TW201636047A

TW201636047A - 抗－ＴＮＦ－α抗體之醫藥調配物

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Publication number: TW201636047A
Application number: TW105102741A
Authority: TW
Inventors: 卡蘿絲巴納多; 賽卓克貝斯; 歐拉麥可葛維
Original assignee: 麥博賽恩斯有限公司; 麥博賽恩斯研究公司
Priority date: 2015-01-28
Filing date: 2016-01-28
Publication date: 2016-10-16
Also published as: WO2016120413A1; AR103544A1; US20180016333A1; EP3250598A1; UY36542A

Abstract

本發明係關於適於長期儲存、詳言之包含針對腫瘤壞死因子α之抗體(抗-TNFα)的水性穩定抗體組合物。更特定言之，其提供一種水性組合物，其包含：- 抗-TNFα抗體；- 緩衝液，係選自由乙酸鹽緩衝液、檸檬酸鹽緩衝液及檸檬酸鹽-乙酸鹽緩衝液組成的清單；及- 賦形劑，其中該賦形劑至少選自雙醣、糖醇及其組合；其中當該緩衝液包含乙酸鹽緩衝液或由乙酸鹽緩衝液組成時，該組合物包含濃度小於240mM的雙醣；其中當該緩衝液包含檸檬酸鹽或檸檬酸鹽-乙酸鹽緩衝液或由檸檬酸鹽或檸檬酸鹽-乙酸鹽緩衝液組成時，該組合物包含濃度為50mM至300mM的糖醇；及其中該組合物之pH值為pH 4.0至pH 7.0。其另外關於該組合物之醫藥用途，詳言之用於治療與TNFα上升相關之發炎性及免疫系統介導之疾病。另外，本發明係關於獲得該組合物之方法及包含其之裝置。

Description

抗-TNF- α 抗體之醫藥調配物

本發明係關於適於長期儲存、詳言之包含針對腫瘤壞死因子α之抗體(抗-TNFα)的水性穩定抗體組合物。其另外關於該等組合物之醫藥用途，詳言之用於治療發炎性及免疫系統介導之疾病。另外，本發明係關於獲得該組合物之方法及包含其之裝置。

治療性多肽製劑常在使用之前儲存。然而，多肽若以水性形式儲存延長的時間段，則不穩定。依賴於水性儲存的替代方案為製備乾燥凍乾形式之多肽，但復原乾燥多肽常常導致凝集或變性。此多肽凝集為不合需要的，因為其可能導致免疫原性。

腫瘤壞死因子α(TNFα)為參與正常發炎及免疫反應之天然存在之細胞激素。TNFα含量升高見於患有類風濕性關節炎、青少年特發性關節炎、牛皮癬性關節炎及僵直性脊椎炎之患者的滑液中且在作為此等疾病標誌之病理性炎症及關節破壞中起重要作用，TNFα含量增加亦見於牛皮癬斑塊中。

結合至可溶性人類TNFα之市售重組人類抗體稱為HUMIRA^®(阿達木單抗(adalimumab))。阿達木單抗藉由充當TNF抑制劑及阻斷其與p55及p75細胞表面TNF受體相互作用而干擾TNFα。阿達木單抗亦調節由TNF誘導或調控之生物學反應，包括負責白血球遷移之黏著分子的含量變化(ELAM-1、VCAM-1及ICAM-1，IC50為0.1-0.2nM)。此人類IgG1抗-TNFα抗體目前用磷酸鈉及檸檬酸鈉緩衝液系統及甘露醇作為穩定劑調配為水性組合物用於皮下注射(參見EP1528933-B1)。

與EP1528933-B1中所揭示類似的抗-TNFα抗體水性組合物為此項技術中已知的，亦即包含有機酸/鹽緩衝液系統；及雙醣或糖醇。

舉例而言，EP2471554-A1揭示42種不同調配物之篩選。值得注意的是，測試7種有機酸/鹽(麩胺酸鹽、烏頭酸、抗壞血酸、蘋果酸、酒石酸、己二酸及檸檬酸)及5種穩定劑(甘露醇、甘胺酸、海藻糖、山梨醇及蔗糖)，其全部與105mM NaCl、0.1%聚山梨醇酯80調配且pH值大約5.2。

WO2004/016286揭示(參見表1.1)包含甘露醇、聚山梨醇酯80、氯化鈉及檸檬酸鹽-磷酸鹽緩衝液系統之抗-TNFα抗體水性醫藥組合物。

此外，EP2471554-A1、WO2013/186230及WO2014/039903揭示緩衝液系統為乙酸鹽緩衝液且甘露醇用於穩定性目的之調配物。

另一方面，WO2013/186230及WO 2013/164837揭示緩衝液系統為乙酸鹽緩衝液且海藻糖用作穩定劑之抗-TNFα抗體調配物。WO2013/186230特定揭示海藻糖濃度為240mM(參見實例1中之F8)，而WO 2013/164837特定揭示海藻糖濃度為140mM(參見實例10)。在兩種情形中，該調配物另外包含精胺酸，其亦用作穩定劑。

本發明解決提供能夠長期儲存的適於醫藥投與的新穎穩定抗-TNFα抗體液體調配物的問題。本發明者已獲得如本文所揭示之此類穩定水性組合物。

本發明之第一態樣係關於包含以下之水性組合物：- 抗-TNFα抗體；- 緩衝液，選自由乙酸鹽緩衝液、檸檬酸鹽緩衝液及檸檬酸鹽- 乙酸鹽緩衝液組成的清單；及- 賦形劑，其中該賦形劑至少選自雙醣、糖醇及其組合；其中當該緩衝液包含乙酸鹽緩衝液或由乙酸鹽緩衝液組成時，該組合物包含濃度小於240mM的雙醣；其中當該緩衝液包含檸檬酸鹽或檸檬酸鹽-乙酸鹽緩衝液或由檸檬酸鹽或檸檬酸鹽-乙酸鹽緩衝液組成時，該組合物包含濃度為50mM至300mM的糖醇；及其中該組合物之pH值為pH 4.0至pH 7.0。

本發明之第二態樣係關於在本發明之第一態樣下的該水性組合物作為醫藥組合物之用途。其另外關於本發明之醫藥組合物及關於包含該醫藥組合物並可用於傳遞該醫藥組合物的裝置。

本發明之第三態樣係關於該組合物或醫藥組合物，其適用於治療發炎性及/或免疫系統介導之疾病的方法，更特定言之適用於治療與TNFα上升相關之發炎性及/或免疫系統介導之疾病的方法。一個相關態樣係關於使用本發明之組合物或醫藥組合物治療發炎性及/或免疫系統介導之疾病的方法，更特定言之關於治療與TNFα上升相關之發炎性及/或免疫系統介導之疾病的方法。

在一個額外態樣中，本發明係關於一種製造根據前述態樣之水性組合物的方法，其包含以下步驟：- 製備在所需pH值下的緩衝液，該緩衝液選自由乙酸鹽緩衝液、檸檬酸鹽緩衝液或檸檬酸鹽-乙酸鹽緩衝液組成的清單，- 添加雙醣及/或糖醇及視情況存在之界面活性劑及/或鹽，- 添加水溶液、較佳水至最終體積且必要時調整pH值，- 將抗-TNFα抗體併入該組合物。

圖1展示在所有時間(0及14天)及條件(4℃、25℃、40℃、3次冷凍/融化及攪拌3天)下的蛋白質濃度量測值(在280nm下之吸光度)。

圖2展示在所有時間(0及14天)及條件(4℃、25℃、40℃、3次冷凍/融化及攪拌3天)下使用動態光散射量測之流體動力大小。

圖3展示在以下所有溫度下培育之非還原條件中在時間0及14天用庫馬斯(Coomassie)染色的SDS-PAGE凝膠：-20℃、25℃、50℃、3次冷凍/融化及攪拌3天。F1及F4樣品在(A)中，F1及F2樣品在(B)中，F2及F3樣品在(C)中，F3及F4樣品在(D)中，F8及F9樣品在(E)中且F8及F9樣品在(F)中。

圖4展示在以下所有溫度下培育之還原條件中在時間0及14天用庫馬斯染色的SDS-PAGE凝膠：-20℃、25℃、50℃、3次冷凍/融化及攪拌3天。F1及F4樣品在(A)中，F1及F2樣品在(B)中，F2及F3樣品在(C)中，F3及F4樣品在(D)中，F8及F9樣品在(E)中且F8及F9樣品在(F)中。

本發明之第一態樣係關於包含以下之水性組合物：- 抗-TNFα抗體；- 緩衝液，選自由乙酸鹽緩衝液、檸檬酸鹽緩衝液及檸檬酸鹽-乙酸鹽緩衝液組成的清單；及- 賦形劑，其中該賦形劑至少選自雙醣、糖醇及其組合；其中當該緩衝液包含乙酸鹽緩衝液或由乙酸鹽緩衝液組成時，該組合物包含濃度小於240mM的雙醣；其中當該緩衝液包含檸檬酸鹽或檸檬酸鹽-乙酸鹽緩衝液或由檸檬酸鹽或檸檬酸鹽-乙酸鹽緩衝液組成時，該組合物包含濃度為50mM至300mM的糖醇；及其中該組合物之pH值為pH 4.0至pH 7.0。

如本文所用，術語「組合物」可指包含經製備以使其適於注射及/或投與有需要之個體之抗體的調配物。「組合物」亦可稱為「醫藥組合物」。在某些實施例中，本文所提供之組合物實質上無菌且不含任何對接受者為過度毒性或感染性之藥劑。另外，如本文所用，溶液或「水性組合物」可意指含有水、視情況與其他彼此可混溶的溶劑(例如水溶性有機溶劑)組合，且一或多種化學物質溶解於其中之流體(液體)製劑。

另外，如本文所用，諸如(但不限於)「約」、「大約」、「大致」之近似詞語係指當如此修飾時理解為不一定絕對或完全，但將視為足夠接近以便一般熟習此項技術者保證將條件指明為存在的。描述可改變之程度將取決於可產生多大的變化且仍有一般熟習此項技術者認為經修飾特徵仍具有未修飾特徵之所需特徵及能力。一般但受制於先前論述，本文中由諸如「約」之近似詞語修飾之數值可在陳述值±1、2、3、4、5、6、7、10、12或15%之範圍內變化。因此，術語「約」可意指指定值±其值之5%，較佳指定值±其值之2%，術語「約」最佳精確意指指定值(±0%)。

如本文所用，術語「抗體」可指免疫球蛋白或其抗原結合片段。除非另外規定，否則該術語包括(但不限於)多株、單株、單特異性、多特異性、人類化、人類、單鏈、嵌合、合成、重組、雜交、突變、移植及活體外產生之抗體。抗體可包括恆定區或其一部分，諸如由κ、λ、α、γ、δ、ε及μ恆定區基因編碼之恆定區或其一部分。舉例而言，可使用各種同型之重鏈恆定區，包括：IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgM、IgA1、IgA2、IgD及IgE。舉例而言，輕鏈恆定區可為κ或λ。

如本文所用，術語「抗原結合片段」可指包含負責抗體與抗原之間的特異性結合之胺基酸的抗體分子之一部分。對於某些抗原，抗原結合片段可僅結合至抗原之一部分。由抗體特異性識別及結合之抗原部分稱為「抗原決定基」或「抗原決定子」。抗原結合片段包括Fab(片段抗原結合)；F(ab')2片段，具有由鉸鏈區之二硫橋鍵連接之兩個Fab片段的二價片段；Fv片段；單鏈Fv片段(scFv)，參見例如Bird等人(1988)Science 242：423-426；及Huston等人(1988)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85：5879-5883)；具有兩個VH及CH1結構域之Fd片段；dAb(Ward等人，(1989)Nature 341：544-546)及保留抗原結合功能之其他抗體片段。Fab片段具有由恆定區之間的二硫鍵共價連接之VH-CH1及VL-CL結構域。Fv片段較小且具有非共價連接之VH及VL結構域。為克服非共價連接之結構域解離的趨勢，可構築scFv。scFv含有(1)將VH之C端連接至VL之N端或(2)將VL之C端連接至VH之N端的可撓性多肽。此等抗體片段使用熟習此項技術者已知的習知技術獲得，且以與完整抗體相同之方式評估片段之功能。

