NO320657B1 - Farmasoytisk blanding omfattende human-antistoffer som binder TNFalfa, samt anvendelser derav - Google Patents

Farmasoytisk blanding omfattende human-antistoffer som binder TNFalfa, samt anvendelser derav Download PDF

Info

Publication number
NO320657B1
NO320657B1 NO20040154A NO20040154A NO320657B1 NO 320657 B1 NO320657 B1 NO 320657B1 NO 20040154 A NO20040154 A NO 20040154A NO 20040154 A NO20040154 A NO 20040154A NO 320657 B1 NO320657 B1 NO 320657B1
Authority
NO
Norway
Prior art keywords
antibody
seq
amino acid
antigen
antibodies
Prior art date
Application number
NO20040154A
Other languages
English (en)
Other versions
NO20040154L (no
Inventor
Jochen G Salfeld
Deborah J Allen
Hendricus R J M Hoogenboom
Zehra Kaymakcalan
Boris Labkovsky
John A Mankovich
Andrew J Roberts
Paul Sakorafas
David Schoenhaut
Tristan J Vaughan
Michael White
Alison Jane Wilton
Brian T Mcguiness
Original Assignee
Abbott Biotech Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=26707297&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=NO320657(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Priority claimed from US08/599,226 external-priority patent/US6090382A/en
Publication of NO20040154L publication Critical patent/NO20040154L/no
Application filed by Abbott Biotech Ltd filed Critical Abbott Biotech Ltd
Publication of NO320657B1 publication Critical patent/NO320657B1/no

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/24—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
    • C07K16/241—Tumor Necrosis Factors
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/24—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/02—Stomatological preparations, e.g. drugs for caries, aphtae, periodontitis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/16—Central respiratory analeptics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/06—Antigout agents, e.g. antihyperuricemic or uricosuric agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A61P29/02—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID] without antiinflammatory effect
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/04—Anorexiants; Antiobesity agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A61P31/22—Antivirals for DNA viruses for herpes viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P33/00—Antiparasitic agents
    • A61P33/02—Antiprotozoals, e.g. for leishmaniasis, trichomoniasis, toxoplasmosis
    • A61P33/06—Antimalarials
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P39/00—General protective or antinoxious agents
    • A61P39/02—Antidotes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/04—Inotropic agents, i.e. stimulants of cardiac contraction; Drugs for heart failure
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/08—Vasodilators for multiple indications
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/64—General methods for preparing the vector, for introducing it into the cell or for selecting the vector-containing host
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/10—Cells modified by introduction of foreign genetic material
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S424/00—Drug, bio-affecting and body treating compositions
    • Y10S424/81—Drug, bio-affecting and body treating compositions involving autoimmunity, allergy, immediate hypersensitivity, delayed hypersensitivity, immunosuppression, immunotolerance, or anergy

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)

