JPH08508884A - マクロファージ炎症蛋白変種 - Google Patents
マクロファージ炎症蛋白変種Info
- Publication number
- JPH08508884A JPH08508884A JP6522924A JP52292494A JPH08508884A JP H08508884 A JPH08508884 A JP H08508884A JP 6522924 A JP6522924 A JP 6522924A JP 52292494 A JP52292494 A JP 52292494A JP H08508884 A JPH08508884 A JP H08508884A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- protein
- amino acid
- seq
- sci
- stem cell
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Withdrawn
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- C07K14/521—Chemokines
- C07K14/523—Beta-chemokines, e.g. RANTES, I-309/TCA-3, MIP-1alpha, MIP-1beta/ACT-2/LD78/SCIF, MCP-1/MCAF, MCP-2, MCP-3, LDCF-1, LDCF-2
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/06—Antipsoriatics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
- A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P39/00—General protective or antinoxious agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Abstract
(57)【要約】
本発明は、生の状態の形態とは異なる少なくとも1個のアミノ酸の変化を含み、有意には凝集しないが、実質的に変化のない幹細胞阻害活性を保持している幹細胞阻害剤(SCI)蛋白を提供する。好ましくは、該変化は荷電アミノ酸残基の保存的置換である。かかる蛋白を、化学療法を行っている患者の幹細胞の治療に使用することができる。
Description
【発明の詳細な説明】
マクロファージ炎症蛋白変種
本発明は、幹細胞阻害剤の変種に関する。
化学療法剤での癌の治療は、体内で分裂している細胞を攻撃し、破壊するよう
に計画されている。よって、かかる治療の副作用は、正常細胞、特に造血系の幹
細胞および頭皮ならびに腸に並んでいる上皮幹細胞の破壊である。放射線照射も
、かかる細胞に対して同様の破壊を引き起こす可能性がある。
化学療法による癌の治療を改良するためには、細胞周期特異的細胞毒性薬剤か
らの幹細胞の保護が望ましいであろうということが提案されている。WO89/
10133には、幹細胞阻害剤が開示されており、癌の治療における該阻害剤の
使用が記載されている。化学療法を行っている間、該阻害剤を患者に投与して幹
細胞を保護することができる。
MIPI−αとしても知られる幹細胞阻害剤(SCI)は、大型の自己凝集体
を形成し、分子量がSCI/MIPI−α単量体の濃度に依存する、約8kDの
ペプチドである(グラハム(Graham)ら,1990年,ネイチャー(Nature)第
344巻:442頁;ウォルプ(Wolpe)およびセラミ(Cerami),1989年
,FASEB J,第3巻:2656頁)。SCI/MIPI−αは、PBSの
ごとき生理学的緩衝液中0.1mg/mlにおいて、生の状態で凝集した場合の
分子量が約100kDであることがわかっている。SCI/MIPI−αを約2
0〜100ng/mlまたはそれ以下にまで希釈すると、この蛋白は凝集しなく
なることがわかっている。
ヒト・SCI/MIPI−αは、我々によりクローン化された(グラハム(Gr
aham)ら(1992年),グロウス・ファクターズ(Growth Factors)第7巻:
151〜160頁)。そのcDNAも、ナカオ(Nakao)ら(1990年,モレ
キュラー・アンド・セル・バイオロジー(Mol.Cell.Biol.)第10巻:3646
〜3658頁)によりクローン化され、LD78βと呼ばれている。非常に
類似した配列を有する変種cDNAであるLD78αも見いだされている。それ
は、わずか4個のアミノ酸残基が異なるだけである。我々によってクローン化さ
れたヒトの該因子のcDNAおよび蛋白配列を配列番号:1に示す。最初の27
個のアミノ酸はリーダー配列である。成熟蛋白は、残基28(Ala)から開始
する。ナカオらにより見いだされた変種のアミノ酸配列を配列番号:3に示す。
該蛋白のリーダー配列はアミノ酸1個だけ短く、よって、成熟蛋白は残基27(
Ala)から開始する。我々が研究したネズミ・相同体の配列も知られており、
非常に類似したものである。それは、例えばグラハム(Garham)らの文献(19
94年,ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー(J.Biol.Chem.)第
269巻:4974〜4978頁)において見いだされる。
単量体のSCI/MIPI−αは、インビトロおよびインビボにおける幹細胞
の増殖を阻害することにおいて、その凝集形態よりも活性があることが報告され
ている(マンテル(Mantel)ら,1993年,PNAS第90巻:2232頁)
。ヒトの治療におけるSCI/MIPI−αの使用に際しては、活性の観点から
でなく、信頼性があり、再生産可能な処方を提供するために、単量体蛋白を投与
することが望ましいであろう。しかしながら、単量体蛋白を提供するために調製
されるSCI/MIPI−αの低い濃度が実用にはあまりに低すぎるであろう。
驚くべきことに、我々は、実質的に生の状態の蛋白の活性を保持しているが、
それと同様の大型の凝集体を形成しないSCI/MIPI−α変種を得ることが
