MX2010013239A - Inmunoglobulinas de dominio variable doble y usos de las mismas. - Google Patents

Inmunoglobulinas de dominio variable doble y usos de las mismas.

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MX2010013239A
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MX
Mexico
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antibody
binding
disease
binding protein
antigen
Prior art date
Application number
MX2010013239A
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Hamish J Allen
Chengbin Wu
Carolyn A Cuff
Tariq Ghayur
Peter C Isakson
Lisa M Olson
Margaret Hugunin
Rajesh V Kamath
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Abbott Lab
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Publication date
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Abstract

La presente invención se refiere a proteínas de unión multivalentes y multiespecíficas diseñadas por ingeniería, métodos de fabricación, y específicamente a sus usos en la prevención, diagnóstico, y/o tratamiento de enfermedades.

Description

I JMUNOGLOBULINAS DE DOMINIO VARIABLE DOBLE Y LAS MISMAS REFERENCIA A SOLICITUDES RELACIONADA Esta solicitud en una solicitud no provisional q oridad de la Solicitud Provisional de E.U.A. Serie No. sentada el 3 de Junio del 2008 y Solicitud Provisiona rie No. 61/197,172, presentada el 23 de Octubre de tenidos de las cuales se incorporan aquí para referenc CAMPO DE LA INVENCION La presente invención se refiere a proteínas ltivalentes y multiespecíficas, métodos de prep pecíficamente a sus usos en el diagnóstico, pre écnicas de ADN recombinante.
Se han producido anticuerpos biespecíf icos :nología de cuadroma (ver, Miistein, C. y A.C. Cu iture 305(5934):537-40) basándose en la fusión somá :erentes líneas de célula de hibridoma expresando )noclonales de murino (mAbs) con las especificidade I anticuerpo biespecíf ico. Debido al apareamiento aléa erentes cadenas pesada y ligera de inmunoglobulina (I línea de célula de híbrido-hibridoma (o cuadroma) re eran hasta diez diferentes especies de Ig, de las cual el anticuerpo biespecífico funcional. La presenci oductos no apareados, y rendimientos de nificativamente reducidos, significa que se re ocedimientos sofisticados de purificación.
Los anticuerpos biespecíf icos también son producid conjugación química de dos diferentes mAbs (ver, Sta ig ida al sitio. Para obtener preparaciones más hom ticuerpos biespecíf icos, dos diferentes fragmentos de F ímícamente entrelazados en sus residuos de cisteína d a forma dirigida al sitio (ver, Glennie, MJ.f et al. munol. 139(7): 2367-75).
Se ha desarrollado una amplia variedad de otros ticuerpo bíespecífico recombinante (ver, Kriangkum, 01) Biomol. Eng. 18(2): 31-40). Entre ellos, las cuerpos de Fv de cadena individual en tándem, y vario los mismos, son los más ampliamente utilizados. Po nstrucción de estas moléculas, empieza a partir de dos Fv (scFv) de cadena individual que reconoce diferente r, Economides, A.N., et al. (2003) Nat. Med. 9(1): léculas scFv en tándem representan un formato píemente conecta las dos moléculas scFv con un ptídico adiciona!. Los dos fragmentos scFv presente Meados para producir moléculas scFv en tándem solu tudio reciente, se reportó la expresión a través de nado transgénicos de un agonista dirigido de scFv )28, y un proteoglicano asociado a melanoma (ver, Gra (1999) J. Clin. Invest. 104(10): 1393-401). En esta c dos moléculas scFv se conectaron a través de un enl se encontraron concentraciones, en suero, de hasta 1 ticuerpo biespecíf ico. Varias estrategias, incluyendo I orden de dominio o uso de enlazadores medios con xibilídad variables, se emplearon para permitir la luble en bacterias. Ahora pocos estudios han r presión de moléculas scFv en tándem en bacterias (ve , et al. (2000) J. Immunol. 164(12): 6495-502; Ito, A., e Immunol. 170(9): 4802-9; Kami, A., et al. (2002) J. Ne 5(1-2): 134-40) utilizando ya sea un enlazador Ala3 lazadores ricos en glicina/serina largos. En otro estud mostró que ia presentación de fago de moléculas scFv combinación con mutagénesis dirigida, es una rramienta para estas moléculas, que pueden ser exp cterias en una forma activa.
Los diacuerpos biespecíf icos (Db) utilizan el cuerpo para expresión. Los diacuerpos son expresado gmentos scFv reduciendo ia longitud del enlazador qu minio VH y VL a aproximadamente 5 residuos (ver, Pe lerius (2002) Biochem. Soc. Trans. 30(4): 507-11). Est ! tamaño de enlazador facilita la dimerización de dos lipéptido a través de apareamiento cruzado de los do . Los diacuerpos biespecíficos son producidos a tr presión de dos cadenas de polipéptido con, ya sea l A-VLB y VHB-VLA (configuración VH-VL), o VLA-VHB onfiguración VL-VH) dentro de la misma célula. En el p ducido una gran variedad de diferentes diacuerpos bie terodímeros activos. Esto necesita de la implementaci purificación adicionales con el fin de obtener pr mogéneas de diacuerpos biespecíf icos. Un aspecto pa neración de diacuerpos biespecíf icos es la pro cuerpos de "perilla en el agujero" (ver, Holliger, P., T. Winter (1993) Proc. Nati. Acad. Sci. U S A 90(14): te aspecto se demostró para un diacuerpo bíespecíf ntra HER2 y CD3. Se introdujo una gran perilla en el ercambiando Val37 con Phe y Leu45 con Trp y se ujero complementario en el dominio VL mutando P e r87 a Ala, ya sea en los dominios variables anti-HER2 utilizar este aspecto, la producción de diacuerpos b ede ser incrementada de 72% por el diacuerpo parent % por el díacuerpo de perilla en el agujero. De manera producción da como resultado solo una ligera redu sultado de estas mutaciones. Sin embargo, se o a farmacocinética no deseable.
Los diacuerpos de cadena individual (scDb) repre trategia alternativa para mejorar la formación de moléc cuerpo biespecífico (ver, Holliger, P. y G. Winter (1 munol. Immunother. 45(3-4): 128-30; Wu, A. ., et munotechnology 2(1): p. 21- 36). Los diacuerpos bies dena individual son producidos conectando las dos lipéptido formadoras de diacuerpo con un enlaz icional con una longitud de aproximadamente 15 r inoácído. Consecuentemente, todas las moléculas c lecular que corresponde a diacuerpos de cadena noméricos (50-60 kDa) son biespecíficas. Varios e mostrado que los diacuerpos biespectficos de caden n expresados en bacterias en forma soluble y act yoría de las moléculas purificadas presentes como r, Holliger, P. y G. Winter (1997 Cáncer Immunol. I scrito la construcción de anticuerpo multivalente co s repeticiones Fab en ia cadena pesada de una IgG y ir cuadro moléculas de antígeno (ver, WO 0177342A1, al. (2003) J. ímmunol. 170(9): 4854-61).
Existe la necesidad en la técnica de proteína ltivalentes mejoradas capaces de unir dos o más an licitud de Patente de E.U.A. Serie No. 11/507,050 prop milia novedosa de proteínas de unión capaces de unir tígenos con alta afinidad, las cuales se munoglobulinas de dominio variable doble (DVD-ig™). ención proporciona proteínas de unión novedosas paces de unir dos o más antígenos, BREVE DESCRIPCION DE LA INVENCION Esta invención se refiere a proteínas de unión m dalidad, VD1 y VD2 en la proteína de unión so riables de cadena pesada. En otra modalidad, el domi cadena pesada se selecciona del grupo que cons minio variable de cadena pesada de murino, un domi cadena pesada humano, un dominio variable de cad ertado a CDR, y un dominio variable de cade manizado. En otra modalidad más, VD1 y VD2 son cap mismo antígeno. En otra modalidad, VD1 y VD2 son ir diferentes antígenos. En otra modalidad más, C es nstante de cadena pesada. Por ejemplo, X1 es u mpre que X1 no sea CH1. Por ejemplo, X1 es u leccionado del grupo que consiste de AKTTPKLEEGEF NO: 1); AKTTPKLEEGEFSE ARV (SEC ID NO: 2); EC ID NO: 3); SAKTTPKLGG (SEC ID NO: 4): SAKTTP ( ; RADAAP (SEC ID NO: 6); RADAAPTVS (SEC I DAAAAGGPGS (SEC ID NO: 8); RADAAAA(G4S)4 (SE NO: 26). En una modalidad, X2 es una región daíidad, X2 es una región Fe variante.
En una modalidad, la proteína de unión de mprende una cadena de polipéptido, en donde la lipéptido comprende VD1 -(X1 )n-VD2-C-(X2)n, en donde imer dominio variable de cadena pesada, VD2 es minio variable de cadena pesada, C es un dominio c dena pesada, X1 es un enfazador siempre que no sea C a región Fe. En una modalidad, VD1 y VD2 en la proteí n dominios variables de cadena ligera. En una m minio variable de cadena ligera se selecciona del nsiste de un dominio variable de cadena ligera de minio variable de cadena ligera humano, un dominio dena ligera injertado en COR, y un dominio variable era humanizado. En -una modalidad, VD1 y VD2 son ir el mismo antígeno. En otra modalidad, VD1 y VD2 AAPTVSIFPP (SEC ID NO: 12); TVAAP (SEC ID APSVFIFPP (SEC ID NO: 14); QPKAAP (SEC I KAAPSVTLFPP (SEC ID NO: 16); AKTTPP (SEC I TTPPSVTPLAP (SEC ID NO: 18); AKTTAP (SEC I TTAPSVYPLAP (SEC ID NO: 20); ASTKGP (SEC I TKGPSVFPLAP (SEC ID NO: 22), GGGGSGGGGSGGG : 23); GENKVEYAP AL AL S (SEC ID AKELTPLKEAKVS (SEC ID NO: 25); GHEAAAVMQVQ NO: 26). En una modalidad, la proteína de unión no En una modalidad, tanto ia cadena pesada varia dena ligera variable comprenden el mismo enlazad dalidad, la cadena pesada variable y la cadena líg mprenden diferentes enlazadores. En otra modalida dena pesada variabie como la cadena ligera variable enlazador corto (aproximadamente 6 aminoácidos lipéptido comprende VD1 -(X1 )n-VD2-C-(X2)n, en donde imer dominio variable de cadena ligera, VD2 es minio variable de cadena ligera, C es un dominio c dena ligera, X1 es un enlazador siempre que no sea C mprenda una región Fe.
En otra modalidad, la invención proporciona una ión que comprende dos cadenas de polipéptído. en mera cadena de polipéptído comprende VD 1 -(X1 )n-V donde VD1 es un primer dominio variable de cadena p un segundo dominio variable de cadena pesada, C es nstante de cadena pesada, X1 es un enlazador siempre 1, y X2 es una región Fe; dicha segunda cadena de mprende VD1-(X1)n-VD2-C-(X2)n, en donde VD 1 es minio variable de cadena ligera, VD2 es un segu riabfe de cadena ligera, C es un dominio constante era, X1 es un enlazador siempre que no sea CH1 donde VD1 es un primer dominio variable de cadena un segundo dominio variable de cadena ligera, C es nstante de cadena ligera, X1 es un enlazador siempre 1, y X2 no comprenda una región Fe. Dicha proteina riable Doble (DVD) tiene cuatro sitios de unión a antíge En otra modalidad, las proteínas de unión descrit paces de unir uno o más objetivos. En una modalidad, selecciona del grupo que consiste de citocinas, perficie celular, enzimas y receptores. En otra m oteína de unión es capaz de modular una función bioló más objetivos. En otra modalidad, la proteína de unión utralizar uno o más objetivos. La proteína de unión de capaz de unir citocinas seleccionadas del grupo que focinas, monocinas, hormonas peptídicas, rec rcadores de tumor. Por ejemplo, la DVD-ig de la i paz de unir dos o más de los siguientes: Factor d . En una modalidad específica, la proteína de unión e ir pares de objetivos seleccionados del grupo que cons IL-17A; TNF y RANKL; TNF y VEGF; TNF y SOST (se K; TNF y alfa.Vbeta3; TNF y NGF; TNF y !L-23p19; F y SOST (sec. 2); TNF e IL-6R; TNF y CD-20; IgE e ; IL- 13 (sec. 1) y IL-23pl9; IgE y IL-4; IgE y !L-9 (sec. (sec. 2); IgE y IL- 13 (sec. 2); IL-13 (sec. 1) e IL-9 (se ec. 1) e IL-4; IL- 13 (sec. 1) e IL-9 (sec. 2); IL- 13 (se ec. 1); IL- 13 (sec. 2) e IL- 4; IL-13 (sec. 2) e IL-23 ec. 2) e IL-9 (sec. 2); IL-6R e VEGF; IL-6R e IL-1 NKL; IL-17A e IL-1 beta (sec. 1); IL-1beta (sec. 1) y eta (sec. 1) y VEGF; RANKL y CD-20; IL-1 alfa e 1L-1 b -1 alfa e IL-1beta (sec. 2).
En una modalidad, la proteína de unión capaz de un A comprende una secuencia de aminoácido de cadena D seleccionada del grupo que consiste de SEC ID N SEC ID NO. 78 y una secuencia de aminoácido de ca DVD de SEC ID NO. 79.
En una modalidad, la proteína de unión capaz de NKL comprende una secuencia de aminoácido de cad DVD seleccionada del grupo que consiste de SEC I C ID NO. 82; y una secuencia de aminoácido de cade D seleccionada del grupo que consiste de SEC ID N NO. 83. En una modalidad, la proteína de unión capaz RANKL comprende una secuencia de aminoácido de cad DVD de SEC ID NO. 80 y una secuencia de aminoácid era de DVD de SEC ID NO. 81. En otra modalidad, la ión capaz de unir TNF y RANKL tiene una. orientació mprende una secuencia de aminoácido de cadena pes SEC ID NO. 82 y una secuencia de aminoácido de c DVD de SEC ID NO. 83.
En una modalidad, la proteína de unión capaz de mprende una secuencia de aminoácido de cadena pes SEC ID NO. 86 y una secuencia de aminoácido de ca DVD de SEC ID NO. 87.
En una modalidad, la proteína de unión capaz de ST (sec. 1) comprende una secuencia de aminoácido sada de DVD seleccionada del grupo que consiste de y SEC ID NO. 90; y una secuencia de aminoácido era de DVD seleccionada del grupo que consiste de SE SEC ID NO. 91. En una modalidad, la proteína de uni i r TNF y SOST (sec. 1) comprende una secuencia de cadena pesada de DVD de SEC ID NO. 88 y una s inoácido de cadena ligera de DVD de SEC ID NO: dalidad, la proteína de unión capaz de unir TNF y SO ne una orientación inversa y comprende una se inoácido de cadena pesada de DVD de SEC ID NO cuencia de aminoácido de cadena ligera de DVD de DVD de SEC ID NO: 93. En otra modalidad, la proteí paz de unir TNF y DKK tiene una orientación inversa y a secuencia de aminoácido de cadena pesada de DVD . 94 y una secuencia de aminoácido de cadena ligera C ID NO: 95.
En una modalidad, la proteína de unión capaz de aVbeta3 comprende una secuencia de aminoácido sada de DVD seleccionada del grupo que consiste de y SEC ID NO. 98; y una secuencia de aminoácido era de DVD seleccionada del grupo que consiste de SE SEC ID NO. 99. En una modalidad, la proteína de uni ir TNF y alfaVbeta3 comprende una secuencia de am dena pesada de DVD de SEC ID NO. 96 y una se inoácido de cadena ligera de DVD de SEC ID NO: dalidad, la proteína de unión capaz de unir TNF y alfa a orientación inversa y comprende una secuencia de D de SEC ID NO. 100 y una secuencia de aminoácid era de DVD de SEC ID NO: 101. En otra modalidad, la ión capaz de unir TNF y NGF tiene una orientació mprende una secuencia de aminoácido de cadena pes SEC ID NO. 102 y una secuencia de aminoácido de c DVD de SEC ID NO: 103.
En una modalidad, la proteína de unión capaz de un p 19 comprende una secuencia de aminoácido de caden D seleccionada de! grupo que consiste de SEC ID NO. NO. 106; y una secuencia de aminoácido de cadena líg leccionada del grupo que consiste de SEC ID NO. 10 . 107. En una modalidad, la proteína de unión capaz IL-23p19 comprende una secuencia de aminoácido sada de DVD de SEC ID NO. 104 y una secuencia de cadena ligera de DVD de SEC ID NO: 105. En otra m oteína de unión capaz de unir TNF e IL-23p19 L-6 comprende una secuencia de aminoácido de caden D de SEC ID NO. 108 y una secuencia de aminoácido era de DVD de SEC ID NO: 109. En otra modalidad, la ión capaz de unir TNF e IL-6 tiene una orientació mprende una secuencia de aminoácido de cadena pes SEC ID NO. 110 y una secuencia de aminoácido de c DVD de SEC ID NO: 111.
En una modalidad, la proteína de unión capaz de ST (sec. 2) comprende una secuencia de aminoácido sada de DVD seleccionada del grupo que consiste de 2 y SEC ID NO. 114; y una secuencia de aminoácido era de DVD seleccionada del grupo que consiste de 3 y SEC ID NO. 115. En una modalidad, la proteína de unir TNF y SOST (sec. 2) comprende una se inoácido de cadena pesada de DVD de SEC ID NO. cuencia de aminoácido de cadena ligera de DVD de leccionada del grupo que consiste de SEC ID NO. 11 . 119. En una modalidad, la proteína de unión capaz IL-6R comprende una secuencia de aminoácido de cad DVD de SEC ID NO. 116 y una secuencia de ami dena ligera de DVD de SEC ID NO: 117. En otra m oteína de unión capaz de unir TNF e IL-6R tiene una ersa y comprende una secuencia de aminoácido de cad DVD de SEC ID NO. 118 y una secuencia de ami dena ligera de DVD de SEC ID NO: 119.
En una segunda modalidad, la proteína de unión ca F y CD-20 comprende una secuencia de aminoácido sada de DVD seleccionada del grupo que consiste de 0 y SEC ID NO. 122; y una secuencia de aminoácido era de DVD seleccionada de! grupo que consiste de 1 y SEC ID NO. 123. En una modalidad, la proteína de unir TNF y CD-20 comprende una secuencia de am NO. 124 y SEC ID NO. 126; y una secuencia de am dena ligera de DVD seleccionada del grupo que consi NO. 125 y SEC ID NO. 127. En una modalidad, la ión capaz de unir IgE e IL-13 (sec. 1) comprende una s iinoácido de cadena pesada de DVD de SEC ID NO. cuencia de aminoácido de cadena ligera de DVD de 5. En otra modalidad, la proteína de unión capaz de u (sec. 1) tiene una orientación inversa y comprende un aminoácido de cadena pesada de DVD de SEC ID NO cuencia de aminoácido de cadena ligera de DVD de 7.
En una cuarta modalidad, la proteína de unión capa (sec. 1) e IL23p19 comprende una secuencia de am dena pesada de DVD seleccionada del grupo que cons NO. 128 y SEC ID NO, 130; y una secuencia de am dena ligera de DVD seleccionada del grupo que consi En una modalidad, la proteína de unión capaz de uni mprende una secuencia de- aminoácido de cadena pes leccionada del grupo que consiste de SEC ID NO. 13 . 134; y una secuencia de aminoácido de cadena lig leccionada del grupo que consiste de SEC ID NO. *\ 3 . 135. En una modalidad, la proteína de unión capaz d -4 comprende una secuencia de aminoácido de cadena D de SEC ID NO. 132 y una secuencia de aminoácid era de DVD de SEC ID NO: 133. En otra modalidad, la ??? capaz de unir IgE e IL-4 tiene una orientació mprende una secuencia de aminoácido de cadena pes SEC ID NO. 134 y una secuencia de aminoácido de c DVD de SEC ID NO: 135.
En una segunda modalidad, la proteína de unión ca E e IL-9 (sec. 1) comprende una secuencia de ami dena pesada de DVD seleccionada de! grupo que cons cuencia de aminoácido de cadena ligera de DVD de 9.
En una tercera modalidad, la proteína de unión ca E e IL-9 (sec. 2) comprende una secuencia de ami dena pesada de DVD seleccionada del grupo que cons NO. 140 y SEC ID NO. 142; y una secuencia de am dena ligera de DVD seleccionada del grupo que consi NO. 141 y SEC ID NO. 143. En una modalidad, la ión capaz de unir IgE e IL-9 (sec. 2) comprende una s inoácído de cadena pesada de DVD de SEC ID NO. cuencia de aminoácido de cadena ligera de DVD de 1. En otra modalidad, la proteína de unión capaz de uni ec. 2) tiene una orientación inversa y comprende una s inoácido de cadena pesada de DVD de SEC ID NO. cuencia de aminoácido de cadena ligera de DVD de 3. 5. En otra modalidad, la proteína de unión capaz de u (sec. 2) tiene una orientación inversa y comprende un aminoácido de cadena pesada de DVD de SEC ID NO cuencia de aminoácido de cadena ligera de DVD de 7.
En una modalidad, la proteína de unión capaz d ec. 1) e IL-9 (sec. 1) comprende una secuencia de am dena pesada de DVD seleccionada del grupo que consi NO. 148 y SEC ID NO. 150; y una secuencia de am dena ligera de DVD seleccionada del grupo que consi NO. 149 y SEC ID NO. 151. En una modalidad, la ión capaz de unir IL-13 (sec. 1) e l'L-9 (sec. 1) com cuencia de aminoácido de cadena pesada de DVD de 8 y una secuencia de aminoácido de cadena ligera de NO: 149. En otra modalidad, la proteína de unión ca -13 (sec. 1) e IL-9 (sec. 1) tiene una orientación ión capaz de unir IL-13 (sec. 1) e IL-4 comprende un aminoácido de cadena pesada de DVD de SEC ID NO cuencia de aminoácido de cadena ligera de DVD de 3. En otra modalidad, la proteína de unión capaz d ec. 1) e IL-4 tiene una orientación inversa y corri cuencia de aminoácido de cadena pesada de DVD de 4 y una secuencia de aminoácido de cadena ligera de NO: 155.
En una tercera modalidad, la proteína de unión ca -13 (sec. 1) e I L - 9 (sec. 2) comprende una se inoácido de cadena pesada de DVD seleccionada de nsiste de SEC ID NO. 156 y SEC ID NO. 158; y una s inoácido de cadena ligera de DVD seleccionada del nsiste de SEC ID NO. 157 y SEC ID NO. 159. En una m oteína de unión capaz de unir IL-13 (sec. 1) e IL mprende una secuencia de aminoácido de cadena pes C ID NO. 160 y SEC ID NO. 162; y una secuencia de cadena ligera de DVD seleccionada del grupo que C ID NO. 161 y SEC ID NO. 163. En una modalidad, la ión capaz de unir IL-13 (sec. 2) e IL-9 (sec. 1) com cuencia de aminoácido de cadena pesada de DVD de 0 y una secuencia de aminoácido de cadena ligera de NO: 161. En otra modalidad, la proteína de unión ca 13 (sec, 2) e IL-9 (sec. 1) tiene una orientación mprende una secuencia de aminoácido de cadena pes SEC ID NO. 162 y una secuencia de aminoácido de c DVD de SEC ID NO: 163.
En una modalidad, la proteína de unión capaz d ec. 2) e IL-4 comprende una secuencia de aminoácid sada de DVD seleccionada del grupo que consiste de 4 y SEC ID NO. 166; y una secuencia de aminoácido era de DVD seleccionada del grupo que consiste de En una segunda modalidad, la proteína de unión ca -13 (sec. 2) e IL-23p19 comprende una secuencia de am dena pesada de DVD seleccionada del grupo que consi NO. 168 y SEC ID NO. 170; y una secuencia de am dena ligera de DVD seleccionada del grupo que consi NO. 169 y SEC ID NO. 171. En una modalidad, la ión capaz de unir IL-13 (sec. 2) e IL-23p19 com cuencia de aminoácido de cadena pesada de DVD de 8 y una secuencia de aminoácido de cadena ligera de NO: 169. En otra modalidad, la proteína de unión ca -13 (sec. 2) e I L-23 p 9 tiene una orientación inversa y a secuencia de aminoácido de cadena pesada de DVD .170 y una secuencia de aminoácido de cadena ligera C ID NO: 171.
En una tercera modalidad, la proteína de unión ca -13 (sec. 2) e IL-9 (sec. 2) comprende una se ersa y comprende una secuencia de aminoácido de cad DVD de SEC ID NO. 174 y una secuencia de ami dena ligera de DVD de SEC ID NO: 175.
En una cuarta modalidad, la proteína de unión capa y VEGF comprende una secuencia de aminoácido sada de DVD seleccionada del grupo que consiste de 6 y SEC ID NO. 178; y una secuencia de aminoácido era de DVD seleccionada del grupo que consiste de 7 y SEC ID NO. 179. En una modalidad, la proteína de unir IL-6R y VEGF comprende una secuencia de am dena pesada de DVD de SEC ID NO. 176 y una s iinoácido de cadena ligera de DVD de SEC ID NO: 1 dalidad, la proteína de unión capaz de unir IL-6R y a orientación inversa y comprende una secuencia de cadena pesada de DVD de SEC ID NO. 178 y una s iñoácido de cadena ligera de DVD de SEC ID NO: 179. oleína de unión capaz de unir IL-6R e IL-17A tiene una ersa y comprende una secuencia de aminoácido de cad DVD de SEC ID NO, 182 y una secuencia de ami dena ligera de DVD de SEC ID NO: 183.
En una modalidad, la proteína de unión capaz de NKL comprende una secuencia de aminoácido de cad DVD seleccionada del grupo que consiste de SEC ID C ID NO. 186; y una secuencia de aminoácido de cade D seleccionada del grupo que consiste de SEC ID NO. NO. 187. En una modalidad, la proteína de unión capa y RANKL comprende una secuencia de aminoácido sada de DVD de SEC ID NO. 184 y una secuencia de cadena ligera de DVD de SEC ID NO: 185. En otra m oteína de unión capaz de unir IL-6R y RANKL tiene una ersa y comprende una secuencia de aminoácido de cad DVD de SEC ID NO. 186 y una secuencia de am cuencia de aminoácido de cadena ligera de DVD de 9. En otra modalidad, la proteína de unión capaz de u -1beta (sed) tiene una orientación inversa y com cuencia de aminoácido de cadena pesada de DVD de 0 y una secuencia de aminoácido de cadena ligera de NO: 191.
En una modalidad, la proteína de unión capaz de u ec.1) y RANKL comprende una secuencia de aminoácid sada de DVD seleccionada de! grupo que consiste de 2 y SEC iD NO. 194; y una secuencia de aminoácido era de DVD seleccionada del grupo que consiste de 3 y SEC ID NO. 195. En una modalidad, la proteína de unir I L- 1 beta (sec.1) y RANKL comprende una s inoácido de cadena pesada de DVD de SEC ID NO. cuencia de aminoácido de cadena ligera de DVD de 3, En otra modalidad, la proteína de unión capaz de u 7 y SEC ID NO. 199. En una modalidad, la proteína de unir IL-1beta (sed) y VEGF comprende una se inoácido de cadena pesada de DVD de SEC ID NO. cuencia de aminoácido de cadena ligera de DVD de 7. En otra modalidad, la proteína de unión capaz de u ec.1) y VEGF tiene una orientación inversa y com cuencia de aminoácido de cadena pesada de DVD de 8 y una secuencia de aminoácido de cadena ligera de NO: 199.
En una modalidad, ia proteína de unión capaz de u -20 comprende una secuencia de aminoácido de caden D seleccionada de! grupo. que consiste de SEC ID NO. NO. 202; y una secuencia de aminoácido de cadena lig leccionada del grupo que consiste de SEC ID NO. 20 . 203. En una modalidad, la proteína de unión ca NKL y CD-20 comprende una secuencia de aminoácid 4 y SEC ID NO. 206; y una secuencia de aminoácido era de DVD seleccionada del grupo que consiste de 5 y SEC ID NO. 207. En una modalidad, la proteína de unir I L- 1 alfa e lL-1beta (sec. 1) comprende una s inoácido de cadena pesada de DVD de SEC ID NO. cuencia de aminoácido de cadena ligera de DVD de 5. En otra modalidad, la proteína de unión capaz de un -1beta (sec. 1) tiene una orientación inversa y com cuencia de aminoácido de cadena pesada de DVD de 6 y una secuencia de aminoácido de cadena ligera de NO: 207.
En una modalidad, la proteína de unión capaz de un -1beta (sec. 1) comprende una secuencia de aminoácid sada de DVD seleccionada del grupo que consiste de 8 y SEC ID NO. 210; y una secuencia de aminoácido era de DVD seleccionada del grupo que consiste de J En una modalidad, la proteína de unión capaz de un -1beta (sec. 1) comprende una secuencia de aminoácid sada de DVD seleccionada del grupo que consiste de 2 y SEC ID NO. 214; y una secuencia de aminoácido era de DVD seleccionada del grupo que consiste de 3 y SEC ID NO. 215. En una modalidad, la proteína de unir ? L- 1 alfa e IL-1beta (sec. 1) comprende una s inoácido de cadena pesada de DVD de SEC ID NO. cuencia de aminoácido de cadena ligera de DVD de 3. En otra modalidad, la proteína de unión capaz de un -1beta (sec. 1) tiene una orientación inversa y com cuencia de aminoácido de cadena pesada de DVD de 4 y una secuencia de aminoácido de cadena ligera de NO: 215.
En una modalidad, la proteína de unión capaz de un -1beta (sec. 1) comprende una secuencia de aminoácid cuencia de aminoácido de cadena pesada de DVD de 8 y una secuencia de aminoácido de cadena ligera de NO: 219.
En una modalidad, la proteína de unión capaz de un -1beta (sec. 2) comprende una secuencia de aminoácid sada de DVD seleccionada del grupo que consiste de 0 y SEC ID NO. 222; y una secuencia de aminoácido era de DVD seleccionada del grupo que consiste de 1 y SEC ID NO. 223. En una modalidad, la proteína de unir I L- 1 alfa e IL-1beta (sec. 2) comprende una s inoácido de cadena pesada de DVD de SEC ID NO. cuencia de aminoácido de cadena ligera de DVD de 1. En otra modalidad, la proteína de unión capaz de un -1beta (sec. 2) tiene una orientación inversa y com cuencia de aminoácido de cadena pesada de DVD de 2 y una secuencia de aminoácido de cadena ligera de cuencia de aminoácido de cadena ligera de DVD de 5. En otra modalidad, la proteína de unión capaz de un -1beta (sec. 2) tiene una orientación inversa y com cuencia de aminoácido de cadena pesada de DVD de 6 y una secuencia de aminoácido de cadena ligera de NO: 227.
En una modalidad, la proteína de unión capaz de un -1beta (sec. 2) comprende una secuencia de aminoácid sada de DVD seleccionada del grupo que consiste de 8 y SEC ID NO. 230; y una secuencia de aminoácido era de DVD seleccionada del grupo que consiste de 9 y SEC ID NO. 231. En una modalidad, la proteína de unir i L- 1 alfa e IL»1beta (sec. 2) comprende una s inoácido de cadena pesada de DVD de SEC ID NO. cuencia de aminoácido de cadena ligera de DVD de 9, En otra modalidad, la proteína de unión capaz de un 3 y SEC ID NO, 235. En una modalidad, la proteína de unir IL-1alfa e IL-1beta (sec. 2) comprende una s inoácido de cadena pesada de DVD de SEC ID NO. cuencia de aminoácido de cadena ligera de DVD de 3. En otra modalidad, la proteína de unión capaz de un -1beta (sec. 2) tiene una orientación inversa y com cuencia de aminoácido de cadena pesada de DVD de 4 y una secuencia de aminoácido de cadena ligera de NO: 235.
En otra modalidad, la invención proporciona una ión que comprende una cadena de polipéptido, en dena de polipéptido comprende VD1 -(X1 )n-VD2~C-(X2) 1 es un primer dominio variable de cadena pesada ob imer anticuerpo parental o una proteína de unión a a ismo; VD2 es un segundo dominio variable de cad tenido de un segundo anticuerpo parental o una proteí imer anticuerpo parental o porción de unión a antígeno 2 es un segundo dominio variable de cadena ligera obt gundo anticuerpo parental o porción de unión a a smo; C es un dominio constante de cadena ligera; ( lazador siempre que no sea CH1, en donde (X1)n esente o ausente; y (X2)n no comprenda una región F cho (X2)n está ya sea presente o ausente. En una moda tá ausente de la región de unión.
En otra modalidad, la proteína de unión de l mprende primera y segunda cadenas de polipéptido cha primer cadena de polipéptido comprende un primer 2-C-(X2)n, en donde VD1 es un primer dominio variabl sada obtenido de un primer anticuerpo parental o porci antígeno del mismo; VD2 es un segundo dominio dena pesada obtenido de un segundo anticuerpo párent unión a antígeno del mismo; C es un dominio c dominio constante de cadena ligera; (X1)n es u mpre que no sea CH1, en donde (X1)n está ya sea sente; y (X2)n no comprenda una región Fe, en donde tá ya sea presente o ausente. En otra modalidad, la ión comprende dos primeras cadenas de poiipép gundas cadenas de polipéptido. En otra modalidad más sente del segundo polipéptido. En otra modalidad a gión Fe, si está presente en el primer polipéptido se se upo que consiste de una región Fe de secuencia n gión Fe de secuencia variante. En una modalidad más, selecciona del grupo que consiste de una región Fe G2, lgG3, lgG4, IgA, IgM, IgE, e IgD.
En otra modalidad, la proteína de unión de la inve D-lg capaz de unir dos antigenos que comprenden cua polipéptido, en donde las primera y tercera lipéptido comprenden VD1-(X1)n-VD2-C-(X2)n, en do donde VD1 es un primer dominio variable de ca tenido de un primer anticuerpo parental o porción 'tígeno del mismo; VD2 es un segundo dominio variabl era obtenido de un segundo anticuerpo parental o porci antígeno del mismo; C es un dominio constante de ca 1)n es un enlazador siempre que no sea CH1, en dond sea presente o ausente; y (X2)n no comprenda una re nde dicho (X2)n está ya sea presente o ausente.
La invención proporciona un método para hacer una ión DVD-lg pre-seleccionando los anticuerpos parenta dalidad, el método para hacer una Inmunoglobulina riable Doble capaz de unión dos antígenos, que co sos de, a) obtener un primer anticuerpo parental o un ión a antígeno del mismo, capaz de unir un primer tener un segundo anticuerpo parental o una porción tígeno del mismo, capaz de ¾ unir una segundo a esente o ausente; d) construir segunda y cuarta lipéptido que comprenden VD1 -(X1 )n-VD2-C~(X2)n, en un primer dominio variable de cadena ligera obtenido ticuerpo parental o porción de unión a antigeno del mis segundo dominio variable de cadena ligera obte gundo anticuerpo parental o porción de unión a a smo; C es un dominio constante de cadena ligera; ( lazador siempre que no sea CH1, en donde (X1)n esente o ausente; y (X2)n no comprenda una región F cho (X2)n está ya sea presente o ausente; e) expr imera, segunda, tercera y cuarta cadenas de poli ñera que se genera una Inmunoglobuiina de Domin ble capaz de unir dicho primer y segundo antígenos.
En otra modalidad más la invención proporciona ra generar una Inmunoglobuiina de Dominio Variable unir dos antígenos con propiedades deseada, que co cadena pesada obtenido de un primer anticuerpo par oteína de unión a antígeno dei mismo; VD2 es un segú riable de cadena pesada obtenido de un segundo rental o una proteína de unión a antígeno del mism minio constante de cadena pesada; (X1)n es un enlaza e no sea CH1, en donde dicho (X1)n está ya sea sente; y (X2)n es una región Fe, en donde dicho (X2)n esente o ausente; d) construir segunda y cuarta ! ipépt id o que comprenden VD1-(X1)n-VD2~C-(X2)n, en un primer dominio variable de cadena ligera obtenido ticuerpo parental o porción de unión a antígeno del mis segundo dominio variable de cadena ligera obte gundo anticuerpo parental o porción de unión a a smo; C es un dominio constante de cadena ligera; ( iazador siempre que no sea CH1, en donde (X1)n esente o ausente; y (X2)n no comprenda una región F tígeno de los mismos. En otra modalidad, VD2 de la gunda cadenas de polipéptido descritas aquí se o smo anticuerpo parental o porción de unión de antígeno otra modalidad, VD2 de las primera y segunda lipéptido descritas aquí se obtienen de diferentes rentales o porciones de unión de antígeno de los mism En una modalidad, el primer anticuerpo parental o ión de antígeno dei mismo, y el segundo anticuerpo rción de unión de antígeno del mismo, son el mismo an ra modalidad, el primer anticuerpo parental o porción tígeno del mismo, y el segundo anticuerpo parental o ión de antígeno del mismo, son anticuerpos diferentes.
En una modalidad, el primer anticuerpo parental o ión de antígeno del mismo, une un primer antígeno, y ticuerpo parental o porción de unión de antígeno del segundo antigeno. En una modalidad particular, lo reníal o porción de unión de antígeno del mismo, une tígeno.
En otra modalidad, el primer anticuerpo parental o ión de antígeno del mismo, y el segundo anticuerpo rción de unión de antígeno del mismo, se selecciona e consiste de anticuerpo humano, anticuerpo injerta ticuerpo humanizado. En una modalidad, las porciones tígeno se seleccionan del grupo que consiste de un fra fragmento F(ab')2, un fragmento bivalente que gmentos Fab enlazados por un puente de disulfuro en I zne; un fragmento Fd que consiste de los dominios V gmento Fv que consiste de los dominios VL y VH d ivídual de un anticuerpo, un fragmento dAb, una re terminación de complementartedad aislada (CDR), un cadena individual, y diacuerpos.
En otra modalidad, la proteína de unión posee al ticuerpo se seleccionan del grupo que consiste de espe tígeno, afinidad a antígeno, potencia, función conocimíento de epítopo, estabilidad, solubilidad, ef oducción, inmunogenicidad, fármaco cinética, bíodís actividad cruzada de tejido, y unión de antígeno ortól dalidad, la proteína de unión es multivalente. En otra proteína de unión es multiespecífíca. Las proteína ltivalentes o multiespecíficas descritas aquí tienen seables, en particular desde un punto de vista tera mpio, la. proteína de unión multivalente o una mu! ede ser (1) internalizada (y/o catabolizada) más ráp ticuerpo bivalente por una célula que expresa un an al se unen los anticuerpos; (2) puede ser un anticuer (3) puede inducir muerte celular y/o apoptosís de un presa un antígeno, en donde el anticuerpo multivalen unirse. El "anticuerpo parental" que proporciona por lo nstruyen como una proteína de unión muítivalent scribe aquí.
En otra modalidad, la proteína de unión de la inv a constante de velocidad de acción (Kon) para uno o m leccionados del grupo que consiste de: por roximadamente 10 M S"1; por lo menos aproximadam "1; y por lo menos aproximadamente 106M4S 1, segú vés de resonancia de piasmón superficial. En otra m oteína de unión de la invención tiene una constante d acción (Kon) para uno o más objetivos de entre 102M" ; entre 103M- S"1 y 104M- S"1; entre 10 M-1S*'1 y 1 tre 105M-1S"1 y 106M-1S"\ según medido a través de re smón superficial.
En otra modalidad, la proteína de unión tiene una c s locidad sin acción (Koff) para uno o más objetivos se \ grupo que consiste de: por lo menos aproximadam e consiste de: a lo mucho 10"7M; a lo mucho 10"8M¡ a l : a lo mucho 10*10 ; a lo mucho 1CT11M; a lo mucho 1 cho 10'13 . En una modalidad, la proteína de unió nstante de disociación (KD) para sus objetivos de 10"7 10'8 M a 10-9 M¡ de 10"9 M a 10'10 M; de 10'10 a 10'11 M 10"12 M; o de 10~12 a M 10"13 M.
En otra modalidad, la proteína de unión descrita njugado que además comprende un agente seleccionad e consiste de una molécula de inmunoadhesión, mador de imagen, un agente terapéutico, y un agent una modalidad, el agente formador de imagen se sel upo que consiste de una radiomarca, una enzima, u orescente, una etiqueta luminiscente, una eti miniscente, una etiqueta magnética, y biotina. En otra agente formador de imagen es una radioetiqueta selec upo que consiste de: 3H, 4C 35S, 90Y, "Te, 1ln, 1251, unión cristalizada tiene una vida medía mayor, ín traparte soluble de dicha proteína de unión. En otr icional , la proteína de unión cristalizada retiene l ológica.
En otra modalidad, la proteína de unión descrit icosilada. Por ejemplo, la glicosilación es un icosilación humano.
Un aspecto de la invención se refiere a un áci slado que codifica cualquiera de las proteínas de uni uí. Una modalidad más proporciona un vector que c ido nucleico aislado descrito aquí, en donde dich lecciona del grupo que consiste de pcADN; pTT (Dur cleic Acids Research 2002, Vol 30, No.2); pTT3 (pTT onación múltiple adicional; pEFBOS (Mizushima, S. y 990) Nucleic acids Research Vol 18, No. 17); pBV; pJ PO, pEF6 TOPO y pBJ. En una modalidad, el vector S; NSO, SP2, PER.C6 o una célula fúngíca ccahoromyces cerevisiae; o una célula de insecto tal c En una modalidad, dos o más DVD-lgs, por ej erentes especificidades, se producen en una célu combinante individual. Por ejemplo, la expresión de un ticuerpos ha sido denominada Oligoclonics™ (M landa) Patentes de E.U.A. Nos. 7,262,028; 7,429,486.
Otro aspecto de la invención proporciona un m oducir una proteína de unión descrita aquí, que compre alquiera de las células huésped también descritas dio de cultivo bajo condiciones suficientes para oteína de unión. En una modalidad, un 50%~75% de la ión producida mediante este método es una proteín travalente específica doble. En una modalidad partícul % de la proteína de unión producida mediante este mé oteína de unión tetravalente específica doble. En un nhídridos), poli (dépsípéptido), poli (ésteres), ácido p \6o poli (láctico-co-glicólico) o PLGA, poli (b-hidroxib aprolactona), poli (dioxanona); poli (etilen gl idroxipropil) meta cr ¡lamida, poli [(órgano)fosfazeno], teres), alcohol poli (vinílico), poli (vinilpirrolidona), cop hídrido maleico-alquil vinil éter, , polioles plurónicos inato, celulosa y derivados de celulosa, coiáge latina, ácido hialurónico, oligosacáridos, glicam lisacáridos sulfatadas, mezclas y copolímeros de los mplo, el ingrediente se selecciona del grupo que búmina, sacarosa, trehalosa, lactitol, gelatina, h id lodextrina, metoxipolietilen glicol y polietiien g dalidad proporciona un método para tratar a un ma mprende el paso de administrar al mamífero una canti la composición descrita aquí.
La invención también proporciona una hibidor de TIE-2), un bloqueador de molécula de co- cluyendo, pero no limitándose a anti-B7.1, anti-B7,2 ti-CD20), un bloqueador de molécula de adhesión ro no limitándose a un anticuerpo anti-LFA-1 , un anti L selectina, un inhibidor de molécula pequeña), y un ti-citocina o fragmento funcional del mismo (inciuyen ítándose a anticuerpo de receptor anti-ÍL-18, anti-TN citocina), metotrexato, ciclosporina, rapamicina, F iqueta o reportero detectable, un antagonista de TN umático; un relajante muscular, un narcótico, un fá lamatorío no esteroidal (NSAID), un analgésico, un an dante, un anestésico local, un bloqueador neurom timicrobiano, un antí-psoriático, un corticoesteroide, abólico, una erítropoyetína, una inmuniza munoglobulina, un inmunosupresor, una hormona de fármaco de reemplazo de hormona, un radio-farma chos síntomas es mitigado o el tratamiento es l mplo, el trastorno se selecciona del grupo que compre teoartritis, artritis crónica juvenil, artritis séptica, artrit ritis psoriática, artritis reactiva, espondiloatrop témico eritematoso, enfermedad de Crohn, colitis fermedad inflamatoria del intestino, diabetes mellitus insulina, tiroiditis, asma, enfermedades alérgicas, rmatitis escieroderma, enfermedad de injerto contr chazo de trasplante de órgano, enfermedad inmun ónica asociada con trasplante de órganos, erosclerosis, coagulación intravascular diseminada, enf wasaki, enfermedad de grave, síndrome nefrótico, s tiga crónica, granulomatosis de Wegener, púrpura hoenlein, vasculitis microscópica de los ríñones, hep ónica, uveítis, choque séptico, síndrome de cho ndrome de > sepsis, caquexia, enfermedades erativa, sinovitis enteropática, clamidia, yersinia y ociada con salmonella, espondiloartropatia, eromatosa/arterioescierosis, alergia atópica, enferme toinmune, pénfigo vulgaris, pénfigo foliáceo, fermedad de IgA lineal, anemia hemolítica autoinmu molítica positiva de Coombs, anemia perniciosa adquir rniciosa juvenil, encefalitis mialgica/enfermedad Libr ndidiasis mucocutánea crónica, hepatitis esclerosant patitis autoinmune criptogénica, síndrome de inmun quirida, enfermedades relacionadas con inmun quirida, hepatitis B, hepatitis Ct inmunodeficiencia va ipogamaglobulmemia va iable común), cardiorniopatí ertilidad femenina, falla ovárica, falla ovárica fermedad pulmonar fibrótica, alveolitts fibrosante c fermedad pulmonar intersticial pos-inflamatoria, tersticial, enfermedad de tejido conectivo asociada con lmonar intersticial inducida por fármaco, fibrosis, diación, bronquiolitis obliteran, neumonía eosinofíli fermedad pulmonar de infiltración linfocitica, enfermed ersticial pos-infecciosa, artritis gotosa, hepatitis patitis autoinmune de tipo 1 (hepatitis autoinmune poide), hepatitis autoinmune de tipo 2 (hepatitis de antt M), hipoglícemia mediada autoinmune, resistencia a ín n acantosis nigricans, enfermedad inmune aguda a splante de órgano, enfermedad inmune crónica as splante de órgano, osteoartritis, colangitis esclerosan oriasis tipo 1, psoriasis tipo 2, leucopenia idiopática, toinmune, NOS de enfermedad renal, glomerulonefri^tí croscópíca de los ríñones, enfermedad de Lyme, lupus scoide, infertilidad masculina idiopática o NOS, autoin perma, esclerosis múltiple (todos los sub-tipos patética, hipertensión pulmonar secundaria a enfermed pático inducido por alcohol, colecistitis, enfermedad iosincrática, hepatitis inducida por fármacos, esteato ohólica, alergia y asma, infección por estreptococo BS), trastornos mentales (por ejemplo, depresión y es fermedades mediadas por tipo Th2 y tipo Th1, dol ónico (diferentes formas de dolor), ycánceres tales c pulmón, de mama, de estómago, de vejiga, de^colon, d ovario, de próstata y rectal y malignidades hem ucemia y linfoma), abetalipoprotemia, Acrocianosis, rásitos o infecciosos agudos y crónicos, leucemia agud foblástica aguda (ALL), leucemia mieloide aguda (AM cteriana aguda o crónica, pancreatitis aguda, falla r enocarcinoma, latidos ectópicos aéreos, complejo de d DA, hepatitis inducida por alcohol, conjuntivitis alérgic érgica por contacto, rinitis alérgica, rechazo de ficiencia de alfa-1-anti-tripsina, esclerosis lateral mores cardiacos, cardiomiopatía, respuesta de infl rivación cardiopulmonar, rechazo de trasplante d generaciones corticales de cerebelo, trastornos d quicardia atríal caótica o de foco múltiple, trastorno n quimioterapia, leucemia mielocítica crónica (CML), ónico, patologías inflamatorias crónicas, leucemia ónica (CLL), enfermedad pulmonar obstructiva cróni oxicación crónica por salicilato, carcinoma color rdiaca congestiva, conjuntivitis, dermatitis por co lmonar, enfermedad de arteria coronaria, enfe eutzfeldt-Jakob, sepsis negativa de cultivo, f i b r o s stornos asociados con terapia de citocina, demencia fermedades desmielizantes, fiebre hemorrágica p rmatítis, condiciones dermatológicas, diabetes, diabet fermedad ateroesclerótica diabética, enfermedad del wy Difuso, cardiomiopatía congestiva dilatada, trasto chazo de injerto de cualquier órgano o tejido, s gativa, sepsis gram positiva, granulomas debido racelulares, leucemia de célula pilosa, enfer llerrorden-Spatz, tiroiditis de Hashimoto, fiebre del he trasplante de corazón, hemacromatosis, hemodiálisi émico hemolítico/púrpura trombocitopénico t morragia, hepatitis (A), arritmias de haz de His, infecci uropatía por VIH, enfermedad de Hodgkin, tra vimiento hipercinéticos, reacciones de hipers umonitis por hípersensibílídad , hipertensión, tra vimiento hipocin éticos, evaluación hipotalámtca-p renal, enfermedad de Addison idiopáttca, fibrosi iopática, citotoxicidad mediada por anticuerpo, áste scular espinal infantil, inflamación de !a aorta, i posición a radiación ionizante, iridociclitis/uvettis/neu ño por isquemia-reperfusión, choque isquémico, artritis seph), miastenia grave, micobacterium aviar i berculosis por micobacteria, síndrome mielodiplásico ocardio, trastornos isquémicos al miocardio, carci ríngeo, enfermedad pulmonar crónica neonatal, nefriti fermedades neurodegenerativas, atrofias musculares n fiebre neutropénica, iinfoma de no Hodgkin, oclusión dominal y sus ramificaciones, trastornos arteriales rapia okt3, orquitis/epididimitis, orquitis/procedimientos vasectomía, órganomegalia, osteoporosis, rechazo d páncreas, carcinoma pancreático, síndrome par percalcemia de malignidad, rechazo de trasplante de fermedad inflamatoria pélvica, rinitis perenial, ricardial, enfermedad aterosclerótica periférica, scuiares periféricos, peritonitis, anemia perniciosa, umonía carinii, neumonía, síndrome de POE S (pol ganomegalia, endocrinopatía, gamopatia monocional, mbios de piel, rechazo de trasplante de intestino delga iidos, arritmias específicas, ataxia espinal, deg pino-cerebelares, miositis por estreptococo, lesiones e i cerebelo, panencefalítis esclerosante, sub-agudá, sín l sistema cardiovascular, anafalaxis sistémica, sí spuesta inflamatoria sistémica, artritis reumatoide juve témico, ALL de célula T o FAB, telangiectasia, tr literante, trombocitopenia, toxicidad, uma/hemorragia, reacciones de hipersensibilidad d persensibilidad de tipo IV, angina inestable, uremia, ticaria, enfermedades cardiacas valvulares, venas sculitis, enfermedades venosas, trombosis venosa, ntricular, infecciones virales y fúngicas, encefalitis vit éptica,, síndrome hemafagocítíco asociado vital, sí ernicke-Korsakoff , enfermedad de Wilson, rechazo de cualquier órgano o tejido, síndromes coronari rdiovascular, síndrome anti-fosfoíípido catastrófico, liaca, espondilitis cervical, isquemia crónica, penfigoid ndrome clínicamente aislado (cis) con riesgo de ltiple, conjuntivitis, trastorno psiquiátrico de inicio fermedad pulmonar obstructiva crónica (COPD), d rmatomiositis, retinopatía diabética, diabetes mellitus sco, prolapsos de disco, anemia hemolítica inmune i rmacos, endocarditis, endometriosis, endoftalmitis, terna multiforme, eritema multiforme mayor, stacional, síndrome de Guillain-Barré (GBS), fiebre ndrome de Hughes, enfermedad de Parkinson idiopatic tersticial idiopática, alergia mediada por I g E , anemi muñe, miositis corporal de oclusión, enfermedad inflam fecciosa, enfermedad desmielizante inflamatoria, rdiaca inflamatoria, enfermedad renal inflamatoria, IP eratitis, queratoconjuntivitis seca, enfermedad de dosa (o periarteritis nodosa), poiicondritis, poiimialgia !iosis, JRA poliart icular, síndrome de deficiencia po liomiositis, poiimialgia reumática (P R), síndrome de p rkinsonismo primario, cáncer de próstata y rectal y matopoyéticas (leucemia y linfoma), prostatitis, óbulos rojos pura, insuficiencia adrenal primaria, n currente óptica, restenosis, enfermedad cardiaca reu inovitis, acné, pustulosis, hiperostosis y osteítis), es iloidosis secundaria, ataque pulmonar, escleriti suficiencia adrena! secundaria, enfermedad de tejid ociada con silicón, dermatosis de sneddon-wilkinson, quilosante, síndrome de Stevens-Johnson (SJS), s spuesta inflamatoria sistémica, arteritis tempora xoplásmica, necrolísis epidérmica tóxica, mielitis APS (receptor de factor de necrosis tumoral), reacc o 1, diabetes tipo II, urticaria, neumonía intersticial jiga y urotelio), tracto genital femenino (incluyendo cér arios, así como coriocarcinoma y enfermedad t stacional), tracto genital masculino (incluyendo próstat mínales, testículos y tumores de célula germina!) docrinas (incluyendo la tiroides, glándulas adrenales piel, así como hemangiomas, melanomas, sarcomas uellos que surgen de huesos y tejidos blandos así co Kaposi), tumores del cerebro, nervios, ojos, y cluyendo astrocitomas, gliomas, glioblastomas, retin uromas, neurobiastomas, Schwanomas, y meningioma lidos que surgen de malignidades hematopoyéticas ucemias, y linfomas (tanto linfomas de Hodgkin c dgkin).
Las DVD-lgs de la invención también pueden trata las siguientes enfermedades: síndromes coronari lineuritis Idiopática Aguda, Poliradiculoneuropatía D pondi!osis cervical, isquemia crónica, penfigoíde de ci ndrome clínicamente aislado (CIS) con riesgo de ltipíe, conjuntivitis, Trastorno Psiquiátrico que inicia fermedad pulmonar obstructiva crónica (COP'D), d rmatomiositis, retinopatía diabética, diabetes mellitus seo, prolapsos de disco, anemia hemolítica inmune i rmacos, endocarditis, endometriosis, endoftalmitis, itema multiforme, eritema multiforme mayor, stacional, síndrome de Guillain-Barré (GBS), Fiebre ndrome de Hughes, enfermedad de Parkinson ídíopátic tersticial idiopática, alergia mediada por IgE, anemi mune, miositis corporal de inclusión, enfermedad ular infecciosa, enfermedad desmielizante i fermedad cardiaca inflamatoria, enfermedad renal i F/UIP, iritis, queratitis, queratocónjunti itis seca, enf ssmaul o enfermedad de Kussmaul-Meier, parálisis limialgia reumática, poliosis, JRA po!iarticular, si ficiencia poliendocrina, polimiositis, polimiatgia reumá ndrome pos-bomba, parkinsonismo primario, cáncer d ctal, y malignidades hematopoyéticas (leucemia ostatitis, aplasia de célula roja pura, Insuficien imaría, Optica de Neuromielitis Recurrente, enfermed umática, SAPHO (sinovítis, acné, pustuiosis, hipe teítis), escleroderma, amiloidosis secundaria, choqu cleritis, ciática, insuficiencia adrenal secundaria, enf jido conectivo asociada con sil icón , dermatosis d ilkinson, espondilitis anquilosante, síndrome de Stev JS), síndrome de respuesta inflamatoria sistémic mporal, retinitis toxoplásmica, necroüsis epidérmica tóx nsversal, TRAPS (Receptor de Factor de Necrosi acción alérgica tipo 1, diabetes tipo II, urticaria tersticial usual (UlP), vasculitis, conjuntivitis primave ministrar cualquiera de una de las proteínas de unió uí antes, concurrente, o después de la administra gundo agente, como se discute aquí. En una modalida segundo agente se selecciona de! grupo que denosida, factor de crecimiento epidérmico, cortic losporina, suífasalazina, aminosaliciiatos, 6-mer atioprina, metronidazol, inhibidores de lipoxígenasa, r alazina, balsalazida, antioxidantes, inhibidores de t tagonistas de receptor de IL-1, mAbs anti-IL-?ß, mAbs i-IL-6 o IL-6, factores de crecimiento, inhibidores d mpuestos de piridinil-imidazo!, anticuerpos o agonist , IL-1, IL-2, IL-6, IL-7, IL-8, IL-12, IL-13, IL-15, IL-16, I AP-II, GM-CSF, FGF, y PDGF, anticuerpos de CD2, 8, CD-19, CD25, CD28, CD30, CD40, CD45, CD69, andos, metotrexato, ciclosporina, FK506, rapamicina, fetil, leflunomida, NSAIDs, ibuprofeno, cortic 10, IL-11, IL-13 y TGF ß.
En una modalidad particular, las composiciones fa scritas aquí se administran al paciente a través de p modo seleccionado de administración parenteral, ra muscular, intravenosa, intra-articular, intrabronq domínai, intracapsular, intracartílaginosa, in racelial, íntracerebelar, intra-cerebrovascular, racervical, íntragástrica, intrahepática, intramiocardio, ra pélvica, intrapericardiaca, intraperitoneal, i raprostática, intrapulmonar, intra-rectal, intra-renai, i raespinal, intrasinovial, intratoráxica, intrauterina, i io, vaginal, rectal, bucal, sublingual, intranasal, y trans Un aspecto de la invención proporciona por lo ticuerpo anti-idiotípico para por lo menos una proteína presente invención. El anticuerpo anti-idiotípico inclu oteína o péptido conteniendo una molécula que compr BREVE DESCRIPCION DE LOS DIBUJOS La Figura 1A es una representación esqu nstrucciones de Dominio Variable Doble (DVD)-lg y trategia para la generación de una DVD-lg de dos rentales; La Figura 1B es una representación de construccion D2-lg, y dos anticuerpos mono-específicos quimérico hibridoma 2D13.E3 (anti-IL-1a) y 13F5,G5 (anti- IL-?ß) DESCRIPCION DETALLADA DE LA INVENCIO Esta invención se refiere a proteínas de unión multi ltiespecíf icas capaces de unir dos o más pecíf icamente, la invención se refiere a inmunogl minio variable (DVD-lg), y composiciones farmacéuti rminos deben ser claros, sin embargo, en el caso d bigüedad latente, las definiciones provistas a ecedente sobre cualquier definición de diccionario o emás, a menos que se requiera lo contrario por c rminos singulares deben incluir pluralidades y los térmi ben incluir los singulares. En esta solicitud, el uso de /o" a menos que se establezca otra cosa. Además, rmino "que incluye", así como otras formas, tales como ciuido", no es limitante. También, los términos lemento" o "componente" abarcan tanto eleme mponentes que comprenden una unidad y el mponentes que comprenden más de una subunidad a pecíficamente se establezca lo contrario.
En general, las nomenclaturas utilizadas con re cnicas de, cultivo celular u de tejido, biología munología, microbiología y química de proteína y ácid cnica o como se describe aquí. Las nomenclaturas úti lación a, y los procedimientos de laboratorio y técnicas alítica, química orgánica sintética, y química rmacéutica descritas aquí, son aquellas bien c múnmente conocidas en la técnica. Se utilizan técnicas ra síntesis químicas, análisis químicos, preparación fa rmulación y suministro, y tratamiento de pacientes.
Para entender la presente invención más f cil rminos seleccionados se definen a continuación.
El término "polipéptido" como se utiliza aquí, s alquier cadena polimérica de aminoácidos. Los términ "proteína" se usan intercambiablemente con el término también se refieren a una cadena polimérica de amin rmino "polipéptido" abarca proteínas nativas o gmentos de proteína y análogos de polipéptido de un proteína. Un polipéptido puede ser monomérico o pol r lo menos aproximadamente 15 aminoácidos contigu nos aproximadamente 20 aminoácidos contiguos. Una lipéptido es como se describe aquí.
El término "proteína aislada" o "polipéptido aisla oteína o polipéptido que en virtud de su origen o rivación no está asociado con componentes n ociados que lo acompañan en su estado n bstancialmente libre de otras proteínas de la misma presa por una célula de una especie diferente; o no turaleza. De esta manera, un polipéptido que está q tetizado o sintetizado en un sistema celular diferente partir de la cual se origina naturalmente debe ser "ais mponentes naturalmente asociados. Una proteína ta r presentada substancíalmente libre de componentes ociados mediante aislamiento, utilizando técnicas de proteína bien conocidas en el campo. lógicas incluye, pero no se limitan a, receptor de unió proliferación de célula, inhibición de crecimiento ucciones de otras citocínas, inducción de apoptosis, zimática. La actividad biológica también incluye la a molécula de Ig.
Los términos "unión específica" o "específicament mo se utiliza aquí, con referencia a la interacc ticuerpo, una proteína, o un péptido con una segú ímica, significa que la interacción depende de la prese tructura particular (por ejemplo, un determinante a ítopo) en la especie química; por ejemplo, un anticuer se une a una estructura de proteína específica e oteínas en general. Si un anticuerpo es específico para \ la presencia de una molécula que contiene el epítop no marcado), en una reacción conteniendo "A" ma ticuerpo, reducirá la cantidad de A marcado unido al an tá compuesta de una región variable de cadena pesad uí como HCVR o VH) y una región constante de cadena gión constante de cadena pesada está compuesta de tr 1, CH2 y CH3. Cada cadena ligera está compuesta de riable de cadena ligera (abreviado aquí como LCVR gión constante de cadena ligera. La región constante era está compuesta de un dominio, CL. Las region emás pueden ser subdívididas en regiones de htper nominadas regiones de determinación de comple DR), intercaladas con regiones que son más c nominadas regiones de estructura de trabajo (FR). Ca tá compuesta de tres CDRs y cuatro FRs, dispuest rmino amino hacia el término carboxi en el siguiente R1, FR2, CDR2} FR3, CDR3, FR4. Las mo munogiobulina pueden ser de cualquier tipo de clase ( G, I g E , IgM, IgD, IgA e IgY), o subclase (por ejemplo, l función efectora de anticuerpo (Winter, et al, Patente s. 5,648,260 y 5,624,821). La porción Fe de un anticu rias funciones efectoras importantes, por ejemplo, la i ocína, ADCC, fagocitosis, citotoxicidad depen mplemento (CDC) y vida media/velocidad de elim ticuerpo y complejos de antígeno-anticuerpo. En alg tas funciones efectoras son deseables para anticuerpo ro en otros casos pueden ser innecesarias o a pendiendo de los objetivos terapéuticos. Ciertas isoti rticularmente lgG1 e lgG3, median ADCC y CDC a t ión a FCyRs y C1q de complemento, respectiva eeptores de Fe neonatales (FcRn) son los componen e determinan la vida media en circulación de los anti ra modalidad, por lo menos un residuo de ami emplazado en la región constante del anticuerpo, por gión Fe del anticuerpo, de manera que las funciones e ochemistry 37: 9266-73). Por lo tanto, es posible gen edia monovalente. De manera interesante, estas molé edia monovalente se han encontrado por naturalez bclases de IgG como de IgA (Seligman 1978 Ann I 5-70; Biewenga, et al, 1983 Clin Exp Immunol 51: 3 tequiometría de la región Fe de FcRn:lg se ha determ 1 (West, et al, 2000 Biochemístry 39: 9698-708), y la ficiente para mediar la unión de FcRn (Kim, et al, munol; 24; 542-548). Las mutaciones para int merización del dominio CH3 pueden no tener mayor ef bre su unión de FcRn ya que los residuos importan merización de CH3 están localizados en la superfici terna de la estructura de la lámina de CH3 b, mien gión responsable para la unión de FcRn está ubi perficie colindante externa de los dominios CH bargo, la molécula Ig media puede tener cierta ve ñera que un fragmento i g G 1 Fe apropiado puede nerando así una i g G 1 Fe completamente recombinant n potencia enormemente mejorada (Anthony, R.M. et ience 320:373-376).
El término "porción de unión a antígeno" de un a plemente "porción de anticuerpo"), como se utiliz fiere a uno o más fragmentos de un anticuerpo qu bilidad de unirse específicamente a un antígeno. Se e la función de unión a antígeno de un anticuerpo alizada a través de fragmentos de un anticuerpo mpleta. Dichas modalidades de anticuerpo también rmatos biespecíf icos, específicos dobles, o multi- iéndose específicamente a dos o más antígenos emplos de fragmentos de unión abarcados dentro orción de unión a antígeno" de un anticuerpo inclu gmento de Fab, un fragmento monovalente que con DR). Además, aunque los dos dominios del fragmento , son codificados por genes separados, éstos pueden lizando métodos recombinantes, a través de un enlaza e les permite hacerse como una cadena de proteína i nde las regiones VL y VH se emparejan para forma novalentes (conocidas como Fv de cadena individual rd, et al, (1988) Science 242: 423-426; Huston, et al, ( tl. Acad. Sci. USA 85: 5879-5883). Dichos anticuerpo ividual también pretenden ser abarcados dentro orción de unión a antígeno" de un anticuerpo. nsideran otras formas de anticuerpos de cadena indiv mo diacuerpos. Los diacuerpos son anticuerpos specíficos, en donde los dominios VH y VL se expré dena de polipéptido individual, pero utilizando un enlaz masiado corto para permitir la formación de pares en minios en la misma cadena, forzando así a los lipéptidos de cadena ligera de complementariedad, for regiones de unión a antígeno (Zapata, et al, P 10):1057-1062); y Patente de E.U.A. No. 5,641,870).
El término "proteína de unión multivalente" se esta especificación para denotar una proteína de mprende dos o más sitios de unión a antígeno. En una proteína de unión multivalente se diseña por ingenierí tres o más sitios de unión a antígeno, y en gener ticuerpo de existencia natural. El término "proteín ltiespecíf ica" se refiere a una proteína de unión capaz más objetivos relacionados o no relacionados. Las p ión de dominio variable doble (DVD) de ia invención s ó más sitios de unión a antígeno y son protéín travalentes o multivalentes. Los DVDs pu noespecíf icos, es decir, capaces de unir un a ltiespecíficos, es decir, capaces de unir dos o más ant fiere a anticuerpos de longitud completa que son diante la tecnología de cuadroma (ver, Milstein, C. y ture, 1983. 305(5934); p. 537-40), a través de conjuga dos diferentes anticuerpos monoclonales (ver, Staerz, ture, 1985. 314(6012), o a través de perilla en e pectos similares que introducen mutaciones en la r er, Holliger, P., T. Prospero, y G. Winter, Proc Nati Ac 93. 90(14): p. 6444-8.18), dando como resultad ferentes especies de inmunoglobulina, de las cuales so ticuerpo biespecífico funcional. A través de función m ticuerpo biespecífico une un antígeno (o epítopo) en s brazos de unión (un par de HC/LC), y une un difere epítopo) en su segundo brazo (un par diferente de vés de esta definición, un anticuerpo biespecífico stintos brazos de unión a antígeno (tanto en especif cuencias de CDR), y es monovalente para cada antíge Un "sitio de unión a antígeno funcional" de una ión es uno que es capaz de unir un antígeno objetivo. unión a antígeno del sitio de unión a antíg cesariamente tan fuerte como el anticuerpo parental, al se deriva el sitio de unión a antígeno, pero la habil antígeno debe ser medible utilizando cualquiera de riedad de métodos conocidos para evaluar la unión de antígeno. Además, la afinidad de unión a antígeno de s sitios de unión a antígeno de un anticuerpo multivale cesíta ser cuantitativamente la misma.
