ES2753159T3 - Compuestos de naftiridina como inhibidores de quinasa JAK - Google Patents
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Abstract
Un compuesto de fórmula (Iórmula** R1 se selecciona entre: (a) alquilo C1-4, en donde alquilo C1-4 está opcionalmente sustituido con uno, dos, o tres fluoro o con un sustituyente seleccionado entre: -CN, -Oalquilo C1-3, -C(O)Oalquilo C1-4, fenilo, en donde fenilo está opcionalmente sustituido con -OH, piridinilo, en donde piridinilo está opcionalmente sustituido con -CN, tetrahidropiranilo, - C(O)NRaRb, en donde Ra y Rb son independientemente hidrógeno o alquilo C1-3 o Ra es hidrógeno y Rb es **Fórmula** y un grupo seleccionado entre **Fórmula** y (b) un grupo seleccionado entre **Fórmula** y en donde m es 1 o 2; (c) -C(O)R6, en donde R6 se selecciona entre alquilo C1-4, en donde alquilo C1-4 está opcionalmente sustituido con uno, dos o tres fluoro o con un sustituyente seleccionado entre -OH, -CN, -Oalquilo C1-4, fenilo, y -NReRf, en donde Re y Rf son independientemente hidrógeno o alquilo C1-3; cicloalquilo C3-6, en donde cicloalquilo C3-6 está opcionalmente sustituido con alquilo C1-3; piridinilo, en donde piridinilo está opcionalmente sustituido con -CN; y **Fórmula** en donde R7 es -CN, -CF3, u -OCH3; (d) -C(O)OR8, en donde R8 se selecciona entre alquilo C1-4, en donde alquilo C1-4 está opcionalmente sustituido con -CN, cicloalquilo C3-6, tetrahidrofuranilo, u -ORm, en donde Rm es hidrógeno o alquilo C1-3; y alquenilo C1-4; y (e) -S(O)2R9, en donde R9 se selecciona entre alquilo C1-4, en donde alquilo C1-4 está opcionalmente sustituido con -CN, -Oalquilo C1-3, fenilo, piridinilo, o cicloalquilo C3-6, alquenilo C1-4, cicloalquilo C3-6, en donde cicloalquilo C3-6 está opcionalmente sustituido con alquilo C1-3, fenilo, piridinilo, en donde piridinilo está opcionalmente sustituido con fluoro, heterociclo que contiene de 4 a 6 átomos en el anillo incluido un átomo de nitrógeno, en donde el heterociclo está opcionalmente sustituido con -CN o alquilo C1-3, en donde alquilo C1-3 está opcionalmente sustituido con -CN u -Oalquilo C1-3; y **Fórmula** R2 se selecciona entre hidrógeno, -Oalquilo C1-3, y -CH2-R10, en donde R10 se selecciona entre -OH, morfolinilo, piperidinilo, en donde piperidinilo está opcionalmente sustituido con 2 fluoro, y piperazinilo, en donde piperazinilo está opcionalmente sustituido con metilo; R3 se selecciona entre hidrógeno, alquilo C1-3, -Oalquilo C1-3, -C(O)Oalquilo C1-3, -S(O)2alquilo C1-3, y -CH2S(O)2alquilo C1-3; R4 es hidrógeno u -Oalquilo C1-3; R5 es hidrógeno o fluoro; y n es 1 o 2; con la condición de que cuando R3 es -Oalquilo C1-3 y R2, R4 y R5 son cada uno hidrógeno, R9 no es fenilo; cuando R5 es fluoro, n es 1, y R2, R3 y R4 son cada uno hidrógeno, R9 no es fenilo; y cuando R5 es fluoro, R3 es metilo, y R2 y R4 son cada uno hidrógeno, R1 no es -C(O)OR8; o una sal o estereoisómero farmacéuticamente aceptable del mismo.
Description
DESCRIPCIÓN
Compuestos de naftiridina como inhibidores de quinasa JAK
Antecedentes de la invención
Campo de la invención
La invención está dirigida a compuestos de naftiridina útiles como inhibidores de quinasa JAK. La invención también se dirige a composiciones farmacéuticas que comprenden tales compuestos, tales compuestos para usar en métodos para tratar enfermedades inflamatorias, y procesos e intermedios útiles para preparar tales compuestos.
Estado de la técnica
La colitis ulcerosa es una enfermedad inflamatoria crónica del colon. La enfermedad se caracteriza por inflamación y ulceración de la capa mucosa del recto y el intestino grueso. Los síntomas comunes incluyen diarrea, heces con sangre, y dolor abdominal. El curso clínico es intermitente, marcado por períodos alternos de exacerbación y remisión. La incidencia parece ser mayor en los países desarrollados que en los países en desarrollo. Se estima que 1,2 millones de personas en los principales países industrializados sufren colitis ulcerosa y se espera que las cifras aumenten junto con el crecimiento de la población. Los pacientes con colitis ulcerosa tienen un mayor riesgo de desarrollar cáncer colorrectal. (por ejemplo, Danese et al. N Engl J Med, 2011, 365, 1713-1725).
Aunque existe una variedad de opciones terapéuticas para promover y mantener la remisión de la colitis ulcerosa (CU) en pacientes, ninguna es ideal. Los tratamientos relacionados con la sulfasalazina a menudo son efectivos en la CU leve, pero mucho menos en la enfermedad moderada a severa. Los corticosteroides a menudo se usan para proporcionar una inducción rápida de la remisión en pacientes con CU moderada a grave. Sin embargo, se desaconseja el uso crónico de esteroides para mantener la remisión debido a su asociación con efectos adversos a más largo plazo (por ejemplo, osteoporosis y fracturas, infecciones, cataratas, curación de heridas más lenta y supresión de la producción de hormonas de la glándula suprarrenal). Inmunosupresores sistémicos como azatioprina, ciclosporina y metotrexato tienen un inicio lento y una eficacia moderada en pacientes con CU moderada a severa, pero el uso prolongado puede ser problemático debido a las consecuencias de la inmunosupresión sistémica a largo plazo (por ejemplo, mayor riesgo de infecciones y linfoma). Anticuerpos anti-TNFa (por ejemplo, infliximab y adalimumab), aunque son caros y requieren administración subcutánea o intravenosa, son eficaces en aproximadamente 60 a 70 % de los pacientes con CU con enfermedad moderada a grave. Sin embargo, hasta un tercio de los pacientes no responden adecuadamente, mientras que otro tercio de los respondedores iniciales desarrollan tolerancia durante unas pocas semanas (Allez et al., J Crohn's Colitis, 2010, 4, 355-366; Rutgeerts et al., N Engl J Med, 2005, 353, 2462-2476). La terapia para CU aprobada más recientemente, vedolizumab, un anticuerpo anti-integrina a4p7, es eficaz en pacientes con CU moderada a severa, aunque su vía parenteral es subóptima, y las consecuencias de la inmunosupresión a largo plazo a través de este mecanismo aún no se han determinado. A pesar de las opciones terapéuticas existentes, alrededor del 10 al 20 % de los pacientes con CU todavía requieren colectomía en los 10 años posteriores al diagnóstico (Targownik et al., Am J Gastroenterol, 2012, 107, 1228-1235). Está claro que sigue existiendo una necesidad médica insatisfecha de una terapia efectiva para promover y mantener la remisión de la CU moderada a severa sin las preocupaciones de seguridad derivadas de la inmunosupresión sistémica, crónica.
Aunque el mecanismo subyacente a la colitis ulcerosa no se comprende completamente, se cree que los factores ambientales en individuos genéticamente susceptibles evocan una reacción inapropiada (excesiva) por parte del sistema inmune a la microbiota intestinal, resultando en inflamación del colon, daño tisular y síntomas asociados característicos de la enfermedad.
Aunque la patogenia precisa de la CU no está clara, es evidente que las citoquinas proinflamatorias juegan un papel fundamental en la respuesta inmunológica (Strober et al., Gastroenterol, 2011, 140, 1756-1767). Muchas de las citoquinas proinflamatorias más comúnmente elevadas en la CU (por ejemplo, IL-4, IL-6, IL-13, IL-15, IL-23, IL-24, IFNy y leptina), dependen de la familia JAK de tirosina quinasas (es decir, JAK1, JAK2, JAK3 y Tyk2) para transducción de señales. La unión del ligando a un receptor de citoquina desencadena la autofosforilación de su JAK asociada, que a su vez da como resultado la fosforilación de un transductor de señal y un activador de la proteína de transducción (STAT). Diferentes STAT forman hetero u homodímeros y promueven la transcripción de sus genes diana en el núcleo celular para regular funciones tales como crecimiento, diferenciación y muerte celular (Clark et al., J Med Chem, 2014, 57, 5023-5038).
La inhibición de la familia de las enzimas JAK podría inhibir la señalización de muchas citoquinas proinflamatorias clave. Por lo tanto es probable que los inhibidores de JAK sean útiles en el tratamiento de la colitis ulcerosa y otras enfermedades inflamatorias como enfermedad de Crohn, rinitis alérgica, asma, y enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EPOC). Sin embargo, debido al efecto modulador de la vía JAK/STAT en el sistema inmune, la exposición sistémica a los inhibidores de JAK puede tener un efecto inmunosupresor sistémico adverso. Sería deseable, por tanto, proporcionar nuevos inhibidores de JAK que tengan su efecto en el sitio de acción sin efectos sistémicos
significativos. En particular, para el tratamiento de enfermedades inflamatorias gastrointestinales, como colitis ulcerosa, sería deseable proporcionar nuevos inhibidores de JAK que puedan administrarse por vía oral y lograr una exposición terapéuticamente relevante en el tracto gastrointestinal con una exposición sistémica mínima.
Sumario de la invención
En un aspecto, la invención proporciona nuevos compuestos que tienen actividad como inhibidores de quinasa JAK. En consecuencia, la invención proporciona un compuesto de fórmula (I):
en donde
R1 se selecciona entre:
(a) alquilo C1-4, en donde alquilo C1-4 está opcionalmente sustituido con uno, dos o tres fluoro o con un sustituyente seleccionado entre -CN; -Oalquilo C1-3; -C(O)Oalquilo C1-4; fenilo, en donde fenilo está opcionalmente sustituido con -OH; piridinilo, en donde piridinilo está opcionalmente sustituido con -CN; tetrahidropiranilo; -C(O)NRaRb, en donde Ra y Rb son independientemente hidrógeno o alquilo C1-3 o Ra es hidrógeno y Rb es
y un grupo seleccionado entre
(b) un grupo seleccionado entre
en donde m es 1 o 2;
(c) -C(O)R6, en donde R6 se selecciona entre
alquilo C1-4, en donde alquilo C1-4 está opcionalmente sustituido con uno, dos o tres fluoro o con un sustituyente seleccionado entre -OH, -CN, -Oalquilo C1-4, fenilo, y -NReRf, en donde Re y Rf son independientemente hidrógeno o alquilo C1-3;
cicloalquilo C3-6, en donde cicloalquilo C3-6 está opcionalmente sustituido con alquilo C1-3;
piridinilo, en donde piridinilo está opcionalmente sustituido con -CN; y
en donde R7 es -CN, -CF3 , u -OCH3 ;
(d) -C(O)OR8, en donde R8 se selecciona entre
alquilo C1-4, en donde alquilo C1-4 está opcionalmente sustituido con -CN, cicloalquilo C3_6, tetrahidrofuranilo, u -ORm, en donde Rm es hidrógeno o alquilo C1-3; y
alquenilo C1-4; y
(e) -S(O)2R9, en donde R9 se selecciona entre
alquilo C1-4, en donde alquilo C1-4 está opcionalmente sustituido con -CN, -Oalquilo C1-3, fenilo, piridinilo, o cicloalquilo C3-6,
alquenilo C1-4,
cicloalquilo C3-6, en donde cicloalquilo C3-6 está opcionalmente sustituido con alquilo C1-3,
fenilo,
piridinilo, en donde piridinilo está opcionalmente sustituido con fluoro,
heterociclo que contiene de 4 a 6 átomos en el anillo incluido un átomo de nitrógeno, en donde el heterociclo está opcionalmente sustituido con -CN o alquilo C1-3, en donde alquilo C1-3 está opcionalmente sustituido con -CN
o alquilo -OC1-3; y
R2 se selecciona entre hidrógeno, -Oalquilo C1-3, y -CH2-R10, en donde R10 se selecciona entre -OH, morfolinilo, piperidinilo, en donde piperidinilo está opcionalmente sustituido con dos fluoro, y piperazinilo, en donde piperazinilo está opcionalmente sustituido con metilo;
R3 se selecciona entre hidrógeno, alquilo C1-3, -Oalquilo C1-3, -C(O)Oalquilo C1-3, -S(O)2alquilo C1-3, y-CH2S(O)2alquilo C1-3;
R4 es hidrógeno u -Oalquilo C1-3;
R5 es hidrógeno o fluoro; y
n es 1 o 2;
con la condición de que
cuando R3 es -Oalquilo C1-3 y R2, R4 y R5 son cada uno hidrógeno, R9 no es fenilo;
cuando R5 es fluoro, n es 1, y R2, R3 y R4 son cada uno hidrógeno, R9 no es fenilo; y
cuando R5 es fluoro, R3 es metilo, y R2 y R4 son cada uno hidrógeno, R1 no es -C(O)OR8;
o una sal o estereoisómero farmacéuticamente aceptable del mismo.
Como se usa en adelante en el presente documento, la expresión "compuesto de fórmula (I)" significa un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; es decir, esta expresión significa un compuesto de fórmula (I) en forma de base libre o en una forma de sal farmacéuticamente aceptable a menos que se indique lo contrario.
La invención también proporciona una composición farmacéutica que comprende un compuesto de la invención y un vehículo farmacéuticamente aceptable.
En otro aspecto, la invención proporciona un compuesto particular de fórmula (I) en forma de base libre cristalina. Se ha encontrado que 3-((1R,3s,5S)-3-((7-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-1,6-naftiridin-5-il)amino)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-8-il)propanotonitrilo cristalino tiene una temperatura de fusión en el intervalo de aproximadamente 243 °C a aproximadamente 253 °C, típicamente entre aproximadamente 246 °C y
aproximadamente 250 °C, un inicio de descomposición a aproximadamente 237 °C, y para exhibir cambios de peso de menos de aproximadamente 0,15 % cuando se expone a un intervalo de humedad relativa entre aproximadamente 5 % y aproximadamente 90 % a temperatura ambiente. En otro aspecto más, la invención proporciona un solvato cristalino de 3-((1R,3s,5S)-3-((7-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-1,6-naftiridin-5-il)amino)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-8-il)propanonitrilo.
También se describe un método para tratar la enfermedad inflamatoria gastrointestinal, en particular, colitis ulcerosa en un mamífero, comprendiendo el método administrar al mamífero una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto o de una composición farmacéutica de la invención. En aspectos separados y distintos, la invención también proporciona procesos sintéticos e intermedios descritos en el presente documento, que son útiles para preparar compuestos de la invención.
La invención también proporciona un compuesto de la invención como se describe en el presente documento para uso en terapia médica, así como el uso de un compuesto de la invención en la fabricación de una formulación o medicamento para tratar la enfermedad inflamatoria gastrointestinal en un mamífero.
Breve descripción de los dibujos
Varios aspectos de la presente invención se ilustran con referencia a los dibujos adjuntos.
La Figura 1 muestra un patrón de difracción de rayos X en polvo (PXRD) de la Forma cristalina I 3-((1R,3s,5S)-3-((7-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-1,6-naftiridin-5-il)amino)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-8-il)propanonitrilo [en adelante, Forma I].
La Figura 2 muestra un termograma de calorimetría diferencial de barrido (DSC) de la Forma cristalina I.
La Figura 3 muestra un gráfico de análisis térmico gravimétrico (TGA) de la Forma cristalina I.
La Figura 4 muestra una isoterma de sorción dinámica de humedad (DMS) de la Forma cristalina I observada a una temperatura de aproximadamente 25 °C
La Figura 5 muestra un patrón de difracción de rayos X en polvo (PXRD) del solvato cristalino de Forma II 3-((1R,3s,5S)-3-((7-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-1,6-naftiridin-5-il)amino)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-8-il)propanonitrilo.
Descripción detallada de la invención
Entre otros aspectos, la invención proporciona inhibidores de quinasa JAK de fórmula (I), sales farmacéuticamente aceptables de los mismos e intermedios para la preparación de los mismos. Los siguientes sustituyentes y valores están destinados a proporcionar ejemplos representativos de varios aspectos de esta invención. Estos valores representativos están destinados a definir mejor dichos aspectos y no están destinados a excluir otros valores o limitar el alcance de la invención.
En un aspecto específico, R1 es alquilo C1-4, en donde alquilo C1-4 está opcionalmente sustituido con uno, dos, o tres fluoro o con un sustituyente seleccionado entre -CN; -Oalquilo C1-3; -C(O)Oalquilo C1-4; fenilo, en donde fenilo está opcionalmente sustituido con -OH; piridinilo, en donde piridinilo está opcionalmente sustituido con -CN; tetrahidropiranilo; -C(O)NRaRb, en donde Ra y Rb son independientemente hidrógeno o alquilo C1-3 o Ra es hidrógeno y Rb es
y un grupo seleccionado entre
En otro aspecto específico, R1 es alquilo C1-4, en donde alquilo C1-4 está opcionalmente sustituido con uno, dos, o tres fluoro o con un sustituyente seleccionado entre -CN; -Oalquilo C1-3; fenilo, en donde fenilo está opcionalmente sustituido con -OH; piridinilo, en donde piridinilo está opcionalmente sustituido con -CN; tetrahidropiranilo; -C(O)NHCH3; y
En otro aspecto específico, R1 es alquilo C1-4, en donde alquilo C1-4 está sustituido con uno, dos, o tres fluoro, o con -CN, o -C(O)NHCH3.
En aspectos específicos, R1 es un grupo seleccionado entre
en donde m es 1 o 2, o en donde m es 1.
En un aspecto específico, R1 es -C(O)R6, en donde R6 se selecciona entre alquilo C1-4, en donde alquilo C1-4 está opcionalmente sustituido con uno, dos o tres fluoro o con un sustituyente seleccionado entre -OH, -CN, -Oalquilo C1-4, fenilo, y -NReRf, en donde Re y Rf son independientemente hidrógeno o alquilo C1-3; cicloalquilo C3-6, en donde cicloalquilo C3-6 está opcionalmente sustituido con alquilo C1-3; piridinilo, en donde piridinilo está opcionalmente sustituido con -CN; y
en donde R7 es -CN, -CF3 , u -OCH3.
En otro aspecto específico, R1 es -C(O)R6, en donde R6 se selecciona entre alquilo C1-4, en donde alquilo C1-4 está opcionalmente sustituido con uno, dos, o tres fluoro o con un sustituyente seleccionado entre -OH y fenilo; cicloalquilo C3-6, en donde cicloalquilo C3-6 está opcionalmente sustituido con alquilo C1-3; y
en donde R7 es -CN o -CF3.
En otro aspecto específico, R1 es -C(O)R6, en donde R6 es alquilo C1-4, en donde alquilo C1-4 está sustituido con uno, dos o tres fluoro, o con -CN o -C(O)NHCH3.
En un aspecto específico, R1 es -C(O)OR8, en donde R8 se selecciona entre alquilo C1-4, en donde alquilo C1-4 está opcionalmente sustituido con -CN, cicloalquilo C3-6, tetrahidrofuranilo, u -ORm, en donde Rm es hidrógeno o alquilo C1-3; y alquenilo C1-4.
En un aspecto específico, R1 es -S(O)2R9, en donde R9 se selecciona entre alquilo C1-4, en donde alquilo C1-4 está opcionalmente sustituido con -CN, -Oalquilo C1-3, fenilo, piridinilo, o cicloalquilo C3-6; alquenilo C1-4; cicloalquilo C3-6, en donde cicloalquilo C3-6 está opcionalmente sustituido con alquilo C1-3; fenilo; piridinilo, en donde piridinilo está opcionalmente sustituido con fluoro; heterociclo que contiene de 4 a 6 átomos en el anillo incluido un átomo de nitrógeno, en donde el heterociclo está opcionalmente sustituido con -CN o alquilo C1-3, en donde alquilo C1-3 está opcionalmente sustituido con -CN u -Oalquilo C1-3; y
En otro aspecto específico, R1 es -S(O)2R9, en donde R9 se selecciona entre alquilo C1-4, en donde alquilo C1-4 está opcionalmente sustituido con -CN, -Oalquilo C1-3, fenilo, piridinilo, o cicloalquilo C3-6; alquenilo C1-4; cicloalquilo C3-6,
en donde cicloalquilo C3-6 está opcionalmente sustituido con alquilo C1-3; piridinilo, en donde piridinilo está opcionalmente sustituido con fluoro; heterociclo que contiene 4 o 5 átomos en el anillo incluido un átomo de nitrógeno, en donde el heterociclo está unido al azufre a través del átomo de nitrógeno y el heterociclo está opcionalmente sustituido con -CN o con -CH2OCH3 ; y
En otro aspecto específico, R1 es -S(O)2R9, en donde R9 es piridinilo.
En otro aspecto más, R1 se selecciona entre -(CH2)2CN, -CH2CH2F, -CH2C(O)NHCH3, -C(O)CHF2 , y -S(O)2-piridin-3-ilo.
En un aspecto específico, R2 se selecciona entre hidrógeno, -Oalquilo C1-3, y -CH2-R10, en donde R10 se selecciona entre -OH, morfolinilo, piperidinilo, en donde piperidinilo está opcionalmente sustituido con dos fluoro, y piperazinilo, en donde piperazinilo está opcionalmente sustituido con metilo.
En otro aspecto específico, R2 se selecciona entre hidrógeno, -OCH3 , y -CH2-R10 , en donde R10 se selecciona entre -OH, morfolinilo, piperidinilo, en donde piperidinilo está sustituido con 2 fluoro en la posición 4, y piperazinilo, en donde piperazinilo está sustituido con metilo en la posición 4.
En otro aspecto específico más, R2 es hidrógeno.
En un aspecto específico, R3 se selecciona entre hidrógeno, alquilo C1-3, -Oalquilo C1-3, -C(O)Oalquilo C1-3, -S(O)2alquilo C1-3, y-CH2S(O)2alquilo C1-3.
En otro aspecto específico, R3 se selecciona entre hidrógeno, -CH3, -OCH3, y -C(O)OCH3.
En otro aspecto específico más, R3 es hidrógeno.
En aspectos específicos, R4 es hidrógeno u -Oalquilo C1-3; o R4 es hidrógeno u -OCH3 , o R4 es hidrógeno.
En aspectos específicos, R5 es hidrógeno o fluoro, o R5 es hidrógeno.
En un aspecto especifico n es 1. En otro aspecto especifico n es 2.
En un aspecto específico, la invención proporciona un compuesto de fórmula (I) en donde:
R1 se selecciona entre:
(a) alquilo C1-4, en donde alquilo C1-4 está opcionalmente sustituido con uno, dos o tres fluoro o con un sustituyente seleccionado entre -CN; -Oalquilo C1-3; fenilo, en donde fenilo está opcionalmente sustituido con -OH; piridinilo, en donde piridinilo está opcionalmente sustituido con -CN; tetrahidropiranilo; -C(O)NHCH3; y
(b) un grupo seleccionado entre
en donde m es 1;
(c) -C(O)R6, en donde R6 se selecciona entre alquilo C1-4, en donde alquilo C1-4 está opcionalmente sustituido con uno, dos, o tres fluoro o con un sustituyente seleccionado entre - O h y fenilo; cicloalquilo C3-6, en donde cicloalquilo C3-6 está opcionalmente sustituido con alquilo C1-3; y
en donde R7 es -CN o -CF3 ;
(d) -C(O)OR8 en donde R8 se selecciona entre alquilo C1-4, en donde alquilo C1-4 está opcionalmente sustituido con -CN, cicloalquilo C3-6, tetrahidrofuranilo, u -ORm, en donde Rm es hidrógeno o alquilo C1-3; y alquenilo C1-4; y
(e) -S(O)2 R9, en donde R9 se selecciona entre alquilo C1-4, en donde alquilo C1-4 está opcionalmente sustituido con -CN, -Oalquilo C1-3, fenilo, piridinilo, o cicloalquilo C3-6; alquenilo C1-4; cicloalquilo C3-6, en donde cicloalquilo C3-6 está opcionalmente sustituido con alquilo C1-3; piridinilo, en donde piridinilo está opcionalmente sustituido con fluoro; heterociclo que contiene 4 o 5 átomos en el anillo incluido un átomo de nitrógeno, en donde el heterociclo está unido al azufre a través del átomo de nitrógeno y el heterociclo está opcionalmente sustituido con -CN o -CH2OCH3 ; y
R2 se selecciona entre hidrógeno, -OCH3 , y -CH2-R10, en donde R10 se selecciona entre -OH, morfolinilo, piperidinilo, en donde piperidinilo está sustituido con dos fluoro en la posición, 4 y piperazinilo, en donde piperazinilo está sustituido con metilo en la posición 4;
R3 se selecciona entre hidrógeno, -CH3 , -OCH3 , y -C(O)OCH3;
R4 es hidrógeno u -OCH3 ;
R5 es hidrógeno o fluoro; y
n es 1 o 2,
siempre que cuando R5 es fluoro, R3 es hidrógeno.