較佳地，該抗-TNFα抗體為針對人類TNFα之抗體。如本文所用，術語「人類TNFα」(在本文中縮寫為hTNFα或僅hTNF)意欲指以17kD分泌形式及26kD膜相關形式存在之人類細胞激素，其生物學活性形式由非共價結合之17kD分子之三聚體組成。hTNFα之結構進一步描述於例如Pennica,D.等人，(1984)Nature 312：724-729；Davis,J.M.等人，(1987)Biochemistry 26：1322-1326；及Jones,E.Y.等人，(1989)Nature 338：225-228中。術語人類TNFα意欲包括重組人類TNFα(rhTNFα)，其可藉由標準重組表現方法製備或商業購買(R&D Systems，目錄號210-TA,Minneapolis,MN)。

在一特定實施例中，該抗-TNFα抗體為人類抗體，較佳人類抗-hTNFα抗體。如本文所用，術語「人類抗體」意欲包括具有來源於人類生殖系免疫球蛋白序列之可變區及恆定區的抗體。人類抗體可例如在CDR且詳言之CDR3中包括不由人類生殖系免疫球蛋白序列(例如藉由活體外隨機或定點突變誘發或藉由活體內體細胞突變引入之突變) 編碼之胺基酸殘基。然而，如本文所用，術語「人類抗體」不意欲包括來源於另一種哺乳動物物種(諸如小鼠)之生殖系的CDR序列已移植於人類構架序列上的抗體。

較佳地，該人類抗體為重組抗體。如本文所用，表述「重組人類抗體」可指藉由重組方式製備、表現、形成或分離之所有人類抗體，諸如使用轉染至宿主細胞中之重組表現載體表現之抗體、自重組組合人類抗體庫分離之抗體、自人類免疫球蛋白基因之轉殖基因動物(例如小鼠)分離之抗體(參見例如Taylor,L.D.等人，(1992)Nucl.Acids Res.20：6287-6295)；或藉由涉及將人類免疫球蛋白基因序列剪接至其他DNA序列之任何其他方式製備、表現、形成或分離之抗體。此類重組人類抗體具有來源於人類生殖系免疫球蛋白序列之可變區及恆定區。然而，在某些態樣中，此類重組人類抗體經受活體外突變誘發(或當使用人類Ig序列之轉殖基因動物時，為活體內體細胞突變誘發)，且因此重組抗體之VH及VL區之胺基酸序列雖然來源於人類生殖系VH及VL序列且與其相關，但可不活體內天然存在於人類抗體生殖系譜系內。

在一較佳實施例中，抗-TNFα抗體為阿達木單抗。以商標Humira®商品化之阿達木單抗為重組人類抗-hTNFα IgG1抗體。此抗體亦稱為D2E7。其由1330個胺基酸組成且具有大致148千道爾頓之分子量。(http：//www.drugbank.ca/drugs/DB00051)。阿達木單抗已描述且主張於美國專利第6,090,382號中。術語「阿達木單抗」亦意欲包括市售Humira®中所存在之活性阿達木單抗蛋白質的所謂「生物類似」及「生物較佳」型式。

如本文所用，(經批准之參考產品/生物學藥物，諸如蛋白質治療劑、抗體等之)「生物類似物」係指基於來源於以下之資料與參考產品類似之生物產品：(a)證明生物學產品與參考產品高度類似、但臨床上非活性組分存在微小差異的分析研究；(b)動物研究(包括毒性評定)；及/或(c)足以證明在參考產品經核准且意欲使用及該生物學產品尋求核准的一或多個適當使用病狀中之安全性、純度及效力的臨床研究(包括免疫原性及藥物動力學或藥效動力學評定)。在一個實施例中，生物類似生物學產品及參考產品對於建議標記中所規定、推薦或提出之使用病狀利用相同作用機制，但僅在參考產品之作用機制已知的情況下。在一個實施例中，生物學產品之建議標記中所規定、推薦或提出之使用病狀已先前經批准用於參考產品。在一個實施例中，生物學產品之投與途徑、劑型及/或劑量與參考產品之投與途徑、劑型及/或劑量相同。在一個實施例中，生物學產品製造、加工、封裝或保存之設施滿足經設計以確保生物學產品持續安全、純且有效的標準。參考產品可在美國、歐洲或日本中之至少一者中經批准。

重組抗-TNFα抗體(例如阿達木單抗)可藉由此項技術中已知用於抗體生產之標準方法製備。舉例而言，美國專利6,090,382及8,216,583描述熟習此項技術者可用於製備適用於本發明之調配物之阿達木單抗的各種方法。此等方法以引用的方式併入本文中。舉例而言，阿達木單抗可藉由免疫球蛋白輕鏈及重鏈基因在宿主細胞中之重組表現來製備。

多肽在多種不同宿主細胞中之選殖及表現的系統為此項技術中所熟知，此等系統可來自真核或原核生物體(亦即細菌細胞，諸如大腸桿菌)。關於適用於產生抗體之細胞，參見例如Gene Expression Systems,Academic Press，編.Fernandez等人，1999。該等宿主細胞較佳為真核細胞。最常見的真核表現平台目前包括酵母(例如甲醇酵母(Pichia pastoris)及釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae))、桿狀病毒表現載體系統(苜蓿銀紋夜蛾(Autographa californica)多核多角體病毒及昆蟲細胞宿主草地黏蟲(Spodoptera frugiperda)或粉紋夜蛾 (Trichoplusia ni))及哺乳動物細胞系統(包括多種經轉型及/或經遺傳修飾之細胞株)。更佳地，該等細胞為哺乳動物細胞，包括猿猴、人類、犬及嚙齒動物細胞。人類細胞之實例為PER.C6細胞(WO01/38362)、MRC-5(ATCC CCL-171)、WI-38(ATCC CCL-75)、HEK-293細胞(ATCC CRL-1573)、HeLa細胞(ATCC CCL2)及胚胎恆河猴肺細胞(ATCC CL-160)。非人類靈長類細胞之實例為Vero細胞(ATCC CCL81)、COS-1細胞(ATCC CRL-1650)或COS-7細胞(ATCC CRL-1651)。犬細胞之實例為MDCK細胞(ATCC CCL-34)。嚙齒動物細胞之實例為倉鼠細胞，諸如BHK21-F、HKCC細胞或CHO細胞。可使用任何蛋白質相容表現系統產生本發明之組合物中所用的抗-TNFα抗體(例如阿達木單抗)。適合的表現系統包括Gene Expression Systems,Academic Press，編.Fernandez等人，1999.中所述之轉殖基因動物。

在一較佳實施例中，該重組抗-TNFα抗體(例如阿達木單抗)藉由重組DNA技術在哺乳動物宿主細胞中、較佳在作為用於生產Humira®之宿主細胞的中國倉鼠卵巢(CHO)哺乳動物細胞表現系統中產生。

所表現之抗-TNFα抗體可藉由任何標準方法進行純化。用於多肽分離及/或純化之方法為此項技術中所熟知(參見例如Isolation and Purification of Proteins,2003年2月5日，CRC Press,ISBN 9780824707262)。用於多肽純化之程序起初視蛋白質表現部位而定。一些蛋白質分泌至細胞培養基中；其他為細胞內蛋白質。在第二種情況中，純化方法之第一步涉及細胞溶解，其可藉由多種方法進行，包括機械剪切、滲透衝擊或酶促處理，且一般而言，細胞碎片藉由差速離心或藉由過濾移除。通常，當蛋白質分泌至培養基中時，首先使用標準多肽濃縮過濾器濃縮清液層。亦可添加蛋白酶抑制劑以抑制蛋白分解，且可包括抗生素以防止微生物生長。

抗-TNFα抗體可使用例如羥基磷灰石層析、凝膠電泳、透析及親和層析及已知或尚有待於發現之純化技術的任何組合來純化，包括(但不限於)蛋白質A層析、在離子交換管柱上分級分離、乙醇沈澱、逆相HPLC、二氧化矽層析、肝素SEPHAROSET®層析、陰離子或陽離子交換樹脂層析(諸如聚天冬胺酸管柱)、層析聚焦、SDS-PAGE及硫酸銨沈澱。

抗-TNFα抗體或人類抗-hTNFα抗體或阿達木單抗之濃度不受特別限制。舉例而言，其可為5mg/mL至500mg/mL、7.5mg/mL至250mg/mL、10mg/mL至200mg/mL、10mg/mL至150mg/mL或10mg/mL至100mg/mL。在一特定實施例中，該抗體濃度為40至200mg/mL，諸如40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、105、110、115、120、125、130、135、140、145、150、155、160、165、170、175、180、185、190、195或200mg/mL。在另一特定實施例中，抗-TNFα抗體或人類抗-hTNFα抗體或阿達木單抗濃度為10至100mg/mL、較佳20至60mg/mL、更佳25至55mg/mL且該濃度甚至更佳為約40mg/mL、約45mg/mL或約50mg/mL。該濃度最佳為約10mg/mL、約50mg/mL、約100mg/mL、約150mg/mL或約200mg/mL。

根據本發明之第一態樣的組合物包含水性緩衝液，其選自由乙酸鹽緩衝液、檸檬酸鹽緩衝液、磷酸鹽緩衝液及其組合組成之群，諸如選自由乙酸鹽緩衝液、檸檬酸鹽緩衝液及磷酸鹽緩衝液組成之群。如本文所用，術語「乙酸鹽緩衝液」、「檸檬酸鹽緩衝液」及「磷酸鹽緩衝液」可指包含有機酸(亦即分別乙酸、檸檬酸及磷酸)及/或其鹽(亦即分別包含對應共軛鹼，亦即乙酸根離子、檸檬酸根離子及磷酸根離子)之緩衝液系統。

在一特定實施例中，該水性緩衝液為磷酸鹽緩衝液，諸如磷酸鈉或磷酸鉀。在另一實施例中，該緩衝液係選自由乙酸鹽緩衝液、檸檬酸鹽緩衝液及檸檬酸鹽-乙酸鹽緩衝液組成的清單。在一較佳實施例中，該緩衝液係選自由乙酸鹽緩衝液、檸檬酸鹽緩衝液及檸檬酸鹽-乙酸鹽緩衝液組成的清單，其限制條件為本發明之組合物不包含檸檬酸鹽-磷酸鹽緩衝液。在另一較佳實施例中，該緩衝液係選自由乙酸鹽緩衝液、檸檬酸鹽緩衝液及檸檬酸鹽-乙酸鹽緩衝液組成的清單，其限制條件為該組合物不包含磷酸鹽緩衝液。在另一實施例中，該緩衝液並非由唯一的組胺酸緩衝液組成或包含組胺酸與除檸檬酸鹽或乙酸鹽緩衝液以外之緩衝液的組合。

在另一實施例中，該水性緩衝液為檸檬酸鹽緩衝液。檸檬酸鹽緩衝液之說明性非限制性實例為檸檬酸鈉或檸檬酸鉀。在另一實施例中，該水性緩衝液為乙酸鹽緩衝液。乙酸鹽緩衝液之說明性非限制性實例為乙酸鈉、二乙酸鈉、乙酸鎂、乙酸鉀、乙酸銨、(參)乙酸參-(羥甲基)-胺基甲烷或組胺酸乙酸鹽。在一較佳實施例中，該乙酸鹽緩衝液為組胺酸乙酸鹽。在另一較佳實施例中，該水性緩衝液為乙酸鈉。在另一較佳實施例中，該水性緩衝液為檸檬酸鹽-乙酸鹽緩衝液。與該緩衝液單獨或組合用於組合物中無關，其濃度較佳為5mM至100mM、更佳10mM至50mM、最佳在15mM至30mM範圍內。在一更佳實施例中，該濃度為約10mM或約20mM或約25mM。尤其較佳緩衝液為濃度為10mM至50mM、較佳約20mM之乙酸鹽緩衝液、更佳組胺酸乙酸鹽或乙酸鈉。其他尤其較佳緩衝液為濃度為10mM至50mM、較佳約20mM之檸檬酸鹽或檸檬酸鹽-乙酸鹽緩衝液。

該組合物之pH值可為pH 4.0至pH 7.0、較佳pH 4.4至pH 6.5、更佳pH 5.0至pH 6.0，為選自5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8及5.9之任何可能的pH值。在一個實施例中，該組合物之pH值為pH 4.0至pH 5.7，為選自4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6之任何可能的pH值，該組合物之 pH值較佳為約pH 5.2且該緩衝液為檸檬酸鹽緩衝液(較佳地，檸檬酸鈉)或乙酸鹽緩衝液(較佳地，乙酸鈉或組胺酸乙酸鹽)。在另一實施例中，該緩衝液為檸檬酸鹽緩衝液(較佳地，檸檬酸鈉)且pH值為pH 4.4至pH 5.2，為選自4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0及5.1之任何可能的pH值，該組合物之pH值較佳為約pH 4.4(較佳地，pH 4.42)或約pH 5.2。在另一實施例中，該組合物之pH值為pH 5.5至pH 6.5，為選自5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3及6.4之任何可能的pH值，該組合物之pH值較佳為約pH 6.0且該緩衝液為磷酸鹽緩衝液(較佳地，磷酸鈉)。

