KR101846596B1 - Ｃ형 간염 바이러스 억제제의 조합 - Google Patents

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Abstract

본 개시는 일반적으로 항바이러스 화합물에 관한 것이며, 더 구체적으로는 C형 간염 바이러스(HCV)를 억제할 수 있는 화합물의 조합, 그러한 화합물을 포함하는 조성물, 및 그러한 조합을 이용하여 C형 간염을 치료하는 방법에 관한 것이다. 최대 효능을 달성하고 바이러스를 잠재적으로 근절하기 위해서는, 조합 요법, 특히 별개의 HCV 바이러스 표적을 표적화하는 요법들을 이용하는 것이 중요할 것이다. 시험관내 레플리콘-기반 조합 연구에 따르면 상승작용 효과에 대한 부가 효과가 HCV 억제제의 다양한 조합으로 달성될 수 있는 것으로 나타났다.

Description

Ｃ형 간염 바이러스 억제제의 조합{COMBINATIONS OF HEPATITIS C VIRUS INHIBITORS}
관련 출원의 상호 참조
본 출원은 2010년 8월 6일에 출원한 미국 가출원 일련 번호 61/371,399를 우선권 주장한다.
본 개시는 일반적으로 항바이러스 화합물에 관한 것이며, 더 구체적으로는 C형 간염 바이러스(HCV)를 억제할 수 있는 화합물의 조합, 그러한 화합물을 포함하는 조성물, 및 그러한 조합을 이용하여 C형 간염을 치료하는 방법에 관한 것이다.
HCV는 주요 인간 병원체로서, 전 세계적으로는 어림잡아 170,000,000명을 감염시키며, 이는 인간 면역결핍 바이러스 유형 1로 감염된 수치의 대략 5배에 해당한다. 이들 HCV-감염 개체의 상당 비율은 간경변 및 간세포암을 포함하여 중증의 진행성 간 질환으로 진전된다.
HCV는 양성-가닥 RNA 바이러스이다. 추론된 아미노산 서열의 비교 및 5' 비-번역 영역에서의 광범위한 유사성을 토대로, HCV는 플라비비리대(Flaviviridae)과(科)의 독립된 속(屬)으로서 분류되어 왔다. 플라비비리대과의 모든 멤버는 단일의 비단속(uninterrupted) 오픈 리딩 프레임의 번역을 통해 모든 공지의 바이러스-특이적 단백질을 코딩하는 양성 가닥 RNA 게놈을 함유하는 외피보유 비리온이다.
교정능이 결여된 코딩된 RNA-의존성 RNA 폴리머라제의 높은 오류율에 기인하여 HCV 게놈 전역에 걸쳐서 뉴클레오티드 및 코딩된 아미노산 서열내에서 상당한 이질성이 발견된다. 적어도 6종의 주요 유전자형이 특징규명되었으며, 50종이 넘는 하위유형이 전 세계적으로 분포하는 것으로 전해진다. HCV의 유전자 이질성의 임상적 의의는 단독요법 치료중 돌연변이의 발생 성향을 증명해 주었다는 것이며; 이에 따라, 사용할 부가적인 치료 옵션이 요망된다.
단일 가닥 HCV RNA 게놈은 대략 9500 뉴클레오티드 길이이며, 약 3000개의 아미노산으로 구성된 단일 거대 폴리단백질을 코딩하는 단일 오픈 리딩 프레임(ORF)을 갖는다. 감염 세포에서, 이러한 폴리단백질은 다수의 부위에서 세포 및 바이러스 프로테아제에 의해 절단되어 구조 및 비-구조(NS) 단백질을 생성한다. HCV의 경우, 성숙 비-구조 단백질(NS2, NS3, NS4A, NS4B, NS5A 및 NS5B)의 생성은 두 종의 바이러스 프로테아제에 의해 달성된다. 첫 번째 하나는 메탈로프로테아제인 것으로 생각되고, NS2-NS3 접합부에서 절단을 하며; 다른 하나는 NS3의 N-말단 영역내에 함유된 세린 프로테아제(본원에서는 NS3 프로테아제로도 호칭함)로서, NS3-NS4A 절단 부위에서는 시스로도, 및 나머지 NS4A-NS4B, NS4B-NS5A, NS5A-NS5B 부위에 대해서는 트랜스로도, NS3의 하류에서의 모든 후속 절단을 매개한다. NS4A 단백질은 NS3 프로테아제에 대한 보조인자로도 작용하고, NS3 및 다른 바이러스 레플리카제 성분의 막 국재화에도 조력함으로써 다중 기능을 수행하는 것으로 보인다. NS3/NS4A 복합체의 형성은 절단 사건의 증가된 단백질분해 효율로 귀착되는 적정 프로테아제 활성을 위해 필요하다. NS3 단백질은 또한 뉴클레오시드 트리포스파타제 및 RNA 헬리카제 활성도 보인다. NS4B는 HCV 복제 복합체가 조립하는 것으로 생각되는 장소인 막성 웹(membranous web)의 형성에 관여하는 내재성 막 단백질이다. NS5B(본원에서는 HCV 폴리머라제로도 호칭함)는 레플리카제 복합체에서, NS5A를 포함하여 다른 HCV 단백질을 갖는 HCV의 복제에 관여하는 RNA-의존성 RNA 폴리머라제이다.