En otro aspecto específico, la invención proporciona un compuesto de fórmula (I) en donde:
R1 se selecciona entre:
(a) alquilo C1-4, en donde alquilo C1-4 está sustituido con uno, dos o tres fluoro, o con -CN o -C(O)NHCH3; (c) -C(O)R6, en donde R6 es alquilo C1-4, en donde alquilo C1-4 está sustituido con uno, dos, o tres fluoro; y (e) -s (o )2 R9 en donde R9 es piridinilo;
R2, R3, R4 y R5 son cada uno hidrógeno; y
n es 1 o 2.
En un aspecto determinado, la invención proporciona compuestos de fórmula (II):
en donde la variable R1 es como se define en el presente documento.
En otro aspecto, la invención proporciona compuestos de fórmula (III):
en donde la variable R1 es como se define en el presente documento.
En un aspecto, la invención proporciona los compuestos de los Ejemplos 1-23 y las Tablas 1-8 a continuación
En otro aspecto, la invención proporciona un compuesto seleccionado entre los siguientes compuestos
3-((1R,3s,5S)-3-((7-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-1,6-naftiridin-5-il)amino)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-8-il)propanonitrilo,
W5-((1R,3s,5S)-8-(2-fluoroetil)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)-W7-(5-metil-1H-pirazol-3-il)-1,6-naftiridin-5,7-diamina, W7-(5-metil-1H-pirazol-3-il)-W5-((1R,3s,5S)-8-(piridin-3-ilsulfonil)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)-1,6-naftiridin-5,7-diamina,
2-(dimetilamino)-1-((1R,3s,5S)-3-((7-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-1,6-naftiridin-5-il)amino)-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-9-il)etan-1-ona,
2,2-difluoro-1-((1R,3s,5S)-3-((7-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-1,6-naftiridin-5-il)amino)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-8-il)etan-1-ona,
W5-((1R,3s,5S)-8-((2-metoxietil)sulfonil)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)-W7-(5-metil-1H-pirazol-3-il)-1,6-naftiridin-5,7-diamina,
W7-(5-metil-1H-pirazol-3-il)-W5-((1R,3s,5S)-9-(piridin-3-ilsulfonil)-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-il)-1,6-naftiridin-5,7-diamina,
(1R,3s,5S)-3-((2-(hidroximetil)-7-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-1,6-naftiridin-5-il)amino)-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de isobutilo,
W-metil-2-((1R,3s,5S)-3-((7-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-1,6-naftiridin-5-il)amino)-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-9-il)acetamida, y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.
Las estructuras químicas se nombran en el presente documento de acuerdo con las convenciones de IUPAC implementadas en el software ChemDraw (PerkinElmer, Inc., Cambridge, MA). Por ejemplo, el compuesto del Ejemplo 1:
se designa como 3-((1 R,3s,5S)-3-((7-((5-metil-1 H-pirazol-3-il)amino)-1,6-naftiridin-5-il)amino)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-8-il) propanonitrilo. La notación (1R,3s,5S) describe la orientación exo del grupo naftiridinilamino con respecto al grupo 8-azabiciclo-[3.2.1]octano. Todos los compuestos de la invención están en la orientación exo.
Además, el resto pirazolilo de los compuestos de fórmula (I) existe en forma tautomérica. Por ejemplo, el compuesto del Ejemplo 1 puede representarse de manera equivalente como:
De acuerdo con la convención IUPAC, estas representaciones dan lugar a una numeración diferente de los átomos de la porción pirazolilo. La representación anterior se designa como 3-((1R,3s,5S)-3-((7-((3-metil-1H-pirazol-5-il)amino)-1,6-naftiridin-5-il)amino)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-8-il)propanonitrilo, donde el subrayado identifica dónde difiere el nombre del de la primera representación. Se entenderá que aunque las estructuras se muestran o nombran, en una forma particular, la invención también incluye el tautómero de las mismas.
Los compuestos de la invención contienen uno o más centros quirales y por lo tanto, tales compuestos (y sus intermedios) pueden existir como mezclas racémicas; estereoisómeros puros (es decir, enantiómeros o diastereómeros); mezclas enriquecidas en estereoisómeros y similares. Los compuestos quirales mostrados o nombrados en el presente documento sin una estereoquímica definida en un centro quiral pretenden incluir cualquiera o todas las posibles variaciones de estereoisómeros en el estereocentro indefinido a menos que se indique lo contrario. La representación o denominación de un estereoisómero particular significa que el estereocentro indicado tiene la estereoquímica designada con el entendimiento de que también pueden estar presentes cantidades menores de otros estereoisómeros a menos que se indique lo contrario, siempre que la utilidad del compuesto representado o nombrado no se elimine por la presencia de otro estereoisómero.
Los compuestos de fórmula (I) también contienen varios grupos básicos (por ejemplo, grupos amino) y, por lo tanto, tales compuestos pueden existir como la base libre o en varias formas de sal, tal forma de sal mono-protonada, una forma de sal di-protonada, una forma de sal triprotonada, o mezclas de las mismas. Todas estas formas están incluidas dentro del alcance de esta invención, a menos que se indique otra cosa.
Esta invención también incluye compuestos marcados isotópicamente de fórmula (I), es decir, compuestos de fórmula (I) donde un átomo ha sido reemplazado o enriquecido con un átomo que tiene el mismo número atómico pero una masa atómica diferente de la masa atómica que predomina en la naturaleza. Los ejemplos de isótopos que pueden incorporarse en un compuesto de fórmula (I) incluyen, pero sin limitación, 2H, 3H, 11C, 13C, 14C, 13N, 15N, 15O, 17O, 18O, 35S, 36Cl, y 18F. De particular interés son los compuestos de fórmula (I) enriquecidos en tritio o carbono-14, compuestos que se pueden usar, por ejemplo, en estudios de distribución de tejidos. También son de particular interés los compuestos de fórmula (I) enriquecidos en deuterio, especialmente en un sitio de metabolismo, compuestos que se espera que tengan una mayor estabilidad metabólica. Adicionalmente son de particular interés los compuestos de fórmula (I) enriquecidos en un isótopo emisor de positrones, como 11C, 18F, 15O y 13N, compuestos que se pueden usar, por ejemplo, en estudios de tomografía por emisión de positrones (PET).
Definiciones
Al describir esta invención que incluye sus diversos aspectos y realizaciones, los siguientes términos tienen los siguientes significados, a menos que se indique otra cosa.
El término "alquilo" significa un grupo hidrocarburo saturado monovalente que puede ser lineal o ramificado o combinaciones de los mismos. Salvo que se defina de otra forma, dichos grupos alquilo contienen típicamente de 1 a 10 átomos de carbono. Los grupos alquilo representativos incluyen, a modo de ejemplo, metilo (Me), etilo (Et), npropilo (n-Pr) o (nPr), isopropilo (i-Pr) o (iPr), n-butilo (n-Bu) o (nBu), sec-butilo, isobutilo, ferc-butilo (t-Bu) o (tBu), npentilo, n-hexilo, 2,2-dimetilpropilo, 2-metilbutilo, 3-metilbutilo, 2-etilbutilo, 2,2-dimetilpentilo, 2-propilpentilo, y similares.
Cuando un número específico de átomos de carbono está destinado a un término particular, se muestra el número de átomos de carbono que precede al término. Por ejemplo, el término "alquilo C1-3" significa un grupo alquilo que tiene de 1 a 3 átomos de carbono en donde los átomos de carbono están en cualquier configuración químicamente aceptable, incluyendo configuraciones lineales o ramificadas.
El término "alcoxi" significa el grupo monovalente -O-alquilo, donde alquilo se define como anteriormente. Los grupos alcoxi representativos incluyen, a modo de ejemplo, metoxi, etoxi, propoxi, butoxi y similares.
El término "cicloalquilo" significa un grupo carbocíclico saturado monovalente que puede ser monocíclico o
multicíclico. Salvo que se defina de otra forma, dichos grupos cicloalquilo contienen típicamente de 3 a 10 átomos de carbono. Los grupos cicloalquilo representativos incluyen, a modo de ejemplo, ciclopropilo (cPr), ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, cicloheptilo, ciclooctilo, adamantilo y similares.
El término "heterociclo", "heterocíclico" o "anillo heterocíclico" significa un grupo no aromático cíclico saturado o parcialmente insaturado monovalente, que tiene de 3 a 10 átomos en anillo totales, en donde el anillo contiene de 2 a 9 átomos de carbono en el anillo y de 1 a 4 heteroátomos en el anillo seleccionados entre nitrógeno, oxígeno y azufre. Los grupos heterocíclicos pueden ser monocíclicos o multicíclicos (es decir, fusionados o puenteados). Los grupos heterocíclicos representativos incluyen, a modo de ejemplo, pirrolidinilo, piperidinilo, piperazinilo, imidazolidinilo, morfolinilo, tiomorfolilo, indolin-3-ilo, 2-imidazolinilo, tetrahidropiranilo, 1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-2-ilo, quinuclidinilo, 7-azanorbomanilo, nortropanilo, y similares, donde el punto de unión está en cualquier átomo de carbono o anillo de nitrógeno disponible. Cuando el contexto hace evidente el punto de unión del grupo heterocíclico, dichos grupos pueden denominarse alternativamente especies no valentes, es decir, pirrolidina, piperidina, piperazina, imidazol, tetrahidropirano, etc.
El término "cantidad terapéuticamente efectiva" significa una cantidad suficiente para efectuar el tratamiento cuando se administra a un paciente que necesita tratamiento.
El término "tratamiento" como se usa en el presente documento significa el tratamiento de una enfermedad, trastorno o afección médica (como una enfermedad inflamatoria gastrointestinal), en un paciente, como un mamífero (particularmente un humano) que incluye uno o más de los siguientes:
(a) prevenir que se produzca la enfermedad, trastorno, o afección médica, es decir, prevenir la recurrencia de la enfermedad o afección médica o el tratamiento profiláctico de un paciente predispuesto a la enfermedad o afección médica;
(b) mejorar la enfermedad, trastorno, o afección médica, es decir, eliminar o causar la regresión de la enfermedad, trastorno, o afección médica en un paciente, incluyendo contrarrestar los efectos de otros agentes terapéuticos;
(c) suprimir la enfermedad, trastorno, o afección médica, es decir, ralentizar o detener el desarrollo de la enfermedad, trastorno o afección médica en un paciente; o
(d) aliviar los síntomas de la enfermedad, trastorno o afección médica en un paciente.
La expresión "sal farmacéuticamente aceptable" significa una sal que es aceptable para la administración a un paciente o mamífero, tal como un ser humano (por ejemplo, sales que tienen una seguridad aceptable en mamíferos para un régimen de dosificación dado). Las sales farmacéuticamente aceptables representativas incluyen sales de ácido acético, ascórbico, bencenosulfónico, benzoico, alcanforsulfónico, cítrico, etanosulfónico, edisílico, fumárico, gentísico, glucónico, glucorónico, glutámico, hipúrico, bromhídrico, clorhídrico, isetiónico, láctico, lactobiónico, maleico, málico, mandélico, metanosulfónico, múcico, naftalenosulfónico, naftaleno-1,5-disulfónico, naftaleno-2,6-disulfónico, nicotínico, nítrico, orótico, pamoico, pantoténico, fosfórico, succínico, sulfúrico, tartárico, ptoluenosulfónico y xinafoico, y similares.
La expresión "sal del mismo" significa un compuesto formado cuando el hidrógeno de un ácido es reemplazado por un catión, tal como un catión metálico o un catión orgánico y similares. Por ejemplo, el catión puede ser una forma protonada de un compuesto de fórmula (I), es decir, una forma en donde uno o más grupos amino han sido protonados por un ácido. Normalmente, la sal es una sal farmacéuticamente aceptable, aunque esto no es necesario para las sales de compuestos intermedios que no están destinados a la administración a un paciente.
La expresión "grupo protector de amino" significa un grupo protector adecuado para prevenir reacciones no deseadas en un nitrógeno amino. Los grupos protectores de amino representativos incluyen, pero sin limitación, formilo; grupos acilo, por ejemplo grupos alcanoílo, tales como acetilo y trifluoroacetilo; grupos alcoxicarbonilo, como tere butoxicarbonilo (Boc); grupos arilmetoxicarbonilo, tales como benciloxicarbonilo (Cbz) y 9-fluorenilmetoxicarbonilo (Fmoc); grupos arilmetilo, tal como bencilo (Bn), tritilo (Tr), y 1,1-di-(4'-metoxifenil)metilo; grupos sililo, tal como trimetilsililo (t Ms ), tercbutildimetilsililo (TBDMS), [2-(trimetilsilil)etoxi]metilo (SEM); y similares. Numerosos grupos protectores, y su introducción y eliminación, se describen en T. W. Greene y G. M. Wuts, Protecting Groups in Organic Synthesis, Tercera Edición, Wiley, Nueva York.
Procedimientos sintéticos generales
Los compuestos de esta invención, y sus intermedios, pueden prepararse de acuerdo con los siguientes métodos y procedimientos generales usando materiales de partida y reactivos disponibles comercialmente o preparados rutinariamente. Los sustituyentes y variables (por ejemplo, R1, R2, R3, R4, etc.) usados en los siguientes esquemas tienen los mismos significados que los definidos en otra parte de este documento a menos que se indique lo contrario. Adicionalmente, los compuestos que tienen un átomo ácido o básico o un grupo funcional pueden usarse o pueden producirse como una sal a menos que se indique lo contrario (en algunos casos, el uso de una sal en una reacción particular requerirá la conversión de la sal a una forma no salina, por ejemplo, una base libre, usando procedimientos de rutina antes de realizar la reacción).
Aunque una realización particular de la presente invención puede mostrarse o describirse en los siguientes procedimientos, los expertos en la materia reconocerán que otras realizaciones o aspectos de la presente invención también pueden prepararse usando tales procedimientos o usando otros métodos, reactivos y materiales de partida conocidos por los expertos en la materia. En particular, Se apreciará que los compuestos de la invención pueden prepararse mediante una variedad de rutas de proceso en donde los reactivos se combinan en diferentes órdenes para proporcionar diferentes intermedios en el camino hacia la producción de productos finales.
Un método general de preparación de compuestos finales de la invención utiliza un intermedio clave 1 como se ilustra en el Esquema 1. Las variables R1, R2, R3, R4, R5, R6, R8, y R9 se definen como en la fórmula (I), RA representa un alquilo C1-4 opcionalmente sustituido, y L es un grupo saliente. Por simplicidad, el esquema muestra compuestos en donde la variable n de fórmula (I) se define como 1, es decir, el grupo biciclo es 8-azabiciclo[3.2.1]octilo. Para preparar compuestos en donde la variable n es 2 se usa un proceso análogo.
Esquema 1
Para preparar compuestos en donde R1 es un grupo alquilo opcionalmente sustituido como se define en la opción (a), la reacción de alquilación usa típicamente un grupo saliente de halo L, principalmente bromo o yodo, aunque también se pueden emplear grupos salientes alternativos tales como hidroxi o trifluorometanosulfonato (comúnmente triflato). La reacción se realiza típicamente contactando intermedios 1 con un exceso del reactivo L-RA en un diluyente inerte en presencia de un exceso de base. La reacción se realiza típicamente a una temperatura entre aproximadamente 20 y aproximadamente 60 °C durante aproximadamente 10 y 24 horas o hasta que la reacción esté sustancialmente completa.
Como alternativa, la reacción de adición de Michael puede usarse para preparar compuestos en donde R1 es un grupo cianoetilo. Por ejemplo, como se describe en los ejemplos a continuación, para preparar un compuesto en donde R1 es -(CH2)2CN, el intermedio 1 contacta con un exceso, por ejemplo 1,1 a 1,5 equivalentes, de acrilonitrilo en presencia de un exceso de base, por ejemplo diisopropiletilamina o diazobicicloundeceno. La reacción se realiza típicamente a temperatura ambiente durante aproximadamente 3 y aproximadamente 24 horas o hasta que la reacción se haya completado sustancialmente. En ciertos casos es útil preparar compuestos en donde R1 es un grupo alquilo opcionalmente sustituido por aminación reductora con un aldehído adecuadamente seleccionado.
Compuestos en donde R1 se define como -C(O)R6 pueden prepararse contactando intermedios 1 con un modesto exceso de reactivo de ácido carboxílico HO-C(O)-R6 bajo condiciones típicas de acoplamiento de amida. La reacción se realiza típicamente en presencia de un exceso de base que utiliza un agente activador tal como hexafluorofosfato de W,W,W,W'-tetrametil-0-(7-azabenzotriazol-1-il)uronio (HATU). La reacción se realiza típicamente a temperatura ambiente durante aproximadamente 3 y aproximadamente 24 horas o hasta que la reacción se haya completado sustancialmente.
Un reactivo de cloroformiato Cl-C(O)OR8 puede usarse para preparar compuestos de carbamato en donde R1 se define como -C(O)OR8. Normalmente, el intermedio 1 se pone en contacto con aproximadamente 1 equivalente del cloroformiato en presencia de un exceso de base a una temperatura del orden de 0 °C. La reacción se realiza típicamente entre aproximadamente 1 y aproximadamente 3 horas o hasta que la reacción se complete sustancialmente.
Compuestos de sulfonamida en donde R1 se define como -S(O)2R9 normalmente se preparan contactando intermedios 1 con entre aproximadamente 1 y aproximadamente 1,1 equivalentes de un cloruro de sulfonilo de la
forma Cl-S(O)2R9 en presencia de un exceso de base a una temperatura del orden de 0 °C. La reacción se realiza típicamente entre aproximadamente 1 y aproximadamente 24 horas o hasta que la reacción se complete sustancialmente.
Una reacción ejemplar para la preparación del intermedio 1-2 en donde las variables R2, R3, R4, y R5 son cada una hidrógeno se ilustra en el Esquema 2.
Esquema 2
En la reacción de desplazamiento de amina de la etapa 1, la di-cloro-naftiridina 2 reacciona con un ligero exceso de un amino-8-azabiciclo-[3.2.1]octano 3 protegido con ferc-butoxicarbonilo (Boc) en presencia de base para proporcionar el intermedio 4. El intermedio amino-metil-pirazol 5 protegido con Boc luego se hace reaccionar con el intermedio 4 bajo condiciones estándar de aminación de Buchwald. Por ejemplo el intermedio 4 se combina con entre aproximadamente 1 y aproximadamente 1,5 equivalentes del intermedio pirazol 5 en presencia de una base, tal como carbonato de cesio y un catalizador de paladio. La reacción se realiza típicamente a temperatura elevada, entre aproximadamente 85 °C y aproximadamente 110 °C durante aproximadamente 24 y aproximadamente 48 horas o hasta que la reacción se haya completado sustancialmente. El grupo protector Boc puede eliminarse del metilpirazol durante el curso de la reacción de Buchwald, como se muestra en el Esquema 2, o el grupo protector Boc puede permanecer en el metilpirazol y eliminarse junto con el grupo protector en el grupo 8-azabiciclooctilo en la etapa final. En la última etapa, el grupo o grupos Boc pueden eliminarse mediante tratamiento estándar con un ácido, típicamente ácido trifluoroacético o ácido clorhídrico en dioxano.
Tal como se describe en los ejemplos adjuntos, la preparación del intermedio 1 en donde uno o más de R2, R3, R4, y R5 es diferente al hidrógeno puede seguir la secuencia de etapas mostradas en el Esquema 2, comenzando con un reactivo de dicloro-naftiridina sustituido análogo al intermedio 2. El intermedio 2 sustituido puede estar disponible comercialmente o prepararse fácilmente a partir de reactivos comerciales mediante procedimientos estándar.
Se apreciará que los compuestos de la invención pueden prepararse mediante una variedad de rutas de proceso en donde los reactivos se combinan en diferentes órdenes para proporcionar diferentes intermedios en el camino hacia la producción de productos finales. Para ciertos sustituyentes, R2, R3, R4, o R5 es preferente comenzar con un intermedio de naftiridina sustituido con un precursor del sustituyente deseado, realizar la reacción de desplazamiento de amina para añadir el grupo amino-8-azabiciclooctilo protegido, y transformar el precursor en el sustituyente deseado o una etapa alejada de un sustituyente deseado antes de añadir el grupo pirazol. Un ejemplo específico, el proceso para formar el intermedio 6-3, el precursor protegido con Boc al intermedio 2 sustituido donde R2 es -CH2OH y R3, R4 y R5 son cada uno hidrógeno, se representa en el Esquema 3 a continuación y se describe explícitamente en las Preparaciones 5 y 6.
Esquema 3
El grupo amino-8-azabiciclooctilo protegido 3 se añade a una di-cloro-naftiridina 2-3 sustituida con hidroxilo para formar el intermedio 7-3. Con el grupo 8-azabiciclooctilo instalado, el sustituyente hidroxilo se transforma sucesivamente en el triflato, 8-3, y luego en el éster metílico, 9-3, antes de añadir el aminopirazol 5 protegido para formar el intermedio 10-3, que se hidrogena para formar el intermedio protegido 6-3 que lleva el sustituyente R2 -CH2OH.
Los procesos sintéticos adicionales para la preparación de compuestos de la invención en donde los sustituyentes R2, R3, R4 o R5 son distintos del hidrógeno y los procesos para la preparación de compuestos en donde la variable n es 2, se describen en los ejemplos a continuación.
En consecuencia, en un aspecto de método, la invención proporciona un método para preparar un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, comprendiendo el método hacer reaccionar un compuesto de fórmula (IV):
con (i) un compuesto de fórmula L-RA en donde L es un grupo saliente y RAes un alquilo opcionalmente sustituido como se define para la opción (a) de R1 o un sustituyente de la opción (b), o (ii) HO-C(O)R6, o (iii) Cl-C(O)OR8, o (iv) Cl-S(O)2R9 para formar un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
En aspectos separados y distintos, la invención proporciona un compuesto de fórmula (IV) en donde las variables
toman cualquiera de los valores descritos anteriormente y un compuesto de fórmula (IV) en donde R2, R3, R4, y R5 son cada uno de hidrógeno.
Formas cristalinas
En otro aspecto, la invención proporciona 3-((1R,3s,5S)-3-((7-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-1,6-naftiridin-5-il)amino)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-8-il)propanonitrilo (Ejemplo 1) en forma de base libre cristalina o un solvato del mismo.
La forma cristalina I de la invención es una base libre cristalina del compuesto del ejemplo 1. En un aspecto, la forma I se caracteriza por un patrón de difracción de rayos X en polvo (PXRD) que tiene picos de difracción significativos, entre otros picos, a valores 20 de 7,87 ± 0,20, 12,78 ± 0,20, 15,78 ± 0,20 y 20,41 ± 0,20. La forma I puede caracterizarse además por un patrón PXRD que tiene dos o más picos de difracción adicionales, incluyendo tres o más y cuatro o más picos de difracción adicionales a valores de 20 seleccionados entre 10,80 ± 0,20, 13,47 ± 0,20, 13,64 ± 0,20, 14,66 ± 0,20, 15,11 ± 0,20, 15,54 ± 0,20, 17,75 ± 0,20, 21,00 ± 0,20, 22,22 ± 0,20, 22,93 ± 0,20 y 23,65 ± 0,20. En otro aspecto, La forma I se caracteriza por un patrón PXRD que tiene picos de difracción a valores de 20 de 7,87 ± 0,20, 10,80 ± 0,20, 12,78 ± 0,20, 13,47 ± 0,20, 13,64 ± 0,20, 14,66 ± 0,20, 15,11 ± 0,20, 15,54 ± 0,20, 15,78 ± 0,20, 17,75 ± 0,20, 20,41 ± 0,20, 21,00 ± 0,20, 22,22 ± 0,20, 22,93 ± 0,20 y 23,65 ± 0,20.
Como es bien conocido en el campo de la difracción de rayos X en polvo, las posiciones máximas de los espectros PXRD son relativamente menos sensibles a los detalles experimentales, como detalles de preparación de muestras y geometría de instrumentos, que las alturas de pico relativas. De este modo, en un aspecto, la forma cristalina I se caracteriza por un patrón de difracción de rayos X en polvo en donde las posiciones máximas están sustancialmente de acuerdo con las mostradas en la figura 1.
La estructura de la Forma I cristalina se ha caracterizado además por el análisis de difracción de rayos X de cristal único. Los cristales pertenecen a un sistema cristalino monoclínico y grupo espacial P2Vn. Las dimensiones de la celda unitaria son: a = 8,8240 (10) A, b = 22,4866 (3) A, c = 10,2464 (2) A, a = 90°, p = 93,2360 (10)°, y = 90°, volumen = 2029,87 (5) A3. La densidad calculada es 1,317 g/cm.3. Los cristales contienen cuatro moléculas por celda unitaria. La estructura confirma que los cristales no contienen agua u otras moléculas de disolvente y la estructura molecular es consistente con la estructura del compuesto del Ejemplo 1 como se representa en el presente documento. Los picos de difracción de rayos X en polvo predichos a partir de las posiciones atómicas derivadas están en excelente acuerdo con los resultados observados.
En otro aspecto, la forma cristalina I se caracteriza por su comportamiento cuando se expone a altas temperaturas. Como se muestra en la Figura 2, la traza de calorimetría diferencial de barrido (DSC) registrada a una velocidad de calentamiento de 10 °C por minuto exhibe un pico en el flujo de calor endotérmico, identificado como una transición de fusión, en el intervalo de aproximadamente 243 °C a aproximadamente 253 °C, incluyendo entre aproximadamente 246 °C y aproximadamente 250 °C. La traza del análisis gravimétrico térmico (TGA) de la Figura 3 no muestra una pérdida de peso significativa a temperaturas inferiores al inicio de la descomposición a aproximadamente 237 °C.