Description

Tumor-nekrosefaktor a (TNFa) er et cytokin produsert av en rekke
celletyper, inkludert monocytter og makrofager, som opprinnelig ble identifisert
basert på dets kapasitet til å fremkalle nekrose av visse musetumorer {se teks.
Old, L. (1985) Science 230:630-632). En faktor betegnet kakektin, knyttet til
kakeksi, ble deretter vist å være det samme molekyl som TNFa. TNFa er implisert i mediering av sjokk (se f. eks. Beutler, B. og Cerami, A. (1988) Annu.
Rev. Biochem. 57:505-518; Beutler, B. og Cerami, A. (1989) Annu. Rev. Immunol. 7:625-655). Videre er TNFa implisert i patofysiologien til en rekke andre human-sykdommer og lidelser, inkludert sepsis, infeksjoner, autoimmune sykdommer, transplantatawisning og «graft-versus-host» sykdom (se f. eks. Moelier, A., et al.
(1990) Cytokine 2:162-169; U.S.-patent nr. 5,231,024 til Moelier et al. ; europeisk
patentpublikasjon nr. 260610 B1 til Moelier, A., et a/.Vasilli, P. (1992) Annu. Rev. Immunol. 10:411 -452; Tracey, KJ. og Cerami, A. (1994) Annu. Rev. Med. 45:491-
503).
På grunn av den skadelige rollen til human TNFa (hTNFd) ved eh rekke
lidelser hos mennesker, er terapeutiske strategier laget for å hemme eller
motvirke hTNFa-aktivitet. Spesielt er det søkt etter antistoffer som binder til og nøytraliserer hTNFa, som et middel for å hemme hTNFa-aktivitet. Noen av de tidligste av slike antistoffer var mus-monoklonale antistoffer (mAb), utskilt av hybridomer produsert av lymfocytter fra mus immunisert med hTNFa (se f. eks.
Hann T; et al., (1985) Proe Nati Acad Sei USA 82:3814-3818; Liang, C-M., et al.
(1986) Biochem. Biophys. Res. Commun. 137:847-854: Hirai, M.f et al. (1987) J.
Immunol. Methods 96:57-62; Fendly, B.M., et al. (1987) Hybridoma 6:359-370;
Moelier, A., et al. (1990) Cytokine 2:162-169; U.S.-patent nr. 5,231,024 til Moelier
et al, ; europeisk patent- publikasjon nr. 186 833 B1 av Wallach, D.; europeisk patentsøknad publikasjon nr. 218 868 A1 av Old et al. ; europeisk patent-
publikasjon nr. 260 610 B1 av Moelier, A., et al.). Selv om disse mus-anti-hTNFa-
antistoffer ofte viser høy affinitet for hTNFa ( f. eks. Kd < 10"<9>M) og er i stand til å
nøytralisere hTNFa-aktivitet, kan anvendelse av dem in vivo være begrenset av problemer forbundet med administrering av mus-antistoffer til mennesker, så som kort serum-halveringstid, en manglende evne til å utløse visse human-
effektorfunksjoner og fremkalling av uønsket immunrespons mot mus-antistoff hos et menneske ("humån-anti-mus-antistoff" (HAMA) -reaksjon).
I et forsøk på å overkomme problemene forbundet med anvendelse av fullt munne antistoffer på mennesker, er murine anti-hTNFa-antistoffer blitt konstruert genetisk for å bli mer "human-lignende." For eksempel er kimære antistoffer, hvor de variable områdene i antistoffkjedene er murin-avledet og de konstante områdene av antistoffkjedene er human-avledet, blitt fremstilt (Knight, D.M, et al.
(1993) Mol. Immunol. 30:1443-1453; PCT- publikasjon nr. WO 92/16553 av Daddona, P. E., etal.). Dessuten er også humaniserte antistoffer, hvor de hypervariable domenene av antistoffvariabel-områdene er murin-avledet, mens de resterende variabel-områder og antistoffets konstante områder er human-avledet, fremstilt (PCT-publikasjon nr. WO 92/11383 av Adair, J.R., et al.). Fordi disse kimære og humaniserte antistoffer fremdeles beholder noen murin-sekvenser, kan de imidlertid fortsatt utløse en uønsket immunreaksjon, en human anti-kimær antistoff- (HACA) reaksjon, spesielt når de blir administrert over lenger tid, f.eks. ved kroniske indikasjoner, så som revmatoid artritt (se f. eks. Elliott, M.J., et al.
(1994) Lancet 344:1125-1127; Elliot, M.J., et al. (1994) Lancet344:1105-1110).
Et foretrukket hTNFoc-hemmende middel for murine mAb eller derivater derav { f. eks. kimære eller humaniserte antistoffer) vil være et fullstendig human-anti-hTNFa-antistoff, ettersom et slikt middel ikke vil utløse en HAMA-reaksjon, selv om det anvendes over lengere tid. Human-monoklonale autoantistoffer mot hTNFa er blitt fremstilt ved anvendelse av human-hybridomteknikker {Boyle, P., et al. (1993) Cell. Immunol. 152:556-568: Boyle, P., et al. (1993) Cell. Immunol. 152:569-581; europeisk patentsøknad, publikasjon nr. 614 984 A2 av Boyle, et
al.). Imidlertid er disse hybridomavledete monoklonale autoantistoffer rapportert å ha en affinitet for hTNFa som var for lav til å beregne ved konvensjonelle metoder, de var ikke i stand til å binde oppløselig hTNFa og var ikke i stand til å nøytralisere hTNFa-fremkalt cytotoksisitet (se Boyle, et al. ; supra). Dessuten avhenger suksessen av human-hybridomteknikken av naturlig tilstedeværelse av lymfocytter som produserer autoantistoffer spesifikke for hTNFa i humant perifert blod. Visse undersøkelser har detektert serum-autoantistoffer mot hTNFa hos mennesker (Fomsgaard, A., ef al. (1989) Scand. J. Immunol. 30:219-223; Bendtzen, K., et al. (1990) Prog. Leukocyte Biol. 10B:447-452), mens andre har ikke (Leusch, H-G., et al. (1991) J. Immunol. Methods 139:145-147).
Et alternativ til naturlig forekommende human-anti-hTNFa-antistoffer ville
være et rekombinant hTNFa-antistoff. Rekombinante human-antistoffer som
binder til hTNFa med relativt lav affinitet (dvs. Kq- ~10~<7>M) og rask
frigjeringshastighet (dvs. Koff 10-<2> sek-<1>) er beskrevet (Griffiths, A.D., et al.
(1993) EMBOJ. 12:725-734). På grunn av deres relativt hurtige
dissosiasjonskinetikk, vil imidlertid disse antistoffer ikke være egnet for terapeutisk anvendelse. Videre er en rekombinant human anti-hTNFa beskrevet, som ikke nøytraliserer hTNFa-aktivitet, men heller forsterker binding av hTNFa til overflaten
av celler og forsterker internalisering av hTNFa (Lidbury, A., et al. (1994)
Biotechnol. Ther. 5:27-45; PCT- publikasjon nr. WO 92/03145 av Aston, R. ef al.)
Følgelig er det fortsatt et behov for human-antistoffer, så som
rekombinante human-antistoffer som binder oppløselig hTNFa med høy affinitet og langsom dissosiasjonskinetikk og som har kapasitet til å nøytralisere hTNFa-
aktivitet, omfattende hTNFa-fremkalt cytotoksisitet { in vitro og in vivo) og hTNFa-fremkalt celleaktivering.
Foreliggende oppfinnelse tilveiebringer en farmasøytisk blanding kjennetegnet ved at den omfatter en biokompatibel polymer og et isolert human antistoff, eller en antigen-bindingsdel derav, som dissosierer fra human TNFa med en Kd på 1 x 10~<8> M eller mindre og en Koff hastighets-konstant på 1 x 10"3
s"<1> eller mindre, begge bestemt ved overflate-plasmon-resonans og nøytraliserer human TNFa cytotoksisitet i en standard in vitro L929-testanalyse med en IC50
på 1 x 10'<7> M eller mindre.
Antistoffene er karakterisert ved binding til hTNFa med høy affinitet og
langsom dissosiasjonskinetikk og ved nøytralisering av hTNFa-aktivitet,
omfattende hTNFa-fremkalt cytotoksisitet { in vitro og in vivo) og hTNFa-fremkalt cellulær aktivering. Antistoffene er videre karakterisert ved binding til hTNFa,
men ikke til hTNFp (lymfotoksin) og ved at de har evnen til å binde til annet primat TNFa og ikke-primat TNFa i tillegg til human TNFa
Antistoffene kan ha full lengde { f. eks. et lgG1- eller lgG4-antistoff) eller kan
omfatte bare en antigen-bindingsdel { f. eks. et Fab-, F(ab')2" eller scFv-fragment).
Foreliggende oppfinnelse tilveiebringer i et annet aspekt en farmasøytisk blanding omfattende en biokompatibel polymer og et isolert human antistoff, eller antigen-bindingsdel derav kjennetegnet ved at; a) det dissosierer fra human TNFa med en Koff hastighetskonstant på 1 x10"<3> s"<1> eller mindre, som bestemt ved overflate plasmon resonansanalayse; b) har et lettkjede CDR3-domene omfattende aminosyresekvensen til SEKV ID NR: 3, eller modifisert fra SEKV ID NR: 3 ved en enkelt alaninsubstitusjon ved stilling 1,4,5,7 eller 8 eller ved en til fem konservative aminosyresubstitusjoner i stillingene 1,3,4,6,7,8 og/eller 9;
c) har et tungkjede CDR3-domene omfattende aminosyresekvensen til SEKV ID NR: 4, eller modifisert fra SEKV ID NR: 4 ved en enkelt alaninsubstitusjon i
stillingene 2,3,4, 5,6,8, 9,10 eller 11 eller ved en til fem konservative aminosyresubstitusjoner i stillingene 2,3,4,5, 6, 8,9,10,11 og/eller 12.
I et ytterligere aspekt omfatter foreliggende oppfinnelse en farmasøytisk blanding kjennetegnet ved at den omfatter en biokompatibel polymer og et isolert human antistoff, eller en antigenbindingsdel derav, med en lettkjede variabel region (LCVR) omfattende aminosyresekvensen til SEKV ID NR: 1 og tungkjede variabel region (HCVR) omfattende aminosyresekvensen av SEKV ID t#*: 2.
Foreliggende oppfinnelse omfatter i et annet aspekt en farmasøytisk blanding kjennetegnet ved at den omfatter en biokompatibel polymer og ot D2E7-antistoff, eller en antigenbindende del derav.
I et annet aspekt av foreliggende oppfinnelse omfattes en farmasøytisk blanding kjennetegnet ved at den omfatter et absorpsjonsforsinkende middel og et isolert human antistoff, eller en antigen-bindingsdel derav, som dissosierer fra human TNFa med en Kd på 1x 10"<8> M eller mindre, og en Korhastighetskonstant på 1 x 10"<3> s"<1> eller mindre, begge bestemt ved overflate-plasmonresonans og nøytraliserer human TNFa-cytotoksisitet i en standard in w'fro-L929-testanalyse med en IC50 på 1 x 10'<7> M eller mindre.
I et annet aspekt av foreliggende oppfinnelse omfattes en farmasøytisk blanding omfattende et absorpsjonsforsinkende middel og et isolert human antistoff, eller antigen-bindingsdel derav, kjennetegnet ved at; a) det dissosierer fra human TNFa med en Koff hastighetskonstant på 1 x10"3 s"<1> eller mindre, som bestemt ved overflate plasmon resonansanalayse; b) har et lettkjede CDR3-domene omfattende aminosyresekvensen til SEKV ID NR: 3, eller modifisert fra SEKV ID NR: 3 ved en enkelt alaninsubstitusjon ved stilling 1,4,5,7 eller 8 eller ved en til fem konservative aminosyresubstitusjoner i stillingene 1,3,4,6,7,8 og/eller 9; c) har et tungkjede CDR3-domene omfattende aminosyresekvensen til SEKV ID NR: 4, eller modifisert fra SEKV ID NR: 4 ved en enkelt alanin-
substitusjon i stillingene 2,3,4, 5, 6,8,9,10 eller 11 eller ved en til fem konservative aminosyresubstitusjoner i stillingene 2,3,4,5, 6, 8,9,10,11 og/eller 12.
I et annet aspekt av foreliggende oppfinnelse omfattes én farmasøytisk blanding kjennetegnet ved at den omfatter et absorpsjonsforsinkende middel og et isolert human antistoff, eller en antigen-bindingsdel derav, med én lettkjede
variabel region (LCVR) omfattende aminosyresekvensen til SEKV ID NR: 1 og tungkjede variabel region (HCVR) omfattende aminosyresekvensen av SEKV ID
NR: 2.
I et annet aspekt av foreliggende oppfinnelse omfattes en farmasøytisk blanding kjennetegnet ved at den omfatter et absorpsjonsforsinkende middel <p>g et D2E7-antistoff, eller en antigenbindende del derav.
I et ytterligere foretrukket aspekt av foreliggende oppfinnelse omfattes en farmasøytisk blanding kjennetegnet ved at den omfatter en bærer som forhindrer hurtig frigjøring og et isolert human antistoff, eller en antigen-bindingsdel derav,
som dissosierer fra human TNFa med en Ka på 1 x 10"<8> M eller mindre, og enXor hastighetskonstant på 1 x 10'<3> s"<1> eller mindre, begge bestemt ved overflate-plasmonresonans og nøytraliserer human TNFa-cytotoksisitet i en standard in w'fro-L929-testanalyse med en IGsopå 1 x 10"<7> M eller mindre.
I et ytterligere foretrukket aspekt av foreliggende oppfinnelse omfattes en farmasøytisk blanding omfattende en bærer som forhindrer hurtig frigjøring og et isolert human antistoff, eller antigenbindingsdel derav, kjennetegnet ved at; a) det dissosierer fra human TNFa med en Koff hastighetskonstant på 1x10* s"<1> eller mindre som bestemt ved overflate plasmon resonansanalayse; b) har et lettkjede CDR3-domene omfattende aminosyresekvensen til SEKV ID NR: 3, eller
modifisert fra SEKV ID NR: 3 ved en enkelt alaninsubstitusjon ved stilling 1,4, 5,
7 eller 8 eller ved en til fem konservative aminosyresubstitusjoner i stillingene 1, 3,4, 6, 7,8 og/eller 9; c) et tungkjede CDR3-domene omfattende aminosyresekvensen til SEKV ID NR: 4, eller modifisert fra SEKV ID NR: 4 ved en enkelt alaninsubstitusjon i stillingene 2, 3,4,5, 6, 8, 9,10 eller 11 eller ved en til fem konservative aminosyresubstitusjoner i stillingene 2,3,4,5, 6, 8,9,10,11 og/eller 12.
I et ytterligere foretrukket aspekt av foreliggende oppfinnelse omfattes en farmasøytisk blanding kjennetegnet ved at den omfatter en bærer som forhindrer hurtig frigjøring og et isolert human antistoff, eller en antigen-bindingsdel derav med en lettkjede variabel region (LCVR) omfattende aminosyresekvensen til
SEKV ID NR: 1 og tungkjede variabel region (HCVR) omfattende aminosyresekvensen av SEKV ID NR: 2.
I enda et ytterligere foretrukket aspekt av foreliggende oppfinnelse omfattes
en farmasøytisk blanding kjennetegnet ved at den omfatter en bærer som forhindrer hurtig frigjøring og et D2E7-antistoff, eller en antigenbindende del derav.
I ytterligere et foretrukket aspekt av foreliggende oppfinnelse omfattes en farmasøytisk blanding ifølge et hvilket som helst av kravene 1-4, kjennetegnet ved
at den ytterligere omfatter i det minste ett ytterligere terapeutisk middel.
I en foretrukken utførelse, er det ytterligere terapeutiske middelet valgt fra gruppen bestående av ikke steroide anti-inflammatoriske legemidler, cytokin suppressive anti-inflammatoriske legemidler, CDP-571/BAY-10-3356, cA2,75 kdTNFR-IgG, 55 kdTNFR-IgG, IDEC-CE9.1/SB 210396, DAB 486-IL-2, DAB 389-IL-2, Anti-Tac, IL-4, IL-10, IL-4-agonister, IL-10-agonister, IL-1 RA, TNF-bp/s-
TNFR, S284, R973401, MK-966, lloprost, metotreksat, thalidomid, thalidomid-relaterte legemidler, leflunomid, traneksaminsyre, T-614, prostaglandin E1,
Tenidap, Naproxen, Meloxicam, Piroxicam, Diclofenac, Indomethacin, Sulfasala-zine, Azathioprince, ICE-inhibitorer, zap-70-inhibitorer, Ick-inhibitorer, VEGF-inhibitorer, VEGF-R-inhibitorer, kortikosteroider, TNF-konvertaseinhibitorer, anti-IL-12-antistoffer, inteireukin-11, interleukin-13, interleukin-17-inhibitorer, gull, penicillamin, klorokin, hydroksyklorokin, klorambucil.cyklofosfamid, cyklosporin, anti-tymocyttglobulin, anti-CD4-antistoffer, CD5-toksiner, oralt administrerte peptider, kollagen, lobenzaritt-disodium, cytokinregulerende midler HP228 og HP466, ICAM-1-antisens-fosforotioat-oligodeoksynukleotider, løselig komplement-reseptor 1, predinson, orgotein, glykosaminoglykan-polysulfat, minocyklin, anti-IL2R-antistoffer, marine lipider, botaniske lipider, auranofin, fenylbutazon, mekiofenaminsyre, flufenaminsyre, intravenøs immunglobulin, ziieuton, mykofenolsyre, takrolimus, sirolimus, amiprilose, kladribin, azabrin, budenosid, epidermal vekstfaktor, aminosalicylater, 6-merkaptopurin, metronidazol, lipoksy-genaseinhibitorer, mesalamin, olsalazin, balsalazid, antioksidanter, tromboksan-inhibitorer, IL-1 -reseptorantagonister, anti-IL-1 (3-monoklonale antistoffer, anti-IL-6-monoklonale antistoffer, vekstfaktorer, elastaseinhibitorer, pyridinyl-imidazol-forbindelser, glukuronid-konjugerte prolegemidler av prednisolon, deksametason eller budesonid, dekstran-konjugerte prolegemidler av prednisolon, deksametason eller budesonid, løselig kdmpiementreseptor 1, langsom-firgjørende mesalazin, antagonister av plateaktiverende faktor (PAF), ciprofloksacin, lignokain,
prednisolon, metylprednisolon, cyklofosfamin, 4-aminopyridin, tizanidin, interferon-
p 1 a, interferon-p 1b, kopolymer 1, hyperbarisk oksygen, intravenøs
immunglobulin, klabribin, hypertoniske saltløsninger, antibiotika, kontinuerlig hemofiftrering, karbapenemer, antagonister av cytokiner slik som TNFa, IL-1 p, IL-6 og/eller IL-8, SK&F 107647, tetravalent guanylhydrazon CN1-1493, vevsfaktor-reaksjonsveiinhibitor, PHP, jem-chelatorer og chelater, inkludert dietylentriaminpentaeddiksyre-jem(lll)kompleks, iisofyllin, PGG-glukan, apolipo-
protein A-1 rekonstituert med lipider, kirale hydroksaminsyrer, anti-endotoksinanti-
stoffer, E5531,1BPI21, syntetiske anti-endotoksinpeptider, overflate-erstatningste-rapi og anti-IL-8-antistoffer.
Foreliggende oppfinnelse omfatter også anvendelse av den farmasøytiske
blanding ifølge oppfinnelsen i fremstilling av et medikament for behandling av en lidelse i hvilken TNFa er skadelig.
Foreliggende oppfinnelse omfatter også anvendelser av den farmasøytiske blanding ifølge foreliggende oppfinnelse som ytterligere omfatter i det minste ett ytterligere terapeutisk middel, for fremstilling av et medikament for behandling av en lidelse i hvilken TNFa er skadelig.
Ifølge et annet foretrukket aspekt ved foreliggende oppfinnelse omfattes en blanding kjennetegnet ved at den omfatter en biokompatibel polymer og et isolert human antistoff, eller en antigen-bindingsdel derav, som dissosierer fra human
TNFa med en Ka på 1 x 10"<6> M eller mindre, og en Korhastighetskonstant på 1 x
10"<3> s"<1> eller mindre, begge bestemt ved overflate-plasmonresonans og nøytra-liserer human TNFa-cytotoksisitet i en standard in v/frø-L929-testanalyse med en IC5opå1 x 10'7 M eller mindre.
Ifølge et annet foretrukket aspekt ved foreliggende oppfinnelse omfattes en blanding omfattende en biokompatibel polymer og et isolert human antistoff eller antigen-bindingsdel derav kjennetegnet ved at; a) det dissosierer fra human TNFa med en Koff hastighetskonstant på 1x10"<3> s"<1> eller mindre, som bestemt ved overflate plasmon resonansanalayse; b) har et lettkjede CDR3-domene omfattende aminosyresekvensen til SEKV ID NR: 3, eller modifisert fra SEKV ID
NR: 3 ved en enkelt alaninsubstitusjon ved stilling 1,4, 5, 7 eller 8 eller ved en til
fem konservative aminosyresubstitusjoner i stillingene 1,3, 4, 6,7,8 og/eller 9; c)
har et tungkjede CDR3-domene omfattende aminosyresekvensen til SEKV ID NR:
4, eller modifisert fra SEKV ID NR: 4 ved en enkelt alaninsubstitusjon i stillingene 2,3,4,5, 6, 8,9,10 eller 11 eller ved en til fem konservative aminosyre-
substitusjoner i stillingene 2,3,4,5,6,8,9,10,11 og/eller 12.
Ifølge et annet foretrukket aspekt ved foreliggende oppfinnelse omfattes en. blanding kjennetegnet ved at den omfatter en biokompatibel polymer og et isolert human antistoff, eller en antigen-bindingsdel derav med en lettkjede variabel region (LCVR) omfattende aminosyresekvensen til SEKV ID NR: 1 og tungkjede variabel region (HCVR) omfattende aminosyresekvensen av SEKV ID NR: 2.
Ifølge enda et foretrukket aspekt ved foreliggende oppfinnelse, omfattes en
blanding kjennetegnet ved at den omfatter en biokompatibel polymer og et D2E7-
antistoff, eller en antigenbindende del derav.
I en foretrukket utførelsesform av foreliggende oppfinnelse omfattes en
blanding som er kjennetegnet ved at den omfatter et absorpsjonsforsinkende middel og et isolert human antistoff, eller en antigen-bindingsdel derav, som dissosierer fra human TNFa med én Ka på 1 x 10"8 M eller mindre, og en Kor hastighetskonstant på 1 x 10"<3> s"<1> eller mindre, begge bestemt ved overflate-plasmonrésonans og nøytraliserer human TNFa-cytotoksisitet i en standard in w'frø-L929-testanalyse med en IC50 på 1 x 10'<7> M eller mindre.
I en annen foretrukket utførelsesform av foreliggende oppfinnelse omfattes en blanding omfattende et absorpsjonsforsinkende middel og et isolert human
antistoff, eller antigen-bindingsdel derav som er kjennetegnet ved at; a) det dissosierer fra human TNFa med en Koff hastighetskonstant på 1 x10"<3> s"<1> eller
mindre som bestemt ved overflate plasmon resonansanalayse; b) har et lettkjede CDR3-domene omfattende aminosyresekvensen til SEKV ID NR: 3, eller
modifisert fra SEKV ID NR: 3 ved en enkelt alaninsubstitusjon ved stilling 1,4, 5,
7 eller 8 eller ved en til fem konservative aminosyresubstitusjoner i stillingene 1,3, 4,6,7,8 og/eller 9; c) har et tungkjede CDR3-domene omfattende aminosyresekvensen til SEKV ID NR: 4, eller modifisert fra SEKV ID NR: 4 ved en enkelt alaninsubstitusjon i stillingene 2,3,4,5,6,8,9,10 eller 11 eller ved en til fem konservative aminosyresubstitusjoner i stillingene 2,3,4,5,6,8,9,10,11
og/eller 12.
I en annen foretrukket utførelsesform av foreliggende oppfinnelse omfattes
en blanding som er kjennetegnet ved et absorpsjonsforsinkende middel og et isolert human antistoff, eller en antigenbindingsdel derav, med en lettkjede variabel region (LCVR) omfattende aminosyresekvensen til SEKV ID NR: 1 og tungkjede variabel region (HCVR) omfattende aminosyresekvensen av SEKV ID
NR: 2.
I en foretrukket utførelsesform av foreliggende oppfinnelse omfattes en blanding som er kjennetegnet ved at den omfatter et absorpsjonsforsinkende middel og et D2E7-antistoff, eller en antigenbindende del derav.
I et foretrukket aspekt av foreliggende oppfinnelse omfatter blandingen en
bærer som forhindrer hurtig frigjøring og et isolert human antistoff som definert i patentkravene 43-46.
Kort beskrivelse av tegningene
Figurene 1A og 1B viser aminosyresekvenser i lettkjede variabel-regionen
til D2E7 (D2E7 VL; også vist i SEKV ID NR: 1), alanin-scan-mutanter av D2E7 VL (LD2E7<*>.A1, LD2E7\A3, LD2E7<*>.A4, LD2E7<*>.A5, LD2E7<*.>A7 og LD2E7VA8),
lettkjede variabel-regionen til det D2E7-beslektede antistoff 2SD4 (2SD4 VL; også
vist i SEKV ID NR: 9) og andre D2E7-beslektede lettkjede variabel-regioner (EP
B12, VL10E4, VL100A9, VL100D2, VL10F4, LOE5, VLLOF9, VLL0F10, VLLOG7, VLLOG9, VLLOH1, VLLOH10, VL1B7, VL1C1, VL1C7, VL0.1 F4, VL0.1 H8, LOE7, LOE7.A og LOE7.T). Figur 1A viser FR1 -, CDR1 -, FR2- og CDR2-domener.
Figur 1B viser FR3-, CDR3- og FR4-domener. Lettkjede CDR1-("CDR L1'),
CDR2- ("CDR L2") og CDR3- ("CDR L3") domener er innrammet.
Figurene 2A og 2B viser aminosyresekvenser av tungkjede variabel-
regionen av D2E7 (D2E7 VH; også vist i SEKV ID NR: 2), alanin-scan-mutanter
av D2E7 VH (HD2E7<*.>A1, HD2E7<*>.A2, HD2E7<*>.A3, HD2E7<*>.A4, HD2E7<*>.A5, HD2E7<*>.A6, HD2E7<*>.A7, HD2E7<*>.A8 og HD2E7<*>.A9), tungkjede variabel-
regionen av det D2E7-beslektede antistoff 2SD4 (2SD4 VH; også vist i SEKV ID
NR: 10) og andre D2E7-beslektede tungkjede variabel-regioner (VH1B11, VH1D8, VH1A11, VH1B12, VH1-D2, VH1E4, VH1F6, VH1G1, 3C-H2, VH1-D2.N
og VH1-D2.Y). Figur 2A viser FR1 CDR1 -, FR2- og CDR2-domenene. Figur 2B
viser FR3-, CDR3- og FR4-domenene. Tungkjede CDR1- ("CDR H1"), CDR2-
("CDR H2") og CDR3-("CDR H3") domenene er innrammet.
Figur 3 er en kurve som viser hemning av TNFa-fremkalt L929
cytotoksisitet med human-anti-hTNFa-antistoffet D2E7, sammenlignet med det
murine anti-hTNFa-antistoff MAK 195.
Figur 4 er en kurve som vjser hemning av rhTNFoc-binding til hTNFoc-
reseptorer på U-937-celler av human-anti-hTNFa-antistoffet D2E7, sammenlignet med murint anti-hTNFa-antistoff MAK 195.
Figur 5 er en kurve som viser hemning av TNFa-f remkalt ELAM-1 -
ekspresjon på HUVEC av human-anti-hTNFa-antistoffet D2E7, sammenlignet med murin-anti-hTNFa-antistoffet MAK 195.
Figur 6 er et stolpediagram som viser beskyttelse mot TNFa-fremkalt
dødelighet hos D-galaktosamin-sensibiliserte mus ved administrering av human-anti-hTNFa-antistoffet D2E7 (sorte stolper), sammenlignet med murin-anti-hTNFa-antistoffet MAK 195 (skraverte stolper).
Figur 7 viser nukleotidsekvensen av lettkjede variabel-regionen av D2E7, med den forutsatte aminosyresekvens nedenfor nukleotidsekvensen. CDR L1-,
CDR L2- og CDR L3-regionene er understreket.
Figur 8 viser nukleotidsekvensen av tungkjede variabel-regionen i D2E7,
med den forutsatte aminosyresekvens nedenfor nukleotidsekvensen. CDR H1-,
CDR H2- og CDR H3-regionene er understreket.
Figur 9 er en kurve som viser virkningen av D2E7-antist6ff-behandling på gjennomsnittlig ledd-størreIse hos Tg197 transgene mus som en polyartritt modell.
Foreliggende oppfinnelse angår farmasøytiske blandinger og blandinger
som omfatter isolerte human-antistoffer eller antigen-bindingsdeler derav, som
binder til human TNFa med høy affinitet, lav frigjøringshastighet og høy nøytraliseringskapasitet.
For at foreliggende oppfinnelse lettere skal forstås, er visse betegnelser
først definert.
Betegnelsen "human TNFa" (forkortet her som hTNFa eller ganske enkelt hTNF), som anvendt her, skal referere til et human-cytokin som eksisterer som en 17 kD sekreter! form og en 26 kD membran-assosiert form, idet den biologisk aktive fonn av denne består av en trimer av ikke kovalent bundnel 7 kD molekyler. Strukturen til hTNFa er videre beskrevet i for eksempel Pennicå, D., et ål. (1984)
Nature 312:724-729; Davis, J.M., et al. (1987) Biochemistry 26:1322-1326; og
Jones, E.Y., et al. (1989) Nature 338:225-228. Betegnelsen human TNFa skal
omfatte rekombinant human TNFa (rhTNFa), som kan fremstilles ved standard rekombinante ekspresjonsmetoder eller anskaffes kommersielt (R & D Systems,
Katalog Nr. 210-TA, Minneapolis, MN).
Betegnelsen "antistoff", som anvendt her, skal referere til immunoglobulin-molekyler bestående av fire polypeptidkjeder, to tung- (H) kjeder og to lett- (L)
kjeder inter-forbundet med disulfid-bindinger. Hver tungkjede består av en tungkjede variabel-region (forkortet her som HCVR eller VH) og en tungkjede konstant-region. Tungkjede konstant-regionen består avtre domener, CH1, CH2
og CH3. Hver lettkjede består av en lettkjede variabel-region (forkortet her som LCVR eller VL) og en lettkjede konstant-region. Lettkjede konstant-regionen består av ett domene, CL. VH-og VL-regionene kan være ytterligere underoppdelt i regioner av hypervariabilitet, betegnet kompiementaritets-
bestemmende regioner (CDR), innflettet med regioner som er mer konserverte,
betegnet rammeverk-regioner (FR). Hver VH og VL er sammensatt av tre CDR
og fire FR, arrangert fra amino-terminus tii karboksy-terminus i den følgende rekkefølge: FR1, CDR1 i FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4.
Betegnelsen "antigen-bindingsdel" av et antistoff (eller enkelt "antistoffdel"), som anvendt her, angir ett eller flere fragmenter av et antistoff som opprettholder evnen til spesifikt å binde til et antigen ( f. eks. hTNFa). Det er vist at antigen-bindingsfunksjonen til et antistoff kan utføres med fragmenter av et full-lengde antistoff. Eksempler på bindingsfragmenter omfattet av betegnelsen "antigen-bindingsdel" av et antistoff omfatter (i) et Fab-fragment, et monovalent fragment bestående av VL-, VH-, CL- og CH1 -domener; (ii) et F(ab')2-fragment, et bivaient fragment omfattende to Fab-fragmenter lenket av en disulfid-bro i hengsel-regionen; (iii) et Fd-fragment bestående av VH- og CH1 -domener; (iv) et Fv-fragment bestående av VL- og VH-domener av en enkel arm av et antistoff, (v)
et dAb-fraament fl/Vard et al.. (1989) Nature 341:544-546). som består av et VH-domene; og (vi) en isolert komplementaritets-bestemmende region (CDR). Videre, selv om de to domener av Fv-fragmentet, VL og VH, er kodet for av
separate gener, kan de forbindes, ved anvendelse av rekombinante metoder, med en syntetisk linker som lar dem fremstilles som en enkel proteinkjede hvor VL- og VH-regionene pares for å danne monovalente molekyler (kjent som enkel-kjede
Fv (scFv); se f. eks. Bird et al. (1988) Science 242:423-426: og Huston et al.
(1988) Proe. Nati. Acad. Sei. USA 85:5879-5883). Slike enkel-kjede antistoffer
skal også omfattes av betegnelsen "antigen-bindingsdel" av et antistoff. Andre
former for enkel-kjede antistoffer, så som diabodies omfattes også. Diabodies er bivalente, bispesifikke antistoffer hvor VH- og VL-domener er uttrykt på en enkel polypeptidkjede, men har en linker som er for kort til å tillate paring mellom de to domener på samme kjede, for derved å tvinge domenene til å pare med komplementære domener i en annen kjede og skape to antigen-bindingsseter (se
f. eks. Holliger, P., et al. (1993) Proe. Nati. Acad. Sei. USA 90:6444-6448; Poljak,
R.J., et al. (1994) Structure 2:1121-1123).
Videré kan et antistoff eller antigen-bindingsdel derav være del av større immunoadhesjonsmolekyler, dannet ved kovalent eller ikke-kovalent tilknytning av antistoffet eller antistoffdelen til ett eller flere andre proteiner eller peptider. Eksempler på slike immunoadhesjonsmolekyler omfatter anvendelse åv streptavidin-kjeme-regionen for å fremstille et tetramert scFv-molekyl (Kipriyanov,
S.M., er al. (1995) Human Antibodies and Hybridomas 6:93-101) og anvendelse
av en cystein-rest, et markør-peptid og et C-terminalt polyhistidin-merke for å
fremstille bivalente og biotinylerte scFv-molekyler (Kipriyanov, S.M., et al. (1994) Mol. Immunol. 31.:1047-1058). Antistoffdeler, så som Fab- og Ffab^-fragmenter,
kan fremstilles fra hele antistoffer ved anvendelse av konvensjonelle teknikker, så som henholdsvis papain- eller pepsin-fordøyelse av hele antistoffer. Videre kan antistoffer, antistoffdeler og immunoadhesjonsmolekyler oppnås ved anvendelse
av standard rekombinante DNA-teknikker, som beskrevet her.
Betegnelsen "human-antistoff", som anvendt her, skal omfatte antistoffer
som har variable og konstante regioner avledet fra human-kimlinje-
immunoglobulin-sekvenser. Human-antistoffene ifølge oppfinnelsen kan omfatte aminosyrerester som ikke kodes for av human-kimlinje-immunoglobulin-sekvenser
( f. eks. mutasjoner innført véd tilfeldig eller sete-spesifikk mutagenese in vitro eller ved somatisk mutasjon in vivo), for eksempel i CDR og spesielt CDR3. Imidlertid
skal betegnelsen "human-antistoff", som anvendt her, ikke omfatte antistoffer hvor CDR-sekvenser avledet fra kimlinje fra en annen pattedyrart, så som en mus, er
podet i human-rammeverk-sekvenser.
Betegnelsen "rekombinant human-antistoff, som anvendt her, skai omfatte
alle human-antistoffer som blir fremstilt, uttrykt, skapt eller isolert ved
rekombinante metoder, så som antistoffer uttrykt ved anvendelse av en
rekombinant ekspresjonsvektor transfektert i en vertscelle (ytterligere beskrevet i Seksjon II, nedenfor), antistoffer isolert fra et rekombinant, kombinatorisk human-antistoff-bibliotek (ytterligere beskrevet i Seksjon III nedenfor), antistoffer isolert fra et dyr ( f. eks. en mus) som er transgent for human-immunoglobulin-gener (se f. eks. Taylor, L.D., et al. (1992) Nucl. Acids Res. 20:6287-6295) eller antistoffer
fremstilt, uttrykt, skapt eller isolert ved hvilke som helst andre metoder som involverer spleising av human-immunoglobulin-gensekvenser med andre DNA-
sekvenser. Slike rekombinante human-antistoffer har variable og konstante regioner avledet fra human-kimlinje-immunoglobulin-sekvenser. Ved visse utførelsesform er blir imidlertid slike rekombinante human-antistoffer underkastet in vitro mutagenese (eller når et dyr transgent for human-lg-sekvenser blir anvendt, in vivo somatisk mutagenese) og aminosyresekvensene i VH- og VL-regionene av de rekombinante antistoffer er således sekvenser som, selv bm de er avledet fra og relatert til human-kimlinje-VH-og VL-sekvenser, ikke kan eksistere naturlig i human-antistoff kimlinje-repertoar in vivo.
Et "isolert antistoff", som anvendt her, skal referere til et antistoff som er i
alt vesentlig fritt for andre antistoffer som har forskjellig antigeri-spesifitet ( f. eks. er et isolert antistoff som spesifikt binder til hTNFa, i det vesentlige fritt for antistoffer som spesifikt binder til antigener forskjellig fra hTNFa). Et isolert antistoff som spesifikt binder til hTNFa kan imidlertid ha kryss-reaktivitet til andre antigener, så
som TNFa-molekyler fra andre arter (beskrevet mer detaljert nedenfor). Videre kan et isolert antistoff være i alt vesentlig fritt for annet cellulært materiale og/eller kjemikalier.
Et "nøytraliserende antistoff", som anvendt her (eller et "antistoff som nøytraliserer hTNFa-aktivitet"), skal referere til et antistoff hvis binding til hTNFa resulterer i hemning av den biologiske aktiviteten til hTNFa. Denne hemning av den biologiske aktiviteten til hTNFa kan bestemmes ved måling av én eller flere indikatorer for hTNFa biologisk aktivitet, så som hTNFa-fremkalt cytotoksisitet (enten in vitro eller in vivo), hTNFa-fremkalt cellulær aktivering og hTNFa-binding
til hTNFa-reseptorer. Disse indikatorer for hTNFa biologisk aktivitet kan
bedømmes ved én eller flere av mange standard in vitro- eller in wVo-forsøk kjent på området (se Eksempel 4). Fortrinnsvis blir evnen til et antistoff til å nøytralisere hTNFa-aktivitet bedømt ved hemning av hTNFa-fremkalt cytotoksisitet av L929 celler. Som en ytterligere eller alternativ parameter for hTNFa-aktivitet, kan evnen til et antistoff til å hemme hTNFa-fremkalt ekspresjon
av ELAM-1 på HUVEC, som et mål på hTNFa-fremkalt cellulær aktivering, bestemmes.
Betegnelsen "overflate plasmon-resonans", som anvendt her, angir et optisk fenomen som tillater analyse av sanntids biospesifikke interaksjoner ved deteksjon av endringer i proteinkonsentrasjoner i en biosensor-matriks, for eksempel ved anvendelse av BIAcore-systemet (Pharmacia Biosensor AB,
Uppsala, Sverige og Piscataway, NJ). For ytterligere beskrivelser, se Eksempel 1
og Jonsson, U., et al. (1993) Ann. Biol. Clin. 51:19-26; Jonsson, U., et al. (1991) Biotechniques 11:620-627; Johnsson, B., et al. (1995) J. Mol. flecogn/f. 8:125-
131: oa Johnnson. B.. et al. f1991) Anal. Biochem. 198:268-277.
Betegnelsen "Koff", som anvendt her skal referere til frigjøringskonstanten
for dissosiering av et antistoff fra antistoff/antigen-komplekset.
Betegnelsen "Kd", som anvendt her, skal referere til dissosjasjons-konstanten for en spesiell antistoff-antigen-interaksjon........
Betegnelsen "nukleinsyremolekyl", som anvendt her, skal omfatte DNA-molekyler og RNA-molekyler. Et nukleinsyremolekyl kan være enkelttrådet eller dobbelttrådet, men er fortrinnsvis dobbelttrådet DNA.
Betegnelsen "isolert nukleinsyremolekyl", som anvendt her i forbindelse
med nukleinsyrer som koder for antistoffer eller antistoffdeler ( f. eks. VH, VL,
CDR3) som binder til hTNFa, skal angi et nukleinsyremolekyl hvor
nukleotidsekvenser som koder for antistoffet eller antistoffdeien er fri for andre
nukleotidsekvenser som koder for antistoffer eller antistoffdeler som binder til antigener forskjellig fra hTNFa, hvilke andre sekvenser naturlig kan flankere nukleinsyren i humant genomisk DNA. For eksempel inneholder én isolert nukleinsyre ifølge oppfinnelsen som koder for en VH-region av et anti-TNFa-antistoff således ingen andre sekvenser som koder for andre VH-regioner som
binder til antigener forskjellig fra TNFa.
Betegnelsen "vektor", som anvendt her, skal referere til et nukleinsyre-
molekyl som kan transportere en annen nukleinsyre til hvilken den er lenket. En
type vektor er et "plasmid", som angir en sirkulær dobbelttrådet DNA-løkke til hvilken ytterligere DNA-segmentér kan væré ligert. En annen type vektor er en viral vektor, hvor ytterligere DNA-segmenter kan være ligert i det virale genom.
Visse vektorer er i stand til autonom replikasjon i en vertscelle i hvilken de er
innført ( f. eks. bakterielle vektorer som har bakteriell replikasjonsopprinnelse og episomale pattedy r-vektorer). Andre vektorer ( f. eks. ikke-episomale pattedyr-
véktorer) kan integreres i genomet til en vertscelle ved innføring i vertscellen og blir derved replikert sammen med vertsgenomet. Videre er visse vektorer i stand til å dirigere uttrykket av gener som de er operativt bundet til. Slike vektorer er referert til her som "rekombinante ekspresjonsvektorer" (eller enklere, "ekspresjonsvektorer"). Generelt er ekspresjonsvektorer som er nyttige ved rekombinante DNA-teknikker ofte i form av plasmider. I foreliggende beskrivelse kan "plasmid" og "vektor" anvendes om hverandre, ettersom plasmidet er den mest vanlig anvendte form av vektor. Imidlertid skal oppfinnelsen omfatte slike andre former for ekspresjonsvektorer, så som virale vektorer ( f. eks. replikasjons-
defekte retrovirus, adenovirus og adeno-assosierte virus), som tjener ekvivalente funksjoner.
Betegnelsen "rekombinant vertscelle" (eller enklere "vertscelle"), som anvendt her, skal referere til en celle i hvilken en rekombinant ekspresjonsvektor er innført. Det skai forstås at slike betegnelser skal angi ikke bare den spesielle
aktuelle celle men også avkommet til en slik celle. Fordi visse modifikasjoner kan forekomme i påfølgende generasjoner på grunn av enten mutasjon eller
påvirkning fra omgivelsene, trenger ikke slikt avkom i realiteten være identisk
med modercelien, men omfattes allikevel av betegnelsen "vertscelle" som anvendt her.
Forskjellige aspekter ved oppfinnelsen er beskrevet mer detaljert i de
følgende underavsnitt.
I. Human- antistoffer som binder human TNFa
Det beskrives isolerte human-antistoffer eller antigén-bindingsdeler derav,
som binder til human TNFa med høy affinitet, lav frigjøringshastighet og høy nøytraliseringskapasitet. Fortrinnsvis er human-antistoffene rekombinante, nøytraliserende human-anti-hTNFa- antistoffer. Det mest foretrukne rekombinante, nøytraliserende antistoff ifølge oppfinnelsen er referert til her som D2E7 og har VL- og VH-sekvenser som vist i henholdsvis Figur 1 A, 1B og Figur
2A, 2B (aminosyresekvensen til D2E7 VL-regionen er også vist i SEKV ID NR: 1; amiriosyresekvensen til D2E7 VH-regionen er også vist i SEKV ID NR: 2). Bindingsegenskapene til D2E7, sammenlignet med det murine anti-hTNFa MAK
195 mAb som oppviser høy affinitet og langsom dissosiasjonskinetikk og et annet human-anti-hTNFa-antistoffbeslektet i sekvens med D2E7, 2SD4, er oppsummert nedenfor:
D2E7-antistoffet og beslektede antistoffer har også stor kapasitet til å
nøytralisere hTNFa-aktivitet, som bestemt ved flere in vitro- og in vivo- forsøk (se Eksempel 4).. For eksempel nøytraliserer disse antistoffer hTNFa-fremkalt cytotoksisitet av L929-celler med IC5o-verdier i området omtrent 10~<7> M til omtrent 10"10M. D2E7, når det er uttrykt som et full-lengde lgG1-antistoff,
nøytraliserer hTNFa-fremkalt cytotoksisitet av L929-celler med IC50 på omtrent 1,25 x 10"<10> M. Dessuten blir den nøytraliserende kapasiteten til D2E7
opprettholdt når antistoffet er uttrykt som et Fab-, F(ab')2- eller scFv-fragment. D2E7 hemmer også TNFa-fremkalt cellulær aktivering, som målt ved hTNFa-
fremkalt ELAM-1 -ekspresjon på HUVEC (IC50 omtrent 1,85 x 10'<10> M) og binding av hTNFa til hTNFa-reseptorer på U-937-celler (IC50 = omtrent 1,56 x 10"
10 M). Når det gjelder sistnevnte, hemmer D2E7 binding av hTNFa til både p55
og p75 hTNFa-reseptorer. Videre hemmer antistoffet hTNFa-fremkalt dødelighet in vivo hos mus (ED50 = 1-2,5 mg/mus).
Når det gjelder bindingsspesifisiteten av D2E7, binder dette antistoffet til
human TNFa i forskjellige former, omfattende oppløselig hTNFa, transmembran-hTNFa og hTNFa bundet til cellulære reseptorer. D2E7 binder ikke spesifikt til andre cytokiner, så som lymfotoksin (TNFp), IL-1 a, IL-1 p, IL-2, IL-4, IL-6, IL-8,
IFNy og TGFp. Imidlertid oppviser ikke D2E7 kryssreaktivitet til tumomekrosefaktorer f ra andre arter. For eksempel nøytraliserer antistoffet aldiviteten til minst fem primat TNFa (sjimpanse, bavian, marmosett, cynomolgus og rhesus) med omtrent ekvivalente ICsrj-verdier som for nøytralisering av hTNFa (se Eksempel
4, underavsnitt E). D2E7 nøytraliserer også aktiviteten til mus-TNFa, selv om det er omtrent 1000-ganger mindre godt enn human TNFa (se Eksempel 4, underavsnitt E). D2E7 binder også til hund- og gris-TNFa.
Ved ett aspekt angår oppfinnelsen anvendelse av D2E7-antistoffer og
antistoffdeler, D2E7-beslektede antistoffer og antistoffdeler og andre human-
antistoffer og antistoffdeler med ekvivalente egenskaper til D2E7, så som høy affinitet ved binding til hTNFa med lav dissosiasjonskinetikk og høy
nøytraliserende kapasitet. Ved én utførelsesform tilveiebringer oppfinnelsen et
isolert human-antistoff eller en antigen-bindingsdel derav, som dissosierer fra human-TNFa med eh Kd på 1 x 10"8 M eller mindre og en K0ff-hastighetskonstant på 1 x 10"<3> s-<1> eller mindre, begge bestemt ved overflate-plasmon-resonans og nøytraliserer human TNFa-cytotoksisitet i et standard in
vitro L929-forsøk med en IC50 på 1 x 10"<7> M eller mindre. Mer foretrukket
dissosierer det isolerte human-antistoff eller antigen-bindingsdelen derav, frå human TNFa med en Koff på 5 x 10"<4> s"<1> eller mindre eller enda mer foretrukket, med en K0ff på 1 x kHs-1 eller mindre. Mer foretrukket nøytraliserer det isolerte human-antistoff eller antigen-bindingsdelen derav, human TNFa-cytotoksisitet i et standard in vitro L929-forsøk med en IC50 på 1 x 10"<8> M eller mindre, enda mer foretrukket med en IC50 på 1 x 10"<9> M eller mindre og spesielt foretrukket med en IC50 på 5 x 10"10 M eller mindre. Ved en foretrukket utførelsesform er antistoffet
et isolert humant rekombinant antistoff eller en antigen-bindingsdel derav. Ved en annen foretrukket utførelsesform nøytraliserer også antistoffet TNFa-fremkalt cellulær aktivering, som bedømt ved anvendelse av et standard in vitro- forsøk
med TNFa-fremkalt ELAM-1 -ekspresjon på human umbilikalvene-endotelceller
(HUVEC).
Overflate-plasmon-resonans-analyse for bestemmelse av Kq" og Koff kan utføres som beskrevet i Eksempel 1. Et standard in vitro L929-forsøk for
bestemmelse av IC5Q-verdier er beskrevet i Eksempel 4, underavsnitt A. Et
standard in vitro forsøk for TNFa-fremkalt ELAM-1 -ekspresjon på human-umbilikalvene-endotelceller (HUVEC) er beskrevet i Eksempel 4, underavsnitt C. Eksempler på rekombinante human-antistoffer som imøtekommer eller er forventet å imøtekomme, ovennevnte kinetiske og nøytraliserende kriterier omfatter antistoffer som har de følgende [VH/VL] par; sekvensene for hvilke er vist
i Figurene 1 A, 1B, 2A og 2B (se også Eksempler 2,3 og 4 for kinetikk- og nøytraliseringsanalyser): [D2E7 VH/D2E7 VL]; [HD2E7<*.>A1/D2E7 VL],
[HD2E7<*>.A2/D2E7 VL], [HD2E7<*>.A3/D2E7 VL], [HD2E7\A4/D2E7 VL],
[HD2E7<*>.A5/D.2E7 VL], [HD2E7<*>.A6/D2E7 VL], [HD2E7<*.>A7/D2E7 VL],
[HD2E7<*>.A8/D2E7 VL], [HD2E7<*>.A9/D2E7 VL], [D2E7 VH/LP2E7<*>.A1], [D2E7 VH/LD2E7<*>.A4], [D2E7 VH/LD2E7<*>.A5], [D2E7 VH/LD2E7<*>.A7], [D2E7
VH/LD2E7<*>.A8], [HD2E7<*.>A9/LD2E7<*>.A1], [VH1-D2/LOE7], [VH1-D2.N/LOE7.T], [VH1 -D2.Y/LOE7.A], [VH1 -D2.N/LOE7.A], [VH1-D2/EP B12] og [3C-H2/LOE7].
Det er velkjent på området at antistoff-tung- og lettkjede CDR3-domener spiller en viktig rolle i bindingsspesifisitet/affinitet av et antistoff for et antigen.
Følgelig angår oppfinnelsen ved et annet aspekt anvendelse av human-antistoffer
som har langsom dissosiasjonskinetikk for assosiering med hTNFa og som har
lett- og tungkjede CDR3-domener som strukturelt er identiske med eller beslektet
med de til D2E7. Som vist i Eksempel 3, kan stilling 9 av D2E7 VL CDR3 være okkupert av Ala eller Thr uten i særlig grad å påvirke Koff. Følgelig omfatter et konsensusmotiv for D2E7 VL CDR3, aminosyresekvensen: Q-R-Y-N-R-A-P-Y-
(T/A) (SEKV ID NR: 3). Videre kan stilling 12 i D2E7 VH CDR3 være okkupert av
Tyr eller Asn, uten i særlig grad å påvirke Koff. Følgelig omfatter et konsensus-motiv for D2E7 VH CDR3 aminosyresekvensen: V-S-Y-L-S-T-A-S-S-L-D-(Y/N)
(SEKV ID NR: 4). Videre, som demonstrert i Eksempel 2, er CDR3-domenet av
D2E7 tung- og lettkjeder mottagelig for substitusjon med en enkel alanin-rest (i
stilling 1,4, 5, 7 eller 8 i VL CDR3 eller i stilling 2,3,4, 5, 6,8,9,10 eller 11 i VH
CDR3) uten i særlig grad å påvirke K0ff. Videre vil fagfolk på området forstå at,
gitt mottageligheten til D2E7 VL-og VH-CDR3-domener for substitusjoner med alanin, kan substitusjon av andre aminosyrer i CDR3- domenene være mulig
mens den lave frigje ringshastighetskonstanten til antistoffet opprettholdes,
spesielt substitusjoner med konservative aminosyrer. En "konservativ aminosyresubstitusjon", som anvendt her, er én hvor én aminosyrerest blir erstattet med en annen aminosyrerest som har en lignende sidekjede. Familier av aminosyre-rester som har lignende sidekjeder er definert i litteraturen,
omfattende basiske sidekjeder { f. eks. jysin, arginin, histidin), sure sidekjeder
{ f. eks. asparaginsyre, glutaminsyre), uladede polare sidekjeder { f. eks. glycin, asparagin, glutamin, serin, treonin, tyrosin, cystein), ikke-polare sidekjeder ( f. eks.
alanin, valin, leucin, isoleucin, prolin, fenylalanin, metionin, tryptofan), beta-forgrenede sidekjeder ( f. eks. treonin, valin, isoleucin) og aromatiske sidekjeder ( f. eks. tyrosin, fenylalanin, tryptofan, histidin). Fortrinnsvis blir ikke mer enn én til fem konservative aminosyresubstitusjoner utført i D2E7 VL- og/eller VH-GDR3-
domener. Mer foretrukket blir ikke mer enn én til tre konservative aminosyresubstitusjoner utført i D2E7 VL- og/eller VH-CDR3-domener. Videre bør ikke konservative aminosyresubstitusjoner gjøres i aminosyrestillinger som er kritiske for binding til hTNFa. Som vist i Eksempel 3 synes stillingene 2 og 5 i D2E7-VL-
CDR3 og stillinger 1 og 7 i D2E7-VH-CDR3 å være kritiske for interaksjon med hTNFa og konservative aminosyresubstitusjoner blir således fortrinnsvis ikke gjort
i disse stillinger (selv om en alanin-substitusjon i stilling 5 av D2E7-VL-CDR3 er godtagbar, som beskrevet ovenfor).
Ved en annen utførelse tilveiebringes følgelig et isolert human-antistoff eller
antigen-bindingsdel derav, med de følgende karakteristika:
a) dissosierer fra human TNFa med en K0ff-hastighetskonstant på 1 x 10"3 s"1 eller mindre, som bestemt ved overflate-plasmon-resonans;
b) har et lettkjede CDR3-domene omfattende aminosyresekvensen med SEKV ID NR: 3 eller modifisert fra SEKV ID NR: 3 med en enkel alanin-
substitusjon i stilling 1,4,5,7 eller 8 eller ved én til fem konservative aminosyresubstitusjoner i stillingene 1,3,4,6,7,8 og/eller 9;
c) har et tungkjede CDR3-domene omfattende aminosyresekvensen med SEKV ID NR: 4 eller modifisert fra SEKV ID NR: 4 med en enkel alanin-
substitusjon i stilling 2,3,4, 5,6, 8,9,10 eller 11 eller ved én til fem konservative aminosyre- substitusjoner i stillingene 2,3,4,5,6, 8,9,10,11 og/eller 12.
Mer foretrukket dissosierer antistoffet eller antigen-bindingsdelen derav, fra human-TNFa med en K0ff på 5 x 10"4 s-1 eller mindre. Enda mér foretrukket
dissosierer antistoffet eller antigen-bindingsdelen derav, fra human-TNFot'med en
Koff på 1 x 10"<4> s"<1> eller mindre.
Ved enda en annen utførelse tilveiebringes et isolert human-antistoff eller en antigen-bindingsdel derav, med en lettkjede variabel-region (LCVR) som har et CDR3-domene omfattende aminosyresekvensen med SEKV ID NR: 3 eller modifisert fra SEKV ID NR: 3 med en enkel alanin-substftusjon i stilling 1, 4,5, 7
eller 8 og med en tungkjede variabel-region (HCVR) som har et CDR3-domene omfattende aminosyresekvensen med SEKV ID NR: 4 eller modifisert fra SEKV
ID NR: 4 med en enkel alanin-substitusjon i stilling 2, 3,4. 5, 6, 8, 9,10 eller 11. Fortrinnsvis har LCVR ytterligere et CDR2-domene omfattende aminosyresekvensen med SEKV ID NR: 5 (dvs. D2E7 VL CDR2) og HCVR har ytterligere et CDR2-domene omfattende aminosyresekvensen med SEKV ID NR: 6 (dvs. D2E7 VH CDR2). Enda mer foretrukket har LCVR ytterligere et CDR1-domene
omfattende aminosyresekvensen med SEKV ID NR: 7 (dvs. D2E7 VL CDR1) og HCVR har et CDR1-domene omfattende aminosyresekvensen med SEKV ID NR: 8 (dvs. D2E7 VH CDR1). Rammeverk-regioner for VL er fortrinnsvis fra V|<l human kimlinje-familie, mer foretrukket fra A20 human kimlinje Vk-gen og mest foretrukket fra D2E7 VL-rammeverk-sekvensene vist i Figurene 1A og 1B. Rammeverk-regionene for VH er fortrinnsvis fra Vh3 human-kimlinje-familien, mer foretrukket fra DP-31 human kimlinje VH-gen og mest foretrukket fra D2E7 VH-rammeverk-sekvensene vist i Figurene2A og 2B.
Ved enda en annen utførelse tilveiebringes et isolert human-antistoff eller
en antigen-bindingsdel derav, med en lettkjede variabel-region (LCVR)
omfattende aminosyresekvensen méd SEKV ID NR: 1 (dvs. D2E7 VL) og en tungkjede variabel-region (HCVR) omfattende aminosyresekvensen med SEKV
ID NR: 2 (dvs. D2E7 VH). I visse utførelsesformer omfatter antistoffet en
tungkjede konstant-region, så som en lgG1, lgG2, igG3, lgG4, IgA, IgE, IgM eller IgD konstant-region. Fortrinnsvis er tungkjede konstant-regionen en lgG1
tungkjede konstant-region eller en lgG4 tungkjede konstant-region. Videre kan antistoffet omfatte en lettkjede konstant-region, enten en kappa lettkjede konstant-
region eller en lambda lettkjede konstant-region. Fortrinnsvis omfatter antistoffet en kappa lettkjedé konstant-region. Alternativt kan antistoffdelen for eksempel
være et Fab-fragment eller et enkel-kjede Fv-fragment.
Det tilveiebringes også et isolert human-antistoff eller en antigenbindings-
del derav, som har D2E7-beslektede VL- og VH- CDR3-domener, for eksempel
antistoffer eller antigen-bindingsdeler derav, med en lettkjede variabel-region
(LCVR) som har et CDR3-domene omfattende en aminosyresekvens valgt fra gruppen bestående av SEKV ID NR: 3, SEKV ID NR: 11, SEKV ID NR: 12, SEKV
ID NR: 13, SEKV ID NR: 14, SEKV ID NR: 15, SEKV ID NR: 16, SEKV ID NR: 17, SEKV ID NR: 18, SEKV ID NR: 19, SEKV ID NR: 20, SEKV ID NR: 21, SEKV ID NR: 22, SEKV ID NR: 23, SEKV ID NR: 24, SEKV ID NR: 25 og SEKV |D NR: 26
eller med en tungkjede variabel-region (HCVR) som har et CDR3-domene
omfattende en aminosyresekvens valgt fra gruppen bestående av SEKV ID NR: 4,
SEKV ID NR: 27, SEKV ID NR: 28, SEKV ID NR: 29, SEKV ID NR: 30, SEKV ID
NR: 31, SEKV ID NR: 32, SEKV ID NR: 33, SEKV ID NR: 34 og SEKV ID NR: 35.
Ved enda en annen utførelse tilveiebringes et rekombinant human-antistoff
