trombina humana sólida e não compreende qualquer agente antifibrinolítico tal como aprotinina, ácido ε-aminocapróico ou oc2-antiplasmina, em que dito colágeno, fibrinogênio e trombina são de origem mamífera.

9. Uso de um veículo de colágeno tendo pelo menos duas das seguintes propriedades físicas: um módulo de elasticidade na faixa de 10-50 N/cm2, uma densidade de 1-10 mg/cm3, diâmetro de câmara maior que 0,75 mm e menor que 4 mm e/ ou tendo um diâmetro de câmara médio inferior a 3 mm, e 2-10 mg/cm2 de fibrinogênio e 1,0-5,5 IU/cm2 de trombina, caracterizado pelo fato de ser para a preparação de um produto para a vedação do tecido.

10. Uso de um veículo de colágeno tendo pelo menos duas das seguintes propriedades físicas: um módulo de elasticidade na faixa de 10-50 N/cm2, uma densidade de 1-10 mg/cm3, diâmetro de câmara maior que 0,75 mm e menor que 4 mm e / ou tendo um diâmetro de câmara médio inferior a 3 mm, e 2-10 mg/cm2 de fibrinogênio e 1,0-5,5 IU/cm2 de trombina, caracterizado pelo fato de ser para a preparação de um produto para a hemostasia.

11. Uso de um veículo de colágeno tendo pelo menos duas das seguintes propriedades físicas: um módulo de elasticidade na faixa de 10-50 N/cm2, uma densidade de 1-10 mg/cm3, diâmetro de câmara maior que 0,75 mm e menor que 4 mm e/ ou tendo um diâmetro médio de câmara abaixo de 3 mm, e 2-10 mg/cm2 de fibrinogênio e 1,0-5,5 IU/cm2 de trombina, caracterizado pelo fato de ser para a preparação de um produto para a colagem de tecido.

12. Uso de acordo com qualquer das reivindicações 9 a 11, caracterizado pelo fato de que o veículo é uma esponja de colágeno, por exemplo uma esponja de colágeno que consiste essencialmente de fibras de colágeno tipo I.

13. Uso de acordo com qualquer das reivindicações 9 a 12, caracterizado pelo fato de que o veículo possui um ou mais lados ativos, em que o fibrinogênio está presente em uma quantidade de 4,3- 6,7 mg/cm2, preferivelmente de cerca de 5,5 mg/cm2, e trombina está presente em uma quantidade de 1,5-2,5 IU/cm2, preferivelmente de 2,0 IU/cm2.

14. Uso de acordo com qualquer das reivindicações 9 a 13, caracterizado pelo fato de que o fibrinogênio é purificado a partir de uma fonte natural.

15. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 9 a 14, caracterizado pelo fato de que a trombina é purificada a partir de uma fonte natural.