EA026667B1 - Фармацевтическая композиция для лечения вируса гепатита с - Google Patents

Фармацевтическая композиция для лечения вируса гепатита с Download PDF

Info

Publication number
EA026667B1
EA026667B1 EA201490588A EA201490588A EA026667B1 EA 026667 B1 EA026667 B1 EA 026667B1 EA 201490588 A EA201490588 A EA 201490588A EA 201490588 A EA201490588 A EA 201490588A EA 026667 B1 EA026667 B1 EA 026667B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
compound
compounds
hcv
mmol
replicon
Prior art date
Application number
EA201490588A
Other languages
English (en)
Other versions
EA201490588A1 (ru
EA026667B9 (ru
Inventor
Эдриан С. Рэй
Уильям Дж. Уоткинс
Джон О. Линк
Дэвид В. Олдач
Уильям Е. Делэйни IV
Original Assignee
Джилид Фармассет Ллс
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=46970425&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=EA026667(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Джилид Фармассет Ллс filed Critical Джилид Фармассет Ллс
Publication of EA201490588A1 publication Critical patent/EA201490588A1/ru
Publication of EA026667B1 publication Critical patent/EA026667B1/ru
Publication of EA026667B9 publication Critical patent/EA026667B9/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
    • A61K31/7052—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides
    • A61K31/706—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom
    • A61K31/7064—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines
    • A61K31/7068—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines having oxo groups directly attached to the pyrimidine ring, e.g. cytidine, cytidylic acid
    • A61K31/7072—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines having oxo groups directly attached to the pyrimidine ring, e.g. cytidine, cytidylic acid having two oxo groups directly attached to the pyrimidine ring, e.g. uridine, uridylic acid, thymidine, zidovudine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/38—Heterocyclic compounds having sulfur as a ring hetero atom
    • A61K31/381—Heterocyclic compounds having sulfur as a ring hetero atom having five-membered rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A61K31/4164—1,3-Diazoles
    • A61K31/4184—1,3-Diazoles condensed with carbocyclic rings, e.g. benzimidazoles
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A61K31/4196—1,2,4-Triazoles
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/513—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim having oxo groups directly attached to the heterocyclic ring, e.g. cytosine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
    • A61K31/7052—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
    • A61K31/7052—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides
    • A61K31/7056—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing five-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/06—Tripeptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A61K38/21—Interferons [IFN]
    • A61K38/212—IFN-alpha
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0053—Mouth and digestive tract, i.e. intraoral and peroral administration
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/20—Pills, tablets, discs, rods
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A61P31/22—Antivirals for DNA viruses for herpes viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2300/00—Mixtures or combinations of active ingredients, wherein at least one active ingredient is fully defined in groups A61K31/00 - A61K41/00

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Physiology (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Treating Waste Gases (AREA)
  • Exhaust Gas After Treatment (AREA)

Abstract

Изобретение относится к фармацевтической композиции для лечения вирусной инфекции гепатита С, содержащей 1) соединение 3, имеющее структуруили его фармацевтически приемлемую соль, и 2) соединение 6, имеющее структуруили его фармацевтически приемлемую соль.

