CZ247698A3 - Lidské protilátky k lidskému TNF alfa - Google Patents

Lidské protilátky k lidskému TNF alfa Download PDF

Info

Publication number
CZ247698A3
CZ247698A3 CZ982476A CZ247698A CZ247698A3 CZ 247698 A3 CZ247698 A3 CZ 247698A3 CZ 982476 A CZ982476 A CZ 982476A CZ 247698 A CZ247698 A CZ 247698A CZ 247698 A3 CZ247698 A3 CZ 247698A3
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
seq
antibody
human
amino acid
tnfα
Prior art date
Application number
CZ982476A
Other languages
English (en)
Other versions
CZ292465B6 (cs
Inventor
Jochen G. Salfeld
Debora J. Allen
Zehra Kaymakcalan
Boris Labkovsky
John A. Mankovich
Brian T. Mcguinness
Andrew J. Roberts
Paul Sakorafas
Hendricus R. J. M. Hoogenboom
David Schoenhaut
Tristan J. Vaughan
Michael White
Alison J. Wilton
Original Assignee
Basf Aktiengesellschaft
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=26707297&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=CZ247698(A3) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Priority claimed from US08/599,226 external-priority patent/US6090382A/en
Application filed by Basf Aktiengesellschaft filed Critical Basf Aktiengesellschaft
Publication of CZ247698A3 publication Critical patent/CZ247698A3/cs
Publication of CZ292465B6 publication Critical patent/CZ292465B6/cs

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
    • C07K16/241—Tumor Necrosis Factors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/02—Stomatological preparations, e.g. drugs for caries, aphtae, periodontitis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/16—Central respiratory analeptics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/06—Antigout agents, e.g. antihyperuricemic or uricosuric agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A61P29/02—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID] without antiinflammatory effect
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/04—Anorexiants; Antiobesity agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A61P31/22—Antivirals for DNA viruses for herpes viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P33/00—Antiparasitic agents
    • A61P33/02—Antiprotozoals, e.g. for leishmaniasis, trichomoniasis, toxoplasmosis
    • A61P33/06—Antimalarials
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P39/00—General protective or antinoxious agents
    • A61P39/02—Antidotes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/04—Inotropic agents, i.e. stimulants of cardiac contraction; Drugs for heart failure
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/08—Vasodilators for multiple indications
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/64—General methods for preparing the vector, for introducing it into the cell or for selecting the vector-containing host
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/10—Cells modified by introduction of foreign genetic material
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S424/00—Drug, bio-affecting and body treating compositions
    • Y10S424/81—Drug, bio-affecting and body treating compositions involving autoimmunity, allergy, immediate hypersensitivity, delayed hypersensitivity, immunosuppression, immunotolerance, or anergy

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)