El término "citocína" es un término genérico par eradas por una población de célula, las cuales actúa blación de célula como mediadores intercelulares. chas citocinas son linfocinas, monocínas, y ho lipéptido tradicionales. Entre las citocinas se incluyen crecimiento tal como hormona de crecimiento human mbopoyetina (TPO); factores de crecimiento de nervios F-alfa; factor de crecimiento de plaqueta; factor de cre centa, factores de crecimiento de transformación ( ?t?? TGF-alfa y TGF-beta; factor-1 y -11 de crecimie ulina; eritropoyetina (EPO); factores osteoinductivo; les como interferón-alf a, -beta y -gama, factores esti lonia (CSFs) tales como macrófago-CSF (M-CSF); crófago.CSF (GM-CSF); y granulocito-CSF (G-CSF); i s), tales como IL-1, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL , IL-11, IL-12, IL-13, IL-15, IL-18, IL-21, IL-22, IL-2 ctor de necrosis tumoral tai como TNF-alfa o TNF-b ctores de polipéptido incluyendo LIF y el ligando kit (K iliza aquí, el término citocina incluye proteínas túrales o de un cultivo de célula recombinante y oiógicamente activos de las citocinas de secuencia nati El término "enlazador" se utiliza para denotar polip EC ID NO: 6); RADAAPTVS (SEC ID NO: 7); RADA EC ID NO: 8); RADAAAA(G S)4 (SEC ID KTTPKLEEGEFSEARV (SEC ID NO: 10); ADAAP (SEC AAPTVSIFPP (SEC ID NO: 12); TVAAP (SEC I AAPSVFIFPP (SEC ID NO: 14); QPKAAP (SEC I KAAPSVTLFPP (SEC ID NO: 16); AKTTPP (SEC I TTPPSVTPLAP (SEC ID NO: 18); AKTTAP (SEC I TTAPSVYPLAP (SEC ID NO: 20); ASTKGP (SEC I TKGPSVFPLAP (SEC ID NO: 22), GGGGSGGGGSGGG : 23); GENKVEYAPALMALS (SEC ID NO: 24); GPAKEL EC ID NO: 25); GHEAAAVMQVQYPAS (SEC ID NO: 26).
Un "dominio constante de inmunoglobulina" se r minio constante de cadena pesada o ligera. En la nocidas las secuencias de aminoácido de dominio c dena pesada y cadena ligera de IgG humana.
El término "anticuerpo monoclonal" o "mAb", com tra un determinante individua! en el antígeno. El onoclonal" no debe ser construido como requiriendo la í anticuerpo mediante cualquier método particular.
El término "anticuerpo humano", como se utiliza aq luir anticuerpos que tienen regiones variables y rivadas de secuencias de inmunoglobulina de líne mana. Los anticuerpos humanos de la invención incluy aminoácido no codificados por secuencias" de inmuno ea germinal humana (por ejemplo, mutaciones i diante mutagénesis aleatoria o de sitio específico i vés de mutación somática in vivo), por ejemplo, en las rticular, CDR3. Sin embargo, el término "anticuerp mo se utiliza aquí, no pretende incluir anticuerpos cuencias de CDR derivadas de la línea germinal de otra mífero, tal como un ratón, han sido injertadas en se tructura de marco humanas. rrick J.W. (2002) BioTechniques 29:128-145; Hoogen ames P. (2000) Immunoiogy Today 21:371-378), lados de un animal (por ejemplo, un ratón) que es ra genes de inmunoglobulina humana (ver, Taylor, L 992) Nucí. Acids Res. 20:6287-6295; Ke!lermann S-A. y 002) Current Opinión in Biotechnoiogy 13:593-597; Litt 000) Immunology Today 21:364-370) o anticuerpos presados, creados o aislados mediante otros olucran la división de secuencias del gen de inmu tuana a otras secuencias de ADN. Dichos anticuerp combinantes tienen regiones variables y constantes d cuencias de inmunoglobulina de línea germinal h bargo, en ciertas modalidades, dichos anticuerpo combinantes son sometidos a mutagénesís in vítro (o, iliza un animal transgénico para secuencias de I tagénesis somática in vivo) y de esta manera las se ticuerpos maduros de afinidad ilustrativos tendrán nomolares o aún picomoiares para el antígeno o ticuerpos maduros de afinidad son producidos ocedimientos conocidos en la técnica. Marks, et al, Bid 1 :779-783 (1992) describe maduración de afinida tremezclado de dominio VH y VL. La mutagénesis aleat residuos de estructura de marco se describe por: B oe. Nat. Acad. Sci, USA 91:3809-3813 (1994); Schier 9:147- 155 (1995); Yelton et al. J. Immunol. 155:1994- ckson et al., J. Immunol. 154(7):3310-9 (1995); Hawki l. Biol 226:889-896 (1992) y mutación selectiva en p utagénesis selectiva, posiciones de contacto o hiperm residuo de aminoácido de mejora de actividad como ta Patente de E.U.A. US 6914128B1.
El término "anticuerpo quimérico" se refiere a anti mprenden secuencias de región variable de cadena pes las CDRs de murino (por ejemplo, CDR3) ha sido reem cuencias de CDR humanas.
El término "anticuerpo humanizado" se refiere a e comprenden secuencias de región variable de cade era de una especie no humana (por ejemplo, un rató nde por lo menos una porción de la secuencia VH y/o e ra da a una apariencia "de tipo humano", es decir, m cuencias variables de línea germinal humanas, ticuerpo humanizado en un anticuerpo injertado co nde se introducen secuencias de CDR humanas en se VL no humanas para reemplazar las secuencias manas correspondientes. También "anticuerpo humani ticuerpo o una variante, derivado, análogo o fragment e se une de manera inmunoespecífica a un antígeno e comprende una región de estructura de marco (F bstancialmente la secuencia de aminoácido de un minios variables (Fab, Fab', F(ab') 2, FabC, Fv) en do bstancialmente todas las regiones de CDR corre uellas de una inmunoglobulina no humana (es decir, nador) y todas o substancialmente todas las regiones d marco son aquellas de una secuencia de co munoglobulina humana. En una modalidad, un manizado también comprende por lo menos una por g i ó n constante de inmunoglobulina (Fe), típicamente a inmunoglobulina humana. En algunas modalidades, u manizado contiene tanto la cadena ligera como al minio variable de una cadena pesada. El anticuer cluye las regiones CH1, de gozne, CH2, CH3, y CH4 d sada. En algunas modalidades, un anticuerpo huma ntiene una cadena ligera humanizada. En algunas mod ticuerpo humanizado solo contiene una cade manizada. En modalidades específicas, un anticuerpo abat et al. (1971) Ann. NY Acad, Sci. 190:382-391 v. a\. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Inte ición, U.S. Department of Health and Human Services, H No. 91-3242). Para la región variable de cadena gión hipervariable varía de las posiciones de aminoáci ra CDR1, posiciones de aminoácido 50 a 65 par siciones de aminoácido 95 a 102 para CDR3. Par riable de cadena ligera, la región hipervariable v siciones de aminoácido 24 a 34 para CDR1, po iinoácido 50 a 56 para CDR2, y posiciones de aminoác ra CDR3.
Como se utiliza aquí, el término "CDR" se refiere a I terminación de complementariedad dentro de secuenci anticuerpo. Existen tres CDRs en cada una de l riables de la cadena pesada y la cadena ligera, la signan CDR1, CDR2 y CDR3, para cada una de l residuo definiendo las tres CDRs. Estas CDRs nominadas como CDRs de Kabat. Chothia y colaborado Lesk, J. Mol. BioL 196:901-917 (1987) y Chothia et 2:877-883 (1989)) encontraron que ciertas sub-porcion s CDRs de Kabat adoptan conformaciones de estructura ptido casi idénticas, a pesar de tener gran diversidad cuencia de aminoácido. Estas sub-porciones se desig , L2 y L3 ó H1, H2 y H3, en donde °LB y "H" designan I cadena ligera y de cadena pesada, respectivam giones pueden ser denominadas como las CDRs de ales tienen límites que traslapan con las CDRs de ites que definen CDRs que traslapan con las CDRs d do descritos por Padlan (FASEB J. 9:133-139 (19¾5)) y Mol Bíol 262(5):732-45 (1996)). Otras definiciones m CDR pueden no estrictamente seguir uno de los sis esente, pero traslaparán con las CDRs de Kabat, aun etantes de una región variable menos las CDRs. Ya q finición de una secuencia de CDR puede ser deter ferentes sistemas, el significado de una secuencia de e rco es sometido a interpretaciones correspon ferentes. Las seis CDRs (CDR-L1, -L2, y -L3 de la cad R-H1, -H2, y -H3 de cadena pesada) también dividen l estructura de marco en la cadena ligera y la caden atro sub-regiones (FR1, FR2, FR3 y FR4) en cada nde la CDR1 está colocada entre FR1 y FR2, CDR2 3, y CDR3 entre FR3 y FR4. Sin especificar las s rticulares como FR1, FR2, FR3 o FR4, una región de e rco, como las denominadas por otras, represent mbinadas dentro de la región variable de una munoglobulína de existencia natura!, individual. Com uí, una FR representa una de las cuatro sub-regiones presentan dos o más de las cuatro sub-regiones que presente invención se basa en ei reconocimiento que l ticuerpo de línea germinal son probablemente más qu anticuerpo maduros para conservar estructuras de s inoácido esenciales características de individuos en l r lo que menos probablemente serán reconocidas c ente extraña cuando se usan terapéuticamente en esa e Como se utiliza aquí, el término "neutralizar" s ntrarrestar la actividad biológica de un antígeno oteína de unión específicamente une el antígen daiidad, la proteína de unión de neutralización une l duce su actividad biológica por al menos aproximada %, 60%, 80%, 85% ó más.
El término "actividad" incluye actividades tale pecificidad de unión y la afinidad de una DVD-lg para tígenos.
El término "epítopo" incluye cualquier deter tígeno objetivo en una mezcla compleja de pr cromoléculas. Se dice que los anticuerpos "se une ítopo" si los anticuerpos compiten de manera cruzada ( ion o efecto modulador del otro). Además, las tructurales de epítopos (traslape, similar, idé ormativas, pero las definiciones funcionales por lo s relevantes ya que abarcar parámetros estructurale ncionales (modulación, competencia).
¦ El término "resonancia de plasmón superficial", co uí, se refiere a un fenómeno óptico que permite el eracciones bioespecíficas en tiempo real a través de t alteraciones en concentraciones de proteína dentro d bio-sensor, por ejemplo, utilizando el sistema BIAcor ternational AB, una compañía de GE Healthcare, Uppsa scataway, NJ). Para más descripciones, ver Jónsson 993) Ann. Biol. Clin. 51:19-26; Jónsson, U., et ercambiablemente aquí. Este valor que indica la v ión de un anticuerpo a su antígeno objetivo o la v rmación de complejo entre un anticuerpo y un antígeno estra por la siguiente ecuación: Anticuerpo ("Ab") + Antígeno ("Ag") ? Ab-A El término "?0?? como se utiliza aquí, se refiere a ! velocidad sin acción para la disociación, o "co locidad de disociación", de una proteína de unión (por ticuerpo) del, por ejemplo, complejo de antícuerpo/ant conocido en la técnica. Este valor indica la v sociación de un anticuerpo a partir de su antígeno paración del complejo Ab-Ag con el tiempo en el anticu antígeno como se muestra por la siguiente ecuación: ticuerpo a un antígeno. En la técnica son bien co todos para determinar las constantes de velocidad de disociación. La utilización de técnicas a base de f rece alta sensibilidad y la habilidad de examinar guladores de pH fisiológicos en equilibrio, Otro perimentales e instrumentos tales como el ensay nálisis de interacción bio-molecular) pueden ser utii emplo, el instrumento disponible de BlAcore Internatío mpañía de GE Healthcare, Uppsala, Suecia). Además, ede utilizar un ensayo KinExA® (Kjnetic E_sclusi sponible de Sapidyne Instruments (Boise, Idaho).
"Etiqueta" y "etiqueta detectable" significan una por patrón de unión específico, tal como un anticuerpo o emplo, para presentar la reacción entre miembros de ión específico, tal como un anticuerpo y un analito, d patrón de unión específico, por ejemplo, anticuerpo o mplo, estreptaviclina conteniendo un marcador fluo tividad enzimática que puede ser detectada a través ticos y colorímétricos). Ejemplos de etiquetas para luyen, pero no se limitan a, los siguientes: radi dionúclidos (por ejemplo, 3H, 14C, 35S¾ 90Y, "Te, 111l Lu, 166Ho, o 153Sm); cromógenos, etiquetas fluores mplo, FITC, rodamina, fósforos lantánidos), etiquetas or ejemplo, peroxidasa de rábano, luciferasa, fosfatas rcadores quimioluminiscentes; grupos de biotinilo; lipéptido predeterminados reconocidos por un reportero or ejemplo, secuencias de par de cierre de leucina, siti ra anticuerpos secundarios, dominios de unión de met epítopo); y agentes magnéticos, tales como quelatos d emplos representativos de etiquetas comúnmente empl unoensayos incluyen porciones que produce luz, p mpuestos de acridinio, y porciones que producen flu zcla de compuestos químicos, una macromolécula bio tracto hecho de materiales biológicos. En una mo entes terapéuticos o citotóxicos incluyen, pero no s xina pertussis, taxol, citocalasin B, gramicidina D, etid etina, mitomicina, etoposida, tenoposida, vincristina, lquicina, doxorubicina, daunorubicina, dihidroxi antr toxantrona, mitramicina, actinomicina D, 1 -deshidrot ucocorticoides, procaína, tetracaína, lidocaína, pro romicina y análogos u homólogos de los mismos, plean en el contexto de un inmunoensayo, el an njugado puede ser un anticuerpo detectablemente iquetado utilizado como el anticuerpo de detección.
Los términos "crista!" y "cristalizado" como se utili fieren a una proteína de unión (por ejemplo, un an rción de unión a antígeno del mismo, que existe en istal. Los cristales son una forma del estado sólido de imétrica. La repetición de la unidad asimétrica en una e se conforma a una simetría cristalográfica bi oporciona la "celda unitaria" del cristal. La repetición itaría por traducciones regulares en todas las tres oporciona el cristal. Ver, Giege, R. y Ducruix, ystallization of Nucleic Acids and Proteins, a Practica d ea., pp. 20 1- 16, Oxford University Press, New York 999).
El término "polinucleótido" se refiere a una forma p s o más nucleótidos, ya sea ribonucl soxiribonucleótidos o una forma modificada de cualq cleótido. El término incluye formas de ADN de es dena individual o doble.
El término "polinucleótido aislado" debe refer linucleótido (por ejemplo, de origen genómico, ADNc, o guna combinación de los mismos) que, en virtud de s gmentos de ADN adicionales. Otro tipo de vector e al, en donde segmentos de ADN adicionales pueden se genoma viral. Ciertos vectores son capaces de tónoma en una célula huésped en donde se intro mplo, vectores bacterianos que tienen un origen ba ctores de replicación y episomales de mamífero). Otr or ejemplo, vectores de mamífero no episomales) egrados al genoma de una célula huésped desp roducción a la célula huésped, y de esta manera se re n el genoma huésped. Además, ciertos vectores son igir la expresión de genes a los cuales están ope lazados. Dichos vectores son denominados aquí como presión recombinante" (o simplemente "vectores de exp neral, los vectores de expresión de utilidad en técni combinantes están por lo regular en la forma de plás esente especificación, "plásmido" y "vector" pueden s cuencia de control "operablemente enlazada" a una s dificación está ligada de tal manera que ia expr cuencia de codificación se logra bajo condiciones com s secuencias de control. Las secuencias "op lazadas" incluyen tanto secuencias de control de ex n contiguas al gen de interés como secuencias de presión que actúan in trans o a una distancia para con interés. El término "secuencia de control de expresió iliza aquí, se refiere a secuencias de polinucleóti cesarias para efectuar la expresión y procesamiento de codificación a las cuales están ligadas. Las secuencia expresión incluyen secuencias apropiadas de rminación, promotoras y mejoradoras; señales de proce N eficientes tales como señales de división y de poli cuencias que estabilizan el ARNm citoplásmico; sec ejoran la eficiencia de traducción (es decir, secuencia ra la expresión y procesamiento, y también pue mponentes adicionales cuya presencia es ventajosa, cuencias líderes y secuencias de patrón de fusión.
"Transformación" se refiere a cualquier procedimien cual el ADN exógeno entra a una célula h nsformacion puede ocurrir bajo condiciones naturales lizando varios métodos bien conocidos en la t nsformacion puede basarse en cualquier método cono serción de secuencias de ácido nucleico extrañas en ésped procariótica o eucariótica. El método se sándose en la célula huésped siendo transformada y p ro no se limita a, infección viral, electroporación, ii mbardeo de partículas. Dichas células "transformad 1 u las establemente transformadas en donde el ADN i paz de replicación ya sea como un piásmido de tónoma o como parte del cromosoma huésped. Tamb ogenie de dicha célula. Ya que ciertas modificació urrir en generaciones siguientes debido a sus inf tación o ambientales, dicha progenie, en realidad, n ntica a la célula de origen o parental, pero siguen i ntro del alcance del término "célula huésped" como se una modalidad, las células huésped incluyen células p eucaríoticas seleccionadas de cualquiera de los Reinos otra modalidad, las células eucaríoticas incluy otistas, fúngicas, vegetales y de animal. En otra mo lulas huésped incluyen, pero no se limitan a, !a line ocariótica E. Coli; líneas de célula de mamífero CHO S, NSO, SP2, y PER.C6; la línea de célula de insec lula fúngica Saccharomyces cerevisiae.
Se pueden utilizar técnicas estándares para ADN re ntesis de oligonucleótido, y cultivo y transformación d emplo, electroporación, lipofección). Se pueden realiza 989)).
"Organismo transgénico", como es conocido en la fiere a un organismo que tiene células que contienen u donde el transgen introducido en el organismo (o un ganismo) expresa un polipéptido no naturalmente expr ganismo. Un "transgen" es una construcción de ADN, I table y operablemente integrada en el genoma de u rtir de la cual se desarrolla un organismo transgénico expresión de un producto de gen codificado en uno o i u 1 a o tejidos del organismo transgénico.
Los términos "regular" y "modular" s ercambiablemente, y, tal como se utiliza aquí, se r mbio o una alteración en la actividad de una molécul or ejemplo, la actividad biológica de una citocína). La ede ser un incremento o una reducción en la magnit tividad o función de la molécula de interés. Ac sencia del modulador. En ciertas modalidades, un mod ibidor, el cual reduce la magnitud de por lo menos una nción de una molécula. Los inhibidores ilustrativos inc se limitan a, proteínas, péptidos, anticuerpos, p rbohidratos o moléculas orgánicas pequeñas. Los pept scriben en, por ejemplo, WO 01/83525.
El término "agonista" se refiere a un modulador que ne en contacto con una molécula de interés, o remento en la magnitud de cierta actividad o fun lécula comparado con la magnitud de la actividad servada en ausencia del agonista. Los agonistas rticulares pueden incluir, pero no se limitan a, polipépti cleicos, carbohidratos, o cualquier otra molécula qu tígeno.
El término "antagonista" o "inhibidor" se refiere a u e, cuando se pone en contacto con una molécula cantidad de una terapia que sea suficiente para redu severidad y/o duración de un trastorno o uno o tomas, evitar el avance de un trastorno, ocasionar un un trastorno, evitar la recurrencia, desarrollo, inicio o uno o más síntomas asociados con un trastorno, storno, o mejorar o aliviar el efecto(s) profiláctico o ter ra terapia (por ejemplo, agente profiláctico o terapéutic "Paciente" y "sujeto" pueden ser utilizados intercam uí para referirse a un animal, tal como un mamífero, in imate (por ejemplo, un ser humano, un mono, y un chi primate (por ejemplo, una vaca, un cerdo, un camello, caballo, un*a cabra, un conejo, una oveja, un hámster, gato, un perro, una rata, un ratón, una ballena), mplo, un pato o un ganso), y un tiburón. Preferib ciente o sujeto es un ser humano, tal como un ser hu té tratando o se le haya determinado una enfermedad, tas, monos, perros, conejos, y otros animales. Dichas luyen, pero no se limitan a, sangre (por ejemplo, san sma, suero, orina, fluido amniótico, fluido sinovi doteliales, leucocitos, monocitos, otras células, órgan dula ósea, nodos linfáticos y bazo.
"Componente", "componentes", y "por lo mponente", se refieren generalmente a un anticuerpo anticuerpo de detección o conjugado, un control, un a serie de calibradores, un panel de sensibilidad, un regulador de pH, un diiuyente, una sal, una enzima, rá una enzima, un reactivo de detección, un reactivo/ etratamiento, un substrato (por ejemplo, como una sol lución de detención, y similares que pueden ser incl uipo para ensayo de una muestra de prueba, tal como paciente, muestra de suero o plasma, de acuerdo con scritos aquí y otros métodos conocidos en la técni ontrol negativo") o por contener un analito ("control p trol positivo puede comprender una concentración c alito. "Control", "control positivo", y "calibrador" puede ercambiablemente aquí y sé refieren a una comp mprende una concentración conocida de analito. sitivo" puede utilizarse para establecer carácte cionamiento de ensayo y es un indicador útil de la in activos (por ejemplo, analitos).
"Corte predeterminado" y "nivel predeterminado" se neral a un valor de corte de ensayo que se utiliza para sultados de diagnóstico/pronóstico/terapéuticos comp ultados del ensayo contra el corte/nivel predeterminad corte/nivel predeterminado ya ha sido enlazado o a rios parámetros clínicos (por ejemplo, severidad de la ogresión/no progresión/mejora, etc.). Aunque la scripción puede proporcionar niveles predeterminados "Reactivo de pre-tratamiento", por ejemplo, lisis, p reactivo de solubilización, como se utiliza en un gnóstico como se describe aquí es uno que permite la ulas y/o solubiliza cualquier analito que esté/estén p a muestra de prueba. El pre-tratamiento no es nec das las muestras, como se describe aquí. Entre otra lubilízación del analito (por ejemplo, polipéptido de int esentar la liberación del analito a partir de cualquier lón endógena presente en la muestra. Un reacti tamiento puede ser homogéneo (que no requiere de paración) o heterogéneo (que requiere de un paso de n el uso de un reactivo de pre-tratamiento heterogéne noción de cualquier 'proteína de unión de analito p rtir de la muestra de prueba antes de proseguir al sig i ensayo.
"Reactivos de control de calidad" en el c calibradores) en conjunto para comprender un sibilidad".
"Riesgo" se refiere a la posibilidad o probabilidad d rticular que ocurre ya sea en la actualidad o en algún uro. "Estratificación de riesgo" se refiere a una dis ctores de riesgo clínicos conocidos que permiten a l sificar pacientes en un riesgo, bajo, moderado, alto, o sarrollar una enfermedad, trastorno o condición particul "Específ ico(a)" y "especificidad" en el contex eracción entre miembros de un par de unión esp mplo, un antígeno (o fragmento del mismo) y un a gmento antigénicamente reactivo del mismo)) se re actividad selectiva de la interacción. La frase "específi e a" y frases análogas se refiere a la habilidad de an gmentos antigénicamente reactivos de los mismos pecíficamente a un analito (o fragmento del mismo) zimas, inhibidores de enzima y enzimas, y similares. res de unión específicos pueden incluir miembro álogos de los miembros de unión específicos orig mplo, una analito-análogo. Los miembros de unión unoreacti vos incluye antígenos, fragmentos de a ticuerpos, incluyendo anticuerpos monocíonales y poli mo complejos, fragmentos, y variantes (incluyendo fra riantes) de los mismos, ya sea aislados o recombi oducidos.
"Variante", como se utiliza aquí, representa un p o i i iere de un polipéptido dado (por ejemplo, polipéptid P, NGAL o VIH o anticuerpo anti-polipéptido) en una s inoácido mediante la adición (por ejemplo, inserción), substitución conservadora de aminoácidos, pero que tividad biológica del polipéptido dado (por ejemplo, u 18 puede competir con un anticuerpo anti-IL-18 para la rácter hidrofóbico y carga. Se sabe en la técni inoácidos de índices similares hidropáticos p bstituidos y seguir reteniendo la función de la prot pecto, los aminoácidos que tienen índices hidropático stituidos. E! carácter hidrofílico de los I aminoácidos ta r utilizado para revelar substituciones que podrían sultado proteínas que retengan la función biol nsíderación del carácter hidrofílico de aminoácidos en péptido permite-el cálculo del carácter hidrofílico pro yor de ese péptido, una medida útil que ha sido rep rrelacionarse bien con la antigenicidad e inmunogen ejemplo, Patente de E.U.A, No. 4,554,101). La sub inoácidos que tienen valores de carácter hidrofílic ede dar como resultado péptidos que retienen l ológica, por ejemplo, inmunogenicidad, como es ente cnica. En un aspecto, las substituciones son real bién se puede utilizar para describir un polipéptido l mismo que ha sido diferehcialmente procesado, tal co proteólisis, fosforilación, u otra modificación de pos n retiene su actividad biológica o reactividad anti mplo, la habilidad para unirse a IL-18. El uso de "va retende abarcar fragmentos de una variante a menos a cosa por el contexto.
Generación de proteína de unión DVD La invención se refiere a proteínas de unión riable Doble capaces de unir uno o más objetivos, y m cer las mismas. En una modalidad, la proteína de unión a cadena de polipéptido, en donde dicha cadena de mprende VD1 -{X1)n-vd2-c(X2)n, en donde VD1 es minio variable, VD2 es un segundo dominio variabl minio constante, X1 representa un aminoácido o poli ticuerpos pueden ser de existencia natural o pueden se través de tecnología recombinante.
Se pueden preparar rnAbs utilizando una amplia cnicas conocidas en el campo incluyendo el uso de enologías recombinantes, y de presentación de fa mbinación de las mismas. Por ejemplo, se pueden pr ilizando técnicas de hibridoma, incluyendo aquellas c campo y enseñadas en, por ejemplo, Harlow et al. , A boratory Manual, (Coid Spring Harbor Laboratory Pre 88); Hammerlíng, et al., en: onoclonal Antibodies bridomas 563-681 (Elsevier, N.Y., 1981). El término noclonal", como se utiliza aquí, no está limitado a oducidos a través de tecnología de hibridoma. ticuerpo monoclonal" se refiere a un anticuerpo que s clon individual, incluyendo cualquier clon eucariótico, de fago, y no el método a través del cual se pr una modalidad particular, los hibridomas son hibridom otra modalidad, los hibridomas son producidos en una mana, no de ratón, tal como ratas, ovejas, cerdos, cab caballos. En otra modalidad, ios hibridomas son manos, en donde un mieloma de no secreción ionado a una célula humana expresando un anticuerp ión un antígeno específico.
Los mAbs recombinantes también son generados focitos individuales, aislados, utilizando un pr nominado en la técnica como el método de anticuerpo leccionado (SLAM), como se describe en la Patente de 627,052, Publicación de PCT WO 92/02551 y Babcock, 996) Proc. Nati. Acad. Sci. USA 93:7843-7848. En este ntifican anticuerpos de interés de secreción ividuales, por ejemplo, linfocitos derivados de unizado, y, se rescatan ADNcs de región variables slar anticuerpos de expresión al antígeno de i cuencias de inmunoglobulina amplificada además nipuladas in vitro, tal como a través de métodos de ma inidad in vitro, tales como aquellos descritos en la Pu T WO 97/2913 y Publicación de PCT WO 00/56772.
Los anticuerpos rnonoclonales también se produce inmunización de un animal no ser humano comprendien todos, de los sitios de inmunoglobulina humana con un terés. En una modalidad, el animal no ser humano nsgénico XENOMOUSE, una cepa de ratón diseñada po e comprende grandes fragmentos de sitios de inm mana y es deficiente en la producción de anticuerpo d r ejemplo, Green et al, Nature Genetics 7:13-21 (1994) E.U.A. Nos. 5,916,771, 5,939,598, 5,985,615, 075,181, 6,091,001, 6,114,598 Y 6,130,364. Ver t /10741, publicada el 25 de Julio, 1991, WO 94/02602, NO OUSE contiene aproximadamente 80% del re ticuerpo humano a través de la introducción de fragme nfiguración de línea germinal, con un tamaño de mega íos de cadena pesada humana y x sitios de cadena ndez et al., Nature Genetics 15:146-156 (1997) kobovits J. Exp. Meó. 188:483-495 (1998.
También se pueden utilizar métodos in vitro par ticuerpos parenterales, en donde una biblioteca de a sificada para identificar un anticuerpo que tiene le e unión deseada. Los métodos para dicha clasi liotecas de anticuerpo recombinantes son bien cono mpo e incluyen métodos descritos en, por ejemplo, L tente de E.U.A. No. 5,223,409; Kang et al. Publicaci 92/18619; Dower et al. Publicación PCT No. W ínter et al. Publicación PCT No. WO 92/20791; Mar blicación PCT No. WO 92/15679; Breitling et al. Publ arbas et al. (1991) PNAS 88.:7978- 7982, publicación patente de E.U.A. 20030186374, y Publicación P /29131.
Los anticuerpos parentales de la presente invenc eden ser generados utilizando varios métodos de pres o conocidos en la técnica. En métodos de presentaci dominios de anticuerpo funcionales son presentad perficie de partículas de fago, las cuales llevan ias se linucleótido que las codifican. En particular, dicho fag lizado para presentar dominios de unión a antígeno e rtir de una biblioteca de anticuerpo de repertorio o de or ejemplo, humano o murino). El fago que expresa un ion a antígeno que une el antígeno de interés leccionado o identificado con el antígeno, por ejemplo antígeno marcado o antígeno unido o capturado a un lida o perla. El fago utilizado en estos métodos es típ rton et al., Advances in Immunology 57:191-280 (199 PCT No, PCT/GB91/01134; publicaciones de PCT W 91/10737; WO 92/01047; WO 92/18619; WO 93/ /15982; WO 95/20401; y Patentes de E.U.A. Nos. 23,409; 5,403,484; 5,580,717; 5,427,908; 5,750,753; 71,698; 5,427,908; 5,516,637; 5,780, 225; 5,658,727; 69,108.
Como se describió en las referencias de la presen la selección del fago, las regiones que codifican el an o pueden ser aisladas y utilizadas para generar teros incluyendo anticuerpos humanos o a travé gmento de unión a antígeno deseado, y expresadas e ésped deseado, incluyendo células de mamífero, ecto, células vegetales, células de levadura, y ba mplo, como se describe con detalle más adelante. P bién se pueden emplear técnicas para ience 240:1038-1040 (1988).
Como alternativa a la clasificación de bibliotecas d combinante a través de presentación de fago, se pue as metodologías conocidas en las técnicas para clasifi liotecas de combinación para la identificación de renteraies. Un tipo de sistema de expresión alternativ nde la biblioteca de anticuerpo recombínante se ex siones de ARN-proteína, como se describe en la Pu T No. WO 98/31700 de Szostak y Roberts, y por Robe ostak, J. W. (1997) Proc. Nati Acad. Sci. USA 94:1229 te sistema, se crea una fusión covalente entre un ptido o proteína que codifica a través de traducción Nms sintéticos que llevan puromicina, un antibiótico ptidilo, en su extremo 3'. De esta manera, un ARN ede ser enriquecido a partir de una mezcla de complej or ejemplo, una biblioteca de combinación) basa iones de ARNm-péptido en donde se han introducido la secuencia(s) originalmente seleccionada, o a trav todos para maduración de afinidad in vitro de combinantes, como se describe aquí.
En otro aspecto, los anticuerpos parentales también nerados utilizando métodos de presentación de levadur la técnica. En los métodos de presentación de l ilizan métodos genéticos para atar o unir dominios de pared de célula de levadura y presentarlos sobre la s levadura. En particular, dicha levadura puede ser úti esentar dominios de unión a anttgeno expresados a p lioteca de repertorio o de combinación (por ejemplo, d rino). Ejemplos de métodos de presentación de le eden ser utilizados para hacer los anticuerpos parenta uellos descritos por Wittrup, et al, Patente de 699,658. reemplazo de cadena recta en dicha estructura de m neral conduce a cierta pérdida de afinidad de unión tre más homólogo sea un anticuerpo humano al an ríno origina!, hay menos posibilidad de que la com Rs de murino con la estructura de marco humano torsiones en las CDRs que podrían reducir la afini to, en una modalidad, la estructura de marco variable selecciona para reemplazar la estructura de marco ríno aparte de las CDRs tiene por lo menos un 65% d secuencia con la estructura de marco de región ticuerpo de murino. En una modalidads las regione manas y de murino aparte de las CDRs tienen por lo identidad de secuencia. En una modalidad partícul giones variables humanas y de murino aparte de las r lo menos 75% de identidad de secuencia. En otra mo giones variables humanas y de murino aparte de las Los anticuerpos humanizados son moléculas de an anticuerpo de especie no humana que une el antíge iendo una o más regiones de determinación de comple DRs) de la especie no humana y regiones de estructu una molécula de inmunoglobulina humana. Las secue mana conocidas se describen en, por w. nebí. nlm. nih.gov/entrez-/query.fcgi; www.sci w.abcam.com/; www.antibody re so urce, com/onlin w. public. iastate.edu/, a bout. pedro/re sea rch tools. html; w.mgen.uni- heidelberg.de/S w. whf reeman. com/immunology/CH- ' 05Z w.library.thinkquest.org/12429/lmmune/Antibody.html; w. hhmi.org/gran ts/lectures/l w.patIV. ca rn.ac.uk/. a bout. mwA/m- ikei w. antibodyresource.com/; mcb. harvard.edu/BioLin y. html. www. immunologylink. com/; c/l NTRO.html; www. ibt. unam . mx/vir/V gt.cnusc,fr;8104/; www.b .uk/.about.martin/abs/ índex. html; antibody . gen. cvm.tamu.edu/lab/wwwa bgen.html; w. unizh. ch/.about. honegger/AHOsem-inar/SlideO w.cryst.bbk.ac.Uk/.about.ubcg07s/; w.nimr.mrc.ac.uk/CC/ccaewg/ccaewg.htm; w. path.cam.ac. uk/. about.mrc7/h-umanisation/T w.ibt. u a iTLmx/vir/ structu re/st at_aim.htm I; w. biosci.missouri.edu/smithgp/index. html; www.cry uk/. a bo-ut.fmoli na/Web- pag es/Pe pt/spottech. html; ww ducts.htm; www, patents.ibm.com/ibm.html.Kabat et al., Proteins of immunologica! Interest, U.S. Dept. He chas secuencias importadas pueden ser utilizadas par unogenicidad, o reducir, mejorar o modificar la unió ocidad de activación, velocidad de no activación rco importantes para la unión a antígeno y comp cuencia para identificar residuos de estructura de uales en posiciones particulares. (Ver, por ejemplo, Q tente de E.U.A. No. 5,585,089; Riechmann et al., Nat 988). Están comúnmente disponibles modelos de inmu dimensionales y son familiares para aquellos expe nica. Están disponibles programas de computadora qu esentan estructuras de conformación tridimensi cuencias de inmunoglobulina candidatas seleccio pección de estas presentaciones permite el análisis d pel de los residuos en el funcionamiento de la se unoglobulina candidato, es decir, e! análisis de re luencian la habilidad de la inmunoglobulina candidat tígeno. De esta manera, los residuos FR pueden ser se combinados a partir de las secuencias de cons portación de manera que la característica de anticuer , J. Immunol. 151:2623 (1993), Pad!an, Molecular (4/5):489-498 (1991); St dnicka et al., Protein 6):805-814 (1994); Roguska. et at. , PNAS 91:969- bücación de PCT WO 91/09967, PCT/: US98/16280, 91/09630, US91/05939, US94/01234, GB89/01334, 92/01755; WO90/ 14443 , WO90/14424, WO90/ 14430, . 592,106; EP 519,596, EP 239,400, Pat. E.U.A. Nos. 23,323, 5,976,862, 5,824,514, 5,817,483, 5814476 23323, 5,766886, 5,714,352, 6,204,023, 6,180,370, 530,101, 5,585,089, 5,225,539; 4,816,567.
Criterios para seleccionar anticuerpos mo rentales Una modalidad de la invención se refiere a ticuerpos parentales con al menos una o más seadas en la molécula de DVD-lg. En una modalidad, l . Afinidad a antígeno La afinidad deseada de un mAb terapéutico puede d naturaleza del antígeno, y el punto final terapéutico d a modalidad, los anticuerpos monoclonales tienen afín as (Kd = 0.01 - 0.05 pM) cuando bloquean una int ceptor de citocina-citocina ya que dicha interacción ne altas interacciones de afinidad (por ejemplo, escal M). En tales casos, la afinidad de mAb para su objeti a! a o mejor que la afinidad de la citocina (ligand ceptor. Por otro lado, mAb con afinidad menor (escala r terapéuticamente efectiva, por ejemplo, para elimin tencialmente patogénicas en circulación, por ejemplo, noclonales que se unen a, secuestran, y eliminan esp amiloíde en circulación. En otros casos, se puede ducción de la afinidad de un mAb de alta afinidad vés de mutagénesis dirigida al sitio o utilizando u SÍ ble reducir el valor de Kd para ajustar la dosis y/o ctos laterales. La afinidad del mAb parental puede jug portante en !a activación por objetivo apropiada de m perficíe celular para lograr un resultado terapéutico d mplo, si un objetivo es expresado en células cancero a densidad y en células normales con baja densidad, nidad inferior unirá un número mayor de objetivos orales que en células normales, dando como r minación de la célula tumoral a través de ADCC o CD to, puede tener efectos terapéuticamente deseable ñera, la selección de un mAb con afinidad deseada evante para objetivos tanto solubles como de superficie La señalización a través de un receptor desp eracción con su ligando puede depender de la afí eracción del receptor-ligando. Similarmente, es conce inidad de un mAb para un receptor de superficie pueda pendiendo del resultado terapéutico deseado. En una seleccionan anticuerpos parentales con afinidad (K tígeno particular igual a, o mejor que la afinidad desea para el mismo antígeno. La afinidad de unión a an ética se determinan a través de la técnica Biacore u una modalidad, cada anticuerpo parenta! tiene una c ociación (Kd) para su antígeno seleccionado del nsiste de: a lo mucho aproximadamente 10"7M¡ a oximadamente 10"8M; a lo mucho aproximadamente cho aproximadamente 10"10M; a lo mucho aproximad ; a lo mucho aproximadamente 10"12 ; y a roximadamente 10* 3M. El primer anticuerpo parenta! al VD1 se obtiene y el segundo anticuerpo parenta! al VD2 se obtiene y pueden tener una afinidad sir erente (KD) para el antígeno respectivo. Cada anticue ne una constante de velocidad de acción (Kon) da anticuerpo parental tiene una constante de velocida off) al antígeno seleccionada del grupo que consist cho 10"3s"1; a lo mucho 10" s"1; a lo mucho 10~5s"1; y "6s~\ según medido a través de resonancia de plasmón primer anticuerpo parental a partir del cual VD1 se gundo anticuerpo parental a partir del cual VD2 se obti ner constantes de velocidad sin acción (Koff) similares ra el antígeno respectivo.
. Potencia La afinidad/potencia deseada de los anticuerpos m rentales dependerá del resultado terapéutico de mplo, para interacciones de receptor-ligando (R-L), d) es igual o mejor que la kd de R-L (escala pM). Para iminación de una proteína patogénica en circulación, el ede estar en una baja escala de nM, por ejemplo, la eli seado en la DVD-lg. Las consideraciones de afinidad rental también puede depender de si DVD-lg contiene C íos de unión a antígeno idénticos (es decir, una DVD-lg ividual). En este caso, el valor de kd aparente pued e el mAb debido a la avidez. Dichas DVD-lgs ipleadas para e! entrelazamiento cruzado del r perficie, incrementar potencia de neutralización, minación de proteínas patológicas, etc.
En una modalidad, se seleccionan los anticuerpos n potencia de neutralización para el antígeno especí jor que el potencial de neutralización deseado de la mismo antígeno. La potencia de neutralización terminada a través de un bioensayo dependiente de nde las células de un tipo apropiado producen una se S decir, proliferación o producción de citocina) en res timulación del objetivo, y la neutralización de objetivo adro 1. Algunas Aplicaciones de Potencial para rapéuticos Los mAbs con distintas funciones descritos en ios e adro 1 pueden ser seleccionados para obtener rapéuticos deseados. Dos o más anticuerpos m rentales seleccionados después pueden ser utiliza rmato de DVD-lg para obtener dos funciones distin lécula de DVD-lg individual. Por ejemplo, una DVD-l ivídual que poseerá las dos funciones distintas tagonista) de los anticuerpos monoclonales selecciona lécula individual. Similarmente, se pueden utilizar dos noclona!es antagontsticos para receptores de superf da uno bloqueando la unión de ligandos de receptor or ejemplo, EGF e IGF) en un formato de DVD-lg ersa, se puede seleccionar un mAb antí-receptor a or ejemplo, anti-EGFR) y un mediador anti-soluble n or ejemplo anti-IGF1/2) para hacer una DVD-lg.
. Reconocimiento de Epítopo Diferentes regiones de proteínas pueden realizar nciones. Por ejemplo, regiones específicas de u eractúan con el receptor de citocina para producir a ceptor, mientras que otras regiones de la proteína queridas para estabilizar la citocina. En este caso, giones puede ya sea interferir con las funciones pedimento estérico) o alterar la conformación de la ñera que la proteína no puede funcionar (mAb a rec andos múltiples que alteran la conformación del ñera que ningún ligando puede unirse). Tambi ntificado anticuerpos monoclonales anti-citocina que unión de la citocina a su receptor, pero bloquean la t señal (por ejemplo, 125-2H, un mAb anti-IL-18).
Ejemplos de funciones de epítopos y mAb incluyen, itan a, bloquear la interacción de Receptor-Lig eutralizando mAb que inhibe -el sitio de inter pedimento estérico que da como resultado la unión d guna unión de R. un Ab puede unir el objetivo en un un sitio de unión de receptor, pero sigue interfiriendo receptor y funciones del objetivo induciendo un nformación y elimina funciones (por ejemplo; Xo!air), tagénesis (Wu C. et al, 2003 J Immunol 170:5571-7).
. Propiedades físico-químicas y farmacéuticas El tratamiento terapéutico con anticuerpos por quiere de la administración de altas dosis, por lo ge /kg (debido a una baja potencia en una base masiv nsecuencia de un peso molecular típicamente grande) adaptarse a la comodidad del paciente y p ecuadamente terapias de enfermedad crónica y trat ciente externo, es deseable la administración subcutá ramuscular (i.m.) de mAbs terapéuticos. Por ejemplo, ximo deseable para administración s e. es de aprox 0 mi, y por lo tanto, son deseables concentraciones de ra limitar el número de inyecciones por dosis. En una anticuerpo terapéutico se administra en una dosis. El d ha formulación está restringido, sin embargo, por inter mplo, aspectos de estabilidad, solubilidad y viscosidad .1 Estabilidad Una formulación de anticuerpo "estable" es una e ticuerpo esencialmente retiene sus estabilidad tabilidad química y/o actividad biológica de acenamíento. La estabilidad puede ser medida a una leccionada durante un período de tiempo selecciona dalidad, el anticuerpo en la formulación es estable a biente (aproximadamente 30°C) o a 40°C durante al m estable a aproximadamente 2-8°C durante al me rante a! menos 2 años. Además, en una modalidad, la estable después de la congelación (a, por ejempl scongelación de la formulación, de aquí en adelante mo "ciclo de congelación/descongelación". En otro ej rmulación "estable" puede ser una en donde lécula monomérica, intacta) puede ser determinada rias técnicas, tales como cromatografía de intercambi matografía de exclusión de tamaño, SDS-PAGE, así c bioactividad. Para una lista más comprensiva de t nicas analíticas que pueden ser empleadas pa dificaciones covalentes y de conformación, ver, Jone 993) Analytical methods for the assessment of protein f d delivery systems. En: Cleiand, J. L.; Langer, rmulation and delivery of peptides and proteins, shington, ACS, pág. 22-45; y Pearlman, R.; Nguyen, alysis of protein drugs. En: Lee, V. H., editor. Peptide ug delivery, 1o edición, Nueva York, Marcel Dekker, Inc 1.
Heterogeneidad y formación de agregado: la est ticuerpo puede ser tal que la formulación puede revel roximadamente 10%, en una modalidad, r ico (por ejemplo, cromatografía de intercambio iónico), cromatografía de interacción hidrofóbica, u otr es como enfoque isoeléctrico o electroforesis capilar. estabilidad química del anticuerpo puede ser tal que acenamiento de por lo menos 12 meses a 2-8°C, presenta el anticuerpo no modificado en una croma ercambío catiónico puede incrementarse a no más de 2 dalidad, no más de 10%, o, en otra modalidad, no gún comparado von la solución e anticuerpo antes de acenamiento.
En una modalidad, los anticuerpos parentales egridad estructural; formación correcta de enlace de egue correcto. La inestabilidad química debido a car tructura secundaría o terciaria de un anticuerpo puede tividad de anticuerpo. Por ejemplo, la estabilidad, seg r la actividad del anticuerpo, puede ser tal que IgG monomérica, correctamente plegada. La solubilida ede, por lo tanto, ser determinada a través de HPLC, IgG soluble (monomérica) dará surgimiento a un pico i cromatografía de HPLC, mientras que la insoiuble (p ltimérica y agregada) dará surgimiento a una pluralida experto en la técnica, por lo tanto, será capaz de remento o reducción en la solubilidad de una Ig cnicas de HPLC de rutina. Para una lista más com cnicas analíticas que pueden ser empleadas para ubilidad (ver, Jones, A. G, Dep. Chem. Biochem. Eng., ndon, London, UK. Editor(es): Shamlou, P. Ayazi. Pro . Suspensions (1993), 93-117. Publisher: Butterworth- ford, UK and Pearlman, Rodney; Nguyen, Tue H, renteral Sciences (1990), 4 (Pept. Protein Drug Del 1). La solubilidad de un mAb terapéutico para formula ncentración por lo regular requirió de dosificación adec portantes las propiedades físico-químicas de la s oteína, por ejemplo, estabilidad, solubilidad, visc bargo, un experto en la técnica apreciará que una amp excipientes existen que pueden ser utilizados como a pactar benéficamente las características de ia for oteína final. Esto excipientes pueden incluir: (i) solvent -solventes (por ejemplo, alcoholes, tales como etanol); guiadores de pH (por ejemplo, reguladores de pH etato, citrato, aminoácido); (iii) azúcares o alcoholes or ejemplo, sacarosa, trehalosa, rafinosa, manito xtrañas); (iv) agentes tensoactivos (por ejempjo, poli , 60, 80, poloxámeros); (v) modificadores de isoton mplo, sales tales como NaCI, azúcares, alcoholes de i) otros (por ejemplo conservadores, agentes q tioxidantes, substancias quelatadoras (por ejemp límeros biodegradables, moléculas portadoras (por ej inyección pequeños son inherentes a la ventaja de dol saciones de inyección, y las soluciones no necesariam e ser isotónicas para reducir el dolor en la inyec ciente. La viscosidad de la solución de anticuerpo pu e a velocidades de esfuerzo cortante de 100 (1/s) ia vi lución del anticuerpo está por abajo de 200 mPa dalidad por abajo de 125 mPa s, en otra modalidad p mPa s, y en aún otra modalidad por abajo de 25 mPa s r abajo de 10 mPa s. .3 Eficiencia de producción La generación de una DVD-lg que es eficientement células de mamífero, tales como células de ovario iño (CHO), en una modalidad, requerirá de dos noclonales parentaies que por sí mismos son tcientemente en células de mamífero. El rendimiento de joradores y marcadores de selección puede incrementa transcripción del gen de interés a partir de una copi egrada. La identificación de sitios de integración de n permisibles para altos niveles de transcripción de mentar la expresión de proteína a partir de un vector ( 04, Nature Biotechnology , 2004, Vol/Iss/Pág. 22/11 (1 emás, los niveles de producción son afectados por la denas pesada y ligera del anticuerpo y varios p ocedimiento del ensamble de proteína y secreción ( 06, Biotechnology Progress, Enero-Febrero 2006, col. g. 313-8).
. Inmunogenicidad La administración de un mAb terapéutico puede sultado cierta incidencia de una respuesta inmunológic formación de anticuerpos endógenos dirigidos con apéuticos (Morrison y Schlom, 1990). Alternativ unogenicidad puede ser reducida transfiriendo sec R de murino a una estructura de marco de anticuerpo nfiguración/injerto de CDR/humanízación), como se de anticuerpo terapéutico por Riechmann et al, 1988. Otr nomina como "rejuvenecimiento" o "recubrimiento", emp dominios ligero y pesado variables de roedor inoácidos de estructura de marco accesibles por su erados a ios humanos, mientras que la CDR y terrados permanecen del anticuerpo de roedor parent al, 1996). En otro tipo de humanización, en lugar de tn CDRs, una técnica injerta solamente las "r terminación de especificidad" (SDRs), definidas como residuos de CDR que está involucrado en la unión del su objetivo (Kashmirt et al, 2005). Esto necesita la id las SDRs ya sea a través de análisis de manos y se encontró que es inaceptablemente inmun ítopos de célula B pueden ser trazados y después alt tar la detección inmunológica. Otro aspecto utiliza m onosticar y remover epítopos de célula T potencíal sarrollado métodos computacionales para explorar o ntificar las secuencias de péptido de terapéuticos bio potencial para unirse a proteínas MHC (Desmet et ternativamente, se puede utilizar un método a bas ndrítica humana para identificar epítopos de célula rgenos proteínicos potenciales (Stíckler et al, 2005; S. Schlom, Importan Adv. Oncol. (1990), pág. 3-18; Rie ark, M.( Waldmann, H. y Winter, G. "Reshaping human r therapy". Nature (1988) 332: 323-327; Roguska M-A, Henry-A-H, Searle-S-M, Roja-C-M, Avery-B, Hoffee- mbert-J-M, Bláttler-W-A, Rees-A-R, Guild-B-C. A co. o murine mAbs humanized by CDR-grafting and vari M, Estell-D-A, Hardinq-F-A. CD4hT-cell epitope d ing unexposed human donor peripheral blood mononu urnal of immunotherapy 2000, vol. 23, pag. 654-60). x . Eficacia in vivo Para generar una molécula de DVD-lg con efica seada, es importante generar y seleccionar mAbs co ilitud de eficacia in vivo cuando se da en combi bargo, en algunos casos, la DVD-lg puede exhibir efic e no puede ser lograda con la combinación de parados. Por ejemplo, una DVD-lg lleva dos objetivos nduciendo a una actividad que no puede ser logr mbinación de dos mAbs separados. Aquí en la sec scriben funciones biológicas deseables adicionales, leccionar anticuerpos parentales con características d molécula de DVD-lg con base en factores t trategia de activación doble específica, en otros tie uería seleccionar mAbs parentales con la distribución o similar deseada cuando se daban en combinación. P el caso de una DVD-lg en donde un componente de r objetivo la acción de la DVD-lg a una terapia de siti vando al segundo componente de unión al mismo sit r ejemplo, una especificidad de unión de una DVD-lg r objetivo el páncreas (células de isleta) y la otra e ede llevar a GLP1 al páncreas para inducir insulina.
. Isotipo Para generar una molécula de DVD-lg con seadas incluyendo, pero no limitándose a, Isotipo, ctoras y vida media en circulación, en una mo leccionan mAbs parentales con funciones Fc-efectoras pendiendo de la utilidad terapéutica y el punto final otoxicidad dependiente de complemento (CDC), (iii) minación de complejos de antígeno-anticuerpo, y (iv) li ocina en algunos casos. Estas funciones Fc-efecto lécula de anticuerpo son mediadas a través de la inter gión Fe con un grupo de receptores de superficie d se específica. Los anticuerpos del isotipo de lgG tivos mientras que lgG2 e lgG4 tienen funciones efecto ninguna. Las funciones efectoras de los anticuerp diadas a través de interacciones con tres tipos de ulares estructuralmente homólogos (y subtipos) (FcgR gRIII). Estas funciones efectoras de una i g G 1 minadas a través de la mutación de residuos de pecíficos en la región de gozne inferior (por ejem 35A) que son requeridos para la unión de FcgR siduos de aminoácido en la región Fe, en particular l 2-CH3, también determinan la vida media en circul a citocina soluble entonces se puede utilizar un isotipo (b) Si el resultado deseado es la eliminación de u tológica se puede utilizar un isotipo activo; (c) Si el resultado deseado es la eliminación de a teína se puede utilizar un isótopo activo; (d) Si el resultado deseado es para antagonizar superficie se utiliza entonces un isotipo inactivo (Ty T3, I g G 1 mutada); (e) Si el resultado deseado es eliminar células liza un isotipo activo (Herceptin, I g G 1 (y funcione joradas)); y (f) Si el resultado deseado es eliminar prote culación sin entrar al CNS se puede utilizar un isoti mplo, eliminar especies de péptido Ab en circuiación).
Las funciones efectoras Fe de un mAb parental terminadas a través de varios métodos in vitro bien c r ejemplo, la eliminación de células tumorales, son tipos o mutaciones o des-fucosilación en la región Fe funciones efectoras (Presta GL, Adv. Drug Detivery R 6, 2006; Satoh M. , (ida S., Shitara K. Expert Opinión 161-1173, 2006). Similarmente, dependiendo de apéutica, la vida media en circulación de una m ticuerpo puede ser reducida/prolongada ai m eracciones de anticuerpo-Fc-Rn introduciendo pecíficas en la región Fe (DalTAqua WF, Kiener PA, W em. 281:23514-23524, 2006; Petkova SB. , Akilesh S., al, Internat. ImmunoL 18:1759-1769, 2006; Vaccaro , Wanjie S et al, PNAS 103:18709.18714, 2007).
La información publicada en varios residuos que inf erentes funciones efectoras de un mAb terapéutico no cesitar ser confirmada para DVD-lg. Puede ser posibl mato de DVD-lg puedan ser importantes residuos d IgG 1 mutante - A234, A235 lgG2 - alotipo: G2m(n-) Kappa - Km3 ° Lambda Estudios de Receptor Fe y C1q: La posi otoxicidad mediada por célula dependiente de ant seada (ADCC) y de citotoxicidad dependiente de c DC) mediante formación de complejo de anticuerpo jetivo sobre-expresado en membranas celulares rogada por las mutaciones de región de gozne (p 34A, L235A). Se espera que estos aminoácidos s esentes en la región de gozne de I g G 1 de mAb, sultado la unión disminuida de mAb a receptores Fe hur FcRn), ya que se cree que la unión de FcgR ocurr ios de traslape en la región de gozne I g G 1 , Esta carac unológicos de antígeno/lgG activa la cascada de c sica con consecuentes respuestas inflamatorias y uiadoras. El sitio de unión a C1q en IgG ha sido loca iduos dentro de la región de gozne IgG. La unión rementar las concentraciones de mAb se determinó q ELISA. Los resultados demuestran que mAb es incap 1q, según esperado cuando se comparó con la unión control de tipo silvestre. En resumen, la mutación d zne L234A, L235A abolió la unión de mAb a FcgRI, Fcg ro no impacta la interacción de mAb con FcgRIlb. gieren que in vivo, mAb con Fe muíante interactuarán n n FcgRIlb inhibidor pero probablemente fallará para n los receptores de activación FcgRI y FcgRIIa o C1q.
Unión de FcRn humana: El receptor neonatal sponsable del transporte de IgG a través de la pla ? 148 vida media terminal de IgG. Las proteínas en luyendo IgG, se toman en la fase de fluido a cropinocitosis a través de ciertas células, tales como dotelio vascular. La IgG puede unir FcRn en endo ndiciones ligeramente acidas (pH 6.0-6.5) y pueden r perficie celular, en donde es liberada bajo condí utras (pH 7.0-7.4). El trazo del sitio de unión de re Rn80, 16, 17 mostró que dos residuos de histidin pecies cruzadas conservadas, Hts310 y His435, son r la dependencia de pH de su interacción. Al utilizar te esentación de fago, se identificó una mutación de re tón que incrementa la unión a FcRn y extiende la vida G de ratón (ver, G. et al.; Nature Biotechnoiog (1997), 0). También se han identificado mutaciones de la re rementan la afinidad de unión de IgG humana para Fc 6.0, pero no a un pH de 7.4 (ver, Dall'Acqua Willia núan la interacción con FcRn pueden reducir la vid ticuerpo. 10 Farmacoci néti ca (PK): Para generar una molécula de DVD-lg con rmacocinético deseado, en una modalidad, se selecc rentales con el perfil farmacocinético similarmente de nsideración es que la respuesta inmunogénica a noclonales (es decir, HAHA, respuesta de anticuerpo mano; HACA, respuesta de anticuerpo antí-quiméri emas complica la farmacocinética de estos agentes t una modalidad, se utilizan anticuerpos monoclonal unogenícidad mínima o ninguna para construir moléc manera que las DVD-igs resultantes tambié unogenícidad mínima o ninguna. Algunos factores que PK de un mAb incluyen, pero no se limitan a, Después de que se seleccionan los anticuerpos m rentales con características deseadas de PK (y otras cionales deseadas como se discute aquí), la DVD-lg s medida que las moléculas de DVD-lg contienen dos ión a antígeno de dos anticuerpos monoclonales par piedades de PK de la DVD-lg también se determinan. entras se determinan las propiedades de PK de la eden emplear ensayos de PK que determinen el p sándose en la funcionalidad de ambos dominios tígeno derivados de los 2 anticuerpos monoclonales pa rfil de PK de una DVD-lg puede ser determinado como el Ejemplo 1.2.2.3. A. los factores adicionales q pactar en el perfil de PK de la DVD-lg incluyen la ori minio de unión a antígeno (CDR); tamaño de e eracciones de Fc/FcRn. Las características de PK de rentales pueden ser evaluadas determinando los disponibilidad absoluta variable después de la adr travascular. Usualmente, se pueden observar inórem disponibilidad absoluta con dosis en incrementos de nocíonaíes debido a la capacidad proteolítica satura s altas. El proceso de absorción para un mAb es usua to ya que el fluido .de linfa se drena lentamente scular, y la duración de la absorción puede ocurrir dura rios días. La biodisponibilidad absoluta de nocíonaíes después de la administración SC general 50% a 100%. En el caso de una estructura me nsporte en la barrera hematoencefálica activa nstrucción de DVD-lg, los tiempos de circulación en eden ser reducidos debido al transporte trans-celular barrera hematoencefálica (BBB) en el compartimento rvioso central, en donde la DVD-lg es liberada para tivación a través de su segundo sitio de recono eramente mayor que el volumen en el plasma (2-3 trón bifásico distinto en perfil de concentración en sue ntra tiempo puede no ser evidente con otras ministración, tales como IM o SC, ya que la fase de dis curva de concentración en suero (plasma)-tiempo se r la porción de larga absorción. Muchos factores, opiedades físico-químicas, consumo mediado po ientado por objetivo y de sitio específico, capacidad ido, y dosis de mAb pueden influenciar la biodistrib b. Algunos de estos factores pueden contribuir a la n la biodistribución para un mAb.
Metabolismo y Excreción: Debido al tamaño mo ticuerpos monocíonales intactos no son excretados a vés del riñon. Estos son principalmente inactivados tabolismo (por ejemplo, catabolismo). Para 11 Patrón de reactividad cruzada de tejido en marías y toxicológ ¡cas El patrón de tinción idéntico sugiere que la toxici tenc¡al puede ser evaluada en especies toxicoló pecies toxicológicas son aquellos animales en donde s icidad no relacionada.
Los anticuerpos individuales se seleccionan para sa terios. (1) Tinción de tejido apropiada para la expresi l anticuerpo objetivo. (2) Patrón de tinción similar e manos y especies toxicológicas del mismo órgano.
Criterio 1: Las inmunizaciones y/o seleccionéis de icamente emplean antígenos recombinantes o roteínas, carbohidratos u otras moléculas). La u ntraparte natural y contra-clasificación contra an lacionados por lo regular son parte del embudo de ra anticuerpo terapéuticos. Sin embargo, la clasifica tudios típicos de reactividad cruzada en secciones ngelados se puede demostrar ia unión esperada nocido y/o, a un grado menor, la unión a tejidos basán interacciones de bajo nive! (unión no específica, un el a antígenos similares, interacciones a base de ca el, etc.)- En cualquier caso, la especie animal toxic evante es aquella con el grado más alto de coincidenc ejido humano y animal.
Los estudios de reactividad cruzada siguen líne uiadoras apropiadas incluyendo EC CPMP Guideline 1 roduction and quality control of mAbs" y 1997 US oints ,to Consider in the Manufacture and Testing of tibody Products for Human Use". Crio-secciones (5 pm manos obtenidos de autopsia o bíopsia se fijaron y se objeto de vidrio. Se realizó la tinción con peroxid cciones de tejido, utilizando el sistema de avidina-bi zo, cerebelo, nodo linfático, testículos, corteza cereb o, colon, páncreas, tiroides, endotelio, paratiroides , uitaria, útero, trompa de Faiopio y placenta) de mano. En la segunda fase, se realiza un estudio de zada completo con hasta 38 tejidos (incluyendo adre SO sanguíneo, médula ósea, cerebelo, cerebro, cérvi , corazón, riñón, intestino grueso, hígado, pulmón, no ndula mamaria de pecho, ovario, oviducto, páncreas, p rvios periféricos, pituitaria, placenta, próstata, glánd l, intestino delgado, médula espinal, bazo, estómag triado, testículos, timo, tiroides, amígdala, uréter, veji útero) de 3 adultos no relacionados. Los estudios s icamente a niveles mínimos de dos dosis.
El anticuerpo terapéutico (es decir, artículo de p ticuerpo de control de isotipo coincidente pueden se ra detección del complejo de avidina-biotina (ABC); ot ículo de prueba se incubó con la IgG anti-humana cundaria y se desarrolló en un complejo inmunológico. unológico a las concentraciones finales de 2 y 1 ículo de prueba se agregó a secciones de tejido sobre rio y después las secciones de tejidos se hicieron rante 30 minutos con un equipo de avidina-biotina- bsecuentemente, se aplicó DAB (3,3'-diaminoben bstrato para la reacción de peroxidasa, durante 4 min ción de tejido. Se utilizaron perlas de antígeno-Seph cciones de tejido de control positivo.
Se juzgó que cualquier tinción específica es y actividad esperada (por ejemplo, consistente con la e tígeno) o inesperada basándose en la expresión c tígeno objetivo en cuestión. Cualquier tinción juzgad clasificada para intensidad y frecuencia. Estudios de bloqueo de antígeno o suero pueden ayudar ad los dos anticuerpos parentaies, y cualquier unión n cesita ser confirmada con estudios de competencia de mplejo.
Es fácilmente evidente que el complejo que toma ctividad cruzada de tejido con una molécula multi-espe a DVD-lg es enormemente simplificado si los dos rentales son seleccionados para (1) falta de ha actividad cruzada de tejido inesperados y (2) pa opiada de hallazgos de reactividad cruzada de te j i d idos de especies humanas y toxicologicas correspondie 2. Especificidad y selectividad: Para generar una molécula de DVD-lg con esp lectividad deseadass se necesita generar y selecc rentales con el perfil de especificidad y selectividad s seado. r lo tanto, la caracterización cuidadosa de cada rental es crítica. Después de que cada anticuerpo ¡n o caracterizado para especificidad, la confirmación d especificidad de los sitios de unión individuales en la D~lg es enormemente simplificada.
Es fácilmente evidente que el complejo qu terminación de la especificidad de una DVD-lg es e plificada si se seleccionan dos anticuerpos pare pecificidad antes de ser combinados con una DVD-lg.
Los estudios de interacción de antígeno-anticue ar muchas formas, incluyendo estudios de inte teína-proteína clásicos, incluyendo ELISA (e unoabsorción ligado a enzimas), espectrómetr trelazamiento químico, SEC con difusión de luz, uilibrio, penetración de gel, ultrafiltración, cromatogr C analítica de zona grande, ultracentrifugación ligan, Barbara E. Bierer, David H. Margulies, Ethan rren Strober (eds.) publicadas por John Wiley & erencias relevantes incluidas ahí.
Liberación de citocina en sangre entera: La int b con células de sangre humana puede ser investiga un ensayo de liberación de citocina (Wing, M. G. munology (1995), 2(4), 183-190; "Current Pr armacology", SJ. Enna, Michael Williams, John W. Fer nakín, Paul Moser, (eds.) publicada por John Wiley dhusudan, S. CMnical Cáncer Research (2004), 10(19), x, J. Methods (2006), 38(4), 274-282; Choi, I. Europea munology (2001), 31(1), 94-106). Brevemente, se incu ncentraciones de mAb con sangre entera durante 2 ncentración probada debe cubrir una amplia escala, ncentraciones finales que imitan niveles de sangre n células de sangre humana para liberar espon ocinas inflamatorias.
Los estudios para la liberación de citocina para una mplejos debido a los cuatro o más sitios de unión, d ra cada antígeno. En resumen, los estudios de li ocina, como se describe aquí, miden el efecto de toda DVD-lg en sangre entera u otros sistemas de célula, solver qué porción de la molécula ocasiona la lib ocina. Una vez que se ha detectado la liberación de reza de la preparación de DVD-lg tiene que ser dete e algunos componentes celulares de co-purif icaci asionar la liberación de citocina en ella misma. Si la p ítida, la fragmentación de DCD-lg (incluyendo, peo no la remoción de la porción Fe, separación de sitios de tagénesis de sitio de unión u otros métodos ne ipleados para desconvolucionar cualquier obser opiadas, por ejemplo, mono cínomolgo. Los rentales necesitan unirse a especies objetivo ortóloga no cinomolgo) y producir una respuestas apropiada ( utralización, activación). En una modalidad, la reactivi inidad/potencia) a especies objetivo ortólogas debe ser jetivo humano. En la práctica, los anticuerpos par aluados para especies múltiples, incluyendo ratón, no (y otros primates no humanos), así como especies enfermedad (es decir, ovejas para modelo de ctividad cruzada aceptable para especies toxicológi ticuerpos monocionales parentales permite estudios t uros de DVD-lg~lg en la misma especie. Por esa raz ticuerpos monocionales parentales deben tener una zada aceptable para una especie toxicológica común, í estudios de DVD-lg en la misma especie.