可能であることを見いだした。これらの変種は、生の状態のSCI/MIPI−
αよりも何倍も高い濃度において、単量体または小型の集塊(例えば、二量体ま
たは四量体)として安定である。よって、生の状態のSCI/MIPI−αに匹
敵する活性を有するそれらの変種については、インビボにおいてそれらは単位重
量あたり高い活性を有する可能性がある。
したがって、本発明は、生の状態の形態とは異なる少なくとも1個のアミノ酸
の変化を含み、有意には凝集しないが実質的に変化のない幹細胞阻害活性を保持
している幹細胞阻害剤蛋白を提供する。該蛋白は、全長の幹細胞阻害剤またはリ
ーダー配列を欠く成熟しプロセッシングされた形態のいずれからなっていてもよ
い。
さらに本発明は、医薬上許容される担体または希釈剤ならびに所望により他の
治療成分と混合された本発明幹細胞阻害剤からなる医薬組成物を提供する。担体
は、処方中の他の成分と適合し、それを投与される者に有害でないという意味で
「許容される」ものでなくてはならない。
処方は、非経口(皮下、筋肉内、静脈内、腹腔内、皮内、鞘内およひ硬膜外を
含む)投与に適する処方を包含する。便利には、処方を1回分の剤型として提供
することができ、処方を製薬の分野においてよく知られたすべての方法によって
製造することができる。かかる方法は、1種またはそれ以上の補助的成分を構成
する担体と活性成分を混合する工程を包含する。一般的には、活性成分を液体担
体と均一かつ十分に混合することにより処方を製造する。
非経口投与に適した処方は、抗酸化剤、緩衝剤、抗細菌剤ならびに処方を対象
の血液と等張にする溶質を含有用していてもよい水性ならびに非水性滅菌注射用
溶液;および懸濁促進剤および増粘剤を含有していてもよい水性ならびに非水性
滅菌懸濁液、さらには化合物を血液成分または1つもしくはそれ以上の器官に送
達するように設計されたリポソームまたは他の微粒子系を包含する。適当な液体
担体は、pH7ないし8の間、例えば7.4のリン酸緩衝化セイラインを包含す
る。処方を1回分または何回分かの容器、例えば、密封アンプルおよびバイアル
に入れて提供してもよく、さらに、使用直前に滅菌担体、例えば、注射用水の添
加のみを必要とする凍結乾燥状態で貯蔵してもよい。
好ましい1回分の処方は、活性成分の1日分の用量、1日分を何回分かに分け
た用量、もしくはその適当なフラクションを含有する処方である。
好ましくは、本発明SCI/MIPI−1α蛋白処方は0.05ないし5mg
/ml、例えば0.1ないし1.0mg/mlの蛋白を含有する。我々は、当業
者による簡単な滴定によりどのような変種の最大溶解度でも決定できるが、本発
明変種の溶解度は一様でないということを見いだしている。
さらに本発明は、ヒトまたは動物の身体の治療方法において使用される、かか
る蛋白および組成物を提供する。
さらに本発明は、対象に有効量の本発明蛋白または組成物を投与することによ
る、分裂中または細胞周期を進行中の幹細胞を殺傷しうる因子に曝露されている
対象の治療方法を提供する。
化学療法中、または化学療法を行った後、本発明蛋白または組成物で対象を治
療してもよい。後者の場合においては、通常、体内から化学療法薬剤が除去され
るに十分な期間をおいてからこの治療が行われる。
本発明治療方法を、固形腫瘍または白血病の治療に用いてもよい。白血病の治
療の場合には、患者が治療を受けている間、体内から取り出した患者の骨髄試料
を治療することができる。本発明組成物の蛋白の存在下において癌細胞を骨髄か
ら除去し、次いで、治療された骨髄を患者に再導入する。
本発明変種蛋白の用量は、治療すべき症状の性質および患者の状態を考慮して
、最終的には医師の裁量による。変種蛋白の有効用量は、約10μg/kg体重
ないし約5mg/kg体重であり、例えば、約50ないし約1000μg/kg
、例えば約500μg/kgであってもよい。
我々はさらに、エクスビボ(ex vivo)でサイトカインにより誘発される幹細
胞の増加に関する実験において、SCI/MIPI−αが始原造血細胞の増加を
促進する働きをしうることを見いだした。かくして、患者から取り出した幹細胞
集団をエクスビボにおいて増加させる方法に本発明変種蛋白を用いることもでき
る。その場合、同一患者または別の患者に再導入する前に、かかる幹細胞を、そ
の増殖および数の増加が可能な条件下において増殖因子および本発明変種蛋白と
接触させる。かかる方法を骨髄移植法に用いて、提供者から得られる限られた数
の初発細胞を移植の前に増加させることができ、あるいは治療の前に患者から骨
髄試料を取り出し、治療後に再導入するある種の療法においてかかる方法を用い
ることもできる。かかる療法は、白血病の治療、または骨髄への損傷が生じうる
固形腫瘍をはじめとする他の腫瘍の治療を包含する。適切な活性を生じさせるに
必要な変種蛋白の濃度は、約1ないし約100ng/ml、例えば、約10ない
し50ng/mlであろう。
本発明蛋白または組成物を、幹細胞の増殖により引き起こされる疾患、例えば
乾癬の治療に用いてもよい。
好ましくは、本発明蛋白は、例えば1個またはそれ以上の荷電アミノ酸の置換
による生の状態の蛋白とは異なる少なくとも1つの変化であって、蛋白上の1つ
またはそれ以上の電荷の消失を引き起こす変化を有する蛋白である。
該変化は、欠失または置換もしくは挿入の結果であってもよい。欠失または挿
入の場合、生の状態の蛋白と同様の構造を保持するためには塩基1個だけの欠失
または挿入が一般的に好ましい。しかしながら、これ以上、例えば2、3、4、
5個またはそれ以上のアミノ酸の欠失または挿入が可能である。置換の場合、A
spのAsnへの置換、またはGluのGlnへの置換のごとき保存的置換が好
ましい。
さらに、その幹細胞阻害活性を保持しているが、凝集しにくい傾向を有する生
の状態の蛋白のフラグメントも本発明の範囲内である。
好ましくは、蛋白の変化はC末端、例えばその最後の20個またはその最後の
10個のアミノ酸におけるものである。これにはC末端の欠失が包含されてもよ
い。
生の状態の幹細胞阻害蛋白に対する1つ以上の変化があってもよい。例えば、
2、3、4または5つの変化があってもよい。
変更されてもよいMIPIの他の好ましい領域は、配列番号:1のアミノ酸6
8と71との間の推定上のヘパリン結合領域である。我々は、実験により、そし
