CN106170298B - 用于提高抗体稳定性的缓冲液制剂 - Google Patents
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Abstract
本发明提供缓冲的阿达木单抗制剂。所述制剂包含缓冲液，所述缓冲液包含乙酸盐、甘露醇、冰乙酸、氯化钠，和聚山梨醇酯80。所述制剂具有酸性pH，并增强抗体(包括阿达木单抗抗体)的热稳定性、构象稳定性和胶体稳定性。
Description
相关申请的交叉引用
本申请要求2013年10月16日提交的美国临时申请号61/891,485的优先权，其内容通过引用以其整体结合到本文中并用于所有目的。
序列表的引用
本申请包括作为创建于2014年10月10日的名称为Buffered AdalimumabST25.txt的文本文件电子提交的序列表，其大小为16,000字节。该序列表通过引用结合到本文中。
发明领域
本发明总体上涉及抗体制剂化学的领域。更具体地，本发明涉及用于抗体贮存的缓冲的制剂，其提高抗体的热稳定性、构象和胶体稳定性，从而提高抗体的长期贮存。
发明背景
本说明书全文引用了各种出版物，包括专利、公布的申请、登记号、技术论文和学术论文。这些引用的出版物各自通过引用以其整体结合到本文中并用于所有目的。
作为生物制剂价格竞争与创新法案(BPCIA)的一部分，如果数据显示生物药物产品(自活的生物体产生或衍生)尤其是与已经批准的生物产品″高度类似的″，则所述生物药物产品可表示为″生物类似的″。生物类似的产品应至少保留美国食品和药品管理局(U.S.Food and Drug Agency)批准的生物产品的生物功能和治疗功效。然而，生物类似的产品可与已批准的生物产品不同地配制。该制剂可改善生物药物产品的稳定性和贮存期，还可改善在治疗特定疾病或病况中的功效。该制剂还可改善其它给药方面，包括减少患者不适，或减少在给予已批准的生物产品时患者可能经历的其它不利作用。
抗体分子可用作生物药物，并且许多这样的抗体经批准用于人。抗体分子可作为生物类似物(biosimilar)而产生，从而重新配制。本领域中对高品质的抗体生物类似物仍存在需要。
发明简述
本发明特征在于缓冲的抗体制剂，其包含(a)抗体。所述抗体可特异性结合肿瘤坏死因子α。所述抗体可含有包含SEQ ID NO：1的氨基酸序列的重链和包含SEQ ID NO：2的氨基酸序列的轻链。除了抗体之外，所述制剂还包含(b)水性缓冲液，其包含约0.7mM-约1.3mM的乙酸盐，优选乙酸钠三水合物，约200mM-约206mM的甘露醇，约16mM-约22mM的冰乙酸和约24mM-约28mM的氯化钠；和(c)约0.07％(v/v)-约0.15％(v/v)的非离子表面活性剂例如聚山梨醇酯80。所述缓冲的抗体制剂具有约5.1-约5.3的pH，优选约5.2。
在一些方面，所述制剂包含约30mg-约50mg的所述抗体。在一些优选的方面，所述制剂包含约35mg-约45mg的所述抗体。在一些优选的方面，所述制剂包含约37mg-约43mg的所述抗体。在一些优选的方面，所述制剂包含约40mg的所述抗体。
所述缓冲液可包含约0.8mM-约1.2mM的乙酸钠三水合物，或约0.9mM-约1.1mM的乙酸钠三水合物，或约1mM的乙酸钠三水合物。所述缓冲液可包含约201mM-约205mM的甘露醇，或约202mM-约204mM的甘露醇，或约203mM的甘露醇。所述缓冲液可包含约17mM-约21mM的冰乙酸，或约18mM-约20mM的冰乙酸，或约19mM的冰乙酸。所述缓冲液可包含约25mM-约27mM的氯化钠，或约26mM的氯化钠，或约27mM的氯化钠，或约26.35mM的氯化钠。
所述缓冲的抗体制剂包含非离子表面活性剂，其优选是聚山梨醇酯80。在一些方面，所述制剂包含约0.08％(v/v)-约0.12％(v/v)的聚山梨醇酯80。在一些方面，所述制剂包含约0.09％(v/v)-约0.11％(v/v)的聚山梨醇酯80。在一些方面，所述制剂包含约0.1％(v/v)的聚山梨醇酯80。
在一个详细的方面，缓冲的抗体制剂包含(a)约30mg-约50mg的抗体，所述抗体含有包含SEQ.ID NO：1的氨基酸序列的重链和包含SEQ.ID NO：2的氨基酸序列的轻链；(b)缓冲液，所述缓冲液包含约1mM的乙酸盐，优选乙酸钠三水合物，约203mM的甘露醇，约19mM的冰乙酸和约26.35mM的氯化钠；和(c)约0.1％(按体积计)的聚山梨醇酯80。所述缓冲的抗体制剂具有约5.1-约5.3的pH，优选约5.2。在一些优选的方面，所述制剂包含约35mg-约45mg的抗体。在一些优选的方面，所述制剂包含约37mg-约43mg的抗体。在一些优选的方面，所述制剂包含约40mg的抗体。
所述缓冲的抗体制剂可用作药物，并可用于治疗方法。例如，所述缓冲的抗体制剂可用于治疗关节炎。在一些方面，所述缓冲的抗体制剂可用于治疗类风湿性关节炎，或幼年性特发性关节炎，或银屑病关节炎。在一些方面，所述缓冲的抗体制剂可用于治疗强直性脊柱炎。在一些方面，所述缓冲的抗体制剂可用于治疗克罗恩病。在一些方面，所述缓冲的抗体制剂可用于治疗溃疡性结肠炎。在一些方面，所述缓冲的抗体制剂可用于治疗斑块状银屑病。
所述治疗方法包括用于治疗关节炎的方法，所述关节炎包括类风湿性关节炎、幼年性特发性关节炎和银屑病关节炎。所述治疗方法还包括用于治疗强直性脊柱炎的方法、用于治疗克罗恩病的方法、用于治疗斑块状银屑病的方法和用于治疗溃疡性结肠炎的方法。
在一些方面，治疗方法包括给予关节炎(包括类风湿性关节炎、幼年性特发性关节炎或银屑病关节炎)患者有效治疗患者的关节炎的量的本文所述或举例说明的缓冲的抗体制剂。在一些方面，治疗方法包括给予强直性脊柱炎患者有效治疗患者的强直性脊柱炎的量的本文所述或举例说明的缓冲的抗体制剂。在一些方面，治疗方法包括给予克罗恩病患者有效治疗患者的克罗恩病的量的本文所述或举例说明的缓冲的抗体制剂。在一些方面，治疗方法包括给予溃疡性结肠炎患者有效治疗患者的溃疡性结肠炎的量的本文所述或举例说明的缓冲的抗体制剂。在一些方面，治疗方法包括给予斑块状银屑病患者有效治疗患者的斑块状银屑病的量的本文所述或举例说明的缓冲的抗体制剂。所述缓冲的抗体制剂优选经皮下给予患者，例如，通过皮下注射。所述患者优选是人。
本发明还提供药盒，其可例如按照所述治疗方法使用。因此，例如，所述药盒通常包含本文所述或举例说明的任何缓冲的抗体制剂和在治疗方法中使用所述制剂的说明书。所述治疗方法可以是用于治疗关节炎的方法。所述治疗方法可以是用于治疗类风湿性关节炎的方法。所述治疗方法可以是用于治疗幼年性特发性关节炎的方法。所述治疗方法可以是用于治疗银屑病关节炎的方法。所述治疗方法可以是用于治疗强直性脊柱炎的方法。所述治疗方法可以是用于治疗克罗恩病的方法。所述治疗方法可以是用于治疗溃疡性结肠炎的方法。所述治疗方法可以是用于治疗斑块状银屑病的方法。所述药盒可包括用于将抗体制剂给予患者的装置。所述装置可包含注射器和针头。所述装置可包含导管。
附图简述
图1显示来自代表性的实验系列1制剂条件的SE-UPLC色谱图重叠。
图2显示SE-UPLC％高分子量物质(HMWS)作为溶液pH的函数的趋势。
图3显示代表性的实验系列1制剂条件的DSC温谱图。
图4显示由缓冲液组成规定的50mg/ml蛋白浓度的制剂溶液的DLS和pH范围。
图5显示在应激稳定性实验(55℃直至14天)的持续时间下阿达木单抗参考制剂的SE-UPLC色谱图重叠。
图6显示来自ONS-3010的实验系列2制剂条件的代表性SE-UPLC色谱图重叠。
图7显示在应激条件下SE-UPLC聚集随时间的趋势。
图8显示在应激条件下SE-UPLC片段化随时间的趋势。
图9显示ONS-3010实验系列3 DLS结果。
图10显示在应激稳定性实验(55℃直至7天)的持续时间下阿达木单抗参考制剂的SE-UPLC色谱图重叠。
图11显示来自实验系列3 ONS-3010制剂条件的代表性SE-UPLC色谱图重叠。
图12显示在应激条件下实验系列3SE-UPLC聚集随时间的趋势。
图13显示在第0、1和2天，阿达木单抗参考制剂的55℃-孵育的样品的CEX-HPLC色谱图重叠。
图14显示55℃-孵育直至2天的样品的CEX-HPLC主峰百分比。
图15显示55℃-孵育直至2天的样品的CEX-HPLC酸性峰百分比。
图16显示55℃-孵育直至2天的样品的CEX-HPLC碱性峰百分比。
图17显示55℃应激的ONS-3010样品的肽图中异构化物质的总百分比(x轴是指制剂条件号)。
图18显示55℃应激的ONS-3010样品的肽图中环化N-端肽的百分比(x轴是指制剂条件号)。
图19显示55℃应激的ONS-3010样品的肽图中氧化甲硫氨酸肽的总百分比(x轴是指制剂条件号)。
图20显示55℃应激的ONS-3010样品的肽图中脱酰胺肽的总百分比(x轴是指制剂条件号)。
图21显示在37℃下孵育的阿达木单抗参考制剂样品的SE-UPLC色谱图重叠，时间为零和第28天。
图22显示37℃-孵育的第28天样品的SE-UPLC色谱图重叠。
图23显示ONS-3010被迫氧化研究肽图中氧化甲硫氨酸-256肽的百分比(x轴是指制剂条件号)。上图＝全视图，下图＝放大图。
图24显示ONS-3010被迫氧化研究肽图中氧化甲硫氨酸-432肽的百分比(x轴是指制剂条件号)。上图＝全视图，下图＝放大图。
图25显示2-8℃-孵育的第28天样品的SE-UPLC色谱图重叠。
图26显示2-8℃-孵育5个月样品的SE-UPLC色谱图重叠。
图27显示2-8℃-孵育12个月样品的SE-UPLC色谱图重叠，条件1和3。
图28显示2-8℃-孵育18个月样品的SE-UPLC色谱图重叠，条件1和3。
发明详述
涉及本发明各方面的各种术语用于整个说明书和权利要求书。这样的术语具有其在本领域中的普通含义，除非另外指明。其它具体定义的术语应以与本文提供的定义一致的方式进行解释。
如本文所用，单数形式″一个″、″一种″和″所述″包括复数对象，除非明确另外说明。
如本文所用，术语″包含″、″具有″和″包括″涵盖更限制性的术语″基本上由……组成″和″由……组成″。
术语受试者和患者可互换使用，并包括任何动物。受试者包括哺乳动物，包括伴侣和农用哺乳动物，以及啮齿动物，包括小鼠、兔和大鼠和其它啮齿动物。受试者优选为非人灵长类动物。受试者高度优选为人。
根据本发明已观察到，特异性结合肿瘤坏死因子α的ONS-3010的制剂，可用甘露醇和乙酸盐缓冲，同时将氯化钠减至最少，其中该缓冲液提高抗体的热和胶体稳定性，甚至与目前批准用于患者的阿达木单抗的制剂相比更是如此。已观察到，在用合适的盐和缓冲液组分建立和维持约5.2的酸性pH中存在细微平衡。已观察到，例如，高水平的盐可诱导聚集和降解，这可通过降低盐水平得到改善。因此，本公开内容的特征在于用于抗体的缓冲的制剂，所述制剂包括包含缓冲液(包含乙酸盐和甘露醇)以及非离子表面活性剂的水性载体，但具有最少的氯化钠。
在一些优选的方面，所述抗体特异性结合肿瘤坏死因子α上的表位，和所述表位可以是线性的或构象性的。在一些优选的方面，所述抗体含有包含SEQ ID NO：1的氨基酸序列的重链。在一些优选的方面，所述抗体含有包含SEQ ID NO：2的氨基酸序列的轻链。优选地，所述抗体包含重链恒定结构域和/或轻链恒定结构域。在高度优选的方面，所述抗体含有包含SEQ ID NO：1的氨基酸序列的重链和包含SEQ ID NO：2的氨基酸序列的轻链，其一个实例为ONS-3010。所述抗体的重链和轻链氨基酸序列可包含美国专利号6,090,382中的那些。
