CN111362975A

CN111362975A - 作为jak激酶抑制剂的萘啶化合物

Info

Publication number: CN111362975A
Application number: CN202010325911.7A
Authority: CN
Inventors: 瑞安·赫德森; J·科扎克; 保罗·R·法特里; D·D·波德什托; G·E·L·勃兰特; 梅丽莎·弗勒里; 安妮-玛丽·博索莱伊; 黄小军; 文卡特·R·萨兰迪
Original assignee: Theravance Biopharma R&D IP LLC
Current assignee: Theravance Biopharma R&D IP LLC
Priority date: 2015-05-28
Filing date: 2016-05-26
Publication date: 2020-07-03
Anticipated expiration: 2036-05-26
Also published as: US9725470B2; JP6692836B2; EP3569604A1; AU2016267141A1; ES2924698T3; EA032953B1; BR112017025542A2; TWI704152B; US20170305934A1; EP3303348A1; US20210179637A1; JP2020111593A; SG10201910742VA; US11780852B2; KR20180011272A; IL255358B; TW201716416A; TWI746178B; EA201792619A1; TW202108593A

Abstract

本申请涉及作为JAK激酶抑制剂的萘啶化合物。本发明提供作为JAK激酶抑制剂的式(I)化合物，

Description

作为JAK激酶抑制剂的萘啶化合物

本申请为申请日2016年5月26日，申请号201680029912.9，名称为“作为JAK激酶抑制剂的萘啶化合物”的发明专利申请的分案申请。

技术领域

本发明针对适用作JAK激酶抑制剂的萘啶化合物。本发明还针对包括所述化合物的医药组合物，使用所述化合物治疗发炎性疾病的方法，和适用于制备所述化合物的方法和中间物。

背景技术

溃疡性结肠炎为结肠的慢性发炎性疾病。所述疾病的特征为直肠和大肠的粘膜层的发炎和溃疡。常见症状包含腹泻、血便和腹痛。临床过程为间断的，通过恶化和缓解的交替周期而标记。发病率似乎在已开发国家比在开发中国家更高。在主要工业化国家，估计有120万人患有溃疡性结肠炎且数量预期随人口增长而增加。患有溃疡性结肠炎的患者罹患结直肠癌的风险增加。(例如丹尼斯等人N Engl J Med,2011,365,1713-1725)。

虽然存在多种治疗选择来促进且维持患者的溃疡性结肠炎(UC)的缓解，但均不理想。柳氮磺胺吡啶相关治疗在轻度UC中常常有效，但在中度到重度疾病中不太有效。在患有中度到重度UC的患者中，常常使用皮质类固醇快速诱导缓解。然而，不赞成长期使用类固醇来维持缓解，因为其与长期不良作用(例如，骨质疏松和骨折、感染、白内障、较慢的伤口愈合和抑制肾上腺激素的产生)相关。在中度到重度UC患者中，如硫唑嘌呤、环孢灵(cyclosporine)和甲氨喋呤(methotrexate)的全身性免疫抑制剂具有减缓发作和适度功效，但由于长期全身性免疫抑制的后果(例如，感染和淋巴瘤的风险增加)，长期使用可能存在问题。抗TNFα抗体(例如，英利昔单抗(infliximab)和阿达木单抗(adalimumab))虽然昂贵且需要皮下或静脉内投药，但在大约60％到70％的患有中度到重度疾病的UC患者中有效。然而，高达三分之一的患者无法适当反应，而另三分之一的初始反应者在数周内产生耐受性(阿列斯等人,J Crohn′s Colitis,2010,4,355-366；瑞格瑞特斯等人,N Engl J Med,2005,353,2462-2476)。最近批准的UC疗法维多珠单抗(vedolizumab；一种抗α₄β₇整合素抗体)在中度到重度UC患者中有效，但其非经肠途径为次最佳的，且经由此机制进行长期免疫抑制的后果有待确定。尽管现有治疗选择，约10％到20％UC患者在诊断的10年内仍需要结肠切除术(塔果尼克等人,Am J Gastroenterol,2012,107,1228-1235)。应了解，对于促进且维持中度到重度UC的缓解，而无由慢性、全身性免疫抑制引起的安全问题的有效疗法的医疗需求仍有待满足。

虽然尚未完全了解引起溃疡性结肠炎的机制，但认为环境因素在基因易感个体中引起免疫系统针对肠道微生物群的不当(过度)反应，导致结肠发炎、组织损害和所述疾病特有的相关症状。

虽然UC的确切发病机制尚不明确，但显而易知促炎性细胞激素在免疫反应中起关键作用(斯乔博等人,Gastroenterol,2011,140,1756-1767)。在UC中最常升高的许多促炎性细胞激素(例如，IL-4、IL-6、IL-13、IL-15、IL-23、IL-24、IFNγ和瘦素)依赖于酪氨酸激酶的JAK家族(即，JAK1、JAK2、JAK3和Tyk2)进行信号转导。配位体结合到细胞激素受体引起其相关JAK的自体磷酸化，此又导致信号转导子和转导活化子(STAT)蛋白的磷酸化。不同STAT形成异二聚体或同二聚体，且促进其标靶基因在细胞核中的转录，以调节如细胞生长、分化和死亡的功能(克拉克等人,J Med Chem,2014,57,5023-5038)。

对JAK酶家族的抑制可抑制许多关键促炎性细胞激素的信号传导。因此，JAK抑制剂很可能适用于治疗溃疡性结肠炎和其它发炎性疾病，如克罗恩氏病(Crohn′sdisease)、过敏性鼻炎、哮喘和慢性阻塞性肺病(COPD)。然而，由于JAK/STAT路径对免疫系统的调节作用，全身性暴露于JAK抑制剂可能具有不利的全身免疫抑制作用。因而需要提供新JAK抑制剂，其在作用部位处具有其作用，同时无显著全身作用。具体来说，为治疗胃肠发炎性疾病，如溃疡性结肠炎，将需要提供新JAK抑制剂，其可经口投与且在最小全身暴露下在胃肠道中实现治疗相关的暴露。

发明内容

在一个方面中，本发明提供具有作为JAK激酶抑制剂的活性的新颖化合物。

因此，本发明提供一种式(I)化合物：

其中

R¹选自

(a)C_1-4烷基，其中C_1-4烷基任选地经一个、两个或三个氟或经选自以下的取代基取代：-CN；-OC_1-3烷基；-C(O)OC_1-4烷基；苯基，其中苯基任选地经-OH取代；吡啶基，其中吡啶基任选地经-CN取代；四氢哌喃基；-C(O)NR^aR^b，其中R^a和R^b独立地为氢或C_1-3烷基或R^a为氢且R^b为

和选自

的基团；

(b)选自以下的基团：

其中m为1或2；

(c)-C(O)R⁶，其中R⁶选自

C_1-4烷基，其中C_1-4烷基任选地经一个、两个或三个氟或经选自以下的取代基取代：-OH、-CN、-OC_1-4烷基、苯基和-NR^eR^f，其中R^e和R^f独立地为氢或C_1-3烷基；

C_3-6环烷基，其中C_3-6环烷基任选地经C_1-3烷基取代；

吡啶基，其中吡啶基任选地经-CN取代；和

其中R⁷为-CN、-CF₃或-OCH₃；

(d)-C(O)OR⁸，其中R⁸选自

C_1-4烷基，其中C_1-4烷基任选地经-CN、C_3-6环烷基、四氢呋喃基或-OR^m取代，其中R^m为氢或C_1-3烷基；和

C_1-4烯基；和

(e)-S(O)₂R⁹，其中R⁹选自

C_1-4烷基，其中C_1-4烷基任选地经-CN、-OC_1-3烷基、苯基、吡啶基或C_3-6环烷基取代，

C_1-4烯基，

C_3-6环烷基，其中C_3-6环烷基任选地经C_1-3烷基、苯基取代，

吡啶基，其中吡啶基任选地经氟取代，

含有包含一个氮原子在内的4到6个环原子的杂环，其中杂环任选地经-CN或C_1-3烷基取代，其中C_1-3烷基任选地经-CN或-OC_1-3烷基取代；和

R²选自氢、-OC_1-3烷基和-CH₂-R¹⁰，其中R¹⁰选自-OH；吗啉基；哌啶基，其中哌啶基任选地经两个氟取代；和哌嗪基，其中哌嗪基任选地经甲基取代；

R³选自氢、C_1-3烷基、-OC_1-3烷基、-C(O)OC_1-3烷基、-S(O)₂C_1-3烷基和-CH₂S(O)₂C_1-3烷基；

R⁴为氢或-OC_1-3烷基；

R⁵为氢或氟；且

n为1或2；

其限制条件为

当R³为-OC_1-3烷基且R²、R⁴和R⁵各自为氢时，R⁹不为苯基；

当R⁵为氟，n为1且R²、R³和R⁴各自为氢时，R⁹不为苯基；且

当R⁵为氟，R³为甲基且R²和R⁴各自为氢时，R¹不为-C(O)OR⁸；

或其医药学上可接受的盐或立体异构体。

如下文中所使用，除非另外指示，否则词组“式(I)化合物”意指式(I)化合物或其医药学上可接受的盐；即此短语意指呈游离碱形式或呈医药学上可接受的盐形式的式(I)化合物。

本发明也提供一种包括本发明化合物和医药学上可接受的载剂的医药组合物。

在另一方面中，本发明提供一种呈结晶游离碱形式的特定式(I)化合物。已发现结晶3-((1R,3s,5S)-3-((7-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)-1,6-萘啶-5-基)氨基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)丙腈的熔化温度在约243℃到约253℃范围内，典型地在约246℃与约250℃之间，在约237℃下分解开始，且当在室温下暴露于约5％与约90％之间的相对湿度范围时，呈现小于约0.15％的重量变化。在又一方面中，本发明提供一种3-((1R,3s,5S)-3-((7-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)-1,6-萘啶-5-基)氨基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)丙腈的结晶溶剂合物。

本发明也提供一种治疗哺乳动物的胃肠发炎性疾病、具体来说溃疡性结肠炎的方法，所述方法包括向哺乳动物投与治疗有效量的化合物或本发明的医药组合物。在各别和不同方面中，本发明也提供本文中所描述的合成方法和中间物，其适用于制备本发明化合物。

本发明也提供一种如本文中所描述的本发明化合物，其用于医学疗法；以及本发明化合物用于制造供治疗哺乳动物的胃肠发炎性疾病用的调配物或药物的用途。

附图说明

本发明的各种方面通过参考附图说明。

图1展示结晶形式I 3-((1R,3s,5S)-3-((7-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)-1,6-萘啶-5-基)氨基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)丙腈[下文中形式I]的粉末x射线衍射(PXRD)图案。

图2展示结晶形式I的差示扫描量热法(DSC)热分析图。

图3展示结晶形式I的热解重量分析(TGA)图。

图4展示在约25℃的温度下观测的结晶形式I的动态吸湿(DMS)等温线。

图5展示结晶形式II溶剂合物3-((1R,3s,5S)-3-((7-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)-1,6-萘啶-5-基)氨基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)丙腈的粉末X射线衍射(PXRD)图案。

具体实施方式

在其它方面中，本发明提供式(I)的JAK激酶抑制剂、其医药学上可接受的盐，和用于制备其的中间物。以下取代基和值意图提供本发明的各种方面的代表性实例。这些代表值意图进一步定义所述方面且不意图排除其它值或限制本发明的范围。

在一特定方面中，R¹为C_1-4烷基，其中C_1-4烷基任选地经一个、两个或三个氟或经选自以下的取代基取代：-CN；-OC_1-3烷基；-C(O)OC_1-4烷基；苯基，其中苯基任选地经-OH取代；吡啶基，其中吡啶基任选地经-CN取代；四氢哌喃基；-C(O)NR^aR^b，其中R^a和R^b独立地为氢，或C_1-3烷基或R^a为氢且R^b为

和选自

的基团。

在另一特定方面中，R¹为C_1-4烷基，其中C_1-4烷基任选地经一个、两个或三个氟或经选自以下的取代基取代：-CN；-OC_1-3烷基；苯基，其中苯基任选地经-OH取代；吡啶基，其中吡啶基任选地经-CN取代；四氢哌喃基；-C(O)NHCH₃；和

在另一特定方面中，R¹为C_1-4烷基，其中C_1-4烷基经一个、两个或三个氟或经-CN或-C(O)NHCH₃取代。

在特定方面中，R¹为选自以下的基团：

其中m为1或2，或其中m为1。

在一特定方面中，R¹为-C(O)R⁶，其中R⁶选自C_1-4烷基，其中C_1-4烷基任选地经一个、两个或三个氟或经选自以下的取代基取代：-OH、-CN、-OC_1-4烷基、苯基和-NR^eR^f，其中R^e和R^f独立地为氢或C_1-3烷基；C_3-6环烷基，其中C_3-6环烷基任选地经C_1-3烷基取代；吡啶基，其中吡啶基任选地经-CN取代；和

其中R⁷为-CN、-CF₃或-OCH₃。

在另一特定方面中，R¹为-C(O)R⁶，其中R⁶选自C_1-4烷基，其中C_1-4烷基任选地经一个、两个或三个氟或经选自-OH和苯基的取代基取代；C_3-6环烷基，其中C_3-6环烷基任选地经C_1-3烷基取代；和

其中R⁷为-CN或-CF₃。

在另一特定方面中，R¹为-C(O)R⁶，其中R⁶为C_1-4烷基，其中C_1-4烷基经一个、两个或三个氟或经-CN或-C(O)NHCH₃取代。

在一特定方面中，R¹为-C(O)OR⁸，其中R⁸选自C_1-4烷基，其中C_1-4烷基任选地经-CN、C_3-6环烷基、四氢呋喃基或-OR^m取代，其中R^m为氢或C_1-3烷基；和C_1-4烯基。

在一特定方面中，R¹为-S(O)₂R⁹，其中R⁹选自C_1-4烷基，其中C_1-4烷基任选地经-CN、-OC_1-3烷基、苯基、吡啶基或C_3-6环烷基取代；C_1-4烯基；C_3-6环烷基，其中C_3-6环烷基任选地经C_1-3烷基取代；苯基；吡啶基，其中吡啶基任选地经氟取代；含有包含一个氮原子在内的4到6个环原子的杂环，其中杂环任选地经-CN或C_1-3烷基取代，其中C_1-3烷基任选地经-CN或-OC_1-3烷基取代；和

在另一特定方面中，R¹为-S(O)₂R⁹，其中R⁹选自C_1-4烷基，其中C_1-4烷基任选地经-CN、-OC_1-3烷基、苯基、吡啶基或C_3-6环烷基取代；C_1-4烯基；C_3-6环烷基，其中C_3-6环烷基任选地经C_1-3烷基取代；吡啶基，其中吡啶基任选地经氟取代；含有包含一个氮原子在内的4或5个环原子的杂环，其中杂环经由氮原子键结到硫，且杂环任选地经-CN或经-CH₂OCH₃取代；和

在另一特定方面中，R¹为-S(O)₂R⁹，其中R⁹为吡啶基。

在又一方面中，R¹选自-(CH₂)₂CN、-CH₂CH₂F、-CH₂C(O)NHCH₃、-C(O)CHF₂和-S(O)₂-吡啶-3-基。

在一特定方面中，R²选自氢、-OC_1-3烷基和-CH₂-R¹⁰，其中R¹⁰选自-OH；吗啉基；哌啶基，其中哌啶基任选地经两个氟取代；和哌嗪基，其中哌嗪基任选地经甲基取代。

在另一特定方面中，R²选自氢、-OCH₃和-CH₂-R¹⁰，其中R¹⁰选自-OH；吗啉基；哌啶基，其中哌啶基在4位经2个氟取代；和哌嗪基，其中哌嗪基在4位经甲基取代。

在又一特定方面中，R²为氢。

在一特定方面中，R³选自氢、C_1-3烷基、-OC_1-3烷基、-C(O)OC_1-3烷基、-S(O)₂C_1-3烷基和-CH₂S(O)₂C_1-3烷基。

在另一特定方面中，R³选自氢、-CH₃、-OCH₃和-C(O)OCH₃。

在又一特定方面中，R³为氢。

在特定方面中，R⁴为氢或-OC_1-3烷基；或R⁴为氢或-OCH₃，或R⁴为氢。

在特定方面中，R⁵为氢或氟，或R⁵为氢。

在一特定方面中，n为1。在另一特定方面中n为2。

在一特定方面中，本发明提供一种式(I)化合物，其中：

R¹选自：

(a)C_1-4烷基，其中C_1-4烷基任选地经一个、两个或三个氟或经选自以下的取代基取代：-CN；-OC_1-3烷基；苯基，其中苯基任选地经-OH取代；吡啶基，其中吡啶基任选地经-CN取代；四氢哌喃基；-C(O)NHCH₃；和

(b)选自以下的基团：

其中m为1；

(c)-C(O)R⁶，其中R⁶选自C_1-4烷基，其中C_1-4烷基任选地经一个、两个或三个氟或经选自-OH和苯基的取代基取代；C_3-6环烷基，其中C_3-6环烷基任选地经C_1-3烷基取代；和

其中R⁷为-CN或-CF₃；

(d)-C(O)OR⁸，其中R⁸选自C_1-4烷基，其中C_1-4烷基任选地经-CN、C_3-6环烷基、四氢呋喃基或-OR^m取代，其中R^m为氢或C_1-3烷基；和C_1-4烯基；和

(e)-S(O)₂R⁹，其中R⁹选自C_1-4烷基，其中C_1-4烷基任选地经-CN、-OC_1-3烷基、苯基、吡啶基或C_3-6环烷基取代；C_1-4烯基；C_3-6环烷基，其中C_3-6环烷基任选地经C_1-3烷基取代；吡啶基，其中吡啶基任选地经氟取代；含有包含一个氮原子在内的4或5个环原子的杂环，其中杂环经由氮原子键结到硫，且杂环任选地经-CN或-CH₂OCH₃取代；和