Se pueden selecciona mAbs parentales de varios m r2/neu, anti-F gp, anti-CD111/18, anti-C D 14, anti-IC N, anti CD-19, anti-CD80 (por ejemplo, ver WO200303 4, anti-CD3, anti-CD23, anti-beta2-integrina, anti-a ti-CD52, anti-HLA DR, anti-CD22 (por ejemplo, ver U.A. NO: 5,789,554), anti-CD20, anti- IF, anti~CD64 R alfa beta, anti-CD2, anti-Hep B, anti-CA 125, anti-E 120, anti-CMV, anti-gpllbllla, anti-lgE, anti-CD25J antí- A, anti-IGF1,2, anti IGFR, anti-VNRintegrina, anti-IL-1 Ibeta, receptor anti-IL-1, receptor anti-IL-2, anti-IL-ti-IL-4, anti-IL5, receptor anti-IL-5, anti-IL-6, anti-IL-ti-IL-13, anti-IL- 13 receptor, anti-IL-17, and anti-IL-23 . 2005 Selection, design, and engineering of ticuerpos J Allergy Clin ImmunoL 116 p://www. path.cam.ac. uk/ mrc7/humanisation/anticuerpo También se pueden seleccionar mAbs de varios robados para uso, en estudios clínicos, o en el desarro nentech) (ver, por ejemplo, Pat. E.U.A. No. 5,6 ticuerpo anti-Her2/neu humanizado aprobado para trata ma; pertuzumab (rhuMab-2C4, Omnitarg®), actualm sarrollado por Genentech; un anticuerpo antí-Her2 des U.A. No. 4,753,894; cetuximab (Erbitux®, Imclone) (Pat. 43,533; PCT WO 96/40210), un anticuerpo quimérico ensayos clínicos para una variedad de cánceres; AB U.A. No. 6,235,883), actualmente siendo desarrollado p munex-Amgen; HuMax- EGFr (U,S. Ser. No. 1 tualmente siendo desarrollado por Genmab; 425, D62000, y EMD72000 (Merck KGaA) (Pat. E.U.A. No. rthy et al, 1987, Arch Biochem Biophys, 252(2): 549-60 1987, J Cell Biochem. 35(4):315-20; Kettleborough e otein Eng. 4(7):773-83); ICR62 (Instítute of Cáncer Res 95/20045; Modjtahedi et al., 1993, J, Cell Biophys. :129-46; Modjtahedi et al., 1993, Br J Cáncer. 1993, 6 llenium), un mAb humanizado actualmente aproba tamiento de leucemia crónica de célula B; muro rthoclone OKT3®), un anticuerpo anti-CD3 desarroliad tech/Johnson & Johnson, íbritumomab tiuxetan (Ze ticuerpo anti-CD20 desarrollado por IDEC/Sch mtuzumab ozogamicin ( ylotarg®), un anticuerpo anti oteína) desarrollado por Celltech/Wyeth, aiefacept (Ame ión anti-LFA-3 Fc desarrollada por Biogen), abciximab sarrollado por Centocor/Lilly, basiliximab ( sarrol!ado por Novartis, palivizumab (Synagís®), desa dimmune, infüximab (Remicade®), un anticuerpo sarrollado por Centocor, adalimumab (Humira®), un ti-TNFalfa desarrollado por Abbott, Humicade®, un anti Falfa desarrollado por Celitech, golimumab (CNT ticuerpo totalmente humano TNF desarrollado por anercept (Enbrel®), una fusión Fc del receptor 1407) siendo desarrollado por Antisoma, atalizumab), un anticuerpo anti-alfa-4-beta-1 (VLA-4) y siendo desarrollado por Biogen, VLA-1 mAb, un anti A-1 integrina siendo desarrollado por Biogen, LTB ticuerpo de receptor anti-limfotoxina (LTBR) siendo r Biogen beta, CAT-152, un anticuerpo anti-TGF sarrollad por Cambridge Antibody Technology, ABT anticuerpo anti-IL-12 p40 siendo desarrollado por A 2, un anticuerpo anti-TGFpl siendo desarrollado por tibody Technology and Genzyme, CAT-213, un antic taxinl siendo desarrollado por Cambridge Antibody mphoStat-B® un anticuerpo anti-Blys siendo desar mbridge Antibody Technology and Human Genome Sc AIL-R1mAb, un anticuerpo anti-TRAIL-R1 siendo desa mbridge Antibody Technology and Human Genome Sci astin® bevacizumab, rhuMAb-VEGF), un anticuerpo Max- IL 15, un anticuerpo anti-IL15 siendo desar nmab and Amgen, HuMax-lnflam, siendo desarrollado d Medarex, HuMax-Cancer, un anticuerpo anti-Heparan sarrollado por Genmab and Medarex y Oxford G Max-Linfoma, siendo desarrollado por Genmab a Max-TAC, siendo desarrollado por Genmab, IDEC-1 ticuerpo anti-CD40L siendo desarrollado armaceuticals, IDEC-151 (Clenolíxtmab), un anticuer ndo desarrollado por IDEC Pharmaceuticals, iD ticuerpo anti-CD80 siendo desarrollado por IDEC Phar EC- 152, un anti-CD23 siendo desarrollado armaceuticals, anticuerpos de factor de migración ant IF) siendo desarrollados por IDEC Pharmaceuticals, ticuerpo anti-idiotípico siendo desarrollado por Imclone anticuerpo anti-KDR siendo desarrollado por Imclone, ticuerpo anti-flk-1 siendo desarrollado por Imclone, darex, MDX-070 siendo desarrollado por Medarex ndo desarrollado por Medarex, Osidem® (IDM-1), y un ti-Her2 siendo desarrollado por Medarex e immu lecules, HuMax®-CD4, un anticuerpo anti-CD4 siendo r Medarex and Genmab, HuMax-IL15, un anticuerp ndo desarrollado por Medarex and Genmab, CNT ticuerpo anti-TNFa siendo desarrollado por Me ntocor/J&J, CNTO 1275, un anticuerpo anti-citoc sarrollado por Centocor/J& J, MOR101 y MOR102, ant lécula-1 de adhesión anti-íntercelular (ICAM-I) (C sarrollados por MorphoSys, MOR201, un anticuerpo d factor de crecimiento anti-f ibroblasto (FGFR sarrollado por MorphoSys, Nuvioh® (yisilizumab), un ti-CD3 siendo desarrollado por Protein Design Labs, ticuerpo interferón anti-gamma siendo desarrollado sign Labs, Anti-a 5 ß I Integrina, siendo desarrollado 3 integrina, Medimmune); volociximab (alfa ?ß1 ogen/PDL); mAb 216 Humano (epítopo glicosilado d l)¡ BiTE MT103 (CD19 x CD3 biespecífíco, Medimmun celIxFcgammaRI biespecífíco, Medarex/Merck KGa); rM PG biespecífíco, Patente de E.U.A. No. EP144426 MD 82633) (CD64 x EGFR biespecífíco, Medarex); C movab) (EpCAM x anti-CD3 biespecífíco, tumaxomab (HER2/CD3 biespecífíco, Fresenius egovomab (OvaRex) (CA-125, VíRexx); Rencarex® nhidrasa carbónica I.X, Wilex); CNTO 888 (CCL2, C105 (CD105 (endoglin), Tracon); BMS-663513 (agon ystol Myers Squibb); MDX-1342 (CD19, Medarex); EDI-507) (CD2, Medimmune); Ofatumumab (Humax-C nmab); Rituximab (Rituxan) (CD2G, Genentech); A20) (CD20, Immunomedics); Epratuzumab (CD2 iliximab (IDEC 152) (CD23, Bíogen); muromonab- uibb); Tremelimumab (Ticilimumab, CP-675,2) (CTL S-ETR1 (Mapatumumab) (agonista DR4 TRAIL-R1 , Hu ience /Gíaxo Smith Kline); AMG-655 (DR5, Amgen); Ap nentech); CS-1008 (DR5, Daiicht Sankyo); xatumumab) (agonista DR5 TRAIL-R2, HGS); Cetuxim GFR, Imclone); I C-11F8, (EGFR, Imclone); Nimotuzur Bio); Panitumumab (Vectabix) (EGFR, Amgen); Z uMaxEGFr) (EGFR, Genmab); CDX-110 (EGFRvI munotherapeutics); adecatumumab (MT201) (Epcar recolomab (Panorex, 17-1A) (Epcam , Glaxo/Centoco 3 (receptor a de folato, Morphotech); KW-2871 (gangl owa); MORAb-009 (GP-9, Morphotech); CDX- 307 CGb, Celldex); Trastuzumab (Herceptin) (HER2, rtuzumab (rhuMAb 2C4) (HER2 (DI), Genentech); dena HLA-DR beta, PDL Pharma); AMG-479 (IGF-I ti-IGF-1 R R1507 (IGF1-R, Roche); CP 751871 (IGF1 clone); bavituximab (fosfatidilserina. Peregrine); huJ rnell Research Foundation); muJ591 (PSMA, Cornel undation); GC1008 (inhibidor TGFb (pan) (lgG4), liximab (Remicade) (TNFa, Centocor); A27.15 (r nsferrina, Saik Institute, INSERN WO 2005/111 ceptor de transferrina, Salk Institute); Bevacizuma EGF, Genentech); HuMV833 (VEGF, Tsukuba Res /2000/034337, University of Texas); IMC-18F1 clone); IMC-1121 (VEGFR2, Imclone).
Construcción de moléculas de DVD La molécula de inmunoglobulina de dominio var VD-lg) se diseña de manera que dos diferentes domini cadena ligera (VL) de dos diferentes anticuerpos m rentales se enlazan en tándem directamente o a tr lazador corto mediante técnicas de ADN recombinante, ertada o un dominio variable de cadena pesad manizado. En una modalidad, el dominio variable es riable de cadena pesada o ligera humano.
En una modalidad, los primero y segundo dominio n enlazados directamente entre sí utilizando técnic cornbinante. En otra modalidad, los dominios var lazados a través de una secuencia enlazadora. En una enlazan dos dominios variables. Tres o más domini mbién pueden ser enlazados directamente o a trav cuencia enlazadora. Los dominios variables pueden un tígeno o pueden unir diferentes antígenos. Las molécu la invención pueden incluir un dominio v unogiobulina y un dominio variable de no inmunog mo un dominio de unión a ligando de un receptor, do una enzima. Las moléculas de DVD también pueden c más dominio no Ig. : 13); TVAAPSVFIFPP (SEC ID NO: 14); QPKAAP ( ); QPKAAPSVTLFPP (SEC ID NO: 16); AKTTPP (SEC TTPPSVTPLAP (SEC ID NO: 18); AKTTAP (SEC ID NO SVYPLAP (SEC ID NO: 20); ASTKGP (SEC ID TKGPSVFPLAP (SEC ID NO: 22), GGGGSGGGGSGGG : 23); GENKVEYAPALMALS (SEC ID NO: 24); GPAKEL EC ID NO: 25); GHEAAAVMQVQ YPAS (SEC ID N cción de las secuencias enlazadoras se basa en el tructura de cristal de varias moléculas Fab. Existe xible natural entre el dominio variable y el domini 1/CL en una estructura molecular de Fab o de antic lace natural comprende aproximadamente 10-12 r inoácido, contribuidos por 4-6 residuos del término C y 4-6 residuos del término N del dominio CL/CH1. Las invención se generaron utilizando 5-6 residuos de am rminales, ó 11-12 residuos de aminoácido, de CL o iones.
Otras secuencias enlazadoras pueden incluir cuencia de cualquier longitud del dominio CL/CH1, pe residuos del dominio CL/CH1; por ejemplo, los pri Siduos de aminoácido de los dominios CL/CH1; los enl dena ligera pueden ser de CK O ??; y los enlazadores sada pueden derivarse de CH1 de cualquier isotipo, 1, Cy2, ??3, Cy4, Cal, Cot2, C6, Ce, y ?µ. Las lazadoras también pueden derivarse de otras proteínas oteínas de tipo Ig, (por ejemplo, TCR, FcR, KIR); s se de G S (por ejemplo, repeticiones G4S); secuencia la región de gozne; y otras secuencias naturale oteínas.
En una modalidad, un dominio constante es enlaza minios variables enlazados utilizando técnicas combinante. En una modalidad, la secuencia que a región Fe humara. En otra modalidad, la región Fe gión Fe de. lgG1, lgG2, lgG3, lgG4, IgA, IgM, I g E , o IgD.
En otra modalidad, dos poiipéptidos de DVD de cad os poiipéptidos de DVD de cadena ligera se combinan a molécula de DVD-lg. El Cuadro 2 lista secuencias de regiones VH y VL de anticuerpos ilustrativos para obj ra tratar una enfermedad, por ejemplo, para tratar cán dalidad, la invención proporciona un DVD comprendi nos dos de las regiones VH y/o VL listada en el C alquier orientación. adro 2. Lista de Secuencias de Aminoácido de Reg de Anticuerpos para la Generación de DVP-igs HIC . ID Región de Secuencia ID Unica Proteina No, ABT 1234567890123456789012345 28 AB001 H VH CD20 QVQLQQPGAELV PGASVKMSCKAS VKQTPGRGLEWIGAIYPGNGD SYN SEC . ID Región de Secuencia Unica Proteina No. ABT 1234567890123456789012345 34 AB018VH VH RANKL F,VQLLE5GGGLVQPGG3LRLSCAAS V QAPG GLEWVSGITGSGGSTYY DNSKNTLYLQMMSLRAEDTAVYYCA FDPWGQGTLVTVSS 35 AB018VL VL RANKL EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRA YQQ PGQAPRLLIYGASSRA GIPD TLTISRLEPEDFAVFYCQQYGSSPR R 36 AB02QVH. NGF QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVS IRQPPGKGLEWIG11WGDGTTDYNS TSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAR DYWGQGTLVTVSS 37 AB020VL NGF DIQMTQSPSSLSAS7GDRVTITCRA QQKPGKAPKLLIYYTSRFHSGV SR FTISSLQPEDIATYYCQQEHTLPYT 38 AB022VH SOST ( sec. 1) EVQLQQSGPELVTPGASVKISCKAS VKQSHGKSLEWIGDINPYSGETTYN DKSSSI YMEIRGLTSEDSAVYYCA WGQGTLVTVSA 39 AB022VL SOST (sec. 1} DVQMIQSPSSLSASLGDIVTLvJTCQA QQ PGKAPKLLI GSSNILEDGVPSR LTISSLEDEDLATYFCLQH3YLPY 40 AB023VH DKK E QLVESGGGLVQPANSLKLSCAAS VRQS KKGLEWV T11 DGSSTYYR DMAKSTLYLQ DSLRSEDT TYYCA YWGQGVLVTVSS 41 AB023VL DKK DIRMTQSP SLSASLGETVMIECL QQ GKSPQLLIYNA SLQNGVFSR L INSLQSEDVATYFCQQYNNYPPT B024VH alfaVbeta3 V LVESGGGVV PGRSLRLSCAAS SEC . ID Región de Secuencia ID Unica Proteina No . ABT 1234567890123456789012345 47 AB027VL IL-4 DIVLTQSPSSLSASVGDRVTI C A MNWYQQ PGKAPKLLIYAASNLESG T D F FT13 SLQPE DI TYYCQQSNE EIKR 48 AB028VH IL~9 (sec. 1) QVQLVQSGAEVKKPGASVKSC ASG RQAPGQLEWMGEILPGSTTNYNEKF TSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARAD WGQGTLVTSS 49 ABG28VL IL-9 {sec. 1} DIQMTQS PSSLSASVGDRVTITCKA QQKPGKAPKLLIYSTSYRYSGVPSR LTISSLQPEDFATY CQHFYSYPL 50 AB029VH IL-17A EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSC AS VRQA PGKGLEWVAAINQDGSEKYYV DNAKNSLYLQMNSLRVEDTAVYYCV I HY YFDLWGRGTLVTVSS 51 AB029VL IL-17A EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRA YQQKPGQAPRLLIY SSRATGIPD TLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPC R 52 AB032VH IL-lbe a (sec. 1) QVQLVE oGGGVVQPGRSLRLSCAAS VRQAPG GLE VAI IWYDGDNQYYA D SKMTLYLQM GLR EDT VYYCA GQGTLVTVSS 53 AB032VL IL-lbeta {sec. 1) EI LTQSPDFQSVTPKEKVTITCRA QQKPDQSPKLLIKYASQSFSGVPSR L INSLEAEDAAAY CHQSSSLPFT 54 AB038VH IL-23 p.19 DVNLVESGGGLVKPGGSLKLSCAAS VRQTPEKRLEWVATISSGGT TYYP DN AK1SI LYLQMSSLKSEDTAMFYCT FDY GQGATLTVSS SEC · Región de Secuencia ID Unica Proteína No. ABT 1234567890123456789012345 60 AB051VH IL-13 (sec. 2} EVTLRESGPGLVKPTQTLTLTCTLY DWIRQPPGKGLEWLAHIWWDDVKRY D SKNQ VLKLTSVDPVD ATYYC A.MDYWGQGTLVTVSS 61 AB051VL IL-13 (sec. 2) DIQMTQSPSSLSASVGDRVTISCRA QQKPGKAPKLLIFYTSKLHSGVPSR LTISSLQPEDIATYYCQQGL PPLT 62 AB053VH IgE EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVS WIRQAPGKGLEWVASITYDGSTMYN DDSKN FYLQM SLR ED AVYYC AVWGQGTLVTVSS 63 AB053VL DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRA MMWYQQKPG P LLIY ASYLESG TDFTLTISSLQPEDFA YYCQQSHE EI R 64 AB05 VH IL-6R EVQLQESGPGLVRPSQTLSLTCTVS WVRQPPGP.GLEWIG IS SGITTYN DTSKNQFSLRLSSVTAADTAVYYCA WGQGSLVTVSS 65 AB05 VL IL-6R DIQMTQSPSSLS SVGDRV ITCRA QQKPGKAPKLLI YTSRLHSGVPSR FTISSLQPEDIATYYCQQGNTLPYT 66 AB056VH IL-9 (sec. 2) ,QVQLQQSGAELMKPG SVKLSCKAT IKQRPGHGLEWI QILPGSGSAYYN DTSSKT YIQLISLTTEDS IYYC YWGQGTLLTVSA 67 AB056 L IL-9 (sec. 2) DILLTQS AILS SPGERVSFSCRA QQRTNGSPRLLIKY SESISG PSR LSI SVESEDIADYYCQQSNNW LT ILl-alpha QVQL ESGGGVVQPGRSLRLSCTAS VRQ PGKGLE VAAVSYDGSNKYY 68 AB065VH DKSK ILFLQMDSLRLEDTAVYYC esenía más adelante.
Producción de proteínas de DVD Las proteínas de unión de la presente invención oducidas a través de cualquier número de técnicas con mpo. Por ejemplo, la expresión a partir de células h nde los vectores de expresión que codifican las cade DVD y ligera de DVD son transfretados a una célula vés de técnicas estándares. Se pretenden varias mino "transfección" para abarcar una amplia variedad múnmente utilizadas para la introducción de ADN exó uía huésped procariótica o eucarionte, por ctroporación, precipitación de fosfato de calcio, tran AE-dextrana, y similares. Aunque es posible ex oteínas de DVD de la. invención en células huésp ocarióticas como eucariontes, las proteína de DVD se * 4216-4220, utilizadas con un marcador seleccionado mplo, como se describe por RJ. Kaufman y P.A. Sharp ol. 159:601 - 621), células de mieloma NSO, células C 2 y PER.C6. Cuando se introducen vectores de combinantes que codifican proteínas de DVD a células mífero, las proteínas de DVD se producen cultivando ésped durante un período de tiempo suficiente para presión de las proteínas de DVD en las células creción de las proteínas de DVD en el medio de cultiv desarrollan las células huésped. Las proteínas de DVD cuperadas del medio de cultivo utilizando métodos de proteínas estándares.
En un sistema ilustrativo para la expresión reco oteínas de DVD de la invención, un vector de combinante que codifica tanto el DVD de cadena pesa D de cadena ligera es introducido en células dhfr-CHO presión de DVD de cadena pesada y ligera y la prote acta es recuperada del medio de cultivo. Se utilizan logía molecular estándares para preparar el vector d combinante, transfectar células huésped, nsformantes, cultivar las células huésped y recuperar DVD del medio de cultivo. Aún más, la invención pro todo para sintetizar una proteína de DVD de l itivando una célula huésped de ia invención en un medi ecuado hasta que se sintetiza una proteína de ención. El método además puede comprender aislar ia D del medio de cultivo.
Una característica importante de una DVD-lg es qu oducida y purificada en una forma similar a un nvencional. La producción de DVD-lg da como re oducto principal, individua!, homogéneo con actividad ble deseada, sin ninguna modificación de secuencia d ejemplo, basándose en el diseño descrito por íll ublicación de OCT WO 2001/077342 (A1)), existen mb i naciones de cadenas pesadas y ligeras. Consec io el 6.25% de ía proteína probablemente estará en la f seada, y no como un producto individual principal ividual primario comparado con las otras 1 mbinaciones. La separación de las formas totalme seada de la proteína a partir de las formar i rcialmente activas de la proteína utilizando t omatografía estándares, típicamente usadas en ía fa an escala, aún se va a demostrar.
Sorprendentemente el diseño de las "proteínas d gitud completa, multivalentes, dobles específicas" de ención conduce a una cadena ligera de dominio varia a cadena pesada de dominio variable doble que incipalmente a las "proteínas de unión de longitu una "proteína de unión de longitud completa tetrava pecífica".
La presente invención proporciona un método pa a cadena ligera de dominio variable doble y una caden minio variable doble en una célula individual que co roducto primario" de una "proteína de unión de longit travalente doble específica", en donde el "producto s del 50% de toda la proteína ensamblada, compre dena ligera de dominio variable doble y una cadena minio variable doble.
La presente invención proporciona métodos para e dena ligera de dominio variable doble y una cadena minio variable doble en una célula individual condu roducto primario" individua! de una "proteína de unión mpleta tetravalente doble, específica", en donde e mario" es más del 75% de toda la proteína dena pesada de dominio variable doble.
Proteínas de unión de DVD deri vatizadas Una modalidad proporcionar una proteína de unión iquetada, en donde la proteína de unión de la rivatizada o enlazada a otra molécula funcional (por ej ptido o proteína). Por ejemplo, una proteína de unión invención puede ser derivada enlazando funciona teína de unión de la invención (a través de acoplamie sión genética, asociación no covalente u otra cosa) a u ras entidades moleculares, tal como otro anticuerpo ( anticuerpo biespecífico o un diacuerpo), un agente de ente citotóxico, un agente farmacéutico, y/o una proteí e pueden mediar la asociación de la proteína de uni lécula (tal como una región de núcleo de estreptavi iqueta de poli-histidina). regando reactivos adicionales que la enzima utiliza p producto de reacción detectabie. Por ejemplo, cuand tectable, tal como peroxidasa de rábano, está presente peróxido de hidrógeno y diaminobenzidina conduce a reacción de color, el cual es detectabie. Una proteí bién puede ser derivatizada con biotina, y detectada dición indirecta de unión de avidína o estreptavidina.
Otra modalidad de la invención proporciona una ión cristalizada y formulaciones y composiciones que hos cristales. En una modalidad, la proteína de unión ne una vida media mayor in vivo que la contraparte s oteína de unión. En otra modalidad, la proteína de unió tividad biológica después de cristalización.
La proteína de unión de cristalización de la inve r producida de acuerdo con métodos conocidos en l mo se describe en WO 02072636, I 185 oteínas glicosiiadas o glicoproteí ñas. Los anticu coproteínas con uno o más residuos de carbohidrato e t así como el dominio variable. Los residuos de carboh minio Fe tienen un efecto importante en la función minio Fc} con un efecto mínimo en la unión a antíge dia del anticuerpo (R. Jefferis, Biotechnol. Prog. 21 -16). En contraste, la glicosílación del dominio vari ner un efecto en la actividad de unión a antígeno del glicosilación en el dominio variable puede tener gatívo en la afinidad de unión de anticuerpo, pro bido a la impedancia estérica (Co, M.S. et al, Mol. Imm :1361-1367), o dar como resultado una afinidad increm antígeno (Wallick, S.C., et al., Exp. Med. (1988) 168 ight, A., et al., EMBO J. (1991) 10:2717 2723).
Un aspecto de la presente invención está dirigid tantes de sitio de glicosilación en los cuales rece de glicosilación). La glicosilación puede ser al rnplo, para incrementar la afinidad del anticuer tígeno. Dichas modificaciones de carbohidrato pued r ejemplo, alterando uno o más sitios de glicosilación cuencia de anticuerpo. Por ejemplo, se pueden hacer bstituciones de aminoácido que dan como resultado la uno o más sitios de glicosilación de región variable p í la glicosilación en ese sitio. Dicha aglicosila rementar la afinidad del anticuerpo para el antíg pecto se describe con mayor detalle en la Publicación O3O16466A2, y Patentes de E.U.A. Nos. 5,714,350 y 6, Además o alternativamente, se puede hacer una ión modificada de la invención que tiene un tipo icosilación, tal como un anticuerpo hipofucosilad ntidades reducidas de residuos de fucosilo (ver, Kand ., Journal of Biotechnology (2007), 130(3), 300- erada. Ver, por ejemplo, Shields, R. L. et al. (2002) J. 7:26733-26740; Umana et al. (1999) Nat. Biotech. 1 mo también, Patente Europea No: EP 1,176,195; Publi T WO 03/035835; WO 99/54342 80.
La glicosilacion de proteína depende de la se inoácido de la proteína de interés, así como la célula nde se expresa la proteína. Diferentes organismos pue erentes enzimas de glicosilacion (por ejemplo, glicosilt glicosidasas), y tienen diferentes substratos (a cleótido) disponibles. Debido a dichos factores, el cosilacion de proteína y la composición de residuos eden diferir dependiendo del sistema huésped en oteína particular es expresada. Los residuos de glicosi la invención pueden incluir, pero no se limitan lactosa, mañosa, fucosa, n-acetilglucosamina y ácido a modalidad, la proteína de unión glicosilada compren unogénicas en seres humanos y muestran vida media o después de administración. Los receptores específic manos y otros animales pueden reconocer re cosilación específicos y promueven la rápida elimin oteína a partir del a corriente sanguínea. Otros efect eden incluir cambios en el pliegue de proteína, sceptíbilidad a proteasas, tráfico, transporte, capacída mpartimentos, secreción, reconocimiento por otras tores, antigenicidad, o alergenicidad. Por consig acticante puede elegir una proteína terapéutica mposición específica y patrón de glicosilación, p mposición de glicosilación y patrón idénticos, o po ilares, a aquella producida en células humanas o en especie específica del animal pretendido.
La expresión de proteínas glicosiladas diferente de ésped puede lograrse modificando genéticamente ) 189 tente de E.U.A. 200440018590 y 20020137134 y pu T WO 2005100584 A2).
Además de las proteínas de unión, la present bién está dirigida a anticuerpos anti-idiotípico pecíficos para dichas proteínas de unión de la in ticuerpo anti-ld es un anticuerpo, el cual reconoce de ieos generalmente asociados con la región de unión otro anticuerpo. El anti-ld puede ser preparado inm ima! con la proteína de unión o una región del mismo R. El animal inmunizado reconocerá, y respond terminantes idiottpicos del anticuerpo de inmunización anticuerpo anti-ld. Es fácilmente evidente que puede S nerar anticuerpos anti-idiotípicos para los dos o más rentales incorporados a una molécula de DVD-lg; tudios de unión a través de métodos bien reconocidos e or ejemplo, BIAcore, ELISA) para verificar que los antic fase sólida (por ejemplo, oblea de BIAcore, placa de E juagado con un regulador de pH de enjuague, incuba estra de suero, otro paso de enjuague y finalmente inc o anticuerpo anti-idiotípico para el otro sitio de unión rcado a sí mismo con una enzima para la cuantific acción de unión. En una modalidad, para una DVD-lg s sitios de unión diferentes, los anticuerpos anti-idiot dos sitios de unión más externos (más lejos y cerca nstante) no solo ayudarán a determinar la concentració suero humano, sino que también documentarán la inte lécula in vivo. Cada anticuerpo anti-ld también puede tno un "inmunógeno" para inducir una respuesta inm ro animal, produciendo un así llamado anticuerpo anti-a Además, se apreciará por un experto en la técni oteína de interés puede ser expresada utilizando una b lulas huésped genéticamente diseñadas por tnge . Usos de DVD-lg Dada su habilidad para unirse a dos o más ant oteínas de unión de la invención pueden ser utili tectar los antígenos (por ejemplo! en una muestra bi mo suero o plasma), utilizando un inmunoensayo conv mo ensayos por inmunoabsorción ligado a -enzimas dioinmunoensayo (RIA), o inmunohístoqu ímica de tejido directa o indirectamente marcada con una substanci ra facilitar la detección del anticuerpo unido o no bstancias detectables^ incluyen varias enzimas, grupos teríales fluorescentes, materiales luminiscentes y dioactivos. Ejemplos de enzimas adecuadas incluyen pe bano, fosfatasa alcalina, ß-galactosidasa, o acetilco emplos de complejos de grupos prostéticos treptavidina/biotina y avidina/biotina; ejemplos de orescentes incluyen umbeliferona, fluoresceína, isoti jetos mamíferos teniendo los antígenos con los oteína de unión de la invención reacciona en forma ra modalidad, la invención proporciona un método par tividad de antígeno en un sujeto que sufre de una e storno en donde la actividad de antígeno es dañina. U unión de la invención puede ser administrada a un ra propósitos terapéuticos.
Como se utiliza aquí eí término "un trastorno e tividad de antígeno es dañina" pretende incluir enfe ros trastornos en donde la presencia del antígeno es u fre del trastorno ha mostrado que es o tiene sospech a responsable de la patofisiología del trastorno o un tribuye a un empeoramiento del trastorno. Por cons storno en donde la actividad de antígeno es pelig storno en donde se espera que la actividad de antíge ntomas y/o la progresión del trastorno. Dichos trastor Las DVD-lgs de la invención pueden unir un ltiples antígenos. Dichos antígenos incluyen, pero no objetivos listados en las siguientes bases de datos, d datos se incorporan aquí para referencia. Estas bas jetivo incluyen estas listas: erapeutic targets (http://xin.cz3. ñus. edu.sg/group/cjttd/ tokines and cytokine receptors (http://www.cytokinewe p://www. cope withcyt o kin es. de/cope, cg í , p://c mbi.bjmu.edu. cn/cmbidata/cgf/CGF_Database/cyto amoto-u.ac.jp/CFC/indexR. html); emokines (http: //cytokine. medie ac.jp/CFC/CK/C hemokine.html); emokine receptors and GPCRs (http://csp. medie ac.jp/CSP/ Receptor. html, http://www.gpcr.org/7tm/); factory Receptors (http://senselab.med.yale.edu/sens fau!t.asp); Las DVD-lgs son útiles como agentes terapé ultáneamente bloquear dos diferentes objetivos para icacia/seguridad y/o incrementar la cobertura del pacie jetivos pueden incluir objetivos solubles (TNF) y o ceptor de superficie de célula (VEGFR y EGFR). Tambi ilizar para inducir citotoxicidad redirigida entre células uías T (Her2 y CD3) para terapia de cáncer, o entre la activa y células efectoras para enfermedad aut splante, o entre cualquier célula objetivo y la célula e imínar células causantes de enfermedad en cualquier da.
Además, la DVD-lg puede ser utilizada para rupación y activación de receptor cuando se diseñe s diferentes epítopos en el mismo receptor. Esto pue neficio de hacer terapéuticos anti-GPCR ago tagonísticos. En este caso, la DVD-lg puede ser úti mero de trastornos inmunológicos. Las interacciones de gativamente regulan la activación de célula T at ogresión del ciclo celular, la producción de IL-2, y la células T después de la activación, y el acoplamiento D152) puede sub-regular la activación de célula T y ucción de tolerancia inmunológica. Sin embargo, la e enuar la activación de célula T a través de acoplamient anticuerpo agonístico no ha tenido éxito ya que la a L-4 requiere de ligación. La interacción molecular de tá en arreglos de "cierre torcido", como se demue álisis estructural de cristal (Stamper 2001 Nature 41 bargo, ninguno de los reactivos de unión CTLA-4 ponible tiene propiedades de ligación, incluyendo LA-4. Se han hecho varios intentos para dirigir esta caso, se generó un anticuerpo de cadena individu embro, y significativamente inhibió el rechazo alo rapéutico. Hasta este punto, la ligación de CTLA-4 pue ilizando una molécula de DVD-lg, que activa dos ítopos (o dos copias del mismo epítopo) de dominio ext LA-4. La razón fundamental es que la distancia que íos de unión de una IgG, aproximadamente 15 masiado grande para la ligación activa de CTLA-4 (30 homodímero 2 CTLA-4). Sin embargo, la distancia e íos de unión en DVD-lg (un brazo) es mucho más corta, escala de 30-50 A, permitiendo la ligación apropiada d Similarmente, la DVD-lg puede activar dos diferente un complejo de receptor de superficie de célula (por alfa y beta). Además, la DVD-lg puede activar la oteína soluble/patógeno para dirigir una rápida elimin teína/patógeno soluble objetivo.
Además, las DVD-lgs de la invención pueden ser ra suministro específico en tejido (objetivo de un rementar la vida media del antígeno. Además, la D r diseñada ya sea para enlazarse físicamente a dicos implantados en pacientes o activar estos dicos (ver, Burke, Sandra E.; Kuntz, Richard E.; Sch Zotarolimus eluting stents. Advanced Drug Delive 006), 58(3), 437-446; Surface coatings for biológica! ac nctionalization of medical devices, Hildebrand, H. F.; B ; Mayer, G.; Chai, F.; Lefebvre, M.; Boschin, F., atings Technology (2006), 200(22-23), 6318-6324; mbinations for local drug therapies and infection prop ng; Grainger, David W., Biomaterials (2006), 27(11), diation of the cytokine network in the implantation of vices., Marques, A. P.; Hunt, J. A.; Reís, Rui L, Bí stems in Tissue Engineering and Regenerative Medic 7-397). En resumen, la dirección de tipos apropiados io de implantes médicos puede promover la pueden conducir a ia formación de coágulos. Recienten scrito un stent recubierto con el anticuerpo anti-CD duce restenosis y evita que se formen coágulos captura ogenitoras endoteliales (EPC) que circulan a través d s células endoteliales son células que alinean vasos mitiendo que la sangre fluya suavemente. Las EPCs s superficie dura del stent formando una capa suave omueve la curación sino que también evita la r águlos, complicaciones previamente asociadas con nts (Aoji et ai., 2005 J Am Coll Cardiol. 45(10): 1574- mejorar los resultados para pacientes que requieren mbién existen complicaciones para pacientes que r ugía de derivación cardiovascular. Por ejemplo, u scular prostético (arteria artificia!) cubierto con antic C podría eliminar la necesidad de utilizar arterias d azos de pacientes para injertos de cirugía de deriv bre dispositivos médicos y después de implantación y li os los DVDs del dispositivo (o cualquier otra necesida querir DVD-lg fresco adicional, incluyendo enveje snaturalización de ka DVD-lg ya cargada) el dispos lver a ser cargado a través de administración sistémic sca al paciente, en donde la DVD-lg se diseña para jetivo de interés (una citocína, un marcador de super l como CD34), etc.) con un grupo de sitios de un jetivo colocado como cubierta en el dispositivo (incl teína, un epítopo de cualquier tipo, incluyendo itándose a, lípidos, poiisacáridos y polímeros) con e enología tiene la ventaja de extender la utilidad d biertos. uso de DVD-lgs en varias enfermedades Las moléculas de DVD-lg de la invención tambié L17 (TARC), CCL18 (PARC), CCL19, CCL2 (mcp-1), ), CCL21 (MIP-2), CCL23 ( PIF-I), CCL24 (MPIF-2 / L25 (TECK), CCL26, CCL3 ( !P-1a), CCL4 (MIP ANTES), CCL7 (mcp-3), CCL8 (rncp-2), CXCL1 , CXC CL11 (l-TAC / IP-9), CXCL12 (SDF1 ), CXCL13, CXCL CL3, CXCL5 (ENA-78 / LIX), CXCL6 (GCP-2), CXCL9 L13 (mcp-4), CCR1 , CCR2 , CCR3, CCR4, CCR5, C R8, CCR9, CX3CR1 , 1L8RA, XCR1 (CCXCR1), 1FNA2, 7C, IL1A, IL1B, IL1F10, ÍL1F5, IL1F6, IL1F7, IL1F8, t , IL8, IL9, LTA, LTB, MIF, SCYE1 (citocina de a nocito endotelia!), SPP1 , TNF, TNFSF5, IFNA2, IL10 3, IL13RA1, IL5RA, IL9, IL9R, ABCF1 , BCL6, C3, C P, ICEBERG, IL1R1, IL1RN, IL8RB, LTB4R, TOL AK1, 1RAK2, MYD88, NCK2, TNFAIP3, TRADD, TRA AF3, TRAF4, TRAF5, TRAF6, ACVR1 , ACVR1B, ACVR VRL1, CD28, CD3E, CD3G, CD3Z, CD69, CD80, C F3, DKFZp451J0118, FGF2, GFI1, IFNA1, 1FNB1 , I 1A, IL1B, IL1R1, IL1R2, IL2, IL2RA, IL2RB, IL2RG, IL3 5, IL5RA, IL6, !L6R, i L6ST, IL7, IL8, I L8RA, IL8RB, IL9, 10RA, IL10RB, IL11, IL11RA, IL12A, IL12B, IL12RB1 13, IL13RA1, IL13RA2, IL15, IL15RA, IL16, IL17, I 18R1, IL19, IL20, KITLG, LEP, LTA, LTB, LTB4R, LTB F, NPPB, PDGFB; TBX21 , TDGF1, TGFA, TGFB1 FB2, TGFB3, TGFBi, TGFBR1 , TGFBR2, TGFBR3, FRSF1A, TNFRSF B, TNFRSF7, TNFRSF8, FRSF11 A, TNFRSF21 , TNFSF4, TNFSF5, TNFSF6, GFf ZFPM2, y RNF110 (ZNF144). En un aspecto, se p D-lgs capaces de unir uno o más de los objetivos lista Se contemplan DVD-lgs capaces de unir los siguient jetivos para tratar enfermedades inflamatorias: TNF e I RANKL; TNF y VEGF; TNF y SOST (sec. 1); TNF y faVbeta3; TNF y NGF; TNF e IL-23pl9¡ TNF e IL-6; T Asma El asma alérgica se caracteriza por la presencia de taplasia de célula de calciforme, alteraciones de célu er-reactividad de vías respiratorias (AHR), y expresión 2 y Th1, así como niveles elevados de IgE en suer pliamente aceptado que la inflamación de vías respira ctor clave que subraya la patogénesis de asma, ínvol eracción de complejo de células inflamatorias tales c células B, eosinófilos, células cebadas o mastocitos y e otros mediadores secretados incluyendo citocinas y s corticoesteroides son el tratamiento anti-inflam portante para asma en la actualidad, sin embargo, su acción es no específico y existen preocupaciones de pecialmente en la población de pacientes jóvenes. El d rapias más específicas y dirigidas, por lo tanto, está iste una evidencia creciente de que IL-13 en ratones ir mo un tratamiento novedoso para asma. Sin emb diadores de trayectorias inmunologicas diferenciales t o involucrados en la patogénesis de asma, y el bloqu diadores, además de IL-13, puede ofrecer un beneficio icional. Dichos pares objetivo incluyen, pero no se limi una citocina pro-inflamatoria, tal como factor-a de necr I NF- ). El TNF-a puede amplificar la respuesta infl ma y puede ser enlazado a la severidad de la icDonneíl, et al., Progress in Respiratory Research (200 ugs for Asthma, Allergy and COPD), 247- 250.)- Ésto bloquear tanto IL-13 como TNF-a puede tener efecto rticularmente en enfermedad severa de las vías respi ra modalidad, la DVD-lg de la invención une los objeti F-a, y se utiliza para tratar asma.
Modelos de animales tales como el modelo de rat ducida por OVA, en donde se pueden valorar tanto pares de objetivo para el grado de inmunosupresión rantizadas y útiles para seleccionar los mejores pares r, Luster et al., Toxicology (1994), 92(1-3), 229-43; , Developments in biological standardizaron (1992), rt et al., Journal of Allergy and Clinical Immunol 8(2), 250-257).
Basándose en los fundamentos descritos aquí y u smo modelo de evaluación para eficacia y seguridad, objetivos que las moléculas de DVD-lg pueden unir ra tratar asma pueden ser determinados. En una modal jetivos incluyen, pero no se limitan a, IL-13 e IL-1 b bién se implican en la respuesta inflamatoria en as ocinas y quimiocinas que están involucradas en inflam mo IL-13 e IL-9; IL-13 e IL-4; IL-13 e IL-5; IL-13 e IL RC; IL-13 y MDC; IL-13 y MIF; IL-13 y TGF-ß: IL-13 R; IL-13 y CL25; IL-13 y SPRR2a; IL-13 y SPRR2b 3CL1, CXCL1, CXCL2, CXCL3, XCL 1 , CCR2, CCR3, C R6, CCR7, CCR8, CX3CR1 , GPR2, XCR'1, FOS, GA K3, STAT6, TBX21 , TGFB1 , TNF, TNFSF6, YY1, ER1A, FCER2, LTB4R, TB4R2, LTBR, y quitinasa.
Artritis reumatoide La artritis reumatoide (RA), una enfermedad si racteriza por una reacción inflamatoria crónica en la ovial de articulaciones y está asociada con ia dege rtílago y erosión del hueso yuxta-arttcular. Muchas ci lamatorias, incluyendo TNF, quimiocinas, y factores de expresan en articulaciones enfermas. La administraci anticuerpo anti-TNF o proteina de fusión sTNFR a tón de RA se mostró ser anti-inflamatoria y pr eculaciones. Las investigaciones clínicas en donde la F en pacientes con RA se bloqueó con ínfliximab a apéuticos involucrados en artritis reumatoide. T ometedores, tales como antagonistas de interleucina-6 receptor de IL-6, IVIRA, desarrollado por Chugai, shimoto, Noríhiro et al., Arthritis & Rheumatism (2 61-1769), CTLA4lg (abatacept, Genovese Me et al 200 r rheumatoid arthritis refractory to tumor necrosis f ibition. N Engl J Med. 353:1114-23.), y terapia de c tuximab, Okamoto H, Kamatani N. 2004 Rituximab fqr thritis. N Engl J Med. 351 :1909) ya han sido probados ntrolados aleatorízados durante el año pasado. Se han ras citocinas y se ha mostrado que son de beneficio en imai, incluyendo interleucina-15 (anticuerpo terapéut _15, AMG 714, ver, Baslund, Bo et al., Arthritis & 005), 52(9), 2686-2692), interleucina-17 e interle sayos clínicos de estos agentes están actualmente e rapia de anticuerpo doble específica, combinando anti ra el grado de inmunosupresión pueden ser garantiza ra seleccionar los mejores pares de objetivo (ver, L xicology (1994), 92(1-3), 229-43; Descotes, et al., D biological standardization (1992), 77 99-102; Hart et al. lergy and Clinical imrnunology (2001), 108(2), 250-2 lécula de DVD-lg será útil para el tratamiento umatoide, esto se puede determinar utilizando modelo imal pre-clínicos tales como un modelo de ratón ducida por colágeno. En la técnica también son bie ros útiles modelos (ver, Brand DD., Comp. Med. (2005 ). Basándose en la reactividad cruzada de los rentales para ortólogos humanos y de ratón (p actividad para TNF humano y de ratón, IL-15 humana e.) se pueden conducir estudios de validación en el mo ratón con un "anticuerpo substituto coincidente" léculas de DVD-lg; en resumen, una DVD-lg basada ducción de auto-anticuerpo y formación de unológico. La anormalidad fundamental parece ser lulas T para suprimir los clones de célula B prohibidos sregulación generalizada de células T. Además, la int 1 u la B o T se facilita a través de carias citocínas, tales í como moléculas co-estimulantes, tales como, CD40 y CD28 y CTLA-4, las cuales inician la segunda s eracciones junto con la eliminación fagocítica mplejos inmunes y material apoptótico, perpetuán l unológica con daño de tejido resultante. Los siguient eden ser involucrados en SLE y potenciaimente ilizados para el aspecto de DVD-lg para intervención rapias activadas por célula B: CD-20, CD-22, CD-19, 80, HLA-DRA, IL10, IL2, IL4, TNFRSF5, TNFRSF FSF6, BLR1, HDAC4, HDAC5, HDAC7A, HDAC9, ICO 4A1, RGS1, SLA2, CD81, IFNB1, IL10, TNFRSF5, tre niveles locales de citocinas pro-inf lamatoria iamatorias (ver, Sfikakis PP eí al 2005 Curr Opin :550-7). Se considera que SLE es .una enfermedad diri con elevaciones documentadas en suero de IL-4, mbién se contemplan DVD-lgs capaces de unir uno o m leccionados del grupo que consiste de IL-4, IL-6, IL-1 F-a. La combinación de objetivos, discutida aquí, icacia terapéutica para SLE que puede ser probada en modelos pre-clínicos de lúpus (ver, Peng SL (2004) d.; 102:227-72). Basándose en la reactividad cruz ticuerpos parentales para ortólogos humanos y de nripio, reactividad para CD20 humano y de ratón, int mano y de ratón, etc.) se pueden conducir estudios d un modelo de ratón con lupus con moléculas de DVD- "anticuerpo substituto coincidente"; en resumen, sada en dos (o más) anticuerpos específicos de obj vés del sistema nervioso es la principal patología de l ltiple. La MS es una enfermedad de patologías com olucra la infiltración por células T CD4+ y CD8+ y d ntro del sistema nervioso central. En la MS se han presión en el sistema nervioso central de citocinas, l nitrógeno reactivas y moléculas co-estimula nsíderación principal son los mecanismos inmunol tribuyen al desarrollo de autoinmunidad. En pa presión de antígeno, interacciones de citocina y lulas T reguladoras, que ayudan a equilibrar/modular o tales como células Th1 y Th2, son áreas importan ntificación terapéutica objetivo.
IL-12 es una citocina pro-inflamatoria que es pr C y promueve la diferenciación de células efectoras T oducida en las lesiones en desarrollo de pacientes c ÍTIO en animales afectados por EAE. Previamente, se m TWEAK y Fn14 ARNm se incrementó en la médula espi cefalomieiitis autoinmune experimental (EAE). El trat ticuerpo anti-TWEAK en EAE inducida por glicop godendrocito de mielina (MOG) en ratones C57BL/ sultado una reducción de severidad de enfermedad e in cocito cuando los ratones se trataron después de oceso de inicio de la polimerización.
Un aspecto de la invención se refiere a moléculas paces de unir uno o más, por ejemplo dos, objetivos se l grupo que consiste de iL-12, TWEAK, IL-23, CXC 40L, IL-18, VEGF, VLA-4, TNF, CD45RB, CD200, IN F, FGF, C5, CD52, y CCR2. Una modalidad incluye ti-il12/TWEAK específico doble como un agente néfico para el tratamiento de MS.
Varios modelos de animal para valorar la utili léculas de DVD para tratar MS son conocidos en la t EAE de ratón con moléculas de DVD-lg derivadas de bstituto coincidente"; en resumen, una DVD-lg basad s) anticuerpos específicos objetivo de ratón pue incidente al grado posible a las características de los mano o humanizados parentales usados para la cons D-lg humana (afinidad similar, potencia de neutraliza a media similar, etc.). El mismo concepto se aplica a ima! en otras especies de no roedor, en donde rivada de un "anticuerpo substituto coincidente" leccionada para la farmacología anticipada y p tudios de seguridad. Además las valoraciones de s tina de estas pruebas específicas de pares objetivo p inmunosupresíón pueden ser garantizadas y útiles par mejores pares objetivo (ver, Luster et a!, Toxicól (1-3), 229-43; Descotes, et al, Developments in ndarization (1992), 77 99-102; Jones R. 2000 Roveliz cientemente descritos, después se transmite una señal nduciendo a la producción final de las citocinas pro-in ctor-alfa de necrosis tumoral (TNF-alfa) e interleucina-1 incipales respuestas inflamatorias e inmunológicas s enciales de choque séptico y juegan una parte ce togénesis del daño de tejido, falla múltiple de órgan ucida por sepsis. Se ha mostrado que las citocinas, es ctor de necrosis tumoral (TNF) e interleucina ( I L - 1 ) son íticos de choque séptico. Estas citocinas tienen un e ecto en los tejidos; también activan la fosfolipasa ros efectos conducen a concentraciones incrementada activación de plaqueta, promoción de actividad de ido nítrico, promoción de infiltración de tejido a utrófilos, y promoción de actividad de neutrófilo.
El tratamiento de sepsis y choque séptico permane unto clínico difícil, y pruebas recientes de pro linfocito puede ser activada por la ausencia de IL eración de glucocorticoides, granzimas, o las as ocinas de "muerte"; factor alfa de necrosis tumoral o l apoptosis prosigue a través de auto-acti ación d osólicas y/o mitocondriales, las cuales pueden ser i r los miembros pro- y anti-apoptóticos de la famili ímales experimentales, no solo el tratamiento con inh optosis evita la apoptosis de célula iínfoide, sino q jorar el resultado. Aunque las pruebas clínicas con a optóticos permanece distante debido en gran parte a cnicas asociadas con su administración y activación d ibición de apoptosis representa un objetivo terapéuti ra el paciente séptico. Asimismo, un agente doble es tiva tanto mediadores inflamatorios como un mediador ede tener un beneficio agregado. Un aspecto de la i fiere a DVD-lgs capaces de unir uno o más objetivos i , (2000) Nat Med. 6(2): 164-70).
Trastornos Neurológícos 1 Enfermedades Neurodegenerativas Las enfermedades neurodegenerativas son ya sea yo caso usualmente dependientes de ia edad o a emplo, apoplejía, daño traumático ai cerebro, daño pinai). Se caracterizan por la pérdida progresiva d uronales (muerte de célula neuronal, desmielinacion), vilidad y pérdida de memoria. El conocimiento emerg canismos que subrayan enfermedades neurode ónicas (por ejemplo, enfermedad de Alzheimer) m mpleja etiología y una se ha reconocido una variedad ra contribuir a su desarrollo y progresión, por eje tado glicémico, producción de amiloide y mult umulación de productos finales de glicación avanzado específicos (por ejemplo, corticoesteroides, inhibidor mo agentes para prevenir la pérdida de neuronas y/ ápticas. Estos tratamientos fallan para detener la prog fermedad, Estudios recientes sugieren que terapia jetivo, tales como anticuerpos para péptido A cluyendo las formas oiigoméricas A-b) no pueden sol ogresión de la enfermedad sino que pueden ayudar a moria también. Estas observaciones preliminares s rapias específicas que activan más de un mediador de or ejemplo, A-b y una citocina pro-inflamatoria tal eden proporcionar una eficacia terapéutica aún fermedades neurodegenerativas crónicas que la obser tivación de un mecanismo de enfermedad individual (p balone soluble) (ver, CE. Shepherd, et al, Neurobio! de Octubre; Nelson RB,, Curr Pharm Des. 2005; 11:3 Klein; Neurochem Int. 2002; 41:345; Michelle C Janels plicado en la patogénesis de AD, por ejemplo, AG foterina), citocinas pro-inflamatorias (por ejem imiocinas (por ejemplo, MPC1), moléculas que generación de nervios (por ejemplo, (Mogo, RGM A), mo joran el crecimiento de neuritas (neurotrof inas). La efi léculas de DVD-lg puede ser validad en modelos de a nicos tales como los ratones transgénicos que sobre-oteína precursora amiloide o RAGE y desarrollan sínto fermedad de Alzheimer. Además, las moléculas de DV r construidas y probadas para eficacia en los modelos a mejor DVD-lg terapéutica puede ser seleccionada par cientes seres humanos. Las moléculas de DVD-lg tam r empleadas para el tratamiento de otras en urodegenerativas tales como la enfermedad de Parkins ucleína está involucrada en la patología de Parkinson. paz de activar la alfa-sinucleina y mediadores inflama daño primario es usualmente seguido por mecanism cundarios (mediadores inflamatorios, por ejemplo, imiocinas) que empeoran el daño inicial y dan como r randamiento importante del área de lesión, algunas ve 10 veces. Estos mecanismos primarios y secundarios y similares a aquellos en daño de cerebro causad dios, por ejemplo, ataque apopléjico. No exis tamiento satisfactorio y la única terapia utilizada en u bolo de dosis alta de metilprednisolona (MP) dentro tiempo limitado de 8 horas después del daño. Sin em pretende evitar daño secundario sin ocasion cuperación funcional importante. Es altamente crítica icacia inequívoca y los efectos adversos seve munosupresión con subsecuentes infecciones eraciones musculares histopatológicas. No se han apr rmacos, biológicos o moléculas pequeñas, que ibidores en astrocitos reactivos (algunas semaforinas n embargo, en el sitio de la lesión no se encuentra ibidoras de crecimiento sino que también factores de crecimiento de neurita como neurotrofinas, laminina, te ensamble de moléculas inhibidoras de crecimiento omotoras de crecimiento puede explicar que el bloqueo ivíduales, como NogoA o RGM A5 dio como r cuperación funcional importante en modelos de SCI d e una reducción de las influencias inhibidoras puede uilibrio de inhibición de crecimiento a promoción de n embargo, las recuperaciones observadas con ei bloq lécula inhibidora de sobre-crecimiento de neurita i eron completas. Para lograr recuperaciones más ráp onunciadas, puede ser deseable bloquear dos hibidoras de sobre-crecimiento de neuritas, por ejem M A, o bloquear una molécula inhibidora de sobre-cre ng Xu, et al (2004), J. Neurochem.; 91; 1018).
En un aspecto, las DVD-lgs capaces de unir pa les como NgR y RGM A; NogoA y RGM A; MAG y RG A; RGM A y RGM B; CSP,Gs y RGM A; agreca urocan, versican, fosfacan Te38 y TNF-a; se p ticuerpos específicos de globulómero ?ß combi ticuerpos que promueven dendritas y brotes de axón. dendrita es un signo muy antiguo de AD y se sabe q stringe el crecimiento de dendritas. Se puede combina ab con cualquiera de los Ab de candidato de SC (p elina). Otros objetivos de DVD-lg pueden inclui mbinación de NgR~p75, NgR-Troy, NgR-Nogo66 (Nogo), ngo-Troy, Lingo-p75, MAG u Omgp. Además, los objeti eden incluir cualquier mediador, soluble o superficie plicados en la inhibición de neurita, por ejemplo, N G, RGM A, semaforinas, efrinas, A-b soluble, cit 22.1 ceptor individual, por ejemplo, receptor Nogo, el cu andos, Nogo, Ompg, y MAG y RAGE que unye A-b emás, los inhibidores de sobre-crecimiento de n mpio, nogo y receptor nogo, también juegan un papel prevenir la regeneración de nervios en en unológicas como esclerosis múltiple. Se ha mostr hibición de la interacción del receptor nogo-nogo cuperación de modelos de animal de esclerosis múlti nto, las moléculas de DVD-lg que pueden bloquear la fu diador inmunológico, por ejemplo, una citocina como lécula inhibidora de sobre-crecimiento de neurita, p go o RGM, pueden ofrecer una eficacia más rápida y oqueo de ya sea una molécula inmune o una molécula i bre-crecimiento de neurita sola.
En general, los anticuerpos no cruzan matoencefálica (BBB) en una forma eficiente y rel B, permitiendo así el transporte trans-BBB de la tructuras de la BBB que permiten dicho transporte inc se limitan a, receptor de insulina, receptor de transfe GE. Además, las estrategias permiten el uso de DVD-mo lanzaderas para transportar fármacos potencíal tema nervioso central incluyendo fármacos de lecular, nanopartículas y ácidos nucleicos (Coloma OOO) Pharm Res. 17(3):266-74; Boado RJ, et al (2007) em 18(2):447-55).
Trastornos Oncológicos La terapia de anticuerpo monoclonal ha surgido dalidad terapéutica importante para cáncer (von Mehr 003), Annu Rev Med,; 54:343-69). Los anticuerpos pue ctos antitumorales induciendo apoptosis, citotoxicida erferencia con interacciones de ligando-receptor, ucir una red ahti-idiotípica, citotoxicidad me mplemento, o citotoxicidad celular dependiente de DCC). El uso del anticuerpo específico doble que diadores de tumor separados probablemente dará u icional comparado con una terapia mono-específica.
En otra modalidad, un DVD de la invención es ca GF y fosfatidilserina; VEGF y ErbB3¡ VEGF y PLG B04; VEGF y BSG2; VEGF y CDCP1; VEGF y ANPEP; T; HER-2 y ERB3; HER-2 y BSG2; HER-2 y CDCP PEP; EGFR y CD64; EGFR y BSG2; EGFR y CDC PEP; IGF1R y PDGFR; IGF1R y VEGF; IGF1R y CD 74; CD20 y CD30; CD20 y DR4; CD20 y VEGFR2; CD 20 y CD4; HGF y c-MET; HGF y NRP1; HGF y fosf bB3 e IGF1R; ErbB3 y IGF1 ,2 ; c-Met y Her-2 ; c-Met t e IGF1R; IGF1.2 y PDGFR; IGF ,2 y CD20; !GF1, F2 y EGFR; IGF2 y HER2; IGF2 y CD20; IGF2 y VE 28 y MAPG; CD80 y CD40; CD80 y CD30; CD80 y CD 74; CD80 y CD2; CD80 y CD3; CD80 y CD19; CD80 y C 52; CD80 y VEGF; CD80 y DR5; CD80 y VEGFR2; CD 22 y CD80; CD22 y CD40; CD22 y CD23; CD22 y CD 74; CD22 y CD19; CD22 y DR5; CD22 y DR4; CD22 y CD52; CD30 y CD20; CD30 y CD22; CD30 y CD23; CD 30 y VEGF; CD30 y CD74; CD30 y CD19; CD30 y D 4; CD30 y VEGFR2; CD30 y CD52; CD30 y CD4; CD13 33 y FTL3; CD33 y VEGF; CD33 y VEGFR2; CD33 y C 4; CD33 y DR5; DR4 y CD137; DR4 e IGF1,2; DR4 e I 5; DR5 y CD40; DR5 y CD137; DR5 y CD20; DR5 y E F1,2; DR5 e IGFR, DR5 y HER-2, EGFR y D mbínaciones objetivo incluyen uno o más miembros c F/erb-2/erb-3. Otros objetivos (uno o más) invol fermedades oncológicas que las DVD-lgs pueden un ro no se limitan a aquellos seleccionados del grupo q K5, CDK6, CDK7, CDK9, E2F1, EGFR, EN01, ER R2, IGFBP3, IGFBP6, IL2, INSL4, MYC, N0X5, N NA, PRKCQ, PRKD1, PRL, TP53, FGF22, FGF23, FG , INHA, KLK6, TP53, CHGB, GNRH1, IGF1, IGF2, IN SL4, PRL, KLK6, SHBG, NRID1, NR1H3, NR1I3, NR2 R1, ESR2, NR0B1, NR0B2, NR1D2, NR1H2, NR1 2C1, NR2C2, NR2E1, NR2E3, NR2F1, NR2F2, NR3 4A1, NR4A2, NR5A1, NR5A2, NR6A1 , PGR, RARB, F F6, KL 3, KRT1 , AP0C1, BRCA1, CHGA, CHGB, CL L6A1, EGF, ERBB2, ERK8, FGF1, FGF10, FGF11, FG F16, FGF17, FGF1&, FGF2, FGF20, FGF21, FGF22, F F4, FGF5, FGF6, FGF7, FGF8, FGF9, GNRH1, I FBP3, IGFBP6, IL12A, IL1A, IL1B, IL2, IL24, INHA, IN K10, KLK12, KLK13, KLK14, KLK15, KLK3, KLK4, K K9, MP2, MP9, MSMB, NTN4, 0DZ1, PAP, PLAU, RPINA3, SHBG, TGFA, TIMP3, CD44, CDH1, CDH F2, FIGF, FLT1, JAG1, KDR, LAMAS, NRP1 , NRP2, PG AB1, VEGF, VEGFC, ANGPTL3, BAM , COL4A3, IL8, LA P2, STAB 1 , ANGPTL4, PECAM 1 , PF47 PR0K2, FAIP2, CCL11, CCL2, CXCL1 , CXCL10, CXCL3, CXC CL9, IFNA1 , IFNB1, IFNG, IL1B, IL6, MDK, EDG1 , EFN NB2, EGF, EPHB4, FGFR3, HGF, IGF1, ITGB3, P FA, TGFB1 , TGFB2, TGFBR1 , CCL2, CDH5, COL1 G, ITGAV, ITGB3, THBS1 , THBS2, BAD, BAG1, BC NA2, CCND1 , CCNE1 , CCNE2, CDH1 ( E-caderina 27Kipl), CDKN2A (pl6INK4a), COL6A1, CTNNB1 (b-cat atepsina B), ERBB2 (Her-2), ESR1, ESR2, F3 (TF), FOS TA3, GSN (Geisolin), IGFBP2, IL2.RA, IL6, IL licoproteina 130), ITGA6 (a6 integrina), JUN, KL P2K7 (c-Jun), MKI67 (Ki-67), NGFB (NGF), NGFR, NM R, PLAU (uPA), PTEN, SERPINB5 (maspin), SERPI FA, THBS1 (tromboespondina-1), TIE (Tie-1), TNF BS4, y TNFAIP2 (B94), RON, c- et, CD64, DLL4, PL sfatidilserina, ROB04, CD80, CD22, CD40, CD23, C 55, CD38, CD70, CD74, CD30, CD138, CD56, CD33, C 4, DR5, RANKL, VEGFR2, PDGFR, VEGFR1, MT HB2, EPHA1 , EPHA2, EpCA , PGE2, NKG2D, LPA, MA, MAPG, FLT3, PDGFR alfa, PDGFR beta, ROR1, P D1 , y CD59.
. Composiciones Farmacéuticas La invención también proporciona composiciones fa e comprenden una proteína de unión de la invención y rmacéuticamente aceptable. Las composiciones fármac mprenden proteínas de unión de la invención son para ro no se limitan a, el diagnóstico, detección, o verific storno, en la prevención, tratamiento, manejo o mitig storno o uno o más síntomas del mismo^ y/o en inves mposición además puede comprender un vehículo, cipiente.
Las proteínas de unión de la invención pueden ser i composiciones farmacéuticas para administrarse a picamente, la composición farmacéutica comprende u unión de la invención y un vehículo farmacéuticament rno se utiliza aquí, "vehículo farmacéuticamente acepta alquiera y todos los solventes, medios de cubrimientos, agentes antibacterianos y anti-fúngic tónicos y de retraso de absorción, y similares iológicamente compatibles. Ejemplos de rmacéuticamente aceptables incluyen uno o más de a liña regulada en su pH con fosfato, dextrosa, glicero milares, así como combinaciones de los mismos. dalidades, en la composición se incluyen agentes iso emplo, azúcares, polialcoholes tales como manitol, ofiláctico o agente terapéutico útil para prevenir, mane tigar un trastorno o uno o más síntomas del mismo, p capsulación en liposomas, micropartículas, microcápsu combinantes capaces de expresar el anticuerpo o fr ticuerpo, endocitosis mediada por receptor (ver, por ej u, J. Bíol. Chem. 262:4429-4432 (1987)), construcción cleico como parte de un vector retroviral u otro vect todos para administrar un agente profiláctico o terap ención incluyen, pero no se limitan a, administració or ejemplo, intradérmica, intramuscular, intr ravenosa o subcutánea), administración epidural, ad ra-tumoral, y administración por la mucosa (po ranasal y rutas orales). Además, se puede ministración pulmonar, por ejemplo, a través del aiador o nebulizador, y formulación con un agente r, por ejemplo, Patentes de E.U.A. Nos. 6,019,968; subcutánea. Los agentes profilácticos o terapéuticos ministrados a través de cualquier ruta conveniente, po vés de infusión o inyección de bolo, a través d diante cubiertas epiteliales o mucocutáneas (por ejem al, mucosa rectal e intestinal) y se pueden administr ros agentes biológicamente activos. La administració témica o local.
En una modalidad, la unión específica de nanotubos opiados a anticuerpo (CNTs) a células tumorales in vi r su ablación altamente específica con luz casi infr ede ser utilizada para tener como objetivo células tu mplo, se pueden utilizar lípidos biotinilados par spersiones de CNT no citotóxico, biocompatible, spués se unen a una o dos diferentes DVD-lgs deriva idina dirigidas contra uno o más antígenos tumorales ( 22) (Chakravarty, P. et al, (2008) Proc. Nati. Aca níidad efectiva dé uno o más anticuerpos de los antago ención se administran localmente al área afectada d ra prevenir, tratar, manejar, y/o mitigar un trastorno o l mismo. En otra modalidad, una cantidad efectiva de ticuerpos de la invención se administra oralmente al ár combinación con una cantidad efectiva de una o más t mplo, uno o más agentes profilácticos o terapéuticos) a proteína de unión de ia invención de un sujeto pa tar, manejar, y/o mitigar un trastorno o uno o más s smo.
En otra modalidad, el agente profiláctico o terapé r suministrado en un sistema de liberación controlada stenida. En una modalidad, se puede utilizar una rar la liberación controlada o sostenida (ver, Lan fton, 1987, CRC Crit. Ref. Biomed, Eng. 14:20; Buc 80, Surgery 88:507; Saudek et al, 1989, N. Engl. J. M 105); Patente de E.U.A. No. 5,679,377; Patente de E. 6,597; Patente de E.U.A. No. 5,912,015; Patente de 989,463; Patente de E.U.A. No. 5,128,326; Publicación 99/15154; y Publicación de PCT No. WO 99/20253. límeros utilizados en formulaciones de liberación luyen, pero no se limitan a, poli(2-hidrosi etil li(metil metacrilato), ácido poli(acrílico) , acetato de po ilo), ácido poli(metacrílico), poiiglicolidas (PLG), pol ¡i(N-vinilpirrolidona), alcohol poli(vinílico), pol li(etilen glicol), polílactidas (PLA), polí(lactida-co-gl liortoésteres. En una modalidad, e! polímero utiliz rmulación de liberación sostenida es inerte, libre de ibiables, estable al almacenamiento, estéril, y biodeg ra modalidad más, un sistema de liberación controlada ede ser colocado cerca del objetivo profiláctico o quiriendo así solo de una fracción de la dosis sistémi dioimmunotheraphy of a Human Colon Cáncer Xenogr stained-Release Gel," Radiotherapy & Oncoíogy 39:17 al., 1995, "Antibody Mediated Lung Targeting of Long- ulsions," PDA Journal of Pharmaceutical Science & :372-397, Cleek et al., 1997, "Biodegradable Polymeric bFGF Antibody for Cardiovascular Application," Pro. ntrol. Reí. Bioact. Mater. 24:853-854, and Lam et licroencapsulation of Recombinant Humanized Monoclo r Local Delivery," Proc. Int'l. Symp. Control Re!. Bi :759- 760.
En una modalidad específica, en donde la compo vención es un ácido nucleico que codifica un agente p rapéutico, el ácido nucleico puede ser administrado i omover la expresión de sus agente profiláctico o dificado, construyéndolo como parte de un vector de e ido nucleico apropiado y administrándolo de manera qu racelularmente e incorporarse dentro del ADN de cél ra la expresión a través de recombinación homologa.
Una composición farmacéutica de la invención se f r compatible con su ruta de administración pretendida. tas de administración incluyen, pero no se limitan a, ad renteral, por ejemplo, intravenosa, intradérmica, subcu ranasal (por ejemplo, inhalación), transdérmíca (p pica), transmucosa, y rectal. En una modalidad es mposición se formula de acuerdo con procedimiento mo una composición farmacéutica adaptada para ad ravenosa, subcutánea, intramuscular, oral, intranasal, res humanos. Típicamente, las composiciones para ad ravenosa son soluciones ren un regulador de pH acuos téril. Cuando es necesario, la composición también p agente de solubilización y un anestésico local nocamne para reducir el dolor en el sitio de la inyecció más excipientes compatibles con la aplicación tópica a viscosidad dinámica mayor que el agua. Las fo ecuadas incluyen, pero no se limitan a, soluciones, su iulsíones, cremas, ungüentos, polvos, linimentos, ilares, los cuales son, si se desea, esterilizados o me entes auxiliares (por ejemplo, conservadores, esta entes humectantes, reguladores de pH, o sales) para rias propiedades, tales como, por ejemplo, presión osm rmas de dosis tópicas adecuadas incluyen prepar rosoi que se pueden rociar, en donde el ingrediente ac dalidad, en combinación con un vehículo inerte solid empaca en una mezcla con un volátil presurizado (por opulsor gaseoso, tal como freón) o una botella qu mprimir. También se pueden agregar humectadores o las composiciones farmacéuticas y formas de dosis s emplos de dichos ingredientes adicionales son bien c clorofluorometano, dicloro tetrafluoroetano, dióxido de ro gas adecuado). En el caso de un aerosol presuriza itaría puede ser determinada proporcionando una v mínístrar una cantidad medida. Se pueden formular rtuchos (compuestos, por ejemplo, de gelatina) para u alador o insuflador conteniendo una mezcla de mpuesto y una base de polvo tal como lactosa o almidó Si el método de la invención comprende administrac mposiciones pueden ser formuladas oralmente en l bletas, cápsulas, bolsas pequeñas, cápsulas de gel luciones, y similares. Se pueden preparar tabletas o vés de medios convencionales con excipientes farmac eptables tales como agentes de unión (por ejemplo, íz pregelatinizado, polivínilpirrolidona o hidroxipropilm nadores (por ejemplo, lactosa, celulosa microcristalin ido de calcio); lubricantes (por ejemplo, estearato de it i vos farmacéuticamente aceptables tales como spension (por ejemplo, jarabe de sorbitol, derivados de asas comestibles hidrogenadas); agentes de emulsifi mplo, lecítina o acacia); vehículos no acuosos (p eite de almendras, ésteres oleosos, alcohol etílico, getales fraccionados); y conservadores (por e roxibenzoatos de metilo o propílo o ácido so eparaciones también pueden contener sales regulado entes saborizantes, colorantes, y edulcorantes, ropiado. Las preparaciones para administración oral nvenientemente formuladas para liberación lenta, ntrolada, o liberación sostenida de un agente(s) pr rapéutico.
