PL188192B1 - Izolowane ludzkie przeciwciało albo jego część wiążąca antygen, rekombinowane ludzkie przeciwciało albo jego część wiążąca antygen, kompozycje farmaceutyczne, izolowane kwasy nukleinowe, rekombinowany wektor ekspresyjny, komórka gospodarza, sposób syntetyzowania przeciwciała ludzkiego, które wiąże ludzki TNFalfa, sposób hamowania aktywności ludzkiego TNFalfa in vitro, przeciwciało albo jego częśćwiążąca antygen, zastosowanie przeciwciała albo jego części wiążącej antygen - Google Patents

Izolowane ludzkie przeciwciało albo jego część wiążąca antygen, rekombinowane ludzkie przeciwciało albo jego część wiążąca antygen, kompozycje farmaceutyczne, izolowane kwasy nukleinowe, rekombinowany wektor ekspresyjny, komórka gospodarza, sposób syntetyzowania przeciwciała ludzkiego, które wiąże ludzki TNFalfa, sposób hamowania aktywności ludzkiego TNFalfa in vitro, przeciwciało albo jego częśćwiążąca antygen, zastosowanie przeciwciała albo jego części wiążącej antygen

Info

Publication number
PL188192B1
PL188192B1 PL97328411A PL32841197A PL188192B1 PL 188192 B1 PL188192 B1 PL 188192B1 PL 97328411 A PL97328411 A PL 97328411A PL 32841197 A PL32841197 A PL 32841197A PL 188192 B1 PL188192 B1 PL 188192B1
Authority
PL
Poland
Prior art keywords
antibody
disease
seq
binding portion
tnf
Prior art date
Application number
PL97328411A
Other languages
English (en)
Other versions
PL328411A1 (en
Inventor
Jochen G. Salfeld
Deborah J. Allen
Zehra Kaymakcalan
Boris Labkovsky
John A. Mankovich
Brian T. Mcguiness
Original Assignee
Abbott Lab Bermuda Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=26707297&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=PL188192(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Priority claimed from US08/599,226 external-priority patent/US6090382A/en
Application filed by Abbott Lab Bermuda Ltd filed Critical Abbott Lab Bermuda Ltd
Publication of PL328411A1 publication Critical patent/PL328411A1/xx
Publication of PL188192B1 publication Critical patent/PL188192B1/pl

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
    • C07K16/241—Tumor Necrosis Factors
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/02—Stomatological preparations, e.g. drugs for caries, aphtae, periodontitis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/16—Central respiratory analeptics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/06—Antigout agents, e.g. antihyperuricemic or uricosuric agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A61P29/02—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID] without antiinflammatory effect
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/04—Anorexiants; Antiobesity agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A61P31/22—Antivirals for DNA viruses for herpes viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P33/00—Antiparasitic agents
    • A61P33/02—Antiprotozoals, e.g. for leishmaniasis, trichomoniasis, toxoplasmosis
    • A61P33/06—Antimalarials
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P39/00—General protective or antinoxious agents
    • A61P39/02—Antidotes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/04—Inotropic agents, i.e. stimulants of cardiac contraction; Drugs for heart failure
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/08—Vasodilators for multiple indications
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/64—General methods for preparing the vector, for introducing it into the cell or for selecting the vector-containing host
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/10—Cells modified by introduction of foreign genetic material
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S424/00—Drug, bio-affecting and body treating compositions
    • Y10S424/81—Drug, bio-affecting and body treating compositions involving autoimmunity, allergy, immediate hypersensitivity, delayed hypersensitivity, immunosuppression, immunotolerance, or anergy

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Pulmonology (AREA)

Abstract

1. Izolowane ludzkie przeciwcialo albo jego czesc wiazaca antygen, które ma naste- pujace cechy charakterystyczne: a) dysocjuje od ludzkiego TNFa ze stala szybkosci Koff- równa 1 x 10-3 s-1 albo mniej, jak okreslono metoda rezonansu plazmonów powierzchniowych; b) posiada domene CDR3 lancucha lekkiego obejmujaca sekwencje aminokwasowa o Identyfikatorze Sekw. nr 3 albo zmodyfikowana na podstawie Identyfikatora Sekw. nr 3 przez pojedyncze zastapienie alanina w pozycjach 1, 4, 5, 7 albo 8, albo przez jedno do pieciu zastapien konserwatywnych aminokwasów w pozycjach 1, 3,4, 6, 7, 8 i/lub 9; c) posiada domene CDR3 lancucha ciezkiego obejmujaca sekwencje aminokwasowa o Identyfikatorze Sekw. nr 4 albo zmodyfikowana na podstawie Identyfikatora Sekw. nr 4 przez pojedyncze zastapienie alanina w pozycjach 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10 albo 1 1 , albo przez jedno do pieciu zastapien konserwatywnych aminokwasów w pozycjach 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10, 11 i/lub 12. 24. Izolowane przeciwcialo ludzkie albo jego czesc wiazaca antygen, znamienne tym, ze posiada region zmienny lancucha lekkiego (LCVR) obejmujacy sekwencje amino- kwasowa o Identyfikatorze Sekw. nr 1 i region zmienny lancucha ciezkiego (HCVR) obej- mujacy sekwencje aminokwasowa o Identyfikatorze Sekw. nr 2. PL PL PL PL PL PL PL