대부분의 만성 HCV 감염 환자의 처치를 위한 현행 표준치료는 페길화 인터페론-알파와 리바비린의 처방이다. 그러나, 많은 비율의 환자가 이러한 요법에 반응을 보이지 않으며, 치료는 심각한 부작용을 수반한다. 따라서, 좀더 안전하고 좀더 효과적인 요법의 개발이 절실하다. 다수의 소형 분자 HCV 억제제가 현재 임상 시험중에 있기는 하지만, 몇몇 연구로부터의 임상 데이터에 근거하면 억제제의 조합은 HCV-감염 환자에서의 지속적인 바이러스 반응을 성취할 것이 요구될 수도 있음이 분명하다. 프로테아제 억제제로의 치료시와, 뉴클레오시드 및 비-뉴클레오시드 HCV 억제제로의 치료시에 치료중에 환자에서 내성의 출현, 및 치료후 바이러스 반등(post-treatment viral rebound)이 관찰되어 왔다. 최대 효능을 달성하고 바이러스를 잠재적으로 근절하기 위해서는, 조합 요법, 특히 별개의 HCV 바이러스 표적을 표적화하는 요법들을 활용하는 것이 중요할 것이다. 시험관내 레플리콘-기반 조합 연구에 따르면 상승작용 효과에 대한 부가 효과가 HCV 억제제의 다양한 조합으로 달성될 수 있는 것으로 나타났다.
공유 특허출원 WO2008/021927에는 HCV에 의해 코딩된 NS5A 단백질의 기능을 억제하는 화합물이 개시되어 있다. 미국 특허 일련 번호 6,995,174에는 HCV에 의해 코딩된 NS3 프로테아제의 기능을 억제하는 화합물이 개시되어 있다. 미국 특허 일련 번호 7,456,166에는 NS5B 폴리머라제의 기능을 억제하는 화합물이 개시되어 있다. 본 개시는 특이적 HCV NS5A 억제제, 특이적 HCV NS3 프로테아제 억제제와, HCV의 치료에 유용한 NS5B 폴리머라제 억제제의 조합을 교시하고 있다.
제1 측면에서, 본 개시는 치료 유효량의 하기 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염; 치료 유효량의 하기 화학식 II의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염; 치료 유효량의 HCV 폴리머라제의 기능 억제에 유효한 화합물; 및 제약상 허용되는 담체를 포함하는 조성물을 제공한다.
<화학식 I>
Figure 112013019111719-pct00001
,<화학식 II>
Figure 112013019111719-pct00002
제1 측면의 제1 실시양태에서, HCV 폴리머라제의 기능 억제에 유효한 화합물은 PSI-6130, PF-00868554, ANA-598, IDX-375, IDX-184, INX-189, BI-207127, PSI-7851, PSI-938, PSI-879, VCH-759, VCH-916, VCH-222, BMS-929075, GS-9190, ABT-333, 및 ABT-072 중에서 선택된다.
제2 측면에서, 본 개시는 치료 유효량의 하기 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염; 치료 유효량의 하기 화학식 II의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염; 치료 유효량의 하기 화학식 III의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염; 및 제약상 허용되는 담체를 포함하는 조성물을 제공한다.
<화학식 I>
Figure 112013019111719-pct00003
<화학식 II>
Figure 112013019111719-pct00004
<화학식 III>
Figure 112013019111719-pct00005
제2 측면의 제1 실시양태에서, 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염:화학식 II의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염:화학식 III의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 몰비는 약 1:20:5이다.
제2 측면의 제2 실시양태에서, 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염:화학식 II의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염:화학식 III의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 몰비는 약 1:250:1000이다.
제3 측면에서, 본 개시는 하기 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염; 치료 유효량의 하기 화학식 II의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염; 치료 유효량의 HCV 폴리머라제의 기능 억제에 유효한 화합물; 및 제약상 허용되는 담체를 포함하는 조성물의 치료 유효량을 환자에 투여하는 것을 포함하는, 환자에서 HCV 감염을 치료하는 방법을 제공한다.
<화학식 I>
Figure 112013019111719-pct00006
<화학식 II>
Figure 112013019111719-pct00007
제3 측면의 제1 실시양태에서, HCV 폴리머라제의 기능 억제에 유효한 화합물은 PSI-6130, PF-00868554, ANA-598, IDX-375, IDX-184, INX-189, BI-207127, PSI-7851, PSI-938, PSI-879, VCH-759, VCH-916, VCH-222, BMS-929075, GS-9190, ABT-333, 및 ABT-072 중에서 선택된다.
제4 측면에서, 본 개시는 치료 유효량의 하기 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염; 치료 유효량의 하기 화학식 II의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염; 치료 유효량의 하기 화학식 III의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염; 및 제약상 허용되는 담체를 포함하는 조성물의 치료 유효량을 환자에 투여하는 것을 포함하는, 환자에서 HCV 감염을 치료하는 방법을 제공한다.
<화학식 I>
Figure 112013019111719-pct00008
<화학식 II>
Figure 112013019111719-pct00009
<화학식 III>
Figure 112013019111719-pct00010
제4 측면의 제1 실시양태에서, 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염:화학식 II의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염:화학식 III의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 몰비는 약 1:20:5이다.
제4 측면의 제2 실시양태에서, 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염:화학식 II의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염:화학식 III의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 몰비는 약 1:250:1000이다.
본 개시의 다른 측면은 본원에 개시된 실시양태의 적당한 조합을 포함할 수 있다.
또 다른 측면 및 실시양태는 본원에 제공되는 상세한 설명에서 찾아볼 수 있다.
명세서에서 인용하는 모든 특허, 특허출원, 및 참고문헌은 그 전문이 본원에 참고로 포함된다. 모순되는 경우, 정의를 포함하여 본 개시가 우선하게 된다.
당해 명세서에서 사용되고 있는 바와 같이, 하기 용어는 표시된 의미를 갖는다:
본원에서 사용되는 바와 같이, 단수의 표현("a," "an," 및 "the)은 문맥상 명백하게 다르게 뜻하지 않는 한 복수의 표현을 포함한다.
본 개시의 특정 화합물은 분리할 수 있는 상이한 안정한 입체배좌 형태로 존재할 수 있다. 예를 들어 입체장애 또는 고리 스트레인 때문에 생기는 비대칭 단일 결합 주위의 제한된 회전에 기인하는 비틀림 비대칭(torsional asymmetry)은 회전장애이성질체(atropisomer)로서 일반적으로 알려져 있는 상이한 이형태체(conformer)의 분리를 허용할 수 있다. 본 개시는 이들 화합물의 각각의 형태 이성질체 및 그들의 혼합물을 포함한다.
