HU221984B1 - Humán TNFalfa-t kötő antitestek, ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények és alkalmazásuk - Google Patents

Humán TNFalfa-t kötő antitestek, ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények és alkalmazásuk Download PDF

Info

Publication number
HU221984B1
HU221984B1 HU9901874A HUP9901874A HU221984B1 HU 221984 B1 HU221984 B1 HU 221984B1 HU 9901874 A HU9901874 A HU 9901874A HU P9901874 A HUP9901874 A HU P9901874A HU 221984 B1 HU221984 B1 HU 221984B1
Authority
HU
Hungary
Prior art keywords
antibody
seq
amino acid
human
antibodies
Prior art date
Application number
HU9901874A
Other languages
English (en)
Inventor
Deborah J. Allen
Hendricus R. J. M. Hoogenboom
Zehra Kaymakcalan
Boris Labkovsky
John A. Mankovich
Original Assignee
Basf Ag
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=26707297&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=HU221984(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Priority claimed from US08/599,226 external-priority patent/US6090382A/en
Application filed by Basf Ag filed Critical Basf Ag
Publication of HUP9901874A2 publication Critical patent/HUP9901874A2/hu
Publication of HUP9901874A3 publication Critical patent/HUP9901874A3/hu
Publication of HU221984B1 publication Critical patent/HU221984B1/hu

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
    • C07K16/241—Tumor Necrosis Factors
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/02—Stomatological preparations, e.g. drugs for caries, aphtae, periodontitis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/16—Central respiratory analeptics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/06—Antigout agents, e.g. antihyperuricemic or uricosuric agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A61P29/02—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID] without antiinflammatory effect
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/04—Anorexiants; Antiobesity agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A61P31/22—Antivirals for DNA viruses for herpes viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P33/00—Antiparasitic agents
    • A61P33/02—Antiprotozoals, e.g. for leishmaniasis, trichomoniasis, toxoplasmosis
    • A61P33/06—Antimalarials
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P39/00—General protective or antinoxious agents
    • A61P39/02—Antidotes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/04—Inotropic agents, i.e. stimulants of cardiac contraction; Drugs for heart failure
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/08—Vasodilators for multiple indications
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/64—General methods for preparing the vector, for introducing it into the cell or for selecting the vector-containing host
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/10—Cells modified by introduction of foreign genetic material
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S424/00—Drug, bio-affecting and body treating compositions
    • Y10S424/81—Drug, bio-affecting and body treating compositions involving autoimmunity, allergy, immediate hypersensitivity, delayed hypersensitivity, immunosuppression, immunotolerance, or anergy

Abstract

A találmány tárgya izolált TNF?-kötő humán antitest vagy antigénkötőrésze, amely a) a humán TNF?-tól 1×10–3 s–1 vagy ennél kisebb Koff-értékkel és 1×10–8 M vagy ennél kisebb Kd-értékkel disszociál,mindkettőt felületi plazmonrezonanciával meghatározva; b) könnyű láncCDR3 doménje 3. számú aminosavszekvenciát vagy az 1., 4., 5., 7. vagy8. pozícióban egyetlen ala- ninhelyettesítéssel, vagy az 1., 3., 4.,6., 7., 8. és/vagy 9. pozícióban 1–5 konzervatívaminosavhelyettesítéssel módosított 3. számú aminosavszekvenciáttartalmaz; c) nehéz lánc CDR3 doménje 4. számú aminosavszekvenciátvagy a 2., 3., 4., 5., 6., 8., 9., 10. vagy 11. pozícióban egyetlenalaninhelyettesítéssel, vagy a 2., 3., 4., 5., 6., 8., 9., 10., 11.és/vagy 12. pozícióban 1–5 konzervatív amino- savhelyettesítésselmódosított aminosavszekvenciát tartalmaz; és d) 1×10–7 M vagy ennélkisebb IC50-értékkel rendelkezik. A találmány a fenti antitestekettartalmazó gyógyszerkészítményekre és az antitestek alkalmazására isvonatkozik. ŕ