Description

Настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции для лечения вирусной инфекции гепатита С.
Уровень техники
Гепатит - заболевание, возникающее во всем мире. Гепатит, как правило, имеет вирусный характер, хотя если рассматривать состояние хронического воспаления печени, существуют и другие, неинфекционные, известные причины. Вирусный гепатит, безусловно, является наиболее распространенной формой гепатита. По оценкам Американского Центра по контролю и профилактике заболеваний не менее 1,8% населения США имеет серологические признаки инфекции гепатита С, в большинстве случаев связанные с хронической активной инфекцией. ВГС является вирусом с положительным РНК-геномом, принадлежит к семейству ИауМййае и имеет тесную связь с пестивирусами, которые включают вирус холеры свиней и вирус бычьей вирусной диареи.
Геном ВГС является одноцепочечной положительно-полярной РНК из примерно 9600 п.о., кодирующей полипротеин из 3009-3030 аминокислот, которая расщепляется котрансляционно и посттрянсляционно под действием клеточной и двух вирусных протеиназ на зрелые вирусные белки (ядро, Е1, Е2, р7, N82, N83, Ν84Α, Ν84Β, Ν85Α, Ν85Β). Считается, что структурные белки, Е1 и Е2, заключены в вирусную липидную оболочку и образуют стабильные гетеродимеры. Полагают, что структурные белки ядра взаимодействуют с геномом вирусной РНК с образованием нуклеокапсида. Неструктурные белки, обозначаемые с Ν82 по Ν85, включают белки с ферментативными функциями, вовлеченными в размножение вируса и обработку белка, включая полимеразу, протеазу и геликазу. ВГС размножается за счет производства комплементарной отрицательно-полярной матричной РНК.
ВГС - генетически разнообразный вирус. У одного и того же инфицированного пациента можно определить несколько вариантов вируса, так называемого вирусного роя, или вирусных квазивидов. В глобальной человеческой популяции ВГС также генетически разнообразен, при этом определены по меньшей мере 6 важных генотипов (генотипы 1-6), а также многочисленные подтипы (т. е. генотип ВГС 1а и 1Ь). Генотипы ВГС определены при помощи геномного филогенетического анализа и диагностированы (у конкретного пациента) по диагностическим тестам последовательности ВГС РНК.
Основным путем заражения ВГС является заражение через кровь. Масштаб проблемы здравоохранения, которую составляет инфекция ВГС, иллюстрируется распространенностью этой инфекции среди групп повышенного риска. Например, по данным некоторых опросов в западных странах от 60 до 90% больных гемофилией и более чем 80% наркозависимых, принимающих наркотик внутривенно, имели хроническую ВГС инфекцию. Для наркозависимых, принимающих наркотик внутривенно, распространенность колеблется от 28 до 80% в зависимости от изучаемой популяции. Доля новых заражений, связанных с кровью или продуктами переливания крови, была значительно снижена благодаря фармацевтическим достижениям и широкому применению чувствительных серологических анализов и анализов, обнаруживающих РНК, для проверки доноров крови, однако уже сложилась большая группа стареющих хронически инфицированных людей.
Известным лекарством против инфекции ВГС является пегилированный интерферон-альфа (РЕСΙΡΝ а1а или РЕС-ΙΡΝ а1Ь), который согласно современным руководствам по лечению вводят еженедельно посредством подкожной инъекции на протяжении от 24 до 48 недель в зависимости от вирусного генотипа ВГС, который подвергают лечению. Несмотря на то что можно ожидать подавления ВГС виремии у более чем 50% пациентов с инфекцией ВГС генотипа 1 по окончании 48 недельной терапии, у значительной доли этих пациентов случается вирусный рецидив. Соответственно при лечении одним лишь РЕС-ΙΡΝ устойчивый вирусологический ответ (УВО, определяется при отрицательных результатах РНК ВГС по прошествии 24 недель после прекращения лечения и рассматривается как эквивалент излечения) достигается только в 30-40% случаев инфекции ВГС генотипа 1. Кроме того, лечение РЕСΙΡΝ+рибавирин плохо переносится, при этом наблюдаемые побочные эффекты включают гриппоподобные симптомы, тромбоцитопению, анемию и серьезные психиатрические побочные эффекты. Хотя на фоне существующих стандартов терапии такое лечение не является оптимальным решением, многие пациенты лишены возможности когда-либо начать терапию из-за сопутствующих заболеваний, распространенных у населения, инфицированного ВГС, в том числе психических расстройств, заболеваний печени на поздних стадиях и злоупотребление алкоголем или наркотиками.
Рибавирин представляет собой противовирусный препарат, являющийся нуклеозидным аналогом. Рибавирин обычно принимают перорально (через рот) два раза в сутки. Точный механизм действия рибавирина неизвестен. Однако считается, что когда рибавирин вводится в клетку, он фосфорилируется; затем он действует как ингибитор инозин-5'-монофосфат-дегидрогеназы (1МРЭН). Ингибиторы 1МРЭН. такие как рибавирин, уменьшают внутриклеточный синтез и хранение гуанина, нуклеотидного строи- 1 026667 тельного блока, необходимого для производства ДНК и РНК, таким образом препятствуя репликации вируса. Ингибиторы ΙΜΡΌΗ также препятствуют воспроизводству быстро размножающихся клеток и клеток с высокой скоростью оборота белка. Лечение рибавирином в качестве монотерапии оказывает незначительное влияние на уровни РНК ВГС, но связано со снижением аланинтрансферазы (АЛТ) в сыворотке крови. Это наблюдение позволяет предположить, что рибавирин может действовать не в качестве противовирусного средства, а скорее в качестве модулятора функции иммунной системы. Рибавирин одобрен только для применения для лечения инфекции ВГС в сочетании с ΙΡΝ.
Лечение ΡΕΟ-ΙΡΝ в комбинации с рибавирином повышает величину УВО по сравнению с той, которая наблюдается в случае, когда лечение производится только ΡΕΟ-ΙΡΝ, в значительной степени за счет снижения частоты вирусных рецидивов по окончании терапии. Согласно клиническим испытаниям величины УВО для пациентов с инфекцией ВГС генотипа 1 в случае, когда лечение производилось ΡΕΟΙΡΝ в комбинации с рибавирином, варьировались в диапазоне 40-55%. В настоящее время терапия ΡΕΟΙΡΝ в комбинации с рибавирином считается стандартным лечением хронической инфекции ВГС. Однако ожидается, что стандарт медицинской помощи быстро изменится в ближайшем будущем, когда будут одобрены противовирусные средства прямого действия, которые будут на начальном этапе использоваться в сочетании с ΡΕΟ-ΙΡΝ и рибавирином.
К сожалению, различные генотипы ВГС по-разному реагируют на терапию ΡΕΟ-ΙΡΝ в комбинации с рибавирином; например ВГС генотипа 1 более устойчив к терапии, чем типы 2 и 3. Кроме того, многие современные методы лечения ВГС вызывают нежелательные побочные эффекты. Таким образом, в настоящее время существует необходимость в новых видах противовирусной терапии. В частности, существует потребность в новых видах противовирусной терапии, которые производят меньше нежелательных побочных эффектов, которые более эффективны против ряда генотипов ВГС или обладают менее сложными схемами дозирования, то есть которые требуют введения агентов меньшее количество раз в течение дня.
Краткое описание изобретения
Настоящее изобретение обеспечивает композиции, пригодные для лечения вирусных инфекций (например, ВГС). Некоторые композиции согласно изобретению вызывают меньшее количество нежелательных побочных эффектов, являются более эффективными против ряда генотипов ВГС, уменьшают вероятность вирусной отдачи благодаря резистентной селективности и имеют укороченные и менее сложные расписания дозирования, чем у препаратов, доступных в настоящее время.
Соответственно в одном варианте реализации изобретение обеспечивает композицию, включающую два или более соединений, выбранных из соединения 3, соединения 6 и их фармацевтически приемлемых солей.
Композиции настоящего изобретения могут обеспечивать синергию и синергетический эффект, т.е. эффект, достигаемый, когда активные ингредиенты (включая два или более комбинационных соединения) используются совместно, больше, чем сумма эффектов, достигаемых при применении этих соединения по отдельности.
Композиции по настоящему изобретению являются полезными, поскольку они обеспечивают лечение для широкого спектра генотипов ВГС и потому, что они вызывают меньше побочных эффектов или менее серьезные побочные эффекты, чем существующие методы лечения ВГС (например, лечение, которое включает введение интерферона). Кроме того, некоторые комбинации соединений могут обеспечить устойчивый вирусологический ответ (УВО) значительно выше, чем при применении текущих методов лечения (например, ВГС терапии). Например, некоторые комбинации соединений могут обеспечивать УВО, который составляет по меньшей мере примерно 70% или по меньшей мере примерно 80%.
Подробное описание изобретения
Определения.
Если не указано иное, подразумевается, что следующие термины и фразы в данном документе имеют следующие значения. Тот факт, что конкретный термин или фраза не определены специально, не следует рассматривать как неопределенность или отсутствие четкости; это свидетельствует лишь о том, что термины использованы в данном документе в их обычном значении. Когда в данном документе использованы торговые наименования, заявители подразумевают, что независимо включены также торговое название продукта и активный фармацевтический ингредиент(ы) торговой марки продукта.
В данном документе термин комбинационные соединения означает соединение 3, соединение 6.
В данном документе соединение 3 представляет собой
- 2 026667
В данном документе соединение 6 представляет собой
Относительно рибавирина дается ссылка на ЕР 0093401 В1, который включен в настоящий документ посредством ссылки относительно процесса производства, а также номенклатуры, касающейся рибавирина. В данном документе рибавирин означает
Рибавирин также упоминается как 1-в-О-рибофуранозил-1Н-1,2,4-триазол-3-карбоксамид, 1-β-Όрибофуранозил-1,2,4-триазол-3 -карбоксамид; 1 -β-Ό-рибофуранозил-1,2,4-триазол-3 -карбоксамид; КОПЕГУС (ΟΘΡΕΟυδ, РосНе); ΌΚΟ-0028; Η8ΌΒ 6513; ΙΟΝ 1229; МегаРибавирин (например, в составах 100 мг рибавирин/мл); N80 163039; РАВАНЕКС (ΚΑνΑΝΕΧ, ВюРайпеге); РЕБЕТОЛ, (РЕВЕТОЬ, 8сНегшд-Р1оидН; Аекса; Вауег 8сНегш§ РНагта; Еккех; РП/ег; ТгаДшд РНагта; 2иеШд РНагта); Рибамид; РИБАМИДИЛ (Биофарма, Россия); РИБАСФИР (К1ВА8РНЕКЕ, ТНгее РАегв РНагтасеиНсаЛ); Рибаварин; Рибавирина; Трибавирин; ВИЛОНА (νΐΕΟΝΑ, Уа1еап1 РНагтасеиОсаН; ΙΟΝ РНагтасеиНсаЛ); ВИРАМИД (νίΚΑΜΙΌ, ΙΟΝ РНагтасеиНсак; А1£а Ааввегтапп); ВИРА3ОЛ (νίΚΑΖΟΕΕ, Уа1еап1 РНагтасеиНсаЛ); и ВИРИЗАДОЛ (νίΚΙΖΑΟΟΕΕ, иа-Гагта, 8ао ВегпагДо До Сатро, 8ао Раи1о, Вга/ίΐ). Также в данном документе рибавирин включает аналоги рибавирин, включая тарибавирин (ВИРАМИДИН, νΙΚΑΜΙΌΙΝΕ, ΙΟΝ 3142).
Термин интерферон включает 1) интерфероны, например пегилированный ΓΙΡΝ-альфа 2Ь (РБСΙπΙιόπ. Мегск & Со., 1пс.), пегилированный ΓΙΡΝ-альфа 2а (ΡΕΟΑ8Υ8, НоГГтапп-Ба РосНе 1пс.), ΓΙΡΝальфа 2Ь (ΙΝΤΚΟΝ® Α, Мегск & Со., 1пс.), τΙΡΝ-альфа 2а (РоГегоп®-Л. НоГГтапп-Ьа РосНе 1пс.), интерферон альфа (ΜυΕΤΙΡΕΚΟΝ® УиапаПуе ЛΒ СогрогаДоп, ОРС-18, Л1ГаГе^опе. Л1ίапаΐ^νе, 8иЬа1ш), интерферон альфакон-1 (Уа1еап1). интерферон альфа-п1 (АеДГегоп™, О1ахо Ае11соте), интерферон альфа-п3 (Л^ΡΕРΟN®-Ηет^8рНе^x ВюрНагта, 1пс.), интерферон-бета-1а (ΑνΟΝΕΧ® Вюдеп 1Дес. ΌΕ-8234 ЭайсЫ РНагтасеиДса1 Со. ЫД), интерферон-омега (омега ΌυΚΟ8®, ΑΕι СогрогаДоп, 1п1агс1а ТНегареиДсв, 1пс.; ВютеД 510, 1п1агс1а ТНегареиДсв, 1пс.), альбинтерферон альфа-2Ь (Л^ΒυΡΕРΟN®, Нитап Оепоте 8аепсев, ΙΝΟ), ΙΡΝ альфа-2Ь ХЬ, ВЬХ-883 (^ΟСΤΕРΟN®, Вю1ех ТНегареиДсв, ΙΝΟ), ΌΑ-3021, гликозилированный интерферон альфа-2Ь (Ανΐ-005), ΡΕΟ-INΡΕРΟΕN®, Лт§еп, 1пс., Реду1а1еД интерферон лямбда-1 Дуре III) (ΡΕΟу1аΐеД 1Ь-29) и ΒΕ^ΕРΟΡΟN®, №иД1и8 Вю1есН.
Термин комбинированная терапия означает композиции, или способы, или применение и тому подобное, включающие два или более комбинационных соединения. Комбинированная терапия также может включать другие активные ингредиенты в дополнение к двум или более комбинационным соединениям, включая, но не ограничиваясь ими: рибавирин, интерферон, ингибитор альфа-глюкозидазы 1, гепатопротектор, агонист толл-подобного рецептора (ТЬР)-7, ингибитор циклофилина, ингибитор попадания вируса ВГС в клетку, ингибитор созревания ВГС и ингибитор IРΕ8-элемента ВГС (участок внутренней посадки рибосомы).
Термин активный ингредиент означает компонент комбинированной терапии, который оказывает или может оказывать фармацевтический эффект, включая любое из комбинационных соединений, рибавирин, интерферон, ингибитор альфа-глюкозидазы 1, гепатопротектор, агонист ТЬР-7, ингибитор цик- 3 026667 лофилина, ингибитор попадания вируса ВГС в клетку, ингибитор созревания ВГС и ингибитор 1КЕ8элемента ВГС (участок внутренней посадки рибосомы).
Термин лечение и его грамматические эквиваленты при использовании в контексте лечения болезни означает замедление или остановку прогрессирования болезни или облегчение по меньшей мере одного симптома болезни, более предпочтительно облегчения более чем одного симптома болезни. Например, пациент с ВГС может испытывать облегчение одного или всех из следующих симптомов, которые могут ассоциироваться с инфекцией ВГС: увеличение уровня аланинаминотрансферазы (АЛТ), высокая температура, головная боль, мышечные боли, желтуха, усталость, потеря аппетита, тошнота, рвота и диарея. Лечение вирусной инфекции гепатита С может включать сокращение вирусной нагрузки ВГС у человека, инфицированного ВГС.
Некоторые соединения, описанные в настоящем документе, содержат один или более хиральных центров или каким-либо другим образом могут существовать в качестве нескольких стереоизомеров. Объем настоящего изобретения включает смеси стереоизомеров, в также очищенные энантиомеры или энантиомерно/диастереомерно обогащенные смеси. Индивидуальные изомеры соединений, представленных формулами, показанными в настоящем документе, а также любые полностью или частично уравновешенные их смеси также включены в объем настоящего изобретения. Настоящее изобретение также включает индивидуальные изомеры соединений, представленных формулами, показанными в настоящем документе, в качестве смесей с их изомерами, в которых один или более хиральный центр инвертирован. Стереохимические определения и понятия, используемые в данном документе, как правило, следуют из 8.Р. Рагкег, Еб., МсСта^-НШ Эюбопагу о£ Сйет1са1 Тегпъ (1984) МсСга\\-НП1 Воок Сотрапу, №\ν Уогк; аиб ЕНе1 Е. и \Уйеп 8., 81егеосйет181гу о£ Отдашс Сотроипбз (1994) 1ойп \УПеу & 8оп§, 1пс., №\ν Уогк, полностью включенными в настоящий документ посредством ссылки.
Многие органические соединения существуют в оптически активных формах, т. е. обладают способностью вращать плоскость плоскополяризованного света. При описании оптически активного соединения префиксы Ό и Ь или К и 8 используются для обозначения абсолютной конфигурации молекулы относительно ее хирального центра(ов). Префиксы б и I или (+) и (-) используются для обозначения знака вращения плоскополяризованного света на соединении, где (-) или I означает, что соединение является левовращающим. Соединение с префиксом (+) или б является правовращающим.
Конкретный стереоизомер может также упоминаться как энантиомер, и смесь таких изомеров часто называют энантиомерной смесью. Смесь энантиомеров 50:50 называют рацемической смесью или рацематом, что может образоваться, когда в химической реакции или процессе не было никакой стереоселекции или стереоспецифичности. Термины рацемическая смесь и рацемат относятся к эквимолярной смеси двух энантиомерных видов, лишенных оптической активности.
Комбинации.
Настоящее изобретение включает комбинации соединения 3 и соединения 6.
Композиции.
Один аспект настоящего изобретения включает композицию, например фармацевтическую композицию, при этом композиция включает соединение 3 и дополнительно включает второе соединение 6.
Соли.
Комбинационные соединения и другие активные ингредиенты могут быть в форме солей. Обычно, но не в абсолютно всех случаях, соли комбинационных соединений и других активных ингредиентов представляют собой фармацевтически приемлемые соли. Соли, подпадающие под термин фармацевтически приемлемые соли, относятся к нетоксичным солям комбинационных соединений и/или других активных ингредиентов. Примеры подходящих фармацевтически приемлемых солей включают соли присоединения неорганических кислот, такие как хлорид, бромид, сульфат, фосфат и нитрат; соли присоединения органических кислот, такие как ацетат, галактарат, пропионат, сукцинат, лактат, гликолят, малат, тартрат, цитрат, малеат, фумарат, метансульфонат, п-толуолсульфонат и аскорбат; соли с кислой аминокислотой, такие как аспартат и глутамат; соли щелочных металлов, такие как соль натрия и соль калия; соли щелочно-земельных металлов, такие как соль магния и соль кальция; соль аммония; органические основные соли, такие как соль триметиламина, соль триэтиламина, соль пиридина, соль пиколина, соль дициклогексиламина и соль Ν,Ν'-дибензилэтилендиамина; и соли с основной аминокислотой, такой как соль лизина и соль аргинина. В некоторых случаях соли могут быть гидратами или сольватами этанола.
Фармацевтические составы.
Комбинационные соединения и/или другие активные ингредиенты могут быть составлены в рецептуру с обычными носителями или эксципиентами, которые могут быть выбраны в соответствии с обычной практикой. Таблетки обычно содержат эксципиенты, глиданты, наполнители, связующие вещества и тому подобное. Водные препараты могут быть приготовлены в стерильной форме, и в случаях, когда они предназначены для какой-либо иной доставки, кроме орального введения, они обычно будут изотоническими. Все составы возможно будут содержать эксципиенты, такие как те, которые предусмотрены в НапбЬоок о£ Рйагтасеибса1 Ехс1р1еп18 (1986), который включен в настоящий документ посредством ссылки в полном объеме. Эксципиенты включают аскорбиновую кислоту и другие антиоксиданты, хела- 4 026667 тирующие агенты, такие как ЭДТК, углеводороды, такие как декстрин, гидроксиалкилцеллюлозу, гидроксиалкилметилцеллюлозу, стеариновую кислоту и тому подобное.
рН фармацевтических составов составляет от примерно 3 до примерно 11, но обычно составляет примерно от 7 до 10.
Хотя активный ингредиент и может быть введен отдельно, но может быть предпочтительным представить один или более активных ингредиентов в виде фармацевтических составов. Составы согласно настоящему по изобретению как для применения для ветеринарии, так и для человека содержат по меньшей мере один активный ингредиент вместе с одним или более приемлемыми носителями и возможно другими терапевтическими ингредиентами. Носитель(и) должен быть приемлемым в смысле совместимости с другими ингредиентами состава и физиологически безопасны для реципиента.
Составы включают составы, пригодные для способов введения, изложенных ниже. Составы могут быть удобно представлены в единичной лекарственной форме и могут быть получены любым из способов, хорошо известных в области фармации. Методы и составы обычно можно найти в РепипдЮЮ РЬагтасеийса1 Бсюпссх (Маек РиЬНкПид Со, ЕаЧоп, РА), который включен в настоящий документ посредством ссылки в полном объеме. Такие способы включают стадию приведения активного ингредиента в сочетание с носителем, который состоит из одного или более вспомогательных ингредиентов. Как правило, составы могут быть получены путем равномерного и однородного смешивания одного или более активных ингредиентов с жидкими носителями или тонко измельченными твердыми носителями или обоими и затем, если необходимо, формования продукта.
Составы по настоящему изобретению, подходящие для перорального введения, могут быть представлены в виде дискретных единиц, таких как капсулы, сашеты или таблетки, каждая из которых содержит заранее определенное количество активного ингредиента; в виде порошка или гранул; в виде раствора или суспензии в водной или неводной жидкости или в виде жидкой эмульсии масло-в-воде или жидкой эмульсии вода-в-масле. Активный ингредиент может также быть введен в виде болюса, лекарственной кашки или пасты.
Таблетка может быть изготовлена прессованием или формованием, необязательно с одним или более вспомогательными ингредиентами. Прессованные таблетки могут быть получены прессованием в соответствующем аппарате активного ингредиента в свободно текучей форме, такой как порошок или гранулы, необязательно смешанного со связующим веществом, смазывающим веществом, инертным разбавителем, консервантом, поверхностно-активным или диспергирующим агентом. Формованные таблетки могут быть получены формованием в соответствующем аппарате смеси порошкообразного активного ингредиента, увлажненного инертным жидким разбавителем. Таблетки могут необязательно быть покрыты оболочкой или на них может быть нанесена насечка и, необязательно, могут быть составлены в рецептуру таким образом, чтобы обеспечить медленное или контролируемое высвобождение активного ингредиента.
Для введения в глаза или в другие внешние ткани, например рот и кожу, составы могут предпочтительно применяться в качестве мази или крема, содержащих активный ингредиент(ы) в количестве, например, от 0,075 до 20% вес./вес. (включая активный ингредиент(ы) в диапазоне между 0,1 и 20% с шагом в 0,1% вес./вес., например 0,6, 0,7% вес./вес. и т.д.), предпочтительно от 0,2 до 15% вес./вес. и предпочтительнее всего от 0,5 до 10% вес./вес. При приготовлении в виде мази активный ингредиент может быть использован либо с парафиновой либо со смешивающейся с водой мазевой основой. Альтернативно, активный ингредиент может быть составлен в рецептуру в виде крема с кремовой основой масло-вводе.
При необходимости водная фаза кремовой основы может включать, например, по крайней мере 30% вес./вес. многоатомного спирта, т.е. спирта, имеющего две или более гидроксильные группы, такого как пропиленгликоль, бутан 1,3-диол, маннитол, сорбитол, глицерол и полиэтиленгликоль (ПЭГ 400 в том числе) и их смеси. Составы для местного применения могут при необходимости включать соединение, которое усиливает проникновение или поглощение активного ингредиента через кожу или другие пораженные области. Примеры таких усилителей проникновения через кожу включают диметилсульфоксид и родственные аналоги.
Масляная фаза эмульсий комбинационных соединений и/или других активных ингредиентов может быть составлена в рецептуру из известных ингредиентов известным способом. Хотя фаза может содержать только эмульгатор (иначе известный как эмульгент), фаза желательно содержит смесь по меньшей мере одного эмульгатора с жиром или маслом или как с жиром, так и с маслом. Предпочтительно гидрофильный эмульгатор включают вместе с липофильным эмульгатором, который действует как стабилизатор. Предпочтительно также включать как масло, так и жир. Вместе эмульгатор(ы) с или без стабилизатора(ов) образуют так называемый эмульгирующий воск, а воск вместе с маслом и жиром образуют так называемую эмульгирирующую основу мази, которая образует масляную дисперсную фазу состава в виде крема.
Эмульгенты и стабилизаторы эмульсии, пригодные для применения в составах согласно настоящему изобретению, включают Т\\сеп® 60 (1С1 Атепсап 1пс), §раи 80, цетостеариловый спирт, бензиловый спирт, миристиловый спирт, глицерилмоностеарат и лаурилсульфат натрия.
- 5 026667
Выбор подходящих масел или жиров для композиции обусловлен желательностью косметических свойств. Крем должен быть предпочтительно нежирным, не пачкающим и смывающимся продуктом с подходящей консистенцией, чтобы избежать утечки из тюбиков или других контейнеров. Могут быть применены прямые или разветвленные цепи, моно- или двухосновные алкиловые сложные эфиры, такие как диизоадипат, изоцетил стеарат, пропиленгликоль диэфира жирных кислот кокосового масла, изопропилмиристат, децилолеат, изопропилпальмитат, бутилстеарат, 2-этилгексилпальмитат или смесь жирных спиртовых эфиров с разветвленными цепями, известная как Стобато1 САР, при этом последние три являются предпочтительными эфирами. Они могут быть применены по отдельности или в комбинации в зависимости от требуемых свойств. Альтернативно, могут быть применены липиды с высокой температурой плавления, такие как белый мягкий парафин и/или жидкий парафин или другие минеральные масла.
Фармацевтические составы согласно настоящему изобретению содержат один или более активный ингредиент вместе с одним или более фармацевтически приемлемыми носителями или эксципиентами и, возможно, другими терапевтическими агентами. Фармацевтические составы, содержащие активные ингредиенты, могут быть в любой форме, пригодной для предполагаемого способа введения. При применении для перорального применения могут быть получены, например, таблетки, формованные пастилки, пастилки для рассасывания, водные или масляные суспензии, диспергируемые порошки или гранулы. эмульсии, твердые или мягкие капсулы, сиропы или эликсиры. Композиции, предназначенные для перорального применения, могут быть получены согласно любому способу, известному в данной области техники для изготовления фармацевтической композиции и такие композиции могут содержать один или более агентов, включая подсластители, ароматизаторы, красители и консерванты, с тем чтобы обеспечить состав, приятный на вкус. Являются приемлемыми таблетки, содержащие активный ингредиент в смеси с нетоксичным фармацевтически приемлемым наполнителем, который пригоден для изготовления таблеток. Этими наполнителями могут быть, например, инертные разбавители, такие как карбонат кальция или натрия, лактоза, моногидрат лактозы, кроскармеллоза натрия, повидон, фосфат кальция или натрия; гранулирующие и дезинтегрирующие агенты, такие как кукурузный крахмал или альгиновая кислота; связующие агенты, такие как целлюлоза, микрокристаллическая целлюлоза, крахмал, желатин или аравийская камедь; и смазывающие агенты, такие как стеарат магния, стеариновая кислота или тальк. Таблетки могут быть непокрытыми или могут быть покрыты известными способами, включая микроинкапсулирование, чтобы задержать дезинтеграцию и адсорбцию в желудочно-кишечном тракте и тем самым обеспечить пролонгированное действие в течение более длительного периода. Например, может быть использован материал, обеспечивающий задержку по времени, такой как глицерилмоностеарат или глицерилдистеарат, один или с воском.
Композиции для перорального применения могут быть также представлены в виде твердых желатиновых капсул, в которых активный ингредиент(ы) смешивают с инертным твердым разбавителем, например с фосфатом кальция или каолином, или в виде мягких желатиновых капсул, в которых активный ингредиент смешан с водой или масляной средой, например арахисовым маслом, жидким парафином или оливковым маслом.
Водные суспензии согласно настоящему изобретению содержат активные вещества в смеси с эксципиентами, пригодными для изготовления водных суспензий. Такие эксципиенты включают суспендирующий агент, такой как карбоксиметилцеллюлоза натрия, метилцеллюлоза, гидроксипропилметилцеллюлоза, альгинат натрия, поливинилпирролидон, трагакантовая камедь и камедь акации, и диспергирующие или смачивающие агенты, такие как природные фосфатиды (например, лецитин), продукт конденсации алкиленоксида с жирной кислотой (например, стеарат полиоксиэтилена), продукт конденсации этиленоксида с длинноцепочечным алифатическим спиртом (например, гептадекаэтиленоксицетанол), продукт конденсации этиленоксида с частичным сложным эфиром, полученным из жирной кислоты и ангидрида гексита (например, моноолеат полиоксиэтиленсорбитана). Водная суспензия может также содержать один или более консервант, таких как этил или н-пропил-п-гидроксибензоат, один или более красителей, один или более ароматизирующих агентов и один или более подслащивающих агентов, таких как сахароза или сахарин.
Масляные суспензии могут быть приготовлены суспендированием активного ингредиента в растительном масле, например арахисовом масле, оливковом масле, кунжутном масле или кокосовом масле, или в минеральном масле, таком как жидкий парафин. Пероральные суспензии могут содержать загуститель, например пчелиный воск, твердый парафин или цетиловый спирт. Могут быть добавлены подсластители, такие как изложено в данном документе, и ароматизаторы, чтобы обеспечить вкус перорального препарата. Для сохранения этих составов может быть добавлен антиоксидант, такой как аскорбиновая кислота.
Диспергируемые порошки и гранулы согласно изобретению, пригодные для получения водной суспензии при добавлении воды, обеспечивают активный ингредиент в смеси с диспергирующим или смачивающим агентом, суспендирующим агентом и одним или более консервантами. Подходящие диспергирующие или смачивающие агенты и суспендирующие агенты проиллюстрированы теми, что описаны выше. Также могут присутствовать дополнительные наполнители, например подслащивающие, аромати- 6 026667 зирующие и окрашивающие агенты.
Фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению могут также быть в виде эмульсий масло-в-воде. Масляная фаза может представлять собой растительное масло, например оливковое масло или арахисовое масло, минеральное масло, например жидкий парафин, или их смесь. Подходящие эмульгаторы включают природные камеди, такие как аравийская камедь и трагакантовая камедь, природные фосфатиды, такие как соевый лецитин, сложные эфиры или неполные эфиры, полученные из жирных кислот и ангидридов гексита, такие как моноолеат сорбитана, и продукты конденсации этих неполных сложных эфиров с этиленоксидом, например моноолеат полиоксиэтиленсорбитана. Эмульсия может также содержать подсластители и ароматизаторы. Сиропы и эликсиры могут быть приготовлены с использованием подслащивающих агентов, таких как глицерин, сорбит или сахароза. Такие составы могут также содержать средство, уменьшающее раздражение, консервант, ароматизатор или краситель.
Фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению могут быть в форме стерильного инъецируемого препарата, например стерильной инъецируемой водной или масляной суспензии. Эта суспензия может быть составлена в рецептуру в соответствии с известными способами с использованием подходящих диспергирующих или смачивающих агентов и суспендирующих агентов, которые указаны в настоящем документе. Стерильная инъекционная форма может также быть стерильным инъекционным раствором или суспензией в нетоксичном парентерально приемлемом разбавителе или растворителе, таком как раствор в 1,3-бутан-диоле или может быть приготовлена в виде лиофилизированного порошка. Среди приемлемых носителей и растворителей, которые можно использовать, можно указать воду, раствор Рингера и изотонический раствор хлорида натрия. Кроме того, стерильные нелетучие масла традиционно могут быть использованы в качестве растворителя или суспендирующей среды. С этой целью может быть использовано любое мягкое нелетучее масло, в том числе синтетические моно- или диглицериды. Кроме того, в приготовлении инъецируемых препаратов также могут быть использованы жирные кислоты, такие как олеиновая кислота.
Количество активного ингредиента, которое можно комбинировать с материалом носителя для получения единичной лекарственной формы, будет варьироваться в зависимости от пациента и конкретного способа введения. Например, препарат замедленного высвобождения, предназначенный для перорального введения человеку, может содержать приблизительно от 1 до 1000 мг активного вещества, смешанного с соответствующим и удобным количеством материала носителя, которое может варьировать от примерно 5 до примерно 95% от общей композиции (вес./вес.). Фармацевтическая композиция может быть приготовлена так, чтобы предоставить легко измеримые количества для введения. Например, водный раствор, предназначенный для внутривенного вливания, может содержать от примерно 3 до 500 мкг активного ингредиента на миллилитр раствора с тем, чтобы могло происходить вливание в подходящем объеме со скоростью примерно 30 мл/ч.