본 개시의 화합물은 제약상 허용되는 염으로서 존재할 수 있다. 본원에서 사용되는 용어 "제약상 허용되는 염"이란 건전한 의학적 판단의 범주 안에서 볼 때, 합리적인 이득/위험비(benefit/risk ratio)에 비례하는 과도한 독성, 과민증, 알레르기 반응, 또는 기타 문제점이나 합병증 없이 환자의 조직과 접촉하여 사용하기에 적합하고, 그들의 목적하는 용도에 효과적인, 수용성이거나 유용성 또는 분산성인 본 개시의 화합물의 염 또는 쯔비터이온 형태를 의미한다. 염은 화합물의 최종 분리 및 정제 중에 또는 적당한 질소 원자를 적당한 산과 반응시킴으로써 개별적으로 제조될 수 있다. 대표적인 산 부가염으로는 아세테이트, 아디페이트, 알기네이트, 시트레이트, 아스파테이트, 벤조에이트, 벤젠술포네이트, 비술페이트, 부티레이트, 캄포레이트, 캄포술포네이트; 디글루코네이트, 글리세로포스페이트, 헤미술페이트, 헵타노에이트, 헥사노에이트, 포르메이트, 푸마레이트, 히드로클로라이드, 히드로브로마이드, 히드로아이오다이드, 2-히드록시에탄술포네이트, 락테이트, 말레에이트, 메시틸렌술포네이트, 메탄술포네이트, 나프틸렌술포네이트, 니코티네이트, 2-나프탈렌술포네이트, 옥살레이트, 팔모에이트, 펙티네이트, 퍼술페이트, 3-페닐프로피오네이트, 피크레이트, 피발레이트, 프로피오네이트, 숙시네이트, 타르트레이트, 트리클로로아세테이트, 트리플루오로아세테이트, 포스페이트, 글루타메이트, 비카르보네이트, 파라-톨루엔술포네이트, 및 운데카노에이트가 포함된다. 제약상 허용되는 부가염의 형성에 사용될 수 있는 산의 예로는 무기산, 예컨대 염산, 브로민산, 황산 및 인산과, 유기산, 예컨대 옥살산, 말레산, 숙신산 및 시트르산이 포함된다.
염기성 부가염은 산성 양성자를 적당한 염기, 예컨대 금속 양이온의 히드록시드, 카르보네이트 또는 비카르보네이트와 또는 암모니아나 유기 1급, 2급 또는 3급 아민과 반응시킴으로써 화합물의 최종 분리 및 정제 중에 제조될 수 있다. 제약상 허용되는 염의 양이온으로는 리튬, 나트륨, 칼륨, 칼슘, 마그네슘과 알루미늄, 및 무독성 4급 아민 양이온, 예컨대 암모늄, 테트라메틸암모늄, 테트라에틸암모늄, 메틸아민, 디메틸아민, 트리메틸아민, 트리에틸아민, 디에틸아민, 에틸아민, 트리부틸아민, 피리딘, N,N-디메틸아닐린, N-메틸피페리딘, N-메틸모르폴린, 디시클로헥실아민, 프로카인, 디벤질아민, N,N-디벤질펜에틸아민 및 N,N'-디벤질에틸렌디아민이 포함된다. 염기 부가염의 형성에 유용한 기타 대표적인 유기 아민으로는 에틸렌디아민, 에탄올아민, 디에탄올아민, 피페리딘 및 피페라진이 포함된다.
당해 개시는 치료 유효량의 화학식 I 및 II의 화합물 또는 그들의 제약상 허용되는 염, NS5B 억제제, 및 1종 이상의 제약상 허용되는 담체, 희석제 또는 부형제를 포함하여 이루어지는 제약 조성물을 제공한다. 본원에서 사용되는 용어 "치료 유효량"이란 의미있는 환자 이득, 예를 들어, 바이러스 부하의 지속적 감축을 나타내기에 충분한 각 활성 성분의 총량을 말한다. 단독으로 투여된 개별 활성 성분에 적용하는 경우, 상기 용어는 그 성분 단독을 지칭한다. 조합에 적용하는 경우, 상기 용어는 조합하여 투여하든, 순차적으로 투여하든, 또는 동시 투여하든간에, 치료 효과를 도출하는 활성 성분의 조합량을 지칭한다. 화학식 I 및 II의 화합물과 그들의 제약상 허용되는 염, 및 NS5B 폴리머라제 억제제는 전술한 바와 같다. 담체(들), 희석제(들), 또는 부형제(들)은 제제의 타 성분과 상용성이고 그들의 수용자에게 유해하지 않다는 점에서 허용가능하여야 한다. 본 개시의 또 다른 측면에 따르면, 화학식 I 및 II의 화합물 또는 그들의 제약상 허용되는 염을 NS5B 폴리머라제 억제제 및 1종 이상의 제약상 허용되는 담체, 희석제 또는 부형제와 혼합하는 것을 포함하는, 제약 제제의 제조 방법이 또한 제공된다. 본원에서 사용되는 용어 "제약상 허용되는"이란 건전한 의학적 판단의 범주 안에서 볼 때, 합리적인 이득/위험비에 비례하는 과도한 독성, 과민증, 알레르기 반응, 또는 기타 문제점이나 합병증 없이 환자의 조직과 접촉하여 사용하기에 적합하고, 그들의 목적하는 용도에 효과적인, 상기 화합물, 물질, 조성물, 및/또는 투여 형태를 지칭한다.