eller en antigen-bindingsdel derav, som nøytraliserer aktiviteten til human TNFa men ikke human TNFp. Fortrinnsvis nøytraliserer antistoffet eller antigen-bindingsdelen derav også aktiviteten av sjimpanse-TNFa og minst én ytterligere primat-TNFa valgt fra gruppen bestående av bavian-TNFa, marmosett-TNFa, cynomolgus-TNFa og rhesus-TNFa. Fortrinnsvis nøytraliserer antistoffet eller antigen-bindingsdelen derav, human-, sjimpanse- og/eller ytterligere primat-TNFa i et standard in vitro L929-forsøk med en IC50 på 1 x 10"8 M eller mindre, mer foretrukket 1 x 10"<9> M eller mindre og enda mer foretrukket 5 x 10"<10> M eller
mindre. I én subutførelsesform nøytraliserer antistoffet også aktiviteten til hund-TNFa, fortrinnsvis i et standard in vitro L929-forsøk med en IC50 på 1 x 10"7 M
eller mindre, mer foretrukket l x 10"8 M eller mindre og enda mer foretrukket 5 x 10"9 M eller mindre. I en annen subutførelsesform nøytraliserer antistoffet også
aktiviteten til gris-TNFa, fortrinnsvis med en IC50 på 1 x 10~<5> M eller mindre, mer foretrukket 1 x 10'6 M eller mindre og enda mer foretrukket 5 x 1 p-7 M eller mindre. Ved enda en annen utførelsesform nøytraliserer antistoffet også aktiviteten til mus-TNFa, fortrinnsvis med en IC50 på 1 x 10"<4> M eller mindre, mer foretrukket 1x 10'<5> M eller mindre og enda mer foretrukket 5 x 10"6 M eller mindre.
Et antistoff eller en antistoffdel kan derivatiseres eller knyttes til et annet funksjonelt molekyl (f.eks. et annet peptid eller protein). Følgelig kan antistoffene og antistoffdelene omfatte derivatiserte og på annen måte modifiserte former av human-anti-hTNFa-antistoffene beskrevet her, omfattende
immunoadhesjonsmolekyler. For eksempel kan et antistoff eller en antistoffdel
være funksjonelt bundet (ved kjemisk kobling, genetisk kondensering, ikke-
kovalent assosiering eller på annen måte) til én eller flere andre molekylgrupper,
så som et annet antistoff ( f. eks. et bispesifikt antistoff eller et diabody), et detekterbart middel, et cytotoksisk middel, et farmasøytisk middel og/eller et protein eller péptid som kan mediere tilknytning av antistoffet eller antistoffdelen tii
et annet molekyl (så som en streptavidin-kjemé-region eller et poiyhistidin-merke).
En type derivatisert antistoff blir produsert ved kryssbinding av to eller flere, antistoffer (av samme type eller av forskjellige typer, f. eks. for å danne bispesifikke antistoffer). Egnede kryssbindingsmidler omfatter de som er heterobifunksjonelle, som har to distinkte reaktive grupper separert av en passende spacér ( f. eks. m-maleimidobenzoyl-N-hydroksysuccinimid-ester) eller homobifunksjonelle ( f. eks. disuccinimidyl-suberat). Slike linkere er tilgjengelig frå Pierce Chemical Company, Rockford, IL
Nyttige detekterbare midler med hvilke et antistoff eller en antistoffdel kan være derivatisert, omfatter fluorescerende forbindelser. Eksempler på fluorescerende detekterbare midler omfatter fluorescein, fluorescein-isotiocyanat, rhodamin, 5-dimetylamin-1-naftalensulfonylklorid, fykoerytrin og lignende. Et antistoff kan også derivatiseres med detekterbare enzymer, så som alkalisk fosfatase, pepperrot-peroksydase, glukoseoksydase og lignende. Når et antistoff er derivatisert med et detekterbart enzym, blir det detektert ved tilsetning av ytterligere reagenser som enzymet anvender for å produsere et detekterbart
reaksjonsprodukt. Når for eksempel det detekterbare middel pepperrot-
peroksydase er til stede, fører tilsetning av hydrogenperoksyd og diaminobenzidin til et farget reaksjonsprodukt, som er detekterbart. Et antistoff kan også
derivatiseres med biotin og detekteres gjennom indirekte måling av avidin- eller streptavidin-binding.
II. Ekspresjon av antistoffer
Et antistoff eller en antistoffdel kan fremstilles ved rekombinant ekspresjon av immunoglobulin lett- og tungkjede-gener i en vertscelle. For å uttrykke et antistoff rekombinant, blir en vertscelle transfektert med én eller flere rekombinante ekspresjonsvektorer som bærer DNA-fragmenter som koder for immunoglobulin lett-og tungkjeder av antistoffet slik at lett-og tungkjedene blir uttrykt i vertscellen og, fortrinnsvis, utskilt i det medium hvor vertscellene blir
dyrket, fra hvilket medium antistoffene kan gjenvinnes. Standard rekombinante DNA-metoder blir anvendt for å oppnå antistoff tung- og lettkjede gener, innføre disse gener i rekombinante ekspresjonsvektorer og innføre vektorene i vertsceller,
så som de beskrevet i Sambrpok, Fritsch og Maniatis (ed.), Molecular Cloning; A Laboratory Manual, Second Edition, Cold Spring Harbor, N.Y., (1989), Ausubel, F.M. et al. (ed.) Current Protocols in Molecular Biology, Green Publishing
Associates, (1989) og i U.S.-patent nr. 4,816,397 av Boss et al.
For å uttrykke D2E7 eller et D2E7-beslektet antistoff, blir DNA-fragmenter
som koder for lett- og tungkjede variable regioner først oppnådd. Disse DNAer
kan oppnås ved amplifisering og modifikasjon av kimlinje lett- og tungkjede variable sekvenser ved anvendelse av polymerase kjede-reaksjon (PCR). Kimlinje DNA-sekvenser for human-tung- og lettkjede variabel-region gener er
kjent på området (se f. eks. "Vbase" human kimlinje sekvens database; se også Kabat, E.Å., et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Frfth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publikasjon Nr. 91-3242; Tomlirison, I.M., ef al. (1992) "The Repertoire of Human Germline Vh
Sequences Reveals about Fifty Groups of Vu Segments with Different
Hypervariable Loops" J. Mol. Biol. 227:776-798; og Cox, J.P.L. et al. (1994) "A
Directory of Human Germ-line V|< Segments Reveals a Strong Bias in their
Usage" Eur. J. Immunol. 24:827-836; idet innholdet av hver av disse inntas her
ved referanse). For å oppnå et DNA-fragment som koder for den tungkjede variable region av D2E7 eller et D2E7-beslektet antistoff, blir et medlem av Vh3-
familien human-kimlinje VH-gener amplifisert ved standard PCR.Mest foretrukket blir DP-31 VH-kimlinje-sekvensen amplifisert. For å oppnå et DNA- fragment som koder for lettkjede variabel-regionen i D2E7 eller et D2E7-beslektet antistoff, blir et medlem av V^l-familien av human-kimlinje VL-gener amplifisert ved standard PCR. Mest foretrukket amplifiseres A20 VL-kimlinje-sekvensen. PCR-primere
egnet for anvendelse ved amplifisering av DP-31 kimlinje VH- og A20 kimlinje VL-sekvenser kan konstrueres på basis av nukleotidsekvensené beskrevet i referansene referert til ovenfor, ved anvendelse av standard metoder.
Når kimlinje VH-og VL-fragmenter blir oppnådd, kan disse sekvenser
muteres til å kode for D2E7 eller D2E7-beslektede aminosyresekvenser beskrevet her. Aminosyresekvenser kodet for av kimlinje VH- og VL-DNA- sekvenser blir først sammenlignet med D2E7 eller D2E7-beslektede VH-og VL-aminosyresekvenser for å identifisere aminosyrerestene i D2E7 eller den D2E7-
beslektede sekvens som skiller seg fra kimlinjen. Deretter blir de passende nukleotider i kimlinje DNA-sekvenser mutert slik at den muterte kimlinje-sekvens koder for D2E7 eller én D2E7-beslektet aminosyresekvens, ved anvendelse av den genetiske koden for å bestemme hvilke nukleotidendringer som skal gjøres. Mutagenese av kimlinje-sekvenser blir utført ved standard metoder, så som PCR-mediert mutagenese (hvor de muterte nukleotider blir innført i PCR-primere slik at PCR-produktet inneholder mutasjonene) eller sete-styrt mutagenese.
Videre skal det bemerkes at hvis "kimlinje-sekvenser oppnådd ved PCR-amplifisering koder for aminosyreforskjeller i rammeverk regioner fra den riktige kimlinje-konfigurasjon (dvs. forskjeller i den amplifisetre sekvens sammenlignet med den riktige kimlinje-sekvens, for eksempel som et resultat av somatisk mutasjon), kan det være ønskelig å endre disse aminosyreforskjeller tilbake til de riktige kimlinje-sekvenser (dvs. "tilbakemutasjon" av rammeverk-rester til kimlinje-konfigurasjon).
Når DNA-fragmenter som koder for D2E7 eller D2E7-beslektede VH- og
VL- segmenter er oppnådd (ved amplifisering og mutagenese av kimlinje VH- og
VL- gener, som beskrevet ovenfor), kan disse DNA-fragmenter ytterligere
manipuleres ved standard rekombinante DNA-teknikker, for eksempel for å
omdanne variabel-region-gener tii full-lengde antistoffkjedegener, til Fab-fragmentgener eller til et scFv-gen. Ved disse manipulasjonene blir et VL- eller VH-kodende DNA-fragment operativt lenket til et annet DNA-fragment som koder for et annet protein, så som en antistoff konstant-region eller en fleksibel linker. Betegnelsen "operativt lenket", som anvendt i denne sammenheng skal bety at de to DNA-fragmenter er knyttet sammen slik at aminosyresekvenser som kodes av de to DNA-fragmenter forblir i rammen.
Det isolerte DNA som koder for VH-regionen kan omdannes til et full-lengde tungkjede gen ved operativ lenking av VH-kodende DNA til et annet DNA-molekyl som koder for tungkjede konstante regioner (CH1, CH2 og CH3). Sekvensene av humane tungkjede konstant-region-gener er kjent i litteraturen (se f. eks. Kabat, E.A., et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publikasjon
Nr. 91-3242) og DNA-fragmenter som omfatter disse regioner kan oppnås ved standard PCR-amplifisering. Tungkjede konstant-regionen kan være en lgG1, lgG2, lgG3, lgG4, IgA, IgE, IgM eller IgD konstant-region, men er mest foretrukket en IgGl eller lgG4 konstant-region. For et Fab-fragment tungkjede gen, kan VH-kodende DNA være operativt lenket til et annet DNA-molekyl som koder for bare tungkjede CH1-konstant-regionen.
Det isolerte DNA som koder for VL-regionen kan omdannes til et full-lengde lettkjede gen (så vel som et Fab-lettkjede gen) ved operativ lenking av VL-kodende DNA til et annet DNA-molekyl som koder for lettkjede konstant-regionen, CL. Sekvenser av human lettkjede konstant-region-gener er kjent på området (se f. eks. Kabat, E.A., et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publikasjon nr. 91-3242) og DNA-fragmenter som omfatter disse regioner kan oppnås ved standard PCR-amplifisering. Lettkjede konstant-regionen kan være en kappa-eller lambda-konstant-region, men mest foretrukket er den en kappa-konstant-region.
For å danne et scFv-gen, blir VH- og VL-kodende DNA-fragmenter operativt lenket til et annet fragment som koder for en fleksibel linker, f. eks. som koder for aminosyresekvensen (Gly^Sertø, slik at VH- og VL-sekvenser kan uttrykkes som et tilstøtende enkel-kjede protein, med VL- og VH-regioner knyttet
sammen av en fleksibel linker (se f. eks. Bird et al. (1988) Science 242:423-426:
Huston er al. (1988) Proe. Nati. Acad. Sei. USA 85:5879-5883; McCafferty er al., Nature (1990) 348:552-554).
For å uttrykke antistoffene eller antistoff delene, blir DNA som koder for partielle eller full-lengde lette og tunge kjeder, oppnådd som beskrevet ovenfor, innført i ekspresjonsvektorer slik at genene blir operativt lenket til transkripsjonene og translasjonene kontrollsekvenser. I denne sammenheng skal betegnelsen
"operativt lenket" bety at et antistoffgen er ligert i en vektor slik at transkripsjonene og translasjonene kontrollsekvenser innen vektoren tjener deres tiltenkte funksjon
av regulering av transkripsjon og translasjon av antistoffgenet.
Ekspresjonsvektor- og ekspresjonskontrollsekvenser er valgt slik at de er kompatible med den anvendte ekspresjonsvertscelle. Antistoff-lettkjede genet og antistoff-tungkjede genet kan innføres i separate vektorer eller, mer typisk, begge gener blir innsatt i den samme ekspresjonsvektor. Antistoff-gener blir innsatt i ekspresjonsvektoren ved standard metoder { f. eks. ligering av komplementære restriksjonsseter på antistoff-genfragment og vektor eller butt-ende ligering hvis jngen restriksjonsseter er til stede). Før innføring av D2E7 eller D2E7-beslektede
lett- eller tungkjede-sekvenser, kan ekspresjonsvektoren allerede bære antistoff- . konstant-region-sekvenser. For eksempel er en metode for omdannelse av D2E7
eller D2E7-beslektede VH- og VL-sekvenser til full-lengde antistoff-gener å innføre dem i ekspresjonsvektorer som allerede koder for henholdsvis tungkjede konstante og lettkjede konstante regioner, slik at VH-segmentet ér operativt lenket
til CH-segment(er) i vektoren og VL-segmentet er operativt lenket til CL-segmentet i vektoren. I tillegg eller alternativt kan den rekombinante ekspresjons-
vektor kode for et signalpeptid som letter sekresjon av antistoff kjeden f ra en
vertscelle. Antistoffkjede-genet kan klones i vektoren slik at signal- peptidet blir
lenket innen rammen til amino-terminus i antistoffkjede-genet. Signalpeptidét kan være et immunoglobulin-signalpeptid eller et heterologt signalpeptid (dvs. et signalpeptid fra et ikke-immunoglobulin-protein).
I tillegg til antistoffkjede-gener, bærer de rekombinante ekspresjonsvektorer
ifølge oppfinnelsen regulerende sekvenser som kontrollerer ekspresjon av antistoffkjede-gener i en vertscelle. Betegnelsen "regulerende sekvens" skal omfatte promotere, enhancere og andre ekspresjonskontroll- elementer ( f. eks.
polyadenyleringssignaler) som kontrollerer transkripsjon.eller translasjon av antistoffkjede-gener. Slike regulerende sekvenser er for eksempel beskrevet i Goeddel; Gene Expression Technology: Methods in Enzymology185, Academic
Press, San Diego, CA (1990). Det vil forstås av fagfolk på området at design av ekspresjonsvektor, omfattende seleksjon av regulerende sekvenser, kan avhenge
av slike faktorer som valget av vertscelle som skal transformeres, det ønskede nivå av ekspresjon av protein, etc. Foretrukne regulerende sekvenser for pattedyrvertscelle-ekspresjon omfatter virale elémenter som styrer høye nivåer av protein-ekspresjon i pattedyrceller, så som promotere og/eller enhancere avledet fra cytomegalovirus (CMV) (så som CMV- prpmoter/enhancer), Simian Virus 40
(SV40) (så som SV40 promoter/enhancer), adenovirus, ( f. eks. adenovirus siste hoved-promoter (AdMLP)) og polyoma. For videre beskrivelse av virale regulerende elementer og sekvenser derav, se f. eks. U.S.-patent nr. 5,168,062 av Stinski, U.S.-patent nr. 4,510,245 av Bell et al. og U.S.-patent nr. 4,968*615 av Schaffner et al.
I tillegg til antistoffkjede-gener og regulerende sekvenser, kan de rekombinante ekspresjonsvektorer ifølge oppfinnelsen bære ytterligere sekvenser,
så som sekvenser som regulerér replikasjon av vektoren i vertsceller ( f. eks. ■ replikasjonsopprinnelser) og selekterbare markørgener. Det selekterbare markørgen letter utvelgelse av vertsceller i hvilke vektoren blir innført (se f. eks: U.S.-patenter nr. 4,399,216, 4,634,665 og 5,179,017, allétil Axel et al.). For eksempel gir typisk det selekterbare markørgen resistens for medikamenter, så
som G418, hygromycin eller methotrexat, til en vertscelle i hvilken vektoren er
innført. Foretrukne selekterbare markørgener omfatter dihydrofolat-reduktase-
(DHFR) gen (for anvendelse i dhfrvertsceller med methotrexat-seleksjon/- amplifisering) og neo-gen (for G418 seleksjon).
For ekspresjon av lett- og tungkjeder, blir ekspresjonsvektorer) som koder
for tung- og lettkjeder transfektert i en vertscelle ved standard teknikker. De forskjellige former av betegnelsen "transfeksjon" skal omfatte en rekke forskjellige teknikker som er vanlig anvendt for innføring av exogent DNA i en prokaryot eller evkaryot vertscelle, f. eks. elektroforering, kalsium-fosfat-felling, DEAE-dextrari-transfeksjon og lignende. Selv om det teoretisk er mulig å uttrykke antistoffene
ifølge oppfinnelsen i enten prokaryote eller evkaryote vertsceller, er ekspresjon av
antistoffer i evkaryote celler og mest foretrukket pattedyrvertsceller, mest foretrukket fordi slike evkaryote celler og spesielt pattedyrceller, mer sannsynlig enn prokaryote celler, vil sette sammen og sekretere et riktig foldet og
immunologisk aktivt antistoff. Prokaryot ekspresjon av antistoff-gener er angitt å
være ineffektiv for produksjon av høye utbytter av aktivt antistoff (Boss, M.A. og Wood, C. R. (1985) Immunology Today 6:12-13).
Foretrukne pattedyrvertsceller for ekspresjon av de beskrevne rekombinante antistoffer omfatter Chinese Hamster Ovåry (CHO-celler)
(omfattende dhfr-CHO-celler, beskrevet i Urlaub og Chasin, (1980) Proe. Nati. Acad. Sei. USA 77:4216-4220, anvendt med en DHFR selekterbar markør, f. eks. som beskrevet i R.J. Kaufman og P.A. Sharp (1982) Mol. Biol. 159:601-621). NSO-myelomceller, COS-celler og SP2-celler. Når rekombinante ekspresjons-
vektorer som koder for antistoff-gener blir innført i pattedyrvetrsceller, blir antistoffene produsert ved dyrkning av vertscellene i en tidsperiode som er tilstrekkelig til å tillate ekspresjon av antistoffet i vertscellene eller, mer foretrukket, sekresjon av antistoffet i kulturmediet hvor vertscellene blir dyrket. Antistoffer kan gjenvinnes fra dyrkningsmediet ved anvendelse av standard proteinrensningsmetoder.
Vertsceller kan også anvendes for å produsere deler av intakte antistoffer,
så som Fab-fragmenter eller scFv-molekyler. Det vil forstås at variasjoner av metodene ovenfor er mulig. For eksempel kan det være ønskelig å transfektere en vertscelle med DNA som koder for enten lettkjeden eller tungkjeden (men ikke begge) av et antistoff. Rekombinant DNA-teknologi kan også anvendes for å fjerne noe eller alt DNA som koder for en eller begge lett- og tungkjedene som ikke er nødvendig for binding til hTNFa. Molekylene uttrykt fra slike avkortede DNA-molekyler er også omfattet av antistoffene. I tillegg kan bifunksjonellé
antistoffer produseres hvor én tung-og én lettkjede er et antistoff og den andre tung- og lettkjede er spesifikk for et antigen forskjellig fra hTNFa ved kryssbinding av et antistoff til et andre antistoff ved standard kjemiske kryssbindingsmetpder.
I et foretrukket system for rekombinant ekspresjon av et antistoff eller en antigen-bindingsdel derav, blir en rekombinant ekspresjonsvektor som koder for både antistoff-tungkjeden og antistoff-lettkjeden innført i dhfr-CHO-celler ved kalsiumfosfat-mediert transfeksjon; I den rekombinante ekspresjonsvektor, blir antistoff-tung- og lettkjede-genér hver operativt lenket til enhancer/promoter regulerende elementer (f.eks. avledet fra SV40, CMV, adenovirus og lignende, så
som et CMV-enhancér/AdMLP-promoter regulerende element eller et SV40-enhancer/AdMLP-promoter regulerende element) for å f remme høye nivåer av transkripsjon av genene. Den rekombinante ekspresjonsvektor bærer også et DHFR-gen, som tillater seleksjon av CHO-celler som er transfektert med vektoren
ved anvendelse av methotrexat-seleksjon/amplifisering. De valgte transformant-vertsceller blir dyrket for å tillate ekspresjon av antistoff-tung-og lettkjeder og intakt antistoff blir gjenvunnet fra dyrkningsmediet. Standard molekylærbiologi-teknikker blir anvendt for å fremstille den rekombinante ekspresjonsvektor, transfektere vertscellene, velge transformanter, dyrke vertscellene og gjenvinne antistoffet fra dyrkningsmediet.
På bakgrunn av det foregående beskrives nukleinsyre-, vektor-og vertscellepreparater som kan anvendes for rekombinant ekspresjon av antistoffene og antistoffdelene. Nukleotidsekvensen som koder for D2E7-lettkjede variabel-regionen er vist i Figur 7 og SEKV ID NR: 36. CDR1-domenet til LCVR
omfatter nukleotidene 70-102, CDR2- domenet omfatter nukleotidene 148-168 og CDR3-domenet omfatter nukleotidene 265-291. Nukleotidsekvensen som koder
for D2E7-tungkjede variabel-regionen er vist i Figur 8 og SEKV ID NR: 37. CDR 1-domenet til HCVR omfatter nukleotidene 91-105, CDR2-domenet omfatter nukleotidene 148-198 og CDR3-domenet omfatter nukleotidene 295-330. Det vil forstås av fagfolk på området at nukleotidsekvenser som koder for D2E7-relaterte antistoffer eller deler derav ( f. eks. et CDR-domene, så som et CDR3-domene), kan avledes fra nukleotidsekvenser som koder for D2E7 LCVR og HCVR ved anvendelse av den genetiske kode og standard molekylærbiologi-teknikker.
Ved én utførelse tilveiebringes en isolert nukleinsyre som koder for et
lettkjede CDR3-domene omfattende aminosyresekvensen med SEKV ID NR: 3
(dvs. D2E7 VL CDR3) eller modifisert fra SEKV ID NR: 3 med en enkel alanin-
substitusjon i stilling 1,4, 5, 7 eller 8 eller med én til fem konservative aminosyresubstitusjoner i stillingene 1,3,4, 6, 7, 8 og/eller 9. Denne nukleinsyre kan kode
bare for CDR3-regionen eller, mer foretrukket, for en hel antistoff-lettkjede variabel-region (LCVR). For eksempel kan nukleinsyren kode for en LCVR som har et CDR2-domene omfattende aminosyresekvensen med SEKV ID NR: 5 (dvs.
D2E7 VL CDR2) og et CDR1-domene omfattende aminosyresekvensen med
SEKV ID NR: 7 (dvs. D2E7 VL CDR1).
Ved en annen utførelse tilveiebringes en isolert nukleinsyre som koder for
et tungkjede CDR3-domene omfattende aminosyresekvensen med SEKV ID NR: 4 (dvs. D2E7 VH CDR3) eller modifisert fra SEKV ID NR: 4 méd en enkel alanin-substitusjon i stillingene 2,3,4,5,6,8,9,10 eller 11 eller med én til fem konservative aminosyresubstitusjoner i stillinger 2,3,4,5,6, 8,9,10,11 og/eller 12. Denne nukleinsyre kan kode bare for CDR3- regionen eller mer foretrukket,
for en hel antistoff-tungkjede variabel-region (HCVR). For eksempel kan
nukleinsyren kode for en HCVR som har et CDR2- domene omfattende aminosyresekvensen med SEKV ID NR: 6 (dvs. D2E7VHCDR2) og et CDR1-domene omfattende aminosyresekvensen med SEKV ID NR: 8 (dvs. D2E7 VH CDR1).
Ved enda en annen utførelse tilveiebringes isolerte nukleinsyrer som koder
for et D2E7-relatert CDR3-domene, f. eks. omfattende en aminosyresekvens valgt fra gruppen bestående av: SEKV ID NR: 3, SEKV ID NR 4, SEKV ID NR: 11,
SEKV ID NR: 12, SEKV ID NR: 13, SEKV ID NR: 14, SEKV ID NR: 15, SEKV ID NR: 16, SEKV ID NR: 17, SEKV ID NR: 18, SEKV ID NR: 19, SEKV ID NR: 20, SEKV ID NR: 21, SEKV ID NR: 22, SEKV ID NR: 23, SEKV ID NR: 24, SEKV ID
NR: 25, SEKV ID NR: 26, SEKV ID NR: 27, SEKV ID NR: 28, SEKV ID NR: 29, SEKV ID NR: 30, SEKV ID NR: 31, SEKV ID NR: 32, SEKV ID NR: 33, SEKV ID NR: 34 og SEKV ID NR: 35.
Ved enda en annen utførelse tilveiebringes en isolert nukleinsyre som
koder for en antistoff-lettkjede variabel-region omfattende aminosyresekvensen
med SEKV ID NR: 1 (dvs. D2E7 LCVR). Fortrinnsvis omfatter denne
nukleinsyren nukleotidsekvensen med SEKV ID NR: 36, selv om fagfolk på
området vil forstå at på grunn av degenerasjon av den genetiske koden kan andre nukleotidsekvenser kode for aminosyresekvensen med SEKV ID NR: 1.
Nukleinsyren kan kode bare for LCVR eller kan også kode for en antistoff-
lettkjede konstant-region, operativt lenket til LCVR. Ved én utførelsesform er denne nukleinsyren i en rekombinant ekspresjonsvektor.
Ved enda en annen utførelse tilveiebringes en isolert nukleinsyre som
koder for en antistoff-tungkjede variabel-region omfattende denne :
aminosyresekvensen med SEKV ID NR: 2 (dvs: D2E7 HCVR). Fortrinnsvis omfatter denne nukleinsyren nukleotidsekvensen med SEKV ID NR: 37, selv om fagfolk på området vil forstå at på grunn av degenerasjon av den genetiske
koden, kan andre nukleotidsekvenser kode for aminosyresekvensen med SEKV ID NR: 2. Nukleinsyren kan kode bare for HCVR eller kan også kode for en tungkjede konstant-region, operativt lenket til HCVR. For eksempel kan nukleinsyren omfatte en lgG1- eller lgG4-konstant-region. Ved én utførelsesform
er denne nukleinsyren i en rekombinant ekspresjonsvektor.
Det beskrives også rekombinante ekspresjonsvektorer som koder for både
en antistoff-tungkjede og en antistoff-lettkjede. Ved en utførelse tilveiebringes for eksempel en rekombinant ekspresjonsvektor som koder for:
a) en antistoff-lettkjede som har en variabel-region omfattende aminosyresekvensen med SEKV ID NR: 1 (dvs. D2E7 LCVR); og b) en antistoff-tungkjede som har en variabel-region omfattende aminosyresekvensén med SEKV ID NR: 2 (dvs. D2E7 HCVR)..
Det beskrives også vertsceller i hvilke én eller flere av de beskrevne rekombinante ekspresjonsvektorer er innført. Fotrrinnsvis er vertscellen en pattedyrvertscelle, mer foretrukket er vertscellen en CHO-celle, en NSO-celle eller en COS-celle.
Det beskrives videre en metode for syntetisering av et rekombinant human-antistoff ved dyrkning av en vertscelle i et egnet dyrkningsmedium inntil et
rekombinant human-antistoff er syntetisert. Metoden kan videre omfatte isolering av det rekombinante human-antistoff fra dyrkningsmediet.
III. Seleksjon av rekombinante human- antistoffer
Rekombinante human-antistoffer, i tillegg til de D2E7-eller D2E7-beslektede antistoffer beskrevet her, kan isoleres ved screening av et
rekombinant kombinatorisk antistoff-bibliotek, fortrinnsvis et scFv-fag-display-
bibliotek, fremstilt ved anvendelse av human VL- og VH-cDNA fremstilt fra mRNA avledet fra human-lymfocytter. Metoder for fremstilling og screening av slike biblioteker er kjent på området. I tillegg til kommersielt tilgjengelige sett for generering av fag-display-biblioteker ( f. eks. the Pharmacia Recombinant Phage Antibody System, katalog nr. 27-9400-01; og Stratagene SurfZAP™ fag display
settet, katalog nr. 240612), kan eksempler på metoder og reagenser spesielt egnet for anvendelse for generering og screening av antistoff display-biblioteker,
for eksempel finnes i Ladner era/. U.S.-patent nr. 5,223,409; Kang et al. PCT-publikasjon nr. WO 92/18619; Dower et al. PCT-pubiikasjon nr. WO 91/17271; Winter et al. PCT-publikasjon nr. WO 92/20791; Markland et al. PCT-publikasjon
nr. WO 92/15679; Breitling et al. PCT-publikasjon nr. WO 93/01288; McCafferty et al. PCT-publikasjon nr. WO 92/01047; Garrard et al. PCT-publikasjon nr. WO
92/09690; Fuchs et al. (1991) Bio/ Technology 9:1370-1372; Hay et al. (1992) Hum Antibod Hvbridomas 3:81 -85: Huse et al. (1989) Science 246:1275-1281: McCafferty et al., Nature (1990) 348:552-554; Griff iths et al. (1993) EMBO J 12:725-734; Hawkins et al. (1992) J Mol Biol 226:889-896; Clackson et al. (1991)
Nature 352:624-628; Gram et al. (1992) PNAS 89:3576-3580; Garrad et al. (1991) Bio/ Technology 9:1373-1377; Hoogenboom et al. (1991) Nuc Acid Res 19:4133-
4137; og Barbas ef al. (1991) PNAS 88:7978-7982.
Ved en foretrukket utførelsesform for å isolere human-antistoffer med høy affinitet og en lav frigjøringskonstant for hTNFa, blir et murint anti-hTNFa-antistoff som har høy affinitet og lav frigjøringshastighetskonstant for hTNFa
( f. eks. MAK 195, hvis hybridoma har deponeringsnummér ECACC 87 050801)
først anvendt for å velge human-tung- og lettkjede-sekvenser som har lignende bindingsaktivitet mot hTNFa, ved anvendelse av epitop-imprint eller styrt seleksjon, hvilke metoder er beskrevet i Hoogenboom et al., PCT-publikasjon nr. WO 93/06213. Antistoff-biblioteker anvendt ved denne metoden er fortrinnsvis scFv-biblioteker fremstilt og screenet som beskrevet i McCafferty et al., PCT-publikasjon nr. WO 92/01047, McCafferty ef al., sNature (1990) 348:552-554; og Griff iths et al., (1993) EMBOJ 12:725-734. scFv-antistoff-bibliotekene blir
fortrinnsvis screenet ved anvendelse av rekombinant human TNFa som antigen.
Når de initielle human-VL- og VH-segmenter er valgt, blir "mix og match".
forsøk, hvor forskjellige par av de initielt valgte VL- og VH-segmenter blir screenet for hTNFa-binding, utført for å velge foretrukne VL/VH-par- kombinasjoner.
Videre, for ytterligere å forbedre affiniteten og/eller nedsette frigjøringshastighetskonstanten for hTNFa-binding, kan VL- og VH-segmenter av det (de) foretrukne VLA/H-par muteres tilfelding, fortrinnsvis i CDR3-regionen av VH og/ellér VL, ved
en fremgangsmåte analog med den in vivo somatiske mutasjonsprosess som er
ansvarlig for affinitets-modning av antistoffer under en naturlig immun-respons. Denne in vitro affiiritetsmodning kan oppnås ved amplifisering av VH- og VL-regioner ved anvendelse av PCR-primere komplementære med henholdsvis VH
CDR3 eller VL CDR3, hvilke primere er "spritet opp" med en tilfelding blanding av
de fire nukleotidbaser i visse stillinger slik at de resulterende PCR-produkter koder
for VH- og VL-segmenter i hvilke tilfeldige mutasjoner er innført i VH- og/eller VL-CDR3-regionene. Disse tilfeldig muterte VH- og VL-segmenter kan screenes påny for binding til hTN Fa og sekvenser som oppviser høy affinitet og en lav frigjøringshastighet for hTNFa-binding kan velges.
Aminosyresekvensene i valgte antistoff-tung- og lettkjeder kan
sammenlignes med kimlinje-tung- og lettkjede aminosyresekvenser. I tilfeller hvor visse rammeverk-rester i de valgte VL- og/eller VH-kjeder skiller seg fra kimlinje-konfigurasjonen ( f. eks. som et resultat av somatisk mutasjon av immunoglobulin-genene anvendt for å fremstille fag-biblioteket), kan det være ønskelig å "tilbakemutere" de endrede rammeverk-rester i de valgte antistoffer til kimlinje-konfigurasjonen (dvs. endring av rammeverk-aminosyresekvenser i de valgte antistoffer slik at de blir de samme som kimlinje-rammeverk-aminosyresekvensene). Slik "tilbakemutering" (eller "kimlinjedannelse") av rammeverk-rester kari oppnås ved standard molekylærbiologiske metoder for innføring av spesifikke mutasjoner ( f. eks. sete-styrt mutagenese; PCR-mediert mutagenese og lignende).
Etter screening og isolering av et anti-hTNFa-antistoff fra et rekombinant immunoglobulin-display-bibliotek, kan nukleinsyre som koder for det valgte antistoff gjenvinnes fra display-pakken ( f. eks. fra fag-genomet) og subklones i andre ekspresjonsvektorer ved standard rekombinante DNA-teknikker. dm ønsket kan nukleinsyren manipuleres videre for å danne andre antistoff-former
( f. eks. lenket til nukleinsyre som koder for ytterligere immunoglobulin-domener, så
som ytterligere konstante regioner). For å uttrykke et rekombinant human-
antistoff isolert ved screening av et kombinatorisk bibliotek blir DNA som koder for antistoffet klonet i en rekombinant ekspresjonsvektor og innført i pattedyrverts-
celler, som beskrevet mer detaljert i Seksjon II ovenfor.
IV. Farmasøytiske preparater oa farmasøytisk administrering
Antistoffene og antistoffdelene beskrevet heri kan innføres i farmasøytiske preparater egnet for administrering til et individ. Typisk omfatter det farmasøytiske preparatet et antistoff eller en antistoffdel og en farmasøytisk godtagbar bærer. Som anvendt her omfatter "farmasøytisk godtagbar bærer" hvilke som helst og alle oppløsningsmidler, dispersjonsmedier, belegg, antibakterielle og antifungale midler, isotoniske og absorpsjons-forsinkende midler og lignende som er fysiologisk kompatible. Eksempler på farmasøytisk godtagbare bærere omfatter én eller flere av vann, saltvann, fosfat- bufrét
saltvann, dekstrose, glycerol, etanol og lignende, så vel som kombinasjoner derav. I mange tilfeller vil det være foretrukket å inkludere isotoniske midler, for eksempel sukkere, polyalkoholer så som mannitol, sorbitol eller natriumklorid i preparatet. Farmasøytisk godtagbare bærere kan videre omfatte mindre mengder av hjelpestoffer, så som fukte- eller emulgeringsmidler, konserveirngsmidler eller buffere, som forbedrer lagringstiden eller effektiviteten av antistoffet eller antistoffdelen.
Preparatene ifølge foreliggende oppfinnelse kan være i en rekke former. Disse omfatter for eksempel flytende, halvfaste og faste doseformer, så som flytende løsninger ( f. eks. injiserbare og infuserbare løsninger), dispersjoner eller suspensjoner, tabletter, piller, pulvere, liposomer og suppositorier. Den foretrukne form avhenger av den tilsiktede administreirngsmetode og terapeutiske
anvendelse. Typiske foretrukne preparater er i form av injiserbare eller infuser-
bare løsninger, så som preparater lignende de som anvendes for passiv immunisering av mennesker med andre antistoffer. Den foretrukne administreirngsmetode er parenteral [ f. eks. intravenøs, subkutan, intraperitoneal, intramuskulær). Ved en foretrukket utførelsesform blir antistoffet administrert ved intravenøs infusjon eller injeksjon. Ved en annen foretrukket utførelsesform blir antistoffet administrert ved intramuskulær eller subkutan injeksjon.
Terapeutiske preparater må typisk være sterile og stabile under fremstillings-
og lagringsbetingelsene. Preparatet kan formuleres som en løsning,
mikroemulsjon, dispersjon, liposom eller annen ordnet struktur egnet for høy medikament-konsentrasjon. Sterile injiserbare løsninger kan fremstilles ved innføring av den aktive forbindelse <dvs. antistoff eller antistoffdel) i den nødvendige
mengde i et passende oppløsningsmiddel med én eller en kombinasjon av bestanddelene angitt ovenfor, som nødvendig, fulgt av filtrer- sterilisering. Generelt blir dispersjoner fremstilt ved innføring av den aktive forbindelse i en sterile bærer som inneholder et basisk dispersjonsmedium og de nødvendige andre bestanddeler angitt ovenfor. I tilfellet av sterile pulvere for fremstilling av sterile injiserbare løsninger, er de foretrukne fremstillingsmetoder vakuum-tørring og frysetørring som gir et pulver av den aktive bestanddel pluss hvilken som helst ytterligere ønsket bestanddel fra en tidligere sterilfirtrert løsning derav. Den passende fluiditet av en løsning kan for eksempel opprettholdes ved anvendelse av et belegg så som lecitin, ved opprettholdelse av den ønskede partikkelstørrelse i
tilfellet av dispersjon og ved anvendelse av overflateaktive midler. Forlenget absorpsjon av injiserbare preparater kan tilveiebringes ved å inkludere i preparatet
et middel som forsinker absorpsjon, for eksempel monostéaratsalter og gelatin.
Antistoffene og antistoffdelene kan administreres ved en rekke metoder kjent på området, selv bm for mange terapeutisk anvendelser, den foretrukne vei/metode for administrering er intravenøs injeksjon eller infusjon. Som det vil forstås av
fagfolk på området vil veien og/eller metoden for administrering variere avhengig av
de ønskede resultater. Ved visse utførelsesformer kan den aktive forbindelse fremstilles med en bærer som vil beskytte forbindelsen mot rask frigjøring, så som
et kontrollert frigjøringspreparat, omfattende implantater, transdenmale plaster© og mikroinnkapslede avleverings-systemer. Bionedbrytbare, biokompatible polymerer
kan anvendes, så som etylenvinylacetat, polyanhydrider, polyglykolsyre, kollagen, polyortoestere og polymelkesyre. Mange metoder for fremstilling av slike
preparater er patentert eller generelt kjent for fagfolk på området. Se f. eks.
Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems, J.R. Robinson, ed., Marcel Dekker, Inc., New York, 1978.
Ved visse utførelsesf ormer kan et antistoff eller en antistoffdel
administreres oralt, for eksempel med et inert fortynningsmiddel eller en assimilerbar spiselig bærer. Forbindelsen (og om ønsket andre bestanddeler) kan
også innføres i en hard eller myk gelatinkapsel, presses til tabletter eller innføres direkte i individets diett. For oral terapeutisk administrering kan forbindelsene
blandes med tilsetningsmidler og anvendes i form av svelgbare tabletter, buckale
tabletter, pastiller, kapsler, eliksirer, suspensjoner, siruper, kjeks og lignende. For
å administrere en blanding ifølge oppfinnelsen ved en annen metode enn parenteral administrering, kan det være nødvendig å belegge forbindelsen med eller sam-administrere forbindelsen med, et materiale for å hindre inaktivering.
Supplerende aktive forbindelser kan også innføres i blandingen ifølge foreliggende oppfinnelse. Ved visse utførelsesf ormer formuleres et antistoff eller en antistoffdel sammen med og/eller administreres sammen med ett eller flere ytterligere terapeutiske midler som er nyttige for behandling av lidelser hvor TNFa-aktivitet er skadelig. For eksempel kan et anti-hTNFa-antistoff eller en antistoffdel formuleres sammen med og/eller administreres sammen med ett eller
flere ytterligere antistoffer som binder til andre mål { f. eks. antistoffer som binder til
andre cytokiner eller som binder til celleoverflate-molekyler), ett eller flere cytokiner, oppløselig TNFa-reseptor (se f. eks. PCT-publikasjon nr. WO 94/06476) og/eller ett eller flere kjemiske midler som hemmer hTNFoc-produksjon eller r aktivitet (så som cykloheksan-yliden-derivater som beskrevet i PCT-publikasjon nr. WO 93/19751). Videre kan ett eller flere antistoffer anvendes i kombinasjon
med to eller flere av de foregående terapeutiske midler. Slike kombinasjons-térapier kan fordelaktig anvende lavere doser av de administrerte terapeutiske midler, og således unngå eventuelle toksisiteter eller komplikasjoner forbundet med de forskjellige monoterapiene. Ikke-begrensende eksempler på terapeutiske midler mot revmatoid artritt med hvilke et antistoff eller en antistoffdel kan kombineres, omfatter de følgende: ikke-steroide anti-inflammatoriske medikament(er) (NSAID); cytokin-suppressive anti-inflammatoriske medikament(er) (CSAID); CDP-571/BAY-10-3356
(humanisert anti-TNFa-antistoff; Celltech/Bayer); cA2 (kimært anti-TNFa-
antistoff; Centocor); 75 kdTNFR-IgG (75 kD TNF reseptor-lgG-fusjonsprotein;
Immunex; se f. eks. Arthritis & Rheumatism (1994) Vol. 37, S295; J. fnvest. Med.
(1996) Vol. 44,235A); 55 kdTNFR-IgG (55 kD TNF reseptor-lgG-fusjonsprotein;
Hoffmann-LaRoche); IDEC-CE9,1 /SB 210396 (ikke-reduserende primatisert anti-CD4-antistoff; IDEC/SmithKline; se f. eks. Arthritis & Rheumatism (1995) Vol. 38,
S185); DAB 486-IL-2 og/eller DAB 389-IL-2 (IL-2 fusjonsproteiner; Seragen; se f. eks. Arthritis & Rheumatism (1993) Vol. 36,1223); Anti-Tac (humanisert anti-IL-
2Ra; Protein Design Labs/Roche); IL-4 (anti-inflammatorisk cytokin;
DNAX/Schering); IL-10 (SCH 52000; rekombinant IL-10, anti-inflammatorisk cytokin; DNAX/Schering); IL-4-; IL-10- og/eller IL-4-agonister { f. eks. agonist-antistoffer); IL-1 RA (IL-1 reseptor-rantagonist; Synergen/Amgen); TNF-bp/s-TNFR (oppløselig TNF-bindingsprotein; se f. eks. Arthritis & Rheumatism (1996) Vol. 39,
nr. 9 (supplement), S284; Amer. J. Physiol. - Heart and Circulatory Physiology
(1995) Vol. 268, s. 37-42); R973401 (fosfodiesterase Type IV-inhibitor; se f. eks.
Arthritis & Rheumatism (1996) Vol. 39, nr. 9 (supplement), S282); MK-966 (COX-2-inhibitor; se f. eks. Arthritis & Rheumatism (1996) Vol. 39, hr. 9 (supplement), 581) ; lloprost (se f. eks. Arthritis & Rheumatism (1996) Vol. 39, nr. 9 (supplement), 582) ; methotrexat; thalidomid (se f. eks. Arthritis & Rheumatism (1996) Vol. 39, nr. 9 (supplement), S282) og thalidomid-beslektede medikamenter { f. eks. Celgen);
leflunomid (anti-inflammatorisk og cytokin-inhibitor; se f. eks. Arthritis &
Rheumatism (1996) Vol. 39, No. 9 (supplement), S131; Inflammation Research
(1996) Vol. 45, pp. 103-107); tranexåminsyre (inhibitor av plasminogen-aktivering; se f. eks. Arthritis & Rheumatism (1996) Vol. 39, No. 9 (supplement), S284); T-614 (cytokin-inhibitor; se f. eks. Arthritis & Rheumatism (1996) VoJ, 39, nr. 9
(supplement), S282); prostaglandin E1 ( se f. eks. Arthritis & Rheumatism (1996) Vol. 39, nr. 9 (supplement), S282); Tenidap (ikke-steroid anti-inflammatorisk medikament; se f. eks. Arthritis & Rheumatism (1996) Vol. 39, nr. 9 (supplement), S280); Naproxeh (ikke-steroid anti-inflammatorisk medikament; se f. eks. Neuro Report (1996) Vol. 7, s. 1209-1213); Meloxicam (ikke-steroid anti-inflammatorisk medikament); Ibuprofen (ikke-steroid anti-inflammatorisk medikament); Piroxicam (ikke-steroid anti-inflammatorisk medikament); Diclofenac (ikke-steroid anti-inflammatorisk medikament); Indomethacin (ikke-steroid anti-inflammatorisk medikament); Sulfasalazin ( se f. eks. Arthritis & Rheumatism (1996) Vol. 39. nr. 9 (supplement), S281); Azatioprin (se f. eks. Arthritis & Rheumatism (1996) Vol. 39, nr. 9 (supplement), S281); ICE-inhibrtor (inhibitor aV enzymet interleukin-1 B-
omdannende enzym); zap-70 og/eller Ick-inhibitor (inhibitor av tyrosin-kinasen zap-70 eller lek); VEGF-inhibitor og/eller VEGF-R-inhibitor (inhibitorer av vaskulær endotelcelle-vekstfaktor eller vaskulær endotelcelle-vekstfaktor-reseptor;
inhibitorer av angiogenese); kortikosteroide anti-inflammatoriske medikamenter ( f. eks. SB203580); TNF-konvertase-inhibitorer; anti-IL-12-antistoffer; interieukin-11 (se f. eks. Arthritis & Rheumatism (1996) Vol. 39, nr. 9 (supplement), S296); interleukin-13 (se f. eks. Arthritis & Rheumatism (1996) Vol. 39, nr. 9 (supplement),
S308); interleukin-17-inhibitorer (se f. eks. Arthritis & Rheumatism (i 996) Vol. 39,
nr. 9 (supplement), S120); gull; penicillamin; chloroquine; hydroksychloroquine; chlorambucil; cyklofosfamid; cyklosporin; total lymfoid bestråling; anti-thymocytt-
globulin; anti-CD4-antistoffer; CD5-toksiner; oralt-administrerte peptider og kollagen; lobenzarit-dinatrium; cytokin-regulerende midler (CRA) HP228 og HP466 (Houghten Pharmaceuticals, Inc.); ICAM-1-antisénse-fosfortioat-oligodeoksynukleotider (ISIS 2302; Isis Pharmaceuticals, Inc.); oppløselig komplement-reseptor 1 (TP10; T Cell Sciences, Inc.); prednisoh; orgotein; glykosaminoglykan-polysulfat; minocyklin; anti-ll_2R-antistoffer; marine og
botaniske lipider (fiske- og plantefrø-fettsyrer; se f. eks. DeLuca et al. (1995) Rheum. Dis. Clin. North Am. 21:759-777); auranofin; fenylbutazon; meclofenaminsyre; flufenaminsyre; intravenøst immunoglobulin; zileuton; mycofenolsyre (RS-61443); tacrolimus (FK-506); sirolimus (rapamycin); amiprilose (therafectin); cladribine (2-kiordeoksyadenosin); og azaribine.
I kke-beg rensen de eksempler på terapeutiske midler mot inf lammatorisk tarmsykdom med hvilke et antistoff eller en antistoffdel kan kombineres, omfatter dé følgende: budenosid; épidermal vekstfaktor; kortikosteroider; cyklosporin, sulfasalazin; aminosalicylater; 6-merkaptopurin; azatioprin; metronidazol; lipoksygenase-inhibitorer; mesalamin; olsalazin; balsalazid; antioksydasjons-
midler; tromboksan-inhibitorer; IL-1-reseptor-antagonister; anti-IL-1B monoklonale antistoffer; anti-IL-6-monoklonale antistoffer; vekstfaktorer; elastase-inhibitorer; pyridinyl-imidazol-forbindelser; CDP-571/BAY-10-3356 (humanisert anti-TNFa-antistoff; Celltech/Bayer); cA2 (kimært anti-TNFa-antistoff; Centocor); 75 kdTNFR-IgG (75 kD TNF-reseptor-lgG-fusjonsprotein; Immunex; sé f. eks. Arthritis & Rheumatism (1994) Vol. 37, S295; J. Invest. Med. (1996) Vol. 44,235A); 55 kdTNFR-IgG (55 kD TNF- reseptor-lgG-fusjonsprotein; Hoffmann-LaRoche); interleukin-10 (SCH 52000; Schering Plough); IL-4; IL-10 og/eller IL-4-agonister ( f. eks. agonist-antistoffer); interleukin-11; glukuronid- eller dekstran-konjugerte prodrug for prednisolon, deksametason eller budesonid; ICAM-1-antisense-fosfortioat-oligodeoksynukleotider (ISIS 2302; Isis Pharmaceuticals, Inc.);
oppløselig komplement-reseptor 1 (TP10; T Cell Sciences, Inc.); langsomt-
frigjørende mesalazin; methotrexat; antagonister for blodplate-aktiverende factor (PAF); ciprofloxacin; og lignokain.
Ikke-begrensende eksempler på terapeutiske midler mot multippel sklerose
med hvilke et antistoff eller en antistoffdel kan kombineres, omfatter de følgende: kortikosteroider; prednisolon; metyl prednisolon; azatioprin; cyklofosfamid; cyklosporin; metotreksat; 4-aminopyridin; tizahidin; interieron-B1å (Avonex™; Biogen); interferbn-p1b (Betaseron™; Chiron/Berlex); kopolymer 1 (Cop-1;
Copaxon™; Teva Pharmaceutical Industries, Inc.); hyperbarisk oksygen; intravenøst immunoglobulin; clabribin; CDP-571/BAY-10-3356 (humanisert anti-
TNFpc- antistoff; Celltech/Bayer); cA2 (kimært anti-TNFa-antistoff; Centocor); 75 kdTNFR-IgG (75 kD TNF-reseptor-lgG-fusjonsprotein; Immunex; se f. eks. Arthritis & Rheumatism (1994) Vol. 37, S295; J. Invest. Med. (1996) Vol. 44, 235A); 55 kdTNFR-IgG (55 kD TNF-reseptor-lgG-fusjonsprotein; Hoffmann-LaRoche); IL-10; IL-4; og IL-10 og/eller IL-4-agonister ( f. eks. agonist-antistoffer).
Ikke-begrensende eksempler på terapeutiske midler mot sepsis méd hvilke
et antistoff eller en antistoffdel kan kombineres, omfatter de følgende: hypertoniske saltvannsløsninger; antibiotika; intravenøst gamma-globulin; kontinuerlig hemofiltrering; karbapenemer ( f. eks. meropenem); antagonister for cytokiner så som TNFa, IL-1 B, IL-6 og/eller IL-8; CDP-571 /BAY-10-3356
(humanisert anti-TNFa-antistoff; Celltech/Bayer); cA2 (kimært anti-TNFa-antistoff; Centocor); 75 kdTNFR-IgG (75 kD TNF-reseptor-lgG-fusjonsprotein; Immunex; se
f. eks. Arthritis & Rheumatism (1994) Vol. 37, S295; J. Invest. Med. (1996) Vol. 44, 235A); 55 kdTNFR-IgG (55 kD TNF-reseptor-lgG-fusjonsprotein; Hoffmann-LaRoché); Cytokin-regulerende midler (CRA) HP228 og HP466 (Houghten Pharmaceuticals, Inc.); SK&F 107647 (lav-molekylært peptid; SmithKline Beecham); tetravalent guanylhydrazon CNI-1493 (Picower Institute); Tissue
Factor Pathway Inhibitor (TFPI; Chiron); PHP (kjemisk modifisert hemoglobin;
APEX Bioscience); jem-chelatorer og chelater, omfattende dietylentriamin-pentaeddiksyre - jem(lll)-kompleks (DTPA jem(lll); Molichem Medicines); lisofyllin
(syntetisk små-molekyl metylxantin; Cell Therapeutics, Inc.); PGG-Glucan (vandig oppløselig B1,3glukan; Alpha-Beta Technology); apolipoproteih A-1 rekonstituert med lipider; chirale hydroksamsyrer (syntetiske antibakterielle midler som
hemmer lipid A-biosyntese); anti-endotoksin-antistoffer; E5531 (syntetisk lipid A-
antagonist; Eisai America, Inc.); rBPl2i (rekombinant N-terminal-fragment av
human-baktericid/permeabilitetsøkende protein); og syntetiske anti-endotoksin-
peptider (SAEP; Biosynth Research Laboratories).
Ikke-begrensende eksempler på terapeutiske midler mot voksen
respiratorisk lidelsessyndrom (ARDS) med hvilke et antistoff eller en antistoffdel. kan kombineres, omfatter de følgende: anti-IL-8-antistoffer; surfaktant-
erstatningsterapi; CDP-571/BAY-10-3356 (humanisert anti-TNFa- antistoff; Celltech/Bayer); cA2 (kimært anti-TNFa-antistoff; Centocor); 75 kdTNFR-IgG (75
kD TNF-reseptor-lgG-fusjonsprotein; Immunex; se f. eks. Arthritis & Rheumatism
(1994) Vol. 37, S295; J. Invest. Med. (1996) Vol. 44, 235A); og 55 kdTNFR-IgG
(55 kD TNF-reseptor-lgG-fusjonsprotein; Hoffman n-LaRoche).
Anvendelse av antistoffene eller antistoffdeléne i kombinasjon med andre terapeutiske midler er ytterligere beskrevet i underavsnitt V.
De farmasøytiske preparater ifølge oppfinnelsen kan omfatte en "terapeutisk effektiv mengde" eller en "profylaktisk effektiv mengde" av et antistoff eller en antistoffdel. En "terapeutisk effektiv mengde" angir en mengde som ved doser og i den nødvendige tidsperiode er effektiv for å oppnå det ønskede terapeutiske resultat. En terapeutisk effektiv mengde av antistoffet eller antistoff delen kan variere i henhold til faktorer så som sykdomstilstanden, alder, kjønn og vekt til individet og evnén til antistoffet eller antistoffdelen til å utløse en
ønsket respons hos individet. En terapeutisk effektiv mengde er også én hvor hvilke som helst toksiske eller skadelige effekter av antistoffet eller antistoffdelen blir oppveiet av de terapeutisk fordelaktige effekter. En "profylaktisk effektiv mengde" angir en mengde som ved doser og i nødvendige tidsperioder er effektiv
for å oppnå det ønskede profylaktiske resultat. Typisk vil, ettersom en profylaktisk dose blir anvendt hos individer før eller på et tidlig stadium av én sykdom, den
profylaktisk effektive mengde være mindre enn den terapeutisk effektive mengde.
Doseregimer kan reguleres for å gi den optimale ønskede respons { f. eks.
en terapeutisk eller profylaktisk respons). For eksempel kan en enkel bolus administreres, flere oppdelte doser kan administreres over tid eller dosen kan reduseres eller økes proporsjonalt i henhold til hva som kreves etter den terapeutiske situasjon. Det er spesielt fordelaktig å formulere parenterale preparater i en doseenhetsform som letter administrering og jevnhet av dosen. Doseenhetsform som anvendt her betyr fysisk adskilte enheter egnet som
enhetsdoser for pattedyret som skal behandles; idet hver enhet inneholder en forutbestemt mengde av aktiv forbindelse beregnet å gi den ønskede terapeutiske effekt sammen med den nødvendige farmasøytiske bærer. Spesifikasjonen av doseenhetsformer ifølge oppfinnelsen er diktert av og direkte avhengig av (a) de unike karakteristika av den aktive forbindelse og den spesielle terapeutiske eller profylaktiske effekt som skal oppnås og (b) de iboende begrensningene for formulering av en slik aktiv forbindelse for behandling åv sensitivitet hos individer.
Et ikke-begrensende. eksempel på en terapeutisk eller profylaktisk effektiv mengde av et antistoff eller en antistoffdel er 0,1 -20 mg/kg, mer foretrukket 1-10
mg/kg. Det skal bemerkes at dose-verdier kan variere med typen og
alvorlighetsgraden av lidelsen som skål lindres. Det vil videre forstås at for et hvilket som helst spesielt individ, bør det spesifikke doseregime reguleres over tid i henhold til det individuelle behov og den profesjonelle bedømmelse av personen
som administrerer eller overvåker administreringen av preparatene og at dose-områdene angitt her bare er eksempler og skal ikke begrense omfanget eller anvendelsen av det aktuelle preparat.
V. Anvendelser av antistoffene
Gitt deres evne til å binde til hTNFa, kan anti-hTNFa-antistoffer eller deler
derav, anvendes for å detektere hTNFa ( f. eks. i en biologisk prøve, så som serum
eller plasma), ved anvendelse av et konvensjonelt immunoforsøk, så som "enzyme linked immunosorbent assays" (ELISA), et radioimmunoforsøk (RIA) eller vev-immunohistokjemi. Oppfinnelsen tilveiebringer en metode for deteksjon
av hTNFa i en biologisk prøve som omfatter å bringe en biologisk prøve i kontakt
med et antistoff eller en antistoffdel og deteksjon av enten antistoffet (eller antistoffdelen) bundet til hTNFa eller ubundet antistoff (eller antistoffdel), for
derved å detektere hTNFa i den biologiske prøven. Antistoffet er direkte eller indirekte merket med et detekterbart stoff for å lette deteksjon av bundet eller ubundet antistoff. Egnede detekterbare stoffer omfatter forskjellige enzymer,
profetiske grupper, fluorescerende materialer, luminescerende materialer og radioaktive materialer. Eksempler på egnede enzymer omfatter pepperrot-