R²选自氢、-OCH₃和-CH₂-R¹⁰，其中R¹⁰选自-OH；吗啉基；哌啶基，其中哌啶基在4位经两个氟取代；和哌嗪基，其中哌嗪基在4位经甲基取代；

R³选自氢、-CH₃、-OCH₃和-C(O)OCH₃；

R⁴为氢或-OCH₃；

R⁵为氢或氟；且

n为1或2，

其限制条件为当R⁵为氟时，R³为氢。

在另一特定方面中，本发明提供一种式(I)化合物，其中

R¹选自：

(a)C_1-4烷基，其中C_1-4烷基经一个、两个或三个氟或经-CN或-C(O)NHCH₃取代；

(c)-C(O)R⁶，其中R⁶为C_1-4烷基，其中C_1-4烷基经一个、两个或三个氟取代；和

(e)-S(O)₂R⁹，其中R⁹为吡啶基；

R²、R³、R⁴和R⁵各自为氢；且

n为1或2。

在某一方面中，本发明提供式(II)化合物：

其中变量R¹如本文中所定义。

在另一方面中，本发明提供式(III)化合物：

其中变量R¹如本文中所定义。

在一个方面中，本发明提供以下实例1-23和表1-8的化合物。

在另一方面中，本发明提供一种选自以下化合物的化合物：

3-((1R,3s,5S)-3-((7-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)-1,6-萘啶-5-基)氨基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)丙腈，

N⁵-((1R,3s,5S)-8-(2-氟乙基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)-N⁷-(5-甲基-1H-吡唑-3-基)-1,6-萘啶-5,7-二胺，

N⁷-(5-甲基-1H-吡唑-3-基)-N⁵-((1R,3s,5S)-8-(吡啶-3-基磺酰基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)-1,6-萘啶-5,7-二胺，

2-(二甲基氨基)-1-((1R,3s,5S)-3-((7-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)-1,6-萘啶-5-基)氨基)-9-氮杂双环[3.3.1]壬-9-基)乙-1-酮，

2,2-二氟-1-((1R,3s,5S)-3-((7-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)-1,6-萘啶-5-基)氨基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)乙-1-酮，

N⁵-((1R,3s,5S)-8-((2-甲氧基乙基)磺酰基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)-N⁷-(5-甲基-1H-吡唑-3-基)-1,6-萘啶-5,7-二胺，

N⁷-(5-甲基-1H-吡唑-3-基)-N⁵-((1R,3s,5S)-9-(吡啶-3-基磺酰基)-9-氮杂双环[3.3.1]壬-3-基)-1,6-萘啶-5,7-二胺，

(1R,3s,5S)-3-((2-(羟基甲基)-7-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)-1,6-萘啶-5-基)氨基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酸异丁酯，

N-甲基-2-((1R,3s,5S)-3-((7-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)-1,6-萘啶-5-基)氨基)-9-氮杂双环[3.3.1]壬-9-基)乙酰胺，和其医药学上可接受的盐。

如ChemDraw软件(铂金埃尔默公司(PerkinElmer,Inc.)，剑桥，麻州)中所实施，本文中根据IUPAC公约命名化学结构。举例来说，实例1的化合物

指定为3-((1R,3s,5S)-3-((7-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)-1,6-萘啶-5-基)氨基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)丙腈。(1R,3s,5S)标记描述相对于8-氮杂双环-[3.2.1]辛烷基团，萘啶基氨基的外定向。所有本发明化合物处于外定向。

此外，式(I)化合物的吡唑基部分以互变异构形式存在。举例来说，实例1的化合物可等效地表示为：

根据IUPAC公约，这些表述产生吡唑基部分原子的不同编号。以上表述指定为3-((1R,3s,5S)-3-((7-((3-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)-1,6-萘啶-5-基)氨基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)丙腈，其中加下划线标识名称不同于第一表述的名称。将理解，虽然结构以特定形式展示或命名，但本发明还包含其互变异构体。

本发明化合物含有一或多个手性中心，且因此所述化合物(和其中间物)可以外消旋混合物、纯立体异构体(即对映异构体或非对映异构体)、立体异构体-富集的混合物和其类似物的形式存在。除非另外指示，否则本文中展示或命名的在手性中心不具有确定立体化学的手性化合物意图包含在未确定的立构中心的任何或所有可能的立体异构体变化形式。除非另外指示，否则特定立体异构体的描述或命名意指所指示立构中心具有指定的立体化学，同时应理解为还可存在少量其它立体异构体，其限制条件为所描绘或所命名的化合物的效用不因存在另一立体异构体而消除。

式(I)化合物还含有若干碱性基团(例如氨基)，且因此，所述化合物可以游离碱形式或以各种盐形式，如单质子化盐形式、二质子化盐形式、三质子化盐形式或其混合物存在。除非另外指示，否则所有所述形成包含在本发明范围内。

本发明还包含同位素标记的式(I)化合物，即原子被换成或富含原子数相同但原子质量不同于在自然界中占绝大多数的原子质量的原子的式(I)化合物。可并入式(I)化合物中的同位素的实例包含(但不限于)²H、³H、¹¹C、¹³C、¹⁴C、¹³N、¹⁵N、¹⁵O、¹⁷O、¹⁸O、³⁵S、³⁶Cl和¹⁸F。尤其关注的为富含氚或碳14的式(I)化合物，所述化合物可用于例如组织分布研究中。尤其关注的还为尤其在代谢部位富含氘的式(I)化合物，所述化合物预期具有较高代谢稳定性。另外，尤其关注的为富含如¹¹C、¹⁸F、¹⁵O和¹³N的正电子发射同位素的式(I)化合物，所述化合物可用于例如正电子发射断层摄影法(PET)研究。

定义

除非另外指示，否则当描述本发明(包含其各种方面和实施例)时，以下术语具有以下含义。

术语“烷基”意指可为直链或分支链或其组合的单价饱和烃基。除非另外定义，否则所述烷基典型地含有1到10个碳原子。代表性烷基包含例如甲基(Me)、乙基(Et)、正丙基(n-Pr)或(nPr)、异丙基(i-Pr)或(iPr)、正丁基(n-Bu)或(nBu)、仲丁基、异丁基、叔丁基(t-Bu)或(tBu)、正戊基、正己基、2,2-二甲基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、2-乙基丁基、2,2-二甲基戊基、2-丙基戊基和其类似基团。

当特定数目的碳原子意图用于特定术语时，碳原子数目在术语前展示。举例来说，术语“C_1-3烷基”意指具有1到3个碳原子的烷基，其中碳原子呈任何化学可接受的配置，包含直链或分支链配置。

术语“烷氧基”意指单价基团-O-烷基，其中烷基如以上所定义。代表性烷氧基包含例如甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基和其类似基团。

术语“环烷基”意指可为单环或多环的单价饱和碳环基。除非另外定义，否则所述环烷基典型地含有3到10个碳原子。代表性环烷基包含例如环丙基(cPr)、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基、金刚烷基和其类似基团。

术语“杂环(heterocycle/heterocyclic/heterocyclic ring)”意指具有总计3到10个环原子的单价饱和或部分不饱和环状非芳族基团，其中环含有2到9个碳环原子和1到4个选自氮、氧和硫的环杂原子。杂环基可为单环或多环(即稠合或桥接)的。代表性杂环基包含例如吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、咪唑啶基、吗啉基、硫吗啉基、吲哚啉-3-基、2-咪唑啉基、四氢哌喃基、1,2,3,4-四氢异喹啉-2-基、奎宁环基、7-氮杂降莰烷基、降托烷基和其类似基团，其中连接点在任何可用的碳或氮环原子处。在上下文显现杂环基的连接点的情况下，所述基团或者可称作非价物质，即吡咯烷、哌啶、哌嗪、咪唑、四氢哌喃等。

术语“治疗有效量”意指当投与到需要治疗的患者时足以实现治疗的量。

如本文中所使用的术语“治疗”意指对如哺乳动物(特定来说人类)的患者的疾病、病症或医学病状(如胃肠发炎性疾病)的治疗，其包含以下中的一或多者：

(a)预防疾病、病症或医学病状发生，即预防疾病或医学病状复发，或预防性治疗预先易患疾病或医学病状的患者；

(b)改善疾病、病症或医学病状，即消除或引起患者的疾病、病症或医学病状的消退，包含抵消其它治疗剂的效应；

(c)抑止疾病、病症或医学病状，即减缓或阻止患者的疾病、病症或医学病状的发展；或

(d)缓解患者的疾病、病症或医学病状的症状。

术语“医药学上可接受的盐”意指可接受以用于投与到患者或哺乳动物(如人类)的盐(例如，对于既定给药方案具有可接受的哺乳动物安全性的盐)。代表性医药学上可接受的盐包含以下的盐、乙酸、抗坏血酸、苯磺酸、苯甲酸、樟脑磺酸、柠檬酸、乙磺酸、乙二磺酸、反丁烯二酸、龙胆酸、葡萄糖酸、葡糖醛酸、谷氨酸、马尿酸、氢溴酸、盐酸、羟乙基磺酸、乳酸、乳糖酸、顺丁烯二酸、苹果酸、杏仁酸、甲烷磺酸、粘酸、萘磺酸、萘-1,5-二磺酸、萘-2,6-二磺酸、烟碱酸、硝酸、乳清酸、帕莫酸、泛酸、磷酸、丁二酸、硫酸、酒石酸、对甲苯磺酸和羟萘甲酸和其类似酸。

术语“其盐”意指当酸的氢经阳离子(如金属阳离子或有机阳离子和其类似阳离子)置换时所形成的化合物。举例来说，阳离子可为式(I)化合物的质子化形式，即一或多个氨基由酸质子化的形式。典型地，盐为医药学上可接受的盐，但此对于不意图投与到患者的中间化合物的盐而言不需要。

术语“氨基保护基”意指适合于防止在氨基氮处发生不当反应的保护基。代表性氨基保护基包含(但不限于)甲酰基；酰基，例如烷酰基，如乙酰基和三氟乙酰基；烷氧基羰基，如叔丁氧基羰基(Boc)；芳基甲氧基羰基，如苯甲氧基羰基(Cbz)和9-芴基甲氧基羰基(Fmoc)；芳基甲基，如苯甲基(Bn)、三苯甲基(Tr)和1,1-二(4′-甲氧基苯基)甲基；硅烷基，如三甲基硅烷基(TMS)、叔丁基二甲基硅烷基(TBDMS)、[2-(三甲基硅烷基)乙氧基]甲基(SEM)；和其类似基团。众多保护基和其引入和移除描述于T.W.格林和G.M.伍兹，《有机合成中的保护基(Protecting Groups in Organic Synthesis)》，第三版，威利，纽约中。

通用合成程序

本发明化合物和其中间物可根据以下通用方法和程序使用市售或常规制备的起始物质和试剂来制备。除非另外指示，否则以下流程中所使用的取代基和变量(例如，R¹、R²、R³、R⁴等)具有与本文中其它处所定义的如者相同的含义。另外，除非另外指示，否则具有酸性或碱性原子或官能基的化合物可以盐形式使用或可制备成盐形式(在一些情况下，在特定反应中使用盐将需要在进行反应前使用常规程序将盐转化成非盐形式，例如游离碱形式)。

虽然可在以下程序中展示或描述本发明的特定实施例，但所属领域的技术人员将认识到本发明的其它实施例或方面还可使用所述程序或通过使用所属领域的技术人员已知的其它方法、试剂和起始物质来制备。具体来说，应了解，本发明化合物可通过多种工艺途径制备，其中反应物以不同次序组合以提供不同中间物烯途径，以制备最终产物。

制备本发明的最终化合物的通用方法使用如流程1中所说明的关键中间物1。变量R¹、R²、R³、R⁴、R⁵、R⁶、R⁸和R⁹如式(I)中所定义，R^A表示任选地经取代的C_1-4烷基，且L为离去基。为简单起见，流程展示以下化合物：其中式(I)的变量n定义为1，即双环基团为8-氮杂双环[3.2.1]辛基。类似工艺用以制备变量n为2的化合物。

流程1

为制备如选项(a)中所定义R¹为任选地经取代的烷基的化合物，烷化反应典型地使用卤基离去基L，主要为溴或碘，但也可采用如羟基或三氟甲烷磺酸酯(通常三氟甲磺酸酯)的替代离去基。反应典型地通过在惰性稀释剂中在过量碱存在下使中间物1与过量试剂L-R^A接触来进行。反应典型地在约20℃与约60℃之间的温度下进行，持续约10小时与24小时之间或直到反应基本上完成。

可替代地，麦克尔(Michael)加成反应可用以制备R¹为氰基乙基的化合物。举例来说，如以下实例中所描述，为制备R¹为-(CH₂)₂CN的化合物，在过量碱例如二异丙基乙胺或重氮双环十一烯存在下，使中间物1与过量(例如1.1到1.5当量)丙烯腈接触。反应典型地在室温下进行，持续约3小时与约24小时之间，或直到反应基本上完成。在某些情况中，适用于通过与适合选择的醛还原胺化来制备R¹为任选地经取代的烷基的化合物。

R¹定义为-C(O)R⁶的化合物可通过在典型酰胺偶合条件下使中间物1与适度过量的羧酸试剂HO-C(O)-R⁶接触来制备。反应典型地在过量碱存在下使用如六氟磷酸N,N,N′,N′-四甲基-O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)

(HATU)的活化剂来进行。反应典型地在室温下进行，持续约3小时与约24小时之间，或直到反应基本上完成。

氯甲酸酯试剂Cl-C(O)OR⁸可用以制备R¹定义为-C(O)OR⁸的氨基甲酸酯化合物。典型地，在约0℃的温度下在过量碱存在下，中间物1与约1当量氯甲酸酯接触。反应典型地进行约1小时与约3小时之间，或直到反应基本上完成。

R¹定义为-S(O)₂R⁹的磺酰胺化合物典型地通过在约0℃的温度下在过量碱存在下，使中间物1与约1与约1.1当量之间的形式Cl-S(O)₂R⁹的磺酰氯接触来制备。反应典型地进行约1小时与约24小时之间，或直到反应基本上完成。

在流程2中说明用于制备变量R²、R³、R⁴和R⁵各自为氢的中间物1-2的示例性反应。

流程2

在步骤1的胺置换反应中，在碱存在下使二氯-萘啶2与稍微过量的经叔丁氧基羰基(Boc)保护的氨基-8-氮杂双环-[3.2.1]辛烷3反应，得到中间物4。随后在标准的布赫瓦尔德(Buchwald)胺化条件下使经Boc保护的中间物氨基-甲基-吡唑5与中间物4反应。举例来说，在如碳酸铯的碱和钯催化剂存在下，中间物4与约1与约1.5当量之间的吡唑中间物5组合。反应典型地在约85℃与约110℃之间的高温下进行，持续约24小时与约48小时之间或直到反应基本上完成。如流程2中所展示，在布赫瓦尔德反应过程期间，Boc保护基可从甲基吡唑移除，或Boc保护基可保留在甲基吡唑上，且在最终步骤中连同8-氮杂双环辛基上的保护基移除。在最后步骤中，Boc基团可通过用酸的标准处理移除，所述酸典型地为二恶烷中的三氟乙酸或盐酸。

如随附实例中所描述，制备R²、R³、R⁴和R⁵中的一或多者不为氢的中间物1可遵循流程2中所展示的步骤顺序，以类似于中间物2的经取代二氯-萘啶试剂为起始物质。经取代中间物2市售可得或易于通过标准程序由商业试剂制备。

应了解，本发明化合物可通过多种工艺途径制备，其中反应物以不同次序组合以提供不同中间物烯途径，以制备最终产物。对于某些取代基，R²、R³、R⁴或R⁵，优选地，以经所需取代基的前体取代的萘啶中间物为起始物质，进行胺置换反应以添加受保护氨基-8-氮杂双环辛基，且将前体转变成所需取代基，或转变所需取代基的一个步骤，之后添加吡唑基团。一个具体实例，形成中间物6-3的方法简述于以下流程3中且明确描述于制备5和6中，所述中间物为经取代中间物2的经Boc保护的前体，其中R²为-CH₂OH且R³、R⁴和R⁵各自为氢。

流程3

将受保护氨基-8-氮杂双环辛基3添加到经羟基取代的二氯-萘啶2-3中以形成中间物7-3。针对所安置的8-氮杂双环辛基，羟基取代基连续转变成三氟甲磺酸酯8-3，且随后转变成甲酯9-3，之后添加受保护氨基吡唑5以形成中间物10-3，其经氢化以形成带有R²取代基-CH₂OH的受保护中间物6-3。

在以下实例中描述用于制备取代基R²、R³、R⁴或R⁵不为氢的本发明化合物的额外合成方法，和用于制备变量n为2的化合物的方法。

因此，在一方法方面中，本发明提供一种制备式(I)化合物或其医药学上可接受的盐的方法，所述方法包括使式(IV)化合物：

与(i)式L-R^A化合物，其中L为离去基且R^A为如针对R¹选项(a)所定义的任选地经取代的烷基，或选项(b)的取代基；或(ii)HO-C(O)R⁶；或(iii)Cl-C(O)OR⁸；或(iv)Cl-S(O)₂R⁹反应，以形成式(I)化合物或其医药学上可接受的盐。

在各别和不同方面中，本发明提供一种变量采取以上所描述的任何值的式(IV)化合物，和R²、R³、R⁴和R⁵各自为氢的式(IV)化合物。

结晶形式

在另一方面中，本发明提供呈结晶游离碱形成或其溶剂合物的3-((1R,3s,5S)-3-((7-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)-1,6-萘啶-5-基)氨基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)丙腈(实例1)。

本发明的结晶形式I为实例1的化合物的结晶游离碱。在一个方面中，形式I通过粉末X射线衍射(PXRD)图案表征，所述图案除其它峰以外在以下2θ值处具有显著衍射峰：7.87±0.20、12.78±0.20、15.78±0.20和20.41±0.20。形式I可进一步通过PXRD图案表征，所述图案在选自以下的2θ值处具有两个或两个以上额外衍射峰，包含三个或三个以上和四个或四个以上额外衍射峰：10.80±0.20、13.47±0.20、13.64±0.20、14.66±0.20、15.11±0.20、15.54±0.20、17.75±0.20、21.00±0.20、22.22±0.20、22.93±0.20和23.65±0.20。在另一方面中，形式I通过在以下的2θ值处具有衍射峰的PXRD图案表征：7.87±0.20、10.80±0.20、12.78±0.20、13.47±0.20、13.64±0.20、14.66±0.20、15.11±0.20、15.54±0.20、15.78±0.20、17.75±0.20、20.41±0.20、21.00±0.20、22.22±0.20、22.93±0.20和23.65±0.20。

如粉末X射线衍射的领域中所熟知，与相对峰高度相比，PXRD光谱的峰位置对实验细节(如样品制备和仪器几何结构的细节)相对更不敏感。因此在一个方面中，结晶形式I通过如下粉末x射线衍射图案表征，其中峰位置基本上符合图1中所展示的如者。