根據本發明之第一態樣的組合物包含醫藥學上可接受之賦形劑，其中該賦形劑至少選自由雙醣、糖醇及其組合組成的清單。在一較佳實施例中，該雙醣、糖醇或其組合用作穩定劑。較佳地，該雙醣、糖醇或其組合之濃度小於300mM、較佳小於240mM、更佳小於140mM。在一較佳實施例中，當該緩衝液包含乙酸鹽緩衝液或由乙酸鹽緩衝液組成時，該組合物包含濃度小於140mM之雙醣(較佳海藻糖、蔗糖或其組合)。

適用於本發明組合物之雙糖的實例包括乳糖、海藻糖、蔗糖及其組合。可用於本發明之一些實施例之雙糖的額外實例包括麥芽糖、異麥芽糖、纖維二糖、異蔗糖、異海藻糖、山梨糖、松二糖、蜜二糖、龍膽二糖及其混合物中之至少一者。

較佳地，該雙醣為海藻糖、蔗糖或其組合。舉例而言，該水性組合物包含濃度為5至290mM，諸如30mM至230mM，諸如40mM至220mM或諸如45mM至200mM之海藻糖及/或蔗糖。在一特定實施例中，海藻糖及/或蔗糖濃度小於240mM、較佳小於140mM、更佳小於135mM，例如在40mM至130mM範圍內。在另一特定實施例中，蔗糖及/或海藻糖濃度高於50mM，諸如高於55mM，例如在55mM至 135mM、較佳80至120mM範圍內，諸如65mM至100mM。

在一較佳實施例中，該雙醣為濃度為40mM至130mM、較佳50mM至75mM之海藻糖，且更佳為濃度為約55mM、約60mM、約65mM或約70mM之海藻糖，其較佳呈二水合海藻糖形式。在另一較佳實施例中，賦形劑為濃度為40mM至130mM之蔗糖，蔗糖較佳以80mM至120mM、更佳90mM至110mM之範圍存在。在一更佳實施例中，蔗糖濃度為約95mM、約100mM或約105mM。

在一特定實施例中，該水性組合物包含蔗糖與海藻糖之組合，其中海藻糖及蔗糖之濃度小於240mM、較佳小於140mM、更佳小於135mM，例如在40mM至130mM範圍內。在另一特定實施例中，蔗糖及海藻糖濃度高於50mM，諸如高於55mM，例如在55mM至135mM、較佳60至120mM範圍內，諸如65mM至100mM。在一較佳實施例中，賦形劑為蔗糖與海藻糖之組合，其中海藻糖濃度為55mM至75mM(較佳約65mM)且蔗糖濃度為80mM至120mM(較佳約100mM)。

在另一特定實施例中，該賦形劑為糖醇。適用於本發明之糖醇的實例包括甘露醇、木糖醇、赤藻糖醇、蘇糖醇、核糖醇、肌肉肌醇(myoinisitol)、半乳糖醇、山梨醇、丙三醇及其類似物。較佳地，發現該糖醇濃度為50mM至300mM，諸如150mM至300mM，諸如60mM至275mM，諸如65mM至150mM或諸如65mM至85mM。在一較佳實施例中，該糖醇以超過240mM、更佳250至300、例如約275mM之濃度存在。在另一較佳實施例中，該糖醇以低於240mM之濃度、較佳以低於200mM之濃度存在。在一更佳實施例中，該糖醇以40mM至195mM、較佳50mM至100mM、更佳55mM至90mM之濃度，諸如約65mM、約75mM或約85mM之濃度存在。在一較佳實施例中，該賦形劑為甘露醇。如本文所用，術語「甘露醇」可指D-甘露醇，亦即一種與甘露糖相關且與山梨醇異構之六元醇。在一更佳實施例中，該賦形劑為濃度為約275mM、約85mM、約75mM、約65mM或約55mM之甘露醇。

在一較佳實施例中，當緩衝液為乙酸鹽緩衝液時，該水性組合物包含較佳濃度小於240mM、更佳小於140mM、最佳小於135mM，例如濃度為40mM至130mM，諸如50mM至75mM或諸如80mM至120mM之雙醣。在另一較佳實施例中，當緩衝液為檸檬酸鹽或磷酸鹽緩衝液時，該水性組合物包含較佳濃度超過240mM、更佳250至300、例如約275mM之糖醇(較佳甘露醇)。在另一較佳實施例中，當緩衝液為檸檬酸鹽或磷酸鹽緩衝液時，該水性組合物包含濃度低於240mM、較佳濃度低於200mM之甘露醇。在一更佳實施例中，甘露醇以40mM至195mM、較佳50mM至100mM、更佳55mM至90mM之濃度，諸如以約65mM、約75mM或約85mM之濃度存在。

本發明之水性組合物為穩定組合物。如本文所用，「穩定組合物」可指其中抗體在儲存後基本上保留其物理穩定性及/或化學穩定性及/或生物學活性之調配物。用於量測蛋白質穩定性之各種分析技術為在此項技術中可用的且綜述於例如Peptide and Protein Drug Delivery,247-301,Vincent Lee編，Marcel Dekker,Inc.,New York,N.Y.,Pubs.(1991)及Jones,A.Adv.Drug Delivery Rev.10：29-90(1993)中。可在所選溫度下持續所選時間段量測穩定性。較佳地，調配物在室溫(約25℃)下或在40℃下穩定至少14天、至少1個月或至少3個月，及/或在約2-8℃下(較佳在4℃下)穩定至少1個月、至少3個月、至少6個月、至少1年或至少2年。此外，調配物較佳在調配物冷凍(至例如-80℃)及融化(在下文中稱為「冷凍/融化循環」)後，較佳在3個冷凍/融化循環之後及/或在攪拌之後、較佳在室溫下攪拌3天之後為穩定的。

若醫藥調配物中之抗體在顏色及/或澄清度目視檢查後或如藉由 UV光散射(例如動態光散射)或藉由尺寸排阻層析所量測實質上未展示凝集、沈澱及/或變性跡象，則其「保留其物理穩定性」。

若在給定時間之化學穩定性使得醫藥調配物中之抗體視為仍如下文所定義保留其生物學活性，則該抗體「保留其化學穩定性」。可藉由偵測且定量抗體之化學上改變之形式來評估化學穩定性。化學改變可涉及尺寸修改(例如截割)，其可使用例如尺寸排阻層析、SDS-PAGE及/或基質輔助雷射解吸附離子化/飛行時間質譜分析(MALDI/TOF MS)評估。其他類型之化學改變包括電荷改變(例如由於脫醯胺化而出現)，其可例如藉由離子交換層析評估。

若醫藥調配物中之抗體具有用於其預期目的之生物學活性，則該醫藥調配物中之抗體「保留其生物學活性」。舉例而言，若醫藥調配物中之抗體的生物學活性降低為在製備醫藥調配物時所存在之生物學活性之約30%、約20%、約10%、約5%或5%以下之內，則生物學活性保留。

本發明組合物較佳包含界面活性劑作為另一賦形劑。包括界面活性劑可保護蛋白質在潛在去穩定化界面抵抗在加工期間遇到的表面及抵抗其熱力學構形穩定性改變。界面活性劑為此項技術中所熟知，諸如聚山梨醇酯或聚乙二醇40硬脂酸酯。其他可能的表面活性劑包括磷脂，諸如卵磷脂；聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物，諸如普洛尼克(Pluronic)界面活性劑；12-羥基硬脂酸之聚氧乙烯酯，諸如Solutol界面活性劑；膽固醇之乙氧基化物，諸如二醯基丙三醇、二烷基丙三醇；膽汁鹽，諸如膽酸鈉、去氧膽酸鈉；蔗糖酯，諸如蔗糖單月桂酸酯、蔗糖單油酸酯；聚乙烯吡咯啶酮(PVP)；或聚乙烯醇(PVA)。在一特定實施例中，界面活性劑為聚山梨醇酯，諸如聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯60或聚山梨醇酯80。較佳地，聚山梨醇酯為聚山梨醇酯80(聚氧乙烯(20)脫水山梨糖醇單油酸酯)。界面活性劑較佳以0.01% w/v至1% w/v、更佳0.05% w/v至0.2% w/v、最佳約0.1% w/v之濃度存在。在一較佳實施例中，聚山梨醇酯為聚山梨醇酯80且以0.1% w/v(0.76mM)之濃度存在。

本發明組合物較佳包含鹽作為另一賦形劑。鹽濃度可大於100mM或為80至130mM。鹽濃度較佳為90至120mM，諸如90至115mM或100至115mM，特定言之約105mM或約110mM。在一較佳實施例中，鹽濃度(較佳NaCl)為約105mM。與濃度無關，鹽較佳為氯化鈉，儘管亦可使用其他鹽，諸如氯化鉀、檸檬酸鈉、硫酸鎂、氯化鈣、次氯酸鈉、硝酸鈉、硫化汞、鉻酸鈉及二氧化鎂。較佳地，該水性組合物為等張的。如本文所用，術語「等張」可意指重量莫耳滲透濃度接近於人體之生理重量莫耳滲透濃度，因此使得組合物更適合用於非經腸投與，例如皮下投與。等張調配物之滲透壓將一般為約250至350mOsm/L，較佳約290mOsm/L。等張性可使用例如蒸氣壓或冰冷凍型滲透計量測。

在一較佳實施例中，本發明組合物由上述成分組成，亦即其為由阿達木單抗、水性檸檬酸鹽、乙酸鹽或檸檬酸鹽-乙酸鹽緩衝液、糖醇或雙醣及視情況存在之鹽及/或界面活性劑組成的組合物。在另一較佳實施例中，本發明組合物由上述成分組成，亦即其為由阿達木單抗、水性檸檬酸鹽、乙酸鹽或檸檬酸鹽-乙酸鹽緩衝液、糖醇或雙醣、鹽及界面活性劑組成的組合物。上文描述此等成分之化學性質及濃度的較佳實施例。

在另一實施例中，根據本發明之組合物可包含其他賦形劑置換鹽及界面活性劑，或除了鹽及界面活性劑之外，亦包含其他賦形劑。一或多種其他醫藥學上可接受之載劑、賦形劑或穩定劑，諸如Remington's Pharmaceutical Sciences第17版(1985)中所述之彼等，可包括於調配物中，其限制條件為其不會不利地影響調配物之所要特徵。可接受之載劑、賦形劑或穩定劑在所用劑量及濃度下對接受者無毒且包括額外緩衝液；共溶劑；抗氧化劑，包括抗壞血酸及甲硫胺酸；螯合劑，諸如EDTA；金屬錯合物(例如Zn-蛋白質錯合物)；成鹽抗衡離子，諸如鈉、胺基酸聚合物；含硫還原劑，諸如脲、麩胱甘肽、硫辛酸、硫乙醇酸鈉、硫代甘油、α-單硫代甘油及硫代硫酸鈉；低分子量多肽(亦即<10個殘基)；蛋白質，諸如人類血清白蛋白、牛血清白蛋白、明膠或免疫球蛋白；親水性聚合物，諸如聚乙烯吡咯啶酮；單醣，諸如木糖、甘露糖、果糖及葡萄糖；以及多糖，諸如葡聚糖。

在某些實施例中，本文所述之組合物中之一或多種賦形劑之濃度為約0.001至5重量百分比，而在其他實施例中，一或多種賦形劑之濃度為約0.1至2重量百分比。賦形劑為此項技術中所熟知且藉由已知方法製造及可購自商業供應商。

