JP2002524110A - 血管密封材および創傷被覆材として用いるためのｉ型コラーゲンおよびｉｉｉ型コラーゲン止血性組成物 - Google Patents
血管密封材および創傷被覆材として用いるためのｉ型コラーゲンおよびｉｉｉ型コラーゲン止血性組成物Info
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Abstract
(57)【要約】
重合化したＩ型コラーゲンおよび／またはＩＩＩ型コラーゲンに基づく、血管密封材および創傷被覆材としての医療用途のための組成物、ならびにその調製が記載される。重合化の前に、コラーゲンモノマーが組換え的に調製され、これによりこのようなモノマーを形成するためのコラーゲンの化学改変は必要でない。Ｉ型コラーゲンおよびＩＩＩ型コラーゲンからなるゼラチンを含む、Ｉ型コラーゲンおよび／またはＩＩＩ型コラーゲン組成物は、軟部組織を結合するための医医療用接着剤（ｍｅｄｉｃａｌ ａｄｈｅｓｉｖｅ）として、および種々の医学用途のための密封材として有用である。本発明のさらなる局面において、重合化したＩ型コラーゲンおよび／またはＩＩＩ型コラーゲン組成物は創傷治癒を誘導する因子を含むか、または組織密封または創傷被覆において所望される有利なさらなる特徴を提供する。本発明の組成物はまた、非接着性形態でも有用である。
Description
【０００１】 （関連出願との相互参照） 本出願は、米国仮出願番号６０／０９５，９７７の一部継続出願である。
【０００２】 （発明の分野） 本発明は、密封材および創傷被覆材としての医療用途のための、重合化した組
換えのＩ型コラーゲンおよび／またはＩＩＩ型コラーゲンに基づく組成物（ゼラ
チンに基づく組成物を含む）ならびにそれらの組み合わせに関する。本発明は、
さらに、このような組成物の調製に関する。これらの組成物は種々の医療適用に
おける密封材として有用である。これには、血管プラグ（ｖａｓｃｕｌａｒ ｐ
ｌｕｇ）型のデバイス、創傷閉鎖（ｗｏｕｎｄ ｃｌｏｓｕｒｅ）デバイス、外
科手順後の癒着の形成を防ぐための腱ラップ（ｔｅｎｄｏｎ ｗｒａｐ）および
切開、滲出創傷などを処置するのに用いるための包帯、ならびに組織を結合する
ための医療用接着剤が挙げられる。本発明のさらなる局面において、この組成物
は、創傷治癒を誘導するか、または組織密封材に所望されるさらなる有利な特徴
を提供する因子を含む。より詳細には、本発明の組成物は血管密封材として用い
られ得る。
換えのＩ型コラーゲンおよび／またはＩＩＩ型コラーゲンに基づく組成物（ゼラ
チンに基づく組成物を含む）ならびにそれらの組み合わせに関する。本発明は、
さらに、このような組成物の調製に関する。これらの組成物は種々の医療適用に
おける密封材として有用である。これには、血管プラグ（ｖａｓｃｕｌａｒ ｐ
ｌｕｇ）型のデバイス、創傷閉鎖（ｗｏｕｎｄ ｃｌｏｓｕｒｅ）デバイス、外
科手順後の癒着の形成を防ぐための腱ラップ（ｔｅｎｄｏｎ ｗｒａｐ）および
切開、滲出創傷などを処置するのに用いるための包帯、ならびに組織を結合する
ための医療用接着剤が挙げられる。本発明のさらなる局面において、この組成物
は、創傷治癒を誘導するか、または組織密封材に所望されるさらなる有利な特徴
を提供する因子を含む。より詳細には、本発明の組成物は血管密封材として用い
られ得る。
【０００３】 （発明の背景） （機械的接着技術、化学的接着技術、合成的接着技術および自己の接着技術） 生物学的組織を結合する能力は、生物医学の研究者にとって重要な研究領域で
ある。純粋に機械的な結合を通して、所望される接着性を提供するための試みは
、簡便でも恒久的でもないことが判明している（Ｂｕｏｎｏｃｏｒｅ，Ｍ．，Ａ
ｄｈｅｓｉｏｎ ｉｎ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｒ．Ｓ．Ｍａ
ｎｌｙ編、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９７０，第１
５章）。例えば、手術、傷害などの後の軟部組織における切開の閉鎖の選り抜き
の従来法は、縫合およびステープル（ｓｔａｐｌｅ）であった。これらの技術お
よび方法は、例えば、疼痛を生じ得、そして瘻孔肉芽腫および神経腫を処置する
のが困難である、縫合またはステープルとの組織の不適合性により制限される。
機械的手段はまた、純粋に接着性であることに制限され得、このため出血または
滲出などをしている閉鎖創傷に適用される密封材と比べて十分に満足され得ない
。縫合およびステープルはまた、弱い実質組織または血管新生に乏しい組織を通
じて切断する傾向にあり得る。縫合は、液体および生物の漏れを可能にし得る通
路を残したままにし得る。縫合は、さらに、いずれの縫合についても針がそれに
付けられる縫合糸より大きく、従って針の通路が縫合を形成するために用いた縫
合糸により充填され得るより大きいという点で問題である。
ある。純粋に機械的な結合を通して、所望される接着性を提供するための試みは
、簡便でも恒久的でもないことが判明している（Ｂｕｏｎｏｃｏｒｅ，Ｍ．，Ａ
ｄｈｅｓｉｏｎ ｉｎ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｒ．Ｓ．Ｍａ
ｎｌｙ編、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９７０，第１
５章）。例えば、手術、傷害などの後の軟部組織における切開の閉鎖の選り抜き
の従来法は、縫合およびステープル（ｓｔａｐｌｅ）であった。これらの技術お
よび方法は、例えば、疼痛を生じ得、そして瘻孔肉芽腫および神経腫を処置する
のが困難である、縫合またはステープルとの組織の不適合性により制限される。
機械的手段はまた、純粋に接着性であることに制限され得、このため出血または
滲出などをしている閉鎖創傷に適用される密封材と比べて十分に満足され得ない
。縫合およびステープルはまた、弱い実質組織または血管新生に乏しい組織を通
じて切断する傾向にあり得る。縫合は、液体および生物の漏れを可能にし得る通
路を残したままにし得る。縫合は、さらに、いずれの縫合についても針がそれに
付けられる縫合糸より大きく、従って針の通路が縫合を形成するために用いた縫
合糸により充填され得るより大きいという点で問題である。
【０００４】 さらに、外科医の側に要求される手技および視覚の器用さ、ならびに微小手術
における縫合またはステープルの使用に要する時間の過度の長さにより制限が課
される。さらに、ステープルまたは縫合の間の隙間におけるつなぎ目は、適切に
適用される場合でさえ、ステープルまたは縫合は本質的に弱いかまたは、時間経
過とともに構造的に弱くそして漏出し得る。
における縫合またはステープルの使用に要する時間の過度の長さにより制限が課
される。さらに、ステープルまたは縫合の間の隙間におけるつなぎ目は、適切に
適用される場合でさえ、ステープルまたは縫合は本質的に弱いかまたは、時間経
過とともに構造的に弱くそして漏出し得る。
【０００５】 いく人かの研究者が、創傷のレーザー閉鎖を研究してきた。（例えば、Ａｂｅ
ｒｇｅｌ，Ｒ．Ｐ．ら（１９８６）Ｊ．Ａｍ．Ａｃａｄ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．１
４（５）：８１０〜８１４；Ｃｅｓｐａｎｙｉ，Ｅら（１９８７）Ｊ．Ｓｕｒｇ
．Ｒｅｓ．４２（２）：１４７〜１５２；Ｏｚ，Ｍ．Ｃ．ら（１９８９）Ｌａｓ
ｅｒｓ Ｓｕｒｇ．Ｍｅｄ．９（３）：２４８〜２５３；Ｏｚ，Ｍ．Ｃ．ら（１
９９１）Ａｍ．Ｓｕｒｇ．５７（５）：２７５〜２７９；およびＯｚ，Ｍ．Ｃ．
ら（１９９３）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｌａｓｅｒ Ｍｅｄ．Ｓｕｒｇ．１１（３）：１
２３〜１２６を参照のこと）。初期の努力は、創傷の縁に直接適用する異なる波
長のレーザーを用いて組織を溶着すること、およびこのようにして生成した組織
融合の微細構造の基礎を研究することに集中した。研究者は、変化した個体の原
線維の嵌合をともなうコラーゲンの均質化変化を提唱した。（例えば、Ｓｃｈｏ
ｂｅｒ、Ｒら（１９８６）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３２（４７５６）：１４２１〜１
４２２を参照のこと）。研究者は、コラーゲン原線維を、架橋を可能にする閾値
レベル以上に加熱する案を探求した。しかし、この反応を可能にするために必要
な熱は、付随する熱損傷を引き起こす。これは、例えば、眼組織においてはわず
かな歪みでさえ機能的な結果を有し得るために望ましくない。また、レーザー溶
着不全の事象では、組織の端が初めの処置により損傷され得、そしてレーザーエ
ネルギーに再曝露され得ない。
ｒｇｅｌ，Ｒ．Ｐ．ら（１９８６）Ｊ．Ａｍ．Ａｃａｄ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．１
４（５）：８１０〜８１４；Ｃｅｓｐａｎｙｉ，Ｅら（１９８７）Ｊ．Ｓｕｒｇ
．Ｒｅｓ．４２（２）：１４７〜１５２；Ｏｚ，Ｍ．Ｃ．ら（１９８９）Ｌａｓ
ｅｒｓ Ｓｕｒｇ．Ｍｅｄ．９（３）：２４８〜２５３；Ｏｚ，Ｍ．Ｃ．ら（１
９９１）Ａｍ．Ｓｕｒｇ．５７（５）：２７５〜２７９；およびＯｚ，Ｍ．Ｃ．
ら（１９９３）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｌａｓｅｒ Ｍｅｄ．Ｓｕｒｇ．１１（３）：１
２３〜１２６を参照のこと）。初期の努力は、創傷の縁に直接適用する異なる波
長のレーザーを用いて組織を溶着すること、およびこのようにして生成した組織
融合の微細構造の基礎を研究することに集中した。研究者は、変化した個体の原
線維の嵌合をともなうコラーゲンの均質化変化を提唱した。（例えば、Ｓｃｈｏ
ｂｅｒ、Ｒら（１９８６）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３２（４７５６）：１４２１〜１
４２２を参照のこと）。研究者は、コラーゲン原線維を、架橋を可能にする閾値
レベル以上に加熱する案を探求した。しかし、この反応を可能にするために必要
な熱は、付随する熱損傷を引き起こす。これは、例えば、眼組織においてはわず
かな歪みでさえ機能的な結果を有し得るために望ましくない。また、レーザー溶
着不全の事象では、組織の端が初めの処置により損傷され得、そしてレーザーエ
ネルギーに再曝露され得ない。
【０００６】 さらなる研究は、創傷において色素を配置することにより熱活性化架橋を増強
することを試みた。レーザー波長での色素の吸収の適合が、より低いレーザー出
力およびより少ない付帯する温度損傷を伴う、接着性の効果を獲得したことが報
告された。（例えば、Ｃｈｕｃｋ，Ｒ．Ｓ．ら（１９８９）Ｌａｓｅｒｓ Ｓｕ
ｒｇ．Ｍｅｄ．９（５）：４７１〜４７７；およびＯｚ，Ｍ．Ｃ．ら（１９９０
）Ｊ．Ｖａｓｃ．Ｓｕｒｇ．１１（５）：７１８〜７２５を参照のこと）。組織
「はんだ（結合物質：ｓｏｌｄｅｒ）」を作成するための色素とタンパク質との
組み合わせがまた研究された。一般に用いられるタンパク質はフィブリノーゲン
、および特には自己のフィブリノーゲンである。自己のフィブリノーゲンは、プ
ールしたドナーからの血液成分の使用を通じたウイルス性疾患の伝播の問題を回
避するために用いられる。以前の適用では、フィブリノーゲンは、全血の画分と
して得られている。これは他の血液成分、例えば凝固因子を含む。種々の動物モ
デルにおけるこのようなタンパク質−色素混合物の適用は、色素のみに対する改
善であることを確認した。（例えば、Ｍｏａｚａｍｉ、Ｎら（１９９０）Ａｒｃ
ｈ．Ｓｕｒｇ．１２５（１１）：１４５２〜１４５４；およびＯｚら（１９９０
）を参照のこと）。しかし、ヒトへの直接適用は、ドナー血漿からの感染の危険
性を回避する手順の前に、患者由来の必須のタンパク質フィブリノーゲンを単離
する必要性に起因して妨げられた。他のタンパク質、例えばアルブミンは、匹敵
する溶着強度が得られなかったので不十分な代替物であった。
することを試みた。レーザー波長での色素の吸収の適合が、より低いレーザー出
力およびより少ない付帯する温度損傷を伴う、接着性の効果を獲得したことが報
告された。（例えば、Ｃｈｕｃｋ，Ｒ．Ｓ．ら（１９８９）Ｌａｓｅｒｓ Ｓｕ
ｒｇ．Ｍｅｄ．９（５）：４７１〜４７７；およびＯｚ，Ｍ．Ｃ．ら（１９９０
）Ｊ．Ｖａｓｃ．Ｓｕｒｇ．１１（５）：７１８〜７２５を参照のこと）。組織
「はんだ（結合物質：ｓｏｌｄｅｒ）」を作成するための色素とタンパク質との
組み合わせがまた研究された。一般に用いられるタンパク質はフィブリノーゲン
、および特には自己のフィブリノーゲンである。自己のフィブリノーゲンは、プ
ールしたドナーからの血液成分の使用を通じたウイルス性疾患の伝播の問題を回
避するために用いられる。以前の適用では、フィブリノーゲンは、全血の画分と
して得られている。これは他の血液成分、例えば凝固因子を含む。種々の動物モ
デルにおけるこのようなタンパク質−色素混合物の適用は、色素のみに対する改
善であることを確認した。（例えば、Ｍｏａｚａｍｉ、Ｎら（１９９０）Ａｒｃ
ｈ．Ｓｕｒｇ．１２５（１１）：１４５２〜１４５４；およびＯｚら（１９９０
）を参照のこと）。しかし、ヒトへの直接適用は、ドナー血漿からの感染の危険
性を回避する手順の前に、患者由来の必須のタンパク質フィブリノーゲンを単離
する必要性に起因して妨げられた。他のタンパク質、例えばアルブミンは、匹敵
する溶着強度が得られなかったので不十分な代替物であった。
【０００７】 タンパク質−色素適用および縫合閉鎖の比較は、タンパク質−色素適用がそれ
ほど炎症性応答を生成せず、そしてより大きいコラーゲン生成、破裂のより大き
い平均ピーク応力、およびより良好な美容術を生じることを示す。（例えば、Ｗ
ｉｌｄｅｒ，Ｔ．Ｍ．ら（１９９１）Ｐｌａｓｔ．Ｒｅｃｏｎｓｔｒ．Ｓｕｒｇ
．８８（６）：１０１８〜１０２５を参照のこと）。このような組織はんだ（結
合物質）の眼科適用は、結膜小胞の密封、強膜切開、網膜切除術の閉鎖、および
加熱角膜形成を含む。（例えば、Ｆｉｎｋ，Ａ．Ｊ．ら（１９８６）Ａｍ．Ｊ．
Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．１０１（６）：６９５〜６９９；およびＬａｔｉｎａ，
Ｍ．Ａ．ら（１９９０）Ａｒｃｈ．Ｏｈｔｈａｌｍｏｌ．１０８（１２）：１７
４５〜１７５０を参照のこと）。
ほど炎症性応答を生成せず、そしてより大きいコラーゲン生成、破裂のより大き
い平均ピーク応力、およびより良好な美容術を生じることを示す。（例えば、Ｗ
ｉｌｄｅｒ，Ｔ．Ｍ．ら（１９９１）Ｐｌａｓｔ．Ｒｅｃｏｎｓｔｒ．Ｓｕｒｇ
．８８（６）：１０１８〜１０２５を参照のこと）。このような組織はんだ（結
合物質）の眼科適用は、結膜小胞の密封、強膜切開、網膜切除術の閉鎖、および
加熱角膜形成を含む。（例えば、Ｆｉｎｋ，Ａ．Ｊ．ら（１９８６）Ａｍ．Ｊ．
Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．１０１（６）：６９５〜６９９；およびＬａｔｉｎａ，
Ｍ．Ａ．ら（１９９０）Ａｒｃｈ．Ｏｈｔｈａｌｍｏｌ．１０８（１２）：１７
４５〜１７５０を参照のこと）。
【０００８】 上記のような縫合、ステープルおよびレーザー技術のような機械的手段の欠乏
および制限のせいで、生体医学接着剤（ａｄｈｅｓｉｖｅ）および密封材として
、例えばシアノアクリレートのような合成ポリマーを開発する労力がなされた。
しかし、これらのプラスチック材料は、炎症性組織反応を誘導する。さらに、生
理学的な条件下で恒久的な結合を確立するこれらの材料の能力は、まだ完全には
理解されていない。
および制限のせいで、生体医学接着剤（ａｄｈｅｓｉｖｅ）および密封材として
、例えばシアノアクリレートのような合成ポリマーを開発する労力がなされた。
しかし、これらのプラスチック材料は、炎症性組織反応を誘導する。さらに、生
理学的な条件下で恒久的な結合を確立するこれらの材料の能力は、まだ完全には
理解されていない。
【０００９】 合成的接着剤に関連する公知の毒性は、結合材料としての生物学的に誘導され
た接着剤の開発への研究者を導いた。例えば、フィブリンに基づくのりは、かな
り注意を引いた。（例えば、フィブリン接着剤の一般的考察については、Ｅｐｓ
ｔｅｉｎ，Ｇ．Ｈ．ら、Ａｎｎ．Ｏｔｏｌ．Ｒｈｉｎｏｌ．Ｌａｒｙｎｇｏｌ．
９５：４０〜４５（１９８６）；Ｋｒａｍ、Ｈ．Ｂ．らＡｒｃｈ．Ｓｕｒｇ．１
１９：１３０９〜１３１１（１９８４）；Ｓｃｈｅｅｎｅｅ Ｊら、Ｓｕｒｇｅ
ｒｙ ９５：６〜１２（Ｊａｎｕａｒｙ １９８４）；およびＳｉｅｄｅｎｔｏ
ｐ，Ｋ．Ｈ．らＬａｒｙｎｇｏｓｃｏｏｅ ９３：１３１０〜１３１３（１９８
３）を参照のこと）。市販のフィブリン組織接着剤は、ヒト血漿に由来し、従っ
て有害な免疫原性応答および感染因子（例えば、Ｂ型肝炎ウイルスのような）の
伝播のような潜在的な健康状の危険性を提示する。さらに、このような接着剤に
より与えられる結合強度は、コラーゲン接着剤と比較して相対的に弱い。（例え
ば、Ｄｅ Ｔｏｌｅｄｏ，Ａ．Ｒ．ら、Ａｓｓｏｃ．ｆｏｒ Ｒｅｓ．Ｖｉｓｉ
ｏｎ ａｎｄ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ，Ａｎｎｕａｌ Ｍｅｅｔｉｎｇ
Ａｂｓｔｒａｃｔ，第３１巻、３１７（１９９０）を参照のこと）。従って、生
物医学適用のための安全でかつ有効な生物学的に適合性の組織接着剤の必要性が
存在する。
た接着剤の開発への研究者を導いた。例えば、フィブリンに基づくのりは、かな
り注意を引いた。（例えば、フィブリン接着剤の一般的考察については、Ｅｐｓ
ｔｅｉｎ，Ｇ．Ｈ．ら、Ａｎｎ．Ｏｔｏｌ．Ｒｈｉｎｏｌ．Ｌａｒｙｎｇｏｌ．
９５：４０〜４５（１９８６）；Ｋｒａｍ、Ｈ．Ｂ．らＡｒｃｈ．Ｓｕｒｇ．１
１９：１３０９〜１３１１（１９８４）；Ｓｃｈｅｅｎｅｅ Ｊら、Ｓｕｒｇｅ
ｒｙ ９５：６〜１２（Ｊａｎｕａｒｙ １９８４）；およびＳｉｅｄｅｎｔｏ
ｐ，Ｋ．Ｈ．らＬａｒｙｎｇｏｓｃｏｏｅ ９３：１３１０〜１３１３（１９８
３）を参照のこと）。市販のフィブリン組織接着剤は、ヒト血漿に由来し、従っ
て有害な免疫原性応答および感染因子（例えば、Ｂ型肝炎ウイルスのような）の
伝播のような潜在的な健康状の危険性を提示する。さらに、このような接着剤に
より与えられる結合強度は、コラーゲン接着剤と比較して相対的に弱い。（例え
ば、Ｄｅ Ｔｏｌｅｄｏ，Ａ．Ｒ．ら、Ａｓｓｏｃ．ｆｏｒ Ｒｅｓ．Ｖｉｓｉ
ｏｎ ａｎｄ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ，Ａｎｎｕａｌ Ｍｅｅｔｉｎｇ
Ａｂｓｔｒａｃｔ，第３１巻、３１７（１９９０）を参照のこと）。従って、生
物医学適用のための安全でかつ有効な生物学的に適合性の組織接着剤の必要性が
存在する。
【００１０】 より近年では、組み合わせ産物が組織接着および密封材としての使用のために
考案されている。皮膚移植片、鼓膜形成術の適用、硬膜欠損の修復、扁摘後の止
血および気管形成術への適用のためののりを得るための、３つの別個に調製した
物質（ヒトフィブリノーゲン寒冷沈降物、カルシウムイオンの存在下のトロンビ
ン、および第ＸＩＩＩ因子濃縮物）の組み合わせ使用が記載されている。（Ｓｔ
ａｉｎｄｌ（Ａｎｎ．Ｏｔｏｌ（１９７９）８８：４１３〜４１８）を参照のこ
と）。この同じ期間に、Ｉｍｍｕｎｏ−ＡＧ、Ｖｉｅｎｎａ、Ａｕｓｔｒｉａ、
は、２つの成分の「フィブリンシール（ｆｉｂｒｉｎ ｓｅａｌ）」システムの