제약 제제는 단위 용량당 예정량의 활성 성분을 함유하는 단위 투여 형태로 제공될 수 있다. 전형적으로, 본 개시의 제약 조성물은 하루에 약 1 내지 약 5회 투여되거나 또는 별법으로 연속 주입으로서 투여될 것이다. 이러한 투여는 만성 또는 급성 요법으로서 이용될 수 있다. 단일 투여 형태를 생성하기 위하여 담체 물질과 조합될 수 있는 활성 성분의 양은 치료되는 증상, 증상의 중증도, 투여 횟수, 투여 경로, 사용되는 화합물의 배출 속도, 치료 지속기간, 및 환자의 연령, 성별, 체중 및 상태에 따라 변동될 것이다. 바람직한 단위 투여 제제는 활성 성분의 (본원에서 상술한 바와 같은) 1일 용량 또는 하위 용량(sub-dose), 또는 그들의 적당 분율을 함유하는 것들이다. 일반적으로, 치료는 화합물의 최적 용량보다 실질적으로 적은 낮은 투여량으로 개시된다. 따라서, 투여량은 그러한 상황하에서의 최적 효과에 이를 때까지 소량 증분으로 증가된다. 일반적으로, 화합물은 가장 바람직하게는 어떠한 유해하거나 해로운 부작용도 유발하지 않으면서 일반적으로 항바이러스적으로 유효한 결과를 제공하게 될 농도 수준으로 투여된다.
본 개시의 조성물은 항-HCV 활성이 있는 3종 이상의 화합물의 조합을 포함함에 따라, 모든 화합물은 단독요법 처방에서 보통 투여되는 투여량 이하의 용량으로 존재할 수 있다. 본 개시의 화합물 각각의 약 0.01 내지 약 250 밀리그램/킬로그램("mg/kg") 체중/일, 바람직하게는 약 0.05 내지 약 100 mg/kg 체중/일의 투여량 수준이 HCV-매개 질환의 예방 및 치료를 위한 단독요법에서 전형적이다. 본 개시의 조성물은 1종 이상의 부가적인 치료제 또는 예방제와, 예를 들어, 일체형 및/또는 2층/다층형 정제의 형태로 함께 제제화될 수 있거나 또는 치료제 또는 예방제(들)과는 개별적으로 투여될 수 있다.
제약 제제는 임의의 적절한 경로에 의한 투여, 예를 들어 경구(협측 또는 설하 포함), 직장, 비강, 국소(협측, 설하 또는 경피 포함), 질내, 또는 비경구(피하, 피내, 근육내, 관절내, 활액막내, 흉골내, 경막내, 병소내, 정맥내 또는 진피내 주사 또는 주입 포함) 경로에 의한 투여용으로 적합할 수 있다. 그러한 제제는 조제학 분야에 공지된 임의 방법으로, 예를 들어 활성 성분을 담체(들) 또는 부형제(들)과 회합시킴으로써 제조될 수 있다.
경구 투여하기에 적합한 제약 제제는 불연속 단위, 예컨대 캡슐 또는 정제; 분말 또는 과립; 수성 또는 비-수성 액체 중의 용액 또는 현탁액; 식용 포움 또는 휘프(whip); 또는 수중유 액체 에멀젼 또는 유중수 에멀젼으로서 제공될 수 있다.
예를 들어, 정제 또는 캡슐 형태로 경구 투여를 하기 위해서는, 활성 약물 성분은 경구용 무독성의 제약상 허용되는 불활성 담체, 예컨대 에탄올, 글리세롤, 물 등과 조합될 수 있다. 분말은 화합물을 적당한 미세 크기로 분쇄한 다음, 유사하게 분쇄된 제약 담체, 예컨대 식용 탄수화물, 예를 들어, 전분 또는 만니톨과 혼합함으로써 제조된다. 향미제, 보존제, 분산제, 및 착색제 또한 존재할 수 있다.
캡슐은 전술한 바와 같이 분말 혼합물을 제조한 다음, 형성된 젤라틴 외피(sheath)를 충전함으로써 제조된다. 콜로이드성 실리카, 활석, 스테아르산마그네슘, 스테아르산칼슘, 또는 고체 폴리에틸렌 글리콜과 같은 활택제 및 윤활제를 충전 작업에 앞서 분말 혼합물에 첨가할 수 있다. 캡슐이 섭취되는 경우에는 의약의 이용도 향상을 위해 아가-아가, 탄산칼슘 또는 탄산나트륨과 같은 붕해제 또는 가용화제가 또한 첨가될 수 있다.
더욱이, 소망하는 경우 또는 필요에 따라, 적합한 결합제, 윤활제, 붕해제, 및 착색제가 또한 혼합물에 혼입될 수 있다. 적합한 결합제로는 전분, 젤라틴, 천연 당류, 예컨대 글루코스 또는 베타-락토스, 옥수수 감미제, 천연 및 합성 검, 예컨대 아카시아, 트라가칸트 또는 알긴산나트륨, 카르복시메틸셀룰로스, 폴리에틸렌 글리콜 등이 포함된다. 이들 투여 형태에 사용되는 윤활제는 올레인산나트륨, 염화나트륨 등을 포함한다. 붕해제는 비제한적으로 전분, 메틸 셀룰로스, 아가, 벤토나이트, 크산탄 검 등을 포함한다. 정제는 예를 들어, 분말 혼합물을 제조하고, 과립화 또는 슬러깅(slugging)하여, 윤활제 및 붕해제를 첨가한 다음, 정제로 타정함으로써 제제화된다. 분말 혼합물은 화합물(적절히 분쇄된 것)을 전술한 바와 같은 희석제 또는 염기, 및 임의로는, 카르복시메틸셀룰로스, 알기네이트, 젤라틴 또는 폴리비닐 피롤리돈과 같은 결합제, 파라핀과 같은 용액 지연제, 4급 염과 같은 재흡수 촉진제 및/또는 벤토나이트, 카올린 또는 제2인산칼슘과 같은 흡수제와 혼합함으로써 제조된다. 분말 혼합물은 시럽, 전분 페이스트, 아라비아고무 점액, 또는 셀룰로스 또는 중합체 물질의 용액과 같은 결합제로 습윤화한 다음, 스크린에 강제 통과시킴으로써 과립화될 수 있다. 과립화 단계에 대한 별법으로서, 분말 혼합물을 타정기에 관통하여 통과시킬 수 있으며, 그 결과 과립으로 쪼개진 슬러그가 불완전하게 형성된다. 과립은 스테아르산, 스테아레이트 염, 활석 또는 미네랄 오일의 첨가에 의해 정제-형성 다이에의 부착을 방지하도록 윤활시킬 수 있다. 이어서, 윤활된 혼합물을 정제로 타정한다. 본 개시의 화합물은 또한 자유-유동 불활성 담체와 조합된 다음, 과립화 또는 슬러깅 단계를 거치지 않고 바로 정제로 타정시킬 수 있다. 셸락의 실링 코트, 당 또는 중합체 물질의 코팅, 및 왁스의 광택 코팅으로 이루어진 투명 또는 불투명 보호 코팅이 제공될 수 있다. 상이한 단위 투여량을 구별짓기 위해 이들 코팅에 염료가 첨가될 수 있다.