在一個實施例中，本發明之水性組合物另外包含精胺酸作為穩定劑，較佳濃度為5mM至50mM、較佳15mM至30mM、更佳20mM至30mM、最佳約25mM。

在一些情況下，無精胺酸組合物可為較佳的，因為精胺酸可在一些人中造成嚴重副作用。在精胺酸注射之後可能發生稱為全身性過敏反應之嚴重過敏反應，以及胃不適，包括噁心、胃痙攣，或糞便數量增加。在一個實施例中，本發明之水性組合物實質上不含呈游離胺基酸形式之精胺酸。更佳地，該組合物實質上不含任何游離胺基酸。如本文所用，術語「實質上不含」係指調配物含有小於0.033%、小於0.001%、小於0.0005%、小於0.0003%或小於0.0001%之呈游離胺基酸形式之精胺酸(或較佳任何游離胺基酸)。舉例而言，該組合物不包含精胺酸，較佳既不包含精胺酸，亦不包含半胱胺酸、脯胺酸、甘胺酸、甲硫胺酸、組胺酸、絲胺酸、纈胺酸、離胺酸、麩胺酸鹽。注意，儘管根據本發明之組合物較佳不包含呈游離胺基酸形式之精胺酸(或更佳地，任何其他胺基酸，諸如脯胺酸、甘胺酸、甲硫胺酸、組胺酸、絲胺酸、纈胺酸、離胺酸、麩胺酸鹽)，但抗體本身可在其鏈中含有精胺酸(或任何其他胺基酸)殘基。

在一個實施例中，本發明之水性組合物基本上不含一或多種防腐劑，諸如苯甲醇、苯酚、間甲酚、氯丁醇及苄索氯銨。在另一實施例中，調配物中可包括防腐劑，尤其調配物為多劑量調配物時。防腐劑之濃度可在約0.1%至約2%、最佳約0.5%至約1%之範圍內。

下文所述之本發明之特定實施例可視情況與上文或下文所述之一或多個特徵組合：

乙酸鹽緩衝液/雙醣調配物

在一特定實施例中，本發明之組合物包含以下各物或由以下各物組成：- 抗-TNFα抗體；- 濃度為10mM至50mM之乙酸鹽緩衝液；及- 濃度小於140mM之雙醣；及- 視情況存在之0.01% w/v至1% w/v之界面活性劑；其中該組合物之pH值為pH 4.0至pH 7.0。

在一個實施例中，根據以上實施例之組合物另外包含濃度為0.05% w/v至0.2% w/v、較佳約0.1% w/v之界面活性劑。

抗-TNFα抗體較佳為人類抗-hTNFα抗體，抗-TNFα抗體較佳為阿達木單抗。抗-TNFα抗體或人類抗-hTNFα抗體或阿達木單抗濃度可為5至500mg/mL、7.5至250mg/mL、10mg/mL至200mg/mL、10mg/mL至150mg/mL或10mg/mL至100mg/mL。在一特定實施例中，抗-TNFα抗體濃度為40至200mg/mL，諸如40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、105、110、115、120、125、 130、135、140、145、150、155、160、165、170、175、180、185、190、195或200mg/mL。

另外，該組合物較佳另外包含以大於100mM或80至130mM之濃度存在之鹽，較佳其中該鹽濃度為105mM，更佳其中該鹽為氯化鈉。

在一特定實施例中，根據本發明之組合物包含以下各物或較佳由以下各物組成：10mg/mL至200mg/mL(較佳50mg/mL)阿達木單抗、10mM至50mM乙酸鹽緩衝液、40mM至130mM雙醣、90至115mM鹽及視情況存在之0.05% w/v至0.2% w/v界面活性劑。較佳地，該組合物之pH值為pH 4.4至pH 6.5、更佳pH 4.0至pH 5.7、甚至更佳pH 4.4至pH 5.2。

較佳地，該界面活性劑為聚山梨醇酯80。雙醣亦較佳為海藻糖、蔗糖或其組合。在一特定實施例中，當雙醣為海藻糖時，其以40mM至130mM之濃度存在。在另一特定實施例中，當雙醣為蔗糖時，其以80mM至120mM之濃度、較佳以100mM之濃度存在。

較佳地，該乙酸鹽緩衝液係選自組胺酸乙酸鹽及乙酸鈉。

在一較佳實施例中，根據本發明之組合物包含以下各物或較佳由以下各物組成：10mg/mL至200mg/mL(較佳50mg/mL)阿達木單抗、10mM至50mM組胺酸乙酸鹽、55mM至75mM海藻糖、90至115mM NaCl及0.05% w/v至0.2% w/v聚山梨醇酯80。較佳地，該組合物之pH值為pH 4.7至pH 5.7。

在一更佳實施例中，根據本發明之組合物包含以下各物或較佳由以下各物組成：10mg/mL至200mg/mL(較佳50mg/mL)阿達木單抗、20mM組胺酸乙酸鹽、65mM海藻糖、105mM NaCl及0.1% w/v聚山梨醇酯80，其中該組合物之pH值為約pH 5.2。

在另一較佳實施例中，根據本發明之組合物包含以下各物或較佳由以下各物組成：10mg/mL至200mg/mL(較佳50mg/mL)阿達木單抗、10mM至50mM組胺酸乙酸鹽、55mM至75mM海藻糖及90至115mM NaCl。較佳地，該組合物之pH值為pH 4.7至pH 5.7。

在一更佳實施例中，根據本發明之組合物包含以下各物或較佳由以下各物組成：10mg/mL至200mg/mL(較佳50mg/mL)阿達木單抗、20mM組胺酸乙酸鹽、65mM海藻糖及105mM NaCl，其中該組合物之pH值為約pH 5.2。

在另一較佳實施例中，根據本發明之組合物包含以下各物或較佳由以下各物組成：10mg/mL至200mg/mL(較佳50mg/mL)阿達木單抗、10mM至50mM乙酸鈉、80mM至120mM蔗糖、90至115mM NaCl及視情況存在之0.05% w/v至0.2% w/v聚山梨醇酯80。較佳地，該組合物之pH值為pH 4.7至pH 5.7。

在一更佳實施例中，根據本發明之組合物包含以下各物或較佳由以下各物組成：10mg/mL至200mg/mL(較佳50mg/mL)阿達木單抗、20mM乙酸鈉、100mM蔗糖、105mM NaCl及0.1% w/v聚山梨醇酯80，其中該組合物之pH值為約pH 5.2。

在另一較佳實施例中，根據本發明之組合物包含以下各物或較佳由以下各物組成：10mg/mL至200mg/mL(較佳50mg/mL)阿達木單抗、10mM至50mM乙酸鈉、80mM至120mM蔗糖、15mM至30mM精胺酸、90至115mM NaCl及視情況存在之0.05% w/v至0.2% w/v聚山梨醇酯80。較佳地，該組合物之pH值為pH 4.7至pH 5.7。

在一更佳實施例中，根據本發明之組合物包含以下各物或較佳由以下各物組成：10mg/mL至200mg/mL(較佳50mg/mL)阿達木單抗、20mM乙酸鈉、100mM蔗糖、25mM精胺酸、105mM NaCl及0.1% w/v聚山梨醇酯80，其中該組合物之pH值為約pH 5.2。

在另一更佳實施例中，根據本發明之組合物包含以下各物或較佳由以下各物組成：10mg/mL至200mg/mL(較佳50mg/mL)阿達木單抗、20mM乙酸鈉、100mM蔗糖、25mM精胺酸、105mM NaCl，其中該組合物之pH值為約pH 5.2。

檸檬酸鹽或檸檬酸鹽-乙酸鹽緩衝液/糖醇調配物

在另一特定實施例中，本發明之組合物包含以下各物或由以下各物組成：- 抗-TNFα抗體；- 檸檬酸鹽或檸檬酸鹽-乙酸鹽緩衝液；- 濃度為50mM至300mM之糖醇；及- 視情況存在之界面活性劑；其中該組合物之pH值為pH 4.0至pH 7.0。

較佳地，本發明之組合物包含以下各物或由以下各物組成：- 抗-TNFα抗體；- 濃度為10mM至50mM之檸檬酸鹽或檸檬酸鹽-乙酸鹽緩衝液；- 濃度為50mM至300mM之糖醇；及- 視情況存在之0.01% w/v至1% w/v之界面活性劑；其中該組合物之pH值為pH 4.0至pH 7.0。

抗-TNFα抗體較佳為人類抗-hTNFα抗體，抗-TNFα抗體較佳為阿達木單抗。抗-TNFα抗體或人類抗-hTNFα抗體或阿達木單抗濃度可為5至500mg/mL、7.5至250mg/mL、10mg/mL至200mg/mL、10mg/mL至150mg/mL或10mg/mL至100mg/mL。在一特定實施例中，抗-TNFα抗體濃度為40至200mg/mL，諸如40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、105、110、115、120、125、130、135、140、145、150、155、160、165、170、175、180、185、 190、195或200mg/mL。

在另一特定實施例中，根據本發明之組合物包含以下各物或較佳由以下各物組成：10mg/mL至200mg/mL(較佳50mg/mL)阿達木單抗、10mM至50mM檸檬酸鹽或檸檬酸鹽-乙酸鹽緩衝液、50至300mM糖醇、90至115mM鹽及視情況存在之0.05% w/v至0.2% w/v界面活性劑。較佳地，該組合物之pH值為pH 4.0至pH 5.7、更佳pH 4.4至pH 5.2。亦較佳的是，該糖醇為甘露醇，該界面活性劑為聚山梨醇酯80及/或該鹽為氯化鈉(NaCl)。較佳地，該組合物實質上不含呈游離胺基酸形式之精胺酸。

在一較佳實施例中，根據本發明之組合物包含以下各物或較佳由以下各物組成：10mg/mL至200mg/mL(較佳50mg/mL)阿達木單抗、10mM至50mM檸檬酸鹽或檸檬酸鹽-乙酸鹽緩衝液、50至300mM甘露醇、90至115mM NaCl及0.05% w/v至0.2% w/v聚山梨醇酯80。較佳地，該組合物之pH值為pH 4.0至pH 5.7、更佳約pH 4.4或約pH 5.2。

在另一較佳實施例中，根據本發明之組合物包含以下各物或較佳由以下各物組成：10mg/mL至200mg/mL(較佳50mg/mL)阿達木單抗、10mM至50mM檸檬酸鹽或檸檬酸鹽-乙酸鹽緩衝液、50至300mM甘露醇及90至115mM NaCl。較佳地，該組合物之pH值為pH 4.0至pH 5.7、更佳約pH 4.4或約pH 5.2。

較佳地，該緩衝液為檸檬酸鈉或檸檬酸鹽-乙酸鹽緩衝液。

在一更佳實施例中，根據本發明之組合物包含以下各物或較佳由以下各物組成：10mg/mL至200mg/mL(較佳50mg/mL)阿達木單抗、20mM檸檬酸鈉、65mM甘露醇、105mM NaCl及0.1% w/v聚山梨醇酯80，其中該組合物之pH值為約pH 5.2。

在一更佳實施例中，根據本發明之組合物包含以下各物或較佳由以下各物組成：10mg/mL至200mg/mL(較佳50mg/mL)阿達木單抗、20mM檸檬酸鈉、65mM甘露醇及105mM NaCl，其中該組合物之pH值為約pH 5.2。

在另一更佳實施例中，根據本發明之組合物包含以下各物或較佳由以下各物組成：10mg/mL至200mg/mL(較佳50mg/mL)阿達木單抗、10mM檸檬酸鈉、85mM甘露醇、105mM NaCl及0.1% w/v聚山梨醇酯80，其中該組合物之pH值為約pH 5.2。

在另一更佳實施例中，根據本發明之組合物包含以下各物或較佳由以下各物組成：10mg/mL至200mg/mL(較佳50mg/mL)阿達木單抗、20mM檸檬酸鈉、65mM甘露醇、105mM NaCl及視情況存在之0.1% w/v聚山梨醇酯80，其中該組合物之pH值為約pH 4.4、較佳pH 4.42。

在一額外更佳實施例中，根據本發明之組合物包含以下各物或較佳由以下各物組成：10mg/mL至200mg/mL(較佳50mg/mL)阿達木單抗、20mM檸檬酸鹽-乙酸鹽、65mM甘露醇、105mM NaCl及0.1% w/v聚山梨醇酯80，其中該組合物之pH值為約pH 5.2。

在另一額外更佳實施例中，根據本發明之組合物包含以下各物或較佳由以下各物組成：10mg/mL至200mg/mL(較佳50mg/mL)阿達木單抗、20mM檸檬酸鹽-乙酸鹽、65mM甘露醇及105mM NaCl，其中該組合物之pH值為約pH 5.2。

在一額外特定實施例中，根據本發明之組合物包含以下各物或較佳由以下各物組成：10mg/mL至200mg/mL(較佳50mg/mL)阿達木單抗、10mM至50mM檸檬酸鹽或檸檬酸鹽-乙酸鹽緩衝液、50至300 mM糖醇及視情況存在之0.05% w/v至0.2% w/v界面活性劑。較佳地，該組合物之pH值為pH 4.0至pH 5.7。

