KR20150124955A

KR20150124955A - 사람 성장 호르몬 유사체를 사용한 소아 성장 호르몬 결핍증의 치료 방법

Info

Publication number: KR20150124955A
Application number: KR1020157023667A
Authority: KR
Inventors: 제프리 엘 클리랜드; 조지 엠 브라이트; 에릭 험프리스
Original assignee: 아뮤닉스 오퍼레이팅 인코포레이티드
Priority date: 2013-03-11
Filing date: 2014-03-10
Publication date: 2015-11-06
Also published as: EA201591529A1; PH12015502063A1; JP2017101074A; BR112015022257A2; CL2015002456A1; CN105209055A; AU2014249258A1; US20160158321A1; IL240392A0; EP2968451A4; CA2900949A1; HK1216617A1; JP2016514132A; WO2014164568A1; MX2015012175A; SG11201506732YA; JP2019056013A; BR112015022257A8; EP2968451A1

Abstract

본 발명은 소아 시험대상자용 소아 성장 호르몬 결핍증(PGHD) 치료요법에 관한 것이다. 당해 치료요법은 PGHD를 지닌 소아 환자에게 사람 성장 호르몬-XTEN(hGH-XTEN) 융합 단백질을 치료학적 유효량으로 매주, 매 격주, 1개월당 2회, 매 3주, 또는 매달 투여함을 포함한다. 당해 치료요법은 동일한 기간에 걸쳐 XTEN에 연결되지 않은 h호 매일 주사로 달성된 높이 속도와 비교하여 열악하지 않다.

Description

사람 성장 호르몬 유사체를 사용한 소아 성장 호르몬 결핍증의 치료 방법{TREATMENT OF PEDIATRIC GROWTH HORMONE DEFICIENCY WITH HUMAN GROWTH HORMONE ANALOGUES}

발명의 배경

사람 성장 호르몬(hGH)은 전형적으로 수면 동안 수분 내지 수시간 지속되는 간헐적인 박동으로서 사람 하수체 전엽으로부터 천연적으로 분비된다. hGH 분비의 속도 및 정도는 노화와 함께 감소되며 일반적으로 건강한 영양섭취가 잘된 어린이에게서 사춘기 때에 최대가 된다. hGH는 STAT(신호 변환기 및 전사 활성화제), MAPK(유사분열물질-활성화된 단백질 키나제) 및 PI3K(포스포이노시티드-3 키나제) 경로를 포함하는 신호전달 공정을 개시하는 hGH 수용체에 결합한다. 인슐린-유사 성장 인자-I (IGF-I) 유전자 발현은 hGH 수용체로부터 활성화되어 순환기내로 IGF-I의 분비를 생성한다. IGF-I은 인슐린-유사 성장 인자 결합 단백질-3(IGFBP-3) 및 산 불안정한 소단위(ALS)와 함께 복합체를 형성한다. IGFBP-3 및 ALS 발현 둘 다는 또한 hGH 수용체 활성화에 의해 조절된다.

hGH의 발현 또는 분비의 결여로부터 생성되고 hGH 수용체에서의 결함에 의해 유발되지 않은 성장 호르몬 결핍증(GHD)을 지닌 어린이에 있어서, rhGH의 매일 주사를 사용한 대체 치료요법은 흔히 정상에 가까운 성장 및 발달을 촉진하기 위해 처방된다. 새로운 골(bone)은, 사춘기 이후 성장 판이 융합될 때까지 hGH 및 IGF-I에 대한 반응시 골단부에서 형성되어 선형 성장을 생성한다. 매일 rhGH 투여는 비-GHD 어린이에서 hGH의 정상의 내인성 박동을 모사하지 않지만, 11cm/yr의 치료시 전형적인 첫해 성장률로 성장에 있어서의 유의적인 증가를 생성한다. 펌프를 사용한 rhGH의 연속 주입의 임상 연구는 매일 rhGH 주사로 달성된 것과 비교가능한 성장 속도 및 IGF-I 수준을 입증하였다[참조:

등 J. Clin Endocrinol Metab. 70(6), 1616-23 (1990); Laursen, T. 등 J Clin Endocrinol Metab. 80(8), 2410-8 (1995); Tauber, M. 등 J Clin Endocrinol Metab. 76(5), 1135-9 (1993)]. 따라서, 연속적이고, 또한 박동성인, rhGH의 투여가 효과적이다.

매일의 rhGH 치료요법의 안전성은 GHD 어린이 및 성인 둘 다에서 연구되어 왔다. 일부 과체중 또는 비만 환자에서, 증가하는 절식 및 식후 인슐린 수준에 대한 경향성이 관찰되어 왔다. 일반적으로 잘 견딘다고 해도, 매일의 rhGH 치료요법은 약한 내지 중간 정도의 두통, 관절통, 오심, 구토 및 주사 반응을 유발할 수 있다.

다른 것들은 다양한 서방성 GH 제제에서 보고되어 왔다[참조: Cook DM, 등 2002. J Clin Endocrinol Metab 87(10):4508-4514; Biller BM, 등 2011. J Clin Endocrinol Metab 96(6):1718-1726; Peter F. 등, 2012. J Clin Endocrinol Metab 97(2):400-407; Fares F. 등; 2010. Endocrinology 151(9):4410-4417; Sondergaard E, 등 2011. J Clin Endocrinol Metab 96(3):681-688; de Schepper J 등 2011. European Journal of Endocrinology 165(3):401-409; Bidlingmaier M, 등 2006. J Clin Endocrinol Metab 91(8):2926-2930]. 그러나, 대체 GH 치료제, 용량, 및 치료 섭생(regimen)에 대한 요구가 남아있다.

VRS-317은 GHD를 지닌 성인 및 소아 GHD를 지닌 어린이에 대한 장기간 교체 치료요법에 대한 발달에 있어서 연구용의 장기간-작용하는 rhGH이다. VRS-317은, 감소된 투여 빈도(연당 12회로 적은 것 대 365회 이하의 주사)로 치료 유착을 증가시킴으로써 전체적인 치료 결과를 개선시킬 수 있다는 기대로 매달 1회 투여까지 달성하도록 설계되었다. VRS-317은 천연의 hGH 서열의 N- 및 C-말단에 연장된 재조합체 폴리펩타이드(XTEN) 아미노산 서열을 유전적으로 융합시킴으로써 rhGH에 대한 돌연변이없이 달성된 수용체 결합에 있어서의 감소를 통해 수용체 매개된 청소율을 최소화하기 위해 설계된 rhGH 융합 단백질이었다[참조: Cleland 등 2012, Journal of Pharmaceutical Sciences. 101(8):2744-2754, Epub 2012 Jun 7].

발명의 요약

본 발명은 어린이에서 소아 성장 호르몬 결핍증("PGHD") 치료요법에 대한 개선된 치료 섭생에 관한 것이다. 특히, 본 발명은 하나 이상의 연장된 폴리펩타이드(XTEN)에 융합된 사람 성장 호르몬(이후 "hGH-XTEN"으로 언급된 융합 단백질)을 포함하는 융합 단백질의 조성물의 일시(bolus) 투여량 투여를 위한 방법에 관한 것이다. 따라서, 하나의 측면에서, 본 발명은 hGH-XTEN 융합 단백질을 사용한 사람 PGHD를 지닌 소아 환자의 치료 방법에 관한 것이다.

하나의 측면에서, 본 발명은 PGHD 환자에게 사람 성장 호르몬-XTEN (hGH-XTEN) 융합 단백질의 투여량을 투여함으로써 소아 환자에서 사람 소아 성장 호르몬 결핍증(PGHD)을 치료하는 방법을 제공한다. 다른 구현예에서, hGH-XTEN 융합 단백질은, 서열 번호: 1에 대해 서열 동일성이 적어도 약 90%인 아미노산 서열을 포함한다. 하나의 다른 구현예에서, 투여량은 일시 투여량이다. 하나의 구현예에서, hGH-XTEN의 일시 투여량은 치료학적으로 유효한 체중 조절된 일시 투여량이다. 다른 구현예에서, hGH-XTEN의 일시 투여량은 약 0.80mg/kg 내지 약 6.3mg/kg이다. 다른 구현예에서, hGH-XTEN의 일시 투여량은 약 0.80mg/kg 내지 약 7.0mg/kg이다.

다른 구현예에서, hGH-XTEN의 일시 투여량은 매주, 격주, 매달 2회(즉, 1개월당 2회 발생), 매 3주, 또는 매달 투여된다. 다른 구현예에서, hGH-XTEN의 일시 투여량의 투여는 매달이다. 바람직한 구현예에서, hGH-XTEN의 일시 투여량의 투여는 매주이다. 바람직한 구현예에서, hGH-XTEN의 일시 투여량의 투여는 매달 2회이다. 다른 바람직한 구현예에서, hGH-XTEN의 일시 투여량의 투여는 매 3주이다. 추가의 구현예에서, hGH-XTEN의 일시 투여량은 피하 투여된다.

추가의 구현예에서, 사람 소아 환자는 일시 투여량의 hGH-XTEN의 투여 후, 혈청 IGF-I 표준 편차 점수(SDS)가 약 -2.0 내지 약 2.0이다. 다른 구현예에서, 사람 소아 환자는 일시 투여량의 hGH-XTEN의 첫 번째, 또는 두 번째, 또는 세 번째, 또는 네 번째 일시 투여량 후, 혈청 IGF-I 표준 편차 점수(SDS)가 약 -2.0 내지 약 2.0이다. 다른 구현예에서, 소아 환자는 일시 투여량의 투여 후 상기 혈청 IGF-I SDS를 나타내며, 여기서 IGF-I SDS는 약 -2.0 이상, 약 -1.5 이상, 약 -1.0 이상, 약 -0.5 이상, 약 0 이상, 약 0.5 이상, 약 1.0 이상, 및 약 1.5 이상으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 다른 구현예에서, 소아 환자는 일시 투여량의 투여 후 상기 혈청 IGF-I SDS를 나타내며, 여기서 IGF-I SDS는 약 -1.5 내지 약 2.0 이상, 약 -1.0 내지 약 2.0 이상, 약 -0.5 내지 약 2.0 이상, 약 0 내지 약 2.0 이상, 약 0.5 내지 약 2.0 이상, 약 1.0 내지 약 2.0 이상, 및 약 1.5 내지 약 2.0 이상으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 다른 구현예에서, 소아 환자는 일시 투여량의 투여 후 상기 혈청 IGF-I SDS를 나타내며, 여기서 IGF-I SDS는 약 -1.0 내지 약 2.0 이상, 약 0 내지 약 2.0 이상, 및 약 1.0 내지 약 2.0 이상으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 다른 구현예에서, 소아 환자는 일시 투여량의 투여 후 상기 혈청 IGF-I SDS를 나타내며, 여기서 투여는 매주, 격주, 3주마다, 또는 매달이다. 다른 구현예에서, 투여는 매주, 매 격주, 매달 2회, 매 3주, 또는 매달이다. 추가의 구현예에서, 투여는 매달 2회, 또는 매달이다. 다른 구현예에서, 일시 투여량은, 투여 후 소아 환자의 혈청 IGF-I SDS를 약 -2.0 내지 약 2.0로 적어도 약 7일, 적어도 약 8일, 적어도 약 9일, 적어도 약 10일, 적어도 약 11일, 적어도 약 12일, 적어도 약 13일, 적어도 약 14일, 적어도 약 15일, 적어도 약 16일, 적어도 약 17일, 적어도 약 18일, 적어도 약 19일, 적어도 약 20일, 적어도 약 21일, 적어도 약 22일, 적어도 약 23일, 적어도 약 24일, 적어도 약 25일, 적어도 약 26일, 적어도 약 27일, 적어도 약 28일, 적어도 약 29일, 적어도 약 30일, 또는 적어도 약 1개월 동안 유지하는데 효과적이다. 다른 구현예에서, 일시 투여량은, 투여 후 소아 환자의 혈청 IGF-I SDS를 약 -2.0 내지 약 2.0로 적어도 약 14일, 적어도 약 21일, 또는 적어도 약 30일 동안 유지하는데 효과적이다. 다른 구현예에서, 일시 투여량은 소아 환자의 혈청 IGF-I SDS를 약 -2.0 내지 약 2.0에서 투여 후 적어도 약 14일, 또는 적어도 약 30일 동안 유지하는데 효과적이다. 다른 구현예에서, 사람 소아 환자는, hGH-XTEN의 첫 번째, 또는 두 번째, 또는 세 번째, 또는 네 번째 일시 투여량 투여 후, 혈청 IGF-I 표준 편차 점수(SDS)가 약 -2.0 내지 약 2.0이다.

다른 구현예에서, 일시 투여량은, 투여 후 소아 환자의 혈청 IGF-I SDS 기준선 혈청 IGF-I 표준 편차 점수(SDS)를 적어도 1.0으로 적어도 약 7일, 적어도 약 8일, 적어도 약 9일, 적어도 약 10일, 적어도 약 11일, 적어도 약 12일, 적어도 약 13일, 적어도 약 14일, 적어도 약 15일, 적어도 약 16일, 적어도 약 17일, 적어도 약 18일, 적어도 약 19일, 적어도 약 20일, 적어도 약 21일, 적어도 약 22일, 적어도 약 23일, 적어도 약 24일, 적어도 약 25일, 적어도 약 26일, 적어도 약 27일, 적어도 약 28일, 적어도 약 29일, 적어도 약 30일, 또는 적어도 약 1개월 동안 유지시키는데 효과적이다. 다른 구현예에서, 일시 투여량은, 투여 후 소아 환자의 혈청 IGF-I SDS 기준선 혈청 IGF-I 표준 편차 점수(SDS)를 적어도 1.0으로 적어도 약 14일, 적어도 약 21일, 또는 적어도 약 30일 동안 유지시키는데 효과적이다. 추가의 구현예에서, 일시 투여량은, 투여 후 소아 환자의 혈청 IGF-I SDS 기준선 혈청 IGF-I 표준 편차 점수(SDS)를 적어도 1.0으로 적어도 약 14일, 또는 적어도 약 30일 동안 유지시키는데 효과적이다. 다른 구현예에서, 일시 투여량은, hGH-XTEN의 첫 번째, 또는 두 번째, 또는 세 번째, 또는 네 번째 일시 투여량 투여 후 소아 환자의 혈청 IGF-I SDS 기준선 혈청 IGF-I 표준 편차 점수(SDS)를 적어도 1.0으로 유지시키는데 효과적이다.

다른 구현예에서, 소아 환자는, 적어도 두 번째, 또는 세 번째, 또는 네 번째 일시 투여량의 투여 후 상기 혈청 IGF-I 표준 편차 점수(SDS)를 나타낸다.

다른 구현예에서, 본 발명은, hGH-XTEN 융합 단백질을 소아 환자에게 투여함으로써 소아 환자에서 사람 소아 성장 호르몬 결핍증(PGHD)을 치료하는 방법을 제공하며, 여기서 hGH-XTEN은 소아 환자에서 적어도 약 6cm/yr, 또는 적어도 약 7cm/yr, 또는 적어도 약 8cm/yr, 또는 적어도 약 9cm/yr, 또는 적어도 약 10cm/yr, 또는 적어도 약 11cm/yr, 또는 적어도 12cm/yr와 동일한 높이 속도를 달성하는데 효과적이다. 다른 구현예에서, hGH-XTEN의 일시 투여량은 약 7cm/yr 내지 약 12cm/yr와 동일한 높이 속도를 달성하는데 효과적이다. 다른 구현예에서, hGH-XTEN의 일시 투여량은 소아 환자에서 약 8cm/yr 내지 11cm/yr와 동일한 높이 속도를 달성하는데 효과적이다. 단락의 상기한 구현예에서, 높이 속도는 소아 환자에서 투여 후 적어도 3개월 후, 적어도 6개월 후, 적어도 9개월 후, 또는 적어도 12개월 후 달성된다. 다른 구현예에서, 달성된 높이 속도는 첫해 높이 속도이다.

여전히 다른 구현예에서, 본 발명은 hGH-XTEN 융합 단백질을 소아 환자에게 투여함으로써 소아 환자에서 사람 소아 성장 호르몬 결핍증(PGHD)을 치료하는 방법을 제공하며, 여기서 당해 방법은 동일한 기간에 걸쳐 XTEN에 연결되지 않은 hGH의 매일 주사를 사용하여 달성한 것과 비교하여 소아 환자에서 높이 속도를 달성하는데 열악하지 않다. 하나의 구현예에서, 투여된 hGH-XTEN 융합 단백질은 몰 기준으로, XTEN에 연결되지 않은 hGH의 등량과 비교가능하며 소아 환자에게 투여된다. 하나의 구현예에서, 등량은 적어도 약 25, 적어도 약 30, 적어도 약 33, 적어도 약 35, 적어도 약 37, 또는 적어도 약 40 μg의 hGH/kg/일의 hGH 투여량으로부터 선택된다.

여전히 다른 구현예에서, 본 발명은 hGH-XTEN 융합 단백질을 소아 환자에게 투여함으로써 소아 환자에서 사람 소아 성장 호르몬 결핍증(PGHD)을 치료하는 방법을 제공하며, 여기서 당해 방법은 소아 환자의 높이 속도를 몰 기준으로 등량의 XTEN에 연결되지 않은 hGH의 매일 주사를 투여받은 소아 환자에서 달성된 높이 속도와 비교하여 적어도 약 10%, 적어도 약 20%, 또는 적어도 약 30% 내로, 비교가능한 투여 기간에 걸쳐 유지하는데 효과적이다. 하나의 구현예에서, 등량은 적어도 약 25, 적어도 약 30, 적어도 약 33, 적어도 약 35, 적어도 약 37, 또는 적어도 약 40 μg의 hGH/kg/일의 hGH 투여량으로부터 선택된다.

하나의 구현예에서, hGH-XTEN의 일시 투여량은 약 0.8mg/kg, 약 1.0mg/kg, 약 1.2mg/kg, 약 1.4mg/kg, 약 1.6mg/kg, 약 1.8mg/kg, 약 2.0mg/kg, 약 2.2mg/kg, 약 2.4mg/kg, 약 2.6mg/kg, 약 2.7mg/kg, 약 2.8mg/kg, 약 3mg/kg, 약 3.2mg/kg, 약 3.4mg/kg, 약 3.6mg/kg, 약 3.8mg/kg, 약 4.0mg/kg, 약 4.2mg/kg, 약 4.4mg/kg, 약 4.6mg/kg, 약 4.8mg/kg, 약 5.0mg/kg, 약 5.2mg/kg, 약 5.4mg/kg, 약 5.6mg/kg, 약 5.8mg/kg, 약 6.0mg/kg, 및 약 6.3mg/kg으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 다른 구현예에서, 일시 투여량은 약 0.8mg/kg 내지 약 2.0mg/kg이다. 다른 구현예에서, 일시 투여량은 약 2.0mg/kg 내지 약 4.0mg/kg이다. 다른 구현예에서, 일시 투여량은 약 4.0mg/kg 내지 약 6.0mg/kg이다. 다른 구현예에서, 일시 투여량은 약 6.0mg/kg 내지 약 7.0mg/kg이다. 다른 구현예에서, 일시 투여량은 약 0.8mg/kg 내지 약 1.5mg/kg이다. 다른 구현예에서, 일시 투여량은 약 1.8mg/kg 내지 약 3.2mg/kg이다. 다른 구현예에서, 일시 투여량은 약 3.5mg/kg 내지 약 6.3mg/kg이다.

다른 구현예에서, hGH-XTEN 융합 단백질은 서열 번호: 1의 아미노산 서열을 포함한다. 다른 구현예에서, hGH-XTEN 융합 단백질은 서열 번호: 1에 대해 적어도 약 91%, 또는 적어도 약 92%, 또는 적어도 약 93%, 또는 적어도 약 94%, 또는 적어도 약 95%, 또는 적어도 약 96%, 또는 적어도 약 97%, 또는 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99%의 서열 동일성(sequence identity)을 갖는다.

다른 측면에서, 본 발명은 사람 소아 성장 호르몬 결핍증(PGHD)을 지닌 사람 소아 환자에게 당해 환자의 혈청 IGF-I 표준 편차 점수 (SDS)를 특정 수준에서 유지시키기에 효과적인 투여량의 사람 성장 호르몬-XTEN(hGH-XTEN) 융합 단백질을 투여함으로써 사람 소아 환자에서 사람 소아 성장 호르몬 결핍증(PGHD)을 치료하는 방법을 제공한다. 하나의 구현예에서, 당해 방법은 서열 번호: 1에 대해 서열 동일성이 적어도 약 90%인 아미노산 서열을 지닌 hGH-XTEN 융합 단백질을 투여함을 포함한다. 다른 구현예에서, 투여량은 치료학적으로 유효한 체중 조절된 일시 투여량이다. 하나의 다른 구현예에서, 일시 투여량은 환자의 혈청 IGF-I 표준 편차 점수(SDS)를 약 -2.0 내지 약 2.0으로 유지하는데 효과적이다. 추가의 구현예에서, 일시 투여량은 일시 투여량의 투여 후 적어도 7일 동안 IGF-I SDS를 약 -2.0 내지 약 2.0으로 유지하는데 효과적이다. 다른 구현예에서, hGH-XTEN의 일시 투여량은 약 0.8 mg/kg 내지 약 6.3 mg/kg이다. 하나의 구현예에서, hGH-XTEN의 일시 투여량은 환자의 혈청 IGF-I SDS를 약 -2.0 내지 약 2.0에서 투여 후 적어도 약 7일, 적어도 약 8일, 적어도 약 9일, 적어도 약 10일, 적어도 약 11일, 적어도 약 12일, 적어도 약 13일, 적어도 약 14일, 적어도 약 15일, 적어도 약 16일, 적어도 약 17일, 적어도 약 18일, 적어도 약 19일, 적어도 약 20일, 적어도 약 21일, 적어도 약 22일, 적어도 약 23일, 적어도 약 24일, 적어도 약 25일, 적어도 약 26일, 적어도 약 27일, 적어도 약 28일, 적어도 약 29일, 적어도 약 30일, 또는 적어도 약 1개월 동안 유지하는데 효과적이다. 다른 구현예에서, 일시 투여량은 소아 환자의 혈청 IGF-I SDS를 약 -2.0 내지 약 2.0로 투여 후 적어도 약 14일, 적어도 약 21일, 또는 적어도 약 30일 동안 유지시키는데 효과적이다. 다른 구현예에서, 일시 투여량은 소아 환자의 혈청 IGF-I SDS를 약 -2.0 내지 약 2.0에서 투여 후 적어도 약 14일, 또는 적어도 약 30일 동안 유지하는데 효과적이다.

하나의 추가의 측면에서, 본 발명은 소아 일시 투여량의 hGH-XTEN 융합 단백질을 제공한다. 하나의 구현예에서, hGH-XTEN 융합 단백질은 서열 번호: 1에 대해 서열 동일성이 적어도 약 90%인 아미노산 서열을 포함한다. 다른 구현예에서, 일시 투여량은 치료학적으로 유효한 체중 조절된 일시 투여량이다. 하나의 다른 구현예에서, hGH-XTEN의 일시 투여량은 약 0.8mg/kg 내지 약 6.3mg/kg의 hGH-XTEN 융합 단백질을 포함한다. 다른 구현예에서, 일시 투여량은 요구되는 소아 환자에서 사람 소아 성장 호르몬 결핍증(PGHD)을 치료하는데 사용된다. 다른 구현예에서, hGH-XTEN 융합 단백질은 서열 번호: 1의 아미노산 서열을 포함한다. 하나의 구현예에서, 일시 투여량의 hGH-XTEN은 피하 투여용으로 제형화된다.

다른 측면에서, 본 발명은 (i) 사람 소아 환자에서 사람 소아 성장 호르몬 결핍증(PGHD)을 치료하는 방법에서 사용하거나; (ii) 소아 환자에서 PGHD의 치료용 의약의 제조시 사용하기 위한 hGH-XTEN 융합 단백질을 제공한다. 하나의 구현예에서, hGH-XTEN 융합 단백질은 서열 번호: 1에 대해 서열 동일성이 적어도 약 90%인 아미노산 서열을 포함한다. 추가의 구현예에서, 상기 방법은 일시 투여량의 hGH-XTEN 융합 단백질을 투여함을 포함한다. 다른 구현예에서, 상기 의약은 일시 투여량의 hGH-XTEN 융합 단백질을 포함한다. 하나의 다른 구현예에서, 일시 투여량은 hGH-XTEN 융합 단백질의 치료학적으로 효과적인 체중조절된 일시 투여량이다. 하나의 구현예에서, 일시 투여량은 약 0.8mg/kg 내지 약 6.3mg/kg이다. 다른 구현예에서, 일시 투여량은 매주, 격주, 매달 2회, 3주마다, 또는 매달 투여된다. 다른 구현예에서, 일시 투여량은 매달 매 2회, 또는 매달 투여된다. 하나의 추가의 구현예에서, hGH-XTEN 융합 단백질은 서열 번호: 1의 아미노산 서열을 포함한다. 다른 구현예에서, 일시 투여량은 피하 투여된다. 다른 구현예에서, 의약은 피하 투여용으로 제형화된다. 다른 구현예에서, 사람 소아 환자는, 혈청 IGF-I 표준 편차 점수(SDS)가 일시 투여량의 hGH-XTEN의 투여 후 약 -2.0 내지 약 2.0이다. 하나의 추가의 구현예에서, 소아 환자는 일시 투여량의 투여 후 상기 혈청 IGF-I SDS를 나타내며, 여기서 IGF-I SDS는 약 -2.0 이상, 약 -1.5 이상, 약 -1.0 이상, 약 -0.5 이상, 약 0 이상, 약 0.5 이상, 약 1.0 이상, 및 약 1.5 이상으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 하나의 구현예에서, 일시 투여량은 매주, 격주, 3주마다, 매달 2회 또는 매달 투여된다. 다른 구현예에서, 일시 투여량은 매달 2회, 또는 매달 투여된다. 다른 구현예에서, IGF-I SDS는 약 -1.5 이상, 약 -1.0 이상, 약 -0.5 이상, 약 0 이상, 약 0.5 이상, 약 1.0 이상, 및 약 1.5 이상으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 다른 구현예에서, IGF-I SDS는 약 -1.0 이상, 약 0 이상, 및 약 1.0 이상으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.

다른 구현예에서, hGH-XTEN 융합 단백질 투여는 매주, 격주, 매달 2회, 3주마다, 또는 매달이다. 다른 구현예에서, hGH-XTEN 융합 단백질 투여는 매달 2회, 또는 매달이다.

하나의 다른 측면에서, 본 발명은 소아 성장 호르몬 결핍증(PGHD)의 치료용 키트(kit)를 제공한다. 하나의 구현예에서, 상기 키트는 사람 성장 호르몬-XTEN(hGH-XTEN) 융합 단백질을 포함하는 약제학적 조성물을 보유하는 용기를 포함한다. 다른 구현예에서, hGH-XTEN 융합 단백질은, 서열 번호: 1에 대해 서열 동일성이 적어도 약 90%인 아미노산 서열을 포함한다. 하나의 다른 구현예에서, 상기 키트는 상기 용기와 연합된 포장 삽입물을 추가로 포함한다. 하나의 추가의 구현예에서, 상기 포장 삽입물은, 상기 조성물이 초기 투여량의 hGH-XTEN 융합 단백질을 투여함에 의한 소아 환자에서 소아 성장 호르몬 결핍증(PGHD)의 치료용임을 나타낸다. 다른 구현예에서, 상기 포장 삽입물은 다수의 후속적인 투여량의 hGH-XTEN 융합 단백질의 투여를 추가로 나타낸다. 하나의 다른 구현예에서, 초기 투여량은 약 0.8mg/kg 내지 약 6.3mg/kg이다. 추가의 구현예에서, hGH-XTEN 융합 단백질의 다수의 후속적인 투여량은 약 0.8mg/kg 내지 약 6.3mg/kg이다. 하나의 구현예에서, hGH-XTEN 융합 단백질의 투여량은 매주, 격주, 매달 2회, 3주마다, 또는 매달 투여된다. 다른 구현예에서, hGH-XTEN 융합 단백질의 투여량은 매달 2회, 또는 매달 투여된다.

다른 측면에서, 본 발명은 소아 환자에서 소아 성장 호르몬 결핍증(PGHD)의 치료를 위한 약제학적 요법에서 사용하기 위한 사람 성장 호르몬-XTEN (hGH-XTEN) 융합 단백질을 제공한다. 하나의 구현예에서, hGH-XTEN 융합 단백질은 서열 번호: 1에 대해 서열 동일성이 적어도 약 90%인 아미노산 서열을 포함한다. 다른 구현예에서, 약제학적 요법은 일시 투여량의 hGH-XTEN 융합 단백질을 소아 환자에게 투여하여 소아 환자를 치료함을 포함한다. 하나의 다른 구현예에서, 일시 투여량은 hGH-XTEN 융합 단백질의 치료학적으로 효과적인 체중조절된 일시 투여량이다. 하나의 구현예에서, 일시 투여량은 약 0.8mg/kg 내지 약 6.3mg/kg이다. 하나의 다른 구현예에서, 약제학적 요법은 소아 환자에서 IGF-I 표준 편차 점수(SDS)를 약 -2.0 내지 약 2.0으로 달성하는데 요구되는 hGH-XTEN 융합 단백질의 양을 결정하는 단계를 추가로 포함한다. 하나의 구현예에서, 소아 환자를 치료하기 위한 약제학적 요법은 약 0.8mg/kg 내지 약 6.3mg/kg의 초기 일시 투여량의 hGH-XTEN 융합 단백질 및 약 0.8mg/kg 내지 약 6.3mg/kg의 다수의 후속적인 일시 투여량의 hGH-XTEN 융합 단백질을 투여함을 포함한다. 다른 구현예에서, 일시 투여량은 매주, 격주, 매달 2회, 3주마다, 또는 매달 투여된다. 다른 구현예에서, 일시 투여량은 매달 2회, 또는 매달 투여된다.

참조 문헌의 편입

본 명세서에 언급된 모든 공보, 특허, 및 특허원은, 각각의 개개 공보, 특허, 또는 특허원이 참조로 혼입되는 것으로 구체적으로 및 개별적으로 나타내지 않는 한, 동일한 정도로 참조로 본원에 혼입된다.

도면의 간단한 설명

도 1은 hGH-XTEN 융합 단백질(hGH 서열은 밑줄쳐져 있고 굵은 활자체이다)에 대한 아미노산 서열(서열 번호1)을 제공한다.

도 2는 소아 환자에서 사람 성장 호르몬-XTEN (hGH-XTEN) 융합 단백질의 1b/2a 상 연구에 대한 설계를 요약한다.

도 3은 hGH-XTEN 융합 단백질 혈장 농도(ng/mL) 평균 값을 나타낸다.

도 4는 hGH-XTEN 융합 단백질 Cmax(ng/mL) 및 hGH-XTEN 융합 단백질 AUC(hr-ng/mL)를 나타낸다.

도 5는 IGF-I(평균 값)에 있어서 지속된 변화(기준선으로부터)를 입증한다.

도 6은, IGF-I 반응이 hGH-XTEN 융합 단백질의 투여량과 선형으로 관련되어 있음을 입증한다.

도 7은 소아 환자에서 사람 성장 호르몬-XTEN(hGH-XTEN) 융합 단백질의 제1b/2a 상 연구에 대한 설계를 요약한다. hGH-XTEN 융합 단백질은 재조합체 hGH (rhGH) 질량에 있어서 30일 동안 취한 5 내지 37μ과 동일하다.

도 8은 완료된 투여 그룹의 임상 특성을 나타내는 표이며; 수치는 평균(SD)이다.

도 9는 투여량 수준 그룹 1 내지 6에서 연구 약물과 가능하게, 가능성 있게 또는 명확하게 관련된 관련 부작용을 나타내는 표를 제공한다. 모든 관련된 AE는 경증이고(CTCAE 등급 1) 일시적이다. SAE 없음, 예측되지 않은 AE 없음, 환자 포기 없음, 지방이영양증 없음, 결절 없음

도 10은 hGH-XTEN 융합 단백질 혈장 농도(ng/mL) 평균 값(제1b 상으로부터의 예비 PK)을 나타낸다.

도 11은 hGH-XTEN 융합 단백질 Cmax(ng/mL) 및 hGH-XTEN 융합 단백질 AUC(hr-ng/mL) (투여량 비례성)을 나타낸다.

도 12a-b는 융합 단백질의 단일 투여량에 대한 IGF-I SDS 반응을 나타낸다.

도 13a-b는 매달 평균 IGF-I SDS(단일 투여량)에 있어서 기준선으로부터의 증가를 나타낸다. 평균 IGF-I SDS에 있어서의 증가는 투여량 증가와 함께 증가한다(p < 0.00001). 바람직한 매달 IGF-I 프로파일이 달성되었다.

도 14는 연령-조화된 역사적 대조군 및 VRS-317 치료된 환자에 대한 평균 연간으로 환산한 높이 속도를 나타낸다.