Композиции, пригодные для введения через глаза, включают глазные капли, в которых активный ингредиент растворен или суспендирован в подходящем носителе, в частности водном растворителе для активного ингредиента. Активный ингредиент предпочтительно присутствует в таких препаратах в концентрации от 0,5 до 20%, предпочтительно 0,5 до 10%, особенно примерно 1,5% вес./вес.
Композиции, пригодные для местного введения через рот, включают пастилки для рассасывания, содержащие активный ингредиент в ароматизированной основе, обычно в сахарозе и акации или трагаканте; пастилки, содержащие активный ингредиент в инертной основе, такой как желатин и глицерин, или в сахарозе и гуммиарабике; и жидкости для полоскания рта, содержащие активный ингредиент в соответствующем жидком носителе.
Составы для ректального введения могут быть представлены в виде суппозиториев с подходящим основанием, включающим, например, масло какао или салицилат.
Составы, пригодные для внутрилегочного или назального введения, имеют размер частиц, например, в диапазоне от 0,1 до 500 мкм (включая размер частиц в диапазоне от 0,1 до 500 мкм с таким шагом, как 0,5, 1, 30, 35 мкм и т.д.), их вводят путем быстрой ингаляции через носовой ход или путем ингаляции через рот так, чтобы достичь альвеолярных мешочков. Подходящие составы включают водные или масляные растворы активного ингредиента. Составы, пригодные для введения в виде аэрозоля или в виде сухого порошка, могут быть получены в соответствии с обычными способами и могут быть доставлены с другими терапевтическими агентами, такими как соединения, которые по настоящее время используют при лечении или профилактики инфекций, как описано в данном документе.
Составы, пригодные для вагинального введения, могут быть представлены в виде вагинальных суппозиториев, тампонов, кремов, гелей, паст, пен или спреев, содержащих в дополнение к активному ингредиенту носители, известные в данной области техники как подходящие.
Составы, подходящие для парентерального введения, включают водные и неводные стерильные растворы для инъекций, которые могут содержать антиоксиданты, буферы, бактериостатические и растворенные вещества, которые делают препарат изотоническим с кровью предполагаемого реципиента; и водные и неводные стерильные суспензии, которые могут включать суспендирующие агенты и загустители. Составы могут быть представлены в однодозовых или многодозовых контейнерах, например герметичный ампулах и флаконах, и могут храниться в высушенном сублимацией (лиофилизированном)
- 7 026667 состоянии, когда требуется только добавление стерильного жидкого носителя, например воды для инъекций, непосредственно перед применением. Приготовленные для немедленного приема растворы и суспензии для инъекций могут быть приготовлены из стерильных порошков, гранул и таблеток ранее описанного типа. Предпочтительные единичная лекарственная форма могут быть те, которые содержат суточную дозу или ежедневную субдозу, как здесь описано выше, или ее соответствующую часть активного ингредиента.
Следует понимать, что в дополнение к ингредиентам, отдельно упомянутым выше, составы комбинационных соединений и/или других активных ингредиентов могут включать другие агенты, обычные в данной области техники с учетом типа рассматриваемой композиции, например составы для перорального введения могут включать вкусовые агенты.
Комбинационные соединения и другие активные ингредиенты также могут быть составлены в рецептуру таким образом, чтобы обеспечить контролируемое высвобождение активного ингредиента, что позволяет менее частое дозирование или улучшение фармакокинетического профиля или профиля токсичности активного ингредиента. Таким образом, изобретение также обеспечивает композиции, включающие два или более комбинационных соединения, составленные в рецептуру с устойчивым или контролируемым высвобождением.
Дозы.
Эффективная доза активного ингредиента зависит по крайней мере от природы подлежащего лечению состояния, от токсичности, от того, используется ли соединение профилактически (более низкие дозы) или против активной болезни или состояния, от способа доставки, от фармацевтической композиции, и может быть определена лечащим врачом с использованием обычных исследований эскалации дозы.
В качестве примера композиции согласно настоящему изобретению (например, таблетки) могут быть составлены в рецептуру так, чтобы обеспечивать эффективные дозы. Например, относительно соединения 3 или его фармацевтически приемлемой соли композиция может содержать от 10 до 1000 мг, или от 50 до 400 мг, или от 100 до 400 мг, или от 200 до 400 мг и может быть приспособлена для введения один или более раз в сутки человеку, нуждающемуся в этом, в сочетании с соединением 6. Относительно соединения 6 или его фармацевтически приемлемой соли композиция может содержать от 1 до 500 мг, или от 3 до 300 мг, или от 3 до 200 мг, или от 3 до 100 мг, или от 10 до 90 мг, или от 30 до 90 мг, и может быть приспособлена для введения один или более раз в сутки человеку, нуждающемуся в этом, в сочетании с соединением 3. Дозы для соединений 3, 6, которые вводят совместно, возможно, должны быть скорректированы с учетом потенциальных лекарственных взаимодействий. Два или более комбинационных соединения могут быть введены в сочетании с рибавирином в количестве от примерно 800, 1000 или 1200 мг в сутки в одной или более дозах (например, примерно 400, 500 или 600 мг дважды в сутки).
Применение комбинаций изобретения.
При воплощении на практике этого аспекта изобретения комбинационные соединения могут быть применены в дозах, указанных выше.
Один аспект настоящего изобретения включает соединение 3 для применения в способе лечения инфекции ВГС, при этом соединение 3 используется в комбинации со вторым соединением, соединением 6.
Один аспект настоящего изобретения относится к способу облегчения одного или более симптомов инфекции ВГС у человека, способу снижения вирусной нагрузки у человека с диагнозом ВГС, способу лечения ВГС у человека и к способу снижения появления квазивидов ВГС, обладающих резистентностью к совместно вводимым пероральным противовирусным агентам, каждый способ включает введение соединения 3 и дополнительно включает введение второго соединения, выбранного из соединения 6.
Пути и способы введения.
Два из соединения 3, соединения 6 и любые другие компоненты комбинированной терапии могут быть адаптированы к введению любым путем, соответствующим состоянию, которое подлежит лечению. Подходящие пути включают пероральный, ректальный, назальный, местный (в том числе трансбуккальный и подъязычный), вагинальный и парентеральный (включая подкожный, внутримышечный, внутривенный, внутрикожный, интратекальный и эпидуральный) и пр. Следует понимать, что предпочтительный путь может изменяться в зависимости, например, от состояния реципиента.
Синергический эффект может быть достигнут, когда активные ингредиенты: (1) совместно составлены в рецептуру (например, в виде стандартных лекарственных форм) и введены или доставлены одновременно в комбинированном составе; (2) доставлены чередованием или параллельно в виде отдельных составов или (3) посредством какого-либо другого режима. При доставке в чередующейся терапии синергический эффект может быть достигнут в случае, когда соединения введены или доставлены последовательно, например, в виде отдельных таблеток, пилюль или капсул, или различных инъекций в отдельных шприцах. В целом, во время чередующейся терапии эффективную дозу каждого активного ингредиента вводят последовательно, т.е. поочередно, в то время как в комбинированной терапии эффективные дозы двух или более активных ингредиентов вводят вместе.
- 8 026667
Совместное введение комбинационного соединения с одним или более комбинационными соединениями в целом относится к одновременному или последовательному введению одного или более комбинационных соединений, таким образом, что терапевтически эффективные количества двух или более комбинационных соединений присутствуют в организме пациента. В некоторых случаях комбинационные соединения (например, два, три или четыре комбинационных соединения) будут совместно составлены в рецептуру с тем, чтобы введение происходило в одно и то же время. В некоторых случаях одно из комбинационных соединений, совместно составленных в рецептуру, может быть введено совместно с одним или более дополнительными комбинационными соединениями.
Совместное введение также включает введение разовых доз комбинационных соединений до или после введения разовых доз одного или более других активных ингредиентов, например введение двух или более комбинационных соединений в течение нескольких секунд, минут или часов после введения одного или более других активных ингредиентов. Например, разовая доза комбинационного соединения может быть введена первой, а затем в течение нескольких секунд или минут производится введение разовой дозы второго комбинационного соединения, а затем в течение нескольких секунд или минут производится введение разовой дозы одного или более других активных ингредиентов. Альтернативно, разовая доза одного или более другого активного ингредиента может быть введена первой, а затем в течение нескольких секунд или минут производится введение разовой дозы комбинационного соединения, а затем в течение нескольких секунд или минут производится введение разовой дозы второго комбинационного соединения. В некоторых случаях может быть желательно вводить разовую дозу комбинационного соединения первой, а затем после периода в несколько часов (например, 1-12 ч) производится введение разовой дозы второго комбинационного соединения, а затем после периода в несколько часов (например, 1-12 ч) производится введение разовой дозы одного или более других активных ингредиентов. В некоторых случаях может быть желательно вводить разовую дозу одного или более других активных ингредиентов первой, а затем после периода в несколько часов (например, 1-12 ч) производится введение разовой дозы комбинационного соединения, а затем после периода в несколько часов (например, 1-12 ч) производится введение разовой дозы второго комбинационного соединения. В случаях, когда три или более комбинационных соединений вводят с одним или более дополнительными активными ингредиентами, комбинационные соединения можно вводить один за другим в течение секунд, минут или часов (например, 1-12 ч) друг после друга, а один или более дополнительный активный ингредиент может быть введен до, во время или после введения комбинационных соединений. В случаях, когда комбинационные соединения совместно составлены в рецептуру, они могут быть введены одновременно, либо до, либо после введения одного или более дополнительных активных ингредиентов.
Если не указано иное, комбинированная терапия может быть введена в виде отдельных лекарственных форм с каждым активным ингредиентом, вводимых вместе или раздельно, последовательно или одновременно и либо близко по времени, либо удаленно во времени друг от друга.
Курс лечения может длиться, например, от примерно 12 недель до приблизительно 48 недель или дольше, например от примерно 12 недель до приблизительно 24 недель.
Настоящее изобретение включает комбинацию терапевтически эффективных компонентов для облегчения по меньшей мере одного симптома инфекции ВГС у человека, включая, но не ограничиваясь ими, тошноту, рвоту, потерю аппетита, слабость, желтуху, рвоту, понос, обезвоживание, боль в животе, цирроз печени. Кроме того, у некоторых индивидуумов, инфицированных ВГС, применение комбинированной терапии является эффективным для снижения вирусной нагрузки вирусных частиц ВГС, присутствующих в организме инфицированного человека в статистически значимом количестве. Вирусная нагрузка может быть измерена, например, путем измерения в плазме уровней РНК ВГС с применением, например, ВГС анализа СОВА8 ТацМаи (КосЬе Мо1еси1аг §у8(еш8). Как правило, инфицированный ВГС человек, который получает лечение комбинационными соединениями в соответствии с настоящим изобретением, испытывает облегчение одного или всех симптомов, связанных с инфекцией ВГС.
Примеры синтеза.
Протоколы синтеза для получения соединений 3 и 6 известны в литературе. Кроме того, протоколы синтеза для приготовления каждого из комбинационных соединений приведены в примерах ниже.
Соединение 3 может быть получено с использованием методов синтеза и промежуточных соединений, таких как те, которые описаны в υδδΝ 12/215 605 (И8 20090257978 А1). Соединение 3 также может быть получено так, как описано в следующем примере.
Пример 3. Получение соединения 3
- 9 026667
Соединение 315 (12 г, 13 ммоль) растворяли в ТГФ (200 мл), затем добавляли ПОН (11 г, 260 ммоль) в Н2О (200 мл), а затем МеОН (200 мл). Смесь выдерживали при перемешивании при комнатной температуре в течение 20 ч. После завершения реакции добавляли 4Ν НС1 в Н2О, чтобы довести рН до 7 при 0°С. Водный слой экстрагировали этилацетатом (2x400 мл). Объединенный органический слой промывали насыщенным солевым раствором, сушили (№28О4) и концентрировали в вакууме с получением соединения 3 в виде желтого твердого вещества (11 г, 93%). ЖХ/МС=911,52 (М++1). 'Н ЯМР (300 МГц, СБ3ОБ) δ 7,95 (ά, 1Н), 7,90 (5, 1Н), 7,48 (5, 1Н), 7,31 (ά, 1Н), 5,42 (5, 1Н), 4,37 (άά, 1Н), 4,20 (т, 2Н), 3,833,56 (т, 7Н), 3,50 (т, 2Н), 3,39 (т, 2Н), 2,45 (т, 1Н), 2,27 (т, 1Н), 1,62 (т, 2Н), 1,50 (т, 1Н), 1,33 (т, 2Н), 1,18 (т, 1Н), 1,05 (т, 8Н), 0,90 (т, 3Н), 0,76 (т, 11Н), 0,14-0,04 (т, 2Н).
Промежуточное соединение 315 получали следующим образом.
a) Получение соединения 301.
В сухую продутую аргоном трехгорлую круглодонную колбу (1000 мл) добавляли безводный дихлорметан (100 мл) и Εΐ2Ζη (28 мл, 273 ммоль) при 0°С. (ВНИМАНИЕ: источник аргона не может быть от иглы. Используйте только соответствующий стеклянный адаптер. Для предотвращения чрезмерного повышения давления к колбе также может быть прикреплен второй барботер.) Затем по каплям добавляли циклопентен-3-ол (10,0 мл, 119 ммоль) (было произведено большое количество газообразного этана) в колбу, и реакционную смесь оставляли перемешиваться, пока выделение газа не прекратилось. Затем по каплям добавляли дииодметан (22 мл, 242 ммоль) в течение 30 мин. Реакционную смесь оставляли нагреваться до комнатной температуры и продолжали перемешивать в течение ночи при положительном токе аргона, после чего ТСХ показала полное исчезновение исходного спирта. Затем реакционную смесь разбавляли СН2С12 и гасили 2М НС1 (белый осадок должен быть полностью растворен). Двухфазную смесь выливали в делительную воронку и собирали органический слой. Растворитель удаляли при пониженном давлении, пока не осталось 100 мл материала, содержащего соединение 301.
b) Приготовление соединения 302.
Безводный дихлорметан (525 мл) добавляли в колбу с последующим добавлением по каплям триэтиламина (34 мл, 245 ммоль). Реакционную смесь продолжали перемешивать при комнатной температуре при положительном токе азота и в этот момент в колбу порциями добавили дисукцинимидилкарбонат (40,7 г, 159 ммоль). Реакционную смесь оставляли перемешиваться до тех пор, пока ТСХ не показала полное исчезновение исходного материала (2-3 дня). По окончании реакционную смесь гасили 1М НС1 (200 млх2) и промывали Н2О (200 млх2). Желаемый продукт экстрагировали с помощью СН2С12, и объединенные органические слои сушили при помощи безводного Мд§О4 и пропускали через пробку со слоем диоксида кремния. Растворитель удаляли при пониженном давлении, неочищенный материал очищали с помощью флэш-хроматографии (Е(=0,33, 1:1 гексан/этилацетат с получением соединения 302 (22 г, 75%). Ή ЯМР (300 МГц, СБС13) δ 5,24 (1, 1Н), 3,82 (5, 4Н), 2,24 (т, 2Н), 2,03 (ά, 2Н), 1,38 (т, 2Н), 0,48 (т, 1Н),0,40 (т, 1Н).
- 10 026667
с) Получение соединения 304.
Сложный метиловый эфир М-трет-Вос-цис-4-гидрокси-Ь-пролина 303 (100,0 г, 407,7 ммоль) и ЭЛВСО (1,4-диазабицикло[2.2.2]октан) (1,5 экв, 68,6 г, 611,6 ммоль) растворяли в безводном толуоле (200 мл) в трехгорлой круглодонной колбе объемом 2 л с механической мешалкой и капельной воронкой. После охлаждения раствора до 0°С в атмосфере Ν2 добавляли раствор хлорида 4-бром-бензолсульфонила (1,3 экв, 135,6 г, 530,0 ммоль) в 300 мл толуола через капельную воронку в течение 60 мин. Реакционную смесь перемешивали и нагревали до комнатной температуры в течение ночи (16 ч). Смесь медленно выливали в 2 л 1М №-ьСО3 (водн.) и продукт экстрагировали этилацетатом (2 л). После того как органическую фазу промыли 0,5Ν НС1 (2 л), Н2О (1 л) и насыщенным солевым раствором (1 л), ее сушили (М§§О4) и концентрировали с получением 195,45 г желтого маслянистого продукта брозилата.
К раствору вышеуказанного брозилата (407,7 ммоль) в дихлорметане (300 мл) медленно добавляли 4,0М НС1 в диоксане (500 мл, 5 экв) и полученный раствор оставляли перемешиваться при комнатной температуре в течение 2 ч. После того как к реакционной смеси добавили эфир (500 мл), смесь перемешивали в течение 15 мин, и белый осадок собирали путем фильтрации. Твердое вещество промывали эфиром и гексаном и затем сушили в вакууме в течение ночи с получением 153,0 г амингидрохлоридной соли соединения 304, 381,8 ммоль с выходом 94% в два этапа.
й) Получение соединения 305.
К раствору Вос-трет-бутил-глицина (97,0 г, 420,0 ммоль) в ΌΜΡ (200 мл) и метиленхлориду (200 мл) добавляли НАТИ (217,76 г, 572,7 ммоль) и основание Хюнига (126 мл, 1145,4 ммоль) при комнатной температуре. После того как смесь перемешивали в течение 20 мин при комнатной температуре, раствор предыдущей гидрохлоридной соли (153,0 г, 381,8 ммоль) и основание Хюнига (126 мл, 1145,4 ммоль) в ΌΜΡ (200 мл) и дихлорметане (200 мл) в виде одной порции добавляли к вышеуказанной кислотной смеси. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч, контроль осуществляли при помощи ЖХ-МС. Реакционную смесь концентрировали для удаления дихлорметана при пониженном давлении, и образованный белый твердый продукт отфильтровывали. Оставшийся ΌΜΡ раствор разбавляли этилацетатом (1 л), промывали последовательно 3% ЫС1 (водн.) (3x650 мл), насыщенным ΝΠ·|0 (2x500 мл), 0,5Ν НС1 (водн.) (2x600 мл), насыщенным солевым раствором (500 мл), насыщенным раствором №-1НСО3 (3x500 мл) и насыщенным солевым раствором (500 мл). Полученную органическую фракцию сушили (М§§О4) и концентрировали, получая соединение 305 (111 г).
е) Получение соединения 306.
К раствору метилового эфира 305 (120 г, 207,8 ммоль) в ТГФ (300 мл), МеОН (75 мл) добавляли раствор ЫОН (26,18 г, 623,4 ммоль) в Н2О (150 мл). Раствор оставляли перемешиваться при комнатной температуре в течение 4 ч. Смесь охлаждали в ледяной бане, проводя в это время подкисление с помощью 3Ν НС1 до рН примерно 5,5, перемешивали в течение 10 мин, и образовавшееся белое твердое вещество собирали фильтрованием. Твердые вещества промывали дополнительным количеством воды, эфира и гексана. Твердые вещества сушили в вакууме при 40°С в течение ночи с получением 95,78 г (82%) кислоты 306.
ί) Получение соединения 307.
К раствору карбоновой кислоты 306 (81,4 г, 144,27 ммоль) в ΌΜΡ (200 мл) и дихлорметану (200 мл) добавляли НАТИ (82,3 г, 216,4 ммоль) и основание Хюнига (47,5 мл, 432,8 ммоль) при комнатной температуре. После того как смесь перемешивали в течение 20 мин при комнатной температуре, раствор амина (158,7 ммоль) и основание Хюнига (47,5 мл, 1145,4 ммоль) в ΌΜΡ (200 мл) и дихлорметане (200 мл) в
- 11 026667 виде одной порции добавляли к вышеуказанной кислотной смеси. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч, контроль осуществляли при помощи ЖХ-МС. Смесь концентрировали при пониженном давлении для удаления дихлорметана, затем отфильтровывали образовавшиеся белые твердые вещества. Оставшийся ΏΜΤ раствор разбавляли этилацетатом (600 мл), промывали последовательно 3% ЫС1 (водн.) (2x550 мл), насыщенным ΝΗ^Ι (500 мл), 1Ν НС1 (водн.) (500 мл), насыщенным раствором NаΗСΟз (500 мл) и насыщенным солевым раствором (300 мл). Полученную органическую фракцию сушили (Να^δΟ^ и концентрировали, получая соединение 307 (111 г).
д) Получение соединения 308.
Соединение 307 растворяли в 4Ν НС1 в диоксане (300 мл) при комнатной температуре и перемешивали в течение 2 ч. Затем его концентрировали под вакуумом и совместно выпаривали с дихлорметаном (2x200 мл) досуха. Остаток растворяли в этилацетате (600 мл) и насыщенном водн. №НСО3 (1 л). Раствор энергично перемешивали. Через 10 мин одной порцией добавляли угольную кислоту бицикло [3.1.0] гекс-3-иловый эфир 2,5-диоксо-пирролидин-1-иловый эфир 302 (41,4 г, 173,1 ммоль). После перемешивания полученной смеси в течение еще 30 мин собирали органический слой, промывали насыщенным солевым раствором (500 мл), сушили (№2804) и концентрировали. Неочищенный продукт очищали флэш-хроматографией на силикагеле с использованием смеси этилацетат/гексан с получением 94,44 г (92%) соединения 308.
Ь) Получение соединения 310.
1-(2-амино-3-хлор-4-гидрокси-фенил)-этанон 309 (70,7 г, 354 ммоль) перемешивали в 48% водн. НВг (500 мл) при 110°С в течение 72 ч. После охлаждения смеси до 0°С при перемешивании твердые вещества отфильтровывали и промывали водой. Полученные твердые вещества растирали с насыщенным раствором №НСО3 (~ 350 мл), фильтровали, промывали водой и сушили в вакууме с получением ~40 г (61%) неочищенного 310 в виде темно-коричневого твердого вещества. ЖХ/МС=186(М++1).
ί) Получение соединения 311.
1-(2-амино-3-хлор-4-гидрокси-фенил)-этанон 310 (40 г, 215 ммоль) растворяли в ΏΜΤ (360 мл). Добавляли карбонат цезия (140 г, 430 ммоль), а затем бромацетальдегида диметилформамид (54,5 г, 323 ммоль). Затем смесь энергично перемешивали при 65°С в течение 24 ч. После охлаждения до комнатной температуры к смеси добавляли этилацетат (1 л) и Н2О (1 л). Органический слой экстрагировали этилацетатом (1 х400 мл). Объединенный органический слой промывали водным 3%-ным раствором ЫС1 (2х 1 л), насыщенным солевым раствором, сушили (№2804) и концентрировали в вакууме. Остаток очищают хроматографией на силикагеле с получением соединения 311 в виде белого твердого вещества (39 г, 67%).
_]) Получение соединения 312.
К смеси 1-[2-амино-3-хлор-4-(2,2-диметокси-этокси)-фенил]-этанона 311 (13 г, 47,5 ммоль) и гидробромида изопропиламинотиазол-4-карбоновой кислоты (12,64 г, 47,5 ммоль) в пиридине (150 мл) медленно добавляли оксихлорид фосфора (9,47 г, 61,8 ммоль) при -40°С. Затем смесь энергично перемешивали при 0°С в течение 4 ч. После завершения реакции к смеси по каплям добавляли Н2О (30 мл). Затем смесь энергично перемешивали при 0°С в течение 15 ч. Фильтрат концентрировали в вакууме. Остаток разбавляли этилацетатом, промывали насыщ. водным раствором Να^θ3. Органический слой сушили
- 12 026667 (Να2§04) и концентрировали в вакууме. Остаток растворяли в СН2С12, к раствору медленно добавляли гексаны, твердое вещество желтого цвета начинало выпадать в осадок. Далее добавляли еще гексаны до тех пор, пока не истощился продукт в маточной жидкости, с получением соединения 312 (18 г, 85%).
k) Получение соединения 313.
2-Изопропиламино-тиазол-4-карбоновой кислоты [6-ацетил-2-хлор-3 -(2,2-диметокси-этокси)фенил]амид 312 (18 г, 40,7 ммоль) суспендировали в толуоле (400 мл). К энергично перемешиваемой смеси добавляли ΝαΗ (2,4 г, 61 ммоль), при этом контролировали эволюцию Н2. Во время нагревания с обратным холодильником смесь становилась прозрачным раствором. Реакция завершилась после кипячения с обратным холодильником в течение 3 ч. Смесь охлаждали до комнатной температуры. К смеси был добавлен раствор уксусной кислоты (69,2 ммоль) в Н2О (3 объема). После энергичного перемешивания в течение 1 ч при 0 °С твердые вещества собирали фильтрованием и промывали Н2О. Влажный осадок сушили в высоком вакууме до постоянного веса с получением соединения 313 (15 г, 86%).
l) Получение соединения 314.
К смеси промежуточного соединения брозилата 303 (15 г, 35 ммоль) и соединения 313 (27,5 г, 38,5 ммоль) в ΝΜΡ (200 мл) добавляли карбонат цезия (25,1 г, 77 ммоль). Затем смесь энергично перемешивали при 65°С в течение 5 ч. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, к смеси добавляли этилацетат (600 мл) и 3%-ный водный раствор ЫС1 (600 мл). Органический слой промывали водным 3%-ным раствором ЫС1 (1x600 мл), насыщенным солевым раствором, сушили (Ν;·ι2804) и концентрировали в вакууме. Остаток очищали хроматографией на силикагеле с получением желаемого метилового эфира в виде желтого твердого вещества (23,6 г, 75%). ЖХ/МС=900,13 (М++1).
т) Получение соединения 315.
Метиловый эфир 314 (23,6 г, 26 ммоль) растворяли в ледяной уксусной кислоте (200 мл), к раствору добавляли 1,4Ν НС1 в Н2О (75 мл). Затем смесь перемешивали при 60°С в течение 1 ч. После завершения реакции смесь концентрировали для удаления растворителей, выпаривали с толуолом (2 раза), чтобы удалить остаточную уксусную кислоту. Остаток растворяли в этилацетате (500 мл) и насыщенном водн. растворе NаНС0з (достаточном для нейтрализации смеси), контролируя эволюцию СО2. Органический слой промывали насыщенным солевым раствором, сушили (Να2§04) и концентрировали в вакууме. Остаток дополнительно высушивали под высоким вакуумом в течение 1 ч и использовали в полученном виде на следующей стадии. Неочищенный продукт растворяли в СН2С12 (360 мл), к смеси добавляли морфолин (3,4 г, 39 ммоль) и триацетоксиборгидрид натрия (7,2 г, 34 ммоль) при 0°С. Затем по каплям к смеси добавляли ледяную уксусную кислоту (0,47 г, 7,8 ммоль). Реакция завершалась за 10 мин при 0°С. Насыщ. водный раствор NаНС0з добавляли, чтобы погасить реакцию. После перемешивания в течение еще 20 мин органический слой промывали насыщенным солевым раствором, сушили (№2804) и концентрировали в вакууме. Остаток очищали хроматографией на силикагеле с получением желаемого аминового продукта 315 в виде желтого твердого вещества (12 г, 50%). ЖХ/МС=924,63 (М++1).
Соединение 6 может быть получено с использованием методов синтеза и промежуточных соединений, таких как те, которые описаны в υδδΝ 12/779023 (υδ 20100310512 А1). Соединение 6 также может быть получено так, как описано в следующем примере.
Пример 6. Приготовление метилового эфира (1-{3-[6-(9,9-дифтор-7-{2-[5-(2-метоксикарбониламино-3-метил-бутирил)-5-аза-спиро[2.4]гепт-6-ил]-3Н-имидазол-4-ил}-9Н-флуорен-2-ил)-1Н-бензоимидазол-2-ил]-2-аза-бицикло[2.2.1]гептан-2-карбонил}-2-метил-пропил)карбоновой кислоты 6.
Трет-бутиловый эфир 3-[6-(9,9-дифтор-7-{2-[5-(2-метоксикарбониламино-3-метил-бутирил)-5-азаспиро[2.4]гепт-6-ил]-3Н-имидазол-4-ил}-9Н-флуорен-2-ил)-1Н-бензоимидазол-2-ил]-2-аза-бицикло[2.2.1]гептан-2-карбоновой кислоты 614 (115 мг, 0,138 ммоль) растворяли в метиленхлориде (2 мл), добавляли НС1 в диоксане (4М, 2 мл) и продолжали перемешивание при комнатной температуре. Через 20 мин все летучие вещества удаляли в вакууме. Неочищенный материал использовали на следующей стадии без дополнительной очистки. Неочищенный материал растворяли в ΌΜΡ (1,5 мл) и добавляли ΌΙΕΑ (53,4 мг, 0,414 ммоль). Добавляли раствор 2-(Ь) метоксикарбониламино-3-метилмасляной кислоты 611 (24,2 мг, 0,138 ммоль), НАТи (52,4 мг, 0,138 ммоль) и ΌΙΕΑ (17,8 мг, 0,138 ммоль) в ΌΜΡ(1 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре. Через 20 мин реакционную смесь разбавляли этилацетатом и промывали водным раствором бикарбоната, водным раствором ЫС1 (5%), насыщенным солевым раствором и сушили над сульфатом натрия. После фильтрования и удаления растворителей в вакууме получали неочищенный материал, который очищали с помощью ОФ-ВЭЖХ (элюент:вода/ΜеСN ν/0,1% ТРА), получая соединение 6 (76 мг). ЖХ-МС-ИЭР+: рассчитано для
- 13 026667
СЧ 1,ГЛ'8О... 888,9 (М+); получено: 890,0 (М+Н+). ’Н-ЯМР: 300 МГц, (ΌΜδΘ-ά6) δ 8.20-7,99 (т, 8Н), 7,73 (к, 2Н), 7,37-7,27 (т, 2Н), 5,25 (йй, 1=7,2 Гц, 1Н), 4,78 (к, 1Н) 4,54 (к, 1Н), 4,16 (т, 1Н), 4,02 (т, 1Н), 3,87 (т, 1Н), 3,74 (т, 1Н), 3,55 (к, 3Н), 3,53 (к, 3Н), 2,75 (т, 1Н), 2,25 (т, 2Н), 2,09-2,04 (т, 2Н), 1,88-1,79 (т, 2Н), 1,54 (т, 1Н), 0,94-0,77 (т, 15Н) 0,63 (т, 4Н) ррт. 19Р-ЯМР: 282 МГц, (ΌΜδΘ-ά6) δ: -109,1 ррт [-74,8 ррт ТФК].
Промежуточное соединение 614 получали следующим образом.
/-ы'600 1. НС1, МеОН “ζ с*-7 ТСЛ εΐ5ζ СЬг
2. СЬ2-С1, ΝΜΜ ^^\дСОгМе — -Ζ-Ζ-Г ’улсОгМе [ >ЛСО2Ме
Ι.Ι, , ”-Г ЧлсОгМе Г VI эсм
ΝΜΟ, ОзО4 ТН Е/ Н2О/. ацетон
1СО2Н ион.
ТНР, МеОН. Н,0 хсо2ме
a) Получение соединения 1-бензилового эфира 2-метилового эфира 4-метилен-пирролидин-1,2дикарбоновой кислоты 602.
1-трет-Бутиловый эфир 4-метилен-пирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты 601 (10,0 г, 44 ммоль) растворяли в МеОН (75 мл) при комнатной температуре и добавляли НС1 (4Μ в диоксане, 75 мл). Перемешивание при комнатной температуре продолжали в течение 4 ч. Все летучие компоненты удаляли в вакууме и получали твердое вещество бежевого цвета. Неочищенный материал суспендировали в метиленхлориде (100 мл) и добавляли Ν-метилморфолин (13,3 г, 132 ммоль). Смесь охлаждали до 0°С и добавляли бензилхлорформиат (8,26 г, 48,4 ммоль) при перемешивании. Через 30 мин реакционную смесь нагревали до комнатной температуры, и раствор промывали водой и водным раствором НС1 (1Μ). Раствор сушили над сульфатом натрия. После фильтрования и испарения растворителей получали неочищенный продукт, который очищали хроматографией на силикагеле (элюент:Е1ОЛс/гексаны), получая соединение 602 (10,2 г). ЖХ-МС-ИЭР+: рассчитано для СыН^О4: 275,3 (М+); получено: 276,4 (М+Н+).
b) Получение смеси соединений 603 и 604.
Высушенную в сушильном шкафу 3-горлую круглодонную колбу оснастили адаптером для впуска азота и капельной воронкой на 250 мл. Третье горло колбы закрыли перегородкой. В колбу загружали мешалку, дихлорметан (120 мл) и диэтилцинк (1,0М в гексане, 118 мл, 118 ммоль), затем охлаждали до 0°С в бане со льдом. Капельную воронку загружали дихлорметаном (40 мл) и трифторуксусной кислотой (9,1 мл, 118 ммоль). После того как раствор диэтилцинка охладился до 0°С (примерно 25 мин), к перемешиваемой реакционной смеси добавляли по каплям в течение 20 мин раствор трифторуксусной кислоты. После перемешивания в течение еще 20 мин при 0°С медленно в течение 4 мин добавляли дииодметан (9,5 мл, 118 ммоль). После еще 20 мин добавляли 1-бензиловый эфир 2-метиловый эфир 4-метиленпирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты 602 (8,10 г, 29,4 ммоль) в 30 мл дихлорметана с помощью канюли. Затем колбу, содержащую 1-бензиловый эфир 2-метиловый эфир 4-метилен-пирролидин-1,2дикарбоновой кислоты, промывают еще 10 мл дихлорметана, и полученный раствор также переносят к реакционной смеси через канюлю. Реакционную смесь оставляли нагреваться до комнатной температуры и перемешивали в течение 110 ч (примерно 5 дней), после чего реагенты гасили насыщенным водным раствором хлорида аммония (~ 150 мл). Содержимое колбы медленно выливали в 2 л делительную воронку, содержащую насыщенный водный бикарбонат натрия (800 мл). Водную фазу три раза экстрагировали 300 мл этилацетата. Объединенные органические слои сушили над сульфатом магния и концентрировали с получением смеси соединений 603 и 604.
c) Получение соединения 603.