Description

A tumomekrózis-faktor-α (TNFa) egy citokin, amelyet számos sejttípus - beleértve a monícitákat és makrofágokat - termel. A TNFa-t eredetileg annak alapján azonosították, hogy bizonyos egértumorok nekrózisát (elhalását) tudta indukálni [lásd például: L. Old, Science, 230, 630-632 (1985)]. Ezt követően egy cachexiával összefüggő, cachectinnek nevezett faktorról kiderítették, hogy ez a molekula azonos a TNFaval. A TNFa részt vesz a sokk közvetítésében [lásd például: B. Beutler, A. Cerami, Annu. Rév. Biochem., 57, 505-518 (1988); B. Beutler, A. Cerami, Annu. Rév. Immunoi., 7, 625-655 (1989)]. A TNFa szerepet játszik még számos humán betegség és rendellenesség patofiziológiájában, beleértve a szepszist, a fertőzéseket, az autoimmun betegségeket, a transzplantátumkilökődést és a graft versus hőst betegséget [lásd például: A. Moeller, et al., Cytokine, 2, 162-169 (1990); 5,231,024 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás (Moeller et al.); 260 610 Bl számon közzétett európai szabadalmi iratok (A. Moeller, et al.); P. Vasilli, Annu. Rév. Immunoi., 10, 411-452 (1992); K. J. Tracey, A. Cerami, Annu. Rév. Med., 45, 491-503 (1994)].
Mivel a humán TNFa (hTNFa) a legkülönbözőbb humánbetegségekben káros hatást fejt ki, terápiás stratégiát dolgoztak ki a hTNFa aktivitásának gátlására, vagy elhárítására. Főképpen olyan antitestek segítségével kísérelték meg a hTNFa aktivitását gátolni, amelyek kötődnek a hTNFa-hoz és azt neutralizálják. A legkorábbi ilyen antitestek közé tartoztak az egér monoklonális antitestek (mAt-ek), amelyeket hTNFa-val immunizált egerek limfocitáiból előállított hibridómák szekretálnak [lásd például: T. Hahn et al., Proc. Natl. Acad. Sci., 82, 3814-3818 (1985); C-M. Liang et al., Biochem. Biophys. Rés. Commun., 137, 847-854 (1986); M. Hirai, et al., J. Immunoi. Methods., 96, 57-62 (1987); B. M. Fendly et al., Hybridoma, 6, 359-370 (1987); A. Moeller et al., Cytokine, 2, 162-169 (1990); 5,231,024 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás (Moeller et al.); 186 833 Bl számon közzétett európai szabadalmi iratok (D. Wallach); 218 868 Al számon közzétett európai szabadalmi bejelentés (Old et al.); 260 610 Bl számon közzétett európai szabadalmi iratok (A. Moeller et al.)]. Bár ezek az egér-anti-hTNFa antitestek gyakran erős affinitást fejtettek ki a hTNFa-val szemben (például: K<j<10-9 M) és képesek voltak a hTNFa-aktivitás neutralizálására, in vivő használatukat olyan problémák korlátozhatják, amelyek az egérantitestek embereknél való alkalmazásából fakadnak. Ilyen probléma a szérumfelezési idő, továbbá, hogy az egérantitest nem képes bizonyos humáneffektor-fiinkciók megindítására, és hogy nem kívánt immunválasz jön létre emberben egérantitest ellen [„humán antiegérantitest” reakció; humán anti-mouse antibody (HAMA) reaction].
A teljes egérantitest emberben való használatával kapcsolatos problémák leküzdése végett megkísérelték az egér-anti-hTNFa antitestek genetikai manipulálását, ezek „emberszerübbé” változtatása céljából. Előállítottak például olyan kiméra antitesteket, amelyekben az antitestláncok variábilis szakaszai egéreredetűek, és az antitestláncok konstans szakaszai emberi eredetűek voltak [D. M. Knight et al., Mól. Immunoi., 30, 1443-1453 (1993); WO 92/16553 számon közzétett nemzetközi szabadalmi iratok (P. E. Daddona et al.)]. Előállítottak ezenkívül olyan humanizált antitesteket, amelyekben az antitest variábilis szakaszainak hipervariábilis doménjei egéreredetűek voltak, de a megmaradt variábilis szakaszok és az antitest konstans szakaszai emberből származtak [WO 92/11383 számon közzétett nemzetközi szabadalmi iratok (J. R. Adair et al.)]. Azonban, mivel ezek a kiméra és humanizált antitestek még mindig tartalmaznak néhány egérszekvenciát, ezek még mindig kiválthatnak nem kívánt immunreakciókat - humán antikiméra antitest reakciót [humán anti-chimeric antibody (HACA) reaction] - különösen ha hosszú időn át alkalmazzák, például krónikus indikációk esetén, mint a rheumatoid arthritis [lásd például: M. J. Elliot et al., Láncét, 344, 1125-1127 (1994); M. J. Elliot et al., Láncét, 344, 1105-1110(1994)].
Előnyös hTNFa-inhibitor lenne az egér-mAt-ekkel vagy ezek származékaival szemben (például a kiméra vagy humanizált antitestekkel szemben) egy teljesen humán anti-hTNFa antitest, mivel egy ilyen szer nem váltaná ki a HAMA-reakciót még hosszú időn át való használat esetén sem. Humánhibridóma-technikákkal előállítottak hTNFa elleni humán monoklonális autoantitesteket [P. Boyle et al., Cell Immunoi., 152, 556-568 (1993); P. Boyle et al., Cell Immunoi 152, 569-581 (1993); 614 984 számon közzétett európai: szabadalmi bejelentés (Boyle et al.)]. Megállapították azonban, hogy ezen hibridómaeredetű monoklonális antitestek affinitása hTNFa-hoz túl alacsony - hagyományos módszerekkel ezt nem lehetett kiértékelni -, és hogy nem tudják megkötni az oldható TNFa-t, és nem tudják neutralizálni a hTNFa-indukált citotoxicitást (Boyle et al., lásd előbb). Másrészt a humánhibridómatechnika sikere a hTNFa-specifikus autoantitesteket termelő limfociták humán perifériás vérben való természetes jelenlététől függ. Néhány tanulmány beteg emberekben hTNFa elleni szénim-autoantitesteket mutatott ki [A. Fomsgaard, et al., Scand. J. Immunoi., 30, 219-223 (1989); K. Bendtzen, et al., Prog. Leukocyte Bioi., 10b, 447-452 (1990)], míg mások ezt nem erősítették meg [H-G. Leusch, et al., J. Immunoi. Methods, 139, 145-147 (1991)].
A természetben előforduló humán anti-hTNFa antitestek alternatívája egy Tekombináns humán antihTNFa antitest lenne. Leírtak [A. D. Griffiths et al., EMBO J., 12, 725-734 (1993)] olyan rekombináns humán antitesteket, amelyek viszonylag alacsony affinitással (például: Kd~10-? M) és gyors felbomlási sebesség (off rate) mellett (például Κ,,β-ΙΟ2 s1) kötik a hTNFa-t. Viszonylag gyors disszociációs kinetikájuk miatt azonban ezek az antitestek valószínűleg nem alkalmasak terápiás használatra. Leírták ezenkívül, hogy a rekombináns humán anti-hTNFa nem neutralizálja a hTNFa-aktivitást, inkább elősegíti a hTNFa sejtek felületéhez való kötődését, és fokozza a hTNFa intemali2
HU 221 984 Β1 zációját [A. Lidbury et al., Biotechnoi. Ther., 5, 27-45 (1994); WO 92/03145 számon közzétett nemzetközi szabadalmi iratok (R. Aston et al.)J.
Fentiek alapján még mindig igény van olyan humán antitestek, például olyan rekombináns humán antitestek iránt, amelyek erős affinitással és lassú disszociációs kinetikával kötik meg az oldható hTNFa-t, és képesek a hTNFa-aktivitás - beleértve a hTNFa - indukált citotoxicitást (in vitro és in vivő) és a hTNFa-indukált sejtaktiválást - neutralizálására.
A találmány olyan humán antitestekre, előnyösen olyan rekombináns humán antitestekre vonatkozik, amelyek specifikusan kötődnek humán TNFa-hoz. A találmány szerinti antitesteket az jellemzi, hogy erős affinitással és alacsony disszociációs kinetikával kötődnek a hTNFa-hoz, és hogy neutralizálják a hTNFa aktivitását, beleértve a hTNFa-indukált citotoxicitást (in vitro és in vivő) és a hTNFa-indukált sejtaktiválást. A találmány szerinti antitestekre jellemző még, hogy a hTNFa-hoz kötődnek, de a hTNFP-hoz (limfotoxin) nem, és a humán TNFa-n kívül más főemlős-TNFa-khoz és nem főemlős-TNFa-khoz is képesek kötődni.
A találmány szerinti antitestek lehetnek teljes hosszúságúak (például: IgGl vagy IgG4 antitest), vagy csak egy antigénkötő részt (például: Fab, F(ab’)2 vagy scFv fragmentumot) tartalmazhatnak. A találmány szerinti legelőnyösebb rekombináns antitest - neve: D2E7 egy könnyű lánc CDR3 doménből - a 3. számú szekvencia szerinti aminosavszekvenciát tartalmazza - és egy nehéz lánc CDR3 doménből - a 4. számú szekvencia szerinti aminosavszekvenciát tartalmazza - áll. Előnyös, ha a D2E7 antitest könnyű lánc variábilis szakasza (LCVR=light chain variable region) az 1. számú szekvencia szerinti aminosavszekvenciát tartalmazza és nehéz lánc variábilis szakasza (HCVR=heavy chain variable region) a 2. számú szekvencia szerinti aminosavszekvenciát tartalmazza.
Egyik kiviteli alakjában a találmány egy olyan izolált humán antitestet biztosít, vagy ennek egy olyan antigénkötő részét bocsátja rendelkezésre, amely a humán TNFa-tól 1 χ 10-* M vagy ennél kisebb IQ-értékkel és 1 χ 10~3 s~* vagy ennél kisebb Ko^-értékkel disszociál - mindkét értéket felületi plazmonrezonanciával határoztuk meg - és amely a humán TNFa citotoxicitását egy standard in vitro L929 assay-ben 1 χ 10~7 M vagy ennél kisebb ICso-értékkel neutralizálja. Előnyösebb, ha az izolált humán antitest, vagy antigénkötő része a TNFa-tól 5 χ 10-4 s-1 vagy kisebb K^fpértékkel és még előnyösebben 1 χ 10~4 s_1 Κ^,β-értékkel disszociál. Előnyösebb, ha az izolált humán antitest vagy antigénkötő része a TNFa citotoxicitását egy standard in vitro L929 assay-ben 1 χ 10~8 M vagy kisebb IC50-érték mellett, még előnyösebben 1 χ 10~9 M vagy kisebb Kiérték mellett neutralizálja.
Egy másik kiviteli alakban a találmány tárgyát az alábbiakkal jellemzett humán antitest, vagy ennek antigénkötő része képezi:
a) a TNFa-tól 1 χ 10~3 s_1 vagy kisebb Kofl-érték mellett disszociál, felületi plazmonrezonanciával való meghatározás szerint;
b) könnyű lánc CDR3 doménje a 3. számú szekvenciával leírt aminosavszekvenciát tartalmazza, vagy egy olyan 3. számú szekvenciát, amely egyetlen alaninszubsztitúcióval van módosítva az 1., 4., 5., 7. vagy
8. pozícióban vagy 1-5 konzervatív aminosavszubsztitúcióval az 1., 3., 4., 6., 7., 8. és/vagy 9. pozícióban;
c) nehéz lánc CDR3 doménje a 4. számú szekvenciával leírt aminosavszekvenciát tartalmazza, vagy egy olyan 4. számú szekvenciát, amely egyetlen alaninszubsztitúcióval van módosítva a 2., 3., 4., 5., 6.,
8., 9., 10. vagy 11. pozícióban vagy 1-5 konzervatív aminosavszubsztitúcióval a 2., 3., 4., 5., 6., 8.,
9., 10., 11. és/vagy 12. pozícióban.
Előnyösebb, ha az antitest vagy antigénkőtő része a humán TNFa-tól 5xl04 s-‘ vagy kisebb K^A-érték mellett disszociál. Még előnyösebb, ha az antitest vagy antigénkötő része a humán TNFa-tól 1 χ 10~4 vagy kisebb Κ,,Α-érték mellett disszociál.
Egy további kiviteli alakban a találmány olyan humán antitestet - vagy ennek antigénkötő részét - bocsát rendelkezésre, amelyben az LCVR CDR3 doménje a 3. számú szekvencia szerinti aminosavszekvenciát tartalmazza, vagy a 3. számú szekvenciának egyetlen alaninszubsztitúciójával - az 1., 4., 5., 7. vagy 8. pozícióban - módosított változatát, és amelyben a HCVRr CDR3 doménje a 4. számú szekvencia szerinti aminosavszekvenciát tartalmazza vagy a 4. számú szekvenciának egyetlen alaninszubsztitúciójával - a 2., 3., 4., 5„
6., 8., 9., 10. vagy 11. pozícióban - módosított változatát. Előnyösebb, ha az LCVR egy CDR2 domént is tartalmaz, amely az 5. számú szekvencia szerinti aminosavszekvenciából áll, és ha a HCVR egy CDR2 domént is tartalmaz, amely a 6. számú szekvencia szerinti aminosavszekvenciából áll. Még előnyösebb, ha az LCVR egy CDR1 domént is tartalmaz, amelyet a 7. számú szekvencia szerinti aminosavszekvencia alkot, és ha a HCVR egy CDR1 domént is tartalmaz, amelyet a 8. számú szekvencia szerinti aminosavszekvencia alkot.
Még egy további kiviteli alakban a találmány olyan izolált humán antitestet - vagy ennek antigénkötő részét - ismertet, amelyben az LCVR az 1. számú szekvencia szerinti aminosavszekvenciából és a HCVR a 2. számú szekvencia szerinti aminosavszekvenciából áll. Bizonyos kiviteli formákban az antitest egy IgGl nehéz lánc konstans szakaszt vagy egy IgG4 nehéz lánc konstans szakaszt tartalmaz. További kiviteli formákban az antitest egy Fab fragmentum vagy egy F(ab’)2 fragmentum, vagy egy egyetlen láncból álló Fv fragmentum lehet.
További kiviteli alakokban a találmány szerint előállított antitestek, vagy ezek antigénkötő részei olyan LCVR-t tartalmaznak, amelyben a CDR3 dómén aminosavszekvenciáját a következő szekvenciákból álló csoportból választjuk ki: 3. számú szekvencia, 11. számú szekvencia, 12. számú szekvencia, 13. számú szekvencia, 14. számú szekvencia, 15. számú szekvencia, 16. számú szekvencia, 17. számú szekvencia, 18. számú szekvencia, 19. számú szekvencia, 20. számú szekvencia, 21. számú szekvencia, 22. számú szekvencia,
HU 221 984 Β1
23. számú szekvencia, 24. számú szekvencia, 25. számú szekvencia, 26. számú szekvencia, vagy olyan HCVR-t tartalmaznak, amelyben a CDR3 dómén aminosavszekvenciáját a következő szekvenciákból álló csoportból választjuk ki: 4. számú szekvencia, 27. számú szekvencia, 28. számú szekvencia, 29. számú szekvencia, 30. számú szekvencia, 31. számú szekvencia,
32. számú szekvencia, 33. számú szekvencia, 34. számú szekvencia és 35. számú szekvencia.
Egy másik megvalósítási formában a találmány tárgyát olyan izolált humán antitest, vagy ennek antigénkötő része képezi, amely neutralizálja a humán TNFa aktivitását, de a humán TNFp-ét (limfotoxin) nem. Egy előnyös megvalósítási formában a humán antitest, vagy antigénkötő része neutralizálja a humán TNFa, csimpánz-TNFa aktivitását és legalább még egy további, a következő csoportból kiválasztott főemlős-TNFa aktivitását: pávián-TNFa, selyemmajom-TNFa, közönségesmakákó-TNFa és rhesus (makákó)-TNFa. Az antitest előnyösen egy nem főemlős-TNFa aktivitását is neutralizálja. Például: az egyik mellékalakban az izolált humán antitest, vagy antigénkötő része a kutyaTNFa aktivitását is neutralizálja. Egy másik mellékalakban az izolált humán antitest vagy antigénkötő része a sertés-TNFa aktivitását is neutralizálja. Egy további mellékalakban az izolált humán antitest, vagy antigénkötő része az egér-TNFa aktivitását is neutralizálja.
A találmány - egy további vonatkozásában - olyan nukleinsavmolekulákra vonatkozik, amelyek a találmány szerinti antitesteket vagy antigénkötő részeit kódolják. Egy találmány szerinti előnyös nukleinsav amely a D2E7 LCVR-t kódolja - nukleotidszekvenciáját a 7. ábra és a 36. számú szekvencia mutatja be. Egy másik találmány szerinti előnyös, D2E7 HCVR-t kódoló nukleinsav nukleotidszekvenciáját a 8. ábra és a
37. számú szekvencia mutatja be. A találmány szerinti antitestkódoló nukleinsavakat hordozó rekombináns expressziós vektorok és azok a gazdasejtek, amelyekbe ezeket a vektorokat bevittük, szintén a találmány részét képezik, valamint azok az eljárások is, amelyekben a találmány szerinti antitesteket a találmány szerinti gazdasejtek tenyésztésével állítjuk elő.
Vonatkozik a találmány továbbá a humán TNFaaktivitás gátlásának módszereire, amelyekben egy találmány szerinti antitestet vagy ennek antigénkötő részét használjuk. Egy kiviteli alakban a módszer abból áll, hogy a humán TNFa-t úgy hozzuk össze a találmány szerinti antitesttel, vagy antigénkötő részével, hogy a humán TNFa-aktivitás gátlása végbemenjen. Egy másik kiviteli alakban a módszer abból áll, hogy egy találmány szerinti antitestet, vagy antigénkötő részét beteg embernél - akinél olyan betegség áll fenn, amelyben a TNFa-aktivitás káros hatású - alkalmazzuk olyan módon, hogy a humán TNFa-aktivitás gátlása a beteg emberben megtörténjék. A betegség lehet például szepszis, autoimmun betegség (például rheumatoid arthritis, allergia, szklerózis multiplex, autoimmun diabétesz, autoimmun uveitis és nefrózisos szindróma), fertőző betegség, rosszindulatú daganatos betegség, transzplantátumrejekció vagy graft versus hőst betegség, tüdőbetegség, csontrendellenesség, bélbetegség, szívbetegség.
Az alábbiakban az ábrák rövid leírás következik.
Az 1A. és IB. ábra a D2E7 könnyű lánc variábilis szakasz aminosavszekvenciáit (D2E7 VL; lásd az 1. számú szekvenciát is), a D2E7 VL alanin mutánsait (LD2E73.A1, LD2E7+.A3, LD2E7+.A4, LD2E7+.A5, LD2E7+.A7 és LD2E7+.A8), a D2E7-tel rokon 2SD4 antitest könnyű lánc variábilis szakaszát (2SD4 VL; lásd a 9. számú szekvenciát is) és a többi D2E7-tel rokon könnyű lánc variábilis szakaszokat (EP B12, VL10E4, VL100A9, VL100D2, VL10F4, LOE5, VLLOF9, VLLOFIO, VLLOG7, VLLOG9, VLLOH1, VLLOHIO, VL1B7, VL1C1, VL1C7, VLO.1F4, VLO.1H8, LOE7, LOE7.A és LOE7.T) ábrázolja. Az 1A. ábra az FR1, CDR1, FR2 és CDR2 doméneket tartalmazza. Az IB. ábra az FR3, CD3 és FR4 doméneket tartalmazza. A könnyű lánc CDR1 („CDR Ll”), CDR2 („CDR L2”) és CDR3 („CDR L3”) doméneket bekereteztük.
A 2A. és 2B. ábra a D2E7 nehéz lánc variábilis szakasz aminosavszekvenciáit (D2E7 VH; lásd a<
2. számú szekvenciát is, a D2E7 VH alanin. mutánsait (HD2E7+.A1, HD2E7+.A2* HD2E7+.A3, HD2E7+.A4, HD2E7+.A5, HD2E7+.A6, HD2E7+.A7, HD2E7+.A8 és HD2E7+.A9), a D2E7-tel rokon 2SD4 antitest nehéz lánc variábilis szakaszt (2SD4 VH; lásd a 10. számú szekvenciát is) és a többi D2E7tel rokon nehéz lánc variábilis szakasz (VH1B11, VH1D8, VH1A11, VH1B12, VH1-D2, VH1E4, VH1F6, VH1G1, 3C-H2, VH1-D2.N és VH1-D2.Y) ábrázolja. A 2A. ábra az FR1, CDR1, FR2 és CDR2 doméneket mutatja. A 2B. ábra az FR3, CDR3 és FR4 doméneket mutatja. A nehéz lánc CDR1 („CDR Hl”), CDR2 („CDR H2”) és CDR3 („CDR H3”) doméneket bekereteztük.
A 3. ábrán grafikusan ábrázoljuk a TNFa-indukált L929 citotoxicitás D2E7 humán antihTNFa-val való gátlását, MÁK 195 egér anti-hTNFa-val összehasonlításban.
A 4. ábrán grafikusan ábrázoljuk az rhTNFa-nak az U-937 sejteken lévő hTNFa receptorokhoz való kötődésének D2E7 humán anti-hTNFa antitest által történő gátlását, MÁK 195 egér-anti-hTNFa-val összehasonlításban.
Az 5. ábrán grafikusan ábrázoljuk az ELAM-1 HUVCEC-en való TNFa-indukált expressziójának D2E7 humán anti-hTNFa antitest által történő gátlását MÁK 195 egér-anti-hTNFa-val összehasonlításban.
A 6. ábrán látható hasábdiagram összehasonlítja, hogy D-galaktóz-amin-szenzitizált egerek4
HU 221 984 Bl ben a TNFa-indukált letalitás elleni védelmet miként biztosítja a D2E7 humán antiTNFa antitest (pontozott hasábok) és a MÁK 195 egér-anti-hTNFa (üres hasábok) alkalmazása.
A 7. ábra a D2E7 könnyű lánc variábilis szakasz nukleotidszekvenciáját mutatja, a nukleotidszekvencia alatt az előrelátható aminosavszekvenciával. A CDR Ll, CDR L2 és CDR L3 szakaszokat aláhúztuk.
A 8. ábra a D2E7 nehéz lánc variábilis szakasz nukleotidszekvenciáját mutatja, a nukleotidszekvencia alatt az előrelátható aminosavszekvenciával. A CDR Hl, CDR H2 és CDR H3 szakaszokat aláhúztuk.
A 9. ábra grafikusan ábrázolja a D2E7 antitestkezelés hatását Tg 197 transzgenikus egerek mint poliarthritis modellek - átlag-ízületméretére.
A találmány olyan izolált humán antitestekre, vagy ezek antigénkötő részeire vonatkozik, amelyek a humán TNFa-hoz nagy affinitással, alacsony disszociációs sebességgel és magas neutralizáló kapacitással kötődnek. A találmány különböző megvalósítási formái antitestekre, antitestfragmentumokra és az ezekből előállított gyógyszerkészítményekre vonatkoznak, valamint olyan nukleinsavakra, rekombináns expressziós vektorokra és gazdasejtekre, amelyek ezen antitestek és fragmentumok előállítását szolgálják. A találmány szerinti antitestek felhasználása a humán TNFa kimutatására vagy a humán TNFa-aktivitás gátlására szolgáló módszerekben - akár in vitro, akár in vivő - szintén a találmány oltalmi köréhez tartozik.
A találmány könnyebb megértése érdekében először néhány kifejezést definiálunk.
A „humán TNFa” (rövidítve: hTNFa, vagy egyszerűen hTNF) kifejezés használatával egy olyan humán citokinre utalunk, amely 17 kD tömegű szekretált formában és 26 kD tömegű membránasszociált formában fordul elő, amelynek biológiailag aktív formáját nem kovalensen kötött 17 kD tömegű molekulákból álló trimer alkotja. [A hTNFa szerkezetének további leírását például a következő közlemények tartalmazzák: D. Pennica, et al., Natúré 312, 724-729 (1984); J. M. Davis, et al., Biochemistry, 26, 1322-1326 (1987); E. Y. Jones, et al., Natúré, 338, 225-228 (1989).] A humán TNFa meghatározás magában foglalja a rekombináns humán TNFa-t (rhTNFa), amely standard rekombináns expressziós módszerekkel állítható elő, vagy beszerezhető a kereskedelemből (R and D Systems, Minneapolis, MN., kát. szám: 210-TA).
Az „antitest” szó használatával immunglobulinmolekulákra utalunk, amelyek négy polipeptidláncból állnak, mégpedig két nehéz (H, heavy) láncból és két könnyű (L, light) láncból, amelyek belső diszulfidkötésekkel kapcsolódnak Össze. Mindegyik nehéz lánc egy nehéz lánc variábilis szakaszból (rövidítve: HCVR vagy VH) és egy nehéz lánc konstans szakaszból áll. A nehéz lánc konstans szakaszt három dómén alkotja: CH1, CH2 és CH3. Mindegyik könnyű lánc egy könnyű lánc variábilis szakaszból (rövidítve: LCVR vagy VL) és egy könnyű lánc konstans szakaszból áll. A könnyű lánc konstans szakasz egy domént - CL tartalmaz. A VH és VL szakaszokat tovább osztályozhatjuk hipervariábilis szakaszokra, amelyeket komplementaritást meghatározó szakaszoknak (CDR=complementarity determining region) nevezünk. A CDR-eket átszövik olyan szakaszok, amelyek még állandóbbak (konzervatívabbak), és ezeket framework szakaszoknak (framework region=FR=konstans szakaszváz) nevezzük. Minden egyes VH-t és VL-t három CDR és négy FR alkot. Sorrendjük az aminoterminális végtől a karboxiterminális végig a következő: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4.
Egy antitest „antigénkötő része” (vagy egyszerűen „antitestrész”) alatt egy antitest egy vagy több olyan fragmentumát értjük, amelyek megtartották azt a képességüket, hogy specifikusan kötődjenek egy antigénhez (például hTNFa-hoz). Kimutatták, hogy egy antitest antigénkötő funkciója a teljes hosszúságú antitest fragmentumaival is teljesíthető. Egy antitest „antigénkötő része” kifejezés például a következő kötőfragmentumokra vonatkozik: (i) Fab fragmentum, amely VL, VH, CL és CH1 doménekből álló monovalens fragmentum; (ii) F(ab’)2 fragmentum egy bivalens fragmentum, amely a kapocsszakasznál egy diszulfidhíddal összekötött két Fab fragmentumot tartalmaz; (iii) Fd fragmentum, amely a VH és CH1 doménből áll; (iv) Fv fragmentum, amely az antitest egyik karjának VL és VH doménjét tartalmazza; (v) dAt fragmentum [Ward et al., Natúré, 341, 544-546 (1989)], amely egy VH doménből áll; és (vi) izolált komplementaritást meghatározó szakasz (CDR). Ezenkívül, jóllehet az Fv fragmentum két doménjét - VL és VH - két külön gén kódolja, rekombináns módszerek használatával, egy szintetikus linker segítségével ezek összekapcsolhatók, és így lehetővé válik, hogy egyetlen olyan proteinlánc keletkezzék, amelyben a VL és VH szakaszpár monovalens molekulákat alkot (egyláncú Fv néven ismert; single chain Fv=scFv). [Lásd például: Bírd et al., Science, 242, 423-426 (1988); Huston et al., Proc. Natl. Acad. Sci., 85, 5879-5883 (1988)]. Az ilyen egyláncú antitestekre is vonatkoztatjuk az antitest „antigénkötő része” kifejezést. Idetartoznak az egyláncú antitestek más formái is, így például a diatestek (diabodies). A diatestek bivalens, bispecifikus antitestek, amelyekben a VH és VL domének egyetlen polipeptidláncon fejeződnek ki, de olyan linker használata mellett, amely túl rövid ahhoz, hogy ugyanezen a láncon a két doménből pár képződjék, ezáltal késztetvén a doméneket arra, hogy egy másik lánc komplementer doménjeivel alkossanak párt, és így két antigénkötő helyet hozzanak létre [lásd például: P. Holliger et al., Proc. Natl. Acad. Sci., 90, 6444-6448 (1993); R. J. Poljak, Structure, 2, 1121-1123 (1994)].
Továbbá egy antitest, vagy ennek antigénkötő része olyan nagyobb immunadhéziós molekula része lehet, amely az antitest vagy az antitestrész és egy vagy több más protein vagy peptid kovalens vagy nem kovalens társulása révén jött létre. Ilyen adhéziós molekulákra
HU 221 984 Bl példa a sztreptavidin magrégió használatával előállított tetramer scFv molekula [Kipriyanov, S. M. et al., Humán Antibodies and Hybridomas, 6, 93-101 (1995)], és ilyenek például egy ciszteinmaradék, egy marker peptid és egy C-terminális polihisztidin toldalék használatával előállított bivalens és biotinezett scFv molekulák [S. M. Kipriyanov, et al., Mól. Immunoi., 31, 1047-1058 (1994)]. Az antitestrészeket, mint az Fab-t és F(ab’)2-t előállíthatjuk teljes antitestekből a szokásos technikákkal, a teljes antitest papainos, illetve pepszines emésztésével. Az antitestek, antitestrészek és immunadhéziós molekulák ezenkívül előállíthatók standard rekombináns DNS-technikák használatával, ahogy itt leírjuk.
A „humán antitest'’ kifejezés - ahogy itt használjuk - olyan antitestekre vonatkozik, amelyek humán csíravonal immunglobulinszekvenciákból származó variábilis és konstans szakaszokat tartalmaznak. A találmány szerinti humán antitestekben lehetnek olyan aminosavcsoportok - például a CDR-ekben és különösen a CDR3-ban - amelyeket nem csíravonal humán immunglobulinszekvenciák kódolnak [például: mutációkat viszünk be találomra (random) vagy helyspecifikus mutagenezissel in vitro, vagy szomatikus mutációval in vivő]. A „humán antitest” kifejezést azonban nem használjuk azokra az antitestekre, amelyekben a humán framework szekvenciákba más emlős faj - például egér - csíravonalból származó CDR-szekvenciákat ültettünk be.
A „rekombináns humán antitest” kifejezés alatt minden olyan humán antitestet értünk, amelyeknek az előállítását, kifejezését, létrehozását vagy izolálását rekombináns eszközökkel végeztük. Például: az antitestek kifejezéséhez rekombináns expressziós vektort használunk, amelyet gazdasejtbe transzformálunk (a további leírást lásd alább, a Π. fejezetben), az antitesteket rekombináns, kombinatorikus humán antitestgyűjteményből izoláljuk (a további leírást lásd alább, a III. fejezetben), az antitestet olyan állatból (például egérből) izoláljuk, amely humán immunglobulingénekre nézve transzgenikus [lásd például: L. D. Taylor et al., Nucl. Acids. Rés., 20, 6287-6295 (1992)], vagy pedig az antitestek előállítását, kifejezését, létrehozását vagy izolálását bármilyen más olyan módszerrel végezzük, amely humán immunglobulin-génszekvenciáknak más DNS-szekvenciákkal való összeillesztését (splicing) tartalmazza. Ezek a rekombináns humán antitestek humán csíravonal immunglobulinszekvenciákból származó variábilis és konstans szakaszokat tartalmaznak. Bizonyos megvalósítások esetén azonban, az ilyen rekombináns humán antitesteket in vitro mutagenizáljuk (vagy, ha humán Ig-szekvenciák révén transzgenikus állatot használunk, in vivő szomatikus mutagenezist végzünk), amikor is a rekombináns antitestek VH és VL szakaszainak aminosavszekvenciái olyan szekvenciák, amelyek - noha humán csíravonal VH és VL szekvenciákból vagy ezekkel rokon szekvenciákból származnak - a humán antitestcsíravonal-repertoárban a természetben in vivő valószínűleg nem fordulnak elő.
Az „izolált antitest” kifejezés használatával olyan antitestre utalunk, amely lényegében a különböző antigénspecificitású más antitestektől mentes (például: egy izolált antitest, amely specifikusan köti a hTNFa-t, lényegében mentes olyan antitestektől, amelyek a hTNFa-tól eltérő antigéneket kötnek meg). Egy izolált antitest azonban, amely specifikusan köti a hTNFa-t, keresztreagálhat más antigénekkel, például más fajból származó TNFa-molekulákkal (alább részletesen tárgyaljuk). Az izolált antitest ezenkívül lényegében mentes lehet más celluláris anyagtól és/vagy kémiai anyagoktól.
A „neutralizáló antitest” kifejezés (vagy egy „antitest, amely neutralizálja a hTNFa-aktivitást”) egy olyan antitestre vonatkozik, amely, ha a hTNFa-hoz kötődik, a hTNFa biológiai aktivitásának gátlását eredményezi. A hTNFa biológiai aktivitásának gátlása a hTNFa - biológiai aktivitás egy vagy több indikátorának mérésével állapítható meg, ilyen aktivitás például a hTNFa-indukált citotoxicitás (akár in vitro, akár in vivő), a hTNFa-indukált sejtaktiválás és a hTNFa hTNFa-receptorokhoz való kötődése. A hTNFa biológiai aktivitásának ezen indikátorait a szakterületen ismert számos standard in vitro vagy in vivő assay közül egy vagy több assay elvégzésével vizsgálhatjuk (lásd a
4. példát). Azt, hogy egy antitest képes-e neutralizálni a hTNFa aktivitását, előnyösen a hTNFa-indukált citotoxicitás gátlásával állapíthatjuk meg, L929 sejteken. A hTNFa-aktivitás egy további, vagy alternatív paramétereként, meghatározhatjuk, hogy egy antitest képes-e meggátolni az ELAM-1 hTNFa-indukállíesip- resszióját HUVEC-en, ugyanis ez, a hTNFa-indüfc&lt celluláris aktiválás mértékéül szolgál.
A „felületi plazmonrezonancia” kifejezés egy olyan optikai jelenségre vonatkozik, amely lehetővé teszi a valóságos idő alatt lezajló biospecifikus kölcsönhatások analízisét azáltal, hogy egy bioszenzor-mátrixban detektálja a proteinkoncentrációkban végbemenő változásokat, például a BIAcore system (Pharmacia Biosensor AB, Uppsala, Svédország és Piscataway, NJ., USA) használatával. A módszer további ismertetését lásd az 1. példában és a következő közleményekben: U. Jönsson et al., Ann. Bioi. Clin., 51,19-26 (1993); U. Jönsson et al., Biotechniques, 11, 620-627 (1991); B. Johnsson et al., J. Mól. Recognit., 8, 125-131 (1995); B. Johnsson et al., Anal. Biochem., 198, 268-277 (1991).
Az itt használt, rövidítés egy antitestnek az antigén/antitest komplexből való disszociációjánál a felbomlási sebességi állandót jelenti.
Az itt használt „Kj” rövidítés egy adott antitest-antigén kölcsönhatás disszociációs konstansára vonatkozik.
A „nukleinsavmolekula” kifejezés alatt DNS- és RNS-molekulákat értünk. Egy nukleinsavmolekula lehet egyszálú vagy kétszálú, de előnyösen kétszálú DNS-re vonatkozik.
Az „izolált nukleinsavmolekula” kifejezés - itt olyan nukleinsavak vonatkozásában használjuk, amelyek hTNFa-t kötő antitesteket vagy antitestrészeket (például: VH, VL, CDR3) kódolnak - olyan nukleinsavmolekulára vonatkozik, amelyben az antitest vagy antitestrészt kódoló nukleotidszekvenciák nem tartal6
HU 221 984 Β1 maznak más antigént - azaz nem hTNFa-t - kötő antitesteket vagy antitestrészeket kódoló nukleotidszekvenciákat. Ezalatt olyan szekvenciákat értünk, amelyek normálkörülmények között határolják a nukleinsavat a humán genomiális DNS-ben. Tehát, például egy találmány szerinti izolált nukleinsav, amely egy anti-TNFa antitest VH szakaszát kódolja, nem tartalmaz más olyan szekvenciákat, amelyek nem a TNFa-t, hanem más antigéneket kötő VH szakaszokat kódolnak.
A „vektor” kifejezés egy olyan nukleinsavmolekulára vonatkozik, amely egy másik nukleinsavat - amelyhez hozzákötötték - képes transzportálni. Az egyik vektortípus a „plazmid”, amely egy olyan kör alakú kétszálú DNS-huroknak felel meg, amelybe további DNSszegmentumok ligálhatók. Egy másik típusú vektor a virális vektor, ahol a virális genomba további DNSszegmentumok ligálhatók. Bizonyos vektorok abban a gazdasejtben, amelybe bevezették, autonóm módon replikálódnak (például a bakteriális vektorok, amelyek bakteriális replikációs origót tartalmaznak, és az episzomális emlősvektorok). Más vektorok (például a nem episzomálís vektorok) a gazdasejt genomjába integrálhatók a gazdasejtbe való bevezetésükkor, és ezáltal a gazdagenommal együtt replikálódnak. Ezenfelül bizonyos vektorok azoknak a géneknek az expresszióját tudják irányítani, amelyekhez működőképes módon kapcsolódnak. Az ilyen vektorokat „rekombináns expressziós vektorok”-nak (vagy egyszerűen „expressziós vektorokénak) nevezzük. A rekombináns DNS-technikákban általában használatos expressziós vektorok gyakran plazmidok. Ebben a leírásban a „plazmid” és „vektor” megjelölést egymással felcserélve használhatjuk, minthogy a plazmid a vektor legáltalánosabban használt formája. A találmányban azonban más expressziós formák is szerepelnek, így virális vektorok is (például: replikációjuk vonatkozásában hiányos funkciójú retrovírusok, adenovírusok és adenoasszociált vírusok), amelyek azonos funkciókat töltenek be.
A „rekombináns gazdasejt” (vagy egyszerűen „gazdasejt”) kifejezés használatával egy olyan sejtre kívánunk utalni, amelybe egy rekombináns expressziós vektort vezettünk be. Magától értetődik, hogy ezek a kifejezések nemcsak a konkrét szóban forgó sejtre, hanem egy ilyen sejt szaporulatára is vonatkoznak. Minthogy a következő generációkban előfordulhatnak bizonyos módosulások akár mutáció, akár környezeti befolyások következtében, nem biztos, hogy a szaporulat ténylegesen azonos a szülői sejttel, de még mindig a „gazdasejt” fogalomkörébe tartozónak tekintjük.
A találmány számos szempontját részletesen ismertetjük a következő alfejezetekben.
I. Humán TNFa-t kötő humán antitestek
A találmány olyan izolált humán antitestekre vagy ezek antigénkötő részeire vonatkozik, amelyek a humán TNFa-hoz magas affinitással kötődnek, továbbá alacsony disszociációs sebességgel és magas neutralizáló kapacitással rendelkeznek. A találmány szerinti antitestek előnyösen rekombináns, neutralizáló humán anti-TNFa antitestek. A találmány szerinti legelőnyösebb rekombináns neutralizáló antitestnek D2E7 elnevezést adtunk, és VL és VH szekvenciáit az ΙΑ., 1B., illetve 2A., 2B. ábrákon mutatjuk be (a D2E7 VL szakasz aminosavszekvenciáját az 1. számú szekvenciáját az 1. számú szekvencia is bemutatja; a D2E7 VH szakasz ami·; nosavszekvenciáját a 2. számú szekvencia is bemutatja). A D2E7 kötési tulajdonságait, összehasonlítva a n»· gas affinitást és alacsony disszociációs kinetikát mutató MÁK 195 egér anti-hTNFa mAt-tel, és egy D2E7ítel rokon szekvenciájú másik humán anti-hTNFa antitesttel, a 2SD4-gyel, az alábbiakban foglaljuk össze.
Antitest Krfrs-1 KonM-’s-' KiM Sztöchiometria
D2E7IgGl 8,81x10-’ 1,91x105 6,09x10-’» 1,2
2SD4 8,4xl0-3 4,20x105 2,00x10-’ 0,8
MÁK 195 F(ab’)2 8,70x IO5 1,90x105 4,60x10-’° 1,4
A D2E7 antitest és a rokon antitestek is, nagy hatás- 45 fokkal neutralizálják a hTNFa-aktivitást számos in vitro és in vivő assay-vel (lásd a 4. példát) végzett meghatározás szerint. Például, ezek az antitestek neutralizálják L929 sejteken a hTNFa-indukált citotoxicitást körülbelül ΙΟ 7 Μ-ΗΗ® M tartományba eső ICjo-érté- 50 kekkel (IC=inhibitory concentration=gátló koncentráció). A D2E7, ha mint teljes hosszúságú IgGl antitest fejeződik ki, L929 sejteken körülbelül 1,25x10-’° M ICso-nel neutralizálja a hTNFa-indukált citotoxicitást. Ezenkívül, a D2E7 megőrzi neutralizáló képességét, ha az antitest Fab, F(ab’)2 vagy scFv fragmentum formában fejeződik ki. A D2E7 a TNFa-indukált celluláris aktiválást is gátolja, amelyet az ELAM-1 HUVEC-en való hTNFa-indukált expressziója segítségével (IC50=körülbelül 1,85x10-’° M) mérünk, és gátolja a 60 hTNFa kötődését az U-937 sejteken lévő hTNFa receptorokhoz (ICjo^körűlbelül 1,56 χ 10- ’° M). Ez utóbbi esetben a D2E7 a hTNFa-nak mind a p55, mind a p75 hTNFa receptorokhoz való kötődését gátolja. Az antitest gátolja továbbá a hTNFa-indukált letalitást in vivő egerekben (EDJ0=effektive dose=hatásos dózis). (ELAM=endothelial cell leukocyte adhesion molecule; HUVEC=human umbilical vein endothelial cell).
A D2E7 kötőspecificitását tekintve, ez az antitest a humán TNFa különböző formáihoz, így az oldható 55 hTNFa-hoz, transzmembrán hTNFa-hoz és a celluláris receptorokhoz kötött hTNFa-hoz is kötődik. A D2E7 nem kötődik specifikusan más citokinekhez, azaz nem kötődik a következőkhöz: limfotoxin (TNFP), IL-la, IL-Ιβ, IL-2, IL-4, IL-6, IL-8, IFNX és TGFP (IL=interleukin; IFN=interferon;
HU 221 984 Β1
TGF=transzformáló növekedési faktor). A D2E7 azonban más fajokból származó tumomekrózis-faktorokkal keresztreagál. Például: az antitest legalább öt főemlős TNFa-jának (csimpánz, pávián, selyemmajom, közönséges makákó és rhesus majom) aktivitását neutralizálja közel azonos ICso-értékkel, mint a hTNFa neutralizációs értéke (lásd a 4. példa E. alfejezetét). A D2E7 az egér-TNFa aktivitását is neutralizálja, bár körülbelül ezerszer kevésbé eredményesen, mint a humán TNFaét (lásd a 4. példa E. alfejezetét). A D2E7 a kutya- és a sertés-TNFa-hoz is kötődik.
A találmány a D2E7 antitestekre és antitestrészekre, a D2E7-tel rokon antitestekre és antitestrészekre, és más olyan humán antitestekre és antitestrészekre vonatkozik, amelyek a D2E7-tel azonos tulajdonságokkal rendelkeznek, ilyen a hTNFa-hoz való kötődés erős affinitással és alacsony disszociációs kinetikával és ma^s neutralizációs kapacitással. Egy kiviteli alakban a találmány olyan izolált humán antitestet vagy antigénkötő részét ismerteti, amely a humán TNFa-tól 1 χ ΙΟ-8 M, vagy ennél kisebb Kj-értékkel disszociál, K„ff sebességi állandója 1 χ 10~3 S1 vagy kisebb - mindkét értéket felületi plazmonrezonanciával határoztuk meg - és amely a humán TNFa citotoxicitását standard in vitro L929 assay-ben 1 χ 10~7 M vagy kisebb ICjq mellett neutralizálja. Előnyösebb, ha az izolált humán antitest, vagy antigénkötő része, a humán TNFa-tól K„ff=5 x 10~4 s-1 vagy kisebb sebességgel bomlik fel, és még előnyösebben Κοβ=1 χ10~4 s ! vagy kisebb sebességgel. Előnyösebb, ha az izolált humán antitest, vagy antigénkötő része a humán TNFa-citotoxicitást egy standard in vitro L929 assay-ben 10^=1 χ 10~8 M vagy kisebb érték mellett, még előnyösebben ICso= 1 χ 10~9 M vagy kisebb érték mellett, és igen előnyösen ICso=5 χ 10-10 M vagy kisebb érték mellett neutralizálja. Egy előnyös megvalósítás esetében az antitest egy izolált humán rekombináns antitest, vagy ennek antigénkötő része. Egy másik előnyös megvalósításban az antitest a TNFa-indukált celluláris aktiválódást is neutralizálja, amelyet standard ín vitro assay-ben határozunk meg, amikor is humán köldökvéna endoteliális sejteken (HUVEC=humán umbilical vein endothelial cell) a TNFa-indukált ELAM-1 (endothelial cell leucocyte adhesion molecule-1) expresszióját vizsgáljuk.
A IQ és Κ,,β· meghatározására szolgáló felületi plazmonrezonancia-analízist az 1. példában leírtak szerint végezhetjük el. Az 1C5(, meghatározására szolgáló standard in vitro L929 assay-t a 4. példa A. fejezetében írjuk le. A 4. példa C. fejezete egy olyan standard in vitro assay-t ír le, amely az ELAM-1 humán köldökvéna endoteliális sejteken való TNFa-indukált kifejeződését méri. Az előbbiekben említett kinetikának és neutralizációs kritériumoknak például a következő rekombináns humán antitestek felelnek meg, illetve előreláthatóan meg fognak felelni: [VH/VL] párok, amelyeknek a szekvenciáit az 1A., 1B., 2A. és 2B. ábrák mutatják be (lásd a 2., 3. és 4. példát is a kinetikai és neutralizációs analízisek vonatkozásában): [D2E7 VH/D2E7 VL]; [HD2E7+.A1/D2E7 VL]; [HD2E7+.A2/D2E7 VL]; [HD2E7+.A3/D2E7 VL]; [HD2E7+.A4/D2E7 VL];
[HD2E7+.A5/D2E7 VL]; [HD2E7+.A6/D2E7 VL]; [HD2E7+.A7/D2E7 VL]; [HD2E7+.A8/D2E7 VL]; [HD2E7+.A9/D2E7 VL]; [D2E7 VH/LD2E7+.A1]; [D2E7 VH/LD2E7+.A4]; [D2E7 VH/LD2E7+.A5J; [D2E7 VH/LD2E7+.A7]; [D2E7 VH/LD2E7+.A8]; [HD2E7+.A9/LD2E7+.A1]; [VH1-D2/LOE7]; [VH1D2. N/LOE7. T); [VH1-D2. Y/LOE7A]; [VH1D2.N/LOE7.A]; [VH1-D2/EP B12] és [3C-H2/LOE7],
A szakterületen jól ismert, hogy az antitest nehéz lánc és könnyű lánc CDR3 doménjei fontos szerepet játszanak egy antitest antigénnel szembeni specificitásában/affinitásában. Ennek megfelelően - egy másik szempontból - a találmány olyan humán antitestekre vonatkozik, amelyek alacsony disszociációs kinetikával rendelkeznek a hTNFa-val való asszociáció tekintetében, és hogy olyan könnyű és nehéz lánc CDR3 doméneket tartalmaznak, amelyek strukturálisan azonosak vagy rokonságban vannak a D2E7 CDR3 doménekkel. Mint a 3. példában bemutatjuk, a D2E7 VL CDR3 9. pozícióját elfoglalhatja egy Alá vagy Thr csoport anélkül, hogy ez lényegesen befolyásolná a Κ^ értéket. Ennélfogva a D2E7 VL CDR3 számára általánosan elfogadott motívum aminosavszekvenciája a következő: Q-R-Y-L-S-T-A-P-Y-(T/A) (3. számú szekvencia). Ezenkívül a D2E7 VH CDR3 12. pozícióját Tyr vagy Asn csoport foglalhatja el anélkül, hogy lényegesen befolyásolná a K^értéket. Ennek megfelelően a D2E7 VH CDR3-ra a V-S-Y-L-S-T-A-S-S-L-D-(Y/N). (4. számú szekvencia) aminosavszekvencia az általánosan elfogadott motívum. Ezenfelül, mint a 2. példában bemutatjuk, a D2E7 nehéz és könnyű láncok CDR3 doménje elviseli, hogy egyetlen alanincsoporttal szubsztituáljuk (a VL CDR3-ban az 1., 4., 5., 7. vagy 8. pozícióban és a VH CDR3-ban a 2., 3., 4., 5., 6., 8:, 9.,
10. vagy 11. pozícióban) anélkül, hogy ez lényegesen befolyásolná a K^értéket. A gyakorlattal rendelkező szakember ezenkívül azzal is tisztában van, hogy mivel a D2E7 VL és VH CDR3 domének elviselik az alaninnal való szubsztitúciót, végezhető volna más aminosavak szubsztitúciója is - főképpen konzervatív aminosavak szubsztitúciója - a CDR3 doméneken belül úgy, hogy eközben az antitest még megtartsa alacsony K<,ff sebességi állandóját. A „konzervatív aminosavval való szubsztitúció” alatt itt azt értjük, hogy egy amínosavat olyan aminosavakkal helyettesítünk, amelyeknek hasonló az oldallánca. A szakma meghatározta a hasonló oldalláncokat tartalmazó aminosavak családját. Ezek a következők: bázikus oldalláncok (például: lizin, arginin, hisztidin), savas kémhatású oldalláncok (például: aszparaginsav, glutaminsav), töltetlen poláris oldalláncok (például: glicin, aszparagin, glutamin, szerín, treonin, tirozin, cisztein), nem poláris oldalláncok (például: alanin, valin, leucin, izoleucin, prolin, fenil-alanin, metionin, triptofán), béta-elágazást tartalmazó oldalláncok (például : treonin, valin, izoleucin) és aromás oldalláncok (például: tirozin, fenil-alanin, triptofán, hisztidin). Előnyös, ha ötnél több konzervatív aminosavval való szubsztitúciót nem alkalmazunk a D2E7 VL és/vagy VH CDR3 doméneken belül. Még előnyösebb, ha háromnál több konzervatív aminosav8
HU 221 984 Β1 val való szubsztitúciót nem alkalmazunk a D2E7 VL és/vagy VH CDR3 doménekben. Ezenfelül nem szabad konzervatív aminosavat szubsztituálni azokban az aminosavpozíciókban, amelyek kritikusak a hTNFa-hoz való kötődés szempontjából. Mint a 3. példában kimutatjuk, úgy tűnik, hogy a D2E7 VL CDR3 2. és 5. pozíciói és a D2E7 VH CDR3 1. és 7. pozíciói kritikusak a hTNFa-val való kölcsönhatás szempontjából, tehát előnyösen nem végzünk szubsztitúciókat ezekben a pozíciókban (bár, mint fent leírtuk, az alaninszubsztitúciója a D2E7 VL CDR3 5. pozíciójában elfogadható).
Egy további kiviteli alakban tehát a találmány tárgyát az alábbi tulajdonságokkal rendelkező izolált humán antitest vagy ennek antigénkötő része képezi:
a) a humán TNFa-tól 1 χ 10~3 s*1 Κθ^ sebességi állandó mellett disszociál, felületi plazmonrezonanciával meghatározva;
b) könnyű lánc CDR3 doménje a 3. számú szekvencia által leírt aminosavszekvenciát tartalmazza, vagy egy módosított 3. számú szekvenciát, amely egyetlen alaninszubsztitúciót tartalmaz az
1., 4., 5., 7. vagy 8. pozícióban, vagy 1-5 konzervatív aminosavszubsztitúciót az 1., 3., 4., 6.,
7., 8. és/vagy 9. pozícióban;
c) nehéz lánc CDR3 doménje a 4. számú szekvencia által leírt aminosavszekvenciát tartalmazza vagy egy módosított 4. számú szekvenciát, amely egyetlen alaninszubsztitúciót tartalmaz a
2., 3., 4., 5., 6., 8., 10. vagy 11. pozícióban, vagy
1-5 konzervatív aminosavszubsztitúciót a 2.,
3., 4., 5., 6., 8., 9., 10., 11. és/vagy 12. pozícióban.
Előnyösebb, ha az antitest, vagy ennek antigénkötő része a humán TNFa-tól 5 χ 10~4 s*1 Koff sebességi állandó mellett disszociál. Még előnyösebb, ha az antitest, vagy ennek antigénkötő része a humán TNFa-tól 1 χ 10~4 s-' Koff sebességi állandó mellett disszociál.
Egy következő kiviteli alakban a találmány egy olyan izolált humán antitestet vagy ennek antigénkötő részét ismerteti, amelyben a könnyű lánc variábilis szakasz (LCVR) olyan CDR3 domént tartalmaz, amelynek az aminosavszekvenciáját a 3. számú szekvencia úja le, vagy egy olyan módosított 3. számú szekvencia, amely egyetlen alaninszubsztitúciót tartalmaz az 1., 4., 5., 7. vagy 8. pozícióban, és amelyben a nehéz lánc variábilis szakasz (HC VR) olyan CDR3 domént tartalmaz, amelynek az aminosavszekvenciáját a 4. számú szekvencia úja le, vagy egy olyan módosított 4. számú szekvencia, amely egyetlen alaninszubsztitúciót tartalmaz a 2., 3.,
4., 5., 6., 8„ 9., 10. vagy 11. pozícióban. Előnyösen az LCVR egy olyan CDR2 domént tartalmaz, amelynek az aminosavszekvenciáját az 5. számú szekvencia (azaz: a D2E7 VL CDR2) úja le, és a HCVR egy olyan CDR2 domént tartalmaz, amelynek az aminosavszekvenciáját a 6. számú szekvencia (azaz a D2E7 VH CDR2) úja le. Még előnyösebb, ha az LCVR CDR1 doménje a 7. számú szekvencia szerinti (azaz a D2E7 VL CDR1) aminosavszekvenciát tartalmazza, és ha a HCVR CDR1 doménje a 8. számú szekvencia szerinti (azaz a D2E7 VH CDR1) aminosavszekvenciát tartalmazza. A VL framework szakaszok előnyösen a Vkl humán csíravonalcsaládból származnak, előnyösebben az A2O humán csíravonal Vk génből és legelőnyösebben az 1A. és IB. ábrákon látható D2E7 VL framework szekvenciákból. A VH framework szakaszok előnyösen a Vh3 humán csíravonalcsaládból származnak, előnyösebben a DP-31 humán csiravonal VH génből és legelőnyösebben a 2A. és 2B. ábrákon látható D2E7 VH framework szekvenciákból.
Egy még további kiviteli alakban a találmány egy olyan izolált humán antitestet, vagy ennek antigénkötő részét biztosítja, amelyben a könnyű lánc variábilis szakasza (LCVR) az 1. számú szekvencia szerinti aminosavszekvenciát (azaz a D2E7 VL) tartalmazza, és a nehéz lánc variábilis szakasz (HCVR) a 2. számú szekvencia szerinti aminosavszekvenciát (azaz a D2E7 VH) tartalmazza. Bizonyos kiviteli formákban az antitest egy olyan nehéz lánc konstans szakaszt tartalmaz, mint egy IgGl, IgG2, IgG3, IgG4, IgA, IgE, IgE, IgM vagy IgD konstans szakasz. A nehéz lánc konstans szakasz előnyösen egy IgGl nehéz lánc konstans szakasz vagy egy IgG4 nehéz lánc konstans szakasz. Ezenkívül az antitest olyan könnyű lánc konstans szakaszt tartalmazhat, amely vagy egy kappa könnyű lánc konstans szakasz vagy egy lambda könnyű lánc konstans szakasz. Az antitest előnyösen kappa könnyű lánc konstans szakaszt tartalmaz. Az antitestrész például vagy egy Fab fragmentum vagy egy egyláncú Fv fragmentum lehet.
További kiviteli formákban a találmány olyan izolált humán antitestet vagy ennek antigénkötő formáját biztosítja, amelyben D2E7-tel rokon VL és VH' CDR3 domének vannak. Itt például olyan antitestekről vagy ezek antigénkötő részeiről van szó, amelyekben a könnyű lánc variábilis szakaszának (LCVR) CDR3 doménje olyan aminosavszekvenciát tartalmaz, amelyet a következő csoportból választunk ki: 3. számú szekvencia, 11. számú szekvencia, 12. számú szekvencia, 13. számú szekvencia, 14. számú szekvencia, 15. számú szekvencia, 16. számú szekvencia, 17. számú szekvencia, 18. számú szekvencia, 19. számú szekvencia, 20. számú szekvencia, 21. számú szekvencia, 22. számú szekvencia, 23. számú szekvencia, 24. számú szekvencia, 25. számú szekvencia, 26. számú szekvencia, vagy amelyekben a nehéz lánc variábilis szakaszának (HCVR) CDR3 doménje olyan aminosavszekvenciát tartalmaz, amelyet a kővetkező csoportból választunk ki: 4. számú szekvencia, 27. számú szekvencia, 28. számú szekvencia, 29. számú szekvencia, 30. számú szekvencia, 31. számú szekvencia, 32. számú szekvencia,
33. számú szekvencia, 34. számú szekvencia vagy 35. számú szekvencia.
Egy még további kiviteli formában a találmány tárgyát olyan rekombináns humán antitest, vagy ennek antigénkötő része képezi, amely a humán TNFa-t neutralizálja, de a humán TNFp-t nem. Az antitest vagy ennek antigénkötő része előnyösen a csimpánz-TNFa aktivitását is neutralizálja, és még legalább egy további főemlős-TNFa-t, amely lehet pávián-TNFa, selyemmajom-TNFa, közönségesmakákó-TNFa, vagy rhesusmajom-TNFa. Az antitest vagy antigénkötő része elő9
HU 221 984 Β1 nyösen humán, csimpánz- és/vagy egy további főemlős-TNFa-t neutralizál egy standard in vitro L929 assay-ben, 1 χ 10~8 M vagy kisebb IC50 mellett, előnyösebben 1 χ ΙΟ-9 M vagy kisebb, még előnyösebben 5 χ 10~10 M vagy kisebb IC50 mellett. Egy kiviteli rész alakban az antitest a kutya-TNFa-aktivitást is neutralizálja, előnyösen egy standard in vitro L929 assayben 1 χ 10~7 M vagy kisebb IC50 mellett, előnyösebben 1 χ 10*8 M vagy kisebb, még előnyösebben 5 χ 10~9 M vagy kisebb IC50 mellett. Egy másik kiviteli rész alakban az antitest a sertés-TNFa-aktivitást is neutralizálja, előnyösen 1 χ ΙΟ-5 M vagy kisebb ICS0 mellett, előnyösebben 1 χ 10~6 M vagy kisebb, és még előnyösebben 5 χ 10~7 M vagy kisebb ICjq mellett. Egy további kiviteli alakban az antitest az egér-TNFa-aktivitást is neutralizálja, előnyösen 1 χ 10~4 M vagy kisebb IC50 mellett, előnyösebben 1 χ 10 5 M vagy kisebb, és még előnyösebben 5 χ ΙΟ-6 M vagy kisebb ICso-nel.
Egy találmány szerinti antitestnek vagy antitestrésznek előállíthatjuk a származékait, vagy az antitestet vagy antitestrészt hozzáköthetjük más funkciós molekulához (például más pepiidhez vagy proteinhez). Ennek megfelelően a találmány szerinti antitestek és antitestrészek magukban foglalják az itt leírt humán antiTNFa antitestek származékait és más módon módosított formáit, beleértve az immunadhéziós molekulákat is. Például: egy találmány szerinti antitest vagy antitestrész működőképesen kapcsolódhat (kémiai kötéssel, genetikai fúzióval, nem kovalens asszociációval vagy másként) egy vagy több más molekuláris entitáshoz, ilyen egy másik antitest (például egy bispecifikus antitest vagy diatest), egy detektálható anyag, egy citotoxikus anyag, egy gyógyszerhatóanyag és/vagy egy olyan protein vagy peptid, amely közvetítheti az antitest vagy antitestrész egy másik molekulával való asszociációját (ilyen egy sztreptavidin magszakasz vagy egy polihisztidintoldalék).
Az antitestszármazékok egyik típusát két vagy több (azonos típusú vagy különböző típusú) antitest keresztkötésével állítják elő (például bispecifikus antitestek előállítása céljából). Keresztkötést létesítő alkalmas linkerek lehetnek olyan heterobifunkciós linkerek, amelyek két, határozottan eltérő, olyan reaktív csoportot tartalmaznak, amelyeket megfelelő betétszakasz (spacer; például: mmaleimido-benzoil-N-hidroxi-szukcinimid-észter) választ el egymástól, vagy homobifunkciós linkerek (például: diszukcinimidil-szuberát). Ilyen linkerek a Pierce Chemical Companytől (Rockford, IL.) beszerezhetők.
Egy találmány szerinti antitest vagy antitestrész módosításához használható kimutatható reagensek közé tartoznak a fluoreszcens vegyületek. Ilyen kimutatható fluoreszcens reagens például a fluoreszcein, fluoreszcein-izotio-cianát, rodamin, 5-dimetil-amin-l-naftalinszulfonil-klorid, fikoeritrin és hasonlók. Egy antitestet detektálható enzimekkel is módosíthatunk. Ilyenek például az alkalikus foszfatáz, torma-peroxidáz, glükózoxidáz és hasonlók. Egy antitestnek egy kimutatható enzimmel alkotott származékát további olyan reagensek hozzáadásával mutatjuk ki, amelyeket az enzim kimutatható reakciótermék előállítására használ. Például : ha a kimutatható anyag torma-peroxidáz, a hidrogénperoxid és diamino-benzidin hozzáadása olyan színes reakcióterméket eredményez, ami kimutatható. Egy antitest biotinnal is módosítható, amely az avidin- vagy sztreptavidinkötődés indirekt mérésével detektálható.
II. Antitestek kifejezése
Egy találmány szerinti antitestet, vagy antitestrészt előállíthatunk immunglobulin könnyű és nehéz lánc gének gazdasejtben való rekombináns kifejezésével. Annak érdekében, hogy egy antitestet rekombináns technikával fejezzünk ki, egy gazdasejtet egy vagy több olyan rekombináns expressziós vektorral, amelyek az antitest immunglobulin könnyű és nehéz láncokat kódoló DNS-fragmentumokat hordozzák, olyan módon transzfektálunk, hogy a könnyű és nehéz láncok a gazdasejtben kifejeződjenek. Előnyös, ha a kifejeződött láncok abba a táptalajba szekretálódnak, amelyben a gazdasejteket tenyésztjük és amelyből az antitesteket kinyerhetjük. Standard rekombináns metodikákat használunk az antitest nehéz és könnyű lánc gének izolálásához, e gének rekombináns expressziós vektorokba való beépítéséhez, a vektorok gazdasejtekbe való bevezetéséhez. A metodikák leírása megtalálható a következő kiadványokban: Sambrook, Fritsch és Maniatis (szerk.), Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2. kiadás, Cold Spring Harbor, N. Y. (1989); F. M. Ausubel et al.» (szerk.) Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing Associates (1989); 4,816,397 számú, amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás (Boss etal.).
A D2E7 antitest vagy egy D2E7-tel rokon antitest kifejezéséhez először a könnyű és nehéz lánc variábilis szakaszokat kódoló DNS-fragmentumokat izoláljuk. Ezeket a DNS-eket polimeráz-láncreakció (PCR) használatával a csiravonal könnyű és nehéz lánc variábilis szekvenciák sokszorozásával és módosításával kaphatjuk meg. A humán nehéz és könnyű lánc variábilis szakasz gének csíravonal-DNS-szekvenciái ismertek ezen a szakterületen [lásd például: „Vbase” humán csíravonal-szekvencia adatbázis; továbbá: E. A. Kábát et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5. kiadás, U. S. Department of Health and Humán Services; NIH Publication No. 91-3242 (1991); I. M. Tomlinson et al., „The Repertoire of Humán Germline VH Sequences Reveals about Fifty Groups of VH Segments with Different Hypervariable Loops”, J. Mól. Bioi., 227, 776-798 (1992); J. P. L. Cox et al., ,Λ Directory of Humán Germline VK Segments Reveals a Strong Bias in their Usage”, Eur. J. Immunoi., 24, 827-836 (1994); az említett kiadványok tartalmát referenciának tekintjük]. A D2E7, vagy egy D2E7-tel rokon antitest nehéz lánc variábilis szakaszát kódoló egy DNS-fragmentum izolálása céljából a humán csíravonal VH gének VH3 családjának egy tagját standard PCR-rel sokszorozzuk. A legelőnyösebb, ha a DP-31 VH csíravonal-szekvenciát sokszorozzuk. A D2E7, vagy egy D2E7-tel rokon antitest könnyű lánc variábilis szakaszát kódoló egy DNS-fragmentum izolálása céljából a humán csíravonal VL gének VKI családjának egy tagját standard PCR-rel sokszorozzuk. A leg10
HU 221 984 Β1 előnyösebb, ha az A20 VL csiravonal-szekvenciát sokszorozzuk. A DP-31 csíravonal VH és A20 csíravonal VL szekvenciák sokszorozásához alkalmas PCR-primereket a fent említett kiadványokban szereplő nukleotidszekvenciák alapján tervezhetjük meg, standard módszerek használatával.
Mihelyt megkaptuk a csíravonal VH és VL fragmentumokat, ezeket a szekvenciákat úgy mutagenizálhatjuk, hogy azok az itt leírt D2E7 vagy D2E7-tel rokon aminosavszekvenciákat kódolják. A csíravonal VH és VL DNS-szekvenciák által kódolt aminosavszekvenciákat először összehasonlítjuk a D2E7 vagy D2E7-tel rokon VH és VL aminosavszekvenciákkal, hogy azonosítsuk a D2E7-ben vagy a D2E7-tel rokon szekvenciában azokat az aminosavakat, amelyek különböznek a csíravonaltól. Ezután a csíravonal-DNS-szekvenciák megfelelő nukleotidjait úgy mutagenizáljuk, hogy a mutált csíravonal-szekvencia a D2E7 vagy a D2E7-tel rokon aminosavszekvenciát kódolja, amikor is a genetikai kódot használjuk annak meghatározására, hogy milyen nukleotid változtatásokat kell végezni. A csíravonal-szekvenciák mutagenizálásához standard módszereket használunk, ilyen a PCR-közvetített mutagenezis (itt a mutált nukleotidokat olyan módon visszük be a PCR-primerekbe, hogy a PCR-termék már tartalmazza a mutációkat) vagy a helyre irányuló mutagenezis.
Ezenkívül meg kell jegyeznünk, hogy ha a PCRamplifikációval kapott „csíravonaT-szekvenciák olyan aminosavakat kódolnak a framework szakaszokban, amelyek különböznek a valódi csíravonal-konfigurációtól (azaz: a sokszorozott szekvenciában a valódi csíravonal-szekvenciához képest előforduló különbségeket például szomatikus mutáció eredményezi), kívánatos lehet, hogy visszaváltoztassuk ezeket az aminosavkülönbségeket az eredeti csfravonal-szekvenciákra (azaz a framework csoportok „visszamutálása” a csíravonal-konfigurációra).
Mihelyt megkaptuk a D2E7 vagy D2E7-tel rokon VH és VL szegmentumokat kódoló DNS-fragmentumokat (a csíravonal VH és VL gének sokszorozásával és mutagenizálásával, mint fent leírtuk), ezeket a DNSfragmentumokat tovább manipulálhatjuk standard rekombináns DNS-technikákkal, például: a variábilis szakasz géneket teljes hosszúságú antitestláncgénekké, Fab fragmentumgénekké vagy scFv génekké konvertálhatjuk. Ezekben a manipulációkban a VL- vagy VH-kódoló DNS-fragmentumot működőképesen egy más proteint - például antitest konstans szakaszt vagy egy flexibilis linkért - kódoló más DNS-fragmentumhoz kapcsoljuk. A .működőképesen összekapcsolt” kifejezés - ahogy ebben a kontextusban használjuk - azt jelenti, hogy a két DNS-fragmentumot úgy kapcsoljuk össze, hogy a két DNS-fragmentum által kódolt aminosavszekvenciák működőképesek maradjanak.
A VH szakaszt kódoló izolált DNS-t teljes hosszúságú nehéz lánc génné változtathatjuk azáltal, hogy a VH-kódoló DNS-t egy másik olyan DNS-molekulához kapcsoljuk - működőképes módon - amely nehéz lánc konstans szakaszokat (CH1, CH2 és CH3) kódol. A humán nehéz lánc konstans szakaszok ismertek a szakterületen [lásd például: E. A. Kábát et al. „Sequences of Proteins of Immunological Interest”, 5. kiadás, U. S. Department of Health and Humán Services, NIH Publication No. 91-3242 (1991)] és az ezen szakaszokat tartalmazó DNS-fragmentumokat standard PCRsokszorozással kaphatjuk meg. A nehéz lánc konstans szakasz lehet IgGl, IgG2, IgG3, IgG4, IgA, IgE, IgM vagy IgD konstans szakasz, de a legelőnyösebb egy IgGl vagy IgG4 konstans szakasz. Ami a Fab fragmentum nehéz lánc gént illeti, a VH-kódoló DNS-t egy másik olyan DNS-molekulához kapcsolhatjuk - működőképesen - amely csak a nehéz lánc CH1 konstans szakaszt kódolja.
A VL szakaszt kódoló izolált DNS-t teljes hosszúságú könnyű lánc génné (valamint Fab könnyű lánc génné) konvertálhatjuk azáltal, hogy ha a VL-kódoló DNS-t működőképes módon egy másik olyan DNSmolekulával kapcsoljuk össze, amely a CL könnyű lánc konstans szakaszt kódolja. A humán könnyű lánc konstans szakasz gének ismertek ezen a szakterületen [lásd például: E. A. Kábát et al. „Sequences of Proteins of Immunological Interest”, 5. kiadás, U. S. Department of Health and Humán Services, NIH Publication No. 91-3242 (1991)] és az ezen szakaszokat tartalmazó DNS-fragmentumokat standard PCR-sokszorozásával kaphatjuk meg. A könnyű lánc konstans szakasz lehet kappa vagy lambda konstans szakasz, de legelőnyösebb egy kappa konstans szakasz.
Egy scFv gén létrehozása céljából a VH- és VL-kódoló DNS-fragmentumokat működőképes módon hozzákapcsoljuk egy flexibilis linkért kódoló másik fragmentumhoz - például (Gly4-Ser)3 aminosavakat kódoló szekvenciához - mégpedig úgy, hogy a VH és VL szekvenciák folytonos egyláncú proteinként - a flexibilis linkerrel összekötött VL és VH szakaszokkal - fejeződhessenek ki [lásd például: Bírd et al., Science, 242, 423-426 (1988); Huston et al., Proc. Natl. Acad. Sci., 85, 5879-5883 (1988); McCafferty et al., Natúré, 348, 552-554(1990)].
A találmány szerinti antitestek vagy antitestrészek kifejezése végett a részleges vagy teljes hosszúságú könnyű és nehéz láncokat kódoló DNS-eket - amelyeket a fentiekben leírt módon kaptunk - expressziós vektorokba építjük be úgy, hogy a gének működőképesen kapcsolódjanak transzkripciós és transzlációs szabályozószekvenciákhoz. Ebben a kontextusban a „működőképesen összekapcsolt” kifejezéssel azt kívánjuk jelezni, hogy egy antitestgént úgy Egálunk a vektorba, hogy a transzkripciós és transzlációs szabályozószekvenciák a vektoron belül funkciójuknak megfelelően működjenek, azaz irányítsák az antitestgén transzkripcióját és transzlációját. Az expressziós vektort és az expressziós szabályozószekvenciákat úgy választjuk meg, hogy a használt gazdasejttel kompatibilisek legyenek. Az antitest könnyű lánc gént és az antitest nehéz lánc gént külön vektorokba is beépíthetjük, de általánosabban úgy járunk el, hogy mindkét gént ugyanabba az expressziós vektorba építjük be. Az antitestgéneket standard módszerekkel (például az antitestgénen és a vektoron lévő komplementer restrikciós helyek ligálásával vagy, ha