製造および商品化を開始した。ここで、１つの成分は、プールした血液から調製
した、高度に濃縮したヒトフィブリノーゲン、第ＸＩＩＩ因子および他のヒト血
漿タンパク質を含み、そしてもう一方の成分はトロンビンおよびカルシウムイオ
ンを供給する。この２つの成分はフィブリン溶解性インヒビターの存在下で一緒
に添加される。適用後、凝固およびフィブリンの架橋が起こる。最後に、このシ
ールは、組織の再構成を伴う創傷または外傷の治癒のプロセスにおいて溶解し得
る。このシステムの２つの成分を同時混合しそして適用する、このシステムのた
めの適用デバイスの開発が記載されている。（Ｒｅｄｌ、Ｈら「Ｂｉｏｍａｔｅ
ｒｉａｌｓ １９８０」Ｗｉｎｔｅｒ，Ｇ．Ｄ．ら編（１９８２）Ｊｏｈｎ Ｗ
ｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ．Ｌｔｄ．，第６６９〜６７５頁）。これらの組み合わせシ
ステムおよびそれらの使用は、広範に記載されいる。（例えば、Ｓｅｅｌｉｃｈ
，Ｔ．，Ｊ Ｈｅａｄ ａｎｄ Ｎｅｃｋ Ｐａｔｈｏｌ（１９８２）３：６５
〜６９；Ｏ’Ｃｏｎｎｏｒ，Ａ．Ｆ．，ら．，Ｏｔｏｌａｒｙｎｇｏｌ Ｈｅａ
ｄ Ｎｅｃｋ Ｓｕｒｇ（１９８２）９０：３４７〜３４８；Ｍａｒｑｕｅｔ，
Ｊ．，Ｊ．Ｈｅａｄ ａｎｄ Ｎｅｃｋ Ｐａｔｈｏｌ（１９８２）３：７１〜
７２；Ｔｈｏｒｓｏｎ，Ｇ．Ｋ．ら．，Ｊ Ｓｕｒｇ Ｏｎｃｏｌ（１９８３）
２４：２２１〜２２３を参照のこと）。十二指腸洞の出血の処置におけるこのフ
ィブリンのりシステムへのバリウムイオンの添加が追跡監視を容易にすることが
また報告されている。（例えば、ＭｃＣａｒｔｈｙ，Ｐ．Ｍ．ら、Ｍａｙｏ Ｃ
ｌｉｎ Ｐｒｏｓ（１９８７）６２：３１７〜３１９；Ｐｏｒｔｍａｎｎ Ｍ．
Ｊ Ｈｅａｄ ａｎｄ Ｎｅｃｋ Ｐａｔｈｏｌ（１９８２）３：９６；Ｐａｎ
ｉｓ，Ｒ．，（同書）９４〜９５、を参照のこと）。
考案されている。皮膚移植片、鼓膜形成術の適用、硬膜欠損の修復、扁摘後の止
血および気管形成術への適用のためののりを得るための、３つの別個に調製した
物質（ヒトフィブリノーゲン寒冷沈降物、カルシウムイオンの存在下のトロンビ
ン、および第ＸＩＩＩ因子濃縮物）の組み合わせ使用が記載されている。（Ｓｔ
ａｉｎｄｌ（Ａｎｎ．Ｏｔｏｌ（１９７９）８８：４１３〜４１８）を参照のこ
と）。この同じ期間に、Ｉｍｍｕｎｏ−ＡＧ、Ｖｉｅｎｎａ、Ａｕｓｔｒｉａ、
は、２つの成分の「フィブリンシール（ｆｉｂｒｉｎ ｓｅａｌ）」システムの
製造および商品化を開始した。ここで、１つの成分は、プールした血液から調製
した、高度に濃縮したヒトフィブリノーゲン、第ＸＩＩＩ因子および他のヒト血
漿タンパク質を含み、そしてもう一方の成分はトロンビンおよびカルシウムイオ
ンを供給する。この２つの成分はフィブリン溶解性インヒビターの存在下で一緒
に添加される。適用後、凝固およびフィブリンの架橋が起こる。最後に、このシ
ールは、組織の再構成を伴う創傷または外傷の治癒のプロセスにおいて溶解し得
る。このシステムの２つの成分を同時混合しそして適用する、このシステムのた
めの適用デバイスの開発が記載されている。（Ｒｅｄｌ、Ｈら「Ｂｉｏｍａｔｅ
ｒｉａｌｓ １９８０」Ｗｉｎｔｅｒ，Ｇ．Ｄ．ら編（１９８２）Ｊｏｈｎ Ｗ
ｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ．Ｌｔｄ．，第６６９〜６７５頁）。これらの組み合わせシ
ステムおよびそれらの使用は、広範に記載されいる。（例えば、Ｓｅｅｌｉｃｈ
，Ｔ．，Ｊ Ｈｅａｄ ａｎｄ Ｎｅｃｋ Ｐａｔｈｏｌ（１９８２）３：６５
〜６９；Ｏ’Ｃｏｎｎｏｒ，Ａ．Ｆ．，ら．，Ｏｔｏｌａｒｙｎｇｏｌ Ｈｅａ
ｄ Ｎｅｃｋ Ｓｕｒｇ（１９８２）９０：３４７〜３４８；Ｍａｒｑｕｅｔ，
Ｊ．，Ｊ．Ｈｅａｄ ａｎｄ Ｎｅｃｋ Ｐａｔｈｏｌ（１９８２）３：７１〜
７２；Ｔｈｏｒｓｏｎ，Ｇ．Ｋ．ら．，Ｊ Ｓｕｒｇ Ｏｎｃｏｌ（１９８３）
２４：２２１〜２２３を参照のこと）。十二指腸洞の出血の処置におけるこのフ
ィブリンのりシステムへのバリウムイオンの添加が追跡監視を容易にすることが
また報告されている。（例えば、ＭｃＣａｒｔｈｙ，Ｐ．Ｍ．ら、Ｍａｙｏ Ｃ
ｌｉｎ Ｐｒｏｓ（１９８７）６２：３１７〜３１９；Ｐｏｒｔｍａｎｎ Ｍ．
Ｊ Ｈｅａｄ ａｎｄ Ｎｅｃｋ Ｐａｔｈｏｌ（１９８２）３：９６；Ｐａｎ
ｉｓ，Ｒ．，（同書）９４〜９５、を参照のこと）。
【００１１】 最近、市販の組織接着剤製品およびシステムにおいて血液血漿由来産物の使用
により惹起される健康上の問題を回避することを探求する方法に労力が集中して
いる。フィブリノーゲン含有成分の自己対応物を単離する試みがなされている。
（例えば、Ｆｅｌｄｍａｎ、Ｍ．Ｃ．ら、Ａｒｃｈ Ｏｔｏｌａｒｙｎｇｏｌ−
Ｈｅａｄ ａｎｄ Ｎｅｃｋ Ｓｕｒｇ（１９８８）１１４：１８２〜１８５；
Ｆｅｌｄｍａｎ，Ｍ．Ｃ．ら、Ａｒｃｈ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ（１９８７）１
０５：９６３〜９６７；Ｆｅｌｄｍａｎ，Ｍ．Ｃ．ら、Ｍ Ｊ Ｏｔｏｌｏｇ（
１９８８）９：３０２〜３０５；Ｓｉｌｂｅｒｓｔｅｉｎ，Ｌ．Ｅ．ら、Ｔｒａ
ｎｓｆｕｓｉｏｎ（１９８８）２８：３１９〜３２１を参照のこと）。自己フィ
ブリノーゲン調製物の使用はまた、明白な制限を有する。
により惹起される健康上の問題を回避することを探求する方法に労力が集中して
いる。フィブリノーゲン含有成分の自己対応物を単離する試みがなされている。
（例えば、Ｆｅｌｄｍａｎ、Ｍ．Ｃ．ら、Ａｒｃｈ Ｏｔｏｌａｒｙｎｇｏｌ−
Ｈｅａｄ ａｎｄ Ｎｅｃｋ Ｓｕｒｇ（１９８８）１１４：１８２〜１８５；
Ｆｅｌｄｍａｎ，Ｍ．Ｃ．ら、Ａｒｃｈ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ（１９８７）１
０５：９６３〜９６７；Ｆｅｌｄｍａｎ，Ｍ．Ｃ．ら、Ｍ Ｊ Ｏｔｏｌｏｇ（
１９８８）９：３０２〜３０５；Ｓｉｌｂｅｒｓｔｅｉｎ，Ｌ．Ｅ．ら、Ｔｒａ
ｎｓｆｕｓｉｏｎ（１９８８）２８：３１９〜３２１を参照のこと）。自己フィ
ブリノーゲン調製物の使用はまた、明白な制限を有する。
【００１２】 （血管密封材）組織接着剤の重要な局面の１つは、創傷、詳細には、血管穿刺
および他の血管創傷（例えば、手術から生じる）の密封である。
および他の血管創傷（例えば、手術から生じる）の密封である。
【００１３】 例えば、主要な血管構造に経皮的にアクセスすることは、種々の診断手順およ
び治療手順（経皮的経管的冠動脈形成術（ＰＴＣＡ）、経皮冠動脈造影、および
経皮冠状動脈内粥腫切除術を含む）において、重要な工程である。経皮血管内手
順において、血管空間へのアクセスは一般的に、いわゆるセルディンガー法を使
用して獲得され、この方法では、まず中空の針を用いて皮膚、内在する筋組織、
および選択された血管（例えば、大腿動脈）の壁を通した穿刺創傷を作製する。
次に、ガイドワイヤーを、その遠位端が血管内に配置されるまで管状針を通して
挿入し、配置された時点でこの針をガイドワイヤーから取り外し、そして誘導針
シースおよび拡張器と交換する。誘導針シースは、代表的に、ガイドワイヤー周
囲を密封するために、その近位端に自己密封止血弁を備える。次いで、ガイドワ
イヤーを、誘導針を通して血管空間に前進させ、そして血管系の予め選択された
領域に配向する。一旦、ガイドワイヤーが位置付けられると、カテーテルを、こ
のガイドワイヤーの上で所望の領域まで前進させる。
び治療手順（経皮的経管的冠動脈形成術（ＰＴＣＡ）、経皮冠動脈造影、および
経皮冠状動脈内粥腫切除術を含む）において、重要な工程である。経皮血管内手
順において、血管空間へのアクセスは一般的に、いわゆるセルディンガー法を使
用して獲得され、この方法では、まず中空の針を用いて皮膚、内在する筋組織、
および選択された血管（例えば、大腿動脈）の壁を通した穿刺創傷を作製する。
次に、ガイドワイヤーを、その遠位端が血管内に配置されるまで管状針を通して
挿入し、配置された時点でこの針をガイドワイヤーから取り外し、そして誘導針
シースおよび拡張器と交換する。誘導針シースは、代表的に、ガイドワイヤー周
囲を密封するために、その近位端に自己密封止血弁を備える。次いで、ガイドワ
イヤーを、誘導針を通して血管空間に前進させ、そして血管系の予め選択された
領域に配向する。一旦、ガイドワイヤーが位置付けられると、カテーテルを、こ
のガイドワイヤーの上で所望の領域まで前進させる。
【００１４】 一旦、この手順が完了し、そしてカテーテルおよび誘導針シースが穿刺部位か
ら取り除かれると、特に患者が抗凝固療法（例えば、ヘパリン、クマジン（ｃｏ
ｕｍａｄｉｎ）、アスピリン、または血栓崩壊剤）にある場合には、大量の出血
が起こり得る。アクセス部位での手順後の出血を阻止するために使用される最も
一般的な方法は、正常な生理学的経路がアクセス部位を密封するまで、穿孔部位
に直接的圧力を適用することに関する。この方法に伴ういくつかの問題点が存在
する。第１に、圧力適用技術は、出血の阻止に失敗し得る。このような出血は、
生命の危機に関わり得るか、または大量の血腫を導き得る。例えば、鼡径部など
における大量の血腫は、主要な神経供給を前方のより低い端にとどめ得る。
ら取り除かれると、特に患者が抗凝固療法（例えば、ヘパリン、クマジン（ｃｏ
ｕｍａｄｉｎ）、アスピリン、または血栓崩壊剤）にある場合には、大量の出血
が起こり得る。アクセス部位での手順後の出血を阻止するために使用される最も
一般的な方法は、正常な生理学的経路がアクセス部位を密封するまで、穿孔部位
に直接的圧力を適用することに関する。この方法に伴ういくつかの問題点が存在
する。第１に、圧力適用技術は、出血の阻止に失敗し得る。このような出血は、
生命の危機に関わり得るか、または大量の血腫を導き得る。例えば、鼡径部など
における大量の血腫は、主要な神経供給を前方のより低い端にとどめ得る。
【００１５】 第２に、圧力適用技術は、入院滞在の長さを延長する。例えば、ＰＴＣＡは２
〜３時間で完了し得るが、患者は代表的に、アクセス部位を生理学的に密封させ
るために、さらに数時間から一晩の間入院する。この延長した入院滞在の間、患
者は、例えば大腿動脈のアクセスの場合に、しばしば患者の大腿にテープされた
砂嚢を伴って、固定して滞在することが必要とされる。
〜３時間で完了し得るが、患者は代表的に、アクセス部位を生理学的に密封させ
るために、さらに数時間から一晩の間入院する。この延長した入院滞在の間、患
者は、例えば大腿動脈のアクセスの場合に、しばしば患者の大腿にテープされた
砂嚢を伴って、固定して滞在することが必要とされる。
【００１６】 これらおよび他の合併症は、自然の弾性を減少した動脈を一般に有する高齢の
患者においてＰＴＣＡ手順が実施される場合に悪化する。比較的非弾性の動脈に
おけるアクセス穿孔は、正常の弾性の動脈における場合と同じ程度には緊縮また
は収縮しない。結果として生じる非縮小穿孔は、代表的に、正常な動脈における
アクセス穿孔よりも２〜３倍大きく、アクセス部位の止血の開始および正常な生
理学的密封をさらに複雑にする。
患者においてＰＴＣＡ手順が実施される場合に悪化する。比較的非弾性の動脈に
おけるアクセス穿孔は、正常の弾性の動脈における場合と同じ程度には緊縮また
は収縮しない。結果として生じる非縮小穿孔は、代表的に、正常な動脈における
アクセス穿孔よりも２〜３倍大きく、アクセス部位の止血の開始および正常な生
理学的密封をさらに複雑にする。
【００１７】 １９９２年に全世界で５００、０００を超えるＰＴＣＡが実施され（Ｃｏｗｅ
ｎ Ｒｅｐｏｒｔ、１９９３年３月）、そして主要な血管構造に経皮的にアクセ
スすることを必要とするその数の数倍の他の手順もまた実施された。従って、圧
力適用技術によって必要とされる入院滞在の長さの増大は、このような血管への
アクセスに必要とされる手順の経費をかなり増加させる。
ｎ Ｒｅｐｏｒｔ、１９９３年３月）、そして主要な血管構造に経皮的にアクセ
スすることを必要とするその数の数倍の他の手順もまた実施された。従って、圧
力適用技術によって必要とされる入院滞在の長さの増大は、このような血管への
アクセスに必要とされる手順の経費をかなり増加させる。
【００１８】 より速くかつより安全な血管アクセス部位の密封を可能にする技術は、非常に
大量の健康管理資金を節約する。医学文献は、多数の多様な手段によって、血管
造影または血管形成術のような用途における、経皮的に適用された血管内誘導針
の除去後の止血を達成することの問題に取り組んできた。米国特許第５，２９０
，３１０号は、血管壁における貫通部位に対して、皮下的にコラーゲン栓を送達
するためのデバイスを記載する。そのバレルの中にドーナツ型のコラーゲン栓を
含む器具が、管状誘導針の外部周辺に作製される。この器具は、穿刺創傷内およ
びこの穿刺の部位の血管の外部壁に対してコラーゲン栓を排出するためのプッシ
ャー（ｐｕｓｈｅｒ）を備える。このデバイスは、動物供給源に由来し、従って
主にヘテロ三量体のＩ型コラーゲンを含むコラーゲン栓に依存する。
大量の健康管理資金を節約する。医学文献は、多数の多様な手段によって、血管
造影または血管形成術のような用途における、経皮的に適用された血管内誘導針
の除去後の止血を達成することの問題に取り組んできた。米国特許第５，２９０
，３１０号は、血管壁における貫通部位に対して、皮下的にコラーゲン栓を送達
するためのデバイスを記載する。そのバレルの中にドーナツ型のコラーゲン栓を
含む器具が、管状誘導針の外部周辺に作製される。この器具は、穿刺創傷内およ
びこの穿刺の部位の血管の外部壁に対してコラーゲン栓を排出するためのプッシ
ャー（ｐｕｓｈｅｒ）を備える。このデバイスは、動物供給源に由来し、従って
主にヘテロ三量体のＩ型コラーゲンを含むコラーゲン栓に依存する。
【００１９】 米国特許第５，１２９，８８２号はまた、その遠位端がもはや血管内にはない
ように十分に誘導針シースの内腔が収縮した後に、誘導針シースの内腔を通して
注射デバイスを経由させることによって穿刺創傷に止血剤を注射するための外科
的器具を開示する。プランジャーを使用することにより、止血剤は器具の外側で
、そして穿刺創傷付近の動脈の外部壁に対して押し出される。
ように十分に誘導針シースの内腔が収縮した後に、誘導針シースの内腔を通して
注射デバイスを経由させることによって穿刺創傷に止血剤を注射するための外科
的器具を開示する。プランジャーを使用することにより、止血剤は器具の外側で
、そして穿刺創傷付近の動脈の外部壁に対して押し出される。
【００２０】 米国特許第４，７４４，３６４号、同第４，８５２，９７４号、同第４，８９
０，６１２号、同第５，０２１，０５９号、および同第５，２２２，９７４号は
各々、創傷内に適切な密封材を注射するための固着デバイスに付着された細糸を
使用しつつ、穿刺を通して血管内に固着デバイスを挿入することによって止血を
もたらすための方法および装置を記載する。固着デバイスは、血管内への密封物
質の進入を妨げ、そして選択された血管に向けさせるためのアンカー（ａｎｃｈ
ｏｒ）およびガイド（ｇｕｉｄｅ）として作用する。
０，６１２号、同第５，０２１，０５９号、および同第５，２２２，９７４号は
各々、創傷内に適切な密封材を注射するための固着デバイスに付着された細糸を
使用しつつ、穿刺を通して血管内に固着デバイスを挿入することによって止血を
もたらすための方法および装置を記載する。固着デバイスは、血管内への密封物
質の進入を妨げ、そして選択された血管に向けさせるためのアンカー（ａｎｃｈ
ｏｒ）およびガイド（ｇｕｉｄｅ）として作用する。
【００２１】 さらに他の、血管手順後に穿刺損傷内に止血剤を注射するためのデバイスが、
米国特許第５、２８１、１９７号、同第４、８３８、２８０号、同第５、１９２
、３００号、および同第４、７３８、６５８号、ならびに公開された欧州特許出
願０ ４７６ １７８Ａ１に記載されている。
米国特許第５、２８１、１９７号、同第４、８３８、２８０号、同第５、１９２
、３００号、および同第４、７３８、６５８号、ならびに公開された欧州特許出
願０ ４７６ １７８Ａ１に記載されている。
【００２２】 （生体適合物質としてのコラーゲン／ゼラチン） 動物における主要な結合組
織タンパク質であるコラーゲンは、合成ポリマーには見られない多数の特徴を有
する。コラーゲンの特徴としては、生組織との良好な適合性、細胞増殖の促進、
ならびに移植の吸収および同化が挙げられる（例えば、Ｓｈｉｍｉｚｕ，Ｒ．ら
、Ｂｉｏｍａｔ．Ｍｅｄ．Ｄｅｖ．Ａｒｔ．Ｏｒｇ．５（１）：４９−６６（１
９７７）を参照のこと）。これらの同じ特徴は、コラーゲンの誘導産物であるゼ
ラチンにもあてはまる。
織タンパク質であるコラーゲンは、合成ポリマーには見られない多数の特徴を有
する。コラーゲンの特徴としては、生組織との良好な適合性、細胞増殖の促進、
ならびに移植の吸収および同化が挙げられる（例えば、Ｓｈｉｍｉｚｕ，Ｒ．ら
、Ｂｉｏｍａｔ．Ｍｅｄ．Ｄｅｖ．Ａｒｔ．Ｏｒｇ．５（１）：４９−６６（１
９７７）を参照のこと）。これらの同じ特徴は、コラーゲンの誘導産物であるゼ
ラチンにもあてはまる。
【００２３】 生体適合物質としてのコラーゲンの種々の適用（例えば、人工腎の透析膜、人
工角膜、硝子体、人工の皮膚および血管、止血剤、ソフトコンタクトレンズ、お
よび外科手術におけるコラーゲンの使用）が試験されている（Ｓｔｅｒｚｅｌ，
Ｋ．Ｈ．ら、Ａｍｅｒｉ．Ｓｏｃ．Ａｒｔｉｆ．Ｉｎｔ．Ｏｒｇａｎｓ １７：
２９３（１９７１）、Ｒｕｂｉｎ，Ａ．Ｌ．ら、Ｎａｔｕｒｅ ２３０：１２０
（１９７１）、および米国特許第４，５８１，０３０号、Ｄｕｎｎ，Ｍ．ら、Ａ
ｍｅｒ．Ｓｏｃ．Ａｒｔｉｆ．Ｉｎｔ．Ｏｒｇａｎｓ １７:４２１（１９７１
）、Ｋｒａｊｉｃｅｋ，Ｍ．ら、Ｊ．Ｓｒｕｇ．Ｒｅｓ．４：２９０（１９６４
）、米国特許第４，２１５，２００号、米国特許第４，２６４，１５５号；同第
４，２６４，４９３号；同第４，３４９，４７０号；同第４，３８８，４２８号
；同第４，４５２，９２５号、および同第４，６５０，６１６号、ならびにＣｈ
ｖａｐｉｌ，Ｍ．ら、Ｉｎｔ．Ｒｅｖ．Ｃｏｎｎ．Ｔｉｓｓ．Ｒｅｓ．６：１−
６１（１９７３））。
工角膜、硝子体、人工の皮膚および血管、止血剤、ソフトコンタクトレンズ、お
よび外科手術におけるコラーゲンの使用）が試験されている（Ｓｔｅｒｚｅｌ，
Ｋ．Ｈ．ら、Ａｍｅｒｉ．Ｓｏｃ．Ａｒｔｉｆ．Ｉｎｔ．Ｏｒｇａｎｓ １７：
２９３（１９７１）、Ｒｕｂｉｎ，Ａ．Ｌ．ら、Ｎａｔｕｒｅ ２３０：１２０
（１９７１）、および米国特許第４，５８１，０３０号、Ｄｕｎｎ，Ｍ．ら、Ａ
ｍｅｒ．Ｓｏｃ．Ａｒｔｉｆ．Ｉｎｔ．Ｏｒｇａｎｓ １７:４２１（１９７１
）、Ｋｒａｊｉｃｅｋ，Ｍ．ら、Ｊ．Ｓｒｕｇ．Ｒｅｓ．４：２９０（１９６４
）、米国特許第４，２１５，２００号、米国特許第４，２６４，１５５号；同第
４，２６４，４９３号；同第４，３４９，４７０号；同第４，３８８，４２８号
；同第４，４５２，９２５号、および同第４，６５０，６１６号、ならびにＣｈ
ｖａｐｉｌ，Ｍ．ら、Ｉｎｔ．Ｒｅｖ．Ｃｏｎｎ．Ｔｉｓｓ．Ｒｅｓ．６：１−
６１（１９７３））。
【００２４】 しかし、天然のコラーゲン繊維は、コラーゲンを無限に架橋されたネットワー
クに変換する共有結合性分子間架橋が理由で、成熟組織において基本的に不溶性
である。天然のコラーゲンの分散および可溶化は、分子間結合を破壊し、そして
コラーゲンの所望の特性を付与する基本の堅固な三重らせん構造に影響すること
なく、免疫原性の非らせん末端領域を取り除く種々のタンパク質分解性酵素で処