peroksydase, alkalisk fosfatase, B-galaktosidase eller acetylcholinesterase;
eksempler på egnede prostetiske.komplekser omfatter streptavidin/biotin og
avidin/biotin; eksempler på egnede fluorescerende materialer omfatter umbelliferon, fluorescein, fluorescein-isotiocyanat, rhodamin, diklortriazinylamin-fluorescein, dansylklorid eller fykoerytrin; et eksempel på et luminescerende materiale omfatter luminol; og eksempler på egnede radioaktive materialer
omfatter <125>l,1<31>1, 35S eller 3H.
Alternativt til merking av antistoffet, kan hTNFa undersøkes i biologiske
væsker ved et konkurranse-immunoforsøk ved anvendelse av rhTNFa-Standarder merket med et detekterbart stoff og et umerket anti-hTNFa-antistoff. I
dette forsøket, kombineres den biologiske prøven, de merkede rhTNFa-
standarder og anti-hTNFa-antistoff, og mengden av merket rhTNFa-standard bundet til det umerkede antistoff blir bestemt. Mengden av hTNFa i den
biologiske prøve er omvendt proporsjonal med mengden av merket rhTNFa-
standard bundet til anti-hTNFa-antistoffet.
Et D2E7-antistoff kan også anvendes for å detektere TNFa fra andre arter enn mennesker, spesielt TNFa fra primater (f.eks. sjimpanse, bavian, marmosett, cynomolgus og rhesus), gris og mus, ettersom D2E7 kan binde til hver av disse TNFa (ytterligere beskrevet i Eksempel 4, underavsnitt E).
Antistoffene og antistoffdelene kan nøytralisere hTNFa-aktivitet både in
vitro og in vivo ( se Eksempel 4). Videre kan minst noen av antistoffene så som D2E7, nøytralisere TNFa-aktivitet fra andre arter. Følgelig kan antistoffene og antistoffdelene anvendes for å hemme TNFa-aktivitet, f. eks. i en cellekultur inneholdende hTNFa, hos mennesker eller andre pattedyr som har TNFa med hvilke et antistoff ifølge oppfinnelsen kryssreagerer ( f. eks. sjimpanse, bavian,
marmosett, cynomolgus og mesus, gris eller mus). Ved én utførelsesform tilveiebringer oppfinnelsen en metode for hemning av TNFa-aktivitet som omfatter
å bringe TNFa i kontakt med et antistoff eller antistoffdel slik at TNFa-aktivitet blir hemmet. Fortrinnsvis er TNFa human-TNFa. For eksempel kan, i en cellekultur som inneholder eller mistenkes for å inneholde hTNFa, et antistoff eller en antistoffdel settes til kulturmediet for å hemme hTNFa-aktivitet i kulturen.
Ved en annen utførelsesform tilveiebringer oppfinnelsen en metode for hemning av TNFa-aktivitet hos et individ som har en lidelse hvor TNFa- aktivitet er ugunstig. TNFa er implisert ved patofysiologien til en rekke forskjellige lidelser
(se f. eks. Moelier, A., et al. (1990) Cytokine 2:162-169; U.S.- patent nr. 5,231,024
til Moelier et al. ; europeisk patent-publikasjon nr. 260 610 B1 av Moelier, A.).
Metoder for hemning av TNFa-aktivitet hos et individ som har en slik lidelse, kan
omfatte administering til individet av et antistoff eller en antistoffdel, slik at TNFa-aktivitet hos individet blir hemmet. Fortrinnsvis er TNFa humah-TNFa og individet'
et menneske. Alternativt kan individet være et pattedyr som uttrykker en TNFa
med hvilken et antistoff ifølge oppfinnelsen kryssreagerer. Videre kan individet
være et pattedyr i hvilket hTNFa er innført { f. eks. ved administrering av hTNFa eller ved ekspresjon av et hTNFa-transgen). Et antistoff kan administreres til et menneske for terapeutiske formål (ytterligere beskrevet nedenfor). Videre kan et antistoff administreres til et ikke-humånt pattedyr som uttrykker en TNFa med hvilken antistoffet kryssreagerer { f. eks. en primat, gris eller mus) for veterinær-
formål eller som en dyremodell av en human sykdom. Når det gjelder sistnevnte, kan slike dyremodeller være nyttige for evaluering av den terapeutiske effektivitet til antistoffene ( f. eks. ved testing av doser og tidsforløp for administrering).
Som anvendt her skal betegnelsen "en lidelse hvor TNFa-aktivitet er ugunstig" omfatte sykdommer og andre lidelser hvor tilstedeværelse av TNFa hos et individ som har lidelsen er vist å være eller mistenkt å være enten ansvarlig for patofysiologien til lidelsen eller en faktor som bidrar til å forverre lidelsen. Følgelig er en lidelse hvor TNFa-aktivitet er ugunstig, en lidelse hvor hemning av TNFa-aktivitet er forventet å lindre symptomene og/eller utvikling av lidelsen. Slike lidelser kan for eksempel vises Ved en økning i konsentrasjonen av TNFa i en biologisk væske hos et individ som har lidelsen ( f. eks. en økning i konsentrasjonen av TNFa i serum, plasma, leddvæske etc. hos individet), som for eksempel kan detekteres ved anvendelse av et anti-TNFa-antistoff som beskrevet ovenfor. Det er en rekke eksempler på lidelser hvor TNFa-aktivitet er skadelig. Anvendelse av antistoffene og antistoffdelene ved behandling av spesifikke
lidelser er beskrevet mer omfattende nedenfor:
A. Sepsis Tumor-nekrosefaktor har en etablert rolle i patofysiologien til sepsis, med biologiske effekter som omfatter hypotensjon, myokardial suppresjon, vaskulær lekkasje-syndrom, organ-nekrose, stimulering av frigjøring av toksiske sekundære mediatorer og aktivering av størkningskaskaden (se f. eks. Moelier, A., ef al.
(1990) Cytokine 2:162-169; U.S.-patent nr. 5,231,024 til Moelier er a/.; europeisk patentpublikasjon nr. 260 610 B1 av Moelier, A.; Tracey, K.J. og Cerami, A.
(1994) Annu. Rev. Med. 45:491-503; Russell, D og Thompson, R-C. (1993) Curr.
Opin. Biotech. 4:714-721). Følgelig kan human-antistoffené ogantistoffdelene anvendes for behandling av sepsis i hvilken som helst av dens kliniske fonner, omfattende septisk sjokk, endotoksisk sjokk, gram-negativ sepsis og toksisk sjokk-syndrom.
For behandling av sepsis kan videre et anti-hTNFa-antistoff eller antistoffdel administreres sammen med ett eller flere ytterligere terapeutiske midler som ytterligere kan lindre sepsis, så som en interleukin-1-inhibitor (så som de
beskrevet i PCT-publikasjonene nr. WO 92/16221 og WO 92/17583), cytokinet interleukin-6 (se f. eks. PCT-publikasjon nr. WO 93/11793) eller én antagonist for blodplate-aktiverende faktor (se f. eks. europeisk patentsøknad, publikasjon nr. EP 374 510). Andre kombinasjonsterapier for behandling av sepsis er ytterligere beskrevet i underavsnitt III.
Videre, ved en foretrukket utførelsesform, blir et anti-TNFa-antistoff eller antistoffdel administrert til et menneske innen en undergruppe av sepsis-pasienter som har en serum-eller plasmakonsentrasjon av IL-6 over 500 pg/ml og mer foretrukket 1000 pg/ml ved tidspunktet for behandling (se PCT-publikasjon nr: WO 95/20978 av Daum, L, ef al.).
B. Autoimmune sykdommer Tumornekrosefaktor er implisert i patofysiologien tii en rekke autoimmune sykdommer. For eksempel har TNFa vært implisert i aktivering av vev-
inflammasjon og forårsaking av ledd-déstruksjon ved revmatoid artritt ( se f. eks.
Moelier, A., et al. (1990) Cytokine 2:162-169; U.S.-patent nr. 5,231,024 til Moelier
et al. ; europeisk patent-publikasjon nr. 260 610 B1 av Moelier, A.; Tracey og Cerami, supra; Arend, W.P. og Dayer, J-M. (1995) Arth. Rheum. 38:151-160; Fava, R.A., et al. (1993) Clin. Exp. Immunol. 94:261 -266). TNFa har også vært
implisert i å fremme død av øyceller og i mediering av insulinresistens ved diabetes (se f. eks. Tracey og Cerami, supra; PCT-publikasjon nr. WO 94/08609).
TNFa har også vært implisert i mediering av cytotoksisitet til oligodendrocytter og induksjon av inflammatorisk plakk ved multippel sklerose (se f. eks. Tracey og
Cerami, supra). Kimære og humaniserte murine anti-hTNFoc-antistoffer har vært underkastet klinisk testing for behandling av revmatoid artritt (se f. eks. Elliott,
M.J., et al. (1994) Lancet 344:1125-1127; Elliot, M.J., et al. (1994) Lancet
344:1105-1110; Rankin, E.C., ef al. (1995) Br. J. Rheumatol. 34:334-342).
Human-antistoffene og antistoffdelene kan anvendes for å behandle autoimmune sykdommer, spesielt de som er forbundet med inflammasjon, omfattende revmatoid artritt, revmatoid spondylitt, osteoartritt og giktisk artritt,
allergi, multippel sklerose, autoimmun diabetes, autoimmun uveitt og nefrotisk syndrom. Typisk blir antistoffet eller antistoffdelen administrert systemisk, selv om lokal administrering.av antistoffet eller antistoffdelen på stedet for inflammasjonen kan være fordelaktig for visse lidelser ( f. eks. lokal administrering i leddene ved revmatoid artritt eller topisk påføring ved diabetiske ulcere, alene eller i
kombinasjon med et cykloheksanylidenderivat som beskrevet i PCT-publikasjon nr. WO 93/19751). Et antistoff eller en antistoffdel kan også administreres med ett eller flere ytterligere terapeutiske midler som er nyttige ved behandling av autoimmune sykdommer, som ytterligere beskrevet i underavsnitt III.
C. Infeksiøse sykdommer
. Tumomekrosefaktor har vært impliset ri mediering av biologiske effekter observert ved en rekke infeksiøse sykdommer. For eksempel har TNFa Vært implisert i mediering av hjeme-inflammasjon og kapillær trombose og infarkt ved malaria. TNFa har også vært implisert i mediering av hjeme-inflammasjon, idet den fremkaller nedbrytning av blod-hjeme-barrieren, utløsning av septisk sjokk-
syndrom og aktivering av venøst infarkt ved meningitt. TNFa har også vært implisert i fremkalling av kakeksi, stimulering av viral proliférasjon og mediering av sentralnervesystem-skade ved ervervet immun-svikt syndrom (AIDS). Følgelig kan antistoffene og antistoffdelene anvendes ved behandling av infeksiøse sykdommer, omfattende bakteriell meningitt (se f. eks. europeisk patentsøknad,
publikasjon nr. EP 585 705), cerebral malaria, AIDS og AIDS-relatert kompleks (ARC) (se f. eks. europeisk patentsøknad, publikasjon nr. EP 230 574), så vel som cytomegalovirus-infeksjon etter transplantasjon (se f. eks. Fietze, E., et al. (1994) Transplantation 58:675-680). Antistoffene og antistoffdelene kan også anvendes
for å lindre symptomer forbundet med infeksiøse sykdommer, innbefattet feber og
myalgier på grunn av infeksjon (så som influensa) og kakeksi etter infeksjon { f. eks. etter AIDS eller ARC).
D. Transplantasjon
Tumornekrosefaktor har vært implisert som en nøkkel-mediator ved «allograft»-awisning og «graft versus host» sykdom (GVHD) og ved mediering av
en ugunstig reaksjon som har vært observert når rotte-antistoff OKT3, rettet mot T-celle-reseptor-CD3-kompleks, blir anvendt for å hemme avvisning av nyre- - transplantater (se f. eks. Eason, J.D., et al. (1995) Transplantation 59:300-305; Suthanthiran, M. og Strom, T.B. (1994) New Engl. J. Med. 331:365-375). Følgelig
kan antistoffene og antistoffdelene anvendes for å hemme transplåntat-åwisning, omfattende avvisning av «allografter» og «xenografter» dg for å hemme GVHD. Selv om antistoffet eller antistoffdelen kan anvendes alene, er det mer foretrukket
at det blir anvendt i kombinasjon med ett eller flere andre midler som hemmer immunrespons mot «allograftet» eller hemmer GVHD. For eksempel blir i én utførelsesform et antistoff eller en antistoffdel anvendt i kombinasjon med OKT3
for å hemme OKT3-fremkalte reaksjoner. Ved en annen utførelsesform blir et antistoff eller en antistoffdel anvendt i kombinasjon med ett eller flere antistoffer rettet mot andre mål som er involvert i regulering av immunresponser, så som celleoverflate-molekylene CD25 (interleukin-2-reseptor-a), CD11a (LFA-1), CD54 (ICAM-1), CD4, CD45, CD28/CTLA4, CD80 (B7-1) og/eller CD86 (B7-2). Ved enda en annen utførelsesform blir et antistoff eller en antistoffdel anvendt i kombinasjon med ett eller flere generelle immunosuppressive midler, så som
cyklosporin A eller FK506.
E. Ondartet sykdom
Tumornekrosefaktor har vært implisert i fremkalling av kakeksi, stimulering
av tumorvekst, forsterkning av metastatisk potensiale og mediering av cytotoksisitet ved ondartede sykdommer. Følgelig kan antistoffene og antistoffdelene anvendes ved behandling av ondartede sykdommer, for å hemme tumorvekst eller metastase og/eller for å bedre kakeksi etter en ondartet sykdom. Antistoffet eller antistoffdelen kan administreres systemisk eller lokalt til tumor-
stedet.
F. Pulmonale lidelser
Tumornekrosefaktor har vært implisert i patofysiologien til «voksen
respiratorisk lidelses-syndrom» (ARDS), som omfatter stimulering av leukocytt-endotelaktivering, dirigering av cytotoksisitet til pneumocytter og fremkalling av
vaskulært lekkasjesyndrom. Følgelig kan antistoffene og antistoffdelene anvendes for å behandle forskjellige pulmonale lidelser, omfattende «voksen respiratorisk lidelses-syndrom» (se f. eks. PCT-publikasjon nr. WO 91/04054), sjokklunge, kronisk pulmonal inflammatorisk sykdom, puimonal sarkoidose, ... pulmonal fibrose og silikose. Antistoffet eller antistoffdelen kan administreres systemisk eller lokalt til lungeoverflaten, for eksempel som en aerosol. Et antistoff eller en antistoffdel kan også administreres med ett eller flere ytterligere terapeutiske midler nyttige ved behandling av pulmonale lidelser, som ytterligere beskrevet i underavsnitt III.
G. Intestinale lidelser
Tumornekrosefaktor har vært implisert i patofysiologien til inflammatoriske tarmlidelser (se f. eks. Tracy, K.J., et ål. (1986) Science 234:470-474: Sun, X-M., et al. (1988) J. Clin. Invest. 6V.1328-1331; MacDonald, T.T., ef al. (1990) Clin. Exp. Immunol. 81:301-305). Kimære murine anti-hTNFa-antistoffer har vært underkastet klinisk testing for behandling av Crohn's sykdom (van Dullemen, H.M., et al. (1995) Gastroenterology 109:129-135). Human-antistofféne dg antistoffdelene kan også anvendes for å behandle intestinale lidelser, så som idiopatisk inflammatorisk tarm-sykdom, som omfatter to syndromer, Crohn's
sykdom og ulcerativ kolitt. Et antistoff eller en antistoffdel kan også administreres med ett eller flere ytterligere terapeutiske midler nyttige ved behandling av intestinale lidelser, som ytterligere beskrevet i underavsnitt ill.
H. Hjertelidelser
Antistoffene og antistoffdelene kan også anvendes for å behandle
forskjellige hjertelidelser, omfattende ischemi i hjertet (se f. eks. europeisk patentsøknad, publikasjon nr. EP 453 898) og hjertesvikt (svakhet ved hjertemuskelen)(se f. eks. PCT-publikasjon nr. WO 94/20139).
I. Andre
Antistoffene og antistoffdelene kan også anvendes for å behandle
forskjellige andre lidelser hvor TNFa-aktivitet er ugunstig. Eksempler på andre sykdommer og lidelser hvor TNFa-aktivitet har vært implisert i patofysiologien. og således kan behandles ved anvendelse av et antistoff eller antistoffdel ifølgé
foreliggende oppfinnelse,, omfatter inflammatoriske ben-lidelser og ben-resorpsjonssykdom (se teks. Bertolini, D.R., er a/. (1986) Nature 319:516-518;
Konig, A., et al. (1988) J. Bone Miner. Res. 3:621-627; Lemer, U.H. og Ohlin, A.
(1993) J. Bone Miner. Res. 8:147-155; bg Shankar, G. og Stem, P.H. (1993) Bone 14:871-876), hepatitt, omfattende alkoholisk hepatitt (se f. eks. McClåin, C.J. og Cohen, D.A. (1989) Hepatology 9:349-351; Felver, M.E., et al. (1990) Alcohol. Clin. Exp. Res. 14:255-259; og Hansen, J., et al. (1994) Hepatology20:461-474),
viral hepatitt (Sheron, N., et al. (1991) J. Hepåtol. 12:241-245; og Hussain, M.J.,
ef al. (1994) J. Clin. Pathol. 47:1112-1115) og fulminant hepatitt; koagulerings-
forstyrrelser (se f. eks. van der Poll, T., et al. (1990) N. Engl. J. Med. 322:1622-
1627; og vari der Poli, T., et al. (1991) Prog. Clin. Biol. Res. 367:55-60).
forbrenning (sé f. eks. Giroir, BP., et al. (1994) Am. J. Physiol. 267:H118-124; bg Liu, X.S., et al. (1994) Bums 20:40-44). reperfusjonsskadé ( se f. eks. Scales,
W.E., et al. (1994) Am, J. Physiol. 267:G1122-1127; Serrick, C, et al. (1994) Transplantation 58:1158-1162; og Yao, Y.M., et al. (1995) Resuscitation 29:157-168), keloid-dannelse (se f. eks. McCauley, R.L., ef al. (1992) J. Clin. Immunol.. 12:300-308), arrvevsdannelse; pyrexi; periodontal sykdom; o bes itet og strålingstoksisitet.
EKSEMPEL 1: Kinetisk analyse av binding av human-antistoffer til
hTNFa
Sanntidsbindingsinteraksjoner mellom ligand (biotinylert rekombinant
human-TNFa (rhTNFa) immobilisert på en biosensormatriks) og analytt (antistoffer i løsning) ble målt ved overflate-plasmonresonans (SPR) ved anvendelse av BIAcore-systemet (Pharmacia Biosensor, Piscataway, NJ). Systemet anvender de optiske egenskapene til SPR til å detektere endringer i proteinkonsentrasjoner i en dekstran-biosensor-matriks. Proteiner-blir kovalent
bundet til dekstran-matriksen i kjente konsentrasjoner. Antistoffer blir injisert gjennom dekstran-matriksen og spesifikk binding mellom injiserte antistoffer og immobilisert ligand resulterer i en øket matriks-proteinkonsentrasjon og resulterende endring i SPR-signalet. Disse endringer i SPR-signal blir registrert som resonans-enheter (RU) og blir vist i forhold til tiden på y-aksen av et - sensorgram.
For å lette immobilisering av biotinylet rrhTNFa på biosensor-matriksen, blir streptavidin kovalent bundet via frie amingrupper tii dekstran-matriksen ved først å aktivere karboksyl-grupper på matriksen med 100 mM N-hydroksysuccinimid (NHS) og 400 mM N-etyl-N'-(3-<d>iet<y>lamino<p>ro<p>yl)-karbodiimid-h<y>droklorid (EDC). Deretter blir streptavidin injisert i den aktiverte matriks. 35 mikroliter streptavidin
(25 mg/ml), fortynnet i natriumacetat, pH 4,5, blir injisert gjennom den aktiverte biosensor og f rie aminer på proteinet blir bundet direkte til de aktiverte karboksylgrupper. Uomsatte matriks-EDC-estere blir deaktivert ved injeksjon av 1
M etanolamin. Streptavidin-koblede biosensor-chips er også kommersielt
tilgjengelige (Pharmacia BR-1000-16, Pharmacia Biosensor, Piscataway, NJ).
Biotinylert mTNFa ble fremstilt ved først å oppløse 5,0 mg biotin (D-biotinyl-e-aminokapronsyre-N-hydroksysuccinimidester; Boehringer Mannheim Kat. Nr. 1008 960) i 500 jitl dimetylsulfoksyd for å fremstille en 10 mg/ml løsning. 10 mikroliter biotin ble tilsatt pr. ml rhTNFa (i 2,65 mg/ml) for et 2:1 molforhold av biotin til rhTNFa. Reaksjonsblandingen ble forsiktig blandet og inkubert i to timer ved romtemperatur i mørke. En PD-10 kolonne, Sephadex G-25M (Pharmacia Katalog Nr. 17-0851-01) ble ekvilibrert med 25 ml kald PBS og lastet med 2 mi rhTNFa-biotin pr. kolonne. Kolonnen ble eluert med 10x1 ml kald PBS.
Fraksjoner ble oppsamlet og lest ved OD280 (1,0 OD = 1,25 mg/ml). De
passende fraksjoner ble samlet og lagret ved -80° C før anvendelse. Biotinylert rhTNFa er også kommersielt tilgjengelig (R & D Systems Katalog Nr. FTA00,
Minneapolis, MN).
Biotinylert rhTNFa som skal immobiliseres på matriksen via streptavidin ble . fortynnet i PBS løpende buffer (Gibco Kat. No. 14190-144, Gibco BRL, Grand
Island, NY) supplert med 0,05% (BIAcore) surfaktant P20 (Pharmacia BR-1000-
54, Pharmacia Biosensor, Piscataway, NJ). For å bestemme kapasiteten til rhTNFa-spesifikke antistoffer til å binde til immobilisert rhTNFa, bie et bindings-
forsøk utført som følger. Aliquoter av biotinylert rhTNFa (25 nM; 10 ul aliquoter)
ble injisert gjennom den streptavidin-koblede dekstran-matriks med en strømningshastighet på 5 ul/min. Før injeksjon av proteinet og umiddelbart
etterpå, ble bare PBS-buffer strømmet gjennom hver strømningscelle. Netto-
differansen i signal mellom baselinje og omtrent 30 sek. etter fullførelse av biotinylert rhTNFa-injeksjon ble tatt for å representere bindingsverdien (omtrent 500 RU). Direkte rhTNFa-spesifikk antistoff-binding til immobilisert biotinylert
rhTNFa ble målt. Antistoffer (20 ug/ml) ble fortynnet i PBS løpende buffer og 25
ml aliquoter ble injisert gjennom de immobiliserte protein-matrikser med en strømningshastighet på 5 uJ/min. Før injeksjon av antistoff og umiddelbart, etter, ble bare PBS-buffer strømmet gjennom hver strømningscelle. Nettodifferansen i baselinjesignal og signal etter fullførelse av antistoff-injeksjon ble antatt å
representere bindingsverdien av den spesielle prøven. Biosensormatrikser ble regenerert ved anvendelse av 100 mM HCI før injeksjon av neste prøve. For å
bestemme frigjøringshastigheten (KQff), bindingshastigheten (Kon),.assosierings-hastighets- (Ka) og dissosieringshastighet- (Kd) konstanter, ble BIAcore kinetisk evalueringssoftware (versjon 2,1) anvendt.
Representative resultater av D2E7 (lgG4 full-lengde antistoff) som binder til biotinylert rhTNFa, sammenlignet med mus mAb MAK 195 (F(ab')2 fragment), er vist nedenfor i Tabell 1.
Ved en andre serie eksperimenter ble de molekylære kinetiske interaksjoner mellom en lgG1 full-lengde-form av D2E7 og biotinylert rhTNF kvantitativt analysert ved anvendelse av BIAcore teknologi, som beskrevet ovenfor og kinetiske hastighets-konstanter ble avledet, som oppsummert i
Tabellene 2,3 og 4.
Dissosiasjons- og assosiasjonshastighetskonstanter ble beregnet ved
analysering av dissosiasjons- og assosiasjonsregioner av sensorgrammene ved BIA-analyseprogramvare. Konvensjonell kjemisk reaksjonskinetikk ble antatt for interaksjon mellom D2E7 og biotinylert rhTNF-molekyl: en nullte. orden dissosiasjon og første orden assosiasjonskinetikk, For analysen ble interaksjon bare mellom én arm av det bivalente D2E7-antistoff og én enhet av det trimere biotinylerte rhTNF tatt i betraktning ved valg av molekylmodeller for analyse av de kinetiske data. Tre uavhengige eksperimenter ble utført og resultatene ble analysert separat. Gjennomsnittlig åpenbar dissosiasjonshastighetskonstant (k<j)
av interaksjonen mellom D2E7 og biotinylert rhTNF var 8,81 ± i ,06 x IO"5 s"<1> og gjennomsnittlig åpenbar assosiasjonshastighetskonstant, ka var 1,91 1,26 x 10^ M"<1> s"<1>. Den åpenbare reelle dissosiasjonskonstant (Kd) ble deretter beregnet
ved formelen: Kd= kd/ ka. Således var gjennomsnittlig «d av D2E7 antistoff for rhTNF avledet fra kinetiske parametere 6,09 ± 3,42 x 10"<10> M. Mindre differanser i de kinetiske verdier for lgG1 -formen av D2E7 (presentert i Tabellene 2, 3 og 4)
og lgG4-formen av D2E7 (presentert i Tabell 1 og i Eksemplene 2 og 3) er ikke
antatt å være riktige differanser som er et resultat av tilstedeværelse av enten
lgG1 eller lgG4 konstante regioner, men er heller antatt å skyldes å skyldes mer nøyaktige antistoff-konsentrasjonsmålinger anvendt for den lgG1 kinetiske analyse. Følgelig er de kinetiske verdier for lgG1-formen av D2E7 presentert her antatt å være de mest nøyaktige kinetiske parametere for D2E7-antistoffet.
EKSEMPEL 2: Alanin-scanning-mutagenese av D2E7 CDR3-domener ...
En serie av enkle alanin-mutasjoner ble innført ved standard metoder i CDR3-domenet av D2E7 VL- og D2E7 VH-regioner. Lettkjede mutasjoner er
illustrert i Figur -1B (LD2E7<*>.A1, LD2E7\A3, LD2E7<*>.A4, LD2E7*.A5, LD2E7*.A7
og LD2E7*.A8, som har en alanin-mutasjon i henholdsvis stilling 1,3,4, 5,7 eller
8, av D2E7 VL-CDR3-domenet). Tungkjede mutasjoner er illustrert i Figur 2B
(HD2E7<*>.A1, HD2E7<*.>A2, HD2E7<*>.A3, HD2E7<*.>Å4, HD2E7<*.>A5, HD2E7<*>.A6,. HD2E7<*>.A7, HD2E7<*>.A8 og HD2E7<*>.A9, som har en alanin-mutåsjon i
henholdsvis stilling 2, 3,4,5,6, 8, 9,10 eller 11, av D2E7 VH CDR3-domenet).
Kinetikken av rhTNFa-interaksjon med et antistoff sammensatt av villtype D2E7 VL og VH ble sammenlignet med den til antistoffer sammensatt av 1) en villtype
D2E7 VL paret med en alanin-substituert D2E7 VH; 2) en villtype D2E7 VH paret
med en alanin-substituert D2E7 VL; eller 3) en alanin-substituert D2E7 VL paret med en alanin-substituert D2E7 VH. Alle antistoffer ble testet som full-lengde, lgG4-molekyler.
. Kinetikken til interaksjonen av antistoffer med rhTNFa ble bestemt ved overflate-plasmon-resonans som beskrevet i Eksempel 1. Koff-hastigheter for de forskjellige VhWL-par er oppsummert nedenfor i Tabell 5:
Disse resultater demonstrerer at hoveddelen av stillingene av CDR3-
domener i D2E7 VL-regionen og VH-regionen er mottagelige for substitusjon med en enkel alanin-rest. Substitusjon av et enkelt alanin i stilling 1,4,5 eller 7 åv D2E7 VL-CDR3-domenet eller i stilling 2, 5, 6, 8, 9 eller 10 av D2E7 VH-CDR3-domenet påvirker ikke i særlig grad frigjøringshastigheten av hTNFa-binding sammenlignet med villtype parentalt D2E7 antistoff. Substitusjon av alanin i stilling 8 av D2E7 VL-CDR3 eller i stilling 3 av D2E7 VH^CDR3 gir en 4-ganger raskere K0ff og en alanin-substitusjon i stilling 4 eller 11 av D2E7 VH-CDR3 gir en 8-ganger raskere K0ff, hvilket indikerer at disse stillinger er mer kritiske for binding til hTNFa. Imidlertid resulterer fortsatt en enkel alanin-substitusjon i stilling 1,4, 5,
7 eller 8 åv D2E7 VL-CDR3 domenet eller i stilling 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, it) eiier li av D2E7 VH-CDR3-domenet i et anti-hTNFa-antistoff som har en Koff på 1 x 10"<3>
sek-<1> eller mindre.
EKSEMPEL 3: Bindingsanalyse av D2E7-beslektede antistoffer
En serie antistoffer beslektet i sekvens med D2E7 ble analysert for deres
binding til rhTNFa, sammenlignet med D2E7, ved overflate-plasmon-resonans som béskrevet i Eksempel 1. Aminosyresekvensene av de testede VL-regioner er vist i Figurene 1A og 1B. Aminosyresekvensene av de testede VH-regioner er vist i Figurene 2A og 2B. «off-hastigheter for forskjellige VH/VL-par (i det angitte format, enten som et full-lengde lgG1- eller lgG4-antistoff eller som en scFv) er oppsummert nedenfor i Tabell 6:
De langsomme frigje ringshastigheter (dvs. Kpff ^1 x 10"<*> sek-<1>) for full-lengde-antistoffer (dvs. IgG-format) som har en VL valgt fra D2E7, LOE7, LOE7.T og LOE7.A, som har enten treonin eller alanin i stilling 9, indikerer at stilling 9 i D2E7 VL-CDR3 kan være okkupert av hvilken som helst av disse to rester uten i særlig grad å påvirke K0ff. Følgelig omfatter et konsensus-motiv for D2E7 VL-CDR3 aminosyresekvensen: Q-R-Y-N-R-A-P-Y-(T/A) (SEKV ID NR: 3). Videre indikerer de langsomme f rigjø ringshastigheter (dvs. K0ff < 1 x 10"<4> sek-1) for antistoffer som har en VH valgt fra D2E7, VH1-D2.N og VH1 -D2.Y, som har enten tyrosin eller asparagin i stilling 12, at stilling 12 av D2E7 VH-CDR3 kan være okkupert av hvilken som helst av disse to rester uten i særlig grad å påvirke Koff. Følgelig omfatter et konsensus-motiv for D2E7 VH-CDR3 aminosyresekvensen: V-S-Y-L-S-T-A-S-S-L-D-(Y/N) (SEKV ID NR:4).
Resultatene vist i Tabell 6 demonstrerer at i scFv format oppviser antistoffer inneholdende 2SD4 VL-eller VH-CDR3-regionen en raskere Koff (dvs. K0ff > 1 x 10"<3> sek-<1>) sammenlignet med antistoffer inneholdende D2E7 VL- eller VH-CDR3-regionen. I VL-CDR3 skiller 2SD4 seg fra D2E7 i stillingene 2, 5 og 9.
Som beskrevet ovenfor, kan imidlertid stilling 9 være okkupert av Ala (som i
2SD4) eller Thr (som i D2E7) uten i særlig grad å påvirke Koff. Ved sammenligning av 2SD4 og D2E7, kan således stillingene 2 og 5 i D2E7 VL-CDR3, begge argininer, identifiseres som kritiske for assosieringen av antistoffet med hTNFa. Disse restene kan være direkte involvert som kontakt-rester på antistoff-bindingssetet eller kan kritisk bidra til å opprettholde stillasarkitekturen til antistoffmolekylet i denne regionen. Når det gjelder betydningen av stilling 2, akselererer erstatning av Arg (i LOE7, som har samme VL-CDR3 som D2E7) med Lys (i EP B12) frigjøringshastigheten med en faktor på to. Når det gjelder
betydningen av stilling 5, akselererer også erstatning av Arg (i D2E7) med Ala (i LD2E7<*>.A5), som beskrevet i Eksempel 2 frigjøringshastigheten to ganger.
Videre, uten Arg i begge stillinger 2 og 5 (i 2SD4), blir frigjøringshastigheten fem
ganger raskere. Imidlertid skal det bemerkes at selv bm stilling 5 er viktig for forbedret binding til hTNFa, kan en endring i denne stilling oppheves véd endringer i andre stillinger, som det sees i VLLOE4, VLLOH1 eller VL0.1 H8.
I VH-CDR3, skilller 2SD4 seg fra D2E7 i stillingene 1,7 og 12. Som angitt
ovenfor, kan imidlertid stilling 12 være okkupert av Asn (som i 2SD4) eller Tyr (som i D2É7) uten i særlig grad å påvirke Koff. Ved sammenligning av 2SD4 og
D2E7, kan således stillingene 1 og 7 i D2E7 VH-CDR3 identifiseres som kritiske
for binding til hTNFa. Som beskrevet ovenfor kan disse rester være direkte involvert som kontakt-rester på antistoff-bindingssetet eller kritisk bidra til å opprettholde stillasarkitekturen til antistoffmolekylet i denne region. Beggé
stillinger er viktige for binding til hTNFa, ettersom når 3C-H2 VH-CDR3 (som har en valin til alanin endring i stilling 1 i forhold til D2E7 VH-CDR3) blir anvendt, har scFv en 3 ganger raskere frigjøringshastighet enn når D2E7 VH-CDR3 blir anvendt, men denne frigjøringshastigheten er enda fire ganger langsommere enn når 2SD4 VH-CDR3 blir anvendt (som har endringer i begge stillingene 1 og 7 i forhold til D2E7 VH-CDR3).
EKSEMPEL 4: Funksjonell aktivitet av D2E7
For å undersøke den funksjonelle aktiviteten til D2E7 ble antistoffet
anvendt i flere forsøk som måler evnen til antistoffet til å hemme hTNFa-aktivitet, enten in vitro eller in vivo.
A. Nøytralisering av TNFa- fremkalt cytotoksisitet i L929- celler
Human-rekombinant TNFa (rhTNFa) forårsaker celle-cytotoksisitet hos
murine L929-cel|er etter en inkuberingsperiode på 18-24 timer. Human-anti-hTNFa-antistoffer ble bedømt i L929-forsøk ved medinkubering av antistoffer med rhTNFa og cellene som følger. En 96-brønn mikrotiterplate inneholdende 100 ul anti-hTNFa Ab ble serielt fortynnet 1/3 nedover platen i duplikater ved anvendelse av RPMI-medium inneholdende 10% føtalt bovint serum (FBS).
50 mikroliter rhTNFa ble tilsatt for en endelig konsentrasjon på 500 pg/ml i hver
prøve-brønn. Platene ble deretter inkubert i 30 minutter ved romtemperatur.
Deretter ble 50 ul TNFa-sensitive L929 muse-fibroblastceller tilsatt for en endelig konsentrasjon på 5 x 10<4> celler pr. brønn, omfattende 1 mg/ml Actinomycin-D. Kontroller omfattet medium pluss celler og rhTNFa pluss celler. Disse kontroller
og en TNFa-standardkurve, fra 2 ng/ml til 8,2 pg/ml, ble anvéndt for å bestemme kvaliteten av forsøket og gi et nøytralitetsperspektiv. Platene ble deretter inkubert natten over (18-24 timer) ved 37° C i 5% CO2.
Ett hundre mikroliter av medium ble fjernet fra hver brønn og 50 uJ
5 mg/ml 3,(4,4-dimetyltiazol-2-yl)2,5-difenyl-tetrazolium-bromid (MTT; kommersielt tilgjengelig fra Sigma Chemical Cb., St. Louis, MO) i PBS ble tilsatt. Platene ble deretter inkubert i 4 timer ved 37° C. Femti mikroliter 20% natrium- dodecyl-sulfat (SDS) ble deretter satt til hver brønn, og platene ble inkubert natten over ved 37°
C. Den optiske densitet ved 570/630 nm ble målt, kurver ble plottet for hver
prøve og IC50 ble bestemt ved standard metoder.
Representative resultater for human-antistoffer som har forskjellige VL- og
VH-par, sammenlignet med det murine MAK 195 mAb, er vist i Figur 3 og i Tabell
7 nedenfor.
Resultatene i Figur 3 og Tabell 7 demonstrerer at D2E7 human-anti-hTNFa-antistoff og forskjellige D2E7-beslektede antistoffer, nøytraliserer TNFa-fremkalt L929-cytotoksisitet med en kapasitet omtrent ekvivalent med den til murint anti-hTNFa mAb MAK 195: Ved en annen serie eksperimenter ble evnen til lgG1-formen av D2E7 til å nøytralisere TNFa-fremkalt L929-cytotoksisitet undersøkt som beskrevet ovenfor. Resultatene fra tre uavhengige eksperimenter og gjennomsnittet av disse er oppsummert nedenfor i Tabell 8:
Denne serie av eksperimenter bekreftet at D2E7, i full-lengde IgGI-form,
nøytraliserer TNFa-fremkalt L929-cytotoksis'rtet med en gjennomsnittlig IC50 [M]
på1,25±0,01 x10"in.
B. Hemning av TNFa- bindina til TNFa- reseptorer på U- 937- celler
Evnen til human-anti-hTNFa-antistoffer til å hemme binding av hTNFa til hTNFa-reseptorer på overflaten av celler ble undersøkt ved anvendelse aV U-937-celle-linje (ATCC No. CRL 1593), en human histiocytisk cellelinje som uttrykker hTNFa-reseptorer. U-937-celler ble dyrket i RPMI 1640-medium supplert med 10% føtalt boVint serum (Hyclone A-1111, Hyclone Laboratories, Logan, UT), L-glutamin (4 nM), HEPES-bufferløsning (10 mM), penicillin (100 ug/ml) og
Streptomycin (100 mg/ml). For å undersøke aktiviteten til full-lengde IgG-
antistoffer, ble U-937-celler preinkubert med PBS supplert med 1 mg/ml human
IgG (Sigma j-4506, Sigma Chemical Co., St. Louis, MO) i 45 minutter på is og
deretter ble cellene vasket tre ganger med bindingsbuffer. For reseptor-
bindingsforsøk ble U-937-celler (5 x 10<6> celler/brønn) inkubert i en bindingsbuffer
(PBS supplert med 0,2% bovint serum-albumin) i 96-brønn mikrotiterplater (Costar 3799, Costar Corp., Cambridge, MA) sammen med <125>|.merket rhTNFa (3 x 10-10 M; 25 uCi/ml; anskaffet fra NEN Research Products, Wilmington, DE), med eller uten anti-hTNFa-antistoff er, i et totalt volum på 0,2 ml. Platene ble inkubert på is i 1,5 timer. Deretter ble 75 uJ av hver prøve overført til 1,0 ml test-rør (Sarstedt 72,700, Sarstedt Corp., Princeton, NJ) inneholdende dibutylftalat (Sigma D-2270, Sigma Chemical Co., St. Louis, MO) og dinonylftalat (ICN 210733, ICN, Irvin, CA). Te st rø rene inneholdt en 300 uJ blanding av dibutylftalat og dinonylftalat, i henholdsvis et volumforhold på 2:1. Fritt (dvs. ubundet) <12>5|. merket rhTNFa ble fjernet ved mikrosentirfugering i fem minutter. Deretter ble hver testrør-ende inneholdende en celle-pellet kuttet ved hjelp av en mikrorør-saks (Bel-Art 210180001, Bel-Art Products, PeqUannock, NJ). Celle-pelleten inneholder <125>|.merket rhTNFa bundet til p60 eller p80 TNFa-reseptor, mens den vandige fasen ovenfor oljeblandingen inneholder overskudd av fritt<125>l-merket rhTNFa. Alle celle-pellets ble oppsamlet i et tellerør (Falcon 2052, Becton Dickinson Labware, Lincoln Park, NJ) og tellet i en scintillasjonsteller.
Representative resultater er vist i Figur 4. ICsrj-verdien for D2E7-hemning
av hTNFa-binding til hTNFa-reseptorer på U-937-celler er omtrent 3 x 10'10 M i disse eksperimentene. Disse resultater demonstrerer at D2E7 human-anti-hTNFa-antistoff hemmer rhTNFa-binding til hTNFa-reseptorer på U-937-celler i konsentrasjoner omtrent ekvivalente med de til murint anti-hTNFa mAb MAK 195.
Ved en annen serie av eksperimenter ble evnen til lgG1-formen av D2E7 til å hemme rhTNFa-binding til hTNFa-reseptorer på U-937-celler undersøkt som beskrevet ovenfor. Resultatene f ra tre uavhengige eksperimenter og gjennomsnittet derav, er oppsummert nedenfor i Tabell 9:
Denne serie åv eksperimenter bekreftet at D2E7, i full-lengde IjgGI-forrri, hemmer TNF-reseptor-binding på U-937-celler med en gjennomsnittlig IC50 [M] på 1,56 ±0,12 x IO-™. - For å undersøke den hemmende kapasiteten til D2E7 for binding av<1>25|-rhTNF som binder til individuelle p55-og p75^reseptorer, ble et fast fase radioimmunoforsøk utført. For å måle ICso-verdiene for D2E7 for separate TNF-reseptorer ble varierende konsentrasjoner av antistoffet inkubert med 3 x 10~1Q konsentrasjon av <125>l-rhTNF. Blandingen ble deretter testet på separate plater inneholdende enten p55- eller p75-TNF-reseptorer på en doseavhengig måte. Resultatene er oppsummert nedenfor i Tabell 10:
Hemning av 125l-rhTNF-binding til p55- og p75-TNF-reseptorer på U937-celler av D2E7 fulgte en enkel S-formet kurve, hvilket indikerer lignende ICso-verdier for hver reseptor. I fast-fase radioimmunoforsøks- (RIA) eksperimenter med rekombinante TNF-reseptorer, ble ICso-verdier for hemning av <125>l-rhTNF-binding til p55- og p75-reseptorer av D2E7, beregnet som henholdsvis 1,47 x 10"<9 >og 1,26 x 10"<9> M. Reduksjonen av ICso-verdier i den faste fasen var sannsynligvis på grunn av høyere densitet av reseptorer i RIA-formatet, ettersom umerket rhTNF også hemmet med lignende ICso-verdier. ICso-verdiene for hemning av 125l-rhTNF-binding til p55-.og p7.5-reseptorer av umerket rhTNF var henholdsvis 2,31 x 10"<9> og 2,70 x 10"9 M.
C. Hemning av ELAM- 1- ekspresjon på HUVEC
Human-navlevene-endotelceller (HUVEC) kan fås til å uttrykke
endotelcelle-leukocytt-adhesjonsmolekyl 1 (ELAM-1) på deres celleoverflate ved . behandling med rhTNFa, hvilket kan detekteres ved å reagere rhTNFa-beh<a>ndlet HUVEC med et mus-anti-human-ELAM-1 -antistoff. Evnen til human-anti-hTNFa-antistoffer til å hemme denne TNFa-frémkalte ekspresjon av ELAM-1 på HUVEC
ble undersøkt som følger: HUVEC (ATCC Nr. CRL 1730) ble platet ut i 96-brønn-
plater (5 x 10<4> celler/brønn) og inkubert natten over ved 37 °C. Den følgende dag ble seriefortynninger av human-anti-hTNFa-antistoff (1:10) fremstilt i én mikrotiterplate, ved å starte med 20-100 ug/ml antistoff. En lagerløsning av rhTNFa ble fremstilt med 4,5 ng/ml, aliquoter av rhTNFa ble satt til hver antistoff-inneholdende brønn, og innholdet ble godt blandet. Kontroller omfattet medium alene, medium pluss anti-hTNFa-antistoff og medium pluss rhTNFa. HUVEC-
platene ble fjernet fra inkuberingen natten over ved 37° C, og mediet ble forsiktig aspirert frå hver brønn. To hundre mikroliter av antistoff-rhTNFa-blandingen ble overført til hver brønn i HUVEC-platene. HUVEC-platene bie deretter videre ... inkubert ved 37° C i 4 timer. Deretter ble et murint anti-ELAM-1-antistoff-lager fortynnet 1:1000 i RPMI. Mediet i hver brønn av HUVEC-platen ble forsiktig aspirert, 50 uJ/brønn av anti-ELAM-1-antistoffløsning ble tilsatt og HUVEC-platene ble inkubert 60 minutter ved romtemperatur. En 125|-merket anti-mus-lg-
antistoffløsning ble fremstilt i RPMI (omtrent 50,000 cpm i 50 uJ). Mediet i hver brønn av HUVEC-platene ble forsiktig aspirert, brønnene ble vasket to ganger
med RPMI og 50 jil av 125|-merket anti-mus-lg-løsning ble satt til hver brønn.
Platene ble inkubert i én time ved romtemperatur og deretter ble hver brønn vasket tre ganger med RPMI. 180 mikroliter 5% SDS ble satt til hver brønn for å
lyse cellene. Céllelysatet fra hver brønn ble deretter overført til et rør og tellet i én scintillasjonsteller.
Representative resultater er vist i Figur 5. ICso-vérdien for D2E7-hemning av hTNFa-fremkalt ekspresjon av ELAM-1 på HUVEC er omtrent 6 x 10"<11> M i disse eksperimenter. Disse resultater demonstrerer at D2E7 human-anti-hTNFa-antistoff hemmer hTNFa-fremkalt ekspresjon av ELAM-1 på HUVEC i konsentrasjoner omtrent ekvivalente med de til murint anti-hTNFa mAb MAK 195.
Ved en annen serie av eksperimenter ble evnen til lgG1 -formen av D2E7 til
å hemme hTNFa-fremkalt ekspresjon av ELAM-1 på HUVEC undersøkt som beskrevet ovenfor. Resultatene fra tre uavhengige eksperimenter og gjennomsnittet derav, er oppsummert nedenfor i Tabell 11:
Denne serien av eksperimenter bekreftet at D2E7, i full-lengde lgG1 -form, hemmer TNFa-fremkalt ELAM-1 -ekspresjon på HUVEC med en gjennomsnittlig IC50 [M] på 1,85 ± 0,14 x 10"10.
Nøytraliseringskapasiteten av D2E7-lgG1 ble også undersøkt for rhTNF-
f remkalt ekspresjon av to andre adhesjonsmolekyler, ICAM-1 og VCAM-1.
Ettersom rhTNF-titreringskurven for ICAM-1 -ekspresjon etter 16 timer var meget lignende kurven for ELAM-1 -ekspresjon, ble samme konsentrasjon av rhTNF
anvendt i antistoff-nøytraliseringseksperimenter. HUVEC ble inkubert med rhTNF i nærvær av varierende konsentrasjoner av D2E7 i en 37°C C02-inkubator i 16
timer og ICAM-1 -ekspresjon ble målt ved mus-anti-ICAM-1 -antistoff fulgt av <1>25I-merket sau-anti-mus-antistoff. To uavhengige eksperimenter ble utført <p>g ICso-verdier ble beregnet. Et ubeslektet human-lgG1 -antistoff hemmet ikke ICAM-1-ekspresjon.
Den eksperimentelle metoden for å teste hemning av VCAM-1-ekspresjon
var den samme som metoden for ELAM-1-ekspresjon, bortsett fra at anti-VCAM-1
MAb ble anvendt istedenfor anti-ELAM-1 MAb. Tre uavhengige eksperimenter ble utført og ICso-verdier ble beregnet. Et ubeslektet human-lgG1-antistoff hemmet ikke VCAM-1-ekspresjon.
Resultatene er oppsummert nedenfor i Tabell 12:
Disse eksperimenter demonstrerte at behandling av primære human-navlevene-endoteiceller med rhTNF fører til optimal ekspresjon åv adhesjonsmolekyler: ELAM-1 og VCAM-1 etter fire timer og maksimum opp-regulert ekspresjon av ICAM-1 etter 16 timer. D2E7 var i stand til å hemme ekspresjon av de tre adhesjonsmolekyler på en doseavhengig måte. ICso-verdiene for hemning av ELAM-1, ICAM-1 og VCAM-1 var henholdsvis 1,85 x 10"10, 2,17 x 10"10 og
1,01 x 10"<10> M. Disse verdier er meget like, hvilket indikerer lignende krav til dose av rhTNF-aktiveringssignal for å fremkalle ELAM-1 -, ICAM-1 - og VCÅM-1 - ekspresjon. Interessant var D2E7 tilsvarende effektivt i det lenger inhibérings-forsøk for ICAM-1-ekspresjon. ICAM-1-inhiberingsforsøk krevet 16 timer saminkubering av rhTNF og D2E7 med HUVEC i motsetning til 4 timer som Var nødvendig for ELAM-1- og VCAM-1-inhiberingsforsøkene. Ettersom D2E7 haren langsom frigjøringshastighet for rhTNF, antas det at under den 16 timer lange sam-inkuberingsperioden var det ingen konkurranse av betydning av TNF-reseptorer på HUVEC.
D. In vivo nøytralisering av hTNFa
Tre forskjellige in wVo-systemer ble anvendt for å demonstrere at D2E7 er effektiv for hemning av hTNFa-aktivitet in vivo.
I. Hemning av TNF- fremkalt- dødeliahet hos D- aalaktosamin- sensibiliserte
mus
Injeksjon av rekombinant human TNFa (rhTNFa) til D-galaktosamin-
sensibiliserte mus forårsaker død innenfor en periode på 24 timer. TNFa-nøytraliserende midler er vist å forhindre dødelighet ved denne modellen. For å undersøke evnen til human-anti-hTNFa-antistoffer til å nøytralisere hTNFa in vivo i denne modellen, ble C57BI/6 mus injisert med varierende konsentrasjoner av D2E7-lgG1 eller et kontroll-protein, i PBS intraperitonealt (i.p.). Musene ble utfordret 30 minutter senere med 1 ug rhTNFa og 20 mg D-galaktosamin i PBS i.p. og observert 24 timer senere. Disse mengder av rhTNFa og D-galaktosamin var tidligere funnet å gi 80-90% dødelighet i disse musene.
Representative resultater, angitt som et stolpediagram av % overlevelse
mot antistoff-konsentrasjon, er vist i Figur 6. De sorte stolpene representerer D2E7, mens de skraverte stolpene representerer MAK 195. Injeksjon av 2,5-25
ug D2E7 antistoff pr. mus beskyttet dyrene fra TNFa-fremkalt død. EDsQ-verdien er omtrent 1-2,5 ug/mus. Det positive kontroll-antistoff, MAK 195, hadde tilsvarende beskyttelsesevne. Injeksjon av D2E7 i fravær av rhTNFa hadde ikke noen skadelig virkning på musene. Injeksjon avet ikke-spesifikt human-lgGI-
antistoff ga ikke noen beskyttelse mot TNFa-fremkalt dødelighet.
Ved et andre eksperiment bie 49 mus delt inn i 7 like grupper. Hver gruppe
mottok varierende doser av D2E7 30 minutter før de fikk en LDøo-dose av en rhTNF/D-galaktosamin-blanding (1,0 mg rhTNF og 20 mg D-galaktosamin pr.
mus. Kontroll-gruppe 7 fikk normalt human-lgG1 -kappa-antistoff i en 25 ug/mus dose. MUsene ble undersøkt 24 timer senere. Overlevelse for hver gruppe er oppsummert nedenfor i Tabell 13.
II. Hemning av TNF- fremkalt kanin- pvrexi
Effektiviteten av D2E7 til å hemme rtiTNF-fremkalt pyrexirespons hos kaniner ble undersøkt. Grupper på tre NZW-hunnkaniner som veide omtrent 2,5 kg hver ble injisert intravenøst med D2E7, rhTNF og immunkomplekser av D2E7
og rhTNF. Rektale temperaturer ble målt med termistor-sonder på en Kaye varme-registrator hvert minutt i omtrent 4 timer. Rekombinant human-TNF i saltvann, injisert med 5 ug/kg, frembragte en temperaturøkning over 0,4°C omtrent 45 minutter etter injeksjonen. Antistoffpreparatet selv, i saltvann i en dose på 138 ug/kg, frembragte ikke en temperaturøkning hos kaninene opptil 140 minutter etter administrering. Ved alle andre eksperimenter ble D2E7 eller kontrollreagenser (human lgG1 eller en saltvann-bærer) injisert i.v. i kaninene, 15 minutter senere fulgt av en injeksjon av rhTNF i saltvann med 5 ug/kg i.v. Representative resultater fra flere eksperimenter er oppsummert nedenfor i Tabell 14:
<*>=Topp-temperatur
**=% inhibering=(1 -{temperaturstigning med rhTNF & D2E7/températurstigning med rhTNF alene}) x 100.
Intravenøs forbehandling med D2E7 i eh dose på 14 ug/kg hemmet delvis den pyrogene respons, sammenlignet med kaniner forbehandlet med saltvann alene. D2E7 administrert med 137 ug/kg undertrykket fullstendig den pyrogene respons på rhTNF i samme eksperiment. Ved et andre eksperiment undertrykket D2E7 administrert med 24 ug/kg også delvis den pyrogene respons, sammenlignet med kaniner forbehandlet med saltvann alene. Molforholdet av D2E7 til rhTNF var 1/6:1 i dette eksperiment. Ved et tredje eksperiment undertrykket D2E7 injisert i.v. med 48 ug/kg (moMorhold D2E7:rtiTNF = 3,3:1) fullstendig den pyrogene respons, sammenlignet med kaniner forbehandlet med kontroll-human lgG1 i saltvann med 30 ug/kg. I det endelige eksperiment, utviklet kaniner forbehandlet med D2E7 (792 ug/kg) i et meget høyt mofforhold til rhTNF (55:1) ikke noen temperaturstigning på noe tidspunkt innenfor 4 timers observasjon. Behandling av kaniner med immunkomplekser dannet fra en blanding av D2E7 og rhTNF inkubert ved 37°C i 1 time med et molforhold på 55:1, uten påfølgende itiTNF-administrering frembragte heller ingen temperaturstigning ved det samme eksperiment.
III. Forhindring av polvartirtt i Ta197 transgene mus
Virkningen av D2E7 på sykdomsutvikling ble undersøkt i en transgen murin modell av artritt. Transgene mus (Tg 197) er frembragt som uttrykker human villtype TNF (modifisert i 3'-regionen etter de kodende sekvenser) og disse mus
utvikler kronisk polyartritt med 100% forekomst, 4-7 uker gamle (se EMBQ J
(1991) 10:4025-4031 for ytterligere beskrivelse av Tg197-modellen av polyartritt).
Transgene dyr ble identifisert med PCR da de var 3 dager gamle. Kuli med transgene mus ble delt inn i seks grupper. Transgene mus ble verifisert ved "slot-blot" hybridiseringsanalyse da de var 15 dager gamle. Behandlingsprotokollene for de seks grupper var som følger Gruppe 1= ingen behandling; Gruppe 2=saltvann (bærer); Gruppe 3=D2E7 med 1,5 ug/g; Gruppe 4=D2E7 med 15 ug/g; Gruppe 5=D2E7 med 30 ug/g; og Gruppe 6=lgG1-isotype-kontroll med 30 ug/g.
Et kull med ikke-transgene mus ble også inkludert i undersøkelsen for å tjene som kontroll (Gruppe 7 - ikke-transgene; ingen behandling). Hver gruppe mottok tre i.p. injeksjoner pr. uke av de angitte behandlinger. Injeksjonene ble fortsatt i 10 uker. Hver uke ble makroskopiske endringer i ledd-morfologi registrert for hvert dyr. Etter 10 uker ble alle musene avlivet og muse-vev ble oppsamlet i formalin.
Mikroskopisk undersøkelse åv vevet ble Utført.
DyreVekt i gram ble notert for hver mus ved begynnelsen av hver uke. På samme tid ble målinger av leddstørrelse (i mm) også registrert, som en måling av alvorlighetsgraden av sykdommen. Leddstørrelsen ble bestemt som et gjennom-snitt av tre målinger av høyre bakankel ved anvendelse av en mikrometer-anordning. Artrittisk score ble registrert hver uke som følgen 0 = Ingen artritt, (normalt utseende og fleksjon); + = mild artritt (ledd-distorsjon); -h- = moderat artritt (hevelse, ledd-deformasjon) og +++ = sterk artritt (ankylose detektert på fleksjon og alvorlig svekket bevegelse). Histopatologisk scoring basert på hematoksylin/eosinmerking av leddseksjoner var basert som følger; 0 = ingen detekterbar sykdom; 1 = proliferasjon av synovial-membranen; 2 = sterk synovial-fortykning 3 = brusk-destruksjon og ben-erosjon.
Virkningen av D2E7-behandling på den gjennomsnittlige leddstørrelsen
hos Tg 197 transgene artrittiske mus er vist i kurven på Figur 9. Histopatologisk og artrittisk scoring for Tg 197 transgene mus, 11 uker gamle, er oppsummert nedenfor i Tabell 15:
Dette eksperimentet demonstrerte at D2E7-antistoffet har en klar gunstig
effekt på transgene mus som uttrykker villtype human TNF (Tg197) uten noen
påvist artritt etter undersøkelsesperioden.
E. D2E7- nøvtraliserina av TNFa fra andre arter
Bindingsspesifisitet til D2E7 ble undersøkt ved å måle dets evne til å
nøytralisere tumomekrosefaktorer fra forskjellige primat-arter og fra mus, ved anvendelse av et L929-cytotoksisitetsforsøk (som beskrevet i. Eksempel 4,
underavsnitt A, ovenfor). Resultatene er oppsummert i Tabell 16 nedenfor:
Resultatene i Tabell 16 demonstrerer at D2E7 kan nøytralisere aktiviteten til fem primat-TNFa omtrent ekvivalent med human TNFa og, videre, kan nøytralisere aktiviteten til kanint TNFa (omtrent ti-ganger mindre bra enn human-TNFa) og porcint og murint TNFa (omtrent -1000-ganger mindre bra enn human-TNFa). Videre ble binding av D2E7 til løsningsfase rhTNFa ikke hemmet av
andre cytokiner, så som lymfotoksin (TNFB), IL-1 a, IL-1B, IL-2, IL-4, IL-6, IL-8,
IFNy og TGFB, hvilket indikerer at D2E7 er meget spesifikk for dens ligand TNFa.
F. Mangel på cvtokin- frigjørina av menneske- fullblod inkubert med D2E7
I dette eksemplet ble evnen til D2E7 til selv å bevirke at normale human-blodceller utskiller cytokiner eller sprer celleoverflate-molekyler undersøkt. D2E7
ble inkubert med fortynnet fullblod fra tre forskjellige normale donorer i varierende konsentrasjoner i 24 timer: En LPS-posrtiv kontroll ble kjørt samtidig, i en konsentrasjon som tidligere var funnet å stimulere immunokompetente blodceller til å utskille cytokiner. Supematantene ble høstet og testet i et panel på ti oppløselige cytokin-, reseptor- og adhesjonsmolekyl-ELISA-sett: IL-1 a, IL-1 B, IL-1 reseptor-antagonist, IL-6, IL-8, TNFa, oppløselig TNF-reseptor I, oppløselig TNF
reseptor II, oppløselig ICAM-1 og oppløselig E-selektin. Ingen betydelige mengder av cytokiner eller spredde celleoverflate-molekyler ble målt som et resultat av D2E7-antistoff saminkubering, ved konsentrasjoner opptil 343 ug/ml. Kontroll-kulturer uten tilsetning av antistoffet ga heller ikke noen målbare mengder
av cytokiner, mens LPS samkulturkontrollen ga forhøyede verdier i området høy pikogram til lav nanogram. Disse resultater indikerer at D2E7 ikke får fullblodceller til å skille ut cytokiner eller spre celleoverflateproteiner over normale nivåer i ex wVokulturer.
Den følgende sekvensliste utgjør del av foreliggende beskrivelse, og innholdet er oppsummert i tabellen nedenfor.

