CN112673008B - 次黄嘌呤化合物 - Google Patents

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Abstract

本发明的课题在于提供具有脯氨酰羟化酶(PHDs)的抑制作用、作为溃疡性大肠炎等炎症性肠病的治疗剂有用的新化合物。本发明涉及次黄嘌呤化合物或其药理学上可接受的盐。本发明的化合物或其药理学上可接受的盐具有脯氨酰羟化酶的抑制作用，作为溃疡性大肠炎等炎症性肠病的治疗剂等有用。作为一个实施方式，本发明涉及一种炎症性肠病的治疗方法，其包括对患者给药必要量的包含次黄嘌呤化合物或其药理学上可接受的盐以及药品添加物的药物组合物。

Description

次黄嘌呤化合物
技术领域
本发明涉及作为药品有用的次黄嘌呤化合物。更详细而言，本发明涉及具有脯氨酰羟化酶的抑制作用、作为溃疡性大肠炎等炎症性肠病的治疗剂有用的次黄嘌呤化合物或其药理学上可接受的盐。
背景技术
炎症性肠病(IBD)是由于免疫的过度应答而在肠道粘膜产生炎症和溃疡的慢性疾病。IBD包括例如溃疡性大肠炎和克罗恩病。
溃疡性大肠炎是产生原因不明的弥漫性非特异性炎症的大肠疾病。大肠的粘膜受侵，有时在粘膜形成糜烂或溃疡。溃疡性大肠炎可以分为可见血便、糜烂、溃疡等的“活动期”、以及活动期的所见消失的“缓解期”。大多情况下在其过程中反复发生复发和缓解，因此需要长期的治疗。
溃疡性大肠炎的治疗中，首先使用5-氨基水杨酸制剂(5-ASA)作为标准药。但是，5-ASA的有效性为约50％～约65％，通过给药5-ASA而确认到缓解的患者为约30％～约45％。在未确认到5-ASA的效果的情况下，使用类固醇制剂。有时在这些药剂的基础上将免疫抑制剂、抗TNFα抗体等用于溃疡性大肠炎的治疗。但是，任意一种药剂均存在副作用、要求谨慎给药等课题，需要具有新型作用机理的溃疡性大肠炎的治疗剂。
在IBD的病态中，已知低氧诱导因子1α(HIF-1α)诱导与消化道上皮的屏障功能相关的基因的表达。HIF-1α为低氧诱导因子α(HIF-α)的亚型之一。HIF-α在低氧的环境下(Hypoxia)变得稳定，使对低氧产生应答的各种基因的转录活化。另一方面，在氧丰富存在的环境下(Normoxia)，HIF-α的脯氨酸残基被脯氨酰羟化酶(PHDs)羟化，该HIF-α受到蛋白酶体分解。
PHDs已知PHD1、PHD2和PHD3这三个亚型。作为PHD2抑制剂，已知AKB-4924，据报道，AKB-4924在大肠组织中使HIF-1α稳定化(非专利文献1)。此外，AKB-4924在三硝基苯磺酸(TNBS)诱发大肠炎模型中确认到改善效果。
另一方面，PHDs抑制剂、例如罗沙司他(Roxadustat)和达普司他(Daprodustat)具有造血作用，也被开发为贫血治疗剂(非专利文献2)。因此，在使用PHDs抑制剂作为IBD的治疗剂的情况下，与造血作用等全身作用的分割变得重要。
作为PHDs抑制剂，例如，在专利文献1中记载了喹唑啉酮化合物，在专利文献2中记载了吡唑并嘧啶化合物。另外，在专利文献3至7和非专利文献3中记载或例示了包含次黄嘌呤的化合物。但是，上述文献中未记载本申请发明的次黄嘌呤化合物。
现有技术文献
专利文献
专利文献1：国际公开第2010/093727号
专利文献2：美国专利申请公开第2015/0239889号说明书
专利文献3：美国专利申请公开第2015/0368247号说明书
专利文献4：美国专利申请公开第2013/0165426号说明书
专利文献5：美国专利申请公开第2010/0029671号说明书
专利文献6：美国专利申请公开第2006/0258651号说明书
专利文献7：美国专利申请公开第2010/0120761号说明书
非专利文献
非专利文献1：Ellen Marks等、“Inflamm.Bowel.Dis.”、2015年、第21卷、第2期、267-275页
非专利文献2：Mun Chiang Chan等、“Molecular Aspects of Medicine”、2016年、第47-48卷、54-75页
非专利文献3：Takashi Goi等、“Synlett”、2018年、第29卷、第14期、1867-1870页
发明内容
发明所要解决的问题
本发明的课题在于提供具有PHD2抑制作用、对炎症性肠病的治疗有用的新化合物。
用于解决问题的方法
本发明涉及下述本发明的化合物或其药理学上可接受的盐。即，本发明涉及下述[1]～[13]等。
[1]选自由下述化合物组成的组中的化合物或其药理学上可接受的盐：
[2]如上述[1]所述的化合物或其药理学上可接受的盐，其中，所述化合物由下式表示：
[3]如上述[1]所述的化合物或其药理学上可接受的盐，其中，所述化合物由下式表示：
[4]如上述[1]所述的化合物或其药理学上可接受的盐，其中，所述化合物由下式表示：
[5]如上述[1]所述的化合物或其药理学上可接受的盐，其中，所述化合物由下式表示：
[6]如上述[1]所述的化合物或其药理学上可接受的盐，其中，所述化合物由下式表示：
[7]如上述[1]所述的化合物或其药理学上可接受的盐，其中，所述化合物由下式表示：
[8]如上述[1]所述的化合物或其药理学上可接受的盐，其中，所述化合物由下式表示：
[9]如上述[1]所述的化合物或其药理学上可接受的盐，其中，所述化合物由下式表示：
[10]如上述[1]所述的化合物，其中，所述化合物由下式表示：
[11]一种药物组合物，其包含上述[1]～[10]中任一项所述的化合物或其药理学上可接受的盐以及药品添加物。