HU 221 984 Bl nincsenek restrikciós helyek, a tompa végek ligálásával) építjük be az expressziós vektorba. A D2E7 vagy a D2E7-tel rokon könnyű vagy nehéz lánc szekvenciák beépítését megelőzően az expressziós vektor már tartalmazhat antitest konstans szakasz szekvenciákat. Például: a D2E7 vagy a D2E7-tel rokon VH és VL szekvenciák teljes hosszúságú antitestgénekké való konvertálásának egyik megoldása abból áll, hogy a nehéz lánc konstans, illetve könnyű lánc konstans szakaszokat már kódoló expressziós vektorokba építjük be őket úgy, hogy a VH szegmentum működőképesen kapcsolódjon a CH szegmentum(ok)hoz a vektoron belül és a VL szegmentum működőképesen kapcsolódjon a CL szegmentumhoz a vektoron belül. Egy további, vagy alternatív megoldás szerint a rekombináns expressziós vektor egy olyan szignálpeptidet kódolhat, amely elősegíti az antitestlánc gazdasejtből való szekrécióját. Az antitestláncgént a vektorba úgy klónozhatjuk be, hogy a szignálpeptid működőképesen kapcsolódjék az antitestláncgén aminoterminális végéhez. A szignálpeptid lehet egy immunglobulin szignálpeptid vagy egy heterológ szignálpeptid (azaz egy nem immunglobulinproteinből származó szignálpeptid).
A találmány szerinti rekombináns expressziós vektorok az antitestláncgéneken kívül olyan szabályozószekvenciákat hordoznak, amelyek az antitestláncgének expresszióját irányítják. A „szabályozószekvencia” kifejezés alatt promotereket, enhancereket és más olyan expresszióirányító elemeket (például : poliadenilációs szignál) értünk, amelyek az antitestláncgének transzkripcióját vagy transzlációját irányítják. Ilyen szabályozószekvenciákat ír le például a következő kiadvány: Goeddel: Gene Expression Technology, Methods in Enzymology, 185, Academic Press, San Diego, CA. (1990). A szakterületen jártas szakemberek tudják, hogy az expressziós vektor tervezése, beleértve a szabályozószekvenciák kiválasztását, olyan faktoroktól függhet, mint a transzformálandó gazdasejt kiválasztása, a kívánt protein expressziójának szintje, stb. Emlősgazdasejtben történő expresszióhoz előnyös szabályozószekvenciák közé sorolhatók az olyan virális elemek, amelyek emlőssejtekben a magas szintű proteinexpressziót vezérlik, ilyenek a citomegalovínis (CMV) (mint a CMV promoter/enhancer), a simian vírus 40 (SV40) (mint az SV40 promoter/enhancer), adenovírus [például az adenovírus fő késői promoter (AdMLP)] és a polyomaeredetű promoterek és/vagy enhancerek. A virális szabályozóelemeknek és ezek szekvenciáinak további leírását lásd: 5,168,062 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás (Stinski); 4,510,245 (Bell et al.) és 4,968,615 (Schaffiier et al.) számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás.
A találmány szerinti vektorok az antitestláncgéneken és szabályozószekvenciákon kívül további szekvenciákat tartalmazhatnak, például olyan szekvenciákat, amelyek a vektor replikációját szabályozzák a gazdasejtben (például a replikációs origók) és szelekciós markergéneket. A szelekciós markergének elősegítik azoknak a gazdasejteknek a szelektálását, amelyekbe a vektort bevezettük (lásd például a 4,399,216;
4,634,665 és 5,179,017 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírásokat, ezek mind Axel és munkatársaitól származnak). Például a szelekciós markergén rendszerint gyógyszerek - ilyenek a G418, higromicin vagy metotrexát - elleni rezisztenciát kölcsönöz annak a gazdasejtnek, amelybe a vektort bevezettük. Előnyös szelekciós markergén például a dihidrofolát-reduktáz (DHFR)-gén (dhfr- gazdasejtekben való felhasználáshoz metotrexát szelekció/amplifikáció esetén) és a neo gén (G418 szelekcióhoz).
Könnyű és nehéz láncok expressziója végett a könnyű és nehéz láncokat kódoló expressziós vektort (vektorokat) egy gazdasejtbe transzfektáljuk standard technikákkal. A „transzfekció” kifejezés különböző formái olyan technikák széles változatát foglalják magukban, amelyeket általánosan használnak exogén DNS bevezetésére egy prokarióta- vagy eukarióta-gazdasejtbe. Ilyen technika például az elektroporáció, kalcium-foszfátos precipitáció, DEAE-dextrános transzfekció és hasonlók. Bár a találmány szerinti antitesteket elméletileg lehetséges akár prokarióta-, akár eukarióta-gazdasejtekben kifejezni, mégis a legelőnyösebbnek tartjuk, ha az antitesteket eukariótasejtekben és leginkább emlősgazdasejtekben fejezzük ki, mivel valószínűbb, hogy a prokarióta sejtekkel ellentétben az eukariótasejtek és főképpen az emlőssejtek tudják összeszerelni és szekretálni a megfelelően felgombolyodott és immunológiailag aktív antitestet. Közölték, hogy az antitestgének prokariótaexpressziója képtelen magas kihozatallal aktív antitesttermelésére [M. A. Boss, C. R. Wood, Immunology Today, 6,12-13 (1985)}.
A találmány szerinti rekombináns antitestek kifejezéséhez előnyös emlősgazdasejtek közé tartoznak a kínaihörcsög-petefészek (Chinese Hamster Ovaiy=CHO)sejtek [beleértve a dhfr- CHO-sejteket; lásd: Uriaub és Chasin, Proc. Natl. Acad. Sci., 77, 4216-4220 (1980)], amelyeket DHFR szelekciós markerrel használnak például R. J. Kaufmann és P. A. Sharp leírása szerint: Mól. Bioi., 159, 601-621 (1982), az NSO-mielomasejtek, COS-sejtek és SP2 sejtek. Amikor antitestgéneket kódoló rekombináns vektorokat vezetnek be emlősgazdasejtekbe, az antitestek termelése úgy történik, hogy a gazdasejteket annyi ideig tenyésztik, amennyi elégséges ahhoz, hogy az antitest kifejeződjék a gazdasejtben, előnyösebben, az antitest abba a táptalajba szekretálódjék, amelyben a gazdasejtek növekednek. Az antitestek standard proteintisztítási módszerek használatával nyerhetők ki a táptalajból.
A gazdasejtek arra is felhasználhatók, hogy az ép antitestek részeit - ilyenek a Fab fragmentumok, vagy scFv molekulák - megtermeljék. Magától értetődik, hogy a fenti eljárásban végrehajtott változtatások a találmány oltalmi köréhez tartoznak. Például: kívánatos lehet, hogy a találmány szerinti antitest akár könnyű láncát, akár nehéz láncát (de nem mindkettőt) kódoló DNS-sel egy gazdasejtet transzformáljunk. A rekombináns DNS-technológiát arra is használhatjuk, hogy azt a könnyű láncot, vagy azt a nehéz láncot kódoló DNSrészt eltávolítsuk, amelyre nincs szükség a hTNFa megkötéséhez, de használhatjuk mind a könnyű, mind a ne12
HU 221 984 Bl héz láncot kódoló teljes DNS eltávolítására is, ha a hTNFa kötésénél ezekre sincs szükség. Az ilyen csonka DNS-ből kifejeződő molekulákat szintén a találmány szerinti antitesteknek tekintjük. Ezenkívül, termelhetünk olyan bifiinkciós antitesteket, amelyekben egy nehéz lánc és egy könnyű lánc a találmány szerinti antitestnek felel meg, és a másik nehéz és könnyű lánc nem a hTNFa-ra, hanem egy másik antigénre specifikus, ha úgy járunk el, hogy standard kémiai kötési módszerekkel egy találmány szerinti antitestet egy másik antitesthez kapcsolunk.
Egy előnyös rendszerben a találmány szerinti antitestnek, vagy antigénkötő részének rekombináns expressziója végett mind az antitest nehéz láncot, mind az antitest könnyű láncot kódoló rekombináns expressziós vektort dhfr- CHO-sejtekbe vezetjük be kalcium-foszfát-közvetített transzfekcióval. A rekombináns expressziós vektorban az antitest nehéz és könnyű lánc gének mindegyikét működőképesen kapcsoljuk össze enhancer/promoter szabályozóelemekkel (ezek például SV40-, CMV-, adenovírus- stb. eredetűek lehetnek, mint egy CMV enhancer/AdMLP promoter szabályozóelem, vagy egy SV40 enhancer/AdMLP promoter szabályozóelem), hogy a gének magas szintű transzkripcióját irányítsák. A rekombináns expressziós vektor DHFR gént is tartalmaz, amely a vektorral transzfektált CHO-sejtek szelekcióját teszi lehetővé metotrexát szelekció/amplifikáció használatával. A szelektált transzformáit gazdasejteket tenyészthetjük, hogy lehetővé tegyük az antitest nehéz és könnyű láncok expresszióját, majd az antitestet kinyerjük a táptalajból. Standard molekuláris biológiai technikákat használunk a rekombináns expressziós vektor előállításához, a gazdasejtek transzfektálásához, a transzformált sejtek szelekciójához, a gazdasejtek tenyésztéséhez és az antitest táptalajból való elkülönítéséhez.
Tekintettel az előbbiekre, a találmány további tárgyát olyan nukleinsav, vektor- és gazdasejt-összetételek képezik, amelyek a találmány szerinti antitestek és antitestrészek rekombináns expressziójához használhatók. A D2E7 könnyű lánc variábilis szakaszt a
7. ábra és a 36. számú szekvencia mutatja be. Az LCVR CDR1 doménje a 70-102 nukleotidokat foglalja magában, CDR2 doménje a 148-168 nukleotidokat foglalja magában, CDR3 doménje a 265-291 nukleotidokat foglalja magában. A D2E7 nehéz lánc variábilis szakaszt kódoló nukleotidszekvenciát a 8. ábra és a 37. számú szekvencia mutatja be. A HCVR CDR1 doménje a 91-105 nukleotidokat foglalja magában, a CDR2 doménje a 148-198 nukleotidokat foglalja magában és a CDR3 doménje a 295-330 nukleotidokat foglalja magában. A gyakorlott szakemberek számára magától értetődik, hogy a D2E7-tel rokon antitesteket vagy ezek részeit (például egy CDR domént, mint egy CDR3 domént) a D2E7 LCVR-t és HCVR-t kódoló nukleotidszekvenciákból leszármaztathatják a genetikai kód és standard molekuláris biológiai technikák alkalmazásával.
Egy kiviteli alakban a találmány olyan izolált nukleinsavat biztosít, amely egy könnyű lánc CDR3 domént kódol. Ez a dómén a 3. számú szekvencia szerinti aminosavszekvenciát, azaz a D2E7 VL CDR3-at tartalmazza, vagy egy egyetlen alaninszubsztitúcióval - az
1., 4., 5., 7. vagy 8. pozícióban - vagy 1-5 konzervatív aminosavszubsztitúcióval - az 1., 3., 4., 6., 7., 8. és/vagy 9. pozícióban - rendelkező módosított 3. számú szekvenciát tartalmaz. Ez a nukleinsav csak a CDR3 szakaszt, vagy előnyösebben egy teljes antitest könnyű lánc variábilis szakaszt (LCVR) tud kódolni. Például: a nukleinsav egy olyan LCVR-t tud kódolni, amelynek a CDR3 doménje az 5. számú szekvencia szerinti aminosavszekvenciát (azaz a D2E7 VL CDR2-t) tartalmazza és CDR1 doménje a 7. számú szekvencia szerinti aminosavszekvenciát (azaz a D2E7 VL CDR1et) tartalmazza.
Egy másik kiviteli alakban a találmány olyan izolált nukleinsavat biztosít, amely nehéz lánc CDR3 domént kódol. Ez a dómén a 4. számú szekvencia szerinti aminosavszekvenciát (azaz a D2E7 VH CDR3-at) tartalmazza, vagy egy egyetlen alaninszubsztitúcióval - a
2., 3., 4., 5., 6., 8., 9., 10., 11. pozícióban - vagy
1-5 konzervatív aminosavszubsztitúcióval - a 2., 3.,
4., 5., 6., 8., 9., 10., 11. és/vagy 12. pozícióban - rendelkező módosított 4. számú szekvenciát tartalmaz. Ez a nukleinsav csak a CDR3 szakaszt, vagy előnyösebben egy teljes antitest nehéz lánc variábilis szakaszt (HCVR) tud kódolni. Például: a nukleinsav egy olyan HCVR-t kódolhat, amelynek a CDR2 doménje a 6. számú szekvencia szerinti aminosavszekvenciát (azaz a D2E7 VH CDR2-t) tartalmazza, és CDR1 doménje a 8. számú szekvencia szerinti aminosavszekvenciát (azaz a D2E7 VH CDRl-et) tartalmazza.
Egy további kiviteli alakban a találmány olyan izolált nukleinsavakat biztosít, amelyek D2E7-tel rokon CDR3 domént kódolnak, például amelyeknek az aminosavszekvenciáját a következő csoportból választjuk ki: 3. számú szekvencia, 4. számú szekvencia, 11. számú szekvencia, 12. számú szekvencia, 13. számú szekvencia, 14. számú szekvencia, 15. számú szekvencia, 16. számú szekvencia, 17. számú szekvencia, 18. számú szekvencia, 19. számú szekvencia, 20. számú szekvencia, 21. számú szekvencia, 22. számú szekvencia, 23. számú szekvencia, 24. számú szekvencia, 25. számú szekvencia, 26. számú szekvencia, 27. számú szekvencia, 28. számú szekvencia, 29. számú szekvencia, 30. számú szekvencia, 31. számú szekvencia, 32. számú szekvencia, 33. számú szekvencia, 34. számú szekvencia és 35. számú szekvencia.
Egy még másik kiviteli alakban a találmány egy 1. számú szekvencia szerinti aminosavszekvenciát (azaz a D2E7 LCVR-t) tartalmazó antitest könnyű lánc variábilis szakaszt kódoló izolált nukleinsavat biztosít. Ez a nukleinsav előnyösen a 36. számú szekvencia szerinti nukleinsavszekvenciát tartalmazza, bár a gyakorlott szakemberek tudták, hogy a genetikai kód degeneráltsága következtében más nukleotidszekvenciák is kódolhatják az 1. számú szekvencia szerinti aminosavszekvenciát. A nukleinsav csak az LCVR-t kódolhatja vagy kódolhat egy olyan antitest könnyű lánc konstans szakaszt is, amely működőképesen kapcsolódik az LCVR13
HU 221 984 Bl hez. Egy kiviteli alakban ez a nukleinsav egy rekombináns expressziós vektorban van.
Egy még további kiviteli alakban a találmány egy 2. számú szekvencia szerinti aminosavszekvenciát (azaz a D2E7 HCVR-t) tartalmazó antitest nehéz lánc variábilis szakaszt kódoló izolált nukleinsavat biztosít. Ez a nukleinsav előnyösen a 37. számú szekvencia szerinti nukleinsavszekvenciát tartalmazza, bár a gyakorlott szakemberek tudják, hogy a genetikai kód degeneráltsága következtében más nukleotidszekvenciák is kódolhatják a 2. számú szekvencia szerinti aminosavszekvenciát. A nukleinsav csak a HCVR-t kódolhatja, vagy kódolhat egy olyan antitest nehéz lánc konstans szakaszt is, amely működőképesen kapcsolódik a HCVR-hez. Például: a nukleinsav egy IgGl vagy lgG4 konstans szakaszt tartalmazhat. Egy kiviteli alakban ez a nukleinsav egy rekombináns expressziós vektorban van.
A találmány olyan expressziós vektorokra is vonatkozik, amelyek antitest nehéz láncot és antitest könnyű láncot is kódolnak. Például: egy kiviteli alakban az expressziós vektor
a) olyan antitest könnyű láncot kódol, amelynek a variábilis szakasza az 1. számú szekvencia szerinti aminosavszekvenciát (azaz a D2E7 LCVR-t) tartalmazza; és
b) olyan antitest nehéz láncot kódol, amelynek a variábilis szakasza a 2. számú szekvencia szerinti aminosavszekvenciát (azaz a D2E7 HCVR-t) tartalmazza.
A találmány tárgyát képezik azok a gazdasejtek, amelyekbe egy vagy több találmány szerinti rekombináns expressziós vektort vezettünk be. Előnyös, ha a gazdasejt emlősgazdasejt, előnyösebb, ha a gazdasejt egy CHO-sejt, egy NSO-sejt vagy egy COS-sejt.
A találmány továbbá módszert ad egy találmány szerinti rekombináns humán antitest szintetizálásához, amikor is a találmány szerinti gazdasejtet megfelelő táptalajban addig tenyésztjük, amíg egy találmány szerinti rekombináns humán antitest nem szintetizálódik. A módszer tartalmazhatja még a rekombináns humán antitest táptalajból való izolálását is.
III. Rekombináns humán antitestek szelektálása
A találmány szerinti D2E7 vagy D2E7-tel rokon antitesteken kívül a találmány szerinti rekombináns humán antitesteket rekombináns kombinatorikus antitestgyűjtemény szűrése révén izolálhatjuk, előnyösen olyan tág által bemutatott scFv-gyűjtemény (phage display library) szűrésével, amelyet humán limfocitákból származó mRNS-ből készített humán VL és VH cDNS-ek használatával állítottunk elő. Az ilyen gyűjtemények készítésének és szűrésének metodikái ismertek ezen a szakterületen. Fág által bemutatott gyűjtemények létesítéséhez a kereskedelemben rendelkezésre álló kiteken (például: a Pharmacia által gyártott Recombinant Phage Antibody System, kát. szám: 27-9400-01; és a Stratagene-féle SuríZAP™ phage display kit, kát. szám: 240612) kívül az antitestbemutató gyűjtemények létrehozásában és szűrésében különösen alkalmas reagensekre és módszerekre találhatunk példákat a következő szabadalmi leírásokban és közleményekben: 5,223,409 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás (Ladner et al.); WO 92/18619 számú nemzetközi PCT közzétételi iratok (Rang et al.); WO 91/17271 számú nemzetközi PCT közzétételi iratok (Dower et al.); WO 92/20791 számú nemzetközi PCT közzétételi iratok (Winter et al.); WO 92/15679 számú nemzetközi PCT közzétételi iratok (Markland et al.); WO 93/01288 számú nemzetközi PCT közzétételi iratok (Breitling et al.); WO 92/01047 számú nemzetközi PCT közzétételi iratok (McCafferty et al.); WO 92/09690 számú nemzetközi PCT közzétételi iratok (Garrard et al.); Fuchs et al., Bio/Tecbnology 9, 1370-1372 (1991); Hay et al., Hűm. Antibod. Hybridomas, 3, 81-85 (1992); Huse et al., Science, 246, 1275-1281 (1989); McCafferty et al., Natúré, 348, 552-554 (1990); Griffiths et al., EMBO J„ 12, 725-734 (1993); Hawkins et al., J. Mól. Bioi., 226, 889-896 (1992); Clackson et al., Natúré, 352, 624-628 (1991); Gram et al., PNAS, 89, 3576-3580 (1992); Garrad et al., Bio/Technology, 9, 1373-1377 (1991); Hoogenboom et al., Nucl. Acids. Rés., 19, 4133-4137 (1991); Barbas et al., PNAS, 88, 7978-7982 (1991).
Egy előnyös kiviteli alakban a hTNFa vonatkozásában magas affinitással és alacsony felbomlási sebességi állandóval (off rate constant) rendelkező humán antitestek izolálása céljából egy, a hTNFa vonatkozásában magas affinitású és alacsony felbomlási sebességi állandóval rendelkező egér-anti-hTNFa-t (például: MÁK 195, a hibridóma letéti száma: ECACC 87 050801) használtunk először olyan humán nehéz és könnyű lánc szekvenciák szelektálásához, amelyeknek hasonló a kötési aktivitása hTNFa-val szemben. A szelektálásra a Hoogenboom és munkatársai által leírt (WO 93/06213 számú nemzetközi PCT közzétételi iratok) epitóp lenyomatos (epitope imprinting) vagy irányított szelekciós (quided selection) módszereket használtunk. Az ebben az eljárásban használt antitestgyűjtemények előnyösen scFv-tárak voltak [a tárakat a következő szerzők által leírtak szerint hoztuk létre és szűrtük: McCafferty et al., WO 92/01047 számú nemzetközi PCT közzétételi iratok; McCafferti et al., Natúré, 348, 552-554 (1990); Grffiths et al., EMBO I, 12. 725-734 (1993)]. Az scFv-antitesttárak szűréséhez előnyösen rekombináns humán hTNFa antigént használtunk.
Mihelyt az első humán VL és VH szegmentumokat kiszűrtük, ,jnix and match” (keverés és illesztés) kísérleteket végeztünk. Ezekben a kísérletekben az elsőként szelektált VL és VH szegmentumokat különböző párosításban hTNFa-kötésre szűrtük, hogy kiválasszuk az előnyös VL/VH párkombinációkat. Ezenkívül, hogy tovább javíthassuk az affinitást és/vagy hogy csökkentsük a felbomlási sebesség állandó értékét a hTNFa vonatkozásában, az előnyös VL/VH pár(ok) VL és VH szegmentumait találomra mutagenizálhatjuk, előnyösen a VH és/vagy VL CDR3 szakaszában, egy olyan eljárásban, amely analóg az in vivő szomatikus mutációs folyamattal. Ez az in vivő folyamat felelős az antitestek affinitásának éréséért a természetes immunválasz folyamán. Ilyen in vivő affinitásérést úgy viteleztünk ki, hogy a VH és VL szakaszokat olyan PCR-primerek használatával sokszoroztuk, amelyek a VH CDR3-mal, illetve VL CDR3-mal komplementerek. Ezeket a prime14
HU 221 984 Β1 reket bizonyos pozíciókban a négy nukleotidbázis egy random keverékével úgy „spékeltünk” meg, hogy a kapott PCR-termékek olyan VH és VL szegmentumokat kódoljanak, amelyekbe random mutációk kerülnek bevezetésre, éspedig a VH és/vagy VL CDR3 szakaszokban. Ezeket a véletlenszerűen mutagenizált VH és VL szegmentumokat újra szűrhetjük hTNFa-kötésre és kiválaszthatjuk azokat a szekvenciákat, amelyek magas affinitást és alacsony felbomlási sebességet mutatnak a hTNFa-val való kötődés vonatkozásában.
A kiválasztott antitest nehéz és könnyű láncok aminosavszekvenciáit összehasonlíthatjuk a csíravonal nehéz és könnyű lánc aminosavszekvenciákkal. Azokban az esetekben, amelyekben a szelektált VL és/vagy VH láncok némely framework csoportja különbözik a csíravonal-konfigurációtól (például a fággyűjtemény létesítéséhez használt immunglobulingének szomatikus mutációja következményeként), kívánatos lehet, hogy „visszamutáljuk” a szelektált antitestek megváltozott framework csoportjait a csíravonal-konfigurációhoz (azaz, hogy úgy változtassuk meg a szelektált antitestek framework aminosavszekvenciáit, hogy azok a csiravonal framework aminosavszekvenciákkal egyezzenek meg). A framework csoportok ezen „visszamutálását” (vagy csíravonalhoz igazítását: „germlining”) standard molekuláris biológiai módszerekkel, specifikus mutációk bevezetésével (például: helyre irányuló mutagenezis; PCR-közvetített mutagenezis; és hasonlók) végezhetjük el.
Miután egy találmány szerinti antitestet egy rekombináns immunglobulinbemutató gyűjteményből kiszűrtünk és izoláltunk, a kiválasztott antitestet kódoló nukleinsavat kinyerhetjük a display-csomagból (például a fág genomból) és más expressziós vektorokba klónozhatjuk be standard rekombináns DNS-technikák segítségével. Ha kívánt, a nukleinsavat tovább manipulálhatjuk, hogy más találmány szerinti antitestformákat hozzunk létre (például: további immunglobulindoméneket - például további konstans szakaszokat - kódoló nukleinsavhoz kapcsolhatjuk). Egy kombinatorikus gyűjteményből szűrés révén izolált rekombináns humán antitest kifejezéséhez az antitestet kódoló DNS-t rekombináns expressziós vektorba klónozzuk be, majd emlősgazdasejtbe vezetjük be, ahogyan fent, a II. fejezetben leírtuk
IV. Gyógyszerkészítmények és alkalmazásuk
A találmány szerinti antitesteket és antitestrészeket betegnek való beadásra alkalmas gyógyszerkészítményekbe vihetjük be. A gyógyszerkészítmény általában egy találmány szerinti antitestet vagy antitestrészt és egy gyógyszerészetileg engedélyezett vivőanyagot tartalmaz. A „gyógyszerészetileg engedélyezett vivőanyag” alatt bármilyen és minden olyan oldószer, diszpergálószer, bevonószer, antibakteriális és antifungális szer, izotonicitást biztosító és abszorpciót késleltető szer és hasonló értendő, amelyek fiziológiailag kompatibilisek. Gyógyszerészeti szempontból elfogadott vivőanyag például a víz, konyhasóoldat, foszfáttal pufferolt konyhasóoldat, dextrózoldat, glicerin, etanol és hasonlók, valamint ezek kombinációi. Sok esetben előnyös lehet, ha toxicitást befolyásoló szereket adunk a készítményhez, például cukrokat, polialkoholokat
- mint a mannit és szorbit - vagy nátrium-kloridot A gyógyszerészetileg engedélyezett vivőanyagok tartalmazhatnak még kis mennyiségű kisegítőanyagokat is, mint például nedvesítő- vagy emulgeálóanyagokat, konzerválószereket vagy pufiereket, amelyek az antitest vagy antitestrész tárolási idejét növelik és hatásosságát fokozzák.
A találmány szerinti készítmény változatos formákban állhat rendelkezésre. Ilyenek például a folyadék, félig szilárd és szilárd dozírozási formák, azaz a folyékony oldatok (például injekciós és infúziós oldatok), diszperziók vagy szuszpenziók, tabletták, pirulák, porok, liposzómák és kúpok. Az előnyös forma a bevitel és a terápiás alkalmazás tervezett módjától függ. Az előnyös készítmények rendszerint injekciós vagy infúziós oldatok formájában állnak rendelkezésre. Az ilyen készítmények hasonlóak azokhoz, amelyeket emberek más antitestekkel való passzív immunizálásához használnak. A beadás előnyösen parenterálisan (például: intravénásán, szubkután, intraperitoneálisan, intramuszkulárisan) történik. Egy előnyös kiviteli forma szerint az antitestet intravénás infúzióval vagy injekcióval juttatjuk be. Egy másik előnyös kiviteli forma szerint az antitestet intramuszkuláris vagy szubkután injekcióban adjuk be.
A terápiás készítményeknek az előállítás és tárolás körülményei között sterilnek és stabilnak kell lenniük. A készítmény oldat, mikroemulzió, diszperzió, liposzóma gyógyszerformában formulázható, vagy más olyan javallt formában, amely alkalmas magas gyógyszer-koncentrációhoz. Steril injekciós oldatokat úgy készítünk, hogy az aktív vegyület (azaz antitest vagy antitestrész) előírt mennyiségét bevisszük megfelelő oldószerbe, a fent felsorolt egy vagy több alkotórésszel kombinálva, és ha szükséges, ezután szűréssel sterilizáljuk. A diszperziókat áltálában úgy készítjük, hogy az aktív vegyületet olyan steril vivőanyagba visszük be, amely egy bázikus diszpergálóanyagot és a fent felsoroltak közül a szükséges egyéb alkotórészeket tartalmazza. Steril porok esetében, amelyekből steril injekciós oldatokat készítünk, a készítés előnyös módszere a vákuumszárítás és liofilizálás. A liofílizálással port állítunk elő az aktív hatóanyag plusz az összes többi kívánt alkotórész előzőleg sterilre szűrt oldatából. Egy oldat megfelelő fluiditása például bevonatanyag
- ilyen a lecitin - használatával tartható fenn, továbbá diszperziók esetében a kívánt részecskenagyság fenntartásával és felületaktív anyagok használatával. Az injekciós készítmények meghosszabbított abszorpciója úgy biztosítható, hogy a készítménybe egy olyan szert viszünk be, amely késlelteti az abszorpciót, például monosztearátsókkal és zselatinnal.
A találmány szerinti antitestek és antitestrészek a szakma által ismert számos módszerrel alkalmazhatók, bár ami a sokféle terápiás használatot illeti, az alkalmazás előnyben részesített útja/módja az intravénás injekció vagy infúzió. A szakterületen jártas szakemberek tudják, hogy az alkalmazás útja és/vagy módja a kívánt
HU 221 984 Β1 eredményektől függően változik. Bizonyos kiviteli alakokban az aktív vegyületet olyan vivőanyaggal készíthetjük, amely megvédi a vegyületet a gyors felszabadulástól. Ilyenek a szabályozott leadást biztosító gyógyszerformák, például az implantátumok, a transzdermális tapaszok és a mikrokapszulás leadórendszerek. Használhatók biodegradálható, biokompatibilis polimerek, ilyenek az etilén-vinil-acetát, polianhidridek, poliglikolsavak, kollagén, poliorto-észterek és politejsav. Ezen gyógyszerformák előállításának számos módszerét szabadalmaztatták vagy pedig általánosan ismertek a gyakorlott szakemberek előtt. Lásd például: Sustained and Controlled Release Drog Delivery Systems, J. R. Robinson (szerk.) Marcel Dekker, Inc., New York, 1978.
Néhány kiviteli forma szerint egy találmány szerinti antitest vagy antitestrész orálisan alkalmazható, például inért oldatban vagy asszimilálható, ehető vivőanyagban. A vegyületet (és más alkotórészeket is, ha kívánt) bevihetjük kemény vagy lágy falú zselatinkapszulákba, tablettázhatjuk, vagy közvetlenül a beteg ételébe is bekeverhetjük. Orális terápiás alkalmazáshoz a ve-, gyületeket kötőanyagokkal együtt formulázhatjuk, és lenyelhető tabletták, bukkális tabletták, pasztillák, kapszulák, elixírek, szuszpenziók, szirupok, ostyák és hasonló formákban használhatjuk. Amennyiben a találmány szerinti vegyületet nem parenterálisan alkalmazzuk, szükség lehet arra, hogy a vegyületet olyan anyaggal vonjuk be, vagy a vegyületet olyan anyaggal együtt adjuk be, amely megvédi az inaktiválódástól.
Kiegészítő aktív vegyületeket is bevihetünk a készítményekbe. Bizonyos kiviteli formákban a találmány szerinti antitest vagy antitestrészt együtt formulázzuk és/vagy együtt alkalmazzuk egy vagy több további olyan terápiás szerrel, amelyek hasznosak az olyan rendellenességek kezelésében, amelyekben a TNFa-aktivitás ártalmas. Például: a találmány szerinti anti-hTNFa antitestet vagy antitestrészt együtt formulázhatjuk egy vagy több további olyan antitesttel, amelyek más célantigénekhez kötődnek (például: olyan antitestekkel, amelyek más citokineket körnek meg, vagy amelyek sejtfelületi molekulákhoz kötődnek), például egy vagy több citokinhez, oldható TNFa-receptorhoz (lásd például a WO 94/06476 számon közzétett nemzetközi PCT szabadalmi iratokat) és/vagy egy vagy több olyan kémiai anyaghoz, amelyek gátolják a hTNFa-termelődést vagy -aktivitást (ilyenek a ciklohexán-ilidénszármazékok, amelyeket a WO 93/19751 számon közzétett nemzetközi PCT szabadalmi iratok ismertetnek). Ezenkívül egy vagy több találmány szerinti antitest két vagy több, előzőekben említett terápiás szerrel kombinálva használható. Az ilyen kombinált terápiákban az alkalmazott terápiás szerekből eredményesen használhatunk alacsonyabb adagokat, miáltal elkerüljük a lehetséges toxikus tüneteket, vagy azokat a szövődményeket, amelyek a különböző monoterápiákhoz társulnak.
A találmány szerinti antitest vagy antitestrész például a következő (nem kizárólag) rheumatoid arthritisnél használt terápiás szerekkel kombinálható : nem szteroid gyulladásgátló szerek (non-steroiddal antiinflammatory drog(s)=NSAIDs); citokin szuppresszív gyulladásgátló szerek (cytokine suppressive antiinflammatory drog(s)=CSAIDs); CDP-571/BAY-1O3356 (humanizált anti-TNFa antitest; Celltech/Bayer); cA2 (kiméra anti-TNFa antitest; Centocor); 75 kdTNFR-IgG [75 kD TNF receptor-IgG fúziós protein; Immunex; lásd például: Arthritis and Rheumatism, 37, S295 (1994); J. Invest. Med., 44, 235A (1996)]; 55 kdTNFR-IgG (55 kD TNF receptor-IgG fúziós protein; Hoffmann-LaRoche); IDEC-CE9.1/SB 210396 [nem kimerített primatizált anti-CD4 antitest; IDEC/SmithKline, lásd például: Arthritis and Rheumatism, 38, S185 (1995)]; DAB 486-IL-2 és/vagy DAB 389-IL-2 (IL-2 fúziós proteinek; Seragen; lásd például: Arthritis and Rheumatism, 36, 1223 (1993); Anti-Tac (humanizált anti-IL-2Ra; Protein Desing Labs/Roche); IL-4 (gyulladásgátló citokin; DNAX/Schering); IL-10 (SCH 52 000; rekombináns IL-10, gyulladásgátló citokin; DNAX/Schering); IL-4, IL-10 és/vagy IL-4 agonisták (például agonista antitestek); IL-1RA (IL-1 receptorantagonista; Synergen/Amgen); TNF-bp/s-TNFR [oldható TNFkötő protein; lásd például: Arthritis and Rheumatism, 39, 9. szupplementum, S284; Amer. J. Physiol-Heart and Circulatory Physiology, 268, 37-42 (1995)]; R973401 [foszfo-diészteráz IV típusú inhibitor; lásd például: Arthritis and Rheumatism, 39, 9. szupplementum, S282 (1996)]; MK-966 [COX-2-inhibitor; lásd például: Arthritis and Rheumatism, 39, 9. szupplementum, S81 (1996)]; Iloprost [lásd például: Arthritis and' Rheumatism, 39, 9. szupplementum, S82 (1996)]; metotrexát; talidomid [lásd például: Arthritis and Rheumatism, 39, 9. szupplementum, S282 (1996)} és a talidomiddal rokon gyógyszerek (például: Celgen); leflunomid [gyulladásgátló és citokininhibitor; lásd például: Arthritis and Rheumatism, 39, 9. szupplementum, S13 (1996); Inflammation Research, 45, 103-107 (1996)]; tranexaminsav [a plazminogén aktiválódás inhibitora; lásd például: Arthritis and Rheumatism, 39, 9. szupplementum, S284 (1996)]; T-614 [citokininhibitor, lásd például: Arthritis and Rheumatism, 39, 9. szupplementum, S282 (1996)]; prosztaglandin El [lásd például: Arthritis and Rheumatism, 39, 9. szupplementum, S282 (1996)]; Tenidap [nem szteroid gyulladásgátló szer; lásd például: Arthritis and Rheumatism, 39,
9. szupplementum, S280 (1996)]; Naproxen [nem szteroid gyulladásgátló szer; lásd például: Neuro Report, 7, 1209-1213 (1996)]; Meloxicam (nem szteroid gyulladásgátló szer); Ibuprofen (nem szteroid gyulladásgátló szer); Piroxicam (nem szteroid gyulladásgátló szer); Diclofenac (nem szteroid gyulladásgátló szer); Indomethacin (nem szteroid gyulladásgátló szer); Sulfásalazine [lásd például: Arthritis and Rheumatism, 39, 9. szupplementum, S281 (1996)]; Azathioprine [lásd például: Arthritis and Rheumatism, 39, 9. szupplementum, S281 (1996)]; ICE-inhibitor (az interleukin-ΐβ konvertáló enzim inhibitora); zap-70 és/vagy lek-inhibitor (zap-70 vagy lek tirozinkináz-inhibitor); VEGF-inhibitor és/vagy VEGF-R-inhibitor (vaszkuláris endoteliális sejtnövekedési faktor vagy vaszkuláris
HU 221 984 Bl endoteliális sejtnövekedési faktorreceptor-inhibitorok; angiogenezis-inhibitorok); kortikoszteroid gyulladásgátló szerek (például SB203580); TNF-konvertáz-inhibitorok; anti-IL-12 antitestek; interleukin-11 [lásd például; Arthritis and Rheumatism, 39, 9. szupplementum, S296 (1996)]; interleukin-13 [lásd például; Arthritis and Rheumatism, 39, 9. szupplementum, S308 (1996)]; interleukin-17 inhibitorok [lásd például: Arthritis and Rheumatism, 39, 9. szupplementum, S120 (1996)]; gold; penicill-amin; klorokin; hidroxiklorokin; klór-ambucil; ciklofoszfamid; ciklosporín, teljes limfoid besugárzás; antitimocita-globulin; anti-CD4 antitestek; CD5-toxinok; orálisan alkalmazott peptidek és kollagén; lobenzarit dinátriumsó; Cytokine Regulating Agents (CRAs) HP228 és HP466 (Houghten Pharmaceuticals, Inc.); ICAM-1 antiszensz foszforotioát oligodezoxi-nukleotidok (ISIS 2302; Isis Pharmaceuticals, Inc.); oldható komplementreceptor 1 (ΤΡΙΟ; T Cell Sciences, Inc.); prednizon; orgotein; glúkóz-amino-glükán-poliszulfát; minociklin; anti-IL2R antitestek; halfélékből származó és botanikai lipidek [halés növényi mageredetű zsírsavak; lásd például DeLuca et al., Rheum. Dis. Clin. North. Am., 21, 759-777 (1995)]; auranofin; fenil-butazon; meklofenaminsav; flufenaminsav; intravénás immunglobulin; zileuton; mikrofenolsav (RS-61443); takrolimusz (FK.-506); szirolimusz (rapamicin); amiprilóz (terafektin); kladribin (2-klór-dezoxi-adenozín); és azaribin.
Egy találmány szerinti antitest vagy antitestrész például a következő (nem kizárólag) gyulladásos bélbetegségnél használt terápiás szerekkel kombinálható: budenozid; epidermális növekedési faktor, kortikoszteroidok; ciklosporín; szulfaszalazin; amino-szalicilátok;
6-merkapto-purin; azatioprin; metronidazol; lipoxigenáz-inhibitorok; mezalamin; olszalazin; balszalazid; antioxidánsok; tromboxáninhibitorok; IL—1 receptor antagonisták; anti-IL-Ιβ monoklonális antitestek; antiIL-6 monoklonális antitestek; növekedési faktorok; elasztázinhibitorok; pridinil-imidazol-vegyületek; CDP-571/BAY-3356 (humanizált anti-TNFa antitest; Celltech/Bayer); cA2 (kimérd anti-TNFa antitest; Centocor); 75 kdTNFR-IgG [75 kD TNF receptor-IgG fúziós protein; Immunex, lásd például: Arthritis and Rheumatism, 37, S295 (1994); J. Invest. Med., 44, 235A (1996)]; 55 kdTNFR-IgG (55 kD TNF receptor-IgG fúziós protein; Hoffinann-LaRoche); interleukin-10 (SCH 52 000; Schering-Plough); IL-4, IL-10 és/vagy IL-4 antagonisták (például: agonista antitestek); interleukin-11; a prednizolon, dexametazon vagy budezonid glukuroniddal vagy dextránnal konjugált gyógyszer előtermékei; ICAM-1 antiszensz foszforotioát oligodezoxinukleotidok (ISIS 2302; Isisi Pharmaceuticals, Inc.); oldható komplementreceptor 1 (ΤΡΙΟ; T Cell Sciences, Inc.); lassan felszabaduló meszalazin; metotrexát; Platelet Activating Factor (PAF) antagonisták; ciprofloxacin; és lignokain.
Egy találmány szerinti antitest vagy antitestrész például a következő (nem kizárólag) szklerózis multiplexnél használt terápiás szerekkel kombinálható : kortikoszteroidok; prednizolon; metilprednizolon; azatioprin;
ciklofoszfamid; ciklosporín; metotrexát; 4-amino-piridin; tizanidin; interferencia (Avonex™; Biogen); interferonClb (Betaseron™; Chiron/Berlex); Copolymer 1 (Cop-1; Copaxone™; Teva Pharmaceutical Industries, Inc.); magas nyomású oxigén; intravénás immunglobulin; klabribin; CDP-571/BAY-10-3356 (humanizált anti-TNFa antitest; Celltech/Bayer); cA2 (Iáméra anti-TNFa antitest; Centocor); 75 kdTNFR-IgG [75 kD TNF receptor-IgG fúziós protein; Immunex; lásd például Arthritis and Rheumatism, 37, S295 (1994); J. Invest. Med., 44, 235A (1996)}; 55 kdTNFRIgG (55 kD TNF receptor-IgG fúziós protein; Hoffinann-LaRoche); IL-10, IL-4; és IL-10 és/vagy IL-4 agonisták (például agonista antitestek).
Egy találmány szerinti antitest vagy antitestrész például a következő (nem kizárólag szepszisnél használt terápiás szerekkel kombinálható: hipertóniás sóoldatok; antibiotikumok; intravénás gammaglobulin; folyamatos hemofíltráció; karbapenemek (például: meropenem); citokinantagonisták, mint TNFa, IL-Ιβ, IL-6 és/vagy IL-8 antagonisták; CDP-571/BAY-103356 (humanizált anti-TNFa antitest; Celltech/Bayer); cA2 (kiméra anti-TNFa antitest; Centocor); 75 kdTNFR-IgG [75 kD receptor-IgG fúziós protein; Immunex; lásd például: Arthritis and Rheumatism, 37,. S295 (1994); J. Invest. Med., 44, 235A (1996)]; 55 kdTNFR-IgG [55 kD TNF receptor-IgG fúziós protein; Hoffinann-LaRoche); Cytokine Regulating Agents (CRAs) HP228 és HP466 (Houghten Pharmaceuticals, Inc.); SK&F 107647 (alacsony molekulatömegű peptid; SmithKline Beecham); tetravalens guanilhidrazon CNI-1493 (Picower Institute); Tissue Factor Pathway Inhibitor (TFPI, Chiron); PHP (kémiailag módosított hemoglobin; APEX Bioscience); vas kelátképzők és kelátok, beleértve a dietilén-triamin pentaecetsav-vas(III)-komplexet (DTPA vas(III); Molichem Medicines); lizofillin (szintetikus kis molekulájú metilxantin; Cell Therapeutics, Inc.); PGG-Glucan (vízben oldódó β1,3 glukán; Alpha-Beta Technology); apolipoprotein A-l, lipidekkel feltöltve; királis hidroxámsavak (szintetikus antibakteriális szerek, amelyek gátolják a lipid A bioszintézisét); antiendotoxin antitestek; E5531 (szintetikus lipid A antagonisták; Eisai America, Inc.); rBPI21 (humán Bactericidal/Permeability-Increasing Protein rekombináns N-terminális fragmentuma); és Synthetic Anti-Endotoxin Peptides (SAEP; BiosYnth Research Laboratories).
Egy találmány szerinti antitest vagy antitestrész például a következő (nem kizárólag) felnőttkori respirációs distressz-szindróma (aduit respiratory distress syndrome=ARDS) esetén használt terápiás szerekkel kombinálható: anti-IL-8 antitestek; felületaktív anyag bejuttatásával (pótlásával) végzett terápia; CDP-571/BAY-103356 (humanizált anti-TNFa antitest; Celltech/Bayer); cA2 (kiméra anti-TNFa antitest; Centocor); 75 kdTNFRIgG [75 kD TNF receptor-IgG fúziós protein; Immunex, lásd például: Arthritis and Rheumatism, 37, S295 (1994),
J. Invest. Med., 44, 235A (1996)]; és 55 kdTNFR-IgG (55 kD TNF receptor IgG-fúziós protein; Hoffmann-LaRoche).
HU 221 984 Bl
A találmány szerinti antitestek vagy antitestrészek más terápiás szerekkel való kombinálását a továbbiakban a IV. alfejezetben tárgyaljuk.
A találmány szerinti készítmények egy találmány szerinti antitest vagy antitestrész „terápiásán hatásos mennyiségét” vagy „profilaktikusan hatásos mennyiségét” tartalmazhatják. A „terápiásán hatásos mennyiség” olyan hatásos mennyiségre utal, amellyel a szükséges adagolás mellett és időtartam alatt elérhető a kívánt terápiás eredmény. Az antitest vagy antitestrész terápiásán hatásos mennyisége például a következő faktorok szerint változhat: a betegség státusától, az egyén korától, nemétől, súlyától és az antitest vagy antitestrész azon képességétől, hogy kiváltja-e a kívánt választ az egyénben. A terápiásán hatásos mennyiség olyan mennyiség, amelyben az antitest vagy antitestrész minden toxikus vagy káros hatását ellensúlyozzák a terápiásán jótékony hatások. Egy „profilaktikusan hatásos mennyiség” olyan hatásos mennyiséget jelent, amellyel a szükséges adagolás mellett és időtártam alatt elérhető a kívánt profilaktikus eredmény. Minthogy profilaktikus dózist a betegeknél a betegség előtt vagy a betegség egy korai szakaszában használunk, a profilaktikusan hatásos mennyiség általában kevesebb lesz, mint a terápiásán hatásos mennyiség.
A dozírozási protokollt úgy állíthatjuk be, hogy az az optimálisan kívánt választ nyújtsa (például egy terápiás vagy profilaktikus választ). Például: alkalmazhatunk egyetlen boluszt, alkalmazhatunk több osztott dózist egy bizonyos ideig, vagy pedig arányosan csökkenthetjük vagy növelhetjük a dózist a terápiás helyzet követelményeinek megfelelően. A parenterális készítmények egyadagos formulázása különösen előnyös az alkalmazás megkönnyítése és az adagolás egyenletessége miatt. Az ezen leírásban szereplő egyadagos forma fizikailag különálló egységeket jelent, amelyek, mint egységes adagok, megfelelőek a kezelendő emlős betegek számára; mindegyik egység az aktív vegyület egy előre meghatározott mennyiségét tartalmazza, amely számítás szerint a kívánt terápiás hatást eredményezi az előírt gyógyszerészeti vivőanyaggal együtt. A találmány szerinti egyadagos formákra vonatkozó előírást (a) az aktív vegyület jellemző tulajdonságai és az elérendő speciális terápiás vagy profilaktikus hatás és (b) az egyének érzékenységének megfelelő kezeléshez szolgáló ezen aktív vegyületek elkészítési módjával együtt járó megszorítások szabják meg és az említett előírás ezektől függ.
A találmány szerinti antitest vagy antitestrész terápiásán vagy profilaktikusan hatásos mennyisége - nem kizárólag - 0,1-20 mg/kg, előnyösen 1-10 mg/kg tartományban van. Megjegyzendő, hogy az adagolási értékek az enyhítendő állapot típusa és súlyossága szerint változhatnak. Továbbá magától értetődik, hogy minden konkrét beteg számára specifikus dozírozási protokollt kell időre beállítani az egyén szükséglete szerint és az alkalmazást végző vagy a készítmény alkalmazását ellenőrző személy szakszerű megítélése szerint. Magától értetődik továbbá, hogy az itt ismertetett adagtartományok csupán példák, amelyekkel nem óhajtjuk korlátozni a találmány szerinti készítmény alkalmazási területét vagy gyakorlatát.
IV. A találmány szerinti antitestek felhasználási területe
Amennyiben a találmány szerinti anti-hTNFa antitestek vagy részeik meg tudják kötni a hTNFa-t, akkor felhasználhatók a hTNFa kimutatására (például egy biológiai mintában, mint a szérum vagy plazma) egy szokásos immunassay-ben. Ilyen az enzim-immunassay (enzyme-linked immunosorbent assay=ELISA), a radioimmunassay (RIA) vagy a szöveti immunhisztokémia. A találmány módszert ad a hTNFa biológiai mintákban való kimutatására, amely abból áll, hogy a biológiai mintát összehozzuk egy találmány szerinti antitesttel vagy antitestrésszel, és vagy a hTNFa-hoz kötött antitestet (vagy antitestrészt) vagy a kötetlen antitestet (vagy antitestrészt) detektáljuk, miáltal a hTNFa-t mutatjuk ki a biológiai mintában. Az antitestet vagy közvetlenül, vagy közvetve, egy kimutatható anyaggal jelezzük, hogy megkönnyítsük a kötött vagy kötetlen antitest észlelését. Alkalmas kimutatható anyagok például a különböző enzimek, prosztetikus csoportok, fluoreszkáló anyagok, lumineszkáló anyagok és radioaktív anyagok. Megfelelő enzimek például a kővetkezők: torma-peroxidáz, alkalikus foszfatáz, β-galaktozidáz vagy acetilkolin-észteráz; alkalmas prosztetikus csoportkomplexek közé tartozik például a sztreptavidin (biotin és avidin) és biotin; megfelelő fluoreszcenciát adó anyagok például a következők: umbelliferon, fluoreszcein, fluoreszcein-izotio-cianát, rodamin, diklór-triazinil-amin-fluoreszcein, danzil-klorid vagy fikoeritrin; lumineszkáló anyag például a luminol; alkalmas radioaktív anyag a 1251, 133I, 35S vagy 3H.
Az antitest jelölésén kívül - alternatív megoldásként - biológiai folyadékokban a hTNFa kompetitiv immunassay-vel vizsgálható. Ebben, kimutatható anyaggal jelzett rhTNFa standardokat és egy jelzetlen antihTNFa antitestet használunk. A vizsgálatban a biológiai folyadékot összehozzuk a jelzett rhTNFa standardokkal és az anti-hTNFa antitesttel, és a jelzetlen antitesthez kötődött jelzett rhTNFa standard mennyiségét meghatározzuk. A biológiai mintában lévő hTNFa mennyisége fordított arányban van az anti-hTNFa antitesthez kötődött jelzett rhTNFa standard mennyiségével.
A találmány szerinti D2E7 antitest is felhasználható nem humán eredetű, hanem más fajokból származó TNFa-k kimutatására, különösen főemlősökből (például: csimpánz, pávián, selyemmajom, közönséges makákó és rhesus majom), sertésből és egérből származó TNFa-k esetében, minthogy a D2E7 mindezen fajok TNFa-it meg tudja kötni (a téma további megbeszélését lásd a 4. példa E. fejezetében).
A találmány szerinti antitestek és antitestrészek képesek a hTNFa-aktivitás neutralizálására mind in vitro, mind in vivő (lásd a 4. példát). Ezenfelül legalább néhány találmány szerinti antitest - ilyen a D2E7 - más fajok TNFa-aktivitását is képes neutralizálni. Ennek megfelelően a találmány szerinti antitesteket és antitestrészeket fel tudjuk használni a TNFa-aktivitás gátlására például hTNFa-t tartalmazó sejttenyészetekben, és
HU 221 984 Β1 olyan TNFa-kat tartalmazó emberekben és más emlősökben (ilyenek a csimpánz, pávián, selyemmajom, közönséges makákó és rhesus majom, a sertés vagy egér), amelyekkel egy találmány szerinti antitest keresztreagál. Egy kiviteli formában a találmány módszert ad a TNFa-aktivitás gátlására. Ez abból áll, hogy a TNFa-t olyan módon hozzuk érintkezésbe egy találmány szerinti antitesttel vagy antitestrésszel, hogy ez gátolja a TNFa aktivitását. Előnyös, ha a TNFa humán TNFa. Például: egy olyan sejttenyészet esetén, amely hTNFa-t tartalmaz, vagy gyanítjuk, hogy hTNFa-t tartalmaz, egy találmány szerinti antitestet vagy antitestrészt adhatunk a táptalajhoz, hogy a tenyészetben meggátoljuk a hTNFa aktivitását.
Egy másik kiviteli alakban a találmány módszert biztosít a hTNFa-aktivitás gátlására egy olyan rendellenességben szenvedő betegben, amelyben a TNFaaktivitás káros hatású. A TNFa a rendellenességek széles változatának patofiziológiájában szerepel [lásd például: A. Moeller et al., Cytokine, 2, 162-169 (1990); 5,231,024 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás (Moeller et al.), 260 610 B1 számon közzétett európai szabadalmi leírás (A. Moeller)]. A találmány módszert ismertet a TNFa-aktivitás gátlására egy olyan betegben, aki ilyen rendellenességben szenved. A módszer szerint a betegnél egy találmány szerinti antitestet vagy antitestrészt olyan módon alkalmazunk, hogy a betegben a TNFa aktivitását gátolják. Előnyös, ha a TNFa humán TNFa, és ha a beteg egy beteg ember. A beteg egy TNFa-t kifejező olyan emlős is lehet, amellyel a találmány szerinti antitest keresztreakciót ad. A beteg egy olyan emlős is lehet, amelybe hTNFa-t vittek be (például hTNFa bevitelével vagy egy hTNFa transzgén expressziója révén). Egy találmány szerinti antitest beteg embernél is alkalmazható terápiás célból (alább még tárgyaljuk). A találmány szerinti antitestet ezenkívül TNFa-t kifejező nem humán emlősnél (ilyen egy főemlős, sertés vagy egér) is alkalmazhatjuk - amennyiben ezen antitest a TNFa-val keresztreagál - állatorvoslási céllal, vagy ha az emlős egy humán betegség állatmodellje. Ami ez utóbbit illeti, az ilyen állatmodellek hasznosak lehetnek a találmány szerinti antitestek terápiás hatékonyságának kiértékelésében (például: az adagolás és az alkalmazás időtartamának tesztelésében).
„Egy rendellenesség, amelyben a TNFa-aktivitás káros hatású” megállapítással olyan betegségekre és más rendellenességekre utalunk, amelyekben kimutatták, hogy a rendellenességben szenvedő betegben jelen lévő TNFa felelős vagy feltételezhetően felelős a zavar kórélettani okáért, vagy egy olyan faktor, amely hozzájárul a rendellenesség rosszabbodásához. Ennek megfelelően egy rendellenesség, amelyben a TNFa-aktivitás káros hatást fejt ki, egy olyan rendellenesség, amelyben a TNFa-aktivitás gátlása feltehetően enyhíteni fogja a tüneteket és/vagy a kórfolyamat súlyosbodását. Az ilyenfajta zavarokat például azzal támaszthatjuk alá, ha a betegségben szenvedő beteg egy biológiai folyadékában a TNFa-koncentráció megnő (például : egy beteg szérumában, plazmájában, szinoviális folyadékában stb. megnő a TNFa-koncentráció), és ez - például a fent leírtak szerint - egy anti-TNFa antitesttel kimutatható. Az olyan betegségekre számos példa van, amelyekben a TNFa-aktivitás káros hatású. A találmány szerinti antitestek és antitestrészek használatát a speciális betegségek kezelésében az alábbiakban tárgyaljuk meg.
A. Szepszis
A tumomekrózis-faktomak meghatározó szerepe van a szepszis patofiziológiájában, amely olyan biológiai hatásokkal jár, mint az alacsony vérnyomás, miokardiális szupresszió (szívizomgátlás), étrendszeri szivárgási szindróma, szervelhalás, toxikus, másodlagos mediátorok felszabadulásának stimulálása, és az alvadási kaszkád aktiválódása [lásd például: A. Moeller et al., Cytokine, 2, 162-169 (1990); 5,231,024 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás (Moeller et al.) 260 610 B1 számon közzétett európai szabadalmi leírás (A. Moeller); K. J. Tracey, A. Cerami, Annu. Rév. Med. 45, 491-503 (1994); D. Russel, R. C. Thompson, Curr. Opin. Biotech., 4, 714-721 (1993)]. A találmány szerinti humán antitestek és antitestrészek tehát felhasználhatók a szepszis kezelésére, annak minden klinikai megnyilvánulásánál, beleértve a szeptikus sokkot, endotoxikus sokkot, Gram-negatív-szepszist és a toxikussokk-szindrómát.
A szepszis kezelésében ezenkívül egy találmány szerinti anti-hTNFa antitestet vagy antitestrészt együtt alkalmazhatunk egy vagy több egyéb olyan terápiás szerrel, amelyek tovább enyhíthetik a szepszist, ilyen egy interleukm-1 inhibitor (lásd a WO 92/16221' és WO 92/17583 számon közzétett PCT nemzetközi szabadalmi leírásokat), a citokin interleukin-6 (lásd a WO 93/11793 számon közzétett PCT nemzetközi szabadalmi leírást), vagy egy trombocitaaktiváló faktor antagonista (lásd például az EP 374 510 számon közzétett európai szabadalmi bejelentést). A szepszis kezelésére szolgáló további kombinációs terápiákat a III. alfejezet tárgyalja.
Egy előnyös kiviteli alakban ezenkívül egy találmány szerinti anti-TNFa antitestet vagy antitestrészt adunk be a szepszises betegek egy alcsoportjához tartozó olyan beteg embernek, akinek a szérumában vagy plazmájában a kezelés időpontjában az IL-6 koncentrációja 500 pg/ml felett van, és előnyösebben 1000 pg/ml [lásd a WO 95/20978 számon közzétett PCT nemzetközi szabadalmi leírást (L. Daum et al.)].
B. Autoimmun betegségek
Megállapították, hogy a tumomekrózis-faktor szerepet játszik a különböző autoimmun betegségek kórélettanában. A TNFa részt vesz például a szövetgyulladás aktiválásában és rheumatoid arthritisben ízületi károsodást okoz [lásd például: A. Moeller et al., Cytokine, 2, 162-169 (1990); 5,231,024 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás (Moeller et al.); 260 610 B1 számon közzétett európai szabadalmi leírás (A. Moeller); Tracey és Cerami, lásd fentebb; W. P. Arend, J. M. Dayer, Arth. Rheum., 38, 151-160 (1995); R. A. Fava et al., Clin. Exp. Immunoi., 94, 261-266 (1993)]. A TNFa-nak szerepe van a szigetsej19
HU 221 984 Bl tek elhalásának előmozdításában és az inzulinrezisztencia közvetítésében cukorbetegségben [lásd például: Tracey és Ceramí, lásd fentebb; WO 94/08609 számon közzétett nemzetközi PCT szabadalmi leírás]. TNFa játszik szerepet az oligodendrocitákkal szembeni citotoxicitás közvetítésében és a gyulladásos plakkok indukációjában szklerózis multiplexben (például: Tracey és Cerami, lásd fentebb). Kiméra és humanizált egér-antihTNFa antitesteket teszteltek már klinikán rheumatoid arthritis kezelésében [lásd például: M. J. Elliott et al., Láncét, 344, 1125-1127 (1994); M. J. Elliott et al., Láncét, 344, 1105-1110 (1994); E. C. Rankin et al., Br. J. Rheumatol., 34, 334-342 (1995)].
A találmány szerinti humán antitesteket és antitestrészeket fel lehet használni autoimmun betegségek kezelésében, különösen azokban, amelyek gyulladással járnak. Ilyenek a rheumatoid arthritis, rheumatoid spondylitis, osteoarthritis és köszvény-arthritis, allergia, szklerózis multiplex, autoimmun diabétesz, autoimmun uveitis és veseszindróma. Az antitestet vagy antitestrészt általában szisztémásán alkalmazzuk, bár néhány betegség esetén az antitest vagy antitestrész lokális alkalmazása a gyulladás helyén, jótékony hatású lehet (ilyen például rheumatoid arthritisben az ízületekben való lokális adás, vagy helyi alkalmazás diabetikus fekélyekre, vagy egyedül, vagy egy ciklohexán-ilidén-származékkal kombinálva, ahogyan ezt a WO 93/19751 számon közzétett PCT nemzetközi szabadalmi iratokban ismertetik). Egy találmány szerinti antitest, vagy antitestrész egy vagy több további olyan terápiás szerrel együtt is alkalmazható, amelyek az autoimmun betegségek kezelésére alkalmasak, mint ezt alább a III. fejezetben megvitatjuk.
C. Fertőző betegségek
Megállapították, hogy a tumomekrózis-faktor egy sor fertőző betegségben észlelt biológiai hatást közvetít. A TNFa részt vesz például maláriában az agyvelőgyulladás, kapilláristrombózis és infarktus kialakulásának közvetítésében. TNFa szerepel meningitisben az agyvelőgyulladás közvetítésében, a vérliquorgátösszeomlás indukciójában, a szeptikussokk-szindróma kiváltásában, és a vénás infarktus aktiválásában. A TNFa részt vesz a cachexia indukciójában, a virális proliferáció stimulálásában és szerzett immunhiányos szindrómában (AIDS-ben) a központi idegrendszerkárosodás mediálásában. Tehát a találmány szerinti antitestek és antitestrészek fertőző betegségek - beleértve a meningitist (lásd például a EP 585 705 számon közzétett európai szabadalmi bejelentést), a cerebrális maláriát, az AIDS-t és AIDS-szel összefüggő komplexet (ARC) (lásd például az EP 230 574 számon közzétett európai szabadalmi bejelentést), valamint a transzplantáció utáni szekunder citomegolovírus-fertőzést [lásd például: E. Fietze et al., Transplantation, 58, 675-680 (1994)] - kezelésében használhatók. A találmány szerinti antitestek és antitestrészek felhasználhatók még a fertőző betegségekkel járó tünetek - beleértve a lázat és a fertőzés okozta (például influenza) izomfájdalmat - enyhítésére, és a fertőzés utáni (például az AIDS vagy ARC utáni) másodlagosan kialakult cachexia csökkentésére.
D. Transzplantáció
Megállapították, hogy a tumomekrózis-faktor kulcsmediátorként vesz részt az allograft kilökődésében, a graft versus hőst betegségben (GVDH) és egy olyan adverz reakció közvetítésében, amelyet akkor figyeltek meg, amikor a T-sejt receptor-CD3 komplex elleni OKT3 patkány-antitestet használták transzplantált vesék kilökődésének gátlására [lásd például: J. D. Eason et al., Transplantation, 59, 300-305 (1995); M. Suthanthiran, T. B. Strom, New Engl. J. Med., 331, 365-375 (1994)]. Tehát a találmány szerinti antitesteket és antitestrészeket felhasználhatjuk a transzplantátum kilökődésének gátlására - beleértve az allograftokat és xenograflokat - és a GVDH-gátlásra. Jóllehet az antitestet és antitestrészt magában is használhatjuk, előnyösebb, ha egy vagy több más olyan szerrel együtt használjuk, amelyek az allograft elleni immunválaszt gátolják, vagy a GVDH-t gátolják. Például : az egyik kiviteli alakban egy találmány szerinti antitestet vagy antitestrészt OKT3-mal kombinálva használunk az OKT-indukált reakciók gátlására. Egy másik kiviteli alakban a találmány szerinti antitestet és antitestrészt egy vagy több olyan antitesttel kombinálva használjuk, amelyek más - az immunválaszok szabályozásában részt vevő - célok ellen irányulnak, ilyenek a sejtfelületi molekulák, a CD25 (interleukin-2 receptor-α), CDlla (LFA-1), CD54 (ICAM-1), CD4, CD45, CD28/CTLA4, CD80 (B7-1) és/vagy CD86 (B7-2). Egy még további kiviteli formában a találmány szerinti antitestet vagy antitestrészt egy vagy több általános immunszuppresszív szerrel - mint a ciklosporin A vagy az FK506 - kombinálva használjuk.
E. Malignitás
Rosszindulatú betegségekben a tumomekrózisfaktor a cachexia megindításában, a tumomövekedés stimulálásában, a metasztatikus potenciál fokozásában és a citotoxicitás közvetítésében vesz részt. Tehát a találmány szerinti antitesteket és antitestrészeket felhasználhatjuk a rosszindulatú betegségek kezelésében a tumomövekedés vagy metasztázis gátlására és/vagy a malignitás másodlagos betegségének, a cachexiának az enyhítésére. Az antitest vagy antitestrész szisztémásán vihető be, vagy lokálisan, a tumor helyére adható.
F. Tüdőbetegségek
Tumomekrózis-faktor szerepel a felnőttkori distressz-szindróma (ARDS) patofíziológiájában, beleértve a leukocita endoteliális aktiválás stimulációját, a pneumociták elleni citotoxicitás irányítását és a vaszkuláris szivárgási szindróma indukcióját. A találmány szerinti antitesteket és antitestrészeket tehát fel lehet használni a különböző pulmonális zavarok kezelésére, beleértve a felnőttkori respirációs distressz-szindrómát (lásd például a WO 91/04054 számon közzétett nemzetközi PCT szabadalmi leírást), a sokk tüdőt, a krónikus tüdőgyulladást, a pulmonális sarcoidosist, pulmonális fibrózist és szilikózist. Az antitest vagy antitestrész szisztémásán adható, vagy lokálisan vihető be a tüdő felszínére, például aeroszol formában. A találmány szerinti antitest vagy antitestrész egy vagy több olyan további terápiás szenei alkalmazható, amelyeket pulmo20
HU 221 984 Β1 nális zavarok kezelésében használnak. A továbbiakra vonatkozóan lásd a III. alfejezetet.
G. Bélbetegségek
A tumomekrózis-faktor a gyulladásos bélbetegségek patofiziológiájában is szerepel [lásdpéldául: K. J. Tracy et al., Science, 234, 4Π0-4Ί4 (1986); X-M. Sun et al., J. Clin. Invest., 81, 1328-1331 (1988); T. T. MacDonald et al., Clin. Exp. Immunoi., 81, 301-305 (1990)]. A kiméra egér-anti-hTNFa antitestek klinikai tesztelése a Crohn-betegség kezelésében [Η. M. van Dullemen et al., Gastroenterology, 109, 129-135 (1995)] már megtörtént. A találmány szerinti antitestek és antitestrészek a bélrendszer zavarainak kezelésére is használhatók. Ilyen a gyulladásos bélbetegség, amelyet két tünetegyüttes jellemez: a Crohn-betegség és a colitis ulcerosa. Egy találmány szerinti antitest vagy antitestrész egy vagy több olyan további terápiás szerrel alkalmazható, amelyeket bélrendszeri zavarok kezelésében használnak. A továbbiakra vonatkozóan lásd a III. alfejezetet.
H. Sávbetegségek
A találmány szerinti antitestek és antitestrészek különböző szívbetegségek kezelésére is használhatók. Ilyen a szívisémia (lásd például az EP 453 898 számon közzétett európai szabadalmi bejelentést) és a szívelégtelenség (a szívizom gyengesége) (lásd például a WO 94/20139 számon közzétett nemzetközi szabadalmi bejelentést).
I. Egyéb
A találmány szerinti antitesteket és antitestrészeket különböző más olyan betegségek kezelésére ugyancsak használhatjuk, amelyekben a TNFa-aktivitásnak káros hatása van. A patofiziológia számon tart más olyan betegségekre és rendellenességekre vonatkozó példákat, amelyekben szerepet játszik a TNFa-aktivitás, így ezek is kezelhetők a találmány szerinti antitest vagy antitestrész használatával. Ilyenek például a gyulladásos csontbetegségek és a csontreszorpciós betegség [lásd például: D. R. Bertolini et al., Natúré, 319, 516-518 (1986); A. Konig et al., J. Boné Miner. Rés., 3, 621-627 (1988); U. H. Lemer, A. Ohlin, J. Boné Miner. Rés., 8, 147-155 (1993); és G. Shankar, P. H. Stem, Boné, 14, 871-876 (1993)], a hepatitis, beleértve az alkoholos hepatitist [lásd például: C. J. McClain, D. A. Cohen, Hepatology, 9, 349-351 (1989); Μ. E. Felver et al., Alcohol. Clin. Exp. Rés., 14, 255-259 (1990); J. Hansen et al., Hepatology, 20, 461-474 (1994)], a vírushepatitist [lásd: N. Sheron et al., J. Hepatol., 12, 241-245 (1991); M. J. Hussain et al., J. Clin. Pathol., 47, 1112-1115 (1994)], és a fulmináns hepatitist; továbbá az alvadási zavarok [lásd például: T. van dér Poll et al., N. Engl. J. Med., 322,1622-1627 (1990); T. van dér Poll et al., Prog. Clin. Bioi. Rés., 367, 55-60 (1991)], az égések [lásd például: Β. P. Giroir et al., Am. J. Physiol., 267, H118-124 (1994); X. S. Liu et al., Bums, 20,40-44 (1994)], a reperfüziós sérülés [lásd például: W. E. Scales et al., Am. J. Physiol., 267, G1122-1127 (1994); C. Serrick et al., Transplantation, 58, 1158-1162 (1994); Y. M. Yao et al., Resuscitation, 29,157-168 (1995)], a kelőid képződés [lásd például: R. L. McCauley et al., J. Clin. Immunoi., 12, 300-308 (1992)], a hegszövetképződés, pyrexia, a periodontális betegség, a kóros elhízás és a besugárzásos toxicitás.
A találmányt a következő példákkal szemléltetjük. Ezek azonban nem értelmezendők úgy, hogy korlátozzák a találmány oltalmi körét Az idézett szakirodalmi közleményeket és szabadalmi iratokat ebben a bejelentésben referenciaként tekintjük.
1. példa
Humán antitestek hTNFa-hoz való kötődésének kinetikai analízise