Description

Lidské protilátky k lidskému TNFa
Oblast techniky
Předkládaný vynález se týká lidských protilátek k lidskému faktoru nekrosy nádorů oí, TNFa. Dále se předkládaný vynález týká nukleových kyselin, vektorů a hostitelských buněk pro expresi rekombinantních lidských protilátek a způsobů pro syntesu rekombinantních lidských protilátek.
Dosavadní stav techniky
Faktor nekrosy nádorů a (TNFa) je cytokin produkovaný mnoha typy buněk, včetně monocytů a makrofágů, který byl původně identifikován díky jeho schopnosti indukovat nekrosu jistých typů nádorů u myší (viz například Old, L. (1985), Science 230: 630 632). Následně byl faktor nazývaný kachexin, asociovaný s kachexií, identifikován jako stejná molekula jako TNFa. Předpokládala se účast TNFa ve zprostředkování šoku {viz například Beutler, B a Cerami, A (1988) Annu. Rev. Biochem., 57: 505 - 518; Beutler, B a Cerami, A (1989) Annu. Rev. Immunol. 7: 625 - 655) . Dále, předpokládá se účast TNFa v patofyziologii mnoha dalších lidských onemocnění a poruch, včetně sepse, infekcí, autoimunitních onemocnění, rejekce transplantátu a reakce štěpu proti hostiteli (viz například Moeller, A. et al., Cytokine 2: 162 - 169 (1990); U.S. patent č. 5231024, Moeller et al.; Evropská patentová přihláška publikační č. 260610 Bl, Moeller, A. et al..; Vasilli, P. Annu. Rev. Immunol., 10: 411452 (1992); Tracey, K.J. a Cerami, A. Annu. Rev. Med. 45: 491 503 (1994) .
• 9 • ·
Vzhledem ke škodlivé úloze lidského TNFa (hTNFa) v mnoha lidských onemocněních byly navrženy terapeutické strategie pro inhibici nebo zrušení aktivity hTNFa. Konkrétně, byly navrženy protilátky, které se váží na a neutralizují hTNFa jako prostředek pro inhibici aktivity hTNFa. Jedněmi z prvních takových protilátek byly myší monoklonální protilátky (mAb), secernované hybridomy připravenými z lymfocytů myší imunizovaných hTNFa (viz například Hahn, T. et al., Proč. Nati. Acad. Sci. USA 82: 3814 3818 (1985); Liang, C.M. et al., Biochem. Biophys. Res. Commun. 137: 847 - 854 (1986); Hirai, Metal., J. Immunol. Methods 96:
- 62 (1987); Fendly, B.M. et al., Hybridoma 6: 359 - 370 (1987); Moeller, A. et al., Cytokine 2: 162 - 169 (1990); U.Š. patent č. 5231024, Moeller et al., Evropská patentová přihláška publikační č publikační č publikační č
186833 Bl,
218868 Al 260610 Al
Wallach, D.; Evropská patentová přihláška Old et al.; Evropská patentová přihláška Moeller et al.). Ačkoliv tyto myší anti-hTNFa protilátky často vykazovaly vysokou afinitu pro hTNFa (například K^ < 10“®M) a byly schopné neutralizovat aktivitu hTNFa, jejich použití in vivo je omezeno problémy spojenými s podáním myších protilátek lidem, jako je krátký poločas v séru, neschopnost spouštět určité lidské efektorové funkce a vyvolání nežádoucí imunitní odpovědi proti myším protilátkám u lidí (lidská anti-myší protilátka (HAMA) reakce).
Při pokusu o překonání těchto problémů spojených s úplnými myšími protilátkami u lidí byly myší anti-hTNFa protilátky geneticky zpracovány tak, aby byly více podobné lidským. Například, byly připraveny chimérické protilátky, ve kterých jsou variabilní regiony protilátkových řetězců odvozeny od myší a konstantní regiony protilátkových řetězců jsou odvozeny od lidí (Knight, D.M. et al., Mol. Immunol. 30: 1443 - 1453 (1993); PCT
přihláška š. WO 92/16553 od Daddona, P.E. et al.). Dále byly také připraveny humanizované protilátky, ve kterých jsou hypervariabilní domény variabilních regionů protilátky odvozeny od myší, ale zbytek variabilních regionů a konstantní regiony protilátky jsou lidské (PCT přihláška č. WO 92/11383^ Adair, J.R. et al.). Nicméně, jelikož mají tyto chimérické a humanizované protilátky stále ještě nějaké myší sekvence, mohou stále vyvolat nežádoucí imunitní reakci, lidskou reakci proti chimérické protilátce (HACA), zejména pokud jsou podávány dlouhodobě, například v chronických indikacích, jako je revmatoidní artritida (viz například Elliot, M.J. et al. Lancet 344: 1125 - 1127 (1994); Elliot, M.J. et al., tancet 344: 1105 1110 (1994) .
Výhodným inhibitorem hTNFo; k myším mAb nebo jejich derivátům (například chimérickým nebo humanizovaným protilátkám) může být zcela lidská anti-hTNFa; protilátka, protože takové agens by nemělo vyvolávat HAMA reakci, ani když bude užíváno dlouhodobě. Lidské monoklonální autoprotilátky proti hTNFo; byly připraveny za použití lidské hýbridomní techniky (Boyle, P. et al., Cell. Immunol. 152: 556 - 558, (1993); Boyle, P. et al., Cell. Immunol.
152: 569 - 581, (1993); Mezinárodní patentová přihláška publikační č. 614984 A2^ Boyle et al.) . Nicméně, u těchto od hybridomů odvozených monoklonálních autoprotilátek bylo popsáno, že mají afinitu k hTNFo;, která je příliš nízká pro určení běžnými způsoby, nebyly schopné vázat se na solubilní hTNFo; a nebyly schopné neutralizovat cytotoxicitu indukovanou hTNFo; (viz Boyle et al., výše). Kromě toho, úspěch těchto hýbridomních technik závisí na přirozené přítomnosti lymfocytů produkujících autoprotilátky specifické pro hTNFo; v lidské periferní krvi. Některé studie detekovaly sérové autoprotilátky proti hTNFo; u lidských subjektů (Fomsgaard, A. et al., Scand. J, Immunol. 30: 219 - 223 (1989); Bendtzen, K. et al., Prog. Leukocyte Biol. 10B: 447 - 452 (1990), zatímco jiné nikoliv (Leusch, H-G., et al., J. Immunol. Methods 139: 145 - 147 (1991).
Alternativou k přirozeně se vyskytujícím lidským anti-hTNFa protilátkám by měla být rekombinantní hTNFa protilátka. Rekombinantní lidské protilátky, které váží hTNFa s relativně nízkou afinitou (t.j. « 10-7 M) a rychlostí (t.j. KQCf « 102 s_1) byly popsány (Griffiths, A.D. et al., EMBO J., 12: 725 - 734 (1993)). Nicméně, vzhledem k jejich relativně rychlé disociační kinetice nejsou tyto protilátky vhodné pro terapeutické použití. Kromě toho, byla popsána rekombinantní lidská anti-hTNFa protilátka, která neutralizuje aktivitu hTNFa, ale dosti zvyšuje vazbu hTNFa na povrch buněk a zvyšuje internalizaci hTNFa (Lídbury, A. et al., Biotechnol. Ther. 5: 27-45 (1994); PCT přihláška č. WO 92/03145 od Aston, R. et al.).
V souladu s tím stále existuje potřeba lidských protilátek, jako jsou rekombinantní lidské protilátky, které se váží na solubilní hTNFa s vysokou afinitou a které mají pomalou disociační kinetiku, a které mají kapasitu pro neutralizaci aktivity hTNFa, včetně cytotoxicity indukované hTNFa (in vitro a in vivo) a včetně aktivace buněk indukované hTNFa.
Podstata vynálezu
Předkládaný vynález poskytuje lidské protilátky, výhodně rekombinantní lidské protilátky, které se specificky vážou na lidský TNFa. Protilátky podle předkládaného vynálezu jsou charakterizovány vazbou na hTNFa s vysokou afinitou a pomalou ·· ·· ·· ·· • · · · 0 · · · • · · · · · ··
0« « 0 0 0 0 ··· · · 0 · 0 0 · 0 disociační kinetikou a neutralizací aktivity hTNFa, včetně cytotoxicity indukované hTNFa (in vitro a in vivo) a včetně aktivace buněk indukované hTNFa. Protilátky podle předkládaného vynálezu jsou dále charakterizovány vazbou na hTNFa, ale nikoli na hTNFE (lymfotoxin) a tím, že mají schopnost vazby na TNFa od jiných primátů a TNFa od jiných zvířat, než jsou primáti, kromě vazby na lidský TNFa.
b#
Protilátky podle předkládaného vynálezu mohou 'kompletní (například IgGl nebo IgG4 protilátky) nebo mohou být omezeny pouze na část vážící antigen (např. Fab, F(ab')2 nebo scFv fragment). Nejvýhodnější rekombinantní protilátka podle předkládaného vynálezu, nazvaná D2E7, má CDR3 doménu lehkého řetězce obsahující aminokyselinovou sekvenci SEQ ID NO: 3 a CDR3 doménu těžkého řetězce obsahující aminokyselinovou sekvenci SEQ ID NO: 4. Výhodně má D2E7 protilátka variabilní region lehkého řetězce (LCVR) obsahující aminokyselinovou sekvenci SEQ ID NO: 1 a variabilní region těžkého řetězce (HCVR) obsahující aminokyselinovou sekvenci SEQ ID N0:2.
V jednom provedení poskytuje vynález izolovanou lidskou protilátku nebo její antigen-vazebnou část, které disociuje z lidského TNFa s K* 1 x 10_θ M nebo menší a Ko££ rychlostní konstantou 1 x 10-3s-:L nebo menší, jak jsou obě tyto hodnoty určeny povrchovou plasmonovou resonancí, a která neutralizuje cytotoxicitu lidského TNFa ve standartním in vitro L929 testu s ICso 1 x ΙΟ-7 M nebo menší. Výhodněji izolovaná lidská protilátka nebo její antigen-vazebná část, disociuje z lidského TNFa s 5 x 10_4s_:L nebo menší, ještě lépe s Κθ££ 1 x 10_4s“x nebo menší. Výhodněji izolovaná lidská protilátka nebo její antigen-vazebná část, neutralizuje cytotoxicitu lidského TNFa ve standartním in ještě lépe s ICs 1θ M nebo menší.
vitro L929 1 x 109 M testu s IC 1 x 10 8 M nebo menší, nebo menší a nejlépe s ICso 5 x 10'
V jiném provedení poskytuje vynález lidskou protilátku nebo její antigen-vazebnou část s následujícími charakteristikami:
a) disociuje z lidského TNFa s Koee 1 x 10“3s 1 nebo menší, jak je určeno povrchovou plasmonovu resonancí;
b) má CDR3 doménu lehkého řetězce obsahující aminokyselinovou sekvenci SEQ ID NO: 3, nebo sekvenci modifikovanou ze SEQ ID NO:
jednou substitucí alaninu v pozici 1, 4, 5, 7 nebo 8 nebo jednou až pěti konzervativními aminokyselinovými substitucemi v pozicích 1, 3, 4, 6, 7, 8 a/nebo 9.
c) má CDR3 doménu těžkého řetězce obsahující aminokyselinovou sekvenci SEQ ID NO: 4, nebo sekvenci modifikovanou ze SEQ ID NO:
jednou substitucí alaninu v pozici 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10 nebo 11 nebo jednou až pěti konzervativními aminokyselinovými substitucemi v pozicích 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10, 11 a/nebo 12.
Lépe, protilátka, nebo její antigen-vazebná část, disociuje z lidského TNFa s K 5 x 10_4s_1 nebo menší. Ještě lépe, of f x protilátka, nebo její antigen-vazebná část, disociuje z lidského TNFo; s K 1 x 10''4s_1 nebo menší.
Of f
V ještě jiném provedení poskytuje vynález lidskou protilátku, nebo její antigen-vazebnou část, s LCVR majícím CDR3 doménu obsahující aminokyselinovou sekvenci SEQ ID NO: 3, nebo sekvenci modifikovanou ze SEQ ID NO: 3 jednou substitucí alaninu v pozici 1, 4, 5;7nebo 8 a s HCVR majícím CDR3 doménu obsahující • · 4 4 4 4 4 4 4 4 4 • · 4 4 4 4 ··· 4 444 4
444 44 4 44 aminokyselinovou sekvenci SEQ ID NO: 4, nebo sekvenci modifikovanou ze SEQ ID NO: 4 jednou substitucí alaninu v pozici 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10 nebo 11. Lépe, LCVR má dále CDR2 doménu obsahující aminokyselinovou sekvenci SEQ ID NO: 5 a HCVR má dále CDR2 doménu obsahující aminokyselinovou sekvenci SEQ ID NO: 6. Ještě lépe, LCVR má dále CDRl doménu obsahující aminokyselinovou sekvenci SEQ ID NO: 7a HCVR má dále CDRl doménu obsahující aminokyselinovou sekvenci SEQ ID NO: 8.
V ještě jiném provedení poskytuje vynález izolovanou lidskou protilátku, nebo její antigen-vazebnou část, s LCVR obsahujícím aminokyselinovou sekvenci SEQ ID NO: 1 a HCVR obsahujícím aminokyselinovou sekvenci SEQ ID NO: 2. V určitých provedeních má protilátka konstantní region těžkého řetězce IgGl nebo konstantní region těžkého řetězce IgG4. V ještě jiných provedeních je protilátka Fab fragment, F(ab')2 fragment nebo jednořetězcový Fv fragment.
V ještě jiném provedení poskytuje vynález izolovanou lidskou protilátku, nebo její antigen-vazebnou část, s LCVR obsahujícím CDR3 doménu obsahující aminokyselinovou sekvenci vybranou ze Skupiny skládající se z SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO:
12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16,
SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 20, SEQ
ID NO: 21, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 24, SEQ ID
NO: 25, SEQ ID NO: 26 nebo s HCVR obsahujícím CDR3 doménu obsahující aminokyselinovou sekvenci vybranou ze skupiny Skládající se z SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 31, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 33, SEQ ID NO: 34 a SEQ ID NO: 35.
V ještě jiném provedení poskytuje vynález izolovanou lidskou protilátku, nebo její antigen-vazebnou část, která neutralizuje aktivitu lidského TNFa, ale nikoli lidského TNFS (lymfotoxinu).
Ve výhodném provedení lidská protilátka, nebo její antigen-vazebná část, neutralizuje aktivitu lidského TNFa, šimpanzího TNFa a alespoň jednoho dalšího TNFa od primátů, který je vybrán ze skupiny skládající se z paviáního TNFa, kosmaního TNFa, makak (cynomolgus) TNFa a makak rhesus TNFa. Výhodně protilátka také neutralizuje aktivitu alespoň jednoho TNFa od jiného zvířete, než primáta. Například, v jednom podprovedení izolovaná lidská protilátka, nebo její antigen-vazebná část, také neutralizuje aktivitu psího TNFa. V jiném podprovedení izolovaná lidská protilátka, nebo její antigen-vazebná část, také neutralizuje aktivitu prasečího TNFa. V ještě jiném podprovedení izolovaná lidská protilátka, nebo její antigen-vazebná část, také neutralizuje aktivitu myšího TNFa.
Jiný aspekt vynálezu se týká molekul nukleových kyselin kódujících protilátky, nebo jejich antigervazebné části, podle předkládaného vynálezu. Preferovaná nukleová kyselina podle předkládaného vynálezu, kódující D2E7 LCVR, má nukleotidovou sekvenci ukázanou na obrázku 7 a SEQ ID NO: 36. Jiná preferovaná nukleová kyselina podle předkládaného vynálezu, kódující D2E7 HCVR, má nukleotidovou sekvenci ukázanou na obrázku 8 a SEQ ID NO: 37. Ve vynálezu jsou také obsaženy rekombinantní expresní vektory nesoucí nukleové kyseliny kódující protilátky a hostitelské buňky, do kterých mohou být takové vektory zavedeny, stejně jako způsoby pro produkci protilátek podle předkládaného vynálezu kultivací hostitelských buněk podle předkládaného vynálezu.
• 4
4« 44 44 44
4 4 4 4 4 4
4 4 4 4 44
444 4 4444 4
4 4 4 4
44 44 44
Ještě jiný aspekt předkládaného vynálezu se týká způsobů pro inhibici aktivity lidského TNFa za použití protilátky, nebo její antigen-vazebné části, podle předkládaného vynálezu. V jednom provedení způsob obsahuje kontaktování lidského TNFa s protilátkou podle předkládaného vynálezu, nebo její antigen-vazebnou částí, tak, že aktivita lidského TNFa je inhibována. V jiném provedení způsob obsahuje podání protilátky podle předkládaného vynálezu, nebo její antigen-vazebné části, lidskému subjektu trpícímu chorobou, při které je aktivita TNFa škodlivá tak, že aktivita TNFa u lidského subjektu je inhibována Onemocněním může být, například, sepse, autoimunitní onemocnění (například revmatoidní artritida, alergie, roztroušená sklerosa, autoimunitní diabetes, autoimunitní uveitida a nefrotický syndrom), infekční onemocnění, malignita, rejekce transplantátu nebo reakce štěpu proti hostiteli, plicní onemocnění, onemocnění kostí, střevní onemocnění nebo onemocnění srdce.
Popis obrázků na připojených výkresech
Obrázky IA a 1B ukazují aminokyselinové sekvence variabilního regionu lehkého řetězce D2E7 (D2E7 VL; též ukázáno v SEQ ID NO:
1), alanin-vyhledávači mutanty D2E7 VL (LD2E7*.A1, LD2E7*.A3, LD2E7*.A4, LD2E7*.A7 a LD2E7*.A8), variabilní region lehkého řetězce příbuzné protilátky 2SD4 (2SD4 VL; též ukázáno v SEQ ID NO: 9) a další variabilní regiony lehkého řetězce příbuzné k D2E7 (EP B12, VL10E4, VL100A9, VL100D2, VL10F4, LOE5, VLLOF9, VLLOFIO, VLL0G7, VLL0G9, VLLOH1, VLLOHIO, VL1B7, VL1C1, VL1C7, VL0.1F4, VL0.1H8, L0E7, L0E7.A a L0E7.T). Obrázek IA ukazuje FR1, CDR1, FR2 a CDR2 domény. Obrázek 1B ukazuje FR3, CDR3 a FR4 domény. CDR1 (CDR LI), CDR2 (CDR L2) a CDR3 (CDR L3) domény lehkého řetězce jsou v rámečku.
·· ·· ·· ·· • · · · 4 4 4
9 9 9 4 99
999 9 999 9 9
9 9 9 9 9
99 99 94
Obrázky 2A a 2B ukazují aminokyselinové sekvence variabilního regionu těžkého řetězce D2E7 (D2E7 VH; též ukázáno v SEQ ID NO:
2), alanin-vyhledávači mutanty D2E7 VH (HD2E7*.A1, HD2E7~.A2, HD2E7*.A3, HD2E7*.A4, HD2E7*.A5, HD2E7*.A6 HD2E7*.A7, HD2E7*.A8 a HD2E7*.A9), variabilní region těžkého řetězce příbuzné protilátky 2SD4 (2SD4 VH; též ukázáno v SEQ ID NO: 10) a další variabilní regiony těžkého řetězce příbuzné k D2E7 (VH1B11,
VH1D8, VH1A11, VH1B12, VH1-D2, VH1E4, VH1F6, VH1G1, 3C-H2, VH1-D2.N A VH1-D2.Y). Obrázek 2A ukazuje FR1, CDR1, FR2 a CDR2 domény. Obrázek 2B ukazuje FR3, CDR3 a FR4 domény. CDR1 (CDR Ll), CDR2 (CDR L2) a CDR3 (CDR L3) domény těžkého řetězce jsou v rámečku.
Obrázek 3 je graf znázorňující inhibicí TNFa indukované L929 cytotoxicity lidskou anti-hTNFa protilátkou D2E7, ve srovnání s myší anti-hTNFa protilátkou MAK 195.
Obrázek 4 je graf znázorňující inhibici rhTNFa vazby na hTNFa receptory na U-937 buňkách lidskou anti-hTNFa protilátkou D2E7, ve srovnání s myší anti-hTNFa protilátkou MAK 195.
Obrázek 5 je graf znázorňující inhibici TNFa-indukované exprese ELAM-1 na HUVEC lidskou anti-hTNFa protilátkou D2E7, ve srovnání s myší anti-hTNFa protilátkou MAK 195.
Obrázek 6 je sloupcový graf znázorňující ochranu před TNFa-indukovanou letalitou u D-galaktosaminem sensitizovaných myší podáním lidské anti-hTNFa protilátky D2E7 (černé sloupce), ve srovnání s myší anti-hTNFa protilátkou MAK 195 (šrafované sloupce).
·· ·· ·· ·· • · · · · · · «
9 9 9 9 9 99
9 999 9 999 9 9
9 9 9 9 9
9 9 9 9 9 9 9
Obrázek 7 ukazuje nukleotidovou sekvenci variabilního regionu lehkého řetězce D2E7, s předpokládanou aminokyselinovou sekvencí pod nukleotidovou sekvencí. CDR Ll, CDR L2 a CDR L3 regiony jsou podtrženy.
Obrázek 8 ukazuje nukleotidovou sekvenci variabilního regionu těžkého řetězce D2E7, s předpokládanou aminokyselinovou sekvencí pod nukleotidovou sekvencí. CDR Hl, CDR H2 a CDR H3 regiony jsou podtrženy.
Obrázek 9 je graf znázorňující účinek léčby D2E7 protilátkou na průměrnou velikost kloubu u Tgl97 transgeních myší jako modelu polyartritidy.
Tento vynález se týká izolovaných lidských protilátek, nebo jejich antigen-vazebných částí, které se vážou na lidský TNFa s vysokou afinitou, nízkou rychlostí disociace a s vysokou neutralizační kapacitou. Různé aspekty vynálezu se týkají protilátek a protilátkových fragmentů a jejich farmaceutických přípravků, stejně jako nukleových kyselin, rekombinantních expresních vektorů a hostitelských buněk pro výrobu takových protilátek a fragmentů. Vynález také obsahuje způsoby použití protilátek podle předkládaného vynálezu pro detekci lidského TNFa nebo pro inhibici aktivity lidského TNFa, jak in vitro, tak in vivo.
Pro snadnější pochopení předkládaného vynálezu jsou nejprve definovány určité termíny.
• 4
4 4 4
4 4 4
4 4 4
4 4
Termín lidský TNFa (zkratka hTNFa, nebo jednoduše hTNFa) , jak je zde použit, označuje lidský cytokin, který existuje jako 17 kDa secernovaná forma a 26 kDa membránová forma, jehož biologicky aktivní forma je složena z trimeru nekovalentně vázaných 17 kDa molekul. Struktura hTNFa je popsána dále v, například, Pennica, D. et al., Nátuře 312: 724 - 729, (1984);
Davis, J.M. et al., Biochemistry 26: 1322 - 1326 (1987); a Jones, E.Y. et al., Nátuře 338: 225 - 228 (1989). Termín lidský TNFa je míněn tak, že zahrnuje rekombinantní lidský TNFa (rhTNFa), který může být získán standartními rekombinantními expresními metodami nebo může být získán komerčně (R & D Systems, katalogové č.
210-TA, Minneapolis, MN).
Termín protilátka, jak je zde použit, označuje imunoglobulinové molekuly složené ze čtyř polypeptidových řetězců, dvou těžkých (H) a dvou lehkých (L) řetězců mezi sebou spojených disulfidovou vazbou. Každý těžký řetězec je složen z variabilního regionu těžkého řetězce (zde zkráceno jako HCVR nebo VH) a konstantního regionu těžkého řetězce. Konstantní region těžkého řetězce je složen ze tří domén, CH1, CH2 a CH3. Každý lehký řetězec je složen z variabilního regionu lehkého řetězce (zde zkráceno jako LCVR nebo VL) a konstantního regionu lehkého řetězce. Konstantní region lehkého řetězce je složen z jedné domény, CL. VH a VL regiony mohou být dále děleny na regiony hypervariability, které se nazývají komplementaritu určující regiony (CDR), mezi kterými jsou vmezeřeny regiony, které jsou více konzervované a nazývají se regiony pracovních rámečků (FR). Každý VH a VL se skládá ze tří CDR a čtyř FR, které jsou uspořádány z amino-konce v následujícím pořadí: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4.
• ♦ ·♦ ···» * · · « • · · ♦ · · · · · · · » · · · · · ··· · ··· · · ··· ·· · 9 9 9
9 99 9 9 9 99 9 9 9 9
Termín antigen-vazebná část protilátky (nebo prostě část protilátky) jak je zde použit, označuje jeden nebo více fragmentů protilátky, které si zachovávají schopnost specifické vazby na antigen (např. hTNFa). Bylo ukázáno, že funkce vazby antigenu protilátky může být prováděna fragmenty kompletní protilátky. Příklady vazebných fragmentů zahrnutých v termínu antigen-vazebná část protilátky zahrnují (i) Fab fragment, monovalentní fragment skládající se z VL, VH, CL a CHl domén;
(ii) F(ab') fragment, bivalentní fragment obsahují dva Fab fragmenty vázané disulfidovým můstkem v pantovém regionu; (iii)
Fd fragment skládající se z VH a CHl domén; (iv) Fv fragment skládající se z VL a VH domén jednoho ramena protilátky; (v) dAb fragment (Ward et al., Nátuře 641: 544 - 546 (1989)), který se skládá z VH domény; a (vi) izolovaný komplementaritu určující region (CDR). Dále, ačkoliv dvě domény Fv fragmentu, VI a VH, jsou kódovány různými geny, mohou být za použití rekombinantních metod spojeny syntetickým linkerem, který umožňuje jejich výrobu jako jediného proteinu, ve kterém jsou VL a VH regiony spárovány za tvorby monovalentních molekul (známé jako jednořetězcové Fv (scFv); viz například Bird et al Science 242: 423 - 426 (1988); a Huston et al., Proč. Nati. Acad. Sci. USA 85: 5879 - 5883 (1988)). Takové jednořetězcové protilátky jsou také zahrnuty termínem antigen-vazebná část protilátky. Jiné formy jednořetězcových protilátek, jako jsou dialátky, jsou tímto termínem také obsaženy. Dialátky jsou bivalentní, bispecifické protilátky, ve kterých jsou VH a VL domény expriwovány na jednom polypeptidovém řetězci, ale využívají linkeru, který je příliš krátký pro umožnění párování mezi dvěma doménami stejného řetězce, což nutí domény k párování s komplementárními doménami jiného řetězce a tak ke tvorbě dvou vazebných míst pro antigen (viz například Hollinger, P. et al. Proč. Nati. Acad. Sci. USA
• · 4 4« • 4 44 4 ·
4 • 4 • · 4 4 4 4 4
• 4 • 4 4 4 4 4 4 4
4 4 4 · « 444 4 444 4
• 4 • 4 4 4 4
90: 6444 - 6448 (1993); Poljak, R.J. et al., Structure 2: 1121
- 1123 (1994)).
Ještě dále může být protilátka nebo její antigen-vazebná část částí větších imunoadhesivních molekul, tvořených kovalentní nebo nekovalentní asociací protilátky nebo části protilátky s jedním nebo více proteiny nebo peptidy. Příklady takových imunoadhesních molekul zahrnují použití jaderného regionu streptavidinu pro tvorbu tetramerní scFv molekuly (Kipriyanov, S.M. et al., Human Antibodies and Hybridomas 6: 93 - 101 (1995)) a použití cysteinového zbytku, markerového peptidu a C-koncové polyhistidinové smyčky pro tvorbu bivalentních a biotinylovaných scFv molekul (Kipriyanov, S.M. et al., Mol. Immunol. 31: 1047
- 1058 (1994)). Části protilátky, jako jsou Fab a F(ab')2 fragmenty, mohou být připraveny z celých protilátek za použití běžných technik, jako je štěpení celých protilátek papainem, resp. pepsinem. Kromě toho, protilátky, části protilátek a imunoadhesní molekuly mohou být získány za použití standartních rekombinantních DNA technik, jak je zde popsáno.
Termín lidská protilátka, jak je zde použit, je míněn tak, že zahrnuje protilátky mající variabilní a konstantní regiony odvozené od lidských imunoglobulinových sekvencí zárodečné linie. Lidské protilátky podle předkládaného vynálezu mohou obsahovat aminokyselinové zbytky, které nejsou kódované lidskými imunoglobulinovými sekvencemi zárodečné linie (např. mutace zavedené náhodnou nebo místně řízenou mutagenesí in vitro nebo somatickou mutací in vivo), například v CDR a zejména v CDR3. Nicméně, termín lidská protilátka jak je zde použit, není míněn tak, aby zahrnoval protilátky, ve kterých byly CDR sekvence odvozené ze zárodečných linií jiných savčích druhů, jako jsou ftft • · • · ft · • · • ftft ftft ftft ftft • ft ftftft· ftftft · ft ···· ftft·· • ftft · ftftft · ftftft ft ft • ftft » ftftft ftftft ftft ftft ftft ftft myši, přeneseny k sekvencím lidského pracovního rámečku.
Termín rekombinantní lidská protilátka, jak je zde použit, je míněn tak, že zahrnuje všechny protilátky, které jsou připraveny, exprimovány, vytvořeny nebo izolovány rekombinantními prostředky, jako jsou protilátky exprivované za použití rekombinantního expresního vektoru přeneseného do hostitelské buňky (toto je popsáno v části II, dále), protilátky izolované z rekombinantní, kombinatoriální knihovny lidských protilátek (toto je popsáno v části III, dále), protilátky izolované od zvířete (například od myši), která je transgenní pro lidské geny pro imunoglobuliny (viz například Taylor, L.D. et al., Nucl.
Acids Res. 20: 6287 - 6295 (1992)) nebo protilátky připravené , exprimované, vytvořené nebo izolované jakýmikoliv jinými prostředky obsahujícími sestřih sekvencí genů pro lidské imunoglobuliny s jinými DNA sekvencemi. Takové rekombinantní lidské protilátky mají variabilní a konstantní regiony odvozené od lidských imunoglobulinových sekvencí zárodečné linie.
V určitých provedeních jsou, nicméně, takové rekombinatní lidské protilátky podrobeny in vitro mutagenesi (nebo, pokud je použito zvíře transgenní pro lidské IgG sekvence, in vivo somatické mutagenesi) a tak jsou aminokyselinové sekvence VH a VL regionů rekombinantních protilátek sekvence které, ačkoliv jsou odvozeny od a jsou příbuzné k lidským VH a VL sekvencím, nemusí přirozeně existovat v lidském protilátkovém zárodečném repertoáru in vivo.
Izolovaná protilátka zde označuje protilátku, která je v podstatě prostá dalších protilátek majících jinou antigenní specificitu (například izolovaná protilátka, která specificky váže hTNFa, je v podstatě prostá protilátek, které specificky vážou antigeny jiné než hTNFa). Izolovaná protilátka, která
4 specificky váže hTNFa může, nicméně, mít zkříženou reaktivitu s jinými antigeny, jako jsou molekuly TNFa z jiných druhů (toto je podrobněji probráno dále). Kromě toho, izolovaná protilátka je významně prostá dalšího buněčného materiálu a/nebo chemikálií.
Neutralizační protilátka, jak je zde použito, (nebo protilátka, která neutralizuje aktivitu hTNFa) , označuje protilátku, jejíž vazba na hTNFa vede k inhibici biologické aktivity hTNFa. Tato inhibice biologické aktivity hTNFa může být hodnocena měřením jednoho nebo více indikátorů biologické aktivity hTNFa, jako je hTNFa-indukovaná cytotoxicita (jak in vitro, tak in vivo), hTNFa indukovaná buněčná aktivace a vazba hTNFa na receptory pro hTNFa. Tyto indikátory biologické aktivity hTNFa mohou být hodnoceny jedním nebo více z několika standartních testů známých v oboru (viz příklad 4). Výhodně je schopnost protilátky neutralizovat aktivitu hTNFa hodnocena inhibici hTNFa-indukované cytotoxicity L929 buněk. Jako další nebo alternativní parametr aktivity hTNFa může být hodnocena schopnost protilátky inhibovat hTNFa-indukovanou expresi ELAM-1 na HUVEC, jako míru hTNFa-indukovaný buněčn£z aktivace.
Termín povrchová plasmonová resonance, jak je zde použit, označuje optický jev, který umožňuje analýzu biospecifických interakcí v reálném čase detekcí změn v koncentracích proteinů v biosensorové matrici, například za použití BIAcore systému (Pharmacia Biosensor AB, Uppsala, Sweden a Piscataway, NJ). Pro další popis viz příklad 1 a Jonsson, U. et al. Ann. Biol. Clin 51: 19 - 26 (1993); Jonsson, U. et al., Biotechniques 11: 620 627 (1991); Johnson, B. et al., J. Mol. Recognit. 8: 125 - 131 (1995); a Johnson, B. et al., Anal. Biochem. 198: 268 - 277 (1991) .
• 4
4
Termín jak je zde použit, označuje rychlostní konstantu pro disociaci protilátky z komplexu protilátka/antigen.
Termín Kd, jak je zde použit, označuje disociační konstantu pro určitou interakci antigen-protilátka.
Termín molekula nukleové kyseliny, jak je zde použit, zahrnuje DNA molekuly a RNA molekuly. Molekula nukleové kyseliny může být jednořetězcová nebo dvouřetězcová, ale výhodně to je dvouřetězcová DNA.
Termín izolovaná molekula nukleové kyseliny, jak je zde použit v souvislosti s nukleovými kyselinami kódujícími protilátky nebo části protilátek (např. VH, VL, CDR3), které se vážou na hTNFa, označuje molekulu nukleové kyseliny, ve které jsou nukleotidové sekvence kódující protilátku nebo části protilátky prosté jiných nukleotidových sekvencí kódujících protilátky nebo části protilátek, které se vážou na jiný antigen, než na hTNFa, kde tyto jiné sekvence mohou přirozeně sousedit s nukleovou kyselinou v lidské genomové DNA. Tak, například, izolovaná nukleová kyselina podle předkládaného vynálezu kódující VH region anti-TNFa protilátky neobsahuje další sekvence kódující jiné VH regiony, které se vážou na antigeny jiné než TNFa.
Termín vektor, jak je zde použit, označuje molekulu nukleové kyseliny schopnou transportu jiné nukleové kyseliny, na kterou je navázán. Jedním typem vektoru je plasmid, což ooznačuje cirkulární dvouřetezcovou DNA smyčku, do které mohou být ligovány další DNA segmenty. Jiným typem vektoru je virový vektor, ve kterém mohou být další DNA segmenty ligovány do virového genomu. Určité vektory jsou schopné autonomní replikace v hostitelské • · • ·
buňce, do které jsou vloženy (například bakteriální vektory mající bakteriální zdroj replikace a episomální savčí vektory). Další vektory (například neepisomální savčí vektory) mohou být integrovány do genomu hostitelské buňky po zavedení do hostitelské buňky a tak jsou replikovány spolu s genomem. Kromě toho, určité vektory jsou schopné řízení exprese genů, na které jsou navázány. Takové vektory jsou zde označovány jako rekombinantní expresní vektory (nebo jednoduše expresní vektory). Obecně, expresní vektory použitelné v rekombinantních DNA technikách jsou často ve formě plasmidů. V předkládané přihlášce, plasmid a vektor mohou být zaměnitelné, protože plasmid je nejběžněji používanou formou vektoru. Nicméně, vynález je míněn tak, že zahrnuje také jiné formy expresních vektorů, jako jsou virové vektory (např. replikace - deficientní retroviry, adenoviry a adeno-asociované viry), které slouží ekvivalentní funkci.
Termín rekombinantní hostitelská buňka (nebo jednoduše hostitelská buňka'ý, jak je zde použit, označuje buňku, do které byl vložen rekombinantní expresní vektor. Mělo by být jasné, že tyto termíny označují nejenom určitou jednotlivou buňku, ale potomstvo takové buňky. Protože v dalších generacích může dojít k určitým modifikacím díky mutacím nebo vlivu prostředí, nemusí být takévé potomstvo ve skutečnosti identické s rodičovskou buňkou, ale stále spadá do významu termínu hostitelská buňka jak je zde použit.
Různé aspekty vynálezu jsou dále podrobněji popsány v následujících sekcích.
·· · ·
I. Lidské protilátky, které se vážou na lidský TNFa
Tento vynález poskytuje izolované lidské protilátky, nebo jejich antigen-vazebné části, které se vážou na lidský TNFa s vysokou afinitou, nízkou rychlostní konstantou a vysokou neutralizační kapacitou. Výhodně jsou lidské protilátky podle předkládaného vynálezu rekombinantní, neutralizační lidské anti-hTNFa protilátky. Nejvýhodnější rekombinantní, neutralizační protilátka podle předkládaného vynálezu je zde označena D2E7 a má VL a VH sekvence jak jsou ukázány na obrázcích ΙΑ, 1B a obrázcích 2A, 2B, v příslušném pořadí (aminokyselinová VL regionu D2E7 ja také ukázána v SEQ ID NO: 1; aminokyselinová VH regionu D2E7 ja také ukázána v SEQ ID NO: 2). Vazebné charakteristiky D2E7 ve srovnání s myší anti-hTNFa MAK 195 mAb, která vykazuje vysokou afinitu a pomalou disociační kinetiku a s další lidskou anti-hTNFa protilátkou se sekvencí příbuznou D2E7, 2SD4, jsou shrnuty níže:
Protilátka K of s-1
K on.
M_1S_:L ca
StQchiometrie
D2E7 igGi 8,81 x 10~s 1,91 x 105 6,09 x 10-1° 1,2
2SD4 IgG4 8,4 x 103 4,20 x 105 2,00 x 10“® 0,8
MAK 195 F(ab')2 8,70 x 10-5 1,90 x 10® 4,60 x 10_1° 1,4
D2E7 protilátka a příbuzné protilátky, také vykazují silnou kapacitu pro neutralizaci aktivity hTNFa, jak je hodnoceno několika in vitro a in vivo testy (viz příklad 4). Například, tyto protilátky neutralizují hTNFa-indukovanou cytotoxicitu L929
buněk s hodnotami IC v rozmezí od asi 10 7 M do asi 10 10 M.
O
D2E7, pokud je exprivována jako kompletní IgGl protilátka, neutralizuje hTNFa-indukovanou cytotoxicitu L929 buněk s ICso asi
1,25 χ ΙΟ-10 M. Navíc, neutralizační kapacita D2E7 je uchována, pokud je protilátka exprivována jako Fab, F(ab')2 nebo scFv fragment. D2E7 také inhibuje TNFa-indukovanou buněčnou aktivaci, jak je měřena hTNFo;-indukovanou ELÁM expresí na HUVEC (IC5O = asi 1,85 χ ΙΟ-3-0 M) , a vazbu hTNFa na receptory pro hTNFo; na U-937 buňkách (ICso = asi 1,56 χ 10_1θ M). S ohledem na poslední uvedené, D2E7 inhibuje vazbu hTNFa jak na p55, tak na p75 receptory pro hTNFa. Kromě toho, protilátka inhibuje hTNFa-indukovanou letalitu in vivo u myší (EDSO =1-2,5 ^g/myš).
Co se týká vazebné specificity D2E7, tato protilátka se váže na lidský TNFa v různých formách, včetně solubilního hTNFa, transmembránového hTNFa a hTNFa navázaného na buněčné receptory. D2E7 se neváže specificky na jiné cytokiny, jako je lymfotoxin (TNFS), IL-ία, IL-1S, IL-2, IL-4, IL-6, IL-8, IFNt a TGF-S. Nicméně, D2E7 vykazuje zkříženou rektivitu s faktorem nekrosy nádorů z jiných druhů. Například, protilátka neutralizuje aktivitu alespoň pěti TNFa od jiných primátů (šimpanzího, paviáního, kosmaního, makaka (cynomolgus) a makaka rhesus) s přibližně stejnými hodnotami ICso jako pro neutralizaci hTNFa (viz příklad 4, sekce E). D2E7 také neutralizuje aktivitu myšího TNFa, asi 1000-krát hůře, než lidského TNFa (viz příklad 4, sekce E). D2E7 se také váže na psí a prasečí TNFa.
V jednom aspektu se vynález týká D2E7 protilátek a částí protilátek a dalších lidských protilátek a částí protilátek se shodnými vlastnostmi jako má D2E7, tak jako je vysoce afinitní
vazba na hTNFa s pomalou disociační kinetikou a vysokou neutralizační kapacitou. V jednom provedení poskytuje vynález izolovanou lidskou protilátku, nebo její antigen-vazebnou část, která disociuje z lidského TNFa s 1 x 10“® M nebo nižší Ko rychlostní konstantnou 1 x 10-3s_1 nebo nižší, kde obě tyto hodnoty jsou určeny povrchovou plasmonovou resonancí, a která neutralizuje cytotoxicitu lidského TNFa ve standartním in vitro L929 testu s IC 1 x 10-7 M nebo nižší. Lépe, izolovaná lidská protilátka, nebo její antigen-vazebná část, disociuje z lidského TNFa s K 5 x 10’4s:L nebo nižší, nebo ještě lépe s K 1 x 10“4s-:1· nebo nižší. Lépe, izolovaná lidská protilátka, nebo její antigen-vazebná část, neutralizuje cytotoxicitu lidského TNFa ve standartním in vitro L929 testu s IC 1 x 10“® M nebo nižší, ještě lépe s ICso 1 x 10_s> M nebo nižší, a nejlépe s ICso 1 x ΙΟ“10 M nebo nižší. Ve výhodných provedeních je protilátka izolovaná lidská rekombinantní protilátka, nebo její antigen-vazebná část. V dalším výhodném provedení protilátka také neutralizuje TNFa-indukovanou buněčnou aktivaci, jak je hodnocena za použití standartního in vitro testu pro TNFa-indukovanou expresi ELAM-1 na endotelových buňkách lidské pupeční žíly (HUVEC).
Analýza povrchovou plasmonovou resonancí pro určení ΚΛ a Ko3ec může být provedena tak, jak je popsáno v příkladu 1. Standartní in vitro L929 test pro určení hodnot ICso je popsán v příkladu 4, sekci A. Standartní in vitro test pro TNFa-indukovanou expresi ELAM-1 na endotelových buňkách lidské pupeční žíly (HUVEC) je popsán v příkladu 4, sekci C. Příklady rekombinantních lidských protilátek, které splňují výše uvedená kriteria kinetiky a neutralizace, zahrnují protilátky mající následující (VH/VL) páry, jejichž sekvence jsou ukázány na obrázcích ΙΑ,Β, 2A a 2B
(viz také příklady 2, 3 a 4 pro analýzu kinetiky a neutralizace): (D2E7 VH/D2E7 VL); (HD2E7*.A1/D2E7 VL); (HD2E7*.A2/D2E7 VL);
(HD2E7*.A3/D2E7 VL); (HD2E7*.A4/D2E7 VL); (HD2E7*.A5/D2E7 VL);
(HD2E7*.A6/D2E7 VL); (HD2E7*.A7/D2E7 VL); (HD2E7*.A8/D2E7 VL) ;
(HD2E7*.A9/D2E7 VL); (D2E7 VH/LD2E7*.Al); (D2E7 VH/LD2E7*.A4);
(D2E7 VH/LD2E7*.A5); (D2E7 VH/LD2E7*.A7); (D2E7VH/LD2E7*.A8);
(HD2E7*.A9/LD2E7*.Al); (VH1-D2/LOE7); (VH1-D2.N/L0E7.T);
(VH1-D2.Y/L0E7.A); (VH1-D2.N/L0E7.A); (VH1-D2/EP B12);
a (3C-H2/LOE7A).
V oboru je dobře známo, že CDR3 domény těžkého a lehkého řetězce protilátky mají významnou úlohu ve vazebné specificitě/afinitě protilátky pro antigenu. V souladu s tím, v jiném aspektu, se vynález týká lidských protilátek, které mají pomalou disociační kinetiku pro asociaci s hTNFa a které mají CDR3 domény těřkého a lehkého řetězce, které jsou strukturálně identické nebo příbuzné k doménám D2E7. Jak je ukázáno v příkladu 3, pozice 9 D2E7 VL CDR3 může být obsazena Ala nebo Thr bez významného ovlivnění KQff. V souladu s tím, konsensuální motiv pro D2E7 VL CDR3 obsahuje aminokyselinovou sekvenci: Q-R-Y-N-R-A-P-Y-(T/A) (SEQ ID NO: 3). Dále, pozice 12 D2E7 VL CDR3 může být obsazena Tyr nebo Asn bez významného ovlivnění K . V souladu s tím, konsensuální motiv pro D2E7 VL CDR3 obsahuje aminokyselinovou sekvenci: V-S-Y-L-S-T-A-S-S-L-D-(Y/N) (SEQ ID NO: 4). Kromě toho, jak je ukázáno v příkladu 2, CDR3 doména těžkých a lehkých řetězců D2E7 je vhodná pro substituce jedním alaninovým zbytkem (v pozicích 1, 4, 5, 7 nebo 8 ve VL CDR3 nebo v pozicích 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10 nebo 11 ve VH CDR3) bez významného ovlivnění Kocf. Ještě dále, odborníci v oboru ocení, že při dané přístupnosti D2E7 VL a VH CDR3 domén k substitucím alaninem mohou být možné substituce jiných
aminokyselin v CDR3 doménách za zachování nízké rychlostní konstanty disociace protilátky, zejména substituce konzervativními aminokyselinami. Konzervativní aminokyselinová substituce, jak je zde použito, je substituce, při které je jeden aminokyselinový zbytek nahrazen jiným aminokyselinovým zbytkem majícím podobný postranní řetězec. Rodiny aminokyselinových zbytků majících podobné postranní řetězce byly v oboru identifikovány a zahrnují basické postranní řetězce (napříklak lysin, arginin, histidin), kyselé postranní řetězce (například kyselina aspartová, kyselina glutamová), nenabité polární postranní řetězce (například glycin, asparagin, glutamin, serin, threonin, tyrosin, cystein), nepolární postranní řetězce (například alanin, valin, leucin, isoleucin, prolin, fenylalanin, methionin, tryptofan), beta-větvené postranní řetězce (například threonin, valin, izoleucin) a aromatické postranní řetězce (například tyrosin, fenylalanin, tryptofan, histidin). Výhodně je provedeno ne více než pět konzervativních aminokyselinových substitucí v D2E7 VL a/nebo VH CDR3 doménách. Lépe je provedeno ne více než jedna až tři konzervativní aminokyselinové substituce v D2E7 VL a/nebo VH CDR3 doménách. Dále ba neměly být provedeny konzervativní aminokyselinové substituce v aminokyselinových pozicích kritických pro vazbu na hTNFa. Jak je ukázáno na obrázku 3, pozice 2 a 5 D2E7 VL CDR3 a pozice 1 a 7 D2E7 VH CDR3 se zdají být kritické pro interakci s hTNFa a proto by výhodně neměly být konzervativní aminokyselinové substituce provedeny v těchto pozicích (ačkoliv alaninová substituce v pozici 5 D2E7 VL CDR3 je přijatelná, jak je popsáno výše).
V souladu s tím, v jiném provedení, poskytuje vynález izolovanou lidskou protilátku, nebo její antigen-vazebnou část, s následujícími charakteristikami:
·· · ·· ·· 44 ·· • 4 ·· 4 · · · · 4 · · · 4 4 4 4 4 ···· · 4 4 4 4 ··· · ··· 4 ·
444 44 · 4··
a) disociuje z lidského TNFce s Ko£e rychlostní konstantou
I x 10_3s_x nebo menší, jak je určeno povrchovou plasmonovou resonancí;
b) má CDR3 doménu lehkého řetězce obsahující aminokyselinovou sekvenci SEQ ID NO: 3, nebo sekvenci modifikovanou ze SEQ ID NO:
jednou substitucí alaninu v pozici 1, 4, 5, 7 nebo 8 nebo jednou až pěti konzervativními aminokyselinovými substitucemi v pozicích 1, 3, 4, 6, 7, 8 a/nebo 9.
c) má CDR3 doménu těžkého řetězce obsahující aminokyselinovou sekvenci SEQ ID NO: 4, nebo sekvenci modifikovanou ze SEQ ID NO:
jednou substitucí alaninu v pozici 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10 nebo
II nebo jednou až pěti konzervativními aminokyselinovými substitucemi v pozicích 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10, 11 a/nebo 12.
Lépe, protilátka, nebo její antigen-vazebná část, disociuje z lidského TNFce s K 5 x lO^s“1 nebo menší. Ještě lépe, of f protilátka, nebo její antigen-vazebná část, disociuje z lidského TNFce s K 1 x 10-4^-1 nebo menší.
of f
V ještě jiném provedení poskytuje vynález izolovanou lidskou protilátku, nebo její antigen-vazebnou část, s variabilním regionem lehkého řetězce (LCVR) majícím CDR3 doménu obsahující aminokyselinovou sekvenci SEQ ID NO: 3, nebo sekvenci modifikovanou ze SEQ ID NO: 3 jednou substitucí alaninu v pozici 1, 4, 5 nebo 8 a s variabilním regionem těžkého řetězce (HCVR) majícím CDR3 doménu obsahující aminokyselinovou sekvenci SEQ ID NO: 4, nebo sekvenci modifikovanou ze SEQ ID NO: 4 jednou substitucí alaninu v pozici 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10 nebo 11.
Lépe, LCVR má dále CDR2 doménu obsahující aminokyselinovou φ· · 44 44 44 44 φ 4 · 4 444· · · · · φ· 4 4444 · · 4 4 φ 4 φ 4 4 4 ··· Φ 444 4 · • 44 ·4 · ·φ· sekvenci SEQ ID NO: 5 (t.j. D2E7 VL CDR2) a HCVR má dále CDR2 doménu obsahující aminokyselinovou sekvenci SEQ ID NO: 6 (t.j. D2E7 VH CDR2). Ještě lépe, LCVR má dále CDR1 doménu obsahující aminokyselinovou sekvenci SEQ ID NO: 7 (t.j. D2E7 VL CDRl) a HCVR má dále CDRl doménu obsahující aminokyselinovou sekvenci SEQ ID NO: 8 (t.j. D2E7 VH CDRl) . Regiony pracovního rámečku pro VL jsou výhodně z Vkappal lidské zárodečné rodiny, lépe z Vk genu A20 lidské zárodečné linie a nejlépe z D2E7 VL sekvencí pracovního rámečku ukázaných na obrázcích 1A a IB. Regiony pracovního rámečku pro VH jsou výhodně z Vh3 lidské zárodečné rodiny, lépe z VH genu DP-31 lidské zárodečné linie a nejlépe z D2E7 VH sekvencí pracovního rámečku ukázaných na obrázcích 2A a 2B.
V ještě jiném provedení poskytuje vynález izolovanou lidskou protilátku, nebo její antigen-vazebnou část, s variabilním regionem lehkého řetězce (LCVR) obsahujícím aminokyselinovou sekvenci SEQ ID NO: 1 (t.j. D2E7 VL) a variabilní regionem těžkého řetězce (HCVR) obsahujícím aminokyselinovou sekvenci SEQ ID NO: 2 (t.j. D2E7 VH). V určitých provedeních má protilátka konstantní region těžkého řetězce, jako je konstantní region IgGl, IgG2, IgG3, IgG4, IgA, IgE, IgM nebo IgD. Výhodně je konstantní region těžkého řetězce konstantní region těžkého řetězce IgGl nebo konstantní region těžkého řetězce IgG4. Navíc, protilátka může obsahovat konstantní region lehkého řetězce, buď konstantní region kappa lehkého řetězce nebo konstantní region lambda lehkého řetězce. Výhodně protilátka obsahuje konstantní region kappa lehkého řetězce. Alternativně, částí protilátky může být, například Fab fragment nebo jednořetězcový Fv fragment.
V ještě jiných provedeních poskytuje vynález izolovanou ··· to • to toto • toto · • toto· • ••to · • · · • · to to lidskou protilátku, nebo její antigen-vazebnou část, mající s D2E7-příbuzné VL a VH CDR3 domény, například protilátky nebo jejich antigen-vazebné části, s variabilním regionem lehkého řetězce (LCVR) obsahujícím CDR3 doménu obsahující aminokyselinovou sekvenci vybranou ze skupiny skládající se z SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18,
SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 22, SEQ
ID NO: 23, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 25 a SEQ ID NO: 26 nebo s variabilní regionem těžkého řetězce (HCVR) obsahujícím CDR3 doménu obsahující aminokyselinovou sekvenci vybranou ze skupiny skládající se z SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 31, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 33, SEQ ID NO: 34 a SEQ ID NO: 35.
V ještě jiném provedení poskytuje vynález rekombinantní lidskou protilátku, nebo její antigen-vazebnou část, která neutralizuje aktivitu lidského TNFo;, ale nikoli lidského TNFE. Výhodně protilátka, nebo její antigen-vazebná část, neutralizuje také aktivitu šimpanzího TNFo; a alespoň jednoho dalšího TNFa od primátů, který je vybrán ze skupiny skládající se z paviáního TNFa, kosmaního TNFa, makak (cynomolgus) TNFo; a makak rhesus TNFa. Výhodně protilátka, nebo její antigen-vazebná část, neutralizuje lidský, šimpanzí a/nebo další primáti TNFa ve standartním in vitro L929 testu s IC 1 x 10‘8 M nebo menší, lépe 1 x 109 M nebo menší a ještě lépe 5 x 10χθ M nebo menší.
V jednom podprovedení protilátka také neutralizuje aktivitu psího TNFa, výhodně ve standartním in vitro L929 testu s ICso 1 x ÍO-7 M nebo menší, lépe l x 10_s M nebo menší a ještě lépe 5 x 10_E>
M nebo menší. V jiném podprovedení protilátka také neutralizuje aktivitu prasečího TNFa, výhodně s ICso 1 x 10~5 M nebo menší,
99
9 9 * • · ♦·
999 9 ·
9 9
99
9 9
999 lépe 1 χ 10 ~s M nebo menší a ještě lépe 5 x 10“7 M nebo menší.
V ještě jiném podprovedení protilátka také neutralizuje aktivitu myšího TNFa, výhodně s ICso 1 χ 10-4 M nebo menší, lépe 1 x 10-s M nebo menší a ještě lépe 5 χ 10-6 M nebo menší.
Protilátka nebo část protilátky podle předkládaného vynálezu může být derivatizována nebo může být navázána na jinou funkční (například na jiný peptid nebo protein). V souladu s tím, protilátky a části protilátek podle předkládaného vynálezu zahrnují derivátizované a jinak modifikované formy lidských anti-hTNFa protilátek zde popsané, včetně imunoadhesních molekul Například, protilátka nebo část protilátky podle předkládaného vynálezu může být funkčně navázána (např. chemickou vazbou, genetickou fúsí, nekovalentní asociací nebo jinak) na jednu nebo více molekulových entit, jako je jiná protilátka (například, bispecifická protilátka nebo dialátka), detekovatelné činidlo, cytotoxické činidlo, farmaceutické činidlo a/nebo protein nebo peptid, který může zprostředkovat asociaci protilátky nebo části protilátky s jinou molekulou (jako je jaderný region streptavidinu nebo polyhistidinová smyčka).
Jeden typ derivátizované protilátky je produkován zkříženou vazbou mezi dvěma nebo více protilátkami (stejného nebo různého typu, například pro tvorbu bispecifických protilátek). Vhodná činidla způsobující zkříženou vazbu jsou ta, která jsou heterobifunkční a mají dvě různě reaktivní skupiny separované vhodnou vmezeřenou skupinou (například m-meleimidobenzoyl-N-hydroxysukcimid ester) nebo jsou homobifunkční (například disukcinimidilsuberat). Taková činidla je možno získat od Pierce Chemical Company, Rockford, IL.
44
4 4 ·
4 4 4
444 4 4
4 4 4
444* • 4 • · 4
4 4
444
Použitelná detekovatelná činidla, se kterými může být protilátka nebo část protilátky vázána, zahrnují fluorescentní sloučeniny. Příklady fluorescentních detekovatelných činidel zahrnují fluorescein, fluorescein isothiokyanat, rhodamin, 5-dimethylamin-l-naftalensulfonylchlorid, fykoerytrin a podobně. Protilátka může být také navázána na detekovatelné enzymy, jako je alkalická fosfatasa, křenová peroxidasa, glukosa-oxidasa a podobně. Pokud je protilátka navázána na detekovatelný enzym, pak je detekována přidáním dalších činidel, která enzym využívá pro produkci detekovatelného reakčního produktu. Například, když je jajko detekovatelné činidlo použita křenová peroxidasa, pak přidání peroxidu vodíku diaminobenzidinu vede ke vzniku barevného produktu reakce, který je detekovatelný. Protilátka může být také navázána na biotin a detekována pomocí nepřímého měření vazby avidinu nebo streptavidinu.
II. Exprese protilátek
Protilátka, nebo část protilátky, podle předkládaného vynálezu, může být připravena rekombinantní expresí genů pro lehké a těžké řetězce imunoglobulinu v hostitelské buňce. Pro rekombinantní expresi protilátky je hostitelská buňka transfektována jedním nebo více rekombinantními expresními vektory nesoucími DNA fragmenty kódujícími lehké a těžké řetězce imunoglobulinové protilátky, takže lehké a těžké řetězce jsou exprivovány v hostitelské buňce a, výhodně, secernovány do media, ve kterém jsou hostitelské buňky kultivovány. Pro získání genů pro lehké a těžké řetězce protilátky, inkorporaci těchto genů do rekombinantních expresních vektorů a pro vložení vektorů do hostitelských buněk jsou použity standartní rekombinantní DNA metody, jako jsou ty, které jsou popsány v Sambrook, Fritsch a • » ft · ft · • · • ftft · · ftft ftftft ft* • ft ftft • · · ft ft · ftft • ftftft · ft ftftft ftft ftft ftft • ftft ·
Maniatis (vyd), Molecular Cloning: A Labortaory Manual, Second Edition, Cold Spring Harbor, N.Y., (1989), Ausubel, F.M. et al (vyd.), Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing Associates, (1989) a v U.S. patentu č. 4816397 od Boss et al..
Pro expresi D2E7 a D2E7-příbuzných protilátek jsou nejprve získány DNA fragmenty kódující variabilní regiony lehkého a těžkého řetězce. Tyto DNA mohou být získány amplifikací a modifikací variabilních sekvencí lehkého a těžkého řetězce zárodečné linie za použití polymerasové řetězové reakce (PCR).
DNA sekvence zárodečné linie pro geny pro variabilní regiony lehkého a těžkého řetězce jsou v oboru známé (viz například Vbaze database sekvencí lidské zárodečné linie; viz též Kabat, E.A. et al., (1991), Sequences of Proteins of Immunological
Interest, 5. vydání, U.S. Department of Health and Human Services, NIH publikace č. 91-3242; Tomlison, I.M. et al (1992), The Repertoire of Human Germline Vh Sequences Reveals about Fifty Groups of Vh Segments with Different Hypervariable Loops, J. Mol. Biol. 227: 776 - 798; a Cox, J.P.L. et al., (1994), A
Directory of Human Germline K Segments Reveals a Strong Bias in their Usage, Eur. J. Immunol. 24: 827 - 836; jejichž obsah je zde uveden jako odkaz). Pro získání DNA fragmentu kódujícího variabilní region těžkého řetězce D2E7, nebo D2E7 příbuzné protilátky je člen Vh3 rodiny lidských zárodečných VH genů amplifikován standartní PCR. Nejlépe je amplifikována DP-31 VH sekvence zárodečné linie. Pro získání DNA fragmentu kódujícího variabilní region lehkého řetězce D2E7, nebo D2E7 příbuzné protilátky je člen Vkappal rodiny lidských zárodečných VL genů amplifikován standartní PCR. Nejlépe je amplifikována A20 VL sekvence zárodečné linie. PCR primery vhodné pro použití při amplifikaci sekvencí DP-31 VH a A20 VL zárodečné linie mohou být
99
9 4
99
999 9 4
9 4
9 9
9 9
999
9· 99
9 9
9 9
99 9
99 navrženy na základě nukleotidových sekvencí popsaných v odkazech citovaných výše, za použití standartních metod.
Po získání VH a VL fragmentů zárodečné linie mohou být tyto sekvence mutovány tak, aby kódovaly D2E7 nebo D2E7-příbuzné aminokyselinové sekvence, které jsou zde popsány. Aminokyselinové sekvence kódované zárodečnými VH a VL DNA sekvencemi jsou nejprve srovnávány s D2E7 a D2E7-příbuznými VH a VL aminokyselinovými sekvencemi pro identifikaci aminokyselinových zbytků v D2E7 a D2E7-příbuzných sekvencích, které se liší od zárodečné linie. Potom jsou vhodné nukleotidy v zárodečné DNA sekvenci mutovány tak, aby mutovaná zárodečná sekvence kódovala D2E7 nebo D2E7-příbuznou aminokyselinovou sekvenci, za využití genetického kódu pro určení toho, které nukleotidové změny mají být provedeny. Mutagenese zárodečných sekvencí je provedena standartními metodami, jako je PCR-zprostředkovaná mutagenese (ve které jsou mutované nukleotidy inkorporovány do PCR primerů tak, že PCR produkt obsahuje mutace) nebo místně řízená mutagenese.
Kromě toho, mělo by být uvedeno, že pokud zárodečné sekvence získané PCR amplifikaci kódují aminokyselinové rozdíly v regionech pracovního rámečku vzhledem ke správné zárodečné konfiguraci (t.j. odlišnosti v amplifikované sekvenci při srovnání se správnou zárodečnou sekvencí, například v důsledku somatických mutací), může být žádoucí změna těchto aminokyselinových odlišností zpět na správné zárodečné sekvence (t.j. zpětná mutace zbytků v pracovním rámečku na konfiguraci zárodečné sekvence).
Po získání DNA fragmentů kódujících D2E7 nebo D2E7-příbuzné VH a VL segmenty (amplifikaci nebo mutagensí ze zárodečných VH a VL ··« 4 genů, jak je popsáno výše), mohou být tyto DNA fragmenty dále upravovány standartními rekombinantními DNA technikami, například pro konverzi genů pro variabilní region na geny pro kompletní řetězec protilátky, ne geny pro Fab fragment nebo na geny pro scFv. Při těchto úpravách je VL- nebo VH- kódující DNA fragment operativně navázán na jiný DNA fragment kódující jiný protein, jako je konstantní region protilátky nebo flexibilní linker. Termín operativně navázán, jak je zde použit, znamená, že dva DNA fragmenty jsou spojeny tak, že aminokyselinová sekvence kódovaná dvěma DNA fragmenty zůstává v rámečku.
Izolovaná DNA kódující VH region může být přeměněna na kompletní gen pro těžký řetězec operativní vazbou VH-kodující DNA na jinou molekulu DNA kódující konstantní regiony těžkého řetězce (CH1, CH2 a CH3). Sekvence lidských genů pro konstantní regiony těžkého řetězce jsou v oboru známé (Rabat, E.A. et al., (1991),
Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5. vydání, U.S. Department of Health and Human Services, NIH publikace č.
91-3242) a DNA fragmenty obsahující tyto regiony mohou být získány standartní PCR amplifikací. Konstantní regiony těžkého řetězce mohou být konstantní regiony IgGl, IgG2, IgG3, IgG4, IgA, IgE, IgM nebo IgD, ale nejlépe to jsou konstantní regiony IgGl nebo lgG4. Pro gen pro Fab fragment těžkého řetězce může být VH-kodující DNA operativně navázána na jinou DNA molekulu kódující pouze CH1 konstantní region těžkého řetězce.
Izolovaná DNA kódující VL region může být přeměněna na kompletní gen pro lehký řetězec operativní vazbou VL-kodující DNA na jinou molekulu DNA kódující konstantní region lehkého řetézce (CL). Sekvence lidských genů pro konstantní regiony lehkého řetězce jsou v oboru známé (Rabat, E.A. et al., (1991), Sequences
00 00 ··
0 0 0 0 0 0
0 0 0 0 00
000 0 00· 0 · • 0 0 0 « · • 0 00 »· ·· »· • 0 ·
• · • · • 0 of Proteins of Immunological Interest, 5. vydání, U.S. Department of Health and Human Services, NIH publikace č. 91-3242) a DNA fragmenty obsahující tyto regiony mohou být získány standartní PCR amplifikací. Konstantní region lehkého řetězce může být konstantní region kappa nebo lambda, ale nejlépe to je konstantní region kappa.
Pro vytvoření scFv genu jsou VH- a VL- kódující DNA fragmenty operativně navázány na jiný fragment kódující flexibilní linker, například kódující aminokyselinovou sekvenci (Gly4-Ser)3 tak, že VL a VH sekvence mohou být expriwovány jako pokračující jednořetězcový protein, s VH a VL regiony spojenými flexibilním linkerem (viz například Bird et al., (1988) Science 242: 423 426; Houston et al. (1988) Proč. Nati. Acad. Sci. USA 85: 5879 5883; McCafferty et al., Nátuře (1990) 348: 552 - 554).
