RO119831B1 - Anticorp uman, care se leagă la tnf alfa, cu acţiune antiinflamatoare - Google Patents

Anticorp uman, care se leagă la tnf alfa, cu acţiune antiinflamatoare Download PDF

Info

Publication number
RO119831B1
RO119831B1 RO98-01269A RO9801269A RO119831B1 RO 119831 B1 RO119831 B1 RO 119831B1 RO 9801269 A RO9801269 A RO 9801269A RO 119831 B1 RO119831 B1 RO 119831B1
Authority
RO
Romania
Prior art keywords
seq
disorder
antibody
amino acid
human
Prior art date
Application number
RO98-01269A
Other languages
English (en)
Inventor
Jochen G. Salfeld
Deborah J. Allen
Zehra Kaymakcalan
Boris Labkovsky
John A. Mankovich
Brian T. Mcguinness
Andrew J. Roberts
Paul Sakorafas
Hendricus R.J.M. Hoogenboom
David Schoenhaut
Tristan J. Vaughan
Michael White
Alison J. Wilton
Original Assignee
Basf Aktiengesellschaft
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=26707297&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=RO119831(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Priority claimed from US08/599,226 external-priority patent/US6090382A/en
Application filed by Basf Aktiengesellschaft filed Critical Basf Aktiengesellschaft
Publication of RO119831B1 publication Critical patent/RO119831B1/ro

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/24—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
    • C07K16/241—Tumor Necrosis Factors
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/24—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/02—Stomatological preparations, e.g. drugs for caries, aphtae, periodontitis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/16—Central respiratory analeptics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/06—Antigout agents, e.g. antihyperuricemic or uricosuric agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A61P29/02—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID] without antiinflammatory effect
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/04—Anorexiants; Antiobesity agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A61P31/22—Antivirals for DNA viruses for herpes viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P33/00—Antiparasitic agents
    • A61P33/02—Antiprotozoals, e.g. for leishmaniasis, trichomoniasis, toxoplasmosis
    • A61P33/06—Antimalarials
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P39/00—General protective or antinoxious agents
    • A61P39/02—Antidotes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/04—Inotropic agents, i.e. stimulants of cardiac contraction; Drugs for heart failure
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/08—Vasodilators for multiple indications
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/64—General methods for preparing the vector, for introducing it into the cell or for selecting the vector-containing host
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/10—Cells modified by introduction of foreign genetic material
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S424/00—Drug, bio-affecting and body treating compositions
    • Y10S424/81—Drug, bio-affecting and body treating compositions involving autoimmunity, allergy, immediate hypersensitivity, delayed hypersensitivity, immunosuppression, immunotolerance, or anergy

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)

Abstract

Invenţia se referă la un anticorp uman izolat sau porţiune de legare la antigen, a acestuia, la o secvenţă de acid nucleic care codifică pentru acesta, la un vector de expresie recombinant, ce cuprinde acest anticorp, la o compoziţie farmaceutică, precum şi la utilizarea acestuia în tratamentul unor tulburări în care activitatea TNF alfa este dăunătoare. Anticorpul conform invenţiei cuprinde: a) un domeniu CDR 3 al catenei uşoare, care cuprinde secvenţa aminoacidă a SEQ ID NR:3, sau o secvenţă modificată a acesteia, printr-o singură substituţie aminoacidă a alaninei, la poziţiile 1, 4, 5, 7 sau 8, sau prin 1-5 substituţii aminoacide conservative, din poziţiile 1, 3, 4, 6, 7, 8 şi/sau 9; b) un domeniu CDR 3 al catenei grele, care cuprinde secvenţa aminoacidă a SEQ ID NR: 4, sau o secvenţă modificată a acesteia, printr-o singură substituţie aminoacidă a alaninei, la poziţiile 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10 sau 11, sau prin 1-5 substituţii aminoacide conservative, la poziţiile 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10, 11şi/sau 12; c) disocierea de TNF alfa uman, cu Kd de 1x10-8 M sau mai mică şi constanta ratei Koff de 1x10-3 S-1 sau mai mică, constante determinate prin rezonanţa suprafeţei plasmonului şi neutralizarea citotoxicităţii TNF alfa uman, într-un test L929 standard, in vitro, cu IC5 de 1x10-7 M sau mai mic. Invenţia prezintă aplicabilitate în domeniul medical. ŕ

Description

Invenția se referă la un anticorp uman izolat sau la o porțiune de legare la antigen a acestuia, la o secvență de acid nucleic care codifică pentru acesta, la un vector recombinant care cuprinde acest anticorp, la o compoziție farmaceutică, precum și la utilizarea acestuia în tratamentul unor tulburări în care activitatea TNFa este dăunătoare.
Factorul a al necrozei tumorii (TNFa) este o citokină produsă de numeroase tipuri de celule, incluzând monocite și macrofage, care a fost identificată inițial pe baza capacității sale de a induce necroza anumitor tumori la șoarece (vezi, de exemplu, Old, L. (1985) Science, 230:630-632). Ulterior, un factor denumit cașectină, asociat cu cașexia, s-a dovedit a fi aceeași moleculă ca TNFa. TNFa a fost implicat în medierea șocului (vezi, de exemplu, Beutler, B. și Cerami, A. (1988) Annu. Rev. Biochem. 57:505-518; Beutler, B. și Cerami, A. (1989) Annu. Rev. Immunol. 7:625-655). Mai mult, TNFa a fost implicat în patofiziologia a diverse alte boli și tulburări, incluzând sepsie, infecții, bolii autoimune, respingerea transplantului și boala gazdei față de grefă (vezi, de exemplu, Moeller, A. și colab. (1990) Cytokine 2:162-169; US 5231024 pentru Moeller și colab.; publicația brevetului european 260610 B1 de Moller, A. și colab. Vasilli, P. (1992) Annu. Rev. Immunol. 10:411-452: Tracev. K.J. și Cerami, A (1994) Annu. Rev. Med. 45:491-503).
Datorită rolului dăunător al TNFa uman (hTNFa) într-o diversitate de tulburări umane s-au desemnat strategii terapeutice pentru a inhiba sau contracara activitatea hTNFa. în special, anticorpi care se leagă la și neutralizează hTNFa au fost utilizați ca un mijloc de a inhiba activitatea hTNFa. Unii din primii anticorpi utilizați au fost anticorpi monoclonali de șoarece (mAb), secretați de celule hibridoma preparate de la limfocite de șoareci imunizați cu hTNFa (vezi, de exemplu, Hahn T. și colab., (1985) Proc. Natl. Acad. Sci USA 82:38143818; Liang, C-M., și colab., (1986) Biochem. Biophys. Res. Commun. 137:847-854; Hirai, M., și colab., (1987) J. Immunol. Methods 96:57-62; Fendly., B.M., și colab. (1987) Hybr/cfoma6:359-370; Moeller, A., și colab., (1990) Cytokine2:162-169; US 5231024 pentru Moeller și colab., publicația brevetului european 186833 B1 de Wallach, D.; publicația cererii de brevet european 218868 A1 de Old și colab.; publicația brevetului european 260610 B1 de Moeller, A., și colab). în timp de acești anticorpi de șoarece anti-hTNFa prezintă adesea afinitate crescută pentru hTNFa (de exemplu, Kd< 10'9 M) și au fost capabili să neutralizeze activitatea hTNFa, utilizarea lor in vivo poate fi limitată de probleme asociate cu administrarea anticorpilor de șoarece la oameni, cum ar fi timpul de înjumătățire scurt în ser, o incapacitate de a declanșa anumite funcții efectoare umane și provocarea unui răspuns imun nedorit împotriva anticorpului de șoarece la un om (reacția “anticorp uman antișoarece” (HAMA)).
Pentru a depăși problemele asociate cu folosirea anticorpilor în întregime murini la oameni, anticorpii murini anti-hTNFa au fost prelucrați prin inginerie genetică pentru a deveni mai mult “like-umani”. De exemplu, s-au preparat anticorpi himerici în care regiunile variabile ale catenelor anticorpului derivate de la anticorpii murinici și regiunile constante ale catenelor anticorpului sunt derivate de la om (Knight, D.M., și colab. (1933) Mol. Immunol. 30:1443-1453 publicație PCT WO 92/16553 de Daddona, P.E., și colab.). Suplimentar, au fost preparați, de asemenea, anticorpi umanizați, în care domeniile hipervariabile ale regiunilor variabile ale anticorpului sunt derivate de la anticorpii murinici, dar restul regiunilor variabile și regiunile constante ale anticorpului sunt derivate de la om (publicație PCT WO 92/11383 de Adair, J.R. și colab.). Cu toate acestea, deoarece acești anticorpi himerici umanizați păstrează încă unele secvențe murine, ei încă mai provoacă o reacție imună nedorită, reacția umană anticorp anti-himeric (HACA), în special când se administrează perioade prelungite, de exemplu, pentru indicații cronice cum ar fi artrită reumatoidă (vezi,
RO 119831 Β1 de exemplu, Elliot, M.J., și colab. (1994) Lance/344:1125-1127; Elliot, M.J., și colab., (1994) 1
Lance/344:1105-1110).
Un agent inhibitor preferat hTNFa pentru mAb murin sau derivați ai acestora (de 3 exemplu, anticorpi himerici sau umanizați) va fi un anticorp uman în întregime anti-hTNFa, deoarece un astfel de agent nu ar provoca reacția HAMA, chiar dacă se folosesc perioade 5 prelungite. Autoanticorpi monoclonali umani împotriva hTNFa s-au obținut utilizând tehnica de obținere a celulelor hibridoma umane (Boyle, P., și colab. (1993) Cell. Immunol. 152:556- 7
568; Boyle, P., și colab. (1993) Cell. Immunol. 152:569-581; publicația cererii de brevet european 614984 A2 de Boyle, și colab.). Totuși, acești autoanticorpi monoclonali derivați 9 de la celulele hibridoma s-au raportat ca având o afinitate pentru hTNFa care a fost prea scăzută pentru a se calcula prin metode convenționale, au fost incapabili să lege hTNFa 11 solubil și au fost incapabili să neutralizeze citotoxicitatea indusă hTNFa (vezi Boyle, și colab., supra). Mai mult, succesul tehnicii - “hibridoma umană” depinde de prezența naturală 13 în sângele periferic uman a limfocitelor care produc autoanticorpi specifici pentru hTNFa. Anumite studii au detectat autoanticorpi în ser pentru hTNFa la subiecți umani (Fomsgaard, 15 A., și colab. (1989) Scand. J. Immunol. 30:219-223; Bendtzen, K., și colab. (1990) Prog.Leukocyte biol. 108:447-452). în timp ce altele nu Leusch, H-G, și colab. (1991) J. 17 Immunol. Methods 139:145-147).
Alternativa la anticorpii umani anti-hTNFa întâlniți în mod natural vor fi anticorpi 19 recombinați hTNFa. Au fost descriși anticorpi umani recombinanți care leagă hTNFa cu afinitate relativ scăzută (adică, K^-10 7M) și o rată rapidă a detașării (adică, K^-IO^sec1) 21 (Griffitihs, A.D., și colab. (1993) EMBOJ. 12:725-734). Cu toate acestea, datorită cineticii lor de disociere relativ rapidă, acești anticorpi nu pot fi adecvați pentru utilizare terapeutică. 23 Suplimentar, s-a descris un anti-hTNFa uman recombinant care nu neutralizează activitatea hTNFa, ci mai degrabă intensifică legarea hTNFa la suprafața celulelor și intensifică 25 internalizarea hTNFa (Lidbury, A., și colab. (1994) Biotechnol. Ther. 5:27-45; publicația PCT WO 92/03145 de Aston, R. și colab.). 27 în conformitate, anticorpi umani cum ar fi anticorpi umani recombinanți, care leagă hTNFa cu afinitate crescută și cinetici de disociere lentă și care au capacitatea de a 29 neutraliza activitatea hTNFa, inclusiv citotoxicitatea indusă de hTNFa (in vitro și in vivo) și activarea celulei indusă de hTNFa sunt încă necesari. 31
Invenția se referă la anticorpi umani, de preferință, anticorpi umani recombinați, care se leagă specific la TNFa uman. Anticorpii descriși în invenție sunt caracterizați prin legare 33 la hTNFa cu afinitate ridicată și cinetică de disociere lentă și prin neutralizarea activității hTNFa, inclusiv citotoxicitatea indusă de hTNFa (ăn vitro și in vivo) și activarea celulară 35 indusă de hTNFa. Anticorpii sunt caracterizați suplimentar prin legare la hTNFa, dar nu și la hTNFp (limfotoxină) și prin a avea capacitatea de a se lega la alți TNFa de la primate și 37 TNFa de la animale care nu sunt primate, în plus față de TNFa uman.
Anticorpii pot fi de lungime întreagă (de exemplu, un anticorp IgG 1 sau lgG4) sau pot 39 să cuprindă numai o porțiune de legare antigen (de exemplu, un fragment Fab, F(ab’)2 sau scFv. Anticorpul recombinant, conform invenției, denumit D2E7 are un domeniu CDR3 al ca- 41 tenei ușoare cuprinzând secvența aminoacidă a SEQ ID NR:3 și un domeniu CDR3 al catenei grele cuprinzând secvența aminoacidă a SEQ ID NR:4. De preferință, anticorpul 43
D2E7 are o regiune variabilă a catenei ușoare (LCVR) care cuprinde secvența aminoacidă a SEQ ID NR:1 și o regiune variabilă a catenei grele (HCVR) care cuprinde secvența 45 aminoacidă a SEQ ID NR:2.
RO 119831 Β1
Invenția se referă la un anticorp uman izolat, sau o porțiune de legare antigen a acestuia, care disociată de TNFa uman cu o Kd de 1x10® M, sau mai mică și o rată constantă KoH de 1x10’3s'1, sau mai mică, ambele determinate de suprafața de rezonanță a plasmonului și neutralizează citotoxicitatea TNFa uman într-un test standard L929 in vitro cu un IC50 de 1 x10 7M sau mai mic. Mai mult, anticorpul uman izolat, sau porțiunea de legare antigen a acestuia disociază de la TNFa uman cu o Kott de 5x104s1 sau mai mică, sau chiar mai preferat, cu de 1x10¼1 sau mai mică. De asemenea, anticorpul uman izolat, sau porțiunea de legare la antigen a acestuia, neutralizează citotoxicitatea TNFa uman într-un test standard L929 in vitro cu un IK50 de IxIO^M sau mai mic, chiar mai preferat, cu un IK50 de 1x10 9M sau mai mic și, încă mai preferat, cu un IK50 de 5x10‘1° M sau mai mic.
Anticorpul uman, sau o porțiune de legare la antigen a acestuia, conform invenției, cuprinde:
a) un domeniu CDR3 al catenei ușoare, care cuprinde secvența aminoacidă a SEQ ID NR: 3, sau o secvență modificată a acesteia printr-o singură substituție aminoacidă a alaninei la pozițiile 1, 4, 5, 7 sau 8, sau prin 1 -5 substituții aminoacide conservative din pozițiile 1, 3, 4, 6, 7, 8 și/sau 9;
b) un domeniu CDR3 al catenei grele, care cuprinde secvența aminoacidă a SEQ ID NR: 4, sau o secvență modificată a acesteia printr-o singură substituție aminoacidă a alaninei la pozițiile 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10 sau 11, sau prin 1-5 substituții aminoacide conservative la pozițiile 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9,10,11 și/sau 12;
c) disocierea de TNFa uman cu de 1x1 θ’8 M sau mai mică și constanta ratei de 1x10 3 s’1 sau mai mică, constante determinate prin rezonanța suprafeței plasmonului și neutralizarea citotoxicității TNFa uman într-un test L929 standard in vitro cu IK50 de 1x10'7 M sau mai mic.
Mai mult, anticorpul, sau porțiunea de legare antigen a acestuia, disociată de la TNFa uman cu Κθ„ de 5x1 OV1 sau mai mică. De asemenea, anticorpul, sau porțiunea de legare la antigen a acestuia, disociată de la TNFa uman cu Κθ„ de 1x10-4 s’1 sau mai mică.
Invenția asigură un anticorp uman, sau o porțiune de legare antigen a acestuia, cu un LCVR având domeniul CDR3 care cuprinde secvența aminoacidă SEQ ID NR:3, sau modificată de la SEQ ID NR:3 printr-o singură substituție alanină la poziția 1,4,5,7 sau 8, și cu un HCVR având un domeniu CDR3 care cuprinde secvența aminoacidă a SEQ ID NR:4, sau modificată de la SEQ ID NR:4 printr-o singură substituție alanină la poziția 2, 3, 4,5, 6,8, 9,10 sau 11. Mai mult, LCVR are în plus un domeniu CDR2 cuprinzând secvența aminoacidă a SEQ ID NR:5 și HCVR are în plus un domeniu CDR2 cuprinzând secvența aminoacidă SEQ ID NR:6. încă mai preferat, LCVR are în plus un domeniu CDR1 cuprinzând secvența aminoacidă a SEQ ID NR:7 și HCVR are în plus un domeniu CDR1 cuprinzând secvența aminoacidă SEQ ID NR:8.
Pe de altă parte, invenția asigură un anticorp uman izolat, sau o porțiune de legare antigen a acestuia, cu un LCVR cuprinzând secvența aminoacidă a SEQ ID NR:1 și un HCVR cuprinzând secvența aminoacidă a SEQ ID NR:2. în anumite realizări, anticorpul are o regiune constantă a catenei grele lgG1 sau o regiune constantă a catenei grele lgG4. Pe de altă parte, anticorpul este un fragment Fab, un fragment F(ab’)2 sau un fragment Fv cu o singură catenă.
Invenția se referă la anticorpi, sau la porțiuni de legare antigen ale acestora, cu un LCVR având domeniul CDR3 cuprinzând o secvență aminoacidă selectată din grupul care constă din SEQ ID NR:3, SEQ ID NR:11, SEQ ID NR:12, SEQ ID NR:13, SEQ ID NR:14, SEQ ID NR:15, SEQ ID NR: 16, SEQ ID NR:17, SEQ ID NR:18, SEQ ID NR:19, SEQ ID
RO 119831 Β1
NR:20, SEQ IO NR:21, SEQID NR:22, SEQID NR:23, SEQID NR:24, SEQID NR:25, SEQ 1
ID NR:26, sau cu un HCVR având un domeniu CDR3 cuprinzând o secvență aminoacidă selectată din grupul care consgtă din SEQ ID NR:4, SEQ ID NR:27, SEQ ID NR:28, SEQ 3
ID NR:29, SEQ ID NR:30, SEQ ID NR:31, SEQ ID NR:32, SEQ ID NR:33, SEQ ID NR:34,
SEQ ID NR:35. 5
De asemenea, invenția se referă la un anticorp uman izolat, sau porțiune de legare la antigen a acestuia, care neutralizează activitatea TNFa uman, dar nu și a TNFP uman 7 (limfotoxină). Anticorpul uman, sau o porțiune de legare antigen a acestuia neutralizează activitatea TNFa uman, TNFa de la cimpanzeu, și cel puțin un TNFa de la o primată 9 suplimentară selectată din grupul care constă din TNFa de la babuin, TNFa de la sanguin, TNFa de la cynomolgus și TNFa de la rhesus. De asemenea, de preferință, anticorpul 11 neutralizează activitatea TNFa de la cel puțin un animal care nu este primat. De exemplu, anticorpul uman izolat, sau porțiunea de legare a acestuia, neutralizează, de asemenea, 13 activitatea TNFa canin. De asemenea, anticorpul uman izolat sau porțiunea de legare a acestuia, neutralizează activitatea TNFa de la porc, precum și activitatea TNFa de la 15 șoarece.
Alt aspect al invenției aparține moleculelor de acid nucleic care codifică anticorpii, sau 17 porțiunile de legare la antigen ale acestuia. Un acid nucleic preferat al invenției, care codifică un D2E7 LCVR, are secvența nucleotidică prezentată în fig. 7 și SEQ ID NR:36. Alt acid 19 nucleic preferat al invenției, care codifică un D2E7 HCVR, are secvența nucleotidică prezentată în fig. 8 și SEQ ID NR:37. Vectori de expresie recombinanți care conțin acizii 21 nucleici care codifică anticorpul invenției și celule gazdă în care s-au introdus asemenea vectori sunt, de asemenea, cuprinși în invenție, deoarece sunt metode de obținere a 23 anticorpilor conform invenției, prin cultivarea celulelor gazdă ale invenției.
într-un alt aspect invenția se referă și la metode pentru inhibarea activității TNFa 25 uman folosind un anticorp, sau o porțiune de legare antigen a acestuia .conform invenției, într-o realizare, metoda cuprinde punerea în contact a TMFa uman cu anticorpul conform 27 invenției, sau porțiunea de legare anticorp a acestuia, astfel încât activitatea TNFa uman este inhibată. în altă realizare, metoda cuprinde administrarea unui anticorp conform 29 invenției sau a porțiunii de legare antigen a acestuia, la un subiect uman care suferă de o tulburare în care activitatea TNFa este dăunătoare, astfel încât activitatea TNFa uman din 31 subiectul uman este inhibată. Tulburarea poate fi, de exemplu, sepsie, o boală autoimună (de exemplu, artrită reumatoidă, alergie, scleroză multiplă, diabet autoimun, uveită 33 autoimună și sindrom nefrotic), o boală infecțioasă, o malignitate, respingerea transplantului sau boala gazdei față de grefă, o tulburare pulmonară, o tulburare osoasă, o tulburare 35 intestinală, sau o tulburare cardiacă.
în continuare se prezintă pe scurt figurile care însoțesc invenția. 37
- fig.1 A și 1B arată secvențele aminoacide ale regiunii variabile ale catenei ușoare ale D2E7 (D2E7 VL; de asemenea prezentate în SEQ ID NR:1), mutante alanină-scan ale 39 D2E7 VL (LD2E7*, A1, LD2E7*, A3, LD2E7*, A4, LD2E7*, A5, LD2E7*, A7, și LD2E7*, A8, regiunea variabilă a anticorpului înrudit D2E7,1SD4 (2SD4 VL; prezentat de asemenea în 41
SEQ ID NR:9) și alte regiuni variabile ale catenei ușoare întrudite D2E7 (EP B12, VL10E4,
VL100A9, VL100D2 VL10F4, LOES, VLLOF9, VLLOF10, VLLOG7, VLLOG9, VLLOH1, 43
VLLOH10, VL1B7, VL1C1, VL1C7, VL0.1F4, VLO, 1H8, LOE7, LOE7.A Șl LOET.T). Figura
1A prezintă domeniile FR1, CDR1, FR2 și CDR2. Fig. 1B arată domeniile FR3, CDR3 și 45
FR4. Domeniile catenei ușoare sunt încercuite CDR1 “CDR L1), CDR2 (“CDR L2“) și CDR3 (“CDR L3“); 47
RO 119831 Β1
- fig. 2A și 2B prezintă secvențele aminoacide ale regiunii variabile ale catenei grele ale D2E7 (D2E7 VH; prezentată de asemenea în SEQ ID NR:2), mutante alanină-scan ale D2E7 VH (HD2E7*.A1, HD2E7*.A2, HD2E7*.A3, HD2E7*.A4, HD2E7.A5, HD2E7*.A6, HD2E7*.A7, HD2E7*.AB și HD2E7*-A9, regiunea variabilă a catenei grele a anticorpului înrudit D2E7,2SD4 (2SD4 VH; de asemenea prezentat în SEQ ID NR:10) și regiuni variabile ale catenei grele înrudite la D2E7 (VH1B11, VH1D8, VH1A11, VH1B12, VH1-D2, VH1E4, VH1F6, VH1G1, 3C-H2, VH1-D2.N și VH1-D2.Y). Fig. 2a prezintă domeniile FR1, CDR1, FR2 și CDR2. Figura 28 arată domeniile FR3, CDR3 și FR4. Domeniile catenei grele CDR1 (“CDR H1), CDR2 (“CDR H29 și CDR3(“CDR H3) sunt încercuite.
- fig. 3 este un grafic care ilustrează inhibarea citoxicității TNFa indusă de L929 prin anticorpul D2E7 anti-TNFa uman, comparativ cu anticorpul murin anti-TNFa, MAK 195.
- fig. 4 este un grafic care ilustrează inhibarea legării rhTNFa la receptori hTNFa pe celule U-937 prin anticorpul D2E7 anti-TNFa uman, comparativ cu anticorpul MAK 195 murin anti-htNFa;
- fig. 5, este un grafic care ilustrează inhibarea ELAM-1 indusă TNFa pe HUVEC prin anticorpul uman D2E7 anti-hTNFa, comparativ cu anticorpul murin MAK anti-hTNFa;
- fig. 6, este un grafic cu bare care ilustrează protecția de letalitate indusă TNFa la șoareci sensibilizați D-galactozamină prin administrare de anticorp uman D2E7 anti-hTNFa (bare negre), comparativ cu anticorpul murin MAK 195 anti-hTNFa (bare deschise);
- fig. 7 arată secvența nucleotidică a regiunii variabile a catenei ușoare a D2E7, cu secvența aminoacidă prezisă sub secvența nucleotidică. Regiunile CDR L1, CDR L2 și CDR L3 sunt subliniate;
- fig. 8, prezintă secvența nucleotidică a regiunii variabile a catenei grele a D2E7, cu secvența aminoacidă prezisă sub secvența nucleotidică. Regiunile CDR H1, CDR H2 și CDR H3 sunt subliniate;
- fig. 9, este un grafic care ilustrează efectul tratamentului cu anticorp D2E7 asupra mărimii medii a articulației șoarecilor transgenici Tg197 ca un model de poliartrită.
Această invenție aparține domeniului anticorpilor umani izolați, sau porțiunilor de legare antigen ale acestora, care se leagă la TNFa uman cu afinitate ridicată, o rată de detașare scăzută și capacitate de neutralizare ridicată. Diverse aspecte ale invenției se referă la anticorpi și fragmente de anticorp și la compoziții farmaceutice ale acestora, precum acizi nucleici, vectori de expresie recombinanți și celule gazdă pentru a obține astfel de anticorpi și fragmente. Metode de folosire a anticorpilor conform invenției, pentru detectarea TNFa uman sau pentru a inhiba activitatea TNFa uman, fie in vitro, fie in vivo, sunt de asemenea cuprinse în invenție.
în scopul înțelegerii invenției de față cu mai multă ușurință, mai întâi sunt definiți anumiți termeni.
Termenul “TNFa uman” (abreviat aici ca hTNFa, sau simplu, hTNF), așa cum s-a folosit aici, se referă la o citokină umană care există ca o formă secretată de 17 kD și o formă asociată membranei de 26 kD a cărei formă biologic activă este compusă dintr-un trimer de molecule 17 kD legate necovalent. Structura hTNFa este descrisă suplimentar în, de exemplu, Pennica, D., și colab. (1984) Nature 312:724-729: Davis, J.M., și colab. (1988) B/ochem/stry26:1322-1326; și Jones, E.Y., și colab. (1989) Nature 338:225-228. Termenul TNFa uman intenționează să includă TNFa uman recombinant (rhTNFa), care se poate prepara prin metode de expresie standard sau se poate procura comercial (R&D Systems, Catalog NR: 210-TA, Minneapolis, MN).
RO 119831 Β1
Termenul “anticorp”, așa cum s-a folosit aici, se referă la molecule de imunoglobină 1 cuprinzând 4 catene polipeptidice, 2 catene grele (H) și două catene ușoare (L) interconectate prin punți disulfură. Fiecare catenă grea cuprinde o regiune variabilă a catenei 3 grele (abreviată aici ca HCVR sau VH) și o regiune constantă a catenei grele. Regiunea constantă a catenei grele cuprinde 3 domenii, CH1, CH2 și CH3. Fiecare catenă ușoară 5 cuprinde o regiune variabilă a catenei ușoare (abreviată aici ca LCVR sau VL) și o regiune constantă a catenei ușoare. Regiunea constantă a catenei ușoare cuprinde un domeniu, CL. 7 Regiunile VH și VL pot fi subdivizate în continuare în regiuni de hipervariabilitate, denumite regiuni care determină complementaritate (CDR), care alternează cu regiuni care sunt mai 9 conservate, denumite regiuni cadru (FR). Fiecare VH și VL este compus din 3 CDR-uri și 4 FR-uri, aranjate de la terminusul amino spre terminusul carboxi în următoarea ordine: FR1, 11
CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4.
Termenul “porțiune de legare antigen” a unui anticorp (sau simplu “porțiune 13 anticorp”), așa cum s-a folosit aici, se referă la unul sau mai multe fragmente ale unui anticorp care păstrează capacitatea de a se lega specific la un antigen (de exemplu, 15 hTNFa). S-a dovedit că funcțiunea de legare antigen a unui anticorp poate fi realizată prin fragmente ale unui anticorp de lungime întreagă. Exemple de fragmente de legare cuprinse 17 în termenul “porțiune de legare antigen ale unui anticorp includ (i) un fragment Fab, un fragment monovalent, care constă din domeniile VL, VH, CL și CH1; (ii) un fragment F(ab’)2, 19 un fragment bivalent care cuprinde 2 fragmente Fab legate printr-o punte disulfură la regiunea de legătură; (iii) un fragment Fd constând din domeniile VH și CH1; (iv) un 21 fragment Fv constând din domeniile VL și VH ale unui singur braț al unui anticorp; (v) un fragment dAb (Ward și colab. (1989) Nature 341:544-546) care constă dintr-un domeniu VH; 23 și (vi) o regiune izolată de determinare a complementarității (CDR). Mai mult, deși cele 2 domenii al fragmentului FV. VL și VH, sunt codificate de gene separate, ele pot fi unite, 25 folosind metode de recombinare, printr-un linker sintetic care le face să fie ca o singură catenă de proteină în care regiunile VL și VH se împerechează pentru a forma molecule 27 monovalente (cunoscute drept catenă unică Fv’(scFv); vezi, de exemplu, Bird și colab, (1988) Science 242:423-426; și Huston și colab.(1988) Proc. Natl. Acad. Sci USA 85:5879- 29
5883). Astfel de anticorpi cu o singură catenă sunt de asemenea intenționați să fie cuprinși în termenul “porțiune de legare antigen” a unui anticorp. Alte forme de anticorpi cu o singură 31 catenă, cum ar fi diacorpii sunt de asemenea cuprinși în invenție. Diacorpii sunt anticorpi bivalenți, bispecifici în care domeniile VH și VL sunt exprimate pe o singură catenă 33 polipeptidică, dar folosind un linker care este prea scurt pentru a permite împerecherea dintre cele 2 domenii pe aceiași catenă, prin aceasta forțând domeniile să se împerecheze 35 cu domeniile complementare ale altei catene și creând 2 situri de legare antigen (vezi, de exemplu, Holliger, P., și colab. (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:6444-6448; Poljak, R.J., 37 și colab. (1994) Strucft/re 2:1121-1123).