용액, 시럽 및 엘릭시르와 같은 경구액은 주어진 분량이 예정량의 화합물을 함유하도록 단위 투여 형태로 제조될 수 있다. 시럽은 화합물을 적당하게 향미가 가미된 수용액에 용해시킴으로써 제조될 수 있는 반면에, 엘릭시르는 무독성 비히클의 사용을 통해 제조된다. 가용화제 및 유화제, 예컨대 에톡실화 이소스테아릴 알콜 및 폴리옥시에틸렌 솔비톨 에테르, 보존제, 향미 첨가제, 예컨대 페퍼민트 오일 또는 천연 감미제, 또는 사카린 또는 기타 인공 감미제 등이 또한 첨가될 수 있다.
경우에 따라, 경구 투여용 단위 투여 제제는 마이크로캡슐화될 수 있다. 제제는 또한, 예를 들어 입상 물질을 코팅하거나 또는 중합체, 왁스 등에 포매시킴으로써 방출을 연장하거나 지속하도록 제조될 수도 있다.
화학식 I 및 II의 화합물과 그들의 제약상 허용되는 염은 NS5B 폴리머라제 억제제와 함께, 소형 단층 소포, 대형 단층 소포 및 다층 소포와 같은 리포솜 전달 시스템의 형태로 또한 투여될 수 있다. 리포솜은 콜레스테롤, 스테아릴아민 또는 포스파티딜콜린과 같은 다양한 인지질로부터 형성될 수 있다.
화학식 I 및 II의 화합물과 그들의 제약상 허용되는 염은 NS5B 폴리머라제 억제제와 함께, 화합물 분자가 커플링되는 개별 담체로서 모노클로날 항체의 사용에 의해서 또한 전달될 수 있다. 화합물은 또한 표적화가능한 약물 담체로서 가용성 중합체와 커플링시킬 수도 있다. 그러한 중합체에는 폴리비닐피롤리돈, 피란 공중합체, 폴리히드록시프로필메타크릴아미드페놀, 폴리히드록시에틸아스파르트아미드페놀, 또는 팔리토일 잔기로 치환된 폴리에틸렌옥시드폴리리신이 포함될 수 있다. 나아가, 화합물은 약물의 제어 방출을 달성하는 데 유용한 생분해성 중합체, 예를 들어, 폴리락트산, 폴리엡실론 카프로락톤, 폴리히드록시 부티르산, 폴리오르토에스테르, 폴리아세탈, 폴리디히드로피란, 폴리시아노아크릴레이트, 및 히드로겔의 가교된 또는 양친매성 블록 공중합체에 커플링될 수 있다.
경피 투여하기에 적합한 제약 제제는 장시간 동안 수용자의 표피와 밀착상태로 있도록 의도되는 분리 패치(discrete patch)로서 제공될 수 있다. 예를 들어, 활성 성분은 문헌 [Pharmaceutical Research, 3(6), 318(1986)]에 일반적으로 기재되어 있는 바와 같은 이온영동에 의해 패치로부터 전달될 수 있다.
국소 투여하기에 적합한 제약 제제는 연고, 크림, 현탁액, 로션, 분말, 용액, 페이스트, 겔, 스프레이, 에어로졸 또는 오일로서 제제화될 수 있다.
눈 또는 다른 외부 조직, 예를 들어 구강 및 피부의 치료를 위해, 제제는 바람직하게는 국소용 연고 또는 크림으로서 도포된다. 연고로 제제화되는 경우, 활성 성분은 파라핀 또는 수-혼화성 연고 기제와 사용될 수 있다. 별법으로, 활성 성분은 수중유 크림 기제 또는 유중수 기제를 사용하여 크림으로 제제화될 수 있다.
눈에 국소 투여하기에 적합한 제약 제제는 활성 성분이 적당한 담체, 특히 수성 용매 중에 용해 또는 현탁되는 점안제를 포함한다.
구강에 국소 투여하기에 적합한 제약 제제는 로젠지, 향정, 및 구강 세정제를 포함한다.
직장 투여하기에 적합한 제약 제제는 좌제 또는 관장제로서 제공될 수 있다.
담체가 고체인, 비강 투여하기에 적합한 제약 제제는 코로 들이쉬는 방식으로, 즉 코에 가까이 댄 분말 용기로부터 비도를 통해 재빠르게 흡입함으로써 투여되는 조분말(粗粉末)을 포함한다. 담체가 액체인, 비강용 스프레이 또는 점비제로서 투여하기 위한 제제는 활성 성분의 수용액 또는 오일 용액을 포함한다.
흡입에 의한 투여에 적합한 제약 제제는 다양한 유형의 가압 정량분무식 에어로졸, 분무기, 또는 취입기에 의해 생성될 수 있는 입자 분진 또는 연무를 포함한다.