발명의 상세한 설명

본 발명의 구현예를 설명하기 전에, 이러한 구현예는 단지 예로서 제공되며, 본원에 기술된 발명의 구현예에 대한 다양한 대안이 본 발명을 실시하는데 사용될 수 있음이 이해되어야 한다. 다수의 변형, 변화, 및 치환은 본 발명에서 벗어나지 않고 당해 분야의 숙련가에게 이제 일어날 것이다.

달리 정의하지 않는 한, 본원에 사용된 모든 기술적 및 과학적 용어는, 본 발명이 속한 당해 분야의 통상의 기술자에 의해 일반적으로 이해되는 의미와 동일한 의미를 갖는다. 본원에 기술된 것과 유사하거나 동일한 방법 및 물질이 본 발명의 실시 또는 시험에 사용될 수 있다고 해도, 적합한 방법 및 물질이 하기 기술되어 있다. 상충되는 경우, 정의를 포함하는 특허 명세서가 조절할 것이다. 또한, 물질, 방법, 및 실시예는 단지 예시하기 위한 것이며 제한하는 것으로 의도되지 않는다. 다수의 변형, 변화, 및 치환은 본 발명에서 벗어나지 않고 당해 분야의 숙련가에게 이제 일어날 것이다.

정의

본원에 사용된 것으로서, 다음의 용어는 달리 정의되지 않는 한 이들에 속하는 것으로 고려된다.

명세서 및 특허청구범위에 사용된 것으로서, 단수형("a", "an" 및 "the")은, 내용에서 달리 명확히 나타내지 않는 한 복수 참조를 포함한다. 예를 들면, 용어 "세포"는 이의 혼합물을 포함하는, 다수의 세포를 포함한다.

용어 "폴리펩타이드", "펩타이드", 및 "단백질"은 본원에서 상호 교환 가능하게 사용되어 어떠한 길이의 아미노산의 중합체도 언급한다. 중합체는 선형 또는 측쇄일 수 있으며, 이는 변형된 아미노산을 포함할 수 있고, 비 아미노산에 의해 차단될 수 있다. 상기 용어는 또한 예를 들면, 이황화물 결합 형성, 글리코실화, 지질화, 아세틸화, 인산화, 또는 표지 성분과의 접합과 같은 어떠한 다른 조작에 의해 변형된 아미노산 중합체를 포함한다.

본원에 사용된 것으로서, 용어 "아미노산"은 글리신 및 D 또는 L 광학 이성체 둘 다, 및 아미노산 유사체 및 펩티도미메틱스를 포함하나, 이에 한정되지 않는 천연 및/또는 비천연 또는 합성 아미노산을 말한다. 표준 단일 문자 또는 3 문자 코드는 아미노산을 지정하기 위해 사용된다.

용어 "천연의 L-아미노산"은 글리신(G), 프롤린(P), 알라닌(A), 발린(V), 루이신(L), 이소루이신(I), 메티오닌(M), 시스테인(C), 페닐알라닌(F), 타이로신(Y), 트립토판(W), 히스티딘(H), 라이신(K), 아르기닌(R), 글루타민(Q), 아스파라긴(N), 글루탐산(E), 아스파르트산(D), 세린(S), 및 트레오닌(T)의 L 광학 이성체 형을 의미한다.

서열에 적용되고 본원에 사용된 것으로서, 용어 "비-천연적으로 존재하는"은 야생형 또는 포유동물에서 발견된 천연적으로 존재하는 서열에 대한 대응부분을 가지지 않거나, 이에 대해 상보성이 아니거나, 고도의 상동성을 가지지 않는 폴리펩타이드 또는 폴리뉴클레오타이드 서열을 의미한다. 예를 들면, 비-천연적으로 존재하는 폴리펩타이드 또는 단편은 적합하게 정렬되는 경우 천연의 서열과 비교하여 99%, 98%, 95%, 90%, 80%, 70%, 60%, 50% 이하 또는 심지어 미만의 아미노산 서열 동일성을 공유할 수 있다.

용어 "친수성" 및 "소수성"은 물질이 갖는 물과의 친수성 정도를 말한다. 친수성 물질은 물에 대해 강력한 친수성을 가지며, 물 속에 용해되거나, 물과 혼합되거나, 물에 의해 습윤되는 경향이 있는 반면, 소수성 물질은 물에 대한 친화성이 실질적으로 결여되어 있거나, 물을 격퇴하는 경향이 있고 물을 흡수하지 않으며 물 속에 용해되지 않거나, 물과 혼합되지 않거나 물에 의해 습윤되지 않는 경향이 있다. 아미노산은 이들의 소수성을 기준으로 하여 특성화될 수 있다. 다수의 규모가 개발되어 왔다. 예는 레비트, 엠(Levitt, M) 등에 의해 개발된 규모[참조: J Mol Biol (1976) 104:59, 이는 Hopp, TP, 등, Proc Natl Acad Sci U S A (1981) 78:3824에 나열되어 있다]이다. "친수성 아미노산"의 예에는 아르기닌, 라이신, 트레오닌, 알라닌, 아스파라긴, 및 글루타민이 있다. 특히 흥미로운 것은 친수성 아미노산 아스파르테이트, 글루타메이트, 및 세린, 및 글리신이다. "소수성 아미노산"의 예에는 트립토판, 타이로신, 페닐알라닌, 메티오닌, 루이신, 이소루이신, 및 발린이 있다.

"단편"은 치료학적 및/또는 생물학적 활성 중의 적어도 일부를 보유하는 천연의 생물학적으로 활성인 단백질의 트렁케이트된 형태(truncated form)이다. "변이체"는 생물학적으로 활성인 단백질의 치료학적 및/또는 생물학적 활성중의 적어도 일부를 보유한 천연의 생물학적으로 활성인 단백질에 대해 서열 상동성을 지닌 단백질이다. 예를 들면, 변이체 단백질은, 참조 생물학적으로 활성인 단백질과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 아미노산 서열 동일성을 공유할 수 있다. 본원에 사용된 것으로서, 용어 "생물학적으로 활성인 단백질 잔기"는 예를 들면, 부위 지시된 돌연변이유발, 삽입에 의해 고의적으로 변형되거나, 돌연변이를 통해 우연히 변형된 단백질을 포함한다.

"숙주 세포"는 대상 벡터에 대한 수용체일 수 있거나 수용체이었던 개개 세포 또는 세포 배양물을 포함한다. 숙주 세포는 단일 숙주 세포의 후대세포를 포함한다. 후대세포는 천연적으로, 우연히, 또는 의도적인 돌연변이로 인한 원래의 모 세포와 필수적으로 완전하게 동일(전체 DNA 상보체의 형태학적 또는 유전적으로)할 수 없다. 숙주 세포는 본 발명의 벡터를 사용하여 생체내에서 형질감염시킨 세포를 포함한다.

본원에 개재된 다양한 폴리펩타이드를 기술하는데 사용되는 경우 "분리된"은 이의 천연 환경의 성분으로부터 확인되어 분리되고/되거나 회수된 폴리펩타이드를 의미한다. 천연 환경의 오염 물질 성분은 폴리펩타이드에 대한 진단학적 또는 치료학적 용도를 전형적으로 방해할 수 있는 물질이며, 효소, 호르몬, 및 다른 단백질성 또는 비-단백질성 용질을 포함할 수 있다. 당해 분야의 숙련가에게 명백한 바와 같이, 비-천연적으로 발생하는 폴리뉴클레오타이드, 펩타이드, 폴리펩타이드, 단백질, 항체, 또는 이의 단편은 이의 천연적으로 발생하는 대응물로부터 이를 구별하기 위한 "분리"를 필요로 하지 않는다. 또한, "농축된", "분리된" 또는 "희석된" 폴리뉴클레오타이드, 펩타이드, 폴리펩타이드, 단백질, 항체, 또는 이의 단편은, 용적당 농도 또는 분자의 수가 이의 천연적으로 발생하는 대응물의 것보다 일반적으로 더 크다는 점에서 이의 천연적으로 발생하는 대응물과 구별된다. 일반적으로, 재조합 수단에 의해 제조되어 숙주 세포내에서 발현된 폴리펩타이드는 "분리된" 것으로 고려된다.

"분리된" 폴리뉴클레오타이드 또는 폴리펩타이드-암호화 핵산 또는 다른 폴리펩타이드-암호화 핵산은 폴리펩타이드-암호화 핵산의 천연 공급원과 원래 연관된 적어도 하나의 오염 물질 핵산 분자로부터 확인되어 분리된 핵산 분자이다. 분리된 폴리펩타이드-암호화 핵산 분자는, 이것이 천연에서 발견되는 형태 또는 설정 이외의 것이다. 따라서, 분리된 폴리펩타이드-암호화 핵산 분자는, 이것이 천연의 세포 속에서 존재하므로 특수한 폴리펩타이드-암호화 핵산 분자와 구별된다. 그러나, 분리된 폴리펩타이드-암호화 핵산 분자는 폴리펩타이드를 원래 발현하는 세포 속에 함유된 폴리펩타이드-암호화 핵산 분자를 포함하며, 여기서, 예를 들면, 핵산 분자는 염색체 내에 또는 천연의 세포와는 상이한 염색체외 위치에 존재한다.

"키메라" 단백질은 천연에 존재하는 서열이외의 서열 내에 상이한 위치에서의 영역을 포함하는 적어도 하나의 융합 폴리펩타이드를 함유한다. 상기 영역은 별도의 단백질 속에 일반적으로 존재하며 융합 폴리펩타이드 속에 함께 제공되거나; 이들은 동일한 단백질 속에 일반적으로 존재할 수 있지만 융합 폴리펩타이드 속에 새로운 정렬로 위치한다. 키메라 단백질은 예를 들면, 화학 합성에 의해, 또는 폴리뉴클레오타이드를 생성하여 해독함으로써 생성시킬 수 있으며, 여기서 펩타이드 영역은 바람직한 관계로 암호화된다.

"접합된", "연결된", "융합된" 및 "융합"은 본원에서 상호교환적으로 사용된다. 이들 용어는 화학적 접합 또는 재조합체 수단을 포함하는 어떠한 수단에 의해 2개 이상의 화학 성분 또는 성분들과 함께 연결됨을 말한다. 예를 들면, 프로모터 또는 인핸서(enhancer)는, 서열의 전사에 영향을 미치는 경우 암호화 서열에 작동적으로 연결된다. 일반적으로, "작동적으로 연결된"은, 연결되는 DNA 서열이 연속적으로, 및 판독 상으로 또는 프레임내(in-frame)에 존재함을 의미한다. "프레임-내 융합"은, 원래의 개방 판독 프레임(ORF)을 유지하는 방식으로 2개 이상의 ORF를 연결시켜 연속된 보다 긴 ORF를 형성하는 것을 말한다. 따라서, 생성되는 재조합체 융합 단백질은 원래의 ORF(당해 분절은 천연에서 일반적으로 이렇게 접합되어 있지 않다)에 의해 암호화된 폴리펩타이드에 상응하는 2개 이상의 분절을 함유하는 단일 단백질이다.

폴리펩타이드의 내용에서, "선형 서열" 또는 "서열"은, 서열 내에 서로 이웃하는 잔기가 폴리펩타이드의 주요 구조내에서 연속적인 아미노에서 카복실 말단 방향으로 폴리펩타이드내 아미노산의 순서이다. "하위서열"은 하나 또는 둘 다의 방향으로 추가의 잔기를 포함하는 것으로 알려진 폴리펩타이드 부분의 선형 서열이다.

"이종"은, 이것이 비교되는 실체의 나머지로부터 유전적으로 명백한 실체로부터 기원함을 의미한다. 예를 들면, 이의 천연의 암호화 서열로부터 제거되고 천연 서열 이외의 암호화 서열에 작동적으로 연결된, 글리신이 풍부한 서열은 이종의 글리신이 풍부한 서열이다. 폴리뉴클레오타이드, 폴리펩타이드에 적용된 것으로서, 용어 "이종"은, 폴리뉴클레오타이드 또는 폴리펩타이드가, 이것이 비교되는 실체의 나머지의 것으로부터 유전형적으로 명백한 실체로부터 기원함을 의미한다.

용어 "폴리뉴클레오타이드", "핵산", "뉴클레오타이드" 및 "올리고뉴클레오타이드"는 상호교환적으로 사용된다. 이들은 어떠한 길이의 뉴클레오타이드의 중합체 형태, 데옥시리보뉴클레오타이드 또는 리보뉴클레오타이드, 또는 이의 유사체를 말한다. 폴리뉴클레오타이드는 3-차원 구조 중 어느 것도 가질 수 있고, 공지되거나 공지되지 않은 어떠한 기능도 수행할 수 있다. 다음은 폴리뉴틀레오타이드의 비-제한적 예이다: 유전자 또는 유전자 단편의 암호화 또는 비-암호화 영역, 연결 분석으로부터 정의된 유전자 자리들(유전자 자리), 엑손, 인트론, 전령 RNA (mRNA), 전달 RNA, 리보소옴 RNA, 리보자임, cDNA, 재조합체 폴리뉴클레오타이드, 측쇄된 폴리뉴클레오타이드, 플라스미드, 벡터, 어떠한 서열의 분리된 DNA, 어떠한 서열의 분리된 RNA, 핵산 프로브, 및 프라이머. 폴리뉴클레오타이드는 메틸화된 뉴클레오타이드 및 뉴클레오타이드 유사체와 같은 변형된 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 존재하는 경우, 뉴클레오타이드 구조에 대한 변형은 중합체의 조립 전 또는 후에 부여될 수 있다. 뉴클레오타이드의 서열은 비-뉴클레오타이드 성분에 의해 차단될 수 있다. 폴리뉴클레오타이드는 중합 후에, 예를 들면, 표지 성분과의 접합에 의해서와 같이 추가로 변형될 수 있다.

용어 "폴리뉴클레오타이드의 상보체"는 참조 서열과 비교하여 상보성 염기 서열 및 역 배향을 지님으로써 이것이 참조 서열과 완전한 정확성으로 하이브리드화 할 수 있는 폴리뉴클레오타이드 분자를 나타낸다.

폴리뉴클레오타이드에 적용된 것으로서 "재조합체"는, 폴리뉴클레오타이드가 시험관내 클로닝, 제한 및/또는 연결 단계, 및 숙주 세포내에서 잠재적으로 발현될 수 있는 작제물을 생성하는 다른 과정의 다양한 조합의 생성물임을 의미한다.

용어 "유전자" 또는 "유전자 단편"은 본원에서 상호교환적으로 사용된다. 이들은 전사되어 해독된 후 특정한 단백질을 암호화할 수 있는 적어도 하나의 개방 판독 프레임을 함유하는 폴리뉴클레오타이드를 말한다. 유전자 또는 유전자 단편은, 폴리뉴클레오타이드가 전체 암호화 영역 또는 이의 분절을 포함할 수 있는 적어도 하나의 개방 판독 프레임을 함유하는 한, 게놈성 또는 cDNA일 수 있다. "융합 유전자"는 함께 연결된 적어도 2개의 이종 폴리뉴클레오타이드로 구성된 유전자이다.

"상동성" 또는 "동종"은 2개 이상의 폴리뉴클레오타이드 서열 또는 2개 이상의 폴리펩타이드 서열 사이의 서열 유사성 또는 상호교환능을 말한다. BestFit와 같은 프로그램을 사용하여 서열 동일성, 2개의 상이한 아미노산 서열 사이의 유사성 또는 상동성을 측정하는 경우, 디폴트 셋팅을 사용하거나, blosum45 또는 blosum80과 같은 적절한 점수매김 매트릭스를 선택하여 동일성, 유사성 또는 상동성 점수를 최적화할 수 있다. 바람직하게는, 상동성인 폴리뉴클레오타이드는 본원에 정의된 바와 같은 엄격한 조건(stringent condition) 하에 하이브리드화되는 것들이며 이들 서열에 대해 적어도 70%, 바람직하게는 적어도 80%, 보다 바람직하게는 적어도 90%, 보다 바람직하게는 95%, 보다 바람직하게는 97%, 보다 바람직하게는 98%, 및 심지어 보다 바람직하게는 99% 서열 동일성을 갖는다.

"연결"은 2개의 핵산 단편 또는 유전자 사이에 포스포디에스테르 결합을 형성하여 이들을 함께 연결시키는 공정을 말한다. DNA 단편 또는 유전자를 함께 연결시키기 위하여, DNA의 말단을 서로 양립성이도록 하여야만 한다. 일부 경우에, 말단은 엔도뉴클레아제 분해 후 직접 양립성일 것이다. 그러나, 엔도뉴클레아제 분해 후 일반적으로 생산된 시차를 둔 말단(staggered end)을 우선 전환시켜 이들을 연결을 위해 양립성이도록 하는 것이 필수적일 수 있다.

용어 "엄격한 조건" 또는 "엄격한 하이브리드화 조건"은, 폴리뉴클레오타이드가 이의 표적 서열에 대해 하이브리드화되어 다른 서열보다 검출가능하게 더 큰 정도(예를 들면, 배경보다 적어도 2배)가 되도록 할 참조 조건을 포함한다. 일반적으로, 하이브리드화의 스트링전시는, 세척 단계가 수행되는 온도 및 염 농도를 참조하여 부분적으로 발현된다. 전형적으로, 엄격한 조건은, 염 농도가 pH 7.0 내지 8.3에서 약 1.5M 미만의 Na 이온, 전형적으로 약 0.01 내지 1.0M의 Na 이온 농도(또는 다른 염)이고 온도가 짧은 폴리뉴클레오타이드 (예를 들면, 10 내지 50개 뉴클레오타이드)의 경우 적어도 약 30 ℃ 및 긴 폴리뉴클레오타이드 (예를 들면, 50개 이상의 뉴클레오타이드)의 경우 적어도 약 60 ℃인 것일 것이며 예를 들면, "엄격한 조건"은 37 ℃에서 50% 포름아미드, 1M NaCl, 1% SDS 속에서 하이브리드화, 각각 15분 동안 0.1×SSC/1% SDS 속에서 60 ℃ 내지 65 ℃로 3회 세척을 포함할 수 있다. 달리는, 약 65 ℃, 60 ℃, 55 ℃, 또는 42 ℃의 온도가 사용될 수 있다. SSC 농도는 약 0.1 내지 2×SSC에서 변할 수 있으며, SDS는 약 0.1%에서 존재한다. 이러한 세척 온도는 정의된 이온 강도 및 pH 에서 특이적인 서열에 대한 열 융점보다 낮은 약 5 ℃ 내지 20 ℃가 되도록 선택된다. Tm은, 50%의 표적 서열이 완벽하게 조화된 프로브로 하이브리드화되는 온도(정의된 이온 강도 및 pH 하에서)이다. Tm을 계산하기 위한 방정식 및 핵산 하이브리드화를 위한 조건은 잘 공지되어 있으며 문헌(참조: Sambrook, J. 등 (1989) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2nd ed., vol. 1-3, Cold Spring Harbor Press, Plainview N.Y.; specifically see volume 2 and chapter 9)에서 찾을 수 있다. 전형적으로, 차단 시약을 사용하여 비-특이적인 하이브리드화를 차단한다. 이러한 차단 시약은 예를 들면, 약 100-200 μ에서 공유되고 변성된 연어 정자 DNA를 포함한다. 약 35 내지 50% v/v의 농도에서 포름아미드와 같은 유기 용매를 RNA:DNA 하이브리드화와 같은 특수 환경하에 또한 사용할 수 있다. 이들 세척 조건에 대한 유용한 변화는 당해 분야의 통상의 기술자에게 용이하게 인식될 것이다.

폴리뉴클레오타이드 서열에 적용된 것으로서, 용어 "동일성 퍼센트" 및 "% 동일성"은 표준화된 알고리즘을 사용하여 정렬된 적어도 2개의 폴리뉴클레오타이드 서열 사이의 잔기 조화 퍼센트를 말한다. 이러한 알고리즘은 2개의 서열 사이의 정렬을 최적화하기 위하여 비교되는 서열 내에 갭(gap)을 표준화된 재생성 방식으로 삽입할 수 있으므로, 2개의 서열의 보다 의미있는 비교를 달성한다. 퍼센트 동일성은 전체 정의된 폴리뉴클레오타이드 서열의 길이에 따라 측정될 수 있거나, 보다 짧은 길이에 따라, 예를 들면, 보다 긴, 정의된 폴리뉴클레오타이드 서열로부터 취한 단편의 길이에 따라, 예를 들면, 적어도 45개, 적어도 60개, 적어도 90개, 적어도 120개, 적어도 150개, 적어도 210개 또는 적어도 450개의 연속된 잔기의 단편의 길이에 따라 측정할 수 있다. 이러한 길이는 단지 예시적이며, 표, 도면 또는 서열 목록에서 본원에 나타낸 서열에 뒷받침되는 어떠한 단편 길이도 사용하여 동일성 퍼센트가 측정될 수 있는 길이를 기술할 수 있음이 이해된다.

본원에 정의된 폴리펩타이드 서열과 관련하여, "아미노산 서열 동일성 퍼센트(%)"는 서열을 정렬하고 필요할 경우 갭을 도입시켜 최대의 서열 동일성 퍼센트를 달성하고 서열 동일성의 일부로서 어떠한 보존적 치환을 고려하지 않은 후, 제2의 참조 폴리펩타이드 서열의 아미노산 잔기와 동일한 문제의 서열내 아미노산 잔기의 퍼센트로서 정의된다. 아미노산 서열 동일성 퍼센트를 측정할 목적을 위한 정렬은 예를 들면, BLAST, BLAST-2, ALIGN 또는 메갈린(Megalign)(DNASTAR) 소프트웨어와 같은 공공 이용가능한 컴퓨터 소프트웨어를 사용하여, 당해 분야의 기술 내에 있는 다양한 방법으로 달성할 수 있다. 당해 분야의 기술자들은 비교하는 서열의 전체 길이에 걸쳐 최대 정렬을 달성하는데 요구되는 어떠한 알고리즘을 포함하는, 정렬을 측정하기 위한 적절한 매개변수를 측정할 수 있다. 동일성 퍼센트는 전체의 정의된 폴리펩타이드 서열의 길이에 따라 측정할 수 있거나, 보다 짧은길이에 따라, 예를 들면, 보다 큰, 정의된 폴리펩타이드 서열로부터 취한 단편, 예를 들면, 적어도 15, 적어도 20, 적어도 30, 적어도 40, 적어도 50, 적어도 70 또는 적어도 150개의 연속된 잔기의 단편의 길이에 따라 측정될 수 있다. 이러한 길이는 단지 예시적이며, 표, 도면 또는 서열 목록에서 본원에 나타낸 서열에 뒷받침되는 어떠한 단편 길이도 사용하여 동일성 퍼센트가 측정될 수 있는 길이를 기술할 수 있음이 이해된다.

폴리펩타이드의 내용에서 본원에 사용된 것으로서 용어 "비-반복성"은 펩타이드 또는 폴리펩타이드 서열내 내부 상동성의 결여 또는 제한된 정도를 말한다. 용어 "실질적으로 비-반복성"은 예를 들면, 동일한 아미노산 유형인 서열내 4개의 연속된 아미노산이 거의 존재하지 않거나 이의 예가 없거나, 폴리펩타이드가 10 미만의 소서열 점수(subsequence score)(아랫쪽에 정의됨)를 가지거나 N- 내지 C-말단으로부터 폴리펩타이드 서열을 구성하는 서열 모티프(motif)의 순서의 양식이 존재하지 않음을 의미할 수 있다. 폴리펩타이드의 내용에서 본원에 사용된 것으로서, 용어 "반복성"은 펩타이드 또는 폴리펩타이드 서열내 내부 상동성의 정도를 말한다. 대조적으로, "반복된" 서열은 짧은 아미노산 서열의 다수의 동일한 카피를 함유할 수 있다. 예를 들면, 목적한 폴리펩타이드 서열은 n-머(mer) 서열로 분리될 수 있으며 동일한 서열의 수가 계수될 수 있다. 고도의 반복성 서열은 동일한 서열의 거대 분획을 함유하는 반면 비-반복성 서열은 약간의 동일한 서열을 함유한다. 폴리펩타이드의 내용에서, 서열은 정의되거나 다양한 길이의 보다 짧은 서열, 또는 모티프의 다수의 카피를 함유할 수 있으며, 여기서 모티프 자체는 비-반복성 서열이어서, 완전한 길이의 폴리펩타이드가 실질적으로 비-반복성이 되도록 한다. 비-반복성이 측정되는 폴리펩타이드의 길이는 3개의 아미노산 내지 약 200개의 아미노산, 약 6개 내지 약 50개의 아미노산, 또는 약 9개 내지 약 14개의 아미노산으로 변할 수 있다. 폴리뉴클레오타이드 서열의 내용에서 사용된 "반복성"은 예를 들면, 제공된 길이의 동일한 뉴클레오타이드 서열의 빈도와 같은 서열내 내부 상동성의 정도를 말한다. 반복성은 예를 들면, 동일한 서열의 빈도를 분석함으로써 측정할 수 있다.

"벡터"는 삽입된 핵산 분자를 숙주 세포내로 및/또는 숙주 세포 사이에 전달하는, 적절한 숙주내에서, 바람직하게는 자가-복제하는 핵산 분자이다. 당해 용어는 DNA 또는 RNA를 세포내로 삽입시키기 위해 주로 작용하는 벡터, DNA 또는 RNA의 복제에 주로 작용하는 벡터의 복제, 및 DNA 또는 RNA의 전사 및/또는 해독을 위해 작용하는 발현 벡터를 포함한다. 또한 상기 기능 중 하나 이상을 제공하는 벡터가 포함된다. "발현 벡터"는 적절한 숙주 세포내로 도입되는 경우 폴리펩타이드(들)내로 전사되어 해독될 수 있는 폴리뉴클레오타이드이다. "발현 시스템"은 일반적으로 바람직한 발현 생성물을 생성하도록 작용할 수 있는 발현 벡터로 구성되는 적합한 숙주 세포를 내포한다.

폴리펩타이드에 적용시키는 경우, "혈청 분해 내성"은 혈청 또는 혈장 속의 프로테아제를 전형적으로 포함하는, 혈액 또는 이의 성분 속에서 분해를 견디는 폴리펩타이드의 능력을 말한다. 혈청 분해 내성은 단백질을 전형적으로, 일(예를 들면, 0.25, 0.5, 1, 2, 4, 8, 16일), 전형적으로 약 37 ℃의 범위에서 사람(또는 적절하게는 마우스, 랫트, 원숭이) 혈청 또는 혈장과 합하여 측정할 수 있다. 이들 시점에 대한 시료는 웨스턴 블롯 검정(Western blot assay)으로 수행할 수 있으며 단백질은 항체로 측정된다. 항체는 단백질 속에서 태그에 대해 존재할 수 있다. 단백질이 웨스턴 블롯에서 단일 밴드를 나타내는 경우, 단백질의 크기는 주입된 단백질의 크기와 동일하며, 이후 분해는 일어나지 않는다. 이러한 예시적인 방법에서, 웨스턴 블롯 또는 동일한 기술에 의해 판단된 것으로서, 단백질의 50%가 분해되는 시점은 단백질의 혈청 분해 반감기 또는 "혈청 반감기"이다.

본원에 사용된 것으로서 용어 "t1/2"은 ln(2)/K_el로서 계산된 말기 반감기를 의미한다. K_el는 로그 농도 대 시간 곡선의 말기 선형 비의 선형 회귀로 계산된 말기 제거율 상수이다. 반감기는 전형적으로 살아있는 유기체 속에서 침착된 투여된 물질의 양의 1/2이 정상의 생물학적 공정에 의해 대사되거나 제거되는데 필요한 시간을 말한다. 용어 "t1/2", "말기 반감기", "제거 반감기" 및 "순환하는 반감기"는 본원에서 상호교환적으로 사용된다.

"겉보기 분자량 인자(Apparent Molecular Weight Factor)" 또는 "겉보기 분자량"은 특수한 아미노산 서열에 의해 나타난 겉보기 분자량에 있어서의 상대적인 증가 또는 감소의 척도를 언급하는 관련된 용어이다. 겉보기 분자량은 크기 배제 크로마토그래피(SEC) 및 구형 단백질 표준물과 비교하여 유사한 방법을 사용하여 측정되며 "겉보기(apparent) kD" 단위로 측정된다. 겉보기 분자량 인자는 겉보기 분자량과 실제 분자량 사이의 비이며; 후자는 아미노산 조성물을 기준으로, 조성물내 아미노산의 각각의 유형의 계산된 분자량을 첨가함으로써 예측된다.

"유체역학적 반경" 또는 "스트로크 반경(Stokes radius)"은, 이것이 용액을 통해 이동하는 본체이며 용액의 점도에 의해 저항성이 되는 것으로 추정하여 측정된 용액 속의 분자의 유효 반경(nm 단위의 Rh)이다. 본 발명의 구현예에서, XTEN 융합 단백질의 유체역학적 반경 측정은 '겉보기 분자량 인자'와 관련되며, 이는 보다 직관적인 척도이다. 단백질의 "유체역학적 반경"은 수용액 속에서 확산 속도 및 거대분자의 겔 속에서 이주하는 이의 능력에 영향을 미친다. 단백질의 유체역학적 반경은 이의 분자량 뿐만 아니라 형태 및 압착성을 포함하는 이의 구조에 의해서도 측정된다. 유체역학적 반경을 측정하는 방법은 크기 배제 크로마토그래피(SEC)를 사용하는 것과 같이, 당해 분야에 잘 공지되어 있으며, 이는 미국 특허 제 6,406,632호 및 제7,294,513호에 기술되어 있다. 대부분의 단백질은 구형 구조이며, 이는, 단백질이 가장 작은 유체역학적 반경을 가질 수 있는 가장 압축된 3-차원 구조 단백질이다. 일부 단백질은 무작위적이고 개방된, 구조화되지 않거나, '선형' 구조를 채택하고 있으며 그 결과 유사한 분자량의 전형적인 구형 단백질과 비교하여 보다 큰 유체역학적 반경을 가진다.

"생리학적 조건"은 살아있는 숙주의 상태의 세트 및 살아있는 시험대상자의 상태를 모사하는 온도, 염 농도, pH를 포함하는, 시험관내 조건을 말한다. 시험관내 검정에서 사용하기 위한 생리학적으로 관련된 상태의 숙주는 확립되어 있다. 일반적으로, 생리학적 완충제는 생리학적 농도의 염을 함유하며 약 6.5 내지 약 7.8, 및 바람직하게는 약 7.0 내지 약 7.5 범위의 중성 pH로 조절된다. 다양한 생리학적 완충제가 문헌[참조: Sambrook 등 (1989)]에 나열되어 있다. 생리학적으로 관련된 온도는 약 25 ℃ 내지 약 38 ℃, 및 바람직하게는 약 35 ℃ 내지 약 37 ℃의 범위이다.

"반응성 그룹"은 제2의 반응성 그룹과 커플링될 수 있는 화학 구조이다. 반응성 그룹에 대한 예는 아미노 그룹, 카복실 그룹, 설프하이드릴 그룹, 하이드록실 그룹, 알데하이드 그룹, 아지드 그룹이다. 일부 반응성 그룹은 제2의 반응성 그룹과의 커플링을 촉진하기 위해 활성화될 수 있다. 활성화를 위한 비-제한적 예는 카복실 그룹과 카보디이미드의 반응, 카복실 그룹의 활성화된 에스테르로의 전환, 또는 카복실 그룹의 아지드 작용으로의 전환이다.

"조절된 방출제", "서방성 제제", "데포트 제형" 또는 "지연된 방출성 제제"는, 폴리펩타이드가 제제의 부재하에 투여되는 경우 방출 기간과 관련하여 본 발명의 폴리펩타이드의 방출 기간을 연장시킬 수 있는 제제를 말하기 위해 상호교환적으로 사용된다. 본 발명의 상이한 구현예는 상이한 치료학적 양을 생성하는, 상이한 방출 속도를 가질 수 있다.

용어 "항원", "표적 항원" 또는 "면역원"은 본원에서 상호교환적으로 사용되어 항체 단편 또는 항체 단편-계 치료제가 결합하거나 이에 대해 특이성을 갖는 구조 또는 결합 결정인자를 말한다.

본원에 사용된 것으로서 용어 "페이로드(payload)"는 생물학적 또는 치료학적 활성을 갖는 단백질 또는 펩타이드 서열: 소 분자의 약물분자구조에 대한 대응물을 말한다. 페이로드의 예는 사이토킨, 효소, 호르몬 및 혈액 및 성장 인자를 말하나, 이에 한정되지 않는다. 페이로드는 화학치료제, 항바이러스 화합물, 독소, 또는 조영제와 같은 유전적으로 융합되거나 화학적으로 접합된 잔기를 추가로 포함할 수 있다. 이들 접합된 잔기는 절단 가능하거나 절단이 불가능할 수 있는 링커를 통해 폴리펩타이드의 나머지에 접합될 수 있다.