El método de la invención puede comprender ad lmonarf por ejemplo, a través del uso de un i bulizador, de una composición formulada con un una composición formulada para administración p vés de inyección (por ejemplo, mediante inyección usión continua). Las formulaciones para inyección esentadas en una forma de dosis unitaria (por polletas o en recipientes de dosis múltiples) con un regado. Las composiciones pueden tomar formas spensiones, soluciones o emulsiones en vehículos uosos, y pueden contener agentes de formulación entes de suspensión, de estabilización y/o de ternativamente, el ingrediente activo puede estar e ivo para constitución con un vehículo adecuado (por ej re de pirógeno, estéril) antes de uso.
Los métodos de la invención además pueden cor ministración de composiciones formuladas como prepa pósito. Dichas formulaciones de larga acción ministradas a través de implantación (por ejemplo, s iones tales como aquellas derivadas de ácidos sfórico, acético, oxálico, tartárico, etc., y aquellas fo tiones tales como aquellas derivadas de sodio, potas lcio, hidróxidos férricos, isopropilamina, trieti iiaminoetanol, histidina, procaína, etc.
Generalmente, los ingredientes de las compo mínistran ya sea en forma separada o mezclados conju forma de dosis unitaria, por ejemplo, como un polv eo o concentrado libre de agua en un contenedor her liado, tal como una ampolleta o saco pequeño i ntidad de agente activo. Cuando el modo de admin usión, la composición puede ser suministrada con un usión conteniendo agua o salina de grado farmacéu ando el modo de administración es a través de in ede proporcionar una ampolleta de agua estéril para i liña, de manera que los ingredientes pueden ser mezc tenedor herméticamente sellado y pueden ser reconst mplo, con agua o salina) a la concentración apropi ministración a un sujeto. En una modalidad, uno o filácticos o terapéuticos o composiciones farmacéu ención se suministran como un polvo iiofilizado estér contenedor herméticamente sellado a una dosis unitar nos 5 mg, por lo menos 10 mg, por lo menos 15 mg, p mg, por lo menos 35 mg, por lo menos 45 mg, por l , por lo menos 75 mg, o por lo menos 100 mg. ofilácticos o terapéuticos liofilizados o co rmacéuticas de la invención deben ser almacenados de C, en su contenedor original y los agentes pro rapéuticos, o composiciones farmacéuticas de la inve r administradas en 1 semana, por ejemplo, en 5 días, 48 horas, en 24 horas, en 12 horas, en 6 horas, en 5 ras o en 1 hora después de ser reconstituidas. En un /ml, por lo menos 75 mg/ml, o por lo menos 100 mg/ uida debe ser almacenada entre 2*C y 8°C, en su ginal.
Las proteínas de unión de la invención pueden ser i una composición farmacéutica adecuada para ad renteral. En una modalidad, el anticuerpo o po ticuerpo serán preparados como una solución teniendo 0.1-250 mg/ml de la proteína de unión. ectable puede estar compuesta de ya sea de una forr uida o üofilizada en un frasco de cristal o ámbar, inga pre-üenada. El regulador de pH puede ser L-his ), opcionalmente 5-10 mM, al un pH de 5.0 a 7.0 (ópti de 6.0). Otros reguladores de pH incluyen, pero no s ccinato de sodio, citrato de sodio, fosfato de sodio tasio. Se puede utilizar cloruro de sodio para xicidad de la solución a una concentración de luyen glicina, arginina, y pueden ser incluidos co lisorbato-80 (óptimamente 0.005-0.01%). Agentes icionales incluyen, pero no se limitan a, polisorbato 2 nsoactivos BRIJ. La composición farmacéutica que cor oteínas de unión de la invención preparadas como u ectable para administración parenterai, adem mprender un agente útil como un auxiliar, tales co ilizados para incrementar la absorción, o dispersi oteína terapéutica (por ejemplo, anticuerpo). rticularmente útil es hialuronídasa, tal como ialuronidasa humana recombinante). La adición de hialu solución inyectable mejora la biodisponibilidad huma administración parenterai, en particular ad bcutánea. También permite volúmenes mayores d ección (es decir, mayores que 1 mi) con men omodidad, e incidencia mínima de reacciones de sitio ilares a aquellas utilizadas para inmunización pasiv manos con otros anticuerpos. El modo de ad leccionado es parenteral (por ejemplo, intravenosa, raperítoneal, intramuscular). En una modalidad, el an ministrado a través de infusión intravenosa o inyecci dalidad, el anticuerpo es administrado a través d ramuscular o subcutánea.
Las composiciones terapéuticas deben ser estérile jo las condiciones de fabricación y almacena mposición puede ser formulada como una solución, mic spersión, liposoma, u otra estructura ordenada adecua ta concentración de fármaco. Las soluciones inyectabl eden ser preparadas incorporando el compuesto activ ticuerpo o porción de anticuerpo) en la cantidad requ ivente apropiado con uno o una combinación de i umerados aquí, según se requiera, seguido por e ntenida, por ejemplo, a través del uso de un recub ftio lecitina, a través del mantenimiento del tamaño querido en el caso de dispersión y a través del uso nsoactivos. Una absorción prolongada de las cor ectables puede ser lograda incluyendo, en la comp ente que retrase la absorción, por ejemplo, noestearato y gelatina.
Las proteínas de unión de la presente invención ministradas a través de una variedad de métodos con cnica, aunque para muchas aplicaciones terapéutic dalidad, la ruta/modo de administración es inyección yección intravenosa o infusión. Como será aprecia pertos en la técnica, la ruta/modo de administrac pendiendo de los resultados deseados. En ciertas mod mpuesto activo puede ser preparado con un vehículo qu compuesto contra una rápida liberación, tal como una En ciertas modalidades, una proteína de unión de I ede ser oralmente administrada, por ejemplo, con u rte o un vehículo comestible, asimilable. El compue redientes, si se desea) también puede ser encerr psula de gelatina de cubierta dura o suave, comprimida incorporarse directamente en la dieta del su mintstración terapéutica oral, los compuestos p corporados con excipientes y utilizarse en la forma eribles, tabletas bucales, trociscos, cápsulas spensiones, jarabes, obleas, y similares. Para ad mpuesto de la invención a través de otro tipo de ad renteral, puede ser necesario recubrir el compuesto ministrar el compuesto con un material para activación.
También se pueden incorporar compuesto plementarios en las composiciones. En ciertas modai chas terapias de combinación ventajosamente pueden u s bajas de los* agentes terapéuticos administrados, sibles toxicidades o complicaciones asociadas con noterapias.
En ciertas modalidades, una proteína de unión está vehículo de extensión de vida media conocido en chos vehículos incluyen, pero no se limitan a, el lietiien glicol, y dextrana. Dichos vehículos se descri mplo, Solicitud de E.U.A. Serie No. 09/428,082 y Solic blicada No. WO 99/25044.
En una modalidad específica, se administran se ido nucleico que codifican una proteína de unión de la ros agente profiláctico o terapéutico de la invención evenir, manejar, o mitigar un trastorno o uno o más s smo a través de terapia de gen. La terapia de en se r rapia realizada a través de la administración a< un s xicol. 32:573-596; Mulligan, Science 260:926- 932 rgan y Anderson, 1993, Ann. Rev. Biochem. 62:191 93, TIBTECH 11 (5) : 155-215. Los métodos comúnment la técnica de tecnología de ADN recombinante que s scriben por Ausubel et al. (eds.)t Current Protocols i ology, John Wiley & Sons, Y (1993); y Kriegler, Ge d Expression, A Laboratory Manual, Stockton Press, a descripción detallada de varios métodos de terapia scribe en US20050042664 A1.
Las proteínas de unión de la invención son útiles rias enfermedades en donde los objetivos que son reco s proteínas de unión son peligrosos. Dichas en ciuyen, pero no se limitan a, artritis reumatoide, o tritis crónica juvenil, artritis séptica, artritis de Ly oriática, artritis reactiva, espondiloartropatía, lupu itematoso, enfermedad de Crohn, colitis ulcerativa, eítis, choque séptico, síndrome de choque tóxico, s psis, caquexia, enfermedades infecciosas, en rásitas, síndrome de inmunodef iciencia adquirid nsversal aguda, corea de Huntington, enfermedad de fermedad de Alzheimer, apoplejía, cirrosis biliar prima molifica, malignidades, falla cardiaca, infarto al fermedad de Addison, deficiencia polig!andular esporá y deficiencia poliglandular de tipo II, síndrome d ndrome de dificultad respiratoria en adultos (aguda opecia areata, artropatía seronegativa, artropatía, enf iter, artropatía psoriática, artropatía eolítica ulcerati teropática, clamidia, yersinia y artropatía asociada con pondiloartropatía, enfermedad ateromatosa/arteri ergia atópica, enfermedad bullosa autoinmune, pénfí nfigo foliáceo, penfigoide, enfermedad de IgA lin molítica autoinmune, anemia hemolítíca positiva d fermedad pulmonar intersticial pos-inflamatoria, tersticial, enfermedad de tejido conectivo asociada con imonar intersticial, enfermedad pulmonar asociada con tejido conectivo mixta, enfermedad pulmonar interstici n esclerosis sistémica, enfermedad pulmonar interstici n artritis reumatoide, enfermedad pulmonar asociada témico eritematoso, enfermedad pulmonar aso rmatomiositis/polimiositis, enfermedad pulmonar asoc fermedad de Sjógren, enfermedad pulmonar as pondilitis anquilosante, enfermedad pulmonar difusa fermedad pulmonar asociada con hemasiderosis, imonar intersticial inducida por fármaco, fibrosis, diación, bronquiolitis obliteran, neumonía eosinofíli fermedad pulmonar de infiltración linfocítica, enfermed ersticial pos-infecciosa, artritis gotosa, hepatitis patitis autoinmune de tipo 1 (hepatitis autoinmun ertilidad masculina idiopática o NOS, autoinmunidad clerosis múltiple (todos los sub-tipos), oftalmía pertensión pulmonar secundaria a enfermedad de tejid ndrome de Goodpasture, manifestación pulmonar de dosa, fiebre reumática aguda, espondilitis reumatoide, Still, esclerosis sistémica, síndrome de Sjorgren, enf kayasu/arteritis, trombocitopenia autoinmune, trom iopática, enfermedad de la tiroides autoinmune, hip potiroidismo autoinmune con bocio (enfermedad de potiroidismo autoinmune atrófico, mixídema prima cogénica, vasculitis primaria, enfermedad hepática agu fermedades crónicas del hígado, cirrosis alcohólica, da ducido por alcohol, colecistitis, enfermedad iosincrática, hepatitis inducida por fármacos, estato cohólica, alergia y asma, infección por estreptococo BS), trastornos mentales (por ejemplo, depresión y es r SIDA, hepatitis inducida por alcohol, conjuntiviti rmatitis alérgica por contacto, rinitis alérgica, injerto, deficiencia de alfa-1 -anti-tripsina, escler iotrófica, anemia, angina de pecho, degeneración celu terior, terapia anti-cd3, síndrome anti-fosfolípido, re persensibilidad de anti-receptor, aneurismas aórticos y ección aórtica, hipertensión arterial, arterioesclero teriovenosa, ataxia, fibrilación atrial (sostenida o pidación auricular, bloque atrioventricular, linfoma d chazo de injerto de hueso, rechazo de trasplante de T), bloque de ramificación de grupo, linfoma emaduras, arritmias cardiacas, síndrome de atrofi mores cardiacos, cardiomiopatía, respuesta de infl rivacíón cardiopulmonar, rechazo de trasplante d generaciones corticales de cerebelo, trastornos d quicardia atrial caótica o de foco múltiple, trastorno bre hemorrágica por dengue, dermatitis, rmatológicas, diabetes, diabetes mellitus, eroescierótica diabética, enfermedad del cuerpo de L rdiomiopatía congestiva dilatada, trastornos de l sales, síndrome de Down en edad media, tra vimiento inducidos por fármacos, que bloquean los re pamina del sistema nervioso central (CNS), sen rmacos, eczema, encefaíomielitis, endocarditis, end iglotitis, infección por el virus de Epstein-barr, eri stornos extrapiramidales y del cerebelo, I i nf o matofagocítica familiar, rechazo de implante de timo Friedreich, trastornos arteriales periféricos funcion ngica, gangrena de gas, úlcera gástrica, nefritis chazo de injerto de cualquier órgano o tejido, s gativa, sepsis gram positiva, granulomas debido racelulares, leucemia de célula pilosa, enfer iopática, citotoxicidad mediada por anticuerpo, áste scular espinal infantil, inflamación de la aorta, i posición a radiación ionizante, iridociclitis/u veítis/neu ño por ¡squemia-reperfusíón, choque isquémico, artritis enil, atrofia muscular espinal juvenil, sarcoma de Kap trasplante de riñon, legionella, leishmaniasis, lepra, tema cortiespinal, lipedema, rechazo de trasplante federma, malaria, linfoma maligno, histiocitosi lanoma maligno, meningitis, meningococcemia, en tabólicas/idiopáticas, migraña, dolor de cabeza, tr tema múltiple mitocondrial, enfermedad de tejido cone mopatía monoclonai, mieloma múltiple, degener stemas múltiples (Menee! Dejerine-Thomas Shi-Drager seph), miastenia grave, micobacterium aviar berculosis por micobactería, síndrome mielodiplásico ocardio, trastornos isquémicos al miocardio, carci ricardial, enfermedad aterosclerótica periférica, sculares periféricos, peritonitis, anemia perniciosa, n eumocistis carinii, neumonía, síndrome de POEMS (pol ganomegalia, endocrinopatía, gamopatia monoclonal, cambios de piel), síndrome de pos-perfusión, síndro mba, síndrome de cardiotomía pos-MI, preeclampsi ogresiva de supra-núcleo, hipertensión pulmonar prim radiación, fenómeno y enfermedad de Raynaud, enf ynaud, enfermedad de Refsum, taquicardia QRS estre pertensión reno-vascular, daño por reperfusión, ca strictiva, sarcomas, escleroderma, corea senil, demen o de cuerpo de Lewy, artropatías seronegativas, apopl células falciformes, rechazo de aloinjerto de piel, s mbios de piel, rechazo de trasplante de intestino delga iidos, arritmias específicas, ataxia espinal, deg pino-cerebe!ares, miositís por estreptococo, lesiones e ntricular, infecciones virales y fúngicas, encefalitis vita éptica, síndrome hemafagocítico asociado vital, si ernicke-Korsakoff , enfermedad de Wilson, rechazo de cualquier órgano o tejido, (ver, Peritt et al. publicac . WO2002097048A2, Leonard et al., publicación d 9524918 Al, y Salfeld et al., publicación de 00/56772?1).
Las DVD-lgs de Ea invención también pueden tratar las siguientes enfermedades: síndromes coronari lineuritís Idíopática Aguda, Poliradiculoneuropatía D flamatoria Aguda, isquemia aguda, Enfermedad de Still opecia areata, anafilaxis, síndrome de anticuerpo anti emia aplástica, arteriosclerosis, eczema atópico, ópica, dermatitis autoinmune, trastorno autoinmune a ección por Streptococcus, pérdida de la audición ndrome Linfoproliferativo Autoinmune (ALPS), rmacos, endocarditis, endometriosis, endoftalmitis, itema multiforme, eritema multiforme mayor, stacional, síndrome de Guillain-Barré (GBS), Fiebre ndrome de Hughes, enfermedad de Parkinson idíopátic ersticial idíopática, alergia mediada por IgE, anemia mune, miositis corporal de inclusión, enfermedad ular infecciosa, enfermedad desmielizante i fermedad cardiaca inflamatoria, enfermedad renal i F/UIP, iritis, queratitis, queratoconjuntivitis seca, enf ssmaul o enfermedad de Kussmaul-Meier, parálisis stiocitosis de célula de Langerhan, livedo reticularis, d cular, malignidades, poliangitts microscópica, Morbus stornos de neurona motora, penfigoide de membrana gánica múltiple, miastenía grave, síndrome miel iocarditis, trastorno de raíz nerviosa, neuropatía, Hepat de no A, neuritis óptica, cáncer de ovario, JRA pa umática, SAPHO (sinovitis, acné, pustulosis, hipe teítis), escleroderma, amiloidosís secundaria, choqu cleritis, ciática, insuficiencia adrenal secundaria, enf ido conectivo asociada con silicón, dermatosis d ilkinson, espondilitis anquilosante, síndrome de Stev JS), síndrome de respuesta inflamatoria sistémic mporal, retinitis toxoplásmica , necrolisis epidérmica tóx nsversal, TRAPS (Receptor de Factor de Necrosi acción alérgica tipo 1, diabetes tipo II, urticaria, ersticial usual (UIP), vasculitis, conjuntivitis primave al, síndrome de Vogt-Koyanagi-Harada (síndro generación macular húmeda, y curación de heridas.
Las proteínas de unión de la invención pueden s ra tratar seres humanos que sufren de enfermedades a particular aquellas asociadas con inflamación, incluye umatoide, espondilitis, alergia, diabetes autoinmu etos biliares, intestino delgado, tracto urinario (incluy jiga y urotelio), tracto genital femenino (incluyendo cé arios, así como coriocarcinoma y enfermedad t stacional), tracto genital masculino (incluyendo próstat mínales, testículos y tumores de célula germinal) docrinas (incluyendo la tiroides, glándulas adrenales piel, así como hemangiomas, melanomas, sarcomas uellas surgen de hueso y tejidos blandos así como posi), tumores del cerebro, nervios, ojos, y meninges trocitomas, gliomas, glioblast ornas, retinoblast ornas, uroblastomas, Schwannomas (neurilemmoma), y me mores sólidos que surgen de malignidades hematopoy rno leucemias, y linfomas (linfomas tanto de Hodgk dgkín).
En una modalidad, Jos anticuerpos de la invención unión a antígeno de los mismos, se utilizan para tra hibidores de topoisomerasa I, inhibidores de topoisom orouracilo (5-FU), leucovorin, irinotecan, inhibidores nasa de receptor por ejemplo, erlotinib, gefitinib), in X-2 (por ejemplo, celocoxib), inhibidores de cinasa, y Una proteína de unión de la invención también ministrada con uno o más agentes terapéuticos adicio el tratamiento de varias enfermedades.
Una proteína de unión de la invención puede ser u en combinación para tratar dichas enfermedades. Se de e las proteínas de unión pueden ser utilizadas mbinación con un agente adicional, por ejemplo, rapéutico, dicho agente adicional seleccionándose perto en la técnica para su uso pretendido. Por ejempl icional puede ser un agente terapéutico reconocido e e es útil para tratar la enfermedad o condición q tando por el anticuerpo de la presente invención, i agente adicional seleccionado de las listas que se pr elante. La combinación también incluye más de icional, por ejemplo, dos o tres agentes adició mbinación es tal que la composición formada pueda nción pretendida.
Las combinaciones para tratar enfermedades aut lamatorias son fármacos anti-inf lamatorios no esteroid nominados como NSAIDS, los cuales incluyen fárma uprofeno. Otras combinaciones son corticoesteroides ednisolona; los efectos laterales bien conocidos teroides pueden ser reducidos o aún eliminados unie esteroide requerida cuando se tratan pacientes en n las DVD-lgs de esta invención. Ejemplos no M entes terapéuticos para artritis reumatoide con iticuerpo, o porción de anticuerpo, de la invención mbinado incluyen los siguientes: fármacos anti-i Las combinaciones de agentes terapéuticos pueden ferentes puntos en la cascada autoinmune e bsecuente; ejemplos incluyen antagonistas de ticuerpos de TNF quiméricos, humanizados o ALIMUMAB, (Publicación de PCT No. WO 97/2 emicade™), CDP 571, y receptores de TNF solubles rivados de los mismos, (p75TNFRIgG (Enbrel™) o enercept), y también inhibidores de enzima de conversi ACE); similarmente, inhibidores de IL-1 (inhibidores d nversión lnterleucina-1 , IL-1RA, etc.) pueden ser efect sma razón. Otras combinaciones incluyen Interleuci mbinación más incluyen jugadores clave de la toinmune, los cuales pueden actuar en paralelo a, dep de acuerdo con la función de IL-12; especial tagonistas de IL-12 incluyendo anticuerpos IL-18 o re -18 solubles, o proteínas de unión de IL-18. Se ha m oroquinina/hidroxicloroquina, pencilamina, a tramuscu!ar y oral), azatioprina, coquicina, corti rales, inhalados e inyección local), agonistas ren o receptor (salbutamol, terbutalina, salmeteral) ofilina, aminofilina), cromoglicato, nedocromil, cetotife oxitropio, ciclosporina-, FK506, rapamicina, mícofenol flunomida, NSAIDs, por ejemplo, ibuprofeno, corti les como prednisolona, inhibidores de fosfodiesteras adenosina, agentes anti-trombóticos, inhibidores de c entes adrenérg icos, agentes que interfieren con la se ves de citocinas pro-inflamatorias tales como TNF-a emplo, IRAK, NIK, IKK , p38 o inhibidores de M hibidores de enzima de conversión IL-?ß, inhibidores d nversión TNFa (TACE), inhibidores de señalización d les como inhibidores de cinasa, inhibidores de metal lfasalazina, azatioprina, 6-mercaptopurinas, inhibidore bumetona, diclofenac, piroxicam, etodolac, diclofenac, dica, HCI de oxicodona, bitartrato de hidrocodona/apap dico/misoprostol, fentaniio, anakinra, recombinante h tramadol, salsalato, sulindac, cianocobalamin/f etaminofen, alendronato sódico, prednisolona, sulfato rhidrato de lidocaina, indometacina, glucosamina sulf/ l de amitriptilina, sulfadiazina, HCI de oxicodona/ac l de . olopatadina, misoprostol, naproxen sódico, clofosfamida, rituximab, IL-1 TRAP, MRA, CTLA4-IG, ti-IL-18, Anti-i L155 BIRB-796, SCIO-469, VX-702, AlV 0, Roflumilast, IC-485, CDC-801, y Mesopram. Las co cluyen metotrexato o lefiunomida y en casos de artritis oderada o severa, ciclosporina.
Los agentes adicionales no limitantes que también ilizados en combinación con una proteína de unión tritis reumatoide incluyen, pero no se limitan a, los EC/SmithKI¡ne; ver, por ejemplo, Arthritis & Rheuma L 38, S185); DAB 486-IL-2 y/o DAB 389-IL-2 (proteín -2; Seragen; ver, también, Arthritis & Rheumatism (19 23); Anti-Tac . (anti-IL-2Ra humanizado; Prote bs/Roche); ÍL-4 (citocina anti-inflamatoria; DNAX/Sch CH 52000; IL-10 recombinante, citocina anti-i AX/Schering); IL-4; agonistas de IL-10 y/o IL-4 (p ticuerpos agonistas); IL-IRA (antagonista de rec nergen/Amgen); anakinra (Kineret®/Amgen); T roteína de unión TNF soluble; ver, por ejemplo, eumatism (1996) Vol. 39, No. 9 (suplemento), S28 ysiol. - Heart and Circulatory Physiology (1995) VoL ); R973401 (inhibidor de fosfodiesterasa Tipo IV; ver, thritis & Rheumatism (1996) Vol. 39, No. 9 (supieme -966 (Inhibidor de COX-2; ver, por ejemplo, eumatism (1996) Vol. 39, No. 9 (suplemento), $81); li 84); T-614 (inhibidor de citocina; ver, por ejemplo, eumatism (1996) Vol. 39, No. 9 (suplement ostaglandina E1 (ver, por ejemplo, Arthritis & Rheum l. 39, No. 9 (suplemento), S282); Tenidap (fár flamatorio no-esteroidal; ver, por ejemplo, Arthritis & 996) Vol. 39, No. 9 (suplemento), S280); Naproxen (f flamatorio no-esteroidal; ver, por ejemplo,, Neuro R l. 7, pp. 1209-1213); eloxicam (fármaco anti-infla teroidaf); Ibuprofen (fármaco anti-inflamatorio no roxicam (fármaco anti-inflamatorio no-esteroidal); rmaco anti-inflamatorio no-esteroidal); Indometacin ti-inflamatorio no-esteroidal); Sulfasalazina (ver, p thritis & Rheumatism (1996) Vol. 39, No. 9 (supleme atioprina (ver, por ejemplo, Arthritis & Rheumatism ( 19 , 9 (suplemento), S281); inhibidor de ICE (inhibidor d conversión de interleucina-1 ß); zap-70 y/o inhibi hibidores de interiéucina-17 (ver, por ejemplo, eumatism (1996) VoL 39, No. 9 (suplemento), S nicilamina; cloroquina; clorambucil; hidrox closporina; ciclofosfamida; irradiación íinfoide total; gl ocito; anticuerpos anti-CD4; CD5-toxinas; péptidos ministrados y colágeno; lobenzarit disódico; Agentes Citocina (CRAs) HP228 y HP466 (Houghten Pharr c); oligo-desoxinucleótídos fosforotioato ICAM-I antis 02; Isis Pharmaceuticals, Inc.); receptor 1 de complem ?10; T Cell Sciences, Inc.); prednisona; orgotein; po icosaminoglican; minociclina; anticuerpos anti-l L2 rinos y botánicos (ácidos grasos de pescado y semill t, por ejemplo, DeLuca et al. (1995) Rheum. Dis. Clin :759-777); auranofin; fenilbutazona; ácido meclofená fenámico; globulina inmune intravenosa; zileuton; azar icofenólico (RS-61443); tacrolimus (FK-506); lfato de hidroxicloroquina; rofecoxib; etanercept; flunomida; naproxen; váldecoxib; sulfasalazina; metilp uprofen; meloxicam; acetato de metilprednisolona; ti o-sodio¡ aspirina; azatíoprina; triamcínolona acetonid propoxifeno /apap; folato; nabumetona; diclofenac; odolac; diclofenaco sódico; oxaprozína; HCI de tartrato de hidrocodona/apap; diclofenaco sódico/ tanilo; anakinra, recombinante humano; HCI de lsalato; sulindac; cianocobalamin/fa/piridoxina; a endronato sódico; prednisolona; sulfato de morfina; cí ocaína; tndometacina; sulfato de glucosamina/ closporina; HCI de amitriptilina; sulfadiaztna; icodona/acetaminofen; HCI de olopatadina; misoprost dico; omeprazol; mícofenolato mofetil; ciclofosfamida -1 TRAP; MRA; CTLA4-IG; IL-18 BP; IL-12/23; anti-IL ; BIRB-796; SCIO-469; VX-702; AMG-548; VX-740; Rofl ctores de crecimiento; inhibidores de elastasa; ridinil-imidazol; anticuerpos para o antagonistas d manas o factores de crecimiento, por ejemplo, TNF, L -6, IL-7, IL-8, IL-15, IL-16, IL-17, IL-18, EMAP-II, GM- GF. Los anticuerpos de la invención, o porciones tígeno de los mismos, pueden ser combinados con ant s molécula de superficie celular, tales como CD2, CD3 25, CD28, CD30, CD40, CD45, CD69, CD90 o sus li ticuerpos de la invención, o porciones de unión a antí ismos, también pueden ser combinados con agentes, etotrexato, ciclosporina, FK506, rapamicina, micofeno flunomida, NSAIDs, por ejemplo, ibuprofen, corticoeste mo prednisolona, inhibidores de fosfodiesterasa, a enosina, agentes anti-trombótícos, inhibidores de c entes adrenérgicos, agentes que interfieren con la se vés de citocinas pro-inflamatorios tales como TNFa Ejemplos de agentes terapéuticos para la enfermed donde una proteína de unión puede ser combinada i guientes: antagonistas de TNF, por ejemplo, anticuerp ALIMUMAB (Publicación de PCT No. WO 97/29131; HU EMICADE), CDP 571, construcciones de TNFR-ig, ( NBREL) e inhibidores de p55TNFRIgG (LENERCEPT)) e PDE4. Los anticuerpos de la invención, o una porción tígeno de los mismos, pueden ser combi rticoesteroides, por ejemplo, budenosida y dexamet oteínas de unión de la invención o porciones de unión los mismos, también pueden ser combinados con a rno sulfasalazina, ácido 5-aminosalicílico y olsalazina e interfieren con la síntesis o acción de cit flamatorias, tales como IL-1, por ejemplo, inhibidores d nversión de I L- 1 ß e IL-1ra. Los anticuerpos de la inve rción de unión a antígeno de los mismos pueden rocodona/apap, clorhidrato de tetraciclina, fl tronidazol, tirnerosai/ácido bórico, colestirarnin rhidrato de ciprof loxacina, sulfato de hiosciamina, clo peridína, clorhidrato de. mídazoiam, icodona/acetaminofen, clorhidrato de prometazina, dio, sulfametoxazol/trimetoprim, celecoxib, policarbofi propoxifeno, hidrocortisona, multivitam ínicos, ódica, fosfato de codeína/apap, HCI de c nocobalamin, ácido fóiico, levofloxacina, metilpr talizumab y interferón-gamma.
Ejemplos no limitantes de agentes terapéuticos par ltiple con los cuales las proteínas de unión de la inven r combinadas incluyen los siguientes: cortic dnisolona; azatioprina; ciclofosfamida; ciclosporina; minopiridina; tízanidina; interferón-ß? a (AVON EX erferón- 1b (BETASERON; Chiron/Berlex); interfe ticuerpos para las moléculas de superficie de célula, 2, CD3, CD4, CD8, CD19, CD20, CD25, CD28, CD30, C 69, CD80, CD86, CD90 o sus ligandos. Las proteínas invención también pueden ser combinadas con ag mo metotrexato, ciclosporina, FK506, rapamicina, fetil, leflunomida, NSAIDs, por ejemplo, rticoestero¡des tales como prednisolona, inhib fodiesterasa, agonistas de adenosina, agentes anti-t íbídores de complemento, agentes adrenérgicos, a erfieren con la señalización a través de citocinas pro-i es como TNFa o IL-1 (por ejemplo, IRAK, NIK, I ibidores de MAP cinasa), I L- 1 ß inhibidores de nversión, inhibidores de TACE, inhibidores de seña uía T, tales como inhibidores de cinasa, inhi taloproteinasa, sulfasalazina, azatioprina, 6-merc ibidores de enzima de conversión de angiotensína, ra ligando CD40 y CD80.
Las proteínas de unión de la invención también mbinadas con agentes, tales como alemtuzumab, imed, daclizumab, mitoxantrona, clorhidrato de pridina, acetato de glatiramer, natalizumab, sin unocina NNS03, ABR-215062, AnergiX,MS, antag eptor de quimiocina, BBR-2778, cafagualina, CPI- itoxantrona encapsulada en liposoma), THCCBD abinoide) MBP-8298, mesopram (inhibidor de PDE4) ticuerpo de receptor antí-IL-6, neurovax, pirfenidona al DP-1258), sTNF-R1 , talampanel, teriflunomida, limotida, antagonistas de VLA-4 (por ejemplo, TR-1 trahaler, Antegran-ELAN/Biogen), antagonistas de mma, agonistas de IL-4.
Ejemplos no limitantes de agentes terapéuticos para cuales las proteínas de unión de la invención artan potásico, lisinopril/cloruro . de tiazida, felodipina arato de bisoproloi.
Ejemplos no limitantes de agentes terapéu pondilitis anquilosante con los cuales las proteínas de ención pueden ser combinadas incluyen los siguientes lofenaco y misoprostol, naproxen, meloxicam, in lofenaco, celecoxib, rofecoxib, Sulfasalazina, atioprina, minociclina, prednisona, etanercept, inflixima Ejemplos no limitantes de agentes terapéuticos par cuales las proteínas de unión de la invención mbinadas incluyen los siguientes: albuterol, salmeterol/ ntelukast sódico, propionato de fluticasona, dnisona, xinafoato de salmeterol, HCI de levalbuterol uterol/ipratropio, fosfato de predntsolona-sodio, tr etonida, dipropionato de beclometasona, bromuro de tromicina, acetato de pirbuterol, prednisolona, teofili nzonatato, cefalexina, pe/hidrocodona/clorfenir, tirizina/pseudoefed, fenilefrina/cod/p deína/prometazina, cefprozil, dex aifenesina/pseudoefedrina, chlorfeniramina/h docromil sódico, sulfato de terbutalina, tilprednisolona, sulfato de metaproterenol.
Ejemplos no limitantes de agentes terapéuticos par cuales las proteínas de unión de la invención mbinadas incluyen los siguientes: sulfato de albuterol omuro de ipratropio, salmeterol/f luticasona, albuterol, x lmeterol, propionato de fluticasona, prednisona, teofili ccinato de metiiprednisolona-sodio, montelukas desonida, fumarato de formoterol, triamcínolona ofloxacina, guaifenesina, azitromicina, dipropi c!ometasona, HCi de levalbuterol, flunisolida, ceftriax hidrato de amoxicilina, gatifloxacina, a-2b, Interferón-alfa conl, Interferón-alfa-n1 , interf gilado, interferón-alf a-2b pegilado, ribavirina, Peginte + ribavirina, ácido Ursodesoxicólico, ácido alfasin, Maxamina, VX-497 y cualesquiera compues lizan para tratar HCV a través de la intervención de lo jetivos: HCV polimerasa, HCV proteasa, HCV helicasa, tio de entrada de ribosoma interno).
Ejemplos no limitantes de agentes terapéuticos p lmonar idiopática con los cuales las proteínas de ención pueden ser combinadas incluyen los ednisona, azatioprina, albuteroi, colquicina, sulfato d oxina, gamma-interferón, metilprednisolona sod succ, osemida, lisinopril, nitroglicerina, espironolactona, cicl omuro de ipratropio, actinomicina d, alteplasa, pro ticasona, levof loxacina, sulfato de metaproterenol, rfina, HCi de oxicodona, cloruro de potasio, tr mipril, tenecteplasa, maléalo de enalapril, torsemida artan potásica, HCI de quinapril/mag carb, burnetanida alaprilat, clorhidrato de amiodarona, HCI m-hidrato d rhidrato de diltiazem, captopril, irbesartan, valsartan, propranolol, fosinoprti sódico, clorhidrato de tifibatida, cefazolin sódico, sulfato de atropi inocaproico, espironolactona, interferón, clorhidrato ruro de potasio, docusato sódico, HCI de dobutamina, avastatina sódica, atorvastatina de calcio, clor dazolam, clorhidrato de meperidina, dinitrato dé inefrina, clorhidrato de dopamina, bivaíirudina, ro etimiba/simvastatina, avasimiba, cariporida.
Ejemplos no limitantes de agentes terapéuticos pa n los cuales las proteínas de unión-de la invención imbinadas incluyen los siguientes: inhibidor de KDR queña, inhibidor de Tie-2 de molécula pequeña, c toxsalen, hc/bismuto subga!/znox/resor, ac ti!prednisolona, prednisona, filtro solar, halcinon licílico, antralina, pivalato de clocortolona, extracto uitrán de hulla/ácido salicííico, alquitrán de icíl ico/azufre, desoximetasona, diazeparn, ocinonida/emoliente, aceite mineral/aceite de ricino/na neral/aceite de cacahuate, petróleo/miristato de oralen, ácido salicííico, jabón/tribromsalan , tímerosal/á lecoxib, infliximab, ciclosporina, alefacept, efalizurnab, ecrolimus, PUVA, UVB, sulfasalazina.
Ejemplos no limitantes de agentes terapéuticos oriática con los cuales las proteínas de unión de l eden ser combinadas incluyen los siguientes: nercept, rofecoxib, celecoxib, ácido fólico, su proxen, lefiunomida, acetato de metilprednisolonat in If ato de hidroxicloroquina, prednisona, suündac, be n los cuales las proteínas de unión de la invención mbinadas incluyen los siguientes: sirolimusJ paclitaxel, rolimus, Zotarolimus, acetaminofen.
Ejemplos no limitantes de agentes terapéuticos para cuales las proteínas de unión de la invención mbinadas incluyen los siguientes: bitartrato de hidroc ecoxib, HCI de ciclobenzaprina, metilprednisolona , profen, HCI de oxicodona/acetaminofen, celecoxib, etato de metilprednisolona, prednisona, fosfato de co l de tramadol/acetaminofen, metaxalona, tocarbamol, clorhidrato de lidocaína, diclofena bapentina, dexametasona, carisoprodol, cetorolac t ometacina, acetaminofen, diazepam, nabumetona icodona, HCI de tizanidina, díclofenaco sódíco/r psitato de propoxifen/apap, asa/oxicod/oxíco profen/corte de hidrocodona, HCI de tramadol, etodo denosida, dexametasona; citotóxicos, por ejemplo, lofosfamida, micofenolato mofetii, metotrexato; inhi E4 o Inhibidor de síntesis de purina, por ejemplo C oteínas de unión de la invención, también pueden ser n agentes tales como sulfasalazina, ácido 5-ami alazina, Imuran y agentes que interfieren con oducción o acción de citocinas pro-inflamatorias tale r ejemplo, inhibidores de caspasa como inhibidores d nversión IL-?ß e IL-1ra, Las proteínas de unión de i mbién pueden ser utilizadas con inhibidores de seña uía T, por ejemplo, inhibidores de tirosina cinasa; o mo nen por objeto moléculas de activación de célula T, p ticuerpos de la familia CTLA-4-lgG o anti-B7, anticu miiia anti-PD-1. Las proteínas de unión de la inv eden ser combinadas con IL-11 o anticuerpos anti-c mplo, fonotolizumab (anticuerpo anti-IFNg), o anti ibidores de bcl-2t ya que se ha demostrado que presión de bcl-2 en ratones transgénícos ocasiona un f pus (ver Marquina, Regina et al., Journal of Immunol 2(11), 7177-7185), por lo tanto se espera que la inhi ectos terapéuticos.
Las composiciones farmacéuticas de la invención pu a "cantidad terapéuticamente efectiva" o una ofilácticamente efectiva" de una proteína de unión de l a "cantidad terapéuticamente efectiva" se refiere a u ectiva, a dosis y durante períodos de tiempo nece grar el resultado terapéutico deseado. Una rapéuticamente efectiva de la proteína de unión terminada por un experto en la técnica y puede variar n factores tales como el estado de la enfermedad, ed so del individuo, y la habilidad de la proteína de oducir una respuesta deseada en el individuo. U Los regímenes de dosis pueden ser ajustados para p respuesta óptima deseada (por ejemplo, una respuesta profiláctica). Por ejemplo, un bolo individual ministrado, varias dosis divididas pueden ser administr mpo o la dosis puede ser proporcionalmente rementada según sea indicado por las exigencias de apéutica. Es especialmente ventajosa formular cor renterales en una forma de dosis unitaria para ministración y uniformidad .de la dosis. La forma de do mo se utiliza aquí, se refiere a unidades físicament ecuadas como dosis unitarias para los sujetos ma rán tratados; cada unidad conteniendo una edeterminada de un compuesto activo calculada para cto terapéutico deseado en asociación con e rmacéutico requerido. La especificación para las form itaría de la invención se dictan por y directamente depe tencler que para cualquier sujeto particular, los régime pecíficos deben ser ajustados con el tiempo de acu cesidad individual y el juicio profesional de la p ministra o está supervisando la administración de la c que las escalas de dosis establecidas aquí son solo i e no pretenden limitar el alcance o práctica de la damada.
Será evidente para aquellos expertos en la técnic dificaciones y adaptaciones adecuadas de los mét vención, aquí descrita, son obvias y se pueden hace uivalentes adecuados sin apartarse del alcance de la s modalidades descritas aquí. Habiendo ahora descrito vención con detalle, la misma se entenderá más ciendo referencia a los siguientes ejemplos, los cuales ra propósitos de ilustración solamente y no pre itantes de la invención. nos una DVD-lg como se describe aquí. Cualquier en conocido en la técnica, puede ser usado en el mplos incluyen, pero no se limitan a, inmunoensayo, unoensayo emparedado (por ejemplo, inn nocionales, policlonales y/o de emparedado de alquier variación de los mismos (por ejemplo, monoclo D-lg/policlonal, etc.), incluyendo detección de dioinmunoensayo (RIA)) y detección de enzima (inmu zima (EIA) o ensayo por inmunoabsorción ligado LISA) (por ejemplo, Quantikine ELISA assays, R& nneapolis, MN))), inmunoensayo de inhibición comp mplo, 1 anterior y reverso), inmunoensayo de pola orescencia (FPIA), técnica de inmunoensayo mult zima (EMIT), transferencia de energía de res oluminiscencia (BRET), y ensayo quimioluminiscente e. En un inmunoensayo basado en SELDI, un reactivo vés de SELDI. Un inmunoensayo de mi imioluminiscente, en particular, uno que emplea el tomático AR.CHITEC® (Abbott Laboratories, Abbott Par mplo de un inmunoensayo preferido.
Los métodos bien conocidos en la técnica para reu rocesar orina, sangre, suero y plasma, y otros fluidos utilizan en la práctica de la presente descripción, p ando una DVD-lg, como se describe aquí, se enripie activo de inmunodiagnóstico y/o en un equipo de inmu alito. La muestra de prueba puede comprender otra emas del analito de interés, tales como anticuerpos, ptenos, hormonas, fármacos, enzimas, receptores, ptidos, polipéptídos, oligonucleótidos y/o polinucle mplo, la muestra puede ser una muestra de sa tenida de un sujeto. Puede ser necesario o desea estra de prueba, particularmente sangre entera, sea t l, (b) uno o más solventes y sal, y opcionalmente, dét tergente, o (d) detergente y sal. Los reactivos de pre n conocidos en la técnica, y dicho pre-tratamiento pleado, por ejemplo, como se usa para ensayos en a Abbott TDx, AxSYM®, y ARCHITECT® (Abbott L bott Park, IL), como se describe en la literatura (ver, tscoff et al., Abbott TDx Monoclonal Antibody Assay E asuring Cyclosporine in Whole Blood, Clin. Chem. 36: 990), y Wallemacq et al., Evaluation of the N closporine Assay: Comparison with TDx Monoclonal d EMIT Cyclosporine Assays, Clin. Chem. 45: 432-435 mo está comercialmente disponible. Además, pre ede ser realizado como se describe en la Patente de 135,875 de Abbott, Pat. Pub. Europea No. 0 471 29 ovisional de E.U.A. 60/878,017, presentada el 29 de 06, y Sol. Pat. E.U.A. Pub. No, 2008/0020401 (incorp zcla formada por la adición del agente de pre-trat estra. En dicho ensayo, el sobrenadante de la mezcla alquier proteína de unión se utiliza en el ensayo, p ectamente al paso de captura de anticuerpo.
Con el uso de un reactivo de pre-tratarniento hom iste dicho paso de separación. La mezcla entera de la ueba y el reactivo de pre-tratam iento se ponen en cont trón de unión específico marcado para al analito (o fr smo), tal como un anticuerpo anti-analito marcado (o u tigénicamente reactivo del mismo). El reactivo de pre pleado para dicho ensayo típicamente se diluye en l estra de prueba pre-tratada, ya sea antes o durante la primer patrón de unión específico. A pesar de dic rta cantidad del reactivo de pre-tratamiento aún sigue rmanece) en esta mezcla de muestra de prueba durante acuerdo con la invención, el patrón de unión específ trón de unión específico es un anticuerpo anti-an gmento del mismo. El primer parón de unión específic a DVD-ig (o un fragmento, una variante, o un fragme riante de! mismo) como se describe aquí. El orden e estra de prueba y el primer patrón específico se a mar la mezcla no es crítico. Preferiblemente, el prime ión específico es inmovilizado sobre una fase sólid ida utilizada en el inmunoensayo (para el primer patr pecífico y, opcionalmente, el segundo patrón de unión ede ser cualquier fase sólida conocida en la técnica ro no limitándose a, una partícula magnética, una pe ensayo, una placa de microtitulación, una mem lécula de andamio, una película, un papel filtro, un cuito.
Después de que se forma la mezcla que contiene primer patrón de unión específico-analito, cualquier rmar un complejo de primer patrón de unión especí I gundo patrón de unión específico. El segundo patró pecífico de preferencia es un anticuerpo anti-analito q epítopo sobre el analito que difiere del epítopo en el a r el primer patrón de unión específico. Además, eferencia, el segundo patrón de unión específico es iquetado con o contiene una marca detectable como teriormente. El segundo patrón de unión específico pu D-lg (o un fragmento, una variante, o un fragme riante del mismo) como se describe aquí.
Cualquier marca o etiqueta detectable adecuad nocido en la técnica, puede ser utilizada. Por ejempl tectable puede ser una marca radioactiva (tal como 3 , 32P, y 33P), una marca enzímática (tal como pe bano, peroxidasa alcalina, 6-fosfato deshidrogenasa d ilares), una marca quimioluminiscente (tal como quetas, procedimiento de marcación y detección de cuehtra en Polak y Van Noorden, ¡ntro munocytochemistry, 2° ed., Springer Verlag, N.Y. (1 ugland, Handbook of Fluorescent Probes and Researc 996), el cual es un manual o guía combinada y catáíog r Molecular Probes, Inc., Eugene, Oregón. Una marca f ede ser utilizada en FPIA (ver Patentes de E.U.A. Nos. 573,904, 5,496,925, 5,359,093, y 5,352,803). Un co ridinio puede ser utilizado como una marca o etiqueta un ensayo de quimioluminiscencia homogéneo o heter r ejemplo, Adamczyk et al., Bioorg. Med. Chem. Lett 28 (2006); Adamczyk et al., Bioorg. Med. Chem. Lett, 4 004 ) ; Adamczyk et al., Biorg. Med. Chem. Lett. 14: 004); y Adamczyk et al., Org. Lett. 5: 3779- 3782 (2003) Un compuesto de acridinio preferido es una 9-carb ridinio. Los métodos para preparar 9-carboxamidas de ter. Un ejemplo de un acridinio-9-carboxilato aril orosulfonato de 10-metil-9-(fenoxicarbonil)acridinio (di yman Chemical, Ann Arbor, MI). Los métodos pa ridinio-9-carboxilato aril ésteres se describen por McC otochem. Photobiol. 4: 1111-21 (1965); Raza minescence 15: 245-249 (2000); Razavi et al., Lumin 9-244 (2000); y Patente de E.U.A. No. 5,241,070 (cada ales se incorpora aquí para referencia en su totalida señanzas con respecto a lo mismo). Otros det cridinio-9-carboxilato aril éster y su uso se estable 08-0248493.
Se pueden realizar ensayos quimioluminiscentes (p ilizando acridinio como se describió anteriormente u ot ímioluminiscentes) de acuerdo con los métodos d amczyk et al., Anal. Chim. Acta 579(1): 61-67 (200 alquier formato de ensayo adecuado puede ser u tectablemente marcados. De manera alternativa, si s gundo patrón de unión específico y el segundo patr pecífico es detectablemente marcado con imioluminiscente tal como un compuesto acridinio, mplejos de primer patrón de unión específ ico-anal trón de unión específico. Cualquier patrón de unión e ido, ya sea marcado o no marcado, puede ser rem zcla utilizando cualquier técnica conocida en el camp ado.
Se puede generar peróxido de hidrógeno in situ en oporcionarse o suministrarse a la mezcla (por ejempl \ peróxido de hidrógeno siendo uno. o más regulador ras soluciones que son conocidas por contener p rógeno)antes, simultáneamente con, o después de la mpuesto acridinio antes descritos. El peróxido de hidró r generado in situ en un número de formas tales COI gnesio, carbonato de sodio, bicarbonato de sodio, h lcio, carbonato de calcio, y bicarbonato de calcio. La lución básica agregada a la muestra depende de la co la solución básica. Basándose en la concentración de sica usada, un experto en la técnica fácilmente puede cantidad de solución básica que se agregará a la muest La señal quimioluminiscente que es generado tectada utilizando técnicas de rutina conocidas p pertos en el campo. Basándose en la intensidad nerada, la cantidad de analito en la muestra antificada. Específicamente, la cantidad de analito en proporcional a la intensidad de la señal generada. La alito presente puede ser cuantificada comparando la generada con una curva estándar para el analito o n un estándar de referencia. La curva estándar nerada utilizando diluciones en serie o s pecíficamente, en un formato de inmunoensayo, por lo ticuerpos son empleados para separar y cuantificar el mo un analito humano, o un fragmento del mismo, en u s específicamente, por lo menos los dos analitos erentes epítopos en un analito (o fragmento del mism complejo inmune, el cual es denominado como un "e genera!, en los inmunoensayos, uno o más anticuer r utilizados para capturar el analito (o fragmento d smo) en la muestra de prueba (estos anticu cuentemente denominados como un anticuerpo de ticuerpos de "captura") y uno o más anticuerpos ilizados para unir una marca detectable (prin antificable) al emparedado (estos anticuerpos son fre nomínados como el "anticuerpo de detección", los "ant tección", el "conjugado", o los "conjugados"). De esta contexto de un formato de inmunoensayo emparedad mer epítopo en un analito (o fragmento del mismo) y minio que puede unir un segundo epítopo en un a gmento del mismo) puede ser utilizada como un an ptura y/o un anticuerpo de detección. Alternativament que tiene un primer dominio que puede unir un epí mer analito (o un fragmento del mismo) y un segundo ede unir un epítopo en un segundo analito (o un fr smo) puede ser utilizada como un anticuerpo de cap ticuerpo de detección para detectar, y opcionalmente s o más analitos. En el caso de que un analito esente en una muestra en más de una forma, tal com nomérica y una forma dimérica/multimérica, que momérica o heteromérica, una DVD-lg teniendo un ede unir un epítopo que solo está expuesto e onomérica y otra DVD-lg teniendo un dominio que pu ítopo en una parte diferente de una forma dimérica lexibilidad estructural para permitir la unión de un epít los dominios internos así como de unir otro epítopo minios externos. A este respecto, si una DVD-lg pue erentes analitos y un anaiito es más grande qu seablemente el anaiito más grande es unido po ternos.
Hablando en general, una muestra que es probad mplo, con sospecha de contener) anaiito (o un fra smo) puede ponerse en contacto con al menos un an ptura (o anticuerpos) y al menos un anticuerpo de d al puede ser un segundo anticuerpo de detección ticuerpo de detección o aún un anticuerpo su umerado, por ejemplo, como cuando el anticuerpo de ección comprende anticuerpos múltiples) ya sea si cuencialmente y en cualquier orden. Por ejemplo, la ueba primero puede ponerse en contacto con al pone en contacto con al menos un primer anticuerpo jo condiciones que permitan la formación de un primer ticuerpo/analito. Si se utiliza más de un anticuerpo de ma un primer compiejo de anticuerpo de ca mprendiendo dos o más anticuerpos de captura. En iparedado, los anticuerpos, es decir, preferiblemente, a ticuerpo de captura, son utilizados en cantidades en e la cantidad máxima del analito (o un fragmento perada en la muestra de prueba. Por ejemplo, se pue aproximadamente 5 a aproximadamente 1 mg de an del regulador de pH (por ejemplo, regulador cubrimiento de micropartícula).
Los inmunoensayos de inhibición competitivos, los c gular se utilizan para medir analitos pequeños ya q diante solo un anticuerpo es requerida, comprend cuenciales y clásicos. En un inmunoensayo de rametilbenzidina (TMB). Después de lavar, la señal g analito marcado se mide y es inversamente propor tidad de analito en la muestra. En un inmunoensayo d mpetitivo clásico, un anticuerpo para un analito de locado como recubrimiento en un soporte sólido. (por e vidad de una placa de microtitulación). Sin embargo, l inmunoensayo de inhibición competitivo secuencia!, J analito marcado se agregar a la cavidad al mis alquier analito en la muestra compite con el analito m i rse al anticuerpo de captura. Después de lavar, la señ r el analito marcado es medida y es inversamente prop ntidad de analito en la muestra.
Opcionalmente, antes de poner en contacto la estra con al menos un anticuerpo de captura (por mer anticuerpo de captura), al menos un anticuerpo ede ser unido a un soporte sólido, el cual facilita la se poliestireno o perlas magnéticas), una tira de un filtr or ejemplo, nitrocelulosa o nylon), micropartículas (p rticulas de látex, micropartículas magnetizables (p cropartículas que tienen núcleos de óxido férrico u óxi recubrimientos homo- o hetero-poliméricos y roximadamente 1-10 mieras). El substrato puede co tería! poroso adecuado con una afinidad de superfici ra unir antígenos y suficiente porosidad para permitir vés de anticuerpos de detección. Generalmente se terial microporoso, aunque se puede utilizar latinoso en un estado hidratado. Dichos substratos eferencia están en la forma de láminas con un roximadamente 0.01 a aproximadamente 0.5 mm, de rededor de 0.1 mm. Aunque el tamaño de poro puede bit, de preferencia el tamaño de poro es de aprox 025 a aproximadamente 15 mieras, muy preferibl ede ser unido con micropartículas, las cuales eviamente cubiertas con estreptavidina (por ejempl gnetic Beads, Invitrogen, Carlsbad, CA) o biotina (p ilizando micropartícuias recubiertas con estreptavidina ndTM-SA-MP (Seradyn, Indianapo!is, IN)) o noclonales anti-especies-específ icos. Si es ne bstrato puede ser derívattzado para permitir ta rea rios grupos funcionales en el anticuerpo. Dicha de quiere del uso de ciertos agentes de acoplamiento, eje ales incluyen, pero no se limitan a, anhídrido r droxisuccinimida y etil-1-3-(3-dimetilaminopropil) carb desea, uno o más reactivos de captura, tales como an gmentos de los mismos), cada uno de los cuales e ra al analito(s) puede ser unido a fases sólidas e icaciones físicas y dirigible, por ejemplo, tal cor nfiguración de biochip (ver, por ejemplo, Pat. se de anticuerpo derivatizado, a base de perla, p nología de xMAP de Luminex (Austin, TX).
Después de que la muestra de prueba que es ana alito (o un fragmento del mismo) se pone en contacto c anticuerpo de captura (por ejemplo, el primer an ptura), la mezcla se incuba con el fin de permitir la f complejo de primer anticuerpo (o anticuerpo múltiple fragmento del mismo). La incubación puede realizarse roximadamente 4,5 a aproximadamente 10.0, a una tem roximadamente 2°C a aproximadamente 45°C, y durant por lo menos aproximadamente un (1) minuto a aprox ciocho (18) horas, de preferencia de aproximada roximadamente 24 minutos, muy preferiblemente de air 8 minutos. El inmunoensayo descrito aquí puede ser c paso (lo que significa que la muestra de prueba, por l ticuerpo de captura y por lo menos un anticuerpo d gundo anticuerpo de detección), en realidad, cuando ltiples anticuerpos para captura y/o detección, al ticuerpo de detección puede ser el segundo, tercero, ticuerpos usados en el inmunoensayo. Si el complejo d captura/analito (o un fragmento del mismo) se pone n más de un anticuerpo de detección, entonces s mplejo de anticuerpo de captura (primero o múltiple)/a gmento del mismo)/anticuerpo de detección (múltiple) anticuerpo de captura (por ejemplo, el primer an ptura), cuando al menos un anticuerpo de detección ( gundo y cualquiera subsecuente) se pone en cont mplejo de anticuerpo de captura/analito (o un fra smo), se requiere de un período de incubación bajo milares a aquellas descritas anteriormente para la fo mplejo de anticuerpo de captura (primero o múltiple)/a gmento del mismo)/anticuerpo de detección (segundo La marca detectable puede ser unida a los anticue ectamente o a través de un agente de acoplamiento, un agente de acoplamiento que puede ser utilizad orhidrato de 1 -etil-3-(3-dimetilaminopropil) carbodiimid mercialmente disponible de Sigma-Aldrich, St. Louis, entes de acoplamiento que pueden ser utilizados son c técnica. Los métodos para unir una marca detec ticuerpo son conocidos en la técnica. Además, mucha iquetas detectables pueden ser compradas o sintetiza ntienen grupos finales que faciliten el acopiamiento tectable al anticuerpo, tal como CPSP-Acridinio Este rboxamida de 9-[N-tosii-N-(3-carboxipropiT)]-10-(3- ridinio) o SPSP-Acridinio Ester (es decir, carboxamida lfopropil)-N-(3-suifopropil)-acridínio-9).
El complejo de anticuerpo de captura ltiple)/analito/antícuerpo de detección (segundo o múl detección para formar un complejo de primer últiple)/a na lito/segundo anticuerpo (múltiple), segui moción del fluido (muestra de prueba) del contacto co lido. Si al menos un primer anticuerpo de captura no porte sólido, entonces el complejo de anticuerpo rimero o múltiple)/analito (segundo o múltiple) no tie movido de la muestra de prueba para cuantificacion de la marca o etiqueta.
Después de la formación del complejo de ant ptura/analito/anticuerpo de detección marcado (por mplejo del primer anticuerpo de captura/anal ticuerpo de detección), la cantidad de marca en el antificada utilizando técnicas conocidas en el campo. se utiliza una marca enzimática, el complejo marca accionar con un substrato para la marca que da u antificable tal como el desarrollo de color. Si la m y os x, película fotográfica de alta velocidad, una cámar a vez que la cantidad de la marca en el comple antificada, la concentración del analito o un fragment la muestra de prueba se determina a través ropiados, tales como a través del uso de una curva e sido generada usando diluciones en serie de a gmento del mismo de concentración conocida. En luga luciones en serie del analito o un fragmento del mis tándar puede ser generada gravimétricamente, a pectroscopia masiva y a través de otras técnicas con mpo.
En un ensayo de micropartícula quimioluminiscente analizador ARCHITECT®, el pH del diiuyente conjuga aproximadamente 6.0 +/- 0.2, el regulador de pH de re micropartícula debe ser mantenido a temperatura a cir, de aproximadamente 17 a aproximadamente 27° mpetitivo. Un compuesto fluorescentemente marcado, cita por una luz linealmente polarizada, emitirá fl iendo un grado de polarización inversamente propor ocidad de rotación. Cuando un complejo de rastreado orescentemente marcado es excitado por una luz larizada, la luz emitida permanece altamente polarizad oróforo es restringido de la rotación entre el tiempo es absorbida y el tiempo en el que la luz es emitida, mpuesto rastreador "libre" (es decir, un compuesto q ido a un anticuerpo) es excitado mediante luz larizada, su rotación es mucho más rápida que el c st re ador- anticuerpo correspondiente producido unoensayo de unión competitivo. Los FPIAs son venta RIAs ya que no hay substancias radioactivas que r nejo y desecho especiales. Además, los FPIAs s mogéneos que pueden ser fácil y rápidamente realizado rlante, o un fragmento de una variante del mismo) irse a un analito, y (?') por lo menos una marca detec e comprende comparar una señal generada a través fectable como una indicación directa o indirecta de la ntidad o concentración de analito (o un fragmento del estra de prueba para una señal generado como un ecta o indirecta de la presencia, cantidad o conce alito (o un fragmento del mismo) en un control o ca librador es opcionalmente parte de una serie de calib nde cada uno de ios calibradores difiere de los otros r la concentración de analito.
El método puede comprender (i) poner en contacto prueba con al menos un primer patrón de unión especí alito (o un fragmento del mismo) seleccionado del nsiste de un anticuerpo, o un fragmento de un anti ede unirse a un analito, una variante de un anticuerpo ticuerpo anti-analito detectablemente marcado, un tectablemente marcado de un anticuerpo anti-analito irse al analito, una variante detectablemente marc ticuerpo anti-analito que puede unirse al analito, u tectabiemente marcado de una variante de una anti a I i t o que puede unirse al analito, y una DVD-lg dete rcada (o un fragmento, una variante, o un fragme riante del mismo) con el fin de formar un complejo d trón de unión especifico/analito (o un frag smo)/segundo patrón de unión específico, y (íii) de esencia, cantidad o concentración de analito en la ueba detectando la señal generada por la marca dete mplejo del primer patrón de unión específico/an gmento del mismo)/segundo patrón de unión específico ). Como se describe aquí se puede preferir un métod r lo menos un primer patrón de unión específico (o u rlante de un anticuerpo que puede unirse a un analito, (o un fragmento, una variante, o un fragmento de una smo) y simultánea o secuencialmente, en cualquier o contacto la muestra de prueba con al menos un segun i ón específico, que puede competir con I analito (o u Í mismo) para unirse por lo menos a un primer patr pecífico y el cual se selecciona del grupo que con alito detectablemente marcado, un fragmento dete rcado del analito que puede unirse al primer patró pecífico, una variante detectablemente marcada del ede unirse al primer patrón de unión específico, y u tectablemente marcado de una variante del analito irse al primer patrón de unión específico. Cualquier a gmento del mismo) presente en la muestra de prueba segundo patrón de unión específica compiten entre sí complejo de primer patrón de unión especifico/an oporcional a la cantidad o concentración del analito en prueba. .
Los métodos anteriores además pueden gnóstico, pronóstico o valoración de la eficacia de un rapéutico/profiláctico de un paciente de donde se estra de prueba. Si el método además comprende icacia de un tratamiento terapéutico/profiláctico del nde se obtuvo la muestra, el método opcionalme mprende modificar el tratamiento terapéutico/prof i ciente según sea necesario para mejorar la eficacia, ede ser adaptado para usarse en un sistema automa tema serni-automatizado.
Con respecto a los métodos de ensayo (y equi smos), puede ser posible emplear anticuerpos mercialmente disponibles o métodos para la producción al ito como se describe en la literatura. Los mero de veces y bajo condiciones apropiadas de ma ede hacer un enlace o asociación de presencia ntidad o concentración con una etapa particular o pu a enfermedad, trastorno o condición o con indici rticulares. Típicamente, el nivel predeterminado es o sayos de sujetos de referencia (o poblaciones de alito medido puede incluir fragmentos del mismo, p gradación de los mismos, y/o productos de escisión en s mismos.
En particular, con respecto a un nivel predetermina plea para verificar la progresión y/o tratamien fermedad, la cantidad o concentración de analito o u l mismo puede ser "no cambiada", "favorable" (o "fav terada"), o "desfavorable" (o "desfavorablemente levada" o "incrementada" se refiere a una cantidad o co una muestra de prueba que es mayor que el nivel o es cala típica o normal (por ejemplo, un nivel predete bre otro nivel o escala de referencia (por ejemplo, m mprana o de línea de base).
El nivel o escala típico o normal para el analito s uerdo con la práctica estándar. Ya que los niveles d unos casos serán muy bajos, se puede considera mado nivel o alteración alterada ha ocurrido cu alquier cambio neto según comparado con el nivel o e normal, o nivel o escala de referencia, que no puede s través de error experimental o variación de muest ñera, el nivel medido en una muestra particular será n el nivel o escala de niveles determinados en muestr partir de un así llamado sujeto normal. En este context rmal" es un individuo sin ninguna enfermedad det nripio, un paciente "normal" (algunas veces denomina población es uno que no exhibe ninguna enfermedad e que el nivel de un anaiito está "elevado" cuando e rmalmente no detectable (por ejemplo, el nivel normal ntro de una escala de aproximadamente 25 a aproxima rcentiles de poblaciones normales), pero se dete estra de prueba, así cuando también el anaiito está pr estra de prueba a un nivel más alto que lo norm ñera, entre otras cosas, la descripción proporciona ra clasificar un sujeto que tiene, o que está en riesg a enfermedad particular, trastorno o condición. El sayo también puede involucrar el ensayo de otros m ilares.
Por consiguiente, los métodos descritos aquí tam r utilizados para determina si un sujeto tiene o no o e sgo de desarrollar una enfermedad, trastorno o cond pecíficamente, dicho método puede comprender los pas (a) determinar la concentración o cantidad en una tbargo, si la concentración o cantidad de un analito el paso (a) es no favorable con respecto al nivel pred tonces se determina que el sujeto tiene o está en ries a enfermedad, trastorno o condición dada.
Además, aquí se proporciona un método para ogresión de la enfermedad en un sujeto. Opcionalmeñt mprende los pasos de: (a) determinar la concentración o cantidad de an estra de prueba de un sujeto; (b) determinar la concentración o cantidad de u a última muestra de prueba del sujeto; y (c) comparar la concentración o cantidad de a termtnada en el paso (b) con concentración o cantida terminada en el paso (a), en donde si la concentració terminada en el paso (b) no cambio o es desfavorabl mpara con la concentración o cantidad de analito dét ), por ejemplo, con un nivel predeterminado cionalmente el método comprende tratar al sujeto con mposiciones farmacéuticas durante un período de ti mparación muestra que la concentración o cantidad gún determinada en el paso (b), por ej sfavorablemente alterada con respecto al nivel predete Aún más, los métodos pueden ser utilizados para tamiento en un sujeto que recibe el tratamiento con mposiciones. Específicamente, dichos métodos oporcionar una primera muestra de un sujeto antes d ya administrado una o más composiciones far seguida, la concentración o cantidad de analito en estra de prueba de un sujeto se determina (por ejempl $ métodos descritos aquí o como es conocido en spués de que se determinó la concentración o cantida cionalmente después se compara la concentración o r determinado por un experto en la técnica (por ejemplo tiempo puede ser de aproximadamente siete ( roximadamente dos años, de preferencia de aprox torce (14) días a aproximadamente un (1) año.
Durante el curso del tratamiento con una o mposiciones farmacéuticas, después se obtienen bsecuentes muestras de prueba del sujeto. El número prueba y el tiempo en el cual dichas muestras de tienen del sujeto no son críticos. Por ejemplo, u estra de prueba puede ser obtenida siete (7) días des sujeto se le administró por primera vez una o r mposiciones farmacéuticas, una tercera muestra de p r obtenida dos (2) semanas después de que al sujeto p ministró una o más de las composiciones farmacé arta muestra de prueba puede ser obtenida tres ( spués de que al sujeto se le administró primero una terminada en cada una de la segunda y subsecuente r ueba, después se compara con la concentración o a I i to , según determinada en la primera muestra de mplo, la muestra de prueba que originalmente y en for comparó con el nivel predeterminado). Si la conc ntidad de analito, según determinada en el paso (c) ando se compara con la concentración o cantidad de an terminada en el paso (a), entonces se determi fermedad en el sujeto ha terminado, ha regresado o ha sujeto se le debe continuar administrando una o mposiciones farmacéuticas del paso (b). Sin emb ncentración o cantidad de analito, según determinada no cambia o no es favorable cuando se comp ncentración o cantidad de analito, según determinada ), entonces se determina que la enfermedad en el suje osigue o empeora, y el sujeto debe ser tratad ede ser realizada (por ejemplo, verificación de progr fermedad y/o respuesta al tratamiento), se obtiene un bsecuente muestra de prueba a un período de tiempo e la primera muestra de prueba ha sido obtenido pecíficamente, una segunda muestra de prueba del s r obtenida minutos, horas, días, semanas o años desp ha obtenido la primera muestra de prueba del sujeto. segunda muestra de prueba puede ser obtenida del ríodo de tiempo de aproximadamente 1 minuto, aproxim nutos, aproximadamente 10 minutos,, aproximadamente 30 minutos, aproximadamente oximadamente 60 minutos, aproximadamente roximadamente 3 horas, aproximadamente roximadamente 5 horas, aproximadamente roximadamente 7 horas, aproximadamente roximadamente 9 horas, aproximadamente roximadamente 7 días, aproximadamente 2 roximadamente 3 semanas, aproximadamente 4 roximadamente 5 semanas, aproximadamente 6 oximadamente 7 semanas, aproximadamente 8 roximadamente 9 semanas, aproximadamente 10 roximadamente 11 semanas, aproximadamente 12 roximadamente 13 semanas, aproximadamente 14 roxlmadamente 15 semanas, aproximadamente 16 roximadamente 17 semanas, aproximadamente 18 roximadamente 19 semanas, aproximadamente 20 roximadamente 21 semanas, aproximadamente 22 roximadamente 23 semanas, aproximadamente 24 roximadamente 25 semanas, aproximadamente 26 roximadamente 27 semanas, aproximadamente 28 roximadamente 29 semanas, aproximadamente 30 roximadamente 31 semanas, aproximadamente 32 roximadamente 51 semanas, aproximadamente 52 roximadamente 1 .5 años, aproximadamente roximadamente 2. 5 años, aproximadamente roximadamente 3. .5 años, aproximadamente roximadamente 4, ,5 . años, aproximadamente roximadamente 5. 5. años, aproximadamente roximadamente 6. ,5 años, aproximadamente roximadamente 7 , .5 años, aproximadamente roximadamente 8, .5 años, aproximadamente roxímadamente 9.5 años o aproximadamente 10.0 años e la primera muestra de prueba se obtuvo del sujeto.