Pro expresi protilátek nebo částí protilátek podle předkládaného vynálezu je DNA kódující částečné nebo úplné těžké a lehké řetězce, získaná jak je popsáno výše, insertována do expresních vektorů tak, že geny jsou operativně vázány na transkripční a translační kontrolní sekvence. V tomto kontextu termín operativně vázány znamená, že gen pro protilátku je ligován do takového vektoru tak, že transkripční a tranlační kontrolní sekvence ve vektoru slouží jako regulátory transkripce a translace genu pro protilátku. Expresní vektor a expresní kontrolní sekvence jsou vybrány tak, aby byly kompatibilní s expresí v použité hostitelské buňce. Gen pro lehký řetězec protilátky a gen pro těžký řetězec protilátky mohou být insertovány do jednotlivých vektorů, nebo, častěji, jsou oba geny insertovány do stejného expresního vektoru. Geny pro protilátku jsou insertovány do expresního vektoru standartními metodami ·· ·· • · · · • · ·· ··· · · ·· »· ·· ·· · • · ·· • · · • · · • · * • t ··· ·· ·· ··· · «· (např. ligací komplementárních restrikčních míst na fragmentu genu pro protilátku a vektoru, nebo ligací tupých konců, pokud nejsou přítomna žádná restrikční místa). Před insercí D2E7 nebo D2E7-příbuzných sekvencí lehkých a těžkých řetězců může již expresní vektor nést sekvence pro konstantní region protilátky. Například, jeden přístup pro konversi D2E7 nebo D2E7-příbuzných VH a VL sekvencí na geny pro kompletní protilátku je jejich inserce do expresního vektoru již kódujícího konstantní regiony lehkého a těžkého řetězce, v příslušném pořadí, takže VH segment je operativně vázán na CH segment ve vektoru a VL segment je operativně vázán na CL segment ve vektoru. Další nebo alternativní rekombinantní expresní vektory mohou kodovat signální peptid, který usnadňuje sekreci protilátkového řetězce z hostitelské buňky. Gen pro řetězec protilátky může být klonován do vektoru tak, že signální peptid je navázán v rámečku s amino-koncem genu pro řetězec protilátky. Signálním peptidem může být imunoglobulínový signální peptid nebo heterologní signální peptid (t.j. signální peptid z neimunoglobulinového proteinu).
Kromě genů pro řetězce protilátky mohou rekombinantní expresní vektory podle předkládaného vynálezu nést regulační sekvence, které kontrolují expresi genů pro řetězce protilátky v hostitelské buňce. Termín regulační sekvence zahrnuje promotory, enhancery a jiné expresní kontrolní elementy (například polyadenylační signály), které kontrolují transkripci a translaci genů pro řetězce protilátky. Takové regulační sekvence jsou popsány, například, v Goeddel: Gene Expression Technology: Methods in Enzymology 185, Academie Press, San Diego, CA (1990). Odborníkům v oboru bude jasné, že vývoj expresního vektoru, včetně selekce regulačních sekvencí, může záviset na
• 4 · ·
4 ·· « takových faktorech, jako je volba hostitelské buňky, která má být transformována, požadované hladině exprese proteinu, atd. Výhodné regulační sekvence pro expresi v savčí hostitelské buňce zahrnují virové elementy, které řídí vysokou hladinu proteinové exprese v savčích buňkách, jako jsou promotory a/nebo enhancery odvozené od cytomegaloviru (CMV) (jako je CMV promotor/enhancer), Simian Virus 40 (SV40) (jako je SV40 promotor/enhancer), adenoviru (například adenovirový hlavní pozdní promotor (AdMLP)) a od polyomaviru. Pro další popis virových regulačních elementů a jejich sekvencí viz například U.S. patent č. 5168062 od Stinski, U.S. patent č. 4510245 od Bell et al. a U.S. patent č. 4968615 od Schaffner et al..
Kromě genů pro řetězce protilátkek a regulačních sekvencí mohou rekombinantní expresní vektory podle předkládaného vynálezu nést další sekvence, jako jsou sekvence, které regulují replikaci vektoru v hostitelské buňce (například zdroje replikac) a geny pro selektovatelné markéry. Gen pro selektovatelný markér usnadňuje selekci hostitelských buněk, do kterých byl vektor zaveden (viz například U.S. patenty č. 4399216, 4634665 a 5179017 od Axel et al.). Například, typicky způsobuje selektovatelný markerový gen rezistenci hostitelské buňky, do které byl vektor zaveden, na léky, jako je G418, hygromycin nebo methotrexat. Výhodné geny pro selektovatelný markér zahrnuj í gen pro dihydrofolatreduktasu (DHFR) (pro použití u dhfr- hostitelských buněk se selekcí/amplifikací methotrexatem) a neo gen (pro selekci G418).
Pro expresi těžkých a lehkých řetězců je expresní vektor(y) kódující těžké a lehké řetězce přenesen do hostitelských buněk standartními technikami. Různé formy termínu transfekce
• · · · • · » · » · ··· · zahrnuji širokou škálu technik běžně používaných pro vložení exogenní DNA do prokaryotických nebo eukaryotických hostitelských buněk, napříkla elektroporaci, srážení fosforečnanem vápenatým, DEAE-dextranovou transfekci a podobně. Ačkoliv je teoreticky možné exprivovat protilátky podle předkládaného vynálezu jak v prokaryotických, tak v eukaryotických hostitelských buňkách, je exprese protilátek v eukaryotických buňkách, a zejména v savčích hostitelských buňkách, nejvíce preferována, jelikož takové eukaryotické buňky, a zejména savčí buňky, jsou s větší pravděpodobností než prokaryotické buňky schopny sestavit a secernovat řádně složenou a imunologicky aktivní protilátku. Prokaryotické exprese genů pro protilátky byla popsána jako neúčinná pro produkci větších množství aktivních protilátek (Boss, M.A. a Wood, C.R. (1985) Immunology Today 6: 12 13) .
Výhodné savčí hostitelské buňky pro expresi rekombinantních protilátek podle předkládaného vynálezu zahrnují Ovariální buňky čínského křečka (CHO) (včetně dhfr CHO buněk, které popisuje Urlaub a Chasin, (1980) Proč. Nati. Acad. Sci. USA 77: 4216 - 4220, použitých s DHFR selektovatelným markérem, například jak to popisuje R.J. Kaufman a P.A. Sharp (1982), Mol. Biol. 159:
601 - 621), NSO myelomové buňky, COS buňky a SP2 buňky. Když jsou rekombinantní expresní vektory kódující protilátkové geny vloženy do savčích hostitelských buněk, tak jsou protilátky produkovány kultivací hostitelských buněk po dobu dostatečnou pro expresi protilátky v hostitelských buňkách, nebo, lépe, pro sekreci protilátky do kultivačního media, ve kterém jsou hostitelské buňky kultivovány. Protilátky mohou být získány z kultivačního media za použití standartních metod pro přečištění proteinů.
Hostitelské buňky mohou být také použity pro produkci částí intaktních protilátek, jako jsou Fab fragmenty nebo scFv molekuly. Mělo by být jasné, že variace výše uvedeného postupu spadají do rozsahu předkládaného vynálezu. Například, může být žádoucí transfekce hostitelské buňky DNA kódující buď lehký řetězec, nebo těžký řetězec (ale ne oba) protilátky podle předkládaného vynálezu. Rekombinantní DNA technologie může být také použita pro odstranění některých nebo všech DNA kódujících jeden nebo oba z těžkých a lehkých řetězců, které nejsou nezbytné pro vazbu na hTNFa. Molekuly exprinjované z takových zkrácených molekul DNA jsou také obsaženy v protilátkách podle předkládaného vynálezu. Kromě toho, mohou být produkovány bifunkční protilátky, ve kterých je jeden lehký a jeden těžký řetězce z protilátky podle předkládaného vynálezu a jiný těžký a lehký řetězec jsou specifické pro antigen jiný než hTNFa zkříženou vazbou protilátky podle předkládaného vynálezu s druhou protilátkou standartními metodami chemické zkřížené vazby.
Ve výhodném systému pro rekombinantní expresi protilátky nebo její antigen-vazebné části podle předkládaného vynálezu je rekombinantní expresní vektor kódující jak těžký řetězec protilátky, tak lehký řetězec protilátky zaveden do dhfr~ CHO buněk transfekcí zprostředkovanou fosforečnanem vápenatým. V rekombinantním expresním vektoru jsou jsou geny pro lehké a těžké řetězce protilátky operativně navázány na enhancerové/promotorové regulační elementy (například odvozené od SV40, CMV, adenoviru a podobně, jako je CMV enhancerový/AdNLP promotorový regulační element nebo SV40 enhancerový/AdNLP promotorový regulační element) pro řízení vysokých hladin transkripce genů. Rekombinantní expresní vektor také nese DHFR gen, který umožňuje selekci CHO buněk, které byly transfektovány vektorem, za použití v
selekce/amplifikace methotrexatem. Selektované transformované hostitelské buňky jsou kultivovány pro umožnění exprese lehkých a těžkých řetězců protilátky a intaktní protilátka získána z kultivačního media. Standartní techniky molekulární biologie jsou použity pro přípravu rekombinantního expresního vektoru, transfekci hostitelských buněk, selekci transformantů, kultivaci hostitelských buněk a získání protilátky z kultivačního media.
Z pohledu dříve uvedeného se další aspekt vynálezu týká přípravků nukleových kyselin, vektorů a hostitelských buněk, které mohou být použity pro rekombinantní expresi protilátek a částí protilátek podle předkládaného vynálezu. Nukleotidová sekvence kódující variabilní region lehkého řetězce D2E7 je ukázána na obrázku 7 a v SEQ ID NO: 36. CDRl doména LCVR obsahuje nukleotidy 70 - 102, CDR2 doména obsahuje nukleotidy 148 - 168 a CDR3 doména obsahuje nukleotidy 265 - 291. Nukleotidová sekvence kódující variabilní region těžkého řetězce D2E7 je ukázána na obrázku 8 a v SEQ ID NO: 37. CDRl doména HCVR obsahuje nukleotidy 91 - 105, CDR2 doména obsahuje nukleotidy 148 - 198 a CDR3 doména obsahuje nukleotidy 295 - 330. Odborníkům v oboru bude jasné, že nukleotidové sekvence kódující D2E7-příbuzné protilátky nebo části protilátek (například CDR doménu, jako je CDR3 doména), mohou být odvozeny od nukleotidových sekvencí kódujících D2E7 LCVR a HCVR za použití genetického kódu a standartních technik molekulární biologie.
V jednom provedení poskytuje vynález izolovanou nukleovou kyselinu kódující CDR3 doménu lehkého řetězce obsahující aminokyselinovou sekvenci SEQ ID NO: 3 (t.j. D2E7 VL CDR3), nebo sekvenci modifikovanou ze SEQ ID NO: 3 jednou substitucí alaninu v pozici 1, 4, 5(?nebo 8 a nebo pěti konzervativními • · • · · • ··· aminokyselinovými substitucemi v pozicích 1, 3, 4, 6, 7, 8 a/nebo 9. Tato nukleová kyselina může kodovat pouze CDR3 region, nebo výhodněji, kóduje celý variabilní region lehkého řetězce protilátky (LCVR). Například, nukleová kyselina může kodovat LCVR mající CDR2 doménu obsahující aminokyselinovou sekvenci SEQ ID NO: 5 (t.j. D2E7 VL CDR2) a CDR1 doménu obsahující aminokyselinovou sekvenci SEQ ID NO: 7 (t.j. D2E7 VL CDR1).
V jiném provedení poskytuje vynález izolovanou nukleovou kyselinu kódující CDR3 doménu těžkého řetězce obsahující aminokyselinovou sekvenci SEQ ID NO: 4 (t.j. D2E7 VH
CDR3), nebo sekvenci modifikovanou ze SEQ ID NO: 4 jednou substitucí alaninu v pozici 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10 nebo 11 a nebo pěti konzervativními aminokyselinovými substitucemi v pozicích 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10, 11 a/nebo 12. Tato nukleová kyselina může kodovat pouze CDR3 region, nebo výhodněji, kóduje celý variabilní region těžkého řetězce protilátky (HCVR). Například, nukleová kyselina může kodovat HCVR mající CDR2 doménu obsahující aminokyselinovou sekvenci SEQ ID NO: 6 (t.j. D2E7 VH CDR2) a CDR1 doménu obsahující aminokyselinovou sekvenci SEQ ID NO: 8 (t.j. D2E7 VH CDR1).
V ještě jiném provedení vynález poskytuje izolované nukleové kyseliny kódující D2E7-příbuzné CDR3 domény, například obsahující aminokyselinové sekvence vybrané ze skupiny skládající se z: SEQ ID NO: 3, -SEQ ID ΝΟτ r SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16, SEQ
ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 20, SEQ ID
NO: 21, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO:
25, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 29,
SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 31, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 33, SEQ ·· » · » · ·· · ··· ··
ID NO: 34 a SEQ ID NO: 35.
V ještě jiném provedení poskytuje vynález izolovanou nukleovou kyselinu kódující variabilní region lehkého řetězce protilátky obsahující aminokyselinovou sekvenci SEQ ID NO; 1 (t.j. D2E7 LCVR). Výhodná nukleová kyselina obsahuje nukleotidovou sekvenci SEQ ID NO: 36, ačkoliv odborníkům v oboru bude jasné, že vzhledem k degeneraci genetického kódu mohou další nukleotidové sekvence kodovat aminokyselinovou sekvenci SEQ ID NO: 1. Nukleová kyselina může kodovat pouze LCVR, nebo může také kodovat konstantní region lehkého řetězce protilátky, operativně navázaný na LCVR. V jednom provedení je tato nukleová kyselina v rekombinantním expresním vektoru.
V ještě jiném provedení poskytuje vynález izolovanou nukleovou kyselinu kódující variabilní region těžkého řetězce protilátky obsahující aminokyselinovou sekvenci SEQ ID NO: 2 (t.j. D2E7 HCVR). Výhodná nukleová kyselina obsahuje nukleotidovou sekvenci SEQ ID NO: 37, ačkoliv odborníkům v oboru bude jasné, že vzhledem k degeneraci genetického kódu mohou další nukleotidové sekvence kodovat aminokyselinovou sekvenci SEQ ID NO: 2. Nukleová kyselina může kodovat pouze HCVR, nebo může také kodovat konstantní region těžkého řetězce protilátky, operativně navázaný na HCVR. ttapříklad, nukleová kyselina může obsahovat konstantní region IgGl nebo IgG4. V jednom provedení je tato nukleová kyselina v rekombinantním expresním vektoru.
Vynález také poskytuje rekombinantní expresní vektory kódující jak lehký řetězec protilátky, tak těžký řetězec protilátky. Například, v jednom provedení, vynález poskytuje rekombinantní expresní vektor kódující:
• ·
·· • ·
a) lehký řetězec protilátky mající variavilní region obsahující aminokyselinovou sekvenci SEQ ID NO: 1 (t.j. D2E7 LCVR); a
b) těžký řetězec protilátky mající variavilní region obsahující aminokyselinovou sekvenci SEQ ID NO: 2 (t.j. D2E7 HCVR).
Vynález dále poskytuje hostitelské buňky, do kterých může být jeden nebo více z rekombinantních expresních vektorů podle předkládaného vynálezu zaveden. Výhodně je hostitelskou buňkou CHO buňka, NSO buňka nebo COS buňka.
Ještě dále vynález poskytuje způsob pro syntesu rekombinantní lidské protilátky podle předkládaného vynálezu kultivací hostitelských buněk podle předkládaného vynálezu ve vhodném kultivačním mediu do té doby, doku není syntetizována rekombinantní lidská protilátka podle předkládaného vynálezu. Způsob může dále obsahovat izolaci rekombinantní lidské protilátky z kultivačního media.
III. Selekce rekombinantních lidských protilátek
Rekombinantní lidské protilátky podle předkládaného vynálezu jiné než D2E7 nebo D2E7-příbuzné protilátky zde popsané mohou být izolovány vyšetřením rekombinantní kombinatoriální knihovny protilátek, výhodně scFv fágové zobrazovací knihovny, připravené za použití lidské VH a VL cDNA přípravných z mRNA odvozené od lidských lymfocytů. Způsoby pro přípravu a vyšetřování takových knihoven jsou v oboru známé. Kromě komerčně dostupných kitů pro generování fágových zobrazovacích knihoven (například Pharmacia • ·
Recombinant Phage Antibody System, katalogové č. 27-9400-01; a Stratagene SurfZAP™ phage display kit, katalogové č. 240612), mohou být příklady způsobů a činidel zejména vhodných pro použití při generování a vyšetřování protilátkových zobrazovacích knihoven nalezeny v, například, Ladner et al., U.S. Patent č. 5223409; Kang et al., PCT přihláška č. WO 92/18619; Dower et al., PCT přihláška č. WO 91/17271; Winter et al., PCT přihláška č. WO 92/20791; Markland et al., PCT přihláška č. WO 92/15679;
Breitling et al., PCT přihláška č. WO 93/01288; McCafferty et al., PCT přihláška č. WO 92/01047; Garrad et al., PCT přihláška č. WO 92/09690; Fuchs et al., (1991), Bio/Technology 9: 1370
- 1372; Hay et al., (1992), Hum. Antibod. Hybridomas 3: 81 - 85;
Huse et al., (1989), Science 246: 1275 - 1281; McCafferty et al.,
Nátuře (1990), 348: 552 - 554; Griffiths et al (1993), EMBO J.
12: 725 - 734; Hawkins et al., (1992), J. Mol. Biol. 226: 889
- 896; Clackson et al., (1991), nátuře 352: 624 - 628; Gram et al., (1992) PNAS 89: 3576 - 3580; Garrad et al., (1991)
Bio/Technology 9: 1373 - 1377; Hoogenboom et al., (1991) Nuc.
Acids Res. 19: 4133 - 4137; a Barbas et al., (1991) PNAS 88:
7978 - 7982.
Ve výhodném provedení, pro izolaci lidských protilátek s vysokou afinitou a nízkou rychlostní konstantou pro hTNFa je nejprve použita myší anti-hTNFa protilátka mající vysokou afinitu a nízkou rychlostní konstantu pro hTNFa (například MAK 195, jejíž hybridom má přírůstkové č. ECACC 87 050801) pro selekci sekvencí pro lidské těžké a lehké řetězce majících podobnou vazebnou aktivitu pro hTNFa, za použití epitopového imprintingu a řízené selekce, což jsou metody, které popsal Hoogenboom et al., PCT přihláška Č. WO 93/06213. Protilátkovou knihovnou použitou v této metodě jsou výhodně scFv knihovny připravené a vyšetřované jak je • ·
• 4 popsáno v McCafferty et al., PCT přihláška č. WO 92/01047, McCafferty et al., Nátuře (1990), 348: 552 - 554; Griffiths et al (1993), EMBO J. 12: 725 - 734. scFv protilátkové knihovny jsou výhodně vyšetřovány za použití rekombinantního lidského TNFa jako antigenu.
Po selekci počátečných lidských VH a VL segmentů jsou provedeny smíchej a páruj pokusy, ve kterých jsou různé páry počátečně vybraných VL a VH segmentů vyšetřovány na vazbu na hTNFa, pro selekci výhodných kombinací VL/VH párů. Kromě toho, pro další zvýšení afinity a/nebo snížení rychlostní konstanty pro vazbu na hTNFa mohou být VL a VH segmenty výhodných VL/VH párů náhodně mutovány, výhodně v CDR3 regionu VH a/nebo VL, v procesu analogickém k in vivo procesu somatických mutací odpovědnému za afinitní dozrávání protilátek v průběhu přirozené imunitní odpovědi. Toto in vitro afinitní dozrávání může být provedeno amplifikací VH a VL regionů za použití PCR primerů komplementárních k VH CDR3 nebo VL CDR3, v příslušném pořadí, kdy primery jsou napíchnuty náhodnou směsí čtyř nukleotidových baží v určitých pozicích, takže vzniklé PCR produkty kódují VH a VL segmenty, ve kterých byly náhodné mutace vloženy do VH a/nebo VL CDR3 regionů. Tyto náhodně mutované VH a VL segmenty mohou být znovu vyšetřovány na vazbu na hTNFa a mohou být vybrány sekvence, které vykazují nejvyšší afinitu a nejnižší rychlostní konstantu pro vazbu na hTNFa.
Aminokyselinové sekvence vybraných těžkých a lehkých řetězců protilátky mohou být srovnávány s aminokyselinovými sekvencemi zárodečných těžkých a lehkých řetězců. V případech, kdy se určité zbytky pracovních rámečků vybraných VL a/nebo VH řetězců liší od zárodečné konfigurace (například v důsledku somatické mutace ··
4 ·
44 • 4 4 4 4 ·· 4 imunoglobulinových genů použitých v přípravě fágové knihovny), může být žádoucí zpětná mutace změněných zbytků pracovního rámečku vybraných protilátek na zárodečnou konfiguraci (t.j. změna aminokyselinové sekvence pracovního rámečku vybraných protilátek tak, aby byla stejná jako aminokyselinová sekvence pracovního rámečku v zárodečné linii). Takové zpětné mutace (nebo germlining) zbytků pracovního rámečku může být provedena standartními metodami molekulární biologie pro zavedení specifických mutací (například místně řízenou mutagenesí;
PCR-zprostředkovanou mutagenesí a podobně).
Po vyšetření a izolaci anti-hTNFa protilátky podle předkládaného vynálezu z rekombinantní imunoglobulinové zobrazovací knihovny může být nukleová kyselina kódující vybranou protilátku získána z zobrazovacího balíčku (například z fágového genomu) a může být subklonována do jiných expresních vektorů standartními rekombinantními DNA technikami. Pokud je to žádoucí, může být nukleová kyselina dále upravována za tvorby jiné formy protilátky podle předkládaného vynálezu (například může být navázána na nukleovou kyselinu kódující další imunoglobulinové domény, jako jsou další konstantní regiony). Pro expresi rekombinantní lidské protilátky izolované vyšetřováním kombinatoriální knihovny je DNA kódující protilátku klonována do rekombinantního expresního vektoru a vložena do savčích hostitelských buněk, jak bylo podrobněji popsáno v části II, výše.
IV. Farmaceutické přípravky a farmaceutické podání
Protilátky nebo části protilátek podle předkládaného vynálezu mohou být součástí farmaceutických přípravků vhodných pro podání ·· ·· • · « * * ♦ ♦·.
« 4444 ’
4 « ·· ·· subjektu. Typicky farmaceutický přípravek obsahuje protilátku nebo část protilátky podle předkládaného vynálezu a farmaceuticky přijatelný nosič. Jak je zde použit, zahrnuje termí farmaceuticky přijatelný nosič jakákoliv rozpouštědla, dispersní media, potahy, antibakteriální a antimykotická činidla, izotonická činidla a činidla zpomalující absorpci a podobně, která jsou fyziologicky kompatibilní. Příklady farmaceuticky přijatelných nosičů zahrnují jeden nebo více z vody, salinického roztoku, fosfátem pufrovaného salinického roztoku, dextrosy, glycerolu, ethanolu a podobně, stejně jako jejich kombinace. V mnoha případech bude výhodné zahrnout do přípravku izotonická činidla, například cukry, polyalkoholy jako je manitol, sorbitol, nebo chlorid sodný. Farmaceuticky přijatelné nosiče mohou dále obsahovat malá množství pomocných substancí jako jsou zvlhčující nebo emulsifikační činidla, konzervační činidla nebo pufry, která zvyšují poločas nebo účinnost protilátky nebo části protilátky.
Přípravky podle předkládaného vynálezu mohou být v různých formách. Tyto zahrnují, například, kapalné, semisolidní nebo solidní dávkové formy, jako jsou kapalné roztoky (například injikovatelné nebo infusibilní roztoky), disperse nebo suspense, tablety, pilulky, prášek, liposomy a Čípky. Výhodná forma závisý na zamýšleném způsobu podání a terapeutické aplikaci. Typické preferované přípravky jsou ve formě injikovatelných nebo infusibilních roztoků, jako jsou přípravky, které se podobají přípravkům používaným pro pasivní imunizaci lidí jinými protilátkami. Výhodný způsob podání je parenterálně (například intravenosnš, subkutáně, intraperitoneálně, intramuskulárně). ve výhodném provedení je protilátka podána intravenosní injekcí nebo infusí. V jiném výhodném provedení je protilátka podána intramuskulární nebo subkutání injekcí.
·· ·· > · « · • » ··, ··· » 1
Terapeutické přípravky musí typicky být sterilní a stabilní za podmínek výroby a skladování. Přípravek může být formulován jako roztok, mikroemulse, disperse, liposomový přípravek, nebo jiná řádná struktura vhodná pro vysokou koncentraci léčiva. Sterilní injikovatelné roztoky mohou být připraveny inkorporací aktivní sloučeniny (t.j. protilátky nebo části protilátky) v požadovaném množství do vhodného rozpouštědla s jednou nebo s s kombinací přísad vyjmenovaných výše, jak je potřeba, a potom filtrační sterilizací. Obecně, disperse jsou připraveny inkorporací aktivní sloučeniny do sterilního vehikula, které obsahuje základní dispersní medium a další požadované přísady z těch, které byly uvedeny výše. V případě sterilních prášků pro přípravu sterilních injikovatelných roztoků jsou výhodnými způsoby přípravy sušení vakuem a sublimace ze zmrazeného stavu, kterými se získá prášek aktivní složky plus jakékoliv další požadované přísady z jejich předem filtrovaného sterilního roztoku. Řádná tekutost roztoku může být udržována, například, použitím potahu jako je lecitin, udržováním požadované velikosti částic v případě disperse a použitím surfaktantu. Prolongovaná absorpce injikovatelných přípravků může být dosažena přidáním činidla zpomalujícího absorpci do přípravku, například solí monosteratu a želatiny.
Protilátky a části protilátek podle předkládaného vynálezu mohou být podány různými metodami známými v oboru, ačkoliv pro mnoho terapeutických aplikací je výhodnou cestou/způsobem podání intravenosní injekce nebo infuse. Jak bude odborníkům v oboru jasné, cesta a/nebo způsob podání se bude velmi lišit v závislosti na požadovaném výsledku. V určitých provedeních může být aktivní sloučenina připravena s nosičem, který bude bránit rychlému uvolňování sloučeniny, tak, jako je tomu v přípravcích s kontrolovaným uvolňováním, včetně implantátů, transdermálních
·
999 ··
999 · 4 * « • · ·· náplastí a mikroenkapsulováných systémů pro podání. Mohou být použity biodegradovatelné, biokompatibilní polymery, jako jsou ethylenvinylacetat, polyanhydridy, polyglykolové kyseliny, kolagen, polyortoestery a polymléčná kyselina. Mnoho metod pro přípravu takových přípravků je patentováno nebo je odborníkům v oboru obecně známo. Viz například Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems, J.R. Robinson, vyd., Marcel Dekker, lne., New York, 1978.
V některých provedeních může být protilátka nebo část protilátky podle předkládaného vynálezu podána orálně, například, s inertním ředidlem nebo s asimilovatelným poživatelným nosičem. Sloučenina(nebo další přísady, pokud jsou žádoucí), může být také obsažena v kapsli z měkké nebo tuhé želatiny, komprivována do tablet nebo přímo obsažena v dietě subjektu. Pro orální terapeutické podání může být sloučenina smísena s přísadami a použita ve formě tablet pro gastrointestinální podání, bukálních tablet, pastilek, kapslí, elixírů, suspenzí, sirupů, oplatek a podobně. Pro podání sloučenin podle předkládaného vynálezu jiným způsobem, než parenterálně, je nezbytné potáhnout sloučeninu, nebo podat sloučeninu současně s, materiálem, který zabrání její inaktívaci.
V přípravcích mohou být také obsaženy doplňkové aktivní sloučeniny. V některých provedeních je protilátka nebo část protilátky podle předkládaného vynálezu formulována spolu s a/nebo podána spolu s jedním nebo více dalších terapeutických činidel, která jsou užitečná při léčbě onemocnění, při kterých je aktivita TNFčy poškozující. Například, anti-hTNFa protilátka nebo část protilátky podle předkládaného vynálezu může být formulována spolu s a/nebo podána spolu s jednou nebo s více dalšími ··· «· ·· ·· k · · · » · ·· ··· · · • * · ·· ·· protilátkami, které se vážou na jiné cíle (například protilátkami, které se vážou na jiné cytokiny, nebo které se vážou na buněčné povrchové molekuly), jedním nebo více cytokiny, solubilním receptorem pro TNFa (viz například PCT přihláčka č. WO 94/06476) a/nebo s jedním nebo více chemickými činidly, které inhibují produkci nebo aktivitu hTNFa (jako jsou deriváty cyklohexan-ylidenu jak je popisuje PCT přihláška č. WO 93/19751). Kromě toho, jedna nebo více protilátek podle předkládaného vynálezu může být použita v kombinaci s jedním nebo více uvedených terapeutických činidel. Takové kombinované terapie mohou výhodně používat nižších dávek podaného terapeutického činidla a tak je možné se vyhnout možné toxicitě nebo komplikacím spojeným s různými monoterapiemi.
Neomezující příklady terapeutických činidel pro léčbu revmatoidní artritidy, se kterými může být protilátka, nebo část protilátky, podle předkládaného vynálezu kombinována, zahrnují: nesteroidní protizánětlivá léčiva (NSAID); cytokiny potlačující protizánětlivé léčiva (CSAID); CDP-571/BAY-10-3356 (humanizovaná anti-TNFa protilátka; Celltech/Bayer); cA2 (chimérická anti-TNFa protilátka; Centocor); 75 kd TNFR-IgG (75 kD TNF-receptor - IgG fúsní protein, Immunex, viz Arthritis & Rheumatism (1994), svazek 37: S295; J. Invest. Med. (1996), svazek 44: 235A); 55 kd TNFR-IgG (55 kD TNF-receptor - IgG fúsní protein,
Hoffmann-LaRoche); IDEC-CE9.l/SB 210396 (nedepletující primátizovaná anti-CD4 protilátka, IDEC/SmithKline, viz například Arthritis & Rheumatism (1995), svazek 38: S185); DAB 486-IL-2 a/nebo DAB 389-IL-2 (IL-2 fúsní proteiny, Seragen, viz například Arthritis & Rheumatism (1993), svazek 36: 1223); Anti-Tac (humanizovaná anti-IL-2Ra, Protein Design Labs/Roche); IL-4 (protizánětlivý cytokin, DNAX/Schering); IL-10 (SCH 52000,
4
4«
444
4 ·· 44 * 4
4 44
4 4 4 4
4 ·· rekombinantní IL-10, protizánětlivý cytokin, DNAX/Schering); agonisté IL-4, IL-10 a/nebo IL-4 (například agonistické protilátky); IL-1RA (receptorový antagonista UIL-1, Synergen/Amgen); TNF-bp/s-TNFR (solubilní TNF vazebný protein, viz Arthritis & Rheumatism (1996), svazek 39, č. 9 (supplement), S284; Amer. J. Physiol. - Heart and Circulatory Physiology (1995), svazek 268: str. 37 - 42); R973401 (inhibitor fosfodiesterasy typu IV, viz Arthritis & Rheumatism (1996), svazek 39, č. 9 (supplement), S282); MK-966 (COX-2 inhibitor, viz Arthritis & Rheumatism (1996), svazek 39, č. 9 (supplement),
S81); Iloprost (viz Arthritis & Rheumatism (1996), svazek 39, č.
(supplement), S82); methotrexat; thalidomid (viz Arthritis & Rheumatism (1996), svazek 39, č. 9 (supplement), S282) a léky příbuzné thalidomidu (například Celgen); leflunomid (protizánětlivý a inhibitor cytokinů, viz Arthritis & Rheumatism (1996), svazek 39, č. 9 (supplement), S131); kyselina tranexamová (inhibitor aktivace plasminogenu, viz Arthritis & Rheumatism (1996), svazek 39, č. 9 (supplement), S284); T-614 (inhibitor cytokinů, viz Arthritis & Rheumatism (1996), svazek 39, č. 9 (supplement), S282); prostaglandin El (viz Arthritis & Rheumatism (1996), svazek 39, č. 9 (supplement), S282); Tenidap (nesteroidní protizánětlivý lék, viz například Arthritis & Rheumatism (1996), svazek 39, č. 9 (supplement), S280); Naproxen (nesteroidní protizánětlivé léčivo, viz například Neuro Report (1996), svazek 7, str. 1209 - 1213); Meloxicam (nesteroidní protizánětlivé léčivo); Ibuprofen (nesteroidní protizánětlivé léčivo); Piroxicam (nesteroidní protizánětlivé léčivo); Diclofenac (nesteroidní protizánětlivé léčivo); Indometacin (nesteroidní protizánětlivé léčivo); Sulfasalazin ( viz například Arthritis & Rheumatism (1996), svazek 39, č. 9 (supplement),S281); Azathiprin (viz například Arthritis & Rheumatism (1996), svazek 39, č. 9
44 • 4 4
4 ·
444
4*
444 4 »
4 ·
44 (supplement),S281); ICE inhibitor (inhibitor enzymu interleukin-1S konvertasy); zap-70 a/nebo lek inhibitor (inhibitor tyrosin kinasy zap-70 nebo lek); VEGF inhibitor a/nebo VEGF-R inhibitor (inhibitory růstového faktoru vaskulárních endotelových buněk nebo receptoru růstového faktoru vaskulárních endotelových buněk, inhibitory angiogenese); kortikoidní protizánětlivá léčiva (napříkla SB203580); inhibitoryTNF-konvertasy; anti-IL-12 protilátky; interleukin 11 (viz například Arthritis & Rheumatism (1996), svazek 39, č. 9 (supplement),S296); interleukin-13 (viz například Arthritis & Rheumatism (1996), svazek 39, č. 9 (supplement),S308); interleukin-17 (viz například Arthritis & Rheumatism (1996), svazek 39, č. 9 (supplement),S120); zlato, penicilamin; chlorokin; hydroxychlokin; chlorambucil; cyklofosfamid, cyklosporin; ozáření veškeré lymfatické tkáně; anti-thymocytární globulin; anti-CD-4 protilátky; CD5-toxiny; orálně podané peptidy nebo kolagen; lobenzarid dvoj sodný; Cytokiny regulující činidla (CRA) HP228 a HP466 (Houghten Pharmaceuticals, lne.); ICAM-1 antisense fosforothioatové oligodeoxynukleotidy (ISIS 2302; Isis Pharmaceutical, lne.); solubilní komplementový receptor 1 (TP10,
T Cell Sciences, lne.); prednison; orgotein; glykosaminoglykan polysulfat; minocyklin; anti-IL-2R protilátky; mořské a botanické lipidy (mastné kyseliny z rym a rostlinných semen, viz například DeLucca et al. (1995), Rheum. Dis. Clin. North Am. 21: 759
- 777); auranofin; fenylbutazon; kyselina meklofenamová; intravenosní imunitní globulin; zileuton; kyselina mykofenolová (RS-61443); takrolimus (FK-506); sirolimus (rapamycin); amiprilos (therafektin); kladribin (2-chlorodeoxyadenosin); a azaribin.
Neomezující příklady terapeutických činidel pro léčbu zánětlivých střevních onemocnění, se kterými může být protilátka, • fl ··· fl· fl · fl · <
fl · I ·· ·« nebo část protilátky, podle předkládaného vynálezu kombinována, zahrnují: budenosid; epidermální růstový faktor; kortikosteroidy; cyklosporin; sulfasalazin; aminosalicylaty; 6-merkaptopurin; azathioprin; metronidazol; inhibitory lipooxygenasy; mesalamin; olsalazin; balsalazin; antioxidanty; inhibitory tromboxanu; antagonisté IL-1 receptoru; anti-IL-Ιβ monoklonální protilátky; anti-IL-6 monoklonální protilátky; růstové faktory; inhibitory elastasy; pyridinyl-imidazolové sloučeniny; CDP-571/BAY-10-3356 (humanizovaná anti-TNFa protilátka; Celltech/Bayer); cA2 (chimérická anti-TNFa protilátka; Centocor); 75 kd TNFR-IgG (75 kD TNF-receptor - IgG fúsní protein, Immunex, viz Arthritis & Rheumatism (1994), svazek 37: S295; J. Invest. Med. (1996), svazek 44: 235A); 55 kd TNFR-IgG (55 kD TNF-receptor - IgG fúsní protein, Hoffmann-LaRoche); IL-10 (SCH 52000, Schering Plough); agonisté IL-4, IL-10 a/nebo IL-4 (například agonistické protilátky); interleukin 11; proléčiva prenisolonu, dexamethasonu nebo budesonidu konjugovaná s glukuronidem nebo dextranem;
ICAM-1 antisense fosforothioatové oligodeoxynukleotidy (ISIS 2302; Isis Pharmaceutical, lne.); solubilní komplementový receptor 1 (ΤΡΙΟ, T Cell Sciences, lne.); mesalazin se zpomaleným uvolňováním; methotrexat; antagonisty destičkového aktivačního faktoru (PAF); ciprofloxacin a lignokain.
Neomezující příklady terapeutických činidel pro léčbu roztroušené sklerosy, se kterými může být protilátka nebo část protilátky podle předkládaného vynálezu kombinována, zahrnují: kortikosteroidy; prednisolon; methylprednisolon; azathioprin; cyklofosfamid; cyklosporin; methotrexat; 4-aminopyridin; tizanidin; interferon-pia (Avonex™, Biogen); interferon-pib (Betaseron™, Chiron/Berlex); Copolymer 1 (Cop-1, Copaxon™, Teva Pharmaceutical Industries, lne.); hyperbarický kyslík;
• · · • ··· intravenosní imunoglobulin; kladribin; CDP-571/BAY-10-3356 (humanizovaná anti-TNFa protilátka; Celltech/Bayer); cA2 (chimérická anti-TNFa protilátka; Centocor); 75 kd TNFR-IgG (75 kD TNF-receptor - IgG fúsní protein, Immunex, viz Arthritis & Rheumatism (1994), svazek 37: S295; J. Invest. Med. (1996), svazek 44: 235A); 55 kd TNFR-IgG (55 kD TNF-receptor - IgG fúsní protein, Hoffmann-LaRoche); IL-10 (SCH 52000, Schering Plough); agonisté IL-10, IL-4, IL-10 a/nebo IL-4 (například agonistické protilátky).
Neomezující příklady terapeutických činidel pro léčbu sepse, se kterými může být protilátka, nebo část protilátky, podle předkládaného vynálezu kombinována, zahrnují: hypertonické salinické roztoky; antibiotika; intravenosní gamaglobulin; kontinuální hemofiltraci; karbapenemij (například meronem); antagonisty cytokinů jako je TNFa, IL-Ιβ, IL-6 a/nebo IL-8; CDP-571/BAY-10-3356 (humanizovaná anti-TNFa protilátka; Celltech/Bayer); cA2 (chimérická anti-TNFa protilátka; Centocor); 75 kd TNFR-IgG (75 kD TNF-receptor - IgG fúsní protein, Immunex, viz Arthritis & Rheumatism (1994), svazek 37: S295; J. Invest. Med. (1996), svazek 44: 235A); 55 kd TNFR-IgG (55 kD TNF-receptor - IgG fúsní protein, Hoffmann-LaRoche); Cytokiny regulující činidla (CRA) HP228 a HP466 (Houghten Pharmaceuticals, lne.); SK&F 107647 (nízkomolekulární peptid, SmithKline Beecham); tetravalentní guanylhydrazon CNI-1493 (Picower Institute); inhibitor dráhy tkáňového faktoru (TFPI, Chiron); PHP (chemicky modifikovaný hemoglobin, APEX Bioscience); chelační činidla železa a cheláty, včetně komplexu diethylentriaminpentaoctové kyseliny - železo (III) (DTPA iron (III), Molichem Medicines); lisofylin (syntetická malá molekula methylxantinu, Cell Therapeutics, lne.); PGG-Glukan (Sl,3 glukan rozpustný ve vodě, fl • 9 • · • · • · • · • · ·· • · flfl • fl • flfl • fl ·· • · • ·· • flfl 9 9 9 *·
Alpha-Beta Technology); apolipoprotein A-l rekonstituovaný lipidy; chirální hydroxamové kyseliny (syntetická antibakteriální činidla, která inhibují biosyntesu lipidu A); protilátky proti endotoxinu; E5531 (syntetický anatagonista lipidu A, Eisai America, lne.); rBPI2;L (rekombinantní N-koncový fragment lidského baktericidního/permeabilitu zvyšujícího proteinu); a syntetické anti-endotoxinové peptidy (SAEP, BiosYnth Research Laboratories).
Neomezující příklady terapeutických činidel pro léčbu syndromu respirační tísně dospělých (ARDS), se kterými může být protilátka, nebo část protilátky, podle předkládaného vynálezu kombinována, zahrnují: anti-IL-8 protilátky; surfaktantovou substituční terapii; CDP-571/BAY-10-3356 (humanizovaná anti-TNFa protilátka; Celltech/Bayer); cA2 (chimérická anti-TNFa protilátka; Centocor); 75 kd TNFR-IgG (75 kD TNF-receptor - IgG fúsní protein, Immunex, viz Arthritis & Rheumatism (1994), svazek 37: S295; J. Invest. Med. (1996), svazek 44: 235A); a 55 kd TNFR-IgG (55 kD TNF-receptor - IgG fúsní protein,
Hoffmann-LaRoche).
Použití protilátek, nebo částí protilátek, podle předkládaného vynálezu, v kombinaci s jinými terapeutickými činidly, je dále probíráno v části IV.
Farmaceutické přípravky podle předkládaného vynálezu mohou obsahovat terapeuticky účinné množství nebo profylakticky účinné množství protilátky nebo části protilátky podle předkládaného vynálezu. Terapeuticky účinné množství označuje množství, které je při nezbytných dávkách a době podávání účinné pro dosažení požadovaného terapeutického výsledku. Terapeuticky účinné množství protilátky nebo části protilátky^se může velmi • · » · » 4
444 · • · lišit podle faktorů jako je typ onemocnění, věk, pohlaví a hmotnost jedince, a podle schopnost protilátky nebo části protilátky vyvolat požadovanou odpověď u jedince. Terapeuticky účinné množství je také takové, u kterého jsou jakékoliv toxické nebo škodlivé účinky protilátky nebo části protilátky převáženy terapeuticky výhodnými účinky. Profylakticky účinné množství označuje množství, které je při nezbytných dávkách a době podávání účinné pro dosažení požadovaného profylaktického výsledku. Typicky, protože profylaktická dávka je použita u subjektu před onemocněním nebo v časných stadiích onemocnění, bude profylakticky účinné množství nižší než terapeuticky účinné množství.
Dávkové režimy mohou být upraveny tak, aby dávaly optimální požadovanou odpověď (například terapeutickou nebo profylaktickou odpověď). Například, může být podána jedna bolusová dávka, může být podáno několik rozdělených dávek za určitou dobu nebo může být dávka proporcionálně redukována nebo zvyšována podle terapeutické situace. Zejména výhodné je formulování parenterálních přípravků v jednotkové dávkové formě pro snadnost podání a pro uniformitu dávky. Dávková jednotková forma, jak je zde použito, označuje fyzikálně samostatnou jednotku jako unitární dávku pro savčí subjekty, které jsou léčeny; každá jednotka obsahuje předem určené množství aktivní sloučeniny vypočítané pro produkci požadovaného terapeutického účinku spolu s požadovaným farmaceutickým nosičem. Požadavky pro jednotkové dávkové formy podle předkládaného vynálezu jsou určovány a jsou přímo závislé na: (a) jedinečných charakteristikách aktivní sloučeniny a na určitém terapeutickém nebo profylaktickém výsledku, který má být dosažen, a (b) na omezeních daných v oboru přípravy takových aktivních sloučenin pro léčbu sensitivity u jedinců.
Příkladným, neomezujícím rozmezím pro terapeuticky nebo profylakticky účinné množství protilátky nebo části protilátky podle předkládaného vynálezu je 0,1 -20 mg/kg, lépe 1-10 mg/kg. Melo by být uvedeno, že hodnoty dávky se mohou velmi lišit v závislosti na typu a závažnosti stavu, který je léčen. Mělo by být dále jasné, že pro jakýkoliv jednotlivý subjekt by měly být specifické režimy dávkování upravovány podle potřeb jedince a podle profesionálních úvah osoby podávající přípravek nebo dohlížející na podání přípravku, a že dávky zde uvedené jsou pouze příkladné a neomezují rozsah nebo použití nárokovaného přípravku.
IV. Použití protilátek podle předkládaného vynálezu
Na základě své schopnosti vázat hTNFa mohou být anti-hTNFa protilátky nebo jejich části, použity pro detekci hTNFa (například v biologických vzorcích, jako je sérum nebo plasma), za použití běžných imunotestů, jako je enzymově vázaný imunosorbentní test (ELISA), radioimunotest (RIA) nebo tkáňová imunohistochemie. Vynález poskytuje způsob pro detekci hTNFa v biologických vzorcích, kde tento způsob obsahuje kontaktování biologického vzorku s protilátkou, nebo s částí protilátky, podle předkládaného vynálezu, a detekování bud' protilátky (nebo části protilátky) navázané na hTNFa, nebo nenavázané protilátky (nebo části protilátky), a tím detekování hTNFa v biologickém vzorku. Protilátka je přímo nebo nepřímo značena detekovatelnou substancí pro usnadnění detekce navázané nebo nenavázané protilátky. Vhodné detekovatelné substance zahrnují různé enzymy, protetické skupiny, fluorescentní materiály, luminiscentní materiály
a radioaktivní materiály. Příklady vhodných enzymů zahrnují křenovou peroxidasu, alkalickou fosfatasu, β-galaktosidasu, nebo acetylcholinesterasu; příklady vhodných komplexů protetických skupin zahrnují streptavidin/biotin a avidin/biotin; příklady vhodných fluorescentních materiálů zahrnují umbelliferon, fluorescein, fluorescein isothiokyanat, rhodamin, dichlorotriazinylamin fluorescein, dansylchloride nebo fýkoerytrin; příklady luminiscentních materiálů zahrnují luminol; a příklady radioaktivních materiálů zahrnují 125I, 13a-I, 35S nebo 3H.
Alternativně ke značení protilátky může být hTNFa testován v biologických tekutinách kompetičním imunotestem využívajícím rhTNFa standardů značených detekovatelnou substancí a neznačené anti-hTNFa protilátky. V tomto testu jsou biologický vzorek, značené rhTNFa standardy a anti-hTNFa protilátka kombinovány a je určeno množství značeného rhTNFa standardu navázaného na neznačenou protilátku. Množství hTNFa v biologickém vzorku je nepřímo úměrné množství značeného rhTNFa standardu navázaného na anti-hTNFa protilátku.
D2E7 protilátka podle předkládaného vynálezu může být také použita pro detekci TNFa od jiných druhů než od lidí, zejména pro určení TNFa od primátů (například šimpanzů, paviánů, kosmanů, makaků (cynomolgus) a makaků rhesus), prasat a myší, protože D2E7 se může vázat na TNFa od každého z těchto druhů (podrobně uvedeno v příkladu 4, sekci E).
Protilátka nebo části protilátky podle předkládaného vynálezu jsou schopné neutralizace aktivity hTNFa jak in vitro, tak in vivo (viz příklad 4). Kromě toho, alespoň některé z protilátek ··· ·· • · podle předkládaného vynálezu, jako je D2E7, mohou neutralizovat aktivitu TNFaz jiných druhů. V souladu s tím, protilátka nebo části protilátky podle předkládaného vynálezu mohou být použity pro inhibování aktivity TNFa, například v buněčné kultuře obsahující hTNFa, u lidí nebo u jiných savců majících TNFa, se kterým je protilátka podle předkládaného vynálezu reaktivní (například u šimpanzů, paviánů, kosmanů, makaků (cynomolgus) a makaků rhesus, prasat nebo myší). V jednom provedení poskytuje vynález způsob pro inhibici aktivity TNFa provedením kontaktu TNFa s protilátkou nebo částí protilátky podle předkládaného vynálezu tak, že aktivita TNFa je inhibována. Výhodně je TNFa lidský TNFa. Například, do buněčné kultury obsahující, nebo předpokládané obsahující hTNFa může být přidána protilátka nebo část protilátky podle předkládaného vynálezu do kultivačního media pro inhibici aktivity hTNFa v kultuře.
V jiném provedení poskytuje vynález způsob pro inhibici aktivity TNFa u subjektu trpícího onemocněním, při kterém je aktivita TNFa škodlivá. Účast TNFa se předpokládá v patofyziologii mnoha onemocnění (viz například Moeler, A. et al. (1990), Cytokine 2: 162 - 169; U.S. patent č. 5231024 od Moeller et al.; Evropská patentová přihláška č. 260610 B1 od Moeller,
A.). Vynález poskytuje způsob pro inhibici aktivity TNFa u subjektu trpícího takovým onemocněním, kde tento způsob obsahuje podání protilátky nebo části protilátky podle předkládaného vynálezu subjektu, takže je inhibována aktivita TNFa u subjektu. Výhodně je TNFa lidský TNFa a subjektem je člověk. Alternativně, subjektem může být savec exprňyjuj ící TNFa, se kterým je protilátka podle předkládaného vynálezu reaktivní, ^eště dalším subjektem může být savec, do kterého byl vložen hTNFa (například podáním hTNFa nebo expresí hTNFa transgenu). Protilátka podle
předkládaného vynálezu může být podána člověku za terapeutickým účelem (dále uvedeno výše). Kromě toho, protilátka podle předkládaného vynálezu může být podána savcům jiným než lidem exprivujícím TNFa, se kterým je protilátka reaktivní (např. primátům nebo prasatům nebo myším) pro veterinární účely nebo jako zvířecí model lidského onemocnění. Z ohledem na dále uvedené jsou takové zvířecí modely užitečné pro hodnocení terapeutické účinnosti protilátek podle předkládaného vynálezu (například pro testování dávek a načasování podávání).
Jak je zde použito, znamená termín onemocnění, ve kterém je aktivita TNFa škodlivá zahrnuje onemocnění nebo jiné poruchy, u kterých je přítomnost TNFa u subjektu trpícího onemocnění prokázané nebo pravděpodobně odpovědná za patofyziologii onemocnění, nebo je faktorem, který zhoršuje onemocnění. Podle toho, onemocnění, při kterém je aktivita TNFa šodlivá je onemocnění, u kterého se předpokládá, že inhibice aktivity TNFa zmírní příznaky a/nebo progresi onemocnění. Takové onemocnění může být prokázáno, například, zvýšením koncentrace TNFa v biologických tekutinách subjektu trpícího onemocněním (například zvýšením koncentrace TNFa v séru, plasmě, synoviální tekutině atd. od subjektu), které může být detekváno, například, za využití anti-TNFa protilátky jak je popsáno výše. Existuje mnoho příkladů onemocnění, u kterých je aktivita TNFa škodlivá. Použití protilátek a částí protilátek podle předkládaného vynálezu v léčbě jednotlivých onemocnění je popsáno podrobněji dále.
A. Sepse
Faktor nekrosy nádorů má stanovenou úlohu v patofyzioogii sepse, s biologickými účinky, které zahrnují hypotensi, ·· ·· • · · · • · ··
myokardiální supresi, syndrom propustnosti kapilár, orgánovou nekrosu, stimulaci uvolňování sekundárních mediátorů a aktivace kaskady srážení krve (viz například Moeler, A. et al., (1990), Cytokine 2: 162 - 169; U.S. patent č. 5231024 od Moeller et al.; Evropská patentová přihláška č. 260610 B1 od Moeller, A.; Tracey,
K.J. a Cerami, A. (1994), Annu. Rev. Med. 45: 491 - 503; Russell, D. a Thompson, R.C. (1993) Curr. Opin. Biotech. 4: 714 - 721). V souladu s tím, lidské protilátky a části protilátek podle předkládaného vynálezu mohou být použity pro sepse v jakékoliv její klinické formě, včetně septického šoku, endotoxinového šoku, gram-negativní sepse a syndromu toxického šoku.
Kromě toho, pro léčbu sepse může být anti-hTNFa protilátka nebo část protilátky podle předkládaného vynálezu podána společně s jedním nebo více terapeutickými činidly, které mohou dále zmírňovat sepsi, jako je inhibitor interleukinu-1 (jak je popsán v PCT přihláškách č. WO 92/16221 a WO 92/17583), cytokin interleukin-6 (viz například PCT přihlášku č. WO 93/11793) nebo antagonista destičkového aktivačního faktoru (viz například Evropská patentová přihláška č. EP 374 510). Další kombinované terapie pro léčbu sepse jsou podrobněji uvedeny v sekci III.
Kromě toho, ve výhodném provedení, anti-hTNFa protilátka nebo část protilátky podle předkládaného vynálezu je podány lidskému subjektu patřícímu do podskupiny septických pacientů majících v době léčby sérovou nebo plasmatickou koncentraci IL-6 vyšší než 500 pg/ml a lépe 1000 pg/ml (viz PCT přihláška č. WO 95/20978^ Daum, L. et al.).
• · · • ··· ·♦ ·· » · · · . ♦ ·· · · · 4
9 4 ·· ··
B. Autoimunitní onemocnění
Předpokládá se účast faktoru nekrosy nádorů v patofyziologii různých autoimunitních onemocnění. Například, TNFa se předpokládá při aktivaci tkáňového zánětu a předpokládá se, že způsobuje destrukci kloubů u revmatoidní artritidy^ například Moeler, A. et al., (1990), Cytokine 2: 162 - 169; U.S. patent č. 5231024; Moeller et al.; Evropská patentová přihláška č. 260610 Bij Moeller, A.; Tracey, K.J. a Cerami, A. výše; Arend, W.P. a Dayer, J.M. (1995) Arth. Rheum. 38: 151 - 160; Fava, R.A. et al. (1993)
Clin. Exp. Immunol. 94: 261 - 266). TNFa se také předpokládá v indukci smrti buněk Langerhansových ostrůvků a ve zprostředkování insulinové resistence u diabetů (viz například Tracey a Cerami, výše; PCT přihláška č. WO 94/08609). TNFa se také předpokládá ve zprostředkování cytotoxicity oligodendroglií a v indukci zánětlivých plaků u roztroušené sklerosy (viz například Tracey a Cerami, výše). V současnosti probíhá klinické testování chimérických a humanizovaných myších anti-hTNFa protilátek pro léčbu revmatoidní artritidy (viz například Elliott, M.J. et al., (1994) Lancet 344: 1125 - 1127; Elliott, M.J. et al., (1994) Lancet 344: 1105 - 1110; Rankin, E.C. et al., (1995) Br. J. Rheumatol. 34: 334 - 342).
Lidské protilátky a části protilátek podle předkládaného vynálezu mohou být použity pro léčbu autoimunitních onemocnění, zejména těch, které jsou asociované se zánětem, včetně revmatoidní artritidy, revmatoidní spondylitidy, osteoartritidy a dnavé artritidy, alergie, roztroušené sklerosy, autoimunního diabetů, autoimunní uveitidy a nefrotického syndromu. Typicky je protilátka nebo část protilátky podána systémově, ačkoliv u některýh onemocnění může být výhodné lokální podání protilátky
··· · t · ··· · • · nebo části protilátky do místa zánětu (například, lokální podání do kloubů u revmatoidní artritidy nebo lokální podání do diabetických vředů, samostatně nebo v kombinaci s cyklohexan-ylidenovými deriváty jak je popsáno v PCT přihlášce č. WO 93/19751). Protilátka nebo část protilátky podle předkládaného vynálezu může být také podána společně s jedním nebo více terapeutickými činidly užitečnými při léčbě autoimunitních onemocnění, jak je podrobněji uvedeno v sekci III.
C. Infekční onemocnění
Faktor nekrosy nádorů se předpokládá při zprostředkování biologických účinků u mnoha infekčních onemocnění. Například,
TNFo; se předpokládá při zprostředkování mozkového zánětu a kapilární trombosy a infarktu u malarie. TNFa se také předpokládá při zprostředkování mozkového zánětu, při indukci porušení hematoencefalické bariery, při spouštění syndromu septického šoku a při aktivaci venosního infarku u meningitidy. TNFa se také předpokládá v indukci kachexie, stimulaci proliferace viru a při poškození centrálního nervového systému u syndromu získané imunodeficience (AIDS). V souladu s tím, protilátky a části protilátek podle předkládaného vynálezu mohou být použity při léčbě infekčních onemocnění, včetně bakteriální menin^.tidy (viz například Evropská patentová přihláška publik, č. EP 585 705) , mozkové malarie, AIDS a AIDS - příbuzného komplexu (ARC) (viz napříkla Evropská patentová přihláška publik, č. EP 230 574), stejně jako cytomegalovirové infekce sekundární po transplantaci (viz například Fietze, E. et al., (1994),
Transplantation 58: 675 - 680). Protilátky a části protilátek podle předkládaného vynálezu mohou být také použity pro zmírnění příznaků spojených s infekčními onemocněními, včetně horečky ·· • · · • ··
a myalgie způsobené infekcí (jako je chřipka) a kachexie způsobené infekcí (napřílad spojené s AIDS nebo ARC).
D. Transplantace
Předpokládá se, že faktor nektosy nádorů je klíčovým mediátorem při rejekci alotransplantátu a reakci štěpu proti hostiteli (GVHD) a ve zprostředkování nežádoucích reakcí, které byly pozorovány, když byla krysí protilátka 0KT3, namířená proti CD3 komplexu T receptoru, použita pro inhibici rejekce ledvinných transplantátů (viz například Eason, J.D. et al., (1995)
Transplantation 59: 300 - 305; Suthanthiran, M. a Strom, T.B. (1994) New Engl. J. Med. 331: 365 - 375. V souladu s tím mohou být protilátky, nebo části protilátek, podle předkládaného vynálezu, použity pro inhibici rejekce transplantátu, včetně rejekce alotransplantátů a xenotransplantátů a k inhibici GVHD. Ačkoliv může být protilátka nebo část protilátky použita samostatně, výhodněji je použita v kombinaci s jedním nebo více činidly, která inhibují imunitní odpověď namířenou proti alotransplantátu nebo která inhibují GVHD. Například, v jednom provedení je protilátka nebo část protilátky podle předkládaného vynálezu použita v kombinaci s 0KT3 pro inhibici reakcí indukovaných OKT3. V jiném provedení je protilátka nebo část protilátky podle předkládaného vynálezu použita v kombinaci s jednou nebo více protilátkami proti jiným cílům účastnících se v regulaci imunitní odpovědi, jako jsou povrchové buněčné molekuly CD25 (α-receptor pro interleukin -2), CDlla (LFA-1),
CD54 (ICAM-1), CD4, CD45, CD28/CTLA4, CD80 (B7-1) a/nebo CD86 (7-2). V ještě jiném provedení je protilátka nebo část protilátky podle předkládaného vynálezu použita v kombinaci s jedním nebo více imunosupresivními činidly, jako je cyklosporin A nebo FK506.
·*
0 ·
0 · ···
0· · ·· ·♦ 0 0 0 0 0*· • 0 0 0 0 0 0 ··
E. Malignity
Předpokládá se úloha faktoru nekrosy nádorů v indukci kachexie, stimulaci nádorového růstu, zvýšení metastatického potenciálu a ve zprostředkování cytotoxicity u malignit. V souladu s tím mohou být protilátky, nebo části protilátek, podle předkládaného vynálezu použity v léčbě malignit, v inhibici nádorového růstu a/nebo při zmírnění sekundární kachexie při malignitách. Protilátka, nebo část protilátky může být podána systémově nebo lokálně do místa nádoru.
F. Plicní onemocnění
Předpokládá se úloha faktoru nekrosy nádorů v patofyziologii syndromu respirační tísně dospělých (ARDS), a to ve stimulaci leukocytární-endotelové aktivace, v přímé cytotoxicitě na pneumocyty a v syndromu propustnosti kapilár. V souladu s tím mohou být protilátky, nebo části protilátek, podle předkládaného vynálezu použity v léčbě různých plicních onemocnění, včetně syndromu respirační tísně dospělých (viz například PCT přihláška č. WO 91/04054), šokové plíce, chronických zánětlivých onemocnění plic, plicní sarkoidosy, plicní fibrosy a silikosy. Protilátka, nebo část protilátky, může být podána systémově nebo lokálně do plic, například ve formě aerosolu. Protilátka, nebo část protilátky, může být také podána s jedním nebo více terapeutickými činidly použitelnými v léčbě plicních onemocnění, jak je podrobněji uvedeno v sekci III.
G. Střevní onemocnění
Předpokládá se úloha faktoru nekrosy nádorů v patofyziologii
44 «4 • · • 4 ·· • · · · • · ··• 4 · · 4 · • 4 4 zánětlivých střevních onemocnění (viz například Tracy, K.J. et al. (1986) Science 234: 470 - 474; Sun, X.M. et al., (1988) J.
Clin. Invest. 81: 1328 - 1331; MacDonald, T.T. et al., (1990)
Clin. Exp. Immunol. 81: 301 - 305). Probíhá klinické testování chimérických myších anti-hTNFa protilátek pro léčbu Crohnovij nemoci (van Dullemen, H.M. et al., (1995), Gastroenterology 109:
129 - 135). Lidské protilátky, nebo části protilátek, podle předkládaného vynálezu, mohou být také použity pro léčbu střevních onemocnění, jako jsou idiopatické zánětlivé střevní onemocnění, které zahrnují dva syndromy: Crohnovu nemoc a ulcerosní kolitidu. Protilátka, nebo část protilátky, může být také podána s jedním nebo více terapeutickými činidly použitelnými v léčbě střevních onemocnění, jak je podrobněji uvedeno v sekci III.
H. Onemocnění srdce
Protilátky, nebo části protilátek, podle předkládaného vynálezu, mohou být také použity pro léčbu různých onemocnění srdce, včetně srdeční ischemie (viz například Evropská patentová přihláška publikační č. EP 453 898) a srdeční insuficience (slabosti srdečního svalu) (viz například PCT přihláška č. WO 94/20139) .
I. Jiné
Protilátky, nebo části protilátek, podle předkládaného vynálezu, mohou být také použity pro léčbu různých dalších onemocnění, při kterých je aktivita TNFa škodlivá. Příklady dalších onemocnění, u kterých se předpokládá účast aktivity TNFa v patofyziologii, a které tak mohou být léčeny za použití ·· ·*.
• · · · • · · !
• · ··· protilátky nebo části protilátky podle předkládaného vynálezu, zahrnují zánětlivá onemocnění kostí a onemocnění kostí spojené s jejich resorpcí (viz například Bertolini, D.R. et al ., (1986)
Nátuře 319: 516 - 518; Konig, A. et al., (1988) J. Bone Miner.
Res. 3: 621 - 627; Lerner, U.H. a Ohlin, A. (1993) J. Bone Miner. Res. 8: 147 - 155; a Shankar, G. a Stern, P.H. (1993) Bone 14:
871 - 876), hepatitidu, včetně alkoholové hepatitidy (viz například McClain, C.J. a Cohen, D.A. (1989) Hepatology 9: 349 351; Felver, M.E. et al. (1990) Alcohol. Clin. Exp. Res. 14: 255
- 259; a Hansen, J. et al. (1994) Hepatology 20: 461 - 474), virovou hepatitidu (Sheron, N. et al. (1991) J. Hepatol. 12: 241
- 245; a Hussain, M.J., et al. (1994) J. Clin. Pathol. 47: 1112 1115), a fulminantní hepatitidy; poruchy koagulace (viz například van der Poli, T. et al. (1990) N. Engl. J. Med. 322: 1622 - 1627;
a van der Poli, T. et al. (1991) Prog. Clin. Biol. Res. 367: 55 60), popáleniny (viz například Giroir, B.P. et al. (1994) Am. J.
Physiol. 267: H118 - 124; a Liu, X.S. et al. (1994) Burns 20: 40
- 44), reperfúsní poškození (viz například Scales, W.E. et al. (1994) Am. J. Physiol. 267: G1122 - 1127; Serrick, C. et al.