De asemenea, un anticorp sau porțiune de legare la antigen a acestuia poate fi parte 39 a unei molecule de imunoadeziune mai mare, formată prin asocierea covalentă sau necovalentă a anticorpului sau porțiunii anticorp cu una sau mai multe alte proteine sau peptide. 41 Exemple de astfel de molecule de imunoadeziune includ folosirea regiunii miez a streptavidinei pentru a obține o moleculă scFv tetramerică (Kipriyanov), S.M., și colab. 43 (1995) Human Antibiodies and Hybridomas 6:93-101) și folosirea unui rest cisteină, o peptidă marker și o coadă C-terminală polilizină pentru a obține molecule bivalente și 45 biotinilate scFv (Kipriayanov, S.M., și colab. (1994) Mol. Immunol. 31:1047-1058). Porțiuni anticorp, cum ar fi fragmente Fab și F(ab’)2, se pot prepara de la anticorpi întregi folosind 47
RO 119831 Β1 tehnici convenționale, cum ar fi digestie cu papaină sau respectiv cu pepsină, a anticorpilor întregi. Mai mult, anticorpi, porțiuni anticorp și molecule de imunoadeziune pot fi obținute folosind tehnicile ADN recombinant standard, așa cum s-au descris aici.
Termenul “anticorp uman”, așa cum s-a folosit aici, se referă la anticorpi având regiuni variabile și constante derivate de la secvențe ale liniei germinate imunoglobină. Anticorpii umani ai invenției pot să includă resturi de aminoacizi care nu sunt codificați de secvențele liniei germinale ale imunoglobulinei umane (de exemplu, mutații introduse prin mutageneză randomică sau dirijată în sit in vitro sau prin mutație somatică in vivo), de exemplu, în CDR-uri și în special CDR3. Totuși, termenul “anticorp uman”, așa cum s-a folosit aici, se referă la anticorpi în care secvențele CDR derivate de la linia germinală a altor specii mamifere, cum ar fi un șoarece, au fost grefate pe secvențe cadru umane.
Termenul “anticorp recombinant uman”, așa cum s-a folosit aici, se intenționează să includă toți anticorpii umani care sunt preparați, creați sau izolați prin mijloace recombinante, cum ar fi anticorpii exprimați folosind un vector recombinant transfectat într-o celulă gazdă (descrisă suplimentar în secțiunea II, de mai jos), anticorpi izolați de la bancă de anticorpi recombinanți, combinatoriali (descrisă în plus în Secțiunea III, de mai jos), anticorpi izolați de la un animal (de exemplu, un șoarece) care este transgenic pentru genele imunoglobulinei umane (vezi, de exemplu, Taylor, L.D., (1992) Nuci. Acids Res. 20:62876295) sau anticorpi preparați, exprimați, creați sau izolați prin orice alte mijloace care implică îmbinarea secvențelor genei imunoglobulinei umane la alte secvențe ADN. Asemenea anticorpi recombinanți umani au regiuni variabile și constante derivate de la secvențele liniei germinale ale imunoglobulinei umane. în unele realizări, totuși, asemenea anticorpi umani recombinanți sunt supuși la mutageneză in vitro (sau, când se folosește un animal transgenic pentru secvențe lg umane, mutageneză somatică in vivo) și astfel secvențele aminoacizi ale regiunilor VH și VL ale anticorpilor recombinanți sunt secvențe care, în timp ce sunt derivate de la și înrudite la secvențele liniei germinale VBH și VL, pot să nu existe în mod natural în repertoriul in vivo al liniei germinale de anticorpi umani.
Un “anticorp izolat”, așa cum s-a folosit aici, se referă la un anticorp care este în mod substanțial liber de alți anticorpi care au specificități antigenice diferite (de exemplu, un anticorp izolat care se leagă specific la hTNFa este substanțial liber de anticorpi care se leagă antigeni specifici alții decât hTNFa). Un anticorp izolat care se leagă specific la hTNFa poate, cu toate acestea, să aibă reactivitate încrucișată față de alți antigeni, cum ar fi molecule TNFa de la alte specii (discutate în detaliu mai jos). Mai mult, un anticorp izolat poate fi substanțial liber de alt material celular și/sau substanțe chimice.
Un “anticorp de neutralizare”, așa cum s-a folosit aici (sau un “anticorp care a neutralizat activitatea hTNFa”), se se referă la un anticorp a cărui legare la hTNFa rezultă în inhibarea activității biologice a hTNFa. Această inhibare a activității biologice a hTNFa poate fi cercetată prin măsurarea unuia sau mai multor indicatori ai activității biologice a hTNFa, cum ar fi citoxicitatea indusă hTNFa (fie in vitro sau in vivo), activarea celulară hTNFa și legarea hTNFa la receptorii hTNFa. Acești indicatori ai activității biologice a hTNFa au fost cercetați prin una sau mai multe analize standard in vitro sau in vivo cunoscute în domeniu (vezi Exemplul 4). De preferință, capacitatea unui anticorp de a neutraliza activitatea hTNFa este cercetată prin inhibarea citoxicității induse de hTNFa a celulelor L929. Ca un parametru suplimentar sau alternativ al activității hTNFa, poate fi cercetată capacitatea unui anticorp de a inhiba expresia indusă hTNFa al ELAM-1 pe HUVEC, ca o măsură a activării celulare indusă de hTNFa.
RO 119831 Β1
Termenul “rezonanța suprafeței plasmonului”, așa cum s-a folosit aici, se referă la 1 un fenomen optic care permite analiza interacțiunilor biospecifice în timp real prin detecția modificărilor în concentrațiile proteice cu o matrice biosenzor, de exemplu, folosind sistemul 3
BIAcore (Pharmacia Biosensor AB, Uppsala, Suedia și Piscataway, NJ). Pentru descrieri suplimentare vezi Exemplul 1 și Jonsson, U., și colab. (1993) Ann. Biol. Clin. 51:19-26; 5
Jonsson, U., și colab. (1991) Biotechniques 11:620-627; Johnsson, B., și colab. (1995) J.Mol.Recognit. 8:125-131; și Johnsson, B., și colab. (1991) Anal. Biochem. 198: 268-277.7
Termenul “Ko()”, așa cum s-a folosit aici, se referă la constanta ratei de detașare pentru disocierea unui anticorp din complexul anticorp/antigen.9
Termenul “K^, așa cum s-a folosit aici, se referă la constanta disocierii unei interacțiuni particulare anticorp-antigen.11
Termenul “moleculă de acid nucleic”, așa cum s-a folosit aici, includ molecule ADN și molecule ARN. O moleculă de acid nucleic poate fi cu o singură bandă sau cu 2 benzi, dar 13 de preferință, este ADN cu 2 benzi.
Termenul “moleculă de acid nucleic izolat”, așa cum s-a folosit aici cu referire la acizi 15 nucleici care codifică anticorpi sau porțiuni anticorp (de exemplu, VH, VL, CDR3) care leagă hTNFa, se referă la o moleculă de acid nucleic în care secvențele nucleotidice care codifică 17 anticorpi sau porțiuni anticorp sunt libere de alte secvențe nucleotidice care codifică anticorpi sau porțiuni anticorp care leagă antigeni, alții decât hTNFa, în care alte secvențe pot flanca 19 acidul nucleic natural în ADN-ul genomic uman. Astfel, de exemplu, un acid nucleic izolat al invenției care codifică o regiune VH a unui anticorp anti-TNFa, nu conține alte secvențe care 21 codifică alte regiuni VH care leagă antigeni, alții decât TNFa.
Termenul “vector”, așa cum s-a folosit aici, se referă la o moleculă de acid nucleic 23 capabilă să transporte alt acid nucleic la care a fost legat. Un tip de vector este un “plasmid”, care se referă la o buclă de ADN dublu bandă circulară în care pot fi legate segmente de 25 ADN suplimentare. Alt tip de vector este un vector viral, în care segmente de ADN suplimentar pot fi legate în genomul viral. Anumiți vectori sunt capabili de replicare autonomă 27 într-o celulă gazdă în care ei sunt produși (de exemplu, vectori bacterieni având o origine a replicării bacteriene și vectori epizomali mamiferi). Alți vectori (de exemplu, vectori mamiferi 29 non-epizomali) pot fi integrați în genomul unei celule gazdă la introducere în celula gazdă și prin aceasta sunt replicați împreună cu genomul gazdei. Mai mult, anumiți vectori sunt 31 capabili să dirijeze expresia genelor la care ei sunt legați operațional. Astfel de vectori sunt cunoscuți aici ca “vectori de expresie recombinanți” (sau simplu, “vectori de expresie”). în 33 general, vectori de expresie cu utilitate în tehnicile ADN recombinant sunt adesea sub formă de plasmide. în prezenta descriere, “plasmid” și “vector” pot fi folosiți interschimbabil, 35 deoarece plasmidul este cea mai comună formă de vector folosit. Cu toate acestea, invenția intenționează să includă astfel de alte forme ale vectorilor de expresie, cum ar fi vectori virali 37 (de exemplu, retrovirusuri deficiente pentru replicare, adenovirusuri și virusuri asociate adeno), care servesc pentru funcțiuni echivalente. 39
Termenul “celulă gazdă recombinantă” (sau simplu, “celulă gazdă”), așa cum s-a folosit aici, se intenționează să se refere la o celulă în care a fost introdus un vector de 41 expresie recombinant. Se va înțelege că asemenea termeni se intenționează să se refere nu numai la celula subiect particular, ci și la urmașii unei astfel de celule. Deoarece anumite 43 modificări se pot petrece în generațiile în succesiune fie datorită mutațiilor, fie influențelor de mediu, astfel de urmași, de fapt, nu pot fi identici cu celula parentală, dar sunt încă incluși 45 în cuprinsul termenului “celulă gazdă” cum s-a folosit aici.
Diverse aspecte ale invenției sunt descrise în continuare în detaliu după cum 47 urmează.
RO 119831 Β1
/. Anticorpi umani care leagă TNFcr uman
Această invenție se referă la anticorpi umani izolați, sau porțiuni de legare antigen ale acestora, care se leagă la TNFa uman cu afinitate crescută, o rată a detașării scăzută și capacitate de neutralizare ridicată. De preferință, anticorpii umani conform invenției sunt anticorpi umani de neutralizare anti-hTNFa,recombinanți. Cel mai preferat anticorp recombinant de neutralizare conform invenției este denumit până aici ca D2E7 și are secvențele VL și VH cum sau prezentat în fig. 1A, 1B și respectiv, fig. 2A, 2B (secvența aminoacidă a regiunii D2E7 VL este de asemenea prezentată în SEQ ID NR:1; secvența aminoacidă a regiunii D2E7 VH este prezentată de asemenea în SEQ ID NR:2). Proprietățile legării D2E7, așa cum s-au comparat la mAb murin MAK 195 anti-hTNFa care prezintă afinitate crescută și cinetici de disociere lentă și alt anticorp uman anti-hTNFa înrudit secvenței D2E7, 2SD4, sunt rezumate mai jos:
Anticorp Kottsec·’ K^M^sec’1 Stoichiometrie
D2E7 lgG1 8,81x10’5 1,91x105 6,09x1010 1,2
2SD4 lgG4 8,4x10'3 4,20x105 2,00x10’8 0,8
MAK 195 F(ab')z 8,70x10’5 1,90x105 4,60x1O'10 1,4
Anticorpul D2E7 și anticorpi înrudiți prezintă de asemenea o capacitate puternică de a neutraliza activitatea hTNFa, cu s-a cercetat prin câteva analize in vitro și in vivo (vezi, exemplul 4). De exemplu, acești anticorpi neutralizează citotoxicitatea indusă hTNFa a celulelor cu valori IC^ în domeniu de aproximativ 10’7 M la aproximativ 10'1° M. D2E7, când s-a exprimat ca anticorp lgG1 de lungime întreagă, neutralizează citotoxicitatea indusă hTNFa a celulelor L929 cu IC50 de aproximativ 1,25 x 10'1° M. Mai mult, capacitatea de neutralizare a D2E7 este menținută când anticorpul se exprimă ca un fragment Fab, F(ab’)2 sau scFv. De asemenea, D2E7 inhibă activarea celulară indusă de TNFa, așa cum s-a măsurat prin expresia ELAM-1 pe HUVEC indusă de hTNFa (IC50 = aproximativ 1,85x10'10 M) și legarea hTNFa la receptori hTNFa pe celule U-937 (IC50=aproximativ 1,56x10’1° M). Considerând cele din urmă D2E7 inhibă legarea hTNFa la ambii receptori hTNFa p55 și p75. Mai mult, anticorpul inhibă in vivo letalitatea indusă hTNFa la șoareci (EDs0=1-2,5 pg/șoarece).
Considerând specificitatea legării D2E7, acest anticorp se leagă la TNFa uman în diverse forme, incluzând hTNFa solubil, hTNFa transmembranar și hTNFa legat la receptori celulari. D2E7 nu se leagă specific la alte citokine ca limfotoxine (ΤΝΡβ), IL-1a, IL-1 β, IL-2, IL-4, IL-6, IL-8, IFNY și ΤΰΕβ. Totuși, D2E7 prezintă reactivitate încrucișată la factorii necrozei tumorii de la alte specii. De exemplu, anticorpul neutralizează activitatea a cel puțin 5 TNFa de la primate (cimpanzeu, babuin, sanquin, cynomolgus și rhesus) cu valori IC50 aproximativ echivalente ca pentru neutralizarea hTNFa (vezi, exemplul 4, subsecțiunea E). De asemenea, D2E7 neutralizează activitatea TNFa de șoarece, deși de aproximativ 1000 de ori mai puțin decât TNFa uman (vezi, exemplul 4, subsecțiunea E). De asemenea, D2E7 se leagă la TNFa canin și porcin.
într-un aspect, invenția cuprinde anticorpii D2E7 și porțiuni de anticorp, anticorpi înrudiți D2E7 și porțiuni anticorp și alți anticorpi umani și porțiuni de anticorp cu proprietăți echivalente la D2E7, cum ar fi afinitate de legare ridicată la hTNFa cu cinetici de disociere scăzute și capacitate de neutralizare ridicată. într-o realizare, invenția asigură un anticorp
RO 119831 Β1 uman izolat, sau o porțiune de legare antigen a acestuia, care disociată de TNFa uman cu 1
Kd de 1x1 θ’8 M sau mai puțin și o rată constantă de 1x103s1 sau mai mică, ambele determinate de suprafața de rezonanță a plasmonului și neutralizează citotoxicitatea TNFa 3 uman într-un test standard L929 in vitro cu IC50 de 1x10'7 sau mai mic. Mai preferat, anticorpul uman izolat, sau porțiunea de legare antigen a acestuia disociază de la TNFa 5 uman cu de 5x1 ΟΎ sau mai mică, sau chiar mai preferat, cu Kotl de 1x1 ΟΎ1 sau mai mică. Mai preferat, anticorpul uman izolat sau porțiunea de legare antigen a acestuia, 7 neutralizează citotoxicitatea TNFa uman într-un test standard L929 in vitro cu IC50 de 1x10‘8 M sau mai puțin, chiar mai preferat, cu IC50 de 1 x10’9 M sau mai puțin și încă, mai preferabil, 9 cu IC50 de 1x1010 M sau mai puțin. într-o realizare preferată, anticorpul este un anticorp uman recombinant izolat, sau o porțiune de legare antigen a acestuia. în altă realizare 11 preferată, anticorpul neutralizează de asemenea, activarea celulară TNFa, așa cum s-a cercetat folosind o analiză standard in vitro pentru expresia ELAM-1 indusă TNFa pe celule 13 endoteliale din vena ombilicală umană (HUVEC).
Analiza de rezonanță a suprafeței plasmonului pentru determinarea Kd și Koff poate 15 fi realizată cum s-a descris în exemplul 1. Un test standard L929 in vitro pentru determinarea valorilor IC50 este descris în exemplul 4, subsecțiunea A. Un test standard in vitro pentru 17 expresia ELAM-1 indusă TNFa asupra celulelor endoteliale din vena ombilicală umană (HUVEC) este descris în exemplul 4, subsecțiunea C. Exemple de anticorpi umani 19 recombinanți care îndeplinesc sau sunt anticipați a îndeplini, criteriile cinetice și de neutralizare menționate mai înainte includ anticorpi având următoarele perechi de secvențe 21 [VHA/L] care sunt prezentate în fig. 1A, 1B, 2A și 2B (de asemenea vezi, Exemplele 2, 3 și 4 pentru analizele cinetice și de neutralizare): 23 [D2E7 VH/D2E7 VL]; [HD2E7*.A1/D2E7 VL], [HD2E7*.A2/D2E7 VL], [HD2E7‘.A3/D2E7 VL], [HD2E7*.A4/D2E7 VL], [HD2E7*.A5/D2E7 VL], [HD2E7‘.A6/D2E7 VL], [HD2E7TA7/D2E7 25 VL], (HD2E7TAB/D2E7 VL], [HD2E7TA9/D2E7 VL], [D2E7 VH/LD2E7TA1], [D2E7 VH/LD2E7TA4], [D2E7 VH/LD2E7*.A5], [D2E7 VH/LD2E7*.A7], [D2E7 VH/LD2E7*.AB], 27 [HD2E7*.A9/ LD2E7*. A1 ], [VH1-D2/LOE7], [VH1 -D2.N/LOE7.T], [VH1 -D2.Y/LOE7.A], [VH1 D2.N/LOE7.A], [VH1-D2/EP B127] și [3C-H2/LOE7]. 29
Este bine cunoscut în domeniu că domeniile CDR3 ale catenei grea și ușoară joacă un rol important în specificitatea/afinitatea legării unui anticorp pentru un antigen. în 31 conformitate, un alt aspect, invenția aparține anticorpilor umani care au cinetici de disociere mai mari pentru asociere cu hTNFa și care au domenii CDR3 ale catenei ușoare și grea 33 care structural sunt identice la sau înrudite celor ale D2E7. Așa cum s-a demonstrat în exemplul 3, poziția 9 a D2E7 VL CDR3 poate fi ocupată de Ala sau Thr cu afectarea 35 substanțială a KoH. în conformitate, un motiv consens pentru D2E7 VL CDR3 cuprinde secvența de aminoacizi: Q-R-Y-N-R-A-P-Y-(T/A) (SEW ID NR:3). Suplimentar, poziția 12 a 37 D2E7 VL CDR3 poate fi ocupată de Tyr sau Asn, fără afectarea substanțială a Ko((. în conformitate, un motiv consens pentru D2E7 VL CDR3 cuprinde secvența de aminoacizi: V- 39
S-Y-L-S-T-A-S-S-L-D-(Y/N) (SEQ ID NR:4). Mai mult, așa cum s-a demonstrat în exemplul 2, domeniul CDR3 al catenelor grea și ușoară a D2E7 este favorabil pentru substituție cu un 41 singur rest alanină (la poziția 1,4, 5,7 sau 8 în VL CDR3 sau la poziția 2, 3, 4, 5,6,8,9,10 sau 11 în VH CDR3) fără afectarea substanțială a KoH. De asemenea, specialistul în domeniu 43 va aprecia că dat fiind caracterul favorabil al domeniilor D2E7 VL și VH CDR3 pentru substituțiile prin alanină, substituția altor aminoacizi în domeniile CDR3 poate fi posibilă 45 păstrând încă rata de detașare constantă a anticorpului, în special, substituții cu aminoacizi conservativi. O “substituție aminoacidă conservativă”, așa cum s-a folosit aici, este una în 47
RO 119831 Β1 care restul de aminoacid este înlocuit cu alt rest de aminoacid având o catenă laterală similară. Familii ale resturilor aminoacide care au catene laterale similare au fost definite în domeniu, incluzând catene laterale bazice (de exemplu, lizină, arginină, histidină, catene laterale acide (de exemplu, acid aspartic, acid glutamic), catene laterale polare neîncărcate (de exemplu, glicină, asparagină, glutamină, serină, treonină, tirozină, cisteină), catene laterale nepolare (de exemplu, alanină, valină, leucină, izoleucină, prolină, fenilalanină, metionină, triptofan), catene laterale β-ramificate (de exemplu, treonină, valină, izoleucină) și catene laterale aromatice (de exemplu, tirozină, fenilalanină, triptofan, histidină). De preferință, nu sunt făcute mai mult de 1 la 5 substituții de aminoacizi conservative în D2E7 VL și/sau domeniile VH CDR3. Mai preferat, nu sunt făcute mai mult decât 1 la 3 substituții de aminoacizi conservative în domeniile D2E7 VL și/sau VH CDR3. Suplimentar, substituțiile de aminoacizi conservative nu vor fi făcute la poziții de aminoacizi critice pentru legare la hTNFa. Așa cum s-a arătat în exemplul 3, pozițiile 2 și 5 ale D2E7 L CDR3 și pozițiile 1 și 7 ale D2E7 VH CDR3 par a fi critice pentru interacțiune cu hTNFa și astfel, de preferință, substituții de aminoacizi conservative nu sunt făcute la aceste poziții (deși o substituție alanină la poziția 5 a D2E7 VL CDR3 este acceptabilă, așa cum s-a descris mai sus).
Astfel, în altă realizare, invenția se referă la un anticorp uman izolat, sau porțiune de legare antigen a acestuia, cu următoarele caracteristici:
a) disociază de la TNFa uman cu o rată constantă KoH de 1x10’3s’1 sau mai mică, cum s-a determinat prin rezonanța suprafeței plasmonului;
b) are un domeniu CDR3 al catenei ușoare cuprinzând secvența aminoacidă a SEQ ID NR:3, sau modificată de la SEQ ID NR:3 printr-o singură substituție alanină la poziția 1,
4, 5, 7, sau 8, sau prin 1 la 5 substituții aminoacide conservative la pozițiile 1,3, 4, 6,7, 8, și/sau 9;
c) are un domeniu CDR3 al catenei grele care cuprinde secvența aminoacidă a SEQ ID NR:4, modificată de la SEQ ID NR:4 printr-o singură substituție alanină la pozițiile 2, 3, 4,5,6,8, 9,10 sau 11 sau prin 1 la 5 substituții aminoacide conservative la pozițiile 2, 3,4,
5, 6, 8, 9, 10 și/sau 12.
Mai preferabil, anticorpul, sau porțiunea de legare antigen a acestuia, disociază de la TNFa uman cu un Kof( de 5x10'4s'1 sau mai mic. Chiar mai preferabil, anticorpul, sau porțiunea de legare antigen a acestuia, disociază de la TNFa uman cu un de 1x1 O^s’1 sau mai mic.
în altă realizare, invenția se referă la un anticorp uman izolat, sau o porțiune de legare antigen a acestuia, cu o regiune variabilă a catenei ușoare (LCVR) având un domeniu CDR3 care cuprinde secvența aminoacidă a SEQ ID NR:3, sau modificată de la SEQ ID NR:3 printr-o singură substituție alanină la poziția 1,4, 5,7 sau 8, și cu o regiune variabilă a catenei grele (HCVR) având un domeniu CDR3 cuprinzând secvența aminoacidă a SEQ ID NR:4, sau modificată de la SEQ ID NR:4 printr-o singură poziție 2,3,4,5,6,8,9,10 sau 11. De preferință, LCVR cuprinde în plus un domeniu CDR2 cuprinzând secvența aminoacidă a SEQ ID NR:5 (adică, D2E7 VL CDR2) și HCVR cuprinde în plus un domeniu CDR2 care cuprinde secvența aminoacidă a SEQ ID NR:6 adică, D2E7 VH CDR2). Chiar mai preferat, LCVR are în plus un domeniu CDR1 care cuprinde secvența aminoacidă a SEQ ID NR:7 (adică, D2E7 VL CDR1) și HCVR are un domeniu CDR1 care cuprinde secvența aminoacidă a SEQ ID NR:8 (adică, D2E7 VH CDR1). Regiunile cadru pentru VL sunt de preferință de la linia germinală umană Vkl, mai preferat de la gena Vk a liniei germinale umane A20 și cel mai preferat de la secvențele cadrului D2E7 VL prezentate în fig. 1A și 1B. Regiunile cadru pentru VH sunt de preferință de la familia germinală umană Vh3, mai preferat de la gena VH linia germinală DP-31 și cel mai preferat de la secvențele cadrului D2E7 VH prezentate în fig. 2A și 2B.
RO 119831 Β1
Pe de altă parte, invenția se referă la un anticorp uman izolat, sau porțiune de legare 1 la antigen a acestuia, cu o regiune variabilă a catenei ușoare (LCVR) care cuprinde secvența de aminoacizi a secvenței SEQ ID NR:1 (adică, D2E7 VL) și o regiune variabilă a catenei 3 grele (HCVR) care cuprinde secvența de aminoacizi a SEQ ID NR:2 (adică, D2E7 VH). în anumite realizări, anticorpul cuprinde o regiune constantă a catenei grele, cum ar fi o regiune 5 constantă lgG2, lgG3, lgG4, ilgA, IgE IgM sau IgD. De preferință, regiunea constantă a catenei grele este o regiune constantă a catenei grele lgG1 sau o regiune constantă a 7 catenei grele lgG4. Mai mult, anticorpul poate cuprinde o regiune constantă a catenei ușoare, fie o regiune constantă kappa a catenei ușoare, fie o regiune constantă lambda a 9 catenei ușoare. De preferință, anticorpul cuprinde o regiune constantă kappa a catenei ușoare. Alternativ, porțiunea anticorp poate fi, de exemplu, un fragment Fab sau un fragment 11 mono catenar Fv.
Invenția se referă la un anticorp uman izolat sau la o porțiune de legare antigen a 13 acestuia, având domenii CDR3 VL și VH înrudite D2E7, de exemplu, anticorpi, sau porțiuni de legare antigen ale acestora, cu regiune variabilă a catenei ușoare (LCVR) având un 15 domeniu CDR3 cuprinzând o secvență aminoacidă selectată din grupul care constă din SEQ ID NR:3, SEQ ID NR:11, SEQ ID NR:12, SEQ ID NR:13, SEQ ID NR:14, SEQ ID NR:15, 17
SEQ ID NR:16, SEQ ID NR:17, SEQ ID NR:18, SEQ ID NR:19, SEQ ID NR:20, SEQ ID NR:21, SEQ ID NR:22, SEQ ID NR.23, SEQ ID NR:24, SEQ ID NR:25 și SEQ ID NR:26 sau 19 cu regiune variabilă a catenei grele (HCVR) având un domeniu CDR3 cuprinzând o secvență de aminoacizi selectată din grupul constând din SEQ ID NR:4, SEQ ID NR:27, SEQ ID 21 NR:28, SEQ ID NR:29, SEQ ID NR:30, SEQ ID NR:31, SEQ ID NR:32, SEQ ID NR:33, SEQ ID NR:34 și SEQ ID NR:35. 23
Pe de altă parte, invenția se referă la un anticorp uman recombinant, sau o porțiune de legare antigen a acestuia, care neutralizează activitatea TNFa uman dar nu a TNFȘ 25 uman. De preferință, anticorpul, sau porțiunea de legare antigen a acestuia, neturalizează, de asemenea, TNFa de cimpanzeu și cel puțin un TNFa de la un primat suplimentar 27 selectat din grupul care constă din TNFa de babuin, TNFa de sanguin, TNFa de cynomolgus și TNFa de la rhesus. De preferință, anticorpul, sau porțiunea de legare antigen 29 a acestuia, neutralizează TNFa uman, de la cimpanzeu și/sau TNFa de la o primată suplimentară într-un test standard L929 in vitrocu un IC501 χ1 θ’® M sau mai mic, mai preferat 31
1x10'9 M sau mai mic, și chiar mai preferat 5x10'10 M sau mai mic. într-o subrealizare, anticorpul neutralizează de asemenea activitatea TNFa canin, de preferință într-un test 33 standard L929 in vitro cu un IC50 de 1x10'7 M sau mai puțin, mai preferat IxW® M sau mai puțin și chiar mai preferat 5x10‘9 M sau mai puțin. în altă subrealizare, anticorpul 35 neutralizează, de asemenea, activitatea TNFa de la porc, de preferință cu IC50 de 1x10‘5 M sau mai puțin, maki preferat 1x1 θ'6 M sau mai puțin și chiar mai preferat 5x10’7 M sau mai 37 puțin. în încă altă realizare, anticorpul neutralizează de asemenea activitatea TNFa de la șoarece, de preferință cu IC50de IxIO^M sau mai puțin, mai preferat 1x10’5M sau mai puțin 39 sau chiar mai preferat 5x1 θ'® M sau mai puțin.
Un anticorp sau porțiune anticorp ale invenției pot fi derivate sau legate la altă 41 moleculă funcțională (de exemplu, altă peptidă sau proteină); astfel, anticorpii sau porțiunile de anticorp conform invenției intenționează să includă forme derivate sau modificate în alt 43 fel ale anticorpilor umani anti-hTNFa descriși aici, incluzând molecule de imunoadeziune.
De exemplu, un anticorp sau porțiune de anticorp ale invenției pot fi legați funcțional (prin 45 cuplare, fuziune genetică, asociere necovalentă sau în alt fel) la una sau mai multe alte entități moleculare, cum ar fi alt anticorp (de exemplu, un anticorp bispecific sau un diacorp), 47
RO 119831 Β1 un agent detectabil, un agent citotoxic, un agent farmaceutic, și/sau o proteină sau peptidă care poate media asocierea anticorpului sau porțiunii de anticorp cu altă moleculă (cum ar fi o regiune miez streptavidină sau o coadă polihistidină).