结晶形式I的结构已进一步通过单晶x射线衍射分析表征。结晶属于单斜晶体系统和P2₁/n空间群。单位晶胞尺寸为：

α＝90°，β＝93.2360(10)°，γ＝90°，

计算密度为1.317g/cm³。结晶含有四个分子/单位晶胞。结构证实结晶不含有水或其它溶剂分子，且分子结构符合如本文中所描绘的实例1的化合物的结构。从经导出原子位置预测的粉末X射线衍射峰与观测结果极佳地一致。

在另一方面中，当暴露于高温时，结晶形式I通过其行为表征。如图2中所显示，在10℃/min的加热速率下记录的差示扫描量热法(DSC)迹线呈现在约243℃到约253℃范围内(包含约246℃与约250℃之间)，具有呈吸热热流形式的峰，鉴定为熔化转变。图3的热解重量分析(TGA)迹线展示在小于约237℃的分解起始的温度下，无显著的重量损失。

已显示结晶形式I具有吸湿性的倾向格外小的可逆吸附/解吸概况。如图4中所展示，在室温下，形式I显示在5％到90％相对湿度的湿度范围内小于约0.14％的重量增加，和在5％到90％相对湿度的湿度范围内小于约0.07％的重量增加。在吸附和解吸的两个循环中未观测到滞后。形式I视为非吸湿的。

已展示当暴露于升高的温度和湿度时结晶形式I为稳定的。在40℃和75％相对湿度的加速条件下3个月之后，在化学物质含量中或在杂质概况中未观测到统计上显著的变化。

结晶形式II为实例1的化合物的结晶溶剂合物，通过除其它峰以外在以下2θ值处具有显著衍射峰的图5的粉末x射线衍射图案表征：9.76±0.20、15.06±0.20、16.61±0.20、20.40±0.20和21.99±0.20。如以下实例18中所描述，形式II溶剂合物含有约6％与约7％之间的甲醇、约2％与约2.5％之间的N,N-二甲基甲酰胺，和约1％与约1.5％之间的水。

形式II的溶剂合物可通过以下方式制备：将典型地甲醇与水的比在约1.5:1与约3:1之间的甲醇与水的混合物添加到N⁵-((1R,3s,5S)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)-N⁷-(5-甲基-1H-吡唑-3-基)-1,6-萘啶-5,7-二胺(流程2中的化合物1-2)与丙烯腈或与溴丙腈的反应的产物中，此典型地在二甲基甲酰胺中进行。在约20℃与约25℃之间的温度下，将所得反应混合物搅拌约4小时与约24小时之间，过滤，且用甲醇或甲醇与水的混合物(如1:1、2:1或3:1甲醇与水的混合物)洗涤，得到形式II溶剂合物。乙醇溶剂合物可通过将形式II溶剂合物浆化于乙醇中来制备。

非溶剂化的结晶形式I宜由实例1的化合物的溶剂合物形式、优选地形式II的溶剂合物制备。在典型工艺中，形式II溶剂合物典型地与非质子化溶剂组合，得到浆液。适用的溶剂包含但不限于二恶烷、甲苯、乙酸丁酯和丙酮。浆液典型地以在约50mg溶剂合物/毫升溶剂与约85mg/mL之间的浓度形成。可将浆液加热到约40℃与约110℃之间的温度，之后维持约4小时与约3天之间，过滤，且洗涤，得到形式I结晶固体。如以下实例19和20中所描述，已发现丙酮为尤其适用的溶剂。

在另一方面中，本发明提供一种制备结晶形式I的方法，所述方法包括(a)形成3-((1R,3s,5S)-3-((7-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)-1,6-萘啶-5-基)氨基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)丙腈的结晶溶剂合物于选自以下的溶剂中的浆液：二恶烷、甲苯、乙酸丁酯和丙酮；(b)在约40℃与约110℃之间的温度下加热浆液，持续约4小时与约3天之间；和(c)从浆液分离结晶形式I。

医药组合物

本发明化合物和其医药学上可接受的盐典型地以医药组合物或调配物的形式使用。所述医药组合物可通过投药的任何可接受途径投与到患者，所述任何可接受途径包含但不限于投药的口服、经直肠、经鼻、吸入、局部(包含经皮)和非经肠模式。

因此，在其一个组合物方面中，本发明针对一种医药组合物，其包括医药学上可接受的载剂或赋形剂和式(I)化合物，其中如以上所定义，“式(I)化合物”意指式(I)化合物或其医药学上可接受的盐。任选地，必要时所述医药组合物可含有其它治疗和/或调配剂。当论述组合物和其用途时，“本发明化合物”在本文中也可称作“活性剂”。如本文中所使用，术语“本发明化合物”意图包含式(I)涵盖的所有化合物以及以式(II)和(III)形式实施的物质和其医药学上可接受的盐。

本发明的医药组合物典型地含有治疗有效量的本发明化合物。然而所属领域的技术人员将认识到，医药组合物可含有大于一种治疗有效量，即散装组合物，或低于一种治疗有效量，即针对多种投药而设计以获得治疗有效量的个别单位剂量。

典型地，所述医药组合物将含有约0.1到约95重量％的活性剂；优选地约5到约70重量％；且更佳约10到约60重量％的活性剂。

任何常规载剂或赋形剂可用于本发明的医药组合物中。选择特定载剂或赋形剂，或载剂或赋形剂的组合将视用于治疗特定患者或特定类型的医学病状或疾病病况的投药模式而定。就此而言，对于特定的投药模式，适合医药组合物的制备很好地在医药领域的技术人员的范围内。另外，本发明的医药组合物中所使用的载剂或赋形剂市售可得。借助于进一步说明，常规调配物技术描述于以下中：雷明顿:《药学的科学和实践(The Science andPractice of Pharmacy)》,第20版,利平科特威廉姆斯和怀特，巴尔的摩，马里兰(2000)；和H.C.安塞尔等人,《药物剂型和药物递送系统(Pharmaceutical Dosage Forms and DrugDelivery Systems)》,第7版,利平科特威廉姆斯和怀特，巴尔的摩，马里兰(1999)。

可充当医药学上可接受的载剂的物质的代表性实例包含(但不限于)以下：糖，如乳糖、葡萄糖和蔗糖；淀粉，如玉米淀粉和马铃薯淀粉；纤维素，如微晶纤维素，和其衍生物，如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和乙酸纤维素；粉末状黄蓍；麦芽；明胶；滑石；赋形剂，如可可豆油和栓剂蜡；油，如花生油、棉籽油、红花油、芝麻油、橄榄油、玉米油和大豆油；二醇，如丙二醇；多元醇，如丙三醇、山梨糖醇、甘露糖醇和聚乙二醇；酯，如油酸乙酯和月桂酸乙酯；琼脂；缓冲剂，如氢氧化镁和氢氧化铝；褐藻酸；无热原质水；等渗盐水；林格氏溶液(Ringer′s solution)；乙醇；磷酸盐缓冲溶液；和其它用于医药组合物的无毒兼容物质。

典型地通过将活性剂与医药学上可接受的载剂和一或多种任选地选用的成分充分且紧密地混合或掺合来制备医药组合物。随后可使用常规程序和设备将所得均匀掺合的混合物成形为锭剂、胶囊、丸剂和其类似物或装载到其中。

本发明的医药组合物优选地以单位剂型封装。术语“单位剂型”是指适合于供给患者的物理离散单位，即各单元含有预定数量的所计算活性剂，以单独或与一或多个额外单位组合来产生所需治疗效应。举例来说，所述单位剂型可为胶囊、锭剂、丸剂和其类似物，或适合于非经肠投药的单位封装。

在一个实施例中，本发明的医药组合物适合于口服投药。用于口服投药的适合的医药组合物可呈胶囊、锭剂、丸剂、口含锭、扁囊剂、糖衣药丸、散剂、颗粒形式；或呈于水性或非水性液体中的溶液或悬浮液形式；或呈水包油或油包水液体乳液形式；或呈酏剂或糖浆形式；和其类似形式；各自含有预定量的本发明化合物作为活性成份。

当意图以固体剂型(即，呈胶囊、锭剂、丸剂和其类似物形式)用于口服投药时，本发明的医药组合物将典型地包括活性剂和一或多种医药学上可接受的载剂，如柠檬酸钠或磷酸二钙。任选地或可替代地，所述固体剂型还可包括：填充剂或增量剂，如淀粉、微晶纤维素、乳糖、磷酸二钙、蔗糖、葡萄糖、甘露糖醇和/或硅酸；粘合剂，如羧甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、褐藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和/或阿拉伯胶；保湿剂，如甘油；崩解剂，如交联羧甲基纤维素钠、交联聚维酮、琼脂-琼脂、碳酸钙、马铃薯或木薯淀粉、褐藻酸、某些硅酸盐和/或碳酸钠；溶液延迟剂，如石蜡；吸收促进剂，如第四铵化合物；湿润剂，如鲸蜡基醇和/或单硬脂酸甘油酯；吸附剂，如高岭土和/或膨润土；润滑剂，如滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、月桂基硫酸钠和/或其混合物；着色剂；和缓冲剂。

释放剂、湿润剂、包衣剂、甜味剂、调味剂和芳香剂、防腐剂和抗氧化剂也可存在于本发明的医药组合物中。医药学上可接受的抗氧化剂的实例包含：水溶性抗氧化剂，如抗坏血酸、半胱氨酸盐酸盐、硫酸氢钠、偏亚硫酸钠、亚硫酸钠和其类似物；油溶性抗氧化剂，如抗坏血酸棕榈酸酯、丁基化羟基大茴香醚、丁基化羟基甲苯、卵磷脂、没食子酸丙酯、α生育酚和其类似物；和金属螯合剂，如柠檬酸、乙二胺四乙酸、山梨糖醇、酒石酸、磷酸和其类似物。用于锭剂、胶囊、丸剂和其类似物的包衣剂包含用于肠溶包衣的如包衣剂，如邻苯二甲酸乙酸纤维素、聚乙酸乙烯酯邻苯二甲酸酯、邻苯二甲酸羟丙基甲基纤维素、甲基丙烯酸、甲基丙烯酸酯共聚物、偏苯三甲酸乙酸纤维素、羧甲基乙基纤维素、丁二酸乙酸羟丙基甲基纤维素和其类似物。

本发明的医药组合物也可经调配，以使用例如呈变化比例的羟丙基甲基纤维素或其它聚合物基质、脂质体和/或微球体，来提供活性剂的减缓或控制释放。另外，本发明的医药组合物可任选地含有乳浊剂且可经调配，使得其任选地以经延迟方式在胃肠道的某一部分中仅仅或优先释放活性成份。可使用的包埋组合物的实例包含聚合物质和蜡。活性剂也可呈如果适宜与以上所描述的赋形剂中的一或多者的微囊封形式。

用于口服投药的适合的液体剂型(以说明的方式)包含医药学上可接受的乳液、微乳液、溶液、悬浮液、糖浆和酏剂。液体剂型典型地包括活性剂和惰性稀释剂(如水)或其它溶剂、增溶剂和乳化剂，如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸苯甲酯、丙二醇、1,3-丁二醇、油(尤其棉籽油、花生油、玉米油、胚芽油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油)、油酸、甘油、四氢呋喃醇、聚乙二醇和脱水山梨糖醇的脂肪酸酯，和其混合物。可替代地，某些液体调配物可例如通过喷雾干燥转变成粉末，所述粉末用以通过常规程序制备固体剂型。

除活性成份以外，悬浮液可含有悬浮剂，如乙氧基化异硬脂醇、聚氧化乙烯山梨糖醇和脱水山梨糖醇酯、微晶纤维素、偏氢氧化铝、膨润土、琼脂-琼脂和黄蓍和其混合物。

本发明化合物也可非经肠(例如，通过静脉内、皮下、肌内或腹膜内注射)投与。对于非经肠投药，活性剂典型地与用于非经肠投药的适合媒剂掺合，所述适合媒剂包含例如无菌水溶液；盐水；低分子量醇，如丙二醇、聚乙二醇；植物油；明胶；脂肪酸酯，如油酸乙酯和其类似物。调配物也可含有一或多种抗氧化剂、增溶剂、稳定剂、防腐剂、湿润剂、乳化剂、缓冲剂或分散剂。可通过使用无菌可注射介质、灭菌剂、过滤、照射或加热来使这些调配物无菌。

可替代地，本发明的医药组合物经调配以通过吸入来投与。通过吸入投与的适合的医药组合物将典型地呈气溶胶或粉末形式。所述组合物一般使用熟知的递送装置投与，所述递送装置如定量给药吸入器、干粉吸入器、喷雾器或类似递送装置。

当使用加压容器通过吸入投与时，本发明的医药组合物将典型地包括活性成份和适合的推进剂，如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其它适合的气体。另外，医药组合物可呈包括本发明化合物的胶囊或药筒(由例如明胶制备)和适合用于粉末吸入器的粉末形式。适合的粉末基质包含例如乳糖或淀粉。

本发明化合物还可使用已知经皮递送系统和赋形剂来经皮投与。举例来说，活性剂可与渗入增强剂(如丙二醇、聚乙二醇单月桂酸酯、氮杂环烷-2-酮和其类似物掺合)，且并入到贴片或类似递送系统中。必要时可在所述经皮组合物中使用其它赋形剂，包含胶凝剂、乳化剂和缓冲液。

可替代地，本发明化合物可以栓剂形式投与。典型的栓剂调配物一般由活性剂与粘合和/或润滑剂构成，所述粘合和/或润滑剂如明胶或可可豆油或其它低熔点植物或合成蜡或脂肪。

以下非限制性实例说明本发明的代表性医药组合物。

锭剂口服固体剂型

将本发明化合物或其医药学上可接受的盐与微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮和交联羧甲纤维素钠以4:5:1:1的比干燥掺合，且压缩成锭剂，得到例如5mg、20mg或40mg活性剂/锭剂的单位剂量。

胶囊口服固体剂型

通过湿式造粒将本发明化合物或其医药学上可接受的盐与微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮和交联羧甲基纤维素钠以4:5:1:1的比组合，且装载到明胶或羟丙基甲基纤维素胶囊中，得到例如5mg、20mg或40mg活性剂/胶囊的单位剂量。

锭剂口服固体剂型

将本发明化合物或其医药学上可接受的盐与微晶纤维素、乳糖、羟丙基甲基纤维素、交联聚维酮和硬脂酸镁干燥或湿性粒化。以％wt/wt为单位的调配物组成为本发明化合物(4％)、微晶纤维素(45％)、乳糖(36％)、羟丙基甲基纤维素(10％)、交联聚维酮(3％)和硬脂酸镁(2％)。经干燥或湿性粒化的掺合物压缩成锭剂，得到10mg活性剂/250mg锭剂的单位剂量。

锭剂口服固体剂型

将本发明化合物或其医药学上可接受的盐与微晶纤维素、羟丙基甲基纤维素、交联聚维酮和硬脂酸镁干燥或湿性粒化。以％wt/wt为单位的调配物组成为本发明化合物(40％)、微晶纤维素(45％)、羟丙基甲基纤维素(10％)、交联聚维酮(3％)和硬脂酸镁(2％)。经干燥或湿性粒化的掺合物压缩成锭剂，得到100mg活性剂/250mg锭剂的单位剂量。

液体调配物

包括本发明化合物(0.1％)、水(98.9％)和抗坏血酸(1.0％)的液体调配物通过将本发明化合物添加到水与抗坏血酸的混合物中来形成。

包覆肠溶包衣口服剂型

将本发明化合物溶解于含有聚乙烯吡咯烷酮的水溶液中，且以1:5w/w活性剂:珠粒的比喷雾涂布于微晶纤维素或糖珠粒上，且随后施用大约5％重量增加的肠溶包衣，其包括丙烯酸共聚物，例如以商标名

和

可用的丙烯酸共聚物的组合，或丁二酸乙酸羟丙基甲基纤维素。将包覆肠溶包衣的珠粒装载到明胶或羟丙基甲基纤维素胶囊中，得到例如30mg活性剂/胶囊的单位剂量。

包覆肠溶包衣口服剂型

将包括

和

的组合或丁二酸乙酸羟丙基甲基纤维素的肠溶包衣施用到以上所描述的锭剂口服剂型或胶囊口服剂型。

效用

已经展示本发明化合物为酶的JAK家族：JAK1、JAK2、JAK3和TYK2的强效抑制剂。对JAK酶的家族的抑制可抑制许多关键促炎性细胞激素的信号传导。因此，本发明的JAK抑制剂预期适用于治疗发炎性疾病，如溃疡性结肠炎、克罗恩氏病、过敏性鼻炎、哮喘和慢性阻塞性肺病(COPD)。

本发明化合物经设计为吸收不充分的，以使全身性暴露降到最低。如以下实验部分中所描述，典型化合物的吸收率和分布已在临床前分析中广泛描绘。经插管大鼠中所测试的经选择化合物在门静脉处展示到血浆中的低吸收率。另外，化合物经设计以在胃肠道中在作用位点处具有其效应。在大鼠中，经选择化合物展现大于约450的结肠中的暴露与血浆中的暴露的比。具体来说，当在临床前物种中口服给药时，实例1的化合物在整个胃肠道中显示比血浆中的暴露显著更高的暴露。此外，已在健康人类个体中评估实例1的化合物，且发现其在大便样品中呈现高药物浓度，表明胃肠道中的显著暴露。

恶唑酮诱导的结肠炎为具有与人类溃疡性结肠炎类似的组织的实验模型。如以下所描述，在其它本发明化合物中，实例1的化合物在小鼠的恶唑酮诱导的结肠炎模型中显示活性。此外，当在小鼠的免疫抑制模型中测试(探测全身性功能活性)时，在为显示恶唑酮模型的功效所需的相同剂量下，化合物显示免疫抑制的最小效应。因此，在临床前模型中，化合物在不呈现全身性效应的情况下显示抗结肠炎活性。