Cuando se utiliza para verificar la progresión de la ensayo anterior puede ser utilizado para verificar la pr enfermedad en sujetos que padecen de condiciones ndiciones agudas, también conocidas como condiciones ticas, se refieren a enfermedades aguas, que ponen e rificación repetitiva en un marco de tiempo ncipalmente, minutos, horas o días (por ejemplo aprox minuto, aproximadamente 5 minutos, aproximadamente roxímadamente 15 ,minutos, aproximadamente 3 roximadamente 45 minutos, aproximadamente 6 roximadamente 2 horas, aproximadamente roxímadamente 4 horas, aproximadamente roximadamente 6 horas, aproximadamente roximadamente 8 horas, aproximadamente roximadamente 10 horas, aproximadamente roximadamente 12 horas, aproximadamente roximadamente 14 horas, aproximadamente roximadamente 16 horas, aproximadamente roximadamente 18 horas, aproximadamente roximadamente 20 horas, aproximadamente roximadamente 22 horas, aproximadamente udas se refieren a condiciones diferentes a condició e ponen en peligro la vida u otras condiciones médi e involucran por ejemplo, el sistema cardiovascular y/o creción. Típicamente, las condiciones no agudas incluy duración a largo plazo mayor o crónicas. Para con udas, generalmente se realiza la verificación repeti rco de tiempo más largo, por ejemplo, horas, días, os (por ejemplo, 1 hora, aproximadamente roximadamente 3 horas, aproximadamente roximadamente 5 horas, aproximadamente roximadamente horas, aproximadamente roximadamente 9 horas, aproximadamente roximadamente 11 horas, aproximadamente roximadamente 13 horas, aproximadamente roximadamente 15 horas, aproximadamente roximadamente 17 horas, aproximadamente roximadarnente 9 semanas, aproximadamente 10 roximadamente 11 semanas, aproximadamente 12 roximadamente 13 semanas, aproximadamente 14 roximadamente 15 semanas, aproximadamente 16 roximadamente 17 semanas, aproximadamente 18 roximadamente 19 semanas, aproximadamente 20 roximadamente 21 semanas, aproximadamente 22 roximadamente 23 semanas, aproximadamente 24 roximadamente 25 semanas, aproximadamente 26 roximadamente 27 semanas, aproximadamente 28 roximadamente 29 semanas, aproximadamente 30 roximadamente 31 semanas, aproximadamente 32 roximadamente 33 semanas, aproximadamente 34 roximadamente 35 semanas, aproximadamente 36 roximadamente 37 semanas, aproximadamente 38 roximadamente 39 semanas, aproximadamente 40 roximadamente 4. ,5 años, aproximadamente roximadamente 5. 5. años, aproximadamente roximadamente 6, .5 años, aproximadamente roximadamente 7. .5 años, aproximadamente roximadamente 8, .5 años, aproximadamente roximadamente 9.5 años o aproximadamente 10.0 sayo inicial asimismo en general se realiza dentro de mpo más largo, por ejemplo, aproximadamente horas, años del inicio de la enfermedad o condición.
Además, los ensayos anteriores pueden ser ilizando una primera muestra de prueba obtenida de u nde la primera muestra de prueba se obtiene de una rno orina, suero o plasma. Opcionalmente, los ensayo spués pueden ser repetidos utilizando una segunda ueba obtenida del sujeto, en donde la segunda muestr obtiene de otra fuente. Por ejemplo, si la primera tamiento. En particular, la descripción se refiere a oductos de diagnóstico de analito compañero. De esta todo de "verificar el tratamiento de la enfermedad e mo se describe aquí, además también en forma opcí lecciona o identificar candidatos para terapia.
De esta manera, en modalidades particulares, la mbién proporciona un método para determinar si un ne, o está en riesgo de una enfermedad dada, ndición es candidato para terapia. Generalmente, el su e ha experimentado algún síntoma de una enfermedad, ndición dada, o quien en realizada ya ha sido diagno ner, o estar en riesgo de tener, una enfermedad, ndición dada, y/o quien demuestra una concentración favorable de analito o un fragmento del mismo, como uí.
El método opcionalmente comprende un ensayo beneficiará de recibir tratamiento adicional o contini e una concentración o cantidad favorable de anatito spués del tratamiento confirma que el sujeto se be cibir tratamiento adicional o continuo. Esta confirmaci nejo de estudios clínico, y provisión de cuidado ciente.
No se puede finalizar sin decir que, aunq dalidades de la presente son ventajosas cuando se e forar una enfermedad, trastorno o condición dada com uí, los ensayos y equipos pueden ser empleados par alito en otras enfermedades, trastornos y condiciones ensayo también puede involucrar el ensayo de otros m ilares.
El método de ensayo también puede ser util ntificar un compuesto que mitigue o mejore una storno o condición dada. Por ejemplo, una célula que mprende por lo menos un componente para analizar la ueba para el analito (o un fragmento del mismo) e i ra analizar la muestra de prueba para el analito (o u l mismo). Al menos un componente para analizar la ueba para el analito (o un fragmento óe\ mismo) puede mposición que comprende una DVD-lg anti-anaiito (o u a variante, o un fragmento de una variante del mismo) cionalmente inmovilizado sobre una fase sólida.
El equipo puede comprender por lo menos un comp alizar la muestra de prueba para un analito a munoensayo, por ejemplo, inmunoensayo de mí imio!uminiscente, e instrucciones para analizar la ueba para un analito a través de inmunoensayo, p munoensayo de micropartícula quimioluminiscente. Por uipo puede comprender por lo menos un patrón de unió ra un analito, tal como un anticuerpo riante, o un fragmento de una variante del mismo)), mpetir con cualquier analito en una muestra de prueba un anticuerpo anti-analito, monoclonal/policlonal (o u mismo que puede unirse al analito, una variante del ede unirse al analito, o un fragmento de una variante irse al analito) o una DVD-íg anti-analito (o un frag riante, o un fragmento de una variante del mismo), cua ales puede ser inmovilizado sobre un soporte sólido ede comprende un calibrador o control, por ejem lado o purificado. El equipo puede comprender por l ntenedor (por ejemplo, tubo, placas de microtitulación eden ya ser recubiertas con un primer patrón de unión r ejemplo) para conducir el ensayo, y/o regulador de p regulador de pH de ensayo o un regulador de pH alquier de los cuales puede ser provisto como u ncentrada, una solución de substrato para la marca dét a porción radioactiva, una enzima, una marca de biot cromóforo, una marca quimiolurniniscente, o similares, ede incluir reactivos para realizar la marcación déte ticuerpos, calibradores y/o controles pueden ser p ntenedores por separado o pre-surtidos en un format ropiado, por ejemplo, en placas de rnicrotitulación.
Opcíonalmente, el equipo incluye componentes de lidad (por ejemplo, paneles de sensibilidad, calibrados sitivos), La preparación de reactivos de control de cali nocída en la técnica y se describe en hojas anexa riedad de productos de inmunodiagnóstico. Opcion ilizan miembros de panel de sensibilidad para racterísticas de funcionamiento del ensayo, cionalmente son indicadores útiles de la integrid activos de equipo de inmunoensayo, y ia estandariza sayos. eden ser liof i I izad os } en ese caso el equipo ade mprender reactivos adecuados para la reconstituci mponentes liofilizados.
Los varios componentes del equipo opciona oporcionan en contenedores adecuados según sea ne mplo, una placa de microtitulación. El equipo ade luir contenedores para mantener o almacenar una m mplo, un contenedor o cartucho para una muestra ando es apropiado, el equipo opcionalmente tam ntener vasos de reacción, vasos de mezclado mponentes que facilitan la preparación de reactivos o prueba. E! equipo también puede incluir uno o más i ra asistir a la obtención de una muestra de prueba, t ringa, pipeta, fórceps, cuchara medidora, o similares.
Si la marca detectable es por lo menos un co ridinio, el equipo puede comprender por lo menos una . Adaptación del Equipo y Método El equipo (o componentes del mismo), así como el terminar la presencia, cantidad o concentración de u a muestra de prueba por un ensayo, tal como un in mo se describe aquí, puede ser adaptado para usa riedad de sistemas automáticos o semi-automáticos uellos en donde la fase sólida comprende una míe mo se describe en, por ejemplo, Patentes de 089,424 y 5,006,309, y como se vende comercial emplo, por Abbott Laboratories (Abbott Park, CHITEC®.
Algunas de las diferencias entre el sistema automá tomático, según comparado con un sistema no auto emplo, ELISA), incluyen el substrato al cual el prime ión específico (por ejemplo, un anticuerpo noclonal/policlonal) (o un fragmento del mismo, una íomático o semi-automático (por ejemplo, ARCHITE boratories) puede tener un tiempo de incubación re s corto )por ejemplo, aproximadamente 18 mi CHITEC®). Similarmente, aunque un formato no aut mo ELISA, puede incubar un anticuerpo de detección, activo de conjugado, durante un tiempo de lativamente más largo (por ejemplo! aproximadamente rmato automático o semi-automático (por ejemplo, A ede tener un tiempo de incubación relativamente má emplo, aproximadamente 4 minutos para ARCHITEC®).
Otras plataformas disponibles de Abbott Laboratori ro no se limitan a, AxSYM®, IMx® (ver, por ejemplo, . 5,294,404), PRISM®, El A (perla), y Quantum™ II, así ataformas. Además, los ensayos, equipos y componente eden ser empleados en otros formatos, por e ectroquímicos u otros sistemas de ensayo independi En particular, con respecto a la adaptación de un alito para el sistema l-STAT®, se prefiere la nfiguración . Un chip de silicio micro-fabricado se fab r de electrodos de trabajo amperométricos de oro y u referencia de plata-cloruro de plata. En una de los el bajo, perlas de poliestireno (diámetro 0.2 mm) con anti alito inmovilizado, monoclonal/policlonal (o un fra smo, una variante del mismo, o un fragmento de una smo) o una DVD-ig anti-analito (o un fragmento del rfante del mismo, o un fragmento de una variante del hieren a un recubrimiento de polímero de alcohol polivi electrodo. Este chip se ensambla en un cartucho I-ST rmato de fluido adecuado para inmunoensayo. Una o red de la cámara de soporte de muestra del cartucho e comprende un patrón de unión específico para un mo anticuerpo anti-analito, monoclonal/policlonal (o u cartucho es insertado en el lector l-STAT®. Despué trón de unión específico para un analito se ha dis estra, un elemento de bomba dentro del cartucho estra hacia un conducto conteniendo el chip. Aquí, se ra promover la formación del emparedado. En el pen t ensayo, el fluido es forzado fuera de la bolsa y hacia ra sacar por lavado la muestra del chíp y hacia una sperdicio. En el paso final del ensayo, la marca o sfatasas alcalina reacciona con fosfato de p-amin sdoblar el grupo fosfato y permitir que el p-aminofe a electroquímicamente oxidado en el electrodo sándose en la corriente medida/ eí lector es capaz d ntidad de analito en la muestra a través de un algorit curva de calibración determinada por fábrica.
Si no puede terminar sin antes decir, que los uipos descritos aquí necesariamente abarcan otros timicrobiano, y un detergente. Un diiuyente de strativo es un diiuyente de calibrador humano pleado en ciertos equipos (Abbott Laboratories, Abbo cual comprende un regulador de pH conteniendo ME a bloqueador de proteína, y un agente antimicrobia iño se describe en la Solicitud de Patente de /142,048 presentada el 31 de Diciembre del 2008, tener la generación de una seña! mejorada, por eje rmato de cartucho l-Stat, utilizando una secuenci cleico enlazada al anticuerpo de señal como un amp ñal.
EJEMPLIFICACION emplo 1:Diseño, Construcción v Análisis de una DVD emplo 1.1: Ensayos Utilizados para identificar v ticuerpos Parentaies v DVD-lq sificar anticuerpos que unen un antígeno objetivo alizaron como sigue. Placas de ELISA de unión super star #3369, Acton, MA) se recubrieron con 100 µ?/ca /ml de antígeno objetivo deseado (R&D Systems, Minn dominio extracelular de antígeno objetivo deseado/ sión FC (R&D Systems, Minneapolis, MN) o antic lihistidina de ratón monoclonal (R&D Systems nneapolis, MN) en salina regulada en su pH con fosfat bott Bioresearch Center, Media Prep MPS-073, Wor rante la noche a 4°C. Las placas se lavaron cuatro vec nteniendo 0.02% Tween 20. Las placas se bloquearon adición de 300 ML/cavidad de solución de bloqueo (po n grasa, varios proveedores al menudeo, diluido a 2 rante ½ hora temperatura ambiente. Las placas se iav ces después e bloquear con PBS conteniendo 0.02% T Alternativamente, cien microlitros por cavidad de antígeno objetivo deseado/placa de fusión FC o l ticuerpo anti-poli-Histidina/antígeno objetivo deseado s preparada como se describió anteriormente y se incu ra a temperatura ambiente. Las cavidades se lavaron c n PBS conteniendo 0.0% Tween 20.
Cien microlitros de 10 ng/ml de anticuerpo conjuga pecífico de IgG-FC anti-humano de cabra (Souther 40-05, Birmingham, AL) se agregaron a cada cavidad antígeno objetivo deseado o placa de anticuerp stidina/antígeno objetivo déseado marcado con ternativamente, cien microlitros de 10 ng/ml de njugado con HRP específico de cadena ligera IgG- mano de cabra (Southern Biotech # 2060-05 Birming regaron a cada cavidad de la placa de antíge seado/fusión FC y se incubaron durante 1 hora a biente. Las placas se lavaron 4 veces con PBS conten El Cuadro 4 contiene los datos de unión expresados ra aquellos anticuerpos y construcciones de DVD-lg pro sayo de ELISA de Unión Directa.
En ELISA de Unión Directa, la unión algunas ve servada, ya que el sitio de unión a anticuerpo en jetivo tanto se "etiquetó" o el antígeno se "distorsionó locó como cubierta en la superficie de plástico. La inc a DVD-lg para unir su objetivo también se debe a un térica impuesta en el DVD-lg a través dei formato d ión Directa. Los anticuerpos parentales y las DVD-lg ieron en el formato de de ELISA de Unión Directa s tígeno objetivo en otros formatos de ELISA, tales c acore o bioensayo. La no unión de una DVD-lg también ustarte la longitud del eníazador entre dos dominios var D-lg, como se mostró previamente.
Dominio Extracelular Histidina como objetivo nstrucciones de PVP-fg B029 IL-17A 0.5 VD121 !L-1 b IL-17A 9.78 VD 122 IL-1 7A IL-1b 0.58 B032 IL-1b 2.6 BQU VEGF 2.0 VD 123 IL-1b VEGF 8.2 VD 124 VEGF IL- Ib 3.49 B032 IL-1 b 5.2 RANKL 0.4 VD125 IL-1b RANKL 4.36 VD 126 RANKL IL-tb 0.4 B054 IL-6R 1.2 3018 RANKL 0.2 VD 129 IL-6R RANKL 0.96 VD 130 RANKL IL-6R 0.17 3054 IL-6R 1 .3 B014 VEGF 2.0 VD145 IL-6R VEGF 0.96 VD 146 VEGF IL-6R 0.68 B054 IL-6R 1.4 3029 IL-17A 0.9 VD 147 IL-6R IL-17A 175 VD 148 IL-17A IL-6R 1.37 B029 RANKL 0.0 VDI 65 CD-20 RANKL )V1 )166 RANKL CD-20 0.12 B017 TNF 0.2 VD187 TNF IL -6 0.16 B051 IL-13 5.4 B027 IL-4 5.8 VD267 IL-13 IL-4 5.89 VD268 IL-4 11-13 3.13 B051 1 L-13 31. ?017 TNF 0.2 VD287 TNF CD-20 0.18 VD288 CD-20 TNF La unión de todas las construcciones de DVD-lg s e comparable con aquella de anticuerpos parentales. minios variables N-terminales con una alta afinidad sim ticuerpo parental así como los dominios variables C-te nstrucciones de DVD055, DVD068, DVD125, DVD12 D165, DVD280, y DVD288.
Los Cuadros 5 y 6 contienen datos de ELISA de U ra construcciones DVD-lg que activan secuencias IL-1 adro 5: ELISA de Unión Directa lL-1a de Construcc IL-1a & IL-1B con Varias Secuencias y Eníazadores adro 6: ELISA de Unión Directa IL-?ß de Construcci lL-1a & 1L-1I3 con Varias Secuencias v Enlazadores emplo 1.1.1.B: ELISA de Captura Se incubaron placas de ELISA (Nunc, axiSorp, Ro rante la noca de 4°C con anticuerpo Fe anti-humano S, Jackson Immunoresearch, West Gr ve, PA). Las varon tres veces en regulador de pH de lavado (PBS 05% Tween 20), y se bloquearon durante 1 hora ULTRA-TMB ELISA (Pierce, Rockford, IL). Después de color, la reacción se detuvo con 1N HCI y se midió la 450 nM. emplo 1.1.1.C: Determinación de Afinidad cnoloqía BIACORE adro 7: Reactivo utilizado en Análisis Biacore Ensayo Antígeno Designación de Vendedor Vendedor IL-?ß IL-1a Humana Recombínante Sistemas R&D IL-4 IL-4 Humana Recombínante Sistemas R&D IL-17 IL-17 Humana Recombínante Sistemas R&D VEGF VEGF Humano Recombínante Sistemas R&D RANKL TRAIMCE/RANKL/TNFSF11 Sistemas Humana Recombínante R&D IL-6R IL-6 sR Humana Recombínante Sistemas R&D IL-15 IL-15 Humana Recombínante Sistemas R&D NGF ß-NGF Humano Recombínante Sistemas R&D C = antígeno/proteína de fusión de dominio IgG Fe todos Bl ACORE: El ensayo BIACORE (Biacore, Inc, Piscataway, NI) n idad de anticuerpos o DVD-lg con mediciones c nstantes de velocidad de acción y velocidad sin acció anticuerpos o DVD-lg a un antígeno objetivo (por tígeno objetivo recombinante purificado) se determinó diciones basadas en resonancia de plasmón superfi trumento Biacore® 1000 ó 3000 (Biacore® AB, Upps ilizando HBS-EP corriendo (10 mM HEPES [pH 7.4], 15 mM EDTA, y 0.005% agente tensoactivo P20) a 25°C imicos se obtuvieron de Biacore® AB (Uppsala, Sueci ñera de una fuente diferente como se describe en e mplo, aproximadamente 5000 RU de IgG anti-ratón de ticuerpo policlonal de fragmento específico (Pierce Bi superficie de referencia. Para análisis cinético, las ec locidad derivadas del modelo de unión Langmuir 1:1 s ultáneamente a fases de asociación y disociación ecciones (utilizando un análisis de ajuste global) con ftware Biaevaluation 4.0.1. Los anticuerpos o DVD-lg salina regulada en su pH-HEPES para captura a perficies de reacción específicas de IgG anti-ratón d ectaron anticuerpos o DVD-lg que se captura como 5 g/ml) a través de matrices de reacción a una veloci 5 µ?/min. Las constantes de velocidad de asociación y n (M"V1) y k0ff (s~ ) se determinaron bajo una veloci ntinuo de 25 µ?/minuto. Las constantes de velocidad ciendo mediciones de unión cinéticas a diferentes con antígeno variando de 10 - 200 nM. La constante de di uilibrio (M) de la reacción entre anticuerpos o D tígeno objetivo se calculó después a partir de las co adro 8: Análisis de BIACORE de Anticuerpos P nstrucciones DVD AB053 ígE 1.72E+05 3.38E-03 DVD 109 le E 3.97E+05 4.29E-03 DVD 109 IL-4 4.52E+04 5.03E-04 DVD1 10 IL-4 8.82E+06 7.72E-05 DVD110 IgE 3.05E+04 2.24E-02 AB027 IL-4 5.92E+06 1.30E-04 AB053 IL-13 2.14E+06 1.15E-04 DVD267 IL-13 1.75E+06 8.69E-05 DVD267 IL-4 7.06E+04 3.43E-04 DVD268 IL-4 2.33E+05 1.31 E-03 DVD268 IL-13 7.57E+05 4.46E-04 AB051 IL-13 2.14E+06 1. 5E-04 AB053 le 1.72E+05 3.38E-03 DVD273 IL-13 1.35E+06 1.22E-04 DVD273 IgE 1.27E+04 5.10E-03 DVD274 IgE 3.81 E+Q5 3.72E-03 DVD274 IL-13 119E+05 9.44E-05 AB051 IL-13 7.57E+05 4.46E-04 AB056 IL-9 (SEC. 2) 5.66E+06 5.62E-05 DVD285 IL-9 (SEC. 2) 4.51 E+06 7.50E-05 DVD285 IL-13 03E+05 1.05E-04 DVD286 IL-13 1 ;33E+06 1.77E-04 AB029 IL- 7 1.43E+05 114E-04 AB032 IL-1 B 1.32E+06 1.73E-05 DVD121 IL-1 B 1.22E+06 7.52E-05 DVD 122 IL-17 2.17E+05 6.66E-05 AB029 IL-17 1.43E+05 1.14E-04 AB054 IL 6R 3.36E+05 2.06E-04 DVD147 IL-6R 7.09E+05 1.87E-04 DVD 147 IL-17 3.46E+04 2.00E-03 DVD 148 IL-17 2.06E+05 4.18E-05 DVD148 IL-6R 8.46E+04 3.52E-04 AB032 IL-1 B 1.32E+06 1.73E-05 + - unieron con una alta afinidad similar como el anticuerp emplo 1.1.2: Ensayos usados para Determinar la ncional de Anticuerpos Parentales v DVD-lg emplo 1.1.2. A: Bioensayo de Citocina La habilidad de una anti-citocina o un anticuerpo ctor de antí-crecimiento o DVD-lg conteniendo secuenci ti-citocina o anti-crecimiento para inhibir o neut oactividad de citocina o factor de crecimiento terminando el potencial inhibidor del anticuerpo o emplo, la habilidad de un anticuerpo anti-IL-4 par oducción de IgE mediada por IL-4 puede ser utilizada. aislaron células B naturales humanas a partir riférica, respectivamente, capas ieucocitarias a ntrifugación Ficoll-paque, seguido por separación ma rlas MACS (Miltenyi Biotec, Bergísch Gladbach, adruplicado de titulaciones de anticuerpo empezando rriendo una dilución por triplicado a 29 ng/nl de concen regados en 50 µ? de pre-dilución cuatro veces conce ucír la producción de IgE, se agregaron a cada cavid ng/ml más anticuerpo monoclonal anti-CD40 (Nova iza) a concentraciones finales de 0.5 pg/ml, y las conc IgE se determinaron al final del período de cultivo a t todo de ELISA de emparedado estándar. emplo 1.1.2.B: Ensayo de Liberación de Citocina Se analizó la habilidad de un anticuerpo parental o asionar la liberación de citocina. Se sacó sangre perifé nadores saludables a través de una venopunción cutainer. La sangre entera se diluyó 1:5 con un medi 40 y se colocó en placas de cultivo de tejido de 24 cavi por cavidad. Los anticuerpos antí-citocina (por ejempl nsfirieron a tubos de ensayo y se hicieron girar durant 1200 rpm. Los sobrenadantes libres de célula se reco ngelaron para ensayos de citocina. Las células qu bre las placas y en los tubos se lisaron con 0.5 mi de is, y se colocaron a -20°C y se descongelaron. Se ag del medio (para Negar a un volumen al mismo niv estras de sobrenadante libre de célula) y las prepa lula se recolectaron y se congelaron para ensayos de c brenadantes libres de célula y los lisatos de célula s ra niveles de citocina a través de ELISA, por ejemplo, IL-8, IL-6, IL-?ß, IL-1RA, o TNF-a. emplo 1.1.2.C: Estudio de Reactividad Cruzada d Se analizó la habilidad de un anticuerpo parental an D-lg dirigido a una citoctna(s) de interés para reacció uzada con otras citocinas. Los anticuerpos parentales picamente, se inmovilizaron 5000 Unidades de Resona S EDC-ésteres de matriz sin reaccionar se desactivar una inyección de 1M etanolamina. Se preparó una seg flujo como un estándar de referencia inmoviliza mana utilizando el equipo de acoplamiento de amina e alizaron mediciones de SPR utilizando el chip de bio dos los antígenos que se analizarán en la superficie d diluyeron en regulador de pH de corrida de HBS-EP 0 al 0.01%.
Para examinar la especificidad de unión de citocina exceso de citocina de interés (100 nM, por ejemp ombinante soluble) a través del anticuerpo parental an perficie de biosensor inmovilizada con DVD-lg (tiempo minutos). Antes de la inyección de la citocina d mediatamente después, el regulador de pH de HBS vés de cada célula de flujo. La diferencia neta en 12, !L-13, IL-15, IL-16, IL-17, IL-18, IL-19, IL-20, IL-2 , TNF-a, TNF-ß, y IFN-?. por ejemplo) sobre ta s ferencia !gG1/K de ratón inmovilizada para regtstra tecedente de unión específica. Al preparar una su ferencia y de reacción, Biacore automáticamente s tos de superficie de referencia de los datos de s acción con el fin de eliminar la mayoría del' cambio d fracción y ruido de inyección. De esta manera, terminar la verdadera respuesta de unión atribuida a u unión de anticuerpo anti-citocina o DVD-lg.
Cuando una citocina de interés se inyecta a tr ticuerpo anti-citocina inmovilizado, se observó portante. La regeneración con 10 mM de HCI co mueve todas las proteínas no covalentemente as rnen del sensorgrama muestra que la unión de anti ocina inmovilizado o DVD-lg a citocina soluble es fuert emplo 1.1.2.D: Reactividad Cruzada de Tejido Se realizaron estudios de reactividad cruzada de te apas, la primera etapa incluyendo crio-secciones de 3 gunda etapa incluyendo hasta 38 tejidos, y la te luyendo tejidos adicionales de 3 adultos no relacionad scribe más adelante. Los estudios se realizaron típica eles de dosis.
Etapa 1: se fijaron crio-secciones (aproximadam tejidos humanos (32 tejidos (típicamente de: glánd cto gastrointestinal, próstata, vejiga, corazón quelético, células de la sangre o hematocitos, riñon, ea, hígado, médula espinal, mama, pulmón, aere fático, testículos, corteza cerebral, ovario, timo, colo oides, endotelio, paratiroides, uréter, ojo, pituitaria, út Falopio y placenta) de un donador humano obtenid topsia o biopsia) y se secaron sobre un objeto de vidri ígdala, uréter, vejiga urinaria, y útero) de 3 acionados obtenidos mediante autopsia o biopsia) y bre un objeto de vidrio. Se realizó tinción con peroxi cciones de tejido, utilizando el sistema de avidína-bioti Etapa 3: se fijaron crio-secciones (aproximadam tejidos de mono cinomolgo (38 tejidos (incluyen ngre, vaso sanguíneo, médula ósea, cerebelo, cere ófago, ojo, corazón, riñon, intestino grueso, hígado, p fático, glándula mamaria, ovario, oviducto, páncreas, rvio periférico, pituitaria, placenta, próstata, glándula estino delgado, médula espinal, bazo, estómago, músc stículos, timo, amígdala, uréter, vejiga urinaria, y nos adultos no relacionados obtenidos mediante opsia) y se secaron sobre un objeto de vidrio. Se re n peroxidasa de las secciones de tejido, utilizando el idina-biotina. tígeno-Sepharose como secciones de tejido de contr S estudios de bloqueo de antígeno objetivo y de su vieron como controles adicionales. El complejo in ncentraciones de 2 y 10 pg/ml de anticuerpo o DVD ubó con antígeno objetivo (concentración final de 1 ero humano (concentración final 10%) durante 30 spués se agregaron sobre las secciones de tejido en rio y después las secciones de tejido se hicieron rante 30 minutos con un equipo de avidina-biotina- bsecuentemente, se aplicó DAB (3,3'-diaminoben bstrato para la.reacción de peroxidasa, durante 4 min ción de tejido.
Cualquier tinción específica se juzgó como una perada (por ejemplo, consistente con la expresión del sperada basada en la expresión conocida del antígeno estión. Cualquier tinción juzgada específica se cla rmales o HUVEC (pasaje 2-6) en EBM-2 (Lonz alkersville, MD) suplementado con EGM-2 SingleQu onetics, Walkersville, MD, #CC«4176). Las células locaron en placas a 10,000 células/cavidad sobre pl vidades negras cubiertas con colágeno en EMB-2 (100 0.1% en ausencia de factores de crecimiento. Al día s dios se reemplazaron con FBS al 0.1% en ausencia de ecimiento. Al día siguiente el medio se reemplazó co B-2 (sin factores de crecimiento o suero) y se inc atro horas antes de la adición de VEGF y anticuerpos/D ticuerpos monoclonales anti-VEGF o DVD-lgs (a con ales de 67 nM, 6.7 nM t 0.67 nM) se diluyeron en EM 0.1% y se pre-incubaron con VEGF165 (50 ng/ml) dura °C en 50 µ?. Después se agregaron mezclas de anticu VEGF a las células (50 µ?), y las placas se incubaro a atmósfera húmeda de C02 al 5% durante 72 horas. emplazó con 100 pL de 400 ng/ml (2x concentrado) de regó TNF-a recombinante a las cavidades. Las placas s 37°C, 5% C02 hasta la adición de IL-13 y anticuerpo. trabajo de 20 pg/ml de anticuerpo (4x concentrado) se medio completo F12. Se realizó una dilución en se ntos (5 pg/ml-0.0003 pg/ml) en F12 completo en placas rsh. Se agregaron 60 uL/cavidad de cada dilución d r cuadruplicado a una placa de 96 cavidades con fon v (Costar# 3894) y se agregaron 16 pL de una ncentrada (20 ng/ml) de IL-13 a las cavidades de anti ntrol. Las cavidades de control recibieron 60 pL (IL-1 0 pL (control de célula TNF) de medio. Después de un 1 hora, se agregaron 100 pL de la mezcla de Ab/Ag a i 49. Todos los volúmenes de cavidad fueron iguales a ncentración final de IL-13 recombinante fue de 5 ng/m e de 200 ng/ml. Todos los reactivos de placa adro 9: Ensavo de Neutralización IL-13 con rental IL-13 y Construcciones DVD-lq Todas las DVD-lgs conteniendo VDs de AB051 y Sición N-termina! o C-terminal mostraron neutraliza sayo de neutralización de A549 IL-13. eparó en un medio completo F12. Se realizó una díluc ocho puntos (5 pg/ml-0.0003 Mg/ml) en F12 completo e lución Marsh. Se agregaron 65 uL/cavidad de cada ticuerpo por cuadruplicado a una placa de 96 cavidade forma de v (Costar# 3894) y se agregaron 65 pL de u concentrada (20 ng/ml) de IL-4 a las cavidades de ant ntrol. Las cavidades de control recibieron 65 µ!_ (IL-1 0 pL (control de célula TNF) de medio. Después de un 1 hora, se agregaron 100 pL de la mezcla de AbAAg a 49. Todos los volúmenes de cavidad fueron iguales a ncentración final de IL-4 recombinante fue de 5 ng/m e de 100 ng/mi. Todos los reactivos de placa ncentraron 1 vez. Después de una incubación de 16-2 ntenidos de cavidad (200 pL) se transfirieron a una pla dondo de 96 cavidades (Costar# 3799) y se coloc ngelador a -20°C. Los sobrenadantes se probaron par adro 10. Ensayo de Neutralización de IL-4 con rental IL-4 y Construcciones DVD-lq Todas las DVD-lgs conteniendo VDs de AB207 y sición N-terminal o C-terminal mostraron neutraliza sayo de neutralización A549 IL-4. emplo 1.1.2.H: Bioensavo de IL-?a/ß y Ensayo de Ne Se colocaron en placas células MRC5 a 1.5-2 x 10 volumen de 10 µ? y se incubaron durante la noche IL-1cc o IL-?ß ó 50 pg/ml de IL- a/ß mixta (4x conce pL de medio MEM y las cavidades de control de medi 0 pL del medio. Después de una incubación de regaron 100 pL de la mezcla Ab/Ag a las células MRC lúmenes de la cavidad fueron igual a 200 pL. Todos l placa después se concentraron 1 vez. Después de un 16-20 horas, los contenidos de la cavidad (1 nsfirieron a una placa de fondo redondo de 96 cavidad 99) y se colocaron en un congelador a -20°C. Los so probaron para niveles de hlL-8 utilizando un equipo E mana (R&D Systems, Minneapolis, MN) o MSD hlL-8 imioluminiscencia). La potencia de neutralización s lculando el porcentaje de inhibición con relación a IL-valor de control solo de IL- a/ß (Cuadro 11), adro 11: Ensayo de Neutralización de I L-1 ß con Todas las DVD-lgs conteniendo VDs de AB032 en la a N-terminal o C-terrnina! mostraron neutralización en e utralízación MRC5 IL-??a/ß. emplo 1.1.2.1: Ensayo de pSTAT3 inducido por IL-6 Se cultivaron células TF-1 en DMEM con 2 m M de mM HEPES, 100 U/ml de Pen/strep, 1.5 g/l de bic dio, 4.5 g/l de glucosa, 1 mM de piruvato de sodio, FB /ml de GM-CSF. Las células se colocaron en placas a lulas por cavidad en un volumen de 10 pL y se incuba noche a 37°C, 5% C02 en medio de ensayo (DME nos GM-CSF). Las células se colocaron en placas en u sayo blanca de 96 Vi cavidades. Un material de 0 Mg/ml de anticuerpo (4x concentrado) se preparó e ticuerpos y las DVD-lgs se diluyeron en serie 1:5 en sayo en placas de dilución de Marsh. Se agregaron 5 vidades y las placas se agitaron durante 10 minutos a biente. Las placas se congelaron a -20°C y se corri TAT3 SureFire (Perkin Elmer).
La placa se descongeló a temperatura ambiente y se cada cavidad, 30 pL/cavidad de Regulador de pH de r a mezcla de Regulador de pH de Activación conteniend eptor Alpha Screen Acceptor Beads (40 partes de regu reacción, 10 partes de regulador de pH de activación rlas de aceptor). La placa se selló con hoja de al otegerla de la luz y se agitó moderadamente durant °C. Se agregó, a cada cavidad un regulador de pH 2.5 L/cavidad) conteniendo las perlas Donadoras Al 0 partes de regulador de pH de dilución a 1 part nadoras). La placa se selló con hoja de aluminio deradamente durante 2 horas a 37°C. La placa mperatura ambiente y se leyó en el lector de placa A adro 12. Ensayo de Inhibición de IL-6 con Anticuer -6R y Construcciones PVP-lg Todas las DVD-lgs conteniendo VDs de AB054 y sición N-terminal o C-terminal mostraron neutraliza sayo de inhibición de IL-6. emplo 1.1.2J: Bioensavo de IL-17 v Ensayo de Neutr La línea de célula HS27 humana (ATCC #CRL-1634) sayo. La IL-17 humana (R&D Systems, #317-IL/CF) se PBS estéril sin Ca2 y g2+ almacenados cientemente descongelados para uso y se diluyeron X) en el medio de ensayo. Se hicieron diluciones ticuerpos en una placa por separado (concentráci zclaron con un volumen igual de 40 ng/ml (4X) de hu ubaron a 37°C durante' 1 hora. Se agregaron cé picamente alrededor de 20,000 células en 50 µ? d sayo) a cada cavidad de una placa de cultivo de teji no de 96 cavidades (Costar #3599), seguido por la µ? del anticuerpo pre-incubado más la mezcla d ncentración final de IL-17 es de 10 ng/ml. Las células s rante aproximadamente 24 horas a 37°C, Los sobreñ dio después se recolectaron. El nivel de neutralizaci e medido determinando la cantidad de IL-6 en el s ilizando un equipo Meso Scale Discovery de acuer adro 13. Ensayo de Neutralización de IL-17 con rental IL-17 y Construcciones PVD-lg Todas las DVD-lgs conteniendo VDs de AB029 y sición N-terminal o C-terminal mostraron neutraliza sayo de neutralización de IL-17. emplo 1.1.2. K: Neutralización de huTNFa ensayo. Se agregó una muestra de anticuerpo (200 µ?_ 00 \ L) en un esquema de dilución 1:2 y se dejó incubar ras a temperatura ambiente.
La solución de DVD-lg™/huTNFoe se agregó a las c aca a 100 µ?_ para una concentración final de 100 pg/ml 25 nM - 0.00014 nM DVD-lg™. Las placas se incubaron ras a 37°C, 5% C02. Para cuantificar la viabilidad, se 0 [iL de las cavidades y se agregaron 10 L del rea oche cat# 11644807001). Las placas se incubaro ndiciones del ensayo durante 3.5 horas, se centrifugar 75 ML de sobrenadante se transfirieron a una plac ostar cat#3369). Las placas se leyeron a OD 420-60 ctor de placa Spectromax 190 ELISA. Una EC50 promed sayos se incluye en el Cuadro 14, adro 14. Ensayo de neutralización HuTNFoc con Todas las DVD-tgs conteniendo VDs de AB017 y sición N-terminal o C-terminal mostraron neutraliza sayo de neutralización de TNFa. emplo 1.1.2.L: Efecto Inhibidor de Crecimien ticuerpo iVIonoclonal de Receptor de Tumor o DVD-lq utilizaron sin tratamiento de anticuerpo como controle hibición mientras que las cavidades sin células se co straron un 100% de inhibición. emplo 1.1.2.M: Efecto Tumoricida de un Anticuerpo P-fg in Vítro Los anticuerpos parentales o DVD-lg que se unen jetivo en células tumorales pueden ser analizados pa moricida. En resumen, los anticuerpos parentales o luidos en D-PBS-BSA (salina regulada en su pH con lbecco con BSA al 0.1%) y se agregaron a célula manas a concentraciones finales de 0.01 pg/ml a 1 0 pg/ml. Las placas se incubaron a 37°C en una atmó 2 humedecida durante 3 días. El número de células vi vidad es cuantificado utilizando reactivos MTS de acu strucciones del fabricante (Promega, Madison, Wl) par bleta de coctel de inhibidor de proteasa; libre de E armaceuticals, Nutiey, NJ) a temperatura ambiente c rante 20 minutos. Después de la iisis de célula, se agr un regulador de pH de reacción de caspasa-3 (48 m 5, 252 mM sacarosa, 0.1% CHAPS, 4 mM DTT, y bstrato Ac-DEVD-AMC; Biomol Research Labs, Inc. eting, PA) y las placas se incubaron durante 2 horas acas se leyeron en un Contador de Etiquetas Múl CTOR (Perkin Elmer Life Sciences, Downers, Grove, I s siguientes parámetros: excitación = 360/40, emisión = cremento de unidades de fluorescencia de células t ticuerpo con relación a las células tratadas con ticuerpo de isótopo es indicativo de apoptosis. emplo 1.1.2. N: Inhibición de Proliferación de Célu ticuerpo Parental v Construcciones DVD-lg ) de acuerdo con las instrucciones del fabricante. emplo 1.1.2.0: Anticuerpo Parental VEGF y Con D-lg Evita la Interacción de VEGFifis con VEGFR1 Se incubaron placas de ELISA (Nunc, MaxiSorp, Ro rante la noche a 4°C con 100 µ? de PBS conteniendo sión de dominio Fe extracelu!ar de VEGFR1 recombinan D Systems, Minneapolis, MN). Las placas se lavaron tr guiador de pH de lavado (PBS conteniendo 0.05% Twe oquearon durante 1 hora a 25°C en regulador de pH BS conteniendo BSA al 1%). Se incubaron diluciones da anticuerpo/DVD-lg en PBS conteniendo BSA al 0.1 2 nM de VEGF bíotinilado durante 1 hora a 25°C. Las ticuerpo/VEGF DVD-lg bíotinilado (100 µ?) se agregaro s cavidades cubiertas con VEGFR1-Fc y se incuba rante 10 minutos. Las cavidades se lavaron tres veces 96 cavidades a 40,000 células/cavidad en 180 µ? de suero (DMEM + BSA al 0.1%), y se incubaron durante °C, 5% C02. Las placas de Costar El A (Lowell, MA) s n 100 µ?/cavtdad de Ab de captura de recepto ncentración final), y se incubaron durante la noche a biente mientras se agitaba. Al día siguiente, las plac biertas con anticuerpo receptor se lavaron (tres veces 5% Tween 20 en PBS, pH 7.2 - 7.4), y se agregaro lución de bloqueo (1% BSA, 0.0% NaN3 en PBS, pH 7. quear durante 2 horas a temperatura ambiente en u S células tumoraies humanas se co-incubaron con an D-lgs y ligando. Anticuerpos monoclonales o DVD-lg d S-BSA (salina regulada en su pH con fosfato de Dulbe 0.1%) se agregaron a células de carcinoma ncentraciones finales de 0.01 pg/ml - 100 pg/ml. Simul agregaron factores de crecimiento a las células a conc uíente, las placas de ELISA se lavaron, y se agr cavidad de Ab de detección pTyr-HRP (equipo p-IG D System #DYC1770, inneapolis, MN), y las placas S rante 2 horas a 25°C en la oscuridad. Las placas se d ra determinar la fosforilación de acuerdo a las instru bricante. emplo 1.1.2.Q; Inhibición de Fosforilación de VEGF vés de Anticuerpo Parental VEGF y Construcciones Se colocaron en placas células NIH3T3 expresan mano (KDR) a 20,000 células/cavidad (100 µ?) en p vidades en DMEM suplementado con FBS ai 10%. Al dí s células se lavaron dos veces con DMEM y se privar rante 3 horas en DMEM sin FBS. El anticuerpo parenta DVD-lgs (a concentraciones finales de 67 nM, 6.7 nM luido en DMEM con BSA al 0.1% se pre-incubaron c ubaron a 25°C con agitación moderada durante dos vidades se lavaron cinco veces con regulador de p BS conteniendo 0.05% Tween 20), y se incubaron con lucíón 1:2000 de anticuerpo anti-fosfotirosina biotinil llipore, Billerica, MA) durante 1 hora a 25°C. Las c aron cinco veces con PBS conteniendo 0.05% T spués se incubaron durante 1 hora a 25°C con estrept PL #474-3000, Gaithersburg , MD). Las cavidades se ces con estreptavidina-HRP (KPL #474-3000, Gaithers s cavidades se lavaron tres veces con PBS content een 20, y 100 µ? de ULTRA-TMB ELISA (Pierce, Rock regaron por cavidad. Después del desarrollo de color, detuvo con 1N HCI y se midió la absorbancia a 450 nM emplo 1.1.2.R: Eficacia de una DVD-íq en el Crec noiniertos de Flanco Subcutáneo de Carcinoma Hum mores se midieron tres veces en una semana, roximadamente en eí día 10 después de la inyecció moral. emplo 1.1.2.S: Unión de Anticuerpos onoclon perficie de Líneas de Célula Tumoral Humana seaú r Citometría de Flujo Líneas de célula estable sobre-expresando un perficie celular de interés o líneas de célula tumoral secharon a partir de matraces de cultivo de tejido y se spender en salina regulada en su pH con fos nteniendo suero de bovino fetal al 5% (PBS/FBS). ción, se incubaron células tumorales humanas sobre hi mana (100 µ?) a 5 pg/ml en PBS/FCS. Se incubaron uías con anticuerpo o DVD-lg (2 pg/ml) en PBS/FBS du nutos sobre hielo. Las células se lavaron dos veces y s . an). Con los datos de registro transformado, la media utilizó para normalizar la carga de la distribución d uíente cuadro contiene la media geométrica de ticuerpos parentales y construcciones de DVD-lg. adro 15: Clasificación de Célula Activada Fluor nstrucc io nes DVD-lg Anticuerpo Dominio Dominio Media Geométrica M Parental o ID Variable N- Variable C- de FACS N- DVD-lg terminal (VD) terminal (VD) terminal B024 AlfaVbeta3 20.19 VD067 TNF AlfaVbeta3 VD068 AlfaVbeta3 TNF 0.48 B054 IL-6R 5.94 VD 129 IL-6R RANKL 8.43 VD 130 RANKL IL-6R 3054 IL-6R 5.94 VD 145 IL-6R VEGF 8.23 Todas las DVDs mostraron unión a sus objetivos d lular. Los dominios N-terminales de DVDs unieron s bre la superficie celular así como o mejor que el rental. La unión puede ser restaurada o mejorada a gitud de enlazador, emplo 1.1.2.T: Unión de Anticuerpo de Receptor nstrúcciones PVD-lq a la Superficie de Líneas moral Humanas según Valorado a través de Citometr Líneas de célula estable sobre-expresando rec perficie celular o líneas de célula tumoral humanas se partir de matraces de cultivo de tejido y se volvieron salina regulada en su pH con fosfato de Dulbe nteniendo suero de becerro fetal al 1% (DPBS/FCS). S 5 x 105 células con 100 pL de anticuerpos o DVD-lgs (1 BS/FCS durante 30-60 minutos sobre hielo. Las célula empto 1.2: Generación de Anticuerpos M rentales para un Antigeno Humano de Interés A continuación se presenta como se obtuvieron mA rentales capaces de unión a y neutralizar un antígeno terés y una variante del mismo: emplo 1.2. A: Inmunización de Ratones con un mano de Interés Se inyectaron, subcutáneamente, veinte micro tígeno humano purificado recombinante (por ejem zclados con auxiliar completo de Freund o auxiliar iagen, Valencia, CA) a cinco ratones Balb/C de 6-8 ad, y cinco ratones AJ, en el Día 1. En los días 24, yectaron, simultáneamente, a los mismos rato icrogramos de variante de antígeno humano combinante mezclado con auxiliar incompleto de Freun oductos de fusión se colocaron en placas en un medio nteniendo azaserina e hipoxantina en placas de 96 a densidad de 2.5 x 106 células de bazo por cavidad. te a diez días de la fusión, se observaron colonias d croscópicos. El sobrenadante de cada cavidad lonias de hibridoma se probó a través de ELISA para anticuerpo para el antígeno de interés (como se de emplo 1.1.1. A). Los sobrenadantes que exhibe pecífica de antígeno, después se probaron para la acti describe en los ensayos del Ejemplo 1.1.2), por bilidad de neutralizar el antígeno de interés en un bi mo aquel descrito en el Ejemplo, 1.1.2.1). emplo 1.2.C: Identificación v Caracterización de noclonales Parentales para un Antígeno Objetivo terés 1.2.1. Los anticuerpos de producción de hibridomas co 50 en el bioensayo menores que 1000 pM, en una nores que 100 pM se escalaron y se clonaron a través limitación. Las células de hibridoma se expandieron teniendo suero de bovino fetal a! 10% con bajo conte yclone #SH30151, Logan, UT). En promedio 250 brenadante de hibridoma (derivado de una población secharon, se concentraron y se purificaron a omatografía de afinidad de proteína Af como se d rlow, E. y Lañe, D. 1988 "Antibodies: A Laboratory bilidad de los mAbs purificados para inhibir la acti tígeno objetivo se determinó, por ejemplo, utilizando e citocina como se describe en el Ejemplo 1.1.2.1. emplo 1.2.C.2: Análisis de Reactividad Cr ticuerpo onoclonal Parental para Antígeno de aetí vidad para antígeno humano) se selección racterización futura. emplo 1.2.D: Determinación de la Secuencia de Ami región Variable para cada Anticuerpo Monoclonal A Murino El aislamiento de los ADNcs, expresión y caracteriz bs de ratón anti-humanos recombinantes se condujo ra cada determinación de secuencia de roximadamente 1 x 106 células de hibridoma se aislar ntrif ugación y se procesaron para aislar el ARN tota ibco BRL/Invitrogen, Carlsbad, CA) siguiendo las instr bricante. El ARN total se sometió a síntesis de ADN tructura de cadena utilizando el sistema Superscript nthesis System (Invitrogen, Carlsbad, CA) sig strucciones del fabricante. Se utilizó oligo(dT) par PCR de colonia en los transformantes para identi teniendo un inserto. El ADN de plásmido se aisló d nteniendo inserto utilizando un equipo QIAprep Minipr lencia, CA). Los insertos en los plásmidos se secu bas estructuras de cadena para determinar las secuen cadena pesada variable o de cadena ligera variabl ¡dadores de avance M13 y de reversa M13 (Fer iences, Hanover MD). Se identificaron secuencias sada variable y de cadena ligera variable de los m dalidad, los criterios de selección para un pane ncipales para el siguiente paso de desarrollo (hu cluyen los siguientes: El anticuerpo no contiene ningún sitio de g I ic lazado (NXS), excepto de uno de estructura de cadena El anticuerpo no contiene ninguna cisteína extra ad steínas normales en cada anticuerpo material de células COS o de células 293 La secuencia de proteína se verificó para desamidación de Asn que puede dar como resultad de actividad El anticuerpo tiene un bajo nivel de agregación El anticuerpo tiene una solubilidad >5-10 mg/ml (e investigación); >25 mg/ml El anticuerpo tiene un tamaño normal (5-6 nm) Diseminación de Luz Dinámica (DLS) El anticuerpo tiene una heterogeneidad de carga baj El anticuerpo carece de liberación de citocina ( 1.1.2.B) El anticuerpo tiene especificidad para la citocina (ver Ejemplo 1.1.2.B) El anticuerpo carece de reactividad cruzada inesperada (ver Ejemplo 1.1.2.D) i fragmento de ADNc que codifica la región constan mana conteniendo 2 mutaciones de aminoácido de regi través de recombinación homologa en bacterias. Esta n un cambio de leucina a alanina en la posición 234 ) y un cambio de leucina a alanina en la posición 235 91, J. Immunol., 147:2657). La región constante de c cada uno de estos anticuerpos se reemplaza por una r mana- Los anticuerpos quiméricos de longitud co sajeramente expresados en células COS a trav nsfección de ADNcs de cadena pesada y ligera quimér plásmido de expresión pBOS (Mizushima y Nagat'a, search 1990, Vol 18, pág 5322). Los sobrenadante teniendo el anticuerpo quimérico recombinante se p vés de cromatografía de Proteína A Sepharose y e! ido se eluyó a través de la adición de regulador de p ticuerpos se neutralizaron y se díalizaron a PBS. acore) y para actividad funcional, por ejemplo, par oducción de I g E inducida por citocina como se desc emplos 1.1.1.G y 1.1.2. B. los mAbs quiméricos que tividad de los mAbs de hibridoma parentales se selec sarrollo futuro. emplo 1.2.2.2: Construcción v Expresión de rentafes Anti-humanos Humanizados emplo 1.2.2.2. A: Selección de Estructuras de ticuerpo Humano Cada secuencia de gen de cadena pesada variabl era variable de murino se alineó separadamente cuencias de cadena pesada variable de línea ger cuencias de cadena ligera variable de línea g munoglobulina humana (derivadas del sitio web NCBI tp://www.ncbi.ním .noh.gov/re trieveig.html.) utilizando señaron estrategias de humanización adicionales basá álisis de secuencias de anticuerpo de línea germinal subgrupo de las mismas, que poseen un alto grado de decir, similitud de secuencia, a ia secuencia de ami las regiones variables de anticuerpo de murino.
La modelación de homología se utiliza para identifi icos a ias secuencias de anticuerpo de murino que s e son críticos para la estructura del sitio de com ticuerpo, las CDRs. La modelación de homología es mputacional mediante el cual se generan dimensionales aproximadas para una proteína. La ordenadas iniciales y guía para su refinación ad icio gunda proteína, la proteína de referencia, para l nocidas las coordenadas tridimensionales y la secue ales se relaciona con la secuencia de la primera lación entre las secuencias de las dos proteínas se nsistencia con las coordenadas de modelo ya transf tructura de proteína computacional además puede se pleada directamente en estudios de modelación. La c tructura de modelo se determina a través de la exa ntención con la que las proteínas de referencia y ob acionadas y la precisión con la cual se construye la al cuencia.
Para mAbs de murino, se utiliza una combinación d AST e inspección visual para identificar estructuras d ecuadas. La identidad de secuencia de 25% entre las aminoácido de referencia y objetivo se considera cesario para intentas un ejercicio de modelación de s alineaciones de secuencia se construyen manualr neran coordenadas de modelo con el programa Jackal ( et al. (2003) Proteins 53 (Suppl. 6): 430-435).
Las secuencias primarias de las regiones de es adro 16: Secuencia de Dominio Constante sada y de Dominio Constante de Cadena Ligera de I tención del residuo de murino en el anticuerpo hum cir, retro-mutación).
Los anticuerpos humanizados construidos in nstruyen utilizando oligonucleótidos. Para cada ADN riable, se diseñan 6 oligonucleótidos de 60-80 nucle siaparse entre sí por 20 nucleotidos en el extremo da oligon ucleótido . En una reacción de clasífica igonucleótidos se combinan, hierven y se clasifican e dNTPs. Se agregó ADN polimerasa I, fragmento gran ew England Biolabs #M0210, Beverley, MA.) para llena roximadamente 40 bp entre ios oligonucleótidos trasl alizó la PCR para amplificar el gen de región de vari ilizando dos iniciadores muy extremos conteniendo lgantes complementarias al sitio de clonación múltiple OS modificado ( izushima,. S. y Nagata, S. (1990) N s. 18: 17). Los productos de PCR derivados de cada era variable se insertó en marco con la región cons rnana a través de recombinación homologa. Se aislar cterianas y el ADN de plásmido se extrajo. Los insert secuenciaron en su totalidad. Las cadenas pesada manizadas correctas que corresponden a cada anticu nsfectaron en células COS para ^producir pa ticuerpos anti-humanos humanizados de longitud co brenadantes de célula conteniendo un anticuerpo combinante se purificaron a través de cromatografía d pharose y el anticuerpo unido se eluyó a través de l gulador de pH ácido. Los anticuerpos se neutrali alizaron en PBS. emplo 1.2.2.3: Caracterización de Anticuerpos H Se determinó la habilidad de los anticuerpos rificados para inhibir una activad funcional, por ejempl eron caracterizados. emplo 1.2.2.3. A: Análisis Farmacocinético de manizados Se realizaron estudios farmacocinéticos en rata wiey y monos cinomolgos. Se dosificaron, intr bcutáneamente, ratas macho y hembra y monos cino a sola dosis de 4 mg/kg de, mAb y se analizaron l ilizando ELISA de captura de antígeno, y se deter rámetros farmacocinéticos a través de anális mpartimento. En resumen, las placas de ELISA se cu ticuerpo anti-biotina de cabra (5 mg/ml, 4°C, durante l oquearon con Superblock (Pierce), y se incubaron c mano biotinilado a 50 ng/ml en Superblock TTBS mperatura ambiente durante 2 horas. Las muestras ? luyeron en serie (0.5% suero, Superblock al 10% en celente biodisponibilidad 50-100%). emplo 1.2.2.3.B: Análisis Físico-Químico y Est tro de Anticuerpos Monocionales Humanizados omatografía de exclusión de tamaño Se diluyeron anticuerpos a 2.5 mg/ml con agua alizaron en un sistema Shima&zu HPLC utilizando una 000 SWXL de gel TSK (Tosoh Bioscience, cat# k55 uyeron muestras de la comuna con 211 mM de sulfato de fosfato de sodio, pH 7.0, a una velocidad de /minutos. Las condiciones de operación del sistema H uientes: se móvil: 211 mM Na2S04, 92 mM Na2HP04*7 adíente: Isocrático locidad de flujo: 0.3 mi /minuto tector de longitud de onda: 280 nm adro 17: Pureza de Anticuerpos Pare nstrucciones de PVD-lg según Determinado a omatografia de Exclusión de Tamaño Las DVD-lgs mostraron un excelente perfil de yoría de las DVD-lg mostrando >90% de monómero. E n 100 mM DTT, y se calentaron a 60°C durante 30mi diciones de no reducción, las muestras se mezclar gulador de pH de muestra y se calentaron a 100° nutos. Las muestras reducidas (10 mg por carril) se car l de tris-glicina pre-colado al 12% (Invitrogen, cat# te # 6111021), y las muestras no reducidas (10 mg p rgaron en un ge! de tris-glicina pre-colado al 8%-16% t# EC6045caja, lote # 6111021). Se utilizó Se vitrogen, cat# LC5925, lote # 1351542) como un marca lecular. Los ge!es se corrieron en una caja de gel de ell SureLock (Invitrogen, cat# EI0001) y las pr pararon aplicando primero un voltaje de 75 para uestras en el gel, seguido por un voltaje constante d e el colorante frontal llegó al fondo del gel. El regulad rrida usado fue regulador de pH 1X tris-glicina SDS, rtir de un regulador de pH 10X tris-glicina SDS (AB ctores. Estas piezas centrales tiene una longitud de tica de 1.2 centímetros y se construyen con ventanas d ilizó PBS para un reguiador de pH de referencia y C ntuvo 140 µ?. Todas las muestras se examinaron simu ilizando un rotor de 4 agujeros (??-60??) en una ult ialítica Beckman ProteomeLab XL-I (serie # PL106C01).
Las condiciones de operación se programaron y s ntrol de centrífuga utilizando ProteomeLab (v5.6). Las rotor se dejaron equilibrar térmicamente durante un álisis (20.0 +.0.1°C). Se realizó la confirmación de car ropiada a 3000 rpm y se registró una escaneada indi da célula. Las condiciones de velocidad de sedime iño sigue: lumen de célula de muestra: 420 mi lumen de célula de referencia: 420 mi mperatura: 20°C edición de peso molecular LC-MS de anticuerpos inta Se analizaron los pesos moleculares de anticuerpo vés de LC-MS. Cada anticuerpo se diluyó a aprox mg/ml con agua. Se utilizó un sistema 1100 HPLC (Agü icro-trampa de proteína (Michrom Bioresources, 4/25109/03) para desalar y se introdujeron 5 mg de la espectrómetro masivo API Qstar pulsar i (Applied Bios ilizó un gradiente corto para eluir las muestras. El rrió con una fase móvil A (0.08% FA, 0.02% TFA en ag una fase móvil B (0.08% FA y 0.02% TFA en acetoni locidad de flujo de 50 ml/minuto. El espectrómetro mas un voltaje de aspersión de 4.5 kvoltios con una escala 2000 a 3500, relación de masa a carga, edición de peso molecular LC-MS de cadenas ligera ticuerpo °C. Se utilizó un sistema Agilent 1100 HPLC con una ydac, cat# 214TP5115, S/N 060206537204069) para roducir la muestra (5 mg) en un espectrómetro masiv lsar i (Applied Biosystems). Se utilizó un gradiente cort muestra. El gradiente se operó con una fase móvil A 02% TFA en agua de HPLC) y una fase móvil B (0.08% A en acetonitrilo) a una velocidad de flujo de 50 m pectrómetro masivo se operó a un voltaje de asper oltios con una escala de escaneo de 800 a 3500, relaci carga. peo de péptido El anticuerpo se desnaturalizó durante 15 mperatura ambiente con una concentración final de 6M guanidina en 75 mM bicarbonato de amonio. La snaturalizadas se redujeron con una concentración fin peo de péptido con detección de espectrómetro pararon 40 mi de tas digestiones a través de crom uido de alto rendimiento de fase inversa (RPHPL lumna C18 (Vydac, cat# 218TP51, S/N NE9606 10. tema Agilent 1100 HPLC. La separación de péptido s gradiente utilizando una fase móvil A (0.02% TFA y 0 ua de HPLC) y una fase móvil B (0.02% TFA y 0. etonitrilo) a una velocidad de flujo de 50 mi pectrómetro masivo API QSTAR Pulsar i se operó sitivo a un voltaje de aspersión de 4.5 kvoltíos y un caneo de 800 a 2500, relación de masa a carga. apeo de Enlace de Disuifuro Para desnaturalizar el anticuerpo, se mezclaron- ticuerpo con 300 mi de 8 M HCI de guanidina carbonato de amonio. El pH se verificó para asegur icionales de tripsina o Lys-C a las muestras y la díges oseguir durante 2 horas más a 37°C. Las digestiones s regando 1 mi de TFA a cada muestra. Las muestras pararon a través de RPHPLC utilizando una columna t# 218TP51 S/N N E020630- 1 - 1 A) en un sistema Agüe paracíón se operó con el mismo gradiente utilizado pa péptído utilizando una fase móvil A (0.02% TFA y 0 ua de HPLC) y una fase móvil B (0.02% TFA y 0. etonitrilo) a una velocidad de flujo de 50 ml/ ndicíones de operación de HPLC fueron iguales lízadas para ei mapeo de péptído. El espectrómetro TAR Pulsar i se operó en un modo positivo a un persíón de 4.5 kvoltios y a una escala de escaneo de lación de masa a carga. Se asignaron enlaces d ciend'o coincidir los MWs observados de los péptidos c onosticados de péptído trípticos o Lys-C unidos a DTNB + RSH ® RS-TNB + TNB- + H + La absorbancia del TNB- se midió a 412 nm ut pectrofotómetro Cary 50, Se trazó una curva de ilizando diluciones de 2-mercaptoetano! (b-ME) como SH libre y se determinaron las concentraciones de ífhidrilo libre en la proteína a partir de la absorbancia muestra.
Se preparó un abastecimiento del estándar b-ME a dilución en serie de 14.2 M b-ME con agua de grado ncentración final de 0.142 mM. Después, se prepararon r triplicad para cada concentración. El anticuerpo se mg/ml utilizando un filtro de centrífuga amicon ultra 1 illipore. cat# UFC801096, lote # L3KN5251) y el regu cambió al regulador de pH de formulación util alimumab (5.57 mM fosfato de sodio monobásico, 8.69 cantidad de SH libre y OD4 2 nm de los estándares d Iculó el contenido de SH libre basándose en esta curva substracción del manto. omatografía de Intercambio de Catión Débil El anticuerpo se diluyó a 1 mg/ml con 10 mM fosfat 6.0. Se analizó la heterogeneidad de carga utilizando imadzu HPLC con una columna analítica WCX-10 ProP t# 054993, S/N 02722). Las muestras se cargaron en la % de fase móvil A (10 mM fosfato de sodio, pH 6.0) y 2 vil B (10 mM fosfato de sodio, 500 mM NaClt pH 6.0) y na velocidad de flujo de 1.0 ml/minuto. rfil de Oligosacárido Los oligosacáridos libreados después del tratamient anticuerpo se dertvatizaron con el reactivo de m regó salina regulada en su pH con fosfato para dar a I de 60 mi. La muestra se incubó durante la noche a mo-mezclador Eppendorf fijado a 700 RPM. alimumab, lote AFP04C, fue digerido con PNGase trol.
Después del tratamiento con PNGase F, las m ubaron a 95°C durante 5 minutos en un term pendorf fijado a 750 RPM para precipitar las proteín muestras se colocaron en una centrifuga de Eppendo nutos a 10,000 RPM para hacer girarlas proteínas prec brenadante conteniendo los oligosacáridos se transfiri Eppendorf de 500 mi y se secó en un velocidad-vac a Los oligosacáridos se marcaron con 2AB utilizand marcación 2AB comprado en Prozyme (cat# GKK-2026). El reactivo de marcación se preparó de acue trucciones del fabricante. Se agregó ácido acétic acción se colocaron en un termo-mezclador de Eppend °C y 700-800 RPM durante 2 horas de reacción.
Después de la reacción de marcación, se removió e orante fluorescente utilizando cartuchos GlycoClean S t# GKI-4726), Antes de la adición de las muestras, lo lavaron con 1 mi de agua Milii-Q seguido por 5 lavado a solución de ácido acético al 30%. Justo antes de estras, se agregó 1 mi de acetonitrilo (Burdick and Ja 015-4) a los cartuchos.
Después de que todo el acetonitrilo se hizo pasar rtucho, la muestra se salpicó sobre el centro cientemente lavado y se dejó absorber en el disco nutos. El disco se lavó con 1 mi de acetonitrilo seguid ados de 1 mi de acetonitrilo al 96%. Los cartuchos s bre un tubo de Eppendorf de 1.5 mi y los oligosacárido n 2-AB se eluyeron con 3 lavados (400 mi cada lava dio monobásico, 8.69 mM fosfato de sodio dibásico, CI, 1.07 mM citrato de sodio, 6.45 mM ácido cítrico nitol, 0.1% (p/v) Tween, pH 5.2; ó 10 mM histidi tionina, 4% manitol, pH 5.9, utilizando filtros de ult icon. La co.ncentración final de los anticuerpos se /ml con ios reguladores de pH apropiados. Las so ticuerpo después se esterilizaron mediante filtro y se 5 mi de alícuotas bajo condiciones estériles. Las a jaron ya sea a -80°C, 5°C, 25^0, ó 40°C, durante manas. Al final del período de incubación, las alizaron mediante cromatografía de exclusión de tam GE.
Las muestras de estabilidad se analizaron a trav GE bajo condiciones tanto de reducción como de no r ocedimiento utilizado fue igual al descrito aquí. Lo eron durante la noche con tinción azul coloidal (Invi mplo 1.2.2.3.C: Eficacia de un Anticuerpo manizado Por Sí Mismo o en Combinación con Qu bre el Crecimiento de Xenoiniertos de Carcinoma Hu Se desarrollaron células cancerosas humanas in vit viabilidad, 85% de confluencia en matraces de cultiv marcaron en la oreja y se rasuraron ratones SCI cho (Charles Rivers Labs) a 19-25 gramos. Después ron inoculados subcutáneamente en el flanco derecho 2 x 106 células tumorales humanas (1:1 matrigel) en tud io . La administración (!P, G3D/semana) de vehí ticuerpo humanizado, y/o quimioterapia se inició desp ratones se hicieron coincidir por tamaño en jaulas s ones con volúmenes medios de tumor de aproximada 0 mm3. Los tumores se midieron a través de un par de S veces a la semana, empezando aproximadamente spués de la inoculación y los volúmenes de tumor se c sangYe periférica aisladas previamente congeladas vés de una columna de enriquecimiento de selecc-i &D Systems, Minneapolis, MN; Cat.# HTCC-523). Las timularon durante 4 días en matraces (tapa de rning, Acton, MA) cubiertos con 10 pg/ml de anti-C ioscience, Inc., San Diego, CA) y 2 pg/ml de anti-CD ioscience, Inc., San Diego, CA) en D-PBS (Invitroge ) y se cultivaron en 30U/ml de IL-2 (Roche) en un me 40 completo (Invitrogen, Carlsbad, CA) con L-glutam ME, Pen/Strep, 10% FBS). Después, las células T posar durante la noche en 30U/ml de IL-2 antes de util sayo. Las células objetivo DoHH2 o Raji se marcaron igma-Aldricht St. Louis, MO) de acuerdo con las instr bricante. A través de todo el ensayo de rCTL, se utilí MI 1640 (sin fenol, Invitrogen, Carlsbad, CA) con tamina y 10% FBS (Hyclone, Logan, UT). (Ver, Dreier % (Invitrogen, Carlsbad, CA), azida de sodio al 0.1% yoduro de propidio (BD) en D-PBS. Los datos d olectaron en una máquina FACS Canto M (Becton Dic se, CA) y se analizaron en Flowjo (Treestar). El po jetivos vivos en las muestras tratadas con DVD-lg divid rcentaje total de objetivos (control, sin tratamiento) ra determinar el porcentaje específico de lisis. Se ca lores de IC50s en Prism (Graphpad).