优选地，所述抗体是全长抗体，包含可变区和恒定区两者，尽管在一些方面，所述抗体可包含全长抗体的衍生物或片段或部分，其保留抗原结合特异性，和还优选保留全长抗体分子的大部分或全部亲和力。所述抗体可包含翻译后修饰(PTM)或部分，其可影响抗体活性或稳定性。所述抗体可被甲基化、乙酰化、糖基化、硫酸化、磷酸化、羧化和/或酰胺化，和可包含本领域众所周知的其它部分。对于ONS-3010，常见的PTM包括N-糖基化、C-端变体(例如，赖氨酸的裂解、脯氨酸酰胺化)、N-端焦-E形成、氧化、异构化、脱酰胺化、琥珀酰亚胺形成、甘露糖基化、K98糖化和片段化。所述部分包括自然界通常存在于免疫球蛋白分子上的任何化学基团或基团组合，或通过重组表达系统包括原核和真核表达系统另外添加至抗体的任何化学基团或基团组合。
所述制剂优选包含治疗有效量的抗体。所述抗体可以是与水性缓冲液制剂相容的任何抗体。优选的抗体包含具有SEQ.ID NO：1的氨基酸序列的重链和具有SEQ.ID NO：2的氨基酸序列的轻链。治疗有效量可改变，这取决于给予所述抗体时所治疗的疾病或病况，和/或取决于所述抗体所给予的受试者的特征，例如年龄、性别、身高、体重、疾病或病况的进展状态或阶段、之前给药的数量和功效、给予受试者的其它治疗剂和从业者已知的或在确定合适剂量时另外考虑的其它特性。优选地，治疗有效量是有效治疗类风湿性关节炎的量。在一些优选的方面，治疗有效量是有效治疗幼年性特发性关节炎、银屑病关节炎、强直性脊柱炎、克罗恩病、斑块状银屑病、溃疡性结肠炎、炎性肠病、化脓性汗腺炎或难治性哮喘的量。
所述制剂可包含约10mg-约70mg的抗体。在一些方面，所述制剂包含约20mg-约60mg的抗体。在一些方面，所述制剂包含约30mg-约50mg的抗体。在一些方面，所述制剂包含约35mg-约45mg的抗体。在一些方面，所述制剂包含约37mg-约43mg的抗体。在一些方面，所述制剂包含约38mg-约42mg的抗体。在一些方面，所述制剂包含约39mg-约41mg的抗体。在一些方面，所述制剂包含约30mg-约60mg的抗体。在一些方面，所述制剂包含约35mg-约55mg的抗体。在一些方面，所述制剂包含约40mg-约60mg的抗体。这些范围包括限定该范围的下限量和上限量。在一些方面，所述制剂包含约40mg的抗体。
所述抗体优选用缓冲的水性载体配制，和所述载体优选包含水。所述缓冲的抗体制剂优选呈液体形式，和更优选呈适合于皮下给予的液体形式。因此，缓冲的制剂中水的量可按照可注射物(injectable bolus)的所需体积而改变。所述缓冲液包含乙酸钠三水合物、甘露醇、氯化钠、冰乙酸和非离子表面活性剂，和保持所述抗体制剂在酸性pH下。当在缓冲的制剂中贮存时，所述抗体在正常的贮存条件下在保质期中是稳定的(shelf-stable)。
所述缓冲液可包含约0.1mM-约5mM的乙酸盐。在一些方面，所述缓冲液可包含约0.3mM-约3mM的乙酸盐。在一些方面，所述缓冲液可包含约0.5mM-约2mM的乙酸盐。在一些方面，所述缓冲液可包含约0.5mM-约1.5mM的乙酸盐。在一些方面，所述缓冲液可包含约0.6mM-约1.4mM的乙酸盐。在一些方面，所述缓冲液可包含约0.7mM-约1.5mM的乙酸盐。在一些方面，所述缓冲液可包含约0.7mM-约1.3mM的乙酸盐。在一些方面，所述缓冲液可包含约0.8mM-约1.2mM的乙酸盐。在一些方面，所述缓冲液可包含约0.8mM-约1.5mM的乙酸盐。在一些方面，所述缓冲液可包含约0.8mM-约1.1mM的乙酸盐。在一些方面，所述缓冲液可包含约0.9mM-约1.2mM的乙酸盐。在一些方面，所述缓冲液可包含约0.9mM-约1.4mM的乙酸盐。在一些方面，所述缓冲液可包含约0.9mM-约1.1mM的乙酸盐。这些范围包括限定该范围的下限量和上限量。在一些方面，所述缓冲液包含约1mM的乙酸盐。乙酸盐可包含任何合适的乙酸盐。优选的乙酸盐的非限制性实例包括乙酸镁盐、乙酸钾盐、乙酸钙盐、乙酸锌盐和乙酸钠盐。更优选的乙酸盐包括无水乙酸钠和乙酸钠三水合物。乙酸钠三水合物是高度优选的。
所述缓冲液可包含约100mM-约300mM的甘露醇。在一些方面，所述缓冲液可包含约110mM-约290mM的甘露醇。在一些方面，所述缓冲液可包含约120mM-约280mM的甘露醇。在一些方面，所述缓冲液可包含约150mM-约250mM的甘露醇。在一些方面，所述缓冲液可包含约175mM-约225mM的甘露醇。在一些方面，所述缓冲液可包含约180mM-约220mM的甘露醇。在一些方面，所述缓冲液可包含约185mM-约215mM的甘露醇。在一些方面，所述缓冲液可包含约190mM-约215mM的甘露醇。在一些方面，所述缓冲液可包含约195mM-约210mM的甘露醇。在一些方面，所述缓冲液可包含约197mM-约209mM的甘露醇。在一些方面，所述缓冲液可包含约198mM-约208mM的甘露醇。在一些方面，所述缓冲液可包含约198mM-约205mM的甘露醇。在一些方面，所述缓冲液可包含约199mM-约207mM的甘露醇。在一些方面，所述缓冲液可包含约200mM-约210mM的甘露醇。在一些方面，所述缓冲液可包含约200mM-约207mM的甘露醇。在一些方面，所述缓冲液可包含约200mM-约206mM的甘露醇。在一些方面，所述缓冲液可包含约200mM-约205mM的甘露醇。在一些方面，所述缓冲液可包含约200mM-约203mM的甘露醇。在一些方面，所述缓冲液可包含约201mM-约205mM的甘露醇。在一些方面，所述缓冲液可包含约201mM-约204mM的甘露醇。在一些方面，所述缓冲液可包含约201mM-约203mM的甘露醇。在一些方面，所述缓冲液可包含约202mM-约204mM的甘露醇。在一些方面，所述缓冲液可包含约202mM-约203mM的甘露醇。在一些方面，所述缓冲液可包含约202mM-约206mM的甘露醇。这些范围包括限定该范围的下限量和上限量。在一些方面，所述缓冲液包含约203mM的甘露醇。
所述缓冲液可包含约9mM-约30mM的冰乙酸。在一些方面，所述缓冲液可包含约10mM-约30mM的冰乙酸。在一些方面，所述缓冲液可包含约9mM-约29mM的冰乙酸。在一些方面，所述缓冲液可包含约10mM-约28mM的冰乙酸。在一些方面，所述缓冲液可包含约11mM-约27mM的冰乙酸。在一些方面，所述缓冲液可包含约12mM-约26mM的冰乙酸。在一些方面，所述缓冲液可包含约13mM-约25mM的冰乙酸。在一些方面，所述缓冲液可包含约14mM-约24mM的冰乙酸。在一些方面，所述缓冲液可包含约15mM-约23mM的冰乙酸。在一些方面，所述缓冲液可包含约15mM-约21mM的冰乙酸。在一些方面，所述缓冲液可包含约15mM-约20mM的冰乙酸。在一些方面，所述缓冲液可包含约16mM-约22mM的冰乙酸。在一些方面，所述缓冲液可包含约16mM-约20mM的冰乙酸。在一些方面，所述缓冲液可包含约17mM-约21mM的冰乙酸。在一些方面，所述缓冲液可包含约17mM-约20mM的冰乙酸。在一些方面，所述缓冲液可包含约18mM-约20mM的冰乙酸。在一些方面，所述缓冲液可包含约18mM-约19mM的冰乙酸。在一些方面，所述缓冲液可包含约18mM-约23mM的冰乙酸。在一些方面，所述缓冲液可包含约19mM-约20mM的冰乙酸。这些范围包括限定该范围的下限量和上限量。在一些方面，所述缓冲液包含约19mM的冰乙酸。
所述缓冲液优选包括最少量的氯化钠，和在一些方面，不包括氯化钠。在一些方面，所述缓冲液可包含约15mM-约36mM的氯化钠。在一些方面，所述缓冲液可包含约16mM-约36mM的氯化钠。在一些方面，所述缓冲液可包含约18mM-约34mM的氯化钠。在一些方面，所述缓冲液可包含约20mM-约32mM的氯化钠。在一些方面，所述缓冲液可包含约22mM-约30mM的氯化钠。在一些方面，所述缓冲液可包含约23mM-约29mM的氯化钠。在一些方面，所述缓冲液可包含约23mM-约27mM的氯化钠。在一些方面，所述缓冲液可包含约24mM-约28mM的氯化钠。在一些方面，所述缓冲液可包含约24mM-约30mM的氯化钠。在一些方面，所述缓冲液可包含约25mM-约27mM的氯化钠。在一些方面，所述缓冲液可包含约25mM-约28mM的氯化钠。在一些方面，所述缓冲液可包含约25mM-约30mM的氯化钠。在一些方面，所述缓冲液可包含约25.5mM-约27.5mM的氯化钠。在一些方面，所述缓冲液可包含约25.3mM-约27.3mM的氯化钠。在一些方面，所述缓冲液可包含约25.4mM-约27.4mM的氯化钠。在一些方面，所述缓冲液可包含约25.35mM-约27.35mM的氯化钠。在一些方面，所述缓冲液可包含约26mM-约30mM的氯化钠。在一些方面，所述缓冲液可包含约26mM-约28mM的氯化钠。在一些方面，所述缓冲液可包含约26mM-约27mM的氯化钠。在一些方面，所述缓冲液可包含约26.3mM-约27.3mM的氯化钠。在一些方面，所述缓冲液可包含约26.4mM-约27.4mM的氯化钠。在一些方面，所述缓冲液可包含约26.3mM-约26.4mM的氯化钠。这些范围包括限定该范围的下限量和上限量。在一些方面，所述缓冲液包含约26mM的氯化钠。在一些方面，所述缓冲液包含约27mM的氯化钠。在一些方面，所述缓冲液包含约26.3mM的氯化钠。在一些方面，所述缓冲液包含约26.4mM的氯化钠。在一些方面，所述缓冲液包含约26.35mM的氯化钠。
所述抗体制剂优选包含非离子表面活性剂。更优选地，所述非离子表面活性剂包含聚山梨醇酯80。包含抗体和水性缓冲液的所述抗体制剂优选包含约0.01％-约1％(按体积计)的聚山梨醇酯80。在一些方面，所述抗体制剂包含约0.03％-约0.7％(按体积计)的聚山梨醇酯80。在一些方面，所述抗体制剂包含约0.05％-约0.4％(按体积计)的聚山梨醇酯80。在一些方面，所述抗体制剂包含约0.075％-约0.3％(按体积计)的聚山梨醇酯80。在一些方面，所述抗体制剂包含约0.07％-约0.25％(按体积计)的聚山梨醇酯80。在一些方面，所述抗体制剂包含约0.07％-约0.2％(按体积计)的聚山梨醇酯80。在一些方面，所述抗体制剂包含约0.07％-约0.15％(按体积计)的聚山梨醇酯80。在一些方面，所述抗体制剂包含约0.07％-约0.14％(按体积计)的聚山梨醇酯80。在一些方面，所述抗体制剂包含约0.08％-约0.3％(按体积计)的聚山梨醇酯80。在一些方面，所述抗体制剂包含约0.08％-约0.2％(按体积计)的聚山梨醇酯80。在一些方面，所述抗体制剂包含约0.08％-约0.15％(按体积计)的聚山梨醇酯80。在一些方面，所述抗体制剂包含约0.08％-约0.12％(按体积计)的聚山梨醇酯80。在一些方面，所述抗体制剂包含约0.08％-约0.1％(按体积计)的聚山梨醇酯80。在一些方面，所述抗体制剂包含约0.09％-约0.15％(按体积计)的聚山梨醇酯80。在一些方面，所述抗体制剂包含约0.09％-约0.2％(按体积计)的聚山梨醇酯80。在一些方面，所述抗体制剂包含约0.09％-约0.18％(按体积计)的聚山梨醇酯80。在一些方面，所述抗体制剂包含约0.09％-约0.11％(按体积计)的聚山梨醇酯80。在一些方面，所述抗体制剂包含约0.09％-约0.1％(按体积计)的聚山梨醇酯80。这些范围包括限定该范围的下限量和上限量。在一些方面，所述抗体制剂包含约0.1％(按体积计)的聚山梨醇酯80。
所述抗体制剂优选被缓冲至酸性pH。所述制剂优选具有约4.8-约5.6的pH。在一些方面，所述制剂具有约4.9-约5.5的pH。在一些方面，所述制剂具有约5.0-约5.4的pH。在一些优选的方面，所述制剂具有约5.0-约5.3的pH。在一些优选的方面，所述制剂具有约5.0-约5.2的pH。在一些方面，所述制剂具有约5.1-约5.3的pH。在一些方面，所述制剂具有约5.1-约5.5的pH。在一些优选的方面，所述制剂具有约5.1-约5.2的pH。在一些优选的方面，所述制剂具有约5.1-约5.4的pH。在一些方面，所述制剂具有约5.2-约5.4的pH。在一些方面，所述制剂具有约5.2-约5.5的pH。在一些优选的方面，所述制剂具有约5.2-约5.3的pH。这些范围包括限定该范围的下限量和上限量。在一些方面，所述制剂具有约5.2的pH。