(1994) Transplantation 58: 1158 - 1162; a Yao, Y.M. et al. (1995) Resuscitation 29: 157 - 168), tvorbu keloidů (viz například McCauley, R.L. et al. (1992) J. Clin. Immunol. 12: 300 - 308);
tvorbu jizevnaté tkáně; pyrexii; onemocnění periodontu; obezitu a radiační toxicitu.
Vynález je dále ilustrován následujícími příklady, které nejsou nijak omezující. Obsah všech referencí, patentů a publikovaných patentových přihlášek citovaným v této přihlášce je zde uveden j ako odkaz.
Příklady provedení vynálezu
Příklad 1: Analýza kinetiky vazby lidských protilátek na hTNFa
Vazebné interakce - v reálném čase - mezi ligandem (biotinylovaným rekombinantním lidským TNFa (rhTNFa) imobilizovaným na biosensorové matrici) a analytem (protilátkami v roztoku) byly měřeny povrchovou plasmonovou resonancí (SPR) za použití BIAcore systému (Pharmacia Biosensor, Piscataway, NJ). System využívá optických vlastností SPR pro detekci změn v koncentraci proteinů v dextranové biosensorové matrici.
Proteiny jsou kovalentně navázány na dextranovou matrici ve známých koncentracích. Protilátky jsou injikovány do dextranové matrice a specifická vazba mezi injikovanými protilátkami a imobilizovanými ligandy vede ke zvýšené koncentraci proteinů v matrici a tím ke změně SPR signálu. Tyto změny SPR signálu jsou zaznamenávány jako jednotky resonance (RU) a jsou vyjádřeny v závislosti na čase na Y-ose sensorgramu.
Pro usnadnění imobilizace biotinylovaného rhTNFa na biosensorovou matrici je streptavidin kovalentně navázán přes volné aminoskupiny na dextranovou matrici nejprve aktivací karboxylových skupin matrice 100 mM N-hydroxysukcimidu (NHS) a 400 mM N-ethyl-N'-(3-diethylaminopropylJkarbodiimidhydrochloridu (EDC). Potom je streptavidin injikován do aktivované matrice. Třicet pět mikrolitrů streptavidinu (25 μg/ml), ředěného v octanu sodném, pH 4,5, je injikováno do aktivovaného biosensoru a volné aminy na proteinu jsou navázány přímo na aktivované karboxylové skupiny. Nezreagované EDC-estery matrice jsou inaktivovány injekcí 1 M ethanolaminu. Biosensorové čipy s navázaným streptavidinem jsou také komerčně dostupné (Pharmacia BR-1000-16, Pharmacia Biosensor, Piscataway, NJ).
• ·
Biotjnylovaný rhTNFa byl připraven nejprve rozpuštěním 5,0 mg biotinu (N-hydroxysukcimid ester D-biot/nyl-epsilon-aminokapr3jové kyseliny; Boehringer Mannheim katalogové č. 1008 960) v 500 μΐ dimethylsulfoxidu pro výrobu roztoku 10 mg/ml. 10 μΐ biotinu se přidá na ml rhTNFa (při 2,65 mg/ml) pro získání molárního poměru 2:1 biotinu k rhTNFa. Reakce se jemně mísí a inkubuje se po dobu dvou hodin při pokojové teplotě ve tmě. PD-120 kolona, Sephadex G-25M (Pharmacia katalogové č. 17-0851-01) se ekvilibruje 25 ml chladného PBS a plní se 2 ml rhTNFa-biotin na kolonu. Kolona se eluuje 10 χ 1 ml chladným PBS. Odeberou se frakce a odečítají se při ODsso (1,0 OD = 1,25 mg/ml). Vhodné frakce se shromáždí a skladují se při -80 °C do použití. Biotinylovaný rhTNFa je také komerčně dostupný (R & D Systems, katalogové č. FTA00,
Minneapolis, MN).
Biotinylovaný rhTNFa, který má být imobilizován na matrici pomocí streptavidinu, se ředí v PBS nosném pufru (Gibco, katalogové č. 14190-144, Gibco BRL, Grand Island, NY) doplněném 0,05% (BIAcore) surfaktantem P20 (Pharmacia BR-1000-54, Pharmacia Biosensor, Piscataway, NJ). Pro určení kapacity rhTNFa-specifických protilátek vázat se na imobilizovaný rhTNFa je proveden následujícím způsobem vazebný test. Aliquoty biot/nylovaného rhTNFa (25 nM; 10 μΐ aliquoty) se injikují přes dextranovou matrici s navázaným streptavidinem rychlostí 0,5 μΐ/min. Před injekcí proteinu a ihned po se nechá přes každou průtokovou kyvetu projít PBS pufr samotný. Rozdíl v signálu mezi základním stavem a asi 30 s po dokončení injekce biot/nylováného rhTNFa se bere jako hodnota vazby (přibližně 500 RU). Měří se přímá rhTNFa-specifická protilátka vážící se na imobilizovaný biotinylovaný rhTNFa. Protilátky (20 ^g/ml) se ředí v PBS nosném pufru a 25 μΐ aliquoty se injikují přes matrice s imobilizovaným
proteinem rychlostí 5 μΐ/min. Před injekcí protilátky a ihned po se nechá přes každou průtokovou kyvetu projít PBS pufr samotný. Rozdíl v signálu mezi základním stavem a signálem po dokončení injekce protilátky se bere jako hodnota vazby pro určitý vzorek. Biosensorové matrice se regenerují 100 mM HCl před injekcí dalšího vzorku. Pro určení rychlosti disociace (Koefi), rychlosti asociace (K ), asociační konstanty (K_J a disociační konstanty (K ) byl použit BIAcore kinetic evaluation software (verze 2.1).
Representativní výsledky vazby D2E7 (i^čf kompletní protilátka) na biotínylovaný rhTNFa, ve srovnání s myší mAb MAK 195 (F(ab')2 fragment), jsou ukázány v tabulce 1 dále.
• ·
Tabulka 1: Vazba D2E7 IgG4 nebo MAK195 na biotínylovaný rhTNFa
Protilátka (Ab),nM rhTNFa vazba,RU Ab,vazba RU rhTNFa/Ab (průměr)
D2E7 267 373 1215 1,14 8,45 x 10'5
133 420 1569 1,30 5,42 x 10s
67 434 1633 1,31 4,75 X 10“5
33 450 1532 1,19 4,46 x 105
17 460 1296 0,98 3,47 x 10-5
8 486 936 0,67 2,63 x 10“5
4 489 536 0,38 2,17 x 10’5
2 470 244 0,18 3,68 x 10s (4,38 x 10-5)
MAK 195 400 375 881 1,20 5,38 x 105
200 400 1080 1,38 4,54 x 10s
100 419 1141 1,39 3,54 x 105
50 427 1106 1,32 3,67 x 10s
25 446 957 1,09 4,41 x 10“s
13 464 708 0,78 3,66 x 10’5
6 474 433 0,47 7,37 x 10“5
3 451 231 0,26 6,95 x 10s (4,94 x 10“5)
Ve druhé sérii pokusů byly kvantitativně analyzovány molekulárně kinetické interakce mezi IgGl kompletní D2E7 a biotjnylovaným rhTNFa, za použití BIAcore technologie, jak je popsána výše, a byly odvozeny kinetické rychlostní konstanty, shrnuté dále v tabulkách 2, 3 a 4.
· · • 9·9
Tabulka 2: Určené disociační rychlostní konstanty interakcí mezi D2E7 a biotínylovaným rhTNFa
Pokus K (s1) <3.
1 9,58 X 10“s
2 9,26 X 10~s
3 7,60 X 10“5
průměr 8,81 ± 1,06 x 10-s
Tabulka 3: Určené asociační rychlostní konstanty interakcí mezi D2E7 a biot ínylovaným rhTNFa
Pokus
1 1,33 X 105
2 1, 05 X 105
3 3,36 X 10s
průměr 1,91 ± 1,26 x 10s
Tabulka 4: Určené rychlostní a afinitní konstanty D2E7 a biot inylovaného rhTNFa
Pokus K (M a. KJs-) K (M) <3.
1 1,33 x 10Ξ 9,58 x 10s 7,20 x 10“1θ
2 1,05 x 105 9,26 x 10s 8,82 x 10-1°
3 3,36 x 10s 7,60 x 10~s 2,26 x 10’1θ
průměr 1,91 ± 1,26 x 10s 8,81 ± 1,06 x 10_s 6,09 ± 3.42 x 10~1θ
4 ♦· 44 44 • · · · 4 4 4 • · 4 4 4 44
4444 4444 4 9 4 4 4 4
Disociační a asociační rychlostní konstanty byly kalkulovány na základě analýzy disociačních a asociačních oblastí sensorgramů za použití BIA analysis softwaru. Pro interakce mezi D2E7 a biottnylovanou molekulou rhTNFa byly předpokládány běžné kinetiky chemických reakcí: kinetika nultého řádu pro disociaci a kinetika prvního řádu pro asociaci. Pro analýzu byly uvažovány interakce pouze mezi jedním ramenem bivalentní D2E7 protilátky a jednou jednotkou trimerického biot|nylovaného rhTNFa, při vybírání molekulového modelu pro analýzu kinetiky. Byly provedeny tři nezávislé pokusy a výsledky byly analyzovány jednotlivě. Průměrná určená disociační konstanta (k ) interakcí mezi D2E7 a d
biottnylováným rhTNFa byla 8,81 + 1,06 x 10-s s-a· a průměrná určená asociační konstanta (ka) byla 1,91 + 1,26 x 10s M-1sx. Průměrná skutečná disociační konstanta (K^) byla počítána podle vzorce Κ^= kd/ka. Tak, průměrná K D2E7 protilátky pro rhTNFa odvozená z parametrů kinetiky byla 6,09 ± 3,42 x x 10-x°
M. Malé rozdíly v hodnotách kinetiky pro IgGl formu D2E7 (uvedeno v tabulkách 2, 3 a 4) a IgG4 formu D2E7 (uvedeno v tabulce 1 a v příkladech 2 a 3) nejsou pravděpodobně rozdíly vycházející z přítomnosti buď IgGl nebo IgG4 konstantního regionu, ale spíše je možné je přisoudit přesnějšímu měření koncentrace protilátky použitému pro analýzu kinetiky IgGl. V souladu s tím, hodnoty kinetiky pro IgGl formu D2E7 zde uvedené se považují za nejpřesnější parametry kinetiky pro D2E7 protilátku.
Příklad 2: Alanin vyhledávací mutagenese D2E7 CDR3 domén.
Serie mutací jednoho alaninu byly standartními metodami vloženy do CDR3 domén D2E7 VL a D2E7 VH regionů. Mutace v lehkém řetězci jsou zobrazeny na obrázku IB (LD2E7*.A1, LD2E7*.A3, LD2E7*.A4, LD2E7~.A5, LD2E7*,A7 a LD2E7*.A8 mající alaninovou
mutaci v pozici 1, 3, 4, 5, 7 nebo 8, v příslušném pořadí, D2E7 VL CDR3 domény). Mutace v těžkém řetězci jsou zobrazeny na Obrázku 2B (HD2E7*.A1, HD2E7~.A2, HD2E7*.A3, HD2E7*.A4, HD2E7*.A5, HD2E7*.A6, HD2E7*.A7, HD2E7*.A8 a HD2E7*.A9 mající alaninovou mutaci v pozici 2, 3,4, 5, 6, 8, 9, 10 nebo 11, v příslušném pořadí, D2E7 VH CDR3 domény). Kinetika rhTNFa interakcí s protilátkou složenou z přirozených D2E7 VL a VH byla srovnávána s kinetikou protilátek složených z 1) D2E7 VL přirozeného typu s alaninem substituovaným D2E7 VH; 2) D2E7 VHL přirozeného typu s alaninem substituovaným D2E7 VLH; nebo 3) alaninem substituovaného D2E7 VL s alaninem substituovaným D2E7 VH.
Všechny protilátky byly testovány jako kompletní IgG4 molekuly.
Kinetika interakcí protilátek s rhTNFa byla určena povrchovou plasmonovou resonancí jak je popsána v příkladu 1. K rychlosti pro různé VH/VL páry jsou shrnuty v tabulce 5.
·»· · • · ·· «
Tabulka 5: Vazba D2E7 Alanin-vyhledávacích mutantů na biot{nylovaný rhTNFa
VH VL K <=>££ (S1)
D2E7 VH D2E7 VL 9,65 χ 105
HD2E7*.Al D2E7 VL 1,4 x 10~4
HD2E7*.A2 D2E7 VL 4,6 χ 10“4
HD2E7*.A3 D2E7 VL 8,15 χ 104
HD2E7*.A4 D2E7 VL 1,8 χ 10-4
HD2E7*.A5 D2E7 VL 2,35 χ 10’4
HD2E7*.A6 D2E7 VL 2,9 χ 104
HD2E7* . A7 D2E7 VL 1,0 χ 10“4
HD2E7*.A8 D2E7 VL 3,1 χ 104
HD2E7*,A9 D2E7 VL 8,1 x 10~4
D2E7 VH LD2E7*.Al 6,6 x 10s
D2E7 VH LD2E7*.A3 nedetekovatelné
D2E7 VH LD2E7*.A4 1,75 χ 104
D2E7 VH LD2E7*. A5 1,8 χ 10“4
D2E7 VH LD2E7*,A7 1,4 χ 104
D2E7 VH LD2E7*,A8 3,65 χ 10~4
HD2E7*.A9 LD2E7*.Al 1,05 χ 10“4
Tyto výsledky ukazují, že většina z pozic v CDR3 doménách D2E7 VL a VH regionů je vhodná pro substituci jedním alaninovým zbytkem. Substituce jedním alaninovým zbytkem v pozici 1, 4, 5
·· ·· • · · · • · · · ··· · · • · · ·· ·* nebo 7 D2E7 VL CDR3 domény nebo v pozici 2, 5, 6, 8, 9 nebo 10 D2E7 VH CDR3 domény neovlivňuje signifikantně rychlost disociace vazby na hTNFa oproti přirozené původní D2E7 protilátce. Substituce alaninu v pozici 8 D2E7 VL CDR3 nebo v pozici 3 D2E7 VH CDR3 dává 4-krát rychlejší Κο££ a alaninová substituce v pozici 4 nebo 11 D2E7 VH CDR3 dává 8-krát rychlejší Koe£, což naznačuje, že tyto pozice jsou významnější pro vazbu na hTNFa. Nicméně, substituce jednoho alaninu v pozici 1, 4, 5, 7 nebo 8 D2E7 VL CDR3 domény nebo v pozici 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10 nebo 11 D2E7 VH CDR3 domény stále vede k anti-hTNFa protilátce mající K 1 x 10“3 s“x nebo menší.
Příklad 3: Analýza vazby D2E7-příbuzných protilátek
Serie protilátek příbuzných ve své sekvenci k D2E7 byla analyzována na svou vazbu na rhTNFa a byly srovnávány s D2E7, pomocí povrchové plasmonové resonance jak byla popsána v příkladu
1. Aminokyselinové sekvence testovaných VL regionů jsou ukázány na obrázcích IA a IB. Aminokyselinové sekvence testovaných VH regionů jsou ukázány na obrázcích 2A a 2B. Koře rychlosti pro různé páry VH/VL (jak je ukázáno ve sloupci formát, bud' jako kompletní IgGl nebo IgG4 protilátky, nebo jako scFv) jsou shrnuty v tabulce 6, dále.
444
4
44 • ·4 4
4 · · • · 444 4
4 ·
44
44 • 4 4 4
4 44
4 4 4
4 4
44
Tabulka 6: Vazba D2E7-příbuzných protilátek na biotynylovaný rhTNFa
VH VL Formát K Of f (s_1)
D2E7 VH D2E7 VL IgGl/IgG4 9,65 X 10~5
VH1-D2 LOE7 IgGl/lgG4 7,7 x 10“3
VH1-D2 LOE7 scFv 4,6 x 104
VH1-D2. N LOE7.T IgG4 2,1 x 10s
VH1-D2. Y LOE7.A IgG4 2,7 x 10s
VH1-D2.N LOE7.A IgG4 3,2 x 105
VH1-D2 EP B12 scFv 8,0 x 104
VH1-D2 2SD4 VL scFv 1,94 x 103
3C-H2 LOE7 SCFv 1,5 x 103
2SD4 VH LOE7 scFv 6,07 x 103
2SD4 VH 2SD4 VL scFv 1,37 x 102
VH1A11 2SD4 VL scFv 1,34 x 102
VH1B12 2SD4 VL scFv 1,01 x 10’2
VH1B11 2SD4 VL scFv 9,8 x 10“3
VH1E4 2SD4 VL scFv 1,59 x 10’2
VH1F6 2SD4 VL scFv 2,29 x 102
VH1D8 2SD4 VL scFv 9,5 x 10~3
VH1G1 2SD4 VL scFv 2,14 x 10~2
2SD4 VH EP B12 scFv 6,7 x 103
2SD4 VH VL10E4 scFv 9,6 x 103
2SD4 VH VL100A9 scFv 1,33 x 102
2SD4 VH VL100D2 scFv 1,41 x 102
2SD4 VH VL10F4 scFv 1,11 x 10-2
2SD4 VH VLLOE5 scFv 1,16 x 102
2SD4 VH VLL0F9 scFv 6,09 x 103
2SD4 VH VLL0F10 scFv 1,34 x 102
999 9 • fl • · • fl flfl • fl fl · • fl flfl • flfl » • · flfl flflflfl · • * · flfl flfl
Tabulka 6 - pokračování
VH VL Formát K (s r1)
Of f
2SD4 VH VLL0G7 scFv 1, 56 X 10-2
2SD4 VH VLL0G9 scFv 1,46 X IO-2
2SD4 VH VLL0H1 scFv 1,17 X 10~2
2SD4 VH VLL0H10 scFv 1,12 X 102
2SD4 VH VL1B7 scFv 1,3 X 10”2
2SD4 VH VL1C1 scFv 1,36 X 10“2
2SD4 VH VL1C7 scFv 2,0 X 10“2
2SD4 VH VLO.1F4 scFv 1,76 X 102
2SD4 VH VLO.1H8 scFv 1,14 X IO-2
Pomalé rychlosti disociace (t.j. Ko££ s 1 x 10_4s-:L) pro kompletní protilátky (t.j. IgG formát) mající VL vybraný z D2E7, LOE7, L0E7.T a L0E7.A, které mají buď threonin, nebo alanin v pozici 9, naznačuje, že pozice 9 D2E7 VL CDR3 může být obsazena jedním z těchto dvou zbytků bez významného ovlivnění Κθ££·
V souladu s tím, konsensuální motiv pro D2E7 VL CDR3 obsahuje aminokyselinovou sekvenci: Q-R-Y-N-R-A-P-Y-(T/A) (SEQ ID NO: 3). Dále, pomalé rychlosti disociace (t.j. Κθ££ s 1 x 10-4s_1) pro protilátky mající VH vybraný z D2E7, VH1.D2.N a VH1-D2.Y, které mají buď tyrosin, nebo asparagin v pozici 12, naznačuje, že pozice 12 D2E7 VH CDR3 může být obsazena jedním z těchto dvou zbytků bez významného ovlivnění Kocc. V souladu s tím, konsensuální motiv pro D2E7 VH CDR3 obsahuje aminokyselinovou sekvenci: V-S-Y-L-S-T-A-S-S-L-D-(Y/N) (SEQ ID NO: 4).
Výsledky ukázané v tabulce 6 ukazují, že, v scFv fornátu, <·
• · protilátky obsahující 2SD4 VL nebo VH CDR3 regiony vykazují rychlejší K (t.j. K 2 1 x 10~3 s'1) ve srovnání s protilátkami obsahujícími D2E7 VL nebo VH CDR3 region. Ve VL CDR3 se 2SD4 liší od D2E7 v pozicích 2, 5 a 9. Nicméně, jak bylo uvedeno výše, pozice 9 může být obsazena Ala (jak je tomu u 2SD4) nebo Thr (jak je tomu u D2E7) bez významného ovlivnění Κθ££. Tak, srovnáním 2SD4 a D2E7 mohou být pozice 2 a 5 D2E7 VL CDR3, obě obsazené argininem, identifikovány jako kritické pro asociaci protilátky s hTNFa. Tyto zbytky se mohou přímo účastnit jako kontaktní zbytky ve vazebném místě protilátky, nebo mohou být zásadní pro udržení architektury molekuly protilátky v tomto regionu. Vzhledem k významu pozice 2 akceleruje nahrazení Arg (v LOE7, která má stejný VL CDR3 jako D2E7) Lys (v EP B12) rychlost disociace dvakrát. Vzhledem k významu pozice 5 akceleruje nahrazení Arg (v D2E7) Ala (v LD2E7*.A5) B12) rychlost disociace dvakrát, jak je popsáno v příkladu 2. Kromě toho, bez argininů v pozicích 2 a 5 (v 2SD4) je rychlost disociace pětkrát rychlejší. Nicméně, mělo by být uvedeno, že ačkoliv je pozice 5 významná pro vylepšení vazby na hTNFa, může být změna v této pozici negována změnami v jiných pozicích, jako tomu je u VLL0E4, VLL0H1 a VLO.1H8.
Ve VH CDR3 se 2SD4 liší od D2E7 v pozicích 1, 7 a 12. Nicméně, jak bylo uvedeno výše, pozice 12 může být obsazena Asn (jak je tomu u 2SD4) nebo Tyr (jak je tomu u D2E7) bez významného ovlivnění KQff. Tak, srovnáním 2SD4 a D2E7 mohou být pozice 1 a 7 D2E7 VH CDR3 identifikovány jako kritické pro asociaci protilátky s hTNFa. Jak bylo uvedeno výše, tyto zbytky se mohou přímo účastnit jako kontaktní zbytky ve vazebném místě protilátky, nebo mohou být zásadní pro udržení architektury molekuly protilátky v tomto regionu. Obě pozice jsou významné pro vazbu na hTNFce, protože když je použita 3C-H2 VH CDR3 (která má změnu valinu na alanin v pozici 1 vzhledem k D2E7 VH CDR3), tak má scFv 3-krát rychlejší rychlost disociace, než když je použita D2E7 VH CDR3, ale tato rychlost disociace je stále čtyřikrát pomalejší, než když je použita 2SD4 VH CDR3 (která má změnu v obou pozicích 1 a 7 vzhledem k D2E7 VH CDR3).
Příklad 4: Funkční aktivita D2E7
Pro vyšetření funkční aktivity D2E7 byla protilátka použita v několika testech pro měření schopnosti protilátky inhibovat aktivitu hTNFa, buď in vitro, nebo in vivo.
A. Neutralizace TNFa-indukované cytotoxicity u L929 buněk
Lidský rekombinantní TNFa (rhTNFa) způsobuje buněčnou cytotoxicitu u myších L929 buněk po inkubační době 18 - 24 hodin. Lidské anti-hTNFa protilátky byly hodnoceny v L929 testech společnou inkubací protilátek s rhTNFa a buňkami následujícím způsobem. 96-jamková mikrotitrační plotna obsahující 100 μΐ anti-hTNFa Ab byla sériově ředěna 1/3 směrem dolů v plotně v dvojím provedení za použití RPMI media obsahujícího 10% fetální hovězí sérum (FBS). Padesát mikrolitrů rhTNFa bylo přidáno do konečné koncentrace 500 pg/ml do každé jamky. Plotny byly potom inkubovány po dobu 30 minut při pokojové teplotě. Dále bylo přidáno 50 μΐ TNFa-sensitivních L929 myších fibroblastů v konečné koncentraci 5 χ 104 buněk na jamku spolu s 1 ^g/ml Aktinomycinu D. Kontroly obsahovaly medium plus buňky a rhTNFa plus buňky. Tyto kontroly, a TNFcf standardní křivka, v rozmezí od 2 ng/ml do 8,2 pg/ml, byly použity pro určení kvality testu a pro získání okénka pro neutralizaci. Plotny byly potom inkubovány »4 • 44 4 • 4 4«
4 4 4
4 44
444 4 4
4 4
44 přes noc (18 - 24 hodin) při 37 °C v 5% C02.
100 μΐ media bylo odebráno z každé jamky a bylo přidáno 50 μΐ 5 mg/ml 3,(4,4-dimethylthiazol-2-yl)2,5-difenyl-tetrazolimbromidu (MTT; komerčně dostupný od Sigma Chemical Co., St. Louis, MO) v PBS. Plotny byly potom inkubovány po dobu 4 hodin při 37 °C.
Potom bylo přidáno do každé jamky 50 μΐ 20% dodecyl síranu sodného (SDS) a plotny byly inkubovány přes noc při 37 °C. Byla měřena optická hustota při 570/630 nm, křivky byly pro každý vzorek zapsány do grafu a hodnoty ICso byly určeny standartními způsoby.
Representativní výsledky pro lidské protilátky mající různé VH a VL páry, ve srovnání s myší MAK 195 mAb, jsou ukázány na obrázku 3 a v tabulce 7, dále.
44 • 4 4 4
4 4 4
4 444
4 4 • * · • 4 44
4 4
4 4 4
4 ·
44
4 4
44 • 44 4 4
4 4
Tabulka 7: Neutralizace TNFa-indukované L929 cytotoxicity
VH VL Struktura ic , so ' M
D2E7 D2E7 scFv 1,1 X 10-xo
D2E7 D2E7 IgG4 4,7 X 10xx
2SD4 2SD4 scFv/IgGl/IgG4 3,0 X 10 7
2SD4 L0E7 scFv 4,3 X 10®
VH1-D2 2SD4 scFv 1,0 X 10®
VH1-D2 L0E7 SCFv/lgGl/lgG4 3,4 X 10χθ
VH1-D2.Y LOE7.T IgG4 8,1 X 10xx
VH1-D2. N LOE7.T IgG4 1,3 X 1θ-χο
VH1-D2.Y L0E7.A IgG4 2,8 X io-xx
VH1-D2. N L0E7.A IgG4 6,2 X 10“xx
MAK 195 MAK 195 scFv 1,9 X 10_®
MAK 195 MAK 195 F(ab’)2 6,2 X 10_χχ
Výsledky na obrázku 3 a v tabulce 7 ukazují, že D2E7 lidská anti-hTNFa protilátka, a různé D2E7-příbuzné protilátky, mohou neutralizovat TNFa-indukovanou L929 cytotoxicitu s kapacitou přibližně ekvivalentní kapacitě myší anti-hTNFa mAb MAK 195.
V jiné sérii pokusů byla testována sT^copnost IgGl formy D2E7 neutralizovat TNFa-indukovanou L929 cytotoxicitu způsobem, který byl popsán výše. Výsledky ze tří nezávislých pokusů a jejich průměr jsou shrnuty v tabulce 8, dále.
Tabulka 8: Neutralizace TNFa-indukované L929 cytotoxicity způsobená D2E7 IgGl.
Pokus IC (M) 50
1 1,26 x 1010
2 1,33 x 10xo
3 1,15 x 1010
průměr 1,25 ± 0,01 x 101θ
Tato serie pokusů potvrdila, že D2E7, ve formě kompletního IgGl, neutralizuje TNFa-indukovanou L929 cytotoxicitu s průměrnou hodnotou IC (M) 1,25 ± 0,01 x 10_1°.
O
B. Inhibice vazby TNFa na receptory pro TNFa na U-937 buňkách
Schopnost lidských anti-hTNFa protilátek inhibovat vazbu hTNFa na receptory pro hTNFa na povrchu buněk byla vyšetřována za použití buněčné linie U-937 (ATCC č. CRL 1593), lidské histiocytární linie, která exprivuje receptory pro hTNFa. U-937 buňky byly kultivovány v RPMI 1640 mediu doplněném 10% fetálním hovězím sérem (Hyclone A-1111, Hyclone Laboratories, Logan, UT), L-glutaminem (4 nM), HEPES pufrovacím roztokem (10 mM), penicilinem (100 ^g/ml) a streptomycinem (10 ^g/ml). Pro vyšetření aktivity kompletních IgG protilátek byly U-937 buňky předem inkubovány s PBS doplněným 1 mg/ml lidského IgG (Sigma
1-4506, Sigma Chemical Co., St. Louis, MO) po dobu 45 minut na ledu a potom byly buňky třikrát promyty vazebným pufrem. Pro test vazby na receptor byly U-937 buňky (5 x 106 buněk na jamku) inkubovány ve vazebném pufru (PBS doplněný 0,2% hovězím sérovým
albuminem) v 96-jamkových mikrotitračních plotnách (Costar 3799, Costar Corp., Cambridge, ΜΆ) spolu s X25I-značeným rhTNFa (3 x 10-1° M; 25 MCi/ml; získán od NEN Research Products, Wilmington, DE) , s nebo bez anti-hTNFa protilátek, v celkovém objemu 0,2 ml. Plotny byly inkubovány na ledu po dobu 1,5 hodiny. Potom byly 75 μΐ každého vzorku přeneseno do 1,0 ml testovacích trubiček (Sarsted 72.700, Sarsted Corp., Princeton, NJ) obsahujících dibutylftalat (Sigma D-2270, Sigma Chemical Co., St. Louis, MO) a dinonylftalat (ICN 210733, ICN, Irvine, CA). Testovací trubičky obsahovaly 300 μΐ směsi dibutylftalatu a dinonylftalatu, v objemovém poměru 2:1, v příslušném pořadí. Volný (t.j. nenavázáný) X25I-značený rhTNFa byl odstraněn mikrocentrifugací po dobu 5 minut. Potom byl konec každé testovací trubičky obsahující buněčnou peletu odstřižen za pomoci nůžek na trubičky (Bel-Art 210180001, Bel-Art Products, Pequannock, NJ). Buněčná peleta obsahovala X2SI-značený rhTNFa navázaný na p60 nebo p80 receptor pro TNFa, zatímco vodná fáze nad olejovou směsí obsahovala přebytek volného 12SI-značeného rhTNFa. Všechny buněčné pelety byly shromážděny v odečítací trubici (Falcon 2052, Becton Dickinson Labware, Lincoln Park, NJ) a odečítány ve scintilační komůrce.
Representativní výsledky jsou ukázány na obrázku 4. Hodnota ICso pro D2E7 inhibici vazby hTNFa na receptory pro hTNFa na U-937 buňkách je v těchto pokusech přibližně 3 x 10_1θ M. Tyto výsledky ukazují, že D2E7 lidská anti-hTNFa protilátka inhibuje vazbu rhTNFa na receptory pro hTNFa na U-937 buňkách v koncentracích přibližně ekvivalentních koncentracím myší anti-hTNFa mAb MAK 195.
V jiné sérii pokusů byla testována sí^copnost IgGl formy D2E7 • · · · · · · · · · · • · · · · · · 9 9 9 9 9
9 9999 9999
9999 999 9 999 · · ··· 9 9 9 9 9 9
99 9 9 9 9 9 9 9 9 9 inhibovat vazbu rhTNFa na receptory pro hTNFa na U-937 buňkách způsobem, který byl popsán výše. Výsledky ze tří nezávislých pokusů a jejich průměr jsou shrnuty v tabulce 9, dále.
Tabulka 9: Inhibice vazby na TNF receptor na U-937 buňkách způsobená D2E7 IgGl.
Pokus IC (M)
1 1,70 x ÍO'10
2 1,49 χ 10~1θ
3 1,50 x 10“10
průměr 1,56 ± 0,12 χ 10_1θ
Tato serie pokusů potvrdila, že D2E7, ve formě kompletního IgGl, inhibuje vazbu na receptor pro TNF na U-937 buňkách s průměrnou hodnotou ICso (M) 1,56 ± 0,12 χ 10-1°.
Pro výzkum inhibičního potenciálu D2E7 ve vazbě 125I-rhTNFavazby na jednotlivé p55 a p75 receptory byl proveden radioimunotest na pevné fázi. Pro měření ICso hodnot D2E7 pro jednotlivé receptory pro TNF byly různé koncentrace protilátky inkubován s 3 x 10_:LO koncentracemi 125I-rhTNFa. Směs byla potom testována na separátních plotnách obsahujících bud' p55, nebo p75 receptory pro TNF v závislosti na dávce. Výsledky jsou shrnuty v tabulce 10, dále.
• to
Tabulka 10: Inhibice vazby na TNF receptor pro p55 a p75 TNFR
způsobená D2E7 IgGl
IC (M) 5 O
Reagens p55 TNFR p75 TNFR
D2E7 1,47 x 109 1,26 x 10’9
rhTNF 2,31 x 10~9 2,70 x 10-9
Inhibice vazby 12sI-rhTNF na p55 a p75 receptory na U-937 buňkách způsobená D2E7 sledovala jednoduchou esovítou křivku, což ukazuje na podobné ICso hodnoty pro oba receptory. V radioimunotestu na pevné fázi (RIA) pro rekombinantní TNF receptory byly hodnoty ICso pro inhibici vazby 12sI-rhTNF na p55 a p75 receptory způsobenou D2E7 vypočítány jako 1,47 x 109 a
1,26 x 10-9, v příslušném pořadí. Snížení hodnot ICso v pevné fázi bylo pravděpodobně způsobeno vyšší hustotou receptorů v RIA formátu, protože neznačený rhTNF také inhiboval se stejnými hodnotami IC . ICso hodnoty pro inhibici vazby 125I-rhTNF na p55 a p75 receptory podle neznačeného rhTNF byly 2,31 x 10-9 a 2, 70 x 10”9 M, v příslušném pořadí.
C. Inhibice ELAM-1 exprese na HUVEC
Endotelové buňky lidské pupečníkové žíly (HUVEC) mohou být indukovány k expresi leukocytové adhesní molekuly endotelových buněk 1 (ELAM-1) na svém povrchu ošetřením rhTNFa, kde tyto molekuly mohou být detekovány reakcí HUVEC ošetřených rhTNFa s myší protilátkou proti lidské ELAM-1. Schopnost lidských • · · · · · ··« · ··· · · ··· ·« · ··· ·· · ·· ·· ·· ·a · · anti-hTNFa protilátek inhibovat tuto TNFa-indukovanou expresi ELAM-l na HUVEC byla vyšetřována následujícím způsobem: HUVEC (ATCC č. CRL 1730) byly umístěny v 96 jamkových plotnách (5 x 104 buněk na jamku) a byly inkubovány přes noc při 37 °C. Následující den byla v mikrotitrační plotně připravena sériová ředění lidské anti-hTNFa protilátky (1:10), počínaje 20 - 10 Mg/ml protilátky. Zásobní roztok rhTNFa byl připraven v koncentraci 4,5 ng/ml, aliquoty rhTNFa byly přidány do každé jamky obsahující protilátku a obsahy jamek byly dobře promíchány. Kontroly obsahovaly medium samotné, medium plus anti-hTNFa protilátku a medium plus rhTNFa. HUVEC plotny byly vyndány z inkubace přes noc při 37 °C a medium bylo opatrně aspirováno z každé jamky. 200 μΐ směsi protilátka-rhTNFa byly přeneseno do každé jamky HUVEC ploten. HUVEC plotny byly dále inkubovány při 37 °C po dobu 4 hodin.
Potom byla myší anti-ELAM-1 protilátka ředěna 1:1000 v RPMI. Medium v každé jamce HUVEC plotny bylo opatrně aspirováno, přidalo se 50 μΐ/jamku roztoku anti-ELAM-1 protilátky a HUVEC plotny se inkubovaly po dobu 60 minut při pokojové teplotě.
Roztok 125I-značené anti-myší Ig protilátky byl připraven v RPMI (přibližně 50000 cpm v 50 μΐ). Medium v každé jamce HUVEC ploten bylo opatrně aspirováno, jamky byly dvakrát promyty RPMI a do každé jamky se přidalo 50 μΐ roztoku 123I-značeného anti-myšího Ig. Plotny byly inkubovány po dobu 1 hodiny při pokojové teplotě a každá jamka byla potom promyta třikrát RPMI. Do každé jamky se přidalo se 180 μΐ 5% SDS pro lýzu buněk. Lyzát buněk z každé jamky se potom přenesl do zkumavky a byl odečítán ve scintilační komůrce.
Representativní výsledky jsou ukázány na obrázku 5. ICso hodnota pro D2E7 inhibici hTNFa-indukované exprese ELAM-l na HUVEC je těchto pokusech přibližně 6 x 10“11 M. Tyto výsledky • · • ·
ukazují, že lidská anti-hTNFa protilátka D2E7 inhibuje hTNFa-indukovanou expresi ELAM-1 na HUVEC v koncentracích přibližně ekvivalentních koncentracím myší anti-hTNFa mAb MAK 195.
V jiné sérii pokusů byla testována schopnost IgGl formy D2E7 inhibovat hTNFa-indukovanou expresi ELAM-1 na HUVEC způsobem, který byl popsán výše. Výsledky ze tří nezávislých pokusů a jejich průměr jsou shrnuty v tabulce 11, dále.
Tabulka 11: Inhibice TNFa-indukované exprese ELAM-1 na HUVEC
způsobená D2E7 IgGl.
Pokus IC (M) 50
1 1,95 x 10~χθ
2 1,69 x ΙΟ10
3 1,90 x 101θ
průměr 1,85 ± 0,14 x 10“χθ
Tato serie pokusů potvrdila, že D2E7, ve formě kompletního IgGl, inhibuje TNFa-indukovanou expresi ELAM-1 na HUVEC s průměrnou hodnotou ICso (M) 1,85 ± 0,14 x 10_χθ.
Neutralizační potenciál D2E7 IgGl byl také testován pro rhTNFa indukovanou expresi dvou dalších adhesních molekul, ICAM-1 a VCAM-1. Protže rhTNF titrační křivka pro ICAM-1 expresi byla v 16 hodinách velmi podobná křivce pro ELAM-1 expresi, byly v testu neutralizace protilátkou použity stejné koncentrace rhTNF. HUVEC byly inkubovány s rhYNF za přítomnosti různých koncentrací D2E7 při 37 °C v C02 inkubátoru po dobu 16 hodin a exprese ICAM-l byla měřena myší anti-ICAM-1 protilátkou následovanou X25I-značenou ovčí anti-myší protilátkou. Byly provedeny dva nezávislé pokusy a byly vypočítány hodnoty IC5O. Nepříbuzná lidská IgGl protilátka neinhibovala expresi ICAM-1.
Postup pro testování inhibice exprese VCAM-1 byl stejný jako postup pro expresi ELAM-1 s tou výjimkou, že místo anti-ELAM-l MAb byla použita anti-VCAM-1 MAb. Byly provedeny tři nezávislé pokusy a byly vypočítány hodnoty IC . Nepříbuzná lidská IgGl protilátka neinhibovala expresi VCAM-1.
Výsledky jsou shrnuty v tabulce 12, dále.
Tabulka 12: Inhibice exprese ICAM-1 a VCAM-1 způsobená D2E7 IgGl.
Inhibice ICAM-1 Inhibice VCAM-1
Pokus ICso (M) Pokus ICso (M)
1 1,84 X 10“1θ 1 1,03 x 10“3-0
2 2,49 x 10_χθ 2 9,26 x 1011
3 3 1,06 x 10-xo
průměr 2,17 ± 0,46 X 10-χο průměr 1,01 ± 0,01 x 10~χθ
Tyto pokusy ukazují, že ošetření endotelových buněk primární lidské pupečníkové žíly rhTNF vede k optimální expresi adhesních molekul: ELAM-1 a VCAM-1 ve čtvrté hodině a k maximálnímu zvýšení exprese ICAM-1 v 16 hodině. D2E7 byla schopná inhibovat expresi • 0 0 0 · 9 9 · · · 9 · ·· · · 9 9 9 «9 99 • · 9 9 9 · 099 9 999 9 9
9 9 99 9 999
9 999 9> 9· 09 09 tří adhesních molekul způsobem závislým na dávce. Hodnoty ICso pro inhibici ELAM-1, ICAM-1 a VCAM-1 byly 1,85 x 101θ, 2,17 x 10“10 a 1,01 x 1010 M, v příslušném pořadí. Tyto hodnoty jsou velmi podobné, což ukazuje na podobné požadavky pro dávku rhTNF aktivačního signálu pro indukci exprese ELAM-1, ICAM-1 a VCAM-1. Je zajímavé, že D2E7 byla podobně účinná v delším testu inhibice exprese ICAM-1. Test inhibice ICAM-1 vyžaduje 16 hodinovou společnou inkubaci rhTNF a D2E7 s HUVEC, oproti 4 hodinám nutným pro test inhibice ELAM-1 a VCAM-1. Protože má D2E7 pomalou rychlost disociace pro rhTNF je představitelné, že během 16 hodinové inkubační doby zde nebyla signifikantní kompetice TNF receptorů na HUVEC.
D. In vivo neutralizace hTNFa
Tři různé in vivo systémy byly použity pro demonstraci toho, že D2E7 je účinná v inhibici aktivity hTNFa in vivo.
1. Inhibice letality indukované TNF u D-galaktosaminem sensitizovaných myší
Injekce rekombinantního lidského TNFa (rhTNFa) myším sesitizovaným D-galaktosaminem způsobuje letalitu během 24 hodin. Činidla neutralizující TNFa brání letalitě v tomto modelu. Pro vyšetření schopnosti lidských anti-hTNFa protilátek neutralizovat hTNFa in vivo v tomto modelu byly C57B1/6 myším injikovány různé koncentrace D2E7 IgGl, nebo kontrolní protein, v PBS intraperitoneálně (i.p.). Myším byl o 30 hodin později podán 1 ptg rhTNFa a 20 mg D-galatosaminu v PBS i.p. a pozorování myší bylo provedeno o 24 hodin později. Toto množství rhTNFa a
D-galaktosaminu bylo předem určeno pro dosažení 80 - 90% letality • · · · · · · ·· ·· • ftftft · · · ft · · ft » • ftft · · · · ftft ftft • · · · · · ··· · ftftft · · ftftft ftft · ftftft u těchto myší.
Representativní výsledky, znázorněné jako sloupcový graf % přežívání versus koncentrace protilátky, jsou ukázány na obrázku
6. Černé sloupce představují D2E7, zatímco šrafováné sloupce představují MAK 195. Injekce 2,5 - 25 /zg D2E7 protilátky na myš chrání zvířata před TNFa-indukovanou létal i tou. Hodnota ED__o je přibližné 1 - 2,5 ^g/myš. Pozitivní kontrolní protilátka, MAK 195, byla podobná ve své protektivní schopnosti. Injekce D2E7 za absence rhTNFa neměla na myš žádné škodlivé účinky. Injekce nespecifické lidské IgG protilátky nezpůsobovala žádnou ochranu před TNFa-indukovanou letalitou.
Ve druhém pokusu bylo 49 myší rozděleno do 7 stejných skupin. Každá skupina dostala různé dávky D2E7 třicet minut před podáním LDeo dávky směsi rhTNF/D-galaktosaminu (1 μg rhTNF a 20 mg D-galaktosaminu na myš). Kontrolní skupina č. 7 dostala normální lidskou IgGl kappa protilátku v dávce 25 /zg/myš. Myši byly vyšetřovány o 24 hodin později. Přežívání pro každou skupinu je shrnuto v tabulce 13.
· 99 99
9 99 9 9 9 9
9 9 9 9 9 9
9 9 * · ···· • · f 9 9 9
99
9 9 9
9 99 • ··· · 9
9 9
Tabulka 13: 24 hodinové přežívání po podání D2E7
Skupina Přežívání (živé/celkem) Přežívání (%)
1 (bez protilátky) 0/7 0
2 (1 Mg) 1/7 14
3 (2,6 μ9) 5/7 71
4 (5,2 M9) 6/7 86
5 (26 Μ9) 6/7 86
6 (26 Mg; bez rhTNF) 7/7 100
7 (25 Mg Hu igGD 1/7 14
2. Inhibice pyrexie u králíků indukované TNF
Byla vyšetřována účinnost D2E7 v inhibici rhTNF indukované pyretické odpovědi u králíků. Skupině tří samic NZW králíků, každá o hmotnosti přibližně 2,5 kg, byla podána injekčně D2E7, rhTNF a imunitní komplexy D2E7 a rhTNF. Termistorovou sondou byla měřena rektální teplota na Kayeově snímači teplot každou minutu po dobu přibližně 4 hodin. Rekombinantní lidský TNF v salinickém roztoku, injikovaný v koncentraci 5 ^g/kg, zvyšoval teplotu o více než 0,4 °C v asi 45 minutě po injekci. Přípravek protilátky samotné, v salinickém roztoku v dávce 138 ^g/kg, nezvyšoval teplotu u králíků do 140 minuty po podání. Ve všech dalších pokusech byla D2E7 nebo kontrolní činidlo (lidský IgGl nebo sal inické vehikulum) podána injekčně i.v. králíkům a potom následovala po 15 minutách injekce rhTNF v salinickém roztoku v dávce 5 Mg/kg i.v.. Representativní výsledky z několika pokusů jsou shrnuty v tabulce 14, dále.
4 4· 44 44 44
444 4 44 4 4 44 4
4 4444 4444 • 4 4 4 4 4 444 4 444 4 4 •44 44 4 444
Tabulka 14: D2E7 zprostředkovaná inhibice pyrexie indukované rhTNF u králíků
Vzestup teploty* Molární Vrcholná
dávka °C poměr teplota
D2E7 rhTNF + % inhibice** D2E7 : minuty po
(M9/kg) rhTNF D2E7 rhTNF rhTNF
14 0,53 0,25 53 1 60
24 0,43 0,13 70 1,6 40
48 0,53 0,03 94 3,3 50
137 0,53 0,00 100 9,5 60
792 0,80 0,00 100 55 60
* = Vrcholná teplota **=% inhibice = (1-(vzestup teploty s rhTNF a D2E7/vzestupu teploty s rhTNF samotným)) x 100
Intravenosní předošetření D2E7 v dávce 14 ^g/kg částečně inhibovalo pyrogenní odpověď ve srovnání s králíky ošetřenými samotným salinickým roztokem. D2E7 podaná v dávce 13 7 /zg/kg zcela potlačila pyrogenní odpověď na rhTNF ve stejném pokusu. Ve druhém pokusu D2E7 podaná v dávce 24 μg/kg také částečně potlačovala pyrogenní odpověď, ve srovnání s králíky ošetřenými pouze salinickým roztokem. Molární poměr D2E7 k rhTNF byl v tomto pokusu 1/6:1. Ve třetím pokusu zcela potalčovala D2E7 injikovaná
i.v. v dávce 48 gg/kg (molární poměr D2E7:rhTNF = 3,3:1) pyrogenní odpověď, ve srovnání s králíky ošetřenými kontrolním lidským IgGl v salinickém roztoku v dávce 30 μg/kg. V posledním pokusu, králíci ošetření D2E7 (792 μg/kg) ve velmi vysokém
99 9 99 99 99 99
9 · 9 9 9 9 9 9 9 9 • 9 9 9 9 9 9 999 9 9 9 · 9 999 9 • 9 9 9
molárnim poměru k rhTNF (55:1) nevykazoval) jakékoliv zvýšení teploty během 4 hodin pozorování. Ošetření králíků imunitními komplexy generovanými ze směsi D2E7 a rhTNF inkubované po dobu 1 hodiny při 37 °C v molárnim poměru 55:1, bez následného podání rhTNF, také nevyvolalo jakýkoliv vzestup teploty ve stejném pokusu.
3. Prevence polyartritidy u Tgl97 transgenních myší
Účinek D2E7 na vývoj onemocnění byl zkoumán v transgenním myším modelu artritidy. Byly vyvinuty transgenní myši (Tgl97), které exprivují lidský přirozený TNF (modifikovaný ve 3' regionu za kódující sekvencí) a u těchto myší se vyvíjela chronická polyartritida se 100% incidencí ve věku 4-7 týdnů (pro další popis Tgl97 modelu polyartritidy viz EMBO J. (1991) 10: 4025 - 4031).
Transgenní zvířata byla identifikována PCR ve věku 3 dní. Vrhy transgenních myší byly rozděleny do šesti skupin. Léčebné protokoly pro šest skupin byly následující: Skupina 1 = bez léčby; Skupina 2 = salinický roztok (vehikulum); Skupina 3 = D2E7 v dávce 1,5 ^g/g; Skupina 4 = D2E7 v dávce 15 /xg/g; Skupina 5 = D2E7 v dávce 3 0 /xg/g; a Skupina 6 = IgGl kontrola v dávce 30 /zg/g.Do studie byly zavzaty také vrhy netransgenních myší a sloužily jako kontroly (Skupina 7 = netransgenní; bez léčby). Každá skupina dostávala tři injekce za týden i.p. ukázané léčby. Injekce probíhaly po dobu 10 týdnů. Každý týden byly pro každé zvíře zaznamenávány makroskopické změny v morfologii kloubů. V 10 týdnech byly myši utraceny a tkáň byla uchovávána ve formalinu. Bylo provedeno mikroskopické vyšetření tkáně.
• · ··
U každé myši byla na začátku každého týdne zaznamenána hmotnost v gramech. Ve stejnou dobu bylo také provedeno měření velikosti kloubů (v mm), jako měření závažnosti onemocnění, velikost kloubu byla určena jako průměr tří měření na kotníku pravé tlapky za použití mikrometru. Artritické skoré bylo zaznamenáváno týdně následujícím způsobem: 0 = žádná artritida (normální vzhled a flexe); + = mírná artritida (deformace kloubu); ++ = střední artritida (otok, deformace kloubu) a +++ = těžká artritida (detekována ankylosa při flexi a závažná porucha hybnosti). Na základě barvení řezů kloubu haematoxylinem/eosinem bylo stanoveno histopatologické skóre: 0 = bez detekovatelného onemocnění; l = proliferace synoviální membrány; 2 = těžké ztluštění synoviální membrány; 3 = destrukce chrupavky a erose kosti.
Účinek ošetření D2E7 na průměrnou velikost kloubu Tgl97 transgenních artritických myší je ukázán graficky na obrázku 9. Histopatologické a artritické skóre Tgl97 transgenních myší, ve věku 11 týdnů, je uvedeno v tabulce 15, dále.
4 ·· ·4 44 44 • · 4 4 4 4 4
4 4 4 4 44 • ··· 4 444 4 4 • · 4 4 4 4
44 44 44
Tabulka 15: Účinek D2E7 na histopatologické a artritické skóre u Tgl97 myší
Skupina Léčba Histopatologické skóre Artritické skóre
1 žádná 3 (7/7) +++ (7/7)
2 šalin, roztok 3 (8/8) +++ (8/8)
6 IgGl kontrola 3 (9/9) +++ (7/9)
3 D2E7 1,5 jzg/g 0 (6/8) 0 (8/8)
4 D2E7 15 gg/g 0 (7/8) 0 (8/8)
5 D2E7 30 Mg/g 0 (8/8) 0 (8/8)
Tento pokus ukazuje, že D2E7 protilátka má výrazné pozitivní účinky na transgenní myši expriwjuj ící přirozený lidský TNF (Tgl97) bez přítomnost artritidy na konci studované doby.
E. D2E7 neutralizace TNFa od jiných druhů
Vazebná specificita D2E7 byla vyšetřována měřením její schopnosti neutralizovat faktor nekrosy nádorů od jiných druhů primátů a od myší, za použití testu L929 cytotoxicity (jak je popsán v příkladu 4, sekci A, výše). Výsledky jsou shrnuty v tabulce 16, dále.
• 4 44
4 · 4 · 44
4 4 4
4 4
Tabulka 16: Schopnost D2E7 neutralizovat TNF od jiných druhů v L929 testu
TNFa* Zdroj IC SO neutra pro D2E7 Llizaci (M) **
člověk rekombinantní 7,8 x 10“11
šimpanz LPS-stimulované PBMC 5,5 x 10“11
pavián rekombinantní 6,0 x 10“xx
kosman LPS-stimulováné PBMC 4,0 x 10“χθ
makak LPS-stimulované PBMC 8,0 x 10“xx
(cynomolgus)
makak rhesus LPS-stimulované PBMC 3,0 x 10“xx
pes LPS-stimulované PBMC 2,2 x 10x°
prase rekombinantní 1,0 x 10“7
myš rekombinantní > 1,0 x 10”7
Výsledky v tabulce 16 ukazují, že D2E7 může neutralizovat aktivitu pěti primátích TNFa přibližně stejně jako lidského TNFa a, navíc, může neutralizovat aktivitu psího TNFa (přibližně desetkrát méně než lidského TNFa) a prasečího a myšího TNFa (přibližně 1000-krát méně než lidského TNFa). Kromě toho, vazba D2E7 na rhTNFa ve fázi roztoku nebyla inhibována dalšími cytokiny, jako je lymfotoxin (TNFE), IL-la, IL-Ιβ, IL-2, IL-4, IL-6, IL-8, IFNt a TGFS, což ukazuje, že D2E7 je velmi specifická pro svůj ligand TNFa.
44
4 4 4
4 44 •44 4 «
4 «
44
F. Chybění uvolňování cytokinů lidskou plnou krví inkubovanou S D2E7
V tomto příkladu byla vyšetřována schopnost D2E7 indukovat, samostatně, sekreci cytokinů nebo expresi povrchových molekul na normálních buňkách lidské krve. D2E7 byla inkubována s ředěnou plnou krví od tří různých normálních dárců v různých koncentracích po dobu 24 hodin. LPS pozitivní kontrola byla provedena ve stejnou dobu, v koncentraci předem určené pro stimulaci sekrece cytokinů imunokompetentními buňkami. Byly získány supernatanty a byly testovány v panelu deseti solubilních cytokinů, receptoru a adehesních molekul v ELISA kitu: IL-lce, IL-1E, antagonista IL-1 receptoru, IL-6, IL-8, TNFcť, solubilní TNF receptor I, solubilní TNF receptor II, solubilní ICAM-1 a solubilní E-selektin. Žádná signifikantní množství cytokinů nebo povrchových buněčných molekul nebyla měřena v důsledku společné inkubace D2E7 protilátky, v koncentraci 343 ^g/ml. Kontrolní kultury bez přidání protilátky také nevykazovaly žádná měřitelná množství cytokinů, zatímco LPS-kontrola vykazovala zvýšené hladiny v rozmezí mnoha pikogramů až nanogramů. Tyto výsledky ukazují, že D2E7 neindukuje sekreci cytokinů nebo povrchových buněčných proteinů buňkami plné krve nad normální hladinu v kulturách ex vivo.
• · ··· ·» 94
9 9 9
9 99
999 4 9 • · · • · · ·
Části předkládané přihlášky je připojený seznam sekvencí, jehož obsah je shrnut v následující tabulce:
SEQ ID NO: Řetězec Typ sekvence
protilátky Region
1 D2E7 VL aminokyselina
2 D2E7 VH aminokyselina
3 D2E7 VL CDR3 aminokyselina
4 D2E7 VH CDR3 aminokyselina
5 D2E7 VL CDR2 aminokyselina
6 D2E7 VH CDR2 aminokyselina
7 D2E7 VL CDR1 aminokyselina
8 D2E7 VH CDR1 aminokyselina
9 2SD4 VL aminokyselina
10 2SD4 VH aminokyselina
11 2SD4 VL CDR3 aminokyselina
12 EP B12 VL CDR3 aminokyselina
13 VL10E4 VL CDR3 aminokyselina
14 VL100A9 VL CDR3 aminokyselina
15 VLL100D2 VL CDR3 aminokyselina
16 VLL0F4 VL CDR3 aminokyselina
17 L0E5 VL CDR3 aminokyselina
18 VLLOG7 VL CDR3 aminokyselina
19 VLL0G9 VL CDR3 aminokyselina
20 VLLOH1 VL CDR3 aminokyselina
21 VLLOHIO VL CDR3 aminokyselina
22 VL1B7 VL CDR3 aminokyselina
23 VL1C1 VL CDR3 aminokyselina
24 VLO.1F4 VL CDR3 aminokyselina
·· 99 99 99
9 9 · · ·· · • · · · 9 9 99
9 · 999 9 999 · · • · · 9 9 9
99 99 99
SEQ ID NO: Řetězec
protilátky Region Typ sekvence
25 VLO.1H8 VL CDR3 aminokysel ina
26 LOE7.A VL CDR3 aminokyselina
27 2SD4 VH CDR3 aminokyselina
28 VH1B11 VH CDR3 aminokyselina
29 VH1D8 VH CDR3 aminokyselina
30 VH1A11 VH CDR3 aminokyselina
31 VH1B12 VH CDR3 aminokyselina
32 VH1E4 VH CDR3 aminokyselina
33 VH1F6 VH CDR3 aminokyselina
34 3C-H2 VH CDR3 aminokyselina
35 VH1-D2.N VH CDR3 aminokyselina
36 D2E7 VL nukleová kyselina
37 D2E7 VH nukleová kyselina
Odborníci v oboru poznají, nebo budou schopni zjistit běžným experimentováním mnoho ekvivalentů specifických provedení vynálezu, která jsou zde popsána. Takové ekvivalenty jsou zahrnuty následujícími patentovými nároky.
Seznam sekvencí (1) Obecné informace:
(i) Přihlašovatel:
(A) Jméno: BASF Aktiengesellschaft (B) Ulice: Carl-Bosch Str. 38 (C) Město: 67056 Ludwigshafen (D) Země: Rheinland-Pfalz (E) Stát: Německá Spolková Republika (ii) Název vynálezu: Lidské protilátky k lidskému TNFa (iii) Počet sekvencí: 37 (iv)
Adresa pro korespondenci
(A) Adresa: Lahive & Cocfield
(B) Ulice : 60 State Street,
(C) Město : Boston
(D) Stát: Massachusetts
(E) Země: USA
(F) ZIP: 02109-1875
suitě 510 (v) Počítačová čtecí forma:
(A) Typ media: Floppy disk (B) Počítač: IBM PC kompatibilní (C) Operační systém: PC-DOS/MS-DOS (D) Software: Patentln Release #1.0, verse #1.25
• · • 4 44 44 ·· • · · 4 · · · · ••44 4 · 44 • · *44 4 444 4 4 • · · 4 4 · (vi) Údaje o současné přihlášce:
(A) Číslo přihlášky:
(B) Datum podání:
(C) Klasifikace:
(vii) Předchozí data přihlášky:
(A) Číslo přihlášky: US 08/599226 (B) Datum podání: 9.2.1996 (C) Klasifikace:
(vii) Předchozí data přihlášky:
(A) Číslo přihlášky: US 60/031476 (B) Datum podání: 25.11.1996 (C) Klasifikace:
(viii) Zástupce/agent - informace (A) Jméno: DeConti, Giulio A., Jr.
(B) Registrační číslo: 31503 (C) Reference/číslo rejstříku: BBI-043CPPC (ix) Telekomunikační informace:
(A) Telefon: (617)227-7400 (B) Telefax: (617)227-5941 (2) Informace pro SEQ ID NO: 1:
(i) Charakteristiky sekvence:
(A) Délka: 107 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (D) Topologie: lineární
100 • ·
(ii) Typ molekuly: peptid (v) Typ fragmentu: vnitřní (xi) Popis sekvence:SEQ ID NO: 1:
Asp Ile Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gin Gly Ile Arg Asn Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Sér Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gin Pro
65 70 75 80
Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Arg Tyr Asn Arg Ala Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
(2) Informace pro SEQ ID NO: 2:
(i) Charakteristiky sekvence:
(A) Délka: 121 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (v) Typ fragmentu: vnitřní (xi) Popis sekvence:SEQ ID NO: 2:
Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Arg
S 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr
25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala 50 Ile Thr Trp Asn Ser 55 Gly His Ile Asp Tyr 60 Ala Asp Ser Val
Glu €5 Gly Arg Phe Thr Ile 70 Ser Arg Asp Asn Ala 75 Lys Asn Ser Leu Tyr 80
Leu Gin Met Asn Ser 85 Leu Arg Ala Glu Asp 90 Thr Ala Val Tyr Tyr 95 Cys
Ala Lys Val Ser 100 Tyr Leu Ser Thr Ala 105 Ser Ser Leu Asp Tyr' 110 Trp Gly
Gin Gly Thr 115 Leu Val Thr Val Ser 120 Ser
(2) Informace pro SEQ ID NO: 3:
(i) Charakteristiky sekvence:
(A) Délka: 9 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (v) Typ fragmentu: vnitřní (ix) Vlastnosti:
(A) Jméno/klíč: modifikované místo (B) Umístění: 9 (C) Jiné informace: /Xaa je Thr nebo Ala
102 • · • ·
(xi) Popis sekvence:SEQ ID NO: 3:
Gin Arg Tyr Asn Arg Ala Pro Tyr Xaa 1 5 (2) Informace pro SEQ ID NO: 4:
(i) Charakteristiky sekvence:
(A) Délka: 12 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (v) Typ fragmentu: vnitřní
Vlastnosti:
(A) Jméno/klíč: modifikované místo (B) Umístění: 12 (C) Jiné informace: /Xaa je Thr nebo Ala
Popis sekvence:SEQ ID NO: 4:
Ser Tyr Leu Ser Thr Ala Ser Ser Leu Asp Xaa 5 · 10 (2) Informace pro SEQ ID NO: 5:
(i) Charakteristiky sekvence:
(A) Délka: 7 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (D) Topologie: lineární (ix) (xi)
Val
103 (ii) Typ molekuly: peptid (v) Typ fragmentu: vnitřní (xi) Popis sekvence:SEQ ID NO: 5:
Ala Ala Ser Thr Leu Gin Ser 1 5 (2) Informace pro SEQ ID NO: 6:
(i) Charakteristiky sekvence:
(A) Délka: 17 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (v) Typ fragmentu: vnitřní (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 6:
Ala Ile Thr Trp Asn Ser Gly His Ile Asp Tyr Ala Asp Ser Val Glu 1 5 10 15
Gly (2) Informace pro SEQ ID NO: 7:
(i) Charakteristiky sekvence:
(A) Délka: 11 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid
104
(v) Typ fragmentu: vnitřní (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 7:
Arg Ala Ser Gin Gly Ile Arg Asn Tyr Leu Ala 1 5 10 (2) Informace pro SEQ ID NO: 8:
(i) Charakteristiky sekvence:
(A) Délka: 5 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (v) Typ fragmentu: vnitřní (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 8:
Asp Tyr Ala Met His 1 5 (2) Informace pro SEQ ID NO: 9:
(i) Charakteristiky sekvence:
(A) Délka: 107 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid v
• ·
105 • · · <
» · ·· • •4 · 4
4 I ·· 44 (v) Typ fragmentu: vnitřní
(xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 9:
Asp Ile Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Ile Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gin Gly Ile Arg Asn Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gin Pro
65 70 75 B0
Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Lys Tyr Asn Ser Ala Pro Tyr
85 90 95
Ala Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
(2) Informace pro SEQ ID NO: 10:
(i) Charakteristiky sekvence:
(A) Délka: 121 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (v) Typ fragmentu: vnitřní (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 10:
106
Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr
20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Asp Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Thr Trp Asn Ser Gly His Ile Asp Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Glu Gly Arg Phe Ala Val Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ala Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Lys Ala Ser Tyr Leu Ser Thr Ser Ser Ser Leu Asp Asn Trp Gly
100 105 - 110
Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 (2) Informace pro SEQ ID NO: 11:
(i) Charakteristiky sekvence:
(A) Délka: 9 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (v) Typ fragmentu: vnitřní (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 11:
Gin Lys Tyr Asn Ser Ala Pro Tyr Ala 1 5 (2) Informace pro SEQ ID NO: 12:
(i) Charakteristiky sekvence:
107 ·· ·· • · · I • · ·« ··· · 4 • · « ·· ·· (A) Délka: 9 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (v) Typ fragmentu: vnitřní (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 12:
Gin Lys Tyr Asn Arg Ala Pro Tyr Ala 1 5 (2) Informace pro SEQ ID NO: 13:
(i) Charakteristiky sekvence:
(A) Délka: 9 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (v) Typ fragmentu: vnitřní (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 13:
Gin Lys Tyr Gin Arg Ala Pro Tyr Thr 1 5 (2) Informace pro SEQ ID NO: 14:
(i) Charakteristiky sekvence:
(A) Délka: 9 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (D) Topologie: lineární
108 ·
··· • 9
99 • 9 9 4
9 99
999 9 4 (ii) Typ molekuly: peptid (v) Typ fragmentu: vnitřní (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 14:
Gin Lys Tyr Ser Ser Ala Pro Tyr Thr 1 5 (2) Informace pro SEQ ID NO: 15:
(i) Charakteristiky sekvence:
(A) Délka: 9 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (v) Typ fragmentu: vnitřní (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 15:
Gin Lys Tyr Asn Ser Ala Pro Tyr Thr 1 5 (2) Informace pro SEQ ID NO: 16:
(i) Charakteristiky sekvence:
(A) Délka: 9 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid
109 (v) Typ fragmentu: vnitřní (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 16:
Gin Lys Tyr Asn Arg Ala Pro Tyr Thr 1 5 (2) Informace pro SEQ ID NO: 17:
(i) Charakteristiky sekvence:
(A) Délka: 9 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (v) Typ fragmentu: vnitřní (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 17:
Gin Lys Tyr Asn Ser Ala Pro Tyr Tyr 1 5 (2) Informace pro SEQ ID NO: 18:
(i) Charakteristiky sekvence:
(A) Délka: 9 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (v) Typ fragmentu: vnitřní (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 18:
Gin Lys Tyr Asn Ser Ala Pro Tyr Asn 1 5 • to ·· • ·· · • to ·· ··· · · • · · ·· ·· • toto
110 to· • · to • ·· • · * · ·♦ (2) Informace pro SEQ ID NO: 19:
(i) Charakteristiky sekvence:
(A) Délka: 9 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (v) Typ fragmentu: vnitřní (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 19:
Gin Lys Tyr Thr Ser Ala Pro Tyr Thr 1 5 (2) Informace pro SEQ ID NO: 20:
(i) Charakteristiky sekvence:
(A) Délka: 9 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (v) Typ fragmentu: vnitřní (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 20:
Gin Lys Tyr Asn Arg Ala Pro Tyr Asn 1 5 (2) Informace pro SEQ ID NO: 21:
111 • fl · flfl fl· flfl flfl ···· · · · · flfl·· • · · flflflfl flflflfl flfl flflflfl flfl· fl flflfl fl fl • flfl flfl · ··· • fl flflfl flfl flfl flfl flfl (i) Charakteristiky sekvence:
(A) Délka: 9 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (v) Typ fragmentu: vnitřní (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 21:
Gin Lys Tyr Asn Ser Ala Ala Tvr Ser 1 5 (2) Informace pro SEQ ID NO: 22:
(i) Charakteristiky sekvence:
(A) Délka: 9 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (v) Typ fragmentu: vnitřní (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 22:
Gin Gin Tyr Asn Ser Ala Pro Asp Thr 1 5 (2) Informace pro SEQ ID NO: 23:
(i) Charakteristiky sekvence:
(A) Délka: 9 aminokyselin
112 ·· ·· 44 • 44 4 4 44 4
4 4 4 4 4 44
4 4444 4444 4
4 4 4 4 4 (B) Typ: aminokyselina (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (v) Typ fragmentu: vnitřní (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 23:
Gin Lys Tyr Asn Ser Asp Pro Tyr Thr 1 5 (2) Informace pro SEQ ID NO: 24:
(i) Charakteristiky sekvence:
(A) Délka: 9 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (v) Typ fragmentu: vnitřní (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 24:
Gin Lys Tyr Ile Ser Ala Pro Tyr Thr 1 5 (2) Informace pro SEQ ID NO: 25:
(i) Charakteristiky sekvence:
(A) Délka: 9 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina
113
4« 44
4 4 4 4 4 4 ••4 «44« • 4444 44 44 4
4 4 4 4 (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (v) Typ fragmentu: vnitřní (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 25:
Gin Lys Tyr Asn Arg Pro Pro Tyr Thr 1 5 (2) Informace pro SEQ ID NO: 26:
(i) Charakteristiky sekvence:
(A) Délka: 9 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (v) Typ fragmentu: vnitřní (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 26:
Gin Arg Tyr Asn Arg Ala Pro Tyr Ala 1 S (2) Informace pro SEQ ID NO: 27:
(i) Charakteristiky sekvence:
(A) Délka: 12 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (D) Topologie: lineární
114 • · · · · J *99* · 9 999 9 999 9 9
9 9 9 9 9 (ii) Typ molekuly: peptid (v) Typ fragmentu: vnitřní (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 27:
Ala Ser Tyr Leu Ser Thr Ser Ser Ser Asp Asn 1 5 10 (2) Informace pro SEQ ID NO: 28:
(i) Charakteristiky sekvence:
(A) Délka: 12 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (v) Typ fragmentu: vnitřní (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 28:
Ala Ser Tyr Leu Ser Thr Ser Ser Ser Leu Asp Lys 1 5 10 (2) Informace pro SEQ ID NO: 29:
(i) Charakteristiky sekvence:
(A) Délka: 12 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid
115
·* flfl flfl flfl • » · fl · ·· fl • · · · · · flfl • · · ··· · ··· · · flfl · · · · • ·· flfl flfl ·· (v) Typ fragmentu: vnitřní (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 29:
Ala Ser Tyr Leu Ser Thr Ser Ser Ser Leu Asp Tyr 1 5 10 (2) Informace pro SEQ ID NO: 30:
(i) Charakteristiky sekvence:
(A) Délka: 12 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (v) Typ fragmentu: vnitřní (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 30:
Ala Ser Tyr Leu Ser Thr Ser Ser Ser Leu Asp Asp 1 5 10 (2) Informace pro SEQ ID NO: 31:
(i) Charakteristiky sekvence:
(A) Délka: 12 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (v) Typ fragmentu: vnitřní • · • · » « • ·
116 (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 31:
'Ala Ser Tyr Leu Ser Thr Ser Phe Ser Leu Asp Tyr χ S 10 (2) Informace pro SEQ ID NO: 32:
(i) Charakteristiky sekvence:
(A) Délka: 12 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (v) Typ fragmentu: vnitřní (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 32:
Ala Ser Tyr Leu Ser Thr Ser Ser Ser Leu His Tyr 15 10 (2) Informace pro SEQ ID NO: 33:
(i) Charakteristiky sekvence:
(A) Délka: 12 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (v) Typ fragmentu: vnitřní (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 33:
Ala Ser Phe Leu Ser Thr Ser Ser Ser Leu Glu Tyr 1 5 io • · · • · · · · • ft
117 (2) Informace pro SEQ ID NO: 34:
(i) Charakteristiky sekvence:
(A) Délka: 12 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (v) Typ fragmentu: vnitřní (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 34:
Ala Ser Tyr Leu Ser Thr Ala Ser Ser Leu Glu Tyr X 5 10 (2) Informace pro SEQ ID NO: 35:
(i) Charakteristiky sekvence:
(A) Délka: 12 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (v) Typ fragmentu: vnitřní (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 35:
Val Ser Tyr Leu Ser Thr Ala Ser Ser Leu Asp Asn 15 10 (2) Informace pro SEQ ID NO: 36:
(i) Charakteristiky sekvence:
(A) Délka: 321 párů baží (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: dvojitý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: cDNA (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 36:
GACATCCAGA TGACCCAGTC TCCATCCTCC CTGTCTGCAT CTGTAGGGGA CAGAGTCACC 60
ATCACTTGTC GGGCAAGTCA GGGCATCAGA AATTACTTAG CCTGGTATCA GCAAAAACCA 120
GGGAAAGCCC CTAAGCTCCT GATCTATGCT GCATCCACTT TGCAATCAGG GGTCCCATCT 180
CGGTTCAGTG GCAGTGGATC TGGGACAGAT TTCACTCTCA CCATCAGCAG CCTACAGCCT 240
GAAGATGTTG CAACTTATTA CTGTCAAAGG TATAACCGTG CACCGTATAC TTTTGGCCAG 300
GGGACCAAGG TGGAAATCAA A 321
(2) Informace pro SEQ ID NO: 37:
(i) Charakteristiky sekvence:
(A) Délka: 363 párů baží (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: dvojitý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: cDNA
(xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 37:
GAGGTGCAGC TGGTGGAGTC TGGGGGAGGC TTGGTACAGC CCGGCAGGTC CCTGAGACTC 60
TCCTGTGCGG CCTCTGGATT CACCTTTGAT GATTATGCCA TGCACTGGGT CCGGCAAGCT 120
CCAGGGAAGG GCCTGGAATG GGTCTCAGCT ATCACTTGGA ATAGTGGTCA CATAGACTAT 180
GCGGACTCTG TGGAGGGCCG ATTCACCATC TCCAGAGACA ACGCCAAGAA CTCCCTGTAT 240
CTGCAAATGA ACAGTCTGAG AGCTGAGGAT ACGGCCGTAT ATTACTGTGC GAAAGTCTCG 300
TACCTTAGCA CCGCGTCCTC CCTTGACTAT TGGGGCCAAG GTACCCTGGT CACCGTCTCG 360
AGT