理することによって達成され得る（精製された可溶性コラーゲンを調製する一般
的な方法については、例えば、米国特許第３，９３４，８５２号；同第３，１２
１，０４９号；同第３，１３１，１３０号；同第３，３１４，８６１号；同第３
，５３０，０３７号；同第３，９４９，０７３号；同第４，２３３，３６０号、
および同第４，４８８，９１１号を参照のこと）。
クに変換する共有結合性分子間架橋が理由で、成熟組織において基本的に不溶性
である。天然のコラーゲンの分散および可溶化は、分子間結合を破壊し、そして
コラーゲンの所望の特性を付与する基本の堅固な三重らせん構造に影響すること
なく、免疫原性の非らせん末端領域を取り除く種々のタンパク質分解性酵素で処
理することによって達成され得る（精製された可溶性コラーゲンを調製する一般
的な方法については、例えば、米国特許第３，９３４，８５２号；同第３，１２
１，０４９号；同第３，１３１，１３０号；同第３，３１４，８６１号；同第３
，５３０，０３７号；同第３，９４９，０７３号；同第４，２３３，３６０号、
および同第４，４８８，９１１号を参照のこと）。
【００２５】 コラーゲンを生体医学的接着剤としてより適合させるためにコラーゲンを改変
するための、種々の方法および物質が提案された（コラーゲンおよび合成ポリマ
ーに関する一般的考察については、例えば、Ｄｅ Ｔｏｌｅｄｏ，Ａ．Ｒ．ら、
Ａｓｓｏｃ．ｆｏｒ Ｒｅｓ．ｉｎ Ｖｉｓｉｏｎ ａｎｄ Ｏｐｈｔｈａｌｍ
ｏｌｏｇｙ、Ａｎｎｕａｌ Ｍｅｅｔｉｎｇ Ａｂｓｔｒａｃｔ、第３１巻、３
１７（１９９０）；Ｌｌｏｙｄら、「Ｃｏｖａｌｅｎｔ Ｂｏｎｄｉｎｇ ｏｆ
Ｃｏｌｌａｇｅｎ ａｎｄ Ａｃｒｙｌｉｃ Ｐｏｌｙｍｅｒｓ」、Ａｍｅｒ
ｉｃａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ ｏｎ Ｂ
ｉｏｍｅｄｉｃａｌ ａｎｄ Ｄｅｎｔａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ
Ｐｏｌｙｍｅｒｓ、Ｐｏｌｙｍｅｒ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏ
ｌｏｇｙ、第１４巻、Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ（Ｇｅｂｅｌｅｉｎ ａｎｄ
Ｋｏｂｌｉｔｚ編）Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、１９８０、第５９〜８４頁；Ｓｈｉｍｉ
ｚｕら、Ｂｉｏｍａｔ．Ｍｅｄ．Ｄｅｖ．Ａｒｔ．Ｏｒｇ．５（１）：４９−６
６（１９７７）；およびＳｈｉｍｉｚｕら、Ｂｉｏｍａｔ．Ｍｅｄ．Ｄｅｖ．Ａ
ｒｔ．Ｏｒｇ．６（４）：３７５−３９１（１９７８）を参照のこと）。多くの
場合、先行の改変されたコラーゲンベースの接着剤は、以下を含む種々の欠陥を
被る：（１）発熱を産生する架橋／重合反応、（２）長い反応時間、および（３
）酸素および生理学的ｐＨ範囲の存在下で効力のない反応（例えば、Ｌｅｅ Ｍ
．Ｌ．ら、Ａｄｈｅｓｉｏｎ ｉｎ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓｙｓｔｅｍｓ、
Ｒ．Ｓ．Ｍａｎｌｙ編、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、１
９７０、第１７節を参照のこと）。さらに、多くの先行の改変されたコラーゲン
ベースの接着剤は、それらを生体医学的用途に不適合にさせる毒性物質を含む（
例えば、Ｂｕｏｎｏｃｏｒｅ，Ｍ．Ｇ．（１９７０）および米国特許第３，４５
３，２２２号を参照のこと）。
するための、種々の方法および物質が提案された（コラーゲンおよび合成ポリマ
ーに関する一般的考察については、例えば、Ｄｅ Ｔｏｌｅｄｏ，Ａ．Ｒ．ら、
Ａｓｓｏｃ．ｆｏｒ Ｒｅｓ．ｉｎ Ｖｉｓｉｏｎ ａｎｄ Ｏｐｈｔｈａｌｍ
ｏｌｏｇｙ、Ａｎｎｕａｌ Ｍｅｅｔｉｎｇ Ａｂｓｔｒａｃｔ、第３１巻、３
１７（１９９０）；Ｌｌｏｙｄら、「Ｃｏｖａｌｅｎｔ Ｂｏｎｄｉｎｇ ｏｆ
Ｃｏｌｌａｇｅｎ ａｎｄ Ａｃｒｙｌｉｃ Ｐｏｌｙｍｅｒｓ」、Ａｍｅｒ
ｉｃａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ ｏｎ Ｂ
ｉｏｍｅｄｉｃａｌ ａｎｄ Ｄｅｎｔａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ
Ｐｏｌｙｍｅｒｓ、Ｐｏｌｙｍｅｒ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏ
ｌｏｇｙ、第１４巻、Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ（Ｇｅｂｅｌｅｉｎ ａｎｄ
Ｋｏｂｌｉｔｚ編）Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、１９８０、第５９〜８４頁；Ｓｈｉｍｉ
ｚｕら、Ｂｉｏｍａｔ．Ｍｅｄ．Ｄｅｖ．Ａｒｔ．Ｏｒｇ．５（１）：４９−６
６（１９７７）；およびＳｈｉｍｉｚｕら、Ｂｉｏｍａｔ．Ｍｅｄ．Ｄｅｖ．Ａ
ｒｔ．Ｏｒｇ．６（４）：３７５−３９１（１９７８）を参照のこと）。多くの
場合、先行の改変されたコラーゲンベースの接着剤は、以下を含む種々の欠陥を
被る：（１）発熱を産生する架橋／重合反応、（２）長い反応時間、および（３
）酸素および生理学的ｐＨ範囲の存在下で効力のない反応（例えば、Ｌｅｅ Ｍ
．Ｌ．ら、Ａｄｈｅｓｉｏｎ ｉｎ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓｙｓｔｅｍｓ、
Ｒ．Ｓ．Ｍａｎｌｙ編、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、１
９７０、第１７節を参照のこと）。さらに、多くの先行の改変されたコラーゲン
ベースの接着剤は、それらを生体医学的用途に不適合にさせる毒性物質を含む（
例えば、Ｂｕｏｎｏｃｏｒｅ，Ｍ．Ｇ．（１９７０）および米国特許第３，４５
３，２２２号を参照のこと）。
【００２６】 さらに、コラーゲンベースの接着剤の使用にはまた、このような接着剤が動物
供給源（そして代表的にはウシ供給源）由来であるので、免疫学的な懸念が存在
する。注射可能デバイスとしてのこのようなコラーゲンの使用に関する研究は、
少数の炎症応答を報告した。より近年では、ウシ海綿状脳障害（「狂牛病」）に
関連したヒトへの障害の伝染に関する潜在的な問題が、特にヨーロッパで、動物
および特にウシ供給源の物質の使用を制限するように注意を集めた。
供給源（そして代表的にはウシ供給源）由来であるので、免疫学的な懸念が存在
する。注射可能デバイスとしてのこのようなコラーゲンの使用に関する研究は、
少数の炎症応答を報告した。より近年では、ウシ海綿状脳障害（「狂牛病」）に
関連したヒトへの障害の伝染に関する潜在的な問題が、特にヨーロッパで、動物
および特にウシ供給源の物質の使用を制限するように注意を集めた。
【００２７】 これらの欠陥にもかかわらず、伝えるところでは適切な接着性強度および多く
の医療的適用（特に、柔組織に関する）における有用性を有する、特定のコラー
ゲンベースの接着剤が記載された（米国特許第５，２１９，８９５号、同第５，
６１４，５８７号、同第５，５８２，８３４号、同第５，５７５，９９７号、同
第５，３５４，３３６号、および同第４，６００，５７４号を参照のこと）。参
考文献は、コラーゲンベースの接着剤においてＩ型およびＩＩ型の使用を確認し
ている。ここで、精製されたＩ型およびＩＩ型コラーゲンは、化学的に改変され
て生理学的条件で可溶性のモノマーを形成し、そして重合化されて接着性および
密封材特性を有する組成物を形成する。特に、この報告は、コラーゲン混合物を
提示する天然の供給源由来のコラーゲンからなるコラーゲンベースの接着剤に限
定されている。例えば、天然の供給源から単離されるようなＩ型コラーゲンは、
使用される組織供給源に依存して、代表的に約１０〜２０％のＩＩＩ型コラーゲ
ンおよび他のコラーゲン、ならびに約９０〜８０％のＩ型コラーゲンを含む。「
Ｉ型コラーゲン」混合物に関して、参考文献はさらに、その構造的特徴の結果と
同じ程度の接着性のコラーゲンの使用、あるいは、上皮細胞接着において暗示さ
れたＩ型コラーゲンのホモ三量体と比較した、優勢なＩ型コラーゲンのへテロ三
量体の使用のみを教示している（例えば、Ｇｈｅｒｓｉら、１９８９、Ｅｕｒ．
Ｊ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．５０:２７９−８４を参照のこと）。
の医療的適用（特に、柔組織に関する）における有用性を有する、特定のコラー
ゲンベースの接着剤が記載された（米国特許第５，２１９，８９５号、同第５，
６１４，５８７号、同第５，５８２，８３４号、同第５，５７５，９９７号、同
第５，３５４，３３６号、および同第４，６００，５７４号を参照のこと）。参
考文献は、コラーゲンベースの接着剤においてＩ型およびＩＩ型の使用を確認し
ている。ここで、精製されたＩ型およびＩＩ型コラーゲンは、化学的に改変され
て生理学的条件で可溶性のモノマーを形成し、そして重合化されて接着性および
密封材特性を有する組成物を形成する。特に、この報告は、コラーゲン混合物を
提示する天然の供給源由来のコラーゲンからなるコラーゲンベースの接着剤に限
定されている。例えば、天然の供給源から単離されるようなＩ型コラーゲンは、
使用される組織供給源に依存して、代表的に約１０〜２０％のＩＩＩ型コラーゲ
ンおよび他のコラーゲン、ならびに約９０〜８０％のＩ型コラーゲンを含む。「
Ｉ型コラーゲン」混合物に関して、参考文献はさらに、その構造的特徴の結果と
同じ程度の接着性のコラーゲンの使用、あるいは、上皮細胞接着において暗示さ
れたＩ型コラーゲンのホモ三量体と比較した、優勢なＩ型コラーゲンのへテロ三
量体の使用のみを教示している（例えば、Ｇｈｅｒｓｉら、１９８９、Ｅｕｒ．
Ｊ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．５０:２７９−８４を参照のこと）。
【００２８】 入手可能な報告は、ＩＩＩ型コラーゲン、ＩＩＩ型コラーゲンの予想外の止血
特徴、または当該分野で記載されるような最初の化学的改変工程を回避すること
を可能にする組換えコラーゲンの使用に言及していない。
特徴、または当該分野で記載されるような最初の化学的改変工程を回避すること
を可能にする組換えコラーゲンの使用に言及していない。
【００２９】 まとめると、より速くかつより安全な治癒を可能にし、ドナー（非ヒトを含む
）供給源からの感染の危険性を最小化し、簡便性および耐久性を増加し、外科手
術の資金および時間への依存を最小化し、そして優れた生体適合性を示す密封材
および創傷被覆材として有用な組成物についての必要性が、当該分野において存
在する。さらに、現在の利用可能な処方を超える改善された簡便性および耐久性
を提供し、そして侵襲性の少ない処置を促進して、医療的監視のもとで改善され
た患者の痛みの軽減およびより短時間を生じる、生物学的に誘導された接着剤に
ついての必要性が存在する。さらに、このような組成物は、好ましくは、改善さ
れた結合強度を提供する。上記に挙げられたより安全かつより有効な治癒の利点
を提供し、そして生物学的に適合性である非接着性組成物についても、必要性が
存在する。
）供給源からの感染の危険性を最小化し、簡便性および耐久性を増加し、外科手
術の資金および時間への依存を最小化し、そして優れた生体適合性を示す密封材
および創傷被覆材として有用な組成物についての必要性が、当該分野において存
在する。さらに、現在の利用可能な処方を超える改善された簡便性および耐久性
を提供し、そして侵襲性の少ない処置を促進して、医療的監視のもとで改善され
た患者の痛みの軽減およびより短時間を生じる、生物学的に誘導された接着剤に
ついての必要性が存在する。さらに、このような組成物は、好ましくは、改善さ
れた結合強度を提供する。上記に挙げられたより安全かつより有効な治癒の利点
を提供し、そして生物学的に適合性である非接着性組成物についても、必要性が
存在する。
【００３０】 （発明の要旨） 本発明は、可溶性の組換え的に誘導されたＩＩＩ型コラーゲンモノマーおよび
／またはＩ型コラーゲンモノマー、またはＩＩＩ型コラーゲンモノマーおよび／
またはＩ型コラーゲンモノマー由来のゼラチンを使用して形成され得る、密封材
特性を有する生物学的に適合性のＩＩＩ型コラーゲン産物および／またはＩ型コ
ラーゲン産物（コラーゲン産物およびゼラチン産物は、ひとまとめにして、本明
細書中以降、「コラーゲン」といわれる）を含み、ここでこのモノマーは、重合
化されて密封材特性を有するＩＩＩ型コラーゲン組成物および／またはＩ型コラ
ーゲン組成物を形成する。好ましくは、コラーゲンはヒトであり、そして組換え
技術を使用して誘導される。ＩＩＩ型コラーゲンは、他の型のコラーゲンと比較
して、その予想外に優れた止血特徴のために選択された。Ｉ型コラーゲンは、そ
の構造的特徴のため、ならびに特定のＩ型コラーゲン形態（例えば、Ｉ型コラー
ゲンのホモ三量体）の止血特性のために選択された。重合化反応は、化学的酸化
剤、紫外線照射、適切な酸化酵素、または大気中の酸素のような適切な重合化開
始剤によって開始され得る。さらに、グルタルアルデヒド、色素媒介性光酸化、
ＰＥＧおよびその誘導体、アシルアジ化物、プライエポキシ（ｐｌｙｅｐｏｘｙ
）固定剤、酸化デンプン（過ヨウ素酸塩）および水溶性カルボジイミド（「ＷＳ
Ｃ」）を含む架橋剤は、重合化プロセスにおいて使用されて、密封材特性を有す
るコラーゲン組成物を形成し得る。
／またはＩ型コラーゲンモノマー、またはＩＩＩ型コラーゲンモノマーおよび／
またはＩ型コラーゲンモノマー由来のゼラチンを使用して形成され得る、密封材
特性を有する生物学的に適合性のＩＩＩ型コラーゲン産物および／またはＩ型コ
ラーゲン産物（コラーゲン産物およびゼラチン産物は、ひとまとめにして、本明
細書中以降、「コラーゲン」といわれる）を含み、ここでこのモノマーは、重合
化されて密封材特性を有するＩＩＩ型コラーゲン組成物および／またはＩ型コラ
ーゲン組成物を形成する。好ましくは、コラーゲンはヒトであり、そして組換え
技術を使用して誘導される。ＩＩＩ型コラーゲンは、他の型のコラーゲンと比較
して、その予想外に優れた止血特徴のために選択された。Ｉ型コラーゲンは、そ
の構造的特徴のため、ならびに特定のＩ型コラーゲン形態（例えば、Ｉ型コラー
ゲンのホモ三量体）の止血特性のために選択された。重合化反応は、化学的酸化
剤、紫外線照射、適切な酸化酵素、または大気中の酸素のような適切な重合化開
始剤によって開始され得る。さらに、グルタルアルデヒド、色素媒介性光酸化、
ＰＥＧおよびその誘導体、アシルアジ化物、プライエポキシ（ｐｌｙｅｐｏｘｙ
）固定剤、酸化デンプン（過ヨウ素酸塩）および水溶性カルボジイミド（「ＷＳ
Ｃ」）を含む架橋剤は、重合化プロセスにおいて使用されて、密封材特性を有す
るコラーゲン組成物を形成し得る。
【００３１】 産物の構造的安定性および止血特徴を最適化することによって、組換えコラー
ゲン産物の密封材特性および接着性特性を最適化する目的のために、産物は、純
粋な組換えＩ型コラーゲンおよびＩＩＩ型コラーゲンの組み合わせから構成され
る。純粋な組換えＩＩＩ型コラーゲン 対 純粋な組換えＩ型コラーゲン（ヘテ
ロ三量体）の割合は、好ましくは約３０％以上のＩＩＩ型コラーゲン 対 約７
０％以下のＩ型コラーゲン（ヘテロ三量体）である。より好ましくは、純粋な組
換えＩＩＩ型コラーゲン 対 純粋な組換えＩ型コラーゲン（ヘテロ三量体）の
割合は、約３０％〜約５０％のＩＩＩ型コラーゲン 対 約７０〜約５０％のＩ
型コラーゲン（ヘテロ三量体）である。最も好ましくは、純粋な組換えＩＩＩ型
コラーゲン 対 純粋な組換えＩ型コラーゲン（ヘテロ三量体）の割合は、約３
０〜約４０％のＩＩＩ型コラーゲン 対 約７０〜約６０％のＩ型コラーゲン（
ヘテロ三量体）である。
ゲン産物の密封材特性および接着性特性を最適化する目的のために、産物は、純
粋な組換えＩ型コラーゲンおよびＩＩＩ型コラーゲンの組み合わせから構成され
る。純粋な組換えＩＩＩ型コラーゲン 対 純粋な組換えＩ型コラーゲン（ヘテ
ロ三量体）の割合は、好ましくは約３０％以上のＩＩＩ型コラーゲン 対 約７
０％以下のＩ型コラーゲン（ヘテロ三量体）である。より好ましくは、純粋な組
換えＩＩＩ型コラーゲン 対 純粋な組換えＩ型コラーゲン（ヘテロ三量体）の
割合は、約３０％〜約５０％のＩＩＩ型コラーゲン 対 約７０〜約５０％のＩ
型コラーゲン（ヘテロ三量体）である。最も好ましくは、純粋な組換えＩＩＩ型
コラーゲン 対 純粋な組換えＩ型コラーゲン（ヘテロ三量体）の割合は、約３
０〜約４０％のＩＩＩ型コラーゲン 対 約７０〜約６０％のＩ型コラーゲン（
ヘテロ三量体）である。
【００３２】 Ｉ型コラーゲンのホモ三量体から構成される組成物に関して、純粋な組換えＩ
型ホモ三量体 対 組換えＩ型コラーゲンのへテロ三量体および組換えＩＩＩ型
コラーゲンの組み合わせの割合は、約９０:１０である。より好ましくは、純粋
な組換えＩ型ホモ三量体 対 組換えＩ型コラーゲンのへテロ三量体および組換
えＩＩＩ型コラーゲンの組み合わせの割合は、約７５:２５である。最も好まし
くは、純粋な組換えＩ型ホモ三量体 対 組換えＩ型コラーゲンのへテロ三量体
および組換えＩＩＩ型コラーゲンの組み合わせの割合は、約５０:５０である。
型ホモ三量体 対 組換えＩ型コラーゲンのへテロ三量体および組換えＩＩＩ型
コラーゲンの組み合わせの割合は、約９０:１０である。より好ましくは、純粋
な組換えＩ型ホモ三量体 対 組換えＩ型コラーゲンのへテロ三量体および組換
えＩＩＩ型コラーゲンの組み合わせの割合は、約７５:２５である。最も好まし
くは、純粋な組換えＩ型ホモ三量体 対 組換えＩ型コラーゲンのへテロ三量体
および組換えＩＩＩ型コラーゲンの組み合わせの割合は、約５０:５０である。
【００３３】 他の型のコラーゲンを含まず、以下の特徴および能力のうちの少なくとも１つ
を有する、純粋な組換えＩＩＩ型コラーゲンの組織密封材、純粋な組換えＩ型の
組織密封材、または純粋な組換えＩ型コラーゲンおよびＩＩＩ型コラーゲンの組
織密封材を提供することが本発明の目的である。
を有する、純粋な組換えＩＩＩ型コラーゲンの組織密封材、純粋な組換えＩ型の
組織密封材、または純粋な組換えＩ型コラーゲンおよびＩＩＩ型コラーゲンの組
織密封材を提供することが本発明の目的である。
【００３４】 （ｉ）止血。密封材は、止血障壁として作用し、そして血清、リンパ、および
液体の漏出の危険を低減する。ＩＩＩ型コラーゲンは、固有に止血特性を保有す
るので、止血デバイスにおけるその使用は、既知のフィブリン密封材を超える改
善を提供する。Ｉ型コラーゲンはまた、いくつかの止血特性を保有する。
液体の漏出の危険を低減する。ＩＩＩ型コラーゲンは、固有に止血特性を保有す
るので、止血デバイスにおけるその使用は、既知のフィブリン密封材を超える改
善を提供する。Ｉ型コラーゲンはまた、いくつかの止血特性を保有する。
【００３５】 （ｉｉ）接着。その接着特性に起因して、本発明の密封材は、それらの間に強
力な連結を形成することによって組織を結合し、そして一様ではない創傷表面に
適合する。接着効果は、以下に記載される薬剤のような薬剤とＩＩＩ型コラーゲ
ンおよび／またはＩ型コラーゲンとの組み合わせによって増大する。
力な連結を形成することによって組織を結合し、そして一様ではない創傷表面に