在一些优选的方面，所述抗体制剂包含约35mg-约45mg的抗体，其特异性结合肿瘤坏死因子α和含有包含SEQ ID NO：1的氨基酸序列的重链和包含SEQ ID NO：2的氨基酸序列的轻链；缓冲液，其包含约0.7mM-约1.3mM的乙酸钠三水合物、约200mM-约206mM的甘露醇、约16mM-约22mM的冰乙酸和约24mM-约28mM的氯化钠；和约0.07％-约0.15％(按体积计)的聚山梨醇酯80，并具有约5.1-约5.3的pH。在一些方面，所述抗体制剂基本上由约35mg-约45mg的抗体，其特异性结合肿瘤坏死因子α和含有包含SEQ ID NO：1的氨基酸序列的重链和包含SEQ ID NO：2的氨基酸序列的轻链；缓冲液，其基本上由约0.7mM-约1.3mM的乙酸钠三水合物、约200mM-约206mM的甘露醇、约16mM-约22mM的冰乙酸和约24mM-约28mM的氯化钠组成；和约0.07％-约0.15％(按体积计)的聚山梨醇酯80组成，并具有约5.1-约5.3的pH。在一些方面，所述抗体制剂由约35mg-约45mg的抗体，其特异性结合肿瘤坏死因子α和含有包含SEQ ID NO：1的氨基酸序列的重链和包含SEQ ID NO：2的氨基酸序列的轻链；缓冲液，其由约0.7mM-约1.3mM的乙酸钠三水合物、约200mM-约206mM的甘露醇、约16mM-约22mM的冰乙酸和约24mM-约28mM的氯化钠组成；和约0.07％-约0.15％(按体积计)的聚山梨醇酯80组成，并具有约5.1-约5.3的pH。在任何这样的实施方案中，所述抗体可以约37mg-约43mg或约38mg-约42mg或约39mg-约41mg或约40mg存在于所述制剂中。
在一些优选的方面，所述抗体制剂包含约35mg-约45mg的抗体，其特异性结合肿瘤坏死因子α和含有包含SEQ ID NO：1的氨基酸序列的重链和包含SEQ ID NO：2的氨基酸序列的轻链；缓冲液，其包含约0.8mM-约1.2mM的乙酸盐、约201mM-约205mM的甘露醇、约17mM-约21mM的冰乙酸和约25mM-约27mM的氯化钠；和约0.08％-约0.15％(按体积计)的聚山梨醇酯80，和具有约5.1-约5.3的pH。在一些方面，所述抗体制剂基本上由约35mg-约45mg的抗体，其特异性结合肿瘤坏死因子α和含有包含SEQ.ID NO：1的氨基酸序列的重链和包含SEQ IDNO：2的氨基酸序列的轻链；缓冲液，其基本上由约0.8mM-约1.2mM的乙酸盐、约201mM-约205mM的甘露醇、约17mM-约21mM的冰乙酸和约25mM-约27mM的氯化钠组成；和约0.08％-约0.15％(按体积计)的聚山梨醇酯80组成，和具有约5.1-约5.3的pH。在一些方面，所述抗体制剂由约35mg-约45mg的抗体，其特异性结合肿瘤坏死因子α和含有包含SEQ ID NO：1的氨基酸序列的重链和包含SEQ ID NO：2的氨基酸序列的轻链；缓冲液，其由约0.8mM-约1.2mM的乙酸盐、约201mM-约205mM的甘露醇、约17mM-约21mM的冰乙酸和约25mM-约27mM的氯化钠组成；和约0.08％-约0.15％(按体积计)的聚山梨醇酯80组成，和具有约5.1-约5.3的pH。在任何这样的实施方案中，所述抗体可以约37mg-约43mg或约38mg-约42mg或约39mg-约41mg或约40mg存在于所述制剂中。乙酸盐可包含任何合适的乙酸盐。优选的乙酸盐的非限制性实例包括乙酸镁盐、乙酸钾盐、乙酸钙盐、乙酸锌盐和乙酸钠盐。更优选的乙酸盐包括无水乙酸钠和乙酸钠三水合物。乙酸钠三水合物是高度优选的。
在一些优选的方面，所述抗体制剂包含约39mg-约41mg的抗体，其特异性结合肿瘤坏死因子α和含有包含SEQ ID NO：1的氨基酸序列的重链和包含SEQ ID NO：2的氨基酸序列的轻链；缓冲液，其包含约0.9mM-约1.1mM的乙酸盐、约202mM-约204mM的甘露醇、约18mM-约20mM的冰乙酸和约25.35mM-约26.35mM的氯化钠；和约0.09％-约0.11％(按体积计)的聚山梨醇酯80，和具有约5.1-约5.3的pH。在一些方面，所述抗体制剂基本上由约39mg-约41mg的抗体，其特异性结合肿瘤坏死因子α和含有包含SEQ ID NO：1的氨基酸序列的重链和包含SEQ.ID NO：2的氨基酸序列的轻链；缓冲液，其基本上由约0.9mM-约1.1mM的乙酸盐、约202mM-约204mM的甘露醇、约18mM-约20mM的冰乙酸和约25.35mM-约26.35mM的氯化钠组成；和约0.09％-约0.11％(按体积计)的聚山梨醇酯80组成，和具有约5.1-约5.3的pH。在一些方面，所述抗体制剂由约39mg-约41mg的抗体，其特异性结合肿瘤坏死因子α和含有包含SEQID NO：1的氨基酸序列的重链和包含SEQ ID NO：2的氨基酸序列的轻链；缓冲液，其由约0.9mM-约1.1mM的乙酸盐、约202mM-约204mM的甘露醇、约18mM-约20mM的冰乙酸和约25.35mM-约26.35mM的氯化钠组成；和约0.09％-约0.11％(按体积计)的聚山梨醇酯80组成，和具有约5.1-约5.3的pH。在任何这样的实施方案中，所述抗体可以约37mg-约43mg或约38mg-约42mg或约39mg-约41mg或约40mg存在于所述制剂中。乙酸盐可包含任何合适的乙酸盐。优选的乙酸盐的非限制性实例包括乙酸镁盐、乙酸钾盐、乙酸钙盐、乙酸锌盐和乙酸钠盐。更优选的乙酸盐包括无水乙酸钠和乙酸钠三水合物。乙酸钠三水合物是高度优选的。
在一些优选的方面，所述抗体制剂包含约40mg的抗体，其特异性结合肿瘤坏死因子α和含有包含SEQ ID NO：1的氨基酸序列的重链和包含SEQ ID NO：2的氨基酸序列的轻链；缓冲液，其包含约1mM的乙酸盐、约203mM的甘露醇、约19mM的冰乙酸和约26.35mM的氯化钠；和约0.1％(按体积计)的聚山梨醇酯80，和具有约5.2的pH。在一些方面，所述抗体制剂基本上由约40mg的抗体，其特异性结合肿瘤坏死因子α和含有包含SEQ ID NO：1的氨基酸序列的重链和包含SEQ ID NO：2的氨基酸序列的轻链；缓冲液，其基本上由约1mM的乙酸盐、约203mM的甘露醇、约19mM的冰乙酸和约26.35mM的氯化钠组成；和约0.1％(按体积计)的聚山梨醇酯80组成，和具有约5.2的pH。在一些方面，所述抗体制剂由约40mg的抗体，其特异性结合肿瘤坏死因子α和含有包含SEQ ID NO：1的氨基酸序列的重链和包含SEQ ID NO：2的氨基酸序列的轻链；缓冲液，其由约1mM的乙酸盐、约203mM的甘露醇、约19mM的冰乙酸和约26.35mM的氯化钠组成；和约0.1％(按体积计)的聚山梨醇酯80组成，和具有约5.2的pH。乙酸盐可包含任何合适的乙酸盐。优选的乙酸盐的非限制性实例包括乙酸镁盐、乙酸钾盐、乙酸钙盐、乙酸锌盐和乙酸钠盐。更优选的乙酸盐包括无水乙酸钠和乙酸钠三水合物。乙酸钠三水合物是高度优选的。
所述制剂将抗体稳定以改善保质期贮存，特别是数月至数年的一段时间。当在所述制剂中贮存时，在贮存期间所述抗体保持热和胶体稳定性。例如，当在所述制剂中贮存时，所述抗体是稳定的和显示最小的聚集、絮凝、片段化和变性，和所述抗体保留其肿瘤坏死因子α结合活性。
优选的是，所述抗体制剂在冷藏条件下贮存，优选在约2℃-约8℃的温度下，包括约2℃-约6℃，并且包括约2℃、约3℃、约4℃、约5℃、约6℃、约7℃或约8℃。所述抗体制剂可贮存在这样的温度下至少约3个月。在一些方面，所述抗体制剂可贮存在这样的温度下至少约6个月。在一些方面，所述抗体制剂可贮存在这样的温度下至少约9个月。在一些方面，所述抗体制剂可贮存在这样的温度下至少约12个月。在一些方面，所述抗体制剂可贮存在这样的温度下至少约15个月。在一些方面，所述抗体制剂可贮存在这样的温度下至少约18个月。在贮存期间，所述抗体是稳定的和显示最小的聚集、絮凝、片段化和变性，并且所述抗体保留其肿瘤坏死因子α结合活性，以致所述抗体制剂可从贮存中移出，给予患者并仍显示针对所述制剂所给予的病况的治疗功效。
所述制剂包含约10mg-约70mg的抗体。该抗体蛋白量中有呈活性的天然形式的抗体单体的百分比以及具有降低的肿瘤坏死结合活性或没有肿瘤坏死结合活性的抗体片段、抗体聚集体和变性或部分变性的抗体的百分比。高度优选的是，所述制剂包括最大量的功能性抗体单体和最少量的具有降低的结合活性和/或治疗功效(相对于未改变的单体)的抗体片段、聚集体和结构改变形式的抗体。例如，当在约2℃-约8℃下贮存至少约6个月时，所述抗体制剂优选包含至少约85％重量的抗体单体，和少于约15％重量的具有降低的肿瘤坏死因子α结合活性和/或治疗功效的抗体片段、聚集体和结构改变形式。
在一些方面，当在约2℃-约8℃下贮存至少约6个月时，所述抗体制剂包含至少约90％重量的抗体单体和少于约10％重量的具有降低的肿瘤坏死因子α结合活性和/或治疗功效的抗体片段、聚集体和结构改变形式。在一些方面，当在约2℃-约8℃下贮存至少约6个月时，所述抗体制剂包含至少约93％重量的抗体单体和少于约7％重量的具有降低的肿瘤坏死因子α结合活性和/或治疗功效的抗体片段、聚集体和结构改变形式。在一些方面，当在约2℃-约8℃下贮存至少约6个月时，所述抗体制剂包含至少约95％重量的抗体单体和少于约5％重量的具有降低的肿瘤坏死因子α结合活性和/或治疗功效的抗体片段、聚集体和结构改变形式。在一些方面，当在约2℃-约8℃下贮存至少约6个月时，所述抗体制剂包含至少约96％重量的抗体单体和少于约4％重量的具有降低的肿瘤坏死因子α结合活性和/或治疗功效的抗体片段、聚集体和结构改变形式。在一些方面，当在约2℃-约8℃下贮存至少约6个月时，所述抗体制剂包含至少约97％重量的抗体单体和少于约3％重量的具有降低的肿瘤坏死因子α结合活性和/或治疗功效的抗体片段、聚集体和结构改变形式。在一些方面，当在约2℃-约8℃下贮存至少约6个月时，所述抗体制剂包含至少约98％重量的抗体单体和少于约2％重量的具有降低的肿瘤坏死因子α结合活性和/或治疗功效的抗体片段、聚集体和结构改变形式。在一些方面，当在约2℃-约8℃下贮存至少约6个月时，所述抗体制剂包含至少约99％重量的抗体单体和少于约1％重量的具有降低的肿瘤坏死因子α结合活性和/或治疗功效的抗体片段、聚集体和结构改变形式。可根据本领域合适的任何技术，包括本文描述或举例说明的那些技术，测定抗体单体和抗体片段、聚集体和结构改变形式的量，所述技术包括以下的任一种或其组合：动态光散射(DLS)、差示扫描量热法(DSC)、尺寸排阻色谱法(SE-UPLC)、非还原和还原毛细管电泳SDS(NR CE-SDS和R CE-SDS)、肽作图和粒子计数(PC)。