Description

Przedmiotem wynalazku są izolowane ludzkie przeciwciało albo jego cześć wiążąca antygen, rekombinowane ludzkie przeciwciało, albo jego część wiążąca antygen, kompozycje farmaceutyczne, izolowane kwasy nukleinowe, rekombinowany wektor ekspresyjny, komórka gospodarza, sposób syntetyzowania przeciwciała ludzkiego, które wiąże ludzki TNFa, sposób hamowania aktywności ludzkiego TNFa in vitro, przeciwciało albo jego część wiążąca antygen, zastosowania przeciwciała, albo jego części wiążącej antygen.
Czynnik martwicy nowotworu a (TNFa) jest cytokiną wytwarzaną przez wiele rodzajów komórek, w tym przez monocyty i makrofagi, która została początkowo zidentyfikowana w oparciu o jej zdolność do wywoływania martwicy pewnych nowotworów mysich (patrz np. Old (1985) Science 230: 630-632). Następnie wykazano, że czynnik określany jako kachektyna związany z kacheksją jest tą samą cząsteczką co TNFa. TNFa wiąże się z wywoływaniem wstrząsu (patrz np. Beutler i Cerami (1988) Annu. Rev. Biochem. 57: 505-518; Beutler i Cerami (1989) Annu. Rev. Immunol. 7: 625-655). Ponadto, TNFa wiąże się z patofizjologią różnych innych chorób i zaburzeń u człowieka, w tym posocznicy, zakażeń, chorób autoimmunizacyjnych, odrzucania przeszczepu i reakcji przeszczep przeciwko gospodarzowi (patrz np. Moeller i in., (1990) Cytokine 2: 162-169; patent USA nr 5 231 024, Moeller i in.; europejskie zgłoszenie patentowe nr 260610B1, Moeller i in., Vasilli (1992) Annu. Rev. Immunol. 10: 411-452; Tracey i Cerami (1994) Annu. Rev. Med. 45: 491-503).
Z powodu szkodliwej roli ludzkiego TNFa (hTNFa) w różnych zaburzeniach u człowieka, opracowano strategie terapeutyczne w celu zahamowania albo przeciwdziałania czynności hNNF a. W szczególności, poszukiwano przeciwciał, które wiążą i neutralizują hTNFa, jako środków do hamowania działania hTNFa. Niektóre z wcześniejszych przeciwciał były mysimi przeciwciałami monoklonalnymi (mAb), wydzielanymi przez hybrydoma wytworzone z limfocytów myszy immunizowanych hTNFa (patrz np. Hahn i in., (1985) Proc. Natl. Acad. Sei. USA 82: 3814-3818; Liang i in., (1986) Biochem. Biophys. Res. Commun. 137: 847-854; Hirai i in., (1987) J. Immunol. Meth. 96: 57-62; Fendly i in., (1987) Hybridoma 6: 359-370; Moeller i in., (1990) Cytokine 2: 162-169; patent USA nr 5 231 024, Moeller; europejskie zgłoszenie patentowe nr 186833B1, Wallach; opublikowane europejskie zgłoszenie patentowe nr 218868A1, Old i in.; europejska publikacja patentowa nr 260610B1, Moeller i in.). O ile przeciwciała te wykazywały zwykle wysokie powinowactwo do hTNFa (np. Kd < 10'9 M)
188 192 i były zdolne do neutralizacji aktywności hTNFa, ich zastosowanie in vivo może być ograniczone przez problemy związane z podawniem mysich przeciwciał ludziom, takich jak krótki okres półtrwania w surowicy, niezdolność do wywołania niektórych ludzkich funkcji efektorowych i wywoływanie niepożądanej reakcji odpornościowej u ludzi przeciwko mysim przeciwciałom (reakcja ludzkich przeciwciał przeciwko mysim przeciwciałom; HAMA). W celu przezwyciężenia problemów związanych z zastosowaniem u ludzi w pełni mysich przeciwciał, mysie przeciwciała przeciwko hTNFa poddano inżynierii genetycznej powodującej, że stały się bardziej podobne do ludzkich. Przykładowo, wytworzono przeciwciała chimeryczne, w których regiony zmienne łańcuchów przeciwciał są pochodzenia mysiego, zaś regiony stałe łańcuchów przeciwciał są pochodzenia ludzkiego (Knight i in., (1993) Mol. Immunol. 30: 1443-1453; publikacja PCT WO 92/16553, Daddona i in.). Oprócz tego, wytworzono również przeciwciała humanizowane, w których domeny hiperzmienne regionów zmiennych przeciwciał są pochodzenia mysiego, zaś pozostała część regionów zmiennych oraz regiony stałe przeciwciała są pochodzenia ludzkiego (publikacja PCT WO 92/11383, Adair i in.). Jednakże, ponieważ takie przeciwciała chimeryczne i humanizowane wciąż zachowują nieco sekwencji mysich, wciąż mogą wywoływać niepożądaną reakcję odpornościową, reakcję ludzkich przeciwciał przeciwko przeciwciałom chimerycznym (HACA), zwłaszcza przy podawaniu przez czas dłuższy, np. ze wskazań przewlekłych, takich jak reumatoidalne zapalenie stawów (patrz, np. Elliot i in., (1994) Lancet 344: 1125-1127; Elliot i in., (1994) Lancet 344: 1105-1110).
Korzystny w stosunku do mysich mAb albo ich pochodnych (np. przeciwciał chimerycznych albo humanizowanych) środek hamujący hTNFa powinien być w całości ludzkim przeciwciałem przeciwko hTNFa, ponieważ środek taki nie powinien wywoływać reakcji HAMA, nawet podawany przez czas dłuższy. Ludzkie przeciwciała monoklonalne przeciwko hTNFa wytworzono stosując techniki ludzkich hybrydoma (Boyle i in., (1993) Cell. Immunol. 152: 556-568; Boyle i in., (1993) Cell. Immunol. 152: 569-581; opublikowane europejskie zgłoszenie patentowe nr 614984A2, Boyle i in.). Jednakże, opisywano, 'że te autoprzeciwciała monoklonalne pochodzące z hybrydoma wykazują powinowactwo względem hTNFa zbyt niskie do obliczenia konwencjonalnymi metodami, były niezdolne do wiązania rozpuszczalnego hTNFa i niezdolne do neutralizacji cytotoksyczności wywołanej hTNFa (patrz Boyle i in., wyżej). Ponadto, powodzenie techniki ludzkich hybrydoma zależy od naturalnej obecności w ludzkiej krwi obwodowej limfocytów wytwarzających autoprzeciwciała przeciwko hTNFa. Pewne badania wykryły surowicze autoprzeciwciała przeciwko hTNFa u osobników ludzkich (Fomsgaard i in., (1989) Scand. J. Immunol. 30: 219-223; Bendtzen i in., (1990) Prog. Leucocyte Biol. 106: 447-452), podczas gdy inne nie (Leusch i in., (1991) J. Immunol. Meth. 139: 145-147).
Alternatywą dla naturalnie występujących ludzkich przeciwciał przeciwko hTNFa powinno być rekombinowane przeciwciało przeciwko hTNFa. Opisano rekombinowane ludzkie przeciwciała, które wiążą hTNFa ze względnie niskim powinowactwem (tj. Kd~10’7 M) i dużą szybkością odłączania (tj. KOff~10’2 s') (Griffith i in., (1993) EMBO J. 12: 725-734). Jednakże, z powodu ich względnie szybkiej kinetyki dysocjacji, przeciwciała te mogą nie być przydatne do zastosowań terapeutycznych. Oprócz tego opisano, że rekombinowane ludzkie przeciwciała przeciwko hTNFa nie neutralizują aktywności hTNFa, ale raczej zwiększają wiązanie hTNFa z powierzchnią komórek oraz zwiększają internalizację hTNFa (Lidbury i in., (1994) Biotechnol. Ther. 5: 27-45; publikacja PCT nr WO 92/03145, Aston i in.).
Potrzebne są więc wciąż przeciwciała ludzkie, takie jak rekombinowane ludzkie przeciwciała, które wiążą rozpuszczalny hTNFa z wysokim powinowactwem i powolną kinetyką dysocjacji oraz które mają zdolność do neutralizacji aktywności hTNFa, w tym cytotoksyczności wywołanej hTNFa (m vitro i in vivo) oraz aktywacji komórek wywołanej hTNFa.
Streszczenie wynalazku
Wynalazek dostarcza izolowane ludzkie przeciwciało albo jego część wiążącą antygen, które ma następujące cechy charakterystyczne:
a) dysocjuje od judzkiego TNFa ze stalą szybkozci Kofr równą 1 χ 1 0’3s‘ 1 albo mmej , jak określono metodą rezonansu plazmonów powierzchniowych;
188 192
b) posiada domenę CDR3 łańcucha lekkiego obejmującą sekwencję aminokwasową o Identyfikatorze Sekw. nr 3 albo zmodyfikowaną na podstawie Identyfikatora Sekw. nr 3 przez pojedyncze zastąpienie alaniną w pozycjach 1,4, 5, 7 albo 8, albo przez jedno do pięciu zastąpień konserwatywnych aminokwasów w pozycjach 1, 3, 4, 6, 7, 8 i/lub 9;
c) posiada domenę CDR3 łańcucha ciężkiego obejmującą sekwencję aminokwasową o Identyfikatorze Sekw. nr 4 albo zmodyfikowaną na podstawie Identyfikatora Sekw. nr 4 przez pojedyncze zastąpienie alaniną w pozycjach 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10 albo 11, albo przez jedno do pięciu zastąpień konserwatywnych aminokwasów w pozycjach 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10, 11 i/lub 12.
W korzystnym wykonaniu wynalazku ludzkie przeciwciało albo jego część wiążąca antygen, dysocjuje od ludzkiego TNFa ze stałą Kd równą 1 x 10'8 M albo mniej oraz ze stałą szybkości Koff równą 1 x 10‘3s4 albo mniej, określonymi metodą rezonansu plazmonów powierzchniowych oraz neutralizuje cytotoksyczność ludzkiego TNFa w standardowym teście in vitro L929 z IC50 równą 1 x 10’7 M albo mniej, korzystniej z IC50 równą 1 x 10'8 M albo mniej, korzystniej z IC50 równą 1 x 10’9 M albo mniej, jeszce korzystniej z IC50 równą 5 x 10’10 M albo mniej.
W jednym wykonaniu wynalazek dostarcza wyizolowane ludzkie przeciwciało albo jego część wiążącą antygen, które jest przeciwciałem rekombinowanym albo jego częścią wiążącą antygen.
W korzystnym wykonaniu przeciwciało takie hamuje wywołaną ludzkim TNFa ekspresję ELAM-1 na ludzkich komórkach śródbłonka żyły pępowinowej.
W innym wykonaniu wynalazku izolowane ludzkie przeciwciało albo jego część wiążąca antygen dysocjuje od ludzkiego TNFa ze stałą szybkości K«,f równą 5 x W^s4 albo mniej, korzystniej ze stałą szybkości Kof równą 1 x 104s 4 albo mniej.
W zakres wynalazku wchodzi izolowane przeciwciało ludzkie albo jego część wiążąca antygen zawierające region zmienny łańcucha lekkiego (LCVR) o domenie CDR3 obejmującej sekwencję aminokwasową o Identyfikatorze Sekw. nr 3 albo zmodyfikowaną na podstawie Identyfikatora Sekw. nr 3 przez pojedyncze zastąpienie alaniną w pozycji 1, 4, 5, 7 albo 8 oraz region zmienny łańcucha ciężkiego (HCVR) o domenie CDR3 obejmującej sekwencję aminokwasową o Identyfikatorze Sekw. nr 4 albo zmodyfikowaną na podstawie Identyfikatora Sekw. nr 4 przez pojedyncze zastąpienie alaniną w pozycji 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10 albo 11.
Korzystnie LCVR posiada ponadto domenę CDR2 obejmującą sekwencję aminokwasową o Identyfikatorze Sekw. nr 5 oraz HCVR posiada ponadto domenę CDR2 obejmującą sekwencję aminokwasową o Identyfikatorze Sekw'. nr 6, korzystniej LCVR posiada ponadto domenę CDR1 obejmującą sekwencję aminokwasową o Identyfikatorze Sekw'. nr 7 oraz HCVR posiada ponadto domenę CDR1 obejmującą sekwencję aminokwasową o Identyfikatorze Sekw. nr 8.
W innym wykonaniu wynalazku izolowane przeciwciało ludzkie albo jego część wiążąca antygen posiada region zmienny łańcucha lekkiego (LCVR) o domenie CDR3 obejmującej sekwencję aminokwasową wybraną z grupy składającej się z: Identyfikatora Sekw'. nr 3, Identyfikatora Sekw'. nr 11, Identyfikatora Sekw. nr 12, Identyfikatora Sekw. nr 13, Identyfikatora Sekw. nr 14, Identyfikatora Sekw. nr 15, Identyfikatora Sekw. nr 16, Identyfikatora Sekw. nr 17, Identyfikatora Sekw. nr 18, Identyfikatora Sekw. nr 19, Identyfikatora Sekw. nr 20, Identyfikatora Sekw. nr 21, Identyfikatora Sekw. nr 22, Identyfikatora Sekw. nr 23, Identyfikatora Sekw. nr 24, Identyfikatora Sekw. nr 25, Identyfikatora Sekw. nr 26 albo region zmienny łańcucha ciężkiego (HCVR) o domenie CDR3 obejmującej sekwencję aminokwasową wybraną z grupy składającej się z: Identyfikatora Sekw. nr 4, Identyfikatora Sekw. nr 27, Identyfikatora Sekw. nr 28, Identyfikatora Sekw. nr 29, Identyfikatora Sekw. nr 30, Identyfikatora Sekw. nr 31, Identyfikatora Sekw. nr 32, Identyfikatora Sekw. nr 33 i Identyfikatora Sekw. nr 34.
Kolejny aspekt wynalazku dostarcza izolowane przeciwciało ludzkie albo jego część wiążącą antygen, które posiada region zmienny łańcucha lekkiego (LCVR) obejmujący sekwencję aminokwasową o Identyfikatorze Sekw. nr 1 i region zmienny łańcucha ciężkiego (HCVR) obejmujący sekwencję aminokwasową o Identyfikatorze Sekw. nr 2.
188 192
W korzystnym wykonaniu tego aspektu wynalazku izolowane przeciwciało ludzkie albo jego część wiążąca antygen posiada region stały łańcucha ciężkiego IgG1, korzystnie IgG4.
W kolejnym korzystnym wykonaniu izolowane przeciwciało ludzkie jest fragmentem Fab, korzystniej jest jednołańcuchowym fragmentem Fv.
W kolejnym wykonaniu wynalazek dostarcza rekombinowane przeciwciało ludzkie albo jego część wiążąca antygen, które neutralizuje aktywność ludzkiego TNFa, ale nie neutralizuje aktywności ludzkiego TNFp oraz posiada identyfikujące cechy charakterystyczne przeciwciała według wynalazku. Korzystnie przeciwciało takie neutralizuje także aktywność TNFa szympansa i przynajmniej jednego dodatkowego TNFa naczelnych wybranego z grupy składającej się z TNFa orangutana, TNFa marmosety, TNFa cynomolgusa i TNFa rezusa, korzystniej również neutralizuje aktywność TNFa psa, jeszcze korzystniej neutralizuje aktywność TNFa świni.
Inny aspekt wynalazku dostarcza kompozycji farmaceutycznej, obejmującej przeciwciało albo jego część wiążącą antygen według wynalazku oraz farmaceutycznie dopuszczalny nośnik, korzystnie kompozycja obejmuje przynajmniej jeden dodatkowy środek terapeutyczny do leczenia choroby, w której aktywność TNFa jest szkodliwa. W korzystnym wykonaniu kompozycji dodatkowe czynniki terapeutyczne wybrane są z grupy składającej się z niesteroidowych środków przeciwzapalnych, środków przeciwzapalnych hamujących cytokiny, CDP-571/BAY-10-3356, cA2, 75 kdTNFR-IgG, 55 kdTNFR-IgG, IDEC-CE9.1/SB210396, DAB486-IL-2, DAB 389-IL-2, Anti-Tac, IL-4, IL-10, agonistów IL-4, agonistów IL-10, IL-1RA, TNF-bp/s-TNFR, S284, R973401, MK-966, Iloprostu, metotreksatu, talidomidu, środków pokrewnych do talidomidu, leflunonidu, kwasu traneksamowego, T-614, prostaglandyny El, Tenidapu, Naproxenu, Meloxicamu, Piroxicamu, Diclofenacu, Indometacyny, Sulfasalazyny, Azatiopryny, inhibitorów ICE, inhibitorów zap-70, inhibitorów lek, inhibitorów VEGF, inhibitorów VEGF-R, kortykosteroidów, inhibitorów TNF-konwertazy, przeciwciał przeciw IL-12, inhibitorów interleukiny 11, interleukiny 13, interleukiny-17, złota, penicylaminy, chlorochiny, hydroksychlorochiny, chlorambucylu, cyklofosfamidu, cyklosporyny, globuliny anty-tymocytamej, przeciwciał przeciw CD4, CD5-toksyn, doustnie podawanych peptydów, kolagenu, disodowej soli lobenzarytu, czynników regulujących cytokiny HP228 i HP466, antysensownych fosforotionianowych oligodeoksynukleotydów ICAM-1, rozpuszczalnego dopełniacza receptora 1, prednizonu, orgoteiny, polisiarczanu glikozoaminoglikanu, minocykliny, przeciwciał przeciw IL2R, lipidów morskich, lipidów roślinnych, auranofiny, fenylobutazonu, kwasu meklofenamowego, kwasu flufenamowego, wewnątrzżylnych globulin odpornościwych, zileutonu, kwasu mykofenolowego, takrolimusu, sirolimusu, amiprilosu, kladribiny, azarybiny, budenozydu, epidermalnego czynnika wzrostowego, aminosalicylanów, 6-merkaptopuryny, metronidazolu, inhibitorów lipoksygenazy, mesalaminy, olsalazyny, balsalazydu, przeciwutleniaczy, inhibitorów tromboksanu, antagonistów receptora IL-1, przeciwciał monoklonalnych przeciwko IL-Ιβ, przeciwciał monoklinalnych przeciwko IL-6, czynników wzrostu, inhibitorów elastazy, związków pirydynylo-imidazolu, prednizolonowych proleków skoniugowanych z glukuronidem, deksametazonu lub budezonidu, prednizolonowych proleków skoniugowanych z dekstranem, powolnie uwalnianej mesalazyny, antagonistów czynnika aktywującego płytki (PAF, ang. Platelet Activating Factor), ciprofloksacyny, lingokainy, predizolonu, metylopredizolonu, cyklofosfamidu, 4-aminopirydyny, tizanidyny, interferonu pla, interferonu pib, kopolimeru 1, tlenu hiperbarycznego, wewnątrzżylnej immunoglobuliny, klabribiny, hipertonicznego roztworu soli, antybiotyków, ciągłej hemofiltracji, karbapenemów, antagonistów cytokin, takich jak TNFa, IL-βΙ, IL-6 i/albo IL-8, SK&F 107647, czterowartościowego guanylohydrazonu CNI-1493, inhibitora szlaku czynnika tkankowego, PHP, czynników chelatujących żelazo oraz chelatów, łącznie z kcnpleksem kwas dietylenotriaminopentaoctowy-żelazo (III), lizofiliny, PGG-glukanu, apolipoproteiny A-1 rekonstytuowanej lipidami, chiralnych kwasów hydroksamowych, przeciwciał przeciw endotoksynie, E5531, rBPI2i, syntetycznych peptydydów przeciw endotoksynie, surfaktantów terapii zastępczej oraz przeciwciał przeciw IL-8.
W kolejnym wykonaniu wynalazku dostarcza on izolowany kwas nukleinowy kodujący łańcuch lekki przeciwciała według wynalazku, którego domena CDR3 obejmuje sekwencję
188 192 aminokwasową o Identyfikatorze Sekw. nr 3 albo zmodyfikowaną na podstawie Identyfikatora Sekw. nr 3 przez pojedyncze zastąpienie alaniną w pozycjach 1, 4, 5, 7 albo 8, albo przez jedno do pięciu zastąpień konserwatywnych aminokwasów w pozycjach 1, 3, 4, 6, 7, 8 i/lub 9, korzystnie region zmienny łańcucha lekkiego (LCVR) przeciwciała, korzystnie domena CDR2 LCVR przeciwciała obejmuje sekwencję aminokwasową o Identyfikatorze Sekw. nr 5, korzystniej o Identyfikatorze Sekw. nr 7. W korzystnym wykonaniu domena CDR3 obejmuje sekwencję aminokwasową o Identyfikatorze Sekw. nr 4 albo zmodyfikowaną na podstawie Identyfikatora Sekw. nr 4 przez pojedyncze zastąpienie alaniną w pozycjach 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10 albo 11, albo przez jedno do pięciu zastąpień konserwatywnych aminokwasów w pozycjach 2, 3,4, 5, 6, 8, 9, 10, 11 i/lub 12.
W innym korzystnym wykonaniu izolowany kwas nukleinowy według wynalazku koduje region zmienny łańcucha ciężkiego (HCVR) przeciwciała, korzystnie domena CDR2 HCVR przeciwciała obejmuje sekwencję aminokwasową o Identyfikatorze Sekw. nr 6, korzystniej o Identyfikatorze Sekw. nr 8.
W innym wykonaniu wynalazku izolowany kwas nukleinowy kodujący łańcuch lekki lub ciężki przeciwciała według wynalazku, którego domena CDR3 obejmuje sekwencję aminokwasową wybraną z grupy składającej się z:
a) łańcucha lekkiego o Identyfikatorze Sekw. nr 3, Identyfikatorze Sekw. nr 11-26;
b) łańcucha ciężkiego o Identyfikatorze Sekw. nr 4, Identyfikatorze Sekw.. nr 27-34.
Wynalazek dostarcza również izolowany kwas nukleinowy kodujący region zmienny łańcucha lekkiego przeciwciała obejmujący sekwencję aminokwasową o Identyfikatorze Sekw. nr 1. Korzystnie izolowany kwas nukleinowy według wynalazku koduje region zmienny łańcucha lekkiego przeciwciała oraz region stały łańcucha lekkiego przeciwciała, korzystnie izolowany kwas nukleinowy według wynalazku jest rekombinowanym wektorem ekspresyjnym. Wynalazek dalej dostarcza izolowany kwas nukleinowy kodujący region zmienny łańcucha ciężkiego przeciwciała obejmujący sekwencję aminokwasową o Identyfikatorze Sekw. nr 2. W korzystnym wykonaniu koduje on region zmienny łańcucha ciężkiego przeciwciała oraz region stały łańcucha ciężkiego przeciwciała, korzystnie region stały łańcucha ciężkiego przeciwciała jest regionem stałym IgGl, korzystniej region stały łańcucha ciężkiego przeciwciała jest regionem stałym IgG4. W korzystnym wykonaniu izolowany kwas nukleinowy według wynalazku jest rekombinowanym wektorem ekspresyjnym.
W jeszcze innym wykonaniu wynalazek dostarcza rekombinowany wektor ekspresyjny kodujący:
a) region zmienny łańcucha lekkiego przeciwciała obejmujący sekwencję aminokwasową o Identyfikatorze Sekw., nr 1 oraz
b) region zmienny łańcucha ciężkiego przeciwciała obejmujący sekwencję aminokwasową o Identyfikatorze Sekw. nr 2.
Wynalazek dostarcza również komórkę gospodarza, do której wprowadzono rekombinowany wektor ekspresyjny według wynalazku.
Inne wykonanie wynalazku dostarcza sposobu syntetyzowania przeciwciała ludzkiego, które wiąże ludzki TNFa, który to obejmuje hodowanie komórki gospodarza według wynalazku w pożywce hodowlanej do momentu /.syntetyzowania przez komórkę przeciwciała ludzkiego, wiążącego ludzki TNFa.
Kolejnym przedmiotem wynalazku jest również sposób hamowania aktywności ludzkiego TNFa in vitro, który obejmuje kontaktowanie ludzkiego TNFa z przeciwciałem albo jego częścią wiążącą antygen według wynalazku, w wyniku czego aktywność TNFa jest zahamowana.
Kolejny aspekt wynalazku dostarcza przeciwciało albo jego część wiążącą antygen według wynalazku do zastosowania w hamowaniu aktywności ludzkiego TNFa u człowieka cierpiącego na chorobę, w której aktywność TNFa jest szkodliwa.
W korzystnym wykonaniu tego aspektu wynalazku chorobąjest posocznica, korzystnie przeciwciało to podaje się człowiekowi wraz z cytokiną, interleukiną-6 (IL-6) albo podaje się człowiekowi, u którego stężenie IL-6 w surowicy albo osoczu wynosi powyżej 500 pg/ml.
188 192
W kolejnym korzystnym wykonaniu chorobąjest choroba autoimmunizacyjna, korzystnie choroba autoimmunizacyjna wybrana jest z grupy składającej się z reumatoidalnego zapalenia stawów, zesztywniającego zapalenia stawów kręgosłupa, zapalenia kości i stawów, dnawego zapalenia stawów, alergii, stwardnienia rozsianego, autoagresyjnej cukrzycy, autoagresyjnego zapalenia błony naczyniowej oka oraz zespołu nerczycowego.
W dalszych korzystnych wykonaniach przeciwciało albo jego część wiążąca antygen według wynalazku do zastosowania w hamowaniu aktywności ludzkiego TNFa u człowieka cierpiącego na chorobę, w której aktywność TNFa jest szkodliwa wykorzystywane jest, gdy chorobą jest choroba zakaźna, odrzucanie przeszczepu albo reakcja przeszczepu przeciwko gospodarzowi, choroba nowotworowa, choroba płuc, choroba jelit, choroba serca, choroba jest wybrana z grupy składającej się z choroby zapalnej kości, choroby resorpcyjnej kości, poalkoholowego zapalenia wątroby, wirusowego zapalenia wątroby, hepatitis fulminans, zaburzeń krzepnięcia, oparzeń, uszkodzenia poreperfuzyjnego, tworzenia bliznowca, tworzenia tkanki bliznowatej, gorączki, choroby ozębnej, otyłości oraz toksyczności wywołanej promieniowaniem.
Kolejny aspekt wynalazku dotyczy zastosowania przeciwciała albo jego części wiążącej antygen według wynalazku do wytwarzania leku do leczenia choroby, w której aktywność TNFa jest szkodliwa, gdy chorobąjest posocznica, korzystnie przeciwciało podaje się człowiekowi wraz z cytokiną, interleukiną-6 (IL-6) albo podaje się człowiekowi, u którego stężenie IL-6 w surowicy albo osoczu wynosi powyżej 500 pg/ml.
Kolejne korzstne wykonanie wynalazku dotyczy zastosowania przeciwciała albo jego części wiążącej antygen według wynalazku do wytwarzania leku do leczenia choroby, w której aktywność TNFa jest szkodliwa, gdy chorobą jest reumatoidalne zapalenie stawów, zesztywniające zapalenie stawów kręgosłupa, zapalenia kości i stawów, dnawe zapalenie stawów, alergia, stwardnienie rozsiane, autoagresyja cukrzycowa, autoagresyjne zapalenie błony naczyniowej oka oraz zespół nerczycowy.
W dalszych korzystnych wykonaniach przeciwciało albo jego część wiążącą antygen według wynalazku do zastosowania do wytwarzania leku do leczenia choroby, w której aktywność TNFa jest szkodliwa wykorzystywane jest, gdy cho^<^l^ćąjest odrzucanie przeszczepu albo reakcja przeszczepu przeciwko gospodarzowi, choroba nowotworowa, chorobąjest wybrana z grupy składającej się z choroby zapalnej kości, choroby resorpcyjnej kości, poalkoholowego zapalenia wątroby, wirusowego zapalenia wątroby, hepatitis fulminans, zaburzeń krzepnięcia, oparzeń, uszkodzenia poreperfuzyjnego, tworzenia bliznowca, tworzenia tkanki bliznowatej, gorączki, choroby ozębnej, otyłości oraz toksyczności wywołanej promieniowaniem.
Kolejny aspekt wynalazku dostarzca przeciwciało albo jego część wiążącą antygen według wynalazku do zastosowania w leczeniu. '
W jeszcze innym wykonaniu wynalazek dostarcza przeciwciało albo jego część wiążącą antygen według wynalazku w kombinacji z co najmniej jednym dodatkowym czynnikiem terapeutycznym do zastosowania w leczeniu choroby, w której aktywność TNFa jest szkodliwa. W korzystnym wykonaniu dodatkowy czynnik terapeutyczny wybrany jest z grupy składającej się z niesteroidowych środków przeciwzapalnych, środków przeciwzapalnych hamujących cytokiny, CDP-571/BAY-10-3356, cA2, 75 kdTNFR-IgG, 55 kdTNFR-IgG, IDEC-CE9.1/SB210396, DAB486-IL-2, DAB 389-IL-2, Anti-Tac, IL-4, IL-10, agonistów IL-4, agonistów IL-10, IL-1RA, TNF-bp/s-TNFR, S284, R973401, mK-966, Iloprostu, metotreksatu, talidomidu, środków pokrewnych do talidomidu, leflunomidu, kwasu traneksamowego, T-614, prostaglandyny El, Tenidapu, Naproxenu, Meloxicamu, Piroxicamu, Diclofenacu, Indometacyny, Sulfasalazyny, Azatiopryny, inhibitorów ICE, inhibitorów zap-70, inhibitorów lek, inhibitorów VEGF, inhibitorów VEGF-R, kortykosteroidów, inhibitorów TNF-konwertazy, przeciwciał przeciw IL-12, inhibitorów interleukiny 11, interleukiny 13, interleukiny-17, złota, penicylaminy, chlorochiny, hydroksychlorochiny, chlorambucylu, cyklofosfamidu, cyklosporyny, globuliny anty-tymocytamej, przeciwciał przeciw CD4, CD5-toksyn, doustnie podawanych peptydów, kolagenu, disodowej soli lobenzarytu, czynników regulujących cytokiny HP228 i HP466, antysensownych fosfotionianowych oligodeoksynukleotydów ICAM-1, rozpuszczalnego dopełniacza receptora 1, prednizonu, orgoteiny, polisiarczanu glikozoamino188 192 glikanu, minocykliny, przeciwciał przeciw IL2R, lipidów morskich, lipidów roślinnych, auranofiny fenclobutazenu, kwasu muklefunamowuge, kwasu flufenamowego, wewnątrzż^nych globulin odporno-sUwych, zileutonu, kwasu mckefunelowege, takrolimusu, sirolimusu, amiprilosu, klaciribiny, azarybiny, budenozydu, upiUurmalnugo czynnika wzrostowego, aminosalicclanów, 6-merkaptepurync, metrenidazelu, inhibitorów lipeksygunaz.y, mesalaminy, olsalazyny, balsalazydu, przucjwutleniaczy, inhibitorów tromboksanu, antagonistów receptora IL-1, przeciwciał moneklenalncch przeciwko IL-1 β, przeciwciał menoklenalncch przeciwko IL-6, czynników wzrostu, inhibitorów elastazy, związków piryUynyleimiUazelu, pruUnizelenowcch proleków skoniugowanych z glukuronidem, deksamutazenu lub budezonidu, prednizelonowych proleków skoniugowanych z dekstranem, powolnie uwalnianej mesalazyny, antagonistów czynnika aktywującego płytki (PAF, ang. Platelet Activating Factor), ciprefleksacyny, lingokainy, predizolonu, mutylopreUizelenu, ccklofeefamiUu, 4-aminopiryUcny, tizaniUcnc, interferonu [la, interferonu βΐb, kopolimeru 1, tlenu hipurbarccznego, wewnątrzżylned immuneglobulinc, klabribiny, hipertonicznego roztworu soli, antybiotyków, ciągłej humefiltracji, karbapenemów, antagonistów cytokin, takich jak TNFa, IL-βΙ, IL-6 i/albo IL-8, SK&F 107647, czturowarteściewege guanylohcUrazenu CNI-1493, inhibitora szlaku czynnika tkankowego, PHP, czynników chelatujących żelazo oraz chelatów, łącznie z kompleksem kwas Uietylunotriaminopuntaectowy-żelazo (III), lizefilinc, PGG-glukanu, apelipoproteiny A-1 rekonstytuowanej lipidami, chiralnych kwasów hcdrekeamowcch, przeciwciał przeciw endotoksynie, E5531, rBPI21, syntetycznych puptyUcdów przeciw endotokeynie, surfaktantów terapii zastępczej oraz przeciwciał przeciw IL-8.
Krótki opis figur
Figury 1A i 1B pokazują sekwencje aminokwasowe regionu zmiennego łańcucha lekkiego D2E7 (D2E7 VL; pokazane również na Identyfikatorze Sekw. nr 1), mutanty otrzymane metodą skanowania alaniną VL D2E7 (LD2E7*.A1, LD2E7*.A3, LD2E7*.A4, LD2E7*.A5, LD2E7*.A7 i LD2E7*.A8) regionu zmiennego łańcucha lekkiego przeciwciała pokrewnego z D2E7, 2SD4 (VL 2SD4; pokazane również na Identyfikatorze Sekw. nr 9) i inne pokrewne regiony zmienne łańcucha ciężkiego (EP B12, VL10E4, VL100A9, VL100D12, VL10F4, LOE5, VLLOF9, VLLOFIO, VLLOG7, VLLOG9, YLLOHIO, VL1B7, VL1C1, VL1C7, VL0.1F4, VL0.1H8, LOE7, LOE7.A i LOE7.T). Figura 1A pokazuje domeny FR1, CDR1, FR2 i cDr2. Figura 1B pokazuje domeny FR3, CDR3 i FR4. Domeny łańcucha lekkiego CDR1 („CDR L1”), CDR2 („CDR L2”) i CDR3 („CDR L3”) zaznaczono ramkami.
Figury 2A i 2b pokazują sekwencje aminekwaeewu regionu zmiennego łańcucha ciężkiego D2E7 (D2E7 VH; pokazane również na Identyfikatorze Sekw. nr 2), mutanty otrzymane metodą skanowania alaniną D2E7 VH (HD2E7*.A1, HD2E7*.A2, HD2E7*.A3, HD2E7*.A4, HD2E7*.A5, HD2E7*.A6, HD2E7*.A7, HD2E7*.A8, HD2E7*.A9), regionu zmiennego łańcucha ciężkiego przeciwciała pokrewnego z D2E7, 2SD4 (VH 2SD4; pokazane również na Identyfikatorze Sekw nr 10) i inne regiony zmienne łańcuchów ciężkich pokrewne z D2E7 (VH1B11, VH1D8,VH1A11, VH1B12, VH1-D2, VH1E4, VH1F6,VH1G1, 3C-H2, VH1D2.N i VH1-D2.Y). Figura 2 pokazuje domeny FR3, CDR3 i FR4. Domeny łańcucha ciężkiego CDR1 („CDR H1”), CDR2 („CDR H2”) i CDR3 („CDR H3”) zaznaczono ramkami.
Figura 3 stanowi wykres przedstawiający zahamowanie cctotokscczneści komórek L929 wywołanej TNFa przez ludzkie przeciwciała przeciwko hTNFa, D2E7, w porównaniu z przeciwciałem mysim przeciwko hTNFa, MAK 195.
Figura 4 jest wykresem przedstawiającym zahamowanie wiązania rhTNFa z receptorami hTNFa na komórkach U-937 przez ludzkie przeciwciała przeciwko hTNFa, D2E7, w porównaniu z przeciwciałem mysim przeciwko hTNFa, MAK 195.
Figura 5 jest wykresem przedstawiającym zahamowanie ekspresji ELAM-1 na komórkach HUVEC wywołanej TNFa przez ludzkie przeciwciała przeciwko hTNFa, D2E7, w porównaniu z przeciwciałem mysim przeciwko hTNF a, MAK 195.
Figura 6 jest wykresem słupkowym przedstawiającym ochronę przed działaniem letalnym wywołanym TNFa u myszy uczulonych D-galaktozaminą po podaniu ludzkiego przeciwciała przeciwko hTNF a, D2E7 (słupki czarne), w porównaniu z przeciwciałem mysim przeciwko hTNFa, MAK 195 (słupki kreskowane).
188 192
Figura 7 pokazuje sekwencję nukleotydową regionu zmiennego łańcucha lekkiego D2E7, z przewidywaną sekwencją aminokwasową poniżej sekwencji nukleotydowej. Podkreślono regiony CDR LI, CDR L2 i CDR L3.
Figura 8 pokazuje sekwencję nukleotydową regionu zmiennego łańcucha ciężkiego D2E7, z przewidywaną sekwencją aminokwasową poniżej sekwencji nukleotydowej. Podkreślono regiony CDR HI, CDR H2 i CDR H3.
Figura 9 jest wykresem przedstawiającym wpływ leczenia przeciwciałem D2E7 na średnią wielkość stawu transgenicznych myszy Tgl97 jako modelu zapalenia wielostawowego.
Szczegółowy opis wynalazku
Wynalazek dostarcza izolowanych ludzkich przeciwciał albo ich fragmentów wiążących antygen, które wiążą się z ludzkim TNFa z wysokim powinowactwem, powolnym tempem odłączania (dysocjacji) i wysoką zdolnością neutralizacji. Różne aspekty wynalazku dotyczą przeciwciał i fragmentów przeciwciał oraz ich kompozycji farmaceutycznych, jak również kwasów nukleinowych, rekombinowanych wektorów ekspresyjnych i komórek gospodarza do wytwarzania takich przeciwciał i fragmentów. Sposoby zastosowania przeciwciał według wynalazku w celu wykrywania ludzkiego TNFa albo w celu hamowania aktywności ludzkiego TNFa, zarówno in vitro jak i in vivo są również objęte wynalazkiem.
W celu lepszego wyjaśnienia wynalazku zostaną najpierw zdefiniowane pewne określenia.
Określenie „ludzki TNFa” (w skrócie hTNFa albo po prostu hTNF) w znaczeniu tu zastosowanym dotyczy ludzkiej cytokiny, która występuje jako postać wyd/Ielnic/a 17 kDa oraz postać związana z błoną 26 kDa, której biologicznie czynna postać składa się z trimeru niekowalencyjnie związanych jednostek 17 kDa. Strukturę hTNFa opisano dalej w, przykładowo, Pennica i in., (1984) Nature 312: 724-729; Davies i in., (1987) Biochemistry 26: 1322-1326; oraz Jones i in., (1989) Nature 338: 225-228. W zsmier/eniach, określenie TNFa obejmuje rekombinowany ludzki TNFa (rhTNFa), który można wytworzyć standardowymi metodami ekspresji rekombinacyjnej albo nabyć w handlu (R&D Systems, nr kat. 210-TA, Minneapolis, MN).
Określenie „przeciwciało” w znaczeniu tu zastosowanym ma w założeniach obejmować cząsteczki immunoglobulin zbudowane z czterech łańcuchów polipeptydowych, dwóch łańcuchów ciężkich (H) i dwóch lekkich (L) połączonych ze sobą wiązaniami disisrczkowymI, Każdy łańcuch ciężki obejmuje region zmienny łańcucha ciężkiego (w skrócie HCVR albo VH) oraz region stały łańcucha ciężkiego. Region stały łańcucha ciężkiego obejmuje trzy domeny, CHI, CH2 i CH3. Każdy łańcuch lekki obejmuje region zmienny łańcucha lekkiego (w skrócie LCVR albo VL) i region stały łańcucha lekkiego. Region stały łańcucha lekkiego obejmuje jedną domenę CL. Regiony VH i VL można dalej podzielić ną regiony hiperzmienności, określane jako regiony określające komplementamość (CDR), przedzielone regionami bardziej zakonserwowanymi, określanymi jako regiony zrębowe (FR). Każdy VL i VH składa się z trzech CDR i czterech FR, ustawionych od końca aminowego do końca karboksylowego w następującej kolejności: FR1, CDR1, Fr2, CDR2, FR3, CDR3, FR4.
Określenie „część wiążąca antygen” przeciwciała (albo po prostu „część przeciwcIałs”) w znaczeniu tu użytym dotyczy jednego albo wielu fragmentów przeciwciała, które zachowują zdolność do swoistego wiązania z antygenem (np. hTNFa). Wykazano, że funkcja wiązania antygenu przeciwciała może być wykonywana przez fragmenty przeciwciała pełnej długości. Przykłady fragmentów wiążących objęte określeniem „część wiążąca antygen” przeciwciała obejmują:
(i) fragment Fab, monowalentny fragment obejmujący domeny VL, VH, CL i CHI;
(ii) fragment F(ab')2, biwalentny fragment obejmujący dwa fragmenty Fab połączone mostkiem disiarczkowym w regionie zawiasowym;
(iii) fragment Fd obejmujący domeny VH i CHI;
(iv) fragment Fv obejmujący domeny VL i VH jednego ramienia przeciwciała, (v) fragment dAb (Ward i in., (1989) Nature 341: 544-546), który obejmuje domenę VH; oraz (vi) izolowany fragment określający komplementamość (CDR).
188 192
Ponadto, jakkolwiek dwie domeny fragmentu Fv, VL i VH, kodowane są przez osobne geny, mogą być one połączone przy użyciu metod rekombinacyjnych łącznikiem syntetycznym, który umożliwia ich wytwarzanie jako pojedynczy łańcuch białka, w których para regionów VL i VH tworzy monowalentną cząsteczkę (znaną również jako jednołańcuchowy Fv (scFv); patrz, Bird i in., (1988) Science 242: 423-426; oraz Huston i in., (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85: 5879-5883). Takie przeciwciała jednołańcuchowe objęte są również określeniem „część wiążąca antygen” przeciwciała. Inne postaci przeciwciał jednołańcucho wych, takie jak przeciwciała o podwójnej swoistości są również nim objęte. Przeciwciała takie są biwalentnymi przeciwciałami o podwójnej swoistości, w których domeny VH i VL wyrażane są jako pojedynczy łańcuch polipeptydowy, ale z użyciem łącznika, który jest na tyle krótki, ze uniemożliwia tworzenie par pomiędzy domenami tego samego łańcucha, zmuszając je do tworzenia pary z komplementarnymi domenami innego łańcucha i tworzenia dwóch miejsc wiążących antygen (patrz, Holliger i in (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 6444-6448; Poljak i in., (1994) Structure 2: 1121-1123).
Jeszcze dalej, przeciwciało albo jego część wiążąca antygen może stanowić część większej cząsteczki immunoadhezyjnej, wytworzonej przez połączenie kowalencyjne albo niekowalencyjne przeciwciała albo części przeciwciała z jednym albo wieloma białkami albo peptydami. Przykłady takich cząsteczek immunoadhezyjnych obejmują zastosowanie regionu rdzeniowego streptawidyny do wytworzenia tetramerycznej cząsteczki scFv (Kipriyanov i in., (1995) Human Antibodiesand Hybridomas 6: 93-101) i zastosowanie reszty cysternowej, peptydu znacznikowego oraz C-końcowego znacznika polihistydynowego do wytworzenia biwalentnych i biotynowanych cząsteczek scFv (Kipriyanov i in., (1994) Mol. Immunol. 31: 1047-1058). Części przeciwciał takie jak fragmenty Fab albo F(ab')2 można wytworzyć z całych przeciwciał stosując konwencjonalne techniki, takie jak, odpowiednio, trawienie papainą albo pepsyną całych przeciwciał. Ponadto, przeciwciała, części przeciwciał i cząsteczki immunoadhezyjne można otrzymać stosując standardowe techniki rekombinacji DNA, jak to tu opisano.
Określenie „przeciwciało ludzkie” w znaczeniu tu użytym obejmuje w zamierzeniach przeciwciała o regionach stałych i zmiennych pochodzących z ludzkich zarodkowych sekwencji immunoglobulin. Przeciwciała ludzkie według wynalazku mogą obejmować reszty aminokwasowe nie kodowane przez ludzkie zarodkowe sekwencje immunoglobulin (np. mutacje wprowadzone przez losową albo ukierunkowaną mutagenezę in vitro albo przez mutację somatyczną in vivo), przykładowo w CDR, a zwłaszcza w CDR3. Jednakże, określenie „przeciwciało ludzkie” w znaczeniu tu użytym, w zamierzeniach nie ma obejmować przeciwciał, w których sekwencje CDR pochodzące z linii zarodkowej ssaka innego gatunku, takiego jak mysz, zostały przeszczepione do ludzkich sekwencji zrębowych.
Określenie „rekombinowane ludzkie przeciwciało” w znaczeniu tu użytym w zamierzeniach obejmuje wszystkie ludzkie przeciwciała, które są wytwarzane, wyrażane, tworzone albo izolowane sposobami rekombinacyjnymi, takie jak przeciwciała wyrażane przy użyciu rekombinowanych wektorów ekspresyjnych transfekowanych do komórek gospodarza (opisane dalej w rozdziale II, poniżej), przeciwciała wyizolowane z rekombinacyjnej kombinatoryjnej ludzkiej biblioteki przeciwciał (opisanej dalej w rozdziale III, poniżej), przeciwciała wyizolowane od zwierząt (np. myszy) transgenicznych pod względem ludzkich genów immunoglobulin (patrz, np. Taylor i in., (1992) Nuci. Acids Res. 30: 6287-6295) albo przeciwciała wytworzone, wyrażane, tworzone albo izolowane jakimkolwiek innym sposobem, który obejmuje składanie sekwencji genu ludzkiej immunoglobuliny z innymi sekwencjami DNA. Takie rekombinowane ludzkie przeciwciała mają regiony zmienne i stałe pochodzące z ludzkich sekwencji zarodkowych immunoglobulin. W pewnych wykonaniach jednakże, takie rekombinowane przeciwciała ludzkie poddawane są mutagenezie in vitro (albo, gdy stosuje się zwierzę transgeniczne pod względem sekwencji ludzkich Ig, mutagenezie somatycznej in vivó), stąd sekwencje aminokwasowe regionów VH i VL przeciwciał rekombinowanych są sekwencjami, które pochodząc albo będąc spokrewnionymi z ludzkimi sekwencjami zarodkowymi VH i VL, mogą nie występować naturalnie w repertuarze ludzkich przeciwciał zarodkowych in vivo.
188 192 „Przeciwciało izolowane” w założeniach ma dotyczyć przeciwciała, które jest zasadniczo wolne od innych przeciwciał, posiadających inne swoistości antygenowe (np. izolowane przeciwciało wiążące hTNFa jest zasadniczo wolne od przeciwciał, które swoiście wiążą antygeny inne niż hTNFa). Jednakże, izolowane przeciwciało, które swoiście wiąże hTNFa może wykazywać aktywność krzyżową z innymi antygenami, takimi jak cząsteczki TNFa innych gatunków (co jest dyskutowane szczegółowo poniżej). Ponadto, izolowane przeciwciało może być zasadniczo wolne od innych składników komórki i/lub związków chemicznych.
„Przeciwciało neutralizujące” w znaczeniu tu użytym (albo „przeciwciało neutralizujące aktywność hTNFa”) w założeniach ma dotyczyć przeciwciała, którego związanie się z hTNFa powoduje zahamowanie aktywności biologicznej hTNFa. To zahamowanie aktywności biologicznej hTNFa można określić przez zmierzenie jednego albo wielu wskaźników aktywności biologicznej hTNFa, takich jak cytotoksyczność wywołana hTNFa (in vitro jak i in vivo), aktywacja komórkowa wywołana hTNFa i wiązanie się hTNFa z receptorem hTNFa. Te wskaźniki aktywności biologicznej można określić jednym albo wieloma znanymi standardowymi testami in vitro albo in vivo (patrz przykład 4). Korzystnie, zdolność przeciwciała do neutralizacji aktywności hTNFa oceniana jest przez zahamowanie cytotoksyczności komórek L929 wywołanej hTNFa. Jako dodatkowy albo alternatywny parametr aktywności hTNFa można ocenić zdolność przeciwciała do zahamowania wywołanej hTNFa ekspresji ELAM-1 na HUVEC, jako miary pobudzenia komórkowego hTNFa.
Określenie „metoda rezonansu plazmonów powierzchniowych” w znaczeniu tu użytym dotyczy zjawiska optycznego, które umożliwia analizę swoistych oddziaływań biologicznych w czasie rzeczywistym, przez wykrywanie zmian w stężeniu białka w matrycy sensora biologicznego, przykładowo stosując układ BIAcore (Pharmacia Biosensor AB, Uppsala, Szwecja i Piscataway, NJ). W celu dalszego opisu, patrz przykład 1 oraz Jonsson i in., (1993) Ann. Biol. Clin. 51: 1926; Jonsson i in., (1991) Biotechniques 11: 620-627; Johnsson i in., (1995) J. Mol. Recognit. 8: 125-131; i Johnsson i in., (1991) Anal. Biochem. 198: 268-277.
Określenie „Kefr” w znaczeniu tu użytym dotyczy w zamierzeniach stałej szybkości odłączania dla dysocjacji przeciwciała z kompleksu przeciwciało/antygen.
Określenie „Kd” w znaczeniu tu użytym dotyczy w zamierzeniach stałej dysocjacji konkretnego oddziaływania przeciwciało-antygen.
Określenie „cząsteczka kwasu nukleinowego” w znaczeniu tu użytym obejmuje w zamierzeniach cząsteczki DNA i cząsteczki RNA. Cząsteczka kwasu nukleinowego może być jednoniciowa albo dwuniciowa, ale korzystnie jest dwuniciowym DNA.
Określenie „izolowana cząsteczka kwasu nukleinowego” w znaczeniu tu użytym w odniesieniu do kwasów nukleinowych kodujących przeciwciała albo części przeciwciał (np. VH, VL, CDR3), które wiążą hTNFa, dotyczy cząsteczki kwasu nukleinowego, w której sekwencje nukleotydowe kodujące przeciwciało albo część przeciwciała są wolne od innych sekwencji nukleotydowych kodujących przeciwciała albo części przeciwciał wiążących antygeny inne niż hTNFa, które to sekwencje mogą w naturze flankować kwas nukleinowy w ludzkim genomowym DNA. Tak więc, przykładowo, izolowany kwas nukleinowy według wynalazku kodujący region VH przeciwciała przeciwko hTNFa nie zawiera innych sekwencji kodujących inne regiony VH, które wiążą antygeny inne niż hTNFa.
Określenie „wektor” w znaczeniu tu użytym ma w założeniach dotyczyć cząsteczki kwasu nukleinowego zdolnej do transportowania innego kwasu nukleinowego, do którego została przyłączona. Jednym z rodzajów wektora jest „plazmid”, który dotyczy kolistej pętli dwuniciowego DNA, do której można włączyć dodatkowy segment DNA. Innym rodzajem wektora jest wektor wirusowy, w którym dodatkowe segmenty DNA można poddać ligacji w genomie wirusowym. Pewne wektory są zdolne do autonomicznej replikacji w komórce gospodarza, do którego je wprowadzono (np. wektory bakteryjne posiadające bakteryjny początek replikacji i episomalne wektory ssaków). Inne wektory (np. nie episomalne wektory ssaków) mogą ulegać integracji z genomem komórki gospodarza po wprowadzeniu do komórki gospodarza i w ten sposób ulegają replikacji wraz z genomem gospodarza. Ponadto, pewne wektory są zdolne do kierowania ekspresją genów, do których zostały funkcjonalnie przyłączone. Wektory takie określane są jako „rekombinacyjne wektory ekspresyjne” (albo po
188 192 prostu „wektory ekspresyjne”). Ogólnie, wektory ekspresyjne przydatne w technikach rekombinacji DNA są często w postaci plazmidów. W niniejszym opisie „plazmid” i „wektor” mogą być używane zamiennie, ponieważ plazmid jest najczęściej stosowaną postacią wektora. Jednakże, w zamierzeniach wynalazek obejmuje inne postaci wektorów ekspresyjnych, takich jak wektory wirusowe (np. niezdolne do replikacji retrowirusy, adenowirusy i wirusy towarzyszące adenowirusowi), które pełnią funkcje równoważne.
Określenie „rekombinowana komórka gospodarza” (albo po prostu „komórka gospodarza”) dotyczy komórki, do której został wprowadzony rekombinowany wektor ekspresyjny. Należy rozumieć, że takie określenia w zamierzeniach dotyczą nie tylko konkretnej komórki, ale również jej potomstwa. Ponieważ mogą wystąpić pewne modyfikacje w kolejnych pokoleniach z powodu mutacji albo wpływów środowiska, potomstwo takie może nie być w rzeczywistości identyczne z komórką rodzicielską, ale wciąż zawiera się w zakresie określenia „komórka gospodarza”.
Różne aspekty wynalazku zostaną opisane dalej szczegółowo w poniższych podrozdziałach.
I. Przeciwciała ludzkie, które wiążą ludzki TNFa
Wynalazek dostarcza izolowanych ludzkich przeciwciał albo ich części wiążących antygen, które wiążą ludzki TNFa z dużym powinowactwem, powolnym tempem odłączania i wysoką zdolnością neutralizacji. Korzystnie, ludzkie przeciwciała według wynalazku są rekombinowanymi, neutralizującymi ludzkimi przeciwciałami przeciwko hTNFa. Najkorzystniejsze rekombinowane przeciwciało neutralizujące według wynalazku określane jest jako D2E7 i ma sekwencje VL i VH pokazane, odpowiednio, na figurach 1A i 1B oraz figurach 2A i 2B (sekwencja aminokwasowa regionu VL D2E7 pokazana jest również na Identyfikatorze Sekw. nr 1; sekwencja aminokwasową regionu VH D2E7 pokazana jest na Identyfikatorze Sekw. nr 2). Właściwości wiązania D2E7, w porównaniu z mysim mAb MAK 195 przeciwko hTNFa, które wykazuje wysokie powinowactwo i powolną kinetykę dysocjacji oraz innego ludzkiego przeciwciała przeciwko hTNFa, pokrewnego sekwencją z D2E7, 2SD4 podsumowano poniżej:
Przeciwciało Koff s‘ Kon M''s·' Kd M Stechiometria
D2E7 IgG1 8,81 x 10’5 1,91 x 10'5 6,09 x 10'10 1,2
2SD4 IgG4 8,40 x 10’3 4,20 x 10’5 2,00 x 10’8 0,8
MAK 197 F(ab')2 8,70 x 10’5 1,90 x 10- 4,60 x 10'O 1,4
Przeciwciało D2E7 i przeciwciała pokrewne wykazują również silną zdolność do neutralizacji aktywności hTNFa, jak oceniono w kilku testach in vitro i in vivo (patrz przykład 4). Przykładowo, przeciwciała te neutralizują wywołaną hTNFa cytotoksyczność komórek L929 z IC50 w zakresie około 10'7 M do około 1Ó'10 M. D2E7, wyrażane jako przeciwciało IgG1 pełnej długości, neutralizuje wywołaną hTNFa cytotoksyczność komórek L929 z IC50 równą około 1,25 x 10*0 M. Ponadto, zdolność do neutralizacji D2E7 jest zachowana, gdy przeciwciało jest wyrażane jako fragment Fab, F(ab')2 albo scFv. D2E7 hamuje również aktywację komórek wywołaną hTNF a, jak zmierzono wywołaną hTNFa ekspresją ELAM-1 na HUVEC (IC5o = około 1,85 x 10'*0 M) i wiązanie hTNFa z receptorem hTNFa na komórkach U-937 (IC50 = około 1,56 x 10'O M). W odniesieniu do tego ostatniego, D2E7 hamuje wiązanie hTNFa z receptorem p55 jak i p75. Ponadto, przeciwciało hamuje wywołany hTNFa wpływ letalny in vivo u myszy (ED50 = 1-2,5 μg/mysz).
W odniesieniu do swoistości wiązania D2E7, przeciwciało to wiąże się z ludzkim TNFa w różnych postaciach, w tym z rozpuszczalnym hTNFa, śródbłonowym hTNFa oraz hTNFa związanym z receptorem komórkowym. D2E7 nie wiąże się swoiście z innymi cytokinami, takimi jak limfotoksyna (TNFfi) IL-1a, IL-1-β, IL-2, IL-4, IL-6, IL-8, IFNy i TGFβ. Jednakże, D2E7 wykazuje aktywność krzyżową z postaciami czynnika martwicy nowotworu innych gatunków. Przykładowo, przeciwciało neutralizuje aktywność przynajmniej pięciu TNFa innych naczelnych (szynpansa, orangutana, marmosety, cynomolgusa i rezusa), z wartościami
188 192
IC50 w przybliżeniu równoważnymi, jak w przypadku neutralizacji hTNFa (patrz przykład 4, podrozdział E). D2E7 neutralizuje również aktywność mysiego TNFa, aczkolwiek około 1000-^^^ słabiej niż ludzki TNFa (patrz przykład 4, podrozdział E). D2E7 wiąże się również z TNFa psa i świni.