Un tip de anticorp derivatizat este produs prin legarea încrucișată a doi sau mai mulți anticorpi (de același tip sau tipuri diferite, de exemplu, pentru a creea anticorpi bispecifici). Linkeri încrucișați includ pe cei care sunt heterofuncționali, care au două grupări reactive distincte separate printr-un distanțier corespunzător (de exemplu, ester m-maleimidobenzoil-Nhidroxisuccinimidă) sau homobifuncțional (de exemplu, suberat de disuccinimidil). Astfel de linkeri sunt accesibili de la Pierce Chemical Company, Rockford, II.
Agenți detectabili utilizați, cu care un anticorp sau porțiune anticorp conform invenției pot fi derivați, includ compuși fluorescenți. Agenți fluorescenți detectabili exemplificatori includ fluoresceină, izotiocianat de fluoresceină, rodamină, clorură de 5-dimetilamin-1naftalensulfonil, ficoeritrină și alții. De asemenea, un anticorp poate fi derivat cu enzime detectabile, cum ar fi fosfatază alcalină, peroxidază de la hrean, glucoz oxidază și altele. Când un anticorp este derivat cu o enzimă detectabilă, el se detectează adăugând reactivi suplimentari ere folosesc enzimă pentru a da un produs de reacție detectabil. De exemplu, când este prezent agentul detectabil peroxidază de la hrean, adăugarea de apă oxigenată și diaminobenzidină conduce la un produs de reacție colorat care este detectabil. Un anticorp poate fi derivat cu biotină și detectat prin măsurare indirectă a legării avidinei sau streptavidinei.
II. Expresia anticorpilor
Un anticorp, sau porțiune anticorp conform invenției se poate prepara prin expresia genelor catenei ușoare și grea ale imunoglobulinei într-o celulă gazdă. Pentru a exprima un anticorp recombinant, o celulă gazdă este transfectată cu unul sau mai mulți vectori de expresie recombinanți care conțin fragmente ADN care codifică catenele ușoară și grea ale imunoglobinei ale anticorpului astfel încât catenele ușoară și grea sunt exprimate în celule gazdă și, de preferință, secretate în mediul la care sunt cultivate celule gazdă, mediu din care se pot recupera anticorpii. Metodologiile ADN recombinarea standard sunt folosite pentru a obține catenele grea și ușoară ale anticorpilor, se încorporează aceste gene în vectori de expresie recombinanți și se introduc vectorii în celule gazdă precum cei descriși îbn Sambrook, Fritsch și Maniatis (ed.), Molecular Cloning; A Laboratory Manual, Second Edition, Cold Spring Harbor, N.Y., (1989), Ausubel, F.M. și colab. (ed.) Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing Associates, (1989) și în US 4816397 de Boss și colab.
Pentru a exprima anticorp D2E7 sau anticorp înrudit D2E7 mai întâi sunt obținute, fragmente ADN care codifică regiunile variabile ale catenei ușoară și grea. Aceste ADN-uri pot fi obținute prin amplificarea și modificarea liniei germinale a secvențelor variabile ale catenei ușoară și grea folosind reacția polimerazică de catenă (POR). Secvențele ADN ale liniei germinale pentru genele regiunii variabile ale catenei grea și ușoară umane sunt cunoscute în domeniu (vezi, de exemplu, “Vbase” baza de date pentru secvențe ale liniilor germinale umane; vezi, de asemenea, Kabat, E.A., și colab. (1991 )-Sequences ofProteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242; Tomlinson, I.M., și colab., (1992) “The Repertoire of Human Germline VH Sequences Reveals about Fifty Groups of VH Segments with Different Hypervariable Loopa” J.Mol.Biol. 227:776-698; și Cox, J.P.L. și colab. (1994) “A Directory of Human Germ-line VH Segments Reveals a Strong Bias in Their Usage” Eur.J.Immunol. 24:827-836; conținuturile fiecăreia fiind cu precădere încorporate aici ca referință). Pentru a obține un fragment- ADN care codifică regiunea variabilă a catenei grele a anticorpului
RO 119831 Β1
D2E7 sau unui anticorp înrudit D2E7, un membru al familiei VH3 al genelor liniei germinale 1
VH este amplificat prin PCR standard. Cel mai preferat, este amplificată secvența liniei germinale DP-31 VH. Pentru a obține un fragment ADN care codifică regiunea variabilă a 3 catenei ușoare a anticorpului D2E7 sau unui anticorp înrudit D2E7, un membru al familiei
VHI al genelor liniei germinale VL este amplificat prin PCR standard. Cel mai preferat, este 5 amplificată secvența liniei germinale A20 VL. Primeri PCR corespunzători pentru utilizare la amplificarea liniei germinale DP-31 VH și liniei germinale A20 VL, secvențele se pot de- 7 semna pe baza secvențelor nucleotidice discutate în referințele citate supra, folosind metode standard. 9
O dată ce sunt obținute fragmentele liniei germinale VH și VL, aceste secvențe pot fi mutate pentru a codifica secvențele de aminoacizi D2E7 sau înrudite D2E7 descrise aici. 11 Secvențele de aminoacizi codificate prin secvențele ADN ale liniei germinale VH și VL sunt comparate mai întâi la secvențele aminoacide VH și VL pentru D2E7 și înrudite D2E7 pentru 13 identificarea resturilor de aminoacizi din secvența D2E7 sau înrudită D2E7 care diferă de linia germinală. Apoi nucleotidele corespunzătoare ale secvențelor ADN ale liniei germinale 15 sunt mutate astfel, încât secvența liniei germinale mutate codifică secvența de aminoacizi D2E7 sau înrudită D2E7, folosind codul genetic pentru a determina care schimbări 17 nucleotidice ar putea fi făcute. Mutageneză secvențelor liniei germinale se realizează prin metode standard, cum ar fi mutageneză mediată PCR (în care nucleotidele mutate sunt 19 încorporate în primerii PCR, astfel că produsul PCR conține mutațiile) sau mutagenază dirijată în sit. 21
Mai mult, ar fi de remarcat că dacă secvențele “liniei germinale” obținute prin amplificare PCR codifică diferențe aminoacide în regiunile cadru de la configurația adevărată 23 a liniei germinale (adică, diferențele în secvența amplificată cum s-au comparat la secvența liniei germinale adevărate, de exemplu, ca un rezultat al mutației somatice), poate fi de dorit 25 să se schimbe aceste diferențe aminoacide înapoi la secvențele liniei germinale adevărate (adică, “mutație înapoi” a resturilor cadrului la configurația linei germinale). 27
O dată ce fragmentele ADN care codifică segmente VH și VL ale D2E7 sau înrudite
D2E7 sunt obținute (prin amplificare și mutageneză a liniei germinale VH și VL, cum s-a 29 descris mai sus) aceste fragmente ADN pot fi manipulate în continuare prin tehnici ADN recombinant standard, de exemplu, pentru convertirea genelor regiunii variabile la genele 31 catenei anticorpului de lungime întreagă, la genele fragmentului Fab, sau la o genă scFv.
în aceste manipulări, un fragment ADN care codifică VL sau VH este legat operațional la alt 33 fragment ADN care codifică altă proteină, cum ar fi o regiune constantă a unui anticorp sau un linker flexibil. Termenul “legată operațional” așa cum s-a folosit în acest context, 35 intenționează să însemne că cele două fragmente ADN sunt unite astfel încât secvențele aminoacide codificate de cele două fragmente ADN rămân în cadru. 37
ADN-ul izolat care codifică regiunea VH poate fi transformat la o genă a catenei grele de lungime întreagă, legând operațional ADN-ul care codifică VH la altă moleculă de ADN 39 care codifică regiunile constante ale catenei grele (CH1, CH2 și CH3). Secvențele genelor regiunii constante ale catenei grele umane sunt cunoscute în domeniu (vezi, de exemplu, 41 Kabat, E.A., și colab. (1991 )-Sequences ofProteins of ImmunologicalInterest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91 -3242) și fragmente 43 ADN care cuprind aceste regiuni se pot obține prin amplificare PCR standard. Regiunea constantă a catenei grele poate fi o regiune constantă lgG1, lgG2, lgG3, lgG4, IgA, lgE, IgM 45 sau IgD, dar cel mai preferat este o regiune constantă lgG1, sau lgG4. Pentru un fragment Fab gena catenei grele, ADN-ul care codifică VH poate fi legat operațional la altă moleculă 47 ADN care codifică numai regiunea constantă CH1 a catenei grele.
RO 119831 Β1
ADN-ul izolat care codifică regiunea VL poate fi transformat la gena catenei ușoare de lungime întreagă (precum o genă a catenei ușoare Fab) prin legarea operațională a ADNului care codifică VL la altă moleculă ADN care codifică regiunea constantă a catenei ușoare, CL. Secvențele genelor regiunii constante ale catenei ușoare umane sunt cunoscute în domeniu (vezi, de exemplu, Kabat, e.A., și colab. (1991) - Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Departmentof Health and Human Services, NIH Publication No. 91 -3242) și fragmentele ADN care cuprind aceste regiuni pot fi obținute prin amplificare PCR standard. Regiunea constantă a catenei ușoare poate fi o regiune constantă kappa sau lambda, dar cel mai preferat este o regiune constantă kappa.
Pentru a crea o genă scFv, fragmentele ADN care codifică VH- și VL- sunt legate operațional la alt fragment care codifică un linker flexibil, de exemplu, codifică secvența aminoacidă (Gly4-Ser)3, astfel încât secvențele VH și VI pot fi exprimate ca o proteină contiguă cu o singură catenă, cu regiunile VL și VH legate prin linkerul flexibil (vezi, de exemplu, Bird și colab. (1988) Science 242:423-426: Huston și colab (1988) Proc. Natl. Acad.Sci. L/SA 85:5879-5883; McCafferty și colab. Nature (1990) 348:552-554).
Pentru a exprima anticorpii sau porțiuni anticorp ale invenției, ADN-urile care codifică catenele ușoară și grea parțiale, sau de lungime întreagă, obținute cum s-a descris mai sus, sunt inserate în vectori de expresie astfel încât genele sunt legate operațional la secvențe de control transcripțional și translațional. în acest context, termenul “legat operațional” intenționează să însemne că o genă anticorp este legată într-un vector, astfel încât secvențele de control transcripțional și translațional din vector servesc funcției lor intenționate de reglare a transcripției și translației genei anticorp. Vectorul de expresie și secvențele de control ale expresiei sunt alese pentru a fi compatibile cu expresia celulei gazdă folosite. Gena catenei ușoare a anticorpului și gena catenei grele a anticorpului, pot fi inserate în vector separat sau, mai obișnuit, ambele gene sunt inserate în același vector de expresie. Genele anticorpului sunt inserate în vectorul de expresie prin metode standard (de exemplu, situri de expresie complementare ligării pe fragmentul genei anticorpului și vector, sau ligare la capăt teșit dacă nu sunt prezente situri de restricție). înaintea inserării catenelor ușoară sau grea ale D2E7 sau înrudit D2E7, vectorul de expresie poate să conțină deja secvențele regiunii constante a anticorpului. De exemplu, o abordare pentru transformarea secvențelor VH și VL D2E7 și înrudit D2E7 la gene anticorp de lungime întreagă este să se însereze acestea în vectori de expresie care codifică deja regiuni constante ale catenei grele și, respectiv regiuni constante ale catenei ușoare, astfel încât segmentul VH este legat operațional la segmentul(e) CH din vector și segmentul VL este legat operațional la segmentul CL din vector. Suplimentar sau alternativ, vectorul de expresie recombinant poate codifica o peptidă semnal care facilitează secreția catenei anticorpului dintr-o celulă gazdă. Gena catenei anticorpului poate fi donată în vector, astfel încât peptida semnal este legată în cadru la terminusul amino al genei catenei anticorpului. Peptida semnal poate fi o peptidă semnal imunoglobulină sau o peptidă semnal heteroloagă (adică, o peptidă semnal de la o proteină care nu este imunoglobulină).
Suplimentar la genele catenei anticorpului, vectorii recombinanți de expresie ai invenției conțin secvențe reglatoare care controlează expresia genelor catenei anticorpului într-o celulă gazdă. Termenul “secvență reglatoare” intenționează să includă promotori, intensificatori și alte elemente de control ale expresiei (de exemplu, semnale de poliadenilare) cae controlează transcripția sau translația genelor catenei anticorpului. Astfel de secvențe reglatoare sunt descrise, de exemplu, în Goeddel; Gene Expression Technology: Methods in Enzymology 185, Academic Press, San Diego, CA (4990). Se ~va
RO 119831 Β1 aprecia de către cei cu pregătire în domeniu că desemnarea vectorului de expresie, inclusiv 1 selecția secvențelor reglatoare, poate să depindă de astfel de factori ca alegerea celulei gazdă care trebuie transformată, nivelul expresiei proteinei dorite etc. Secvențe reglatoare 3 preferate pentru expresia unei celule gazdă de la mamifer includ elemente virale care dirijează expresia proteinei la niveluri ridicate în celule de la mamifere, cum ar fi promotori 5 și/sau intensificatori derivați de la citomegalovirus (CMV) (cum ar fi promotorul/ intensificatorul CMV), virusul simian 40 (SV40) (cum arfi promotorul/intensificatorul SV40), adenovirus 7 (de exemplu, promotorul târziu principal al adenovirusului (AdMLP)) și polioma. Pentru descrierea suplimentară a elementelor reglatoare virale și secvențele acestora, vezi de 9 exemplu, US 5168062 de Stinski, US 4510245 de Bel și colab. și US 4968615 de Schaffner și colab. 11 în plus la genele catenei anticorpului și secvențele reglatoare, vectorii recombinanți de expresie ai invenției pot să conțină secvențe suplimentare, cum ar fi secvențele care 13 reglează replicarea vectorului în celule gazdă (de exemplu, originile replicării și gene marker de selecție). Gena marker de selecție facilitează selecția celulelor gazdă în care s-a introdus 15 vectorul (vezi, de exemplu, US 4399216, 4634665 și 5179017 toate de Axei și colab.). De exemplu gene marker de selecție tipice conferă rezistență la medicamente, cum ar fi G418, 17 higromicină sau metotrexat, pe o celulă gazdă în care s-a introdus vectorul. Gene marker de selecție preferate includ gena dihidrofolat reductază (DHFR) (pentru utilizare în celule 19 gazdă dhfr cu selecție/amplificare metotrexat și genă neo (pentru selecție G418).
Pentru expresia catenelor ușoară și grea, vectorul(i) de expresie care codifică 21 catenele grea și ușoară se transfectează într-o celulă gazdă prin tehnici standard. Diverse forme ale termenului “transfecție” sunt intenționate să cuprindă o gamă largă de tehnici 23 folosite în mod obișnuit pentru introducerea ADN-ului exogen într-o celulă gazdă procariotică sau eucariotică, de exemplu, electroporare, precipitare fosfat de calciu, transfecție DEAE- 25 dextran și altele. Deși teoretic este posibil să se exprime anticorpii invenției fie în celule gazdă procariotice, fie eucariotice, expresia anticorpilor în celule eucariotice și, cel mai 27 preferat, celula gazdă de la mamifere, este cea mai preferată, deoarece astfel de celule eucariotice și, în special, celule de la mamifere, sunt mai probabil decât celulele procariotice 29 să se asemene și să secrete un anticorp pliat corespunzător și imunologic activ. Expresia procariotică a genelor anticorpului a fost raportată ca ineficientă pentru producerea cu 31 randamente ridicate a anticorpului activ (Boss, M.A. și Wood, C.R.(1985) Immunology Today 6:6-13). 33
Celule gazdă de la mamifere, preferate pentru expresia anticorpilor recombinanți ai invenției includ celule ovariene de la hamster chinezesc (celule CHO) (incluzând celule CHO 35 dhfr, descrise în Urlaub și Chasin (1980) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216-4220, folosite cu un marker de selecție DHFR, de exemplu, cum s-a descris în R.J.Kaufman și P.A. Sharp 37 (1982) Mol.Biol. 159:601-621). celule mielomice NSO, celule COS și celule SP2. Când vectori recombinanți de expresie care codifică gene anticorp sunt introduși în celule gazdă 39 mamifere, anticorpii sunt produși prin cultivarea celulelor gazdă pentru o perioadă de timp suficientă să permită expresia anticorpului în celulele gazdă sau, mai preferabil, secreția 41 anticorpului în mediul de cultură în care sunt crescute celulele gazdă. Anticorpii pot fi recuperați din mediul de cultură folosind metode standard de purificare a proteinelor. 43
Celulele gazdă pot fi folosite de asemenea, pentru a produce porțiuni ale anticorpilor intacți, cum ar fi fragmente Fab sau molecule scFv. Se va înțelege că variațiile privind 45 procedura de mai sus sunt cuprinse în prezenta invenție. De exemplu, poate fi de dorit să se transfecteze o celulă gazdă cu ADN care codifică fîe catena ușoară, fie catena grea (dar 47
RO 119831 Β1 nu ambele) ale unui anticorp conform acestei invenții. Tehnologia ADN recombinant poate fi de asemenea, folosită pentru a îndepărta o parte sau tot ADN-ul care codifică una sau ambele catene ușoară și grea care nu sunt necesare pentru legare la hTNFa. Moleculele exprimate de la astfel de molecule ADN scurtate, sunt de asemenea cuprinse de anticorpii invenției. Suplimentar, pot fi produși anticorpi bifuncționali în care o catenă ușoară și o catenă grea sunt ale unui anticorp conform invenției și altă catenă grea și catenă ușoară sunt specifice pentru un antigen, altul decât hTNFa prin legarea încrucișată alunui anticorp al invenției la un al doilea anticorp prin metode chimice standard de legare încrucișată.
într-un sistem preferat pentru expresia unui anticorp recombinant, sau porțiune de legare antigen a acestuia, al invenției, un vector recombinant de expresie care codifică atât catena grea, cât și catena ușoară ale anticorpului se introduce în celule CHO dhfr- prin transfecție mediată fosfat de calciu. în vectorul recombinant de expresie, genele catenei grea și ușoară ale anticorpului sunt fiecare legate operațional la elemente reglatoare intensificator/promotor (de exemplu, derivate de la SV40, CMV, adenovirus și altele cum ar fi un element regulator CMV intensificator/promotor AdMLP sau un element regulator SV40 intensificator/promotor AdMLP) pentru a conduce niveluri ridicate ale transcripției genelor. De asemenea, vectorul recombinant de expresie conține o genă DHFR, care permite selecția celulelor CHO care au fost transfectate cu vectorul folosind selecția/amplificarea metotrexat. Celulele gazdă transformante, selectate, sunt lăsate pentru expresia catenelor grea și ușoară ale anticorpului, și anticorpul intact se recuperează din mediul de cultură. Tehnicile biologiei moleculare standard sunt folosite pentru prepararea vectorului de expresie recombinant, transfectarea celulelor gazdă, selectarea transformanților, cultura celulelor gazdă și recuperarea anticorpului din mediul de cultură.
Vectorului și compozițiilor de celule gazdă se utilizează pentru expresia anticorpilor și porțiunilor anticorp ale invenției. Secvența nucleotidică care codifică regiunea variabilă catenă ușoară D2E7 este prezentată în fig. 7 și SEQ ID NR:36. Domeniul CDR1 al LCVR cuprinde nucleotidele 70-102, domeniul CDR2 cuprinde nucleotidele 148-168 și domeniul CDR3 cuprinde nucleotidele 265-291. Secvența nucleotidică care codifică regiunea variabilă catenă grea D2E7 este prezentată în fig. 8 și SEQ ID NR:37. Domeniul CDR1 al HCVR cuprinde nucleotidele 91-105, domeniul CDR2 cuprinde nucleotidele 148-198 și domeniul CDR3 cuprinde nucleotidele 295-330. Se va aprecia de către specialistul în domeniu că secvențele nucleotidice care codifică anticorpi înrudiți D2E7, sau porțiuni ale acestora (de exemplu, un domeniu CDR cum ar fi un domeniu CDR3), pot fi derivați de la secvențele nucleotidice care codifică LCVR și HCVR D2E7 folosind codul genetic și tehnicile biologiei moleculare standard.
într-o realizare, invenția se referă la un acid nucleic izolat care codifică un domeniu CDR3 catenă ușoară cuprinzând secvența aminoacizi SEQ ID NR:3 (adică, D2E7 VLCDR3), sau modificată de la SEQ ID NR:3 printr-o singură substituție alanină la poziția 1,4,5,7, sau 8, sau prin 1 la 5 substituții aminoacide conservative la pozițiile 1, 3, 4, 6, 7, 8, și/sau 9. Acest acid nucleic poate codifica numai regiunea CDR3, sau mai preferat, codifică o regiune variabilă catenă ușoară întreagă a anticorpului (LCVR). De exemplu, acidul nucleic poate codifica un LCVR având un domeniu CDR2 care cuprinde secvența de aminoacizi a SEQ ID NR:5 (adică, D2E7 VL CDR2) și un domeniu CDR1 cuprinzând secvența aminoacidă a SEQ ID NR:7 (adică, D2E7 VL CDR1).
în altă realizare, invenția se referă la un acid nucleic izolat care codifică un domeniu CDR3 catenă grea cuprinzând secvența aminoacidă a SEQ ID NR:4 (adică, D2E7 VH CDR3), sau modificată de la SEQ ID NR:4 printr-o singură substituție alanină la poziția 2,
RO 119831 Β1
3,4, 5,6,8,9,10 sau 11, sau prin 1 la 5 substituții de aminoacizi conservative la pozițiile 2, 1
3, 4, 5, 6, 8, 9,10,11, și/sau 12. Acest acid nucleic poate codifica numai regiunea CDR3, sau mai preferat, codifică o regiune variabilă catenă grea întreagă a anticorpului (HCVR). 3 De exemplu, acidul nucleic poate codifica un HCVR având un domeniu CDR2 care cuprinde secvența aminoacidă a SEQ ID NR:6 (adică, D2E7 VH CDR2) și un domeniu CDR1 5 cuprinzând secvența aminoacidă a SEQ ID NR:8 (adică, D2E7 VH CDR1).
în altă realizare, invenția se referă la acizii nucleici izolați care codifică un domeniu 7 CDR3 înrudit D2E7, de exemplu, cuprinzând o secvență de aminoacizi selectată din grupul care constă din: SEQ ID NR:3, SEQ ID NR:4, SEQ ID NR:11, SEQ ID NR:12, SEQ ID 9
NR:13, SEQ ID NR:14, SEQ ID NR:15, SEQ ID NR:16, SEQ ID NR:17, SEQ ID NR:18, SEQ ID NR:19, SEQ ID NR:20, SEQ ID NR:21, SEQ ID NR:22, SEQ ID NR:23, SEQ ID NR:24,11
SEQ ID NR:25, SEQ ID NR:26, SEQ ID NR:27, SEQ ID NR:28, SEQ ID NR:29, SEQ ID NR:30, SEQ ID NR:31, SEQ ID NR:31, SEQ ID NR:33, SEQ ID NR:34, și SEQ ID NR:35.13
Pe de altă parte, invenția se referă la un acid nucleic izolat care codifică o regiune variabilă a catenei ușoare a unui anticorp cuprinzând secvența de aminoacizi a SEQ ID NR: 115 (adică, D2E7 LCVR). De preferință, acest acid nucleic cuprinde secvența nucleotidică a SEQ ID NR:36, deși specialistul în domeniu va aprecia că, datorită degenerării codului genetic, 17 și alte secvențe nucleotidice pot codifica secvența aminoacidă a SEQ ID NR:1. Acidul nucleic poate codifica numai LCVR-ul sau poate, de asemenea, codifica regiunea constantă 19 catenă ușoară, legată operațional la LCVR. într-o realizare, acest acid nucleic este un vector recombinant de expresie. 21 în altă realizare, invenția se referă la un acid nucleic izolat care codifică o regiune variabilă a catenei grea a unui anticorp cuprinzând secvența de aminoacizi a SEQ ID NR:2 23 (adică, D2E7 HCVR). De preferință, acest acid nucleic cuprinde secvența nucleotidică a SEQ ID NR:37, deși specialistul în domeniu va aprecia că, datorită degenerării codului 25 genetic, și alte secvențe nucleotidice pot codifica secvența aminoacidă a SEQ ID NR:2. Acidul nucleic poate codifica numai HCVR-ul sau poate, de asemenea, să codifice regiunea 27 constantă a catenei grea, legată operațional la HCVR. De exemplu, acidul nucleic poate cuprinde o regiune constantă lgG1 sau lgG4. într-o realizare, acest acid nucleic este un 29 vector recombinant de expresie.
De asemenea, invenția se referă la vectori recombinanți de expresie care codifică 31 atât o catenă grea a anticorpului, cât și o catenă ușoară a anticorpului. De exemplu, într-o realizare, invenția asigură un vector recombinant de expresie care codifică: 33
a) o catenă ușoară a unui anticorp având o regiune variabilă cuprinzând secvenței de aminoacizi a SEQ ID NR:1 (adică, D2E7 LCVR); și 35
b) o catenă grea a unui anticorp având o regiune variabilă cuprinzând secvența aminoacidă a SEQ ID NR:2 (adică, D2E7 HCVR). 37
De asemenea, invenția asigură celule gazdă în care s-au introdus unul sau mai mulți vectori recombinanți de expresie. De preferință, celula gazdă este o celulă gazdă de la 39 mamifer, mai preferat, celula gazdă este o celulă CHO, o celulă NSO, sau o celulă COS.
încă suplimentar, invenția asigură o metodă de sinteză a unui anticorp recombinant 41 uman, conform invenției, prin cultivarea unei celule gazdă a invenției într-un mediu de cultură adecvat, până când se sintetizează un anticorp recombinant uman conform invenției. Metoda 43 poate cuprinde în plus, izolarea anticorpului uman recombinant din mediul de cultură.
III. Selecția anticorpilor umani recombinanți 45
Anticorpii recombinanți umani, conform invenției, suplimentar față de D2E7 sau anticorpii înrudiți D2E7, descriși aici, pot fi izolați în cercetarea unei bănci de anticorpi recombi 47
RO 119831 Β1 nanți combinatoriali, de preferință, o bancă care prezintă un fag scFv, preparată folosind cADN-uri VL și VH preparate de la mARN din limfocite umane. Metodologii pentru prepararea și cercetarea de astfel de bănci sunt cunoscute în domeniu. Suplimentar, la trusele accesibile comercial pentru generarea băncilor care prezintă fag (de exemplu, Pharmacia Recombinant Phage Antibody Systemm catalog nr.27-9400-01; și kit-ul de prezentare fag Stratagene SurfZAP™, catalog nr.240612), exemple de metode și reactivi favorabili în mod deosebit pentru folosire în generarea și cercetarea băncilor care prezintă anticorp pot fi găsite în, de exemplu, Ladner și colab., US 5223409; Kang și colab. Pibșocare PCT WO 92/19619; Dower și colab., publicație PCT WO 91/17171; Winter și colab., publicație PCT WO 92/20791; Markland și colab., publicație PCT WO 92/15679; Breitling și colab., publicație PCT WO 93/01288; McCafferty și colab. publicație PCT WO 92/01047; Garrard și colab., publicație PCT WO 92/09690; Fuchs și colab. (1991) Bio/Technology9:1370-1372; Hay și colab. (1992) Hum Antibod Hybridomas 3:81-85; Huse și colab. (1989) Science 246:1275-1281; McCafferty și colab., Nature (1990) 348:552-554: Friffithd și colab. (1993) EMBO J 12:725-734: Hawkins și colab. (1992)Hum Antibod Hybridomas 3:81 -85; Huse și colab. (1989) Science 246:1275-1281: McCafferty și colab., Nature (1990) 348:552-554: Friffithd și colab. (1993) EMBO j 12:725-734; Hawjins și colab. (1992) J ,o/ b/o/246:889-896: Clackson și colab. (1991) Nature 352:624-628: Gram și colab. (1992) PNAS 89:3576-3580; Garrad și colab.(1991 Bio/Technology 9:1373-1377; Hoogenboom și colab.(1991) NucAcids Res 19:4133-4137; și Barbas și colab. (1991) PNAS 88:7978-7982.
Pentru izolarea anticorpilor umani cu afinitate crescută și o constantă a ratei de detașare redusă pentru hTNFa, s-a folosit mai întâi un anticorp murin anti-hTNFa având afinitate crescută și o rată de detașare redusă pentru hTNFa (de exemplu, MAK 195, hibridom pentru care există depozitul cu numărul ECACC 87 050801) pentru selectarea secvențelor catenei grea și ușoară umane care au activitate de legare similară față de hTNFa, folosind epitop de supraimprimare, sau selecția ghidată, metode descrise în Hoogenboom și colab., publicare PCT WO 93/06213. Băncile de anticorp folosite în această metodă sunt de preferință bănci scFv preparate și cercetate cum s-a descris în McCafferty și colab.,publicație PCT WO 92/011047, McCafferty și colab., Nature (1990) 348:552-554: și Griffiths și colab., (1993) EMBOJ 12:725-734. Băncile de anticorp scFv sunt cercetate, de preferință, folosind TNFa uman recombinant ca antigen.
O dată ce segmentele umane inițiale VL și VH selectat, sunt realizate experimente “amestec și împerechere”, în care diferite perechi ale segmentelor VL și Vh inițiale sunt cercetate pentru legare hTNFa pentru a selecta combinații pereche preferată VL/VH. Suplimentar, pentru a îmbunătăți afinitatea și/sau constanta ratei detașării pentru legare hTNFa, segmentele VL și VH ale perechi(lor) VL/VH preferate pot fi mutate randomic, de preferință în regiunea CDR3 a VH și/sau VL, într-un proces analog procesului de mutație somatică in vivo, responsabil pentru maturarea afinității anticorpilor în timpul răspunsului imun natural. Această maturare a afinității in vitrose poate realiza prin amplificarea regiunilor VH și VL folosind primeri POR complementari la CDR3 VH sau respectiv VL CDR3, primeri care au fost “fixați” cu un amestec randomic de 4 baze nucleotidice la anumite poziții, astfel încât produsele POR rezultate codifică segmente VH și VL în care mutațiilor randomice au fost introduse în regiunile CDR3 VH și/sau VL. Aceste segmente VH și VL mutate randomic pot fi recercetate pentru legare la hTNFa, și secvențele care prezintă activitate ridicată și rată de detașare scăzută pentru hTNFa pot fi selectate.