てこの配列を既知のヘパリン結合領域と比較することにより、MIPIのこの部
分がヘパリン結合活性を有すると結論した。かくして、本発明により変化されて
もよい適当なアミノ酸は、68(Lys)、69(Arg)および71(Arg
)のうちの1個、2個または3個を包含する。所望ならば、上記MIPI蛋白の
C末端領域に対する変化とともに、かかる変化があってもよい。
本発明の好ましい幹細胞阻害蛋白は、配列番号:2または配列番号:3のヒト
・蛋白に基づく蛋白である。かかる蛋白の成熟形態、すなわち残基28以降も好
ましい。
配列番号:2または配列番号:3において変更されうる特定のアミノ酸は、正
に荷電したいずれかの残基、例えばLysまたはArgおよび/または負に荷電
したいずれかの残基、例えばAspまたはGluである。よって、変更されても
よい配列番号:2の残基は、29(Asp)、41(Arg)、50(Asp)
、53(Glu)、60(Lys)、68(Lys)、69(Arg)、71(
Arg)、76(Asp)、79(Glu)、80(Glu)、84(Lys)
、87(Asp)または90(Glu)を包含する。それらの位置に対する変化
は上記のごときものであってもよい。
あってもよい変化の組み合わせは、幹細胞阻害蛋白の最終的な2、3、4、5
または6個の荷電残基の変化を包含する。ヒト・蛋白の場合、この変化は、位置
90および/または位置76、79、80、84または88のうちの1個または
それ以上の位置における変化を除き、生の状態の蛋白に相当する蛋白を生じる。
好ましくは、すべての変化はアミノ酸1個だけの置換である。好ましくは、すべ
てのかかる置換は保存的変化である。
本発明蛋白を、当該分野で使用可能なすべての手段により製造することができ
る。下記実施例において、我々は、ネズミ・SCI cDNAのPCRプライマ
ーを用いる部位特異的突然変異法を行い、次いで、ベクター中のその修飾cDN
Aを宿主細胞において発現させて蛋白を得ることにより、修飾された幹細胞抑制
蛋白を製造した。自体公知の蛋白精製法を用いて蛋白を回収することができる。
類似の方法を用いてヒトまたは他の霊長類のSCIを製造してもよい。例えば、
WO89/10133を参照することにより、あるいは出版された文献を参照す
ることにより、ネズミ・cDNAを得てもよい。さらにヒト・cDNAを、出版
された文献を参照することにより得てもよく、また、配列番号:1のすべてまた
は一部分に基づくプローブを用いてクローニングを行って、SCI RNAを発
現する細胞から作成されたcDNAライブラリー中のSCI cDNAを同定す
ることもできる。
したがって、さらに本発明は、
(i)SCI蛋白のアミノ酸配列において変化を起こさせる少なくとも1つの変
化を導入するためにSCI蛋白をコードしているDNA配列を修飾し;
(ii)ベクター中でプロモーターに作動可能に連結された該DNAを、該プロモ
ーターに適合する宿主細胞中で発現させ;次いで、
(iii)該蛋白を回収する
からなる本発明蛋白の製造方法を提供する:
上述した、あるいは実施例で説明する部位特異的突然変異法によりDNAを修
飾して、そのアミノ酸配列において挿入、欠失または置換を行ってもよい。
ベクターは、1個またはそれ以上の選択可能なマーカー遺伝子、例えば、細菌
プラスミドの場合にはアンピシリン遺伝子を、哺乳動物ベクターにはネオマイシ
ン耐性遺伝子を有していてもよい。
本発明のさらなる具体例は、上記のごとく修飾された配列番号:1のDNAを
はじめとする上記のごとく得られたDNAの複製および発現のためのベクターで
形質転換またはトランスフェクションされた宿主細胞を提供する。細胞は、ベク
ターに適合するように選択され、例えば、細菌、酵母、昆虫または哺乳動物細胞
であってよい。
さらに本発明は、本発明ペプチドに対するモノクローナルまたはポリクローナ
ル抗体であって、生の状態のSCIに対する変化を含んでいるエピトープに指向
される抗体を提供する。さらに本発明は、かかるモノクローナルまたはポリクロ
ーナル抗体の製造方法を提供する。蛋白またはそのペプチドフラグメントを免疫
原として用いる慣用的なハイブリドーマ法により、モノクローナル抗体を製造し
てもよい。宿主動物、例えば、ラットまたはウサギに本発明ペプチドを接種し、
次いで、免疫血清を回収することがらなる慣用的手段により、ポリクローナル抗
体を製造することもできる。
いずれの場合にも、抗体を生成させた生の状態のSCIおよび変化したSCI
を用いて変化したエピトープを認識する抗体をスクリーニングし、次いで、変化
したSCIのみを認識する抗体を同定することにより、変化したエピトープを認
識する抗体を同定することができる。
以下の実施例は本発明を説明する。実施例1
図1は、ネズミ・SCI/MIPI−αを図式的に示したものであり、荷電ア
ミノ酸の位置を示してある。蛋白をコードしているcDNAに対するプライマー
を野生型5’プライマーとともに用いて一連の変化した蛋白(1)〜(3)を製
造した。変化した蛋白はすべて保存的変化、すなわちグルタミン酸のグルタミン
への変化および/またはアスパラギン酸のアスパラギンへの変化を有していた。
用いたプライマーは以下のとおり:
変種1:
この配列はネズミ・MIPI−α蛋白のC末端VQEYITDLELNA(配列
番号:5)をVQEYITDLQLNA(配列番号:6)へと変化させる。
変種2:
この配列は、配列番号:5をVQEYITNLQLNA(配列番号:8)へと変
化させる。
変種3:
この配列は、配列番号:5をVQQYITNLQLNA(配列番号:10)へと
変化させる。
変化したcDNA分子を融合蛋白発現ベクター中に連結し、変化した蛋白を得
た。クロマトグラフィー法および各分子量を推定することにより、3種の変化し
た蛋白とともに生の状態の蛋白を分析した。
推定分子量は以下のとおり:
生の状態の蛋白 100〜150kD
蛋白(1) 35kD
蛋白(2) 18kD
蛋白(3) 8kD
よって、生の状態のMIPI−αが凝集蛋白として存在する条件下では、蛋白
(1)は四量体として存在し、蛋白(2)は二量体として存在し、蛋白(3)は
単量体として存在すると思われる。
標準的方法(プラグネル(Pragnell)ら,ブラッド(blood),1988年,