[12]如上述[11]所述的药物组合物，其为炎症性肠病的治疗用药物组合物。
[13]如上述[12]所述的药物组合物，其中，炎症性肠病为溃疡性大肠炎或克罗恩病。
作为一个实施方式，本发明涉及一种炎症性肠病的治疗方法，其包括对患者给药必要量的上述[11]所述的药物组合物。
作为一个实施方式，本发明涉及上述[1]～[10]中任一项所述的化合物或其药理学上可接受的盐在制造炎症性肠病的治疗用药物组合物中的应用。
发明效果
本发明的化合物具有优良的PHD2抑制作用。因此，本发明的化合物或其药理学上可接受的盐作为炎症性肠病的治疗剂有用。
具体实施方式
以下，对本发明的实施方式更详细地进行说明。
本发明中，只要没有特别声明，各术语具有下述含义。
本文中、图表中和表中的下述缩写分别为下述含义。
DIPEA：N,N-二异丙基乙胺
DMF：N,N-二甲基甲酰胺
DMSO：二甲基亚砜
NMP：1-甲基-2-吡咯烷酮
TBAF：四丁基氟化铵
TFA：三氟乙酸
THF：四氢呋喃
Pd2(dba)3：三(二亚苄基丙酮)二钯(0)
tBuXPhos：2-二叔丁基膦-2’,4’,6’-三异丙基联苯
氨基硅胶：氨基丙基化硅胶
ODS柱色谱：十八烷基甲硅烷基化硅胶柱色谱
Ref.No.：参考例编号
Ac：乙酰基
Bn：苄基
Et：乙基
Me：甲基
tBu：叔丁基
SEM：2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基
TIPS：三异丙基甲硅烷基
Tr：三苯基甲基
Ex.No.：实施例编号
物理数据(Physical data)：物性值
IC50：50％抑制浓度
FITC：异硫氰酸荧光素
1H-NMR：氢核磁共振谱图
DMSO-d6：二甲基亚砜-d6
CDCl3：氯仿-d1
MeOH-d4：甲醇-d4
MS：质谱分析
(表中的MS的值通过电喷雾电离法-大气压化学电离法的复合电离法进行测定)
在本发明的化合物中存在互变异构体的情况下，本发明包含其互变异构体中的任意一种。例如，可以列举下述互变异构体。
本发明的化合物也可以根据需要按照常规方法制成其药理学上可接受的盐。作为这样的盐，可以列举酸加成盐或与碱的盐。
作为酸加成盐，可以列举与盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硫酸、硝酸、磷酸等无机酸的酸加成盐、与甲酸、乙酸、三氟乙酸、甲磺酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、丙酸、柠檬酸、琥珀酸、酒石酸、富马酸、丁酸、草酸、丙二酸、马来酸、乳酸、苹果酸、碳酸、苯甲酸、谷氨酸、天冬氨酸等有机酸的酸加成盐。
作为与碱的盐，可以列举与锂、钠、钾、钙、镁等无机碱的盐、与N-甲基-D-葡糖胺、N,N’-二苄基乙二胺、三乙胺、哌啶、吗啉、吡咯烷、精氨酸、赖氨酸、胆碱等有机碱的盐。
在本发明的化合物或其药理学上可接受的盐以例如结晶形式存在的情况下，本发明包含任意一种晶型。例如，药理学上可接受的盐还包含与水或乙醇等作为药品可接受的溶剂的溶剂合物、与适当的共晶形成剂(Coformer)的共晶等。
本发明的化合物中，各原子的一部分可以被各自所对应的同位素取代。本发明也包含这些被同位素取代的化合物。作为同位素的示例，可以列举分别由2H、3H、11C、13C、14C、36Cl、18F、123I、125I、13N、15N、15O、17O、18O、32P和35S表示的氢原子、碳原子、氯原子、氟原子、碘原子、氮原子、氧原子、磷原子和硫原子的同位素。作为一个实施方式，可以列举本发明的化合物的一部分氢原子被2H(D：重氢原子)取代的化合物。
本发明的化合物中，一部分原子被同位素取代的化合物可以使用市售的导入有同位素的结构单元(building block)，利用与后述的制造方法同样的方法来制造。例如，本发明的化合物的一部分氢原子被重氢原子取代的化合物也可以使用上述方法和文献记载的方法(例如参考有机合成化学协会志、第65卷、12期、1179-1190页、2007年)来制造。另外，例如，本发明的化合物的一部分碳原子被13C取代的化合物也可以使用上述方法和文献记载的方法(例如参考RADIOISOTOPES、第56卷、11期、35-44页、2007年)来制造。
本发明的化合物及其制造中间体也可以根据需要通过作为该技术领域的本领域技术人员公知的分离和纯化手段的、溶剂萃取、结晶、重结晶、色谱、制备高效液相色谱等来进行分离和纯化。
作为硅胶柱色谱和氨基硅胶柱色谱，可以列举例如使用SNAP Ultra和SNAPIsolute NH2(Biotage)、以及Hi-Flash柱(山善)等的快速色谱。
作为ODS柱色谱，可以列举例如使用制备纯化LC系统(Gilson，流速：30mL/分钟，检测：UV、220nm下)和柱：SunFire C18 Prep OBD(5μm 19x50 mm)的制备色谱。
本发明的化合物具有优良的PHD2抑制作用，因此能够用作IBD的治疗剂(参考Nature Reviews Drug Discovery,2014,13,p.852-869)。本发明中，IBD包括例如溃疡性大肠炎、克罗恩病、肠型白塞氏病、感染性肠炎、放射性肠炎、药物性肠炎、缺血性肠炎、肠系膜静脉硬化症(静脉硬化性大肠炎)、阻塞性大肠炎、以及伴随胶原病而产生的肠炎。本发明的化合物可以优选用作溃疡性大肠炎或克罗恩病的治疗剂(参考Inflamm.Bowel.Dis.,2015,21(2),p.267-275)。