Claims (66)

  1. IPeLfcenfcoAz^és nároky
    1. Izolovaná lidská protilátka, nebo její antigen-vazebná část, která disociuje z lidského TNFa s K 1 x 10® nebo menší a Ko£f rychlostní konstantou 1 x 10-3s-:L nebo menší, jak jsou obě určeny povrchovou plasmonovou resonancí, a která neutralizuje cytotoxicitu lidského TNFa ve standartním in vitro L929 testu s IC 1 x 10'7 * M nebo menší.
    SO
  2. 2. Izolovaná lidská protilátka, nebo její antigen-vazebná část, podle nároku 1, která disociuje z lidského TNFa s K rychlostní konstantou 5 x 10“4 s_1 nebo menší.
  3. 3. Izolovaná lidská protilátka, nebo její antigen-vazebná část, podle nároku 1, která disociuje z lidského TNFa s Κθ££ rychlostní konstantou 1 x 10“4 s_x nebo menší.
  4. 4. Izolovaná lidská protilátka, nebo její antigen-iázebná část, podle nároku 1, která neutralizuje cytotoxicitu lidského TNFa ve standartním in vitro L929 testu s IC l x 10® M nebo menší.
  5. 5 O
    5. Izolovaná lidská protilátka, nebo její antigen-iazebná část, podle nároku 1, která neutralizuje cytotoxicitu lidského TNFa ve standartním in vitro L929 testu s IC 1 x 10~9 M nebo menší.
    5 O
  6. 6. Izolovaná lidská protilátka, nebo její antigen-^zebná část, podle nároku 1, která neutralizuje cytotoxicitu lidského TNFa ve standartním in vitro L929 testu s IC 1 x 10_1° M nebo menší.
    5 O
  7. 7. Izolovaná lidská protilátka, nebo její antigen-vazebná část, podle nároku 1, která je rekombinantní protilátka, nebo • · ·
    121 • to její antigen-vazebná část.
  8. 8. Izolovaná lidská protilátka, nebo její antigen-vazebná část, podle nároku 1, která inhibuje lidským TNFa indukovanou expresi ELAM-1 na endotelových buňkách lidské pupečníkové žíly.
  9. 9. Izolovaná lidská protilátka, nebo její antigen-vazebná část, s následujícími charakteristikami:
    a) disociuje z lidského TNFa s K rychlostní konstantou
    I x 10”3s“x nebo menší, jak je určeno povrchovou plasmonovou resonancí;
    b) má CDR3 doménu lehkého řetězce obsahující aminokyselinovou sekvenci SEQ ID NO: 3, nebo sekvenci modifikovanou ze SEQ ID NO:
    3 jednou substitucí alaninu v pozici 1, 4, 5, 7 nebo 8 nebo jednou až pěti konzervativními aminokyselinovými substitucemi v pozicích 1, 3, 4, 6, 7, 8 a/nebo 9.
    c) má CDR3 doménu těžkého řetězce obsahující aminokyselinovou sekvenci SEQ ID NO: 4, nebo sekvenci modifikovanou ze SEQ ID NO:
    4 jednou substitucí alaninu v pozici 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10 nebo
    II nebo jednou až pěti konzervativními aminokyselinovými substitucemi v pozicích 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10, 11 a/nebo 12.
  10. 10. Izolovaná lidská protilátka podle nároku 9, nebo její antigen vazebná část, která disociuje z lidského TNFa s rychlostní konstantou 5 x 10“4 s_x nebo menší.
  11. 11. Izolovaná lidská protilátka podle nároku 9, nebo její antigen vazebná část, která disociuje z lidského TNFa s Koff
    .. · ·· ·· ·· ·· ·· ·· · · · · · · · · ίϊ . ···· ···· ; » , . . · ♦»· · ··· · · ·..· ·..· ..· ..·····
    122 rychlostní konstantou 1 χ ΙΟ4 s1 nebo menší.
  12. 12. Izolovaná lidská protilátka, nebo její antigen-vazebná část, s variabilním regionem lehkého řetězce (LCVR) majícím CDR3 doménu obsahující aminokyselinovou sekvenci SEQ ID NO: 3, nebo modifikovanou ze SEQ ID NO: 3 jednou alaninovou substitucí v pozici 1, 4, 5, 7 nebo 8 a s variabilním regionem těžkého řetězce (HCVR) majícím CDR3 doménu obsahující aminokyselinovou sekvenci SEQ ID NO: 4, nebo modifikovanou ze SEQ ID NO: 4 jednou alaninovou substitucí v pozici 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10 nebo 11.
  13. 13. Izolovaná lidská protilátka, nebo její antigen-vazebná část, podle nároku 12, kde LCVR má dále CDR2 doménu obsahující aminokyselinovou sekvenci SEQ ID NO: 5a HCVR má dále CDR2 doménu obsahující aminokyselinovou sekvenci SEQ ID NO: 6.
  14. 14. Izolovaná lidská protilátka, nebo její antigen-vazebná část, podle nároku 13, kde LCVR má dále CDRl doménu obsahující aminokyselinovou sekvenci SEQ ID NO: 7a HCVR má dále CDRl doménu obsahující aminokyselinovou sekvenci SEQ ID NO: 8.
  15. 15. Izolovaná lidská protilátka, nebo její antigen-vazebná část, s variabilním regionem lehkého řetězce (LCVR) obsahujícím aminokyselinovou sekvenci SEQ ID NO: las variabilním regionem těžkého řetězce (HCVR) obsahujícím aminokyselinovou sekvenci SEQ ID NO: 2.
  16. 16. Izolovaná lidská protilátka podle nároku 15, která má konstantní region těžkého řetězce IgGl.
  17. 17. Izolovaná lidská protilátka podle nároku 15, která má • 4
    123
    44 44
    4 4 4 4
    4 4 4 4
    44 4 444
    4 4 4
    44 44 > 4 4 «
    I 4 4 4
    4 4 4 4 <
    4 4 <
    • 4 <4 konstantní region těžkého řetězce IgG4.
  18. 18. Izolovaná lidská protilátka podle nároku 15, která je Fab fragment.
  19. 19. Izolovaná lidská protilátka podle nároku 15, která je jednořetězcový Fv fragment.
  20. 20. Izolovaná lidská protilátka, nebo její antigen-vazebná část, s variabilním regionem lehkého řetězce (LCVR) majícím CDR3 doménu obsahující aminokyselinovou sekvenci vybranou ze skupiny Skládající se z SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ
    ID NO: 13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16, SEQ ID
    NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO:
  21. 21, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 25,
    SEQ ID NO: 26 nebo s variabilním regionem těžkého řetězce (HCVR) majícím CDR3 doménu obsahující aminokyselinovou sekvenci vybranou ze skupiny skládající se ze SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 31, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 33 a SEQ ID NO: 34.
    21. Rekombinantní lidská protilátka, nebo její antigen-vazebná část, která neutralizuje aktivitu lidského TNFa, ale ne aktivitu lidského TNFS.
  22. 22. Rekombinantní lidská protilátka, nebo její antigen-vazebná část, podle nároku 21, která také neutralizuje aktivitu šimpanzího TNFa a alespoň jednoho dalšího primátího TNFa vybraného ze skupiny skládající se z paviáního TNFa, kosmaního TNFa, makak (cynomolgus) TNFa a makak rhesus TNFa.
    • 4 4 4
    4 4
    44 «
    124
  23. 23. Rekombinantní lidská protilátka, nebo její antigen-vazebná část, podle nároku 22, která také neutralizuje aktivitu psího TNFa.
  24. 24. Rekombinantní lidská protilátka, nebo její antigen-vazebná část, podle nároku 22, která také neutralizuje aktivitu prasečího TNFa.
  25. 25. Izolovaná nukleová kyselina kódující CDR3 doménu lehkého řetězce obsahující aminokyselinovou sekvenci SEQ ID NO:
    3, nebo modifikovanou ze SEQ ID NO: 3 jednou alaninovou substitucí v pozici 1, 4, 5, 7 nebo 8 nebo jednou až pěti konzervativními aminokyselinovými substitucemi v pozicích 1, 3,
    4, 6, 7, 8 a/nebo 9.
  26. 26. Izolovaná nukleová kyselina podle nároku 25, která kóduje variabilní region lehkého řetězce (LCVR) protilátky.
  27. 27. Izolovaná nukleová kyselina podle nároku 26, kde CDR2 doména LCVR protilátky obsahuje aminokyselinovou sekvenci SEQ ID NO: 5.
  28. 28. Izolovaná nukleová kyselina podle nároku 27, kde CDR1 doména LCVR protilátky obsahuje aminokyselinovou sekvenci SEQ ID NO: 7.
  29. 29. Izolovaná nukleová kyselina kódující CDR3 doménu těžkého řetězce obsahující aminokyselinovou sekvenci SEQ ID NO:
    4, nebo modifikovanou ze SEQ ID NO: 4 jednou alaninovou substitucí v pozici 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10 nebo 11 nebo jednou až pěti konzervativními aminokyselinovými substitucemi v pozicích
    125
    2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10, 11 a/nebo 12.
  30. 30. Izolovaná nukleová kyselina podle nároku 29, která kóduje variabilní region těžkého řetězce (LCVR) protilátky.
  31. 31. Izolovaná nukleová kyselina podle nároku 30, kde CDR2 doména HCVR protilátky obsahuje aminokyselinovou sekvenci SEQ ID NO: 6.
  32. 32. Izolovaná nukleová kyselina podle nároku 31, kde CDRl doména HCVR protilátky obsahuje aminokyselinovou sekvenci SEQ ID NO: 8.
  33. 33. Izolovaná nukleová kyselina kódující CDR3 doménu obsahující aminokyselinovou sekvenci vybranou ze skupiny skládající se z:
    SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO:
    17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 21,
    SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 25, SEQ
    ID NO: 26, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 29, SEQ ID
    NO: 30, SEQ ID NO: 31, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 33 a SEQ ID NO: 34 .
  34. 34. Izolovaná nukleová kyselina kódující variabilní region lehkého řetězce protilátky obsahující aminokyselinovou sekvenci SEQ ID NO: 1.
  35. 35. Izolovaná nukleová kyselina podle nároku 34, která kóduje variabilní region lehkého řetězce protilátky a konstantní region lehkého řetězce protilátky.
    126
  36. 36. Izolovaná nukleová kyselina podle nároku 35, která je v rekombinantním expresním vektoru.
  37. 37. Izolovaná nukleová kyselina kódující variabilní region těžkého řetězce protilátky obsahující aminokyselinovou sekvenci SEQ ID NO: 2.
  38. 38. Izolovaná nukleová kyselina podle nároku 37, která kóduje variabilní region těžkého řetězce protilátky a konstantní region těžkého řetězce protilátky.
  39. 39. Izolovaná nukleová kyselina podle nároku 38, kde konstantní region těžkého řetězce protilátky je konstantní region IgGl.
  40. 40. Izolovaná nukleová kyselina podle nároku 38, kde konstantní region těžkého řetězce protilátky je konstantní region IgG4.
  41. 41. Izolovaná nukleová kyselina podle nároku 38, která je v rekombinantním expresním vektoru.
  42. 42. Rekombinantní expresní vektor kódující:
    a) lehký řetězec protilátky mající variabilní region obsahující aminokyselinovou sekvenci SEQ ID NO: 1.
    b) těžký řetězec protilátky mající variabilní region obsahující aminokyselinovou sekvenci SEQ ID NO: 2.
  43. 43. Hostitelská buňka, do které byl vložen rekombinantní expresní vektor podle nároku 42.
    • 4 44
    4 4 4 4 * 4 44
    444 4 4
    4 4 4
    4 4 4 4
    127 • 4
    4 4
    4 4
    4 ·
  44. 44. Způsob syntesy lidské protilátky, která se váže na lidský TNFa, vyznačující se tím, že zahrnuje kultivaci hostitelské buňky podle nároku 43 v kultivačním mediu, dokud není lidská protilátka, která se váže na lidský TNFa, syntetizována buňkou.
  45. 45. Farmaceutický přípravek, vyznačující se tím, že zahrnuje protilátku, nebo její antigen vazebnou část, podle kteréhokoliv z nároků 1 až 24 a farmaceuticky přijatelný nosič.
  46. 46. Farmaceutický přípravek podle nároku 45, vyznačující se tím, že dále zahrnuje alespoň jedno další terapeutické činidlo pro léčbu onemocnění, při kterých je aktivita TNFa škodlivá.
  47. 47. Způsob inhibice aktivity lidského TNFa, vyznačující se tím, že zahrnuje kontaktování lidského TNFa s protilátkou, nebo její antigen vazebnou částí, podle kteréhokoliv z nároků 1 až 24, takže je aktivita lidského TNFa inhibována.
  48. 48. Způsob inhibice aktivity lidského TNFa u lidského subjektu trpícího onemocněním, u kterého je aktivita TNFa škodlivá, vyznačující se tím, že zahrnuje podání protilátky, nebo její antigen-vazebné části, podle kteréhokoliv z nároků 1 až 24 subjektu, takže je aktivita lidského TNFa v lidském subjektu inhibována.
  49. 49. Způsob podle nároku 48,vyznačující se tím, že onemocněním je sepse.
    128 „ ·· • φ · φ φ φ • > · φ φφ • φφ φ φφ« > · φ φφφ
  50. 50. Způsob podle nároku 49 vyznačující se tím, že protilátka je podána lidskému subjektu spolu s cytokinem interleukinem-6 (IL-6) nebo je podána lidskému subjektu, který má sérovou nebo plasmatickou koncentraci IL-6 vyšší než 500 pg/ml.
  51. 51. Způsob podle nároku 48 vyznačující se tím, že onemocněním je autoimunitní onemocnění.
  52. 52. Způsob podle nároku 51,vyznačující se tím, že autoimunitní onemocnění je vybráno ze skupiny skládající se z revmatoidní artritidy, revmatoidní spondylitidy, osteoartritidy a dnavé artritidy.
  53. 53. Způsob podle nároku 51,vyznačující se tím, že autoimunitní onemocnění je vybráno ze skupiny skládající se z alergie,roztroušené sklerosy, autoimunitního diabetů, autoimunitní uveitidy a nefrotického syndromu.
  54. 54. Způsob podle nároku 48 vyznačující se tím, že onemocněním je infekční onemocnění.
  55. 55. Způsob podle nároku 48 vyznačuj ící se tím, že onemocněním je rejekce transplantátu nebo reakce štěpu proti hostiteli.
  56. 56. Způsob podle nároku 48 vyznačující se tím, že onemocněním je malignita.
  57. 57. Způsob podle nároku 48 vyznačující se tím, že onemocněním je plicní onemocnění.
    129 • 4 4 4 4 ·· *
    4 4 4 4 4 · ·· • φ 444 ♦ ··· · * < 4 4 4 4 4
    44 44 44 ·*
  58. 58. Způsob podle nároku 48 vyznačuj ící že onemocněním je střevní onemocnění.
  59. 59. Způsob podle nároku 48 vyznačuj ící že onemocněním je srdeční onemocnění.
  60. 60. Způsob podle nároku 48 vyznačuj ící se tím, se tím, se tím, že onemocnění je vybráno ze skupiny skládající se ze zánětlivých onemocnění kostí, resorpčních onemocnění kostí, alkoholické hepatitidy, virové hepatitidy, fulminantní hepatitidy, poruch koagulace, popálenin, reperfúsního poškození, tvorby keloidů, tvorby jizevnaté tkáně, pyrexie, onemocnění periodontu, obezity a radiační toxicity.
  61. 61. Použití protilátky, nebo její antigen vazebné části, podle kteréhokoliv z nároků 1 až 24 k výrobě léku pro léčbu onemocnění, při kterých je aktivita TNFa škodlivá.
  62. 62. Použití podle nároku 61, kde onemocněním je sepse.
  63. 63. Použití podle nároku 62, kde protilátka je podána lidskému subjektu spolu s cytokinem interleukinem-6 (IL-6) nebo je podána lidskému subjektu, který má sérovou nebo plasmatickou koncentraci IL-6 vyšší než 500 pg/ml.
  64. 64. Použití podle nároku 61, kde onemocněním je autoimunitní onemocnění.
  65. 65. Použití podle nároku 64, kde autoimunitní onemocnění je vybráno ze skupiny skládající se z revmatoidní artritidy, • · ' ···
    I · • · ·
    130 revmatoidní spondylitidy, osteoartritidy a dnavé artritidy.
  66. 66. Použití podle nároku 64, kde autoimunitní onemocnění je vybráno ze skupiny skládající se z alergie, roztroušené sklerosy, autoimunitního diabetů, autoimunitní uveitidy a nefrotického syndromu.
    67. Použití onemocnění. podle nároku 61, kde onemocněním je infekční 68. Použití transplantátu podle nároku 61, kde onemocněním je nebo reakce štěpu proti hostiteli. rejekce 69. Použití podle nároku 61, kde onemocněním je malignita. 70. Použití onemocnění. podle nároku 61, kde onemocněním je plicní 71. Použití onemocnění. podle nároku 61, kde onemocněním je střevní 72. Použití onemocnění. podle nároku 61, kde onemocněním je srdeční 73. Použití podle nároku 61, kde onemocnění je vybráno ze
    skupiny skládající se ze zánětlivých onemocnění kostí, resorpčních onemocnění kostí, alkoholické hepatitidy, virové hepatitidy, fulminantní hepatitidy, poruch koagulace, popálenin, reperfúsního poškození, tvorby keloidů, tvorby jizevnaté tkáně, pyrexie, onemocnění periodontu, obezity a radiační toxicity.
    ·· • ·
    131 fl fl flfl • · • flfl · • · • fl flfl
    74. Farmaceutický přípravek podle nároku 46, vyznačující se tím, že další terapeutické činidlo je vybráno ze skupiny zahrnující nesteroidní protizánětlivá léčiva; cytokiny potlačující protizánětlivá léčiva; CDP-571/BAY-10-3356; cA2; 75 kd TNFR-IgG; 55 kd TNFR-IgG; IDEC-CE9.1/SB 210396; DAB 486-IL-2 a DAB 389-IL-2; Anti-Tac; IL-4; IL-10; agonisty IL-4, agonisty IL-10;
    IL-1RA; TNF-bp/s-TNFR; S284; R973401; MK-966; Iloprost; methotrexat; thalidomid a léky příbuzné thalidomidu; leflunomid; kyselinu tranexamovou; T-614; prostaglandin El; Tenidap;
    Naproxen; Meloxicam; Piroxicam; Diclofenac; Indometacin; Sulfasalazin; Azathioprin; ICE inhibitory; zap-70 inhibitiry; lek inhibitory; VEGF inhibitory ; VEGF-R inhibitory; kortikosteroidy; inhibitory TNF-konvertasy; anti-IL-12 protilátky;
    interleukin-11; interleukin-13; inhibitory interleukinu-17; zlato; penicilamin; chlorokin; hydroxychlorokin; chlorambucil; cyklofosfamid, cyklosporin; anti-thymocytární globulin; anti-CD-4 protilátky; CD5-toxiny; orálně podávané peptidy; kolagen; lobenzarit dvojsodný; cytokiny regulující činidla HP228 a HP466; ICAM-1 antisense fosforothioatové oligodeoxynukleotidy; solubilní komplementový receptor 1; prednison; orgotein; glykosaminoglykan polysulfat; minocyklin; anti-IL-2R protilátky; mořské lipidy; botanické lipidy; auranofin; fenylbutazon; kyselinu meklofenamovou; kyselinu flufenamovou; intravenosní imunitní globulin; zileuton; kyselinu mykofenolovou; takrolimus; sirolimus; amiprilos; kladribin; azaribin; budenosid; epidermální růstový faktor; aminosalicylaty; 6-merkaptopurin; metronidazol; inhibitory lipooxygenasy; mesalamin; olsalazin; balsalazid; antioxidanty; inhibitory tromboxanu; antagonisty IL-1 receptoru; anti-IL-Ιβ monoklonální protilátky; anti-IL-6 monoklonální protilátky; růstové faktory; inhibitory elastasy;
    ··· · « • · « ·· ··
    132 ·· pyridinyl-imidazolové sloučeniny; proléčiva prenisolonu, dexamethasonu nebo budesonidu konjugovaná s glukuronidem; proléčiva prenisolonu, dexamethasonu nebo budesonidu konjugovaná s dextranem; solubilní komplementový receptor 1; mesalazin se zpomaleným uvolňováním; antagonisty destičkového aktivačního faktoru (PAF); ciprofloxacin; lignokain; prednisolon;
    methylprednisolon; cyklofosfamid; 4-aminopyridin; tizanidin; interferon-pia; interferon-pib; Copolymer 1; hyperbarický kyslík; intravenosní imunoglobulin; kladribin; hypertonické salinické roztoky; antibiotika; kontinuální hemofiltraci; karbapenemy; antagonisty cytokinů jako je TNFa, IL-Ιβ, IL-6 a/nebo IL-8; SK&F 107647; tetravalentní guanylhydrazon CNI-1493; inhibitor dráhy tkáňového faktoru; PHP; chelační činidla železa a cheláty, včetně komplexu diethylentriaminpentactová kyselina-železo(III); lisofylin; PGG-Glukan; apolipoprotein A-1 rekonstituovaný lipidy; chirální hydroxamové kyseliny; protilátky proti endotoxinu;
    E5531; rBPI21; syntetické anti-endotoxinové peptidy, surfaktantovou náhradní terapii a anti-IL-8 protilátky.
    75. Použití protilátky, nebo její antigen vazebné části, podle kteréhokoliv z nároků 1 až 24 v terapii.
    76. Použití protilátky, nebo její antigen vazebné části, podle kteréhokoliv z nároků 1 až 24 v terapii v kombinaci s alespoň jedním dalším terapeutickým činidlem pro léčbu onemocnění, při kterém je aktivita TNFa škodlivá.
    77. Použití podle nároku 76, kde další terapeutické činidlo je vybráno ze skupiny zahrnující nesteroidní protizánětlivé léčiva; cytokiny potlačující protizánětlivé léčiva; CDP-571/BAY-10-3356; cA2; 75 kd TNFR-IgG; 55 kd TNFR-IgG; IDEC-CE9.1/SB 210396; DAB • · · • ···
    133 • · « ·
    0 0 · · ·
    0 0 0 · · • 0 000 0 · ··
    486-IL-2 a DAB 389-IL-2; Anti-Tac; IL-4; IL-10; agonisty IL-4, agonisty IL-10; IL-1RA; TNF-bp/s-TNFR; S284; R973401; MK-966; Iloprost; methotrexat; thalidomid a léky příbuzné thalidomidu; leflunomid; kyselinu tranexamovou; T-614; prostaglandin El; Tenidap; Naproxen; Meloxicam; Piroxicam; Diclofenac; Indometacin; Sulfasalazin; Azathioprin; ICE inhibitory; zap-70 inhibitiry; lek inhibitory; VEGF inhibitory ; VEGF-R inhibitory; kortikosteroidy; inhibitory TNF-konvertasy; anti-IL-12 protilátky;
    interleukin-11; interleukin-13; inhibitory interleukinu-17; zlato; penicilamin; chlorokin; hydroxychlorokin; chlorambucil; cyklofosfamid, cyklosporin; anti-thymocytární globulin; anti-CD-4 protilátky; CD5-toxiny; orálně podávané peptidy; kolagen; lobenzarit dvojsodný; cytokiny regulující činidla HP228 a HP466; ICAM-1 antisense fosforothioatové oligodeoxynukleotidy; solubilní komplementový receptor 1; prednison; orgotein; glykosaminoglykan polysulfat; minocyklin; anti-IL-2R protilátky; mořské lipidy; botanické lipidy; auranofin; fenylbutazon; kyselinu meklofenamovou; kyselinu flufenamovou; intravenosní imunitní globulin; zileuton; kyselinu mykofenolovou; takrolimus; sirolimus; amiprilos; kladribin; azaribin; budenosid; epidermální růstový faktor; aminosalicylaty; 6-merkaptopurin; metronidazol; inhibitory lipooxygenasy; mesalamin; olsalazin; balsalazid; antioxidanty; inhibitory tromboxanu; antagonisty IL-1 receptoru; anti-IL-Ιβ monoklonální protilátky; anti-IL-6 monoklonální protilátky; růstové faktory; inhibitory elastasy;
    pyridinyl-imidazolové sloučeniny; proléčiva prenisolonu, dexamethasonu nebo budesonidu konjugovaná s glukuronidem; proléčiva prenisolonu, dexamethasonu nebo budesonidu konjugovaná s dextranem; solubilní komplementový receptor 1; mesalazin se zpomaleným uvolňováním; antagonisty destičkového aktivačního faktoru (PAF); ciprofloxacin; lignokain; prednisolon;
    1»
    134 • ·· *· ·· · · · · • · * · · • e · · ··· • · · · ··· 99 ·»
    99 99 • · · ·
    9 9 99
    9 999 · 9
    9 9 9
    99 99 methylprednisolon; cyklofosfamid; 4-aminopyridin; tizanidin; interferon-pia; interferon-pib; Copolymer 1; hyperbarický kyslík; intravenosní imunoglobulin; kladribin; hypertonické salinické roztoky; antibiotika; kontinuální hemofiltraci; karbapenemy; antagonisty cytokinů jako je TNFa, IL-Ιβ, IL-6 a/nebo IL-8; SK&F 107647; tetravalentní guanylhydrazon CNI-1493; inhibitor dráhy tkáňového faktoru; PHP; chelační činidla železa a cheláty, včetně komplexu diethylentriaminpentactová kyselina-železo(III); lisofylin; PGG-Glukan; apolipoprotein A-l rekonstituovaný lipidy; chirální hydroxamové kyseliny; protilátky proti endotoxinu;
    E5531; rBPI21; syntetické anti-endotoxinové peptidy, surfaktantovou náhradní terapii a anti-IL-8 protilátky.
CZ19982476A 1996-02-09 1997-02-10 Lidské protilátky k lidskému TNFalfa CZ292465B6 (cs)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US08/599,226 US6090382A (en) 1996-02-09 1996-02-09 Human antibodies that bind human TNFα
US3147696P 1996-11-25 1996-11-25