본원에 사용된 것으로서, 용어 "길항제"는 본원에 개재된 천연의 폴리펩타이드의 생물학적 활성을 부분적으로 또는 완전히 차단하거나, 억제하거나, 중화시키는 어떠한 분자도 포함한다. 폴리펩타이드의 길항제를 확인하는 방법은 천연의 폴리펩타이드를 후보물 길항제 분자와 접촉시키고 천연의 폴리펩타이드와 일반적으로 관련된 하나 이상의 생물학적 활성에 있어서의 검출가능한 변화를 측정함을 포함할 수 있다. 본 발명의 내용에서, 길항제는 생물학적으로 활성인 단백질의 효과를 감소시키는 단백질, 핵산, 탄수화물, 항체 또는 어떠한 다른 분자로 포함할 수 있다.

용어 "효능제"는 광범위한 의미로 사용되며 본원에 개재된 천연의 폴리펩타이드의 생물학적 활성을 모사하는 어떠한 분자로 포함한다. 적합한 효능제 분자는 구체적으로 효능제 항체 또는 항체 단편, 천연의 폴리펩타이드의 단편 또는 아미노산 서열 변이체, 펩타이드, 소 유기 분자 등을 포함한다. 천연의 폴리펩타이드의 효능제를 확인하는 방법은 천연의 폴리펩타이드를 후보물 효능제 분자와 접촉시키는 단계 및 천연의 폴리펩타이드와 일반적으로 관련된 하나 이상의 생물학적 활성에 있어서 검출 가능한 변화를 측정하는 단계를 포함할 수 있다.

본원의 목적을 위한 "활성"은 상응하는 천연의 생물학적으로 활성인 단백질의 것과 일치하는 융합 단백질의 성분의 작용 또는 효과를 말하며, 여기서 "생물학적 활성"은 수용체 결합, 길항제 활성, 효능제 활성, 또는 세포 또는 생리학적 반응을 포함하나, 이에 한정되지 않는 시험관내 또는 생체내 생물학적 작용 또는 효과를 말한다.

본원에 사용된 것으로서, "치료" 또는 "치료하는" 또는 "경감시키는" 또는 "완화하는"은 본원에서 상호교환적으로 사용된다. 이들 용어는 치료학적 이점 및/또는 예방학적 이점을 포함하나 이에 한정되지 않는 유리하거나 바람직한 결과를 수득하기 위한 시도를 말한다. 치료학적 이점은 치료되고 있는 잠재하는 질환의 근절 또는 완화를 의미한다. 또한, 치료학적 이점은 잠재하는 질환과 관련된 생리학적 증상들 중의 하나 이상이 근절 또는 완화되어 대상체가 잠재하고 있는 질환으로 여전히 고통받을 수 있음에도 불구하고, 소아 시험대상자에서 개선이 관찰됨으로써 달성된다. 예방학적 이점의 경우, 조성물은, 특수한 질병의 진단이 이루어지지 않을 수 있는 경우에서조차,당해 질병으로 발달할 위험이 있는 소아 시험대상자에게, 또는 질병의 생리학적 증상 중 하나 이상을 보고하는 소아 시험대상자에게 투여될 수 있다.

본원에 사용된 것으로서, "치료학적 효과"는 생물학적으로 활성인 단백질에 의해 소유된 항원성에피토프에 대한 항체의 생산을 유도하는 능력 이외에 본 발명의 융합 폴리펩타이드에 의해 유발된, 사람 또는 다른 동물에서 질병의 치유, 경감, 완화, 또는 예방을 포함하나, 이에 한정되지 않는 생리학적 효과, 또는 달리 사람 또는 동물의 육체적인 또는 정신적인 행복을 향상시키는 것을 말한다. 치료학적 유효량의 측정은 특히 본원에 제공된 상세한 개재내용의 측면에서, 당해 분야의 숙련가의 능력 내에 있다.

본원에 사용된 것으로서, 용어 "치료학적 유효량" 및 "치료학적 유효 투여량"은, 소아 시험대상자에게 하나 또는 반복된 투여량으로 투여되는 경우 질병 상황 또는 상태의 어떠한 증상, 측면, 측정된 매개변수 또는 특징에 있어서 어떠한 검출가능한, 유리한 효과를 가질 수 있는, 융합 단백질 조성물 단독 또는 이의 부분으로서 생물학적으로 활성인 단백질의 양을 말한다. 이러한 효과는 절대적으로 유리하여야 함을 요구하지 않는다.

"약제학적으로 허용되는 담체"는 소아 시험대상자에게 대해 무독성인, 활성 성분 이외의 약제학적 조성물 속의 성분을 말한다. 약제학적으로 허용되는 담체는 완충제, 부형제, 안정화제, 또는 방부제를 포함하나, 이에 한정되지 않는다.

본원에 사용된 것으로서, 용어 "치료학적 유효 투여량 요법"은 단독으로 또는 융합 단백질 조성물의 부분으로서, 생물학적으로 활성인 단백질의 연속적으로 투여된 투여량의 스케쥴을 말하며, 여기서 당해 투여량은 질병 상황 또는 상태의 어떠한 증상, 측면, 측정된 매개변수 또는 특징에 있어서 지속된 유리한 효과를 생성하는 치료학적 유효량으로 제공된다.

본원에 사용된 것으로서 용어 "소아 환자", "소아 시험대상자"는 성인이 아닌 개인을 말한다. 소아 환자는 영아, 어린이, 및 청소년을 포함한다. 하나의 구현예에서, 어린이는 사춘기 이전(pre-adolescent) 또는 사춘기 전(pre-pubertal) 개인이다. 다른 구현예에서, 소아 환자는 사람 환자이다.

I). 일반적인 기술

본 발명의 실시는 달리 나타내지 않는 한, 면역학, 생화학, 분자 생물학, 미생물학, 세포 생물학, 유전학 및 재조합체 DNA의 통상의 기술을 사용하며, 이는 당해 분야의 기술 내에 있다. 문헌: Sambrook, J. 등, "Molecular Cloning: A Laboratory Manual," 3rd edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2001; "Current protocols in molecular biology", F. M. Ausubel, 등 eds.,1987; the series "Methods in Enzymology," Academic Press, San Diego, CA.; "PCR 2: a practical approach", M.J. MacPherson, B.D. Hames and G.R. Taylor eds., Oxford University Press, 1995; "Antibodies, a laboratory manual" Harlow, E. and Lane, D. eds., Cold Spring Harbor Laboratory,1988; "Goodman & Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics," 11th Edition, McGraw-Hill, 2005; and Freshney, R.I., "Culture of Animal Cells: A Manual of Basic Technique," 4th edition, John Wiley & Sons, Somerset, NJ, 2000을 참조하며, 이의 내용은, 이들의 전문이 본원에 참조로 포함된다.

II). 성장 호르몬

본 발명은 소아 성장 호르몬 결핍증 (PGHD) 환자를 치료하기 위한 개선된 치료학적 요법에 관한 것이다. 특히, 본 발명은 PGHD를 지닌 소아 환자에게 hGH-XTEN 융합 단백질의 일시 투여량 투여를 위한 방법에 관한 것이다. 따라서, 하나의 측면에서, 본 발명은 hGH-XTEN 융합 단백질을 사용하여 소아 환자에서 사람 소아 성장 호르몬 결핍증(PGHD)을 치료하는 방법에 관한 것이다.

(a) 성장 호르몬 단백질

"성장 호르몬" 또는 "GH"는 성장 호르몬 단백질 및 이의 종 및 서열 변이체를 의미하며, 사람 GH의 191개의 일본쇄 아미노산 서열을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. GH는 천연의, 완전한 길이의 단백질일 수 있거나 천연의 단백질의 생물학적 활성 중 적어도 일부를 보유하는 트렁케이트된 단편 또는 서열 변이체일 수 있다. 뇌하수체로부터 기원한 2개의 공지된 유형의 사람 GH(이후 "hGH"로 기술함): 약 22,129 달톤(22kD hGH)의 분자량을 갖는 것 및 약 20,000 달톤(20kD hGH)의 분자량을 갖는다는 것이 존재한다. 20kD HGH는, 22kD hGH의 32 번째 내지 46 번째의 15개 아미노산 잔기가 결여된 것을 제외하고는, 191개 아미노산으로 이루어진 22kD hGH의 아미노산 서열에 상응하는 아미노산 서열을 갖는다. 일부 보고는, 20kD hGH가 22kD hGH보다 더욱 낮은 위험 및 더욱 높은 활성을 나타내는 것으로 밝혀졌음을 입증하여 왔다. 본 발명은 22 kD, 20kD hGH, 및 또한 종 및 서열 변이체 및 이의 트렁케이트된 단편이 hGH-XTEN 조성물용의 본원에 개재된 XTEN과의 융합 파트너로서 사용하기에 적절한 것으로 고려한다. hGH에 대한 클로닝된 유전자는 에스케리키아 콜라이(Eschericha coli)(참조: 미국 특허 제4,898,830호; Chang, C. N., 등, Gene 55:189 [1987])에서 분비된 형태로 발현되어 왔으며 이의 DNA 및 아미노산 서열은 보고되어 있다(참조: Goeddel, 등 Nature,281:544 [1979]); Gray, 등, Gene 39: 247[1985]).

본 발명은 GH의 생물학적 활성 또는 생물학적 기능의 적어도 일부를 보유하고/하거나 소아 환자에서 GH-관련된 질병, 결핍, 질환 또는 상태를 예방하거나, 치료하거나, 매개하거나, 완화시키는데 유용한 사람 및 비-천연 서열 변이체와 같은, 천연인 GH 서열, 서열 단편에 대해 상동성인 hGH-XTEN 조성물 서열 속의 혼입을 고려한다. 또한, 사람 GH에 대해 상동성인 천연 서열은 NCBI BLAST와 같은 표준 상동성 조사 기술에 의해 발견될 수 있다.

신체의 조직에서 GH의 효과는 일반적으로 동화작용으로 기술될 수 있다. 대부분의 다른 단백질 호르몬과 같이, 천연의 GH는 성장 호르몬 수용체라고 불리는, 특이적인 혈장막 수용체와 상호작용함으로써 작용한다. GH는 간 및 다른 조직에서 작용하여 GH의 성장 촉진 효과에 관여하는 IGF-I의 생산을 자극하고 생산된 양을 또한 반영한다. 궁극적으로 IGF-I은 골아세포 및 연골세포 활성에서 자극 효과를 가짐으로써 골 성장을 촉진한다. 하나의 구현예에서, 본 발명은 본원에 상기 기술된 천연의 GH의 특성 중 적어도 하나를 나타내는 hGH-XTEN을 제공한다.

하나의 구현예에서, 대상 조성물 속에 포함된 GH는 천연에서 발견된 단백질에 상응하는 서열을 가진 재조합체 폴리펩타이드이다. 다른 구현예에서, GH는 상응하는 천연의 GH의 생물학적 활성 중의 적어도 일부를 보유하는 천연의 서열의 서열 변이체, 단편, 유사체 또는 모사체이다. 하나의 다른 구현예에서, GH는 다음의 아미노산 서열을 포함하는 사람 GH이다: FPTIPLSRLFDNAMLRAHRLHQLAFDTYQEFEEAYIPKEQKYSFLQNPQTSLCFSESIPTPSNREETQQKSNLELLRISLLLIQSWLEPVQFLRSVFANSLVYGASDSNVYDLLKDLEEGIQTLMGRLEDGSPRTGQIFKQTYSKFDTNSHNDDALLKNYGLLYCFRKDMDKVETFLRIVQCRSVEGSCGF (서열 번호: 41). 천연의 GH의 생물학적 활성 중의 적어도 일부를 보유한 계열들 사이의 개개 돌연변이를 셔플링(shuffling)함으로써 작제한 어떠한 사람 GH 서열 또는 동종 유도체도 본 발명의 융합 단백질용으로 유용할 수 있다. hGH-XTEN 융합 단백질내로 포함될 수 있는 GH는 서열 번호: 41에 대해 적어도 약 80% 서열 동일성, 또는 달리는 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 나타내는 단백질을 포함할 수 있다.

III). PGHD를 치료하기 위한 사람 성장 호르몬- XTEN 융합 단백질 조성물

본 발명은 소아 환자용의 소아 성장 호르몬 결핍증 (PGHD) 치료요법을 위한 개선된 치료학적 요법에 관한 것이다. 특히, 본 발명은 PGHD를 지닌 소아 환자에게 hGH-XTEN 융합 단백질의 일시 투여량 투여를 위한 방법에 관한 것이다. 하나의 측면에서, 본 발명에서 사용하기에 적합한 hGH 융합 단백질은 본원에 기술된 것으로서 및 문헌(참조: Schellenberger 등 WO10/144502A2 및 WO10/091122, 이는, 전문이 본원에 참조로 포함된다)에 기술된 바와 같은 사람 성장 호르몬 폴리펩타이드 및 하나 이상의 XTEN 서열을 포함한다.

하나의 다른 측면에서, hGH-XTEN 융합 단백질은 완전한 길이의 서열 및 하나 이상의 연장된 재조합체 폴리펩타이드("XTEN" 또는 "XTENs")에 공유 연결된 GH의 서열 변이체를 포함하는 GH의 분리된 단량체성 융합 단백질이다. 하나의 구현예에서, hGH-XTEN 융합 단백질은 도 1에 나타낸 아미노산 서열(서열 번호: 1), 또는 이의 약리학적으로 활성인 변이체를 포함한다. 다른 구현예에서, hGH-XTEN 융합 단백질은 표 1로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다.

예를 들면, hGH-XTEN 융합 단백질 VRS-317은 재조합체 사람 성장 호르몬(rhGH) 및 XTEN으로 언급된 2개의 재조합체 폴리펩타이드로 구성되며, 이들은 문헌(참조: Schellenberger 등 (2009). Nat Biotechnol 27, 1186-90, Schellenberger 등 WO10/144502A2, 및 WO10/091122)에 기술되어 있고, 이들 문헌 각각은, 이들의 전문이 본원에 참조로 포함되어 있다. 아미노산의 2개의 구조화되지 않은 친수성 쇄인 XTEN 도메인은 rhGH에 대한 반감기 연장물을 제공한다. VRS-317의 분자량은 118.9kDa이며, rhGH가 22.1kDa를 차지하고 나머지 질량은, XTEN 작제물이 차지한다. 따라서, rhGH 대 VRS-317의 질량비는 1:5.37이다.

표 1 예시적인 hGH - XTEN 융합 단백질

표 1에 제공된 예시적인 hGH-XTEN 융합 단백질의 추가의 특성화는, 이의 전문이 본원에 참조로 포함된, Schellenberger 등의 제WO10/144502A2호의 실시예(예를 들면, 실시예 27 내지 35)에서 찾을 수 있다.

본 발명은 도 1, 표 1에 나타내거나, Schellenberger 등의 제WO10/144502A2호(이는, 이의 전문이 본원에 참조로 포함된다)에 기술된 바와 같은 아미노산 서열 중의 하나를 포함하는 hGH-XTEN 융합 단백질의 용도를 고려한다. 또한, 본원에 기술되고 언급된 어떠한 hGH-XTEN 융합 단백질의 약리학적으로 활성인 변이체도또한 고려된다.

또한 하기에 보다 충분히 기술된 바와 같이, 융합 단백질은 프로테아제에 의해 작용되는 경우 융합 단백질로부터 GH를 방출하기 위한 절단 서열을 추가로 포함함으로써 XTEN 서열(들)로부터 GH를 방출하는 스페이서 서열을 임의로 포함한다.

하나의 측면에서, 본 발명은 하나 이상의 연장된 재조합체 폴리펩타이드("XTEN")에 공유 연결된 적어도 제1의 생물학적으로 활성인 성장 호르몬 단백질을 포함함으로써, 성장 호르몬-XTEN 융합 단백질 조성물(이후, "hGH-XTEN"로 언급됨)을 생성하는 분리된 융합 단백질을 제공한다. 하나의 구현예에서, 성장 호르몬은 사람 성장 호르몬 또는 hGH의 서열 변이체이다. 하기에 보다 충분히 기술된 바와 같이, 융합 단백질은 프로테아제에 의해 활성화되는 경우 융합 단백질로부터 GH를 방출하기 위한 절단 서열을 추가로 포함하는 스페이서 서열을 임의로 포함한다.

본원에 사용된 것으로서, 용어 "hGH-XTEN"은 성장 호르몬과 관련된 하나 이상의 생물학적 또는 치료학적 활성을 매개하는 생물학적으로 활성인 GH를 포함하는 페이로드 영역 및, 담체로서 역할하는 적어도 제1의 XTEN 폴리펩타이드를 포함하는 적어도 하나의 다른 영역을 포함하는 융합 폴리펩타이드를 포함하는 것을 의미한다. 하나의 구현예에서, 본 발명은 표 1에 설정된 서열을 포함하는 hGH-XTEN 융합 단백질을 제공한다.

상응하는 핵산 및 아미노산 서열과 함께 본 조성물의 GH는 당해 분야에 잘 공지되어 있으며 이러한 기술 및 서열은 Chemical Abstracts Services Databases (예를 들면, CAS Registry), GenBank, The Universal Protein Resource(UniProt)과 같은 공공의 데이터베이스 및 GenSeq (예를 들면, Derwent)과 같은 데이터베이스에서 제공한 구독에서 이용 가능하다. 폴리뉴클레오타이드 서열은 제공된 GH(예를 들면, 완전한 길이 또는 성숙한)를 암호화하는 야생형 폴리뉴클레오타이드 서열일 수 있거나, 일부 예에서, 당해 서열은 야생형 폴리펩타이드 서열(예를 들면, 야생형의 생물학적으로 활성인 단백질을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드, 여기서 폴리뉴클레오타이드의 DNA 서열은 예를 들면 특수한 종에서 발현용으로 최적화된다)의 변이체; 또는 부위 지시된 돌연변이체 또는 대립형질 변이체와 같은 야생형 단백질의 변이체를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드일 수 있다. GH의 야생형 또는 공통(consensus) cDNA 서열 또는 코돈-최적화된 변이체를 사용하여 당해 분야에 공지된 방법 및/또는 본원에 제공된 안내 및 방법과 함께 본 발명에서 고려된 융합 단백질 작제물을 생성하는 것은 당해 분야의 숙련가의 능력 내에 있으며, 이의 전문이 본원에 참조로 혼입된 Schellenberger 등의 제WO10/144502A2호의 실시예에 보다 완전하게 기술되어 있다.

본 발명의 hGH-XTEN 속에 포함시키기 위한 GH는 어떠한 성장 호르몬 또는 생물학적, 치료학적, 예방학적, 또는 진단학적 목적 또는 작용의, 또는 소아 시험대상자에게 투여되는 경우 성장, 성장호르몬 결핍증 또는 결함과 관련된 질병, 질환 또는 상태를 매개하거나, 예방하거나, 완화시키는데 유용한 서열 변이체도 포함한다. 특히, 흥미로운 것은, 천연의 GH와 비교하여 약력학적 매개변수에 있어서의 증가, 증가된 가용성, 또는 일부 다른 향상된 약제학적 또는 약동학적 특성이 추구되거나, 이에 대한 말기 반감기의 증가가 효능, 안전성을 개선시킬 수 있거나 투여 빈도에 있어서의 감소를 초래하고/하거나 소아 환자 순응도를 개선시킬 수 있는 hGH-XTEN 융합 단백질 조성물이다. 따라서, hGH-XTEN 융합 단백질 조성물은 예를 들면, XTEN과 연결되지 않은 GH와 비교하여, 소아 시험대상자에게 투여되는 경우 hGH-XTEN가 치료학적 윈도우(therapeutic window)내에서 남아있는 길이 또는 생체내 노출을 증가시킴으로써 생활성 GH의 치료학적 효능을 개선시킴을 포함하는 의도된 다양한 목적으로 제조된다.

하나의 구현예에서, 목적한 조성물에 포함된 GH는 사람 성장 호르몬과 같이, 천연에서 발견된 단백질에 상응하는 서열을 지닌 재조합체 폴리펩타이드일 수 있다. 하나의 구현예에서, GH는 다음의 아미노산 서열을 포함하는 사람 GH이다:

FPTIPLSRLFDNAMLRAHRLHQLAFDTYQEFEEAYIPKEQKYSFLQNPQTSLCFSESIPTPSNREETQQKSNLELLRISLLLIQSWLEPVQFLRSVFANSLVYGASDSNVYDLLKDLEEGIQTLMGRLEDGSPRTGQIFKQTYSKFDTNSHNDDALLKNYGLLYCFRKDMDKVETFLRIVQCRSVEGSCGF (서열번호:41).

다른 구현예에서, GH는 천연의 GH의 생물학적 활성 중의 적어도 일부를 보유한 천연 서열의 서열 변이체, 단편, 동족체, 또는 모사체이다. 비-제한적인 예에서, GH는 서열 번호: 41의 단백질 서열에 대해 적어도 약 80%의 서열 동일성, 또는 달리는 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 적어도 약 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 나타내는 서열이다. 하나의 구현예에서, hGH-XTEN 융합 단백질은 XTEN에 연결된 단일의 GH 분자를 포함한다(하기에서 보다 완전히 기술됨). 다른 구현예에서, hGH-XTEN 융합 단백질은 XTEN-GH-XTEN의 N- 내지 C-말단 구조로, 제1 및 제2의 XTEN에 연결된 단일의 GH 분자를 포함하며, 여기서 GH는 사람 성장 호르몬 단백질 서열(서열 번호: 41)에 대해 적어도 약 80% 서열 동일성, 또는 달리는 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 적어도 약 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 나타내는 서열이며, 상기 제1 및/또는 제2의 XTEN은 표 2로부터 선택된 서열에 대해 적어도 약 80%의 서열 동일성, 또는 달리는 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 적어도 약 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 나타내는 서열이다.

일반적으로, hGH-XTEN의 GH 융합 파트너 성분은, 생체내에서 사용될 때 또는 실험실 검정에서 이용될 때, 주어진 표적 또는 또 하나의 원하는 생물학적 특징에 대한 결합 특이성을 나타낸다. 예를 들면, hGH-XTEN은 성장 호르몬에 대한 전이막(transmembrane) 수용체에 결합하는 능력을 지닌 효능제이다. 하나의 구현예에서, 성장 수용체에 대한 hGH-XTEN의 결합은 수용체 이량체화를 야기하며 천연의 성장 호르몬과 비교하여 세포내 시그날 형질도입 경로의 활성화의 적어도 일부를 야기한다. 하나의 구현예에서, 성장 호르몬에 대한 전이막 수용체에 결합된 hGH-XTEN은 XTEN에 연결되지 않은 천연의 성장 호르몬과 비교하여 세포내 신호 형질도입 경로의 활성화의 적어도 약 1%, 또는 약 5%, 또는 약 10%, 또는 약 15%, 또는 약 20%, 또는 약 25%, 또는 약 30%, 또는 약 40%, 또는 약 50%, 또는 약 60%, 또는 약 70%, 또는 약 80%, 또는 약 90%, 또는 적어도 약 95%를 나타낼 수 있다.

본 발명의 대상 hGH-XTEN은 스페이서 서열의 절단에 의해 융합 단백질로부터 GH의 방출에 의해 임의로 향상된, 하나 이상의 약력학적 또는 약동학적 매개변수의 향상을 나타낸다. 약력학적 매개변수가 향상된 hGH-XTEN은 최소 유효 투여량 또는 혈액 농도(Cmin) 내지 최대 내성 투여량 또는 혈액 농도(Cmax) 사이의 치료학적 윈도우내에서 생물학적으로 활성인 hGH-XTEN을 유지하는 것과 같은, 그러나 이에 한정되지 않는 향상된 약력학적 효과 또는 덜 빈번한 투여를 허용한다. 또한, 약력학적 매개변수가 향상된 hGH-XTEN은 지연되거나 또는 표준화된 IGF-I 표준 편차 점수(IGF-I SDS)와 같은 그러나 이에 한정되지 않는, 보다 적고/적거나 덜 빈번한 투여 또는 향상된 약동학적 효과를 허용한다. 이러한 경우에서, 선택된 XTEN 서열(들)을 포함하는 융합 단백질에 대한 GH의 연결은 이들 특성에 있어서의 개선을 초래하여 XTEN에 연결되지 않은 GH와 비교하여 치료학적 또는 예방학적 제제로서 보다 유용하도록 한다.

IV). 연장된 재조합 폴리펩타이드

본 발명은 PGHD 치료요법에 대한 개선된 치료학적 요법에 관한 것이다. 특히, 본 발명은 PGHD를 지닌 소아 환자에게 사람 성장 호르몬-XTEN(hGH-XTEN) 융합 단백질의 일시 투여량을 투여하는 방법에 관한 것이다. 따라서, 하나의 측면에서, 본 발명은 hGH-XTEN 재조합체 폴리펩타이드 또는 융합 단백질을 사용하여 사람 소아 성장 호르몬 결핍증(PGHD)을 치료하는 방법에 관한 것이다.

다른 구현예에서, 본 발명은 GH가 연결되어, hGH-XTEN 융합 단백질을 생성하는 융합 단백질 파트너로서 유용한 XTEN 폴리펩타이드 조성물을 제공한다. XTEN은 생리학적 조건하에서 낮은 정도 또는 2차 또는 3차 구조를 지니지 않은 서열을 지닌, 주로 작은 친수성 아미노산으로 구성된 비-천연적으로 존재하는, 실질적으로 비-반복성 서열을 지닌 일반적으로 연장된 길이의 폴리펩타이드이다.

XTEN은, 이들이 GH에 연결되어 융합 단백질을 생성하는 경우, 특정의 바람직한 약력학적, 물리화학적 및 약제학적 특성을 부여하는 "담체"로서 제공한다는 점에서 융합 단백질 파트너로서의 유용성을 지닌다. 이러한 바람직한 특성은 본원에 기술된 다른 특성 중에서도 조성물의 향상된 약력학적 매개변수 및 가용성 특성을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 이러한 융합 단백질 조성물은 본원에 기술된 바와 같은, 특정의 성장 호르몬-관련 질병, 질환 또는 상태를 치료하는 유용성을 갖는다. 본원에 사용된 것으로서, "XTEN"은 일본쇄 항체 또는 경쇄 또는 중쇄의 Fc 단편과 같은 항체 또는 항체 단편을 구체적으로 배제한다.

일부 구현예에서, XTEN은, 담체로서 사용되는 경우 약 100 내지 약 3000개 이상, 바람직하게는 400 내지 약 3000개 이상의 잔기를 갖거나 하나의 XTEN 단위가 단일의 융합 단백질에서 사용되는 경우 누적적으로 긴 폴리뉴클레오타이드이다. 다른 구현예에서, 융합 단백질 성분들 사이의 링커로서 사용되거나 융합 단백질의 반감기에 있어서의 증가가 필요하지 않지만, GH 융합 파트너 성분에 대한 가용성 또는 물리/화학적 특성에 있어서의 증가가 요구되는 경우, 100개 보다 ?E은 아미노산 잔기, 예를 들면, 약 96개, 또는 약 84개, 또는 약 72개, 또는 약 60개, 또는 약 48개, 또는 약 36개 아미노산 잔기의 XTEN이 GH와의 융합 단백질 조성물 내로 포함되어 당해 특성을 발휘한다.

일반적으로, 본 발명의 융합 단백질 조성물을 생성하는데 사용된 생물학적으로 활성인 단백질에 연결될 XTEN에 대한 선택 기준은 궁극적으로 융합 단백질에 향상된 약제학적 및 약력학적 특성을 부여하는데 사용된, XTEN의 물리/화학적 특성 및 구성적 구조의 기여에 관한 것이다. 본 발명의 XTEN은 하나 이상의 다음의 유리한 특성을 나타낸다: 구조적 굴곡성, 향상된 수 용해도, 고도의 프로테아제 내성, 저 면역원성, 포유동물 수용체에 대한 낮은 결합, 및 증가된 유체역학적(또는 스토크(Stoke)) 반경; 이들을 융합 단백질 파트너로서 특히 유용하도록 하는 특성. XTEN에 의해 향상된 GH를 포함하는 융합 단백질의 특성의 비-제한적 예는 전체 가용성 및/또는 대사 안전성에 있어서의 증가, 단백질 분해에 대한 감소된 민감성, 감소된 면역원성, 피하 또는 근육내 투여되는 경우 감소된 흡수율, 및 보다 긴 말단 반감기 및 증가된 곡선하 영역(AUC), 피하 또는 근육내 주사 후 보다 느린 흡수(XTEN에 연결되지 않고 유사한 경로로 투여된 GH와 비교하여)로 Cmax가 보다 낮아지도록 함으로써 궁극적으로, GH의 부작용에 있어서의 감소를 생성하고, 총괄적으로 소아 환자에게 투여된 hGH-XTEN 조성물의 융합 단백질이 치료학적 활성을 보유하는 기간을 증가시키는 것을 포함한다.

1. 비-반복성 서열

일부 구현예에서, 조성물의 XTEN 서열은 실질적으로 비-반복성이다. 일반적으로, 반복성 아미노산 서열은 콜라겐 및 루이신 지퍼(leucine zipper)와 같은 천연의 반복성 서열에 의해 예시되는 바와 같은, 보다 높은 차수의 구조로 응집하거나 이를 형성하거나, 결정성 또는 슈도결정성 구조를 생성하는 접촉물을 형성하는 경향성을 갖는다. 대조적으로, 비-반복성 서열의 응집하는 것에 대한 낮은 경향성은, 서열이 또한 반복성인 경우 응집하는 경향이 있을 수 있는, 비교적 낮은 빈도의 하전된 아미노산을 사용한 긴-서열 XTEN의 설계를 가능하도록 한다. 전형적으로, hGH-XTEN 융합 단백질은, 아미노산 잔기가 약 100 내지 약 3000 보다 크고, 바람직하게는 400 내지 약 3000개 보다 큰 누적 잔기의 XTEN 서열을 포함하며, 여기서 당해 서열은 실질적으로 비-반복성이다. 하나의 구현예에서, XTEN 서열은, 아미노산 잔기가 약 100 내지 약 3000보다 크고, 바람직하게는 400 내지 약 3000보다 크며, 여기서 서열내 3개의 연속된 아미노산은, 아미노산이 세린이 아니라면(여기서 이 경우 3개 이하의 연속된 아미노산은 세린 잔기이다) 동일한 아미노산 유형이다. 앞서의 구현예에서, XTEN 서열은 실질적으로 비-반복성일 수 있다.

폴리펩타이드 또는 유전자의 반복성 정도는 컴퓨터 프로그램 또는 알고리즘 또는 서열 점수(참조: Schellenberger 등 WO10/144502A2의 실시예 44; Cleland 등 U.S. 13/829,369; 및 Cleland 등 WO13/184216, 이들 각각은, 이의 전문이 본원에 참조로 포함된다)를 포함하는, 당해 분야에 공지된 다른 수단에 의해 측정된다. 일부 구현예에서, 본 발명은 하나 이상의 XTEN을 각각 포함하는 hGH-XTEN을 제공하며, 여기서 XTEN은 하위서열 점수(subsequence score)는 12 미만, 보다 바람직하게는 10 미만, 보다 바람직하게는 9 미만, 보다 바람직하게는 8 미만, 보다 바람직하게는 7 미만, 보다 바람직하게는 6 미만, 및 가장 바람직하게는 5 미만이다. 당해 단락에 기술된 상기 구현예에서, 하위서열 점수가 약 10 미만(즉, 9, 8, 7 등)인 XTEN은 "실질적으로 비-반복성"이다.

XTEN의 비-반복성 특성은 GH와의 융합 단백질에게 반복성 서열을 지닌 폴리펩타이드와 비교하여 더 큰 용해도를 부여하고 응집하는 경향성을 거의 부여하지 않는다. 이들 특성은, 일부 경우에 100mg/ml를 초과하는 극도로 높은 약물 농도를 함유하는 XTEN-함유 약제학적 제제의 제형을 촉진한다.

2. 예시적인 서열 모티프

본 발명은 보다 짧은 서열 또는 모티프의 다수 단위를 포함하는 XTEN을 포함하며, 여기서 당해 모티프의 아미노산 서열은 비-반복성이다. XTEN 서열을 설계하는데 있어서, 비-반복성 기준은 XTEN 서열을 생성하기 위해 다량체화된 서열 모티프의 라이브러리를 사용한 "빌딩 블록(building block)" 접근법의 사용에도 불구하고 충족될 수 있음이 발견되었다. 따라서, XTEN 서열은, 모티프 자체가 일반적으로 비-반복성 아미노산 서열로 이루어지므로, 4개로 적은 상이한 유형의 서열 모티브의 다수 단위로 이루어질 수 있지만, 전체 XTEN 서열은 실질적으로 비-반복성이 된다(참조: Schellenberger 등 WO10/144502A2; Cleland 등 U.S. 13/829,369; 및 Cleland 등 WO13/184216, 이들 각각은, 이들의 전문이 본원에 참조로 포함된다).