Claims (46)

1. Farmasøytisk blanding, karakterisert ved at dén omfatter en biokompatibel polymer og et isolert human antistoff, eller en antigen-bindingsdel derav, som dissosierer fra human TNFa med en Kd på 1 x 10"<8> M eller mindre og en Koff hastighetskonstant på 1 x 10"<3> s_<1> eller mindre, begge bestemt ved overflate-plasmon-resonans og nøytraliserer human TNFa cytotoksisitet i en standard in vitro L929-testanalyse med en IC50 på 1 x 10"<7> M eller mindre.
2. Farmasøytisk blanding omfattende en biokompatibel polymer og et isolert human antistoff, eller antigen-bindingsdel derav, karakterisert ved at: a) det dissosierer fra human TNFa med en Koff hastighetskonstant på IxlO"<3> s"<1> eller mindre, som bestemt ved overflate plasmon resonansanalayse; b) har et lettkjede CDR3-domene omfattende aminosyresekvensen til SEKV ID NR: 3, eller modifisert fra SEKV ID NR: 3 ved en enkelt alaninsubstitusjon ved stilling 1,4, 5, 7 eller 8 eller ved en til fem konservative aminosyresubstitusjoner i stillingene 1,3,4,6,7, 8 og/eller 9; c) har et tungkjede CDR3-domene omfattende aminosyresekvensen til SEKV ID NR: 4, eller modifisert fra SEKV ID NR: 4 ved en enkelt alaninsubstitusjon i stillingene 2,3,4,5,6, 8,9,10 eller 11 eller ved en til fem konservative aminosyresubstitusjoner i stillingene 2,3,4,5,6,8, 9,10, 11 og/eller 12. a.
Farmasøytisk blanding, karakterisert ved at den omfatteren biokompatibel polymer og et isolert human antistoff, eller en antigen-bindingsdel derav, med en lettkjede variabel region (LCVR) omfattende aminosyresekvensen til SEKV ID NR: 1 og tungkjede variabel region (HCVR) omfattende aminosyresekvensen av SEKV ID NR: 2.
4. Farmasøytisk blanding, karakterisert ved at den omfatteren biokompatibel polymer og et D2E7-antistoff, eller en antigen-bindende del derav.
5. Farmasøytisk blanding ifølge et hvilket som helst av kravene 1 -4, karakterisert ved at den biokompatible polymeren er valgt fra gruppen bestående av etylenvinylacetat, polyanhydrider, polyglykolsyre, kollagen, polyortoestere, og polymelkesyre.
6. Farmasøytisk blanding ifølge et hvilket som helst av kravene 1-4, karakterisert ved at den biokompatible polymeren er biodegraderbar.
7. Farmasøytisk blanding, karakterisert ved at den omfatter et absorpsjonsforsinkende middel og et isolert human antistoff, eller en antigen-bindingsdel derav, som dissosierer fra human TNFa med en Ku på 1 x 10"<8> M eller mindre, og en Korhastighetskonstant på 1 x 10"<3> s'<1> eller mindre, begge bestemt ved overflate-plasmon resonans og nøytraliserer human TNFa-cytotoksisitet i en standard in wYro-L929-testanalyse med en ICsopå 1 x 10"<7> M eller mindre.
8. Farmasøytisk blanding omfattende et absorpsjonsforsinkende middel og et isolert human antistoff, eller antigen-bindingsdel derav, karakterisert ved at: a) det dissosierer fra human TNFa med en Koff hastighetskonstant på 1x10'<3> s'<1> eller mindre, som bestemt ved overflate plasmon resonansanalayse; b) har et lettkjede CDR3-domene omfattende aminosyresekvensen til SEKV ID NR: 3, eller modifisert fra SEKV ID NR: 3 ved en enkelt alaninsubstitusjon ved stilling 1,4, 5, 7 eller 8 eller ved en til fem konservative aminosyresubstitusjoner i stillingene 1,3,4, 6, 7, 8 og/eller 9; c) har et tungkjede CDR3-domene omfattende aminosyresekvensen til SEKV ID NR: 4, eller modifisert fra SEKV ID NR: 4 ved en enkelt alaninsubstitusjon i stillingene 2,3,4,5,6,8,9,10 eller 11 eller ved en til fem konservative aminosyresubstitusjoner i stillingene 2,3,4, 5, 6, 8, 9,10,11 og/eller 12.
9. Farmasøytisk blanding, karakterisert ved at den omfatter et absorpsjonsforsinkende middel og et isolert human antistoff, eller en antigen-bindingsdel derav, med en lettkjede variabel region (LCVR) omfattende aminosyresekvensen til SEKV ID NR: 1 og tungkjede variabel region (HCVR) omfattende aminosyresekvensen av SEKV ID NR: 2.
10. Farmasøytisk blanding, karakterisert ved at den omfatter et absorpsjonsforsinkende middel og et D2E7-antistoff, eller en antigen-bindende del derav.
11. Farmasøytisk blanding, karakterisert ved at den omfatter en bærer som forhindrer hurtig frigjøring og et isolert human antistoff, eller en antigen-bindingsdel derav, som dissosierer fra human TNFa med en Kd på 1 x 10"<8> M eller mindre, og en Korhastighetskonstant på 1 x 10"<3> s'<1> eller mindre, begge bestemt ved overflate-plasmonresonans og nøytraliserer human TNFa-cytotoksisitet i en standard in wfro-L929-testanalysé med en ICsopå 1 x 10'<7> M eller mindre.
12. Farmasøytisk blanding omfattende en bærer som forhindrer hurtig firgjøring og et isolert human antistoff, eller antigen-bindingsdel derav, karakterisert ved at: a) det dissosierer fra human TNFa med en Kott hastighetskonstant på IxlO"3 s'1 eller mindre som bestemt ved overflate plasmon resonansanalayse; b) har et lettkjede CDR3-domene omfattende aminosyresekvensen til SEKV ID NR: 3, eller modifisert fra SEKV ID NR: 3 ved en enkelt alaninsubstitusjon ved stilling 1,4, 5,7 eller 8 eller ved en til fem konservative aminosyresubstitusjoner i stillingene 1, 3,4,6, 7,8 og/eller 9; c) har et tungkjede CDR3-domene omfattende aminosyresekvensen til SEKV ID NR: 4, eller modifisert fra SEKV ID NR: 4 ved en enkelt alaninsubstitusjon i stillingene 2, 3,4,5,6, 8,9,10 eller 11 eller ved én til fem konservative aminosyresubstitusjoner i stillingene 2,3,4,5,6,8,9,10,11 og/eller 12.
13. Farmasøytisk blanding, karakterisert v edat den omfatter en bærer som forhindrer hurtig frigjøring og et isolert human antistoff, eller en antigen-bindingsdel derav med en lettkjede variabel region (LCVR) omfattende aminosyresekvensen til SEKV ID NR: 1 og tungkjede variabel region (HCVR) omfattende aminosyresekvensen av SEKV ID NR: 2.
14. Farmasøytisk blanding, karakterisert ved at den omfatter en bærer som forhindrer hurtig frigjøring og et D2E7-antistoff, eller en antigen-bindende del derav.
15. Farmasøytisk blanding ifølge ét hvilket som helst av kravene 1-4, karakterisert ved at den ytterligere omfatter i det minste ett ytterligere terapeutisk middel.
16. Farmasøytisk blanding ifølge krav 15, hvor det ytterligere terapeutiske middelet er valgt fra gruppen bestående av ikke steroide anti-inflammatoriske legemidler, cytokiri suppressive anti-inflammatoriske legemidler, CDP-571/BAY-10-3356, cA2, 75 kdTNFR-IgG, 55 kdTNFR-IgG, IDEC-CE9.1/SB 210396, DAB 486-IL-2, DAB 389-IL-2, Anti-Tac, IL-4, IL-10, IL-4-agonister, IL-10-agonister, IL-1 RA, TNF-bp/s-TNFR, S284, R973401, MK-966, lloprost, metotreksat, thalidomid, thalidomid-relaterte legemidler, leflunomid, traneksaminsyre, T-6.14, prostaglandin E1, Tenidap, Naproxen, Meloxicam, Piroxicam, Diclofenac, jndomethåcin, Sulfasala-zine, Azathioprince, ICE-inhibitorer, zap-70-inhibitorer, Ick-inhibitorer, VEGF-inhibitorer, VEGF-R-inhibitorer, kortikosteroider, TNF-konvertaseinhibitorer, anti-IL-12-antistoffer, interleukin-11, interleukin-13, interleukin-17-inhibitorer, gull, penicillamin, klorokin, hydroksyklorokin, klorambucil.cyklofosfamid, cyklosporin, anti-tymocyttglobulin, anti-CD4-antistoffer, CD5-toksiner, oralt administrerte peptider, kollagen, lobenzaritt-disodium, cytokinregulerende midler HP228 og HP466, ICAM-1-antisens-fosforotioat-oligodeoksynukleotider, løselig komplement-reseptor 1, predinson, orgotein, glykosaminoglykan-polysulfat, minoc<y>klin, anti-IL2R-antistoffer, marine lipider, botaniske lipider, auranofin, fenylbutazon, meklofenaminsyre, flufenaminsyre, intravenøs immunglobulin, zileuton, mykofenolsyre, takrolimus, sirolimus, amiprilose, kladribin, azabrin, budenosid, epidermal vekstfaktor, aminosalicylater, 6-merkaptopurin, metronidazol, lipoksy-genaseinhibitorer, mesalamin, olsalazin, balsalazid, antioksidanter, tromboksan-inhibitorer, IL-1 -reseptorantagonister, ariti-IL-1 B-monoklonale antistoffer, anti-IL-6-monoklonale antistoffer, vekstfaktorer, elastaseinhibitorer, pyridinyl-imidazol-forbindelser, glukuronid-konjugerte prolegemidler av prednisolon, deksametason eller budesonid, dekstran-konjugerte prolegemidler av prednisolon, deksametason eller budesonid, løselig komplementreseptor 1, langsom-firgjørende mesalazin, antagonister av plateaktiverende faktor (PAF), ciprofloksacin, lignokain, prednisolon, metylprednisolon, cyklofosfamin, 4-aminopyridin, tizanidin, interferon-B1a, interferon-B.1 b, kopolymer 1, hyperbarisk oksygen, intravenøs immunglobulin, klabribin, hypertoniske sattløsninger, antibiotika, kontinuerlig hemofiltrering, karbapenemer, antagonister av cytokiner slik som TNFa, IL-16, IL-6 og/eller IL-8, SK&F 107647, tetravalent guanylhydrazon CNI-1493, vevsfaktor-reaksjonsveiinhibitor, PHP, jem-chelatorer og chelater, inkludert dietylentriaminpentaeddiksyre-jem(lll)kompleks, lisdfyllin, PGG-glukan, apolipo- protein A-1 rekonstituert med lipider, kirale hydroksaminsyrer, anti-endotoksinanti-stoffer, E5531, rBPI21l syntetiske anti-endotoksinpeptjder, overflate-erstatningste- rapi og anti-IL-8-antistoffer.
17. Anvendelse av en farmasøytisk blanding ifølge et hvilket som helst av kravene 1-4, i fremstilling av et medikament for behandling av én lidelse i hvilken TNFa er skadelig.
18. Anvendelse ifølge krav 17, i hvilken lidelsen er en autoimmun sykdom.
19. Anvendelse ifølge krav 18, hvor den autoimmune sykdommen er valgt fra gruppen reumatoid artritt, reumatoid spondylitt, osteoartritt og giktartritt.
20. Anvendelse ifølge krav 18, hvor den autoimmune lidelsen er valgt fra gruppen bestående av allergi, multippel sklerose, autoimmun diabetes, autoimmun uveitt og nefrotisk syndrom,
21. Anvendelse ifølge krav 17, hvor lidelsen er valgt fra gruppen bestående av en infeksiøs sykdom, intestinal lidelse, transplantat-awisning eller transplarttat-mot-vert-sykdom, en ondartet sykdom, en pulmonal lidelse eller en hjertelidelse.
22. Anvendelse ifølge krav 17, hvor lidelsen er sepsis.
23. Anvendelse ifølge krav 22, hvor blandingen blir administrert til et menneskeindivid sammen med cytokinet interleukin-6 (IL-6) eller blir administrert til et menneskeindivid med en serum- eller plasma-konsentrasjon av IL-6 over 500 pg/ml.
24. Anvendelse ifølge krav 17, hvor lidelsen er valgt fra gruppen bestående av inflammatoriske ben-lidelser, ben-resorpsjonssykdom, alkoholisk hepatitt, viral hepatitt, fulminant hepatitt, koaguleringsforstyrrelser, brannsår, reperfusjonsskade, keloid-dannelse, arrvevsdannelse, pyrexi, tannsykdom, fedme og strålingsgiftighet.
25. Anvendelse ifølge krav 17, hvor forstyrrelsen er valgt fra gruppen bestående av septisk sjokk, endotoksisk sjokk, gramnegativ sepsis, toksisk sjokksyndrom, malaria, meningitt, kachexi, AIDS, bakteriell meningitt og AIDS-relatert kompleks (ARC).
26. Anvendelse ifølge krav 17, hvor forstyrrelsen er valgt fra gruppen bestående av cytomegalovirus infeksjon sekundær til transplantasjon, feber og myalgier forårsaket av infeksjon og kachexi sekundær til infeksjon og allotransplantat-awisning.
27. Anvendelse ifølge krav 17, hvor forstyrrelsen er valgt fra gruppen bestående av stimulering av tumorvekst, forsterke det metastatiske potensiale og mediering av cytotoksisitet i malignfteter og inhibering av tumorvekst eller metastaser.
28. Anvendelse ifølge krav 17, hvor forstyrrelsen er valgt fra gruppen bestående av voksen respiratorisk nødsyndrom, sjokklunge, kronisk pulmonal inflammatorisk sykdom, pulmonal sarkoidose, pulmonær fibrose og silikose.
29. Anvendelse ifølge krav 17, hvor forstyrrelsen er valgt fra gruppen bestående av inflammatorisk tarmsykdom, idiopatisk inflammatorisk tarmsykdom, Chrons sykdom og ulcerøs kolitt.
30. Anvendelse ifølge krav 17, hvor forstyrrelsen er valgt fra gruppen bestående av ischemi i hjerte, hjerte-insuffisiens og hepatitt.
31. Anvendelse ifølge et hvilket som helst av kravene 17-30, i kombinasjon med i det minste ett ytterligere terapeutisk middel.
32. Farmasøytisk blanding ifølge krav 31, hvor det ytterligere terapeutiske middelet er valgt fra gruppen bestående av ikke steroide anti-inflammatoriske legemidler, cytokin suppressive anti-inflammatoriske legemidler, CDP-571/BAY-10-3356, cA2, 75 kdTNFR-IgG, 55 kdTNFR-IgG, IDEC-CE9.1/SB 210396, DAB 486-IL-2, DAB 389-IL-2, Anti-Tac, IL-4, IL-10, IL-4-agonister, IL-10-agonister, IL-1 RA, TNF-bp/s-TNFR, S284, R973401, MK-966, lloprost, metotreksat, thalidomid, thalidomid-relatetre legemidler, leflunomid, traneksaminsyre, T-614, prostaglandin El, Tenidap, Naproxen, Meloxicam, Piroxicam, Diclofenac, Indomethacin, Sulfasala-zine, Azathioprince, ICE-inhibitorer, zap-70-inhibitorer, Ick-inhibitorer, VEGF-inhibitorer, VEGF-R-inhibitorer, kortikosteroider, TNF-konvertaseinhibitorer, anti-IL-12-antistoffer, <i>nterleukin-11, interleukin-13, interleukin-17-inhib'rtorer, gull, penicillamin, klorokin, hydroksyklorokin, klorambucil.cyklofosfamid, cyklosporin, anti-tymocyttglobulin, anti-CD4-antistoffer, CD5-toksiner, <p>ralt administrerte peptider, kollagen, lobenzaritt-disodium, cytokinregulerende midler HP228 og HP466, ICAM-1-antisens-fosforotioat-oligodeoksynukleotider, løselig komplement-reseptor 1, predinson, orgotein, glykosaminoglykan-polysulfat, minocyklin, anti-IL2R-antistoffer, marine lipider, botaniske lipider, auranofin, fenylbutazon, meklofenaminsyre, flufenaminsyre, intravenøs immunglobulin, zileuton, mykofenolsyre, takrolimus, sirolimus, amiprilose, kladribin, azabrin, budenosid, epidermal vekstfaktor, aminosalicylater, 6-merkaptopurin, metronidazol, lipoksy-genaseinhibitorer, mesalamin, olsalazin, balsalazid, antioksidanter, tromboksan-inhibitorer, IL-1-reseptorantagonister, anti-IL-18-monoklonale antistoffer, anti-IL-6-monoklonale antistoffer, vekstfaktorer, elastaseinhibitorer, pyridinyl-imidazol-forbindelser, glukuronid-konjugerte prolegemidler av prednisolon, deksametason eller budesonid, dekstran-kbnjugerte prolegemidler av prednisolon, deksametason eller budesonid, løselig komplementreseptor 1, langsom-frigjørende mesalazin, antagonister av plateaktiverende faktor (PAF), ciprofloksacin, lignokain, prednisolon, metylprednisolon, cyklofosfamin, 4-aminopyridin, tizanidin, interferon-B1 a, interferon-B1 b, kopolymer 1, hyperbarisk oksygen, intravenøs immunglobulin, klabribin, hypertoniske saltløsninger, antibiotika, kontinuerlig hemofiltrering, karbapenemer, antagonister av cytokiner slik som TNFa, IL-1B, IL-6 og/eller IL-8, SK&F 107647, tetravalent guanylhydrazon CNI-1493, vevsfaktor-reaksjonsveiinhibitor, PHP, jem-chelatorer og chelater, inkludert dietylentriaminpentaeddiksyre-jem(lll)kompleks, lisofyllin, PGG-glukan, apolipo-protein A-1 rekonstituert med lipider, kirale hydroksaminsyrer, anti-endotoksinanti-stoffer, E5531, rBPI2i, syntetiske anti-endotoksinpeptider, overflåte-érstatningste-rapi og anti-IL-8-antistoffer.
33. Blanding, karakterisert ved at den omfatter en biokompatibel polymer og et isolert human antistoff, eller en antigen-bindingsdel derav, som dissosierer fra human TNFa med en Kd på 1 x 10"<8> M eller mindre, og en Kor hastighetskonstant på 1 x 10'<3> s"<1> eller mindre, begge bestemt ved overflate-plasmonresonans og nøytraliserer human TNFa-cytotoksisitet i en standard in wfrø-L929-testanalyse med en ICsopå 1 x 10"<7> M eller mindre.
34. Blanding omfattende en biokompatibel polymer og et isolert human antistoff, eller antigen-bindingsdel derav, karakterisert ved at: a) det dissosierer fra human TNFa med én Kon hastighetskonstant på IxlO"<3> s'<1> eller mindre, som bestemt ved overflate plasmon resonansanalayse; b) har et lettkjede CDR3-domene omfattende aminosyresekvensen til SEKV ID NR: 3, eller modifisert fra SEKV ID NR: 3 ved en enkelt alaninsubstitusjon ved stilling 1,4,5, 7 eller 8 eller ved en til fem konservative aminosyresubstitusjoner i stillingene 1,3,4, 6, 7,8 og/eller 9; c) har et tungkjede CDR3-domene omfattende aminosyresekvensen til SEKV ID NR: 4, eller modifisert fra SEKV ID NR: 4 ved en enkelt alaninsubstitusjon i stillingene 2, 3,4,5, 6, 8,9,10 eller 11 eller ved en til fem konservative aminosyresubstitusjoner i stillingene 2,3,4,5,6,8,9,10, 11 og/eller 12.
35. Blanding, karakterisert ved at den omfatter en biokompatibel polymer og et isolert human antistoff, eller en antigen-bindingsdel derav med en lettkjede variabel region (LCVR) omfattende aminosyresekvensen til SEKV ID NR: 1 og tungkjede variabel region (HCVR) omfattende aminosyresekvensen av SEKV ID NR: 2.
36. Blanding, karakterisert ved at den omfatter en biokompatibel polymer og et D2E7-antistoff, eller en antigen-bindende del derav.
37. Blanding ifølge et hvilket som helst av kravene 33-36, karakterisert ved at den biokompatible polymeren er valgt fra gruppen bestående av etylenvinylacetat, polyanhydrider, polyglykolsyre, kollagen, polyortoestere, og polymelkesyre.
38. Blanding ifølge et hvilket som helst av kravene 33-36, karakterisert ved at den biokompatible polymeren er biodegraderbar.
39. Blanding, karakterisert ved at den omfatter et absorpsjons-forsinkende middel og et isolert human antistoff, eller en antigen-bindingsdel derav, som dissosierer fra human TNFa med en Ku på 1 x 10<*8> M eller mindre, og en Kotrhastighetskonstant på 1 x 10"3 s'1 eller mindre, begge bestemt ved overflate-plasmonresonans og nøytraliserer human TNFa-cytotoksisitet i en standard in wfro-L929-testanalyse med en IC50 på 1 x 10"<7> M eller mindre.
40. Blanding omfattende et absorpsjonsforsinkende middel og et isolert human antistoff, eller antigen-bindingsdel derav, karakterisert ved at: a) det dissosierer fra human TNFa med en Kon hastighetskonstant på 1 xlO"3 s"<1> eller mindre som bestemt ved overflate plasmon resonansanalayse; b) har et lettkjede CDR3-domene omfattende aminosyresekvensen til SEKV ID NR: 3, eller modifisert fra SEKV ID NR: 3 ved en enkelt alaninsubstitusjon ved stilling 1,4,5, 7 eller 8 eller ved en til fem konservative aminosyresubstitusjoner i stillingene 1,3,4,6,7, 8 og/eller 9; c) har et tungkjede CDR3-domene omfattende aminosyresekvensen til SEKV ID NR: 4, eller modifisert fra SEKV ID NR: 4 ved en enkelt alaninsubstitusjon i stillingene 2,3,4,5,6,8,9,10 eller 11 eller ved en til fem konservative aminosyresubstitusjoner i stillingene 2, 3,4,5,6,8,9,10, 11 og/eller 12.
41. Blanding omfattende et absorpsjonsforsinkende middel og et isolert human antistoff, eller en antigen-bindingsdel derav, med en lettkjede variabel region (LCVR) omfattende aminosyresekvensen til SEKV ID NR: 1 og tungkjede variabel region (HCVR) omfattende aminosyresekvensen av SEKV ID NR: 2.
42. Blanding, karakterisert ved at den omfatter et absorpsjons-forsinkende middel og et D2E7-antistoff, eller én antigen-bindende del derav.
43. Blanding, karakterisert ved at den omfatter en bærer som forhindrer hurtig frigjøring og et isolert human antistoff, eller en antigen-bindingsdel derav, som dissosierer fra human TNFa med en Kd på 1 x 10"<8> M eller mindre, og en Korhastighetskonstaht på 1 x IO'<3> s'<1> eller mindre, begge bestemt ved overflate-plasmonresonans og nøytraliserer human TNFa-cytotoksisitet i en standard in w'fn>L929-testanalyse med en ICsopå 1 x 10'7 M eller mindre.
44. Blanding omfattende en bærer som forhindrer hurtig frigjøring og et isolert human antistoff, eller antigen-bindingsdel derav, karakterisert veda t: a) det dissosierer fra human TNFa med en Koff hastighetskonstant på 1 x10-<3> s"<1> eller mindre som bestemt ved overflate plasmon resonansanalayse; b) har et lettkjede CDR3-domene omfattende aminosyresekvensen til SEKV ID NR: 3, eller modifisert fra SEKV ID NR: 3 ved en enkelt alaninsubstitusjon ved stilling 1,4,5,7 eller 8 eller ved en til fem konservative aminosyresubstitusjoner i stillingene 1,3,4,6,7,8 og/eller 9; c) har et tungkjede CDR3-domene omfattende aminosyresekvensen til SEKV ID NR: 4, eller modifisert fra SEKV ID NR: 4 ved en enkelt alaninsubstitusjon i stillingene 2,3,4, 5,6, 8,9,10 eller 11 eller ved en til fem konservative aminosyresubstitusjoner i stillingene 2,3,4,5,6,8,9,10, 11 og/elier12.
45. Blanding, karakterisert ved at den omfatter en bærer som. forhindrer hurtig frigjøring og et isolert human antistoff, eller en antigen- bindingsdel derav med en lettkjede variabel region (LCVR) omfattende aminosyresekvensen til SEKV ID NR: 1 og tungkjede variabel region (HCVR) omfattende aminosyresekvensen av SEKV ID NR: 2.
46. Blanding, karakterisert ved at den omfatter en bærer som forhindrer hurtig frigjøring og et D2E7-antistoff, eller en antigen-bindende del derav.
NO20040154A 1996-02-09 2004-01-13 Farmasoytisk blanding omfattende human-antistoffer som binder TNFalfa, samt anvendelser derav NO320657B1 (no)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US08/599,226 US6090382A (en) 1996-02-09 1996-02-09 Human antibodies that bind human TNFα
US3147696P 1996-11-25 1996-11-25
PCT/US1997/002219 WO1997029131A1 (en) 1996-02-09 1997-02-10 HUMAN ANTIBODIES THAT BIND HUMAN TNF$g(a)