適合する。接着効果は、以下に記載される薬剤のような薬剤とＩＩＩ型コラーゲ
ンおよび／またはＩ型コラーゲンとの組み合わせによって増大する。
【００３６】 （ｉｉｉ）創傷治癒。密封材は、効率的な止血および創傷表面間の接着と組み
合わせて、改善された治癒プロセスを提供する繊維芽細胞の増殖を促進する（Ｇ
ｈｅｒｓｉら、１９８９、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．５０：２７９−２
８４（ホモ三量体およびヘテロ三量体のＩ型コラーゲンの特徴の比較）もまた、
参照のこと）。抗接着性／創傷治癒組成物としての本発明の組成物の使用は、瘢
痕組織ではなく正常（再生）組織を生じる（すなわち、最適な創傷治癒）ことが
予期される。さらに、このような組成物はまた、炎症応答を減少させる。
合わせて、改善された治癒プロセスを提供する繊維芽細胞の増殖を促進する（Ｇ
ｈｅｒｓｉら、１９８９、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．５０：２７９−２
８４（ホモ三量体およびヘテロ三量体のＩ型コラーゲンの特徴の比較）もまた、
参照のこと）。抗接着性／創傷治癒組成物としての本発明の組成物の使用は、瘢
痕組織ではなく正常（再生）組織を生じる（すなわち、最適な創傷治癒）ことが
予期される。さらに、このような組成物はまた、炎症応答を減少させる。
【００３７】 従って、生体医学的適用（特に、柔組織に関する適用）のために適切な接着性
強度を有する、安全で効率的な生物学的接着剤として、重合化されたＩＩＩ型コ
ラーゲンおよび／またはＩ型コラーゲンの組成物を提供することが、本発明の目
的である。より詳細には、本発明は、大きな血管および心臓における穿刺および
切開を密封する際に有用な組成物に関する。重合化された物質は、その意図され
る生体医学的適用（眼科学、形成外科学、整形外科学、および心臓学における用
途を含む）に合わせて、多くのサイズおよび形状をとり得る。ＩＩＩ型コラーゲ
ンおよび／またはＩ型コラーゲンを含有する本発明の血管密封材組成物は、単独
で、または組織密封材デバイス（例えば、米国特許第５，７８２，８６０号（１
９９８年７月２１日発行）、同第５，７５９，１９４号（１９９８年６月２日発
行）、および同第５，７２８，１３２号（１９９８年３月１７日発行）において
示されるデバイスを含む）と組み合わせて、使用され得る。
強度を有する、安全で効率的な生物学的接着剤として、重合化されたＩＩＩ型コ
ラーゲンおよび／またはＩ型コラーゲンの組成物を提供することが、本発明の目
的である。より詳細には、本発明は、大きな血管および心臓における穿刺および
切開を密封する際に有用な組成物に関する。重合化された物質は、その意図され
る生体医学的適用（眼科学、形成外科学、整形外科学、および心臓学における用
途を含む）に合わせて、多くのサイズおよび形状をとり得る。ＩＩＩ型コラーゲ
ンおよび／またはＩ型コラーゲンを含有する本発明の血管密封材組成物は、単独
で、または組織密封材デバイス（例えば、米国特許第５，７８２，８６０号（１
９９８年７月２１日発行）、同第５，７５９，１９４号（１９９８年６月２日発
行）、および同第５，７２８，１３２号（１９９８年３月１７日発行）において
示されるデバイスを含む）と組み合わせて、使用され得る。
【００３８】 本発明の別の目的において、ＩＩＩ型コラーゲンおよび／またはＩ型コラーゲ
ンの組成物はさらに、血管密封材または創傷被覆材のためにさらに所望される特
徴を付与する薬剤から構成される。例えば、フィブリン、フィブリノーゲン、ト
ロンビン、カルシウムイオン、およびＸＩＩＩ因子が、重合化コラーゲンの三次
元ネットワークの形成をより良好にもたらすために組成物中に含められ得る。本
発明のなお別の目的において、組換えＩＩＩ型コラーゲン組成物は、創傷治癒能
力を有する化合物を取りこむ。１つの実施態様において、この化合物は、結合組
織増殖因子であり、そして創傷へのこの化合物の徐放をもたらすように組成物中
に取りこまれる。本発明の第２の実施態様では、米国特許第４，８０８，４０２
号（１９８９年２月２８日発行）に記載のように、薬物（例えば、腫瘍壊死因子
）が血管新生を改善する。
ンの組成物はさらに、血管密封材または創傷被覆材のためにさらに所望される特
徴を付与する薬剤から構成される。例えば、フィブリン、フィブリノーゲン、ト
ロンビン、カルシウムイオン、およびＸＩＩＩ因子が、重合化コラーゲンの三次
元ネットワークの形成をより良好にもたらすために組成物中に含められ得る。本
発明のなお別の目的において、組換えＩＩＩ型コラーゲン組成物は、創傷治癒能
力を有する化合物を取りこむ。１つの実施態様において、この化合物は、結合組
織増殖因子であり、そして創傷へのこの化合物の徐放をもたらすように組成物中
に取りこまれる。本発明の第２の実施態様では、米国特許第４，８０８，４０２
号（１９８９年２月２８日発行）に記載のように、薬物（例えば、腫瘍壊死因子
）が血管新生を改善する。
【００３９】 （発明の詳細な説明） 方法論、プロトコール、細胞株、ベクター、および試薬などは変動し得るので
、本発明が、本明細書中に記載の特定の方法論、プロトコール、細胞株、ベクタ
ー、および試薬などに制限されないことが理解される。また、本明細書中で用い
られる用語は、特定の実施態様のみを記載する目的で使用され、そして本発明の
範囲を制限することを意図しないことも理解される。本明細書中で使用される場
合および添付の特許請求の範囲において、単数の形態「ａ」、「ａｎ」および「
ｔｈｅ」は、その文脈が明らかに他を指示しない限り、複数の言及を含むことに
注意されなければならない。従って、例えば、「ａｎ ａｎｔｉｂｏｄｙ（抗体
）」に対する言及は、１つ以上の抗体および当業者に公知のそれらの等価物など
を参照する。
、本発明が、本明細書中に記載の特定の方法論、プロトコール、細胞株、ベクタ
ー、および試薬などに制限されないことが理解される。また、本明細書中で用い
られる用語は、特定の実施態様のみを記載する目的で使用され、そして本発明の
範囲を制限することを意図しないことも理解される。本明細書中で使用される場
合および添付の特許請求の範囲において、単数の形態「ａ」、「ａｎ」および「
ｔｈｅ」は、その文脈が明らかに他を指示しない限り、複数の言及を含むことに
注意されなければならない。従って、例えば、「ａｎ ａｎｔｉｂｏｄｙ（抗体
）」に対する言及は、１つ以上の抗体および当業者に公知のそれらの等価物など
を参照する。
【００４０】 他に定義されない限り、本明細書中で使用されるすべての専門用語および科学
用語は、本発明が属する分野の当業者によって一般に理解されるのと同じ意味を
有する。好ましい方法、デバイス、および物質が記載されるが、本明細書中に記
載のそれらに対して類似または等価な任意の方法および物質が、本発明の実施ま
たは試験において使用され得る。本明細書中に引用されるすべての参考文献は、
その全体において、本明細書中で参考として援用される。
用語は、本発明が属する分野の当業者によって一般に理解されるのと同じ意味を
有する。好ましい方法、デバイス、および物質が記載されるが、本明細書中に記
載のそれらに対して類似または等価な任意の方法および物質が、本発明の実施ま
たは試験において使用され得る。本明細書中に引用されるすべての参考文献は、
その全体において、本明細書中で参考として援用される。
【００４１】 （定義） 本明細書中で使用される場合、「生物学的適合性」とは、本発明に従って改変
された組換えＩＩＩ型コラーゲンおよび／またはＩ型コラーゲン（すなわち、重
合化されたＩＩＩ型コラーゲン組換え産物）をいい、これは、被験体の生物学的
組織内に組み込まれるか、または移植されるか、あるいは生物学的組織に隣接し
て配置され、そしてより詳細には、このような組み込みまたは移植あるいは配置
後に、経時的に顕著に劣化しないか、または免疫応答もしくは有害な組織反応を
誘導しない。
された組換えＩＩＩ型コラーゲンおよび／またはＩ型コラーゲン（すなわち、重
合化されたＩＩＩ型コラーゲン組換え産物）をいい、これは、被験体の生物学的
組織内に組み込まれるか、または移植されるか、あるいは生物学的組織に隣接し
て配置され、そしてより詳細には、このような組み込みまたは移植あるいは配置
後に、経時的に顕著に劣化しないか、または免疫応答もしくは有害な組織反応を
誘導しない。
【００４２】 本明細書中で使用される場合、用語「純粋な組換えＩ型コラーゲン」とは、実
質的に他のコラーゲン型を含まない、組換え技術によって製造されたＩ型コラー
ゲンをいう。他に詳細に言及されない限り、用語、純粋な組換えＩ型コラーゲン
は、Ｉ型コラーゲンホモトリマーおよびＩ型コラーゲンヘテロトリマーの両方、
およびその混合物を含む。この用語は、他の任意の形態の組換えＩ型コラーゲン
、およびコラーゲンのサブセット（例えば、ゼラチン）として分類され得る、こ
れらのＩ型コラーゲンに対してなされる任意の改変を含み得る。この用語は、天
然の供給源から単離されたＩ型コラーゲンを除外する。
質的に他のコラーゲン型を含まない、組換え技術によって製造されたＩ型コラー
ゲンをいう。他に詳細に言及されない限り、用語、純粋な組換えＩ型コラーゲン
は、Ｉ型コラーゲンホモトリマーおよびＩ型コラーゲンヘテロトリマーの両方、
およびその混合物を含む。この用語は、他の任意の形態の組換えＩ型コラーゲン
、およびコラーゲンのサブセット（例えば、ゼラチン）として分類され得る、こ
れらのＩ型コラーゲンに対してなされる任意の改変を含み得る。この用語は、天
然の供給源から単離されたＩ型コラーゲンを除外する。
【００４３】 本明細書中で使用される場合、用語「純粋な組換えＩＩＩ型コラーゲン」とは
、実質的に他のコラーゲン型を含まない、組換え技術によって製造されたヒトＩ
ＩＩ型コラーゲンをいう。この用語は、他の任意の形態の組換えＩＩＩ型コラー
ゲン、およびコラーゲンのサブセット（例えば、ゼラチン）として分類され得る
、これらのＩＩＩ型コラーゲンに対してなされる任意の改変を含み得る。この用
語は、天然の供給源から単離されたＩＩＩ型コラーゲンを除外する。
、実質的に他のコラーゲン型を含まない、組換え技術によって製造されたヒトＩ
ＩＩ型コラーゲンをいう。この用語は、他の任意の形態の組換えＩＩＩ型コラー
ゲン、およびコラーゲンのサブセット（例えば、ゼラチン）として分類され得る
、これらのＩＩＩ型コラーゲンに対してなされる任意の改変を含み得る。この用
語は、天然の供給源から単離されたＩＩＩ型コラーゲンを除外する。
【００４４】 本明細書中で使用される場合、用語「実質的に含まない」とは、他の任意のコ
ラーゲン型から実質的に純粋な組換えコラーゲン型、または他の任意のコラーゲ
ン型と混合されていない組換えコラーゲン型、および好ましくは他のコラーゲン
型を少なくとも９０％含まない組換えコラーゲン型をいう。
ラーゲン型から実質的に純粋な組換えコラーゲン型、または他の任意のコラーゲ
ン型と混合されていない組換えコラーゲン型、および好ましくは他のコラーゲン
型を少なくとも９０％含まない組換えコラーゲン型をいう。
【００４５】 本明細書中で使用される場合、用語「血管密封材」とは、止血特性を保持する
、血管創傷を閉じる際に有用な任意の組成物（プラグを含む）をいう。
、血管創傷を閉じる際に有用な任意の組成物（プラグを含む）をいう。
【００４６】 本明細書中で使用される場合、用語「創傷」とは、皮膚、粘膜または上皮管壁
における任意の開口をいい、ほとんどのこのような開口は、一般的に、露出され
た組織、皮がむけた生身の組織または擦過された組織に関連する。本発明に従っ
て処置され得る創傷または他の外傷の型に関する限定はなく、このような創傷は
、以下を含むがこれらに限定されない：Ｉ度熱傷、ＩＩ度熱傷およびＩＩＩ度熱
傷（特に、ＩＩ度熱傷およびＩＩＩ度熱傷）；手術切開（美容手術の切開を含む
）；裂傷、切開および穿通を含む、創傷；ならびに潰瘍（褥瘡潰瘍（とこずれ）
、および糖尿病患者、歯科患者、血友病患者、悪性の患者、および肥満患者に関
連する潰瘍または創傷を含む）。主な関心は、新生血管形成による重い創傷の治
癒であるが、本発明がまた、軽度の創傷および上皮細胞の美容再生に有用であり
得ることが意図される。好ましくは、処置されるべき創傷は、ウイルス感染また
は腫瘍に関連があるか否かに関わらず、熱傷および手術切開である。
における任意の開口をいい、ほとんどのこのような開口は、一般的に、露出され
た組織、皮がむけた生身の組織または擦過された組織に関連する。本発明に従っ
て処置され得る創傷または他の外傷の型に関する限定はなく、このような創傷は
、以下を含むがこれらに限定されない：Ｉ度熱傷、ＩＩ度熱傷およびＩＩＩ度熱
傷（特に、ＩＩ度熱傷およびＩＩＩ度熱傷）；手術切開（美容手術の切開を含む
）；裂傷、切開および穿通を含む、創傷；ならびに潰瘍（褥瘡潰瘍（とこずれ）
、および糖尿病患者、歯科患者、血友病患者、悪性の患者、および肥満患者に関
連する潰瘍または創傷を含む）。主な関心は、新生血管形成による重い創傷の治
癒であるが、本発明がまた、軽度の創傷および上皮細胞の美容再生に有用であり
得ることが意図される。好ましくは、処置されるべき創傷は、ウイルス感染また
は腫瘍に関連があるか否かに関わらず、熱傷および手術切開である。
【００４７】 （重合化された組換えＩ型コラーゲンおよびＩＩＩ型コラーゲンの調製） （Ｉ型コラーゲンモノマーおよびＩＩＩ型コラーゲンモノマーの生成） 接着特性および止血特性を有する、本発明の生物学的適合性コラーゲン産物を
形成する際に有用なコラーゲンの型は、組換えＩ型コラーゲンおよびＩＩＩ型コ
ラーゲンである。モノマーの可溶性Ｉ型コラーゲンおよびＩＩＩ型コラーゲンは
、トランスジェニック動物におけるＩＩＩ型コラーゲンの生成に関するプロセス
を包含する、組換えプロセスによって得られる。このような組換えプロセスは、
例えば、米国特許第５，５９３，８５９号（本明細書中に参考として援用される
）に示される。好ましくは、Ｉ型コラーゲンまたはＩＩＩ型コラーゲンは、Ｉ型
コラーゲンまたはＩＩＩ型コラーゲンを含むポリペプチドをコードする少なくと
も１つの遺伝子、と翻訳後酵素プロリル４−ヒドロキシラーゼのαサブユニット
およびβサブユニットをコードする遺伝子とでトランスフェクトされた細胞を培
養し、そしてそれらから生じるコラーゲンモノマーを精製することによって、組
換え製造される。好ましくは、モノマーの可溶性Ｉ型コラーゲンおよびＩＩＩ型
コラーゲン材料は、粘稠性のコンシステンシーならびに種々の程度の透明度およ
び清澄性を示す。
形成する際に有用なコラーゲンの型は、組換えＩ型コラーゲンおよびＩＩＩ型コ
ラーゲンである。モノマーの可溶性Ｉ型コラーゲンおよびＩＩＩ型コラーゲンは
、トランスジェニック動物におけるＩＩＩ型コラーゲンの生成に関するプロセス
を包含する、組換えプロセスによって得られる。このような組換えプロセスは、
例えば、米国特許第５，５９３，８５９号（本明細書中に参考として援用される
）に示される。好ましくは、Ｉ型コラーゲンまたはＩＩＩ型コラーゲンは、Ｉ型
コラーゲンまたはＩＩＩ型コラーゲンを含むポリペプチドをコードする少なくと
も１つの遺伝子、と翻訳後酵素プロリル４−ヒドロキシラーゼのαサブユニット
およびβサブユニットをコードする遺伝子とでトランスフェクトされた細胞を培
養し、そしてそれらから生じるコラーゲンモノマーを精製することによって、組
換え製造される。好ましくは、モノマーの可溶性Ｉ型コラーゲンおよびＩＩＩ型
コラーゲン材料は、粘稠性のコンシステンシーならびに種々の程度の透明度およ
び清澄性を示す。
【００４８】 （Ｉ型コラーゲンモノマーおよびＩＩＩ型コラーゲンモノマーの重合化）続い
て、組換えＩ型コラーゲンモノマーおよびＩＩＩ型コラーゲンの溶液を、重合化
または架橋条件に供して、本発明の重合化されたコラーゲン組成物を生成し得る
。重合化は、照射（例えば、ＵＶ、γ、または蛍光）を使用して行われ得る。Ｕ
Ｖ照射は、標準の２５４ｎｍ光源またはＵＶレーザー光源を使用して、短波長範
囲で達成され得る。標準の２５４ｎｍ光源（４〜１２ワット）を用いて、２．５
〜１０ｃｍの露光距離、好ましくは２．５〜５ｃｍの距離で、重合化は、１０〜
４０分、好ましくは２０〜３０分で生じる。過度のＵＶ露光は、コラーゲンポリ
マーの脱重合を開始させる。γ照射を使用する重合化は、０．５〜２．５Ｍｒａ
ｄを使用して行われ得る。過度のγ照射もまた、コラーゲンポリマーを脱重合さ
せる。酸素の存在下での重合化は、露光前の流体に開始剤を添加することによっ
て達成され得る。開始剤の限定されない例としては、過硫酸ナトリウム、チオ硫
酸ナトリウム、塩化鉄四水和物、亜硫酸水素ナトリウム、および酸化酵素（例え
ば、ペルオキシダーゼまたはカテコールオキシダーゼ）が挙げられる。開始剤が
使用される場合、重合化は、３０秒〜５分、通常１〜３分で生じる。
て、組換えＩ型コラーゲンモノマーおよびＩＩＩ型コラーゲンの溶液を、重合化
または架橋条件に供して、本発明の重合化されたコラーゲン組成物を生成し得る
。重合化は、照射（例えば、ＵＶ、γ、または蛍光）を使用して行われ得る。Ｕ
Ｖ照射は、標準の２５４ｎｍ光源またはＵＶレーザー光源を使用して、短波長範
囲で達成され得る。標準の２５４ｎｍ光源（４〜１２ワット）を用いて、２．５
〜１０ｃｍの露光距離、好ましくは２．５〜５ｃｍの距離で、重合化は、１０〜
４０分、好ましくは２０〜３０分で生じる。過度のＵＶ露光は、コラーゲンポリ
マーの脱重合を開始させる。γ照射を使用する重合化は、０．５〜２．５Ｍｒａ
ｄを使用して行われ得る。過度のγ照射もまた、コラーゲンポリマーを脱重合さ
せる。酸素の存在下での重合化は、露光前の流体に開始剤を添加することによっ
て達成され得る。開始剤の限定されない例としては、過硫酸ナトリウム、チオ硫
酸ナトリウム、塩化鉄四水和物、亜硫酸水素ナトリウム、および酸化酵素（例え
ば、ペルオキシダーゼまたはカテコールオキシダーゼ）が挙げられる。開始剤が
使用される場合、重合化は、３０秒〜５分、通常１〜３分で生じる。
【００４９】 重合化因子は、好ましくはＵＶ照射である。しかし、モノマー置換基の重合化
または架橋は、材料を大気中の酸素に単純に曝露すること（しかし、重合化の速
度は、ＵＶ照射または化学的薬剤の場合より、顕著により遅い）を含む、当該分
野で公知の任意の方法によって行われ得る。
または架橋は、材料を大気中の酸素に単純に曝露すること（しかし、重合化の速
度は、ＵＶ照射または化学的薬剤の場合より、顕著により遅い）を含む、当該分
野で公知の任意の方法によって行われ得る。
【００５０】 他の因子もまた、重合化プロセスにおいて有用であり得る。例えば、本発明の
組成物から形成される接着剤の接着強度を改善するために、二官能性のモノマー
架橋剤を、本発明の組成物に添加して重合化をもたらし得る。このような架橋剤
は、例えば、米国特許第３，９４０，３６２号（本明細書中に参考として援用さ
れる）において、当該分野で公知である。
組成物から形成される接着剤の接着強度を改善するために、二官能性のモノマー
架橋剤を、本発明の組成物に添加して重合化をもたらし得る。このような架橋剤
は、例えば、米国特許第３，９４０，３６２号（本明細書中に参考として援用さ
れる）において、当該分野で公知である。
【００５１】 さらに、当該分野で周知の、重合化方法および架橋剤（例えば、グルタルアル
デヒド、色素媒介光酸化、ＰＥＧおよびその誘導体、アシルアジド、ポリエポキ
シ（ｐｌｙｅｐｏｘｙ）固定剤；酸化デンプン（過ヨウ素酸塩）および水溶性カ