在无相关的全身性促进的不良效应的情况下，吾人预期用这些化合物获得的高结肠与血浆的比率将提供稳固的内腔促进的抗炎性活性。预期化合物适用于多种胃肠发炎适应症，包含(但不限于)溃疡性结肠炎(直肠乙状结肠炎、全结肠炎、溃疡性直肠炎和左半结肠炎)、克罗恩氏病、胶原性结肠炎、淋巴球性结肠炎、白塞氏病(Behcet′sdisease)、乳糜泻、检查点癌症治疗诱导的结肠炎(例如，CTLA-4抑制剂诱导的结肠炎)、回肠炎、嗜伊红血球食道炎、移植体对抗宿主疾病相关的结肠炎和感染性结肠炎。溃疡性结肠炎(瑞玛德等人,J Clin Immunology,1996,16,144-150)、克罗恩氏病(沃伊沃特等人,Eur JGastroenterology Hepatology,1999,11,267-276)、胶原性结肠炎(库玛瓦特等人,MolImmunology,2013,55,355-364)、淋巴球性结肠炎(库玛瓦特等人,2013)、嗜伊红血球食道炎(韦恩布朗-果奇博格等人,Immunol Res,2013,56,249-260)、移植体对抗宿主疾病相关的结肠炎(科格希尔等人,Blood,2001,117,3268-3276)、感染性结肠炎(施塔尔马赫等人,Int J Colorectal Dis,2004,19,308-315)、白塞氏病(周等人,Autoimmun Rev,2012,11,699-704)、乳糜泻(德尼托等人,World J Gastroenterol,2009,15,4609-4614)、检查点癌症治疗诱导的结肠炎(例如，CTLA-4抑制剂诱导的结肠炎)(矢野等人,J Translation Med,2014,12,191)和回肠炎(山本等人,Dig Liver Dis,2008,40,253-259)的特征为某些促炎性细胞激素水平的升高。作为经由JAK活化的许多促炎性细胞激素信号，本申请案中所描述的化合物能够减轻发炎且提供症状缓解。

具体来说，预期本发明化合物适用于诱导且维持溃疡性结肠炎的缓解，且用于治疗克罗恩氏病、CTLA-4抑制剂诱导的结肠炎和移植体对抗宿主疾病中的胃肠不良效应。

因而在一个方面中，本发明提供一种治疗哺乳动物(例如，人类)的胃肠发炎性疾病的方法，所述方法包括向哺乳动物投与治疗有效量的本发明化合物，或包括医药学上可接受的载剂和本发明化合物的医药组合物。

本发明进一步提供一种治疗哺乳动物的溃疡性结肠炎的方法，所述方法包括向哺乳动物投与治疗有效量的本发明化合物，或包括医药学上可接受的载剂和本发明化合物的医药组合物。

当用以治疗胃肠发炎性疾病时，本发明化合物将典型地以单次日剂量或以多次剂量/天经口投与，但可使用其它投药形式。每剂量投与的活性剂的量或每天投与的总量典型地由医师根据相关情况，包含待治疗的病状、所选投药途径、投与的实际化合物和其相对活性、个别患者的年龄、重量和反应、患者症状的严重程度和其类似者来确定。

对于平均70kg人类，预期用于治疗溃疡性结肠炎和其它胃肠发炎病症的适合剂量在约1毫克/天到约400毫克/天活性剂范围内，包含约5毫克/天到约300毫克/天和约20毫克/天到约70毫克/天活性剂。

组合疗法

本发明化合物也可与一或多种通过相同机制或通过不同机制起作用来实现胃肠发炎病症的治疗的药剂组合使用。用于组合疗法的药剂的有用种类包含(但不限于)氨基水杨酸盐、类固醇、全身性免疫抑制剂、抗TNFα抗体、抗VLA-4抗体、抗整合素α4β7抗体、抗细菌剂和抗腹泻药品。

可与本发明JAK抑制剂化合物组合使用的氨基水杨酸盐包含(但不限于)美色拉嗪(mesalamine)、奥色拉嗪(osalazine)和柳氮磺胺吡啶(sulfasalazine)。类固醇的实例包含(但不限于)泼尼松(prednisone)、泼尼龙(prednisolone)、氢化可的松(hydrocortisone)、布地奈德(budesonide)、倍氯米松(beclomethasone)和氟替卡松(fluticasone)。适用于治疗发炎病症的全身性免疫抑制剂包含(但不限于)环孢灵、硫唑嘌呤、甲氨喋呤、6-巯基嘌呤和他克莫司(tacrolimus)。此外，在组合疗法中可使用抗TNFα抗体，包含(但不限于)英利昔单抗、阿达木单抗、戈利木单抗(golimumab)和赛妥珠单抗(certolizumab)。通过其它机制起作用的有用化合物包含抗VLA-4抗体，如那他珠单抗(natalizumab)；抗整合素α4β7抗体，如维多珠单抗(vedolizumab)；抗细菌剂，如利福昔明(rifaximin)和抗腹泻药品，如洛哌丁胺(loperamide)。(莫扎法里等人生物疗法专家见解(Expert Opin.Biol.Ther.)2014,14,583-600；丹尼斯,内脏(Gut),2012,61,918-932；拉姆等人,免疫疗法(Immunotherapy),2014,6,963-971)。

因而在另一方面中，本发明提供一种用于治疗胃肠发炎病症的治疗组合，所述组合包括本发明化合物和一或多种适用于治疗胃肠发炎病症的其它治疗剂。举例来说，本发明提供一种组合，其包括本发明化合物和一或多种选自以下的药剂：氨基水杨酸盐、类固醇、全身性免疫抑制剂、抗TNFα抗体、抗VLA-4抗体、抗整合素α4β7抗体、抗细菌剂和抗腹泻药品。当包含时二级药剂以治疗有效量，即以当与本发明化合物共同投与时产生治疗上有益的效应的任何量存在。

因而也提供一种医药组合物，其包括本发明化合物和一或多种适用于治疗胃肠发炎病症的其它治疗剂。

此外，在一方法方面中，本发明提供一种治疗胃肠发炎病症的方法，所述方法包括向哺乳动物投与本发明化合物和一或多种适用于治疗胃肠发炎病症的其它治疗剂。

当用于组合疗法时，药剂可如以上所揭示调配成单一医药组合物，或药剂可提供在分开的组合物中，所述分开的组合物同时或在不同时间通过相同或通过不同的投药途径投与。当分开投与时，药剂的投与在时间上足够接近以便提供所需治疗效应。所述组合物可分开地封装或可作为套组共同封装。套组中两种或两种以上治疗剂可通过相同投药途径或通过不同投药途径投与。

已显示本发明化合物在酶结合分析中为JAK1、JAK2、JAK3和TYK2酶的强效抑制剂，且在细胞分析中在无细胞毒性的情况下具有强效的功能活性，如以下实例中所描述。

实例

提供以下合成和生物实例以说明本发明，且不以任何方式解释为限制本发明的范围。除非另外指示，否则在以下实例中，以下缩写具有以下含义。以下未定义的缩写具有其一般可接受的含义。

ACN ＝乙腈

DCM ＝二氯甲烷

DIPEA ＝ N,N-二异丙基乙胺

DMF ＝ N,N-二甲基甲酰胺

DMSO ＝二甲亚砜

EtOAc ＝乙酸乙酯

h ＝小时

HATU ＝六氟磷酸N,N,N′,N′-四甲基-O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)

min ＝分钟

NMP ＝ N-甲基-2-吡咯烷酮

Pd(dppf)Cl₂ ＝二氯(1,1′-双(二苯膦基)-二茂铁)二钯(II)

Pd₂(dba)₃ ＝参(二苯亚甲基丙酮)二钯(0)

PdXPhos ＝氯(2-二环己基膦基-2′-,4′-,6′--三异丙基-1,1′-联二苯)[2-(2′-氨基-1,1′-联二苯)]钯(II)

RT ＝室温

Selectfluor ＝ 1-氯甲基-4-氟-1,4-二氮杂双环[2.2.2]辛烷双(四氟硼酸盐)

TEA ＝三乙胺

TFA ＝三氟乙酸

THF ＝四氢呋喃

双(频哪醇根基)二硼＝ 4,4,5,5,4′,4′,5′,5′-八甲基-[2,2′]二[[1,3,2]二氧杂硼戊环基

Xantphos ＝ 4,5-双(二苯膦基)-9,9-二甲基二苯并哌喃

Xphos ＝二环已基膦基-2′,4′,6′-三异丙基联二苯

试剂和溶剂购自商业供货商(Aldrich、Fluka、Sigma等)且不经进一步纯化即使用。通过薄层色谱(TLC)、分析型高效液相色谱(anal.HPLC)和质谱分析监测反应混合物的进展。如在各反应中具体描述来处理反应混合物；通常通过萃取和其它纯化方法(如温度依赖性和溶剂依赖性结晶和沈淀)来纯化反应混合物。另外，通过管柱色谱或通过制备型HPLC，典型地使用C18或BDS管柱填充物和常规洗脱剂来常规纯化反应混合物。下文描述典型的制备型HPLC条件。

通过质谱和¹H-NMR光谱常规进行反应产物的表征。对于NMR分析，样品溶解于氘化溶剂(如CD₃OD、CDCl₃或d₆-DMSO)中，且在标准观测条件下用瓦瑞安(Varian)Gemini 2000仪器(400MHz)获得¹H-NMR光谱。通过电喷雾电离法(ESMS)用耦接到自动纯化系统的AppliedBiosystems(福斯特城，加州)型号API 150EX仪器或Waters(米尔福德，麻州)3100仪器，来进行化合物的质谱鉴定。

制备型HPLC条件

方法1

粗化合物以约50mg/mL溶解于1:1水:乙酸中。使用2.1×50mm C18管柱进行4分钟分析规模的测试操作，接着使用100μL注射液，使用基于分析规模的测试操作的B滞留％，进行15或20分钟制备型规模操作。准确的梯度依赖于样品。用21×250mm C18管柱和/或21×150mm C14管柱检查具有紧密操作杂质的样品以进行最佳分离。通过质谱分析鉴定含有所期望产物的洗脱份。

制备型HPLC条件

方法2

分析型HPLC条件

方法3

梯度：总计30min(时间(min)/％B)：0/2、10/20、24/90、26/90、27/2、30/2

制备1：(1R,3s,5S)-3-((7-氯-1,6-萘啶-5-基)氨基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酸叔丁酯

向20mL小瓶中添加5,7二氯-1,6-萘啶(289.1mg，1.45mmol)、(1R,3s,5S)-3-氨基-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酸叔丁酯(362mg，1.60mmol)、DIPEA(0.76mL，4.36mmol)和DMSO(7.26mL)。将小瓶加盖且将反应混合物加热到110℃且搅拌16小时。将反应混合物用水稀释且用EtOAc(3×20mL)萃取。将经合并的有机洗脱份经硫酸钠干燥，过滤且浓缩，得到棕色油状物，其通过管柱色谱(24g管柱；0-80％于己烷中的EtOAc)纯化，得到呈淡黄色固体状的标题产物(455.2mg，69％产率；85％纯度)。(m/z):[M+H]⁺C₂₀H₂₅ClN₄O₂的计算值389.17、391.16，实验值391.5。

制备2：N⁵-((1R,3s,5S)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)-N⁷-(5-甲基-1H-吡唑-3-基)-1,6-萘啶-5,7-二胺

(a)(1R,3s,5S)-3-((7-((1-(叔丁氧基羰基)-5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)-1,6-萘啶-5-基)氨基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酸叔丁酯

向20mL小瓶中添加(1R,3s,5S)-3-((7-氯-1,6-萘啶-5-基)氨基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酸叔丁酯(474.6mg，1.22mmol)、3-氨基-5-甲基-1H-吡唑-1-甲酸叔丁酯(289mg，1.46mmol)、氯[2-(二环已基膦基)-3,6-二甲氧基-2′-4′-6′-三异丙基-1,1′-联二苯][2-(2-氨基乙基)苯基]钯(II)(58mg，0.073mmol)和碳酸铯(517mg，1.59mmol)。用橡胶隔膜密封小瓶且用氮气吹扫氛围。随后经由针筒添加二恶烷(6.10mL)，且用白色帽快速替换隔膜。将反应混合物加热到110℃且搅拌26小时且冷却到室温。将悬浮液用水和盐水稀释且用EtOAc(4×20mL)萃取。将经合并的有机洗脱份经硫酸钠干燥，过滤且浓缩，得到棕色泡沫状固体，其直接用于下一步骤。(m/z):[M+H]⁺C₂₉H₃₉N₇O₄的计算值550.31，实验值550.8。

(b)N⁵-((1R,3s,5S)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)-N⁷-(5-甲基-1H-吡唑-3-基)-1,6-萘啶-5,7-二胺

向先前步骤的产物(671mg，1.22mmol)中添加DCM(3.05mL)，随后添加TFA(3.05mL)，且在室温下将反应混合物搅拌4小时且浓缩，得到粘稠红色油状物。将粗油状物溶解于包含0.1mL ACN(10mL)的15％乙酸于水中的溶液中，且通过制备型HPLC(方法1)纯化，得到呈红色/橙色固体状的标题产物的双三氟乙酸盐(705mg，73％产率；97％纯度)。(m/z):[M+H]⁺C₁₉H₂₃N₇的计算值350.20，实验值350.5。

制备3：(1R,3s,5S)-3-((7-氯-1,6-萘啶-5-基)氨基)-9-氮杂双环[3.3.1]壬烷-9-甲酸叔丁酯

向40mL小瓶中添加5,7-二氯-1,6-萘啶(510mg，2.56mmol)、(1R,3s,5S)-3-氨基-9-氮杂双环[3.3.1]壬烷-9-甲酸叔丁酯(677mg，2.82mmol)、DIPEA(1.34mL，7.69mmol)和DMSO(8.54mL)。将小瓶加盖且将反应混合物加热到110℃且搅拌16小时。将反应混合物用水和盐水稀释且用EtOAc(4×30mL)萃取。将经合并的有机洗脱份经硫酸钠干燥，过滤且浓缩，得到呈棕色固体状的所需产物，将其溶解于最少量的DCM中且吸附于

上，通过管柱色谱(40g管柱；0-100％于己烷中的EtOAc)纯化，得到呈黄色固体状的标题产物(901.6mg，86％产率；99％纯度)。(m/z):[M+H]⁺C₂₁H₂₇ClN₄O₂的计算值403.18，实验值403.3。

制备4：N⁵-((1R,3s,5S)-9-氮杂双环[3.3.1]壬-3-基)-N⁷-(5-甲基-1H-吡唑-3-基)-1,6-萘啶-5,7-二胺

(a)(1R,3s,5S)-3-((7-((1-(叔丁氧基羰基)-5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)-1,6-萘啶-5-基)氨基)-9-氮杂双环[3.3.1]壬烷-9-甲酸叔丁酯

向100mL圆底烧瓶中添加制备3的产物(876.4mg，2.18mmol)、3-氨基-5-甲基-1H-吡唑-1-甲酸叔丁酯(515mg，2.61mmol)、氯[2-(二环已基膦基)-3,6-二甲氧基-2′-4′-6′-三异丙基-1,1′-联二苯][2-(2-氨基乙基)苯基]钯(II)甲基叔丁基醚加合物(104mg，0.131mmol)和碳酸铯(921mg，2.83mmol)。用橡胶隔膜密封烧瓶且用氮气吹扫氛围。经由针筒添加二恶烷(21.75mL)。将具有附着氮气球囊的冷凝器添加到烧瓶中，且将反应混合物加热到110℃且搅拌20小时。将反应混合物冷却到室温，用盐水稀释且用EtOAc(4×30mL)萃取。将经合并的有机洗脱份经硫酸钠干燥，过滤且浓缩，得到粗棕色固体，其不经进一步纯化即用于下一步骤。

(b)N⁵-((1R,3s,5S)-9-氮杂双环[3.3.1]壬-3-基)-N⁷-(5-甲基-1H-吡唑-3-基)-1,6-萘啶-5,7-二胺

向先前步骤的产物(1.226g，2.175mmol)中添加DCM(5.44mL)和TFA(5.44mL)。用经针穿透的橡胶隔膜覆盖烧瓶。在室温下搅拌溶液4小时且浓缩，得到暗红色油状物。将粗物质溶解于3:1:0.25水:乙酸:乙腈溶液(18mL)中，过滤且通过制备型HPLC分两批纯化，得到呈红色固体状的标题产物的双三氟乙酸盐(991.1mg，75％产率；97％纯度)。(m/z):[M+H]⁺C₂₀H₂₅N₇的计算值364.22，实验值364.1。

制备5：5,7-二氯-1,6-萘啶-2-醇

(a)N-(2,6-二氯吡啶-4-基)特戊酰胺

在0℃下向2,6-二氯吡啶-4-胺(80.0g，491mmol)和TEA(99.8g，982mmol)于DCM(800mL)中的混合物中添加特戊酰氯(118.0g，982mmol)，且将混合物在20℃下搅拌13小时，过滤，用DCM萃取，用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤，在真空中浓缩，且随后通过从DCM再结晶来纯化，得到呈白色固体状的标题中间物(90g，70％产率)。

(b)N-(2,6-二氯-3-甲酰基吡啶-4-基)特戊酰胺

在-78℃下向先前步骤的产物(24.0g，97.1mmol)于THF(250mL)中的混合物中添加叔丁基锂(224mL，291.3mmol)，且在-78℃下搅拌反应混合物1.5小时。添加DMF(22.7g，291.3mmol)，在-78℃下搅拌反应混合物3小时且添加6M HCl。将反应混合物用EtOAc萃取，用盐水洗涤，干燥，浓缩且通过管柱色谱纯化。合并三个相同反应的产物，得到标题中间物(36g，45％产率)。

(c)3-(2,6-二氯-4-特戊酰氨基吡啶-3-基)-3-羟基丙酸叔丁酯

将二异丙基胺(17.2g，170.8mmol)溶解于THF(100mL)中且冷却到-78℃，且随后在-78℃下逐滴添加正丁基锂(68.3mL，170.8mmol)。在-78℃下搅拌混合物0.5小时，且随后在-78℃下逐滴添加溶解于THF(100mL)中的乙酸叔丁酯(19.8g，170.8mmol)。在-78℃下搅拌反应混合物0.5小时，且随后在-78℃下逐滴添加溶解于THF(150mL)中的先前步骤的产物(18g，65.7mmol)，且在-78℃下搅拌混合物1.0小时。添加氯化铵水溶液且用EtOAc(2×800mL)萃取反应混合物。将有机层干燥且蒸发，且通过管柱色谱纯化残余物。合并两个相同反应的产物，得到呈白色固体状的标题中间物(58g)。

(d)5,7-二氯-1,6-萘啶-2-醇

将HCl水溶液(400mL)添加到溶解于二恶烷(400mL)中的3-(2,6-二氯-4-特戊酰氨基吡啶-3-基)-3-羟基丙酸叔丁酯(64g，164mmol)中，且在100℃下搅拌反应混合物12小时。添加水且过滤反应混合物，得到呈白色固体状的标题中间物(33g，94％产率)。

制备6：(1R,3s,5S)-3-((2-(羟基甲基)-7-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)-1,6-萘啶-5-基)氨基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酸叔丁酯