3. 서열의 길이

본 발명의 다른 측면에서, 본 발명은 연장된 길이의 서열을 지닌 XTEN 폴리펩타이드의 담체를 포함하는 hGH-XTEN 조성물을 포함한다. (참조: Schellenberger 등 WO10/144502A2; Cleland 등 U.S. 13/829,369; 및 Cleland 등 PCT/US2013/031673, 이들 각각은, 이들의 전문이 본원에 참조로 포함된다). 본 발명의 hGH-XTEN에 포함시키기 위해 고려된 XTEN의 비-제한적 예는 표 2에 나타낸다. 하나의 구현예에서, 본 발명은 hGH-XTEN 조성물을 제공하며, 여기서 융합 단백질(들)의 XTEN 서열 길이는 약 100 내지 약 3000개 이상의 아미노산 잔기이고, 일부 경우에 400 내지 약 3000개 이상의 아미노산 잔기이며, 여기서 XTEN은 XTEN에 연결되지 않은 GH와 비교하여 hGH-XTEN에 있어서 향상된 약력학적 특성을 부여한다. 일부 구현예에서, 본 발명의 hGH-XTEN 조성물의 XTEN 서열은, 길이가 약 100, 또는 약 144, 또는 약 288, 또는 약 401, 또는 약 500, 또는 약 600, 또는 약 700, 또는 약 800, 또는 약 900, 또는 약 1000, 또는 약 1500, 또는 약 2000, 또는 약 2500 또는 약 3000 이하의 아미노산 잔기일 수 있다. 다른 경우에, XTEN 서열은, 길이가 약 100 내지 150, 약 150 내지 250, 약 250 내지 400, 401 내지 약 500, 약 500 내지 900, 약 900 내지 1500, 약 1500 내지 2000, 또는 약 2000 내지 약 3000개 아미노산 잔기일 수 있다. 하나의 구현예에서, hGH-XTEN은 XTEN 서열을 포함할 수 있으며, 여기서 당해 서열은 표 2로부터 선택된 XTEN에 대해 적어도 약 80%의 서열 동일성, 또는 달리는 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 나타낸다. 일부 구현예에서, XTEN 서열은 융합 단백질을 암호화하는 유전자의 XTEN 부분내 최적화된 N-말단 리더 서열(NTS)에 대한 암호화 뉴클레오타이드를 혼입시킴으로써 hGH-XTEN의 N-말단 성분으로서의 최적화된 발현을 위해 설계된다. 다른 구현예에서, 발현된 hGH-XTEN의 N-말단 XTEN 서열은 표 2로부터 선택된 어떠한 서열에 대해서도 적어도 90% 서열 동일성을 갖는다. 하나의 구현예에서, 발현된 hGH-XTEN의 N-말단 XTEN 서열은 AE48 또는 AM48, AE624, AE911, AE912 또는 AM923의 서열에 대해 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는다.

다른 구현예에서, hGH-XTEN 융합 단백질은 제1 및 제2의 XTEN 서열을 포함하며, 여기서, XTEN 서열내에서 누적된 총 잔기는 약 400 내지 약 3000개의 아미노산 잔기보다 더 크다. 앞서의 구현예에서, hGH-XTEN 융합 단백질은 제1 및 제2의 XTEN 서열을 포함하며, 여기서 당해 서열은 표 2로부터 선택된 적어도 제1 또는 추가로 제2의 XTEN에 대해 적어도 약 80%의 서열 동일성, 또는 달리는 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 나타낸다. 하나 이상의 XTEN이 hGH-XTEN 조성물에 사용된 예는 적어도 하나의 GH의 N- 및 C-말단 둘다에 연결된 XTEN을 지닌 작제물을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.

하기에 보다 완전히 기술된 바와 같이, 본 발명은, hGH-XTEN이 XTEN의 길이를 선택함으로써 소아 시험대상자에게 투여된 융합 단백질에서 표적 반감기를 부여하도록 설계된 방법을 제공한다. 일반적으로, hGH-XTEN 조성물내로 혼입된 거의 누적된 400개 잔기보다 긴 XTEN 길이는 보다짧은 누적된 길이, 예를 들면, 약 280개 잔기 보다 짧은 잔기와 비교하여 보다 긴 반감기를 생성한다. 그러나, 다른 구현예에서, hGH-XTEN 융합 단백질은 소아 시험대상자에게 피하 또는 근육내 투여후보다 느린 전신계 흡수율을 추가로 부여하도록 선택된 보다 긴 서열 길이를 지닌 XTEN을 포함하도록 설계된다. 이러한 구현예에서, Cmax는 XTEN에 연결되지 않은 GH의 비교가능한 투여량과 비교하여 감소됨으로써, 조성물에 대한 치료학적 윈도우내에서 hGH-XTEN을 유지하는 능력에 기여한다. 따라서, XTEN은 본원에 기술된 다른 물리적/화학적 특성 외에도, 투여된 hGH-XTEN에 대한 데포트(depot) 특성을 부여한다.

표 2: XTEN 폴리펩타이드

hGH-XTEN 융합 단백질의 XTEN 성분이 글리신(G), 알라닌(A), 세린(S), 트레오닌(T), 글루타메이트(E) 및 프롤린(P) 중에서 선택된 4, 5 또는 6개 유형의 아미노산으로 이루어진 이의 아미노산의 100% 미만, 또는 표 2의 XTEN 서열로 이루어진 서열의 100% 미만인 이들 구현에에서, XTEN의 다른 아미노산 잔기는 다른 14개의 천연 L-아미노산 중 어느 것으로부터 선택되나 바람직하게는 소수성 아미노산으로부터 선택됨으로써 XTEN 서열은 적어도 약 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 적어도 약 99%의 친수성 아미노산을 함유한다. 글리신(G), 알라닌(A), 세린(S), 트레오닌(T), 글루타메이트(E) 및 프롤린(P)이 아닌 XTEN 아미노산은 XTEN 서열 전체에 산재하여, 서열 모티브 내에 또는 사이에 위치하거나, XTEN 서열의 하나 이상의 짧은 길이에서 농축되어, 예를 들면, XTEN 성분과 hGH 성분 사이에 링커를 생성한다. hGH-XTEN의 XTEN 성분이 글리신(G), 알라닌(A), 세린(S), 트레오닌(T), 글루타메이트(E) 및 프롤린(P) 이외의 아미노산을 포함하는 이러한 경우에, 아미노산의 약 2% 미만 또는 약 1% 미만이 소수성 잔기가 되도록 함으로써 생성되는 서열이 제2 구조를 일반적으로 결여하도록 하는, 예를 들면, 본원에 개재된 방법에 의해 측정된 것으로서, 예를 들면, 2% 이상의 알파 나선 또는 2%의 베타-쉬이트를 갖지 않도록 하는 것이 바람직하다. XTEN의 구조내에서 덜 선호되는 소수성 잔기는 트립토판, 페닐알라닌, 타이로신, 루이신, 이소루이신, 발린, 및 메티오닌을 포함한다. 또한, 5% 미만 또는 4% 미만 또는 3% 미만 또는 2% 미만 또는 1% 미만의 다음 아미노산을 함유하거나 함유하지 않는 XTEN 서열을 설계할 수 있다: 시스테인(이황화물 형성 및 산화를 방지하기 위함), 메티오닌(산화를 방지하기 위함), 아스파라긴 및 글루타민(탈아미드화를 방지하기 위함). 따라서, 일부 구현예에서, 글리신(G), 알라닌(A), 세린(S), 트레오닌(T), 글루타메이트(E) 및 프롤린(P) 이외의 다른 아미노산을 포함하는 hGH-XTEN의 XTEN 성분은 초우-파스만(Chou-Fasman) 알고리즘에 의해 측정된 것으로서 알파-나선형 및 베타-쉬이트에 기여하는 5% 미만의 잔기, 또는 GOR 알고리즘에 의해 측정된 것으로서 적어도 90%, 또는 적어도 약 95% 이상의 무작위 코일 형성에 기여하는 5% 미만의 잔기를 지닌 서열을 갖는다.

4. XTEN 분절

하나의 구현예에서, 본 발명은 분리된 hGH-XTEN 융합 단백질을 제공하며, 여기서 XTEN 성분의 누적 길이는 표 2(및 이의 전문이 본원에 참조로 포함된 Schellenberger 등의 WO10/144502A2의 표 8, 9, 10, 11, 및 12)로부터 선택된 적어도 하나의 폴리펩타이드 서열 분절을 함유하는 약 100 내지 약 3000개 이상의 아미노산이고, 여기서 XTEN 서열의 나머지의 적어도 약 90%, 또는 적어도 약 91%, 또는 적어도 약 92%, 또는 적어도 약 93%, 또는 적어도 약 94%, 또는 적어도 약 95%, 또는 적어도 약 96%, 또는 적어도 약 97%, 또는 적어도 약 98% 이상은 대체로 친수성 아미노산을 함유하고 XTEN의 나머지의 약 2% 미만은 소수성 또는 방향족 아미노산, 또는 시스테인으로 이루어진다. 일부 구현예에서, XTEN은 다수의 분절을 함유하며, 여기서 당해 분절은 동일하거나 상이하다(참조: Schellenberger 등의 WO10/144502A2; Cleland 등의 U.S. 13/829,369; 및 Cleland 등의 WO13/184216, 이들 각각은, 이들의 전문이 본원에 참조로 포함된다).

5. N-말단 XTEN 발현-향상 서열

일부 구현예에서, 본 발명은 hGH-XTEN 융합 단백질의 N-말단 부위로서 혼입된 짧은 길이의XTEN 서열을 제공한다. 융합 단백질의 발현은 결합 융합 단백질을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드에 혼입된 최적화된 N-말단 리더 폴리뉴클레오타이드 서열(이는 N-말단 XTEN을 암호화한다)을 포함하는 적합한 발현 벡터로 형질감염된 숙주 세포내에서 향상되어 있다. Schellenberger 등의 WO10/144502A2(이는, 이의 전문이 본원에 참조로 포함된다)의 실시예 14-17에 기술된 바와 같이, 결합 융합 단백질 유전자내 최적화된 N-말단 리더 서열(NTS)을 포함하는 이러한 발현 벡터로 형질감염된 숙주 세포는 NTS를 포함하지 않는 폴리뉴클레오타이드로부터의 상응하는 융합 단백질의 발현과 비교하여 융합 단백질의 크게-향상된 발현을 초래하며, 발현을 향상시키기 위해 사용된 비-XTEN 리더 서열의 혼입에 대한 필요성을 제거한다(참조: Schellenberger 등의 WO10/144502A2; Cleland 등의 U.S. 13/829,369; 및 Cleland 등의 WO13/184216, 이들 각각은, 이들의 전문이 본원에 참조로 포함된다).

하나의 구현예에서, hGH-XTEN의 N-말단 XTEN 폴리펩타이드는 AE48, AE48.1, AM48, 또는 AM48.1의 아미노산 서열에 대해 적어도 약 80%, 보다 바람직하게는 적어도 약 90%, 보다 바람직하게는 적어도 약 91%, 보다 바람직하게는 적어도 약 92%, 보다 바람직하게는 적어도 약 93%, 보다 바람직하게는 적어도 약 94%, 보다 바람직하게는 적어도 약 95%, 보다 바람직하게는 적어도 약 96%, 보다 바람직하게는 적어도 약 97%, 보다 바람직하게는 적어도 약 98%, 보다 바람직하게는 적어도 99%의 서열 동일성을 나타내는 서열을 포함하거나, 100%의 서열 동일성을 나타내며, 상기 각각의 아미노산 서열은 다음과 같다:

AE48: MAEPAGSPTSTEEGTPGSGTASSSPGSSTPSGATGSPGASPGTSSTGS (서열 번호: 13)

AE48.1: AEPAGSPTSTEEGTPGSGTASSSPGSSTPSGATGSPGASPGTSSTGS (서열 번호: 36)

AM48: MAEPAGSPTSTEEGASPGTSSTGSPGSSTPSGATGSPGSSTPSGATGS (서열 번호: 14)

AM48.1: AEPAGSPTSTEEGASPGTSSTGSPGSSTPSGATGSPGSSTPSGATGS (서열 번호: 37).

다른 구현예에서, hGH-XTEN의 N-말단 XTEN은 본원에 기술된 바와 같이, AE48, AM48 또는 AE912에 대해 적어도 90%의 동일성을 나타내는 서열을 포함하며, 여기서, N-말단 M 잔기는 부재한다(예를 들면, AE48.1 서열 번호: 36; AM48.1 서열 번호: 37; 및 AE912.1 서열 번호: 38). 추가의 구현예에서, hGH-XTEN의 C-말단 XTEN 폴리펩타이드는 본원에 기술된 바와 같이 AE146에 대해 적어도 90%의 동일성을 나타내는 서열을 포함한다(예를 들면, AE146 서열 번호: 35; 또는 AE146.1 서열 번호: 40).

다른 구현예에서, 짧은 길이의 N-말단 XTEN은 보다 긴 길이의 XTEN에 연결되어 hGH-XTEN 융합 단백질의 N-말단 영역을 형성하며, 여기서 짧은 길이의 N-말단 XTEN을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 서열은 숙주 세포내에서 향상된 발현의 특성을 부여하고, 여기서 발현된 XTEN의 긴 길이는 상기 기술된 바와 같이, 융합 단백질내 XTEN 담체의 향상된 특성에 기여한다. 일부 구현예에서, 긴 길이를 지닌 N-말단 XTEN 폴리펩타이드는 서열 AE624, AE911, AE912, 및 AM923으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 약 80%, 또는 적어도 약 90%, 또는 적어도 약 91%, 또는 적어도 약 92%, 또는 적어도 약 93%, 또는 적어도 약 94%, 또는 적어도 약 95%, 또는 적어도 약 96%, 또는 적어도 약 97%, 또는 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99%의 서열 동일성을 나타낸다.

6. 순 전하(net charge)

다른 구현예에서, XTEN 폴리펩타이드는 순 전하를 지닌 아미노산 잔기를 혼입시키고/시키거나 XTEN 서열내 소수성 아미노산의 비율을 감소시킴으로써 부여된 구조화되지 않은 특성을 갖는다. 전체 순 전하 및 순 전하 밀도는 XTEN 서열내 하전된 아미노산의 함량을 변형시킴으로써 조절한다. 일부 구현예에서, 조성물의 XTEN의 순 전하 밀도는 +0.1 초과 또는 -0.1 이하의 전하/잔기일 수 있다. 다른 구현예에서, XTEN내 순 전하는 약 0%, 약 1%, 약 2%, 약 3%, 약 4%, 약 5%, 약 6%, 약 7%, 약 8%, 약 9%, 약 10% 약 11%, 약 12%, 약 13%, 약 14%, 약 15%, 약 16%, 약 17%, 약 18%, 약 19%, 또는 약 20% 이상일 수 있다(참조: Schellenberger 등의 WO10/144502A2; Cleland 등의 U.S. 13/829,369; 및 Cleland 등의 PCT/US2013/031673, 이들 각각은, 이들 전문이 본원에 참조로 포함된다).

7. 낮은 면역원성

다른 측면에서, 본 발명은, XTEN 서열이 낮은 정도의 면역원성을 가지거나 실질적으로 비-면역원성인 조성물을 제공한다. 수개의 인자가 XTEN의 낮은 면역원성, 예를 들면, XTEN 서열내 비-반복성 서열, 구조화되지않은 형태, 높은 용해도, 낮거나 결실된 자가-응집, 서열내 단백질분해 부위의 낮은 정도 또는 결여, 및 에피토프의 낮은 정도 또는 결여에 기여할 수 있다(참조: Schellenberger 등의 WO10/144502A2; Cleland 등의 U.S. 13/829,369; 및 Cleland 등의 PCT/US2013/031673, 이들 각각은, 전문이 참조로 포함되어 있다),

8. 증가된 유체역학적 반경

다른 측면에서, 본 발명은 XTEN을 제공하며, 여기서 당해 XTEN 폴리펩타이드는 XTEN을 포함하는 hGH-XTEN 융합 단백질에 대해 상응하는 증가된 겉보기 분자량을 부여하는 고 유체역학적 반경을 갖는다. Schellenberger 등의 WO10/144502A2의 실시예 37에 상세히 기술된 바와 같이, GH 서열에 대한 XTEN의 연결은 XTEN에 연결되지 않은 GH와 비교하여 증가된 유체역학적 반경, 증가된 겉보기 분자량, 및 증가된 겉보기 분자량 인자를 가질 수 있는 hGH-XTEN 조성물을 생성한다(참조: Schellenberger 등의 WO10/144502A2; Cleland 등의 U.S. 13/829,369; 및 Cleland 등의 WO13/184216, 이들 각각은, 이들의 전문이 본원에 참조로 포함된다).

V). hGH - XTEN 구조적 배열 및 특성

대상 조성물의 사람 성장 호르몬(GH)은 천연의, 완전한 길이의 폴리펩타이드에 한정되지 않으나, 재조합체 버전 뿐 아니라 생물학적으로 및/또는 약리학적으로 활성인 변이체 또는 이의 단편도 포함한다. 예를 들면, 다양한 아미노산 결실, 삽입 및 치환은 GH의 생물학적 활성 또는 약리학적 특성과 관련하여 본 발명의 취지를 벗어나지 않고 변이체를 생성하기 위헤 GH에서 이루어질 수 있음을 인지할 것이다. 폴리펩타이드 서열내 아미노산에 대한 보존적 치환의 예는 표 3에 나타나 있다. 그러나, GH의 서열 동일성이 본원에 개재된 특이적인 서열과 비교하여 100% 미만인 hGH-XTEN의 구현예에서, 본 발명은 제공된 GH의 제공된 아미노산 잔기에 대해 다른 19개의 천연 L-아미노산 중의 어느 것의 치환을 고려하며, 이는 인접한 아미노산 잔기를 포함하는, GH의 서열내 어떠한 위치일 수 있다. 어떠한 하나의 치환도 생물학적 활성에서 바람직하지 않은 변화를 생성하는 경우, 대안의 아미노산 중의 하나를 사용할 수 있고 작제물은 본원에 기술된 방법에 의해, 또는 예를 들면, 이의 내용이, 이의 전문으로 본원에 참조로 포함된 미국 특허 제5,364,934호에 설정된 보존적 및 비-보존적 돌연변이에 대한 기술 및 안내 중의 어느 것을 사용하여 평가할 수 있다. 또한, 변이체는 예를 들면, 하나 이상의 아미노산 잔기가 천연의 펩타이드의 생물학적 활성 모두가 아닌 일부를 보유하는 GH의 완전한 길이의 천연 아미노산 서열의 N- 또는 C-말단에서 첨가되거나 결실된 폴리펩타이드를 포함할 수 있다.

표 3: 예시적인 보존적 아미노산 치환

(a) 융합 단백질 배열

본 발명은 특이적인 N-및 C-말단 배열에 연결된 GH 및 XTEN 성분을 지닌 융합 단백질조성물을 제공한다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 GH는 스페이서의 존재 또는 부재하에서 N-말단 또는 C-말단에서하나 이상의 XTEN에 연결되어 블록 공중합체를 형성하며, 융합 단백질내 GH 및 XTEN의 서열 정렬은 블록 공중합체 화학에 공지된 배열과 동일하다. 하나 이상의 GH, XTEN, 또는 스페이서가 존재하는 경우, GH, XTEN, 또는 스페이서 각각은 동일하거나 상이한 서열을 가지며, GH 및/또는 XTEN은 연속적으로 또는 교호적으로(규칙적으로 또는 불규칙적으로) 연결된다. 따라서, 본원에 제공된 서열식 모두에서, 하나 이상의 GH, XTEN, 또는 스페이서가 존재하는 경우, GH, XTEN, 및 스페이서 각각은 동일하거나 상이하다. 일부 구현예에서, 융합 단백질은 하나의 XTEN 폴리펩타이드에 연결된 GH와의 단량체성 융합 단백질이다. 다른 구현예에서, 융합 단백질은 2개 이상의 XTEN 폴리펩타이드에 연결된 GH와의 단량체성 융합 단백질이다. 여전히 다른 구현예에서, 융합 단백질은 하나의 XTEN 폴리펩타이드에 연결된 2개 이상의 GH와의 단량체성 융합 단백질이다. 여전히 다른 구현예에서, 융합 단백질은 2개 이상의 XTEN 폴리펩타이드에 연결된 2개 이상의GH와의 단량체성 융합 단백질이다. 표 4는 본 발명에 포함된 배열의 비-제한적 예를 제공하며; 다수의 다른 변형은 본원에 개재되거나 당해 분야에 공지된 스페이서 및 절단 서열의 혼입을 포함하여, 통상의 기술자에게 명백할 것이다.

표 4: hGH - XTEN 배열

* 1개의 성분에 대해 단일로서 또는 2개 이상의 성분에 대해 다수로서 특성화됨

** 성장 인자 및 XTEN 성분의 N- 내지 C-말단 배열을 반영함

본 발명은 표 4에 나타낸 배열 내에 존재하고 XTEN에 연결되지 않은 상응하는 GH의 생물학적 활성의 적어도 일부를 보유하는 융합 단백질 조성물을 고려한다. 다른 구현예에서, GH 성분은 하기에 보다 완전하게 기술된, 스페이서 서열 내에 혼입된 임의의 절단 서열의 절단에 의해 XTEN으로부터 hGH-XTEN으로의 이의 방출시 생물학적으로 활성이 되거나 생물학적 활성에 있어서의 증가를 갖는다.

hGH-XTEN 조성물의 하나의 구현예에서, 본 발명은 화학식 I의 융합 단백질을 제공한다:

(XTEN)x-GH-(XTEN)y I

여기서 각각 서로 독립적으로, GH는 사람 성장 호르몬이고; x는 0 또는 1이며 y는 0 또는 1이고, 여기서 x+y는>1이고; XTEN는 연장된 재조합체 폴리펩타이드이다.

hGH-XTEN 조성물의 다른 구현예에서, 본 발명은 화학식 II의 융합 단백질을 제공한다:

(XTEN)x-(GH)-(S)y-(XTEN)y II

여기서, 각각 독립적으로, GH는 사람 성장 호르몬이고; S는 절단 서열을 임의로 포함할 수 있는 1 내지 약 50개 아미노산 잔기를 갖는 스페이서 서열이며; x는 0 또는 1이고 y는 0 또는 1이며, 여기서 x+y는 >1이고; XTEN은 연장된 재조합체 폴리펩타이드이다.

다른 구현예에서, 본 발명은 분리된 융합 단백질을 제공하며, 여기서 당해 융합 단백질은 화학식 III이다:

(GH)-(S)x-(XTEN)-(S)y-(GH)-(S)z-(XTEN)z III

여기서 각각 독립적으로, GH는 사람 성장 호르몬이고; S는 절단 서열을 임의로 포함할 수 있는 1 내지 약 50개의 아미노산 잔기를 갖는 스페이서 서열이며; x는 0 또는 1이고; y는 0 또는 1이며; z는 0 또는 1이고; XTEN은 연장된 재조합체 폴리펩타이드이다.

다른 구현예에서, 본 발명은 분리된 융합 단백질을 제공하며, 여기서 당해 융합 단백질은 화학식 IV이다:

(XTEN)x-(S)y-(GH)-(S)z-(XTEN)-(GH) IV

다른 구현예에서, 본 발명은 분리된 융합 단백질을 제공하며, 여기서 당해 융합 단백질은 화학식 V이다:

(GH)x-(S)x-(GH)-(S)y-(XTEN) V

여기서 각각 독립적으로, GH는 성장 호르몬이고; S는 절단 서열을 임의로 포함할 수 있는 1 내지 약 50개 아미노산 잔기를 지닌 스페이서 서열이며; x는 0 또는 1이고; y는 0 또는 1이며; XTEN은 연장된 재조합체 폴리펩타이드이다.

다른 구현예에서, 본 발명은 분리된 융합 단백질을 제공하며, 여기서 당해 융합 단백질은 화학식 VI이다:

(XTEN)-(S)x-(GH)-(S)y-(GH) VI

다른 구현예에서, 본 발명은 분리된 융합 단백질을 제공하며, 여기서 당해 융합 단백질은 화학식 VII이다:

(XTEN)-(S)x-(GH)-(S)y-(GH)-(XTEN) VII

다른 구현예에서, 본 발명은 분리된 융합 단백질을 제공하며, 여기서 당해 융합 단백질은 화학식 VIII이다:

((S)m-(GH)x-(S)n-(XTEN)y-(S)o)t VIII

여기서 t는 0 보다 큰 정수(1, 2, 3 등)이고; m, n, o, x, 및 y는 각각 독립적으로 정수(0, 1, 2, 3 등)이며, GH는 성장 호르몬이고; S는 절단 부위를 임의로 포함하는, 스페이서이고; XTEN은 연장된 재조합체 폴리펩타이드이며, 단 (1) x+ y > 1이고, (2) t = 1인 경우, x>0이며 y>0이고, (3) 하나 이상의 GH, S, 또는 XTEN가 존재하는 경우, 각각의 GH, XTEN, 또는 S는 동일하거나 독립적으로 상이하고; (4) t >1인 경우, 각각의 소단위내의 각각의 m, n, o, x, 또는 y는 동일하거나 독립적으로 상이하다.

다른 구현예에서, 본 발명은 분리된 융합 단백질을 제공하며, 여기서 융합 단백질은 화학식 IX이다:

(XTEN)x-(S)x-(GH)-(S)y-(XTEN)y IX

여기서 각각 독립적으로, GH는 사람 성장 호르몬이고; S는 절단 서열을 임의로 포함할 수 있는 1 내지 약 50개 아미노산 잔기를 갖는 스페이서 서열이며; x는 0 또는 1이고 y는 0 또는 1이며, 여기서 x+y >1이고; XTEN은 연장된 재조합체 폴리펩타이드이다.

어떠한 스페이서 서열 그룹도 본 발명에 포함된 융합 단백질 속에서 임의적이다. 스페이서는 숙주 세포로부터 융합 단백질의 발현을 향상시키거나 입체 장애를 감소시킴으로써 GH 성분이 이의 바람직한 3차 구조를 추정하고/하거나 이의 표적 수용체와 적절하게 상호작용하도록 하기 위해 제공된다. 스페이서 및 바람직한 스페이서를 확인하는 방법에 대해서는 본원에 참조로 구체적으로 포함된 문헌(참조: 예를 들면, George, 등 (2003) Protein Engineering 15:871879)을 참조한다. 하나의 구현예에서, 스페이서는, 길이가 1 내지 50개 아미노산 잔기이거나, 길이가 약 1 내지 25개 잔기, 또는 약 1 내지 10개 잔기인 하나 이상의 펩타이드 서열을 포함한다. 절단 부위를 배제한, 스페이서 서열은 20개의 천연 L 아미노산 중의 어느 것도 포함할 수 있으며 바람직하게는 글리신(G), 알라닌(A), 세린(S), 트레오닌(T), 글루타메이트(E) 및 프롤린(P)을 포함할 수 있으나, 이에 한정되지 않는 입체적으로 장애되지 않는 친수성 아미노산을 포함할 것이다. 일부 경우에, 스페이서는 폴리글리신 또는 폴리알라닌일 수 있거나 주로 글리신 및 알라닌 잔기의 조합의 혼합물일 수 있다. 하나의 구현예에서, hGH-XTEN 융합 단백질내 스페이서 서열 하나 또는 둘 다는 절단 서열을 각각 추가로 함유하며, 이는 동일하거나 상이하고, 여기서 절단 서열은 프로테아제에 의해 작용하여 융합 단백질로부터 GH를 방출한다.

하나의 구현예에서, hGH-XTEN 융합 단백질내로 혼입된 GH는 서열 41에 나타낸 바와 같은 서열에 대해 적어도 약 80%의 서열 동일성, 달리는 서열 번호: 41의 서열과 비교하여 적어도 약 81%, 또는 약 82%, 또는 약 83%, 또는 약 84%, 또는 약 85%, 또는 약 86%, 또는 약 87%, 또는 약 88%, 또는 약 89%, 또는 약 90%, 또는 약 91%, 또는 약 92%, 또는 약 93%, 또는 약 94%, 또는 약 95%, 또는 약 96%, 또는 약 97%, 또는 약 98%, 또는 약 99%, 또는 약 100%의 서열 동일성을 나타내는 서열을 갖는다. 앞서의 구현예의 GH는 검정을 사용하여 활성에 대해 평가될 수 있거나, 본원에 기술된 바와 같이 측정되거나 결정될 수 있으며, 상응하는 천연의 GH 서열과 비교하여 적어도 약 40%, 또는 약 50%, 또는 약 55%, 또는 약 60%, 또는 약 70%, 또는 약 80%, 또는 약 90%, 또는 약 95% 이상의 활성을 보유하는 서열이 시험대상자 hGH-XTEN에 포함되기에 적합한 것으로 고려될 수 있다. 적합한 수준의 활성을 보유하는 것으로 밝혀진 GH는 본원의 상기에서 기술된 하나 이상의 XTEN 폴리펩타이드에 연결될 수 있다. 하나의 구현에에서, 적합한 활성 수준을 보유하는 것으로 밝혀진 GH는 표 3으로부터의 서열에 대해 적어도 약 80% 서열 동일성, 달리는 표 3의 서열과 비교하여 적어도 약 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 약 100% 서열 동일성을 갖는 하나 이상의 XTEN 폴리펩타이드에 연결되어 키메라 융합 단백질을 생성할 수 있다.

단일의 XTEN에 연결된 단일의 GH를 함유하는 융합 단백질의 서열의 비-제한적 예는, 이의 전문이 본원에 참조로 포함된, Schellenberger 등의 WO10/144502A2의 표 35에 나타나 있다. 하나의 구현예에서, hGH-XTEN 조성물은 Schellenberger 등의 WO10/144502A2(이는, 이의 전문이 본원에 참조로 포함됨)의 표 35로부터의 hGH-XTEN에 대해 적어도 약 80% 서열 동일성, 달리는 이의 전문이 본원에 참조로 포함된, Schellenberger 등의 WO10/144502A2의 표 35로부터의 hGH-XTEN과 비교하여 적어도 약 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 약 100%의 서열 동일성을 갖는 융합 단백질을 포함할 수 있다. 하나 이상의 GH에 연결된 XTEN의 2개 분자를 함유하는 융합 단백질의 서열의 비-제한적인 예는 Schellenberger 등의 WO10/144502A2(이는, 이의 전문이 본원에 참조로 포함된다)의 표 36에 나타나 있으나, 본 발명은 또한 표 2로부터 선택된 서열에 대해 적어도 약 90% 서열 동일성을 나타내는, 동일하거나 상이할 수 있는 하나 또는 2개의 XTEN에 연결된 서열 번호: 41의 서열에 대해 적어도 약 90% 서열 동일성을 나타내는 서열을 지닌 다른 GH의 치환을 고려한다. GH, XTEN, 및 스페이서 아미노산을 포함하는 hGH-XTEN의 비-제한적 예는, 이의 전문이 본원에 참조로 포함된, Schellenberger 등의 WO10/144502A2에 나타나 있다. (또한 Schellenberger 등의 WO10/144502A2; Cleland 등의 U.S. 13/829,369; 및 Cleland 등의 WO13/184216를 참조하며, 이들 각각은, 이들의 전문이 본원에 참조로 포함된다).

VI). 본 발명의 조성물의 용도

신체의 성장에 포함된 대부분의 공정은 다수의 펩타이드 및 호르몬에 의해 조절되며, 이러한 펩타이드 및 호르몬, 및 이의 유사체는 성장 호르몬-관련된 질병, 질환 및 상태의 치료시 유용성이 밝혀져 있다. 그러나, 시판되는 성장 호르몬을 사용하여 소아 환자를 치료하는 것은 이러한 질병, 질환 및 상태로 고통받는 소아 환자의 관리시 최적 미만의 성공을 충족하여 왔다. 특히, 투여량 최적화 및 투여 빈도는 소아 환자에서 성장 호르몬-관련된 질병 및 질환의 치료시 사용된 펩타이드 및 호르몬 생물학에 중요하다. 성장 호르몬이 짧은 반감기(예를 들면, 피하 투여되는 경우 일반적으로 4시감 미만)를 가지며, 임상적 이점을 달성하기 위해서는 빈번한(예를 들면, 매일) 투여가 필수적이며, 이는 이러한 소아 환자의 관리에 어려움을 초래한다. 매일 성장 호르몬(GH) 주사에 따른 비-순응성은 치료 효과의 손실을 유발할 수 있다.