Se ha demostrado que la forma cristalina I tiene un perfil reversible de sorción/desorción con una propensión excepcionalmente pequeña a la higroscopicidad. La Forma I demostró un aumento de peso de menos de aproximadamente 0,14 % en el intervalo de humedad de 5 % a 90 % de humedad relativa y menos de aproximadamente 0,07 % de aumento de peso en el intervalo de humedad de 5 % a 90 % de humedad relativa a temperatura ambiente, como se muestra en la Figura 4. No se observó histéresis en dos ciclos de sorción y desorción. Se considera que la Forma I no es higroscópica.
Se ha demostrado que la forma cristalina I es estable tras la exposición a temperatura y humedad elevadas. Después de 3 meses en condiciones aceleradas de 40 °C y 75 % de humedad relativa, no se observaron cambios estadísticamente significativos en el contenido químico ni en el perfil de impurezas.
La forma cristalina II es un solvato cristalino del compuesto del ejemplo 1, caracterizado por el patrón de difracción de rayos X en polvo de la Figura 5 con picos de difracción significativos, entre otros picos, a valores 20 de 9,76 ± 0,20, 15,06 ± 0,20, 16,61 ± 0,20, 20,40 ± 0,20 y 21,99 ± 0,20. Como se describe en el Ejemplo 18 a continuación, el solvato de la Forma II contiene entre aproximadamente 6 % y aproximadamente 7 % de metanol, entre aproximadamente 2 % y aproximadamente 2,5 % de N,N-dimetilformamida, y entre aproximadamente 1 y aproximadamente 1,5 % de agua.
El solvato de la Forma II puede prepararse añadiendo una mezcla de metanol y agua, típicamente una relación de metanol a agua entre aproximadamente 1,5:1 y aproximadamente 3:1, al producto de la reacción de N5-((1 R,3s,5S)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)-N7-(5-metil-1H-pirazol-3-il)-1,6-naftiridin-5,7-diamina (compuesto 1-2 en el esquema 2) con acrilonitrilo o con bromopropionitrilo, que típicamente se realiza en dimetilformamida. La mezcla de reacción resultante se agita a una temperatura de entre aproximadamente 20 °C y aproximadamente 25 °C durante entre aproximadamente 4 horas y aproximadamente 24 horas, se filtra y se lava con metanol o una mezcla de metanol y
agua, tal como una mezcla 1:1,2:1 o 3:1 de metanol y agua para proporcionar el solvato de la Forma II. Se puede preparar un solvato de etanol suspendiendo el solvato de Forma II en etanol.
La Forma I cristalina no solvatada se prepara convenientemente a partir de una forma de solvato del compuesto del Ejemplo 1, preferentemente el solvato de la Forma II. En un proceso típico, el solvato de la Forma II se combina típicamente con un disolvente no protonante para proporcionar una suspensión. Los disolventes útiles incluyen, pero sin limitación, a dioxano, tolueno, acetato de butilo, y acetona. La suspensión se forma típicamente a una concentración de entre aproximadamente 50 mg de solvato a mililitro de disolvente y aproximadamente 85 mg/ml. La suspensión se puede calentar a una temperatura de entre aproximadamente 40 °C y aproximadamente 110 °C durante aproximadamente 4 horas y aproximadamente 3 días, filtrar y lavar para proporcionar el sólido cristalino de la Forma I. Como se describe en los ejemplos 19 y 20 a continuación, se ha encontrado que la acetona es un disolvente particularmente útil.
En otro aspecto, la invención proporciona un método para preparar la Forma cristalina I, comprendiendo el método (a) formar una suspensión de un solvato cristalino de 3-((1R,3s,5S)-3-((7-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-1,6-naftiridin-5-il)amino)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-8-il)propanonitrilo en un disolvente seleccionado entre dioxano, tolueno, acetato de butilo, y acetona, (b) calentar la suspensión a una temperatura entre aproximadamente 40 °C y aproximadamente 110 °C durante aproximadamente 4 horas y aproximadamente 3 días, y (c) aislar la Forma I cristalina de la suspensión.
Composiciones farmacéuticas
Los compuestos de la invención y sus sales farmacéuticamente aceptables se usan típicamente en forma de una composición o formulación farmacéutica. Dichas composiciones farmacéuticas pueden administrarse a un paciente por cualquier vía de administración aceptable que incluya, pero sin limitación, modos de administración oral, rectal, nasal, inhalada, tópica (incluyendo transdérmica) y parenteral.
En consecuencia, en uno de sus aspectos de composición, la invención se dirige a una composición farmacéutica que comprende un vehículo o excipiente farmacéuticamente aceptable y un compuesto de fórmula (I), donde, como se ha definido anteriormente, "compuesto de fórmula (I)" significa un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. Opcionalmente, tales composiciones farmacéuticas pueden contener otros agentes terapéuticos y/o formuladores si se desea. Cuando se discuten composiciones y usos de las mismas, el "compuesto de la invención" también puede denominarse en el presente documento "agente activo". Como se usa en el presente documento, el término "compuesto de la invención" pretende incluir todos los compuestos abarcados por la fórmula (I) así como las especies incorporadas en las fórmulas (II) y (III) y sus sales farmacéuticamente aceptables.
Las composiciones farmacéuticas de la invención típicamente contienen una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de la presente invención. Los expertos en la materia reconocerán, sin embargo, que una composición farmacéutica puede contener más de una cantidad terapéuticamente efectiva, es decir, composiciones a granel, o menos de una cantidad terapéuticamente efectiva, es decir, dosis unitarias individuales diseñadas para administración múltiple para lograr una cantidad terapéuticamente efectiva.
Normalmente, tales composiciones farmacéuticas contendrán de aproximadamente 0,1 a aproximadamente 95 % en peso del agente activo; preferentemente, de aproximadamente 5 a aproximadamente 70 % en peso; y más preferentemente de aproximadamente 10 a aproximadamente 60 % en peso del agente activo.
Se puede usar cualquier vehículo o excipiente convencional en las composiciones farmacéuticas de la invención. La elección de un vehículo o excipiente particular, o combinaciones de vehículos o excipientes, dependerá del modo de administración que se utilice para tratar a un paciente en particular o tipo de condición médica o estado de enfermedad. En este sentido, la preparación de una composición farmacéutica adecuada para un modo particular de administración está dentro del alcance de los expertos en las técnicas farmacéuticas. Adicionalmente, los vehículos o excipientes usados en las composiciones farmacéuticas de esta invención están disponibles comercialmente. A modo de ilustración adicional, Las técnicas de formulación convencionales se describen en Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20a edición, Lippincott Williams & White, Baltimore, Maryland (2000); y H.C. Ansel et al., Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, 7a edición, Lippincott Williams & White, Baltimore, Maryland (1999).
Los ejemplos representativos de materiales que pueden servir como vehículos farmacéuticamente aceptables incluyen, pero sin limitación, los siguientes: azúcares, tales como lactosa, glucosa y sacarosa; almidones, tales como almidón de maíz y almidón de patata; celulosa, como celulosa microcristalina y sus derivados, tales como carboximetilcelulosa sódica, etilcelulosa y acetato de celulosa; tragacanto en polvo; malta; gelatina; talco; excipientes, tales como manteca de cacao y ceras de supositorio; aceites, tales como aceite de cacahuete, aceite de semilla de algodón, aceite de cártamo, aceite de sésamo, aceite de oliva, aceite de maíz y aceite de soja; glicoles, tales como propilenglicol; polioles, tal como glicerina, sorbitol, manitol y polietilenglicol; ésteres, tales como oleato de etilo y laurato de etilo; agar; agentes tamponadores, tales como hidróxido de magnesio e hidróxido de aluminio;
ácido algínico; agua sin pirógenos; solución salina isotónica; solución de Ringer; alcohol etílico; soluciones de tampón fosfato; y otras sustancias compatibles no tóxicas empleadas en composiciones farmacéuticas.
Las composiciones farmacéuticas se preparan típicamente mezclando o mezclando completa e íntimamente el agente activo con un vehículo farmacéuticamente aceptable y uno o más ingredientes opcionales. La mezcla resultante uniformemente mezclada se puede conformar o cargar en comprimidos, cápsulas, píldoras y similares usando procedimientos y equipos convencionales.
Las composiciones farmacéuticas de la invención se envasan preferentemente en una forma de dosificación unitaria. La expresión "forma de dosificación unitaria" se refiere a una unidad físicamente discreta adecuada para dosificar a un paciente, es decir, cada unidad contiene una cantidad predeterminada de agente activo calculada para producir el efecto terapéutico deseado, ya sea solo o en combinación con una o más unidades adicionales. Por ejemplo, tales formas de dosificación unitarias pueden ser cápsulas, comprimidos, píldoras y similares, o paquetes unitarios adecuados para administración parenteral.
En una realización, Las composiciones farmacéuticas de la invención son adecuadas para administración oral. Las composiciones farmacéuticas adecuadas para administración oral pueden estar en forma de cápsulas, comprimidos, píldoras, pastillas para chupar, obleas, grageas, polvos, gránulos; o como una solución o suspensión en un líquido acuoso o no acuoso; o como una emulsión líquida de aceite en agua o agua en aceite; o como un elixir o jarabe; y similares; que contienen cada uno una cantidad determinada de un compuesto de la presente invención como un principio activo.
Cuando están destinadas a la administración oral en una forma de dosificación sólida (es decir, como cápsulas, comprimidos, píldoras y similares), las composiciones farmacéuticas de la invención comprenderán típicamente el agente activo y uno o más vehículos farmacéuticamente aceptables, tal como citrato sódico o fosfato dicálcico. Opcional o alternativamente, tales formas de dosificación sólidas también pueden comprender: cargas o expansores, tales como almidones, celulosa microcristalina, lactosa, fosfato de dicalcio, sacarosa, glucosa, manitol y/o ácido silícico; aglutinantes, tal como carboximetilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa, alginatos, gelatina, polivinilpirrolidona, sacarosa y/o goma arábiga; humectantes, tales como glicerol; agentes disgregantes, tal como croscarmelosa sódica, crospovidona, agar-agar, carbonato de calcio, almidón de patata o tapioca, ácido algínico, ciertos silicatos y/o carbonato sódico; agentes retardantes de la solución, tales como parafina; acelerantes de la absorción, tales como compuestos de amonio cuaternario; agentes humectantes, tal como alcohol cetílico y/o monoestearato de glicerol; absorbentes, tal como caolín y/o arcilla de bentonita; lubricantes, tal como talco, estearato de calcio, estearato de magnesio, polietilenglicoles sólidos, laurilsulfato sódico, y/o mezclas de los mismos; agentes colorantes; y agentes tamponantes.
Agentes de liberación, agentes humectantes, agentes de recubrimiento, edulcorantes, agentes aromatizantes y perfumantes, conservantes y antioxidantes también pueden estar presentes en las composiciones farmacéuticas de la invención. Los ejemplos de antioxidantes farmacéuticamente aceptables incluyen: antioxidantes solubles en agua, tales como ácido ascórbico, clorhidrato de cisteína, bisulfato sódico, metabisulfato sódico, sulfito sódico y similares; antioxidantes solubles en aceite, tales como palmitato de ascorbilo, hidroxianisol butilado, hidroxitolueno butilado, lecitina, galato de propilo, alfa-tocoferol, y similares; y agentes quelantes de metales, tales como ácido cítrico, ácidoetilendiaminotetracético, sorbitol, ácido tartárico, ácido fosfórico y similares. agentes de recubrimiento para comprimidos, cápsulas, piedras y similares, incluyendo los usados para recubrimientos entéricos, como ftalato de acetato de celulosa, ftalato de acetato de polivinilo, ftalato de hidroxipropilmetilcelulosa, ácido metacrílico, copolímeros de éster de ácido metacrílico, trimelitato de acetato de celulosa, carboximetil etil celulosa, acetato succinato de hidroxipropilmetilcelulosa, y similares.
Las composiciones farmacéuticas de la invención también pueden formularse para proporcionar una liberación lenta o controlada del agente activo usando, a modo de ejemplo, hidroxipropil metil celulosa en proporciones variables; u otras matrices poliméricas, liposomas y/o microesferas. Además, las composiciones farmacéuticas de la invención pueden contener opcionalmente agentes opacificantes y pueden formularse de modo que liberen solo el principio activo, o preferentemente, en una determinada parte del tracto gastrointestinal, opcionalmente, de manera retardada. Los ejemplos de composiciones incluidas que pueden utilizarse incluyen sustancias poliméricas y ceras. El agente activo también puede estar en forma microencapsulada, si es apropiado, con uno o más excipientes descritos anteriormente.
Las formas de dosificación líquidas adecuadas para administración oral incluyen, a modo de ilustración, emulsiones farmacéuticamente aceptables, microemulsiones, soluciones, suspensiones, jarabes y elixires farmacéuticamente aceptables. Las formas de dosificación líquidas comprenden típicamente el agente activo y un diluyente inerte, tales como, por ejemplo, agua u otros disolventes, agentes solubilizantes y emulsionantes, tales como alcohol etílico, alcohol isopropílico, carbonato de etilo, acetato de etilo, alcohol bencílico, benzoato de bencilo, propilenglicol, 1,3-butilenglicol, aceites (esp., de semillas de algodón, de cacahuete, maíz, germen, aceite de oliva, de ricino y de sésamo), ácido oleico, glicerol, alcohol tetrahidrofurílico, polietilenglicoles y ésteres de ácidos grasos de sorbitano, y mezclas de los mismos. Como alternativa, ciertas formulaciones líquidas se pueden convertir, por ejemplo, por secado por pulverización, en un polvo, que se usa para preparar formas de dosificación sólidas por procedimientos
convencionales.
Las suspensiones, además del principio activo, pueden contener agentes de suspensión como, por ejemplo, alcoholes isoestearílicos etoxilados, polioxietilensorbitol y ésteres de sorbitán, celulosa microcristalina, metahidróxido de aluminio, bentonita, agar-agar y tragacanto y mezclas de los mismos.
Los compuestos de esta invención también pueden administrarse por vía parenteral (por ejemplo, por vía intravenosa, subcutánea, inyección intramuscular o intraperitoneal). Para administración parenteral, el agente activo se mezcla típicamente con un vehículo adecuado para administración parenteral que incluye, a modo de ejemplo, soluciones acuosas estériles, solución salina, alcoholes de bajo peso molecular tales como propilenglicol, polietilenglicol, aceites vegetales, gelatina, ésteres de ácidos grasos tales como oleato de etilo, y similares. Las formulaciones parenterales también pueden contener uno o más antioxidantes, solubilizantes, estabilizantes, conservantes, agentes humectantes, emulsionantes, agentes tamponantes, o agentes dispersantes. Estas formulaciones pueden volverse estériles mediante el uso de un medio inyectable estéril, un agente esterilizante, filtración, irradiación, o calor.
Como alternativa, las composiciones farmacéuticas de la invención están formuladas para administración por inhalación. Las composiciones farmacéuticas adecuadas para la administración por inhalación estarán típicamente en forma de un aerosol o un polvo. Dichas composiciones se administran generalmente usando dispositivos de administración bien conocidos, como un inhalador de dosis medida, un inhalador de polvo seco, un nebulizador o un dispositivo de administración similar.
Cuando se administra por inhalación usando un recipiente presurizado, las composiciones farmacéuticas de la invención comprenderán típicamente el principio activo y un propulsor adecuado, tales como diclorodifluorometano, triclorofluorometano, diclorotetrafluoroetano, dióxido de carbono u otro gas adecuado. Adicionalmente, la composición farmacéutica puede estar en forma de cápsula o cartucho (hecho, por ejemplo, de gelatina) que comprende un compuesto de la invención y un polvo adecuado para usar en un inhalador de polvo. Las bases en polvo adecuadas incluyen, a modo de ejemplo, lactosa o almidón.
Los compuestos de la invención también pueden administrarse por vía transdérmica usando sistemas y excipientes de administración transdérmica conocidos. Por ejemplo, el agente activo se puede mezclar con potenciadores de permeación, tales como propilenglicol, monolaurato de polietilenglicol, azacicloalcan-2-onas y similares, e incorporado en un parche o sistema de administración similar. Los excipientes adicionales incluyendo agentes gelificantes, emulgentes y tampones, pueden usarse en tales composiciones transdérmicas si se desea.
Como alternativa, Los compuestos de la invención pueden administrarse en forma de supositorios. Una formulación típica de supositorios generalmente consistirá en un agente activo con un agente aglutinante y/o lubricante como una gelatina o manteca de cacao u otra cera o grasa vegetal o sintética de bajo punto de fusión.
Los siguientes ejemplos no limitantes ilustran composiciones farmacéuticas representativas de la presente invención. Comprimido en forma de dosificación sólida oral
Un compuesto de la invención o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo se mezcla en seco con celulosa microcristalina, polivinilpirrolidona y croscarmelosa sódica en una proporción de 4:5:1:1 y prensados en comprimidos para proporcionar una dosis unitaria de, por ejemplo, 5 mg, 20 mg o 40 mg de agente activo por comprimido.
Cápsula en forma de dosificación sólida oral
Un compuesto de la invención o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo se combina con celulosa microcristalina, polivinilpirrolidona y croscarmelosa sódica en una proporción de 4:5:1:1 por granulación húmeda y cargada en cápsulas de gelatina o hidroxipropilmetilcelulosa para proporcionar una dosis unitaria de, por ejemplo, 5 mg, 20 mg o 40 mg de agente activo por cápsula.
Comprimido en forma de dosificación sólida oral
Un compuesto de la invención o una de sus sales farmacéuticamente aceptables se granula en seco o en húmedo con celulosa microcristalina, lactosa, hidroxipropilmetilcelulosa, crospovidona, y estearato de magnesio. La composición de la formulación en % en p/p es el compuesto de la invención (4 %), celulosa microcristalina (45 %), lactosa (36 %), hidroxipropilmetilcelulosa (10 %), crospovidona (3 %) y estearato de magnesio (2 %). Las mezclas granuladas secas o húmedas se prensan comprimidos para proporcionar una dosis unitaria de 10 mg de agente activo por comprimido de 250 mg.
Comprimido en forma de dosificación sólida oral
Un compuesto de la invención o una de sus sales farmacéuticamente aceptables se granula en seco o en húmedo
con celulosa microcristalina, hidroxipropilmetilcelulosa, crospovidona, y estearato de magnesio. La composición de la formulación en % en p/p es el compuesto de la invención (40 %), celulosa microcristalina (45 %), hidroxipropilmetilcelulosa (10 %), crospovidona (3 %) y estearato de magnesio (2 %). Las mezclas granuladas secas o húmedas se prensan comprimidos para proporcionar una dosis unitaria de 100 mg de agente activo por comprimido de 250 mg.
Formulación líquida
Una formulación líquida que comprende un compuesto de la invención (0,1 %), agua (98,9 %) y ácido ascórbico (1,0 %) se forma añadiendo un compuesto de la invención a una mezcla de agua y ácido ascórbico.
Forma de dosificación oral con recubrimiento entérico
Un compuesto de la invención se disuelve en una solución acuosa que contiene polivinilpirrolidona y se pulveriza sobre celulosa microcristalina o perlas de azúcar en una proporción de 1:5 en p/p de agente activo:perlas y luego un aumento de peso de aproximadamente 5 % de un recubrimiento entérico que comprende un copolímero acrílico, por ejemplo se aplica una combinación de copolímeros acrílicos disponibles con los nombres comerciales Eudragit-L® y Eudragit-S®, o succinato de acetato de hidroxipropilmetilcelulosa. Las perlas con recubrimiento entérico se cargan en cápsulas de gelatina o hidroxipropilmetilcelulosa para proporcionar una dosis unitaria de, por ejemplo, 30 mg de agente activo por cápsula.
Forma de dosificación oral con recubrimiento entérico
Se aplica un recubrimiento entérico que comprende una combinación de Eudragit-L® y Eudragit-S®, o succinato de acetato de hidroxipropilmetilcelulosa a una forma de dosificación oral de comprimido o una forma de dosificación oral de cápsula descrita anteriormente.
Utilidad
Se ha demostrado que los compuestos de la invención son potentes inhibidores de la familia de enzimas JAK: JAK1, JAK2, JAK3 y TYK2. La inhibición de la familia de las enzimas JAK podría inhibir la señalización de muchas citoquinas proinflamatorias clave. Por lo tanto se espera que los inhibidores de JAK de la invención sean útiles en el tratamiento de enfermedades inflamatorias tales como colitis ulcerosa, enfermedad de Crohn, rinitis alérgica, asma, y enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EPOC).
Los compuestos de la invención están diseñados para ser pobremente absorbidos para minimizar la exposición sistémica. Como se describe en la sección experimental a continuación, la absorción y distribución de compuestos típicos ha sido ampliamente perfilada en ensayos preclínicos. Los compuestos seleccionados ensayados en ratas canuladas mostraron baja absorción en plasma en la vena porta. Además, los compuestos están diseñados para tener su efecto en el sitio de acción en el tracto gastrointestinal. Los compuestos seleccionados exhibieron una relación de exposición en el colon a exposición en plasma en ratas mayor de aproximadamente 450. En particular, El compuesto del Ejemplo 1 ha demostrado una exposición significativamente mayor en todo el tracto gastrointestinal que la exposición en plasma tras la administración oral en especies preclínicas. Además, El compuesto del Ejemplo 1 se ha evaluado en sujetos humanos sanos y se encontró que exhibía una alta concentración de fármaco en muestras de heces lo que sugiere una exposición significativa en el tracto gastrointestinal.
La colitis inducida por oxazolona es un modelo experimental que tiene un parecido histológico con la colitis ulcerosa humana. Como se describe abajo, el compuesto del Ejemplo 1, entre otros compuestos de la invención, demostró actividad en el modelo de colitis inducida por oxazolona en ratones. Además, cuando se ensayó en un modelo de inmunosupresión en ratones, que sondea la actividad funcional sistémica, el compuesto demostró un efecto mínimo de inmunosupresión a la misma dosis requerida para demostrar la eficacia en el modelo de oxazolona. Así el compuesto demostró actividad anticolítica sin exhibir efectos sistémicos en modelos preclínicos.
Se espera que la alta proporción de colon a plasma lograda con estos compuestos proporcione actividad antiinflamatoria dirigida luminalmente, robusta, sin efectos adversos asociados, impulsados sistémicamente. Se espera que los compuestos sean útiles para una variedad de indicaciones inflamatorias gastrointestinales que incluyen, pero sin limitación, colitis ulcerosa (proctosigmoiditis, pancolitis, proctitis ulcerosa y colitis del lado izquierdo), enfermedad de Crohn, colitis colágena, colitis linfocítica, enfermedad de Behpet, enfermedad celíaca, colitis inducida por el tratamiento del cáncer en el punto de control, (por ejemplo, colitis inducida por inhibidores de CTLA-4), ileítis, esofagitis eosinófila, colitis relacionada con la enfermedad de injerto contra huésped, y colitis infecciosa. Colitis ulcerosa (Reimund et al., J Clin Immunology, 1996, 16, 144-150), enfermedad de Crohn (Woywodt et al., Eur J Gastroenterology Hepatology, 1999, 11,267-276), colitis colagenosa (Kumawat et al., Mol Immunology, 2013, 55, 355-364), colitis linfocítica (Kumawat et al., 2013), esofagitis eosinofílica (Weinbrand-Goichberg et al., Immunol Res, 2013, 56, 249-260), colitis relacionada con la enfermedad de injerto contra huésped (Coghill et al., Blood, 2001, 117, 3268-3276), colitis infecciosa (Stallmach et al., Int J Colorectal Dis, 2004, 19, 308-315), Enfermedad de Behcet (Zhou et al., Autoimmun Rev, 2012, 11, 699-704), enfermedad celíaca (de Nitto et al., World
J Gastroenterol, 2009, 15, 4609-4614), colitis inducida por el tratamiento del cáncer en el punto de control (por ejemplo, colitis inducida por inhibidores de CTLA-4; (Yano et al., J Translation Med, 2014, 12, 191) e ileítis (Yamamoto et al., Dig Liver Dis, 2008, 40, 253-259) se caracterizan por la elevación de ciertos niveles de citoquinas proinflamatorias. Como muchas citoquinas proinflamatorias señalizan a través de la activación de JAK, los compuestos descritos en esta solicitud pueden aliviar la inflamación y aliviar los síntomas.
En particular, se espera que los compuestos de la invención sean útiles para la inducción y el mantenimiento de la remisión de la colitis ulcerosa, y para el tratamiento de la enfermedad de Crohn, La colitis inducida por inhibidores de CTLA-4, y los efectos adversos gastrointestinales en la enfermedad de injerto contra huésped.
En un aspecto, por tanto, la invención proporciona los compuestos de la invención para uso en un método de tratamiento de una enfermedad inflamatoria gastrointestinal en un mamífero (por ejemplo, un humano), comprendiendo el método administrar al mamífero una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de la invención o de una composición farmacéutica que comprende un vehículo farmacéuticamente aceptable y un compuesto de la invención.
La invención proporciona además los compuestos de la invención para uso en un método para tratar la colitis ulcerosa en un mamífero, comprendiendo el método administrar al mamífero una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de la invención o de una composición farmacéutica que comprende un vehículo farmacéuticamente aceptable y un compuesto de la invención.
Cuando se usan para tratar la enfermedad inflamatoria gastrointestinal, los compuestos de la invención se administrarán típicamente por vía oral en una sola dosis diaria o en múltiples dosis por día, aunque pueden usarse otras formas de administración. La cantidad de agente activo administrado por dosis o la cantidad total administrada por día generalmente será determinada por un médico, a la luz de las circunstancias pertinentes, incluyendo la afección a tratar, la vía de administración elegida, el compuesto real administrado y su actividad relativa, la edad, el peso y la respuesta del paciente individual, la gravedad de los síntomas del paciente y similares.