Publications (2)

Publication Number Publication Date
NO20040154L NO20040154L (no) 1998-10-07
NO320657B1 true NO320657B1 (no) 2006-01-09

Family

ID=26707297

Family Applications (6)

Application Number Title Priority Date Filing Date
NO19983627A NO316711B1 (no) 1996-02-09 1998-08-07 Isolert human-antistoff eller antigen-bindingsdel derav som binder human TNF<alfa>, rekombinant human-antistoff eller antigen-bindingsdel derav, isolert nukleinsyre som koder for en lett eller tungkjede av antistoffet, eventuelt en region derav, rekombina
NO20026202A NO319955B1 (no) 1996-02-09 2002-12-23 Anvendelse av isolert human-antistoff som binder human-TNF-alfa, fremgangsmate for inhibering av TNF-alfa-aktivitet in vitro, samt isolert human-antistoff som binder human-TNF-alfa og farmasoytisk blanding som omfatter nevnte antistoff.
NO20040052A NO322755B1 (no) 1996-02-09 2004-01-07 Anvendelse av et antistoff og minst ett ytterligere terapeutisk middel, isolerte human-antistoffer inkludert D2E7, derivatisert eller bundet til minst ett funksjonelt molekyl, isolerte human-antistoffer og fragmenter derav, samt isolerte nukleinsyrer.
NO20040154A NO320657B1 (no) 1996-02-09 2004-01-13 Farmasoytisk blanding omfattende human-antistoffer som binder TNFalfa, samt anvendelser derav
NO2004002C NO2004002I2 (no) 1996-02-09 2004-04-15 Adalimumab
NO2017038C NO2017038I2 (no) 1996-02-09 2017-08-01 Adalimumab - Forlenget SPC

Family Applications Before (3)

Application Number Title Priority Date Filing Date
NO19983627A NO316711B1 (no) 1996-02-09 1998-08-07 Isolert human-antistoff eller antigen-bindingsdel derav som binder human TNF<alfa>, rekombinant human-antistoff eller antigen-bindingsdel derav, isolert nukleinsyre som koder for en lett eller tungkjede av antistoffet, eventuelt en region derav, rekombina
NO20026202A NO319955B1 (no) 1996-02-09 2002-12-23 Anvendelse av isolert human-antistoff som binder human-TNF-alfa, fremgangsmate for inhibering av TNF-alfa-aktivitet in vitro, samt isolert human-antistoff som binder human-TNF-alfa og farmasoytisk blanding som omfatter nevnte antistoff.
NO20040052A NO322755B1 (no) 1996-02-09 2004-01-07 Anvendelse av et antistoff og minst ett ytterligere terapeutisk middel, isolerte human-antistoffer inkludert D2E7, derivatisert eller bundet til minst ett funksjonelt molekyl, isolerte human-antistoffer og fragmenter derav, samt isolerte nukleinsyrer.

Family Applications After (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
NO2004002C NO2004002I2 (no) 1996-02-09 2004-04-15 Adalimumab
NO2017038C NO2017038I2 (no) 1996-02-09 2017-08-01 Adalimumab - Forlenget SPC

Country Status (32)

Country Link
US (9) US6258562B1 (no)
EP (1) EP0929578B1 (no)
JP (8) JP3861118B2 (no)
KR (1) KR100317188B1 (no)
CN (5) CN102070715A (no)
AT (1) ATE239041T1 (no)
AU (1) AU722077B2 (no)
BG (7) BG64564B1 (no)
BR (3) BRPI9715219B8 (no)
CA (1) CA2243459C (no)
CY (2) CY2463B1 (no)
CZ (1) CZ292465B6 (no)
DE (4) DE122004000004I1 (no)
DK (1) DK0929578T3 (no)
ES (1) ES2198552T3 (no)
HK (4) HK1214610A1 (no)
HU (4) HU221984B1 (no)
IL (4) IL125697A (no)
LU (1) LU91062I2 (no)
MX (1) MX336813B (no)
NL (1) NL300143I2 (no)
NO (6) NO316711B1 (no)
NZ (5) NZ536216A (no)
PL (2) PL193499B1 (no)
PT (1) PT929578E (no)
RO (2) RO119831B1 (no)
RU (3) RU2270030C2 (no)
SI (1) SI9720020B (no)
SK (1) SK284040B6 (no)
TR (1) TR199801532T2 (no)
UA (2) UA57726C2 (no)
WO (1) WO1997029131A1 (no)