在一較佳實施例中，根據本發明之組合物包含以下各物或較佳由以下各物組成：10mg/mL至200mg/mL(較佳50mg/mL)阿達木單抗、10mM至50mM檸檬酸鈉緩衝液、50至300mM甘露醇及視情況存在之0.05% w/v至0.2% w/v聚山梨醇酯80。較佳地，該組合物之pH值為pH 4.0至pH 5.7。

在一更佳實施例中，根據本發明之組合物包含以下各物或較佳由以下各物組成：10mg/mL至200mg/mL(較佳50mg/mL)阿達木單抗、20mM檸檬酸鈉、275mM甘露醇及0.1% w/v聚山梨醇酯80，其中該組合物之pH值為約pH 5.2。

在甚至另一特定實施例中，根據本發明之組合物包含以下各物或較佳由以下各物組成：10mg/mL至200mg/mL(較佳50mg/mL)阿達木單抗、10mM至50mM磷酸鹽緩衝液、50至100mM糖醇、90至115mM鹽及視情況存在之0.05% w/v至0.2% w/v界面活性劑。較佳地，該組合物之pH值為pH 5.5至pH 6.5。

在一較佳實施例中，根據本發明之組合物包含以下各物或較佳由以下各物組成：10mg/mL至200mg/mL(較佳50mg/mL)阿達木單抗、10mM至50mM磷酸鈉緩衝液、50至100mM甘露醇、90至115mM NaCl及視情況存在之0.05% w/v至0.2% w/v聚山梨醇酯80。較佳地，該組合物之pH值為pH 5.5至pH 6.5。

在一更佳實施例中，根據本發明之組合物包含以下各物或較佳由以下各物組成：10mg/mL至200mg/mL(較佳50mg/mL)阿達木單抗、20mM磷酸鈉、65mM甘露醇、105mM NaCl及0.1% w/v聚山梨醇酯80，其中該組合物之pH值為約pH 6.0。

治療方法

本發明之組合物可適於活體外或活體內使用。較佳地，該組合物為醫藥組合物。在第二態樣中，本發明係關於本發明之水性組合物作為醫藥組合物之用途。其亦關於用作藥劑或用於療法之本發明之組合物或醫藥組合物。

如本文所用，「醫藥組合物」係指醫藥學上可接受之組合物。如本文所用，術語「醫藥學上可接受」係指彼等化合物、材料、組合物及/或劑型在合理醫學判斷之範疇內，適於與人類及動物之組織接觸而無過度毒性、刺激、過敏反應或其他問題併發症，與合理的利益/風險比相稱。

本發明之該醫藥組合物經調配以與其預期投與途徑相容。實現投與之方法為一般熟習此項技術者已知的。此包括例如注射，藉由非經腸途徑，諸如靜脈內、血管內、動脈內、皮下、肌肉內、腹膜內、室內、胸膜內或其他以及經口、經鼻、經眼、經直腸或局部。亦特定涵蓋持續釋放投與，藉由諸如儲槽式注射液或可侵蝕性植入物之方式。

在一個實施例中，該水性組合物藉由皮下投與而投與個體。在一更佳實施例中，本發明之該醫藥組合物用於皮下注射。出於此類目的，組合物可使用注射器以及其他裝置注射，包括注射裝置(例如Inject-ease及Genject裝置)；注射筆(諸如GenPen)；無針裝置(例如MediJector及Biojectorr 2000)；及皮下貼片傳遞系統。在一個實施例中，例如注射器、自動注射筆之裝置含有規格尺寸範圍介於25 G或小於25 G直徑之針頭。在一個實施例中針頭規格尺寸範圍介於25G至33 G(包括其中間範圍，例如25sG、26、26sG、27G、28G、29G、30G、31G、32G及33G)。在一較佳實施例中，根據調配物之黏度特徵及用於傳遞本發明組合物之裝置選擇最小針頭直徑及適當長度。

本發明亦包括使用無針裝置傳遞至個體的方法。此類裝置使得蛋白質可在無需藉由針頭注射之情況下分散在個體之整個組織中。無針裝置之實例包括(但不限於)Biojectorr 2000(Bioject Medical Technologies)、Cool.Click(Bioject Medical Technologies)、Iject(Bioject Medical Technologies)、Vitajet 3(Bioject Medical Technologies)、Mhi500(The Medical House PLC)、Injex 30(INJEX-Equidyne Systems)、Injex 50(INJEX-Equidyne Systems)、Injex 100(INJEX-Equidyne Systems)、Jet Syringe(INJEX-Equidyne Systems)、Jetinjector(Becton-Dickinson)、J-Tip(National Medical Devices,Inc.)、Medi-Jector VISION(Antares Pharma)、MED-JET(MIT Canada,Inc.)、DermoJet(Akra Dermojet)、Sonoprep(Sontra Medical Corp.)、PenJet(PenJet Corp.)、MicroPor(Altea Therapeutics)、Zeneo (Crossject Medical Technology)、Mini-Ject(Valeritas Inc.)、ImplaJect(Caretek Medical LTD)、Intraject(Aradigm)及Serojet(Bioject Medical Technologies)。

本發明亦包括容納本發明之水性組合物的傳遞裝置。此類裝置之實例包括(但不限於)注射器、筆(諸如自動注射筆)、植入物、吸入裝置、無針裝置及貼片。另外，本發明包括藉由吸入傳遞本發明組合物的方法及用於此類傳遞之含有該組合物的吸入裝置。在一個實施例中，水性調配物係使用噴霧器或液體吸入器經由吸入投與個體。一般而言，噴霧器使用壓縮空氣以濕氣溶膠或霧狀物形式傳遞藥品以供吸入且因此，需要藥物可溶於水。噴霧器類型包括噴射噴霧器(空氣噴射噴霧器及液體噴射噴霧器)及超音波噴霧器。

在第三態樣中，本發明係關於如前述態樣中所述之組合物或醫藥組合物，其適用於治療發炎性及/或免疫系統介導之疾病的方法，更特定言之適用於治療與TNFα上升相關之發炎性及/或免疫系統介導之疾病的方法。一個相關態樣係關於使用本發明之組合物或醫藥組合物治療發炎性及/或免疫系統介導之疾病的方法，更特定言之關於治療與TNFα上升相關之發炎性及/或免疫系統介導之疾病的方法。在一個實施例中，治療該發炎性及/或免疫系統介導之疾病、更特定言之與TNFα上升相關之發炎性及/或免疫系統介導之疾病的方法包含向個體投與有效治療該發炎性及/或免疫系統介導之疾病之量的本發明之組合物或醫藥組合物。

根據本發明之組合物中所包含之抗-TNFα抗體的治療效應為此項技術中已知的且包括(但不限於)治療類風濕性關節炎、多關節青少年特發性關節炎、牛皮癬性關節炎、僵直性脊椎炎、肉芽腫、克羅恩氏病(Crohn's disease)、潰瘍性結腸炎、慢性阻塞性肺病、C型肝炎、子宮內膜異位、哮喘、惡病質、牛皮癬、化膿性汗腺炎或異位性皮膚炎、或其他發炎性或免疫系統介導之疾病、病症或病狀，更特定言之當此疾病、病症或病狀與TNFα上升相關時。組合物可以足以治療病症(緩解其症狀、停止或減緩其進展)之量(例如治療有效量)投與。

除非另外指明，否則如本文所用，術語「治療(treating)」包括疾病或病症之改善、治癒及/或維持治癒(亦即預防或延遲復發)。在病症已開始之後的治療旨在減輕、緩解、改善或完全消除該病症及/或其相關症狀、預防其變得更糟、減緩進展速率、或在該病症已最初消除後預防其再出現(亦即預防復發)。

除非另外指明，否則如本文所用，術語「治療(treatment)」係指上文剛剛定義之「治療(treating)」的作用。

如本文所用，抗-TNFα抗體之「治療有效量」可指在單次或多次劑量投與個體(諸如人類患者)後，有效治療發炎性或免疫系統介導之疾病、更特定言之有效治療與TNFα上升相關之發炎性或免疫系統介導之疾病之抗體的量。

在一個額外態樣中，本發明係關於一種製造根據前述態樣之水性組合物的方法，其包含以下步驟：- 製備在所需pH值下的緩衝液，該緩衝液選自由乙酸鹽緩衝液、檸檬酸鹽緩衝液或檸檬酸鹽-乙酸鹽緩衝液組成的清單，- 添加雙醣及/或糖醇及視情況存在之界面活性劑及/或鹽，- 添加水溶液至最終體積且必要時調整pH值，- 將抗-TNFα抗體併入該組合物。

為了完成最終體積所添加之該水溶液較佳為水。通常使用去離子水，較佳如由各個當局(例如ISO 3696)所定義之「第1型」『超純』水，諸如milliQ水。

抗-TNFα抗體可以純化形式或以溶液(例如緩衝液)形式存在。在抗體以溶液形式存在時，抗體併入水性組合物中通常藉由使用透析置換溶液(亦即藉由透析更換緩衝液)來進行。

如本文所用，術語「透析」係指經溶解溶質逆著濃度梯度擴散穿過選擇性滲透膜以努力達成平衡。儘管小溶質通過膜，但較大溶質仍截留在一側。藉由更換膜外側之滲透緩衝液，你可持續脫除較小溶質以純化所截留之較大分子。

可使用數輪透析進行緩衝液更換。一般而言，當緩衝液置換少數次(例如2或3次)且接著較佳在室溫下保留在攪拌盤上隔夜時，透析將最有效。透析標準方案為16至24小時。許多因素影響透析速率，包括：擴散係數、pH值、溫度、時間、物質濃度、樣品體積、滲透液(緩衝液)體積、滲透液更換次數、膜表面積、膜厚度、分子電荷及滲透液攪拌。

數種類型的透析膜為市售的且為此項技術中所熟知。說明性非限制性實例為聚偏二氟乙烯(PVDF)膜、纖維素酯(CE)膜及再生纖維素(RC)膜。

預期本說明書中所論述之任何實施例可相對於任何組合物、醫藥組合物、醫療用途、治療方法及製造該組合物之方法來實施；且反之亦然。應瞭解本文所述之特定實施例以說明方式顯示且不顯示為本發明之限制。可在不背離本發明之範疇的情況下在各種實施例中採用本發明之主要特徵。熟習此項技術者將至多使用常規實驗認識到或能夠確定本文所述之特定程序的許多等效物。此類等效物視為在本發明之範疇內且由申請專利範圍所涵蓋。

本說明書中提及之所有公開案及專利申請案指示熟習本發明所屬技術者之技術水準。所有公開案及專利申請案均以引用之方式併入本文，其程度如同每一個別公開案或專利申請案特定且單獨地指示為以引用的方式併入。

使用詞語「一(a或an)」可意指「一個(種)」，但其亦與「一或多個(種)」、「至少一個(種)」及「一個(種)或一個(種)以上」之含義相符。使用術語「另一」亦可係指一或多個(種)。除非明確指示僅指替代物或除非替代物為相互排斥的，否則在申請專利範圍中使用術語「或」用於意指「及/或」。

如本說明書及申請專利範圍中所用，詞語「包含(comprising)」(及包含之任何形式，諸如「包含(comprise)」及「包含(comprises)」)、「具有(having)」(及具有之任何形式，諸如「具有(have)」及「具有(has)」)、「包括(including)」(及包括之任何形式，諸如「包括(includes)」及「包括(include)」)或「含有(containing)」(及含有之任何形式，諸如「含有(contains)」及「含有(contain)」為包括性或開放的且並不排除額外未列出之要素或方法步驟。如本文所用，片語「基本上由……組成」將申請專利範圍之範疇限制於規定材料或步驟及實質上不影響所主張發明之基礎及新穎特徵的材料或步驟。如本文所用，片語「由……組成」不包括申請專利範圍中未規定的任何要素、步驟或成分，例如通常與要素或限制相關聯之雜質除外。

如本文所用，術語「或其組合」係指在該術語前面所列項目之所有排列及組合。舉例而言，「A、B、C或其組合」意欲包括以下中之至少一者：A、B、C、AB、AC、BC或ABC，且若在特定情形下順序為重要的，則亦包括BA、CA、CB、CBA、BCA、ACB、BAC或CAB。繼續此實例，明確地包括含有一或多個項目或術語之重複的組合，諸如BB、AAA、AB、BBC、AAABCCCC、CBBAAA、CABABB等等。熟習此項技術者應理解，除非另外自上下文顯而易知，否則通常不存在對任何組合中之項目或術語數目的限制。