在一些方面，当在约2℃-约8℃下贮存至少约12个月时，所述抗体制剂包含至少约90％重量的抗体单体和少于约10％重量的具有降低的肿瘤坏死因子α结合活性和/或治疗功效的抗体片段、聚集体和结构改变形式。在一些方面，当在约2℃-约8℃下贮存至少约12个月时，所述抗体制剂包含至少约93％重量的抗体单体和少于约7％重量的具有降低的肿瘤坏死因子α结合活性和/或治疗功效的抗体片段、聚集体和结构改变形式。在一些方面，当在约2℃-约8℃下贮存至少约12个月时，所述抗体制剂包含至少约95％重量的抗体单体和少于约5％重量的具有降低的肿瘤坏死因子α结合活性和/或治疗功效的抗体片段、聚集体和结构改变形式。在一些方面，当在约2℃-约8℃下贮存至少约12个月时，所述抗体制剂包含至少约96％重量的抗体单体和少于约4％重量的具有降低的肿瘤坏死因子α结合活性和/或治疗功效的抗体片段、聚集体和结构改变形式。在一些方面，当在约2℃-约8℃下贮存至少约12个月时，所述抗体制剂包含至少约97％重量的抗体单体和少于约3％重量的具有降低的肿瘤坏死因子α结合活性和/或治疗功效的抗体片段、聚集体和结构改变形式。在一些方面，当在约2℃-约8℃下贮存至少约12个月时，所述抗体制剂包含至少约98％重量的抗体单体和少于约2％重量的具有降低的肿瘤坏死因子α结合活性和/或治疗功效的抗体片段、聚集体和结构改变形式。在一些方面，当在约2℃-约8℃下贮存至少约12个月时，所述抗体制剂包含至少约99％重量的抗体单体和少于约1％重量的具有降低的肿瘤坏死因子α结合活性和/或治疗功效的抗体片段、聚集体和结构改变形式。可按照本领域合适的任何技术，包括本文描述或举例说明的那些技术，测定抗体单体和抗体片段、聚集体和结构改变形式的量，所述技术包括以下的任一种或其组合：动态光散射(DLS)、差示扫描量热法(DSC)、尺寸排阻色谱法(SE-UPLC)、非还原和还原毛细管电泳SDS(NR CE-SDS和R CE-SDS)、肽作图和粒子计数(PC)。
在一些方面，当在约2℃-约8℃下贮存至少约18个月时，所述抗体制剂包含至少约90％重量的抗体单体和少于约10％重量的具有降低的肿瘤坏死因子α结合活性和/或治疗功效的抗体片段、聚集体和结构改变形式。在一些方面，当在约2℃-约8℃下贮存至少约18个月时，所述抗体制剂包含至少约93％重量的抗体单体和少于约7％重量的具有降低的肿瘤坏死因子α结合活性和/或治疗功效的抗体片段、聚集体和结构改变形式。在一些方面，当在约2℃-约8℃下贮存至少约18个月时，所述抗体制剂包含至少约95％重量的抗体单体和少于约5％重量的具有降低的肿瘤坏死因子α结合活性和/或治疗功效的抗体片段、聚集体和结构改变形式。在一些方面，当在约2℃-约8℃下贮存至少约18个月时，所述抗体制剂包含至少约96％重量的抗体单体和少于约4％重量的具有降低的肿瘤坏死因子α结合活性和/或治疗功效的抗体片段、聚集体和结构改变形式。在一些方面，当在约2℃-约8℃下贮存至少约18个月时，所述抗体制剂包含至少约97％重量的抗体单体和少于约3％重量的具有降低的肿瘤坏死因子α结合活性和/或治疗功效的抗体片段、聚集体和结构改变形式。在一些方面，当在约2℃-约8℃下贮存至少约18个月时，所述抗体制剂包含至少约98％重量的抗体单体和少于约2％重量的具有降低的肿瘤坏死因子α结合活性和/或治疗功效的抗体片段、聚集体和结构改变形式。在一些方面，当在约2℃-约8℃下贮存至少约18个月时，所述抗体制剂包含至少约99％重量的抗体单体和少于约1％重量的具有降低的肿瘤坏死因子α结合活性和/或治疗功效的抗体片段、聚集体和结构改变形式。可按照本领域合适的任何技术，包括本文描述或举例说明的那些技术，测定抗体单体和抗体片段、聚集体和结构改变形式的量，所述技术包括以下的任一种或其组合：动态光散射(DLS)、差示扫描量热法(DSC)、尺寸排阻色谱法(SE-UPLC)、非还原和还原毛细管电泳SDS(NR CE-SDS和R CE-SDS)、肽作图和粒子计数(PC)。
本发明的特征还在于通过给予治疗有效量的本文所述或举例说明的任何抗体制剂，用于治疗有需要的受试者的类风湿性关节炎的方法。本发明的特征还在于通过给予治疗有效量的本文所述或举例说明的任何抗体制剂，用于治疗幼年性特发性关节炎、银屑病关节炎、强直性脊柱炎、克罗恩病、斑块状银屑病、溃疡性结肠炎、炎性肠病、化脓性汗腺炎或难治性哮喘的方法。通过例如给予的制剂中存在的ONS-3010抗体获得治疗功效。所述抗体制剂的给予可按照任何合适的途径进行，优选通过注射，更优选通过皮下注射。可在医学从业者的指导或监督下进行给药。
本文所述或举例说明的抗体制剂可用作药物。本文所述或举例说明的抗体制剂可用于制备药物。所述制剂可用于治疗类风湿性关节炎。所述制剂可用于治疗幼年性特发性关节炎。所述制剂可用于治疗银屑病关节炎。所述制剂可用于治疗强直性脊柱炎。所述制剂可用于治疗克罗恩病。所述制剂可用于治疗斑块状银屑病。所述制剂可用于治疗溃疡性结肠炎。所述制剂可用于治疗炎性肠病。所述制剂可用于治疗化脓性汗腺炎。所述制剂可用于治疗难治性哮喘。
本发明的特征还在于药盒。所述药盒可用于，例如实施本文所述或举例说明的任何方法。在一些方面，药盒包含本文所述或举例说明的任何抗体制剂，和在本文所述或举例说明的任何方法或用途中使用所述抗体制剂的说明书。所述药盒可包含用于注射所述抗体制剂至受试者的装置，包括但不限于注射器和针头，或导管。
药盒中包括的说明书可包括在用于治疗类风湿性关节炎的方法中用于给予所述抗体制剂的说明书，包括用于注射所述抗体制剂至有需要的类风湿性关节炎患者的说明书。在一些方面，药盒中包括的说明书可包括在用于治疗幼年性特发性关节炎的方法中用于给予所述抗体制剂的说明书，包括用于注射所述抗体制剂至有需要的幼年性特发性关节炎患者的说明书。在一些方面，药盒中包括的说明书可包括在用于治疗银屑病关节炎的方法中用于给予所述抗体制剂的说明书，包括用于注射所述抗体制剂至有需要的银屑病关节炎患者的说明书。在一些方面，药盒中包括的说明书可包括在用于治疗强直性脊柱炎的方法中用于给予所述抗体制剂的说明书，包括用于注射所述抗体制剂至有需要的强直性脊柱炎患者的说明书。在一些方面，药盒中包括的说明书可包括在用于治疗克罗恩病的方法中用于给予所述抗体制剂的说明书，包括用于注射所述抗体制剂至有需要的克罗恩病患者的说明书。在一些方面，药盒中包括的说明书可包括在用于治疗斑块状银屑病的方法中用于给予所述抗体制剂的说明书，包括用于注射所述抗体制剂至有需要的斑块状银屑病患者的说明书。在一些方面，药盒中包括的说明书可包括在用于治疗溃疡性结肠炎的方法中用于给予所述抗体制剂的说明书，包括用于注射所述抗体制剂至有需要的溃疡性结肠炎患者的说明书。在一些方面，药盒中包括的说明书可包括在用于治疗炎性肠病的方法中用于给予所述抗体制剂的说明书，包括用于注射所述抗体制剂至有需要的炎性肠病患者的说明书。在一些方面，药盒中包括的说明书可包括在用于治疗化脓性汗腺炎的方法中用于给予所述抗体制剂的说明书，包括用于注射所述抗体制剂至有需要的化脓性汗腺炎患者的说明书。在一些方面，药盒中包括的说明书可包括在用于治疗难治性哮喘的方法中用于给予所述抗体制剂的说明书，包括用于注射所述抗体制剂至有需要的难治性哮喘患者的说明书。
提供以下实施例以更详细地描述本发明。它们意欲说明而非限制本发明。
实施例1
材料和方法
引言。抗体ONS-3010代表阿达木单抗的生物类似物，并已被重新配制以提高贮存稳定性。认为对制剂组合物的缓冲液的改变可减少注射-部位反应的发生率，包括自皮下给予阿达木单抗观察到的注射疼痛和灼烧感(Kaiser C等(2012)Rheumatol.Int.32：295-9，和Fransson J等(1996)J.Pharm.Pharmacol.48：1012-5)。当前的阿达木单抗制剂包括(除了抗体之外)氯化钠、一碱式磷酸钠二水合物、二碱式磷酸钠二水合物、柠檬酸钠、柠檬酸一水合物、甘露醇、聚山梨醇酯80和无菌注射用水。下文描述的实验方法包括三个实验系列的开发工作以重新配制阿达木单抗用于治疗性给药。
第一个实验系列的研究集中在缓冲液组成、浓度和实现约5.2的所需pH的能力上。第二个实验系列的实验利用应激稳定性研究与根据实验系列1的结果的一组精细的制剂条件。在实验系列2中探查氯化钠浓度。第三个实验系列的制剂开发研究比较了三种条件，包括阿达木单抗参考产品缓冲液的对照(每0.8ml∶40mg阿达木单抗、4.93mg氯化钠、0.69mg一碱式磷酸钠二水合物、1.22mg二碱式磷酸钠二水合物、0.24mg柠檬酸钠、1.04mg柠檬酸一水合物、9.6mg甘露醇、0.8mg聚山梨醇酯80和适量无菌注射用水，pH 5.2)。对于各缓冲液系统，对于NaCI和甘露醇的阿达木单抗参考制剂水平存在一种条件，和其中这些水平相对于阿达木单抗参考制剂而被改变的一种条件(较低的NaCI、较高的甘露醇(LS/HM))。这些改变产生具有与阿达木单抗参考制剂相当的摩尔渗透压浓度同时保持等渗性的制剂。
动态光散射(DLS)。DLS试验方法使用Wyatt DynaProTM Plate Reader以提供关于溶液中蛋白大小分布和总体胶体稳定性的信息。流体动力学半径提供关于溶液中聚集存在情况的信息和分子结构的确认。DLS试验提供在非变性条件下在溶液中大小分布的正交度量。
差示扫描量热法(DSC)。差示扫描量热法测量蛋白的熔化转变，因此提供关于溶液中蛋白热稳定性的信息。使用GE VP Capillary DSC系统进行量热法。以在蛋白解折叠的同时允许熔化转变(Tm)发生的最佳扫描速率将蛋白自25℃加热至95℃。缓冲液对照与样品并行加热，用于计算熔化温度和转变。DSC特征是抗体特有的，证明蛋白折叠成不同的结构域。
尺寸排阻色谱法(SE-UPLC)。SE-UPLC用于监测ONS-3010尺寸变体分布。SE-UPLC试验方法基于尺寸而分离蛋白。所述方法是用磷酸钠运行缓冲液等度的，使用WatersAcquity UPLC BEH200SEC柱(1.7μιη，4.6x150mm)。使用280nm的吸光度监测峰。单体峰之前洗脱的物质是聚集体(HMWS)和单体峰之后洗脱的峰是降解物(LMWS)。
非还原和还原毛细管电泳SDS(NR CE-SDS和R CE-SDS)。CE-SDS分析用于在变性条件下，以非还原和还原条件两者，使用Beckman PA800plus仪器比较ONS-3010尺寸变体。毛细管凝胶电泳提供通过尺寸的还原和非还原蛋白的自动分析，以确定蛋白纯度和/或异质性。用烷基化剂或还原剂处理样品，并将SDS与所有蛋白通过样品缓冲液进行结合。将聚合物基质填充到毛细管中，然后进行样品分析。将样品通过施加的电压电动引入毛细管，然后通过施用恒定电压至毛细管进行电泳。SDS处理的蛋白具有与蛋白重量成比例的质量：电荷性质，这允许通过分子量的差异分开SDS-结合的蛋白。试验物蛋白通过220nm的UV检测而定量。
TNF-α活性的调节：基于L929细胞的生物测定法。阿达木单抗的主要作用机制是中和循环TNF-α。基于L929细胞的生物测定法测量细胞死亡/成活力。TNF-α在L929细胞中诱导细胞毒性；阿达木单抗的相对效力通过经由发光标签监测活细胞来测量。
肽作图。使用肽作图LC-MS方法测量N-端序列变体、C-端序列变体、氧化、脱酰胺化、琥珀酰亚胺形成、异构化。
粒子计数。聚集体和微粒的水平是有助于评价液体蛋白制剂的关键品质。聚集体和微粒的存在可负面影响产品品质。
实施例2
结果
实验系列1。第一个实验系列的研究集中在缓冲液组成、浓度和实现5.2的所需pH的能力上。测试的缓冲液包括柠檬酸盐和磷酸盐(其用于参考产品制剂)和乙酸盐(表1)。在整个实验系列1实验中，将氯化钠和甘露醇浓度(等于阿达木单抗参考制剂中的浓度)加入至各条件中。根据该实验系列的实验，发现在实现和维持范围4.9-5.5(阿达木单抗参考制剂之外0.3pH单位)的所需pH上，一些缓冲液比其它更好。具体而言，SE-UPLC纯度与pH高度相关，并且使用乙酸盐缓冲液产生更好的特征(图1和2)。
表1.第1轮制剂条件
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Y：阿达木单抗参考缓冲液中包括的NaCl和甘露醇浓度分别为4.93mg/0.08mL和9.6mg/0.8mL。