(a)(1R,3s,5S)-3-((7-氯-2-羟基-1,6-萘啶-5-基)氨基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酸叔丁酯

向5,7-二氯-1,6-萘啶-2-醇(7.0g，32.5mmol)和(1R,3s,5S)-3-氨基-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酸叔丁酯(8.1g，35.8mmol)于DMSO(70mL)中的混合物中添加DIPEA(8.4g，65.0mmol)。将反应混合物加热到110℃后维持8小时，倒入水中，过滤，且用EtOAc(200mL)洗涤，得到呈黄色固体状的标题中间物(10g，75％产率)。

(b)(1R,3s,5S)-3-((7-氯-2-(((三氟甲基)磺酰基)氧基)-1,6-萘啶-5-基)氨基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酸叔丁酯

在0℃下向先前步骤的产物(10g，24mmol)和碳酸铯(15.6g，48mmol)于DMF(100mL)中的溶液中逐滴添加N-苯基-双(三氟甲基磺酰亚胺)(17.0g，48mmol)于DMF(100mL)中的溶液，且在20℃下搅拌反应混合物2小时。添加水(200mL)，且将反应混合物用EtOAc(400mL)萃取，用盐水(100mL)洗涤，经硫酸钠干燥，且浓缩，得到粗标题中间物(14g)，其直接用于下一步骤。

(c)5-(((1R,3s,5S)-8-(叔丁氧基羰基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)氨基)-7-氯-1,6-萘啶-2-甲酸甲酯

向先前步骤的产物(14g，26mmol)于MeOH(280mL)中的溶液中添加Pd(dppf)Cl₂(2.0g，2.6mmol)和TEA(5.3g，52mmol)，且在CO氛围(50psi)下将反应混合物加热到50℃后维持12小时。将反应混合物过滤，用水(100mL)稀释，用EtOAc(300mL)萃取，用盐水(50mL)洗涤，经硫酸钠干燥，浓缩且通过管柱色谱纯化，得到标题中间物(8.0g，70％产率)。(m/z):[M+H]⁺C₂₂H₂₇ClN₄O₄的计算值447.17，实验值447.1。

(d)7-((1-(叔丁氧基羰基)-5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)-5-(((1R,3s,5S)-8-(叔丁氧基羰基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)氨基)-1,6-萘啶-2-甲酸甲酯

在氮气下向先前步骤的产物(8.0g，17.8mmol)、3-氨基-5-甲基-1H-吡唑-1-甲酸叔丁酯(4.5g，21.5mmol)和碳酸铯(7.1g，21.5mmol)于二恶烷(80mL)中的混合物中添加PdXPhos(2.8g，3.56mmol)。在100℃下将反应混合物搅拌12小时，用EtOAc(150mL)稀释，用水(50mL)和盐水(30mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，浓缩且通过管柱色谱纯化，得到标题中间物(3.0g，72％产率)。(m/z):[M+H]⁺C₃₁H₄₁N₇O₆的计算值608.31，实验值608.3。

(e)(1R,3s,5S)-3-((2-(羟基甲基)-7-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)-1,6-萘啶-5-基)氨基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酸叔丁酯

在0℃下向硼氢化钠(225mg，5.91mmol)于MeOH(565mg，17.6mmol)和THF(10mL)中的溶液中添加先前步骤的产物(500mg，0.98mmol)于THF(40mL)中的溶液，且在50℃下搅拌反应混合物2小时。添加水(15mL)，随后添加EtOAc(150mL)。将反应混合物用盐水(30mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，浓缩且通过制备型HPLC(方法2)纯化，得到标题产物(840mg，46％产率)。(m/z):[M+H]⁺C₂₅H₃₃N₇O₃的计算值480.26，实验值480.2。

制备7：2-(溴甲基)-5,7-二氯-1,6-萘啶

(a)2-(2-乙氧基-2-侧氧基乙基)-6-甲基烟碱酸

向叔丁醇钾(90.2g，804mmol)于异丙醇(600mL)中的混合物中添加乙酰乙酸乙酯(69.8g，536mmol)。在室温下搅拌反应混合物1小时，随后添加乙酸铜(4.8g，26.8mmol)，随后添加2-氯-6-甲基烟碱酸(46.0g，268mmol)，且在80℃下搅拌反应混合物5小时，添加稀HCl以将pH调整到2，且用EtOAc(3×500mL)萃取溶液。将经合并的有机层用盐水洗涤，干燥且浓缩，得到粗产物，其用5:1石油醚:甲苯再结晶，得到呈棕色固体状的标题中间物(47g，79％产率)。

(b)2-甲基-1,6-萘啶-5,7(6H,8H)-二酮

向先前步骤的产物(25g，105.5mmol)于THF(250mL)中的溶液中添加TEA(15.9g，158.2mmol)。将混合物冷却到-10℃且添加氯甲酸乙酯(17.2g，158.2mmol)，且在-10-5℃下搅拌反应混合物1小时。在0-5℃下逐滴添加氢氧化铵(200mL)，且在室温下搅拌反应混合物2小时。合并两个相同反应的产物，且用3M HCl将反应混合物调整到pH 6.5-7.5，在真空下浓缩，在-10-5℃下搅拌1小时，过滤，且在真空下干燥，得到呈棕色固体状的标题中间物(30g粗)。(m/z):[M+H]⁺C₉H₈N₂O₂的计算值177.07，实验值177.1。

(c)5,7-二氯-2-甲基-1,6-萘啶

将先前步骤的产物(10.0g，56.7mmol)溶解于磷酰氯(40mL)中，且在160℃下于100mL密封管中搅拌6小时。通过减压蒸馏移除磷酰氯，且将反应混合物倒入冰/水(400mL)中且用DCM(3×400mL)萃取。将有机层合并，用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，浓缩，且通过急骤色谱纯化残余物，得到呈红色固体状的标题中间产物(3.4g，28％产率)。

(d)2-(溴甲基)-5,7-二氯-1,6-萘啶

向5,7-二氯-2-甲基-1,6-萘啶(5.0g，23.4mmol)于四氯化碳(100mL)中的溶液中添加N-溴丁二酰亚胺(4.17g，23.4mmol)和过氧化苯甲酰(0.28g，1.2mmol)，且在回流下加热反应混合物12小时且浓缩，得到粗产物，其通过硅胶色谱纯化，得到呈红色固体状的标题化合物(3.8g，55％产率)。(m/z):[M+H]⁺C₉H₅BrCl₂N₂的计算值290.90，实验值290.9。

制备8：(1R,3s,5S)-3-((7-氯-2-(吗啉基甲基)-1,6-萘啶-5-基)氨基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酸叔丁酯

(a)4-((5,7-二氯-1,6-萘啶-2-基)甲基)吗啉

在0℃下向2-(溴甲基)-5,7-二氯-1,6-萘啶(1.0g，3.43mmol)于ACN(34.3mL)中的溶液中添加DIPEA(1.79mL，10.28mmol)，随后添加吗啉(0.31mL，3.60mmol)。在0℃到室温下将混合物搅拌隔夜，经由用EtOAc洗涤的

的垫过滤。通过旋转蒸发浓缩经合并的有机洗脱份，得到粗标题产物，其不经纯化即用于下一步骤。(m/z):[M+H]⁺C₁₃H₁₃Cl₂N₃O₂的计算值298.04，实验值298.0。

(b)(1R,3s,5S)-3-((7-氯-2-(吗啉基甲基)-1,6-萘啶-5-基)氨基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酸叔丁酯

在室温下向先前步骤的产物(1020mg，3.42mmol)和(1R,3s,5S)-3-氨基-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酸叔丁酯(774mg，3.42mmol)于DMSO(34.3mL)中的混合物中添加DIPEA(1.787mL，10.26mmol)。在120℃下搅拌所得混合物19小时。通过旋转蒸发移除溶剂，得到粗产物，其通过管柱色谱纯化，得到呈棕色固体状的标题化合物(513mg，30.7％产率)。(m/z):[M+H]⁺C₂₅H₃₄ClN₅O₃的计算值488.24，实验值488.2。

制备9：5,7-二氯-2-((4,4-二氟哌啶-1-基)甲基)-1,6-萘啶

根据制备8(a)的通用程序，用4,4-二氟哌啶取代吗啉，获得标题中间物。(m/z):[M+H]⁺C₁₄H₁₃Cl₂F₂N₃的计算值332.05，实验值332.0。

制备10：5,7-二氯-2-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-1,6-萘啶

根据制备8(a)的通用程序，用1-甲基哌嗪取代吗啉，获得标题中间物。(m/z):[M+H]⁺C₁₄H₁₆Cl₂N₄的计算值311.08，实验值311.0。

制备11：5,7-二氯-3-甲氧基-1,6-萘啶

(a)5,7-二氯-3-碘-1,6-萘啶

在回流下加热5,7-二氯-1,6-萘啶(4.0g，20mmol)和N-碘丁二酰亚胺(9.0g，37mmol)于乙酸(100mL)中的混合物12小时。在真空下浓缩反应混合物，且通过管柱色谱20:1石油醚:EtOAc纯化残余物，得到呈黄色固体状的标题中间物(2.4g，37％产率)。

(b)(5,7-二氯-1,6-萘啶-3-基)

酸

在氮气下向5,7-二氯-3-碘-1,6-萘啶(6.0g，18.5mmol)、双(频哪醇根基)二硼烷(5.2g，20.4mmol)和乙酸钾(3.6g，37.0mmol)于二恶烷(50mL)中的溶液中添加Pd(dppf)₂Cl₂(0.6g)。在90℃下加热反应混合物隔夜且过滤。浓缩滤液，得到呈黄色油状的标题中间物(6g，粗)。

(c)5,7-二氯-1,6-萘啶-3-醇

将先前步骤的产物(6g，粗)溶解于DCM(20mL)中，且在0℃下添加过氧化氢(6mL)。在室温下搅拌反应混合物隔夜，且随后在0℃下将硫代硫酸钠的水溶液(20mL)添加到混合物中。用DCM萃取混合物，将经合并的有机层用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，且浓缩，得到呈黄色固体状的标题中间物(6.0g，粗)。

(d)5,7-二氯-3-甲氧基-1,6-萘啶

在室温下向先前步骤的产物(6.0g，27.9mmol)和碳酸钾(30.6g，83.7mmol)于DMF(50mL)中的混合物中添加碘代甲烷(14.4g，101mmol)。在室温下将反应混合物搅拌2小时，用水(50mL)稀释，用EtOAc(3×100mL)萃取，用盐水(2×30mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤且在真空下浓缩。通过管柱色谱纯化残余物，得到呈黄色固体状的标题化合物(3.0g，46％产率)。

制备12：5-(((1R,3s,5S)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)氨基)-7-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)-1,6-萘啶-3-甲酸甲酯

(a)(1R,3s,5S)-3-((7-氯-3-碘-1,6-萘啶-5-基)氨基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酸叔丁酯

在110℃下加热5,7-二氯-3-碘-1,6-萘啶(7.0g,21.6mol)、DIPEA(5.6g，43.2mmol)和(1R,3s,5S)-3-氨基-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酸叔丁酯(5.8g，25.9mmol)溶解于NMP(70mL)中的溶液3小时。通过管柱色谱(用EtOAc:石油醚0-20％洗脱)纯化反应混合物，得到呈黄色固体状的标题中间物(10.2g，91.8％产率)。

(b)5-(((1R,3s,5S)-8-(叔丁氧基羰基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)氨基)-7-氯-1,6-萘啶-3-甲酸甲酯

将先前步骤的产物(10.1g，19.7mmol)、PdCl₂(dppf)(2.87g，3.94mmol)和TEA(5.97g，59.2mmol)溶解于甲醇(200mL)中，且在60℃下在CO氛围下搅拌反应混合物4小时，过滤且蒸发。通过管柱色谱(用EtOAc:石油醚0-25％洗脱)纯化残余物，得到呈黄色固体状的标题中间物(7.5g，85.6％产率)。

(c)5-(((1R,3s,5S)-8-(叔丁氧基羰基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)氨基)-7-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)-1,6-萘啶-3-甲酸甲酯

将先前步骤的产物(6.6g，14.8mmol)、3-氨基-5-甲基-1H-吡唑-1-甲酸叔丁酯(3.5g，17.7mmol)、碳酸铯(9.61g，29.6mmol)和Pd Xphos(2.32g，2.95mmol)溶解于二恶烷(130mL)中且用氮气净化。在110℃下搅拌反应混合物12小时。将产物与类似反应的产物合并，用EtOAc(600mL)萃取且用盐水(3×300mL)洗涤。蒸发有机层。使残余物结晶，得到标题中间物(5g，58％产率)和2g粗产物，所述粗产物通过制备型HPLC(方法2)纯化。

(d)5-(((1R,3s,5S)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)氨基)-7-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)-1,6-萘啶-3-甲酸甲酯

将先前步骤的产物(5.5g，10.85mmol)溶解于HCl-甲醇(50mL)中，且在室温下将反应混合物搅拌4小时且减压蒸发，得到呈橙色固体状的标题化合物的二盐酸盐(5.2g，100％产率)。(m/z):[M+H]⁺C₂₁H₂₅N₇O₂的计算值408.21，实验值408.1。

制备13：5,7-二氯-4-甲氧基-1,6-萘啶

在100℃下搅拌5,7-二氯-1,6-萘啶-4-醇(7g，32.6mmol)、碘代甲烷(41.22g，290.4mmol)和碳酸银(17.9g，65.2mmol)于甲苯(140mL)中的混合物2小时。将反应混合物过滤且在真空中浓缩且通过管柱色谱纯化，从而获得呈黄色固体状的标题化合物(2.1g，28.1％产率)。(m/z):[M+H]⁺C₉H₆Cl₂N₂O的计算值228.99、230.98，实验值229.1、230.0。

制备14：5,7-二氯-8-氟-1,6-萘啶

(a)2,6-二氯-3-氟吡啶-4-胺

向2,6-二氯吡啶-4-胺(3.0g，18.4mmol)于DMF(30mL)和ACN(30mL)中的混合物中添加SelectFluor(7.8g，22.1mmol)。在80℃下搅拌反应混合物0.5小时，浓缩且通过制备型HPLC(方法2)纯化，得到呈白色固体状的标题中间物(1.5g，45％产率)。(m/z):[M+H]⁺C₅H₃Cl₂FN₂的计算值180.97，实验值180.9。

(b)N-(2,6-二氯-3-氟吡啶-4-基)特戊酰胺

在0℃下向先前步骤的产物(1.5g，8.29mmol)于THF(50mL)中的混合物中添加氢化钠(662mg，16.57mmol)和特戊酰氯(1.12mL，9.12mmol)。在25℃下将反应混合物搅拌2小时，用水稀释，用EtOAc(3×100mL)萃取，干燥且浓缩，得到呈白色固体状的标题中间物(2.0g，90％产率)。

(c)5,7-二氯-8-氟-1,6-萘啶

在-70℃下向先前步骤的产物(2.0g，7.55mmol)于THF(25mL)中的溶液中添加正丁基锂溶液(2.5M，7.5mL，18.9mmol)，且在-10℃下搅拌反应混合物60分钟。在-70℃下历经15分钟添加(E)-3-(二甲基氨基)丙烯醛(1.12g，11.3mmol)于THF(5mL)中的溶液，在-65℃下搅拌反应混合物20分钟，添加HCl(5M，12mL)且在约65℃下搅拌反应混合物12小时。用Na₂CO₃水溶液将反应混合物调整到pH 9，用EtOAc(3×200mL)萃取，干燥且浓缩，得到呈棕色油状的残余物，其通过管柱色谱(用0-30％EtOAc/石油醚洗脱)纯化，得到呈微黄色固体状的标题化合物(1.0g，99％产率)。(m/z):[M+H]⁺C₈H₃Cl₂FN₂的计算值216.97、218.96，实验值217.0、219.0。

制备15：5,7-二氯-8-氟-3-甲基-1,6-萘啶

根据制备14(c)的通用程序，用(E)-3-(二甲基氨基)-2-甲基丙烯醛取代(E)-3-(二甲基氨基)丙烯醛，获得标题中间物。(m/z):[M+H]⁺C₉H₅Cl₂FN₂的计算值230.98、232.98，实验值231.0、233.0。

制备16：(1R,3s,5S)-3-((7-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)-3-(甲基磺酰基)-1,6-萘啶-5-基)氨基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酸叔丁酯

(a)(1R,3s,5S)-3-((7-氯-3-(甲硫基)-1,6-萘啶-5-基)氨基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酸叔丁酯

在90℃下将(1R,3s,5S)-3-((7-氯-3-碘-1,6-萘啶-5-基)氨基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酸叔丁酯(6.5g，12.6mmol)、硫代甲醇钠(3.0g，42.8mmol)、Pd₂(dba)₃(1.1g，1.26mmol)和Xantphos(728mg，1.26mmol)于3:70水:甲苯(73mL)中的混合物搅拌12小时，且在真空下浓缩。通过管柱色谱(1:3EtOAc:石油醚)纯化残余物，得到呈黄色固体状的标题中间物(5g，90％产率)。

(b)(1R,3s,5S)-3-((7-氯-3-(甲基磺酰基)-1,6-萘啶-5-基)氨基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酸叔丁酯

在0℃下向先前步骤的产物(4.5g，10mmol)于DCM(1000mL)中的溶液中添加间氯过氧苯甲酸(5.2g，30mmol)，且在0℃下将反应混合物搅拌3小时，用10％NaOH(3×200mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥且过滤。在真空下浓缩滤液，得到呈黄色固体状的标题中间物(4.2g，90％产率)。

(c)(1R,3s,5S)-3-((7-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)-3-(甲基磺酰基)-1,6-萘啶-5-基)氨基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酸叔丁酯

在氮气下在110℃下将先前步骤的产物(4.2g，9.0mmol)、3-氨基-5-甲基-1H-吡唑-1-甲酸叔丁酯(2.7g，13.5mmol)、PdXphos(1.4g，1.8mmol)和碳酸铯(5.9g，18.0mmol)于二恶烷(120mL)中的混合物搅拌12小时，且在真空下浓缩。通过管柱色谱(1:50甲醇:DCM)纯化残余物，得到呈黄色固体状的标题产物(4.0g，85％产率)。(m/z):[M+H]⁺C₂₅H₃₃N₇O₄S的计算值528.23，实验值528.1。

制备17：(1R,3s,5S)-3-((7-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)-3-(甲基磺酰基)-1,6-萘啶-5-基)氨基)-9-氮杂双环[3.3.1]壬烷-9-甲酸叔丁酯