以下實例用以說明本發明且不應理解為限制其範疇。

實例 材料及方法 分析方法 1.- 目視檢查

對於目視檢查，根據歐洲藥典(第7版；單行本2.9.20)在平緩的手動徑向攪拌下在白色背景前5秒及在黑色背景前5秒檢查小瓶是否存在可見粒子。由兩個獨立的經過訓練的檢查者進行檢查。

2.- pH

藉由經校準pH測定計(SevenEasy®,Mettler Toledo AG,Schwerzenbach,Switzerland)使用正常離子強度電極(InLab® Micro)量測調配物pH值。

3.- 重量莫耳滲透濃度

樣品之重量莫耳滲透濃度係藉由冰點下降法使用Knauer自動半微滲透計K-7400(Knauer,Berlin,Germany)來量測。

4.- UV光譜分析

UV吸光度係藉由使用Agilent 8453 UV分光光度計來量測。在 0.01-cm路徑長度石英光析槽中進行分析。樣品在50mg/mL下未經稀釋量測。使用消光係數A280nm=1.39ml mg-1cm-1計算mAb之濃度。使用在350nm下測定之光學密度分別評定樣品濁度及光散射程度，其可表示為聚集指數A.I.：A.I.=100*(A350/(A280-A350))。在350nm下之吸光度以及A.I.對不溶性聚集物為靈敏的，但對溶液中之低含量可溶性聚集物較不靈敏。使用濃度為2mg/ml之牛血清白蛋白(BSA)作為對照材料(消光係數A280nm=0.667(ml/mg)-1(cm-1)。

5.- 微流體成像(MFI)

在配備有經矽烷塗佈之高解析度100μm流槽之DPA-5200粒子分析儀系統(ProteinSimple,Santa Clara,CA,USA)進行微流體成像量測。樣品稀釋於安慰劑調配物中以5mg/mL之濃度加以分析。預操作體積為0.17ml，接著為0.28ml樣品操作。每一樣品獲取大致1100個影像。在量測之間，流槽用純化水清潔且使用安慰劑調配物使背景照明最佳化。使用MFI視圖系統軟體(MFI View System Software，MVSS)版本2-R2-6.1.20.1915進行量測且使用MFI視圖分析套件(MFI View Analysis Suite，MVAS)軟體版本1.3.0.1007分析樣品。

6.- 共振質量量測(ARCHIMEDES)

使用配備有經1μm聚苯乙烯標準品校準之微型感測器(尺寸範圍0.3-4μm)的ARCHIMEDES粒子計量系統(Affinity Biosensors,Santa Barbara,CA,USA)進行RMM。

所有樣品稀釋於安慰劑調配物中以5mg/mL之濃度加以分析。一些樣品必須用MQ水稀釋2倍以獲得可靠資料。在量測之前，系統用樣品填充且以自動模式測定較低尺寸偵測極限(LOD)三次並將平均值設定為量測的固定偵測極限。LOD相當於一種樣品內之最低可偵測粒度。對於負浮力粒子(蛋白質粒子)，LOD視樣品內之噪聲級而定大約為0.3μm，因此可切實表徵0.3μm的粒度。對於正浮力粒子(聚矽氧油樣液滴)，LOD略微較高且通常在約0.5μm下(歸因於粒子密度相對於緩衝液之較小差異)。對於LOD高於0.3μm或0.5μm之樣品，實際總粒子濃度可高於報導值。

單獨測定各調配緩衝液之緩衝液密度且基於製造商推薦，將粒子密度任意設定成負浮力粒子(蛋白質粒子)1.32g/mL且正浮力粒子(聚矽氧油樣液滴)0.97g/mL。量測停止觸發劑設定成0.15μl體積且一式三份量測之總樣品體積為600μl。在每次量測之間，用超純水沖洗系統。使用ParticleLab軟體(v1.9.50)以10nm之尺寸分格步長分析結果。

由製造商推薦之總粒子(亦即粒度類別0.3μm)之定量下限(LOQ)為每毫升300,000個粒子(在所分析之小體積(亦即0.15μl)中所偵測之粒子的最少數目必須>50個粒子)。每毫升低於300,000個粒子的總粒子濃度不應視為統計學上相關的。

7.- 動態光散射(DLS)

藉由使用Zetasizer APS 2000盤式分析儀(Malvern Instruments,Worcestershire,UK)儀器進行DLS量測。每一樣品取100μl，在Corning 96孔盤中在20℃下分析。所有樣品於安慰劑調配物中稀釋，以5mg/mL之濃度分析。

使用軟體之自動量測模式以使諸如量測時間及採集數目(通常每10秒10-15次採集)達最佳量測設定。此外，藉由軟體使諸如衰減器設定之儀器參數達最佳化，以獲得推薦計數速率。各樣品量測三次。

使用Malvern Zetasizer軟體(版本7.03)，使用「蛋白質分析」算法計算Z-平均直徑、多分散指數(PdI)及粒度分佈(藉由強度)。自軟體資料庫選擇蛋白質材料(RI=1.450，吸光度=0.001)及作為溶劑之水(RI=1.330，在20.0℃下之黏度=1.0031cP)。

8.- 微量熱法(μ-DSC)

使用MicroCal VP-毛細管DSC系統(GE Healthcare)進行蛋白質調配物之超敏量熱分析以測定蛋白質之熔融溫度(Tm)。

量測時需要約0.4ml經稀釋蛋白質調配物。濃縮之mAb樣品使用相應調配緩衝液稀釋25倍，以達到~2mg/ml mAb之目標濃度。為藉由消除濃度差異來改良μ-DSC資料之標準化，在稀釋之後經由在280nm下之UV吸收量測(A280nm)測定蛋白質濃度。使用Tecan Safire2盤式分析儀(Tecan Austria GmbH,Grödig,Austria)且在Costar UV 96孔盤(Corning Incorporation,NY,USA)中一式三份地量測200μl樣品。減去相應調配緩衝液之吸光度。使用1.39ml/mg之比消光係數計算蛋白質濃度。另外，使用148kDa之分子量使所獲得之熱容量(Cp)標準化成莫耳濃度值。

樣品在分析之前在自動進樣器系統中在5℃下冷卻。為測定背景值，在參考槽及樣品槽中填充調配緩衝液，且依60℃/h，自10℃掃描至100℃。為測定蛋白質之Tm，用經稀釋蛋白質溶液填充樣品槽且用調配緩衝液填充參考槽，且依60℃/h，自10至100℃進行一次加熱掃描。

在蛋白質掃描之後，用10% Decon 90溶液填充槽，且在與蛋白質樣品相同之設定下掃描。隨後，用高度純化水充分洗滌該槽，以移除清潔劑。

自樣品量測值減去自相應調配緩衝液掃描獲得之背景值。在減除基線值之後，自去卷積反摺疊轉變之最大峰值測定Tm值(具有4次轉變之非二態模型)。藉由使用Origin 7.0 DSC軟體進行資料分析。

9.- 高效尺寸排阻層析(HP-SEC)

使用以下參數進行HP-SEC分析：儀器：HP1200(Agilent Technology)

管柱：Super SW3000；4.6×300mm(4μm)；TOSOH Bioscience，目錄號：18675。

批次號95W

流動速率：0.35mL/min；移動相：0.2M磷酸鈉，pH 6.8±0.2

偵測：在280nm下之UV，參考關閉

頻帶：4nm，參考關閉；管柱烘箱：30℃；樣品冷卻：4℃；注射：抽取速度及射出速度450μl/min；注射體積：30μg(1.0mg/mL樣品30μl)

分析時間：20min

10.- 離子交換層析(IEX)

使用以下參數進行IEX分析：儀器：HP1200(Agilent Technology)

管柱：Dionex Propac WCX-10，4.0mm d.i.×250mm(弱陽離子交換樹脂)CV=3.14ml；Dionex目錄號：054993。

批次號014-27-012

移動相：移動相A：10mM磷酸鈉(pH 7.40±0.05)

移動相B：10mM磷酸鈉，0.25M NaCl(pH 7.40±0.05)

流動速率：0.5mL/min

偵測：在280nm下之UV，關閉參考

*214nm，參考360nm

頻帶：16nm，關閉參考(280nm)

*4nm，參考100nm(214nm)

管柱烘箱：35℃；樣品冷卻：4℃

注射：抽取速度及射出速度450μL/min；注射體積：40μg(對於2mg/mL樣品20μL)

分析時間：40min。

11.- SDS-PAGE還原性及非還原性電泳

SDS-PAGE電泳的目的為根據尺寸且無其他物理特徵分離蛋白質，而在非還原性凝膠電泳中，蛋白質製備於非還原、非變性樣品緩衝液中且亦在不存在變性劑及還原劑的情況下進行電泳。在電泳後，凝膠用庫馬斯亮藍R-250染色以允許觀測經分離蛋白質。

本文所用之分析方法可具有下表中指示之目的：

實例1 樣品製備

對於實例1中所述之研究，使用HUMIRA®藥品(調配於6-14mM檸檬酸鈉/磷酸鈉、65mM甘露醇、105mM NaCl、0.1% PS80，pH 5.2中(亦即F1或原創調配物)作為起始材料。藉由透析進行緩衝液更換。

調配物

在以下緩衝液中分析以下阿達木單抗樣品：

各樣品包含10mg/mL標稱(目標)濃度之阿達木單抗。亦在無阿達木單抗抗體的情況下製備安慰劑樣品。各樣品的緩衝液如下所指示來製備：

- 緩衝液F1. 檸檬酸鹽-磷酸鹽，pH 5.2

- 緩衝液F2. 檸檬酸鹽，pH 5.2

20mM檸檬酸鈉，pH 5.2：

A：20mM檸檬酸鈉*2H2O(5.8824g/L)

B：20mM檸檬酸*H2O(4.2028g/L)

添加B超過A以達到pH 5.2

添加可溶性組分甘露醇、NaCl及PS80。添加milli-Q水至最終體積。必要時，調整pH值至5.2。

- 緩衝液F3. 磷酸鹽，pH 6.0

20mM磷酸鈉，pH 6.0：

A：20mM NaH2PO4*H2O(2.7598g/L)

B：20mM Na2HPO4(2.8392g/L)

添加123mL B超過877mL A。pH 6.0

添加可溶性組分甘露醇、NaCl及PS80。添加milli-Q水至最終體積·必要時，調整pH值至6.0。

- 緩衝液F4. 組胺酸乙酸鹽，pH 5.2

20mM組胺酸乙酸鹽，pH 5.2：

A：乙酸20mM(1.20g/L)。pH 3。

B：L-組胺酸20mM(3.10g/L)

添加B超過A。pH 5.2

添加可溶性組分L-組胺酸、海藻糖、NaCl及PS80。添加milli-Q水至最終體積。必要時，調整pH值至5.2。

- 緩衝液F8. 乙酸鹽，pH 5.2

20mM乙酸鈉，pH 5.2：

A：乙酸20mM(1.20g/L)

B：乙酸鈉20mM(1.64g/L)

添加643mL B超過357mL A。pH 5.2

添加可溶性組分蔗糖、NaCl及PS80。添加milli-Q水至最終體積。必要時，調整pH值至6.0。

- 緩衝液F9. 乙酸鹽-精胺酸，pH 5.2

20mM乙酸鈉，pH 5.2：

A：乙酸20mM(1.20g/L)

B：乙酸鈉20mM(1.64g/L)

添加643mL B超過357mL A。pH 5.2

添加可溶性組分L-精胺酸、蔗糖、NaCl及PS80。添加milli-Q水至最終體積。用HCl調整pH值至5.2。

對樣品進行以下分析：

- 視覺外觀

- pH

- 280nm吸光度(蛋白質濃度)

- 330nm吸光度(濁度)

- DLS(亞可見粒子分析)

- 近UV(250-350吸光度)光譜分析(三級結構)

- 尺寸排阻HPLC層析(SEC-HPLC)

- 還原性及非還原性SDS-PAGE

- 離子交換HPLC(IEX-HPLC)

穩定性條件.