DSC温谱图有助于评价产品对热变性的稳定性。所有迹线显示两个主要的热转变：72℃后较大的一个，和80℃后较小的一个。在某些条件下，在60℃后观察到另外的肩状部分，认为这表示在这些配制条件下开始解折叠过程(图3)。后面的这些制剂从随后的筛选实验系列中排除。
动态光散射(DLS)用于监测溶液中蛋白分子的流体动力学半径Rh(大小)。在较低(约1mg/mL)蛋白浓度下在5-6纳米范围内的流体动力学半径大小是单体单克隆抗体(约140kDa大小)所特有的；该大小随蛋白浓度而增加，可能是由于拥挤的自缔合或聚集。在配制条件下通常应避免这样的较高的大小，因为较高的大小指示固有不稳定的状况。为了更完全描绘胶体稳定性，实验系列1配制条件中ONS-3010的流体动力学半径以两个蛋白浓度进行监测。Rh不受pH控制(图4)：存在显著的Rh变化，甚至在相对狭窄的pH范围内，这强调了缓冲液组成对胶体稳定性的影响。选择Rh≤阿达木单抗参考制剂的8.0nm的条件用于进一步在实验系列2中评价。
实验系列2。基于实验系列1的结果，第二个实验系列以一组精细的配制条件，利用应激的稳定性研究。20mM水平的乙酸盐缓冲液是特别关注的。还评价了氯化钠浓度。一些条件匹配了阿达木单抗参考制剂NaCl水平，而其它条件不包含NaCl(表2)。
表2.实验系列2配制条件
Y：阿达木单抗参考(AR)缓冲液中包括的NaCl和甘露醇浓度(分别为4.93mg/0.8mL和9.6mg/0.8mL)。N：未加入NaCl。
与不含NaCl的缓冲液相比，含有NaCl的实验系列2制剂缓冲液在55℃孵育多达14天时更不稳定。如图5中所示，升高温度下的时间引起聚集(增加SE-UPLC高分子量物质或HMWS)以及降解和片段化(增加低分子量物质或LMWS)。相对于阿达木单抗参考制剂，在这些实验中含有NaCl的配制条件显示相当的聚集和片段化速率。然而，对聚集和降解两种机制，缺少NaCl的制剂显示改善的稳定性。这在图6中示出，其显示用阿达木单抗参考缓冲液配制的、用含NaCl的乙酸盐缓冲液配制的和用不含NaCl的乙酸盐缓冲液配制的ONS-3010的重叠的色谱图。图7和图8分别突出了SE-UPLC聚集和片段化的趋势。
除去NaCl显示还与改善的胶体稳定性相关，如通过DLS测量的，和在CEX-HPLC中与改善的稳定性有关。对于实验系列3，设计较低NaCl条件，其降低(但未消除)NaCl水平，同时调整甘露醇浓度以得到接近参考产品制剂的摩尔渗透压浓度水平。
下文的表3概述了实验系列2条件和它们的分析结果，突出了它们包括到实验系列3研究中或从实验系列3研究中排除的原因。一般而言，实验系列3选择的条件显示对热和化学变性相当的或改善的稳定性，如通过各种正交技术(SE-UPLC、CEX-HPLC、CE-SDS)监测的。还使用基于L929细胞的效力测定法评价了相对效力，和用DLS监测胶体稳定性。最后，所有样品在整个研究中进行目测监测(并且在用于测试的稀释时的雾度(haziness)成为排除标准)。
表3.实验系列2数据概述
实验系列3。最后实验系列的制剂开发研究比较三种条件，包括阿达木单抗参考制剂作为对照(表4)。其它两种再配制条件使用乙酸盐缓冲液。存在一种乙酸盐缓冲液，其匹配NaCl和甘露醇的阿达木单抗参考水平，和一种乙酸盐缓冲液，其中所述水平相对于阿达木单抗参考(AR)制剂而修改(较低NaCl、较高甘露醇(LS/HM))。这些修改产生具有与阿达木单抗参考相当的摩尔渗透压浓度的制剂，保持等渗性。
表4.实验系列3配制条件
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Y：阿达木单抗参考(AR)缓冲液中包括的NaCl和甘露醇浓度(分别为4.93mg/0.8mL和9.6mg/0.8mL)。LS/HM：较低的NaCl和较高的甘露醇水平。
综合系列的应激、加速和实时稳定性研究作为实验系列3制剂开发的一部分(表5)进行。实时研究在玻璃管中进行，以同时提供类似于最终药物产品包装(1型硼硅酸盐玻璃)的容器接触和利于产品外观和粒子形成的评价。除了在不同温度下作为液体孵育ONS-3010之外，还将产品贮存在冷冻条件下(-20℃和-80℃两者)以及暴露于冷冻至液体转变的重复循环。被迫氧化研究和摇动/剪切力研究提供另外的信息以有助于提供最终的制剂选择。
表5.第3轮实验的组分和范围
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实施例3
材料的表征
动态光散射。动态光散射用于测量四种不同蛋白浓度的ONS-3010的流体动力学半径(Rh)(对于图形表示的结果参见图9)。50mg/ml的阿达木单抗参考制剂具有8.0nm的平均流体动力学半径。在完全的50mg/ml浓度下，条件2(乙酸盐)显示类似的值，而具有较低盐的条件3(乙酸盐LS/HM)显示较小的Rh值，与较高蛋白浓度下自缔合的更好控制有关。用于条件3的较低量的氯化钠足以破坏在通常配制条件下使用的50mg/mL时发生的拥挤/缔合。在较低的浓度时，Rh值集中在单体单克隆抗体所特有的5-6nm范围的值。条件3(乙酸盐LS/HM)在测量的整个蛋白浓度范围中产生最低的Rh值。
在50mg/mL的高蛋白浓度下，缓冲的制剂中存在较少量的氯化钠(26.35mM氯化钠对比105.45mM氯化钠)防止个体抗体分子的拥挤。对于含有低氯化钠的缓冲的制剂，这种现象通过较低的流体动力学半径进一步证实(图9乙酸盐LS/HM缓冲液条件350mg/mL)。这是氯化钠(较低浓度)与乙酸盐缓冲液的独特的协同作用，其防止拥挤和减少聚集(HMWS)(图11和12)。认为所述制剂中较低浓度的氯化钠和缺少柠檬酸盐可能与较好的患者可接受性有关(在注射部位处刺激和疼痛减少)。缓冲液组分的改变(特别是，较低浓度或除去柠檬酸盐)可在皮下给予药物时减少注射-部位反应(例如，″灼烧感″)的发生率。
在约50mg/mL时在2-8℃下在玻璃管(I型硼硅酸盐)中贮存17个月后，测试来自200L试验规模的另一种这样的ONS-3010材料的胶体性质。将测试的批次配制成乙酸盐LS/HM缓冲液制剂(BDS-O)和阿达木单抗参考制剂(BDS-H)两者，如表6中所示，BDS-O的流体动力学半径是约5.5nm，其明显低于BDS-H(7.9nm)。流体动力学半径(Rh)的这种差异指示与阿达木单抗参考制剂相比，在缓冲的制剂中胶体稳定性增加。此外，这种重要的胶体性质(Rh)在2-8℃下在17个月的贮存期间保持不变，指示缓冲的制剂的更大的贮存稳定性。
表6.ONS-3010DLS结果
| 样品 | 蛋白浓度(mg/mL) | 平均Rh(nm) |
| BDS-0 | 49.9 | 5.5 |
| 阿达木单抗参考(BDS-H) | 53.7 | 7.9 |
摩尔渗透压浓度。三种条件的摩尔渗透压浓度值使用Nova Flex仪器测量。所有条件彼此类似，并且与阿达木单抗参考制剂类似，并且在290-340mOsm/kg的等渗范围内(表7)。
表7.ONS-3010实验系列3摩尔渗透压浓度值
| 条件号 | 描述 | 摩尔渗透压浓度(mOsm/kg) |
| 1 | 阿达木单抗参考 | 330 |
| 2 | 乙酸盐 | 320 |
| 3 | 乙酸盐LS/HM | 324 |
对于缓冲液组分，参考表4。LS/HM：较低的NaCI和较高的甘露醇水平。
粒子计数。粒子分析使用HIAC Model 9703+系统按改良的USP方法(允许检测小至2μm的粒子)进行。所有大小范围的累积结果显示在表8中，其中计数/容器基于0.8ml预填装注射器包装计算。10和25μm大小组(bin)特别按照USP方法<788>进行跟踪。对于＞25微米粒子，所有条件的值都完全低于≤600累积计数/容器的限值，和对于＞10微米粒子，所有条件的值都完全低于≤6000累积计数/容器的限值。相对于阿达木单抗参考制剂和较高盐制剂，较低盐(配制条件3)显示进一步减少2-10微米的粒子(表8)。
表8.实验系列3时间零和第28天样品的粒子计数结果
对于缓冲液组分参考表4。LS/HM：较低的NaCl和较高的甘露醇水平。
应激稳定性(55℃)。为探查ONS-3010对升高温度的应激条件的行为，将样品在55℃孵育直至7天，然后通过多种分析方法测试。尽管55℃远高于贮存条件和临床中将遇到的任何预期的短期操作条件，但应激稳定性配备(arm)在突出制剂保护免于在较高温度下占主导的许多被迫降解事件的能力中非常有用。对于阿达木单抗和ONS-3010两者，55℃低于热变性的开始发生，如通过差示扫描量热法所监测的。
SE-UPLC。将ONS-3010暴露于55℃产生较高和较低分子量物质(HMWS和LMWS)(表9)，这两者可通过SE-UPLC监测。从时间零至第7天，在二聚体(保留时间为大约3.1分钟)和大于二聚体的物质(具有更早的保留时间)中有显著增加，这两者都作为HMWS计数。对于片段化，在偏离约3.9分钟的单体峰的背部，形成不同的峰，加上4.5分钟的另外的峰(图10)。7天孵育后，在各配制条件的SE-UPLC色谱图之间存在明显差异(图11)。具体而言，相对于阿达木单抗参考制剂和其它配制条件，乙酸盐LS/HM条件显示对HMWS形成的保护。这也显示在图12中。
表9.第1天至第7天应激稳定性(55℃)的SE-UPLC数据
对于缓冲液组分参考表4。LS/HM：较低的NaCl和较高的甘露醇水平。
CEX-HPLC。在55℃处理的样品的阳离子交换色谱提供许多物理化学变化的广泛视角，其可将自身显示为分子电荷变化。这包括基于特定电荷的修饰，例如脱酰胺化、异构化和焦谷氨酰胺形成，但也可揭示更加精细构象变化，其可在升高温度下开始发生。对于时间零至第2天的样品，监测CEX-HPLC特征(表10)。
表10.对于应激稳定性(55℃)的CEX数据
对于缓冲液组分参考表4。LS/HM：较低的NaCl和较高的甘露醇水平。
阿达木单抗参考制剂中样品的代表性色谱图显示在图13中，具有55℃第2天的样品的重叠。CEX％主要、酸性和碱性物质的趋势显示在图14、图15和图16。在55℃处理2天后，乙酸盐LS/HM缓冲液制剂具有与阿达木单抗参考制剂类似的CEX特征。较小的差异在测定法可变性之内。
CE-SDS R/NR。为提供大小变体的正交视图(变性对比非变性SE-UPLC方法)，在非还原和还原两种条件下使用CE-SDS。用SE-UPLC观察到的在配制条件之间的强烈区别在通过变性技术的分析下不可见，表示形成的大小变体在性质上大部分是非共价的。
生物测定法。一般而言，所有测试的样品在生物测定法中显示在方法可变性内的相当的相对效力。在55℃7天处理后没有可测量的效力变化，证实对热变性的稳定性。
肽图。肽作图允许对ONS-3010中修饰的更具体视图。55℃孵育温度促进某些化学修饰，其通常在较低温度下不可见，例如N-端重链的焦谷氨酸形成和特定的异构化事件。条件3(乙酸盐LS/HM)显示具有针对该类型的化学修饰的最大保护(图17、图18、图19、图20和表11)。例如，在条件3第7天应激样品中CH2结构域的甲硫氨酸256的氧化保持在未应激范围内的水平。C-端变体和糖基化水平在整个处理中保持恒定。
表11.在应激稳定性样品中通过肽作图监测的选择的ONS-3010翻译后修饰
对于缓冲液组分参考表4。LS/HM：较低的NaCl和较高的甘露醇水平。
加速稳定性(37℃和25℃)。加速(37℃和25℃)和实时稳定性研究在玻璃管中进行。将样品取出用于通过SE-UPLC、CEX-HPLC、CE-SDS、外观、生物测定和肽作图(在选定时间点)进行分析。在25℃直至28天，对于CEX-HPLC、SE-UPLC、CE-SDS、肽图和生物测定，乙酸盐制剂与阿达木单抗参考制剂相当。