Se probó CD3/CD20 DVD-lg para toxicidad redirigi iquilación de tumor in vítro con un valor de IC50 = cuencia de este CD3 / CD20 DVD-lg se describió en la tente de E.U.A. Serie No. 20070071675. emplo 1.4: Generación de una DVD-lg Se construyeron moléculas de DVD-lg capaces d tígenos, utilizando dos anticuerpos monoclona!es pare erentes orientaciones de dominio: VA-VB-C y VB-VA-C ). Las secuencias enlazadoras, derivadas de la se minal del dominio Cl/Ck o CH1 humano, son como sigu Para construcciones DVDAB: Cadena ligera (si anti-A tiene ?): Enlazador cort EC ID NO: 15); Enlazador largo: QPKAAPSVTLFPP(SEC Cadena ligera (si anti-A tiene ?): Enlazador corto: T NO: 13); Enlazador largo: TVAAPSVFIFPP (SEC ID NO: Cadena pesada (?1): Enlazador corto: ASTKGP ( ); Enlazador largo: ASTKGPSVFPLAP (SEC ID NO: 22) Para construcciones DVDBA: Cadena ligera (si anti-B tiene ?): Enlazador cort EC ID NO: 15); Enlazador largo: QPKAAPSVTLFPP ( ) Cadena ligera (si antí-B tiene ?): Enlazador corto: NO: 13); Enlazador largo: TVAAPSVFIFPP (SEC ID NO: adro 18: Construcciones de PVD-lq anti-A/B emplo 1.4.2: Clonación molecuiar de construccion ara DVDABSL y PVDABLL Para generar construcciones de cadena pesada DV DABHC-SL, eí dominio VH del anticuerpo A se amplifi R utilizando iniciadores específicos (iniciadores 3 cuencia de forro corta/larga para construcción spectivamente); mientras que el dominio VH del antic móloga estándar.
Para generar construcciones DVDABLC-LL y DVD dena ligera, el dominio VL del anticuerpo A se amplifi R utilizando iniciadores específicos (iniciadores 3' cuencia de forro corta/larga para las construccio spectivamente); mientras que el dominio VL del antic iplificó utilizando iniciadores específicos (iniciadores cuencia de forro corta/larga para las construccio spectivamente). Ambas reacciones de PCR se re uerdo con técnicas y procedimientos de PCR estandar oductos de PCR se purificaron con gel, y se utilizaron ino plantilla traslapante para la reacción subsecuen slapante utilizando condiciones de PCR estándares. LO PCR traslapantes se subclonaron en un vector de e mífero (Abbott) pBOS-hCk digerido doble Srf I y Not aspecto de recombinación homologa estándar. Se ha /LL, respectivamente); mientras que el dominio VH del se amplificó utilizando iniciadores específicos (ini ntienen secuencia de forro corta/larga para las con /LL, respectivamente). Ambas reacciones de PCR se r uerdo con técnicas y procedimientos de PCR estándar oductos de PCR se purificaron con gel, y se utilizaron mo plantilla traslapante para la reacción subsecuen slapante utilizando condiciones de PCR estándares. LO PCR traslapantes se subclonaron en el vector de expr mífero pBOS-h-Cy1,z digerido doble Srf I y Sal ilizando un aspecto de recombinación homologa estanda Para generar construcciones DVDBALC-LL y DVD dena ligera, el dominio VL del anticuerpo B se amplifí R utilizando iniciadores específicos (iniciadores 3' cuencia de forro corta/larga para las construccio spectivamente); mientras que el dominio VL del antic aspecto de recombinación homologa estándar. emplo 1.4.4: Construcción v Expresión de DVD-lq A emplo 1.4.4.1: Preparación de Construcciones D-lg Las secuencias de aminoácido de anticuerpo pa ticuerpos específicos, que reconocen antígenos es ítopos del mismo, para incorporación a una DVD-ig tenidas a través de la preparación de hibridoma scribió anteriormente o se pueden obtener m cuenciación de proteínas de anticuerpo conocidas cleicos. 'Además, se pueden obtener secuencias cono eratura. Las secuencias pueden ser utilizadas par idos nucleicos utilizando síntesis de ADN o tecn plificación y ensamblando los fragmentos de anticuerp vectores de expresión, usando tecnología de ADN r bclonaron en un vector de expresión. (Ver, 7,306,914; 279,159; 7,150,969; 20080115243; 20080102475; 20 080075690; 20080063780; 20080050506; 20 080022422; 20070289033; 20070287170; 20 070243194; 20070225227; 20070207171 ; 20 070135620; 20070128190; 20070104722; 20 070037196: 20070028321 ; 20060172404; 20 060153791; 20030215458; 20030157643).
Un grupo de vectores pHybE (Solicitud de Patent rie No. 61/021,282) se utilizó para la clonación del rental y DVD-lg. Se utilizó V1, derivado de pJP1 gl,z,no~a V2, para la clonación del anticuerpo y caden DVD con una región constante de tipo silvestre. Se rivado de pJP191; pHybE-hCk V2, para la clonación de adenas ligeras de DVD con una región constante kapp , derivado de pJP192; pHybE-hC1 V2, para la cí Haciendo referencia al Cuadro 19, se utilizó un ctores en la clonación de los anticuerpos parentales y L de DVD-lg. adro 19: Vectores Usados para Clonar rentales v DVD-l s ID Vector de Cadena Vector de Cadena Pesada Ligera DVD284 V1 V2 DVD285 V1 V2 DVD286 V1 V2 DVD287 V1 V2 DVD288 V1 V2 DVD369 V1 V2 DVD370 V1 V2 DVD371 V1 V2 DVD372 V1 V2 DVD373 V1 V2 DVD374 V1 V2 DVD375 V1 V2 DVD376 V1 V2 DVD377 V1 V2 DVD378 V1 V2 DVD379 V1 V2 DVD380 V1 V2 DVD381 V1 V2 DVD382 V1 V2 DVD383 V1 V2 DVD384 V1 V2 emplo 1.4.4.2: Transfección y Expresión en Céiu La expresión de los anticuerpos de referencia y ró a través de co-transfección pasajera de célul BNA) con plásmidos conteniéndolos ácidos nucleicos solución de abastecimiento PE! [solución de abaste /ml (pH 7,0) Lineal 25 kDa PEI, Polisciences Cat# mplejo de transfección se mezcló a través de inversió incubó a temperatura ambiente durante 10 minutos a regado al cultivo de célula. Después de la transf Iti os continuaron desarrollándose en la incubadora d 2l 125 RPM, 37°C). Después de 24 horas de la tran ltivo se suplemento con 25 mi de una solución al 1% (Organo Technie, La Courneuve France Cat# 19553). eve días de transfección, las células se removieron de diante centrifugación (16,000 g, 10 minutos), y el s enido se filtró estéril (Millipore HV Durapore Stericup, colocó a 4°C hasta el inicio del paso de purificación.
Cada anticuerpo o DVD-ig se purificó individualment a columna empacada de 1 mi desechable (empacada p chnologies) conteniendo la resina MabSelect combinaron basándose en los cromatogramas y se dial guiador de pH de almacenamiento final [10 m ác mM Na2HP04l pH 6.0]. Después de la diálisis, las raron a través de Steriflíp de 0.22 um (Millip centraciones de proteína se determinaron mediante pectrómetro de arreglo de diodo de Hewlett Packar álisis de SDS-PAGE se realizó sobre muestras analí ducidas como no reducidas) para determinar la p rificar la presencia de bandas de cadena pesad opiadamente dimensionadas, y confirmar la a ntídades importantes de cadena ligera libre (por e mplejo) (en las muestras no reducidas).
El Cuadro 20 contiene los datos de producción para rentales o construcciones de DVD-lg expresados como litro en células 293. adro 20: Expresión Pasajera en Producc ticuerpos Parentales v Construcciones de DVD-lg DVD286 IL-13 (SEC.2) IL-9(SEC.2) AB017 TNF AB001 CD-20 DVD287 TNF CD-20 DVD288 CD-20 TNF DVD374 IL-1 beta (sec.1) IL- 1 alfa DVD377 IL-1 alfa IL- 1 beta (sed) DVD378 IL-1 beta (sec.1) , IL- 1 alfa DVD379 IL-1alfa IL-1 beta (sec.2) DVD380 IL-1 beta (sec.2) IL- 1 alfa DVD381 IHalfa ÍL- 1 beta (sec.1) DVD382 IL-1 beta (sec.1) IL-1 alfa DVD383 IL-1 alfa IL-1 beta (sec.2) AB017 TNF i AB029 IL-17A DVD051 TNF IL-17 A DVD052 IL-17A TNF Todos los DVDs se expresaron bien en células 293 eden ser fácilmente purificados sobre una columna de la mayoría de los casos >5mg/l de DVD-lg purificad tenido fácilmente de los sobrenadantes de las células 2 emplo 1.4.5: Caracterización v seiección principal d ra cada mAb. Basándose en la colección de análisis ncipal final se hizo avanzar al desarrollo de la líne table CHO, y se empleó el material derivado de CHO estabilidad, farmacocinética y eficacia en monos cí tividades de pre-formulación. emplo 2: Generación y, C a ra eteriza c i m u noq lobu linas de Dominio Variable Dob e (PVD-lq) Se generaron inmunoglobulinas de dominio vari VD-ig) utilizando anticuerpos con secuencias de nocidas, sintetizando fragmentos de polinucleótido q cuencias de cadena pesada variable de DVD-lg y de c riable de DVD-lg y clonando los fragmentos a un vecto acuerdo con el Ejemplo 1.4.4.1. Las construcciones d naron a y se expresaron en células 293 como se de emplo 1.4.4.2. La proteína de DVD-lg se purificó de emplo 2.1: Generación de TNF e IL-17A adro 21 SEC. Nombre de Nombre de Nombre de Secuencia ID Dominio Dominio Dominio NO. Variable Variable Variable DVD Externo Interno 123456789012345673901234567 76 DVD051H ABGÍ7VH . ABU29VH EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASG HWVRQAPGKGLEWVSAITWNSGHIDY TISRÜNAKNSLYLQMNSL EDTAVY STASSLDYWGQGTLVTVSSAST GPE GLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYWMN GLEWAAINQDGSEKYYVGSVKGRF SLYLQMNSLRVEDTAVYYCVRDYYDI MYFDLWGRGTLVTVSS 77 DVD051L AB01 VL AB029VL DIQMTQSPS5LSA5VGDRVTITCRAS WYQQ PGKAPKLLI YAAS LQSGVPS TDFTLTXSSLQPEDVATYYCQRYNRA VEIKRTVAAPEIVLTQSPGTLSLSP RASOSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLI GIPDRFSGSGSGTDF LTISRLEPED 1 YG5SPCTFGQGTRLEI R 78 DVD052H AB029VH AB017VH EV0LVESGGGLVQPGGSLRLSCAA3G NWV QAPG GLEWVAAI Q GSE YY XSRDNA NSLYLQMNSLRVEDTAVY ILTDYYI HYWYFDL GRGTLVTVSSA LVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGF F RQAPGKGLEWVSAITWNSGHIDYADS RDNAKNSLYLQMWSLRAEDTAV Y A S3LDYWGQGTLVTVSS 79 DVD052L AB029VL AB017VL EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRAS AWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGI GTDFTLTISRLEPEUFAVYYCQQYGS Generación de TNF v RANKL DVD-lgs adro 22 emplo 2.3: Generación de TNF v VEGF DVP-lgs adro 23 SEC. Nombre de Nombre de Nombre de Secuencia ID Dominio Dominio Dominio NO. Variable Variable Variable DVD Externo Interno 1234567890123456789012345678 84 DVD055H AB01 VH AB014VH EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFT WVRQAPGKGLE VSAIT SGHIDYADS SRO A SL LQMNSLRABDTAVYYCAK SSLDYWGQGTLVTVSSASTKGPEVQLVE PGGSLRLSCAASGYTFTNYGMNWVRQAP GWl'NTYTGEPTYAADFKRRFTFSLDTSK NSLRAEDTAVYYCAKYPHYYGSSHWYFD TVSS 85 DVD055L AB017VL AB01 L DIQMTQS SSLSASVGDRVT? TCRASQG YOQKPGKAPKLLIYAASTLQSGVPSRFS FTLTISSLQPEDVATYYCQRYNRAPYTF I RTVAAPD1QMTQS SSLSASVGDRVT DISNYLWWYQQKPGKAP VLIYFTSSLH SGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQ FGQGTKVEIKR 86 DVD056H AB014VH AB017VH EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYT WVRQAPGKGLEWVGWINTYTGEPTYAAD SLDTS STAYLQMNSLRAEDTAVYYCAK SHWYFDVWGQGTLVTVSSASTKGPEVQL VQPGRSLRLSCAASGFTFDDYAMHWVRQ W SAITWNSGHID ADSVEGRF ISRDN Q NSLRAEDTAVYYCAKVSYLSTASSLD VTVSS 87 DVD056L AB014VL AB017VI, DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCSASQD YQQKPGKAPKVLIYFTSSLHSGVPSRFS pío 2.4: Generación de TNF v SOST (sec. 1) DV ro 24 emplo 2.5: Generación de TNF v DKK PVP-lqs adro 25 emplo 2.6: Generación de TNF v alfaVbeta3 DVP-l adro 26 SEC . Nombre de Nombre de Nombre de Secuencia ID Dominio Dominio Dominio NO. Variable Variable Variable DVD Externo Interno 1234567890123456789012345678 96 DVD067H AB017VH A 02 VH EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFT WVRQAPGKGLEWVSAITWNSGHXDYADS SRDNAK SLYLQMNSLRAEDTAVYYCAK SSLDÍ GQGTLVTVSSASTKGPOVQLVES PGRSLRLSCAASGFTFSSYDMS VRQAP AKVSSGGGSTYYLDTVQGRFTISRDNSK NSLRAEDTAVYYCARHNYGSFAYWGQGT 97 DVDQ67L AB017VL AB024VL DIQMTQ3PS3LSASVGDRVTITCRASQ I YQQK PG AP LLIYAASTLQSGVPSRFS FTLTISSLQPEDVATYYCQRYNRAPYTF I RTVAAPEIVLTQSPATLSLSPGERAT SISNHLHWYQQRPGQAPRLLIKYRSQS I SGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQ FGGGTKVEIKR 98 DVD068H AB024 IÍ AB01 VH QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFT WVRQAPGKGLEWVAKVSSGGGSTYYLDT SRDNSKNTLYLQMWSLRAED AVYYC R YWGQGTTVTVSSASTKGPEVQLVESGGG LRLSCAASGFTFDDYAMHWVRQAPGKGL WNSGH TD ADS EGR T ISRDNAKN5LY AEDT A YYC VSYLSTASSL0 WGQGT 99 DVD068L AB024 L AB017VL EI T..TQ3PATLSLSPGERATLSCQASQS YQQRPGQAPRLLI RSQSISGI PARFS FTLT I.SSLEPEDFAVYYCQQSGSWPHTF IKRXVAAPDIQMTQSPS3LSASVGDRVT lo 2.7: Generación de TNF v NGF DVP-lgs o 27 emplo 2.8: Generación de TNF e IL-23 p19 PVP-lgs adro 28 em ío 2.9: Generación de TNF e 1L-6 PVP-lgs adro 29 SEC. Nombre de Nombre de Nombre de Secuencia ID Dominio Dominio Dominio NO. Variable Variable Variable DVD Externo Interno 1234567890123456789012345678 108 DVD187H AB017VH AB040VH EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFT WVRQAPGKGLEWVSAITWNSGHIDYADS SRDNAKNS YLQMNSLRAEDTA YYCAK SSLDYWGQGTL TVSSASTKGPQV LKES P3Q LSLTCSFSGFSLSTNGMGVSWI Q WLAHI WDED RYNPSLKSRLTISKDTS IT VDTADTATYYCARRRI IYDVEDYFD LTVSS 109 DVD18 L AB01 VL AB040VL DIQMTQSP3SLS S GDRVTI CRASQGI YQQKPGKAPKLLIYAASTLQSGVPSRFS FTLTISSLQPEDVATYYCQ YNRAPYTF IKRTVAAPQIVLIQSPAIMSASPGEKVT SVSYMYWYQQKFGSSPRLLIYDTSNLAS GSGSGT8YSLTISRMEAEDAATYYCQQW GGGTKLEIKR 110 DVD 88H AB040VH AB017VH QVTLKESGPGILQPSQTLSLTCSFSGFS VSWIRQPSGKGLEWLAHIYWDEDKRYNP IS DTSN QVFL I VDTADTAT YCA VEDYFDYWGQGTTLTVSSASTKGPE QL VQPGRSLRLSCAASGFTFDDYAMHWVRQ WVSAITWNSGHIDYAD5VEGRFTISRDK QWNSLRAEDTAVYYCAKVSYLSTASSLD VTVSS 111 DVD188I* ABO 4 OVL AB017VL QIVLIQSPAIMSASPGEKVTMTCSASSS QQKPGSSPRLLIYDTSNLASGVPVRFSG emplo 2.10: Generación de TNF v SOST (sec. 2) DV adro 30 emplo 2.11: Generación de TNF e IL-6R DVP-íqs adro 31 pío 2.12: Generación de TNF v CD-20 DVD-igs adro 32 emplo 2.13: Generación de IgE e 1L-13 (sec. 1) PVP adro 33 SEC . Nombre de Nombre de Nombre de Secuencia ID Dominio Dominio Dom nio NO. Variable Variable Variable DVD Externo Interno 1234567890123456789012345678 DVD071H AB053VH AB026VH EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGYSI NWIRQAPGKGLEWVASIT DGSTNYNPS SRDDS NTFYLQMNSLRAEDTAVYYCAR WHFAVVÍGQGTLVTVS3ASTKGPEV LRE PTQ LTLTCTLYGFSLSTSDMG DWIRQ WLAHIWWDDVKRYN ALKSRLTISKDTS LTSVDPVD ATY CARTVS3GYIYYAMD TVSS 125 DVD071L ABG53VL AB026VL DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQS YMNWYQQKPGKAPKLLIYAASYLESGVP 8GTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSHED TKVEIKRTVAAPDIOMTQSPSSLSASVG RASQDIRNYLN YQQKPGKAPKLLIFYT PSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDIATY LPLTFGGGT VEIKR 126 DVD072H AB026VH ABGS3VH EVTLRESGPGLVKPTQTLTLTCTLYGFS VDWrRQPPGKGLEWLAHIWWDDVKRYNP ISKDTS KOWLKLTSVDPVDTATYYCA IY A DYWGQGTLVTVSSASTKGPEVQL VQPGGSLRLSCAVSGYSITSGYSWNWIR EWVASITYDGSTN NP5VKG ITISRDD QMNSLRAEDTAVYYCARGSH FGHWHFA VTVSS 127 DVD072L AB026VL AB053VL DIQMTQSPSSLSASVGDRVTISCRASQD YQQKPGKAP LLIFYTSKLHSGVPSRFS adro 34 SEC . Nombre de Nombre de Nombre de Secuencia ID Dominio Dominio Dominio NO. Variable Variable Variable DVD Externo Interno 12345678901234567890123456789 128 DVD186H AB026VH AB038VH EVTLRESGPGLVKPTQTLTLTCTLYGFS VDWIRQPPG GLEVíLAHIWWDDVKRYNP ISKDTSKNQVVLKLTSVDPVDTATYYCA IYYAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPDVNL VKPGGSLKLSCAASGFTFSSYT SWVRQ VATIS'SGGTYTYYPDSVKGRFTISRDN QMSSLKSEDTAMFYCTRDNH YDRG F TLTVSS 129 DVD186L AB026VL AB038VL DIQMTQSPSSLSASVGDRVTISCRASQDI YQQKPGKAPKLLIFYTSKLHSGVPSRFS YTLTISSLQPEDIATYYCQQGNTLPLTF IKR VAAPDIVMSQSPSSLVVSVGE VT NLFYRSNQKNHLAWYQQKPGQSPTLLIY GVPDRFTGSGSGTDFTLTISRVKAEDLA YSYPPTFGGGT LEIKR 130 DV 185H AB038VH AB026VH DVNLVESGGGLVKPGGSLKLSCAASGFT WVRQTPEKRLEWVATISSGGTYTYYPDS SRDKAKNTLYLQMSSLKSEDTAMFYCTR GPFFDYWGQGATLTVSSASTKGPEVTLR KPTQTLTLTCTLYGFSLSTSD GVDWIR EWLAHIWWDDVKRYN ALKSRLTISKDT KLTSVD VDTATYYCARTVSSGYIYYAM LVTVSS 131 DVD185L ABO38VI» AB026VL DIV SQSPSSLWSVGEKVTMSCKSSQN NHLAWYQQKPGQSPTLLIYWTSTRESG emplo 2.15: Generación de IqE e IL-4 DVD-lgs adro 35 emplo 2.16 Generación de adro 36 SEC . Nombre de Nombre de Nombre de Secuencia ID Dominio Dominio Dominio NO. Variable Va able Variable DVD Externo Interno 1234567890123456789012345678 136 DVD111H AB053VH AB028VB EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAV3GYS NWIRQAPGKGLEWVASITYDGSTNYNPS SRDDSKNTF LQMMSLRAEDTAVYYCAR WHFAVWGQGTLVTVSSA3 KGP0VQLVQ PGA3VKSCKA5GYTFTGYWIEWVRQAPG ILPGSTTMYNEKFKGRVTMTRDTS STV RSEDTAVYYCA ADYYGSDYV FDYWGQ 137 DVD111L AB053VL AB028VL DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQS YMNWYQQK GKAPKLLI AASYLESGVP 3GTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSHED TKVEI R VAAPDIQMTQSPSSLGASVG KASQHVGTHVTWYQQKPGKAPKLLIYST PSRFSGSGSGTDFTLTISS LQPEDFATY YPLTFGGGTKVEIKR 138 DVD112H AB028VH AB053VH QVQLVQSGAEV K GAS KSCKASGYTF VRQAPGQLEWMGEILPGSTTNYNEKFKG TSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARADY FDYWGQGTLVTSSASTKGPEVQLVESGG SLRLSCAVSGYSITSGYSWNWIRQAPG ITYDGSTNYNPSVKGRITISRDDS WTF RAEDTAVYYCARGSHYFGHWHFAVWGQG 139 VD112L AB028VL AB053VL DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC ASQH YQQ PGKAP LLIYSTSYRYSGVPSRFS FTL I SSLQPEDFATYYCQHFYSYPLTF I RTVAAPDIQLTQSPSSLSASVGDRV 37 pío 2.18: Generación de IqE e iL-13 (sec. 2) DVD ro 38 SEC. Nombre de Nombre de Nombre de Secuenci ID Dominio Dominio Dominio NO. Variable Variable Variable DVD Externo Interno 1234567890123456789G12345678 144 DVD274H AB053VH AB051VH EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGYS NWIROAPGKGLEW ASI YDGSTNYN S SRDDSKNTFYU)M SLRAEDTAVYYCAR WHFAVWGQGTLVTVSSASTKGPEVTLRE PTQTLTLTC LYGFSLSTSDMGVDWI Q WLAHIW.WDDVKRYMPAL SRLTISKDTS LTSVDPVDTATYYCARTVSSGYIYYAMD VTVSS 145 DVD274L AB053VL AB051VL DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQS YMNW QQ PG AP LLX AASYLESGVP SGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSHED TKVEIKRTVAAPDIQMTQSPSSLSASVG RASQDIRNYLNWYQQKPGKAPKLLIFYT PSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDIATY PPLTFGGGT VEIKR 146 DVD273H AB051VH AB0S3VH EVTLRESGPGLV PTQTLTLTCTLYGFS VDWIRQPPGKGLEWLAHIWWPDVKRYNP ISKDTSKNQWLKLTSVDPVDTATYYCA IYYAMDY GQGTLVTVSSA3TKGPEV0L VQPGGSLRLSCAVSGYSI.TSGYSWNWIK EWVASITYDGSTNYNPSVKG I??SRDD QMNSLRAEDTAVYYCARGSHYFGHWHFA VTVSS 147 DVD273L AB051VL AB053VL DIQMTQSPSSLSASVGDRVTISCRASQD YQQKPGKAPKLLIFYTSKLHSGVPSRFS 2.19: Generación de IL-13 (sec. 1) e IL-9 (s 39 lo 2.20: Generación de IL-13 (sec. 1) e lL-4 DV o 40 pío 2.21: Generación de 1L-13 (sec. 1) e IL-9 (s ro 41 Nombre de Nombre de Nombre de Secuencia ID Dominio Dominio Dominio NO. Variable Variable Variable DVD Externo Interno 1234567890123456789012345678 156 DVD284H AB026 H AB056VH EVTLRESG GLVKPTQTLTLTCTLYGFS VDWIROPPG GLEWLAHIWWDDVKRYNP ISKDTS RQVVLKLTSVDPVDTATYYCA IYYAMDYWGQG LVTVSSASTKGPQVQL M PGASV LSCKATGYTFTGSWIE I Q WIGQILPGSGSA YNEKFKGKATFTADT QLISLTTEDSAIYYCAREDNYGSSSLAY TVSA 157 DVD284L AB026VL AB056 L DIQMTQSPSSLSASVGDRVTISCRASQD YQQKPGKAPKLLIFYTSKLHSGVPSRFS YTLTIS5LQPEDIATYYCQQGNTLPLTF IKRTVAAPDILLTQSFAILSVSPGERVS SIGTNIHWYQQRTNGSPRLL1KYASESI SGGGSGTDFTLSINSVESEDIADYYCQQ FGAGTKLELKR 158 DVD283H ABG56VH ABO26 il . QVQLQQSGAELMKPGASVKLSCKATGYT WIKQRPGHGLEWIGQILPGSGSAYYNEK TADTSSKTVYIQLISLTTEDSAIYYCAR STJAYWGQGTLLTVSAAS KGPEVTLRES TQTLTLTCTLYGFSLSTSDMGVDWIRQP LAHI DDV RYNPALKSRLTISKDTSK TSVDPVDTATYYCARTVSSGYIYYAMDY TVSS e m p I o 2.22: Generación de IL-13 (sec, 1 ) e IL-9 (s SEC. Nom re de Nombre de Nombre de Secuencia ID Dominio Dominio Dominio NO. Variable Variable Variable DVD Externo Interno 1234567890123456789012345678 160 DVD265H AB051VH AB028 H EVTLRESGPGLVKPTQTLTL'X'CTLYGFS VDWtRQPPGKGLEWLAHIWWDDVKRYNP IS SKNOVVLKLTSVDPVD ATYYCA lYYAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPQVQ KKPGASVK5CKASGYTFTGYWIEWVRQA GEILPGSTTNYNEKFKGRV*FM RDTSTS SLRSEDTAVYYCARADYYGSD KFDYW SS 161 DVD265L AB051VL AB028VL DIQMTQSPSSLSASVGDRVTISCRASQD YQQKPGKAPKLLIFYTSKLHSGVPSRFS YTLTISSLQPEDIATYYCQQGLTPPLTF IKRrWUUPDIQMTQSPSSLSASVGDRVT HVGTHVTWYOQ PGKAPKLLIYS S RY SGSGSGTDFTLTISSLQPEDFA YCQH FGGGTKVEIKR 162 DVD266H AB028VH AB051VH QVQLVQSGAEVKKPGASVKSCKASGYTF VRQAPGQLEWMGEI LPGSTTNYNEKFKG TSTSTVYMELSSLRSED AVYYC RADY FDYWGQGTLVTSSAST GPE TLRESGP TLTLTCTLYGFSLSTSDMGVDWIRQPPG HIWWDDVKRYNPALKSRLTIS DTS NQ VDPVDTATYYCARTVSSG IYY??DYWG SS pío 2.23: Generación de 1L-13 (sec, 2) e IL-4 DVD ro 43 i SEC. Nombre de Nombre de Nombre de Secuencia ID Dominio Dominio Dominio ¡ NO. Variable Variable Variable DVD Externo Interno 12345678901234567890123456789 164 DVD267H AB051VH AB027VH EVTLRESGPGLVKPTQTLTLTCTLYGFS VDWXRQ PGKGLE L HXWWDDV RYNP ISKDTSKNQWL LTSVDPVDTATYYCA IYYAMDYWGQGTLVTV35ASTKGPQVTL VKPTQTLTLTCTFSGFSLSTSG GVSWI LEWLAHIYWDDDKRYWPSL S LTIS D LT TNMDPVDTATYYCARRETVFYWYFD VTVSS 165 DVD267L AB051VL AB027VL DIQMTQSPSS-LSASVGDRVTISCRASQDI YQQKPGKAPKLLIFYTSKLHSGVPSRFS YT?..?ISSLQPEDIATYYCQQGLTPPLTF IKRTVAAPDI LTQSPSSLSASVGDRV I SVDY GDSYMNWYQQ PGKAP LLI AAS PSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATY DPPTFGQGTKVEIKR 166 DVD268H AB027VH AB051VH QVTLRESGPALV PTOTLTLTCTFSGFS VSWIRQPPG GLEWLAHIYWDDDKRYNP IS DTSRNQWLTMTNMDPVD TYYCA WYFDVWGRGTPVTVSSASTKGPEVTLRE PTQTLTL CTLYGFSLSTSDMGVDWIRQ LAHIWWDDVKRYNPALKSRLTISKDTS LTSVDPVDTATYYCARTVSSGYIYYAMD TVSS 167 DVD268L AB027VL AB051VL DIVLTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQS YMWMYQQ PG APKLLIYAASNLESGI T FT L ED emplo 2.24: Generación de 1L-13 (sec. 2) e lL-23 p1 adro 44 SEC. Nombre de Nombre de Nombre de Secuencia ID Dominio Dominio Dominio NO. Variable Variable Variable DVD Externo Interno 12345678901234567890123456789 168 DVD275H AB051VH AB038VH EVTLRESGPGLVKPTQTLTLTCTLYGFSL VDWIRQPPGKGLEWLAHIWWDDVKRYNP ISKDTS NQWLKLTSVDP DTATY CA IYXAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPDVNL VKPGGSLKL5CAASGFTFSSYTMSWVRQ WVATISSGGTYT Y DSVKGRFTISRDN QMSSLKSEDTAMFYCTRDNHAYDRGPFF TLTVSS 169 DVD275L AB051VL AB038VL DIQMTQSPSSLSASVGDRVTISCRASQDI YQQKPGKAPKLLIFYTS LHSGVPSRFSG YTLTISSLQPEDIATYYCQQGLTPPLTFG IKRTVAAPDIVMSQSPSS LWSVGEKVTM NLFYRSNQKNHLAWYQQKPGQS PTLLI W GVPDRFTGSGSGTDFTL.TISRVKAEDLAV YSYPPTFGGGTKLEI R 170 DVD276H AB038VH AB051VH DVNIiVESGGGLVKPGGSLKLSCMSGFTF VRQTPEKRLEW ATISSGGTYT PDSV SRDNAKWTLYLQMSSLKSEDTAMFYCTRD GPFFDYWGQGATLTVSSASTKGPEVTLRE KPTQTLTLTCTLYGFSLSTSDMGVDWIRQ E I-AHI WDDVKRYNPALKSP.LTIS DTS KL SVDFVDTATYYCARTVSSG IYYAMD LVTVSS 171 DVD27 L AB038VL AB051VL DIVMSQ3PSSLWSVGEKVTMSC SSQNL KNHLAWYQQKPGQS TLLIYWTSTRESGV SGSGTDFTL IS VKAEDLA CQQYYS 2.25: Generación de iL-13 (sec. 2 e lL-9 (s 45 SEC. Nombre de Nombre de Nombre de Secuencia ID Dominio Dominio Dominio NO. Variable Variable Variable DVD Externo Interno 1234567890123456789012345678 172 DVD286H AB051VH AB056VH EVTLRESGPGLV PTQTLTLTCTLYGFS VD I Q GKGLEWLAHIWWODVKRYN ISKDTSKWQWL LTSVDPVDTATYYC IYYAMDYWGQGTLVTVSSWTKGPQVQ MKPGASVKLSCKATGYTFTGSWIEWIK WIGQILPGSGSAYYNEKFKGKATFTAD QLISLTTEDSAIYYCAREDNYGSSSLA TVSA 173 DVD286L AB051VL ABO56 L DIQMTQSPSSLSASVGDRVTISCRASQD YQQKPGKAPKLLIFYTS LHSGVPSRFS YTLTISSLQPEDIATYYCQQGLTPPLTF IKRTVAAPDILLTQSPAILSVSPGERVS SIGTNIHWYQQRTNGSPRLLIKYASESI SGGGSGTDFTLSINSVE5EDIADYYCQQ FGAGTKLELKR X DVD285H AB056VH ABO 51VH QVQLQQSGAELMKPGASVKLSCKATGYT WI QRPGHGLEWIGQ1LPGSGSAYYNEK TADTSS TVYIQLISLTTEDS IY CAR SLAYVÍGQGTLLTVSAASTKGPEV LRES TQTLTLTCTLYGFSLSTSD GVDWIRQP LAHIWWDDVKRYNPALKSRLTISKDTS TSVDPVDTATYYCARTVSSGYIYYAMDY TVSS 2.26: Generación de IL-6R v VEGF DVD-lgs mplo 2.27: Generación de 1L-6R e 1L-17A PVP-lqs adro 47 SEC. Nombre de Nombre de Nombre de Secuencia ID Dominio Dominio Dominio NO. Variable Variable Variable DVD Externo Interno 1234567890123456789012345678 180 DVD1 7H AB05 VH AB029 H EVQLQESGPGLVRPSQTLSLTCTVSGYS SWVRQPPGRGLEWXGYISYSGI TYNP5 LRDTSKNQFSLRLSSVTAADTAVYYCAR MDYWGQGSLVTVSSASTKGPEVQLVE5G GSLRLSCAASGFTFSNYWMNWVRQAPGK INQDGSEKYYVGSVKGRFTISRDNAKNS LRVEDTAV CVRDYYD?LTDY IHYW TLVTVSS 181 DVD147L AB054VL AB029VL DIQ TQSPSSLSASVGDRV ITCRASQD YQQKPGKAP LTJ1Y TS ñSG PS FS FTFTISSLQPEDIATYYCQQGNTLP TF r RTVAAPEIVLTQSPGTLSLSPGERAT SVSSSYLAWYQQKPG APRLLI GASSR FSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQ TFGQGTRLEIKR 182 DVD148H AB029VH AB05 VH EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFT WVRQAPGKGLE VAAIMQDGSEKY VGS SRONAKNSLYIiQMNSLRVEDTAVYYCVR DYYIHYW FDLWGRGTLVTVSSASTKGP GPGLVRPSQ LSLTCTVSG SITSDHAW GRGLEWIGYISYSGITTYNP5LKSRVTM QFSLRL5SVTAADTAVYYCARSIARTTA SLVTVSS 183 DVD148L ABO29VL AB054VL EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQS WYQQ PGQAPRLLI GASSRATGIPDRF DFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPCT Generación de IL-6R v RANKL PVP-lgs adro 48 Ge nerac i ón d e 1 L-1 7A e l l_-1 beta PV D -l ad ro 49 SEC . Nombre de Nombre de Nombre de Secuencia ID Dominio Dominio Dominio NO. Variable Variable Variable DVD Externo Interno 1234567890123456789012345678 188 0VD121H AB032VH AB02 VH QVQLVESGGGWQPGRSLRLSCAASGFT WVRQAPGKGLEWVAI IWYDGDNQYYADS SRDNSKNTL LQMNGLRAEDTAV CAR DYWGQGTLVTVSSASTKGPEVQL ESGG 3LRLSCAASGFTFSNYWMNWVRQAPGKG NQDGSEKYYVGSVKGRFTISRDNAKNSL RVED AVYYCVRDYYDIL Y IHYWYF LVTVSS 189 DVD121L AE032VL AB02 VL EIVLTQSPDFQSVTPKEKVTíTCRASQS YQQKPDQSPKLLI YASQSFSGVPSRFS FTLTINSLEAEDAAAYYCHQSSSLPFTF IKRTVAAPEIVLTQS GTLSLSPGERAT SVSSSYLAWYQQ PGQAPRLLIYGASSR FSGSGSGTDFTL ISRLEPEDFAVYYCQ TFGQG RLEIKR 190 DVD122H AB029VH AB032VH EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFT VRQAPGKGLEWVAAIMQDGSEKYYVGS SRDNAKNSLYLQMHSLRVED AVYYCVR DYYIHYWYFDLWGRGTLVTVSSASTKGP GGGWQPGRSLRLSCAASGFTFSVYGMN KGLEWVAIIWYDGDNQYYADSVKGRFTI TLYLQMNGLRAEDTAVYYCARDLRTGPF LVTVSS 191 DVD122L ABQ29VL AB032 L EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQS WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRF Generación de tL-1beta v RANKL PVD-l adro 50 Generación de IL-1beta v VEGF PVD-lg adro 51 Generación de RANKL v CP-20 PVP-lgs 52 »mplo 2.33: Generación de ¾L-1alfa e lt-1beta (sec. n Grupo Eniazador 1 adro 53 SEC . Nombre de Nombre de Nombre de Secuencia ID Dominio Dominio Domin o NO. Variable Variable Variable DVD Externo Interno 123456789C123456789012345678 204 DVD369H AB065 ABO32 QVQLVESGGGWQPGRSLRLSCTA5GFT WVRQAPGKGLEWVAAVSYDGSNKYYAES SRDNSKNILFI.QMDSL LEDTAVYYCAR PAPLAHWGQGTLVTFSSASTKGPQVQLV QPGRSLRLSCAASGFTFSVYGMNWVRQA VAI IWYDGDNQ YADSVKGRFTISRDNS MNGLRAEDTAVYYCARDLRTGPFDYWGQ S 205 DVD369L ABO65 AB032 DIQMTQSPS3VSAS GDRVTITCRASQG YQQKPGKAPKLLIYEASNLETGVPSRFS FTLTISSLOPEDFATYYCQQ SSFLLSF HKRTVAAPEIVLTQSPDFQSVTPKEKVT SIGSSLHWYQQ PDQSPKLLIKYASQSF SGSGSGTDFTLTINQLEAEDAAAYYCHQ FGPGTKVDIKR 206 DV 3 OH AB032 ABO65 QVQLVESGGGWQPGRSLRLSCAASGF WVRQAPGKGLEWVAIIWYDGDNQYYADS SRDNSKNTLYLQMNGLRAEDTAVYYCAR DYWGQGTLVTVSSASTKGPQVQLVESGG 3LRLSCTASGFTFSMFGVHWRQAPGKG SYDGSNKYYAESVKGRFTISRDNSKNIL RLED AVYYCARGRPKWI PAPLAHWGQ 3 34: Generación de IL-1alfa e lL-1beta (sec.
Enlazador 2 adro 54 V SEC. Nombre de Nombre de Nombre de Secuencia ID Dominio Dominio Dominio NO. Variable Variable Variable DVD Externo Interno 12345678901234567890123456789 208 DVD373H AB065 ABO32 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCTASGFT WVRQAPGKGLEWVAAVSYDGStíKYYAES S DN5KNILFLQMDSLRLEDTAV CAR PAPLAHWGQGTLVTFSSASTKGPSVFPL ESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSVYG E'GKGLEWV 11WYDGDNQYYADSVKGRF KNTLYLQMNGLRAEDTAVYYCARDLRTG GTLVTVSS 209 DVD373L AB065 AB032 DIQMTQSPSSVSASVGDRVTI CRASQG YQQKPGKAPKLLIYEASNXBTGVPSRFS FTLTISSLQPEDFATYYCQQTSSFLLSF H RTVAAPSVFIFPPEIVLTQSPDFQSV ITCRASQSIGSSLHWYQQKPDQSPKLLI SGVPSRFSGSGSGTDFTLTINSLEAEDA SSSLPFTFGPGTKVDIKR 210 DVD37 H AB032 AB065 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFT WVRQAPGKGLEWVAI IWYDGDNQYYADS S D SKN L LQMNGLRAED AV CAR DYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPQV GWQPGRSLRLSCTASGFTFSMFGVHWV LEWVAAVSYDGSNKYYAESVKGRFTISR FLQMDSLRLEDTAVYYCARGRPKWIPA GTLVTFSS implo 2.35: Generación de lL-1alfa e IL-1beta (sec. n Grupo Enlazador 3 adro 55 SEC . Nombre de Nombre de Nombre de Secuencia ID Dominio Dominio Domin o NO. Variable Var able Variable DVD Externo Interno 1234567890123456789012345678 212 DVD377H ABO65 AB032 QVQLVESGGGVVQPGRSL LSCTASGFT WVRQAPGKGLEWVAAVSYDGSNKYYAES SRDNSKNILFLQMDSLRLEDTAVYYCAR PAPTJAHWGQGTLVTFSSASTKGPSVFPI ESGGGWQPGRSLRtSCAASGFTFSVYG PG GLEWVAIIWYDGDNQYYADSVKGRF KNTLYLQMNGLRAEDTAVYYCARDLRTG GTLV VSS 213 DVD377L AB065 AB032 DIQMTQS PSSVSASVGDRVTITCRASQG YQQKPG APKLLIYEASNLETGVPSRFS FTLTISSLQPEDFATYYCQQTSSFLLSF HKRTVAAPEIVLTQSPDFQSVTPKEKV SIGSSLHWYQQKPDQSPKLLIKYASQSF SGSGSGTDFTLTINSI.EAEDAAAYYCHQ FGPGTKVD1KR 214 DV 378H AB032 ABO65 QVQLVESGGGWQPGRSLRLSCAASGFT WVRQAPGKGLEWVA11WYDGDNQYYADS SRDNSKNTLYLQMNGLRAEDTAVYYCAR DYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFP1APQV GWQPGRSLRtSCTASGFTFSMFGVHWV LEWVAAVSYDGSNKYYAESVKGRFTISR FLQMDSLRLEDTAVYYCARGRPKVVI A GTLVTFSS lo 2.36: Generación de IL-1alfa e IL-1beta (sec. rupo Enlazador 4 o 56 SEC . Nombre de Nombre de Nombre de ¡Secuencia ID Dominio Dominio Dominio NO. Variable Variable Variable DVD Externo Interno 12345678901234567890123456789 216 DVD381H AB065 ABO32 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCTASGFT WVRQAPGKGLEWVAAVSYDGSNKYYAES S DNSK ILFLQ DSLRLED AV?YCAR PAPLAHWGQGTLVTFSSASTKGPQVQLV QPGRSLRLSCAASGFTFSVYGMNWVRQA V I1WYDGDNQYYADSVKGRFTISRDNS MNGLRAEDTAVYYCARDL TGPFDYMGQ S 217 DVD381L AB065 ABO32 DIQMTQSPSSVSASVGDRV ITCRASQG YQQKPGKAP IiLIYEAS LETGVPSRFS FTLTISSLQPEDFATYYCQQTSSFLLSF H R VAAPSVFIFPPEIVLTQSPDFQSV ITCRASQSIGSSLHWYQQ PDQSP LLI SGVPSRFSGSGSGTDFTLTINSLEAEDA SSSLPF FGPGT VD1KR 218 DVD382H AB032 AB065 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFT WVRQAPGKGLEWAIIWYDGDNQYYADS SRDNS???LYLQMNGLRAEDTAVYYCAR DYWGQGTLVTVSSASTK6PQVQLVESGG SLRLSCTASGFTFSMFGVHWVRQAPGRG SYDGSNKY AESVKGRFT?SRDNSKNIL RLEDTAVYYCARGRP WI PAPLAHWGQ G emplo 2.37: Generación de IL-1a¾fa e lL-1beta (sec. n Grupo Enlazador 1 uadro 57 SEC . Nombre de Nombre de Nombre de Secuencia ID Dominio Dominio- Dominio NO. Variable Variable Variable DVD Externo Interno 12345678901234567890123456769 220 DVD371H ABO65 ABO66 QVQLVESGGGWQPGRSL LSCTASGFTF WVRQAPGKGLEWVAAVSYDG3NKYYAES S DNS NI^ LFLQMD3LRLEDTAVYYCAR PAPLAHWGQGTLVTFSSASTKGPEVQLV QPGRSLRLSCSSSGFIFSSYDMSWVRQA VAYISSGGGGTYYPDTVKGRFTISRD S DSLRPEDTGVYFCARGGVTKGYFDVWG SS 221 DVD371L AB065 ABO66 DIQ TQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGI YCftKPGKAPKLLIYEASNLETGVPSRFS F LTISSLQPED ?? YC Q SSFLL5F HKRTVAAPDIQMTQSPSSLSASV DRVTI NIHNYLTWYQQTPG AP LLIYNAK LA SGSGSGTDYTFTISSLQPEDIATYYCQH FGQGTKLQIT 222 DVD372H ABO66 AB065 EVQLVESGGGWQPGRSIjRLSCSS SGFI WVRQAPGKGLEWVAYISSGGGGTYYPDT SRDWSKWTLFLQMDSLRPEI3 GVYFCAR FDVWGQGTPVTVSSASTKGPQVQLVESG RSLRLSCTASGFTFSMFGVHWVRQAPGK VSYDGSKKYYAESVKGRF ISRDNSKNI LRLEDTAVYYCARGRPKWIPAPLAHWG emplo 2.38: Generación de IL-1a¾fa e IL-1beta (sec. adro 58 SEC. Nombre de Nombre de Nombre de Secuencia ID Dominio Dominio Dominio NO. Variable Variable Variable DVD Externo Interno 12345678901234567890123456789 224 DVD375H ABO65 ABO66 DVQLVESGGGWOPGRSLRLSCTASGFTF WRQAPGKGLEWVAAVSYDGSNKYYAES SRDNSKNILFLQMDSLRLEDTAVYYCAR PAPIAHWGQGTLVTF5SASTKGPSVFPL ESGGGWQPGRSLRLSCSSSGFIFSSYD PGKGLEWVA ISSGGGGTYYPDTVKGRF NTLFLQMDSLRPEDTGVYFCARGGVTK QGTPVTV5S 225 DVD375L ABO65 ABO66 DIQMTQSPSSVSASVGBRVTITCRASQGI YQQKPGKAP LLIYEASNLETGVPSRFS FTL ISSLOPEDFATYYCQQTSSFLLSF HKR VAAPSVFIFPPDIQMTQSPSSLSAS ITCRASGN1HNYLTWYQQTPG APKLLIY DGVPSRFSGSGSGTDYTFTISSLQPEDI FWSIPYTFGQGTKLQIT 226 DVD376H AB066 ABO65 EVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCSSSGFI WVRQAPGKGLEWVAYISSGGGGTYYPDT SRDNSKNTLFLQMDSLRPEDTGVYFCAR FDV GQGTPVTVSSASTKGPSVFPLAPQ GGWQPGRSLRLSCTABGFTFS FGVH GLEMVAAVSYDGSNKYYAESVKGRFTT.S LFLQMDSLRLEDTAVYYCARGRPKWIP QGTLVTFSS emplo 2.39: Generación de IL-1alfa e IL-1beta (sec. uadro 59 SEC, Nombre de Nombre de Nombre de Secuencia ID Dominio Dominio Dominio NO. Variable Variable Variable DVD Externo Interno 12345678901234567890123456789 228 DVD379H ABO 65 AB066 QVQLVESGGGWQPGRSLRLSCTASG TF WVRQAPGKGLEWVAAVSYDGSHKYYAESV SRDHS NILFLQMDSLRLEDTAVYYCARG PAPLAHWGQGTLVTFSSASTKGPSVFPL ESGGGWQPGRSLRL3CSSSGFIFSSYD PGKGLEWVAYISSGGGGTYYPDTVKGRFT KNTLFLQMDSLRPEDTGVYFCARGGVTK QGTPVTVSS 229 DVD379L AB065 AB066 DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGl YQQKPGKAPKLLIYEASNLETGVPSRFSG FTLTISSLQPEDFATYYCQQTS5FLLSFG HKRTVAAPDIQMTQSPSSLSASVGDRVT? NIHNYLTWYQQTPG APKLLIY'NA TLAD SGSGSGTDYTFTISSLQPEDIATYYCQHF FGQGT LQI 230 DVD380H ABO66 ABO65 EVQLVE5GGGWQPGRSLRLSCSS3GFIF VRQAPG GLEWVAYISSGGGGTYYPDT SRDNS NTLFLQMDSLR EDTGVYFCAR FDVWGQGTPVTVSSASTKGPSVFPLAPQ GGVVQPGRSLRLSCTASGFTFSMFGVHW GLE VAAVSYDGSNKYYAESV GRFTIS LFLQMDSLRLEDTAVYYCARGRPKVVIP QGTLVTFSS emplo 2.40: Generación de ¾L-1alfa e iL-1 beta (sec. n Grupo Enlazador 4 adro 60 SEC - Nombre de Nombre de Nombre de Secuencia ID Dominio Dominio Dominio NO. Variable Variable Variable DVD Externo Interno 12345678901234567890123456789 232 DVD383H ABO 65 ABO 66 QVQLVESGGGWQPGRSLRLSCTASGFTF WVRQAPGKGLEWVAAVSYDGSNKYYAESV SRDNSKNILFLQMDSLRLEDTAVYYCARG PAPLAHMGQGTLVTFSSASTKGPEVQLVE QPGRSLRLSCSSSGFIFSSYDMSWVRQAP VAY1SSGGGGTYYPD V GRFTISRDNSK DSLRPEDTGVYFCARGGVTKGYFDVWGQ SS 233 DVD383L ABO65 AB066 DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGI YQQKPG APKLLIYEASNLE GVPSRFSG FTLTISSLQPEDFATYYCQQTSSFLLSFG HKRTVAAPSWIFPPDIQiVJTQSPSSLSAS ITCRASGNIHNYLTWYQQTPGKAPKLLI DGVPSRFSGSGSGTD TXSSLQPEDIA FWSIPYTFGQGTKLQIT 234 DVD38 H ??066 ABO65 EVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCSSSGFIF WVRQAPGKGLEWVAYISSGGGGTYYPDTV SRDMSKNTLFLQMDSLRPEDTGVYFCARG FDVWGQGTPVTVSSASTRGPQVQLVESGG RSLRLSCTASGFTFSMFGVHWVRQAPGKG VSYDGSNKYYAESVKGRFTISRDNSKNIL LRLEDTAVYYCARGRPKWI A9LAHWGQ SS 41 : Secuencias de Vector de Clonación ir Secuencias de Anticuerpo Parental y PVD- Nombre de Secuencias de Nucleótido Vector 12345678901234567890.23456789012345678901234 V ? GCGT CG CC AGGGCCC CGGTC T CCCCCT GGCAC CC C C C ACC CTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTA GAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGG ACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAG GTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTG AATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCC TGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACT GGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCT TCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCA CCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCA AAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGT GTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTA AAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCAT GCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTG ACACCCTGCCCCC GAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAA TATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCC AACTACAAGACCACGCC CCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTT TACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAA TCA GCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCA CTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGAGCGGCCGCTCGAGGCCGGCA ATCCCCCGACCTCGACCTCTGGCTAATAAAGGAAATTTATTTTC TAGTGTGTTGGAATTTTTTGTGTCTCTCACTCGGAAGGACATAT CAAATCATTTGGTCGAGATCCCTCGGAGA CTCTAGCTAGAGGA CCGCCCCGGACGAACTAAACCTGACTACGACATC CTGCCCCTT GGGCAGTGCATGTAATCCCTTCAGTTGGTTGGTACAACTTGCCA CCTGTTCCACATGTGACACGGGGGGGGACCAAACACAAAGGGGT CTGTAGTTGACATCCTTATAAA GGATGTGCACA TTGCCAACA GCTTTCATCCTGGAGCAGACTTTGCAGTCTGTGGACTGCAACAC CCTTTATGTGTAACTCTTGGCTGAAGCTCTTACACCAATGC GG GCGÁ C GGAGG GGTTGTTGGTCCTCATATTCACGAGGTCGCTGAGAGCACGGT TTGCCATGGGTAGCATATACTACCCAAATATCTGGATAGCAT TAATCTATATCTGGG AGCATAGGCTATCCTAATCTATATCT ATGCTATCCTAATCTATATCTGGGTAGTATATGCTATCCTAA GGGTAGCATAGGCTATCCTAATCTATATCTGGGTAGCATATG T CT AT AT CTGGG T AGT AT ATGCT AT C CTAA C TG T ATCCGGG CTATCCTAATAGAGATTAGGGTAGTATATGCTATCCTAATTT AGCATA ACTACCCAAATA C GGATAGCATATGCTATCCT CTGGGTAGCATATGCTATCCTAATCTATATCTGGGTAGCATA AATC ATATCTGGGTAGCAT ATGCT A CCTAATCTATATCTG TGCTATCCTAATTTATATCTGGGTAGCATAGGCTATCCTAAT GGTAGCATATGCTATCCTAATCTATATCTGGGTAGTATATGC CTGTATCCGGGTAGCATATGCTATCCTCATGATAAGCTGTCA ATTTTCTTGAAGACCAAAGGGCCTCGTGATACGCCTATTTTT TGTCATGATAATAATGGTTTCTTAGACGTCAGGTGGCACTTT TGTGCGCGGAACCCCTATTTGTTTATTTTTCTAAATACATTC TCCGCTCATGAGACAATAACCCTGATAAATGCTTCAATAATA GAAGAGTAT G AGTATTC AAC ATT T CCGTGTCGCC CTT AT TCC GGCATTTTGCCTTCCTGTTTTTGCTCACCCAGAAACGCTGGT AGATGCTGAAGATCAGTTGGGTGCACGAGTGGGTTACATCGA CAACAGCGGTAAGATCCTTGAGAGTTTTCGCCCCGAAGAACG GATGAGCACTTTTAAAGTTCTGCTATGTGGCGCGGTATTATC CGCCGGGCAAGAGCAACTCGGTCGCCGCATACACTATTCTCA GGTTGAGTACTCACCAGTCACAGAAAAGCATCTTACGGATGG AAGAGAATTATGCAGTGCTGCCATAACCATGAGTGATAACAC CTTACTTCTGACAACGATCGGAGGACCGAAGGAGCTAACCGC CAACATGGGGGATCATGTAACTCGCCTTGATCGTTGGGAACC TGAAGCCATACCAAACGACGAGCGTGACACCACGATGCCTGC AACAACGTTGCGCAAACTATTAACTGGCGAACTACTTACTCT GCAACAATTAATAGACTGGATGGAGGCGGATAAAGTTGCAGG GCGCTCGGCCCTTCCGGCTGGCTGGTTTATTGCTGATAAATC TGAGCGTGGGTCTCGCGGTATCATTGCAGCACTGGGGCCAGA CTCCCGTATCGTAGTTATCTACACGACGGGGAGTCAGGCAAC ACGAAATAGACAGATCGCTGAGATAGGTGCCTCACTGATTAA ACTGTCAGACCAAGTTTACTCATATATACTTTAGATTGATTT TTTTTAATTTAAAAGGATCTAGGTGAAGATCCTTTTTGATAA CAAAATCCCTTAACGTGAGTTTTCGTTCCACTGAGCGTCAGA AAAGATCAAAGGATCTTCTTGAGATCCTTTTTTTCTGCGCGT CTTGCAAACAAAAAAACCACCGCTACCAGCGGTGGTTTGTTT TTTGCAAAGATGGATAAAGTTTTAAACAGAGAGGAATCTTTG GACCTTCTAGGTCTTGAAAGGAGTGGGAATTGGCTCCGGTGC GGCAGAGCGCACATCGCCCACAGTCCCCGAGAAGTTGGGGGG CAATTGAACCGGTGCCTAGAGAAGGTGGCGCGGGGTAAACTG TGTCGTGTACTGGCTCCGCCTTTTTCCCGAGGGTGGGGGAGA AAGTGCAGTAGTCGCCGTGAACGTTCTTTTTCGCAACGGGTT AACACAGGTAAGTGCCGTGTGTGGTTCCCGCGGGCCTGGCCT TTATGGCCCTTGCGTGCCTTGAATTACTTCCACCTGGCTGCA TCTTGATCCCGAGCTTCGGGTTGGAAGTGGGTGGGAGAGTTC CGCTTAAGGAGCCCCTTCGCCTCGTGCTTGAGTTGAGGCCTG CTGGGGCCGCCGCGTGCGAATCTGGTGGCACCTTCGCGCCTG TTTCGATAAGTCTCTAGCCATTTAAAATTTTTGATGACCTGC TTTTTTCTGGCAAGATAGTCTTGTAAATGCGGGCCAAGATCT TATTTCGGTTTTTGGGGCCGCGGGCGGCGACGGGGCCCGTGC CACATGT CGGCGAGGCGGGGCCTGCGAGCGCGGCCACCGAG GGGGTAGTCTCAAGCTGGCCGGCCTGCTCTGGTGCCTGGCCT GTGTA CGCCCCGCCCTGGGCGGCAAGGCTGGCCCGGTCGGC GTGAGCGGAAAGATGGCCGCTTCCCGGCCCTGCTGCAGGGAG GAGGACGCGGCGCTCGGGAGAGCGGGCGGGTGAGTCACCCAC AAGGGCCTTTCCGTCCTCAGCCGTCGCTTCATG GAC CCAC GGCGCCGTCCAGGCACCTCGATTAGTTCTCGAGCTTTTGGAG TTAGGTTGGGGGGAGGGGTTTTATGCGATGGAGT CCCCA GGTGGAGACTGAAGTTAGGCCAGCTTGGCAC TGATGTAATT ATTTGCCCTTTTTGAGTTTGGATCTTGGTTCATTCTCAAGCC GGTTCAAAGTTTTTTTCTTCCATTTCAGGTGTCGTGAGGAAT ATCCCTCGACCTCGAGATCCATTGTGCCCGGGCGCCACCATG CTGAGCTGGCTTTTTCTTGTCGCGATTTTAAAAGGTGTCCAG ACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGAT AAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTC GAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCG CAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTAC AGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAA TGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAG AGGGGAGAGTGTTGAGCGGCCGCTCGAGGCCGGCAAGGCCGG CCTCGACCTCTGGCTAA AAAGGAAATTTATTTTCATTGCAA GGAATTTTTTGTGTCTCTCACTCGGAAGGACATATGGGAGGG TGGTCGAGATCCCTCGGAGATCTCTAGCTAGAGGATCGATCC ACGAACTAAACCTGACTACGACATCTCTGCCCCTTCTTCGCG ATGTAATCCCTTCAGTTGGTTGGTACAACTTGCCAACTGGGC CATGTGACACGGGGGGGGACCAAACACAAAGGGGTTCTCTGA TGCGGTCAAACCACTTGCCCACAAAACCACTAATGGCACCCC CTGCATAAGTAGGTGGGCGGGCCAAGATAGGGGCGCGATTGC GAGGACAAATTACACACACTTGCGCCTGAGCGCCAAGCACAG TCCTCATATTCACGAGGTCGCTGAGAGCACGGTGGGCTAATG GTAGCATATACTACCCAAATATCTGGATAGCATATGCTATCC TCTGGGTAGCATAGGCTATCCTAATCTATA CTGGGTAGCAT TAATCTATATCTGGGTAGTATATGCTATCC AATTTATATCT AGGCTATCCTAATCTATATCTGGGTAGCATATGCTATCCTAA GGGTAGTATATGCTATCCTAATCTGTATCCGGGTAGCATATG TAGAGATTAGGGTAGTATATGCTATCCTAATTTATATCTGGG CTACCCAAATATCTGGA AGCA ATGCTATCCTAATCTATAT ATATGCTATCCTAATC A ATCTGGGTAGCATAGGCTATCCT CTGGGTAGCATATGCTATCCTAA CTATATCTGGGTAGTATA AAT TT AT ATC TGG GT AGC AT AGG CT AT CCT AATCT AT AT CTG T GCTAT CC T AAT CT AT ATCTGGGT AGT AT ATGCT ATCCT AAT GGTAGCATATGCTATCCTCATGATAAGCTGTCAAACATGAGA AAGACGAAAGGGCCTCGTGATACGCCTATTTT ATAGGTTAA AATAA GGTTTCTTAGACGTCAGGTGGCACTTT CGGGGAAA AACCCCTATTTGTTTATTTTTCTAAATACATTCAAATATGTA GAGACAATAACCCTGATAAATGCTTCAATAATATTGAAAAAG GAGTATTCAACATTTCCGTG CGCCCTTATTCCCTTTTTTGC CCTTCCTGTTTTTGCTCACCCAGAAACGCTGGTGAAAGTAAA AGATCAGTTGGGTGCACGAGTGGGTTACATCGAACTGGATCT TAAGA CC GAGAG TTTCGCCCCGAAGAACGTTTTCCAA TTTTAAAGTTCTGCTATGTGGCGCGGTATTATCCCGTGTTGA AGAGCAACTCGGTCGCCGCATACACTATTCTCAGAATGACTT CTCACCAGTCACAGAAAAGCATCTTACGGATGGCATGACAGT ATGCAGTGCTGCCATAACCATGAGTGATAACACTGCGGCCAA GACAACGATCGGAGGACCGAAGGAGCTAACCGCTTTTTTGCA GGATCATGTAACTCGCCTTGATCGTTGGGAACCGGAGCTGAA ACCAAACGACGAGCGTGACACCACGATGCCTGCAGCAATGGC GCGCAAACTATTAACTGGCGAACTACTTACTCTAGCTTCCCG AATAGACTGGATGGAGGCGGATAAAGTTGCAGGACCACTTCT CCTTCCGGCTGGCTGGTTTATTGCTGATAAATCTGGAGCCGG GTCTCGCGGTATCATTGCAGCACTGGGGCCAGATGGTAAGCC CGTAGTTATCTACACGACGGGGAGTCAGGCAACTATGGATGA ACAGA CGCTGAGATAG GTGCCT C ACTG AT T AAGCAT TGGTA CCAAGTTTACTCATATATACTTTAGATTGATTTAAAACTTCA TAAAAGGATCTAGGTGAAGATCCTTTTTGATAATCTCATGAC TTAACGTGAGTTTTCGTTCCACTGAGCGTCAGACCCCGTAGA TTATTTATGCAGAGGCCGAGGCCGCCTCGGCCTCTGAGCTAT AGTGAGGAGGCTTTTTTGGAGGCCTAGGCTTTTGCAAAAAGC ATGGATAAAGTTTTAAACAGAGAGGAATCTTTGCAGC AATG GGTCTTGAAAGGAGTGGGAATTGGCTCCGGTGCCCGTCAGTG CACATCGCCCACAGTCCCCGAGAAGTTGGGGGGAGGGGTCGG CGGTGCCTAGAGAAGGTGGCGCGGGGTAAACTGGGAAAGTGA Cl'GGCTCCGCCTT'l'TTCCCGAGGGTGGGGGAGAACCGTA AT AGTCGCCGTGAACGTTCTTT TCGCAACGGGTTTGCCGCCAG AAGTGCCGTG GTGG TCCCGCGGGCCTGGCCTCT TACGGG TTGCG GCCTTGAATTACTTCCACC GGCTGCAGTACGTGAT 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GGGTAGTATATGCTATCC AATCT AGCATATGCTATCCTCATGATAAGCTG CAAACATGAGAAT ACGAAAGGGCC CGTGATACGCC A TT TATAGGT AATG AATGGTT CTTAGACGTCAGGTGGCACTTTTCGGGGAAATG CCCTATTTGTTTATT TTCTAAATACA CAAATA GTATC ACAATAACCCTGATAAATGCT CAATAATATTGAAAAAGGA TATTCAACATTTCCGTG CGCCC TATTCCCTTT TTGCGG 'rCCTGTTTTTGiCTCACCCAGAAACGC GGTGAAAGTAAA vG TCAGTTGGGTGCACGAGTGGGTTACATCGAAC GGATCTCA GATCCTTGAGAGTTTTCGCCCCGAAGAACGTTTTCCAATGA TAAAGTTCTGC A GTGGCGCGGTATTATCCCGTGTTGACG GCAACTCGGTCGCCGCATACACTATTCTCAGAATGACT GG ACCAG CACAGAAAAGCATCTTACGGATGGGA GACAGTAA CAGTGCTGCCATAACCATGAGTGATAACACTGCGGCCAACT AACGATCGGAGGACCGAAGGAGCTAACCGCTT TTTGCAC TCATGTAACTCGCCTTGATCGTTGGGAACCGGAGCTGAATG AAACGACGAGCGTGACACCACGATGCCTGCAGCAATGGCA CAAACTATTAACTGGCGAACTACTTACTCTAGCTTCCCGGC AGACTGGATGGAGGCGGATAAAGTTGCAGGACCACTTCTGC TCCGGCTGGCTGGTTTATTGCTGATAAATCTGGAGCCGGTG TCGCGGTATCATTGCAGCACTGGGGCCAGATGGTAAGCCCT AGTTATCTACACGACGGGGAGTCAGGCAACTATGGATGAAC GATCGCTGAGATAGGTGCCTCACTGATTAAGCATTGGTAA AG TTACTCATATATACTTTAGATTGATTTAAAACTTCAT 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GTCCTCAGCCGTCGCTTCATGTGACTCCACGGAGTACCGGG GCACCTCGATTAGTTCTCGAGCTTTTGGAGTACGTCGTCTT GGAGGGGTTTTATGCGATGGAGTTTCCCCACACTGAGTGGG AGTTAGGCCAGCTTGGCACTTGATGTAATTCTCCTTGGAAT TGAGTTTGGATCTTGGTTCATTCTCAAGCCTCAGACAGTGG TTTTCTTCCATTTCAGGTGTCGTGAGGAATTCTCTAGAGAT CGAGATCCATTGTGCCCGGGCGCCACCATGACTTGGACCCC CTCACCCTCCTCCTCCACTGCACAGGAAGCTTATCG ACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGA AAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTT GAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATC CAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTA AGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAA TGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAA AGGGGAGAGTGTTGAGCGGCCGCTCGAGGCCGGCAAGGCCG CCTCGACCTCTGGCTAATAAAGGAAATTTATTTTCATTGCA GGAATTTTTTGTGTCTCTCACTCGGAAGGACATATGGGAGG AGCGGACTCCACTGGTTGTCTCTAACACCCCCGAAAATTAA ACGCCAATGGGGCCCATAAACAAAGACAAGTGGCCACTCTT TTGTGGAGTGGGGGCACGCGTCAGCCCCCACACGCCGCCCT ACTGTAAAATAAGGGTGTAATAACTTGGCTGATTGTAACCC TGCGGTCAAACCACT GCCCACAAAACCACTAATGGCACCC CTGCATAAGTAGGTGGGCGGGCCAAGATAGGGGCGCGATTG GAGGACAAATTACACACACTTGCGCCTGAGCGCCAAGCACA TCCTCA ATTCACGAGGTCGCTGAGAGCACGGTGGGCTAAT GTAGCA ATACTACCCAAATATCTGGATAGCATATGCTATC TCTGGGTAGCATAGGCTATCCTAATCTATATCTGGGTAGCA TAATCTATATCTGGGTAGTATATGCTATCCTAATTTATATC AGGCTATCCTAA CTATATCTGGGTAGCATATGCTATCCTA GGGTAGTATATGCTATCCTAATCTGTATCCGGGTAGCATAT TAGAGATTAGGGTAGTATATGCTATCCTAATTTATATCTGG CTACCCAAATATCTGGATAGCATATGCTATCCTAATCTATA ATATGCTATCCTAATCTATATCTGGGTAGCATAGGCTATCC CTGGGTAGCATATGCTATCCTAATCTATATCTGGGTAGTAT AATTTATATCTGGGTAGCATAGGCTATCCTAATCTATATCT TGCTATCCTAA CTATATCTGGGTAGTATATGCTATCCTAA GGTAGCATATGCTATCCTCATGATAAGCTGTCAAACATGAG AAGACGAAAGGGCCTCGTGATACGCCTA TTTATAGGT A AATAATGGTT CTTAGACGTCAGGTGGCACTTTTCGGGGAA AACCCCTATT GTTTATTTTTCTAAATACATTCAAATA GT GAGACAA AACCCTGATAAATGC TCAATAA ATTGAAAAA GAGTATTCAACATTTCCGTGTCGCCCTTATTCCCTTTTTTG CCTTCCTGTTTTTGCTCACCCAGAAACGCTGGTGAAAGTAA AGATCAGTTGGGTGCACGAGTGGGTTACATCGAAC GGATC TAAGATCCTTGAGAGTTTTCGCCCCGAAGAACGT TTCCAA TTTTAAAGTTCTGCTATGTGGCGCGGTATTATCCCGTGTTG AGAGCAACTCGGTCGCCGCATACACTATTCTCAGAATGACT CTCACCAGTCACAGAAAAGCATCTTACGGATGGCATGACAG ATGCAG GC GCCATAACCATGAGTGATAACACTGCGGCCA GACAACGATCGGAGGACCGAAGGAGCTAACCGCTTT TGC GGATCATGTAACTCGCCTTGATCGTTGGGAACCGGAGCTGA ACCAAACGACGAGCGTGACACCACGATGCCTGCAGCAATGG GCGCAAACTATTAACTGGCGAACTACTTACTCTAGCTTCCC AATAGACTGGATGGAGGCGGATAAAGTTGCAGGACCACTTC CCTTCCGGCTGGCTGGTTTATTGC GATAAATCTGGAGCCG GTCTCGCGGTATCATTGCAGCACTGGGGCCAGATGGTAAGC CGTAGT ATCTACACGACGGGGAGTCAGGCAACTATGGATG ATAACAATTTCACACAGGAAACAGCTATGACCATGATTACG GCTAGAGGTCGAGTCCCTCCCCAGCAGGCAGAAGTATGCAA TCAATTAGTCAGCAACCATAGTCCCGCCCC AACTCCGCCC TAACTCCGCCCAGTTCCGCCCATTCTCCGCCCCATGGCTGA TTATTTATGCAGAGGCCGAGGCCGCCTCGGCCTCTGAGCTA AGTGAGGAGGCTTTTTTGGAGGCCTAGGCTTTTGCAAAAAG ATGGATAAAGTTTTAAACAGAGAGGAATCTTTGCAGCTAAT GGTCTTGAAAGGAGTGGGAATTGGCTCCGGTGCCCGTCAGT CACATCGCCCACAGTCCCCGAGAAGTTGGGGGGAGGGGTCG CGGTGCCTAGAGAAGGTGGCGCGGGGTAAACTGGGAAAGTG CTGGCTCCGCCTTTTTCCCGAGGGTGGGGGAGAACCGTATA AGT CGCCGTG AACGT TCTT TT CGC AACGGG TGCCGC CA AAGTGCCGTGTGTGGTTCCCGCGGGCCTGGCCTCTTTACGG TTGCGTGCCTTGAATTACTTCCACCTGGCTGCAGTACGTGA CGAGCTTCGGGTTGGAAGTGGGTGGGAGAGTTCGAGGCCTT AGCCCCTTCGCCTCGTGCTTGAGT GAGGCCTGGCCTGGGC CCGCGTGCGAATCTGGTGGCACCTTCGCGCCTGTCTCGCTG GTCTCTAGCCATTTAAAATTTTTGATGACCTGCTGCGACGC GCAAGATAGTCTTGTAAATGCGGGCCAAGATCTGCACACTG TTTTGGGGCCGCGGGCGGCGACGGGGCCCGTGCGTCCCAGC GGCGAGGCGGGGCCTGCGAGCGCGGCCACCGAGAATCGGAC TC GCTGGCCGGCCTGCTCTGGTGCCTGGCCTCGCGCCGC CCCGCCCTGGGCGGCAAGGCTGGCCCGGTCGGCACCAGTTG AAGATGGCCGCTTCCCGGCCCTGCTGCAGGGAGCTCAAAAT GCGCTCGGGAGAGCGGGCGGGTGAGTCACCCACACAAAGGA CCGTCCTCAGCCGTCGCTTCATGTGACTCCACGGAGTACC CAGGCACCTCGATTAGTTCTCGAGCTTTTGGAGTACGTCGT GGGGGAGGGGTTTTATGCGATGGAGTTTCCCCACACTGAGT TGAAGTTAGGCCAGCTTGGCACTTGATGTAATTCTCCTTGG TTTTGAGTTTGGATCTTGGTTCATTCTCAAGCCTCAGACAG TTTTTTTCTTCCATTTCAGGTGTCGTGAGGAATTCTCTAGA CCTCGAGATCCATTGTGCCCGGGCGCACCATGACT GGACC TCCTCACCCTCCTCCTCCACTGCACAGGAAGCTTATCG 240 V5 CAACCCAAGGCTGCCCCCTCGGTCACTCTGTTCCCGCCCTC CTTCAAGCCAACAAGGCCACACTGGTGTGTCTCATAAGTGA GGAGCCGTGACAGTGGCCTGGAAGGCAGATAGCAGCCCCGT GTGGAGACCACCACACCC CCAAACAAAGCAACAACAAG A AGCTACCTGAGCCTGACGCCTGAGCAGTGGAAGTCCCACAG TGCCAGGTCACGCATGAAGGGAGCACCGTGGAGAAGACAGT GAATGTTCATGAGCGGCCGCTCGAGGCCGGCAAGGCCGGAT TGGGGTTATTAAGATGTGTCCCAGGCAGGGACCAAGACAGG TGTTACACTCTATTTGTAACAAGGGGAAAGAGAGTGGACGC GGACTCCACTGGTTG CTCTAACACCCCCGAAAATTAAACG CCAATGGGGCCCATAAACAAAGACAAGTGGCCACTCTTTTT TGGAGTGGGGGCACGCGTCAGCCCCCACACGCCGCCCTGCG GTAAAATAAGGGTGTAATAACTTGGCTGATTGTAACCCCGC GGTCAAACCACTTGCCCACAAAACCACTAAl'GGCACCCCGG CATAAGTAGGTGGGCGGGCCAAGATAGGGGCGCGATTGCTG GACAAATTACACACACTTGCGCCTGAGCGCCAAGCACAGGG TCATATTCACGAGGTCGCTGAGAGCACGGTGGGCTAATGTT GCA ATAC ACCCAAATATCTGGA AGCATATGCTA CCTA GGGTAGCATAGGCTATCCTAATC A ATCTGGGTAGCA AT TCTATATCTGGGTAGTATATGCTATCCTAATTTATATCTGG CT AT CCTAAT CTAT AT CTGGGT AGC AT A GCT AT CC AAT C TAGTATATGCTATCCTAATCTGTATCCGGGTAGCATATGCT AGATTAGGGTAGTATATGCTATCCTAATTTATATCTGGGTA CCCAAATATCTGGATAGCATATGCTATCC AATCTATATCT TGCTATCCTAATCTATATCTGGGTAGCATAGGCTATCCTAA GGTAGCATA GCTATCCrAATCTATATCTGGGTAGTATATG TTATATCTGGGTAGCATAGGCTATCCTAA CTATATCTGGG TATCCTAATCTATATCTGGGTAGTATATGC ATCCTAATCT AGCATATGCTATCCTCATGATAAGCTGTCAAACATGAGAAT ACGAAAGGGCCTCGTGATACGCCTATTTTTATAGGTTAATG AATGGTTTCTTAGACGTCAGGTGGCACTTTTCGGGGAAATG CCCTATTTGTTTATTTTTCTAAATACATTCAAATATGTATC ACAATAACCCTGATAAATGCTTCAATAATATTGAAAAAGGA TATTCAACATTTCCGTGTCGCCCTTATTCCCTTTTTTGCGG TCCTGTTTTTGCTCACCCAGAAACGCTGGTGAAAGTAAAAG TCAGTTGGGTGCACGAGTGGGTTACATCGAACTGGATCTCA GATCCTTGAGAGTTTTCGCCCCGAAGAACGTTTTCCAATGA TAAAGTTCTGCTATGTGGCGCGGTATTATCCCGTGT GACG GCAACTCGGTCGCCGCA ACACTATTCTCAGAATGACTTGG ACCAGTCACAGAAAAGCATCTTACGGATGGCATGACAGTAA CAGTGCTGCCATAACCATGAGTGATAACACTGCGGCCAACT AACGATCGGAGGACCGAAGGAGCTAACCGC TTTTGCACA TCATGTAACTCGCCTTGATCGTTGGGAACCGGAGCTGAATG AAACGACGAGCGTGACACCACGATGCCTGCAGCAATGGCAA CAAACTATTAACTGGCGAACTACTTACTCTAGCTTCCCGGC AGACTGGATGGAGGCGGATAAAGTTGCAGGACCACTTCTGC TCCGGCTGGCTGGTTTATTGCTGATAAATCTGGAGCCGGTG TGAGCGCAACGCAATTAATGTGAG TAGC C CTCA AGGC T TACACTTTATGCTTCCGGCTCGTATGTTGTGTGGAATTGT ACAA TTCACACAGGAAACAGCTATGACCATGATTACGCCAA AGAGGTCGAGTCCCTCCCCAGCAGGCAGAAGTATGCAAAGCA ATTAGTCAGCAACCATAGTCCCGCCCCTAACTCCGCCCATCC CTCCGCCCAGTTCCGCCCATTC CCGCCCCATGGCTGACTAA TTTATGCAGAGGCCGAGGCCGCCTCGGCCTCTGAGC ATTCC GAGGAGGCTT TTTGGAGGCCTAGGCTTTTGCAAAAAGC T GATAAAGTTTTAAACAGAGAGGAATCTTTGCAGCTAATGGAC CTTGAAAGGAGTGGGAATTGGCTCCGGTGCCCGTCAGTGGGC ATCGCCCACAGTCCCCGAGAAGTTGGGGGGAGGGG CGGCAA TGCCTAGAGAAGGTGGCGCGGGGTAAACTGGGAAAGTGA GT GCTCCGCCTT TTCCCGAGGGTGGGGGAGAACCGTATATAAG CGCCGTGAACGTTCTTT TCGCAACGGGTT GCCGCCAGAAC TGCCGTGTGTGGTTCCCGCGGGCCTGGCCTCTTTACGGGTTA CGTGCCTTGAATTAC CCACCTGGCTGCAGTACGTGATTCT GCTTCGGGTTGGAAGTGGGTGGGAGAGTTCGAGGCCTTGCGC CCCTTGGCCTCG GCTTGAGTTGAGGCC GGCCTGGGCGCTG CGTGCGAA CTGGTGGCACC TCGCGCCTGTC CGCTGCT TCTAGCCATTTAAAA TGATGACCTGC GCGACGCTTTT AGATAGTCT GTAAATGCGGGCCAAGATCTGCACACTGGTAT TGGGGCCGCGGGCGGCGACGGGGCCCGTGCGTCCCAGCGCAC GAGGCGGGGCCTGCGAGCGCGGCCACCGAGAATCGGACGGGG AGCTGGCCGGCCTGCTCTGGTGCCTGGCCTCGCGCCGCCGTG GCCCTGGGCGGCAAGGCTGGCCCGGTCGGCACCAGTTGCGTG ATGGCCGCTTCCCGGCCCTGCTGCAGGGAGCTCAAAATGGAG CTCGGGAGAGCGGGCGGGTGAGTCACCCACACAAAGGAAAAG GTCCTCAGCCGTCGCT CATGTGACTCCACGGAGTACCGGGC GCACCTCGATTAGTTCTCGAGCTTTTGGAGTACG CG CTTT GGAGGGGTTTTATGCGA GGAG TTCCGCACACTGAGTGGGT AGTTAGGCCAGCTTGGCACTTGATGTAATTCTCCTTGGAATT TGAGTTTGGATCT GGTTCATTCTCAAGCCTCAGACAGTGGT TTTTC TCCAT CAGG GTCGTGAGGAATTCTCTAGAGATC CGAGA CCA TGTGCCCGGGCGCCACCATGGACATGCGCG CTGCTGGGCCTGCTGCTGCTGTGGTTCCCCGGCTCGCGATG 241 V7 GCGTCGACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTC ACCTC GGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGA GAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAG ACCTTCCCGGCTGTCCTACAG CCTCAGGACTC ACTCCCT GTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACAT CCTTTATGTGTAACTCTTGGCTGAAGCTCTTACACCAATGCT GTACCTCCCAGGGGCCCAGGAAGACTACGGGAGGCTACACC AGAGGGGCCTGTGTAGCTACCGATAAGCGGACCCTCAAGAG ATAGTGTTTATAAGGCCCCCTTGTTAACCC AAACGGGTAG CCGGGTAGTAGTATATACTATCCAGACTAACCCTAATTCAA TACCCAACGGGAAGCATA GCTATCGAATTAGGGTTAGTAA AGGAACAGCGATATCTCCCACCCCATGAGCTGTCACGGTT GGGTCAGGATTCCACGAGGGTAGTGAACCATTTTAGTCACA CTGAAGATCAAGGAGCGGGCAGTGAACTCTCCTGAA CTTC TCATTCTCCTTCGTTTAGCTAATAGAATAACTGCTGAGTTG GGTGTATGTGAGGTGCTCGAAAACAAGGTTTCAGGTGACGC AAA TTGGACGGGGGGTTCAGTGGTGGCATTGTGCTATGAC CCCTCACAAACCCCTTGGGCAATAAATACTAGTGTAGGAAT GAATATCTTTAACAA AGAAATCCATGGGGTGGGGACAAGC GGATGTCCATCTCACACGAATTTATGGCTA GGGCAACACA GCAATATGATACTGGGGTTATTAAGATGTGTCCCAGGCAGG GGTGAACCATGTTGTTACACTCTA TTGTAACAAGGGGAAA GCCGACAGCAGCGGACTCCACTGGTTGTCTCTAACACCCCC CGGGGCTCCACGCCAATGGGGCCCATAAACAAAGACAAGTG TTTTTGAAATTGTGGAGTGGGGGCACGCGTCAGCCCCCACA CGGTTTTGGACTGTAAAATAAGGGTGTAATAACT GGCTGA GCTAACCACTGCGGTCAAACCACTTGCCCACAAAACCACTA GGGGAATACCTGCATAAGTAGGTGGGCGGGCCAAGATAGGG TGCGATCTGGAGGACAAATTACACACACTTGCGCCTGAGCG GGTTGTTGG CCTCA ATTCACGAGGTCGCTGAGAGCACGG TTGCCATGGGTAGCATATACTACCCAAATATCTGGATAGCA TAATCTATATCTGGGTAGCATAGGCTATCC AATCTATATC ATGCTATCCTAATCTATATCTGGGTAGTA ATGCTATCCTA GGGTAGCATAGGCTATCCTAATCTATATCTGGGTAGCATAT TCTATATCTGGGTAGTATATGC ATCCTAATCTGTATCCGG CTATCCTAATAGAGATTAGGGTAG ATA GCTATCCTAATT AGCATATACTACCCAAATATCTGGATAGCATATGCTATCC CTGGGTAGCATATGCTATCCTAATCTATATCTGGGTAGCAT AATCTA ATCTGGGTAGCATATGCTATCCTAATCTATATCT GCTATCCTAATTTATATCTGGGTAGCATAGGCTATCCTAA GGTAGCA ATGCTATCCTAATCTATATCTGGGTAGTATATG CTGTATCCGGGTAGCA ATGCTATCCTCATGATAAGCTGTC ATTTTCTTGAAGACGAAAGGGCCTCGTGATACGCC ATTTT TGTCATGATAATAATGGTTTCTTAGACGTCAGGTGGCACTT GTGCGCGGAACCCC A'I'TTG TTATTTTTC AAATACATT AGAGCTACCAACTCTTTTTCCGAAGGTAACTGGCTTCAGC ACCAAATACTGTTCTTCTAGTGTAGCCGTAGTTAGGCCAC C C GTAGCACCGCCTACATACCTCGCTCTGCTAATCCTG TGCTGCCAGTGGCGATAAGTCGTGTCTTACCGGGTTGGAC GTTACCGGATAAGGCGCAGCGGTCGGGCTGAACGGGGGGT GCCCAGCTTGGAGCGAACGACCTACACCGAACTGAGATAC GCTATGAGAAAGCGCCACGCTTCCCGAAGGGAGAAAGGCG GGTAAGCGGCAGGGTCGGAACAGGAGAGCGCACGAGGGAG AAACGCCTGGTATCTTTATAGTCCTGTCGGGTTTCGCCAC GCGTCGATTTTTGTGATGCTCGTCAGGGGGGCGGAGCCTA CAGCAACGCGGCCTTTTTACGGTTCCTGGCCTTTTGCTGG CATGTTCTTTCCTGCGTTATCCCCTGATTCTGTGGATAAC CTTTGAGTGAGCTGATACCGCTCGCCGCAGCCGAACGACC GTCAGTGAGCGAGGAAGCGGAAGAGCGCCCAATACGCAAA CGCGCGTTGGCCGATTCATTAATGCAGCTGGCACGACAGG GAAAGCGGGCAGTGAGCGCAACGCAATTAATGTGAGTTAG GGCACCCCAGGCTTTACACTTTATGCTTCCGGCTCGTATG TGTGAGCGGATAACAATTTCACACAGGAAACAGCTATGAC CAAGCTCTAGCTAGAGGTCGAGTCCC CCCCAGCAGGCAG GCATGCATCTCAATTAGTCAGCAACCATAGTCCCGCCCC TCCCGCCCCTAAC CCGCCCAGTTCCGCCCATTCTCCGCC TAATTTTTTTTATTTATGCAGAGGCCGAGGCCGCCTCGGC TCCAGAAGTAGTGAGGAGGCTTTTTTGGAGGCCTAGGCTT TTTGCAAAGATGGATAAAGTTTTAAACAGAGAGGAATCTT GACCTTCTAGGTCTTGAAAGGAGTGGGAATTGGCTCCGGT GGCAGAGCGCACATCGCCCACAGTCCCCGAGAAGTTGGGG CAATTGAACCGGTGCCTAGAGAAGGTGGCGCGGGGTAAAC TGTCGTGTACTGGCTCCGCCTTTTTCCCGAGGGTGGGGGA AAGTGCAGTAGTCGCCGTGAACGTTCTTTTTCGCAACGGG AACACAGGTAAGTGCCGTGTGTGGTTCCCGCGGGCCTGGC TTATGGCCCTTGCGTGCCTTGAATTACTTCCACCTGGCTG TCTTGATCCCGAGCTTCGGGTTGGAAGTGGGTGGGAGAGT CGCTTAAGGAGCCCCTTCGCCTCGTGCTTGAGTTGAGGCC CTGGGGCCGCCGCGTGCGAATCTGGTGGCACCTTCGCGCC TTCGATAAGTCTCTAGCCATTTAAAATTTTTGATGACCT TTTTTTCTGGCAAGATAGTCTTGTAAATGCGGGCCAAGAT TATTTCGGTTTTTGGGGCCGCGGGCGGCGACGGGGCCCGT CACATGTTCGGCGAGGCGGGGCCTGCGAGCGCGGCCACCG GGGGTAGTCTCAAGCTGGCCGGCCTGCTCTGGTGCCTGGC La presente invención incorpora para referen alidad, técnicas bien conocidas en el campo de biologí suministro de fármaco. Estas técnicas incluyen, pero n técnicas descritas en las siguientes publicaciones: subel et al. (eds.), Current Protocols in Molecular Bi iley & Sons, NY (1993); subel, F.M. et al. eds., Short Protocols In Molecular . 1999) John Wíley & Sons, NY. (ISBN 0-471 -32938-X). ntrolled Druq Bioavailability. Drug Product D rformance. Smolen and Ball (eds.), Wiley, New York (1 ege, R. and Ducruix, A. Barrett, Crystallization of d Proteins, a Practica! Approach, 2nd ea., pp. 20 1 iversity Press, New York, New York, (1999); odson, in Medical Applications of Controlled Reléase, 5-138 (1984); mmerling, et al., in: Monoclonal Antibodies and T-Cell rlag. New York. 790 pp. (ISBN 3-540-41354-5). iegler, Gene Transfer and Expression, A Laborato ockton Press, NY (1990); and Weiner eds., Cloninq and Expression Vector nction Analvsis (2001) BioTechniques Press. Westb 8 pp. (ISBN 1-881299-21 -X). dical Applications of Controlled Reléase. Langer and C Pres., Boca Ratón, Fia. (1974); d, R. W. & S, B. Primrose, Principies of Gene Mani troduction To Genetic Engineeríng (3d Ed. 1985 ientific Publications, Boston. Studies in Microbiology; BN 0-632-01318-4). mbrook, J. et ai. eds., Molecular Cloning: A Laboratorv . 1989) Cold Spring Harbor Laboratory Press, NY. Vols 87969-309-6). stained and Controlled Reléase Prug Deliverv Sv incorporación para Referencia Los contenidos de todas las referencias citadas ferencias de literatura, patentes, solicitudes de pate b) que pueden ser citados a través de esta solicitud s uí expresamente para referencia en su totalidad, a ferencias citadas ahí. La práctica de la present ipleará, a menos que se indique otra cos nvencionales de inmunología, biología molecular y biol s cuales son bien conocidas en la técnica.