本发明中，“治疗”包括“预防”的意思。例如，溃疡性大肠炎的治疗包括“预防复发”和“维持缓解”的意思。
本发明的化合物对大肠炎的治疗效果可以按照试验例2所记载的方法或该技术领域中公知的方法来确认。可以列举例如Biol.Pharm.Bull 2004,27(10),p.1599-1603等中记载的方法或以该方法为基准的方法。
作为一个实施方式，为了限定因HIF-α的稳定化而产生的脱靶作用，本发明的化合物为特异性地作用于大肠组织的PHD2抑制剂。“特异性地作用于大肠组织”是指，例如与血中相比，化合物在大肠组织中显示出高浓度，观察不到全身性的作用(例如造血作用)而在大肠中发挥治疗效果(参考试验例2和3)。
作为一个实施方式，本发明的优选化合物对铁的螯合作用弱。例如，在利用Mol.Pharmacol.,2011,79(6),p910-920等中记载的方法或以该方法为基准的方法进行测定的情况下，本发明的优选化合物在化合物浓度为100μM时仅显示出50％以下的抑制活性。
本发明的药物组合物根据用法使用各种剂型。作为这样的剂型，可以列举例如散剂、颗粒剂、细粒剂、干糖浆剂、片剂、胶囊剂、注射剂、液剂、软膏剂、栓剂、贴剂和灌肠剂。
本发明的药物组合物包含本发明的化合物或其药理学上可接受的盐作为有效成分。
本发明的药物组合物通过使用本发明的化合物或其药理学上可接受的盐以及至少一种药品添加物来制备。这些药物组合物也可以根据其剂型，通过利用制剂学上公知的方法与适当的赋形剂、崩解剂、粘结剂、润滑剂、稀释剂、缓冲剂、等渗剂、防腐剂、润湿剂、乳化剂、分散剂、稳定剂、助溶剂等药品添加物适当混合、稀释或溶解来制备。
在将本发明的药物组合物用于治疗的情况下，本发明的化合物或其药理学上可接受的盐的给药量根据患者的年龄、性别、体重、疾病和治疗的程度等而适当确定。可以将1天的给药量分成1次、2次、3次或4次来进行给药。优选将本发明的药物组合物经口给药。
在经口给药的情况下，对成人的给药量例如在0.1～1000mg/天的范围内确定。作为一个实施方式，经口给药量也可以在1～500mg/天的范围内确定，优选为10～200mg/天的范围。
在非经口给药的情况下，对成人的给药量例如在0.1～1000mg/天的范围内确定。作为一个实施方式，非经口给药量也可以在0.5～200mg/天的范围内确定，优选为1～20mg/天的范围。
作为一个实施方式，本发明的药物组合物也可以与PHDs抑制剂以外的其他药剂组合使用。作为在炎症性肠病的治疗中可以组合使用的其他药剂，可以列举例如5-ASA、类固醇制剂、免疫抑制剂、以及抗TNFα抗体、Janus激酶抑制剂和α4β7整合素抗体。
在将本发明的化合物或其药理学上可接受的盐与其他药剂组合使用的情况下，可以以同时含有这些有效成分的制剂、或者将这些有效成分各自分开制剂化而成的制剂的形式给药。在分开制剂化的情况下，可以将这些制剂分开给药或同时给药。另外，本发明的化合物或其药理学上可接受的盐的给药量可以根据组合使用的其他药剂的给药量而适当减量。
本发明的化合物也可以适当转换为前药来使用。例如，本发明的化合物的前药也可以通过使用相应的卤化物等前药化试剂导入构成前药的基团并进行纯化来制造。作为构成前药的基团，可以列举例如“药品的开发”(广川书店、1990年)第7卷163-198页中记载的基团。
实施例
以下，基于实施例进一步详细地对本发明进行说明，但本发明并不限定于该内容。
关于下述实施例中记载的化合物名称，除了市售的试剂以外，使用ChemDrawProfessional(PerkinElmer)、MarvinSketch(ChemAxon)等进行命名。
参考例1
7-([1,1’-联苯]-4-基甲基)-2,6-二氯-7H-嘌呤
向2,6-二氯嘌呤(1.89g)和碳酸钾(2.76g)的DMF(40mL)悬浮液中加入4-(溴甲基)-1,1’-联苯(2.72g)。将反应混合物在室温下搅拌18小时。向反应混合物中加水，用乙酸乙酯萃取。将有机层用饱和盐水清洗后，用无水硫酸镁干燥，在减压下浓缩。将所得到的残渣用硅胶柱色谱(洗脱溶剂：乙酸乙酯/己烷＝44/56～65/35)纯化，得到标题化合物(0.78g)。
参考例2
7-([1,1’-联苯]-4-基甲基)-2-氯-1,7-二氢-6H-嘌呤-6-酮
向参考例1(0.78g)的THF(4.4mL)溶液中加入1mol/L氢氧化钠水溶液(11mL)。将反应混合物在80℃下搅拌2小时。自然冷却至室温后，向反应混合物中加入1mol/L盐酸(11mL)和水(11mL)，滤取析出的不溶物。将所得到的固体用水清洗后，在减压下在50℃下干燥12小时，得到标题化合物(0.90g)。
参考例3
1-(7-([1,1’-联苯]-4-基甲基)-6-氧代-6,7-二氢-1H-嘌呤-2-基)-1H-吡唑-4-羧酸乙酯
在冰冷却下向参考例2(0.90g)和DIPEA(0.85g)的THF(4mL)溶液中加入1-(氯甲氧基)-2-甲氧基乙烷(0.41g)。将反应混合物在室温下搅拌12小时。向反应混合物中加水，用乙酸乙酯萃取。将有机层用饱和盐水清洗后，用无水硫酸镁干燥，在减压下浓缩。将所得到的残渣用硅胶柱色谱(洗脱溶剂：乙酸乙酯/己烷＝80/20～100/0)纯化。
向所得到的化合物(0.56g)的DMF(3mL)溶液中加入1H-吡唑-4-羧酸乙酯(0.21g)和碳酸铯(0.87g)。将反应混合物在50℃下搅拌3小时。自然冷却至室温后，向反应混合物中加入水。滤除析出的不溶物，用乙酸乙酯萃取滤液。将有机层用饱和盐水清洗后，用无水硫酸镁干燥，在减压下浓缩。将所得到的残渣用硅胶柱色谱(洗脱溶剂：乙酸乙酯/己烷＝70/30～91/9)纯化。