A ligandum [bioszenzor mátrixon immobilizált biotinezett rekombináns humán TNFa (rhTNFa)] és a vizsgált anyag (oldatban lévő antitestek) között valós idő alatt lezajló kölcsönhatásokat (real-time interactions) felületi plazmonrezonancia (SPR=surface plazmon resonance) segítségével mértük, BIAcore rendszer (Pharmacia, Piscataway, NI, USA) használatával. (Plazmon=egy sejt teljes extrakromoszomális állományának gyűjtőneve.) A rendszer egy dextrán bioszenzor-mátrixban a bekövetkező proteinkoncentráciőváltozások észlelésére az SPR optikai tulajdonságait használja fel. A proteineket - ismert koncentrációk mellett - kovalens kötéssel kötjük a dextránmátrixhoz. Amikor antitesteket injektálunk a dextránmátrixon át, az injektált antitestek és az immobilizált ligandum kör'* zött létrejött specifikus kötés megnövekedett mátrixprotein-koncentrációt eredményez, amely változást idézető az SPR szignálban. Az SPR szignál ezen változatait rezonanciaegységként (RU=resonance unit) regisztráljuk, és egy szenzogram y tengelyén az idő függvényében ábrázoljuk.
Annak érdekében, hogy a biotinezett rhTNFa immobilizálását a bioszenzor mátrixon elősegítsük, sztreptavidint kapcsolunk kovalens kötéssel a dextránmátrixhoz szabad amincsoportokon keresztül úgy, hogy először aktiváljuk a mátrix karboxilcsoportjait 100 mM Nhidroxi-szukcinimiddel (NHS) és 400 mM N-etil-N’(3-dietil-amino-propil)-karbodiimid-hidrokloriddal (EDC). Ezután sztreptavidint nyomatunk át az aktivált mátrixon. Harmincöt mikroliter sztreptavidint 25 pg/ml; nátrium-acetátban oldva, pH 4,5 - nyomunk át az aktivált bioszenzoron és a proteinen lévő szabad aminok közvetlenül kötődnek az aktivált karboxilcsoportokhoz, A lereagálatlan EDC-észtereket 1 M etanolamin injektálásával dezaktiváljuk. A sztreptavidinnel konjugált bioszenzorcsipek a kereskedelemből is beszerezhetők (Pharmacia, BR-1000-16; Pharmacia Biosensor, Piscataway, NJ. USA).
A biotinezett rhTNFa-t a következőképpen készítjük: először feloldunk 5,0 mg biotint (D-biotinil-s-amino-kapronsav - N-szukcinimid-észter, Boehringer Mannheim, kát. szám: 1008 960) 500 pl dimetil-szulfoxidban, és így egy 10 mg/ml koncentrációjú oldatot kapunk. Tíz mikroliter biotint adunk az rhTNFa 1 ml-éhez (2,65 mg/ml mellett), hogy egy 2:1 bitón:rhTNFa arányt kapjunk. A reakcióelegyet óvatosan elkeveijük és 2 órán át szobahőmérsékleten, sötét helyen inkubáljuk. Egy
HU 221 984 Β1
PD-10 oszlopot - töltet: Sephadex G-25M (Pharmacia, kát. szám: 17-0851-01) - 25 ml hideg PBS-sel hozunk egyensúlyba és felviszünk rá 2 ml rhTNFa-biotin-t Az oszlopot 10x1 ml hideg PBS-sel eluáljuk. A leszedett frakciókat OD280-on olvassuk le (1,0 OD=1,25 mg/ml). 5 A megfelelő frakciókat egyesítjük és felhasználásig -80 °C-on tároljuk. Biotinezett rhTNFa szintén kapható a kereskedelemben (R&D Systems, Minneapolis, MN., USA; kát. szám: FTA00).
A mátrixon sztreptavidin útján immobilizálandó bio- 10 tinezett rhTNFa-t 0,05% (BIAcore) P20 felületaktív szenei (Pharmacia BR-1000-54, Pharmacia Biosensor, Piscataway, NJ., USA) kiegészített PBS fúttatópufferrel (running buffer) (Gibco BRL, Grand Island, NY., USA; kát. szám: 14190-144) hígítjuk. Az rhTNFa-specifikus 15 antitestek meghatározására kötési vizsgálatot végzünk a következőképpen: a biotinezett rhTNFa részleteit (25 nM; 10 μΐ-es részletek) átnyomatjuk a sztreptavidinnel konjugált dextránmátrixon 5 μΐ/perc átfolyási sebességgel. A protein injekciója előtt és közvetlenül utána egyedül PBS-puffert folyatunk át minden cellán. Az alapszignál és a biotinezett rhTNFa-injekció befejezése után körülbelül 30 másodperccel kapott szignál közötti nettó különbséget tekintjük a kötési érték (körülbelül 500 RU) mértékének. Mértük az rhTNFa-specifikus antitestek immobilizált biotinezett rhTNFa-hoz való közvetlen kötődését is. Az antitesteket PBS fúttatópufferben (20 pg/ml) hígítottuk és 25 μΐ-es részleteket nyomattunk át az immobilizált proteinmátrixokon 5 μΐ/perc átfolyási sebességgel. Az antitest injekciója előtt és közvetlenül utána csak PBS-puffert folyattunk át az egyes cellákon. Az alapszignál és az antitestinjekció befejezése utáni szignál nettó különbsége mutatja a szóban forgó minta kötési értékét. A bioszenzormátrixokat 100 mM sósavoldattal regeneráljuk a következő minta injektálása előtt. A felbomlási sebességi állandó (off rate; K„ff constant), a kötődési sebességi állandó (on rate; K^, constant), az asszociációs sebességi állandó (association rate; constant) és a disszociációs sebességi állandó (dissociation rate; Kj constant) meghatározására BIAcore kinetikai kiértékelő szoftvert (2.1 verzió) használtunk.
A D2E7 pg G4 teljes hosszúságú antitest) biotine20 zett rhTNFa-hoz való kötődésének reprezentatív eredményeit összehasonlítva az egér MÁK 195 mAt [F(ab’)2 fragmentum] használatával kapott eredményekkel, az 1. táblázatban foglaljuk össze.
1. táblázat
A D2E7 IgG4 vagy a MÁK 195 kötődése biotinezett rhTNFa-hoz
Antitest At(nM) ATNFa, kötött (RU) At, kötött (RU) ATNFa/At KoirS'1 (középérték)
D2E7 267 373 1215 1,14 8,45x10-’
133 420 1569 1,30 5,42x10-5
67 434 1633 1,31 4,75x10-5
33 450 1532 1,19 4,46x10-5
17 460 1296 0,98 3,47x10-5
8 486 936 0,67 2,63x10-5
4 489 536 0,38 2,17x10-’
2 470 244 0,18 3,68x10-5
(4,38x10-5)
MÁK 195 400 375 881 1,20 5,38x10-5
200 400 1080 1,38 4,54x10-5
100 419 1141 1,39 3,54x10-5
50 427 1106 1,32 3,67x10-5
25 446 957 1,09 4,41x10-5
13 464 708 0,78 3,66x10-5
6 474 433 0,47 7,37x10-5
3 451 231 0,26 6,95x10-5
(4,94x10-5)
Egy második kísérletsorozatban a D2E7 egy IgGl teljes hosszúságú formája és a biotinezett rhTNFa közötti molekuláris kinetikai kölcsönhatások kvantitatív analí- 60 zisét végeztük el a BIAcore technológiát használva, mint fent leírtuk. A kinetikai sebességi állandókat a 2., 3. és 4. táblázatban foglaljuk össze.
HU 221 984 Bl
2. táblázat
A D2E7 és a biotinezett rhTNFa közötti kölcsönhatásra kiszámított disszociációs sebességi állandók
3. táblázat
A D2E7 és a biotinezett rhTNFa közötti kölcsönhatásra kiszámított asszociációs sebességi állandók
Kísérlet Ka(s->)
1. 9,58x10-5
2. 9,26xl0-5
3. 7,60x10-5
Középérték 8,81+1,06x10-5
Kísérlet K,(M-'s-’)
1. 1,33x105
2. 1,05x105
3. 3,36x105
Középérték 1,91+1,26x105
4. táblázat
A D2E7-re és biotinezett rhTNFa-ra kiszámított reakciósebességi és affinitási állandók
Kísérlet K,(M-’s-’) Kd(s-’) Ki(M)
1. 133x105 9,58x10-5 7,20x10-’«
2. 1,05x105 9,26x 10-5 8,82x10-’«
3. 3,36x105 7,60x10-5 2,26x10-’»
Középérték 1,91+1,26x105 8,81±l,06x 10-s 6,09+3,42x10-’«
A disszociációs és asszociációs sebességi állandókat úgy számítottuk ki, hogy BIA-analízis-szoftverrel analizáltuk a szenzogram disszociációs és asszociációs szakaszait. Feltételeztük, hogy a D2E7 és a biotinezett rhTNFa molekula közötti kölcsönhatás a szokásos kémiai reakciókinetikát követi: a disszociáció zérus rendű reakció és az asszociáció elsőrendű reakció szerint megy végbe. A kinetikai adatok analíziséhez szükséges molekuláris modellek megválasztásában, az analízis kedvéért, csak a bivalens D2E7 antitest egyik karja és a trimer biotinezett rhTNFa egy egysége közötti kölcsönhatást vettük számításba. Három egymástól független kísérletet végeztünk és az eredményeket külön analizáltuk. A D2E7 és a biotinezett rhTNFa közötti kölcsönhatás számított disszociációs sebességi állandójának (Kj) középértéke 8,81±l,06xl0-5-s-’ és az asszociációs sebességi állandó Ka=l,91±l,26xl0-5 M’-s-’ volt. Az intrinszik disszociációs állandó (Kd-t) ezután a K^ka/kg képlettel számítottuk ki. Tehát a D2E7 antitest rhTNFa-ra vonatkoztatott közepes IQ értékére a kinetikai paraméterekből 6,09+3,42 x 10-’° M értéket kaptunk. A D2E7 IgGl formájára (lásd a 2., 3. és 4. táblázatot) és a D2E7 IgG4 formájára (lásd az 1. táblázatot és a 2. és 3. példát) kapott kinetikai értékekben lévő kis különbségeket nem tekintjük valódi olyan különbségeknek, amelyeket vagy egy IgGl, vagy egy IgG4 konstans szakasz jelenléte okoz, inkább azt gondoljuk, hogy ez a pontosabb antitestkoncentráció-méréseknek tulajdonítható, amelyeket az IgGl kinetikai analízisénél használtunk. Ezért azt gondoljuk, hogy a D2E7 IgGl formájára kapott kinetikai értékek a D2E7 antitest legpontosabb kinetikai paramétereinek tekinthetők.
2. példa
A D2E7 CDR3 domének alaninnal végzett pásztázó mutagenizálása
Standard technikák használatával a D2E7 VL és D2E7 VH szakaszok CDR3 doménjei hosszában egyetlen alanin bevezetésével egy sorozat mutagenizálást végeztünk. A könnyű lánc mutációkat az IB. ábra mutatja be (az LD2E7+.A1, LD3E7+.A3, LD2E7+.A4, LD2E7+.A5, LD2E7+.A7 és LD2E7+.A8 szekvenciák egy alaninmutációt tartalmaznak a D2E7 VL CDR3 dómén 1., 3., 4., 5., 7., illetve 8. pozíciójában). A nehéz lánc mutációk a 2B. ábrán láthatók (a HD2E7+.A1, HD2E7+.A2, HD2A7+.A3, HD2E7+.A4, HD2E7+.A5, HD2E7+.A6, HD2E7+.A7, HD2E7+.A8 és HD2E7+.A9 szekvenciák egy alaninmutációt tartalmaznak a D2E7 VH CDR3 dómén 2., 3., 4., 5., 6., 8.,
9., 10., illetve 11. pozíciójában. Az rhTNFa vad típusú D2E7 VL-ből és VH-ból álló antitesttel végbemenő reakciójának a kinetikáját összehasonlítottuk olyan antitestekkel történő reakciójának a kinetikájával, amelyekben 1. egy vad típusú D2E7 VL egy alaninnal szubsztituált D2E7 VH-val párosodott; 2. egy vad típusú D2E7 VH egy alaninnal szubsztituált D2E7 VL-lel párosodott; vagy 3. egy alaninnal szubsztituált D2E7 VL egy alaninnal szubsztituált D2E7 VH-val párosodott. Mindegyik antitestet teljes hosszúságú IgG4 molekulaként teszteltük.
Az antitestek rhTNFa-val való kölcsönhatásának kinetikáját felületi plazmonrezonanciával határoztuk meg az 1. példában leírt módon. A különböző VH/VL párok felbomlási sebességi állandóját (IQff) az 5. táblázatban foglaljuk össze.
HU 221 984 Bl
5. táblázat
D2E7 alanin-scan mutánsok kötődése biotinezett rbTNFa-hoz
VH VL Kofrís-1)
D2E7VH D2E7VL 9,65x10-5
HD2E7*.A1 D2E7VL l,4xl0-4
HD2E7*.A2 D2E7VL 4,6xl0-4
HD2E7*.A3 D2E7VL 8,15 xlO'4
HD2E7*A4 D2E7VL 1,8 xlO-4
HD2E7*.A5 D2E7VL 2,35 xlO-4
HD2E7*.A6 D2E7VL 2,9xl0-4
HD2E7*.A7 D2E7VL 1,0χ 104
HD2E7*.A8 D2E7VL 3,1 xlO-4
HD2E7*.A9 D2E7VL 8,1x1ο-4
D2E7VH LD2E7*.A1 6,6x10-5
D2E7VH LD2E7*.A3
D2E7VH LD2E7*.A4 1,75 xlO-4
D2E7VH LD2E7*.A5 l,8xl0~4
D2E7VH LD2E7*.A7 1,4 xlO-4
D2E7VH LD2E7*.A8 3,65 xlO-4
HD2E7*.A9 LD2E7*.A1 1,05 xlO-4
Ezek az eredmények azt mutatják, hogy a D2E7 VL és VH szakaszok CDR3 doménjében a pozíciók többsége alkalmas egyetlen alanincsoporttal való szubsztituálásra. Egyetlen alanin szubsztitúciója a D2E7 VL CDR3 dómén 1., 4., 5. vagy 7. pozíciójában vagy a D2E7 VH CDR3 2., 5., 6., 8., 9. vagy 10. pozíciójában lényegesen nem befolyásolja a rhTNFa-kötés felbomlási sebességét, összehasonlítva a vad típusú szülői D2E7 antitesttel. A D2E7 VL CDR3 8. pozíciójában vagy a D2E7 VH CDR3 3. pozíciójában végzett alaninszubsztitúció 4-szer gyorsabb Kog-értéket és egy alanin szubsztitúciója a D2E7 VH CDR3 4. vagy 11. pozíciójában 8-szor gyorsabb Kog-értéket adott, ami azt mutatja, hogy ezek a pozíciók a kritikusabbak a rhTNFahoz való kötődésre nézve. Egyetlen alaninszubsztitúció a D2E7 VL CDR3 dómén 1., 4., 5., 7. vagy 8. pozíciójában, vagy a D2E7 VH CDR3 dómén 2., 3., 4., 5.,
6., 8., 9., 10. vagy 11. pozíciójában még mindig olyan anti-rhTNFa antitestet eredményez, amelynek Koffértéke 1 χ 103 s-1 vagy ennél kisebb.
3. példa
D2E7-tel rokon antitestek kötési analízise
Az 1. példában leírt felületi plazmonrezonancia segítségével egy sor D2E7-tel rokon szekvenciájú antitestet analizáltunk - a D2E7-tel összehasonlítva - rhTNFahoz való kötődésükre nézve. A vizsgált VL szakaszok aminosavszekvenciáit az 1A. és 1B. ábra mutatja. A vizsgált VH szakaszok aminosavszekvenciáit a 2 A. és 2B. ábra mutatja. A különböző VH/VL párok (a jelzett formában, vagy mint teljes hosszúságú IgGl vagy
IgG4 antitest, vagy mint egy scFv) K„ff sebességi állandóit a 6. táblázatban foglaljuk össze.
6. táblázat
D2E7-tel rokon antitestek kötődése biotinezett rhTNFa-hoz
VH VL Forma w*-1)
D2E7VH D2E7VL IgGl/IgG4 9,65x10-5
VH1-D2 LOE7 IgGl/IgG4 7,7x10-5
VH1-D2 LOE7 scFv 4,6xl0-4
VH1-D2.N LOE7.T IgG4 2,1x10-5
VH1-D2.Y LOE7.A IgG4 2,7x10-5
VH1-D2.N LOE7.A IgG4 3,2x10-5
VH1-D2 EPB12 scFv 8,0xl0~4
VH1-D2 2SD4VL scFv 1,94x10-’
3C-H2 LOE7 scFv 1,5x10-3
2SD4VH LOE7 scFv 6,07x10-3
2SD4 VH 2SD4VL scFv 1,37x10-3
VH1A11 2SD4VL scFv 1,34x10-3
VH1B12 2SD4VL scFv 1,01x10-2
VH1B11 2SD4VL scFv 9,8x10-3
VH1E4 2SD4VL scFv 1,59x10-2
VH1F6 2SD4VL scFv 2,29x10-2
VH1D8 2SD4VL scFv 9,5x10-3
VH1G1 2SD4VL scFv 2,14x10-2
2SD4VH EPB12 scFv 6,7x10-3
2SD4VH VL10E4 scFv 9,6x10-3
2SD4VH VL100A9 scFv 1,33x10-2
2SD4VH VL100D2 scFv 1,41x10-2
2SD4VH VL10F4 scFv 1,11x10-2
2SD4VH VLLOE5 scFv 1,16x10-2
2SD4VH VLLOF9 scFv 6,09x10-3
2SD4VH VLLOF10 scFv 1,34x10-2
2SD4VH VLLOG7 scFv 1,56x10-2
2SD4VH VLLOG9 scFv 1,46x10-2
2SD4VH VLLOH1 scFv 1,17x10-2
2SD4VH VLLOH10 scFv 1,12x10-2
2SD4VH VL1B7 scFv 1,3x10-2
2SD4VH VL1C1 scFv 1,36x10-2
2SD4VH VL1C7 scFv 2,0x10-2
2SD4VH VL0.1F4 scFv 1,76x10-2
2SD4VH VL0.1H8 scFv 1,14x10-2
A teljes hosszúságú antitesteknél (azaz IgG-formáknál) - amelyekben a VL-t a D2E7, LOL7, LOE7.T és LOE7.A szekvenciák közül választottuk, amelyekben vagy egy treonin, vagy egy alanin van a 9. pozícióban kapott alacsony K^g sebességi állandók (például: K„ff 1 x 10-4 s-1) azt mutatják, hogy a D2E7 VL CDR3 9. po24
HU 221 984 Bl zíciöját e két csoport közül bármelyik elfoglalhatja anélkül, hogy lényegesen befolyásolnák a Kojj-értékét. Ennek megfelelően a D2E7 VL CDR3-ra általánosan elfogadott motívum a Q-R-Y-N-R-A-P-Y-(T/A) (3. számú szekvencia) aminosavszekvencia. Továbbá a kapott alacsony sebességi állandók (például: K<,ff 1 χ 10~4 s-1) azoknál az antitesteknél, amelyeknél a VH-t a D2E7, VH1-D2 N és VHl-D2.4-ből választottuk - amelyek vagy egy tirozint, vagy egy aszparagint tartalmaztak a
12. pozícióban - azt mutatják, hogy a D2E7 VH CDR3 12. pozícióját e két csoport közül bármelyik elfoglalhatja anélkül, hogy lényegesen befolyásolnák a Κ^ értékét. Ennek megfelelően a D2E7 VH CDR3-ra általánosan elfogadott motívum a V-S-Y-L-S-T-A-S-S-L-D(Y/N) (4. számú szekvencia) aminosavszekvencia.
A 6. táblázatban bemutatott eredmények azt bizonyítják, hogy scFv formában a 2SD4 VL vagy VH CDR3 szakaszt tartalmazó antitestek gyorsabb Κ,,αértéket (például: K^ 1 χ 10-J s-·, mutatnak, összehasonlítva a D2E7 VL vagy VH CDR3 szakaszt tartalmazó antitestekkel. A 2SD4 a VL CDR3-ban a D2E7től a 2., 5. és 9. pozíciónál különbözik. Mint fent megtárgyaltuk, a 9. pozíciót azonban elfoglalhatja az alanin (mint a 2SD4-ben) vagy a treonin (mint a D2E7-ben) anélkül, hogy lényegesen befolyásolnák a Kgg-értékét. Tehát, a 2SD4 és D2E7 összehasonlításából kitűnik, hogy a D2E7 VL CDR3 2. és 5. pozíciójában lévő két argininnel kapcsolatban megállapíthatjuk, hogy ezek kritikusak az antitest hTNFa-val való asszociációja szempontjából. Ezek a csoportok, mint kontakt csoportok, valószínűleg közvetlen szerepet játszanak az antitest kötőhelyén vagy komoly mértékben járulnak hozzá az antitestmolekula ezen szakaszának szerkezeti felépítéséhez. Ami a 2. pozíció fontosságát illeti: az Arg csoport helyettesítése (a LOE7-ben, amelyben a VL CDR3 azonos a D2E7-ével) Lys csoporttal (az EP B12ben) kétszeresére gyorsítja a felbomlási sebességet. Ami az 5. pozíció fontosságát illeti: az Arg csoport helyettesítése (a D2E7-ben) Ala csoporttal (az LD2E7+.A5-ben), mint a 2. példában leírjuk, szintén kétszeresére gyorsítja a felbomlási sebességet. Továbbá, Arg csoport nélkül úgy a 2., mint az 5. pozícióban (a 2SD4-ben) a felbomlási sebesség ötször gyorsabb. Meg kell jegyezni azonban, hogy bár az 5. pozíció fontos a hTNFa-hoz való kötődés javítása szempontjából, egy ebben a pozícióban végrehajtott változtatás más pozícióknál végzett változtatásokkal hatálytalanítható, mint ezt a VLLOE4, VLL0H1, vagy VL0.1H8 szekvenciák esetén láthatjuk.
A VH CDR3 szakaszban a 2SD4 a D2E7-től az 1., 7. és 12. pozícióban különbözik. Azonban, mint fent megbeszéltük, a 12. pozíciót elfoglalhatja az Asn (mint a 2SD4-ben) vagy a Tyr (mint a D2E7-ben) anélkül, hogy lényegesen befolyásolnák a Kog-értékét. A 2SD4 és a D2E7 összehasonlításából megállapítható tehát, hogy a D2E7 VH CDR3 1. és 7. pozíciói kritikusak a hTNFa kötése szempontjából. Mint fent említettük, ezek a csoportok közvetlen szerepet játszhatnak kontakt csoportok gyanánt az antitest kötőhelyén vagy komoly mértékben járulhatnak hozzá az antitestmolekula szerkezeti felépítéséhez ebben a szakaszban. Mind a két pozíció fontos a hTNFa-hoz való kötődésre nézve, mivel ha 3C-H2 VH CDR3-at (ebben egy valint cseréltünk alaninra az 1-es pozícióban a D2E7 VH CDR3-ra vonatkozóan) használunk, az scFv-nek háromszor gyorsabb a felbomlási sebessége, mint amikor D2E7 VH CDR3-at használunk, de ez a felbomlást sebesség még mindig négyszer lassúbb, mint amikor 2SD4 VH CDR3-at használunk (amely a D2E7 VH CDR3-hoz viszonyítva, mind az 1., mind a 7. pozícióban változtatásokat tartalmaz).
4. példa
A D2E7 fitnkciós aktivitása
A D2E7 funkciós aktivitásának vizsgálata céljából számos assay-ben mértük az antitest hTNFa-aktivitást gátló képességét mind in vitro, mint in vivő.
A. TNFa.-indukált citotaxicitás-neutralizálás
L929 sejtekben
A humán rekombináns TNFa (rhTNFa) sejtcitotoxicitást idéz elő egér L929 sejteken 18-24 órás inkubációs időtartam után. Humán anti-hTNFa antitesteket értékeltünk L929 assay-kben úgy, hogy az antitesteket rhTNFa-val és a sejtekkel együtt inkubáltuk a következőképpen: 96 tartályos mikrotitrálólemezeken 100 μΐ anti-hTNFa antitestből 1/3-os párhuzamos sorozathígításokat készítettünk 10% fetális marhaszérumot (FBS) tartalmazó RPMI táptalaj használatával. Minden mintát tartalmazó tartályba 50 μΐ rhTNFa-t mértünk, és így 500 pg/ml végső koncentrációt kaptunk. A lemezeket ezután 30 percig szobahőmérsékleten inkubáltuk. Ezt követően 50 μΐ-ben TNFa-szenzitív L929 egér-fibroblasztsejteket adtunk minden tartályhoz - így 5 χ 104 sejt/tartály végső koncentrációt értünk el - és 1 pg/ml aktinomicin-D-t. A kontrollok táptalajt plusz sejteket és rhTNFa-t plusz sejteket tartalmaztak. Ezek a kontrollok és egy TNFa standard görbe - 2 ng/ml-től 8,2 pg/ml-ig - biztosították az assay minőségét és azt, hogy rálátást kapjunk a neutralizációra. A lemezeket egy éjszakán át (18-24 órán át) 37 °C-on, 5% CO2tartalmú atmoszférában inkubáltuk.
Minden tartályból 100 μΐ táptalajt vettünk ki és hozzáadtunk 50 μΐ PBS-ben 50 mg/ml koncentrációjú 3(4,4-dimetil-tiazol-2-il)-2,5-difenil-tetrazolium-bromidot (MTT; beszerezhető a kereskedelemben, a Sigma Chemical Co., cégtől; St. Louis, MO., USA). A lemezeket ezután 4 órán át 37 °C-on inkubáltuk. Minden tartályba 50 μΐ 20%-os nátrium-dodecil-szulfátot (SDS) mértünk, majd a lemezeket egy éjszakán át 37 °C-on inkubáltuk. Az optikai sűrűséget 570/630 nm-en mértük, minden mintára görbét vettünk fel és az ICS0-értékét standard módszerekkel határoztuk meg.
A különböző VL és VH párokat tartalmazó humán antitestek reprezentatív eredményeit a MÁK 195 mAttel kapott eredményekkel összehasonlítva, a 3. ábrán és az alábbi 7. táblázatban mutatjuk be.
A 3. ábra és a 7. táblázat adatai bizonyítják, hogy a D2E7 humán anti-hTNFa antitest és a különböző D2E7-tel rokon antitestek, a TNFa-indukált L929 citotoxicitást megközelítőleg hasonló kapacitással neutralizálják, mint a MÁK 195 egér anti-hTNFa mAt.
HU 221 984 Β1
7. táblázat
A TNFa-indukált L929 citotoxicitás neutralizálása
VH VL Szerkezet 1C5O(M)
D2E7 D2E7 scFv 1,1 xlO-10
D2E7 D2E7 IgG4 4,7x10-”
2SD4 2SD4 scFv/IgGl/IgG4 3,0 xlO-7
2SD4 LOE7 scFv 4,3x10-’
VH1-D2 2SD4 scFv 1,0x10-’
VH1-D2 LOE7 scFv/IgGl/IgG4 3,4x10-1°
VH1.D2.Y LOE7.T IgG4 8,1x10-
VH1-D2.N LOE7.T IgG4 1,3x10-1°
VH1-D2.Y LOE7.A IgG4 2,8x10-”
VH1-D2.N LOE7.A IgG4 63x10-n
MÁK 195 MÁK 195 scFv 1,9x10-«
MÁK 195 MÁK 195 Ffab’), 6,2x10-11
Egy másik kísérletsorozatban a D2E7 IgGl formájának TNFa-indukált L929 citotoxicitást neutralizáló képességét vizsgáltuk a fentiek szerint. Három független vizsgálat eredményét és ezek átlagát a 8. táblázat foglalja össze.
8. táblázat
A TNFa-indukált L929 citotoxicitás neutralizálása D2E7 IgGl-gyel
Kísérlet 1C5O(M)
1. 136x10-1°
2. 133x10-1°
3. 1,15x10-1°
Kőzépérték l,25±0,01xl0->«
Ez a kísérletsorozat megerősítette, hogy a D2E7 teljes hosszúságú IgGl-formája l,25±0,01 χ 1010 M ICjo átlagérték mellett neutralizálja a TNFa-indukált L929 citotoxicitást.
B. A TNFa U-937 sejteken lévő TNFa receptorokhoz való kötődésének gátlása
Megvizsgáltuk, hogy a humán anti-hTNFa antitestek képesek-e gátolni a hTNFa kötődését a sejtek felületén lévő hTNFa receptorokhoz. A vizsgálatban U-937 sejtvonalat (ATCC CRL 1593) használtunk, amely egy hTNFa receptorokat kifejező humán hisztiocitás sejtvonal. Az U-937 sejteket 10% fetális marhaszérummal (Hyclone A-1111; Hycone Laboratories, Logan, UT., USA), L-glutaminnal (4 nM), HEPES-pufferrel (10 mM), penicillinnel (100 pg/ml) és sztreptomicinnel (100 pg/ml) kiegészített RPMI táptalajon tenyésztettük. A teljes hosszúságú IgG antitestek aktivitásának vizsgálata végett az U-937 sejteket 1 mg/ml humán IgG-vel (Sigma 1-4506; Sigma Chemical Co., St. Louis, MO., USA) kiegészített PBS-ben 45 percig jégen előinkubáltuk, és ezután a sejteket háromszor mostuk kötőpufferrel. A receptorkötési assayhez az U-937 sejteket 96 tartályos mikrotitráló lemezeken (Costar 3799; Costar Corp., Cambridge, MA., USA) (SxlO6 sejt/tartály) kötőpufferben (0,2% marhaszérumalbuminnal kiegészített PBS) 125I-jelzett rhTNFa-val együtt (3 x 10-10 M; 25 pCi/ml; NEN Research Products, Wilmington, DE., USA) inkubáltuk anti-hTNFa antitestek jelenlétében, vagy anélkül, összesen 0,2 ml-ben. A lemezeket jégen inkubáltuk másfél órán át. Ezután minden mintából 75 μΐ-t vittünk át dibutil-ftalát (Sigma D-2270; Sigma Chemical Co., St. Louis, MO., USA) és dinonil-ftalát (ICM 210733; ICN, Irvine, CA., USA) keverékét tartalmazó 1,0 ml-es tesztcsövekbe. A tesztcsövek a dibutil-ftalát és dinonilftalát 2:1 arányú keverékéből 300 μΐ-t tartalmaztak. A szabad (azaz kötetlen) 12SI-jelzett rhTNFa-t 5 perces mikrocentrifúgálással távolítottak el. Ezután minden egyes tesztcső végét, amely a sejtüledéket tartalmazza, egy mikrocsőolló (Bel-Art 210180001; Bel-Art Products, Pequannock NJ., USA) segítségével levágtuk. A sejtüledék p60 vagy p80 TNFa receptorhoz kötött 125I-jelzett rhTNFa-t tartalmaz, míg az olajos keverék feletti vizes fázis a feleslegben lévő szabad ,25I-jelzett rhTNFa-t tartalmazza. A sejtüledékeket számlálócsőbe (Falcon 2052; Becton Dickinson Labware, Lincoln Park, NJ., USA) gyűjtöttük össze és szcintillációs számlálóban számláltuk.
A 4. ábrán láthatók a reprezentatív eredmények. Ezekben a vizsgálatokban a hTNFa-nak U-937 sejteken megjelenő hTNFa receptorokhoz való kötődését a D2E7 3x10-10 M IC^-érték mellett gátolta. Ezek az eredmények igazolják, hogy a D2É7 humán antihTNFa antitestek olyan koncentrációk mellett gátoljak az rhTNFa kötődését U-937 sejteken lévő hTNFa receptorokhoz, amelyek azonosak az egér MÁK 195 anti-hTNFa koncentrációival.
Egy másik kísérletsorozatban a D2E7 IgGl formájának a hTNFa U-937 sejteken lévő hTNFa receptorokhoz való kötődése elleni gátlóhatását vizsgáltuk, mint fent leírtuk. Három független vizsgálat eredményét és ezek átlagát a 9. táblázat foglalja össze.
9. táblázat
TNF-receptor-kötés gátlása U-937 sejteken D2E7 IgGl-gyel
Kísértet IC50(M)
1. 1,70x10-1°
2. 1,49x10-1“
3. 1,50x10-1°
Középérték l,56±0,12xl0-‘“
Ez a kísérletsorozat igazolta, hogy a D2E7 teljes hosszúságú IgGl-formája átlag 1,56±0,12χ 10-10 (M) IC50-értékkel gátolja U-937 sejteken a TNF receptorhoz való kötődést.
A D2E7 gátlóhatását a 125I-rhTNFa individuális p55 és p75 receptorokhoz való kötődésére szilárd fázisú radioimmunassay-ben (RIA) vizsgáltuk. A D2E7nek a különböző TNF receptorokra vonatkozó IC5026
HU 221 984 Bl értékeinek méréséhez az antitest változó koncentrációit a 125I-rhTNF 3χ10~1θ koncentrációjával inkubáltuk. A keveréket ezután külön lemezeken - az egyik a p55, a másik a p75 TNF receptort tartalmazta - teszteltük dózisfüggő módon. Az eredményeket a 10. táblázat foglalja össze.
10. táblázat
TNF - receptor - p55 és p75 TNFR kötés gátlása D2E7 IgGl-gyel
ICjofM)
Reagens p55TNFR P75 TNFR
D2E7 1,47x10-» 1,26x10-»
rhTNF 2,31x10» 2,70 χ 10-»
A 125I-rhTNF U-937 sejteken kifejeződő p55 és p75 TNF receptorhoz való kötődésének gátlása D2E7tel egy egyszerű S alakú görbét ír le, ami az egyes receptoroknál hasonló IC^-értékekre utal. A rekombináns TNF receptorokkal szilárd fázisú radioimmunassay-vel (RIA) végzett kísérletekben a 12S-IrhTNF p55 és p75 receptorokhoz való kötődésének D2E7-tel való gátlására 1,47x10-’ M, illetve 1,26x10-’ M ICjo-értékeket számítottunk ki. Az ICjoértékek csökkenését a szilárd fázisban valószínűleg az okozta, hogy a receptorok sűrűsége nagyobb a RIA alakban, ugyanígy az ihTNF-é, amely hasonló IC50értékekkel volt gátolt. A 125I-rhTNF p55 és p75 receptorhoz való kötődésének gátlása jelzetlen rhTNF-fel a következő IC50-értékeket adta: 2,31x10-’ M, illetve 2,70xl0-’M.
C. ELAM-l-expresszió gátlása HUVEC-en
A humán köldökvéna endoteliális sejtek (HUVEC=human umbilical vein endothelial cell) sejtjeik felületén endoteliális sejt leukocita adhéziós molekula-1 (ELAM-1 =endothelial cell leukocyte adhesion molecula 1) kifejezésére indukálhatók rhTNFakezeléssel. A jelenséget úgy tudjuk kimutatni, hogy az rhTNFa-val kezelt HUVEC-et egy egér anti-humán ELAM-1 antitesttel reagáltatjuk. A humán antihTNFa antitestek azon képességét, miszerint az ELAM-1 HUVEC-en történő TNFa-indukált expresszióját gátolják, a következőképpen határozzuk meg: HUVEC-et (ATCC CRL 1730) viszünk 96 tartályos lemezekre (5 χ 104 sejt/tartály) és a lemezeket egy éjszakán át 37 °C-on inkubáljuk. A következő napon egy mikrotitráló lemezen a humán anti-hTNFa antitestből sorozathígításokat (1:10) készítünk. A hígításokat 20-100 pg/ml antitesttel kezdjük. Egy 4,5 ng/ml koncentrációjú rhTNFa törzsoldatot készítünk, majd az antitestet tartalmazó tartályokhoz hozzáadjuk az rhTNFa aliquot részleteit és tartalmukat jól összekeverjük. A kontrollok csak táptalajt, táptalajt plusz anti-hTNFa antitestet és táptalajt plusz rhTNFa-t tartalmaznak. A HUVEC lemezeket kivesszük az inkubátorból (ahol egy éjszakán át 37 °C-on tartottuk) és a táptalajt óvatosan leszívatjuk a tartályokból. Ekkor a HUVEC lemezek minden tartályához 200 pl antitest-rhTNFa keveréket adunk. A HUVEC lemezeket ezután tovább inkubáljuk 37 °C-on 4 órán át. Ezt követően egy egér-antiELAM-1 antitest törzsoldatot l:1000-re hígítunk RPMI-ben. A HUVEC lemez tartályaiból óvatosan kiszívjuk a táptalajt, az anti-ELAM-1 antitestoldatból 50 μΐ-t mérünk be tartályonként és a HUVEC lemezeket 60 percig szobahőmérsékleten inkubáljuk. Készítünk egy 125I-jelzett antiegér-lg antitestoldatot RPMIben (körülbelül 50 000 cpm 50 μΐ-ben). A HUVEC lemezek minden tartályából óvatosan kiszívjuk a táptalajt, a tartályokat kétszer mossuk RPMI-vel és minden tartályhoz 50 μΐ 125I-jelzett antiegér Ig-oldatot adunk. A lemezeket 1 óra hosszat szobahőmérsékleten inkubáljuk, majd minden tartályt háromszor mosunk RPMIvel. Ezután minden tartályhoz 180 μΐ 5%-os SDS-t adunk a sejtek lizálása céljából. Ezután minden tartályból csőbe visszük át a sejüizátumokat és szcintillációs számlálóban számlálunk.
Az 5. ábrán a reprezentatív eredményeket mutatjuk be. Ezekben a kísérletekben a ELAM-1 HUVEC-en való hTNFa-indukált expressziójának D2E7-tel végzett gátlásának ICso-értéke körülbelül 6x 10-11 M. Ezek az eredmények igazolják, hogy a D2E7 humán antihTNFa antitest olyan koncentrációban gátolja az ELAM-1 HUVEC-en való hTNFa-indukált expresszióját, amely megközelítőleg azonos a MÁK 195 egér-anti-hTNFa mAt gátló koncentrációjával.
Egy másik kísérletsorozatban a D2E7 IgGl formájának az ELAM-1 HUVEC-en való hTNFa-indukált expressziója elleni gátlóhatását vizsgáltuk, mint fent leírtuk. Három független vizsgálat eredményét és ezek középértékét all. táblázat foglalja össze.
11. táblázat
TNFa-indukált ELAM-l-expresszió gátlása D2E7 IgGl-gyel
Kísérlet Κ?5β(Μ)
1. 1,95x10-1»
2. l,69x 10-'«
3. 1,90x10'»
Középérték l,85±0,14x10-1«
Ez a kísérletsorozat megerősítette, hogy a D2E7, teljes hosszúságú IgGl formában, a TNFa-indukált ELAM-l-expresszióját HUVEC-en 1,85±0,14χ10-10 IC50 (M) értékkel gátolja.
A D2E7 IgGl neutralizációs hatékonyságát két másik adhéziós molekula - ICAM-1 és VCAM-1 rhTNFa-indukált expressziójára is megvizsgáltuk. (ICAM=intercellular adhesion molecule; VCAM=vascular cell adhesion molecule). Minthogy az rhTNF bírálási göibe ICAM-1 expresszióra a 16. órában nagyon hasonló volt az ELAM-1 expressziós görbéhez, az rhTNF ugyanazon koncentrációját használtuk az antitestneutralizációs kísérletekben. A HUVEC-et rhTNF-fel inkubáltuk a D2E7 különböző koncentrációival egy 37 °C hőmérsékletű CO2-inkubátorban 16 órán át. Az ICAM-1expressziót egér anti-ICAM-1 antitest, majd 125I-jelzett
HU 221 984 Β1 birka-antiegér antitest segítségével mértük. Két független kísérletet végeztünk és kiszámítottuk az IC^-értékeket. Egy nem rokon humán IgGl antitest nem gátolta az ICAM-1 expressziót.
A VCAM-l-expresszió gátlását tesztelő kísérleti eljárás azonos volt az ELAM-l-expressziót tesztelő eljárással, kivéve, hogy anti-VCAM-1 mAt-et használtunk anti-ELAM-1 mAt helyett. Három független kísérletet végeztünk és kiszámítottuk az ICj0-értékeket. Egy nem rokon IgGl antitest nem gátolta a VCAM-1 expresszióját.
Az eredményeket a 12. táblázatban foglaljuk össze.
12. táblázat
ICAM-1- és VCAM-l-expresszió gátlása D2E7 IgGl-gyei
ICAM-l-gétlis VCAM-l-gátlás
Kísérlet Kísérlet ICjefM)
1. 1,84x10-'° 1. 1,03x10-'»
2. 2,49x10-'° 2. 9,26x10-
3. 1,06x10-'°
Közép- érték 2,17±0,46xl0-»° Közép- érték 1,01 ±0,01x10'°
Ezek a kísérletek azt bizonyították, hogy a primer humán köldökvéna endoteliális sejtek kezelése rhTNF-fel az adhéziós molekulák optimális expresszióját eredményezi. ELAM-1 és VCAM-1 esetén a 4. óránál, ICAM-l-nél pedig a 16. óránál éri el maximumát a felerősített expresszió. A D2E7 meg tudta gátolni dózisfüggően a három adhéziós molekula expresszióját. Az ELAM-1, ICAM-1 és VCAM-1 gátlására kapott ICMértékek a következők voltak: 1,85χΚΗ0, 2,17xlO*·0, illetve 1,01x10-·° M. Ezek az értékek nagyon hasonlóak, ami arra utal, hogy az ELAM-1-, ICAM-1- és VCAM-l-expresszió indukálásához szükséges aktiválási szignál az rhTNF dózisa iránt hasonló igényeket támaszt Érdekes módon, a D2E7 az ICÁM -1 hosszabb inhibíciós vizsgálatában hasonlóan hatásos volt. Az ICAM-1 gátlási assay-ben az rhTNF-et és D2E7-et 16 órán át kellett együtt inkubálni HUVEC-cel, ezzel szemben 4 órára volt szükség az ELAM-1 és VCAM-1 gátlási assay-kben. Minthogy a D2E7-nek alacsony a disszociációs sebessége rhTNF vonatkozásában, elképzelhető, hogy a 16 órás koinkubációs időtartam alatt nem volt jelentős versengés a HUVEC-en lévő TNF-receptorok iránt
D. A hTNFa in vivő neutralizálása
Három különböző in vivő rendszert használtunk annak bizonyítására, hogy a D2E7 hatékonyan gátolja a hTNFa-aktivitást in vivő.
I. TNF-indukált letalitás gátlása D-galaktózamin-szenzitizált egerekben
Rekombináns TNFa (rhTNFa) injekciója D-galaktóz-aminnal szenzitizált egereknek 24 órán belül halált okoz. Kimutatták, hogy a TNFa-neutralizáló szerek meggátolják a letalitást ebben a modellben. Vizsgáltuk ebben a modellben a humán anti-hTNFa antitestek hTNFaneutralizáló képességét in vivő. Ennek érdekében C57BI/6 egereknek intraperitoneális (ip.) injekcióval különböző koncentrációjú D2E7-IgGl-et, vagy egy kontrollproteint adtunk PBS-ben. Az egereket 30 perccel később 1 pg hTNFa-val és 20 mg D-galaktóz-aminnal - PBS-ben ip. - challengeltük, majd 24 órával később megfigyeltük az állatokat. Előzőleg meghatároztuk, hogy ezen rhTNFa- és D-galaktóz-amin-mennyiségek 80-90% letalitást értek el ezekben az egerekben.
A 6. ábrán azokat a reprezentatív eredményeket mutatjuk be hasábdiagram formában - amelyek a %-os túlélést az antitestkoncentráció függvényében ábrázolják. A pontozott hasábok képviselik a D2E7-et, míg az üres hasábok a MÁK 195-öt. Egerenként 2,5-25 pg D2E7 injekciója megvédte az állatokat a TNFa-indukált letalitástól. Az ED50-érték körülbelül 1-2,5 pg/egér. A pozitív kontrollantitest, a MÁK 195, hasonlóan protektív hatást fejtett ki. A D2E7 injekciója rhTNFa távollétében nem hatott károsan az egerekre. Az aspecifikus humán IgGl antitest injekciója nem nyújtott védelmet a TNFa-indukált letalitás ellen.
Egy második kísérletben 49 egeret osztottunk 7 egyenlő csoportba. Mindegyik csoport különböző dózisú D2E7-et kapott, majd 30 perc múlva egy LD80 dózisú rhTNF/D-galaktóz-amin keveréket (1,0 pg rhTNF és 20 mg D-galaktóz-amin per egér). A 7-es kontrollcsoport normál humán IgGl kappa-antitestből 25 pg/egér dózist kapott. Az egereket 24 órával később ellenőriztük. Az egyes csoportokban talált túlélést az alábbi, 13. táblázatban foglaljuk össze.
13. táblázat
Huszonnégy órás túlélés D2E7-tel való kezelés után
Csoport Túlélők (élő/összes) Túlélők (%)
1. (antitest nélkül) 0/7 0
2.(1 pg) 1/7 14
3- (2,6 pg) 5/7 71
4-(5,2pg) 6/7 86
5.(26pg) 6/7 86
6. (26 pg; rhTNF nélkül) 7/7 100
7. (25 pg Hz IgGl) 1/7 14
II. TNF-indukált nyúlpyrexia gátlása A D2E7 hatását rhTNF-indukált pyrexiaválasz gátlásában nyulakban vizsgáltuk. Három, körülbelül
2,5 kg-os NZW nőstény nyúlból álló csoportokat oltottunk intravénásán D2E7-tel, rhTNF-fel és D2E7-ből és rhTNF-ből álló immunkomplexekkel. Végbélhőmérsékleteket mértünk közel 4 órán át percenként, termisztor szondákkal, egy Kaye-féle hőmérséklet-regisztrálón. A rekombináns humán TNF-ből - normál konyhasóoldatban - 5 pg/kg injekciója 0,4 °C-nál nagyobb hőmérséklet-emelkedést váltott ki az injekció után körülbelül 45 perc múlva. Maga az antitestkészítmény - normál konyhasóoldatban - 138 pg/kg dózisban való alkal28
HU 221 984 Β1 mazás után 140 percen át nem váltott ki a nyulakban hőmérséklet-emelkedést. Minden további kísérletben a D2E7-et vagy a kontrollreagenseket (humán IgGl vagy a konyhasóoldat, mint vivőanyag) iv. oltottuk a nyulakba, ezt 5 perccel később egy rhTNF-injekció követte normál konyhasóoldatban - 5 pg/kg dózisban, iv. Számos kísérletet végeztünk, és a jellemző eredményeket a
14. táblázatban, alább foglaljuk össze.
14. táblázat rhTNF-indukált pyrexia gátlása D2E7-tel nyulakban
D2E7-dózis (Mg/kg) Hőmérséklet-emelkedés* (°C) Gátlás** (%) Mólarány Csúcshőmérséklet
rhTNF ATNF+D2E7 D2E7: rhTNF ATNF-injekció után (perc)
14 0,53 0,25 53 1 60
24 0,43 0,13 70 1,6 40
48 0,53 0,03 94 3,3 50
137 0,53 0,00 100 9,5 60
792 0,80 0,00 100 55 60
•“csúcshőmérséklet hőmérséklet-emelkedés ATNF-fel+D2E7-tel **=gátlás%=hőmérséklet-emelkedés csak rhTNF-fel
A D2E7-tel végzett előkezelés 14 pg/kg dózissal rész- 25 legesen gátolta a pirogén választ, azokhoz a nyulakhoz képest, amelyek előkezelésként csak normál konyhasóoldatot kaptak. A D2E7137 pg/kg dózisban alkalmazva teljesen gátolta az rhTNF-re adott pirogén választ ugyanebben a kísérletben. Egy második kísérletben a D2E7 alkal- 30 mazása 24 pg/kg-os dózisban szintén részlegesen szuppresszálta a pirogén választ, azokhoz a nyulakhoz viszonyítva, amelyek előkezelésként csak normál konyhasóoldatot kaptak. Ebben a kísérletben a D2E7 mólaránya az rhTNF-hez 1/6:1 volt. Egy harmadik kísérletben 35 48 pg/kg (mólarány: D2E7:rhTNF=3,3:1) D2E7 iv. injekciója teljesen gátolta a pirogén hatást, összehasonlítva azokkal a nyulakkal, amelyek kontroll humán IgGl-et kaptak előkezelésként, éspedig 30 pg/kg-ot normál konyhasóoldatban. Az utolsó kísérletben a nyulak élőké- 40 zelését D2E7-tel (792 pg/kg) az rhTNF-hez viszonyítva nagyon magas mólarány mellett (55:1) végeztük. Itt nem alakult ki hőmérséklet-emelkedés egyszer sem a 4 órán át tartó megfigyelés alatt. A nyulak immunkomplexekkel való kezelése további rhTNF alkalmazása nélkül szintén 45 nem váltott ki hőmérséklet-emelkedést ugyanebben a kísérletben. Az immunkomplexet úgy állítottuk elő, hogy a D2E7 és az rhTNF 55:1 mólarányú keverékét 37 °C-on 1 órán át inkubáltuk.
III. Polyarthritis megelőzése Tgl97 transzgenikus 50 egerekben
A D2E7-nek a betegség kialakulására gyakorolt hatását tanulmányoztuk egy arthritises transzgenikus egérmodellben. Olyan transzgenikus egereket (Tgl97) hoztak létre, amelyek humán vad típusú TNF-et (a kódolószekven- 55 cián belüli 3' szakasz módosított) fejeznek ki, és ezekben az egerekben 4-7 hetes korukra 100%-os gyakorisággal krónikus polyarthritis alakul ki [a Tgl97 polyarthritismodell további leírását lásd: EMBO J„ 10, 4025-4031 (1991)].
A transzgenikus állatokat 3 napos korukban PCRrel azonosítottuk. A transzgenikus egéralmokat 6 csoportra osztottuk. A transzgenikus egereket 15 napos korukban „slot-blot” hibridizációs analízissel ellenőriztük. A hat csoportra vonatkozó kezelési protokoll a következő volt: 1-es csoport: kezelést nem kapott; 2-es csoport: normál konyhasóoldatot (vivőanyag) kapott;;
3-as csoport: 1,5 pg/g D2E7; 4-es csoport: 15 pg/g D2E7; 5-ös csoport: 30 pg/g D2E7; 6-os csoport:: 30 pg/g IgGl izotípus, kontrollként. Egy nem transzgenikus egéralmot is bevontuk a vizsgálatba kontroll gyanánt (7-es csoport: nem transzgenikus állatok, kezelést nem kaptak). Mindegyik csoport hetenként három ip. injekciót kapott az említett anyagokból. Az injekciózást 10 hétig folytattuk. Minden héten minden állatnál feljegyeztük az ízület morfológiájában végbement makroszkópos változásokat. A10. héten minden állatot elöltünk és az egérszövetet formaimba tettük. A szövet vizsgálatát mikroszkóppal végeztük.
Minden hét elején lemértük az ízület méretét (mmben), amely a betegség súlyosságának a mértékét adja meg. A jobb hátsó bokaízületen mikrométerrel végzett három mérés átlaga adja meg az ízület méretét. Az arthritist hetenként, a következőképpen értékeltük ki: 0=nincs arthritis (normálküllem és -hajlékonyság); + =enyhe arthritis (ízületi disztorzió); + + =mérsékelt arthritis (duzzanat, ízületdeformáció); + + + =erős arthritis (ankilózis - ízületi merevség - észlelhető hajlításkor és erősen csökkent mozgás). Az ízület metszeteinek hematoxilin/eozin festésén alapuló pontozás a következőképpen történt: 0=nincs észlelhető betegség; 1 =a szinoviális membrán proliferációja észlelhető; 2=erős szinoviális zavarosodás; 3=porcdestrukció (lebomlás) és csonterózió (lepusztulás).
A D2E7-kezelés hatását a Tgl97 transzgenikus 60 arthritises egerek ízületméretének átlagértékére a 9. áb29
HU 221 984 Bl rán mutatjuk be. A Tgl97 transzgenikus egerek - 11 hetes - kórszövettani és arthritises pontszámait alább, a
15. táblázat foglalja össze.
15. táblázat
A D2E7 hatása kórszövettani és arthritises pontozásra Tgl97 egereken
Csoport Kezelés Kórszövettani pontozás Arthritis pontozása
1. nélkül 3 (7/70) + + +(7/7)
2. normál konyhasóoldat 2(8/8) + + 4- (8/8)
6. IgGl-kontroll 3(9/9) + + + (7/9)
3. D2E7-nél 0(6/8) 0(8/8)
4. 15 pg/g D2E7-nél 0(7/8) 0(8/8)
5. 30pg/g D2E7-nél 0(8/8) 0(8/8)
Ez a kísérlet azt szemlélteti, hogy a D2E7 antitestek határozott jótékony hatást gyakorolnak azon transzgenikus egerekre, amelyek vad típusú humán TNF-et fejeznek ki (Tgl97). A vizsgálati idő után nyilvánvaló arthritist nem észleltünk.
E. Más fajokból származó TNPa.-k neutralizálása D2E7-tel
A D2E7 kötőkapacitását úgy tanulmányoztuk, hogy megmértük a különböző főemlősfajokból és egerekből származó tumomekrózis-faktorokra gyakorolt neutralizáló képességét L929 citotoxikus assay-t használva (lásd fentebb, a 4. példában az A. alfejezetet). Az eredményeket aló. táblázatban foglaljuk össze.
16. táblázat
Hogyan képes a D2E7 a különböző fajokból származó TNF neutralizálására L929 assay-ben
TNFa* Eredet D2E7-neutralizálás IC«i-értéke (M)**
Ember rekombináns 7,8x10-
Csimpánz LPS-stimulált PBMC 5,5x10-
Pávián rekombináns 6,0x10-
Selyemmajom LPS-stimulált PBMC 4,0x10-10
Közönséges makákó LPS-stimuált PBMC 8,0x10-
Rhesus majom LPS-stimulált PBMC 3,0x10-
Kutya LPS-stimulált WBC 2,2 xlO-10
TNFa* Eredet D2E7-neutralizálás ICjo-értéke (M)·*
Sertés rekombináns Ι,ΟχΙΟ-7
Egér rekombináns >l,0xl0-7
* «« [PBMC=perifériás vér mononukleáris sejt; WBC=teljes vérsejt]
A 16. táblázatban közölt eredmények igazolják, hogy a D2E7 öt főemlős TNFa-aktivitását képes neutralizálni, nagyjából azonos módon, mint a humán TNFa-t, ezenfelül neutralizálja a kutya-TNFa aktivitását (körülbelül tízszer kisebb mértékben, mint a humán TNFa-t) és a sertés- és egér-TNFa-t (körülbelül mintegy ezerszer kevésbé jól, mint a humán TNFa-t). Továbbá: a D2E7 kötődését az oldalban lévő rhTNFa-hoz nem gátolták más citokinek, azaz a limfotoxin (TNFP), az IL-la, IL-Ιβ, IL-2, IL-4, IL-6, IL-8, IFNy és TGFp és ez arra utal, hogy a D2E7 erősen specifikus TNFa ligandumára.
F. A D2E7-tel inkubált humán teljes vérből nem szabadul fel citokin
Ebben a példában azt tanulmányoztuk, hogy a D2E7 maga képes-e a normál humán vérsejteket citokinek szekretálására vagy a sejtfelszíni molekulákat leválásra késztetni. Három különböző donortól levett és hígított teljes vért a D2E7 változó koncentrációival inkubáltuk 24 órán át. Ugyanakkor egy LPS-pozitív kontrollt is futtattunk, olyan koncentrációval, amelyről előzőleg megállapítottuk, hogy az immunkompetens vérsejteket citokinek szekretálására stimulálja. A felülúszókat learattuk és tízféle oldható citokin, receptor és adhéziós molekula ELISA-kit panellel teszteltük, úgymint IL-a, IL-Ιβ, IL-1 receptorantagonista, IL-6, IL-8, TNFa, oldható TNF receptor I, oldható TNF receptor Π, oldható ICAM-1, és oldható E-szelektin. A D2E7 antitesttel - egészen 343 pg/ml-ig - való koinkubálás eredményeként szignifikáns mennyiségben sem citokineket, sem levált sejtfelületi molekulákat nem észleltünk A kontrolltenyészetekben, antitest hozzáadása nélkül, egyetlen citokinből sem kaptunk mérhető mennyiségeket, míg az LPS-kontroll tenyészetekben magas értékeket kaptunk, a magas pikogrammtól az alacsony nanogramm tartományig. Ezekből az eredményekből arra a következtetésre jutottunk, hogy a D2E7 nem indukálja a teljes vér sejtjeit citokinszekretálásra vagy sejtfelűleti proteinek elhullatására a normálértékeken felül, ex vivő tenyészetekben.
A mellékelt szekvenciajegyzék - amely a találmány részét képezi - tartalmát az alábbi táblázatban foglaljuk össze:
Szekvencia száma Antitestlánc Szakasz Szekvencia- típus
1. D2E7 VL aminosav
2. D2E7 VH aminosav
HU 221 984 Β1
Táblázat (folytatás)
Szekvencia száma Antitestlánc Szakasz Szekvencia- típus
3. D2E7 VLCDR3 aminosav
4. D2E7 VHCDR3 aminosav
5. D2E7 VLCDR2 aminosav
6. D2E7 VHCDR2 aminosav
7. D2E7 VLCDR1 aminosav
8. D2E7 VHCDR1 aminosav
9. 2SD4 VL aminosav
10. 2SD4 VH aminosav
11. 2SD4 VLCDR3 aminosav
12. EPB12 VLCDR3 aminosav
13. VL10E4 VLCDR3 aminosav
14. VL100A9 VLCDR3 aminosav
15. VLL100D2 VLCDR3 aminosav
16. VLLOF4 VLCDR3 aminosav
17. LOE5 VLCDR3 aminosav
18. VLLOG7 VLCDR3 aminosav
19. VLLOG9 VLCDR3 aminosav
20. VLLOH1 VLCDR3 aminosav
21. VLLOH10 VLCDR3 aminosav
22. VL1B7 VLCDR3 aminosav
Szekvencia száma Antitestlánc Szakasz Szekvencia- típus
23. VL1C1 VLCDR3 aminosav
24. VLO.1F4 VLCDR3 aminosav
25. VLO.1H8 VLCDR3 aminosav
26. LOE7.A VLCDR3 aminosav
27. 2SD4 VHCDR3 aminosav
28. VH1B11 VHCDR3 aminosav
29. VH1D8 VHCDR3 aminosav
30. VH1A11 VHCDR3 aminosav
31. VH1B12 VHCDR3 aminosav
32. VH1E4 VHCDR3 aminosav
33. VH1F6 VHCDR3 aminosav
34. 3C-H2 VHCDR3 aminosav
35. VH1-D2.N VHCDR3 aminosav
36. D2E7 VL nukleinsav
37. D2E7 VH nukleinsav
Az ezen a szakterületen jártas szakemberek el fogják ismerni, vagy meggyőződhetnek arról, hogy az itt leírt találmány szerinti speciális kiviteli alakoknak csupán rutinkisérleteket használva - számos azonos megvalósítási módja lehetséges. Ezeket az ekvivalens kiviteli alakokat is tartalmazzák a következő igénypontok.
(SZEKVENCIÁK JEGYZÉKE) SEQUENCE LISTING (1) GENERAL INFORMATION:
(i) APPLICANT:
(A) NAME: BASF Aktiengesellschaft (B) STREET: Carl-Bosch Str. 38 (C) CITY: 67056 Ludwigshafen (D) STATE: Rheinland-Pfalz (E) COUNTRY: Federal Republic of Gennany (ii) TITLE OF INVENTION: Humán Antibodies that Bind Humán TNFa (iii) NUMBER OF SEQUENCES: 37 (iv) CORRESPONDENCE ADDRESS:
(A) ADDRESSEE: LAHIVE & COCKFIELD (B) STREET: 60 State Street, suite 510 (C) CITY: Boston (D) STATE: Massachusetts (E) COUNTRY: USA (F) ZIP: 02109-1875 (v) COMPUTER READABLE FORM :
(A) MÉDIUM ΤΥΡΕ: Floppy disk (B) COMPUTER: IBM PC compatible (C) OPERATING SYSTEM: PC-DOS/MS-DOS (D) SOFTWARE: PatentinRelease#1.0, Version#1.25 (vi) CURRENT APPLICATION DATA:
(A) APPLICATION NUMBER:
(B) FILINGDATE :
(C) CLASSIFICATION:
(vii) PRIOR APPLICATION DATA:
(A) APPLICATION NUMBER: US 08/599,226 (B) FILINGDATE: 09-FEB-1996
HU 221 984 Bl (C) CLASSIFICATION:
(vii) PRIOR APPLICATION DATA:
(A) APPLICATION NUMBER: US 60/031,476 (B) FILINGDATE: 25-NOV-1996 (C) CLASSIFICATION:
(viii) ATTORNEY/AGENT INFORMATION:
(A) NAME: DeConti, Giulio A., Jr.
(B) REGISTRATION NUMBER: 31,503 (C) REFERENCE/DOCKET NUMBER: BBI-043CPPC (ix) TELECOMMUNICATION INFORMATION:
(A) TELEPHONÉ: (617)227-7400 (B) TELEFAX: (617)227-5941 (2) INFORMATION FÓR SEQ ID NO: 1:
(i) SEQUENCECHARACTERISTICS:
(A)LENGTH: 107 amino acids (Β) ΤΥΡΕ: amino acid (D) TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULETYPE: peptíde (v) FRAGMENT ΤΥΡΕ : internál (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 1:
Asp Ile Gin Me t Thr Gin Ser Pro Sér Ser Leu Ser Al a Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Al a Ser Gin Gly Ile Arg Asn Tyr
20 25 30
Leu Alá Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Al a Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Al a Al a Se r Thr Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gin Pro
65 70 75 80
Glu Asp Val Al a Thr Tyr Tyr Cys Gin Arg Tyr Asn Arg Alá Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 (2) INFORMATION FÓR SEQ ID NO: 2:
(i) SEQUENCECHARACTERISTICS:
(A) LENGTH: 121 amino acids (Β) ΤΥΡΕ: amino acid (D)TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULETYPE: peptide (v) FRAGMENT ΤΥΡΕ: internál (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 2:
Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly G1 y Leu Val Gin Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Al a Alá Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr
20 25 30
Alá Me t His Trp Val Arg Gin Alá Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Al a Ile Thr Trp Asn Ser Gly Hi s Ile Asp Tyr Alá Asp Ser Val
50 55 60
HU 221 984 Β1
Glu Gly 65
Leu Gin
Alá Lys
Arg Phe
Me t Asn
Val Ser 100
Thr Ile 70
Se r Leu
85
Tyr Leu
Ser Arg
Arg Alá
Ser Thr
Asp Asn
Glu Asp
90
Al a Ser
105
Alá Lys 75
Thr Alá
Ser Leu
Asn Ser
Val Tyr
Asp Tyr 110
Leu Tyr 80
Tyr Cys 95
Trp Gly
Gin Gly Thr
Leu Val
Thr Val
Ser Ser
115 120 (2) INFORMATION FÓR SEQ ID NO: 3:
<i) SEQUENCECHARACTERISTICS:
(A) LENGTH: 9 amino acids (B) TYPE: amino acid (D)TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULE TYPE: peptide (v) FRAGMENTTYPE: internál (ix)FEATURE:
(A) NAME/KEY : Modified-site (B) LOCATION: 9 (D) OTHER INFORMATION: /note=„Xaa is Thr or Alá” (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO:3:
Gin Arg Tyr Asn Arg Alá Pro Tyr Xaa
5 (2) INFORMATION FÓR SEQ ID NO: 4:
(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:
(A) LENGTH: 12 amino acids (B) TYPE: amino acid (D)TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULE TYPE: peptide (v) FRAGMENTTYPE: internál (ix)FEATURE:
(A) NAME/KEY: Modified-site (B) LOCATION: 12 (D) OTHER INFORMATION: /note=„Xaa is Tyr or Asn” (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO :4:
Val Ser Tyr Leu Ser Thr Alá Ser Ser Leu Asp 1 5 10 (2) INFORMATION FÓR SEQ ID NO: 5:
(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:
(A) LENGTH: 7 amino acids (B) TYPE: amino acid (D)TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULE TYPE: peptide (v) FRAGMENTTYPE: internál (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 5:
Alá Alá Ser Thr Leu Gin Ser 1 5 (2) INFORMATION FÓR SEQ ID NO: 6:
(i) SEQUENCECHARACTERISTICS:
(A) LENGTH: 17 amino acids (B) TYPE: amino acid (D)TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULE TYPE : peptide (v) FRAGMENTTYPE: internál (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 6:
Alá I le Thr Trp Asn Ser Gly His Ile Asp Tyr
5 10
Xaa
Al a
Asp Ser
Val Glu 15
Gly
HU 221 984 Β1 (2) INFORMATION FÓR SEQ ID NO: 7:
(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:
(A) LENGTH: 11 amino acids (Β) ΤΥΡΕ: amino acid (D)TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULE ΤΥΡΕ: peptide (v) FRAGMENTTYPE: internál (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 7:
Arg Alá Ser Gin Gly Ile Arg Asn Tyr Leu Alá 1 5 10 (2) INFORMATION FÓR SEQ ID NO: 8:
(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:
(A) LENGTH: 5 amino acids (Β) ΤΥΡΕ: amino acid (D)TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULE ΤΥΡΕ: peptide (v) FRAGMENTTYPE: internál (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 8:
Asp Tyr Alá Met His 1 5 (2) INFORMATION FÓR SEQ ID NO:9:
(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:
(A) LENGTH: 107 amino acids (Β) ΤΥΡΕ: amino acid (DJTOPOLOGY: linear (ii) MOLECULE ΤΥΡΕ: peptide (v) FRAGMENTTYPE: internál (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 9:
Asp Ile Gin Met Thr Gin Se r Pro Ser Ser Leu Ser Al a Se r Ile Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Alá Ser Gin Gly Ile Arg Asn Tyr
20 25 30
Leu Al a Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Al a Pr o Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Al a Alá Ser Thr Leu Gin Ser Gly Val Pr o Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gin Pro
65 70 75 80
Glu Asp Val Al a Thr Tyr Tyr Cys Gin Lys Tyr Asn Ser Al a Pr o Tyr
85 90 95
Al a Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
(2) INFORMATION FÓR SEQ ID NO: 10:
(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS :
(A) LENGTH: 121 amino acids (Β) ΤΥΡΕ: amino acid (D)TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULE ΤΥΡΕ: peptide (v) FRAGMENTTYPE: internál (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 10:
Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val
5 10
Gin Pro Gly Arg 15
HU 221 984 Bl
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Alá Al a Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr
20 25 30
Alá Met His Trp Val Arg Gin Al a Pro Gly Lys G1 y Leu Asp Trp Val
35 40 45
Ser Al a Ile Thr Trp Asn Ser Gly Hi s Ile Asp Tyr Alá Asp Ser Val
50 55 60
Glu Gly Arg Phe Al a Val Ser Arg Asp Asn Alá Lys Asn Al a Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gin Me t Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Al a Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Lys Alá Se r Tyr Leu Ser Thr Ser Ser Ser Leu Asp Asn Trp Gly
100 105 110
Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 (2) INFORMATION FÓR SEQ ID NO: 11:
(i) SEQUENCECHARACTERISTICS:
(A) LENGTH: 9 amino acids (B) TYPE: amino acid (D)TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULETYPE: peptide (v) FRAGMENTTYPE: internál (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 11: Gin Lys Tyr Asn Ser Alá Pro Tyr Alá 1 5 (2) INFORMATION FÓR SEQ ID NO: 12:
(i) SEQUENCECHARACTERISTICS:
(A) LENGTH: 9 amino acids (B) ΤΥΡΕ: amino acid (D)TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULE ΤΥΡΕ: peptide (v) FRAGMENTTYPE: internál (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 12: Gin Lys Tyr Asn Arg Alá Pro Tyr Alá 1 5 (2) INFORMATION FÓR SEQ ID NO: 13:
(i) SEQUENCECHARACTERISTICS:
(A) LENGTH: 9 amino acids (B) ΤΥΡΕ: amino acid (D)TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULE ΤΥΡΕ: peptide (v) FRAGMENTTYPE: internál (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 13: Gin Lys Tyr Gin Arg Alá Pro Tyr Thr 1 5 (2) INFORMATION FÓR SEQ ID NO: 14:
(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:
(A) LENGTH: 9 amino acids (B) ΤΥΡΕ: amino acid (D)TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULETYPE: peptide (v) FRAGMENTTYPE: internál (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 14:
Gin Lys Tyr Ser Ser Alá Pro Tyr Thr
5
HU 221 984 Β1 (2) INFORMATION FÓR SEQID NO: 15:
(i) SEQUENCECHARACTERISTICS:
(A) LENGTH: 9 amino acids (Β) ΤΥΡΕ: amino acid (D) TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULETYPE: peptide (v) FRAGMENTTYPE: internál (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 15:
Gin Lys Tyr Asn Ser Alá Pro Tyr Thr 1 5 (2) INFORMATION FÓR SEQ ID NO: 16:
(i) SEQUENCECHARACTERISTICS:
(A) LENGTH: 9 amino acids (Β) ΤΥΡΕ: amino acid (D) TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULETYPE: peptide (v) FRAGMENTTYPE: internál (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 16:
Gin Lys Tyr Asn Arg Alá Pro Tyr Thr 1 5 (2) INFORMATION FÓR SEQ IDNO: 17:
(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:
(A) LENGTH: 9 amino acids (B) TYPE: amino acid (D) TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULETYPE: peptide (v) FRAGMENTTYPE: internál (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 17:
Gin Lys Tyr Asn Ser Alá Pro Tyr Tyr 1 5 (2) INFORMATION FÓR SEQ ID NO: 18:
(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:
(A) LENGTH: 9 amino acids (Β) TYPE: amino acid (D) TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULETYPE: peptide (v) FRAGMENTTYPE: internál (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ED NO: 18:
Gin Lys Tyr Asn Ser Alá Pro Tyr Asn 1 5 (2) INFORMATION FÓR SEQ ID NO: 19:
(i) SEQUENCECHARACTERISTICS:
(A) LENGTH: 9 amino acids (B) TYPE: amino acid (D) TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULE TYPE: peptide (v) FRAGMENTTYPE: internál (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQIDNO:19:
Gin Lys Tyr Thr Ser Alá Pro Tyr Thr 1 5 (2) INFORMATION FÓR SEQ ID NO: 20:
(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:
(A) LENGTH: 9 amino acids (B) TYPE: amino acid (D) TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULETYPE: peptide (v) FRAGMENTTYPE: internál (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO:20:
Gin Lys Tyr Asn Arg Alá Pro Tyr Asn
5
HU 221 984 Β1 (2) INFORMATION FÓR SEQID NO:21:
(i) SEQUENCECHARACTERISTICS:
(A) LENGTH: 9 amino acids (Β) ΤΥΡΕ: amino acid (D)TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULE ΤΥΡΕ: peptide (v) FRAGMENTTYPE: internál (xi) SEQUENCE DESCRJPTION: SEQ ID NO: 21:
Gin Lys Tyr Asn Ser Alá Alá Tyr Ser 1 5 (2) INFORMATION FÓR SEQ ID NO: 22 (i) SEQUENCECHARACTERISTICS:
(A) LENGTH: 9 amino acids (Β) ΤΥΡΕ: amino acid (D)TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULE ΤΥΡΕ: peptide (v) FRAGMENTTYPE: internál (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 22:
Gin Gin Tyr Asn Ser Alá Pro Asp Thr 1 5 (2) INFORMATION FÓR SEQ ID NO.23:
(i) SEQUENCECHARACTERISTICS:
(A) LENGTH: 9 amino acids (Β) ΤΥΡΕ: amino acid (D)TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULE ΤΥΡΕ: peptide (v) FRAGMENTTYPE: internál (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 23:
Gin Lys Tyr Asn Ser Asp Pro Tyr Thr 1 5 (2) INFORMATION FÓR SEQ ID NO:24:
(i) SEQUENCECHARACTERISTICS:
(A) LENGTH: 9 amino acids (Β) ΤΥΡΕ: amino acid (D)TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULE ΤΥΡΕ: peptide (v) FRAGMENTTYPE: internál (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 24:
Gin Lys Tyr Ile Ser Alá Pro Tyr Thr 1 5 (2) INFORMATION FÓR SEQ ID NO: 25:
(i) SEQUENCECHARACTERISTICS:
(A) LENGTH: 9 amino acids (Β) ΤΥΡΕ: amino acid (D)TOPOLOGY. linear (ii) MOLECULE ΤΥΡΕ: peptide (v) FRAGMENTTYPE: internál (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO:25:
Gin Lys Tyr Asn Arg Pro Pro Tyr Thr 1 5 (2) INFORMATION FÓR SEQ ID NO: 26:
(i) SEQUENCECHARACTERISTICS:
(A) LENGTH: 9 amino acids (Β) ΤΥΡΕ: amino acid (D)TOPOLOGY : linear (ii) MOLECULE ΤΥΡΕ: peptide (v) FRAGMENT ΤΥΡΕ: internál (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO:26:
Gin Arg Tyr Asn Arg Alá Pro Tyr Alá
5
HU 221 984 Bl (2) INFORMATION FÓR SEQ ID NO: 27 :
(i) SEQUENCECHARACTERISTICS:
(A) LENGTH: 12 amino acids (B) TYPE: amino acid (D)TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULETYPE: peptide (v) FRAGMENTTYPE: internál (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 27: Alá Ser Tyr Leu Ser Thr Ser Ser Ser 1 5 (2) INFORMATION FÓR SEQ ID NO: 28:
(i) SEQUENCECHARACTERISTICS:
(A) LENGTH: 12 amino acids (B) TYPE: amino acid (D)TOPOLOGY : linear (ii) MOLECULETYPE: peptide (v) FRAGMENTTYPE: internál (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 28: Alá Ser Tyr Leu Ser Thr Ser Ser Ser 1 5 (2) INFORMATION FÓR SEQ ID NO:29:
(i) SEQUENCECHARACTERISTICS:
(A) LENGTH: 12 amino acids (B) TYPE: amino acid (D)TOPOLOGY ; linear (ü) MOLECULETYPE: peptide (v) FRAGMENTTYPE: internál (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 29: Alá Ser Tyr Leu Ser Thr Ser Ser Ser 1 5 (2) INFORMATION FÓR SEQ ID NO: 30:
(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:
(A) LENGTH: 12 amino acids (B) TYPE: amino acid (D)TOPOLOGY: linear (ü) MOLECULE TYPE: peptide (v) FRAGMENTTYPE: internál (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 30 : Alá Ser Tyr Leu Ser Thr Ser Ser Ser 1 5 (2) INFORMATION FÓR SEQ ID NO: 31:
(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:
(A) LENGTH: 12 amino acids (B) TYPE: amino acid (D)TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULE TYPE: peptide (v) FRAGMENTTYPE: internál (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 31: Alá Ser Tyr Leu Ser Thr Ser Phe Ser 1 5 (2) INFORMATION FÓR SEQ ID NO: 32:
(i) SEQUENCECHARACTERISTICS:
(A) LENGTH: 12 amino acids (B) TYPE: amino acid (D)TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULE TYPE: peptide (v) FRAGMENTTYPE: internál (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 32:
Alá Ser Tyr Leu Ser Thr Ser Ser Ser
5
Leu Asp Asn 10
Leu Asp Lys 10
Leu Asp Tyr 10
Leu Asp Asp 10
Leu Asp Tyr 10
Leu Hi s Tyr 10
HU 221 984 Bl (2) INFORMATION FÓR SEQID NO: 33:
(i) SEQUENCECHARACTERISTICS:
(A) LENGTH: 12 amino acids (Β) ΤΥΡΕ: amino acid (D) TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULE ΤΥΡΕ: peptide (v) FRAGMENTTYPE: internál (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 33:
Alá Ser Phe Leu Ser Thr Ser Ser Ser Leu Glu 1 5 10 (2) INFORMATION FÓR SEQ ID NO: 34:
(i) SEQUENCECHARACTERISTICS:
(A) LENGTH: 12 amino acids (Β) ΤΥΡΕ: amino acid (D) TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULE ΤΥΡΕ: peptide (v) FRAGMENTTYPE: internál (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 34:
Alá Ser Tyr Leu Ser Thr Alá Ser Ser Leu Glu 1 5 10 (2) INFORMATION FÓR SEQ ID NO: 35:
(i) SEQUENCECHARACTERISTICS:
(A) LENGTH: 12 amino acids (Β) ΤΥΡΕ: amino acid (D) TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULE ΤΥΡΕ: peptide (v) FRAGMENTTYPE: internál (xi) SEQUENCE DESCRIPTION; SEQ ID NO: 35:
Val Ser Tyr Leu Ser Thr Alá Ser Ser Leu Asp 1 5 10 (2) INFORMATION FÓR SEQ ID NO: 36 :
(i) SEQUENCECHARACTERISTICS:
(A) LENGTH: 321 base pairs (Β) ΤΥΡΕ: nucleic acid (C) STRANDEDNESS: double (D) TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULE ΤΥΡΕ: cDNA (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 36: GACATCCAGA TGACCCAGTC TCCATCCTCC CTGTCTGCAT ATCACTTGTC GGGCAAGTCA GGGCATCAGA AATTACTTAG GGGAAAGCCC CTAAGCTCCT GATCTATGCT GCATCCACTT CGGTTCAGTG GCAGTGGATC TGGGACAGAT TTCACTCTCA GAAGATGTTG CAACTTATTA CTGTCAAAGG TATAACCGTG GGGACCAAGG TGGAAATCAA A (2) INFORMATION FÓR SEQ ID NO 37:
(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:
(A) LENGTH: 363 base pairs (Β) ΤΥΡΕ: nucleic acid (C) STRANDEDNESS: double (D) TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULE ΤΥΡΕ: cDNA (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 37: GAGGTGCAGC TGGTGGAGTC TGGGGGAGGC TTGGTACAGC TCCTGTGCGG CCTCTGGATT CACCTTTGAT GATTATGCCA CCAGGGAAGG GCCTGGAATG GGTCTCAGCT ATCACTTGGA GCGGACTCTG TGGAGGGCCG ATTCACCATC TCCAGAGACA CTGCAAATGA ACAGTCTGAG AGCTGAGGAT ACGGCCGTAT TACCTTAGCA CCGCGTCCTC CCTTGACTAT TGGGGCCAAG AGT
Tyr
Tyr
Asn
CTGTAGGGGA
CCTGGTATCA
TGCAATCAGG
CCATCAGCAG
CACCGTATAC
CCGGCAGGTC
TGCACTGGGT
ATAGTGGTCA
ACGCCAAGAA
ATTACTGTGC
GTACCCTGGT
CAGAGTCACC
GCAAAAACCA
GGTCCCATCT
CCTACAGCCT
TTTTGGCCAG
CCTGAGACTC
CCGGCAAGCT
CATAGACTAT
CTCCCTGTAT
GAAAGTCTCG
CACCGTCTCG
120
180
240
300
321
120
180
240
300
360
363