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CZ247698A3 true CZ247698A3 (cs) 1998-11-11
CZ292465B6 CZ292465B6 (cs) 2003-09-17

Family

ID=26707297

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ19982476A CZ292465B6 (cs) 1996-02-09 1997-02-10 Lidské protilátky k lidskému TNFalfa

Country Status (32)

Country Link
US (9) US6258562B1 (cs)
EP (1) EP0929578B1 (cs)
JP (8) JP3861118B2 (cs)
KR (1) KR100317188B1 (cs)
CN (5) CN1300173C (cs)
AT (1) ATE239041T1 (cs)
AU (1) AU722077B2 (cs)
BG (7) BG64564B1 (cs)
BR (3) BRPI9707379B8 (cs)
CA (1) CA2243459C (cs)
CY (2) CY2463B1 (cs)
CZ (1) CZ292465B6 (cs)
DE (4) DE122004000004I1 (cs)
DK (1) DK0929578T3 (cs)
ES (1) ES2198552T3 (cs)
HK (4) HK1214609A1 (cs)
HU (4) HU230515B1 (cs)
IL (4) IL125697A (cs)
LU (1) LU91062I2 (cs)
MX (1) MX336813B (cs)
NL (1) NL300143I2 (cs)
NO (6) NO316711B1 (cs)
NZ (5) NZ576716A (cs)
PL (2) PL193499B1 (cs)
PT (1) PT929578E (cs)
RO (2) RO119831B1 (cs)
RU (3) RU2270030C2 (cs)
SI (1) SI9720020B (cs)
SK (1) SK284040B6 (cs)
TR (1) TR199801532T2 (cs)
UA (2) UA57726C2 (cs)
WO (1) WO1997029131A1 (cs)