ルボジイミド（「ＷＳＣ」）は、本発明の重合化コラーゲンを生成するために使
用され得る。（例えば、米国特許第４，６１５，７９４号、米国特許第５，４４
４，１５４号、米国特許第４，５００，４５３号、米国特許第５，７０２，８１
８号、米国特許第５，４１５，９３８号、米国特許第５，３０８，６４１号、米
国特許第５，２６４，５５１号、米国特許第５，２５８，５０１号、米国特許第
５，２５８，４８１号、米国特許第４，４２７，８０８号、米国特許第４，２７
２，６１０号を参照のこと）。
デヒド、色素媒介光酸化、ＰＥＧおよびその誘導体、アシルアジド、ポリエポキ
シ（ｐｌｙｅｐｏｘｙ）固定剤；酸化デンプン（過ヨウ素酸塩）および水溶性カ
ルボジイミド（「ＷＳＣ」）は、本発明の重合化コラーゲンを生成するために使
用され得る。（例えば、米国特許第４，６１５，７９４号、米国特許第５，４４
４，１５４号、米国特許第４，５００，４５３号、米国特許第５，７０２，８１
８号、米国特許第５，４１５，９３８号、米国特許第５，３０８，６４１号、米
国特許第５，２６４，５５１号、米国特許第５，２５８，５０１号、米国特許第
５，２５８，４８１号、米国特許第４，４２７，８０８号、米国特許第４，２７
２，６１０号を参照のこと）。
【００５２】 さらに、重合化を達成するためのポリアルデヒド組成物の使用もまた、利用さ
れ得る（例えば、ＰＣＴ ＷＯ９７／２９７１５およびＥＰ ７４７，０６６
Ａ２を参照のこと）。
れ得る（例えば、ＰＣＴ ＷＯ９７／２９７１５およびＥＰ ７４７，０６６
Ａ２を参照のこと）。
【００５３】 （ゼラチンの形成）本発明の組換えコラーゲンタンパク質は、当該分野で公知
の手順を使用して、さらに改変および加工されてゼラチンにされ得る。（例えば
、Ｖｅｉｓ，１９６５，Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｏｎａｌ Ｒｅｖｉｅｗ ｏｆ
Ｃｏｎｎｅｃｔｉｖｅ Ｔｉｓｓｕｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，「Ｔｈｅ Ｐｈｙｓ
ｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｇｅｌａｔｉｎ」，Ａｃａｄｅｍｉｃ
Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ ａｎｄ Ｌｏｎｄｏｎを参照のこと）。例えば
、全ての標準コラーゲンのゼラチン転換プロセスの一般的特徴は、コラーゲンタ
ンパク質の二次構造の喪失であり、大半の例において、コラーゲンの一次構造ま
たは三次構造のいずれかの変更である。本発明のコラーゲンは、所望のゼラチン
の型に依存する異なる手順を使用して、加工され得る。
の手順を使用して、さらに改変および加工されてゼラチンにされ得る。（例えば
、Ｖｅｉｓ，１９６５，Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｏｎａｌ Ｒｅｖｉｅｗ ｏｆ
Ｃｏｎｎｅｃｔｉｖｅ Ｔｉｓｓｕｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，「Ｔｈｅ Ｐｈｙｓ
ｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｇｅｌａｔｉｎ」，Ａｃａｄｅｍｉｃ
Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ ａｎｄ Ｌｏｎｄｏｎを参照のこと）。例えば
、全ての標準コラーゲンのゼラチン転換プロセスの一般的特徴は、コラーゲンタ
ンパク質の二次構造の喪失であり、大半の例において、コラーゲンの一次構造ま
たは三次構造のいずれかの変更である。本発明のコラーゲンは、所望のゼラチン
の型に依存する異なる手順を使用して、加工され得る。
【００５４】 １つのアプローチにおいて、改変は、細胞塊または培養培地に存在する未精製
コラーゲンまたはプロコラーゲンに対して生じ得るか、あるいは任意のさらなる
改変が、上記のような精製コラーゲンに対してなされ得る。例えば、組換えコラ
ーゲンまたはプロコラーゲンは、組換えゼラチンへと改変および加工され得る。
ゼラチンは、上昇した温度でのゼラチンの可溶性、ならびに低ｐＨまたは高ｐＨ
、低塩濃度または高塩濃度、および高温条件での安定性を利用して、細胞塊また
は培養培地から直接的に生成され得る。例えば、細胞塊または培養培地をさらに
処理して、界面活性剤、加熱または変性剤を使用してコラーゲンの三重らせん構
造を変性することによって、ゼラチンを抽出し得る。（例えば、特に、Ｖｉｅｓ
を参照のこと）。組織由来ゼラチンの製造のためのよく確立された操作が、組換
えゼラチンの生成に適用され得る。これは、強アルカリまたは強酸での処理、水
溶液中での加熱抽出、イオン交換クロマトグラフィー、クロスフリー（ｃｒｏｓ
ｓ−ｆｌｏｗ）濾過および加熱乾燥を含むが、これらに限定されない。
コラーゲンまたはプロコラーゲンに対して生じ得るか、あるいは任意のさらなる
改変が、上記のような精製コラーゲンに対してなされ得る。例えば、組換えコラ
ーゲンまたはプロコラーゲンは、組換えゼラチンへと改変および加工され得る。
ゼラチンは、上昇した温度でのゼラチンの可溶性、ならびに低ｐＨまたは高ｐＨ
、低塩濃度または高塩濃度、および高温条件での安定性を利用して、細胞塊また
は培養培地から直接的に生成され得る。例えば、細胞塊または培養培地をさらに
処理して、界面活性剤、加熱または変性剤を使用してコラーゲンの三重らせん構
造を変性することによって、ゼラチンを抽出し得る。（例えば、特に、Ｖｉｅｓ
を参照のこと）。組織由来ゼラチンの製造のためのよく確立された操作が、組換
えゼラチンの生成に適用され得る。これは、強アルカリまたは強酸での処理、水
溶液中での加熱抽出、イオン交換クロマトグラフィー、クロスフリー（ｃｒｏｓ
ｓ−ｆｌｏｗ）濾過および加熱乾燥を含むが、これらに限定されない。
【００５５】 （Ｉ型コラーゲン組成物およびＩＩＩ型コラーゲン組成物） 本発明の組成物は、重合化されたＩ型コラーゲンおよびＩＩＩ型コラーゲンか
ら構成され、ここで、上記組成物は、以下の工程を包含するプロセスによって製
造される：（１）上記の組換え方法による、Ｉ型コラーゲンモノマーおよびＩＩ
Ｉ型コラーゲンモノマーの生成；ならびに（２）このようなモノマーの重合化。
さらに、最終組成物が、ゼラチンベースの密封材または創傷被覆材である場合、
このプロセスは、コラーゲンをゼラチンに転換する工程を包含する。
ら構成され、ここで、上記組成物は、以下の工程を包含するプロセスによって製
造される：（１）上記の組換え方法による、Ｉ型コラーゲンモノマーおよびＩＩ
Ｉ型コラーゲンモノマーの生成；ならびに（２）このようなモノマーの重合化。
さらに、最終組成物が、ゼラチンベースの密封材または創傷被覆材である場合、
このプロセスは、コラーゲンをゼラチンに転換する工程を包含する。
【００５６】 組換えコラーゲン産物の構造的安定性ならびにこの産物の止血特性を最適化す
ることにより、この産物の密封材特性および接着剤特性を最適化する目的のため
に、この産物は、好ましくは、純粋な組換えＩ型コラーゲンおよびＩＩＩ型コラ
ーゲンの組み合わせ構成される。純粋な組換えＩ型コラーゲン（ヘテロトリマー
）に対する純粋な組換えＩＩＩ型コラーゲンの比は、約７０％以下のＩ型コラー
ゲン（ヘテロトリマー）に対して、約３０％以上のＩＩＩ型コラーゲンである。
より好ましくは、純粋な組換えＩ型コラーゲン（ヘテロトリマー）に対する純粋
な組換えＩＩＩ型コラーゲンの比は、約７０％〜約５０％のＩ型コラーゲン（ヘ
テロトリマー）に対して、約３０％〜約５０％のＩＩＩ型コラーゲンである。最
も好ましくは、純粋な組換えＩ型コラーゲン（ヘテロトリマー）に対する純粋な
組換えＩＩＩ型コラーゲンの比は、約７０％〜約６０％のＩ型コラーゲン（ヘテ
ロトリマー）に対して、約３０％〜約４０％のＩＩＩ型コラーゲンである。
ることにより、この産物の密封材特性および接着剤特性を最適化する目的のため
に、この産物は、好ましくは、純粋な組換えＩ型コラーゲンおよびＩＩＩ型コラ
ーゲンの組み合わせ構成される。純粋な組換えＩ型コラーゲン（ヘテロトリマー
）に対する純粋な組換えＩＩＩ型コラーゲンの比は、約７０％以下のＩ型コラー
ゲン（ヘテロトリマー）に対して、約３０％以上のＩＩＩ型コラーゲンである。
より好ましくは、純粋な組換えＩ型コラーゲン（ヘテロトリマー）に対する純粋
な組換えＩＩＩ型コラーゲンの比は、約７０％〜約５０％のＩ型コラーゲン（ヘ
テロトリマー）に対して、約３０％〜約５０％のＩＩＩ型コラーゲンである。最
も好ましくは、純粋な組換えＩ型コラーゲン（ヘテロトリマー）に対する純粋な
組換えＩＩＩ型コラーゲンの比は、約７０％〜約６０％のＩ型コラーゲン（ヘテ
ロトリマー）に対して、約３０％〜約４０％のＩＩＩ型コラーゲンである。
【００５７】 本発明の組織密封材および接着剤中の成分の濃度の適切な範囲は、当該分野で
周知の方法によって決定され得る。（例えば、Ｈａｒａｓｋｉ，Ｈ．ら（１９９
９）第ＸＸＩＩ巻、Ｓｏｃｉｅｔｙ ｆｏｒ Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ，１５
８〜１５９頁；Ｆａｓｍａｎ，Ｇ．Ｄ．編（１９８９）Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｈ
ａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａ
ｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｓｅｃｔｉｏｎ １，１２６〜１３０頁；米国特許第５，
８３４，２３２号（１９９８年１１月１０日発行）；Ｓｉｅｒｒａ，Ｄ．Ｈ．ら
（１９９２）Ｊ．Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｍａｔｅｒ．３（２）：１４７−１５１；Ｍ
ａｒｔｉｎｏｗｉｔｚ，Ｕ．およびＲ．Ｓａｌｔｚ（１９９６）Ｃｕｒｒ．Ｏｐ
ｉｎ．Ｈｅｍａｔｏｌ．３（５）：３９５−４０２；ならびにＳｉｒｉｅｘ，Ｄ
．（１９９８）Ａｎｎ．Ｖａｓｃ．Ｓｕｒｇ．１２（４）：３１１−３１６を参
照のこと）。本発明の組成物のコラーゲン成分の実際の割合は、この組成物に対
する他の薬剤の添加およびこの組成物の所望の用途に依存する。特定の組成物に
適切な割合の決定は、当業者のレベル内であり、そして本発明は、達成され得る
種々の組み合わせを意図する。
周知の方法によって決定され得る。（例えば、Ｈａｒａｓｋｉ，Ｈ．ら（１９９
９）第ＸＸＩＩ巻、Ｓｏｃｉｅｔｙ ｆｏｒ Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ，１５
８〜１５９頁；Ｆａｓｍａｎ，Ｇ．Ｄ．編（１９８９）Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｈ
ａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａ
ｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｓｅｃｔｉｏｎ １，１２６〜１３０頁；米国特許第５，
８３４，２３２号（１９９８年１１月１０日発行）；Ｓｉｅｒｒａ，Ｄ．Ｈ．ら
（１９９２）Ｊ．Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｍａｔｅｒ．３（２）：１４７−１５１；Ｍ
ａｒｔｉｎｏｗｉｔｚ，Ｕ．およびＲ．Ｓａｌｔｚ（１９９６）Ｃｕｒｒ．Ｏｐ
ｉｎ．Ｈｅｍａｔｏｌ．３（５）：３９５−４０２；ならびにＳｉｒｉｅｘ，Ｄ
．（１９９８）Ａｎｎ．Ｖａｓｃ．Ｓｕｒｇ．１２（４）：３１１−３１６を参
照のこと）。本発明の組成物のコラーゲン成分の実際の割合は、この組成物に対
する他の薬剤の添加およびこの組成物の所望の用途に依存する。特定の組成物に
適切な割合の決定は、当業者のレベル内であり、そして本発明は、達成され得る
種々の組み合わせを意図する。
【００５８】 本発明の組成物は、血管組織、およびより一般的には、軟組織を接着または密
封する際に有用な他の薬剤からさらに構成され得る。例えば、組換えＩ型コラー
ゲンタンパク質および／または組換えＩＩＩ型コラーゲンタンパク質に加えて、
この組成物は、好ましくは、第ＸＩＩＩ因子および／またはフィブリン／フィブ
リノーゲン／フィブロネクチンおよび／またはプラスミノゲンのようなトランス
グルタミナーゼを含む。これらの成分の適切な濃度は、当該分野で周知の方法に
よって選択され得る。例えば、フィブリノーゲンはまた、血漿濃度で存在し得、
例えば、約１．５ｍｇ／ｍｌ〜約４．０ｍｇ／ｍｌ、またはそれより高い。フィ
ブリノーゲンは、例えば、性能をモニターするためにより低濃度で存在し得る。
封する際に有用な他の薬剤からさらに構成され得る。例えば、組換えＩ型コラー
ゲンタンパク質および／または組換えＩＩＩ型コラーゲンタンパク質に加えて、
この組成物は、好ましくは、第ＸＩＩＩ因子および／またはフィブリン／フィブ
リノーゲン／フィブロネクチンおよび／またはプラスミノゲンのようなトランス
グルタミナーゼを含む。これらの成分の適切な濃度は、当該分野で周知の方法に
よって選択され得る。例えば、フィブリノーゲンはまた、血漿濃度で存在し得、
例えば、約１．５ｍｇ／ｍｌ〜約４．０ｍｇ／ｍｌ、またはそれより高い。フィ
ブリノーゲンは、例えば、性能をモニターするためにより低濃度で存在し得る。
【００５９】 好ましくは、この組成物はまた、凝固酵素（すなわち、トロンビン）を、特に
、二価カルシウム（例えば、塩化カルシウム）と組み合わせで含む。塩化カルシ
ウム濃度は、組織接着組成物の特定の目的に依存して、例えば、４０ｍＭ〜０．
２Ｍとの間で変化し得る。高濃度の塩化カルシウムは、線維芽細胞増殖を阻害し
、従って、抗接着適用（フィブロネクチン（線維芽細胞の増殖を刺激する）は、
このような組成物中で存在しなくてもよい）に好ましい。フィブリン溶解インヒ
ビター（例えば、プラスミンインヒビター（例えば、アプロチニン、アプリロチ
ニン（ａｐｒｉｌｏｔｉｎｉｎ）、α−２−アンチプラスミン、α−２−マクロ
グロブリン、α−１−アンチトリプシン、ε−アミノカプロン酸またはε−トラ
ネキサム酸）、あるいはプラスミンアクチベーターインヒビター（例えば、ＰＡ
Ｉ−１またはＰＡＩ−２））を含むことは、さらに価値があり得る。
、二価カルシウム（例えば、塩化カルシウム）と組み合わせで含む。塩化カルシ
ウム濃度は、組織接着組成物の特定の目的に依存して、例えば、４０ｍＭ〜０．
２Ｍとの間で変化し得る。高濃度の塩化カルシウムは、線維芽細胞増殖を阻害し
、従って、抗接着適用（フィブロネクチン（線維芽細胞の増殖を刺激する）は、
このような組成物中で存在しなくてもよい）に好ましい。フィブリン溶解インヒ
ビター（例えば、プラスミンインヒビター（例えば、アプロチニン、アプリロチ
ニン（ａｐｒｉｌｏｔｉｎｉｎ）、α−２−アンチプラスミン、α−２−マクロ
グロブリン、α−１−アンチトリプシン、ε−アミノカプロン酸またはε−トラ
ネキサム酸）、あるいはプラスミンアクチベーターインヒビター（例えば、ＰＡ
Ｉ−１またはＰＡＩ−２））を含むことは、さらに価値があり得る。
【００６０】 本発明の組織接着組成物における以前に公知の成分の割合が、当該分野で周知
の方法に従って選択され得るが、粘性増強ポリマーの必要量は、特定のポリマー
および意図される使用形態に依存して、当業者によって容易に決定され得る。従
って、この粘性増強ポリマーの濃度および／または分子量が非常に低い場合、粘
性増加は不十分であり、そして非常に高い濃度および／または分子量は、フィブ
リン重合化および組織への接着を阻害する。
の方法に従って選択され得るが、粘性増強ポリマーの必要量は、特定のポリマー
および意図される使用形態に依存して、当業者によって容易に決定され得る。従
って、この粘性増強ポリマーの濃度および／または分子量が非常に低い場合、粘
性増加は不十分であり、そして非常に高い濃度および／または分子量は、フィブ
リン重合化および組織への接着を阻害する。
【００６１】 トロンビン濃度を増加することによって、本発明の組成物の重合化は速められ
得、にかわが固まるまでの時間を減少する。例えば、低いトロンビン濃度では、
組成物のフィブリンは、適用後数分間、多かれ少なかれ流体のまま残存する。従
って、本発明に従う粘性増強ポリマーで粘性を増加するさらに有益な効果は、よ
り低濃度のトロンビン（密着されるべき部分が、引き続いて、非水平表面に対す
る順応さえ必要とする状況下で必要とされる）が、使用され得ることである。
得、にかわが固まるまでの時間を減少する。例えば、低いトロンビン濃度では、
組成物のフィブリンは、適用後数分間、多かれ少なかれ流体のまま残存する。従
って、本発明に従う粘性増強ポリマーで粘性を増加するさらに有益な効果は、よ
り低濃度のトロンビン（密着されるべき部分が、引き続いて、非水平表面に対す
る順応さえ必要とする状況下で必要とされる）が、使用され得ることである。
【００６２】 同様に、本発明の組成物は、本明細書中に記載の薬剤の組み合わせを含むより
むしろ、融合タンパク質を含み得、この融合タンパク質において、Ｉ型コラーゲ
ンおよび／またはＩＩＩ型コラーゲンと、例えば、フィブリンが結合されて１つ
の分子を形成する。このような融合タンパク質は、本明細書中に記載の組換え技
術に従って製造され得る。
むしろ、融合タンパク質を含み得、この融合タンパク質において、Ｉ型コラーゲ
ンおよび／またはＩＩＩ型コラーゲンと、例えば、フィブリンが結合されて１つ
の分子を形成する。このような融合タンパク質は、本明細書中に記載の組換え技
術に従って製造され得る。
【００６３】 本発明のさらなる実施態様において、本発明の組成物は、組織の形成を誘導ま
たは促進すること、あるいは線維症性接着の形成を限定することのいずれかによ
る創傷治癒に有用な薬剤を含む。このような薬剤としては、抗生物質、または成
長因子（例えば、結合組織成長因子（例えば、米国特許第５，４０８，０４０号
および同第５，５８５，２７０号（参考として本明細書中に援用される）に記載
される）が挙げられる。本発明の別の実施態様において、この薬剤は、血管形成
を改善する（例えば、腫瘍壊死因子（米国特許第４，８０８，４０２号（１９８
９年２月２８日発行）に記載される）。
たは促進すること、あるいは線維症性接着の形成を限定することのいずれかによ
る創傷治癒に有用な薬剤を含む。このような薬剤としては、抗生物質、または成
長因子（例えば、結合組織成長因子（例えば、米国特許第５，４０８，０４０号
および同第５，５８５，２７０号（参考として本明細書中に援用される）に記載
される）が挙げられる。本発明の別の実施態様において、この薬剤は、血管形成
を改善する（例えば、腫瘍壊死因子（米国特許第４，８０８，４０２号（１９８
９年２月２８日発行）に記載される）。
【００６４】 特に本発明の血管密封材の局面に関して、ＩＩＩ型コラーゲンおよび／または
Ｉ型コラーゲンを含む血管密封材組成物は、単独で使用され得るか、または組織
密封材デバイス（例えば、米国特許第５，７８３，８６０号（１９９８年７月２
１日発行）、同第５，７５９，１９４号（１９９９年６月２日発行）および同第
５，７２８，１３２号（１９９８年３月１７日発行）に示されるデバイスを含む
）との組み合わせで使用され得る。
Ｉ型コラーゲンを含む血管密封材組成物は、単独で使用され得るか、または組織
密封材デバイス（例えば、米国特許第５，７８３，８６０号（１９９８年７月２