Неочищенный материал из подраздела Ь растворяли в смеси ТГФ/вода/ацетон 3:1:1(165 мл), затем обрабатывали ^метилморфолин-^оксидом (3,45 г, 29,4 ммоль) и осмий тетраоксидом (4 вес.% в воде, 5 мл, 0,818 ммоль). После перемешивания при комнатной температуре в течение 7 ч реагенты гасили 1М водным раствором тиосульфата натрия (~100 мл). Содержимое колбы выливали в 1 л делительную воронку, содержащую воду (~300 мл). Водную фазу три раза экстрагировали 300 мл дихлорметана. Объединенные органические вещества сушили над сульфатом магния и концентрировали. Неочищенный остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле (от 5 до 45% ЕЮЛс/гексан) с получением 5бензилового эфира 6-метилового эфира 5-аза-спиро[2.4]гептан-5,6-дикарбоновой кислоты 603 в виде прозрачного масла (5,54 г, 19,15 ммоль, 65%). Ή ЯМР (СПС13) δ 7,36-7,29 (т, 5Н), 5,21-5,04 (т, 2Н), 4,56-4,47 (т, 1Н), 3,75 (к, 1,5 Н), 3,60 (т, 1,5Н), 03,51-3,37 (т, 2Н), 2,32-2,25 (т, 1Н), 1,87-1,80 (т, 1Н), 0,64-0,51 (т, 4Н).
й) Получение 5-бензилового эфира 5-аза-спиро[2.4]гептан-5,6-дикарбоновой кислоты 606.
5-Бензиловый эфир 6-метиловый эфир 5-аза-спиро[2.4]гептан-5,6-дикарбоновой кислоты 603 (244 мг, 0,840 ммоль) растворяли в ТГФ (2,0 мл)/МеОН (1,5 мл). Добавляли водный раствор ЫОН (35,5 мг,
- 14 026667
0,84 ммоль) и продолжали перемешивание при комнатной температуре. Через 3 ч реакционную смесь нейтрализовывали водным раствором НС1 (1Μ), и органические растворители удаляли в вакууме. Неочищенную смесь разбавляли водой и ΕίΘΛα. и собирали органический слой. Все летучие вещества удаляли в вакууме, и неочищенную кислоту 606 использовали без дальнейшей очистки. ЖХ-МС-ИЭР+: рассчитано для ί'.’ι5Η|-ΝΘ4: 275,3 (М+); получено: 276,3 (М+Н+).
е) Получение 2,7-дибром-9,9-дифтор-9Н-флуорена 608.
2.7- Дибром-флуорен-9-он 607 (4,0 г, 11,8 ммоль) суспендировали в деоксофторе (12 мл) при комнатной температуре и добавляли ΕΐΘΗ (4 капли). Перемешиваемую суспензию нагревали при 90°С в течение 24 ч. (Внимание: использование деоксофтора при повышенных температурах, как описано выше, требует особой осторожности, так как могут произойти быстрые и опасные экзотермические реакции). Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и выливали в лед, содержащий бикарбонат натрия. Образовывалось твердое вещество, которое собирали фильтрованием. Неочищенный материал растворяли в ΕίΘΛα и промывали водным раствором НС1 (1Μ) и насыщенным солевым раствором. Раствор сушили над сульфатом натрия. После фильтрования и испарения растворителей получали неочищенный продукт, который очищали хроматографией на силикагеле (элюентБЮЛс/гексаны), получая соединение 608 (3,2 г). 19Р-ЯМР: 282 МГц, (ΌΜδΟ-ά6) δ: -111,6 ррт. Перед использованием материала в следующей стадии он в виде раствора в ВΐОΑс подвергался воздействию древесного угля.
ί) Получение 5-бензилового сложного эфира 6-[2-(7-бром-9,9-дифтор-9Н-флуорен-2-ил)-2-оксоэтил] сложного эфира 5-аза-спиро[2.4]гептан-5,6-дикарбоновой кислоты 609.
2.7- Дибром-9,9-дифтор-9Н-флуорен 608 (372 мг, 1,04 ммоль), Ρά(ΡΡΗ3)4 (30,0 мг, 0,026 ммоль), ΡάΟ2(ΡΡΗ3)2 (18,2 мг, 0,026 ммоль), Αδ(ΡΡΗ3)3 (5,0 мг) растворяли в диоксане (10 мл) в атмосфере аргона. Добавляли этоксивинил-трибутилолово (376,4 мг, 1,04 ммоль). Смесь нагревали в течение 140 мин при 85°С (масляная баня). Реакцию охлаждали до комнатной температуры. Добавляли Ν-бромсукцинимид (177 мг, 1,0 ммоль) с последующим добавлением воды (2 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч, после чего большую часть диоксана удаляли в вакууме. Неочищенную реакционную смесь разбавляли этилацетатом и промывали водой. Все летучие компоненты удаляли в вакууме. Добавляли толуол, и все летучие вещества удаляли в вакууме во второй раз. Неочищенный материал растворяли в ДМФА/ΜеСN (2 мл, 1:1) при комнатной температуре. Добавляли раствор ΝСЬ/-4-циклопропил (Ь) пролина 606 (0,84 ммоль) и ΌΙΕΑ (268 мг, 2,08 ммоль) в ΜеСN (2 мл) и продолжали перемешивание при комнатной температуре. После 14 ч большую часть ΜеСN удаляли в вакууме, и неочищенную реакционную смесь разбавляли ΕίΘΑ^ Смесь промывали водным раствором НС1 (1Μ), водным раствором ЫС1 (5%), насыщенным солевым раствором и сушили над сульфатом натрия. После фильтрования и испарения растворителей получали неочищенный продукт реакции, который очищали хроматографией на силикагеле (элюент:ВЮАс/гексаны), получая соединение 609 (176 мг). ЖХ-МСИЭР+: рассчитано для С30Н24ВгР2НО5: 596,4 (М+); получено: 595,2/597,2 (М+Н+).
д) Получение 6-[5-(7-бром-9,9-дифтор-9Н-флуорен-2-ил)-1Н-имидазол-2-ил]-5-азаспиро [2.4]гептан-5-карбоновой кислоты бензиловый эфир 610.
- 15 026667
5-Бензиловый эфир 6-[2-(7-бром-9,9-дифтор-9Н-флуорен-2-ил)-2-оксоэтил] эфир 5-азаспиро[2.4]гептан-5,6-дикарбоновой кислоты 609 (172 мг, 0,293 ммоль) растворяли в метаксилолах (6,0 мл). Добавляли ацетат аммония (226 мг, 2,93 ммоль), и реакционную смесь перемешивали при 140°С в течение 60 мин в условиях микроволнового излучения. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, и все летучие вещества удаляли в вакууме. Неочищенный продукт очищали с помощью хроматографии на силикагеле (элюент:ЕЮАс/гексаны), получая соединение 610 (80,3 мг). ЖХ-МС-ИЭР+: рассчитано для С30Н24ВгР2Ы302: 576,4 (М+); получено: 575,2/577,2 (М+Н+).
Ιι) Приготовление метилового эфира (1-{6-[5-(7-бром-9,9-дифтор-9Н-флуорен-2-ил)-1Н-имидазол-2ил]-5-аза-спиро[2.4]гептан-5-карбонил}-2-метил-пропил)карбаминовой кислоты 612.
Бензиловый эфир 6-[5-(7-бром-9,9-дифтор-9Н-флуорен-2-ил)-1Н-имидазол-2-ил] -5-азаспиро[2.4]гептан-5-карбоновой кислоты 610 (800 мг, 1,38 ммоль) растворяли в метиленхлориде (15 мл), добавляли НВг в уксусной кислоте (37%, 2 мл) и продолжали перемешивание при комнатной температуре. После 180 мин суспензию разбавили гексаном, твердое вещество собирали фильтрованием и промывали гексаном и помещали в вакуум. Неочищенный материал использовали на следующей стадии без дополнительной очистки. Неочищенный материал растворяли в ЭМР (4,0 мл) и добавляли Э1ЕА (356 мг, 2,76 ммоль). Добавляли раствор 2-(Ь)-метоксикарбониламино-3-метилмасляной кислоты 611 (242 мг, 1,38 ммоль), НАТИ (524 мг, 1,38 ммоль) и Э1ЕА (178 мг, 1,38 ммоль) в ЭМР (1 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре. Через 50 мин реакционную смесь разбавляли этилацетатом и промывали водным раствором бикарбоната, водным раствором ЫС1 (5%), насыщенным солевым раствором и сушили над сульфатом натрия. После фильтрования и удаления растворителей в вакууме получали неочищенный материал, который очищают хроматографией на силикагеле (элюент:Е10Ас/гексаны) с получением слегка нечистого соединение 612 (878 мг). ЖХ-МС-ИЭР+: рассчитано для С29Н29ВгР2Ы403: 599,5 (М+); получено: 598,5/600,5 (М+Н+).
ί) Приготовление трет-бутилового эфира 3-[6-(9,9-дифтор-7-{2-[5-(2-метоксикарбониламино-3метил-бутирил)-5-аза-спиро[2.4]гепт-6-ил]-3Н-имидазол-4-ил}-9Н-флуорен-2-ил)-1Н-бензоимидазол-2ил]-2-аза-бицикло[2.2.1]гептан-2-карбоновой кислоты 614.
Метиловый эфир 1-{6-[5-(7-бром-9,9-дифтор-9Н-флуорен-2-ил)-1Н-имидазол-2-ил]-5-азаспиро[2.4]гептан-5-карбонил}-2-метил-пропил)карбаминовой кислоты 612 (840 мг, 1,4 ммоль), третбутиловый эфир (3-[6-(4,4,5,5-тетраметил-[1,3,2]диоксаборолан-2-ил)-1Н-бензоимидазол-2-ил]-2-азабицикло[2.2.1]гептан-2-карбоновой кислоты 613 (615 мг, 1,4 ммоль), Рб(РРЬ3)4 (161 мг, 0,14 ммоль), К2С03 (579 мг, 4,2 ммоль), растворяли в ЭМЕ (15 мл)/вода (3 мл) в атмосфере аргона. Смесь нагревали в течение 120 мин при 85°С (масляная баня). После 120 мин добавляли дополнительный сложный эфир бороновой кислоты (61 мг, 0,14 ммоль) и нагревание продолжали. Через 3 ч реакцию охлаждали до комнатной температуры. Большую часть ЭМЕ удаляли в вакууме и неочищенную реакционную смесь разбавляли ЕЮАс. Смесь промывали водным раствором насыщенным солевым раствором и сушили над сульфатом натрия. После фильтрования и испарения растворителей получали неочищенный продукт реакции, который очищали хроматографией на силикагеле (элюент:ЕЮАс/гексаны), получая соединение 614 (878 мг). ЖХ-МС-ИЭР+: рассчитано для (/11..1% (к 831,9 (М+); получено: 832,7 (М+Н+).
Промежуточное соединение 613 может быть получено следующим образом.
.)) Получение трет-бутилового эфира 3-(2-амино-4-бром-фенилкарбамоил)-2-аза-бицикло[2.2.1]гептан-2-карбоновой кислоты 617.
К раствору 2-трет-бутилового эфира 2-аза-бицикло[2.2.1]гептан-2,3-дикарбоновой кислоты 616 (0,327 г, 1,36 ммоль, 1 экв.), 4-бром-бензол-1,2-диамину 615 (0,507 г, 2,71 ммоль, 2 экв.) и 4метилморфолину (0,299 мл, 2 экв.) в 10 мл ДМФ добавляли НАТИ (0,543 г, 1,05 экв.). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч и затем концентрировали. Реакционную смесь разбавляли этилацетатом и промывали разбавленным водным раствором ЫаНС03 и насыщенным солевым раствором. Органический слой концентрировали и очищали колоночной флэш-хроматографией (силикагель, от 20 до 80% этилацетат/гексан) с получением смеси региоизомера трет-бутилового эфира 3-(2-амино-4бром-фенилкарбамоил)-2-азабицикло[2.2.1]гептан-2-карбоновой кислоты 617.
к) Получение трет-бутилового эфира 3-(6-бром-1Н-бензоимидазол-2-ил)-2-аза-бицикло[2.2.1]гептан-2-карбоновой кислоты 618.
Указанную выше смесь из региоизомера трет-бутилового эфира 3-(2-амино-4-бромфенилкарбамоил)-2-аза-бицикло[2.2.1]гептан-2-карбоновой кислоты 617 растворяли в этаноле и нагрева- 16 026667 ли до 130°С в герметично закрытой пробирке в течение ночи и продолжали нагревание при 170°С в течение 3 дней. ЖХ-МС показала требуемый продукт и Вое расщепляемый продукт (приблизительно 1: 1 отношение). Смесь концентрировали и растворяли в НС1. Добавляли ди-трет-бутилдикарбонат (0,6 экв.), и реакционную смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Реакционную смесь концентрировали и очищали колоночной флэш-хроматографией (силикагель, от 20 до 80% этилацетат/гексан) с получением трет-бутилового эфира 3-(6-бром-1Н-бензоимидазол-2-ил)-2-аза-бицикло[2,2 0,1]гептан-2-карбоновой кислоты 618 (0,383 г, 72%) в виде оранжевой пены.
1) Получение соединения 613.
Смесь трет-бутилового эфира 3-(6-бром-1Н-бензоимидазол-2-ил)-2-аза-бицикло[2.2.1]гептан-2карбоновой кислоты 618 (264 мг, 0,673 ммоль), пинаконового сложного эфира бензол-1,4-дибороновой кислоты (5 экв., 3,36 г, 6,95 ммоль), тетракис(трифенилфосфин)палладия (5%, 39 мг) и 2М водный раствор карбоната калия (3 экв., 1,01 мл) в 5 мл ДМЭ нагревали до 90°С в атмосфере аргона в течение 4 ч. Реакционную смесь охлаждали и разбавляли этилацетатом и промывали насыщенным раствором бикарбоната натрия. Органический слой сушили (Мд8О4), концентрировали и очищали колоночной флэшхроматографией (силикагель, от 20 до 60% этилацетат/гексан) с получением трет-бутилового эфира 3-{6[4-(4,4,5,5-тетраметил-[1,3,2]диоксаборолан-2-ил)-фенил]-1Н-бензоимидазол-2-ил}-2-аза-бицикло[2.2.1]гептан-2-карбоновой кислоты 613. ЖХ-МС-ИЭР: рассчитано для С30Н38В^О4: 515,45; получено: 516,1 (М+Н+).
Соединение 7 можно получить с использованием способов синтеза и промежуточных продуктов, как те, которые описаны в И8 7429572. Соединение 7 также может быть получено так, как описано в следующем примере.
Биологические примеры.
Протокол анализа.
Высокоэффективный анализ репликона (НТВ8, англ. 1йдк 1ктоидЬри1 герНсоп а55ау).
Клетки, содержащие репликон, несущий Н77 (генотип 1а) или Соп1 (генотип 1Ь) РНК ВГС и репортер люциферазы Ееш11а высевали в черные планшеты с 384 лунками с плотностью 1,6x103 клеток на лунку в культуральной среде БМЕМ 90 мкл, за исключением 0-418. Соединения серийно разводили в 100% ДМСО и добавляли к клеткам в разведении 1:225, достигая конечной концентрации 0,44% ДМСО в общем объеме 90 мкл с помощью Вю1ек цР1оте Уотк51аРоп. Ячеистые планшеты инкубировали при 37°С с 5% СО2 в течение 3 дней, после чего культуральную среду удаляли, и клетки анализировали на активность люциферазы в качестве маркера для уровня репликации. Экспрессию люциферазы измеряли с помощью реагентов для анализа люциферазы Биа1-01о (Рготеда, Маά^5оη, У1, США). Вкратце, 20 мкл буфера люциферазы Биа1-01о добавляли для того, чтобы лизировать клетки, в течение 10 мин, и впоследствии 20 мкл разбавленного Биа1-01о 81ор & субстрата 01о (1:100) добавляли в каждую лунку. Люминесцентный сигнал измеряли при помощи планшет-ридера Реткш Е1тег Епу151оп после инкубации в течение 10 мин. Уровни люциферазы были преобразованы в проценты по отношению к необработанной контрольной группе (определяли как 100%), и данные подставляли в логистическое уравнение дозозависимого эффекта у=/а/(1+(х/Ь)с) с использованием программного обеспечения ХЬР114 (ГОВ8, ЕтетууШе, СА, США). Значения ЕС50 рассчитывали из полученных уравнений. Кроме того, противовирусная активность может быть проанализирована с помощью определения 1С50 ВГС N83 протеазы.
Активность протеазы ВГС N83 контролировали с помощью метода резонансного переноса энергии флуоресценции (РЕЕТ) депсипептидного субстрата (ЕЕТ 81, Апа5рес, 8ап 1о5е. СА США), основанного на методе Талиани, ТаПаш М., В1апсЫ Е., №-1Г|е5 Р., Ро55а1еШ М., ИтЬаш А., 81ешкиЫет С., е1 а1. Непрерывный анализ протеазы вируса гепатита С на основе резонансного переноса энергии депсипептидных субстратов. Апа1. ВюсПет. 1996; 240 (1):60-7, включенный здесь в качестве ссылки в отношении выполнения такого анализа.
Коротко, 20 нмоль очищенных доменов протеазы N83 предварительно инкубировали при 37°С в течение 10 мин с 20 мкмоль изогенными пептидными кофакторами Ν84Λ (81дта, 81. Ьош5, МО, США), в 40% буфере глицерина с 50 ммоль НЕРЕ8, рН 7,5 и 10 ммоль БТТ. Соединения поочередно разводили 1:3 в ДМСО, инкубировали со смесью фермента/кофактора в течение 10 мин и начинали реакцию добавлением субстрата 2 мкмоль ЕЕТ 81(конечная концентрация). Увеличение флуоресценции непрерывно измеряли в течение одного часа с использованием флуоресцентного планшет-ридера У1с1от3 V (Реткш Е1тег, ХУаккат М.А., США). Начальные скорости были рассчитаны для каждой концентрации ингибитора с ПО ХУогкоШ 1.5 (^ΛΖ^А^, Еа51 8и55ех, ИК) с алгоритмом максимального склонения. Данные по скорости преобразовали в проценты по отношению к необработанной контрольной группе (определенной как 100%) и выполняли нелинейную регрессию для расчета 50% ингибирующей концентрации (1С50 значения).
Ферментативная активность N83.
Очищенную протеазу N83 объединяли с пептидом №4А и затем инкубировали с последовательными разбавлениями соединений (БМ8О использовали в качестве растворителя). Реакции инициировали добавлением двумеченого пептидного субстрата и измеряли полученное кинетическое увеличение флуо- 17 026667 ресценции. Выполняли нелинейную регрессию данных скорости для вычисления 1С50. Первоначально активность испытывали относительно протеазы генотипа 1Ь. В зависимости от эффективности, полученной относительно генотипа 1Ь, могут быть проверены дополнительные генотипы (1А, 2А, 3) и/или устойчивые ферменты ингибиторов протеазы (Ό168Υ, Ό168ν или А156Т мутанты). В качестве контроля при всех анализах используется ΒΙΕΝ-2061. Соединения образцов оценивали в данном анализе, и установили, что они имеют величины Ιί'.'50 менее примерно 1 мкм.
Активность и цитотоксичность репликона.
Клетки НиЬ-1ис (стабильно воспроизводящиеся ВайеиксЫадег'к I3891ис-иЬ^-ηео/N83-3'/ЕТ генотип репликона 1Ь) обрабатывали последовательным разведением соединения (ΌΜ80 использовали в качестве растворителя) в течение 72 ч. Число копий репликона измеряли биолюминесцентной и нелинейной регрессией для расчета ЕС50. Параллельные планшеты, обработанные одними и теми же разведениями лекарств, анализировали на цитотоксичность с использованием Рготеда Се11Тйет-С1о анализа жизнеспособности клеток. В зависимости от активности, достигнутой относительно репликона 1Ь, соединения могут быть испытаны относительно репликона генотипа 1а и/или устойчивых к ингибитору репликонов, кодирующих Ό168Υ или А156Т мутации. В качестве контроля при всех анализах используется ΒΙΕΝ2061. Соединения образцов оценивали в данном анализе, и установили, что они имеют величины ЕС50 менее примерно 5 мкм.
Влияние сывороточных белков на активность репликона.
Анализы репликона проводили в нормальной культуральной клеточной среде (ΟΜΗΜ+10%ΡΒ8) с добавлением физиологических концентраций человеческого сывороточного альбумина (40 мг/мл) или αкислотного гликопротеина (1 мг/мл). Значения ЕС50 в присутствии сыворотки белков крови человека сравнивают с ЕС50 в нормальной среде для определения разового сдвига в активности.
Ферментативная селективность.
Ингибирование протеазы млекопитающих, включая свиную панкреатическую эластазу, эластазу лейкоцитов человека, протеазу 3 и катепсин Ό, оценивали по Км для соответствующих субстратов для каждого фермента. Ю50 для каждого фермента сравнивали с Ю50, полученными для протеазы Ν83 1Ь для расчета селективности.
Цитотоксичность клеток МТ-4.
Клетки МТ4 обрабатывали серийными разведениями соединений в течение пяти дней. Жизнеспособность клеток измеряли в конце периода обработки с помощью анализа Рготеда Се11ТПег-С1о и выполняли нелинейную регрессию для расчета СС50.
Концентрация соединений, ассоциированная с клетками при ЕС50.
Культуры НиЬ-1ис инкубировали с соединением в концентрации, равной ЕС50. В различные моменты времени (0-72 ч) клетки двукратно промывали в холодной среде и экстрагировали 85% ацетонитрила; в каждой временной точке также извлекали образец среды. Клетки и экстракты среды анализировали с помощью ЖХ/МС/МС для определения молярной концентрации соединений в каждой фракции.
Растворимость и стабильность.
Растворимость определяли, взяв аликвоту 10 ммоль исходного раствора ΌΜ80 и получая соединение при конечной с концентрации 100 мкмоль в тестовом растворе среды (ΤΒ8, рН 7,4 и 0,1 Ν НС1, рН 1,5) с суммарной концентрацией ΌΜ80 1%. Тестовые растворы среды инкубировали при комнатной температуре при встряхивании в течение 1 ч. Затем растворы центрифугировали и восстановленные кондиционированные среды анализировали с помощью ВЭЖХ/УФ. Растворимость можно рассчитать путем сравнения количества соединения, обнаруженного в определенном тестовом растворе, по сравнению с количеством, обнаруженным в ΌΜ80 при той же концентрации. Также определяли стабильность соединений после 1-часовой инкубации в испытуемой среде при 37°С.
Стабильность в криосохраненных гепатоцитах человека, собаки и крысы.
Каждое соединение инкубировали в течение 1 ч в суспензии гепатоцитов (100 мкл, 80000 клеток на лунку) при 37°С. Замороженные гепатоциты восстанавливали в бессывороточной инкубационной среде. Суспензию переносили в 96-луночные планшеты (50 мкл/лунку). Для запуска инкубации соединения разбавляли в инкубационной среде до 2 мкмоль и затем добавляли к суспензии гепатоцитов. Образцы отбирали на 0, 10, 30 и 60 мин после начала инкубации, и реакцию можно было гасить смесью, состоящей из 0,3% муравьиной кислоты в 90% ацетонитрила/10% воды. Концентрацию соединения в каждом образце анализировали с помощью ЖХ/МС/МС. Полупериод исчезновения соединения в суспензии гепатоцитов определяли при подстановке данных время-концентрация в монофазное экспоненциальное уравнение. Данные также пересчитывали для представления общего внутреннего гепатического клиренса и/или общего гепатического клиренса.
Стабильность в гепатической фракции 89 человека, собаки и крысы.
Каждое соединение инкубировали в течение до 1 ч в суспензии 89 (500 мкл, 3 мг белка/мл) при 37°С (п=3). Соединения добавляли к суспензии 89, чтобы начать инкубацию. Образцы отбирали на 0, 10, 30 и 60 мин после начала инкубации. Концентрацию соединения в каждом образце анализировали с помощью ЖХ/МС/МС. Полупериод исчезновения соединения в суспензии 89 определяли при подстановке данных время-концентрация в монофазное экспоненциальное уравнение.
- 18 026667
Проницаемость Сасо-2.
Измерили обе, прямую (А-к-В) и обратную (В-к-А), проницаемости. Монослой Сасо-2 выращивали до конфлиентности на покрытых коллагеном микропористых поликарбонатных мембранах в 12луночних планшетах Сок!аг Тгап5\ус11®. Соединения дозировали на апикальной стороне для прямой проницаемости (А-к-В) и дозировали на базолатеральной стороне для обратной проницаемости (В-к-А). Клетки инкубировали в увлажненном инкубаторе при 37°С с 5% СО2. В начале инкубации через 1 и 2 ч после инкубации брали аликвоту 200 мкл из приемной камеры и заменяли на свежий тест-буфер. Концентрацию соединения в каждом образце определяли с помощью ЖХ/МС/МС. Рассчитывается видимая проницаемость (Рарр).
Связывание белка плазмы.
Связывание белка плазмы измеряется равновесным диализом. Каждое соединение вводили в чистую плазму при конечной концентрации 2 мкмоль. Плазму с добавлением известного количества определяемого вещества и фосфатный буфер помещали на противоположные стороны собранных клеток диализа, которые затем медленно вращали в водяной бане при 37°С. В конце инкубации определяли концентрацию соединения в плазме и фосфатном буфере. Несвязанный процент (цпЪоипф рассчитывался по следующей формуле:
где Сг и СЪ свободны и связанные концентрации определены как концентрации в постдиализных буфере и в плазме соответственно.
Профилирование СУР450.
Каждое соединение инкубируют с каждым из 5 рекомбинантных человеческих ферментов СУР450, включая СУР1А2, СУР2С9, СУР3А4, СУР2И6 и СУР2С19 в присутствии и в отсутствие ΝΑΌΡΗ. Серийные образцы могут быть взяты из инкубационной смеси в начале инкубации и через 5, 15, 30, 45 и 60 мин после начала инкубации. Концентрацию соединения в каждой инкубационной среде определяли с помощью ЖХ/МС/МС. Процент соединения, оставшегося после инкубации при каждой временной точке, рассчитывают путем сравнения с пробами, отобранными в начале инкубации.
Стабильность в плазме крови крысы, собаки, обезьяны и человека.
Соединения инкубируют в плазме (крыса, собака, обезьяна, или человека) до 2 ч при 37°С. Соединения добавляют в плазму при конечных концентрациях от 1 до 10 мкг/мл. Аликвоты брали на 0, 5, 15, 30, 60 и 120 мин после добавления соединения. Концентрация соединений и основных метаболитов в каждой временной точке измеряли методом ЖХ/МС/МС. Биологические данные (противовирусная активность [ЕС50] определялась с использованием анализа репликона репортер ВГС на основе люциферазы КепШа (КЬис) - ВГС 1Ъ РЬис).
Биологический пример 1.
Анти-ВГС активность комбинации соединения 1 и соединения 2.
Материалы и способы.
Клеточные линии.
Клетки, несущие репликон генотипа ВГС 1Ъ (НиЪ-1ис), были получены из РеЬПкоп (Майнц, Германия). Репликон в этих клетках обозначен 13891ис-иЫ-пео/№3-3'/ЕТ и кодирует селектируемый маркер устойчивости (неомицинфосфотрансферазы), а также ген-репортер люциферазы светлячка. Клетки Ник1ис поддерживались в среде игла, модифицированной Дульбекком (ИМЕМ; О1ВСО, СаткЪай, СА, США) с добавлением 10%-ной фетальной бычьей сыворотки (ЕВ§, Нус1опе, Ьодап, ИТ) и 0,5 мг/мл О418(О1ВСО). Клетки пересевали два раза в неделю и поддерживали на субконфлюентных уровнях.
Определения ЕС50.
Клетки, несущие репликон, высевали в планшеты с 96-лунками с плотностью 5х103 клеток на лунку в культуральной среде ИМЕМ 100 мкл, за исключением О-418. Соединения 1 и 2 последовательно разводили 1:3 в 100% ИМ8О (81дта). Эти серийные разведения добавляли к клеткам в разведении 1:200 для достижения конечной концентрации 0,5% ИМ8О в общем объеме 200 мкл. Планшеты инкубировали при 37°С в течение 3 дней, после чего культуральную среду удаляли и клетки лизировали и анализировали на активность люциферазы с использованием коммерческого анализа люциферазы (Рготеда, Майкоп ^.1., США). Уровни репликации ВГС в образцах, обработанных препаратом, были выражены в процентах по отношению к необработанной контрольной группе (определяли как 100%), и данные подставляли в логистическое уравнение дозозависимого эффекта у=а/(1+(х/Ъ)с с использованием ПО ХЬРй4 (ГОВ§, ЕтегууШе, СА, США). Значения ЕС50 рассчитывали из полученных уравнений, как описано выше (Ие1анеу ^.Е., е! а1., Апйт1сгоЫа1 Адеп!к СкетоШетару, 45(6): 1705-1713 (2001)).
Исследования противовирусных комбинаций.
Клетки, несущие репликон, высевали в 96-луночные планшеты при плотности 5х103 клеток на лунку в 100 мкл культуральной среды. Соединения 1 и 2 последовательно разводили в 100% ИМ8О, как описано выше, и добавляли в формате матрицы в 96-луночные планшеты, достигая определенного набора различных концентраций препарата и соотношений в конечном объеме 200 мкл и конечной концен- 19 026667 трации ΌΜδΘ 0,5%. Для каждого отдельного препарата (за исключением рибавирина) значение ЕС50 было выбрано как средняя точка для испытуемого диапазона концентраций. Клетки инкубировали в течение трех дней и анализировали на экспрессию люциферазы, как указано выше. В комбинированном исследовании два независимых эксперимента проводили в трех повторностях.
Анализ данных комбинаций.
Данные были проанализированы с помощью ПО МасБуиегду II, разработанной Причардом и Шипманом (РпсЬагб Μ.Ν., АкеМие К.К., БЫртаи С., 1г., МасБуиегдуТМ II, Уегк1ои 1.0. Итуегкйу о£ МЫйдап Апп АгЬог, МкЫдаи, 1993; РпсНагб М.К, БЫртаи С., 1г., Аи1Мга1 Кек 14 (4-5):181-205 (1990); РпсНагб М.К, БЫртаи С., 1г., ΛπΗνίΓ ТНег 1 (1):9-20 (1996); РпсНагб М.К, е1 а1., АиНткгоЬ АдеШк СНетоШег 37 (3):540-5 (1993). Программа вычисляла теоретическое ингибирование, предполагая аддитивное взаимодействие между лекарственными средствами (на основе модели Β1ίκκ Шбереибеисе) и определяя количественно статистически значимые различия между теоретическими и наблюдаемыми значениями ингибирования. Изображение этих различий в трех измерениях приводит к получению плоскости, где возрастания по Ζ-шкале представляли противовирусную синергию, а впадины представляли противовирусный антагонизм между соединениями. Расчетные объемы поверхностных отклонений выражали в нмоль2%. По Причарду и Шипману комбинации эффектов определены как:
Высоко синергичны, если объемы >100 нмоль2.
Слегка синергичны, если объемы >50 и <100 нмоль2.
Аддитивны, если объемы >50 нмоль2 и <50 нмоль2.
Слегка аддитивны, если объемы >100 и <50 нмоль2.
Антагонистичны, если объемы <100 нмоль2.
Результаты.
Биологический пример 2. Комбинации с соединением 3.
Материалы и способы.
Противовирусные соединения.
Соединение 3 было синтезировано СПеаб БЛеисек (Рок1ег Сйу, СА, США). Рибавирин и Интерферон-α были приобретены у Б1дта (δΐ. Ьошк, МО, США).
Клеточные линии.
Клетки, несущие репликон генотипа ВГС 1Ь (НиЬ-1ис), были получены из КеЬНкои (Майнц, Германия). Репликон в этих клетках обозначен I3891ис-иЬ^-иео/Nδ3-3'/ЕТ и кодирует селектируемый маркер устойчивости (неомицинфосфотрансферазы), а также ген-репортер светлячка люциферазы. Клетки НиН1ис поддерживались в среде игла, модифицированной Дульбекком (Ό-МЕМ) с 01и1аМАХ™ (Iиν^ΐ^одеη, Сат1кЬаб, СА) с добавлением 10%-ной фетальной бычьей сыворотки (ΡΒδ, Нус1оие, Бодан, ИТ) и 0,5 мг/мл 0-418 (Шуйтодеи). Клетки пассировали два раза в неделю и поддерживали на уровне субконфлюентных.
Определения ЕС50.
Клетки, несущие репликон, высевали в планшеты с 96-лунками с плотностью 5х103 клеток на лунку в культуральной среде ИМЕМ 100 мкл с добавлением 10% ΡΒδ, за исключением 0-418. Соединения последовательно разводили 1:3 в 100% ИМБО (Б1дта). Эти последовательные разведения добавляли к клеткам в соотношении 1:200 до достижения конечной концентрации 0,5% ИМБО в общем объеме 200 мкл. Планшеты инкубировали при 37°С в течение 3 дней, после чего культуральную среду удаляли и клетки лизировали и анализировали на активность люциферазы с использованием коммерческого анализа люциферазы (Рготеда, МайРои, ЭД1, США). Уровни репликации ВГС в обработанных препаратом образцах были выражены в процентах по отношению к необработанной контрольной группе (определяли как 100%), и данные приводили в соответствие с логистическим уравнением дозозависимого эффекта у=а/(1+(х/Ь)с с использованием ПО ХЬРй4 (ГОВБ, ЕтетууШе, СА, США). Значения ЕС50 рассчитывали из полученных уравнений, как описано выше.
Исследования противовирусных комбинаций.
Клетки, несущие репликон, высевали в планшеты с 96 лунками с плотностью 5х 103 клеток на лунку в 100 мкл культуральной среды, за исключением 0-418. Соединения 3 и другие соединения последовательно разводили в 100% ИМБО, как описано выше, и добавляли в формате матрицы в 96-луночные планшеты, достигая определенного набора различных концентраций препарата и соотношений в конечном объеме 200 мкл и конечной концентрации ИМБО 0,5%. Для каждого отдельного препарата (за исключением рибавирина) значение ЕС50 было выбрано как средняя точка для испытуемого диапазона концентраций. Для Рибавирина, который не обладал селективным противовирусным действием, была выбрана верхняя доза 6,2 мкмоль, т.к это было примерно в 3 раза ниже концентрации, при которой начинала наблюдаться цитотоксичность. Клетки инкубировали с препаратами в течение трех дней и анализировали на экспрессию люциферазы, как указано выше. Для исследования каждой комбинации два независимых эксперимента проводили в трех повторностях.
Анализ данных комбинаций.
Данные были проанализированы с помощью ПО МасБуиегду II, разработанного Причардом и
- 20 026667
Шипманом. Программа вычисляла теоретическое ингибирование, предполагая аддитивное взаимодействие между лекарственными средствами (на основе модели Β1ΐ88 1иБереиБеисе) и определяя количественно статистически значимые различия между теоретическими и наблюдаемыми значениями ингибирования. Изображение этих различий в трех измерениях приводит к получению плоскости, где возрастания по Ζ-шкале представляли противовирусную синергию, а впадины представляли противовирусный антагонизм между соединениями. Расчетные объемы поверхностных отклонений выражали в нмоль2%. По Причарду и Шипману комбинированные эффекты определяли следующим образом:
сильный синергизм, если объемы >100 нмоль2; этот объем синергизма, вероятно, важен ίη νίνο, умеренный синергизм, если объемы >50 и <100 нмоль2; этот объем синергизма может быть важным ίη νίνο, незначительный синергизм, если объемы >25 и <50 нмоль2, аддитивность, если объемы -25 и <25 нмоль2, незначительный антагонизм, если объемы <-25 и >-50 нмоль2, умеренный антагонизм, если объемы >-100 и <-50 нмоль2; этот объем антагонизма может быть важным ίη νίνο, сильный антагонизм, если объемы <-100 нмоль2; этот объем антагонизма, вероятно, важен ίη νίνο. Результаты.
Значения ЕС50 для индивидуальных соединений в клетках, несущих репликон Ник-1ис.
До начала комбинационных экспериментов определяли значения ЕС50 в клетках, несущих репликон
НиБ-1ис для каждого соединения, как приведено в табл. IV. Все соединения имели противовирусный эффект, за исключением рибавирина, у которого не было противовирусной активностью вплоть до концентраций, которые начинали показывать цитотоксичность.
ТаблицаIV
Индивидуальные значения ЕС50 для анти-ВГС соединений в клетках, несущих репликон НиБ-1ис
Соединение ЕС5о1нМ)а
Соединение 3 2,3 + 2,6
ΙΡΝ-α 0,105 + ,003 (ЕД/мл)в
Рибавирин >12500
а - ЕС50 обозначает среднее арифметическое±стандартное отклонение для двух или более независимых экспериментов.
ь - ΙΝΡ-α ЕС50 выражается в единицах (ЕД) на миллилитр (мл) вместо наномолярной концентрации.
Противовирусный эффект комбинаций и взаимодействие с лекарствами.
Биологический пример 3.
Материалы и способы.
Анти-ВГС агенты.
Соединение 3 и соединение 6 были синтезированы ОПеаБ Баенсея (Ρο8!е^ С11у. СА, США). Пуромицин, интерферон-α и рибавирин были приобретены у §1§та (8ΐ. Εοιιίδ. МО, США). Кальцеин АМ (Са1сет АМ) был приобретен у Аиазрес (Ρ^етοη!, СА, США).
Клеточная линия и культура клеток.