재조합체 hGH(rhGH)에 대한 현재의 치료 프로토콜과 비교하여, 소아 PGHD 환자에 대한 hGH-XTEN 융합 단백질의 이점은 주사의 수 및 빈도에 있어서 실질적인 감소를 포함할 수 있다. 예를 들면, 임상 시험의 제2a 상 단계에서(실시예 2 참조), 소아 PGHD 환자는, 매일 rhGH 치료요법을 겪는 소아 환자들이 동일한 기간에 걸쳐 제공받을 수 있는 것보다 유의적으로 더 적은 총 주사(예를 들면, 이들 환자들이 6개월의 매일의 rhGH 치료요법을 제공받을 수 있는 rhGH의 180회의 총 주사와 비교하여 hGH-XTEN 융합 단백질을 6개월 동안 1개월당 1회로, 총 6회 주사)를 제공받을 것이다. 현재의 임상 실시에서 rhGH를 사용한 주사의 빈도는 흔히 순응도의 결여를 유발한다. 매일의 치료요법에 대한 순응도는 정상의 성장을 위해 충분한 잠재성을 실현시키는데 중요하이다(참조: Rosenfeld, R. G. & Bakker, B. (2008). Endocr Pract 14, 143-54; Desrosiers, P. 등 (2005). Pediatr Endocrinol Rev 2 Suppl 3, 327-31). hGH-XTEN 융합 단백질은 PGHD를 지닌 어린이에 대해 비-매일(예를 들면, 주당 2회, 매주, 매 격주, 매 3주, 또는 매달) 투여의 장점을 제공하며, 현재의 매일 주사에 대한 안전한 대체요법을 제공하는 것으로 예측된다. 매일의 rhGH 치료요법보다 덜 빈번하게 투여된 hGH 생성물은 보다 큰 순응도를 제공할 수 있으므로 PGHD 어린이에 대해 보다 우수한 장기간 치료 결과를 제공할 수 있다.

하나의 측면에서, 본 발명은 소아 사람 환자에서 성장 호르몬 결핍증을 포함하나, 이에 한정되지 않는 GH에 의해 매개된 질병, 질환 또는 상태에 있어서 유리한 효과를 달성하기 위한 방법을 제공한다. 다른 측면에서, 본 발명은 소아 환자에서 성장 호르몬 결핍증을 포함하나, 이에 한정되지 않는 GH에 의해 매개된 질병, 질환 또는 상태에 있어서 유리한 효과를 달성하기 위한 방법을 제공한다. 유리한 효과는 GH-관련된 질병, 결핍증, 질환 또는 상태를 치료하거나, 중재하거나, 완화시키는 것을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 본 발명은 비교적 짧은 말기 반감기 및/또는 협소한 치료학적 윈도우를 갖는 GH의 단점 및/또는 제한에 관한 것이다.

1. 소아 성장 호르몬 결핍증(PGHD)

본원에 사용된 것으로서, "소아 성장 호르몬 결핍증" 또는 "PGHD"는 성장 호르몬을 사용한 치료로부터 유리할 수 있는 사람 소아 환자에서 질병, 결핍증, 질환 또는 상태를 말한다. PGHD는 GH 결핍증(예를 들면, 뇌하수체 PGHD, 시상하부 PGHD, 작용성 PGHD, 및 특발성 PGHD)의 공급원을 기본으로 하여 분류되는 질환을 포함한다. 회하수체 또는 "전통적인" PGHD 는 성장 호르몬을 생산하는 뇌하수체의 불능이다. "시상하부 PGHD"는 신경내분비 메시지전달 호르몬, GH를 생산하는 뇌하수체의 적절한 작용화를 지시하는, 성장 호르몬 방출 호르몬(GHRH)을 생산하고/하거나 전달하는 시상하부의 불능이며; "작용성 PGHD"는 GH를 생산하고/하거나, 흡수하고/하거나, 이용하기 위한 시상하부의 불능과 관련된 다른 호르몬 및 대사 작용의 불능이다. PGHD는 또한 특발성 단신 상태, 터너 증후군(Turner syndrome), 프라더-윌리 증후군(Prader Willi syndrome), 저체중아(small for gestational age: SGA), 단신 호메오박스(short stature homeobox)-함유 유전자(SHOX 결핍증); 및 만성 신장병(CKD)을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. PGHD는 선천적이거나 천연적으로 획득될 수 있다.

PGHD는 또한 태내 발육 지연, 선천적인 뇌하수체 기능부전 또는 후천적인 뇌하수체 기능부전(종양, 예를 들면, 두개인두종에 의해 유발된 뇌하수체 기능부전); 저체중아, 뇌하수체내 또는 근처에서 발달 결핍증; GH의 생산을 지닌 유전적 문제; 프라더-윌리 증후군; 터너 증후군; 특발성 단신 상태; 태내 발육 지연; 정중앙 안면 결함; 및 뇌하수체 및 종양, 감염, 방사선 치료, 또는 심각한 두부 손상으로 인한 주변 부위에 대한 손상의 결과로서 발생할 수 있다.

PGHD는, GH 결핍증이 만연하게 되어진 생애의 단계를 기준으로 분류될 수 있다. 예를 들면, 청소년은 유아 또는 전-청소년기 어린이에서 시작하는, 어린시절 발병하는 PGHD(어린이에서 발병하는 PGHD 및 어린이에서 발병하는 특발성 PGHD 포함)이 연속인 PGHD를 가질 수 있다. 어린시절 발병하는 PGHD의 원인은 상기 제공되어 있다. 전-청소년기 어린이로서 뇌 종양에서 살아남은 청소년은 수술, 두개 방사선 또는 화학치료요법의 영향으로부터 발달하는 PGHD의 위험에 처할 수 있다. PGHD는 청소년기, 즉, 어린이에게서 발병하는 PGHD로 발달할 수 있으며, 이는 전-청소년기 어린이로서 GH-결핍증으로 진단되지 않았다. PGHD는 뇌하수체에 대한 손상 또는 외상에 의해 유발될 수 있다. 손상은 전형적으로 종양(예를 들면, 뇌하수체 속 및/또는 주변의 종양; 또는 시상하부 속의 종양)에 의해 유발된다. 분비선 또는 손상을 압착할 수 있는 뇌하수체 종양은, 종양이 신경수술을 통해 제거되는 경우 발생할 수 있다. 뇌하수체는 또한 감염, 혈관 질병, 심각한 두부 손상, 또는 두부 및 목의 종양을 치료하기 위한 두개 방사선 또는 화학 치료요법에 의해 손상될 수 있다. PGHD는 이들의 출생시 또는 출생 직후 어린이 또는 청소년기에 발생한 외상; 중추 신경계 감염; 시상하부 또는 뇌하수체의 종양; 침윤성 또는 육아종 질병; 두개 방사선; 수술; 또는 특발성 원인에 의해 유발될 수 있다.

2. hGH-XTEN 일시 투여량 및 용량 요법

하나의 측면에서, 본 발명은 사람 성장 호르몬-XTEN(hGH-XTEN) 융합 단백질을 환자에게 투여함으로써 사람 소아 환자에서 소아 성장 호르몬 결핍증(PGHD)를 치료하는 방법을 제공한다. 하나의 측면에서, 당해 방법은 hGH-XTEN 융합 단백질을 소아 환자에게 일시 투여량으로서 투여함을 포함한다. 다른 구현예에서, 일시 투여량은 치료학적으로 유효한 체중 조절된 일시 투여량이다. 하나의 다른 구현예에서, 일시 투여량은 약 0.8mg/kg 내지 약 6.3mg/kg이다. 하나의 구현예에서, 융합 단백질은 서열 번호: 1에 대하여 적어도 약 90%의 서열 동일성을 지닌 아미노산 서열을 포함한다. 다른 구현예에서, 융합 단백질은 서열 번호: 1에 대해 적어도 약 91%, 또는 적어도 약 92%, 또는 적어도 약 93%, 또는 적어도 약 94%, 또는 적어도 약 95%, 또는 적어도 약 96%, 또는 적어도 약 97%, 또는 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99%의 서열 동일성을 포함한다. 다른 구현예에서, 융합 단백질은 서열 번호: 1의 서열을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.

하나의 측면에서, 일시 투여량은 투여량 범위에 걸쳐 투여될 수 있다. 약 제1의 mg/kg 내지 약 제2의 mg/kg 사이의 일시 투여량의 투여에 대해 참조가 이루어진 경우, "제1의 mg/kg" 용어는 제1의 mg/kg 값을 포함할 수 있고 "제2의 mg/kg" 용어는 제2의 mg/kg 값을 포함할 수 있음에 주목하여야 한다.

하나의 구현예에서, hGH-XTEN 융합 단백질은 (i) 서열 번호: 1에 대해 적어도 약 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산; (ii) 서열 번호: 1의 아미노산 서열; (iii) 서열 번호: 4(AE912-hGH)에 대해 적어도 약 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열; (iv) 서열 번호: 4(AE912-hGH)의 아미노산 서열; (v) 서열 번호: 38에 대해 적어도 약 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열; 또는 (vi) 서열 번호: 38의 아미노산 서열을 포함한다.

하나의 다른 측면에서, hGH-XTEN 융합 단백질의 일시 투여량은 유한 또는 무한일 수 있는, 적합한 기간에 걸쳐 정기적으로 사람 소아 환자에게 투여된다. 하나의 구현예에서, 일시 투여량은 매주, 매 격주, 매 3주, 또는 매달 투여된다. 다른 구현예에서, 일시 투여량은 1달에 1회, 1달에 2회, 1달에 3회, 또는 1달에 4회 투여된다. 다른 구현예에서, 일시 투여량은 약 7일마다, 약 10일마다, 약 14일마다, 약 21일마다, 약 28일마다, 또는 약 30일마다 투여된다. 하나의 구현예에서, 일시 투여량은 비-매일 기준으로 투여되거나, 비-매일 일시 투여량이다.

추가의 측면에서, hGH-XTEN 융합 단백질의 일시 투여량은 사람 소아 환자에게 (i) 약 1.0mg/kg 내지 약 6.3mg/kg; (ii) 약 1.0mg/kg 내지 약 1.5mg/kg; (iii) 약 2.0mg/kg 내지 약 3mg/kg, 또는 (iv) 약 4.5mg/kg 내지 약 5.5mg/kg의 투여량으로 투여되며, 여기서 당해 투여량은 매달, 매달 2회, 또는 주 기준으로 투여된다. 하나의 구현예에서, 융합 단백질은 약 1.0mg/kg, 약 1.05mg/kg, 약 1.10mg/kg, 약 1.15mg/kg, 약 1.20mg/kg, 약 1.25mg/kg, 약 1.30mg/kg, 약 1.35mg/kg, 약 1.40mg/kg, 약 1.45mg/kg, 및 약 1.50mg/kg의 투여량으로 투여된다. 다른 구현예에서, 융합 단백질은 약 2.0mg/kg, 약 2.10mg/kg, 약 2.20mg/kg, 약 2.30mg/kg, 약 2.40mg/kg, 약 2.50mg/kg, 약 2.60mg/kg, 약 2.70mg/kg, 약 2.80mg/kg, 약 2.90mg/kg, 및 약 3.0mg/kg의 투여량으로 투여되며, 여기서 당해 투여량은 매달, 매달 2회, 또는 주 기준으로 투여된다. 하나의 다른 구현예에서, 융합 단백질은 약 4.50mg/kg, 약 4.60mg/kg, 약 4.70mg/kg, 약 4.80mg/kg, 약 4.90mg/kg, 약 5.0mg/kg, 약 5.10mg/kg, 약 5.20mg/kg, 약 5.30mg/kg, 약 5.40mg/kg, 약 5.50mg/kg, 약 6.0mg/kg, 및 약 6.3mg/kg의 투여량으로 투여되며, 여기서 당해 투여량은 매달, 매달 2회, 또는 주 기준으로 투여된다. 바람직한 구현예에서, 융합 단백질은 (i) 주 기준으로 약 1.15mg/kg의 투여량으로; (ii) 매달 2회 기준으로 약 2.5mg/kg의 투여량으로; 및/또는 (iii) 매달 기준으로 약 5.0mg/kg의 투여량으로 투여된다.

다른 구현예에서, 융합 단백질은 약 0.8mg/kg, 약 0.9mg/kg, 1.60mg/kg, 약 1.70mg/kg, 약 1.80mg/kg, 약 1.90mg/kg, 약 3.10mg/kg, 약 3.20mg/kg, 약 3.30mg/kg, 약 3.40mg/kg, 약 3.50mg/kg, 약 3.60mg/kg, 약 3.70mg/kg, 약 3.80mg/kg, 약 3.9mg/kg, 약 4.0mg/kg, 약 4.10mg/kg, 약 4.20mg/kg, 약 4.30mg/kg, 약 4.40mg/kg, 약 5.60mg/kg, 약 5.70mg/kg, 약 5.80mg/kg, 및 약 5.90mg/kg의 투여량으로 투여되며, 여기서 당해 투여량은 매달, 매달 2회, 또는 주 기준으로 투여된다.

다른 측면에서, 사람 소아 환자용 hGH-XTEN 융합 단백질의 추가의 일시 투여량 및 일시 투여량의 범위가 적합하다. 하나의 구현예에서, hGH-XTEN의 일시 투여량은

(i) 약 0.8mg/kg 내지 약 1.2mg/kg, 약 1.2mg/kg 내지 약 1.8mg/kg, 약 1.8mg/kg 내지 약 2.7mg/kg, 약 2.7mg/kg 내지 약 4mg/kg, 약 4mg/kg 내지 약 6mg/kg, 약 0.8mg/kg 내지 약 1.8mg/kg, 약 0.8mg/kg 내지 약 2.7mg/kg, 또는 약 0.8mg/kg 내지 약 4mg/kg;

(ii) 약 1.2mg/kg 내지 약 1.8mg/kg, 약 1.2mg/kg 내지 약 2.7mg/kg, 약 1.2mg/kg 내지 약 4mg/kg, 또는 약 1.2mg/kg 내지 약 6.3mg/kg;

(iii) 약 1.8mg/kg 내지 약 2.7mg/kg, 약 1.8mg/kg 내지 약 4mg/kg, 또는 약 1.8mg/kg 내지 약 6mg/kg;

(iv) 약 2.7mg/kg 내지 약 4mg/kg, 약 2.7mg/kg 내지 약 6mg/kg; 또는

(v) 약 4mg/kg 내지 약 6mg/kg이다.

다른 구현예에서, hGH-XTEN의 일시 투여량은 약 0.8mg/kg, 약 1.0mg/kg, 약 1.2mg/kg, 약 1.4mg/kg, 약 1.6mg/kg, 약 1.8mg/kg, 약 2.0mg/kg, 약 2.2mg/kg, 약 2.4mg/kg, 약 2.6mg/kg, 약 2.7mg/kg, 약 2.8mg/kg, 약 3mg/kg, 약 3.2mg/kg, 약 3.4mg/kg, 약 3.6mg/kg, 약 3.8mg/kg, 약 4mg/kg, 약 4.2mg/kg, 약 4.4mg/kg, 약 4.6mg/kg, 약 4.8mg/kg, 약 5mg/kg, 약 5.2mg/kg, 약 5.4mg/kg, 약 5.6mg/kg, 약 5.8mg/kg, 약 6mg/kg, 및 약 6.3mg/kg으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.

하나의 구현예에서, 당해 방법은 PGHD를 지닌 사람 소아 환자에게 사람 성장 호르몬 hGH-XTEN 융합 단백질의 적어도 2회의 일시 투여량을 투여함을 포함하며, 여기서 상기 투여는 적어도 약 7일, 적어도 약 10일, 적어도 약 14일, 적어도 약 21일, 적어도 약 28일, 또는 적어도 약 30일까지 분리된다. 하나의 다른 구현예에서, 일시 투여량은 치료학적으로 효과적인 체중 조절된 일시 투여량(본원에 기술된 바와 같음)이다. 하나의 다른 구현예에서, 투여 단계는 도 1에 설정된 아미노산 서열(서열 번호: 1)을 포함하는 유효량의 hGH-XTEN 융합 단백질을 포함하는 약제학적 조성물을 투여함을 포함한다. 다른 구현예에서, 본원에 기술된 방법은 도 1에 설정된 서열(서열 번호: 1)에 대해 적어도 약 90%, 또는 적어도 약 95%, 또는 적어도 약 96%, 또는 적어도 약 97%, 또는 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99%의 서열 동일성을 갖는 융합 단백질의 용도를 포함한다.

다른 구현예에서, 일시 투여량의 투여는 적어도 약 1개월, 적어도 약 31일, 적어도 약 30일, 적어도 약 29일, 적어도 약 28일, 적어도 약 27일, 적어도 약 26일, 적어도 약 25일, 적어도 약 24일, 적어도 약 23일, 적어도 약 22일, 적어도 약 21일, 적어도 약 20일, 적어도 약 19일, 적어도 약 18일, 적어도 약 17일, 적어도 약 16일, 적어도 약 15일, 적어도 약 14일, 적어도 약 13일, 적어도 약 12일, 적어도 약 11일, 적어도 약 10일, 적어도 약 9일, 적어도 약 8일, 적어도 약 7일, 적어도 약 6일, 적어도 약 5일, 적어도 약 4일, 적어도 약 3일, 또는 적어도 약 2일까지 분리된다.

다른 구현예에서, 치료학적으로 유효한 체중 조절된 일시 투여량의 hGH-XTEN 융합 단백질은 사람 소아 환자에게 피하 투여된다.

일반적으로, "일시 투여량"은 짧은 기간 내에 투여된 투여량이다. 다른 구현예에서, 일시 투여량은 약 1 내지 약 30분, 약 1 내지 약 20분, 약 1 내지 약 15분, 약 1 내지 약 10분, 또는 약 1 내지 약 5분 내에 투여된다. 하나의 구현예에서, 일시 투여량은 약 1 내지 약 5분 내에 투여된다. 하나의 다른 구현예에서, 일시 투여량은 피하 일시 투여량이다.

본 발명은 사람 소아 환자용의 본 발명의 hGH-XTEN 약제학적 조성물에 대한 투여량 요법을 달성하기 위한 방법을 제공한다. 당해 방법은 다양한 기간을 사용하여 치료학적 유효량의 hGH-XTEN 조성물의 연속 투여량을 투여하여, 바람직한 매개변수, 혈액 수준 또는 임상 효과를 달성하고/하거나 유지하는데 충분한 투여의 간격을 결정함을 포함하며; 유효 간격에서의 이러한 연속 투여량의 치료학적 유효량은 PGHD 상태에 대한 hGH-XTEN용의 치료학적으로 유효한 투여량 요법을 달성한다. 따라서, 하나의 측면에서, 본 발명은 사람 성장 호르몬 결핍증(PGHD)에 치료학적으로 효과적인 치료 요법에서 사용하기 위한 hGH-XTEN 조성물을 제공한다.

다른 측면에서, 본 발명은 사람 소아 성장 호르몬 결핍증(PGHD)용 치료 요법에서 사용하기 위한 hGH-XTEN 융합 단백질을 제공하며, 당해 요법은 hGH-XTEN 융합 단백질을 사람 소아 환자에게 투여함을 포함한다. 하나의 구현예에서, 치료 요법은 특정의 시간 간격(본원에 기술된 바와 같음)에서 hGH-XTEN 융합 단백질의 일시 투여량(본원에 기술된 바와 같음)을 사람 소아 환자에게 투여함을 포함한다. 하나의 추가의 구현예에서, 치료 요법은 hGH-XTEN의 일시 투여량의 피하 투여를 포함한다. 하나의 구현예에서, 당해 요법은 적어도 2개의 일시 투여량(본원에 기술된 바와 같음)의 hGH-XTEN 융합 단백질을 사람 소아 환자에게 적절한 시간 간격(본원에 기술된 바와 같음)까지 분리하여 투여함을 포함한다.

다른 구현예에서, 본 발명은 연속적인 투여량 요법을 제공하며, 여기서 각각의 일시 투여량의 hGH-XTEN은 매주(또는 주마다), 매 2주마다, 매 3주마다, 매 4주마다, 또는 매달 투여된다.

치료 요법에서 사용하기 위한 hGH-XTEN 조성물의 하나의 구현예에서, hGH-XTEN 융합 단백질은 도 1에 설정된 바와 같이 나타낸 아미노산 서열(서열 번호: 1)을 포함한다. 하나의 구현에에서, 치료학적 유효 투여량의 치료 요법은 적어도 2개의 치료학적으로 유효한 체중 조절된 일시 투여량을 소아 환자에게 투여함을 포함하며, 여기서 당해 투여량은 피하 투여된다.

3. rhGH에 대해 동일한 hGH-XTEN

다른 구현예에서, 본 발명은 매일 투여된 상응하는 hGH(XTEN에 연결되지 않음)의 유효량과 동일하거나, 이의 미만과 동일한 일시 투여량으로서 치료학적 유효량의 hGH-XTEN 융합 단백질을 사용하여 소아 환자에서 사람 성장 호르몬 결핍증(PGHD)를 치료하는 방법을 제공한다. 하나의 구현예에서, 일시 투여량의 융합 단백질은 약 4.8 μg의 hGH/kg/일 내지 약 37 μg hGH/kg/일 미만; 또는 약 4.8 μg hGH/kg/일, 약 7.4 μg hGH/kg/일, 약 11.1 μg hGH/kg/일, 약 16.7 μg hGH/kg/일, 약 24.7 μg hGH/kg/일, 또는 약 37 μg hGH/kg/일 미만 또는 이와 동일한 양과 동일하다. 적절한 평균 소아 rhGH 매일 투여량은 40 μg의 hGH/kg/일 내지 43 μg의 hGH/kg/일이다. 다른 구현예에서, 일시 투여량은 hGH-XTEN 융합 단백질의 치료학적으로 유효한 체중 조절된 일시 투여량이다.

하나의 추가의 측면에서, 본 발명은 사람 소아 성장 호르몬 결핍증(PGHD)을 지닌 사람 소아 환자에게 hGH-XTEN 융합 단백질을 재조합체 hGH의 동일한 매일 투여량 이하 또는 미만인 용량(예를 들면, rhGH의 추천된 매일 투여량)으로 투여함을 포함하여, PGHD를 치료하는 방법을 제공한다.

다른 구현예에서, 상기 일시 투여량의 투여는 적어도 약 7 일, 적어도 약 10 일, 적어도 약 14 일, 적어도 약 21 일, 적어도 약 28 일, 적어도 약 30 일, 적어도 약 1개월까지 분리된다.

하나의 구현예에서, 일시 투여량의 hGH-XTEN은 약 43 μg의 hGH/kg/일 미만인 hGH/kg/일과 동일하다. 다른 구현예에서, 일시 투여량의 hGH-XTEN은 약 40 μg의 hGH/kg/일 미만인 hGH/kg/일 용량과 동일하다. 다른 구현예에서, hGH-XTEN의 용량은 약 39 μg의 hGH/kg/일, 약 38 μg의 hGH/kg/ 일, 약 36 μg의 hGH/kg/ 일, 약 34 μg의 hGH/kg/ 일, 약 32 μg의 hGH/kg/ 일, 약 30 μg의 hGH/kg/ 일, 약 28 μg의 hGH/kg/ 일, 약 26 μg의 hGH/kg/ 일, 약 25 μg의 hGH/kg/ 일, 약 24 μg의 hGH/kg/ 일, 약 22 μg의 hGH/kg/ 일, 약 20 μg의 hGH/kg/ 일, 약 18 μg의 hGH/kg/ 일, 약 17 μg의 hGH/kg/ 일, 약 16 μg의 hGH/kg/ 일, 약 14 μg의 hGH/kg/ 일, 약 12 μg의 hGH/kg/ 일, 약 11 μg의 hGH/kg/ 일, 약 8 μg의 hGH/kg/ 일, 약 7 μg의 hGH/kg/ 일, 약 6 μg의 hGH/kg/ 일, 약 5 μg의 hGH/kg/ 일, 약 4 μg의 hGH/kg/ 일, 약 2 μg의 hGH/kg/일 미만과 동일하다.

다른 일 구현예에서, 일시 투여량의 hGH-XTEN은 약 7일, 약 14일, 약 21일, 약 28일, 또는 약 30일에 걸쳐 투여된 누적된 동량의 hGH/kg/일 용량과 동일하거나 미만이다.

여전히 다른 구현예에서, hGH-XTEN 융합 단백질은 도 1에 설정된 것으로서 나타낸 아미노산 서열(서열 번호: 1)을 포함한다. 다른 구현예에서, 투여는 피하 투여이다.

일 측면에서, 일시 투여량의 hGH-XTEN은 hGH/kg/일 투여량 미만과 동일한 투여량의 범위에걸쳐 투여될 수 있다. 약 제1의 μg의 hGH/kg/일 내지 약 제2의 μg의 hGH/kg/일인 hGH/kg/일 미만과 동일한 일시 투여량에 대해 참조하는 경우, "제1의 μg의 hGH/kg/일" 용어는 제1의 μg의 hGH/kg/일 값을 포함할 수 있고 "제2의 μg의 hGH/kg/일" 용어는 제2의 μg의 hGH/kg/일 값을 포함할 수 있다.

4. hGH-XTEN 및 IGF-I 수준

본 발명의 방법은 hGH-XTEN 융합 단백질을 사용한 치료 후 사람 소아 환자에서 생성되는 IGF-I 수준과 관련하여 유리하다. 고 수준의 혈액 IGF-I는, 고 IGF-I이 암에 대한 위험 인자로 여겨지므로 바람직하지 않다(참조: Svensson 등 J Clin Endocrin Metab. epub September 26, 2012 as doi:10.1210/jc.2012-2329). 사람에서 IGF-I 생성은 주로 GH 신호생성의 결과이며 IGF-I는 GH 치료요법 동안 관찰된 동화작용에 대한 중요한 매개인자이다(참조: Le Roith 등 (2001). Endocr Rev 22, 53-74). 따라서, IGF-I은 hGH-XTEN 융합 단백질 생활성에 대한 중요한 약동학적 마커이다. 실시시, GH(예를 들면, 매일의 rhGH 치료요법)에 대한 IGF-I 반응은 연령- 및 성별-특이적인 규범 데이터의 측면에서 해석된다(참조: Vance 등 (1999). N Engl J Med 341, 1206-16; Molitch 등 (2011). J Clin Endocrinol Metab 96, 1587-609). 당해 해석은 IGF-I 표준 편차 점수(IGF-I SDS)의 사용으로 가장 용이하게 수행된다. 또한, 건강한 개인에서와 같이, GH 결핍증을 가진 소아 환자는 기준선 IGF-I 값 범위를 갖는다. 따라서, 0시에 기준선에 대해 교정된 IGF-I SDS를 사용하여 IGF-I 반응에 있어서 잠재적인, hGH-XTEN 융합 단백질 투여량 효과를 시험할 수 있다.

하나의 측면에서, 본 발명은 PGHD의 치료 방법을 제공하며, 여기서 사람 소아 환자는 hGH-XTEN 융합 단백질의 투여 후 정상 범위에서 IGF-I 반응(예를 들면, 평균 IGF-I SDS에 의해 측정된 것으로서)을 유지한다. IGF-I SDS의 경우, 정상 범위는 일반적으로 약 -1.5 내지 약 1.5이지만 또한 약 -2.0 내지 약 2.0일 수 있다.

약 제1의 값(예를 들면, -2.0) 내지 약 제2의 값(예를 들면, 2.0)의 IGF-I SDS를 참조하는 경우, "제1의 값"은 제1의 값을 포함할 수 있고, 제2의 값"은 제2의 값을 포함할 수 있음이 이해되어야 한다.

하나의 구현예에서, 본 발명은 hGH-XTEN 융합 단백질을 소아 성장 호르몬 결핍증(PGHD)을 지닌 환자에게 투여함으로써 사람 소아 환자에서 소아 성장 호르몬 결핍증(PGHD)을 치료하는 방법을 제공하며, 여기서 사람 환자는 투여 후 약 -2.0 내지 약 2.0의 혈청 IGF-I 표준 편차 점수(SDS)를 갖는다. 하나의 구현예에서, 당해 방법은 일시 투여량(본원에 기술된 바와 같음)으로서 hGH-XTEN 융합단백질을 소아 환자에게 투여함을 포함한다. 다른 구현예에서, 일시 투여량은 치료학적으로 유효한 체중 조절된 일시 투여량이다. 다른 구현예에서, 소아 환자는 hGH-XTEN의 투여 후 약 -2.0 이상, 약 -1.5 이상, 약 -1.0 이상, 약 -0.5 이상, 또는 약 0 이상, 약 0.5 이상, 약 1.0 이상, 약 1.5 이상, 약 1.6 이상, 약 1.7 이상, 약 1.8 이상, 또는 약 1.9 이상의 혈청 IGF-I SDS를 갖는다.

다른 구현예에서, 일시 투여량의 hGH-XTEN는 일시 투여량의 투여 후 소아 환자의 혈청 IGF-I 표준 편차 점수(SDS)를 (a) 약 -2.0 내지 약 2.0, 또는 (b) 약 0 내지 약 2.0으로 적어도 약 7일 동안, 적어도 약 8일, 적어도 약 9일, 적어도 약 10일, 적어도 약 11일, 적어도 약 12일, 적어도 약 13일, 적어도 약 14일, 적어도 약 15일, 적어도 약 16일, 적어도 약 17일, 적어도 약 18일, 적어도 약 19일, 적어도 약 20일, 적어도 약 21일, 적어도 약 22일, 적어도 약 23일, 적어도 약 24일, 적어도 약 25일, 적어도 약 26일, 적어도 약 27일, 적어도 약 28일, 적어도 약 29일 또는 적어도 약 30일 동안 유지하는데 효과적이다.

다른 구현예에서, 다수의 연속적인 hGH-XTEN 일시 투여량의 투여는 소아 환자의 혈청 IGF-I 표준 편차 점수(SDS)를 일시 투여량의 투여 사이에서 (a) 약 -2.0 내지 약 2.0, 또는 (b) 약 0 내지 약 2.0에서 적어도 약 7일, 적어도 약 8일, 적어도 약 9일, 적어도 약 10일, 적어도 약 11일, 적어도 약 12일, 적어도 약 13일, 적어도 약 14일, 적어도 약 15일, 적어도 약 16일, 적어도 약 17일, 적어도 약 18일, 적어도 약 19일, 적어도 약 20일, 적어도 약 21일, 적어도 약 22일, 적어도 약 23일, 적어도 약 24일, 적어도 약 25일, 적어도 약 26일, 적어도 약 27일, 적어도 약 28일, 적어도 약 29일, 또는 적어도 약 30일 동안 유지하는데 효과적이다. 앞서의 구현예에서, 일시 투여량은 매주, 매 2주, 매 3주, 또는 매달 투여된다.

다른 구현예에서, 다수의 연속적인 hGH-XTEN 일시 투여량의 투여는 소아 환자의 평균 혈청 IGF-I 표준 편차 점수(SDS) 를 일시 투여량의 투여 사이에서 (a) 약 -2.0 내지 약 2.0, 또는 (b)약 -1.0 내지 약 2.0으로 적어도 약 7일, 적어도 약 8일, 적어도 약 9일, 적어도 약 10일, 적어도 약 11일, 적어도 약 12일, 적어도 약 13일, 적어도 약 14일, 적어도 약 15일, 적어도 약 16일, 적어도 약 17일, 적어도 약 18일, 적어도 약 19일, 적어도 약 20일, 적어도 약 21일, 적어도 약 22일, 적어도 약 23일, 적어도 약 24일, 적어도 약 25일, 적어도 약 26일, 적어도 약 27일, 적어도 약 28일, 적어도 약 29일, 또는 적어도 약 30일 동안 유지하는데 효과적이다. 앞서의 구현예에서, 일시 투여량은 매주, 매 2주, 매 3주, 또는 매달 투여된다.

다른 구현예에서, 다수의 연속적인 hGH-XTEN 일시 투여량의 투여는 일시 투여량의 투여 사이에 소아 환자의 혈청 IGF-I 표준 편차 점수(SDS)를 (a) 약 -2.0 초과, 또는 (b) 약 0 초과, 또는 (c) 약 1.0 초과, 또는 (d) 약 1.5 초과로 적어도 약 7일, 적어도 약 8일, 적어도 약 9일, 적어도 약 10일, 적어도 약 11일, 적어도 약 12일, 적어도 약 13일, 적어도 약 14일, 적어도 약 15일, 적어도 약 16일, 적어도 약 17일, 적어도 약 18일, 적어도 약 19일, 적어도 약 20일, 적어도 약 21일, 적어도 약 22일, 적어도 약 23일, 적어도 약 24일, 적어도 약 25일, 적어도 약 26일, 적어도 약 27일, 적어도 약 28일, 적어도 약 29일, 또는 적어도 약 30일 동안 유지시키는데 효과적이다. 앞서의 구현예에서, 일시 투여량은 매주, 매 2주, 매 3주, 또는 매달 투여된다.

다른 구현예에서, 다수의 연속적인 hGH-XTEN 일시 투여량의 투여는 일시 투여량의 투여 사이에서 소아 환자의 혈청 IGF-I 표준 편차 점수(SDS)를 (a) 약 1.5 이하, 또는 (b) 약 2.0 이하로 적어도 약 7일, 적어도 약 8일, 적어도 약 9일, 적어도 약 10일, 적어도 약 11일, 적어도 약 12일, 적어도 약 13일, 적어도 약 14일, 적어도 약 15일, 적어도 약 16일, 적어도 약 17일, 적어도 약 18일, 적어도 약 19일, 적어도 약 20일, 적어도 약 21일, 적어도 약 22일, 적어도 약 23일, 적어도 약 24일, 적어도 약 25일, 적어도 약 26일, 적어도 약 27일, 적어도 약 28일, 적어도 약 29일, 또는 적어도 약 30일 동안 유지시키는데 효과적이다. 앞서의 구현예에서, 일시 투여량은 매주, 매 2주, 매 3주, 또는 매달 투여된다.