Secvențele de aminoacizi ale catenelor grea și ușoară ale anticorpului pot fi comparatein secvențele de aminoacizi ale catenei grea și ușoară ale liniei germinale. în
RO 119831 Β1 cazul unde anumite resturi ale cadrului catenelor selectate VL și/sau VH diferă de 1 configurația liniei germinate (de exemplu, ca un rezultat al mutației somatice a genelor imunoglobulinei folosite pentru a prepara banca de fa), se poate dori să se “mute înapoi” 3 resturile modificate ale cadrului ale anticorpilor selectați față de configurația liniei germinate (adică, schimbarea secvențelor aminoacide ale cadrului anticorpilor selectați, astfel încât ele 5 sunt aceleași ca secvențele aminoacide ale cadrului liniei germinale). Astfel de “mutație înapoi” (sau “aliniere germinală”) a resturilor cadrului se poate realiza prin metodele biologiei 7 moleculare standard pentru introducerea mutațiilor specifice (de exemplu, mutageneză dirijată în sit; mutageneză mediată POR, și altele). 9
După cercetarea și izolarea unui anticorp anti-hTNFa al invenției din banca prezentată de imunoglobulină recombinantă, acidul nucleic care codifică anticorpul selectat 11 poate fi recuperat din seria prezentată (de exemplu, de la genomul fagului) și subclonat în alți vectori de expresie prin tehnici ADN recombinant standard. Dacă se dorește, acidul 13 nucleic poate fi manipulat suplimentar pentru a crea alte forme anticorp ale invenției (de exemplu, legat la acid nucleic care codifică domenii suplimentare ale imunoglobulinei, cum 15 ar fi regiuni constante suplimentare). Pentru a exprima un anticorp uman recombinant izolat prin cercetarea unei bănci combinatoriale, ADN-ul care codifică anticorpul este donat într-un 17 vector recombinant de expresie și introdus în celule gazdă mamifere, cum s-a descris în detalii suplimentare în Secțiunea II de mai sus. 19
IV. Compoziții și administrare farmaceutică
Anticorpii și porțiunile anticorp ale invenției pot fi încorporate în compoziții 21 farmaceutice pentru administrare la un subiect. De obicei, compoziția farmaceutică cuprinde un anticorp sau porțiune anticorp a invenției și un purtător acceptabil farmaceutic. Așa cum 23 s-a menționat aici, “purtător acceptabil farmaceutic” include oricare și toți solvenții, medii de dispersie, acoperiri, agenți antibacterieni și antifungici, agenți izotonici și de întârziere a 25 absorpției, și altele care sunt compatibile fiziologic. Exemple de purtători acceptabili farmaceutic includ unul sau mai mulși ditnre apă, soluție salină, soluție salină tamponată 27 fosfat, dextroză, glicerol, etanol și altele, precum și combinații ale lor. în numeroase cazuri, va fi preferat să să includă agenți izotonici, de exemplu, zaharuri, polialcooli ca manitol, 29 sorbitol, sau clorură de sodiu în compoziție. Purtători acceptabili farmaceutic pot să cuprindă suplimentar cantități minore de substanțe auxiliare, cum ar fi agenți de umectare sau 31 emulgatori, conservanți sau tampon, care intensifică durata termenului de valabilitate, sau eficiența anticorpului sau porțiunii anticorp. 33
Compozițiile acestei invenții pot fi într-o diversitate de forme. Acestea includ, de exemplu, forme de dozaj lichide, semisolide și solide cum ar fi soluții lichide (de exemplu, 35 soluții injectabile sau infuzabile), dispersii sau suspensii, tablete, pilule, pulberi, lipozomi și supozitoare. Forma preferată depinde de modul intenționat de administrare și aplicare 37 terapeutică. Compoziții tipice preferate sunt sub formă de soluții injectabile sau infuzabile, cum ar fi compoziții similare celor folosite pentru imunizarea pasivă a oamenilor cu alți 39 anticorpi. Modul preferat de administrare este parenteral (de exemplu, intravenos, subcutanat, intraperitoneal, inramuscular). într-o realizare preferată, anticorpul se 41 administrează prin infuzie sau injectare intravenoasă. în altă realizare preferată, anticorpul se administrează prin injectare intramusculară sau subcutanată. 43
Compoziții terapeutice tipice trebuie să fie sterile și stabile în condițiile de fabricare și depozitare. Compoziția poate fi formulată ca o soluție, microemulsie, dispersie, lipozom, 45 sau altă structură ordonată adecvată pentru concentrații crescute ale medicamentului.
Soluțiile injectabile sterile pot fi preparate prin încorporarea compusului activ (adică, anticorp 47
RO 119831 Β1 sau porțiune anticorp) în cantitatea cerută dintr-un solvent corespunzător cu unul sau o combinație de ingrediente enumerate mai sus, după cum este necesar, urmat de sterilizare prin filtrare. în general, dispersiile sunt preparate fie prin încorporarea compusului activ întrun vehicul steril care conține un mediu de dispersie de bază și necesită alte ingrediente dintre cele enumerate mai sus. în cazul pulberilor sterile, pentru prepararea soluțiilor injectabile sterile, metodele preferate de preparare sunt uscarea sub vid și liofilizarea care dă o pulbere a ingredientului activ plus orice ingredient suplimentar dorit dintr-o soluție filtrată steril anterior a acestuia. Fluiditatea corespunzătoare a unei soluții poate fi menținută, de exemplu, prin folosirea unei acoperiri cum ar fi lecitina, prin menținerea mărimii cerute a particulei în cazul dispersiei și prin folosirea surfactanților. Absorbția prelungită a compozițiilor injectabile poate fi obținută prin includerea în compoziție a unui agent care întârzie absorpția, de exemplu, săruri monostearat și gelatină.
Anticorpii și porțiunile anticorp conform prezentei invenții pot fi administrate printr-o diversitate de metode cunoscute în domeniu, deși, pentru numeroase aplicații terapeutice, ruta/modul preferat de administrare este injectarea intravenoasă sau infuzia. Așa cum se va aprecia de către specialistul în domeniu, ruta și/sau modul de administrare vor varia depinzând de rezultatele dorite. în anumite realizări, compusul activ poate fi preparat cu un purtător care va proteja compusul împotriva eliberării rapide, cum ar fi o formulare cu eliberare controlată, incluzând împlânte, plasturi transdermali și sisteme de eliberare microîncapsulate. Pot fi folosiți polimeri biodegradabili, biocompatibili, cum ar fi acetat de etilenvinil, polianhidride, acid poliglicolic, colagen, poliortoesteri și acid polilactic. Numeroase metode pentru prepararea de asemenea formulări sunt brevetate sau cunoscute în general celor cu pregătire în domeniu. Vezi, de exemplu, Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems, J.R. Robinson ed., Marcel Dekker, Inc., New York, 1978.
în anumite realizări, un anticorp sau porțiuni anticorp conform invenției pot fi administrate oral, de exemplu, cu un diluent inert, sau un purtător comestibil asimilabil. Compusul (și alte ingrediente, dacă se dorește) poate fi închis de asemenea, într-o cochilie de gelatină dură sau moale, comprimată în tablete, sau încorporată direct în dieta subiectului. Pentru administrare terapeutică orală, compușii pot fi încorporați cu excipiente și folosiți sub formă de tablete ingerabile, tablete bucale, gelule, capsule, elixire, suspensii, siropuri, cașete și altele. Pentru a administra un compus al invenției altfel decât administrarea parenterală, poate fi necesar să se acopere compusul cu, sau să se coadministreze compusul cu un material pentru prevenirea inactivării sale.
De asemenea, în compoziție pot fi încorporați compuși activi suplimentar. în anumite realizări, un anticorp sau porțiune anticorp conform invenției este coformulat cu și/sau cooadministrat cu unul sau mai mulți agenți terapeutici suplimentari, care sunt utili pentru tratarea tulburărilor în care activitatea TNFa este dăunătoare. De exemplu, un anticorp antihTNFa sau o porțiune de anticorp conform invenției poate fi conformulat și/sau coadministrat cu unul sau mai mulți anticorpi suplimentari, care se leagă la alte ținte (de exemplu, anticorpi care leagă alte citokine, sau care se leagă la moleculele suprafeței celulare), una sau mai multe citokine, receptor TNFa solubil (vezi, de exemplu, publicația PCT WO 94/06476) și/sau unul sau mai mulți agenți chimici care inhibă producerea sau activitatea hTNFa (cum ar fi derivați ciclohexan-iliden cum s-au descris în publicația PCT WO 93/19751). înplus, unul sau mai mulți anticorpi conform invenției pot fi folosiți în combinație cu 2 sau mai mulți agenți terapeutici anteriori. Astfel de terapii combinate pot să utilizeze avantajos dozaje mai scăzute ale agenților terapeutici administrați evitând astfel toxicității posibile sau complicațiile asociate cu diverse monoterapii. -22
RO 119831 Β1
Exemple nelimitative de agenți terapeutici pentru artrită reumatoidă cu care un 1 anticorp sau porțiune anticorp conform invenției poate fi combinat include următoarele: medicamente(e) antiinflamatoare nesteroide (NSAID); medicament(e) antiinflamatoare 3 supresive ale citokinei (CSAID); CDP-561/BAY-10-3356 (anticorp umanizat anti-TNFa; Celltech/Bayer); cA2 (anticorp himeric anti-TNFa; Centocor); 75 kdTNFR-lgG (proteină de 5 fuziune75 kDTNF receptor-lgG; Immunex; vezi, de exemplu, Arthritis& Rheumatism(1994) voi. 37, S295; J.lvest.Med. (1996) voi .44:235A); 55 kdTNFR-lgG (proteină de fuziune 55 kD 7 TNF receptor-lgG; Hoffmann-LaRoche); IDEC-CE9.1/SB210396 (anticorp anti-CD4 primatizat neepuizat; IDEC/SmithKline; vezi, de exemplu, Arthritis & Rheumatism (1995) 9
Vol.38, S185); DAB 486-IL-2 și/sau DAB 389-IL-2 (proteine de fuziune IL-2; Seragen; vezi de exemplu, Arthritis & Rheumatism (1993) vol.36,1223); Anti-Tac (anti-IL-2Ra umanizate; 11 Protein Design Labs/Roche); IL-4 (citokină antiinflamatorie; DNAX/Schering); IL-10 (SCH 52000; IL-10 recombinant, citokină antiinflamatorie; DNAX/Schering); IL-4; agoniști iL-10 13 și/sau iL-4 (de exemplu, anticorpi agoniști); IL-IRA (antagonist receptor IL-1; Synergen/ Amgen); TNF-bp/s-TNFR (proteină de legare TNF solubilă; vezi de exemplu, Arthritis & 15
Rheumatism (1996) Vol.39. nr. 9 (supliment); S284; Amer, J, Physiot.-HeartandCirculatory Phasiology (1995) Voi. 268, p.37-42); R973401 (inhibitor fosfodiesterază tip IV; vezi, de 17 exemplu, Arthritis & Rheumatism (1996) Vol.39, nr.9 (supliment), S282); MK.966 (inhibitor COS-2; vezi de exemplu, Arthritis & Rheumatism (1996) vol.39, nr.9 (supliment), S81); 19 lloprost (vezi, de exemplu, Arthritis & Rheumatism (1996) Vol.39, nr.9 (supliment), S82); metotrexat; talidomidă (vezi, de exemplu, Arthritis & Rheumatism (1996) Vol.39, nr.9 21 (supliment), S282) și medicmente talidomidă legată (de exemplu, Celgen); leflunomidă (inhibitori citokină și antiinflamatori; vezi, de exemplu, Arthritis & Rheumatism (1996) vol.39, 23 nr.9 (supliment), S131; Inflammation Research (1996) Vol.45, p.103-107); acid tranexamic (inhibitor al activității plasminogen; vezi, de exemplu, Arthritis & Rheumatism (1996) voi. 39, 25 nr.9 (spliment), S284); T-614(inhibitor citokină; vezi, de exemplu, Arthritis & Rheumatism (1996) Voi. 39, nr.9 (supliment), S282); prostaglandin E1 (vezi, de exemplu, Arthritis & 27
Rheumatism (1996) Vol.39, mr.9 (supliment), S282);Tenidap (medicament nesteroid antiinflamator; vezi, de exemplu, Arthritis & Rheumatism (1996) Vol.39, mr.9 (supliment), 29 S280); Naproxan (medicament nesteroid antiinflamator; vezi, de exemplu, Neuro Report (1996) Vol.7, p. 1209-1213); Meloxicam (medicament nesteroidal antiinflamator); Ibuprofen 31 (medicament nesteroidal antiinflamator); Piroxicam (medicament nesteroidal antiinflamator); Diclofenac (medicament nesteroidal antiinflamator); Indometacin (medicament nesteroidal 33 antiinflamator); Sulfasalazină (vezi, de exemplu, Arthritis& Rheumatism (1996) Vol.39, nr.9 (supliment), S281); Azatioprină (vezi, de exemplu, Arthritis & Rheumatism (1996) Vol.39, 35 nr.9 (supliment), S281); Inhibitor ICE (inhibitor al enzimei interleukin-1 β enzimă de acoperire); inhibitor zap-70 și/sau 1ck (inhibitor al tirozin kinaza zap-70 sau 1 ck); inhibitor 37 VEGF și/sau inhibitor VEGF-R (inhibitori al factorului de creștere vascular al celulei endoteliale sau receptor factor de creștere vascular al celulei endoteliale; inhibitori ai angio- 39 genezei); medicamente corticosteroide antiinflamatorii (de exemplu, SB203580); inhibitori TNF-convertază; anticorpi anti-IL-12; interleukin-11 (vezi, de exemplu, Arthritis & Rheuma- 41 tism (1996) Vol.39, nr.9 (supliment), S296); interleukin-13 (vezi, de exemplu, Arthritis & Rheumatism (1996) Vol.39, nr.9 (supliment), S308); inhibitori interleukin-17 (vezi, de exem- 43 piu, Arthritis & Rheumatism (1996) Vol.39, nr.9 (supliment), S120); aur; penicilinamină; clorochină; hidroxiclorochină; clorambucil; ciclofosfamidă; ciclosporină; iradiere totală limfoid; 45 globulină antitimocit; anticorpi anti-CD4; toxine-CD5; peptide administrate oral și colagen; lobenzarit disodiu; Cytokine Regulating Agents (CRA-uri) HP228 și HP466 (Houghten Phar 47
RO 119831 Β1 maceuticals, Inc.); oligodeoxinucleotidă fosforotioat antisens ICAM-1 (ISIS 2302; Isis Pharmaceuticals, Inc.); receptor 1 complement solubil (TP10; T Cell Sciences, Inc.); prednison; orgotein; glicosaminoglican polisulfat; minociclină; anticorpi anti-IL2R; lipide marine și botanice (acizi grași din pește și din semințe de plante; vezi, de exemplu, DeLuca și colab. (1995) Theum.Dis.Clin.NorthAm. 21:759-777); auranofin;fenilbutazonă; acid meclofenamic; acid flufenamic; globulin intravenos imun; zileuton; acid micofenolic (RS-61443); tacrolimus (FK-506); sirolimus (rapamicin); ampiriloză (tetrafectin); cladribină (2-clorodeoxiadenozin); și azaribină.
Exemple nelimitative de agenți terapeutici pentru boala inflamatorie a intestinului cu care un anticorp, sau o porțiune anticorp conform invenției pot fi combinate, includ următoarele; budenozidă; factorul de creștere epidermal; corticosteroizi; ciclosporină, sulfasalazină; aminosalicilați; 6-mercaptopurină; azatioprină; metronidazol; inhibitori lipoxigenază; mesalamină; olsalazin; balsalazidă; antioxidanți; inhibitori tromboxan; antagoniști receptor IL-1; anticorpi monoclonali anti-IL-1 β; anticorpi monoclonali anti-IL-6; factori de creștere; inhibitori elastază; compuși piridinil-imidazol; CDP-571/BAY-10-3356 (anticorp anti-TNFa umanizat; Celltech/Bayer); cA2 (anticorp himeric anti-TNFa; Centocor); 75 kdTNFR-lgG (proteină de fuziune TNF receptor-lgG 75 kD; Immunex; vezi, de exemplu, Arthritis & Rheumatism (1994) Vol.37, (supliment), S295); J.lnvest: Med (1996) Vol.44, 235A); 55 kdTNFR-lgG (proteină de fuziune TNF receptor-lgG 55 kD; Hoffmann-LaRpcje); interleukin10 (SCH 52000; Schering Plough); IL-4; agoniști IL-10 și/sau IL-4 (de exemplu, anticorpi agonist); interleukin-11; promedicamente glucoronid- sau dextran-conjugate ale prednisolin, dexametrasonă sau budezonidă; oligodeoxinucleotide fosforotioat ICAM-1 antisens (ISIS 2302; Isis Pharmaceuticals, Inc.); receptor 1 complement solubil (TP10; T Cel Sciences, Inc.); mesalazină cu eliberare scăzută; metotraxat; antagoniști ai factorului de activare a plachetului (PAF); ciprofloxacin; și lignocaină.
Exemple nelimitative de agenți terapeutici pentru scleroză multiplă, cu care un anticorp sau porțiune anticorp a invenției poate fi combinat include următoarele: corticosteroizi, prednisolin; metilprednisolon; azatioprin; ciclofosfamidă; ciclosporină; metotrexat; 4-aminopiridină; tizanidină; interferon-pia (Avonex™; Biogen); interferon-βΐ b (Betaseron™; Chiron/ Berlex); Copolimer 1 (Cop-1; Copaxone™; Teva Pharmaceutical Industries, Inc); oxigen hiperbatic; imunoglobulină intravenoasă; clabribin; CDP-571/BAY-10-3356 (anticorp antiTNFa umanizate; Celltech/Bayer); cA2 (anticorp anti-TNFa himeric; Centocor); 75 kdTNFRlgG (proteină de fuziune TNF receptor-lgG 75 kD; Immunex; vezi, de exemplu, Arthritis & Rheumatism (1994) Vol.37, S295); J.Invest.Med, (1996) Vol.44, 235A); 55 kdTNFR-lgG (proteină de fuziune TNF receptor-lgG 55 kD; Hoffmann-LaRoche); IL-10; IL-4; și agoniști IL-10 și/sau IL-4 (de exemplu, anticorpi agonist).
Exemple nelimitative de agenți terapeutici pentru sepsie cu care un anticorp, sau porțiune anticorp conform invenției poate fi combinat include următoarele: soluții saline hipertonice; antibiotice; gamma globulină intravenoasă; hemofiltrare continuă: carbapeneme (de exemplu, meropenem); antagoniști de citokine precum TNFa, IL-1 β, IL-6 și/sau IL-8; CDP-571/CAY-10-3356 (anticorp anti-TNFa umanizat; Celltech/Bayer); cA2 (anticorp antiTNFa himeric; Centocor); 75 kdTNFR-lgG (proteină de fuziune TNF receptor-lgG75 kD; Immunex; vezi, de exemplu, Arthritis & Rheumatism (1994) Vol.37, S295); J.Invest.Med. (1996) Vol.44, 235a); 55 kdTNFR-lgG (proteină de fuziune TNF receptor-lgG 55 kD; Hoffmann-LaRoche); agenți de reglare citokină (CRA-uri) HO228 și HP466 (Houghten Pharmaceuticals, Inc.); SK&F 107647 (peptidă moleculară ușoară; SmithKline Beecham); guanilhidrazonă CNI-1493 tetravalentă (Picower Institute); factorul inhibitor al căii țesutului
RO 119831 Β1 (TFPI; Chiron) PHP (hemoglobină modificată chimic; APEX Bioscience); chlaori de fier și 1 chelați, care includ complex acid dietilentriamin pentaacetic-fier (III) (DTPA iron (III); Molichem Medicines); lizofilină (metilxantină sintetică cu moleculă mică; Cell Therapeutics, 3 Inc.); PGG-Glucan (β1,3glucan solubil apos; Alpha-Beta Technology); apolipoproteină A-1 reconstituită cu lipide; acizi chiral hidroxamici (anticacterieni sintetici care inhibă biosinteza 5 lipidei A); anticorpi anti-endotoxină; E5531 (antagonist sintetic lipidă A; Eisai America, Inc.); rBPI21 (fragment recombinant N-terminal al proteinei umane de creștere bactericid/ 7 permeabilitate); și peptide sintetice antiendotoxină (SAEP; biosYnth Research Laboratories);
Exemple nelimitative de agenți terapeutici pentru sindromul bolii respiratorii la adult 9 (ARDS) cu care un anticorp, sau o porțiune anticorp conform invenției poate fi combinată includ următoarele: anticorpi anti-IL-8; terapie de înlocuire agent de suprafață; CDP- 11 571/BAY-10-3356 (anticorp anti-TNFa umanizat; Celltech/Bayer); cA2 (anticorp anti-TNFa himeric; Centocor); 75 kdTNFR-lgG (proteină de fuziune TNF receptor-lgG 75 kD; Immunex; 13 vezi, de exemplu, Arthritis & Rheumatism (1994) Vol.37, S295); J. Invest.Med. (1996) Vol.44,235A); și 55kdTNFR-lgG (proteină de fuziune TNF receptor-lgG 55 kD; Hoffmann- 15 LaRoche).
Utilizarea anticorpilor, sau a porțiunilor anticorp conform invenției în combinație cu 17 alți agenți terapeutici s-a discutat suplimentar în subsecțiunea IV.
Compozițiile farmaceutice ale invenției pot include o “cantitate eficientă terapeutic” 19 sau o “cantitate eficientă profilactic” dintr-un anticorp sau porțiune anticorp conform invenției. O “cantitate eficientă terapeutic” se referă la o cantitate eficientă, la dozaje și pentru 21 perioade de timp necesare, pentru a obține rezultatul terapeutic dorit. O cantitate eficientă terapeutic a anticorpului sau porțiunii de anticorp poate varia conform factorilor cum ar fi 23 starea de boală, vârstă, sex, și greutatea individului, și capacitatea anticorpului sau porțiunii anticorp de a provoca răspunsul dorit la individ. De asemenea, o cantitate eficientă tera- 25 peutic este una în care orice efecte toxice sau dăunătoare ale anticorpului sau porțiunii anticorp sunt depășite și sunt terapeutic benefice. O “cantitate eficientă profilactic” se referă la 27 o cantitate eficientă, la dozaje și pentru perioade de timp necesare, pentru a atinge rezultatul profilactic dorit. De obicei, deoarece o doză profilactică se folosește la subiecți înainte sau 29 la un stadiu mai timpuriu al bolii, cantitatea eficientă terapeutic va fi mai mică decât cantitatea eficientă terapeutic. 31
Regimurile de dozaj pot fi ajustate pentru a asigura răspunsul optim dorit (de exemplu, un răspuns terapeutic sau profilactic). De exemplu, poate fi administrat un singur bol, 33 pot fi administrate câteva doze divizate în timp sau doza poate fi redusă sau crescută proporțional după cum este indicat de exigențele situației terapeutice. Este avantajos în mod 35 special să se formuleze compoziții parenterale sub formă de doze unitate pentru ușurința administrării și uniformitatea dozajului. Forma de doză unitate așa cum s-a folosit aici se 37 referă la unități fizice concrete potrivite ca dozaje unitare pentru tratarea subiecților mamifer; fiecare unitate conține o cantitate predeterminată a compusului activ calculată pentru a pro- 39 duce efectul terapeutic dorit în asociere cu purtătorul farmaceutic necesar. Descrierea pentru formele unitate dozată ale invenției este dictată de și direct dependent de (a) caracteristicile 41 unice ale compusului activ și de efectul terapeutic și profilactic particular, care trebuie atins, și (b) limitările inerente în domeniul compoundării, cum ar fi un compus activ pentru 43 tratamentul sensibilității la indivizi.
Un domeniu exemplificator, nelimitativ pentru o cantitate eficientă terapeutic și 45 profilactic a unui anticorp sau porțiune de anticorp conform invenției este 0,1-20 mg/kg, mai preferat 1-10 mg/kg. Este de remarcat că valorile dozajului pot varia cu tipul și severitatea 47
RO 119831 Β1 condiției care trebuie ameliorată. Este de înțeles în plus că, pentru orice subiect particular, regimurile specifice de dozaj vor fi ajustate în timp conform nevoii individuale și aprecierii profesionale a persoanei care administrează sau supervizează administrarea compozițiilor, și că domeniile de dozaj menționate aici sunt numai exemplificatoare și nu intenționează să limiteze întinderea sau practica compoziției revendicate.
IV. Utilizări ale anticorpilor conform în invenției
Dată fiind capacitatea lor de a se lega la hTNFa, sau porțiuni ale acestora, ale invenției se pot folosi pentru a detecta hTNFa (de exemplu, într-o probă biologică cum ar fi ser sau plasmă), folosind un imunotest convențional, cum ar fi analizele enzimă legată la imunosorbent (ELISA), un radioimunotest (RIA) sau imunohistochimia țesutului. Invenția asigură o metodă pentru detectarea hTNFa într-o probă biologică cuprinzând contactarea unei probe biologice cu un anticorp, sau porțiune de anticorp conform invenției și detectarea fie a anticorpului (sau porțiunii anticorp) legat la hTNFa sau anticorp nelegat (sau porțiune de anticorp), prin aceasta detectând hTNFa într-o probă biologică. Anticorpul este direct sau indirect marcat cu o substanță detectabilă pentru a facilita detectarea anticorpului legat sau nelegat. Substanțe detectabile adecvate includ diverse enzime, grupări prostetice, materiale fluorescente, materiale luminiscente și materiale radioactive. Exemple de enzime corespunzătoare includ peroxidază de la hrean, fosfatază alcalină, β-galactozidază, sau acetilcolinesterază; exemple de complexe de grupări prostetice corespunzătoare includ streptavidină/biotină și avidină/biotină; exemple de materiale fluorescente corespunzătoare includ umbelliferonă, fluoresceină, izotiocianat de fluoresceină, rodamină, diclorotriazinilamină, fluoresceină, clorură de dansil sau ficoeritrina; un exemplu de material luminiscent include luminolul; și exemple de material radioactiv corespunzător include 125l, 131l, 35S sau 3H.
Alternativ la marcarea anticorpului, hTNFa poate fi cercetat în fluide biologice printrun imunotest de competiție folosind standarde rhTNFa marcate cu o substanță detectabilă și un anticorp anti-hTNFa nemarcat. în această analiză, proba biologică, standardele rhTNFa marcate și anticorpul anti-hTNFa sunt combinate și se determină cantitatea de standard rhTNFa legată la anticorpul nemarcat. Cantitatea de hTNFa dintr-o probă biologică este invers proporțională cantității de standard rhTNFa marcat legată la anticorp antihTNFa.
Anticorpul D2E7, descris în invenție, se poate folosi, de asemenea, pentru detectarea TNFa de la alte specii decât oameni, în special TNFa de la primate (de exemplu, cimpanzeu, babuin, sanguin, cynomolgus și rhesus), porc și șoarece, deoarece D2E7 se poate lega la fiecare dintre aceste TNFa (cum s-a discutat suplimentar în exemplul 4, subsecțiunea E).
Anticorpii și porțiunile anticorp descrise în invenție sunt capabile să neutralizeze activitatea hINFa atât in vitro cât și in vivo (vezi exemplul 4). Mai mult, cel puțin unii dintre anticorpii conform în invenție, cum ar fi D2E7, pot neutraliza activitatea TNFa de la alte specii. Astfel, anticorpii, și porțiunile anticorp conform invenției pot fi folosite pentru inhibarea activității TNFa, de exemplu într-o cultură de celule care conține hTNFa, la subiecți umani sau alți subiecți mamiferi care au TNFa cu care anticorpul conform invenției reacționează încrucișat (de exemplu, cimpanzeu, babuin, sanguin, cynomolgus și rhesus, porc sau șoarece). într-o realizare a invenției, se prezintă o metodă pentru inhibarea activității TNFa, cuprinzând contactarea TNFa cu un anticorp sau porțiune anticorp conform invenției, astfel încât activitatea TNFa este inhibată. De preferință TNFa este TNFa uman. De exemplu, într-o cultură de celule care conține, sau este suspectată că ar conține hTNFa, se poate adăuga un anticorp sau la o porțiune anticorp conform invenției, la mediul de cultură, pentru a inhiba activitatea a hTNFa din cultură.
RO 119831 Β1 într-o altă realizare, invenția se referă la o metodă pentru inhibarea activității TNFa 1 la un subiect care suferă de o tulburare în care activitatea TNFa este dăunătoare. TNFa a fost implicat în patofiziologia unei game largi de tulburări (vezi de exemplu, Moeller, A., și 3 colab. (1990) Citokine 2:162-169; US 5231024 pentru Moeller și colab.; publicația de brevet european 260610 de Moeller, A.). Invenția asigură metode pentru activitatea TNFa la un 5 subiect care suferă de o astfel de tulburare, metodă care cuprinde administrarea la subiect a unui anticorp sau porțiune anticorp conform invenției, astfel că activitatea TNFa din subiect 7 este inhibată. De preferință, TNFa este uman și subiectul este un subiect uman. Alternativ, subiectul poate fi un mamifer care exprimă un TNFa cu care un anticorp conform invenției 9 reacționează încrucișat. în plus, subiectul poate fi un mamifer în care s-a introdus hTNFa (de exemplu, prin administrarea hTNFa sau prin expresia unei transgene hTNFa). Un 11 anticorp conform invenției poate fi administrat la un subiect uman pentru scopuri terapeutice (discutate suplimentar mai jos). Mai mult, un anticorp conform invenției poate fi administrat 13 la un mamifer care nu este om care exprimă un TNFa cu care anticorpul reacționează încrucișat (de exemplu, o primată, porc sau șoarece) pentru scopuri veterinare sau ca un 15 model animal al bolii umane. Cu privire la cele din urmă, astfel de modele animale pot fi utile pentru evaluarea eficacității terapeutice a anticorpilor conform invenției (de exemplu, prin 17 testarea dozajelor și durateloe de timp pentru administrare).