根据制备16的通用程序，用(1R,3s,5S)-3-((7-氯-3-碘-1,6-萘啶-5-基)氨基)-9-氮杂双环[3.3.1]壬烷-9-甲酸叔丁酯取代步骤(a)中的(1R,3s,5S)-3-((7-氯-3-碘-1,6-萘啶-5-基)氨基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酸叔丁酯，制备呈黄色固体状的标题中间物。(m/z):[M+H]⁺C₂₆H₃₅N₇O₄S的计算值542.25，实验值542.1。

制备18：5,7-二氯-2-((甲基磺酰基)甲基)-1,6-萘啶

向20mL小瓶中添加2-(溴甲基)-5,7-二氯-1,6-萘啶(307mg，1.052mmol)、甲烷亚磺酸钠85％(107mg，1.052mmol)和DMF(5.26mL)。将小瓶加盖，且将反应混合物加热到45℃且搅拌1.5小时，冷却到室温且通过旋转蒸发浓缩。用水稀释溶液；形成白色沈淀物，其通过过滤移除，且用水和己烷洗涤，得到呈茶色固体状的标题中间物(259mg，85％产率)。(m/z):[M+H]⁺C₁₀H₈Cl₂N₂O₂S的计算值290.97，实验值290.9。

实例1：3-((1R,3s,5S)-3-((7-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)-1,6-萘啶-5-基)氨基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)丙腈

向20mL小瓶中添加N⁵-((1R,3s,5S)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)-N⁷-(5-甲基-1H-吡唑-3-基)-1,6-萘啶-5,7-二胺双三氟乙酸盐(462.4mg，0.80mmol)、甲醇(4mL)和DIPEA(0.70mL，4.00mmol)。在室温下搅拌反应混合物5分钟，且随后缓慢添加丙烯腈(0.058mL，0.88mmol，100mL)。将小瓶加盖，且在室温下将反应混合物搅拌20小时，浓缩，溶解于15％乙酸于水中的溶液中，且通过制备型HPLC(方法1)纯化。将洗脱份合并，冻干，溶解于15％于水中的乙酸中，且通过反相HPLC来纯化。将洗脱份合并且冻干，得到呈亮红色固体状的标题化合物(505mg，52％产率；98％纯度)。(m/z):[M+H]⁺C₂₂H₂₆N₈的计算值403.23，实验值403.7。

实例2：N⁵-((1R,3s,5S)-8-(2-氟乙基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)-N⁷-(5-甲基-1H-吡唑-3-基)-1,6-萘啶-5,7-二胺

向250mL烧瓶中添加N⁵-((1R,3s,5S)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)-N⁷-(5-甲基-1H-吡唑-3-基)-1,6-萘啶-5,7-二胺二盐酸盐(5.027g，11.90mmol)、碳酸钾(9.87g，71.4mmol)和DMF(59.5mL)。在室温下搅拌反应混合物10分钟，且随后一次性添加1-溴-2-氟乙烷(1.064mL，14.28mmol)。烧瓶安装有空气冷凝器，且将反应混合物为加热到40℃且搅拌隔夜。添加另一部分1-溴-2-氟乙烷，且将反应混合物加热到60℃且搅拌24小时。添加另一部分1-溴-2-氟乙烷，且在室温下再搅拌反应混合物24小时。将悬浮液分于四个小瓶中且通过旋转蒸发浓缩，得到呈红色固体状的粗产物。将各小瓶中的物质溶解于约1:1水：乙酸中，过滤且通过制备型HPLC(方法1)纯化，得到所需产物(总计2.31g，48％产率，97％纯度)。(m/z):[M+H]⁺C₂₁H₂₆FN₇的计算值396.22，实验值396.2。

实例3：N⁷-(5-甲基-1H-吡唑-3-基)-N⁵-((1R,3s,5S)-8-(吡啶-3-基磺酰基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)-1,6-萘啶-5,7-二胺

将DIPEA(0.815mL，4.66mmol)和N⁵-((1R,3s,5S)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)-N⁷-(5-甲基-1H-吡唑-3-基)-1,6-萘啶-5,7-二胺单三氟乙酸盐(300mg，0.78mmol)于DMF(6mL)中的混合物冷却到0℃，且随后添加吡啶-3-磺酰氯(0.093mL，0.39mmol)，且搅拌溶液20分钟。在真空下移除溶剂且将粗残余物溶解于1:1乙酸:水(1mL)中，且通过反相HPLC纯化，得到呈橙色固体状的标题化合物的单三氟乙酸盐(156.5mg，33％产率)。(m/z):[M+H]⁺C₂₄H₂₆N₈O₂S的计算值491.19，实验值491。

实例4：2-(二甲基氨基)-1-((1R,3s,5S)-3-((7-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)-1,6-萘啶-5-基)氨基)-9-氮杂双环[3.3.1]壬-9-基)乙-1-酮

向20mL小瓶中添加二甲基甘氨酸盐酸盐(31mg，0.22mmol)、HATU(85mg，0.22mmol)和DMF(1mL)。在室温下搅拌澄清溶液15分钟，随后添加N⁵-((1R,3s,5S)-9-氮杂双环[3.3.1]壬-3-基)-N⁷-(5-甲基-1H-吡唑-3-基)-1,6-萘啶-5,7-二胺双三氟乙酸盐(120mg，0.20mmol)。在室温下搅拌反应混合物30分钟，且随后添加DIPEA(0.18mL，1.01mmol)。在室温下将所得反应混合物搅拌2天，且通过旋转蒸发浓缩，得到粘稠的深棕色油状物。将粗油状物溶解于2:1水:乙酸中，过滤且通过反相HPLC纯化。将洗脱份合并且冻干，得到呈红色固体状的标题化合物的双三氟乙酸盐(23mg，25％产率，100％纯度)。(m/z):[M+H]⁺C₂₄H₃₂N₈O的计算值449.27，实验值449.2。

实例5：2,2-二氟-1-((1R,3s,5S)-3-((7-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)-1,6-萘啶-5-基)氨基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)乙-1-酮

向20mL小瓶中添加二氟乙酸(0.026mL，0.42mmol)、HATU(159mg，0.42mmol)和DMF(1.91mL)。在室温下搅拌澄清溶液10分钟，随后一次性添加N⁵-((1R,3s,5S)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)-N⁷-(5-甲基-1H-吡唑-3-基)-1,6-萘啶-5,7-二胺双三氟乙酸盐(220mg，0.38mmol)。在室温下搅拌所得红色溶液20分钟，且添加DIPEA(0.33mL，1.91mmol)。将小瓶加盖，且在室温下将反应混合物搅拌隔夜，且通过旋转蒸发浓缩，得到粘稠的红色油状物。将粗油状物溶解于约3:1水:乙酸中，过滤，且通过制备型HPLC(方法1)纯化，得到呈红色固体状的所需产物。将洗脱份合并，溶解于2:1水:乙酸中，且通过制备型HPLC(方法1)纯化，得到呈红色固体状的标题产物的单三氟乙酸盐(77mg，36％产率；96％纯度)。(m/z):[M+H]⁺C₂₁H₂₃F₂N₇O的计算值428.19，实验值428.1。

实例6：N⁵-((1R,3s,5S)-8-((2-甲氧基乙基)磺酰基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)-N⁷-(5-甲基-1H-吡唑-3-基)-1,6-萘啶-5,7-二胺

向4mL小瓶中添加N⁵-((1R,3s,5S)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)-N⁷-(5-甲基-1H-吡唑-3-基)-1,6-萘啶-5,7-二胺双三氟乙酸盐(30mg，0.052mmol)、DIPEA(0.045mL，0.26mmol)和DMF(1.15mL)。将溶液冷却到0℃且将2-甲氧基-1-乙磺酰氯(12mg，0.078mmol)于DMF(1.15mL)中的溶液缓慢添加到冷反应混合物中。用DMF(1.15mL)冲洗含有磺酰氯的小瓶，且将冲洗液添加到含有反应溶液的小瓶中，将小瓶加盖且在0℃下搅拌30分钟，升温到室温，且搅拌6小时。通过旋转蒸发浓缩溶液，得到红色油状物，将其溶解于3:1水:乙酸中，过滤且通过反相HPLC纯化，得到标题化合物的单三氟乙酸盐(12.3mg，100％纯度)。(m/z):[M+H]⁺C₂₂H₂₉N₇O₃S的计算值472.21，实验值472.2。

实例7：N⁵-((1R,3s,5S)-8-(乙基磺酰基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)-N⁷-(5-甲基-1H-吡唑-3-基)-1,6-萘啶-5,7-二胺

根据实例6的程序，使用乙基磺酰氯(0.007mL，0.078mmol)替代2-甲氧基-1-乙磺酰氯，来制备标题化合物的单三氟乙酸盐(10.1mg，100％纯度)。(m/z):[M+H]⁺C₂₁H₂₇N₇O₂S的计算值442.20，实验值442.2。

实例8：N⁷-(5-甲基-1H-吡唑-3-基)-N⁵-((1R,3s,5S)-9-(吡啶-3-基磺酰基)-9-氮杂双环[3.3.1]壬-3-基)-1,6-萘啶-5,7-二胺

将N⁵-((1R,3s,5S)-9-氮杂双环[3.3.1]壬-3-基)-N⁷-(5-甲基-1H-吡唑-3-基)-1,6-萘啶-5,7-二胺二盐酸盐(43.6mg，0.10mmol)和DIPEA(0.105mL，0.60mmol)于DMF(1mL)中的混合物冷却到0℃且添加吡啶-3-磺酰氯(17.8mg，0.10mmol)。将溶液搅拌隔夜，使其逐渐升温到室温，在真空中浓缩到干燥，溶解于2:1水:乙酸(1.5mL)中，针筒过滤(0.2微米)，且通过反相HPLC纯化，得到标题化合物的单三氟乙酸盐(24mg，94.4％纯度)。(m/z):[M+H]⁺C₂₅H₂₈N₈O₂S的计算值505.21，实验值505.2。

实例9：N⁷-(5-甲基-1H-吡唑-3-基)-N⁵-((1R,3s,5S)-9-(苯基磺酰基)-9-氮杂双环[3.3.1]壬-3-基)-1,6-萘啶-5,7-二胺

根据实例8的准确程序，用苯磺酰氯(17.7mg，0.10mmol)取代吡啶-3-磺酰氯(17.8mg，0.10mmol)，获得标题化合物的单三氟乙酸盐(7mg，94.4％纯度)。(m/z):[M+H]⁺C₂₅H₂₈N₈O₂S的计算值504.21，实验值504.1。

实例10：N⁵-((1R,3s,5S)-9-(乙基磺酰基)-9-氮杂双环[3.3.1]壬-3-基)-N⁷-(5-甲基-1H-吡唑-3-基)-1,6-萘啶-5,7-二胺

向20mL小瓶中添加N⁵-((1R,3s,5S)-9-氮杂双环[3.3.1]壬-3-基)-N⁷-(5-甲基-1H-吡唑-3-基)-1,6-萘啶-5,7-二胺双三氟乙酸盐(100mg，0.17mmol)、DIPEA(0.148mL，0.85mmol)和DMF(0.85mL)。将溶液冷却到0℃且将乙基磺酰氯(26mg，0.20mmol)于DMF(0.85mL)中的溶液逐滴添加到冷反应混合物中。用DMF(0.85mL)冲洗含有磺酰氯的小瓶，且将冲洗液添加到含有反应溶液的小瓶中，在0℃下将其搅拌15分钟，升温到室温，且搅拌20小时。通过旋转蒸发浓缩溶液，得到暗红色油状物，将其溶解于3:1水:乙酸混合物(3mL)中，过滤且通过制备型HPLC(方法1)纯化，得到标题化合物的单三氟乙酸盐(13mg，93％纯度)。(m/z):[M+H]⁺C₂₂H₂₉N₇O₂S的计算值456.21，实验值456.1。

实例11：1-(((1R,3s,5S)-3-((7-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)-1,6-萘啶-5-基)氨基)-9-氮杂双环[3.3.1]壬-9-基)磺酰基)氮杂环丁烷-3-甲腈

将N⁵-((1R,3s,5S)-9-氮杂双环[3.3.1]壬-3-基)-N⁷-(5-甲基-1H-吡唑-3-基)-1,6-萘啶-5,7-二胺二盐酸盐(58mg，0.067mmol)和DIPEA(0.584mL，0.335mmol)于DMF(1mL)中的混合物冷却到0℃且添加3-氰基-1-氮杂环丁烷磺酰氯(24mg,0.067mmol)。将溶液搅拌隔夜，使其逐渐升温到室温，在真空中浓缩到干燥，溶解于1:1水:乙酸(1.5mL)中，针筒过滤(0.2微米)，且通过反相HPLC纯化，得到标题化合物的单三氟乙酸盐(7.8mg，100％纯度)。(m/z):[M+H]⁺C₂₄H₂₉N₉O₂S的计算值508.22，实验值508.6。

实例12：(1R,3s,5S)-3-((2-(羟基甲基)-7-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)-1,6-萘啶-5-基)氨基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酸异丁酯

(a)(5-(((1R,3s,5S)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)氨基)-7-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)-1,6-萘啶-2-基)甲醇

向40mL小瓶中添加(1R,3s,5S)-3-((2-(羟基甲基)-7-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)-1,6-萘啶-5-基)氨基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酸叔丁酯(146.6mg，0.31mmol)、4M于二恶烷中的HCl(1.53mL，6.11mmol)和二恶烷(1.53mL)。将小瓶加盖，且在室温下将反应混合物搅拌6小时，在-78℃下冷冻且冻干，得到呈茶色固体状的标题中间物的二盐酸盐，其不经纯化即用于下一反应。(m/z):[M+H]⁺C₂₀H₂₅N₇O的计算值380.21，实验值380.1。

(b)(1R,3s,5S)-3-((2-(羟基甲基)-7-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)-1,6-萘啶-5-基)氨基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酸异丁酯

向先前步骤的产物(138mg，0.31mmol)中添加DMF(1.53mL)和DIPEA(0.32mL，1.83mmol)。将溶液冷却到0℃，且随后逐滴添加氯甲酸异丁酯(0.04mL，0.31mmol)。将小瓶加盖，且在0℃下将反应混合物搅拌30分钟，随后升温到室温，搅拌1小时，且通过旋转蒸发浓缩，得到红色固体。将固体将溶解于2:1乙酸:水中，过滤，且通过制备型HPLC(方法1)纯化，得到呈橙色/红色固体状的标题化合物的单三氟乙酸盐(104.2mg，57％产率；99％纯度)。(m/z):[M+H]⁺C₂₅H₃₃N₇O₃的计算值480.26，实验值480.2。

实例13：1-(((1R,3s,5S)-3-((7-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)-1,6-萘啶-5-基)氨基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)磺酰基)氮杂环丁烷-3-甲腈

将N⁵-((1R,3s,5S)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)-N⁷-(5-甲基-1H-吡唑-3-基)-1,6-萘啶-5,7-二胺双三氟乙酸盐(77mg，0.067mmol)和DIPEA(0.584mL，0.335mmol)于DMF(1mL)中的混合物冷却到0℃且添加3-氰基-1-氮杂环丁烷磺酰氯(24mg,0.067mmol)。将溶液搅拌隔夜，使其逐渐升温到室温，在真空中浓缩到干燥，溶解于1:1水:乙酸(1.5mL)中，针筒过滤(0.2微米)，且通过反相HPLC纯化，得到标题化合物的单三氟乙酸盐(5.3mg，100％纯度)。(m/z):[M+H]⁺C₂₃H₂₇N₉O₂S的计算值494.20，实验值494.6。

实例14：N⁵-((1R,3s,5S)-9-((5-氟吡啶-3-基)磺酰基)-9-氮杂双环[3.3.1]壬-3-基)-N⁷-(5-甲基-1H-吡唑-3-基)-1,6-萘啶-5,7-二胺

将N⁵-((1R,3s,5S)-9-氮杂双环[3.3.1]壬-3-基)-N⁷-(5-甲基-1H-吡唑-3-基)-1,6-萘啶-5,7-二胺二盐酸盐(30.2mg，0.069mmol)和DIPEA(0.072mL，0.41mmol)于DMF(1mL)中的混合物冷却到0℃且添加5-氟吡啶-3-磺酰氯(13.5mg，0.069mmol)。将溶液搅拌隔夜，使其逐渐升温到室温，在真空中浓缩到干燥，溶解于2:1水:乙酸(1.5mL)中，针筒过滤(0.2微米)，且通过反相HPLC纯化，得到标题化合物的单三氟乙酸盐(20mg，100％纯度)。(m/z):[M+H]⁺C₂₅H₂₇FN₈O₂S的计算值523.20，实验值523.2。

实例15：N^7-(5-甲基-1H-吡唑-3-基)-2-(吗啉基甲基)-N⁵-((1R,3s,5S)-8-(2,2,2-三氟乙基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)-1,6-萘啶-5,7-二胺

在20℃下向N⁵-((1R,3s,5S)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)-N⁷-(5-甲基-1H-吡唑-3-基)-2-(吗啉基甲基)-1,6-萘啶-5,7-二胺(81mg，0.181mmol)和DIPEA(0.126mL，0.722mmol)于DMF(3.62mL)中的溶液中添加2,2,2-三氟乙基三氟甲烷-磺酸酯(0.030mL，0.217mmol)。在20℃下将混合物搅拌3天，通过旋转蒸发浓缩，且通过制备型HPLC(方法1)纯化，得到呈红色固体状的标题化合物(22.1mg，19％产率)。(m/z):[M+H]⁺C₂₆H₃₃F₃N₈O的计算值531.27，实验值531.2。

实例16：7-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)-5-(((1R,3s,5S)-8-(2-侧氧基四氢-2H-哌喃-3-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)氨基)-1,6-萘啶-3-甲酸甲酯

向5-(((1R,3s,5S)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)氨基)-7-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)-1,6-萘啶-3-甲酸甲酯二盐酸盐于甲醇(4mL)中的溶液中添加聚合物结合的碳酸四烷基铵(0.231mmol)，且在室温下将悬浮液搅拌30分钟，过滤且浓缩，得到游离碱性羧酸盐化合物。