向所得到的化合物(0.32g)的乙醇(1.5mL)溶液中加入4mol/L氯化氢/1,4-二氧杂环己烷溶液(1.5mL)。将反应混合物在室温下搅拌18小时。向反应混合物中加入乙醚，滤取不溶物。将所得到的固体用乙醚清洗，得到标题化合物(0.23g)。
参考例4
7-((苄基氧基)甲基)-2,6-二氯-7H-嘌呤
在氩气气氛中在冰冷却下向氢化钠(含量50～72％、1.2g)的THF(100mL)悬浮液中加入2,6-二氯嘌呤(4.72g)的THF(25mL)溶液。将反应混合物搅拌30分钟后，加入苄基氯甲基醚(5.87g)。将反应混合物在室温下搅拌3小时。向反应混合物中加水，用乙酸乙酯萃取。将有机层用饱和盐水清洗后，用无水硫酸镁干燥，在减压下浓缩。将所得到的残渣用硅胶柱色谱(洗脱溶剂：乙酸乙酯/己烷＝23/77～44/56～65/35)纯化，得到标题化合物(2.55g)。
参考例5
7-((苄基氧基)甲基)-2-氯-1,7-二氢-6H-嘌呤-6-酮
利用与参考例2同样的方法，由参考例4(2.55g)得到标题化合物(1.71g)。
参考例6
1-(7-((苄基氧基)甲基)-6-氧代-6,7-二氢-1H-嘌呤-2-基)-1H-吡唑-4-羧酸乙酯
在冰冷却下向参考例5(1.71g)和DIPEA(1.90g)的THF(29mL)溶液中加入2-(氯甲氧基)乙基三甲基硅烷(1.18g)。将反应混合物在室温下搅拌12小时。向反应混合物中加水，用乙酸乙酯萃取。将有机层用饱和盐水清洗后，用无水硫酸镁干燥，在减压下浓缩。将所得到的残渣用硅胶柱色谱(洗脱溶剂：乙酸乙酯/己烷＝49/51～70/30)纯化。
向所得到的化合物(1.25g)的DMF(6.0mL)溶液中加入1H-吡唑-4-羧酸乙酯(0.46g)和碳酸铯(1.94g)。将反应混合物在50℃下搅拌1小时。自然冷却至室温后，向反应混合物中加水，用乙酸乙酯萃取。将有机层用饱和盐水清洗后，用无水硫酸镁干燥，在减压下浓缩。将所得到的残渣用硅胶柱色谱(洗脱溶剂：乙酸乙酯/己烷＝51/49～72/28)纯化。
向所得到的化合物(0.67g)的乙醇(3.2mL)溶液中加入4mol/L氯化氢/1,4-二氧杂环己烷溶液(3.2mL)。将反应混合物在室温下搅拌2小时。向反应混合物中加入乙醚(6.0mL)，滤取析出的不溶物。将所得到的固体用乙醚清洗后，在减压下干燥，得到标题化合物(0.33g)。
参考例8a
2,6-二氯-9-(4-((三异丙基甲硅烷基)氧基)苄基)-9H-嘌呤
参考例8b
2,6-二氯-7-(4-((三异丙基甲硅烷基)氧基)苄基)-7H-嘌呤
向2,6-二氯嘌呤(1.89g)和碳酸钾(2.76g)的DMF(40mL)悬浮液中加入(4-(溴甲基)苯氧基)三异丙基硅烷(4.28g)。将反应混合物在室温下搅拌6小时。向反应混合物中加水，用乙酸乙酯萃取。将有机层用饱和盐水清洗后，用无水硫酸钠干燥，在减压下浓缩。将所得到的残渣用硅胶柱色谱(洗脱溶剂：乙酸乙酯/己烷＝30/70～60/40)纯化，分别得到标题化合物8a(2.40g)和8b(1.19g)。
参考例9
6-(苄基氧基)-2-氯-7-(4-((三异丙基甲硅烷基)氧基)苄基)-7H-嘌呤
在氩气气氛中在冰冷却下向参考例8b(1.19g)的DMF(4.4mL)和THF(4.4mL)的混合物中加入苯甲醇(0.30g)和氢化钠(含量50～72％、0.12g)。将反应混合物在0℃下搅拌15分钟。向反应混合物中加入饱和氯化铵水溶液，用乙酸乙酯萃取。将有机层用饱和盐水清洗后，用无水硫酸钠干燥，在减压下浓缩。将所得到的残渣用硅胶柱色谱(洗脱溶剂：乙酸乙酯/己烷＝30/70～60/40)纯化，得到标题化合物(1.10g)。
参考例10
1-(6-(苄基氧基)-7-(4-((三异丙基甲硅烷基)氧基)苄基)-7H-嘌呤-2-基)-1H-吡唑-4-羧酸乙酯
在氩气气氛下向参考例9(0.47g)和1H-吡唑-4-羧酸乙酯(0.19g)的叔丁醇(1.5mL)和THF(1.5mL)的悬浮液中加入磷酸三钾(0.66g)、tBuXPhos(0.08g)和Pd2(dba)3(0.16g)。将反应混合物在90℃下搅拌90分钟。自然冷却至室温后，向反应混合物中加水，用乙酸乙酯萃取。将有机层用饱和盐水清洗后，用无水硫酸镁干燥，在减压下浓缩。将所得到的残渣用硅胶柱色谱(洗脱溶剂：乙酸乙酯/己烷/甲醇＝50/50/0～100/0/0～95/0/5)纯化，得到标题化合物(0.29g)。
参考例11
1-(6-(苄基氧基)-7-(4-羟基苄基)-7H-嘌呤-2-基)-1H-吡唑-4-羧酸乙酯
在冰冷却下向参考例10(0.35g)的THF(1.9mL)溶液中加入TBAF(约1mol/L THF溶液、0.7mL)。将反应混合物在0℃下搅拌30分钟。向反应混合物中加入饱和氯化铵水溶液，用二氯甲烷/甲醇(10/1)的混合溶剂萃取。将有机层在减压下浓缩后，用水和乙醚清洗所得到的残渣，得到标题化合物(0.22g)。
参考例12
1-(7-(4-乙酰氧基苄基)-6-(苄基氧基)-7H-嘌呤-2-基)-1H-吡唑-4-羧酸乙酯
向参考例11(0.15g)的吡啶(1.2mL)溶液中加入乙酸酐(0.3mL)。将反应混合物在室温下搅拌12小时。将反应混合物在减压下浓缩后，将所得到的残渣用硅胶柱色谱(洗脱溶剂：乙酸乙酯/己烷/甲醇＝70/30/0～100/0/0～95/0/5)纯化，得到标题化合物(0.14g)。
参考例13
1-(7-(4-乙酰氧基苄基)-6-氧代-6,7-二氢-1H-嘌呤-2-基)-1H-吡唑-4-羧酸乙酯