W jednym aspekcie, wynalazek dostarcza przeciwciał D2E7 i części przeciwciał, przeciwciał pokrewnych D2E7 i części przeciwciał oraz innych ludzkich przeciwciał i części przeciwciał o właściwościach równoważnych z D2E7, takich jak wysokie powinowactwo wiązania z hTNFa z powolną kinetyką Zyszcjącji i wysoką zdolnością neutralizacji. W jednym wykonaniu, wynalazek dostarcza izolowanego przeciwciała ludzkiego albo jego części wiążącej antygen, które dysocjuje z ludzkiego TNFa z Kz równą 1 x 10'8 M albo mniejszą i stałą szybkości Kof równą 1 x 10'3 s'1 albo mniejszą, przy czym obie wartości wyznaczono metodą rezonansu plazmonów powierzchniowych oraz neutralizuje cytatoksycznzść wywołaną hTNFa wobec komórek L929 w standardowym teście in vitro z IC50 równym 1 x 10-7 M albo mniej. Jeszcze korzystniej, izolowane ludzkie przeciwciało albo jego część wiążąca antygen dysocjuje z ludzkiego TNFa z Kof· równą 5 x 104 s- albo mniejszą, albo nawet jeszcze korzystniej z Kof równą 1 x 10- s4 albo mniejszą. Jeszcze korzystniej, izolowane ludzkie przeciwciało albo jego część wiążąca antygen neutralizuje cytotoksyczność ludzkiego TNFa w standardowym teście in vitro z L929 z IC50 =1 x 10*8 M gjbo mniej, jeszcze korzystniej z IC50 = 1 x 10'9 M albo mniej, zaś jeszcze korzystniej z IC50- 5 x 10^ M albo mniej. W najkorzystniejszym wykonaniu, przeciwciało jest izolowanym ludzkim rekombinzwanym przeciwciałem albo jego częścią wiążącą antygen. W innym najkorzystniejszym wykonaniu, przeciwciało neutralizuje również aktywację komórkową wywołaną TNFa, jak oceniono stosując standardowy test in vitro na wywołaną hTNFa ekspresję ELAM-1 na ludzkich komórkach śróZbłznka żyły pępowinowej (HUVEC).
Analizę rezonansu plazmonów powierzchniowych do określania Kd i Kof można wykonać jak to opisano w przykładzie 1. Standardowy test in vitro z komórkami L929 na określenie wartości IC50 opisano w przykładzie 4, podrozdział A. Standardowy test in vitro na wywołaną hTNFa ekspresję ELAM-1 na ludzkich komórkach śróWbłznka żyły pępowinowej (HUVEC) opisano w przykładzie 4, podrozdział C. Przykłady rekambinzwtnych ludzkich przeciwciał, które odpowiadają wyżej wspomnianym kryteriom kinetyki i neutralizacji obejmują przeciwciała posiadające następujące pary [VH/LH], których sekwencje pokazano na fig. 1A, 1B, 2A i 2B (patrz również przykład 2, 3 i 4, analiza kinetyki i neutralizacji): [D2E7 VH/D2E7 VL]; [HD2E7*.A1/DaE7 VL], [HD2E7*.A2/D2E7 VL], [HD2E7*.An/DaE7 VL], [HD2E7*.A4/D2E7 VL], [HDaE7*.A5/D2E7 VL], [HDaE7*.A6/DaE7 VL], [HD2E7*-.A7/D2E7 VL], [HDaE7*.A8/DaE7 VL], [HD2E7*.A9/DaE7 VL], [D2E7 VH/LD2E7*.A1], [D2E7 VH/LD2E7*.A4], [D2E7 VH/LD2E7*.A5], [D2E7 VH/LD2E7*.A7], [D2E7 VH/LDaE7*.A8], [HD2E7*.A9/LD2E7*.A1], [VH1-D2/LOE7], [VH1-D2.N/LOE7.T], [VH1-Da.Y/LOE7.A], [VH1-D2.N/LOE7.A], ^1^2^ B12] i [3C-H2/LOE7].
Wiadomo, że domeny CDR3 łańcucha lekkiego i ciężkiego odgrywają istotną rolę w swoistości/powinowactwie wiązania przeciwciała z antygenem. W innym aspekcie, wynalazek dostarcza ludzkich przeciwciał wykazujących powolną kinetykę Zyszcjacji z połączenia z hTNFa i których domeny CDR3 łańcucha lekkiego i ciężkiego strukturalnie są identyczne albo pokrewne z D2E7. Jak pokazano w przykładzie 3, pozycja 9 CDR3 VL D2E7 może być zajęta przez Ala albo Thr bez istotnego wpływu na Koff. Nawiązując, motyw zgodności dla CDR3 VL D2E7 obejmuje sekwencję aminzkwaszwą: Q-R-Y-N-R-P-Y-(T/A) (Identyfikator Sekw. nr 3). Oprócz tego, pozycja 12 CDR3 VH D2E7 może być zajmowana przez Tyr albo Asn bez istotnego wpływu na Kof. Nawiązując, motyw zgodności dla CDR3 VH D2E7 obejmuje sekwencję aminokwasową: V-S-Y-L-S-T-A-S-S-L-D-(Y/N) (Identyfikator Sekw. nr 4). Ponadto, jak pokazano w przykładzie 2, domena CDR3 łańcuchów lekkich i ciężkich D2E7 może być podstawiona pojedynczymi resztami alaniny (w pozycjach 1, 4, 5, 7 albo 8 w CDR3 VL albo w pozycjach 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10 albo 11 w CDR3 VH) bez istotnego wpływu na Kof. Jeszcze dalej, specjalista zauważy, że wziąwszy pod uwagę możliwość podstawienia CDR3 VL i VH D2E7 alaniną, możliwe jest zastąpienie aminokwasów w CDR3 przy zachowaniu niskiej stałej odłączania przeciwciała, w szczególności przy zastąpieniach aminokwasami konserwa188 192 tywnymi. „Zastąpienie aminokwasem konserwatywnym” w znaczeniu tu użytym oznacza, że jedna reszta aminokwasową zastępowana jest inną resztą aminokwasową posiadającą podobny łańcuch boczny. Zdefiniowano rodziny reszt aminokwasowych posiadających podobne łańcuchy boczne, w tym łańcuchy boczne zasadowe (np. lizyna, arginina, histydyna), łańcuchy boczne kwasowe (np. kwas asparaginowy, kwas glutaminowy), łańcuchy boczne nienaładowane polarne (np. glicyna, asparagina, glutamina, seryna, treonina, tyrozyna, cysteina), łańcuchy boczne niepolarne (np. alanina, walina, leucyna, izoleucyna, prolina, fenyloalanina, metionina, tryptofan), łańcuchy boczne rozgałęzione w pozycji beta (np. treonina, walina, izoleucyna) i łańcuchy boczne aromatyczne (np. tyrozyna, fenyloalanina, tryptofan, histydyna). Korzystnie, wykonuje się nie więcej jak od 1do 5 zastąpień aminokwasami konserwatywnymi w domenach CDR3 VL i/lub VH D2E7. Jeszcze korzystniej, wykonuje się nie więcej jak od 1 do 3 zastąpień aminokwasami konserwatywnymi w domenach CDR3 VL i/lub VH D2E7. Oprócz tego, zastąpienia aminokwasami konserwatywnymi nie powinno wykonywać się w miejscach krytycznych dla wiązania hTNFa. Jak pokazano w przykładzie 3, pozycje 2 i 5 w CDR3 VL d2E7 i pozycje 1 i 7 CDR3 VH D2E7 wydają się być pozycjami krytycznymi dla oddziaływania z hTNFa, stąd korzystnie nie wykonuje się zastąpienia aminokwasami konserwatywnymi w tych pozycjach (jakkolwiek dopuszczalne jest zastąpienie alaniną w pozycji 5 CDR3 VL D2E7, jak to opisano wyżej).
W innym wykonaniu, wynalazek dostarcza izolowanego ludzkiego przeciwciała albo jego części wiążącej antygen o następujących właściwościach:
a) dysocjuje z ludzkiego TNFa ze stałą szybkości Koff równą 1 x 10’3s1 albo mniejszą, jak określono metodą rezonansu plazmonów powierzchniowych;
b) ma domenę CDR3 łańcucha lekkiego obejmującą sekwencję aminokwasową o Identyfikatorze Sekw. nr 3 albo zmodyfikowaną na podstawie Identyfikatora Sekw. nr 3 przez zastąpienie alaniną w pozycji 1, 4, 5, 7 albo 8 przez jedno do pięciu zastąpień aminokwasami konserwatywnymi w pozycjach 1, 3, 4, 6, 7, 8 i/lub 9;
c) ma domenę CDR3 łańcucha ciężkiego obejmującą sekwencję aminokwasową ° Identyfikatorze Sekw. nr 4 albo zmodyfikowaną na podstawie Identyfikatora Sekw. nr 4 przez zastąpienie alaniną wpozycji 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10 albo 11 albo przez jedno do pięciu zastąpień aminokwasami konserwatywnymi w pozycjach 2, 3,4, 5, 6, 8,9, 10, 11 i/lub 12.
Korzystniej, przeciwciało albo jego część wiążąca antygen dysocjuje z ludzkiego TNFa z Kof równą 5 x 10^* s'1 albo mniejszą. Jeszcze korzystniej, przeciwciało albo jego część wiążąca antygen dysocjuje z ludzkiego TNFa z Kof-równą 1 x 10-4 s- albo mniejszą.
W jeszcze innym wykonaniu, wynalazek dostarcza izolowanego przeciwciała ludzkiego albo jego części wiążącej antygen, z regionem zmiennym łańcucha lekkiego (LCVR) o domenie CDR3 obejmującej sekwencję aminokwasową o Identyfikatorze Sekw·'. nr 3 albo zmodyfikowaną na podstawie Identyfikatora Sekw. nr 3 przez zastąpienie alaniną w pozycji 1, 4, 5, 7 albo 8 i z regionem zmiennym łańcucha ciężkiego (HCVR) o domenie CDR3 obejmującej sekwencję aminokwasową o Identyfikatorze Sekw. nr 4 albo zmodyfikowaną na podstawie Identyfikatora Sekw. nr 4 przez zastąpienie alaniną w pozycji 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10 albo 11. Korzystnie, LCVR dalej ma domenę CDR2 obejmującą sekwencję aminokwasową o Identyfikatorze Sekw. nr 5 (tj. CDR2 VL D2E7), zaś HCVR dalej ma domenę CDR2 obejmującą sekwencję aminokwasową o Identyfikatorze Sekw. nr 6 (tj. CDR2 VH D2E7). Jeszcze korzystniej, LCVR dalej ma domenę CDR1 obejmującą sekwencję aminokwasową o Identyfikatorze Sekw. nr 7 (tj. CDR1 VL D2E7), zaś HCVR dalej ma domenę CDR1 obejmującą sekwencję aminokwasową o Identyfikatorze Sekw. nr 8 (tj. CDRJ VH D2E7). Regiony zrębowe VL korzystnie pochodzą z ludzkiej rodziny zarodkowej V«I, korzystniej z genu Vk ludzkiej linii zarodkowej A20, zaś najkorzystniej z sekwencji zrębowych VL D2E7 pokazanych na figurach 1A i iB. Regiony zrębowe dla Vk korzystnie pochodzą z ludzkiej rodziny zarodkowej Vh3, korzystniej z genu VH ludzkiej linii zarodkowej DP-31, zaś najkorzystniej z sekwencji zrębowych VH D2E7 pokazanych na figurach 2A i 2B.
W jeszcze innym wykonaniu, wynalazek dostarcza izolowanego ludzkiego przeciwciała albo jego części wiążącej antygen z regionem zmiennym łańcucha lekkiego (LCVR) obejmującym sekwencję aminokwasową o Identyfikatorze Sekw. nr 1 (tj. VL D2E7) i regionem
188 192 zmiennym łańcucha ciężkiego (HCVR) obejmującym sekwencję aminokwasową o Identyfikatorze Sekw. nr 2 (tj. VH D2E7). W pewnych wykonaniach, przeciwciało obejmuje region stały łańcucha ciężkiego, taki jak region stały IgGl, IgG2, IgG3, IgG4, IgA, IgE, IgM albo IgD. Korzystnie, region stały łańcucha ciężkiego jest regionem stałym łańcucha ciężkiego IgGl albo IgG4. Ponadto, przeciwciało może obejmować region stały łańcucha lekkiego, region stały łańcucha lekkiego kappa albo lambda. Korzystnie, przeciwciało obejmuje region stały łańcucha lekkiego kappa. Alternatywnie część przeciwciała może być, przykładowo, fragmentem Fab albo jeUnełancuchewym Fv.
Najkorzystniejsze rukombinewane przeciwciało według wynalazku, określone jako D2E7, ma domenę CDR3 łańcucha lekkiego obejmującą sekwencję aminokwasową Identyfikatora Sekw. nr 3 i domenę CDR3 łańcucha ciężkiego obejmującą sekwencję aminekwasową Identyfikatora Sekw. nr 4. Korzystnie, przeciwciało D2E7 ma region zmienny łańcucha lekkiego (LCVR) obejmujący sekwencję aminokwasową Identyfikatora Sekw. nr 1 oraz region zmienny łańcucha ciężkiego (HCVR) obejmujący sekwencję aminokwasową Identyfikatora Sekw. nr 2.
W jeszcze innych wykonaniach wynalazek dostarcza izolowanego przeciwciała ludzkiego albo jego części wiążącej antygen, posiadającego domeny CDR3 VL i VH pokrewne z D2E7, przykładowo przeciwciał albo ich fragmentów wiążących antygen z regionem zmiennym łańcuchów lekkich (LCVR) o domenach CDR3 obejmujących sekwencję aminokwasową wybraną z grupy obejmującej Identyfikator Sekw. nr 3, Identyfikator Sekw. nr 11, Identyfikator Sekw. nr 12, Identyfikator Sekw. nr 13, Identyfikator Sekw. nr 14, Identyfikator Sekw. nr 15, Identyfikator Sekw. nr 16, Identyfikator Sekw. nr 17, Identyfikator Sekw. nr 18, Identyfikator Sekw. nr 19, Identyfikator Sekw. nr 20, Identyfikator Sekw. nr 21, Identyfikator Sekw. nr 22, Identyfikator Sekw. nr 23, Identyfikator Sekw: nr 24, Identyfikator Sekw. nr 25 i Identyfikator Sekw: nr 26 albo z regionem zmiennym łańcucha ciężkiego (HCVR) o domenach CDR3 obejmujących sekwencję aminokwasową wybraną z grupy obejmującej Identyfikator Sekw: nr 4, Identyfikator Sekw. nr 27, Identyfikator Sekw. nr 28, Identyfikator Sekw. nr 29, Identyfikator Sekw. nr 30, Identyfikator Sekw: nr 31, Identyfikator Sekw. nr 32, Identyfikator Sekw. nr 33, Identyfikator Sekw. nr 34 i Identyfikator Sekw. nr 35.
W jeszcze innym wykonaniu wynalazek dostarcza rekombinowanego ludzkiego przeciwciała albo jego części wiążącej antygen, które neutralizuje aktywność ludzkiego TNFa, ale nie ludzkiego TNFjl. Korzystnie, przeciwciało albo jego część wiążąca antygen neutralizuje również aktywność TNFa szympansa i przynajmniej jednego dodatkowego TNFa naczelnych wybranego z grupy obejmującej TNFa orangutana, 'TNFa marmosety, TNFa cynoimolgusa i TNFa rezusa. Korzystnie, przeciwciało albo jego część wiążąca antygen neutralizuje TNFa człowieka, szympansa i/lub dodatkowego gatunku naczelnych w standardowym teście in vitro z komórkami L929 z wartością IC50 równą 1 x 10’8 M albo mniejszą, korzystniej równą 1 x 10’9 M albo mniejszą, zaś jeszcze korzystniej równą 5 x 10‘10 M albo mniejszą. W jednym wykonaniu przeciwciało neutralizuje również aktywność TNFa psa, korzystnie w standardowym teście in vitro z komórkami L929 z wartością IC50 równą 1 x 10'7 M albo mniejszą, korzystniej równą 1 x 10'8 M albo mniejszą, zaś jeszcze korzystniej równą 5 x Kr M albo mniejszą. W innym wykonaniu przeciwciało neutralizuje również aktywność TNFa świni, korzystnie w standardowym teście in vitro z komórkami L929 z wartością IC50 równą 1 x 105 M albo mniejszą, korzystniej równą 1 x 10'6 M albo mniejszą, zaś jeszcze korzystniej równą 5 x 10'7 M albo mniejszą. W jeszcze innym wykonaniu, przeciwciało neutralizuje również aktywność TNFa myszy, korzystnie w standardowym teście in vitro z komórkami L929 z wartością IC50 równą 1 x 10'4 M albo mniejszą korzystniej równą 1 x 10'5M albo mniejszą zaś jeszcze korzystniej równą 5 x 10’6 M albo mniejszą.
Przeciwciało albo jego część wiążącą antygen można derywatyzować albo łączyć z inną funkcyjną cząsteczką (np. innym peptydem albo białkiem). Przeciwciała albo ich części wiążące antygen według wynalazku obejmują durcwatyzewane i zmienione w inny sposób postaci ludzkich przeciwciał przeciwko hTNFa, w tym cząsteczki immumoaUhezcjmu. Przykładowo, przeciwciało albo jego część wiążąca antygen według wynalazku może być funkcjonalnie połączone (wiązaniem chemicznym, fuzją genową, połączeniem miukewαlunccjncm albo
188 192 jeszcze inaczej) z jedną albo wieloma cząstkami, takimi jak inne przeciwciało (np. przeciwciało o podwójnej swoistości), czynnik możliwy do wykrycia, środek cytotoksyczny, środek farmaceutyczny i/lub białko albo peptyd, który może pośredniczyć w wiązaniu przeciwciała albo części przeciwciała z inną cząsteczką (taką jak region rdzeniowy streptawidyny albo znacznik polihistydynowy).
Jeden rodzaj derywatyzowanego przeciwciała jest wytwarzany przez sieciowanie dwóch albo więcej przeciwciał (tego samego rodzaju albo różnych rodzajów, np. w celu wytworzenia przeciwciał o podwójnej swoistości). Odpowiednie środki sieciujące obejmują łączniki heterobifunkcjonalne, posiadające dwie odmiennie reagujące grupy oddzielone odpowiednim odstępnikiem (np. ester m-maleimidobenzoilo-N-hydroksysukcymidowy) albo homobifunkcjonalne (np. suberynian disukcymidylu). Łączniki takie dostępne są z Pierce Chemical Company, Rockford, IL.
Przydatne środki umożliwiające wykrywanie, którymi mogą być derywatyzowane przeciwciała albo ich części obejmują związki fluorescencyjne. Przykładowe fluorescencyjne środki umożliwiające wykrywanie obejmują fluoresceinę, izotiocyjsnIsn fluoresceiny, rodaminę, chlorek 5-dimetyloamino-l-naftalenosulfonylu, fikoerytrynę itp. Przeciwciało może być również derywatyzowane wykrywalnym enzymem, takim jak fosfataza alkaliczna, peroksydaza chrzanowa, oksydaza glukozy itp. Gdy przeciwciało jest derywatyzowane wykrywalnym enzymem, wykrywa się je przy użyciu odpowiednich reagentów, które enzym wykorzystuje do wytworzenia wykrywalnego produktu reakcji. Przykładowo, gdy występuje wykrywalny enzym - peroksydaza chrzanowa, dodanie nadtlenku wodoru i diaminobenzydyny prowadzi do powstania barwnego produktu reakcji, który jest wykrywalny. Przeciwciało może być również derywatyzowane biotyną i wykrywane przez pośredni pomiar wiązania awidyny albo streptawidyny.
II. Ekspresja przeciwciał
Przeciwciało albo jego część według wynalazku można wytworzyć rekombinacyjną ekspresją genów łańcuchów lekkich i ciężkich immunoglobuliny w komórce gospodarza. W celu wyrażenia przeciwciała rekombinacyjnie, komórkę gospodarza transfekuje się jednym albo wieloma rekombinowanymi wektorami ekspresyjnymi, niosącymi fragmenty DNA kodujące łańcuchy lekkie i ciężkie przeciwciała, tak że łańcuchy lekkie i ciężkie ulegają ekspresji w komórce gospodarza i korzystnie wydzielane do pożywki, w której komórka gospodarza jest hodowana i z której można odzyskiwać przeciwciała. Standardową metodykę rekombinacji DNA można zastosować w celu uzyskania genów łańcucha lekkiego i ciężkiego przeciwciał, wbudowania tych genów do wektorów ekspresyjnych i wprowadzenia wektorów do komórek gospodarza, tak jak to opisano w Sambrook i in., (wyd.) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, wydanie drugie, Cold Spring Harbor, NY, (1989), Ausubel i in., (wyd.) Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing Associates, (1989) oraz Boss i in., patent USA nr 4 816 397.
W celu wyrażania d2E7 i przeciwciała pokrewnego D2E7 fragmenty DNA można otrzymać przez amplifikację i modyfikację sekwencji łańcucha ciężkiego i lekkiego linii zarodkowej przy użyciu reakcji łańcuchowej polimerazy (PCR). Sekwencje zarodkowe DNA dla ludzkich genów regionów zmiennych łańcuchów lekkich i ciężkich są znane (patrz np. baza danych sekwencji ludzkiej linii zarodkowej „Vbase”; patrz również, Kabat i in., (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, wydanie piąte, US Department of Health and Human Services, NIH Publication nr 91-3242; Tomlinson i in., (1992) J. Mol. Biol. 227: 776-798; Cox i in., (1994) „A Directory of Human Germ-line Vk Segments Reveals a Strong Bias in their Usage” Eur. J. Immunol. 24: 827-836; których treść załączono tu przez odniesienie). W celu otrzymania fragmentu DNA kodującego region zmienny łańcucha ciężkiego D2E7 albo przeciwciała pokrewnego D2E7, jednego z członków rodziny Vh3 ludzkiej linii zarodkowej VH amplifikuje się standardową PCR. Korzystniej, anplifikuje się sekwencję VH linii zarodkowej DP-31. W celu otrzymania fragmentu Dna kodującego region zmienny łańcucha lekkiego D2E7 albo przeciwciała pokrewnego D2E7, jednego z członków rodziny VrI ludzkiej linii zarodkowej genów VL amplifikuje się standardową PCR. Korzystniej, amplifikuje się sekwencję VL linii zarodkowej a20. Startery PCR przydatne do zastosowania w ampli28
188 192 fikacji sekwencji linii zarodkowej VH DP-31 i VL A20 można zaprojektować w oparciu o sekwencje nukleotydowe ujawnione w odnośnikach cytowanych wyżej, przy użyciu standardowych sposobów.
Gdy uzyska się fragmenty VL i VH linii zarodkowej, sekwencje te można zmutować w taki sposób by kodowały ujawnione tu sekwencje aminokwasowe D2E7 albo pokrewne D2E7. Sekwencje aminokwasowe kodowane przez sekwencje DNA VH i VL linii zarodkowej porównuje się z sekwencjami aminokwasowymi VH i VL D2E7 albo pokrewnymi z D2E7 w celu identyfikacji reszt aminokwasowych, które różnią sekwencje D2E7 albo pokrewne D2E7 od linii zarodkowej. Następnie, mutuje się odpowiednie nukleotydy w DNA linii zarodkowej w taki sposób, że zmutowane sekwencje linii zarodkowej kodują sekwencję aminokwasową D2E7 albo pokrewną D2E7, stosując kod genetyczny w celu określenia, jakie należy wykonać zmiany nukleotydowe. Mutagenezę sekwencji zarodkowych przeprowadza się metodami standardowymi, takimi jak mutageneza za pomocą PCR (w której zmutowane nukleotydy wbudowywane są do starterów PCR w taki sposób, że produkt PCR zawiera mutacje) albo ukierunkowaną mutagenezą.
Ponadto, należy zaznaczyć, że jeżeli sekwencje „zarodkowe” otrzymane przez PCR kodują aminokwasy odmienne w regionie zrębowym niż w oryginalnej konfiguracji zarodkowej (tj. różnice w sekwencji amplifikowanej w stosunku do rzeczywistych sekwencji zarodkowych, przykładowo z powodu mutacji somatycznej) może być pożądana zmiana tych różnic aminokwasowych z powrotem do sekwencji zarodkowych (tj. „mutacja wsteczna” reszt zrębowych do konfiguracji zarodkowej).
Gdy uzyska się fragmenty DNA kodujące segmenty VH i VL D2E7 albo pokrewne D2E7 (przez amplifikację i mutagenezę genów VL i VH linii zarodkowej, jak to opisano wyżej), fragmentami tymi można dalej manipulować standardowymi technikami rekombinacji DNA, przykładowo w celu przekształcenia genów regionu zmiennego do genów łańcucha przeciwciała pełnej długości, genów fragmentu Fab albo genu scFv. W tych manipulacjach fragmenty DNA kodujące VL i VH są połączone funkcjonalnie z innym fragmentem DNA kodującym inne białko, takie jak region stały przeciwciała albo giętki łącznik. Określenie „połączone funkcjonalnie” w znaczeniu tu użytym oznaczać ma, że dwa fragmenty DNA są połączone w taki sposób, że sekwencje aminokwasowe kodowane przez dwa fragmenty DNA pozostają w jednej ramce odczytu.
Izolowany DNA kodujący region VH można przetworzyć w gen łańcucha ciężkiego pełnej długości przez funkcjonalne połączenie DNA kodującego VH z inną cząsteczką DNA kodującą regiony stałe łańcucha ciężkiego (CHI, CH2 i CH3). Sekwencje genów regionu stałego łańcucha ciężkiego są znane (patrz, przykładowo, Kabat i in., (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, wydanie piąte, US Department of Health and Human Services, NIH Publication nr 91-3242), zaś fragmenty DNA obejmujące te regiony można uzyskać przez standardową amplifikację PCR. Region stały łańcucha ciężkiego może być regionem stałym IgGl, IgG2, IgG3, IgG4, IgA, IgE, IgM albo IgD, ale najkorzystniej jest regionem stałym IgGl albo IgG4. Dla genu łańcucha ciężkiego fragmentu Fab, DNA kodujący VH można połączyć funkcjonalnie z inną cząsteczką DNA kodującą tylko region stały CHl łańcucha ciężkiego.
Izolowany DNA kodujący region VL można przekształcić w gen łańcucha lekkiego pełnej długości (jak również w gen łańcucha ciężkiego Fab) przez funkcjonalne połączenie DNA kodującego VL z inną cząsteczką DNA kodującą region stały CL łańcucha lekkiego. Sekwencje genów regionu stałego łańcucha lekkiego są znane (patrz, przykładowo, Kabat i in., (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, wydanie piąte, US Department of Health and Human Services, NIH Publication nr 91-3242), zaś fragmenty DNA obejmujące te regiony można uzyskać przez standardową amplifikację PCR. Region stały łańcucha lekkiego może być regionem stałym kappa albo lambda, ale najkorzystniej jest regionem stałym kappa.
W celu wytworzenia genu scFv fragmenty DNA kodujące VH i VL są łączone funkcjonalnie z innym fragmentem kodującym giętki łącznik, np. kodującym sekwencję aminokwasową (Gly4-Ser)3 w taki sposób, że sekwencje VH i VL mogą ulegać ekspresji jako ciągłe białko jednołańcuchowe, z regionami VL i VH połączonymi giętkim łącznikiem (patrz Bird
188 192 i in., (1988) Science 242: 423-426 oraz Huston i in., (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85: 5879-5883; McCafferty i in., Nature (1990) 348: 552-554).
W celu wyrażania przeciwciał albo części przeciwciał według wynalazku DNA kodujące łańcuchy lekkie i ciężkie pełnej długości, uzyskane w opisany wyżej sposób, wprowadza się do wektorów ekspresyjnych w taki sposób, że geny są połączone operacyjnie z sekwencjami kontrolującymi transkrypcję i translację. W tym kontekście, określenie „połączone funkcjonalnie” ma oznaczać, ze gen przeciwciał jest poddany ligacji do wektora w taki sposób, że sekwencje kontrolujące transkrypcję i translację w wektorze służą w wyznaczonej im funkcji regulowania transkrypcji i translacji genu przeciwciała. Wektor ekspresyjny i sekwencje kontrolujące ekspresję są wybrane w taki sposób, że są zgodne z zastosowaną komórką gospodarza. Gen łańcucha lekkiego przeciwciała można wprowadzić do osobnego wektora albo, częściej, oba geny są wprowadzone do tego samego wektora ekspresyjnego. Geny przeciwciał są wprowadzone do wektora ekspresyjnego metodami standardowymi (np. ligacji komplementarnych miejsc restrykcyjnych we fragmencie genu przeciwciała i wektorze albo poddane ligacji tępymi końcami jeżeli nie występują żadne miejsca restrykcyjne). Przed wprowadzeniem sekwencji łańcucha lekkiego albo ciężkiego D2E7, albo pokrewnego D2E7, wektor ekspresyjny może już nieść sekwencje regionu stałego przeciwciała. Przykładowo, jedno z podejść do konwersji sekwencji D2E7 albo pokrewnych D2E7 w geny przeciwciała pełnej długości obejmuje wprowadzenie ich do wektorów ekspresyjnych kodujących już, odpowiednio, regiony stałe łańcucha lekkiego i łańcucha ciężkiego w taki sposób, że segment VH jest połączony funkcjonalnie z segmentem (segmentami) CH w wektorze, zaś segment VL jest połączony funkcjonalnie z segmentem CL w wektorze. Dodatkowo albo alternatywnie, rekombinowany wektor ekspresyjny może kodować peptyd sygnałowy, który ułatwia wydzielanie łańcucha przeciwciała z komórki gospodarza. Gen łańcucha przeciwciała można klonować do wektora w taki sposób, że peptyd sygnałowy jest połączony w jednej ramce z końcem aminowym genu łańcucha przeciwciała. Peptyd sygnałowy może być peptydem sygnałowym immunoglobuliny albo peptydem sygnałowym heterologicznym (tj. peptyd sygnałowy z białka nie będącego immunoglobuliną).
Oprócz genów łańcucha przeciwciała rekombinowane wektory ekspresyjne według wynalazku niosą sekwencje regulacyjne, które kontrolują ekspresję genów łańcucha przeciwciała w komórce gospodarza. Określenie „sekwencja regulatorowa” obejmuje promiotory, wzmacniacze i inne elementy kontrolujące ekspresję (np. sygnały polidenylacji), które kontrolują transkrypcję albo translację genów łańcucha przeciwciała. Takie sekwencje regulacyjne opisane są przykładowo w Goeddel; Gene Expression Technology: Meth. in Enzymol. 185, Academic Press, San Diego, CA (1990). Specjalista zauważy, że projektowanie wektora ekspresyjnego, w tym wybór sekwencji regulatorowych może zależeć od takich czynników jak wybór transformowanej komórki gospodarza, poziom pożądanej ekspresji białka, itp. Korzystne sekwencje regulatorowe dla komórek gospodarza ssaków obejmuje elementy wirusowe, które kierują ekspresją wysokich poziomów białka w komórkach ssaczych, takie jak promotory i/lub wzmacniacze pochodzące z wirusa cytomegalii (CMV) (takie jak wzmacniacz/promotor CMV), wirusa małpiego 40 (SV40) (taki jak promotor/wzmacniacz SV40), adenowirusa (np. główny późny promotor adenowirusa (AdMLP)) oraz polioma. Inne opisy wirusowych elementów regulatorowych zamieszczono przykładowo w patentach USA nr 5 168 062, Stinski; nr 4 510 245, Bell i in.; nr 4 968 615, Schaffner i in.
Oprócz genów łańcuchów przeciwciał i sekwencji regulatorowych, rekombinowane wektory ekspresyjne według wynalazku mogą nieść dodatkowe sekwencje, takie jak sekwencje regulujące replikację wektora w komórce gospodarza (np. początek replikacji) i geny znaczników umożliwiających selekcję. Gen znacznika umożliwiającego selekcję ułatwia selekcję komórek gospodarza, do których wprowadzono wektor (patrz np. patent USA nr nr 4 399 216, 4 634 665 i 5 179 017, Axel i in.). Przykładowo, zwykle gen znacznika umożliwiającego selekcję zapewnia oporność na leki, takie jak G418, higromycynę albo metotreksat, komórce gospodarza, do którego wprowadzono wektor. Korzystne geny znaczników umożliwiających selekcję obejmują gen reduktazy dihydrofolianu (DHFR) (do zastosowania w ko30
188 192 mórkach dhfr' z selekcją/amplifikacją przy użyciu metotreksatu) oraz gen neo (do selekcji przy użyciu G418).
W celu ekspresji łańcuchów lekkich i ciężkich, wektor(y) ekspresyjny kodujący łańcuchy lekkie i ciężkie transfekuje się do komórki gospodarza standardowymi sposobami. Różne postaci „tra^nsfd^<^cję obejmują wielką różnorodność technik stosowanych powszechnie do wprowadzania egzogennego DNA do komórek gospodarza prokariotycznego albo eukariotycznego, np. transfekcja przez elektroporację, precypitację fosforanem wapnia, dekstranDEAE itp. Jakkolwiek możliwe jest teoretycznie wyrażanie przeciwciał według wynalazku w innych komórkach gospodarza prokariotycznego albo eukariotycznego, ekspresja przeciwciał w komórkach eukariotycznych, zaś korzystnie w ssaczych komórkach gospodarza jest najkorzystniejsza, ponieważ takie komórki w porównaniu z komórkami prokariotycznymi dają większe prawdopodobieństwo wytworzenia i wydzielenia prawidłowo pofałdowanego i immunologicznie czynnego przeciwciała. Ekspresja prokariotyczna genów przeciwciał opisana została jako nieskuteczna do wytwarzania znacznych ilości aktywnego przeciwciała (Boss i Wood (1985) Immunology Today 6: 12-13).
Korzystne komórki gospodarza ssaczego do wyrażania rekombinowanych przeciwciał według wynalazku obejmują komórki jajnika chomika chińskiego (CHO) (w tym komórki CHO dhfr', opisane przez Urlaub i Chasin (1980) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77: 4216-4220, zastosowane ze znacznikiem umożliwiającym selekcję DHFR, jak np. opisany w Kaufman i Sharp (1982) Mol. Biol. 159:601-621), komórki szpiczaka NSO, komórki COS i SP2. Gdy rekombinowane wektory ekspresyjne kodujące geny przeciwciała wprowadzi się do ssaczych komórek gospodarza, przeciwciała są wytwarzane przez hodowanie komórek gospodarza przez okres czasu wystarczający do ekspresji przeciwciała przez komórki gospodarza albo jeszcze korzystniej, wydzielenie przeciwciał do pożywki hodowlanej, w której hodowana jest komórka gospodarza. Przeciwciała można odzyskiwać z pożywki hodowlanej stosując standardowe metody oczyszczania białek.
Komórki gospodarza można zastosować do wytworzenia części całych przeciwciał, takich jak fragmenty Fab albo cząsteczki scFv. Należy rozumieć, że odmiany powyższej procedury leżą w zakresie wynalazku. Przykładowo, może być pożądane transfekowanie komórki gospodarza DNA kodującym łańcuch ciężki albo łańcuch lekki (albo oba) przeciwciała według wynalazku. Technologię rekombinacji DNA można również zastosować w celu usunięcia części albo całości DNA kodującego jeden albo oba łańcuchy, lekki i ciężki, co jest konieczne do wiązania hTNFa. Cząsteczki wyrażane z takich okrojonych cząsteczek DNA są również objęte przeciwciałami według wynalazku. Oprócz tego można wytworzyć przeciwciała o podwójnej swoistości, w których jeden łańcuch lekki i ciężki są przeciwciałami według wynalazku, zaś drugi łańcuch lekki i ciężki są swoiste dla antygenu innego niż hTNFa przez sieciowanie przeciwciała według wynalazku z drugim przeciwciałem standardowymi metodami sieciowania chemicznego.
W korzystnym układzie rekombinacyjnej ekspresji przeciwciała albo jego części wiążącej antygen według wynalazku, rekombinowany wektor ekspresyjny kodujący oba łańcuchy przeciwciała, lekki i ciężki, wprowadzany jest do komórek CHO dhfr' metodą transfekcji przy użyciu fosforanu wapnia. W rekombinowanym wektorze ekspresyjnym geny łańcuchów lekkiego i ciężkiego przeciwciała połączone są funkcjonalnie każdy z elementami regulatorowymi wzmacniacz/promotor (np. pochodzącymi z SV40, CMV, adenowirusa itp., takie jak element regulatorowy wzmacniacz CMV/promotor AdMLP albo element regulatorowy wzmacniacz SV40/promotor AdMLP), w celu napędzania wysokich poziomów transkrypcji genów. Rekombinowany wektor ekspresyjny niesie również gen DHFR, który umożliwia selekcję komórek CHO, które zostały transfekowane wektorem, przy użyciu selekcji amplifikacji metotreksatem. Wyselekcjonowane transformanty komórek gospodarza hoduje się w celu umożliwienia im ekspresji łańcuchów lekkich i ciężkich przeciwciała i całe przeciwciało odzyskuje się z pożywki hodowlanej. Standardowe techniki biologii molekularnej stosuje się w celu wytworzenia rekombinowanych wektorów ekspresyjnych, transfekowania komórek gospodarza, selekcjonowania transformantów, hodowania komórek gospodarza i odzyskiwania przeciwciała z pożywki hodowlanej.
188 192
W świetle powyższego, inny aspekt wynalazku dostarcza kompozycji kwasu nukleinowego, wektora i komórki gospodarza, którą można zastosować do rekombinacyjnej ekspresji przeciwciał i części przeciwciał według wynalazku. Sekwencja nuklidową kodująca region zmienny łańcucha lekkiego D2E7 pokazana jest na fig. 7 i Identyfikatorze Sekw. nr 36. Domena CDR1 LCVR obejmuje nukleotydy 70-102, domena CDR2 obejmuje nukleetcdc 148-168, zaś domena CDR3 obejmuje mukluetydy 265-291. Sekwencja nukleotydową kodująca region zmienny łańcucha ciężkiego pokazana jest na figurze 8 i Identyfikatorze Sekw. nr 37. Domena CDR1 HcVR obejmuje nukleotydy 91-105, domena CDR2 obejmuje nukluetcdy 148-198, zaś domena CDR3 obejmuje nukleotydy 295-330. Specjalista zauważy, że sekwencje nukleotydowe kodujące przeciwciała pokrewne z D2E7 albo ich części (np. domenę CDR, taką jak domena CDR3), można otrzymać z sekwencji nuklidowych kodujących LCVR i HCvR D2E7 przy użyciu kodu genetycznego i standardowych technik biologii molekularnej.
W jednym wykonaniu wynalazek dostarcza izolowanego kwasu nukleinowego kodującego domenę CDR3 łańcucha lekkiego obejmującą sekwencję aminokwasową Identyfikatora Sekw. nr 3 (tj. CDR3 VL D2E7) albo zmodyfikowaną na podstawie Identyfikatora Sekw. nr 3 przez zastąpienie alaniną w pozycji 1, 4, 5, 7, albo 8 przez jedno do pięciu zastąpień aminokwasami konserwatywnymi w pozycjach 1, 3, 4, 6, 7, 8 i/lub 9. Ten kwas nukleinowy może kodować wyłącznie region CDR3 albo korzystniej cały region zmienny łańcucha lekkiego przeciwciała (LCVR). Przykładowo, kwas nukleinowy może kodować LCVR o domenie CDR2 obejmującej sekwencję aminokwasową na Identyfikatorze Sekw: nr 5 (tj. CDR2 VL D2E7) i domenę CDR1 obejmującą sekwencję aminekwasewą o Identyfikatorze Sekw. nr 7 (tj. CDR1 VL D2E7).
W innym wykonaniu wynalazek dostarcza izolowanego kwasu nukleinowego kodującego domenę CDR3 łańcucha ciężkiego obejmującą sekwencję aminokwasową o Identyfikatorze Sekw. nr 4 albo zmodyfikowaną na podstawie Identyfikatora Sekw nr 4 przez zastąpienie alaniną w pozycji 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10 albo 11, albo przez jedno do pięciu zastąpień aminokwasami konserwatywnymi w pozycjach 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10, 11 i/lub 12. Ten kwas nukleinowy może kodować wyłącznie region CDR3 albo korzystniej cały region zmienny łańcucha ciężkiego przeciwciała (HCVR). Przykładowo, kwas nukleinowy może kodować HCVR o domenie CDR2 obejmującej sekwencję aminokwasową na Identyfikatorze Sekw. nr 6 (tj. CDR2 VH D2E7) i domenę CDR1 obejmującą sekwencję aminokwasową o Identyfikatorze Sekw. nr 8 (tj. CDR1 VH D2E7).
W jeszcze innym wykonaniu wynalazek dostarcza kwasów nukleinowych kodujących domenę CDR3 pokrewną z D2E7, np. obejmującą sekwencję aminekwasewa wybraną z grupy obejmującej Identyfikator Sekw. nr 2, Identyfikator Sekw. nr 3, Identyfikator Sekw. nr 11, Identyfikator Sekw. nr 12, Identyfikator Sekw. nr 13, Identyfikator Sekw. nr 14, Identyfikator Sekw. nr 15, Identyfikator Sekw. nr 16, Identyfikator Sekw. nr 17, Identyfikator Sekw. nr 18, Identyfikator Sekw'. nr 19, Identyfikator Sekw. nr 20, Identyfikator Sekw. nr 21, Identyfikator Sekw. nr 22, Identyfikator Sekw: nr 23, Identyfikator Sekw. nr 24, Identyfikator Sekw:. nr 25, Identyfikator Sekw. nr 26, Identyfikator Sekw. nr 27, Identyfikator SeRw. nr 28, Identyfikator Sekw. nr 29, Identyfikator Sekw. nr 30, Identyfikator Sekw. nr 31, Identyfikator Sekw. nr 32, Identyfikator Sekw. nr 33, Identyfikator Sekw:. nr 34 i Identyfikator Sekw^. nr 35.
W jeszcze innym wykonaniu wynalazek dostarcza izolowanego kwasu nukleinowego kodującego region zmienny łańcucha lekkiego przeciwciała obejmującego sekwencję aminokwasową Identyfikatora Sekw:. nr 1 (tj. LCVR D2E7). Korzystnie, ten kwas nukleinowy obejmuje sekwencję nukleotydową o Identyfikatorze Sekw. nr 36, jakkolwiek specjalista zauważy, że z powodu degeneracji kodu genetycznego inne sekwencje mukleetyUewe mogą kodować sekwencję aminokwasową o Identyfikatorze Sekw. nr 1. Kwas nukleinowy może kodować wyłącznie LCVR albo może kodować region stały łańcucha ciężkiego przeciwciał, połączony funkcjonalnie z LCVR. W jednym z wykonań, ten kwas nukleinowy jest w rekomtonowanym wektorze ekspresyjnym.
W jeszcze innym wykonaniu wynalazek dostarcza izolowanego kwasu nukleinowego kodującego region zmienny łańcucha ciężkiego przeciwciała obejmujący sekwencję aminokwasową o Identyfikatorze Sekw:. nr 2 (tj. HCYR D2E7). Korzystnie, ten kwas nukleinowy
188 192 obejmuje sekwencję nukleotydową o Identyfikatorze Sekw. nr 37, jakkolwiek specjalista zauważy, że z powodu degeneracji kodu genetycznego inne sekwencje nukleotydowe mogą kodować sekwencję aminokwasową o Identyfikatorze Sekw. nr 2. Kwas nukleinowy może kodować wyłącznie HCVR albo może kodować region stały łańcucha ciężkiego przeciwciał, połączony funkcjonalnie z HCVR. Przykładowo kwas nukleinowy może obejmować region stały IgGl albo IgG4. W jednym z wykonań, ten kwas nukleinowy jest zawarty w rekombinowanym wektorze ekspresyjnym.
Wynalazek dostarcza również rekombinowanych wektorów ekspresyjnych kodujących zarówno łańcuch ciężki, jak i lekki przeciwciała. Przykładowo, w jednym wykonaniu wynalazek dostarcza rekombinowąnego wektora ekspresyjnego kodującego:
a) łańcuch lekki przeciwciała o regionie zmiennym obejmującym sekwencję aminokwasową 0 Identyfikatorze Sekw/. nr 1 (tj. LCVR D2E7); i
b) łańcuch ciężki przeciwciała o regionie zmiennym obejmującym sekwencję aminokwasową o Identyfikatorze Sekw. nr 2 (tj. HCVR D2E7).
Wynalazek dostarcza również komórek gospodarza, do których wprowadzono jeden albo wiele rekombinowanych wektorów ekspresyjnych według wynalazku. Korzystnie, komórka gospodarza jest ssaczą komórką gospodarza, jeszcze korzystniej komórka gospodarza jest komórką CHO, komórką NSO albo komórką cOs.
Jeszcze dalej, wynalazek dostarcza sposobu syntetyzowania rekombinowąnego ludzkiego przeciwciała według wynalazku przez hodowanie komórek gospodarza według wynalazku w odpowiedniej pożywce dopóki nie zostanie zsyntetyzowane rekombinowane ludzkie przeciwciało według wynalazku. Sposób może dalej obejmować izolowanie rekombinowanego ludzkiego przeciwciała z pożywki hodowlanej.
III. Seeekcja r«3l<c^n^lińo3v^^iyjcc^h ludkach przeciwciał
Rekombinowane ludzkie przeciwciała według wynalazku oprócz ujawnionych tu przeciwciał D2E7 i pokrewnych z D2E7 mogą być izolowane przez przesiewanie rekombinacyjnych bibliotek kombinatoryjnych przeciwciał, korzystnie bibliotek fagowych scFv, wytworzonych przy użyciu ludzkich cDNA VL i VH, wytworzonych z mRNA pochodzących z ludzkich limfocytów/. Metodyki wytwarzania i przesiewania takich bibliotek są znane. Oprócz zestawów dostępnych w handlu do wytwarzania bibliotek fagowych (np. Recombinant Phage Antibody System, Pharmacia, nr kat. 27-9400-01; i zestaw SurfZAP™, Stratagene, nr kat. 240612) przykłady sposobów i reagentów szczególnie przydatnych do zastosowania w wytwarzaniu i przesiewaniu bibliotek ekspresyjnych przeciwciał można znaleźć, przykładowo, w Ladner i in., patent USA nr 5 223 409; Kang i in., publikacja PCT WO 92/18619; Dower i in., publikacja PCT WO 91/17271; Winter i in., publikacja PCT WO 92/20791; Markland i in., publikacja PCT WO 92/15679; Breitling i in., publikacja PCT WO 93/01288; McCafferty publikacja PCT WO 92/01047; Garrard i in., publikacja PCT WO 92/09690; Fuchs i in., (1991) Bio/Technology 9: 1370-1372; Hay i in., (1992) Hum. Antibod. Hybridomas 3: 81-85; Huse i in., (1989) Science 246: 1275-1281; McCafferty i in., (1990) 348: 552-554; Griffith i in., (1993) EMBO J. 12: 725-735; Hawkins i in., (1992) J. Mol. Biol. 226: 889-896; Clackson i in., (1991) Nature 352: 624-628; Gram i in., (1992) PNAS 89: 3576-3580; Garrard i in., (1991) Bio/Technology 9: 1373-1377; Hoogenboom i in., (1991) Nuci. Acids Res. 19: 4133-4137; Barbas i in., (1991) PNAS 88: 7978-7982.
W najkorzystniejszym wykonaniu, w celu izolowania ludzkich przeciwciał o wysokim powinowactwie i niskiej stałej szybkości odłączania od hTNFa, mysie przeciwciało przeciwko hTNFa wykazujące wysokie powinowactwo i niską stałą szybkości odłączania od TNFa (np. MAK 195, hybrydoma o numerze dostępu depozytu ECAcC 87 050801) zastosowano do selekcjonowania ludzkich sekwencji łańcuchów lekkich i ciężkich posiadających podobną aktywność wiązania z hTNFa, stosując metodę „odcisku epitopu” albo kierowaną selekcję, w sposób opisany w Hoogenboom i in., publikacja PCT WO 93/06213. Biblioteki przeciwciał zastosowane w sposobie są korzystnie bibliotekami scFv wytworzonymi i przesiewanymi jak to opisano w McCafferty i in., publikacja PCT WO 92/01047; McCafferty i in., (1990) Nature 348: 552-554; oraz Griffith i in., (1993) EMBO J. 12: 725-734. Biblioteki przeciwciał scFv korzystnie przesiewa się stosując jako antygen rekombinowany hTNFa.
Gdy wybierze się wstępnie segmenty VL i VH, wykonuje się doświadczenia „mieszania i dopasowania”, w których różne pary początkowo wybranych segmentów VL i VH przesiewa się pod względem wiązania hTNFa, w celu wyselekcjonowania korzystnych kombinacji par VL/VH. Oprócz tego, w celu dalszej poprawy powinowactwa i/lub niskiego tempa odłączania podczas wiązania hTNFa, segmenty VL i VH korzystnej pary VL/VH można losowo mutować, korzystnie w regionie CDR3 VH i/lub VL, w procesie analogicznym do procesu mutacji somatycznej in vivo odpowiedzialnej za dojrzewanie powinowactwa przeciwciał podczas naturalnej reakcji odpornościowej. To dojrzewanie powinowactwa in vitro można osiągnąć przez amplifikację regionów VH i VL stosując startery PCR komplementarne do VH CDR3 albo VL CDR3, które „wyostrzono” losową mieszaniną czterech zasad nukleotydowych w pewnych pozycjach, w taki sposób, że powstałe produkty PCR kodują segmenty VH i Vl, w których wprowadzono losowe mutacje do regionów CDR3 VH i/lub VL. Te losowo zmutowane segmenty VH i VL można ponownie przesiewać pod kątem wiązania z hTNFa i można selekcjonować sekwencje, które wykazują wysokie powinowactwo wiązania i niską stałą szybkości odłączania hTNFa.
Sekwencje aminokwasowe wyselekcjonowanych łańcuchów lekkich i ciężkich przeciwciała można porównać z sekwencjami zarodkowymi łańcuchów lekkich i ciężkich. W przypadkach, gdy konkretne reszty zrębowe wyselekcjonowanych łańcuchów VL i/lub VH różnią się od konfiguracji zrębowej (np. w wyniku mutacji somatycznej genów immunoglobuliny zastosowanych do wytworzenia biblioteki fagowej) może być pożądane „nurtowanie wsteczne” zmienionych reszt zrębowych wyselekcjonowanych przeciwciał do konfiguracji zarodkowej (tj. zmiana sekwencji aminokwasowej regionu zrębowego wyselekcjonowanego przeciwciała w taki sposób, że są takie same jak sekwencje aminokwasowe zarodkowego regionu zrębowego). Takie „imitowanie wsteczne” (albo „upodabnianie do linii zarodkowej”) reszt zrębowych można osiągnąć standardowymi metodami biologii molekularnej wprowadzania konkretnych mutacji (np. ukierunkowanej mutagenezy; mutagenezy przy użyciu PCR itp.).
Po przesiewaniu i izolacji przeciwciał przeciwko hTNFa według wynalazku z biblioteki fągowej rekombinowanych immunoglobulin, kwas nukleinowy kodujący wyselekcjonowane przeciwciało można odzyskać z pakietu ekspresyjnego (np. z genomu faga) i klonować do innych wektorów ekspresyjnych standardowymi technikami rekombinacji DNA. Jeżeli to pożądane, kwasem nukleinowym można dalej manipulować w celu stworzenia innych postaci przeciwciał według wynalazku (np. przyłączać kwas nukleinowy kodujący dodatkowe domeny inmunoglobuliny, takie jak dodatkowe regiony stałe). W celu wyrażania rekombinowanych ludzkich przeciwciał wyizolowanych przez przesiewanie biblioteki kombinatoryjnej, DNA kodujący przeciwciało klonuje się do rekombinowanego wektora ekspresyjnego i wprowadza do ssaczej komórki gospodarza, jak opisano szczegółowo dalej w rozdziale II wyżej.
IV. Kompozycje farmaceutyczne i podawanie
Przeciwciała i części przeciwciał według wynalazku można włączać do kompozycji farmaceutycznych przydatnych do podawania pacjentom. Zwykle, kompozycja farmaceutyczna obejmuje przeciwciało albo część przeciwciała według wynalazku i dopuszczalny farmaceutycznie nośnik. W znaczeniu tu użytym „nośnik dopuszczalny farmaceutycznie” obejmuje dowolny i wszystkie rozpuszczalniki, ośrodki dyspersyjne, powłoki, środki przeciwbakteryjne i przeciwgrzybicze, środki izotoniczne i opóźniające wchłanianie, itp., które są dopuszczalne fizjologicznie. Przykłady nośników dopuszczalnych fizjologicznie obejmują jedno albo więcej spośród wymienionych: wodę, roztwór soli, roztwór soli buforowany fosforanem, dekstrozę, glicerynę, etanol itp., jak również ich kombinacje. W wielu przypadkach korzystne jest włączenie do kompozycji środków izotonicznych, przykładowo cukrów, polialkoholi, takich jak mannitol, sorbitol albo chlorek sodu. Nośniki dopuszczalne farmaceutycznie mogą dalej obejmować mniejsze ilości substancji dodatkowych, takich jak środki zwilżające albo emulgujące, konserwanty albo bufory, które zwiększają okres przechowywania albo skuteczność przeciwciała albo części przeciwciała.
Kompozycje według wynalazku mogą występować w wielu postaciach. Obejmują one, przykładowo, postaci dawkowania płynne, półstałe i stałe, takie jak roztwory (np. roztwory
188 192 do wstrzyknięć albo przetoczeń), dyspersje albo zawiesiny, tabletki, pigułki, proszki, liposomy albo czopki. Korzystna postać zależy od zamierzonego sposobu podania i zastosowania leczniczego. Typowe korzystne kompozycje są w postaci roztworów do wstrzyknięć albo przetoczeń, takie jak kompozycje podobne do stosowanych w immunizacji biernej ludzi innymi przeciwciałami. Korzystnym sposobem podawania jest podawanie pozajelitowe (np. dożylne, podskórne, dootrzewnowe, domięśniowe). W korzystnym wykonaniu, przeciwciało podaje się przez wstrzyknięcie domięśniowe albo podskórne.
Kompozycje farmaceutyczne zwykle muszą być sterylne i stabilne w warunkach wytwarzania i przechowywania. Kompozycje można wytwarzać jako roztwory, mikroemulsje, dyspersje, liposomy albo inne struktury przydatne do osiągania wysokiego stężenia leku. Sterylne roztwory do wstrzyknięć można wytworzyć przez włączenie składnika czynnego (tj. przeciwciała albo części przeciwciała) w pożądanej ilości do odpowiedniego rozpuszczalnika z jedną albo wieloma kombinacjami składników wymienionych powyżej, jeżeli to konieczne, a następnie sterylizowanie przez filtrowanie. Ogólnie, dyspersje wytwarza się przez włączenie składnika czynnego do sterylnego nośnika, który zawiera podstawowy ośrodek dyspersyjny i wymagane inne składniki jak wymienione powyżej. W przypadku sterylnych proszków do wytwarzania sterylnych roztworów do wstrzyknięć, korzystnym sposobem wytwarzania jest suszenie pod próżnią i suszenie po zamrożeniu, które pozwala uzyskać proszek składnika czynnego z dodatkowymi pożądanym składnikiem z uprzednio przefiltrowanego sterylnie roztworu. Właściwą płynność roztworu można zachować, przykładowo, przez zastosowanie pokrycia takiego jak lecytyna, przez zachowanie pożądanej wielkości cząstek w przypadku dyspersji i zastosowanie surfaktantów. Przedłużone wchłanianie kompozycji do wstrzyknięć można wywołać przez wprowadzenie do kompozycji czynnika opóźniającego wchłanianie, przykładowo soli monostearynianu i żelatyny.
Przeciwciała i części przeciwciał według wynalazku można podawać różnymi znanymi sposobami, jakkolwiek do wielu zastosowań terapeutycznych korzystną drogą/metodą podania jest wstrzyknięcie albo przetoczenie dożylne. Jak zauważy specjalista, droga i/lub sposób podania będzie różny w zależności od pożądanego wyniku. W pewnych wykonaniach, składnik czynny można wytworzyć z nośnikiem, który zapobiegnie gwałtownemu uwalnianiu się związku, takim jak postać do kontrolowanego uwalniania, w tym wszczepy, plastry przezskóme i układy dostarczania mikrokapsułkowanego. Można zastosować ulegające biodegradacji polimery zgodne biologicznie, takie jak octan etylenowinylu, polibezwodniki, polikwas glikolowy, kolagen, poliortoestry i polikwas mlekowy. Opatentowano oraz znanych jest wiele sposobów wytwarzania takich postaci, patrz np. Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems, Robinson (wyd.), Marcel Dekker, Inc., Nowy York, 1978.