第72巻:196頁およびロリモア(Lorimore)ら,1990年,リューケミア
・リサーチ(Leukaemia Research)第14巻:481頁)を用いて、上記蛋白の
生物学的活性を評価し、生物学的に活性があることがわかった。実施例2
以下の配列:
および
を用いて2種の3’(カルボキシ末端)プライマーを合成した。
BamHI認識部位に下線を付してある。
配列番号:11のプライマーは、配列番号:1のアミノ酸83から93までを
コードしているが、位置84のリジン(84(Lys))がグルタミン(Gln
)へ、88(Asp)がAsnへ、90(Glu)がGlnへと変化している。
配列番号:12のプライマーは、配列番号:1のアミノ酸78から93までを
コードしているが、上記の配列番号:11について説明した3つの変化のほかに
、80(Glu)のGlnへの変化を有している。
上記変化を含んでいるヒト蛋白の変種を製造するために、上記各プライマーを
、配列番号:1のアミノ酸28〜35をコードしている配列番号:13
で示されるアミノ末端プライマーとともに用いる。NcoI認識部位に下線を付
してある。これは、ネズミ・SCI/MIPI−1蛋白の開始部分に対応する。
プライマーをPCRに用いて、上記変化を有する変種の全長クローンを得、変
種クローンを発現ベクター中に導入して本発明の凝集していない変種蛋白を得る
。
上記と同様の方法で変種の活性を試験する。実施例3
ネズミ・MIPI−α蛋白の中央部をコードしている内部プライマーを設計し
た。該内部プライマーは、図1(a)に示す3番目と4番目のシステイン残基間
の正に荷電した3つの残基のうち2つを点突然変異させる変化を有していた。該
プライマーの配列は
であり、ネズミ蛋白の配列: FLTKRNRQIC(配列番号:15)をFL
TNSNRQIC(配列番号:16)へと変化させる。
このプライマーおよび野生型アミノ末端プライマーを用い、さらに相補的プラ
イマーを野生型カルボキシ末端プライマーとともに用いて、変異誘発を2つに分
けて行った。次いで、該2つの反応生成物を混合し、野生型アミノおよびカルボ
キシ末端プライマーを用いて全長分子を製造した。その変種の活性も試験する。
配列表
(1)一般的情報:
(i)出願人:
(A)名称:キャンサー・リサーチ・キャンペーン・テクノロジー・リミテ
ッド(Cancer Research Campaign Technology Limited)
(B)通り名:ケンブリッジ・ハウス(Cambridge House)6−10
(C)都市名:ロンドン
(E)国名:イギリス
(F)郵便番号(ZIP):NW1 4JL
(i)出願人
(A)名称:グレアム,ジェラード(Graham,Gerard)
(B)通り名:ビートソン・ラボラトリーズ,ガースキューブ・エステイト
(Beatson Laboratories,Garscube Estate)
(C)都市名:グラスゴー
(E)国名:イギリス
(F)郵便番号(ZIP):G61 1BD
(i)出願人:
(A)名称:プラグネル,イアン(Pragnell,Ian)
(B)通り名:ビートソン・ラボラトリーズ,ガースキューブ・エステイト
(Beatson Laboratories,Garscube Estate)
(C)都市名:グラスゴー
(E)国名:イギリス
(F)郵便番号(ZIP):G61 1BD
(ii)発明の名称:幹細胞阻害剤
(iii)配列の数:16
(iv)コンピューター・リーダブル・フォーム:
(A)媒体タイプ:フロッピーディスク
(B)コンピューター:IBM PCコンパチブル
(C)オペレーティングシステム:PC−DOS/MS−DOS
(D)ソフトウェア:パテントイン・リリース#1.0,
バージョン#1.25(EPO)
(v)現在の出願データ
出願番号:
(2)配列番号:1に関する情報:
(i)配列の特徴:
(A)長さ:282塩基対
(B)タイプ:核酸
(C)鎖の数:2本
(D)トポロジー:直鎖状
(ii)分子の形態:cDNA
(ix)特徴
(A)特徴を表す記号:CDS
(B)位置:1..282
(xi)配列の記載:配列番号:1:
(2)配列番号:2に関する情報:
(i)配列の特徴:
(A)長さ:93アミノ酸
(B)タイプ:アミノ酸
(D)トポロジー:直鎖状
(ii)分子の形態:蛋白
(xi)配列の記載:配列番号:2:
(2)配列番号:3に関する情報:
(i)配列の特徴:
(A)長さ:92アミノ酸
(B)タイプ:アミノ酸
(D)トポロジー:直鎖状
(ii)分子の形態:蛋白
(xi)配列の記載:配列番号:3:
(2)配列番号:4に関する情報:
(i)配列の特徴:
(A)長さ:29塩基対
(B)タイプ:核酸
(C)鎖の数:1本
(D)トポロジー:直鎖状
(ii)分子の形態:cDNA
(xi)配列の記載:配列番号:4:
(2)配列番号:5に関する情報:
(i)配列の特徴:
(A)長さ:12アミノ酸
(B)タイプ:アミノ酸
(C)鎖の数:1本
(D)トポロジー:直鎖状
(ii)分子の形態:ペプチド
(xi)配列の記載:配列番号:5:
(2)配列番号:6に関する情報:
(i)配列の特徴:
(A)長さ:12アミノ酸
(B)タイプ:アミノ酸
(C)鎖の数:1本
(D)トポロジー:直鎖状
(ii)分子の形態:ペプチド
(xi)配列の記載:配列番号:6:
(2)配列番号:7に関する情報
(i)配列の特徴:
(A)長さ:35塩基対
(B)タイプ:核酸
(C)鎖の数:1本
(D)トポロジー:直鎖状
(ii)分子の形態:cDNA
(xi)配列の記載:配列番号:7:
(2)配列番号:8に関する情報:
(i)配列の特徴:
(A)長さ:12アミノ酸
(B)タイプ:アミノ酸
(C)鎖の数:1本
(D)トポロジー:直鎖状
(ii)分子の形態:ペプチド
(xi)配列の記載:配列番号:8:
(2)配列番号:9に関する情報:
(i)配列の特徴:
(A)長さ:47塩基対
(B)タイプ:核酸
(C)鎖の数:1本
(D)トポロジー;直鎖状
(ii)分子の形態:cDNA
(xi)配列の記載:配列番号:9:
(2)配列番号:10に関する情報:
(i)配列の特徴:
(A)長さ:12アミノ酸
(B)タイプ:アミノ酸
(C)鎖の数:1本
(D)トポロジー:直鎖状
(ii)分子の形態:ペプチド
(xi)配列の記載:配列番号:10:
(2)配列番号:11に関する情報:
(i)配列の特徴:
(A)長さ:51塩基対