将参考例12(0.14g)的TFA(0.9mL)溶液在50℃下搅拌90分钟。自然冷却至室温后，将反应混合物滴加到水中，滤取析出的不溶物。将所得到的固体用水和乙醚清洗后，在50℃下减压干燥，得到标题化合物(0.10g)。
参考例14
6-(苄基氧基)-2-氯-9-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-9H-嘌呤
利用与参考例9同样的方法，由2,6-二氯-9-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-9H-嘌呤(2.79g)得到标题化合物(3.14g)。
参考例15
1-(6-(苄基氧基)-9-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-9H-嘌呤-2-基)-1H-吡唑-4-羧酸乙酯
利用与参考例10同样的方法，由参考例14(1.00g)得到标题化合物(0.98g)。
参考例16
1-(6-(苄基氧基)-9H-嘌呤-2-基)-1H-吡唑-4-羧酸乙酯
向参考例15(0.96g)的乙醇(6.5mL)溶液中加入4mol/L氯化氢/1,4-二氧杂环己烷溶液(4.8mL)。将反应混合物在室温下搅拌52小时。向反应混合物中加入乙醚，滤取生成的不溶物。将所得到的固体用乙醚清洗后，在50℃下减压干燥，得到标题化合物(0.65g)。
参考例17a
1-(6-(苄基氧基)-9-(4-(甲基磺酰基)苄基)-9H-嘌呤-2-基)-1H-吡唑-4-羧酸乙酯
参考例17b
1-(6-(苄基氧基)-7-(4-(甲基磺酰基)苄基)-7H-嘌呤-2-基)-1H-吡唑-4-羧酸乙酯
向参考例16(0.19g)和碳酸钾(0.36g)的DMF(3.5mL)悬浮液中加入1-(氯甲基)-4-(甲基磺酰基)苯(0.16g)。将反应混合物在室温下搅拌14小时。向反应混合物中加水，用乙酸乙酯萃取。将有机层用饱和盐水清洗后，用无水硫酸钠干燥，在减压下浓缩。将所得到的残渣用硅胶柱色谱(洗脱溶剂：甲醇/乙酸乙酯＝0/100～10/90)纯化，分别得到标题化合物17a(0.05g)和17b(0.06g)。
参考例18
1-(7-(4-(甲基磺酰基)苄基)-6-氧代-6,7-二氢-1H-嘌呤-2-基)-1H-吡唑-4-羧酸乙酯
利用与参考例13同样的方法，由参考例17b(0.06g)得到标题化合物(0.04g)。
参考例25a
2,6-二氯-9-(4-甲氧基苄基)-9H-嘌呤
参考例25b
2,6-二氯-7-(4-甲氧基苄基)-7H-嘌呤
在室温下向4-甲氧基氯苄(9.40g)的THF(100mL)溶液中加入碘化钠(9.74g)。将反应混合物搅拌1小时后，加入2,6-二氯嘌呤(9.45g)和碳酸钾(10.37g)。将反应混合物在室温下搅拌20小时。向反应混合物中加水，用乙酸乙酯萃取。将有机层用饱和盐水清洗后，用无水硫酸镁干燥，在减压下浓缩。将所得到的残渣用硅胶柱色谱(洗脱溶剂：乙酸乙酯/己烷＝37/63～58/42～70/30)纯化，分别得到标题化合物25a(2.48g)和25b(2.22g)。
参考例26
2-氯-6-甲氧基-7-(4-甲氧基苄基)-7H-嘌呤
在氩气气氛中在冰冷却下向参考例25b(4.35g)的THF(70mL)溶液中滴加28％甲醇钠/甲醇溶液(2.85g)。将反应混合物在室温下搅拌30分钟。向反应混合物中加水，滤取不溶物。将所得到的固体用水清洗后，在50℃下减压干燥6小时，得到标题化合物(3.47g)。
参考例27
1-(6-甲氧基-7-(4-甲氧基苄基)-7H-嘌呤-2-基)-1H-吡唑-4-羧酸乙酯
在氩气气氛下向参考例26(3.21g)、1H-吡唑-4-羧酸乙酯(1.77g)和tBuXPhos(0.90g)的NMP(21mL)溶液中加入磷酸三钾(3.35g)和Pd2(dba)3(0.48g)。将反应混合物在60℃下搅拌3小时。自然冷却至室温后，向反应混合物中加入水和乙酸乙酯，从Hyflo Super-Cel通过而滤除不溶物。用乙酸乙酯萃取滤液后，用水和饱和盐水清洗有机层。将有机层从氨基硅胶通过后，在减压下浓缩。向所得到的残渣中加入乙醇，滤取不溶物。将所得到的固体用乙醇和二异丙醚清洗后，用氨基硅胶柱色谱(洗脱溶剂：乙酸乙酯/己烷＝81/19～100/0)纯化，得到标题化合物(2.02g)。
参考例28
4-((2,6-二氯-9-三苯甲基-8,9-二氢-7H-嘌呤-7-基)甲基)苯甲酸甲酯
在氩气气氛中在冰冷却下向氢化钠(含量50～72％、0.91g)的DMF(20mL)悬浮液中加入2,6-二氯-9-三苯甲基-8,9-二氢-7H-嘌呤(8.25g)的DMF(20mL)溶液。将反应混合物搅拌30分钟。向反应混合物中加入4-(溴甲基)苯甲酸甲酯(4.80g)的DMF(20mL)溶液，在室温下搅拌3小时。向反应混合物中加水，用乙酸乙酯萃取。将有机层用饱和盐水清洗后，用无水硫酸镁干燥，在减压下浓缩。向所得到的残渣中加入乙醚，滤取不溶物。用乙醚清洗所得到的固体，得到标题化合物(4.11g)。
参考例29
4-((2,6-二氯-7H-嘌呤-7-基)甲基)苯甲酸甲酯
在冰冷却下向参考例28(6.20g)的二氯甲烷(110mL)溶液中加入TFA(12.16g)。将反应混合物在室温下搅拌2小时。向反应混合物中加入饱和碳酸氢钠水溶液(110mL)，用二氯甲烷萃取。将有机层用饱和盐水清洗后，用无水硫酸镁干燥，在减压下浓缩。向所得到的残渣中加入乙醚，滤取不溶物。用乙醚清洗所得到的固体，得到标题化合物(2.79g)。