W pewnych wykonaniach przeciwciało albo część przeciwciała można podawać doustnie, przykładowo z obojętnym rozcieńczalnikiem albo przyswajalnym jadalnym nośnikiem. Związek (oraz inne składniki, jeżeli to pożądane) można również zamknąć w kapsułce z twardej albo miękkiej żelatyny, prasować w postaci tabletki albo włączyć bezpośrednio do diety osobnika. Do podawania doustnego, związki można włączyć do zaróbki i zastosować w postaci jadalnych tabletek, tabletek policzkowych, kołaczyków, kapsułek, eliksirów, zawiesin, syropów, opłatków itp. W celu podawania związku według wynalazku innymi sposobami niż podawanie pozajelitowe, może być pożądane pokrycie związku albo podanie równocześnie z substancją zapobiegającą inaktywacji.
Uzupełniające składniki czynne można włączać do kompozycji. W konkretnych wykonaniach przeciwciało albo część przeciwciała według wynalazku łączy się z czynnikami, które są przydatne do leczenia zaburzeń, w których szkodliwa jest aktywność hTNFa. Przykładowo, przeciwciało przeciwko hTNFa albo część przeciwciała według wynalazku można łączyć i/lub podawać równocześnie z jednym albo wieloma dodatkowymi przeciwciałami, które wiążą inne cele (np. przeciwciałami, które wiążą inne cytokiny albo wiążą cząsteczki powierzchniowe komórek), jedną albo wieloma cytokinami, rozpuszczalnymi receptorami TNFa (patrz np. publikacja PCT WO 94/06476) i/lub jednym albo wieloma czynnikami chemicznymi, które hamują wytwarzanie albo czynność hTNFa (takie jak pochodne cykloheksanoilydenu opisane w publikacji PCT WO 93/19751). Ponadto, jedno albo wiele przeciwciał
188 192 według wynalazku można zastosować w kombinacji z dwoma albo wieloma z powyższych środków terapeutycznych. Takie terapie skojarzone mogą korzystnie wykorzystywać mniejsze dawki podawanych środków terapeutycznych, umożliwiając uniknięcie możliwych toksyczności albo powikłań związanych z różnymi monoterspismI.
Nie ograniczające przykłady środków terapeutycznych na reumatoidalne zapalenie stawów, z którymi może być łączone przeciwciało albo część przeciwciała według wynalazku obejmują: niesteroidowe środki przeciwzapalne (NSAID); środki przeciwzapalne Hamujące cytokiny (CSAID); CDP-571/BAY-10-335ó (humanizowane przeciwciało przeciwko hTNFa; Celltech/Bayer); cA2 (chimeryczne przeciwciało przeciwko HTNFa; Centocor); 75 kdTNFR-IgG (białko fuzyjne receptora TNF 75 kDa i IgG; Immunex; patrz Arthritis & Rheumatism (1994) 37:S295·; J. Invest. Med. (1996) 44: 235A); 55 kdTNFR-IgG (białko fuzyjne receptora TNF 55 kDa i IgG; Hoffmann-La Roche); IDEC-CE9.1/SB 210396 (przeciwciało przeciwko CD4, nie usuwające; IDEC/SmithKline; patrz np. Arthritis & Rheumatism (1995) 38:S 185 ); DAB 486-IL-2 i/lub DAB 389-IL-2 (białko fuzyjne IL-2; Seragen; patrz np. Arthritis & Rheumatism (1993) 36:1223); .At-Tsa (humanizowane ppz/eCIecCaSo ppzecćwko IL-2Ra; Protem Desiig Labs/Roche); IL-4 (cytokina przeciwzapalna; DNAX/Schering); IL-10 (SCH 52000; rekombinowana IL-10, cytokiną przeciwzapalna; DNAX/Schering); agoniści IL-4; IL-10 i/lub IL-4 (patrz przeciwciała sgonistyc/ne); IL-1RA (agonista receptora IL-1; Synergen/Amgen); TNFbp/s-TNFR (rozpuszczalne białko wiążące TNF; patrz, np. Arthritis & Rheumatism (1996) 39: 9 (suplement), S284; Amer. J. Physiol. - Heart and Circulatory Physiology (1995) 268: 37-42); R973401 (inhibitor fosfodiesters/y typu IV; patrz np. Arthritis & Rheumatism (1996) 39: (suplement) S282); MK-966 (inhibitor COX-2; patrz np. Arthritis & Rheumatism (1996) 39: (suplement), S81); Iloprost (patrz Arthritis & Rheumatism (1996) 39: (suplement), S82); metotreksat (Arthritis & Rheumatism (1996) 39: (suplement), S82; talidomid (Arthritis & Rheumatism (1996) 39: (suplement), S282) i leki pokrewne z talidomidem (np. Celgen); leflunomid (przeciwzapalny i inhibitor cytokin; patrz np. Arthritis & Rheumatism (1996) 39: (suplement), S131; Inflammation Res. (1996) 45: 103-107); kwas traneksamowy (inhibitor aktywacji plazminogenu; patrz np. Arthritis & Rheumatism (1996) 39: (suplement), S282); prostaglandyna E1 (patrz np. Arthritis & Rheumatism (1996) 39: (suplement), S282); Tenidap (niesteroisdowy lek przeciwzapalny; patrz np. Arthritis & Rheumatism (1996) 39: (suplement), S280); naproksen (niesteroidowy lek przeciwzapalny; patrz np. Neuro Report (1996) 7: 1209-1213); meloksikam (niesteroidowy lek przeciwzapalny); Ibuprofen (niesteroidowy lek przeciwzapalny); piroksicam (niesteroidowy lek przeciwzapalny); diclofenac (niesteroidowy lek przeciwzapalny); indometacyna (niesteroidowy lek przeciwzapalny); sulfasa^azyna (patrz np. Arthritis & Rheumatism (1996) 39: (suplement), S281); azatiopryna (patrz np. Arthritis & Rheumatism (1996) 39: (suplement), S281); inhibitor ICE (inhibitor enzymu konwertującego IL-1P); zap-70 i/lub inhibitor lek (inhibitor kinazy tyrozynowej zap-70 albo 1ck); inhibitor vEGf i/lub inhibitor VEGF-R (inhibitory czynnika wzrostu nabłonka naczyń albo receptor czynnika wzrostu nabłonka naczyń; inhibitory naczyniotworzenia); kortykosteroidowe leki przeciwzapalne (np. SB203580); inhibitory TNF-konwertazy; przeciwciała przeciwko IL-12, interleukinie 11 (patrz np. Arthritis & Rheumatism (1996) 39: (suplement), S296); interleukinie-13 (patrz np. Arthritis & Rheumatism (1996) 39: (suplement), S308); inhibitory interleukiny-17 (patrz np. Arthritis & Rheumatism (1996) 39: (suplement), s120); złoto, penicylamina, chlorochina, hydroksychlorochina, chlorambucil, cyklofosfamid, cyklosporyna, całkowite napromieniowanie narządów limfatycznych, globulina antytymocytarna, przeciwciała przeciwko CD4, CD5-toksyny, doustne peptydy i kolagen, sól disodowa lobenzaritu; Czynniki Regulujące Cytokiny (CRA) HP228 i HP466 (Houghten PHsrmaceutlcsls, Inc.); antysensowne oligodeoksynukleotydy fosfotionianowe przeciwko ICAM-1 (ISIS 2302; Isis Pharmaceuticals, Inc.); rozpuszczalny dopełniacz receptora 1 (TP10; T Celi Sciences, Inc.); prednizon, orgoteina, pollsiarc/sn glIkozsminoglikanu, minocyklina, przeciwciała przeciwko IL-2R; lipidy roślinne i morskie (kwasy tłuszczów ryb i nasion roślin; patrz np. DeLuca i in (1995) Rheum. Dis. Clin. North Am. 21:759-777); aursnofins, fenylobuts/on, kwas meklofenamowy, kwas flufenamowy, wewnątrzżylne globuliny odpornościo36
188 192 we, zileuton, kwas mykofenolowy (RS-61443); takrolimus (FK-506); sirolimus (rapamycyna); amiprilose (therafectin); kladribina (2-chlorodezoksyadenozyna) i azaribina.
Nie ograniczające przykłady środków terapeutycznych na chorobę zapalnąjelita grubego, z którymi może być łączone przeciwciało albo część przeciwciała według wynalazku, obejmują: budenozyd, epidermalny czynnik wzrostowy, kortykosteroidy, cyklosporynę, sulfasalazynę, aminosalicylany, 6-merkaptopurynę, azatioprynę, metronidazol, inhibitory lipooksygenazy, mesalaminę, olsalazynę, balsalazyd, przeciwutleniacze, inhibitory tromboksanu, antagoniści receptora IL-1, przeciwciała monoklonalne przeciwko IL-1 β, przeciwciała monoklonalne przeciwko IL-6, czynniki wzrostu, inhibitory elastazy, związki pirydynylowo-imidazolowe; CDP-571/BAY-10-3356 (humanizowane przeciwciało przeciwko hTNFa; Celltech/Bayer); cA2 (chimeryczne przeciwciało przeciwko hTNFa; Centocor); 75 kdTNFR-IgG (białko fuzyjne receptora TNF 75 kDa i IgG; Immunex; patrz Arthritis & Rheumatism (1994) 37:S295; J. Invest. Med. (1996) 44: 235A); 55 kdTNFR-IgG (białko fuzyjne receptora TnF 55 kDa i IgG; Hoffmaim-La Roche); IDEC-CE9.1/SB 210396 (przeciwciało przeciwko CD4, nie usuwające; IDEC/SmithKline; patrz np. Arthritis & Rheumatism (1995) 38: 3185); DAB 486-IL-2 i/lub DAB 389-IL-2 (białko fuzyjne IL-2; Seragen; patrz np. Arthritis & Rheumatism (1993) 36: 1223); Anti-Tac (humanizowane przeciwciało przeciwko IL-2Ra; Protein Design Labs/Roche); IL-4 (cytokiną przeciwzapalna; DNAX/Schering); IL-10 (SCH 52000; rekombinowana IL-10, cytokiną przeciwzapalna; DNAX/Schering); agoniści IL-4; IL-10 i/lub IL-4 (patrz przeciwciała agonistyczne); interleukina-11, proleki prednizolonu, deksametazonu albo budezonidu sprzęgnięte z glukuronidem albo dekstranem, antysensowne oligodeoksynukleotydy fosfotionianowe przeciwko ICAM-1 (ISIS 2302; Isis Pharmaceuticals, Inc.); rozpuszczalny receptor dopełniacza 1 (TP10; T Celi Sciences, Inc.); mesalazyna do powolnego uwalniania, metotreksat, antagonista czynnika aktywującego płytki (PAF); ciprofloksacyna i lignokaina.
Nie ograniczające przykłady środków terapeutycznych na stwardnienie rozsiane, z którymi może być łączone przeciwciało albo część przeciwciała według wynalazku obejmują: kortykosteroidy, prednizolon, metyloprednizolon, azatiopryna, cyklofosfamid, cyklosporyna, metotreksat, 4-aminopirydyna, tizanidyna, interferon-pia (Avonex™, Biogen), interferon-pib (Betaseron™, ChirońBerlex), kopolimer 1 (Cop-1, Copaxone™, Teva Pharmaceutical Industries, Inc.), tlen hiperbaryczny, dożylne immunoglobuliny, CDP-571/BAY-10-3356 (humanizowane przeciwciało przeciwko hTNEa; Celltech/Bayer); cA2 (chimeryczne przeciwciało przeciwko hTNFa; Centocor); 75 kdTNFR-IgG (białko fuzyjne receptora TNF 75 kDa i IgG; Immunex; patrz Arthritis & Rheumatism (1994) 37: 3295; J. Invest. Med. (1996) 44: 235A); 55 kdTNFR-IgG (białko fuzyjne receptora TNF 55 kDa i IgG; Hoffmann-La Roche); IL-10, IL-4 i IL-10 i/lub IL-4 agoniści (np. przeciwciała agonistyczne).
Nie ograniczające przykłady środków terapeutycznych na posocznicę, z którymi może być łączone przeciwciało albo część przeciwciała według wynalazku, obejmują: hipertoniczne roztwory soli, antybiotyki, wewnątrzżylne globuliny gamma, ciągłą hemofiltrację, karbapenemy (np. meropenem), antagonistów cytokin takich jak TNFa, IL-1 β, IL- 6 l/lubIL-8, CDP -571/BAY-10-3356 (humanizowane przeciwciało przeciwko hTNFa; Celltech/Bayer); cA2 (chimeryczne przeciwciało przeciwko hTNFa; Centocor); 75 kdTNFR-IgG (białko ftizyjne receptora TNF 75 kDa i IgG; Immunex; patrz, Arthritis & Rheumatism (1994) 37 -S295; J. Invest. Med. (1996) 44: 235A); 55 kdTNFR-IgG (białko fuzyjne receptora tNf 55 kDa i IgG; Hoffmann-La Roche), Środki Regulujące Cytokiny (CRA) HP228 i HP466 (Houghten Pharmaceuticals, Inc.), SHF 107647 (peptyd o niskim ciężarze cząsteczkowym; SmithKline Beecham), tetrawalentny guanylohydrazon CNI-1493 (Picower Institute), inhibitor szlaku czynnika tkankowego (TFP1, Chiron), pLXSHD+E6/E7 (hemoglobina modyfikowana chemicznie, APEX Bioscience), czynniki chelatujące żelaza i chelaty, w tym kompleks kwas dietylenotetraiminopentaoctowy-żelazo (III) (DTPA-żelazo(III); Molichem Medicines); lizofillina (syntetyczna metyloksantyna drobnocząsteczkowa; Cell Therapeutics, Inc.), PGGglukan (wodorozpuszczalny β1,3-glukan, Alpha-Beta Technology), apolipoproteina A-1 rekonstytuowana lipidami, chiralne kwasy hydroksamowe (syntetyczne środki przeciwUakteryjne hamujące biosyntezę lipidu A), przeciwciała przeciwko endotoksynie; E5531 (syntetyczny
188 192 antagonista lipidu A, Eisai America, Inc.), rBPI21 (rekombinowany fragment N-końcowy ludzkiego białka bakturiobójczugo/zwiększajacuge przepuszczalność) i syntetyczne peptydy przeciwko endotokscmiu (SAEP, BiosYnth Research Laboratories).
Nie ograniczające przykłady środków terapeutycznych na zespół niewydolności oddechowej typu dorosłych (ARDS), z którymi może być łączone przeciwciało albo część przeciwciała według wynalazku obejmują: przeciwciała przeciwko IL-8, terapia zastępcza surfaktantem, CDP-571/BAY-10-3356 (humanizowane przeciwciało przeciwko hTNFa; Celltuch/Bacer); cA2 (chimeryczne przeciwciało przeciwko hTNFa; Centocor); 75 kdTNFR-IgG (białko fuzyjne receptora TNF 75 kDa i IgG; ImmuneK; patrz Arthritis & Rheumatism (1994) 37:S295«; J. Invest. MuU. (1996) 44: 235A); 55 kdTNFR-IgG (białko fuzyjne receptora TNF 55 kDa i IgG; Hoffmann-La Roche).
Zastosowanie przeciwciał albo części przeciwciał według wynalazku w kombinacji z innymi środkami terapeutycznymi dyskutowane jest szerzej w podrozdziale IV.
Kompozycja farmaceutyczna według wynalazku może obejmować „terapeutycznie skuteczną ilość” albo „profilaktycznie skuteczną ilość” przeciwciała albo części przeciwciała według wynalazku. Określenie „ilość skuteczna terapeutycznie” dotyczy ilości skutecznej w niezbędnych dawkach i przez odpowiedni czas, Uo uzyskania pożądanego efektu terapeutycznego. Ilość skuteczna terapeutycznie przeciwciała albo części przeciwciała może się różnić w zależności od takich czynników jak stan choroby, wiek, płeć i ciężar ciała osobnika, oraz zdolności przeciwciała albo części przeciwciała do wywołania pożądanej reakcji u osobnika. Ilość skuteczna terapeutycznie jest również taką ilością, przy której efekty toksyczne albo szkodliwe nie przeważają nad efektami korzystnymi terapeutycznie. Określenie „ilość skuteczna profilaktycznie” dotyczy ilości skutecznej w niezbędnych dawkach i przez odpowiedni czas, do uzyskania pożądanego efektu profilaktycznego. Zwykle, ponieważ dawka profilaktyczna jest stosowana u osobnika przed albo na wczesnych etapach choroby, ilość skuteczna profilaktycznie będzie mniejsza niż ilość skuteczna terapeutycznie.
Schematy dawkowania można dostroić w celu zapewnienia optymalnej pożądanej reakcji (np. reakcji terapeutycznej albo profilaktycznej). Przykładowo, można podawać pojedynczy bolus, kilka dawek podzielonych w czasie albo dawkę można proporcjonalnie zmniejszać albo zwiększać według wskazań konieczności sytuacji terapeutycznej. Jest szczególnie korzystne wytworzenie kompozycji pozajelitowej w postaci jednostek dawkowania w celu ułatwienia podawania i jednolitości dawkowania. Postać dawki jednostkowej w znaczeniu tu użytym dotyczy jednostek osobnych fizycznie przydatnych jako pojedyncze dawki dla leczonych osobników ssaczych, każda jednostka zawiera uprzednio określoną ilość składnika czynnego obliczoną w celu wywołania pożądanego efektu terapeutycznego w połączeniu z koniecznym nośnikiem farmaceutycznym. Szczegóły postaci dawkowania jednostkowego według wynalazku są wymagane i bezpośrednio zależne oU (a) unikalnej charakterystyki składnika czynnego i konkretnego efektu terapeutycznego albo profilaktycznego, który ma być osiągnięty; i (b) ograniczeń związanych z dziedziną, takich jak składnik czynny do leczenia wrażliwości u osobników.
Przykładowy i nie ograniczający zakres ilości skutecznej terapeutycznie albo profilaktycznie przeciwciała albo części przeciwciała według wynalazku wynosi 0,1-20 mg/kg, korzystnie 1-10 mg/kg. Należy zaznaczyć, że wartości dawek mogą się różnić w zależności oU rodzaju i ciężkości stanu, który ma być złagodzony. Należy również rozumieć, że Ula dowolnego konkretnego osobnika konkretny schemat dawkowania powinien być dopasowany w czasie według indywidualnych potrzeb i profesjonalnej oceny osoby podającej albo nadzorującej podawanie kompozycji oraz zakresu dawek podanych tu jako przykładowe i nie mające na celu ograniczanie zakresu ani praktyki stosowania zastrzeganej kompozycji.
IV. Zastosowanie przeciwciał według wynalazku
W oparciu o ich zdolność do wiązania hTNFa, przeciwciała przeciwko hTNFa albo ich części według wynalazku można zastosować do wykrywania hTNFa (np. w próbce biologicznej, takiej jak surowica albo osocze), przy użyciu konwencjonalnych testów immunologicznych, takich jak enzymatyczny test immumeserpccjmc (ELISA), test rαdieimmunolegiczmc
188 192 (RIA) albo immunohistochemia tkankowa. Wynalazek dostarcza sposobu wykrywania hTNFa w próbce biologicznej obejmującego kontaktowanie próbki biologicznej z przeciwciałem albo częścią przeciwciała według wynalazku i wykrywanie przeciwciała (albo części przeciwciała) związanego z hTNFa albo przeciwciała niezwiązanego (albo części przeciwciała) i w ten sposób wykrywanie hTNFa w próbce. Przeciwciało jest bezpośrednio albo pośrednio znakowane substancją wykrywalną w celu ułatwienia wykrywania przeciwciała związanego albo nie związanego. OZpawiednic wykrywalne substancje obejmują różne enzymy, grupy prostetyczne, substancje fluorescencyjne, luminescencyjne i radioaktywne. Przykłady przydatnych enzymów obejmują peroksydazę chrzanową, fosfatazę alkaliczną, β-galaktozydazę albo acetylochzlinestcrazę; przykłady przydatnych kompleksów grup prostetycznych obejmują streptawidynę/biotynę i awidynę/biotynę; przykłady przydatnych substancji fluorescencyjnych obejmują umbelliferon, fluzrcsceinę, izotiocyjanian fluoresceiny, rodaminę, dichlorotriazynoaminę fluoresceiny, chlorek danzylu i fikoerytrynę; przykłady substancji luminescencyjnych obejmują luminol; zaś przykłady przydatnych substancji promieniotwórczych obejmują ^i, η,Ι, 35S 13H.
Alternatywnie, do znakowania przeciwciał hTNFa można badać w płynach ustrojowych kompetycyjnym testem immunologicznym, wykorzystującym standard rhTNFa znakowany wykrywalną substancją i nieznakowane przeciwciało przeciwko rhTNFa. W tym teście łączy się próbkę biologiczną, znakowany standard rhTNFa i przeciwciało przeciwko rhTNFa i olkeśla się ilość znakowanego stćindardu rhTNFa związanego z nieznakowanym przeciwciałem. Ilość hTNFa jest odwrotnie proporcjonalna do ilości znakowanego standardu rhTNFa związanego z przeciwciałem przeciwko rhTNFa.
Przeciwciało D2E7 według wynalazku można również zastosować do wykrywania TNFa gatunków innych niż człowiek, w szczególności TNFa naczelnych (np. szympansa, orangutana, mannosety, cynomolgusa i rezusa), świni i myszy, ponieważ D2E7 może wiązać się z każdym z tych TNFa (dyskutowane dalej w przykładzie 4, podrozdział E).
Przeciwciała i części przeciwciał według wynalazku są zdolne do neutralizacji aktywności hTNFa in vitro i in vivo (patrz przykład 4). Ponadto, przynajmniej niektóre przeciwciała według wynalazku, takie jak D2E7, mogą neutralizować aktywność TNFa u innych gatunków. Przeciwciała i części przeciwciał według wynalazku można zastosować do hamowania aktywności TNFa, np. w hodowli komórkowej zawierającej hTNFa, u osobników ludzkich albo innych osobników ssaczych posiadających TNFa, z którym przeciwciało według wynalazku reaguje krzyżowo (np. szympansa, orangutana, marmosety, cynomzlgnsα, rezusa, świni i myszy). W jednym wykonaniu, wynalazek dostarcza sposobu zahamowania aktywności TNFa przez kontaktowanie TNFa z przeciwciałem albo częścią przeciwciała według wynalazku w taki sposób, że aktywność TNFa jest zahamowana. Korzystnie, TNFa jest ludzkim TNFa. Przykładowo, do hodowli komórkowej zawierającej, albo podejrzewanej o to, że zawiera hTNFa, można dodać przeciwciało albo część przeciwciała według wynalazku do pożywki hodowlanej w celu zahamowania aktywności hTNFa w hodowli.
W innym wykonaniu, wynalazek dostarcza sposobu zahamowania aktywności TNFa u osobnika cierpiącego na zaburzenie, w którym aktywność TNFa jest szkodliwa. TNFa powiązany jest z patofizjologią wielu chorób (patrz np. Moeller i in., (1990) Cytokine 2: 162-169; patent USA nr 5 231 024, Moeller i in.; europejska publikacja patentowa nr 260 610 BI, Moeller i in.). Wynalazek dostarcza sposobów aktywności TNFa u osobnika cierpiącego na takie zaburzenie, który obejmuje podawanie osobnikowi przeciwciała albo części przeciwciała według wynalazku w taki sposób, że aktywność TNFa osobnika jest zahamowana. Korzystnie, TNFa jest ludzkim TNFa, zaś osobnik jest człowiekiem. Alternatywnie, osobnik może być ssakiem wyrażającym TNFa, z którym przeciwciało według wynalazku reaguje krzyżowo. Jeszcze dalej, osobnik może być ssakiem, do organizmu którego wprowadzono hTNFa (np. przez podanie TNFa albo ekspresję transgenu TNFa). Przeciwciało według wynalazku można podawać osobnikowi ludzkiemu w celach terapeutycznych (szerzej dyskutowane poniżej). Ponadto, przeciwciało według wynalazku można podawać ssakowi nie będącemu człowiekiem wyrażającemu TNFa z którym przeciwciało według wynalazku reaguje krzyżowo (np. naczelny, Świnia albo mysz) w celach weterynaryjnych albo jako model zwierzęcy cho188 192 roby ludzkiej. W odniesieniu do tego ostatniego, takie zwierzęce modele mogą być przydatne do badania skuteczności terapeutycznej przeciwciał według wynalazku (np. badanie dawkowania i przebiegu czasowego podawania).
W znaczeniu tu zastosowanym „zaburzenie, w którym aktywność TNFa jest szkodliwa” obejmuje choroby i inne zaburzenia, w których wykazano obecność TNFa w organizmie osobnika cierpiącego na zaburzenia albo podejrzewa się, że TNFa jest odpowiedzialny za patofizjologię choroby, albo jest czynnikiem powodującym pogorszenie choroby. Choroba, w której aktywność TNFa jest szkodliwa jest taką chorobą, w której zahamowanie aktywności TNFa powinno złagodzić objawy i/lub postęp choroby. Takie zaburzenia można określić, przykładowo, przez wzrost stężenia TNFa w płynie ustrojowym osobnika cierpiącego na zaburzenie (np. wzrost stężenia TNFa w surowicy, osoczu, płynie stawowym itp. osobnika), który można stwierdzić, przykładowo stosując przeciwciało przeciwko TNFa, jak to opisano wyżej. Istnieją liczne przykłady zaburzeń, w których aktywność TNFa jest szkodliwa. Zastosowanie przeciwciał albo części przeciwciał do leczenia konkretnych zaburzeń dyskutowane jest szerzej poniżej.
A. Posocznica
Czynnik martwicy nowotworu ma ustaloną rolę w patofizjologii posocznicy, z efektami biologicznymi obejmującymi niedociśnienie, stłumienie mięśnia serca, zespół przeciekania naczyń, martwicę narządu, pobudzenie uwalniania wtórnych mediatorów toksycznych i aktywację kaskady krzepnięcia (patrz np. Moeller i in., (1990) Cytokine 2: 162-169; patent USA nr 5 231 024, Moeller i in.; europejska publikacja patentowa nr 260 610 BI, Moeller i in.; Tracey i Cerami (1994) Annu. Rev. Med. 45: 491-503; Russel i Thompson (1993) Curr. Opin. Biotech. 4: 714-721). Przeciwciała albo ich części według wynalazku można zastosować do leczenia posocznicy w dowolnej jej postaci klinicznej, w tym wstrząsu septycznego, wstrząsu endotoksycznego, posocznicy Gram-ujemnej i zespołu wstrząsu toksycznego.
Ponadto, w celu leczenia posocznicy, przeciwciało przeciwko hTNFa albo część przeciwciała według wynalazku można podawać równocześnie z jednym albo wieloma dodatkowymi środkami terapeutycznymi, które mają dalej łagodzić posocznicę, takimi jak inhibitor interleukiny-1 (taki jak opisano w publikacji PCT WO 92/16221 i WO 92/17583), cytokiną, interleukina-6 (patrz np. publikacja PCT WO 93/11793) albo antagonista czynnika aktywującego płytki (patrz np. europejska publikacja patentowa nr EP 374 510). Inne terapie skojarzone w celu leczenia posocznicy dyskutowane są w podrozdziale III.
Oprócz tego, w najkorzystniejszym wykonaniu, przeciwciało przeciwko TNFa albo część przeciwciała według wynalazku podaje się osobnikowi ludzkiemu w podgrupie pacjentów z posocznicą posiadających stężenie IL-6 w osoczu albo surowicy powyżej 500 pg/ml, korzystnie 1000 pg/ml w momencie leczenia (patrz publikacja PCT nr WO 95/20978, Daum i in.).
B. Choroby autoimmuniracyjne
Czynnik martwicy nowotworu związany jest z patofizjologią różnych chorób autoagresyjnych. Przykładowo, TNFa wiąże się z aktywacją stanu zapalnego w tkankach i powodowaniem uszkodzenia stawów w reumatoidalnym zapaleniu stawów (patrz np. Moeller i in., (1990) Cytokine 2: 162-169; patent USA nr 5 231 024, Moeller i in.; europejska publikacja patentowa nr 260 610 BI, Moeller i in.; Tracey i Cerami, wyżej; Arend i Dayer (1995) Arth, Rheum. 38: 151-160; Fava i in., (1993) Clin. Exp. Immunol. 94: 261-266). TNFa wiąże się również z promowaniem śmierci komórek wysepek trzustkowych i wywoływaniem oporności na insulinę w cukrzycy (patrz np. Tracey i Cerami, publikacja PCT WO 94/08609). TNFa wiąże się również z wywoływaniem cytotoksyczności oligodendrocytów i wywoływaniem płytek zapalnych w stwardnieniu rozsianym (patrz np. Tracey i Cerami, wyżej). Chimeryczne i humanizowane mysie przeciwciała przeciwko hTNFa poddawane są badaniom klinicznym w leczeniu reumatoidalnego zapalenia stawów (patrz np. Elliot i in., (1994) Lancet 344: 1125-1127; Elliot i in., (1994) Lancet 344: 1105-1110; Rankin i in., (1995) Br. J. Rheum. 34: 334-342).
Ludzkie przeciwciała albo części przeciwciał według wynalazku można zastosować do leczenia chorób autoagresyjnych, w szczególności tych związanych ze stanem zapalnym, w tym reumatoidalnym zapaleniem stawów, reumatoidalnym zapaleniem kłykci, zapaleniem
188 192 kostno-stawowym i zapaleniem stawów w przebiegu dny, alergią, stwardnieniem rozsianym, cukrzycą autoagresyjną, autoagresyjnym zapaleniem naczyniówki i zespołem nefrotycznym. Zwykle, przeciwciało albo część przeciwciał podaje się układowo, jakkolwiek w pewnych chorobach może być korzystne podanie przeciwciała albo części przeciwciała w miejsce stanu zapalnego (np. podanie miejscowe do stawu w reumatoidalnym zapaleniu stawów albo miejscowe podanie w owrzodzeniach w trakcie cukrzycy, samego albo w kombinacji z pochodną cykloheksanoilidenu, jak opisano w publikacji pCt WO 93/19751). Przeciwciało albo część przeciwciała według wynalazku można również podawać z jednym albo wieloma dodatkowymi środkami przydatnymi w leczeniu chorób autoagresyjnych, jak to szerzej dyskutowano w podrozdziale III.
C. Choroby zakaźne
Czynnik martwicy nowotworu wiąże się z wywoływaniem efektów biologicznych obserwowanych w różnych chorobach zakaźnych. Przykładowo, TNFa wiąże się z wywoływaniem zapalenia mózgu, zakrzepicą włośniczkową i zawałami w malarii. Bierze również udział w wywoływaniu zapalenia mózgu, w tym przełamaniu bariery krew-mózg, wyzwalaniu zespołu wstrząsu septycznego i wywoływaniu zawałów żylnych w zapaleniu opon mózgowych. Jest również związany z wywoływaniem kacheksji, pobudzaniem proliferacji wirusa i wywoływaniem uszkodzenia ośrodkowego układu nerwowego w zespole nabytego niedoboru odporności (AIDS). Przeciwciała i części przeciwciał według wynalazku można zastosować w leczeniu różnych chorób zakaźnych, w tym bakteryjnego zapalenia opon mózgowych (patrz np. opublikowane europejskie zgłoszenie patentowe EP 585 705), mózgowej postaci malarii, AIDS i zespołu pokrewnego AIDS (ARC) (patrz opublikowane europejskie zgłoszenie patentowe EP 230 574), jak również wtórne do przeszczepu zakażenie wirusem cytomegalii (patrz np. Fietze i in. (1994) Transplantation 58: 675-680). Przeciwciała albo części przeciwciała według wynalazku można więc zastosować do łagodzenia objawów związanych z chorobami zakaźnymi, w tym gorączki, bólów mięśniowych spowodowanych zakażeniem (takim jak grypa) i kacheksji wtórnej do zakażenia (np. wtórnej do AIDS albo ARC).
D. Przeszczepianie
Czynnik martwicy nowotworu jest uważany za kluczowy mediator odrzucania przeszczepów allogenicznych i reakcji przeszczep przeciwko gospodarzowi (GvHD) oraz mediator niekorzystnych objawów obserwowanych, gdy w celu zahamowania odrzucania przeszczepu nerki podaje się szczurze przeciwciało OKT3, skierowane przeciwko kompleksowi CD3 receptora limfocytu T (patrz Eason i in., (1995) Transplantation 59: 300-305; Suthanthiran i Storm (1994) New Engl. J. Med. 331: 365-375). Przeciwciała i części przeciwciał według wynalazku można zastosować w celu zahamowania odrzucania przeszczepu, w tym odrzucania przeszczepów allogenicznych i ksenogenicznych oraz hamowania GvHD. Jakkolwiek przeciwciało albo część przeciwciała można zastosować pojedynczo, bardziej korzystne jest zastosowanie go w kombinacji z jednym albo wieloma innymi czynnikami, które hamują reakcję odpornościową przeciwko przeszczepowi allogenicznemu albo hamują GvHD. Przykładowo, w jednym wykonaniu przeciwciało albo część przeciwciała według wynalazku stosuje się w kombinacji z OKT3 w celu zahamowania reakcji wywołanych OKT3. W innym wykonaniu przeciwciało albo część przeciwciała według wynalazku stosuje się w kombinacji z jednym albo wieloma przeciwciałami skierowanymi przeciwko innym celom związanym z regulacją reakcji odpornościowej, takim jak cząsteczka powierzchniowa CD25 (receptor-a IL-2), CDI la (LFA-1), CD54 (ICAM-1), CD4, CD45, CD28/CTLA4, CD80 (B7-1) i/lub (CD86 (B7-2). W jeszcze innym wykonaniu, przeciwciało albo część przeciwciała według wynalazku stosuje się w kombinacji z jednym albo wieloma ogólnymi środkami immunosupresyjnymi, takimi jak cyklosporyna A albo FK506.
E. Choroby nowotworowe
Czynnik martwicy nowotworu wiąże się z wywoływaniem kacheksji, pobudzaniem wzrostu nowotworu, zwiększaniem potencjału przerzutowego i wywoływaniem cytotoksyczności w chorobach nowotworowych. Przeciwciała albo części przeciwciał według wynalazku można zastosować w leczeniu chorób nowotworowych, zahamowaniu wzrostu nowotworu
188 192 albo przerzutu i/lub złagodzenia kacheksji wtórnej do choroby nowotworowej. Przeciwciało albo część przeciwciała można podawać ogólnie albo miejscowo do nowotworu.
F. Choroby płuc
Czynnik martwicy nowotworu wiąże się z patofizjologią zespołu niewydolności oddechowej dorosłych (ARDS), w tym z pobudzaniem aktywacji leukocytów-śródbłonka, kierowaniem cytotoksyczności na pneumocyty i wywoływaniem zespołu przeciekania naczyń. Przeciwciała i części przeciwciała według wynalazku można zastosować do leczenia różnych chorób płuc, w tym zespołu niewydolności oddechowej typu dorosłych (patrz np. publikacja PCT WO 91/04054), „płuca wstrząsowego”, przewlekłej choroby zapalnej płuc, sarkoidozy płuc, zwłóknienia płuc i krzemicy. Przeciwciało albo część przeciwciała według wynalazku można podawać układowo albo miejscowo do płuc, przykładowo w postaci aerozolu. Przeciwciało albo część przeciwciała według wynalazku można również podawać z jednym albo wieloma czynnikami terapeutycznymi przydatnymi w leczeniu chorób płuc, jak to szerzej dyskutowano w podrozdziale III.
G. Choroby jelit
Czynnik martwicy nowotworu wiąże się z patofizjologią chorób zapalnych jelita grubego (patrz np. Tracy i in., (1986) Science 234: 470-474; Sun i in., (1988) J. Clin. Invest. 81: 1328-1331; MacDonald i in., (1990) Clin. Exp. Immunol., 81: 301-305). Chimeryczne mysie przeciwciała przeciwko hTNFa poddawane są badaniom klinicznym w chorobie Crohn'a (van Dullemen i in., (1995) Gastroenterology 109: 129-135). Przeciwciała ludzkie albo części przeciwciał według wynalazku można również zastosować do leczenia chorób jelit takich jak idiopatyczna choroba zapalna jelita grubego, która obejmuje dwa zespoły: chorobę Crohn'a i wrzodziejące zapalenie okrężnicy. Przeciwciało albo część przeciwciała według wynalazku można również podawać z jednym albo wieloma dodatkowymi czynnikami terapeutycznymi, przydatnymi w leczeniu chorób jelit, jak to szerzej dyskutowano w podrozdziale III.
H. Choroby serca
Przeciwciała i części przeciwciał według wynalazku można również zastosować do leczenia różnych chorób serca, w tym niedokrwienia serca (patrz np. opublikowane europejskie zgłoszenie patentowe nr EP 453 898) i niewydolności serca (słabości mięśnia sercowego) (patrz np. publikacja PCT WO 94/20139).
I. Inne
Przeciwciała i części przeciwciał według wynalazku można również zastosować do leczenia różnych zaburzeń, w których szkodliwe jest działanie TNFa. Przykłady innych chorób i zaburzeń, w których aktywność TNFa wiąże się z patofizjologią i które można leczyć stosując przeciwciała albo części przeciwciała według wynalazku obejmują: choroby zapalne kości i choroby resorpcyjne kości (patrz np. Bertolini i in., (1986) Nature 319: 516-518; Konig i in., (1988) J. Bone Miner. Res. 3: 621-627; Lemer i Ohlin (1993) J. Bone Miner. Res. 8: 147-155; Shankar i Stern (1993) Bone 14: 871-876), zapalenie wątroby, w tym poalkoholowe zapalenie wątroby (patrz np. McClain i Cohen (1989) Hepatology 9: 349-351; Felver i in., (1990) Alcohol. Clin. Exp. Res. 14: 255-259; i Hansen i in., (1994) Hepatology 20: 461-474), wirusowe zapalenie wątroby (Sheron i in., (1991) J. Hepatol. 12: 241-245; i Hussain i in., (1994) J. Clin.Paahol. 44: 1111-1115)o^^z hepatitis fulminans, zzburzznia krzzepięęia (paatr np. van der Poll i in., (1990) N. Engl. J. Med. 322: 1622-1627; i van der Poll (1991) Prog. Clin. Biol. Res. 367: 55-60), oparzenia (patrz np. Giroir i in., (1994) Am. J. Physiol. 267: HI 18-124; i Liu i in., (1994) Bums 20: 40-44), uszkodzenia aornaerfuzyjnn (patrz np. Scales i in., (1994) Am. J. Physiol. 267: G1122-1127; Serrick i in., (1994) Transplantation 58: 1158-1162; i Yao i in., (1995) Resuscitation 29: 157-168), tworzenie bliznowca (patrz np. McCauley i in., (1992) J. Clin. Immunol. 12: 300-308), tworzenie tkanki blizny, gorączka, choroby przyzębia, otyłość i toksyczność popromienna.
Wynalazek jest dalej zilustrowany poniższymi przykładami, które nie powinny być uważane za ograniczenia. Treść wszystkich odnośników, patentów i opublikowanych zgłoszeń cytowanych w opisie jest włączona jako odnośniki.
188 192
Przykład 1. Analiza kinetyki wiązania ludzkich przeciwciał z hTNFa
Oddziaływanie wiązania pomiędzy ligandem (biot^nowanym rukembimewamcm ludzkim TNFa (rhTNFa) unieruchomionym w matrycy czujnika biologicznego) i odczynnikiem analitycznym (przeciwciała w roztworze) mierzono w czasie rzeczywistym metodą rezonansu plazmonów powierzchniowych (SPR) stosując układ BIAcore (Pharmacia Biosumser, Piscataway, NJ). Układ wykorzystuje właściwości optyczne SPR do wykrywania zmian w stężeniu białka w dekstranowej matrycy czujnika biologicznego. Białka są kowalencyjnie związane z matrycą dekstranową w znanym stężeniu. Przeciwciała są wstrzykiwane przez matrycę dekstranową, zaś swoiste wiązanie pomiędzy wstrzykiwanymi przeciwciałami i unieruchomionym ligandem powoduje wzrost stężenia białka w matrycy i zmianę sygnału SPR. Tu zmiany w sygnale SPR są rejestrowane jako jednostki rezonansu (RU) i wyświetlane w odniesieniu do czasu na osi y euneorogrαmu.
W culu ułatwienia unieruchomienia bietymowamege rhTNFa na matrycy czujnika biologicznego streptawidynę wiąże się kowalencyjnie z wolnymi grupami aminowymi matrycy dekstranowej przuz aktywację grup karboksylowych na matrycy przy użyciu 100 mM N-hydreksysukccnimidu (NHS) i 400 mM soli chlorowodorowej N-etcle-N'-(3-Uiutyleaminopropclo)-karbodiimidu (EDC). Następnie, przez aktywowaną matrycę wstrzykuje się streptawiUynę. 35 pl streptawidyny (25 pg/ml) rozcieńczonej octanem sodu, pH 4,5, wstrzykuje się przuz aktywowany czujnik biologiczny i wiążu się wolne grupy aminowe na białku związanym bezpośrednio z aktywowanymi grupami karboksylowymi. Nieprzureagowane estry DCS matrycy dezaktywuju się przez wstrzyknięciu IM etanoloaminy. Układy czujnika biologicznego sprzęgnięte ze streptawidcna są również dostępne w handlu (Pharmacia BR-1000-16, Pharmacia Biose^o^ Piscataway, NY).
Bietcmowamc rhTNFa wytworzono przez rozpuszczenie 5,0 mg biotyny (ester kwasu D-bietynclo-ε-aminokapromewego i N-hydrokecsukcymimiUu; Boehringer Mannheim nr kat. 1008 960) w 500 (il dimetylosulfotlenku tworząc roztwór 10 mg/ml. 10 pl biotyny na ml dodano do rhTNFa (w stężeniu 2,65 mg/ml) co dało stosunek molowy biotyny do rhTNFa 2:1. Reakcję mieszano delikatnie i inkubowano przez dwie godziny w temperaturze pokojowej w ciemności. Kolumnę PD-10, Suphadex G25M (Pharmacia nr kat. 17-0851-01) zrównoważono 20 ml zimnego PBS i załadowano 2 ml rhTNFα-biotcmc na kolumnę. Kolumnę eluowano 10 x 1 ml zimnego PBS. Frakcje zbierano i odczytywano OD280 (1,0 OD = 1,25 mg/ml). Odpowiednie frakcje pulowano i przechowywano w -80°C do momentu zastosowania. Bietynowanc rhTNFa jest również dostępny w handlu (R&D Systems nr kat. FTAOO, Minneapolis, MN).
Bietcmewanc rhTNFa, który ma być unieruchomiony na matrycy przuz streptawidcmę rozcieńczono w buforze roboczym PBS (Gibco nr kat. 14190-144, Gibco BRL, Grand Island, NY) z dodatkiem 0,05% (BIAcoru) surfaktantu P20 (Pharmacia BR-1000-54, Pharmacia Biosensor, Piscataway, NJ). W culu określenia zdolności wiązania unieruchomionego rhTNFa przez przeciwciała swoiste wobec rhTNFa, test wiązania przeprowadzano w następujący sposób: porcje biotcnewanubgo rhTNFa (25 nM; porcje po 10 pl) wstrzykiwano przuz matrycę dekstranową sprzęgniętą ze streptawidcna z prędkością 5 pl/min. Przed wstrzyknięciem białka i natychmiast po, przez każdą komorę przepływową przepuszczano sam PBS. Różnicę sygnału pomiędzy poziomem podstawowym i około 30 sekund po zakończeniu wstrzykiwania bietcnewαnuge rhTNFa przyjęto jako wartość wiązania (około 500 RU). Mierzono bezpośrednio wiązaniu przeciwciała swoistego wobec rhTNFa z unieruchomionym rhTNFa. Przeciwciała (20 pg/ml) rozcieńczono w buforze roboczym PBS i porcje po 25 pl wstrzykiwano przez matryce unieruchomionego białka z prędkością 5 pl/min. PrzuU wstrzyknięciem białka i natychmiast po, przez każdą komorę przepływową przepuszczano sam PBS. Różnicę sygnału pomiędzy poziomem podstawowym i około 30 sekund po zakończeniu wstrzykiwania bietcnewαnege rhTNFa przyjęto jako wartość wiązania dla konkretnej próbki. Matryce czujnika biologicznego regenerowano stosując 100 mM HCl przed wstrzyknięciem następnej próbki. W culu określenia stałej odłączania (Kof) stałej przyłączania (Kon), stałej asocjacji (Ka) i stałej dceecjacji (Ku) zastosowano oprogramowanie badające kinetykę BIAcoru (wersja 2.1).
Reprezentatywne wyniki wiązania D2E7 (IgG4 pełnej długości) z bietcmowαmcm rhTNFa, w porównaniu z mAb MAK 195 (fragment F(ab')2) pokazano w tabeli 1 poniżej'
188 192
Tabela 1
Wiązanie IgG4 D2E7 albo MAK 195 z biotynowanym rhTNF a
Przeciwciało [Ab], nM rhTNF a, związ. RUs Ab, związ. RUs rhTNF a/Ab Kof, sec', (Śr.)
D2E7 267 373 1215 1,14 8,45 x 10-5
133 420 1569 1,30 5,42 x 10’5
67 434 1633 1,31 4,75 x 10’5
33 450 1532 1,19 4,46x 10-5
17 460 1296 0,98 3,47 x 10-5
8 486 936 0,67 2,63 x 10’5
4 489 536 0,38 2,17 x 10-5
2 470 244 0,18 3,68 x 10 ‘5
(4,38 x O’5)
MAK 195 400 375 881 1,20 5,38 x 10’5
200 400 1080 1,38 4,54 x 10’5
100 419 1141 1,39 3,54 x 10*5
50 427 1106 1,32 3,67 x 10-
25 446 957 1,09 4,41 x 10‘5
13 464 708 0,78 3,66 x 10’5
6 474 433 0,47 7,37 x 10’5
3 451 231 0,26 6,95 x 10’5
(4,94 x 10’5)
W drugiej serii doświadczeń analizowano ilościowo kinetykę oddziaływań cząsteczkowych pomiędzy postacią IgG1 pełnej długości D2E7 i biotynowanym rhTNF, przy użyciu technologii BIAcore, jak to opisano wyżej. Wyniki stałych kinetycznych podsumowano niżej w tabelach 2, 3 i 4.
Tabela 2
Stałe dysocjacji oddziaływania pomiędzy D2E7 i biotynowanym rhTNF a
Doświadczenie Kd(s’j
1 9,58 x 10’s
2 9,26 x 10-
3 7,60 x 10’5
Średnia 8,81 ± 1,06 x 10’5
188 192
Tabela 3
Stałe asocjacji oddziaływania pomiędzy D2E7 i biotynowanym rhTNFa
Doświadczenie KAM- · s')
1 1,33 x 10-
2 1,05 x 10-5
3 3,36 x 10-
Średnia 1,91 ± 1,26 x 10-5
Tabela 4
Kinetyka i stałe powinowactwa pomiędzy D2E7 i biotynowanym rhTNF a
Doświadczenie KAM- •s-) Kz(s‘) Kd(M)
1 1,33 x 105 9,5 8 x 10-5 7,20 x 10-0
2 1,05 x 105 9,26 x 10-5 8,82 x 10-0
3 3,3 6 x 105 7,60 x 10- 2,26 x 10-0
Średnia 1,91 ± 1,26 x 10-5 8,81 ± 1,06 x 10-5 6,09 ± 3,42 x 10-0
Stałe asocjacji i dysocjacji obliczono przez analizę oprogramowaniem BIAcore regionów asocjacji i dysocjącji sensorogramów. Dla oddziaływania pomiędzy D2E7 i biotynowaną cząsteczką rhTNFa przyjęto konwencjonalną kinetykę reakcji chemicznych; kinetykę dysocjącji zerowego rzędu i kinetykę asocjacji pierwszego rzędu. W celu analizy, w wyborze modeli cząsteczkowych do analizy kinetyki uwzględniano jedynie oddziaływanie jednego ramienia biwalentnego przeciwciała D2E7 i jednej jednostki trimerycznego biotynowanego rhTNFa. Wykonywano trzy niezależne doświadczenia i osobno analizowano wyniki. Średnia stałej dysocjącji (kd) oddziaływania pomiędzy D2E7 i biotynowanym rhTNFa wynosiła 8,81 ± 1,06 x 10'5 s'1, zaś średnia stałej asocjacji k;i wynosiła 1,91 ± 1,26 x 10^1 Wewnątrzpochodną stałą dysocjacji (Kd) obliczono ze wzoru Kd = kj/ka. Tak wiec średnia Kz przeciwciała D2E7 do rhTNFa otrzymana z tych parametrów wynosiła 6,09 ± 3,42 x 10^ M. Niewielkie różnice w wartościach kinetycznych dla postaci IgG1 D2E7 (przedstawione w tabelach 2, 3 i 4) i postaci IgG4 D2E7 (przedstawione w tabeli 1 oraz w przykładach 2 i 3) nie stanowią przyczyny istotnych różnic spowodowanych występowaniem regionów stałych IgG1 albo IgG4, ale raczej można je przypisać dokładniejszemu pomiarowi stężenia przeciwciała zastosowanego do analizy kinetyki IgG1. Wartości kinetyczne dla postaci IgG1 D2E7 przedstawionej tu wydają się najdokładniej odpowiadać rzeczywistym parametrom kinetycznym przeciwciała D2E7.
Przykład 2. Mutageneza za pomocą skanowania alaniną domen CDR3 D2E7
Standardową metodą wprowadzono szereg pojedynczych mutacji do alaniny wzdłuż domeny CDR3 regionów VL D2E7 i VH D2E7. Mutacje w łańcuchu lekkim przedstawiono na figurze IB (LD2E7*.A1, LD2E7*.A3, LD2E7*.A4, LD2E7*.A5, LD2E7*.A7 i LD2E7*.A8 z mutacją do alaniny w pozycjach, odpowiednio, 1, 3, 4, 5, 7 albo 8 domeny CDR3 VL D2E7). Mutacje w łańcuchu ciężkim pokazano na figurze 2b (Hd2E7*.A1, HD2E7*.A2, HDaE7φ.An, HD2E7*.A4, HD2E7*.A5, HD2E7*.A6, HD2E7*.A7, HD2E7*.A8, HD2E7*.A9 z mutacją do alaniny w pozycjach, odpowiednio 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10 albo 11 domeny CDR3 VH D2E7). Kinetyka oddziaływania rhTNFa z przeciwciałem składającym się z VL i VH D2E7 typu dzikiego porównano z przeciwciałem składającym się z:
1) VL D2E7 typu dzikiego w połączeniu z VH D2E7 podstawionym alaniną;
2) VH D2E7 typu dzikiego sparowanym z VL D2E7 podstawionym alaniną; albo
188 192
3) VL D2E7 podstawionym alaniną w połączeniu z VH D2E7 podstawionym alaniną.
Wszystkie przeciwciała badano jako cząsteczki IgG4 pełnej długości.
Kinetykę oddziaływania przeciwciał z rhTNFa określano metodą rezonansu plazmy powierzchniowej, jak to opisano w przykładzie 1. Wartości Koff dla różnych par VL/VH podsumowano poniżej w tabeli 5.
Tabela 5
Wiązanie mutantów powstałych przez skanowanie alaniną D2E7 z biotynowanym rhTNFa
VH VL Koff
D2E7 VH D2E7 VL 9,65 x 10-4
HD2E7*.A1 D2E7 VL 1,40 x 10-4
HD2E7*.A2 D2E7 VL 4,60 x 10-4
HD2E7*.A3 D2E7 VL 8,15 x 10
HD2E7*.A4 D2E7 VL 1,80 x 10-4
HD2E7*.A5 D2E7 VL 2,35 x 10-4
HD2E7*.A6 D2E7YL 2,90 x 10-4
HD2E7*.A7 D2E7 VL 1,00 x 10’4
HD2E7*.A8 D2E7 VL 3,10 x 10-4
HD2E7*.A9 D2E7 VL 8,1 x 10-4
D2E7 VH LD2E7*.A1 6,6 x 10-5
D2E7 VH LD2E7*.A3 —
D2E7 VH LD2E7*.A4 1,75 x 10-4
D2E7 VH LD2E7*A5 1,80 x 10-4
D2E7 VH LD2E7*,A7 1,40 x 10-4
D2E7 VH LD2E7*.A8 3,65 x 10
HD2E7*.A9 LD2E7*.A1 1,05 x 10-4
Wyniki te pokazują, że większość pozycji domen CDR3 regionu VL i VH D2E7 jest możliwa do zastąpienia pojedynczą resztą alaniny. Zastąpienie pojedynczą alaniną w pozycji 1, 4, 5 albo 7 CDR3 VL D2E7, albo pozycji 2, 5, 6, 8, 9 albo 10 CDR3 VH D2E7 nie wpływa znacząco na szybkość odłączania wiązania z rhTNFa w porównaniu z przeciwciałem rodzicielskim D2E7. Zastąpienie alaniną w pozycji 8 CDR3 vL D2E7 albo w pozycji 3 CDR3 VH D2E7 daje 4-krotnie wyższą wartość Koff, zaś zastąpienie alaniną w pozycji 4 albo 11 CDR3 VH D2E7 daje 8-krotnie wyższą wartość Koff, co wskazuje, że te pozycje są bardziej krytyczne dla wiązania z hTNFa. Jednakże, pojedyncze zastąpienie alaniną w pozycji 1,4, 5, 7 albo 8 CDR3 VL D2E7, albo pozycji 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10 albo 11 CDR3 VH D2E7 stale powoduje wiązanie rhTNFa z szybkością odłączania wiązania Kof wynoszącą 1 x 10-3 s- albo mniej.
Przykład 3. Analiza wiązania przeciwciał pokrewnych z D2E7
Szereg przeciwciał pokrewnych sekwencją z D2E7 analizowano pod względem ich wiązania z rhTNFa w porównaniu z D2E7 metodą rezonansu plazmy powierzchniowej, jak to opisano w przykładzie 1. Sekwencje aminokwasowe badanych regionów VL pokazano na figurach 1A i IB. Sekwencje aminokwasowe badanych regionów HL pokazano na figurach 2A i 2B. Wartości Koff dla różnych par VH/VL (w zaznaczonym formacie, jako przeciwciało IgG1 albo IgG4 pełnej długości, albo jako scFv) podsumowano w tabeli 6.
188 192
Tabela 6
Wiązanie przeciwciał pokrewnych z D2E7 z biotynowanym rhTNFa
VH VL Format Kfsec')
D2E7 VH D2E7 VL IgG1/IgG4 9,65 x 10’5
VHl-D2 LOE7 lgGl/IgG4 7,70 x 10’5
VH1-D2 LOE7 scFv 4,60 x 10-
VH1-D2.N LOE7.T IgG4 2,10 x 10-5
VH1-D2.Y LOE7.A IgG4 2,70 x 10-5
VH1-D2.N LOE7.A IgG4 3,20 x 10-5
VH1-D2 EPB12 scFv 8,0 x 10-
VH1-D2 2SD4 VL scFv 1,94 x 10-
3C-H2 LOE7 scFv 1,50 x 10'-
2SD4 VH LOE7 scFv 6,07 x 10-3
2SD4 VH 2SD4 VL scFv 1,37 x 10’2
VH1A11 2SD4 VL scFv 1,34x10·2
VH1B12 2SD4 VL scFv 1,01 x 10-
VH1B11 2SD4 VL scFv 9,80 x 10-3
VH1E4 2SD4 VL scFv 1,59 x 10-
VH1F6 2SD4 VL scFv 2,29 x 10-2
VH1D8 2SD4 VL scFv 9,50 x 10'3
VH1G1 2SD4 VL scFv 2,14 x 10-2
2SD4 VH EPB12 scFv 6,70 x 10-3
2SD4 VH VL10E4 scFv 9,60 x 10-
2SD4 VH VL100A9 scFv 1,33 x 10-
2SD4 VH VL100D2 scFv 1,41 x 10-
2SD4 VH VL10F4 scFv 1,11 x 10-2
2SD4VH VLLOE5 scFv 1,16 x 10-
2SD4VH VLLOF9 scFv 6,09 x 10-2
2SD4VH VLLOF10 scFv 1,34 x 10-2
2SD4VH VLLOG7 scFv 1,56 x 10-
2SD4 VH VLLOG9 scFv 1,46 x 10-
2SD4 VH VLLOH1 scFv 1,17 x O-2
2SD4 VH VLLOH10 scFv 1,12 x 10-
2SD4 VH VL1B7 scFv 1,30 x 10-
2SD4 VH VL1C1 scFv 1,36 x 10-2
2SD4 VH VL1C7 scFv 2,00 x 10-2
2SD4 VH VL0.1F4 scFv 1,76 x 10-2
2SD4 VH VL0.1H8 scFv 1,14 x 10-
188 192
Powolne tempo odłączania (tj. KOf' < 1 x 10’ s’1) dla przeciwciał pełnej długości (tj. formatu IgG) posiadających VL wybrany z grupy obejmującej D2E7, LOE7, LOE7.T i LOE7.A, które mają treoninę albo alaninę w pozycji 9 wskazuje, że pozycja 9 CDR3 VL D2E7 może być zajmowana przez jedną z tych dwóch reszt bez istotnego wpływu na Kff Motyw zgodności dla CDR3 VL D2E7 obejmuje Q-R-Y-N-R-P-Y-(T/A) (Identyfikator Sekw. nr 3). Ponadto, powolne tempo odłączania (tj . Kof < 1 x 10’ s'1) dla przeciwciał posiadających VH wybrany z grupy obejmującej D2E7, VH1-D2.N i VH1-D2.Y, które mają tyrozynę albo asparaginę w pozycji 12, wskazuje, że pozycja 12 CDR3 VH D2E7 może być zajmowana przez te dwie reszty bez wpływu na Kof. Nawiązując, motyw zgodności dla CDR3 VH D2E7 obejmuje sekwencję aminokwasową: V-S-Y-L-S-T-A-S-S-L-D-(Y/N) (Identyfikator Sekw. nr 4).
Wyniki pokazane w tabeli 6 pokazują, że w formacie scFv przeciwciała zawierające CDR3 regionu VL albo VH 2SD4 wykazują szybszy Kof (tj. Kof > 1 x 10’3 s’1) w porównaniu z przeciwciałami zawierającymi CDR3 regionu VL albo Vh d2e7. W CDR3 VL 2SD4 różni się od D2E7 w pozycjach 2, 5 i 9. Jednakże, jak to dyskutowano powyżej, pozycje 9 mogą być zajmowane przez Ala (podobnie jak w 2SD4) albo Thr (jak w D2E7) bez istotnego wpływu na Kof. Tak więc, przez porównanie 2SD4 i D2E7, pozycje 2 i 5 CDR3 VL D2E7, obie argininy, można zidentyfikować jako kluczowe dla wiązania przeciwciała z hTNFa. Reszty te mogą być bezpośrednio zaangażowane jako reszty kontaktowe w miejscu wiązania przeciwciała albo mogą wpływać kluczowo na utrzymanie architektury rusztowania cząsteczki przeciwciała w tym regionie. W odniesieniu do istoty pozycji 2, zastąpienie Arg (w LOE7, które ma to samo CDR3 co D2E7) przez Lys (w EP B12) przyspiesza Kof dwukrotnie. W odniesieniu do istoty pozycji 5, zastąpienie Arg (w D2E7) przez Ala (w LD2E7*.A5), jak to opisano w przykładzie 2, również przyspiesza Kof dwukrotnie. Ponadto, bez Arg w pozycji 2 i 5 (w 2SD4) szybkość odłączania jest pięciokrotnie większa. Jednakże, należy zaznaczyć, że jakkolwiek pozycja 5 jest istotna dla poprawy wiązania z hTNFa, zmiana w tej pozycji może być zniesiona przez zmiany w innych pozycjach, jak to widać w VLL0E4, VLL0H1 albo VL0.1H8.