使樣品經受以下條件：

冷凍-融化應力測試(FzTh)由以下組成：-80℃冷凍1小時、+20℃解凍1小時、-80℃冷凍1小時、+20℃解凍1小時、-80℃冷凍1小時、+20℃解凍1小時。

震盪研究測試由以下組成：在室溫下在400rpm下震盪(水平震盪)72小時：目視檢查將在24、48及72小時之後進行。

在各時間點抽樣，即時檢查視覺外觀以記錄顏色、澄清度及微粒存在。小瓶在-80℃下冷凍直至準備用於分析為止。

結果 1. 視覺外觀

在目視檢查後及與原創調配物相比，在所有時間點及條件下之所有調配物均呈現為澄清、無顏色且無可見微粒。

2. pH測試

pH值經量測接近於研究開始時之目標。

3. 藉由A280nm之蛋白質濃度

當更換成替代緩衝液及所選賦形劑系統時，仍維持阿達木單抗之固有穩定性。所有調配物在所有條件下之蛋白質濃度保持恆定，如圖1中所示。

4. 藉由DLS之亞可見微粒分析

DLS量測展示在所有條件下測試之F2、F3、F4及F8的平均流體動力學粒度並未自t=0顯著變化，仍保持恆定(參見圖2)。儘管F9展現與所測試之其他調配物相比略微較高的亞可見微粒的證據，但如藉由SDS-PAGE(還原性及非還原性)、SEC-HPLC及IEX-HPLC所量測，阿達木單抗仍保持類似的純度分佈。

在DLS 3×FzTh條件中，注意到調配物之間及與原創相比，流體動力學尺寸無顯著差異。F9呈現總體上略微較高的粒度，但是相比t=0無變化。

5. 尺寸排阻HPLC層析

每一樣品及條件之主峰、前峰及後峰的比例展示如下：HUMIRA標準品：

在t=0之SEC-HPLC資料證實調配物F2、F3、F4、F8及F9之間及與原創調配物F1及HUMIRA參考標準相比無顯著差異。所有調配物之聚集物及片段含量低，注意到所有調配物在40℃下14天之後的一些變化(後峰片段增加)且與原創調配物類似。且此亦展示為F1原創調配物之情況。

6. SDS-PAGE還原性及非還原性PAGE

在非還原條件下之SDS-PAGE證實調配物之間及與t=0之原創調配物相比無差異。在40℃條件下，所有調配物中50kDa LMW帶之強度增加為顯而易見的，與藉由SEC觀測到的所有調配物的後峰增加相符，如圖3所見。

在還原條件下之SDS-PAGE證實調配物之間及與t=0之原創調配物及HUMIRA參考標準相比無差異(圖3)。

在還原條件下之SDS-PAGE在40℃條件下，所有調配物之額外LMW斷裂帶為顯而易見的(圖3)。

7. IEX-HPLC

如由IEX-HPLC所證實，所有調配物及與HUMIRA參考標準相比在t=0之整體電荷變體分佈類似，且所有調配物在高溫儲存條件下14天之後顯示%前峰(酸性物質)增加。

實例2

使用在與Humira®(下文稱為原創產品)相同的緩衝液中調配之經蛋白質-A純化之阿達木單抗材料(亦即F1調配物)作為起始材料，該緩衝液由6-14mM檸檬酸鈉/磷酸鈉、65mM甘露醇、105mM NaCl、0.1% PS80，pH 5.2組成。藉由透析進行緩衝液更換。

亦在以下緩衝液中分析以下阿達木單抗樣品，在所有情況下之阿達木單抗濃度為50mg/mL：

結果 1. 在t=0之視覺外觀

在目視檢查後及與原創調配物相比，所有調配物均呈現為澄清、無顏色且無可見微粒。

2. 在t=0之藉由A280之蛋白質濃度

當更換成替代緩衝液及所選賦形劑系統時，仍維持阿達木單抗之固有穩定性。所有調配物在t=0之蛋白質濃度保持恆定。

3. 藉由DLS之亞可見微粒分析

DLS量測展示調配物之間主峰(峰1)之平均流體動力學粒度未顯著變化。包括原創調配物之所有調配物展現較大粒子的證據(在每種情況下，峰2)，但調配物之間無顯著差異。

實例3 樣品製備

使用兩種不同原料藥(DS)品質之阿達木單抗生物類似物作為此研究之起始材料：

1.在與Humira®(下文稱為原創產品)相同的緩衝液(6-14mM檸檬酸鈉/磷酸鈉、65mM甘露醇、105mM NaCl、0.1% PS80，pH 5.2)中調配之經充分純化之材料。

2.在與Humira®相同但無PS80(下文稱為原創產品)的緩衝液(6-14mM檸檬酸鈉/磷酸鈉、65mM甘露醇、105mM NaCl，pH 5.2)中調配之經充分純化之材料。

具有聚山梨醇酯80(PS80)之DS用作F1、F2、F4及F20調配物製備之起始材料。無PS80之DS用於製備F26、27及28。經由透析製備所有調配物。

調配物

包括以下用於穩定性及應力測試之調配物。所有調配物包括50mg/mL阿達木單抗抗體。

測試條件

對於以上樣品測試以下條件：

結果 1.- 視覺外觀

含有PS80之起始材料用值1評分，略微混濁且具有微黃色。無PS80調配之DS材料不含任何可見粒子，使得評分為0。

所研究之所有調配物在T0未展示任何可見粒子或僅達到極低程度(評分0或1)。在震盪應力24小時後，大多數調配物未觀測到顯著變化。然而，在震盪48小時之後，無PS80調配物F27及F28具有高含量的可見粒子。其他調配物在48小時震盪應力之後未展示變化。

冷凍-融化應力導致F1及F26中形成一些可見粒子(評分1)。在F4、F20及F27中，在冷凍-融化應力之後粒子在5秒內清晰可見。在F28中，在T-FT觀測到許多可見粒子(評分10)。

在儲存後，僅在F1、F2、F4、F20及F26樣品中觀測到可見粒子之少量增加，而F27及F28已在5℃及25℃下儲存後顯示在可見尺寸範圍之粒子的明顯增加(評分2)且在40℃下更顯著，使得在1個月及3個月儲存時間之後評分為10。

2.- pH

用於透析之調配物緩衝液的pH值為5.2。在透析(T0)之後以及在T-mech及T-FT之樣品的pH值為5.2或5.3。在40℃下儲存3個月之後，所有測試調配物之pH值略微增加至5.4。

3.- 重量莫耳滲透濃度

所有樣品之重量莫耳滲透濃度值在274-314mOsmol/kg之間(參見表1)。F20量測出最高值(314mOsmol/kg)，F28量測出最低值(274mOsmol/kg)。

4.- UV光譜分析

UV光譜分析用於測定蛋白質濃度(λ=280nm)以及聚集指數(A.I.)及濁度(λ=350nm)。

其係對mAb濃度為大約50mg/mL之未經稀釋樣品進行。對於空白量測，使用安慰劑調配物。

對於大多數樣品，所量測之不同調配物的濃度保持在目標值50mg/mL之5%以內(亦即在47.5-52.5mg/ml之間)。所有樣品之聚集指數均低且介於0.01與2.27之間。

5.- 微流體成像(MFI)

MFI用於量測在微米尺寸範圍內之亞可見粒子。樣品在量測之前用經過濾之安慰劑調配物稀釋至5mg/mL。使用安慰劑調配物使背景最佳化。

與不透光度相比，MFI之優勢在於基於粒子之光學特性(諸如形狀或透明度)表徵及區分粒子之能力，其使得能夠在聚矽氧油液滴樣粒子及非聚矽氧油粒子(例如蛋白質粒子)之間進行區分。藉由MVAS軟體之「發現類似物」功能，可分離且分析不同粒子群體。然而，此區分僅在大於約5μm之範圍內為可能的，因為影像在較低尺寸範圍中之解析度不夠。

兩種主體材料均藉由MFI作為短期品質檢查來加以研究(含PS80相對於無PS80)。兩種材料藉由MFI量測之總粒子數目極低(每毫升至多幾千個粒子1μm)且不含聚矽氧油液滴樣粒子，其證實適合用兩種DS材料進行透析。

在F1、F2、F4、F20及F26中偵測出總體較低的粒子數目，其在機械及冷凍一融化應力或在不同溫度下儲存後未大量增加。在F27及F28中，在機械應力之後量測出所有尺寸類別(1μm、2μm、5μm及10μm)之粒子的數目明顯較高。

6.- 共振質量量測(RMM)

ARCHIMEDES使用共振質量量測作為原理，基於粒子重量及密度量化在約0.3μm至幾微米尺寸範圍內之粒子。該技術區別正浮力粒子(密度低於調配物，例如聚矽氧油液滴)與負浮力粒子(密度高於調配物，例如蛋白質粒子)。該技術之主要目的為偵測樣品內之粒子數目的趨勢(相對於不同調配物及應力/儲存條件)，以及測定正浮力粒子(密度低於調配物，例如聚矽氧油液滴)與負浮力粒子(密度高於調配物，例如蛋白質粒子)之間的比率。由於分析體積僅為150nl，故該技術實際上展示粒子量之趨勢，而非確定絕對粒子濃度。

樣品在(i)用安慰劑調配物10倍稀釋至5mg/mL，接著(ii)用MQ水1：1稀釋之後，在2.5mg/mL之濃度下加以量測；由以下所示之資料計算回至5mg/mL，以便將結果與亦在5mg/mL下進行之MFI及DLS結果比較。

在T0及在5℃、25℃及40℃下儲存3個月之後，在大多數樣品中偵測出濃度低於或略高於定量極限(300,000個粒子0.3μm)之負浮力粒子。F2、F20及F26顯示較高總粒子濃度，尤其在40℃下儲存之後。

大多數粒子之正浮力粒子的數目低於50個粒子之定量極限且下表中給出之值僅用於資訊。此外，所有測試樣品之偵測極限為最大粒度0.51-0.56μm。

粒子數目低於方法之定量極限(300,000 #/ml)；上表中給出之值僅用於資訊。

7.- 動態光散射(DLS)

動態光散射分析使得能夠測定奈米尺寸範圍之聚集物的粒徑分佈。

單株抗體一般藉由在大致10nm處之主峰表徵。

結果表明F1、F2、F4、F20及F26幾乎不含奈米尺寸聚集物，因為(i)主要物質之直徑對應於單體IgG所預期之直徑，(ii)主要物質峰之強度為100%，(iii)Z-平均直徑幾乎與主要物質之直徑一致，(iv)PdI值相對較低。

已在T0在F27及F28之所有樣品中量測出奈米尺寸範圍之聚集物。在機械及冷凍-融化應力後，F28顯示比F27略微較高的主峰含量。然而，在儲存1個月及3個月後，觀測到相反結果。

8.- 微量熱法(μ-DSC)

蛋白質之反摺疊溫度(Tm值)藉由μ-DSC量測來確定。由於參考槽用相應安慰劑調配物填充，故熱容量之任何改變可與蛋白質分子相關。

在加熱後觀測到多個吸熱轉變。此為所預期的且與藉由獨立展開之不同結構域表徵之mAb之結構相符。通常，具有最大焓之反摺疊轉變由Fab部分引起。此外，Fc部分通常觀測到兩個轉變，第一個為CH2結構域之反摺疊，接著為CH3在較高溫度下之反摺疊。

F4及F28展現略微較低的Tm值，表明當調配於20mM組胺酸乙酸鹽pH 5.2、65mM海藻糖、105mM NaCl(有或無PS80)中時，對熱反摺疊之較高分子易感性。此對最低轉變溫度Tm1尤其成立。對於所有其他調配物，獲得可比Tm值。參見下表：

9.- 高效尺寸排阻層析(HP-SEC)

HP-SEC用於評定樣品之純度、單體含量以及聚集物及片段含量。在40℃下儲存1個月及在5℃下儲存3個月之後，F4似乎預防一些單體損失。在25℃下儲存3個月之後，所有調配物相當類似且具有大致98%單體含量。在較高溫度(40℃)下，所有調配物中之單體及片段含量分別為<92%及約6-7%。結果展示於下表中：

10. 離子交換層析(IEX)