(B)タイプ:核酸
(C)鎖の数:1本
(D)トポロジー:直鎖状
(ii)分子の形態:cDNA
(xi)配列の記載:配列番号:11:
(2)配列番号:12に関する情報:
(i)配列の特徴:
(A)長さ:63塩基対
(B)タイプ:核酸
(C)鎖の数:1本
(D)トポロジー:直鎖状
(ii)分子の形態:cDNA
(xi)配列の記載:配列番号:12:
(2)配列番号:13に関する情報:
(i)配列の特徴:
(A)長さ:31塩基対
(B)タイプ:核酸
(C)鎖の数:1本
(D)トポロジー:直鎖状
(ii)分子の形態:cDNA
(xi)配列の記載:配列番号:13:
(2)配列番号:14に関する情報:
(i)配列の特徴:
(A)長さ:30塩基対
(B)タイプ:核酸
(C)鎖の数:1本
(D)トポロジー:直鎖状
(ii)分子の形態:cDNA
(xi)配列の記載:配列番号:14:
(2)配列番号:15に関する情報:
(i)配列の特徴:
(A)長さ:10アミノ酸
(B)タイプ:アミノ酸
(C)鎖の数:1本
(D)トポロジー:直鎖状
(ii)分子の形態:ペプチド
(xi)配列の記載:配列番号:15:
(2)配列番号:16に関する情報:
(i)配列の特徴:
(A)長さ:10アミノ酸
(B)タイプ:アミノ酸
(C)鎖の数:1本
(D)トポロジー:直鎖状
(ii)分子の形態:ペプチド
(xi)配列の記載:配列番号:16:
─────────────────────────────────────────────────────
フロントページの続き
(72)発明者 グレアム,ジェラード
イギリス国グラスゴー・ジー61・1ビーデ
ィー、ベアーズデン、ガースキューブ・エ
ステート、キャンサー・リサーチ・キャン
ペーン・ビートソン・ラボラトリーズ、ビ
ートソン・インスティテュート・フォー・
キャンサー・リサーチ(番地の表示なし)
(72)発明者 プラグネル,イアン
イギリス国グラスゴー・ジー61・1ビーデ
ィー、ベアーズデン、ガースキューブ・エ
ステート、キャンサー・リサーチ・キャン
ペーン・ビートソン・ラボラトリーズ、ビ
ートソン・インスティテュート・フォー・
キャンサー・リサーチ(番地の表示なし)
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 1.生の状態の形態とは異なる少なくとも1個のアミノ酸の変化を含み、有意 には凝集しないが、実質的に変化のない幹細胞阻害活性を保持している幹細胞阻 害剤(SCI)蛋白。 2.生の状態の蛋白が凝集体として存在する条件下で、四量体、二量体または 単量体として存在する請求項1記載の蛋白。 3.変化がアミノ酸置換である請求項1または2記載の蛋白。 4.アミノ酸置換が荷電アミノ酸の消失を引き起こすものである請求項3記載 の蛋白。 5.置換が保存的置換である請求項3または4記載の蛋白。 6.置換がAspからAsn、またはGluからGlnへの置換である請求項 5記載の蛋白。 7.成熟した形態の幹細胞阻害剤である請求項1ないし6のいずれか1項に記 載の蛋白。 8.蛋白の生の状態の形態がヒト・幹細胞阻害剤である請求項1ないし7のい ずれか1項に記載の蛋白。 9.アミノ酸の変化が、29(Asp)、41(Arg)、50(Asp)、 53(Glu)、60(Lys)、68(Lys)、69(Arg)、71(A rg)、76(Asp)、79(Glu)、80(Glu)、84(Lys)、 87(Asp)または90(Glu)のうちの1つまたはそれ以上におけるもの である請求項8記載の蛋白。 10.2または3個のアミノ酸の変化を有する上記請求項のいずれか1項に記 載の蛋白。 11.担体または希釈剤と混合された請求項1ないし10のいずれか1項に記 載の蛋白からなる医薬組成物。 12.ヒト・または動物の身体の治療方法に使用する、請求項1ないし10の いずれか1項に記載の蛋白または請求項11記載の組成物。 13.対象に有効量の請求項1ないし10のいずれか1項において定義される 蛋白または請求項11記載の組成物を投与することによる、分裂中または細胞周 期を進行中の幹細胞を殺傷しうる因子に曝露されている対象の治療方法。 14.(i)SCI蛋白のアミノ酸配列において変化を起こさせる少なくとも 1つの変化を導入するためにSCI蛋白をコードしているDNA配列を修飾し; (ii)ベクター中でプロモーターに作動可能に連結された該DNAを、該プロモ ーターに適合する宿主細胞中で発現させ;次いで、 (iii)該蛋白を回収する からなる、請求項1ないし10のいずれか1項において定義される蛋白の製造方 法。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
GB9308060.4 | 1993-04-19 | ||
GB939308060A GB9308060D0 (en) | 1993-04-19 | 1993-04-19 | Stem cell inhibitor |
PCT/GB1994/000822 WO1994024285A1 (en) | 1993-04-19 | 1994-04-19 | Macrophage inflammatory protein variants |
Related Child Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2004030857A Division JP3722819B2 (ja) | 1993-04-19 | 2004-02-06 | マクロファージ炎症蛋白変種 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPH08508884A true JPH08508884A (ja) | 1996-09-24 |
Family
ID=10734085
Family Applications (4)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP6522924A Withdrawn JPH08508884A (ja) | 1993-04-19 | 1994-04-19 | マクロファージ炎症蛋白変種 |
JP2004030857A Expired - Fee Related JP3722819B2 (ja) | 1993-04-19 | 2004-02-06 | マクロファージ炎症蛋白変種 |