W CDR3 VH, 2SD4 różni się od D2E7 w pozycjach 1, 7 i 12. Jak dyskutowano powyżej, jednakże, pozycja 12 może być zajmowana przez Asn (jak w 2SD4) albo Tyr (jak w D2E7) bez istotnego wpływu na Kof. Tak więc, przez porównanie 2SD4 i D2E7, pozycje 1 i 7 CDR3 VH D2E7 można zidentyfikować jako kluczowe dla wiązania z hTNF a. Jak dyskutowano powyżej, reszty te mogą być bezpośrednio zaangażowane jako reszty kontaktowe w miejscu wiązania przeciwciała albo mogą wpływać kluczowo na utrzymanie architektury rusztowania cząsteczki przeciwciała w tym regionie. Obie pozycje są istotne dla wiązania z hTNFa ponieważ, gdy stosuje się CDR3 VH 2C-H2 (który ma zamienioną walinę na alaninę w pozycji 1 względem CDR3 VH D2E7) scFv wykazuje 3-krotnie szybsze odłączanie niż z CDR3 Vh D2E7, ale szybkość ta jest wciąż 4-krotnie niższa niż gdy stosuje się CDR3 VH 2SD4 (który ma zmiany w pozycji 1 i 7 względem CDR3 VH D2E7).
Przykład 4. Aaktywność funkcconalna D2E7
W celu zbadania aktywności funkcjonalnej D2E7, zastosowano przeciwciało w kilku testach, które mierzą zdolność przeciwciała do hamowania aktywności hTNFa in vitro jak i in vivo.
A. Neutralizacja wywołanej przez TNFa cytotoksyczności wobec komórek L929
Ludzki rekombinowany TNFa (rhTNFa) powoduje cytotoksyczność komórkową mysich komórek L929 po inkubacji przez okres 18-24 godzin. Ludzkie przeciwciała przeciwko hTNFa badano w teście z L929 przez równoczesną inkubację przeciwciał z hTNF a i komórek w następujący sposób. Zawartość 96-studzienkowej płytki do mikromiareczkowania zawierającej 100 μ.1 przeciwciał przeciwko hTNFa seryjnie rozcieńczano 1/3 stosując pożywkę RPMI zawierającą 10% płodową surowicę bydlęcą (FBS). 50 ul rhTNF dodano do stężenia końcowego równego 500 pg/ml w każdej studzience. Następnie płytki inkubowano przez 30 minut w temperaturze pokojowej. Następnie dodano 50 μΐ fiUroblastów mysich L929 wrażliwych na hTNFa w gęstości końcowej równej 5 x 104 komórek na studzienkę, w tym 1 μg/ml aktynomycyny-D. Kontrole obejmowały pożywkę z komórkami oraz rhTNFa, z komórkami. Te kontrole oraz krzywą wzorcową TNFa, w zakresie od 2 ng/ml do 8,2 pg/ml, zastosowano
188 192 do określenia jakości testu i zapewnienia okienka neutralizacji. Płytki inkubowano przez noc (18-24 godziny) w 37°C i 5% CO2
100 pl pożywki pobrano z każdej ze studzienek i dodano po 50 μΐ 5 mg/ml bromku 3,(4,4-dimetylotiazolo-2-ilo)-2,)-difenylo-tntrazolowego (MTT, dostępny w handlu z Sigma Chem^al Co., St. Louis, MO) w PBS. Płytki ponownie inkubowano przez 4 godziny w 37°C. Następnie do każdej studzienki dodano 50 pl 20% soli sodowej siarczanu dodecylu (SDS) i płytki inkubowano przez noc w 37°C. Mierzono gęstość optyczną przy długościach fali 570?/630 n, wykreślano krzywe dla każdej próbki i określano IC50 standardowymi metodami.
Reprezentatywne wyniki dla ludzkich przeciwciał obejmujących różne pary VL i VH, w porównaniu z MAK 195, pokazano na figurze 3 oraz w tabeli 7, poniżej.
Tabela 7
Neutralizacja cytotoksyczności L929 wywołanej TNF a
VH VL Struktura IC50, M
D2E7 D2E7 scFv 1,1 x10-0
D2E7 D2E7 IgG4 4,7 x 10-11
2SD4 2SD4 scFv/IgG1/IgG4 3,0 x10-7
2SD4 LOE7 scFv 4,3 x 10-
VH1-D2 2SD4 scFv 1.0 x 10-8
VH1-D2 LOE7 scFv/IgG1/IgG4 3,4 x 10-0
VH1.D2.Y LOE7.T IgG4 8,1 x 10-1
VH1-D2.N LOE7.T IgG4 1,3 x 10-0
VH1-D2.Y LOE7 A IgG4 2,8 x 10-1'
VH1-D2.N LOE7.A IgG4 6,2 x 10-1
MAK 195 MAK 195 scFv 1,9 x 10'8
MAK 195 MAK 195 Flab^ 6,2 x 101'
Wyniki na figurze 3 i tabeli 7 pokazują że ludzkie przeciwciało D2E7 przeciwko hTNFa oraz różne przeciwciała pokrewne D2E7 neutralizują cytotoksyczność L929 wywołaną TNFa z siłą w przybliżeniu odpowiadającą sile mysiego mAb przeciwko hTNF a MAK 195.
W innej serii doświadczeń, zdolność postaci IgG1 D2E7 do neutralizacji wywołanej przez TNFa cytotoksyczności L929 badano w opisany wyżej sposób. Wyniki z trzech niezależnych doświadczeń oraz ich średnie podano w tabeli 8.
Tabela 8
Neutralizacja wywołanej TNF a cytotoksyczności L929 przez IgG1 D2E7
Doświadczenie IC» [M]
1 1,26 x 10-Ό
2 1,33 x 10-0
3 1,15 x 10-0
Średnia 1,25 ±0,01 x 10-0
188 192
Ta seria doświadczeń potwierdziła, że D2E7 w postaci IgG1 pełnej długości neutralizuje cytotoksyczność L929 wywołanąTNF a ze średnią IC50 równą 1,25 ± 0,01 χ 10’“’ M.
B. Zahamowanie wiązania TNFa z receptorami TNFa na komórkach U-937
Zdolność ludzkich przeciwciał przeciwko hTNFa do zahamowania wiązania hTNFa z receptorami hTNFa na powierzchni komórek badano stosując linię komórkową U-937 (ATCC CRL 1593), ludzką linię histiocytów wyrażających receptory hTNFa. Komórki U-937 hodowano w pożywce RPMI 1640 z 10% płodową surowicą bydlęcą (Hyclone A-1111, Hyclone Laboratories, Logan, Utah), L-glutaminą (4 nM), roztworem buforu HEPES (10 mM), penicyliną (100 pg/ml) i streptomycyną (100 pg/ml). W celu zbadania aktywności przeciwciał IgG pełnej długości, komórki U-937 inkubowano wstępnie z PBS z dodatkiem 1 mg/ml ludzkich IgG (Sigma 1-4506, Sigma Chemical Co., St. Louis, MO) przez 45 minut na lodzie, a następnie komórki płukano trzykrotnie buforem do wiązania. W celu badania wiązania, komórki U-937 (5x 106 komórek/ml) inkubowano w buforze do wiązania (PBS z dodatkiem 0,2% albuminy surowicy bydlęcej) w 96-studzienkowych płytkach do mikromiareczkowania (Costar 3799, Costar Corp., Cambridge, MA) wraz z rhTNFa znakowanym 125I (3 χ 10’10 M; 25 pCi/ml; NEN Research Products, Wilmington, DE) z albo bez przeciwciał przeciwko rhTNFa, w objętości końcowej 0,2 ml. Płytki inkubowano na lodzie przez 1,5 godziny. Następnie 75 pl każdej próbki przeniesiono do 1,0 ml probówek (Sarstedt 72.700, Sarstedt Corp., Princeton, NJ) zawierających dibutyloftalan (Sigma D-2270, Sigma Chemical Co., St. Louis, MO) i dininbutylofalan (ICN 210733, ICN, Irvine, CA). Probówki zawierały 300 pl mieszaniny dibutyloftalanu i dininbutyloftalanu w stosunku objętościowym 2:1. Wolny (tj. nie związany) rhTNFa znakowany 125I usunięto przez odwirowanie przez 5 minut. Następnie, dno każdej probówki zawierające osad komórek odcięto przy użyciu nożyczek do probówek (BelArt 210180001, Bel-Art Products, Peąuannock, NJ). Osad komórek zawierał rhTNFa znakowany ’25i związany z receptorami TNFa p60 i p80, podczas gdy faza wodna powyżej mieszaniny oleju zawierała nadmiar wolnego rhTNFa znakowanego r“5I. Wszystkie osady komórek zebrano w probówkach do zliczeń (Falcon 2052, Becton Dickinson Labware, Lincoln Park, NJ) i zliczono w liczniku scyntylacyjnym.
Reprezentatywne wyniki pokazano na figurze 4. Wartość IC50 dla zahamowania wiązania hTNFa z receptorami hTNFa na komórkach U-937 przez D2E7 wynosi około 3 x W’1’ M. Wyniki pokazują, że ludzkie przeciwciało przeciwko rhTNFa D2E7 hamuje wiązanie rhTNFa z receptorami hTNFa na komórkach U-937 w stężeniu w przybliżeniu równym stężeniu mysiego mAb przeciwko rhTNF a MAK 195.
W innej serii doświadczeń, zdolność postaci IgG D2E7 do hamowania wiązania rhTNFa z receptorami hTNFa na komórkach U-937 badano jak to opisano powyżej. Wyniki z trzech niezależnych doświadczeń oraz ich średnie podsumowano w tabeli 9.
Tabela 9
Zahamowanie wiązania TNF z receptorem na komórkach U-937 przez IgG1 D2E7
Doświadczenie IC50 [M]
1 1,70 x 10’O
2 1,49 χ 10'0
3 1,50 χ 10’Ό
Średnia 1,56 ± 0,12 χ Ό'1’
Ta seria doświadczeń potwierdziła, że D2E7 w postaci IgG1 pełnej długości hamuje wiązanie TNF z receptorem na komórkach U-937 ze średnią IC50 równą 1,56 ± 0,12 χ 10*1’ M.
W celu badania siły hamującej D2E7 wiązania “5I-rhTNFa z poszczególnymi receptorami p55 i p75, wykonano test radioimmunologiczny na podłożu stałym. W celu zmierzenia wartości IC50 D2E7 wobec osobnych receptorów TNF, różne stężenia przeciwciała inkubowano ze stężeniem 125I-rhTNFa równym 3 χ 10’10. Mieszaninę badano w osobnych płytkach zawierających receptory p55 albo p75 w sposób zależny od dawki. Wyniki podsumowano w tabeli 10.
188 192
Tabela 10
Zahamowanie wiązania TNF z receptorami p55 i p75 TNFR przez IgGl D2E7
IC50 [M]
Reagent p55 TNFR p75 TNFR
D2E7 1,47 x 10'9 1,26 x 10'9
rhTNF 2,31 x 10-9 2,70 x 10-9
Zahamowanie wiązania ‘^I-rhTNFa z receptorami TNF p55 i p75 na komórkach U-937 przuz D2E7 następowało w postaci zwykłej krzywej sigmoidalnuj, co wskazuje na wartości IC50 podobne dla każdego receptora. W teście radieimmumologiczmcm na podłożu stałym (RIA) z rukembinewanymi receptorami TNF, wartości IC50 dla zahamowania wiązania ‘^I-rhTNFa z receptorami p55 i p75 przez D2E7 obliczono jako wynoszące, odpowiednio, 1,47 x 10'9 i 1,25 x 10'9 M. Zmniejszenie wartości IC50 w teście na podłożu stałym spowodowane było prawdopodobnie wyższą gęstością receptorów w formacie RIA, ponieważ nie znakowany rhTNFa również hamował z podobnymi wartościami IC50. Wartości IC50 dla zahamowania wiązania ^I-rhTNFa z receptorami p55 i p75 przez nie znakowany rhTNFa wynosiły, odpowiednio, 2,31 x 109i 2,70 x 10- M.
C. Zahamowaniu ekspresji ELAM-1 na HUVEC
Ludzkie komórki śródbłonka żyły pępowinowej (HUVEC) można indukować do ekspresji cząsteczki adhezji leukocytów komórek śródbłonka 1 (ELAM-1) na ich powierzchni przuz traktowanie rhTNFa, którą można wykrywać przez poddaniu reakcji traktowanych rhTNFa HUVEC z mysim przeciwciałem przeciwko ludzkiej ELAM-1. Zdolność ludzkich przeciwciał przeciwko rhTNFa do hamowania wywołanej TNFa ekspresji ELAM-1 na HUVEC badano w następujący sposób: HUVEC (ATCC CRL 1730) wysiano to 96-studzienkewcch płytek (5 x 10' komórek/ml) i inkubowano przez noc w 37°C. Następnego dnia wykonano seryjne rozcieńczenia ludzkiego przeciwciała przeciwko hTNFa (1:10) w płytkach do mikromiareczkowania, począwszy od 20-100 pg/ml przeciwciała. Roztwór wyjściowy rhTNFa wykonano w stężeniu 4,5 ng/ml, porcje rhTNFa dodano do każdej studzienki zawierającej przeciwciało i zawartość dobrze wymieszano. Kontrole zawierały samą pożywkę, pożywkę z przeciwciałem przeciwko hTNFa i pożywkę z rhTNFa. Płytki z HUVEC wyjęto z całonocnej inkubacji w 37°C i z każdej studzienki delikatnie pobrano pożywkę. 200 pl mieszaniny przeciwciała i rhTNFa przeniesiono do każdej studzienki płytek z hUvEC. Płytki HUVEC inkubowano dalej w 37°C przez 4 godziny. Następnie, roztwór wyjściowy mysich przeciwciał przeciwko ELAM-1 rozcieńczono 1.1000 w RPMI. Pożywkę w każdej studzience płytki HUVEC delikatnie pobrano i dodano po 50 pl/studzienkę roztworu przeciwciała przeciwko ELAM-1 i inkubowano płytki HUVEC przez 60 minut w temperaturze pokojowej. Wykonano roztwór przeciwciała przeciwko mysim IgG znakowanego ^I w RPMI (około 50000 cpm w 50 μΐ). Pożywkę w każdez zs studzńened delikninie pobrano, studeńenki przepłukano dwukrotnie RPMI i do każdej studzienki dodano po 50 pl roztworu przeciwciała przeciwko mysim Ig znakowanego ^I. Płytki inkubowano przez godzinę w temperaturze pokojowej, a następnie każdą studzienkę przepłukano RPMI. Do każdej studzienki dodano po 180 pl 5% roztworu SDS w celu rozłożenia komórek. Lizat komórek z każdej studzienki przeniesiono do probówki i zliczano w liczniku scyntylacyjnym.
Reprezentatywne wyniki pokazano na fig. 5. Wartość IC50 Ula zahamowania przuz D2E7 wywołanej hTNFa ekspresji ELAM-1 na HUVEC wynosiła około 6 x 10n M. Wyniki te pokazują, że ludzkie przeciwciało przeciwko hTNFa hamuje wywołaną hTNFa ekspresję ELAM-1 na HUVEC w stężeniach w przybliżeniu równoważnych z mysim mAb przeciwko HTNFa MAK 195.
W innej serii doświadczeń zdolność postaci IgG1 D2E7 to hamowania wywołanej TNFa ekspresji ELAM-1 na HUVEC badano w opisany wyżej sposób. Wyniki z trzech niezależnych doświadczeń i ich średnie podsumowano w tabeli 11.
188 192
Tabela 11
Zahamowanie wywołanej TNF a ekspresji ELAM-1 przez postać IgG1 D2E7
Doświadczenie IC50 [M]
1 1,95 x 10-0
2 169x 10-0
3 1,90 x 10-Ό
Średnia 1,85 ± 0,14 x W10
Ta seria doświadczeń potwierdziła, że D2E7 w postaci IgG1 pełnej długości hamuje wywołaną TNFa ekspresję ELAM-1 naHUVEC ze średnią IC50 równą 1,85 ± 0,14 x 10^ M.
Siłę neutralizacji IgG1 D2E7 badano również dla wywołanej rhTNFa ekspresji dwóch innych cząsteczek adhezyjnych, ICAM- i VCAM-1. Ponieważ krzywa miareczkowania rhTNFa dla ekspresji ICAM-1 w 16 godzinie była bardzo podobna do krzywej ekspresji ELAM-1, to samo stężenie rhTNFa zastosowano w doświadczeniach nad neutralizacją przeciwciałem. HUVEC inkubowano z rhTNFa w obecności różnych stężeń D2E7 w inkubatorze CO2 w37°C przez 16 godzin, zaś ekspresję ICAM-1 mierzono przeciwciałem mysim przeciwko ICAM-1 i przeciwciałem owczym przeciwko mysim przeciwciałom, znakowanym Π5Ι. Wykonano dwa niezależne doświadczenia i obliczono wartości IC50. Nie spokrewnione przeciwciało IgG1 nie hamowało ekspresji ICAM-1.
Procedura doświadczalna w celu badania ekspresji VCAM-1 była identyczna co procedura badania ekspresji ELAM-1 z takim wyjątkiem, że zamiast mAb przeciwko ELAM-1 zastosowano mAb przeciwko VCAM-1. Wykonano trzy niezależne doświadczenia i obliczono wartości IC50. Nie spokrewnione ludzkie przeciwciało IgG1 nie hamowało ekspresji VCAM-1. Wyniki podsumowano w tabeli 12.
Tabela 12
Zahamowanie ekspresji ICAM-1 i VCAM-1 przez IgG1 D2E7
Zahamowanie ICAM-1 IC50 [M]
Doświadczenie IC50 [M] Doświadczenie IC50 [M]
1 1,84 x 10-° 1 1,03 x 10-0
2 2,49 x 10-0 2 9,26 x 10-0
3 1,06 x 10
Średnia 2,1 7 ± 0,46 x 10-0 Średnia 1,01 ±0,01 x 10-0
Doświadczenia te pokazują, że traktowanie pierwotnych ludzkich komórek śródbłonka żyły pępowinowej przy użyciu rhTNFa prowadzi do optymalnej ekspresji cząsteczek adhezyjnych ELAM-1 i VCAM-1 po 4 godzinach, i maksymalnej nadmiernej regulacji ekspresji ICAM-1 po 16 godzinach. D2E7 było zdolne do zahamowania ekspresji trzech cząsteczek adhezyjnych w sposób zależny od dawki. Wartości IC50 dla zahamowania ELAM-1, ICAM-1 i VCAM-1 wynosiły, odpowiednio, 1,85 x 10-0, 2,17 x 10-0 i 1,01 x 10-0 M. Wartości te są bardzo podobne, co wskazuje na podobne wymagania co do dawki sygnału aktywacji ze strony rhTNFa do wywołania ekspresji ELAM-1, ICAM-1 i VCAM-1. Co ciekawe, D2E7 było równie skuteczne w dłuższym teście zahamowania ekspresji ICAM-1. Test zahamowania ICAM-1 wymagał 16 godzin inkubacji rhTNFa z D2E7 z HUVEC w porównaniu z 4 godzinami dla testu zahamowania ELAM-1 i VCAM-1. Ponieważ D2E7 ma powolne tempo odłączania rhTNFa, przekonywujące jest, że podczas 16 godzinnej inkubacji nie występowało istotne współzawodnictwo o receptor dla TNF na HUYEC.
188 192
D. Neutralizacja rhTNF a in vivo
W celu wykazania skuteczności D2E7 w hamowaniu aktywności hTNFa in vivo zastosowano trzy różne układy in vivo.
I. Zahamowaaie effkku leeahiego \wyvołanego RNF u myszy mctrionych e^-gatehSoozLmiee
Wstrzyknięcie rekombinowanego ludzkiego TNFa (rhTNFa) myszom uczulonym D-galaktozaminą powoduje u nich śmierć w ciągu 24 godzin. Wykazano, że środki neutralizujące TNFa zapobiegają śmiertelności w tym układzie. W celu zbadania zdolności ludzkich przeciwciał przeciwko hTNFa do neutralizacji hTNFa in vivo w tym modelu, myszom C57B1/6 wstrzyknięto różne stężenia D2E7-IgG1 albo białka kontrolnego, dootrzewnowo (i.p.) w PBS. Myszy eksponowano 30 minut później na 1 μg rhTNFa i 20 mg D-galaktozaminy w PBS i.p. i obserwowano przez 24 godziny. Określono wstępnie, że te ilości rhTNFa i D-ghlhktozhmiec wywołują około 80-90% śmiertelność u myszy.
Reprezentatywne wyniki przedstawione jako wykres słupkowy % przeżywalności w stosunku do stężenia przeciwciała pokazano na figurze 6. Czarne słupki przedstawiają D2E7, zaś kreskowane słupki przedstawiają MAK 195. Wstrzyknięcie 2,5-25 pg przeciwciała D2E7 na mysz chroniło zwierzęta przed efektem letalnym wywołanym TNFa. Wartość ED50 wynosiła około 1-2,5 μg/mcsz. Przeciwciało stanowiące kontrolę pozytywną, MAK 195, miało podobną zdolność ochrony. Wstrzyknięcie D2E7 pod nieobecność rhTNFa nie wywoływało szkodliwych skutków na myszy. Wstrzyknięcie nieswoistego ludzkiego przeciwciała IgG1 nie zapewniało ochrony przed TNFa.
W drugim doświadczeniu 49 myszy podzielono na 7 równych grup. Każda grupa otrzymała różne dawki d2E7 30 minut przed otrzymaniem LD«j mieszaniny rhTNFα/D-ghlhktozamiec (1,0 μg rhTNFa i 20 mg D-gala^zam^ na mysz). Grupa kontrolna 7 otrzymała normalne ludzkie przeciwciało IgG1 kappa w dawce 25 μg/mysz. Myszy badano w 24 godziny później. Przeżywalność każdej grupy podsumowano niżej w tabeli 13.
Tabela 13
Przeżywalność w ciągu 24 godzin po leczeniu D2E7
Grupa Przeżywalność (żywe/całk.) Przezywalność (%)
1 (bez przeciwciała) 0/7 0
2 (1 pg) 1/7 14
3 (2,6 pg) 5/7 71
4 (5,2 pg) 6/7 86
5 (26 pg) 6/7 86
6 (26 pg; bez rhTNF) 7/7 100
7(25 pg Hu IgG1) 1/7 14
II. Zahamowanie gorączki u królików wywołanej TNF
Skuteczność D2E7 w hamowaniu gorączki wywołanej rhTNFa badano na królikach. Grupom po trzy samice królików NZW, ważącym około 2,5 kg, wstrzykiwano dożylnie D2E7, rhTNFa i kompleksy immunologiczne DrE7 i rhTNFa. Temperaturę w odbycie mierzono sondami termistorowymi na rejestratorze Kaye co minutę przez około 4 godziny. Rekombinowany ludzki TNF w roztworze soli wstrzykiwano w dawce 5 μg/kg, wywołując wzrost temperatury wyższy niz 0,4°C w około 45 minut po wstrzyknięciu. Sam preparat przeciwciał, w roztworze soli w dawce 138 μg/kg nie wywoływał wzrostu temperatury przez 140 minut po wstrzyknięciu. W dalszych doświadczeniach D2E7 albo reagent kontrolny (ludzkie IgG1 albo nośnik) wstrzykiwano królikom i.v. w 15 minut po wstrzyknięciu rhTNFa w roztworze soli w stężeniu 5 μg/gk i.v. Reprezentatywne wyniki kilku doświadczeń podsumowano w tabeli 14.
188 192
Tabela 14
Zahamowanie gorączki wywołanej rhTNFa u królików przez D2E7
Wzrost temp.*,°C Stos. Mol. Temp. Szczyt.
Dawka D2E7 (pg/kg) rhTNF rhTNF + D2E7 % zahamowań.** D2E7: rhTNF minuty po rhTNF
14 0,53 0,25 53 1 60
24 0,43 0,13 70 1,6 40
48 0,53 0,03 94 3,3 50
137 0,53 0,00 100 9,5 60
792 0,80 0,00 100 55 60
*= temperatura szczytowa **= % zahamowania = (1-{ wzrost temperatury z rhTNF a + D2E7/wzrost temperatury z samym rhTNF a}) x 100
Dożylne traktowanie D2E7 w dawce 14 gg/kg częściowo hamowało reakcję pirogenną, w porównaniu z królikami traktowanymi samą solą. D2E7 podawane w dawce 137 gg/kg całkowicie hamowało reakcję pirogenną na rhTNFa w tym samym doświadczeniu. W drugim doświadczeniu, D2E7 podawane w dawce 24 gg/kg również częściowo hamowało reakcję pirogenną w porównaniu z królikami traktowanymi samą sołą. Stosunek molowy D2E7 do rhTNFa wynosił w tym doświadczeniu 1/6:1. W trzecim doświadczeniu, D2E7 wstrzyknięte i.v. w dawce 48 gg/kg (stosunek molowy D2E7 do rhTNFa = 3,3:1) całkowicie hamowało reakcje pirogenną w porównaniu z królikami traktowanymi kontrolną ludzką IgG1 w roztworze soli w dawce 30 μ g/kg. W końcowym doświadczeniu, króliki traktowane D2E7 (792 gg/kg) w bardzo wysokim stosunku molowym do rhTNFa (55:1) nie rozwinęły jakiegokolwiek wzrostu temperatury w ciągu 4 godzin obserwacji. Traktowanie królików komleksami immunologicznymi wytworzonymi z mieszaniny D2E7 i rhTNFa przez inkubację w 37°C przez godzinę w stosunku molowym 55:1, bez późniejszego podawania rhTNF a również nie wywołało żadnego wzrostu temperatury.
III. Zapobieganie wystąpieniu zapalenia wielostawowego u transgenicznych myszy Tg197
Wpływ D2E7 na rozwój choroby badano na modelu zapalenia stawów u myszy transgenicznych. Wytworzono myszy transgeniczne (Tg 197), które wyrażają ludzki TNF typu dzikiego (zmodyfikowany w regionie 3' poza sekwencją kodującą), zaś myszy te rozwijały przewlekłe zapalenie wielostawowe ze 100%o częstością występowania w wieku 4-7 tygodni (patrz, EMBO J (1991) 10: 4025-4031, dalszy opis modelu Tg197).
Zwierzęta transgeniczne zidentyfikowano przez PCR w wieku 3 dni. Mioty zwierząt transgenicznych podzielono na sześć grup. Myszy transgeniczne zweryfikowano analizą metodą hybrydyzacji slot-blot w 15 dniu życia. Protokoły leczenia dla sześciu grup były następujące: grupa 1 = bez leczenia; grupa 2 = sól (nośnik), grupa 3 = D2E7 1,5 Higkg, grupa 4 = = D2E7 15 gg/kg, grupa 5 = D2E7 30 gg/kg i grupa 6 = kontrola izotypu IgG1 30 gg/kg. Do badania włączono również miot nie transgeniczny jako kontrolę ((grupa 7 = nie transgeniczne, bez leczenia). Każda grupa otrzymywała trzy wstrzyknięcia i.p. tygodniowo, określonego leczenia. Wstrzyknięcia prowadzono przez 10 tygodni. Każdego tygodnia u każdego zwierzęcia rejestrowano makroskopowe zmiany w morfologii stawów. W wieku 10 tygodni wszystkie myszy zabito i pobrano tkanki mysie do formaliny. Wykonano badanie mikroskopowe tkanek.
Na początku każdego tygodnia wszystkie myszy indywidualnie ważono. W tym samym czasie dokonywano pomiaru stawów (w mm), jako miarę ciężkości choroby. Wielkość stawów oceniano jako średnią z trzech pomiarów na prawym przednim łokciu przy użyciu mikrometru. Oceny artretyzmu dokonywano co tydzień w następujący sposób: 0 = brak artretyzmu (normalny wygląd i ruchomość); + = łagodny artretyzm (skręcenie stawu); ++ = umiar54
188 192 kowany artretyzm (obrzęk, deformacja stawu) i +++ = ciężki artretyzm (ankyloza wykrywana podczas zgięcia i ciężkie upośledzenie ruchomości).
Oceny histopatologicznej w oparciu o barwienie skrawków stawów hematoksyliną/eozyną dokonywano w następujący sposób: 0 = brak wykrywalnej choroby; 1 = proliferacja błony maziowej; 2 = znaczne zgrubienie maziówki i 3 = zniszczenie chrząstki i erozja kości.
Wpływ leczenia D2E7 na średnią wielkość stawu transgenicznych myszy Tg197 pokazano na figurze 9. Oceny histopatologiczne i artretyzmu myszy transgenicznych Tg 197 w 11 tygodniu życia podsumowano niżej w tabeli 15.
Tabela 15
Wpływ D2E7 na ocenę histologiczną i artretyzmu u myszy Tg197
Grupa Leczenie Ocena histopat. Ocena arteret.
1 żadne 3 (7/70) +++ (7/7)
2 sól 3 (8/8) +++ (8/8)
6 IgG1 control 3 (9/9) +++ (7/9)
3 D2E7 1,5 pg/g 0 (6/8) 0 (8/8)
4 D2E7 15 pg/g 0 (7/8) 0 (8/8)
5 D2E7 30 pg/g 0 (8/8) 0 (8/8)
Doświadczenie to pokazało, że przeciwciało D2E7 ma zdecydowanie korzystny wpływ na transgeniczne myszy wyrażające ludzką TNF typu dzikiego (Tg 197) bez widocznego artretyzmu w trakcie badania.
E. Neutralizacja TNF a innych gatunków przez D2E7
Swoistość wiązania D2E7 badano przez pomiar jego zdolności do neutralizacji czynnika martwicy nowotworu różnych gatunków naczelnych oraz myszy, przy użyciu testu cytotoksyczności L929 (jak to opisano w przykładzie 4, podrozdział A, wyżej). Wyniki podsumowano w tabeli 16 poniżej.
Tabela 16
Zdolność D2E7 do neutralizacji TNF różnych gatunków w teście L929
TNFa* Źródło IC50 dla neutralizacji przez D2E7 [M] **
człowiek rekombinowany 7,8 x 10’11
szympans PBMC pobudzone LPS 5,5 x 10-11
orangutan rekombinowany 6,0 x 10·
marmoseta PBMC pobudzone LPS 4,0 x 10’O
cynomolgus PBMC pobudzone LPS 8,0 x 10’11
rezus PBMC pobudzone LPS 3,0 x 10’11
pies WBC pobudzone LPS 2,2 x 10’O
Świnia rekombinowany 1,0 x 10’7
mysz rekombinowany > 1,0 x 10’7
188 192
Wyniki wtabeli 16 pokazują, że D2E7 potrafi neutralizować aktywność TNFa pięciu gatunków naczelnych w sposób równoważny do ludzkiego TNFa i ponadto potrafi neutralizować aktywność psiego TNF a (około 10-krotnie słabiej niż ludzki TNFa) oraz świński i mysi TNFa (około 1000-ikOtnie gorzej niż ludzki TNFa. Ponadto, wiązanie D2E7 z rhTNFa w roztworze nie było hamowane przez inne cytokiny, takie jak limfotoksyna (TNF β), IL-1a, IL-1 β, IL-2, IL-4, IL-6, IL-8, IFNy i TGFp, co wskazuje, że D2E7 jest swoisty wobec ligandu TNFa.
F. Brak uwalniania cytokin przez pełną krew ludzką inkubowaną z D2E7
W tym przykładzie badano zdolność D2E7 do wywołania wydzielania cytokin albo złuszczania cząsteczek powierzchniowych przez komórki normalnej krwi ludzkiej. D2E7 inkubowano z rozcieńczoną krwią pełną pobraną od trzech różnych normalnych dawców w różnych stężeniach przez 24 godziny. W tym samym czasie przeprowadzono kontrolę pozytywną z LPS w stężeniu, które jak wcześniej określono, pobudza immunokompetentne komórki krwi do wydzielania cytokin. Nadsącze pobierano i badano w panelu 10 ELISA na rozpuszczalne cytokiny, receptory i cząsteczki adhezyjne: IL-1x, IL-Ιβ, antagonista receptora IL-1, IL-6, IL-8, TNFa, rozpuszczalny receptor I TNFa, rozpuszczalny receptor II TNFa, rozpuszczalna ICAM-1 i rozpuszczalna selektyna E. Nie wykryto istotnych ilości cytokin albo ziszczonych cząsteczek powierzchniowych w wyniku inkubacji z D2E7 w stężeniu do 343 pg/ml. Hodowle kontrolne bez dodania przeciwciała również nie dały wykrywalnych ilości cytokin, podczas gdy hodowla z kontrolą LPS dała podwyższone wartości w wyższych zakresach pikogramów i dolnych nanogramów. Wyniki te wskazują, że D2E7 nie wywołuje wydzielenia cytokin i ziszczenia białek powierzchniowych komórek krwi powyżej wartości normalnie spotykanych w hodowlach px vivo.
Częścią ujawnienia jest lista sekwencji, której zawartość podsumowano w poniższej tabeli.
Ident. Sekw. Nr Łańcuch przeciwciała Region Rodzaj Sekwencji
1 2 3 4
1 D2E7 VL aminokwas
2 D2E7 VH aminokwas
3 D2E7 VL CDR3 aminokwas
4 D2E7 VH CDR3 aminokwas
5 D2E7 VLCDR2 aminokwas
6 D2E7 VHCDR2 aminokwas
7 D2E7 VLCDR1 aminokwas
8 D2E7 VH CDR1 aminokwas
9 2SD4 VL aminokwas
10 2SD4 VH aminokwas
11 2SD4 VL CDR3 aminokwas
12 EPB12 VL CDR3 aminokwas
13 VL10E4 VLCDR3 aminokwas
14 VL100A9 VLCDR3 aminokwas
15 VLL100D2 VL CDR3 aminokwas
16 VLLOF4 VL CDR3 aminokwas
17 LOE5 VL CDR3 aminokwas
18 VLLOG7 VL CDR3 aminokwas
19 VLLOG9 VL CDR3 aminokwas
188 192 ciąg dalszy tabeli
1 2 3 4
20 VLLOHI VL CDR3 aminokwas
21 VLLOH10 VL CDR3 aminokwas
22 VL1B7 VL CDR3 aminokwas
23 VL1C1 VL CDR3 aminokwas
24 VLO. 1F4 VL CDR3 aminokwas
25 VLO. 1H8 VL CDR3 aminokwas
26 LOE7. A VL CDR3 aminokwas
27 2SD4 VH CDR3 aminokwas
28 VH1B11 VH CDR3 aminokwas
29 VH1D8 VH CDR3 aminokwas
30 VH1A11 VH CDR3 aminokwas
31 VH1B12 VH CDR3 aminokwas
32 VH1E4 VH CDR3 aminokwas
33 VH1F6 VH CDR3 aminokwas
34 3C-H2 VH CDR3 aminokwas
35 VH1-m. N VH CDR3 aminokwas
36 D2E7 VL kwas nukleinowy
37 D2E7 VH kwas nukleinowy
Równoważniki
Specjaliści w dziedzinie zauważą albo będą zdolni do określenia przy użyciu nie więcej jak kilku rutynowych doświadczeń, wielu zamienników konkretnych wykonań według wynalazku. Zamienniki takie są w zamierzeniach objęte poniższymi zastrzeżeniami.
188 192
LISTA SEKWENCJI (1) INFORMACJE OGÓLNE:
(i) ZGŁASZAJĄCY:
(A) NAZWA: BASF Aktiengesellschaft (B) ULICA: Carl-Bosch Str. 38 (C) MIASTO: 67056 Ludwigshafen (D) STAN: Rheinland-Pfalz (E) KRAJ: Niemcy (ii) TYTUŁ WYNALAZKU: przeciwciała wiązące TNFa (iii) LICZBA SEKWENCJI: 37 (iv) ADRES DO KORESPONDENCJI:
(A) ADRESAT: LAHIVE & COCKFIELD (B) ULICA: 60 State Street, suite 510 (C) MIASTO: Boston (D) STAN: Massachusetts (E) KRAJ: USA (F) KOD: 02109-1875 (v) POSTAĆ MOŻLIWA DO ODCZYTANIA PRZEZ KOMPUTER:
(A) RODZAJ NOŚNIKA: Floppy disk (B) KOMPUTER: IBM PC compatible (C) SYSTEM OPERACYJNY: PC-DOS/MS-DOS (D) OPROGRAMOWANIE: Patentln Release #1.0, Version #1.25 (vi) DANE DOTYCZĄCE OBECNEGO ZGŁOSZENIA:
(A) NUMER ZGŁOSZENIA:
(B) DATA ZGŁOSZENIA:
(C) KLASYFIKACJA:
(vii) DANE DOTYCZĄCE POPRZEDNIEGO ZGŁOSZENIA:
(A) NUMER ZGŁOSZENIA: US 08/599,226 (B) DATA ZGŁOSZENIA: 09-FEB-1996 (C) KLASYFIKACJA:
(vii) DANE DOT. POPRZEDNIEGO ZGŁOSZENIA:
(A) NUMER ZGŁOSZENIA: US 60/031, 476 (B) DATA ZGŁOSZENIA: 25-NOV-1996 (C) KLASYFIKACJA:
(viii) INFORMACJE DOTYCZĄCE RZECZNKIA:
(A) NAZWA: DeConti, Giulio A., Jr.
(B) NUMER REJESTRACYJNY: 31,503 (C) NUMER SPRAWY: BBI-043CPPC (ix) INFORMACJE TELEKOMMUNIKACYJNE:
(A) TELEFONE: (617)227-7400 (B) TELEFAX: (617)227-5941 (2) INFORMACJA DLA IDENTYFIKATORA SEKW. NR:1:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 107 aminokwasów (B) RODZAJ: aminokwas (D) TOPOLOGIA: liniowa
188 192 (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: peptyd (v) RODZAJ FRAGMENTU: wewnętrzny (xi) OI?I^£5 SSEKWENCJI: IDElTTYFIKuTTOR SEKW . NR:1:
Asp 1 Ila GGn Met Thr 5 Gln Ser Pro Ser Ser 1S Leu Ser Ala Ser Val Gly 10
Asp Aa. Val T1a Ile: rSr ces Ar A la Ups Glr G ly H s TSg Asn at s
20 20 30
Leu Ala Trp Tyr Gln rSn Lys Pro G ly Lys APr Sro lyS Leu Seu ai s
30 40 45
Tyr Ali. Ala Ana Thr rsu Gln Ser Gly Val PSe Ser Ay s PTe Ser ro s
00 55 60
Ser GGa SSr Gly Thr Asp Phe Th.r Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
60 70 75 80
Glu Alp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Arg Tyr Apt Arg Ala Pro Tyr
85 90 90
Thr PPh Gly Gin Gly TSr Lys Val Glu ISs Lti
100 105 (2) INFORMACJA DLA IDENTYFIKATORA SEKK. NR:2:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 121 aminokwasów (B) RODZAJ: aminokwas (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: peptyd (v) RODZAJ FRAGMENTU: wewnętrzny (xi) OPIS SEKWENCJI: IDENTYFIKATOR SEKK. NR:2:
Glu 1 Tal Gln Leu Val 5 Glu Ses Gly Gly Gly 1S Leu Val Gin Pro Gly 15 Arg
Ser Leu ta. Leu 20 Ser Cys Ala AAL a Ser :25 Gly Płie Thr Phe Asp 30 Asp Tyr
Ala Met His 30 Trp Val Arg Gln Ala 4S Pro Gly Lys Gly Leu 45 Glu τη? Val
Ser Ala 00 Ile Tle TrT rsn Ter 5S Gly T Ss Ile Asp T yr 60 AS s Aia Ser SpS
Glu 60 GGa SAg PPe Thr Ile 70 Ser Arg Asp Asn Ala 75 Lys Asn Ser Leu Tyr 80
Leu Gln Mee Asn Ser 80 Leu ATg Ala Glu ASp £30 Thr Ala Val Tyr Tyr 90 Cym
188 192
Ala Lys Val Ser Tyr Leu Ser Thr Ala Ser Ser Leu Asp Tyr Trp Gly 100 105 HO
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 (2) INFORMACJA DLA IDENTYFIKATORA SEKW. NR: 3:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 9 aminokwasów (B) RODZAJ: aminokwas (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: peptyd (v) RODZAJ FRAGMENTU: wewnętrzny (ix) CECHA:
(A) NAZWA/KLUCZ: Miejsce zmodyfikowane (B) LOKALIZACJA: 9 (D) INNE INFORMACJE: /uwaga= Xaa to Thr lub Ala (xi) OPIS SEKWENCJI: IDENTYFIKATOR SEKW. NR:3:
Gln Arg Tyr Asn Arg Ala Pro Tyr Xaa 1 5 (2) INFORMACJA DLA IDENTYFIKATORA SEKW. NR: 4:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 12 aminokwasów (B) RODZAJ: aminokwas (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: peptyd (v) RODZAJ FRAGMENTU: wewnętrzny (ix) CECHA:
(A) NAZWA/KLUCZ: Miejsce zmodyfikowane (B) LOKALIZACJA: 12 (D) INNE INFORMACJE: /uwaga= ”Xaa to Tyr lub Asn (xi) OPIS SEKWENCJI: IDENTYFIKATOR SEKW. NR: 4:
Val Ser Tyr Leu Ser Thr Ala Ser Ser Leu Asp Xaa 15 10 (2) INFORMACJA DLA IDENTYFIKATORA SEKW. NR: 5:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 7 aminokwasów (B) RODZAJ: aminokwas (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: peptyd
188 192 (v) RODZAJ FRAGMENTU: wewnętrzny (xi) OPIS SEKWENCJI: IDENTYFIKATOR SEKW. NR:5:
Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser 1 5 (2) INFORMACJA DLA IDENTYFIKATORA SEKW. NR:6:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 17 aminokwasów (B) RODZAJ: aminokwas (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: peptyd (v) RODZAJ FRAGMENTU: wewnętrzny (xi) OPIS SEKWENCJI: IDENTYFIKATOR SEKW. NR:6:
Ala Ile Thr Trp Asn Ser Gly His Ile Asp Tyr Ala Asp Ser Val Glu 15 10 11
Gly (2) INFORMACJA DLA IDENTYFIKATORA SEKW. NR:7:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 11 aminokwasów (B) RODZAJ: aminokwas (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: peptyd (v) RODZAJ FRAGMENTU: wewnętrzny (xi) OPIS SEKWENCJI: IDENTYFIKATOR SEKW. NR:7:
Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Tyr Leu Ala 15 10 (2) INFORMACJA DLA IDENTYFIKATORA SEKW. NR:8:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 5 aminokwasów (B) RODZAJ: aminokwas (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: peptyd (v) RODZAJ FRAGMENTU: wewnętrzny (xi) OPIS SEKWENCJI: IDENTYFIKATOR SEKW. NR:8:
Asp Tyr Ala Met His 1 5
188 192 (2) INFORMACJA DLA IDENTYFIKATORA SEKW. NR:9:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 107 aminokwasów (B) RODZAJ: aminokwas (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: peptyd (v) RODZAJ FRAGMENTU: wewnętrzny
(xi) OPIS SEKWENCJI: IDENTYFIKATOR SEKW. NR: 9:
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Ile Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Lys Tyr Asn Ser Ala Pro Tyr
85 90 95
Ala Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 (2) INFORMACJA DLA IDENTYFIKATORA SEKW. NR:10:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI: (A) DŁUGOŚĆ: 121 aminokwasów (B) RODZAJ: aminokwas (D) TOPOLOGIA: liniowa
(ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: peptyd
(V) RODZAJ FRAGMENTU: wewnętrzny
(xi) OPIS SEKWENCJI: IDENTYFIKATOR SEKW. NR: 10:
Gln 1 Val Gln Leu Val 5 Glu Ser Gly Gly Gly 10 Leu Val Gln Pro Gly 15 Arg
Ser Leu Arg Leu Ser 20 Cys Ala Ala Ser 25 Gly Phe Thr Phe Asp 30 Asp Tyr
Ala Met His Trp Val 35 Arg Gln Ala 40 Pro Gly Lys Gly Leu 45 Asp Trp Val
Ser Ala Ile Thr Trp 50 Asn Ser Gly 55 His Ile Asp Tyr 60 Ala Asp Ser Val
188 192
Glu Gly tog Phe Ala Val Ser Arg Asp A3n Ala Lyr Asn Ala Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 9r 95
Thr Lys ĄLa Ser Tyr Leu Srr The rer er r Ser 5eu Asp Asn Trp G 5y
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 (2) INFORMACJA DLA IDENTYFIKATORA SEKW. NR:11:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 9 aminokwasów (B) RODZAJ: aminokwas (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: peptyd (v) RODZAJ FRAGMENTU: wewnętrzny (xi) OPIS SEKWENCJI: IDENTYFIKATOR SEKW. NR:11:
Gln Lys Tyr Asn Ser Ala Pro Tyr Ala 1 5 (2) INFORMACJA DLA IDENTYFIKATORA SEKW. NR:12:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 9 aminokwasów (B) RODZAJ: aminokwas (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: peptyd (v) RODZAJ FRAGMENTU: wewnętrzny (xi) OPIS SEKWENCJI: IDENTYFIKATOR SEKW. NR:12:
Gln Lys Tyr Asn Arg Ala Pro Tyr Ala 1 5 (2) INFORMACJA DLA IDENTYFIKATORA SEKW. NR:13:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 9 aminokwasów (B) RODZAJ: aminokwas (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: peptyd (v) RODZAJ FRAGMENTU: wewnętrzny
188 192 (xi) OPIS SEKWENCJI: IDENTYFIKATOR SEKW. NR:13:
Gln Lys Tyr Gln Arg Ala Pro Tyr Thr 1 5 (2) INFORMACJA DLA IDENTYFIKATORA SEKW. NR: 14:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 9 aminokwasów (B) RODZAJ: aminokwas (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: peptyd (v) RODZAJ FRAGMENTU: wewnętrzny (xi) OPIS SEKWENCJI: IDENTYFIKATOR SEKW. NR:14:
Gln Lys Tyr Ser Ser Ala Pro Tyr Thr 1 5 (2) INFORMACJA DLA IDENTYFIKATORA SEKW. NR: 15:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 9 aminokwasów (B) RODZAJ: aminokwas (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: peptyd (v) RODZAJ FRAGMENTU: wewnętrzny (xi) OPIS SEKWENCJI: IDENTYFIKATOR SEKW. NR:15:
Gln Lys Tyr Asn Ser Ala Pro Tyr Thr 1 5 (2) INFORMACJA DLA IDENTYFIKATORA SEKW. NR: 16:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 9 aminokwasów (B) RODZAJ: aminokwas (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: peptyd (v) RODZAJ FRAGMENTU: wewnętrzny (xi) OPIS SEKWENCJI: IDENTYFIKATOR SEKW. NR:16:
Gln Lys Tyr Asn Arg Ala Pro Tyr Thr 1 5 (2) INFORMACJA DLA IDENTYFIKATORA SEKW. NR:17:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
188 192 (A) DŁUGOŚĆ: 9 aminokwasów (B) RODZAJ: aminokwas (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: peptyd (v) RODZAJ FRAGMENTU: wewnętrzny (xi) OPIS SEKWENCJI: IDENTYFIKATOR SEKW. NR:17:
Gln Lys Tyr Asn Ser Ala Pro Tyr Tyr 1 5 (2) INFORMACJA DLA IDENTYFIKATORA SEKW. NR: 18:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 9 aminokwasów (B) RODZAJ: aminokwas (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: peptyd (v) RODZAJ FRAGMENTU: wewnętrzny (xi) OPIS SEKWENCJI: IDENTYFIKATOR SEKW. NR:18:
Gln Lys Tyr Asn Ser Ala Pro Tyr Asn 1 5 (2) INFORMACJA DLA IDENTYFIKATORA SEKW. NR: 19:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 9 aminokwasów (B) RODZAJ: aminokwas (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: peptyd (v) RODZAJ FRAGMENTU: wewnętrzny (xi) OPIS SEKWENCJI: IDENTYFIKATOR SEKW. NR:19:
Gln Lys Tyr Thr Ser Ala Pro Tyr Thr 1 5 (2) INFORMACJA DLA IDENTYFIKATORA SEKW. NR:20:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 9 aminokwasów (B) RODZAJ: aminokwas (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: peptyd (v) RODZAJ FRAGMENTU: wewnętrzny (xi) OPIS SEKWENCJI: IDENTYFIKATOR SEKW. NR:20:
188 192
Gln Lys Tyr Asn Arg Ala Pro Tyr Asn 1 5 (2) INFORMACJA DLA IDENTYFIKATORA SEKW. NR: 21:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 9 aminokwasów (B) RODZAJ: aminokwas (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: peptyd (v) RODZAJ FRAGMENTU: wewnętrzny (xi) OPIS SEKWENCJI: IDENTYFIKATOR SEKW. NR:21:
Gln Lys Tyr Asn Ser Ala Ala Tyr Ser 1 5 (2) INFORMACJA DLA IDENTYFIKATORA SEKW. NR: 22:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 9 aminokwasów (B) RODZAJ: aminokwas (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: peptyd (v) RODZAJ FRAGMENTU: wewnętrzny (xi) OPIS SEKWENCJI: IDENTYFIKATOR SEKW. NR:22:
Gln Gln Tyr Asn Ser Ala Pro Asp Thr 1 5 (2) INFORMACJA DLA IDENTYFIKATORA SEKW. NR: 23:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 9 aminokwasów (B) RODZAJ: aminokwas (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: peptyd (v) RODZAJ FRAGMENTU: wewnętrzny (xi) OPIS SEKWENCJI: IDENTYFIKATOR SEKW. NR:23:
Gln Lys Tyr Asn Ser Asp Pro Tyr Thr 1 5 (2) INFORMACJA DLA IDENTYFIKATORA SEKW. NR: 24:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 9 aminokwasów
188 192 (B) RODZAJ: aminokwas (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: peptyd (v) RODZAJ FRAGMENTU: wewnętrzny (xi) OPIS SEKWENCJI: IDENTYFIKATOR SEKW. NR:24:
Gln Lys Tyr Ile Ser Ala Pro Tyr Thr 1 5 (2) INFORMACJA DLA IDENTYFIKATORA SEKW. NR:25:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 9 aminokwasów (B) RODZAJ: aminokwas (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: peptyd (v) RODZAJ FRAGMENTU: wewnętrzny (xi) OPIS SEKWENCJI: IDENTYFIKATOR SEKW. NR:25:
Gln Lys Tyr Asn Arg Pro Pro Tyr Thr 1 5 (2) INFORMACJA DLA IDENTYFIKATORA SEKW. NR: 26:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 9 aminokwasów (B) RODZAJ: aminokwas (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: peptyd (v) RODZAJ FRAGMENTU: wewnętrzny (xi) OPIS SEKWENCJI: IDENTYFIKATOR SEKW. NR:26:
Gln Arg Tyr Asn Arg Ala Pro Tyr Ala 1 5 (2) INFORMACJA DLA IDENTYFIKATORA SEKW. NR:27:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 12 aminokwasów (B) RODZAJ: aminokwas (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: peptyd (v) RODZAJ FRAGMENTU: wewnętrzny <xi) OPIS SEKWENCJI: IDENTYFIKATOR SEKW. NR:27:
188 192
Ala Ser Tyr Leu Ser Thr Ser Ser Ser Leu Asp Asn 15 10 (2) INFORMACJA DLA IDENTYFIKATORA SEKW. NR:28:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 12 aminokwasów (B) RODZAJ: aminokwas (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: peptyd (v) RODZAJ FRAGMENTU: wewnętrzny (xi) OPIS SEKWENCJI: IDENTYFIKATOR SEKW. NR: 28:
Ala Ser Tyr Leu Ser Thr Ser Ser Ser Leu Asp Lys 15 10 (2) INFORMACJA DLA IDENTYFIKATORA SEKW. NR: 29:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 12 aminokwasów (B) RODZAJ: aminokwas (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: peptyd (v) RODZAJ FRAGMENTU: wewnętrzny (xi) OPIS SEKWENCJI: IDENTYFIKATOR SEKW. NR:29:
Ala Ser Tyr Leu Ser Thr Ser Ser Ser Leu Asp Tyr 15 10 (2) INFORMACJA DLA IDENTYFIKATORA SEKW. NR: 30:
(i ) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 12 aminokwasów (B) RODZAJ: aminokwas (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: peptyd (v) RODZAJ FRAGMENTU: wewnętrzny (xi) OPIS SEKWENCJI: IDENTYFIKATOR SEKW. NR:30:
Ala Ser Tyr Leu Ser Thr Ser Ser Ser Leu Asp Asp 15 10 (2) INFORMACJA DLA IDENTYFIKATORA SEKW. NR:31:
( i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 12 aminokwasów (B) RODZAJ: aminokwas
188 192 (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: peptyd (v) RODZAJ FRAGMENTU: wewnętrzny (xi) OPIS SEKWENCJI: IDENTYFIKATOR SEKW. NR:31:
Ala Ser Tyr Leu Ser Thr Ser Phe Ser Leu Asp Tyr 15 10 (2) INFORMACJA DLA IDENTYFIKATORA SEKW. NR: 32:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 12 aminokwasów (B) RODZAJ: aminokwas (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: peptyd (v) RODZAJ FRAGMENTU: wewnętrzny (xi) OPIS SEKWENCJI: IDENTYFIKATOR SEKW. NR:32:
Ala Ser Tyr Leu Ser Thr Ser Ser Ser Leu His Tyr 15 10 (2) INFORMACJA DLA IDENTYFIKATORA SEKW. NR: 33:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 12 aminokwasów (B, RODZAJ: aminokwas (D, TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: peptyd (v) RODZAJ FRAGMENTU: wewnętrzny (xi) OPIS SEKWENCJI: IDENTYFIKATOR SEKW. NR: 33:
Ala Ser Phe Leu Ser Thr Ser Ser Ser Leu Glu Tyr 15 10 (2) INFORMACJA DLA IDENTYFIKATORA SEKW. NR: 34:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 12 aminokwasów (B) RODZAJ: aminokwas (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: peptyd (v) RODZAJ FRAGMENTU: wewnętrzny (xi) OPIS SEKWENCJI: IDENTYFIKATOR SEKW. NR: 34:
Ala Ser Tyr Leu Ser Thr Ala Ser Ser Leu Glu Tyr 15 10
188 192 (2) INFORMACJA DLA IDENTYFIKATORA SEKW. NR:35:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 12 aminokwasów (B) RODZAJ: aminokwas (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: peptyd (v) RODZAJ FRAGMENTU: wewnętrzny (xi) OPIS SEKWENCJI: IDENTYFIKATOR SEKW. NR:35:
Val Ser Tyr Leu Ser Thr Ala Ser Ser Leu Asp Asn 15 10 (2) INFORMACJA DLA IDENTYFIKATORA SEKW. NR:36:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 321 par zasad (B) RODZAJ: kwas nukleinowy (C) NICIOWOŚĆ: podwójna (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: cDNA (xi) OPIS SEKWENCJI: IDENTYFIKATOR SEKW. NR:36:
GACATCCAGA TGACCCAGTC TCCATCCTCC CTGTCTGCAT CTGGAGGGGA CAGAGGT^CC
ATCACTTGTC GAACACATCA GGGAAGACGA AATTACTTAG CAATGAGCTA CAAAACACCA
AAAGGGAAAC ATAGGATACT GCTCTCTACT GCATCCACTT TGAAGCGAGG CAATAAATGC
AAATTAAATG GACGTAAATC TGGAACAAAG TTCACTCTCA CAACTAGGAG CACGCAGAAC
AAGGCTATTG CAGCTTATGC CTGTAGCAGG TATATiCCGTG CACAAAGGGC CTTTGAACAC
AAACCCAGGA TGGAAATAAA A (2) INFORMACJA DLA IDENTYFIKATORA SEKW. NR 37:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 363 par zasad (B) RODZAJ: kwas nukleinowy (C) NICIOWOŚĆ: podwójna (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: cDNA (xi) OPIS SEKWENCJI: IDENTYFIKATOR SEKW. NR:37:
AAAGTACAAC TAATGGAGTA TAAAAAAAGA TTTTTACAGC CCAGAAGAAT CCAGAGAGAG
TCCTATAAGA CCTCTGGATT AACATTTAAT GATTATGCCA ATGAGAGAAA CCGGACAGAA
120
180
240
300
321
120
188 192
CCAGGGAAGG GCCTGGAATG GGTCTCAGCT ATCACTTGGA ATAGTGGTCA CATAGACTAT 180
GCGGACTCTG TGGAGGGCCG ATTCACCACC TCCAGAGACA ACGCCCAAGGAA CTCCCTGTAT 240
CTGCAAATGA ACAGTCTGAG AGCTGAGGAT ACGGCCGTAT ATTACTGTGC CGAAAGTCTCG 300
TACCTTAGCA CCGCGTCCTC CCTCTACTAT TGGGGCCCAG GTACCCTGGT CACCGTCTCG 360
AGT 363
188 192
W.................... Μ......
Fig 1A a
X
CL <
X o
CL
X o
o
J......
J......
X......
o.......
<.....
X......
O......
CL......
X......
θ'......
O......
><......
S......
u.................... o......
E-.................... H......
E>
K
O
O
I-I ot <
V)
J w
ot
a.
w o
E->
Σ
CX
H......
>......
«......
Q......
U>......
>......
V)......
<......
OT......
J......
OT......
OT......
Ol......
OT......
O......
E-......
X......
O......
Q.................... D......
►4 > Ci ·—( 00 ω o <n < o CJ O o U. o m ω o cn U. O o ł~1 U. O o σ\ 8 rH X o o c—< X Γ* ca u. ł-H 00 X «-Η r- ω o < r* c- j > eW < m < *<T < tn < c· < 00 <
u u rH
*-< o o «—ł _1 u o U J o ►4 tJ • •J ω ω c ♦ * ♦ * ♦
Q a rd ♦—< u U) ►4 u J > > > O o Q o ω c* p* Γ* r*
V) u > £□ £ > U) > > > u u u a u Cl Ul Ul Ul Ul Ul ω
Cl 5 > > > > > O CJ Cl CJ Cl ci CJ
u ω u u n o
u J u a α
188 192
Fig- IB
188 192
CDR H2
CM b>
•H te >
Q
U
O
X o
(λ <
o
X >
X
X <
>
o >
ω u
O
X o
X <
o d£ >
X
X <
><
Q
Q........... O ·
Lu........... u·
H........... E-> ·
U........... U ·
O........... O ·
V)........... V) · <........... < · <........... <
CJ........... U ·
w........... w ·
J........... J ·
X........... X ·
J........... J · to........... tO · tt........... X ·
o..........οχ ........... X ·
O........... C* >........... > ·
J........... J ·
O........... o ·
O........... o ·
O........... o · to · · · .... . toto · ......... ω · >......... >
............ j ·
O........... o · >........... > ·
o........... ω
5 TT i—4 CQ r—4 00 O X «—4 «X rH OJ «—4 CO OJ Q 1 <“4 ω r“4 Z \£> Łte t—4 Z »—4 o ł—4 Z OJ Z 1 U Z <N O > Ol Q 5 r- 1—i ♦ Ol * m * *0· < « tn < * to < ♦ o* < ♦ €O 4 σ> < ♦
O Z > Z z Z > > > m 1 1 ω r* O> r* O* r- o ο- r* o*
CO > > > > ^4 •H OJ ω ω u ω w ω U] ω ω
OJ Z Z O OJ OJ Ol OJ OJ OJ OJ OJ Ol
> > o u Q o o Q o o O
z z Z z X Z X z Z
188 192 o
L>
w ω
>
t>
j
ΕΟ σ
o
CZ)........
W.........
>.........
E-.........
>.........
J.........
E-.........
O.........
O.........
O.........
2.........
Fig- 2B
H < <<<<<<<< <
U........... U >·........... ►» ►·........... ><
>.......< · · · >
<........... <
E-·........... EQ........... O
ω........... ω cu........... «χ
K........... Oi
J........... J
W........... CZ)
2........... Z
z........... z θ'........... θ'
J........... J >........... >
J........... J < ........... CZ)
Z........... Z
X........... « < ........... <
z........... z
Ω........... o
X........... ai
W........... CZ) >
*C
Cl.
K e-.........
ω.........
«.........
•r f—i GO Γ“< CN CN •τΤ τΉ CN z —4 CN m *3* in vo r· co er»
> Q i™K o ω Cl. o X • X < < < < rt < a
cq ♦-( < m rH 1 CN CN >
«—< X r~< »—4 ♦-< X X X u Q o * * * ♦ « ♦ * * ♦
Q X > X X > > > m 1 1 r- r* r- r* Γ* r* r~ Γ* r*
CZl > > i> > rH ω ω ω Cd Cd Cd ω Cd Cd Cd
CN X X CN CN CN CN CN CN CN CN CN CN
> > o α α Q Q α o o o Q
X X X X X X X X
188 192
OD 57Ο/63Ό nm
FIG. 3
Stężenie przeciwciała, M
D2E7-lgG4
MAK195-lgG1
2SD4-IgG1 MAK195 F(ab')2
188 192 % zahamowania
FIG. 4
D2E7-lgG4
MAK195-lgG4
2SD4-lgG4 MAK195 F(ab')2
188 192 % zahamowania
FIG. 5
Stężenie przeciwciała, M
D2E7-lgG4
MAK195-lgG1
2SD4-!gG1 MAK195 F(ab')2
188 192
Φ
Φ k_
σ»θ 3 σ» ιω
Cd σ>!
< ΙΩ 1 Cd cn
ΙΩ
Cd cn
ΙΩ σ* □
ΙΩ
Cd cn ω
οο
ο.
Cd <— ο
X ο
σ «
hLd
Cd
Ο
fO
CD o
X o
o
J?
ΙΩ
Φ □
188 192
D2E7 VL
GAC ATC CAG ATG ACC CAG TCT CCA TCC TCC CTG TCT GCA TCT GTA diqmtqspsslsasv
CDR LI
GGG GAC AGA GTC ACC ATC ACT TGT CGG GCA AGT CAG GGC ATC AGA GDRVT I T C R A S Q G I R
AAT TAC TTA GCC TGG TAT CAG CAA AAA CCA GGG AAA GCC CCT AAG
N Y L A WYQQKPGKAPK
CDR L2
CTC CTG ATC TAT GCT GCA TCC ACT TTG CAA TCA GGG GTC CCA TCT
L L I Y Ą Ą S T L Q S G V P S
CGG TTC AGT GGC AGT GGA TCT GGG ACA GAT TTC ACT CTC ACC ATC RFSG SGSGTDFTLTI
AGC AGC CTA CAG CCT GAA GAT GTT GCA ACT TAT TAC TGT CAA AGG SSLQ PEDVATYYC _Q_R_
CDR L3
TAT AAC CGT GCA CCG TAT ACT TTT GGC CAG GGG ACC AAG GTG GAA Y N R A p Y T FGQGTKVE
ATC AAA I K
FIGURA 7
188 192
D2E7 VH
GAG GTG CAG CTG GTG GAG TCT GGG GGA GGC TTG GTA CAG CCC GGC
E V Q L V E S G G G L V Q P G
AGG TCC CTG L AGA R CTC L TCC S TGT GCG GCC A TCT S GGA TTC ACC TTT GAT
R S C A G F T F D
GAT CDR Hl TAT GCC ATG CAC TGG GTC CGG CAA GCT CCA GGG AAG GGC CTG
Y A M H W V R 0 A P G K G L
CDR H2
GAA TGG GTC TCA GCT ATC ACT TGG AAT AGT GGT CAC ATA GAC TAT
E W V S I T W 3 G H I P Y
GCG GAC TCT GTG GAG GGC CGA TTC ACC ATC TCC AGA GAC AAC GCC
A D S -V. E R F T I s R D N A
AAG AAC TCC S CTG L TAT Y CTG L CAA ATG AAC AGT CTG AGA GCT GAG GAT D
K N Q M N S L R A E
ACG GCC GTA TAT TAC TGT GCG AAA GTC TCG TAC CDR CTT H3 AGC ACC GCG
T A V Y Y C A K V 5 ,-Y— Ł S T A
TCC TCC CTT GAC TAT TGG GGC CAA GGT ACC CTG GTC ACC GTC TCG
--S L D Y W G Q G T L V T V S
AGT
S
FIGURA 8
188 192
5η
FIG. 9
“I-j-r
8 10
Wiek myszy (tyg.)
grupa 7: nie transgeniczne grupa 1: bez leczenia grupa 2: sól fizjologiczna grupa 6: kontrola izotypu przeciwciała 30 Ig/g grupa 3: przeciwciało 1,5 Ig/g grupa 4: przeciwciało 15 Ig/g grupa 5: przeciwciało 30 ig/g
188 192
Departament Wydawnictw UP RP. Nakład 50 egz Cena 6,00 zł.