질내 투여하기에 적합한 제약 제제는 페사리, 탐폰, 크림, 겔, 페이스트, 포움 또는 스프레이 제제로서 제공될 수 있다.
비경구 투여하기에 적합한 제약 제제는 항산화제, 완충제, 정균제, 및 제제를 의도하는 수용자의 혈액과 등장성이 되게 해주는 용질을 함유할 수 있는 수성 및 비-수성 멸균 주사 용액; 및 현탁화제 및 증점제를 포함할 수 있는 수성 및 비-수성 멸균 현탁액을 포함한다. 제제는 단회 용량 또는 다회 용량 용기, 예를 들어 밀봉 앰플 및 바이알로 제공될 수 있고, 사용 직전에 멸균 액체 담체, 예를 들어 주사용수를 첨가만하면 되는 냉동-건조(동결건조) 상태로 저장될 수 있다. 즉석 주사 용액 및 현탁액은 멸균 분말, 과립, 및 정제로부터 제조될 수 있다.
당연한 얘기지만, 앞서 특별히 언급한 성분들 외에도, 제제는 당해 제제의 유형을 고려하여 당업야에서 통상적인 다른 작용제를 포함할 수 있으며, 예를 들어 경구 투여에 적합한 제제는 향미제를 포함할 수 있다.
용어 "환자"는 인간과 기타 포유동물 둘다를 포함한다.
용어 "치료"는 다음을 의미한다: (i) 질환, 장애 및/또는 병태에 걸리기 쉬울 수 있지만 아직까지는 걸린 것으로 진단되지 않는 환자에서 질환, 장애 또는 병태 발생의 예방; (ii) 질환, 장애 또는 병태의 억제, 즉, 발달의 저지; 및 (iii) 질환, 장애 또는 병태의 완화, 즉, 질환, 장애 및/또는 병태의 퇴행 유발.
하기 표 1에 본 개시의 조성물로 투여될 수 있는 화합물의 일부 예시적인 예를 수록하였다. 본 개시의 조성물은 조합 요법에서 다른 항-HCV 활성 화합물과 공동으로 또는 개별적으로 투여될 수 있거나, 또는 그 화합물을 조성물에 조합함으로써 투여될 수 있다.
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본 개시의 조성물은 또한 실험실용 시약으로도 사용될 수 있다. 화합물은 바이러스 복제 검정의 설계를 위한 연구 도구의 제공, 동물 검정 시스템의 검증 및 HCV 질환 메카니즘의 지식을 더욱 증진시키기 위한 구조 생물학 연구에서 유익한 수단이 될 수 있다. 더욱이, 본 개시의 화합물은 예를 들어 경쟁적 억제에 의해, 다른 항바이러스 화합물의 결합 부위를 확립하거나 결정하는 데에 유용하다.
본 개시의 화합물은 또한 물질의 바이러스 오염을 처리 또는 예방하는 데에 사용될 수 있고, 따라서 그러한 물질, 예를 들어, 혈액, 조직, 수술 기구와 의류, 실험 기구와 의류, 및 채혈 또는 수혈 장치 및 물질과 접촉하는 실험실 또는 의료 관계자 또는 환자의 바이러스 감염의 위험을 줄이는 데에도 사용될 수 있다.
이하 본 개시는 이의 범위를 제한하는 것으로 의도되지 않는 특정 실시양태와 관련하여 기술될 것이다. 이에 반하여, 본 개시는 특허청구범위의 영역 내에 포함될 수 있으므로 모든 대체수단, 변형물 및 등가물을 포함한다. 따라서, 구체적 실시양태를 포함하고 있는 하기 실시예는 본 개시의 일 실시를 실례를 들어 설명할 것이며, 당연한 얘기지만 그러한 실시예는 특정 실시양태의 설명을 목적으로 하며 그의 절차 및 개념적 측면의 가장 유용하고 쉽사리 이해되는 설명이라고 생각되는 것을 제공하도록 제시된다.
출발 물질은 상업적 공급원으로부터 입수될 수 있거나 당업자에게 알려져있는 확립된 문헌 방법에 의해 제조될 수 있다.
실시예
화합물
HCV NS5A 억제제(화학식 I의 화합물)는 공유 특허출원 WO2008/021927 또는 WO2009/020825에 기재된 절차에 따라 제조될 수 있다. HCV NS3 프로테아제 억제제(화학식 II의 화합물)는 공유 미국 특허 일련 번호 6,995,174 및 공유 미국 특허 출원 12/547,158에 기재된 절차에 따라 제조될 수 있다. 화학식 III의 HCV NS5B 억제제는 공유 미국 특허 일련 번호 7,456,166에 기재된 절차에 의해 제조될 수 있다.
HCV 유전자형 1 영점 반응자(null responder)에서 24주 동안 NS5A 억제제(화학식 I; 60 mg QD) 및 NS3 프로테아제 억제제(화학식 II; 600 mg BID) 단독(A 군)의 항바이러스 활성 또는 페길화 인터페론 알파 및 리바비린 공존하(B 군)에서의 그들의 항바이러스 활성. 1차 목표는 요법의 2주차 및 4주차 및 치료후 24주차에서 비검출성 HCV RNA(<10 IU/mL)를 달성하는 대상체의 비율을 측정하는 것이었다. 12주차 중간 분석을 수행하였다. 21인의 환자(11인: A 군, 10인: B 군)를 센티넬 코호트(sentinel cohort)에서 임의 추출하였다. 연령의 중앙치는 55세였고; 13인은 남성, 16인은 백인이었다.