Families Citing this family (476)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5959087A (en) * 1989-08-07 1999-09-28 Peptide Technology, Ltd. Tumour necrosis factor binding ligands
DK0486526T3 (da) 1989-08-07 1996-06-24 Peptide Technology Ltd Bindingsligander for tumornekrosefaktor
US20030225254A1 (en) 1989-08-07 2003-12-04 Rathjen Deborah Ann Tumour necrosis factor binding ligands
US7192584B2 (en) 1991-03-18 2007-03-20 Centocor, Inc. Methods of treating psoriasis with anti-TNF antibodies
US6270766B1 (en) 1992-10-08 2001-08-07 The Kennedy Institute Of Rheumatology Anti-TNF antibodies and methotrexate in the treatment of arthritis and crohn's disease
ZA95960B (en) * 1994-03-14 1995-10-10 Genetics Inst Use of interleukin-12 antagonists in the treatment of autoimmune diseases
US6706264B1 (en) 1994-03-14 2004-03-16 Genetics Institute, Llc Use of IL-12 antagonists in the treatment of conditions promoted by an increase in levels of IFN-y
US20010055581A1 (en) 1994-03-18 2001-12-27 Lawrence Tamarkin Composition and method for delivery of biologically-active factors
US6090382A (en) * 1996-02-09 2000-07-18 Basf Aktiengesellschaft Human antibodies that bind human TNFα
TR199801532T2 (xx) * 1996-02-09 1998-11-23 Basf Aktiengesellschaft �nsan TNFalfa 's�n� ba�layan insan antikorlar�.
US7129061B1 (en) * 1996-08-07 2006-10-31 Biogen Idec Ma Inc. Tumor necrosis factor related ligand
US20040009166A1 (en) * 1997-04-30 2004-01-15 Filpula David R. Single chain antigen-binding polypeptides for polymer conjugation
US6323322B1 (en) * 1997-04-30 2001-11-27 Enzon, Inc. Single-chain antigen-binding proteins capable of glycosylation, production and uses thereof
US6407218B1 (en) 1997-11-10 2002-06-18 Cytimmune Sciences, Inc. Method and compositions for enhancing immune response and for the production of in vitro mabs
US7229841B2 (en) 2001-04-30 2007-06-12 Cytimmune Sciences, Inc. Colloidal metal compositions and methods
US7067144B2 (en) * 1998-10-20 2006-06-27 Omeros Corporation Compositions and methods for systemic inhibition of cartilage degradation
ES2277460T3 (es) 1998-12-14 2007-07-01 Genetics Institute, Llc Cadena del receptor de la citoquina.
US7553487B2 (en) 1998-12-14 2009-06-30 Genetics Institute, Llc Method and compositions for treating asthma
EP1159003B1 (en) * 1999-03-02 2010-11-17 Centocor, Inc. Anti-tnf alpha antibodies in therapy of steroid resistant asthma
US6914128B1 (en) 1999-03-25 2005-07-05 Abbott Gmbh & Co. Kg Human antibodies that bind human IL-12 and methods for producing
US20040220103A1 (en) 1999-04-19 2004-11-04 Immunex Corporation Soluble tumor necrosis factor receptor treatment of medical disorders
AU7912700A (en) * 1999-10-06 2001-05-10 Basf Aktiengesellschaft Modulators of cytokine mediated signalling pathways and integrin alphavbeta3 receptor antagonists for combination therapy
JP2004500086A (ja) 2000-02-10 2004-01-08 アボット・ラボラトリーズ ヒトインターロイキン１８に結合する抗体とその調整方法および使用方法
GB0013810D0 (en) 2000-06-06 2000-07-26 Celltech Chiroscience Ltd Biological products
CN101525384A (zh) 2000-06-29 2009-09-09 艾博特公司 双特异性抗体及其制备方法和用途
UA81743C2 (uk) * 2000-08-07 2008-02-11 Центокор, Инк. МОНОКЛОНАЛЬНЕ АНТИТІЛО ЛЮДИНИ, ЩО СПЕЦИФІЧНО ЗВ'ЯЗУЄТЬСЯ З ФАКТОРОМ НЕКРОЗУ ПУХЛИН АЛЬФА (ФНПα), ФАРМАЦЕВТИЧНА КОМПОЗИЦІЯ, ЩО ЙОГО МІСТИТЬ, ТА СПОСІБ ЛІКУВАННЯ РЕВМАТОЇДНОГО АРТРИТУ
US20050196755A1 (en) * 2000-11-17 2005-09-08 Maurice Zauderer In vitro methods of producing and identifying immunoglobulin molecules in eukaryotic cells
US7981420B2 (en) 2000-12-22 2011-07-19 Max-Planck-Gesellschaft Zur Foederung Der Wissenschaften E.V. Therapeutic use of antibodies directed against repulsive guidance molecule (RGM)
US20090137416A1 (en) 2001-01-16 2009-05-28 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Isolating Cells Expressing Secreted Proteins
EP1392859B1 (en) * 2001-01-16 2006-05-10 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Isolating cells expressing secreted proteins
EP1379125A4 (en) 2001-03-22 2004-12-08 Abbott Gmbh & Co Kg TRANSGENIC ANIMALS THAT EXPRESS SPECIFIC ANTIBODIES FOR INTERESTING GENES AND THEIR USE
US6410955B1 (en) * 2001-04-19 2002-06-25 Micron Technology, Inc. Comb-shaped capacitor for use in integrated circuits
CA2868614A1 (en) * 2001-06-08 2002-12-08 Abbott Laboratories (Bermuda) Ltd. Methods of administering anti-tnf.alpha. antibodies
AU2002316384A1 (en) * 2001-06-26 2003-03-03 Photomed Technologies, Inc. Multiple wavelength illuminator
NZ616594A (en) 2001-06-26 2015-06-26 Amgen Inc Antibodies to opgl
US20050271663A1 (en) * 2001-06-28 2005-12-08 Domantis Limited Compositions and methods for treating inflammatory disorders
TWI334439B (en) 2001-08-01 2010-12-11 Centocor Inc Anti-tnf antibodies, compositions, methods and uses
WO2003024384A2 (en) * 2001-09-20 2003-03-27 Magnum Therapeutics Improved methods for treatment with viral vectors
US20030065382A1 (en) * 2001-10-02 2003-04-03 Fischell Robert E. Means and method for the treatment of coronary artery obstructions
WO2003028630A2 (en) 2001-10-04 2003-04-10 Genetics Institute Llc. Methods and compositions for modulating interleukin-21 receptor activity
US20040018195A1 (en) * 2002-03-26 2004-01-29 Griswold Don Edgar Diabetes-related immunoglobulin derived proteins, compositions, methods and uses
US20040009172A1 (en) * 2002-04-26 2004-01-15 Steven Fischkoff Use of anti-TNFalpha antibodies and another drug
US20030206898A1 (en) * 2002-04-26 2003-11-06 Steven Fischkoff Use of anti-TNFalpha antibodies and another drug
US20090280065A1 (en) * 2006-04-10 2009-11-12 Willian Mary K Uses and Compositions for Treatment of Psoriasis
MX342777B (es) * 2002-07-19 2016-10-12 Abbvie Biotechnology Ltd Inhibidores tnfa para usarse en el tratamiento de trastornos relacionados con tnfa.
US20040033228A1 (en) * 2002-08-16 2004-02-19 Hans-Juergen Krause Formulation of human antibodies for treating TNF-alpha associated disorders
US20040091490A1 (en) * 2002-08-28 2004-05-13 Robert Johnson Stable pH optimized formulation of a modified antibody
MY150740A (en) * 2002-10-24 2014-02-28 Abbvie Biotechnology Ltd Low dose methods for treating disorders in which tnf? activity is detrimental
US9320792B2 (en) 2002-11-08 2016-04-26 Ablynx N.V. Pulmonary administration of immunoglobulin single variable domains and constructs thereof
EP2301967A3 (en) 2002-11-08 2011-07-13 Ablynx N.V. Single domain antibodies for nasal administration
US20060034845A1 (en) 2002-11-08 2006-02-16 Karen Silence Single domain antibodies directed against tumor necrosis factor alpha and uses therefor
US20040162414A1 (en) * 2002-11-22 2004-08-19 Santora Ling C. Method for reducing or preventing modification of a polypeptide in solution
US20040101939A1 (en) * 2002-11-22 2004-05-27 Santora Ling C. Method for reducing or preventing modification of a polypeptide in solution
EP1578799B8 (en) * 2002-12-02 2011-03-23 Amgen Fremont Inc. Antibodies directed to tumor necrosis factor and uses thereof
PL378879A1 (pl) * 2002-12-30 2006-05-29 Amgen Inc. Terapia skojarzona z czynnikami kostymulującymi
US7101978B2 (en) * 2003-01-08 2006-09-05 Applied Molecular Evolution TNF-α binding molecules
JP2007525409A (ja) * 2003-01-08 2007-09-06 アプライド モレキュラー エボリューション，インコーポレイテッド ＴＮＦ−α結合分子
CN100439400C (zh) * 2003-01-10 2008-12-03 埃博灵克斯股份有限公司 治疗性多肽,其同源物、其片段及其在调节血小板介导的聚集方面的应用
DE10303974A1 (de) 2003-01-31 2004-08-05 Abbott Gmbh & Co. Kg Amyloid-β(1-42)-Oligomere, Verfahren zu deren Herstellung und deren Verwendung
BRPI0408315A (pt) * 2003-03-14 2006-03-07 Wyeth Corp anticorpo isolado, composição farmacêutica, ácido nucleico isolado, vetor de expressão, célula hospedeira, métodos de produzir um anticorpo, de gerar um anticorpo ou fragmento de ligação de antìgeno, de regular uma resposta imune, de tratar ou prevenir um distúrbio associado com célula imune em um paciente, de tratar ou prevenir um distúrbio hiperproliferativo em um paciente, e, kit de diagnóstico
EP1460088A1 (en) 2003-03-21 2004-09-22 Biotest AG Humanized anti-CD4 antibody with immunosuppressive properties
WO2004098578A2 (en) * 2003-05-12 2004-11-18 Altana Pharma Ag Composition comprising a pde4 inhibitor and a tnf-alfa antagonist selected from infliximab, adalimumab, cdp870 and cdp517
FR2856075B1 (fr) * 2003-06-16 2007-10-12 Monoclonal Antibodies Therapeu Procede essentiellement automatise de criblage a grande echelle de cellules secretant des anticorps monoclonaux
FR2859725B1 (fr) * 2003-09-16 2006-03-10 Neovacs Procede a haut rendement pour l'obtention d'anticorps humains neutralisant l'activite biologique d'une cytokine humaine
US20050100965A1 (en) 2003-11-12 2005-05-12 Tariq Ghayur IL-18 binding proteins
KR100772800B1 (ko) * 2003-11-17 2007-11-01 주식회사유한양행 인간 종양괴사인자 α를 인식하는 단일클론항체의가변영역 및 이를 코딩하는 유전자
WO2005065121A2 (en) 2003-12-02 2005-07-21 Cytimmune Sciences, Inc. Methods and compositions for the production of monoclonal antibodies
SG10201404273QA (en) 2003-12-23 2014-10-30 Genentech Inc Novel anti-il 13 antibodies and uses thereof
US7435799B2 (en) * 2004-01-08 2008-10-14 Applied Molecular Evolution TNF-α binding molecules
EP1729804A2 (en) 2004-03-19 2006-12-13 Amgen Inc. Reducing the risk of human and anti-human antibodies through v gene manipulation
US7625549B2 (en) * 2004-03-19 2009-12-01 Amgen Fremont Inc. Determining the risk of human anti-human antibodies in transgenic mice
TW201705980A (zh) * 2004-04-09 2017-02-16 艾伯維生物技術有限責任公司 用於治療ＴＮＦα相關失調症之多重可變劑量療法
CN100427504C (zh) * 2004-06-02 2008-10-22 北京天广实生物技术有限公司 TNFα高亲和力嵌合抗体及其用途
US7501121B2 (en) 2004-06-17 2009-03-10 Wyeth IL-13 binding agents
AR049390A1 (es) 2004-06-09 2006-07-26 Wyeth Corp Anticuerpos contra la interleuquina-13 humana y usos de los mismos
GB0414054D0 (en) 2004-06-23 2004-07-28 Owen Mumford Ltd Improvements relating to automatic injection devices
JP2008508885A (ja) * 2004-08-05 2008-03-27 ワイス インターロイキン−２１受容体活性を中和すること
EP1807111A4 (en) * 2004-10-08 2009-05-27 Abbott Biotech Ltd SYNCYTIAL RESPIRATORY VIRUS INFECTION (RSV)
CN101048426A (zh) * 2004-10-22 2007-10-03 金克克国际有限公司 分离人抗体
JP2008520717A (ja) 2004-11-19 2008-06-19 バイオジェン・アイデック・エムエイ・インコーポレイテッド 多発性硬化症についての処置
PL1850873T3 (pl) 2005-02-08 2019-06-28 Genzyme Corporation Przeciwciała przeciwko tgfbeta
AU2006214384A1 (en) * 2005-02-14 2006-08-24 University Of Pittsburgh Of The Commonwealth System Of Higher Education Use of IL-17F in diagnosis and therapy of airway inflammation
WO2006088833A2 (en) * 2005-02-14 2006-08-24 Wyeth Interleukin-17f antibodies and other il-17f signaling antagonists and uses therefor
AU2006214179A1 (en) 2005-02-17 2006-08-24 Biogen Idec Ma Inc. Treating neurological disorders
GT200600148A (es) * 2005-04-14 2006-11-22 Metodos para el tratamiento y la prevencion de fibrosis
ES2432564T3 (es) * 2005-05-10 2013-12-04 Biogen Idec Ma Inc. Tratamiento y evaluación de trastornos inflamatorios
AU2012254978C1 (en) * 2005-05-16 2017-06-01 Abbvie Biotechnology Ltd Use of TNF inhibitor for treatment of erosive polyarthritis
NZ595225A (en) * 2005-05-16 2013-05-31 Abbott Biotech Ltd Use of tnf inhibitor for treatment of erosive polyarthritis
EP1888789A2 (en) * 2005-06-06 2008-02-20 Wyeth a Corporation of the State of Delaware Expression profiles of peripheral blood mononuclear cells for inflammatory bowel diseases
PL2390267T3 (pl) 2005-06-07 2013-09-30 Esbatech A Novartis Co Llc Stabilne i rozpuszczalne przeciwciała hamujące TNF(alfa)
ES2776657T3 (es) 2005-06-14 2020-07-31 Amgen Inc Formulaciones de proteínas autotamponantes
US20060286108A1 (en) * 2005-06-16 2006-12-21 Bell Katherine A Topical compositions for the treatment of chronic wounds
US20080045949A1 (en) * 2005-06-17 2008-02-21 Hunt Margaret M Method of treating degenerative spinal disorders
KR101446503B1 (ko) * 2005-06-24 2014-10-06 듀크 유니버시티 열 반응성 생중합체에 기초한 직접 약물 전달 시스템
EP1910550A4 (en) * 2005-07-21 2009-11-04 Abbott Lab MULTIGENIC EXPRESSION COMPRISING SORF CONSTRUCTS AND METHODS USING POLYPROTEINS, PRO-PROTEINS, AND PROTEOLYSIS
TW200726776A (en) * 2005-07-29 2007-07-16 Friedrich Alexander University Of Erlangen Nuremberg CD33-specific single-chain immunotoxin and methods of use
US7612181B2 (en) 2005-08-19 2009-11-03 Abbott Laboratories Dual variable domain immunoglobulin and uses thereof
US20090215992A1 (en) * 2005-08-19 2009-08-27 Chengbin Wu Dual variable domain immunoglobulin and uses thereof
RU2515108C2 (ru) 2005-08-19 2014-05-10 Эббви Инк Иммуноглобулин с двойными вариабельными доменами и его применения
US20070041905A1 (en) 2005-08-19 2007-02-22 Hoffman Rebecca S Method of treating depression using a TNF-alpha antibody
EP2500354A3 (en) 2005-08-19 2012-10-24 Abbott Laboratories Dual variable domain immunoglobulin and uses thereof
JP2009510002A (ja) 2005-09-30 2009-03-12 アボット ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング ウント コンパニー コマンディトゲゼルシャフト 反発誘導分子（ｒｇｍ）タンパク質ファミリーのタンパク質の結合ドメイン、及びその機能的断片、及びそれらの使用
WO2007049286A1 (en) * 2005-10-27 2007-05-03 Tata Memorial Centre A system for ex-vivo separation of apoptotic chromatin particles from blood or plasma
NZ608431A (en) 2005-11-01 2014-11-28 Abbvie Biotechnology Ltd Methods and compositions for diagnosing ankylosing spondylitis using biomarkers
AR056806A1 (es) 2005-11-14 2007-10-24 Amgen Inc Moleculas quimericas de anticuerpo rankl- pth/ pthrp
PT1954718E (pt) 2005-11-30 2014-12-16 Abbvie Inc Anticorpos anti-globulómeros aβ, suas porções de ligação ao antigénio, correspondentes hibridomas, ácidos nucleicos, vectores, células hospedeiras, métodos de produção dos ditos anticorpos, composições compreendendo os ditos anticorpos, usos dos ditos anticorpos e métodos para uso dos ditos anticorpos
US8497072B2 (en) 2005-11-30 2013-07-30 Abbott Laboratories Amyloid-beta globulomer antibodies
US8841255B2 (en) 2005-12-20 2014-09-23 Duke University Therapeutic agents comprising fusions of vasoactive intestinal peptide and elastic peptides
US8334257B2 (en) 2005-12-20 2012-12-18 Duke University Methods and compositions for delivering active agents with enhanced pharmacological properties
US20130172274A1 (en) 2005-12-20 2013-07-04 Duke University Methods and compositions for delivering active agents with enhanced pharmacological properties
EA017417B1 (ru) 2006-02-01 2012-12-28 Сефалон Астралия Пти Лтд. КОНСТРУКТ ОДНОДОМЕННОГО АНТИТЕЛА, КОТОРЫЙ СВЯЗЫВАЕТСЯ С ЧЕЛОВЕЧЕСКИМ TNF-α, И ЕГО ПРИМЕНЕНИЕ
TW200744634A (en) 2006-02-21 2007-12-16 Wyeth Corp Methods of using antibodies against human IL-22
TWI417301B (zh) 2006-02-21 2013-12-01 Wyeth Corp 對抗人類介白素-２２（ｉｌ-２２）之抗體及其用途
CN102391358B (zh) 2006-04-05 2016-08-10 艾伯维生物技术有限公司 抗体纯化
EP2666479A3 (en) 2006-04-10 2014-03-26 Abbott Biotechnology Ltd Uses and compositions for treatment of juvenile rheumatoid arthritis
US20090317399A1 (en) * 2006-04-10 2009-12-24 Pollack Paul F Uses and compositions for treatment of CROHN'S disease
WO2007120626A2 (en) 2006-04-10 2007-10-25 Abbott Biotechnology Ltd. Uses and compositions for treatment of ankylosing spondylitis
CA2564435A1 (en) 2006-04-10 2007-10-10 Abbott Biotechnology Ltd. Methods for monitoring and treating intestinal disorders
US9605064B2 (en) 2006-04-10 2017-03-28 Abbvie Biotechnology Ltd Methods and compositions for treatment of skin disorders
EP2010214A4 (en) 2006-04-10 2010-06-16 Abbott Biotech Ltd USES AND COMPOSITIONS FOR THE TREATMENT OF RHEUMATOID ARTHRITIS
US9624295B2 (en) 2006-04-10 2017-04-18 Abbvie Biotechnology Ltd. Uses and compositions for treatment of psoriatic arthritis
US20080118496A1 (en) * 2006-04-10 2008-05-22 Medich John R Uses and compositions for treatment of juvenile rheumatoid arthritis
US20080131374A1 (en) * 2006-04-19 2008-06-05 Medich John R Uses and compositions for treatment of rheumatoid arthritis
US20080311043A1 (en) * 2006-06-08 2008-12-18 Hoffman Rebecca S Uses and compositions for treatment of psoriatic arthritis
US20100021451A1 (en) 2006-06-08 2010-01-28 Wong Robert L Uses and compositions for treatment of ankylosing spondylitis
BRPI0713802A2 (pt) 2006-06-30 2012-11-06 Abbott Biotech Ltd dispositivo de injeção automático
EP3524685B1 (en) 2006-09-08 2021-11-03 AbbVie Bahamas Ltd. Interleukin -13 binding proteins
US8911964B2 (en) 2006-09-13 2014-12-16 Abbvie Inc. Fed-batch method of making human anti-TNF-alpha antibody
EP2500416A1 (en) 2006-09-13 2012-09-19 Abbott Laboratories Cell culture improvements
MY161866A (en) 2006-09-13 2017-05-15 Abbvie Inc Cell culture improvements
NZ613356A (en) 2006-10-27 2015-02-27 Abbvie Biotechnology Ltd Crystalline anti-htnfalpha antibodies
US8754107B2 (en) 2006-11-17 2014-06-17 Abbvie Inc. Aminopyrrolidines as chemokine receptor antagonists
WO2008064321A2 (en) 2006-11-21 2008-05-29 Kalobios Pharmaceuticals, Inc. Methods of treating chronic inflammatory diseases using a gm-csf antagonist
US8455626B2 (en) 2006-11-30 2013-06-04 Abbott Laboratories Aβ conformer selective anti-aβ globulomer monoclonal antibodies
WO2008082651A2 (en) 2006-12-29 2008-07-10 Abbott Laboratories Dual-specific il-1a/ il-1b antibodies
CN104524567A (zh) * 2007-01-16 2015-04-22 阿布维公司 用于治疗银屑病的方法
JP2008209378A (ja) * 2007-01-31 2008-09-11 Fujifilm Corp バイオセンサー基板
EP2979729A3 (en) 2007-02-05 2016-05-11 Apellis Pharmaceuticals, Inc. Compstatin analogues for use in the treatment of inflammatory conditions of the respiratory system
WO2008104386A2 (en) 2007-02-27 2008-09-04 Abbott Gmbh & Co. Kg Method for the treatment of amyloidoses
CA2680564C (en) * 2007-03-12 2018-05-01 Esbatech Ag Sequence based engineering and optimization of single chain antibodies
CL2008000883A1 (es) * 2007-03-28 2008-10-03 Wyeth6 3 Metodo de deteccion de compuestos capaces de antagonizar la senalizacion de il-17f/il-17a; compuesto identificado por dicho metodo; uso de una cantidad de un antagonista de senalizacion de il-17f/il-17a, composicion farmaceutica que comprende dicho a
US7807168B2 (en) * 2007-04-10 2010-10-05 Vaccinex, Inc. Selection of human TNFα specific antibodies
WO2008124858A2 (en) * 2007-04-11 2008-10-23 F-Star Biotechnologische Forschungs- Und Entwicklungsges. M.B.H. Targeted receptor
US8092998B2 (en) 2007-05-31 2012-01-10 Abbott Laboratories Biomarkers predictive of the responsiveness to TNFα inhibitors in autoimmune disorders
WO2008150490A2 (en) * 2007-06-01 2008-12-11 Abbott Biotechnology Ltd. Uses and compositions for treatment of psoriasis and crohn's disease
SG182170A1 (en) * 2007-06-06 2012-07-30 Domantis Ltd Polypeptides, antibody variable domains and antagonists
CA2688434A1 (en) * 2007-06-06 2008-12-11 Domantis Limited Polypeptides, antibody variable domains and antagonists
WO2008154543A2 (en) 2007-06-11 2008-12-18 Abbott Biotechnology Ltd. Methods for treating juvenile idiopathic arthritis
EP3461500A1 (en) * 2007-06-14 2019-04-03 Biogen MA Inc. Natalizumab antibody formulations
KR101573086B1 (ko) 2007-06-25 2015-11-30 에스바테크 - 어 노바티스 컴파니 엘엘씨 항체를 변형시키는 방법, 및 기능적 특성이 개선된 변형된 항체
WO2009000098A2 (en) * 2007-06-25 2008-12-31 Esbatech Ag Sequence based engineering and optimization of single chain antibodies
US20090110679A1 (en) * 2007-07-13 2009-04-30 Luk-Chiu Li Methods and compositions for pulmonary administration of a TNFa inhibitor
CN101980722A (zh) 2007-08-08 2011-02-23 雅培制药有限公司 结晶抗体的组合物和方法
AU2008289441A1 (en) 2007-08-22 2009-02-26 Cytomx Therapeutics, Inc. Activatable binding polypeptides and methods of identification and use thereof
MX2010002269A (es) 2007-08-28 2010-03-25 Abbott Biotech Ltd Composiciones y metodos que comprenden proteinas de union para adalimumab.
EP2205249B1 (en) 2007-09-28 2018-11-07 Intrexon Corporation Therapeutic gene-switch constructs and bioreactors for the expression of biotherapeutic molecules, and uses thereof
JP2009082033A (ja) * 2007-09-28 2009-04-23 Kaneka Corp 完全ヒト型抗体生産法
EP2219458B1 (en) 2007-11-08 2015-07-15 Cytimmune Sciences, Inc. Compositions and methods for generating antibodies
EP2231175A4 (en) 2007-11-30 2014-07-16 Abbvie Inc PROTEIN FORMULATIONS AND MANUFACTURING METHOD
US8883146B2 (en) 2007-11-30 2014-11-11 Abbvie Inc. Protein formulations and methods of making same
JP2011510267A (ja) * 2008-01-03 2011-03-31 アボツト・バイオテクノロジー・リミテツド 乾癬の治療における化合物の長期的効力の予測
NZ601913A (en) 2008-01-15 2014-02-28 Abbott Gmbh & Co Kg Powdered protein compositions and methods of making same
US8962803B2 (en) 2008-02-29 2015-02-24 AbbVie Deutschland GmbH & Co. KG Antibodies against the RGM A protein and uses thereof
EP2260057B1 (en) 2008-03-13 2016-11-23 Biotest AG Anti-CD4 antibody dosage regimen for treating autoimmune disease
ES2569217T3 (es) 2008-03-13 2016-05-09 Biotest Ag Agente para tratar enfermedades
KR20100135257A (ko) 2008-03-13 2010-12-24 바이오테스트 아게 질병 치료제
RU2497545C2 (ru) 2008-03-18 2013-11-10 Эбботт Лэборетриз Способ лечения псориаза (варианты)
US20100260668A1 (en) * 2008-04-29 2010-10-14 Abbott Laboratories Dual Variable Domain Immunoglobulins and Uses Thereof
MX2010011955A (es) 2008-04-29 2011-01-21 Abbott Lab Inmunoglobulinas de dominio variable doble y usos de las mismas.
EP2113568A1 (en) 2008-04-30 2009-11-04 Deutsches Rheuma-Forschungszentrum Berlin Knock-in mouse for modelling blockade of human TNFalpha
US8323651B2 (en) 2008-05-09 2012-12-04 Abbott Laboratories Antibodies to receptor of advanced glycation end products (RAGE) and uses thereof
EP2311493A4 (en) * 2008-05-20 2012-09-26 Kaneka Corp CYTOTOXIC COMPOSITION
UY31862A (es) 2008-06-03 2010-01-05 Abbott Lab Inmunoglobulina con dominio variable dual y usos de la misma
TW201006485A (en) 2008-06-03 2010-02-16 Abbott Lab Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
RU2514658C2 (ru) 2008-06-25 2014-04-27 ИЭсБиЭйТЕК, ЭН АЛЬКОН БАЙОМЕДИКАЛ РИСЕРЧ ЮНИТ ЭлЭлСи Оптимизация растворимости иммуносвязывающих средств
SI3444274T1 (sl) 2008-06-25 2021-04-30 Novartis Ag Stabilna in topna protitelesa, ki zavirajo tnf
HUE068894T2 (hu) 2008-06-25 2025-02-28 Novartis Ag VEGF-et gátló stabil és oldható ellenanyagok
CN102131516B (zh) 2008-06-27 2016-03-16 杜克大学 包含弹性蛋白样肽的治疗剂
MX2011000039A (es) * 2008-07-02 2011-05-31 Emergent Product Dev Seattle Proteinas antagonistas del factor-beta de crecimiento transformante (tgf-beta), que se unen a multiples objetivos.
CN102149825B (zh) 2008-07-08 2015-07-22 Abbvie公司 前列腺素e2双重可变结构域免疫球蛋白及其用途
BRPI0915825A2 (pt) 2008-07-08 2015-11-03 Abbott Lab proteínas de ligação à prostaglandina e2 usos das mesmas
MX2011002153A (es) * 2008-08-28 2011-03-29 Wyeth Llc Usos de citocinas de las familias de interleucina-22, interleucina-17 e interleucina-1 en enfermedades autoinmunitarias.
CN102281898B (zh) * 2008-10-07 2015-06-03 成功大学 Il-20拮抗剂在治疗类风湿性关节炎和骨质疏松症中的应用
JP5823867B2 (ja) 2008-10-29 2015-11-25 アブリンクス エン．ヴェー． 単一ドメイン抗原結合分子の製剤
JP6113404B2 (ja) 2008-10-29 2017-04-12 アブリンクス エン．ヴェー． 単一ドメイン抗原結合分子の精製方法
US8415291B2 (en) 2008-10-31 2013-04-09 Centocor Ortho Biotech Inc. Anti-TNF alpha fibronectin type III domain based scaffold compositions, methods and uses
CN101419224B (zh) * 2008-11-06 2012-08-22 复旦大学附属华山医院 一种同时测定人血浆中霉酚酸酯、霉酚酸及其代谢物的方法
KR20110096553A (ko) * 2008-11-28 2011-08-30 아보트 러보러터리즈 안정한 항체 조성물 및 이의 안정화 방법
CN101766602B (zh) * 2008-12-30 2012-01-11 中国医学科学院血液病医院（血液学研究所） 取代芳香基腙类化合物在作为肿瘤坏死因子抑制剂药物方面的应用
JP5684724B2 (ja) 2008-12-30 2015-03-18 ヤンセン バイオテツク，インコーポレーテツド 強直性脊椎炎を有する患者における抗−ＴＮＦα抗体に対する臨床応答を予測する血清マーカー
US20100189651A1 (en) 2009-01-12 2010-07-29 Cytomx Therapeutics, Llc Modified antibody compositions, methods of making and using thereof
RU2011138951A (ru) 2009-02-23 2013-03-27 Сайтомкс Терапьютикс, Инк. Пропротеины и способы их применения
US8030026B2 (en) 2009-02-24 2011-10-04 Abbott Laboratories Antibodies to troponin I and methods of use thereof
RU2015132478A (ru) * 2009-03-05 2015-12-10 Эббви Инк. Связывающие il-17 белки
RU2595379C2 (ru) * 2009-04-16 2016-08-27 АббВай Биотерапеутикс Инк. АНТИТЕЛА ПРОТИВ TNF-α И ИХ ПРИМЕНЕНИЯ
CN101875694B (zh) * 2009-04-28 2014-04-02 中国医学科学院基础医学研究所 TNFα的抗体及其用途
BRPI1012162A2 (pt) 2009-04-29 2016-01-12 Abbott Biotech Ltd dispositivo de injeção automática
NZ613809A (en) * 2009-05-04 2015-02-27 Abbvie Biotechnology Ltd Stable high protein concentration formulations of human anti-tnf-alpha-antibodies
WO2010132872A1 (en) * 2009-05-15 2010-11-18 Novimmune S.A Combination therapies and methods using anti-cd3 modulating agents and anti-tnf antagonists
TW201109438A (en) * 2009-07-29 2011-03-16 Abbott Lab Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
MX366935B (es) 2009-08-14 2019-07-31 Phasebio Pharmaceuticals Inc Peptidos intestinales vasoactivos modificados.
KR20120054077A (ko) * 2009-08-21 2012-05-29 길리아드 바이오로직스, 인크. 폐 섬유증 장애의 치료를 위한 방법 및 조성물
PE20121647A1 (es) 2009-08-29 2012-12-31 Abbvie Inc Proteinas terapeuticas de union a dll4
SG178602A1 (en) 2009-09-01 2012-04-27 Abbott Lab Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
SG179135A1 (en) * 2009-09-14 2012-05-30 Abbott Lab Methods for treating psoriasis
CA2775291A1 (en) * 2009-09-24 2011-03-31 Xbiotech, Inc. Methods, compositions, and kits for reducing anti-antibody responses
US8926976B2 (en) 2009-09-25 2015-01-06 Xoma Technology Ltd. Modulators
JP5885664B2 (ja) 2009-09-25 2016-03-15 ゾーマ テクノロジー リミテッド スクリーニング法
US8716450B2 (en) 2009-10-15 2014-05-06 Abbvie Inc. Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
NZ621655A (en) * 2009-10-26 2015-08-28 Nestec Sa Assays for the detection of anti-tnf drugs and autoantibodies
UY32979A (es) 2009-10-28 2011-02-28 Abbott Lab Inmunoglobulinas con dominio variable dual y usos de las mismas
WO2011053699A1 (en) * 2009-10-30 2011-05-05 Abbott Laboratories Sorf constructs and multiple gene expression
US8420083B2 (en) 2009-10-31 2013-04-16 Abbvie Inc. Antibodies to receptor for advanced glycation end products (RAGE) and uses thereof
CA2780024A1 (en) 2009-11-11 2011-05-19 Gentian As Immunoassay for assessing related analytes of different origin
GB0920944D0 (en) 2009-11-30 2010-01-13 Biotest Ag Agents for treating disease
US8871208B2 (en) * 2009-12-04 2014-10-28 Abbvie Inc. 11-β-hydroxysteroid dehydrogenase type 1 (11β-HSD1) inhibitors and uses thereof
BR112012013734A2 (pt) 2009-12-08 2017-01-10 Abbott Gmbh & Co Kg anticorpos monoclonais contra a proteína rgm a para uso no tratamento da degeneração da camada de fibras nervosas da retina.
NZ600069A (en) 2009-12-15 2015-02-27 Abbvie Biotechnology Ltd Improved firing button for automatic injection device
WO2011075578A1 (en) 2009-12-16 2011-06-23 Philip Bosch Methods of treating interstitial cystitis
USRE49251E1 (en) 2010-01-04 2022-10-18 Mapi Pharma Ltd. Depot systems comprising glatiramer or pharmacologically acceptable salt thereof
US9096655B2 (en) 2010-01-27 2015-08-04 Tata Memorial Centre Method for in-vivo binding of chromatin fragments
MX2012008985A (es) 2010-02-02 2012-09-07 Abbott Biotech Ltd Metodos y composiciones para predecir la capacidad de respuesta al tratamiento con el inhibidor de tnf-alfa.
CN102167741B (zh) * 2010-02-25 2014-05-14 上海百迈博制药有限公司 一种全人源抗TNF-α单克隆抗体、其制备方法及用途
RU2605928C2 (ru) 2010-03-02 2016-12-27 Эббви Инк. Терапевтические dll4-связывающие белки
EP3372617B1 (en) 2010-04-02 2024-07-24 Amunix Pharmaceuticals, Inc. Binding fusion proteins, binding fusion protein-drug conjugates, xten-drug conjugates and methods of making and using same
KR20150038556A (ko) 2010-04-07 2015-04-08 애브비 인코포레이티드 ＴＮＦ-α 결합 단백질
CN102933601B (zh) 2010-04-15 2016-06-08 Abbvie公司 β淀粉样蛋白结合蛋白
SI3202789T1 (sl) 2010-04-16 2020-11-30 Biogen Ma Inc. Protitelesa anti-vla 4
KR101970467B1 (ko) 2010-04-21 2019-04-19 애브비 바이오테크놀로지 리미티드 치료제의 제어된 전달을 위한 착용형 자동 주사 디바이스
NZ604360A (en) 2010-05-14 2014-09-26 Abbvie Inc Il-1 binding proteins
US20110287018A1 (en) 2010-05-19 2011-11-24 Philip Bosch Methods of Treating Interstitial Cystitis
DK2575884T3 (en) 2010-06-03 2018-09-03 Abbvie Biotechnology Ltd APPLICATIONS AND COMPOSITIONS TO TREAT HIDRADENITIS SUPPURATIVA (HS)
WO2012006500A2 (en) 2010-07-08 2012-01-12 Abbott Laboratories Monoclonal antibodies against hepatitis c virus core protein
UY33492A (es) 2010-07-09 2012-01-31 Abbott Lab Inmunoglobulinas con dominio variable dual y usos de las mismas
US20120100166A1 (en) 2010-07-15 2012-04-26 Zyngenia, Inc. Ang-2 Binding Complexes and Uses Thereof
AR082461A1 (es) 2010-08-03 2012-12-12 Abbott Lab Inmunoglobulinas con dominio variable dual y usos de las mismas
CA2808187A1 (en) 2010-08-14 2012-02-23 Abbvie Inc. Amyloid-beta binding proteins
EP4056589A1 (en) 2010-08-19 2022-09-14 Zoetis Belgium S.A. Anti-ngf antibodies and their use
KR20130139884A (ko) 2010-08-26 2013-12-23 애브비 인코포레이티드 이원 가변 도메인 면역글로불린 및 이의 용도
AR083495A1 (es) 2010-10-22 2013-02-27 Esbatech Alcon Biomed Res Unit Anticuerpos estables y solubles
UA113500C2 (xx) 2010-10-29 2017-02-10 Одержані екструзією розплаву тверді дисперсії, що містять індукуючий апоптоз засіб
RU2598345C2 (ru) 2010-10-29 2016-09-20 Эббви Инк. Твердые дисперсии, содержащие средства, вызывающие апоптоз
US20120258108A1 (en) * 2010-11-02 2012-10-11 Abbott Laboratories Dual Variable Domain Immunoglobulins and Uses Thereof
AU2011325974B2 (en) 2010-11-11 2016-10-27 Abbvie Biotechnology Ltd. Improved high concentration anti-TNFalpha antibody liquid formulations
EP2643322B1 (en) 2010-11-23 2017-08-30 Abbvie Inc. Salts and crystalline forms of an apoptosis-inducing agent
UY33746A (es) 2010-11-23 2012-06-29 Abbott Lab Método de tratamiento que usa inhibidores selectivos de bcl-2
AR084210A1 (es) 2010-12-08 2013-05-02 Abbott Lab PROTEINAS DE UNION AL TNF-a
PH12013501336A1 (en) 2010-12-21 2013-08-28 Abbvie Inc Il-1 -alpha and -beta bispecific dual variable domain immunoglobulins and their use
TW201307388A (zh) 2010-12-21 2013-02-16 Abbott Lab Ｉｌ－１結合蛋白
EP2490024A1 (en) 2010-12-22 2012-08-22 Proteomika, S.L. Method to optimize the treatment of patients with biological drugs
CN103491998B (zh) 2011-01-24 2015-11-25 爱康医学农业合作协会有限公司 注射器
KR101853607B1 (ko) 2011-01-24 2018-05-03 애브비 바이오테크놀로지 리미티드 주사기로부터 니들 실드의 제거 및 자동 주사 디바이스들
RU2602039C2 (ru) 2011-01-24 2016-11-10 Эббви Байотекнолоджи Лтд. Автоматические инъекционные устройства, имеющие наформованные поверхности захвата
RU2455025C1 (ru) * 2011-02-10 2012-07-10 Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Белгородский государственный национальный исследовательский университет" (НИУ "БелГУ") Способ фармакологической коррекции ишемии конечности смесью растворов гомеопатических разведений
US20130344081A1 (en) 2011-03-07 2013-12-26 The University Of Tokushima Method of treating amyotrophic lateral sclerosis
US20120233834A1 (en) 2011-03-18 2012-09-20 Abbott Biotechnology Ltd. Systems, devices and methods for assembling automatic injection devices and sub-assemblies thereof
TWI622597B (zh) 2011-03-28 2018-05-01 賽諾菲公司 具有交叉結合區定向之雙重可變區類抗體結合蛋白
MX2013011263A (es) 2011-03-29 2014-03-27 Abbvie Inc Despliegue de cubierta mejorado en dispositivos de inyeccion automaticos.
EP3020428A1 (en) 2011-04-21 2016-05-18 AbbVie Inc. Wearable automatic injection device for controlled administration of therapeutic agents
WO2012149197A2 (en) 2011-04-27 2012-11-01 Abbott Laboratories Methods for controlling the galactosylation profile of recombinantly-expressed proteins
CN103857699B (zh) 2011-05-24 2016-08-31 泽恩格尼亚股份有限公司 多价和单价多特异性复合物及其用途
JP6243838B2 (ja) 2011-05-31 2017-12-06 バイオジェン・エムエイ・インコーポレイテッドＢｉｏｇｅｎ ＭＡ Ｉｎｃ． Ｐｍｌの危険性を査定する方法
US9561262B2 (en) 2011-06-06 2017-02-07 Phasebio Pharmaceuticals, Inc. Use of modified vasoactive intestinal peptides in the treatment of hypertension
CA2841970A1 (en) 2011-07-13 2013-01-17 Abbvie Inc. Methods and compositions for treating asthma using anti-il-13 antibodies
GB201112429D0 (en) * 2011-07-19 2011-08-31 Glaxo Group Ltd Antigen-binding proteins with increased FcRn binding
CA2843315A1 (en) * 2011-08-01 2013-02-07 Avaxia Biologics, Inc. Bovine polyclonal antibody specific for human tnf
RU2018112861A (ru) * 2011-10-20 2019-03-04 ИЭсБиЭйТЕК - Э НОВАРТИС КОМПАНИ ЭлЭлСи Стабильные антитела, связывающиеся с несколькими антигенами
KR20140084253A (ko) 2011-10-24 2014-07-04 애브비 인코포레이티드 Ｔｎｆ에 대한 면역결합제
UY34410A (es) 2011-10-24 2013-05-31 Abbvie Inc Inmunoligantes biespecificos dirigidos contra tnf
HK1200322A1 (en) 2011-10-24 2015-08-07 Abbvie Inc. Immunobinders directed against sclerostin
AU2012346861A1 (en) 2011-11-30 2014-06-19 AbbVie Deutschland GmbH & Co. KG Methods and compositions for determining responsiveness to treatment with a tnf-alpha inhibitor
CA2855570A1 (en) 2011-12-14 2013-06-20 AbbVie Deutschland GmbH & Co. KG Composition and method for the diagnosis and treatment of iron-related disorders
EP3800200A1 (en) 2011-12-14 2021-04-07 AbbVie Deutschland GmbH & Co. KG Composition and method for the diagnosis and treatment of iron-related disorders
EP2791172B1 (en) 2011-12-16 2017-07-19 Synthon Biopharmaceuticals B.V. Compounds and methods for treating inflammatory diseases
AR090047A1 (es) 2011-12-30 2014-10-15 Abbvie Inc Dominio variable dual de inmunoglobulinas y sus usos
AU2012362326A1 (en) 2011-12-30 2014-07-24 Abbvie Inc. Dual variable domain immunoglobulins against IL-13 and/or IL-17
RS57603B1 (sr) 2012-01-27 2018-11-30 Abbvie Deutschland Sastav i metod za dijagnozu i tretiranje bolesti povezanih sa degeneracijom neurita
EA201491644A1 (ru) 2012-03-07 2014-12-30 Кадила Хелзкэр Лимитед Фармацевтические композиции
US9067990B2 (en) 2013-03-14 2015-06-30 Abbvie, Inc. Protein purification using displacement chromatography
US9150645B2 (en) 2012-04-20 2015-10-06 Abbvie, Inc. Cell culture methods to reduce acidic species
US9181572B2 (en) 2012-04-20 2015-11-10 Abbvie, Inc. Methods to modulate lysine variant distribution
EP2657334B1 (en) 2012-04-26 2016-07-06 GeneFrontier Corporation Efficient method for displaying protein multimer
US9249182B2 (en) 2012-05-24 2016-02-02 Abbvie, Inc. Purification of antibodies using hydrophobic interaction chromatography
EP2859018B1 (en) 2012-06-06 2021-09-22 Zoetis Services LLC Caninized anti-ngf antibodies and methods thereof
DK2859017T3 (da) 2012-06-08 2019-05-13 Sutro Biopharma Inc Antistoffer omfattrende stedsspecifikke ikke-naturlige aminosyrerester, fremgangsmåder til fremstilling heraf og fremgangsmåder til anvendelse heraf
AR091755A1 (es) 2012-07-12 2015-02-25 Abbvie Inc Proteinas de union a il-1
BR112015004022B1 (pt) 2012-08-31 2023-04-25 Sutro Biopharma, Inc Aminoácidos modificados compreendendo um grupo azido
US9512214B2 (en) 2012-09-02 2016-12-06 Abbvie, Inc. Methods to control protein heterogeneity
WO2014035475A1 (en) 2012-09-02 2014-03-06 Abbvie Inc. Methods to control protein heterogeneity
EP2892550B1 (en) 2012-09-07 2019-12-18 Coherus Biosciences, Inc. Stable aqueous formulations of adalimumab
EP3211006A3 (en) * 2012-09-19 2017-11-08 AbbVie Biotherapeutics Inc. Variant antibodies to tnf alpha
RU2020139283A (ru) 2012-11-01 2020-12-10 Эббви Инк. Стабильная композиция белка иммуноглобулина с двойными вариабельными доменами
PE20151179A1 (es) 2012-11-01 2015-09-12 Abbvie Inc Inmunoglobulinas de dominio variable dual anti-vegf/dll4 y usos de las mismas
TWI864338B (zh) 2012-11-14 2024-12-01 美商再生元醫藥公司 重組細胞表面捕捉蛋白質
US9550986B2 (en) 2012-12-21 2017-01-24 Abbvie Inc. High-throughput antibody humanization
WO2014106001A2 (en) 2012-12-28 2014-07-03 Abbvie, Inc. Dual specific binding proteins having a receptor sequence
US9856319B2 (en) 2012-12-28 2018-01-02 Abbvie Inc. Monovalent binding proteins
EP2948178A4 (en) 2013-01-25 2016-07-20 Thymon Llc COMPOSITIONS FOR THE SELECTIVE REDUCTION OF CIRCULATING BIOACTIVE SOLUBLE TNF AND METHODS OF TREATING A TNF MEDIATION DISEASE
EP3594230A1 (en) * 2013-02-13 2020-01-15 Laboratoire Français du Fractionnement et des Biotechnologies Highly galactosylated anti-tnf-alpha antibodies and uses thereof
SG11201507230PA (en) 2013-03-12 2015-10-29 Abbvie Inc Human antibodies that bind human tnf-alpha and methods of preparing the same
WO2014143343A1 (en) 2013-03-14 2014-09-18 Abbott Laboratories Hcv core lipid binding domain monoclonal antibodies
US20140275082A1 (en) 2013-03-14 2014-09-18 Abbvie Inc. Apoptosis-inducing agents for the treatment of cancer and immune and autoimmune diseases
EP2970375A1 (en) 2013-03-14 2016-01-20 AbbVie Inc. Low acidic species compositions and methods for producing the same using displacement chromatography
US8921526B2 (en) 2013-03-14 2014-12-30 Abbvie, Inc. Mutated anti-TNFα antibodies and methods of their use
JP2016512241A (ja) 2013-03-14 2016-04-25 アボット・ラボラトリーズＡｂｂｏｔｔ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ 改良された抗体検出のためのｈｃｖｎｓ３組換え抗原およびこの突然変異体
SG11201504260UA (en) 2013-03-14 2015-10-29 Abbvie Inc Low acidic species compositions and methods for producing and using the same
MX362075B (es) 2013-03-14 2019-01-07 Abbott Lab Ensayo de combinación de antígeno-anticuerpo del virus de la hepatitis c (vhc) y métodos y composiciones para usarlo.
US9499614B2 (en) 2013-03-14 2016-11-22 Abbvie Inc. Methods for modulating protein glycosylation profiles of recombinant protein therapeutics using monosaccharides and oligosaccharides
US9017687B1 (en) 2013-10-18 2015-04-28 Abbvie, Inc. Low acidic species compositions and methods for producing and using the same using displacement chromatography
US9469686B2 (en) 2013-03-15 2016-10-18 Abbott Laboratories Anti-GP73 monoclonal antibodies and methods of obtaining the same
WO2014144280A2 (en) 2013-03-15 2014-09-18 Abbvie Inc. DUAL SPECIFIC BINDING PROTEINS DIRECTED AGAINST IL-1β AND / OR IL-17
WO2014144600A2 (en) 2013-03-15 2014-09-18 Viktor Roschke Multivalent and monovalent multispecific complexes and their uses
WO2014144299A2 (en) 2013-03-15 2014-09-18 Abbvie Inc. DUAL SPECIFIC BINDING PROTEINS DIRECTED AGAINST TNFα
BR112015029224A2 (pt) * 2013-05-22 2017-09-19 Metabolic Eng Laboratories Co Ltd Anticorpo de alvo duplo tnf-alfa/cxcl10, transformante, método de produção de um anticorpo de alvo duplo tnf-alfa/cxcl10, composição farmacêutica e método de prevenção ou tratamento de uma doença imunológica
ES2753419T3 (es) 2013-06-07 2020-04-08 Univ Duke Inhibidores del factor H del complemento
ES2658039T3 (es) 2013-07-10 2018-03-08 Sutro Biopharma, Inc. Anticuerpos que comprenden múltiples residuos de aminoácidos no naturales sitio-específicos, métodos para su preparación y métodos de uso
WO2015017683A1 (en) * 2013-07-31 2015-02-05 Malast Mary Antimicrobial compositions and methods of use
IL320195A (en) 2013-09-13 2025-06-01 Genentech Inc Methods and compositions containing purified recombinant polypeptides
CA2920686C (en) 2013-09-13 2022-12-06 Genentech, Inc. Compositions and methods for detecting and quantifying host cell protein in cell lines and recombinant polypeptide products
WO2015051293A2 (en) 2013-10-04 2015-04-09 Abbvie, Inc. Use of metal ions for modulation of protein glycosylation profiles of recombinant proteins
BR112016007592A2 (pt) 2013-10-06 2018-01-23 Abbvie Inc proteína de ligação biespecífica que se liga a pelo menos dois alvos, conjugado de proteína de ligação biespecífica, composição farmacêutica, ácido nucleico isolado, vetor, célula hospedeira, método para produzir uma proteína de ligação biespecífica, método para determinar a reatividade de um paciente a um agente terapêutico que tem capacidade para modular a atividade de um tlr, método para ativar ou inibir células responsivas a tlr9, método para tratar um paciente que precisa de ativação de tlr9 ou inibição de tlr e método para identificar um inibidor ou estimulador de sinalização de tlr
WO2015054658A1 (en) 2013-10-11 2015-04-16 Sutro Biopharma, Inc. Modified amino acids comprising tetrazine functional groups, methods of preparation, and methods of their use
CN106170298B (zh) 2013-10-16 2024-01-09 前瞻疗法公司 用于提高抗体稳定性的缓冲液制剂
US8946395B1 (en) 2013-10-18 2015-02-03 Abbvie Inc. Purification of proteins using hydrophobic interaction chromatography
US9181337B2 (en) 2013-10-18 2015-11-10 Abbvie, Inc. Modulated lysine variant species compositions and methods for producing and using the same
US9085618B2 (en) 2013-10-18 2015-07-21 Abbvie, Inc. Low acidic species compositions and methods for producing and using the same
US20150139988A1 (en) 2013-11-15 2015-05-21 Abbvie, Inc. Glycoengineered binding protein compositions
JP2016540761A (ja) 2013-12-02 2016-12-28 アッヴィ・インコーポレイテッド 変形性関節症を治療するための組成物及び方法
CN103965357B (zh) 2013-12-31 2016-08-17 嘉和生物药业有限公司 一种抗人rankl抗体
US10955422B2 (en) 2014-02-27 2021-03-23 Biogen Ma, Inc. Method of assessing risk of PML
JP6293907B2 (ja) 2014-03-10 2018-03-14 リヒター ゲデオン エヌワイアールティー． プレクリーニング工程を用いた免疫グロブリンの精製
AR099625A1 (es) * 2014-03-21 2016-08-03 Lilly Co Eli Anticuerpos de il-21
AU2015231001A1 (en) 2014-03-21 2016-09-29 Abbvie Inc. Anti-EGFR antibodies and antibody drug conjugates
EP3125928A4 (en) 2014-04-02 2017-11-29 Intas Pharmaceuticals Ltd. Liquid pharmaceutical composition of adalimumab
WO2015172046A1 (en) 2014-05-08 2015-11-12 Phasebio Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for treating cystic fibrosis
DK2946765T3 (en) 2014-05-23 2016-10-31 Ares Trading Sa Liquid pharmaceutical composition
ES2607489T3 (es) 2014-05-23 2017-03-31 Ares Trading S.A. Composición farmacéutica líquida
EP2946766B1 (en) 2014-05-23 2016-03-02 Ares Trading S.A. Liquid pharmaceutical composition
FR3022462B1 (fr) * 2014-06-18 2018-04-27 Laboratoire Francais Du Fractionnement Et Des Biotechnologies Composition orale d'anticorps anti-tnfalpha
EP3145951A1 (en) 2014-06-24 2017-03-29 InSight Biopharmaceuticals Ltd. Methods of purifying antibodies
CA2953714C (en) * 2014-06-30 2021-05-18 Ralf Guenther Anti-tnfa antibodies with ph-dependent antigen binding
WO2016004197A1 (en) 2014-07-03 2016-01-07 Abbvie Inc. Methods for modulating protein glycosylation profiles of recombinant protein therapeutics using cobalt
US20160185848A1 (en) 2014-07-09 2016-06-30 Abbvie Inc. Methods for modulating the glycosylation profile of recombinant proteins using sugars
WO2016007870A2 (en) 2014-07-11 2016-01-14 Iogenetics, Llc Immune recognition motifs
CN107109456B (zh) * 2014-09-03 2021-02-23 博灵格英格尔海姆国际股份公司 靶向IL-23A和TNF-α的化合物及其用途
US10435464B1 (en) 2014-09-05 2019-10-08 Coherus Biosciences, Inc. Methods for making recombinant proteins
HUP1400510A1 (hu) 2014-10-28 2016-05-30 Richter Gedeon Nyrt Gyógyászati TNFalfa ellenes antitest készítmény
US10093733B2 (en) 2014-12-11 2018-10-09 Abbvie Inc. LRP-8 binding dual variable domain immunoglobulin proteins
EP3237000A1 (en) 2014-12-23 2017-11-01 Pfizer Inc Stable aqueous antibody formulation for anti tnf alpha antibodies
EP3085709B1 (en) 2014-12-28 2019-08-21 Genor Biopharma Co., Ltd Humanized anti-human rankl antibody, pharmaceutical composition and use thereof
WO2016118707A1 (en) 2015-01-21 2016-07-28 Oncobiologics, Inc. Modulation of charge variants in a monoclonal antibody composition
EP3053572A1 (en) 2015-02-06 2016-08-10 Ares Trading S.A. Liquid pharmaceutical composition
JP6824888B2 (ja) 2015-02-09 2021-02-03 フェーズバイオ ファーマシューティカルズ，インコーポレイテッド 筋肉の疾患および障害を治療するための方法および組成物
CN105777905B (zh) * 2015-03-24 2019-06-25 广东东阳光药业有限公司 一种全人源抗TNF-α单克隆抗体及其应用
EP3078675A1 (en) 2015-04-10 2016-10-12 Ares Trading S.A. Induction dosing regimen for the treatment of tnf alpha mediated disorders
WO2016179469A1 (en) * 2015-05-07 2016-11-10 Abbvie Inc. Methods and compositions for diagnosing and treating inflammatory bowel disease
HRP20200262T1 (hr) 2015-05-29 2020-05-29 Abbvie Inc. Protutijela protiv cd40 i njihova upotreba
TW201710286A (zh) 2015-06-15 2017-03-16 艾伯維有限公司 抗ｖｅｇｆ、ｐｄｇｆ及／或其受體之結合蛋白
FR3038517B1 (fr) 2015-07-06 2020-02-28 Laboratoire Francais Du Fractionnement Et Des Biotechnologies Utilisation de fragments fc modifies en immunotherapie
HU231463B1 (hu) 2015-08-04 2024-01-28 Richter Gedeon Nyrt. Módszer rekombináns proteinek galaktóz tartalmának növelésére
US11583584B1 (en) 2015-10-28 2023-02-21 Coherus Biosciences, Inc. Stable protein compositions and methods of their use
US11229702B1 (en) 2015-10-28 2022-01-25 Coherus Biosciences, Inc. High concentration formulations of adalimumab
GB201522394D0 (en) 2015-12-18 2016-02-03 Ucb Biopharma Sprl Antibodies
AU2017213775A1 (en) 2016-02-03 2018-08-16 Outlook Therapeutics, Inc. Buffer formulations for enhanced antibody stability
US10465003B2 (en) 2016-02-05 2019-11-05 Janssen Biotech, Inc. Anti-TNF antibodies, compositions, methods and use for the treatment or prevention of type 1 diabetes
RS61374B1 (sr) * 2016-03-17 2021-02-26 Tillotts Pharma Ag Anti-tnf alfa-antitela i njihovi funkcionalni fragmenti
EP3430044A1 (en) * 2016-03-17 2019-01-23 Numab Innovation AG Anti-tnf alpha -antibodies and functional fragments thereof
US20170306050A1 (en) 2016-04-08 2017-10-26 Gilead Sciences, Inc. Compositions and methods for treating cancer, inflammatory diseases and autoimmune diseases
US11071782B2 (en) 2016-04-20 2021-07-27 Coherus Biosciences, Inc. Method of filling a container with no headspace
CA3021334C (en) 2016-04-27 2022-11-29 Abbvie Inc. Methods of treatment of diseases in which il-13 activity is detrimental using anti-il-13 antibodies
TWI728118B (zh) 2016-06-02 2021-05-21 美商艾伯維有限公司 糖皮質素受體促效劑及其免疫結合物
BR112018075639A2 (pt) 2016-06-08 2019-04-09 Abbvie Inc. conjugados de anticorpo fármaco anti-egfr
AU2017279539A1 (en) 2016-06-08 2019-01-03 Abbvie Inc. Anti-B7-H3 antibodies and antibody drug conjugates
BR112018075645A2 (pt) 2016-06-08 2019-04-09 Abbvie Inc. conjugados de anticorpo fármaco anti-egfr
US20200338209A1 (en) 2016-06-08 2020-10-29 Abbvie Inc. Anti-b7-h3 antibodies and antibody drug conjugates
HUE053356T2 (hu) 2016-06-08 2021-06-28 Abbvie Inc B7-H3 elleni antitestek és antitest-hatóanyag konjugátumok
BR112018075630A2 (pt) 2016-06-08 2019-03-19 Abbvie Inc. anticorpos anti-cd98 e conjugados de fármaco de anticorpo
WO2017218698A1 (en) 2016-06-15 2017-12-21 Sutro Biopharma, Inc. Antibodies with engineered ch2 domains, compositions thereof and methods of using the same
WO2018018613A1 (zh) 2016-07-29 2018-02-01 广东东阳光药业有限公司 一种提高抗体纯度的细胞培养基和培养方法
US12097292B2 (en) 2016-08-28 2024-09-24 Mapi Pharma Ltd. Process for preparing microparticles containing glatiramer acetate
HUE062393T2 (hu) 2016-08-31 2023-11-28 Mapi Pharma Ltd Glatiramer-acetátot tartalmazó depórendszerek
WO2018045258A1 (en) * 2016-09-02 2018-03-08 The University Of Chicago TREATMENT OF TNF-alpha CYTOTOXICITY
WO2018050902A2 (en) * 2016-09-15 2018-03-22 Quadrucept Bio Limited Multimers, tetramers & octamers
CN110383068A (zh) 2016-10-03 2019-10-25 雅培实验室 评估患者样品中uch-l1状态的改进方法
WO2018075408A1 (en) 2016-10-17 2018-04-26 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Methods of treating acute myeloid leukemia (aml) with combinations of anti-cd200 antibodies, cytarabine, and daunorubicin
JP6884858B2 (ja) 2016-10-21 2021-06-09 アムジエン・インコーポレーテツド 医薬製剤及びその製造方法
WO2018102594A1 (en) 2016-12-01 2018-06-07 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Methods of treating solid tumors with anti-cd200 antibodies
JP2020508436A (ja) 2016-12-07 2020-03-19 プロジェニティ， インコーポレイテッド 胃腸管の検出方法、装置およびシステム
EP4410832A3 (en) 2016-12-14 2025-03-05 Biora Therapeutics, Inc. Treatment of a disease of the gastrointestinal tract with a tnf inhibitor
CN110234348B (zh) 2016-12-16 2024-06-25 蓝鳍生物医药公司 抗-含cub结构域蛋白1(cdcp1)抗体、抗体药物缀合物及其使用方法
MA47106A (fr) 2016-12-21 2019-10-30 Amgen Inc Formulations d'anticorps anti-tnf alpha
JOP20190162A1 (ar) 2016-12-30 2019-06-27 Biocad Joint Stock Co تركيبة صيدلانية مائية من جسم مضاد لـ tnf? أحادي النسيلة معاود الارتباط الجيني
CA3049857A1 (en) * 2017-01-11 2018-07-19 Celltrion Inc. Stable liquid formulation
TWI856437B (zh) 2017-01-20 2024-09-21 法商賽諾菲公司 抗TGF-β抗體及其用途
AR110755A1 (es) 2017-01-20 2019-05-02 Genzyme Corp Anticuerpos dirigidos a hueso
MX2019008989A (es) 2017-01-30 2019-10-09 Janssen Biotech Inc Anticuerpos anti-tnf, composiciones y metodos para el tratamiento de la artritis psoriasica activa.
CN110418652A (zh) 2017-02-07 2019-11-05 詹森生物科技公司 用于治疗活动性强直性脊柱炎的抗tnf抗体、组合物和方法
US11608357B2 (en) 2018-08-28 2023-03-21 Arecor Limited Stabilized antibody protein solutions
EP3372241A1 (en) 2017-03-06 2018-09-12 Ares Trading S.A. Liquid pharmaceutical composition
EP3372242A1 (en) 2017-03-06 2018-09-12 Ares Trading S.A. Liquid pharmaceutical composition
JP7346300B2 (ja) 2017-03-23 2023-09-19 アボット・ラボラトリーズ 早期バイオマーカーであるユビキチンカルボキシ末端ヒドロラーゼｌ１を使用する、ヒト対象における外傷性脳損傷の程度の診断及び決定の一助となるための方法
CA3050086A1 (en) 2017-03-26 2018-10-04 Mapi Pharma Ltd. Glatiramer depot systems for treating progressive forms of multiple sclerosis
WO2018184692A1 (en) 2017-04-07 2018-10-11 Ares Trading S.A. Liquid pharmaceutical composition
CN110546513A (zh) 2017-04-15 2019-12-06 雅培实验室 使用早期生物标记物帮助超急性诊断和确定人类受试者中的创伤性脑损伤的方法
US10865238B1 (en) 2017-05-05 2020-12-15 Duke University Complement factor H antibodies
EP3631465A1 (en) 2017-05-25 2020-04-08 Abbott Laboratories Methods for aiding in the determination of whether to perform imaging on a human subject who has sustained or may have sustained an injury to the head using early biomarkers
WO2018222784A1 (en) 2017-05-30 2018-12-06 Abbott Laboratories Methods for aiding in diagnosing and evaluating a mild traumatic brain injury in a human subject using cardiac troponin i
EP3649474A1 (en) 2017-07-03 2020-05-13 Abbott Laboratories Improved methods for measuring ubiquitin carboxy-terminal hydrolase l1 levels in blood
WO2019067499A1 (en) 2017-09-27 2019-04-04 Alexion Pharmaceuticals, Inc. BIOMARKER SIGNATURE FOR PREDICTING A TUMOR RESPONSE TO ANTI-CD200 THERAPY
KR20200095477A (ko) 2017-12-01 2020-08-10 애브비 인코포레이티드 글루코코르티코이드 수용체 작용제 및 이의 면역접합체
CN109879962B (zh) * 2017-12-06 2022-10-11 北京科立思维生物科技有限公司 抗tnf单链抗体、抗il-6单链抗体及其融合蛋白及其应用
BR112020010085A2 (pt) 2017-12-09 2020-10-13 Abbott Laboratories métodos para auxiliar no diagnóstico e avaliar uma lesão cerebral traumática em um indivíduo humano usando uma combinação de gfap e uch-l1
JP7344801B2 (ja) 2017-12-09 2023-09-14 アボット・ラボラトリーズ グリア原線維性酸性タンパク質（ｇｆａｐ）及び／又はユビキチンカルボキシ末端ヒドロラーゼｌ１（ｕｃｈ－ｌ１）を使用する、整形外科損傷を負っており、軽度外傷性脳損傷（ｔｂｉ）などの頭部への損傷を負ったか又は負った可能性がある対象についての診断及び査定の一助となるための方法
WO2019126133A1 (en) 2017-12-20 2019-06-27 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Liquid formulations of anti-cd200 antibodies
WO2019126536A1 (en) 2017-12-20 2019-06-27 Alexion Pharmaceuticals Inc. Humanized anti-cd200 antibodies and uses thereof
WO2019177690A1 (en) 2018-03-12 2019-09-19 Zoetis Services Llc Anti-ngf antibodies and methods thereof
EP3775900A1 (en) 2018-03-26 2021-02-17 Alexion Pharmaceuticals, Inc. High throughput method for measuring the protease activity of complement c3 convertase
JP7457661B2 (ja) 2018-06-04 2024-03-28 バイオジェン・エムエイ・インコーポレイテッド 低減したエフェクター機能を有する抗ｖｌａ－４抗体
WO2019246313A1 (en) 2018-06-20 2019-12-26 Progenity, Inc. Treatment of a disease of the gastrointestinal tract with a tnf inhibitor
JP2021529780A (ja) 2018-07-03 2021-11-04 ノバルティス アーゲー Ｎｌｒｐ３アンタゴニストを使用するｔｎｆ阻害剤に対して抵抗性の対象のための治療の方法又は治療を選択する方法
EP3863672A4 (en) 2018-10-11 2022-06-29 The Scripps Research Institute Antibody compounds with reactive arginine and related antibody drug conjugates
JP2022505562A (ja) 2018-10-24 2022-01-14 ノバルティス アーゲー Ｎｌｒｐ活性に関連する状態を治療するための化合物及び組成物
WO2020093990A1 (zh) * 2018-11-05 2020-05-14 北京韩美药品有限公司 抗TNFα/抗IL‐17A天然抗体结构样异源二聚体形式双特异抗体及其制备
HU231514B1 (hu) 2018-11-07 2024-07-28 Richter Gedeon Nyrt. Sejttenyészetben előállított rekombináns glikoprotein glikozilációs mintázatának megváltoztatására szolgáló módszer
ES2957692T3 (es) 2018-11-13 2024-01-24 Novartis Ag Compuestos y composiciones para el tratamiento de afecciones asociadas a la actividad de NLRP
JP2022506891A (ja) 2018-11-13 2022-01-17 ノバルティス アーゲー Ｎｌｒｐ活性に関連する状態を処置するための化合物及び組成物
US20220249814A1 (en) 2018-11-19 2022-08-11 Progenity, Inc. Methods and devices for treating a disease with biotherapeutics
US12428484B2 (en) 2018-12-06 2025-09-30 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Anti-ALK2 antibodies and uses thereof
EP3960858B1 (en) 2018-12-25 2025-05-07 Beijing Baishihekang Pharmaceutical Technology (BSJpharma) Co., Ltd. Small rna medicament for prevention and treatment of inflammation-related diseases and combination thereof
JP2022533287A (ja) 2019-01-22 2022-07-22 ノバルティス アーゲー Ｎｌｒｐ活性に関連する状態を処置するための化合物及び組成物
HU231498B1 (hu) 2019-04-04 2024-05-28 Richter Gedeon Nyrt Immunglobulinok affinitás kromatográfiájának fejlesztése kötést megelőző flokkulálás alkalmazásával
KR102323342B1 (ko) * 2019-04-26 2021-11-08 주식회사 와이바이오로직스 IL-17A 및 TNF-α에 특이적으로 결합하는 이중표적 항체
CA3138241A1 (en) 2019-05-23 2020-11-26 Janssen Biotech, Inc. Method of treating inflammatory bowel disease with a combination therapy of antibodies to il-23 and tnf alpha
WO2021002887A1 (en) 2019-07-02 2021-01-07 Novartis Inflammasome Research, Inc. Gut-targeted nlrp3 antagonists and their use in therapy
EP3997124A4 (en) * 2019-07-09 2024-01-03 National Institute for Biotechnology in the Negev Ltd. ANTIBODIES WITH REDUCED IMMUNOGENICITY
EP4309722A3 (en) 2019-12-13 2024-08-07 Biora Therapeutics, Inc. Ingestible device for delivery of therapeutic agent to the gastrointestinal tract
FR3104582A1 (fr) 2019-12-17 2021-06-18 Commissariat A L'energie Atomique Et Aux Energies Alternatives Variants de l’adalimumab au potentiel immunogène réduit
IL295387A (en) 2020-02-05 2022-10-01 Larimar Therapeutics Inc Tat peptide binding proteins and uses thereof
EP4114852A1 (en) 2020-03-03 2023-01-11 Sutro Biopharma, Inc. Antibodies comprising site-specific glutamine tags, methods of their preparation and methods of their use
CA3175523A1 (en) 2020-04-13 2021-10-21 Antti Virtanen Methods, complexes and kits for detecting or determining an amount of a .beta.-coronavirus antibody in a sample
JP2023528223A (ja) 2020-05-13 2023-07-04 ディスク・メディシン・インコーポレイテッド 骨髄線維症を処置するための抗ヘモジュベリン（ｈｊｖ）抗体
BR112022023489A2 (pt) 2020-05-21 2023-03-14 Janssen Biotech Inc Método de tratamento de doença inflamatória intestinal com uma terapia de combinação de anticorpos para il-23 e tnf-alfa
WO2022031804A1 (en) 2020-08-04 2022-02-10 Abbott Laboratories Improved methods and kits for detecting sars-cov-2 protein in a sample
CN111944052B (zh) * 2020-08-26 2022-02-11 中国药科大学 抗TNF-α/PD-1双特异性抗体及其应用
CN112010970B (zh) * 2020-10-30 2021-01-12 迈威(上海)生物科技股份有限公司 一种去除重组表达抗体聚体和降解产物的方法
WO2022119841A1 (en) 2020-12-01 2022-06-09 Abbott Laboratories Use of one or more biomarkers to determine traumatic brain injury (tbi) in a subject having received a head computerized tomography scan that is negative for a tbi
WO2023102384A1 (en) 2021-11-30 2023-06-08 Abbott Laboratories Use of one or more biomarkers to determine traumatic brain injury (tbi) in a subject having received a head computerized tomography scan that is negative for a tbi
US11672929B2 (en) 2020-12-02 2023-06-13 Breathe Restore, Inc. Product delivery devices and methods
WO2022123293A1 (ko) 2020-12-09 2022-06-16 에이치케이이노엔 주식회사 항 OX40L 항체, 항 OX40L 및 항 TNFα 이중 특이성 항체 및 이들의 용도
MX2023007303A (es) * 2020-12-18 2023-09-11 Elanco Us Inc Anticuerpos tnf alfa y ngf para uso veterinario.
EP4271998A1 (en) 2020-12-30 2023-11-08 Abbott Laboratories Methods for determining sars-cov-2 antigen and anti-sars-cov-2 antibody in a sample
AR124681A1 (es) 2021-01-20 2023-04-26 Abbvie Inc Conjugados anticuerpo-fármaco anti-egfr
JP2024507220A (ja) 2021-02-19 2024-02-16 セリピオン， インコーポレイテッド パラオキソナーゼ融合ポリペプチドならびに関連する組成物および方法
AU2022264509A1 (en) 2021-04-27 2023-12-14 Generation Bio Co. Non-viral dna vectors expressing therapeutic antibodies and uses thereof
WO2022232286A1 (en) 2021-04-27 2022-11-03 Generation Bio Co. Non-viral dna vectors expressing anti-coronavirus antibodies and uses thereof
JP2024519858A (ja) 2021-05-18 2024-05-21 アボット・ラボラトリーズ 小児対象における脳損傷を査定する方法
EP4356129A1 (en) 2021-06-14 2024-04-24 Abbott Laboratories Methods of diagnosing or aiding in diagnosis of brain injury caused by acoustic energy, electromagnetic energy, an over pressurization wave, and/or blast wind
AU2022298665A1 (en) * 2021-06-22 2024-01-04 University Of Virginia Patent Foundation Compositions and methods for detecting and regulating fibronectin-integrin interactions and signaling
CN120463762A (zh) 2021-08-26 2025-08-12 映恩生物科技(上海)有限公司 一种甾体化合物及其缀合物
EP4396587A1 (en) 2021-08-31 2024-07-10 Abbott Laboratories Methods and systems of diagnosing brain injury
CN118715440A (zh) 2021-08-31 2024-09-27 雅培实验室 诊断脑损伤的方法和系统
WO2023056268A1 (en) 2021-09-30 2023-04-06 Abbott Laboratories Methods and systems of diagnosing brain injury
WO2023114978A1 (en) 2021-12-17 2023-06-22 Abbott Laboratories Systems and methods for determining uch-l1, gfap, and other biomarkers in blood samples
CN119256227A (zh) 2022-02-04 2025-01-03 雅培实验室 用于检测样品中泛素羧基末端水解酶l1和/或胶质纤维酸性蛋白的存在或测量其量的侧向流方法、测定和装置
EP4493212A1 (en) 2022-03-14 2025-01-22 Generation Bio Co. Heterologous prime boost vaccine compositions and methods of use
EP4547714A1 (en) * 2022-06-28 2025-05-07 Adafre BioSciences, LLC Anti-tnf-alpha antibodies and compositions
WO2024006876A1 (en) 2022-06-29 2024-01-04 Abbott Laboratories Magnetic point-of-care systems and assays for determining gfap in biological samples
CN116903738A (zh) * 2022-08-02 2023-10-20 北京绿竹生物技术股份有限公司 一种低甘露糖型抗人肿瘤坏死因子-α单抗及其用途
TW202421172A (zh) 2022-09-07 2024-06-01 美商Ｍｄｘ管理有限責任公司 用於治療癌症之shp-1抑制劑
EP4587842A1 (en) 2022-09-15 2025-07-23 Abbott Laboratories Biomarkers and methods for differentiating between mild and supermild traumatic brain injury
EP4611752A1 (en) 2022-11-02 2025-09-10 MDX Management LLC Combination of a tyrosine kinase inhibitor and a pro-inflammatory agent for treating cancer
WO2024196822A1 (en) 2023-03-17 2024-09-26 Mdx Management Llc Compositions and methods for ameliorating adverse effects of therapies
WO2024211475A1 (en) 2023-04-04 2024-10-10 Abbott Laboratories Use of biomarkers to determine whether a subject has sustained, may have sustained or is suspected of sustaining a subacute acquired brain injury (abi)
WO2024226971A1 (en) 2023-04-28 2024-10-31 Abbott Point Of Care Inc. Improved assays, cartridges, and kits for detection of biomarkers, including brain injury biomarkers
WO2025038745A1 (en) 2023-08-16 2025-02-20 Mdx Management Llc Compositions and methods for activating immune cells
WO2025188920A1 (en) 2024-03-06 2025-09-12 Mdx Management Llc Local application of agents inhibiting tyrosine kinase or shp-1 signaling