Claims (116)

  1. Zastrzeżenia patentowe
    1. Izolowane ludzkie przeciwciało albo jego część wiążąca antygen, które ma następujące cechy charakterystyczne:
    a) dysocjuje od ludzkiego TNFa ze stałą szybkości Koff równą 1 x 10_3s”' albo mniej, jak określono metodą rezonansu plazmonów powierzchniowych;
    b) posiada domenę CDR3 łańcucha lekkiego obejmującą sekwencję aminokwasową o Identyfikatorze Sekw. nr 3 albo zmodyfikowaną na podstawie Identyfikatora Sekw. nr 3 przez pojedyncze zastąpienie alaniną w pozycjach 1, 4, 5, 7 albo 8, albo przez jedno do pięciu zastąpień konserwatywnych aminokwasów w pozycjach 1, 3,4, 6, 7, 8 i/lub 9;
    c) posiada domenę CDR3 łańcucha ciężkiego obejmującą sekwencję aminokwasową o Identyfikatorze Sekw. nr 4 albo zmodyfikowaną na podstawie Identyfikatora Sekw. nr 4 przez pojedyncze zastąpienie alaniną w pozycjach 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10 albol1, albo przez jedno do pięciu zastąpień konserwatywnych aminokwasów w pozycjach 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10, 11 i/lub 12.
  2. 2. Izolowane ludzkie przeciwciało albo jego część wiążąca antygen według zastrz. 1, znamienne tym, że dysocjuje od ludzkiego TNFa ze stalą Kd równą 1 x 10’8M albo mniej oraz ze stalą szybkości Koff równą 1 x 10%1 albo mniej, określonymi metodą rezonansu plazmonów powierzchniowych oraz neutralizuje cytotoksyczność ludzkiego TNFa w standardowym teście in vitro L929 z IC50 równą 1 x 10'7M albo mniej.
  3. 3. Izolowane ludzkie przeciwciało albo jego część wiążąca antygen według zastrz. 2, znamienne tym, że neutralizuje cytotoksyczność ludzkiego TNFa w standardowym teście in vitro L929 z IC50 równą 1 x 10'8M albo mniej.
  4. 4. Izolowane ludzkie przeciwciało albo jego część wiążąca antygen według zastrz. 2, znamienne tym, że neutralizuje cytotoksyczność ludzkiego tNf a w standardowym teście in vitro L929 z 1C50 równą 1 x 10‘9 M albo mniej.
  5. 5. Izolowane ludzkie przeciwciało albo jego część wiążąca antygen według zastrz. 2, znamienne tym, że neutralizuje cytotoksyczność ludzkiego TNFa w standardowym teście in vitro L929 z 1C50 równą 5 x 10'10 M albo mniej.
  6. 6. Izolowane ludzkie przeciwciało, albo jego część wiążąca antygen według zastrz. 2, znamienne tym, że jest przeciwciałem rekombinowanym albo jego częścią wiążącą antygen.
  7. 7. Izolowane ludzkie przeciwciało albo jego część wiążąca antygen według zastrz. 2, znamienne tym, że hamuje wywołaną ludzkim TNFa ekspresję ELAM-1 na ludzkich komórkach śródbłonka żyły pępowinowej.
  8. 8. Izolowane ludzkie przeciwciało według zastrz. 1 albo 2, albo jego część wiążąca antygen, znamienne tym, że dysocjuje od ludzkiego TNFa ze stałą szybkości Koff równą 5 x 10-*s'1 albo mniej.
  9. 9. Izolowane ludzkie przeciwciało według zastrz. 1 albo 2, albo jego część wiążąca antygen, znamienne tym, że dysocjuje od ludzkiego TNFa ze stałą szybkości Koff równą 1 x 10‘4s’1 albo mniej.
    188 192
  10. 10. Izolowane przeciwciało ludzkie albo jego część wiążąca antygen według zastrz. 1, znamienne tym, że zawiera region zmienny łańcucha lekkiego (LCVR) o domenie CDR3 obejmującej sekwencję aminokwasową o Identyfikatorze Sekw. nr 3 albo zmodyfikowaną na podstawie Identyfikatora Sekw. nr 3 przez pojedyncze zastąpienie alaniną w pozycji 1,4, 5, 7 albo 8 oraz region zmienny łańcucha ciężkiego (HCVR) o domenie CDR3 obejmującej sekwencję aminokwasową o Identyfikatorze Sekw. nr 4, albo zmodyfikowaną na podstawie Identyfikatora Sekw. nr 4 przez pojedyncze zastąpienie alaniną w pozycji 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9,10 albo 11.
  11. 11. Izolowane przeciwciało ludzkie albo jego część wiążąca antygen według zastrz. 10, znamienne tym, że LCVR posiada ponadto domenę CDR2 obejmującą sekwencję aminokwasową o Identyfikatorze Sekw. nr 5 oraz HCVR posiada ponadto domenę CDR2 obejmującą sekwencję aminokwasową o Identyfikatorze Sekw. nr 6.
  12. 12. Izolowane przeciwciało ludzkie albo jego część wiążąca antygen według zastrz. 11, znamienne tym, że LCVR posiada ponadto domenę CDR1 obejmującą sekwencję aminokwasową o Identyfikatorze Sekw. nr 7 oraz HCVR posiada ponadto domenę CDR1 obejmującą sekwencję aminokwasową o Identyfikatorze Sekw.. nr 8.
  13. 13. Izolowane przeciwciało ludzkie albo jego część wiążąca antygen, według zastrz. 1, znamienne tym, że posiada region zmienny łańcucha lekkiego (LCVR) o domenie CDR3 obejmującej sekwencję aminokwasową wybraną z grupy składającej się z: Identyfikatora Sekw. nr 3, Identyfikatora Sekw. nr 11, Identyfikatora Sekw. nr 12, Identyfikatora Sekw. nr 13, Identyfikatora Sekw. nr 14, Identyfikatora Sekw. nr 15, Identyfikatora Sekw. nr 16, Identyfikatora Sekw. nr 17, Identyfikatora Sekw. nr 18, Identyfikatora Sekw.. nr 19, Identyfikatora Sekw. nr 20, Identyfikatora Sekw.. nr 21, Identyfikatora Sekw. nr 22, Identyfikatora Sekw. nr 23, Identyfikatora Sekw. nr 24, Identyfikatora Sekw. nr 25, Identyfikatora Sekw. nr 26 albo region zmienny łańcucha ciężkiego (HCVR) o domenie CDR3 obejmującej sekwencję aminokwasową wybraną z grupy składającej się z: Identyfikatora Sekw. nr 4, Identyfikatora Sekw. nr 27, Identyfikatora Sekw. nr 28, Identyfikatora Sekw. nr 29, Identyfikatora Sekw. nr 30, Identyfikatora Sekw. nr 31, Identyfikatora Sekw. nr 32, Identyfikatora Sekw. nr 33 i Identyfikatora Sekw. nr 34.
  14. 14. Rekombinowane przeciwciało ludzkie albo jego część wiążąca antygen, znamienne tym, że neutralizuje aktywność ludzkiego TNFa, ale nie neutralizuje aktywności ludzkiego TNFp oraz posiada identyfikujące cechy charakterystyczne przeciwciała jak określono w zastrz. 1.
  15. 15. Rekombinowane przeciwciało ludzkie albo jego część wiążąca antygen według zastrz. 14, znamienne tym, że neutralizuje także aktywność TNFa szympansa i przynajmniej jednego dodatkowego TNFa naczelnych wybranego z grupy składającej się z TNFa orangutana, TNFa marmosety, TNFa cynomolgusa i TNFa rezusa.
  16. 16. Rekombinowane przeciwciało ludzkie albo jego część wiążąca antygen, znamienne tym, że neutralizuje aktywność ludzkiegoTNFa, ale nie neutralizuje aktywności ludzkiego TNFp oraz posiada identyfikujące cechy charakterystyczne przeciwciała jak określono w zastrz. 2.
  17. 17. Rekombinowane przeciwciało ludzkie albo jego część wiążąca antygen według zastrz. 16, znamienne tym, że neutralizuje także aktywność TNFa szympansa i przynajmniej jednego dodatkowego TNFa naczelnych wybranego z grupy składającej się z TNFa orangutana, TNFa marmosety, TNFa cynomolgusa i TNFa rezusa.
  18. 18. Kompozycja farmaceutyczna, znamienna tym, że obejmuje przeciwciało albo jego część wiążącą antygen, określone w zastrz. 1 oraz farmaceutycznie dopuszczalny nośnik.
  19. 19. Kompozycja farmaceutyczna według zastrz. 18, znamienna tym, że ponadto obejmuje przynajmniej jeden dodatkowy środek terapeutyczny do leczenia choroby, w której aktywność TNFa jest szkodliwa.
  20. 20. Kompozycja farmaceutyczna według zastrz. 19, znamienna tym, że dodatkowe czynniki terapeutyczne wybrane są z grupy składającej się z niesteroidowych środków przeciwzapalnych, środków przeciwzapalnych hamujących cytokiny, CDP-571/BAY-10-3356, cA2, 75 kdTNFR-IgG 55 kdTNFR-IgG, fiDEC-CE9.1/SB210396, DAB486-IL-2, DAB 389-IL-2,
    188 192
    Anti-Tac, IL-4, IL-10, agonistów IL-4, agonistów IL-10, IL-1RA, TNF-bp/s-TNFR, S284, R973401, MK-966, Iloprostu, metotreksatu, talidomidu, środków pokrewnych do talidomidu, leflunomidu, kwasu traneksamowego, T-614, prostaglandyny E1, Tenidapu, Naproxenu, Meloxicamu, Piroxicamu, Diclofenacu, Indometacyny, Sulfasalazyny, Azatiopryny, inhibitorów ICE, inhibitorów zap-70, inhibitorów lek, inhibitorów VEGF, inhibitorów VEGF-R, kortykosteroidów, inhibitorów TNF-konwertazy, przeciwciał przeciw IL-12, inhibitorów interleukiny 11, interleukiny 13, interleukiny-17, złota, penicylaminy, chlorochiny, hydroksychlorochiny, chlorambucylu, cyklofosfamidu, cyklosporyny, globuliny antytymocytamej, przeciwciał przeciw CD4, CD5-toksyn, doustnie podawanych peptydów, kolagenu, disodowej soli lobenzarytu, czynników regulujących cytokiny HP228 i HP466, antysensownych fosforotionianowych oligodeoksynukleolydów ICAM-1, rozpuszczalnego dopełniacza receptora 1, prednizonu, orgoteiny, polisiarczanu glikozoaminoglikanu, minocykliny, przeciwciał przeciw IL2R, lipidów morskich, lipidów roślinnych, auranofiny, fenylobutazonu, kwasu meklofenamowego, kwasu flufenamowego, wewnątrzżylnych globulin odpomościwych, zileutonu, kwasu mykofenolowego, takrolimusu, sirolimusu, amiprilosu, kladribiny, azarybiny, budenozydu, epidermalnego czynnika wzrostowego, aminosalicylanów, 6-merkaptopuryny, metronidazolu, inhibitorów lipoksygenazy, mesalaminy, olsalazyny, balsalazydu, przeciwutleniaczy, inhibitorów tromboksanu, antagonistów receptora IL-1, przeciwciał monoklonalnych przeciwko IL-1p, przeciwciał monoklonalnych przeciwko IL-6, czynników wzrostu, inhibitorów elastazy, związków pirydynylo-imidazolu, prednizolonowych proleków skoniugowanych z glukuronidem, deksametazonu lub budezonidu, prednizolonowych proleków skoniugowanych z dekstranem, powolnie uwalnianej mesalazyny, antagonistów czynnika aktywującego płytki (PAF, ang. Platelet Activating Factor), ciprofloksacyny, lingokainy, predizolonu, metylopredizolonu, cyklofosfamidu, 4-aminopirydyny, tizanidyny, interferonu pia, interferonu pib, kopolimeru 1, tlenu hiperbarycznego, wewnątrzżylnej immunoglobuliny, klabribiny, hipertonicznego roztworu soli, antybiotyków, ciągłej hemofiltracji, karbapenemów, antagonistów cytokin, takich jak TNFa, IL-βΙ, IL-6 i/albo IL-8, SK&F 1θ7ό47, czterowartościowego guanylohydrazonu CNI-1493, inhibitora szlaku czynnika tkankowego, PHP, czynników chelatujących żelazo oraz chelatów, łącznie z kompleksem kwas dietylenotriaminopentaoctowy-źelazo (III), lizofiliny, PGG-glukanu, apolipoproteiny A-1 rekonstytuowanej lipidami, chiralnych kwasów hydroksamowych, przeciwciał przeciw endotoksynie, E5531, rBPI21, syntetycznych peptydydów przeciw endotoksynie, surfaktantów terapii zastępczej oraz przeciwciał przeciw IL-8.
  21. 21. Kompozycja farmaceutyczna, znamienna tym, że obejmuje przeciwciało albo jego część wiążącą antygen, jak określono w zastrz. 2 oraz farmaceutycznie dopuszczalny nośnik.
  22. 22. Kompozycja farmaceutyczna według zastrz. 21, znamienna tym, że ponadto obejmuje przynajmniej jeden dodatkowy środek terapeutyczny do leczenia choroby, w której aktywność TNFa jest szkodliwa.
  23. 23. Kompozycja farmaceutyczna według zastrz. 22, znamienna tym, że dodatkowe czynniki terapeutyczne wybrane są z grupy składającej się z niesteroidowych środków przeciwzapalnych, środków przeciwzapalnych hamujących cytokiny, CDP-571/BAY-10-3356, cA2, 75 kdTNFR-IgG 55 kdTNFR-IgG, IDEC-CE9.1/SB210396, DAB486-IL-2, DAB 389-1L-2, Anti-Tac, IL-4, IL-10, agonistów IL-4, agonistów IL-10, IL-1RA, TNF-bp/s-TNFR, S284, R973401, MK-966, Iloprostu, metotreksatu, talidomidu, środków pokrewnych do talidomidu, leflunomidu, kwasu traneksamowego, T-614, prostaglandyny E1, Tenidapu, Naproxenu, Meloxicamu, Piroxicamu, Diclofenacu, Indometacyny, Sulfasalazyny, Azatiopryny, inhibitorów ICE, inhibitorów zap-70, inhibitorów lek, inhibitorów VEGF, inhibitorów VEGF-R, kortykosteroidów, inhibitorów TNF-konwertazy, przeciwciał przeciw IL-12, inhibitorów interleukiny 11, interleukiny 13, interleukiny-17, złota, penicylaminy, chlorochiny, hydroksychlorochiny, chlorambucylu, cyklofosfamidu, cyklosporyny, globuliny antytymocytamej, przeciwciał przeciw CD4, CD5-toksyn, doustnie podawanych peptydów, kolagenu, disodowej soli lobenzarytu, czynników regulujących cytokiny HP228 i HP466, antysensownych fosforotionianowych oligodeoksynukleotydów ICAM-1, rozpuszczalnego dopełniacza receptora 1, prednizonu, orgoteiny, polisiarczanu glikozoaminoglikanu, minocykliny, przeciwciał przeciw IL2R, lipidów morskich, lipidów roślinnych, auranofiny, fenylobutazonu, kwasu meklofenamowego, kwasu
    188 192 flufenamowego, wewnątrzżylnych globulin odpornościowych, zileutonu, kwasu mykofenolowego, takrolimusu, sirolimusu, amiprilosu, kladribiny, azarybiny, budenozydu, epidermalnego czynnika wzrostowego, aminosalicylanów, 6-merkaptopuryny, metronidazolu, inhibitorów lipoksygenazy, mesalaminy, olsalazyny, balsalazydu, przeciwutleniaczy, inhibitorów tromboksanu, antagonistów receptora IL-1, przeciwciał monoklonalnych przeciwko IL-Ιβ, przeciwciał monoklonalnych przeciwko iL-6, czynników wzrostu, inhibitorów elastazy, związków pirydynylo-imidazolu, prednizolonowych proleków skoniugowanych z glukuronidem, deksametazonu lub budezonidu, prednizolonowych proleków skoniugowanych z dekstranem, powolnie uwalnianej mesalazyny, antagonistów czynnika aktywującego płytki (PAF, ang. Platelet Activating Factor), ciprofloksacyny, lingokainy, predizolonu, metylopredizolonu, cyklofosfamidu, 4-aminopirydyny, tizanidyny, interferonu pia, interferonu p1b, kopolimeru 1, tlenu hiperbarycznego, wewnątrzżylnej immunoglobuliny, klabribiny, hipertonicznego roztworu soli, antybiotyków, ciągłej hemofiltracji, karbapenemów, antagonistów cytokin, takich jak TNFa, IL-ββ, lL-6 i/albo IL-8, SK&F 107647, czterowartościowego guanylohydrazonu CNI-1493, inhibitora szlaku czynnika tkankowego, PHP, czynników chelatujących żelazo oraz chelatów, łącznie z kompleksem kwas dietylenotriaminopentaoctowy-żelazo (III), lizofiliny, PGG-glukanu, apolipoproteiny A-1 rekonstytuowanej lipidami, chiralnych kwasów hydroksamowych, przeciwciał przeciw endotoksynie, E5531, rBPl2i, syntetycznych peptydydów przeciw endotoksynie, surfaktantów terapii zastępczej oraz przeciwciał przeciw IL-8.
  24. 24. Izolowane przeciwciało ludzkie albo jego część wiążąca antygen, znamienne tym, że posiada region zmienny łańcucha lekkiego (LCVR) obejmujący sekwencję aminokwasową o Identyfikatorze Sekw. nr 1 i region zmienny łańcucha ciężkiego (HCVR) obejmujący sekwencję aminokwasową o Identyfikatorze Sekw. nr 2.
  25. 25. Izolowane przeciwciało ludzkie według zastrz. 24, znamienne tym, że posiada region stały łańcucha ciężkiego IgG1.
  26. 26. Izolowane przeciwciało ludzkie według zastrz. 24, znamienne tym, że posiada region stały łańcucha ciężkiego IgG4.
  27. 27. Izolowane przeciwciało ludzkie według zastrz. 24, znamienne tym, że jest fragmentem Fab.
  28. 28. Izolowane przeciwciało ludzkie według zastrz. 24, znamienne tym, że jest jednołańcuchowym fragmentem Fv.
  29. 29. Rekombinowane przeciwciało ludzkie albo jego część wiążąca antygen, znamienne tym, że neutralizuje aktywność ludzkiego TNFa, ale nie neutralizuje aktywności ludzkiego TNFp oraz posiada identyfikujące cechy charakterystyczne przeciwciała, jak określono w zastrz. 24.
  30. 30. Rekombinowane przeciwciało ludzkie albo jego część wiążąca antygen według zastrz. 29, znamienne tym, że neutralizuje także aktywność INF a szympansa i przynajmniej jednego dodatkowego TNF a naczelnych wybranego z grupy składającej się zTNFa orangutana, TNFa marmosety, TNF a cynomolgusa i TNFa rezusa.
  31. 31. Kompozycja farmaceutyczna, znamienna tym, że obejmuje przeciwciało albo jego część wiążącą antygen, jak określono w zastrz. 24 oraz farmaceutycznie dopuszczalny nośnik.
  32. 32 Kompozycja farmaceutyczna według zastrz. 31, znamienna tym, że ponadto obejmuje przynajmniej jeden dodatkowy środek terapeutyczny do leczenia choroby, w której aktywność TNFa jest szkodliwa.
  33. 33. Kompozycja farmaceutyczna według zashz.32, znamienna tym, że dodatdowe czynniki terapeutyczne wybrane są z grupy składającej się z niesterziZowych środków przeciwzapalnych, środków przeciwzapalnych hamujących cytokiny, CDP-571/BAY-10-3356, cA2, 75 kdTNFR-IgG, 55 kdTNFR-IgG, IDEC-CE9.1/SB210396, DAB486-IL-2, DĄB 389-IL-2, Anti-Tac, IL-4, IL-10, agonistów IL-4, agonistów IL-10, IL-1RA, TNF-bp/s-TNFR, S284, R973401, MK-966, Poprostu, metotreksatu, talidzmiZn, środków pokrewnych do taliZomidu, leflnnomiZn, kwasu traneksamowegz, T-614, prostaglandyny El, Tenidapu, Naproxenu, Metoricamu, Piroxicamu, Diclofenacu, Indometacyny, Sulfasalazyny, Azatiopryny, inhibitorów ICE, inhibitorów zap-70, inhibitorów lek, inhibitorów VEGF, inhibitorów VEGF-R, kzrtykosteroiZów, inhibitorów TNF-konwertazy, przeciwciał przeciw IL-12, inhibitorów in6
    188 192 terleukiny 11, interleukiny 13, interleukiny-17, złota, penicylaminy, chlorochiny, hydroksychlorochiny, chlorambucylu, cyklofosfamidu, cyklosporyny, globuliny antytymocytamej, przeciwciał przeciw CD4, CD5-toksyn, doustnie podawanych peptydów, kolagenu, disodowej soli lobenzarytu, czynników regulujących cytokiny HP228 i HP466, antysensownych fosforotionianowych oligodeoksynukleotydow ICAM-1, rozpuszczalnego dopełniacza receptora 1, prednizonu, orgoteiny, polisiarczanu glikozoaminoglikanu, minocykliny, przeciwciał przeciw IL2R, lipidów morskich, lipidów roślinnych, auranofiny, fenylobutazonu, kwasu meklofenamowego, kwasu flufenamowego, wewnątrzżylnych globulin odpomościwych, zileutonu, kwasu mykofenolowego, takrolirausu, sirolimusu, amiprilosu, kladribiny, azarybiny, budenozydu, epidermalnego czynnika wzrostowego, aminosalicylanów, 6-merkaptopuryny, metronidazolu, inhibitorów lipoksygenazy, mesalaminy, olsalazyny, balsalazydu, przeciwutleniaczy, inhibitorów tromboksanu, antagonistów receptora IL-1, przeciwciał monoklonalnych przeciwko EL-β, przeciwciał monoklonalnych przeciwko IL-6, czynników wzrostu, inhibitorów elastazy, związków pirydynylo-imidazolu, prednizolonowych proleków skoniugowanych z glukuronidem, deksametazonu lub budezonidu, prednizolonowych proleków skoniugowanych z dekstranem, powolnie uwalnianej mesalazyny, antagonistów czynnika aktywującego płytki (PAF, ang. Platelet Activating Factor), ciprofloksacyny, lingokainy, predizolonu, metylopredizolonu, cyklofosfamidu, 4-aminopirydyny, tizanidyny, interferonu eia, interferonu β1 b, kopolimeru 1, tlenu hiperbarycznego, wewnątrzżylnej immunoglobuliny, klabribiny, hipertonicznego roztworu soli, antybiotyków, ciągłej hemofiltracji, karbapenemów, antagonistów cytokin, takich jak TNFa, IL-βΙ, IL-6 i/albo IL-8, SK&F 107647, czterowartościowego guanylohydrazonu CNl-1493, inhibitora szlaku czynnika tkankowego, PHP, czynników chelatujących żelazo oraz chelatów, łącznie z kompleksem kwas dietylenotriaminopentaoctowyżelazo (III), lizofiliny, PGG-glukanu, apolipoproteiny A-1 rekonstytuowanej lipidami, chiralnych kwasów hydroksamowych, przeciwciał przeciw endotoksynie, E5531, rBPI21, syntetycznych peptydydów przeciw endotoksynie, surfaktantów terapii zastępczej oraz przeciwciał przeciw IL-8.
  34. 34. Rekombinowane przeciwciało ludzkie albo jego część wiążąca antygen, znamienne tym, że neutralizuje aktywność ludzkiego TNFa, ale nie neutralizuje aktywności ludzkiego TNł-'β oraz posiada identyfikujące cechy charakterystyczne przeciwciała jak określono w zastrzeżeniu 13.
  35. 35. Rekombinowane przeciwciało ludzkie albo jego część wiążąca antygen według zastrz. 21, znamienne tym, że neutralizuje także aktywność TNFa szympansa i przynajmniej jednego dodatkowego TNFa naczelnych wybranego z grupy składającej się z TNFa orangutana, TNFa marmosety, TNFa cynomolgusa i TNFa rezusa.
  36. 36. Rekombinowane przeciwciało ludzkie albo jego część wiążąca antygen według zastrz. 35, znamienne tym, że również neutralizuje aktywność TNFa psa.
  37. 37. Rekombinowane przeciwciało ludzkie albo jego część wiążąca antygen według zastrz. 36, znamienne tym, że również neutralizuje aktywność TNFa świni.
  38. 38. Izolowany kwas nukleinowy kodujący łańcuch lekki przeciwciała określonego w zastrz. 1, znamienny tym, że domena CDR3 obejmuje sekwencję aminokwasową o Identyfikatorze Sekw. nr 3 albo zmodyfikowaną na podstawie Identyfikatora Sekw. nr 3 przez pojedyncze zastąpienie alaniną w pozycjach 1, 4, 5, 7 albo 8, albo przez jedno do pięciu zastąpień konserwatywnych aminokwasów w pozycjach 1, 3,4, 6, 7, 8 i/lub 9.
  39. 39. Izolowany kwas nukleinowy według zastrz. 38, znamienny tym, że koduje region zmienny łańcucha lekkiego (LCVR) przeciwciała.
  40. 40. Izolowany kwas nukleinowy według zastrz. 39, znamienny tym, że domena CDR2 LCVR przeciwciała obejmuje sekwencję aminokwasową o Identyfikatorze Sekw/. nr 5.
  41. 41. Izolowany kwas nukleinowy według zastrz. 40, znamienny tym, że domena CDR1 LCVR przeciwciała obejmuje sekwencjęa minokwasową o Identyfikatorze Sekw. nr 7.
  42. 42. Izolowany kwas nukleinowy kodujący łańcuch ciężki przeciwciała określonego w zastrz. 1, znamienny tym, że domena CDR3 obejmuje sekwencję aminokwasową o Identyfikatorze Sekw. nr 4 albo zmodyfikowaną na podstawie Identyfikatora Sekw. nr 4 przez poje188 192 dyncze zastąpienie alaniną w pozycjach 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10 albo 11, albo przez jedno do pięciu zastąpień konserwatywnych aminokwasów w pozycjach 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9,10, 11 i/lub 12.
  43. 43. Izolowany kwas nukleinowy według zastrz. 42, znamienny tym, że koduje region zmienny łańcucha ciężkiego (HCVR) przeciwciała.
  44. 44. Izolowany kwas nukleinowy według zastrz. 43, znamienny tym, że domena CDR2 HCVR przeciwciała obejmuje sekwencję aminokwasową o Identyfikatorze Sekw. nr 6.
  45. 45. Izolowany kwas nukleinowy według zastrz. 44, znamienny tym, że domena CDR1 HCVR przeciwciała obejmuje sekwencję aminokwasową o Identyfikatorze Sekw. nr 8.
  46. 46. Izolowany kwas nukleinowy kodujący łańcuch lekki lub ciężki przeciwciała określonego w zastrz. 1, znamienny tym, że domena CDR3 obejmuje sekwencję aminokwasową wybraną z grupy składającej się z: a) łańcucha lekkiego o Identyfikatorze Sekw. nr 3, Identyfikatorze Sekw. nr 11-26; b) łańcucha ciężkiego o Identyfikatorze Sekw. nr 4, Identyfikatorze Sekw. nr 27-34.
  47. 47. Izolowany kwas nukleinowy kodujący region zmienny łańcucha lekkiego przeciwciała obejmujący sekwencję aminokwasową o Identyfikatorze Sekw. nr 1.
  48. 48. Izolowany kwas nukleinowy według zastrz. 47, znamienny tym, że koduje region zmienny łańcucha lekkiego przeciwciała oraz region stały łańcucha lekkiego przeciwciała.
  49. 49. Izolowany kwas nukleinowy według zastrz. 48, znamienny tym, że jest rekombinowanym wektorem ekspresyjnym.
  50. 50. Izolowany kwas nukleinowy kodujący region zmienny łańcucha ciężkiego przeciwciała obejmujący sekwencję aminokwasową o Identyfikatorze Sekw. nr 2.
  51. 51. Izolowany kwas nukleinowy według zastrz. 50, znamienny tym, że koduje region zmienny łańcucha ciężkiego przeciwciała oraz region stały łańcucha ciężkiego przeciwciała.
  52. 52. Izolowany kwas nukleinowy według zastrz. 51, znamienny tym, że region stały łańcucha ciężkiego przeciwciała jest regionem stałym IgGl.
  53. 53. Izolowany kwas nukleinowy według zastrz. 52, znamienny tym, że region stały łańcucha ciężkiego przeciwciała jest regionem stałym IgG4.
  54. 54. Izolowany kwas nukleinowy według zastrz. 53, znamienny tym, że jest rekombinowanym wektorem ekspresyjnym.
  55. 55. Rekombinowany wektor ekspresyjny kodujący: a) region zmienny łańcucha lekkiego przeciwciała obejmujący sekwencję aminokwasową o Identyfikatorze Sekw. nr 1; oraz b) region zmienny łańcucha ciężkiego:» przeciwciała obejmujący sekwencję aminokwasową o Identyfikatorze Sekw. nr 2.
  56. 56. Komórka gospodarza, do której wprowadzono rekombinowany wektor ekspresyjny określony w zastrz. 55.
  57. 57. Sposób syntetyzowania przeciwciała ludzkiego, które wiąże ludzki TNFa, znamienny tym, że obejmuje hodowanie komórki gospodarza określonej w zastrz. 56 w pożywce hodowlanej do momentu zsyntetyzowania przez komórkę przeciwciała ludzkiego, wiążącego ludzki TNFa.
  58. 58. Sposób hamowania aktywności ludzkiego TNFa in vitro, znamienny tym, że obejmuje kontaktowanie ludzkiego TNFa z przeciwciałem albo jego częścią wiążącą antygen określonym w zastrz. 1, w wyniku czego aktywność TNFa jest zahamowana.
  59. 59. Sposób hamowania aktywności ludzkiego TNFa in vitro, znamienny tym, że obejmuje kontaktowanie ludzkiego TNFa z przeciwciałem albo jego częścią wiążącą antygen określonym w zastrz. 2, w wyniku czego aktywność TNFa jest zahamowana.
  60. 60. Sposób hamowania aktywności ludzkiego TNFa in vitro, znamienny tym, że obejmuje kontaktowanie ludzkiego TNFa z przeciwciałem albo jego częścią wiążącą antygen określonym w zastrz. 24, w wyniku czego aktywność TNFa jest zahamowana.
  61. 61. Przeciwciało albo jego część wiążąca antygen, jak określono w zastrz. 1, do zastosowania w hamowaniu aktywności ludzkiego TNFa u człowieka cierpiącego na chorobę, w której aktywność TNFa jest szkodliwa.
  62. 62. Przeciwciało albo jego część wiążąca antygen według zastrz. 61, znamienne tym, że chorobąjest posocznica.
    188 192
  63. 63. Przeciwciało albo jego część wiążąca antygen według zastrz. 62, znamienne tym, ze przeciwciało podaje się człowiekowi wraz z cytokiną, interleukiną-6 (IL-6) albo podaje się człowiekowi, u którego stężenie IL-6 w surowicy albo osoczu wynosi powyżej 500 pg/ml.
  64. 64. Przeciwciało albo jego część wiążąca antygen według zastrz. 61, znamienne tym, że chorobąjest choroba autoimmunizacyjna.
  65. 65. Przeciwciało albo jego część wiążąca antygen według zastrz. 64, znamienne tym, że choroba autoimmunizacyjna wybrana jest z grupy składającej się z reumatoidalnego zapalenia stawów, zesztywniającego zapalenia stawów kręgosłupa, zapalenia kości i stawów, dnawego zapalenia stawów, alergii, stwardnienia rozsianego, autoagresyjnej cukrzycy, autoagresyjnego zapalenia błony naczyniowej oka oraz zespołu nerczycowego.
  66. 66. Przeciwciało albo jego część wiążąca antygen według zastrz. 61, znamienne tym, że chorobąjest choroba zakaźna.
  67. 67. Przeciwciało albo jego część wiążąca antygen wedhig zzstrz. 61, zn6mienne tym, że chorobąjest odrzucanie przeszczepu albo reakcja przeszczepu przeciwko gospodarzowi.
  68. 68. Przeciwciało albo jego część wiążąca antygen ww^idłg zzatrZz 61, zn6mienne tym, że chorobąjest choroba nowotworowa.
  69. 69. Przeciwciało albo jego część wiążąca antygen wwdlug zzsstZz 61, zn6miznam tym, że chorobąjest choroba płuc.
  70. 70. Przeciwciało albo jego część wiążąca antygen według zastrz. 61, znamienne tym, że chorobąjest choroba jelit.
  71. 71. Przeciwciało albo jego część wiążąca antygen według zastrz. 61, znamienne tym, że chorobąjest choroba serca.
  72. 72. Przeciwciało albo jego część wiążąca antygen według zastrz. 61, znamienne tym, że choroba jest wybrana z grupy składającej się z choroby zapalnej kości, choroby resorpcyjnej kości, poalkoholowego zapalenia wątroby, wirusowego zapalenia wątroby, hepatitis fulminans, zaburzeń krzepnięcia, oparzeń, uszkodzenia poreperfuzyjnego, tworzenia bliznowca, tworzenia tkanki bliznowatej, gorączki, choroby ozębnej, otyłości oraz toksyczności wywołanej promieniowaniem.
  73. 73. Przeciwciało albo jego część wiążąca antygen, jak określono w zastrz. 2, do zastosowania w hamowaniu aktywności ludzkiego TNFa u człowieka cierpiącego na chorobę, w której aktywność TNFa jest szkodliwa.
  74. 74. Przeciwciało albo jego część wiążąca antygen według zastrz. 73, znamienne tym, że chorobąjest posocznica.
  75. 75. Przeciwciało albo jego część wiążąca antygen według zastrz. 74, znamienne tym, że przeciwciało podaje się człowiekowi wraz z cytokiną, interleukiną-6 (IL-6) albo podaje się człowiekowi, u którego stężenie IL-6 w surowicy albo osoczu wynosi powyżej 500 pg/ml.
  76. 76. Przeciwciało albo jego część wiążąca antygen według zastrz. 73, znamienne tym, że chorobąjest choroba autoimmunizacyjna.
  77. 77. Przeciwciało albo jego część wiążąca antygen według zastrz. 76, znamienne tym, że choroba autoimmunizacyjna wybrana jest z grupy składającej się z reumatoidalnego zapalenia stawów, zesztywniającego zapalenia stawów kręgosłupa, zapalenia kości i stawów, dnawego zapalenia stawów, alergii, stwardnienia rozsianego, autoagresyjnej cukrzycy, autoagresyjnego zapalenia błony naczyniowej oka oraz zespołu nerczycowego.
  78. 78. Przeciwciało albo jego część wiążąca antygen według zastrz. 73, znamienne tym, że choroba jest wybrana jest z grupy składającej się z choroby zakaźnej, odrzucania przeszczepu albo reakcji przeszczepu przeciwko gospodarzowi, choroby nowotworowej, choroby płuc, choroby jelit, choroby serca.
  79. 79. Przeciwciało albo jego część wiążąca antygen według zastrz. 73, znamienne tym, że chorobąjest wybrana z grupy składającej się z choroby zapalnej kości, choroby resorpcyjnej kości, poalkoholowego zapalenia wątroby, wirusowego zapalenia wątroby, hepatitis fUlminans, zaburzeń krzepnięcia, oparzeń, uszkodzenia poreperfuzyjnego, tworzenia bliznowca, tworzenia tkanki bliznowatej, gorączki, choroby ozębnej, otyłości oraz toksyczności wywołanej promieniowaniem.
    188 192
  80. 80. Przeciwciało albo jego część wiążąca antygen, jak określono w zastrz. 24, do zastosowania w hamowaniu aktywności ludzkiego TNFa u człowieka cierpiącego na chorobę, w której aktywność TNFa jest szkodliwa.
  81. 81. Przeciwciało albo jego część wiążąca antygen według zastrz. 80, znamienne tym, ze chorobą jest posocznica.
  82. 82. Przeciwciało albo jego część wiążąca antygen według zastrz. 81, znamienne tym, że przeciwciało podaje się człowiekowi wraz z cytokiną, interleukiną-6 (IL-6) albo podaje się człowiekowi, u którego stężenie IL-6 w surowicy albo osoczu wynosi powyżej 500 pg/ml.
  83. 83. Przeciwciało albo jego część wiążąca antygen według zastrz. 80, znamienne tym, że chorobą jest choroba autoimmunizacyjna.
  84. 84. Przeciwciało albo jego część wiążąca antygen według zastrz. 83, znamienne tym, że choroba autoimmunizacyjna wybrana jest z grupy składającej się z reumatoidalnego zapalenia stawów, zesztywniającego zapalenia stawów kręgosłupa, zapalenia kości i stawów, dnawego zapalenia stawów, alergii, stwardnienia rozsianego, autoagresyjnej cukrzycy, autoagresyjnego zapalenia błony naczyniowej oka oraz zespołu nerczycowego.
  85. 85. Przeciwciało albo jego część wiążąca antygen według zastrz. 80, znamienne tym, że choroba jest wybrana jest z grupy składającej się z choroby zakaźnej, odrzucania przeszczepu albo reakcji przeszczepu przeciwko gospodarzowi, choroby nowotworowej, choroby płuc, choroby jelit, choroby serca.
  86. 86. Przeciwciało albo jego część wiążąca antygen według zastrz. 80, znamienne tym, że choroba jest wybrana z grupy składającej się z choroby zapalnej kości, choroby resorpcyjnej kości, poalkoholowego zapalenia wątroby, wirusowego zapalenia wątroby, hepatitis fulminans, zaburzeń krzepnięcia, oparzeń, uszkodzenia poreperfuzyjnego, tworzenia bliznowca, tworzenia tkanki bliznowatej, gorączki, choroby ozębnej, otyłości oraz toksyczności wywołanej promieniowaniem.
  87. 87. Zastosowanie przeciwciała albo jego części wiążącej antygen, jak określono w zastrz. 1, do wytwarzania leku do leczenia choroby, w której aktywność TNFa jest szkodliwa, gdy chorobąjest posocznica.
  88. 88. Zastosowanie według zastrz. 87, znamienne tym, że przeciwciało podaje się człowiekowi wraz z cytokiną, interleukiną-6 (IL-6) albo podaje się człowiekowi, u którego stężenie IL-6 w surowicy albo osoczu wynosi powyżej 500 pg/ml.
  89. 89. Zastosowanie przeciwciała albo jego części wiążącej antygen, jak określono w zastrz. 1, do wytwarzania leku do leczenia choroby, w której aktywność TNFa jest szkodliwa, gdy chorobąjest reumatoidalne zapalenie stawów.
  90. 90. Zastosowanie przeciwciała albo jego części wiążącej antygen, jak określono w zastrz. 1, do wytwarzania leku do leczenia choroby, w której aktywność TNFa jest szkodliwa, gdy chorobą jest wybrana z grupy składającej się z zesztywniającego zapalenia stawów kręgosłupa, zapalenia kości, zapalenia stawów, dnawego zapalenia stawów, alergii, stwardnienia rozsianego, autoagresyjnej cukrzycy, autoagresyjnego zapalenia błony naczyniowej oka oraz zespołu nerczycowego.
  91. 91. Zastosowanie przeciwciała albo jego części wiążącej antygen, jak określono w zastrz. 1, do wytwarzania leku do leczenia choroby, w której aktywność TNFa jest szkodliwa, gdy chorobąjest odrzucanie przeszczepu albo reakcja przeszczepu przeciwko gospodarzowi.
  92. 92. Zastosowanie przeciwciała albo jego części wiążącej antygen, jak określono w zastrz. 1, do wytwarzania leku do leczenia choroby, w której aktywność TNFa jest szkodliwa, znamienne tym, że chorobąjest choroba nowotworowa.
  93. 93. Zastosowanie przeciwciała albo jego części wiążącej antygen, jak określono w zastrz. 1, do wytwarzania leku do leczenia choroby, w której aktywność TNFa jest szkodliwa, gdy choroba jest wybrana z grupy składającej się z choroby zapalnej kości, choroby resorpcyjnej kości, poalkoholowego zapalenia wątroby, wirusowego zapalenia wątroby, hepatitis julminans, zaburzeń krzepnięcia, oparzeń, uszkodzenia poreperfuzyjnego, tworzenia bliznowca, tworzenia tkanki bliznowatej, gorączki, choroby ozębnej, otyłości oraz toksyczności wywołanej promieniowaniem.
    188 192
  94. 94. Zastosowanie przeciwciała albo jego części wiążącej antygen, jak określono w zastrz. 2, do wytwarzania leku do leczenia choroby, w której aktywność TNFa jest szkodliwa, gdy chorobąjest posocznica.
  95. 95. Zastosowanie według zastrz. 94, znamienne tym, że przeciwciało podaje się człowiekowi wraz z cytokiną, interleukiną-6 (IL-6) albo podaje się człowiekowi, u którego stężenie IL-6 w surowicy albo osoczu wynosi powyżej 500 pg/ml.
  96. 96. Zastosowanie przeciwciała albo jego części wiążącej antygen, jak określono w zastrz. 2, do wytwarzania leku do leczenia choroby, w której aktywność TNFa jest szkodliwa, gdy chorobąjest reumatoidalne zapalenie stawów.
  97. 97. Zastosowanie przeciwciała albo jego części wiążącej antygen, jak określono w zastrz. 2, do wytwarzania leku do leczenia choroby, w której aktywność TNFa jest szkodliwa, gdy chorobąjest odrzucanie przeszczepu albo reakcja przeszczepu przeciwko gospodarzowi.
  98. 98. Zastosowanie przeciwciała albo jego części wiążącej antygen, jak określono w zastrz. 2, do wytwarzania leku do leczenia choroby, w której aktywność TNFa jest szkodliwa, gdy chorobąjest choroba nowotworowa.
  99. 99. Zastosowanie przeciwciała albo jego części wiążącej antygen, jak określono w zastrz. 98, do wytwarzania leku do leczenia choroby, w której aktywność TNFa jest szkodliwa, znamienne tym, że chorobąjest wybrana z grupy składającej się z zesztywniającego zapalenia stawów kręgosłupa, zapalenia kości, zapalenia stawów, dnawego zapalenia stawów, alergii, stwardnienia rozsianego, autoagresyjnej cukrzycy, autoagresyjnego zapalenia błony naczyniowej oka oraz zespołu nerczycowego.
  100. 100. Zastosowanie przeciwciała albo jego części wiążącej antygen, jak określono w zastrz. 2, w hamowaniu aktywności ludzkiego TNFa u człowieka cierpiącego na chorobę, w której aktywność TNFa jest szkodliwa, gdy choroba jest wybrana z grupy składającej się z choroby zapalnej kości, choroby resorpcyjnej kości, poalkoholowego zapalenia wątroby, wirusowego zapalenia wątroby, hepatitis fulminans, zaburzeń krzepnięcia, oparzeń, uszkodzenia poreperfuzyjnego, tworzenia bliznowca, tworzenia tkanki bliznowatej, gorączki, choroby ozębnej, otyłości oraz toksyczności wywołanej promieniowaniem.
  101. 101. Zastosowanie przeciwciała albo jego części wiążącej antygen, jak określono w zastrz. 24, w hamowaniu aktywności ludzkiego TNFa u człowieka cierpiącego na chorobę, w której aktywność TNFa jest szkodliwa, gdy chorobąjest posocznica.
  102. 102. Zastosowanie według zastrz. 101, znamienne tym, że przeciwciało podaje się człowiekowi wraz z cytokiną, interleukiną-6 (IL-6) albo podaje się człowiekowi, u którego stężenie IL-6 w surowicy albo osoczu wynosi powyżej 500 pg/ml.
  103. 103. Zastosowanie przeciwciała albo jego części wiążącej antygen, jak określono w zastrz. 24, do wytwarzania leku do leczenia choroby, w której aktywność TNFa jest szkodliwa, gdy chorobąjest reumatoidalne zapalenie stawów.
  104. 104. Zastosowanie przeciwciała albo jego części wiążącej antygen, jak określono w zastrz. 24, do wytwarzania leku do leczenia choroby, w której aktywność TNFa jest szkodliwa, gdy chorobąjest odrzucanie przeszczepu albo reakcja przeszczepu przeciwko gospodarzowi.
  105. 105. Zastosowanie przeciwciała albo jego części wiążącej antygen, jak określono w zastrz. 24, do wytwarzania leku do leczenia choroby, w której aktywność TNFa jest szkodliwa, gdy chorobąjest choroba nowotworowa.
  106. 106. Zastosowanie przeciwciała albo jego części wiążącej antygen, jak określono w zastrz. 24, gdy choroba jest wybrana z grupy składającej się z zesztywniającego zapalenia stawów kręgosłupa, zapalenia kości, zapalenia stawów, dnawego zapalenia stawów, alergii, stwardnienia rozsianego, autoagresyjnej cukrzycy, autoagresyjnego zapalenia błony naczyniowej oka oraz zespołu nerczycowego.
  107. 107. Zastosowanie przeciwciała albo jego części wiążącej antygen, jak określono w zastrz. 24, w hamowaniu aktywności ludzkiego TNFa u człowieka cierpiącego na chorobę, w której aktywność TNFa jest szkodliwa, gdy choroba jest wybrana z grupy składającej się z choroby zapalnej kości, choroby resorpcyjnej kości, poalkoholowego zapalenia wątroby, wirusowego zapalenia wątroby, hepatitis fulminans, zaburzeń krzepnięcia, oparzeń, uszko188 192 dzenia poreperfuzyjnego, tworzenia bliznowca, tworzenia tkanki bliznowatej, gorączki, choroby ozębnej, otyłości oraz toksyczności wywołanej promieniowaniem.
  108. 108. Przeciwciało albo jego część wiążąca antygen, określone w zastrz. 1, do zastosowania w leczeniu.
  109. 109. Przeciwciało albo jego część wiążąca antygen, określone w zastrz. 2, do zastosowania w leczeniu.
  110. 110. Przeciwciało albo jego część wiążąca antygen, określone w zastrz. 24, do zastosowania w leczeniu.
  111. 111. Przeciwciało albo jego część wiążąca antygen, jak określono zastrz. 1, w kombinacji z co najmniej jednym dodatkowym czynnikiem terapeutycznym do zastosowania w leczeniu choroby, w której aktywność TNFa jest szkodliwa.
  112. 112. Przeciwciało albo jego część wiążąca antygen według zastrz. 111, znamienne tym, że dodatkowy czynnik terapeutyczny wybrany jest z grupy składającej się z niesteroidowych środków przeciwzapalnych, środków przeciwzapalnych hamujących cytokiny, CDP-571/BAY-10-3356, cA2, 75 kdTNFR-IgG, 55 kdTNFR-IgG, IDEC-CE9.1/SB210396, DAB486-IL-2, DAB 389-IL-2, Anti-Tac, IL-4, IL-10, agonistów IL-4, agonistów IL-10, IL-1RA, TNF-bp/s-TNFR,S284, R973401, MK-966, Iloprostu, metotreksatu, talidomidu, środków pokrewnych do talidomidu, leflunomidu, kwasu traneksamowego, T-614, prostaglandyny E1, Tenidapu, Naproxenu, Meloxicamu, Piroxicamu, Diclofenacu, Indometacyny, Sulfasalazyny, Azatiopryny, inhibitorów ICE, inhibitorów zap-70, inhibitorów lek, inhibitorów VEGF, inhibitorów VEGF-R, kortykosteroidów, inhibitorów TNF-konwertazy, przeciwciał przeciw IL-12, inhibitorów interleukiny 11, interleukiny 13, interleukiny-17, złota, penicylaminy, chlorochiny, hydroksychlorochiny, chlorambucylu, cyklofosfamidu, cyklosporyny, globuliny anty-tymocytamej, przeciwciał przeciw CD4, CD5-toksyn, doustnie podawanych peptydów, kolagenu, disodowej soli lobenzarytu, czynników regulujących cytokiny HP228 i HP466, antysensownych fosfotionianowych oligodeoksynukleotydow ICAM-1, rozpuszczalnego dopełniacza receptora 1, prednizonu, orgoteiny, polisiarczanu glikozoaminoglikanu, minocykliny, przeciwciał przeciw IL2R, lipidów morskich, lipidów roślinnych, auranofmy, fenylobutazonu, kwasu meklofenamowego, kwasu flufenamowego,wewnątrzżylnych globulin odpomościwych, zileutonu, kwasu mykofenolowego, takrolimusu, sirolimusu, amiprilosu, kladribiny, azarybiny, budenozydu, epidermalnego czynnika wzrostowego, aminosalicylanów, 6-merkaptopuryny, metronidazolu, inhibitorów lipoksygenazy, mesalaminy, olsalazyny, balsalazydu, przeciwutleniaczy, inhibitorów tromboksanu, antagonistów receptora IL-1, przeciwciał monoklonalnych przeciwko IL-Ιβ, przeciwciał monoklonalnych przeciwko IL-6, czynników wzrostu, inhibitorów elastazy, związków pirydynylo-imidazolu, prednizolonowych proleków skoniugowanych z glukuronidem, deksametazonu lub budezonidu, prednizolonowych proleków skoniugowanych z dekstranem, powolnie uwalnianej mesalazyny, antagonistów czynnika aktywującego płytki (PAF, ang. Platelet Activating Factor), ciprofloksacyny, lingokainy, predizolonu, metylopredizolonu, cyklofosfamidu, 4-aminopirydyny, tizanidyny, interferonu β 1 a, interferonu β1 b, kopolimeru 1, tlenu hiperbarycznego, wewnątrzżylnej immunoglobuliny, klabribiny, hipertonicznego roztworu soli, antybiotyków ciągłej hemofiltracji, karbapenemów, antagonistów cytokin, takich jak TNFa, IL-βΙ, IL-6 i/albo IL-8, SK&F 107647, czterowartościowego guanylohydrazonu CNI-1493, inhibitora szlaku czynnika tkankowego, PHP, czynników chelatujących zelazo oraz chelatów, łącznie z kompleksem kwas dietylenotriaminopentaoctowy-żelazo (III), lizofiliny, PGG-glukanu, apolipoproteiny A-1 rekonstytuowanej lipidami, chiralnych kwasów hydroksamowych, przeciwciał przeciw endotoksynie, E5531, rBPI21, syntetycznych peptydydów przeciw endotoksynie, surfaktantów terapii zastępczej oraz przeciwciał przeciw IL-8.
  113. 113. Przeciwciało albo jego część wiążąca antygen, jak określono w zastrz. 2, w kombinacji z co najmniej jednym dodatkowym czynnikiem terapeutycznym do zastosowania w leczeniu choroby, w której aktywność TNFa jest szkodliwa.
  114. 114. Przeciwciało albo jego część wiążąca antygen według zastrz. 113, znamienne tym, że dodatkowy czynnik terapeutyczny wybrany jest z grupy składającej się z niesteroidowych środków przeciwzapalnych, środków przeciwzapalnych hamujących cytokiny,
    188 192
    CDP-571/BAY-10-3356, cA2, 75 kdTNFR-IgG, 55 kdTNFR-IgG, IDEC-CE9.1/SB210396, DAB486-IL-a, DAB 389-IL-2, Anti-Tac, IL-4, IL-10, agonistów IL-4, agonistów IL-10, IL-1RA, TNF-bp/s-TNFR,S284, R973401, MK-966, Doprostu, metztreksatn, taliZomidu, środków pokrewnych do talidamidu, leflunomiZu, kwasu traneksamowego, T-614, prostaglandyny El, Te^idapu, Naproxcnu, Me^^amu, Piroxicamu, Diclofenacu, InZametacyny, Sulfasalazyny, Azatiopryny, inhibitorów ICE, inhibitorów zap-70, inhibitorów lek, inhibitorów VEGF, inhibitorów VEGF-R, kortykasteroiZów, inhibitorów TNF-konwertazy, przeciwciał przeciw IL-12, inhibitorów interleukiny 11, interleukiny 13, inaerlcnkiny-17, złota, penicylaminy, chlorochiny, hydroksychlorochiny, chlorambucylu, cyklzfosfamidu, cyklosporyny, globuliny anty-tymocytarnej, przeciwciał przeciw CD4, CD5-tzksyn, doustnie podawanych peptydów, kolagenu, ZisoZowcj soli lobenzarytu, czynników regulujących cytokiny HP228 iHP466, antysensownych fzsfztiznianzwych zllgodezksynnklezayZzw ICAM-1, rozpuszczalnego dopełniacza receptora 1, prcZnizznn, orgoteiny, pzlisiarczanu glikzzoaminzglikanu, minocykliny, przeciwciał przeciw IL2R, lipidów morskich, lipidów roślinnych, auranofiny, fcnylzbutazznu, kwasu mcklzfenamowegz, kwasu Bufena-mowego, wewnątrzży^ych globulin odpamaściwych, zi^^onu, kwasu mykzfenzlowego, aakrzlimnsu, sirolimusn, amiprilosu, kladribiny, azarybiny, bnZcnozyZu, cpidcrmalnegz czynnika wzrostowego, aminzsalicylanów, 6-merkaptzpuryny, metroniZazoln, inhibitorów lipoksygenazy, mesalaminy, olsalazyny, balsalazydu, przeciwutleniaczy, inhibitorów trzmbzksanu, antagonistów receptora IL-1, przeciwciał manaklznalnych przeciwko IL-1 β, przeciwciał monoklonalnych przeciwko IL-6, czynników wzrostu, inhibitorów elastazy, związków piryZynylz-imiZazzlu, prcZnizzlznzwych proleków skzniugzwanych z glukrnOnidem, Zcksamctazonn lub budezonidu, preZnizolonzwych proleków skzningowanych z dekstranem, powolnie uwalnianej mesalazyny, antagonistów czynnika aktywującego płytki (PAF, ang. Platelet Activating Factor), ciprzflzksacyny, lingokainy, preZizzlznu, metylzpredizzlznn, cyklafzsfamidu, 4-aminzpiryZyny, tizanidyny, interferonu pia, interferonu plb, kopolimeru 1, tlenu hiperbarycznegz, wewnątrzżylnej immnnzglzbulmy, klabribiny, hipcrtznicznegz roztworu soli, antybiotyków, ciągłej hemofiltracji, karbapenemów, antagonistów cytokin, takich jak TNFa, FL-ββ, IL-6 i/albo IL-8, SK&F 107647, czterowartościowegz guanylohydrazann CNI-1493, inhibitora szlaku czynnika tkankowego, PHP, czynników chelatujących żelazo oraz chelatów, łącznie z kompleksem kwas Zictylenotriaminzpentaactowy-dclazz (III), lizofiliny, PGG-glukanu, apolipoproteiny A-1 rekonstytuowanej lipidami, chiralnych kwasów hydroksamowych, przeciwciał przeciw cnZotzksynic, E5531, rBPl21, syntetycznych peptydydów przeciw cndotzksynie, surfaktantów terapii zastępczej oraz przeciwciał przeciw lL-8.
  115. 115. Przeciwciało albo jego część wiążąca antygen, jak określono w zastrz. 24, w kombinacji z co najmniej jednym dodatkowym czynnikiem terapeutycznym do zastosowania w leczeniu choroby, w której aktywność TNFa jest szkodliwa.
  116. 116. Przeciwciało albo jego część wiążąca antygen według zastrz. 115, znamienne tym, że dodatkowy czynnik terapeutyczny wybrany jest z grupy składającej się z niesteroiZzwych środków przeciwzapalnych, środków przeciwzapalnych hamujących cytokiny, CDP-571/BAY-10-3356, cA2, 75 kdTNFR-IgG, 55 kdTNFR-IgG, IDEC-CE9.I/SB210396, DAB486-IL-2, DAB 389-IL-2, Anti-Tac, IL-4, IL-10, agonistów IL-4, agonistów IL-10, IL-1RA, TNF-bp/s-TNFR,S284, R973401, MK-966, Iloprostu, mctoareksatu, talidomiZn,śroZków pokrewnych do aaliZamiZu, lcflunzmidu, kwasu aranckstmawcgz, T-614, prostaglandyny El, Te^idapu, Naproxenu, Meloxicamu, Pirzxicamn, Diclofenacu, InZzmcaacyny, Sulfasalazyny, Azatiopryny, inhibitorów ICE, inhibitorów zap-70, inhibitorów lek, inhibitorów VEGF, inhibitorów VEGF-R, kzrtykzsteroidów, inhibitorów TNF-konwertazy, przeciwciał przeciw IL-12, inhibitorów interleukiny 11, interleukiny 13, inaerlcnkiny-17, złota, penicylaminy, chlarachiny, hydroksychlorochiny, chlorambucylu, cyklofosfamidu, cyklospor^yny, globuliny anty-tymocytarnej, przeciwciał przeciw CD4, CD5-aoksyn, doustnie podawanych peptydów, kolagenu, disoZowcj soli lobenzarytu, czynników regulujących cytokiny HP228 iHP466, antysensownych fzsfatiznianzwych zligoZeoksynnklcztydów ICAM-1, rozpuszczalnego dopełniacza receptora 1, pred^zon^ orgoteiny, pzlisiarczanu glikozzaminzglikanu, minocykliny, przeciwciał przeciw IL2R, lipidów morskich, lipidów roślinnych, anranzfmy,
    188 192 fenylobutazonu, kwasu meklofenamowego, kwasu flufenamowego, wewnątrzżylnych globulin odpomościwych, zileutonu, kwasu mykofenolowego, takrolimusu, sirolimusu, amiprilosu, kladribiny, azarybiny, budenozydu, epidermalnego czynnika wzrostowego, aminosalicylanów, 6-merkaptopuryny, metronidazolu, inhibitorów lipoksygenazy, mesalaminy, olsalazyny, balsalazydu, przeciwutleniaczy, inhibitorów tromboksanu, antagonistów receptora IL-I, przeciwciał monoklonalnych przeciwko Γϋ-1β, przeciwciał monoklonalnych przeciwko IL-6, czynników wzrostu, inhibitorów elastazy, związków pirydynylo-imidazolu, prednizolonowych proleków skoniugowanych z glukuronidem, deksametazonu lub budezonidu, prednizolonowych proleków skoniugowanych z dekstranem, powolnie uwalnianej mesalazyny, antagonistów czynnika aktywującego płytki (PAF, ang. Platelet Activating Factor), ciprofloksacyny, lingokainy, predizolonu, metylopredizolonu, cyklofosfamidu, 4aminopirydyny, tizanidyny, interferonu βΜ, interferonu β1Β, kopolimeru 1, tlenu hiperbarycznego, wewnątrzżylnej immunoglobuliny, klabribiny, hipertonicznego roztworu soli, antybiotyków, ciągłej hemofiltracji, karbapenemów, antagonistów cytokin, takich jak TNFa, IL-βΙ, IL-6 i/albo IL-8, SK&F 107647, czterowartościowego guanylohydrazonu CNI1493, inhibitora szlaku czynnika tkankowego, PHP, czynników chelatujących żelazo oraz chelatów, łącznie z kompleksem kwas dietylenotriaminopentaoctowy-żelazo (III), lizofiliny, PGG-glukanu, apolipoproteiny A-1 rekonstytuowanej lipidami, chiralnych kwasów hydroksamowych, przeciwciał przeciw endotoksynie, E5531, rBPI21, syntetycznych peptydydów przeciw endotoksynie, surfaktantów terapii zastępczej oraz przeciwciał przeciw IL-8.
PL97328411A 1996-02-09 1997-02-10 Izolowane ludzkie przeciwciało albo jego część wiążąca antygen, rekombinowane ludzkie przeciwciało albo jego część wiążąca antygen, kompozycje farmaceutyczne, izolowane kwasy nukleinowe, rekombinowany wektor ekspresyjny, komórka gospodarza, sposób syntetyzowania przeciwciała ludzkiego, które wiąże ludzki TNFalfa, sposób hamowania aktywności ludzkiego TNFalfa in vitro, przeciwciało albo jego częśćwiążąca antygen, zastosowanie przeciwciała albo jego części wiążącej antygen PL188192B1 (pl)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US08/599,226 US6090382A (en) 1996-02-09 1996-02-09 Human antibodies that bind human TNFα
US3147696P 1996-11-25 1996-11-25
PCT/US1997/002219 WO1997029131A1 (en) 1996-02-09 1997-02-10 HUMAN ANTIBODIES THAT BIND HUMAN TNF$g(a)