Se espera que las dosis adecuadas para tratar la colitis ulcerosa y otros trastornos inflamatorios gastrointestinales oscilen entre aproximadamente 1 y aproximadamente 400 mg/día de agente activo, incluyendo de aproximadamente 5 a aproximadamente 300 mg/día y de aproximadamente 20 a aproximadamente 70 mg por día de agente activo para un promedio de 70 kg de ser humano.
Terapia de combinación
Los compuestos de la invención también pueden usarse en combinación con uno o más agentes que actúan por el mismo mecanismo o por mecanismos diferentes para efectuar el tratamiento de trastornos inflamatorios gastrointestinales. Las clases útiles de agentes para la terapia combinada incluyen, pero sin limitación, aminosalicilatos, esteroides, inmunosupresores sistémicos, anticuerpos anti-TNFa, anticuerpos dirigidos contra VLA-4, anticuerpos anti-integrina a4p7, agentes antibacterianos, y medicamentos antidiarreicos.
Los aminosalicilatos que pueden usarse en combinación con los presentes compuestos inhibidores de JAK incluyen, pero sin limitación, mesalamina, osalazina y sulfasalazina. Los ejemplos de esteroides incluyen, pero sin limitación, prednisona, prednisolona, hidrocortisona, budesonida, beclometasona, y fluticasona. Los inmunosupresores sistémicos útiles para el tratamiento de trastornos inflamatorios incluyen, pero no se limitan a ciclosporina, azatioprina, metotrexato, 6-mercaptopurina, y tacrolimus. Además, anticuerpos anti-TNFa, que incluyen, pero sin limitación, infliximab, adalimumab, golimumab, y certolizumab, pueden usarse en terapia combinada. Los compuestos útiles que actúan por otros mecanismos incluyen anticuerpos anti-VLA-4, como natalizumab, anticuerpos anti-integrina a4p7, como vedolizumab, agentes antibacterianos, tales como rifaximina, y medicamentos antidiarreicos, como loperamida. (Mozaffari et al., Expert Opin. Biol. Ther. 2014, 14, 583-600; Danese, Gut, 2012, 61,918-932; Lam et al., Immunotherapy, 2014, 6, 963-971.)
En otro aspecto, por tanto, la invención proporciona una combinación terapéutica para usar en el tratamiento de trastornos inflamatorios gastrointestinales, comprendiendo la combinación un compuesto de la invención y uno o más agentes terapéuticos útiles para tratar trastornos inflamatorios gastrointestinales. Por ejemplo, la invención proporciona una combinación que comprende un compuesto de la invención y uno o más agentes seleccionados entre aminosalicilatos, esteroides, inmunosupresores sistémicos, anticuerpos anti-TNFa, anticuerpos dirigidos contra VLA-4, anticuerpos anti-integrina a4p7, agentes antibacterianos, y medicamentos antidiarreicos. El agente(s) secundario(s), cuando están incluidos, están presentes en una cantidad terapéuticamente efectiva, es decir, en cualquier cantidad que produzca un efecto terapéuticamente beneficioso cuando se administra conjuntamente con un compuesto de la invención.
También se proporciona, por tanto, una composición farmacéutica que comprende un compuesto de la invención y uno o más agentes terapéuticos útiles para tratar trastornos inflamatorios gastrointestinales.
Además, la invención proporciona los compuestos de la invención para uso en un método de tratamiento de
trastornos inflamatorios gastrointestinales, comprendiendo el método administrar al mamífero un compuesto de la invención y uno o más agentes terapéuticos útiles para tratar trastornos inflamatorios gastrointestinales.
Cuando se usa en terapia combinada, los agentes pueden formularse en una única composición farmacéutica, como se desveló anteriormente, o los agentes pueden proporcionarse en composiciones separadas que se administran simultáneamente o en momentos separados, por la misma o por diferentes vías de administración. Cuando se administran por separado, los agentes se administran suficientemente cerca en el tiempo para proporcionar un efecto terapéutico deseado. Dichas composiciones pueden empaquetarse por separado o pueden empaquetarse juntas como un kit. Los dos o más agentes terapéuticos en el kit pueden administrarse por la misma vía de administración o por diferentes vías de administración.
Se ha demostrado que los compuestos de la invención son inhibidores potentes de las enzimas JAK1, JAK2, JAK3 y, TYK2 en ensayos de unión a enzimas y para tener una potente actividad funcional sin citotoxicidad en ensayos celulares, como se describe en los siguientes ejemplos.
Ejemplos
Los siguientes ejemplos sintéticos y biológicos se ofrecen para ilustrar la invención, y no deben interpretarse de ninguna manera como limitantes del alcance de la invención. En los siguientes ejemplos, las siguientes abreviaturas tienen los siguientes significados a menos que se indique lo contrario. Las abreviaturas no definidas a continuación tienen sus significados generalmente aceptados.
ACN = acetonitrilo
DCM = diclorometano
DIPEA = W,W-diisopropiletilamina
DMF = W,W-dimetilformamida
DMSO = dimetil sulfóxido
EtOAc = acetato de etilo
h = hora u horas
HATU = hexafluorofosfato de W-tetrametil-0-(7-azabenzotriazol-1-il)uronio
min = minuto o minutos
NMP = W-metil-2-pirrolidona
Pd(dppf)Cl2 = didoro(1,1'-bis(difenilfosfino)-ferroceno)dipaladio(N)
Pd2(dba)3 = tris(dibencilidenacetona)dipaladio(0)
PdXPhos = cloro(2-diciclohexilfosfino-2',4',6'-triisopropil-1,1'-bifenil)[2-(2'-amino-1,1'-bifenil)]paladio(N) TA = temperatura ambiente
Selectfluor = bis(tetrafluoroborato) de 1-clorometil-4-fluoro-1,4-diazoniabiciclo[2.2.2]octano
TEA = trietilamina
TFA = ácido trifluoroacético
THF = tetrahidrofurano
bis(pinacolato)diboro = 4,4,5,5,4',4',5',5'-octametil-[2,2']bi[[1,3,2]dioxaborolanilo]
Xantphos = 4,5-bis(difenilfosfino)-9,9-dimetilxanteno
Xphos = diciclohexilfosfino-2',4',6'-triisopropilbifenilo
Los reactivos y disolventes se compraron a proveedores comerciales (Aldrich, Fluka, Sigma, etc.), y se usaron sin más purificación. El progreso de las mezclas de reacción se controló por cromatografía en capa fina (TLC), cromatografía líquida analítica de alto rendimiento (HPLC anal.) y espectrometría de masas. Las mezclas de reacción se elaboraron como se describe específicamente en cada reacción; comúnmente se purificaron mediante extracción y otros métodos de purificación, como la cristalización y la precipitación dependientes de la temperatura y del disolvente. Además, las mezclas de reacción se purificaron rutinariamente por cromatografía en columna o por HPLC preparativa, típicamente usando empaquetamientos de columna C18 o BDS y eluyentes convencionales. Las condiciones típicas de HPLC preparativa se describen a continuación.
La caracterización de los productos de reacción se realizó rutinariamente en masa y espectrometría de RMN-H1. Para el análisis de RMN, las muestras se disolvieron en disolvente deuterado (como CD3OD, CDCb, o d6-DMSO), y los espectros de RMN-H1 se adquirieron con un instrumento Varian Gemini 2000 (400 MHz) en condiciones de observación estándar. La identificación espectrométrica de masas de los compuestos se realizó mediante un método de ionización por electropulverización (ESMS) con un instrumento modelo API 150 EX de Applied Biosystems (Foster City, CA) o un instrumento Waters (Milford, MA) 3100, acoplado a sistemas de autopurificación.
Condiciones de HPLC preparativa
Método 1
Columna: C18, 5 |jm 21,2 x 150 mm o C18, 5 jm 21 x 250 mm o C145 jm 21x150 mm Temperatura de la Temperatura ambiente
columna:
Caudal: 20,0 ml/min
Fases móviles: A = agua TFA al 0,05 %
B = ACN TFA al 0,05 %,
Volumen de (100-1500 jl)
inyección:
Longitud de onda del 214 nm
detector:
Los compuestos brutos se disolvieron en agua 1:1 de ácido acético a aproximadamente 50 mg/ml. Se realizó un ensayo de escala analítica de 4 minutos usando una columna C18 de 2,1 x 50 mm seguida de una prueba de escala preparativa de 15 o 20 minutos usando una inyección de 100 j l con el gradiente basado en el % de retención de B del ensayo de escala analítica. Los gradientes exactos dependieron de la muestra. Las muestras con impurezas cercanas se verificaron con una columna C18 de 21 x 250 mm y/o una columna C14 de 21 x 150 mm para una mejor separación. Las fracciones que contenían el producto deseado se identificaron mediante análisis espectrométrico de masas.
Condiciones de HPLC preparativa
Método 2
Columna: Synergi 200 x 50 mm 10 jm
Temperatura de la Temperatura ambiente
columna:
Caudal: 80 ml/min
Fases móviles: A = agua TFA al 0,1 %
B = ACN
Volumen de inyección: 8 ml
Longitud de onda del 220 nm y 254 nm
detector:
Gradiente: B del 25 % al 45 %
Condiciones analíticas de HPLC
Método 3
Columna: LUNA C18 (2), 150 x 4,60 mm, 3 jm
Temperatura de la 37 °C
columna:
Caudal: 1,0 ml/min
Volumen de inyección: 5 j l
Preparación de la Disolver en 1:1 de ACN:agua
muestra:
Fases móviles: A = Agua:ACN:TFA (98:2:0,05)
B = Agua:ACN:TFA (2:98:0,05)
Longitud de onda del 254 nm
detector:
Gradiente: Total de 30 min (tiempo (min)/% de B): 0/2, 10/20, 24/90, 26/90,
27/2, 30/2
Preparación 1: (1R,3s,5S)-3-((7-cloro-1,6-naftiridin-5-il)amino)-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butilo
A un vial de 20 ml se le añadió 5,7-dicloro-1,6-naftiridina, (289,1 mg, 1,45 mmol), (1R,3s,5S)-3-amino-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butilo (362 mg, 1,60 mmol), DIPEA (0,76 ml, 4,36 mmol) y Dm SO (7,26 ml). El vial se tapó y la mezcla de reacción se calentó a 110 °C y se agitó durante 16 h. La mezcla de reacción se diluyó con agua y se extrajo con EtOAc (3 x 20 ml). Las fracciones orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato sódico, se filtraron y se concentraron para proporcionar un aceite marrón, que se purificó por cromatografía en columna (columna de 24 g; EtOAc al 0-80 % en hexanos) para proporcionar el producto del título como un sólido amarillo pálido (455,2 mg, 69 % de rendimiento; 85 % de pureza). (m/z): [M+H]+ calculado para C20H25ClN4O2 389,17, 391,16 encontrado 391,5.
Preparación 2: W5-((1R,3s,5S)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-ilo)-W7-(5-metil-1H-pirazol-3-il)-1,6-naftiridin-5,7-diamina
(a) (1R,3s,5S)-3-((7-((1-(terc-butoxicarbonil)-5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-1,6-naftiridin-5-il)amino)-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato deterc-butilo
A un vial de 20 ml se añadió 1R,3s,5S)-3-((7-cloro-1,6-naftiridin-5-il)amino)-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butilo (474,6 mg, 1,22 mmol), 3-amino-5-metil-1H-pirazol-1-carboxilato de terc-butilo (289 mg, 1,46 mmol), cloro[2-diciclohexilfosfino)-3,6-dimetoxi-2'-4'-6'-tri-(58 mg, 0,073 mmol) y carbonato de cesio (517 mg, 1,59 mmol). El vial se selló con un tabique de goma y la atmósfera se enjuagó con nitrógeno. Luego se añadió dioxano (6,10 ml) mediante una jeringa, y el tabique se reemplazó rápidamente con una tapa blanca. La mezcla de reacción se calentó a 110 °C y se agitó durante 26 h y se enfrió a TA. La suspensión se diluyó con agua y salmuera y se extrajo con EtOAc (4 x 20 ml). Las fracciones orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato sódico, se filtraron y se concentraron para proporcionar un sólido espumoso marrón que se usó directamente en la siguiente etapa. (m/z):
[M+H]+ calculado para C29H39N7O4550,31, observado 550,8.
(b) W5-((1R,3s,5S)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)-W7-(5-metil-1H-pirazol-3-il)-1,6-naftiridin-5,7-diamina
Al producto de la etapa anterior (671 mg, 1,22 mmol) se le añadió DCM (3,05 ml) seguido de TFA (3,05 ml) y la mezcla de reacción se agitó a TA durante 4 h y se concentró para proporcionar un aceite rojo, espeso. El petróleo crudo se disolvió en una solución al 15 % de ácido acético en agua que incluye 0,1 ml de ACN (10 ml) y se purificó por HPLC preparativa (método 1) para proporcionar la sal di-TFA del producto del título como un sólido rojo/naranja (705 mg, 73 % de rendimiento; 97 % de pureza). (m/z): [M+H]+ calculado para C19H23N7350,20, observado 350,5.
Preparación 3: (1R,3s,5S)-3-((7-cloro-1,6-naftiridin-5-il)amino)-9-azabiciclo[3.3.1]nonano-9-carboxilato de terc-butilo
A un vial de 40 ml se le añadió 5,7-dicloro-1,6-naftiridina, (510 mg, 2,56 mmol), (1R,3s,5S)-3-amino-9-azabiciclo[3.3.1]nonano-9-carboxilato de ferc-butilo (677 mg, 2.82 mmol), DIPEA (1,34 ml, 7,69 mmol) y Dm SO (8,54 ml) Se tapó el vial y la mezcla de reacción se calentó a 110 °C y se agitó durante 16 h. La mezcla de reacción se diluyó con agua y salmuera y se extrajo con EtOAc (4 x 30 ml). Las fracciones orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato sódico, se filtraron y se concentraron para proporcionar el producto deseado como un sólido marrón que se disolvió en una cantidad mínima de DCM y se adsorbió sobre Celite®, se purificó por cromatografía en columna (columna de 40 g; 0-100 % de EtOAc en hexanos) para proporcionar el producto del título como un sólido amarillo (901,6 mg, 86 % de rendimiento; 99 % de pureza). (m/z): [M+H]+ calculado para C2H27ClN4O2 403,18 encontrado 403,3.
Preparación 4: W5-((1R,3s,5S)-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-il)-W7-(5-metil-1H-pirazol-3-il)-1,6-naftiridin-5,7-diamina
(a) (1R,3s,5S)-3-(7-((1-(ferc-butoxicarbonil)-5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-1,6-naftiridin-5-il)amino)-9-azabiciclo[3.3.1]nonano-9-carboxilato de ferc-butilo
A un matraz de fondo redondo de 100 ml se añadió el producto de la Preparación 3 (876,4 mg, 2,18 mmol), 3-amino-5-metil-1H-pirazol-1-carboxilato de ferc-butilo (515 mg, 2,61 mmol), aducto de cloro[2-(diciclohexilfosfino)-3,6-dimetoxi-2'-4'-6'-tri-/so-propil-1,1'-bifenil][2- 2-aminoetil)fenil]paladio(II) metil ferc-butiléter (104 mg, 0,131 mmol) y carbonato de cesio (921 mg, 2,83 mmol). El matraz se selló con un tabique de goma y la atmósfera se enjuagó con nitrógeno. Se añadió dioxano (21,75 ml) mediante una jeringa. Se añadió un condensador con un globo de nitrógeno unido al matraz, y la mezcla de reacción se calentó a 110 °C y se agitó durante 20 h. La mezcla de reacción se enfrió a TA, se diluyó con salmuera y se extrajo con EtOAc (4 x 30 ml). Las fracciones orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato sódico, se filtraron y se concentraron para proporcionar un sólido marrón bruto, que se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional.
(b) W5-((1R,3s,5S)-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-il)-W7-(5-metil-1H-pirazol-3-il)-1,6-naftiridin-5,7-diamina
Al producto de la etapa anterior (1,226 g, 2,175 mmol) se le añadió DCM (5,44 ml) y TFA (5,44 ml). El matraz se cubrió con un tabique de goma perforado con una aguja. La solución se agitó a TA durante 4 h y se concentró para proporcionar un aceite rojo, oscuro. El material bruto se disolvió en una solución 3:1:0,25 de agua:ácido acético:acetonitrilo (18 ml), se filtró y se purificó en dos lotes mediante HPLC preparativa para proporcionar la sal 2TFA del producto del título como un sólido rojo (991,1 mg. 75 % de rendimiento; 97 % de pureza). (m/z): [M+H]+ calculado para C20H25N7364,22, observado 364,1.
Preparación 5: 5,7-dicloro-1,6-naftiridin-2-ol
(a) W-(2,6-dicloropiridin-4-il)pivalamida
A una mezcla de 2,6-dicloropiridin-4-amina (80,0 g, 491 mmol) y TEA (99,8 g, 982 mmol) en DCM (800 ml) se añadió cloruro de pivaloílo (118,0 g, 982 mmol) a 0 °C y la mezcla se agitó a 20 °C durante 13 h, se filtró, se extrajo con DCM, se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4, se filtró, se concentró al vacío y luego se purificó por recristalización en DCM para proporcionar el intermedio del título como un sólido blanco (90 g, 70 % de rendimiento). (b) W-(2,6-dicloro-3-formilpiridin-4-il)pivalamida
A una mezcla del producto de la etapa anterior (24,0 g, 97,1 mmol) en THF (250 ml) se añadió ferc-butil litio (224 ml, 291,3 mmol) a -78 °C, y la mezcla de reacción se agitó a -78 °C durante 1,5 h. Se añadió DMF (22,7 g, 291,3 mmol), la mezcla de reacción se agitó a -78°C durante 3 h y se añadió HCl 6 M. La mezcla de reacción se extrajo con EtOAc, se lavó con salmuera, se secó, se concentró y se purificó por cromatografía en columna. Los productos de tres reacciones idénticas se combinaron para proporcionar el intermedio del título (36 g, 45 % de rendimiento). (c) 3-(2,6-dicloro-4-pivalamidopiridin-3-il)-3-hidroxipropanoato de ferc-butilo
La diisopropilamina (17,2 g, 170,8 mmol) se disolvió en THF (100 ml) y se enfrió a -78 °C, y luego se añadió n-butil litio (68,3 ml, 170,8 mmol) gota a gota a -78 °C. La mezcla se agitó a -78°C durante 0,5 h y luego se añadió gota a gota acetato de ferc-butilo (19,8 g, 170,8 mmol) disuelto en THF (100 ml) a -78°C. La mezcla de reacción se agitó a -78 °C durante 0,5 h y luego el producto de la etapa anterior (18 g, 65,7 mmol) disuelto en THF (150 ml) se añadió gota a gota a -78 °C y la mezcla se agitó a - 78 °C durante 1,0 h. Se añadió cloruro de amonio acuoso y la mezcla de reacción se extrajo con EtOAc (2 * 800 ml). La fase orgánica se secó y se evaporó y el residuo se purificó por cromatografía en columna. Los productos de dos reacciones idénticas se combinaron para proporcionar el intermedio del título como un sólido blanco (58 g).
(d) 5,7-dicloro-1,6-naftiridin-2-ol
Se añadió HCl acuoso (400 ml) a 3-(2,6-dicloro-4-pivalamidopiridin-3-il)-3-hidroxipropanoato de ferc-butilo (64 g, 164 mmol) disuelto en dioxano (400 ml) y la mezcla de reacción se agitó a 100 °C durante 12 h. Se añadió agua y la mezcla de reacción se filtró para dar el intermedio del título como un sólido blanco (33 g, 94 % de rendimiento). Preparación 6: (1 R,3s,5S)-3-((2-(hidroximetil)-7-((5-metil-1 H-pirazol-3-il)amino)-1,6-naftiridin-5-il)amino)-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de ferc-butilo
(a) (1R,3s,5S)-3-((7-cloro-2-hidroxi-1,6-naftiridin-5-il)amino)-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de ferc-butilo A una mezcla de 5,7-dicloro-1,6-naftiridin-2-ol (7,0 g, 32,5 mmol) y (1R,3s,5S)-3-amino-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de ferc-butilo (8,1 g, 35,8 mmol) en DMSO (70 ml) se añadió DIPEA (8,4 g, 65,0 mmol), La mezcla de reacción se calentó a 110 °C durante 8 h, se vertió en agua, se filtró y se lavó con EtOAc (200 ml) para dar el
intermedio del título como un sólido amarillo (10 g, rendimiento del 75 %).
(b) (1R,3s,5S)-3-((7-cloro-2-(((trifluorometil)sulfonil)oxi)-1,6-naftiridin-5-il)amino) -8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de tere-butilo
A una solución del producto de la etapa anterior (10 g, 24 mmol) y carbonato de cesio (15,6 g, 48 mmol) en DMF (100 ml) se le añadió gota a gota una solución de W-fenil-b/s(trifluorometanosulfonimida) (17,0 g, 48 mmol) en DMF (100 ml) a 0 °C, y la mezcla de reacción se agitó a 20 °C durante 2 h. Se añadió agua (200 ml) y la mezcla de reacción se extrajo con EtOAc (400 ml), se lavó con salmuera (100 ml), se secó sobre sulfato sódico y se concentró para proporcionar el producto intermedio del título bruto (14 g), que se usó directamente en la siguiente etapa. (c) 5-(((1R,3s,5S)-8-(tere-butoxicarbonil)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)amino)-7-cloro-1,6-naftiridina-2-carboxilato de metilo
A una solución del producto de la etapa anterior (14 g, 26 mmol) en MeOH (280 ml) se añadieron Pd(dppf)Cl2 (2,0 g, 2,6 mmol) y TEA (5,3 g, 52 mmol) y la mezcla de reacción se calentó a 50 °C durante 12 h en atmósfera de CO (50 psi). La mezcla de reacción se filtró, se diluyó con agua (100 ml), se extrajo con EtOAc (300 ml), se lavó con salmuera (50 ml), se secó sobre sulfato sódico, se concentró y se purificó por cromatografía en columna para proporcionar el intermedio del título (8,0 g, 70 % rendimiento).
(m/z): [M+H]+ calculado para C22H27CHN4O4447,17 encontrado 447,1.
(d) 7-((1-(tere-butoxicarbonil)-5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-5-(((1R,3s,5S)-8-(tere-butoxicarbonil)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)amino)-1,6-naftiridin-2-carboxilato de metilo
A una mezcla del producto de la etapa anterior (8,0 g, 17,8 mmol), 3-amino-5-metil-1H-pirazol-1-carboxilato de terebutilo (4,5 g, 21,5 mmol) y carbonato de cesio (7,1 g, 21,5 mmol) en dioxano (80 ml) se añadió PdXPhos (2,8 g, 3,56 mmol) en nitrógeno. La mezcla de reacción se agitó a 100 °C durante 12 h, se diluyó con EtOAc (150 ml), se lavó con agua (50 ml) y salmuera (30 ml), se secó sobre sulfato sódico anhidro, se concentró y se purificó por cromatografía en columna para proporcionar el intermedio del título (3,0 g, 72 % de rendimiento). (m/z): [M+H]+ calculado para C31H41N7O6608,31 encontrado 608,3.
(e) (1 R,3s,5S)-3-((2-(hidroximetil)-7-((5-metil-1 H-pirazol-3-il)amino)-1,6-naftiridin-5-il)amino)-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butilo
A una solución de borohidruro sódico (225 mg, 5,91 mmol) en MeOH (565 mg, 17,6 mmol) y THF (10 ml) se añadió una solución del producto de la etapa anterior (500 mg, 0,98 mmol) en THF (40 ml) a 0 °C, y la mezcla de reacción se agitó a 50 °C durante 2 h. Se añadió agua (15 ml), seguido de EtOAc (150 ml). La mezcla de reacción se lavó con salmuera (30 ml), se secó sobre sulfato sódico anhidro, se concentró y se purificó por HPLC preparativa (método 2) para proporcionar el producto del título (840 mg, 46 % de rendimiento). (m/z): [M+H]+ calculado para C25H33N7O3 480,26 encontrado 480,2.
Preparación 7: 2-(bromometil)-5,7-dicloro-1,6-naftiridina
(a) ácido 2-(2-etoxi-2-oxoetil)-6-metilnicotínico
A una mezcla de terc-butóxido potásico (90,2 g, 804 mmol) en alcohol isopropílico (600 ml) se añadió acetoacetato de etilo (69,8 g, 536 mmol). La mezcla de reacción se agitó a TA durante 1 h, luego se añadió acetato de cobre (4,8 g, 26,8 mmol), seguido de ácido 2-cloro-6-metilnicotínico (46,0 g, 268 mmol) y la mezcla de reacción se agitó a 80 °C durante 5 h, se añadió HCl diluido para ajustar el pH a 2 y la solución se extrajo con EtOAc (3 x 500 ml). Las fases orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron y se concentraron para dar el producto bruto, que se recristalizó con 5:1 de éter de petróleo:tolueno para dar el intermedio del título como un sólido marrón (47 g, 79 % de rendimiento).