Клеточная линия репликона ВГС генотипа 1а, используемая в данном исследовании, была описана ранее. Клетки выращивали в в клеточной культуральной среде, содержащей среду игла в модификации Дульбекко (ИМЕМ) с О1и!аМАХ (ОЛто, СагПЬаБ, СА, США Са! # 10569-044, ) с добавлением 10% ΡΒδ (Нус^е, Ροβηη, ИТ, США, Са! # 8Н30071.03), 100 единиц/мл пенициллина, 100 мкг/мл стрептомицина (ОЛто, СагкЬаБ, СА, США Са!# 15140-122) и 0,1 мМ заменимых аминокислот (ОЛто, СагПЬаБ, СА, США Са!#11140-050). Клетки, несущие репликон, поддерживали в 0,5 мг/мл генетицина (ΙηνίΙΐΌ^η, СагкЬаБ, СА, США Са!# 10131-035), во избежание потери репликона ВГС. Клетки пассировали каждые 3-4 дня до достижения конфлюэнтности.
Анализ репликона ВГС на ЕС50, определение СС50 и изучение комбинаций.
Все соединения были поставлены в 100% ИМ5О, за исключением ΙΡΝ-α, который был поставлен в буфере, указанном производителем (51дта, δ! Εοω8, МО, США Са! # Ι4276). Серийное разведение соединений проводили в 100% ИМ5О, за исключением ΙΡΝ-α, который последовательно разводили в клеточной культуральной среде, описанной в разделе 3.2. Все серийные разведения проводили в 384луночных полипропиленовых планшетах (ТНегию БаейШс, Ниά8οη, N4, США, Са! # 4341) с использованием Вютек РХ \νοιΊ<8ΚιΙίοη. Для определения ЕС50 и СС50 тестируемые соединения серийно разводили в десять этапов в разведениях 1:3 в колонках 3-20 в 384-луночных планшетах. Для изучения комбинаций одно соединение серийно разводили в девять этапов в разведениях 1:2 в горизонтальном направлении с другим соединением, серийно разведенным в семь шагов в разведении 1:2 в вертикальном направ- 21 026667 лении. Этим достигался определенный набор различных концентраций и соотношений лекарственных средств. Для каждого отдельного средства (за исключением рибавирина) значение ЕС50 было выбрано как средняя точка для испытуемого диапазона концентраций. Все серийные разведения были выполнены в четырех повторностях для каждого соединения в том же 384-луночном планшете. 100% ΌΜδΘ добавляли в колонку 1-2 каждого последовательного разбавления 384-луночного планшета. Ингибитор протеазы ВГС ΙΤΜΝ-191 в объеме 100 мкмоль был добавлен в колонку 23 в качестве контроля 100% ингибирования репликации ВГС, в то время как пуромицин в объеме 10 ммоль был добавлен в колонку 24 в качестве контроля 100% цитотоксичности.
С помощью Вю1ек цР1оу \Уогк51аИоп в каждую лунку 384-луночного планшета из черного полистирола (Огешег Вю-она, Мопгое, ΝΟ, США, Са1 # 781086, обработанные культурой клеток) добавили 90 мкл клеточной культуральной среды (без генетицина), содержащий 2000 суспендированных клеток репликона ВГС. Для переноса соединения в планшеты с культурой клеток 0,4 мкл раствора соединения из планшета с серийными разведениями соединения переносили в планшет с клеточной культурой с помощью Вютек РХ \Уогк51аРоп. Концентрация ΌΜδΘ в заключительных аналитических лунках составила 0,44%. Планшеты инкубировали в течение 3 дней при 37°С при 5% СО2 и 85% влажности.
Анализ репликона ВГС являлся многоканальным анализом, который из одной и той же лунки может оценить как цитотоксичность, так и антирепликонную активность. Анализ СС50 проводили в первую очередь. Среду в 384-луночном культуральном планшете отсасывали, и лунки промывали четыре раза 100 мкл 1χΡΒδ в каждую, используя мойку планшетов Вю1ек ЕЬХ405. Объем 50 мкл раствора, содержащего 400 нмоль кальцеина АМ (Аηаδρес, Ргетой, СА, США Са1 # 25200-056), в 1xΡΒδ добавляли в каждую лунку планшета с помощью Вю1ек цР1о\у \Уогк51аРоп. Планшет инкубировали в течение 30 мин при комнатной температуре до измерения сигнала флуоресценции (возбуждение 490 нм, излучение 520 нм) с помощью планшет-ридера Регкш Е1тег Етйюп Р1а1е Кеабег.
Анализ ЕС50 проводили в тех же лунках, что и анализ СС50. Раствор кальцеин-ΡΒδ в 384-луночном культуральном планшете отсасывали с помощью мойки планшетов Вю1ек ЕЬХ405. Буфер люциферазы Ииа1-О1о (Рготеда, МаШзоп, ^1, США Са1 # Е298В) в объеме 20 мкл добавляли в каждую лунку планшета с помощью Вю1ек цР1о\у \Уогк51аИоп. Планшет инкубировали в течение 10 мин при комнатной температуре. Затем с помощью Вю1ек рР1о\у ^огк51айои в каждую лунку планшета добавляли раствор в объеме 20 мкл, содержащий смесь 1:100 Ииа1-О1о δΦρ & О1о субстрат (Рготеда, Маб15оп, ^1, Са1 # Е313В) и Ииа1-О1о δΦρ & О1о буфер (Рготеда, Маб15оп, ^1, Са1 # Е314В). Затем планшет инкубировали при комнатной температуре в течение 10 мин до того, как измеряли сигнал люминесценции с помощью планшетридера Регкш Е1тег Еиν^5^ои Р1а1е Кеабег.
Анализ данных.
Эффект цитотоксичности определялся по преобразованию кальцеина АМ в флуоресцентнцый продукт. Процент цитотоксичности рассчитывали по уравнению 1 % цитотоксичности или % ингибирования = 100 х (1 -2Х—
Мс -мв (1) где ХС является флуоресцентным сигналом от лунки, обработанной соединением; МВ представляет собой средний флуоресцентный сигнал от лунок, обработанных пуромицином; Мс представляет собой средний флуоресцентный сигнал от лунок, обработанных ΌΙ^δΟ. Активность репликации анти-ВГС определяли по люминесцентному сигналу, генерируемому репликоном ВГС репортерна люциферазы Кей11а. Процент ингибирования репликона ВГС рассчитывали с помощью уравнения 1, где ХС люминесцентный сигнал от лунки, обработанной соединением; МВ средний люминесцентный сигнал от лунок, обработанных ГТМ№191; Мс средний люминесцентный сигнал от лунок, обработанных ΌΙ^δΟ.
Значение СС50 определяли как концентрацию тестового соединения, которая вызвала 50%-ное снижение жизнеспособности клеток. Значение ЕС50 определяли как концентрацию тестового соединения, которая вызвала 50%-ное снижение репликации ВГС. Как значения СС50, так и значения ЕС50 были получены с использованием ПО Р1ре1ше Рбо1 5.0 (Ассе1гу5, δаи И1едо, СА, США) с помощью нелинейной регрессионной подгонки экспериментальных данных к уравнению 2 где у - наблюдаемый % ингибирования репликона ВГС при х концентрации соединения, б - оценочный ответ при нулевой концентрации соединения; а - оценочный ответ при бесконечно большой концентрации соединения; с- средняя концентрация (СС50 или ЕС50); Ь - угловой коэффицинт Хилла.
Данные были проанализированы с помощью ПО Μасδуие^§у II, разработанный Причардом и Шипманом. Программа (Μасδуие^§у™ II, ишуегебу о! МюЫдап, М1) вычисляет теоретическое ингибирование, предполагая аддитивное взаимодействие между препаратами (на основе модели В1155 Шберепбепсе) и количественно оценивает статистически значимые различия между теоретическими и наблюдаемыми значениями ингибирования. Изображение этих различий в трех измерениях приводит к получению плос- 22 026667 кости, где возрастания по Ζ-шкале представляли противовирусную синергию, а впадины представляли противовирусный антагонизм между соединениями. Расчетные объемы поверхностных отклонений выражали в нмоль2%. По Причарду и Шипману комбинации эффектов определяются как:
сильный синергизм >100 нмоль2%, умеренный синергизм >50 и <100 нмоль2%, незначительный синергизм >25 и 50 нмоль2%, аддитивность <25 и >-25 нмоль2%, незначительный антагонизм <-25 и >-50 нмоль2%, умеренный антагонизм <-50 и >-100 нмоль2%, сильный антагонизм <-100 нмоль2%.
Для исследовании каждой комбинации проводились три независимых эксперимента в четырех повторностях в каждом эксперименте.
Результаты.
Антивирусная активность и цитотоксичность отдельных соединений в анализе репликона ВГС генотипа 1а.
Анти-ВГС активность и цитотоксичность соединений были испытаны на Ник-7 клетках, несущих репликон ВГС генотипа 1а. ЕС50 и СС50 значения приведены в табл. VI. Не наблюдали никакой существенной цитотоксичности для всех соединений, вплоть до самых высоких тестируемых концентраций.
Таблица VI
ЕС50 и СС50 соединений, используемых в этом исследовании, по сравнению с репликоном генотипа ВГС 1а
Соединения ЕСдо3 (нмоль) СС5оа (нмоль)
Соединение 3 49 ± 18 >22200
Соединение 6 0,033 ±0,011 >44400
ΙΡΝ-α 1.4 ± 0,3й >50ь
Рибавирин 36482 ±17507 >88800
а - значения являются средним±стандартным отклонением для трех или более независимых экспериментов. Ь - ΙΡΝ-α значения выражаются в единицах (ЕД) на миллилитр (мл) вместо наномолярной концентрации.
Биологический пример 4. Комбинации соединения 6.
Материалы и способы.
Соединения.
Соединение 3 и соединение 6 были синтезированы СПеаб §с1еисе8 (Ро81ег СИу, СА, США). ΙΡΝ-α и рибавирин были приобретены у §1дта (δΐ. Ьошк, МО, США).
Клеточные линии.
Клетки, несущие репликон генотипа ВГС 1Ь (НиЪ-1ис), были получены из КеЬНкоп (Майнц, Германия). Репликон в этих клетках обозначен 13891ис-иЫ-пео/№3-3'/ЕТ и кодирует селектируемый маркер устойчивости (неомицинфосфотрансферазы), а также ген-репортер люциферазы светлячка. Клетки Ник1ис поддерживали в среде игла, модифицированной Дульбекком (ΌΜΕΜ) О1и!аМАХ (1пуйгодеп, СагИЬаД СА, США), дополненной 10%-ной фетальной бычьей сывороткой (ΡΒδ; Нус1опе, Бодаи. иТ, США), 1Х пенициллина/стрептомицина, 1Х заменимыми аминокислотами и 0,5 мг/мл 0-418 (все из Ιηνί1годеп, СагИЬаД СА, США). Клетки пассировали два раза в неделю и поддерживали на уровне субконфлюентных.
Анализы.
Анализ противовирусной активности в клетках, несущих репликон Ни1г1ис.
Клетки, несущие репликон, высевали в планшеты с 96-лунками с плотностью 7х 103 клеток на лунку в культуральной среде ΌΜΕΜ 100 мкл, за исключением 0-418. Соединения последовательно разводили 1:2 в 100% ΌΜδΟ. Эти последовательные разведения добавляли к клеткам в соотношении 1:200 до достижения конечной концентрации 0,5% ΌΜδΟ в общем объеме 200 мкл. Планшеты инкубировали при 37°С в течение 3 дней, после чего культуральную среду удаляли, и клетки лизировали и анализировали на активность люциферазы с использованием коммерческого анализа люциферазы (Рготеда, Μаά^8оη, Ж США).
Исследования противовирусных комбинаций.
Клетки, несущие репликон, высевали в планшеты с 96 лунками с плотностью 7х 103 клеток на лунку в 100 мкл культуральной среды, за исключением 0-418. Соединения 6 и другие соединения последовательно разводили 1:2 в 100% ΌΜδΟ и добавляли в формате матрицы в 96-луночные планшеты, достигая определенного набора различных концентраций препарата и соотношений в конечном объеме 200 мкл и конечной концентрации ΌΜδΟ 0,5%. Для каждого отдельного препарата (за исключением рибавирина)
- 23 026667 значение ЕС50 было выбрано как средняя точка для испытуемого диапазона концентраций. Клетки инкубировали в течение 3 дней и анализировали на экспрессию люциферазы с использованием коммерческого анализа на люциферазу (Рготеда). Для исследования каждой комбинации два независимых эксперимента проводили в трех повторностях.
Определение клеточной цитотоксичности.
Клетки, несущие репликон, высевали и лечили с помощью препаратов, как описано выше для исследований противовирусных комбинаций. После трех дней инкубации при 37°С культуральную среду удаляли, клетки лизировали и анализировали на цитотоксичность с использованием люминесцентного анализа жизнеспособности клеток С’е11ТПег-С1о Ьиттевсей Се11 У1аЬШ1у А88ау (Рготеда) в соответствии с инструкциями изготовителя. Относительные световые единицы были преобразованы в проценты по отношению к необработанным контролям (определено как 100%).
Анализ данных.
Расчеты ЕС50.
После анализов на ЕС50 уровни люциферазы в образцах, обработанных лекарственными средствами, были выражены в процентах от необработанной контрольной группы (определено как 100%). Значения ЕС50 рассчитывали методом нелинейного регрессионного анализа повторных наборов данных с использованием ПО ХЬй! 4 (ГОВ8, ЕтегууШе, СА, США).
Расчет противовирусного синергизма и антагонизма.
После анализов комбинаций уровни люциферазы в образцах, обработанных лекарственными средствами, были выражены в процентах от необработанной контрольной группы (определено как 100%). Затем повторные наборы данных были проанализированы с помощью ПО Мас8упегду II, разработанного Причардом и Шипманом. Программа (Мас8упегду™ II, ишуегхПу о£ МкЫдап, МЦ вычисляет теоретическое ингибирование, предполагая аддитивное взаимодействие между препаратами (на основе модели Β1ΐδδ Шберепбепсе) и количественно оценивает статистически значимые различия между теоретическими и наблюдаемыми значениями ингибирования. Изображение этих различий в трех измерениях приводит к получению плоскости, где возрастания по Ζ-шкале представляли противовирусную синергию, а впадины представляли противовирусный антагонизм между соединениями. Расчетные объемы поверхностных отклонений выражали в нмоль2%. По Причарду и Шипману комбинации эффектов определены как:
сильный синергизм, если объемы >100 нмоль2; этот объем синергизма, вероятно, важен ш \луо, умеренный синергизм, если объемы >50 и <100 нмоль2; этот объем синергизма может быть важным ш У1уо, незначительный синергизм, если объемы >25 и <50 нмоль2, аддитивность, если объемы >-25 и <25 нмоль2, незначительный антагонизм, если объемы <-25 и >-50 нмоль2, умеренный антагонизм, если объемы >-100 и <-50 нмоль2; этот объем антагонизма может быть важным ш У1Уо, сильный антагонизм, если объемы <-100 нмоль2; этот объем антагонизма, вероятно, важен ш У1уо.
Результаты.
Противовирусная активность индивидуальных соединений в клетках, несущих репликон Ний-1ис.
До начала экспериментов на комбинации определяли противовирусную активность отдельных соединений в клетках, несущих репликон Ний-1ис. Для всех семи соединений наблюдали значения ЕС50, согласующиеся с историческими результатами.
Таблица IX
Индивидуальные значения ЕС50 для анти-ВГС соединений в клетках, несущих репликон Ний-1ис
Соединение ЕСго (нмоль)3
ΙΗΝ-α6 0,05 ЕД/мл. ± 0,04
Рибавирин > 12 + 2,4
Соединение 3 3,0 ±1,2
Соединение 6 0,0018 ±0,0007
а - ЕС50 обозначает среднее арифметическое±стандартное отклонение для трех или более независимых экспериментов.
Ь - ΣΕΝ-α. ЕС50 выражается в единицах (ЕД) на миллилитр (мл) вместо наномолярной концентрации.
Противовирусный эффект комбинаций и взаимодействие с лекарствами.
Противовирусный эффект соединения 6 в комбинации с другими ингибиторами ВГС был оценен с использованием системы репликона ВГС 1Ь. Полученные данные были проанализированы с использова- 24 026667 нием Мас8упег§у II, которая предоставляет поверхностные графики, отображающие существенные отклонения от аддитивности. Количественное определение статистически значимых отклонений от аддитивности из двух независимых экспериментов обобщены в табл. XII. Комбинации соединения 6 с ΙΡΝ-α привели к объемам синергизма 32 нмоль2, что указывает на незначительный синергизм. Рибавирин показал объем синергизма 61 при сочетании с соединением 6, что указывает на умеренное синергическое взаимодействие между соединением 6 и этим ингибиторами ВГС. Комбинация соединения 6 с соединением 3 привело к объему синергизма 132 нмоль2%, что указывает на сильное синергическое противовирусное взаимодействие. Ни одно из соединений не дало объемы противовирусного антагонизма вне аддитивного диапазона (>-25 нмоль2) в сочетании с соединением 6.
Таблица XII
Количественная оценка противовирусной синергии, антагонизма и лекарственного взаимодействия для комбинаций лекарств с соединением 6
Лекарство(ва) примененное(ые) в комбинации с Соединением б Объем синергии (нмоль2)3 Объем антагонизма (нмоль2)* Взаимодействие
ΙΡΝ-α, 32 ± 1,4 0,0 + 0,0 Незначительный синергизм
Рибавирин 61 ±0,5 -0,5 ±0,1 Умеренный синергизм
Соединение 1 34 ± 9,9 -17 ±0,7 Незначительный синергизм
Соединение 2 52 ± 5,1 -0,7 ±0,7 Умеренный синергизм
Соединение 3 132 + 44 -0,1 + 0,2 Сильный синергизм
Соединение 7 51 ±7,8 -0,2 ±0,1 Умеренный синергизм
а - значения представляют собой среднее арифметическое±стандартное отклонение из двух независимых экспериментов, проведенных в трех повторностях.
Жизнеспособность клеток в процентах для соединения 6 в комбинации с другими ингибиторами
ВГС.
Чтобы убедиться, что результаты для антивирусных комбинаций не были искажены комбинированной цитотоксичностью, цитотоксичность была исследована параллельно с использованием тех же концентраций соединений, исследованных в антивирусных тестах (табл. XIII). Для всех соединений жизнеспособность клеток составляла по меньшей мере 98% от необработанных контролей для комбинаций на самых высоких испытанных концентрациях. Таким образом, не наблюдалось никакой существенной цитотоксичности ίη νίΐΓΟ при тестировании соединения 6 по отдельности или в сочетании с этими агентами.
Таблица XIII
Жизнеспособность клеток в процентах для соединения 6
для комбинаций в клетках НиЬ-1ис, несущих репликон
Соединения Концентрация(ции) (нмоль) Жизнеспособность клеток %а
Соединение 6 0,014 99 ±1
Соединение 6 + ΙΡΝ-α13 0,014 + 0,8 102 ±3
Соединение 6 + Рибавирин 0,014 + 8000 105±4
Соединение 6 + Соединение 3 0,014+ 12,8 104±4
а - жизнеспособность клеток % представляет собой среднее арифметическое±стандартное отклонение для по крайней мере двух независимых экспериментов, проведенных в трех повторностях. ь - IΡN-α выражается в единицах (ЕД) на миллилитр (мл) вместо наномолярной концентрации.
Выводы.
Результаты этих экспериментов, проведенных ίη νίίτο, показывают, что соединение 6 имеет незначительный противовирусный синергизм в сочетании с ШИ-а. Комбинации соединения 6 с рибавирином привели к умеренной противовирусной синергии. Сильную противовирусную синергию наблюдали между соединением 6 и ингибитором протеазы Ν83 соединением 3. Во время тестирования этих комбинаций лекарств не было выявлено какой-либо существенной цитотоксичности ίη νίίτο. Эти результаты показывают, что соединение 6 можно разумно сочетать с существующим стандартом терапии.
Биологический пример 6.
Соединения.
Соединение 3 и соединение 6 были синтезированы Сйеай 8шепсе5 (То51ег Сйу, СА, США).
- 25 026667
Клеточные линии.
Клетки, несущие репликон генотипа ВГС 1Ь (Ний-1ис), были получены из РеЬПкоп (Майнц, Германия). Репликон в этих клетках обозначен 13891ис-иЫ-пео/№3-3'/ЕТ и кодирует селектируемый маркер устойчивости (неомицинфосфотрансферазы), а также ген-репортер люциферазы светлячка. Клетки Нпк1ис поддерживали в среде игла, модифицированной Дульбекком (ΌΜΕΜ) 01πΙπΜΛΧ (1пуйгодеп, СагкЬай, СА, США), дополненной 10%-ной фетальной бычьей сывороткой (РВ§; Нус1опе, Ьодап, ИТ, США), 1Х пенициллина/стрептомицина, 1Х заменимыми аминокислотами и 0,5 мг/мл 0-418 (все из Ιπνί!годеп, СагИЬай, СА, США). Клетки пересевали два раза в неделю и поддерживали на субконфлюентных уровнях.
Анализы.
Определение концентрации соединения, необходимой для подавления РНК репликона на величину 1-1,5 1од в течение 6 дней лечения.
Клетки, несущие репликон генотипа 1Ь, высевали в колбы Т-75 с клеточной плотностью 2,5х105 клеток/колбу, за исключением 0418. Соединения по отдельности добавляли к клеткам в различных концентрациях: соединение 6 добавляли в концентрациях 1, 2, 4, 6, 8 или 12 нмоль, соединение 4 добавляли в 125, 250, 375, 500 или 1000 нмоль, соединение 1 добавляли в 1,25, 2,5, 5, 7,5 или 10 нмоль и соединение 3 добавляли в концентрациях 3,75, 7,5, 11,25, 15, 30 или 60 нмоль. Колбы инкубировали при 37°С, среду и соединения обновляли каждые два дня. После 6 дней инкубации клетки, несущие репликон, собирали для экстракции РНК и анализа репликона РНК количественным анализом ПЦР в реальном времени.
Анализ лечения репликона комбинацией соединений.
Клетки, несущие репликон генотипа 1Ь, высевали в колбы Т-75 с плотностью 2,5х105 клеток/колбу. Соединения добавляли в колбы Т-75 в следующих концентрациях: соединение 6 в 4 нмоль, соединение 4 в 1000 нмоль, соединение 1 в 10 нмоль и соединение 3 в 26,25 нмоль. Колбы инкубировали при 37°С, и соединения и среды обновляли каждые два дня. Все эксперименты выполнялись в двух повторностях и в данном документе будут отмечены как колба 1 и колба 2. На 6 день все клетки собирали из колбы 1 для экстракции РНК с последующим репликоночувствителыным количественным анализом ПЦР в реальном времени, а клетки из колбы 2 снова высевали на 10 см чашках Петри в присутствии 0418 в течение 14 дней, чтобы зафиксировать образование колоний нелеченных клеток, несущих репликон.
Количественный анализ ПЦР в реальном времени.
Общую РНК экстрагировали с помощью набора ШЬоРиге (АΜ1924 Ы£е ТесЬпо1од1е5 Согрогайоп СагкЬай, СА, США), следуя инструкциям производителя. Извлеченные образцы РНК хранили при -80 °С до использования. Для количественного анализа ПЦР в реальном времени использовали набор Ц1адеп Опе-51ер ЦРТ-РСР кй, инструкции производителя (Ц1адеп, Уа1епс1а, СА, США). Специфические праймеры гена N83 генотипа 1Ь ВГС, прямой праймер
Ν53_ΐ8οη 5’-сеесбеАстетстАТСАтеетес[РАМ]о-‘з (зео ГО ΝΟ:1)Μ Обратный Ν53_180 5’-ееТССТееТССАСАТТССТСТ-'З (5Е0 ГО N0:2), и набор праймеров для эндогенного контроля 188 γΡΝΛ ЬИХ™ [ΡАΜ] (115НΜ-01) были произведены корпорацией 1пуйгодеп (СагйЬай, СА, США). Для этапа обратной транскриптазы реакции инкубировали при 44°С в течение 30 мин, затем фермент разрушался при нагревании образца до 94°С в течение 10 мин. Этап количественной ПЦР включал 38 циклов при 94°С в течение 15 с и 58°С в течение 30 с.
Результаты.
До начала экспериментов по лечению репликонов комбинациями определяли концентрацию соединения, необходимую для подавления РНК репликона генотипа 1Ь на 1-1,5 1од для соединения 6, соединения 4, соединения 1 и соединения 3. Логарифмическое уменьшение РНК репликона является относительным к уровням РНК в контрольных обработанных ДМСО клетках, несущих репликон, поддерживаемых в течение 6 дней.
Таблица XIV
Индивидуальная доза соединения, способная вызвать уменьшение РНК репликона 1-1,5 1од, в 6-дневном анализе
Соединение 1_од падение РНК репликона Концентрация соединений (нмоль)
Соединение 3 -0,9 26,25
Соединение 6 -1,4 0,004
Анализ лечения репликона генотипа 1Ь.
Подавление РНК репликона соединениями, соединение 6 и соединение 3, было определено при помощи 6-дневного анализа как отдельных соединений в двойных комбинациях. Ьод уменьшение РНК репликона является относительным к уровням РНК в контрольных обработанных ДМСО клетках, несущих репликон, поддерживаемых в течение 6 дней в колбах, в которых проводилась обработка. Способность различных комбинаций соединений излечивать клетки от репликона ВГС была определена по образова- 26 026667 нию колоний. Образование колоний происходило после того, как соединение, которым обрабатывали, было удалено и давление Ο418 было возвращено в течение 14 дней. Если комбинация соединений полностью излечивает клеточную популяцию от репликона ВГС, какие-либо колонии не будут развиваться, так как клетки не имеют устойчивости к Ο418.
Таблица XV
Количественное определение комбинации соединений в анализе лечения репликона
Соединения 1_од уменьшение РНК репликона Количество неизлеченных колоний
Соединение 6 -1,4 634
Соединение 3 -0,9 989
Соединение З+Соединение 6 -2,62 13
Выводы.
Результаты этих экспериментов ίη νίΐΓΟ показывают, что комбинация двух соединений усиливает 1од уменьшение вирусной РНК на протяжении 6-дневного лечения и увеличивает частоту излеченных клеток, несущих репликон. Двойные комбинации соединения 6 с соединением 3 приводят к большему 1од подавлению репликона РНК и наименьшему количеству неизлеченных колоний по сравнению со всеми другими комбинациями двух соединений.
Биологический пример 7. Соединения 6.
Данное исследование было проведено с целью определения ίη νίίτο профилей перекрестной резистентности соединения 6. Панель мутантных репликонов ВГС, несущая отличительный Νδ5Β нуклеозид ВГС мутации устойчивости к лекарственным средствам 8282Т, или наиболее распространенные ίη νίΐτο и ίη νίνο Νδ5Α ВГС мутации устойчивости к лекарственным средствам были исследованы с помощью анализа неустойчивого репликона, с тем, чтобы определить, существует ли перекрестная резистентность между мутациями, обеспечивающими пониженную восприимчивость к соединению 6. Между этими соединениями перекрестной устойчивости не наблюдалось, при этом мутантные репликоны 8282Т оставались полностью восприимчивыми к соединению 6.
Материалы и способы.
Реагенты.
Соединения.
Соединение 6 было синтезировано Ойеай Бйепсек Иге. в Ро§1ег СНу, СА, США. Клеточные линии НиЬ-1ипе1, клон НиБ-7, который крайне чувствителен к репликации ВГС, был получен из КеВЫкои ОтЬН (Майнц, Германия). Клетки НиЬ-1ипе1 поддерживались в среде игла в модификации Дульбекко (ΌΜΕΜ; ОФсо, СагПЬай, СА, США) с добавлением 10%-ной фетальной бычьей сыворотки (ΡΒδ; Нус1опе, Бодан, ИТ, США). Клетки выдерживали при 37°С во влажной камере (85% влажности) в атмосфере 5% СО2.
Для переходных исследований трансфекции были использованы ΡΙ-ΗΚΙϋΟ, бицистронный репликон, кодирующий ген люциферазы КевШа, расположенный после ΙΚΕδ полиомиелита, и неструктурные гены (Νδ3-Νδ5Β) генотипа 1Ь ВГС (штамм Соп-1), расположенные после ВΜСV ΙΚΕδ. Плазмид ΡΡΙ-1ιΚ1ικ получали из плазмида ρΡΚΙ341 ΡI-^ис/Nδ3-3'/ВТ. который кодирует субгеномный репликон генотипа 1Ь (штамм Соп-1) и был получен от КеВЬ1коп (БпеЬе е! а1., Σ νίΐΌ1 2001; 75(24):12047-57). Ген БК1ис был амплифицирован ПЦР из ΡΡ9 СΜV БК1ис-нео Р1ех1 (К) (Гготеда, Μаά^8οη, ΑΙ) методом ПЦР с использованием Ассирпте Бирег Μίχ Ι ОтЦгодеп, СагкЬай, СА, США) и праймеров Ρν-Юис-Тор и 3'-К1ис (Nοΐ1). Эти два праймера имели следующие последовательности и несли сайты рестрикции для последующего клонирования:
- 27 026667
ТТО ТАТ САТ ААТ ООО ТТС САА ΟΟΤ ОТА СО 3’ (ЗЕО ГО N0:3); 3’-ΚΙυθ{Νθ<Ι): 5' АСО ТСА СТА ТСТ АСО СОО ССО СТТ АСТ ОСТ СОТ ТСТ ТСЗ’ (сайт ΝοίΙ подчеркнут) (ЗЕО ГО N0:4).
Промотор Т7, 5'-иТР и ΙΚΕ8 вируса полиомиелита были амплифицированы ПЦР из плазмиды рРК1341 Р1-Ьис/№3-3'/ЕТ с использованием праймеров 5'-Р7 (8ВР1) и РУ_К1ис_Войот. Эти два праймера имели следующие последовательности и несли сайты рестрикции для последующего клонирования:
5'-Р7(5ЬН): 5’ САА ССТ ААС СТО
ССТ ОСА ΟΟ Т 3’ (сайт ЗЬЯ подчеркнут) (5Е0 ГО N0:5); РУ_К1ис_Во«от: 5’ СОТ АСА ССТ ТОО ААО ССА ТТА ΤΘΑ ТАС ААТ ТОТ СТО АТ (ЗЕО ГО N0:6).
Последующие фрагменты ПЦР из двух вышеуказанных реакций были затем объединены с использованием ПЦР с перекрывающимися праймерами и праймеров 5'-Р7 (8ВР1) и 3'-Р1ис (Nоΐ1). Завершенный продукт амплификации Ρ7-5'υΤΚ-IΚΕ8 полно вируса -НР1ис субклонировали в рСК2.1-ТОРО. Полученную плазмиду переваривали №(1 и 8ВР1, и вырезанный фрагмент ^7-5^1^.-1^8 полио вируса -НР1ис) лигировали с использованием ДНК-лигазы Т4 в рРК1341 Р1-Ьис/№3-3'/ЕТ, переваренный теми же ферментами. Полученный вектор, РР1-НР1ис, секвенировали для подтверждения правильной ориентации и последовательности Р75'иТР- ΙΚΕ8 полио вируса-НР1ис области плазмиды.
Репликоны ОТ 1А и 2А, содержащие НР1ис. были описаны ранее (РоЬиъоп М., Уапд Н., 8ип 8.С., Репд В., Т1ап Υ., РадгаДв Ν., е( а1. №те1 НОУ РероДег РерПсоп Се11 Ыпев ΕпаЬ1е ΕГГ^с^епι ЛпДν^^а1 8сгеепшд ада1И51 Оепо1уре 1а. ЛиДт^с^оЬ Лдепΐδ СНетоШег 2010.)
Репликон Р1-НР1ис был использован в качестве основы для получения химеры. Внутриклональная деления была сделана в №5В, что превращало его в репликационно дефективный. Последние 413 комплементарных пар оснований (кодирующие последние 137 аминокислот Ν85Α) ^^ΟΝΟ Ν85Α были синтезированы внутри рамки с последовательностями №5В из генотипов 2Ь, 3а, 4а, 5а, 6а и (Оеп8спр1 1пс. РЕса1а\уау Ν1, США). Консенсусные последовательности №5В для каждого из этих генотипов были получены путем выравнивания последовательностей, депонированных в европейской базе данных ВГС, и извлечения консенсуса. Эти новые последовательности консенсуса для №5В, а также последовательности, полученные из отдельных клинических изолятов (НегДДу е( а1., ЛиДт^с^оЬ Лдеηΐδ СНетоШег 2008;52 (10):3523-31), были использованы для создания химерных репликонов №5В. Уникальный сайт ХНо1 был использован на 5' конце и уникальный сайт Α8ΕΙ - на 3' конце с целью непосредственно клонировать в вектор 1Ь-НРЕис/№оР №5В с помощью стандартных методов молекулярной биологии.
Мутации №5В 8282Т были введены репликоны плазмиды с помощью комплекта для мутагенеза ОшкС’Напде II ХЬ в соответствии с инструкциями изготовителя (8(га1адепе. Ьа 1о11а. СЛ, США). Весь мутированный репликон секвенировали, чтобы подтвердить присутствие мутации 8282Т и отсутствие каких-либо вторичных мутаций сайта.
Мутантные репликоны Ν85Α были созданы путем синтеза последовательности, кодирующей первые 149 аминокислот Ν85Α, содержащих требуемую мутацию, по бокам ограничены сайтами 5' и 3' В8гО1 и ΕοθΡΙ соответственно (Оеп8сДрД РЕса1а\уау. Ν1, США). Затем синтезированные фрагменты клонировали с помощью стандартных методов молекулярной биологии в репликона плазмиды 1а Р1ис, модифицированной для того, чтобы обеспечить возможность клонирования по уникальным сайтам рестрикции В8гО1 и ΕοθΕΙ. Мутации были подтверждены секвенированием ДНК.
Репликоны линеаризовали с использованием следующих ферментов: 8ре I (на основе репликонов 1Ь Р1-Р1ис). Нра I (на основе репликонов 1а-Р1ис), и ХЬа1/Нра1 (репликоны 2а Р1ис). Репликон РНК транскрибируется ш νίΙΐΌ из репликонкодирующей плазмиды при использовании набора для транскрипции Т7 РЬотах ш ν^ι^о (Рготеда; МаД1воп, ΑΙ, США) с последующей очисткой с использованием колонки Р.NЛеаδу (01адеп; Уа1епс1а. СА США).
Анализы.
Определение лекарственной чувствительности с помощью транзиентной трансфекции репликонов.
РНК трансфицировали в клетки НиН-Еипе1 с помощью метода Ломана с соавторами (ЕоНтапп е( а1., 8с1епсе 1999;285 (5424): 110-3). Коротко, клетки обрабатывали трипсином и дважды промывали РВ8. Суспензию 4х106 клеток в 400 мкл РВ8 смешивали с 5 мкг РНК и подвергали электропорации с использованием параметров 960 мкФ и 270 В. Клетки переносили в 40 мл подогретой культуральной среды и затем высевали в 96-луночные или 384-луночные планшеты. Соединения 3 раза последовательно разводили в 100% ДМСО и добавляли к клеткам для достижения конечной концентрации ДМСО 0,5%. Клетки обрабатывали в течение трех дней, после чего культуральную среду удаляли, клетки лизировали и количественно определяли активность люциферазы РепШа с использованием коммерчески доступных реагентов (Рготеда) и инструмента УюЮг или ВтАюп (Регкш Б1тег. АаИНат, ΜΑ, США).
Анализ данных.
Данные были преобразованы в проценты по отношению к необработанным контролям (определено как 100%), и значения ΕС50 рассчитывали с помощью нелинейной регрессии двух повторных наборов данных с помощью ПО ОгарНРаД РДвш или Р1ре1ше РПоЕ Изменение кратности в резистентности были рассчитаны как отношение ΕС50 репликонов мутантого типа к немутантному.
- 28 026667
Результаты.
Активность соединения 6 по сравнению с 8282Т.
Для репликона немутантного типа значения ЕС50 для КВУ были схожими для всех пяти генотипов, протестированных с самым низким ЕС50 по сравнению с ОТ 2Ь. Интересно, что значения ЕС50 для репликонов 8282Т были от 5 до 10 раз более чувствительны к лечению КВУ, чем их соответствующие немутантные типы для всех пяти генотипов. Не наблюдалось никаких существенных различий в ЕС50 соединения 6 между репликонами немутантного типа и 8282Т, что указывает на то, что эта мутация не изменяет восприимчивость к соединению 6.
Активность соединения 6 по отношению к мутантам Ν85Α.
Все семь мутантов Ν85Α показали пониженную восприимчивость к соединению 6 с увеличением ЕС50 в пределах от 25 до 3029 раз.
Таблица 7.2
Активность соединения 6 по сравнению с мутантами Ν85Α генотипа 1а ίη νίΐτο
Соединение Сдвиг кратности в ЕС50 (ЦВМ ЕС53 / 1а-Н77 ЕС50)
М28Т ОЗОН <ЗЗОВ ОЗОЕ Ь31М У93С Υ93Η
Соединение 6 25 73 170 997 140 327 3029
РВУ 0,4 0,7 0,8 0,8 0,5 1,0
Выводы.
В этом примере оценивали профили кросс-резистентности соединения 6 с использованием транзиторных репликонов ВГС, кодирующих известные мутации резистентности в Ν85Α и Ν85Β, обеспечивающих сниженную чувствительность к соединению 6.
Схема клинических испытаний.