다른 구현예에서, 다수의 연속적인 hGH-XTEN 일시 투여량의 투여는 일시 투여량의 투여 사이에서 기준선 SDS와 비교하여 평균 최대 혈청 IGF-I 표준 편차 점수(SDS)에 있어서 소아 환자의 변화를 (a) 약 0.5 내지 3.0, 또는 (b) 약 1.0 내지 2.5에서 적어도 약 7일, 적어도 약 8일, 적어도 약 9일, 적어도 약 10일, 적어도 약 11일, 적어도 약 12일, 적어도 약 13일, 적어도 약 14일, 적어도 약 15일, 적어도 약 16일, 적어도 약 17일, 적어도 약 18일, 적어도 약 19일, 적어도 약 20일, 적어도 약 21일, 적어도 약 22일, 적어도 약 23일, 적어도 약 24일, 적어도 약 25일, 적어도 약 26일, 적어도 약 27일, 적어도 약 28일, 적어도 약 29일, 또는 적어도 약 30일 동안 유지하는데 효과적이다. 앞서의 구현예에서, 일시 투여량은 매주, 매 2주, 매 3주, 또는 매달 투여된다.

다른 구현예에서, 투여 단계는 도 1에 설정된 아미노산 서열(서열 번호: 1)을 포함하는 유효량의 hGH-XTEN 융합 단백질을 포함하는 약제학적 조성물을 투여하는 단계를 포함한다.

하나의 다른 측면에서, 본 발명은 hGH-XTEN 융합 단백질을 투여하여 소아 환자에서 정상의 혈청 IGF-I 수준을 제공함으로써 소아 환자를 치료하는 방법을 제공한다. 하나의 구현예에서, hGH-XTEN 융합 단백질은 일시 투여량(본원에 기술된 바와 같음)으로서 투여된다. 다른 구현예에서, 적어도 2개의 일시 투여량은 시간 간격(본원에 기술된 바와 같음)에 의해 분리되어 투여된다. 하나의 다른 구현예에서, 일시 투여량(들)은 융합 단백질의 치료학적으로 유효한 체중 조절된 일시 투여량이다. 추가의 다른 구현예에서, 상기 일시 투여량(들)의 hGH-XTEN의 투여는 일시 투여량의 투여 후 소아 시험대상자에서 혈청 IGF-I 수준의 표준화를 적어도 약 7일, 적어도 약 8일, 적어도 약 9일, 적어도 약 10일, 적어도 약 11일, 적어도 약 12일, 적어도 약 13일, 적어도 약 14일, 적어도 약 15일, 적어도 약 16일, 적어도 약 17일, 적어도 약 18일, 적어도 약 19일, 적어도 약 20일, 적어도 약 21일, 적어도 약 22일, 적어도 약 23일, 적어도 약 24일, 적어도 약 25일, 적어도 약 26일, 적어도 약 27일, 적어도 약 28일, 적어도 약 29일, 적어도 약 30일, 또는 적어도 약 1개월 동안 생성한다. 하나의 다른 구현예에서, 정상의 혈청 IGF-I 수준은 약 -2.0 초과; 약 -1.5 초과; 약 -1.0 초과; 약 0 초과; 약 0.5 초과; 약 1.0 초과; 또는 약 1.5 초과인 혈청 IGF-I 표준 편차(SD)에 의해 특징화된다. 다른 구현예에서, 정상의 혈청 IGF-I 수준은 약 -1.5 내지 약 1.5; 약 -1.5 내지 약 1.0; 약 -1.5 내지 약 0.5; 약 -1.5 내지 약 0; 약 -1.5 내지 약 -0.5; 및 약 -1.5 내지 약 -1.0인 혈청 IGF-I 표준 편차(SD)에 의해 특징화된다.

추가의 구현예에서, IGF-I 혈청 수준의 표준화 정도는 hGH 융합 단백질의 치료학적으로 유효한 체중 조절된 일시 투여량의 투여량에 좌우된다. 하나의 다른 구현예에서, IGF-I 표준화 기간은 치료학적으로 유효한 체중 조절된 일시 투여량의 hGH 융합 단백질을 사용하여 증가시킨다.

본 발명의 방법은, hGH-XTEN 융합 단백질의 투여가 바람직하지 않은 고 수준의 IGF-I에 대한과-노출에 의해, 또는 이의 비용으로 사람 소아 환자에서 관찰가능한 및 연장된 IGF-I 반응(예를 들면, IGF-I SDS에 의해 측정된 것으로서)을 제공한다는 점에서 특수한 장점을 제공한다. 다시 말해서, IGF-I 반응은 예를 들면, 1.5 이하의 IGF-I SDS 또는 2.0 이하의 IGF-I SDS에 의해 나타낸 것으로서, 현재의 표준물에 의해 허용가능한 것으로 여전히 고려되는 상승된 수준에서 유지된다.

5. hGH-XTEN 융합 단백질의 혈장 농도

다른 측면에서, 본 발명은 hGH-XTEN 융합 단백질을 환자에게 투여함으로써 사람 소아 환자에서 사람 소아 성장 호르몬 결핍증(PGHD)을 치료하는 방법을 제공하여, 여기서 당해 환자는, 투여 후 상기 융합 단백질의 혈장 농도가 적어도 약 10ng/Ml이다. 하나의 구현예에서, 당해 방법은 일시 투여량(본원에 기술된 바와 같음)으로서 hGH-XTEN 융합단백질을 소아 환자에게 투여함을 포함한다. 다른 구현예에서, 일시 투여량의 hGH-XTEN은 치료학적으로 유효한 체중 조절된 일시 투여량(본원에 기술된 바와 같음)이다. 하나의 구현예에서, 일시 투여량은 약 0.8mg/kg, 약 1.0mg/kg, 약 1.2mg/kg, 약 1.4mg/kg, 약 1.6mg/kg, 약 1.8mg/kg, 약 2.0mg/kg, 약 2.2mg/kg, 약 2.4mg/kg, 약 2.6mg/kg, 약 2.7mg/kg, 약 2.8mg/kg, 약 3mg/kg, 약 3.2mg/kg, 약 3.4mg/kg, 약 3.6mg/kg, 약 3.8mg/kg, 약 4.0mg/kg, 약 4.2mg/kg, 약 4.4mg/kg, 약 4.6mg/kg, 약 4.8mg/kg, 약 5.0mg/kg, 약 5.2mg/kg, 약 5.4mg/kg, 약 5.6mg/kg, 약 5.8mg/kg, 약 6.0mg/kg, 및 약 6.3mg/kg으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 다른 구현예에서, 일시 투여량의 hGH-XTEN은 적어도 약 10ng/mL의 융합 단백질의 혈장 농도를 적어도 약 5일, 적어도 약 7일, 적어도 약 10일, 적어도 약 14일, 적어도 약 20일, 적어도 약 25일, 적어도 약 30일, 또는 적어도 약 1개월 동안 유지시키는데 효과적이다. 다른 구현예에서, 일시 투여량은 적어도 약 100ng/mL의 융합 단백질의 혈장 농도를 적어도 약 5일, 적어도 약 7일, 적어도 약 10일, 적어도 약 14일, 또는 적어도 약 20일 동안 유지하는데 효과적이다. 하나의 다른 구현예에서, 투여 단계는 도 1에 설정된 아미노산 서열(서열 번호: 1)을 포함하는 hGH-XTEN 융합 단백질의 유효량을 포함하는 약제학적 조성물을 투여하는 단계를 포함한다.

6. 부작용의 부재

하나의 구현예에서, 본 발명은 사람 소아 환자에게 hGH-XTEN 융합 단백질을 투여함을 포함하여, 당해 환자에서 하나 이상의 부작용의 부재하에 사람 소아 성장 호르몬 결핍증(PGHD)을 치료하는 방법을 제공한다. 하나의 다른 구현예에서, 하나 이상의 부작용의 부재는 하나 이상의 부작용의 임상적으로 유의적인 수준의 부재이다. 다른 구현예에서, 부재하는 하나 이상의 부작용은 융합 단백질의 투여 후 두통, 관절통, 근육통, 부종, 오심, 및 근육 피로로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 본원에 사용된 것으로서, "임상적으로 유의적인 수준의 부작용"은, 부작용(들)이 예측되지 않고/않거나 심각한 부작용(들)이 아님을 의미한다. 경증이고 일시적인 부작용, 심지어 두통, 관절통, 부종, 오심, 및 근육 피로, 또는 성장 호르몬의 투여와 관련된 것으로 알려진 다른 것들 중 하나라도 임상적으로 유의적인 수준인 것으로 고려되지 않을 수 있다. 하나의 구현예에서, 당해 방법은 일시 투여량(본원에 기술된 바와 같음)으로서 hGH-XTEN 융합단백질을 소아 환자에게 투여함을 포함한다. 다른 구현예에서, 일시 투여량의 hGH-XTEN 융합 단백질은 치료학적으로 유효한 체중 조절된 일시 투여량(본원에 기술된 바와 같음)이다. 하나의 구현예에서, 일시 투여량은 피하 투여된다. 하나의 다른 구현예에서, 투여 단계는 도 1에 설정된 아미노산 서열(서열 번호: 1)을 포함하는 hGH-XTEN 융합 단백질의 유효량을 포함하는 약제학적 조성물을 투여함을 포함한다.

7. 투여 후 매개변수

하나의 구현예에서, 본 발명은 소아 환자에게 치료학적 유효량의 hGH-XTEN 융합 단백질을 투여하는 단계를 포함하여, 성장 호르몬 결핍증을 지닌 사람 소아 환자에서 유리한 효과를 달성하는 방법을 제공하며, 여기서 상기 투여는 PGHD(본원에 기술된 바와 같음)를 포함하는, 성장 호르몬 관련 질병, 질환 또는 상태와 관련된 하나 이상의 생화학적 또는 생리학적 매개변수 또는 임상적 종점의 개선을 초래한다. 유효량은 성장 호르몬 관련된 질병, 질환 또는 상태의 유해한 효과를 치료하는(예를 들면, 중증도를 치유하거나 감소시키는) 것을 돕는데 있어서 유리한 효과를 생성한다. 일부 경우에, 유리한 효과를 달성하는 방법은 치료학적 유효량의 hGH-XTEN 융합 단백질 조성물을 투여하여 PGHD(본원에 기술된 바와 같음)를 포함하는 성장-호르몬 관련된 질병, 질환, 또는 상태를 지닌 소아 환자를 치료함을 포함한다.

본 발명의 방법은 바람직한 매개변수 또는 임상 효과를 달성하고/하거나 유지하는데 충분한 기간동안 치료학적 유효량의 hGH-XTEN의 후속적인 또는 연속적인 투여량을 사람 소아 환자에게 투여함을 포함하며, 치료학적 유효량의 이러한 연속 투여량은 hGH-XTEN에 대한 치료학적 유효 투여량 요법; 즉, 융합 단백질 조성물의 연속 투여된 투여량에 대한 스케쥴을 달성하며, 여기서 당해 투여량은 치료학적 유효량으로 제공되어 본원에 기술된 것들을 포함하나, 이에 한정되지 않는 대사 질병 상황 또는 상태의 어떠한 임상 신호 또는 증상, 측면, 측정된 매개변수 또는 특징에 있어서 지속된 유리한 효과를 생성한다. 본 방법의 하나의 구현예에서, 당해 매개변수는 평균(SD) 높이 표준 편차 점수(HT-SDS), 높이 속도에 있어서의 변화, IGF-I 농도, IGF-I/IGFBP-3의 비율, IGFBP3 농도의 비, 체중에 있어서의 변화, 무지방 체질량, 체질량 지수에 있어서의 변화, 총 체지방(지방조직 지방/조직), 트렁크 지방(trunk fat), 인슐린 챌린지에 대한 반응, 연골세포의 분화율, 연골세포수, 골 밀도, 골 연령, 골 성장, 골 교체, 골 단판 너비에 있어서의 증가, 콜레스테롤에 있어서의 감소, 트리글리세라이드에 있어서의 감소, 및 LDL에 있어서의 감소를 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 본 발명의 다른 구현예에서, 사람 소아 환자에게 후속적이거나 연속적인 투여량의 치료학적 유효량의 hGH-XTEN의 투여는 평균 (SD) 높이 표준 편차 점수(HT-SDS), 높이 속도에 있어서의 변화, IGF-I 농도, IGF-I/IGFBP-3의 비율, IGFBP3 농도, 체중에 있어서의 변화, 무지방 체질량, 체질량 지수에 있어서의 변화, 총 체지방(지방조직 지방/조직), 트렁크 지방, 인슐린 챌린지에 대한 반응, 연골세포의 분화율, 연골세포수, 골 밀도, 골 연령, 골 성장, 골 교체, 골 단판 너비에 있어서의 증가, 콜레스테롤에 있어서의 감소, 트리글리세라이드에 있어서의 감소, 및 LDL에 있어서의 감소를 포함하나, 이에 한정되지 않는다.

재조합체 사람 성장 호르몬(rhGH)을 사용하여 치료된 소아 환자에서의 높이 속도 데이터는 다양한 데이터베이스로 편집된다. 국립 협동 성장 연구(The National Cooperative Growth Study: NCGS) 데이터베이스는 rhGH 치료요법을 제공받은 어린이에서 220,000개의 환자-연(year)의 성장 데이터를 함유한다. NCGS 데이터베이스는 안전성 및 효능의 평가를 위해 1985년 12월에 개시하여 rhGH로 치료한 어린이에서 데이터를 수집하였다. 익명의 데이터가 출생일, 성별, 신장, 체중, 단신 상태의 원인론, 피크, 자극 시험에 대한 피크 혈청 GH 반응, 태너 사춘기 단계(Tanner pubertal stage), 부모 신장, 및 게넨테크(Genentech)의 rhGH 생성물로 치료한 환자에 대한 GH 투여량을 포함하여, 미국에서 임상 연구자에 의해 기록되었다(Shulman, DI, 등 Int J Pediatr Endocrinol. 2013; 2013(1): 2). GH로 치료한 첫해 동안에 관찰된 높이 속도는 임신령(SGA) 어린이의 경우 낮은 GH에 대한 제2의 사춘기 전 해의 성장 반응의 주요 결정인자임이 밝혀졌다(참조: Ranke MB, 등 J Clin Endocrinol Metab. 2003;88:125131). 첫 해 높이 속도는 3개월, 4개월, 6개월, 또는 12개월까지의 다른 기간 동안 측정하여 연간으로 환산한 첫해 높이 속도를 추정하고, "cm/yr"로 나타내었다.

성장 호르몬 결핍증을 지닌 사람 소아 환자에서 유리한 효과를 달성하기 위한 방법의 다른 구현예에서, 당해 방법은 소아 환자에게 치료학적 유효량의 hGH-XTEN 융합 단백질을 투여하는 단계를 포함하며, 여기서 당해 투여는 소아 환자에서 높이 속도율에 있어서의 개선을 생성한다. 당해 방법의 하나의 구현예에서, 당해 방법은 소아 환자에서 7cm/yr 내지 12cm/yr와 동일한 높이 속도를 달성하는데 효과적이다. 당해 방법의 다른 구현예에서, 당해 방법은 소아 환자에서 8cm/yr 내지 11cm/yr와 동일한 높이 속도를 달성하는데 효과적이다. 하나의 구현예에서, 높이 속도는 소아 환자에서 적어도 3개월, 또는 적어도 6개월, 또는 적어도 12개월의 투여 후 달성(또는 측정)된다. 다른 구현예에서, 성취된 높이 속도는 첫 해 높이 속도이다. 다른 구현예에서, 당해 방법은 동일한 기간에 걸쳐 XTEN에 연결되지 않은 hGH의 매일 주사 및 몰 기준으로 비교가능한 동일한 투여량을 사용하여 투여된 높이 속도보다 열악하지 않다. 다른 구현예에서, 당해 방법은 동일한 기간에 걸쳐, 몰 기준으로, 동일한 양의 XTEN에 연결되지않은 hGH의 매일 주사로 달성된 높이 속도와 비교한 것의 10%, 20%, 또는 30% 이내의 투여량으로 적어도 3개월 후 소아 환자의 연간으로 환산한 높이 속도를 유지하는데 효과적이다. 앞서의 하나의 구현예에서, XTEN에 연결되지 않은 hGH의 주사를 매일 투여받은 소아 환자는 적어도 약 25, 적어도 약 30, 적어도 약 33, 적어도 약 35 μg의 rhGH/kg/일, 적어도 약 37 μg의 rhGH/kg/일, 또는 적어도 약 43 μg의 rhGH/kg/일의 투여량을 제공받는다. 당해 단락의 앞서의 구현예에서, 일시 투여량의 hGH-XTEN 융합 단백질은 약 0.8mg/kg 및 약 6.3mg/kg의 hGH-XTEN 융합 단백질을 포함하는 치료학적으로 유효한 체중 조절된 일시 투여량이다. 다른 구현예에서, 일시 투여량의 hGH-XTEN 융합 단백질은 약 0.8mg/kg 내지 약 7.0mg/kg의 hGH-XTEN 융합 단백질을 포함하는 치료학적으로 유효한 체중 조절된 일시 투여량이다. 다른 구현예에서, 일시 투여량은 매주, 매 격주, 매 3주, 1개월에 2회 또는 매달 투여된다. 다른 구현예에서, 소아 환자는 일시 투여량의 약 1.15mg/kg의 hGH-XTEN 융합 단백질을 매주, 또는 약 2.5mg/kg의 hGH-XTEN 융합 단백질을 매 2주, 또는 약 5.0mg/kg의 hGH-XTEN 융합 단백질을 매달 투여받는다. 다른 구현예에서, 소아 환자는 약 0.8mg/kg 내지 약 1.5mg/kg, 약 1.8mg/kg 내지 약 3.2mg/kg, 또는 약 3.5mg/kg 내지 약 6.3mg/kg으로부터 선택된 일시 투여량을 투여받는다. 바람직한 구현예에서, 소아 환자는 적어도 약 5.0mg/kg의 hGH-XTEN 융합 단백질의 일시 투여량을 매달 투여받는다.

당해 요법의 다른 구현예에서, 사람 소아 환자는 골 밀도, 골 성장, 및 골단판 너비에 있어서의 증가 중에서 선택된 적어도 하나의 매개변수에 있어서 2회 이상의 일시 투여량 후 개선을 달성한다. 하나의 다른 구현예에서, 앞서의 개선(들)은 사람 성장 호르몬을 제공받지 않은 사람 소아 환자와비교하여 적어도 약 10%, 또는 적어도 약 20%, 또는 적어도 약 30%, 또는 적어도 약 40%, 또는 적어도 약 50%, 또는 적어도 약 60%, 또는 적어도 약 70%, 또는 적어도 약 80%, 또는 적어도 약 90%이다. 다른 구현예에서, 앞서의 개선(들) 퍼센트는 XTEN에 연결되지 않은 hGH에 의해 달성되고 hGH의 양과 동일한 매일 용량을 사용하여 매일 투여된 개선과 유사하거나, 또는 보다 열악하지 않다.

8. hGH-XTEN 의약

다른 구현예에서, 본 발명은 의약으로서 사용하거나, 소아 환자에서 PGHD를 치료하기 위한 hGH-XTEN 융합 단백질을 제공한다. 다른 구현예에서, 본 발명은 PGHD를 지닌 사람 소아 환자에서 PGHD를 치료하기 위한 의약의 제조시 hGH-XTEN 융합 단백질의 용도를 제공한다. 하나의 다른 구현예에서, 본 발명은, 소아 환자에서 PGHD의 치료용 의약의 제조시 도 1에 설정된 서열(서열 번호: 1)을 지닌 융합 단백질의 용도를 제공한다. 다른 구현예에서, hGH-XTEN 융합 단백질은 일시 투여량(본원에 기술된 바와 같음)으로서 제공된다. 다른 구현예에서, 일시 투여량은 치료학적으로 유효한 체중 조절된 투여량이다. 다른 구현예에서, 의약은 피하 투여용으로 제형화된다. 하나의 다른 구현예에서, hGH-XTEN 융합 단백질은 도 1에 설정된 바와 같이 나타낸 아미노산 서열(서열 번호: 1)을 포함한다.

9. 소아 GH-관련 상태의 징후의 치료

다른 측면에서, 본 발명은 소아 환자에서 소아 성장 호르몬 결핍증(PGHD)과 관련된 질병 또는상태에 대한 hGH-XTEN 융합 단백질-계 치료제를 제공한다. 예방 목적으로, 제공된 질병 또는 상태의 중증도에 있어서의 치료 또는 감소, 본 발명의 치료제의 적절한 용량은 상기 정의된 바와 같은, 치료되는 질병 또는 상태의 유형, 질병 또는 상태의 중증도 및 과정, 당해 제제가 치료 목적을 위해 투여되는 것과 상관없이, 앞서의 치료요법, 소아 환자의 임상 병력 및 당해 제제에 대한 반응, 및 주치의의 재량권에 의존할 것이다.

다른 측면에서, 본 발명은 소아 환자에서 PGHD와 관련된 질병 또는 상태의 진행을 지연시키거나 지체시키기 위한 방법을 제공한다. 하나의 구현예에서, 당해 방법은 질병, 상태, 또는 질환으로 진단된 소아 시험대상자에게 유효량의 hGH-XTEN 융합 단백질을 투여함을 포함한다. 다른 측면에서, 본 발명은 PGHD와 관련된 질병 또는 상태의 징후를 치료하거나 완화시키는 방법을 제공한다. 하나의 측면에서, 본 발명은 질병 또는 상태의 위험에 있는 소아 환자에게 hGH-XTEN 융합 단백질의 유효량을 투여함을 포함하며, 여기서 hGH-XTEN 융합 단백질은 질병 또는 상태의 징후의 발달에 대해 효과적이다.

하나의 추가의 측면에서, hGH-XTEN 융합 단백질은 사람 소아 환자에서 PGHD와 관련된 질병 또는 상태의 발달, 또는 진행, 임상 및/또는 조직학적 및/또는 생화학적 및/또는 병리학적 지수(증상 및 신호 둘 다를 포함)의 발달에 대해 완화 효과를 제공한다. 하나의 구현예에서, 질병 또는 상태는 PGHD이다. 하나의 구현예에서, 소아 환자의 징후는 단신, 체지방의 증가된 수준(특히 중심 또는 트렁크 지방과다증, 즉, 허리), 모든 신체 부위의 느린 성장율, 확립된 키 성장 곡선으로부터 수평화 또는 쇠퇴, 지연된 골 연령, 감소된 IGF-I SDS, 및 평균 이하의 높이 SDS를 포함한다. 다른 구현예에서, 소아 시험대상자는 PGHD와 관련된 상태의 질병 위험에 처해 있다. 일반적으로, 위험에 처해 있는 소아 시험대상자는 뇌하수체 및/또는 시상하부에 대한 일부 손상에 이미 처해질 것이다. 하나의 구현예에서, 위험에 처해 있는 소아 시험대상자는 전립선과 관련된 종양, 및/또는 종양을 치료하기위한 원치않는 수술, 화학치료요법, 또는 방사선 치료요법을 가진 것으로 이미 진단되었다. 다른 구현에에서, 위험에 처해 있는 소아 환자는 뇌하수체로의 혈액 공급이 이미 감소되었거나 감소되고 있다. 하나의 다른 구현예에서, 위험에 처해 있는 소아 시험대상자는 이미 두개골 절제술로 고생하거나 두부 외상의 병력을 가지고 있다. 일부 구현예에서, 위험에 처해 있는 소아 시험대상자는 시상하부-뇌하수체 질병 또는 질환으로 이미 고생하거나 현재 고생하고 있다.

본원에 기술된 질병 및 상태(PGHD 포함)의 치료 효능은 소아 환자에서 PGHD를 평가하는데 일반적으로 사용된 다양한 평가로 측정할 수 있다. 예를 들면, 호르몬-분비 선의 건강을 예를 들면, IGF-I 표준 편차 점수(SDS), 평균(SD) 높이 표준 편차 점수(HT-SDS), 성장 호르몬 자극 시험(GHST), 성장 호르몬 방출 호르몬(GHRH), 자극 시험, 내인성 hHG 펄스의 모니터링 또는 측정, IGF-I 수준, IGF-I 결합 단백질 수준, 다른 혈액 또는 생화학적 시험(예를 들면, 총 콜레스테롤, 저-밀도 지단백질(LDL) 콜레스테롤, 고-밀도 지단백질(HDL) 콜레스테롤, 트리글리세라이드, 및 지질)에 의해 평가될 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.

하나의 추가의 측면에서, 본 발명은 사람 소아 환자에서 사람 성장 호르몬(hGH) 치료요법의 효능을 증가시키는 방법을 제공한다. 다른 측면에서, 본 발명은 PGHD를 지닌 사람 소아 환자를 hGH-XTEN 융합 단백질을 사용하여 치료하는 경우 후속적인 투여 기간에 걸쳐 투여된 hGH-XTEN 융합 단백질의 후속적인 투여량을 측정하는 방법을 제공한다. "투여 기간"은 일시 투여량(예를 들면, 초기 투여량)의 투여와 일시 투여량의 다음의 연속적인 투여량(예를 들면, 후속적인 투여량) 사이의 시간을 의미한다. 투여 기간은 하나 이상의 추가의 연속적인 투여량 또는 투여량들로 변화할 수 있거나, 일정하게 남을 수 있다.

하나의 구현예에서, 효능을 증가시키는 앞서의 방법은 사람 성장 호르몬-XTEN(hGH-XTEN) 융합 단백질의 초기 투여량의 투여의 초기 투여 기간 동안 소아 환자로부터 수득된 혈장 또는 혈청 시료 속에서 IGF-I 표준 편차 점수(SDS)를 모니터링하는 단계를 포함한다. 하나의 구현예에서, hGH-XTEN 융합 단백질은 서열 번호: 1에 대해 서열 동일성이 적어도 약90%인 아미노산 서열을 포함한다. 다른 구현예에서, 당해 방법은 초기 투여 기간 동안 관찰된 IGF-I SDS를 기반으로 후속된 용량기간에 걸쳐 투여된 hGH-XTEN 융합 단백질의 후속적인 투여량을 측정하는 단계를 추가로 포함한다. 하나의 추가의 구현예에서, 당해 방법은 후속적인 용량 기간에 걸쳐서 후속적인 투여량을 투여함을 추가로 포함한다. 하나의 다른 구현예에서, 후속적인 투여량은 후속적인 투여 기간 동안 치료의 효율을 개선시킨다. 다른 구현예에서, 후속적인 투여량은 초기 투여량 보다 높거나, 이 보다 낮거나, 이와 동일하다. 초기 투여량 또는 후속적인 투여량은 본원에 기술된 일시 투여량 중 어느 것일 수 있다. 하나의 추가의 구현예에서, 후속적인 용량 기간은 초기 용량 기간보다 더 길거나, 더 짧거나, 이와 동일할 수 있다. 초기 용량 기간 또는 후속적인 용량 기간은 본원에 기술된 기간 중의 어느 것(예를 들면, 매주, 매 2주, 1개월당 2회, 매 3주, 매월 등, 또는 7일 마다, 10일 마다, 14일 마다, 21일 마다, 30일 마다 등) 일 수 있다.

VII). 용량형 및 약제학적 조성물

다른 측면에서, 본 발명은 본원에 기술된 hGH-XTEN 융합 단백질을 포함하는 일시 투여량 또는용량형을 제공한다.

하나의 구현예에서, hGH-XTEN 융합 단백질의 일시 투여량 또는 용량은 사람 소아 환자용의 치료학적으로 유효한 체중 조절된 일시 투여량을 포함한다. 하나의 다른 구현예에서, 일시 투여량 또는 용량은 약 0.8mg/kg 내지 약 6.3mg/kg의 hGH-XTEN 융합 단백질을 포함한다. 다른 일시 투여량은 본원에 기술되어 있다.

다른 구현예에서, 일시 투여량 또는 용량은 (i) 필요한 소아 시험대상자에서 사람 PGHD를 치료하는데 사용하고/하거나 (ii) 피하 투여용으로 제형화된다. 하나의 다른 구현예에서, hGH-XTEN 융합 단백질은 도 1에 설정된 아미노산 서열(서열 번호: 1)을 포함한다. 하나의 구현예에서, 일시 투여량 또는 용량형은 도 1에 설정된 서열(서열 번호: 1)을 갖는 융합 단백질 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약제학적 조성물이다.

다른 구현예에서, 본 발명은 포장 물질 및 앞서의 구현예의 약제학적 조성물을 포함하는 적어도하나의 제1의 용기 및 약제학적 조성물 및 저장 및 취급 조건을 확인하는 표지, 및 약제학적 조성물의 제조 및 이의 소아 환자에게로의 투여를 위한 지시사항 쉬이트(sheet)를 포함하는 키트(kit)를 제공한다.

하나의 추가의 측면에서, 본 발명은 hGH-XTEN 융합 단백질의 약제학적 조성물, 및 이의 투여량을 제공한다. 하나의 다른 구현예에서, 약제학적 조성물 또는 투여량은 도 1에 설정된 바와 같은 서열(서열 번호: 1), 또는 서열 번호: 1의 서열에 대해 서열 동일성이 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 또는 적어도 약 92%, 또는 적어도 약 93%, 또는 적어도 약 94%, 또는 적어도 약 95%, 또는 적어도 약 96%, 또는 적어도 약 97%, 또는 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99%인 서열을 갖는 융합 단백질을 포함한다. 다른 구현예에서, 투여량은 환자의 체중을 기준으로 한 사람 소아 환자에 대한 것이다. 소아 사람 환자의 체중은 약 10kg 내지 약 50kg의 범위일 수 있다. 하나의 추가의 구현예에서, hGH-XTEN 융합 단백질은 약제학적 조성물, 조성물, 또는 특정한 양으로서의 투여량으로 제공된다. 하나의 다른 구현예에서, 약제학적 조성물 또는 투여량은 약제학적으로 허용되는 담체를 추가로 포함한다.

하나의 구현예에서, 약제학적 조성물은 치료학적 유효 투여량으로 투여한다. 다른 구현예에서, 약제학적 조성물은 투여 기간의 길이 동안 치료학적 유효 투여량 요법(본원에 정의된 바와 같음)을 사용한 다수의 연속 투여량을 사용하여 투여된다.

치료학적 유효량의 hGH-XTEN은 개인의 질병 상태, 연령, 성별, 및 체중과 같은 인자, 및 개인에서 바람직한 반응을 유발하는 융합 단백질의 능력에 따라 변한다. 치료학적 유효량은 또한, hGH-XTEN의 어떠한 독성 또는 유해한 효과가 치료학적으로 유리한 효과에 의해 더 큰 것이다.

약 제1의 mg 및 약 제2의 mg의 양의 hGH-XTEN 융합 단백질을 포함하는 조성물, 약제학적 조성물 또는 투여량에 대해 참조하는 경우, "제1의 mg" 용어는 제1의 mg 값 및 "제2의 mg" 용어는 제2의 mg 값을 포함할 수 있다.

다른 측면에서, 본 발명은 PGHD의 치료를 위한 약제학적 요법 또는 치료학적 유효 투여량 요법에서 사용하기 위한 hGH-XTEN 융합 단백질을 제공한다. 하나의 구현예에서, hGH-XTEN 융합 단백질은 소아 환자를 치료하기 위한 융합 단백질의 일시 투여량을 포함하는 요법에서 사용하기 위한 것이다. 추가의 구현예에서, 당해 요법은 소아 환자에서 약 -2.0 내지 약 2.0의 IGF-I 표준 편차점수 (SDS)를 달성하는데 필요한 hGH-XTEN 융합 단백질의 양을 측정하는 단계를 포함한다.

하나의 다른 구현예에서, 당해 요법은 치료학적으로 유효한 체중 조절된 일시 투여량을 포함한다. 다른 구현예에서, 당해 요법은 약 0.8mg/kg 내지 약 6.3mg/kg인 융합 단백질의 일시 투여량을 포함한다. 하나의 다른 구현예에서, 당해 요법은 융합 단백질의 연속적인 일시 투여량의 투여를 포함한다. 하나의 구현예에서, 연속적인 일시 투여량의 투여는 약 매주, 약 매 격주, 약 매 3주, 또는 약 매달이다. 하나의 추가의 구현예에서, 융합 단백질은 서열 번호: 1에 대해 적어도 약 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 하나의 구현예에서, 당해 요법은 융합 단백질의 일시 투여량의 피하 투여를 포함한다. 다른 구현예에서, 당해 요법은 소아 환자에서 PGHD를 치료하는데 효과적이다.