Publications (2)

Publication Number Publication Date
PL328411A1 PL328411A1 (en) 1999-01-18
PL188192B1 true PL188192B1 (pl) 2004-12-31

Family

ID=26707297

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PL97365237A PL193499B1 (pl) 1996-02-09 1997-02-10 Izolowane ludzkie przeciwciało, rekombinowane ludzkie przeciwciało, kompozycja farmaceutyczna, sposób hamowania aktywności ludzkiego TNFalfa in vitro, zastosowanie tych izolowanych ludzkich przeciwciał i izolowany kwas nukleinowy
PL97328411A PL188192B1 (pl) 1996-02-09 1997-02-10 Izolowane ludzkie przeciwciało albo jego część wiążąca antygen, rekombinowane ludzkie przeciwciało albo jego część wiążąca antygen, kompozycje farmaceutyczne, izolowane kwasy nukleinowe, rekombinowany wektor ekspresyjny, komórka gospodarza, sposób syntetyzowania przeciwciała ludzkiego, które wiąże ludzki TNFalfa, sposób hamowania aktywności ludzkiego TNFalfa in vitro, przeciwciało albo jego częśćwiążąca antygen, zastosowanie przeciwciała albo jego części wiążącej antygen

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PL97365237A PL193499B1 (pl) 1996-02-09 1997-02-10 Izolowane ludzkie przeciwciało, rekombinowane ludzkie przeciwciało, kompozycja farmaceutyczna, sposób hamowania aktywności ludzkiego TNFalfa in vitro, zastosowanie tych izolowanych ludzkich przeciwciał i izolowany kwas nukleinowy

Country Status (32)

Country Link
US (9) US6258562B1 (pl)
EP (1) EP0929578B1 (pl)
JP (8) JP3861118B2 (pl)
KR (1) KR100317188B1 (pl)
CN (5) CN101712720A (pl)
AT (1) ATE239041T1 (pl)
AU (1) AU722077B2 (pl)
BG (7) BG64564B1 (pl)
BR (3) BRPI9715219B8 (pl)
CA (1) CA2243459C (pl)
CY (2) CY2463B1 (pl)
CZ (1) CZ292465B6 (pl)
DE (4) DE122004000004I1 (pl)
DK (1) DK0929578T3 (pl)
ES (1) ES2198552T3 (pl)
HK (8) HK1019452A1 (pl)
HU (4) HU230048B1 (pl)
IL (4) IL125697A (pl)
LU (1) LU91062I2 (pl)
MX (1) MX336813B (pl)
NL (1) NL300143I2 (pl)
NO (6) NO316711B1 (pl)
NZ (5) NZ331579A (pl)
PL (2) PL193499B1 (pl)
PT (1) PT929578E (pl)
RO (2) RO123028B1 (pl)
RU (3) RU2270030C2 (pl)
SI (1) SI9720020B (pl)
SK (1) SK284040B6 (pl)
TR (1) TR199801532T2 (pl)
UA (2) UA57726C2 (pl)
WO (1) WO1997029131A1 (pl)

Families Citing this family (463)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0486526B2 (en) 1989-08-07 2001-03-07 Peptech Limited Tumour necrosis factor binding ligands
US5959087A (en) * 1989-08-07 1999-09-28 Peptide Technology, Ltd. Tumour necrosis factor binding ligands
US20030225254A1 (en) * 1989-08-07 2003-12-04 Rathjen Deborah Ann Tumour necrosis factor binding ligands
US7192584B2 (en) 1991-03-18 2007-03-20 Centocor, Inc. Methods of treating psoriasis with anti-TNF antibodies
US6270766B1 (en) 1992-10-08 2001-08-07 The Kennedy Institute Of Rheumatology Anti-TNF antibodies and methotrexate in the treatment of arthritis and crohn's disease
US6830751B1 (en) 1994-03-14 2004-12-14 Genetics Institute, Llc Use of IL-12 antagonists in the treatment of rheumatoid arthritis
ZA95960B (en) * 1994-03-14 1995-10-10 Genetics Inst Use of interleukin-12 antagonists in the treatment of autoimmune diseases
US20010055581A1 (en) 1994-03-18 2001-12-27 Lawrence Tamarkin Composition and method for delivery of biologically-active factors
US6090382A (en) 1996-02-09 2000-07-18 Basf Aktiengesellschaft Human antibodies that bind human TNFα
DE122004000004I1 (de) * 1996-02-09 2004-08-12 Abott Biotechnology Ltd Humane Antikörper welche an Humanen TNFalpha binden.
US7129061B1 (en) * 1996-08-07 2006-10-31 Biogen Idec Ma Inc. Tumor necrosis factor related ligand
US20040009166A1 (en) * 1997-04-30 2004-01-15 Filpula David R. Single chain antigen-binding polypeptides for polymer conjugation
WO1998049198A1 (en) * 1997-04-30 1998-11-05 Enzon, Inc. Single-chain antigen-binding proteins capable of glycosylation, production and uses thereof
US7229841B2 (en) 2001-04-30 2007-06-12 Cytimmune Sciences, Inc. Colloidal metal compositions and methods
US6407218B1 (en) 1997-11-10 2002-06-18 Cytimmune Sciences, Inc. Method and compositions for enhancing immune response and for the production of in vitro mabs
US7067144B2 (en) * 1998-10-20 2006-06-27 Omeros Corporation Compositions and methods for systemic inhibition of cartilage degradation
US7553487B2 (en) 1998-12-14 2009-06-30 Genetics Institute, Llc Method and compositions for treating asthma
EP1141286B1 (en) 1998-12-14 2006-10-18 Genetics Institute, LLC Cytokine receptor chain
DE60045240D1 (de) * 1999-03-02 2010-12-30 Centocor Inc Antikörper gegen tnf alpha zur therapie von steroidresistentem asthma
US6914128B1 (en) 1999-03-25 2005-07-05 Abbott Gmbh & Co. Kg Human antibodies that bind human IL-12 and methods for producing
US20040220103A1 (en) 1999-04-19 2004-11-04 Immunex Corporation Soluble tumor necrosis factor receptor treatment of medical disorders
AU7912600A (en) * 1999-10-06 2001-05-10 Basf Aktiengesellschaft Inhibitors of the endothelin signalling pathway and alphavbeta3 integrin receptor antagonists for combination therapy
KR101111103B1 (ko) 2000-02-10 2012-02-13 아보트 러보러터리즈 사람 인터류킨-18에 결합하는 항체 및 이를 제조하고 사용하는 방법
GB0013810D0 (en) 2000-06-06 2000-07-26 Celltech Chiroscience Ltd Biological products
CN101525384A (zh) 2000-06-29 2009-09-09 艾博特公司 双特异性抗体及其制备方法和用途
UA81743C2 (uk) * 2000-08-07 2008-02-11 Центокор, Инк. МОНОКЛОНАЛЬНЕ АНТИТІЛО ЛЮДИНИ, ЩО СПЕЦИФІЧНО ЗВ'ЯЗУЄТЬСЯ З ФАКТОРОМ НЕКРОЗУ ПУХЛИН АЛЬФА (ФНПα), ФАРМАЦЕВТИЧНА КОМПОЗИЦІЯ, ЩО ЙОГО МІСТИТЬ, ТА СПОСІБ ЛІКУВАННЯ РЕВМАТОЇДНОГО АРТРИТУ
US20050196755A1 (en) * 2000-11-17 2005-09-08 Maurice Zauderer In vitro methods of producing and identifying immunoglobulin molecules in eukaryotic cells
AU2002231736A1 (en) 2000-12-22 2002-07-08 Max-Planck-Gesellschaft Zur Forderung Der Wissenschaften E.V. Use of repulsive guidance molecule (rgm) and its modulators
US6919183B2 (en) * 2001-01-16 2005-07-19 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Isolating cells expressing secreted proteins
US20090137416A1 (en) 2001-01-16 2009-05-28 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Isolating Cells Expressing Secreted Proteins
CA2440676A1 (en) 2001-03-22 2002-10-03 Abbott Gmbh & Co. Kg Transgenic animals expressing antibodies specific for genes of interest and uses thereof
US6410955B1 (en) * 2001-04-19 2002-06-25 Micron Technology, Inc. Comb-shaped capacitor for use in integrated circuits
CA2385745C (en) * 2001-06-08 2015-02-17 Abbott Laboratories (Bermuda) Ltd. Methods of administering anti-tnf.alpha. antibodies
AU2002316384A1 (en) * 2001-06-26 2003-03-03 Photomed Technologies, Inc. Multiple wavelength illuminator
US7364736B2 (en) 2001-06-26 2008-04-29 Amgen Inc. Antibodies to OPGL
US20050271663A1 (en) * 2001-06-28 2005-12-08 Domantis Limited Compositions and methods for treating inflammatory disorders
TWI327597B (en) 2001-08-01 2010-07-21 Centocor Inc Anti-tnf antibodies, compositions, methods and uses
WO2003024384A2 (en) * 2001-09-20 2003-03-27 Magnum Therapeutics Improved methods for treatment with viral vectors
US20030065382A1 (en) * 2001-10-02 2003-04-03 Fischell Robert E. Means and method for the treatment of coronary artery obstructions
CA2460916A1 (en) 2001-10-04 2003-04-10 Laura Carter Methods and compositions for modulating interleukin-21 receptor activity
EP1494710A4 (en) * 2002-03-26 2007-03-21 Centocor Inc DIABETES-RELEVANT IMMUNOGLOBULIN-BASED PROTEINS, COMPOSITIONS, PROCESSES AND USES
US20030206898A1 (en) * 2002-04-26 2003-11-06 Steven Fischkoff Use of anti-TNFalpha antibodies and another drug
US20040009172A1 (en) * 2002-04-26 2004-01-15 Steven Fischkoff Use of anti-TNFalpha antibodies and another drug
CN102764436A (zh) 2002-07-19 2012-11-07 艾博特生物技术有限公司 TNF α相关疾病的治疗
US20090280065A1 (en) * 2006-04-10 2009-11-12 Willian Mary K Uses and Compositions for Treatment of Psoriasis
US20040033228A1 (en) 2002-08-16 2004-02-19 Hans-Juergen Krause Formulation of human antibodies for treating TNF-alpha associated disorders
WO2004019861A2 (en) * 2002-08-28 2004-03-11 Pharmacia Corporation Stable ph optimized formulation of a modified antibody
MY150740A (en) * 2002-10-24 2014-02-28 Abbvie Biotechnology Ltd Low dose methods for treating disorders in which tnf? activity is detrimental
US9320792B2 (en) 2002-11-08 2016-04-26 Ablynx N.V. Pulmonary administration of immunoglobulin single variable domains and constructs thereof
CA2505316C (en) 2002-11-08 2014-08-05 Ablynx N.V. Single domain antibodies directed against tumour necrosis factor-alpha and uses therefor
US20060034845A1 (en) 2002-11-08 2006-02-16 Karen Silence Single domain antibodies directed against tumor necrosis factor alpha and uses therefor
US20040101939A1 (en) * 2002-11-22 2004-05-27 Santora Ling C. Method for reducing or preventing modification of a polypeptide in solution
US20040162414A1 (en) * 2002-11-22 2004-08-19 Santora Ling C. Method for reducing or preventing modification of a polypeptide in solution
RU2377253C2 (ru) * 2002-12-02 2009-12-27 Амген Фремонт,Инк. Антитела, специфичные к фактору некроза опухолей, и их применение
EP1578782A4 (en) * 2002-12-30 2007-09-12 Amgen Inc COSTIMULATING FACTORIAL THERAPY
JP2007525409A (ja) * 2003-01-08 2007-09-06 アプライド モレキュラー エボリューション，インコーポレイテッド ＴＮＦ−α結合分子
US7101978B2 (en) * 2003-01-08 2006-09-05 Applied Molecular Evolution TNF-α binding molecules
CA2512545C (en) * 2003-01-10 2015-06-30 Karen Silence Recombinant vhh single domain antibody from camelidae against von willebrand factor (vwf)
DE10303974A1 (de) 2003-01-31 2004-08-05 Abbott Gmbh & Co. Kg Amyloid-β(1-42)-Oligomere, Verfahren zu deren Herstellung und deren Verwendung
RU2005131852A (ru) * 2003-03-14 2006-04-20 Уайт (Us) Антитела против человеческого рецептора il-21 и их применение
EP1460088A1 (en) 2003-03-21 2004-09-22 Biotest AG Humanized anti-CD4 antibody with immunosuppressive properties
WO2004098578A2 (en) * 2003-05-12 2004-11-18 Altana Pharma Ag Composition comprising a pde4 inhibitor and a tnf-alfa antagonist selected from infliximab, adalimumab, cdp870 and cdp517
FR2856075B1 (fr) * 2003-06-16 2007-10-12 Monoclonal Antibodies Therapeu Procede essentiellement automatise de criblage a grande echelle de cellules secretant des anticorps monoclonaux
FR2859725B1 (fr) * 2003-09-16 2006-03-10 Neovacs Procede a haut rendement pour l'obtention d'anticorps humains neutralisant l'activite biologique d'une cytokine humaine
US20050100965A1 (en) 2003-11-12 2005-05-12 Tariq Ghayur IL-18 binding proteins
KR100772800B1 (ko) * 2003-11-17 2007-11-01 주식회사유한양행 인간 종양괴사인자 α를 인식하는 단일클론항체의가변영역 및 이를 코딩하는 유전자
CA2548179A1 (en) 2003-12-02 2005-07-21 Cytimmune Sciences, Inc. Methods and compositions for the production of monoclonal antibodies
US7674459B2 (en) 2003-12-23 2010-03-09 Genentech, Inc. Treatment of cancer with a novel anti-IL13 monoclonal antibody
US7435799B2 (en) * 2004-01-08 2008-10-14 Applied Molecular Evolution TNF-α binding molecules
US7625549B2 (en) 2004-03-19 2009-12-01 Amgen Fremont Inc. Determining the risk of human anti-human antibodies in transgenic mice
EP2418224A3 (en) 2004-03-19 2013-07-24 Amgen Inc. Reducing the risk of human and anti-human antibodies through V gene manipulation
TWI556829B (zh) * 2004-04-09 2016-11-11 艾伯維生物技術有限責任公司 用於治療ＴＮＦα相關失調症之多重可變劑量療法
CN100427504C (zh) * 2004-06-02 2008-10-22 北京天广实生物技术有限公司 TNFα高亲和力嵌合抗体及其用途
US7501121B2 (en) 2004-06-17 2009-03-10 Wyeth IL-13 binding agents
AR049390A1 (es) 2004-06-09 2006-07-26 Wyeth Corp Anticuerpos contra la interleuquina-13 humana y usos de los mismos
GB0414054D0 (en) 2004-06-23 2004-07-28 Owen Mumford Ltd Improvements relating to automatic injection devices
EP1773394A2 (en) * 2004-08-05 2007-04-18 Wyeth a Corporation of the State of Delaware Antagonizing interleukin-21 receptor activity
WO2006041970A2 (en) * 2004-10-08 2006-04-20 Abbott Biotechnology Ltd. Treatment of respiratory syncytial virus (rsv) infection
CN101048426A (zh) * 2004-10-22 2007-10-03 金克克国际有限公司 分离人抗体
CN101102792A (zh) 2004-11-19 2008-01-09 比奥根艾迪克Ma公司 治疗多发性硬化
CA2930677A1 (en) 2005-02-08 2006-08-17 Genzyme Corporation Antibodies to tgfbeta
EP1849011A2 (en) * 2005-02-14 2007-10-31 University of Pittsburgh of the Commonwealth System of Higher Education Use of il-17f in diagnosis and therapy of airway inflammation
EP1848743A2 (en) * 2005-02-14 2007-10-31 Wyeth Interleukin-17f antibodies and other il-17f signaling antagonists and uses therefor
WO2006089095A2 (en) 2005-02-17 2006-08-24 Biogen Idec Ma Inc. Treating neurological disorders
GT200600148A (es) * 2005-04-14 2006-11-22 Metodos para el tratamiento y la prevencion de fibrosis
AU2006244014B2 (en) * 2005-05-10 2011-03-17 Biogen Ma Inc. Treating and evaluating inflammatory disorders
AU2012254978C1 (en) * 2005-05-16 2017-06-01 Abbvie Biotechnology Ltd Use of TNF inhibitor for treatment of erosive polyarthritis
TWI399384B (zh) * 2005-05-16 2013-06-21 Abbott Biotech Ltd ＴＮＦα抑制劑於治療侵蝕型多發性關節炎之用途
WO2006133287A2 (en) * 2005-06-06 2006-12-14 Wyeth Expression profiles of peripheral blood mononuclear cells for inflammatory bowel diseases
WO2006131013A2 (en) 2005-06-07 2006-12-14 Esbatech Ag STABLE AND SOLUBLE ANTIBODIES INHIBITING TNFα
US20080311078A1 (en) 2005-06-14 2008-12-18 Gokarn Yatin R Self-Buffering Protein Formulations
US20060286108A1 (en) * 2005-06-16 2006-12-21 Bell Katherine A Topical compositions for the treatment of chronic wounds
US20080045949A1 (en) * 2005-06-17 2008-02-21 Hunt Margaret M Method of treating degenerative spinal disorders
JP5253159B2 (ja) * 2005-06-24 2013-07-31 デューク・ユニヴァーシティ 熱応答性バイオポリマーに基づく直接的ドラッグデリバリーシステム
EP2484774A3 (en) 2005-07-21 2012-11-14 Abbott Laboratories Multiple gene expression including sorf contructs and methods with polyproteins, pro-proteins, and proteolysis
TW200726776A (en) * 2005-07-29 2007-07-16 Friedrich Alexander University Of Erlangen Nuremberg CD33-specific single-chain immunotoxin and methods of use
US20070041905A1 (en) * 2005-08-19 2007-02-22 Hoffman Rebecca S Method of treating depression using a TNF-alpha antibody
US7612181B2 (en) * 2005-08-19 2009-11-03 Abbott Laboratories Dual variable domain immunoglobulin and uses thereof
EP2500353A3 (en) 2005-08-19 2012-10-10 Abbott Laboratories Dual variable domain immunoglobulin and uses thereof
US20090215992A1 (en) * 2005-08-19 2009-08-27 Chengbin Wu Dual variable domain immunoglobulin and uses thereof
KR20140053410A (ko) 2005-08-19 2014-05-07 아보트 러보러터리즈 이원 가변 도메인 면역글로불린 및 이의 용도
US8906864B2 (en) 2005-09-30 2014-12-09 AbbVie Deutschland GmbH & Co. KG Binding domains of proteins of the repulsive guidance molecule (RGM) protein family and functional fragments thereof, and their use
WO2007049286A1 (en) * 2005-10-27 2007-05-03 Tata Memorial Centre A system for ex-vivo separation of apoptotic chromatin particles from blood or plasma
CN101663048A (zh) 2005-11-01 2010-03-03 艾博特生物技术有限公司 使用生物标志物诊断强直性脊柱炎的方法和组合物
AR056806A1 (es) 2005-11-14 2007-10-24 Amgen Inc Moleculas quimericas de anticuerpo rankl- pth/ pthrp
KR20080090408A (ko) 2005-11-30 2008-10-08 아보트 러보러터리즈 항-Ａβ 글로불로머 항체, 이의 항원-결합 잔기, 상응하는하이브리도마, 핵산, 벡터, 숙주 세포, 당해 항체의 제조방법, 당해 항체를 포함하는 조성물, 당해 항체의 용도 및당해 항체의 사용 방법
KR101439828B1 (ko) 2005-11-30 2014-09-17 애브비 인코포레이티드 아밀로이드 베타 단백질에 대한 모노클로날 항체 및 이의 용도
US8334257B2 (en) 2005-12-20 2012-12-18 Duke University Methods and compositions for delivering active agents with enhanced pharmacological properties
US20130172274A1 (en) 2005-12-20 2013-07-04 Duke University Methods and compositions for delivering active agents with enhanced pharmacological properties
US8841255B2 (en) 2005-12-20 2014-09-23 Duke University Therapeutic agents comprising fusions of vasoactive intestinal peptide and elastic peptides
EA017417B1 (ru) 2006-02-01 2012-12-28 Сефалон Астралия Пти Лтд. КОНСТРУКТ ОДНОДОМЕННОГО АНТИТЕЛА, КОТОРЫЙ СВЯЗЫВАЕТСЯ С ЧЕЛОВЕЧЕСКИМ TNF-α, И ЕГО ПРИМЕНЕНИЕ
TWI417301B (zh) 2006-02-21 2013-12-01 Wyeth Corp 對抗人類介白素-２２（ｉｌ-２２）之抗體及其用途
TW200744634A (en) 2006-02-21 2007-12-16 Wyeth Corp Methods of using antibodies against human IL-22
KR20150064254A (ko) * 2006-04-05 2015-06-10 애브비 바이오테크놀로지 리미티드 항체 정제
US9605064B2 (en) * 2006-04-10 2017-03-28 Abbvie Biotechnology Ltd Methods and compositions for treatment of skin disorders
US20080118496A1 (en) * 2006-04-10 2008-05-22 Medich John R Uses and compositions for treatment of juvenile rheumatoid arthritis
EP2012586A4 (en) 2006-04-10 2010-08-18 Abbott Biotech Ltd USES AND COMPOSITIONS FOR THE TREATMENT OF ANKYLOSANTE SPONDYLARTHRITIS
EP2010214A4 (en) 2006-04-10 2010-06-16 Abbott Biotech Ltd USES AND COMPOSITIONS FOR THE TREATMENT OF RHEUMATOID ARTHRITIS
US20090317399A1 (en) * 2006-04-10 2009-12-24 Pollack Paul F Uses and compositions for treatment of CROHN'S disease
EP2666472A3 (en) 2006-04-10 2014-04-02 Abbott Biotechnology Ltd Uses and compositions for treatment of psoriatic arthritis
EP2666479A3 (en) 2006-04-10 2014-03-26 Abbott Biotechnology Ltd Uses and compositions for treatment of juvenile rheumatoid arthritis
CA2564435A1 (en) 2006-04-10 2007-10-10 Abbott Biotechnology Ltd. Methods for monitoring and treating intestinal disorders
US20080131374A1 (en) * 2006-04-19 2008-06-05 Medich John R Uses and compositions for treatment of rheumatoid arthritis
US20080311043A1 (en) * 2006-06-08 2008-12-18 Hoffman Rebecca S Uses and compositions for treatment of psoriatic arthritis
US20100021451A1 (en) * 2006-06-08 2010-01-28 Wong Robert L Uses and compositions for treatment of ankylosing spondylitis
TWI542374B (zh) 2006-06-30 2016-07-21 艾伯維生物技術有限責任公司 自動注射裝置
RU2472807C2 (ru) 2006-09-08 2013-01-20 Эбботт Лэборетриз Интерлейкин-13-связывающие белки
EP2500415A1 (en) 2006-09-13 2012-09-19 Abbott Laboratories Cell culture improvements
US8911964B2 (en) 2006-09-13 2014-12-16 Abbvie Inc. Fed-batch method of making human anti-TNF-alpha antibody
MX2009002748A (es) 2006-09-13 2009-03-26 Abbott Lab Mejoras de cultivos celulares.
KR20150002896A (ko) * 2006-10-27 2015-01-07 애브비 바이오테크놀로지 리미티드 결정형 항-ｈＴＮＦ알파 항체
EP2099454A4 (en) 2006-11-17 2010-11-10 Abbott Lab AMINOPYRROLIDINES AS CHEMOKINE RECEPTOR ANTAGONISTS
EP2101780B1 (en) 2006-11-21 2013-10-09 Kalobios Pharmaceuticals, Inc. Methods of treating chronic inflammatory diseases using a gm-csf antagonist
US8455626B2 (en) 2006-11-30 2013-06-04 Abbott Laboratories Aβ conformer selective anti-aβ globulomer monoclonal antibodies
WO2008082651A2 (en) 2006-12-29 2008-07-10 Abbott Laboratories Dual-specific il-1a/ il-1b antibodies
WO2008088823A2 (en) * 2007-01-16 2008-07-24 Abbott Laboratories Methods for treating psoriasis
JP2008209378A (ja) * 2007-01-31 2008-09-11 Fujifilm Corp バイオセンサー基板
AU2008214359B2 (en) 2007-02-05 2014-01-16 Apellis Pharmaceuticals, Inc. Local complement inhibition for treatment of complement-mediated disorders
US8895004B2 (en) 2007-02-27 2014-11-25 AbbVie Deutschland GmbH & Co. KG Method for the treatment of amyloidoses
NZ579594A (en) 2007-03-12 2012-03-30 Esbatech Alcon Biomed Res Unit Sequence based engineering and optimization of single chain antibodies
TW200902064A (en) * 2007-03-28 2009-01-16 Wyeth Corp Methods and compositions for modulating IL-17F/IL-17A biological activity
US7807168B2 (en) * 2007-04-10 2010-10-05 Vaccinex, Inc. Selection of human TNFα specific antibodies
WO2008124858A2 (en) * 2007-04-11 2008-10-23 F-Star Biotechnologische Forschungs- Und Entwicklungsges. M.B.H. Targeted receptor
EP2679995A1 (en) 2007-05-31 2014-01-01 AbbVie Inc. Biomarkers predictive of the responsiveness to TNF-alfa inhibitors in autoimmune disorders
WO2008150490A2 (en) * 2007-06-01 2008-12-11 Abbott Biotechnology Ltd. Uses and compositions for treatment of psoriasis and crohn's disease
MX2009013137A (es) * 2007-06-06 2010-04-30 Domantis Ltd Metodos para seleccionar polipeptidos resistentes a la proteasa.
BRPI0812398A2 (pt) * 2007-06-06 2019-09-24 Domantis Ltd domínio variável simples de imunoglobulina anti-vegf, antagonista anti-vegf, domínio variável simples de imunoglobulina resistente à protease, uso do antagonista vegf, método para a dispensação oral ou dispensação de um medicamento ao trato gi de um paciente ou ao pulmão ou tecido pulmonar ou olho de um paciente, dispositivo de dispensação pulmonar, formulação oral, ligando específico duplo, ácido nucleico isolado ou recombinante, vetor, célula hospedeira, método para produzir polipeptídeo, composição farmacêutica, polipeptídeo, e, proteína de fusão
WO2008154543A2 (en) 2007-06-11 2008-12-18 Abbott Biotechnology Ltd. Methods for treating juvenile idiopathic arthritis
SI2170390T1 (sl) 2007-06-14 2019-02-28 Biogen Ma Inc. Oblike protitelesa natalizumab
HUE027507T2 (en) * 2007-06-25 2016-10-28 Esbatech Alcon Biomed Res Unit Procedures for Modifying Antibodies and Modified Antibodies with Improved Functional Properties
ES2532725T3 (es) * 2007-06-25 2015-03-31 Esbatech, An Alcon Biomedical Research Unit Llc Modificación por ingeniería genética basada en secuencia y optimización de anticuerpos de cadena sencilla
WO2009011782A2 (en) * 2007-07-13 2009-01-22 Abbott Biotechnology Ltd. METHODS AND COMPOSITIONS FOR PULMONARY ADMINISTRATION OF A TNFa INHIBITOR
CN101980722A (zh) 2007-08-08 2011-02-23 雅培制药有限公司 结晶抗体的组合物和方法
CA3128656A1 (en) 2007-08-22 2009-02-26 The Regents Of The University Of California Activatable binding polypeptides and methods of identification and use thereof
MX2010002269A (es) * 2007-08-28 2010-03-25 Abbott Biotech Ltd Composiciones y metodos que comprenden proteinas de union para adalimumab.
RU2499599C2 (ru) 2007-09-28 2013-11-27 Интрексон Корпорейшн Конструкции терапевтического переключения генов и биореакторы для экспрессии биотерапевтических молекул и их применение
JP2009082033A (ja) * 2007-09-28 2009-04-23 Kaneka Corp 完全ヒト型抗体生産法
CA2706700A1 (en) 2007-11-08 2009-05-14 Cytimmune Sciences, Inc. Compositions and methods for generating antibodies
CN101969971A (zh) 2007-11-30 2011-02-09 雅培制药有限公司 蛋白制剂及其制备方法
US8883146B2 (en) 2007-11-30 2014-11-11 Abbvie Inc. Protein formulations and methods of making same
WO2009086550A1 (en) * 2008-01-03 2009-07-09 Abbott Laboratories Predicting long-term efficacy of a compound in the treatment of psoriasis
CA2711984A1 (en) 2008-01-15 2009-07-23 Abbott Gmbh & Co. Kg Powdered protein compositions and methods of making same
US8962803B2 (en) 2008-02-29 2015-02-24 AbbVie Deutschland GmbH & Co. KG Antibodies against the RGM A protein and uses thereof
RU2540018C2 (ru) 2008-03-13 2015-01-27 Биотест Аг Средство для лечения заболевания
EP2265643B1 (en) 2008-03-13 2016-10-19 Biotest AG Dosing regimen for treating psoriasis and rheumatoid arthritis
WO2009124815A1 (en) 2008-03-13 2009-10-15 Biotest Ag Agent for treating disease
US8178092B2 (en) 2008-03-18 2012-05-15 Abbott Laboratories Methods of treating psoriasis by administration of antibodies to the p40 subunit of IL-12 and/or IL-23
MX2010011955A (es) 2008-04-29 2011-01-21 Abbott Lab Inmunoglobulinas de dominio variable doble y usos de las mismas.
US20100260668A1 (en) * 2008-04-29 2010-10-14 Abbott Laboratories Dual Variable Domain Immunoglobulins and Uses Thereof
EP2113568A1 (en) 2008-04-30 2009-11-04 Deutsches Rheuma-Forschungszentrum Berlin Knock-in mouse for modelling blockade of human TNFalpha
AR071698A1 (es) 2008-05-09 2010-07-07 Abbott Gmbh & Co Kg Anticuerpos contra el receptor de productos finales de glicosilacion avanzada (rage) y usos de los mismos
WO2009142186A1 (ja) * 2008-05-20 2009-11-26 株式会社カネカ 細胞障害性組成物
NZ589436A (en) 2008-06-03 2012-12-21 Abbott Lab Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
MX2010013239A (es) * 2008-06-03 2011-02-24 Abbott Lab Inmunoglobulinas de dominio variable doble y usos de las mismas.
KR102095257B1 (ko) 2008-06-25 2020-04-01 노바르티스 아게 Ｖｅｇｆ를 억제하는 안정하고 가용성인 항체
PT3444274T (pt) 2008-06-25 2021-03-17 Novartis Ag Anticorpos que inibem tnf estáveis e solúveis
ES2629345T3 (es) 2008-06-25 2017-08-08 Esbatech, An Alcon Biomedical Research Unit Llc Optimización de la solubilidad de agentes de unión inmunológica
CN105727261A (zh) 2008-06-27 2016-07-06 杜克大学 包含弹性蛋白样肽的治疗剂
KR20110044992A (ko) * 2008-07-02 2011-05-03 이머전트 프로덕트 디벨롭먼트 시애틀, 엘엘씨 ＴＧＦ-β 길항제 다중-표적 결합 단백질
JP2011527579A (ja) 2008-07-08 2011-11-04 アボット・ラボラトリーズ プロスタグランジンｅ２結合タンパク質およびこの使用
CN102149825B (zh) 2008-07-08 2015-07-22 Abbvie公司 前列腺素e2双重可变结构域免疫球蛋白及其用途
EP2337799A2 (en) * 2008-08-28 2011-06-29 Wyeth LLC Uses of il-22, il-17, and il-1 family cytokines in autoimmune diseases
CN102281898B (zh) * 2008-10-07 2015-06-03 成功大学 Il-20拮抗剂在治疗类风湿性关节炎和骨质疏松症中的应用
MX2011004558A (es) 2008-10-29 2011-06-01 Wyeth Llc Procedimientos para la purificacion de moleculas de union a antigeno de un unico dominio.
EP2362767B1 (en) 2008-10-29 2017-12-06 Ablynx N.V. Formulations of single domain antigen binding molecules
US8415291B2 (en) 2008-10-31 2013-04-09 Centocor Ortho Biotech Inc. Anti-TNF alpha fibronectin type III domain based scaffold compositions, methods and uses
CN101419224B (zh) * 2008-11-06 2012-08-22 复旦大学附属华山医院 一种同时测定人血浆中霉酚酸酯、霉酚酸及其代谢物的方法
KR20110096553A (ko) * 2008-11-28 2011-08-30 아보트 러보러터리즈 안정한 항체 조성물 및 이의 안정화 방법
MX2011007030A (es) 2008-12-30 2011-07-20 Centocor Ortho Biotech Inc Marcadores sericos que predicen la respuesta clinica a los anticuerpos anti-factor de necrosis tumoral alfa en pacientes con espondilitis anquilosante.
CN101766602B (zh) * 2008-12-30 2012-01-11 中国医学科学院血液病医院（血液学研究所） 取代芳香基腙类化合物在作为肿瘤坏死因子抑制剂药物方面的应用
RU2636046C2 (ru) 2009-01-12 2017-11-17 Сайтомкс Терапьютикс, Инк Композиции модифицированных антител, способы их получения и применения
EP2398494A4 (en) 2009-02-23 2015-10-28 Cytomx Therapeutics Inc Proproteins and their methods of use
US8030026B2 (en) 2009-02-24 2011-10-04 Abbott Laboratories Antibodies to troponin I and methods of use thereof
JP5836807B2 (ja) 2009-03-05 2015-12-24 アッヴィ・インコーポレイテッド Ｉｌ−１７結合タンパク質
US20120135005A1 (en) * 2009-04-16 2012-05-31 Harding Fiona A ANTI-TNF-a ANTIBODIES AND THEIR USES
CN101875694B (zh) * 2009-04-28 2014-04-02 中国医学科学院基础医学研究所 TNFα的抗体及其用途
EP2424594A4 (en) 2009-04-29 2014-12-24 Abbvie Biotechnology Ltd AUTOMATIC INJECTION DEVICE
RU2560701C2 (ru) * 2009-05-04 2015-08-20 Эббви Байотекнолоджи Лтд. Стабильные композиции с высокими концентрациями белков антител человека против tnf-альфа
WO2010132872A1 (en) * 2009-05-15 2010-11-18 Novimmune S.A Combination therapies and methods using anti-cd3 modulating agents and anti-tnf antagonists
TW201109438A (en) * 2009-07-29 2011-03-16 Abbott Lab Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
PT3311828T (pt) 2009-08-14 2021-05-05 Phasebio Pharmaceuticals Inc Péptidos intestinais vasoativos modificados
US20110044981A1 (en) * 2009-08-21 2011-02-24 Spangler Rhyannon Methods and compositions for treatment of pulmonary fibrotic disorders
CN102741288B (zh) 2009-08-29 2015-08-19 Abbvie公司 治疗用dll4结合蛋白
PE20121530A1 (es) 2009-09-01 2012-12-22 Abbvie Inc Inmunoglobulinas con dominio variable dual
AU2010291927A1 (en) * 2009-09-14 2012-04-12 AbbVie Deutschland GmbH & Co. KG Methods for treating psoriasis
US20110071054A1 (en) * 2009-09-24 2011-03-24 Xbiotech, Inc. Panel of monoclonal antibody containing pharmaceutical compositions
CA2772945A1 (en) 2009-09-25 2011-03-31 Xoma Technology Ltd. Screening methods
JP2013507928A (ja) 2009-10-15 2013-03-07 アボット・ラボラトリーズ 二重可変ドメイン免疫グロブリンおよびその使用
MX343328B (es) * 2009-10-26 2016-11-01 Nestec Sa Analisis para la deteccion de farmacos anti-tnf y anticuerpos.
UY32979A (es) * 2009-10-28 2011-02-28 Abbott Lab Inmunoglobulinas con dominio variable dual y usos de las mismas
US20110150861A1 (en) 2009-10-30 2011-06-23 Abbott Laboratories Sorf constructs and multiple gene expression
TW201121568A (en) 2009-10-31 2011-07-01 Abbott Lab Antibodies to receptor for advanced glycation end products (RAGE) and uses thereof
US9244063B2 (en) 2009-11-11 2016-01-26 Gentian As Immunoassay for assessing related analytes of different origin
GB0920944D0 (en) 2009-11-30 2010-01-13 Biotest Ag Agents for treating disease
US8871208B2 (en) * 2009-12-04 2014-10-28 Abbvie Inc. 11-β-hydroxysteroid dehydrogenase type 1 (11β-HSD1) inhibitors and uses thereof
CN102656190A (zh) 2009-12-08 2012-09-05 雅培股份有限两合公司 用于在视网膜神经纤维层变性治疗中使用的针对rgm a蛋白质的单克隆抗体
NZ600069A (en) 2009-12-15 2015-02-27 Abbvie Biotechnology Ltd Improved firing button for automatic injection device
US20110150891A1 (en) * 2009-12-16 2011-06-23 Philip Bosch Methods of Treating Interstitial Cystitis
USRE49251E1 (en) 2010-01-04 2022-10-18 Mapi Pharma Ltd. Depot systems comprising glatiramer or pharmacologically acceptable salt thereof
WO2011092715A2 (en) * 2010-01-27 2011-08-04 Tata Memorial Centre Method for in-vivo binding of chromatin fragments
CA2789168A1 (en) 2010-02-02 2011-08-11 Abbott Biotechnology Ltd. Methods and compositions for predicting responsiveness to treatment with tnf-.alpha. inhibitor
CN102167741B (zh) * 2010-02-25 2014-05-14 上海百迈博制药有限公司 一种全人源抗TNF-α单克隆抗体、其制备方法及用途
AU2011223919B2 (en) 2010-03-02 2015-03-19 Abbvie Inc. Therapeutic DLL4 binding proteins
SG184473A1 (en) 2010-04-07 2012-11-29 Abbvie Inc Tnf-alpha binding proteins
WO2011130377A2 (en) 2010-04-15 2011-10-20 Abbott Laboratories Amyloid-beta binding proteins
EP3466977B1 (en) 2010-04-16 2022-01-05 Biogen MA Inc. Anti-vla-4 antibodies
NZ702172A (en) 2010-04-21 2016-03-31 Abbvie Biotechnology Ltd Wearable automatic injection device for controlled delivery of therapeutic agents
KR101848225B1 (ko) 2010-05-14 2018-04-12 애브비 인코포레이티드 Ｉｌ－１ 결합 단백질
WO2011146727A1 (en) 2010-05-19 2011-11-24 Philip Bosch Methods of treating interstitial cystitis
PT2575884T (pt) 2010-06-03 2018-10-31 Abbvie Biotechnology Ltd Utilizações e composições para o tratamento de hidradenite supurativa (hs)
WO2012006500A2 (en) 2010-07-08 2012-01-12 Abbott Laboratories Monoclonal antibodies against hepatitis c virus core protein
UY33492A (es) 2010-07-09 2012-01-31 Abbott Lab Inmunoglobulinas con dominio variable dual y usos de las mismas
US20120100166A1 (en) 2010-07-15 2012-04-26 Zyngenia, Inc. Ang-2 Binding Complexes and Uses Thereof
WO2012018790A2 (en) 2010-08-03 2012-02-09 Abbott Laboratories Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
CN103298833B (zh) 2010-08-14 2015-12-16 Abbvie公司 β淀粉样蛋白结合蛋白
EP2606067B1 (en) 2010-08-19 2018-02-21 Zoetis Belgium S.A. Anti-ngf antibodies and their use
CN103260639A (zh) 2010-08-26 2013-08-21 Abbvie公司 双重可变结构域免疫球蛋白及其用途
AR083495A1 (es) 2010-10-22 2013-02-27 Esbatech Alcon Biomed Res Unit Anticuerpos estables y solubles
UA113500C2 (xx) 2010-10-29 2017-02-10 Одержані екструзією розплаву тверді дисперсії, що містять індукуючий апоптоз засіб
JP6068352B2 (ja) 2010-10-29 2017-01-25 アッヴィ・インコーポレイテッド アポトーシス誘発剤を含む固体分散体
BR112013010857A2 (pt) * 2010-11-02 2016-09-13 Abbott Laboratoires imonoglubulinas de duplo domínio variável e usos das mesmas
DK2637690T3 (da) 2010-11-11 2017-01-02 Abbvie Biotechnology Ltd Flydende ANTI-TNF-alpha-antistofformuleringer med høj koncentration
SG190399A1 (en) 2010-11-23 2013-06-28 Abbvie Inc Methods of treatment using selective bcl-2 inhibitors
BR112013012740A2 (pt) 2010-11-23 2016-09-13 Abbvie Inc sais e formas cristalinas de um agente que induz apoptose
AR084210A1 (es) * 2010-12-08 2013-05-02 Abbott Lab PROTEINAS DE UNION AL TNF-a
US20120275996A1 (en) 2010-12-21 2012-11-01 Abbott Laboratories IL-1 Binding Proteins
AU2011361720B2 (en) 2010-12-21 2017-04-27 Abbvie Inc. IL-1 -alpha and -beta bispecific dual variable domain immunoglobulins and their use
EP2490024A1 (en) 2010-12-22 2012-08-22 Proteomika, S.L. Method to optimize the treatment of patients with biological drugs
JP6478214B2 (ja) 2011-01-24 2019-03-06 アッヴィ バイオテクノロジー リミテッド オーバーモールド把持面を有する自動注射器
CA2824454C (en) 2011-01-24 2018-10-23 Abbvie Biotechnology Ltd. Removal of needle shields from syringes and automatic injection devices
AU2012210170B2 (en) 2011-01-24 2016-09-29 Elcam Medical Agricultural Cooperative Association Ltd. Injector
RU2455025C1 (ru) * 2011-02-10 2012-07-10 Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Белгородский государственный национальный исследовательский университет" (НИУ "БелГУ") Способ фармакологической коррекции ишемии конечности смесью растворов гомеопатических разведений
JP2014508715A (ja) 2011-03-07 2014-04-10 国立大学法人徳島大学 筋萎縮性側索硬化症の治療方法
US20120233834A1 (en) 2011-03-18 2012-09-20 Abbott Biotechnology Ltd. Systems, devices and methods for assembling automatic injection devices and sub-assemblies thereof
TWI588156B (zh) 2011-03-28 2017-06-21 賽諾菲公司 具有交叉結合區定向之雙重可變區類抗體結合蛋白
MX2013011263A (es) 2011-03-29 2014-03-27 Abbvie Inc Despliegue de cubierta mejorado en dispositivos de inyeccion automaticos.
EP4299093A3 (en) 2011-04-21 2024-03-13 AbbVie Inc. Wearable automatic injection device for controlled administration of therapeutic agents
WO2012149197A2 (en) 2011-04-27 2012-11-01 Abbott Laboratories Methods for controlling the galactosylation profile of recombinantly-expressed proteins
AU2012258637B2 (en) 2011-05-24 2017-07-20 Zyngenia, Inc. Multivalent and monovalent multispecific complexes and their uses
SI3575792T1 (sl) 2011-05-31 2023-04-28 Biogen Ma Inc. Metoda ocenjevanja tveganja progresivne multifokalne levkoencefalopatije
WO2012170524A1 (en) 2011-06-06 2012-12-13 Phasebio Pharmaceuticals, Inc. Use of modified vasoactive intestinal peptides in the treatment of hypertension
CA2841970A1 (en) 2011-07-13 2013-01-17 Abbvie Inc. Methods and compositions for treating asthma using anti-il-13 antibodies
GB201112429D0 (en) * 2011-07-19 2011-08-31 Glaxo Group Ltd Antigen-binding proteins with increased FcRn binding
BR112014002133A2 (pt) * 2011-08-01 2017-02-21 Avaxia Biologics Inc anticorpo policlonal bovino específico para tnf humano
TWI577696B (zh) * 2011-10-20 2017-04-11 Ｅｓｂａ科技 諾華有限責任公司 穩定的多重抗原結合抗體
RU2014120981A (ru) 2011-10-24 2015-12-10 Эббви Инк. Иммунные связывающие агенты против склеростина
IN2014CN03936A (pl) 2011-10-24 2015-09-04 Abbvie Inc
EP2771361A1 (en) 2011-10-24 2014-09-03 AbbVie Inc. Bispecific immunobinders directed against tnf and il-17
US20140017174A1 (en) 2011-11-30 2014-01-16 Raja Atreya Methods and compositions for determining responsiveness to treatment with a tnf-alpha inhibitor
US10118958B2 (en) 2011-12-14 2018-11-06 AbbVie Deutschland GmbH & Co. KG Composition and method for the diagnosis and treatment of iron-related disorders
JP6336397B2 (ja) 2011-12-14 2018-06-06 アッヴィ・ドイチュラント・ゲー・エム・ベー・ハー・ウント・コー・カー・ゲー 鉄関連障害を診断および治療するための組成物および方法
WO2013087912A1 (en) 2011-12-16 2013-06-20 Synthon Biopharmaceuticals B.V. Compounds and methods for treating inflammatory diseases
UY34556A (es) 2011-12-30 2013-07-31 Abbvie Inc Dominio variable dual de inmunoglobulinas y sus usos
BR112014015851A2 (pt) 2011-12-30 2019-09-24 Abbvie Inc proteínas de ligação específicas duplas direcionadas contra il-13 e/ou il-17
JP6271441B2 (ja) 2012-01-27 2018-01-31 アッヴィ・ドイチュラント・ゲー・エム・ベー・ハー・ウント・コー・カー・ゲー 神経突起変性に関連する疾患を診断および治療するための組成物および方法
JP2015509526A (ja) 2012-03-07 2015-03-30 カディラ ヘルスケア リミティド 医薬製剤
US9067990B2 (en) 2013-03-14 2015-06-30 Abbvie, Inc. Protein purification using displacement chromatography
US9181572B2 (en) 2012-04-20 2015-11-10 Abbvie, Inc. Methods to modulate lysine variant distribution
WO2013158279A1 (en) 2012-04-20 2013-10-24 Abbvie Inc. Protein purification methods to reduce acidic species
EP2657334B1 (en) 2012-04-26 2016-07-06 GeneFrontier Corporation Efficient method for displaying protein multimer
US9249182B2 (en) 2012-05-24 2016-02-02 Abbvie, Inc. Purification of antibodies using hydrophobic interaction chromatography
CA2875783C (en) 2012-06-06 2018-12-11 Zoetis Llc Caninized anti-ngf antibodies and methods thereof
EP2859017B1 (en) 2012-06-08 2019-02-20 Sutro Biopharma, Inc. Antibodies comprising site-specific non-natural amino acid residues, methods of their preparation and methods of their use
US9670276B2 (en) 2012-07-12 2017-06-06 Abbvie Inc. IL-1 binding proteins
SG11201501464TA (en) 2012-08-31 2015-03-30 Sutro Biopharma Inc Modified amino acids comprising an azido group
CA2883272A1 (en) 2012-09-02 2014-03-06 Abbvie Inc. Methods to control protein heterogeneity
US9512214B2 (en) 2012-09-02 2016-12-06 Abbvie, Inc. Methods to control protein heterogeneity
HUE049282T2 (hu) 2012-09-07 2020-09-28 Coherus Biosciences Inc Adalimumab stabil vizes formulációi
SI2897978T1 (sl) * 2012-09-19 2017-05-31 Abbvie Biotherapeutics Inc. Postopki za identifikacijo protiteles z zmanjšano imunogenostjo
KR20210111353A (ko) 2012-11-01 2021-09-10 애브비 인코포레이티드 항-ｖｅｇｆ／ｄｌｌ4 이원 가변 도메인 면역글로불린 및 이의 용도
AU2013337644A1 (en) 2012-11-01 2015-05-07 Abbvie Inc. Stable Dual Variable Domain Immunoglobulin protein formulations
TWI745610B (zh) 2012-11-14 2021-11-11 美商再生元醫藥公司 重組細胞表面捕捉蛋白質
US9550986B2 (en) 2012-12-21 2017-01-24 Abbvie Inc. High-throughput antibody humanization
US9856319B2 (en) 2012-12-28 2018-01-02 Abbvie Inc. Monovalent binding proteins
EP2938634A2 (en) 2012-12-28 2015-11-04 AbbVie Inc. Dual specific binding proteins having a receptor sequence
EP2948178A4 (en) 2013-01-25 2016-07-20 Thymon Llc COMPOSITIONS FOR THE SELECTIVE REDUCTION OF CIRCULATING BIOACTIVE SOLUBLE TNF AND METHODS OF TREATING A TNF MEDIATION DISEASE
EP2956480B1 (en) 2013-02-13 2019-09-04 Laboratoire Français du Fractionnement et des Biotechnologies Highly galactosylated anti-tnf-alpha antibodies and uses thereof
EP2830651A4 (en) 2013-03-12 2015-09-02 Abbvie Inc HUMAN ANTIBODIES THAT BIND TNF-ALPHA AND PREPARATION METHODS
US9194873B2 (en) 2013-03-14 2015-11-24 Abbott Laboratories HCV antigen-antibody combination assay and methods and compositions for use therein
WO2014159579A1 (en) * 2013-03-14 2014-10-02 Abbvie Inc. MUTATED ANTI-TNFα ANTIBODIES AND METHODS OF THEIR USE
US20140275082A1 (en) 2013-03-14 2014-09-18 Abbvie Inc. Apoptosis-inducing agents for the treatment of cancer and immune and autoimmune diseases
JP2016512241A (ja) 2013-03-14 2016-04-25 アボット・ラボラトリーズＡｂｂｏｔｔ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ 改良された抗体検出のためのｈｃｖｎｓ３組換え抗原およびこの突然変異体
WO2014158231A1 (en) 2013-03-14 2014-10-02 Abbvie Inc. Low acidic species compositions and methods for producing and using the same
WO2014151878A2 (en) 2013-03-14 2014-09-25 Abbvie Inc. Methods for modulating protein glycosylation profiles of recombinant protein therapeutics using monosaccharides and oligosacharides
US9017687B1 (en) 2013-10-18 2015-04-28 Abbvie, Inc. Low acidic species compositions and methods for producing and using the same using displacement chromatography
AU2014240431A1 (en) 2013-03-14 2015-08-27 Abbvie Inc. Low acidic species compositions and methods for producing the same using displacement chromatography
CN113549148A (zh) 2013-03-14 2021-10-26 雅培制药有限公司 Hcv核心脂质结合结构域单克隆抗体
US9469686B2 (en) 2013-03-15 2016-10-18 Abbott Laboratories Anti-GP73 monoclonal antibodies and methods of obtaining the same
EP2968541A4 (en) 2013-03-15 2017-02-08 Zyngenia, Inc. Multivalent and monovalent multispecific complexes and their uses
AU2014227664A1 (en) 2013-03-15 2015-09-24 Abbvie Inc. Dual specific binding proteins directed against TNFalpha
MX2015013166A (es) 2013-03-15 2015-12-11 Abbvie Inc Proteinas de union especificas duales dirigidas contra il-1 beta y/o il-17.
KR101671955B1 (ko) * 2013-05-22 2016-11-07 메타볼랩(주) 항 ＴＮＦ-α/ＣＸＣＬ10 이중 타겟 항체 및 그의 용도
JP6581572B2 (ja) 2013-06-07 2019-09-25 デューク ユニバーシティ 補体因子ｈ阻害薬
WO2015006555A2 (en) 2013-07-10 2015-01-15 Sutro Biopharma, Inc. Antibodies comprising multiple site-specific non-natural amino acid residues, methods of their preparation and methods of their use
WO2015017683A1 (en) * 2013-07-31 2015-02-05 Malast Mary Antimicrobial compositions and methods of use
JP6546178B2 (ja) 2013-09-13 2019-07-17 ジェネンテック， インコーポレイテッド 細胞株中の宿主細胞タンパク質及び組換えポリペプチド産物を検出及び定量化するための組成物並びに方法
KR102373930B1 (ko) 2013-09-13 2022-03-11 제넨테크, 인크. 정제된 재조합 폴리펩티드를 포함하는 방법 및 조성물
US9598667B2 (en) 2013-10-04 2017-03-21 Abbvie Inc. Use of metal ions for modulation of protein glycosylation profiles of recombinant proteins
CA2926644A1 (en) 2013-10-06 2015-04-09 Abbvie Inc. Dual specific binding proteins directed against immune cell receptors and autoantigens
US9840493B2 (en) 2013-10-11 2017-12-12 Sutro Biopharma, Inc. Modified amino acids comprising tetrazine functional groups, methods of preparation, and methods of their use
WO2015057910A1 (en) 2013-10-16 2015-04-23 Oncobiologics, Inc. Buffer formulations for enhanced antibody stability
US9181337B2 (en) 2013-10-18 2015-11-10 Abbvie, Inc. Modulated lysine variant species compositions and methods for producing and using the same
US8946395B1 (en) 2013-10-18 2015-02-03 Abbvie Inc. Purification of proteins using hydrophobic interaction chromatography
US9085618B2 (en) 2013-10-18 2015-07-21 Abbvie, Inc. Low acidic species compositions and methods for producing and using the same
US20150139988A1 (en) 2013-11-15 2015-05-21 Abbvie, Inc. Glycoengineered binding protein compositions
JP2016540761A (ja) 2013-12-02 2016-12-28 アッヴィ・インコーポレイテッド 変形性関節症を治療するための組成物及び方法
CN103965357B (zh) 2013-12-31 2016-08-17 嘉和生物药业有限公司 一种抗人rankl抗体
EP3110976B1 (en) 2014-02-27 2020-05-13 Biogen MA Inc. Method of assessing risk of pml
EP3116891B1 (en) 2014-03-10 2020-02-12 Richter Gedeon Nyrt. Immunoglobulin purification using pre-cleaning steps
IL295906A (en) 2014-03-21 2022-10-01 Abbvie Inc Antibodies against egfr and drug antibody conjugates
AR099625A1 (es) 2014-03-21 2016-08-03 Lilly Co Eli Anticuerpos de il-21
WO2015151115A1 (en) * 2014-04-02 2015-10-08 Intas Pharmaceuticals Limited Liquid pharmaceutical composition of adalimumab
CA2947982C (en) 2014-05-08 2022-11-29 Phasebio Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for treating cystic fibrosis
ES2607489T3 (es) 2014-05-23 2017-03-31 Ares Trading S.A. Composición farmacéutica líquida
HUE029849T2 (en) 2014-05-23 2017-04-28 Ares Trading Sa Liquid pharmaceutical composition
EP2946766B1 (en) 2014-05-23 2016-03-02 Ares Trading S.A. Liquid pharmaceutical composition
FR3022462B1 (fr) * 2014-06-18 2018-04-27 Laboratoire Francais Du Fractionnement Et Des Biotechnologies Composition orale d'anticorps anti-tnfalpha
US20170183376A1 (en) 2014-06-24 2017-06-29 Insight Biopharmaceuticals Ltd. Methods of purifying antibodies
US10183994B2 (en) * 2014-06-30 2019-01-22 Merck Patent Gmbh Anti-TNFα antibodies with pH-dependent antigen binding for improved target clearence
WO2016004197A1 (en) 2014-07-03 2016-01-07 Abbvie Inc. Methods for modulating protein glycosylation profiles of recombinant protein therapeutics using cobalt
WO2016007764A1 (en) 2014-07-09 2016-01-14 Abbvie Inc. Methods for modulating the glycosylation profile of recombinant proteins using non-commonly used sugars
EP4379725A2 (en) 2014-07-11 2024-06-05 Iogenetics, LLC. Immune recognition motifs
TWI711629B (zh) * 2014-09-03 2020-12-01 德商包林格因蓋爾漢國際股份有限公司 靶向IL-23A與TNF-α之化合物及其用途
US10435464B1 (en) 2014-09-05 2019-10-08 Coherus Biosciences, Inc. Methods for making recombinant proteins
HUP1400510A1 (hu) 2014-10-28 2016-05-30 Richter Gedeon Nyrt Gyógyászati TNFalfa ellenes antitest készítmény
WO2016094881A2 (en) 2014-12-11 2016-06-16 Abbvie Inc. Lrp-8 binding proteins
EP3237000A1 (en) 2014-12-23 2017-11-01 Pfizer Inc Stable aqueous antibody formulation for anti tnf alpha antibodies
EP3085709B1 (en) 2014-12-28 2019-08-21 Genor Biopharma Co., Ltd Humanized anti-human rankl antibody, pharmaceutical composition and use thereof
WO2016118707A1 (en) 2015-01-21 2016-07-28 Oncobiologics, Inc. Modulation of charge variants in a monoclonal antibody composition
EP3053572A1 (en) 2015-02-06 2016-08-10 Ares Trading S.A. Liquid pharmaceutical composition
CN114652817A (zh) 2015-02-09 2022-06-24 费斯生物制药公司 用于治疗肌肉疾病和病症的方法和组合物
CN105777905B (zh) * 2015-03-24 2019-06-25 广东东阳光药业有限公司 一种全人源抗TNF-α单克隆抗体及其应用
EP3078675A1 (en) 2015-04-10 2016-10-12 Ares Trading S.A. Induction dosing regimen for the treatment of tnf alpha mediated disorders
WO2016179469A1 (en) * 2015-05-07 2016-11-10 Abbvie Inc. Methods and compositions for diagnosing and treating inflammatory bowel disease
KR102661078B1 (ko) 2015-05-29 2024-05-23 애브비 인코포레이티드 항-ｃｄ40 항체 및 그의 용도
TW201710286A (zh) 2015-06-15 2017-03-16 艾伯維有限公司 抗ｖｅｇｆ、ｐｄｇｆ及／或其受體之結合蛋白
HU231463B1 (hu) 2015-08-04 2024-01-28 Richter Gedeon Nyrt. Módszer rekombináns proteinek galaktóz tartalmának növelésére
US11583584B1 (en) 2015-10-28 2023-02-21 Coherus Biosciences, Inc. Stable protein compositions and methods of their use
US11229702B1 (en) 2015-10-28 2022-01-25 Coherus Biosciences, Inc. High concentration formulations of adalimumab
GB201522394D0 (en) 2015-12-18 2016-02-03 Ucb Biopharma Sprl Antibodies
WO2017136433A1 (en) 2016-02-03 2017-08-10 Oncobiologics, Inc. Buffer formulations for enhanced antibody stability
US10465003B2 (en) 2016-02-05 2019-11-05 Janssen Biotech, Inc. Anti-TNF antibodies, compositions, methods and use for the treatment or prevention of type 1 diabetes
SG11201808041UA (en) * 2016-03-17 2018-10-30 Numab Innovation Ag ANTI-TNFa-ANTIBODIES AND FUNCTIONAL FRAGMENTS THEREOF
RS61374B1 (sr) * 2016-03-17 2021-02-26 Tillotts Pharma Ag Anti-tnf alfa-antitela i njihovi funkcionalni fragmenti
JP2019513737A (ja) 2016-04-08 2019-05-30 ギリアード サイエンシーズ， インコーポレイテッド がん、炎症性疾患および自己免疫疾患を処置するための組成物および方法
US11071782B2 (en) 2016-04-20 2021-07-27 Coherus Biosciences, Inc. Method of filling a container with no headspace
LT3448391T (lt) 2016-04-27 2024-06-25 AbbVie Manufacturing Management Unlimited Company Ligų, kurių atveju il-13 aktyvumas yra žalingas, gydymo būdas, panaudojant anti-il-13 antikūnus
KR20220119529A (ko) 2016-06-02 2022-08-29 애브비 인코포레이티드 글루코코르티코이드 수용체 작용제 및 이의 면역접합체
TWI762487B (zh) 2016-06-08 2022-05-01 美商艾伯維有限公司 抗-b7-h3抗體及抗體藥物結合物
US20190153108A1 (en) 2016-06-08 2019-05-23 Abbvie Inc. Anti-egfr antibody drug conjugates
JP2019521114A (ja) 2016-06-08 2019-07-25 アッヴィ・インコーポレイテッド 抗ｅｇｆｒ抗体薬物コンジュゲート
CA3027033A1 (en) 2016-06-08 2017-12-14 Abbvie Inc. Anti-cd98 antibodies and antibody drug conjugates
CA3027044A1 (en) 2016-06-08 2017-12-14 Abbvie Inc. Anti-b7-h3 antibodies and antibody drug conjugates
CN109641962A (zh) 2016-06-08 2019-04-16 艾伯维公司 抗b7-h3抗体和抗体药物偶联物
WO2017218698A1 (en) 2016-06-15 2017-12-21 Sutro Biopharma, Inc. Antibodies with engineered ch2 domains, compositions thereof and methods of using the same
WO2018018613A1 (zh) 2016-07-29 2018-02-01 广东东阳光药业有限公司 一种提高抗体纯度的细胞培养基和培养方法
US10751324B2 (en) 2016-09-02 2020-08-25 The University Of Chicago Treatment of TNF- alpha cytotoxicity
EP3512875A2 (en) * 2016-09-15 2019-07-24 Quadrucept Bio Limited Multimers, tetramers&octamers
EP3519825A1 (en) 2016-10-03 2019-08-07 Abbott Laboratories Improved methods of assessing gfap status in patient samples
WO2018075408A1 (en) 2016-10-17 2018-04-26 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Methods of treating acute myeloid leukemia (aml) with combinations of anti-cd200 antibodies, cytarabine, and daunorubicin
MX2019004580A (es) 2016-10-21 2019-08-12 Amgen Inc Formulaciones farmaceuticas y metodos para prepararlas.
WO2018102594A1 (en) 2016-12-01 2018-06-07 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Methods of treating solid tumors with anti-cd200 antibodies
US20180193003A1 (en) 2016-12-07 2018-07-12 Progenity Inc. Gastrointestinal tract detection methods, devices and systems
EP3554342A1 (en) 2016-12-14 2019-10-23 Progenity, Inc. Treatment of a disease of the gastrointestinal tract with a tnf inhibitor
WO2018112334A1 (en) * 2016-12-16 2018-06-21 Bluefin Biomedicine, Inc. Anti-cub domain-containing protein 1 (cdcp1) antibodies, antibody drug conjugates, and methods of use thereof
JOP20190162A1 (ar) 2016-12-30 2019-06-27 Biocad Joint Stock Co تركيبة صيدلانية مائية من جسم مضاد لـ tnf? أحادي النسيلة معاود الارتباط الجيني
CA3049857A1 (en) 2017-01-11 2018-07-19 Celltrion Inc. Stable liquid formulation
TWI787230B (zh) 2017-01-20 2022-12-21 法商賽諾菲公司 抗ＴＧＦ-β抗體及其用途
AR110755A1 (es) 2017-01-20 2019-05-02 Genzyme Corp Anticuerpos dirigidos a hueso
MX2019008989A (es) 2017-01-30 2019-10-09 Janssen Biotech Inc Anticuerpos anti-tnf, composiciones y metodos para el tratamiento de la artritis psoriasica activa.
AU2017398101A1 (en) 2017-02-07 2019-08-01 Janssen Biotech, Inc. Anti-TNF antibodies, compositions, and methods for the treatment of active Ankylosing Spondylitis
US11608357B2 (en) 2018-08-28 2023-03-21 Arecor Limited Stabilized antibody protein solutions
EP3372241A1 (en) 2017-03-06 2018-09-12 Ares Trading S.A. Liquid pharmaceutical composition
EP3372242A1 (en) 2017-03-06 2018-09-12 Ares Trading S.A. Liquid pharmaceutical composition
WO2018175942A1 (en) 2017-03-23 2018-09-27 Abbott Laboratories Methods for aiding in the diagnosis and determination of the extent of traumatic brain injury in a human subject using the early biomarker ubiquitin carboxy-terminal hydrolase l1
WO2018178973A1 (en) 2017-03-26 2018-10-04 Mapi Pharma Ltd. Glatiramer depot systems for treating progressive forms of multiple sclerosis
WO2018184692A1 (en) 2017-04-07 2018-10-11 Ares Trading S.A. Liquid pharmaceutical composition
CN110546513A (zh) 2017-04-15 2019-12-06 雅培实验室 使用早期生物标记物帮助超急性诊断和确定人类受试者中的创伤性脑损伤的方法
US10865238B1 (en) 2017-05-05 2020-12-15 Duke University Complement factor H antibodies
CN110651190A (zh) 2017-05-25 2020-01-03 雅培实验室 用早期生物标记物帮助确定是否对已遭受或可能已遭受头部损伤的人受试者执行成像的方法
CN110720041B (zh) 2017-05-30 2024-04-26 雅培实验室 用心肌肌钙蛋白i和早期生物标记物帮助诊断和评价人受试者中轻度创伤性脑损伤的方法
EP3649474A1 (en) 2017-07-03 2020-05-13 Abbott Laboratories Improved methods for measuring ubiquitin carboxy-terminal hydrolase l1 levels in blood
WO2019067499A1 (en) 2017-09-27 2019-04-04 Alexion Pharmaceuticals, Inc. BIOMARKER SIGNATURE FOR PREDICTING A TUMOR RESPONSE TO ANTI-CD200 THERAPY
ES2877659T3 (es) 2017-12-01 2021-11-17 Abbvie Inc Agonista del receptor de glucocorticoides y sus inmunoconjugados
CN109879962B (zh) * 2017-12-06 2022-10-11 北京科立思维生物科技有限公司 抗tnf单链抗体、抗il-6单链抗体及其融合蛋白及其应用
JP7379165B2 (ja) 2017-12-09 2023-11-14 アボット・ラボラトリーズ Ｇｆａｐとｕｃｈ－ｌ１との組合せを使用する、ヒト対象における外傷性脳損傷を診断及び査定する一助となるための方法
JP7344801B2 (ja) 2017-12-09 2023-09-14 アボット・ラボラトリーズ グリア原線維性酸性タンパク質（ｇｆａｐ）及び／又はユビキチンカルボキシ末端ヒドロラーゼｌ１（ｕｃｈ－ｌ１）を使用する、整形外科損傷を負っており、軽度外傷性脳損傷（ｔｂｉ）などの頭部への損傷を負ったか又は負った可能性がある対象についての診断及び査定の一助となるための方法
WO2019126536A1 (en) 2017-12-20 2019-06-27 Alexion Pharmaceuticals Inc. Humanized anti-cd200 antibodies and uses thereof
WO2019126133A1 (en) 2017-12-20 2019-06-27 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Liquid formulations of anti-cd200 antibodies
CA3093772C (en) 2018-03-12 2024-04-16 Zoetis Services Llc Anti-ngf antibodies and methods thereof
US11913951B2 (en) 2018-03-26 2024-02-27 Alexion Pharmaceuticals, Inc. High throughput method for measuring the protease activity of complement C3 convertase
US20210238289A1 (en) 2018-06-04 2021-08-05 Biogen Ma Inc. Anti-vla-4 antibodies having reduced effector function
EP3810095A1 (en) 2018-06-20 2021-04-28 Progenity, Inc. Treatment of a disease of the gastrointestinal tract with a tnf inhibitor
JP2021529780A (ja) 2018-07-03 2021-11-04 ノバルティス アーゲー Ｎｌｒｐ３アンタゴニストを使用するｔｎｆ阻害剤に対して抵抗性の対象のための治療の方法又は治療を選択する方法
CN113329769A (zh) 2018-10-11 2021-08-31 斯克里普斯研究学院 具有反应性精氨酸的抗体化合物及相关的抗体药物缀合物
WO2020086728A1 (en) 2018-10-24 2020-04-30 Novartis Inflammasome Research, Inc. Compounds and compositions for treating conditions associated with nlrp activity
EP3878870A4 (en) * 2018-11-05 2022-08-03 Beijing Hanmi Pharmaceutical Co., Ltd. ANTI-TNFA/ANTI-IL-17A NATURAL ANTIBODY STRUCTURE-LIKE HETERODIMER FORM OF A BISPECIFIC ANTIBODY AND METHODS FOR ITS PRODUCTION
HUP1800376A2 (hu) 2018-11-07 2020-05-28 Richter Gedeon Nyrt Sejttenyészetben elõállított rekombináns glikoprotein glikozilációs-mintázatának megváltoztatására szolgáló módszer
JP2022506891A (ja) 2018-11-13 2022-01-17 ノバルティス アーゲー Ｎｌｒｐ活性に関連する状態を処置するための化合物及び組成物
CN113166081A (zh) 2018-11-13 2021-07-23 诺华股份有限公司 用于治疗与nlrp活性相关的病症的化合物和组合物
US20220249814A1 (en) 2018-11-19 2022-08-11 Progenity, Inc. Methods and devices for treating a disease with biotherapeutics
US20220098310A1 (en) 2018-12-06 2022-03-31 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Anti-alk2 antibodies and uses thereof
CA3124730A1 (en) 2018-12-25 2020-07-02 Institute Of Basic Medical Sciences Chinese Academy Of Medical Sciences Small rna medicament for prevention and treatment of inflammation-related diseases and combinations thereof
JP2022533287A (ja) 2019-01-22 2022-07-22 ノバルティス アーゲー Ｎｌｒｐ活性に関連する状態を処置するための化合物及び組成物
HU231498B1 (hu) 2019-04-04 2024-05-28 Richter Gedeon Nyrt Immunglobulinok affinitás kromatográfiájának fejlesztése kötést megelőző flokkulálás alkalmazásával
KR102323342B1 (ko) * 2019-04-26 2021-11-08 주식회사 와이바이오로직스 IL-17A 및 TNF-α에 특이적으로 결합하는 이중표적 항체
BR112021023295A2 (pt) 2019-05-23 2022-02-08 Janssen Biotech Inc Método de tratamento de doença inflamatória intestinal com uma terapia de combinação de anticorpos para il-23 e tnf-alfa
WO2021002887A1 (en) 2019-07-02 2021-01-07 Novartis Inflammasome Research, Inc. Gut-targeted nlrp3 antagonists and their use in therapy
CA3143478A1 (en) * 2019-07-09 2021-01-14 Tomer Hertz Antibodies with reduced immunogenicity
EP3870261B1 (en) 2019-12-13 2024-01-31 Biora Therapeutics, Inc. Ingestible device for delivery of therapeutic agent to the gastrointestinal tract
FR3104582A1 (fr) 2019-12-17 2021-06-18 Commissariat A L'energie Atomique Et Aux Energies Alternatives Variants de l’adalimumab au potentiel immunogène réduit
EP4100435A1 (en) 2020-02-05 2022-12-14 Larimar Therapeutics, Inc. Tat peptide binding proteins and uses thereof
WO2021178597A1 (en) 2020-03-03 2021-09-10 Sutro Biopharma, Inc. Antibodies comprising site-specific glutamine tags, methods of their preparation and methods of their use
CA3175523A1 (en) 2020-04-13 2021-10-21 Antti Virtanen Methods, complexes and kits for detecting or determining an amount of a .beta.-coronavirus antibody in a sample
KR20230042301A (ko) 2020-08-04 2023-03-28 애벗트 라보라토리이즈 샘플에서 sars-cov-2 단백질을 검출하기 위한 개선된 방법 및 키트
CN111944052B (zh) * 2020-08-26 2022-02-11 中国药科大学 抗TNF-α/PD-1双特异性抗体及其应用
CN112010970B (zh) * 2020-10-30 2021-01-12 迈威(上海)生物科技股份有限公司 一种去除重组表达抗体聚体和降解产物的方法
US20220170948A1 (en) 2020-12-01 2022-06-02 Abbott Laboratories Use of one or more biomarkers to determine traumatic brain injury (tbi) in a human subject having received a head computerized tomography scan that is negative for a tbi
WO2023102384A1 (en) 2021-11-30 2023-06-08 Abbott Laboratories Use of one or more biomarkers to determine traumatic brain injury (tbi) in a subject having received a head computerized tomography scan that is negative for a tbi
US11672929B2 (en) 2020-12-02 2023-06-13 Breathe Restore, Inc. Product delivery devices and methods
JP2023554200A (ja) 2020-12-09 2023-12-26 エイチケー イノ．エヌ コーポレーション 抗ＯＸ４０Ｌ抗体、抗ＯＸ４０Ｌ及び抗ＴＮＦαの二重特異性抗体、並びにこれらの用途
AU2021401815A1 (en) * 2020-12-18 2023-07-06 Elanco Us Inc. Tnf alpha and ngf antibodies for veterinary use
WO2022147147A1 (en) 2020-12-30 2022-07-07 Abbott Laboratories Methods for determining sars-cov-2 antigen and anti-sars-cov-2 antibody in a sample
UY39610A (es) 2021-01-20 2022-08-31 Abbvie Inc Conjugados anticuerpo-fármaco anti-egfr
CA3207134A1 (en) * 2021-02-19 2022-08-25 Jeffrey A. Ledbetter Dnase fusion polypeptides and related compositions and methods
CA3216585A1 (en) 2021-04-27 2022-11-03 Nathaniel SILVER Non-viral dna vectors expressing therapeutic antibodies and uses thereof
WO2022232286A1 (en) 2021-04-27 2022-11-03 Generation Bio Co. Non-viral dna vectors expressing anti-coronavirus antibodies and uses thereof
US20220381796A1 (en) 2021-05-18 2022-12-01 Abbott Laboratories Methods of evaluating brain injury in a pediatric subject
US20240118279A1 (en) 2021-06-14 2024-04-11 Abbott Laboratories Methods of diagnosing or aiding in diagnosis of brain injury caused by acoustic energy, electromagnetic energy, an over pressurization wave, and/or blast wind
US20240210419A1 (en) * 2021-06-22 2024-06-27 University Of Virginia Patent Foundation Compositions and methods for detecting and regulating fibronectin-integrin interactions and signaling
CN117500816A (zh) 2021-08-26 2024-02-02 映恩生物制药（苏州）有限公司 一种甾体化合物及其缀合物
AU2022339759A1 (en) 2021-08-31 2024-03-07 Abbott Laboratories Methods and systems of diagnosing brain injury
AU2022354059A1 (en) 2021-09-30 2024-03-28 Abbott Laboratories Methods and systems of diagnosing brain injury
CA3240822A1 (en) 2021-12-17 2023-06-22 Tony Lee Systems and methods for determining uch-l1, gfap, and other biomarkers in blood samples
WO2023129942A1 (en) 2021-12-28 2023-07-06 Abbott Laboratories Use of biomarkers to determine sub-acute traumatic brain injury (tbi) in a subject having received a head computerized tomography (ct) scan that is negative for a tbi or no head ct scan
WO2023150652A1 (en) 2022-02-04 2023-08-10 Abbott Laboratories Lateral flow methods, assays, and devices for detecting the presence or measuring the amount of ubiquitin carboxy-terminal hydrolase l1 and/or glial fibrillary acidic protein in a sample
WO2023177655A1 (en) 2022-03-14 2023-09-21 Generation Bio Co. Heterologous prime boost vaccine compositions and methods of use
WO2024006681A1 (en) * 2022-06-28 2024-01-04 Adafre Biosciences, Llc Anti-tnf-αlpha antibodies and compositions
WO2024006876A1 (en) 2022-06-29 2024-01-04 Abbott Laboratories Magnetic point-of-care systems and assays for determining gfap in biological samples
CN116903738A (zh) * 2022-08-02 2023-10-20 北京绿竹生物技术股份有限公司 一种低甘露糖型抗人肿瘤坏死因子-α单抗及其用途
WO2024054934A1 (en) 2022-09-07 2024-03-14 Mdx Management Llc Shp-1 inhibitors for treating cancer
WO2024059708A1 (en) 2022-09-15 2024-03-21 Abbott Laboratories Biomarkers and methods for differentiating between mild and supermild traumatic brain injury
WO2024097804A1 (en) 2022-11-02 2024-05-10 Mdx Management Llc Combination of a tyrosine kinase inhibitor and a pro-inflammatory agent for treating cancer