Claims (5)

1. Фармацевтическая композиция для лечения вирусной инфекции гепатита С, содержащая:
1) соединение 3, имеющее структуру или его фармацевтически приемлемую соль, и 2) соединение 6, имеющее структуру или его фармацевтически приемлемую соль.
2. Композиция по п.1, дополнительно содержащая один или более фармацевтически приемлемых разбавителей или носителей.
3. Композиция по п.1, приготовленная в виде дозированной лекарственной формы для введения раз в сутки.
4. Композиция по п.3, приготовленная для перорального введения.
5. Композиция по п.4, приготовленная в виде таблетки.
EA201490588A 2011-09-16 2012-09-14 Фармацевтическая композиция для лечения вируса гепатита с EA026667B9 (ru)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201161535885P 2011-09-16 2011-09-16
US201161561753P 2011-11-18 2011-11-18
PCT/US2012/055621 WO2013040492A2 (en) 2011-09-16 2012-09-14 Methods for treating hcv

Publications (3)

Publication Number Publication Date
EA201490588A1 EA201490588A1 (ru) 2015-01-30
EA026667B1 true EA026667B1 (ru) 2017-05-31
EA026667B9 EA026667B9 (ru) 2017-07-31

Family

ID=46970425

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201490588A EA026667B9 (ru) 2011-09-16 2012-09-14 Фармацевтическая композиция для лечения вируса гепатита с

Country Status (36)

Country Link
US (3) US9393256B2 (ru)
EP (1) EP2709613B2 (ru)
JP (2) JP6073897B2 (ru)
KR (2) KR20190075142A (ru)
CN (2) CN106166160A (ru)
AP (1) AP2014007575A0 (ru)
AU (1) AU2012308295B2 (ru)
BR (1) BR112014006324B8 (ru)
CA (1) CA2840242C (ru)
CL (1) CL2014000630A1 (ru)
CO (1) CO6930366A2 (ru)
CR (1) CR20140177A (ru)
CY (1) CY1119896T1 (ru)
DE (2) DE202012013074U1 (ru)
DK (1) DK2709613T4 (ru)
EA (1) EA026667B9 (ru)
EC (1) ECSP14013312A (ru)
ES (1) ES2659216T5 (ru)
HK (1) HK1231378A1 (ru)
HR (1) HRP20180237T4 (ru)
HU (1) HUE036588T2 (ru)
IL (1) IL231515A (ru)
LT (1) LT2709613T (ru)
MD (1) MD4589C1 (ru)
ME (1) ME03009B (ru)
MX (2) MX336580B (ru)
NZ (1) NZ623396A (ru)
PE (1) PE20141056A1 (ru)
PL (1) PL2709613T5 (ru)
PT (1) PT2709613T (ru)
RS (1) RS56975B1 (ru)
SG (2) SG10201602044WA (ru)
SI (1) SI2709613T2 (ru)
TR (1) TR201802537T4 (ru)
UA (1) UA116087C2 (ru)
WO (1) WO2013040492A2 (ru)

Families Citing this family (50)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP4032897A1 (en) 2003-05-30 2022-07-27 Gilead Pharmasset LLC Modified fluorinated nucleoside analogues
PE20120106A1 (es) 2008-12-09 2012-02-20 Gilead Sciences Inc Moduladores de receptores tipo toll
KR20170041924A (ko) * 2009-05-13 2017-04-17 길리애드 파마셋 엘엘씨 항바이러스 화합물
WO2011035250A1 (en) 2009-09-21 2011-03-24 Gilead Sciences, Inc. Processes and intermediates for the preparation of 1'-substituted carba-nucleoside analogs
EA025252B1 (ru) 2010-07-22 2016-12-30 Гайлид Сайэнсиз, Инк. Способы и соединения для лечения вирусных инфекций paramyxoviridae
WO2012087596A1 (en) 2010-12-20 2012-06-28 Gilead Sciences, Inc. Combinations for treating hcv
CN106166160A (zh) 2011-09-16 2016-11-30 吉利德制药有限责任公司 用于治疗hcv的组合物
WO2013059630A1 (en) * 2011-10-21 2013-04-25 Abbvie Inc. Methods for treating hcv comprising at least two direct acting antiviral agent, ribavirin but not interferon.
CN104436197A (zh) 2011-10-21 2015-03-25 艾伯维公司 至少两种直接作用抗病毒剂的组合产品
US8466159B2 (en) 2011-10-21 2013-06-18 Abbvie Inc. Methods for treating HCV
AU2015200715A1 (en) * 2011-10-21 2015-03-05 Abbvie Ireland Unlimited Company Methods for treating HCV
US8492386B2 (en) 2011-10-21 2013-07-23 Abbvie Inc. Methods for treating HCV
AU2015100283B4 (en) * 2011-10-21 2015-06-18 Abbvie Ireland Unlimited Company Methods for treating HCV
KR20140119012A (ko) 2013-01-31 2014-10-08 길리어드 파마셋 엘엘씨 두 항바이러스 화합물의 병용 제형물
US20140343008A1 (en) * 2013-05-16 2014-11-20 Gilead Pharmasset Llc Hepatitis c treatment
CN104211565A (zh) * 2013-05-31 2014-12-17 浙江九洲药业股份有限公司 一种抗丙型肝炎药物中间体的制备方法
SI3038601T1 (sl) 2013-08-27 2020-07-31 Gilead Pharmasset Llc Formulacija kombinacije dveh protivirusnih spojin
WO2016007765A1 (en) 2014-07-11 2016-01-14 Gilead Sciences, Inc. Modulators of toll-like receptors for the treatment of hiv
CN104130302B (zh) * 2014-08-08 2017-02-15 乳源东阳光药业有限公司 一种核苷药物的晶型及其制备方法
WO2016044182A1 (en) 2014-09-16 2016-03-24 Gilead Sciences, Inc. Solid forms of a toll-like receptor modulator
TWI698444B (zh) 2014-10-29 2020-07-11 美商基利科學股份有限公司 製備核糖苷的方法
ES2892123T3 (es) 2014-12-26 2022-02-02 Univ Emory Derivados antivíricos de N4-hidroxicitidina
CN106138080A (zh) * 2015-04-03 2016-11-23 南开大学 核苷类化合物在制备治疗丙型肝炎病毒(hcv)感染疾病药物的应用
CN106146585B (zh) * 2015-04-10 2019-05-28 正大天晴药业集团股份有限公司 氘修饰的脲苷衍生物
MX2021005087A (es) 2015-09-16 2022-08-18 Gilead Sciences Inc Compuestos de formula i para usarse en el tratamiento de infecciones por virus arenaviridae y coronaviridae.
CN109689063A (zh) 2016-04-28 2019-04-26 埃默里大学 含有炔烃的核苷酸和核苷治疗组合物及其相关用途
WO2017195147A1 (en) * 2016-05-12 2017-11-16 Lupin Limited Process for the preparation of ledipasvir and intermediates thereof
CN105968040B (zh) * 2016-06-29 2019-02-05 爱斯特（成都）生物制药股份有限公司 一种雷迪帕韦中间体的制备方法
CN106432197B (zh) * 2016-09-07 2019-12-10 上海众强药业有限公司 一种雷迪帕韦中间体单对甲苯磺酸盐、其晶型及其制备方法
CN116036112A (zh) 2017-03-14 2023-05-02 吉利德科学公司 治疗猫冠状病毒感染的方法
KR20190141747A (ko) 2017-05-01 2019-12-24 길리애드 사이언시즈, 인코포레이티드 (S)-2-에틸부틸 2-(((S)-(((2R,3S,4R,5R)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f] [1,2,4]트리아진-7-일)-5-시아노-3,4-디히드록시테트라히드로푸란-2-일)메톡시)(페녹시) 포스포릴)아미노)프로파노에이트의 결정질 형태
TW201919648A (zh) 2017-07-11 2019-06-01 美商基利科學股份有限公司 用於治療病毒感染之含rna聚合酶抑制劑與環糊精的組合物
CN107629099B (zh) * 2017-07-26 2020-05-26 江苏科本药业有限公司 一种索非布韦中间体的制备工艺
CN111194217B (zh) * 2017-09-21 2024-01-12 里伯赛恩斯有限责任公司 作为hcv rna复制抑制剂的4’-氟-2’-甲基取代的核苷衍生物
WO2019113462A1 (en) 2017-12-07 2019-06-13 Emory University N4-hydroxycytidine and derivatives and anti-viral uses related thereto
CN109651472B (zh) * 2018-12-29 2020-08-18 湖南千金湘江药业股份有限公司 合成索非布韦关键中间体的方法
CN110531023B (zh) * 2019-10-08 2024-06-14 安徽理工大学 一种薄层色谱分析仪
CN111990544A (zh) * 2019-10-16 2020-11-27 长沙绿叶生物科技有限公司 一种用于阻断和干扰非洲猪瘟病毒与猪的特异受体结合的生物饲料及其应用
WO2021154687A1 (en) 2020-01-27 2021-08-05 Gilead Sciences, Inc. Methods for treating sars cov-2 infections
TWI775313B (zh) 2020-02-18 2022-08-21 美商基利科學股份有限公司 抗病毒化合物
US12030903B2 (en) 2020-02-18 2024-07-09 Gilead Sciences, Inc. Antiviral compounds
TW202322824A (zh) 2020-02-18 2023-06-16 美商基利科學股份有限公司 抗病毒化合物
JP7554841B2 (ja) 2020-03-12 2024-09-20 ギリアード サイエンシーズ， インコーポレイテッド １’－シアノヌクレオシドを調製する方法
JP7482250B2 (ja) 2020-04-06 2024-05-13 ギリアード サイエンシーズ， インコーポレイテッド １’－シアノ置換カルバヌクレオシド類似体の吸入製剤
KR20230018473A (ko) 2020-05-29 2023-02-07 길리애드 사이언시즈, 인코포레이티드 렘데시비르 치료 방법
WO2021262826A2 (en) 2020-06-24 2021-12-30 Gilead Sciences, Inc. 1'-cyano nucleoside analogs and uses thereof
CA3190702A1 (en) 2020-08-27 2022-03-03 Elaine Bunyan Compounds and methods for treatment of viral infections
AU2022256476A1 (en) 2021-04-16 2023-10-12 Gilead Sciences, Inc. Methods of preparing carbanucleosides using amides
KR20240012476A (ko) 2021-05-21 2024-01-29 길리애드 사이언시즈, 인코포레이티드 지카 바이러스 저해제로서의 펜타사이클릭 유도체
US20230295172A1 (en) 2022-03-02 2023-09-21 Gilead Sciences, Inc. Compounds and methods for treatment of viral infections

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20110178129A1 (en) * 2010-01-15 2011-07-21 Gilead Sciences, Inc. Inhibitors of flaviviridae viruses
US20110306541A1 (en) * 2010-06-10 2011-12-15 Gilead Sciences, Inc. Methods for treating hcv
WO2012087596A1 (en) * 2010-12-20 2012-06-28 Gilead Sciences, Inc. Combinations for treating hcv