Așa cum s-a folosit aici, termenul “o tulburare în care activitatea TNFa este 19 dăunătoare” intenționează să includă boli și alte tulburări în care prezența TNFa într-un subiect care suferă de tulburare s-a dovedit a fi sau este suspectată ca fiind responsabilă 21 pentru patofiziologia tulburării sau un factor care contribuie la o înrăutățire a tulburării. în conformitate cu cele menționate, o tulburare în care activitatea TNFa este dăunătoare este 23 o tulburare în care inhibarea activității TNFa este așteptată să amelioreze simptomele și progresul tulburării. Asemenea tulburări pot fi evidențiate, de exemplu, printr-o creștere în 25 concentrația de TNFa într-un fluid biologic al subiectului care suferă de tulburare (de exemplu, o creștere în concentrația de TNFa în ser, plasmă, fluid sinovial etc. al subiectului), 27 care se poate detecta de exemplu, folosind un anticorp anti-TNFa cum s-a descris mai sus.
Există numeroase exemple de tulburări ăn care activitatea TNFa este dăunătoare. Utilizarea 29 anticorpilor sau porțiunilor de anticorp ale invenției în tratamentul tulburărilor specifice este discutat suplimentar mai jos: 31
A. Sepsie
Factorul necrozei tumorii are un rol stabilit în patofiziologia sepsiei, cu efecte 33 biologice care includ hipotensiune, supresie miocardică, sindrom de scurgere vasculară, necroza organelor, stimularea eliberării mediatorilor toxici secundari și activarea cascadei 35 coagulării (vezi, de exemplu, Moeller, a., și colab. (1990) Cytokine 2:162-169; US 5231024 și colab.; publicația de brevet european 260610 B1 de Moeller, A.; Tracey, K.J.- și Cerami, 37 A. 1994) Annu. Rev. Med. 45:491-503; Russel, D și Thompson, R.C. (1993) Curr. Opin. Biotech. 4:714-721). în conformitate cu acestea, anticorpii umani și porțiunile de anticorp, 39 conform invenției se pot folosi pentru tratarea sepsiei în oricare dintre manifestările sale clinice, incluzând șoc septic, șoc endotoxic, sepsie gram negativă și sindromul șocului toxic. 41 în plus, pentru tratarea sepsiei, un anticorp anti-hTNFa, o porțiune de anticorp, conform invenției, se poate coadministra cu unul sau mai mulți agenți terapeutici 43 suplimentari, care pot ameliora suplimentar sepsia, cum ar fi un (inhibitor interleukină-1), precum cei descriși în publicațiile POT WO 92/16221 și WO 92/17583), citokina interleukină- 45 6 (vezi, de exemplu, publicația PCT WO 93/11793) sau un antagonist al factorului de activare plachetară (vezi, de exemplu, publicația cererii de brevet european EP 374510). Alte 47
RO 119831 Β1 terapii combinate pentru tratamentul sepsiei sunt discutate suplimentar în subsecțiunea III.
Suplimentar, într-o realizare preferată, un anticorp anti-hTNFa sau porțiune de anticorp a invenției se administrează la un subiect uman într-un subgrup de pacienți cu sepsie care au o concentrație în ser sau plasmă de IL-6 de peste 500 pg/ml, și mai preferat 1000 pg/ml, la momentul tratamentului (vezi, publicația PCT WO 95/20978 de Daum, L., și colab.).
B. Boli autoimune
Factorul necrozei tumorii a fost implicat ca jucând un rol în patofiziologia unei diversități de boli autoimune. De exemplu, TNFa a fost implicat în activarea inflamării țesutului care produce distrugerea articulației în artrita reumatoidă (vezi, de exemplu, Moeller, A. și colab., (1990) Cytoline 2:162-169; US 5231024 de Moeller și colab.: publicația brevetului european 260610 B1 de Moeller, A.; Tracey și Cerami, supra; Arend, W.O. și Dayer, J-M. (1995) Arth.RHeum, 38:151 -160; Fava, R.A., și colab.al. (1993) Clin. Exp. Immunol. 94:261 266). De asemenea, TNFa a fost implicat în promovarea morții celulelor insulei și în medierea diabetului rezistent la insulină (vezi, de exemplu, Tracey și Cerami, supra; publicație PCT WO 94/08609). De asemenea, TNFa a fost implicat în medierea citotoxicității față de oligodendrocite și inducerea plăcii inflamatorii în scleroza multiplă (vezi, de exemplu, Tracey și Cerami, supra). Anticorpi himerici și umanizați murin anti-hTNFa au fost supuși testării clinice pentru tratamentul artritei reumatoide (vezi, de exemplu, Elliott, M.J., și colab. (1994) Lance/344:1105-1110; Rankin, E.C., și colab. (1995) Br. J. Rheumatol.34:334-342).
Anticorpi umani și porțiuni de anticorp conform invenției pot fi folosite pentru tratarea bolilor autoimune, în special a celor asociate cu inflamație, incluzând artrita reumatoidă, spondilita reumatoidă, osteoartrita și artrita gutoasă, alergia, scleroza multiplă, diabetul autoimun, uveita autoimună și sindromul nefrotic. De obicei, anticorpul sau porțiunea de anticorp se administrează sistemic, deși pentru anumite tulburări, administrarea locală a anticorpului sau porțiunii de anticorp la un sit al inflamării poate fi benefică (administrare locală în articulații în artrita reumatoidă sau aplicare topică la ulcere diabetice, singur sau în combinație cu un derivat ciclohexan-iliden, cum s-a descris în publicația PCT WO 93/19751). Un anticorp, sau porțiune de anticorp conform invenției se poate administra cu unul sau mai mulți agenți terapeutici suplimentari, utili în tratamentul autoimun, cum s-a discutat suplimentar în subsecțiunea III.
C. Boli infecțioase
Factorul necrozei tumorale a fost implicat în medierea efectelor biologice observate într-o diversitate de boli infecțioase. De exemplu, TNFa a fost implicat în medierea inflamării creierului și trombozei capilare și infarctului în malarie. De asemenea, hTNFa a fost implicat în medierea inflamării creierului, inducerea distrugerii barierei sânge creier, declanșarea sindromului de șoc septic și activarea infarctului venos în meningită. De asemenea, TNFa a fost implicat în inducerea cașexiei, stimulării proliferării virale și medierea lezării sistemului nervos central în sindromul deficienței imune dobândite (SIDA). Astfel, anticorpii și porțiunile anticorp conform invenției se pot folosi în tratamentul bolilor infecțioase, incluzând meningita bacteriană (de exemplu, publicația de brevet european EP 585705), malaria cerebrală, SIDA și complexul legat de SIDA (ARC) (vezi, de exemplu, publicația cererii de brevet european EP 230574), precum și infecția citomegalovirus secundară transplantării (vezi, de exemplu, Fietze, E., și colab. (1994) Transplantation 58:675-680). Anticorpii și porțiunile anticorp conform invenției se pot folosi pentru a ameliora simptomele asociate cu boli infecțioase, incluzând febră și mialgie, datorită infecției (ca influenza), și cașexia secundară infecției (de exemplu, secundară la SIDA sau ARC). —-----28
RO 119831 Β1
D. Transplantare 1
Factorul necrozei tumorii a fost implicat ca un mediator cheie al respingerii allogrefei și al bolii gazdei față de grefă (GVHD) și în medierea unei reacții adverse care s-a observat 3 când anticorpul OKT3 de șobolan, îndreptat împotriva complexului celulă T receptor CD3, se folosește pentru a inhiba respingerea transplanturilor renale (vezi, de exemplu, Eason, 5 J.D., și colab. (1995) Transplantarea 59:300-305; Suthanthiran, M. și Strom, T.B. (1994) New Engl. J.Med. 331:365-375). în conformitate, anticorpii și porțiunile anticorp ale invenției 7 se pot folosi pentru inhibarea respingerii transplantului, inclusiv respingerile allogrefelor și xenogrefelor și pentru inhibarea GVHD. Deși anticorpul sau porțiunea anticorp poate fi 9 folosită singură, de preferat se folosește în combinație cu unul sau mai mulți alți agenți care inhibă răspunsul imun împotriva allogrefei sau inhibă GVHD. De exemplu, într-o realizare, 11 un anticorp sau porțiune anticorp a invenției se folosește în combinație cu OKT3 pentru a inhiba reacțiile induse OKT3. în altă realizare, un anticorp sau porțiune anticorp a invenției 13 se folosește în combinație cu unul sau mai mulți anticorpi dirijați la alte ținte implicate în reglarea răspuinsurilor imune, cum ar fi moleculele suprafeței celulei CD25, (receptorul-a 15 interleukină-2), CD11a(LFA-1), CD%#(ICAM-1), CD4, CD45, CD28/CTLA4, CD80 (B7-I) și/ sau CD86(B7-2). într-o altă realizare a invenției, un anticorp sau porțiune anticorp descrisă 17 în invenție se folosește în combinație cu unul sau mai mulți agenți imunosupresivi generali, cum ar fi ciclosporina A sa FK506. 19
E. Malignitate
Factorul necrozei tumorii a fost implicat în inducerea cașexiei, stimularea creșterii 21 tumorii, intensificarea potențialului metastatic și medierea citotoxicității în malignități. în conformitate, anticorpii și porțiuni anticorp descriseîn invenție se pot folosi în tratamentul 23 malignităților, pentru inhibarea creșterii tumorii sau metastazelor și/sau pentru ameliorarea cașexiei secundare malignității. Anticorpul sau porțiunea anticorp se poate administra 25 sistemic sau local, pe locul tumorii.
F. Tulburări pulmonare 27
Factorul necrozei tumorii a fost implicat în patofiziologia sindromului insuficienței respiratorii la adult (ARDS), incluzând stimularea activării leucocită-endotelială, dirijând citotoxi- 29 citatea spre pneumocite și inducând sindromul scurgerii vasculare. Astfel, anticorpii și porțiunile anticorp ale invenției pot fi folosite pentru a trata diverse tulburări pulmonare, 31 incluzând sindromul insuficienței respiratorii la adult (vezi, de exemplu, publicația PCT WO 91/04054), șoc pulmonar, boală inflamatorie pulmonară, sarcoidoză pulmonară, fibroză 33 pulmonară și silicoză. Anticorpul sau porțiunea anticorp poate fi administrată sistemic sau local la suprafața plămânului, de exemplu, ca un aerosol. Un anticorp sau porțiune anticorp 35 conform invenției se poate administra, de asemenea, cu unul sau mai mulți agenți terapeutici suplimentari, utili în tratamentul tulburărilor pulmonare, cum s-a discutat suplimentar în 37 subsectiunea III.
I
G. Tulburări intestinale 39
Factorul necrozei tumorale a fost implicat în patofiziologia tulburărilor inflamatorii ale intestinului (vezi, de exemplu Tracy, K.J., și colab. (1986) Science 234:470-474: Sun, X-M., 41 și colab. (1988) J.CIin.Invest. 81:1328-1331; MacDonald, T. T., și colab., (1990) Clin. Exp.
Immunol. 81.:301-305). Anticorpi himerici murini anti-hTNFa au fost supuși testării clinice 43 pentru tratamentul bolii lui Crohn (van Dullemen, H.E., și colab. (1995) Gastroenterology
109:129-135). Anticorpi umani și porțiuni anticorp descrise în invenție se pot folosi de 45 asemenea, pentru tratarea tulburărilor intestinale, cum ar fi boala idiopatică inflamatorie a intestinului, care include 2 sindromîiri, boala lui Crohn și colita ulcerativă. Un anticorp sau 47
RO 119831 Β1 porțiune anticorp descrisă în invenție poate fi administrată de asemenea cu unul sau mai mulți agenți terapeutici suplimentari, utili în tratamentul tulburărilor intestinale, cum s-a discutat în subsecțiunea III.
H. Tulburări cardiace
Anticorpii și porțiunile anticorp conform invenției pot fi folosite, de asemenea, pentru tratarea diverselor tulburări cardiace, incluzuând ischemia inimii (vezi, de exemplu, publicația cererii de brevet european EP 453898) și insuficiența inimii (slăbirea mușchiului inimii) (vezi, de exemplu, publicația PCT WO 94/20139).
/. Altele
Anticorpii și porțiunile de legare la anticorp conform invenției se pot folosi, de asemenea, pentru tratarea altor diverse tulburări în care activitatea TNFa este dăunătoare. Exemple de alte boli și tublurări în care a fost implicată activitatea TNFa în patofiziologie și care, astfel, pot fi tratate folosind un anticorp sau porțiune anticorp conform invenției includ tulburări inflamatorii ale osului și resorbției osoase (vezi, de exemplu, Bertolini, D.R., și colab. (1986) Nature 319:516-518; Konig, A., și colab, (1988) J.Bone Miner.Res. 3:621 -627Ș Lerner, U.H., și Ohlin, A. (1993) J.Bone Miner.Res. 8:147-155; și Shankar, G. și Stern, P.H. (1993) Bone 14:71-876), hepatite, incluzând hepatite alcoolice (vezi, de exemplu, McClain,C.J. și Cohen.D.A. (1989) Hepatology 9:349-351; Felver, M.E. și colab. (1990) Alcohol. Clin. Exp. Res. 14:255-259: și Hansen, J., și colab. (1994) Hepatology20:461 -474) hepatite virale (Sheron.N., și colab. (1991) J.Hepatol. 12:241 -245; și Hussain, M.J., și colab. (1994) J.CIin. Parhol. 47:1112-1115 (și hepatite explozive; tulburări de coagulare (vezi, de exemplu, van der Poli, T., și colab. (1990) N.Engl. J. Med. 322:1622-1627: și van der Poll.T., și colab. (1991) Prog. Clin. Biol. Res. 367:55-60). arsuri (vezi, de exemplu, Giroir, B.P., și colab. (1994) A. J. Physiol. 267:1-1118-124: și Liu, X.S., și colab. (1994) Burns 20:40-44), leziune de reperfuzare (vezi, de exemplu, Scales, W.E., și colab. (1994) Am. J. Physiol. 267:G1122-1127: Serrick, C., și colab. (1994) Transplantation 58:1158-1162; și Yao, Y.M., și colab. (1995) Resuscitation 29:157-168), formarea cheloidului (vezi, de exemplu, McCauley, R.L., și colab. (1992) J.CIin.lmmunol. 12.300-308), formarea cicatricei țesutului; febră; tulburare periodontală; obezitate și toxicitate de iradiere.
Această invenție este ilustrată suplimentar prin exemplele care urmează, ce nu vor fi interpretate ca limitative. Conținuturile tuturor referințelor, brevetelor și cererilor de brevet publicate citate în această cerere sunt încorporate aici ca referințe.
Exemplul 1. Analiza cineticii legării anticorpilor umani la hTNFa
Interacțiunile de legare în timp real dintre ligand (TNFa uman recombinant biotinilat (rhTNFa) imobilizat pe o matrice biosenzor) și analit (anticorpii în soluție) s-au măsurat prin rezonanța suprafeței plasmonului (SPR) folosind sistemul BIAcore (Pharmacia Biosensor, Piscataway, NJ). Sistemul utilizează proprietățile optice ale SPR pentru a detecta alterări în concentrațiile proteinei într-o matrice dextran biosenzor. Proteinele sunt legate covalent la matricea dextran la concentrațlii cunoscute. Anticorpii sunt injectați în matrice dextran și între anticorpii injectați care se leagă în mod specific și ligandul imobilizat rezultă o creștere a concentrației proteinei din matrice, și schimbarea rezultă în semnalul SPR. Aceste schimbări în semnalul SPR sunt înregistrate ca unități de rezonanță (RU) și sunt afișate față de timp de-a lungul axei y ale unei senzograme.
Pentru a facilita imobilizarea rhTNFa pe o matrice biosenzor, streptavidina este legată covalent prin intermediul grupărilor amină libere la matricea dextran activând mai întâi grupările carboxil pe matrice cu 100 mM N-hidroxisuccinimidă (NHS) și 400 mM clorhidrat de N-etil-N’-(3-dietilaminopropil)-carbodiimidă (EDC). în continuare, streptavidina se injec
RO 119831 Β1 tează prin matricea activată. Se injectează 35 al streptavidină (25 pg/ml) diluată în acetat 1 de sodiu, pH 4,5 în biosenzorul activat și aminele libere de pe proteină sunt legate direct la grupările carboxil activate. Esterii EDC ai matricei nereacționați sunt dezactivați printr-o 3 injecție cu 1M etanolamină. Fragmente biosenzor cuplate la streptavidină sunt, de asemenea, accesibile comercial (Pharmacia BR-1000-16, Pharmacia biosenzor, Piscataway, NJ). 5 S-a preparat rhTNFa biotinilat dizolvând mai întâi 50 mg biotină (esterul acidului Dbiotinil-c-aminocaproic N-hidroxisuccinimidă; Boehringer Mannheim Cat. No. 1008 960) în 7 500 pl dimetilsulfoxid pentru a obține o soluție 10 mg/ml. S-au adăugat 10 μΙ biotină per ml rhTNFa (la 2,65 mg(ml) pentru un raport molar 2:1 biotină față de rhTNFa. Reacția s-a 9 amestecat cu grijă și s-a incubat 2 h în întuneric la temperatura camerei. S-a echilibrat o coloană PD-10, Sephadex G-25M (Pharmacia Catolog Nr. 17-0851-01) cu 25 ml PBS rece 11 și s-a încărcat cu 2 ml rhTNFa-biotină per coloană. Coloana s-a eluat cu 10x1 ml PBS rece. Fracțiunile s-au colectat și s-au citit la OD280 (1,0 OD=1,25 mg/ml). Fracțiunile corespunză- 13 toare s-au strâns și s-au depozitat la -80’C până la utilizare. De asemenea, rhTNFa biotinilat este accesibil comercial (R&D Systems Catalog Nr.FTAOO, Minneapolis, MN). 15
Pentru a fi imobilizat rhTNFa biotinilat pe matrice prin intermediul streptavidinei s-a diluat în tampon de migrare PBS (Gibco Cat-Nr. 14190-144, Gibco BRL, Grand Island, NY) 17 suplimentat cu 0,05% surfactant (BIAcore) P20 (Pharmacia Br-1000-54, Pharmacia Biosensor, Piscataway, NJ). Pentru a determina capacitatea anticorpilor specifici rhTNFa de a lega 19 rhTNFa imobilizat, s-a dirijat un test de legare după cum urmează: s-au injectat alicote de rhTNFa biotinilat (25 nM; alicote 10 μΙ) prin matricea dextran cuplată streptavidină la o rată 21 de curgere de 5 μΙ/min. înaintea injectării proteinei și imediat după s-a trecut un curent de tampon PBS prin fiecare celulă de curgere. Diferența netă în semnal între linia de bară și 23 aproximativ 30 s de după completarea injectării rhTNFa biotinilat s-a considerat a reprezenta valoarea legării (aproximativ 500 RU). S-a măsurat legarea directă anticorp specific rhTNFa 25 la rhTNFa imobilizat biotinilat. S-au diluat anticorpi (20 pg/ml) în tampon de migrare PBS și s-au injectat alicote de 25 μΙ în matricele de proteină imobilizată la o rată de curgere de 5 27 μΙ/minut. înaintea injectării anticorpului și imediat după ce s-a trecut un flux de PBS prin fiecare celulă de curgere. Diferența netă în semnalul liniei de bază și semnalul după comple- 29 tarea injectării anticorp s-a considerat a reprezenta valoarea de legare a probei particulare.
S-au regenerat matricile biosenzor folosind 100 mM HCI înaintea injectării probei următoare. 31 Pentru determinarea ratei de detașare (K^) pe rata de atașare (K^) s-a folosit software-ul de evaluare cinetică BIAcore (versiunea 2.1) a constantelor ratei de asociere (Ka) și ratei de 33 disociere (KJ.
Rezultatele reprezentative ale legării D2E7 (anticorp lgG4 de lungime întreagă) la 35 rhTNFa biotinilat, cum s-a comparat la mAb de șoarece MAK 195 (fragment F(ab’)2) sunt prezentate mai jos în tabelul 1). 37
Tabelul 1
Legarea D2E7 lgG4 sau MAK 195 la rhTNFa biotinilat 41
Anticorp [Ab],nM rhTNFa legat, RU Ab, legat, RU rhTNFa/Ab ^otf’ sec (Avg)
D2E7 267 373 1215 1,14 8,45x10’5
133 420 1569 1,30 5,42x10'5
RO 119831 Β1 (continuare) Tabelul 1
Anticorp [Ab],nM rhTNFa legat, RU Ab, legat, RU rhTNFa/Ab KoW, sec’1 (Avg)
67 434 1633 1,31 4,75x105
33 4,46x10’5
17 3,47x10'5
8 2,63x10’5
4 2,17x10'5
2 3,68x10’5
(4,38x10'5)
MAK 195 400 375 881 1,20 5,38x10’5
200 400 1080 1,38 4,54x10'5
100 419 1141 1,39 3,54x10‘5
50 427 1106 1,32 3,67x105
25 446 957 1,09 4,41x10‘5
13 464 708 0,78 3,66x10'5
6 474 433 0,47 7,37x10'5
3 451 231 0,26 6,95x10’5
(4,94x105)
în a doua serie de experimente dintre un IgG 1 formă de lungime întreagă a D2E7 și rhTNFa s-a analizat cantitativ folosind tehnologia BIAcore și s-au derivat constantele ratei cinetice și s-au rezumat mai jos în tabelele 2, 3 și 4.
Tabelul 2
Constantele ratei de disociere aparentă a interacțiunii dintre D2E7 și rhTNF biotinilat
Experiment Kd(s’1)
1 9,58x105
2 9,26x10'5
3 7,60x10’5
Medie 8,81 ±10‘5
RO 119831 Β1
Tabelul 3
Constantele ratei de asociere aparentă dintre D2E7 și rhTNFa biotinilat
Experiment Ka(M’,s·1)
1 1,33x105
2 1,05x105
3 3,36x105
Medie 1,91 ±26x105
Tabelul 4
Rata cinetică aparentă și constantele afinității D2E7
Experiment Ka(M1,s’) Ms1) Κ,(Μ)
1 1,33x105 9,58x105 7,20x10'10
2 1,05x105 9,26x10'5 8,82x10’10
3 3,36x105 7,60x10‘5 2,26x10‘1°
Medie 1,91±1,26x105 8,81 ±1,06x105 6,09±3,42x10'1°
Constantele ratei de disociere și asociere s-au calculat prin analiza regiunilor 17 disocierii și asocierii a senzogramelor prin software-ul analizei BIA. S-au asumat cineticile reacției chimice convenționale pentru interacțiunea dintre D2E7 și molecula rhTNF: cinetica 19 o disociere de ordinul 0 și asociere de ordinul 1. Pentru analiză, s-a considerat numai interacțiunea dintre un braț al anticorpului bivalent D2E7 și o unitate a rhTNF biotinilat 21 trimeric în alegerea modelelor moleculare pentru analiza datelor cinetice. S-au realizat 3 experimente independente și rezultatele s-au analizat separat. Media constantei ratei diso- 23 cierii aparente dintre D2E7 și molecula rhTNF: cinetica o disociere de ordinul 0 și asociere de ordinul 1. Pentru analiză, s-a considerat numai interacțiunea dintre un braț al anticorpului 25 bivalent D2E7 și o unitate a rhTNF biotinilat trimeric în alegerea modelelor moleculare pentru analiza datelor cinetice. S-au realizat 3 experimente independente și rezultatele s-au analizat 27 separat. Media constantei ratei disocierii aparente dintre D2E7 și rhTNF biotinilat a fost 8,81 ±1,06x10¼1 și media constantei ratei asocierii aparente, ka a fost 1,91 ±1,26x105M~1s’1. 29
Constanta disocierii intrinsece aparente (Kd) a fost calculată apoi prin formula: Kd=kyka. Astfel, media Kd a anticorpului D2E7 pentru rhTNF derivată de la parametrii cinetici a fost 31 6,09±3,42x10''°M. Diferențele minore în valorile cinetice pentru forma lgG1 a D2E7 (prezentate în Tabelele 2, 3 și 4) și forma lgG4 a D2E7 (prezentată în tabelul 1 și în 33 exemplele 2 și 3) nu sunt considerate a fi diferențe reale care rezultă din prezența regiunilor constante fie lgG1, fie lgG4, ci mai degrabă sunt considerate ca putând fi atribuite 35 măsurătorilor concentrației anticorp mai precise folosite pentru analiza cineticii IgG 1. în conformitate, valorile cineticii pentru forma IgG 1 a D2E7 prezentate aici sunt considerate a fi 37 parametrii cei mai preciși pentru anticorpul D2E7.
Exemplul 2. Scanarea mutagenezei alaninei a domeniilor CDR3 D2E7 39
S-au introdus o serie de mutații alanină singulare prin metode standard alături de domeniul CDR3 al regiunilor D2E7 VL și D2E7 VH. Mutațiile catenei ușoare sunt ilustrate în 41 fig. 2 B (LD2E7‘.A1, LD2E7*A3, LD2E7*. A4, LD2E7*. A5, LD2E7*.A7 și LD2E7*. A8, având o mutație alanină la poziția 1,3, 4, 5, 7, sau respectiv 8 ale domeniului D2E7 VL CDR3). 43
RO 119831 Β1
Mutațiile catenei grele sunt ilustrate în fig. 2B (HD2E7*.A1, HDRE7*.A2, HD2E7*. A3, HD2E7*. A4, HD2E7*. A5, HD2E7*. A6, HD2E7*. A7, HD2E7*. A8 și HD2E7*. A9, având o mutație alanină la poziția 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10 sau respectiv, 11 a domeniului D2E7 VH CDR3). Cineticele interacțiuni rhTNFa cu un anticorp compus al tipului sălbatic D2E7 VL și VH s-au comparat cu cele ale anticorpilor compuși din 1) un tip sălbatic D2E7 VL împerecheat cu D2E7 VH cu o alanină substituită; 2) un D2E7 VH de tip sălbatic împerecheat cu D2E7 VL leu o alanină substituită; sau 3) D2E7 VL cu alanină substituită împerecheat cu un D2E7 VH alanină substituită. Toți anticorpii s-au testat ca molecule lgG4 de lungime întreagă.
Cineticile interacțiunii anticorpilor cu rhTNFa s-au determinat prin rezonanța suprafeței plasmonului cum s-a descris în exemplul 1. Ratele detașării Ko(( pentru diferite perechi VH/VL sunt rezumate mai jos în tabelul 5:
Tabelul 5
Legarea mutantelor D2E7 scan-alanină la rhTNFa biotinilat
VH VL K0(f(sec·1)
D2E7 VH D2E7 VL 9,65x10’5
HD2E7*.A1 D2E7 VL 1,4x10
HD2E7*.A2 D2E7 VL 4,6x1ο-4
HD2E7*.A3 D2E7 VL 8,15x10
HD2E7*.A4 D2E7 VL 1,8x10
HD2E7*.A5 D2E7 VL 2,35x10
HD2E7*.A6 D2E7 VL 2,9x10
HD2E7*.A7 D2E7 VL 1,0x10
HD2E7*.A8 D2E7 VL 3,1x10
HD2E7*.A9 D2E7 VL 8,1x10
D2E7 VH LD2E7*.A1 6,6x10'5
D2E7 VH LD2E7*.A3 NETECTABIL
D2E7 VH LD2E7*.A4 1,75x10
D2E7 VH LD2E7*.A5 1,8x10
D2E7 VH LD2E7*.A7 1,4x10
D2E7 VH LD2E7*.A8 3,65x10
H2E7*A9H LD2E7*.A1 1,05x10
RO 119831 Β1
Aceste rezultate demonstrează că majoritatea pozițiilor domeniilor CDR3 ale regiunii 1
D2E7 VL și regiunii VH sunt favorabile substituirii cu un singur rest alanină. Substituția unei singure alanine la poziția 1,4, 5 sau 7 a domeniului CDR3 al D2E7 VH sau la poziția 2, 5, 3
6,8, 9, sau 10 ale domeniului CDR3 al D2E7 VH nu afectează semnificativ legarea hTNFa așa cum s-a comparat la anticorpul D2E7 parental de tip sălbatic. Substituția alaninei la 5 poziția 8 a D2E7 VL CDR3 sau la poziția 3 a D2E7 VH CDR3 dă Kofl de 4 ori mai rapidă și o substituție alanină la poziția 4 sau 11 a D2E7 VH CDR3 dă de 8 ori mai rapidă, arătând 7 că aceste poziții sunt mai critice pentru legare la hTNFa. Totuși, o singură substituție alanină la poziția 1, 4, 5, 7, sau 8 a domeniului CDR3 al D2E7 VL sau la poziția 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 9
10, sau 11 a domeniului CDR3 al D2E7 VH rezultă încă într-un anticorp anti-hTNFa care are Kofj de 1 x10'3 sec’1 sau mai mic. 11
Exemplul 3. Analiza legării anticorpilor înrudiți D2E7
O serie de anticorpi înrudiți în secvență la D2E7 s-au analizat pentru legarea lor la 13 rhTNFa, așa cum s-a comparat cu D2E7, prin rezonanța suprafeței plasmonului cum s-a descris în exemplul 1. Secvențele aminoacide ale regiunilor VL testate sunt prezentate în fig. 15
1A și 1B. Secvențele aminoacide ale regiunilor VH testate sunt prezentate în fig. 2A li 2B.
Ratele pentru diverse perechi VH/VL (în formatul indicat, fie ca anticorp de lungime 17 integrală IgG 1 sau lgG4, fie ca scFv) sunt rezumate mai jos în tabelul 6.