(b) 2-metil-1,6-naftiridin-5,7(6H,8H)-diona
A una solución del producto de la etapa anterior (25 g, 105,5 mmol) en THF (250 ml) se le añadió TEA (15,9 g, 158,2 mmol). La mezcla se enfrió a -10 °C y se añadió cloroformiato de etilo (17,2 g, 158,2 mmol), y la mezcla de reacción
se agitó durante 1 h a -10-5 °C. Se añadió hidróxido de amonio (200 ml) gota a gota a 0-5 °C y la mezcla de reacción se agitó durante 2 h a temperatura ambiente. Los productos de dos reacciones idénticas se combinaron y la mezcla de reacción se ajustó a pH 6,5-7,5 con HCl 3 M, se concentró al vacío, se agitó durante 1 h a -10-5 °C, se filtró y se secó al vacío para dar el título. intermedio como un sólido marrón (30 g bruto). (m/z): [M+H]+ calculado para C9H8N2O2177,07 encontrado 177,1.
(c) 5,7-dicloro-2-metil-1,6-naftiridina
El producto de la etapa anterior (10,0 g, 56,7 mmol) se disolvió en cloruro de fosforilo (40 ml) y se agitó durante 6 h a 160 °C en un tubo sellado de 100 ml. El cloruro de fosforilo se eliminó por destilación a presión reducida y la mezcla de reacción se vertió en hielo/agua (400 ml) y se extrajo con DCM (3 x 400 ml), Las frases orgánicas se combinaron, se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4, se concentró y el residuo se purificó por cromatografía ultrarrápida para dar el producto intermedio del título como un sólido rojo (3,4 g, 28 % de rendimiento).
(d) 2-(bromometil)-5,7-dicloro-1,6-naftiridina
A una solución de 5,7-dicloro-2-metil-1,6-naftiridina (5,0 g, 23,4 mmol) en tetracloruro de carbono (100 ml) se le añadió W-bromosuccinimida (4,17 g, 23,4 mmol) y peróxido de benzoílo (0,28 g, 1,2 mmol) y la mezcla de reacción se calentó a reflujo durante 12 h y se concentró para dar el producto bruto que se purificó por cromatografía en gel de sílice para proporcionar el compuesto del título como un sólido rojo (3,8 g, 55 % de rendimiento).
(m/z): [M+H]+ calculado para CgHsBrCbN 290,90 encontrado 290,9.
Preparación 8: (1R,3s,5S)-3-((7-cloro-2-(morfolinometil)-1,6-naftiridin-5-il)amino)-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de tere-butilo
(a) 4-((5,7-dicloro-1,6-naftiridin-2-il)metil)morfolina
A una solución de 2-(bromometil)-5,7-dicloro-1,6-naftiridina (1,0 g, 3,43 mmol) en ACN (34,3 ml) se añadió DIPEA (1,79 ml, 10,28 mmol) seguido de morfolina (0,31 ml, 3,60 mmol) a 0 °C. La mezcla se agitó a 0 °C a TA durante la noche, se filtró a través de una almohadilla de Celite®, que se lavó con EtOAc. Las fracciones orgánicas combinadas se concentraron por evaporación rotatoria para dar el producto del título bruto, que se usó en la siguiente etapa sin purificación. (m/z): [M+H]+ calculado para C13 H13 Cl2N3O2298,04 encontrado 298,0.
(b) (1R,3s,5S)-3-((7-cloro-2-(morfolinometil)-1,6-naftiridin-5-il)amino)-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de tere-butilo
A una mezcla del producto de la etapa anterior (1020 mg, 3,42 mmol) y (1 R,3s,5S)-3-amino-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de tere-butilo (774 mg, 3,42 mmol) en DMSO (34,3 ml) se añadió DIPEA (1,787 ml, 10,26 mmol) a temperatura ambiente. La mezcla resultante se agitó a 120 °C durante 19 h. El disolvente se eliminó por evaporación rotatoria para dar el producto bruto, que se purificó por cromatografía en columna para dar el compuesto del título como un sólido marrón (513 mg, 30,7 % de rendimiento). (m/z): [M+H]+ calculado para C25H34ClN5O3488,24 encontrado 488,2.
Preparación 9: 5,7-dicloro-2-((4,4-difluoropiperidin-1-il)metil)-1,6-naftiridina
Siguiendo el procedimiento general de la Preparación 8(a), sustituyendo 4,4-difluoropiperidina por morfolina, se obtuvo el intermedio del título. (m/z): [M+H]+ calculado para C14H«ChF2N3332,05 encontrado 332,0.
Preparación 10: 5,7-dicloro-2-((4-metilpiperazin-1-il)metil)-1,6-naftiridina
Siguiendo el procedimiento general de la Preparación 8(a), sustituyendo 1-metilpiperazina por morfolina, se obtuvo el intermedio del título. (m/z): [M+H]+ calculado para C14H16Cl2N4311,08 encontrado 311,0.
Preparación 11: 5,7-dicloro-3-metoxi-1,6-naftiridina
(a) 5,7-dicloro-3-yodo-1,6-naftiridina
Una mezcla de 5,7-dicloro-1,6-naftiridina (4,0 g, 20 mmol) y W-yodosuccinimida (9,0 g, 37 mmol) en ácido acético (100 ml) se calentó a reflujo durante 12 h. La mezcla de reacción se concentró al vacío, y el residuo se purificó por cromatografía en columna 20:1 de éter de petróleo:EtOAc para proporcionar el intermedio del título como un sólido amarillo (2,4 g, rendimiento del 37 %).
(b) ácido (5,7-dicloro-1,6-naftiridin-3-il)borónico
A una solución de 5,7-dicloro-3-yodo-1,6-naftiridina (6,0 g, 18,5 mmol), bis(pinacolato)diborano (5,2 g, 20,4 mmol) y acetato potásico (3,6 g, 37,0 mmol) en dioxano (50 ml) se añadió Pd(dppf)2Cl2 (0,6 g) en nitrógeno. La mezcla de reacción se calentó a 90 °C durante la noche y se filtró. El filtrado se concentró para proporcionar el intermedio del título como un aceite amarillo (6 g, bruto).
(c) 5,7-dicloro-1,6-naftiridin-3-ol
El producto de la etapa anterior (6 g, bruto) se disolvió en DCM (20 ml), y se añadió peróxido de hidrógeno (6 ml) a 0 °C. La mezcla de reacción se agitó a TA durante la noche y luego se añadió una solución acuosa de tiosulfato sódico (20 ml) a la mezcla a 0 °C. La mezcla se extrajo con DCM; las fases orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron con Na2SO4 y se concentraron, para proporcionar el intermedio del título como un sólido amarillo (6,0 g, bruto).
(d) 5,7-dicloro-3-metoxi-1,6-naftiridina
A una mezcla del producto de la etapa anterior (6,0 g, 27,9 mmol) y carbonato de potasio (30,6 g, 83,7 mmol) en
DMF (50 ml) se añadió yoduro de metilo (14,4 g, 101 mmol) a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se agitó a TA durante 2 h, se diluyó con agua (50 ml), se extrajo con EtOAc (3 x 100 ml), se lavó con salmuera (2 x 30 ml), se secó sobre Na2SO4 , se filtró y se concentró al vacío. El residuo se purificó por cromatografía en columna para proporcionar el compuesto del título como un sólido amarillo (3,0 g, 46 % de rendimiento).
Preparación 12: 5-(((1R,3s,5S)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)amino)-7-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-1,6-naftiridina-3-carboxilato de metilo
(a) (1 R,3s,5S)-3-((7-cloro-3-yodo-1,6-naftiridin-5-il)amino)-8-azabiciclo[3.2.1 ]octano-8-carboxilato de ferc-butilo Una solución de 5,7-dicloro-3-yodo-1,6-naftiridina (7,0 g, 21,6 mol), DIPEA (5,6 g, 43,2 mmol) y (1R,3s,5S)-3-amino-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de ferc-butilo (5,8 g, 25,9 mmol) disuelto en NMP (70 ml) se calentó a 110 °C durante 3 h. La mezcla de reacción se purificó por cromatografía en columna (eluida con EtOAc:éter de petróleo al 0 20 %) para dar el intermedio del título como un sólido amarillo (10,2 g, rendimiento del 91,8 %).
(b) 5-(((1R,3s,5S)-8-(ferc-butoxicarbonil)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)amino)-7-cloro-1,6-naftiridina-3-carboxilato de metilo
El producto de la etapa anterior (10,1 g, 19,7 mmol), PdCL(dppf) (2,87 g, 3,94 mmol) y TEA (5,97 g, 59,2 mmol) se disolvieron en metanol (200 ml) y la mezcla de reacción se agitó a 60 °C en atmósfera de CO durante 4 h, se filtró y se evaporó. El residuo se purificó por cromatografía en columna (eluido con EtOAc:éter de petróleo al 0-25 %) para dar el intermedio del título como un sólido amarillo (7,5 g, 85,6 % de rendimiento).
(c) 5-(((1R,3s,5S)-8-(ferc-butoxicarbonil)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)amino)-7-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-1,6-naftiridina-3-carboxilato de metilo
El producto de la etapa anterior (6,6 g, 14,8 mmol), 3-amino-5-metil-1H-pirazol-1-carboxilato de ferc-butilo (3,5 g, 17,7 mmol), carbonato de cesio (9,61 g, 29,6 mmol) y Pd Xphos (2,32 g, 2,95 mmol) se disolvieron en dioxano (130 ml) y se purgaron con nitrógeno. La mezcla de reacción se agitó a 110 °C durante 12 h. El producto se combinó con el producto de una reacción similar, se extrajo con EtOAc (600 ml) y se lavó con salmuera (3 x 300 ml). La fase orgánica se evaporó. El residuo se cristalizó para proporcionar el intermedio del título (5 g, 58 % de rendimiento) y 2 g de producto bruto que se purificó por HPLC preparativa (método 2).
(d) 5-(((1R,3s,5S)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)amino)-7-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-1,6-naftiridina-3-carboxilato de metilo
El producto de la etapa anterior (5,5 g, 10,85 mmol) se disolvió en HCl - metanol (50 ml) y la mezcla de reacción se agitó a TA durante 4 h y se evaporó a presión reducida para dar la sal 2HCl del compuesto del título como un sólido naranja (5,2 g, 100 % de rendimiento). (m/z): [M+H]+ calculado para C21H25N7O2408,21 encontrado 408,1.
Preparación 13: 5,7-dicloro-4-metoxi-1,6-naftiridina
Una mezcla de 5,7-dicloro-1,6-naftiridin-4-ol (7 g, 32,6 mmol), yoduro de metilo (41,22 g, 290,4 mmol) y carbonato de plata (17,9 g, 65,2 mmol) en tolueno (140 ml) se agitó a 100 °C durante 2 h. La mezcla de reacción se filtró y se concentró al vacío y se purificó por cromatografía en columna para obtener el compuesto del título como un sólido amarillo (2,1 g, rendimiento del 28,1 %). (m/z): [M+H]+ calculado para CgH6Cl2N2O 228,99, 230,98 encontrado 229,1,
230,0.
Preparación 14: 5,7-dicloro-8-fluoro-1,6-naftiridina
(a) 2,6-dicloro-3-fluoropiridin-4-amina
A una mezcla de 2,6-dicloropiridin-4-amina (3,0 g, 18,4 mmol) en DMF (30 ml) y ACN (30 ml) se le añadió SelectFluor (7,8 g, 22,1 mmol). La mezcla de reacción se agitó a 80 °C durante 0,5 h, se concentró y se purificó por HPLC preparativa (método 2) para dar el intermedio del título como un sólido blanco (1,5 g, 45 % de rendimiento). (m/z): [M+H]+ calculado para C5H3Cl2FN2180,97 encontrado 180,9.
(b) N-(2,6-dicloro-3-fluoropiridin-4-il)pivalamida
A una mezcla del producto de la etapa anterior (1,5 g, 8,29 mmol) en THF (50 ml) se añadió hidruro sódico (662 mg, 16,57 mmol) y cloruro de pivaloílo (1,12 ml, 9,12 mmol) a 0 °C. La mezcla de reacción se agitó a 25 °C durante 2 h, se diluyó con agua, se extrajo con EtOAc (3 x 100 ml), se secó y se concentró para dar el intermedio del título como un sólido blanco (2,0 g, 90 % de rendimiento).
(c) 5,7-dicloro-8-fluoro-1,6-naftiridina
A una solución del producto de la etapa anterior (2,0 g, 7,55) en THF (25 ml) a -70 °C se le añadió una solución de n-butil litio (2,5 M, 7,5 ml, 18,9 mmol) y la mezcla de reacción se agitó durante 60 min a -10 °C. Una solución de (E)-3-(dimetilamino)acrilaldehído (1,12 g, 11,3 mmol) en THF (5 ml) se añadió durante 15 minutos a -70 °C, la mezcla de reacción se agitó a -65 °C durante 20 min, se añadió HCl (5 M, 12 ml) y la mezcla de reacción se agitó a ~65 °C durante 12 h. La mezcla de reacción se ajustó a pH 9 con Na2CO3 acuoso, se extrajo con EtOAc (3 x 200 ml), se secó y se concentró para dar el residuo como un aceite marrón, que se purificó por cromatografía en columna (eluida con EtOAc al 0-30 % en éter de petróleo) para dar el compuesto del título como un sólido ligeramente amarillo (1,0 g, rendimiento del 99 %). (m/z): [M+H]+ calculado para CsH3Cl2FN2216,97, 218,96 encontrado 217,0, 219,0.
Preparación 15: 5,7-dicloro-8-fluoro-3-metil-1,6-naftiridina
Siguendo el procedimiento general de la Preparación 14 (c) sustituyendo (E)-3-(dimetilamino)-2-metilacrilaldehído por (E)-3-(dimetilamino)acrilaldehído, se obtuvo el intermedio del título. (m/z): [M+H]+ calculado para CgHsChFN 230,98, 232,98 encontrado 231,0, 233,0.
Preparación 16: (1E,3s,5S)-3-((7-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-3-(metilsulfonil)-1,6-naftiridin-5-il)amino)-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butilo
(a) (1R,3s,5S)-3-((7-cloro-3-(metiltio)-1,6-naftiridin-5-il)amino)-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de ferc-butilo
Una mezcla de (1R,3s,5S)-3-((7-cloro-3-yodo-1,6-naftiridin-5-il)amino)-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de ferc-butilo (6,5 g, 12,6 mmol), tiometóxido sódico (3,0 g, 42,8 mmol), Pd2(dba)3 (1,1 g, 1 , 2 6 mmol) y Xantphos (728 mg, 1,26 mmol) en 3:70 de agua:tolueno (73 ml) se agitó a 90 °C durante 12 h y se concentró al vacío. El residuo se purificó por cromatografía en columna (1:3 de EtOAc:éter de petróleo) para proporcionar el intermedio del título como un sólido amarillo (5 g, 90 % de rendimiento).
(b) (1R,3s,5S)-3-((7-cloro-3-(metilsulfonil)-1,6-naftiridin-5-il)amino)-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de fercbutilo
A una solución del producto de la etapa anterior (4,5 g, 10 mmol) en DCM (1000 ml) se añadió ácido mefacloroperoxibenzoico (5,2 g, 30 mmol) a 0 °C y la mezcla de reacción se agitó a 0 °C durante 3 h, se lavó con NaOH al 10 % (3 x 200 ml), se secó sobre Na2SO4 y se filtró. El filtrado se concentró al vacío para proporcionar el intermedio del título como un sólido amarillo (4,2 g, 90 % de rendimiento).
(c) (1R,3s,5S)-3-((7-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-3-(metilsulfonil)-1,6-naftiridin-5-il)amino)-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de ferc-butilo
Una mezcla del producto de la etapa anterior (4,2 g, 9,0 mmol), 3-amino-5-metil-1H-pirazol-1-carboxilato de fercbutilo (2,7 g, 13,5 mmol), PdXphos (1,4 g, 1,8 mmol) y carbonato de cesio (5,9 g, 18,0 mmol) en dioxano (120 ml) se agitó bajo nitrógeno a 110 °C durante 12 h, y se concentró al vacío. El residuo se purificó por cromatografía en columna (1:50 de metanol:DCM) para proporcionar el producto del título como un sólido amarillo (4,0 g, 85 % rendimiento). (m/z): [M+H]+ calculado para C25H33N7O4S 528,23 encontrado 528,1.
Preparación 17: (1R,3s,5S)-3-((7-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-3-(metilsulfonil)-1,6-naftiridin-5-il)amino)-9-azabiciclo[3.3.1]nonano-9-carboxilato de ferc-butilo
Siguiendo el procedimiento general de Preparación 16 sustituyendo (1R,3s,5S)-3-((7-cloro-3-yodo-1,6-naftiridin-5-il)amino)-9-azabiciclo[3.3.1]nonano-9-carboxilato de ferc-butilo por (1R,3s,5S)-3-((7-cloro-3-yodo-1,6-naftiridin-5-il)amino)-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de ferc-butilo en la etapa (a), el intermedio del título se preparó como un sólido amarillo. (m/z): [M+H]+ calculado para C26H35N7O4S 542,25 encontrado 542,1
Preparación 18: 5,7-dicloro-2-((metilsulfonil)metil)-1,6 -naftiridina
A un vial de 20 ml se añadieron 2-(bromometil)-5,7-dicloro-1,6-naftiridina (307 mg, 1,052 mmol), metanosulfinato sódico al 85 % (107 mg, 1,052 mmol) y DMF (5,26 ml). El vial se tapó y la mezcla de reacción se calentó a 45 °C y se agitó durante 1,5 h, se enfrió a temperatura ambiente y se concentró por evaporación rotativa. La solución se diluyó con agua; se formó un precipitado blanco, que se eliminó por filtración y se lavó con agua y hexanos para proporcionar el intermedio del título como un sólido tostado (259 mg, 85 % de rendimiento).
(m/z): [M+H]+ calculado para C10HsCl2N2O2S 290,97 encontrado 290,9.
Ejemplo 1: 3-((1 R,3s,5S)-3-((7-((5-metil-1 H-pirazol-3-il)amino)-1,6-naftiridin-5-il)amino)-8-azabiciclo[3.2.1 ]octan-8-il)propanonitrilo
A un vial de 20 ml se añadió W5-((1R,3s,5S)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)-N7-(5-metil-1H-pirazol-3-il)-1,6-naftiridin-5,7-diamina, 2TFA (462,4 mg, 0,80 mmol), metanol (4 ml) y DIPEA (0,70 ml, 4,00 mmol). La mezcla de reacción se agitó a TA durante 5 min, y luego se añadió lentamente acrilonitrilo (0,058 ml, 0,88 mmol, 100 ml). El vial se tapó y la mezcla de reacción se agitó a TA durante 20 h, se concentró, se disolvió en una solución al 15 % de ácido acético en agua y se purificó por HPLC preparativa (método 1). Se combinaron fracciones, se liofilizaron, se disolvieron en ácido acético al 15 % en agua y se purificaron por HPLC de fase inversa. Las fracciones se combinaron y liofilizaron para proporcionar el compuesto del título como un sólido rojo brillante (505 mg, 52 % de rendimiento; 98 % de pureza).
(m/z): [M+H]+ calculado para C22H26N8403,23 encontrado 403,7.
Ejemplo 2: W5-((1R,3s,5S)-8-(2-fluoroetil)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)-N7-(5-metil-1H-pirazol-3-il)-1,6-naftiridin-5,7-diamina
A un matraz de 250 ml se añadió W5-((1R,3s,5S)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)-W7-(5-metil-1H-pirazol-3-il)-1,6-naftiridin-5,7-diamina, 2 HCl (5,027 g, 11,90 mmol), carbonato potásico (9,87 g, 71,4 mmol) y DMF (59,5 ml). La mezcla de reacción se agitó a TA durante 10 minutos y luego se añadió 1-bromo-2-fluoroetano (1,064 ml, 14,28 mmol) en una porción. El matraz se equipó con un condensador de aire y la mezcla de reacción se calentó a 40 °C y se agitó durante la noche. Se añadió otra porción de 1-bromo-2-fluoroetano y la mezcla de reacción se calentó a 60 °C y se agitó durante 24 h. Se añadió otra porción de 1-bromo-2-fluoroetano, y la mezcla de reacción se agitó a TA durante otras 24 h. La suspensión se dividió en cuatro viales y se concentró por evaporación rotatoria para
proporcionar el producto bruto como un sólido rojo. El material en cada vial se disolvió en ~1:1 de agua:ácido acético, se filtró y se purificó por HPLC preparativa (método 1) para proporcionar el producto deseado (2,31 g en total, 48 % de rendimiento, 97 % de pureza). (m/z): [M+H]+ calculado para C21H26FN7396,22 encontrado 396,2.
Ejemplo 3: W7-(5-metil-1H-pirazol-3-il)-W5-((1R,3s,5S)-8-(piridin-3-ilsulfonil)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)-1,6-naftiridin-5,7-diamina
Una mezcla de DIPEA (0,815 ml, 4,66 mmol) y N5-((1R,3s,5S)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-ilo)-W7-(5-metil-1H-pirazol-3-il)-1,6-naftiridin-5,7-diamina, Se enfrió 1TFA (300 mg, 0,78 mmol) en DMF (6 ml) a 0 °C y luego se añadió cloruro de piridin-3-sulfonilo (0,093 ml, 0,39 mmol) y la solución se agitó durante 20 minutos. El disolvente se eliminó al vacío y el residuo bruto se disolvió en ácido acético 1:1; agua (1 ml) y se purificó por HPLC de fase inversa para proporcionar la sal 1TFA del compuesto del título como un sólido naranja (156,5 mg, 33 % de rendimiento) (m/z): [M+H]+ calculado para C24H26N8O2S 491,19 encontrado 491.
Ejemplo 4: 2-(Dimetilamino)-1-((1R,3s,5S)-3-((7-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-1,6-naftiridin-5-il)amino)-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-9-il)etan-1-ona
A un vial de 20 ml se añadió clorhidrato de dimetilglicina (31 mg, 0,22 mmol), HATU (85 mg, 0,22 mmol) y DMF (1 ml). La solución transparente se agitó a TA durante 15 minutos, seguido de la adición de N5-((1R,3s,5S)-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-il)-W7-(5-metil-1H-pirazol-3-il)-1,6-naftiridin-5,7-diamina 2TFA (120 mg, 0,20 mmol). La mezcla de reacción se agitó a TA durante 30 minutos y luego se añadió DIPEA (0,18 ml, 1,01 mmol). La mezcla de reacción resultante se agitó a TA durante 2 días, y se concentró por evaporación rotatoria para proporcionar un aceite marrón oscuro, espeso. El petróleo crudo se disolvió en 2:1 de agua:ácido acético, se filtró y se purificó por HPLC de fase inversa. Las fracciones se combinaron y se liofilizaron para proporcionar la sal 2TFA del compuesto del título como un sólido rojo (23 mg, 25 % de rendimiento. 100 % de pureza). (m/z): [M+H]+ calculado para C24H32N8O 449,27 encontrado 449,2.
Ejemplo 5: 2,2-difluoro-1-((1R,3s,5S)-3-((7-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-1,6-naftiridin-5-il)amino)-8-azabiciclo[3.2.1 ]octan-8-il)etan-1 -ona
A un vial de 20 ml se añadió ácido difluoroacético (0,026 ml, 0,42 mmol), HATU (159 mg, 0,42 mmol) y DMF (1,91 ml). La solución transparente se agitó a TA durante 10 min, entonces W5-((1R,3s,5S)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)-W7-(5-metil-1H-pirazol-3-il)-1,6-naftiridin-5,7-diamina, 2 TFA (220 mg, 0,38 mmol) se añadió en una porción. La solución roja resultante se agitó a TA durante 20 min, y se añadió DIPEA (0,33 ml, 1,91 mmol). El vial se tapó y la mezcla de reacción se agitó a TA durante la noche, y se concentró por evaporación rotatoria para proporcionar un aceite rojo, espeso. El petróleo crudo se disolvió en ~3:1 de agua:ácido acético, se filtró y se purificó por HPLC preparativa (método 1) para proporcionar el producto deseado como un sólido rojo. Se combinaron fracciones, se disolvieron en 2:1 de agua:ácido acético y se purificaron por HPLC preparativa (método 1) para proporcionar la sal 1TFA del producto del título como un sólido rojo (77 mg, 36 % de rendimiento; 96 % de pureza).
(m/z): [M+H]+ calculado para C21H23F2N 7O 428,19 encontrado 428,1.
Ejemplo 6: W5-((1R,3s,5S)-8-((2-metoxietil)sulfonil)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)-W7-(5-metil-1H-pirazol-3-il)-1,6-naftiridin-5,7-diamina
A un vial de 4 ml se añadió a W5-((1R,3s,5S)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)-W 7-(5-metil-1H-pirazol-3-il)-1,6-naftiridin-5,7-diamina, 2TFA (30 mg, 0,052 mmol), DIPEA (0,045 ml, 0,26 mmol) y DMF (1,15 ml). La solución se enfrió a 0 °C y se añadió lentamente una solución de cloruro de 2-metoxi-1-etanosulfonilo (12 mg, 0,078 mmol) en DMF (1,15 ml) a la mezcla de reacción fría. El vial que contenía cloruro de sulfonilo se enjuagó con DMF (1,15 ml) y el enjuague se añadió al vial que contenía la solución de reacción, que se tapó y agitó a 0 °C durante 30 min, se calentó a TA y se agitó durante 6 h. La solución se concentró por evaporación rotatoria para proporcionar un aceite rojo que se disolvió en 3:1 de agua: ácido acético, se filtró y purificó por HPLC de fase inversa para proporcionar la sal 1TFA del compuesto del título (12,3 mg, 100 % de pureza). (m/z): [M+H]+ calculado para C22H29N7O3S 472,21 encontrado 472,2.