VIII). 제조 물품

하나의 측면에서, 본 발명은 또한 소아 환자에서 질병(예를 들면, PGHD)의 치료, 예방 및/또는 진단에 유용한 물질을 함유하는 키트 및 제조 물품을 제공한다. 다른 구현예에서, 본 발명은 앞서의 구현예의 용량형 또는 약제학적 조성물을 포함하는 적어도 제1의 용기 및 당해 용량형 또는 약제학적 조성물 및 저장 및 취급 조건을 확인하는 표지 및, 소아 환자에게 용량형 또는 약제학적 조성물의 재구성 및/또는 투여를 위한 지시사항의 쉬이트를 포함하는 키트를 제공한다. 하나의 다른 측면에서, 키트는 용기, 및 당해 용기에 위치하거나 용기와 관련될 수 있는 표지를 포함한다. 용기는 병, 바이알(vial), 주사기, 카트릿지(자기주사기 카트릿지 포함), 또는 어떠한 다른 적합한 용기일 수 있으며, 유리 또는 플라스틱과 같은 다양한 물질로부터 형성될 수 있다. 용기는 본원에 기술된 바와 같은 hGH-XTEN 융합 단백질을 지닌 조성물을 유지하며 멸균 접근 포트(sterile access part)를 가질 수 있다. 용기의 예는 피하주사 침에 의해 뚫릴 수 있는 마개(stopper)가 장착된 바이알을 포함한다. 키트는 다양한 시약, 예를 들면, 희석제, 방부제, 및 완충제를 유지하는 추가의 용기를 가질 수 있다. 표지는 조성물의 설명뿐 아니라 소아 환자에서 사용하도록 의도된 지시사항도 제공할 수 있다.

하나의 다른 측면에서, 용기는 예비-충전된 주사기이다. 하나의 구현예에서, 주사기는 본원에 기술된 바와 같은 hGH-XTEN 융합 단백질을 지닌 조성물로 예비-충전된다. 하나의 추가의 측면에서, 본 발명은 본원에 기술된 바와 같은 hGH-XTEN 융합 단백질을 가진 조성물의 용기를 제공하며, 여기서 당해 용기는 조성물의 자기주사에 적합하다. 하나의 구현예에서, 용기는 카트릿지이다. 다른 구현예에서, 용기는 자기주사 펜의 카트릿지이다. 당해 분야의 통상의 기술자는, 다른 적합한 자기주사 장치를 본 발명에 사용할 수 있음을 인식할 것이다. 일부 구현예에서, 자기주사 장치는 주사 전에 침 끝을 가리는 원통형 하우징(housing)내의 스프링-장착된 주사기를 포함한다. 하나의 구현예에서, 소아 환자가 장치에 버튼을 누르면 주사기 장치는 자동적으로 삽입되어 성분을 전달한다.

다른 구현예에서, 당해 장치는 가스 제트 자가주입 장치이다. 다른 구현예에서, 가스 제트 장치는 가압된 가스의 실린더를 포함하나 침은 부재한다. 활성화시, 당해 장치는 침을 사용하지 않고 피부를 통해 액체의 미세한 분사를 추진한다. 하나의 다른 구현예에서, 당해 장치는 이온도입법 장치(iontophoresis device) 또는 전자동약물투여(EMDA) 장치(예를 들면, 침을 사용하지 않고 피부를 통해 제제를 전달하기 위한 소 전자 전하의 사용)이다.

키트는 활성제로서 본원에 기술된 hGH-XTEN 융합 단백질을 포함하는 조성물을 포함하는 적어도 하나의 용기를 갖는다. 용기는 hGH-XTEN 융합 단백질 용량형 또는 약제학적 조성물을 포함할 수 있다. 표지는, 당해 용량형 또는 조성물이 소아 환자에서 질병을 치료하는데 사용될 수 있음을 나타내기 위해 제공될 수 있다. 표지는 또한 치료가 요구되는 소아 환자에게 투여하기 위한 지시사항을 제공할 수 있다. 키트는 주사용 세균정지수(BWFI), 인산염-완충된 염수, 링거액(Ringer's solution) 및 덱스트로즈 용액과 같은 약제학적으로 허용되는 완충제를 지닌 추가의 용기를 추가로 함유할 수 있다. 최종적으로, 키트는 다른 완충제, 희석제, 여과기, 침, 및 주사기를 포함하는 어떠한 다른 적합한 물질을 함유할 수 있다.

하나의 측면에서, 본 발명은 사람 성장 호르몬-XTEN (hGH-XTEN) 융합 단백질을 포함하는 사람 소아 환자에게 투여하기 위한 약제학적 조성물을 보유하는 용기를 포함하는 키트를 제공한다. 하나의 구현예에서, hGH-XTEN 융합 단백질은 도 1에 설정된 서열(서열 번호: 1)에 대해 서열 동일성이 적어도 약 90%인 아미노산 서열을 포함한다. 다른 구현예에서, 키트는 상기 용기와 관련된 포장 삽입물을 추가로 포함한다. 하나의 다른 구현예에서, 포장 삽입물은, 상기 조성물이 하나 이상의 투여량의 조성물을 투여함으로써 성장 호르몬 결핍증의 치료하기 위함임을 나타낸다. 하나의 구현예에서, 투여는 약 0.8mg/kg 내지 약 6.3mg/kg의 초기 투여량의 hGH-XTEN 및 약 0.8mg/kg 내지 약 6.3mg/kg의 다수의 후속 투여량의 hGH-XTEN의 투여이다. 다른 구현예에서, 당해 투여량은 적어도 약 7일까지 서로 시간으로 분리되어 있다. 포장 삽입물은 상이한 투여량, 투여량 범위, 및 본원에 기술된 바와 같은 투여량 사이의 시간을 추가로 나타낼 수 있다.

다음은 본 발명의 방법, 치료 요법, 및 조성물의 예이다. 상기 제공된 일반적인 설명이 제공된 다양한 다른 구현예가 실시될 수 있음이 이해된다.

실시예

실시예 1A 단일 투여량 결과

성장 호르몬 결핍증을 지닌 소아 환자에서 피하(SC) 투여하기 위한 사람 성장 호르몬 유사체(서열 번호: 1, 도 1에 나타낸 바와 같은 사람 성장 호르몬-XTEN(hGH-XTEN) 융합 단백질)의 안전성, 단일 투여량의 약력학(PK) 및 약동학(PD)의 제1b/2a상 시험을 수행하였다. GHD 성인(참조: Yuen, K. C. 등 The Journal of Clinical Endocrinology 및 Metabolism 98, 2595-2603 (2013) 및 1개월에 1회 투여를 달성하기 위한 잠재능에 있어서 안전성 프로파일을 기본으로 하여, GHD 어린이에서 제1b/2a 상 연구는 (i) GHD 어린이에서 hGH-XTEN 융합 단백질의 단일 투여량에 대한 안전성, 내성, PK, 및 IGF-I 반응(제1b 상); 및 (ii) IGF-I을 표준화하는 융합 단백질 투여 요법을 사용한 6개월 높이 속도(제2a 상)을 측정하였다.

연구는 72명의 치료를 받지 않았던, 사춘기 전 어린이를 포함하도록 설계되었다. 주요 포함 기준은 사춘기전 상태, 단신(HT-SDS ≤ -2.00), 쌍을 이룬 GH 자극 시험에 의해 진단된 GHD(GH max ≤ 10 ng/mL), IGF-I 표준 편차 점수(IGF-I SDS) ≤ - 1 및 데이터 해석을 방해할 수 있는 다른 질병 또는 의약의 부재이다. 제1b 상에서, 30일의 기간에 걸친 PK 및 PD(IGF-I 및 IGFBP-3) 반응을 hGH-XTEN 융합 단백질(SAD 설계)의 6개 이하의 상승하는 투여량 수준의 단일의 피하 투여량 후 측정하였다. 안전성을 프로토콜-명시된 정지 기준에 대해 수집된 데이터를 포함하는 각각의 투여량의 단계적 확대 전에 관찰하였다. 제2a 상에 대한 hGH-XTEN 융합 단백질 투여량 선택은 안전성 및 IGF-I 반응을 기준으로 하였다. 투여량 선택 후, 시험대상자를 반복된 투여 후 6개월 높이 속도의 측정을 위한 상이한 투여량 및/또는 투여량 요법의 최대 3개의 집단에 대해 무작위 처리하였다. hGH-XTEN 융합 단백질 투여는 0.80mg/kg에서 시작하였고, GHD 성인에서 안전한 및 잘 견뎌진 투여량은 1.20mg/kg, 1.80mg/kg, 2.70mg/kg, 4.00mg/kg 및 6.00mg/kg 이하까지 증가하였다.

도 2는 제1b/2a 상 연구를 위한 설계를 요약한다. 표 1.1은 제1b 상 투여량 수준을 제공한다. hGH-XTEN 융합 단백질 투여량 수준은 30일에 걸쳐 투여된 40μ일의 평균 소아 GHD 매일의 재조합체 사람 성장 호르몬(rhGH) 투여량 이하이다. 투여량은 30일의 기간 동안 IGF-1 노출을 표준화하는 잠재능을 기준으로 제2a 상에 대해 선택하였다.

표 1.1 제1b 상 수준

표 1.2는 완료된 투여 그룹의 임상 특성을 나타낸다: 수치는 평균(SD)이다.

표 1.2

제1b 상 투여 및 데이터 수집은 0.80, 1.20, 1.80 및 2.70mg/kg의 hGH-XTEN 융합 단백질 그룹에 대해 완료된다. 데이터는 0.80 내지 2.7mg/kg(30일 동안 매일 취한 4.8 내지 16.7μg의 rhGH/kg과 동일) 범위의 투여량에 대해 완료된다.

당해 데이터는, hGH-XTEN 융합 단백질이 안전하고 잘 견딤을 뒷받침한다. 표 1.3은 투여량 수준 그룹 1-4에서 연구 약물과 가능하게, 가능성있게 또는 명확하게 관련된 것으로 고려된 부작용(AE)을 나타낸다. 모든 관련된 AE는 CTCAE 등급 1(경증)이다. 등록된 어린이들 누구에서도 SAE, 예측하지 못한 AE, 환자 포기, 및 지방이영양증은 없었다. 당해 현상은, rhGH 치료가 GHD를 지닌 치료가 처음인(nai어린이에서 시작하는 경우 관찰된것들 중의 대표적인 것으로 판단하였다.

표 1.3

hGH-XTEN 융합 단백질 혈장 수준을 단일 투여량 후 30일까지 지속하였다. 도 3은 hGH-XTEN 융합 단백질 혈장 농도(ng/mL) 평균 값을 나타낸다.

도 4는 hGH-XTEN 융합 단백질 Cmax(ng/mL) 및 hGH-XTEN 융합 단백질 AUC(hr-ng/mL) 데이터에 대한 선형 회귀를 나타낸다. 당해 결과는, 융합 단백질에 대한 노출이 투여량에 대해 선형으로 비례함을 뒷받침한다.

2.70mg/kg의 hGH-XTEN 융합 단백질의 단일 피하 투여량 후, IGF-I SDS를 8명의 시험대상자중 6명에서 30일 전체에서 및 나머지 2명의 시험대상자에서 22일 전체에서 기준선 이상으로 유지되었다. IGF-I SDS의 연장된 반응은, IGF-I에 대한 과노출의 지출이 없다. IGF-I SDS > 2.0 (2.12)은 하나의 시점에서 1명의 환자에서만 관찰되었다.

도 5는 모든 투여량(0.8mg/kg (●); 1.2mg/kg (■); 1.8mg/kg (▲); 및 2.7mg/kg (◆)에 대한 IGF-I(평균 값)에서 지속적인 변화(기준선으로부터)를 입증한다. hGH-XTEN 융합 단백질에 대한 IGF-I 반응은 단일의 피하 투여량 후에서 30일까지 지속된다.

도 6은, 4회의 투여량 그룹에 대한 최대 IGF-SDS 데이터의 선형 회귀를 나타내며 IGF-I 반응이 hGH-XTEN 융합 단백질의 투여량과 선형으로 관련되어 있음을 입증한다.

완료된 투여량 수준으로부터의 데이터는 제2a 상에 대한 매주 또는 1개월당 2회 hGH-XTEN 융합 단백질 투여량 요법의 사용을 뒷받침한다. 투여량의 단계별 증가는 제 2a 상에 대한 매달 1회 hGH-XTEN 융합 단백질 투여량 요법을 뒷받침하기 위해 지속된다.

실시예 1B - 단일 투여량 결과

현재 승인된 성장 호르몬 약물은 GHD를 지닌 환자에 대한 매일의 주사 및 후속적인 포즈의 고려할만한 챌린지를 필요로 한다. 대조적으로, 사람 성장 호르몬 유사체(서열 번호: 1(도 1)에 나타낸 사람 성장 호르몬-XTEN (hGH-XTEN) 융합 단백질)를 개발하여 1개월당 1회 투여까지를 제공하고, 이들의 치료요법에 대해 고착하는 환자의 능력에 있어서의 개선을 촉진시키며, 이들의 전체적인 치료 결과를 개선시킨다.

데이터는 성장 호르몬 결핍증(GHD)을 지닌 사춘기 전 어린이에서 새로이 장기간 작용하는 사람성장 호르몬(hGH-XTEN 융합 단백질)의 제1b/2a 상 연구로부터 모았다. 제1b 상 연구의 목적은 소아 GHD 환자에서 hGH-XTEN 융합 단백질의 단일 투여량 안전성, 내성을 평가하고; 30일에 걸쳐 PK(hGH-XTEN 융합 단백질 농도) 및 PD(IGF-I, IGFBP-3) 프로파일을 측정하는 것이었다.

임상 시험은 발육학 기준 및 2개의 GH 자극 시험에 의해 문서화되었던, GHD를 지닌 72명 이하의 치료를 받지 않은, 사춘기전 어린이를 포함하였다. hGH-XTEN 융합 단백질에 대한 임상 시험은 2개의 단계를 갖는다: 융합 단백질 투여량의 안전성, PK 및 PD를 측정하기 위한 단일의 상승 투여량 단계(제1b 상) 및 6-개월 높이 속도 결과를 수득하기 위한 반복된 투여량 단계(제 2a 상)에서 사용된 투여량 요법의 선택을 가능하게 하는 단계. 당해 연구의 최근 완료된 제1b 상 투여량-상승 단계로부터의 결과가 이용가능하다.

제1b 상으로부터의 데이터는, hGH-XTEN 융합 단백질의 단일 투여량이 GHD를 지닌 어린이에서 매우 잘 견디어짐을 입증하였으며 감소된 투여 빈도를 사용하면서도 우수한 회복 성장과 관련된 수준으로 IGF-I을 안전하게 상승시킬 수 있음을 입증하였다. 당해 데이터는, 시험의 다음 단계에서 1개월당 1회 이하의 투여량의 연속된 연구에 대한 강력한 지지를 제공하였으며,이는 GHD 환자에서 3개월 및 6개월 높이 속도를 추가로 측정할 것이다.

제1b 상에서, 30일의 기간에 걸친 PK 및 PD(IGF-I) 반응을 다음의 단일의 피하 투여량의 hGH-XTEN 융합 단백질 이후 6회의 증가하는 투여량 수준에서 측정하였다. 융합 단백질의 투여는 앞서 완료된 시험에서 GHD 성인에서 안전하고 잘 견디어지는 것으로 밝혀진 투여량인, 0.80mg/kg에서 시작하였으며, 1.20mg/kg, 1.80mg/kg, 2.70mg/kg, 4.00mg/kg 및 6.00mg/kg(30일 동안 취한 일당 kg당 4.8, 7.4, 11.1, 16.7, 24.7 및 37.0mcg의 rhGH과 동일)으로 증가시켰다. 따라서, 당해 시험에서 연구된 hGH-XTEN 융합 단백질의 투여량은 모두 이들 환자에 대해 전형적으로 처방된 매일의 rhGH의 양 이하이다. 제2a 상에 대한 융합 단백질 투여량 선택은 제1b 상으로부터의 안전성 및 IGF-I 반응을 기본으로한다. 제2a 상 투여량 선택 후, 시험대상자에게 3-개월 및 6-개월 높이 속도의 측정을 위해 3개의 투여량집단 각각에 투여하였다.

당해 시험의 제1b 상 부위에서, 평균(SD) 연령이 7.2(2.2)세인 48명의 시험대상자(27M, 21F)를 6회의 투여량 집단(집단 당 8명)에서 연구하였다. 스크리닝에서, 평균(SD) HT-SDS는 -2.7(0.6)이었고, 체중은 18.0(4.6)kg이었으며 IGF-I SDS는 -1.8(0.7)이었다. 투여 3-일 후 평균 시간에서 최대에 이른 hGH-XTEN 융합 단백질 혈장 농도는 투여량에 비례하였으며 시험한 모든 시험대상자에서 단일 투여량으로부터 30일까지 검출가능하게 남는다. IGF-I SDS에서 최대 변화는 1일째에 단일 투여량 후 2 내지 14일째에 발생하였다. IGF-I 반응의 증폭 및 기간은 융합 단백질 투여량의 증가와 함께 증가하였다. 30일에 걸친 평균 IGF-1 SDS에 있어서의 증가는 또한 투여량에 비례하였으며 hGH-XTEN 융합 단백질의 매달 1회투여까지 뒷받침하기에 충분하였다. 중요하게도, 연장된 IGF-I 반응은 높은 IGF-I 수준에 대한 과-노출의 비용에서 오지 않았으며, 여기서 각각의 2명의 환자에서 IGF-I SDS의 단일 값만이 +2를 초과하였다. 보고된 모든 관련된 부작용은 약하고 일시적이었으며, 심각하거나 예측하지 않은 부작용이 보고되지 않았다.

요컨대, 0.8 내지 6.0mg/kg의 hGH-XTEN 융합 단백질의 단일 투여량은 GHD를 지닌 48명의 사춘기 전 어린이에게 투여하는 경우 안전하고 잘 견디어졌다. 또한, hGH-XTEN 융합 단백질 수준 및 IGF-I 반응에 있어서의 투여량 비례적인 증가가 관찰되었으며, 이는 투여량 및 1개월당 1회 이하의 투여의 투여량 요법에 대한 탄력성을 나타낸다. 결과적으로, hGH-XTEN 융합 단백질은 GHD를 지닌 어린이에서 매달-투여 간격 이하까지 잠재능을 지닌 장기간 작용하는 rhGH이다.

도 7은 소아 환자에서 사람 성장 호르몬-XTEN(hGH-XTEN) 융합 단백질의 제1b/2a 상 연구에 대한 설계를 요약한다. hGH-XTEN 융합 단백질은 재조합체 hGH (rhGH) 질량에 있어서 30일 동안 취한 5 내지 37μg/kd/d와 동일하다.

0.80 내지 6.0mg/kg의 hGH-XTEN 융합 단백질의 단일 투여량은 GHD를 지닌 사춘기 전 어린이에서 안전하였으며 잘 견디어졌다. 주사 부위 반응은 경증이고 일시적이며, 결절이 없고 지방이 영양증이 없었다. hGH-XTEN의 투여량은 30일 동안 취한 4.8 내지 37μg의 rhGH/kg/d와 동일하다. 약물 노출 매개변수(Cmax, AUC)는 투여량에 비례하였다. 30일에 걸쳐 평균 IGF-I SDS에 있어서의 증가는 투여량에 비례하였다. 매달 평균 IGF-I에 있어서의 증가는 상승된 IGF-I SDS(2개의 일시적인 값 >2)과 관련되지 않았다. hGH-XTEN 융합 단백질은 매달 투여량까지에 대해 PK/PD 기여도를 갖는 장기-작용하는 rhGH이다.

실시예 2 - 반복된 투여 결과

VRS-317은 서열 번호: 1, 도 1에서 N- 및 C-말단에 부착된 아미노산 서열(XTEN)을 갖는 rhGH로 이루어진 신규 융합 단백질(M.W. 119 kDa)이다. GHD 성인 및 어린이에서의 제1 상 연구에서, VRS-317 농도, IGF-I 및 IGFBP-3 반응은 투여량에비례하였으며, 약물 농도 및 IGF-I 및 IGFBP-3에 있어서의 증가는 단일의 피하 주사 후에 30일까지 여전히 존재하였다. 단일 투여량의 VRS-317 투여는 안전하고 잘 견디어졌으며, 최소의 주사 부위가 불편하였고; 매일의 rhGH 생성물과 비교하여 신규의 안전성 신호는 나타나지 않았다.

반복된 투여 연구를 수행하여 VRS-317 치료 6개월 후 안전성, 내성, 높이 속도, IGF-I 및 IGFBP-3 반응을 측정하였다. 주요 종점은 평균 6-개월 높이 속도이다. 시험대상자는 모두 사춘기 전이고 rhGH 치료를 받지 않았다. GHD는 단신(HT-SDS < -2), 지연된 골 나이, 쌍을 이룬 GH 자극 시험(GHmax ≤ 10 ng/mL), 낮은 IGF-I (IGF-I SDS < -1) 및 불량한 성장을 유발하는 다른 조건의 부재로 진단되었다. 초기에, 48명의 시험대상자(8/투여량 집단)에게 6개의 VRS-317 투여량 수준(0.8 내지 6.0mg/kg; 30일 동안 취한 4.9 내지 37μg의 rhGH/kg/d와 동일) 중의 하나에서의 단일 투여량을 제공하였다. 관찰된 PK/PD 결과를 기준으로 하여, 64명의 시험대상자를 3개의 투여 아암(dosing arm)으로 무작위처리하여 매달 5.0mg/kg, 1개월당 2회 2.5mg/kg 또는 매주 1.15mg/kg(모두에 대해 30 mg/kg/6m의 누적 투여량)을 평가하였다. 반복된 투여량의 개시시, 시험대상자(37M/27F)는 7.8(2.4)세의 평균(SD) 연령, -2.5(0.5)의 HT-SDS 및 -1.7(0.8)의 IGF-I SDS를 가졌다.

지금까지 투여된 465회 이상의 주사로, 주사 부위에서의 불편함은 경증(등급 1)이었고, 일시적이었으며(일반적으로 < 30분) 시험대상자의 22%에서만 보고되었다. 결절 형성 또는 지방이영양증은 주사 부위에서 주목되지 않았다. 관련된 심각한 부작용(SAE) 또는 예측하지 못한 AE는 없었다. 다른 관련된 AE는 경증이며 일시적이고 rhGH가 rhGH 치료를 받지 않은 어린이에서 개시하는 경우 예측된 유형이었다(예를 들면, 5명의 시험대상자에서 근골격 통증, 1명의 시험대상자에서 두통). 피크 IGF-I SDS 수준은 매달 투여로 최대이나 > 3은 아니고 단지 2명의 경우에서만 2를 일시적으로 초과하였다(2.01 및 2.12). 평균 트러프 IGF-I SDS 수준은 모든 투여 그룹에서 30일째에 기준선 초과로 남는다. 투여 2개월 후, 피크 IGF-I 수준은 제1의 투여량 후 일반적으로 더 높으며, 이는, 반복된 VRS-317 투여가 IGF-I 반응을 증강시킬 수 있음을 제안한다.

결론적으로, 대략 30μg의 rhGH/kg/d까지 rhGH 질량에서 동일한 투여량에서, VRS-317를 사용한 반복 투여는 사춘기 전 GHD 어린이에서 안전하고 잘 견디어지며 매주, 개월당 2회 또는 매달의 간격으로 제공되는 경우 IGF-I 과노출없이 기준선 초과의 평균 IGF-I 증가를 유지함이 밝혀졌다. 반복된 VRS-317 투여량은 초기 투여로 관찰된 IGF-I 반응을 증강시킬 수 있다.

실시예 3 - 3 개월 결과

대략 30 μg의 rhGH/kg/일의 매일 rhGH와 동일한 VRS-317 투여량에서, 지금까지 제2a 상에서 VRS-317의 반복된 투여량은 사춘기 전 GHD 어린이에서 안전하고 잘 견디어지는 것으로 밝혀졌으며 매주, 1개월당 2회 및 매달의 간격에서 제공되는 경우 IGF-I 과노출없이 치료학적 범위내에서 및 기준선에 걸쳐 평균 IGF-I 증가를 유지한다. 관련된 심각한 부작용 또는 예측되지 않은 부작용은 없었다. 다른 관련된 부작용은 주로 경증이며 일시적이고 rhGH를 rhGH 치료를 받지 않은 어린이에서 개시하는 경우 예측된 유형이었다. 지금까지 투여된 1000회 이상의 주사로, 주사 부위에서의 불편함은 대부분의 환자에서 발생하지 않았고 경증이며 일시적이었다. 결절 형성 또는 지방이형성증은 주사 부위에서 관찰되지 않았다. 피크 IGF-I SDS 수준은 매달 투여로 최대였으나 3을 초과하지 않고 단지 3개의 경우에서만 일시적으로 2를 초과하였다. 평균 트러프 IGF-I SDS 수준은 모든 투여 그룹에서 30일째에 기준선 초과로 남는다. 투여 2개월 후, 피크 IGF-I 수준은 제1의 투여량 후 보다 일반적으로 더 높았으며, 이는, 반복된 VRS-317 투여가 IGF-I 반응을 증강시킬 수 있음을 제안한다. 제2a 상에서 GHD 어린이로부터 평균 연간으로 환산한 3개월 높이 속도(성장 속도라고도 알려짐)는 매일 rhGH(33 μg의 rhGH/kg/일)의 비교가능한 투여량을 투여받은 역사적 연령-조화된 대조군과 비교가능하다. 전체적으로, GHD 어린이의 제2a 상 임상 시험에서 지금까지의 결과는 VRS-317이 비교가능한 투여량으로 투여된 매일 rhGH의 역사적 연구에 대해 비교가능한 안전성 및 효능 프로파일을 가짐을 나타낸다.