Tabelul 6
Legarea anticorpilor D2E7 legați la rhTNFa biotinilați 21
VH VL Format Koff(sec-’)
D2E7 VH D2E7 VL lgG1/lgG4 9,65x10-5
VH1-D2 LOE7 lgG1/lgG4 7,7x10-5
VH1-D2 LOE7 scFv 4,6x1ο-4
VH1-D2.N LOE7.T IGG4 2,1x10-5
VH1-D2.Y LOE7.A IGG4 2,7x10-5
VH1-D2.N LOE7.A IGG4 3,2x105
VH1-D2 EPB12 scFv 8.0Χ10-4
VH1-D2 2SD4 VL scFv 1,94x10-3
3C-H2 LOE7 scFv 1,5x102
2SD4 VH 2SD4 VL scFv 6,07x10-3
2SD4 VH 2SD4 VL scFv 1,37x10-2
VH1A11 2SD4 VL scFv 1,34x102
VH1B12 2SD4 VL scFv 1,01x102
VH1B11 2SD4 VL scFv 9,8x102
VH1E4 2SD4 VL scFv 1,59x10-2
VH1F6 2SD4 VL scFv 2,29x10-2
RO 119831 Β1 (continuare) Tabelul 6
VH VL Format «„„(sec·1)
VH1D8 2SD4 VL scFv 9,5x102
VH1G1 2SD4 VL scFv 2,14x10'2
2SD4 VH EP B12 scFv 6,7x102
2SD4 VH VL10E4 scFv 9,6x102
2SD4 VH VL100A9 scFv 1,33x10’2
2SD4 VH VL100D2 scFv 1,41x102
2SD4 VH VL10F4 scFv 1,11x10'2
2SD4 VH VLL0E5 scFv 1,16x10’2
2SD4 VH VLL0F9 scFv 6,09x10'2
2SD4 VH VLL0F10 scFv 1,34x10’2
2SD4 VH VLLOG7 scFv 1,56x10’2
2SD4 VH VLLOG9 scFv 1,46x10’2
2SD4 VH VLL0H1 scFv 1,17x10'2
2SD4 VH VLLOH10 scFv 1,12x10’2
2SD4 VH VL1B7 scFv 1,3x10'2
2SD4 VH VL1C1 scFv 1,36x10’2
2SD4 VH VLC7 scFv 2,0x10'2
2SD4 VH VL0.1F4 scFv 1,76x102
2SD4 VH VL0.1H8 scFv 1,14x10‘2
Ratele lente (adică, K^lxIO^sec'1) pentru anticorpi de lungime întreagă (adică, format IgG) având un VL selectat de la D2E7, LOE7, LOE7.E și LOE7. A, care au fie o treonină, fie o alanină la poziția 9, arată că poziția 9 a CDR3 D2E7 VL poate fi ocupată de oricare dintre aceste două resturi fără afectarea substanțială a Koff. în conformitate, un motiv consens pentru CDR3 D2E7 VL cuprinde secvența aminoacidă: Q-R-Y-N-R-A-P-Y-(T/A) (SEQ ID NR:3). Mai mult, (adică, K^^lxIO^sec’1) pentru anticorpi care au un VH selectat de la D2E7, VH1-D2E7.N și VH1-D2E7.Y, care au fie o tirozină, fie o asparagină la poziția 12, arată că poziția 12 a CDR3 D2E7 VH poate fi ocupată de oricare dintre aceste 2 resturi fără a afecta substanțial Ko(). în conformitate, un motiv consens pentru CDR3 D2E7 VH cuprinde secvența aminoacidă: V-S-Y-L-S-T-A-S-S-L-D(Y/N) (SEQ ID NR: 4).
Rezultatele prezentate în tabelul 6 demonstrează că, anticorpii care conțin regiunea 2SD4 VL sau VH CDR3 prezintă Kof) mai rapidă (adică Kof1i1x10'3sec’1) cum s-a comparat la anticorpii care conțin regiunea D2E7 VL sau VH CDR3. în VL CDR3,2SD4 diferă de D2E7 la pozițiile 2,5 și 9. Așa cum s-a discutat mai sus, totuși, poziția 9 poate fi ocupată de Ala (ca în 2SD4) sau Thr (ca în D2E7) fără afectarea substanțială a K^. Astfel, prin comparația 2SD4 și D2E7, pozițiile 2 și 5 ale D2E7 VL CDR3, ambele arginine, pot fi indicate ca fiind critice pentru asocierea anticorpului cu hTNFa. Aceste reziduuri ar putea fi direct implicate
RO 119831 Β1 ca resturi de contact în situl de legare anticorp sau ar putea contribui critic la menținerea 1 arhitecturii scheletului moleculei de anticorp în această regiune. Considerând importanța poziției 2, înlocuirea Arg (în LOE7, care are aceiași VL CDR3 ca D2E7) cu Lys (în EP B12) 3 accelerează rata detașării prin factorul 2. Considerând importanța poziției 5, înlocuirea Arg (în D2E7) cu Ala (în LD2E7*.A5), cum s-a descris în exemplul 2, accelerează de asemenea 5 rata detașării de 2 ori. Mai mult, fără Arg la pozițiile 2 și 5 (în 2SD4), rata detașării este de 5 ori mai rapidă. Cu toate acestea, ar fi de remarcat că, deși poziția 2 este importantă pentru 7 îmbunătățirea legării la hTNFa,o schimbare la această poziție poate fi negată prin schimbări la alte poziții, așa cum s-a observat la VLLOE4, VLLOH1 sau VL0.1H8. 9 în VH CDR3, 2SD4 diferă de D2E7 la pozițiile 1,7 și 12. Așa cum s-a discutat mai sus, totuși poziția 12 poate fi ocupată prin Asn (ca în 2SD4) sau Tyr (ca în D2E7) fără 11 afectarea substanțială a KoH. Astfel, în comparația a 2SD4 și D2E7, pozițiile 1 și 7 ale D2E7 VH CDR3 pot fi identificate ca fiind critice pentru legare la hTNFa. Așa cum s-a discutat mai 13 sus, aceste resturi ar putea fi implicate direct ca resturi de contact în situl de legare anticorp sau ar putea contribui critic la menținerea arhitecturii scheletului moleculei anticorpului din 15 această regiune. Ambele poziții sunt importante pentru legare la hTNFa deoarece atunci când se folosește 3C-H2 VH CDR3 (care are o valină pentru schimbare alanină la poziția 17 1 considerând D2E7 VH CDR3) scFv are o rată de detașare de 3 ori mai rapidă decât atunci când se folosește D2E7 VH CDR3, dar această rată de detașare este încă de 4 ori mai lentă 19 decât atunci când se folosește 2SD4 VH CDR3 (care are schimbări la ambele poziții 1 și 7 față de D2E7 VH CDR3). 21
Exemplul 4. Activitatea funcțională a D2E7
Pentru a examina activitatea funcțională a D2E7, anticorpul s-a folosit în câteva 23 analize care măsoară capacitatea anticorpului de a inhiba activitatea hTNFa, fie in vitro, fie in vivo. 25
A. Neutralizarea citotoxicității indusă TNFa în celule L929
TNFa uman recombinant (rhTNFa) produce citotoxicitate celulară pentru celule 27 murine L929 după o perioadă de incubare de 18-24 h. Anticorpi umani anti-hTNFa au fost evaluați în analize L929 prin coincubarea anticorpilor cu rhTNFa și celule după cum 29 urmează. O placă de microtitrare cu 96 godeuri conținând 100 pl Ab anti-hTNFa a fost diluată serial 1/3 în duplicate folosind mediul RPMI care conține 10% ser fetal bovin (FBS). 31
S-au adăugat 50 μΙ rhTNFa pentru o concentrație finală de 500 pg/ml în fiecare godeu cu probă. Apoi, plăcile s-au incubat 30 min la temperatura camerei. în continuare, s-au adăugat 33 celule fibroblastice de șoarece L929 sensibile la TNFa pentru o concentrație finală de 5x104 celule per godeu, incluzând 1 pg/ml Actinomicină-D. Controalele au inclus mediu plus celule 35 și rhTNFa plus celule. Aceste controale și o curbă standard TNFa, în domeniul de la 2 ng/ml până la 8,2 pg/ml, s-au folosit pentru determinarea calității analizei și pentru a asigura o 37 fereastră a neutralizării. Apoi, plăcile s-au incubat peste noapte (18-24 h) la 37°C în 5% CO2.
S-au îndepărtat 100 μΙ mediu din fiecare godeu și s-au adăugat 50 μΙ de 5 mg/ml bromură 39 de 3. (4,4-dimetiltiazol-2-il)2,5-difenil-tetrazoliu (MTT; accesibilă comercial de la Sigma Chemical Co., St.Louis, MO) în PBS. Apoi, plăcile s-au incubat 4 h la 37’C. S-au adăugat 41 apoi 50 μΙ dodecil sulfat de sodiu 20% (SDS) la fiecare godeu și plăcile s-au incubat peste noapte la 37’C. S-a măsurat densitatea optică la 570/630 nm, curbele s-au marcat pentru 43 fiecare probă și s-au determinat valorile IC50 prin metode standard.
' Rezultatele reprezentative pentru anticorpi umani având diverse perechi VL și VH, 45 așa cum s-au comparat la mAb murin MAK 195, sunt prezentate în fig. 3 și în tabelul 7 de mai jos. *47
RO 119831 Β1
Tabelul 7
VH VL Structură ICso.M
D2E7 D2E7 scFv 1,1x1010
D2E7 D2E7 lgG4 4,7x10”
2SD4 2SD4 scFv/lgG1/lgG4 3,0x10'7
2SD4 LOE7 scFv 4,3x108
VH1-D2 2SD4 scFv 1,0x10’8
VH1-D2 LOE7 scFv/lgG1/lgG4 3,4x10’°
VH1-D2 LOE7.T lgG4 8,1x10”
VH1-D2 LOE7.T lgG4 1,3x10’°
VH1-D2 LOE7.A lgG4 2,8x10”
VH1-D2 LOE7.A igG4 6,2x10”
MAK 195 MAK 195 scFv 1,9x108
MAK 195 MAK 195 F(ab’)2 6,2x10”
Rezultatele din fig. 3 și tabelul 7 demonstrează că anticorpul uman anti-hTNFa D2E7 și diverși anticorpi înrudiți D2E7 neutralizează citotoxicitatea L929 indusă TNFa cu o capacitate aproximativ echivalentă celei a mAb murin anti-hTNFa MAK 195.
în altă serie de experimente s-a examinat cum s-a descris mai sus, capacitatea formei lgG1 a D2E7 de a neutraliza citotoxicitatea L929 indusă TNFa. Rezultatele de la 3 experimente independente și media acestora sunt rezumate în tabelul 8 de mai jos:
Tabelul 8
Neutralizarea citotoxicității L929 indusă TNFa prin IgG 1 D2E7
Experiment IC50[M]
1 1,26x10’°
2 1,33x10’°
3 1,15x10·’°
Medie 1,25±0,01x10’°
Această serie de experimente a confirmat că D2E7, în forma IgG 1 de lungime întreagă, neutralizează citotoxicitatea L929 indusă TNFa cu IC50[M] mediu de 1,25±0,01x10’°.
B. Inhibarea legării TNFa la receptori TNFa pe celule U-937
Capacitatea anticorpilor umani anti-hTNFa de a inhiba legarea hTNFa la receptori hTNFa pe suprafața celulelor a fost examinată folosind linia de celule U-937 (ATCC nr. CRL 1593), o linie celulară histiocitică umană care exprimă receptori hTNFa. Celulele U-937 s-au crescut în mediu RPM11640 suplimentat cu 10% ser fetal bovin (Hyclone A-1111, Hyclone Laboratories, Logan, UT), L-glutamină (4 nM), soluție tampon HEPES (10 mM), penicilină (100 pg/ml). Pentru a examina activitatea anticorpilor IgG, celule U-937 s-au preincubat cu
RO 119831 Β1
PBS suplimentat cu 1 mg/ml IgG uman (Sigma I-4506, Sigma Chemical Co., St.Louis, MO) 1 timp de 45 min pe gheață și apoi celulele s-au spălat de 3 ori cu tampon de legare. Pentru testul legării receptorului, celulele U-937 (5x106 celule/godeu) s-au incubat într-un tampon 3 de legare (PBS suplimentat cu 0,2% albumină serică bovină) în plăci de microtitrare cu 96 godeuri (Costar 3799, Costar Corp., Cambridge, MA) împreună cu rhTNFa marcat ’25l (3 x 5 1010 M; 25 pCi/ml; obținut de la BEB Research Products, Wilmington, DE), cu sau fără anticorpi anti-hTNFa, într-un volum total de 0,2 ml. Plăcile s-au incubat pe gheață timp de 7 1,5 h. Apoi, 75 μΙ al fiecărei probe s-au transferat la eprubete de testat 1,0 ml (Sastedt 72,700, Sarstedt Corp., Princeton NJ) conținând dibutilftalat (Sigma D-2270, Sigma 9 Chemical Co., St.Louis, MO) și dinonilftalat (ICN 210733, ICN, Irvine, CA). Eprubetele de testat au conținut un amestec 300 μΙ de dibutilftalat și dinonilftalat, raport volum respectiv 11 2:1. S-a îndepărtat rhTNFa marcat 125l, liber (adică, nelegat) prin microcentrifugare timp de 5 min. Apoi, fiecare eprubetă de testat a conținut în final un pelet celular care s-a decupat 13 cu ajutorul unei foarfeci pentru microeprubete (Bel-Art 210180001, Bel-Art Products, Pequannock, NJ). Peletul celular conține rhTNFa marcat 125l legat la receptorul TNFa p60 15 sau p80, în timp ce în faza apoasă de mai sus amestecul de ulei conține un exces de rhTNFa liber marcat 125l. Toate peletele celulare s-au colectat într-o eprubetă de numărare 17 (Falcon 2052, Becton Dickinskon Labware, Lincoln Park, NJ) și s-au numărat într-un contor de scintilație. 19
Rezultatele reprezentative sunt prezentate în fig. 4. Valoarea IC50 pentru inhibarea legării hTNFa de către D2E7 la receptorii hTNFa pe celule U-937 este de aproximativ 3x10' 21 10 M în aceste experimente. Aceste rezultate demonstrează că anticorpul uman anti-hTNFa D2E7 inhibă legarea rhTNFa la receptori hTNFa pe celule U-937 la concentrații aproximativ 23 echivalente celor ale mAb murin anti-hTNFa MAK 195.
în altă serie de experimente a fost examinată cum s-a descris mai sus capacitatea 25 formei lgG1 a D2E7 de a inhiba legarea rhTNFa la receptori hTNFa pe celule U-937. Rezultatele de la 3 experimente independente și media lor sunt rezumate în tabelul 9. 27
Tabelul 9
Inhibarea legării receptorului TNFpe celule U-937 prin lgG1 D2E7
Experiment IC50[M]
1 1,70x10'10
2 1,49x10’10
3 1,15x10'10
Medie 1,56±0,12x101°
Această serie de experimente a confirmat că D2E7, în forma IgG 1 de lungime întrea- 37 gă, inhibă legarea receptorului TNF pe celule U-937 cu IC50[M] mediu de 1,56μ0,12χ10'1°.
Pentru a investiga potența inhibitoare a D2E7 în legarea rhTNFa 125l la receptori indi- 39 viduali p55 și p75, s-a realizat un radioimunotest în fază solidă. Pentru a măsura valorile IC50 ale D2E7 pentru receptori separați TNF, s-au incubat diverse concentrații ale anticorpului 41 cu 3x10 ’° concentrație de rhTNF 125l. Apoi, amestecul s-a testat pe plăci separate conținând receptor fie p55, fie p75 TNF într-un mod dependent de doză. Rezultatele sunt rezumate mai 43 jos în tabelul 10:
RO 119831 Β1
Tabelul 10
Inhibarea legării receptorului TNF la p55 și p75 TNFR prin D2E7 IgG 1
IC50[M]
Reactiv p55 TNFR 075 TNFR
D2E7 1,47x109 1,26x10 9
rhTNF 2,31x10’9 2,70x109
Inhibarea legării rhTNFa 125l la receptori p55 și p75 TNF pe celule U, 937 prin D2E7 a urmat o curbă sigmoidală simplă, indicând valori IC50 pentru fiecare receptor. în experimentele radioimunotest în fază solidă (RIA) cu receptori recombinanți TNF, s-au calculat valori IC50 pentru inhibarea legării rhTNF 125l la receptorii p55 și p75 prin D2E7 ca 1,47x10’9 și respectiv, 1,26x10'9 M. Descreșterea în valorile IC50 în faza solidă s-a datorat probabil densității mai mari a receptorilor în format RIA, deoarece rhTNFa nemarcat a inhibat de asemenea, cu valori IC50 similare. Valorile IC50 pentru inhibarea legării rhTNF 125l la receptorii p55 și p75 prin rhTNF nemarcat au fost 2,31x10’9 și respectiv, 2,70x10'9 M.
C. Inhibarea expresiei ELAM-1 pe HUVEC
Celule endoteliale ale venei ombilicale umane (HUVEC) pot fi induse să exprime molecula 1 de adeziune a leucocitului la celula endotelială (ELAM-1) pe suprafața celulei lor prin tratament cu hTNFa, care poate fi detectat prin reacție HUVEC tratate hTNFa cu un anticorp de șoarece anti-uman ELAM-1. Capacitatea anticorpilor umani anti-hTNFa de a inhiba această expresie indusă TNFa a ELAM-1 pe HUVEC s-a examinat după cum urmează: HUVEC (ATCC Nr. CRL 1730) s-au plasat în plăci cu 96 godeuri (5x104 celule/ godeu) și s-au incubat peste noapte la 37’C. în ziua următoare, s-au preparat diluții seriale de anticorp uman anti-hTNFa (1:10) într-o placă de microtitrare, începând cu 20-100 pg/ml anticorp. O soluție stoc de rhTNFa s-a preparat la 4,5 ng/ml, s-au adăugat alicote rhTNFa la fiecare godeu conținând anticorp și conținuturile s-au amestecat bine. Controalele au inclus numai mediu plus anticorp anti-hTNFa și mediu plus rhTNFa. Plăcile HUVEC s-au îndepărtat de la incubarea lor la 37°C peste noapte și mediul din fiecare godeu s-a aspirat cu grijă. S-au transferat 200 pl amestec anticorp-rhTNFa la fiecare godeu al plăcilor HUVEC. Apoi, plăcile HUVEC s-au incubat în continuare la 37’C timp de 4 h. în continuare, stocul de anticorp murin anti-ELAM-1 s-a diluat 1:10000 în RPMI. Mediul din fiecare godeu al plăcii HUVEC s-a aspirat cu grijă, s-au adăugat 50 μΙ/godeu soluție anticorp anti-ELAM-1 și plăcile HUVEC s-au incubat 60 min la temperatura camerei. S-a preparat o soluție anticorp lg anti-șoarece, marcată 125l în RPMI (aproximativ 50000 cpm în 50 μΙ. Mediul din fiecare godeu al plăcilor HUVEC a fost aspirat cu atenție, godeurile s-au spălat de 2 ori cu RPMI și la fiecare godeu s-au adăugat 50 μΙ soluție lg anti-șoarece marcată 12SI.
Plăcile s-au incubat 1 oră la temperatura camerei și apoi fiecare godeu s-a spălat de 3 ori cu RPMI. S-au adăugat 180 μΙ SDS 5% la fiecare godeu pentru liza celulelor. Apoi, lizatul celular de la fiecare godeu s-a transferat într-o eprubetă și s-a numărat într-un contor de scintilație.
Rezultatele reprezentative sunt prezentate în fig. 5. Valoarea IC50 pentru inhibarea expresiei ELAM-1 pe HUVEC indusă hTNFa D2E7 este de aproximativ 6x10'11 M în aceste experimente. Aceste rezultate demonstrează că anticorpul uman D2E7 anti-hTNFa inhibă expresia indusă hTNFa a ELAM-1 pe HUVEC la concentrații aproximativ echivalente celor ale mAb murin anti-hTNFa MAK 195.
RO 119831 Β1 în altă serie de experimente, capacitatea formei IgG 1 a D2E7 de a inhiba expresia 1 indusă hTNFa a ELAM-1 pe HUVEC s-a examinat cum s-a descris mai sus. Rezultatele de la 3 experimente independente și media lor sunt rezumate mai jos în tabelul 11. 3
Tabelul 11
Inhibarea expresiei ELAM-1 indusă TNFcr prin receptor IgG 1 D2E7
Experiment ICJM]
1 1,95x10’°
2 1,69x10’°
3 1,90x10'°
Medie 1,85±0,14x10’°
Această serie de experimente a confirmat că D2E7, în forma lgG1 de lungime întrea- 13 gă, inhibă expresia ELAM-1 pe HUVEC indusă TNFa cu IC50[M] mediu de 1,85±0,14x10’°.
De asemenea, s-a examinat potența de neutralizare a D2E7 lgG1 pentru expresia 15 indusă rhTNF a altor 2 molecule de adeziune ICAM-1 și VCAM-1. Deoarece curba de titrare rhTNF pentru expresia ICAM-1 la 16 h a fost similară curbei de expresie a ELAM-1. Aceeași 17 concentrație de rhTNF s-a folosit în experimentele de neutralizare anticorpului. S-au incubat HUVEC cu rhTNFa în prezența a diverse concentrații D2E7 într-un incubator CO2 la 37*C 19 timp de 26 h, și s-a măsurat expresia ICAM-1 prin anticorp de șoarece anti-ICAM-1 urmată de anticorp de oaie anti-șoarece marcat 125l. S-au realizat 2 experimente independente și s- 21 au calculat valorile IC50. Un anticorp uman neînrudit lgG1 nu inhibă expresia ICAM-1.
Procedura experimentală pentru testarea inhibării expresiei VCAM-1 a fost același 23 ca procedura pentru expresia ELAM-1, cu excepția faptului că s-a folosit Mab anti-VCAM-1 în loc de Mab anti-ELAM-1. S-au realizat 3 experimente independente și s-au calculat 25 valorile ICjg. Un anticorp neînrudit lgG1 uman nu inhibă expresia VCAM-1.
Rezultatele sunt rezumate în tabelul 12 27
Tabelul 12
Inhibarea expresiei ICAM-1 și VCAM-1 prin D2E7 lgG1 29
Inhibare ICAM-1 IC50[M]
Experiment IC50[M] Experiment IC50[M]
1 1,84x10’° 1 1,03x10’°
2 2,49x1010 2 9,26x10”
3 1,06x10’°
Medie 2,17±0,46x10'° Medie 1,01 ±0,01x10’°
Aceste experimente demonstrează că tratamentul celulelor endoteliale ale venei om- 37 bilicale umane primare cu rhTNF au condus la expresia optimă a moleculelor de adeziune
ELAM-1 și VCAM-1 la 4 h, și la expresie maximă reglată crescător a ICAM-1 la 16 h. D2E7 39 a fost capabil să inhibe expresia a 3 molecule de adeziune în mod dependent de doză.
Valorile IC50 pentru inhibarea ELAM-1, ICAM-1 și VCAM-1 au fost 1,85x10'°, 2,17x10 ’° și 41 respectiv, 1,01 x10 ’°. Aceste valori au fost similare, indicând cerințe similare pentru doza de
RO 119831 Β1 activare a semnalului rhTNF de a induce expresia ELAM-1, ICAM-1 și VCAM-1. Interesant, D2E7 a fost eficient similar în testul de inhibare mai lungă a inhibării ICAM-1. Testul de inhibare ICAM-1 a necesitat 16 h de coincubare a rhTNFa și D2E7 cu HUVEC opus la cele 4 h necesare pentru testele de inhibare ELAM-1 și VCAM-1. Deoarece D2E7 are o rată de detașare lentă pentru rhTNF, este de imaginat că în timpul perioadei de 16 h de coincubare nu a existat nici o competiție semnificativă prin receptorii TNF asupra HUVEC.
D. Neutralizarea hTNFa in vivo
S-au folosit 3 sisteme diferite in vivo, pentru a demonstra că D2E7 este eficient pentru inhibarea activității hTNFa in vivo.
I. Inhibarea totalității indusă TNF la șoareci sensibilizați D-galactozamină
Injectarea TNFa uman recombinant (rhTNFa) la șoareci sensibilizați Dgalactozamină produce letalitate într-o perioadă de timp de 24 h. Agenți care neutralizează TNFa s-au dovedit a împiedica totalitatea în acest model. Pentru a examina capacitatea anticorpilor umani anti-hTNFa de a neutraliza hTNFa in vivo în acest model, s-au injectat șoareci C57B1/6 cu diverse concentrații de D2E7-lgGl sau o proteină de control, în PBS intraperitoneal (i.p.). Șoarecii au fost provocați, 30 min mai târziu, cu 1 pg rhTNFa și 20 mg D-galactozamină în PBS i.p. și au fost observați 24 h mai târziu. Aceste cantități rhTNFa și D-galactozamină au fost determinate anterior pentru a obține o totalitate de 80-90% la acești șoareci.
Rezultate reprezentative, ilustrate ca un grafic cu bare, al supraviețuirii % față de concentrația anticorp, sunt prezentate în fig. 6. Barele negre reprezintă D2E7, în timp ce barele hașurate reprezintă MAK 195. Injectarea a 2,5-15 pg anticorp D2E7 per șoarece a protejat animalele de totalitatea indusă TNFa. Valoarea ED50 este de aproximativ 1-2,5 pg/ șoarece. Anticorpul de control pozitiv, MAK 195, a fost similar în capacitatea sa protectoare. Injectarea D2E7 în absența rhTNFa nu a avut nici un efect dăunător asupra șoarecilor. Injectarea unui anticorp IgG 1 uman nespecific nu oferă nici o protecție de totalitatea indusă 7 grupuri egale. Fiecare grup a primit doze D2E7 care variază 30 min înainte de a primi o doză LD80 amestec rhTNF/D-galactozamină (1,0 pg rhTNF și 20 mg D-galactozamină per șoarece). Grupul de control 7 a primit anticorp kappa lgG1 uman normal la doză 25 pg/șoarece. Șoarecii s-au examinat 24 h mai târziu. Supraviețuirea pentru fiecare grup este rezumată mai jos în tabelul 13.
Tabelul 13
Supravie fu/re 24 h după tratament cu D2E7
Grup Supraviețuire (vii/total Supraviețuire (%)
1 (fără anticorpi) 0/7 0
2 (1 pg) 1/7 14
3 (2,6 pg) 5/7 71
4 (5,2 pg) 6/7 86
5 (28 pg) 6/7 86
6 (26 pg; fără rHTNF) 7/7 100
7(15pgHu lgG1) 1/7 14
RO 119831 Β1
II. Inhibarea febrei indusă TNF la iepure 1
S-a examinat eficacitatea D2E7 în inhibarea răspunsului de febră indusă rhTNF la iepuri. Grupuri de iepuri femele NZW cântărind aproximativ 2,5 kg fiecare s-au injectat intra- 3 venos cu D2E7, rhTNF și complexe imune D2E7 și rhTNF. S-au măsurat temperaturile rectal prin sonde termistor pe un înregistrator termic Kaye la fiecare minut aproximativ 4 h. TNF 5 recombinant uman în soluție salină injectat la 5 pg/kg, a provocat o creștere a temperaturii mai mare de 0,4°C la aproximativ 45 min după injectare. Preparatul anticorp, în soluție salină 7 la o doză de 138 pg/kg nu provoacă o creștere în temperatură la iepuri până la 140 min după administrare. în toate experimentele care au urmat, D2E7 sau reactivi de control (lgG1 uman 9 sau un vehicul salin) s-au injectat i.v. la iepuri 15 minte mai târziu printr-o injecție de rhTNF în soluție salină la 5 pg/kg i.v. Rezultatele reprezentative de la câteva experimente sunt 11 rezumate mai jos în tabelul 14:
Tabelul 14
Inhibarea febrei indusă rhTNF la iepuri cu D2E7 15
Creștere temp.*, ’C Raport molar Maxim temp.
Doză D2E7 (pg/kg) rhTNF rhTNF + D2E7 lnhib,%“ D2E7:rhTNF minute post rhTNF
14 0,53 0,25 53 1 60
24 0,43 0,13 70 1,6 40
48 0,53 0,03 94 3,3 50
137 0,53 0,00 100 9,5 60
792 0,80 0,00 100 55 60
* = maxim temperatură **= inhibare % - (1-(creștere temperatură cu rhTNF&D2E7/creștere temperaturp cu rhTNF singur)x100. 25
Pretratamentul intravenos cu D2E7 la o doză de 14 pg/kg a inhibat parțial răspunsul 27 pirogenic, comparat la iepuri pretratați numai cu soluție salină. D2E7 administrat la 137 pg/ kg a suprimat total răspunsul pirogenic al rhTNF în același experiment. în al doilea expe- 29 riment, D2E7 administrat la 24 pg/kg de asemenea a suprimat parțial răspunsul pirogenic, comparat la iepuri tratați numai cu soluție salină. Raportul molar al D2E7 față de rhTNF a 31 fost 1/6:1 în acest experiment. în al treilea experiment, D2E7 injectat i.v. la 48 pg/kg (raport molar D2E7:rhTNF=3,3:1) a suprimat total răspunsul pirogenic, comparat la iepuri pretratați 33 cu IgG 1 uman de control în soluție salină la 30 pg/kg. în experimentul final, iepuri pretratați cu D2E7 (792 pg/kg) la un raport molar foarte ridicat față de rhTNF (55:1) nu dezvoltă nici 35 o creștere în temperatură la orice moment până la 4 ore de observație. Tratamentul iepurilor cu complexe imune generate de la un amestec D2E7 și rhTNF incubat la 37°C timp de 1 h, 37 la un raport molar de 55:1, fără administrare subsecventă de rhTNF, de asemenea nu provoacă nici o creștere de temperatură în același experiment. 39
III. Prevenirea poliartritei la șoareci transgenici Tg197
Efectul D2E7 asupra dezvoltării bolii s-a investigat într-un model murin de artrită. S- 41 au generat șoareci transgenici (Tg197) care exprimă TNF uman de tip sălbatic (modificat în regiunea 3' dincolo de secvențele de codificare) și acești șoareci dezvoltă poliartrită cronică 43 cu incidență 100% la vârsta de 4-7 săptămâni (vezi, EMBO J (1991) 10:4025-4031 pentru descrierea suplimentară a modelului de poliartrită Tg197). 45
RO 119831 Β1
Animale transgenice s-au identificat prin POR la vârsta de 3 zile. Grupuri de șoareci transgenici născuți o dată s-au împărțit în 6 grupuri. Șoarecii transgenici s-au verificat prin analiza de hibridizare slot-blot la vârsta de 15 zile. Protocoalele tratamentului pentru cele 6 grupuri au fost cum urmează: Grup 1 =fără tratament; Grup 2-soluție salină (vehicul); Grup 3=D2E7 la 1,5 pg/g; Grup 4=D2E7 la 15 pg/g; Grup 5=D2E7 la 30 pg/g; și Grup 6=izotip de control IGG1 la 30 pg/g. De asemenea, a fost inclus în studiu un grup de șoareci născuți o dată netransgenici pentru a servi drept control (Grup 7 - netransgenici; fără tratament). Fiecare grup a primit 3 injecții i.p. per săptămână din tratamentele indicate. Injecțiile au continuat timp de 10 săptămâni. în fiecare săptămână s-au înregistrat schimbările macroscopice în morfologia articulației pentru fiecare animal. La 10 săptămâni, toți șoarecii au fost sacrificați și țesutul de șoarece s-a colectat în formalină. S-au realizat examinări microscopice ale țesutului.