Ejemplo 7: W5-((1R,3s,5S)-8-(etilsulfonil)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)-W7-(5-metil-1H-pirazol-3-il)-1,6-naftiridin-5,7-diamina
Siguiendo el procedimiento del Ejemplo 6 , usando cloruro de etilsulfonilo (0,007 ml, 0,078 mmol) en lugar de cloruro de 2-metoxi-1-etanosulfonilo, se preparó la sal 1TFA del compuesto del título (10,1 mg, 100 % de pureza). (m/z):
[M+H]+ calculado para C21H27N7O2S 442,20 encontrado 442,2.
Ejemplo 8 : W7-(5-metil-1 H-pirazol-3-il)-W5-((1 R,3s,5S)-9-(piridin-3-ilsulfonil)-9-azabiciclo[3.3.1 ]nonan-3-il)-1,6 -naftiridin-5,7-diamina
Una mezcla de W5-((1R,3s,5S)-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-il)-W7-(5-metil-1H-pirazol-3-il)-1,6-naftiridin-5,7-diamina 2 HCl (43,6 mg, 0,10 mmol) y DIPEA (0,105 ml, 0 , 6 0 mmol) en d Mf (1 ml) se enfrió a 0 °C y se añadió cloruro de piridin-3-sulfonilo (17,8 mg, 0,10 mmol). La solución se agitó durante la noche, se dejó calentar gradualmente a TA, se concentró a sequedad al vacío, se disolvió en 2:1 de agua:ácido acético (1,5 ml), se filtró con una jeringa (0,2 micrómetros) y se purificó por HPLC de fase inversa para proporcionar la sal 1TFA del compuesto del título (24 mg, 94,4 % de pureza). (m/z): [M+H]+ calculado para C25H23N8O2S 505,21 encontrado 505,2.
Ejemplo 9: N7-(5-metil-1H-pirazol-3-il)-N5-((1R,3s,5S)-9-(fenilsulfonil)-9-azabiciclo[3.3.1] nonan-3-il)-1,6-naftiridin-5,7-diamina
Siguiendo el procedimiento exacto del Ejemplo 8 , sustituyendo cloruro de bencensulfonilo (17,7 mg, 0,10 mmol) por cloruro de piridin-3-sulfonilo (17,8 mg, 0,10 mmol), se obtuvo la sal 1TFA del compuesto del título (7 mg, 94,4 % de pureza). (m/z): [M+H]+ calculado para C25H28N8O2S 504,21 encontrado 504,1.
Ejemplo 10: N5-((1R,3s,5S)-9-(etilsulfonil)-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-il)-W7-(5-metil-1H-pirazol-3-il)-1,6-naftiridin-5,7-diamina
A un vial de 20 ml se añadió W5-((1R,3s,5S)-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-il)-W7-(5-metil-1H-pirazol-3-il)-1,6 naftiridin-5,7-diamina 2TFA (100 mg, 0,17 mmol), DIPEA (0,148 ml, 0,85 mmol) y d Mf (0,85 ml). La solución se enfrió a 0 °C y se añadió gota a gota una solución de cloruro de etilsulfonilo (26 mg, 0,20 mmol) en DMF (0,85 ml) a la mezcla de reacción en columna. El vial que contenía el cloruro de sulfonilo se enjuagó con DMF (0,85 ml) y el enjuague se añadió al vial que contenía la solución de reacción, que se agitó a 0 °C durante 15 min, se calentó a TA y se agitó durante 2 h. La solución se concentró por evaporación rotatoria para proporcionar un aceite rojo oscuro que se disolvió en una mezcla 3:1 de agua:ácido acetílico (3 ml), se filtró y se purificó por HPLC preparativa (método 1) para proporcionar la sal 1TFA del título compuesto (13 mg, 93 % de pureza).
(m/z): [M+H]+ calculado para C22H29N7O2S 456,21 encontrado 456,1
Ejemplo 11: 1-(((1R,3s,5S)-3-((7-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-1,6-naftiridin-5-il)amino)-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-9-il)sulfonil)azetidin-3-carbonitrilo
Una mezcla de W5-((1R,3s,5S)-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-il)-W7-(5-metil-1H-pirazol-3-il)-1,6-naftiridin-5,7-diamina 2HCl (58 mg, 0,067 mmol) y DIPEA (0,584 ml, 0,335 mmol) en DMF (1 ml) se enfrió a 0 °C y se añadió cloruro de 3-ciano-1-azetidinsulfonilo (24 mg, 0,067 mmol). La solución se agitó durante la noche, se dejó calentar gradualmente a TA, se concentró a sequedad al vacío, se disolvió en 1:1 de agua:ácido acético (1,5 ml), se filtró con un jeringa (0,2 micrómetros) y se purificó por HPLC de fase inversa para proporcionar la sal 1TFA del compuesto del título (7,8 mg, 100 % de pureza). (m/z): [M+H]+ calculado para C24H29N9O2S 508,22 encontrado 508,6
Ejemplo 12: (1R,3s,5S)-3-((2-(hidroximetil)-7-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-1,6-naftiridin-5-il)amino)-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de isobutilo
(a) (5-(((1R,3s,5S)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)amino)-7-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-1,6-naftiridin-2-il} metanol A un vial de 40 ml se añadió (1R,3s,5S)-3-((2-hidroximetil)-7-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-1,6-naftiridin-5-il)amino)-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de ferc-butilo (146,6 mg, 0,31 mmol), HCl 4 M en dioxano (1,53 ml, 6,11 mmol) y dioxano (1,53 ml). El vial se tapó y la mezcla de reacción se agitó a TA durante 6 h, se congeló a -78°C y se liofilizó para proporcionar la sal 2HCl del intermedio del título como un sólido de color canela que se usó en la siguiente reacción sin purificación. (m/z): [M+H]+ calculado para C20H25N7O 380,21 encontrado 380,1.
(b) (1 R,3s,5S)-3-((2-(hidroximetil)-7-((5-metil-1 H-pirazol-3-il)amino)-1,6-naftiridin-5-il)amino)-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de isobutilo
Al producto de la etapa anterior (138 mg, 0,31 mmol) se le añadió DMF (1,53 ml) y DIPEA (0,32 ml, 1,83 mmol). La solución se enfrió a 0 °C y luego se añadió cloroformiato de isobutilo (0,04 ml, 0,31 mmol) gota a gota. El vial se tapó y la mezcla de reacción se agitó a 0 °C durante 30 min, luego se calentó a TA, se agitó durante 1 h, y se concentró por evaporación rotatoria para proporcionar un sólido rojo. El sólido se disolvió en 2:1 de ácido acético: agua, se filtro y se purificó por HPLC preparativa (método 1) para proporcionar la sal 1TFA del compuesto del título como un sólido naranja/rojo (104,2 mg, 57 % de rendimiento; 99 % de pureza). (m/z): [M+H]+ calculado para C25H33N7O3 480,26 encontrado 480,2.
Ejemplo 13: 1-(((1R,3s,5S)-3-((7-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-1,6-naftiridin-5-il)amino)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-8-il)sulfonil)azetidin-3-carbonitrilo
Una mezcla de N5-((1 R,3s,5S)-8-azabiciclo[3.2.1 ]octan-3-il)-N7-(5-metil-1 H-pirazol-3-il)-1,6-naftiridin-5,7-diamina 2TFA (77 mg, 0,067 mmol) y DIPeA (0,584 ml, 0,335 mmol) en DMF (1 ml) se enfrió a 0 °C y se añadió cloruro de 3-ciano-1-azetidinsulfonilo (24 mg, 0,067 mmol). La solución se agitó durante la noche, se dejó calentar gradualmente a TA, se concentró a sequedad al vacío, se disolvió en 1:1 de agua:ácido acético (1,5 ml), se filtró con un jeringa (0,2 micrómetros) y se purificó por HPLC de fase inversa para proporcionar la sal 1TFA del compuesto del título (5,3 mg, 100 % de pureza). (m/z): [M+H]+ calculado para C23H27N9O2S 494,20 encontrado 494,6
Ejemplo 14: N5-((1R,3s,5S)-9-((5-fluoropiridin-3-il)sulfonil)-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-il)-N7-(5-metil-1H-pirazol-3-il)-1,6-naftiridin-5,7-diamina
Una mezcla de W5-((1R,3s,5S)-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-il)-W7-(5-metil-1H-pirazol-3-il)-1,6-naftiridin-5,7-diamina 2 HCl (30,2 mg, 0,069 mmol) y DIPEA (0,072 ml, 0,41 mmol) en DMF (1 ml) se enfrió a 0 °C y se añadió cloruro de 5 fluoropiridin-3-sulfonilo (13,5 mg, 0,069 mmol). La solución se agitó durante la noche, se dejó calentar gradualmente a TA, se concentró a sequedad al vacío, se disolvió en 2:1 de agua:ácido acético (1,5 ml), se filtró con una jeringa (0,2 micrómetros) y se purificó por HPLC de fase inversa para proporcionar la sal 1TFA del compuesto del título (20 mg, 100 % de pureza). (m/z): [M+H]+ calculado para C25H27FN8O2S 523,20 encontrado 523,2.
Ejemplo 15: W7-(5-metil-1H-pirazol-3-il)-2-(morfolometil)-W5-((1R,3s,5S)-8-(2,2,2-trifluoroetil)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)-1,6-naftiridin-5,7-diamina
A una solución de W5-((1R,3s,5S)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)-W7-(5-metil-1H-pirazol-3-il)-2-(morfolinometil)-1,6-naftiridin-5,7-diamina (81 mg, 0,181 mmol) y DIPEA (0,126 ml, 0,722 mmol) en DMF (3,62 ml) se añadió 2,2,2-trifluoroetiltrifluorometano-sulfonato (0,030 ml, 0,217 mmol) a 20 °C. La mezcla se agitó a 20 °C durante 3 días, se concentró por evaporación rotatoria y se purificó por HPLC preparativa (método 1) para dar el compuesto del título como un sólido rojo (22,1 mg, rendimiento del 19 %). (m/z): [M+H]+ calculado para C26H33F3N 8O 531,27 encontrado 531,2.
Ejemplo 16: 7-((5-metil-1 H-pirazol-3-il)amino)-5-(((1 R,3s,5S)-8-(2-oxotetrahidro-2H-piran-3-il)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)amino)-1,6-naftiridin-3-carboxilato de metilo
A una solución de 5-(((1R,3s,5S)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)amino)-7-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-1,6-naftiridin-3-carboxilato de metilo 2HCl en metanol (4 ml) se añadió carbonato de tetraalquilamonio, unido a polímero (0,231 mmol) y la suspensión se agitó a TA durante 30 min, se filtró y se concentró para proporcionar el compuesto de carboxilato de base libre.
A un vial de 20 ml se le añadió 3-hidroxitetrahidro-2H-piran-2-ona (0,042 ml, 0,46 mmol) y DCM (0,46 ml). La solución se enfrió a -40 °C y se añadió DIPEA (0,161 ml, 0,92 mmol), seguido de anhídrido trifluorometanosulfónico (0,080 ml, 0,47 mmol). El vial se tapó y se agitó a -40 °C durante 1 h. Después de 1 h, se añadió una solución del compuesto de carboxilato de base libre (0,094 g, 0,23 mmol) disuelta en DMF (200 pl) a la mezcla de reacción fría. El vial se tapó y la solución se agitó a -40 °C y se calentó lentamente a TA durante 2 h, se agitó a TA durante el fin de semana, y se concentró por evaporación rotatoria para proporcionar un aceite marrón, espeso. El petróleo crudo se disolvió en 1:1 de agua:ácido acético, se filtró y se purificó por HPLC de fase inversa para proporcionar el compuesto del título como un sólido rojo brillante (45 mg, rendimiento del 27 %; 100 % de pureza).
(m/z): [M+H]+ calculado para C26H31N7O4506,24 encontrado 506,1.
Ejemplo 17: W-metil-2-((1R,3s,5S)-3-((7-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-1,6-naftiridin-5-il)amino)-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-9-il)acetamida
Una solución de W5-((1R,3s,5S)-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-il)-W7-(5-metil-1H-pirazol-3-il)-1,6-naftiridin-5,7-diamina TFA (100 mg, 0,209 mmol), 2-bromo-n-metilacetamida (33,4 mg, 0,220 mmol) y DIPEA (146 ul) en DMF (2 ml) se agitó durante la noche, se concentró y se purificó por HPLC de fase inversa para proporcionar el compuesto del título (50 mg, 55 % de rendimiento). (m/z): [M+H]+ calculado para C23H30N8O 435,25 encontrado 435,6
Usando métodos sintéticos similares, se prepararon los compuestos de las Tablas 1-8.
Tabla 1
continuación
Tabla 2
Tabla 3
Tabla4
continuación
continuación
Tabla 6
(continuación)
(continuación)
Tabla 7
Ejemplo 18: Solvato cristalino 3-((1R,3s,5S)-3-((7-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-1,6-naftiridin-5-il)amino)-8-azabiciclo[3.2.1 ]octan-8-il) propanon¡tr¡lo Forma II
(a) ((1R,3s,5S)-3-((7-cloro-1,6-naftiridin-5-il)amino)-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de ferc-butilo
A un matraz de 2 l se le añadió 5,7-dicloro-1,6-naftiridina (45,8 g, 230 mmol), (1R,3s,5S)-3-amino-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de ferc-butilo (54,7 g, 242 mmol) y DMSO (458 ml) seguido de DIp Ea (64,3 ml, 368 mmol). La mezcla de reacción se calentó a 110 °C durante 12 h, se enfrió a temperatura ambiente y se añadió agua (458 ml) lentamente durante 45 min. Después de 2 h, la mezcla de reacción se filtró y se lavó con DMSO:agua 1:1 (60 ml) para dar un producto sólido húmedo (65 g). El sólido se lavó en cuatro porciones con MTBE (500 ml) para dar el intermedio del título (74 g, 190 mmol, 83 % de rendimiento) (Tiempo de retención para el Método 3 de HPLC 20,20 min) y el filtrado que se concentró para dar un sólido (19,5 g), principalmente producto. Se añadió heptano (195 ml) al sólido (19,5 g) y la mezcla de reacción se agitó durante 2 h, se filtró y se lavó con heptano para dar otra porción del intermedio del título (12,3 g, 31,6 mmol, rendimiento del 13,75 %)
Tiempo de retención para el Método 3 de HPLC 20,20 min.
(b) ((1R,3s,5S)-3-((7-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-1,6-naftiridin-5-il)amino)-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de ferc-butilo
Una mezcla de ((1R,3s,5S)-3-((7-cloro-1,6-naftiridin-5-il)amino)-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de ferc-butilo (30 g, 77 mmol), 3-amino-5-metil-1H-pirazol-1-carboxilato de ferc-butilo (19,78 g, 100 mmol), Cs2CO3 (50,3 g, 154 mmol), PdXPhos (1,517 g, 1,93 mmol) y XPhos (0,919 g, 1,93 mmol) se desgasificaron con nitrógeno 3 veces, y luego se añadió 1,4-dioxano (300 ml). La mezcla de reacción se desgasificó con nitrógeno 5 veces, se calentó a
reflujo, se agitó durante 16 h, y se enfrió a 75 °C. Se añadió agua (90 ml) y la mezcla de reacción se calentó a reflujo y se agitó a reflujo durante 48 h. Se añadió agua (210 ml) lentamente y la mezcla de reacción se agitó a TA durante 1 h, y se filtró. La torta del filtro se lavó con 1:1 de dioxano:agua (50 ml) y se secó a 50 °C al vacío durante la noche para dar el intermedio del título bruto (35,34 g).
El producto bruto se disolvió en DMF (173 ml). Se añadió sílice funcionalizada con tiol SiliaMetS® (8,65 g) y la mezcla de reacción se agitó durante 45 minutos a 80 °C, se enfrió a TA, se filtró y se enjuagó con DMF (35 ml). Al filtrado se le añadió agua (346 ml) gota a gota y semillas de una preparación previa por el mismo procedimiento. La mezcla de reacción se agitó a TA durante 6 h, se filtró, se lavó con agua (35 ml) y se secó a 50 °C al vacío para dar el intermedio del título (33,6 g, 97 % de rendimiento). Tiempo de retención para el Método 3 de HPLC 16,89 min (c) W5-((1R,3s,5S)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)-W7-(5-metil-1H-pirazol-3-il)-1,6-naftiridin-5,7-diamina
A una suspensión de ((1R,3s,5S)-3-((7-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-1,6-naftiridin-5-il)amino)-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de ferc-butilo (15,6 g, 34,7 mmol) en metanol (78 ml) se añadió HCl 4 M en dioxano (4 M) (87 ml, 347 mmol) a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se agitó durante 2 h, y se añadió diisopropil éter (156 ml) gota a gota. La mezcla de reacción se agitó durante 18 h, se filtró, se lavó con diisopropil éter (20 ml) y se secó a 50 °C al vacío durante 2 h para dar la sal 3wHCl del intermedio del título (11,33 g, 71,2 % de rendimiento). Tiempo de retención para el Método 3 de HPLC 9,87 min.
(d) 3-((1R,3s,5S)-3-((7-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-1,6-naftiridin-5-il)amino)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-8-il)propanonitrilo (bruto)
A una mezcla del producto de la etapa anterior (11,24 g, 24,50 mmol), se añadió DMF (56,2 ml) y metanol (5,75 ml) DBU (15 ml, 103 mmol) gota a gota a TA seguido de acrilonitrilo (2,4 ml, 36,7 mmol) gota a gota. La mezcla de reacción se agitó a TA durante 3 h y luego se añadió 2:1 de metanol:agua (225 ml) gota a gota durante 1 h. Después de 3 h, la mezcla de reacción se filtró, se lavó con 1:1 de metanol:agua (20 ml) y se secó a 50 °C al vacío durante la noche para proporcionar el compuesto del título (9,42 g, rendimiento del 96 %).
(e) 3-((1R,3s,5S)-3-((7-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-1,6-naftiridin-5-il)amino)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-8-il)propanonitrilo
A una mezcla de 3-((1R,3s,5S)-3-((7-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-1,6-naftiridin-5-il)amino)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-8-il)propanonitrilo bruto (38,6 g, 96 mmol) se añadió DMF (232 ml) seguido de sílice funcionalizada con Tiol SiliaMetS® (1,41 mmol/g, 6,8 g). La mezcla se calentó a 75 °C y se agitó durante 45 minutos a 75 °C. La mezcla se enfrió a 25 °C, se filtró, se enjuagó con DMF (1 ml) y luego se añadió 2:1 de MeOH:agua (926 ml) al filtrado gota a gota. La mezcla se agitó a TA durante la noche, se filtró, se lavó con 1:1 de MeOH:agua (40 ml) y se secó a 50 °C al vacío para dar el compuesto del título como un solvato cristalino (38 g, 94 mmol, 98 % de rendimiento) Tiempo de retención para el Método 3 de HPLC 10,23 min. Disolventes residuales por cromatografía de gases: metanol 6,6 %, W,W-dimetilformamida 2,3 %, agua por análisis Karl Fischer 1,2 %.
Ejemplo 19: 3-((1 R,3s,5S)-3-((7-((5-metil-1 H-pirazol-3-il)amino)-1,6-naftiridin-5-il)amino)-8-azabiciclo[3.2.1 ]octan-8-il)propanonitrilo Cristalino Forma I
(a) W5-((1R,3s,5S)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)-W7-(5-metil-1H-pirazol-3-il)-1,6-naftiridin-5,7-diamina
A un reactor se le añadió la sal 3HCl de W5-((1R,3s,5S)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)-W7-(5-metil-1H-pirazol-3-il)-1,6-naftiridin-5,7-diamina (3,4 kg, 1 equiv), seguido de agua (34 kg, 10 equiv) y HCl 1 N (7 kg, 2,05 equiv) para formar un mezcla de reacción. Se añadió carbón activado (0,22 kg, 0,064 equiv), seguido de sílice funcionalizada con tiol SiliaMetS® (1,7 kg, 0,5 equiv) y la mezcla de reacción se agitó a 80 °C durante 16 h, se enfrió a 25 °C y se filtró a través de una almohadilla de Celite a contenedores Nalgene. El reactor se lavó con agua (13,6 kg, 4 equiv), que se transfirió para lavar la torta en el filtro y se recogió en los recipientes de Nalgene.
Al lavado recogido se le añadió metanol (13,6 kg, 4 equiv). La temperatura se ajustó a 20 °C y se añadió NaOH al 30 % p/v (4,4 kg, 1,29 equiv) manteniendo lentamente la temperatura por debajo de 30 °C. La suspensión resultante se agitó durante 3 h a 25 °C, se filtró, se lavó con agua (17 kg, 5 equiv) y se secó a 50 °C al vacío durante 12 h para proporcionar el intermedio del título (2,3 kg, pureza por HPLC 98,4 %) Método 3 de HPLC con gradiente de 32 min (tiempo (min)/% B): 0/2, 10/20, 24/90, 27/90, 27,1/2, 32/2 Tiempo de retención 9,4 min
(b) 3-((1R,3s,5S)-3-((7-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-1,6-naftiridin-5-il)amino)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-8-il)propanonitrilo (bruto)
A un reactor se le añadió el producto de la etapa anterior (2,1 kg, 1 equiv), DMF (19,7 kg, 9,4 equiv), metanol (3,4 kg, 1,6 equiv), THF (9,5 kg, 4,5 equiv) y DBU (0,92 kg, 0,44 equiv) y la mezcla de reacción se agitó a 30 °C hasta que se disolvió por completo. La temperatura se ajustó a 20 °C, se añadió acrilonitrilo (0,48 kg, 0,23 equiv), la mezcla de reacción se agitó durante 16 h, se añadió agua (52,5 kg, 25 equiv) y la temperatura se ajustó a 20 °C. La suspensión
resultante se agitó durante 3 h, se filtró, se lavó con metanol (3,4 kg, 1,5 equiv) que había lavado primero el reactor, y se secó a 50 °C a vacío durante 12 h. Se añadió etanol (21 kg, 10 equiv) a la torta seca, y la suspensión resultante se agitó a reflujo durante 4 h, se enfrió a 25 °C, se agitó a 25 °C durante 1 h, y se filtró. La torta húmeda se lavó con etanol (3,2 kg, 1,5 equiv) y se secó a 50 °C a vacío durante 12 h para proporcionar el intermedio del título (1,8 kg, pureza por HPLC 99,8 %)
(c) Solvato cristalino 3-((1R,3s,5S)-3-((7-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-1,6-naftiridin-5-il) amino)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-8-il)propanonitrilo Forma II
A un reactor se añadió el producto de la etapa anterior (1,5 kg, 1 equiv) y DMF (8,4 kg, 5,6 equiv) y la mezcla de reacción se calentó a 25 °C y se agitó durante 5 minutos hasta que se disolvió completamente. Se añadieron metanol (14,3 kg, 9,5 equiv) y agua (9,0 kg, 6 equiv) durante 1 h. La suspensión resultante se agitó durante 16 h a 25 °C, se filtró y se lavó con metanol (3,0 kg, 2 equiv) que había lavado primero el reactor, y se secó a 50 °C al vacío durante 12 h para proporcionar el intermedio del título (1,4 kg, pureza por HPLC 99,8 %).
(d) 3-((1R,3s,5S)-3-((7-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-1,6-naftiridin-5-il)amino)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-8-il)propanonitrilo Forma I cristalina
[Equivalentes medidos con respecto a la etapa (c).] A un reactor se añadió el producto de la etapa anterior (1,4 kg) seguido de acetona (13,8 kg, 9,2 equiv) y la suspensión resultante se agitó durante 18 h a 45 °C, se enfrió a 25 °C, se agitó a 25 °C durante 30 min, se filtró, se lavó con acetona (3,0 kg, 2 equiv) que había lavado primero el reactor, y se secó a 50 °C al vacío durante 12 h para proporcionar el compuesto del título (1,2 kg, pureza por HPLC 99.8%) como un sólido cristalino amarillo. Columna de HPLC Agilent Poroshell EC C-18 150 x 4,6 mm, 2,7 pm, 45 °C, 2,2 ml/min, 7 pl, detección de 250 nm, Fase móvil A: Agua:ACN:TFA (99:1:0,1), Fase móvil B: Agua:ACN:TFA (10:90:0,1) Gradiente 37 min (tiempo (min)/% B) 0/4, 25/27, 30/100, 33/100, 33,1/4, 37/4 Tiempo de retención 11,2 min. RMN 1H (de-DMSO, 600 mHz) ó (ppm) 11,75 (s, 1H), 8,76 (s, 1H), 8,57 (d, J = 3Hz, 1H), 8,41 (d, J = 3Hz, 1H), 7,15 (d, J = 5Hz, 1H), 6,96 (dd, J = 3 Hz, 5 Hz, 1H), 6,67 (s, 1H), 6,20 (s, 1H), 4,55 (m, 1H), 3,33 (m, 2H), 2,63 (m, 4H), 2,22 (s, 3H), 1,70-1,93 (m, 8H).
Ejemplo 20: 3-((1R,3s,5S)-3-((7-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-1,6-naftiridin-5-il)amino)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-8-il)propanonitrilo Cristalino Forma I
(a) Solvato cristalino 3-((1 R,3s,5S)-3-((7-((5-metil-1 H-pirazol-3-il)amino)-1,6-naftiridin-5-il)amino)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-8-il)propanonitrilo Forma II
A una mezcla de W5-((1R,3s,5S)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)-W7-(5-metil-1H-pirazol-3-il)-1,6-naftiridin-5,7-diamina (5 g, 14,31 mmol) y Dm F (50 ml) se añadió DBU (5,39 ml, 35,8 mmol) seguido de 3-bromopropionitrilo (1,78 ml, 21,5 mmol) gota a gota. La mezcla de reacción se agitó a 20-25 °C durante 4 h y luego se añadió gota a gota 3:1 de metanol:agua (150 ml) durante 60 min. La mezcla de reacción se agitó durante 20 h a 20 °C, se filtró, se lavó con 3:1 de metanol:agua (10 ml) y se secó al vacío a 50 °C durante 2 h para proporcionar el compuesto del título (5,07 g, 12,60 mmol, 88 % de rendimiento) Tiempo de retención para el Método 3 de HPLC 10,13 min.