Family Cites Families (114)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4680276A (en) * 1977-05-25 1987-07-14 Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale Metal polypeptides
EP0609722A1 (en) 1981-09-08 1994-08-10 The Rockefeller University An in vitro method for detecting the presence of invasive stimuli in mammals
US5672347A (en) 1984-07-05 1997-09-30 Genentech, Inc. Tumor necrosis factor antagonists and their use
IL73883A (en) 1984-12-20 1990-12-23 Yeda Res & Dev Monoclonal antibodies against tnf-alpha,hybridomas producing them and method for the purification of tnf-alpha
US4661016A (en) * 1985-04-11 1987-04-28 Mobil Oil Corporation Subsea flowline connector
ATE114673T1 (de) 1985-08-16 1994-12-15 Univ Rockefeller Modulator der anabolischen aktivität und seine verwendungen.
DE3631229A1 (de) 1986-09-13 1988-03-24 Basf Ag Monoklonale antikoerper gegen humanen tumornekrosefaktor (tnf) und deren verwendung
GB8630273D0 (en) * 1986-12-18 1987-01-28 Til Medical Ltd Pharmaceutical delivery systems
AU626572B2 (en) 1988-07-18 1992-08-06 Chiron Corporation Monoclonal antibodies reactive with cachectin
GB8823869D0 (en) * 1988-10-12 1988-11-16 Medical Res Council Production of antibodies
US4940723A (en) * 1988-10-20 1990-07-10 University Of North Carolina, Chapel Hill Use of bis-(5-amidino-2-benzimidazolyl) methane (BABIM) to treat arthritis
EP0366043B1 (en) 1988-10-24 1994-03-30 Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd. Monoclonal antibody
US5530101A (en) * 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
IE63847B1 (en) * 1989-05-05 1995-06-14 Res Dev Foundation A novel antibody delivery system for biological response modifiers
DE3918082A1 (de) * 1989-06-02 1991-01-24 Max Planck Gesellschaft Mittel gegen autoimmunerkrankungen
EP0486526B2 (en) 1989-08-07 2001-03-07 Peptech Limited Tumour necrosis factor binding ligands
US5959087A (en) * 1989-08-07 1999-09-28 Peptide Technology, Ltd. Tumour necrosis factor binding ligands
US6451983B2 (en) 1989-08-07 2002-09-17 Peptech Limited Tumor necrosis factor antibodies
GB8928874D0 (en) 1989-12-21 1990-02-28 Celltech Ltd Humanised antibodies
US5859205A (en) 1989-12-21 1999-01-12 Celltech Limited Humanised antibodies
US6075181A (en) 1990-01-12 2000-06-13 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US6673986B1 (en) * 1990-01-12 2004-01-06 Abgenix, Inc. Generation of xenogeneic antibodies
US6150584A (en) * 1990-01-12 2000-11-21 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
GB9014932D0 (en) 1990-07-05 1990-08-22 Celltech Ltd Recombinant dna product and method
US6255458B1 (en) * 1990-08-29 2001-07-03 Genpharm International High affinity human antibodies and human antibodies against digoxin
US5633425A (en) * 1990-08-29 1997-05-27 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US7084260B1 (en) * 1996-10-10 2006-08-01 Genpharm International, Inc. High affinity human antibodies and human antibodies against human antigens
DE69133476T2 (de) * 1990-08-29 2006-01-05 GenPharm International, Inc., Palo Alto Transgene Mäuse fähig zur Produktion heterologer Antikörper
US5545806A (en) * 1990-08-29 1996-08-13 Genpharm International, Inc. Ransgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5789650A (en) * 1990-08-29 1998-08-04 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5770429A (en) * 1990-08-29 1998-06-23 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5661016A (en) 1990-08-29 1997-08-26 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes
US5625126A (en) * 1990-08-29 1997-04-29 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US6300129B1 (en) * 1990-08-29 2001-10-09 Genpharm International Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
GB9022547D0 (en) 1990-10-17 1990-11-28 Wellcome Found Purified immunoglobulin
GB2279077B (en) * 1990-12-21 1995-06-14 Celltech Ltd Therapeutic compositions comprising recombinant antibodies specific for the TNFalpha
GB9109645D0 (en) 1991-05-03 1991-06-26 Celltech Ltd Recombinant antibodies
US5994510A (en) 1990-12-21 1999-11-30 Celltech Therapeutics Limited Recombinant antibodies specific for TNFα
GB9028123D0 (en) 1990-12-28 1991-02-13 Erba Carlo Spa Monoclonal antibodies against human tumor necrosis factor alpha
US7192584B2 (en) * 1991-03-18 2007-03-20 Centocor, Inc. Methods of treating psoriasis with anti-TNF antibodies
US20060246073A1 (en) 1991-03-18 2006-11-02 Knight David M Anti-TNF antibodies and peptides of human tumor necrosis factor
US5656272A (en) * 1991-03-18 1997-08-12 New York University Medical Center Methods of treating TNF-α-mediated Crohn's disease using chimeric anti-TNF antibodies
US20040120952A1 (en) 2000-08-07 2004-06-24 Centocor, Inc Anti-TNF antibodies and peptides of human tumor necrosis factor
US20070298040A1 (en) 1991-03-18 2007-12-27 Centocor, Inc. Methods of treating seronegative arthropathy with anti-TNF antibodies
CA2736076A1 (en) * 1991-03-18 1992-09-19 New York University Monoclonal and chimeric antibodies specific for human tumor necrosis factor
US6277969B1 (en) 1991-03-18 2001-08-21 New York University Anti-TNF antibodies and peptides of human tumor necrosis factor
US5698195A (en) * 1991-03-18 1997-12-16 New York University Medical Center Methods of treating rheumatoid arthritis using chimeric anti-TNF antibodies
US5328985A (en) * 1991-07-12 1994-07-12 The Regents Of The University Of California Recombinant streptavidin-protein chimeras useful for conjugation of molecules in the immune system
CA2119930C (en) 1991-09-23 2002-10-01 Hendricus R. J. M. Hoogenboom Production of chimeric antibodies - a combinatorial approach
US5869619A (en) * 1991-12-13 1999-02-09 Xoma Corporation Modified antibody variable domains
US6270766B1 (en) 1992-10-08 2001-08-07 The Kennedy Institute Of Rheumatology Anti-TNF antibodies and methotrexate in the treatment of arthritis and crohn's disease
EP0663836B1 (en) * 1992-10-08 1997-07-09 The Kennedy Institute Of Rheumatology Treatment of autoimmune and inflammatory disorders
DE122009000074I1 (de) 1993-03-05 2011-12-01 Bayer Healthcare Ag Humane monoklonale anti-TNF alpha Antikorper.
JPH08510642A (ja) 1993-05-12 1996-11-12 ゾマ コーポレイション ゲロニンおよび抗体から成る免疫毒素
RU2139092C1 (ru) 1993-06-03 1999-10-10 Терапьютик Антибодиз Инк. Фрагменты антител в терапии
US6261558B1 (en) 1993-10-19 2001-07-17 The Scripps Research Institute Synthetic human neutralizing monoclonal antibodies to human immunodeficiency virus
EP0659766A1 (en) 1993-11-23 1995-06-28 Schering-Plough Human monoclonal antibodies against human cytokines and methods of making and using such antibodies
JPH09509835A (ja) 1994-03-04 1997-10-07 メルク エンド カンパニー インコーポレーテッド アラニン走査型突然変異誘発によるｉｎ ｖｉｔｒｏ抗体アフィニティー成熟
JPH07289288A (ja) * 1994-04-27 1995-11-07 L T T Kenkyusho:Kk 抗リウマチ薬の効果評価方法
NZ288997A (en) 1994-06-24 1999-01-28 Immunex Corp Controlled release pharmaceutical formulation comprising polypeptide encapsulated in alginate
US5561053A (en) 1994-08-05 1996-10-01 Genentech, Inc. Method for selecting high-expressing host cells
GB9416721D0 (en) * 1994-08-18 1994-10-12 Short Brothers Plc A bias yarn assembly forming device
US6113898A (en) 1995-06-07 2000-09-05 Idec Pharmaceuticals Corporation Human B7.1-specific primatized antibodies and transfectomas expressing said antibodies
US6090382A (en) 1996-02-09 2000-07-18 Basf Aktiengesellschaft Human antibodies that bind human TNFα
DE122004000004I1 (de) * 1996-02-09 2004-08-12 Abott Biotechnology Ltd Humane Antikörper welche an Humanen TNFalpha binden.
AU3633000A (en) * 1999-03-26 2000-10-16 Human Genome Sciences, Inc. Neutrokine-alpha binding proteins and methods based thereon
US20050249735A1 (en) 2000-08-07 2005-11-10 Centocor, Inc. Methods of treating ankylosing spondylitis using anti-TNF antibodies and peptides of human tumor necrosis factor
UA81743C2 (uk) 2000-08-07 2008-02-11 Центокор, Инк. МОНОКЛОНАЛЬНЕ АНТИТІЛО ЛЮДИНИ, ЩО СПЕЦИФІЧНО ЗВ'ЯЗУЄТЬСЯ З ФАКТОРОМ НЕКРОЗУ ПУХЛИН АЛЬФА (ФНПα), ФАРМАЦЕВТИЧНА КОМПОЗИЦІЯ, ЩО ЙОГО МІСТИТЬ, ТА СПОСІБ ЛІКУВАННЯ РЕВМАТОЇДНОГО АРТРИТУ
US20060018907A1 (en) 2000-08-07 2006-01-26 Centocor, Inc. Anti-TNF antibodies and peptides of human tumor necrosis factor
US20030012786A1 (en) 2001-05-25 2003-01-16 Teoh Leah S. Use of anti-TNF antibodies as drugs in treating septic disorders of anemic patients
CA2385745C (en) * 2001-06-08 2015-02-17 Abbott Laboratories (Bermuda) Ltd. Methods of administering anti-tnf.alpha. antibodies
US20030161828A1 (en) 2002-02-19 2003-08-28 Abbott Gmbh & Co. Kg Use of TNF antagonists as drugs for the treatment of patients with an inflammatory reaction and without suffering from total organ failure
US20040009172A1 (en) 2002-04-26 2004-01-15 Steven Fischkoff Use of anti-TNFalpha antibodies and another drug
US20030206898A1 (en) 2002-04-26 2003-11-06 Steven Fischkoff Use of anti-TNFalpha antibodies and another drug
US20090280065A1 (en) * 2006-04-10 2009-11-12 Willian Mary K Uses and Compositions for Treatment of Psoriasis
CN102764436A (zh) 2002-07-19 2012-11-07 艾博特生物技术有限公司 TNF α相关疾病的治疗
US20040033228A1 (en) 2002-08-16 2004-02-19 Hans-Juergen Krause Formulation of human antibodies for treating TNF-alpha associated disorders
US20040054414A1 (en) * 2002-09-18 2004-03-18 Trieu Hai H. Collagen-based materials and methods for augmenting intervertebral discs
MY150740A (en) 2002-10-24 2014-02-28 Abbvie Biotechnology Ltd Low dose methods for treating disorders in which tnf? activity is detrimental
TWI556829B (zh) 2004-04-09 2016-11-11 艾伯維生物技術有限責任公司 用於治療ＴＮＦα相關失調症之多重可變劑量療法
WO2006041970A2 (en) 2004-10-08 2006-04-20 Abbott Biotechnology Ltd. Treatment of respiratory syncytial virus (rsv) infection
TWI399384B (zh) * 2005-05-16 2013-06-21 Abbott Biotech Ltd ＴＮＦα抑制劑於治療侵蝕型多發性關節炎之用途
US20070041905A1 (en) 2005-08-19 2007-02-22 Hoffman Rebecca S Method of treating depression using a TNF-alpha antibody
CN101663048A (zh) * 2005-11-01 2010-03-03 艾博特生物技术有限公司 使用生物标志物诊断强直性脊柱炎的方法和组合物
KR20150064254A (ko) * 2006-04-05 2015-06-10 애브비 바이오테크놀로지 리미티드 항체 정제
US20080118496A1 (en) 2006-04-10 2008-05-22 Medich John R Uses and compositions for treatment of juvenile rheumatoid arthritis
US9605064B2 (en) * 2006-04-10 2017-03-28 Abbvie Biotechnology Ltd Methods and compositions for treatment of skin disorders
EP2666472A3 (en) * 2006-04-10 2014-04-02 Abbott Biotechnology Ltd Uses and compositions for treatment of psoriatic arthritis
US20090317399A1 (en) * 2006-04-10 2009-12-24 Pollack Paul F Uses and compositions for treatment of CROHN'S disease
EP2010214A4 (en) * 2006-04-10 2010-06-16 Abbott Biotech Ltd USES AND COMPOSITIONS FOR THE TREATMENT OF RHEUMATOID ARTHRITIS
EP2012586A4 (en) * 2006-04-10 2010-08-18 Abbott Biotech Ltd USES AND COMPOSITIONS FOR THE TREATMENT OF ANKYLOSANTE SPONDYLARTHRITIS
US20080131374A1 (en) 2006-04-19 2008-06-05 Medich John R Uses and compositions for treatment of rheumatoid arthritis
US20100021451A1 (en) * 2006-06-08 2010-01-28 Wong Robert L Uses and compositions for treatment of ankylosing spondylitis
US20080311043A1 (en) 2006-06-08 2008-12-18 Hoffman Rebecca S Uses and compositions for treatment of psoriatic arthritis
TWI542374B (zh) * 2006-06-30 2016-07-21 艾伯維生物技術有限責任公司 自動注射裝置
MX2009002748A (es) 2006-09-13 2009-03-26 Abbott Lab Mejoras de cultivos celulares.
KR20150002896A (ko) * 2006-10-27 2015-01-07 애브비 바이오테크놀로지 리미티드 결정형 항-ｈＴＮＦ알파 항체
MX2009010361A (es) 2007-03-29 2009-10-16 Abbott Lab Anticuerpos il-12 anti-humanos cristalinos.
EP2679995A1 (en) 2007-05-31 2014-01-01 AbbVie Inc. Biomarkers predictive of the responsiveness to TNF-alfa inhibitors in autoimmune disorders
WO2008150490A2 (en) * 2007-06-01 2008-12-11 Abbott Biotechnology Ltd. Uses and compositions for treatment of psoriasis and crohn's disease
WO2008154543A2 (en) * 2007-06-11 2008-12-18 Abbott Biotechnology Ltd. Methods for treating juvenile idiopathic arthritis
WO2009011782A2 (en) * 2007-07-13 2009-01-22 Abbott Biotechnology Ltd. METHODS AND COMPOSITIONS FOR PULMONARY ADMINISTRATION OF A TNFa INHIBITOR
CN101980722A (zh) * 2007-08-08 2011-02-23 雅培制药有限公司 结晶抗体的组合物和方法
CN101969971A (zh) * 2007-11-30 2011-02-09 雅培制药有限公司 蛋白制剂及其制备方法
WO2009086550A1 (en) * 2008-01-03 2009-07-09 Abbott Laboratories Predicting long-term efficacy of a compound in the treatment of psoriasis
EP2784089A1 (en) * 2008-01-15 2014-10-01 AbbVie Inc. Improved mammalian expression vectors and uses thereof
CA2711984A1 (en) * 2008-01-15 2009-07-23 Abbott Gmbh & Co. Kg Powdered protein compositions and methods of making same
WO2009099545A1 (en) 2008-01-30 2009-08-13 Abbott Laboratories Compositions and methods for crystallizing antibody fragments
CA2717905A1 (en) * 2008-03-24 2009-10-01 Abbott Biotechnology Ltd. Methods and compositions for treating bone loss
EP2424594A4 (en) 2009-04-29 2014-12-24 Abbvie Biotechnology Ltd AUTOMATIC INJECTION DEVICE
RU2560701C2 (ru) * 2009-05-04 2015-08-20 Эббви Байотекнолоджи Лтд. Стабильные композиции с высокими концентрациями белков антител человека против tnf-альфа
CA2789168A1 (en) 2010-02-02 2011-08-11 Abbott Biotechnology Ltd. Methods and compositions for predicting responsiveness to treatment with tnf-.alpha. inhibitor
PT2575884T (pt) 2010-06-03 2018-10-31 Abbvie Biotechnology Ltd Utilizações e composições para o tratamento de hidradenite supurativa (hs)
US9085618B2 (en) * 2013-10-18 2015-07-21 Abbvie, Inc. Low acidic species compositions and methods for producing and using the same

Also Published As

Publication number Publication date
HU230515B1 (hu) 2016-10-28
HUP1500179A2 (en) 1999-09-28
HK1019452A1 (en) 2000-02-11
NL300143I1 (nl) 2004-05-03
RO119831B1 (ro) 2005-04-29
JP2000507810A (ja) 2000-06-27
BG112042A (bg) 2015-10-30
SK106298A3 (en) 1999-03-12
BR9707379A (pt) 1999-04-13
NO20040154L (no) 1998-10-07
NO20026202D0 (no) 2002-12-23
NZ512006A (en) 2005-05-27
NL300143I2 (nl) 2004-07-01
BR9707379B1 (pt) 2009-08-11
JP5422501B2 (ja) 2014-02-19
BG64564B1 (bg) 2005-07-29
CY2463B1 (en) 2005-06-03
UA82823C2 (en) 2008-05-26
DE69721548T2 (de) 2004-04-01
HU0204115D0 (en) 2003-02-28
US20130330357A1 (en) 2013-12-12
RU2012102323A (ru) 2013-07-27
NZ562935A (en) 2009-06-26
CA2243459C (en) 2002-09-17
NO319955B1 (no) 2005-10-03
PT929578E (pt) 2003-09-30
CN103275221B (zh) 2016-08-17
JP5951056B2 (ja) 2016-07-13
JP2015108011A (ja) 2015-06-11
NO20040052L (no) 1998-10-07
SI9720020B (en) 2001-12-31
US20120258114A1 (en) 2012-10-11
BRPI9715219B8 (pt) 2015-07-07
JP2014055150A (ja) 2014-03-27
US6258562B1 (en) 2001-07-10
HK1066860A1 (en) 2005-04-01
ATE239041T1 (de) 2003-05-15
CN103275221A (zh) 2013-09-04
RU2458704C2 (ru) 2012-08-20
HK1214610A1 (zh) 2016-07-29
JP5689902B2 (ja) 2015-03-25
US20100040604A1 (en) 2010-02-18
JP3861118B2 (ja) 2006-12-20
DE122004000003I1 (de) 2004-09-23
MX9806347A (es) 1998-10-31
IL125697A (en) 2005-03-20
MX336813B (es) 2016-02-02
HK1214608A1 (zh) 2016-07-29
NO2004002I2 (no) 2008-02-04
WO1997029131A1 (en) 1997-08-14
HU230048B1 (hu) 2015-06-29
IL206994A0 (en) 2010-12-30
JP2010209119A (ja) 2010-09-24
JP2003177130A (ja) 2003-06-27
IL151641A0 (en) 2003-04-10
CN1504752A (zh) 2004-06-16
BG110703A (en) 2010-10-29
US20130115224A1 (en) 2013-05-09
SK284040B6 (sk) 2004-08-03
RU2270030C2 (ru) 2006-02-20
CZ292465B6 (cs) 2003-09-17
NZ576716A (en) 2011-02-25
CN1215407A (zh) 1999-04-28
CZ247698A3 (cs) 1998-11-11
EP0929578A1 (en) 1999-07-21
RU2003120859A (ru) 2005-01-10
BG107537A (en) 2003-09-30
DE122004000003I2 (de) 2007-03-29
BG66195B1 (bg) 2012-01-31
BG102755A (en) 1999-05-31
UA57726C2 (uk) 2003-07-15
HK1214609A1 (zh) 2016-07-29
JP2007045828A (ja) 2007-02-22
HUP9901874A2 (hu) 1999-09-28
US8206714B2 (en) 2012-06-26
ES2198552T3 (es) 2004-02-01
HU221984B1 (hu) 2003-03-28
US8372400B2 (en) 2013-02-12
DE122004000004I1 (de) 2004-08-12
RU2005113954A (ru) 2006-11-20
US7223394B2 (en) 2007-05-29
HK1214607A1 (zh) 2016-07-29
NO983627L (no) 1998-10-07
HUP9901874A3 (en) 2000-05-29
CN101712720A (zh) 2010-05-26
NO20026202L (no) 1998-10-07
CN102070715A (zh) 2011-05-25
BRPI9707379C8 (pt) 2017-12-12
NO316711B1 (no) 2004-04-13
KR100317188B1 (ko) 2002-02-19
NZ536216A (en) 2006-08-31
CA2243459A1 (en) 1997-08-14
AU722077B2 (en) 2000-07-20
US7541031B2 (en) 2009-06-02
IL125697A0 (en) 1999-04-11
CN100429232C (zh) 2008-10-29
PL193499B1 (pl) 2007-02-28
IL218518A0 (en) 2012-04-30
KR19990082430A (ko) 1999-11-25
NZ331579A (en) 2001-06-29
CY2005011I1 (el) 2011-06-08
PL328411A1 (en) 1999-01-18
HK1125972A1 (en) 2009-08-21
US20090155205A1 (en) 2009-06-18
EP0929578B1 (en) 2003-05-02
NO2017038I2 (no) 2017-11-17
CN1300173C (zh) 2007-02-14
RO123028B1 (ro) 2010-07-30
JP2013091666A (ja) 2013-05-16
HK1125951A1 (en) 2009-08-21
SI9720020A (sl) 1999-10-31
US20130330356A1 (en) 2013-12-12
BG66509B1 (bg) 2015-11-30
DE69721548D1 (de) 2003-06-05
NO320657B1 (no) 2006-01-09
NO2017038I1 (no) 2017-08-01
HU228630B1 (en) 2013-04-29
NO983627D0 (no) 1998-08-07
BRPI9707379B8 (pt) 2015-07-07
DK0929578T3 (da) 2003-08-25
BR9715219B1 (pt) 2010-02-23
US8753633B2 (en) 2014-06-17
US20030092059A1 (en) 2003-05-15
AU2122997A (en) 1997-08-28
NO322755B1 (no) 2006-12-04
BG109311A (en) 2006-03-31
TR199801532T2 (xx) 1998-11-23
BG64776B1 (bg) 2006-03-31
JP5759526B2 (ja) 2015-08-05
JP2016104798A (ja) 2016-06-09
LU91062I2 (fr) 2004-04-26
RU2458704C9 (ru) 2012-12-10
JP4890997B2 (ja) 2012-03-07
US20070249813A1 (en) 2007-10-25
JP4404181B2 (ja) 2010-01-27

Similar Documents

Publication Publication Date Title
PL188192B1 (pl) Izolowane ludzkie przeciwciało albo jego część wiążąca antygen, rekombinowane ludzkie przeciwciało albo jego część wiążąca antygen, kompozycje farmaceutyczne, izolowane kwasy nukleinowe, rekombinowany wektor ekspresyjny, komórka gospodarza, sposób syntetyzowania przeciwciała ludzkiego, które wiąże ludzki TNFalfa, sposób hamowania aktywności ludzkiego TNFalfa in vitro, przeciwciało albo jego częśćwiążąca antygen, zastosowanie przeciwciała albo jego części wiążącej antygen
EP2397494B1 (en) Human antibodies that bind human TNFalpha
AU2004202769B2 (en) Human antibodies that bind human TNFalpha