Claims (63)

  1. SZABADALMI IGÉNYPONTOK
    1. Izolált TNFa-kötő humán antitest vagy antigénkötő része, amely
    a) a humán TNFa-tól 1 χ 10-3 s1 vagy ennél kisebb Koff-értékkel és 1χ10~8 M vagy ennél kisebb Kjértékkel disszociál, mindkettőt felületi plazmonrezonanciávai meghatározva;
    b) könnyű lánc CDR3 doménje 3. számú aminosavszekvenciát vagy az 1., 4., 5., 7. vagy 8. pozícióban egyetlen alaninhelyettesítéssel, vagy az 1., 3., 4., 6., 7.,
    8. és/vagy 9. pozícióban 1-5 konzervatív aminosavhelyettesítéssel módosított 3. számú aminosavszekvenciát tartalmaz;
    c) nehéz lánc CDR3 doménje 4. számú aminosavszekvenciát vagy a 2„ 3., 4., 5., 6., 8., 9., 10. vagy 11. pozícióban egyetlen alaninhelyettesítéssel, vagy a 2.,
    3., 4., 5., 6., 8., 9., 10., 11. és/vagy 12. pozícióban
    1-5 konzervatív aminosavhelyettesítéssel módosított aminosavszekvenciát tartalmaz; és
    d) 1 χ 10~7 M vagy ennél kisebb IC50-értékkel rendelkezik.
  2. 2. Az 1. igénypont szerinti antitest vagy antigénkötő része, amely a humán TNFa citotoxicitását egy standard in vitro L929 assay-ben neutralizálja 1 χ 10~7 M vagy ennél kisebb IC50-értékkel.
  3. 3. Az 2. igénypont szerinti antitest vagy antigénkötő része, amely a humán TNFa citotoxicitását egy standard in vitro L929 assay-ben 1 χ 10-* M vagy kisebb ICjo-értékkel neutralizálja.
  4. 4. A 3. igénypont szerinti antitest vagy antigénkötő része, amely a humán TNFa citotoxicitását egy standard in vitro L929 assay-ben 1 χ 10~9 M vagy ennél kisebb ICso-értékkel neutralizálja.
  5. 5. A 4. igénypont szerinti antitest vagy antigénkötő része, amely a humán TNFa citotoxicitását egy standard in vitro L929 assay-ben 1 χ 10-10 M vagy ennél kisebb ICS0-értékkel neutralizálja.
  6. 6. Az 1. igénypont szerinti antitest vagy antigénkötő része, amely egy rekombináns antitest vagy ennek antigénkötő része.
  7. 7. Az 1. igénypont szerinti antitest vagy antigénkötő része, amely gátolja az ELAM-1 humán TNFa-indukált expresszióját humán köldökvéna endoteliális sejtekben.
  8. 8. Az 1. igénypont szerinti antitest vagy antigénkötő része, amely a humán TNFa-tól 5 χ 10~4 s_1 vagy ennél kisebb Κ^β-értékkel disszociál.
  9. 9. Az 1. igénypont szerinti antitest vagy antigénkötő része, amely a humán TNFa-tól 1 χ 10 4 s-* vagy ennél kisebb K^értékkel disszociál.
  10. 10. Az 1. igénypont szerinti antitest vagy antigénkötő része, amelyben a könnyű lánc variábilis szakaszának (LCVR) CDR3 doménje a 3. számú aminosavszekvenciát vagy az 1., 4., 5., 7. vagy 8. pozícióban egyetlen alaninhelyettesítéssel módosított 3. számú aminosavszekvenciát tartalmazza, és a nehéz lánc variábilis szakaszának (HCVR) CDR3 doménje a 4. számú aminosavszekvenciát vagy a 2., 3., 4., 5., 6., 8., 9., 10. vagy
  11. 11. pozícióban egyetlen alaninhelyettesítéssel módosított 4. számú szekvenciát tartalmazza.
    11. A 10. igénypont szerinti antitest vagy antigénkötő része, amelyben az LCVR még egy 5. számú aminosavszekvenciát tartalmazó CDR2 doménnel és a HCVR egy 6. számú aminosavszekvenciát tartalmazó CDR2 doménnel is rendelkezik.
  12. 12. A 11. igénypont szerinti antitest vagy antigénkötő része, amelyben az LCVR még egy 7. számú aminosavszekvenciát tartalmazó CDR1 doménnel és a HCVR egy 8. számú aminosavszekvenciát tartalmazó CDR1 doménnel is rendelkezik.
  13. 13. Izolált humán TNFa-kötő antitest vagy antigénkötő része, melynek könnyű lánc variábilis szakasza (LCVR) az 1. számú aminosavszekvenciát és nehéz lánc variábilis szakasza (HCVR) a 2. számú aminosavszekvenciát tartalmazza, Kd-értéke 1 χ 10-8 M vagy ennél kisebb és IC50-értéke 1 χ 10-7 vagy ennél kisebb.
  14. 14. A 13. igénypont szerinti antitest, amely egy IgGl nehéz lánc konstans régiót tartalmaz.
  15. 15. A 13. igénypont szerinti antitest, amely egy IgG4 nehéz lánc konstans régiót tartalmaz.
  16. 16. A13. igénypont szerinti antitest, amely egy Fab fragmentum.
  17. 17. A 13. igénypont szerinti antitest, amely egy egyszálú Fv fragmentum.
  18. 18. Az 1. igénypont szerinti antitest vagy antigénkötő része, amelyben a könnyű lánc variábilis régió (LCVR) CDR3 doménje a 3., 11., 12., 13., 14., 15.,.16.,
    17., 18., 19., 20., 21., 22., 23., 24., 25. vagy 26. számú aminosavszekvenciát tartalmazza, vagy a nehéz lánowariábilis régió (HCVR) CDR3 doménje a 4., 27.^28.,
    29., 30., 31., 32., 33. vagy 34. számú aminosavszekvenciát tartalmazza.
  19. 19. Rekombináns humán TNFa-kötő antitest vagy antigénkötő része, amely neutralizálja a humán TNFa aktivitását, de a humán TNFfi-ét nem, és az 1 -18. igénypontok bármelyikében meghatározott tulajdonságokkal rendelkezik.
  20. 20. A 19. igénypont szerinti rekombináns antitest vagy antigénkötő része, amely neutralizálja a csimpánz-TNFa aktivitását is, és legalább még egy további főemlős-TNFa aktivitását a következők közül: páviánTNFa, selyemmajom-TNFa, közönségesmakákó-majom-TNFa és ihesus majom-TNFa.
  21. 21. A 20. igénypont szerinti rekombináns antitest vagy antigénkötő része, amely a kutya-TNFa aktivitását is neutralizálja.
  22. 22. A 20. igénypont szerinti rekombináns antitest vagy antigénkötő része, amely a sertés-TNFa aktivitását is neutralizálja.
  23. 23. Izolált nukleinsav, amely egy, 1. igénypont szerinti antitest könnyű láncát kódolja, melyben a CDR3 dómén a 3. számú aminosavszekvenciát vagy az 1., 4., 5.,
    7. vagy 8. pozícióban egyetlen alaninhelyettesítéssel, vagy az 1., 3., 4., 6., 7., 8. és/vagy 9. pozícióban 1-5 konzervatív aminosavhelyettesítéssel módosított 3. számú szekvenciát tartalmazza.
  24. 24. A 23. igénypont szerinti izolált nukleinsav, amely egy antitest könnyű lánc variábilis régiót (LCVR) kódol.
    HU 221 984 Β1
  25. 25. A 24. igénypont szerinti izolált nukleinsav, amely egy olyan antitest LCVR-t kódol, amelyben a CDR2 dómén az 5. számú aminosavszekvenciát tartalmazza.
  26. 26. A 25. igénypont szerinti izolált nukleinsav, amely egy olyan antitest LCVR-t kódol, amelyben a CDR1 dómén a 7. számú aminoszekvenciát tartalmazza.
  27. 27. Izolált nukleinsav, amely egy, 1. igénypont szerinti antitest nehéz láncát kódolja, melyben a CDR3 dómén a 4. számú aminosavszekvenciát vagy a 2., 3., 4., 5.,
    6., 8., 9., 10. vagy 11. pozícióban egyetlen alaninhelyettesítéssel, vagy a 2., 3., 4., 5., 6., 8., 9., 10., 11. és/vagy 12. pozícióban 1-5 konzervatív aminosavhelyettesítéssel módosított 4. számú szekvenciát tartalmazza.
  28. 28. A 27. igénypont szerinti izolált nukleinsav, amely egy antitest nehéz lánc variábilis régiót (HCVR) kódol.
  29. 29. A 28. igénypont szerinti izolált nukleinsav, amely egy olyan antitest HCVR-t kódol, amelyben a CDR2 dómén a 6. számú aminosavszekvenciát tartalmazza.
  30. 30. A 29. igénypont szerinti izolált nukleinsav, amely egy olyan antitest HCVR-t kódol, amelyben a CDR1 dómén a 8. számú aminoszekvenciát tartalmazza.
  31. 31. Izolált nukleinsav, amely egy, 1. igénypont szerinti antitest könnyű és nehéz láncát kódolja, amelyben a könnyű lánc CDR3 doménje a 3. számú vagy 11 -26. számú aminosavszekvencia valamelyikét és a nehéz lánc CDR3 doménje a 4. számú vagy 27-34. számú aminosavszekvencia valamelyikét tartalmazza.
  32. 32. Izolált nukleinsav, amely egy olyan antitest könnyű lánc variábilis szakaszt kódol, mely az 1. számú aminosavszekvenciát tartalmazza.
  33. 33. A 32. igénypont szerinti izolált nukleinsav, amely a könnyű lánc variábilis szakaszát és a könnyű lánc konstans szakaszát is kódolja.
  34. 34. A 33. igénypont szerinti izolált nukleinsav, amely egy rekombináns expressziós vektor.
  35. 35. Izolált nukleinsav, amely egy olyan antitest nehéz lánc variábilis szakaszt kódol, mely a 2. számú aminosavszekvenciát tartalmazza.
  36. 36. A 35. igénypont szerinti izolált nukleinsav, amely a nehéz lánc variábilis szakaszát és nehéz lánc konstans szakaszát is kódolja.
  37. 37. A 36. igénypont szerinti izolált nukleinsav, amely nehéz lánc konstans szakaszként egy IgGl konstans régiót kódol.
  38. 38. A 36. igénypont szerinti izolált nukleinsav, amely nehéz lánc konstans szakaszként egy IgG4 konstans régiót kódol.
  39. 39. A 37. igénypont szerinti izolált nukleinsav, amely egy rekombináns expressziós vektor.
  40. 40. Rekombináns expressziós vektor, amely
    a) egy olyan antitest könnyű láncot kódol, melynek variábilis szakasza az 1. számú aminosavszekvenciát tartalmazza; és
    b) egy olyan antitest nehéz láncot kódol, melynek variábilis szakasza a 2. számú aminosavszekvenciát tartalmazza.
  41. 41. Gazdasejt, amelybe a 40. igénypont szerinti rekombináns expressziós vektort bevezettük.
  42. 42. Eljárás humán TNFa-kötŐ humán antitest előállítására, azzal jellemezve, hogy egy, 41. igénypont szerinti gazdasejtet alkalmas táptalajban tenyésztünk, amíg a sejt humán TNFa-kötő humán antitestet szintetizál.
  43. 43. Gyógyszerkészítmény, amely egy, 1-22. igénypontok bármelyike szerinti antitestet vagy antigénkötő részét és egy gyógyszerészetileg elfogadható hordozót tartalmaz.
  44. 44. A 43. igénypont szerinti gyógyszerkészítmény, amely legalább még egy további terápiás szert tartalmaz olyan rendellenesség kezelésére, melyben a TNFa káros hatású.
  45. 45. Eljárás humán TNFa-aktivitás in vitro gátlására, azzal jellemezve, hogy a humán TNFa-t az 1 -22. igénypontok bármelyike szerinti antitesttel vagy antigénkötő részével érintkeztetjük, hogy a TNFa aktivitását gátolja.
  46. 46. Egy 1-22. igénypont szerinti antitest vagy antigénkötő része humán TNFa-aktivitás gátlásában történő alkalmazásra.
  47. 47. Egy, 1-22. igénypont szerinti antitest vagy antigénkötő részének alkalmazása olyan rendellenesség kezelésére szolgáló gyógyszer előállítására, melyben a TNFa-aktivitás káros hatású.
  48. 48. A 47. igénypont szerinti alkalmazás, melyben a rendellenesség szepszis.
  49. 49. A 47. igénypont szerinti alkalmazás interleu- r kin-6 (IL-6) citokint is tartalmazó gyógyszer előállttására olyan rendellenesség kezelésére, melyben a szérum . λ vagy plazma IL-6-koncentrációja 500 pg/ml felettit ,
  50. 50. A 47. igénypont szerinti alkalmazás, melyben a rendellenesség autoimmun betegség.
  51. 51. Az 50. igénypont szerinti alkalmazás, melyben az autoimmun betegség rheumatoid arthritis, rheumatoid spondylitis, osteoarthritis vagy köszvényes arthritis.
  52. 52. Az 50. igénypont szerinti alkalmazás, melyben az autoimmun betegség allergia, szklerózis multiplex, autoimmun diabétesz, autoimmun uveitis vagy nefrózisos szindróma.
  53. 53. A 47. igénypont szerinti alkalmazás, melyben a rendellenesség egy fertőző betegség.
  54. 54. A 47. igénypont szerinti alkalmazás, melyben a rendellenesség transzplantátumkilökődés vagy graft versus hőst betegség.
  55. 55. A 47. igénypont szerinti alkalmazás, melyben a rendellenesség egy rosszindulatú daganatos betegség.
  56. 56. A 47. igénypont szerinti alkalmazás, melyben a rendellenesség egy tüdőbetegség.
  57. 57. A 47. igénypont szerinti alkalmazás, melyben a rendellenesség egy bélbetegség.
  58. 58. A 47. igénypont szerinti alkalmazás, melyben a rendellenesség egy szívbetegség.
  59. 59. A 47. igénypont szerinti alkalmazás, azzal jellemezve, hogy a rendellenesség a következő betegségcsoportba tartozik: gyulladásos csontrendellenességek, csontreszorpciós betegség, alkoholos hepatitis, vírushepatitis, fulmináns hepatitis, alvadási zavarok, égések, reperfüziós sérülés, keloidképződés, hegszövetképző41
    HU 221 984 Bl dés, pyrexia, periodontális betegség, kóros elhízás és besugárzás okozta toxicitás.
  60. 60. A 44. igénypont szerinti gyógyszerkészítmény, amely egy, következők közül választott további terápiás szert is tartalmaz: nem szteroid gyulladásgátló szerek, citokin szuppresszív gyulladásgátló szerek, CDP-571/BAY-10-3356, cA2, 75kdTNFR-IgG, 55kdTNFR-IgG, IDEC-CE9.1/SB 210396, DAB 486IL-2, DAB 389-IL-2, Anti-Tac, IL-4, IL-10, IL-4 antagonisták, IL-10 antagonisták, IL-1RA, TNF-bp/s-TNFR, S284, R973401, MK-966, iloprost, metotrexát, talidomid, talidomiddal rokon szerek, leflunomid, tranexaminsav, T-614, prosztaglandin El, tenidap [(+/- )-5-klór-2,3-dihidro-3-(hidroxi-2-tienilmetilén)-2-oxo-1 H-indol-1 -karboxamid], naproxen [(+)-2-naftalén-ecetsav-5-metoxi-a-metil-észter], meloxicam [4-hidroxi-2-metil-JV-(5-metil-2-tiazolil)2//-1,2-benzotiazin-3-karboxamid-l,l-dioxid], piroxicam [4-hidroxi-2-metil-JV-2-piridinil-2H-1,2-benzotiazin-3-karboxamid-l,l-dioxid], diclofenac [2-[(2,6-diklór-fenil)-amino]-fenil-ecetsav-mononátrium- vagy monokáliumsó], indometacin [l-(4-klór-benzoil)-5-metoxi-2-metil-lH-indol-3-ecetsav], sulfasalazine [5-(p(2-piridil-szulfamoil)-fenil-azo)-szalicilsav), azathioprine [6-(( 1 -metil-4-nitro-imidazol-5-il)-tio)-purin], ICE-inhibitorok, zap-70 inhibitorok, lck-inhibitorok, VEGF-inhibitorok, VEGF-R-inhibitorok, kortikoszteroidok, TNF-konvertáz-inhibitorok, anti-IL-12 antitestek, interleukin-11, interleukin-13, interleukin-17 inhibitorok, arany, penicill-amin, klorokin, hidroxi-klorokin, ciklofoszfamid, ciklosporin, antitimocita-globulin, anti-CD4 antitestek, CD5-toxinok, orálisan beadható peptidek, kollagén, dinátrium-lobenzarit, HP228 és HP466 citokint szabályozó szerek, ICAM-1 antiszensz foszforotioát oligodezoxinukleotidok, oldható komplement receptor 1, prednizon, orgotein, glükóz-amino-glükán-poliszulfát, minociklin, anti-IL2R antitestek, haleredetű lipidek, növényi eredetű lipidek, auranofin, fenil-butazon, meklofenaminsav, flufenaminsav, intravénás immunglobulin, zileuton, mikrofenolsav, takrolimusz, szirolimusz, amiprilóz, kladribin, azaribin, budenozid, epidermális növekedési faktor, amino-szalicilátok, 6-merkaptopurin, metronidazol, lipoxigenáz-inhibitorok, mezalamin, olszalazin, balszalazid, antioxidánsok, tromboxáninhibitorok, IL— 1 receptorantagonisták, anti-IL-Ιβ monoklonális antitestek, anti-IL-6 monoklonális antitestek, növekedési faktorok, elasztázinhibitorok, piridinil-imidazolvegyületek, prednizolon glükuroniddal konjugált előtermékei, prednizolon dextránnal konjugált előtermékei, dexametazon vagy budenozid, oldható komplement receptor 1, lassan felszabaduló mesalazin, vérlemezkeaktiváló faktor (PAF) antagonisták, ciprofioxacin, lignokain, prednizolon, metil-prednizolon, ciklofoszfamid,
    4-amino-piridin, tizanidin, interferon-pia, interferonPíb, kopolimer-1, magas nyomású oxigén, intravénás immunglobulin, klabribin, hipertóniás sóoldatok, antibiotikumok, folyamatos hemofiltrálás, karbapenémek, citokinantagonisták, mint a TNFa, IL-Ιβ, IL-6 és/vagy IL-8, SK&F 107647, tetravalens guanilhidrazon CNI-1493, szöveti faktor pathway inhibitor, PHP, vaskelátképzők és kelátok, beleértve a dietilén-triamin-pentaecetsav-vas(III)-komplexet, lizofillin, PGG-glukán, apolipoprotein A-l lipidekben feloldva, királis hidroxámsavak, antiendotoxin antitestek, E5531, rBPI21, szintetikus antiendotoxin peptidek, felületaktivszer-bevitellel végzett terápia és anti-IL-8 antitestek
  61. 61. Az 1-22. igénypontok bármelyike szerinti antitest vagy antigénkötő része terápiás eljárásban történő alkalmazásra.
  62. 62. Az 1-22. igénypontok bármelyike szerinti antitest vagy antigénkötő része legalább egy további terápiás szerrel kombinálva olyan rendellenesség kezelésében történő alkalmazásra, melyben a TNFa-aktivitás káros hatású.
  63. 63. A 62. igénypont szerinti alkalmazás, ahol a további terápiás szert az alábbiak közül választjuk ki: nem szteroid gyulladásgátló szerek, citokin szuppresszív gyulladásgátló szerek, CDP-571/BAY-103356, cA2, 75kdTNFR-IgG, 55kdTNFR-IgG, IDECCE9.1/SB 210396, DAB 486-IL-2, DAB 389-IL-2, Anti-Tac, IL-4, IL-10, IL-4 antagonisták, IL-10 antagonisták, IL-1RA, TNF-bp/s-TNFR, S284, R973401, MK-966, iloprost, metotrexát, talidomid, talidomiddal , rokon szerek, leflunomid, tranexaminsav, T-614, prosztaglandin El, tenidap [(+/-)-5-klór-2,3-dihidro-3-(hidroxi-2-tienil-metilén)-2-oxo-lH-indol-l-karboxamid]>». naproxen [(+)-2-naftalén-ecetsav-5-metoxr-a-metil-ész4· tér], meloxicam [4-hidroxi-2-metil-7V-(5-metil-2-tiazo+ 1 i 1)-2//-1,2-benzotiazin-3-karboxamid-»l, 1 -dioxid]’ piroxicam [4-hidroxi-2-metil-jV-2-piridiniL2H-l,2-ben-í zotiazin-3-karboxamid-l,l-dioxid], diclofenac [2-((2,6-¾ diklór-fenil)-amino]-fenil-ecetsav-mononátrium- vagy. monokáliumsó], indometacin [l-(4-klór-benzoil)-5-me-í toxi-2-metil-lH-indol-3-ecetsav], sulfasalazine [5-(p(2-piridil-szuIfamoil)-fenil-azo)-szalicilsav], azathioprine [6-(( 1 -meti l-4-nitro-imidazol-5-iI)-tio)-purin], ICE-inhibitorok, zap-70 inhibitorok, lck-inhibitorok, VEGF-inhibitorok, VEGF-R-inhibitorok, kortikoszteroidok, TNF-konvertáz-inhibitorok, anti-IL-12 antitestek, interleukin-11, interleukin-13, interleukin-17 inhibitorok, arany, penicill-amin, klorokin, hidroxi-klorokin, ciklofoszfamid, ciklosporin, antitimocita globulin, antiCD4 antitestek, CD5-toxinok, orálisan beadható peptidek, kollagén, dinátrium-lobenzarit, HP228 és HP466 citokint szabályozó szerek, ICAM-1 antiszensz foszforotioát oligodezoxinukleotidok, oldható komplement receptor 1, prednizon, orgotein, glükóz-amino-glükán-poliszulfát, minociklin, anti-IL2R antitestek, haleredetű lipidek, növényi eredetű lipidek, auranofin, fenilbutazon, meklofenaminsav, flufenaminsav, intravénás immunglobulin, zileuton, mikrofenolsav, takrolimusz, szirolimusz, amiprilóz, kladribin, azaribin, budenozid, epidermális növekedési faktor, amino-szalicilátok, 6merkapto-purin, metronidazol, lipoxigenáz-inhibitorok, mezalamin, olszalazin, balszalazid, antioxidánsok, tromboxáninhibitorok, IL-1 receptorantagonisták, antiIL-Ιβ monoklonális antitestek, anti-IL-6 monoklonális antitestek, növekedési faktorok, elasztázinhibitorok,
    HU 221 984 Β1 piridinil-imidazol-vegyületek, prednizolon glükuroniddal konjugált előtennékei, prednizolon dextránnal konjugált előtennékei, dexametazon vagy budenozid, oldható komplement receptor 1, lassan felszabaduló mesalazin, vérlemezkeaktiváló faktor (PAF) antagonisták, ciprofloxacin, lignokain, prednizolon, metilprednizolon, ciklofoszfamid, 4-amino-piridin, tizanidin, interferon-pia, interferon-pib, kopolimer-1, magas nyomású oxigén, intravénás immunglobulin, klabribin, hipertóniás sóoldatok, antibiotikumok, folyamatos hemofiltrálás, kar- 10 bapenémek, citokinantagonisták, mint a TNFa, IL-Ιβ, IL-6 és/vagy IL-8, SK&F 107647, tetravalens guanilhidrazon CNI-1493, szöveti faktor pathway inhibitor, PHP, vaskelátképzők és kelátok, beleértve a dietilén-tri5 amin-pentaecetsav-vas(III)-komplexet, lizofillin, PGGglükán, apolipoprotein A-l lipidekben feloldva, királis hidroxámsavak, antiendotoxin antitestek, E5531, rBPI2i, szintetikus antiendotoxin peptidek, felületaktívszer-bevitellel végzett terápia és anti-IL-8 antitestek.
HU9901874A 1996-02-09 1997-02-10 Humán TNFalfa-t kötő antitestek, ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények és alkalmazásuk HU221984B1 (hu)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US08/599,226 US6090382A (en) 1996-02-09 1996-02-09 Human antibodies that bind human TNFα
US3147696P 1996-11-25 1996-11-25
PCT/US1997/002219 WO1997029131A1 (en) 1996-02-09 1997-02-10 HUMAN ANTIBODIES THAT BIND HUMAN TNF$g(a)