A una mezcla del producto de la etapa anterior (1 g, 2,49 mmol) en DMF (6 ml) se añadió gota a gota 3:1 de metanol:agua (18 ml). Después de 3 h, la mezcla se filtró, se lavó con metanol (2 ml) y se secó al vacío a 50 °C durante 18 h para proporcionar el compuesto del título (0,94 g, 2,33 mmol, 94 % de rendimiento). Tiempo de retención para el Método 3 de HPLC 10,17 min.
(b) 3-((1R,3s,5S)-3-((7-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-1,6-naftiridin-5-il)amino)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-8-il)propanonitrilo Forma I cristalina
Una mezcla del producto de la etapa anterior (0,6 g, 1,49 mmol) y acetona (7,2 ml) se agitó a TA durante 18 h, se filtró y se lavó con acetona para dar el compuesto del título (0,5 g, 1,24 mmol, 83 % de rendimiento). Tiempo de retención para el Método 3 de HPLC 10,03 min.
Ejemplo 21: 3-((1 R,3s,5S)-3-((7-((5-metil-1 H-pirazol-3-il)amino)-1,6-naftiridin-5-il)amino)-8-azabiciclo[3.2.1 ]octan-8-il)propanonitrilo Cristalino Forma I
Una mezcla del solvato 3-((1R,3s,5S)-3-((7-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-1,6-naftiridin-5-il)amino)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-8-il)propanonitrilo Forma II (100 g, 248 mmol) y 1,4-dioxano (1200 ml) se calentó a 95 °C, se agitó durante 10 h, se enfrió a TA, se agitó durante 3 h, se filtró, se lavó con dioxano y se secó a 50 °C durante 6 horas y luego a TA durante 5 días para proporcionar el compuesto del título (87 g, 86 % de rendimiento) Tiempo de retención para el Método 3 de HPLC 10,21 min.
Ejemplo 22: 3-((1R,3s,5S)-3-((7-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-1,6-naftiridin-5-il)amino)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-8-il)propanonitrilo Cristalino Forma I
Una mezcla del solvato 3-((1R,3s,5S)-3-((7-((5-met¡l-1H-p¡razol-3-¡l)am¡no)-1,6-naft¡r¡d¡n-5-¡l)am¡no)-8-azab¡c¡clo[3.2.1]octan-8-il)propanon¡tr¡lo Forma II (5 g, 12,42 mmol) y tolueno (75 ml) se calentó a reflujo durante 4 h, se enfr¡ó a TA durante 30 m¡nutos, se ag¡tó a TA durante 30 m¡nutos, se f¡ltró y se lavó con tolueno para proporc¡onar el compuesto del título (4,6 g, 92 % de rend¡m¡ento).
Ejemplo 23: 3-((1R,3s,5S)-3-((7-((5-met¡l-1H-p¡razol-3-¡l)am¡no)-1,6-naft¡r¡d¡n-5-¡l)am¡no)-8-azab¡c¡clo[3.2.1]octan-8-¡l)propanon¡tr¡lo Cr¡stal¡no Forma I
Una mezcla del solvato 3-((1R,3s,5S)-3-((7-((5-met¡l-1H-p¡razol-3-¡l)am¡no)-1,6-naft¡r¡d¡n-5-¡l)am¡no)-8-azab¡c¡clo[3.2.1]octan-8-¡l)propanon¡tr¡lo etanol (1 g, 2,49 mmol) y acetato de but¡lo (20 ml) se calentó a 110 °C durante
8 h, se enfr¡ó a TA, se ag¡tó a TA durante 65 h, se f¡ltró y se lavó con agua para proporc¡onar el compuesto del título (0,92 g, rend¡m¡ento del 92 %). T¡empo de retenc¡ón para el Método 3 de HPLC 10,08 m¡n.
Ejemplos 24-27: Prop¡edades de las formas sól¡das de la ¡nvenc¡ón
Muestras de la base l¡bre cr¡stal¡na de la Forma I y del solvato cr¡stal¡no de la Forma II de 3-((1R,3s,5S)-3-((7-((5-met¡l-1H-p¡razol-3-¡l)am¡no)-1,6-naft¡r¡d¡n-5-¡l)am¡no)-8-azab¡c¡clo[3.2.1]octan-8-¡l)propanon¡tr¡lo de los Ejemplos 19 y 18, respect¡vamente, fueron anal¡zadas por d¡fracc¡ón de rayos X en polvo (PXRD). La forma cr¡stal¡na I del Ejemplo 19 tamb¡én se anal¡zó por calor¡metría d¡ferenc¡al de barr¡do (DSC), anál¡s¡s termograv¡métr¡co (TGA), sorc¡ón d¡nám¡ca de humedad (DMS) y por d¡fracc¡ón de rayos X de un solo cr¡stal.
Ejemplo 24 D¡fracc¡ón de rayos X en polvo
Los patrones de d¡fracc¡ón de rayos X en polvo de las F¡guras 1 y 5 se obtuv¡eron con un d¡fractómetro de rayos X Bruker D8-Advance usando rad¡ac¡ón Cu-Ka (A = 1,54051 A) con un voltaje de salida de 45 kV y una corriente de 40 mA. El ¡nstrumento se usó en geometría Bragg-Brentano con ¡nc¡dentes, d¡vergenc¡a y ranuras de d¡spers¡ón conf¡guradas para max¡m¡zar la ¡ntens¡dad en la muestra. Para la med¡da, se pres¡onó suavemente una pequeña cant¡dad de polvo (5-25 mg) sobre un soporte de muestra para formar una superf¡c¡e l¡sa y se expuso a rayos X. Las muestras se escanearon en modo 20-20 de 2° a 40° en 20 con un tamaño de paso de 0,02° y una velocidad de explorac¡ón de 0,30° segundos por paso. La adqu¡s¡c¡ón de datos fue controlada por el software de med¡c¡ón Bruker D¡ffracSu¡te y anal¡zada por el software Jade (vers¡ón 7.5.1). El ¡nstrumento fue cal¡brado con un patrón de cor¡ndón, dentro de ±0,02° de ángulo dos theta. Las pos¡c¡ones de p¡co de dos theta PXRD observadas y los espac¡os d se muestran en las Tablas 9 y 10, respect¡vamente para la Forma cr¡stal¡na I y el solvato cr¡stal¡no de la Forma II.
T l : D PXRD^ r l F rm r ln
Ta l 1 : D PXRD r ^ l lv l F rm ri lina II
Ejemplo 25: Análisis térmico
La calorimetría diferencial de barrido (DSC) se realizó usando un módulo TA Instruments Modelo Q-100 con un controlador Thermal Analyst. Los datos fueron recogidos y se analizaron usando el software TA Instruments Thermal Analysis. Se pesó con precisión una muestra de cada forma cristalina en un recipiente de aluminio cubierto. Después de un período de equilibrio isotérmico de 5 minutos a 5 °C, la muestra se calentó usando una rampa de calentamiento lineal de 10 °C/min de 0 °C a 250 °C. En la Figura 2 se muestra un termograma DSC representativo de la base libre cristalina de Forma I de la invención.
Las mediciones del análisis termogravimétrico (TGA) se realizaron usando un módulo TA Instruments Modelo Q-50 equipado con capacidad de alta resolución. Los datos fueron recogidos usando el controlador TA Instruments Thermal Analyst y se analizaron usando el software TA Instruments Universal Analysis. Se colocó una muestra pesada en una bandeja de platino y se escaneó con una velocidad de calentamiento de 10 °C desde la temperatura ambiente hasta 300 °C. Las cámaras de equilibrio y horno se purgaron con flujo de nitrógeno durante el uso. En la Figura 3 se muestra una traza representativa de TGA de la base libre cristalina de la Forma I de la invención.
Ejemplo 26: Evaluación dinámica de sorción de humedad
La medición de sorción dinámica de humedad (DMS) se realizó usando una microbalanza atmosférica VTI, Sistema SGA-100 (VTI Corp., Hialeah, FL 33016). Se usó una muestra pesada y la humedad fue el valor más bajo posible (cercano al 0 % de HR) al comienzo del análisis. El análisis DMS consistió en una etapa de secado inicial (0 % de HR) durante 120 minutos, seguido de dos ciclos de sorción y desorción con una velocidad de exploración de 5 % de HR/paso en el intervalo de humedad de 5 % de HR a 90 % de HR. La ejecución de DMS se realizó isotérmicamente a 25 °C. En la Figura 4 se muestra una traza representativa de DMS para la base libre cristalina de la Forma I de la invención.
Ejemplo 27 Difracción de rayos X de cristal único
Los datos de intensidad fueron recogidos a 293 °K, usando radiación de Cu (1 = 1,54184 A), en un difractómetro Gemini-R Ultra de difracción de Oxford operado por el software CrysAlis. [Agilent Technologies (2012), Yarnton, Inglaterra] (CrysAlis CCD y CrysAlis RED, 2003) Los datos se corrigieron para efectos de absorción mediante la comparación de reflexiones equivalentes. La estructura se resolvió con el procedimiento de métodos directos implementado en SHELXT y refinado por cuadrados mínimos de matriz completa en F2 usando SHELXL-2014.
[Sheldrick, Acta Cryst. C71 (2015), 3-8]. Los átomos que no son de hidrógeno se ubicaron en mapas de diferencia y se refinaron anisotrópicamente. Los átomos de hidrógeno unidos a los átomos de C se fijaron en posiciones idealizadas. Sus parámetros de desplazamiento térmico se refinaron libremente, a excepción de uno de los grupos metilo. Los átomos de H unidos a N se refinaron usando restricciones de distancia, NH = 0,86 (1) A, y sus parámetros de desplazamiento térmico se refinaron libremente.
Ejemplo 28: Evaluación de estabilidad en estado sólido
Las muestras de la base libre cristalina de la Forma I de la invención se almacenaron en bolsas de polietileno dobles cerradas con cierre de cremallera dentro de una botella de HDPE con tapón de rosca a 25 °C y 60 % de humedad relativa (HR) y a 40 °C y 75 % de HR. A intervalos específicos, el contenido de una muestra representativa se eliminó y analizó por HPLC para determinar la pureza química y por Karl Fischer para el contenido de agua.
Tabla 11: Estudio de estabilidad de la Forma cristalina I
Ensayos biológicos
Los compuestos de la invención se han caracterizado en uno o más de los siguientes ensayos biológicos.
Ensayo 1: Ensayos bioquímicos de JAK y Quinasa fuera de diana
Un panel de cuatro ensayos bioquímicos LanthaScreen JAK (JAK1,2, 3 y Tyk2) se realizó en un tampón de reacción de quinasa común (HEPES 50 mM, pH 7,5, Brij-35 al 0,01 %, MgCl2 10 mM y EGTA 1 mM). Las enzimas JAK etiquetadas con GST recombinante y un sustrato peptídico STAT1 etiquetado con GFP se obtuvieron en Life Technologies.
Los compuestos diluidos en serie se preincubaron con cada una de las cuatro enzimas JAK y el sustrato en microplacas blancas de 384 pocillos (Corning) a temperatura ambiente durante 1 h. Posteriormente se añadió ATP para iniciar las reacciones de la quinasa en un volumen total de 10 pl, con DMSO al 1 %. Las concentraciones finales de enzimas para JAK1, 2, 3 y Tyk2 son 4,2 nM, 0,1 nM, 1 nM y 0,25 nM respectivamente; las correspondientes concentraciones de Km ATP usadas son 25 pM, 3 pM, 1,6 pM, y 10 pM; mientras que la concentración de sustrato es 200 nM para los cuatro ensayos. Se permitió que las reacciones de quinasa continuaran durante 1 hora a temperatura ambiente antes de añadir una preparación de 10 pl de EDTA (concentración final 10 mM) y anticuerpo Tb-anti-pSTAT1 (pTyr701) (Life Technologies, concentración final 2 nM) en tampón de dilución TR-FRET (Life Technologies). Las placas se dejaron incubar a temperatura ambiente durante 1 h antes de leerlas en el lector EnVision (Perkin Elmer). Las señales de relación de emisión (520 nm/495 nm) se registraron y se utilizaron para calcular los valores de porcentaje de inhibición basados en DMSO y controles de fondo.
Para el análisis de dosis-respuesta, los datos de porcentaje de inhibición se representaron gráficamente frente a las concentraciones de compuestos, y los valores de CI50 se determinaron a partir de un modelo de ajuste robusto de 4 parámetros con el software Prism (software GraphPad). Los resultados se expresaron como pCI50 (logaritmo negativo de CI50) y posteriormente se convirtieron en pKi (logaritmo negativo de constante de disociación, Ki) usando la ecuación de Cheng-Prusoff.
Los compuestos de ensayo que tienen un mayor valor de pKi en cada uno de los cuatro ensayos JAK muestran una mayor inhibición de la actividad JAK. Los compuestos de la invención probados en este ensayo exhibieron típicamente valores de pKi entre aproximadamente 7 y aproximadamente 10,3.
Un panel de ensayos de tirosina quinasa fuera de diana (Flt3, RET, FGFR2, TrkA, y pDGFRp) se desarrollaron usando una metodología similar, con enzimas recombinantes obtenidas en Life Technologies y sustratos de péptidos biotinilados sintetizados en AnaSpec. Todos los ensayos se realizaron a temperatura ambiente con una concentración final de ATP de 100 pM. Los reactivos de detección, incluyendo el anticuerpo Eu-anti-fosfotirosina (pY20) y SureLight APC-SA, fueron comprados en Perkin Elmer. Las señales de relación de emisión (665 nm/615 nm) se registraron y usaron para el análisis de datos, y los resultados finales se expresaron como pIC50.
Ensayo 2: Ensayo de potencia celular de JAK
El ensayo de potencia celular AlphaScreen JAKI se realizó midiendo la fosforilación de STAT6 inducida por interleuquina-13 (IL-13, R&D Systems) en células epiteliales de pulmón humano BEAS-2B (ATCC). El anticuerpo anti-STAT6 (Cell Signaling Technologies) se conjugó con perlas aceptoras AlphaScreen (Perkin Elmer), mientras que el anticuerpo anti-pSTAT6 (pTyr641) (Cell Signaling Technologies) se biotiniló usando EZ-Link Sulfo-NHS-Biotin (Thermo Scientific).
Las células BEAS-2B se cultivaron a 37 °C en una incubadora humidificada con CO2 al 5 % en DMEM al 50 %/medio F-12 al 50 % (Life Technologies) suplementado con FBS al 10 % (Hyclone), 100 U/ml de penicilina, 100 pg/ml de
estreptomicina (Life Technologies) y GlutaMAX 2 mM (Life Technologies). En el día 1 del ensayo, las células se sembraron a una densidad de 7.500 células/pocillo en placas de 384 pocillos recubiertas con poli-D-lisina blanca (Corning) con 25 pl de medio, y se les permitió adherirse durante la noche en la incubadora. En el día 2 del ensayo, el medio se retiró y se reemplazó con 12 pl de tampón de ensayo (solución salina equilibrada de Hank/HBSS, 25 mM de HEPES y 1 mg/ml de albúmina de suero bovino/BSA) que contienen dosis-respuestas de los compuestos de ensayo. Los compuestos se diluyeron en serie en DMSO y luego se diluyeron otras 1000 veces en medio para llevar la concentración final de DMSO a 0,1 %. Las células se incubaron con los compuestos de ensayo a 37 °C durante 1 h, y luego se añadieron 12 pl de IL-13 precalentada (80 ng/ml en tampón de ensayo) para la estimulación. Después de incubar a 37 °C durante 30 minutos, se eliminó el tampón de ensayo (que contiene el compuesto e IL-13) y 10 pl de tampón de lisis celular (HEPES 25 mM, SDS al 0,1 %, NP-40 al 1 %, MgCl25 mM, EDTA 1,3 mM, EGTA 1 mM, y suplemento con inhibidores completos de la mini proteasa Ultra y PhosSTOP de Roche Diagnostics). Las placas se agitaron a temperatura ambiente durante 30 min antes de la adición de reactivos de detección. Primero se añadió una mezcla de perlas aceptoras conjugadas con biotina-anti-pSTAT6 y anti-STAT6 y se incubó a temperatura ambiente durante 2 h, seguido de la adición de perlas dadoras conjugadas con estreptavidina (Perkin Elmer). Después de un mínimo de 2 h de incubación, las placas de ensayo se leyeron en el lector de placas EnVision. Las señales de luminiscencia de AlphaScreen se registraron y usaron para calcular los valores de porcentaje de inhibición basados en DMSO y controles de fondo.
Para el análisis de dosis-respuesta, los datos de porcentaje de inhibición se trazaron frente a las concentraciones de compuestos, y los valores de CI50 se determinaron a partir de un modelo de ajuste robusto de 4 parámetros con el software Prism. Los resultados se expresaron como el logaritmo negativo del valor CI50, pIC50.
Los compuestos de ensayo que tienen un valor pIC50 más alto en este ensayo muestran una mayor inhibición de la fosforilación de STAT6 inducida por IL-13. Los compuestos de la invención probados en este ensayo exhibieron típicamente valores pIC50 entre aproximadamente 6,8 y aproximadamente 8,5.
Un ensayo de fosforilación de STAT6 inducida por interleuquina-4 (IL-4, R&D Systems) también se desarrolló en células monocíticas humanas THP-1 (ATCC), usando el mismo formato de ensayo y reactivos de detección. La estimulación con IL-4 se realizó durante 30 min a una concentración final de 30 ng/ml. La recogida y el análisis de datos también se realizaron de manera similar. Los compuestos de la invención probados en este ensayo exhibieron típicamente valores pIC50 entre aproximadamente 6,8 y aproximadamente 8,5.
Ensayo 3: Ensayo de citotoxicidad
Se realizó un ensayo de viabilidad/citotoxicidad de células luminiscentes CellTiter-Glo en células epiteliales de pulmón humano (ATCC) BEAS-2B en condiciones normales de crecimiento.
Las células se cultivaron a 37 °C en una incubadora humidificada con CO2 al 5 % en DMEM al 50 %/medio F-12 al 50 % (Life Technologies) suplementado con FBS al 10 % (Hyclone), 100 U/ml de penicilina, 100 pg/ml de estreptomicina (Life Technologies) y GlutaMAX 2 mM (Life Technologies). En el día 1 del ensayo, las células se sembraron a una densidad de 500 células/pocillo en placas de cultivo de tejido blanco de 384 pocillos (Corning) con 25 pl de medio y se les permitió adherirse durante la noche en la incubadora. En el día 2 del ensayo, Se añadieron 5 pl de medio que contenía dosis-respuestas de los compuestos de ensayo, y se incubaron a 37 °C durante 48 h. Posteriormente se añadieron 30 pl de solución de detección CellTiter-Glo (Promega), se mezcló en un agitador orbital durante 5 minutos, y se incubó durante 10 min adicionales antes de ser leído en el lector EnVision. Se registraron señales de luminiscencia y se calcularon los valores de porcentaje de control de DMSO.
Para el análisis de dosis-respuesta, El porcentaje de datos de control de DMSO se trazó frente a las concentraciones de compuestos para obtener las curvas de dosis-respuesta por la línea que conecta cada punto de datos. La concentración a la que cada curva cruza el umbral de inhibición del 15 % se define como CC15. Los resultados se expresaron como el logaritmo negativo del valor CC15, pCC15.
Se espera que los compuestos de ensayo que exhiben un valor pCC15 más bajo en este ensayo tengan menos probabilidades de causar citotoxicidad. Los compuestos de la invención probados en este ensayo exhibían típicamente valores pCC15 entre menos de 5 y aproximadamente 6.
Resultados del ensayo in vitro
Todos los compuestos de los Ejemplos 1 a 17 y las Tablas 1 a 8 se probaron en uno o más de los ensayos descritos anteriormente. En las siguientes tablas, para los ensayos enzimáticos JAK1, JAK 2, JAK3, y ensayos de enzimas TYK2, A representa un valor de pKj > 10 (K < 0,1 nM), B representa un valor de pK; entre 9 y 10 (K; entre 1 nM y 0,1 nM), C representa un valor de pK; entre 7 y 9 (K; entre 100 nM y 1 nM), y D representa un pK; entre 6,5 y 7 (K; entre 316 nM y 100 nM). Para los ensayos de potencia celular THP-1 y BEAS-2B, A representa un valor pCE50 > 7,5 (CE50 < 32 nM), B representa un valor pCE50 entre 6,7 y 7,5 (CE50 entre 200 nM y 32 nM), y C representa un valor pCE50 < 6,7 (CE50 > 200 nM).
continuación
continuación
continuación
continuación
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continuación
Ensayo 4: Determinación de la absorción en ratas canuladas
Biodisponibilidad oral (% de F), fracción absorbida (% de Fa) y fracción que escapa de la eliminación hepática (% de Fh) se determinaron en ratas Sprague Dawley de los siguientes dos estudios:
(1) Farmacocinética en ratas después de una dosis IV del compuesto de ensayo: Después de la dosificación IV, las muestras de plasma se recolectaron típicamente de 0-6 h. Los niveles de fármaco se determinaron usando un método LC-MS-Ms . Los niveles de fármaco resultantes se usaron para calcular los parámetros farmacocinéticos IV: AUC IV y Dosis IV.
(2) Las ratas que se han canulado en su vena porta (PV) y también en su vena yugular (JV) se dosificaron por vía oral con el compuesto de ensayo. Después de la dosificación oral, las muestras de plasma se recolectaron típicamente de 0-6 h tanto de la vena porta como de la vena yugular. Los niveles de fármaco se determinaron usando un método LC-MS-MS. Los niveles de fármaco resultantes se usaron para calcular los siguientes parámetros farmacocinéticos: AUC PO PV, AUC PO JV, y PO de Dosis.
Usando datos derivados de los estudios anteriores, la biodisponibilidad oral % de F, y las cantidades % de Fa y % de Fh se calcularon a partir de las siguientes fórmulas:
% de F = (AUC PO JV / AUC IV) * (Dosis IV/Dosis PO)*100
% de Fa = (AUC PO PV / AUC IV) * (Dosis IV / Dosis PO)*100
% de Fh = AUC PO JV/AUC PO PV
donde:
AUC PO JV = Área bajo la curva después de la dosis oral y plasma recogido de la vena yugular
AUC PO PV = Área bajo la curva después de la dosis oral y plasma recogido de la vena porta
AUC IV = Área bajo la curva después de una dosis intravenosa
Dosis IV = Dosis Intravenosa en mg/kg
Dosis PO = dosis oral en mg/kg
Los compuestos de la invención exhibieron típicamente biodisponibilidad oral (% de F) inferior a aproximadamente 10 % y absorción en la vena porta (% de Fa) inferior a aproximadamente 20 % incluyendo menos de aproximadamente 10 %. Por ejemplo, los compuestos de los Ejemplos 1-6, 8 y 12 exhibieron valores de % de Fa inferiores a aproximadamente 5 % y valores de % de Fa inferiores a aproximadamente 10 %.
Ensayo 5: Farmacocinética del colon en ratas
Los compuestos de ensayo se formularon individualmente en metilcelulosa al 0,5 % en agua y se dosificaron por sonda oral a 5 mg/kg en ratas Sprague Dawley. En varios momentos (típicamente 1, 2, 4, 6, 24 h) después de la dosificación, se extrajeron muestras de sangre mediante punción cardíaca y se extirparon dos cólones intactos de las ratas. Las muestras de sangre se centrifugaron a 1500 x g durante 15 minutos para recoger plasma. Los dos cólones se lavaron con solución salina tamponada con fosfato enfriada con hielo (PBS), se pesaron y homogeneizaron a una dilución de 1:10 en PBS. Los niveles de plasma y colon del compuesto de ensayo se determinaron mediante análisis LC-MS frente a patrones analíticos construidos en una curva patrón en la matriz de ensayo. Se determinó una relación de colon a plasma como la relación de AUC de colon a AUC de plasma en pg h/g. Por ejemplo, los compuestos de los ejemplos 1, 2 y 5 exhibieron una relación de colon a plasma en exceso de aproximadamente 450.
Ensayo 6: Farmacocinética en plasma y el tracto gastrointestinal en ratas y perros
Un compuesto de ensayo se dosificó a ratas macho Sprague Dawley (n = 3) como se describe en el Ensayo 5. En cada momento (0,5, 1, 3, 6 y 24 h) se tomaron muestras de plasma mediante punción cardíaca e inmediatamente después se extrajo el tracto gastrointestinal y se extirparon los siguientes segmentos: duodeno, colon proximal, y colon distal. Los niveles de plasma y segmento del compuesto de ensayo se determinaron como se describe en el Ensayo 5. En todos los momentos, la concentración plasmática estaba por debajo del límite de cuantificación de
0,001 |jg/ml. Para el compuesto del ejemplo 1, para cada segmento, la proporción de tejido a plasma fue superior a aproximadamente 14000.