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표 2에 나타낸 바와 같이, 6인(54.5%)의 대상체가 바이러스 돌파현상을 겪은 반면에, B 군의 모든 대상체는 바이러스 억제를 유지하였다. 바이러스 돌파는 유전자형 1a로 감염된 개인에서 배타적으로 발생하였는데, 이르게는 3주차에 및 늦게는 12주차에 발생하였다. A 군에서 2인의 유전자형 1b 대상체는 HCV RNA 비검출성으로 잔류하였다. 돌파를 경험한 6인의 대상체는 부가적인 페길화 인터페론 알파 및 리바비린을 투여받았다. HCV RNA는 2인의 대상체에서는 비검출성으로 및 다른 2인의 대상체에서는 <25 IU/mL로 하락한 반면에, 나머지 2인은 HCV RNA가 >1.5 log10 감소하였다. 분석 기간 동안에 사망, 중대한 유해 사례, 또는 유해 사례에 기인한 중단은 기록되지 않았다. 설사가 가장 일반적인 유해 사례였으며, 중증도에 있어서는 주로 경증 내지는 중등도였다.
해당 결과에 따르면, 페길화 인터페론 알파 및 리바비린의 존재 또는 부재하에 화학식 I의 NS5A 억제제 및 화학식 II의 NS3 프로테아제 억제제로의 치료는 HCV-감염 유전자형 1 영점 반응자에서 유사한 RVR율을 보인 반면에, 두 소형 분자 단독을 투여받은 11인의 대상체중 6인은 12주차까지 바이러스 돌파를 경험한 반면에, 4-약물 조합에서는 모든 대상체가 바이러스 억제를 유지하였다. 따라서, 페길화 인터페론 알파 및 리바비린 부재하에서 직접 작용 항바이러스제로 치료하는 경우 바이러스 돌파를 예방하기 위해서는 1종 이상의 부가적인 치료제가 요구된다.
세포주
이들 연구에 사용된 Huh-7 세포주는 랄프 바르텐쉴라허(Ralf Bartenschlager) 박사(하이델베르크 대학(University of Heidelberg), 독일 하이델베르크)로부터 입수하였으며, 10% FBS, 10 U/mL 페니실린 및 10 ㎍/mL 스트렙토마이신을 함유하는 DMEM에서 증식시켰다. 이들 연구에 사용되는 HCV 레플리콘은 WO2004014852에 기재된 절차를 이용하여 브리스톨-마이어스 스퀴브에서 생성하였다. 공개된 유전자형 1b HCV 레플리콘의 코딩 서열(Lohmann, V., F. Korner, J.-O. Koch, U. Herian, L. Theilmann, and R. Bartenschlager 1999, Science 285:110-113)은 EMBL 등록 번호 AJ242652, 뉴클레오티드 1801-7758에 기재된 서열을 이용하여 오페론 테크놀로지스, 인코포레이티드(Operon Tehnologies, Inc., 미국 캘리포니아주 알라메다)에서 합성하였다. 이어서, 기능적 레플리콘을 표준 분자생물학 기술을 이용하여 플라스미드 pGem9zf(+)(프로메가(Promega), 미국 위스콘신주 매디슨)에서 조립하였다. 루시퍼라제 리포터를 코딩하는 레플리콘을 생성하기 위하여, 인간화 레닐라(Renilla) 루시퍼라제 단백질을 코딩하는 유전자를 네오마이신 포스포트랜스퍼라제 유전자의 상류에 도입시켰다. 생성되는 레플리콘은 (i) 캡시드 단백질의 처음 12개의 아미노산에 융합된 HCV 5' UTR, (ii) 레닐라 루시퍼라제 유전자, (iii) 네오마이신 포스포트랜스퍼라제 유전자(neo), (iv) 뇌심근염 바이러스(EMCV)로부터의 IRES, 및 (v) HCV NS3 내지 NS5B 유전자와 HCV 3' UTR로 이루어져 있다.
HCV 레플리콘 세포주는 로만(Lohman) 등(Lohmann, V., F. Korner, J.-O. Koch, U. Herian, L. Theilmann, and R. Bartenschlager 1999, Science 285:110-113)에 의해 기재된 바의 콜로니로부터 단리하였고, 모든 실험에 사용하였다. 간략히 말하면, 레플리콘 클론을 ScaI로 선형화한 다음, RNA 전사물을 제조업자의 지시에 따라 T7 메가스크립트(MegaScript) 전사 키트(앰비온(Ambion), 미국 텍사스주 오스틴)를 사용하여 시험관내 합성하였다. 10 내지 20 ㎍의 시험관내-전사 레플리콘 RNA를 제조업자의 프로토콜에 따라 DMRIE-C 시약(인비트로겐 코포레이션(Invitrogen Corporation), 미국 캘리포니아주 칼스배드)을 사용한 형질감염에 의해 4-5 x 106개 Huh-7 세포 내로 도입시켰다. 24 h 후에, 0.5 mg/mL 게네티신(G418, 기브코-BRL(Gibco-BRL), 미국 메릴랜드주 록빌)을 함유하는 선택 배지를 첨가하고, 배지를 3 내지 5일마다 교체하였다. 대략 4주 후, 세포를 추가 분석을 위해 증대시켰다. 세포를 10% 열-불활성화 송아지 혈청(시그마(Sigma)), 페니실린/스트렙토마이신, 및 0.5 mg/ml G418을 함유하는 DMEM (기브코-BRL, 미국 메릴랜드주 록빌) 중에서 37℃에서 유지시켰다.
세포배양 세포독성 및 루시퍼라제 검정
화합물 효능을 측정하기 위하여, HCV 레플리콘 세포를 96-웰 플레이트에서 10% FBS를 함유하는 DMEM 배지 중에서 104개 세포/웰의 밀도로 플레이팅하였다. 밤새 인큐베이션한 후, DMSO에 연속 희석시킨 화합물, 또는 DMSO 단독을 개개의 웰에 0.5%의 최종 DMSO 농도가 되도록 첨가하였다. 이어서, 세포 플레이트를 세포독성 및 HCV 억제에 대한 검정을 수행하기에 앞서 3일간 37℃에서 인큐베이션하였다. 세포 생존력은 알라마르 블루(Alamar Blue) 검정을 이용하여 측정하였으며, CC50 값은 중위수효과 방정식(median effect equation)을 이용하여 계산하였다.