SE-UPLC。对于阿达木单抗参考制剂，37℃孵育色谱图的重叠显示在图21中，在第28天所有三种条件的局部放大重叠显示在图22。在37℃28天后，所有三种条件具有类似的SE-UPLC特征，其中主峰/单体纯度水平为约96％。在单体峰上(4分钟保留时间)背肩的形成在所有配制条件中观察到，并且对于一些较早时间点，它处于积分阈值(导致在定量LMWS时的一些变化，对于数值参见表12，注意强调的在第21天和第28天之间的增加)。
表12.对于37℃加速稳定性样品的SE-UPLC
对于缓冲液组分参考表4。LS/HM：较低的NaCl和较高的甘露醇水平。
CEX-HPLC。在37℃处理14天、21天和28天的加速稳定性样品的CEX-HPLC分析(表13)显示乙酸盐条件与阿达木单抗参考制剂相当。
表13.对于应激稳定性(37℃)的CEX-HPLC数据
对于缓冲液组分参考表4。LS/HM：较低的NaCl和较高的甘露醇水平。
CE-SDS(R/NR)。对于37℃孵育的样品，28天后在三种条件之间，CE-SDS测试揭示在NR变性大小变体中类似的趋势。对于37℃R CE-SDS，相对于阿达木单抗参考制剂，28天后所有条件是相当的。
生物测定。37℃28天孵育后，所有配制条件在L929生物测定法中显示完全效力。
外观。对于加速和实时稳定性样品进行常规目测检查。具体地，在颜色、透明度和粒子存在情况(蛋白性或非蛋白性的)方面，监测样品的任何变化。一般而言，ONS-3010样品显示对于蛋白产品所需的视觉外观。在37℃孵育的样品中，除了条件3之外所有制剂到第20天显示一些粒子形成，而条件3(乙酸盐LS/HM)在第28天保持没有粒子(表14)。所有制剂在2-8℃26天时显示一些可见粒子(表30)。
表14.对于应激稳定性(37℃)的外观数据
| 天 | 阿达木单抗参考 | 乙酸盐 | 乙酸盐LS/HM |
| 0 | C | C | C |
| 1 | C | C | C |
| 4 | C | C | C |
| 5 | C | C | C |
| 6 | C | C | C |
| 7 | C | C | C |
| 8 | C | C | C |
| 11 | C | C | C |
| 12 | C | C | C |
| 13 | C | C | C |
| 14 | C | C | C |
| 15 | C | C | C |
| 18 | C | C | C |
| 19 | C | C | C |
| 20 | 1P | C | C |
| 21 | 1P | 1P | C |
| 22 | 1P | 1P | C |
| 25 | 1P | 1P | C |
| 26 | 1P | 1P | C |
| 27 | 1P | 1P | C |
| 28 | 1P | 1P | C |
C＝澄清，1P-5P标度：1P＝可见粒子，5P＝可见许多粒子
对于缓冲液组分参考表4。LS/HM：较低的NaCl和较高的甘露醇水平。
被迫氧化。被迫氧化研究利用1％叔丁基过氧化氢处理以在ONS-3010制剂候选物中诱导氧化。SE-UPLC、CEX-HPLC和胰蛋白酶肽图方法用于监测产品品质属性和易受氧化影响的特定氨基酸残基的变化。氧化修饰是主要的化学降解途径之一。在主链或侧链上氧化破坏的位点可改变蛋白表面的疏水性。通过使用LC-MS肽作图的氧化指纹使得快速和可靠的制剂选择方法成为可能。
沿ONS-3010序列分布有5个甲硫氨酸残基：轻链中的残基M4，和重链中的残基M34、M83、M256和M432。M34在CDR内。
根据肽作图数据，Fc区甲硫氨酸残基M256和M432是氧化修饰的主要残基(图23和图24)。配制条件#3提供总体上对氧化的最大保护。残基M4和M83的氧化的物质在方法LOQ之下，甚至在应激条件中。在应激时，氧化的M34处于LOQ，其中三种条件在方法可变性内是相当的。
对于CEX-HPLC，氧化应激处理导致主峰降低和碱性峰百分比相应增加数个百分点(表15)。与其它条件相比，条件3(乙酸盐LS/HM)显示对氧化更具保护性。SE-UPLC值在处理时基本上未改变。
表15.对于被迫氧化37℃的CEX-HPLC数据
对于缓冲液组分参考表4。LS/HM：较低的NaCl和较高的甘露醇水平。
冻融循环。在两个温度下对候选制剂中的样品进行冻融循环：-20℃和-80℃。将样品置于设定在合适温度的冰箱中，允许充分冷冻(至少1小时)。然后将样品从冰箱中取出，允许在25℃融化(大约1小时)。该冷冻步骤加融化步骤构成一个单次循环。样品经过至多5个冻融循环，然后通过SE-UPLC一起分析，其中样品亚组还通过NR CE-SDS测试。
所有配制条件显示对在-80℃多次冻融循环是稳定的，其中5次循环后主峰纯度值等于时间零的值。用-20℃循环，观察到％HMWS的一些增加，在较高的甘露醇配制条件3中更加明显(表16)。认为这可能表示在该较低冷冻温度下促成的甘露醇结晶。阿达木单抗参考制剂和条件3在循环时显示类似的模式，如通过NR CE-SDS所监测。
表16.对于冷冻/融化的SE-UPLC数据(″C″＝冷冻/融化循环1-5)
/>
对于缓冲液组分参考表4。LS/HM：较低的NaCl和较高的甘露醇水平。
摇动研究。为了评价所述制剂对剪切力的保护能力，在玻璃管(0.5mL填充物)中进行摇动研究，所述玻璃管置于设定在37℃150rpm的轨道摇动孵育箱中。第二组(arm)包含未加入聚山梨醇酯80的制剂。样品用以下方法进行测试：SE-UPLC、CEX-HPLC、CE-SDS(R/NR)、L929生物测定、肽图和外观。
对于含和不含聚山梨醇酯80的两种摇动研究，根据SE-UPLC，条件2和3(其中在第28天主峰纯度为约96％)与阿达木单抗参考制剂相当或略微好于阿达木单抗参考制剂(表17-24)。CEX-HPLC结果显示与阿达木单抗参考制剂相比在乙酸盐制剂中无显著差异(表25-27)。第28天样品在L929生物测定中显示完全的效力，和CE-SDS(R/NR)值在各条件间类似。在第28天，所有条件显示一定的可见微粒形成：条件3显示比其它条件更具保护性(表28和29)。
表17.对于含聚山梨醇酯80的摇动研究的SE-UPLC数据-第7天
对于缓冲液组分参考表4。LS/HM：较低的NaCl和较高的甘露醇水平。
表18.对于含聚山梨醇酯80的摇动研究的SE-UPLC数据-第14天
对于缓冲液组分参考表4。LS/HM：较低的NaCl和较高的甘露醇水平。
表19.对于含聚山梨醇酯80的摇动研究的SE-UPLC数据-第21天
对于缓冲液组分参考表4。LS/HM：较低的NaCl和较高的甘露醇水平。
表20.对于含聚山梨醇酯80的摇动研究的SE-UPLC数据-第28天
对于缓冲液组分参考表4。LS/HM：较低的NaCl和较高的甘露醇水平。
表21.对于不含聚山梨醇酯80的摇动研究的SE-UPLC数据-第6天不含聚山梨醇酯80(Tw)
对于缓冲液组分参考表4。LS/HM：较低的NaCl和较高的甘露醇水平。
表22.对于不含聚山梨醇酯80的摇动研究的SE-UPLC数据(Tw)-第13天
对于缓冲液组分参考表4。LS/HM：较低的NaCl和较高的甘露醇水平。
表23.对于不含聚山梨醇酯80的摇动研究的SE-UPLC数据(Tw)-第20天
对于缓冲液组分参考表4。LS/HM：较低的NaCl和较高的甘露醇水平。
表24.对于不含聚山梨醇酯80的摇动研究的SE-UPLC数据-第28天
对于缓冲液组分参考表4。LS/HM：较低的NaCl和较高的甘露醇水平。
表25.对于含聚山梨醇酯80的摇动研究的CEX-HPLC数据-第14天
对于缓冲液组分参考表4。LS/HM：较低的NaCl和较高的甘露醇水平。
表26.对于含聚山梨醇酯80的摇动研究的CEX-HPLC数据-第28天
/>
对于缓冲液组分参考表4。LS/HM：较低的NaCl和较高的甘露醇水平。
表27.对于不含聚山梨醇酯80(Tw)的摇动研究的CEX-HPLC数据-第28天
对于缓冲液组分参考表4。LS/HM：较低的NaCl和较高的甘露醇水平。
表28.对于含聚山梨醇酯80的摇动研究的外观数据
| 天 | 阿达木单抗参考 | 乙酸盐 | 乙酸盐LS/HM |
| 0 | C | C | C |
| 1 | C | C | C |
| 2 | C | C | C |
| 3 | C | C | C |
| 4 | 1P | C | C |
| 7 | 2P | 1P | 1P |
| 8 | 2P | 1P | 1P |
| 9 | 2P | 1P | 1P |
| 10 | 2P | 1P | 1P |
| 11 | 2P | 1P | 1P |
| 14 | 2P | 2P | 1P |
| 15 | 2P | 2P | 1P |
| 16 | 2P | 2P | 1P |
| 17 | 2P | 2P | 1P |
| 18 | 2P | 2P | 1P |
| 21 | 2P | 2P | 1P |
| 22 | 2P | 2P | 1P |
| 23 | 2P | 2P | 1P |
| 24 | 2P | 2P | 1P |
| 25 | 2P | 2P | 1P |
| 28 | 2P | 2P | 1P |
C＝澄清，1P-5P标度：1P＝可见粒子，5P＝可见许多粒子。
对于缓冲液组分参考表4。LS/HM：较低的NaCl和较高的甘露醇水平。
表29.对于不含聚山梨醇酯80的摇动研究的外观数据
C＝澄清，1P-5P标度：1P＝可见粒子，5P＝可见许多粒子。
对于缓冲液组分参考表4。LS/HM：较低的NaCl和较高的甘露醇水平。
在2-8℃和-80℃下的实时稳定性。在长期实时稳定性研究之前，已经进行了包括应激和加速温度、被迫氧化、暴露于高剪切和冻融的制剂研究，以评价制剂候选物。作为这些处理的结果，已经观察到热稳定性、聚集、片段化、降解途径和效力之间的关系。在测试的几种极端条件中，实验系列3，条件3(乙酸盐LS/HM)已经证明比其它条件更具保护性。
对于ONS-3010药物产品，预期在2-8℃和-80℃下贮存。已经以以下时间点在2-8℃和-80℃下进行长期实时稳定性研究：1个月、5个月、12个月和18个月。用以下方法测试样品：SE-UPLC(表32-34)、CEX-HPLC(表35-37)、CE-SDS(R/NR)(表38-42)、L929生物测定(表43)、肽图(表44-46)、粒子计数(第28天2-8℃表8)和外观(表30-31)。
根据SE-UPLC(图25-28)，对用三种不同条件配制的ONS-3010样品的测试结果显示无显著的生物化学变化，并且生物测定结果是等同的且在方法可变性内。对于配制条件1和3在视觉外观上没有显著差异(表30和31)。对于第28天时间点的显微粒子(subvisibleparticle)计数记录在表8中。在第28天时间点，相对于阿达木单抗参考制剂和较高盐制剂，较低盐(配制条件3乙酸盐LS/HM)显示进一步减少2-10微米的粒子。条件2的稳定性评价在5月时间点后被中断，如果需要的话，稳定性样品随后在-80℃被冷冻用于后续测试。
表30.对于2-8℃实时孵育的外观
| 天 | 阿达木单抗参考 | 乙酸盐 | 乙酸盐LS/HM |
| 0 | C | C | C |
| 1 | C | C | C |
| 4 | C | C | C |
| 5 | C | C | C |
| 6 | C | C | C |
| 7 | C | C | C |
| 8 | C | C | C |
| 11 | C | C | C |
| 12 | C | C | C |
| 13 | C | C | C |
| 14 | C | C | C |
| 15 | C | C | C |
| 18 | C | C | C |
| 19 | C | C | C |
| 20 | C | C | C |
| 21 | C | C | C |
| 22 | C | C | C |
| 25 | C | C | C |