１日発行）、同第５，７５９，１９４号（１９９９年６月２日発行）および同第
５，７２８，１３２号（１９９８年３月１７日発行）に示されるデバイスを含む
）との組み合わせで使用され得る。
【００６５】 （用途領域） 本発明の重合化ＩＩＩ型コラーゲン産物および／または重合化Ｉ型コラーゲン
産物は、機械的な密封材および接着系を生成するために有用であり得る。
産物は、機械的な密封材および接着系を生成するために有用であり得る。
【００６６】 （血管接着系）適用領域は、以下を含むが、これらに限定されない：一般的な
外科、歯科、神経外科、形成外科、胸郭および血管外科、腹部外科、整形外科、
事故手術、婦人科、泌尿器科、および眼科（ｏｐｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ）。本発
明のコラーゲン密封材はまた、薬物（例えば、抗生物質、成長因子および細胞増
殖抑制剤）の局所適用に使用されている。
外科、歯科、神経外科、形成外科、胸郭および血管外科、腹部外科、整形外科、
事故手術、婦人科、泌尿器科、および眼科（ｏｐｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ）。本発
明のコラーゲン密封材はまた、薬物（例えば、抗生物質、成長因子および細胞増
殖抑制剤）の局所適用に使用されている。
【００６７】 （密封材フィルムおよび創傷被覆材）本発明の１つの局面において、重合化コ
ラーゲン産物は、密封材フィルムの形態に作製され得る。コラーゲンベースのフ
ィルムは、プラスチックフィルムのコンシステンシーおよび感触を有して可撓性
および弾性であるが、高い生物学的適合性を示し得る。密封材フィルムの用途は
、以下を含むが、これらに限定されない：腱手術後の接着形成の予防（すなわち
、腱周辺のラップとしての使用）、合成鼓膜としての使用、および代用顔面組織
および創傷被覆材成分としての使用。密封材フィルムの可能な用途のさらなる例
としては、角膜擦過傷の処置、創傷閉鎖、カテーテルおよび装置の被覆、ならび
に組織および腱（例えば、腹膜腔）における接着形成を予防するための材料とし
ての使用が挙げられる。
ラーゲン産物は、密封材フィルムの形態に作製され得る。コラーゲンベースのフ
ィルムは、プラスチックフィルムのコンシステンシーおよび感触を有して可撓性
および弾性であるが、高い生物学的適合性を示し得る。密封材フィルムの用途は
、以下を含むが、これらに限定されない：腱手術後の接着形成の予防（すなわち
、腱周辺のラップとしての使用）、合成鼓膜としての使用、および代用顔面組織
および創傷被覆材成分としての使用。密封材フィルムの可能な用途のさらなる例
としては、角膜擦過傷の処置、創傷閉鎖、カテーテルおよび装置の被覆、ならび
に組織および腱（例えば、腹膜腔）における接着形成を予防するための材料とし
ての使用が挙げられる。
【００６８】 本発明のさらなる実施態様は、多くの薬物および薬学的組成物（成長因子、抗
生物質、および他の生物学的に有益な化合物を含む）の送達に特異的な系におい
て使用され得る、密封材および接着性処方物を含む。このような材料は、コラー
ゲン接着剤または密封材に添加されて、細胞移動、細胞接着、および創傷治癒を
促進する。
生物質、および他の生物学的に有益な化合物を含む）の送達に特異的な系におい
て使用され得る、密封材および接着性処方物を含む。このような材料は、コラー
ゲン接着剤または密封材に添加されて、細胞移動、細胞接着、および創傷治癒を
促進する。
【００６９】 （血管形成および血管造影）血管造影は、染料が冠状疾患の存在または非存在
を検出するために動脈（好ましくは、大腿動脈）内に注射されることによる、診
断手順である。血管形成（ＰＣＴＡとしても公知である）は、動脈の妨害物を除
去する目的のための動脈（例えば、冠状動脈）におけるバルーンの膨張を含む、
治療手順である。大腿動脈を穿刺した後、バルーンカテーテルを、大腿動脈を通
して導入し、そしてアテローム性動脈硬化症（プラーク）によってブロックされ
た冠状動脈まで誘導される。一旦、正確に位置付けすると、バルーンは、血管壁
に対して脂肪物質を押し込むことによって動脈を開口する試行において、数回膨
張および収縮され、これは、心筋の罹患領域に血液を循環させるのを可能にする
。種々の型のバルーンカテーテルが、血管形成および血管造影において一般的に
使用され、これらには、以下が挙げられる：１）疾患部位に対して独立したガイ
ドワイアを利用する、オーバーザワイア（ｏｖｅｒ−ｔｈｅ−ｗｉｒｅ）カテー
テル；２）バルーンカテーテルをガイドワイアと組合せて１つのデバイスにした
、固定ワイアカテーテル；３）標準的なオーバーザワイアカテーテルよりもより
簡便に交換され得るオーバーザワイアカテーテルである、迅速交換（ｒａｐｉｄ
−ｅｘｃｈａｎｇｅ）カテーテルまたは単一オペレーター（ｓｉｎｇｌｅ−ｏｐ
ｅｒａｔｏｒ）交換カテーテル；および４）この手順の間の血流を可能にする、
灌流カテーテル。回転チップカテーテルは、動脈壁上に蓄積したプラークを除去
する。これらのデバイスは、識別切断（ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ ｃｕｔｔｉ
ｎｇ）と呼ばれる技術を使用する。石灰化材料は、動脈壁の弾性性質に起因して
、動脈を損傷せずに微小粒子になる。
を検出するために動脈（好ましくは、大腿動脈）内に注射されることによる、診
断手順である。血管形成（ＰＣＴＡとしても公知である）は、動脈の妨害物を除
去する目的のための動脈（例えば、冠状動脈）におけるバルーンの膨張を含む、
治療手順である。大腿動脈を穿刺した後、バルーンカテーテルを、大腿動脈を通
して導入し、そしてアテローム性動脈硬化症（プラーク）によってブロックされ
た冠状動脈まで誘導される。一旦、正確に位置付けすると、バルーンは、血管壁
に対して脂肪物質を押し込むことによって動脈を開口する試行において、数回膨
張および収縮され、これは、心筋の罹患領域に血液を循環させるのを可能にする
。種々の型のバルーンカテーテルが、血管形成および血管造影において一般的に
使用され、これらには、以下が挙げられる：１）疾患部位に対して独立したガイ
ドワイアを利用する、オーバーザワイア（ｏｖｅｒ−ｔｈｅ−ｗｉｒｅ）カテー
テル；２）バルーンカテーテルをガイドワイアと組合せて１つのデバイスにした
、固定ワイアカテーテル；３）標準的なオーバーザワイアカテーテルよりもより
簡便に交換され得るオーバーザワイアカテーテルである、迅速交換（ｒａｐｉｄ
−ｅｘｃｈａｎｇｅ）カテーテルまたは単一オペレーター（ｓｉｎｇｌｅ−ｏｐ
ｅｒａｔｏｒ）交換カテーテル；および４）この手順の間の血流を可能にする、
灌流カテーテル。回転チップカテーテルは、動脈壁上に蓄積したプラークを除去
する。これらのデバイスは、識別切断（ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ ｃｕｔｔｉ
ｎｇ）と呼ばれる技術を使用する。石灰化材料は、動脈壁の弾性性質に起因して
、動脈を損傷せずに微小粒子になる。
【００７０】 血管形成は、血管造影よりもより侵襲性かつ複雑な手順であり、これは、血管
造影に使用されるよりも長い鞘の挿入を必要とする。この鞘は、動脈内にカテー
テルを導入するための媒介物として使用される。さらに、血管造影はまた、手術
手順中またはその後の凝固を予防するために、血液溶剤（ｔｈｉｎｎｅｒ）（例
えば、ヘパリン）の使用を必要とする。抗凝固剤は、身体の自然密封／凝固機構
を妨げ、従って、密封穿刺は、有意な長さの時間を必要とする。
造影に使用されるよりも長い鞘の挿入を必要とする。この鞘は、動脈内にカテー
テルを導入するための媒介物として使用される。さらに、血管造影はまた、手術
手順中またはその後の凝固を予防するために、血液溶剤（ｔｈｉｎｎｅｒ）（例
えば、ヘパリン）の使用を必要とする。抗凝固剤は、身体の自然密封／凝固機構
を妨げ、従って、密封穿刺は、有意な長さの時間を必要とする。
【００７１】 本発明に従って、動脈からカテーテルおよび他の侵襲性デバイスを引き抜いた
後、接着剤塗布器を、必要に応じて、鞘内に導入し、そして動脈中の穿刺近辺ま
たは穿刺に接触する位置に配置し得る。この手順の間、手動または機械的加圧を
動脈に適用して、穿刺部位での血液の流れを減少する。可能な場合、過度の血液
／体液は、穿刺部位から除去される。続いて、本発明の組換えＩＩＩ型コラーゲ
ンモノマーおよび／または組換えＩ型コラーゲンモノマーは、動脈の外表面上の
穿刺および／または穿刺跡内に適用される。次いで、モノマーを、本明細書に記
載の技術（例えば、ＵＶ照射）によって、重合化および／または架橋する。この
結果、重合化は、０〜３００秒以内、好ましくは、０〜１２０秒以内、より好ま
しくは、０〜３０秒以内、そして最も好ましくは、３〜１０秒で生じる。動脈の
外側へこのコラーゲンモノマー組成物を適用することによって、塞栓症（動脈ま
たは循環系の妨害）の発生は、実質的に除去される。あるいは、重合化は、ＰＣ
Ｔ ＷＯ９７／２９７１５およびＥＰ７４７，０６６ Ａ２（参考として本明細
書中に記載される）に示される方法に従って達成され得る。
後、接着剤塗布器を、必要に応じて、鞘内に導入し、そして動脈中の穿刺近辺ま
たは穿刺に接触する位置に配置し得る。この手順の間、手動または機械的加圧を
動脈に適用して、穿刺部位での血液の流れを減少する。可能な場合、過度の血液
／体液は、穿刺部位から除去される。続いて、本発明の組換えＩＩＩ型コラーゲ
ンモノマーおよび／または組換えＩ型コラーゲンモノマーは、動脈の外表面上の
穿刺および／または穿刺跡内に適用される。次いで、モノマーを、本明細書に記
載の技術（例えば、ＵＶ照射）によって、重合化および／または架橋する。この
結果、重合化は、０〜３００秒以内、好ましくは、０〜１２０秒以内、より好ま
しくは、０〜３０秒以内、そして最も好ましくは、３〜１０秒で生じる。動脈の
外側へこのコラーゲンモノマー組成物を適用することによって、塞栓症（動脈ま
たは循環系の妨害）の発生は、実質的に除去される。あるいは、重合化は、ＰＣ
Ｔ ＷＯ９７／２９７１５およびＥＰ７４７，０６６ Ａ２（参考として本明細
書中に記載される）に示される方法に従って達成され得る。
【００７２】 あるいは、重合化ＩＩＩ型コラーゲンおよび／または重合化Ｉ型コラーゲンが
使用され得、そして重合化工程が回避され得る。本発明の接着剤の結合強度のた
めに、少量の接着剤しか、穿刺された動脈を密封するのに必要とされない。さら
に、本発明に従う手術接着剤が、ほとんど直ちに重合化し得るので、この接着剤
は、動脈の内部を貫通することなく動脈の表面上および／または穿刺跡に沿って
重合化し得る。従って、大きい片または大きい粒子の材料は、循環系に進入せず
、これによって、実質的に塞栓症の危険性を減少する。本発明の好ましい接着剤
の迅速かつ強度な結合に起因して、患者は、最短期間の間だけしか固定される必
要がない。
使用され得、そして重合化工程が回避され得る。本発明の接着剤の結合強度のた
めに、少量の接着剤しか、穿刺された動脈を密封するのに必要とされない。さら
に、本発明に従う手術接着剤が、ほとんど直ちに重合化し得るので、この接着剤
は、動脈の内部を貫通することなく動脈の表面上および／または穿刺跡に沿って
重合化し得る。従って、大きい片または大きい粒子の材料は、循環系に進入せず
、これによって、実質的に塞栓症の危険性を減少する。本発明の好ましい接着剤
の迅速かつ強度な結合に起因して、患者は、最短期間の間だけしか固定される必
要がない。
【００７３】 （投与） （処方物）本発明の組織処置組成物は、先行技術のフィブリン密封材と同じ型
の調製物で提示され得る。この成分は、適切な水溶液とともに用いる前に希釈す
るために、冷凍した（ｄｅｅｐ ｆｒｏｚｅｎ）溶液形態か、または凍結乾燥粉
末（例えば、それぞれアプロチニンおよびカルシウムイオンを含有する）として
提供され得る。さらに、本発明の血管密封材は、当該分野で記載されるように、
そして当業者に公知のようにコラーゲンプラグの形態に処方され、そして成形さ
れ得る。
の調製物で提示され得る。この成分は、適切な水溶液とともに用いる前に希釈す
るために、冷凍した（ｄｅｅｐ ｆｒｏｚｅｎ）溶液形態か、または凍結乾燥粉
末（例えば、それぞれアプロチニンおよびカルシウムイオンを含有する）として
提供され得る。さらに、本発明の血管密封材は、当該分野で記載されるように、
そして当業者に公知のようにコラーゲンプラグの形態に処方され、そして成形さ
れ得る。
【００７４】 本発明の組成物は、組織接着剤の適用の際に形成されるコラーゲン網に取りこ
まれるように、組織接着剤に、例えば、抗生物質または増殖因子のような薬学的
因子を組み込むことにより、さらにこれらの因子を含み得る。従って、この因子
は、例えば、この組成物が点眼剤または創傷治癒調製物などとして用いられる場
合、組成物から制御可能に放出されながら、適用の部位で保持される。上記でも
言及したように、本発明の組織接着剤組成物から放出されるべき薬学的に活性な
物質は、それ自体における粘性を増大する重合体またはそれに結合する物質であ
ってもよい。粘性増大の要件を満たし、そして治療的有用性および薬学的有用性
を有し、そしてバイオアベイラビリティーを維持するのに所望され得るこのよう
な粘性増大重合体の具体的な例は、ヒアルロン酸ならびにその塩および誘導体で
ある。これは水に容易に溶解し、そして非常に短い生物学的半減期を有する。従
って、１つの局面において、本発明の組成物は、ヒアルロン酸ならびにその塩お
よび誘導体のようなプロテオグリカンについて有利な徐放性調製物を構成する。
これらは、そのバイオアベイラビリティーをかなり増大する。
まれるように、組織接着剤に、例えば、抗生物質または増殖因子のような薬学的
因子を組み込むことにより、さらにこれらの因子を含み得る。従って、この因子
は、例えば、この組成物が点眼剤または創傷治癒調製物などとして用いられる場
合、組成物から制御可能に放出されながら、適用の部位で保持される。上記でも
言及したように、本発明の組織接着剤組成物から放出されるべき薬学的に活性な
物質は、それ自体における粘性を増大する重合体またはそれに結合する物質であ
ってもよい。粘性増大の要件を満たし、そして治療的有用性および薬学的有用性
を有し、そしてバイオアベイラビリティーを維持するのに所望され得るこのよう
な粘性増大重合体の具体的な例は、ヒアルロン酸ならびにその塩および誘導体で
ある。これは水に容易に溶解し、そして非常に短い生物学的半減期を有する。従
って、１つの局面において、本発明の組成物は、ヒアルロン酸ならびにその塩お
よび誘導体のようなプロテオグリカンについて有利な徐放性調製物を構成する。
これらは、そのバイオアベイラビリティーをかなり増大する。
【００７５】 特に、本発明の組成物は、接着特性を有するものに限定されない。非接着性組
成物も、特にこれらの組成物が主に創傷治癒を意図している場合、含まれる。こ
れらの組成物は、アルブミンおよび／または増殖因子のような非接着性タンパク
質を特に含み得る。実質的に非接着性の組成物もまた、この組成物の重合体部分
がタンパク質部分の接着性特性を阻害する場合にも得られ得る。この文脈におい
て、本明細書においてしばしば平易さの理由から「接着性」と呼ばれているが、
本発明は、接着性の組成物および実質的に非接着性の組成物の両方を含むことが
強調されるべきである。
成物も、特にこれらの組成物が主に創傷治癒を意図している場合、含まれる。こ
れらの組成物は、アルブミンおよび／または増殖因子のような非接着性タンパク
質を特に含み得る。実質的に非接着性の組成物もまた、この組成物の重合体部分
がタンパク質部分の接着性特性を阻害する場合にも得られ得る。この文脈におい
て、本明細書においてしばしば平易さの理由から「接着性」と呼ばれているが、
本発明は、接着性の組成物および実質的に非接着性の組成物の両方を含むことが
強調されるべきである。
【００７６】 （組成物の適用）本発明の組成物は、種々の調剤デバイスを用いて適用され得
る。例えば、外科用接着剤は、視覚的監視システムを通して適用プロセスをモニ
タリングしながら、米国特許第４，９００，３０３号（Ｌｅｍｅｌｓｏｎ）およ
び同第５，３７２，５８５号（Ｔｉｅｓｅｎｂｒｕｎ）に記載されるデバイスを
用いて適用され得る。本発明の組成物はまた、米国特許第５，１２９，８８２号
（Ｗｅｌｄｏｎら）に記載の装置、または上記で引用される他のデバイス、もし
くは当該分野で周知の他のデバイスにより適用され得る。
る。例えば、外科用接着剤は、視覚的監視システムを通して適用プロセスをモニ
タリングしながら、米国特許第４，９００，３０３号（Ｌｅｍｅｌｓｏｎ）およ
び同第５，３７２，５８５号（Ｔｉｅｓｅｎｂｒｕｎ）に記載されるデバイスを
用いて適用され得る。本発明の組成物はまた、米国特許第５，１２９，８８２号
（Ｗｅｌｄｏｎら）に記載の装置、または上記で引用される他のデバイス、もし
くは当該分野で周知の他のデバイスにより適用され得る。
【００７７】 本発明による組成物はまた、他の密封手段と組み合わせて適用され得る。例え
ば、接着組成物は、外科縫合糸またはテープを用いて閉鎖した穿刺部位、例えば
、心臓を含む血管組織における穿刺または切開の密封に適用され得る。この場合
の接着剤は、完全な密封を提供し、従って器官または血管からの体液漏出、例え
ば、動脈穿刺部位からの漏出の危険性を減じる。本発明の外科用接着剤は、さら
に他の密封手段、例えば、プラグなどと組み合わせて用いられ得る。このような
技術は、例えば、米国特許第４，８５２，５６８号（Ｋｅｎｓｅｙ）、同第４，
８９０，６１２号（Ｋｅｎｓｅｙ）、同第５，０５３，０４６号（Ｊａｎｅｓｅ
）、同第５，０６１，２７４号（Ｋｅｎｓｅｙ）、同第５，１０８，４２１号（
Ｆｏｗｌｅｒ）、同第４，８３２，６８８号（Ｓａｇａｅら）、同第５，１９２
，３００号（Ｆｏｗｌｅｒ）、同第５，２２２，９７４号（Ｋｅｎｓｅｙら）、
同第５，２７５，６１６号（Ｆｏｗｌｅｒ）、同第５，２８２，８２７号（Ｋｅ
ｎｓｅｙら）、同第５，２９２，３３２号（Ｌｅｅ）、同第５，３２４，３０６
号（Ｍａｋｏｗｅｒら）、同第５，３７０，６６０号（Ｗｅｉｎｓｔｅｉｎら）
および同第５，０２１，０５９号（Ｋｅｎｓｅｙら）に記載されている。これら
の特許の内容は参考として本明細書において援用されている。
ば、接着組成物は、外科縫合糸またはテープを用いて閉鎖した穿刺部位、例えば
、心臓を含む血管組織における穿刺または切開の密封に適用され得る。この場合
の接着剤は、完全な密封を提供し、従って器官または血管からの体液漏出、例え
ば、動脈穿刺部位からの漏出の危険性を減じる。本発明の外科用接着剤は、さら
に他の密封手段、例えば、プラグなどと組み合わせて用いられ得る。このような
技術は、例えば、米国特許第４，８５２，５６８号（Ｋｅｎｓｅｙ）、同第４，
８９０，６１２号（Ｋｅｎｓｅｙ）、同第５，０５３，０４６号（Ｊａｎｅｓｅ
）、同第５，０６１，２７４号（Ｋｅｎｓｅｙ）、同第５，１０８，４２１号（
Ｆｏｗｌｅｒ）、同第４，８３２，６８８号（Ｓａｇａｅら）、同第５，１９２
，３００号（Ｆｏｗｌｅｒ）、同第５，２２２，９７４号（Ｋｅｎｓｅｙら）、
同第５，２７５，６１６号（Ｆｏｗｌｅｒ）、同第５，２８２，８２７号（Ｋｅ
ｎｓｅｙら）、同第５，２９２，３３２号（Ｌｅｅ）、同第５，３２４，３０６
号（Ｍａｋｏｗｅｒら）、同第５，３７０，６６０号（Ｗｅｉｎｓｔｅｉｎら）
および同第５，０２１，０５９号（Ｋｅｎｓｅｙら）に記載されている。これら
の特許の内容は参考として本明細書において援用されている。