JP2005197807A Withdrawn JP2005336202A (ja) | 1993-04-19 | 2005-07-06 | マクロファージ炎症蛋白変種 |
JP2007029147A Expired - Lifetime JP4319227B2 (ja) | 1993-04-19 | 2007-02-08 | マクロファージ炎症蛋白変種をコードするポリヌクレオチド |
Family Applications After (3)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2004030857A Expired - Fee Related JP3722819B2 (ja) | 1993-04-19 | 2004-02-06 | マクロファージ炎症蛋白変種 |
JP2005197807A Withdrawn JP2005336202A (ja) | 1993-04-19 | 2005-07-06 | マクロファージ炎症蛋白変種 |
JP2007029147A Expired - Lifetime JP4319227B2 (ja) | 1993-04-19 | 2007-02-08 | マクロファージ炎症蛋白変種をコードするポリヌクレオチド |
Country Status (5)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US5936067A (ja) |
EP (1) | EP0696321A1 (ja) |
JP (4) | JPH08508884A (ja) |
GB (1) | GB9308060D0 (ja) |
WO (1) | WO1994024285A1 (ja) |
Families Citing this family (22)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6150328A (en) * | 1986-07-01 | 2000-11-21 | Genetics Institute, Inc. | BMP products |
DE69233022T2 (de) | 1991-11-04 | 2004-02-12 | Genetics Institute, LLC, Cambridge | Rekombinante knochenmorphogenetische protein heterodimere, zusammensetzungen und verfahren zur verwendung |
US6291206B1 (en) * | 1993-09-17 | 2001-09-18 | Genetics Institute, Inc. | BMP receptor proteins |
ES2255059T3 (es) * | 1993-12-07 | 2006-06-16 | Genetics Institute, Llc | Bmp-12, bmp-13 y composiciones suyas inductoras de tendon. |
US6451562B1 (en) | 1993-12-22 | 2002-09-17 | Human Genome Sciences, Inc. | Polypeptides encoding myeloid progenitor inhibitory factor-1 (MPIF-1) polynucleotides |
US6391589B1 (en) | 1994-08-23 | 2002-05-21 | Human Genome Sciences, Inc. | Human chemokine beta-10 mutant polypeptides |
US5605817A (en) * | 1995-01-19 | 1997-02-25 | Incyte Pharmaceuticals, Inc. | DNA encoding chemokine expressed in fetal spleen |
US5874211A (en) * | 1995-04-13 | 1999-02-23 | Incyte Pharmaceuticals, Inc. | Chemokine expressed in eosinophils |
EP0869812B1 (en) * | 1995-11-30 | 2004-03-24 | THE GOVERNMENT OF THE UNITED STATES OF AMERICA, as represented by THE SECRETARY, DEPARTMENT OF HEALTH AND HUMAN SERVICES | C-c chemokines that inhibit retrovirus infection |
WO1997029125A1 (en) * | 1996-02-09 | 1997-08-14 | Schering Corporation | Mammalian dendritic cell chemokine reagents |
EP0972043A1 (en) * | 1996-09-25 | 2000-01-19 | British Biotech Pharmaceuticals Limited | Human rantes mutants incapable of aggregate formation |
EP0848012A1 (de) * | 1996-12-13 | 1998-06-17 | Roche Diagnostics GmbH | Verwendung von Polypeptiden zur Behandlung von Thrombozytopenien |
WO2000028035A1 (en) * | 1998-11-10 | 2000-05-18 | Human Genome Sciences Inc. | CHEMOKINE β-7 |
EP1141295A4 (en) * | 1999-01-08 | 2002-09-18 | Human Genome Sciences Inc | MUTANTS OF HUMAN CHEMOKIN BETA-10 POLYPEPTIDES |