Family Cites Families (324)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
USRE29835E (en) 1971-06-01 1978-11-14 Icn Pharmaceuticals 1,2,4-Triazole nucleosides
US3798209A (en) 1971-06-01 1974-03-19 Icn Pharmaceuticals 1,2,4-triazole nucleosides
JPS5238939A (en) 1975-09-23 1977-03-25 Nippon Telegr & Teleph Corp <Ntt> Optical coupler
US4614719A (en) * 1982-04-30 1986-09-30 Yamasa Shoyu Kabushiki Kaisha Process for producing ribavirin
US5223263A (en) 1988-07-07 1993-06-29 Vical, Inc. Liponucleotide-containing liposomes
US5194654A (en) 1989-11-22 1993-03-16 Vical, Inc. Lipid derivatives of phosphonoacids for liposomal incorporation and method of use
US5463092A (en) 1989-11-22 1995-10-31 Vestar, Inc. Lipid derivatives of phosphonacids for liposomal incorporation and method of use
US5026687A (en) 1990-01-03 1991-06-25 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Treatment of human retroviral infections with 2',3'-dideoxyinosine alone and in combination with other antiviral compounds
US5210015A (en) 1990-08-06 1993-05-11 Hoffman-La Roche Inc. Homogeneous assay system using the nuclease activity of a nucleic acid polymerase
EP0594677A4 (en) 1991-07-12 1997-09-17 Vical Inc Antiviral liponucleosides: treatment of hepatitis b
US5538848A (en) 1994-11-16 1996-07-23 Applied Biosystems Division, Perkin-Elmer Corp. Method for detecting nucleic acid amplification using self-quenching fluorescence probe
US5703058A (en) 1995-01-27 1997-12-30 Emory University Compositions containing 5-fluoro-2',3'-didehydro-2',3'-dideoxycytidine or a mono-, di-, or triphosphate thereof and a second antiviral agent
US6391859B1 (en) 1995-01-27 2002-05-21 Emory University [5-Carboxamido or 5-fluoro]-[2′,3′-unsaturated or 3′-modified]-pyrimidine nucleosides
JPH11502515A (ja) 1995-02-01 1999-03-02 フラウンホファー−ゲゼルシャフト・ツァ・フェルダリュング・デア・アンゲバンテン・フォルシュング・エー・ファウ 細胞増殖抑制剤処理における耐性形成に対する５’置換ヌクレオシドの利用と、このヌクレオシドを含む医薬品
GB9505025D0 (en) 1995-03-13 1995-05-03 Medical Res Council Chemical compounds
DE19514523A1 (de) 1995-04-12 1996-10-17 Schering Ag Neue Cytosin- und Cytidinderivate
US5858389A (en) 1996-08-28 1999-01-12 Shaker H. Elsherbini Squalene is an antiviral compound for treating hepatitis C virus carriers
ATE271063T1 (de) 1996-10-16 2004-07-15 Icn Pharmaceuticals Purin-l-nukleoside, deren analoga und verwendungen
US6509320B1 (en) 1996-10-16 2003-01-21 Icn Pharmaceuticals, Inc. Purine L-nucleosides, analogs and uses thereof
SI20076A (sl) 1996-10-16 2000-04-30 Icn Pharmaceuticals, Inc. Monociklični L-nukleozidi, analogi in uporaba od teh
ATE206618T1 (de) 1997-09-21 2001-10-15 Schering Corp Kombinationstherapie zur entfernung von nachweisbarer hcv-rns in patienten mit chronischer hepatitis c-infektion
US6201262B1 (en) 1997-10-07 2001-03-13 Cree, Inc. Group III nitride photonic devices on silicon carbide substrates with conductive buffer interlay structure
US6703374B1 (en) 1997-10-30 2004-03-09 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Nucleosides for imaging and treatment applications
US7462605B2 (en) 1998-01-23 2008-12-09 Celmed Oncology (Usa), Inc. Phosphoramidate compounds and methods of use
ES2172303T3 (es) 1998-01-23 2002-09-16 Newbiotics Inc Agentes terapeuticos obtenidos por catalisis enzimatica.
KR100965488B1 (ko) 1998-02-25 2010-06-24 에모리 유니버시티 2'-플루오로뉴클레오사이드
US6787305B1 (en) 1998-03-13 2004-09-07 Invitrogen Corporation Compositions and methods for enhanced synthesis of nucleic acid molecules
AU3363499A (en) 1998-03-27 1999-10-18 George W. Griesgraber Nucleosides with antiviral and anticancer activity
DK0956861T3 (da) 1998-05-15 2002-07-01 Schering Corp Kombinationsterapi omfattende ribavirin og interferon-alfa til patienter med kronisk hepatitis C infektion, der ikke har modtaget antiviral behandling
DK1087778T3 (da) 1998-06-08 2005-12-19 Hoffmann La Roche Anvendelse af PEG-IFN-alfa og Ribavirin til behandling af kronisk hepatitis C
GB9816358D0 (en) 1998-07-27 1998-09-23 Angeletti P Ist Richerche Bio Enzyme inhibitors
KR100691737B1 (ko) 1998-08-10 2007-03-12 이데닉스(케이만)리미티드 Ｂ형 간염의 치료용 β-Ｌ-2'-데옥시-뉴클레오시드
GB9821058D0 (en) 1998-09-28 1998-11-18 Univ Cardiff Chemical compound
JP2003507322A (ja) 1998-12-18 2003-02-25 シェリング・コーポレーション リバビリン−ＰＥＧ化インターフェロン−α誘発ＨＣＶ併用治療
US6923966B2 (en) 1999-04-08 2005-08-02 Schering Corporation Melanoma therapy
CN1390227A (zh) 1999-07-22 2003-01-08 新生物生物公司 酶催化的治疗活化
AU1262001A (en) 1999-11-04 2001-05-14 Biochem Pharma Inc. Method for the treatment or prevention of flaviviridae viral infection using nucleoside analogues
US6495677B1 (en) 2000-02-15 2002-12-17 Kanda S. Ramasamy Nucleoside compounds
JP2003523978A (ja) 2000-02-18 2003-08-12 シャイアー・バイオケム・インコーポレイテッド ヌクレオシドアナログを用いるｆｌａｖｉｖｉｒｕｓ感染の処置もしくは予防するための方法
WO2001079246A2 (en) 2000-04-13 2001-10-25 Pharmasset, Ltd. 3'-or 2'-hydroxymethyl substituted nucleoside derivatives for treatment of hepatitis virus infections
US6924270B2 (en) 2000-04-20 2005-08-02 Schering Corporation Ribavirin-interferon alfa combination therapy for eradicating detectable HCV-RNA in patients having chronic hepatitis C infection
MY164523A (en) 2000-05-23 2017-12-29 Univ Degli Studi Cagliari Methods and compositions for treating hepatitis c virus
US6787526B1 (en) 2000-05-26 2004-09-07 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Methods of treating hepatitis delta virus infection with β-L-2′-deoxy-nucleosides
CN100490818C (zh) 2000-05-26 2009-05-27 诺瓦蒂斯有限公司 β-L-2′-脱氧核苷在制备用于治疗丁型肝炎病毒感染的药物中的用途
BR0111196A (pt) 2000-05-26 2004-04-06 Idenix Cayman Ltd Composições e uso das mesmas para tratamento de flavivìrus e pestivìrus
MY141594A (en) 2000-06-15 2010-05-14 Novirio Pharmaceuticals Ltd 3'-PRODRUGS OF 2'-DEOXY-ß-L-NUCLEOSIDES
US6815542B2 (en) 2000-06-16 2004-11-09 Ribapharm, Inc. Nucleoside compounds and uses thereof
UA72612C2 (en) 2000-07-06 2005-03-15 Pyrido[2.3-d]pyrimidine and pyrimido[4.5-d]pyrimidine nucleoside analogues, prodrugs and method for inhibiting growth of neoplastic cells
EP3235823A1 (en) 2000-07-21 2017-10-25 Gilead Sciences, Inc. Prodrugs of phosphonate nucleotide analogues and methods for selecting and making same
AR029851A1 (es) 2000-07-21 2003-07-16 Dendreon Corp Nuevos peptidos como inhibidores de ns3-serina proteasa del virus de hepatitis c
AR039558A1 (es) 2000-08-21 2005-02-23 Inspire Pharmaceuticals Inc Composiciones y metodo para el tratamiento de glaucoma o hipertension ocular
US20030008841A1 (en) 2000-08-30 2003-01-09 Rene Devos Anti-HCV nucleoside derivatives
KR20090089922A (ko) 2000-10-18 2009-08-24 파마셋 인코포레이티드 바이러스 감염 및 비정상적인 세포 증식의 치료를 위한 변형된 뉴클레오시드
CN1516599A (zh) 2000-10-18 2004-07-28 ���鹫˾ 病毒唑-聚乙二醇化干扰素α联合治疗慢性传染性丙型肝炎的方法
CA2429352A1 (en) 2000-12-15 2002-06-20 Lieven Stuyver Antiviral agents for treatment of flaviviridae infections
US7105499B2 (en) 2001-01-22 2006-09-12 Merck & Co., Inc. Nucleoside derivatives as inhibitors of RNA-dependent RNA viral polymerase
WO2002057425A2 (en) 2001-01-22 2002-07-25 Merck & Co., Inc. Nucleoside derivatives as inhibitors of rna-dependent rna viral polymerase
GB0112617D0 (en) 2001-05-23 2001-07-18 Hoffmann La Roche Antiviral nucleoside derivatives
GB0114286D0 (en) 2001-06-12 2001-08-01 Hoffmann La Roche Nucleoside Derivatives
US20050009775A1 (en) 2001-06-21 2005-01-13 Howes Peter David Nucleoside compounds in hcv
DE60217114T2 (de) 2001-07-11 2007-10-25 Vertex Pharmaceuticals Inc., Cambridge Verbrückte bizyklische serinproteaseinhibitoren
EP2335700A1 (en) 2001-07-25 2011-06-22 Boehringer Ingelheim (Canada) Ltd. Hepatitis C virus polymerase inhibitors with a heterobicylic structure
WO2003024461A1 (en) 2001-09-20 2003-03-27 Schering Corporation Hcv combination therapy
US7138376B2 (en) 2001-09-28 2006-11-21 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for treating hepatitis C virus using 4'-modified nucleosides
WO2003037895A1 (en) 2001-11-02 2003-05-08 Glaxo Group Limited 4-(6-membered)-heteroaryl acyl pyrrolidine derivatives as hcv inhibitors
MXPA04005779A (es) 2001-12-14 2005-05-16 Pharmasset Ltd Nucleosidos de n4-acilcitosina para el tratamiento de infecciones virales.
WO2003051899A1 (en) 2001-12-17 2003-06-26 Ribapharm Inc. Deazapurine nucleoside libraries and compounds
US20030153744A1 (en) 2001-12-21 2003-08-14 Micrologix Biotech Inc. Anti-viral 7-deaza L-nucleosides
WO2003062256A1 (en) 2002-01-17 2003-07-31 Ribapharm Inc. 2'-beta-modified-6-substituted adenosine analogs and their use as antiviral agents
US6642204B2 (en) 2002-02-01 2003-11-04 Boehringer Ingelheim International Gmbh Hepatitis C inhibitor tri-peptides
US7323453B2 (en) 2002-02-13 2008-01-29 Merck & Co., Inc. Methods of inhibiting orthopoxvirus replication with nucleoside compounds
US20040023901A1 (en) 2002-02-28 2004-02-05 Cook Phillip D. Nucleoside 5'-monophosphate mimics and their prodrugs
RU2004128943A (ru) 2002-02-28 2005-04-20 Байота, Инк. (Us) Средства, имитирующие нуклеотиды, и их пролекарственные формы
WO2003100017A2 (en) 2002-05-24 2003-12-04 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotides having modified nucleoside units
WO2003106477A1 (en) 2002-06-01 2003-12-24 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligomeric compounds that include carbocyclic nucleosides and their use in gene modulation
US7449488B2 (en) 2002-06-04 2008-11-11 Schering Corporation Pyrazolopyrimidines as protein kinase inhibitors
JP2005533777A (ja) 2002-06-17 2005-11-10 メルク　エンド　カムパニー　インコーポレーテッド Ｒｎａ抗ウイルス剤としての炭素環ヌクレオシドアナログ
JP2005530843A (ja) 2002-06-21 2005-10-13 メルク　エンド　カムパニー　インコーポレーテッド Ｒｎａ依存性ｒｎａウィルスポリメラーゼ阻害剤としてのヌクレオシド誘導体
CA2488484A1 (en) 2002-06-27 2004-01-08 Merck & Co., Inc. Nucleoside derivatives as inhibitors of rna-dependent rna viral polymerase
WO2004003000A2 (en) 2002-06-28 2004-01-08 Idenix (Cayman) Limited 1’-, 2'- and 3'- modified nucleoside derivatives for treating flaviviridae infections
EP1536804A4 (en) 2002-06-28 2007-10-31 Idenix Cayman Ltd 2'-C-METHYL-3'-O-L-VALINESTER-RIBOFURANOSYLCYTIDINE FOR THE TREATMENT OF FLAVIVIRIDAE INFECTIONS
KR20050048544A (ko) 2002-06-28 2005-05-24 이데닉스 (케이만) 리미티드 플라비비리다에 감염 치료용의 변형된 2' 및3'-뉴클레오사이드 프로드럭
US7608600B2 (en) 2002-06-28 2009-10-27 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Modified 2′ and 3′-nucleoside prodrugs for treating Flaviviridae infections
WO2004002977A1 (en) 2002-07-01 2004-01-08 Pharmacia & Upjohn Company Llc Inhibitors of hcv ns5b polymerase
US6973905B2 (en) 2002-07-01 2005-12-13 Cinetic Automation Corporation Valve lash adjustment apparatus and method
MXPA05000255A (es) 2002-07-01 2005-07-15 Pharmacia & Upjohn Co Llc Inhibidores de polimerasa de ns5b de hcv.
JP2005533108A (ja) 2002-07-16 2005-11-04 メルク　エンド　カムパニー　インコーポレーテッド Ｒｎａ依存性ｒｎａウイルスポリメラーゼの阻害剤としてのヌクレオシド誘導体
CA2493816A1 (en) 2002-07-24 2004-01-29 Ptc Therapeutics, Inc. Use of nucleoside compounds for nonsense suppression and the treatment of genetic diseases
AU2003256619A1 (en) 2002-07-24 2004-02-09 Isis Pharmaceuticals, Inc. Pyrrolopyrimidine thionucleoside analogs as antivirals
WO2004011478A2 (en) 2002-07-25 2004-02-05 Micrologix Biotech Inc. Anti-viral 7-deaza d-nucleosides and uses thereof
TWI244393B (en) 2002-08-06 2005-12-01 Idenix Pharmaceuticals Inc Crystalline and amorphous forms of beta-L-2'-deoxythymidine
AU2003261434A1 (en) 2002-08-12 2004-02-25 Bristol-Myers Squibb Company Iminothiazolidinones as inhibitors of hcv replication
AU2003278816A1 (en) 2002-09-13 2004-04-30 Idenix (Cayman) Limited ss-L-2'-DEOXYNUCLEOSIDES FOR THE TREATMENT OF RESISTANT HBV STRAINS AND COMBINATION THERAPIES
US20050215614A1 (en) 2002-10-15 2005-09-29 Rigel Pharmaceuticals, Inc. Substituted indoles and their use as hcv inhibitors
US20040229840A1 (en) 2002-10-29 2004-11-18 Balkrishen Bhat Nucleoside derivatives as inhibitors of RNA-dependent RNA viral polymerase
CA2504344A1 (en) 2002-11-01 2004-05-21 Viropharma Incorporated Benzofuran compounds, compositions and methods for treatment and prophylaxis of hepatitis c viral infections and associated diseases
WO2004044132A2 (en) 2002-11-05 2004-05-27 Isis Pharmaceuticals, Inc. Modified oligonucleotides for use in rna interference
US7696345B2 (en) 2002-11-05 2010-04-13 Isis Pharmaceuticals, Inc. Polycyclic sugar surrogate-containing oligomeric compounds and compositions for use in gene modulation
CA2506129C (en) 2002-11-15 2015-02-17 Idenix (Cayman) Limited 2'-branched nucleosides and flaviviridae mutation
TWI332507B (en) 2002-11-19 2010-11-01 Hoffmann La Roche Antiviral nucleoside derivatives
US7223785B2 (en) 2003-01-22 2007-05-29 Boehringer Ingelheim International Gmbh Viral polymerase inhibitors
AU2003225705A1 (en) 2003-03-07 2004-09-30 Ribapharm Inc. Cytidine analogs and methods of use
ES2320771T3 (es) 2003-04-16 2009-05-28 Bristol-Myers Squibb Company Inhibidores peptidicos de isoquinolina macrociclicos del virus de la hepatitis c.
EP1617848A2 (en) 2003-04-25 2006-01-25 Gilead Sciences, Inc. Anti-cancer phosphonate conjugates
US7407965B2 (en) 2003-04-25 2008-08-05 Gilead Sciences, Inc. Phosphonate analogs for treating metabolic diseases
US7470724B2 (en) 2003-04-25 2008-12-30 Gilead Sciences, Inc. Phosphonate compounds having immuno-modulatory activity
US20050261237A1 (en) 2003-04-25 2005-11-24 Boojamra Constantine G Nucleoside phosphonate analogs
EA014685B1 (ru) 2003-04-25 2010-12-30 Джилид Сайэнс, Инк. Фосфонатсодержащие антивирусные соединения (варианты) и фармацевтическая композиция на их основе
US7452901B2 (en) 2003-04-25 2008-11-18 Gilead Sciences, Inc. Anti-cancer phosphonate analogs
WO2005002626A2 (en) 2003-04-25 2005-01-13 Gilead Sciences, Inc. Therapeutic phosphonate compounds
US20040259934A1 (en) 2003-05-01 2004-12-23 Olsen David B. Inhibiting Coronaviridae viral replication and treating Coronaviridae viral infection with nucleoside compounds
WO2005020884A2 (en) 2003-05-14 2005-03-10 Idenix (Cayman) Limited Nucleosides for treatment of infection by corona viruses, toga viruses and picorna viruses
US20040229839A1 (en) 2003-05-14 2004-11-18 Biocryst Pharmaceuticals, Inc. Substituted nucleosides, preparation thereof and use as inhibitors of RNA viral polymerases
EP4032897A1 (en) 2003-05-30 2022-07-27 Gilead Pharmasset LLC Modified fluorinated nucleoside analogues
GB0317009D0 (en) 2003-07-21 2003-08-27 Univ Cardiff Chemical compounds
JP2007501185A (ja) 2003-07-25 2007-01-25 イデニクス（ケイマン）リミテツド Ｃ型肝炎を含むフラビウイルス関連疾患を治療するためのプリンヌクレオシド類似体
US7713941B2 (en) 2003-08-27 2010-05-11 Biota Scientific Management Pty Ltd Tricyclic nucleosides or nucleotides as therapeutic agents
AR045769A1 (es) 2003-09-18 2005-11-09 Vertex Pharma Inhibidores de las serina proteasas, particularmente, la proteasa ns3-ns4a del vhc (virus hepatitis c)
EP1677822B1 (en) 2003-09-18 2014-04-23 Isis Pharmaceuticals, Inc. 4'-thionucleosides and oligomeric compounds
US20050148534A1 (en) 2003-09-22 2005-07-07 Castellino Angelo J. Small molecule compositions and methods for increasing drug efficiency using compositions thereof
US20050082144A1 (en) 2003-10-14 2005-04-21 Maupin Daniel D. High speed food product peeling or cleaning machine and method
PT1677827E (pt) 2003-10-27 2009-03-13 Vertex Pharma Associações para o tratamento do vhc
US7026339B2 (en) 2003-11-07 2006-04-11 Fan Yang Inhibitors of HCV NS5B polymerase
TW200528459A (en) 2004-01-06 2005-09-01 Achillion Pharmaceuticals Inc Azabenzofuran substituted thioureas; inhibitors of viral replication
AU2005216971A1 (en) 2004-02-25 2005-09-09 Government Of The United States Of America, As Represented By The Secretary Department Of Health And Human Services Office Of Technology Transfer Methylation inhibitor compounds
EP2423326B1 (en) 2004-05-07 2014-01-08 Celera Corporation Genetic polymorphism associated with liver fibrosis methods of detection and uses thereof
US8394947B2 (en) 2004-06-03 2013-03-12 Isis Pharmaceuticals, Inc. Positionally modified siRNA constructs
AU2005252663B2 (en) 2004-06-03 2011-07-07 Isis Pharmaceuticals, Inc. Double strand compositions comprising differentially modified strands for use in gene modulation
WO2005121634A1 (ja) 2004-06-08 2005-12-22 Tokyo Gas Co., Ltd. ガス吸着容器
US7534767B2 (en) 2004-06-15 2009-05-19 Merck & Co., Inc. C-purine nucleoside analogs as inhibitors of RNA-dependent RNA viral polymerase
CA2571675A1 (en) 2004-06-23 2006-01-05 Idenix (Cayman) Limited 5-aza-7-deazapurine derivatives for treating infections with flaviviridae
AU2005267421B2 (en) 2004-06-24 2010-06-03 Merck Sharp & Dohme Corp. Nucleoside aryl phosphoramidates for the treatment of RNA-dependent RNA viral infection
CN101023094B (zh) 2004-07-21 2011-05-18 法莫赛特股份有限公司 烷基取代的2-脱氧-2-氟代-d-呋喃核糖基嘧啶和嘌呤及其衍生物的制备
PL1773856T3 (pl) 2004-07-21 2013-01-31 Gilead Pharmasset Llc Sposób otrzymywania alkilo-podstawionych 2-deoksy-2-fluoro-D-rybofuranozylo-pirymidyn i -puryn oraz ich pochodnych
AR051922A1 (es) 2004-07-27 2007-02-21 Gilead Sciences Inc Analogos de fosfonatos de compuestos inhibidores de hiv
US7348425B2 (en) 2004-08-09 2008-03-25 Bristol-Myers Squibb Company Inhibitors of HCV replication
US7153848B2 (en) 2004-08-09 2006-12-26 Bristol-Myers Squibb Company Inhibitors of HCV replication
WO2006021341A1 (en) 2004-08-23 2006-03-02 F. Hoffmann-La Roche Ag Antiviral 4’-azido-nucleosides
KR100847181B1 (ko) 2004-08-23 2008-07-17 에프. 호프만-라 로슈 아게 이종환 항바이러스 화합물
WO2006029081A2 (en) 2004-09-02 2006-03-16 Neopharm, Inc. Nucleoside-lipid conjugates, their method of preparation and uses thereof
US8492539B2 (en) 2004-09-14 2013-07-23 Gilead Pharmasset Llc Preparation of 2′-fluoro-2′-alkyl-substituted or other optionally substituted ribofuranosyl pyrimidines and purines and their derivatives
WO2006037028A2 (en) 2004-09-24 2006-04-06 Idenix (Cayman) Limited Methods and compositions for treating flaviviruses, pestiviruses and hepacivirus
BRPI0516751A (pt) 2004-09-30 2008-09-16 Tibotec Pharm Ltd pirimidinas bicìclicas que inibem hcv
JP2008517912A (ja) 2004-10-21 2008-05-29 メルク エンド カムパニー インコーポレーテッド ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染治療用フッ素化ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジンヌクレオシド
NZ555441A (en) 2004-10-29 2010-12-24 Biocryst Pharm Inc Therapeutic furopyrimidines and thienopyrimidines
US20060110724A1 (en) 2004-11-19 2006-05-25 Burkhardt William Iii Quantitative real-time assay for noroviruses and enteroviruses with built in quality control standard
EP1674104A1 (en) 2004-12-24 2006-06-28 Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale (Inserm) Uridine derivatives as antiviral drugs against a flaviviridae, especially HCV
WO2006093801A1 (en) 2005-02-25 2006-09-08 Abbott Laboratories Thiadiazine derivatives useful as anti-infective agents
EP1853617A1 (en) 2005-02-28 2007-11-14 Genelabs Technologies, Inc. Tricyclic-nucleoside prodrugs for treating viral infections
EP1869037B1 (en) 2005-03-25 2011-07-27 Tibotec Pharmaceuticals Heterobicylic inhibitors of hvc
AR056327A1 (es) 2005-04-25 2007-10-03 Genelabs Tech Inc Compuestos de nucleosidos para el tratamiento de infecciones virales
WO2006121820A1 (en) 2005-05-05 2006-11-16 Valeant Research & Development Phosphoramidate prodrugs for treatment of viral infection
AR056347A1 (es) 2005-05-12 2007-10-03 Tibotec Pharm Ltd Uso de compuestos de pteridina para fabricar medicamentos y composiciones farmaceuticas
US20060276405A1 (en) 2005-06-02 2006-12-07 Schering Corporation Methods for treating hepatitis C
US8143288B2 (en) 2005-06-06 2012-03-27 Bristol-Myers Squibb Company Inhibitors of HCV replication
US20060293752A1 (en) 2005-06-27 2006-12-28 Missoum Moumene Intervertebral disc prosthesis and associated methods
MX2008001166A (es) 2005-07-25 2008-03-18 Intermune Inc Nuevos inhibidores macrociclicos de la replicacion del virus de hepatitis c.
WO2007014925A1 (en) 2005-07-29 2007-02-08 Tibotec Pharmaceuticals Ltd. Macrocylic inhibitors of hepatitis c virus
EP1919904B1 (en) 2005-07-29 2014-01-08 Janssen R&D Ireland Macrocyclic inhibitors of hepatitis c virus
KR101381387B1 (ko) 2005-07-29 2014-04-11 메디비르 아베 Ｃ형 간염 바이러스의 마크로사이클릭 억제제
PE20070211A1 (es) 2005-07-29 2007-05-12 Medivir Ab Compuestos macrociclicos como inhibidores del virus de hepatitis c
US20100120855A1 (en) 2005-07-29 2010-05-13 Tibotec Pharmaceuticals Ltd. Macrocylic inhibitors of hepatitis c virus
EP1915585A2 (en) 2005-07-29 2008-04-30 Automotive Systems Laboratory Inc. Magnetic crash sensor
JP2009504704A (ja) 2005-08-15 2009-02-05 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲー 抗ウイルス４′−置換プロヌクレオチドホスホルアミダート
AU2006294807B2 (en) 2005-09-26 2013-01-17 Gilead Pharmasset Llc Modified 4'-nucleosides as antiviral agents
CA2627839C (en) 2005-11-02 2014-08-19 Bayer Healthcare Ag Pyrrolo[2,1-f] [1,2,4] triazin-4-ylamines igf-1r kinase inhibitors for the treatment of cancer and other hyperproliferative diseases
RU2422454C2 (ru) 2005-12-09 2011-06-27 Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг Антивирусные нуклеозиды
CA2633541A1 (en) 2005-12-12 2007-06-21 Genelabs Technologies, Inc. N-(6-membered aromatic ring)-amido anti-viral compounds
ES2378473T3 (es) 2005-12-21 2012-04-12 Abbott Laboratories Compuestos antivirales
JP2009521480A (ja) 2005-12-21 2009-06-04 アボット・ラボラトリーズ 抗ウイルス化合物
AU2007215114A1 (en) 2006-02-14 2007-08-23 Istituto Di Ricerche Di Biologia Molecolare P. Angeletti S.P.A. Nucleoside aryl phosphoramidates for the treatment of RNA-dependent RNA viral infection
WO2007093901A1 (en) 2006-02-17 2007-08-23 Pfizer Limited 3 -deazapurine derivatives as tlr7 modulators
US8895531B2 (en) 2006-03-23 2014-11-25 Rfs Pharma Llc 2′-fluoronucleoside phosphonates as antiviral agents
ES2343914T3 (es) 2006-05-25 2010-08-12 Bristol-Myers Squibb Company Inhibidores de ns5b de hcv de indolobenzazepina condensada con ciclopropilo.
US7521442B2 (en) 2006-05-25 2009-04-21 Bristol-Myers Squibb Company Cyclopropyl fused indolobenzazepine HCV NS5B inhibitors
JP2009542698A (ja) 2006-07-07 2009-12-03 ギリアード サイエンシーズ， インコーポレイテッド 抗ウイルスホスフィナート化合物
US20080008682A1 (en) 2006-07-07 2008-01-10 Chong Lee S Modulators of toll-like receptor 7
KR101143596B1 (ko) 2006-07-07 2012-05-11 길리애드 사이언시즈, 인코포레이티드 신규의 피리다진 화합물 및 이의 용도
KR101636221B1 (ko) 2006-07-07 2016-07-04 길리애드 사이언시즈, 인코포레이티드 치료제의 약동학 특성의 모듈레이터
US8303944B2 (en) 2006-08-11 2012-11-06 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
US7759495B2 (en) 2006-08-11 2010-07-20 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
US7659270B2 (en) 2006-08-11 2010-02-09 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
US8329159B2 (en) 2006-08-11 2012-12-11 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
AU2007307057B2 (en) 2006-10-10 2011-09-15 F. Hoffmann La-Roche Ag Preparation of nucleosides ribofuranosyl pyrimidines
PL216525B1 (pl) 2006-10-17 2014-04-30 Ct Badań Molekularnych I Makromolekularnych Polskiej Akademii Nauk 5'-O-[(N-acylo)amidoditiofosforano] nukleozydy oraz sposób wytwarzania 5'-O-[(N-acylo)amidofosforano]-,5'-O-[(N-acylo)amidotiofosforano]-, 5'-O-[(N-acylo)amidoditiofosforano]nukleozydów
WO2008079206A1 (en) 2006-12-20 2008-07-03 Merck & Co., Inc. Nucleoside cyclic phosphoramidates for the treatment of rna-dependent rna viral infection
US20080261913A1 (en) 2006-12-28 2008-10-23 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Compounds and pharmaceutical compositions for the treatment of liver disorders
EP2124555B1 (en) 2007-01-05 2015-07-08 Merck Sharp & Dohme Corp. Nucleoside aryl phosphoramidates for the treatment of rna-dependent rna viral infection
US7964580B2 (en) 2007-03-30 2011-06-21 Pharmasset, Inc. Nucleoside phosphoramidate prodrugs
CN102872461A (zh) * 2007-05-04 2013-01-16 弗特克斯药品有限公司 用于治疗hcv感染的组合治疗
US7741347B2 (en) 2007-05-17 2010-06-22 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
GB0709791D0 (en) 2007-05-22 2007-06-27 Angeletti P Ist Richerche Bio Antiviral agents
EP2168959A1 (en) 2007-06-19 2010-03-31 Kyorin Pharmaceutical Co., Ltd. Pyridazinone derivative and pde inhibitor containing the same as active ingredient
ES2541434T3 (es) 2007-06-29 2015-07-20 Gilead Sciences, Inc. Derivados de purina y su uso como moduladores del receptor de tipo Toll 7
KR101596524B1 (ko) 2007-06-29 2016-02-22 길리애드 사이언시즈, 인코포레이티드 항바이러스 화합물
AP2009005073A0 (en) 2007-06-29 2009-12-31 Gilead Sciences Inc Antiviral compounds
UA99466C2 (en) 2007-07-06 2012-08-27 Гилиад Сайенсиз, Инк. Crystalline pyridazine compound
CN101108870A (zh) 2007-08-03 2008-01-23 冷一欣 核苷磷酸酯类化合物及制备方法和应用
US8629171B2 (en) 2007-08-08 2014-01-14 Bristol-Myers Squibb Company Crystalline form of methyl ((1S)-1-((25)-2-(5-(4'-(2-((25)-1((2S)-2-((methoxycarbonyl)amino)-3-methylbutanoyl)-2-pyrrolidinyl)-1H-imidazol-2-yl)-1-pyrrolidinyl)carbonyl)-2-methylpropyl)carbamate dihydrochloride salt
US7728027B2 (en) 2007-08-08 2010-06-01 Bristol-Myers Squibb Company Process for synthesizing compounds useful for treating hepatitis C
MX2010002909A (es) 2007-09-14 2010-03-30 Schering Corp Metodo de tratamiento de pacientes de hepatitis c.
JO2778B1 (en) 2007-10-16 2014-03-15 ايساي انك Certain vehicles, installations and methods
DE102007052070A1 (de) 2007-10-30 2009-05-07 Tiefenbacher Pharmachemikalien Alfred E. Tiefenbacher Gmbh & Co. Kg Candesartancilexetil
JP5238939B2 (ja) 2007-11-07 2013-07-17 三菱化学株式会社 長繊維強化複合樹脂組成物および成形品
AU2009203992A1 (en) 2008-01-11 2009-07-16 Antaria Limited Visibly transparent UV photoprotective compositions
JP5314053B2 (ja) 2008-02-12 2013-10-16 ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニー Ｃ型肝炎ウイルス阻害剤
PT2242752E (pt) 2008-02-13 2012-10-29 Bristol Myers Squibb Co Imidazolil bifenil imidazóis como inibidores do vírus da hepatite c
US8147818B2 (en) 2008-02-13 2012-04-03 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
US7704992B2 (en) 2008-02-13 2010-04-27 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
US8227431B2 (en) 2008-03-17 2012-07-24 Hetero Drugs Limited Nucleoside derivatives
US20110269814A1 (en) 2008-03-26 2011-11-03 Alnylam Pharamaceuticals, Inc. 2'-f modified rna interference agents
CN102046622A (zh) 2008-04-15 2011-05-04 因特蒙公司 丙型肝炎病毒复制的新颖大环抑制剂
EP2268288A4 (en) 2008-04-15 2012-05-30 Rfs Pharma Llc NUCLEOSIDE DERIVATIVES FOR THE TREATMENT OF CALICIVIRIDAE INFECTIONS, INCLUDING NOROVIRUS INFECTIONS
AR071395A1 (es) 2008-04-23 2010-06-16 Gilead Sciences Inc Analogos carba-nucleosidos 1'-sustituidos para tratamiento antiviral
US8173621B2 (en) 2008-06-11 2012-05-08 Gilead Pharmasset Llc Nucleoside cyclicphosphates
CA2728042A1 (en) 2008-07-10 2010-01-14 Prosidion Limited Piperidinyl gpcr agonists
US7906655B2 (en) 2008-08-07 2011-03-15 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
US7921612B2 (en) 2008-08-31 2011-04-12 United Construction Products, Inc. Method and device for supporting a structure
US8383094B2 (en) 2008-10-01 2013-02-26 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
DE102008057284A1 (de) 2008-11-14 2010-05-20 Ratiopharm Gmbh Tabletten enthaltend Lenalidomid und Adhäsionsverstärker
WO2010062821A1 (en) 2008-11-28 2010-06-03 Glaxosmithkline Llc Anti-viral compounds, compositions, and methods of use
CN104163816A (zh) 2008-12-03 2014-11-26 普雷西迪奥制药公司 Hcv ns5a的抑制剂
SG171891A1 (en) 2008-12-03 2011-07-28 Presidio Pharmaceuticals Inc Inhibitors of hcv ns5a
PE20120106A1 (es) 2008-12-09 2012-02-20 Gilead Sciences Inc Moduladores de receptores tipo toll
CN102325783A (zh) 2008-12-23 2012-01-18 法莫赛特股份有限公司 嘌呤核苷的合成
CN102753563A (zh) 2008-12-23 2012-10-24 吉利德制药有限责任公司 核苷类似物
EP2376088B1 (en) 2008-12-23 2017-02-22 Gilead Pharmasset LLC 6-O-Substituted-2-amino-purine nucleoside phosphoramidates
CA2748792A1 (en) 2009-01-07 2010-07-15 Samuel Earl Hopkins Combination of a cyclosporine derivative and nucleosides for treating hcv
WO2010081082A2 (en) 2009-01-09 2010-07-15 University College Of Cardiff Consultants Limited Phosphoramidate derivatives of guanosine nucleoside compounds for treatment of viral infections
EP2393359A4 (en) 2009-02-09 2012-10-03 Enanta Pharm Inc COMPOUND DIBENZIMIDAZOLE DERIVATIVES
WO2010096462A1 (en) 2009-02-17 2010-08-26 Enanta Pharmaceuticals, Inc Linked diimidazole derivatives
TWI438200B (zh) 2009-02-17 2014-05-21 必治妥美雅史谷比公司 Ｃ型肝炎病毒抑制劑
UY32462A (es) 2009-02-23 2010-09-30 Arrow Therapeutics Ltd Derivados de bifenilo novedosos para el tratamiento de infección por virus de hepatitis c 644
WO2010096777A1 (en) 2009-02-23 2010-08-26 Presidio Pharmaceuticals, Inc. Inhibitors of hcv ns5a
JP5628841B2 (ja) 2009-02-27 2014-11-19 エナンタ ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド Ｃ型肝炎ウイルスインヒビター
SG174364A1 (en) 2009-03-20 2011-10-28 Alios Biopharma Inc Substituted nucleoside and nucleotide analogs
CA2755658A1 (en) 2009-03-27 2010-09-30 Presidio Pharmaceuticals, Inc. Fused ring inhibitors of hepatitis c
WO2010111673A1 (en) 2009-03-27 2010-09-30 Presidio Pharmaceuticals, Inc. Substituted bicyclic hcv inhibitors
UA108351C2 (uk) 2009-03-27 2015-04-27 Інгібітори реплікації вірусу гепатиту c
TWI476190B (zh) 2009-03-30 2015-03-11 必治妥美雅史谷比公司 Ｃ型肝炎病毒抑制劑
US8796466B2 (en) 2009-03-30 2014-08-05 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
DE102009015702A1 (de) 2009-03-31 2010-10-07 Ratiopharm Gmbh Tabletten enthaltend Dapoxetin und Trockenverarbeitungsverfahren zu deren Herstellung
TW201038559A (en) 2009-04-09 2010-11-01 Bristol Myers Squibb Co Hepatitis C virus inhibitors
US8143414B2 (en) 2009-04-13 2012-03-27 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
CN102459165B (zh) 2009-04-15 2015-09-02 Abbvie公司 抗病毒化合物
AU2010240882B2 (en) 2009-04-24 2014-10-23 Janssen Sciences Ireland Uc Diaryl ethers
EP2430015B1 (en) 2009-05-12 2015-06-17 Merck Sharp & Dohme Corp. Fused tricyclic compounds useful for the treatment of viral diseases
KR20170041924A (ko) 2009-05-13 2017-04-17 길리애드 파마셋 엘엘씨 항바이러스 화합물
US8618076B2 (en) 2009-05-20 2013-12-31 Gilead Pharmasset Llc Nucleoside phosphoramidates
TWI583692B (zh) 2009-05-20 2017-05-21 基利法瑪席特有限責任公司 核苷磷醯胺
US8211928B2 (en) 2009-05-29 2012-07-03 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
CA2763140A1 (en) 2009-05-29 2010-12-02 Schering Corporation Antiviral compounds composed of three linked aryl moieties to treat diseases such as hepatitis c
US8138215B2 (en) 2009-05-29 2012-03-20 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
CA2762885A1 (en) 2009-05-29 2010-12-02 Schering Corporation Antiviral compounds composed of three aligned aryl moieties to treat diseases such as hepatitis c
CN103819537A (zh) 2009-06-11 2014-05-28 艾伯维巴哈马有限公司 抗病毒化合物
WO2010148006A1 (en) 2009-06-16 2010-12-23 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Hepatitis c virus inhibitors
US8221737B2 (en) 2009-06-16 2012-07-17 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Hepatitis C virus inhibitors
WO2011004276A1 (en) 2009-07-06 2011-01-13 Pfizer Limited Hepatitis c virus inhibitors
CN102712700B (zh) 2009-07-13 2016-04-27 株式会社美你康 具有广谱抗菌活性的作为涂布剂的壳聚糖水凝胶衍生物
JP2012533569A (ja) 2009-07-16 2012-12-27 ヴァーテックス ファーマシューティカルズ、 インコーポレイテッド フラビウイルス感染症を治療又は予防するためのベンゾイミダゾール類似体
EP2467144A1 (en) 2009-07-24 2012-06-27 ViroLogik GmbH Combination of proteasome inhibitors and anti-hepatitis medication for treating hepatitis
BR112012002662A2 (pt) 2009-08-07 2016-03-22 Tibotec Pharm Ltd derivados de bis-benzimidazol
CA2768637A1 (en) 2009-08-07 2011-02-10 Tibotec Pharmaceuticals Phenyl ethynyl derivatives as hepatitis c virus inhibitors
FR2949465B1 (fr) 2009-09-01 2011-08-12 Pf Medicament Derives chromones, leur procede de preparation et leurs applications therapeutiques
AU2010291215A1 (en) 2009-09-03 2012-02-23 Janssen Sciences Ireland Uc Bis-benzimidazole derivatives
MX2012002759A (es) 2009-09-04 2012-04-30 Glaxosmithkline Llc Compuestos quimicos.
EP2475254A4 (en) 2009-09-11 2013-05-22 Enanta Pharm Inc HEPATITIS C-VIRUS HEMMER
WO2011031904A1 (en) 2009-09-11 2011-03-17 Enanta Pharmaceuticals, Inc Hepatitis c virus inhibitors
ME02656B (me) 2009-09-21 2017-06-20 Gilead Sciences Inc 2' -fluoro supstituisani karba-nukleozidni analozi za antiviralno lečenje
US8415374B2 (en) 2009-10-12 2013-04-09 Bristol-Myers Squibb Company Combinations of hepatitis C virus inhibitors
WO2011050146A1 (en) 2009-10-23 2011-04-28 Glaxosmithkline Llc Chemical compounds
UA108211C2 (ru) 2009-11-04 2015-04-10 Янссен Рід Айрленд Бензимидазолимидазольные производные
CN102055717B (zh) 2009-11-09 2014-08-13 华为技术有限公司 快速播放的方法、终端及服务器
US20110274648A1 (en) 2009-11-11 2011-11-10 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C Virus Inhibitors
US20110269956A1 (en) 2009-11-11 2011-11-03 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C Virus Inhibitors
US20110281910A1 (en) 2009-11-12 2011-11-17 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C Virus Inhibitors
CA2782024A1 (en) 2009-11-25 2011-06-03 Schering Corporation Fused tricyclic compounds and derivatives thereof useful for the treatment of viral diseases
US20110137633A1 (en) 2009-12-03 2011-06-09 Abbott Laboratories Anti-viral compounds and methods of identifying the same
EP2512480A4 (en) 2009-12-14 2013-05-15 Enanta Pharm Inc HEPATITIS C-VIRUS HEMMER
US8377980B2 (en) 2009-12-16 2013-02-19 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
WO2011075607A1 (en) 2009-12-18 2011-06-23 Intermune, Inc. Novel inhibitors of hepatitis c virus replication
WO2011072370A1 (en) * 2009-12-18 2011-06-23 Boehringer Ingelheim International Gmbh Hcv combination therapy
WO2011075615A1 (en) 2009-12-18 2011-06-23 Idenix Pharmaceuticals, Inc. 5,5-fused arylene or heteroarylene hepatitis c virus inhibitors
JP2013515068A (ja) 2009-12-22 2013-05-02 メルク・シャープ・アンド・ドーム・コーポレーション ウイルス性疾患の治療のための縮合三環式化合物およびその使用方法
JP2013515746A (ja) 2009-12-24 2013-05-09 ヴァーテックス ファーマシューティカルズ、 インコーポレイテッド フラビウイルス感染症の治療又は予防のための類似体
US8362020B2 (en) 2009-12-30 2013-01-29 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
WO2011091446A1 (en) 2010-01-22 2011-07-28 Glaxosmithkline Llc Chemical compounds
KR20130008040A (ko) 2010-03-09 2013-01-21 머크 샤프 앤드 돔 코포레이션 융합된 트리시클릭 실릴 화합물 및 바이러스성 질환의 치료를 위한 그의 사용 방법
UY33312A (es) 2010-03-31 2011-10-31 Pharmasset Inc Fosforamidato de nucleosido de purina
US8563530B2 (en) 2010-03-31 2013-10-22 Gilead Pharmassel LLC Purine nucleoside phosphoramidate
PT3290428T (pt) 2010-03-31 2021-12-27 Gilead Pharmasset Llc Comprimido compreendendo 2-(((s)-(((2r,3r,4r,5r)-5-(2,4-dioxo-3,4-dihidropirimidin-1-(2h)-il)¿4¿fluoro¿3¿hidroxi¿4¿metiltetrahidrofuran¿2¿il)metoxi) (fenoxi)fosforil)amino)propanoato de (s)- isopropil cristalino
MX2012011805A (es) 2010-04-13 2012-12-17 Hoffmann La Roche Prediccion de respuesta viral precoz en el tratamiento contra hcv.
WO2011146401A1 (en) 2010-05-17 2011-11-24 Intermune, Inc. Novel inhibitors of hepatitis c virus replication
TW201201815A (en) 2010-05-28 2012-01-16 Gilead Sciences Inc 1'-substituted-carba-nucleoside prodrugs for antiviral treatment
AU2011282241B2 (en) 2010-07-19 2015-07-30 Gilead Sciences, Inc. Methods for the preparation of diasteromerically pure phosphoramidate prodrugs
EP2616461A4 (en) 2010-08-26 2014-03-26 Rfs Pharma Llc POWERFUL AND SELECTIVE INHIBITORS OF HEPATITIS C VIRUS
BR112013008017A2 (pt) 2010-09-20 2016-06-14 Gilead Sciences Inc análogos de carba-nucleosídeo 2-flúor substituídos para tratamento antiviral
BR112013007696A2 (pt) 2010-09-29 2019-09-24 Merck Sharp & Dohme composto, composição farmacêutica, usos do referido composto e da referida composição
WO2012048421A1 (en) 2010-10-14 2012-04-19 Boehringer Ingelheim International Gmbh Hepatitis c inhibitor compounds
US20120107278A1 (en) 2010-10-29 2012-05-03 Pharmasset, Inc. Abbreviated hcv therapy for hcv infected patients with il28b c/c genotype
AR083711A1 (es) 2010-11-17 2013-03-20 Gilead Sciences Inc Compuestos heterociclicos utiles en el tratamiento de la hepatitis c
AU2011336632B2 (en) 2010-11-30 2015-09-03 Gilead Pharmasset Llc Compounds
WO2012087976A2 (en) 2010-12-21 2012-06-28 Intermune, Inc. Novel inhibitors of hepatitis c virus replication
BR112013024880A2 (pt) 2011-03-31 2016-12-20 Hoffmann La Roche seleção de tratamento de hcv
US8655250B2 (en) 2011-03-31 2014-02-18 Xerox Corporation Apparatus and method for marking material fix level control in a printing apparatus
EP2726610A1 (en) 2011-06-30 2014-05-07 Stella ApS Hcv combination therapy
CN106166160A (zh) 2011-09-16 2016-11-30 吉利德制药有限责任公司 用于治疗hcv的组合物
US8466159B2 (en) 2011-10-21 2013-06-18 Abbvie Inc. Methods for treating HCV
US8492386B2 (en) 2011-10-21 2013-07-23 Abbvie Inc. Methods for treating HCV
WO2013059630A1 (en) 2011-10-21 2013-04-25 Abbvie Inc. Methods for treating hcv comprising at least two direct acting antiviral agent, ribavirin but not interferon.
CN104436197A (zh) 2011-10-21 2015-03-25 艾伯维公司 至少两种直接作用抗病毒剂的组合产品
CN104244947A (zh) 2011-10-31 2014-12-24 吉利德法莫赛特有限责任公司 用于治疗hcv的方法和组合物
US20130109647A1 (en) 2011-10-31 2013-05-02 Gilead Pharmasset Llc Methods and compositions for treating hepatitis c virus
PT2907816T (pt) 2011-11-16 2018-10-18 Gilead Pharmasset Llc Imidazolilimidazóis condensados como compostos antivirais
WO2013082003A1 (en) 2011-11-29 2013-06-06 Gilead Pharmasset Llc Compositions and methods for treating hepatitis c virus
US8889159B2 (en) 2011-11-29 2014-11-18 Gilead Pharmasset Llc Compositions and methods for treating hepatitis C virus
EP2907505A3 (en) 2011-12-29 2015-12-30 Abbvie Inc. Solid compositions comprising an HCV inhibitor
EP2802597A1 (en) 2012-01-13 2014-11-19 Gilead Pharmasset LLC Crysral structure of hcv polymerase complexes and methods of use
US8969588B2 (en) 2012-06-05 2015-03-03 Gilead Pharmasset Llc Solid forms of an antiviral compound
US9056860B2 (en) 2012-06-05 2015-06-16 Gilead Pharmasset Llc Synthesis of antiviral compound
KR20140119012A (ko) 2013-01-31 2014-10-08 길리어드 파마셋 엘엘씨 두 항바이러스 화합물의 병용 제형물
TW201446286A (zh) 2013-01-31 2014-12-16 Gilead Pharmasset Llc 抗病毒化合物之固態分散調製劑
US20140249101A1 (en) 2013-03-04 2014-09-04 Gilead Pharmasset Llc Methods for treating hepatitis c virus infection
US20140343008A1 (en) 2013-05-16 2014-11-20 Gilead Pharmasset Llc Hepatitis c treatment