【００７８】 特に、本発明の組成物は、少なくとも１つの表面に対して特定の組成物を適用
することにより２つの表面を接着するために用いられ得る。使用者の特定の要求
に基づいて、本発明の接着組成物は、公知の手段により、例えば、ガラスの撹拌
棒、滅菌ブラシ、または医薬滴下器などを用いて、適用され得る。多くの場合に
は、圧力下のエアロゾル調剤パッケージが好ましい。ここでは、接着組成物は、
適合性の無水噴霧剤を有する溶液中に存在する。モノマーのエアロゾル適用は、
止血における使用のために特に有利である。エアロゾル適用のための機構は当該
分野で周知である。
することにより２つの表面を接着するために用いられ得る。使用者の特定の要求
に基づいて、本発明の接着組成物は、公知の手段により、例えば、ガラスの撹拌
棒、滅菌ブラシ、または医薬滴下器などを用いて、適用され得る。多くの場合に
は、圧力下のエアロゾル調剤パッケージが好ましい。ここでは、接着組成物は、
適合性の無水噴霧剤を有する溶液中に存在する。モノマーのエアロゾル適用は、
止血における使用のために特に有利である。エアロゾル適用のための機構は当該
分野で周知である。
【００７９】 （実施例） 以下の実施例は、単に本発明を例示するために提供され、そして本発明の範囲
を限定することを意図しない。
を限定することを意図しない。
【００８０】 （酵母発現系からの組換えＩＩＩ型コラーゲンの精製） 以下のプロトコールを用いて、Ｐｉｃｈｉａから組換えヒトＩＩＩ型コラーゲ
ン（「ｒｈｃＩＩＩ」または「ＲｈｃＩＩＩ」）を精製した。 １．１容量の細胞ペレットを７容量の０．１Ｎ ＨＣｌで再懸濁する； ２．−２０℃の冷凍庫から取り出してすぐのガラスビーズでＢｅａｄ−Ｂｅａｔ
ｅｒチャンバを半分満たす； ３．細胞懸濁液でこのチャンバを満たす； ４．氷−水のジャケットをこのチャンバに組み合わせる； ５．このジャケットにある程度の塩化ナトリウムとともに氷水をいれる； ６．この細胞ペレットを、それぞれ１分のホモジナイゼーションの間に５分間隔
として、５×１分間、ホモジナイズする； ７．濾紙なしでブーフナー漏斗を通す濾過によりホモジネートを回収する； ８．ペプシン溶液を最終濃度０．２ｍｇ／ｍｌまで添加し、そして４℃で８時間
インキュベートする； ９．１０，０００ｒｐｍで３０分間遠心し、そして上清（画分Ｓ１）およびペレ
ット（画分Ｐ１）を収集する； １０．１０Ｍ ＮａＯＨでｐＨを７．４に調節する、４℃で一晩インキュベート
する。 １１．５Ｍ ＮａＣｌおよびＨＡＣを１Ｍ ＮａＣｌ、０．５Ｍ ＨＡＣに添加
する； １２．４℃で１時間インキュベートする。 １３．遠心分離によりペレットを収集する（画分Ｐ２）； １４．このペレットを３容量の０．１Ｍ ＨＣｌ（コラーゲン量に依存して、コ
ラーゲン濃度を約０．３ｍｇ／ｍｌに調節する）に溶解する； １５．１．５容量の３Ｍ尿素、０．３Ｍ ＮａＣｌ、０．１５Ｍ Ｔｒｉｓ、ｐ
Ｈ７．４を添加し、そしてＮａＯＨでｐＨを７．４に調節する； １６．流速０．１〜０．２ｍｌ／分でＤＥＡＥ−セルロースカラム（１．６×１
５ｃｍ）を通過させる； １７．流出物を収集する； １８．１Ｍ ＮａＣｌ、０．５Ｍ ＨＡＣにおける沈殿によりコラーゲンを濃縮
する； １９．１０ｍＭ ＨＣｌ中のペレットを再溶解する（画分ｒｈｃＩＩＩ）； ２０．必要な場合、１０ｍＭ ＨＣｌに対してコラーゲン溶液を透析する； （組換えヒトＩＩＩ型コラーゲンの特徴付け） 上記のように、精製したｒｈｃＩＩＩを図１に示すようにＳＤＳ−ＰＡＧＥに
より試験し、そしてアミノ酸分析を実行した。そして精製したｒｈｃＩＩＩのア
ミノ酸組成物を以下のように表１に示す。
ン（「ｒｈｃＩＩＩ」または「ＲｈｃＩＩＩ」）を精製した。 １．１容量の細胞ペレットを７容量の０．１Ｎ ＨＣｌで再懸濁する； ２．−２０℃の冷凍庫から取り出してすぐのガラスビーズでＢｅａｄ−Ｂｅａｔ
ｅｒチャンバを半分満たす； ３．細胞懸濁液でこのチャンバを満たす； ４．氷−水のジャケットをこのチャンバに組み合わせる； ５．このジャケットにある程度の塩化ナトリウムとともに氷水をいれる； ６．この細胞ペレットを、それぞれ１分のホモジナイゼーションの間に５分間隔
として、５×１分間、ホモジナイズする； ７．濾紙なしでブーフナー漏斗を通す濾過によりホモジネートを回収する； ８．ペプシン溶液を最終濃度０．２ｍｇ／ｍｌまで添加し、そして４℃で８時間
インキュベートする； ９．１０，０００ｒｐｍで３０分間遠心し、そして上清（画分Ｓ１）およびペレ
ット（画分Ｐ１）を収集する； １０．１０Ｍ ＮａＯＨでｐＨを７．４に調節する、４℃で一晩インキュベート
する。 １１．５Ｍ ＮａＣｌおよびＨＡＣを１Ｍ ＮａＣｌ、０．５Ｍ ＨＡＣに添加
する； １２．４℃で１時間インキュベートする。 １３．遠心分離によりペレットを収集する（画分Ｐ２）； １４．このペレットを３容量の０．１Ｍ ＨＣｌ（コラーゲン量に依存して、コ
ラーゲン濃度を約０．３ｍｇ／ｍｌに調節する）に溶解する； １５．１．５容量の３Ｍ尿素、０．３Ｍ ＮａＣｌ、０．１５Ｍ Ｔｒｉｓ、ｐ
Ｈ７．４を添加し、そしてＮａＯＨでｐＨを７．４に調節する； １６．流速０．１〜０．２ｍｌ／分でＤＥＡＥ−セルロースカラム（１．６×１
５ｃｍ）を通過させる； １７．流出物を収集する； １８．１Ｍ ＮａＣｌ、０．５Ｍ ＨＡＣにおける沈殿によりコラーゲンを濃縮
する； １９．１０ｍＭ ＨＣｌ中のペレットを再溶解する（画分ｒｈｃＩＩＩ）； ２０．必要な場合、１０ｍＭ ＨＣｌに対してコラーゲン溶液を透析する； （組換えヒトＩＩＩ型コラーゲンの特徴付け） 上記のように、精製したｒｈｃＩＩＩを図１に示すようにＳＤＳ−ＰＡＧＥに
より試験し、そしてアミノ酸分析を実行した。そして精製したｒｈｃＩＩＩのア
ミノ酸組成物を以下のように表１に示す。
【００８１】
【表１】 （生体適合性および組織反応試験） ｒｈｃＩＩＩおよびコメリック（ｃｏｍｍｅｒｉｃ）の生体適合性および組織
反応をラット皮下モデルにおいて試験した。ｒｈｃＩＩＩおよび市販のコラーゲ
ン止血薬（Ｃｏｌｌａｇｅｎ Ｈｅｍｏｓｔａｔ）を無菌条件下で注射用ペース
ト／ゲル中に処方した。このｒｈｃＩＩＩサンプルを、内毒素レベルが限界以下
であることを確認するために試験した。このゲルをラットに皮下注射した。予備
的なデータは、ｒｈｃＩＩＩがいかなる紅斑も浮腫も生じないことを示す。この
ゲルを注射後２日、７日および２８日で切開し、そしてＨ＆Ｅ染色を用いて組織
学的に試験した。市販のコラーゲン止血薬は、ｒｈｃよりもかなり強力な組織応
答を有する。７日目にラットから収集したｒｈｃＩＩＩと市販のコラーゲン止血
薬との比較を図２に示す。
反応をラット皮下モデルにおいて試験した。ｒｈｃＩＩＩおよび市販のコラーゲ
ン止血薬（Ｃｏｌｌａｇｅｎ Ｈｅｍｏｓｔａｔ）を無菌条件下で注射用ペース
ト／ゲル中に処方した。このｒｈｃＩＩＩサンプルを、内毒素レベルが限界以下
であることを確認するために試験した。このゲルをラットに皮下注射した。予備
的なデータは、ｒｈｃＩＩＩがいかなる紅斑も浮腫も生じないことを示す。この
ゲルを注射後２日、７日および２８日で切開し、そしてＨ＆Ｅ染色を用いて組織
学的に試験した。市販のコラーゲン止血薬は、ｒｈｃよりもかなり強力な組織応
答を有する。７日目にラットから収集したｒｈｃＩＩＩと市販のコラーゲン止血
薬との比較を図２に示す。
【００８２】 （血小板凝集試験） （方法）上記の組換えヒトＩＩＩ型コラーゲン（「ｒｈｃＩＩＩ」）の原線維
発生を以下の方法に従って試験した：第１のｒｈｃＩＩＩ溶液を１０ｍＭ ＨＣ
ｌで希釈して１ｍｇ／ｍｌにして、次に、１／１０容量の２００ｍＭ Ｎａ2Ｈ
ＰＯ4、ｐＨ１１．２を添加した。次いでこの溶液を十分混合し、そして一晩、
室温（２０〜２２℃）でインキュベートした。インキュベーション後、原繊維の
スラリーをボルテックスした後、用いた。
発生を以下の方法に従って試験した：第１のｒｈｃＩＩＩ溶液を１０ｍＭ ＨＣ
ｌで希釈して１ｍｇ／ｍｌにして、次に、１／１０容量の２００ｍＭ Ｎａ2Ｈ
ＰＯ4、ｐＨ１１．２を添加した。次いでこの溶液を十分混合し、そして一晩、
室温（２０〜２２℃）でインキュベートした。インキュベーション後、原繊維の
スラリーをボルテックスした後、用いた。
【００８３】 次いで、ヒト血小板富化血漿（ＰＲＰ）を明白に健常なドナーの新鮮血液から
調製した。次いで、このＰＲＰを２００Ｋ／μｌに調節し、そしてコラーゲン原
繊維スラリーをＰＲＰに添加した。原繊維スラリーの添加後、血小板凝集プロフ
ィールを血小板凝集計を用いて検出した。５分以内に生じる少なくとも３０％の
光学密度の低下を誘導するコラーゲンの量から、完全な血小板凝集を誘導する最
小量のコラーゲンを推定する。
調製した。次いで、このＰＲＰを２００Ｋ／μｌに調節し、そしてコラーゲン原
繊維スラリーをＰＲＰに添加した。原繊維スラリーの添加後、血小板凝集プロフ
ィールを血小板凝集計を用いて検出した。５分以内に生じる少なくとも３０％の
光学密度の低下を誘導するコラーゲンの量から、完全な血小板凝集を誘導する最
小量のコラーゲンを推定する。
【００８４】 （実験結果）組換えヒトコラーゲンＩＩＩの血小板凝集能を、上記の方法に従
って、そしてＢａｌｌｅｉｓｅｎら、１９７５、Ｋｌｉｎ．Ｗｓｃｈｒ ５３：
９０３〜９０５（本明細書において参考として援用される）においてより完全に
記載しているように、ウシ皮膚由来のコラーゲンの血小板凝集能と比較した。以
下の表２に示すように、組換えヒトコラーゲンＩＩＩから生成した原繊維は、ヒ
ト血小板凝集の誘導において、ウシ皮膚コラーゲンから生成した原繊維よりも、
より少ない最小量でよい。組換えヒトコラーゲンＩＩＩはまた、血小板凝集を誘
導する作用発現時間がより短い。これらの結果は、組換えヒトコラーゲンが、組
織由来コラーゲンよりもより止血性であることを示す。
って、そしてＢａｌｌｅｉｓｅｎら、１９７５、Ｋｌｉｎ．Ｗｓｃｈｒ ５３：
９０３〜９０５（本明細書において参考として援用される）においてより完全に
記載しているように、ウシ皮膚由来のコラーゲンの血小板凝集能と比較した。以
下の表２に示すように、組換えヒトコラーゲンＩＩＩから生成した原繊維は、ヒ
ト血小板凝集の誘導において、ウシ皮膚コラーゲンから生成した原繊維よりも、
より少ない最小量でよい。組換えヒトコラーゲンＩＩＩはまた、血小板凝集を誘
導する作用発現時間がより短い。これらの結果は、組換えヒトコラーゲンが、組
織由来コラーゲンよりもより止血性であることを示す。
【００８５】
【表２】 以降の実験では、血小板を３人の健常ドナーから入手し、そして血漿中で２０
０Ｋ／ｍｌに調製した。コラーゲン原繊維スラリーを血小板懸濁液に添加し、そ
して凝集を血小板凝集計で測定した。完全な血小板凝集を誘導し得る最小量のコ
ラーゲンを添加したコラーゲンの量を段階的に減じることにより決定した。少な
くとも３０％のＯＤの低下が５分以内に生じた場合、完全な凝集が生じたとした
。ｒｈｃＩＩＩは血小板の完全な凝集を誘導するのにより少ない最小量でよいこ
とが示され、そしてこれは、ｒｈｃＩＩＩはウシＩ型コラーゲンよりも止血性で
あることを示す。図１に示されるこの結果は、ＩＩＩ型コラーゲン原繊維がＩ型
コラーゲン原繊維よりも止血性であることを示す。
０Ｋ／ｍｌに調製した。コラーゲン原繊維スラリーを血小板懸濁液に添加し、そ
して凝集を血小板凝集計で測定した。完全な血小板凝集を誘導し得る最小量のコ
ラーゲンを添加したコラーゲンの量を段階的に減じることにより決定した。少な
くとも３０％のＯＤの低下が５分以内に生じた場合、完全な凝集が生じたとした
。ｒｈｃＩＩＩは血小板の完全な凝集を誘導するのにより少ない最小量でよいこ
とが示され、そしてこれは、ｒｈｃＩＩＩはウシＩ型コラーゲンよりも止血性で
あることを示す。図１に示されるこの結果は、ＩＩＩ型コラーゲン原繊維がＩ型
コラーゲン原繊維よりも止血性であることを示す。
【００８６】 （ｒｈｃＩＩＩスポンジの止血効果） ｒｈｃＩＩＩを以下のように調製した： ｒｈｃＩＩＩをｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ中で発現した。選択した発現
クローンを規定の条件下でバイオリアクター中で培養した。ｒｈｃＩＩＩを制限
したペプシン消化およびディファレンシャル塩沈により収集した細胞ペレットか
ら精製した。精製したｒｈｃＩＩＩを、まずリン酸緩衝液での中和、および室温
での一晩のインキュベーションによって原繊維中に処方した。この原繊維を遠心
分離により収集し、次いで水に再懸濁した。均質化後、ｒｈｃＩＩＩゲルを型枠
に移し、そしてスポンジ中で凍結乾燥した。この型のスポンジは水の吸収が非常
に乏しい。
クローンを規定の条件下でバイオリアクター中で培養した。ｒｈｃＩＩＩを制限
したペプシン消化およびディファレンシャル塩沈により収集した細胞ペレットか
ら精製した。精製したｒｈｃＩＩＩを、まずリン酸緩衝液での中和、および室温
での一晩のインキュベーションによって原繊維中に処方した。この原繊維を遠心
分離により収集し、次いで水に再懸濁した。均質化後、ｒｈｃＩＩＩゲルを型枠
に移し、そしてスポンジ中で凍結乾燥した。この型のスポンジは水の吸収が非常
に乏しい。
【００８７】 水吸収能は、止血薬および血管密封材としてのｒｈｃＩＩＩの適用に重要であ
る。本発明の組成物がこの要件を満たし得ることを確実にするため、水吸収性の
ｒｈｃＩＩＩスポンジを処方するプロセスを開発した。基本的に、スポンジをま
ずＵＶ照射で、次いで１％ＷＳＣで架橋した。残存する架橋試薬をＰＢＳ中での
インキュベーションにより除去し、そしてスポンジを水で洗浄した。架橋したス
ポンジを動物試験および組織密封材の処方物のために凍結乾燥する。このプロセ
スは、ｒｈｃＩＩＩスポンジの水吸収を増強するのみでなく、ｒｈｃＩＩＩスポ
ンジの機械的強度を有意に増加した。コントロール研究において、ウシＩ型コラ
ーゲンをまた、同じ手順後にスポンジ内に処方した。
る。本発明の組成物がこの要件を満たし得ることを確実にするため、水吸収性の
ｒｈｃＩＩＩスポンジを処方するプロセスを開発した。基本的に、スポンジをま
ずＵＶ照射で、次いで１％ＷＳＣで架橋した。残存する架橋試薬をＰＢＳ中での
インキュベーションにより除去し、そしてスポンジを水で洗浄した。架橋したス
ポンジを動物試験および組織密封材の処方物のために凍結乾燥する。このプロセ
スは、ｒｈｃＩＩＩスポンジの水吸収を増強するのみでなく、ｒｈｃＩＩＩスポ
ンジの機械的強度を有意に増加した。コントロール研究において、ウシＩ型コラ
ーゲンをまた、同じ手順後にスポンジ内に処方した。
【００８８】 順応したニュージーランド白ウサギ（Ｎｅｗ Ｚｅａｌａｎｄ Ｗｈｉｔｅ
Ｒａｂｂｉｔ）を深く麻酔し、そして脾臓を露出するために開腹術を行った。ス
カペル（ｓｃａｐｅｌ）ブレードを用いて、脾臓に約１ｃｍの長さでかつ０．３
ｃｍの深さの均一な切開を行った。次いでこの切開をｒｈｃＩＩＩスポンジかま
たはウシコラーゲンＩスポンジで処置した。試験物または陽性コントロール材料
の適用から出血停止までの時間間隔を記録した。Ａｎｏｖａおよびスチューデン
ト２サンプルＴ検定を用いて、止血の平均時間の統計分析を行った。ｒｈｃＩＩ
Ｉスポンジで処置した脾臓の出血時間がウシＩ型コラーゲンで処置した時間より
有意に短かったことが観察された。これらの結果を図４に示す。
Ｒａｂｂｉｔ）を深く麻酔し、そして脾臓を露出するために開腹術を行った。ス
カペル（ｓｃａｐｅｌ）ブレードを用いて、脾臓に約１ｃｍの長さでかつ０．３
ｃｍの深さの均一な切開を行った。次いでこの切開をｒｈｃＩＩＩスポンジかま
たはウシコラーゲンＩスポンジで処置した。試験物または陽性コントロール材料
の適用から出血停止までの時間間隔を記録した。Ａｎｏｖａおよびスチューデン
ト２サンプルＴ検定を用いて、止血の平均時間の統計分析を行った。ｒｈｃＩＩ
Ｉスポンジで処置した脾臓の出血時間がウシＩ型コラーゲンで処置した時間より
有意に短かったことが観察された。これらの結果を図４に示す。
【００８９】 （ｒｈｃＩＩＩ密封材の処方物） ｒｈｃＩＩＩ密封材を調製するため、以下を含む、３工程の実験アプローチを
探求した：１）架橋したｒｈｃＩＩＩスポンジを調製する工程；２）ヒトトロン
ビンでこのスポンジをコーティングする工程；および３）引き続き、ヒトフィブ
リノーゲンでこのスポンジをコーティングする工程。
探求した：１）架橋したｒｈｃＩＩＩスポンジを調製する工程；２）ヒトトロン
ビンでこのスポンジをコーティングする工程；および３）引き続き、ヒトフィブ
リノーゲンでこのスポンジをコーティングする工程。
【００９０】 水溶性カルボジイミドで架橋したコラーゲンスポンジを１００％エタノールで
リンスし、そして濾過漏斗に置いた。エタノール中に懸濁したヒトトロンビン（
２５Ｕ／ｍｌ）を用いて、濾過によりスポンジを被膜した。スポンジ上のトロン
ビンの量は、約１０Ｕ／ｃｍ2であった。４ｍｇ／ｍｌの濃度で水中に溶解した
ヒトフィブリノーゲンを３容量のエタノールとの混合により沈殿した。沈殿した
フィブリノーゲンを減圧によりスポンジを通じて濾過した。スポンジ上のフィブ
リノーゲンの量は約３ｍｇ／ｃｍ2であった。コートしたスポンジを凍結乾燥し
、そして動物試験に用いた。
リンスし、そして濾過漏斗に置いた。エタノール中に懸濁したヒトトロンビン（
２５Ｕ／ｍｌ）を用いて、濾過によりスポンジを被膜した。スポンジ上のトロン
ビンの量は、約１０Ｕ／ｃｍ2であった。４ｍｇ／ｍｌの濃度で水中に溶解した
ヒトフィブリノーゲンを３容量のエタノールとの混合により沈殿した。沈殿した
フィブリノーゲンを減圧によりスポンジを通じて濾過した。スポンジ上のフィブ
リノーゲンの量は約３ｍｇ／ｃｍ2であった。コートしたスポンジを凍結乾燥し
、そして動物試験に用いた。
【００９１】 順応したニュージーランドホワイトラビットを深く麻酔し、そして腎臓および
脾臓を露出するために開腹術を行った。スカペルブレードを用いて、腎臓および
／または脾臓に約１．０ｃｍの長さでかつ０．３ｃｍの深さの切開を行った。こ
の切開を市販のコラーゲンスポンジＩＮＳＴＡＴまたはｒｈｃＩＩＩ密封材で処
置した。試験物の適用から出血停止までの時間間隔を記録した。止血が得られた
後の試験部位からの物質の剥離により、試験物の接着能力を評価した。この結果
を表３および表４に示す。
脾臓を露出するために開腹術を行った。スカペルブレードを用いて、腎臓および
／または脾臓に約１．０ｃｍの長さでかつ０．３ｃｍの深さの切開を行った。こ
の切開を市販のコラーゲンスポンジＩＮＳＴＡＴまたはｒｈｃＩＩＩ密封材で処
置した。試験物の適用から出血停止までの時間間隔を記録した。止血が得られた
後の試験部位からの物質の剥離により、試験物の接着能力を評価した。この結果
を表３および表４に示す。
【００９２】
【表３】
【００９３】
【表４】 この研究の結果は、ｒｈｃＩＩＩ原繊維がウシＩ型コラーゲンよりも低濃度で
ヒト血小板凝集を誘導し得ることを示した。このことは、ｒｈｃＩＩＩスポンジ
が、脾臓傷害モデルにおいて、ウシコラーゲンスポンジよりも短い時間で出血を
停止することを示す。フィブリン密封材を増強したｒｈｃＩＩＩの原型は、イン
ビボで、市販のコラーゲンスポンジにまさる優れた止血の可能性を示した。
ヒト血小板凝集を誘導し得ることを示した。このことは、ｒｈｃＩＩＩスポンジ
が、脾臓傷害モデルにおいて、ウシコラーゲンスポンジよりも短い時間で出血を
停止することを示す。フィブリン密封材を増強したｒｈｃＩＩＩの原型は、イン
ビボで、市販のコラーゲンスポンジにまさる優れた止血の可能性を示した。
【００９４】 （架橋実験） （ウシＩ型コラーゲン） 可溶性ウシＩコラーゲンを用いて架橋可能性試験を実行した。１０ｍＭＨＣｌ