US6727224B1 (en) * | 1999-02-01 | 2004-04-27 | Genetics Institute, Llc. | Methods and compositions for healing and repair of articular cartilage |
US20030082233A1 (en) * | 2000-12-01 | 2003-05-01 | Lyons Karen M. | Method and composition for modulating bone growth |
WO2002099037A2 (en) * | 2001-06-01 | 2002-12-12 | Wyeth | Compositions and methods for systemic administration of sequences encoding bone morphogenetic proteins |
TWI267378B (en) * | 2001-06-08 | 2006-12-01 | Wyeth Corp | Calcium phosphate delivery vehicles for osteoinductive proteins |
TW200638946A (en) * | 2002-05-17 | 2006-11-16 | Wyeth Corp | Injectable solid hyaluronic acid carriers for delivery of osteogenic proteins |
KR20060133961A (ko) | 2003-09-12 | 2006-12-27 | 와이어쓰 | 골형성 단백질 전달용의 주사 가능한 인산칼슘 고형 로드및 페이스트 |
WO2006081379A1 (en) * | 2005-01-26 | 2006-08-03 | Wyeth | Use of sfrps as markers of bmp activity |
BRPI0609504A2 (pt) * | 2005-03-30 | 2010-04-13 | Wyeth Corp | métodos para estimular o crescimento capilar administrando proteìnas morfogenéticas ósseas (bmps) |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO1991005451A1 (de) * | 1989-10-04 | 1991-04-18 | Robert Bosch Gmbh | Gehäuse für eine elektronische schaltung |
JPH07502404A (ja) * | 1991-12-23 | 1995-03-16 | ブリティッシュ バイオ−テクノロジー リミテッド | 幹細胞阻害タンパク質 |
Family Cites Families (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
ES2076378T5 (es) * | 1989-09-25 | 1999-10-16 | Genetics Inst | Metodo para la inhibicion del desarrollo de celulas de tallo. |
EP0548214B1 (en) * | 1990-09-14 | 1999-03-10 | Chiron Corporation | EXPRESSION OF MACROPHAGE INDUCIBLE PROTEINS (MIPs) IN YEAST CELLS |
US5556767A (en) * | 1993-12-22 | 1996-09-17 | Human Genome Sciences, Inc. | Polynucleotide encoding macrophage inflammatory protein γ |
-
1993
- 1993-04-19 GB GB939308060A patent/GB9308060D0/en active Pending
-
1994
- 1994-04-19 WO PCT/GB1994/000822 patent/WO1994024285A1/en not_active Application Discontinuation
- 1994-04-19 EP EP94912648A patent/EP0696321A1/en not_active Withdrawn
- 1994-04-19 US US08/535,116 patent/US5936067A/en not_active Expired - Lifetime
- 1994-04-19 JP JP6522924A patent/JPH08508884A/ja not_active Withdrawn
-
1998
- 1998-09-11 US US09/151,450 patent/US6558925B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2004
- 2004-02-06 JP JP2004030857A patent/JP3722819B2/ja not_active Expired - Fee Related
-
2005
- 2005-07-06 JP JP2005197807A patent/JP2005336202A/ja not_active Withdrawn
-
2007
- 2007-02-08 JP JP2007029147A patent/JP4319227B2/ja not_active Expired - Lifetime
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO1991005451A1 (de) * | 1989-10-04 | 1991-04-18 | Robert Bosch Gmbh | Gehäuse für eine elektronische schaltung |