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20110178129A1 (en) * 2010-01-15 2011-07-21 Gilead Sciences, Inc. Inhibitors of flaviviridae viruses
US20110306541A1 (en) * 2010-06-10 2011-12-15 Gilead Sciences, Inc. Methods for treating hcv
WO2012087596A1 (en) * 2010-12-20 2012-06-28 Gilead Sciences, Inc. Combinations for treating hcv

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
E. MURAKAMI, TOLSTYKH T., BAO H., NIU C., STEUER H. M. M., BAO D., CHANG W., ESPIRITU C., BANSAL S., LAM A. M., OTTO M. J., SOFIA : "Mechanism of Activation of PSI-7851 and Its Diastereoisomer PSI-7977", JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY, AMERICAN SOCIETY FOR BIOCHEMISTRY AND MOLECULAR BIOLOGY, vol. 285, no. 45, 5 November 2010 (2010-11-05), pages 34337 - 34347, XP055004551, ISSN: 00219258, DOI: 10.1074/jbc.M110.161802 *

Also Published As

Publication number Publication date
TR201802537T4 (tr) 2018-03-21
PE20141056A1 (es) 2014-09-05
LT2709613T (lt) 2018-02-12
HRP20180237T4 (hr) 2020-12-11
AU2012308295B2 (en) 2017-10-26
CR20140177A (es) 2014-08-18
ECSP14013312A (es) 2014-06-30
JP2017057230A (ja) 2017-03-23
ES2659216T3 (es) 2018-03-14
CY1119896T1 (el) 2018-06-27
HRP20180237T1 (hr) 2018-03-09
MX354958B (es) 2018-03-27
DE202012013074U1 (de) 2014-10-29
JP6220994B2 (ja) 2017-10-25
MX2014003145A (es) 2014-04-30
DK2709613T3 (en) 2018-02-26
KR101991298B1 (ko) 2019-06-21
MX336580B (es) 2016-01-22
EP2709613B1 (en) 2017-11-29
US10456414B2 (en) 2019-10-29
AP2014007575A0 (en) 2012-04-30
NZ720391A (en) 2017-10-27
PT2709613T (pt) 2018-02-16
MD4589C1 (ru) 2019-03-31
SI2709613T2 (sl) 2020-12-31
CA2840242A1 (en) 2013-03-21
WO2013040492A3 (en) 2013-07-25
MD4589B1 (ru) 2018-08-31
MD20140035A2 (ru) 2014-08-31
PL2709613T3 (pl) 2018-05-30
UA116087C2 (uk) 2018-02-12
IL231515A (en) 2017-05-29
CO6930366A2 (es) 2014-04-28
US20170189439A1 (en) 2017-07-06
CL2014000630A1 (es) 2014-11-07
HUE036588T2 (hu) 2018-07-30
EP2709613A2 (en) 2014-03-26
CN104244945B (zh) 2016-08-31
WO2013040492A2 (en) 2013-03-21
IL231515A0 (en) 2014-04-30
AU2012308295A1 (en) 2014-04-17
RS56975B1 (sr) 2018-05-31
NZ623396A (en) 2016-07-29
PL2709613T5 (pl) 2020-12-14
CN104244945A (zh) 2014-12-24
SG10201602044WA (en) 2016-04-28
SG11201400664WA (en) 2014-04-28
JP6073897B2 (ja) 2017-02-01
US20160354425A1 (en) 2016-12-08
BR112014006324B8 (pt) 2019-02-12
DK2709613T4 (da) 2020-11-16
EA201490588A1 (ru) 2015-01-30
KR20190075142A (ko) 2019-06-28
SI2709613T1 (en) 2018-01-31
US9393256B2 (en) 2016-07-19
HK1231378A1 (zh) 2017-12-22
BR112014006324B1 (pt) 2018-12-26
CN106166160A (zh) 2016-11-30
DE202012013074U8 (de) 2015-02-19
ES2659216T5 (es) 2021-06-09
EP2709613B2 (en) 2020-08-12
KR20140096029A (ko) 2014-08-04
CA2840242C (en) 2019-03-26
JP2014526516A (ja) 2014-10-06
ME03009B (me) 2018-10-20
BR112014006324A2 (pt) 2016-06-07
DE202012013382U1 (de) 2016-08-23
US20130243726A1 (en) 2013-09-19
EA026667B9 (ru) 2017-07-31

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EA026667B1 (ru) Фармацевтическая композиция для лечения вируса гепатита с
AU2017219216B2 (en) Tetracyclic pyridone compounds as antivirals
KR101846596B1 (ko) Ｃ형 간염 바이러스 억제제의 조합
JP5815746B2 (ja) Ｃ型肝炎ウイルス阻害剤
JP5632910B2 (ja) Ｃ型肝炎ウイルス阻害剤
US8927576B2 (en) HCV inhibitor and therapeutic agent combinations
US8609648B2 (en) Hepatitis C virus inhibitors
US20200407365A1 (en) Indole-2-carbonyl compounds and their use for the treatment of hepatitis b
WO2017216685A1 (en) Pentacyclic pyridone compounds as antivirals
EA034749B1 (ru) Противовирусные соединения
US20060276511A1 (en) Inhibitors of HCV replication
JP6830909B2 (ja) ｍＩＤＨ１阻害剤としてのＮ−メンチルベンズイミダゾール
KR20120088743A (ko) 특정 ｈｃｖ ｎｓ５ａ 억제제 및 ｈｃｖ ｎｓ３ 프로테아제 억제제의 조합물
CN107108522B (zh) 作为mIDH1抑制剂的苯并咪唑-2-胺
JP2013521279A (ja) Ｈｃｖ複製の阻害剤としての医薬併用剤
US20130273005A1 (en) Methods for treating hcv
JP2012523415A (ja) Ｃ型肝炎ウイルス阻害剤
TW201136942A (en) 5,5-fused arylene or heteroarylene hepatitis C virus inhibitors
EA018313B1 (ru) Ингибиторы вируса гепатита с
CN112673008B (zh) 次黄嘌呤化合物
US20190308969A1 (en) Heterocyclic modulators of lipid synthesis
US20210179613A1 (en) Ghrelin receptor agonist for treatment of cachexia
JP2020203947A (ja) Ｎｓ５ａ、ｎｓ５ｂまたはｎｓ３阻害剤を使用する、ｂ型肝炎ウイルス感染症を処置するための方法
JP6196678B2 (ja) Ｃ型肝炎ウイルス阻害剤
CN104884459A (zh) 用于治疗丙型肝炎的大环苯并呋喃和氮杂苯并呋喃化合物

Legal Events

Date Code Title Description
TH4A Publication of the corrected specification to eurasian patent