中のウシコラーゲンＩを１／１０容量の０．２Ｍ Ｎａ2ＨＰＯ4、ｐＨ１１．２
を用いて中和し、そして室温で１晩インキュベートした。原繊維を水で洗浄し、
そして遠心分離により５０ｍｇ／ｍｌに濃縮した。ホモジナイズしたゲルを小さ
い細胞培養シャーレに移し、そして凍結乾燥してスポンジを形成した。
中のウシコラーゲンＩを１／１０容量の０．２Ｍ Ｎａ2ＨＰＯ4、ｐＨ１１．２
を用いて中和し、そして室温で１晩インキュベートした。原繊維を水で洗浄し、
そして遠心分離により５０ｍｇ／ｍｌに濃縮した。ホモジナイズしたゲルを小さ
い細胞培養シャーレに移し、そして凍結乾燥してスポンジを形成した。
【００９５】 コラーゲンを架橋するため、ウシコラーゲンスポンジを水溶性カルボジイミド
（「ＷＳＣ」）の溶液中で、室温で一晩インキュベートし、次いで、ＰＢＳおよ
び水で洗浄した。次いで、架橋したスポンジを乾燥し、そして溶解度および水吸
収について試験し、そして市販のコラーゲンスポンジ（ＡｎｇｉｏｓｅａｌTMと
いうコラーゲンスポンジ）と比較した。このデータを表５に示す。
（「ＷＳＣ」）の溶液中で、室温で一晩インキュベートし、次いで、ＰＢＳおよ
び水で洗浄した。次いで、架橋したスポンジを乾燥し、そして溶解度および水吸
収について試験し、そして市販のコラーゲンスポンジ（ＡｎｇｉｏｓｅａｌTMと
いうコラーゲンスポンジ）と比較した。このデータを表５に示す。
【００９６】
【表５】 表５および図５に示すように、架橋スポンジは、室温で２４時間水中でインキ
ュベーションした後もインタクトであるようである。一方、非架橋コラーゲンス
ポンジはインタクトではなかった。架橋したコラーゲンスポンジの機械的強度を
試験するためにこれを指で引き裂いた。０．５％より高い濃度のＷＳＣで架橋し
たコラーゲンスポンジは、適切な機械的強度を示した。
ュベーションした後もインタクトであるようである。一方、非架橋コラーゲンス
ポンジはインタクトではなかった。架橋したコラーゲンスポンジの機械的強度を
試験するためにこれを指で引き裂いた。０．５％より高い濃度のＷＳＣで架橋し
たコラーゲンスポンジは、適切な機械的強度を示した。
【００９７】 （組換えＩＩＩ型コラーゲン） １／１０容量の０．２Ｍ Ｎａ2ＨＰＯ4、ｐＨ１１．２を用いる１０ｍＭＨＣ
ｌ中でのｒｈｃＩＩＩの中和によりｒｈｃＩＩＩコラーゲン原繊維を調製し、そ
して室温で１晩インキュベートした。ｒｈｃＩＩＩ原繊維を遠心分離により回収
し、そして水で洗浄した。この原繊維を６０ｍｇ／ｍｌに濃縮し、そしてゲルに
ホモジナイズした。このゲルを型枠に移し、そして約２．５ｍｍの厚さのスポン
ジ中に凍結乾燥した。
ｌ中でのｒｈｃＩＩＩの中和によりｒｈｃＩＩＩコラーゲン原繊維を調製し、そ
して室温で１晩インキュベートした。ｒｈｃＩＩＩ原繊維を遠心分離により回収
し、そして水で洗浄した。この原繊維を６０ｍｇ／ｍｌに濃縮し、そしてゲルに
ホモジナイズした。このゲルを型枠に移し、そして約２．５ｍｍの厚さのスポン
ジ中に凍結乾燥した。
【００９８】 このコラーゲンスポンジを２５％エタノール中の１％ＷＳＣを用いて室温で１
６時間架橋した。反応溶液中でのコラーゲンスポンジの湿潤化を加速するためエ
タノールを添加した。次いで、架橋したスポンジをＰＢＳで２時間洗浄し、引き
続き水で３回洗浄した。凍結乾燥後、約１．４ｃｍ2の大きさのコラーゲンスポ
ンジを用いて、水吸収について試験した。さらに、２ｍｇのコラーゲンスポンジ
を用いて溶解度について試験した。表６に示すように、ｒｈｃＩＩＩスポンジの
架橋は、その水吸収能力を改善した。架橋したｒｈｃＩＩＩスポンジの湿潤化時
間は、約１０秒に低下し、そして水の取り込みは、７６ｍｇから４３３ｍｇに増
加した。架橋したｒｈｃＩＩＩスポンジは、室温で２４時間水中でインキュベー
ションした後もインタクトのままであった。一方、非架橋ｒｈｃＩＩＩはインタ
クトのままではなかった。
６時間架橋した。反応溶液中でのコラーゲンスポンジの湿潤化を加速するためエ
タノールを添加した。次いで、架橋したスポンジをＰＢＳで２時間洗浄し、引き
続き水で３回洗浄した。凍結乾燥後、約１．４ｃｍ2の大きさのコラーゲンスポ
ンジを用いて、水吸収について試験した。さらに、２ｍｇのコラーゲンスポンジ
を用いて溶解度について試験した。表６に示すように、ｒｈｃＩＩＩスポンジの
架橋は、その水吸収能力を改善した。架橋したｒｈｃＩＩＩスポンジの湿潤化時
間は、約１０秒に低下し、そして水の取り込みは、７６ｍｇから４３３ｍｇに増
加した。架橋したｒｈｃＩＩＩスポンジは、室温で２４時間水中でインキュベー
ションした後もインタクトのままであった。一方、非架橋ｒｈｃＩＩＩはインタ
クトのままではなかった。
【００９９】
【表６】 このコラーゲンスポンジをまたＳＤＳ−ＰＡＧＥを用いて試験した。図６に示
すように、レーン１およびレーン６がｒｈｃＩＩＩを示す；レーン２はＡｎｇｉ
ｏｓｅａｌTMについてのコラーゲンスポンジを示す；レーン３は、架橋したウシ
コラーゲンＩスポンジを示す；レーン４は架橋したｒｈｃＩＩＩスポンジを示す
；そしてレーン５は、架橋していないｒｈｃＩＩＩスポンジを示す。コラーゲン
スポンジＡｎｇｉｏｓｅａｌTM、架橋したウシコラーゲンＩスポンジ、および架
橋したｒｈｃＩＩＩスポンジは、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ緩衝液中で溶解しない。
すように、レーン１およびレーン６がｒｈｃＩＩＩを示す；レーン２はＡｎｇｉ
ｏｓｅａｌTMについてのコラーゲンスポンジを示す；レーン３は、架橋したウシ
コラーゲンＩスポンジを示す；レーン４は架橋したｒｈｃＩＩＩスポンジを示す
；そしてレーン５は、架橋していないｒｈｃＩＩＩスポンジを示す。コラーゲン
スポンジＡｎｇｉｏｓｅａｌTM、架橋したウシコラーゲンＩスポンジ、および架
橋したｒｈｃＩＩＩスポンジは、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ緩衝液中で溶解しない。
【０１００】 本発明の記載された方法およびシステムの種々の改変および変更は、本発明の
範囲および精神から逸脱することなく当業者に明白である。本発明は特定の好ま
しい実施態様と組み合わせて記載されるが、特許請求の範囲に記載の本発明は、
このような特定の実施態様に過度に限定されるべきではないことが理解されるは
ずである。実際、分子生物学または関連分野の当業者に自明である本発明を実行
するための記載された様式の種々の改変は、特許請求の範囲の範囲内であること
が意図される。本明細書において引用されるすべての参考文献は、その全体が本
明細書において参考として援用される。
範囲および精神から逸脱することなく当業者に明白である。本発明は特定の好ま
しい実施態様と組み合わせて記載されるが、特許請求の範囲に記載の本発明は、
このような特定の実施態様に過度に限定されるべきではないことが理解されるは
ずである。実際、分子生物学または関連分野の当業者に自明である本発明を実行
するための記載された様式の種々の改変は、特許請求の範囲の範囲内であること
が意図される。本明細書において引用されるすべての参考文献は、その全体が本
明細書において参考として援用される。
【図１】 図１は、ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓによって生成された組換えＩＩＩ型
コラーゲンのＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析を示す。
コラーゲンのＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析を示す。
【図２】 図２は、は、組換えＩＩＩ型コラーゲンおよび市販のコラーゲン止血物質の生
体適合性に関するデータを示す。
体適合性に関するデータを示す。
【図３】 図３は、組換えＩＩＩ型コラーゲンおよびウシＩ型コラーゲンの血小板凝集能
実験に関するデータを示す。
実験に関するデータを示す。
【図４】 図４は、組換えＩＩＩ型コラーゲンおよびウシＩ型コラーゲンで処置した脾臓
の出血時間に関するデータを示す。
の出血時間に関するデータを示す。
【図５】 図５は、水溶性カルボジイミドで架橋されたウシＩ型コラーゲンのＳＤＳ−Ｐ
ＡＧＥ分析を示す。
ＡＧＥ分析を示す。
【図６】 図６は、水溶性カルボジイミドで架橋された組換えＩＩＩ型コラーゲンのＳＤ
Ｓ−ＰＡＧＥ分析を示す。
Ｓ−ＰＡＧＥ分析を示す。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｌ 24/00 Ａ６１Ｌ 15/04 26/00 25/00 Ａ 27/00 Ｋ Ａ６１Ｐ 17/02 Ａ６１Ｋ 37/12 Ｃ１２Ｐ 21/02 37/465 //(Ｃ１２Ｐ 21/02 37/02 Ｃ１２Ｒ 1:84） 37/547 (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，Ｅ Ａ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＧＨ，Ｇ Ｍ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ， ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，Ｎ Ｏ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ， ＵＧ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＷ (72)発明者 ネフ， トーマス ビー． アメリカ合衆国 カリフォルニア 94027， アサートン， グレンウッド アベニュ ー 190 Ｆターム(参考） 4B064 AG01 CA06 CC24 DA01 4C081 AA02 AB13 AC04 BA11 BA13 BA16 CD121 CD151 CD172 CD18 CD23 4C084 AA02 AA06 BA44 DC03 DC10 DC15 DC50 MA01 MA63 NA14 ZA532 ZA891 ZA892
Claims (53)
- 【請求項１】 重合化したＩＩＩ型コラーゲンを含む密封材組成物であって
、ここで該密封材組成物は、細胞において純粋なＩＩＩ型コラーゲンモノマーを
組換え的に製造する工程、および該モノマーを因子と重合化する工程により生成
される、密封材組成物。 - 【請求項２】 前記組成物が生物学的に適合性である、請求項１に記載の組
成物。 - 【請求項３】 請求項１に記載の組成物であって、前記ＩＩＩ型コラーゲン
モノマーの組換え製造が以下の工程： （ａ）ＩＩＩ型コラーゲンを含むポリペプチドをコードする少なくとも１つの
遺伝子、およびプロリル４−ヒドロキシラーゼのαサブユニットまたはβサブユ
ニットの群から選択されるポリペプチドをコードする少なくとも１つの遺伝子で
トランスフェクトされた細胞を培養する工程；ならびに （ｂ）該ＩＩＩ型コラーゲンを精製する工程、 を含む、組成物。 - 【請求項４】 請求項１に記載の組成物であって、前記組成物が、さらにフ
ィブリン、フィブリノーゲン、トロンビン、第ＸＩＩＩ因子または結合組織増殖
因子の群から選択される１つ以上の因子を含む、組成物。 - 【請求項５】 前記密封材が血管密封材である、請求項１に記載の組成物。
- 【請求項６】 前記コラーゲンがゼラチンである、請求項１に記載の組成物
。 - 【請求項７】 前記組成物が非接着性である、請求項１に記載の組成物。
- 【請求項８】 前記組成物がさらにアルブミンを含む、請求項７に記載の組
成物。 - 【請求項９】 前記重合化が架橋により達成される、請求項１に記載の組成
物。 - 【請求項１０】 組織密封材を作製するための方法であって、該方法は、以
下の工程： （ａ）組換え手段によりＩＩＩ型コラーゲンモノマーを製造する工程；および （ｂ）該ＩＩＩ型コラーゲンモノマーを重合化する工程、 を包含する、方法。 - 【請求項１１】 前記重合化が架橋により達成される、請求項１０に記載の
方法。 - 【請求項１２】 重合化したＩ型コラーゲンを含む密閉材組成物であって、
該密封材組成物は、細胞において純粋なＩ型コラーゲンモノマーを組換え的に製
造する工程、および該モノマーを因子と重合化する工程により生成される、密封
材組成物。 - 【請求項１３】 前記組成物が生物学的に適合性である、請求項１２に記載
の組成物。 - 【請求項１４】 請求項１２に記載の組成物であって、Ｉ型コラーゲンモノ
マーの組換え製造が以下の工程： （ａ）Ｉ型コラーゲンを含むポリペプチドをコードする少なくとも１つの遺伝
子、およびプロリル４−ヒドロキシラーゼのαサブユニットまたはβサブユニッ
トの群から選択されるポリペプチドをコードする少なくとも１つの遺伝子でトラ
ンスフェクトされた細胞を培養する工程；ならびに （ｂ）該Ｉ型コラーゲンを精製する工程、 を含む、組成物。 - 【請求項１５】 前記コラーゲンがゼラチンである、請求項１２に記載の組
成物。 - 【請求項１６】 請求項１２に記載の組成物であって、前記組成物が、さら
にフィブリン、フィブリノーゲン、トロンビン、第ＸＩＩＩ因子または結合組織
増殖因子の群から選択される１つ以上の因子を含む、組成物。 - 【請求項１７】 前記密封材が血管密封材である、請求項１２に記載の組成
物。 - 【請求項１８】 前記Ｉ型コラーゲンがヘテロ三量体コラーゲンである、請
求項１２に記載の組成物。 - 【請求項１９】 前記Ｉ型コラーゲンがヘテロ三量体コラーゲンである、請
求項１２に記載の組成物。 - 【請求項２０】 前記組成物が非接着性である、請求項１２に記載の組成物
。 - 【請求項２１】 前記組成物がさらにアルブミンを含む、請求項２０に記載
の組成物。 - 【請求項２２】 前記重合化が架橋により達成される、請求項１２に記載の
組成物。 - 【請求項２３】 組織密封材を作製するための方法であって、該方法は、以
下の工程： （ａ）組換え手段によりＩ型コラーゲンモノマーを製造する工程；および （ｂ）該Ｉ型コラーゲンモノマーを重合化する工程、 を包含する、方法。 - 【請求項２４】 前記重合化が架橋により達成される、請求項２３に記載の
方法。 - 【請求項２５】 重合化した精製ＩＩＩ型コラーゲンおよび重合化した精製
Ｉ型コラーゲンを含む組織密封材組成物。 - 【請求項２６】 前記組成物が生物学的に適合性である、請求項２５に記載
の組成物。 - 【請求項２７】 純粋な組換えＩ型コラーゲンに対する純粋な組換えＩＩＩ
型コラーゲンの比が、約７０％以下のＩ型コラーゲンに対する約３０％以上のＩ
ＩＩ型コラーゲンである、請求項２５に記載の組成物。 - 【請求項２８】 前記コラーゲンがゼラチンである、請求項２５に記載の組
成物。 - 【請求項２９】 請求項２５に記載の組成物であって、前記組成物が、さら
にフィブリン、フィブリノーゲン、トロンビン、第ＸＩＩＩ因子または結合組織
増殖因子の群から選択される１つ以上の因子を含む、組成物。 - 【請求項３０】 重合化したＩＩＩ型コラーゲンを含む創傷被覆組成物であ
って、該組成物は、細胞において純粋なＩＩＩ型コラーゲンモノマーを組換え的
に製造する工程、および該モノマーを因子と重合化する工程により生成される、
創傷被覆組成物。 - 【請求項３１】 前記組成物が生物学的に適合性である、請求項３０に記載
の組成物。 - 【請求項３２】 請求項３０に記載の組成物であって、前記ＩＩＩ型コラー
ゲンモノマーの組換え製造が以下の工程： （ａ）ＩＩＩ型コラーゲンを含むポリペプチドをコードする少なくとも１つの
遺伝子、およびプロリル４−ヒドロキシラーゼのαサブユニットまたはβサブユ
ニットの群から選択されるポリペプチドをコードする少なくとも１つの遺伝子で
トランスフェクトされた細胞を培養する工程；ならびに （ｂ）該ＩＩＩ型コラーゲンを精製する工程、 を含む、組成物。 - 【請求項３３】 前記コラーゲンがゼラチンである、請求項３０に記載の組
成物。 - 【請求項３４】 請求項３０に記載の組成物であって、前記組成物が、さら
にフィブリン、フィブリノーゲン、トロンビン、第ＸＩＩＩ因子または結合組織
増殖因子の群から選択される１つ以上の因子を含む、組成物。 - 【請求項３５】 前記重合化が架橋により達成される、請求項３０に記載の
組成物。 - 【請求項３６】 創傷被覆材を作製するための方法であって、該方法は、以
下の工程： （ａ）組換え手段によりＩＩＩ型コラーゲンモノマーを製造する工程；および （ｂ）該ＩＩＩ型コラーゲンモノマーを重合化する工程、 を包含する、方法。 - 【請求項３７】 前記重合化が架橋により達成される、請求項３６に記載の
方法。 - 【請求項３８】 重合化したＩ型コラーゲンを含む創傷被覆材組成物であっ
て、該組成物は、細胞において純粋なＩ型コラーゲンモノマーを組換え的に製造
する工程、および該モノマーを因子と重合化する工程により生成される、創傷被
覆材組成物。 - 【請求項３９】 前記組成物が生物学的に適合性である、請求項３８に記載
の組成物。 - 【請求項４０】 請求項３８に記載の組成物であって、Ｉ型コラーゲンモノ
マーの組換え製造が以下の工程： （ａ）Ｉ型コラーゲンを含むポリペプチドをコードする少なくとも１つの遺伝
子、およびプロリル４−ヒドロキシラーゼのαサブユニットまたはβサブユニッ
トの群から選択されるポリペプチドをコードする少なくとも１つの遺伝子でトラ
ンスフェクトされた細胞を培養する工程；ならびに （ｂ）該Ｉ型コラーゲンを精製する工程、 を含む、組成物。 - 【請求項４１】 前記コラーゲンがゼラチンである、請求項３８に記載の組
成物。 - 【請求項４２】 請求項３８に記載の組成物であって、前記組成物が、さら
にフィブリン、フィブリノーゲン、トロンビン、第ＸＩＩＩ因子または結合組織
増殖因子の群から選択される１つ以上の因子を含む、組成物。 - 【請求項４３】 前記コラーゲンがゼラチンである、請求項３８に記載の組
成物。 - 【請求項４４】 前記Ｉ型コラーゲンがヘテロ三量体コラーゲンである、請
求項３８に記載の組成物。 - 【請求項４５】 前記Ｉ型コラーゲンがホモ三量体コラーゲンである、請求
項３８に記載の組成物。 - 【請求項４６】 前記重合化が架橋により達成される、請求項３８に記載の
組成物。 - 【請求項４７】 創傷被覆材を作製するための方法であって、該方法は、以
下の工程： （ａ）組換え手段によりＩ型コラーゲンモノマーを製造する工程；および （ｂ）該Ｉ型コラーゲンモノマーを重合化する工程、 を包含する、方法。 - 【請求項４８】 前記重合化が架橋により達成される、請求項４７に記載の
方法。 - 【請求項４９】 重合化した精製ＩＩＩ型コラーゲンおよび重合化した精製
Ｉ型コラーゲンを含む創傷被覆材組成物。 - 【請求項５０】 前記組成物が生物学的に適合性である、請求項４９に記載
の組成物。 - 【請求項５１】 純粋な組換えＩ型コラーゲンに対する純粋な組換えＩＩＩ
型コラーゲンの比が、約７０％以下のＩ型コラーゲンに対する約３０％以上のＩ
ＩＩ型コラーゲンである、請求項４９に記載の組成物。 - 【請求項５２】 前記コラーゲンがゼラチンである、請求項４９に記載の組
成物。 - 【請求項５３】 請求項４９に記載の組成物であって、前記組成物が、さら
にフィブリン、フィブリノーゲン、トロンビン、第ＸＩＩＩ因子または結合組織
増殖因子の群から選択される１つ以上の因子を含む、組成物。
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