| 26 | 1P | 1P | 1P |
| 27 | 1P | 1P | 1P |
| 28 | 1P | 1P | 1P |
| 5个月 | 1P | 1P | 1P |
| 12个月 | 1P | 2P | 1P |
| 18个月 | 1P | 2P | 1P |
C＝澄清，1P-5P标度：1P＝可见粒子，5P＝可见许多粒子
对于缓冲液组分参考表4。LS/HM：较低的NaCl和较高的甘露醇水平。
表31.对于-80℃实时孵育的外观
| 月 | 条件1 | 条件2 | 条件3 |
| 5 | 1P | 2P | 1P |
| 12 | 1P | 未测试 | 1P |
| 18 | 1P | 未测试 | 1P |
C＝澄清，1P-5P标度：1P＝可见粒子，5P＝可见许多粒子
对于缓冲液组分参考表4。LS/HM：较低的NaCl和较高的甘露醇水平。
表32.对于2-8℃和-80℃孵育的SE-UPLC％HMWS
对于缓冲液组分参考表4。LS/HM：较低的NaCl和较高的甘露醇水平。
表33.对于2-8℃和-80℃孵育的SE-UPLC％单体
对于缓冲液组分参考表4。LS/HM：较低的NaCl和较高的甘露醇水平。
表34.对于2-8℃和-80℃孵育的SE-UPLC％LMWS
对于缓冲液组分参考表4。LS/HM：较低的NaCl和较高的甘露醇水平。
表35.对于2-8℃和-80℃孵育的CEX-HPLC％酸性物质
/>
对于缓冲液组分参考表4。LS/HM：较低的NaCl和较高的甘露醇水平。
表36.对于2-8℃和-80℃孵育的CEX-HPLC％主要物质
对于缓冲液组分参考表4。LS/HM：较低的NaCl和较高的甘露醇水平。
表37.对于2-8℃和-80℃孵育的CEX-HPLC％碱性物质
对于缓冲液组分参考表4。LS/HM：较低的NaCl和较高的甘露醇水平。
表38.对于2-8℃和-80℃孵育的CE-SDS还原轻链％面积
对于缓冲液组分参考表4。LS/HM：较低的NaCl和较高的甘露醇水平。
表39.对于2-8℃和-80℃孵育的CE-SDS还原重链％面积
对于缓冲液组分参考表4。LS/HM：较低的NaCl和较高的甘露醇水平。
表40.对于2-8℃和-80℃孵育的CE-SDS还原中间物质％面积
对于缓冲液组分参考表4。LS/HM：较低的NaCl和较高的甘露醇水平。
表41.对于2-8℃和-80℃孵育的CE-SDS非还原主峰％面积
对于缓冲液组分参考表4。LS/HM：较低的NaCl和较高的甘露醇水平。
表42.对于2-8℃和-80℃孵育的CE-SDS非还原的主峰前物质％面积
对于缓冲液组分参考表4。LS/HM：较低的NaCl和较高的甘露醇水平。
表43.对于2-8℃和-80℃孵育的生物测定L929
对于缓冲液组分参考表4。LS/HM：较低的NaCl和较高的甘露醇水平。
表44.对于2-8℃和-80℃孵育的N-端焦E
*在2-8℃28天的样品与在时间零的一组单独的样品一起测试。
对于缓冲液组分参考表4。LS/HM：较低的NaCl和较高的甘露醇水平。
表45.对于2-8℃和-80℃孵育的氧化
对于缓冲液组分参考表4。LS/HM：较低的NaCl和较高的甘露醇水平。
表46.对于2-8℃和-80℃孵育的异构化
对于缓冲液组分参考表4。LS/HM：较低的NaCl和较高的甘露醇水平。
实施例4
被迫降解评价
本实施例提供的数据源自被迫降解测试，说明了用乙酸盐LS/HM缓冲液组成，ONS-3010的稳定性提高。试验样品如下：
A.51.0mg/mL(乙酸盐LS/HM缓冲液制剂)和52.6mg/mL(阿达木单抗参考制剂)
B.48.5mg/mL(乙酸盐LS/HM缓冲液制剂)和50.3mg/mL(阿达木单抗参考制剂)
纯度SE-UPLC：SE-UPLC监测在非变性条件下的ONS-3010大小同质性。SE-UPLC测试方法基于大小分开蛋白。该方法是用磷酸钠运行缓冲液等度的，使用Waters Acquity UPLCBEH200SEC柱(1.7μm，4.6x150mm)。使用280nm的吸光度监测峰。单体峰之前洗脱的物质是聚集体(HMWS)而单体峰之后洗脱的峰是降解物(LMWS)。
纯度CE-SDS(NR)：CE-SDS分析用于监测在变性条件下的ONS-3010大小同质性，用非还原条件，使用Beckman PA800plus仪器。样品用烷基化剂处理，和SDS与所有蛋白通过样品缓冲液结合。将聚合物基质填充至毛细管，然后进行样品分析。通过施加的电压将样品电动引入毛细管，然后通过施用恒定电压至毛细管进行电泳。SDS处理的蛋白具有与蛋白重量成比例的质量：电荷性质，其允许通过分子量差异分开SDS-结合的蛋白。测试物蛋白通过220nm的UV检测来定量。
肽图：UPLC肽作图用于表征蛋白的一级结构。ONS-3010用胰蛋白酶消化，并将得到的肽通过RP-UPLC分开。对于峰相对保留时间和总体峰模式，与参考比较，分析特征性肽图指纹。
55℃处理：在2个批次的ONS-3010中在溶液中进行55℃研究。结果表明，在乙酸盐LS/HM缓冲液制剂中ONS-3010抗体显示与在阿达木单抗参考制剂中的相同抗体相比较慢的降解速率，显示了在非还原CE以及肽图上对于聚集和％完整蛋白，在55℃下稳定性提高。由于阿达木单抗参考缓冲液中的抗体通过10天的处理变成乳色，与乙酸盐LS/HM缓冲液制剂中的抗体(在整个10天的处理中保持澄清)相比也存在目测差异。
表48-50显示具有显著差异的最长的时间点。然而，在整个处理中存在一致的趋势。
表47.对于ONS-3010在55℃10天的被迫温度试验的概述
注意：在两种制剂中对于处理的样品没有效力变化
表48.对于ONS-3010和阿达木单抗在55℃10天的被迫温度试验的概述
注意：在两种制剂中对于处理的样品没有效力变化
pH 3.0处理：在2个批次的ONS-3010抗体中进行在pH 3.0下的处理。根据与阿达木单抗参考制剂中的相同抗体相比的聚集，在乙酸盐LS/HM缓冲液制剂中的ONS-3010BDS显示较高水平的稳定性。还存在视觉差异，其中与乙酸盐LS/HM缓冲液制剂中的抗体(其在pH 3的整个12小时处理中保持澄清)相比，阿达木单抗参考缓冲液中的抗体在12小时处理后变得混浊。
表49.对于ONS-3010在pH 3至多12小时的低pH试验的概述*
注意：在两种制剂中对于处理的样品没有效力变化
*在经1-3小时在pH 3.0下阿达木单抗参考(柠檬酸盐-磷酸盐缓冲液)对比乙酸盐LS/HM缓冲液中形成的聚集体的量上存在2-3倍的差异。这些数据表明在pH 3.0下乙酸盐LS/HM缓冲液提供针对聚集的更大稳定性。在低pH下与阿达木单抗参考制剂相比，乙酸盐LS/HM缓冲液制剂显示更大的保护。
实施例5
概述
根据应激和加速稳定性研究的结果表明有前景的再配制条件，相对于在阿达木单抗参考制剂中的抗体，其具有相当的和/或改善的降解速率。相对于阿达木单抗参考缓冲液，用于实验系列3的配制条件#3(乙酸盐LS/HM)提供对ONS-3010的保护作用。该观察结果在被迫氧化和摇动研究中以及在升高温度下是一致的。乙酸盐LS/HM缓冲液制剂对ONS-3010提供提高的热稳定性、构象稳定性和胶体稳定性，这事实上转变为相当的保质期和/或提高的产品质量。
在2-8℃和-80℃下贮存18个月后，条件1(阿达木单抗参考)和条件3(乙酸盐LS/HM缓冲液制剂)是稳定的，并显示没有明显变化。
阿达木单抗参考制剂缓冲液组分：
105.45mM氯化钠
5.53mM磷酸钠，一碱式二水合物
8.57mM磷酸钠，二碱式二水合物
1.02mM柠檬酸钠，二水合物
6.19mM柠檬酸，一水合物
65.87mM甘露醇
0.1％聚山梨醇酯-80
pH 5.20(按需要用氢氧化钠调整)
适量无菌注射用水
ONS-3010乙酸盐LS/HM制剂缓冲液组分：
26.35mM氯化钠
1.00mM乙酸钠三水合物
19.00mM冰乙酸
203.00mM甘露醇
0.1％聚山梨醇酯-80
pH 5.20(按需要用氢氧化钠调整)
适量无菌注射用水
表50.比较阿达木单抗参考和ONS-3010制剂组分
本发明不限于上文所述和举例说明的实施方案，而是在随附权利要求的范围内能够进行改变和修饰。
Claims (116)
1.一种缓冲的抗体制剂，其包含抗体，所述抗体含有包含SEQ ID NO: 1的氨基酸序列的重链和包含SEQ ID NO: 2的氨基酸序列的轻链；缓冲液，所述缓冲液包含约0.7 mM-约1.3 mM的乙酸盐、约200 mM-约206 mM的甘露醇、约16 mM-约22 mM的冰乙酸和约24 mM-约28 mM的氯化钠；和约0.07% (v/v)-约0.15% (v/v)的聚山梨醇酯80，其中所述抗体制剂具有约5.1-约5.3的pH。
2.权利要求1的缓冲的抗体制剂，其中所述制剂包含约30 mg-约50 mg的所述抗体。
3.权利要求1或2的缓冲的抗体制剂，其中所述制剂包含约35 mg-约45 mg的所述抗体。
4.权利要求1-3中任一项的缓冲的抗体制剂，其中所述制剂包含约37 mg-约43 mg的所述抗体。
5.权利要求1-4中任一项的缓冲的抗体制剂，其中所述制剂包含约40 mg的所述抗体。
6.权利要求1-5中任一项的缓冲的抗体制剂，其中所述缓冲液包含约0.8 mM-约1.2 mM的乙酸盐。
7.权利要求1-6中任一项的缓冲的抗体制剂，其中所述缓冲液包含约0.9 mM-约1.1 mM的乙酸盐。
8.权利要求1-7中任一项的缓冲的抗体制剂，其中所述缓冲液包含约1 mM的乙酸盐。
9.权利要求1-8中任一项的缓冲的抗体制剂，其中所述缓冲液包含约201 mM-约205 mM的甘露醇。
10.权利要求1-9中任一项的缓冲的抗体制剂，其中所述缓冲液包含约202 mM-约204mM的甘露醇。
11.权利要求1-10中任一项的缓冲的抗体制剂，其中所述缓冲液包含约203 mM的甘露醇。
12.权利要求1-11中任一项的缓冲的抗体制剂，其中所述缓冲液包含约17 mM-约21 mM的冰乙酸。
13.权利要求1-12中任一项的缓冲的抗体制剂，其中所述缓冲液包含约18 mM-约20 mM的冰乙酸。
14.权利要求1-13中任一项的缓冲的抗体制剂，其中所述缓冲液包含约19 mM的冰乙酸。
15.权利要求1-14中任一项的缓冲的抗体制剂，其中所述缓冲液包含约25 mM-约27 mM的氯化钠。
16.权利要求1-15中任一项的缓冲的抗体制剂，其中所述缓冲液包含约26 mM的氯化钠。
17.权利要求1-16中任一项的缓冲的抗体制剂，其中所述缓冲液包含约26.35 mM的氯化钠。
18.权利要求1-17中任一项的缓冲的抗体制剂，其中所述制剂包含约0.08% (v/v)-约0.12% (v/v)的聚山梨醇酯80。
19.权利要求1-18中任一项的缓冲的抗体制剂，其中所述制剂包含约0.09% (v/v)-约0.11% (v/v)的聚山梨醇酯80。
20.权利要求1-19中任一项的缓冲的抗体制剂，其中所述制剂包含约0.1% (v/v)的聚山梨醇酯80。
21.权利要求1-19中任一项的缓冲的抗体制剂，其中所述制剂具有约5.2的pH。
22.一种缓冲的抗体制剂，其包含抗体，所述抗体含有包含SEQ. ID NO: 1的氨基酸序列的重链和包含SEQ ID NO: 2的氨基酸序列的轻链；缓冲液，所述缓冲液包含约0.8 mM-约1.2 mM的乙酸盐、约201 mM-约205 mM的甘露醇、约17 mM-约21 mM的冰乙酸和约25 mM-约27 mM的氯化钠；和约0.08%-约0.15% (按体积计)的聚山梨醇酯80，其中所述抗体制剂具有约5.1-约5.3的pH。
23.权利要求22的缓冲的抗体制剂，其中所述制剂包含约30 mg-约50 mg的所述抗体。
24.权利要求22或23的缓冲的抗体制剂，其中所述制剂包含约35 mg-约45 mg的所述抗体。