La începutul fiecărei săptămâni au fost luate greutățile în grame pentru fiecare șoarece. De asemenea, la același moment s-au făcut măsurători ale mărimii articulației (în mm) ca o măsură a severității bolii. Mărimea articulației a fost stabilită ca o medie a 3 măsurători ale gleznei piciorului drept posterior folosind un micrometru. Scorurile artritice s-au înregistrat săptămânal după cum urmează: O=fără artrită (apariție și flexiune normală); +=artrită ușoară (articulație deformată); ++=artrită moderată (umflare, deformarea articulației) și +++=artrită grea (anchiloză detectată asupra flexiunii și mișcare deteriorată sever). Scorurile histopatologice bazate pe colorație hematoxină/eozină a secțiunilor articulației au fost bazate după cum urmează: O=fără boală detectabilă; 1 =proliferarea membranei sinoviale; 2=îngroșare puternică a membranei sinoviale; 3-distrugerea cartilajului și eroziunea osului.
Efectul tratamentului asupra mărimii medii a articulației a șoarecilor artritici transgenici Tg197 este prezentat în graficul fig. 9. Scorurile histopatologice și artritice ale șoarecilor transgenici Tg197, la vârsta de 11 săptămâni sunt rezumate mai jos, în tabelul 15:
Tabelul 15
Efectul D2E7 asupra histopatologiei și scorului artritic la șoareci Tg197
Grup Tratament Scor histopatologic Scor artritic
1 fără 3(7/7) +++(7/7)
2 soluție salină 3(8/8) +++(8/8)
6 control lgG1 3(9/9) +++(7/9)
3 D2E7 la 1,5 pg/g 0(6/8) 0(8/8)
4 D2E7 la 15 pg/g 0(7/8) 0(8/8)
5 D2E7 la 30 pg/g 0/8/8) 0(8/8)
Acest experiment a demonstrat că anticorpul D2E7 are un efect benefic definit asupra șoarecilor transgenici care exprimă TNF uman de tip sălbatic (Tg197), fără nici o artrită evidentă după perioada studiului.
E. Neutralizarea D2E7 a TNFa de la alte specii
Specificitatea legării D2E7 s-a examinat prin măsurarea capacității sale de a neutraliza factorii necrozei tumorii de la diverse specii primate și de la șoarece, folosind un test de citotoxicitate L929 (cum s-a descris în exemplul 4, subsecțiunea a, de mai sus). Rezultatele sunt rezumate în tabelul 7 de mai jos.
RO 119831 Β1
Tabelul 16
Capacitatea D2E7 de a neutraliza hTNFa de la diferite specii în analiza L929
TNFa Sursă IC50 pentru neutralizare D2E7 (ΜΓ
Uman Recombinant 7,8 x 10”
Cimpanzeu LPS-stimulat PBMC 5,5x10”
Babuin Recombinant 6,0 x 10 ”
Sanguin LPS-stimulat PBMC 4,0 x 10‘1°
Cynomolgus LPS-stimulat PBMC 8,0 x 10 ”
Rhesus LPS-stimulat PBMC 3,0 x 10 ”
Canin LPS-stimulat PBMC 2,0x10'10
Porcin Recombinant 1,0 x10’7
Murin Recombinant >1,0 x 10 7
Rezultatele din tabelul 16 demonstrează că D2E7 poate neutraliza activitatea a 5 15
TNFa de la primate aproximativ echivalent TNFa uman și mai mult, pot neutraliza activitatea TNFa canin (aproximativ de 10 mai puțin bine decât TNFa uman) și TNFa porcin și de 17 șoarece (aproximativ de 1000 de ori mai puțin bine decât TNFa uman). Mai mult, legarea D2E7 la rhTNFa în fază de soluție nu a fost inhibată de alte citokine ca limfotoxină (TNFP), 19 IL-1 a, IL-1 β, IL-2, IL-4, IL-6, IL-8, IFNy și TGFp arătând că D2E7 este foarte specific pentru ligandul său TNFa. 21
F. Absența eliberării citokinei de sânge uman integral incubat cu D2E7 în acest exemplu, s-a examinat capacitatea D2E7 de a induce, prin el însăși, celule 23 sanguine umane normale să secrete citokine sau molecule așezate pe suprafața celulei.
D2E7 s-a incubat cu sânge integral diluat de la 3 donatori normali diferiți la diferite 25 concentrații timp de 24 h. La același moment, s-a desfășurat un control pozitiv LPS, la o concentrație determinată anterior de a stimula celule sanguine imunocompetente să secrete 27 citokine. Supernatantele au fost recoltate și testate într-un tablou de truse ELISA cu 10 citokine solubile, receptor și molecule de adeziune: IL-1 a, IL-β, receptor antagonist IL-1, IL- 29 6, IL-8, TNFa, receptor 1 TNF solubil, receptor IITNF solubil, ICAM-1 solubil, și E-selectină solubilă. Nu s-au măsurat cantități semnificative de citokină sau molecule prezente pe 31 suprafața celulei ca urmare a coincubării anticorpului D2E7, la concentrații de până la 343 mg/ml. De asemenea, culturile de control fără adăugare de anticorp nu au dat cantități 33 măsurabile de citokine, în timp ce cultura de control LPS a dat valori ridicate la un domeniu în picograme crescut la nanograme scăzut. Aceste rezultate arată că D2E7 nu induce celule 35 de sânge integral să secrete citokine sau proteine prezente pe suprafața celulei peste nivelurile normale în culturi ex vivo. 37
Este anexată Lista Secvențelor, al cărei conținut este rezumat în tabelul de mai jos.
RO 119831 Β1
SEQ ID NR: CATENÂ ANTICORP REGIUNE TIP SECVENȚĂ
1 D2E7 VL aminoacidă
2 D2E7 VE aminoacidă
3 D2E7 VL CDR3 aminoacidă
4 D2E7 VH CDR3 aminoacidă
5 D2E7 VL CDR2 aminoacidă
6 D2E7 VH CDR2 aminoacidă
7 D2E7 VL CDR1 aminoacidă
8 D2E7 VL CDR1 aminoacidă
9 2SD4 VL aminoacidă
10 2SD4 VH aminoacidă
11 2SD4 VL CDR3 aminoacidă
12 EPB12 VL CDR3 aminoacidă
13 VL10EA VL CDR3 aminoacidă
14 VL100A9 VL CDR3 aminoacidă
15 VLL10002 VL CDR3 aminoacidă
16 VLL0F4 VL CDR3 aminoacidă
17 LOE5 VL CDR3 aminoacidă
18 VLLOG7 VL CDR3 aminoacidă
19 VLLOG9 VL CDR3 aminoacidă
20 VLL0H1 VL CDR3 aminoacidă
21 VLLOH10 VL CDR3 aminoacidă
22 VL1B7 VL CDR3 aminoacidă
23 VL1C1 VL CDR3 aminoacidă
24 VL0.1F4 VL CDR3 aminoacidă
25 VL0.H8 VL CDR3 aminoacidă
26 LOE7.A VL CDR3 aminoacidă
27 2SD4 VH CDR3 aminoacidă
28 VH1B11 VH CDR3 aminoacidă
29 VH1D8 VH CDR3 aminoacidă
30 VH1A11 VH CDR3 aminoacidă
31 VH1B12 VH CDR3 aminoacidă
32 VH1E4 VH CDR3 aminoacidă
33 VH1F6 VH CDR3 aminoacidă
34 3C-H2 VH CDR3 aminoacidă
35 VH1-D2.N VH CDR3 aminoacidă
36 D2E7 VL acid nucleic
37 D2E7 VH acid nucleic
RO 119831 Β1
Specialiștii în domeniu vor recunoaște sau vor fi capabili să stabilească, folosind doar 1 experimentarea de rutină, numeroase echivalențe ale realizărilor specifice ale invenției, descrise aici. 3
LISTA DE SECVENȚE (1) INFORMAȚIE GENERALĂ:
(i) SOLICITANT:
(A) NUME: BASF Aktiengesellschaft
(B) STRADA: Cari-Bosch Str. 38
(C) ORAȘ: 67056 Ludwigshafen
(D) STAT: Rheinland-Pfalz
(E) ȚARĂ: Federal Republic of Germany
(ii) TITLUL INVENȚIEI: Anticorpi umani care se leagă la TNFa uman (iii) NUMĂR DE SECVENȚE: 37 (iv) ADRESA PENTRU CORESPONDENȚĂ:23 (A) ADRESANT: LAHIVE & COCKFIELD (B) STRADA: 60 State Street, suite 51025 (C) ORAȘ: Boston (D) STAT: Massachusetts27 (E) ȚARĂ: USA (F) COD POȘTAL: 02109-1875 (v) FORMĂ CITIBILĂ PE CALCULATOR:
(A) TIP MEDIU: Floppy disk (B) COMPUTER: compatibil IBM PC (C) SISTEM DE OPERARE: PC-DOS/MS-DOS (D) SOFTWARE: Patentln Release <1.0, Version #1.25 (Vi) DATE ALE CERERII CURENTE:
(A) NUMĂRUL CERERII:
(B) DATA DEPUNERII:
(C) CLASIFICARE:
(vii) DATE ALE CEREII ANTERIOARE:
(A) NUMĂRUL CERERII: US 08/599,226 (B) DATA DEPUNERII: 9-FEB-1996 (C) CLASIFICARE:
(vii) DATE ALE CERERII ANTERIOARE:
(A) NUMĂRUL CERERII: US 60/031,476
RO 119831 Β1 (B) DATA DEPUNERII: 25-NOV-1996 (C) CLASIFICARE:
(viii) INFORMAȚIE AGENT/MANDATAR:
(A) NUME: DeConti, Giulio A., Jr.
(B) NUMĂR DE ÎNREGISTRARE: 31,503 (C> NUMĂR DOSAR/REFERINȚĂ: BBI-O43CPPC (ix) INFORMAȚII PENTRU TELECOMUNICARE:
(A) TELEFON: (617)227-7400 (B) TELEFAX: (617)227-5941 (2) INFORMAȚIE PEN.TRU SEQ ID NO;1:
(i) CARACTERISTICE DE SECVENȚĂ:
(A) LUNGIME: 107 aminoacizi (B) TIP: aminoacid (D) TOPOLOGIE: lineară (li) TIPUL MOLECULEI: peptidă (v) TIPUL FRAGMENTULUI: intern (xi) DESCRIEREA SECVENȚEI: SEQ ID NO:1:
Asp 1 Ile Gin Met Thr 5 Gin Ser Pro Ser Ser 10 Leu Ser Ala Ser Val 15 Gly
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gin Gly Ile Arg Asn Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gin Pro
65 70 75 80
Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Arg Tyr Asn Arg Ala Pro Tyr
RO 119831 Β1
Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 (2) INFORMAȚIE PENTRU SEQ ID NO:2:
CARACTERISTICI DE SECVENȚĂ:
(i)
(A) LUNGIME: 121 aminoacizi 11
(B) TIP : aminoacid
(D) TOPOLOGIE: lineară 13
(ii) TIPUL MOLECULEI: peptidă 15
<v) TIPUL FRAGMENTULUI: intern 17
(xi> DESCRIEREA SECVENȚEI : SEQ IC i NO: 2: 19
Glu Val Gin Leu val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Arg 21
1 5 10 15
23
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr
20 25 30 25
Ala Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 27
35 40 45
29
Ser Ala Ile Thr Trp Asn Ser Gly His Ile Asp Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60 31
Glu Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 33
65 70 75 80
35
Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95 37
Ala Lys Val Ser Tyr Leu Ser Thr Ala Ser Ser Leu Asp Tyr Trp Gly 39
105
100
110
Gin
Gly
Thr
115
Leu
Val
Thr
Val
Ser
120
Ser
RO 119831 Β1 (2) INFORMAȚIE PENTRU SEQ ID NO-.3:
(i) CARACTERISTICI DE SECVENȚĂ:
(A) LUNGIME: 9 aminoacizi (R) TIP: aminoacid (O) TOPOLOGIE: lineară (iii TIPUL MOLECULEI: peptidă (v) TIPUL FRAGMENTULUI: intern (ix) TRĂSĂTURA:
(A) NUME/COD: Sit-modificat (B) LOCALIZARE: 9 (D) ALTĂ INFORMAȚIE: /notă- Xaa este Thr sau Ala (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO:3:
Gin Arg Tyr Asn Arg Ala Pro Tyr Xaa
5 (2) INFORMAȚIE PENTRU SEQ ID NO:4:
<i) CARACTERISTICI DE SECVENȚĂ:
(A) LUNGIME: 12 aminoacizi (B) TIP: aminoacid (D) TOPOLOGIE; lineară (ii) TIPUL MOLECULEI: peptidă (v) TIPUL FRAGMENTULUI: intern (ix) TRĂSĂTURA:
(A) NUME/COD: Sit-modificat (B) LOCALIZARE: 12 (D) ALTĂ INFORMAȚIE: /notă- Xaa este Tyr sau Asn (xi) DESCRIEREA SECVENȚEI: SEQ ID NO:4:
Val Ser Tyr Leu Ser Thr Ala Ser Ser Leu Asp Xaa
RO 119831 Β1
Asp Tyr Ala Asp Ser Val Glu
15 33 (2) INFORMAȚIE PENTRU SEQ ID NO:5:
(i) CARACTERISTICI DE SECVENȚA:
(A) LUNGIME: 7 aminoacizi (B) TIP: aminoacid (D) TOPOLOGIE: lineară (ii) TIP MOLECULĂ: peptidă (v) TIP FRAGMENT: intern (xi) DESCRIEREA SECVENȚEI: SEQ ID NO:
Ala Ala Ser Thr Leu Gin Ser
I 5 (2) INFORMAȚIE PENTRU SEQ ID NO:6:
(i) CARACTERISTICI DE SECVENȚĂ:
(A) LUNGIME: 17 aminoacizi (B> TIP: aminoacid (D) TOPOLOGIE: lineară (ii) TIP MOLECULA: peptidă (v) TIP FRAGMENT: intern (xi) DESCRIERE SECVENȚĂ: SEQ ID NO:6:
Ala Ile Thr Trp Asn Ser Gly His Ile
5
Gly (2) INFORMAȚIE PENTRU SEQ ID NO:7:
RO 119831 Β1 (1) CARACTERISTICI DE SECVENȚĂ:
(A) LUNGIME: 11 aminoacizi (B) TIP: aminoacid (D) TOPOLOGIE: lineară (ii) TIP MOLECULĂ; peptidă (v) TIP FRAGMENT: intern (xi) DESCRIERE SECVENȚĂ: SEQ ID NO:7:
Arg Ala Ser Gin Gly Ile Arg Asn Tyr Leu Ala
10 (2) INFORMAȚIE PENTRU SEQ ID NO:8:
(1) CARACTERISTICI DE SECVENȚĂ:
(A) LUNGIME: 5 aminoacizi (B) TIP: aminoacid (D) TOPOLOGIE: lineară (ii) TIPUL MOLECULEI: peptidă (v) TIPUL FRAGMENTULUI; intern (xi) DESCRIEREA SECVENȚEI: SEQ ID NO:8:
Asp Tyr Ala Met His
5 (2) INFORMAȚIA PENTRU SEQ ID NO: 9 :
(i) CARACTERISTICI DE SECVENȚĂ:
(A) LUNGIME: 107 aminoacizi (B) TIP: aminoacid (D) TOPOLOGIE: lineară (ii) TIPUL MOLECULEI: peptidă (v) TIPUL FRAGMENTULUI: intern
RO 119831 Β1 (xj ) DESCRIEREA SECVENȚEI: SEQ ID NO:9:
Asp 1 Asp Ile Arg Gin Met Thr Gin 5 Ser Cys Pro Ser Ser 10 Ser Leu Ser Ala Ile Ser Arg 30 Ile 15 Asn Gly Tyr 3 5 7
Val Thr 20 Ile Thr Arg Ala 25 Gin Gly
Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 9
35 40 45
11
Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60 13
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gin Pro 15
65 70 75 80
17
Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Lys Tyr Asn Ser Ala Pro Tyr
85 90 95 19
Ala Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 21
100 105
(2) INFORMAȚIA PENTRU SEQ ID NO:10:
(i) CARACTERISTICI DE SECVENȚĂ:
(A) LUNGIME: 121 aminoacizi (B) TIP: aminoacid (D) TOPOLOGIE; lineară (ii) TIPUL MOLECULEI: peptidă (v) TIPUL FRAGMENTULUI: intern (Xi) DESCRIEREA SECVENȚEI: SEQ ID NO:10:
Gin 1 Val Gin Leu Val 5 Glu Ser Gly Gly Gly 10 Leu Val Gin Pro Gly 15 Arg 39
Ser Leu Arg Leu 20 Ser Cys Ala Ala Ser 25 Gly Phe Thr Phe Asp 30 Asp Tyr 41
RO 119831 Β1
Ala Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu 45 Asp Trp Val
35 40
Ser Ala Ile Thr Trp Asn Ser Gly His Ile Asp Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Glu Gly Arg Phe Ala Val Ser Arg ASp Asn Ala I.ys Asn Ala Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Lys Ala Ser Tyr Leu Ser Thr Ser Ser Ser Leu Asp Asn Trp Gly
100 105 110
Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
(2) INFORMAȚIA PENTRU SEQ ID NO:11:
(i) CARACTERISTICI DE SECVENȚĂ:
(A) LUNGIME: 9 aminoacizi (B) TIP: aminoacid (D) TOPOLOGIE: lineară (ii) TIPUL MOLECULEI: peptidă (v) TIPUL FRAGMENTULUI: intern (xi) DESCRIEREA SECVENȚEI: SEQ ID NO:11:
Gin Lys Tyr Asn Ser Ala Pro Tyr Ala
5 (2) INFORMAȚIA PENTRU SEQ ID NO:12:
(i) CARACTERISTICI DE SECVENȚĂ:
(A) LUNGIME: 9 aminoacizi (B) TIP: aminoacid (D) TOPOLOGIE: lineară
RO 119831 Β1 (li) TIPUL MOLECULEI: peptidă 1 (V) TIPUL FRAGMENTULUI: intern (xi) DESCRIEREA SECVENȚEI: SEQ ID NO:12:
Gin Lys Tyr Asn Arg Ala Pro Tyr Ala (2) INFORMAȚIE PENTRU SEQ ID NO:13:
3 (1) CARCTERISTICI DE SECVENȚA:
(A) LUNGIME: 9 aminoacizi (B) TIP: aminoacid (D) TOPOLOGIE: lineară (ii) TIPUL MOLECULEI: peptidă (V) TIPUL FRAGMENTULUI: intern (xi) DESCRIEREA SECVENȚEI: SEQ ID NO:13:
Gin Lys Tyr Gin Arg Ala Pro Tyr Thr 25 (2) INFORMAȚIE PENTRU SEQ ID NO:14:
(1) CARACTERISTICI DE SECVENȚĂ:
(A) LUNGIME: 9 aminoacizi (B) TIP: aminoacid.
(D) TOPOLOGIE: lineară (ii) TIPUL MOLECULEI: peptidă (v) TIPUL FRAGMENTULUI: intern (xi) DESCRIEREA SECVENȚEI: SEQ ID NO:14:
Glri Lys Tyr Ser Ser Ala Pro Tyr Thr
5
RO 119831 Β1 (2) INFORMAȚIA FOR SEQ ID NO:15:
(1) CARACTERISTICI DE SECVENȚĂ:
(A) LUNGIME: 9 aminoacizi (B) TIP: aminoacid (D) TOPOLOGIE: Lineară (ii) TIPUL MOLECULEI: peptidfi (v) TIPUL FRAGMENTULUI: intern (zi) DESCRIEREA SECVENȚEI : SEQ ID NO:15:
Gin Lys Tyr Asn Ser Ala Pro Tyr Thr
5 (2) INFORMAȚIE PENTRU SEQ ID NO:16:
(i) CARACTERISTICI DE SECVENȚĂ;
(A) LUNGIME: 9 aminoacizi (B) TIP: aminoacid (D) TOPOLOGIE: lineară (ii) TIPUL MOLECULEI: peptidă (V) TIPUL FRAGMENTULUI: intern (xi) DESCRIEREA SECVENȚEI: SEQ ID NO:16:
Gin Lys Tyr Asn Arg Ala Pro Tyr Thr
5 (2) INFORMAȚIA PENTRU SEQ ID NO:17;
(1) CARACTERISTICI DE SECVENȚĂ:
(A) LUNGIME: 9 aminoacizi (B) TIP: aminoacid (0) TOPOLOGIE: lineară
RO 119831 Β1 (ii) TIPUL MOLECULEI: peptidă 1 (v) tipul fragmentului: intern3 (xi) DESCRIEREA SECVENȚEI: SEQ ID NO:17;5
Gin Lys Tyr Asn Ser Ala Pro Tyr Tyr7 (2) INFORMAȚIE PENTRU SEQ ID NO:18:-μ (i) CARACTERISTICI DE SECVENȚĂ:
(A) LUNGIME: 9 aminoacizi (B) TIP: aminoacid (D) TOPOLOGIE: lineară (ii) TIPUL MOLECULEI: peptidă (v} TIPUL FRAGMENTULUI: intern (xi) DESCRIEREA SECVENȚEI: SEQ ID NO:18:
Gin Lys Tyr Asn Ser Ala Pro Tyr Asn23 (2) INFORMAȚIE PENTRU SEQ ID NO:19:27 (i) CARACTERISTICI DE SECVENȚĂ:29 (A) LUNGIME: 9 aminoacizi (B) TIP: aminoacid31 (D) TOPOLOGIE: lineară (ii) TIPUL MOLECULEI: peptidă (v) TIPUL FRAGMENTULUI: intern (Xi) DESCRIEREA SECVENȚEI: SEQ ID NO:19:
Gin Lys Tyr Thr Ser Ala Pro Tyr Thr
RO 119831 Β1 (2) INFORMAȚIE PENTRU SEQ ID NO:20:
(i) CARACTERISTICI DE SECVENȚĂ:
(A) LUNGIME: 9 aminoacizi (B) TIP: aminoacid (D) TOPOLOGIE: lineară (ii) TIPUL MOLECULEI: peptidă (v) TIPUL FRAGMENTULUI: intern (xi) DESCRIEREA SECVENȚEI: SEQ ID NO:20:
Gin Lys Tyr Asn Arg Ala Pro Tyr Asn
5 (2) INFORMAȚIE PENTRU SEQ ID NO:21:
(1) CARACTERISTICI DE SECVENȚĂ:
(A) LUNGIME: 9 aminoacizi (B) TIP: aminoacid (D) TOPOLOGIE: lineară (ii) TIPUL MOLECULEI: peptidă (v) TIPUL FRAGMENTULUI: intern (xi) DESCRIEREA SECVENȚEI: SEQ ID NO:21:
Gin Lys Tyr Asn Ser Ala Ala Tyr Ser
5 (2) INFORMAȚIE PENTRU SEQ ID NO:22:
(i) CARACTERISTICI D ESECVENȚĂ:
(A) LUNGIME: 9 aminoacizi (B) TIP: aminoacid (D) TOPOLOGIE: lineară
RO 119831 Β1 (ii) TIPUL MOLECULEI: peptida 1 (v) TIPUL FRAGMENTULUI: intern (xi) DESCRIEREA SECVENȚEI: SEQ ID NO:22:
Gin Gin Tyr Asn Ser Ala Pro Asp Thr
5 9 (2) INFORMAȚIA PENTRU SEQ ID NO:23:
(i) CARACTERISTICI DE SECVENȚĂ:
(A) LUNGIME: 9 aminoacizi 15 (B) TIP: aminoacid (D) TOPOLOGIE: lineară (ii) TIPUL MOLECULEI: peptidă (v) TIPUL FRAGMENTULUI: intern (xi) DESCRIEREA SECVENȚEI: SEQ ID NO:23:
Gin Lys Tyr Asn Ser Asp Pro Tyr Thr (2) INFORMAȚIE PENTRU SEQ ID NO:24:
(i) CARACTERISTICI DE SECVENȚĂ: 33 (A) LUNGIME: 9 aminoacizi (B) TIP: aminoacid 35 (D) TOPOLOGIE: lineară (ii) TIPUL MOLECULEI: peptidă (v) TIPUL FRAGMENTULUI: intern (xi) DESCRIEREA SECVENȚEI: SEQ ID NO:24:43
Gin Lys Tyr Ile Ser Ala Pro Tyr Thr45
RO 119831 Β1 (2) INFORMAȚIA PENTRU SEQ ID NO:25:
(i) CARACTERISTICI OE SECVENȚĂ:
(A) LUNGIME: 9 aminoacizi (B) TIP: aminoacid (D) TOPOLOGIE: lineară (ii) TIPUL MOLECULEI: peptidă (v) TIPUL FRAGMENTULUI; intern (xi) DESCRIEREA SECVENȚEI: SEQ ID NO:25:
Glia Lys Tyr Asn Arg Pro Pro Tyr Thr
5 (2) INFORMAȚIE PENTRU SEQ ID NO:26:
(i) CARACTERISTICI DE SECVENȚA:
(A) LUNGIME: 9 aminoacizi (B) TIP: aminoacid (D) TOPOLOGIE; lineară (ii) TIPUL MOLECULEI: peptidă (v) TIPUL FRAGMENTULUI: intern (Xi) DESCRIEREA SECVENȚEI: SEQ ID NO;26:
Gin Arg Tyr Asn Arg Ala Pro Tyr Ala
5 (2) INFORMAȚIE PENTRU SEQ ID NO:27:
(±) CARACTERISTICI DE SECVENȚĂ:
(A) LUNGIME: 12 aminoacizi (B) TIP: aminoacid (D) TOPOLOGIE: lineară
RO 119831 Β1 (11) TIPUL MOLECULEI: peptidă (v) TIPUL FRAGMENTULUI: intern (xl) DESCRIEREA SECVENȚEI: SEQ ID NO:27:
Ala Ser Tyr Leu Ser Thr Ser Ser Ser Leu Asp Asn
IO (2) INFORMAȚIE PENTRU SEQ ID NO:28:
(i) CARACTERISTICI DE SECVENȚĂ:
(A) LUNGIME: 12 aminoacizi (B) TIP: aminoacid (D) TOPOLOGIE: lineară (ii) TIPUL MOLECULEI: peptidă (v) TIPUL FRAGMENTULUI: intern (xi) DESCRIEREA SECVENȚEI: SEQ ID NO:28:
Ala Ser Tyr Leu Ser Thr Ser Ser Ser Leu Asp Lys
10 (2) INFORMAȚIE PENTRU SEQ ID NO:29:
(i) CARACTERISTICI DE SECVENȚĂ:
(A) LUNGIME: 12 aminoacizi (B) TIP: aminoacid <D) TOPOLOGIE: lineară (ii) TIPUL MOLECULEI: peptidă (v) TIPUL FRAGMENTULUI: intern (xi) DESCRIEREA SECVENȚEI: SEQ ID NO:29:
Ala Ser Tyr Leu Ser Thr Ser Ser Ser Leu Asp Tyr
10
RO 119831 Β1 (2) INFORMAȚIE PENTRU SEQ ID NO:30:
(i ) CARACTERISTICI DE SECVENȚĂ:
(A) LUNGIME: 12 aminoacizi (B) TIP: aminoacid (D) TOPOLOGIE: lineară (ii) TIPUL MOLECULEI: peptidă (v) TIPUL FRAGMENTULUI: intern (xi) DESCRIEREA SECVENȚEI: SEQ IQ NO:30:
Ala Ser Tyr Leu Ser Thr Ser Ser Ser Leu Asp Asp
5 10 (2) INFORMAȚIE PENTRU SEQ ID NO:31:
(i) CARACTERISTICI DE SECVENȚĂ:
(A) LUNGIME: 12 aminoacizi (B) TIP: aminoacid (D) TOPOLOGIE: lineară (ii) TIPUL MOLECULEI: peptidă (v) TIPUL FRAGMENTULUI: intern (xi) DESCRIEREA SECVENȚEI: SEQ ID NO:31:
Ala Ser Tyr Leu Ser Thr Ser Phe Sex Leu Asp Tyr
10 (2) INFORMAȚIE PENTRU SEQ ID NO:32:
(i) CARACTERISTICI DE SECVENȚĂ:
(A) LUNGIME: 12 aminoacizi (B) TIP: aminoacid (D) TOPOLOGIE: lineară
RO 119831 Β1 (ii) TIPUL MOLECULEI: peptidă 1 (v) TIPUL FRAGMENTULUI: intern (xi) DESCRIEREA SECVENȚEI: SEQ ID NO:32:$
Ala Ser Tyr Leu Ser Thr Ser Ser Ser Leu Hls Tyr
1510 (2) INFORMAȚIE PENTRU SEQ ID NO:33:
(i) CARACTERISTICI DE SCVENȚĂ:
(A) LUNGIME: 12 aminoacizi (B) TIP: aminoacid (D) TOPOLOGIE: lineară (ii) TIPUL MOLECULEI: peptidă (v) TIPUL FRAGMENTULUI: intern (xi) DESCRIEREA SECVENȚEI: SEQ ID NO:33:
Ala Ser Phe Leu Ser Thr Ser Ser Ser Leu Glu Tyr
10 (2) INFORMAȚIE PENRTU SEQ ID NO:34:
(i) CARACTERISTICI DE SECVENȚĂ:
(A) LUNGIME: 12 aminoacizi (B) TIP: aminoacid (D) TOPOLOGIE: lineară (ii) TIPUL MOLECULEI: peptidă (v) TIPUL FRAGMENTULUI: intern (xi) DESCRIEREA SECVENȚEI: SEQ ID NO:34:
Ala Ser Tyr Leu Ser Thr Ala Ser Ser Leu Glu Tyr
10
RO 119831 Β1 (2) INFORMAȚIE PENTRU SEQ ID NO:35:
(i) CARACTERISTICI DE SECVENȚA:
(A) LUNGIME: 12 aminoacizi (B) TIP: aminoacid (D) TOPOI.OGIF.: lineară (ii) TIPUL MOLECULEI: peptidă (v) TIPUL FRAGMENTULUI: intern (xi) DESCRIEREA SECVENȚEI: SEQ ID NO:35:
Val Ser Tyr Leu Ser Thr Ala Ser Ser Leu Asp Asn
10 (2) INFORMAȚIE PENTRU SEQ ID NO:36:
(i) CARACTERISTICI DE SECVENȚA:
(A) LUNGIME: 321 baze perechi (B) TIP: acid nucleic (C) ÎMPLETIRE: dublă (D) TOPOLOGIE: lineară (ii) TIPUL MOLECULEI: CADN (xi) DESCRIEREA SECVENȚEI: SEQ ID NO:36:
GACATCCAGA TGACCCAGTC TCCATCCTCC CTGTCTGCAT CTGTAGGGGA CAGAGTCACC 60
ATCACTTGTC GGGCAAGTCA GGGCATCAGA AATTACTTAG CCTGGTATCA GCAAAAACCA 120
GGGAAAGCCC CTAAGCTCCT GATCTATGCT GCATCCACTT TGCAATCAGG GGTCCCATCT 180
CGGTTCAGTG GCAGTGGATC TGGGACAGAT TTCACTCTCA CCATCAGCAG CCTACAGCCT 240
GAAGATGTTG CAACTTATTA CTGTCAAAGG TATAACCGTG CACCGTATAC TTTTGGCCAG 300
GGGACCAAGG TGGAAATCAA A 321

Claims (125)

  1. RO 119831 Β1
    Revendicări 1
    1. Anticorp uman izolat, sau porțiune de legare la antigen a acestuia, caracterizat 3 prin aceea că acesta cuprinde:
    a) un domeniu CDR3 al catenei ușoare care cuprinde secvența aminoacidă a SEQ 5 ID NR: 3, sau o secvență modificată a acesteia printr-o singură substituție aminoacidă a alaninei la pozițiile 1, 4, 5, 7 sau 8, sau prin 1-5 substituții aminoacide conservative din 7 pozițiile 1, 3, 4, 6, 7, 8 și/sau 9;
    b) un domeniu CDR3 al catenei grele care cuprinde secvența aminoacidă a SEQ ID 9 NR: 4, sau o secvență modificată a acesteia printr-o singură substituție aminoacidă a alaninei la pozițiile 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10 sau 11, sau prin 1-5 substituții aminoacide 11 conservative la pozițiile 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10, 11 și/sau 12;
    c) disocierea de TNFa uman cu de 1x10'8 M sau mai mică și constanta ratei KoH 13 de 1x10'3 s’1 sau mai mică, constante determinate prin rezonanța suprafeței plasmonului și neutralizarea citotoxicității TNFa uman într-un test L929 standard in vitro cu IC50 de 1x10’7 15
    M sau mai mic.