Publications (3)

Publication Number Publication Date
HUP9901874A2 HUP9901874A2 (hu) 1999-09-28
HUP9901874A3 HUP9901874A3 (en) 2000-05-29
HU221984B1 true HU221984B1 (hu) 2003-03-28

Family

ID=26707297

Family Applications (4)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU9901874A HU221984B1 (hu) 1996-02-09 1997-02-10 Humán TNFalfa-t kötő antitestek, ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények és alkalmazásuk
HU0204115A HU228630B1 (en) 1996-02-09 1997-02-10 Use of human anti bodies that bind human tnf-alpha and process for inhibiting of human tnf-alpha activity
HU1300152A HU230048B1 (hu) 1996-02-09 1997-02-10 Humán TNFalfa-kötő antitestek alkalmazása
HU1500179A HU230515B1 (hu) 1996-02-09 1997-02-10 Humán TNFalfa-kötő antitestek alkalmazásai

Family Applications After (3)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU0204115A HU228630B1 (en) 1996-02-09 1997-02-10 Use of human anti bodies that bind human tnf-alpha and process for inhibiting of human tnf-alpha activity
HU1300152A HU230048B1 (hu) 1996-02-09 1997-02-10 Humán TNFalfa-kötő antitestek alkalmazása
HU1500179A HU230515B1 (hu) 1996-02-09 1997-02-10 Humán TNFalfa-kötő antitestek alkalmazásai

Country Status (32)

Country Link
US (9) US6258562B1 (hu)
EP (1) EP0929578B1 (hu)
JP (8) JP3861118B2 (hu)
KR (1) KR100317188B1 (hu)
CN (5) CN103275221B (hu)
AT (1) ATE239041T1 (hu)
AU (1) AU722077B2 (hu)
BG (7) BG64564B1 (hu)
BR (3) BRPI9715219B8 (hu)
CA (1) CA2243459C (hu)
CY (2) CY2463B1 (hu)
CZ (1) CZ292465B6 (hu)
DE (4) DE122004000003I1 (hu)
DK (1) DK0929578T3 (hu)
ES (1) ES2198552T3 (hu)
HK (8) HK1019452A1 (hu)
HU (4) HU221984B1 (hu)
IL (4) IL125697A (hu)
LU (1) LU91062I2 (hu)
MX (1) MX336813B (hu)
NL (1) NL300143I2 (hu)
NO (6) NO316711B1 (hu)
NZ (5) NZ512006A (hu)
PL (2) PL193499B1 (hu)
PT (1) PT929578E (hu)
RO (2) RO123028B1 (hu)
RU (3) RU2270030C2 (hu)
SI (1) SI9720020B (hu)
SK (1) SK284040B6 (hu)
TR (1) TR199801532T2 (hu)
UA (2) UA57726C2 (hu)
WO (1) WO1997029131A1 (hu)