参考例30
4-((2-氯-6-甲氧基-7H-嘌呤-7-基)甲基)苯甲酸甲酯
利用与参考例26同样的方法，由参考例29(0.67g)得到标题化合物(0.62g)。
参考例31
1-(6-甲氧基-7-(4-(甲氧基羰基)苄基)-7H-嘌呤-2-基)-1H-吡唑-4-羧酸叔丁酯
在氩气气氛下向参考例30(0.62g)、1H-吡唑-4-羧酸叔丁酯(0.34g)、tBuXPhos(0.06g)和磷酸三钾(0.59g)的叔丁醇(5mL)悬浮液中加入Pd2(dba)3(0.04g)。将反应混合物在100℃下搅拌10小时。自然冷却至室温后，向反应混合物中加水，用乙酸乙酯萃取。将有机层用饱和盐水清洗后，用无水硫酸镁干燥，在减压下浓缩。向所得到的残渣中加入乙醚，滤取不溶物。用乙醚清洗所得到的固体，得到标题化合物(0.52g)。
参考例47
6-(苄基氧基)-2-氯-9-(4-((三异丙基甲硅烷基)氧基)苄基)-9H-嘌呤
利用与参考例9同样的方法，由参考例8a(2.40g)得到标题化合物(1.69g)。
参考例48
1-(6-(苄基氧基)-9-(4-((三异丙基甲硅烷基)氧基)苄基)-9H-嘌呤-2-基)-1H-吡唑-4-羧酸乙酯
利用与参考例10同样的方法，由参考例47(0.81g)得到标题化合物(0.78g)。
参考例49
1-(6-(苄基氧基)-9-(4-羟基苄基)-9H-嘌呤-2-基)-1H-吡唑-4-羧酸乙酯
利用与参考例11同样的方法，由参考例48(0.78g)得到标题化合物(0.51g)。
参考例50
1-(9-(4-乙酰氧基苄基)-6-(苄基氧基)-9H-嘌呤-2-基)-1H-吡唑-4-羧酸乙酯
利用与参考例12同样的方法，由参考例49(0.51g)得到标题化合物(0.23g)。
参考例51
1-(9-(4-乙酰氧基苄基)-6-氧代-6,9-二氢-1H-嘌呤-2-基)-1H-吡唑-4-羧酸乙酯
利用与参考例13同样的方法，由参考例50(0.23g)得到标题化合物(0.20g)。
参考例52
2-氯-6-甲氧基-9-(4-甲氧基苄基)-9H-嘌呤
利用与参考例26同样的方法，由参考例25a(2.48g)得到标题化合物(2.27g)。
参考例53
1-(6-甲氧基-9-(4-甲氧基苄基)-9H-嘌呤-2-基)-1H-吡唑-4-羧酸乙酯
在氩气气氛下向参考例52(2.27g)的叔丁醇(18.6mL)和THF(18.6mL)的混合物中加入1H-吡唑-4-羧酸乙酯(1.25g)、叔丁醇钠(0.79g)、tBuXPhos(0.63g)和Pd2(dba)3(0.34g)。将反应混合物在80℃下搅拌90分钟。自然冷却至室温后，向反应混合物中加入水和乙酸乙酯，从Hyflo Super-Cel通过而滤除不溶物。将滤液分离成有机层和水层。将有机层从氨基硅胶通过后，将滤液在减压下浓缩。向所得到的残渣中加入乙醇，滤取不溶物。用乙醇和二异丙醚清洗所得到的固体，得到标题化合物(2.04g)。
参考例54a
1-(6-(苄基氧基)-9-(4-(2-吗啉代乙氧基)苄基)-9H-嘌呤-2-基)-1H-吡唑-4-羧酸乙酯
参考例54b
1-(6-(苄基氧基)-7-(4-(2-吗啉代乙氧基)苄基)-7H-嘌呤-2-基)-1H-吡唑-4-羧酸乙酯
在冰冷却下向(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)甲醇(0.25g)的二氯甲烷(3.5mL)溶液中加入三乙胺(0.14g)和甲磺酰氯(0.15g)。将反应混合物在室温下搅拌30分钟。向反应混合物中加入水。分离出有机层，在减压下浓缩。
向所得到的化合物(0.27g)的DMF(2.3mL)溶液中加入参考例16(0.25g)和碳酸钾(0.47g)。将反应混合物在室温下搅拌18小时。向反应混合物中加水，用乙酸乙酯萃取。将有机层用饱和盐水清洗后，用无水硫酸钠干燥，在减压下浓缩。将所得到的残渣用硅胶柱色谱(洗脱溶剂：乙酸乙酯/己烷/甲醇＝80/20/0～100/0/0～90/0/10)纯化，分别得到标题化合物54a(0.07g)和标题化合物54b(0.10g)。
将参考例的化学结构式示于下述表中。
[表1]
[表2]
[表3]
[表4]
[表5]
[表6]
[表7]
实施例1
1-(7-([1,1’-联苯]-4-基甲基)-6-氧代-6,7-二氢-1H-嘌呤-2-基)-1H-吡唑-4-羧酸
向参考例3(0.23g)的THF(5.2mL)溶液中加入1mol/L氢氧化锂水溶液(2.6mL)。将反应混合物在室温下搅拌18小时。向反应混合物中加入1mol/L盐酸(6.3mL)和水(12mL)。滤取生成的不溶物。将所得到的固体用水清洗后，在50℃下减压干燥，得到标题化合物(0.18g)。
实施例2
1-(7-((苄基氧基)甲基)-6-氧代-6,7-二氢-1H-嘌呤-2-基)-1H-吡唑-4-羧酸
向参考例6(0.33g)的THF(8mL)溶液中加入1mol/L氢氧化锂水溶液(4mL)。将反应混合物在室温下搅拌12小时。向反应混合物中加入1mol/L盐酸(4mL)。滤取生成的不溶物。将所得到的固体用水清洗后，在50℃下减压干燥，得到标题化合物(0.28g)。
实施例3
1-(7-(4-羟基苄基)-6-氧代-6,7-二氢-1H-嘌呤-2-基)-1H-吡唑-4-羧酸
向参考例13(0.10g)的THF(1.2mL)和水(1.2mL)悬浮液中加入氢氧化锂一水合物(0.05g)。将反应混合物在室温下搅拌18小时。向反应混合物中加入1mol/L盐酸(1.2mL)。滤取生成的不溶物。将所得到的固体用水清洗后，在50℃下减压干燥，得到标题化合物(0.09g)。