JPH07502404A (ja) * | 1991-12-23 | 1995-03-16 | ブリティッシュ バイオ−テクノロジー リミテッド | 幹細胞阻害タンパク質 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JP2007181465A (ja) | 2007-07-19 |
JP2005336202A (ja) | 2005-12-08 |
US6558925B2 (en) | 2003-05-06 |
US20010010935A1 (en) | 2001-08-02 |
JP4319227B2 (ja) | 2009-08-26 |
GB9308060D0 (en) | 1993-06-02 |
EP0696321A1 (en) | 1996-02-14 |
WO1994024285A1 (en) | 1994-10-27 |
US5936067A (en) | 1999-08-10 |
JP3722819B2 (ja) | 2005-11-30 |
JP2004203890A (ja) | 2004-07-22 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP4319227B2 (ja) | マクロファージ炎症蛋白変種をコードするポリヌクレオチド | |
WO1993009799A1 (en) | Suppression of megakaryocytopoiesis by macrophage inflammatory proteins | |
JP2005523682A (ja) | 血小板新生活性を有するペプチド及び関連化合物 | |
JPH07188294A (ja) | 新規なポリペプチド、その製造方法、そのポリペプチドをコードするdna、そのdnaからなるベクター、そのベクターで形質転換された宿主細胞、そのポリペプチドの抗体、およびそのポリペプチドまたは抗体を含有する薬学的組成物 | |
JP5036546B2 (ja) | 胸腺特異的タンパク質 | |
JP2002526073A (ja) | 新規のヒト生長分化因子のコード配列、そのdna配列によりコードされるポリペプチド、およびこれらの製造方法。 | |
KR20150124955A (ko) | 사람 성장 호르몬 유사체를 사용한 소아 성장 호르몬 결핍증의 치료 방법 | |
US6447766B1 (en) | Method of mobilizing hematopoietic stem cells | |
BG107214A (bg) | Пептид, модулиращ тромбопоетиновия рецептор | |
WO1993001827A1 (en) | Osteoclast growth regulatory factor | |
US5408041A (en) | Process of purifying antler-derived bone growth factors | |
JPH10501813A (ja) | 腫瘍処置のための組成物および方法 | |
KR20060003853A (ko) | 에리트로포이에틴 내의 t-세포 에피토프 | |
AU682581B2 (en) | Compositions and methods using unbound MPL receptor for stimulating platelet production | |
JP2636864B2 (ja) | 免疫グロブリンeに対するポリペプチド競争体 | |
JP4808316B2 (ja) | 多能性造血幹細胞の動員を刺激するためのヒト成長ホルモン | |
EP0333517A2 (en) | Method and agent for inhibiting the binding of human polymorphonuclear leukocytes to endothelium and compositions therefor | |
TW202038997A (zh) | 胜肽之血中動態改善方法 | |
JP2000125888A (ja) | シアロアドヘシンファミリ―メンバ――3 | |
EP1033997B1 (en) | Method of mobilizing hematopoietic stem cells | |
EP1252897A1 (en) | Drugs for gene therapy | |
WO1993011778A1 (en) | Bifunctional antithrombotic molecules and antithrombotic polypeptides | |
EP0539414A1 (en) | Stable and bioactive modified somatotropins | |
TWI327149B (en) | Peptides and related compounds having thrombopoietic activity | |
JPH08333400A (ja) | 抗血栓活性を有する融合蛋白質及びその製法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20040206 |
|
A911 | Transfer to examiner for re-examination before appeal (zenchi) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A911 Effective date: 20040406 |
|
A912 | Re-examination (zenchi) completed and case transferred to appeal board |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A912 Effective date: 20040422 |
|
A761 | Written withdrawal of application |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A761 Effective date: 20050706 |