Families Citing this family (478)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20030225254A1 (en) * 1989-08-07 2003-12-04 Rathjen Deborah Ann Tumour necrosis factor binding ligands
US5959087A (en) * 1989-08-07 1999-09-28 Peptide Technology, Ltd. Tumour necrosis factor binding ligands
JP3443119B2 (ja) * 1989-08-07 2003-09-02 ペプテック リミテッド 腫瘍壊死因子結合リガンド
US7192584B2 (en) 1991-03-18 2007-03-20 Centocor, Inc. Methods of treating psoriasis with anti-TNF antibodies
US6270766B1 (en) 1992-10-08 2001-08-07 The Kennedy Institute Of Rheumatology Anti-TNF antibodies and methotrexate in the treatment of arthritis and crohn's disease
US6830751B1 (en) * 1994-03-14 2004-12-14 Genetics Institute, Llc Use of IL-12 antagonists in the treatment of rheumatoid arthritis
ZA95960B (en) * 1994-03-14 1995-10-10 Genetics Inst Use of interleukin-12 antagonists in the treatment of autoimmune diseases
US20010055581A1 (en) 1994-03-18 2001-12-27 Lawrence Tamarkin Composition and method for delivery of biologically-active factors
US6090382A (en) 1996-02-09 2000-07-18 Basf Aktiengesellschaft Human antibodies that bind human TNFα
DE122004000004I1 (de) * 1996-02-09 2004-08-12 Abott Biotechnology Ltd Humane Antikörper welche an Humanen TNFalpha binden.
US7129061B1 (en) * 1996-08-07 2006-10-31 Biogen Idec Ma Inc. Tumor necrosis factor related ligand
US20040009166A1 (en) * 1997-04-30 2004-01-15 Filpula David R. Single chain antigen-binding polypeptides for polymer conjugation
JP2002505574A (ja) * 1997-04-30 2002-02-19 エンゾン，インコーポレイテッド ポリアルキレンオキシド修飾された単鎖ポリペプチド
US7229841B2 (en) 2001-04-30 2007-06-12 Cytimmune Sciences, Inc. Colloidal metal compositions and methods
US6407218B1 (en) 1997-11-10 2002-06-18 Cytimmune Sciences, Inc. Method and compositions for enhancing immune response and for the production of in vitro mabs
US7067144B2 (en) * 1998-10-20 2006-06-27 Omeros Corporation Compositions and methods for systemic inhibition of cartilage degradation
ES2277460T3 (es) 1998-12-14 2007-07-01 Genetics Institute, Llc Cadena del receptor de la citoquina.
US7553487B2 (en) 1998-12-14 2009-06-30 Genetics Institute, Llc Method and compositions for treating asthma
AU756677B2 (en) * 1999-03-02 2003-01-23 Centocor Inc. Anti-TNFalpha antibodies in therapy of asthma
US6914128B1 (en) 1999-03-25 2005-07-05 Abbott Gmbh & Co. Kg Human antibodies that bind human IL-12 and methods for producing
US20040220103A1 (en) 1999-04-19 2004-11-04 Immunex Corporation Soluble tumor necrosis factor receptor treatment of medical disorders
CA2386457A1 (en) * 1999-10-06 2001-04-12 Basf Aktiengesellschaft Inhibitors of the endothelin signalling pathway and .alpha.v.beta.3 integrin receptor antagonists for combination therapy
TWI373343B (en) 2000-02-10 2012-10-01 Abbott Gmbh & Co Kg Antibodies that bind human interleukin-18 and methods of making and using
GB0013810D0 (en) 2000-06-06 2000-07-26 Celltech Chiroscience Ltd Biological products
CN101525384A (zh) 2000-06-29 2009-09-09 艾博特公司 双特异性抗体及其制备方法和用途
UA81743C2 (uk) 2000-08-07 2008-02-11 Центокор, Инк. МОНОКЛОНАЛЬНЕ АНТИТІЛО ЛЮДИНИ, ЩО СПЕЦИФІЧНО ЗВ'ЯЗУЄТЬСЯ З ФАКТОРОМ НЕКРОЗУ ПУХЛИН АЛЬФА (ФНПα), ФАРМАЦЕВТИЧНА КОМПОЗИЦІЯ, ЩО ЙОГО МІСТИТЬ, ТА СПОСІБ ЛІКУВАННЯ РЕВМАТОЇДНОГО АРТРИТУ
US20050196755A1 (en) * 2000-11-17 2005-09-08 Maurice Zauderer In vitro methods of producing and identifying immunoglobulin molecules in eukaryotic cells
EP1355666B1 (en) 2000-12-22 2012-06-13 Max-Planck-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. Use of repulsive guidance molecule (RGM) and its modulators
US20090137416A1 (en) 2001-01-16 2009-05-28 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Isolating Cells Expressing Secreted Proteins
WO2002057423A2 (en) * 2001-01-16 2002-07-25 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Isolating cells expressing secreted proteins
CA2440676A1 (en) 2001-03-22 2002-10-03 Abbott Gmbh & Co. Kg Transgenic animals expressing antibodies specific for genes of interest and uses thereof
US6410955B1 (en) * 2001-04-19 2002-06-25 Micron Technology, Inc. Comb-shaped capacitor for use in integrated circuits
CA2385745C (en) * 2001-06-08 2015-02-17 Abbott Laboratories (Bermuda) Ltd. Methods of administering anti-tnf.alpha. antibodies
EP1414517A4 (en) * 2001-06-26 2008-02-06 Photomed Technologies Inc MULTIPLE WAVELENGTH ILLUMINATOR
MY143582A (en) 2001-06-26 2011-05-31 Amgent Fremont Inc Antibodies to opgl
US20050271663A1 (en) * 2001-06-28 2005-12-08 Domantis Limited Compositions and methods for treating inflammatory disorders
TWI334439B (en) 2001-08-01 2010-12-11 Centocor Inc Anti-tnf antibodies, compositions, methods and uses
WO2003024384A2 (en) * 2001-09-20 2003-03-27 Magnum Therapeutics Improved methods for treatment with viral vectors
US20030065382A1 (en) * 2001-10-02 2003-04-03 Fischell Robert E. Means and method for the treatment of coronary artery obstructions
EP1432431B1 (en) 2001-10-04 2017-05-10 Genetics Institute LLC Methods and compositions for modulating interleukin-21 activity
AU2003218432A1 (en) * 2002-03-26 2003-10-13 Centocor, Inc. Diabetes-related immunoglobulin derived proteins, compositions, methods and uses
US20030206898A1 (en) * 2002-04-26 2003-11-06 Steven Fischkoff Use of anti-TNFalpha antibodies and another drug
US20040009172A1 (en) * 2002-04-26 2004-01-15 Steven Fischkoff Use of anti-TNFalpha antibodies and another drug
US20090280065A1 (en) * 2006-04-10 2009-11-12 Willian Mary K Uses and Compositions for Treatment of Psoriasis
AR040603A1 (es) * 2002-07-19 2005-04-13 Abbott Lab S A El uso de un anticuerpo anti-tnfalfa neutralizador de alta afinidad en la fabricacion de un medicamento y conjunto de elementos
US20040033228A1 (en) 2002-08-16 2004-02-19 Hans-Juergen Krause Formulation of human antibodies for treating TNF-alpha associated disorders
WO2004019861A2 (en) * 2002-08-28 2004-03-11 Pharmacia Corporation Stable ph optimized formulation of a modified antibody
MY150740A (en) * 2002-10-24 2014-02-28 Abbvie Biotechnology Ltd Low dose methods for treating disorders in which tnf? activity is detrimental
US9320792B2 (en) 2002-11-08 2016-04-26 Ablynx N.V. Pulmonary administration of immunoglobulin single variable domains and constructs thereof
WO2004041862A2 (en) * 2002-11-08 2004-05-21 Ablynx N.V. Single domain antibodies directed against tumour necrosis factor-alpha and uses therefor
US20060034845A1 (en) 2002-11-08 2006-02-16 Karen Silence Single domain antibodies directed against tumor necrosis factor alpha and uses therefor
US20040162414A1 (en) * 2002-11-22 2004-08-19 Santora Ling C. Method for reducing or preventing modification of a polypeptide in solution
US20040101939A1 (en) * 2002-11-22 2004-05-27 Santora Ling C. Method for reducing or preventing modification of a polypeptide in solution
US7285269B2 (en) 2002-12-02 2007-10-23 Amgen Fremont, Inc. Antibodies directed to tumor necrosis factor
MXPA05007019A (es) * 2002-12-30 2005-08-18 Amgen Inc Terapia de combinacion con factores co-estimuladores.
WO2004063335A2 (en) * 2003-01-08 2004-07-29 Applied Molecular Evolution TNF-α BINDING MOLECULES
US7101978B2 (en) * 2003-01-08 2006-09-05 Applied Molecular Evolution TNF-α binding molecules
RU2357974C2 (ru) * 2003-01-10 2009-06-10 Аблинкс Н.В. Терапевтические полипептиды, их гомологи, их фрагменты и их применение для модуляции агрегации, опосредованной тромбоцитами
DE10303974A1 (de) 2003-01-31 2004-08-05 Abbott Gmbh & Co. Kg Amyloid-β(1-42)-Oligomere, Verfahren zu deren Herstellung und deren Verwendung
CA2518371A1 (en) 2003-03-14 2004-09-30 Wyeth Antibodies against human il-21 receptor and uses therefor
EP1460088A1 (en) 2003-03-21 2004-09-22 Biotest AG Humanized anti-CD4 antibody with immunosuppressive properties
WO2004098578A2 (en) * 2003-05-12 2004-11-18 Altana Pharma Ag Composition comprising a pde4 inhibitor and a tnf-alfa antagonist selected from infliximab, adalimumab, cdp870 and cdp517
FR2856075B1 (fr) * 2003-06-16 2007-10-12 Monoclonal Antibodies Therapeu Procede essentiellement automatise de criblage a grande echelle de cellules secretant des anticorps monoclonaux
FR2859725B1 (fr) * 2003-09-16 2006-03-10 Neovacs Procede a haut rendement pour l'obtention d'anticorps humains neutralisant l'activite biologique d'une cytokine humaine
US20050100965A1 (en) 2003-11-12 2005-05-12 Tariq Ghayur IL-18 binding proteins
KR100772800B1 (ko) * 2003-11-17 2007-11-01 주식회사유한양행 인간 종양괴사인자 α를 인식하는 단일클론항체의가변영역 및 이를 코딩하는 유전자
WO2005065121A2 (en) 2003-12-02 2005-07-21 Cytimmune Sciences, Inc. Methods and compositions for the production of monoclonal antibodies
DK2805728T3 (da) 2003-12-23 2020-04-20 Genentech Inc Hidtil ukendte anti-IL13-antistoffer og anvendelser deraf
US7435799B2 (en) * 2004-01-08 2008-10-14 Applied Molecular Evolution TNF-α binding molecules
AU2005227313A1 (en) 2004-03-19 2005-10-06 Amgen Inc. Reducing the risk of human and anti-human antibodies through V gene manipulation
US7625549B2 (en) * 2004-03-19 2009-12-01 Amgen Fremont Inc. Determining the risk of human anti-human antibodies in transgenic mice
TWI439284B (zh) 2004-04-09 2014-06-01 Abbvie Biotechnology Ltd 用於治療ＴＮＦα相關失調症之多重可變劑量療法
CN100427504C (zh) * 2004-06-02 2008-10-22 北京天广实生物技术有限公司 TNFα高亲和力嵌合抗体及其用途
AR049390A1 (es) 2004-06-09 2006-07-26 Wyeth Corp Anticuerpos contra la interleuquina-13 humana y usos de los mismos
US7501121B2 (en) 2004-06-17 2009-03-10 Wyeth IL-13 binding agents
GB0414054D0 (en) 2004-06-23 2004-07-28 Owen Mumford Ltd Improvements relating to automatic injection devices
CA2574848A1 (en) * 2004-08-05 2006-12-21 Wyeth Antagonizing interleukin-21 receptor activity
EP1807111A4 (en) * 2004-10-08 2009-05-27 Abbott Biotech Ltd SYNCYTIAL RESPIRATORY VIRUS INFECTION (RSV)
JP2008517914A (ja) * 2004-10-22 2008-05-29 ジェネンコー・インターナショナル・インク ヒトの抗体の分離方法
WO2006055871A2 (en) 2004-11-19 2006-05-26 Biogen Idec Ma Inc. Treatment for multiple sclerosis
EP3520815B1 (en) 2005-02-08 2021-11-17 Genzyme Corporation Antibodies to tgfbeta
CA2596986A1 (en) * 2005-02-14 2006-08-24 Wyeth Use of il-17f in diagnosis and therapy of airway inflammation
EP2322553A3 (en) * 2005-02-14 2011-11-16 Wyeth LLC Interleukin-17F antibodies and other IL-17F signaling antagonists and uses therefor
US20090124993A1 (en) 2005-02-17 2009-05-14 Burkly Linda C Treating neurological disorders
GT200600148A (es) 2005-04-14 2006-11-22 Metodos para el tratamiento y la prevencion de fibrosis
CA2607697C (en) 2005-05-10 2015-01-06 Biogen Idec Ma Inc. Treating and evaluating inflammatory disorders
AU2012254978C1 (en) * 2005-05-16 2017-06-01 Abbvie Biotechnology Ltd Use of TNF inhibitor for treatment of erosive polyarthritis
AU2006246721B2 (en) 2005-05-16 2012-12-13 Abbvie Biotechnology Ltd Use of TNF inhibitor for treatment of erosive polyarthritis
AU2006254971A1 (en) * 2005-06-06 2006-12-14 Wyeth Expression profiles of peripheral blood mononuclear cells for inflammatory bowel diseases
JP5089582B2 (ja) 2005-06-07 2012-12-05 エスバテック、アン アルコン バイオメディカル リサーチ ユニット、エルエルシー ＴＮＦαを阻害する安定な可溶性抗体
ES2776657T3 (es) 2005-06-14 2020-07-31 Amgen Inc Formulaciones de proteínas autotamponantes
US20060286108A1 (en) * 2005-06-16 2006-12-21 Bell Katherine A Topical compositions for the treatment of chronic wounds
JP2008543449A (ja) * 2005-06-17 2008-12-04 アボット・ラボラトリーズ 変性脊椎疾患の改良型治療方法
EP3725299A1 (en) * 2005-06-24 2020-10-21 Duke University A direct drug delivery system based on thermally responsive biopolymers
BRPI0613784A2 (pt) * 2005-07-21 2011-02-01 Abbott Lab expressão de gene múltipla incluindo constructos sorf e métodos com poliproteìnas, pro-proteìnas e proteólise
TW200726776A (en) * 2005-07-29 2007-07-16 Friedrich Alexander University Of Erlangen Nuremberg CD33-specific single-chain immunotoxin and methods of use
US7612181B2 (en) 2005-08-19 2009-11-03 Abbott Laboratories Dual variable domain immunoglobulin and uses thereof
US20090215992A1 (en) * 2005-08-19 2009-08-27 Chengbin Wu Dual variable domain immunoglobulin and uses thereof
US20070041905A1 (en) * 2005-08-19 2007-02-22 Hoffman Rebecca S Method of treating depression using a TNF-alpha antibody
EP2500357A3 (en) 2005-08-19 2012-10-24 Abbott Laboratories Dual variable domain immunoglobulin and uses thereof
EP2500352A1 (en) 2005-08-19 2012-09-19 Abbott Laboratories Dual variable domain immunoglobulin and uses thereof
US8906864B2 (en) 2005-09-30 2014-12-09 AbbVie Deutschland GmbH & Co. KG Binding domains of proteins of the repulsive guidance molecule (RGM) protein family and functional fragments thereof, and their use
WO2007049286A1 (en) * 2005-10-27 2007-05-03 Tata Memorial Centre A system for ex-vivo separation of apoptotic chromatin particles from blood or plasma
CA2626804A1 (en) 2005-11-01 2007-08-09 Abbott Biotechnology Ltd. Methods and compositions for diagnosing ankylosing spondylitis using biomarkers
PE20070684A1 (es) 2005-11-14 2007-08-06 Amgen Inc MOLECULAS QUIMERICAS DE ANTICUERPO RANKL-PTH/PTHrP
KR20180058863A (ko) 2005-11-30 2018-06-01 애브비 인코포레이티드 아밀로이드 베타 단백질에 대한 모노클로날 항체 및 이의 용도
PT1954718E (pt) 2005-11-30 2014-12-16 Abbvie Inc Anticorpos anti-globulómeros aβ, suas porções de ligação ao antigénio, correspondentes hibridomas, ácidos nucleicos, vectores, células hospedeiras, métodos de produção dos ditos anticorpos, composições compreendendo os ditos anticorpos, usos dos ditos anticorpos e métodos para uso dos ditos anticorpos
US8334257B2 (en) 2005-12-20 2012-12-18 Duke University Methods and compositions for delivering active agents with enhanced pharmacological properties
US8841255B2 (en) 2005-12-20 2014-09-23 Duke University Therapeutic agents comprising fusions of vasoactive intestinal peptide and elastic peptides
US20130172274A1 (en) 2005-12-20 2013-07-04 Duke University Methods and compositions for delivering active agents with enhanced pharmacological properties
EP1987064A4 (en) 2006-02-01 2010-04-07 Arana Therapeutics Ltd DOMAIN ANTIBODY CONSTRUCT
TW200744634A (en) 2006-02-21 2007-12-16 Wyeth Corp Methods of using antibodies against human IL-22
TWI417301B (zh) 2006-02-21 2013-12-01 Wyeth Corp 對抗人類介白素-２２（ｉｌ-２２）之抗體及其用途
MX2008012896A (es) 2006-04-05 2008-10-14 Abbott Biotech Ltd Purificacion de anticuerpos.
WO2007120626A2 (en) * 2006-04-10 2007-10-25 Abbott Biotechnology Ltd. Uses and compositions for treatment of ankylosing spondylitis
US20090317399A1 (en) * 2006-04-10 2009-12-24 Pollack Paul F Uses and compositions for treatment of CROHN'S disease
US20080118496A1 (en) * 2006-04-10 2008-05-22 Medich John R Uses and compositions for treatment of juvenile rheumatoid arthritis
WO2007120656A2 (en) 2006-04-10 2007-10-25 Abbott Biotechnology Ltd. Uses and compositions for treatment of rheumatoid arthritis
EP2708242A3 (en) 2006-04-10 2014-03-26 Abbott Biotechnology Ltd Uses and compositions for treatment of ankylosing spondylitis
US9605064B2 (en) 2006-04-10 2017-03-28 Abbvie Biotechnology Ltd Methods and compositions for treatment of skin disorders
CA2564435A1 (en) 2006-04-10 2007-10-10 Abbott Biotechnology Ltd. Methods for monitoring and treating intestinal disorders
EP2666472A3 (en) 2006-04-10 2014-04-02 Abbott Biotechnology Ltd Uses and compositions for treatment of psoriatic arthritis
US20080131374A1 (en) * 2006-04-19 2008-06-05 Medich John R Uses and compositions for treatment of rheumatoid arthritis
US20100021451A1 (en) 2006-06-08 2010-01-28 Wong Robert L Uses and compositions for treatment of ankylosing spondylitis
US20080311043A1 (en) * 2006-06-08 2008-12-18 Hoffman Rebecca S Uses and compositions for treatment of psoriatic arthritis
CN103316402A (zh) 2006-06-30 2013-09-25 艾伯维生物技术有限公司 自动注射装置
KR101544108B1 (ko) 2006-09-08 2015-08-13 애브비 바하마스 리미티드 인터루킨-13 결합 단백질
US8911964B2 (en) 2006-09-13 2014-12-16 Abbvie Inc. Fed-batch method of making human anti-TNF-alpha antibody
EP2500416A1 (en) 2006-09-13 2012-09-19 Abbott Laboratories Cell culture improvements
BRPI0716762A2 (pt) 2006-09-13 2013-09-24 Abbott Lab melhorias da cultura celular
NZ576133A (en) 2006-10-27 2012-10-26 Abbott Biotech Ltd Crystalline anti-htnfalpha antibodies
US8754107B2 (en) 2006-11-17 2014-06-17 Abbvie Inc. Aminopyrrolidines as chemokine receptor antagonists
CN101605547A (zh) 2006-11-21 2009-12-16 卡罗拜奥斯制药公司 使用gm-csf拮抗剂治疗慢性炎症疾病的方法
US8455626B2 (en) 2006-11-30 2013-06-04 Abbott Laboratories Aβ conformer selective anti-aβ globulomer monoclonal antibodies
WO2008082651A2 (en) 2006-12-29 2008-07-10 Abbott Laboratories Dual-specific il-1a/ il-1b antibodies
AU2008205512B2 (en) * 2007-01-16 2014-06-12 Abbvie Inc. Methods for treating psoriasis
JP2008209378A (ja) * 2007-01-31 2008-09-11 Fujifilm Corp バイオセンサー基板
WO2008097525A2 (en) 2007-02-05 2008-08-14 Potentia Pharmaceuticals, Inc. Local complement inhibition for treatment of complement-mediated disorders
US20100311767A1 (en) 2007-02-27 2010-12-09 Abbott Gmbh & Co. Kg Method for the treatment of amyloidoses
JP5622397B2 (ja) * 2007-03-12 2014-11-12 エスバテック− ア ノバルティス カンパニー エルエルシー 一本鎖抗体の配列に基づく操作および最適化
TW200902064A (en) * 2007-03-28 2009-01-16 Wyeth Corp Methods and compositions for modulating IL-17F/IL-17A biological activity
US7807168B2 (en) * 2007-04-10 2010-10-05 Vaccinex, Inc. Selection of human TNFα specific antibodies
WO2008124858A2 (en) * 2007-04-11 2008-10-23 F-Star Biotechnologische Forschungs- Und Entwicklungsges. M.B.H. Targeted receptor
WO2008150491A2 (en) 2007-05-31 2008-12-11 Abbott Laboratories BIOMARKERS PREDICTIVE OF THE RESPONSIVENESS TO TNFα INHIBITORS IN AUTOIMMUNE DISORDERS
EP2152318A4 (en) * 2007-06-01 2011-12-07 Abbott Biotech Ltd COMPOSITIONS AND USES FOR THE TREATMENT OF PSORIASIS AND CROHN'S DISEASE
WO2008149147A2 (en) * 2007-06-06 2008-12-11 Domantis Limited Polypeptides, antibody variable domains and antagonists
EA200901494A1 (ru) * 2007-06-06 2010-06-30 Домантис Лимитед Способы селекции протеазоустойчивых полипептидов
WO2008154543A2 (en) 2007-06-11 2008-12-18 Abbott Biotechnology Ltd. Methods for treating juvenile idiopathic arthritis
ES2707815T3 (es) * 2007-06-14 2019-04-05 Biogen Ma Inc Formulaciones de anticuerpo natalizumab
AU2008267733B2 (en) * 2007-06-25 2013-11-14 Esbatech, An Alcon Biomedical Research Unit Llc Sequence based engineering and optimization of single chain antibodies
DK2158315T3 (en) 2007-06-25 2016-06-06 Esbatech Alcon Biomed Res Unit Methods of modifying antibodies and modified antibodies with improved functional properties
EP2173380A4 (en) * 2007-07-13 2011-08-31 Abbott Biotech Ltd METHOD AND COMPOSITIONS FOR PULMONARY ADMINISTRATION OF A TNFa HEMMER
WO2009020654A1 (en) 2007-08-08 2009-02-12 Abbott Laboratories Compositions and methods for crystallizing antibodies
CA3128656A1 (en) 2007-08-22 2009-02-26 The Regents Of The University Of California Activatable binding polypeptides and methods of identification and use thereof
WO2009032128A1 (en) * 2007-08-28 2009-03-12 Abbott Biotechnology Ltd. Compositions and methods comprising binding proteins for adalimumab
KR101666228B1 (ko) 2007-09-28 2016-10-13 인트렉손 코포레이션 생물치료학적 분자를 발현시키기 위한 치료학적 유전자-스위치 작제물 및 생물반응기, 및 이의 용도
JP2009082033A (ja) * 2007-09-28 2009-04-23 Kaneka Corp 完全ヒト型抗体生産法
EP2219458B1 (en) 2007-11-08 2015-07-15 Cytimmune Sciences, Inc. Compositions and methods for generating antibodies
NZ622583A (en) 2007-11-30 2015-08-28 Abbvie Biotechnology Ltd Protein formulations and methods of making same
US8883146B2 (en) 2007-11-30 2014-11-11 Abbvie Inc. Protein formulations and methods of making same
CN101965514A (zh) * 2008-01-03 2011-02-02 艾博特生物技术有限公司 预测化合物在治疗银屑病中的长期功效
BRPI0907186A2 (pt) 2008-01-15 2015-07-14 Abbott Gmbh & Co Kg Composições proteicas pulverizadas e métodos para sua produção
US8962803B2 (en) 2008-02-29 2015-02-24 AbbVie Deutschland GmbH & Co. KG Antibodies against the RGM A protein and uses thereof
RU2540018C2 (ru) 2008-03-13 2015-01-27 Биотест Аг Средство для лечения заболевания
CN102027016A (zh) 2008-03-13 2011-04-20 生物测试股份公司 一种治疗疾病的试剂
EP2265643B1 (en) 2008-03-13 2016-10-19 Biotest AG Dosing regimen for treating psoriasis and rheumatoid arthritis
KR20100126515A (ko) 2008-03-18 2010-12-01 아보트 러보러터리즈 건선의 치료방법
JP5646457B2 (ja) 2008-04-29 2014-12-24 アッヴィ・インコーポレイテッド 二重可変ドメイン免疫グロブリン及びその使用
US20100260668A1 (en) * 2008-04-29 2010-10-14 Abbott Laboratories Dual Variable Domain Immunoglobulins and Uses Thereof
EP2113568A1 (en) 2008-04-30 2009-11-04 Deutsches Rheuma-Forschungszentrum Berlin Knock-in mouse for modelling blockade of human TNFalpha
KR101649168B1 (ko) 2008-05-09 2016-08-18 애브비 인코포레이티드 최종 당화 산물의 수용체(ｒａｇｅ)에 대한 항체 및 이의 용도
US20110112281A1 (en) * 2008-05-20 2011-05-12 Kaneka Corporation Cytotoxic composition
JP2011523853A (ja) * 2008-06-03 2011-08-25 アボット・ラボラトリーズ 二重可変ドメイン免疫グロブリン及びその使用
AR072000A1 (es) 2008-06-03 2010-07-28 Abbott Lab Proteinas de union multivalentes con capacidad de unir dos o mas antigenos y usos de la misma
US9556265B2 (en) 2008-06-25 2017-01-31 Esbatech, An Alcon Biomedical Research Unit Llc Solubility optimization of immunobinders
RU2653753C1 (ru) 2008-06-25 2018-05-14 ИЭсБиЭйТЕК, ЭН АЛЬКОН БАЙОМЕДИКАЛ РИСЕРЧ ЮНИТ ЭлЭлСи СТАБИЛЬНЫЕ И РАСТВОРИМЫЕ АНТИТЕЛА, ИНГИБИРУЮЩИЕ TNFα
HUE032894T2 (hu) 2008-06-25 2017-11-28 Esbatech Alcon Biomed Res Unit VEGF-gátló, stabilis és oldható antitestek
EP3412300A1 (en) 2008-06-27 2018-12-12 Duke University Therapeutic agents comprising elastin-like peptides
WO2010003118A1 (en) * 2008-07-02 2010-01-07 Trubion Pharmaceuticals, Inc. Tgf-b antagonist multi-target binding proteins
BRPI0915448A2 (pt) 2008-07-08 2015-11-10 Abbott Lab imunoglobulinas de domínio variável duplo para prostaglandina e2 e usos das mesmas
BRPI0915825A2 (pt) 2008-07-08 2015-11-03 Abbott Lab proteínas de ligação à prostaglandina e2 usos das mesmas
RU2011105466A (ru) * 2008-08-28 2012-10-10 ВАЙЕТ ЭлЭлСи (US) Применения цитокинов семейств il-22, il-17 и il-1 при аутоиммунных заболеваниях
CA2739794A1 (en) * 2008-10-07 2010-04-15 National Cheng Kung University Use of il-20 antagonists for treating rheumatoid arthritis and osteoporosis
KR20110079693A (ko) 2008-10-29 2011-07-07 와이어쓰 엘엘씨 단일 도메인 항원 결합 분자의 정제 방법
EP2362767B1 (en) 2008-10-29 2017-12-06 Ablynx N.V. Formulations of single domain antigen binding molecules
US8415291B2 (en) 2008-10-31 2013-04-09 Centocor Ortho Biotech Inc. Anti-TNF alpha fibronectin type III domain based scaffold compositions, methods and uses
CN101419224B (zh) * 2008-11-06 2012-08-22 复旦大学附属华山医院 一种同时测定人血浆中霉酚酸酯、霉酚酸及其代谢物的方法
AU2009319856A1 (en) * 2008-11-28 2010-06-03 Abbvie Inc. Stable antibody compositions and methods for stabilizing same
CN101766602B (zh) * 2008-12-30 2012-01-11 中国医学科学院血液病医院（血液学研究所） 取代芳香基腙类化合物在作为肿瘤坏死因子抑制剂药物方面的应用
KR20110110247A (ko) 2008-12-30 2011-10-06 센토코 오르토 바이오테크 인코포레이티드 강직성 척추염 환자에서 항-ＴＮＦα 항체에 대한 임상적 반응을 예측하는 혈청 마커
EP3543256A1 (en) 2009-01-12 2019-09-25 Cytomx Therapeutics Inc. Modified antibody compositions, methods of making and using thereof
BRPI1011384A2 (pt) 2009-02-23 2016-03-15 Cytomx Therapeutics Inc pro-proteinas e seus metodos de uso
US8030026B2 (en) 2009-02-24 2011-10-04 Abbott Laboratories Antibodies to troponin I and methods of use thereof
SG173705A1 (en) 2009-03-05 2011-09-29 Abbott Lab Il-17 binding proteins
CA2758964A1 (en) * 2009-04-16 2010-10-21 Abbott Biotherapeutics Corp. Anti-tnf-.alpha. antibodies and their uses
CN101875694B (zh) * 2009-04-28 2014-04-02 中国医学科学院基础医学研究所 TNFα的抗体及其用途
CN102458517B (zh) 2009-04-29 2014-07-23 阿布维生物技术有限公司 自动注射装置
RU2560701C2 (ru) * 2009-05-04 2015-08-20 Эббви Байотекнолоджи Лтд. Стабильные композиции с высокими концентрациями белков антител человека против tnf-альфа
WO2010132872A1 (en) * 2009-05-15 2010-11-18 Novimmune S.A Combination therapies and methods using anti-cd3 modulating agents and anti-tnf antagonists
UY32808A (es) * 2009-07-29 2011-02-28 Abbott Lab Inmunoglobulinas como dominio variable dual y usos de las mismas
WO2011020091A1 (en) 2009-08-14 2011-02-17 Phasebio Pharmaceuticals, Inc. Modified vasoactive intestinal peptides
CN102711820A (zh) * 2009-08-21 2012-10-03 吉联亚生物科技有限公司 治疗肺纤维化疾病的方法和组合物
MX336152B (es) 2009-08-29 2016-01-08 Abbvie Inc Proteinas terapeutico de union a dll4.
KR20120060877A (ko) 2009-09-01 2012-06-12 아보트 러보러터리즈 이원 가변 도메인 면역글로불린 및 이의 용도
SG179135A1 (en) * 2009-09-14 2012-05-30 Abbott Lab Methods for treating psoriasis
US20110071276A1 (en) * 2009-09-24 2011-03-24 Xbiotech, Inc. Method of modifying a monoclonal antibody
AU2010298036B2 (en) 2009-09-25 2015-05-21 Xoma Technology Ltd. Screening methods
US8926976B2 (en) 2009-09-25 2015-01-06 Xoma Technology Ltd. Modulators
TW201119676A (en) 2009-10-15 2011-06-16 Abbott Lab Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
MX2012004877A (es) * 2009-10-26 2012-05-23 Prometheus Lab Inc Analisis para la deteccion de farmacos anti-tnf y autoanticuerpos.
UY32979A (es) 2009-10-28 2011-02-28 Abbott Lab Inmunoglobulinas con dominio variable dual y usos de las mismas
EP2493923A1 (en) * 2009-10-30 2012-09-05 Abbott Laboratories Sorf constructs and multiple gene expression
US8420083B2 (en) 2009-10-31 2013-04-16 Abbvie Inc. Antibodies to receptor for advanced glycation end products (RAGE) and uses thereof
WO2011058087A1 (en) 2009-11-11 2011-05-19 Gentian As Immunoassay for assessing related analytes of different origin
GB0920944D0 (en) 2009-11-30 2010-01-13 Biotest Ag Agents for treating disease
US8871208B2 (en) * 2009-12-04 2014-10-28 Abbvie Inc. 11-β-hydroxysteroid dehydrogenase type 1 (11β-HSD1) inhibitors and uses thereof
MX2012006560A (es) 2009-12-08 2012-10-05 Abbott Gmbh & Co Kg Anticuerpos monoclonales contra la proteina rgm a para utilizarse en el tratamiento de degeneracion de capa de fibra de nervio retinal.
NZ600069A (en) 2009-12-15 2015-02-27 Abbvie Biotechnology Ltd Improved firing button for automatic injection device
JP2013514388A (ja) 2009-12-16 2013-04-25 フィリップ ボッシュ， 間質性膀胱炎の処置の方法
USRE49251E1 (en) 2010-01-04 2022-10-18 Mapi Pharma Ltd. Depot systems comprising glatiramer or pharmacologically acceptable salt thereof
WO2011092715A2 (en) * 2010-01-27 2011-08-04 Tata Memorial Centre Method for in-vivo binding of chromatin fragments
EP2531613A2 (en) 2010-02-02 2012-12-12 Abbott Biotechnology Ltd. Methods and compositions for predicting responsiveness to treatment with tnf-alpha inhibitor
CN102167741B (zh) * 2010-02-25 2014-05-14 上海百迈博制药有限公司 一种全人源抗TNF-α单克隆抗体、其制备方法及用途
EP3072904A1 (en) 2010-03-02 2016-09-28 Abbvie Inc. Therapeutic dll4 binding proteins
EP3372617B1 (en) 2010-04-02 2024-07-24 Amunix Pharmaceuticals, Inc. Binding fusion proteins, binding fusion protein-drug conjugates, xten-drug conjugates and methods of making and using same
CN102958537B (zh) 2010-04-07 2015-09-16 Abbvie公司 TNF-α结合蛋白
MX336196B (es) 2010-04-15 2016-01-11 Abbvie Inc Proteinas de union a amiloide beta.
HUE050858T2 (hu) 2010-04-16 2021-01-28 Biogen Ma Inc VLA-4 ellenes antitestek
NZ702172A (en) 2010-04-21 2016-03-31 Abbvie Biotechnology Ltd Wearable automatic injection device for controlled delivery of therapeutic agents
MY161302A (en) 2010-05-14 2017-04-14 Abbvie Inc IL-1 binding proteins
US20110287018A1 (en) 2010-05-19 2011-11-24 Philip Bosch Methods of Treating Interstitial Cystitis
HUE039740T2 (hu) 2010-06-03 2019-01-28 Abbvie Biotechnology Ltd Alkalmazások és készítmények hidradenitis suppurativa (HS) kezelésére
US20120009196A1 (en) 2010-07-08 2012-01-12 Abbott Laboratories Monoclonal antibodies against hepatitis c virus core protein
UY33492A (es) 2010-07-09 2012-01-31 Abbott Lab Inmunoglobulinas con dominio variable dual y usos de las mismas
US20120100166A1 (en) 2010-07-15 2012-04-26 Zyngenia, Inc. Ang-2 Binding Complexes and Uses Thereof
EP3252072A3 (en) 2010-08-03 2018-03-14 AbbVie Inc. Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
EP3533803B1 (en) 2010-08-14 2021-10-27 AbbVie Inc. Anti-amyloid-beta antibodies
JP6121903B2 (ja) 2010-08-19 2017-04-26 ゾエティス・ベルジャム・エス・アー 抗ｎｇｆ抗体およびその使用
SG187938A1 (en) 2010-08-26 2013-04-30 Abbvie Inc Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
AR083495A1 (es) 2010-10-22 2013-02-27 Esbatech Alcon Biomed Res Unit Anticuerpos estables y solubles
CA2811805A1 (en) 2010-10-29 2012-05-03 Abbvie Inc. Solid dispersions containing an apoptosis-inducing agent
UA113500C2 (xx) 2010-10-29 2017-02-10 Одержані екструзією розплаву тверді дисперсії, що містять індукуючий апоптоз засіб
EP2635694A4 (en) * 2010-11-02 2015-11-11 Abbott Lab VARIABLE DOUBLE DOMAIN IMMUNOGLOBULINS AND USES THEREOF
AU2011325974B2 (en) 2010-11-11 2016-10-27 Abbvie Biotechnology Ltd. Improved high concentration anti-TNFalpha antibody liquid formulations
SG190399A1 (en) 2010-11-23 2013-06-28 Abbvie Inc Methods of treatment using selective bcl-2 inhibitors
CN107266435A (zh) 2010-11-23 2017-10-20 Abbvie 公司 细胞凋亡诱导剂的盐和晶形
AR084210A1 (es) * 2010-12-08 2013-05-02 Abbott Lab PROTEINAS DE UNION AL TNF-a
AU2011361720B2 (en) 2010-12-21 2017-04-27 Abbvie Inc. IL-1 -alpha and -beta bispecific dual variable domain immunoglobulins and their use
TW201307388A (zh) 2010-12-21 2013-02-16 Abbott Lab Ｉｌ－１結合蛋白
EP2490024A1 (en) 2010-12-22 2012-08-22 Proteomika, S.L. Method to optimize the treatment of patients with biological drugs
EP3187216B1 (en) 2011-01-24 2019-08-21 AbbVie Biotechnology Ltd. Automatic injection devices having overmolded gripping surfaces
AU2012209222B2 (en) 2011-01-24 2015-07-09 Abbvie Biotechnology Ltd Removal of needle shields from syringes and automatic injection devices
US8992477B2 (en) 2011-01-24 2015-03-31 Elcam Agricultural Cooperative Association Ltd. Injector
RU2455025C1 (ru) * 2011-02-10 2012-07-10 Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Белгородский государственный национальный исследовательский университет" (НИУ "БелГУ") Способ фармакологической коррекции ишемии конечности смесью растворов гомеопатических разведений
US20130344081A1 (en) 2011-03-07 2013-12-26 The University Of Tokushima Method of treating amyotrophic lateral sclerosis
MX2013010699A (es) 2011-03-18 2014-03-27 Abbvie Inc Sistemas, dispositivosy metodos para ensamblar dispositivos de inyeccion automaticos y sub-ensambles de los mismos.
TWI588156B (zh) 2011-03-28 2017-06-21 賽諾菲公司 具有交叉結合區定向之雙重可變區類抗體結合蛋白
JP2014515658A (ja) 2011-03-29 2014-07-03 アッヴィ・インコーポレイテッド 自動注射装置における改善されたシュラウド展開
AU2012245211B2 (en) 2011-04-21 2016-03-10 Abbvie Inc. Wearable automatic injection device
EP2702077A2 (en) 2011-04-27 2014-03-05 AbbVie Inc. Methods for controlling the galactosylation profile of recombinantly-expressed proteins
EP2714738B1 (en) 2011-05-24 2018-10-10 Zyngenia, Inc. Multivalent and monovalent multispecific complexes and their uses
KR102292563B1 (ko) 2011-05-31 2021-08-24 바이오젠 엠에이 인코포레이티드 Pml의 위험을 판단하는 방법
EP2717902B1 (en) 2011-06-06 2018-01-24 Phasebio Pharmaceuticals, Inc. Use of modified vasoactive intestinal peptides in the treatment of hypertension
AU2012283039A1 (en) 2011-07-13 2014-01-30 Abbvie Inc. Methods and compositions for treating asthma using anti-IL-13 antibodies
GB201112429D0 (en) * 2011-07-19 2011-08-31 Glaxo Group Ltd Antigen-binding proteins with increased FcRn binding
WO2013019889A2 (en) * 2011-08-01 2013-02-07 Avaxia Biologics, Inc. Bovine polyclonal antibody specific for human tnf
CN109608543A (zh) * 2011-10-20 2019-04-12 艾斯巴技术-诺华有限责任公司 稳定的多抗原结合抗体
UY34411A (es) 2011-10-24 2013-05-31 Abbvie Inc Inmunoenlazantes dirigidos contra esclerostina
MX2014004980A (es) 2011-10-24 2014-09-11 Abbvie Inc Inmunoaglutinantes biespecificos dirigidos contra tnf e il-17.
HK1200464A1 (en) 2011-10-24 2015-08-07 Abbvie Inc. Immunobinders directed against tnf
HK1202628A1 (en) 2011-11-30 2015-10-02 Abbvie Deutschland Gmbh & Co Kg Methods and compositions for determining responsiveness to treatment with a tnf-alpha inhibitor
JP6342812B2 (ja) 2011-12-14 2018-06-13 アッヴィ・ドイチュラント・ゲー・エム・ベー・ハー・ウント・コー・カー・ゲー 鉄関連障害を診断および治療するための組成物および方法
CA2855570A1 (en) 2011-12-14 2013-06-20 AbbVie Deutschland GmbH & Co. KG Composition and method for the diagnosis and treatment of iron-related disorders
US20140359902A1 (en) 2011-12-16 2014-12-04 Synthon Biopharmaceuticals B.V. EXPRESSION OF SECRETORY IgA ANTIBODIES IN DUCKWEED
CN104159920A (zh) 2011-12-30 2014-11-19 艾伯维公司 针对il-13和/或il-17的双重可变结构域免疫球蛋白
AR090047A1 (es) 2011-12-30 2014-10-15 Abbvie Inc Dominio variable dual de inmunoglobulinas y sus usos
PE20190907A1 (es) 2012-01-27 2019-06-26 AbbVie Deutschland GmbH and Co KG Composicion y metodo para el diagnostico y el tratamiento de las enfermedades asociadas a la degeneracion de las neuritas
JP2015509526A (ja) 2012-03-07 2015-03-30 カディラ ヘルスケア リミティド 医薬製剤
US9067990B2 (en) 2013-03-14 2015-06-30 Abbvie, Inc. Protein purification using displacement chromatography
US9181572B2 (en) 2012-04-20 2015-11-10 Abbvie, Inc. Methods to modulate lysine variant distribution
US9334319B2 (en) 2012-04-20 2016-05-10 Abbvie Inc. Low acidic species compositions
US9505833B2 (en) 2012-04-20 2016-11-29 Abbvie Inc. Human antibodies that bind human TNF-alpha and methods of preparing the same
EP2657334B1 (en) 2012-04-26 2016-07-06 GeneFrontier Corporation Efficient method for displaying protein multimer
WO2013176754A1 (en) 2012-05-24 2013-11-28 Abbvie Inc. Novel purification of antibodies using hydrophobic interaction chromatography
US9617334B2 (en) 2012-06-06 2017-04-11 Zoetis Services Llc Caninized anti-NGF antibodies and methods thereof
ES2718478T3 (es) 2012-06-08 2019-07-02 Sutro Biopharma Inc Anticuerpos que comprenden restos de aminoácidos no naturales de localización específica, métodos para su preparación y métodos para su uso
WO2014011955A2 (en) 2012-07-12 2014-01-16 Abbvie, Inc. Il-1 binding proteins
SG11201501464TA (en) 2012-08-31 2015-03-30 Sutro Biopharma Inc Modified amino acids comprising an azido group
US9512214B2 (en) 2012-09-02 2016-12-06 Abbvie, Inc. Methods to control protein heterogeneity
HK1211981A1 (en) 2012-09-02 2016-06-03 Abbvie Inc. Methods to control protein heterogeneity
AU2013312300A1 (en) 2012-09-07 2015-04-16 Coherus Biosciences, Inc. Stable aqueous formulations of adalimumab
RU2648141C2 (ru) * 2012-09-19 2018-03-22 Эббви Биотерапьютикс Инк. Способы идентификации антител с пониженной иммуногенностью
MY171664A (en) 2012-11-01 2019-10-22 Abbvie Inc Anti-dll4/vegf dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
AU2013337644A1 (en) 2012-11-01 2015-05-07 Abbvie Inc. Stable Dual Variable Domain Immunoglobulin protein formulations
TWI675044B (zh) 2012-11-14 2019-10-21 美商再生元醫藥公司 重組細胞表面捕捉蛋白質
US9550986B2 (en) 2012-12-21 2017-01-24 Abbvie Inc. High-throughput antibody humanization
EP2938634A2 (en) 2012-12-28 2015-11-04 AbbVie Inc. Dual specific binding proteins having a receptor sequence
US9856319B2 (en) 2012-12-28 2018-01-02 Abbvie Inc. Monovalent binding proteins
AU2014215639B2 (en) 2013-01-25 2017-03-23 Thymon, Llc Compositions for selective reduction of circulating bioactive soluble TNF and methods for treating TNF-mediated disease
CN105308068A (zh) 2013-02-13 2016-02-03 法国化学与生物科技实验室 高度半乳糖基化的抗TNF-α抗体及其用途
US20140275082A1 (en) 2013-03-14 2014-09-18 Abbvie Inc. Apoptosis-inducing agents for the treatment of cancer and immune and autoimmune diseases
BR112015023239A8 (pt) 2013-03-14 2018-04-17 Abbott Lab ensaio de combinação de anticorpo-antígeno de hcv e métodos e composições para uso do mesmo
WO2014151878A2 (en) 2013-03-14 2014-09-25 Abbvie Inc. Methods for modulating protein glycosylation profiles of recombinant protein therapeutics using monosaccharides and oligosacharides
MX2015012824A (es) 2013-03-14 2016-06-24 Abbott Lab Antigenos recombinantes ns3 del vhc y mutantes de los mismos para la deteccion mejorada de anticuerpos.
MX376492B (es) 2013-03-14 2025-03-07 Abbott Lab Anticuerpos monoclonares que se unen al dominio de unión a lípidos de la proteína de la cápside del virus de la hepatitis c (vhc)
HK1213919A1 (zh) 2013-03-14 2016-07-15 Abbvie Inc. 低酸性物質組合物和利用置換色譜技術製備該組合物的方法
AU2013384204B2 (en) 2013-03-14 2017-03-16 Abbvie Inc. Low acidic species compositions and methods for producing and using the same
US9017687B1 (en) 2013-10-18 2015-04-28 Abbvie, Inc. Low acidic species compositions and methods for producing and using the same using displacement chromatography
WO2014159579A1 (en) * 2013-03-14 2014-10-02 Abbvie Inc. MUTATED ANTI-TNFα ANTIBODIES AND METHODS OF THEIR USE
EP3424530A1 (en) 2013-03-15 2019-01-09 Zyngenia, Inc. Multivalent and monovalent multispecific complexes and their uses
US9469686B2 (en) 2013-03-15 2016-10-18 Abbott Laboratories Anti-GP73 monoclonal antibodies and methods of obtaining the same
WO2014144299A2 (en) 2013-03-15 2014-09-18 Abbvie Inc. DUAL SPECIFIC BINDING PROTEINS DIRECTED AGAINST TNFα
JP2016522793A (ja) 2013-03-15 2016-08-04 アッヴィ・インコーポレイテッド ＩＬ−１βおよび／またはＩＬ−１７に対して指向された二重特異的結合タンパク質
JP2016520595A (ja) * 2013-05-22 2016-07-14 メタボリック エンジニアリング ラボラトリーズ カンパニー リミテッド 抗ＴＮＦ−α／ＣＸＣＬ１０二重ターゲット抗体及びその用途
US10183988B2 (en) 2013-06-07 2019-01-22 Duke University Anti-Complement factor H antibodies
US9764039B2 (en) 2013-07-10 2017-09-19 Sutro Biopharma, Inc. Antibodies comprising multiple site-specific non-natural amino acid residues, methods of their preparation and methods of their use
US20150038454A1 (en) * 2013-07-31 2015-02-05 Mary Malast Antimicrobial compositions and methods of use
KR102332302B1 (ko) 2013-09-13 2021-12-01 제넨테크, 인크. 세포주에서 숙주 세포 단백질 및 재조합 폴리펩티드 생성물을 검출 및 정량화하기 위한 조성물 및 방법
SG10201802525QA (en) 2013-09-13 2018-04-27 Genentech Inc Methods and compositions comprising purified recombinant polypeptides
WO2015051293A2 (en) 2013-10-04 2015-04-09 Abbvie, Inc. Use of metal ions for modulation of protein glycosylation profiles of recombinant proteins
JP2016535765A (ja) 2013-10-06 2016-11-17 アビー・インコーポレイテッドＡｂｂＶｉｅ Ｉｎｃ． 免疫細胞受容体及び自己抗原を対象とする二重特異性結合タンパク質
WO2015054658A1 (en) 2013-10-11 2015-04-16 Sutro Biopharma, Inc. Modified amino acids comprising tetrazine functional groups, methods of preparation, and methods of their use
WO2015057910A1 (en) 2013-10-16 2015-04-23 Oncobiologics, Inc. Buffer formulations for enhanced antibody stability
US8946395B1 (en) 2013-10-18 2015-02-03 Abbvie Inc. Purification of proteins using hydrophobic interaction chromatography
US9085618B2 (en) 2013-10-18 2015-07-21 Abbvie, Inc. Low acidic species compositions and methods for producing and using the same
US9181337B2 (en) 2013-10-18 2015-11-10 Abbvie, Inc. Modulated lysine variant species compositions and methods for producing and using the same
US20150139988A1 (en) 2013-11-15 2015-05-21 Abbvie, Inc. Glycoengineered binding protein compositions
CA2931978A1 (en) 2013-12-02 2015-06-11 Abbvie Inc. Compositions and methods for treating osteoarthritis
CN103965357B (zh) 2013-12-31 2016-08-17 嘉和生物药业有限公司 一种抗人rankl抗体
EP3757224A3 (en) 2014-02-27 2021-03-17 Biogen MA Inc. Method of assessing risk of pml
JP6293907B2 (ja) 2014-03-10 2018-03-14 リヒター ゲデオン エヌワイアールティー． プレクリーニング工程を用いた免疫グロブリンの精製
TWI731535B (zh) 2014-03-21 2021-06-21 美商艾伯維有限公司 抗-egfr抗體及抗體藥物結合物
AR099625A1 (es) * 2014-03-21 2016-08-03 Lilly Co Eli Anticuerpos de il-21
CA2944330A1 (en) * 2014-04-02 2015-10-08 Intas Pharmaceuticals Limited Liquid pharmaceutical composition of adalimumab
US11052132B2 (en) 2014-05-08 2021-07-06 Phasebio Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for treating cystic fibrosis
EP2946766B1 (en) 2014-05-23 2016-03-02 Ares Trading S.A. Liquid pharmaceutical composition
ES2607489T3 (es) 2014-05-23 2017-03-31 Ares Trading S.A. Composición farmacéutica líquida
HUE029849T2 (en) 2014-05-23 2017-04-28 Ares Trading Sa Liquid pharmaceutical composition
FR3022462B1 (fr) * 2014-06-18 2018-04-27 Laboratoire Francais Du Fractionnement Et Des Biotechnologies Composition orale d'anticorps anti-tnfalpha
EP3145951A1 (en) 2014-06-24 2017-03-29 InSight Biopharmaceuticals Ltd. Methods of purifying antibodies
EP3160996B1 (en) * 2014-06-30 2022-06-08 Merck Patent GmbH Anti-tnfa antibodies with ph-dependent antigen binding
US20170226552A1 (en) 2014-07-03 2017-08-10 Abbvie Inc. Methods for modulating protein glycosylation profiles of recombinant protein therapeutics using cobalt
WO2016007764A1 (en) 2014-07-09 2016-01-14 Abbvie Inc. Methods for modulating the glycosylation profile of recombinant proteins using non-commonly used sugars
EP3167396B1 (en) 2014-07-11 2024-01-17 Iogenetics, LLC. Immune recognition motifs
MY192824A (en) 2014-09-03 2022-09-12 Boehringer Ingelheim Int Compound targeting il-23a and tnf-alpha and uses thereof
US10435464B1 (en) 2014-09-05 2019-10-08 Coherus Biosciences, Inc. Methods for making recombinant proteins
HUP1400510A1 (hu) 2014-10-28 2016-05-30 Richter Gedeon Nyrt Gyógyászati TNFalfa ellenes antitest készítmény
WO2016094881A2 (en) 2014-12-11 2016-06-16 Abbvie Inc. Lrp-8 binding proteins
EP3237000A1 (en) 2014-12-23 2017-11-01 Pfizer Inc Stable aqueous antibody formulation for anti tnf alpha antibodies
EP3085709B1 (en) 2014-12-28 2019-08-21 Genor Biopharma Co., Ltd Humanized anti-human rankl antibody, pharmaceutical composition and use thereof
US10696735B2 (en) 2015-01-21 2020-06-30 Outlook Therapeutics, Inc. Modulation of charge variants in a monoclonal antibody composition
EP3053572A1 (en) 2015-02-06 2016-08-10 Ares Trading S.A. Liquid pharmaceutical composition
CA2976038A1 (en) 2015-02-09 2016-08-18 Phasebio Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for treating muscle disease and disorders
CN105777905B (zh) * 2015-03-24 2019-06-25 广东东阳光药业有限公司 一种全人源抗TNF-α单克隆抗体及其应用
EP3078675A1 (en) 2015-04-10 2016-10-12 Ares Trading S.A. Induction dosing regimen for the treatment of tnf alpha mediated disorders
WO2016179469A1 (en) * 2015-05-07 2016-11-10 Abbvie Inc. Methods and compositions for diagnosing and treating inflammatory bowel disease
RU2715597C2 (ru) 2015-05-29 2020-03-02 Эббви Инк. Антитела к cd40 и способы их применения
TW201710286A (zh) 2015-06-15 2017-03-16 艾伯維有限公司 抗ｖｅｇｆ、ｐｄｇｆ及／或其受體之結合蛋白
FR3038517B1 (fr) 2015-07-06 2020-02-28 Laboratoire Francais Du Fractionnement Et Des Biotechnologies Utilisation de fragments fc modifies en immunotherapie
HU231463B1 (hu) 2015-08-04 2024-01-28 Richter Gedeon Nyrt. Módszer rekombináns proteinek galaktóz tartalmának növelésére
US11583584B1 (en) 2015-10-28 2023-02-21 Coherus Biosciences, Inc. Stable protein compositions and methods of their use
US11229702B1 (en) 2015-10-28 2022-01-25 Coherus Biosciences, Inc. High concentration formulations of adalimumab
GB201522394D0 (en) 2015-12-18 2016-02-03 Ucb Biopharma Sprl Antibodies
EP3411401A1 (en) 2016-02-03 2018-12-12 Oncobiologics, Inc. Buffer formulations for enhanced antibody stability
US10465003B2 (en) 2016-02-05 2019-11-05 Janssen Biotech, Inc. Anti-TNF antibodies, compositions, methods and use for the treatment or prevention of type 1 diabetes
JP6978427B2 (ja) * 2016-03-17 2021-12-08 ヌマブ セラピューティクス アクチェンゲゼルシャフト 抗ＴＮＦα抗体とその機能性フラグメント
EP3219726B1 (en) * 2016-03-17 2020-12-02 Tillotts Pharma AG Anti-tnf alpha-antibodies and functional fragments thereof
CA3019003A1 (en) 2016-04-08 2017-10-12 Gilead Sciences, Inc. Compositions and methods for treating cancer, inflammatory diseases and autoimmune diseases
US11071782B2 (en) 2016-04-20 2021-07-27 Coherus Biosciences, Inc. Method of filling a container with no headspace
EA037960B1 (ru) 2016-04-27 2021-06-15 Эббви Инк. Способ лечения эозинофильного эзофагита с применением антитела против il-13
SG10202001787QA (en) 2016-06-02 2020-04-29 Abbvie Inc Glucocorticoid receptor agonist and immunoconjugates thereof
JP2019526529A (ja) 2016-06-08 2019-09-19 アッヴィ・インコーポレイテッド 抗ｂ７−ｈ３抗体及び抗体薬物コンジュゲート
CN109641962A (zh) 2016-06-08 2019-04-16 艾伯维公司 抗b7-h3抗体和抗体药物偶联物
AU2017277914A1 (en) 2016-06-08 2019-01-03 Abbvie Inc. Anti-CD98 antibodies and antibody drug conjugates
CA3027173A1 (en) 2016-06-08 2017-12-14 Abbvie Inc. Anti-egfr antibody drug conjugates
AU2017277534A1 (en) 2016-06-08 2019-01-03 Abbvie Inc. Anti-EGFR antibody drug conjugates
RS61828B1 (sr) 2016-06-08 2021-06-30 Abbvie Inc Anti-b7-h3 antitela i antitelske konjugacije lekova
EP3472197A1 (en) 2016-06-15 2019-04-24 Sutro Biopharma, Inc. Antibodies with engineered ch2 domains, compositions thereof and methods of using the same
WO2018018613A1 (zh) 2016-07-29 2018-02-01 广东东阳光药业有限公司 一种提高抗体纯度的细胞培养基和培养方法
US12097292B2 (en) 2016-08-28 2024-09-24 Mapi Pharma Ltd. Process for preparing microparticles containing glatiramer acetate
AU2017319728B2 (en) 2016-08-31 2024-09-05 Mapi Pharma Ltd Depot systems comprising glatiramer acetate
WO2018045258A1 (en) * 2016-09-02 2018-03-08 The University Of Chicago TREATMENT OF TNF-alpha CYTOTOXICITY
JP2020501508A (ja) * 2016-09-15 2020-01-23 クアドルセプト バイオ リミテッド 多量体、四量体および八量体
WO2018067468A1 (en) 2016-10-03 2018-04-12 Abbott Laboratories Improved methods of assessing uch-l1 status in patient samples
WO2018075408A1 (en) 2016-10-17 2018-04-26 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Methods of treating acute myeloid leukemia (aml) with combinations of anti-cd200 antibodies, cytarabine, and daunorubicin
EP3528787B1 (en) 2016-10-21 2026-01-07 Amgen Inc. Pharmaceutical formulations and methods of making the same
WO2018102594A1 (en) 2016-12-01 2018-06-07 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Methods of treating solid tumors with anti-cd200 antibodies
CA3046489A1 (en) 2016-12-07 2018-06-14 Progenity Inc. Gastrointestinal tract detection methods, devices and systems
KR102616436B1 (ko) 2016-12-14 2023-12-27 비오라 쎄라퓨틱스, 인크. Tnf 저해제로의 위장관 질환의 치료
JP7350313B2 (ja) 2016-12-16 2023-09-26 ブルーフィン バイオメディシン， インコーポレイテッド 抗ｃｕｂドメイン含有タンパク質１（ｃｄｃｐ１）抗体、抗体薬物コンジュゲート、およびその使用方法
EP3824906A1 (en) 2016-12-21 2021-05-26 Amgen Inc. Anti-tnf alpha antibody formulations
JOP20190162A1 (ar) 2016-12-30 2019-06-27 Biocad Joint Stock Co تركيبة صيدلانية مائية من جسم مضاد لـ tnf? أحادي النسيلة معاود الارتباط الجيني
CN120392659A (zh) 2017-01-11 2025-08-01 赛特瑞恩股份有限公司 稳定的液体调配物
TW202506185A (zh) 2017-01-20 2025-02-16 法商賽諾菲公司 抗TGF-β抗體及其用途
AR110755A1 (es) 2017-01-20 2019-05-02 Genzyme Corp Anticuerpos dirigidos a hueso
EP3573658A4 (en) 2017-01-30 2021-07-21 Janssen Biotech, Inc. ANTI-TNF ANTIBODIES, COMPOSITIONS, AND METHODS FOR TREATMENT OF ACTIVE PSORIATIC ARTHRITIS
KR20190115042A (ko) 2017-02-07 2019-10-10 얀센 바이오테크 인코포레이티드 활성 강직성 척추염의 치료를 위한 항-tnf 항체, 조성물, 및 방법
US11608357B2 (en) 2018-08-28 2023-03-21 Arecor Limited Stabilized antibody protein solutions
EP3372241A1 (en) 2017-03-06 2018-09-12 Ares Trading S.A. Liquid pharmaceutical composition
EP3372242A1 (en) 2017-03-06 2018-09-12 Ares Trading S.A. Liquid pharmaceutical composition
CA3052513A1 (en) 2017-03-23 2018-09-27 Abbott Laboratories Methods for aiding in the diagnosis and determination of the extent of traumatic brain injury in a human subject using the early biomarker ubiquitin carboxy-terminal hydrolase l1
MX2019010174A (es) 2017-03-26 2019-10-15 Mapi Pharma Ltd Sistemas de deposito de glatiramer para el tratamiento de formas progresivas de esclerosis multiple.
WO2018184692A1 (en) 2017-04-07 2018-10-11 Ares Trading S.A. Liquid pharmaceutical composition
ES3055047T3 (en) 2017-04-15 2026-02-09 Abbott Lab Methods for aiding in the hyperacute diagnosis and determination of traumatic brain injury in a human subject using early biomarkers
US10865238B1 (en) 2017-05-05 2020-12-15 Duke University Complement factor H antibodies
WO2018218169A1 (en) 2017-05-25 2018-11-29 Abbott Laboratories Methods for aiding in the determination of whether to perform imaging on a human subject who has sustained or may have sustained an injury to the head using early biomarkers
WO2018222783A1 (en) 2017-05-30 2018-12-06 Abbott Laboratories Methods for aiding in diagnosing and evaluating a mild traumatic brain injury in a human subject using cardiac troponin i and early biomarkers
EP3649474A1 (en) 2017-07-03 2020-05-13 Abbott Laboratories Improved methods for measuring ubiquitin carboxy-terminal hydrolase l1 levels in blood
US11761963B2 (en) 2017-09-27 2023-09-19 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Biomarker signature for predicting tumor response to anti-CD200 therapy
CA3082356A1 (en) 2017-12-01 2019-06-06 Abbvie Inc. Glucocorticoid receptor agonist and immunoconjugates thereof
CN109879962B (zh) * 2017-12-06 2022-10-11 北京科立思维生物科技有限公司 抗tnf单链抗体、抗il-6单链抗体及其融合蛋白及其应用
US11016105B2 (en) 2017-12-09 2021-05-25 Abbott Laboratories Methods for aiding in diagnosing and evaluating a traumatic brain injury in a human subject using a combination of GFAP and UCH-L1
EP3721233A2 (en) 2017-12-09 2020-10-14 Abbott Laboratories Methods for aiding in the diagnosis and evaluation of a subject who has sustained an orthopedic injury and that has or may have sustained an injury to the head, such as mild traumatic brain injury (tbi), using glial fibrillary acidic protein (gfap) and/or ubiquitin carboxy-terminal hydrolase l1 (uch-l1)
US11802154B2 (en) 2017-12-20 2023-10-31 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Humanized anti-CD200 antibodies and uses thereof
WO2019126133A1 (en) 2017-12-20 2019-06-27 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Liquid formulations of anti-cd200 antibodies
CA3093772C (en) 2018-03-12 2024-04-16 Zoetis Services Llc Anti-ngf antibodies and methods thereof
WO2019190877A1 (en) 2018-03-26 2019-10-03 Alexion Pharmaceuticals, Inc. High throughput method for measuring the protease activity of complement c3 convertase
KR102848349B1 (ko) 2018-06-04 2025-08-21 바이오젠 엠에이 인코포레이티드 감소된 효과기 기능을 갖는 항-ｖｌａ-4 항체
EP3810095A1 (en) 2018-06-20 2021-04-28 Progenity, Inc. Treatment of a disease of the gastrointestinal tract with a tnf inhibitor
CA3103664A1 (en) 2018-07-03 2020-01-09 Novartis Ag Methods of treating or selecting a treatment for a subject resistant to tnf inhibitor using a nlrp3 antagonist
CN113329769A (zh) 2018-10-11 2021-08-31 斯克里普斯研究学院 具有反应性精氨酸的抗体化合物及相关的抗体药物缀合物
EP3870168A1 (en) 2018-10-24 2021-09-01 Novartis AG Compounds and compositions for treating conditions associated with nlrp activity
KR20210088611A (ko) * 2018-11-05 2021-07-14 베이징 한미 파마슈티컬 컴퍼니 리미티드 항TNFα/항IL-17A 천연항체 구조 형태의 헤테로다이머 이중특이성 항체 및 그 제조방법
HU231514B1 (hu) 2018-11-07 2024-07-28 Richter Gedeon Nyrt. Sejttenyészetben előállított rekombináns glikoprotein glikozilációs mintázatának megváltoztatására szolgáló módszer
US12134611B2 (en) 2018-11-13 2024-11-05 Novartis Ag Compounds and compositions for treating conditions associated with NLRP activity
ES2974842T3 (es) 2018-11-13 2024-07-01 Novartis Ag Compuestos y composiciones para el tratamiento de afecciones asociadas a la actividad de nlrp
CN116726361A (zh) 2018-11-19 2023-09-12 比奥拉治疗股份有限公司 用生物治疗剂治疗疾病的方法和装置
US12428484B2 (en) 2018-12-06 2025-09-30 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Anti-ALK2 antibodies and uses thereof
EP3960858B1 (en) 2018-12-25 2025-05-07 Beijing Baishihekang Pharmaceutical Technology (BSJpharma) Co., Ltd. Small rna medicament for prevention and treatment of inflammation-related diseases and combination thereof
WO2020154321A1 (en) 2019-01-22 2020-07-30 Novartis Inflammasome Research, Inc. Compounds and compositions for treating conditions associated with nlrp activity
HU231498B1 (hu) 2019-04-04 2024-05-28 Richter Gedeon Nyrt Immunglobulinok affinitás kromatográfiájának fejlesztése kötést megelőző flokkulálás alkalmazásával
KR102323342B1 (ko) * 2019-04-26 2021-11-08 주식회사 와이바이오로직스 IL-17A 및 TNF-α에 특이적으로 결합하는 이중표적 항체
US11780911B2 (en) 2019-05-23 2023-10-10 Janssen Biotech, Inc. Method of treating inflammatory bowel disease with a combination therapy of antibodies to IL-23 and TNF alpha
WO2021002887A1 (en) 2019-07-02 2021-01-07 Novartis Inflammasome Research, Inc. Gut-targeted nlrp3 antagonists and their use in therapy
CN114401988A (zh) * 2019-07-09 2022-04-26 国家生物技术研究所公司 具有降低的免疫原性的抗体
WO2021119482A1 (en) 2019-12-13 2021-06-17 Progenity, Inc. Ingestible device for delivery of therapeutic agent to the gastrointestinal tract
FR3104582A1 (fr) 2019-12-17 2021-06-18 Commissariat A L'energie Atomique Et Aux Energies Alternatives Variants de l’adalimumab au potentiel immunogène réduit
WO2021159024A1 (en) 2020-02-05 2021-08-12 Larimar Therapeutics, Inc. Tat peptide binding proteins and uses thereof
US20230095053A1 (en) 2020-03-03 2023-03-30 Sutro Biopharma, Inc. Antibodies comprising site-specific glutamine tags, methods of their preparation and methods of their use
CA3175523A1 (en) 2020-04-13 2021-10-21 Antti Virtanen Methods, complexes and kits for detecting or determining an amount of a .beta.-coronavirus antibody in a sample
CA3177830A1 (en) 2020-05-13 2021-11-18 Maria BECONI Anti-hemojuvelin (hjv) antibodies for treating myelofibrosis
CN115768466A (zh) 2020-05-21 2023-03-07 詹森生物科技公司 用抗IL-23和TNFα抗体的联合疗法治疗炎性肠病的方法
CA3188349A1 (en) 2020-08-04 2022-02-10 A. Scott Muerhoff Improved methods and kits for detecting sars-cov-2 protein in a sample
CN111944052B (zh) * 2020-08-26 2022-02-11 中国药科大学 抗TNF-α/PD-1双特异性抗体及其应用
CN112010970B (zh) * 2020-10-30 2021-01-12 迈威(上海)生物科技股份有限公司 一种去除重组表达抗体聚体和降解产物的方法
WO2023102384A1 (en) 2021-11-30 2023-06-08 Abbott Laboratories Use of one or more biomarkers to determine traumatic brain injury (tbi) in a subject having received a head computerized tomography scan that is negative for a tbi
CA3198161A1 (en) 2020-12-01 2022-06-09 Beth MCQUISTON Use of one or more biomarkers to determine traumatic brain injury (tbi) in a subject having received a head computerized tomography scan that is negative for a tbi
US11672929B2 (en) 2020-12-02 2023-06-13 Breathe Restore, Inc. Product delivery devices and methods
CN117440967A (zh) 2020-12-09 2024-01-23 怡诺安有限公司 抗OX40L抗体、抗OX40L/抗TNFα双特异性抗体及其用途
EP4263603A4 (en) * 2020-12-18 2024-12-11 Elanco US Inc. ANTI-TNF? AND NGF ANTIBODIES FOR VETERINARY USE
EP4271998A1 (en) 2020-12-30 2023-11-08 Abbott Laboratories Methods for determining sars-cov-2 antigen and anti-sars-cov-2 antibody in a sample
AR124681A1 (es) 2021-01-20 2023-04-26 Abbvie Inc Conjugados anticuerpo-fármaco anti-egfr
CA3207134A1 (en) 2021-02-19 2022-08-25 Jeffrey A. Ledbetter Dnase fusion polypeptides and related compositions and methods
AU2022264509A1 (en) 2021-04-27 2023-12-14 Generation Bio Co. Non-viral dna vectors expressing therapeutic antibodies and uses thereof
EP4329884A1 (en) 2021-04-27 2024-03-06 Generation Bio Co. Non-viral dna vectors expressing anti-coronavirus antibodies and uses thereof
AU2022279156A1 (en) 2021-05-18 2023-11-02 Abbott Laboratories Methods of evaluating brain injury in a pediatric subject
EP4356129A1 (en) 2021-06-14 2024-04-24 Abbott Laboratories Methods of diagnosing or aiding in diagnosis of brain injury caused by acoustic energy, electromagnetic energy, an over pressurization wave, and/or blast wind
WO2022271782A1 (en) * 2021-06-22 2022-12-29 University Of Virginia Patent Foundation Compositions and methods for detecting and regulating fibronectin-integrin interactions and signaling
CN120463762A (zh) 2021-08-26 2025-08-12 映恩生物科技(上海)有限公司 一种甾体化合物及其缀合物
CN118715440A (zh) 2021-08-31 2024-09-27 雅培实验室 诊断脑损伤的方法和系统
JP2024534849A (ja) 2021-08-31 2024-09-26 アボット・ラボラトリーズ 脳の損傷を診断する方法及びシステム
JP2024538608A (ja) 2021-09-30 2024-10-23 アボット・ラボラトリーズ 脳の損傷を診断する方法及びシステム
AU2022413677A1 (en) 2021-12-17 2024-06-27 Abbott Laboratories Systems and methods for determining uch-l1, gfap, and other biomarkers in blood samples
EP4473311A1 (en) 2022-02-04 2024-12-11 Abbott Laboratories Lateral flow methods, assays, and devices for detecting the presence or measuring the amount of ubiquitin carboxy-terminal hydrolase l1 and/or glial fibrillary acidic protein in a sample
CN119072330A (zh) 2022-03-14 2024-12-03 世代生物公司 异源初免加强疫苗组合物和使用方法
WO2024006681A1 (en) * 2022-06-28 2024-01-04 Adafre Biosciences, Llc Anti-tnf-αlpha antibodies and compositions
AU2023298134A1 (en) 2022-06-29 2024-11-28 Abbott Laboratories Magnetic point-of-care systems and assays for determining gfap in biological samples
CN116903738A (zh) * 2022-08-02 2023-10-20 北京绿竹生物技术股份有限公司 一种低甘露糖型抗人肿瘤坏死因子-α单抗及其用途
AU2023338402A1 (en) 2022-09-07 2025-03-13 Mdx Management Llc Shp-1 inhibitors for treating cancer
KR20250068723A (ko) 2022-09-15 2025-05-16 아보트 러보러터리즈 경증 및 초경증 외상성 뇌 손상을 구분하기 위한 바이오마커 및 방법
WO2024097804A1 (en) 2022-11-02 2024-05-10 Mdx Management Llc Combination of a tyrosine kinase inhibitor and a pro-inflammatory agent for treating cancer
KR20260016906A (ko) 2023-03-17 2026-02-04 엠디엑스 메니지먼트 엘엘씨 요법의 유해효과를 개선하기 위한 조성물 및 방법
WO2024211475A1 (en) 2023-04-04 2024-10-10 Abbott Laboratories Use of biomarkers to determine whether a subject has sustained, may have sustained or is suspected of sustaining a subacute acquired brain injury (abi)
WO2024226969A1 (en) 2023-04-28 2024-10-31 Abbott Point Of Care Inc. Improved assays, cartridges, and kits for detection of biomarkers, including brain injury biomarkers
WO2025038745A1 (en) 2023-08-16 2025-02-20 Mdx Management Llc Compositions and methods for activating immune cells
WO2025188909A1 (en) 2024-03-06 2025-09-12 Mdx Management Llc Shp-1 inhibitor conjugates with pro-inflammatory compounds
WO2025238106A1 (en) 2024-05-15 2025-11-20 M6P Therapeutics (Switzerland) GmbH Lysosome-targeting degradation fusion design
WO2026043823A2 (en) 2024-08-19 2026-02-26 Sutro Biopharma, Inc. Antibodies comprising site-specific non-natural amino acid residues, methods of preparation and uses thereof