Families Citing this family (460)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5959087A (en) * 1989-08-07 1999-09-28 Peptide Technology, Ltd. Tumour necrosis factor binding ligands
DE10399036I1 (de) * 1989-08-07 2004-04-01 Peptide Technology Ltd Bindeligande für Tumornekrosisfaktor.
US20030225254A1 (en) * 1989-08-07 2003-12-04 Rathjen Deborah Ann Tumour necrosis factor binding ligands
US7192584B2 (en) 1991-03-18 2007-03-20 Centocor, Inc. Methods of treating psoriasis with anti-TNF antibodies
US6270766B1 (en) 1992-10-08 2001-08-07 The Kennedy Institute Of Rheumatology Anti-TNF antibodies and methotrexate in the treatment of arthritis and crohn's disease
US6706264B1 (en) 1994-03-14 2004-03-16 Genetics Institute, Llc Use of IL-12 antagonists in the treatment of conditions promoted by an increase in levels of IFN-y
ZA95960B (en) * 1994-03-14 1995-10-10 Genetics Inst Use of interleukin-12 antagonists in the treatment of autoimmune diseases
US20010055581A1 (en) 1994-03-18 2001-12-27 Lawrence Tamarkin Composition and method for delivery of biologically-active factors
US6090382A (en) * 1996-02-09 2000-07-18 Basf Aktiengesellschaft Human antibodies that bind human TNFα
HU221984B1 (hu) * 1996-02-09 2003-03-28 Basf Ag Humán TNFalfa-t kötő antitestek, ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények és alkalmazásuk
US7129061B1 (en) * 1996-08-07 2006-10-31 Biogen Idec Ma Inc. Tumor necrosis factor related ligand
CA2288992C (en) * 1997-04-30 2012-06-12 Enzon, Inc. Single-chain antigen-binding proteins capable of glycosylation, production and uses thereof
US20040009166A1 (en) * 1997-04-30 2004-01-15 Filpula David R. Single chain antigen-binding polypeptides for polymer conjugation
US7229841B2 (en) 2001-04-30 2007-06-12 Cytimmune Sciences, Inc. Colloidal metal compositions and methods
US6407218B1 (en) 1997-11-10 2002-06-18 Cytimmune Sciences, Inc. Method and compositions for enhancing immune response and for the production of in vitro mabs
US7067144B2 (en) * 1998-10-20 2006-06-27 Omeros Corporation Compositions and methods for systemic inhibition of cartilage degradation
US7553487B2 (en) 1998-12-14 2009-06-30 Genetics Institute, Llc Method and compositions for treating asthma
NZ512942A (en) 1998-12-14 2004-01-30 Univ Johns Hopkins Polynucleotides encoding the IL-13 binding chains of the interleukin receptor, pharmaceutical compositions comprising the protein and methods of identifying inhibitors
ATE488250T1 (de) * 1999-03-02 2010-12-15 Centocor Inc Antikörper gegen tnf alpha zur therapie von steroidresistentem asthma
US6914128B1 (en) 1999-03-25 2005-07-05 Abbott Gmbh & Co. Kg Human antibodies that bind human IL-12 and methods for producing
US20040220103A1 (en) 1999-04-19 2004-11-04 Immunex Corporation Soluble tumor necrosis factor receptor treatment of medical disorders
JP2003511355A (ja) * 1999-10-06 2003-03-25 ビーエーエスエフ アクチェンゲゼルシャフト 併用療法のためのエンドセリンシグナル伝達経路のインヒビターおよびαｖβ３受容体アンタゴニスト
KR20110032012A (ko) 2000-02-10 2011-03-29 아보트 러보러터리즈 사람 인터류킨-１８에 결합하는 항체 및 이를 제조하고 사용하는 방법
GB0013810D0 (en) 2000-06-06 2000-07-26 Celltech Chiroscience Ltd Biological products
PE20020132A1 (es) 2000-06-29 2002-03-04 Abbott Lab Anticuerpos de especificidad doble y metodos para la elaboracion y el uso de los mismos
UA81743C2 (uk) * 2000-08-07 2008-02-11 Центокор, Инк. МОНОКЛОНАЛЬНЕ АНТИТІЛО ЛЮДИНИ, ЩО СПЕЦИФІЧНО ЗВ'ЯЗУЄТЬСЯ З ФАКТОРОМ НЕКРОЗУ ПУХЛИН АЛЬФА (ФНПα), ФАРМАЦЕВТИЧНА КОМПОЗИЦІЯ, ЩО ЙОГО МІСТИТЬ, ТА СПОСІБ ЛІКУВАННЯ РЕВМАТОЇДНОГО АРТРИТУ
US20050196755A1 (en) * 2000-11-17 2005-09-08 Maurice Zauderer In vitro methods of producing and identifying immunoglobulin molecules in eukaryotic cells
WO2002051438A2 (en) 2000-12-22 2002-07-04 MAX-PLANCK-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. Use of repulsive guidance molecule (rgm) and its modulators
IL156910A0 (en) * 2001-01-16 2004-02-08 Regeneron Pharma Isolating cells expressing secreted proteins
US20090137416A1 (en) 2001-01-16 2009-05-28 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Isolating Cells Expressing Secreted Proteins
JP2005508608A (ja) 2001-03-22 2005-04-07 アボット ゲーエムベーハー ウント カンパニー カーゲー 問題遺伝子に対して特異的な抗体を発現するトランスジェニック動物及びその使用
US6410955B1 (en) * 2001-04-19 2002-06-25 Micron Technology, Inc. Comb-shaped capacitor for use in integrated circuits
CA2817619A1 (en) * 2001-06-08 2002-12-08 Abbott Laboratories (Bermuda) Ltd. Methods of administering anti-tnf.alpha. antibodies
AU2002316384A1 (en) * 2001-06-26 2003-03-03 Photomed Technologies, Inc. Multiple wavelength illuminator
PT2087908T (pt) 2001-06-26 2018-07-16 Amgen Inc Anticorpos contra opgl
US20050271663A1 (en) * 2001-06-28 2005-12-08 Domantis Limited Compositions and methods for treating inflammatory disorders
TWI327597B (en) 2001-08-01 2010-07-21 Centocor Inc Anti-tnf antibodies, compositions, methods and uses
AU2002341766A1 (en) * 2001-09-20 2003-04-01 Genstar Therapeutics Corporation Improved methods for treatment with viral vectors
US20030065382A1 (en) * 2001-10-02 2003-04-03 Fischell Robert E. Means and method for the treatment of coronary artery obstructions
JP2005508915A (ja) 2001-10-04 2005-04-07 ジェネティックス・インスチチュート・リミテッド・ライアビリティ・カンパニー インターロイキン２１受容体活性を調節する方法および組成物
US20040018195A1 (en) * 2002-03-26 2004-01-29 Griswold Don Edgar Diabetes-related immunoglobulin derived proteins, compositions, methods and uses
US20030206898A1 (en) * 2002-04-26 2003-11-06 Steven Fischkoff Use of anti-TNFalpha antibodies and another drug
US20040009172A1 (en) * 2002-04-26 2004-01-15 Steven Fischkoff Use of anti-TNFalpha antibodies and another drug
DK1944322T3 (da) * 2002-07-19 2015-06-22 Abbvie Biotechnology Ltd Behandling af TNFalfa-relaterede sygdomme
US20090280065A1 (en) * 2006-04-10 2009-11-12 Willian Mary K Uses and Compositions for Treatment of Psoriasis
US20040033228A1 (en) 2002-08-16 2004-02-19 Hans-Juergen Krause Formulation of human antibodies for treating TNF-alpha associated disorders
AU2003265361A1 (en) * 2002-08-28 2004-03-19 Pharmacia Corporation Stable ph optimized formulation of a modified antibody
MY150740A (en) * 2002-10-24 2014-02-28 Abbvie Biotechnology Ltd Low dose methods for treating disorders in which tnf? activity is detrimental
US20060034845A1 (en) 2002-11-08 2006-02-16 Karen Silence Single domain antibodies directed against tumor necrosis factor alpha and uses therefor
CA2505325C (en) 2002-11-08 2014-02-25 Ablynx N.V. Stabilized single domain antibodies
US9320792B2 (en) 2002-11-08 2016-04-26 Ablynx N.V. Pulmonary administration of immunoglobulin single variable domains and constructs thereof
US20040101939A1 (en) * 2002-11-22 2004-05-27 Santora Ling C. Method for reducing or preventing modification of a polypeptide in solution
US20040162414A1 (en) * 2002-11-22 2004-08-19 Santora Ling C. Method for reducing or preventing modification of a polypeptide in solution
JP4754219B2 (ja) * 2002-12-02 2011-08-24 アムジエン・フレモント・インコーポレイテツド 腫瘍壊死因子を対象とする抗体、およびそれらの使用
WO2004060911A2 (en) * 2002-12-30 2004-07-22 Amgen Inc. Combination therapy with co-stimulatory factors
US7101978B2 (en) * 2003-01-08 2006-09-05 Applied Molecular Evolution TNF-α binding molecules
JP2007525409A (ja) * 2003-01-08 2007-09-06 アプライド モレキュラー エボリューション，インコーポレイテッド ＴＮＦ−α結合分子
ES2542330T3 (es) * 2003-01-10 2015-08-04 Ablynx N.V. Polipéptidos terapéuticos, homólogos de los mismos, fragmentos de los mismos y su uso en modular la agregación mediada por plaquetas
DE10303974A1 (de) 2003-01-31 2004-08-05 Abbott Gmbh & Co. Kg Amyloid-β(1-42)-Oligomere, Verfahren zu deren Herstellung und deren Verwendung
JP4914209B2 (ja) * 2003-03-14 2012-04-11 ワイス ヒトｉｌ−２１受容体に対する抗体および該抗体の使用
EP1460088A1 (en) 2003-03-21 2004-09-22 Biotest AG Humanized anti-CD4 antibody with immunosuppressive properties
WO2004098578A2 (en) * 2003-05-12 2004-11-18 Altana Pharma Ag Composition comprising a pde4 inhibitor and a tnf-alfa antagonist selected from infliximab, adalimumab, cdp870 and cdp517
FR2856075B1 (fr) * 2003-06-16 2007-10-12 Monoclonal Antibodies Therapeu Procede essentiellement automatise de criblage a grande echelle de cellules secretant des anticorps monoclonaux
FR2859725B1 (fr) * 2003-09-16 2006-03-10 Neovacs Procede a haut rendement pour l'obtention d'anticorps humains neutralisant l'activite biologique d'une cytokine humaine
US20050100965A1 (en) 2003-11-12 2005-05-12 Tariq Ghayur IL-18 binding proteins
KR100772800B1 (ko) * 2003-11-17 2007-11-01 주식회사유한양행 인간 종양괴사인자 α를 인식하는 단일클론항체의가변영역 및 이를 코딩하는 유전자
AU2004311630A1 (en) 2003-12-02 2005-07-21 Cytimmune Sciences, Inc. Methods and compositions for the production of monoclonal antibodies
SG10201404273QA (en) 2003-12-23 2014-10-30 Genentech Inc Novel anti-il 13 antibodies and uses thereof
US7435799B2 (en) * 2004-01-08 2008-10-14 Applied Molecular Evolution TNF-α binding molecules
US20050260679A1 (en) * 2004-03-19 2005-11-24 Sirid-Aimee Kellerman Reducing the risk of human anti-human antibodies through V gene manipulation
US7625549B2 (en) 2004-03-19 2009-12-01 Amgen Fremont Inc. Determining the risk of human anti-human antibodies in transgenic mice
TW201705980A (zh) * 2004-04-09 2017-02-16 艾伯維生物技術有限責任公司 用於治療ＴＮＦα相關失調症之多重可變劑量療法
CN100427504C (zh) * 2004-06-02 2008-10-22 北京天广实生物技术有限公司 TNFα高亲和力嵌合抗体及其用途
US7501121B2 (en) 2004-06-17 2009-03-10 Wyeth IL-13 binding agents
AR049390A1 (es) 2004-06-09 2006-07-26 Wyeth Corp Anticuerpos contra la interleuquina-13 humana y usos de los mismos
GB0414054D0 (en) 2004-06-23 2004-07-28 Owen Mumford Ltd Improvements relating to automatic injection devices
BRPI0514138A (pt) * 2004-08-05 2008-05-27 Wyeth Corp método para tratar, melhorar, ou prevenir um distúrbio, proteìna de fusão, vetor, célula hospedeira recombinante, método para produzir uma proteìna de fusão, composição farmacêutica, e, métodos para transplantar/enxertar um órgão, tecido, célula ou grupo de células em um indivìduo mamìfero, e para tratar, prevenir ou melhorar rejeição de transplante/enxerto em um receptor de transplante/enxerto mamìfero
WO2006041970A2 (en) * 2004-10-08 2006-04-20 Abbott Biotechnology Ltd. Treatment of respiratory syncytial virus (rsv) infection
EP1799717B1 (en) * 2004-10-22 2015-05-20 Danisco US Inc. Isolating human antibodies
CN103169965A (zh) 2004-11-19 2013-06-26 比奥根艾迪克Ma公司 治疗多发性硬化
AU2006213875B2 (en) 2005-02-08 2010-08-19 Genzyme Corporation Antibodies to TGFBETA
CN102178953A (zh) * 2005-02-14 2011-09-14 惠氏公司 白介素-17f抗体及其它il-17f信号传递拮抗剂和它们的用途
JP2008532493A (ja) * 2005-02-14 2008-08-21 ワイス Ｉｌ−１７ｆとｉｌ−１７ｒとの間の相互作用の特性解析
EP1859277A4 (en) 2005-02-17 2010-03-17 Biogen Idec Inc TREATMENT OF NEUROLOGICAL DISORDERS
GT200600148A (es) * 2005-04-14 2006-11-22 Metodos para el tratamiento y la prevencion de fibrosis
CA2607697C (en) 2005-05-10 2015-01-06 Biogen Idec Ma Inc. Treating and evaluating inflammatory disorders
JP5757495B2 (ja) 2005-05-16 2015-07-29 アッヴィ バイオテクノロジー リミテッド びらん性多発性関節炎の治療のためのｔｎｆ阻害剤の使用
AU2012254978C1 (en) * 2005-05-16 2017-06-01 Abbvie Biotechnology Ltd Use of TNF inhibitor for treatment of erosive polyarthritis
CA2610960A1 (en) * 2005-06-06 2006-12-14 Wyeth Expression profiles of peripheral blood mononuclear cells for inflammatory bowel diseases
KR101539545B1 (ko) 2005-06-07 2015-07-24 에스바테크 - 어 노바티스 컴파니 엘엘씨 ＴＮＦα를 억제하는 안정적이고 가용성인 항체
JP2008543839A (ja) 2005-06-14 2008-12-04 アムジェン インコーポレーテッド 自己緩衝タンパク質製剤
US20060286108A1 (en) * 2005-06-16 2006-12-21 Bell Katherine A Topical compositions for the treatment of chronic wounds
WO2006138690A2 (en) * 2005-06-17 2006-12-28 Abbott Laboratories Improved method of treating degenerative spinal disorders
WO2007002362A2 (en) * 2005-06-24 2007-01-04 Duke University A direct drug delivery system based on thermally responsive biopolymers
WO2007014162A2 (en) 2005-07-21 2007-02-01 Abbott Laboratories Multiple gene expression including sorf constructs and methods with polyproteins, pro-proteins, and proteolysis
TW200726776A (en) * 2005-07-29 2007-07-16 Friedrich Alexander University Of Erlangen Nuremberg CD33-specific single-chain immunotoxin and methods of use
US7612181B2 (en) 2005-08-19 2009-11-03 Abbott Laboratories Dual variable domain immunoglobulin and uses thereof
WO2007024715A2 (en) 2005-08-19 2007-03-01 Abbott Laboratories Dual variable domain immunoglobin and uses thereof
US20070041905A1 (en) 2005-08-19 2007-02-22 Hoffman Rebecca S Method of treating depression using a TNF-alpha antibody
EP2500358A3 (en) 2005-08-19 2012-10-17 Abbott Laboratories Dual variable domain immunoglobulin and uses thereof
US20090215992A1 (en) * 2005-08-19 2009-08-27 Chengbin Wu Dual variable domain immunoglobulin and uses thereof
CN101277974A (zh) 2005-09-30 2008-10-01 阿伯特有限及两合公司 排斥性引导分子(rgm)蛋白质家族的蛋白质的结合结构域及其功能性片段和它们的用途
WO2007049286A1 (en) * 2005-10-27 2007-05-03 Tata Memorial Centre A system for ex-vivo separation of apoptotic chromatin particles from blood or plasma
BRPI0618085A2 (pt) * 2005-11-01 2011-08-16 Abbott Biotech Ltd processos e kits para diagnóstico de espondilite ancilosante usando biomarcadores
PE20070684A1 (es) 2005-11-14 2007-08-06 Amgen Inc MOLECULAS QUIMERICAS DE ANTICUERPO RANKL-PTH/PTHrP
EP1954718B1 (en) 2005-11-30 2014-09-03 AbbVie Inc. Anti-a globulomer antibodies, antigen-binding moieties thereof, corresponding hybridomas, nucleic acids, vectors, host cells, methods of producing said antibodies, compositions comprising said antibodies, uses of said antibodies and methods of using said antibodies
PT1976877E (pt) 2005-11-30 2014-04-29 Abbvie Inc Anticorpos monoclonais contra proteína beta-amilóide e suas utilizações
US20130172274A1 (en) 2005-12-20 2013-07-04 Duke University Methods and compositions for delivering active agents with enhanced pharmacological properties
CA2634034A1 (en) 2005-12-20 2007-06-28 Duke University Methods and compositions for delivering active agents with enhanced pharmacological properties
US8178495B2 (en) 2008-06-27 2012-05-15 Duke University Therapeutic agents comprising a GLP-1 receptor agonist and elastin-like peptide
US8841255B2 (en) * 2005-12-20 2014-09-23 Duke University Therapeutic agents comprising fusions of vasoactive intestinal peptide and elastic peptides
KR20090039666A (ko) 2006-02-01 2009-04-22 아라나 테라퓨틱스 리미티드 도메인 항체 구조체
TW200744634A (en) 2006-02-21 2007-12-16 Wyeth Corp Methods of using antibodies against human IL-22
TWI417301B (zh) 2006-02-21 2013-12-01 Wyeth Corp 對抗人類介白素-２２（ｉｌ-２２）之抗體及其用途
CA2647029A1 (en) 2006-04-05 2007-10-18 Abbott Biotechnology Ltd. Antibody purification
CA2564435A1 (en) 2006-04-10 2007-10-10 Abbott Biotechnology Ltd. Methods for monitoring and treating intestinal disorders
EP2010214A4 (en) 2006-04-10 2010-06-16 Abbott Biotech Ltd USES AND COMPOSITIONS FOR THE TREATMENT OF RHEUMATOID ARTHRITIS
EP2708242A3 (en) 2006-04-10 2014-03-26 Abbott Biotechnology Ltd Uses and compositions for treatment of ankylosing spondylitis
EP2012586A4 (en) 2006-04-10 2010-08-18 Abbott Biotech Ltd USES AND COMPOSITIONS FOR THE TREATMENT OF ANKYLOSANTE SPONDYLARTHRITIS
US20090317399A1 (en) * 2006-04-10 2009-12-24 Pollack Paul F Uses and compositions for treatment of CROHN'S disease
EP2666472A3 (en) 2006-04-10 2014-04-02 Abbott Biotechnology Ltd Uses and compositions for treatment of psoriatic arthritis
US20080118496A1 (en) * 2006-04-10 2008-05-22 Medich John R Uses and compositions for treatment of juvenile rheumatoid arthritis
US9605064B2 (en) * 2006-04-10 2017-03-28 Abbvie Biotechnology Ltd Methods and compositions for treatment of skin disorders
US20080131374A1 (en) * 2006-04-19 2008-06-05 Medich John R Uses and compositions for treatment of rheumatoid arthritis
US20080311043A1 (en) * 2006-06-08 2008-12-18 Hoffman Rebecca S Uses and compositions for treatment of psoriatic arthritis
US20100021451A1 (en) 2006-06-08 2010-01-28 Wong Robert L Uses and compositions for treatment of ankylosing spondylitis
EP2043711A4 (en) 2006-06-30 2017-08-30 AbbVie Biotechnology Ltd Automatic injection device
CA2914170C (en) 2006-09-08 2018-10-30 Abbvie Bahamas Ltd. Interleukin-13 binding proteins
TW201708537A (zh) 2006-09-13 2017-03-01 艾伯維有限公司 細胞培養改良
US8911964B2 (en) 2006-09-13 2014-12-16 Abbvie Inc. Fed-batch method of making human anti-TNF-alpha antibody
EP2500415A1 (en) 2006-09-13 2012-09-19 Abbott Laboratories Cell culture improvements
EP2089428B1 (en) 2006-10-27 2013-11-20 AbbVie Biotechnology Ltd Crystalline anti-htnfalpha antibodies
EP2099454A4 (en) 2006-11-17 2010-11-10 Abbott Lab AMINOPYRROLIDINES AS CHEMOKINE RECEPTOR ANTAGONISTS
US20080206241A1 (en) 2006-11-21 2008-08-28 Kalobios Pharmaceuticals Inc. Methods of Treating Chronic Inflammatory Diseases Using a GM-CSF Antagonist
US8455626B2 (en) 2006-11-30 2013-06-04 Abbott Laboratories Aβ conformer selective anti-aβ globulomer monoclonal antibodies
US8324350B2 (en) 2006-12-29 2012-12-04 Abbott Laboratories Dual-specific IL-1α/IL-1β antibodies
EP2839743A1 (en) * 2007-01-16 2015-02-25 Abbvie Inc. Methods for treating psoriasis
JP2008209378A (ja) * 2007-01-31 2008-09-11 Fujifilm Corp バイオセンサー基板
ES2545775T3 (es) 2007-02-05 2015-09-15 Apellis Pharmaceuticals, Inc. Análogos de compstatina para uso en el tratamiento de afecciones inflamatorias del sistema respiratorio
US20100311767A1 (en) 2007-02-27 2010-12-09 Abbott Gmbh & Co. Kg Method for the treatment of amyloidoses
EP2118138A1 (en) 2007-03-12 2009-11-18 Esbatech AG Sequence based engineering and optimization of single chain antibodies
TW200902064A (en) * 2007-03-28 2009-01-16 Wyeth Corp Methods and compositions for modulating IL-17F/IL-17A biological activity
US7807168B2 (en) * 2007-04-10 2010-10-05 Vaccinex, Inc. Selection of human TNFα specific antibodies
WO2008124858A2 (en) * 2007-04-11 2008-10-23 F-Star Biotechnologische Forschungs- Und Entwicklungsges. M.B.H. Targeted receptor
WO2008150491A2 (en) 2007-05-31 2008-12-11 Abbott Laboratories BIOMARKERS PREDICTIVE OF THE RESPONSIVENESS TO TNFα INHIBITORS IN AUTOIMMUNE DISORDERS
WO2008150490A2 (en) * 2007-06-01 2008-12-11 Abbott Biotechnology Ltd. Uses and compositions for treatment of psoriasis and crohn's disease
AU2008259513B2 (en) * 2007-06-06 2014-07-24 Domantis Limited Polypeptides, antibody variable domains and antagonists
KR20100018040A (ko) * 2007-06-06 2010-02-16 도만티스 리미티드 프로테아제 내성 폴리펩티드를 선택하는 방법
EP2171451A4 (en) 2007-06-11 2011-12-07 Abbott Biotech Ltd METHOD FOR TREATING JUVENILIAN IDIOPATHIC ARTHRITIS
TWI614028B (zh) 2007-06-14 2018-02-11 百健Ｍａ公司 抗體調配物
JP5506670B2 (ja) * 2007-06-25 2014-05-28 エスバテック − ア ノバルティス カンパニー エルエルシー 単鎖抗体の配列に基づくエンジニアリング及び最適化
SI2158315T1 (sl) 2007-06-25 2016-05-31 Esbatech, An Alcon Biomedical Research Unit Llc Postopki za spreminjanje protiteles in spremenjena protitelesa z izboljšanimi funkcionalnimi lastnostmi
US20090110679A1 (en) * 2007-07-13 2009-04-30 Luk-Chiu Li Methods and compositions for pulmonary administration of a TNFa inhibitor
CN101980722A (zh) 2007-08-08 2011-02-23 雅培制药有限公司 结晶抗体的组合物和方法
EP3492488A1 (en) 2007-08-22 2019-06-05 The Regents of The University of California Activatable binding polypeptides and methods of identification and use thereof
MX2010002269A (es) * 2007-08-28 2010-03-25 Abbott Biotech Ltd Composiciones y metodos que comprenden proteinas de union para adalimumab.
JP2009082033A (ja) * 2007-09-28 2009-04-23 Kaneka Corp 完全ヒト型抗体生産法
NZ584848A (en) 2007-09-28 2012-09-28 Intrexon Corp Therapeutic gene-switch constructs and bioreactors for the expression of biotherapeutic molecules, and uses thereof
US7960145B2 (en) 2007-11-08 2011-06-14 Cytimmune Sciences, Inc. Compositions and methods for generating antibodies
US8883146B2 (en) 2007-11-30 2014-11-11 Abbvie Inc. Protein formulations and methods of making same
WO2009073569A2 (en) 2007-11-30 2009-06-11 Abbott Laboratories Protein formulations and methods of making same
US20090271164A1 (en) * 2008-01-03 2009-10-29 Peng Joanna Z Predicting long-term efficacy of a compound in the treatment of psoriasis
NZ621174A (en) 2008-01-15 2015-09-25 Abbvie Deutschland Powdered protein compositions and methods of making same
US8962803B2 (en) 2008-02-29 2015-02-24 AbbVie Deutschland GmbH & Co. KG Antibodies against the RGM A protein and uses thereof
AU2009224690B2 (en) 2008-03-13 2014-10-09 Biotest Ag Agent for treating disease
AU2009235622C9 (en) 2008-03-13 2015-07-02 Biotest Ag Agent for treating disease
SG190598A1 (en) 2008-03-13 2013-06-28 Biotest Ag Agent for treating disease
AU2009225797A1 (en) 2008-03-18 2009-09-24 Abbvie Inc. Methods for treating psoriasis
US8557239B2 (en) * 2009-09-14 2013-10-15 Abbvie Inc. Methods for treating psoriasis using antibodies that bind to the P40 subunit of IL-12 and/or IL-23
NZ588554A (en) 2008-04-29 2013-03-28 Abbott Lab Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
US20100260668A1 (en) * 2008-04-29 2010-10-14 Abbott Laboratories Dual Variable Domain Immunoglobulins and Uses Thereof
EP2113568A1 (en) 2008-04-30 2009-11-04 Deutsches Rheuma-Forschungszentrum Berlin Knock-in mouse for modelling blockade of human TNFalpha
SG188142A1 (en) 2008-05-09 2013-03-28 Abbott Gmbh & Co Kg Antibodies to receptor of advanced glycation end products (rage) and uses thereof
CN102036683A (zh) * 2008-05-20 2011-04-27 株式会社钟化 细胞毒性组合物
CN102112494A (zh) 2008-06-03 2011-06-29 雅培制药有限公司 双重可变结构域免疫球蛋白及其用途
AR072001A1 (es) * 2008-06-03 2010-07-28 Abbott Lab Inmunoglobulina con dominio variable dual y usos de la misma
EP3858854A1 (en) 2008-06-25 2021-08-04 Novartis AG Stable and soluble antibodies inhibiting tnf
AU2009264566B2 (en) 2008-06-25 2014-05-08 Novartis Ag Solubility optimization of immunobinders
KR101671886B1 (ko) 2008-06-25 2016-11-04 에스바테크 - 어 노바티스 컴파니 엘엘씨 Ｖｅｇｆ를 억제하는 안정하고 가용성인 항체
US20110177070A1 (en) * 2008-07-02 2011-07-21 Emergent Product Development Seatlle, LLC TGF-Beta Antagonist Multi-Target Binding Proteins
TW201014602A (en) 2008-07-08 2010-04-16 Abbott Lab Prostaglandin E2 binding proteins and uses thereof
WO2010006060A2 (en) 2008-07-08 2010-01-14 Abbott Laboratories Prostaglandin e2 dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
EP2337799A2 (en) * 2008-08-28 2011-06-29 Wyeth LLC Uses of il-22, il-17, and il-1 family cytokines in autoimmune diseases
CN102281898B (zh) * 2008-10-07 2015-06-03 成功大学 Il-20拮抗剂在治疗类风湿性关节炎和骨质疏松症中的应用
US10118962B2 (en) 2008-10-29 2018-11-06 Ablynx N.V. Methods for purification of single domain antigen binding molecules
CN104740631B (zh) 2008-10-29 2019-04-16 阿布林克斯公司 单域抗原结合性分子的制剂
US8415291B2 (en) 2008-10-31 2013-04-09 Centocor Ortho Biotech Inc. Anti-TNF alpha fibronectin type III domain based scaffold compositions, methods and uses
CN101419224B (zh) * 2008-11-06 2012-08-22 复旦大学附属华山医院 一种同时测定人血浆中霉酚酸酯、霉酚酸及其代谢物的方法
RU2011126338A (ru) * 2008-11-28 2013-01-10 Эбботт Лэборетриз Стабильные композиции антител и способы их стабилизации
EP2384367A4 (en) 2008-12-30 2013-07-10 Janssen Biotech Inc SERUM MARKERS TO PREDICT THE CLINICAL RESPONSE TO ANTI-TNF ANTIBODIES IN PATIENTS WITH MORBUS BECHTEREW
CN101766602B (zh) * 2008-12-30 2012-01-11 中国医学科学院血液病医院（血液学研究所） 取代芳香基腙类化合物在作为肿瘤坏死因子抑制剂药物方面的应用
BRPI1006141B8 (pt) * 2009-01-12 2021-05-25 Cytomx Therapeutics Llc composições de anticorpo modificado, métodos para preparar e usar as mesmas
CA2753294A1 (en) 2009-02-23 2010-08-26 Cytomx Therapeutics, Inc. Proproteins and methods of use thereof
US8030026B2 (en) 2009-02-24 2011-10-04 Abbott Laboratories Antibodies to troponin I and methods of use thereof
JP5836807B2 (ja) 2009-03-05 2015-12-24 アッヴィ・インコーポレイテッド Ｉｌ−１７結合タンパク質
TWI559930B (en) 2009-04-16 2016-12-01 Abbvie Biotherapeutics Inc Anti-tnf-α antibodies and their uses
CN101875694B (zh) * 2009-04-28 2014-04-02 中国医学科学院基础医学研究所 TNFα的抗体及其用途
BRPI1012162A2 (pt) 2009-04-29 2016-01-12 Abbott Biotech Ltd dispositivo de injeção automática
JP2012526121A (ja) * 2009-05-04 2012-10-25 アボツト・バイオテクノロジー・リミテツド ヒト抗ｔｎｆアルファ抗体の安定した高蛋白質濃度製剤
WO2010132872A1 (en) * 2009-05-15 2010-11-18 Novimmune S.A Combination therapies and methods using anti-cd3 modulating agents and anti-tnf antagonists
UY32808A (es) * 2009-07-29 2011-02-28 Abbott Lab Inmunoglobulinas como dominio variable dual y usos de las mismas
HUE032703T2 (hu) * 2009-08-14 2017-10-30 Phasebio Pharmaceuticals Inc Módosított vazoaktív intesztinális peptidek
KR20120054077A (ko) * 2009-08-21 2012-05-29 길리아드 바이오로직스, 인크. 폐 섬유증 장애의 치료를 위한 방법 및 조성물
CN105131112A (zh) 2009-08-29 2015-12-09 Abbvie公司 治疗用dll4结合蛋白
EP2473524A4 (en) 2009-09-01 2013-05-22 Abbott Lab IMMUNOGLOBULINE WITH DOUBLE VARIABLE DOMAIN AND ITS USE
JP2013505938A (ja) * 2009-09-24 2013-02-21 エックスバイオテク，インコーポレイテッド 抗抗体応答を軽減する方法、組成物およびキット
WO2011038301A2 (en) 2009-09-25 2011-03-31 Xoma Technology Ltd. Screening methods
EP2488658A4 (en) 2009-10-15 2013-06-19 Abbvie Inc IMMUNOGLOBULINE WITH DOUBLE VARIABLE DOMAIN AND ITS USE
AU2010315547C1 (en) * 2009-10-26 2015-06-04 Société des Produits Nestlé S.A. Assays for the detection of anti-TNF drugs and autoantibodies
UY32979A (es) 2009-10-28 2011-02-28 Abbott Lab Inmunoglobulinas con dominio variable dual y usos de las mismas
MX2012005117A (es) 2009-10-30 2012-06-14 Abbott Lab Construcciones de sorf y expresion de gen multiple.
WO2011053707A1 (en) 2009-10-31 2011-05-05 Abbott Laboratories Antibodies to receptor for advanced glycation end products (rage) and uses thereof
WO2011058087A1 (en) 2009-11-11 2011-05-19 Gentian As Immunoassay for assessing related analytes of different origin
GB0920944D0 (en) 2009-11-30 2010-01-13 Biotest Ag Agents for treating disease
US8871208B2 (en) * 2009-12-04 2014-10-28 Abbvie Inc. 11-β-hydroxysteroid dehydrogenase type 1 (11β-HSD1) inhibitors and uses thereof
MX2012006560A (es) 2009-12-08 2012-10-05 Abbott Gmbh & Co Kg Anticuerpos monoclonales contra la proteina rgm a para utilizarse en el tratamiento de degeneracion de capa de fibra de nervio retinal.
BR112012014710A2 (pt) 2009-12-15 2017-07-25 Abbott Biotech Ltd botão de ignição aperfeiçoado para dispositivo de injeção automática
JP2013514388A (ja) 2009-12-16 2013-04-25 フィリップ ボッシュ， 間質性膀胱炎の処置の方法
USRE49251E1 (en) 2010-01-04 2022-10-18 Mapi Pharma Ltd. Depot systems comprising glatiramer or pharmacologically acceptable salt thereof
WO2011092715A2 (en) * 2010-01-27 2011-08-04 Tata Memorial Centre Method for in-vivo binding of chromatin fragments
WO2011097301A2 (en) 2010-02-02 2011-08-11 Abbott Biotechnology Ltd. METHODS AND COMPOSITIONS FOR PREDICTING RESPONSIVENESS TO TREATMENT WITH TNF-α INHIBITOR
CN102167741B (zh) * 2010-02-25 2014-05-14 上海百迈博制药有限公司 一种全人源抗TNF-α单克隆抗体、其制备方法及用途
MY160628A (en) 2010-03-02 2017-03-15 Abbvie Inc Therapeutic DLL4 Binding Proteins
NZ603045A (en) 2010-04-07 2014-11-28 Abbvie Inc Tnf-alpha binding proteins
JP2013523182A (ja) 2010-04-15 2013-06-17 アボット・ラボラトリーズ アミロイドベータ結合タンパク質
ES2805873T3 (es) 2010-04-16 2021-02-15 Biogen Ma Inc Anticuerpos anti-VLA-4
JP5809242B2 (ja) 2010-04-21 2015-11-10 アッヴィ バイオテクノロジー リミテッド 治療薬の制御送達のための装着型自動注入装置
PE20130205A1 (es) 2010-05-14 2013-03-24 Abbvie Inc Proteinas de union a il-1
US20110287018A1 (en) 2010-05-19 2011-11-24 Philip Bosch Methods of Treating Interstitial Cystitis
CN105056232A (zh) 2010-06-03 2015-11-18 阿布维生物技术有限公司 用于治疗化脓性汗腺炎(hs)的用途和组合物
WO2012006500A2 (en) 2010-07-08 2012-01-12 Abbott Laboratories Monoclonal antibodies against hepatitis c virus core protein
UY33492A (es) 2010-07-09 2012-01-31 Abbott Lab Inmunoglobulinas con dominio variable dual y usos de las mismas
WO2012009705A1 (en) 2010-07-15 2012-01-19 Zyngenia, Inc. Ang-2 binding complexes and uses thereof
EP3252072A3 (en) 2010-08-03 2018-03-14 AbbVie Inc. Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
EP2603524A1 (en) 2010-08-14 2013-06-19 AbbVie Inc. Amyloid-beta binding proteins
EP2606067B1 (en) 2010-08-19 2018-02-21 Zoetis Belgium S.A. Anti-ngf antibodies and their use
KR20130139884A (ko) 2010-08-26 2013-12-23 애브비 인코포레이티드 이원 가변 도메인 면역글로불린 및 이의 용도
UY33679A (es) 2010-10-22 2012-03-30 Esbatech Anticuerpos estables y solubles
AU2011319842B2 (en) 2010-10-29 2014-05-29 Abbvie Inc. Solid dispersions containing an apoptosis-inducing agent
UA113500C2 (xx) 2010-10-29 2017-02-10 Одержані екструзією розплаву тверді дисперсії, що містять індукуючий апоптоз засіб
EP2635694A4 (en) * 2010-11-02 2015-11-11 Abbott Lab VARIABLE DOUBLE DOMAIN IMMUNOGLOBULINS AND USES THEREOF
EP2637690B1 (en) 2010-11-11 2016-09-21 AbbVie Biotechnology Ltd HIGH CONCENTRATION ANTI-TNFalpha ANTIBODY LIQUID FORMULATIONS
NZ610151A (en) 2010-11-23 2015-06-26 Abbvie Inc Salts and crystalline forms of an apoptosis-inducing agent
NZ708508A (en) 2010-11-23 2016-06-24 Abbvie Bahamas Ltd Methods of treatment using selective bcl-2 inhibitors
AR084210A1 (es) * 2010-12-08 2013-05-02 Abbott Lab PROTEINAS DE UNION AL TNF-a
US20120275996A1 (en) 2010-12-21 2012-11-01 Abbott Laboratories IL-1 Binding Proteins
SG191312A1 (en) 2010-12-21 2013-07-31 Abbvie Inc Il-1 -alpha and -beta bispecific dual variable domain immunoglobulins and their use
EP2490024A1 (en) 2010-12-22 2012-08-22 Proteomika, S.L. Method to optimize the treatment of patients with biological drugs
SG10201600575WA (en) 2011-01-24 2016-02-26 Abbvie Biotechnology Ltd Removal of needle shields from syringes and automatic injection devices
PE20141436A1 (es) 2011-01-24 2014-11-15 Abbvie Biotechnology Ltd Dispositivos de inyeccion automatica con superficies de agarre sobremoldeadas
MX336571B (es) 2011-01-24 2016-01-25 Elcam Medical Agricultural Cooperative Ass Ltd Inyector.
RU2455025C1 (ru) * 2011-02-10 2012-07-10 Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Белгородский государственный национальный исследовательский университет" (НИУ "БелГУ") Способ фармакологической коррекции ишемии конечности смесью растворов гомеопатических разведений
JP2014508715A (ja) 2011-03-07 2014-04-10 国立大学法人徳島大学 筋萎縮性側索硬化症の治療方法
JP2014511711A (ja) 2011-03-18 2014-05-19 アッヴィ・インコーポレイテッド 自動注入デバイスおよびそのサブアセンブリを組み立てるためのシステム、デバイス、および方法
TWI671315B (zh) 2011-03-28 2019-09-11 法商賽諾菲公司 具有交叉結合區定向之雙重可變區類抗體結合蛋白
CA2831563A1 (en) 2011-03-29 2012-10-04 Abbvie Inc. Improved shroud deployment in automatic injection devices
MX345747B (es) 2011-04-21 2017-02-14 Abbvie Inc Dispositivo de inyección automático portable.
WO2012149197A2 (en) 2011-04-27 2012-11-01 Abbott Laboratories Methods for controlling the galactosylation profile of recombinantly-expressed proteins
WO2012162561A2 (en) 2011-05-24 2012-11-29 Zyngenia, Inc. Multivalent and monovalent multispecific complexes and their uses
PT2715352T (pt) 2011-05-31 2019-06-12 Biogen Ma Inc Método de avaliação do risco de lmp
US9561262B2 (en) 2011-06-06 2017-02-07 Phasebio Pharmaceuticals, Inc. Use of modified vasoactive intestinal peptides in the treatment of hypertension
WO2013009521A2 (en) 2011-07-13 2013-01-17 Abbvie Inc. Methods and compositions for treating asthma using anti-il-13 antibodies
GB201112429D0 (en) * 2011-07-19 2011-08-31 Glaxo Group Ltd Antigen-binding proteins with increased FcRn binding
EP2739650A4 (en) * 2011-08-01 2015-04-01 Avaxia Biologics Inc SPECIFIC BOVINE POLYCLONAL ANTIBODY OF HUMAN TNF
CN103890005A (zh) * 2011-10-20 2014-06-25 艾斯巴技术-诺华有限责任公司 稳定的多抗原结合抗体
AR088514A1 (es) 2011-10-24 2014-06-18 Abbvie Inc Inmunoligantes biespecificos dirigidos contra tnf
CA2853357A1 (en) 2011-10-24 2013-05-02 Abbvie Inc. Immunobinders directed against tnf
UY34411A (es) 2011-10-24 2013-05-31 Abbvie Inc Inmunoenlazantes dirigidos contra esclerostina
WO2013080050A2 (en) 2011-11-30 2013-06-06 Universitaetsklinikum Erlangen Methods and compositions for determining responsiveness to treatment with a tnf-alpha inhibitor
CA2855570A1 (en) 2011-12-14 2013-06-20 AbbVie Deutschland GmbH & Co. KG Composition and method for the diagnosis and treatment of iron-related disorders
AU2012352168C1 (en) 2011-12-14 2018-01-25 AbbVie Deutschland GmbH & Co. KG Composition and method for the diagnosis and treatment of iron-related disorders
US20140359902A1 (en) 2011-12-16 2014-12-04 Synthon Biopharmaceuticals B.V. EXPRESSION OF SECRETORY IgA ANTIBODIES IN DUCKWEED
EP2915818A3 (en) 2011-12-30 2015-11-11 AbbVie Inc. Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
CN104159920A (zh) 2011-12-30 2014-11-19 艾伯维公司 针对il-13和/或il-17的双重可变结构域免疫球蛋白
RS57603B1 (sr) 2012-01-27 2018-11-30 Abbvie Deutschland Sastav i metod za dijagnozu i tretiranje bolesti povezanih sa degeneracijom neurita
CA2866692A1 (en) 2012-03-07 2013-07-11 Cadila Healthcare Limited Formulations which prevent formation of antibody aggregates
WO2013158279A1 (en) 2012-04-20 2013-10-24 Abbvie Inc. Protein purification methods to reduce acidic species
US9067990B2 (en) 2013-03-14 2015-06-30 Abbvie, Inc. Protein purification using displacement chromatography
US9181572B2 (en) 2012-04-20 2015-11-10 Abbvie, Inc. Methods to modulate lysine variant distribution
EP2657334B1 (en) 2012-04-26 2016-07-06 GeneFrontier Corporation Efficient method for displaying protein multimer
WO2013176754A1 (en) 2012-05-24 2013-11-28 Abbvie Inc. Novel purification of antibodies using hydrophobic interaction chromatography
WO2013184871A1 (en) 2012-06-06 2013-12-12 Zoetis Llc Caninized anti-ngf antibodies and methods thereof
KR102172897B1 (ko) 2012-06-08 2020-11-02 서트로 바이오파마, 인크. 부위-특이적 비-천연 아미노산 잔기를 포함하는 항체, 그의 제조 방법 및 그의 사용 방법
WO2014011955A2 (en) 2012-07-12 2014-01-16 Abbvie, Inc. Il-1 binding proteins
PL3584255T3 (pl) 2012-08-31 2022-05-16 Sutro Biopharma, Inc. Modyfikowane aminokwasy zawierające grupę azydkową
SG11201504249XA (en) 2012-09-02 2015-07-30 Abbvie Inc Methods to control protein heterogeneity
US9512214B2 (en) 2012-09-02 2016-12-06 Abbvie, Inc. Methods to control protein heterogeneity
PE20191815A1 (es) 2012-09-07 2019-12-27 Coherus Biosciences Inc Formulaciones acuosas estables de adalimumab
JP2015537190A (ja) * 2012-09-19 2015-12-24 アッヴィ・バイオセラピューティクス・インコーポレイテッド 低減された免疫原性を有する抗体を同定するための方法
TW202033215A (zh) 2012-11-01 2020-09-16 美商艾伯維有限公司 穩定雙重可變區域免疫球蛋白蛋白質調配物
KR20180008921A (ko) 2012-11-01 2018-01-24 애브비 인코포레이티드 항-ｖｅｇｆ／ｄｌｌ4 이원 가변 도메인 면역글로불린 및 이의 용도
TW202206465A (zh) 2012-11-14 2022-02-16 美商再生元醫藥公司 重組細胞表面捕捉蛋白質
WO2014100542A1 (en) 2012-12-21 2014-06-26 Abbvie, Inc. High-throughput antibody humanization
WO2014106001A2 (en) 2012-12-28 2014-07-03 Abbvie, Inc. Dual specific binding proteins having a receptor sequence
US9856319B2 (en) 2012-12-28 2018-01-02 Abbvie Inc. Monovalent binding proteins
JP6134392B2 (ja) 2013-01-25 2017-05-24 サイモン・エルエルシー 循環している生物学的に活性な可溶性ｔｎｆの選択的低減用の組成物およびｔｎｆ媒介性疾患を処置する方法
ES2755181T3 (es) 2013-02-13 2020-04-21 Lab Francais Du Fractionnement Anticuerpos anti-TNF-alfa altamente galactosilados y usos de los mismos
EP2830651A4 (en) 2013-03-12 2015-09-02 Abbvie Inc HUMAN ANTIBODIES THAT BIND TNF-ALPHA AND PREPARATION METHODS
US9017687B1 (en) 2013-10-18 2015-04-28 Abbvie, Inc. Low acidic species compositions and methods for producing and using the same using displacement chromatography
BR112015023355A8 (pt) 2013-03-14 2018-01-30 Abbott Lab antígenos recombinantes ns3 de hcv e mutantes dos mesmos para detecção de anticorpos aprimorada.
SG11201504260UA (en) 2013-03-14 2015-10-29 Abbvie Inc Low acidic species compositions and methods for producing and using the same
WO2014151878A2 (en) 2013-03-14 2014-09-25 Abbvie Inc. Methods for modulating protein glycosylation profiles of recombinant protein therapeutics using monosaccharides and oligosacharides
US8921526B2 (en) 2013-03-14 2014-12-30 Abbvie, Inc. Mutated anti-TNFα antibodies and methods of their use
CA2899449A1 (en) 2013-03-14 2014-10-02 Abbvie Inc. Low acidic species compositions and methods for producing the same using displacement chromatography
MX2015012825A (es) 2013-03-14 2016-06-10 Abbott Lab Anticuerpos monoclonales del dominio de union de lipido del núcleo del virus de la hepatitis c vhc.
CA2906421C (en) 2013-03-14 2022-08-16 George J. Dawson Hcv antigen-antibody combination assay and methods and compositions for use therein
US20140275082A1 (en) 2013-03-14 2014-09-18 Abbvie Inc. Apoptosis-inducing agents for the treatment of cancer and immune and autoimmune diseases
TW201446800A (zh) 2013-03-15 2014-12-16 Abbvie Inc 針對ＴＮＦα之雙特異性結合蛋白
US9469686B2 (en) 2013-03-15 2016-10-18 Abbott Laboratories Anti-GP73 monoclonal antibodies and methods of obtaining the same
CN105324396A (zh) 2013-03-15 2016-02-10 艾伯维公司 针对IL-1β和/或IL-17的双重特异性结合蛋白
CN105451767B (zh) 2013-03-15 2019-10-18 泽恩格尼亚股份有限公司 多价和单价多特异性复合物及其用途
WO2014189306A1 (ko) * 2013-05-22 2014-11-27 메타볼랩(주) 항 ＴＮＦ-α/ＣＸＣＬ10 이중 타겟 항체 및 그의 용도
EP3632467B1 (en) 2013-06-07 2023-09-27 Duke University Inhibitors of complement factor h
WO2015006555A2 (en) 2013-07-10 2015-01-15 Sutro Biopharma, Inc. Antibodies comprising multiple site-specific non-natural amino acid residues, methods of their preparation and methods of their use
WO2015017683A1 (en) * 2013-07-31 2015-02-05 Malast Mary Antimicrobial compositions and methods of use
MX2016003202A (es) 2013-09-13 2016-06-07 Genentech Inc Metodos y composiciones que comprenden polipeptidos recombinantes purificados.
EP3044323B1 (en) 2013-09-13 2022-04-06 F. Hoffmann-La Roche AG Methods for detecting and quantifying host cell protein in cell lines
WO2015051293A2 (en) 2013-10-04 2015-04-09 Abbvie, Inc. Use of metal ions for modulation of protein glycosylation profiles of recombinant proteins
US20150125397A1 (en) 2013-10-06 2015-05-07 Abbvie Inc. Dual specific binding proteins directed against immune cell receptors and autoantigens
EP3055298B1 (en) 2013-10-11 2020-04-29 Sutro Biopharma, Inc. Modified amino acids comprising tetrazine functional groups, methods of preparation, and methods of their use
MX2016004926A (es) 2013-10-16 2017-01-18 Oncobiologics Inc Formulaciones de tampon para la estabilidad de anticuerpo mejorada.
US9085618B2 (en) 2013-10-18 2015-07-21 Abbvie, Inc. Low acidic species compositions and methods for producing and using the same
US9181337B2 (en) 2013-10-18 2015-11-10 Abbvie, Inc. Modulated lysine variant species compositions and methods for producing and using the same
US8946395B1 (en) 2013-10-18 2015-02-03 Abbvie Inc. Purification of proteins using hydrophobic interaction chromatography
US20150139988A1 (en) 2013-11-15 2015-05-21 Abbvie, Inc. Glycoengineered binding protein compositions
TW201536320A (zh) 2013-12-02 2015-10-01 Abbvie Inc 治療骨性關節炎之組合物及方法
CN103965357B (zh) 2013-12-31 2016-08-17 嘉和生物药业有限公司 一种抗人rankl抗体
ES2818823T3 (es) 2014-02-27 2021-04-14 Biogen Ma Inc Método de evaluación del riesgo de LMP
WO2015135884A1 (en) 2014-03-10 2015-09-17 Richter Gedeon Nyrt. Immunoglobulin purification using pre-cleaning steps
AR099625A1 (es) 2014-03-21 2016-08-03 Lilly Co Eli Anticuerpos de il-21
KR20220025946A (ko) 2014-03-21 2022-03-03 애브비 인코포레이티드 항-ｅｇｆｒ 항체 및 항체 약물 접합체
EP3125928A4 (en) 2014-04-02 2017-11-29 Intas Pharmaceuticals Ltd. Liquid pharmaceutical composition of adalimumab
WO2015172046A1 (en) 2014-05-08 2015-11-12 Phasebio Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for treating cystic fibrosis
ES2572919T3 (es) 2014-05-23 2016-06-03 Ares Trading S.A. Composición farmacéutica líquida
PT2946765T (pt) 2014-05-23 2016-11-10 Ares Trading Sa Composição farmacêutica líquida
EP2946767B1 (en) 2014-05-23 2016-10-05 Ares Trading S.A. Liquid pharmaceutical composition
FR3022462B1 (fr) * 2014-06-18 2018-04-27 Laboratoire Francais Du Fractionnement Et Des Biotechnologies Composition orale d'anticorps anti-tnfalpha
EP3145951A1 (en) 2014-06-24 2017-03-29 InSight Biopharmaceuticals Ltd. Methods of purifying antibodies
CA2953714C (en) * 2014-06-30 2021-05-18 Ralf Guenther Anti-tnfa antibodies with ph-dependent antigen binding
US20170226552A1 (en) 2014-07-03 2017-08-10 Abbvie Inc. Methods for modulating protein glycosylation profiles of recombinant protein therapeutics using cobalt
WO2016007764A1 (en) 2014-07-09 2016-01-14 Abbvie Inc. Methods for modulating the glycosylation profile of recombinant proteins using non-commonly used sugars
WO2016036918A1 (en) * 2014-09-03 2016-03-10 Boehringer Ingelheim International Gmbh Compound targeting il-23a and tnf-alpha and uses thereof
US10435464B1 (en) 2014-09-05 2019-10-08 Coherus Biosciences, Inc. Methods for making recombinant proteins
HUP1400510A1 (hu) 2014-10-28 2016-05-30 Richter Gedeon Nyrt Gyógyászati TNFalfa ellenes antitest készítmény
US10093733B2 (en) 2014-12-11 2018-10-09 Abbvie Inc. LRP-8 binding dual variable domain immunoglobulin proteins
WO2016103093A1 (en) 2014-12-23 2016-06-30 Pfizer Inc. Stable aqueous antibody formulation for anti tnf alpha antibodies
EP3085709B1 (en) 2014-12-28 2019-08-21 Genor Biopharma Co., Ltd Humanized anti-human rankl antibody, pharmaceutical composition and use thereof
EP3247718B1 (en) 2015-01-21 2021-09-01 Outlook Therapeutics, Inc. Modulation of charge variants in a monoclonal antibody composition
EP3053572A1 (en) 2015-02-06 2016-08-10 Ares Trading S.A. Liquid pharmaceutical composition
CA2976038A1 (en) 2015-02-09 2016-08-18 Phasebio Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for treating muscle disease and disorders
CN105777905B (zh) * 2015-03-24 2019-06-25 广东东阳光药业有限公司 一种全人源抗TNF-α单克隆抗体及其应用
EP3078675A1 (en) 2015-04-10 2016-10-12 Ares Trading S.A. Induction dosing regimen for the treatment of tnf alpha mediated disorders
WO2016179469A1 (en) * 2015-05-07 2016-11-10 Abbvie Inc. Methods and compositions for diagnosing and treating inflammatory bowel disease
JP6518917B2 (ja) 2015-05-29 2019-05-29 アッヴィ・インコーポレイテッド 抗ｃｄ４０抗体およびその使用
TW201710286A (zh) 2015-06-15 2017-03-16 艾伯維有限公司 抗ｖｅｇｆ、ｐｄｇｆ及／或其受體之結合蛋白
HU231463B1 (hu) 2015-08-04 2024-01-28 Richter Gedeon Nyrt. Módszer rekombináns proteinek galaktóz tartalmának növelésére
US11229702B1 (en) 2015-10-28 2022-01-25 Coherus Biosciences, Inc. High concentration formulations of adalimumab
US11583584B1 (en) 2015-10-28 2023-02-21 Coherus Biosciences, Inc. Stable protein compositions and methods of their use
GB201522394D0 (en) 2015-12-18 2016-02-03 Ucb Biopharma Sprl Antibodies
AU2017213775A1 (en) 2016-02-03 2018-08-16 Outlook Therapeutics, Inc. Buffer formulations for enhanced antibody stability
US10465003B2 (en) 2016-02-05 2019-11-05 Janssen Biotech, Inc. Anti-TNF antibodies, compositions, methods and use for the treatment or prevention of type 1 diabetes
US10774140B2 (en) 2016-03-17 2020-09-15 Numab Therapeutics AG Anti-TNFα-antibodies and functional fragments thereof
HUE052773T2 (hu) * 2016-03-17 2021-05-28 Tillotts Pharma Ag Anti-TNF alfa antitestek és funkcionális fragmenseik
WO2017177179A1 (en) 2016-04-08 2017-10-12 Gilead Sciences, Inc. Compositions and methods for treating cancer, inflammatory diseases and autoimmune diseases
WO2017184880A1 (en) 2016-04-20 2017-10-26 Coherus Biosciences, Inc. A method of filling a container with no headspace
EP3448391A4 (en) 2016-04-27 2019-12-18 AbbVie Inc. METHODS OF TREATING DISEASES IN WHICH IL-13 ACTIVITY IS HARMFUL WITH ANTI-IL-13 ANTIBODIES
SG11201810678WA (en) 2016-06-02 2018-12-28 Abbvie Inc Glucocorticoid receptor agonist and immunoconjugates thereof
WO2017214335A1 (en) 2016-06-08 2017-12-14 Abbvie Inc. Anti-b7-h3 antibodies and antibody drug conjugates
CN109562190A (zh) 2016-06-08 2019-04-02 艾伯维公司 抗egfr抗体药物偶联物
CN109641962A (zh) 2016-06-08 2019-04-16 艾伯维公司 抗b7-h3抗体和抗体药物偶联物
JP2019526529A (ja) 2016-06-08 2019-09-19 アッヴィ・インコーポレイテッド 抗ｂ７−ｈ３抗体及び抗体薬物コンジュゲート
BR112018075630A2 (pt) 2016-06-08 2019-03-19 Abbvie Inc. anticorpos anti-cd98 e conjugados de fármaco de anticorpo
AU2017277422A1 (en) 2016-06-08 2019-01-03 Abbvie Inc. Anti-EGFR antibody drug conjugates
WO2017218698A1 (en) 2016-06-15 2017-12-21 Sutro Biopharma, Inc. Antibodies with engineered ch2 domains, compositions thereof and methods of using the same
WO2018018613A1 (zh) 2016-07-29 2018-02-01 广东东阳光药业有限公司 一种提高抗体纯度的细胞培养基和培养方法
US10751324B2 (en) 2016-09-02 2020-08-25 The University Of Chicago Treatment of TNF- alpha cytotoxicity
EP3512875A2 (en) * 2016-09-15 2019-07-24 Quadrucept Bio Limited Multimers, tetramers&octamers
JP2019535015A (ja) 2016-10-03 2019-12-05 アボット・ラボラトリーズＡｂｂｏｔｔ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ 患者サンプルにおけるｇｆａｐ状況を評価する改善された方法
WO2018075408A1 (en) 2016-10-17 2018-04-26 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Methods of treating acute myeloid leukemia (aml) with combinations of anti-cd200 antibodies, cytarabine, and daunorubicin
EA201990998A1 (ru) 2016-10-21 2019-11-29 Фармацевтические составы и способы их получения
WO2018102594A1 (en) 2016-12-01 2018-06-07 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Methods of treating solid tumors with anti-cd200 antibodies
KR20190091325A (ko) 2016-12-07 2019-08-05 프로제너티, 인크. 위장관 검출 방법, 디바이스 및 시스템
EP3554342A1 (en) 2016-12-14 2019-10-23 Progenity, Inc. Treatment of a disease of the gastrointestinal tract with a tnf inhibitor
CA3047115A1 (en) 2016-12-16 2018-06-21 Bluefin Biomedicine, Inc. Anti-cub domain-containing protein 1 (cdcp1) antibodies, antibody drug conjugates, and methods of use thereof
JOP20190162A1 (ar) 2016-12-30 2019-06-27 Biocad Joint Stock Co تركيبة صيدلانية مائية من جسم مضاد لـ tnf? أحادي النسيلة معاود الارتباط الجيني
ES2933808T3 (es) 2017-01-11 2023-02-14 Celltrion Inc Fórmula líquida estable
AR110755A1 (es) 2017-01-20 2019-05-02 Genzyme Corp Anticuerpos dirigidos a hueso
TW202313678A (zh) 2017-01-20 2023-04-01 法商賽諾菲公司 抗TGF-β抗體及其用途
MX2019008989A (es) 2017-01-30 2019-10-09 Janssen Biotech Inc Anticuerpos anti-tnf, composiciones y metodos para el tratamiento de la artritis psoriasica activa.
CN110418652A (zh) 2017-02-07 2019-11-05 詹森生物科技公司 用于治疗活动性强直性脊柱炎的抗tnf抗体、组合物和方法
US11608357B2 (en) 2018-08-28 2023-03-21 Arecor Limited Stabilized antibody protein solutions
EP3372242A1 (en) 2017-03-06 2018-09-12 Ares Trading S.A. Liquid pharmaceutical composition
EP3372241A1 (en) 2017-03-06 2018-09-12 Ares Trading S.A. Liquid pharmaceutical composition
JP7346300B2 (ja) 2017-03-23 2023-09-19 アボット・ラボラトリーズ 早期バイオマーカーであるユビキチンカルボキシ末端ヒドロラーゼｌ１を使用する、ヒト対象における外傷性脳損傷の程度の診断及び決定の一助となるための方法
CA3050086A1 (en) 2017-03-26 2018-10-04 Mapi Pharma Ltd. Glatiramer depot systems for treating progressive forms of multiple sclerosis
WO2018184692A1 (en) 2017-04-07 2018-10-11 Ares Trading S.A. Liquid pharmaceutical composition
US10877048B2 (en) 2017-04-15 2020-12-29 Abbott Laboratories Methods for aiding in the hyperacute diagnosis and determination of traumatic brain injury in a human subject using early biomarkers
US10865238B1 (en) 2017-05-05 2020-12-15 Duke University Complement factor H antibodies
AU2018272054A1 (en) 2017-05-25 2019-09-26 Abbott Laboratories Methods for aiding in the determination of whether to perform imaging on a human subject who has sustained or may have sustained an injury to the head using early biomarkers
BR112019025313A2 (pt) 2017-05-30 2020-06-23 Abbott Laboratories Métodos para auxílio no diagnóstico e avaliação de uma lesão cerebral traumática leve em um indivíduo humano usando troponina cardíaca i
CA3068041A1 (en) 2017-07-03 2019-01-10 Abbott Laboratories Improved methods for measuring ubiquitin carboxy-terminal hydrolase l1 levels in blood
US11761963B2 (en) 2017-09-27 2023-09-19 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Biomarker signature for predicting tumor response to anti-CD200 therapy
TWI803542B (zh) 2017-12-01 2023-06-01 美商艾伯維有限公司 糖皮質激素受體激動劑及其免疫結合物
CN109879962B (zh) * 2017-12-06 2022-10-11 北京科立思维生物科技有限公司 抗tnf单链抗体、抗il-6单链抗体及其融合蛋白及其应用
CN111094983A (zh) 2017-12-09 2020-05-01 雅培实验室 使用胶质细胞原纤维酸性蛋白(gfap)和/或泛素羧基末端水解酶l1(uch-l1)帮助诊断和评价已遭受骨科损伤并已遭受或可能已遭受头部损伤诸如轻度创伤性脑损伤(tbi)的患者的方法
CA3067055A1 (en) 2017-12-09 2019-06-13 Abbott Laboratories Methods for aiding in diagnosing and evaluating a traumatic brain injury in a human subject using a combination of gfap and uch-l1
WO2019126133A1 (en) 2017-12-20 2019-06-27 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Liquid formulations of anti-cd200 antibodies
US11802154B2 (en) 2017-12-20 2023-10-31 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Humanized anti-CD200 antibodies and uses thereof
EP3765499A1 (en) 2018-03-12 2021-01-20 Zoetis Services LLC Anti-ngf antibodies and methods thereof
WO2019190877A1 (en) 2018-03-26 2019-10-03 Alexion Pharmaceuticals, Inc. High throughput method for measuring the protease activity of complement c3 convertase
WO2019236417A1 (en) 2018-06-04 2019-12-12 Biogen Ma Inc. Anti-vla-4 antibodies having reduced effector function
EP3810095A1 (en) 2018-06-20 2021-04-28 Progenity, Inc. Treatment of a disease of the gastrointestinal tract with a tnf inhibitor
US20220339169A1 (en) 2018-07-03 2022-10-27 Novartis Ag Methods of treating or selecting a treatment for a subject resistant to tnf inhibitor using a nlrp3 antagonist
US20210340277A1 (en) 2018-10-11 2021-11-04 The Scripps Research Institute Antibody compounds with reactive arginine and related antibody drug conjugates
WO2020086728A1 (en) 2018-10-24 2020-04-30 Novartis Inflammasome Research, Inc. Compounds and compositions for treating conditions associated with nlrp activity
JP2022506411A (ja) * 2018-11-05 2022-01-17 北京韓美薬品有限公司 抗ＴＮＦα／抗ＩＬ－１７Ａ天然抗体構造様ヘテロダイマー二重特異性抗体及びその製造方法
HUP1800376A2 (hu) 2018-11-07 2020-05-28 Richter Gedeon Nyrt Sejttenyészetben elõállított rekombináns glikoprotein glikozilációs-mintázatának megváltoztatására szolgáló módszer
US20230025630A1 (en) 2018-11-13 2023-01-26 Novartis Ag Compounds and compositions for treating conditions associated with nlrp activity
US20230024859A1 (en) 2018-11-13 2023-01-26 Novartis Ag Compounds and compositions for treating conditions associated with nlrp activity
WO2020106750A1 (en) 2018-11-19 2020-05-28 Progenity, Inc. Methods and devices for treating a disease with biotherapeutics
WO2020118011A1 (en) 2018-12-06 2020-06-11 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Anti-alk2 antibodies and uses thereof
US20230272402A1 (en) 2018-12-25 2023-08-31 Institute Of Basic Medical Sciences Chinese Academy Of Medical Sciences Small rna medicament for prevention and treatment of inflammation-related diseases and combination thereof
EP3914583A1 (en) 2019-01-22 2021-12-01 Novartis AG Compounds and compositions for treating conditions associated with nlrp activity
HUP1900112A1 (hu) 2019-04-04 2020-10-28 Richter Gedeon Nyrt Immunglobulinok affinitás kromatográfiájának fejlesztése kötést megelõzõ flokkulálás alkalmazásával
KR102323342B1 (ko) * 2019-04-26 2021-11-08 주식회사 와이바이오로직스 IL-17A 및 TNF-α에 특이적으로 결합하는 이중표적 항체
US11780911B2 (en) 2019-05-23 2023-10-10 Janssen Biotech, Inc. Method of treating inflammatory bowel disease with a combination therapy of antibodies to IL-23 and TNF alpha
WO2021002887A1 (en) 2019-07-02 2021-01-07 Novartis Inflammasome Research, Inc. Gut-targeted nlrp3 antagonists and their use in therapy
WO2021005607A1 (en) * 2019-07-09 2021-01-14 National Institute For Biotechnology In The Negev Ltd. Antibodies with reduced immunogenicity
WO2021119482A1 (en) 2019-12-13 2021-06-17 Progenity, Inc. Ingestible device for delivery of therapeutic agent to the gastrointestinal tract
FR3104582A1 (fr) 2019-12-17 2021-06-18 Commissariat A L'energie Atomique Et Aux Energies Alternatives Variants de l’adalimumab au potentiel immunogène réduit
AU2021215936A1 (en) 2020-02-05 2022-08-25 Larimar Therapeutics, Inc. TAT peptide binding proteins and uses thereof
WO2021178597A1 (en) 2020-03-03 2021-09-10 Sutro Biopharma, Inc. Antibodies comprising site-specific glutamine tags, methods of their preparation and methods of their use
EP4136459A1 (en) 2020-04-13 2023-02-22 Abbott Laboratories Methods, complexes and kits for detecting or determining an amount of a ss-coronavirus antibody in a sample
US20220043000A1 (en) 2020-08-04 2022-02-10 Abbott Laboratories Methods and kits for detecting sars-cov-2 protein in a sample
CN111944052B (zh) * 2020-08-26 2022-02-11 中国药科大学 抗TNF-α/PD-1双特异性抗体及其应用
CN112010970B (zh) * 2020-10-30 2021-01-12 迈威(上海)生物科技股份有限公司 一种去除重组表达抗体聚体和降解产物的方法
WO2023102384A1 (en) 2021-11-30 2023-06-08 Abbott Laboratories Use of one or more biomarkers to determine traumatic brain injury (tbi) in a subject having received a head computerized tomography scan that is negative for a tbi
CA3198161A1 (en) 2020-12-01 2022-06-09 Beth MCQUISTON Use of one or more biomarkers to determine traumatic brain injury (tbi) in a subject having received a head computerized tomography scan that is negative for a tbi
US11672929B2 (en) 2020-12-02 2023-06-13 Breathe Restore, Inc. Product delivery devices and methods
CN117440967A (zh) 2020-12-09 2024-01-23 怡诺安有限公司 抗OX40L抗体、抗OX40L/抗TNFα双特异性抗体及其用途
US20240101715A1 (en) * 2020-12-18 2024-03-28 Kindred Biosciences, Inc. Tnf alpha and ngf antibodies for veterinary use
EP4271998A1 (en) 2020-12-30 2023-11-08 Abbott Laboratories Methods for determining sars-cov-2 antigen and anti-sars-cov-2 antibody in a sample
UY39610A (es) 2021-01-20 2022-08-31 Abbvie Inc Conjugados anticuerpo-fármaco anti-egfr
KR20240011714A (ko) 2021-04-27 2024-01-26 제너레이션 바이오 컴퍼니 치료용 항체를 발현하는 비바이러스성 dna 벡터 및 이의 용도
WO2022232286A1 (en) 2021-04-27 2022-11-03 Generation Bio Co. Non-viral dna vectors expressing anti-coronavirus antibodies and uses thereof
CA3216320A1 (en) 2021-05-18 2022-11-24 Abbott Laboratories Methods of evaluating brain injury in a pediatric subject
CA3222291A1 (en) 2021-06-14 2022-12-22 Jaime MARINO Methods of diagnosing or aiding in diagnosis of brain injury caused by acoustic energy, electromagnetic energy, an over pressurization wave, and/or blast wind
EP4341298A1 (en) * 2021-06-22 2024-03-27 University of Virginia Patent Foundation Compositions and methods for detecting and regulating fibronectin-integrin interactions and signaling
CN117500816A (zh) 2021-08-26 2024-02-02 映恩生物制药（苏州）有限公司 一种甾体化合物及其缀合物
AU2022339759A1 (en) 2021-08-31 2024-03-07 Abbott Laboratories Methods and systems of diagnosing brain injury
WO2023056268A1 (en) 2021-09-30 2023-04-06 Abbott Laboratories Methods and systems of diagnosing brain injury
WO2023114978A1 (en) 2021-12-17 2023-06-22 Abbott Laboratories Systems and methods for determining uch-l1, gfap, and other biomarkers in blood samples
US20230213536A1 (en) 2021-12-28 2023-07-06 Abbott Laboratories Use of biomarkers to determine sub-acute traumatic brain injury (tbi) in a subject having received a head computerized tomography (ct) scan that is negative for a tbi or no head ct scan
WO2023150652A1 (en) 2022-02-04 2023-08-10 Abbott Laboratories Lateral flow methods, assays, and devices for detecting the presence or measuring the amount of ubiquitin carboxy-terminal hydrolase l1 and/or glial fibrillary acidic protein in a sample
WO2023177655A1 (en) 2022-03-14 2023-09-21 Generation Bio Co. Heterologous prime boost vaccine compositions and methods of use
WO2024006681A1 (en) * 2022-06-28 2024-01-04 Adafre Biosciences, Llc Anti-tnf-αlpha antibodies and compositions
WO2024006876A1 (en) 2022-06-29 2024-01-04 Abbott Laboratories Magnetic point-of-care systems and assays for determining gfap in biological samples
CN116903738A (zh) * 2022-08-02 2023-10-20 北京绿竹生物技术股份有限公司 一种低甘露糖型抗人肿瘤坏死因子-α单抗及其用途
WO2024054934A1 (en) 2022-09-07 2024-03-14 Mdx Management Llc Shp-1 inhibitors for treating cancer
WO2024059708A1 (en) 2022-09-15 2024-03-21 Abbott Laboratories Biomarkers and methods for differentiating between mild and supermild traumatic brain injury