向20mL小瓶中添加3-羟基四氢-2H-哌喃-2-酮(0.042mL，0.46mmol)和DCM(0.46mL)。将溶液冷却到-40℃，且添加DIPEA(0.161mL，0.92mmol)，随后添加三氟甲磺酸酐(0.080mL，0.47mmol)。将小瓶加盖且在-40℃下搅拌1小时。1小时后，将游离碱性羧酸盐化合物(0.094g，0.23mmol)溶解于DMF(200μL)中的溶液添加到冷反应混合物中。将小瓶加盖，且在-40℃下将溶液搅拌，且历经2小时缓慢升温到室温，在室温下历经周末搅拌，且通过旋转蒸发浓缩，得到粘稠的棕色油状物。将粗油状物溶解于1:1水:乙酸中，过滤且通过反相HPLC纯化，得到呈亮红色固体状的标题化合物(45mg，27％产率；100％纯度)。(m/z):[M+H]⁺C₂₆H₃₁N₇O₄的计算值506.24，实验值506.1。

实例17：N-甲基-2-((1R,3s,5S)-3-((7-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)-1,6-萘啶-5-基)氨基)-9-氮杂双环[3.3.1]壬-9-基)乙酰胺

将N⁵-((1R,3s,5S)-9-氮杂双环[3.3.1]壬-3-基)-N⁷-(5-甲基-1H-吡唑-3-基)-1,6-萘啶-5,7-二胺三氟乙酸盐(100mg，0.209mmol)、2-溴-N-甲基乙酰胺(33.4mg，0.220mmol)和DIPEA(146uL)于DMF(2mL)中的溶液搅拌隔夜，浓缩且通过反相HPLC纯化，得到标题化合物(50mg，55％产率)。(m/z):[M+H]⁺C₂₃H₃₀N₈O的计算值435.25，实验值435.6。

使用类似合成方法，制备表1-8的化合物。

表1

(a)经分离但未鉴定的立体异构体表2

表3

表4

表5

表6

(a)经分离但未鉴定的立体异构体表7

表8

实例18：结晶溶剂合物3-((1R,3s,5S)-3-((7-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)-1,6-萘啶-5-基)氨基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)丙腈形式II

(a)((1R,3s,5S)-3-((7-氯-1,6-萘啶-5-基)氨基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酸叔丁酯

向2L烧瓶中添加5,7-二氯-1,6-萘啶(45.8g，230mmol)、(1R,3s,5S)-3-氨基-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酸叔丁酯(54.7g，242mmol)和DMSO(458mL)，随后添加DIPEA(64.3mL，368mmol)。在110℃下加热反应混合物12小时，冷却到环境温度且历经45分钟缓慢添加水(458mL)。2小时后，将反应混合物过滤且用1:1DMSO:水(60mL)洗涤，得到湿固体产物(65g)。用MTBE(500mL)分四次洗涤固体，得到标题中间物(74g，190mmol，83％产率)(HPLC方法3，滞留时间20.20分钟)，且浓缩滤液，得到为主要产物的固体(19.5g)将庚烷(195mL)添加到固体(19.5g)中，且将反应混合物搅拌2小时，过滤且用庚烷洗涤，得到另一部分标题中间物(12.3g，31.6mmol，13.75％产率)。HPLC方法3，滞留时间20.20分钟。

(b)((1R,3s,5S)-3-((7-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)-1,6-萘啶-5-基)氨基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酸叔丁酯

将((1R,3s,5S)-3-((7-氯-1,6-萘啶-5-基)氨基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酸叔丁酯(30g，77mmol)、3-氨基-5-甲基-1H-吡唑-1-甲酸叔丁酯(19.78g，100mmol)、Cs₂CO₃(50.3g，154mmol)、PdXPhos(1.517g，1.93mmol)和XPhos(0.919g，1.93mmol)的混合物用氮气脱气3次，且随后添加1,4-二恶烷(300mL)。将反应混合物经氮气脱气5次，加热到回流，搅拌16小时，且冷却到75℃。添加水(90mL)且将反应混合物加热到回流，且在回流下搅拌48小时。缓慢添加水(210mL)，且在室温下将反应混合物搅拌1小时且过滤。将滤饼用1:1二恶烷:水(50mL)洗涤，且在50℃下在真空下干燥隔夜，得到粗标题中间物(35.34g)。

将粗产物溶解于DMF(173mL)中。添加

硫醇官能化的二氧化硅(8.65g)，且在80℃下将反应混合物搅拌45分钟，冷却到室温，过滤且用DMF(35mL)冲洗。向滤液中逐滴添加水(346mL)和通过相同程序的来自先前制备的晶种。在室温下将反应混合物搅拌6小时，过滤，用水(35mL)洗涤且在50℃下在真空下干燥，得到标题中间物(33.6g，97％产率)。HPLC方法3，滞留时间16.89分钟

(c)N⁵-((1R,3s,5S)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)-N⁷-(5-甲基-1H-吡唑-3-基)-1,6-萘啶-5,7-二胺

向((1R,3s,5S)-3-((7-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)-1,6-萘啶-5-基)氨基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酸叔丁酯(15.6g，34.7mmol)于甲醇(78mL)中的悬浮液中在室温下添加存于二恶烷中的4MHCl(87mL，347mmol)。搅拌反应混合物2小时，且逐滴添加二异丙基醚(156mL)。将反应混合物搅拌18小时，过滤，用二异丙基醚(20mL)洗涤，且在50℃下在真空下干燥2小时，得到标题中间物的HCl盐(11.33g，71.2％产率)。HPLC方法3，滞留时间9.87分钟。

(d)3-((1R,3s,5S)-3-((7-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)-1,6-萘啶-5-基)氨基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)丙腈(粗)

在室温下向先前步骤的产物(11.24g，24.50mmol)、DMF(56.2mL)和甲醇(5.75mL)的混合物中逐滴添加DBU(15mL，103mmol)，随后逐滴添加丙烯腈(2.4mL，36.7mmol)。在室温下搅拌反应混合物3小时，且随后历经1小时逐滴添加2:1甲醇:水(225mL)。3小时后，将反应混合物过滤，用1:1甲醇:水(20mL)洗涤，且在50℃下在真空下干燥隔夜，得到标题化合物(9.42g，96％产率)。

(e)3-((1R,3s,5S)-3-((7-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)-1,6-萘啶-5-基)氨基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)丙腈

向粗3-((1R,3s,5S)-3-((7-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)-1,6-萘啶-5-基)氨基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)丙腈(38.6g，96mmol)的混合物中添加DMF(232mL)，随后添加

硫醇官能化的二氧化硅(1.41mmol/g，6.8g)。使混合物升温到75℃且在75℃下搅拌45分钟。将混合物冷却到25℃，过滤，用DMF(1mL)冲洗，且随后将2:1MeOH:水(926mL)逐滴添加到滤液中。将混合物在室温下搅拌隔夜，过滤，用1:1MeOH:水(40mL)洗涤，且在50℃下在真空下干燥，得到呈结晶溶剂合物形式的标题化合物(38g，94mmol，98％产率)。HPLC方法3，滞留时间10.23分钟。通过气相色谱的残余溶剂：甲醇6.6％，N,N-二甲基甲酰胺2.3％，通过卡尔费歇尔分析(KarlFischer analysis)的水1.2％。

实例19：结晶3-((1R,3s,5S)-3-((7-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)-1,6-萘啶-5-基)氨基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)丙腈形式I

(a)N⁵-((1R,3s,5S)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)-N⁷-(5-甲基-1H-吡唑-3-基)-1,6-萘啶-5,7-二胺

向反应器中添加N⁵-((1R,3s,5S)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)-N⁷-(5-甲基-1H-吡唑-3-基)-1,6-萘啶-5,7-二胺(3.4kg，1当量)的三盐酸盐，随后添加水(34kg，10当量)和1NHCl(7kg，2.05当量)以形成反应混合物。添加活性炭(0.22kg，0.064当量)，随后添加

硫醇官能化的二氧化硅(1.7kg，0.5当量)，且在80℃下将反应混合物搅拌16小时，冷却到25℃，且经由硅藻土垫过滤到Nalgene容器。用水(13.6kg，4当量)洗涤反应器，所述水经转移以洗涤过滤器上的滤饼，且收集于Nalgene容器中。

向经收集洗液中添加甲醇(13.6kg，4当量)。将温度调整到20℃且缓慢添加30％w/v NaOH(4.4kg，1.29当量)，使温度保持在低于30℃。在25℃下将所得浆液搅拌3小时，过滤，用水(17kg，5当量)洗涤，且在50℃下在真空中干燥12小时，得到标题中间物(2.3kg，HPLC纯度98.4％)。HPLC方法3，其中32分钟梯度(时间(min)/％B)：0/2、10/20、24/90、27/90、27.1/2、32/2，滞留时间9.4分钟。

(b)3-((1R,3s,5S)-3-((7-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)-1,6-萘啶-5-基)氨基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)丙腈(粗)

向反应器中添加先前步骤的产物(2.1kg，1当量)、DMF(19.7kg，9.4当量)、甲醇(3.4kg，1.6当量)、THF(9.5kg，4.5当量)和DBU(0.92kg，0.44当量)，且在30℃下搅拌反应混合物直到完全溶解。将温度调整到20℃，添加丙烯腈(0.48kg，0.23当量)，搅拌反应混合物16小时，添加水(52.5kg，25当量)，且将温度调整到20℃。将所得浆液搅拌3小时，过滤，用已首先洗涤反应器的甲醇(3.4kg，1.5当量)洗涤，且在50℃下在真空中干燥12小时。将乙醇(21kg，10当量)添加到干燥滤饼中，且在回流下将所得浆液搅拌4小时，冷却到25℃，在25℃下搅拌1小时且过滤。将湿滤饼用乙醇(3.2kg，1.5当量)洗涤且在50℃下在真空中干燥12小时，得到标题中间物(1.8kg，HPLC纯度99.8％)。

(c)结晶溶剂合物3-((1R,3s,5S)-3-((7-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)-1,6-萘啶-5-基)氨基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)丙腈形式II

向反应器中添加先前步骤的产物(1.5kg，1当量)和DMF(8.4kg，5.6当量)，且将反应混合物加热到25℃且搅拌5分钟直到完全溶解。历经1小时添加甲醇(14.3kg，9.5当量)和水(9.0kg，6当量)。在25℃下将所得浆液搅拌16小时，过滤，且用已首先洗涤反应器的甲醇(3.0kg，2当量)洗涤，且在50℃下在真空中干燥12小时，得到标题中间物(1.4kg，HPLC纯度99.8％)。

(d)结晶3-((1R,3s,5S)-3-((7-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)-1,6-萘啶-5-基)氨基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)丙腈形式I

[相对于步骤(c)测量的当量]向反应器中添加先前步骤的产物(1.4kg)，随后添加丙酮(13.8kg，9.2当量)，且在45℃下将所得浆液搅拌18小时，冷却到25℃，在25℃下搅拌30分钟，过滤，用已首先洗涤反应器的丙酮(3.0kg，2当量)洗涤，且在50℃下在真空中干燥12小时，得到呈黄色结晶固体状的标题化合物(1.2kg，HPLC纯度99.8％)。HPLC管柱AgilentPoroshell EC C-18 150×4.6mm，2.7μm，45℃，2.2mL/min，7μL，250nm检测，移动相A：水:ACN:TFA(99:1:0.1)，移动相B：水:ACN:TFA(10:90:0.1)，梯度37分钟(时间(min)/％B)0/4、25/27、30/100、33/100、33.1/4、37/4，滞留时间11.2分钟。

¹H NMR(d₆-DMSO,600mHz)δ(ppm)11.75(s,1H),8.76(s,1H),8.57(d,J＝3Hz,1H),8.41(d,J＝3Hz,1H),7.15(d,J＝5Hz,1H),6.96(dd,J＝3Hz,5Hz,1H),6.67(s,1H),6.20(s,1H),4.55(m,1H),3.33(m,2H),2.63(m,4H),2.22(s,3H),1.70-1.93(m,8H)。

实例20：结晶3-((1R,3s,5S)-3-((7-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)-1,6-萘啶-5-基)氨基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)丙腈形式I

(a)结晶溶剂合物3-((1R,3s,5S)-3-((7-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)-1,6-萘啶-5-基)氨基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)丙腈形式II

向N⁵-((1R,3s,5S)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)-N⁷-(5-甲基-1H-吡唑-3-基)-1,6-萘啶-5,7-二胺(5g，14.31mmol)与DMF(50mL)的混合物中添加DBU(5.39mL，35.8mmol)，随后逐滴添加3-溴丙腈(1.78mL，21.5mmol)。在20-25℃下搅拌反应混合物4小时，且随后历经60分钟逐滴添加3:1甲醇:水(150mL)。在20℃下将反应混合物搅拌20小时，过滤，用3:1甲醇:水(10mL)洗涤，且在真空中在50℃下干燥2小时，得到标题化合物(5.07g，12.60mmol，88％产率)。HPLC方法3，滞留时间10.13分钟。

向先前步骤的产物(1g，2.49mmol)于DMF(6mL)中的混合物中逐滴添加3:1甲醇:水(18mL)。3小时后，将混合物过滤，用甲醇(2mL)洗涤，且在真空中在50℃下干燥18小时，得到标题化合物(0.94g，2.33mmol，94％产率)。HPLC方法3，滞留时间10.17分钟。

(b)结晶3-((1R,3s,5S)-3-((7-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)-1,6-萘啶-5-基)氨基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)丙腈形式I

在室温下将先前步骤的产物(0.6g，1.49mmol)与丙酮(7.2mL)的混合物搅拌18小时，过滤且用丙酮洗涤，得到标题化合物(0.5g，1.24mmol，83％产率)。HPLC方法3，滞留时间10.03分钟。

实例21：结晶3-((1R,3s,5S)-3-((7-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)-1,6-萘啶-5-基)氨基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)丙腈形式I

将3-((1R,3s,5S)-3-((7-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)-1,6-萘啶-5-基)氨基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)丙腈溶剂合物形式II(100g，248mmol)与1,4-二恶烷(1200mL)的混合物加热到95℃，搅拌10小时，冷却到室温，搅拌3小时，过滤，用二恶烷洗涤，且在50℃下干燥6小时，且随后在室温下干燥5天，得到标题化合物(87g，86％产率)。HPLC方法3，滞留时间10.21分钟。

实例22：结晶3-((1R,3s,5S)-3-((7-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)-1,6-萘啶-5-基)氨基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)丙腈形式I

将3-((1R,3s,5S)-3-((7-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)-1,6-萘啶-5-基)氨基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)丙腈溶剂合物形式II(5g，12.42mmol)与甲苯(75mL)的混合物加热到回流4小时，历经30分钟冷却到室温，在室温下搅拌30分钟，过滤，且用甲苯洗涤，得到标题化合物(4.6g，92％产率)。

实例23：结晶3-((1R,3s,5S)-3-((7-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)-1,6-萘啶-5-基)氨基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)丙腈形式I

将3-((1R,3s,5S)-3-((7-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)-1,6-萘啶-5-基)氨基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)丙腈乙醇溶剂合物(1g，2.49mmol)与乙酸丁酯(20mL)的混合物加热到110℃后维持8小时，冷却到室温，在室温下搅拌65小时，过滤，且用水洗涤，得到标题化合物(0.92g，92％产率)。HPLC方法3，滞留时间10.08分钟。

实例24-27：本发明的固体形式的特性

通过粉末X射线衍射(PXRD)分别分析实例19和18的3-((1R,3s,5S)-3-((7-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)-1,6-萘啶-5-基)氨基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)丙腈的形式I结晶游离碱和形式II结晶溶剂合物的样品。也通过差示扫描量热法(DSC)、热解重量分析(TGA)、动态吸湿(DMS)且通过单晶x射线衍射来分析实例19的结晶形式I。

实例24：粉末X射线衍射

用Bruker D8-Advance X射线衍射仪使用CU-Kα辐射

在45kV的输出电压和40mA的电流下，获得图1和5的粉末X射线衍射图案。于Bragg-Brentano几何中操作仪器，其中设定入射、发散度和散射狭缝以使样品处的强度最大化。对于测量，将少量粉末(5-25mg)轻缓地按压于样品固持器上以形成光滑表面，且经历X射线曝露。以2θ-2θ模式以2°到40°的2θ扫描样品，其中步长为0.02°且扫描速度为每步0.30秒。通过BrukerDiffracSuite测量软件控制数据采集且通过Jade软件(7.5.1版)分析。用刚玉标准物在±0.02°2θ角内校准仪器。针对结晶形式I和结晶形式II溶剂合物，经观测PXRD 2θ峰位置和d-间隔分别展示在表9和10中。

表9：结晶形式I的PXRD数据

表10：结晶形式II溶剂合物的PXRD数据

实例25：热分析

使用具有Thermal Analyst控制器的TA Instruments型号Q-100模块进行差示扫描量热法(DSC)。收集数据且使用TA Instruments热分析(Thermal Analysis)软件分析。将各结晶形式的样品精确称量到带盖铝盘中。在5℃下进行5分钟等温平衡阶段后，使用10℃/min的线性加热匀变从0℃加热样品到250℃。图2中展示本发明的形式I结晶游离碱的代表性DSC热分析图。

使用具备高分辨率能力的TA Instruments型号Q-50模块进行热解重量分析(TGA)测量。使用TA Instruments热分析(Thermal Analyst)控制器收集数据且使用TAInstruments通用分析(Universal Analysis)软件分析。将称量的样品置于铂盘上且以10℃的加热速率从环境温度到300℃扫描。在使用期间用氮气流净化其余部分和熔炉室。图3中展示本发明的形式I结晶游离碱的代表性TGA迹线。

实例26：动态吸湿评定

使用VTI常压微量天平SGA-100系统(VTI Corp.,Hialeah,FL 33016)进行动态吸湿(DMS)测量。使用经称量的样品且湿度在开始分析时为最低可能值(接近0％RH)。DMS分析由以下组成：进行初始干燥步骤(0％RH)，持续120分钟，随后在5％RH到90％RH的湿度范围内，以5％RH/步的扫描速率进行两个循环的吸附和解吸。在25℃下以等温方式进行DMS操作。图4中展示本发明的形式I结晶游离碱的代表性DMS迹线。

实例27：单晶X射线衍射

在通过CrysAlis软件操作的Oxford Diffraction Gemini-R Ultra衍射仪上，在293°K下使用Cu辐射

收集强度数据。[安捷伦科技(2012),亚恩顿,英格兰](CrysAlis CCD and CrysAlis RED,2003)借助于比较等效物反射，校正吸收作用的数据。用在SHELXT中实施的直接方法程序解析结构且使用SHELXL-2014，基于F²通过全矩阵最小二乘法进行精化。[谢尔德里克,Acta Cryst.C71(2015),3-8]。非氢原子位于差异图中且各向异性地精化。将键结到C原子的氢原子固定于理想位置中。除一个甲基以外，自由地精化其热位移参数。使用距离限制，