Family Cites Families (114)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4680276A (en) * 1977-05-25 1987-07-14 Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale Metal polypeptides
CA1208546A (en) 1981-09-08 1986-07-29 Anthony Cerami Lipoprotein lipase suppression by endotoxin-induced mediator (shock assay)
US5672347A (en) 1984-07-05 1997-09-30 Genentech, Inc. Tumor necrosis factor antagonists and their use
IL73883A (en) 1984-12-20 1990-12-23 Yeda Res & Dev Monoclonal antibodies against tnf-alpha,hybridomas producing them and method for the purification of tnf-alpha
US4661016A (en) * 1985-04-11 1987-04-28 Mobil Oil Corporation Subsea flowline connector
EP0613006A1 (en) 1985-08-16 1994-08-31 The Rockefeller University Antibodies to cachectin and immunoassays
DE3631229A1 (de) 1986-09-13 1988-03-24 Basf Ag Monoklonale antikoerper gegen humanen tumornekrosefaktor (tnf) und deren verwendung
GB8630273D0 (en) * 1986-12-18 1987-01-28 Til Medical Ltd Pharmaceutical delivery systems
JP2638652B2 (ja) 1988-07-18 1997-08-06 カイロン・コーポレーション カケクチンと反応するモノクロナール抗体
GB8823869D0 (en) * 1988-10-12 1988-11-16 Medical Res Council Production of antibodies
US4940723A (en) * 1988-10-20 1990-07-10 University Of North Carolina, Chapel Hill Use of bis-(5-amidino-2-benzimidazolyl) methane (BABIM) to treat arthritis
DE68914244T2 (de) 1988-10-24 1994-10-27 Otsuka Pharma Co Ltd Monoklonaler Antikörper.
US5530101A (en) * 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
ZA902949B (en) * 1989-05-05 1992-02-26 Res Dev Foundation A novel antibody delivery system for biological response modifiers
DE3918082A1 (de) * 1989-06-02 1991-01-24 Max Planck Gesellschaft Mittel gegen autoimmunerkrankungen
US5959087A (en) * 1989-08-07 1999-09-28 Peptide Technology, Ltd. Tumour necrosis factor binding ligands
US6448380B2 (en) 1989-08-07 2002-09-10 Peptech Limited Tumor necrosis factor antibodies
JP3443119B2 (ja) 1989-08-07 2003-09-02 ペプテック リミテッド 腫瘍壊死因子結合リガンド
GB8928874D0 (en) 1989-12-21 1990-02-28 Celltech Ltd Humanised antibodies
US5859205A (en) 1989-12-21 1999-01-12 Celltech Limited Humanised antibodies
US6075181A (en) 1990-01-12 2000-06-13 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US6673986B1 (en) * 1990-01-12 2004-01-06 Abgenix, Inc. Generation of xenogeneic antibodies
US6150584A (en) * 1990-01-12 2000-11-21 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
GB9014932D0 (en) 1990-07-05 1990-08-22 Celltech Ltd Recombinant dna product and method
US5625126A (en) * 1990-08-29 1997-04-29 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5661016A (en) 1990-08-29 1997-08-26 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes
US5545806A (en) * 1990-08-29 1996-08-13 Genpharm International, Inc. Ransgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5789650A (en) * 1990-08-29 1998-08-04 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US7084260B1 (en) * 1996-10-10 2006-08-01 Genpharm International, Inc. High affinity human antibodies and human antibodies against human antigens
US6300129B1 (en) * 1990-08-29 2001-10-09 Genpharm International Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US6255458B1 (en) * 1990-08-29 2001-07-03 Genpharm International High affinity human antibodies and human antibodies against digoxin
ES2108048T3 (es) * 1990-08-29 1997-12-16 Genpharm Int Produccion y utilizacion de animales inferiores transgenicos capaces de producir anticuerpos heterologos.
US5770429A (en) * 1990-08-29 1998-06-23 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5633425A (en) * 1990-08-29 1997-05-27 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
GB9022547D0 (en) 1990-10-17 1990-11-28 Wellcome Found Purified immunoglobulin
US5994510A (en) 1990-12-21 1999-11-30 Celltech Therapeutics Limited Recombinant antibodies specific for TNFα
GB9109645D0 (en) 1991-05-03 1991-06-26 Celltech Ltd Recombinant antibodies
GB2279077B (en) 1990-12-21 1995-06-14 Celltech Ltd Therapeutic compositions comprising recombinant antibodies specific for the TNFalpha
GB9028123D0 (en) 1990-12-28 1991-02-13 Erba Carlo Spa Monoclonal antibodies against human tumor necrosis factor alpha
EP1097945B1 (en) 1991-03-18 2007-07-04 New York University Monoclonal and chimeric antibody specific for human tumor necrosis factor
US5656272A (en) 1991-03-18 1997-08-12 New York University Medical Center Methods of treating TNF-α-mediated Crohn's disease using chimeric anti-TNF antibodies
US20040120952A1 (en) 2000-08-07 2004-06-24 Centocor, Inc Anti-TNF antibodies and peptides of human tumor necrosis factor
US5698195A (en) * 1991-03-18 1997-12-16 New York University Medical Center Methods of treating rheumatoid arthritis using chimeric anti-TNF antibodies
US20070298040A1 (en) 1991-03-18 2007-12-27 Centocor, Inc. Methods of treating seronegative arthropathy with anti-TNF antibodies
US7192584B2 (en) 1991-03-18 2007-03-20 Centocor, Inc. Methods of treating psoriasis with anti-TNF antibodies
US20060246073A1 (en) 1991-03-18 2006-11-02 Knight David M Anti-TNF antibodies and peptides of human tumor necrosis factor
US6277969B1 (en) 1991-03-18 2001-08-21 New York University Anti-TNF antibodies and peptides of human tumor necrosis factor
US5328985A (en) 1991-07-12 1994-07-12 The Regents Of The University Of California Recombinant streptavidin-protein chimeras useful for conjugation of molecules in the immune system
ATE181571T1 (de) * 1991-09-23 1999-07-15 Medical Res Council Methoden zur herstellung humanisierter antikörper
US5869619A (en) * 1991-12-13 1999-02-09 Xoma Corporation Modified antibody variable domains
US6270766B1 (en) 1992-10-08 2001-08-07 The Kennedy Institute Of Rheumatology Anti-TNF antibodies and methotrexate in the treatment of arthritis and crohn's disease
ATE155043T1 (de) * 1992-10-08 1997-07-15 Kennedy Inst Of Rheumatology Behandlung von autoimmun- und entzundungskrankheiten
DE69427928T3 (de) * 1993-03-05 2012-05-10 Bayer Healthcare Llc Humane monoklonale anti-TNF alpha Antikörper
CA2162689C (en) 1993-05-12 2000-07-18 Xoma Corporation Immunotoxins comprising gelonin and an antibody
ATE183513T1 (de) 1993-06-03 1999-09-15 Therapeutic Antibodies Inc Herstellung von antikörperfragmenten
WO1995011317A1 (en) 1993-10-19 1995-04-27 The Scripps Research Institute Synthetic human neutralizing monoclonal antibodies to human immunodeficiency virus
EP0659766A1 (en) 1993-11-23 1995-06-28 Schering-Plough Human monoclonal antibodies against human cytokines and methods of making and using such antibodies
WO1995023813A1 (en) 1994-03-04 1995-09-08 Merck & Co., Inc. In vitro antibody affinity maturation using alanine scanning mutagenesis
JPH07289288A (ja) * 1994-04-27 1995-11-07 L T T Kenkyusho:Kk 抗リウマチ薬の効果評価方法
EP0766564A4 (en) 1994-06-24 1998-09-23 Immunex Corp SLOW RELEASE POLYPEPTIDES COMPOSITIONS AND METHODS FOR TREATING INFLAMMATORY BOWEL CONDITIONS
US5561053A (en) 1994-08-05 1996-10-01 Genentech, Inc. Method for selecting high-expressing host cells
GB9416721D0 (en) * 1994-08-18 1994-10-12 Short Brothers Plc A bias yarn assembly forming device
US6113898A (en) 1995-06-07 2000-09-05 Idec Pharmaceuticals Corporation Human B7.1-specific primatized antibodies and transfectomas expressing said antibodies
US6090382A (en) 1996-02-09 2000-07-18 Basf Aktiengesellschaft Human antibodies that bind human TNFα
DE122004000004I1 (de) * 1996-02-09 2004-08-12 Abott Biotechnology Ltd Humane Antikörper welche an Humanen TNFalpha binden.
WO2000058362A1 (en) * 1999-03-26 2000-10-05 Human Genome Sciences, Inc. Neutrokine-alpha binding proteins and methods based thereon
US20050249735A1 (en) 2000-08-07 2005-11-10 Centocor, Inc. Methods of treating ankylosing spondylitis using anti-TNF antibodies and peptides of human tumor necrosis factor
UA81743C2 (uk) 2000-08-07 2008-02-11 Центокор, Инк. МОНОКЛОНАЛЬНЕ АНТИТІЛО ЛЮДИНИ, ЩО СПЕЦИФІЧНО ЗВ'ЯЗУЄТЬСЯ З ФАКТОРОМ НЕКРОЗУ ПУХЛИН АЛЬФА (ФНПα), ФАРМАЦЕВТИЧНА КОМПОЗИЦІЯ, ЩО ЙОГО МІСТИТЬ, ТА СПОСІБ ЛІКУВАННЯ РЕВМАТОЇДНОГО АРТРИТУ
US20060018907A1 (en) 2000-08-07 2006-01-26 Centocor, Inc. Anti-TNF antibodies and peptides of human tumor necrosis factor
US20030012786A1 (en) 2001-05-25 2003-01-16 Teoh Leah S. Use of anti-TNF antibodies as drugs in treating septic disorders of anemic patients
CA2385745C (en) 2001-06-08 2015-02-17 Abbott Laboratories (Bermuda) Ltd. Methods of administering anti-tnf.alpha. antibodies
US20030161828A1 (en) 2002-02-19 2003-08-28 Abbott Gmbh & Co. Kg Use of TNF antagonists as drugs for the treatment of patients with an inflammatory reaction and without suffering from total organ failure
US20030206898A1 (en) 2002-04-26 2003-11-06 Steven Fischkoff Use of anti-TNFalpha antibodies and another drug
US20040009172A1 (en) 2002-04-26 2004-01-15 Steven Fischkoff Use of anti-TNFalpha antibodies and another drug
US20090280065A1 (en) * 2006-04-10 2009-11-12 Willian Mary K Uses and Compositions for Treatment of Psoriasis
AR040603A1 (es) * 2002-07-19 2005-04-13 Abbott Lab S A El uso de un anticuerpo anti-tnfalfa neutralizador de alta afinidad en la fabricacion de un medicamento y conjunto de elementos
US20040033228A1 (en) 2002-08-16 2004-02-19 Hans-Juergen Krause Formulation of human antibodies for treating TNF-alpha associated disorders
US20040054414A1 (en) * 2002-09-18 2004-03-18 Trieu Hai H. Collagen-based materials and methods for augmenting intervertebral discs
MY150740A (en) 2002-10-24 2014-02-28 Abbvie Biotechnology Ltd Low dose methods for treating disorders in which tnf? activity is detrimental
TWI439284B (zh) 2004-04-09 2014-06-01 Abbvie Biotechnology Ltd 用於治療ＴＮＦα相關失調症之多重可變劑量療法
EP1807111A4 (en) 2004-10-08 2009-05-27 Abbott Biotech Ltd SYNCYTIAL RESPIRATORY VIRUS INFECTION (RSV)
AU2006246721B2 (en) * 2005-05-16 2012-12-13 Abbvie Biotechnology Ltd Use of TNF inhibitor for treatment of erosive polyarthritis
US20070041905A1 (en) 2005-08-19 2007-02-22 Hoffman Rebecca S Method of treating depression using a TNF-alpha antibody
CA2626804A1 (en) 2005-11-01 2007-08-09 Abbott Biotechnology Ltd. Methods and compositions for diagnosing ankylosing spondylitis using biomarkers
MX2008012896A (es) 2006-04-05 2008-10-14 Abbott Biotech Ltd Purificacion de anticuerpos.
WO2007120626A2 (en) * 2006-04-10 2007-10-25 Abbott Biotechnology Ltd. Uses and compositions for treatment of ankylosing spondylitis
US20080118496A1 (en) 2006-04-10 2008-05-22 Medich John R Uses and compositions for treatment of juvenile rheumatoid arthritis
US9605064B2 (en) 2006-04-10 2017-03-28 Abbvie Biotechnology Ltd Methods and compositions for treatment of skin disorders
US20090317399A1 (en) * 2006-04-10 2009-12-24 Pollack Paul F Uses and compositions for treatment of CROHN'S disease
EP2666472A3 (en) * 2006-04-10 2014-04-02 Abbott Biotechnology Ltd Uses and compositions for treatment of psoriatic arthritis
WO2007120656A2 (en) * 2006-04-10 2007-10-25 Abbott Biotechnology Ltd. Uses and compositions for treatment of rheumatoid arthritis
US20080131374A1 (en) 2006-04-19 2008-06-05 Medich John R Uses and compositions for treatment of rheumatoid arthritis
US20100021451A1 (en) * 2006-06-08 2010-01-28 Wong Robert L Uses and compositions for treatment of ankylosing spondylitis
US20080311043A1 (en) 2006-06-08 2008-12-18 Hoffman Rebecca S Uses and compositions for treatment of psoriatic arthritis
CN103316402A (zh) * 2006-06-30 2013-09-25 艾伯维生物技术有限公司 自动注射装置
BRPI0716762A2 (pt) 2006-09-13 2013-09-24 Abbott Lab melhorias da cultura celular
NZ576133A (en) * 2006-10-27 2012-10-26 Abbott Biotech Ltd Crystalline anti-htnfalpha antibodies
MX2009010361A (es) 2007-03-29 2009-10-16 Abbott Lab Anticuerpos il-12 anti-humanos cristalinos.
WO2008150491A2 (en) 2007-05-31 2008-12-11 Abbott Laboratories BIOMARKERS PREDICTIVE OF THE RESPONSIVENESS TO TNFα INHIBITORS IN AUTOIMMUNE DISORDERS
EP2152318A4 (en) * 2007-06-01 2011-12-07 Abbott Biotech Ltd COMPOSITIONS AND USES FOR THE TREATMENT OF PSORIASIS AND CROHN'S DISEASE
WO2008154543A2 (en) * 2007-06-11 2008-12-18 Abbott Biotechnology Ltd. Methods for treating juvenile idiopathic arthritis
EP2173380A4 (en) * 2007-07-13 2011-08-31 Abbott Biotech Ltd METHOD AND COMPOSITIONS FOR PULMONARY ADMINISTRATION OF A TNFa HEMMER
WO2009020654A1 (en) * 2007-08-08 2009-02-12 Abbott Laboratories Compositions and methods for crystallizing antibodies
NZ622583A (en) * 2007-11-30 2015-08-28 Abbvie Biotechnology Ltd Protein formulations and methods of making same
CN101965514A (zh) * 2008-01-03 2011-02-02 艾博特生物技术有限公司 预测化合物在治疗银屑病中的长期功效
NZ600979A (en) * 2008-01-15 2014-01-31 Abbott Lab Improved mammalian expression vectors and uses thereof
BRPI0907186A2 (pt) * 2008-01-15 2015-07-14 Abbott Gmbh & Co Kg Composições proteicas pulverizadas e métodos para sua produção
JP2011511777A (ja) 2008-01-30 2011-04-14 アボット・ラボラトリーズ 抗体断片を結晶化するための組成物及び方法
US20100040630A1 (en) * 2008-03-24 2010-02-18 Aake Elden Methods and compositions for treating bone loss
CN102458517B (zh) 2009-04-29 2014-07-23 阿布维生物技术有限公司 自动注射装置
RU2560701C2 (ru) * 2009-05-04 2015-08-20 Эббви Байотекнолоджи Лтд. Стабильные композиции с высокими концентрациями белков антител человека против tnf-альфа
EP2531613A2 (en) 2010-02-02 2012-12-12 Abbott Biotechnology Ltd. Methods and compositions for predicting responsiveness to treatment with tnf-alpha inhibitor
HUE039740T2 (hu) 2010-06-03 2019-01-28 Abbvie Biotechnology Ltd Alkalmazások és készítmények hidradenitis suppurativa (HS) kezelésére
US9085618B2 (en) * 2013-10-18 2015-07-21 Abbvie, Inc. Low acidic species compositions and methods for producing and using the same

Also Published As

Publication number Publication date
HU221984B1 (hu) 2003-03-28
JP4890997B2 (ja) 2012-03-07
HU230515B1 (hu) 2016-10-28
US20130115224A1 (en) 2013-05-09
WO1997029131A1 (en) 1997-08-14
NZ576716A (en) 2011-02-25
IL218518A0 (en) 2012-04-30
JP2007045828A (ja) 2007-02-22
CZ292465B6 (cs) 2003-09-17
IL206994A0 (en) 2010-12-30
PL328411A1 (en) 1999-01-18
US8206714B2 (en) 2012-06-26
HU230048B1 (hu) 2015-06-29
JP2003177130A (ja) 2003-06-27
KR19990082430A (ko) 1999-11-25
NO2017038I1 (no) 2017-08-01
HK1214609A1 (en) 2016-07-29
BRPI9707379C8 (pt) 2017-12-12
PL193499B1 (pl) 2007-02-28
HK1125972A1 (en) 2009-08-21
US8753633B2 (en) 2014-06-17
CN1215407A (zh) 1999-04-28
NO20026202D0 (no) 2002-12-23
TR199801532T2 (xx) 1998-11-23
BG112042A (bg) 2015-10-30
MX336813B (es) 2016-02-02
HK1214608A1 (en) 2016-07-29
US20130330356A1 (en) 2013-12-12
NO20026202L (no) 1998-10-07
DE69721548D1 (de) 2003-06-05
CN1504752A (zh) 2004-06-16
US7541031B2 (en) 2009-06-02
CY2005011I1 (el) 2011-06-08
US20100040604A1 (en) 2010-02-18
US20030092059A1 (en) 2003-05-15
NZ562935A (en) 2009-06-26
DK0929578T3 (da) 2003-08-25
AU2122997A (en) 1997-08-28
MX9806347A (es) 1998-10-31
JP5951056B2 (ja) 2016-07-13
BRPI9715219B8 (pt) 2015-07-07
UA82823C2 (en) 2008-05-26
RU2270030C2 (ru) 2006-02-20
JP2015108011A (ja) 2015-06-11
NO319955B1 (no) 2005-10-03
BG107537A (bg) 2003-09-30
RU2005113954A (ru) 2006-11-20
IL125697A (en) 2005-03-20
ATE239041T1 (de) 2003-05-15
LU91062I2 (fr) 2004-04-26
SK284040B6 (sk) 2004-08-03
CN101712720A (zh) 2010-05-26
BG64776B1 (bg) 2006-03-31
NZ536216A (en) 2006-08-31
HK1019452A1 (en) 2000-02-11
NO2004002I2 (no) 2008-02-04
NZ512006A (en) 2005-05-27
BG109311A (en) 2006-03-31
NO983627D0 (no) 1998-08-07
IL151641A0 (en) 2003-04-10
NL300143I2 (nl) 2004-07-01
US6258562B1 (en) 2001-07-10
JP2016104798A (ja) 2016-06-09
CN100429232C (zh) 2008-10-29
US7223394B2 (en) 2007-05-29
SI9720020B (en) 2001-12-31
SK106298A3 (en) 1999-03-12
JP2014055150A (ja) 2014-03-27
NO322755B1 (no) 2006-12-04
CY2463B1 (en) 2005-06-03
BR9707379A (pt) 1999-04-13
JP3861118B2 (ja) 2006-12-20
BG64564B1 (bg) 2005-07-29
RU2012102323A (ru) 2013-07-27
NL300143I1 (nl) 2004-05-03
BG110703A (en) 2010-10-29
EP0929578B1 (en) 2003-05-02
PT929578E (pt) 2003-09-30
NO2017038I2 (no) 2017-11-17
HK1125951A1 (en) 2009-08-21
HUP9901874A3 (en) 2000-05-29
CA2243459C (en) 2002-09-17
HK1066860A1 (en) 2005-04-01
NZ331579A (en) 2001-06-29
AU722077B2 (en) 2000-07-20
KR100317188B1 (ko) 2002-02-19
NO20040052L (no) 1998-10-07
IL125697A0 (en) 1999-04-11
JP2013091666A (ja) 2013-05-16
JP4404181B2 (ja) 2010-01-27
JP2010209119A (ja) 2010-09-24
JP2000507810A (ja) 2000-06-27
US20070249813A1 (en) 2007-10-25
JP5689902B2 (ja) 2015-03-25
HK1214610A1 (en) 2016-07-29
JP5422501B2 (ja) 2014-02-19
JP5759526B2 (ja) 2015-08-05
US8372400B2 (en) 2013-02-12
BG102755A (en) 1999-05-31
BR9707379B1 (pt) 2009-08-11
PL188192B1 (pl) 2004-12-31
RU2003120859A (ru) 2005-01-10
NO983627L (no) 1998-10-07
NO20040154L (no) 1998-10-07
HU228630B1 (en) 2013-04-29
ES2198552T3 (es) 2004-02-01
BRPI9707379B8 (pt) 2015-07-07
DE122004000003I1 (de) 2004-09-23
DE69721548T2 (de) 2004-04-01
UA57726C2 (uk) 2003-07-15
CN103275221A (zh) 2013-09-04
CN102070715A (zh) 2011-05-25
DE122004000004I1 (de) 2004-08-12
BR9715219B1 (pt) 2010-02-23
NO316711B1 (no) 2004-04-13
BG66509B1 (bg) 2015-11-30
CA2243459A1 (en) 1997-08-14
CZ247698A3 (cs) 1998-11-11
US20130330357A1 (en) 2013-12-12
BG66195B1 (bg) 2012-01-31
CN1300173C (zh) 2007-02-14
EP0929578A1 (en) 1999-07-21
DE122004000003I2 (de) 2007-03-29
RO123028B1 (ro) 2010-07-30
CN103275221B (zh) 2016-08-17
US20090155205A1 (en) 2009-06-18
HUP1500179A2 (en) 1999-09-28
SI9720020A (sl) 1999-10-31
RO119831B1 (ro) 2005-04-29
US20120258114A1 (en) 2012-10-11
RU2458704C2 (ru) 2012-08-20
HU0204115D0 (en) 2003-02-28
RU2458704C9 (ru) 2012-12-10
HUP9901874A2 (hu) 1999-09-28
HK1214607A1 (en) 2016-07-29

Similar Documents

Publication Publication Date Title
NO320657B1 (no) Farmasoytisk blanding omfattende human-antistoffer som binder TNFalfa, samt anvendelser derav
CA2389943C (en) Human antibodies that bind human tnf.alpha.
NO20120288L (no) Fremgangsmåte ved administrering av anti-TNF-alfa-antistoff
AU2013257402B2 (en) Human antibodies that bind human TNFalpha
AU2004202769B2 (en) Human antibodies that bind human TNFalpha
HK1165437A (en) Human antibodies that bind human tnfalpha
HK1053846A (en) Human antibodies that bind human tnfalpha
HK1161270A (en) Human antibodies that bind human tnfalpha

Legal Events

Date Code Title Description
CHAD Change of the owner's name or address (par. 44 patent law, par. patentforskriften)

Owner name: ABBVIE BIOTECHNOLOGY LTD, BM

MK1K Patent expired