实施例4
1-(7-(4-(甲基磺酰基)苄基)-6-氧代-6,7-二氢-1H-嘌呤-2-基)-1H-吡唑-4-羧酸
向参考例18(0.04g)的THF(0.4mL)和水(0.4mL)悬浮液中加入氢氧化锂一水合物(0.02g)。将反应混合物在室温下搅拌18小时。向反应混合物中加入1mol/L盐酸(0.4mL)。滤取生成的不溶物。将所得到的固体用水清洗后，在50℃下减压干燥，得到标题化合物(0.03g)。
实施例11
1-(7-(4-甲氧基苄基)-6-氧代-6,7-二氢-1H-嘌呤-2-基)-1H-吡唑-4-羧酸
向参考例27(4.48g)的THF(55mL)溶液中加入水(27mL)和4mol/L氢氧化锂水溶液(27mL)。将反应混合物在50℃下搅拌18小时。自然冷却至室温后，向反应混合物中加入2mol/L盐酸(66mL)，在室温下搅拌1小时。滤取生成的不溶物。将所得到的固体用水清洗后，在50℃下减压干燥8小时，得到标题化合物(3.87g)。
实施例12
1-(7-(4-羧基苄基)-6-氧代-6,7-二氢-1H-嘌呤-2-基)-1H-吡唑-4-羧酸
向参考例31(0.52g)的THF(4.5mL)溶液中加入1mol/L氢氧化锂水溶液(2.2mL)。将反应混合物在室温下搅拌3小时。向反应混合物中加水，用乙醚清洗。向水层中加入1mol/L盐酸(4.5mL)，滤取生成的不溶物。将所得到的固体在50℃下减压干燥。
向所得到的化合物(0.37g)的THF(4.2mL)溶液中加入1mol/L氢氧化锂水溶液(4.2mL)。将反应混合物在室温下搅拌24小时。向反应混合物中加水，用乙醚清洗。向水层中加入1mol/L盐酸(4.5mL)，滤取生成的不溶物。将所得到的固体在50℃下减压干燥。
向所得到的化合物(0.25g)的THF(3.0mL)溶液中加入TFA(1.51g)。将反应混合物在室温下搅拌1小时。滤取生成的不溶物。将所得到的固体用THF(20mL)清洗后，在减压下干燥，得到标题化合物(0.21g)。
实施例29
1-(9-(4-羟基苄基)-6-氧代-6,9-二氢-1H-嘌呤-2-基)-1H-吡唑-4-羧酸
向参考例51(0.20g)的THF(2.4mL)和水(2.4mL)悬浮液中加入氢氧化锂一水合物(0.10g)。将反应混合物在室温下搅拌18小时。向反应混合物中加入1mol/L盐酸(2.4mL)。滤取生成的不溶物。将所得到的固体用水清洗后，在50℃下减压干燥，得到标题化合物(0.14g)。
实施例35
1-(9-(4-甲氧基苄基)-6-氧代-6,9-二氢-1H-嘌呤-2-基)-1H-吡唑-4-羧酸
向参考例53(1.00g)的THF(8mL)溶液中加入水(6mL)和4mol/L氢氧化锂水溶液(6mL)。将反应混合物在50℃下搅拌17小时。自然冷却至室温后，向反应混合物中加入2mol/L盐酸(15mL)，滤取生成的不溶物。将所得到的固体用水清洗后，在50℃下减压干燥，得到标题化合物(0.90g)。
实施例75
1-(7-(4-(2-吗啉代乙氧基)苄基)-6-氧代-6,7-二氢-1H-嘌呤-2-基)-1H-吡唑-4-羧酸盐酸盐
向参考例54b(0.10g)的THF(0.9mL)和水(0.6mL)悬浮液中加入氢氧化锂(0.04g)。将反应混合物在60℃下搅拌72小时。向反应混合物中加入1mol/L盐酸(2.1mL)和水。滤取生成的不溶物。将所得到的固体用水和乙醚清洗后，在50℃下减压干燥，得到标题化合物(0.07g)。
将实施例的化学结构式、物性值和PHD2抑制活性(参考试验例1)示于下表中。
[表8]
[表9]
[表10]
试验例1 PHD2抑制试验
(1)人PHD2184-418的表达、制备
利用下述方法表达、制备包含GenBank登录ID：CAC42509所表示的蛋白质的184～418位的氨基酸残基的人PHD2184-418。
在人PHD2184-418的表达构建体中插入N-末端组氨酸标签，将所得到的构建体导入到pET-30a(+)载体中，并对序列进行确认。将该载体导入到BL21(DE3)株中，在37℃下在包含抗生素的LB培养基中进行培养。培养后，在细胞中加入细胞溶解溶液，通过超声波破碎进行破碎悬浮。将破碎悬浮液离心，使用Ni柱纯化上清，得到人PHD2184-418。
(2)试验方法
在包含人HIF-1α的556～574位的氨基酸残基(部分肽)的HIF-1α556-574的N-末端插入FITC-Ahx，将所得到的人HIF-1α556-574(FITC标记的HIF-1α556-574)作为底物。使用FITC标记的HIF-1α556-574，根据FITC标记的HIF-1α556-574的荧光偏振光的变化，利用下述方法评价2-酮戊二酸(2-oxoglutarate)与试验化合物(PHD抑制剂)的竞争抑制。
将酶(人PHD2184-418)和底物用包含10mM HEPES、150mM NaCl、10μM MnCl2·4H2O、2μM 2-酮戊二酸和0.05％吐温-20的分析缓冲液(pH 7.4)进行稀释。将试验化合物用DMSO进行稀释。将试验化合物、人PHD2184-418预先添加到384孔板(Corning、黑色、不透明底)中，添加FITC标记的HIF-1α556-574，由此开始反应。在37℃下温育60分钟后，利用PHERAstar FSX(BMG Labtech)测定荧光偏振光(激发波长470nm、荧光波长530nm)。测定各孔的荧光偏振光，基于试验物质无添加组的值计算出试验化合物的人PHD2结合抑制活性。