離子交換層析用於評估樣品內之電荷變體。

由無PS80之DS製備之F26、F27及F28的特徵在於主要同功異型物含量低於由含有PS80之DS製備之F1、F2、F4及F20。

在40℃下儲存1個月及在25℃及40℃下儲存3個月之後，F4及F28顯示略微較低的主要同功異型物損失。在相同儲存條件下，F2略微劣於F20。結果展示於下表中：

Claims

一種水性組合物，其包含：抗-TNFα抗體；緩衝液，係選自由乙酸鹽緩衝液、檸檬酸鹽緩衝液及檸檬酸鹽-乙酸鹽緩衝液組成的清單；及賦形劑，其中該賦形劑至少選自雙醣、糖醇及其組合；其中當該緩衝液包含乙酸鹽緩衝液或由乙酸鹽緩衝液組成時，該組合物包含濃度小於240mM的雙醣；其中當該緩衝液包含檸檬酸鹽或檸檬酸鹽-乙酸鹽緩衝液或由檸檬酸鹽或檸檬酸鹽-乙酸鹽緩衝液組成時，該組合物包含濃度為50mM至300mM的糖醇；及其中該組合物之pH值為pH 4.0至pH 7.0。
如請求項1之組合物，其限制條件為該組合物不包含檸檬酸鹽-磷酸鹽緩衝液，較佳不包含磷酸鹽緩衝液。
如請求項1或2中任一項之組合物，其包含：抗-TNFα抗體；檸檬酸鹽或檸檬酸鹽-乙酸鹽緩衝液；濃度為50mM至300mM之糖醇；及視情況存在之界面活性劑；其中該組合物之pH值為pH 4.0至pH 7.0。
如請求項1至3中任一項之組合物，其包含：抗-TNFα抗體；濃度為10mM至50mM之檸檬酸鹽或檸檬酸鹽-乙酸鹽緩衝液；濃度為50mM至300mM之糖醇；及視情況存在之0.01% w/v至1% w/v之界面活性劑；其中該組合物之pH值為pH 4.0至pH 7.0。
如請求項1至4中任一項之組合物，其中該抗-TNFα抗體為人類抗-hTNFα抗體，較佳該抗-TNFα抗體為阿達木單抗(adalimumab)。
如請求項1至5中任一項之組合物，其中該糖醇係選自由甘露醇、木糖醇、赤藻糖醇、蘇糖醇、核糖醇、肌肉肌醇、半乳糖醇、山梨醇及丙三醇組成之群，較佳其中該糖醇為甘露醇。
如請求項1至6中任一項之組合物，其中該糖醇以超過240mM之濃度、較佳以250mM至300mM之濃度、更佳以275mM之濃度存在。
如請求項1至6中任一項之組合物，其中該糖醇以低於240mM之濃度、較佳以低於200mM之濃度存在。
如請求項1至6中任一項之組合物，其中該糖醇以40mM至195mM、較佳50mM至100mM、甚至更佳55mM至90mM之濃度存在，諸如以約65mM、約75mM或約85mM之濃度存在。
如請求項1至9中任一項之組合物，其中該緩衝液係選自由檸檬酸鈉緩衝液、檸檬酸鹽-乙酸鹽緩衝液、乙酸鈉緩衝液及組胺酸乙酸鹽緩衝液組成之群，較佳為檸檬酸鈉或檸檬酸鹽-乙酸鹽緩衝液。
如請求項1至10中任一項之組合物，其中該組合物之pH值為pH 4.0至pH 5.7、較佳pH 4.4至pH 5.2。
如請求項1至11中任一項之組合物，其中該組合物實質上不含呈游離胺基酸形式之精胺酸。
如請求項1至12中任一項之組合物，其中該組合物另外包含以80至130mM之濃度存在之鹽，較佳其中該鹽濃度為105mM，更佳其中該鹽為氯化鈉。
如請求項1至12中任一項之組合物，其中該組合物另外包含以超過100mM之濃度存在之鹽，較佳其中該鹽濃度為105mM，更佳其中該鹽為氯化鈉。
如請求項1至12中任一項之組合物，其包含10mg/mL至200mg/mL阿達木單抗、10mM至50mM檸檬酸鹽或檸檬酸鹽-乙酸鹽緩衝液、50至300mM糖醇及視情況存在之0.05% w/v至0.2% w/v界面活性劑。
如請求項15之組合物，其包含10mg/mL至200mg/mL阿達木單抗、10mM至50mM檸檬酸鈉緩衝液、50至300mM甘露醇及0.05% w/v至0.2% w/v聚山梨醇酯80。
如請求項16之組合物，其包含10mg/mL至200mg/mL阿達木單抗、20mM檸檬酸鈉、275mM甘露醇及0.1% w/v聚山梨醇酯80，其中該組合物之pH值為約pH 5.2。
如請求項1至15中任一項之組合物，其中當該組合物包含檸檬酸鹽或檸檬酸鹽-乙酸鹽緩衝液時，該組合物另外包含界面活性劑。
如請求項3至15或18中任一項之組合物，其中該界面活性劑濃度為0.05% w/v至0.2% w/v、較佳約0.1% w/v。
如請求項15或18至19中任一項之組合物，其中該界面活性劑為聚山梨醇酯80。
如請求項1至13中任一項之組合物，其包含10mg/mL至200mg/mL阿達木單抗、10mM至50mM檸檬酸鹽或檸檬酸鹽-乙酸鹽緩衝液、50至300mM糖醇、90至115mM鹽及視情況存在之0.05% w/v至0.2% w/v界面活性劑。
如請求項21之組合物，其包含10mg/mL至200mg/mL阿達木單抗、10mM至50mM檸檬酸鹽或檸檬酸鹽-乙酸鹽緩衝液、50至 300mM甘露醇、90至115mM NaCl及視情況存在之0.05% w/v至0.2% w/v聚山梨醇酯80。
如請求項21或22中任一項之組合物，其包含10mg/mL至200mg/mL阿達木單抗、20mM檸檬酸鈉、65mM甘露醇、105mM NaCl及0.1% w/v聚山梨醇酯80，其中該組合物之pH值為約pH 5.2。
如請求項21或22中任一項之組合物，其包含10mg/mL至200mg/mL阿達木單抗、20mM檸檬酸鈉、65mM甘露醇及105mM NaCl，其中該組合物之pH值為約pH 5.2。
如請求項21或22中任一項之組合物，其包含10mg/mL至200mg/mL阿達木單抗、10mM檸檬酸鈉、85mM甘露醇、105mM NaCl及0.1% w/v聚山梨醇酯80，其中該組合物之pH值為約pH 5.2。
如請求項21或22中任一項之組合物，其包含10mg/mL至200mg/mL阿達木單抗、20mM檸檬酸鈉、65mM甘露醇、105mM NaCl及0.1% w/v聚山梨醇酯80，其中該組合物之pH值為約pH 4.4、較佳pH 4.42。
如請求項21或22中任一項之組合物，其包含10mg/mL至200mg/mL阿達木單抗、20mM檸檬酸鹽-乙酸鹽、65mM甘露醇、105mM NaCl及0.1% w/v聚山梨醇酯80，其中該組合物之pH值為約pH 5.2。
如請求項21或22中任一項之組合物，其包含10mg/mL至200mg/mL阿達木單抗、20mM檸檬酸鹽-乙酸鹽、65mM甘露醇及105mM NaCl，其中該組合物之pH值為約pH 5.2。
如請求項1或2中任一項之組合物，其中當該緩衝液包含乙酸鹽緩衝液或由乙酸鹽緩衝液組成時，該組合物包含濃度小於140 mM之雙醣。
如請求項29之組合物，其包含：抗-TNFα抗體；濃度為10mM至50mM之乙酸鹽緩衝劑；及濃度小於140mM之雙醣；及視情況存在之0.01% w/v至1% w/v之界面活性劑；其中該組合物之pH值為pH 4.0至pH 7.0。
如請求項29或30中任一項之組合物，其中該抗-TNFα抗體為人類抗-hTNFα抗體，較佳該抗-TNFα抗體為阿達木單抗。
如請求項29至31中任一項之組合物，其中該組合物另外包含以80至130mM之濃度存在之鹽，較佳其中該鹽濃度為105mM，更佳其中該鹽為氯化鈉。
如請求項29至32中任一項之組合物，其包含10mg/mL至200mg/mL阿達木單抗、10mM至50mM乙酸鹽緩衝液、40mM至130mM雙醣、90至115mM鹽及視情況存在之0.05% w/v至0.2% w/v界面活性劑。
如請求項29至33中任一項之組合物，其中該雙醣為海藻糖、蔗糖或其組合。
如請求項34之組合物，其中當該雙醣為海藻糖時，其以40mM至130mM之濃度存在。
如請求項34之組合物，其中當該雙醣為蔗糖時，其以80mM至120mM之濃度、較佳以約100mM之濃度存在。
如請求項29至36中任一項之組合物，其中該組合物之pH值為pH 4.0至pH 5.7、較佳pH 4.4至pH 5.2。
如請求項29至37中任一項之組合物，其中該組合物另外包含濃度為0.05% w/v至0.2% w/v、較佳約0.1% w/v之界面活性劑。
如請求項30至38中任一項之組合物，其中該界面活性劑為聚山梨醇酯80。
如請求項29至37中任一項之組合物，其中該乙酸鹽緩衝液為乙酸鈉。
如請求項40之組合物，其包含10mg/mL至200mg/mL阿達木單抗、10mM至50mM乙酸鈉、80mM至120mM蔗糖、90至115mM NaCl及視情況存在之0.05% w/v至0.2% w/v聚山梨醇酯80。
如請求項41之組合物，其包含10mg/mL至200mg/mL阿達木單抗、20mM乙酸鈉、100mM蔗糖、105mM NaCl及0.1% w/v聚山梨醇酯80，其中該組合物之pH值為約pH 5.2。
如請求項37之組合物，其包含10mg/mL至200mg/mL阿達木單抗、10mM至50mM乙酸鈉、80mM至120mM蔗糖、15mM至30mM精胺酸、90至115mM NaCl及視情況存在之0.05% w/v至0.2% w/v聚山梨醇酯80。
如請求項43之組合物，其包含10mg/mL至200mg/mL阿達木單抗、20mM乙酸鈉、100mM蔗糖、25mM精胺酸及105mM NaCl，其中該組合物之pH值為約pH 5.2。
如請求項29至37中任一項之組合物，其中該乙酸鹽緩衝液為組胺酸乙酸鹽。
如請求項45之組合物，其包含10mg/mL至200mg/mL阿達木單抗、10mM至50mM組胺酸乙酸鹽、55mM至75mM海藻糖、90至115mM NaCl及視情況存在之0.05% w/v至0.2% w/v聚山梨醇酯80。
如請求項46之組合物，其包含10mg/mL至200mg/mL阿達木單抗、20mM組胺酸乙酸鹽、65mM海藻糖、105mM NaCl及0.1% w/v聚山梨醇酯80，其中該組合物之pH值為約pH 5.2。
如請求項46之組合物，其包含10mg/mL至200mg/mL阿達木單抗、20mM組胺酸乙酸鹽、65mM海藻糖及105mM NaCl，其中該組合物之pH值為約pH 5.2。
如請求項29至42及45至47中任一項之組合物，其中該組合物實質上不含呈游離胺基酸形式之精胺酸。
如請求項1至49中任一項之組合物，其中阿達木單抗以選自由約10mg/mL、約50mg/mL、約100mg/mL、約150mg/mL或約200mg/mL組成之群之濃度存在。
如請求項1至50中任一項之組合物，其中該組合物為穩定組合物，較佳其中該組合物在約25℃下及/或在約40℃下穩定至少14天、較佳至少1個月、更佳至少3個月。
如請求項1至51中任一項之組合物，其中該組合物為醫藥組合物。
如請求項1至52中任一項之組合物，其中該組合物適於經由選自由以下組成之群之投與模式來投與個體：皮下、靜脈內、吸入、皮內、經皮、腹膜內及肌肉內。
如請求項1至53中任一項之組合物，其用作藥劑。
一種裝置，其包含如請求項1至53中任一項之組合物。
如請求項55之裝置，其中該裝置係選自由以下組成之群：注射器、筆、植入物、無針頭注射裝置、吸入裝置及貼片。
如請求項1至53中任一項之組合物或如請求項55或56中任一項之裝置，其用於治療與TNFα上升相關之發炎性及/或免疫系統介導之疾病的方法。
如請求項57使用之組合物或裝置，其中該疾病係選自由以下組成之群：類風濕性關節炎、多關節青少年特發性關節炎、活動性起止點炎相關關節炎、牛皮癬性關節炎、僵直性脊椎炎、克羅恩氏病(Crohn's disease)、潰瘍性結腸炎、斑塊狀牛皮癬、化膿性汗腺炎、肉芽腫、慢性阻塞性肺病、C型肝炎、子宮內膜異位、哮喘、惡病質及異位性皮膚炎。
一種製造如請求項1至53中任一項之水性組合物的方法，其包含以下步驟：製備在所需pH值下的緩衝液，該緩衝液選自由乙酸鹽緩衝液、檸檬酸鹽緩衝液或檸檬酸鹽-乙酸鹽緩衝液組成的清單，添加雙醣及/或糖醇及視情況存在之界面活性劑及/或鹽，添加水溶液、較佳水至最終體積且必要時調整該pH值，將抗-TNFα抗體併入該組合物。