Family Cites Families (114)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4680276A (en) * 1977-05-25 1987-07-14 Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale Metal polypeptides
JPS58501544A (ja) 1981-09-08 1983-09-16 ザ　ロツクフエラ−　ユニヴア−シテイ エンドトキシン誘発メディエ−タ−（ショック検定）によるリポプロティンリパ−ゼの抑圧
US5672347A (en) 1984-07-05 1997-09-30 Genentech, Inc. Tumor necrosis factor antagonists and their use
IL73883A (en) 1984-12-20 1990-12-23 Yeda Res & Dev Monoclonal antibodies against tnf-alpha,hybridomas producing them and method for the purification of tnf-alpha
US4661016A (en) * 1985-04-11 1987-04-28 Mobil Oil Corporation Subsea flowline connector
DE3650150T2 (de) 1985-08-16 1995-04-27 The Rockefeller University, New York, N.Y. Modulator der anabolischen Aktivität und seine Verwendungen.
DE3631229A1 (de) 1986-09-13 1988-03-24 Basf Ag Monoklonale antikoerper gegen humanen tumornekrosefaktor (tnf) und deren verwendung
GB8630273D0 (en) * 1986-12-18 1987-01-28 Til Medical Ltd Pharmaceutical delivery systems
AU626572B2 (en) 1988-07-18 1992-08-06 Chiron Corporation Monoclonal antibodies reactive with cachectin
GB8823869D0 (en) * 1988-10-12 1988-11-16 Medical Res Council Production of antibodies
US4940723A (en) * 1988-10-20 1990-07-10 University Of North Carolina, Chapel Hill Use of bis-(5-amidino-2-benzimidazolyl) methane (BABIM) to treat arthritis
EP0366043B1 (en) 1988-10-24 1994-03-30 Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd. Monoclonal antibody
US5530101A (en) * 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
IE63847B1 (en) * 1989-05-05 1995-06-14 Res Dev Foundation A novel antibody delivery system for biological response modifiers
DE3918082A1 (de) * 1989-06-02 1991-01-24 Max Planck Gesellschaft Mittel gegen autoimmunerkrankungen
US5959087A (en) * 1989-08-07 1999-09-28 Peptide Technology, Ltd. Tumour necrosis factor binding ligands
DK0486526T3 (da) 1989-08-07 1996-06-24 Peptide Technology Ltd Bindingsligander for tumornekrosefaktor
US6451983B2 (en) * 1989-08-07 2002-09-17 Peptech Limited Tumor necrosis factor antibodies
GB8928874D0 (en) 1989-12-21 1990-02-28 Celltech Ltd Humanised antibodies
US5859205A (en) 1989-12-21 1999-01-12 Celltech Limited Humanised antibodies
US6075181A (en) 1990-01-12 2000-06-13 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US6150584A (en) * 1990-01-12 2000-11-21 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US6673986B1 (en) * 1990-01-12 2004-01-06 Abgenix, Inc. Generation of xenogeneic antibodies
GB9014932D0 (en) 1990-07-05 1990-08-22 Celltech Ltd Recombinant dna product and method
US5625126A (en) * 1990-08-29 1997-04-29 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5545806A (en) * 1990-08-29 1996-08-13 Genpharm International, Inc. Ransgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5770429A (en) * 1990-08-29 1998-06-23 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5789650A (en) * 1990-08-29 1998-08-04 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5661016A (en) 1990-08-29 1997-08-26 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes
US5633425A (en) * 1990-08-29 1997-05-27 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US7084260B1 (en) * 1996-10-10 2006-08-01 Genpharm International, Inc. High affinity human antibodies and human antibodies against human antigens
US6300129B1 (en) * 1990-08-29 2001-10-09 Genpharm International Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
EP0814159B1 (en) * 1990-08-29 2005-07-27 GenPharm International, Inc. Transgenic mice capable of producing heterologous antibodies
US6255458B1 (en) * 1990-08-29 2001-07-03 Genpharm International High affinity human antibodies and human antibodies against digoxin
GB9022547D0 (en) 1990-10-17 1990-11-28 Wellcome Found Purified immunoglobulin
US5994510A (en) 1990-12-21 1999-11-30 Celltech Therapeutics Limited Recombinant antibodies specific for TNFα
GB9109645D0 (en) 1991-05-03 1991-06-26 Celltech Ltd Recombinant antibodies
GB2279077B (en) * 1990-12-21 1995-06-14 Celltech Ltd Therapeutic compositions comprising recombinant antibodies specific for the TNFalpha
GB9028123D0 (en) 1990-12-28 1991-02-13 Erba Carlo Spa Monoclonal antibodies against human tumor necrosis factor alpha
US7192584B2 (en) * 1991-03-18 2007-03-20 Centocor, Inc. Methods of treating psoriasis with anti-TNF antibodies
US6277969B1 (en) * 1991-03-18 2001-08-21 New York University Anti-TNF antibodies and peptides of human tumor necrosis factor
US5656272A (en) * 1991-03-18 1997-08-12 New York University Medical Center Methods of treating TNF-α-mediated Crohn's disease using chimeric anti-TNF antibodies
JPH06506120A (ja) 1991-03-18 1994-07-14 ニューヨーク・ユニバーシティ ヒト腫瘍壊死因子に特異的なモノクローナルなキメラ抗体
US20040120952A1 (en) * 2000-08-07 2004-06-24 Centocor, Inc Anti-TNF antibodies and peptides of human tumor necrosis factor
US5698195A (en) * 1991-03-18 1997-12-16 New York University Medical Center Methods of treating rheumatoid arthritis using chimeric anti-TNF antibodies
US20060246073A1 (en) * 1991-03-18 2006-11-02 Knight David M Anti-TNF antibodies and peptides of human tumor necrosis factor
US20070298040A1 (en) * 1991-03-18 2007-12-27 Centocor, Inc. Methods of treating seronegative arthropathy with anti-TNF antibodies
US5328985A (en) * 1991-07-12 1994-07-12 The Regents Of The University Of California Recombinant streptavidin-protein chimeras useful for conjugation of molecules in the immune system
CA2119930C (en) * 1991-09-23 2002-10-01 Hendricus R. J. M. Hoogenboom Production of chimeric antibodies - a combinatorial approach
WO1994026910A1 (en) 1993-05-12 1994-11-24 Xoma Corporation Immunotoxins comprising gelonin and an antibody
US5869619A (en) * 1991-12-13 1999-02-09 Xoma Corporation Modified antibody variable domains
WO1994008619A1 (en) * 1992-10-08 1994-04-28 The Kennedy Institute Of Rheumatology Treatment of autoimmune and inflammatory disorders
US6270766B1 (en) * 1992-10-08 2001-08-07 The Kennedy Institute Of Rheumatology Anti-TNF antibodies and methotrexate in the treatment of arthritis and crohn's disease
EP0614984B2 (en) 1993-03-05 2010-11-03 Bayer HealthCare LLC Anti-TNF alpha human monoclonal antibodies
ATE183513T1 (de) 1993-06-03 1999-09-15 Therapeutic Antibodies Inc Herstellung von antikörperfragmenten
WO1995011317A1 (en) 1993-10-19 1995-04-27 The Scripps Research Institute Synthetic human neutralizing monoclonal antibodies to human immunodeficiency virus
EP0659766A1 (en) 1993-11-23 1995-06-28 Schering-Plough Human monoclonal antibodies against human cytokines and methods of making and using such antibodies
WO1995023813A1 (en) 1994-03-04 1995-09-08 Merck & Co., Inc. In vitro antibody affinity maturation using alanine scanning mutagenesis
JPH07289288A (ja) * 1994-04-27 1995-11-07 L T T Kenkyusho:Kk 抗リウマチ薬の効果評価方法
WO1996000081A1 (en) 1994-06-24 1996-01-04 Immunex Corporation Controlled release polypeptide compositions and methods of treating inflammatory bowel disease
US5561053A (en) 1994-08-05 1996-10-01 Genentech, Inc. Method for selecting high-expressing host cells
GB9416721D0 (en) * 1994-08-18 1994-10-12 Short Brothers Plc A bias yarn assembly forming device
US6113898A (en) 1995-06-07 2000-09-05 Idec Pharmaceuticals Corporation Human B7.1-specific primatized antibodies and transfectomas expressing said antibodies
US6090382A (en) * 1996-02-09 2000-07-18 Basf Aktiengesellschaft Human antibodies that bind human TNFα
TR199801532T2 (xx) * 1996-02-09 1998-11-23 Basf Aktiengesellschaft �nsan TNFalfa 's�n� ba�layan insan antikorlar�.
AU3633000A (en) * 1999-03-26 2000-10-16 Human Genome Sciences, Inc. Neutrokine-alpha binding proteins and methods based thereon
US20060018907A1 (en) * 2000-08-07 2006-01-26 Centocor, Inc. Anti-TNF antibodies and peptides of human tumor necrosis factor
US20050249735A1 (en) * 2000-08-07 2005-11-10 Centocor, Inc. Methods of treating ankylosing spondylitis using anti-TNF antibodies and peptides of human tumor necrosis factor
UA81743C2 (uk) * 2000-08-07 2008-02-11 Центокор, Инк. МОНОКЛОНАЛЬНЕ АНТИТІЛО ЛЮДИНИ, ЩО СПЕЦИФІЧНО ЗВ'ЯЗУЄТЬСЯ З ФАКТОРОМ НЕКРОЗУ ПУХЛИН АЛЬФА (ФНПα), ФАРМАЦЕВТИЧНА КОМПОЗИЦІЯ, ЩО ЙОГО МІСТИТЬ, ТА СПОСІБ ЛІКУВАННЯ РЕВМАТОЇДНОГО АРТРИТУ
BR0206160A (pt) * 2001-05-25 2004-10-26 Abbott Gmbh & Co Kg Uso de anticorpos anti-tnf como medicamentos no tratamento de distúrbios sépticos de pacientes anêmicos
CA2868614A1 (en) * 2001-06-08 2002-12-08 Abbott Laboratories (Bermuda) Ltd. Methods of administering anti-tnf.alpha. antibodies
US20030161828A1 (en) * 2002-02-19 2003-08-28 Abbott Gmbh & Co. Kg Use of TNF antagonists as drugs for the treatment of patients with an inflammatory reaction and without suffering from total organ failure
US20040009172A1 (en) * 2002-04-26 2004-01-15 Steven Fischkoff Use of anti-TNFalpha antibodies and another drug
US20030206898A1 (en) * 2002-04-26 2003-11-06 Steven Fischkoff Use of anti-TNFalpha antibodies and another drug
MX342777B (es) * 2002-07-19 2016-10-12 Abbvie Biotechnology Ltd Inhibidores tnfa para usarse en el tratamiento de trastornos relacionados con tnfa.
US20090280065A1 (en) * 2006-04-10 2009-11-12 Willian Mary K Uses and Compositions for Treatment of Psoriasis
US20040033228A1 (en) * 2002-08-16 2004-02-19 Hans-Juergen Krause Formulation of human antibodies for treating TNF-alpha associated disorders
US20040054414A1 (en) * 2002-09-18 2004-03-18 Trieu Hai H. Collagen-based materials and methods for augmenting intervertebral discs
MY150740A (en) * 2002-10-24 2014-02-28 Abbvie Biotechnology Ltd Low dose methods for treating disorders in which tnf? activity is detrimental
TW201705980A (zh) * 2004-04-09 2017-02-16 艾伯維生物技術有限責任公司 用於治療ＴＮＦα相關失調症之多重可變劑量療法
EP1807111A4 (en) * 2004-10-08 2009-05-27 Abbott Biotech Ltd SYNCYTIAL RESPIRATORY VIRUS INFECTION (RSV)
NZ595225A (en) * 2005-05-16 2013-05-31 Abbott Biotech Ltd Use of tnf inhibitor for treatment of erosive polyarthritis
US20070041905A1 (en) * 2005-08-19 2007-02-22 Hoffman Rebecca S Method of treating depression using a TNF-alpha antibody
NZ608431A (en) * 2005-11-01 2014-11-28 Abbvie Biotechnology Ltd Methods and compositions for diagnosing ankylosing spondylitis using biomarkers
CN102391358B (zh) * 2006-04-05 2016-08-10 艾伯维生物技术有限公司 抗体纯化
WO2007120626A2 (en) * 2006-04-10 2007-10-25 Abbott Biotechnology Ltd. Uses and compositions for treatment of ankylosing spondylitis
US20080118496A1 (en) * 2006-04-10 2008-05-22 Medich John R Uses and compositions for treatment of juvenile rheumatoid arthritis
US20090317399A1 (en) * 2006-04-10 2009-12-24 Pollack Paul F Uses and compositions for treatment of CROHN'S disease
EP2010214A4 (en) * 2006-04-10 2010-06-16 Abbott Biotech Ltd USES AND COMPOSITIONS FOR THE TREATMENT OF RHEUMATOID ARTHRITIS
US9605064B2 (en) * 2006-04-10 2017-03-28 Abbvie Biotechnology Ltd Methods and compositions for treatment of skin disorders
US9624295B2 (en) * 2006-04-10 2017-04-18 Abbvie Biotechnology Ltd. Uses and compositions for treatment of psoriatic arthritis
US20080131374A1 (en) * 2006-04-19 2008-06-05 Medich John R Uses and compositions for treatment of rheumatoid arthritis
US20080311043A1 (en) * 2006-06-08 2008-12-18 Hoffman Rebecca S Uses and compositions for treatment of psoriatic arthritis
US20100021451A1 (en) * 2006-06-08 2010-01-28 Wong Robert L Uses and compositions for treatment of ankylosing spondylitis
BRPI0713802A2 (pt) * 2006-06-30 2012-11-06 Abbott Biotech Ltd dispositivo de injeção automático
MY161866A (en) * 2006-09-13 2017-05-15 Abbvie Inc Cell culture improvements
NZ613356A (en) * 2006-10-27 2015-02-27 Abbvie Biotechnology Ltd Crystalline anti-htnfalpha antibodies
MX2009010361A (es) 2007-03-29 2009-10-16 Abbott Lab Anticuerpos il-12 anti-humanos cristalinos.
US8092998B2 (en) * 2007-05-31 2012-01-10 Abbott Laboratories Biomarkers predictive of the responsiveness to TNFα inhibitors in autoimmune disorders
WO2008150490A2 (en) * 2007-06-01 2008-12-11 Abbott Biotechnology Ltd. Uses and compositions for treatment of psoriasis and crohn's disease
WO2008154543A2 (en) * 2007-06-11 2008-12-18 Abbott Biotechnology Ltd. Methods for treating juvenile idiopathic arthritis
US20090110679A1 (en) * 2007-07-13 2009-04-30 Luk-Chiu Li Methods and compositions for pulmonary administration of a TNFa inhibitor
CN101980722A (zh) * 2007-08-08 2011-02-23 雅培制药有限公司 结晶抗体的组合物和方法
EP2231175A4 (en) * 2007-11-30 2014-07-16 Abbvie Inc PROTEIN FORMULATIONS AND MANUFACTURING METHOD
JP2011510267A (ja) * 2008-01-03 2011-03-31 アボツト・バイオテクノロジー・リミテツド 乾癬の治療における化合物の長期的効力の予測
AU2009206089B2 (en) * 2008-01-15 2014-08-28 Abbvie Inc. Improved mammalian expression vectors and uses thereof
NZ601913A (en) * 2008-01-15 2014-02-28 Abbott Gmbh & Co Kg Powdered protein compositions and methods of making same
MX2010008364A (es) 2008-01-30 2010-08-23 Abbott Lab Composiciones y metodos para cristalizar fragmentos de anticuerpo.
CA2717905A1 (en) * 2008-03-24 2009-10-01 Abbott Biotechnology Ltd. Methods and compositions for treating bone loss
BRPI1012162A2 (pt) 2009-04-29 2016-01-12 Abbott Biotech Ltd dispositivo de injeção automática
NZ613809A (en) * 2009-05-04 2015-02-27 Abbvie Biotechnology Ltd Stable high protein concentration formulations of human anti-tnf-alpha-antibodies
MX2012008985A (es) 2010-02-02 2012-09-07 Abbott Biotech Ltd Metodos y composiciones para predecir la capacidad de respuesta al tratamiento con el inhibidor de tnf-alfa.
DK2575884T3 (en) 2010-06-03 2018-09-03 Abbvie Biotechnology Ltd APPLICATIONS AND COMPOSITIONS TO TREAT HIDRADENITIS SUPPURATIVA (HS)
US9085618B2 (en) * 2013-10-18 2015-07-21 Abbvie, Inc. Low acidic species compositions and methods for producing and using the same

Also Published As

Publication number Publication date
BG66195B1 (bg) 2012-01-31
NO20026202L (no) 1998-10-07
IL125697A (en) 2005-03-20
US20120258114A1 (en) 2012-10-11
US6258562B1 (en) 2001-07-10
DE69721548D1 (de) 2003-06-05
US20070249813A1 (en) 2007-10-25
NO2017038I1 (no) 2017-08-01
DE122004000003I1 (de) 2004-09-23
HUP9901874A2 (hu) 1999-09-28
TR199801532T2 (xx) 1998-11-23
IL151641A0 (en) 2003-04-10
SK106298A3 (en) 1999-03-12
CZ292465B6 (cs) 2003-09-17
HU221984B1 (hu) 2003-03-28
CN100429232C (zh) 2008-10-29
IL206994A0 (en) 2010-12-30
BR9707379A (pt) 1999-04-13
NO2004002I2 (no) 2008-02-04
ATE239041T1 (de) 2003-05-15
BG112042A (bg) 2015-10-30
UA82823C2 (en) 2008-05-26
NO322755B1 (no) 2006-12-04
LU91062I2 (fr) 2004-04-26
US20130115224A1 (en) 2013-05-09
JP2007045828A (ja) 2007-02-22
HU230515B1 (hu) 2016-10-28
BG109311A (en) 2006-03-31
JP5422501B2 (ja) 2014-02-19
US20030092059A1 (en) 2003-05-15
NO983627L (no) 1998-10-07
HK1214607A1 (en) 2016-07-29
CA2243459C (en) 2002-09-17
EP0929578A1 (en) 1999-07-21
PT929578E (pt) 2003-09-30
NL300143I1 (nl) 2004-05-03
NZ536216A (en) 2006-08-31
JP5689902B2 (ja) 2015-03-25
CN101712720A (zh) 2010-05-26
UA57726C2 (uk) 2003-07-15
JP4404181B2 (ja) 2010-01-27
HK1066860A1 (en) 2005-04-01
NO320657B1 (no) 2006-01-09
NO983627D0 (no) 1998-08-07
JP4890997B2 (ja) 2012-03-07
ES2198552T3 (es) 2004-02-01
JP5759526B2 (ja) 2015-08-05
CN102070715A (zh) 2011-05-25
HU0204115D0 (en) 2003-02-28
CA2243459A1 (en) 1997-08-14
BR9707379B1 (pt) 2009-08-11
RO123028B1 (ro) 2010-07-30
HK1019452A1 (en) 2000-02-11
NZ562935A (en) 2009-06-26
WO1997029131A1 (en) 1997-08-14
NO20026202D0 (no) 2002-12-23
HK1214608A1 (en) 2016-07-29
BRPI9707379B8 (pt) 2015-07-07
BR9715219B1 (pt) 2010-02-23
US8753633B2 (en) 2014-06-17
JP2014055150A (ja) 2014-03-27
CY2463B1 (en) 2005-06-03
BG64776B1 (bg) 2006-03-31
NZ576716A (en) 2011-02-25
HK1214609A1 (en) 2016-07-29
RU2458704C9 (ru) 2012-12-10
SI9720020A (sl) 1999-10-31
NZ331579A (en) 2001-06-29
AU722077B2 (en) 2000-07-20
JP2000507810A (ja) 2000-06-27
CY2005011I1 (el) 2011-06-08
RU2458704C2 (ru) 2012-08-20
MX336813B (es) 2016-02-02
IL125697A0 (en) 1999-04-11
HU228630B1 (en) 2013-04-29
BG66509B1 (bg) 2015-11-30
MX9806347A (es) 1998-10-31
DE122004000003I2 (de) 2007-03-29
HUP1500179A2 (en) 1999-09-28
SK284040B6 (sk) 2004-08-03
CN1215407A (zh) 1999-04-28
CN103275221A (zh) 2013-09-04
DK0929578T3 (da) 2003-08-25
JP2003177130A (ja) 2003-06-27
HK1125972A1 (en) 2009-08-21
US8372400B2 (en) 2013-02-12
NO2017038I2 (no) 2017-11-17
BG102755A (en) 1999-05-31
BRPI9707379C8 (pt) 2017-12-12
CN1300173C (zh) 2007-02-14
PL188192B1 (pl) 2004-12-31
RU2003120859A (ru) 2005-01-10
PL328411A1 (en) 1999-01-18
RO119831B1 (ro) 2005-04-29
RU2270030C2 (ru) 2006-02-20
JP2016104798A (ja) 2016-06-09
US8206714B2 (en) 2012-06-26
KR19990082430A (ko) 1999-11-25
US7541031B2 (en) 2009-06-02
HK1214610A1 (en) 2016-07-29
HU230048B1 (hu) 2015-06-29
HUP9901874A3 (en) 2000-05-29
CN103275221B (zh) 2016-08-17
JP2015108011A (ja) 2015-06-11
AU2122997A (en) 1997-08-28
HK1125951A1 (en) 2009-08-21
RU2012102323A (ru) 2013-07-27
SI9720020B (en) 2001-12-31
NO319955B1 (no) 2005-10-03
PL193499B1 (pl) 2007-02-28
NO20040052L (no) 1998-10-07
US20100040604A1 (en) 2010-02-18
JP5951056B2 (ja) 2016-07-13
RU2005113954A (ru) 2006-11-20
IL218518A0 (en) 2012-04-30
DE122004000004I1 (de) 2004-08-12
JP2013091666A (ja) 2013-05-16
KR100317188B1 (ko) 2002-02-19
EP0929578B1 (en) 2003-05-02
CN1504752A (zh) 2004-06-16
NO20040154L (no) 1998-10-07
BRPI9715219B8 (pt) 2015-07-07
JP2010209119A (ja) 2010-09-24
US20090155205A1 (en) 2009-06-18
NO316711B1 (no) 2004-04-13
BG107537A (bg) 2003-09-30
BG110703A (en) 2010-10-29
US7223394B2 (en) 2007-05-29
US20130330357A1 (en) 2013-12-12
BG64564B1 (bg) 2005-07-29
JP3861118B2 (ja) 2006-12-20
NZ512006A (en) 2005-05-27
US20130330356A1 (en) 2013-12-12
NL300143I2 (nl) 2004-07-01
DE69721548T2 (de) 2004-04-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
AU722077B2 (en) Human antibodies that bind human TNFalpha
EP2397494B1 (en) Human antibodies that bind human TNFalpha
AU775499B2 (en) Human antibodies that bind human TNFalpha
HK1066860B (en) HUMAN ANTIBODIES THAT BIND HUMAN TNFα
HK1165437A (en) Human antibodies that bind human tnfalpha

Legal Events

Date Code Title Description
PD00 Pending as of 2000-06-30 in czech republic
MK4A Patent expired

Effective date: 20170210