精化键结到N的H原子，且自由地精化其热位移参数。

实例28：固态稳定性评定

在25℃和60％相对湿度(RH)下和在40℃和75％RH下，将本发明的形式I结晶游离碱的样品储存于具有螺旋盖的HDPE瓶内部以拉链带封闭的双重聚乙烯袋中。在特定时间间隔，移出代表性样品的内含物，且通过HPLC分析化学纯度且通过卡尔费歇尔分析含水量。

表11：结晶形式I稳定性研究

^a NT＝未测出

生物分析

已在以下生物分析中的一或多者中表征本发明化合物。

分析1：生物化学JAK和脱靶激酶分析

将四种LanthaScreen JAK生物化学分析的组(JAK1、2、3和Tyk2)载于常见激酶反应缓冲液(50mM HEPES，pH 7.5，0.01％Brij-35，10mM MgCl2，和1mM EGTA)中。重组GST标记的JAK酶和GFP标记的STAT1肽受质获自生命技术公司(LifeTechnologies)。

在白色384孔微量培养板(康宁(Corning))中在环境温度下，使连续稀释的化合物与四种JAK酶中的每一者和受质一起预培育1小时。随后添加ATP以起始总体积为10μl、具有1％DMSO的激酶反应物。JAK1、2、3和Tyk2的最终酶浓度分别为4.2nM、0.1nM、1nM和0.25nM；所使用的相对应Km ATP浓度为25μM、3μM、1.6μM和10μM；而对于所有四种分析，受质浓度为200nM。在环境温度下使激酶反应物进行1小时，之后添加于TR-FRET稀释缓冲液(生命技术公司)中的EDTA(10mM最终浓度)和Tb抗pSTAT1(pTyr701)抗体(生命技术公司，2nM最终浓度)的10μl制备物。在环境温度下将培养板培育1小时，之后在EnVision读取器(铂金埃尔默)上读取。记录且使用发射比信号(520nm/495nm)，以基于DMSO和背景对照计算抑制百分比值。

对于剂量反应分析，相较于化合物浓度绘制抑制百分比数据，且用Prism软件(GraphPad软件公司)从4参数稳健拟合模型测定IC50值。结果表示为pIC50(IC50的负对数)，且随后使用Cheng-Prusoff等式变换为pKi(解离常数Ki的负对数)。

在四种JAK分析中的每一者中具有更高pKi值的测试化合物展示对JAK活性的更大抑制。此分析中所测试的本发明化合物典型地展现约7与约10.3之间的pKi值。

使用类似方法，用获自生命技术公司的重组酶和在AnaSpec合成的生物素标记肽受质，来产生脱靶酪氨酸激酶分析的组(Flt3、RET、FGFR2、TrkA和pDGFRβ)。在环境温度下在100μM的最终ATP浓度下进行所有分析。检测试剂，包含Eu抗磷酸酪氨酸(pY20)抗体和SureLight APC-SA，购自铂金埃尔默。记录且使用发射比信号(665nm/615nm)以用于数据分析，且最终结果表示为pIC₅₀。

分析2：细胞JAK效能分析

通过测量诱导BEAS-2B人类肺上皮细胞(ATCC)中的STAT6磷酸化的白细胞介素-13(IL-13，R&D系统(R&D Systems))，来进行AlphaScreen JAKI细胞效能分析。将抗STAT6抗体(细胞信号传导技术(Cell Signaling Technologies))结合到AlphaScreen受体珠粒(铂金埃尔默)，而使用EZ-Link Sulfo-NHS-生物素(赛默科技(ThermoScientific))对抗pSTAT6(pTyr641)抗体(细胞信号传导技术)进行生物素标记。

在5％CO₂含湿气培育箱中在37℃下，在补充有10％FBS(Hyclone)、100U/mL青霉素、100μg/mL链霉素(生命技术公司)和2mM GlutaMAX(生命技术公司)的50％DMEM/50％F-12培养基(生命技术公司)中，使BEAS-2B细胞生长。在分析第1天，在具有25μL培养基的白色聚D赖氨酸涂布的384孔培养板(康宁)中，以7,500个细胞/孔密度接种细胞，且在培育箱中使其粘附隔夜。在分析第2天，将培养基移除，且用含有测试化合物的剂量反应的12μL分析缓冲液(汉克氏(Hank′s)平衡盐溶液/HBSS，25mM HEPES和1mg/ml牛血清白蛋白/BSA)替换。将化合物连续稀释于DMSO中，且随后在培养基中再稀释1000倍，以使最终DMSO浓度达到0.1％。在37℃下使细胞与测试化合物一起培育1小时，且随后添加12μL预温热的IL-13(80ng/ml于分析缓冲液中)以用于刺激。在37℃下培育30分钟后，移除分析缓冲液(含有化合物和IL-13)，并添加10μL细胞裂解缓冲液(25mM HEPES，0.1％SDS，1％NP-40，5mM MgCl2，1.3mM EDTA，1mM EGTA，且补充有Complete Ultra mini蛋白酶抑制剂和来自RocheDiagnostics的PhosSTOP)。在环境温度下震荡培养板30分钟，之后添加检测试剂。首先添加生物素抗pSTAT6和抗STAT6结合的受体珠粒的混合物且在环境温度下培育2小时，随后添加抗生蛋白链菌素结合的供体珠粒(铂金埃尔默)。培育最少2小时后，在EnVision盘式读取器上读取分析培养板。记录且使用AlphaScreen发光信号，以基于DMSO和背景对照计算抑制百分比值。

对于剂量反应分析，相较于化合物浓度绘制抑制百分比数据，且用Prism软件从4参数稳健拟合模型测定IC50值。结果表示为IC₅₀值的负对数，pIC₅₀。

在此分析中具有更高pIC₅₀值的测试化合物展示对IL-13诱导的STAT6磷酸化的更大的抑制。在此分析中所测试的本发明化合物典型地展现约6.8与约8.5之间的pIC₅₀值。

也使用相同分析格式和检测试剂，在THP-1人类单核细胞性细胞(ATCC)中进行白细胞介素-4(IL-4，R&D系统)诱导的STAT6磷酸化分析。以30ng/ml最终浓度进行IL-4刺激，持续30分钟。也以类似方式进行数据收集和分析。在此分析中所测试的本发明化合物典型地展现约6.8与约8.5之间的pIC₅₀值。

分析3：细胞毒性分析

在BEAS-2B人类肺上皮细胞(ATCC)中在普通生长条件下，进行CellTiter-Glo发光细胞活力/细胞毒性分析。

在5％CO₂含湿气培育箱中在37℃下，在补充有10％FBS(Hyclone)、100U/mL青霉素、100μg/mL链霉素(生命技术公司)和2mM GlutaMAX(生命技术公司)的50％DMEM/50％F-12培养基(生命技术公司)中，使细胞生长。在分析第1天，在具有25μL培养基的白色384孔组织培养培养板(康宁)中，以500个细胞/孔密度接种细胞，且在培育箱中使其粘附隔夜。在分析第2天，添加5μL含有测试化合物的剂量反应的培养基，且在37℃下培育48小时。随后添加30μl CellTiter-Glo检测溶液(普洛麦格(Promega))，在定轨震荡器上混合5分钟，且再培育10分钟，之后在EnVision读取器上读取。记录发光信号且计算DMSO对照百分比值。

对于剂量反应分析，相较于化合物浓度绘制DMSO对照百分比数据，以通过连接各数据点的线导出剂量反应曲线。将各曲线超过15％抑制临限值的浓度定义为CC₁₅。结果表示为CC₁₅值的负对数，pCC₁₅。

吾人预期，在此分析中呈现更低pCC₁₅值的测试化合物具有产生细胞毒性的更小的可能性。在此分析中所测试的本发明化合物典型地展现小于5与约6之间的pCC₁₅值。

活体外分析结果

在以上所描述的一或多种分析中测试实例1到17和表1到8的所有化合物。在以下表中，对于JAK1、JAK2、JAK3和TYK2酶分析，A表示pK_i值≥10(K_i≤0.1nM)，B表示9与10之间的pK_i值(K_i在1nM与0.1nM之间)，C表示7与9之间的pK_i值(K_i在100nM与1nM之间)，且D表示6.5与7之间的pK_i值(K_i在316nM与100nM之间)。对于THP-1和BEAS-2B细胞效能分析，A表示pEC₅₀值≥7.5(EC₅₀≤32nM)，B表示6.7与7.5之间的pEC₅₀值(EC₅₀在200nM与32nM之间)，且C表示pEC₅₀值<6.7(EC₅₀>200nM)。

分析4：确定经插管大鼠中的吸收率

在Sprague Dawley大鼠中从以下两个研究确定口服生物可用性(F％)、所吸收百分率(F_a％)和逃出肝消除的百分率(F_h％)。

(1)在测试化合物的IV剂量后的大鼠中的药物动力学：IV给药后，典型地经0-6小时收集血浆样品。使用LC-MS-MS方法确定药物水平。所得药物水平用以计算IV药物动力学参数：AUC IV和剂量IV。

(2)对在门静脉(PV)且也在颈静脉(JV)插管的大鼠经口投加测试化合物。口服给药后，典型地经0-6小时从门静脉和颈静脉两个收集血浆样品。使用LC-MS-MS方法确定药物水平。所得药物水平用以计算以下药物动力学参数：AUC PO PV，AUC POJV和剂量PO。

使用衍生自以上研究的数据，从下式计算口服生物可用性F％和量F_a％和F_h％：

F％＝(AUC PO JV/AUC IV)*(剂量IV/剂量PO)*100

F_a％＝(AUC PO PV/AUC IV)*(剂量IV/剂量PO)*100

F_h％＝AUC PO JV/AUC PO PV

其中：

AUC PO JV＝根据口服剂量和从颈静脉收集的血浆的曲线下面积

AUC PO PV＝根据口服剂量和从门静脉收集的血浆的曲线下面积

AUC IV＝根据静脉内剂量的曲线下面积

剂量IV＝以mg/kg为单位的静脉内剂量

剂量PO＝以mg/kg为单位的口服剂量

本发明化合物典型地展现小于约10％的口服生物可用性(F％)和小于约20％、包含小于约10％的门静脉处的吸收率(F_a％)。举例来说，实例1-6、8和12的化合物均展现小于约5％的F％值和小于约10％的F_a％值。

分析5：大鼠中的结肠药物动力学

将测试化合物个别地调配于0.5％于水中的甲基纤维素中，且经由口服管饲以5mg/kg投加到Sprague Dawley大鼠中。给药后的多个时间点(典型地1、2、4、6、24小时)下，经由心脏穿刺移出血液样品，且从大鼠切除完整结肠。在1500×g下使血液样品离心15分钟以收集血浆。将结肠用冰冷的磷酸盐缓冲盐水(PBS)洗涤，称量且在PBS中以1:10的稀释均质化。通过LC-MS分析，对照在测试矩阵中构建成标准曲线的分析型标准品，来确定测试化合物的血浆和结肠水平。结肠与血浆比测定为以μghr/g为单位的结肠AUC与血浆AUC的比。举例来说，实例1、2和5的化合物展现超过约450的结肠与血浆比。

分析6：大鼠和狗中血浆和胃肠道中的药物动力学

如分析5中所描述，将测试化合物投加到雄性Sprague Dawley大鼠(n＝3)中。在各时间点(0.5、1、3、6和24小时)下，通过心脏穿刺获取血浆样品，且之后将胃肠道立即移出且切除以下片段：十二指肠、近侧结肠和末端结肠。如分析5中所描述，确定测试化合物的血浆和片段水平。在所有时间点下，血浆浓度低于0.001μg/mL的定量限。对于各片段的实例1的化合物，组织与血浆比超过约14000。

在狗中进行类似实验。经由口服管饲对雄性米格鲁犬(beagle dog)(n＝2)投加如以上调配的5mg/kg测试化合物。在狗号1中，在给药后的0.25、1、2、4、6和24小时获取血浆样品。在狗号2中，在6小时下获取血浆样品。在狗号1(在24小时下)和狗号2(在6小时下)两个中，移出胃肠道且按以下分段：十二指肠、回肠、盲肠和分成相等三份(近侧结肠、中间结肠和末端结肠)的结肠。对于每个GI片段，在片段中间切除大约2cm段。将各个在冰冷PBS缓冲液中充分地洗涤，且随后在5体积PBS缓冲液中均质化且如以上分析。对于实例1的化合物，针对口服剂量后6小时进行的收集，GI组织中的化合物浓度与血浆中的化合物的比约9到约165在范围内，其中结肠浓度视为三个结肠片段的总和。针对口服剂量后24小时下进行的收集，GI组织与血浆比在约7到约30范围内。

分析7：恶唑酮诱导的结肠炎的小鼠模型

恶唑酮诱导的结肠炎为具有与人类溃疡性结肠炎类似的组织的实验模型(Heller等人Immunology,2002,17,629-638)。在分析中使用来自Harlan的成年BALB/C小鼠。在第1天，用异氟醚轻度麻醉动物，且谨慎地移除肩部之间的毛发，之后针对皮肤敏感化缓慢施用恶唑酮(4％，150μL，4:1丙酮:橄榄油调配物)或媒剂溶液。皮肤敏感化后七天，将小鼠禁食隔夜，用异氟醚吸入剂麻醉，且将充满恶唑酮溶液的配备有3.5-F导管的1mL针筒谨慎地插入约4cm到小鼠的结肠中。插入后，将50μL恶唑酮溶液(1％，1:1乙醇:水调配物)极缓慢地注入结肠中(历经30秒，使用注射泵)。移除导管且使小鼠垂直地保持(头部向下)2分钟以确保全部恶唑酮溶液留在结肠内部。在恶唑酮直肠内(IR)激发之前，使药物处理(PO，BID或TID)或媒剂开始一天。恶唑酮直肠内激发后第二天，通过针对各小鼠的治疗不知情的实验根据准则得分来评定疾病活性指数(DAI)：大便稠度得分(0，正常；2，松软；4，腹泻)、严重出血得分(0，不存在；2；带血丝；4，存在)和重量减轻得分(0，无；1，1％-5％；2，5％-10％；3，10％-20％；4，大于20％)；DAI＝(大便稠度得分+严重出血得分+重量减轻得分)的平均值。

在分析中测试本发明的经选择化合物。在与经媒剂处理的动物的得分比较时，通过DAI得分的降低证明模型的功效。在恶唑酮模型中，在1、3和/或10mg/kg BID的剂量下，在与经媒剂处理的动物相比较时，实例1、2、3、4、5、6、8、12和1-38的化合物展现DAI得分的统计上显著的降低，而在分析中所测试的达10mg/kg BID的剂量下，实例7、9、11、13、2-1、2-6、2-16、2-17、2-22、2-24、4-3、4-4、4-13、4-18、4-19、4-23和5-11的化合物不展现统计上显著的降低。

分析8：小鼠脾天然杀伤(NK)细胞中的免疫抑制效应

小鼠脾细胞的缺失为免疫抑制的实验模型(库笛拉兹等人,Am.J.ofTransplantation,2004,4,51-57)。在小鼠脾细胞模型中在与恶唑酮诱导的结肠炎模型(分析7)中所使用相同的处理范式后，评定实例1的化合物。

来自Harlan的成年雄性Balb/C小鼠(12-14周龄)用于所述研究。将化合物(1、10和100mg/kg，BID)和作为阳性对照的托法替尼(tofacitinib)(30mg/kg，BID)经口投加到首次接受试验的小鼠，持续三天。最后剂量后1或2小时收集脾且立即压碎以用于细胞亚型染色。固定之前，将用于CD19(FITC；B细胞)、CD3e(PE；pan T细胞)和DX5(APC；NK细胞)的荧光团标记的抗体与来自各动物的脾细胞样品一起培育，以使得可在流式细胞仪上进行同步的多种亚型％分析。各动物的总脾细胞数量由Scepter^TM 2.0手持型自动细胞计数器测量。

从各亚型的百分比乘以各动物的总脾细胞来计算淋巴细胞亚型群体(例如，脾B、T和NK细胞)的绝对数。邓尼特事后测试(Dunnett′s post hoc test)下的单向ANOVA用以比较媒剂和测试化合物组的脾淋巴细胞数目。α水平设定在p<0.05下。对于各组，数据呈现为平均值±SEM。

阳性对照托法替尼(30mg/kg；PO；BID)剂量依赖性地且显著地降低脾NK细胞计数。在相同研究中，脾NK细胞计数不受在达100mg/kg(所测试的最大剂量)的PO(BID)剂量下的实例1的化合物的影响。对于使用任一化合物的B和T细胞群体，未观测到治疗效应。

此数据以及在恶唑酮诱导的结肠炎的小鼠模型(分析7)中引起显著抗结肠炎效应的1mg/kg最少剂量，使得能够计算出实例1的化合物的>100的功能治疗指数。

分析9：首先在人类研究中评估健康个体中的安全性、耐受性和药物动力学

在双盲、随机、安慰剂对照的单次递增剂量(SAD)和多次递增剂量(MAD)研究中评估实例1的化合物在健康个体中的安全性、耐受性和药物动力学。在SAD研究(第一次剂量后)和MAD研究(14天的每天一次给药后)两个中，在最后剂量后达72小时，收集药物动力学样品。SAD研究征选5同属性群且MAD研究征选4同属性群，总计72名个体，其中71名完成给药期。

通过非室体分析使用WinNonLin 6.4.0版(法赛特(Pharsight)，圣路易斯，密苏里州)确定血浆药物动力学(PK)参数。此处呈现的血浆PK参数为：

C_max：血浆中的最大浓度

达1000mg的单次剂量后，化合物的平均C_max血浆浓度小于50ng/mL，其中无个别个体达到大于100ng/mL的C_max。14天的达300mg的化合物投药后，平均C_max血浆化合物浓度小于15ng/mL，其中无个别个体达到大于30ng/mL的C_max。这些数据与其它经口投与的化合物的比较表明实例1的化合物具有极低的口服生物可用性。同样，大便样品中所观测的高药物浓度表明胃肠道中的显著暴露。

虽然本发明已参考其特定实施例加以描述，但所属领域的技术人员应理解，在不脱离本发明的真实精神和范围的情况下，可进行各种改变且可替代等效物。另外，可进行许多修改以使特定情形、物质、物质的组合物、方法、一或多个方法步骤适合于本发明的目标、精神和范围。所有此类修改意图在此处所附的申请专利范围的范围内。另外，所有上文所引用的公开案、专利和专利文献都以引用的方式完全并入本文中，如同以引用的方式个别地并入一般。