SEQUENCE LISTING <110> AMUNIX OPERATING INC. <120> TREATMENT OF PEDIATRIC GROWTH HORMONE DEFICIENCY WITH HUMAN GROWTH HORMONE ANALOGUES <130> 32808-742.601 <140> PCT/US2014/022850 <141> 2014-03-10 <150> 61/948,457 <151> 2014-03-05 <150> 61/931,987 <151> 2014-01-27 <150> 61/911,731 <151> 2013-12-04 <150> 61/880,701 <151> 2013-09-20 <150> 61/835,002 <151> 2013-06-14 <150> 61/810,786 <151> 2013-04-11 <150> 61/776,618 <151> 2013-03-11 <160> 41 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 1250 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 1 Ala Glu Pro Ala Gly Ser Pro Thr Ser Thr Glu Glu Gly Thr Pro Gly 1 5 10 15 Ser Gly Thr Ala Ser Ser Ser Pro Gly Ser Ser Thr Pro Ser Gly Ala 20 25 30 Thr Gly Ser Pro Gly Ala Ser Pro Gly Thr Ser Ser Thr Gly Ser Pro 35 40 45 Gly Ser Pro Ala Gly Ser Pro Thr Ser Thr Glu Glu Gly Thr Ser Glu 50 55 60 Ser Ala Thr Pro Glu Ser Gly Pro Gly Thr Ser Thr Glu Pro Ser Glu 65 70 75 80 Gly Ser Ala Pro Gly Ser Pro 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aagcgctact ccggagtctg gcccaggtac ctctactgaa 2580 ccgtctgagg gtagcgctcc aggtacttct actgaaccgt ccgaaggtag cgcaccaggt 2640 tttccgacta ttccgctgtc tcgtctgttt gataatgcta tgctgcgtgc gcaccgtctg 2700 caccagctgg cctttgatac ttaccaggaa tttgaagaag cctacattcc taaagagcag 2760 aagtactctt tcctgcaaaa cccacagact tctctctgct tcagcgaatc tattccgacg 2820 ccttccaatc gcgaggaaac tcagcaaaag tccaatctgg aactactccg catttctctg 2880 cttctgattc agagctggct agaaccagtg caatttctgc gttccgtctt cgccaatagc 2940 ctagtttatg gcgcatccga cagcaacgta tacgatctcc tgaaagatct cgaggaaggc 3000 attcagaccc tgatgggtcg tctcgaggat ggctctccgc gtactggtca gatcttcaag 3060 cagacttact ctaaatttga tactaacagc cacaatgacg atgcgcttct aaaaaactat 3120 ggtctgctgt attgttttcg taaagatatg gacaaagttg aaaccttcct gcgtattgtt 3180 cagtgtcgtt ccgttgaggg cagctgtggt ttc 3213 <210> 9 <211> 2304 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 9 ggtgagggtt ctggcgaagg ttccgaaggt gagggctccg aaggatctgg cgaaggtgag 60 ggttccgaag gttctggcga aggtgaaggc ggttctgagg gatccgaagg tgaaggctcc 120 gaaggatctg gcgaaggtga aggtggtgaa ggttctggcg aaggtgaggg atctggcgaa 180 ggctctgaag gtgaaggtgg tggtgaaggc tctgaaggtg aaggatctgg tgaaggtggc 240 gaaggtgagg gatctgaagg cggctccgaa ggtgaaggcg gatctgaagg cggcgaaggt 300 gaaggttccg aaggttctgg tgaaggtgaa ggatctgaag gtggctccga aggtgaagga 360 tctgaaggcg gttccgaagg tgagggctct gaaggttctg gcgaaggtga aggctctgaa 420 ggatctggtg aaggtgaagg ttccgaaggt tctggtgaag gtgaaggttc cgaaggttct 480 ggcgaaggtg aaggttctga aggtggctct gaaggtgaag gcggctctga aggatccgaa 540 ggtgaaggtt ctggtgaagg ctctgaaggt gaaggcggct ctgagggttc cgaaggtgaa 600 ggcggaggcg aaggttctga aggtgaggga tctggtgaag gttctgaagg tgaaggcggt 660 tctgaaggtt ccgaaggtga aggtggctct gagggatccg aaggtgaagg tggcgaagga 720 tctggtgaag gtgaaggttc tgaaggttct ggcgaaggtg agggttctgg cgaaggttcc 780 gaaggtgagg gctccgaagg atctggcgaa ggtgagggtt ccgaaggttc tggcgaaggt 840 gaaggcggtt ctgagggatc cgaaggtgag ggttctggcg aaggttccga aggtgagggc 900 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attccgctgt ctcgtctgtt tgataacgct atgctgcgtg cgcaccgtct gcaccagctg 1800 gcgttcgaca cttaccagga atttgaagaa gcgtacattc cgaaggaaca gaagtactct 1860 ttcctgcaaa acccgcagac ctccctgtgc ttcagcgaat ctattccgac tccgtccaat 1920 cgtgaagaaa ctcagcaaaa gtccaatctg gagctgctgc gcatctctct gctgctgatt 1980 cagagctggc tggagcctgt tcagtttctg cgttccgtct tcgccaacag cctggtttat 2040 ggtgcttccg acagcaacgt atacgatctg ctgaaagatc tggaagaagg cattcagacc 2100 ctgatgggtc gtctggaaga tggttctccg cgtactggtc agatcttcaa acaaacttac 2160 tccaaatttg atactaacag ccataacgac gatgctctgc tgaaaaacta tggtctgctg 2220 tattgcttcc gcaaggatat ggacaaagtt gaaaccttcc tgcgtattgt gcagtgtcgt 2280 tccgttgagg gcagctgtgg tttc 2304 <210> 10 <211> 3318 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 10 atggctgaac ctgctggctc tccaacctcc actgaggaag gtaccccggg tagcggtact 60 gcttcttcct ctccaggtag ctctacccct tctggtgcaa ccggctctcc aggtgcttct 120 ccgggcacca gctctaccgg ttctccaggt agcccggctg gctctcctac ctctactgag 180 gaaggtactt ctgaaagcgc tactcctgag tctggtccag gtacctctac tgaaccgtcc 240 gaaggtagcg ctccaggtag cccagcaggc tctccgactt ccactgagga aggtacttct 300 actgaacctt ccgaaggcag cgcaccaggt acctctactg aaccttctga gggcagcgct 360 ccaggtactt ctgaaagcgc taccccggaa tctggcccag gtagcgaacc ggctacttct 420 ggttctgaaa ccccaggtag cgaaccggct acctccggtt ctgaaactcc aggtagcccg 480 gcaggctctc cgacctctac tgaggaaggt acttctgaaa gcgcaacccc ggagtccggc 540 ccaggtacct ctaccgaacc gtctgagggc agcgcaccag gtacttctac cgaaccgtcc 600 gagggtagcg caccaggtag cccagcaggt tctcctacct ccaccgagga aggtacttct 660 accgaaccgt ccgagggtag cgcaccaggt acctctactg aaccttctga gggcagcgct 720 ccaggtactt ctgaaagcgc taccccggag tccggtccag gtacttctac tgaaccgtcc 780 gaaggtagcg caccaggtac ttctgaaagc gcaacccctg aatccggtcc aggtagcgaa 840 ccggctactt ctggctctga gactccaggt acttctaccg aaccgtccga aggtagcgca 900 ccaggtactt ctactgaacc gtctgaaggt agcgcaccag gtacttctga aagcgcaacc 960 ccggaatccg gcccaggtac ctctgaaagc gcaaccccgg agtccggccc 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gctctccgac ctctactgag 1800 gaaggtactt ctgaaagcgc aaccccggag tccggcccag gtacctctac cgaaccgtct 1860 gagggcagcg caccaggtac ctctgaaagc gcaactcctg agtctggccc aggtagcgaa 1920 cctgctacct ccggctctga gactccaggt acctctgaaa gcgcaacccc ggaatctggt 1980 ccaggtagcg aacctgcaac ctctggctct gaaaccccag gtacctctga aagcgctact 2040 cctgaatctg gcccaggtac ttctactgaa ccgtccgagg gcagcgcacc aggtagccct 2100 gctggctctc caacctccac cgaagaaggt acctctgaaa gcgcaacccc tgaatccggc 2160 ccaggtagcg aaccggcaac ctccggttct gaaaccccag gtacttctga aagcgctact 2220 cctgagtccg gcccaggtag cccggctggc tctccgactt ccaccgagga aggtagcccg 2280 gctggctctc caacttctac tgaagaaggt acttctaccg aaccttccga gggcagcgca 2340 ccaggtactt ctgaaagcgc tacccctgag tccggcccag gtacttctga aagcgctact 2400 cctgaatccg gtccaggtac ttctgaaagc gctaccccgg aatctggccc aggtagcgaa 2460 ccggctactt ctggttctga aaccccaggt agcgaaccgg ctacctccgg ttctgaaact 2520 ccaggtagcc cagcaggctc tccgacttcc actgaggaag gtacttctac tgaaccttcc 2580 gaaggcagcg caccaggtac ctctactgaa ccttctgagg 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ccccaggtac ctctgaaagc 3480 gctactcctg aatctggccc aggtacttct actgaaccgt ccgagggcag cgcaccaggt 3540 agccctgctg gctctccaac ctccaccgaa gaaggtacct ctgaaagcgc aacccctgaa 3600 tccggcccag gtagcgaacc ggcaacctcc ggttctgaaa ccccaggtac ttctgaaagc 3660 gctactcctg agtccggccc aggtagcccg gctggctctc cgacttccac cgaggaaggt 3720 agcccggctg gctctccaac ttctactgaa gaaggtactt ctaccgaacc ttccgagggc 3780 agcgcaccag gtacttctga aagcgctacc cctgagtccg gcccaggtac ttctgaaagc 3840 gctactcctg aatccggtcc aggtacttct gaaagcgcta ccccggaatc tggcccaggt 3900 agcgaaccgg ctacttctgg ttctgaaacc ccaggtagcg aaccggctac ctccggttct 3960 gaaactccag gtagcccagc aggctctccg acttccactg aggaaggtac ttctactgaa 4020 ccttccgaag gcagcgcacc aggtacctct actgaacctt ctgagggcag cgctccaggt 4080 agcgaacctg caacctctgg ctctgaaacc ccaggtacct ctgaaagcgc tactcctgaa 4140 tctggcccag gtacttctac tgaaccgtcc gagggcagcg cacca 4185 <210> 12 <211> 3204 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 12 ggtacttcta ctgaaccgtc tgaaggcagc gcaccaggta gcgaaccggc tacttccggt 60 tctgaaaccc caggtagccc agcaggttct ccaacttcta ctgaagaagg ttctaccagc 120 tctaccgcag aatctcctgg tccaggtacc tctactccgg aaagcggctc tgcatctcca 180 ggttctacta gcgaatctcc ttctggcact gcaccaggtt ctactagcga atccccgtct 240 ggtactgctc caggtacttc tactcctgaa agcggttccg cttctccagg tacctctact 300 ccggaaagcg gttctgcatc tccaggtagc gaaccggcaa cctccggctc tgaaacccca 360 ggtacctctg aaagcgctac tcctgaatcc ggcccaggta gcccggcagg ttctccgact 420 tccactgagg aaggtacctc tactgaacct tctgagggca gcgctccagg tacttctgaa 480 agcgctaccc cggagtccgg tccaggtact tctactgaac cgtccgaagg tagcgcacca 540 ggtacttcta ccgaaccgtc cgagggtagc gcaccaggta gcccagcagg ttctcctacc 600 tccaccgagg aaggtacttc taccgaaccg tccgagggta gcgcaccagg tacttctacc 660 gaaccttccg agggcagcgc accaggtact tctgaaagcg ctacccctga gtccggccca 720 ggtacttctg aaagcgctac tcctgaatcc ggtccaggta cctctactga accttccgaa 780 ggcagcgctc caggtacctc taccgaaccg tccgagggca gcgcaccagg tacttctgaa 840 agcgcaaccc ctgaatccgg tccaggtact tctactgaac cttccgaagg tagcgctcca 900 ggtagcgaac ctgctacttc tggttctgaa accccaggta gcccggctgg ctctccgacc 960 tccaccgagg aaggtagctc taccccgtct ggtgctactg gttctccagg tactccgggc 1020 agcggtactg cttcttcctc tccaggtagc tctacccctt ctggtgctac tggctctcca 1080 ggtacctcta ccgaaccgtc cgagggtagc gcaccaggta cctctactga accgtctgag 1140 ggtagcgctc caggtagcga accggcaacc tccggttctg aaactccagg tagccctgct 1200 ggctctccga cttctactga ggaaggtagc ccggctggtt ctccgacttc tactgaggaa 1260 ggtacttcta ccgaaccttc cgaaggtagc gctccaggtg caagcgcaag cggcgcgcca 1320 agcacgggag gtacttctga aagcgctact cctgagtccg gcccaggtag cccggctggc 1380 tctccgactt ccaccgagga aggtagcccg gctggctctc caacttctac tgaagaaggt 1440 tctaccagct ctaccgctga atctcctggc ccaggttcta ctagcgaatc tccgtctggc 1500 accgcaccag gtacttcccc tagcggtgaa tcttctactg caccaggtac ccctggcagc 1560 ggtaccgctt cttcctctcc aggtagctct accccgtctg gtgctactgg ctctccaggt 1620 tctagcccgt ctgcatctac cggtaccggc ccaggtagcg aaccggcaac ctccggctct 1680 gaaactccag gtacttctga aagcgctact ccggaatccg gcccaggtag cgaaccggct 1740 acttccggct ctgaaacccc aggttccacc agctctactg cagaatctcc gggcccaggt 1800 tctactagct ctactgcaga atctccgggt ccaggtactt ctcctagcgg cgaatcttct 1860 accgctccag gtagcgaacc ggcaacctct ggctctgaaa ctccaggtag cgaacctgca 1920 acctccggct ctgaaacccc aggtacttct actgaacctt ctgagggcag cgcaccaggt 1980 tctaccagct ctaccgcaga atctcctggt ccaggtacct ctactccgga aagcggctct 2040 gcatctccag gttctactag cgaatctcct tctggcactg caccaggtac ttctaccgaa 2100 ccgtccgaag gcagcgctcc aggtacctct actgaacctt ccgagggcag cgctccaggt 2160 acctctaccg aaccttctga aggtagcgca ccaggtagct ctactccgtc tggtgcaacc 2220 ggctccccag gttctagccc gtctgcttcc actggtactg gcccaggtgc ttccccgggc 2280 accagctcta ctggttctcc aggtagcgaa cctgctacct ccggttctga aaccccaggt 2340 acctctgaaa gcgcaactcc ggagtctggt ccaggtagcc ctgcaggttc tcctacctcc 2400 actgaggaag gtagctctac tccgtctggt gcaaccggct ccccaggttc tagcccgtct 2460 gcttccactg gtactggccc aggtgcttcc ccgggcacca gctctactgg ttctccaggt 2520 acctctgaaa gcgctactcc ggagtctggc ccaggtacct ctactgaacc gtctgagggt 2580 agcgctccag gtacttctac tgaaccgtcc gaaggtagcg caccaggttt tccgactatt 2640 ccgctgtctc gtctgtttga taatgctatg ctgcgtgcgc accgtctgca ccagctggcc 2700 tttgatactt accaggaatt tgaagaagcc tacattccta aagagcagaa gtactctttc 2760 ctgcaaaacc cacagacttc tctctgcttc agcgaatcta ttccgacgcc ttccaatcgc 2820 gaggaaactc agcaaaagtc caatctggaa ctactccgca tttctctgct tctgattcag 2880 agctggctag aaccagtgca atttctgcgt tccgtcttcg ccaatagcct agtttatggc 2940 gcatccgaca gcaacgtata cgatctcctg aaagatctcg aggaaggcat tcagaccctg 3000 atgggtcgtc tcgaggatgg ctctccgcgt actggtcaga tcttcaagca gacttactct 3060 aaatttgata ctaacagcca caatgacgat gcgcttctaa aaaactatgg tctgctgtat 3120 tgttttcgta aagatatgga caaagttgaa accttcctgc gtattgttca gtgtcgttcc 3180 gttgagggca gctgtggttt ctaa 3204 <210> 13 <211> 48 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 13 Met Ala Glu Pro Ala Gly Ser Pro Thr Ser Thr Glu Glu Gly Thr Pro 1 5 10 15 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<400> 37 Ala Glu Pro Ala Gly Ser Pro Thr Ser Thr Glu Glu Gly Ala Ser Pro 1 5 10 15 Gly Thr Ser Ser Thr Gly Ser Pro Gly Ser Ser Thr Pro Ser Gly Ala 20 25 30 Thr Gly Ser Pro Gly Ser Ser Thr Pro Ser Gly Ala Thr Gly Ser 35 40 45 <210> 38 <211> 912 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 38 Ala Glu Pro Ala Gly Ser Pro Thr Ser Thr Glu Glu Gly Thr Pro Gly 1 5 10 15 Ser Gly Thr Ala Ser Ser Ser Pro Gly Ser Ser Thr Pro Ser Gly Ala 20 25 30 Thr Gly Ser Pro Gly Ala Ser Pro Gly Thr Ser Ser Thr Gly Ser Pro 35 40 45 Gly Ser Pro Ala Gly Ser Pro Thr Ser Thr Glu Glu Gly Thr Ser Glu 50 55 60 Ser Ala Thr Pro Glu Ser Gly Pro Gly Thr Ser Thr Glu Pro Ser Glu 65 70 75 80 Gly Ser Ala Pro Gly Ser Pro Ala Gly Ser Pro Thr Ser Thr Glu Glu 85 90 95 Gly Thr Ser Thr Glu Pro Ser Glu Gly Ser Ala Pro Gly Thr Ser Thr 100 105 110 Glu Pro Ser Glu Gly Ser Ala Pro Gly Thr Ser Glu Ser Ala Thr Pro 115 120 125 Glu Ser Gly Pro Gly Ser Glu Pro Ala Thr Ser Gly 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Ala Thr Pro 545 550 555 560 Glu Ser Gly Pro Gly Ser Pro Ala Gly Ser Pro Thr Ser Thr Glu Glu 565 570 575 Gly Ser Pro Ala Gly Ser Pro Thr Ser Thr Glu Glu Gly Ser Pro Ala 580 585 590 Gly Ser Pro Thr Ser Thr Glu Glu Gly Thr Ser Glu Ser Ala Thr Pro 595 600 605 Glu Ser Gly Pro Gly Thr Ser Thr Glu Pro Ser Glu Gly Ser Ala Pro 610 615 620 Gly Thr Ser Glu Ser Ala Thr Pro Glu Ser Gly Pro Gly Ser Glu Pro 625 630 635 640 Ala Thr Ser Gly Ser Glu Thr Pro Gly Thr Ser Glu Ser Ala Thr Pro 645 650 655 Glu Ser Gly Pro Gly Ser Glu Pro Ala Thr Ser Gly Ser Glu Thr Pro 660 665 670 Gly Thr Ser Glu Ser Ala Thr Pro Glu Ser Gly Pro Gly Thr Ser Thr 675 680 685 Glu Pro Ser Glu Gly Ser Ala Pro Gly Ser Pro Ala Gly Ser Pro Thr 690 695 700 Ser Thr Glu Glu Gly Thr Ser Glu Ser Ala Thr Pro Glu Ser Gly Pro 705 710 715 720 Gly Ser Glu Pro Ala Thr Ser Gly Ser Glu Thr Pro Gly Thr Ser Glu 725 730 735 Ser Ala Thr Pro Glu Ser Gly Pro Gly Ser Pro Ala Gly Ser Pro Thr 740 745 750 Ser Thr Glu Glu Gly Ser Pro Ala Gly Ser Pro Thr Ser Thr Glu Glu 755 760 765 Gly Thr Ser Thr Glu Pro Ser Glu Gly Ser Ala Pro Gly Thr Ser Glu 770 775 780 Ser Ala Thr Pro Glu Ser Gly Pro Gly Thr Ser Glu Ser Ala Thr Pro 785 790 795 800 Glu Ser Gly Pro Gly Thr Ser Glu Ser Ala Thr Pro Glu Ser Gly Pro 805 810 815 Gly Ser Glu Pro Ala Thr Ser Gly Ser Glu Thr Pro Gly Ser Glu Pro 820 825 830 Ala Thr Ser Gly Ser Glu Thr Pro Gly Ser Pro Ala Gly Ser Pro Thr 835 840 845 Ser Thr Glu Glu Gly Thr Ser Thr Glu Pro Ser Glu Gly Ser Ala Pro 850 855 860 Gly Thr Ser Thr Glu Pro Ser Glu Gly Ser Ala Pro Gly Ser Glu Pro 865 870 875 880 Ala Thr Ser Gly Ser Glu Thr Pro Gly Thr Ser Glu Ser Ala Thr Pro 885 890 895 Glu Ser Gly Pro Gly Thr Ser Thr Glu Pro Ser Glu Gly Ser Ala Pro 900 905 910 <210> 39 <211> 913 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 39 Ala Glu Pro Ala Gly Ser Pro Thr Ser Thr Glu Glu Gly Thr Pro Gly 1 5 10 15 Ser Gly Thr Ala Ser Ser Ser Pro Gly Ser Ser Thr Pro Ser Gly Ala 20 25 30 Thr 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Claims

소아 환자에서 사람 소아 성장 호르몬 결핍증(PGHD)을 치료하는 방법으로서, 상기 소아 환자에게, 약 0.80mg/kg 내지 약 6.3mg/kg의 치료학적으로 유효한 체중 조절된 일시 투여량으로서, 서열 번호: 1에 대해 서열 동일성이 적어도 약 90%인 아미노산 서열을 포함하는 사람 성장 호르몬-XTEN(hGH-XTEN) 융합 단백질을 투여함을 포함하는, 방법.
청구항 1에 있어서, 상기 일시 투여량이 매주, 매 격주, 1개월에 2회, 매 3주, 또는 매달 투여되는 방법.
청구항 2에 있어서, 상기 일시 투여량이 매달 투여되는 방법.
청구항 2에 있어서, 상기 일시 투여량이 매 격주 또는 1개월에 2회 투여되는 방법.
청구항 1 내지 청구항 4 중의 어느 한 항에 있어서, 상기 일시 투여량이 피하 투여되는 방법.
청구항 1 내지 청구항 5 중의 어느 한 항에 있어서, 상기 방법이 소아 환자에서 7cm/yr 내지 12 cm/yr와 동일한 높이 속도를 달성하는데 효과적인 방법.
청구항 1 내지 청구항 5 중의 어느 한 항에 있어서, 상기 방법이 소아 환자에서 8cm/yr 내지 11cm/yr와 동일한 높이 속도를 달성하는데 효과적인 방법.
청구항 6 또는 청구항 7에 있어서, 상기 높이 속도가 소아 환자에서 투여 후 적어도 3개월, 적어도 6개월, 또는 적어도 12개월 후 달성되는 방법.
청구항 6 또는 청구항 7에 있어서, 상기 달성된 높이 속도가 첫해 높이 속도인 방법.
청구항 1 내지 청구항 5 중의 어느 한 항에 있어서, 상기 방법이 동일한 기간에 걸쳐 XTEN에 연결되지 않은 hGH의 매일 주사를 사용하여 달성된 것과 비교하여 소아 환자에서 높이 속도를 달성하는데 열악하지 않은 방법.
청구항 6 내지 청구항 10 중의 어느 한 항에 있어서, 상기 일시 투여량이 약 0.8mg/kg 내지 약 1.5mg/kg, 약 1.8mg/kg 내지 약 3.2mg/kg, 또는 약 3.5mg/kg 내지 약 6.3 mg/kg으루부터 선택되는 방법.
청구항 1 내지 청구항 11 중의 어느 한 항에 있어서, 상기 소아 환자가 적어도 1.0의 기준선 혈청 IGF-I 표준편차 점수(SDS)로부터의 증가를 투여 후 적어도 약 7일, 적어도 약 8일, 적어도 약 9일, 적어도 약 10일, 적어도 약 11일, 적어도 약 12일, 적어도 약 13일, 적어도 약 14일, 적어도 약 15일, 적어도 약 16일, 적어도 약 17일, 적어도 약 18일, 적어도 약 19일, 적어도 약 20일, 적어도 약 21일, 적어도 약 22일, 적어도 약 23일, 적어도 약 24일, 적어도 약 25일, 적어도 약 26일, 적어도 약 27일, 적어도 약 28일, 적어도 약 29일, 적어도 약 30일 동안 유지하는 방법.
청구항 1 내지 청구항 11 중의 어느 한 항에 있어서, 상기 소아 환자가 투여 후 적어도 약 14일, 적어도 약 21일, 또는 적어도 약 30일 동안 적어도 1.0의 기준선 혈청 IGF-I 표준편차 점수(SDS)로부터의 증가를 유지하는 방법.
청구항 1 내지 청구항 11 중의 어느 한 항에 있어서, 상기 소아 환자가 투여 후 적어도 약 14일 또는 적어도 약 30일 동안 적어도 1.0의 기준선 혈청 IGF-I 표준편차 점수(SDS)로부터의 증가를 유지하는 방법.
청구항 1 내지 청구항 11 중의 어느 한 항에 있어서, 상기 소아 환자가 투여 후 약 -2.0 내지 약 2.0의 혈청 IGF-I 표준편차 점수(SDS)를 유지하는 방법.
청구항 15에 있어서, 상기 IGF-I SDS가 약 -1.5 내지 약 2.0 이상, 약 -1.0 내지 약 2.0 이상, 약 -0.5 내지 약 2.0 이상, 약 0 내지 약 2.0 이상, 약 0.5 내지 약 2.0 이상, 약 1.0 내지 약 2.0 이상, 및 약 1.5 내지 약 2.0 이상으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 방법.
청구항 15에 있어서, 상기 IGF-I SDS가 약 -1.0 내지 약 2.0 이상, 약 0 내지 약 2.0 이상, 및 약 1.0 내지 약 2.0 이상으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 방법.
청구항 15에 있어서, 상기 소아 환자가 상기 일시 투여량의 투여 후 상기 혈청 IGF-I SDS를 나타내고, 여기서 상기 투여가 매주, 매 격주, 1개월당 2회, 매 3주, 또는 매달인 방법.
청구항 15에 있어서, 상기 소아 환자가 일시 투여량의 투여 후 상기 혈청 IGF-I SDS를 나타내고, 여기서 상기 투여가 1개월당 2회, 또는 매달인 방법.
청구항 12 내지 청구항 19 중의 어느 한 항에 있어서, 상기 소아 환자가 적어도 제2, 또는 제3, 또는 제4의 일시 투여량의 투여 후 상기 혈청 IGF-I SDS를 나타내는 방법.
청구항 15에 있어서, 상기 일시 투여량이 약 -2.0 내지 약 2.0의 소아 환자 혈청 IGF-I SDS를 투여 후 적어도 약 7일, 적어도 약 8일, 적어도 약 9일, 적어도 약 10일, 적어도 약 11일, 적어도 약 12일, 적어도 약 13일, 적어도 약 14일, 적어도 약 15일, 적어도 약 16일, 적어도 약 17일, 적어도 약 18일, 적어도 약 19일, 적어도 약 20일, 적어도 약 21일, 적어도 약 22일, 적어도 약 23일, 적어도 약 24일, 적어도 약 25일, 적어도 약 26일, 적어도 약 27일, 적어도 약 28일, 적어도 약 29일, 적어도 약 30일 동안 유지하는데 효과적인 방법.
청구항 21에 있어서, 상기 일시 투여량이 약 -2.0 내지 약 2.0의 소아 환자의 혈청 IGF-I SDS를 투여 후 적어도 약 14일, 적어도 약 21일, 또는 적어도 약 30일 동안 유지하는데 효과적인 방법.
청구항 21에 있어서, 상기 일시 투여량이 약 -2.0 내지 약 2.0의 소아 환자의 혈청 IGF-I SDS를 투여 후 적어도 약 14일, 또는 적어도 약 30일 동안 유지하는데 효과적인 방법.
청구항 21 내지 청구항 23 중의 어느 한 항에 있어서, 상기 IGF-I SDS가 제1, 또는 제2, 또는 제3, 또는 제4의 일시 투여량의 투여 후 약 -2.0 내지 약 2.0으로 유지되는 방법.
청구항 1 내지 청구항 24에 있어서, 상기 일시 투여량이 약 0.8mg/kg, 약 1.0mg/kg, 약 1.2mg/kg, 약 1.4mg/kg, 약 1.6mg/kg, 약 1.8mg/kg, 약 2.0mg/kg, 약 2.2mg/kg, 약 2.4mg/kg, 약 2.6mg/kg, 약 2.7mg/kg, 약 2.8mg/kg, 약 3mg/kg, 약 3.2mg/kg, 약 3.4mg/kg, 약 3.6mg/kg, 약 3.8mg/kg, 약 4.0mg/kg, 약 4.2mg/kg, 약 4.4mg/kg, 약 4.6mg/kg, 약 4.8mg/kg, 약 5.0mg/kg, 약 5.2mg/kg, 약 5.4mg/kg, 약 5.6mg/kg, 약 5.8mg/kg, 약 6.0 mg/kg, 및 약 6.3mg/kg으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 방법.
청구항 1 내지 청구항 24 중의 어느 한 항에 있어서, 상기 일시 투여량이 약 0.8mg/kg 내지 약 1.5mg/kg인 방법.
청구항 1 내지 청구항 24 중의 어느 한 항에 있어서, 상기 일시 투여량이 약 1.8mg/kg 내지 약 3.2mg/kg인 방법.
청구항 1 내지 청구항 24 중의 어느 한 항에 있어서, 상기 일시 투여량이 약 3.5mg/kg 내지 약 6.3mg/kg인 방법.
청구항 1 내지 청구항 28 중의 어느 한 항에 있어서, 상기 hGH-XTEN 융합 단백질이 서열 번호: 1의 아미노산 서열을 포함하는 방법.
청구항 1 내지 청구항 28 중의 어느 한 항에 있어서, 상기 hGH-XTEN 융합 단백질이 서열 번호1에 대해 서열 동일성이 적어도 약 91%, 또는 적어도 약 92%, 또는 적어도 약 93%, 또는 적어도 약 94%, 또는 적어도 약 95%, 또는 적어도 약 96%, 또는 적어도 약 97%, 또는 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99%인 방법.
PGHD를 지닌 환자에게 약 -2.0 내지 약 2.0의 상기 환자의 혈청 IGF-I 표준 편차 점수(SDS)를유지하는데 효과적인 치료학적으로 유효한 체중 조절된 일시 투여량으로서 서열 번호: 1에 대해 서열 동일성이 적어도 약 90%인 아미노산 서열을 포함하는 사람 성장 호르몬-XTEN(hGH-XTEN) 융합 단백질을 상기 일시 투여량의 투여 후 적어도 7일 동안 투여함을 포함하여, 사람 소아 환자에서 성장 호르몬 결핍증(PGHD)을 치료하는 방법.
청구항 31에 있어서, 상기 일시 투여량이 약 0.8mg/kg 내지 약 6.3mg/kg인 방법.
청구항 31 또는 청구항 32에 있어서, 상기 일시 투여량이 약 -2.0 내지 약 2.0의 상기 환자의 혈청 IGF-I SDS를 투여 후 적어도 약 7일, 적어도 8일, 적어도 약 9일, 적어도 약 10일, 적어도 약 11일, 적어도 약 12일, 적어도 약 13일, 적어도 약 14일, 적어도 약 15일, 적어도 약 16일, 적어도 약 17일, 적어도 약 18일, 적어도 약 19일, 적어도 약 20일, 적어도 약 21일, 적어도 약 22일, 적어도 약 23일, 적어도 약 24일, 적어도 약 25일, 적어도 약 26일, 적어도 약 27일, 적어도 약 28일, 적어도 약 29일, 적어도 약 30일, 또는 적어도 약 1개월 동안 유지하기에 효과적인 방법.
청구항 33에 있어서, 상기 일시 투여량이 약 -2.0 내지 약 2.0의 상기 소아 환자의 혈청 IGF-I SDS를 투여 후 적어도 약 14일, 적어도 약 21일, 또는 적어도 약 30일 동안 유지하는데 효과적인 방법.
청구항 33에 있어서, 상기 일시 투여량이 약 -2.0 내지 약 2.0의 상기 소아 환자의 혈청 IGF-I SDS를 투여 후 적어도 약 14일, 또는 적어도 약 30일 동안 유지하기에 효과적인 방법.
서열 번호: 1에 대한 서열 동일성이 적어도 약 90%인 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 상기 일시 투여량이 약 0.8mg/kg 내지 약 6.3mg/kg의 hGH-XTEN 융합 단백질을 포함하는 치료학적으로 유효한 체중 조절된 일시 투여량인, hGH-XTEN 융합 단백질의 소아 일시 투여량.
청구항 36에 있어서, 소아 성장 호르몬 결핍증(PGHD)의 치료가 필요한 소아 환자에서 소아 성장 호르몬 결핍증(PGHD)을 치료하는데 사용하기 위한 일시 투여량.
청구항 36 또는 청구항 37에 있어서, 상기 hGH-XTEN 융합 단백질이 서열 번호: 1의 아미노산서열을 포함하는 일시 투여량.
청구항 36 내지 청구항 38 중의 어느 한 항에 있어서, 피하 투여용으로 제형화되는 일시 투여량.
사람 소아 환자에서 사람 소아 성장 호르몬 결핍증(PGHD)을 치료하기 위한 방법에서 사용하기 위한, 서열 번호: 1에 대해 서열 동일성이 적어도 약 90%인 아미노산 서열을 포함하는 hGH-XTEN 융합 단백질로서, 상기 방법은 약 0.8mg/kg 내지 약 6.3mg/kg의 투여량에서 hGH-XTEN 융합 단백질의 치료학적으로 유효한 체중 조절된 일시 투여량을 투여함을 포함하는 hGH-XTEN 융합 단백질.
소아 환자에서 PGHD 치료용 의약의 제조에서의, 서열 번호: 1에 대해 서열 동일성이 적어도 약 90%인 아미노산 서열을 포함하는 hGH-XTEN 융합 단백질의 용도로서, 상기 hGH-XTEN 융합 단백질이 소아 환자에게 약 0.8mg/kg 내지 약 6.3mg/kg의 투여량에서 hGH-XTEN 융합 단백질의 치료학적으로 유효한 체중 조절된 일시 투여량으로서 소아 환자에게 투여되는 용도.
청구항 40 또는 청구항 41에 있어서, 상기 일시 투여량이 매주, 매 격주, 1개월에 2회, 매 3주, 또는 매달 투여되는 hGH-XTEN 융합 단백질 또는 용도.
청구항 40 또는 청구항 41에 있어서, 상기 일시 투여량이 1개월에 2회, 또는 매달 투여되는 hGH-XTEN 융합 단백질 또는 용도.
청구항 40 또는 청구항 41 내지 청구항 43 중의 어느 한 항에 있어서, 상기 hGH-XTEN 융합 단백질이 서열 번호: 1의 아미노산 서열을 포함하는 hGH-XTEN 융합 단백질 또는 용도.
청구항 40 또는 청구항 41 내지 청구항 44 중의 어느 한 항에 있어서, 상기 일시 투여량이 피하투여되는 hGH-XTEN 융합 단백질 또는 용도.
청구항 40 또는 청구항 41 내지 청구항 45 중의 어느 한 항에 있어서, 상기 사람 소아 환자가 일시 투여량의 투여 후 약 -2.0 내지 약 2.0의 혈청 IGF-I 표준 편차 점수(SDS)를 갖는 hGH-XTEN 융합 단백질 또는 용도.
청구항 40 또는 청구항 46에 있어서, 상기 IGF-I SDS가 약 -1.5 이상, 약 -1.0 이상, 약 -0.5 이상, 약 0 이상, 약 0.5 이상, 약 1.0 이상, 및 약 1.5 이상으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 hGH-XTEN 융합 단백질 또는 용도.
청구항 40 또는 청구항 46에 있어서, 상기 IGF-I SDS가 약 -1.0 이상, 약 0 이상, 및 약 1.0 이상으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 hGH-XTEN 융합 단백질 또는 용도.
청구항 40 또는 청구항 41 내지 청구항 48 중의 어느 한 항에 있어서, 상기 투여가 매주, 매 격주, 1개월당 2회, 매 3주, 또는 매달 투여되는 hGH-XTEN 융합 단백질 또는 용도.
청구항 40 또는 청구항 41 내지 청구항 48 중의 어느 한 항에 있어서, 상기 투여가 1개월당 2회, 또는 매달인 hGH-XTEN 융합 단백질 또는 용도.
하기를 포함하는, 소아 성장 호르몬 결핍증(PGHD)의 치료용 키트:
(i) 서열 번호: 1에 대해 서열 동일성이 적어도 약 90% 이상인 아미노산 서열을 포함하는 사람 성장 호르몬-XTEN(hGH-XTEN) 융합 단백질을 포함하는 약제학적 조성물을 보유하는 용기, 및
(ii) 상기 용기와 관련된 포장 삽입물로서, 상기 포장 삽입물은, 상기 조성물이 약 0.8mg/kg 내지 약 6.3mg/kg의 초기 투여량의 hGH-XTEN 융합 단백질 및 약 0.8mg/kg 내지 약 6.3mg/kg의 다수의 후속적인 투여량의 hGH-XTEN 융합 단백질을 투여함으로써 소아 환자에서 소아 성장 호르몬 결핍증(PGHD) 치료용임을 나타내고, 여기서 상기 투여량이 매주, 매 격주, 1개월당 2회, 매 3주, 또는 매달 투여되는 포장 삽입물.
청구항 51에 있어서, 상기 용기가 약제학적으로 허용되는 담체를 추가로 포함하는 키트.
소아 환자에서 소아 성장 호르몬 결핍증(PGHD)의 치료를 위한 약제학적 요법에서 사용하기 위해 서열 번호: 1에 대해 서열 동일성이 적어도 약 90%인 아미노산 서열을 포함하는 사람 성장 호르몬-XTEN(hGH-XTEN) 융합 단백질로서, 상기 요법은 사람 성장 호르몬-XTEN(hGH-XTEN) 융합 단백질의 일시 투여량을 투여함으로써 상기 소아 환자를 치료함을 포함하는 사람 성장 호르몬-XTEN(hGH-XTEN) 융합 단백질.
청구항 53에 있어서, 상기 약제학적 요법이 소아 환자에서 약 -2.0 내지 약 2.0의 IGF-I 표준편차 점수(SDS)를 달성하는데 필요한 양의 hGH-XTEN 융합 단백질을 측정하는 단계를 추가로 포함하는 hGH-XTEN 융합 단백질.
청구항 53에 있어서, 소아 환자를 치료하기 위한 상기 약제학적 요법이 hGH-XTEN 융합 단백질을 약 0.8mg/kg 내지 약 6.3mg/kg의 초기 일시 투여량으로 그리고 hGH-XTEN 융합 단백질을 약 0.8mg/kg 내지 약 6.3mg/kg의 다수의 후속적인 일시 투여량으로 투여함을 포함하는 hGH-XTEN 융합 단백질.
청구항 55에 있어서, 상기 일시 투여량이 매주, 매 격주, 1개월당 2회, 매 3주, 또는 매달 투여되는 hGH-XTEN 융합 단백질.
청구항 55에 있어서, 상기 일시 투여량이 1개월당 2회, 또는 매달 투여되는 hGH-XTEN 융합 단백질.
청구항 10에 있어서, 투여된 상기 hGH-XTEN 융합 단백질이, 몰 기준으로, XTEN에 연결되지 않은 hGH의 동량과 비교가능하고 소아 환자에게 투여되는 방법.
청구항 1 내지 청구항 5 중의 어느 한 항에 있어서, 상기 방법이 소아 환자의 높이 속도를 몰 기준으로, 동량의, XTEN 에 연결되지 않은 hGH의 주사액이 매일 투여된 소아 환자에서 달성된 높이 속도와 비교하여 이의 적어도 약 10%, 적어도 약 20%, 또는 적어도 약 30% 내에서, 비교가능한 투여량 기간에 걸쳐 유지하는데 효과적인 방법.