Se realizó un experimento análogo en perros. Los perros beagle macho (n = 2) se dosificaron mediante sonda oral con 5 mg/kg de compuesto de ensayo, formulado como anteriormente. En el perro número 1, se tomaron muestras de plasma a 0,25, 1,2, 4, 6 y 24 horas después de la dosificación. En el perro número 2, se tomaron muestras de plasma a 6 h. Tanto en el perro número 1 (a las 24 h) como en el perro número 2 (a las 6 h) el tracto gastrointestinal se extrajo y se segmentó de la siguiente manera: duodeno, el íleon, ciego y colon segmentados en tercios iguales (colon proximal, medio, y distal). Para cada uno de los segmentos GI, se cortó una pieza de aproximadamente 2 cm en el medio del segmento. Cada uno se lavó a fondo en tampón PBS helado y luego se homogeneizó en 5 volúmenes de tampón PBS y se analizó como anteriormente. Para el compuesto del ejemplo 1, la relación de concentración de compuesto en tejido GI a compuesto en plasma para colecciones realizadas a las 6 horas después de la dosis oral varió de aproximadamente 9 a aproximadamente 165 donde se tomó la concentración de colon como la suma de los tres segmentos de colon. La proporción de tejido GI a plasma varió de aproximadamente 7 a aproximadamente 30 para recogidas realizadas a las 24 horas después de la dosis oral.
Ensayo 7: Modelo de ratón de colitis inducida por oxazalona
La colitis inducida por oxazolona es un modelo experimental que tiene un parecido histológico con la colitis ulcerosa humana (Heller et al., Immunology, 2002, 17, 629-638). En el ensayo se usaron ratones adultos BALB/C de Harlan. El día 1, los animales se anestesiaron ligeramente con isoflurano y los pelos entre el hombro se eliminaron cuidadosamente antes de oxazolona (4 %, 150 jl, 4:1 de formulación de acetona: aceite de oliva) o solución de vehículo se aplicó lentamente para la sensibilización de la piel. Siete días después de la sensibilización de la piel, los ratones se mantuvieron en ayunas durante la noche, se anestesiaron con inhalación de isoflurano, y una jeringa de 1 ml equipada con un catéter 3.5-F, lleno de solución de oxazolona, se insertó cuidadosamente unos 4 cm en el colon del ratón. Después de la inserción, se inyectaron 50 j l de la solución de oxazolona (1 %, formulación de etanol:agua 1:1) muy lentamente (durante 30 segundos usando una bomba de inyección) en el colon. Se retiró el catéter y se mantuvo a los ratones en posición vertical (cabeza abajo) durante 2 minutos para asegurar que toda la solución de oxazolona permaneciera dentro del colon. El tratamiento farmacológico (PO, BID o TID) o vehículo se inició un día antes de la estimulación intrarrectal (IR) de oxazolona. Dos días después de la estimulación intrarrectal de oxazolona, el índice de actividad de la enfermedad (DAI) fue evaluado por experimentadores cegados al tratamiento para cada ratón de acuerdo con la puntuación de criterios: puntuación de consistencia de las heces (0, normal; 2, suelto; 4, diarrea), puntuación bruta de sangrado (0, ausencia; 2, sangre teñida; 4, presencia), y puntuación de pérdida de peso (0, ninguna; 1, 1 %-5 %; 2, 5 %-10 %; 3, 10 %-20 %; 4, más de 20 %); DAI = promedio de (puntuación de consistencia de heces puntuación bruta de sangrado puntuación de pérdida de peso).
Los compuestos de la invención seleccionados se probaron en el ensayo. La eficacia en el modelo se evidencia por una disminución en la puntuación DAI en comparación con la puntuación de los animales tratados con vehículo. Los compuestos de los ejemplos 1, 2, 3, 4, 5, 6, 8, 12 y 1-38, exhibieron una disminución estadísticamente significativa en la puntuación DAI en comparación con los animales tratados con vehículo en el modelo de oxazalona a una dosis de 1,3 y/o 10 mg/kg BID, mientras que los compuestos de los ejemplos 7, 9, 11, 13, 2-1,2-6, 2-16, 2-17, 2-22, 2-24, 4-3, 4-4, 4-13, 4 -18, 4-19, 4-23 y 5-11 no exhibieron una disminución estadísticamente significativa a las dosis de hasta 10 mg/kg BID probadas en el ensayo.
Ensayo 8: Efectos de inmunosupresión en linfocitos citolíticos naturales (NK) esplénicos de ratón
El agotamiento de las células esplénicas de ratón es un modelo experimental de inmunosupresión (Kudlacz et al., Am. J. of Transplantation, 2004, 4, 51-57). El compuesto del Ejemplo 1 se evaluó en el modelo de células esplénicas de ratón siguiendo el mismo paradigma de tratamiento que el usado en el modelo de colitis inducida por oxazolona (Ensayo 7).
Para el estudio se usaron ratones adultos Balb/C macho (12-14 semanas de edad) de Harlan. El compuesto (1, 10 y 100 mg/kg, BID) y tofacitinib (30 mg/kg, BID) como control positivo se dosificaron por vía oral durante tres días a ratones sin tratamiento previo. Los bazos se cosecharon 1 o 2 h después de la última dosis y se trituraron inmediatamente para la tinción del subtipo celular. Antes de la fijación, anticuerpos marcados con fluoróforo para CD19 (FITC; linfocitos B), CD3e (PE; linfocitos pan T) y DX5 (APC; linfocitos NK) se incubaron con muestras de esplenocitos de cada animal para permitir el análisis del % de subtipo múltiple, simultáneo en el citómetro de flujo. El número total de células de bazo para cada animal se midió mediante el contador de células automatizado de mano Sceptre™ 2.0.
El número absoluto de población de subtipos de linfocitos (por ejemplo, linfocitos B, T y NK esplénicos) se calculó a partir del porcentaje de cada subtipo por el total de células de bazo para cada animal. Un ANOVA unidireccional, con ensayo post hoc de Dunnett, se usó para comparar el número de linfocitos esplénicos de los grupos de vehículo y compuesto de ensayo. El nivel a se estableció en p < 0,05. Los datos se presentaron como la media ± ETM para cada grupo.
El control positivo, tofacitinib (30 mg/kg; PO, BID), disminuyó de forma dependiente de la dosis y significativa los recuentos de linfocitos NK esplénicos. En el mismo estudio, los recuentos de linfocitos NK esplénicos no se vieron afectados por el compuesto del Ejemplo 1 a dosis de PO (BID) de hasta 100 mg/kg (la dosis máxima probada). No se observó efecto del tratamiento para las poblaciones de linfocitos B y T con ninguno de los compuestos.
Estos datos, junto con la dosis mínima de 1 mg/kg que causó un efecto anticolítico significativo en el modelo de ratón de colitis inducida por oxazolona (Ensayo 7), permite calcular un índice terapéutico funcional de > 100 para el compuesto del Ejemplo 1.
Ensayo 9: Primer estudio en humanos para evaluar la seguridad, tolerabilidad y farmacocinética en sujetos sanos El compuesto del Ejemplo 1 se evaluó en un estudio con doble ocultación, aleatorio, controlado con placebo, de dosis única ascendente (SAD) y dosis múltiple ascendente (MAD) de seguridad, tolerabilidad, y farmacocinética en sujetos sanos. Las muestras farmacocinéticas se recolectaron hasta 72 horas después de la dosis final tanto en el estudio SAD (después de la primera dosis) como en el estudio MAD (después de 14 días de una dosis diaria). El estudio SAD incluyó 5 cohortes y el estudio MAD incluyó 4 cohortes con un total de 72 sujetos, de los cuales 71 completaron el período de dosificación.
Los parámetros farmacocinéticos (PK) en plasma se determinaron mediante análisis no compartimental usando la Versión 6.4.0 de WinNonLin (Pharsight, St Louis, MO). El parámetro PK en plasma presentado aquí es:
Cmáx: concentración máxima en plasma
Después de una dosis única de hasta 1000 mg, las concentraciones plasmáticas promedio Cmáx del compuesto fueron inferiores a 50 ng/ml y ningún sujeto individual logró una Cmáx de más de 100 ng/ml. Después de 14 días de administración del compuesto hasta 300 mg, las concentraciones plasmáticas promedio Cmáx del compuesto fueron inferiores a 15 ng/ml y ningún sujeto individual logró una Cmáx superior a 30 ng/ml. La comparación de estos datos con otros compuestos administrados por vía oral, sugiere que el compuesto del Ejemplo 1 tiene una biodisponibilidad oral muy baja. También, se observó una alta concentración de fármaco en las muestras de heces lo que sugiere una exposición significativa en el tracto gastrointestinal.
Aunque la presente invención se ha descrito con referencia a las realizaciones específicas de la misma, los expertos en la materia deben entender que se pueden hacer varios cambios y se pueden sustituir equivalentes sin apartarse del alcance de la invención. Además, se pueden realizar muchas modificaciones para adaptar una situación particular, material, composición de materia, proceso, etapa o etapas de proceso, al objeto y alcance de la presente invención. Se pretende que dichas modificaciones se encuentren dentro del alcance de las reivindicaciones adjuntas al mismo.
Claims (31)
1. Un compuesto de fórmula (I):
en donde
R1 se selecciona entre:
(a) alquilo C1-4, en donde alquilo C1-4 está opcionalmente sustituido con uno, dos, o tres fluoro o con un sustituyente seleccionado entre:
-CN,
-Oalquilo C1-3,
-C(O)Oalquilo C1-4,
fenilo, en donde fenilo está opcionalmente sustituido con -OH, piridinilo, en donde piridinilo está opcionalmente sustituido con -CN, tetrahidropiranilo,
- C(O)NRaRb, en donde Ra y Rb son independientemente hidrógeno o alquilo C1-3 o Ra es hidrógeno y Rb es
y un grupo seleccionado entre
y
(b) un grupo seleccionado entre
y
en donde m es 1 o 2;
(c) -C(O)R6, en donde R6 se selecciona entre
alquilo C1-4, en donde alquilo C1-4 está opcionalmente sustituido con uno, dos o tres fluoro o con un
sustituyente seleccionado entre -OH, -CN, -Oalquilo C1-4, fenilo, y -NReRf, en donde Re y Rf son independientemente hidrógeno o alquilo C1-3;
cicloalquilo C3-6, en donde cicloalquilo C3-6 está opcionalmente sustituido con alquilo C1-3; piridinilo, en donde piridinilo está opcionalmente sustituido con -CN; y
en donde R7 es -CN, -CF3 , u -OCH3 ;
(d) -C(O)OR8, en donde R8 se selecciona entre
alquilo C1-4, en donde alquilo C1-4 está opcionalmente sustituido con -CN, cicloalquilo C3-6, tetrahidrofuranilo, u -ORm, en donde Rm es hidrógeno o alquilo C1-3; y
alquenilo C1-4; y
(e) -S(O)2R9, en donde R9 se selecciona entre
alquilo C1-4, en donde alquilo C1-4 está opcionalmente sustituido con -CN, -Oalquilo C1-3, fenilo, piridinilo, o cicloalquilo C3-6,
alquenilo C1-4,
cicloalquilo C3-6, en donde cicloalquilo C3-6 está opcionalmente sustituido con alquilo C1-3, fenilo,
piridinilo, en donde piridinilo está opcionalmente sustituido con fluoro,
heterociclo que contiene de 4 a 6 átomos en el anillo incluido un átomo de nitrógeno, en donde el heterociclo está opcionalmente sustituido con -CN o alquilo C1-3, en donde alquilo C1-3 está opcionalmente sustituido con -CN u -Oalquilo C1-3; y
R2 se selecciona entre hidrógeno, -Oalquilo C1-3, y -CH2-R10, en donde R10 se selecciona entre -OH, morfolinilo, piperidinilo, en donde piperidinilo está opcionalmente sustituido con 2 fluoro, y piperazinilo, en donde piperazinilo está opcionalmente sustituido con metilo;
R3 se selecciona entre hidrógeno, alquilo C1-3, -Oalquilo C1-3, -C(O)Oalquilo C1-3, -S(O)2alquilo C1-3, y -CH2S(O)2alquilo C1-3;
R4 es hidrógeno u -Oalquilo C1-3;
R5 es hidrógeno o fluoro; y
n es 1 o 2;
con la condición de que
cuando R3 es -Oalquilo C1-3 y R2, R4 y R5 son cada uno hidrógeno, R9 no es fenilo;
cuando R5 es fluoro, n es 1, y R2, R3 y R4 son cada uno hidrógeno, R9 no es fenilo; y
cuando R5 es fluoro, R3 es metilo, y R2 y R4 son cada uno hidrógeno, R1 no es -C(O)OR8;
o una sal o estereoisómero farmacéuticamente aceptable del mismo.
2. El compuesto de la reivindicación 1 en donde:
R1 se selecciona entre:
(a) alquilo C1-4, en donde alquilo C1-4 está opcionalmente sustituido con uno, dos, o tres fluoro o con un sustituyente seleccionado entre -CN; -Oalquilo C1-3; fenilo, en donde fenilo está opcionalmente sustituido con -OH; piridinilo, en donde piridinilo está opcionalmente sustituido con -CN; tetrahidropiranilo; -C(O)NHCH3; y
(b) un grupo seleccionado entre
en donde m es 1;
(c) -C(O)R6, en donde R6 se selecciona entre alquilo C1-4, en donde alquilo C1-4 está opcionalmente sustituido con uno, dos, o tres fluoro o con un sustituyente seleccionado entre -OH y fenilo; cicloalquilo C3-6, en donde cicloalquilo C3-6 está opcionalmente sustituido con alquilo C1-3; y
en donde R7 es -CN o -CF3 ;
(d) -C(O)OR8, en donde R8 se selecciona entre alquilo C1-4, en donde alquilo C1-4 está opcionalmente sustituido con -CN, cicloalquilo C3-6, tetrahidrofuranilo, u -ORm, en donde Rm es hidrógeno o alquilo C1-3; y alquenilo C1-4; y
(e) -S(O)2R9, en donde R9 se selecciona entre alquilo C1-4, en donde alquilo C1-4 está opcionalmente sustituido con -CN, -Oalquilo C1-3, fenilo, piridinilo, o cicloalquilo C3-6; alquenilo C1-4; cicloalquilo C3-6, en donde cicloalquilo C3-6 está opcionalmente sustituido con alquilo C1-3; piridinilo, en donde piridinilo está opcionalmente sustituido con fluoro; heterociclo que contiene 4 o 5 átomos en el anillo incluido un átomo de nitrógeno, en donde el heterociclo está unido al azufre a través del átomo de nitrógeno y el heterociclo está opcionalmente sustituido con -CN o -CH2OCH3 ; y
R2 se selecciona entre hidrógeno, -OCH3 , y -CH2-R10, en donde R10 se selecciona entre -OH, morfolinilo, piperidinilo, en donde piperidinilo está sustituido con dos fluoro en la posición, 4 y piperazinilo, en donde piperazinilo está sustituido con metilo en la posición 4;
R3 se selecciona entre hidrógeno, -CH3 , -OCH3 , y -C(O)OCH3;
R4 es hidrógeno u -OCH3 ;
R5 es hidrógeno o fluoro; y
n es 1 o 2,
siempre que cuando R5 es fluoro, R3 es hidrógeno.
3. El compuesto de la reivindicación 2 en donde R1 es alquilo C1-4, en donde alquilo C1-4 está opcionalmente sustituido con uno, dos, o tres fluoro o con un sustituyente seleccionado entre -CN; -Oalquilo C1-3; fenilo, en donde fenilo está opcionalmente sustituido con -OH; piridinilo, en donde piridinilo está opcionalmente sustituido con -CN; tetrahidropiranilo, -C(O)NHCH3, y
4. El compuesto de la reivindicación 2 en donde R1 es -C(O)R6, en donde R6 se selecciona entre alquilo C1-4, en donde alquilo C1-4 está opcionalmente sustituido con uno, dos, o tres fluoro o con un sustituyente seleccionado entre -OH, y fenilo; cicloalquilo C3-6, en donde cicloalquilo C3-6 está opcionalmente sustituido con alquilo C1-3; y
en donde R7 es -CN o -CF3.
5. El compuesto de la reivindicación 2 en donde R1 es -S(O)2R9, en donde R9 se selecciona entre alquilo C1-4, en donde alquilo C1-4 está opcionalmente sustituido con -CN, -Oalquilo C1-3, fenilo, piridinilo, o cicloalquilo C3-6; alquenilo C1-4; cicloalquilo C3-6, en donde cicloalquilo C3-6 está opcionalmente sustituido con alquilo C1-3; piridinilo, en donde piridinilo está opcionalmente sustituido con fluoro; heterociclo que contiene 4 o 5 átomos en el anillo incluido un átomo de nitrógeno, en donde el heterociclo está unido al azufre a través del átomo de nitrógeno y el heterociclo está opcionalmente sustituido con -CN o con -CH2OCH3 ; y
6. El compuesto de la reivindicación 2 en donde R1 se selecciona entre:
(a) alquilo C1-4, en donde alquilo C1-4 está sustituido con uno, dos o tres fluoro, o con -CN o -C(O)NHCH3;
(c) -C(O)R6, en donde R6 es alquilo C1-4, en donde alquilo C1-4 está sustituido con uno, dos, o tres fluoro; y (e) -S(O)2R9, en donde R9 es piridinilo; y R2, R3, R4, y R5 son cada uno de hidrógeno.
7. El compuesto de la reivindicación 6 en donde R1 se selecciona entre -(CH2)2CN, -CH2CH2F, -CH2C(O)NHCH3, -C(O)CHF2, y -S(O)2-piridin-3-ilo.
8. El compuesto de la reivindicación 2 en donde el compuesto se selecciona entre:
3-((1 R,3s,5S)-3-((7-((5-metil-1 H-pirazol-3-il)amino)-1,6-naftiridin-5-il)amino)-8-azabiciclo[3.2.1 ]octan-8-il)propanonitrilo,
W5-((1R,3s,5S)-8-(2-fluoroetil)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)-N7-(5-metil-1H-pirazol-3-il)-1,6-naftiridin-5,7-diamina, W7-(5-metil-1H-pirazol-3-il)-W5-((1R,3s,5S)-8-(piridin-3-ilsulfonil)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)-1,6-naftiridin-5,7-diamina,
2-(dimetilamino)-1-((1R,3s,5S)-3-((7-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-1,6-naftiridin-5-il)amino)-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-9-il)etan-1-ona,
2,2-difluoro-1-((1R,3s,5S)-3-((7-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-1,6-naftiridin-5-il)amino)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-8-il)etan-1-ona,
W5-((1R,3s,5S)-8-((2-metoxietil)sulfonil)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)-W7-(5-metil-1H-pirazol-3-il)-1,6-naftiridin-5,7-diamina,
W7-(5-metil-1H-pirazol-3-il)-W5-((1R,3s,5S)-9-(piridin-3-ilsulfonil)-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-il)-1,6-naftiridin-5,7-diamina,
(1R,3s,5S)-3-((2-(hidroximetil)-7-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-1,6-naftiridin-5-il)amino)-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de isobutilo,
W-metil-2-((1R,3s,5S)-3-((7-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-1,6-naftiridin-5-il) amino)-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-9-il) acetamida, y
sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.
9. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1 en donde el compuesto es de fórmula:
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
10. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1 en donde el compuesto es de fórmula:
11. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1 en donde el compuesto es de fórmula:
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
12. Una forma cristalina de un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1 en donde el compuesto es 3-((1R,3s,5S)-3-((7-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-1,6-naftiridin-5-il)amino)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-8-il)propanonitrilo y en donde la forma cristalina se caracteriza por un patrón de difracción de rayos X en polvo que comprende picos de difracción a valores 20 de 7,87 ± 0,20, 12,78 ± 0,20, 15,78 ± 0,20 y 20,41 ± 0,20.
13. La forma cristalina de la reivindicación 12 en donde el patrón de difracción de rayos X en polvo se caracteriza además por tener dos o más picos de difracción adicionales a valores de 20 seleccionados entre 10,80 ± 0,20, 13,47 ± 0,20, 13,64 ± 0,20, 14,66 ± 0,20, 15,11 ± 0,20, 15,54 ± 0,20, 17,75 ± 0,20, 21,00 ± 0,20, 22,22 ± 0,20, 22,93 ± 0,20 y 23,65 ± 0,20.
14. La forma cristalina de un compuesto de acuerdo con la reivindicación 12 en donde la forma cristalina se caracteriza por un patrón de difracción de rayos X en polvo en donde las posiciones máximas están sustancialmente de acuerdo con las posiciones máximas del patrón mostrado en la Figura 1.
15. La forma cristalina I de un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1 en donde el compuesto es 3-((1R,3s,5S)-3-((7-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-1,6-naftiridin-5-il)amino)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-8-il)propanonitrilo y en donde la forma cristalina se caracteriza por una traza de calorimetría diferencial de barrido registrada a una velocidad de calentamiento de 10 °C por minuto que muestra un máximo en el flujo de calor endotérmico a una temperatura entre aproximadamente 243 °C y aproximadamente 253 °C.
16. La forma cristalina de un compuesto de acuerdo con la reivindicación 15 en donde el compuesto es 3-((1R,3s,5S)-3-((7-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-1,6-naftiridin-5-il)amino)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-8-il)propanonitrilo y en donde la forma cristalina se caracteriza por una traza de calorimetría diferencial de barrido sustancialmente de acuerdo con lo que se muestra en la Figura 2.
17. Un solvato cristalino de un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1 en donde el solvato comprende 3-((1R,3s,5S)-3-((7-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-1,6-naftiridin-5-il)amino)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-8-il)propanonitrilo, metanol, W,W-dimetilformamida, y agua, en donde el solvato cristalino se caracteriza por un patrón de difracción de rayos X en polvo que comprende picos de difracción a valores de 20 de 9,76 ± 0,20, 15,06 ± 0,20, 16,61 ± 0,20, 20,40 ± 0,20 y 21,99 ± 0,20.
18. El solvato cristalino de la reivindicación 17 en donde el solvato comprende entre aproximadamente 6 % y aproximadamente 7 % de metanol, entre aproximadamente 2 % y aproximadamente 2,5 % de W,W-dimetilformamida,
y entre aproximadamente 1 y aproximadamente 1,5 % de agua.
19. El solvato cristalino de la reivindicación 17 en donde el solvato cristalino se caracteriza por un patrón de difracción de polvo de rayos X en polvo en donde las posiciones máximas están sustancialmente de acuerdo con las posiciones máximas del patrón mostrado en la Figura 5.
20. Un compuesto de fórmula (IV):
en donde R2, R3, R4, R5 y n se definen como en la reivindicación 1.
21. El compuesto de la reivindicación 20 en donde R2, R3, R4, y R5 son cada uno de hidrógeno.
22. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 19 y un vehículo farmacéuticamente aceptable.
23. La composición farmacéutica de la reivindicación 22 que además comprende uno o más agentes terapéuticos útiles para tratar la enfermedad inflamatoria gastrointestinal.
24. La composición de acuerdo con la reivindicación 23 en donde el otro agente terapéutico se selecciona entre: mesalamina, osalazina, sulfasalazina, prednisona, prednisolona, hidrocortisona, budesonida, beclometasona, fluticasona, ciclosporina, azatioprina, metotrexato, 6-mercaptopurina, tacrolimus, infliximab, adalimumab, golimumab, certolizumab, natalizumab, vedolizumab, rifaximina, y loperamida.
25. Un proceso de preparación de un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo como se define en la reivindicación 1, comprendiendo el proceso hacer reaccionar un compuesto de fórmula (IV):
en donde R2, R3, R4, R5 y n se definen como en la reivindicación 1 con:
(i) un compuesto de fórmula L-RA en donde L es un grupo saliente y RA es un alquilo opcionalmente sustituido como se define en la reivindicación 1 para la opción de R1 (a) o RA es un sustituyente de la opción (b); o (ii) HO-C(O)R6; o
(iii) Cl-C(O)OR8; o
(iv) Cl-S(O)2R9, en donde R6, R8, y R9 se definen como en la reivindicación 1 para formar un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
26. Un método para preparar la forma cristalina de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 12 a 16,
comprendiendo el método:
(a) formar una suspensión de un solvato cristalino de 3-((1R,3s,5S)-3-((7-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-1,6-naftiridin-5-il)amino)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-8-il)propanonitrilo en un disolvente seleccionado entre dioxano, tolueno, acetato de butilo, y acetona;
(b) calentar la suspensión a una temperatura entre aproximadamente 40 °C y aproximadamente 110 °C durante aproximadamente 4 horas y aproximadamente 3 días; y
(c) aislar la forma cristalina de la suspensión.
27. Un compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 19 o una composición de cualquiera de las reivindicaciones 22 a 24 para uso en el tratamiento de una enfermedad inflamatoria gastrointestinal en un mamífero.
28. El compuesto para uso de la reivindicación 27 en donde la enfermedad gastrointestinal es colitis ulcerosa.
29. El compuesto para uso de la reivindicación 28 en donde la colitis ulcerosa se selecciona entre proctosigmoiditis, pancolitis, proctitis ulcerosa y colitis del lado izquierdo.
30. El compuesto para uso de la reivindicación 27 en donde la enfermedad inflamatoria gastrointestinal es la enfermedad de Crohn.
31. El compuesto para uso de la reivindicación 27 en donde la enfermedad inflamatoria gastrointestinal se selecciona entre el grupo que consiste en colitis colágena, colitis linfocítica, enfermedad de Behpet, enfermedad celíaca, colitis inducida por el tratamiento del cáncer en el punto de control, colitis inducida por inhibidores de CTLA-4, ileítis, esofagitis eosinófila, colitis relacionada con la enfermedad de injerto contra huésped, y colitis infecciosa.
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