Equivalentes La invención puede ser modalizada en otras formas n apartarse del espíritu o sus características esen dalidades anteriores, por lo tanto, deben ser consi dos los respectos ilustrativos en lugar de limita l scrita aquí. El alcance de la invención de esta

Claims (1)

  1. REIVINDICACIONES 1. Uña proteína de unión que comprende una lipéptido, en donde dicha cadena de polipéptído com 1)n~VD2-C-(X2)n, en donde: VD1 es un primer dominio variable de cadena pesad VD2 es un segundo dominio variable de cadena pes C es un dominio constante de cadena pesada; X1 es un enlazador siempre que no sea CH1; X2 es una región Fe; y n es 0 ó 1 ; donde la proteína de unión es capaz de unir un par d leccionados del grupo que consiste de TNF e IL-1 NKL; TNF y VEGF; TNF y SOST; TNF y DKK; TNF y F y NGF; TNF e IL-23pl9; TNF e IL-6; TNF e IL-6R; T E e IL-13; IL- 13 e IL-23p19; IgE e IL~4; IgE e IL-9; IL - - - - lipéptido, en donde dicha cadena de polipéptido com 1 )n-VD2-C-(X2)n, en donde: VD1 es un primer dominio variable de cadena ligera; VD2 es un segundo dominio variable de cadena lige C es un dominio constante de cadena ligera; X1 es un enlazador siempre que no sea CH1; X2 no comprende una región Fe; y n es 0 ó 1; donde la proteína de unión es capaz de unir un par d leccionados del grupo que consiste de TNF e IL-1 NKL; TNF y VEGF; TNF y SOST; TNF y DKK; TNF y F y NGF; TNF e IL-23pl9; TNF e iL-6; TNF e IL-6R; T E e IL-13; IL- 13 e IL-23p19; IgE e IL-4; IgE e IL-9; IL -13 e IL-4; IL-6R y VEGF; IL-6R e IL-17A; IL-6R y RAN -1beta; IL-1beta y RANKL; IL-1beta y VEGF; RANKL y lfa y IL-1 beta. lipéptido comprende un primer VD 1 -(X1 )n-VD2-C-(X2)n, VD1 es un primer dominio variable de cadena pesad VD2 es un segundo dominio variable de cadena pes C es un dominio constante de cadena pesada; X1 es un enlazador siempre que no sea CH1; y X2 es una región Fe; y donde dicha segunda cadena de polipéptido co gundo VD1-(X1)n-VD2-C-(X2)n, en donde: VD1 es un primer dominio variable de cadena ligera; VD2 es un segundo dominio variable de cadena liger C es un dominio constante de cadena ligera; X1 es un enlazador siempre que no sea CH1; X2 no comprende una región Fe; y n es 0 ó 1 ; donde la proteína de unión es capaz de unir un par d eccionados del grupo que consiste de TNF e IL-1 e consiste de SEC ID Nos: 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, , 50, 52, 54, 56, 58, 60, 62, 64, 66, 68, y 70, y e minios variables de cadena ligera VD1 y VD2 comp cuencia de aminoácido seleccionada del grupo que C ID NOs: 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47, 49, , 59, 61, 63, 65, 67, 69, y 71. 8. La proteína de unión de acuerdo con la reivi ó 6, en donde X1 y X2 es una secuencia de leccionada del grupo que consiste de SEC ID NOs 1-26. 9. La proteína de unión de acuerdo con la reivi donde la proteína de unión comprende dos primeras lipéptido y dos segundas cadenas de polipéptido. 10. La proteína de unión de acuerdo con la reivi ó 6, en donde la región Fe se selecciona del grupo q la región Fe de secuencia nativa y una región Fe d riante. ó 6, en donde dicho VD1 de la primera cadena de p cho VD1 de la segunda cadena de polipéptido se o bt i imer y segundo anticuerpo parental diferente, respect rción de unión a antígeno del mismo. 14. La proteína de unión de acuerdo con la reivi ó 6, en donde dicho VD2 de la primera cadena de p cho VD2 de la segunda cadena de polipéptido se o smo primer y segundo anticuerpo parental, respect rción de unión a antígeno del mismo. 15. La proteína de unión de acuerdo con la reivi ó 6t en donde dicho VD2 de la primera cadena de p cho VD2 de la segunda cadena de polipéptido se obti mer y segundo anticuerpo parental diferente, respect rción de unión a antígeno del mismo. 16. La proteína de unión de acuerdo con cualqu ivindicaciones 13-15, en donde dichos primero rción de unión del mismo, une dicho primer antíge inidad diferente de la afinidad con la cual dich ticuerpo parental o porción de unión de antígeno del ho segundo antígeno. 19. La proteína de unión de acuerdo con cualqu ¡vindicaciones 13-15, en donde dicho primer anticuerp rción de unión del mismo, y dicho segundo anticuerp rción de unión a antígeno del mismo, se seleccionan d nsiste de un anticuerpo humano, un anticuerpo injertad un anticuerpo humanizado. 20. La proteína de unión de acuerdo con cualq vindicaciones 13-15, en donde dicho primer anticuerp rción de unión del mismo, y dicho segundo anticuerp rción de unión a antígeno del mismo, se seleccionan d nsiste de un fragmento Fab; un fragmento F(ab')2; u valente que comprende dos fragmentos Fab enlazados rental o porción de unión a antígeno del mismo. 22. La proteína de unión de acuerdo con la reivi donde dicha propiedad deseada se selecciona de rámetros de anticuerpo. 23. La proteína de unión de acuerdo con la reivin donde dichos parámetros se seleccionan del grupo q especificidad de antígeno, afinidad a antígeno, poten lógica, reconocimiento de epítopo, estabilidad, iciencia de producción, inmunogenicidad, farm disponibiiídad, reactividad cruzada de tejido, y unión tóloga. 24. Una proteína de unión capaz de unir dos an mprenden cuadro cadenas de polipéptido, en donde d polipéptido comprenden VD1-(X1)n-VD2-C-(X2)n, en d VD1 es un primer dominio variable de cadena pesad VD2 es un segundo dominio variable de cadena pes X2 no comprende una región Fe; y n es 0 ó 1 ; donde los dominios variables de cadena pesada mprenden una secuencia de aminoácido seleccionad e consiste de SEC ID NOs: 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, , 50, 52, 54, 56, 58} 60, 62, 64, 66, 68, y 70, y e minios variables de cadena ligera VD1 y VD2 comp cuencia de aminoácido seleccionada del grupo que C ID NOs: 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47, 49, , 59, 61, 63, 65, 67, 69, y 71. 25. Una proteína de unión capaz de unir dos an mprenden cuadro cadenas de polipéptido, en donde d polipéptido comprenden VD1 -(X1 )n-VD2-C-(X2)n, en d VD1 es un primer dominio variable de cadena pesad VD2 es un segundo dominio variable de cadena pes C es un dominio constante de cadena pesada; ¦ X2 no comprende una región Fe; y n es 0 ó 1 ; donde las DVD-lg une por lo menos un antígeno selec upo que consiste de TNF, RANKL, VEGF, NGFt SOST, aVbeta3, IL-13, IL-4, IL-9, IL-17A, IL-1 alfa, IL-1 bétaf I IgE, IL-6R, e IL-9. 26. La proteína de unión de acuerdo con la reivi 6, 24, ó 25, en donde dicha proteína de unión tiene un velocidad de acción (Kon) para dicho uno o má leccionados del grupo que consiste de: por roximadamente 102M*1S"1 ; por lo menos aproximada "1; por lo menos aproximadamente 104M-1S ; por roximadamente 105M-1S"1; y por lo menos aproximada "\ según medido a través de resonancia de plasmón su 27. La proteína de unión de acuerdo con la reivi 6, 24, ó 25, en donde dicha proteína de unión tiene un cho 10"9M; a lo mucho 10"',0M; a lo mucho 10"11M; a l ; y a lo mucho 10"13M. 29. Un conjugado de proteína de unión que com oteína de unión de acuerdo con la reivindicación 1, 3, donde dicho conjugado de proteína de unión además agente seleccionado del grupo que consiste de: una munoadhesión, un agente formador de imagen, rapéutico, y un agente citotóxico. 30. El conjugado de proteína de unión de acu ¡vindicación 29, en donde dicho agente es un agente agen se selecciona del grupo que consiste de una radi zima, una etiqueta fluorescente, una etiqueta !umini iqueta bio-luminiscente, una etiqueta magnética, y bioti 31. El conjugado de proteína de unión de acu vindicación 30, en donde dicho el agente formador d a radioetiqueta seleccionada del grupo que consiste 90 " 111 125 31 177 166 153 i ó n cristalizada. 34. La proteína de unión de acuerdo con la reivin donde dicho cristal es un cristal de liberación rmacéutico libre de vehículo. 35. La proteina de unión de acuerdo con la reivin donde dicha proteína de unión tiene una vida media m e la contraparte soluble de dicha proteína de unión. 36. La proteína de unión de acuerdo con la reivin donde dicha proteína de unión retiene la actividad biol 37. Un ácido nucleico aislado que codifica una s inoácido de proteína de unión de acuerdo con cualq ¡vindicaciones 1, 3, 6, 24, ó 25. 38. Un vector que comprende un ácido nucleico uerdo con la reivindicación 37. 39. El vector de acuerdo con la reivindicación 3 cho vector se selecciona del grupo que consiste de p " 44. La célula huésped de acuerdo con la reivindic nde dicha célula eucariótica se selecciona del grupo q célula protista, célula de animal, célula vegetal y célul 45. La célula huésped de acuerdo con la reivindic nde dicha célula eucariótica es una célula de animal s \ grupo que consiste de una célula de mamífero, una cé una célula de insecto. 46. La célula huésped de acuerdo con la reivindic nde dicha célula huésped es una célula CHO. 47. La célula huésped de acuerdo con la reivindic nde dicha célula huésped es COS. 48. La célula huésped de acuerdo con la reivindic nde dicha célula huésped es una célula de levadura. 49. La célula huésped de acuerdo con la reivindic nde dicha célula de levadura es Saccharomyces cerevi 50. La célula huésped de acuerdo con la reivindic 75%-90% de la proteína de unión producida es una ión tetravalente específica doble. 54. El método de acuerdo con la reivindicación 5 90%-95% de la proteína de unión producida es una ión tetravalente específica doble. 55. Una proteína producida de acuerdo con el m ivindicacÍón 51. 56. Una composición farmacéutica que comprende unión de cualquiera de las reivindicaciones 1-36 hículo farmacéuticamente aceptable. 57. La composición farmacéutica de acuerd ¡vindicación 56, que además comprende por lo meno rapéutico adicional. 58. La composición farmacéutica de acuerd ¡vindicación 57, en donde dicho agente terapéutico ecciona del grupo que consiste de. agente terapéut rticoesteroide, un esteroide anabólico, una eritropo munización, una inmunoglobulina, un inmunosupresor, u crecimiento, un fármaco de reemplazo de hormona rmacéutico, un antidepresivo, un anti-psicótico, un esti dicamento para asma, un agonista beta, un esteroid a epinefrina o análogo, una citocina, y un antagonista d 59. Un método para tratar a un sujeto para una e trastorno, administrando al sujeto la proteína d alquiera de las reivindicaciones 1-36 y 55, de ma tamiento es logrado. 60. Ei método de acuerdo con la reivindicación 5 cho trastorno se selecciona del grupo que compre umatoide, osteoartritis, artritis crónica juvenil, artri tritis de Lyme, artritis psoriática, artritis pondiloatropatia, lupus ststémico eritematoso, enfe ohn, colitis ulcerativa, enfermedad inflamatoria de drome de choque tóxico, síndrome de sepsis, fermedades infecciosas, enfermedades parásitas, s unodef ¡ciencia adquirida, mielitis transversal aguda ntington, enfermedad de Parkinson, enfermedad de oplejía, cirrosis biliar primaria, anemia hemolítica, m lla cardiaca, infarto al miocardio, enfermedad d ficiencia poiiglandular esporádica de tipo I y liglandular de tipo 11, síndrome de Schmidt, síndrome spiratoria en adultos (aguda), alopecia, alopecia areat ronegativa, artropatía, enfermedad de Reíter, artropatí tropatía eolítica ulcerativa, sinovitis enteropática rsinia y artropatía asociada con saimonella, espondi fermedad a tero matosa/a rterioesclero sis, alergia fermedad bullosa autotnmune, pénfigo vulgarís, pénfi nfigoide, enfermedad de IgA lineal, anemia hemolítica emia hemolítica positiva de Coombs, anemia pernicios lamatoria, neumonitis intersticial, enfermedad de tejid ociada con enfermedad pulmonar intersticial, enfermed ociada con enfermedad de tejido conectivo mixta, lmonar intersticial asociada con esclerosis sistémica, lmonar asociada con artritis reumatoide, enfermeda ociada con lupus sistémico erítematoso, enfermeda ociada con dermatomiositis/polimiositis, enfermeda ociada con la enfermedad de Sjógren, enfermeda ociada con espondilitis anquilosante, enfermedad pulrr sculítica, enfermedad pulmonar asociada con he fermedad pulmonar intersticial inducida por fármac rosis de radiación, bronquiolitis obliteran, neumonía ónica, enfermedad pulmonar de infiltración linfocítica, lmonar intersticial pos-infecciosa, artritis gotosa toinmune, hepatitis autoinmune de tipo 1 (hepatitis sica o iupoide), hepatitis autoinmune de tipo 2 ( b-tipos), oftalmía sinpatética, hipertensión pulmonar s fermedad de tejido conectivo, síndrome de G nifestación pulmonar de poliarteritis nodosa, fiebr uda, espondilitis reumatoide, enfermedad de Still, témica, síndrome de Sjórgren, enfermedad de Takaya mbocitopenia autoinmune, trombocitopenia idiopática, la tiroides autoinmune, hipertiroidismo, hipotiroidismo n bocio (enfermedad de Hashimoto), hipotiroidismo rófico, mixidema primario, uveítis facogénica, vasculit fermedad hepática aguda, vitíligo, enfermedades c gado, cirrosis alcohólica, daño hepático inducido lecistitis, enfermedad del hígado idiosincrática, hepati r fármacos, esteatohepatitis no alcohólica, alergi ección por estreptococo del grupo B (GBS), trastorn or ejemplo, depresión y esquizofrenia), enfermedade r tipo Th2 y tipo Th1, dolor agudo y crónico (diferente ntacto, rinitis alérgica, rechazo de aloinjerto, deficienc ti-tripsina, esclerosis lateral amiotrófica, anemia, angin generación celular de cuero anterior, terapia anti-cd ti-f osf ol ípido, reacciones de hipersensibílidad de a eurismas aórticos y periféricos, disección aórtica, terial, arteriesclerosis, fístula arteriovenosa, ataxia rial (sostenida o paroxismal), trepidación auricu rioventricular, linfoma de célula B, rechazo de injert chazo de trasplante de médula ósea (BMT), bloque de grupo, linfoma de Burkitt, quemaduras, arritmias ndrome de atrofia cardiaca, tumores cardiacos, car spuesta de inflamación de derivación cardiopulmonar, splante de cartílago, degeneraciones corticales d stornos de cerebelo, taquicardia atrial caótica o de fo stornos asociados con quimioterapia, leucemia mielocí ML), alcoholismo crónico, patologías inflamatoria wy Difuso, cardiomiopatía congestiva dilatada, trasto nglios básales, síndrome de Down en edad media, tr vimiento inducidos por fármacos, que bloquean los re pamina del sistema nervioso central (CNS), sen rmacos, eczema, encefalomielitis, endocarditis, end iglotitis, infección por el virus de Epstein-barr, eri stornos extrapiramidales y del cerebelo, I i n f o matofagocítica familiar, rechazo de implante de timo Friedreich, trastornos arteriales periféricos funcion gica, gangrena de gas, úlcera gástrica, nefritis chazo de injerto de cualquier órgano o tejido, s gativa, sepsis gram positiva, granulomas debido racelulares, leucemia de célula pilosa, enfer llerrorden-Spatz, tiroiditis de Hashímoto, fiebre del he trasplante de corazón, hemacromatosis, hemodiálisi émico hemoiítico/púrpura trombocitopénico t ño por isquemia-reperfusión, choque isquémico, artritis enil, atrofia muscular espinal juvenil, sarcoma de Kap trasplante de riñon, legionella, leishmaniasis, lepra, l tema cortiespinal, lipedema, rechazo de trasplante federma, malaria, linfoma maligno, histiocitosis malign ligno, meningitis, meningococemia, en tabólicas/idiopáticas, migraña, dolor de cabeza, t tema múltiple mitocondrial, enfermedad de tejido cone mopatía monoclonal, mteloma múltiple, degener temas múltiples (Mencel Dejerine-Thomas Shi-Drager seph), miastenía grave, micobacterium aviar berculosis por micobacteria, síndrome mielodiplásico ocardio, trastornos isquémicos al miocardio, carci ríngeo, enfermedad pulmonar crónica neonatal, nefriti fermedades neurodegenerativas, atrofias musculares n fiebre neutropénica, linfoma de no Hodgkin, oclusión ganomegalia, endocrinopatía, gamopatia monoclonal, cambios de piel), síndrome de pos-perfusión, síndro mba, síndrome de cardiotomía pos-MI, preclampsi ogresiva de supra-núcleo, hipertensión pulmonar prim radiación, fenómeno y enfermedad de Raynaud, enf ynaud, enfermedad de Refsum, taquicardia QRS estre pertensión reno-vascular, daño por reperfusión, ca strictiva, sarcomas, escleroderma, corea senil, demen o de cuerpo de Lewy, artropatías seronegativas, apopl células falciformes, rechazo de aloinjerto de piel, s mbios de piel, rechazo de trasplante de intestino delga I i d o s , arritmias específicas, ataxia espinal, deg pino-cerebelares, miositís por estreptococo, lesiones e \ cerebelo, panencefalitis esclerosante, sub-aguda, sin i sistema cardiovascular, anafalaxis sistémíca, sí spuesta infiamatoria sistémíca, artritis reumatoide juve cualquier órgano o tejido, síndromes coronari lineuritis idiopática aguda, poliradiculoneuropatía d flamatoria aguda, isquemia aguda, enfermedad de Still opecia areata, anafilaxis, síndrome de anticuerpo anti emia aplástica, arterioesclerosis, eczema atópico, ópica, dermatitis autoinmune, trastorno autoinmune a fección por estreptococo, enteropatía autoinmune, pérd toinmune, síndrome linfoproliferativo autoinmun iocarditis autoinmune, falla ovárica prematura efaritis, bronquioectais, penfígoide buHoso, rdiovascuiar, síndrome anti-fosfolípido catastrófico, liaca, espondilitis cervical, isquemia crónica, penfígoid ndrome clínicamente aislado (cis) con riesgo de últíple, conjuntivitis, trastorno psiquiátrico de inicio fermedad pulmonar obstructiva crónica (COPD), d rmatomiositis, retinopatia diabética, diabetes mellitus eratitis, queratoconjuntivitis seca, enfermedad de fermedad de Kussmaul-Meier, parálisis de Landry, hist lula de Langerhan, reticulares livedo, degeneració liangitis microscópica, morbus bechterev, trastorno triz, penfigoide de membrana mucosa, faila orgáni astenia grave, síndrome mielodisplásico, miocarditis, t 'ces nerviosas, neuropatía, hepatitis de no A y no tica, osteolisis, cáncer de ovario, JRA pauciarticuiar, lusiva de arteria periférica (PAOD), enfermedad vascul VD), enfermedad de arteria periférica (PAD), flebitis, dosa (o periarteritis nodosa), policondritis, polimialgia liosis, JRA poliarticular, síndrome de deficiencia po liomiositis, polimialgia reumática (PMR), síndrome de p rkinsonismo primario, cáncer de próstata y rectal y matopoyéticas (leucemia y linfoma), prostatitis, bulos rojos pura, insuficiencia adrenal primaria, o 1, diabetes tipo II, urticaria, neumonía intersticial sculitis, conjuntivitis primaveral, retinitis viral, síndro yanagi-Harada (síndrome de VKH), degeneración macu ración de heridas, artropatía asociada con yersinia y sa 61. EL método de acuerdo con la reivindicación 6 cha administración a los sujetos es a través d eccionado de parenteral, subcutánea, intramuscular, i ra-articular, int ra bronquial, int ra -abdominal, in raca rtilaginosa, intra-cavidad, intracelial, int race re broventricular, int ra cólica, int ra cervical, i rahepática, intra-miocardio, intraosteal, i rapericárdica, int ra perito neal, i ntra pleural, int r rapulmonar, intra-rectal, intra-renal, intra-retinal, i rasinovial , íntratoráxica, intrauterina, intravesical, bo ctal, bucal, sublingual, intranasal, y transdérmica. 62. Un método para generar una Inmunoglobulina un primer anticuerpo parental o una proteína de unión l mismo; VD2 es un segundo dominio variable de cad tenido de un segundo anticuerpo parental o una proteí antígeno del mismo; C es un dominio constante de-cadena pesada; (X1)n es un enlazador siempre que no sea CH1; (X2)n es una región Fe; y n es 0 ó 1 ; y d) construir segunda y cuarta cadenas de poli mprenden VD1-(X1)n-VD2-C-(X2)n, en donde VD1 es un primer dominio variable de cadena lige un primer anticuerpo parental o porción de unión a a smo; VD2 es un segundo dominio variable de cadena lig un segundo anticuerpo parental o porción de unión a tígenos seleccionados del grupo que consiste de TN F y RANKL; TNF y VEGF; TNF y SOST; TNF y aVbeta3; TNF y NGF; TNF e IL-23p19; TNF e IL-6; T F y CD-20; IgE e IL-13; IL-13 e IL-23p19; IgE e IL-4; -13 e IL-9; IL-13 e IL-4; IL-6R y VEGF; IL-6R e IL-1 NKL; IL-17A e IL-1beta; IL-1beta y RANKL; I L- 1 be NKL y CD-20; y IL-1 alfa y IL-1beta. 63. El método de acuerdo con la reivindicación 6 s dominios variables de cadena pesada VD1 y VD2 com cuencia de aminoácido seleccionada del grupo que C ID NOs: 28, 30, 32, 34, .36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, , 58, 60, 62, 64, 66, 68, y 70, y en donde los dominios dena ligera VD1 y VD2 comprenden una secuencia de Seccionada del grupo que consiste de SEC ID NOs: 29, \ 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 57, 59, 61, 63, 6 smo, se seleccionan del grupo que consiste de un fra fragmento F(ab')2; un fragmento bivalente que com gmentos Fab enlazados a través de un puente de disu gión de gozne; un fragmento Fd que consiste de los do 1; un fragmento Fv que consiste de los dominios VL azo individual de un anticuerpo; un fragmento dAb; un terminación de complementariedad aislada (CDR); un cadena individual; y diacuerpos. 66, El método de acuerdo con la reivindicación 6 ho primer anticuerpo parental o antígeno de unión see por lo menos una propiedad deseada exhib munoglobulina de Dominio Variable Doble. 67. El método de acuerdo con la reivindicación 6 ho segundo anticuerpo parental o antígeno de unión see por lo menos una propiedad deseada exhib munoglobulina de Dominio Variable Doble. 71. El método de acuerdo con la reivindicación 6 cha propiedad deseada se selecciona de uno o más pa ticuerpo. 72. El método de acuerdo con la reivindicación 7 hos parámetros de anticuerpo se seleccionan del nsiste de especificidad de antígeno, afinidad a antígen nción bioiógíca, reconocimiento de epítopo, lubilidad, eficiencia de producción, inmu rmacocinética, biodisponibilidad, reactividad cruzada iión de antígeno ortóloga. 73. El método de acuerdo con la reivindicación 7 chos parámetros de anticuerpo se seleccionan del nsiste de especificidad de antígeno, afinidad a antígen nción biológica, reconocimiento de epítopo, lubilidad, eficiencia de producción, inmu rmacocinética, biodisponibilidad, reactividad cruzada tencia con la cual dicho segundo anticuerpo o porción tígeno del mismo une dicho segundo antígeno. 76, Un método para generar una Inmunoglobulina riable Doble capaz de unir dos antígenos con seadas, que comprende los pasos de: a) obtener un primer anticuerpo parental o porción l mismo, capaz de unir un primer antígeno y poseer al opiedad deseada exhibida por la Inmunoglobulina riable Doble; b) obtener un segundo anticuerpo parental o una ión a antígeno del mismo, capaz de unir un segundo seer por lo menos una propiedad deseada exhib munoglobulina de Dominio Variable Doble; c) construir primera y tercera cadenas de poli tnprenden VD1-(X1)n-VD2-C-(X2)n, en donde; VD1 es un primer dominio variable de cadena pesa d) construir segunda y cuarta cadenas de poli mprenden VD1-(X1)n-VD2-C-(X2)n, en donde; VD1 es un primer dominio variable de cadena lige un primer anticuerpo parental o porción de unión a smo; VD2 es un segundo dominio variable de cadena lig un segundo anticuerpo parental o porción de unión a smo; C es un dominio constante de cadena ligera; X1 es un enlazador siempre que no sea CH1; y X2 no comprenda una región Fe; y n es 0 ó 1 ; e) expresar dichas primera, segunda, tercera y cua polipéptido; de manera que se genera una Inmuno minio Variable Doble capaz de unir dicho primer tígenos con propiedades deseadas, en donde la proteí
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Families Citing this family (206)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6395511B1 (en) 1998-11-27 2002-05-28 Darwin Discovery, Ltd. Nucleic acids encoding a novel family of TGF-β binding proteins from humans
ES2390425T3 (es) * 2000-12-22 2012-11-12 MAX-PLANCK-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. Uso de moléculas de orientación repulsivas (RGM) y sus moduladores
US7592429B2 (en) 2005-05-03 2009-09-22 Ucb Sa Sclerostin-binding antibody
US20090215992A1 (en) * 2005-08-19 2009-08-27 Chengbin Wu Dual variable domain immunoglobulin and uses thereof
US8906864B2 (en) 2005-09-30 2014-12-09 AbbVie Deutschland GmbH & Co. KG Binding domains of proteins of the repulsive guidance molecule (RGM) protein family and functional fragments thereof, and their use
CL2008002775A1 (es) 2007-09-17 2008-11-07 Amgen Inc Uso de un agente de unión a esclerostina para inhibir la resorción ósea.
US8962803B2 (en) 2008-02-29 2015-02-24 AbbVie Deutschland GmbH & Co. KG Antibodies against the RGM A protein and uses thereof
SG190572A1 (en) 2008-04-29 2013-06-28 Abbott Lab Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
RU2010153578A (ru) 2008-06-03 2012-07-20 Эбботт Лэборетриз (Us) Иммуноглобулины с двойными вариабельными доменами и их применение
RU2011104348A (ru) 2008-07-08 2012-08-20 Эбботт Лэборетриз (Us) Иммуноглобулины с двойным вариабельным доменом против простагландина е2 и их применение
US20100042072A1 (en) * 2008-08-13 2010-02-18 Searete Llc, A Limited Liability Corporation Of The State Of Delaware Biological targeting compositions and methods of using the same
US8211656B2 (en) * 2008-08-13 2012-07-03 The Invention Science Fund I, Llc Biological targeting compositions and methods of using the same
US20100040546A1 (en) * 2008-08-13 2010-02-18 Searete Llc, A Limited Liability Corporation Of The State Of Delaware Biological targeting compositions and methods of using the same
US20100041133A1 (en) * 2008-08-13 2010-02-18 Searete Llc, A Limited Liability Corporation Of The State Of Delaware Biological targeting compositions and methods of using the same
US20120034157A1 (en) * 2010-08-03 2012-02-09 Searete Llc, A Limited Liability Corporation Of The State Of Delaware Artificial cells
CA2753332A1 (en) * 2009-02-24 2010-09-02 Glaxo Group Limited Antigen-binding constructs
CA2753287A1 (en) * 2009-02-24 2010-09-02 Glaxo Group Limited Antigen-binding constructs
EP2810652A3 (en) 2009-03-05 2015-03-11 AbbVie Inc. IL-17 binding proteins
MX2011010169A (es) * 2009-04-07 2011-10-11 Roche Glycart Ag Anticuerpos biespecificos anti-erbb-1/anti-c-met.
EP3029070A1 (en) 2009-08-29 2016-06-08 AbbVie Inc. Therapeutic dll4 binding proteins
KR20120060877A (ko) 2009-09-01 2012-06-12 아보트 러보러터리즈 이원 가변 도메인 면역글로불린 및 이의 용도
US9493578B2 (en) * 2009-09-02 2016-11-15 Xencor, Inc. Compositions and methods for simultaneous bivalent and monovalent co-engagement of antigens
AU2010306677B2 (en) * 2009-10-15 2013-05-23 Abbvie Inc. Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
UY32979A (es) 2009-10-28 2011-02-28 Abbott Lab Inmunoglobulinas con dominio variable dual y usos de las mismas
US8871208B2 (en) * 2009-12-04 2014-10-28 Abbvie Inc. 11-β-hydroxysteroid dehydrogenase type 1 (11β-HSD1) inhibitors and uses thereof
SG181563A1 (en) 2009-12-08 2012-07-30 Abbott Gmbh & Co Kg Monoclonal antibodies against the rgm a protein for use in the treatment of retinal nerve fiber layer degeneration
EP2542582A4 (en) 2010-03-02 2013-12-04 Abbvie Inc THERAPEUTIC PROTEINS LINKING TO DLL4
WO2011112566A2 (en) * 2010-03-11 2011-09-15 Abbott Laboratories Basigin binding proteins
JP2013523153A (ja) 2010-04-07 2013-06-17 アッヴィ・インコーポレイテッド ＴＮＦ−α結合タンパク質
US9150663B2 (en) * 2010-04-20 2015-10-06 Genmab A/S Heterodimeric antibody Fc-containing proteins and methods for production thereof
EA027039B1 (ru) 2010-05-14 2017-06-30 Эмджен Инк. Композиции с высокой концентрацией антител
AU2016222339B2 (en) * 2010-05-14 2017-11-23 Abbvie Inc. IL-1 binding proteins
SI2571532T1 (sl) 2010-05-14 2017-10-30 Abbvie Inc. Proteini, ki vežejo IL-1
CA2803392A1 (en) * 2010-06-24 2011-12-29 Abbvie Inc. Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
JP5953303B2 (ja) 2010-07-29 2016-07-20 ゼンコア インコーポレイテッド 改変された等電点を有する抗体
AU2014246410B2 (en) * 2010-08-03 2016-06-16 Abbvie Inc. Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
KR20130100118A (ko) * 2010-08-03 2013-09-09 아비에 인코포레이티드 이원 가변 도메인 면역글로불린 및 이의 용도
CA2809433A1 (en) * 2010-08-26 2012-03-01 Abbvie Inc. Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
CA2816803A1 (en) * 2010-11-02 2012-05-10 Abbott Laboratories Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
EP3757126A1 (en) 2010-11-05 2020-12-30 Novartis AG Methods of treating psoriatic arthritis using il-17 antagonists
AU2014259526B2 (en) * 2010-11-05 2016-02-04 Novartis Ag Methods of treating ankylosing spondylitis using IL-17 antagonists
US9067988B2 (en) 2010-12-01 2015-06-30 Alderbio Holdings Llc Methods of preventing or treating pain using anti-NGF antibodies
AU2011336470B8 (en) 2010-12-01 2017-09-14 Alderbio Holdings Llc Anti-NGF compositions and use thereof
US11214610B2 (en) 2010-12-01 2022-01-04 H. Lundbeck A/S High-purity production of multi-subunit proteins such as antibodies in transformed microbes such as Pichia pastoris
US9884909B2 (en) 2010-12-01 2018-02-06 Alderbio Holdings Llc Anti-NGF compositions and use thereof
US9539324B2 (en) 2010-12-01 2017-01-10 Alderbio Holdings, Llc Methods of preventing inflammation and treating pain using anti-NGF compositions
US9078878B2 (en) 2010-12-01 2015-07-14 Alderbio Holdings Llc Anti-NGF antibodies that selectively inhibit the association of NGF with TrkA, without affecting the association of NGF with p75
KR20130133247A (ko) * 2010-12-21 2013-12-06 애브비 인코포레이티드 Ｉｌ-1-알파 및 -베타 이특이적 이원 가변 도메인 면역글로불린 및 이의 용도
WO2012097313A2 (en) 2011-01-14 2012-07-19 The Regents Of The University Of California Therapeutic antibodies against ror-1 protein and methods for use of same
CN103596591B (zh) * 2011-02-08 2016-08-24 Abbvie公司 骨关节炎和疼痛的治疗
WO2012118903A2 (en) 2011-03-01 2012-09-07 Amgen Inc. Bispecific binding agents
JP5972915B2 (ja) 2011-03-16 2016-08-17 アムジエン・インコーポレーテツド Ｆｃ変異体
CN103517920B (zh) 2011-03-25 2018-04-17 安进公司 抗硬化蛋白(sclerostin)抗体晶体及其制剂
KR20140059168A (ko) 2011-04-21 2014-05-15 더 리젠츠 오브 더 유니버시티 오브 콜로라도, 어 바디 코포레이트 시신경 척수염 치료용 조성물 및 치료 방법
EP2702077A2 (en) 2011-04-27 2014-03-05 AbbVie Inc. Methods for controlling the galactosylation profile of recombinantly-expressed proteins
WO2012163521A1 (en) * 2011-05-27 2012-12-06 Dutalys Removal of monomeric targets
PT2739311T (pt) 2011-08-04 2018-03-26 Amgen Inc Método para tratamento de defeitos de lacunas ósseas
KR101870555B1 (ko) * 2011-08-23 2018-06-22 로슈 글리카트 아게 T 세포 활성화 항원 및 종양 항원에 대해 특이적인 이중특이적 항체 및 이의 사용 방법
US10851178B2 (en) 2011-10-10 2020-12-01 Xencor, Inc. Heterodimeric human IgG1 polypeptides with isoelectric point modifications
MX2014004977A (es) * 2011-10-24 2014-09-11 Abbvie Inc Inmunoaglutinantes dirigidos contra esclerostina.
JP2014534218A (ja) 2011-10-24 2014-12-18 アッヴィ・インコーポレイテッド Ｔｎｆを標的とする免疫結合剤
RU2014121043A (ru) * 2011-10-24 2015-12-10 Эббви Инк. Биспецифические иммуносвязывающие средства, направленные против tnf и il-17
US9688756B2 (en) 2011-12-21 2017-06-27 Amgen Inc. Variant Fc-polypeptides with enhanced binding to the neonatal Fc receptor
EP2797953B1 (en) 2011-12-28 2020-06-03 Amgen Inc. Method of treating alveolar bone loss through the use of anti-sclerostin antibodies
TW201333033A (zh) 2011-12-30 2013-08-16 Abbvie Inc 雙可變域免疫球蛋白及其用途
TW201333035A (zh) 2011-12-30 2013-08-16 Abbvie Inc 針對ｉｌ－１３及／或ｉｌ－１７之雙特異性結合蛋白
MY176695A (en) 2012-01-27 2020-08-19 Abbvie Inc Composition and method for the diagnosis and treatment of diseases associated with neurite degeneration
WO2013113663A1 (en) * 2012-02-01 2013-08-08 F. Hoffmann-La Roche Ag Method for the detection of a binding partner of a multispecific binder
US9181572B2 (en) 2012-04-20 2015-11-10 Abbvie, Inc. Methods to modulate lysine variant distribution
US9150645B2 (en) 2012-04-20 2015-10-06 Abbvie, Inc. Cell culture methods to reduce acidic species
US9067990B2 (en) 2013-03-14 2015-06-30 Abbvie, Inc. Protein purification using displacement chromatography
WO2013166099A1 (en) * 2012-05-01 2013-11-07 Glaxosmithkline Llc Novel antibodies
KR101525919B1 (ko) * 2012-05-11 2015-06-03 가톨릭대학교 산학협력단 자가면역 질환 예방 및 치료를 위한 ｔｎｆｒ２를 기반으로 하는 이중 항체
WO2013177101A2 (en) 2012-05-22 2013-11-28 Bristol-Myers Squibb Company Bispecific antibodies and methods of using the same
WO2013184200A1 (en) * 2012-06-05 2013-12-12 Msm Protein Technologies Human monoclonal antibodies against human chemokine receptor ccr7
EP2866833B1 (en) 2012-06-27 2019-05-15 Merck Sharp & Dohme Corp. Crystalline anti-human il-23 antibodies
AU2013285488B2 (en) 2012-07-05 2018-03-22 Ucb Pharma S.A. Treatment for bone diseases
WO2014011955A2 (en) 2012-07-12 2014-01-16 Abbvie, Inc. Il-1 binding proteins
US9512214B2 (en) 2012-09-02 2016-12-06 Abbvie, Inc. Methods to control protein heterogeneity
JP6401702B2 (ja) 2012-09-07 2018-10-10 ザ・ガバナーズ・オブ・ザ・ユニバーシティー オブ・アルバータ 炎症性肝疾患の診断のための方法および組成物
WO2014055967A2 (en) * 2012-10-05 2014-04-10 Neotope Biosciences Limited Compositions and methods for treating diseases of protein aggregation involving ic3b deposition
US9217042B2 (en) * 2012-10-23 2015-12-22 Abbott Cardiovascular Systems Inc. Method of reducing MACE in diabetic patients subsequent to stent placement
CA2890263C (en) 2012-11-01 2020-03-10 Abbvie Inc. Anti-vegf/dll4 dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
SG10201802044RA (en) * 2012-11-01 2018-05-30 Abbvie Inc Stable dual variable domain immunoglobulin protein formulations
JP2016502526A (ja) 2012-11-16 2016-01-28 ノバルティス アーゲー 末梢動脈疾患を処置するためのＩＬ−１β結合抗体の使用
UY35148A (es) 2012-11-21 2014-05-30 Amgen Inc Immunoglobulinas heterodiméricas
US20140154702A1 (en) * 2012-11-30 2014-06-05 Endocyte, Inc. Methods For Treating Cancer Using Combination Therapies
JP2016501881A (ja) 2012-12-04 2016-01-21 アッヴィ・インコーポレイテッド 血液脳関門（ｂｂｂ）を透過する二重特異性結合タンパク質
UA117466C2 (uk) * 2012-12-13 2018-08-10 Мерк Шарп Енд Доме Корп. СТАБІЛЬНИЙ СКЛАД У ВИГЛЯДІ РОЗЧИНУ АНТИТІЛА ДО IL-23p19
EP2938634A2 (en) * 2012-12-28 2015-11-04 AbbVie Inc. Dual specific binding proteins having a receptor sequence
CN103060274B (zh) * 2012-12-28 2013-12-11 首都医科大学 Rankl-tnf样区鼠源性单克隆抗体及其制备方法与应用
US9856319B2 (en) 2012-12-28 2018-01-02 Abbvie Inc. Monovalent binding proteins
US11053316B2 (en) 2013-01-14 2021-07-06 Xencor, Inc. Optimized antibody variable regions
US9605084B2 (en) 2013-03-15 2017-03-28 Xencor, Inc. Heterodimeric proteins
US10968276B2 (en) 2013-03-12 2021-04-06 Xencor, Inc. Optimized anti-CD3 variable regions
US10487155B2 (en) 2013-01-14 2019-11-26 Xencor, Inc. Heterodimeric proteins
AU2014205086B2 (en) 2013-01-14 2019-04-18 Xencor, Inc. Novel heterodimeric proteins
US10131710B2 (en) 2013-01-14 2018-11-20 Xencor, Inc. Optimized antibody variable regions
US9701759B2 (en) 2013-01-14 2017-07-11 Xencor, Inc. Heterodimeric proteins
EP2945969A1 (en) 2013-01-15 2015-11-25 Xencor, Inc. Rapid clearance of antigen complexes using novel antibodies
EP2948475A2 (en) 2013-01-23 2015-12-02 AbbVie Inc. Methods and compositions for modulating an immune response
EP2830651A4 (en) 2013-03-12 2015-09-02 Abbvie Inc HUMAN ANTIBODIES THAT BIND TNF-ALPHA AND PREPARATION METHODS
WO2014151878A2 (en) 2013-03-14 2014-09-25 Abbvie Inc. Methods for modulating protein glycosylation profiles of recombinant protein therapeutics using monosaccharides and oligosacharides
US9017687B1 (en) 2013-10-18 2015-04-28 Abbvie, Inc. Low acidic species compositions and methods for producing and using the same using displacement chromatography
US10519242B2 (en) 2013-03-15 2019-12-31 Xencor, Inc. Targeting regulatory T cells with heterodimeric proteins
US10106624B2 (en) 2013-03-15 2018-10-23 Xencor, Inc. Heterodimeric proteins
EP3421495A3 (en) 2013-03-15 2019-05-15 Xencor, Inc. Modulation of t cells with bispecific antibodies and fc fusions
EP2970457A2 (en) 2013-03-15 2016-01-20 AbbVie Inc. Dual specific binding proteins directed against tnf
WO2014144280A2 (en) 2013-03-15 2014-09-18 Abbvie Inc. DUAL SPECIFIC BINDING PROTEINS DIRECTED AGAINST IL-1β AND / OR IL-17
EP3424952A1 (en) 2013-03-15 2019-01-09 Amgen, Inc Heterodimeric bispecific antibodies
US10858417B2 (en) 2013-03-15 2020-12-08 Xencor, Inc. Heterodimeric proteins
US20140302037A1 (en) 2013-03-15 2014-10-09 Amgen Inc. BISPECIFIC-Fc MOLECULES
WO2014182658A1 (en) 2013-05-06 2014-11-13 Abbvie Inc. Compositions for cell culture and methods of using the same
US9506053B2 (en) 2013-08-01 2016-11-29 Abbvie Inc. Methods of selecting biologic-producing cell lines by next generation sequencing
EP3733710A1 (en) 2013-09-25 2020-11-04 Amgen, Inc Hetrodimeric v-c-fc-v-c antibody
EP3049442A4 (en) 2013-09-26 2017-06-28 Costim Pharmaceuticals Inc. Methods for treating hematologic cancers
US9598667B2 (en) 2013-10-04 2017-03-21 Abbvie Inc. Use of metal ions for modulation of protein glycosylation profiles of recombinant proteins
WO2015051379A2 (en) 2013-10-06 2015-04-09 Abbvie Inc. Dual specific binding proteins directed against immune cell receptors and autoantigens
US9181337B2 (en) 2013-10-18 2015-11-10 Abbvie, Inc. Modulated lysine variant species compositions and methods for producing and using the same
US9085618B2 (en) 2013-10-18 2015-07-21 Abbvie, Inc. Low acidic species compositions and methods for producing and using the same
US9416197B2 (en) 2013-11-01 2016-08-16 Ibc Pharmaceuticals, Inc. Bispecific antibodies that neutralize both TNF-α and IL-6: novel therapeutic agent for autoimmune disease
WO2015073884A2 (en) 2013-11-15 2015-05-21 Abbvie, Inc. Glycoengineered binding protein compositions
JP6706578B2 (ja) 2013-12-30 2020-06-10 エピムアブ バイオセラピューティクス インコーポレイテッド タンデム型Ｆａｂ免疫グロブリン及びその使用
JOP20200094A1 (ar) 2014-01-24 2017-06-16 Dana Farber Cancer Inst Inc جزيئات جسم مضاد لـ pd-1 واستخداماتها
JOP20200096A1 (ar) 2014-01-31 2017-06-16 Children’S Medical Center Corp جزيئات جسم مضاد لـ tim-3 واستخداماتها
ES2784238T3 (es) 2014-02-02 2020-09-23 Medimmune Ltd Proteína quimérica compuesta por un dominio antagonista del NGF y un dominio antagonista del TNFalfa
US20150224078A1 (en) 2014-02-10 2015-08-13 Patara Pharma, LLC Methods for the Treatment of Lung Diseases with Mast Cell Stabilizers
SI3104853T1 (sl) 2014-02-10 2020-03-31 Respivant Sciences Gmbh Zdravljenje s stabilizatorji mastocitov za sistemske motnje
EP3119885B1 (en) * 2014-03-17 2021-06-02 Mitsubishi Tanabe Pharma Corporation Antibody-fynomer conjugates
EP3954713A3 (en) 2014-03-28 2022-03-30 Xencor, Inc. Bispecific antibodies that bind to cd38 and cd3
NO2776305T3 (es) 2014-04-23 2018-01-27
CN104004080A (zh) * 2014-06-06 2014-08-27 首都医科大学 靶向于RANKL和TNF-α的人源化抗体及其应用
WO2015191934A2 (en) 2014-06-11 2015-12-17 Abbvie Inc. Blood-brain barrier (bbb) penetrating dual specific binding proteins for treating brain and neurological diseases
US9840553B2 (en) 2014-06-28 2017-12-12 Kodiak Sciences Inc. Dual PDGF/VEGF antagonists
JP6789124B2 (ja) * 2014-07-03 2020-11-25 イエール ユニバーシティ 腫瘍形成を抑制するディコップ２（Ｄｉｃｋｋｏｐｆ２）（Ｄｋｋ２）阻害
US9993551B2 (en) 2014-09-13 2018-06-12 Novartis Ag Combination therapies of EGFR inhibitors
US9616114B1 (en) 2014-09-18 2017-04-11 David Gordon Bermudes Modified bacteria having improved pharmacokinetics and tumor colonization enhancing antitumor activity
CA2966035A1 (en) * 2014-10-31 2016-05-06 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Compositions and methods of stimulating and expanding t cells
AR102417A1 (es) 2014-11-05 2017-03-01 Lilly Co Eli Anticuerpos biespecíficos anti-tnf- / anti-il-23
BR112017011166A2 (pt) 2014-11-26 2018-02-27 Xencor, Inc. anticorpos heterodiméricos que se ligam a cd3 e cd38
CA2967426A1 (en) 2014-11-26 2016-06-02 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind cd3 and tumor antigens
US10259887B2 (en) 2014-11-26 2019-04-16 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind CD3 and tumor antigens
US10093733B2 (en) 2014-12-11 2018-10-09 Abbvie Inc. LRP-8 binding dual variable domain immunoglobulin proteins
MA41142A (fr) 2014-12-12 2017-10-17 Amgen Inc Anticorps anti-sclérostine et utilisation de ceux-ci pour traiter des affections osseuses en tant qu'élements du protocole de traitement
WO2016105450A2 (en) 2014-12-22 2016-06-30 Xencor, Inc. Trispecific antibodies
US10227411B2 (en) 2015-03-05 2019-03-12 Xencor, Inc. Modulation of T cells with bispecific antibodies and FC fusions
US10947305B2 (en) 2015-03-20 2021-03-16 Full Spectrum Genetics, Inc. Anti-TNFα binding compounds and uses thereof
WO2016160976A2 (en) 2015-03-30 2016-10-06 Abbvie Inc. Monovalent tnf binding proteins
EP3280444A4 (en) 2015-04-10 2019-03-27 Adimab, LLC METHOD FOR CLEANING HETERODIMEROUS MULTISPECIFIC ANTIBODIES FROM PARENTAL HOMODIMERIC ANTIBODY TYPES
EP3288975A1 (en) * 2015-04-29 2018-03-07 Institute for Research in Biomedicine Ultra-potent neutralization of cytokines by multispecific antibodies and uses thereof
EP3292143B1 (en) 2015-05-04 2019-08-21 Apogenix AG Single-chain cd40-receptor agonist proteins
BR112017020610A2 (pt) * 2015-05-18 2018-07-17 Lilly Co Eli Compostos de anticorpo biespecífico anti-dkk-1- anti-rankl
TW201710286A (zh) 2015-06-15 2017-03-16 艾伯維有限公司 抗ｖｅｇｆ、ｐｄｇｆ及／或其受體之結合蛋白
WO2017027402A1 (en) 2015-08-07 2017-02-16 Patara Pharma, LLC Methods for the treatment of systemic disorders treatable with mast cell stabilizers, including mast cell related disorders
US10238625B2 (en) 2015-08-07 2019-03-26 Respivant Sciences Gmbh Methods for the treatment of mast cell related disorders with mast cell stabilizers
JP2017057201A (ja) * 2015-09-16 2017-03-23 田辺三菱製薬株式会社 抗体−フィノマー複合体を含む医薬組成物
WO2017068192A1 (en) 2015-10-23 2017-04-27 Apogenix Ag Single-chain cd27-receptor agonist proteins
CA3002741A1 (en) 2015-10-23 2017-04-27 Apogenix Ag Single-chain gitr-receptor agonist proteins
PE20181167A1 (es) 2015-10-25 2018-07-19 Sanofi Sa Proteinas de union triespecificas y/o trivalentes para la prevencion o el tratamiento de la infeccion por vih
WO2017072080A1 (en) 2015-10-28 2017-05-04 Apogenix Ag Single-chain tl1a receptor agonist proteins
WO2017084495A1 (zh) * 2015-11-17 2017-05-26 江苏恒瑞医药股份有限公司 Pd-l1抗体、其抗原结合片段及其医药用途
WO2017085693A1 (en) 2015-11-19 2017-05-26 AbbVie Deutschland GmbH & Co. KG Reporter gene assay methods for identifying and analyzing multi-specific binding proteins
EP3387013B1 (en) 2015-12-07 2022-06-08 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind cd3 and psma
RU2744860C2 (ru) 2015-12-30 2021-03-16 Кодиак Сайенсиз Инк. Антитела и их конъюгаты
CU24613B1 (es) 2016-02-06 2022-07-08 Epimab Biotherapeutics Inc Proteínas de unión a inmunoglobulinas fabs en tandem (fit-ig) biespecíficas que se unen a cmet y egfr
LT3423105T (lt) 2016-03-02 2021-09-10 Eisai R&D Management Co., Ltd. Antikūno-vaisto konjugatai eribulino pagrindu ir jų panaudojimo būdai
GB201604124D0 (en) 2016-03-10 2016-04-27 Ucb Biopharma Sprl Pharmaceutical formulation
FI3443006T3 (fi) * 2016-04-13 2023-10-23 Sanofi Sa Trispesifisiä ja/tai kolmiarvoisia sitojaproteiineja
SG11201808911SA (en) 2016-04-13 2018-11-29 Sanofi Sa Trispecific and/or trivalent binding proteins
US10604586B2 (en) 2016-05-09 2020-03-31 Industrial Technology Research Institute Humanized monoclonal antibody and uses thereof
MX2018015592A (es) 2016-06-14 2019-04-24 Xencor Inc Anticuerpos inhibidores de puntos de control biespecificos.