(2)结果
如上述表所示，本发明的化合物抑制了PHD2与HIF-1α的结合。因此表明，本发明的化合物作为PHD2抑制剂有用。
试验例2在大肠炎模型中的治疗效果
(1)TNBS诱发大肠炎模型大鼠
已知通过向大鼠的大肠内给药TNBS，在大肠局部引发炎症，肠道内的屏障功能被破坏，肠系膜的透过性亢进。因此，将通过经口给药试验化合物而产生的肠系膜的透过性抑制作用作为药效的指标来进行评价。
(2)试验方法
使用8周龄的SLC：SD雄性大鼠(日本SLC)。在戊巴比妥麻醉下，向大肠内距肛门8cm的部位给药300μL用50％乙醇调整的28mg/mL TNBS，引发炎症。对溶剂处置组给药300μL50％乙醇。在给药TNBS前断食48小时。从第二天起1天1次经口给药以0.05％甲基纤维素溶液制备的试验化合物(3mg/kg或10mg/kg)，共计给药3天。给药3天后，在试验化合物给药4小时后经口给药50mg/kg FITC，4小时后在异氟烷麻醉下从颈静脉进行采血。离心分离血清，利用PHERAstar FSX(BMG Labtech)检测荧光强度，由此测定经由肠系膜透过到循环血中的FITC浓度。将试验物质无添加组的值设为0、TNBS未处置组的值设为100，计算出试验化合物的肠系膜的透过性抑制率。
(3)结果
各试验化合物的给药量(Dose)和肠系膜的透过性抑制率(％，平均值)(Inhibition)如下所示。
[表11]
Ex.No. 给药量 抑制率(％)
1 10mg/kg 54
2 3mg/kg 51
3 3mg/kg 93
4 3mg/kg 66
11 3mg/kg 83
12 3mg/kg 78
29 3mg/kg 86
35 3mg/kg 81
75 3mg/kg 80
通过给药TNBS而亢进的FITC的肠道膜透过性利用本发明的化合物的给药而得到抑制。因此表明，本发明的化合物作为炎症性肠病的治疗剂有用。
试验例3大肠组织中的化合物浓度
(1)大鼠PK试验
在非断食下对大鼠(SD、8周龄、雄性、日本SLC)经口给药以0.05％甲基纤维素制备的试验化合物(3mg/kg/5mL)。在给药0.25、0.5、1、2、4、6和8小时后从颈静脉采血，在异氟烷麻醉下开腹，摘出大肠。采集远端大肠约5cm并切开，将摘出的大肠在平皿上使用生理盐水进行清洗。清洗后，将大肠用小剪刀剪碎，将其中约150mg移至试管中。向试管中添加100μL生理盐水，使用振荡破碎机(shake master)(1000rpm x 30分钟)将混合物匀浆化。作为最终体积，添加4倍量的生理盐水，制备样本。通过使用液相色谱质谱分析(LC/MS)的定量分析测定大肠组织中和血浆中的试验化合物浓度。
作为比较例，使用US2015/0239889(WO2014/030716)中作为实施例55所记载的化合物(化合物A)。
(2)大肠组织和血浆中的化合物浓度
如下表所示表明，本发明的化合物在大肠组织中的浓度高于血浆中浓度。因此，本发明的优选化合物是特异性地作用于大肠组织的PHD2抑制剂。
[表12]
Cmax AUC 血浆 大肠 C/P
Ex.No.1 11 2779 3 109 36
Ex.No.2 3 50 <1 188 ＞188
Ex.No.3 6 196 <1 87 ＞87
Ex.No.4 6 1755 2 94 47
Ex.No.11 10 1095 <1 209 ＞209
Ex.No.12 16 2992 2 67 34
Ex.No.29 <1 - <1 646 ＞646
Ex.No.35 <1 - <1 11 ＞11
Ex.No.75 4 774 1 323 ＞323
化合物A 281 79，955 74 <50 <0.7
表中的符号为下述含义。
化合物A：比较例
Cmax：试验化合物的经口给药时的最高血浆中浓度(ng/mL)
AUC：血浆中试验化合物浓度-时间曲线下面积(ng*min/mL)
血浆：8小时后的血浆中试验化合物的浓度(ng/mL)
大肠：8小时后的大肠组织中的试验化合物的浓度(ng/g)
C/P：上述大肠与血浆之比
产业上的可利用性
本发明的化合物或其药理学上可接受的盐作为炎症性肠病的治疗剂有用。

Claims (13)

1.选自由下述化合物组成的组中的化合物或其药理学上可接受的盐：
2.如权利要求1所述的化合物或其药理学上可接受的盐，其中，所述化合物由下式表示：
3.如权利要求1所述的化合物或其药理学上可接受的盐，其中，所述化合物由下式表示：
4.如权利要求1所述的化合物或其药理学上可接受的盐，其中，所述化合物由下式表示：
5.如权利要求1所述的化合物或其药理学上可接受的盐，其中，所述化合物由下式表示：
6.如权利要求1所述的化合物或其药理学上可接受的盐，其中，所述化合物由下式表示：
7.如权利要求1所述的化合物或其药理学上可接受的盐，其中，所述化合物由下式表示：
8.如权利要求1所述的化合物或其药理学上可接受的盐，其中，所述化合物由下式表示：
9.如权利要求1所述的化合物或其药理学上可接受的盐，其中，所述化合物由下式表示：
10.如权利要求1所述的化合物，其中，所述化合物由下式表示：
11.一种药物组合物，其包含权利要求1～10中任一项所述的化合物或其药理学上可接受的盐以及药品添加物。
12.如权利要求11所述的药物组合物，其为炎症性肠病的治疗用药物组合物。
13.如权利要求12所述的药物组合物，其中，炎症性肠病为溃疡性大肠炎或克罗恩病。
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