25.权利要求22-24中任一项的缓冲的抗体制剂，其中所述制剂包含约37 mg-约43 mg的所述抗体。
26.权利要求22-25中任一项的缓冲的抗体制剂，其中所述制剂包含约40 mg的抗体。
27.权利要求22-26中任一项的缓冲的抗体制剂，其中所述缓冲液包含约0.9 mM-约1.1mM的乙酸盐。
28.权利要求22-27中任一项的缓冲的抗体制剂，其中所述缓冲液包含约1 mM的乙酸盐。
29.权利要求22-28中任一项的缓冲的抗体制剂，其中所述缓冲液包含约202 mM-约204mM的甘露醇。
30.权利要求22-29中任一项的缓冲的抗体制剂，其中所述缓冲液包含约203 mM的甘露醇。
31.权利要求22-30中任一项的缓冲的抗体制剂，其中所述缓冲液包含约18 mM-约20mM的冰乙酸。
32.权利要求22-31中任一项的缓冲的抗体制剂，其中所述缓冲液包含约19 mM的冰乙酸。
33.权利要求22-32中任一项的缓冲的抗体制剂，其中所述缓冲液包含约26 mM的氯化钠。
34.权利要求22-32中任一项的缓冲的抗体制剂，其中所述缓冲液包含约27 mM的氯化钠。
35.权利要求22-32中任一项的缓冲的抗体制剂，其中所述缓冲液包含约26.35 mM的氯化钠。
36.权利要求22-35中任一项的缓冲的抗体制剂，其中所述制剂包含约0.09% (v/v)-约0.11% (v/v)的聚山梨醇酯80。
37.权利要求22-36中任一项的缓冲的抗体制剂，其中所述制剂包含约0.1% (v/v)的聚山梨醇酯80。
38.权利要求22-37中任一项的缓冲的抗体制剂，其中所述制剂具有约5.2的pH。
39.一种缓冲的抗体制剂，其包含抗体，所述抗体含有包含SEQ. ID NO: 1的氨基酸序列的重链和包含SEQ ID NO: 2的氨基酸序列的轻链；缓冲液，所述缓冲液包含约0.9 mM-约1.1 mM的乙酸盐、约202 mM-约204 mM的甘露醇、约18 mM-约20 mM的冰乙酸和约25.35 mM-约26.35 mM的氯化钠；和约0.09%-约0.11% (按体积计)的聚山梨醇酯80，其中所述抗体制剂具有约5.1-约5.3的pH。
40.权利要求39的缓冲的抗体制剂，其中所述制剂包含约30 mg-约50 mg的所述抗体。
41.权利要求39或40的缓冲的抗体制剂，其中所述制剂包含约35 mg-约45 mg的所述抗体。
42.权利要求39-41中任一项的缓冲的抗体制剂，其中所述制剂包含约37 mg-约43 mg的所述抗体。
43.权利要求39-42中任一项的缓冲的抗体制剂，其中所述制剂包含约40 mg的所述抗体。
44.权利要求39-43中任一项的缓冲的抗体制剂，其中所述缓冲液包含约1 mM的乙酸盐。
45.权利要求39-44中任一项的缓冲的抗体制剂，其中所述缓冲液包含约203 mM的甘露醇。
46.权利要求39-45中任一项的缓冲的抗体制剂，其中所述缓冲液包含约19 mM的冰乙酸。
47.权利要求39-46中任一项的缓冲的抗体制剂，其中所述缓冲液包含约26 mM的氯化钠。
48.权利要求39-46中任一项的缓冲的抗体制剂，其中所述缓冲液包含约26.35 mM的氯化钠。
49.权利要求39-48中任一项的缓冲的抗体制剂，其中所述制剂包含约0.1% (v/v)的聚山梨醇酯80。
50.权利要求39-49中任一项的缓冲的抗体制剂，其中所述制剂具有约5.2的pH。
51.一种缓冲的抗体制剂，其包含抗体，所述抗体含有包含SEQ. ID NO: 1的氨基酸序列的重链和包含SEQ ID NO: 2的氨基酸序列的轻链；缓冲液，所述缓冲液包含约1 mM的乙酸钠三水合物、约203 mM的甘露醇、约19 mM的冰乙酸和约26.35 mM的氯化钠；和约0.1%(按体积计)的聚山梨醇酯80，其中所述抗体制剂具有约5.2的pH。
52.权利要求51的缓冲的抗体制剂，其中所述制剂包含约30 mg-约50 mg的所述抗体。
53.权利要求51或52的缓冲的抗体制剂，其中所述制剂包含约35 mg-约45 mg的所述抗体。
54.权利要求51-53中任一项的缓冲的抗体制剂，其中所述制剂包含约37 mg-约43 mg的所述抗体。
55.权利要求51-54中任一项的缓冲的抗体制剂，其中所述制剂包含约40 mg的所述抗体。
56.权利要求1-55或95-97中任一项的缓冲的抗体制剂在制备用于治疗类风湿性关节炎的药物中的用途，包括给予有需要的受试者有效治疗类风湿性关节炎的量的缓冲的抗体制剂。
57.权利要求56的用途，其中所述受试者是人。
58.权利要求56或57的用途，其中所述给予步骤包括皮下注射所述抗体制剂。
59.权利要求1-55或95-97中任一项的缓冲的抗体制剂在制备用于治疗幼年性特发性关节炎的药物中的用途，包括给予有需要的受试者有效治疗幼年性特发性关节炎的量的缓冲的抗体制剂。
60.权利要求59的用途，其中所述受试者是人。
61.权利要求59或60的用途，其中所述给予步骤包括皮下注射所述抗体制剂。
62.权利要求1-55或95-97中任一项的缓冲的抗体制剂在制备用于治疗银屑病关节炎的药物中的用途，包括给予有需要的受试者有效治疗银屑病关节炎的量的缓冲的抗体制剂。
63.权利要求62的用途，其中所述受试者是人。
64.权利要求62或63的用途，其中所述给予步骤包括皮下注射所述抗体制剂。
65.权利要求1-55或95-97中任一项的缓冲的抗体制剂在制备用于治疗强直性脊柱炎的药物中的用途，包括给予有需要的受试者有效治疗强直性脊柱炎的量的缓冲的抗体制剂。
66.权利要求65的用途，其中所述受试者是人。
67.权利要求65或66的用途，其中所述给予步骤包括皮下注射所述抗体制剂。
68.权利要求1-55或95-97中任一项的缓冲的抗体制剂在制备用于治疗克罗恩病的药物中的用途，包括给予有需要的受试者有效治疗克罗恩病的量的缓冲的抗体制剂。
69.权利要求68的用途，其中所述受试者是人。
70.权利要求68或69的用途，其中所述给予步骤包括皮下注射所述抗体制剂。
71.权利要求1-55或95-97中任一项的缓冲的抗体制剂在制备用于治疗斑块状银屑病的药物中的用途，包括给予有需要的受试者有效治疗斑块状银屑病的量的缓冲的抗体制剂。
72.权利要求71的用途，其中所述受试者是人。
73.权利要求71或72的用途，其中所述给予步骤包括皮下注射所述抗体制剂。
74.权利要求1-55或95-97中任一项的缓冲的抗体制剂在制备用于治疗溃疡性结肠炎的药物中的用途，包括给予有需要的受试者有效治疗溃疡性结肠炎的量的缓冲的抗体制剂。
75.权利要求74的用途，其中所述受试者是人。
76.权利要求74或75的用途，其中所述给予步骤包括皮下注射所述抗体制剂。
77.权利要求1-55或95-97中任一项的缓冲的抗体制剂，其用于治疗类风湿性关节炎。
78.权利要求1-55或95-97中任一项的缓冲的抗体制剂，其用于治疗幼年性特发性关节炎。
79.权利要求1-55或95-97中任一项的缓冲的抗体制剂，其用于治疗银屑病关节炎。
80.权利要求1-55或95-97中任一项的缓冲的抗体制剂，其用于治疗强直性脊柱炎。
81.权利要求1-55或95-97中任一项的缓冲的抗体制剂，其用于治疗克罗恩病。
82.权利要求1-55或95-97中任一项的缓冲的抗体制剂，其用于治疗斑块状银屑病。
83.权利要求1-55或95-97中任一项的缓冲的抗体制剂，其用于治疗溃疡性结肠炎。
84.权利要求1-55或95-97中任一项的缓冲的抗体制剂，其用作药物。
85.药盒，其包含权利要求1-55或95-97中任一项的缓冲的抗体制剂和在治疗类风湿性关节炎的方法中使用所述抗体制剂的说明书。
86.药盒，其包含权利要求1-55或95-97中任一项的缓冲的抗体制剂和在治疗幼年性特发性关节炎的方法中使用所述抗体制剂的说明书。
87.药盒，其包含权利要求1-55或95-97中任一项的缓冲的抗体制剂和在治疗银屑病关节炎的方法中使用所述抗体制剂的说明书。
88.药盒，其包含权利要求1-55或95-97中任一项的缓冲的抗体制剂和在治疗强直性脊柱炎的方法中使用所述抗体制剂的说明书。
89.药盒，其包含权利要求1-55或95-97中任一项的缓冲的抗体制剂和在治疗克罗恩病的方法中使用所述抗体制剂的说明书。
90.药盒，其包含权利要求1-55或95-97中任一项的缓冲的抗体制剂和在治疗斑块状银屑病的方法中使用所述抗体制剂的说明书。
91.药盒，其包含权利要求1-55或95-97中任一项的缓冲的抗体制剂和在治疗溃疡性结肠炎的方法中使用所述抗体制剂的说明书。
92.权利要求85-91中任一项的药盒，其进一步包含用于注射所述抗体制剂至受试者的装置。
93.权利要求92的药盒，其中所述装置包括注射器和针头。
94.权利要求92的药盒，其中所述装置包括导管。
95.权利要求1-21中任一项的缓冲的抗体制剂，其中所述乙酸盐包括乙酸钠三水合物。
96.权利要求22-38中任一项的缓冲的抗体制剂，其中所述乙酸盐包括乙酸钠三水合物。
97.权利要求39-50中任一项的缓冲的抗体制剂，其中所述乙酸盐包括乙酸钠三水合物。
98.用于抗体贮存的缓冲液制剂，其包含缓冲液，所述缓冲液包含约0.7 mM-约1.3 mM的乙酸盐、约200 mM-约206 mM的甘露醇、约16 mM-约22 mM的冰乙酸和约24 mM-约28 mM的氯化钠；和约0.07% (v/v)-约0.15% (v/v)的聚山梨醇酯80，其中所述制剂具有约5.1-约5.3的pH。
99.权利要求98的缓冲液制剂，其中所述缓冲液包含约0.8 mM-约1.2 mM的乙酸盐。
100.权利要求98或99的缓冲液制剂，其中所述缓冲液包含约0.9 mM-约1.1 mM的乙酸盐。
101.权利要求98-100中任一项的缓冲液制剂，其中所述缓冲液包含约1 mM的乙酸盐。
102.权利要求98-101中任一项的缓冲液制剂，其中所述缓冲液包含约201 mM-约205mM的甘露醇。
103.权利要求98-102中任一项的缓冲液制剂，其中所述缓冲液包含约202 mM-约204mM的甘露醇。
104.权利要求98-103中任一项的缓冲液制剂，其中所述缓冲液包含约203 mM的甘露醇。
105.权利要求98-104中任一项的缓冲液制剂，其中所述缓冲液包含约17 mM-约21 mM的冰乙酸。
106.权利要求98-105中任一项的缓冲液制剂，其中所述缓冲液制剂包含约18 mM-约20mM的冰乙酸。
107.权利要求98-106中任一项的缓冲液制剂，其中所述缓冲液包含约19 mM的冰乙酸。
108.权利要求98-107中任一项的缓冲液制剂，其中所述缓冲液包含约25 mM-约27 mM的氯化钠。
109.权利要求98-108中任一项的缓冲液制剂，其中所述缓冲液包含约26 mM的氯化钠。
110.权利要求98-109中任一项的缓冲液制剂，其中所述缓冲液包含约26.35 mM的氯化钠。
111.权利要求98-110中任一项的缓冲液制剂，其中所述制剂包含约0.08% (v/v)-约0.12% (v/v)的聚山梨醇酯80。
112.权利要求98-111中任一项的缓冲液制剂，其中所述制剂包含约0.09% (v/v)-约0.11% (v/v)的聚山梨醇酯80。
113.权利要求98-112中任一项的缓冲液制剂，其中所述制剂包含约0.1% (v/v)的聚山梨醇酯80。
114.权利要求98-113中任一项的缓冲液制剂，其中所述制剂具有约5.2的pH。
115.权利要求98-114中任一项的缓冲液制剂，其中所述乙酸盐包括乙酸钠三水合物。
116.权利要求98-115中任一项的缓冲液制剂，其进一步包含抗体。
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