CA3029328A1 (en) 2016-06-28 2018-01-04 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind somatostatin receptor 2
US10793632B2 (en) 2016-08-30 2020-10-06 Xencor, Inc. Bispecific immunomodulatory antibodies that bind costimulatory and checkpoint receptors
CA3035528A1 (en) 2016-08-31 2018-03-08 Respivant Sciences Gmbh Cromolyn compositions for treatment of chronic cough due to idiopathic pulmonary fibrosis
EP3522983A4 (en) 2016-10-07 2020-06-03 Respivant Sciences GmbH CROMOLYNE-BASED COMPOSITIONS FOR THE TREATMENT OF PULMONARY FIBROSIS
AU2017342559B2 (en) 2016-10-14 2022-03-24 Xencor, Inc. Bispecific heterodimeric fusion proteins containing IL-15/IL-15Ralpha Fc-fusion proteins and PD-1 antibody fragments
US11129906B1 (en) 2016-12-07 2021-09-28 David Gordon Bermudes Chimeric protein toxins for expression by therapeutic bacteria
US11180535B1 (en) 2016-12-07 2021-11-23 David Gordon Bermudes Saccharide binding, tumor penetration, and cytotoxic antitumor chimeric peptides from therapeutic bacteria
CA3060581A1 (en) 2017-05-02 2018-11-08 Merck Sharp & Dohme Corp. Formulations of anti-lag3 antibodies and co-formulations of anti-lag3 antibodies and anti-pd-1 antibodies
JOP20190260A1 (ar) 2017-05-02 2019-10-31 Merck Sharp & Dohme صيغ ثابتة لأجسام مضادة لمستقبل الموت المبرمج 1 (pd-1) وطرق استخدامها
JP2020529832A (ja) 2017-06-30 2020-10-15 ゼンコア インコーポレイテッド ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαおよび抗原結合ドメインを含む標的化ヘテロダイマーＦｃ融合タンパク質
CN110959015B (zh) * 2017-07-12 2023-07-25 四川科伦博泰生物医药股份有限公司 双特异性重组蛋白
EP4249068A3 (en) 2017-10-10 2023-11-22 Sanofi Anti-cd38 antibodies and combinations with anti-cd3 and anti-cd28 antibodies
US10981992B2 (en) 2017-11-08 2021-04-20 Xencor, Inc. Bispecific immunomodulatory antibodies that bind costimulatory and checkpoint receptors
EP3706793A1 (en) 2017-11-08 2020-09-16 Xencor, Inc. Bispecific and monospecific antibodies using novel anti-pd-1 sequences
WO2019125732A1 (en) 2017-12-19 2019-06-27 Xencor, Inc. Engineered il-2 fc fusion proteins
AU2019206648A1 (en) 2018-01-12 2020-07-16 Genzyme Corporation Methods for the quantitation of polypeptides
MX2020008569A (es) 2018-02-16 2020-09-21 Abbvie Inc Inhibidores selectivos de bcl-2 en combinacion con un anticuerpo anti-pd-1 o anti-pd-l1 para el tratamiento de tipos de cancer.
KR20200138254A (ko) 2018-03-30 2020-12-09 암젠 인크 C-말단 항체 변이체
AU2019247415A1 (en) 2018-04-04 2020-10-22 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind fibroblast activation protein
CA3097593A1 (en) 2018-04-18 2019-10-24 Xencor, Inc. Pd-1 targeted heterodimeric fusion proteins containing il-15/il-15ra fc-fusion proteins and pd-1 antigen binding domains and uses thereof
AU2019256529A1 (en) 2018-04-18 2020-11-26 Xencor, Inc. TIM-3 targeted heterodimeric fusion proteins containing IL-15/IL-15Ra Fc-fusion proteins and TIM-3 antigen binding domains
BR112020022035A2 (pt) 2018-04-30 2021-02-02 Takeda Pharmaceutical Company Limited proteínas de ligação de receptor de canabinoide tipo 1 (cb1) e usos das mesmas
JP2022503959A (ja) 2018-10-03 2022-01-12 ゼンコア インコーポレイテッド Ｉｌ－１２ヘテロ二量体ｆｃ－融合タンパク質
BR112021006558A2 (pt) 2018-10-09 2021-07-13 Sanofi proteínas de ligação triespecíficas anti-cd38, anti-cd28 e anti-cd3 e métodos de uso para o tratamento de infecção viral
WO2020180726A1 (en) 2019-03-01 2020-09-10 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind enpp3 and cd3
US11613576B2 (en) 2019-04-09 2023-03-28 Sanofi Trispecific binding proteins, methods, and uses thereof
KR102323342B1 (ko) * 2019-04-26 2021-11-08 주식회사 와이바이오로직스 IL-17A 및 TNF-α에 특이적으로 결합하는 이중표적 항체
BR112021025086A2 (pt) * 2019-06-14 2022-01-25 Abl Bio Inc Anticorpo biespecífico contra a-syn/igfir e uso do mesmo
CA3157509A1 (en) 2019-10-10 2021-04-15 Kodiak Sciences Inc. Methods of treating an eye disorder
WO2021231976A1 (en) 2020-05-14 2021-11-18 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind prostate specific membrane antigen (psma) and cd3
JP2020162622A (ja) * 2020-06-25 2020-10-08 インスティテュート フォー リサーチ イン バイオメディシン 多重特異性抗体によるサイトカインの非常に強力な中和およびその利用
AU2021329378A1 (en) 2020-08-19 2023-03-23 Xencor, Inc. Anti-CD28 compositions
EP4305067A1 (en) 2021-03-09 2024-01-17 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind cd3 and cldn6
WO2022192586A1 (en) 2021-03-10 2022-09-15 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind cd3 and gpc3
CN117285643A (zh) * 2022-06-16 2023-12-26 清华大学 一种相变调节套件及其用途

Family Cites Families (399)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US2128208A (en) 1937-02-27 1938-08-23 Du Pont Alkoxy derivatives of methacrylic acid esters and method of producing them
CU22545A1 (es) 1994-11-18 1999-03-31 Centro Inmunologia Molecular Obtención de un anticuerpo quimérico y humanizado contra el receptor del factor de crecimiento epidérmico para uso diagnóstico y terapéutico
US4554101A (en) 1981-01-09 1985-11-19 New York Blood Center, Inc. Identification and preparation of epitopes on antigens and allergens on the basis of hydrophilicity
ATE37983T1 (de) 1982-04-22 1988-11-15 Ici Plc Mittel mit verzoegerter freigabe.
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US4753894A (en) 1984-02-08 1988-06-28 Cetus Corporation Monoclonal anti-human breast cancer antibodies
US4943533A (en) 1984-03-01 1990-07-24 The Regents Of The University Of California Hybrid cell lines that produce monoclonal antibodies to epidermal growth factor receptor
US5128326A (en) 1984-12-06 1992-07-07 Biomatrix, Inc. Drug delivery systems based on hyaluronans derivatives thereof and their salts and methods of producing same
US6492107B1 (en) 1986-11-20 2002-12-10 Stuart Kauffman Process for obtaining DNA, RNA, peptides, polypeptides, or protein, by recombinant DNA technique
EP0229046B1 (fr) 1985-03-30 1994-05-04 BALLIVET, Marc Procede d'obtention d'adn, arn, peptides, polypeptides ou proteines, par une technique de recombinaison d'adn
US4980286A (en) 1985-07-05 1990-12-25 Whitehead Institute For Biomedical Research In vivo introduction and expression of foreign genetic material in epithelial cells
US5618920A (en) 1985-11-01 1997-04-08 Xoma Corporation Modular assembly of antibody genes, antibodies prepared thereby and use
DE3600905A1 (de) 1986-01-15 1987-07-16 Ant Nachrichtentech Verfahren zum dekodieren von binaersignalen sowie viterbi-dekoder und anwendungen
US4699784A (en) 1986-02-25 1987-10-13 Center For Molecular Medicine & Immunology Tumoricidal methotrexate-antibody conjugate
US5225539A (en) 1986-03-27 1993-07-06 Medical Research Council Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies
GB8607679D0 (en) 1986-03-27 1986-04-30 Winter G P Recombinant dna product
US4946778A (en) 1987-09-21 1990-08-07 Genex Corporation Single polypeptide chain binding molecules
EP0273115B1 (en) 1986-10-22 1994-09-07 Abbott Laboratories Chemiluminescent acridinium and phenanthridinium salts
IL85035A0 (en) 1987-01-08 1988-06-30 Int Genetic Eng Polynucleotide molecule,a chimeric antibody with specificity for human b cell surface antigen,a process for the preparation and methods utilizing the same
EP0307434B2 (en) 1987-03-18 1998-07-29 Scotgen Biopharmaceuticals, Inc. Altered antibodies
US5258498A (en) 1987-05-21 1993-11-02 Creative Biomolecules, Inc. Polypeptide linkers for production of biosynthetic proteins
US4880078A (en) 1987-06-29 1989-11-14 Honda Giken Kogyo Kabushiki Kaisha Exhaust muffler
WO1989006692A1 (en) 1988-01-12 1989-07-27 Genentech, Inc. Method of treating tumor cells by inhibiting growth factor receptor function
US5006309A (en) 1988-04-22 1991-04-09 Abbott Laboratories Immunoassay device with liquid transfer between wells by washing
US5089424A (en) 1988-06-14 1992-02-18 Abbott Laboratories Method and apparatus for heterogeneous chemiluminescence assay
DE768377T1 (de) 1988-09-02 1998-01-02 Dyax Corp Herstellung und Auswahl von Rekombinantproteinen mit verschiedenen Bindestellen
US5223409A (en) 1988-09-02 1993-06-29 Protein Engineering Corp. Directed evolution of novel binding proteins
US5241070A (en) 1988-09-26 1993-08-31 Ciba Corning Diagnostics Corp. Nucleophilic polysubstituted aryl acridinium esters and uses thereof
WO1990005183A1 (en) 1988-10-31 1990-05-17 Immunex Corporation Interleukin-4 receptors
SE462454B (sv) 1988-11-10 1990-06-25 Pharmacia Ab Maetyta foer anvaendning i biosensorer
KR0184860B1 (ko) 1988-11-11 1999-04-01 메디칼 리써어치 카운실 단일영역 리간드와 이를 포함하는 수용체 및 이들의 제조방법과 이용(법)
US5063081A (en) 1988-11-14 1991-11-05 I-Stat Corporation Method of manufacturing a plurality of uniform microfabricated sensing devices having an immobilized ligand receptor
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
CA2016842A1 (en) 1989-05-16 1990-11-16 Richard A. Lerner Method for tapping the immunological repertoire
CA2016841C (en) 1989-05-16 1999-09-21 William D. Huse A method for producing polymers having a preselected activity
WO1990014443A1 (en) 1989-05-16 1990-11-29 Huse William D Co-expression of heteromeric receptors
AU6430190A (en) 1989-10-10 1991-05-16 Pitman-Moore, Inc. Sustained release composition for macromolecular proteins
JP2571874B2 (ja) 1989-11-06 1997-01-16 アルカーメス コントロールド セラピューティクス，インコーポレイテッド タンパク質マイクロスフェア組成物
GB8928874D0 (en) 1989-12-21 1990-02-28 Celltech Ltd Humanised antibodies
US5859205A (en) 1989-12-21 1999-01-12 Celltech Limited Humanised antibodies
US5780225A (en) 1990-01-12 1998-07-14 Stratagene Method for generating libaries of antibody genes comprising amplification of diverse antibody DNAs and methods for using these libraries for the production of diverse antigen combining molecules
AU7247191A (en) 1990-01-11 1991-08-05 Molecular Affinities Corporation Production of antibodies using gene libraries
DE69120146T2 (de) 1990-01-12 1996-12-12 Cell Genesys Inc Erzeugung xenogener antikörper
US6075181A (en) 1990-01-12 2000-06-13 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US5427908A (en) 1990-05-01 1995-06-27 Affymax Technologies N.V. Recombinant library screening methods
JPH05506357A (ja) 1990-05-25 1993-09-22 ルミニス　ピーティーワイ　リミテッド 酵母株同定用マーカー
DK0585287T3 (da) 1990-07-10 2000-04-17 Cambridge Antibody Tech Fremgangsmåde til fremstilling af specifikke bindingsparelementer
GB9015198D0 (en) 1990-07-10 1990-08-29 Brien Caroline J O Binding substance
CA2090126C (en) 1990-08-02 2002-10-22 John W. Schrader Methods for the production of proteins with a desired function
US5135875A (en) 1990-08-15 1992-08-04 Abbott Laboratories Protein precipitation reagent
CA2048302A1 (en) 1990-08-15 1992-02-16 Victoria P. Meucci Solubilization reagent for biological test samples
WO1992003461A1 (en) 1990-08-24 1992-03-05 Ixsys, Inc. Methods of synthesizing oligonucleotides with random codons
US5698426A (en) 1990-09-28 1997-12-16 Ixsys, Incorporated Surface expression libraries of heteromeric receptors
ES2113940T3 (es) 1990-12-03 1998-05-16 Genentech Inc Metodo de enriquecimiento para variantes de proteinas con propiedades de union alteradas.
US5780279A (en) 1990-12-03 1998-07-14 Genentech, Inc. Method of selection of proteolytic cleavage sites by directed evolution and phagemid display
DE69131017T2 (de) 1990-12-20 1999-07-15 Ixsys Inc Optimierung von bindenden proteinen
DE69233697T2 (de) 1991-03-01 2008-01-24 Dyax Corp., Cambridge Verfahren zur Entwicklung von bindenden Mikroproteinen
JP3854306B2 (ja) 1991-03-06 2006-12-06 メルク パテント ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフトング ヒト化及びキメラモノクローナル抗体
US5656272A (en) 1991-03-18 1997-08-12 New York University Medical Center Methods of treating TNF-α-mediated Crohn's disease using chimeric anti-TNF antibodies
US6277969B1 (en) 1991-03-18 2001-08-21 New York University Anti-TNF antibodies and peptides of human tumor necrosis factor
DK0610201T4 (da) 1991-03-18 2008-02-04 Centocor Inc Monoklonale og kimære antistoffer, der er specifikke for human tumornekrosefaktor
DE69233750D1 (de) 1991-04-10 2009-01-02 Scripps Research Inst Bibliotheken heterodimerer Rezeptoren mittels Phagemiden
ES2134212T3 (es) 1991-04-25 1999-10-01 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Anticuerpo humano reconstituido contra el receptor de la interleuquina 6 humano.
JPH06507404A (ja) 1991-05-01 1994-08-25 ヘンリー　エム．ジャクソン　ファウンデイション　フォー　ザ　アドバンスメント　オブ　ミリタリー　メディスン 感染性の呼吸性疾患の治療方法
EP0519596B1 (en) 1991-05-17 2005-02-23 Merck & Co. Inc. A method for reducing the immunogenicity of antibody variable domains
DE4118120A1 (de) 1991-06-03 1992-12-10 Behringwerke Ag Tetravalente bispezifische rezeptoren, ihre herstellung und verwendung
CA2069530A1 (en) 1991-06-03 1992-12-04 Cass J. Grandone Reagent pack for immunoassays
ES2206447T3 (es) 1991-06-14 2004-05-16 Genentech, Inc. Anticuerpo humanizado para heregulina.
WO1994004679A1 (en) 1991-06-14 1994-03-03 Genentech, Inc. Method for making humanized antibodies
AU2238292A (en) 1991-06-14 1993-01-12 Xoma Corporation Microbially-produced antibody fragments and their conjugates
DE4122599C2 (de) 1991-07-08 1993-11-11 Deutsches Krebsforsch Phagemid zum Screenen von Antikörpern
ES2136092T3 (es) 1991-09-23 1999-11-16 Medical Res Council Procedimientos para la produccion de anticuerpos humanizados.
DK0605522T3 (da) 1991-09-23 2000-01-17 Medical Res Council Fremgangsmåde til fremstilling af humaniserede antistoffer
JPH07501451A (ja) 1991-11-25 1995-02-16 エンゾン・インコーポレイテッド 多価抗原結合タンパク質
DK1024191T3 (da) 1991-12-02 2008-12-08 Medical Res Council Fremstilling af autoantistoffer fremvist på fag-overflader ud fra antistofsegmentbiblioteker
ES2202310T3 (es) 1991-12-13 2004-04-01 Xoma Corporation Metodos y materiales para la preparacion de dominios variables de anticuerpos modificados y sus usos terapeuticos.
US5714350A (en) 1992-03-09 1998-02-03 Protein Design Labs, Inc. Increasing antibody affinity by altering glycosylation in the immunoglobulin variable region
US5912015A (en) 1992-03-12 1999-06-15 Alkermes Controlled Therapeutics, Inc. Modulated release from biocompatible polymers
US5733743A (en) 1992-03-24 1998-03-31 Cambridge Antibody Technology Limited Methods for producing members of specific binding pairs
ES2198823T3 (es) 1992-03-30 2004-02-01 Abbott Laboratories Reactivos que permiten la deteccion y la cuantificacion de la tiroxina en muestras de fluido.
US5352803A (en) 1992-03-30 1994-10-04 Abbott Laboratories 5(6)-methyl substituted fluorescein derivatives
ATE381614T1 (de) 1992-07-24 2008-01-15 Amgen Fremont Inc Bildung von xenogenen antikörpern
US5639641A (en) 1992-09-09 1997-06-17 Immunogen Inc. Resurfacing of rodent antibodies
US5736137A (en) 1992-11-13 1998-04-07 Idec Pharmaceuticals Corporation Therapeutic application of chimeric and radiolabeled antibodies to human B lymphocyte restricted differentiation antigen for treatment of B cell lymphoma
CA2149329C (en) 1992-11-13 2008-07-15 Darrell R. Anderson Therapeutic application of chimeric and radiolabeled antibodies to human b lymphocyte restricted differentiation antigen for treatment of b cell lymphoma
US5934272A (en) 1993-01-29 1999-08-10 Aradigm Corporation Device and method of creating aerosolized mist of respiratory drug
AU6132994A (en) 1993-02-02 1994-08-29 Scripps Research Institute, The Methods for producing antibody libraries using universal or randomized immunoglobulin light chains
US6491916B1 (en) 1994-06-01 2002-12-10 Tolerance Therapeutics, Inc. Methods and materials for modulation of the immunosuppresive activity and toxicity of monoclonal antibodies
WO1995001997A1 (en) * 1993-07-09 1995-01-19 Smithkline Beecham Corporation RECOMBINANT AND HUMANIZED IL-1β ANTIBODIES FOR TREATMENT OF IL-1 MEDIATED INFLAMMATORY DISORDERS IN MAN
WO1995009917A1 (en) 1993-10-07 1995-04-13 The Regents Of The University Of California Genetically engineered bispecific tetravalent antibodies
EP0659766A1 (en) * 1993-11-23 1995-06-28 Schering-Plough Human monoclonal antibodies against human cytokines and methods of making and using such antibodies
US5565352A (en) 1993-11-24 1996-10-15 Arch Development Corporation Deubiquitinating enzyme: compositions and methods
EP0733070A1 (en) 1993-12-08 1996-09-25 Genzyme Corporation Process for generating specific antibodies
EP0733102A1 (en) 1993-12-10 1996-09-25 Abbott Laboratories Reagents and methods for the detection of methotrexate
GB9401182D0 (en) 1994-01-21 1994-03-16 Inst Of Cancer The Research Antibodies to EGF receptor and their antitumour effect
DK0744958T3 (da) 1994-01-31 2003-10-20 Univ Boston Polyklonale antistofbiblioteker
ZA95960B (en) 1994-03-14 1995-10-10 Genetics Inst Use of interleukin-12 antagonists in the treatment of autoimmune diseases
PT699237E (pt) 1994-03-17 2003-07-31 Merck Patent Gmbh Fvs de cadeia anti-egfr e anticorpos anti-egfr
IL109632A (en) 1994-05-11 2007-03-08 Yeda Res & Dev Modulators of the function of tnf receptors
US5516637A (en) 1994-06-10 1996-05-14 Dade International Inc. Method involving display of protein binding pairs on the surface of bacterial pili and bacteriophage
ATE306930T1 (de) 1994-08-12 2005-11-15 Immunomedics Inc Für b-zell-lymphom und leukämiezellen spezifische immunkonjugate und humane antikörper
WO1996020698A2 (en) 1995-01-05 1996-07-11 The Board Of Regents Acting For And On Behalf Of The University Of Michigan Surface-modified nanoparticles and method of making and using same
GB9504344D0 (en) 1995-03-03 1995-04-19 Unilever Plc Antibody fragment production
US6130364A (en) 1995-03-29 2000-10-10 Abgenix, Inc. Production of antibodies using Cre-mediated site-specific recombination
US6091001A (en) 1995-03-29 2000-07-18 Abgenix, Inc. Production of antibodies using Cre-mediated site-specific recombination
US5641870A (en) 1995-04-20 1997-06-24 Genentech, Inc. Low pH hydrophobic interaction chromatography for antibody purification
US6019968A (en) 1995-04-14 2000-02-01 Inhale Therapeutic Systems, Inc. Dispersible antibody compositions and methods for their preparation and use
EP0826034A4 (en) 1995-04-21 2002-06-19 Cell Genesys Inc PRODUCTION OF LARGE GENOMIC DNA DELETIONS
ES2304786T3 (es) 1995-04-27 2008-10-16 Amgen Fremont Inc. Anticuerpos anti-il-8 humanos, derivados a partir de xenoratones inmunizados.
EP0823941A4 (en) 1995-04-28 2001-09-19 Abgenix Inc HUMAN ANTIBODIES DERIVED FROM IMMUNIZED XENO MOUSES
CA2222231A1 (en) 1995-06-07 1996-12-19 Imclone Systems Incorporated Antibody and antibody fragments for inhibiting the growth of tumors
US7060808B1 (en) 1995-06-07 2006-06-13 Imclone Systems Incorporated Humanized anti-EGF receptor monoclonal antibody
US6127977A (en) 1996-11-08 2000-10-03 Cohen; Nathan Microstrip patch antenna with fractal structure
EP0850051A2 (en) 1995-08-31 1998-07-01 Alkermes Controlled Therapeutics, Inc. Composition for sustained release of an agent
WO1997014719A1 (en) 1995-10-16 1997-04-24 Unilever N.V. A bifunctional or bivalent antibody fragment analogue
US6090382A (en) 1996-02-09 2000-07-18 Basf Aktiengesellschaft Human antibodies that bind human TNFα
US6331431B1 (en) 1995-11-28 2001-12-18 Ixsys, Inc. Vacuum device and method for isolating periplasmic fraction from cells
JP2978435B2 (ja) 1996-01-24 1999-11-15 チッソ株式会社 アクリロキシプロピルシランの製造方法
RU2270030C2 (ru) 1996-02-09 2006-02-20 Абботт Байотекнолоджи эЛтиди. СПОСОБ ИНГИБИРОВАНИЯ АКТИВНОСТИ ЧЕЛОВЕЧЕСКОГО TNFα (ВАРИАНТЫ), ПРИМЕНЕНИЕ ВЫДЕЛЕННОГО АНТИТЕЛА ЧЕЛОВЕКА ИЛИ ЕГО АНТИГЕНСВЯЗЫВАЮЩЕГО ФРАГМЕНТА В КАЧЕСТВЕ КОМПОНЕНТА ДЛЯ ПРОИЗВОДСТВА ЛЕКАРСТВЕННОГО СРЕДСТВА (ВАРИАНТЫ) И ВЫДЕЛЕННОЕ ЧЕЛОВЕЧЕСКОЕ АНТИТЕЛО ИЛИ ЕГО АНТИГЕНСВЯЗЫВАЮЩИЙ ФРАГМЕНТ
US5985320A (en) 1996-03-04 1999-11-16 The Penn State Research Foundation Materials and methods for enhancing cellular internalization
US5714352A (en) 1996-03-20 1998-02-03 Xenotech Incorporated Directed switch-mediated DNA recombination
CA2250166A1 (en) 1996-03-28 1997-10-02 The Johns Hopkins University Soluble divalent and multivalent heterodimeric analogs of proteins
JP2000508892A (ja) 1996-04-04 2000-07-18 ユニリーバー・ナームローゼ・ベンノートシャープ 多価および多特異的抗原結合タンパク
US5874064A (en) 1996-05-24 1999-02-23 Massachusetts Institute Of Technology Aerodynamically light particles for pulmonary drug delivery
US5855913A (en) 1997-01-16 1999-01-05 Massachusetts Instite Of Technology Particles incorporating surfactants for pulmonary drug delivery
US5985309A (en) 1996-05-24 1999-11-16 Massachusetts Institute Of Technology Preparation of particles for inhalation
US6699658B1 (en) 1996-05-31 2004-03-02 Board Of Trustees Of The University Of Illinois Yeast cell surface display of proteins and uses thereof
US5916771A (en) 1996-10-11 1999-06-29 Abgenix, Inc. Production of a multimeric protein by cell fusion method
US6986890B1 (en) 1996-11-21 2006-01-17 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Anti-human VEGF receptor Flt-1 monoclonal antibody
DK1500329T3 (da) 1996-12-03 2012-07-09 Amgen Fremont Inc Humane antistoffer, der specifikt binder TNF-alfa
PT954282E (pt) 1997-01-16 2005-06-30 Massachusetts Inst Technology Preparacao de particulas para inalacao
WO1998031700A1 (en) 1997-01-21 1998-07-23 The General Hospital Corporation Selection of proteins using rna-protein fusions
US7306914B2 (en) 1997-01-31 2007-12-11 Odyssey Thera Inc. Protein fragment complementation assays in whole animals applications to drug efficacy, ADME, cancer biology, immunology, infectious disease and gene therapy
US6057098A (en) 1997-04-04 2000-05-02 Biosite Diagnostics, Inc. Polyvalent display libraries
EP0973804B1 (en) 1997-04-07 2006-12-27 Genentech, Inc. Anti-vegf antibodies
US6884879B1 (en) 1997-04-07 2005-04-26 Genentech, Inc. Anti-VEGF antibodies
US6235883B1 (en) 1997-05-05 2001-05-22 Abgenix, Inc. Human monoclonal antibodies to epidermal growth factor receptor
NZ516848A (en) 1997-06-20 2004-03-26 Ciphergen Biosystems Inc Retentate chromatography apparatus with applications in biology and medicine
WO1999006834A2 (en) 1997-08-04 1999-02-11 Ixsys, Incorporated Methods for identifying ligand specific binding molecules
US5989463A (en) 1997-09-24 1999-11-23 Alkermes Controlled Therapeutics, Inc. Methods for fabricating polymer-based controlled release devices
SE512663C2 (sv) 1997-10-23 2000-04-17 Biogram Ab Inkapslingsförfarande för aktiv substans i en bionedbrytbar polymer
US6670453B2 (en) 1997-10-27 2003-12-30 Unilever Patent Holdings B.V. Multivalent antigen-binding proteins
US7179892B2 (en) 2000-12-06 2007-02-20 Neuralab Limited Humanized antibodies that recognize beta amyloid peptide
JP2002505097A (ja) 1998-03-03 2002-02-19 アブジェニックス インク． 治療薬としてのｃｄ１４７結合分子
EP1068356B8 (en) 1998-04-03 2007-01-03 Adnexus Therapeutics, Inc. Addressable protein arrays
US20020029391A1 (en) 1998-04-15 2002-03-07 Claude Geoffrey Davis Epitope-driven human antibody production and gene expression profiling
AU3657899A (en) 1998-04-20 1999-11-08 James E. Bailey Glycosylation engineering of antibodies for improving antibody-dependent cellular cytotoxicity
ATE321066T1 (de) 1998-05-06 2006-04-15 Genentech Inc Anti-her2 antikörperzusammensetzung
CA2336139C (en) 1998-06-24 2008-10-14 Advanced Inhalation Research, Inc. Large porous particles emitted from an inhaler
US6406921B1 (en) 1998-07-14 2002-06-18 Zyomyx, Incorporated Protein arrays for high-throughput screening
EP1105427A2 (en) 1998-08-17 2001-06-13 Abgenix, Inc. Generation of modified molecules with increased serum half-lives
US20030215458A1 (en) 1998-09-30 2003-11-20 Corixa Corporation Compositions and methods for WT1 specific immunotherapy
US6660843B1 (en) 1998-10-23 2003-12-09 Amgen Inc. Modified peptides as therapeutic agents
WO2000034337A1 (en) 1998-12-10 2000-06-15 Tsukuba Research Laboratory, Toagosei Co., Ltd. Humanized monoclonal antibodies against vascular endothelial cell growth factor
KR100856446B1 (ko) 1998-12-23 2008-09-04 화이자 인크. Ｃｔｌａ－４에 대한 인간 단일클론 항체
US8003772B2 (en) 1999-01-14 2011-08-23 Martek Biosciences Corporation Chimeric PUFA polyketide synthase systems and uses thereof
HUP0104865A3 (en) 1999-01-15 2004-07-28 Genentech Inc Polypeptide variants with altered effector function
AU4025300A (en) 1999-03-24 2000-10-09 Packard Bioscience Company Continuous porous matrix arrays
US6914128B1 (en) 1999-03-25 2005-07-05 Abbott Gmbh & Co. Kg Human antibodies that bind human IL-12 and methods for producing
KR101222450B1 (ko) 1999-03-25 2013-01-16 애보트 게엠베하 운트 콤파니 카게 사람 ｉｌ-12에 결합하는 사람 항체 및 이의 제조방법
EP2275540B1 (en) 1999-04-09 2016-03-23 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Method for controlling the activity of immunologically functional molecule
CN1119415C (zh) 1999-06-04 2003-08-27 长春迈灵生物工程有限公司 抗ca125双功能基因工程抗体的克隆与表达
US7087411B2 (en) 1999-06-08 2006-08-08 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Fusion protein capable of binding VEGF
US6531580B1 (en) 1999-06-24 2003-03-11 Ixsys, Inc. Anti-αvβ3 recombinant human antibodies and nucleic acids encoding same
DK2283866T3 (en) 1999-06-25 2015-05-18 Genentech Inc METHODS OF TREATMENT USING ANTI-ERBB ANTIBODY-MAYTANSINOID CONJUGATES
AU1456101A (en) 1999-11-03 2001-05-14 Maxygen, Inc. Antibody diversity generation
TWI373343B (en) 2000-02-10 2012-10-01 Abbott Gmbh & Co Kg Antibodies that bind human interleukin-18 and methods of making and using
BR0108930A (pt) 2000-02-24 2002-12-10 Genentech Inc Método de fornecimento de um agente ativo a um tipo celular de interesse, composição farmacêutica, pró-droga ativada por caspase, kit, método de tratamento de mamìferos, uso de um conjugado de caspase e uso de um pró-agente
EP1266009B1 (en) 2000-02-25 2008-12-31 THE GOVERNMENT OF THE UNITED STATES OF AMERICA, as represented by THE SECRETARY, DEPARTMENT OF HEALTH AND HUMAN SERVICES ANTI-EGFRvIII SCFVS WITH IMPROVED CYTOTOXICITY AND YIELD, IMMUNOTOXINS BASED THEREON, AND METHODS OF USE THEREOF
JP2004500108A (ja) 2000-03-24 2004-01-08 マイクロメット　アーゲー Ｎｋｇ２ｄレセプター複合体のエピトープへの結合部位を含む多機能ポリペプチド
ES2528794T3 (es) 2000-04-11 2015-02-12 Genentech, Inc. Anticuerpos multivalentes y usos de los mismos
CA2407956A1 (en) 2000-05-03 2001-11-08 Amgen Inc. Modified peptides as therapeutic agents
CN1239701C (zh) 2000-05-19 2006-02-01 梨树化学株式会社 抗表皮生长因子受体的人源化抗体
US7449308B2 (en) 2000-06-28 2008-11-11 Glycofi, Inc. Combinatorial DNA library for producing modified N-glycans in lower eukaryotes
KR100787073B1 (ko) 2000-06-28 2007-12-21 글리코파이, 인크. 변형된 당단백질의 제조방법
DE60137421D1 (de) 2000-06-29 2009-03-05 Abbott Lab Antikörper mit zwei spezifizitäten und verfahren zur deren herstellung und verwendung
AU2001270609A1 (en) 2000-06-30 2002-01-14 Vlaams Interuniversitair Instituut Voor Biotechnologie Vzw Heterodimeric fusion proteins
US20090081234A1 (en) 2000-08-07 2009-03-26 George Heavner Anti-tnf antibodies, compositions, methods and uses for treatment of depression and related conditions
GB0020685D0 (en) * 2000-08-22 2000-10-11 Novartis Ag Organic compounds
US20030157643A1 (en) 2000-08-24 2003-08-21 Almond Brian D Synthetic nucleic acids from aquatic species
MXPA00009407A (es) 2000-09-26 2004-12-08 Mexicano Inst Petrol Procedimiento para la preparacion de un catalizador monometalico de tipo zeolitico para la obtencion de gasolinas de alto octando mediante reformacion de naftas.
AU2002211658A1 (en) 2000-10-13 2002-04-22 Uab Research Foundation Human anti-epidermal growth factor receptor single-chain antibodies
JP5312721B2 (ja) 2000-11-07 2013-10-09 シティ・オブ・ホープ Ｃｄ１９特異的再指向免疫細胞
US7601692B2 (en) 2000-11-28 2009-10-13 Compugen Ltd. MCP-1 splice variants and methods of using same
US6818392B2 (en) 2000-12-06 2004-11-16 Abbott Laboratories Monoclonal antibodies to human immunodeficiency virus and uses thereof
PE20020574A1 (es) 2000-12-06 2002-07-02 Wyeth Corp Anticuerpos humanizados que reconocen el peptido amiloideo beta
KR20030074693A (ko) 2000-12-28 2003-09-19 알투스 바이올로직스 인코포레이티드 전항체 및 이의 단편의 결정과 이의 제조 및 사용 방법
AR032028A1 (es) 2001-01-05 2003-10-22 Pfizer Anticuerpos contra el receptor del factor de crecimiento similar a insulina
US7667004B2 (en) 2001-04-17 2010-02-23 Abmaxis, Inc. Humanized antibodies against vascular endothelial growth factor
US20100056762A1 (en) 2001-05-11 2010-03-04 Old Lloyd J Specific binding proteins and uses thereof
EP2340849A1 (en) 2001-05-30 2011-07-06 Genentech, Inc. Anti-NGF antibodies for the treatment of various disorders
WO2002097048A2 (en) 2001-05-30 2002-12-05 Centocor, Inc. ANTI-p40 IMMUNOGLOBULIN DERIVED PROTEINS, COMPOSITIONS, METHODS AND USES
CN100497389C (zh) 2001-06-13 2009-06-10 根马布股份公司 表皮生长因子受体(egfr)的人单克隆抗体
ATE524495T1 (de) 2001-07-31 2011-09-15 Ono Pharmaceutical Co Pd-1-spezifische substanz
WO2003016466A2 (en) 2001-08-17 2003-02-27 Eli Lilly And Company ANTI-Aβ ANTIBODIES
US7247304B2 (en) 2001-08-23 2007-07-24 Genmab A/S Methods of treating using anti-IL-15 antibodies
CA2461529A1 (en) 2001-09-25 2003-04-03 Immuno-Biological Laboratories Co., Ltd. Recombinant anti-osteopontin antibody and use thereof
EP1438400B1 (en) 2001-10-01 2009-06-17 Dyax Corp. Multi-chain eukaryotic display vectors and uses thereof
US7214660B2 (en) 2001-10-10 2007-05-08 Neose Technologies, Inc. Erythropoietin: remodeling and glycoconjugation of erythropoietin
ES2326964T3 (es) 2001-10-25 2009-10-22 Genentech, Inc. Composiciones de glicoproteina.
AU2002346373A1 (en) 2001-11-09 2003-05-19 Idec Pharmaceuticals Corporation Anti-cd80 antibody having adcc activity for adcc mediated killing of b cell lymphoma cells alone or in combination with other therapies
DE10156482A1 (de) 2001-11-12 2003-05-28 Gundram Jung Bispezifisches Antikörper-Molekül
CN100374457C (zh) 2001-11-14 2008-03-12 森托科尔公司 抗il-6抗体、组合物、方法和用途
US7452539B2 (en) 2001-12-19 2008-11-18 Genentech, Inc. Stabilizing polypeptides which have been exposed to urea
AU2003210802B2 (en) 2002-02-05 2009-09-10 Genentech Inc. Protein purification
EP1573002A4 (en) 2002-02-11 2008-07-16 Genentech Inc ANTIBODY VARIANTS WITH ACCELERATED ANTIGEN ASSOCIATED SPEEDS
US7317091B2 (en) 2002-03-01 2008-01-08 Xencor, Inc. Optimized Fc variants
US7419821B2 (en) 2002-03-05 2008-09-02 I-Stat Corporation Apparatus and methods for analyte measurement and immunoassay
JP2005535572A (ja) 2002-04-12 2005-11-24 メディミューン，インコーポレーテッド 組換え抗インターロイキン−９抗体
EP1495055B1 (en) 2002-04-18 2013-08-14 Genencor International, Inc. Production of functional antibodies in filamentous fungi
US20030206898A1 (en) 2002-04-26 2003-11-06 Steven Fischkoff Use of anti-TNFalpha antibodies and another drug
CA2478925C (en) 2002-04-26 2016-06-07 Robert Lee Fahrner Non-affinity purification of proteins
US7438911B2 (en) 2002-04-30 2008-10-21 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Antibody against human insulin-like growth factor
US7714189B2 (en) 2002-05-03 2010-05-11 Monsanto Technology Llc High tryptophan maize
WO2003100008A2 (en) 2002-05-24 2003-12-04 Schering Corporation Neutralizing human anti-igfr antibody
US9321832B2 (en) 2002-06-28 2016-04-26 Domantis Limited Ligand
ES2368733T3 (es) 2002-07-18 2011-11-21 Merus B.V. Producción recombinante de mezclas de anticuerpos.
US20040018577A1 (en) 2002-07-29 2004-01-29 Emerson Campbell John Lewis Multiple hybrid immunoassay
US20040033228A1 (en) 2002-08-16 2004-02-19 Hans-Juergen Krause Formulation of human antibodies for treating TNF-alpha associated disorders
RS20050834A (en) 2002-08-19 2007-12-31 Abgenix Inc., Antibodies directed to monocyte chemo-attractant protein-1 (mcp-1) and uses thereof
ES2629602T5 (es) 2002-09-11 2021-06-08 Genentech Inc Purificación de proteínas
JP4315907B2 (ja) 2002-11-22 2009-08-19 エーザイ・アール・アンド・ディー・マネジメント株式会社 マラリア原虫のｇｐｉの生合成を阻害する化合物をスクリーニングする方法
AU2003298816C1 (en) 2002-12-02 2010-12-16 Amgen Fremont, Inc. Antibodies directed to Tumor Necrosis Factor and uses thereof
DE60332957D1 (de) 2002-12-16 2010-07-22 Genentech Inc Immunoglobulinvarianten und deren verwendungen
PT1575517E (pt) 2002-12-24 2012-05-28 Rinat Neuroscience Corp Anticorpos anti-ngf e métodos de utilização dos mesmos
CA2513113A1 (en) 2003-01-23 2004-08-05 Genentech, Inc. Methods for producing humanized antibodies and improving yield of antibodies or antigen binding fragments in cell culture
CA2517145C (en) 2003-03-05 2017-08-01 Halozyme, Inc. Soluble hyaluronidase glycoprotein (shasegp), process for preparing the same, uses and pharmaceutical compositions comprising thereof
US20060104968A1 (en) 2003-03-05 2006-05-18 Halozyme, Inc. Soluble glycosaminoglycanases and methods of preparing and using soluble glycosaminogly ycanases
WO2005016970A2 (en) 2003-05-01 2005-02-24 Imclone Systems Incorporated Fully human antibodies directed against the human insulin-like growth factor-1 receptor
WO2004104020A2 (en) 2003-05-14 2004-12-02 Dow Corning Corporation Repeat sequence protein polymer active agent conjugates, methods and uses
US20070104722A1 (en) 2003-05-15 2007-05-10 Iogenetics Targeted biocides
US7635472B2 (en) 2003-05-31 2009-12-22 Micromet Ag Pharmaceutical compositions comprising bispecific anti-cd3, anti-cd19 antibody constructs for the treatment of b-cell related disorders
JP5105874B2 (ja) 2003-07-18 2012-12-26 アムジエン・インコーポレーテツド 肝細胞増殖因子に対する特異的結合因子
ES2786568T3 (es) 2003-07-28 2020-10-13 Genentech Inc Reducción de la lixiviación de la proteína A durante la cromatografía de afinidad con proteína A
US20050026881A1 (en) 2003-07-31 2005-02-03 Robinson Cynthia B. Combination of dehydroepiandrosterone or dehydroepiandrosterone-sulfate with an anti-IgE antibody for treatment of asthma or chronic obstructive pulmonary disease
WO2005044853A2 (en) 2003-11-01 2005-05-19 Genentech, Inc. Anti-vegf antibodies
US20050106667A1 (en) 2003-08-01 2005-05-19 Genentech, Inc Binding polypeptides with restricted diversity sequences
US7662928B2 (en) 2003-08-08 2010-02-16 The Research Foundation Of State University Of New York Anti-FcRn antibodies for treatment of auto/allo immune conditions
EP1660534A2 (en) 2003-08-22 2006-05-31 MedImmune, Inc. Humanization of antibodies
CN1871259A (zh) 2003-08-22 2006-11-29 比奥根艾迪克Ma公司 具有改变的效应物功能的经改进的抗体和制备它的方法
US7723099B2 (en) 2003-09-10 2010-05-25 Abbott Point Of Care Inc. Immunoassay device with immuno-reference electrode
US7682833B2 (en) 2003-09-10 2010-03-23 Abbott Point Of Care Inc. Immunoassay device with improved sample closure
US20060134105A1 (en) 2004-10-21 2006-06-22 Xencor, Inc. IgG immunoglobulin variants with optimized effector function
EP1677667A2 (en) 2003-10-24 2006-07-12 Medtronic, Inc. Techniques to treat neurological disorders by attenuating the production of pro-inflammatory mediators
US7968684B2 (en) 2003-11-12 2011-06-28 Abbott Laboratories IL-18 binding proteins
CA2545653C (en) 2003-11-21 2014-07-08 Anp Technologies, Inc. Asymmetrically branched polymer conjugates and microarray assays
EP2221315A1 (en) 2003-12-04 2010-08-25 Xencor, Inc. Methods of generating variant proteins with increased host string content and compositions thereof
JP2007517504A (ja) 2003-12-09 2007-07-05 ベントリア バイオサイエンス 融合担体として種子貯蔵蛋白を利用する植物種子中の融合ポリペプチドの高水準発現
US7235641B2 (en) 2003-12-22 2007-06-26 Micromet Ag Bispecific antibodies
ITRM20030601A1 (it) 2003-12-24 2005-06-25 Lay Line Genomics Spa Metodo per l'umanizzazione di anticorpi e anticorpi umanizzati con esso ottenuti.
US7297541B2 (en) 2004-01-26 2007-11-20 Monsanto Technology Llc Genes encoding 4-hydroxyphenylpyruvate dioxygenase (HPPD) enzymes for plant metabolic engineering
WO2006107617A2 (en) 2005-04-06 2006-10-12 Ibc Pharmaceuticals, Inc. Methods for generating stably linked complexes composed of homodimers, homotetramers or dimers of dimers and uses
US7794713B2 (en) 2004-04-07 2010-09-14 Lpath, Inc. Compositions and methods for the treatment and prevention of hyperproliferative diseases
EP1755673B1 (en) 2004-04-12 2014-07-23 MedImmune, LLC Anti-il-9 antibody formulations and uses thereof
AU2005233387B2 (en) 2004-04-15 2011-05-26 Glycofi, Inc. Production of galactosylated glycoproteins in lower eukaryotes
US7976841B2 (en) 2004-04-30 2011-07-12 Institut National De La Sante Et De La Recherche Anti TfR antibody
WO2005120557A2 (en) 2004-05-13 2005-12-22 Imclone Systems Incorporated Inhibition of macrophage-stimulating protein receptor (ron)
WO2005112597A2 (en) 2004-05-19 2005-12-01 Agrivida, Inc. Transgenic plants expressing intein modified proteins and associated processes for bio-pharmaceutical production
GB0412019D0 (en) 2004-05-28 2004-06-30 Novartis Ag Organic compounds
US7150969B2 (en) 2004-06-04 2006-12-19 Rosetta Inpharmatics Llc Alternatively spliced isoform of acetyl-CoA carboxylase 2 (ACC2)
JP2008512352A (ja) 2004-07-17 2008-04-24 イムクローン システムズ インコーポレイティド 新規な四価の二重特異性抗体
WO2006015373A2 (en) 2004-08-04 2006-02-09 Amgen Inc Antibodies to dkk-1
GB0417487D0 (en) 2004-08-05 2004-09-08 Novartis Ag Organic compound
SI1773885T1 (sl) 2004-08-05 2010-08-31 Genentech Inc Humanizirani anti-CMET antagonisti
CA2577133A1 (en) 2004-08-19 2006-03-23 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
GB0419424D0 (en) 2004-09-02 2004-10-06 Viragen Scotland Ltd Transgene optimisation
RS57636B1 (sr) 2004-09-03 2018-11-30 Genentech Inc Humanizovani anti-beta7 antagonisti i njihova upotreba
US20060067931A1 (en) * 2004-09-25 2006-03-30 Hazel Lum Receptor for lysophosphatidylcholine in vascular endothelial cells and use thereof
JP2008520186A (ja) 2004-10-01 2008-06-19 マックス−プランク−ゲゼルシャフト・ツア・フェルデルング・デア・ヴィッセンシャフテン・エー・ファオ 哺乳類ｅａｇ１イオンチャネルタンパク質に対する新規の抗体
JO3000B1 (ar) 2004-10-20 2016-09-05 Genentech Inc مركبات أجسام مضادة .
WO2006047350A2 (en) 2004-10-21 2006-05-04 Xencor, Inc. IgG IMMUNOGLOBULIN VARIANTS WITH OPTIMIZED EFFECTOR FUNCTION
KR101370253B1 (ko) 2004-10-22 2014-03-05 암젠 인크 재조합 항체의 재접힘 방법
US20060253100A1 (en) 2004-10-22 2006-11-09 Medtronic, Inc. Systems and Methods to Treat Pain Locally
US7423128B2 (en) 2004-11-03 2008-09-09 Amgen Fremont Inc. Anti-properdin antibodies, and methods for making and using same
US20070135620A1 (en) 2004-11-12 2007-06-14 Xencor, Inc. Fc variants with altered binding to FcRn
PE20061401A1 (es) 2004-12-15 2006-12-23 Neuralab Ltd ANTICUERPOS Aß PARA MEJORAR LA COGNICION
AU2005319382B2 (en) 2004-12-21 2011-04-07 Astrazeneca Ab Antibodies directed to angiopoietin-2 and uses thereof
WO2006118617A2 (en) 2004-12-23 2006-11-09 Chlorogen, Inc. EXPRESSING TGF-β PROTEINS IN PLANT PLASTIDS
EP1851245B1 (en) 2005-01-26 2012-10-10 Amgen Fremont Inc. Antibodies against interleukin-1 beta
US20060233791A1 (en) 2005-02-15 2006-10-19 Duke University Anti-CD19 antibodies and uses in oncology
US8048992B2 (en) 2005-02-28 2011-11-01 Institute For Antibodies Co., Ltd. Anti-IgSF4 antibody and utilization of the same
PT1869085E (pt) 2005-03-24 2012-06-01 Vlaams Interuniv Inst Biotech Vzw Novo anticorpo anti-plgf
EP1877075A4 (en) 2005-04-25 2008-07-30 Pfizer ANTIBODIES DIRECTED AGAINST MYOSTATIN
US7592429B2 (en) 2005-05-03 2009-09-22 Ucb Sa Sclerostin-binding antibody
EP1885755A4 (en) 2005-05-05 2009-07-29 Univ Duke TREATMENTS OF AUTOIMMUNE DISEASES BY ANTI-CD19 ANTIBODIES
CN102441163A (zh) 2005-05-27 2012-05-09 比奥根艾迪克Ma公司 结合tweak的抗体
ITRM20050290A1 (it) 2005-06-07 2006-12-08 Lay Line Genomics Spa Uso di molecole in grado di inibire il legame tra ngf e il suo recettore trka come analgesici ad effetto prolungato.
EP1896577A2 (en) 2005-06-24 2008-03-12 Novozymes A/S Lipases for pharmaceutical use
JP2009501006A (ja) 2005-06-30 2009-01-15 セントカー・インコーポレーテツド 抗ｉｌ−２３抗体、組成物、方法および用途
US7776532B2 (en) 2005-08-11 2010-08-17 Synthetic Genomics, Inc. Method for in vitro recombination
US20070041905A1 (en) 2005-08-19 2007-02-22 Hoffman Rebecca S Method of treating depression using a TNF-alpha antibody
US7612181B2 (en) * 2005-08-19 2009-11-03 Abbott Laboratories Dual variable domain immunoglobulin and uses thereof
US20090215992A1 (en) 2005-08-19 2009-08-27 Chengbin Wu Dual variable domain immunoglobulin and uses thereof
RU2515108C2 (ru) * 2005-08-19 2014-05-10 Эббви Инк Иммуноглобулин с двойными вариабельными доменами и его применения
US20070071745A1 (en) 2005-08-26 2007-03-29 Pablo Umana Modified antigen binding molecules with altered cell signaling activity
US7906116B2 (en) 2005-09-01 2011-03-15 Parkash Gill Methods for using and identifying modulators of Delta-like 4
CA2623648C (en) 2005-09-21 2018-05-22 The Regents Of The University Of California Systems, compositions, and methods for local imaging and treatment of pain
AU2006294870B2 (en) 2005-09-23 2011-08-04 WRAIR, a U.S Army Research institution under the United States Government, as represented by the Secretary of the Army Antibodies with simultaneous subsite specificities to protein and lipid epitopes
AU2006301492B2 (en) 2005-10-11 2011-06-09 Amgen Research (Munich) Gmbh Compositions comprising cross-species-specific antibodies and uses thereof
JP2009513608A (ja) 2005-10-28 2009-04-02 ノボ・ノルデイスク・エー／エス エフェクターリンパ球と標的細胞とを結合する融合タンパク質
UA96139C2 (uk) 2005-11-08 2011-10-10 Дженентек, Інк. Антитіло до нейропіліну-1 (nrp1)
AR056806A1 (es) 2005-11-14 2007-10-24 Amgen Inc Moleculas quimericas de anticuerpo rankl- pth/ pthrp
CN101360826B (zh) 2005-11-18 2014-04-30 格兰马克药品股份有限公司 抗α2整联蛋白抗体及它们的用途
EP1957541A2 (en) 2005-11-21 2008-08-20 Laboratoires Serono SA Compositions and methods of producing hybrid antigen binding molecules and uses thereof
AU2006319358B2 (en) 2005-11-30 2012-01-19 AbbVie Deutschland GmbH & Co. KG Anti-Abeta globulomer antibodies, antigen-binding moieties thereof, corresponding hybridomas, nucleic acids, vectors, host cells, methods of producing said antibodies, compositions comprising said antibodies, uses of said antibodies and methods of using said antibodies
RS52357B (en) 2005-12-13 2012-12-31 Medimmune Limited BINDING PROTEINS SPECIFIC TO INSULIN SIMILAR GROWTH FACTORS AND THEIR USE
MX2008009494A (es) 2006-01-23 2009-01-07 Joseph P Errico Metodos y composiciones de desarrollo dirigido de farmacos.
US8377691B2 (en) 2006-01-26 2013-02-19 Integral Molecular, Inc. Lipoparticles comprising ion channels, methods of making and using the same
BRPI0706788A2 (pt) * 2006-01-31 2011-04-05 Novartis Ag anticorpos antagonistas il-17
US20070207171A1 (en) 2006-03-01 2007-09-06 Cerus Corporation Engineered listeria and methods of use thereof
CA2646508A1 (en) 2006-03-17 2007-09-27 Biogen Idec Ma Inc. Stabilized polypeptide compositions
US20070286858A1 (en) 2006-03-21 2007-12-13 Wyeth Methods and Compositions for Antagonism of RAGE
AU2007229698B9 (en) 2006-03-24 2012-11-08 Merck Patent Gmbh Engineered heterodimeric protein domains
KR20080113268A (ko) 2006-03-28 2008-12-29 바이오겐 아이덱 엠에이 인코포레이티드 항 ｉｇｆ-1ｒ 항체 및 그의 용도
US20070232556A1 (en) 2006-03-31 2007-10-04 Montine Thomas J Methods and compositions for the treatment of neurological diseases and disorders
EP2010213A4 (en) 2006-04-10 2010-08-11 Abbott Biotech Ltd USE AND COMPOSITIONS FOR THE TREATMENT OF JUVENIL RHEUMATOID ARTHRITIS
AU2007238677B2 (en) 2006-04-14 2011-03-10 Novartis Ag Use of IL-I antibodies for treating ophthalmic disorders
WO2007124019A2 (en) 2006-04-21 2007-11-01 Gtc Biotherapeutics, Inc. Methods and products related to the transfer of molecules from blood to the mammary gland
MEP39508A (en) 2006-04-21 2011-02-10 Novartis Ag Antagonist anti-cd40 antibody pharmaceutical compositions
US20070254338A1 (en) 2006-04-24 2007-11-01 Amgen Inc. Method for making recombinant protein using complementation dependent DHFR mutants
US20080118978A1 (en) 2006-04-28 2008-05-22 Takashi Sato Anti-tumor agent
CN101058609B (zh) 2006-05-26 2011-04-13 神州细胞工程有限公司 人源抗体及其表达
AR061170A1 (es) 2006-06-02 2008-08-06 Aveo Pharmaceuticals Inc Proteinas que se unen con el factor de crecimiento de hepatocitos (hgf)
AU2007319672B2 (en) 2006-06-06 2011-06-30 Genentech, Inc. Anti-DLL4 antibodies and methods using same
CA2654304A1 (en) 2006-06-06 2007-12-13 Genentech, Inc. Compositions and methods for modulating vascular development
CN1884517B (zh) 2006-06-08 2010-06-30 武汉禾元生物科技有限公司 利用谷物非储藏蛋白为融合载体在胚乳表达多肽的方法及应用
JP2009541275A (ja) 2006-06-22 2009-11-26 ノボ・ノルデイスク・エー／エス 二重特異性抗体の生産
EP2032989B2 (en) 2006-06-30 2015-10-28 Merck Sharp & Dohme Corp. Igfbp2 biomarker
US20080081379A1 (en) 2006-07-13 2008-04-03 Sigler Gerald F Homogeneous double receptor agglutination assay for immunosuppressant drugs
KR101605207B1 (ko) 2006-07-14 2016-03-22 에이씨 이뮨 에스.에이. 아밀로이드 베타에 대해 인간화된 항체
US7592156B2 (en) 2006-07-20 2009-09-22 Wyeth Synthetic dog/human chimeric C-C chemokine receptor 2B
US7883855B2 (en) 2006-07-21 2011-02-08 Abbott Laboratories Immunosuppressant drug extraction reagent for immunoassays
CA2660171C (en) 2006-08-11 2017-05-16 Monsanto Technology Llc Production of high tryptophan maize by chloroplast targeted expression of anthranilate synthase
DK2383297T5 (da) 2006-08-14 2022-07-04 Xencor Inc Optimerede antistoffer rettet mod CD19
ES2902063T3 (es) 2006-09-08 2022-03-24 Abbvie Bahamas Ltd Proteínas de unión a interleucina-13
US20080075690A1 (en) 2006-09-22 2008-03-27 Mark Douglas Howell Method for enhancing immune responses in mammals
PL2066694T3 (pl) 2006-09-29 2016-04-29 Oncomed Pharm Inc Kompozycje i sposoby diagnozowania i leczenia nowotworu
US20080102475A1 (en) 2006-10-13 2008-05-01 Zhengyan Kan Alternatively spliced isoform of phosphodiesterase 4B (PDE4B)
CN106084055A (zh) 2006-11-02 2016-11-09 健泰科生物技术公司 人源化的抗‑d因子抗体
WO2008079326A2 (en) 2006-12-20 2008-07-03 Vasgene Therapeutics, Inc. Methods for using and identifying modulators of delta-like 4
WO2008100995A1 (en) 2007-02-14 2008-08-21 Vaccinex, Inc. Humanized anti-cd100 antibodies
PL2716301T3 (pl) 2007-02-16 2017-10-31 Merrimack Pharmaceuticals Inc Przeciwciała przeciw ERBB3 i ich zastosowania
NZ580245A (en) 2007-03-22 2012-01-12 Biogen Idec Inc Binding proteins, including antibodies, antibody derivatives and antibody fragments, that specifically bind cd154 and uses thereof
US7906293B2 (en) 2007-04-09 2011-03-15 Abbott Laboratories Acridinium phenyl esters useful in the analysis of biological
MX2009011366A (es) 2007-04-23 2009-11-05 Wyeth Corp Metodos y composiciones para tratar y monitorear el tratamiento de trastornos asociados con il-13.
GB0708002D0 (en) 2007-04-25 2007-06-06 Univ Sheffield Antibodies
EP1997832A1 (en) 2007-05-29 2008-12-03 Ganymed Pharmaceuticals AG Monoclonal antibodies against Claudin-18 for treatment of cancer
ES2585702T3 (es) 2007-05-30 2016-10-07 Lpath, Inc Composiciones y métodos para la unión al ácido lisofosfatídico
US8227201B2 (en) 2007-06-27 2012-07-24 Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University BETA2-microglobulin and C reactive protein (CRP) as biomarkers for peripheral artery disease
JP2010535032A (ja) 2007-07-31 2010-11-18 メディミューン，エルエルシー 多重特異性エピトープ結合性タンパク質およびその用途
US8753839B2 (en) 2007-08-08 2014-06-17 Abbvie Inc. Compositions and methods for crystallizing antibodies
WO2009021754A2 (en) 2007-08-15 2009-02-19 Bayer Schering Pharma Aktiengesellschaft Monospecific and multispecific antibodies and method of use
JP2011501673A (ja) 2007-10-19 2011-01-13 アボット・ラボラトリーズ グリコシル化された哺乳動物ｎｇａｌ及びその使用
EP2231705A2 (en) 2007-12-17 2010-09-29 Pfizer Limited Treatment of interstitial cystitis
PT2235064E (pt) 2008-01-07 2016-03-01 Amgen Inc Método de preparação de moléculas heterodiméricas de fc de anticorpos utilizando efeitos de indução eletrostática
EP2784089A1 (en) 2008-01-15 2014-10-01 AbbVie Inc. Improved mammalian expression vectors and uses thereof
US7605603B1 (en) * 2008-02-29 2009-10-20 Altera Corporation User-accessible freeze-logic for dynamic power reduction and associated methods
US8962803B2 (en) 2008-02-29 2015-02-24 AbbVie Deutschland GmbH & Co. KG Antibodies against the RGM A protein and uses thereof
JP5470817B2 (ja) 2008-03-10 2014-04-16 日産自動車株式会社 電池用電極およびこれを用いた電池、並びにその製造方法
US20100260668A1 (en) 2008-04-29 2010-10-14 Abbott Laboratories Dual Variable Domain Immunoglobulins and Uses Thereof
SG190572A1 (en) 2008-04-29 2013-06-28 Abbott Lab Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
MY159667A (en) 2008-05-09 2017-01-13 Abbvie Inc Antibodies to receptor of advanced glycation end products (rage) and uses thereof
RU2010153578A (ru) 2008-06-03 2012-07-20 Эбботт Лэборетриз (Us) Иммуноглобулины с двойными вариабельными доменами и их применение
US8741287B2 (en) 2008-06-18 2014-06-03 Abbott Laboratories PlGF-1 assay and kits and components thereof
RU2011104348A (ru) * 2008-07-08 2012-08-20 Эбботт Лэборетриз (Us) Иммуноглобулины с двойным вариабельным доменом против простагландина е2 и их применение
TW201014602A (en) 2008-07-08 2010-04-16 Abbott Lab Prostaglandin E2 binding proteins and uses thereof
WO2010017103A2 (en) 2008-08-04 2010-02-11 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Servic Fully human anti-human nkg2d monoclonal antibodies
NZ591544A (en) 2008-09-30 2013-01-25 Abbott Lab Improved method of rna display
AU2009313852B2 (en) 2008-11-13 2015-11-26 Eastern Virginia Medical School Activation and aggregation of human platelets and formation of platelet gels by nanosecond pulsed electric fields
BRPI0922807A2 (pt) 2008-12-04 2015-12-22 Abbott Lab imonuglobulinas de domínio variável duplo e usos dos mesmos
EP2810652A3 (en) * 2009-03-05 2015-03-11 AbbVie Inc. IL-17 binding proteins
RU2011148913A (ru) 2009-05-01 2013-06-10 Эбботт Лэборетриз Иммуноглобулин с двумя вариабельными доменами и его применение
RU2011148918A (ru) 2009-05-01 2013-06-10 Эбботт Лэборетриз Иммуноглобулин с двумя вариабельными доменами и его применение
UY32808A (es) 2009-07-29 2011-02-28 Abbott Lab Inmunoglobulinas como dominio variable dual y usos de las mismas
EP3029070A1 (en) 2009-08-29 2016-06-08 AbbVie Inc. Therapeutic dll4 binding proteins
KR20120060877A (ko) 2009-09-01 2012-06-12 아보트 러보러터리즈 이원 가변 도메인 면역글로불린 및 이의 용도
UY32920A (es) 2009-10-02 2011-04-29 Boehringer Ingelheim Int Moleculas de unión biespecíficas para la terapia anti-angiogénesis
AU2010306677B2 (en) 2009-10-15 2013-05-23 Abbvie Inc. Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
US8398966B2 (en) 2009-10-15 2013-03-19 Abbvie Inc. IL-1 binding proteins
UY32979A (es) 2009-10-28 2011-02-28 Abbott Lab Inmunoglobulinas con dominio variable dual y usos de las mismas
EP2542582A4 (en) 2010-03-02 2013-12-04 Abbvie Inc THERAPEUTIC PROTEINS LINKING TO DLL4
SI2571532T1 (sl) 2010-05-14 2017-10-30 Abbvie Inc. Proteini, ki vežejo IL-1
CA2803392A1 (en) 2010-06-24 2011-12-29 Abbvie Inc. Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
UY33492A (es) 2010-07-09 2012-01-31 Abbott Lab Inmunoglobulinas con dominio variable dual y usos de las mismas
KR20130100118A (ko) 2010-08-03 2013-09-09 아비에 인코포레이티드 이원 가변 도메인 면역글로불린 및 이의 용도
CA2809433A1 (en) 2010-08-26 2012-03-01 Abbvie Inc. Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
CA2816803A1 (en) 2010-11-02 2012-05-10 Abbott Laboratories Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
US20120263722A1 (en) 2010-11-04 2012-10-18 Abbott Laboratories Dual Variable Domain Immunoglobulins and Uses Thereof
TW201333033A (zh) 2011-12-30 2013-08-16 Abbvie Inc 雙可變域免疫球蛋白及其用途
TW201333035A (zh) 2011-12-30 2013-08-16 Abbvie Inc 針對ｉｌ－１３及／或ｉｌ－１７之雙特異性結合蛋白
JP2015509704A (ja) 2011-12-30 2015-04-02 アッヴィ・インコーポレイテッド 受容体に対する二重可変ドメイン免疫グロブリン
CA2890263C (en) 2012-11-01 2020-03-10 Abbvie Inc. Anti-vegf/dll4 dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
US20140213772A1 (en) 2012-12-28 2014-07-31 Abbvie, Inc. Cross-over dual variable domain immunoglobulin constructs
JP6136279B2 (ja) 2013-01-15 2017-05-31 株式会社ジェイテクト 転がり軸受装置
EP2970457A2 (en) 2013-03-15 2016-01-20 AbbVie Inc. Dual specific binding proteins directed against tnf
WO2014144280A2 (en) 2013-03-15 2014-09-18 Abbvie Inc. DUAL SPECIFIC BINDING PROTEINS DIRECTED AGAINST IL-1β AND / OR IL-17
TWI503850B (zh) 2013-03-22 2015-10-11 Polytronics Technology Corp 過電流保護元件
TWI510996B (zh) 2013-10-03 2015-12-01 Acer Inc 控制觸控面板的方法以及使用該方法的可攜式電腦
US9816280B1 (en) 2016-11-02 2017-11-14 Matthew Reitnauer Portable floor

Also Published As

Publication number Publication date
US20150315283A1 (en) 2015-11-05
NO20101692A1 (no) 2011-03-03
PE20100092A1 (es) 2010-03-12
EP2297209A2 (en) 2011-03-23
CA2726087A1 (en) 2009-12-10
AU2009256250B2 (en) 2013-05-30
AR072001A1 (es) 2010-07-28
US20140335014A1 (en) 2014-11-13
CL2010001427A1 (es) 2011-07-15
IL209529A0 (en) 2011-01-31
DOP2010000368A (es) 2011-02-15
TW201008580A (en) 2010-03-01
CN102112495A (zh) 2011-06-29
CR11837A (es) 2011-01-12
JP2011523853A (ja) 2011-08-25
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