Family Cites Families (114)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4680276A (en) * 1977-05-25 1987-07-14 Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale Metal polypeptides
JPS58501544A (ja) 1981-09-08 1983-09-16 ザ　ロツクフエラ−　ユニヴア−シテイ エンドトキシン誘発メディエ−タ−（ショック検定）によるリポプロティンリパ−ゼの抑圧
US5672347A (en) 1984-07-05 1997-09-30 Genentech, Inc. Tumor necrosis factor antagonists and their use
IL73883A (en) 1984-12-20 1990-12-23 Yeda Res & Dev Monoclonal antibodies against tnf-alpha,hybridomas producing them and method for the purification of tnf-alpha
US4661016A (en) * 1985-04-11 1987-04-28 Mobil Oil Corporation Subsea flowline connector
EP0613006A1 (en) 1985-08-16 1994-08-31 The Rockefeller University Antibodies to cachectin and immunoassays
DE3631229A1 (de) 1986-09-13 1988-03-24 Basf Ag Monoklonale antikoerper gegen humanen tumornekrosefaktor (tnf) und deren verwendung
GB8630273D0 (en) * 1986-12-18 1987-01-28 Til Medical Ltd Pharmaceutical delivery systems
WO1990000902A1 (en) 1988-07-18 1990-02-08 Chiron Corporation Monoclonal antibodies reactive with cachectin
GB8823869D0 (en) * 1988-10-12 1988-11-16 Medical Res Council Production of antibodies
US4940723A (en) * 1988-10-20 1990-07-10 University Of North Carolina, Chapel Hill Use of bis-(5-amidino-2-benzimidazolyl) methane (BABIM) to treat arthritis
EP0366043B1 (en) 1988-10-24 1994-03-30 Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd. Monoclonal antibody
US5530101A (en) * 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
IE63847B1 (en) * 1989-05-05 1995-06-14 Res Dev Foundation A novel antibody delivery system for biological response modifiers
DE3918082A1 (de) * 1989-06-02 1991-01-24 Max Planck Gesellschaft Mittel gegen autoimmunerkrankungen
US5959087A (en) * 1989-08-07 1999-09-28 Peptide Technology, Ltd. Tumour necrosis factor binding ligands
US6448380B2 (en) 1989-08-07 2002-09-10 Peptech Limited Tumor necrosis factor antibodies
DE10399036I1 (de) 1989-08-07 2004-04-01 Peptide Technology Ltd Bindeligande für Tumornekrosisfaktor.
US5859205A (en) 1989-12-21 1999-01-12 Celltech Limited Humanised antibodies
GB8928874D0 (en) 1989-12-21 1990-02-28 Celltech Ltd Humanised antibodies
US6150584A (en) * 1990-01-12 2000-11-21 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US6075181A (en) 1990-01-12 2000-06-13 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US6673986B1 (en) * 1990-01-12 2004-01-06 Abgenix, Inc. Generation of xenogeneic antibodies
GB9014932D0 (en) 1990-07-05 1990-08-22 Celltech Ltd Recombinant dna product and method
US5625126A (en) * 1990-08-29 1997-04-29 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5789650A (en) * 1990-08-29 1998-08-04 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5770429A (en) * 1990-08-29 1998-06-23 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5545806A (en) * 1990-08-29 1996-08-13 Genpharm International, Inc. Ransgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US7084260B1 (en) * 1996-10-10 2006-08-01 Genpharm International, Inc. High affinity human antibodies and human antibodies against human antigens
US5661016A (en) 1990-08-29 1997-08-26 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes
US6255458B1 (en) * 1990-08-29 2001-07-03 Genpharm International High affinity human antibodies and human antibodies against digoxin
ES2246502T3 (es) * 1990-08-29 2006-02-16 Genpharm International, Inc. Animales no humanos transgenicos capaces de producir anticuerpos heterologos.
US5633425A (en) * 1990-08-29 1997-05-27 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US6300129B1 (en) * 1990-08-29 2001-10-09 Genpharm International Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
GB9022547D0 (en) 1990-10-17 1990-11-28 Wellcome Found Purified immunoglobulin
GB2279077B (en) 1990-12-21 1995-06-14 Celltech Ltd Therapeutic compositions comprising recombinant antibodies specific for the TNFalpha
GB9109645D0 (en) 1991-05-03 1991-06-26 Celltech Ltd Recombinant antibodies
US5994510A (en) 1990-12-21 1999-11-30 Celltech Therapeutics Limited Recombinant antibodies specific for TNFα
GB9028123D0 (en) 1990-12-28 1991-02-13 Erba Carlo Spa Monoclonal antibodies against human tumor necrosis factor alpha
US5656272A (en) 1991-03-18 1997-08-12 New York University Medical Center Methods of treating TNF-α-mediated Crohn's disease using chimeric anti-TNF antibodies
US20040120952A1 (en) 2000-08-07 2004-06-24 Centocor, Inc Anti-TNF antibodies and peptides of human tumor necrosis factor
US5698195A (en) * 1991-03-18 1997-12-16 New York University Medical Center Methods of treating rheumatoid arthritis using chimeric anti-TNF antibodies
DE07012625T1 (de) * 1991-03-18 2010-01-21 New York University Monoklonale und chimäre Antikörper gegen humanen Tumornekrosefaktor
US6277969B1 (en) 1991-03-18 2001-08-21 New York University Anti-TNF antibodies and peptides of human tumor necrosis factor
US7192584B2 (en) 1991-03-18 2007-03-20 Centocor, Inc. Methods of treating psoriasis with anti-TNF antibodies
US20070298040A1 (en) 1991-03-18 2007-12-27 Centocor, Inc. Methods of treating seronegative arthropathy with anti-TNF antibodies
US20060246073A1 (en) 1991-03-18 2006-11-02 Knight David M Anti-TNF antibodies and peptides of human tumor necrosis factor
US5328985A (en) 1991-07-12 1994-07-12 The Regents Of The University Of California Recombinant streptavidin-protein chimeras useful for conjugation of molecules in the immune system
WO1993006213A1 (en) 1991-09-23 1993-04-01 Medical Research Council Production of chimeric antibodies - a combinatorial approach
US5869619A (en) * 1991-12-13 1999-02-09 Xoma Corporation Modified antibody variable domains
US6270766B1 (en) 1992-10-08 2001-08-07 The Kennedy Institute Of Rheumatology Anti-TNF antibodies and methotrexate in the treatment of arthritis and crohn's disease
US5741488A (en) * 1992-10-08 1998-04-21 The Kennedy Institute For Rheumatology Treatment of rheumatoid arthritis with anti-CD4 antibodies in conjunction with anti-TNF antibodies
ES2159529T5 (es) 1993-03-05 2011-03-09 Bayer Corporation Anticuerpos monoclonales humanos anti-tnf alfa.
CA2162689C (en) 1993-05-12 2000-07-18 Marc D. Better Immunotoxins comprising gelonin and an antibody
EP0703925B1 (en) 1993-06-03 1999-08-18 Therapeutic Antibodies Inc. Production of antibody fragments
AU8083594A (en) 1993-10-19 1995-05-08 Scripps Research Institute, The Synthetic human neutralizing monoclonal antibodies to human immunodeficiency virus
EP0659766A1 (en) 1993-11-23 1995-06-28 Schering-Plough Human monoclonal antibodies against human cytokines and methods of making and using such antibodies
CA2183550A1 (en) 1994-03-04 1995-09-08 Craig M. Lewis In vitro antibody affinity maturation using alanine scanning mutagenesis
JPH07289288A (ja) * 1994-04-27 1995-11-07 L T T Kenkyusho:Kk 抗リウマチ薬の効果評価方法
WO1996000081A1 (en) 1994-06-24 1996-01-04 Immunex Corporation Controlled release polypeptide compositions and methods of treating inflammatory bowel disease
US5561053A (en) 1994-08-05 1996-10-01 Genentech, Inc. Method for selecting high-expressing host cells
GB9416721D0 (en) * 1994-08-18 1994-10-12 Short Brothers Plc A bias yarn assembly forming device
US6113898A (en) 1995-06-07 2000-09-05 Idec Pharmaceuticals Corporation Human B7.1-specific primatized antibodies and transfectomas expressing said antibodies
US6090382A (en) 1996-02-09 2000-07-18 Basf Aktiengesellschaft Human antibodies that bind human TNFα
HU221984B1 (hu) * 1996-02-09 2003-03-28 Basf Ag Humán TNFalfa-t kötő antitestek, ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények és alkalmazásuk
WO2000058362A1 (en) * 1999-03-26 2000-10-05 Human Genome Sciences, Inc. Neutrokine-alpha binding proteins and methods based thereon
UA81743C2 (uk) 2000-08-07 2008-02-11 Центокор, Инк. МОНОКЛОНАЛЬНЕ АНТИТІЛО ЛЮДИНИ, ЩО СПЕЦИФІЧНО ЗВ'ЯЗУЄТЬСЯ З ФАКТОРОМ НЕКРОЗУ ПУХЛИН АЛЬФА (ФНПα), ФАРМАЦЕВТИЧНА КОМПОЗИЦІЯ, ЩО ЙОГО МІСТИТЬ, ТА СПОСІБ ЛІКУВАННЯ РЕВМАТОЇДНОГО АРТРИТУ
US20050249735A1 (en) 2000-08-07 2005-11-10 Centocor, Inc. Methods of treating ankylosing spondylitis using anti-TNF antibodies and peptides of human tumor necrosis factor
US20060018907A1 (en) 2000-08-07 2006-01-26 Centocor, Inc. Anti-TNF antibodies and peptides of human tumor necrosis factor
BR0206160A (pt) 2001-05-25 2004-10-26 Abbott Gmbh & Co Kg Uso de anticorpos anti-tnf como medicamentos no tratamento de distúrbios sépticos de pacientes anêmicos
CA2817619A1 (en) 2001-06-08 2002-12-08 Abbott Laboratories (Bermuda) Ltd. Methods of administering anti-tnf.alpha. antibodies
US20030161828A1 (en) 2002-02-19 2003-08-28 Abbott Gmbh & Co. Kg Use of TNF antagonists as drugs for the treatment of patients with an inflammatory reaction and without suffering from total organ failure
US20030206898A1 (en) 2002-04-26 2003-11-06 Steven Fischkoff Use of anti-TNFalpha antibodies and another drug
US20040009172A1 (en) 2002-04-26 2004-01-15 Steven Fischkoff Use of anti-TNFalpha antibodies and another drug
DK1944322T3 (da) 2002-07-19 2015-06-22 Abbvie Biotechnology Ltd Behandling af TNFalfa-relaterede sygdomme
US20090280065A1 (en) * 2006-04-10 2009-11-12 Willian Mary K Uses and Compositions for Treatment of Psoriasis
US20040033228A1 (en) 2002-08-16 2004-02-19 Hans-Juergen Krause Formulation of human antibodies for treating TNF-alpha associated disorders
US20040054414A1 (en) * 2002-09-18 2004-03-18 Trieu Hai H. Collagen-based materials and methods for augmenting intervertebral discs
MY150740A (en) 2002-10-24 2014-02-28 Abbvie Biotechnology Ltd Low dose methods for treating disorders in which tnf? activity is detrimental
TW201705980A (zh) * 2004-04-09 2017-02-16 艾伯維生物技術有限責任公司 用於治療ＴＮＦα相關失調症之多重可變劑量療法
WO2006041970A2 (en) 2004-10-08 2006-04-20 Abbott Biotechnology Ltd. Treatment of respiratory syncytial virus (rsv) infection
JP5757495B2 (ja) * 2005-05-16 2015-07-29 アッヴィ バイオテクノロジー リミテッド びらん性多発性関節炎の治療のためのｔｎｆ阻害剤の使用
US20070041905A1 (en) 2005-08-19 2007-02-22 Hoffman Rebecca S Method of treating depression using a TNF-alpha antibody
BRPI0618085A2 (pt) 2005-11-01 2011-08-16 Abbott Biotech Ltd processos e kits para diagnóstico de espondilite ancilosante usando biomarcadores
CA2647029A1 (en) 2006-04-05 2007-10-18 Abbott Biotechnology Ltd. Antibody purification
EP2012586A4 (en) * 2006-04-10 2010-08-18 Abbott Biotech Ltd USES AND COMPOSITIONS FOR THE TREATMENT OF ANKYLOSANTE SPONDYLARTHRITIS
EP2666472A3 (en) * 2006-04-10 2014-04-02 Abbott Biotechnology Ltd Uses and compositions for treatment of psoriatic arthritis
EP2010214A4 (en) * 2006-04-10 2010-06-16 Abbott Biotech Ltd USES AND COMPOSITIONS FOR THE TREATMENT OF RHEUMATOID ARTHRITIS
US20090317399A1 (en) * 2006-04-10 2009-12-24 Pollack Paul F Uses and compositions for treatment of CROHN'S disease
US9605064B2 (en) 2006-04-10 2017-03-28 Abbvie Biotechnology Ltd Methods and compositions for treatment of skin disorders
US20080118496A1 (en) 2006-04-10 2008-05-22 Medich John R Uses and compositions for treatment of juvenile rheumatoid arthritis
US20080131374A1 (en) 2006-04-19 2008-06-05 Medich John R Uses and compositions for treatment of rheumatoid arthritis
US20100021451A1 (en) * 2006-06-08 2010-01-28 Wong Robert L Uses and compositions for treatment of ankylosing spondylitis
US20080311043A1 (en) 2006-06-08 2008-12-18 Hoffman Rebecca S Uses and compositions for treatment of psoriatic arthritis
EP2043711A4 (en) * 2006-06-30 2017-08-30 AbbVie Biotechnology Ltd Automatic injection device
TW201708537A (zh) 2006-09-13 2017-03-01 艾伯維有限公司 細胞培養改良
EP2089428B1 (en) * 2006-10-27 2013-11-20 AbbVie Biotechnology Ltd Crystalline anti-htnfalpha antibodies
MX2009010361A (es) 2007-03-29 2009-10-16 Abbott Lab Anticuerpos il-12 anti-humanos cristalinos.
WO2008150491A2 (en) 2007-05-31 2008-12-11 Abbott Laboratories BIOMARKERS PREDICTIVE OF THE RESPONSIVENESS TO TNFα INHIBITORS IN AUTOIMMUNE DISORDERS
WO2008150490A2 (en) * 2007-06-01 2008-12-11 Abbott Biotechnology Ltd. Uses and compositions for treatment of psoriasis and crohn's disease
EP2171451A4 (en) * 2007-06-11 2011-12-07 Abbott Biotech Ltd METHOD FOR TREATING JUVENILIAN IDIOPATHIC ARTHRITIS
US20090110679A1 (en) * 2007-07-13 2009-04-30 Luk-Chiu Li Methods and compositions for pulmonary administration of a TNFa inhibitor
CN101980722A (zh) * 2007-08-08 2011-02-23 雅培制药有限公司 结晶抗体的组合物和方法
WO2009073569A2 (en) * 2007-11-30 2009-06-11 Abbott Laboratories Protein formulations and methods of making same
US20090271164A1 (en) * 2008-01-03 2009-10-29 Peng Joanna Z Predicting long-term efficacy of a compound in the treatment of psoriasis
NZ600979A (en) * 2008-01-15 2014-01-31 Abbott Lab Improved mammalian expression vectors and uses thereof
NZ621174A (en) * 2008-01-15 2015-09-25 Abbvie Deutschland Powdered protein compositions and methods of making same
CA2713342A1 (en) 2008-01-30 2009-08-13 Abbott Laboratories Compositions and methods for crystallizing antibody fragments
JP2011517672A (ja) * 2008-03-24 2011-06-16 アボツト・バイオテクノロジー・リミテツド 骨損失を治療するための方法及び組成物
BRPI1012162A2 (pt) 2009-04-29 2016-01-12 Abbott Biotech Ltd dispositivo de injeção automática
JP2012526121A (ja) * 2009-05-04 2012-10-25 アボツト・バイオテクノロジー・リミテツド ヒト抗ｔｎｆアルファ抗体の安定した高蛋白質濃度製剤
WO2011097301A2 (en) 2010-02-02 2011-08-11 Abbott Biotechnology Ltd. METHODS AND COMPOSITIONS FOR PREDICTING RESPONSIVENESS TO TREATMENT WITH TNF-α INHIBITOR
CN105056232A (zh) 2010-06-03 2015-11-18 阿布维生物技术有限公司 用于治疗化脓性汗腺炎(hs)的用途和组合物
US9085618B2 (en) * 2013-10-18 2015-07-21 Abbvie, Inc. Low acidic species compositions and methods for producing and using the same

Also Published As

Publication number Publication date
NO322755B1 (no) 2006-12-04
NZ331579A (en) 2001-06-29
JP3861118B2 (ja) 2006-12-20
HU228630B1 (en) 2013-04-29
JP5689902B2 (ja) 2015-03-25
IL218518A0 (en) 2012-04-30
DE122004000003I2 (de) 2007-03-29
IL125697A (en) 2005-03-20
RU2458704C2 (ru) 2012-08-20
US6258562B1 (en) 2001-07-10
TR199801532T2 (xx) 1998-11-23
HK1214608A1 (zh) 2016-07-29
US20030092059A1 (en) 2003-05-15
US20090155205A1 (en) 2009-06-18
IL206994A0 (en) 2010-12-30
US8372400B2 (en) 2013-02-12
KR19990082430A (ko) 1999-11-25
HK1019452A1 (en) 2000-02-11
HU230048B1 (hu) 2015-06-29
HK1214609A1 (zh) 2016-07-29
LU91062I2 (fr) 2004-04-26
CY2463B1 (en) 2005-06-03
BR9715219B1 (pt) 2010-02-23
DE69721548D1 (de) 2003-06-05
JP5951056B2 (ja) 2016-07-13
CN103275221A (zh) 2013-09-04
CZ292465B6 (cs) 2003-09-17
NL300143I2 (nl) 2004-07-01
NO983627L (no) 1998-10-07
NO20040154L (no) 1998-10-07
UA57726C2 (uk) 2003-07-15
NO2004002I2 (no) 2008-02-04
BR9707379A (pt) 1999-04-13
JP4890997B2 (ja) 2012-03-07
CZ247698A3 (cs) 1998-11-11
ES2198552T3 (es) 2004-02-01
SI9720020A (sl) 1999-10-31
NO2017038I1 (no) 2017-08-01
US20070249813A1 (en) 2007-10-25
RO123028B1 (ro) 2010-07-30
NO20040052L (no) 1998-10-07
JP2010209119A (ja) 2010-09-24
DK0929578T3 (da) 2003-08-25
BG112042A (bg) 2015-10-30
CN100429232C (zh) 2008-10-29
JP2003177130A (ja) 2003-06-27
BG66509B1 (bg) 2015-11-30
JP2013091666A (ja) 2013-05-16
WO1997029131A1 (en) 1997-08-14
PT929578E (pt) 2003-09-30
HUP1500179A2 (en) 1999-09-28
PL328411A1 (en) 1999-01-18
CN102070715A (zh) 2011-05-25
PL193499B1 (pl) 2007-02-28
CN1215407A (zh) 1999-04-28
NZ536216A (en) 2006-08-31
NZ562935A (en) 2009-06-26
RU2458704C9 (ru) 2012-12-10
BRPI9715219B8 (pt) 2015-07-07
NO319955B1 (no) 2005-10-03
US8206714B2 (en) 2012-06-26
NO316711B1 (no) 2004-04-13
NO20026202D0 (no) 2002-12-23
BRPI9707379B8 (pt) 2015-07-07
JP2007045828A (ja) 2007-02-22
SK284040B6 (sk) 2004-08-03
HK1125972A1 (en) 2009-08-21
US20130330357A1 (en) 2013-12-12
US20120258114A1 (en) 2012-10-11
NO20026202L (no) 1998-10-07
RU2012102323A (ru) 2013-07-27
JP2000507810A (ja) 2000-06-27
AU2122997A (en) 1997-08-28
HK1214607A1 (zh) 2016-07-29
AU722077B2 (en) 2000-07-20
ATE239041T1 (de) 2003-05-15
EP0929578B1 (en) 2003-05-02
SK106298A3 (en) 1999-03-12
JP2014055150A (ja) 2014-03-27
JP2015108011A (ja) 2015-06-11
MX9806347A (es) 1998-10-31
HU0204115D0 (en) 2003-02-28
NO2017038I2 (no) 2017-11-17
US20130330356A1 (en) 2013-12-12
IL151641A0 (en) 2003-04-10
CN1300173C (zh) 2007-02-14
IL125697A0 (en) 1999-04-11
DE69721548T2 (de) 2004-04-01
BRPI9707379C8 (pt) 2017-12-12
JP4404181B2 (ja) 2010-01-27
KR100317188B1 (ko) 2002-02-19
US7223394B2 (en) 2007-05-29
NZ576716A (en) 2011-02-25
BG110703A (en) 2010-10-29
HK1066860A1 (en) 2005-04-01
EP0929578A1 (en) 1999-07-21
US7541031B2 (en) 2009-06-02
NZ512006A (en) 2005-05-27
NO983627D0 (no) 1998-08-07
JP5759526B2 (ja) 2015-08-05
SI9720020B (en) 2001-12-31
BG64564B1 (bg) 2005-07-29
BG107537A (en) 2003-09-30
HUP9901874A3 (en) 2000-05-29
CN101712720A (zh) 2010-05-26
US8753633B2 (en) 2014-06-17
BR9707379B1 (pt) 2009-08-11
HU230515B1 (hu) 2016-10-28
HK1214610A1 (zh) 2016-07-29
NO320657B1 (no) 2006-01-09
DE122004000003I1 (de) 2004-09-23
CA2243459A1 (en) 1997-08-14
UA82823C2 (en) 2008-05-26
DE122004000004I1 (de) 2004-08-12
HK1125951A1 (en) 2009-08-21
RU2005113954A (ru) 2006-11-20
CY2005011I1 (el) 2011-06-08
JP5422501B2 (ja) 2014-02-19
BG64776B1 (bg) 2006-03-31
BG102755A (en) 1999-05-31
BG109311A (en) 2006-03-31
CN103275221B (zh) 2016-08-17
US20130115224A1 (en) 2013-05-09
MX336813B (es) 2016-02-02
CA2243459C (en) 2002-09-17
JP2016104798A (ja) 2016-06-09
RU2270030C2 (ru) 2006-02-20
CN1504752A (zh) 2004-06-16
BG66195B1 (bg) 2012-01-31
RO119831B1 (ro) 2005-04-29
PL188192B1 (pl) 2004-12-31
RU2003120859A (ru) 2005-01-10
NL300143I1 (nl) 2004-05-03
US20100040604A1 (en) 2010-02-18
HUP9901874A2 (hu) 1999-09-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP5951056B2 (ja) ヒトＴＮＦαに結合するヒト抗体
EP2397494B1 (en) Human antibodies that bind human TNFalpha
AU2004202769B2 (en) Human antibodies that bind human TNFalpha
AU6664900A (en) Human antibodies that bind human TNFalpha

Legal Events

Date Code Title Description
HFG4 Patent granted, date of granting

Effective date: 20021230

HPC4 Succession in title of patentee

Owner name: ABBOTT LABORATORIES (BERMUDA) LTD., BM

HPC4 Succession in title of patentee

Owner name: ABBOTT BIOTECHNOLOGY LTD., BM

HC9A Change of name, address

Owner name: ABBVIE BIOTECHNOLOGY LTD, BM

Free format text: FORMER OWNER(S): ABBOTT BIOTECHNOLOGY LTD., BM; ABBOTT LABORATORIES (BERMUDA) LTD., BM; BASF AG, DE