이어서 플레이트를 PBS로 2회 세척한 다음, 제조업자의 지시에 따라 듀얼-글로 루시퍼라제 어세이 시스템(Dual-Glo Luciferase Assay System)(프로메가 코포레이션, 미국 위스콘신주 매디슨)을 이용하여 레닐라 루시퍼라제 활성을 검정하였다. 플레이트를 탑카운트 NXT 마이크로플레이트 신틸레이션 앤드 루미네센스 카운터(TopCount NXT Microplate Scintillation and Luminescence Counter)(패커드 인스트루먼트 컴퍼니(Packard Instrument Company)) 상에서 판독하였다. 50% 유효 농도(EC50)는 엑셀 피트(Excel Fit)(버전 2.0, 빌드(Build) 30)을 이용하여 계산하였다. 공지의 x(화합물 농도) 및 y(DMSO-단독 대조군 웰에 대한 %) 값을 이용하여 하기에 나타내는 바와 같은 엑셀 피트 방정식 205로 EC50을 계산하였다:
y = A + ((B-A)/(1+((C/x)^D)))
상기 식에서, A 및 B는 각각 곡선의 하부 및 상부 플래토(plateau)이고, C는 곡선 중앙에서의 x 값이며, D는 기울기 계수이다.
조합 연구
억제제 조합 연구를 위해, HCV NS5A, NS3 프로테아제, 및 NS5B 폴리머라제의 억제제를 각각 11가지의 농도에서 시험하였다. 세포/배지에 첨가하기에 앞서 DMSO에 3배 희석하여 목적하는 최종 검정 농도의 200배에 해당하는 원액을 준비하였다. 화합물은 다양한 농도비에서 단독요법으로서 및 조합하여 시험하였다. 세포를 화합물에 3일간 노출시킨 다음, HCV 억제의 양을 전술한 바의 루시퍼라제 검정을 이용하여 측정하였다. 또한 이들 조합된 작용제의 잠재적인 세포독성도 알라마르 블루 염색에 의해 병행하여 분석하였다. 길항작용, 상가성(additivity), 또는 상승작용의 정도를 소정 범위의 약물 농도에 걸쳐 측정하였으며, 조합 반응 곡선을 적합시켜(fit) 약물 치료 조합의 항바이러스 효과를 평가하였다. 조합에서의 약물의 복합 효과는 슈 슈 티(Chou Chou T)의 방법을 이용하여 분석하였다(Theoretical Basis, Experimental Design, and Computerized Simulation of Synergism and Antagonism in Drug Combination Studies. Pharmacological Reviews. 2006; 58(3):621-81).
모든 평가는 생물통계 소프트웨어 SAS Proc NLIN, 및 4-파라미터 로지스틱을 이용하여 계산하였다. 모든 조합 지수는 이소볼로그램(isobologram)법을 이용하여 상가성으로부터의 일탈에 대하여 시험하였다. 점근적 신뢰 구간 또한 조합 지수의 각각에 대하여 계산하였다. 한계치(bound)를 1과 비교함으로써 상가성으로부터의 일탈에 대하여 시험하는 데 이들 구간을 이용하였다 - 1보다 큰 구간의 하한은 길항작용을 표시하고, 1보다 작은 상한은 상승작용을 표시하며, 구간에 포함된 1의 값은 상가성을 표시한다.
결과
Figure 112013019111719-pct00016
항바이러스 요법에 대한 내성이 만성 바이러스 감염 환자의 관리에서 주요 문제가 되고 있다. 지속적인 바이러스 반응을 달성하기 위해서는, 조합 요법, 특히 별개의 HCV 바이러스 표적을 표적화하는 요법들을 이용하는 것이 중요할 것이다.
이들 결과는 화학식 I의 NS5A 억제제, 화학식 II의 HCV NS3 프로테아제 억제제, 및 화학식 III의 NS5B 억제제를 이용한 레플리콘 세포의 조합 치료가 상가적인 항바이러스 효과를 산출함을 증명한다. 중요하게는, 이들 조합 중 어느 것으로도 길항작용 또는 증강된 세포독성이 관찰되지 않았다. 따라서, 이들 조합은 HCV-감염 환자에서의 조합 요법을 위한 탁월한 후보이다.
본 개시는 선행의 예증적인 실시예에 한정되지 않으며, 그의 본질적인 속성으로부터 일탈함이 없이 다른 구체적 형태로 구현될 수 있음이 당업자에게 자명할 것이다. 따라서, 상기 실시예는 모든 점에서 설명에 도움을 주는 것이며 제한적인 것이 아님을 유념하고, 선행 실시예보다는 첨부 특허청구범위를 참고함이 요망되며, 따라서 특허청구범위의 등가성의 의미와 범위 안에 들어오는 모든 변경도 특허청구범위내에 포함시키고자 한다.

Claims (10)

  1. 삭제
  2. 삭제
  3. 치료 유효량의 하기 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염; 치료 유효량의 하기 화학식 II의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염; 치료 유효량의 하기 화학식 III의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염; 및 제약상 허용되는 담체를 포함하는, C형 간염 바이러스(HCV) 감염을 치료하기 위한 약학적 조성물.
    <화학식 I>
    Figure 112017084107697-pct00019

    <화학식 II>
    Figure 112017084107697-pct00020

    <화학식 III>
    Figure 112017084107697-pct00021
  4. 제3항에 있어서, 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염:화학식 II의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염:화학식 III의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 몰비가 1:20:5인 약학적 조성물.
  5. 제3항에 있어서, 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염:화학식 II의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염:화학식 III의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 몰비가 1:250:1000인 약학적 조성물.
  6. 삭제
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