  2. 2. Anticorp conform revendicării 1, caracterizat prin aceea că regiunea variabilă a 17 catenei ușoare are un domeniu CDR2, care cuprinde secvența aminoacidă a SEQ ID NR:
    5 și regiunea variabilă a catenei grele are un domeniu CDR2 care cuprinde secvența 19 aminoacidă a SEQ ID NR:6.
  3. 3. Anticorp conform revendicării 1, caracterizat prin aceea că regiunea variabilă a 21 catenei ușoare are un domeniu CDR1, care cuprinde secvența aminoacidă a SEQ ID NR:7 și regiunea variabilă a catenei grele are un domeniu CDR1, care cuprinde secvența 23 aminoacidă a SEQ ID NR:8.
  4. 4. Anticorp conform revendicării 1, caracterizat prin aceea că regiunea variabilă a 25 catenei ușoare cuprinde secvența aminoacidă a SEQ ID NR:1 și regiunea variabilă a catenei grele cuprinde secvența aminoacidă a SEQ ID NR:2. 27
  5. 5. Anticorp conform revendicării 1, caracterizat prin aceea că regiunea variabilă a catenei ușoare are un domeniu CDR3 care cuprinde o secvență aminoacidă selectată din 29 grupul constând din: SEQ ID NR:3, SEQ ID NR:11, SEQ ID NR:12, SEQ ID NR:13, SEQ ID NR:14, SEQ ID NR:15, SEQ ID NR:16, SEQ ID NR:17, SEQ ID NR:18, SEQ ID NR:19, SEQ 31 ID NR:20, SEQ ID NR:21, SEQ ID NR:22, SEQ ID NR:23, SEQ ID NR:24, SEQ ID NR:25,
    SEQ ID NR:26, sau regiunea variabilă a catenei grele are un domeniu CDR3 care cuprinde 33 o secvență aminoacidă selectată din grupul constând din SEQ ID NR:4, SEQ ID NR:27, SEQ ID NR:28, SEC ID NR:29, SEQ ID NR:30, SEQ ID NR:31, SEQ ID NR:32, SEQ ID NR:33, 35
    SEQ ID NR:34.
  6. 6. Anticorp conform revendicării 1, caracterizat prin aceea că acesta cuprinde o re- 37 giune constantă a catenei grele a IgG 1.
  7. 7. Anticorp conform revendicării 1, caracterizat prin aceea că acesta cuprinde o re- 39 giune constantă a catenei grele a lgG4.
  8. 8. Anticorp conform revendicării 1, caracterizat prin aceea că disociază de TNFa 41 uman cu o constantă a ratei Ko(( de 5x10-4 s1 sau mai mică.
  9. 9. Anticorp conform revendicării 1, caracterizat prin aceea că disociază de TNFa 43 uman cu o constantă a ratei KoH de 1x1 θ’4 s’1 sau mai mică.
  10. 10. Anticorp conform revendicării 1, caracterizat prin aceea că neutralizează cito- 45 toxicitatea TNFa uman într-un test L929 standard in vitro cu IC50 DE 1x1 θ’8 M sau mai mic.
  11. 11. Anticorp conform revendicării 1, caracterizat prin aceea că neutralizează cito- 47 toxicitatea TNFa uman într-un test L929 standard in vitro cu IC50 de 1x10'9 M sau mai mic.
    RO 119831 Β1
  12. 12. Anticorp conform revendicării 1, caracterizat prin aceea că neutralizează citotoxicitatea TNFa uman într-un test L929 standard in vitro cu IC50 de 5 x10’1° M sau mai mic.
  13. 13. Anticorp conform revendicării 1, caracterizat prin aceea că inhibă expresia ELAM-1 pe celule endoteliale ale venei ombilicale umane indusă de TNFa uman.
  14. 14. Anticorp conform revendicării 1, caracterizat prin aceea că neutralizează activitatea TNFa de cimpanzeu și cel puțin un TNFa de la o primată suplimentară, selectată din grupul care constă din TNFa de babuin, TNFa de sanguin, TNFa de cynomolgus și TNFa de rhesus.
  15. 15. Anticorp conform revendicării 1, caracterizat prin aceea că neutralizează activitatea TNFa canin.
  16. 16. Anticorp conform revendicării 1, caracterizat prin aceea că neutralizează activitatea TNFa de la porc.
  17. 17. Anticorp conform revendicării 1, caracterizat prin aceea că e un anticorp recombinant sau porțiune de legare la antigen a acestuia.
  18. 18. Secvență de acid nucleic, caracterizată prin aceea că aceasta codifică un domeniu CDR3 al catenei ușoare ce cuprinde secvența aminoacidă a SEQ ID NR:3 sau o secvență modificată a acesteia printr-o singură substituție aminoacidă a alaninei la poziția 1,4, 5, 7, sau 8, sau prin 1-5 substituții aminoacide conservatoare la pozițiile 1,3, 4, 6, 7, 8 și/sau 9 sau codifică pentru un domeniu CDR3 al catenei grele cuprinzând secvența aminoacidă a SEQ ID NR: 4, sau o secvență modificată a acesteia printr-o singură substituție aminoacidă a alaninei la poziția 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9,10 sau 11, sau prin 1-5 substituții aminoacide conservative la pozițiile 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9,10,11 și/sau 12.
  19. 19. Secvență de acid nucleic, conform revendicării 18, caracterizată prin aceea că aceasta codifică pentru secvența SEQ ID NR:5 corespunzătoare domeniului CDR2 al regiunii variabile a catenei ușoare a numitului anticorp.
  20. 20. Secvență de acid nucleic, conform revendicării 18, caracterizată prin aceea că aceasta codifică pentru secvența SEQ ID NR:7 corespunzătoare domeniului CDR1 al regiunii variabile a catenei ușoare a numitului anticorp.
  21. 21. Secvență de acid nucleic, conform revendicării 18, caracterizată prin aceea că aceasta codifică pentru secvența SEQ ID NR:6 corespunzătoare domeniului CDR2, al regiunii variabile a catenei grele a numitului anticorp.
  22. 22. Secvență de acid nucleic, conform revendicării 18, caracterizată prin aceea că aceasta codifică pentru secvența SEQ ID NR:8 corespunzătoare domeniului CDR1 al regiunii variabile a catenei grele a numitului anticorp.
  23. 23. Secvență de acid nucleic, caracterizată prin aceea că aceasta codifică pentru secvența SEQ ID NR:1 corespunzătoare regiunii variabile a catenei ușoare a numitului anticorp.
  24. 24. Secvență de acid nucleic, caracterizată prin aceea că aceasta codifică pentru secvența SEQ ID NR:2 corespunzătoare regiunii variabile a catenei grele a numitului anticorp.
  25. 25. Secvență de acid nucleic, conform revendicării 18, caracterizată prin aceea că aceasta codifică pentru domeniul CDR3 al catenei ușoare și catenei grele ce corespunde secvențelor aminoacide selectate din grupul constând din: SEQ ID NR:3, SEQ ID NR:4, SEQ ID NR:11, SEQ ID NR:12, SEQ ID NR:13, SEQ ID NR:14, SEQ ID NR:15, SEQ ID NR:16, SEQ ID NR:17, SEQ ID NR:18, SEQ ID NR:19, SEQ ID NR:20, SEQ ID NR:21, SEQ ID NR:22, SEQ ID NR:23, SEQ ID NR:24, SEQ ID NR:25, SEQ ID NR:26, SEQ ID NR:27, SEQ ID NR:28, SEQ ID NR:29, SEQ ID NR:30, SEQ ID NR:31, SEQ ID NR:32, SEQ ID NR:33, și SEQ ID NR:34.
    RO 119831 Β1
  26. 26. Vector de expresie recombinant, caracterizat prin acea că acesta codifică:1
    a) un anticorp având o regiune variabilă a catenei ușoare care cuprinde secvența aminoacidă SEQ ID NR: 1; și3
    b) un anticorp având o regiune variabilă a catenei grele, care cuprinde secvența aminoacidă
    SEQ ID Nr:2.5
  27. 27. Compoziție farmaceutică, caracterizată prin aceea că aceasta cuprinde anticorpul sau porțiunea de legare antigen a acestuia, definite la revendicarea 1, și un 7 purtător acceptabil farmaceutic.
  28. 28. Compoziție farmaceutică, conform revendicării 27, caracterizată prin aceea că 9 mai cuprinde cel puțin un agent antiinflamator suplimentar pentru tratarea unei tulburări în care activitatea TNFa este dăunătoare. 11
  29. 29. Compoziție farmaceutică, conform revendicării 28, caracterizată prin aceea că agentul este selectat din grupul de medicamente antiinflamatoare constând din: medica- 13 mente antiinflamatoare nesteroidice, medicamente antiinflamatoare supresive ale citokinei, CDP-571/BAY-10-3356, cA2, 75 kdTNFR-lgG 55 kdTNFR-lgG, IDEC-CE9.1/SB 210396, 15
    DAB 486-IL-2, DAB 389-IL-2, Anti-Tac, IL-4, IL-10, agoniști IL-4, agoniști IL-10, IL-IRA, TNFbp/s-TNFR, S284, R973401, MK-966, lloprost, metotrexat, talidomidă, medicamente înrudite 17 talidomidă, leflunomidă, acid tranexanic, T-614, prostaglandin E1, tenidap, naproxen, meloxicam, piroxicam, diclofenac, indometacin, sulfsalazin, azatioprin, inhibitori ICE, inhibitori 19 zap-70, inhibitori Ick, inhibitori VEGF, inhibitori VEGF-R, corticosteroizi, inhibitori TNF-convertază, anticorpi anti-IL-12, interleukină-11, interleukină-13, inhibitori interleukină-17, aur, 21 penicilamină, clorochină, hidroxiclorochină, clorambucil, ciclofosfamidă, ciclosporină, globulină anti-timocit, anticorpi anti-CD4, CD5-toxine, peptide administrate oral, colagen, loben- 23 zărit disodiu, agenți de reglare citokină HP228 și HP466, oligodeoxinucleotide fosforotioat antisens ICAM-1, receptor 1 complement solubil, prednison, orgotein, polisulfat de glicosa- 25 minoglican, minociclină, anticorpi anti-IL2R, lipide marine, lipide botanice, auranofin, fenilbutazonă, acid meclofenamic, acid flufenamic, globulină imună intravenoasă, zileuton, acid 27 micofenolic, tacrolimus, sirolimus, amipriloză, cladribine, azaribine, budebosidă, factor de creștere epidermală, aminosalicilați, 6-mercaptopurină, metronidazol, inhibitori lipoxigenază, 29 mesalamină, olsalazină, balsalazidă, antioxidanți, inhibitori tromboxan, antagoniști ai receptorului IL-1, anticorpi monoclonali anti-IL-1 β, anticorpi monoclonali anti-IL-6, factori de 31 creștere, inhibitori elastază, compuși piridinil-imidazol, promedicamente glucuronid -conjugate ale prednisolonului, dexametazonei sau budezonidului, promedicamente dextran-con- 33 jugate ale prednisolonului, dexametrazonei sau budezonidului, receptor 1 complement solubil, mesalazină cu eliberare lentă, antagoniști ai factorului de activare a plachetelor (PAF), 35 ciprofloxacin, lignocaină, prednisolon, metilprednisolon, ciclofosfamidă, 4-aminopiridină, tizanidină, interferon-βΐ a, interferon-βΐ b, Copolimer 1, oxigen hiperbaric, imunoglobulină intra- 37 venoasă, clabribină, soluții saline hipertonice, antibiotice, hemofiltrare continuă, carbapenem, antagoniști ai citokinelor cum ar fi TNFa,IL-1 β, IL-6, și/sau IL-8, SK&F 107647, gua- 39 nilhidrazon tetravalent CNI-1493, factor inhibitor al căii țesutului, PHP, chelatori de fier și chelați, incluzând un complex acid dietilentriamină pentaacetic-fier (III), lizofilină, PGG- 41 glucan, apolipoproteină A-1 reconstituită cu lipide, acizi chiral hidroxamici, anticorpi antiendotoxină, E5531, rBPI22, peptide sintetice anti-endotoxină, anticorpi terapeutici de înlocuire 43 a surfactanților și anticorpi anti-IL-8.
  30. 30. Utilizare a unui anticorp uman izolat, sau a unei porțiuni de legare antigen a aces- 45 tuia, care disociază din TNFa uman cu un l^ de 1 x 10-8 M sau mai mic și o constantă a ratei
    KoW de 1 x 10'3 s’1 sau mai mică, ambele determinate prin rezonanța suprafeței plasmonului, 47
    RO 119831 Β1 și neutralizează citotoxicitatea TNFa uman într-un test standard L929 in vitro cu un IC50 de
    1 x 107 M sau mai mic, la fabricarea unui medicament pentru tratamentul unei tulburări pentru care activitatea TNFa este dăunătoare, în care anticorpul este administrat unui subiect uman, astfel încât activitatea TNFa uman la subiectul uman este inhibată.
  31. 31. Utilizare a unui anticorp uman izolat, sau a unei porțiuni de legare antigen a acestuia, cu următoarele caracteristici:
    a) disociază de la TNFa uman cu o rată constantă Kot( de 1 x 103 s’1, sau mai mică, determinată prin rezonanța suprafeței plasmonului;
    b) are un domeniu CDR3 al catenei ușoare care cuprinde secvența aminoacidă a SEQ ID NR:3, sau modificată de la SEQ ID NR:3 printr-o singură substituție alanină la poziția 1,4,5,7 sau 8, sau prin 1 la 5 substituții aminoacide conservative la pozițiile 1,3,4, 6, 7, 8 și/sau 9;
    c) are un domeniu CDR3 al catenei grele care cuprinde secvența aminoacidă a SEQ ID NR:4, sau modificată de la SEQ ID NR:4 printr-o singură substituție alanină la poziția 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10 sau 11, sau prin 1 la 5 substituții aminoacide conservative la pozițiile 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10, 11 și/sau 12.
    la fabricarea unui medicament pentru tratamentul unei tulburări pentru care activitatea TNFa este dăunătoare, în care anticorpul este administrat unui subiect uman, astfel încât activitatea TNFa uman la subiectul uman este inhibată.
  32. 32. Utilizare a unui anticorp uman izolat, sau a unei porțiuni de legare antigen a acestuia, cu o regiune variabilă a catenei ușoare (LCVR) cuprinzând secvența aminoacidă a SEQ ID NR:1 și cu o regiune variabilă a catenei grele (HCVR) cuprinzând secvența aminoacidă a SEQ ID NR:2 la fabricarea unui medicament pentru tratamentul unei tulburări în care activitatea TNFa este dăunătoare, în care anticorpul este administrat unui subiect uman, astfel încât activitatea TNFa uman la subiectul uman este inhibată.
  33. 33. Utilizare a unui anticorp D2E7 la fabricarea unui medicament pentru tratamentul unei tulburări în care activitatea TNFa este dăunătoare, în care anticorpul este administrat unui subiect uman astfel încât activitatea TNFa uman la subiectul uman este inhibată.
  34. 34. Utilizare a oricăreia dintre revendicările 30, 31,32 și 33, în care tulburarea este o boală autoimună.
  35. 35. Utilizare a oricăreia dintre revendicările 30, 31,32 și 33, în care tulburarea este o boală infecțioasă.
  36. 36. Utilizare a oricăreia dintre revendicările 30, 31, 32 și 33, în care tulburarea este respingerea transplantului sau boala gazdei față de grefă.
  37. 37. Utilizare a oricăreia dintre revendicările 30, 31, 32 și 33, în care tulburarea este o malignitate.
  38. 38. Utilizare a oricăreia dintre revendicările 30, 31, 32 și 33, în care tulburarea este o tulburare pulmonară.
  39. 39. Utilizare a oricăreia dintre revendicările 30, 31,32 și 33, în care tulburarea este o tulburare intestinală.
  40. 40. Utilizare a oricăreia dintre revendicările 30, 31, 32 și 33, în care tulburarea este o tulburare cardiacă.
  41. 41. Utilizare a oricăreia dintre revendicările 30, 31,32 și 33, în care tulburarea este sepsis.
  42. 42. Utilizare conform revendicării 41, în care anticorpul se administrează la subiectul uman împreună cu citokina interleukină-6 (IL-6), sau se administrează la un subiect uman cu o concentrație serică sau plasmatică de IL-6 peste 500 pg/ml.
    RO 119831 Β1
  43. 43. Utilizare a oricăreia dintre revendicările 30, 31,32 și 33, în care tulburarea este 1 artrită reumatoidă.
  44. 44. Utilizare a oricăreia dintre revendicările 30, 31,32 și 33, în care tulburarea este 3 spondilită reumatoidă.
  45. 45. Utilizare a oricăreia dintre revendicările 30, 31,32 și 33, în care tulburarea este 5 artroză.
  46. 46. Utilizare a oricăreia dintre revendicările 30, 31,32 și 33, în care tulburarea este 7 artrită gutoasă.
  47. 47. Utilizare a oricăreia dintre revendicările 30, 31,32 și 33, în care tulburarea este 9 o alergie.
  48. 48. Utilizare a oricăreia dintre revendicările 30, 31,32 și 33, în care tulburarea este 11 scleroză multiplă.
  49. 49. Utilizare a oricăreia dintre revendicările 30, 31,32 și 33, în care tulburarea este 13 diabet autoimun.
  50. 50. Utilizare a oricăreia dintre revendicările 30, 31,32 și 33, în care tulburarea este 15 uveită autoimună.
  51. 51. Utilizare a oricăreia dintre revendicările 30, 31, 32 și 33, în care tulburarea este 17 sindrom nefrotic.
  52. 52. Utilizare a oricăreia dintre revendicările 30,31,32 și 33, în care tulburarea constă 19 din tulburări inflamatorii ale osului.
  53. 53. Utilizare a oricăreia dintre revendicările 30, 31,32 și 33, în care tulburarea este 21 boala de resorbție osoasă.
  54. 54. Utilizare a oricăreia dintre revendicările 30, 31, 32 și 33, în care tulburarea este 23 hepatită alcoolică.
  55. 55. Utilizare a oricăreia dintre revendicările 30, 31,32 și 33, în care tulburarea este 25 hepatită virală.
  56. 56. Utilizare a oricăreia dintre revendicările 30,31,32 și 33, în care tulburarea constă 27 din tulburări de coagulare.
  57. 57. Utilizare a oricăreia dintre revendicările 30,31,32 și 33, în care tulburarea constă 29 din arsuri.
  58. 58. Utilizare a oricăreia dintre revendicările 30,31,32 și 33, în care tulburarea constă 31 din leziuni de reperfuzare.
  59. 59. Utilizare a oricăreia dintre revendicările 30, 31,32 și 33, în care tulburarea este 33 formarea cheloidului.
  60. 60. Utilizare a oricăreia dintre revendicările 30, 31,32 și 33, în care tulburarea este 35 formarea țesutului cicatricial.
  61. 61. Utilizare a oricăreia dintre revendicările 30, 31, 32 și 33, în care tulburarea este 37 pirexie.
  62. 62. Utilizare a unui anticorp uman izolat, sau a unei porțiuni de legare antigen a aces- 39 tuia, care disociază din TNFa uman cu un 1^ de 1 x 10’8 M sau mai mic și o constantă a ratei
    Kot) de 1 x 103 s'1 sau mai mică, ambele determinate prin rezonanța suprafeței plasmonului, 41 și neutralizează citotoxicitatea TNFa uman într-un test standard L929 in vitro cu un IC50 de
    1 x 107 M sau mai mic, la fabricarea unui medicament pentru tratamentul unei tulburări în 43 care activitatea TNFa este dăunătoare, în care anticorpul este administrat unui subiect, astfel încât tulburarea este tratată. 45
  63. 63. Utilizare a unui anticorp uman izolat, sau a unei porțiuni de legare antigen a aces- tuia, cu următoarele caracteristici: 47
    RO 119831 Β1
    a) disociază de la TNFa uman cu o rată constantă KoH de 1 x 103 s \ sau mai mică determinată prin rezonanța suprafeței plasmonului;
    b) are un domeniu CDR3 al catenei ușoare, care cuprinde secvența aminoacidă a SEQ ID NR:3, sau modificată de la SEQ ID NR:3 printr-o singură substituție alanină la poziția 1,4, 5, 7, sau 8, sau prin 1 la 5 substituții aminoacide conservative la pozițiile 1, 3, 4, 6, 7, 8 și/sau 9;
    c) are un domeniu CDR3 al catenei grele care cuprinde secvența aminoacidă a SEQ ID NR:4, sau modificată de la SEQ ID NR:4 printr-o singură substituție alanină la poziția 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9,10 sau 11, sau prin 1 la 5 substituții aminoacide conservative la pozițiile 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10, 11 și/sau 12.
    la fabricarea unui medicament pentru tratamentul unei tulburări în care activitatea TNFa este dăunătoare, în care anticorpul este administrat unui subiect astfel încât tulburarea este tratată.
  64. 64. Utilizare a unui anticorp uman izolat, sau a unei porțiuni de legare antigen a acestuia, cu o regiune variabilă a catenei ușoare (LCVR), cuprinzând secvența aminoacidă a SEQ ID NR:1 și cu o regiune variabilă a catenei grele (HCVR) cuprinzând secvența aminoacidă a SEQ ID NR:2 la fabricarea unui medicament pentru tratamentul unei tulburări în care activitatea TNFa este dăunătoare, în care anticorpul este administrat unui subiect astfel încât tulburarea este tratată.
  65. 65. Utilizare a unui anticorp D2E7 la fabricarea unui medicament pentru tratamentul unei tulburări la care activitatea TNFa este dăunătoare, în care anticorpul este administrat unui subiect astfel încât se tratează tulburarea.
  66. 66. Utilizare a oricăreia dintre revendicările 62, 63, 64 și 65, în care tulburarea este o boală autoimună.
  67. 67. Utilizare a oricăreia dintre revendicările 62, 63, 64 și 65, în care tulburarea este o boală infectioasă.
    I
  68. 68. Utilizare a oricăreia dintre revendicările 62, 63, 64 și 65, în care tulburarea este respingerea transplantului sau boala gazdei față de grefă.
  69. 69. Utilizare a oricăreia dintre revendicările 62, 63, 64 și 65, în care tulburarea este o malignitate.
  70. 70. Utilizare a oricăreia dintre revendicările 62, 63, 64 și 65, în care tulburarea este o tulburare pulmonară.
  71. 71. Utilizare a oricăreia dintre revendicările 62, 63, 64 și 65, în care tulburarea este o tulburare intestinală.
  72. 72. Utilizare a oricăreia dintre revendicările 62, 63, 64 și 65, în care tulburarea este o tulburare cardiacă.
  73. 73. Utilizare a oricăreia dintre revendicările 62, 63, 64 și 65, în care tulburarea este sepsis.
  74. 74. Utilizare conform revendicării 73, în care anticorpul se administrează la un subiect uman împreună cu citokina interleukină-6 (IL-6), sau se administrează la un subiect uman cu o concentrație serică sau plasmidică de IL-6 peste 500 pg/ml.
  75. 75. Utilizare a oricăreia dintre revendicările 62, 63, 64 și 65 în care tulburarea este artrită reumatoidă.
  76. 76. Utilizare a oricăreia dintre revendicările 62, 63, 64 și 65 , în care tulburarea este spondilită reumatoidă.
  77. 77. Utilizare a oricăreia dintre revendicările 62, 63, 64 și 65, în care tulburarea este artroză. _____
    RO 119831 Β1
  78. 78. Utilizare a oricăreia dintre revendicările 62,63, 64 și 65, în care tulburarea este 1 artrită gutoasă.
  79. 79. Utilizare a oricăreia dintre revendicările 62, 63, 64 și 65, în care tulburarea este 3 o alergie.
  80. 80. Utilizare a oricăreia dintre revendicările 62, 63, 64 și 65, în care tulburarea este 5 scleroză multiplă.
  81. 81. Utilizare a oricăreia dintre revendicările 62, 63, 64 și 65, în care tulburarea este 7 diabet autoimun.
  82. 82. Utilizare a oricăreia dintre revendicările 62, 63, 64 și 65, în care tulburarea este 9 uveită autoimună.
  83. 83. Utilizare a oricăreia dintre revendicările 62, 63, 64 și 65, în care tulburarea este 11 sindrom nefrotic.
  84. 84. Utilizare a oricăreia dintre revendicările 62,63,64 și 65, în care tulburarea constă 13 din tulburări inflamatorii ale osului.
  85. 85. Utilizare a oricăreia dintre revendicările 62, 63, 64 și 65, în care tulburarea este 15 boala de resorpție osoasă.
  86. 86. Utilizare a oricăreia dintre revendicările 62, 63, 64 și 65, în care tulburarea este 17 hepatită alcoolică.
  87. 87. Utilizare a oricăreia dintre revendicările 62, 63, 64 și 65, în care tulburarea este 19 hepatită virală.
  88. 88. Utilizare a oricăreia dintre revendicările 62,63,64 și 65, în care tulburarea constă 21 din tulburări de coagulare.
  89. 89. Utilizare a oricăreia dintre revendicările 62,63,64 și 65, în care tulburarea constă 23 din arsuri.
  90. 90. Utilizare a oricăreia dintre revendicările 62,63,64 și 65, în care tulburarea constă 25 din leziuni de reperfuzare.
  91. 91. Utilizare a oricăreia dintre revendicările 62, 63, 64 și 65, în care tulburarea este 27 formarea cheloidului.
  92. 92. Utilizare a oricăreia dintre revendicările 62, 63, 64 și 65, în care tulburarea este 29 formarea țesutului cicatricial.
  93. 93. Utilizare a oricăreia dintre revendicările 62, 63, 64 și 65, în care tulburarea este 31 piraxie.
  94. 94. Utilizare a oricăreia dintre revendicările 30, 31, 32, 33, 62, 63, 64 și 65, în care 33 anticorpul uman izolat este combinat cu un purtător acceptabil farmaceutic.
  95. 95. Utilizare a oricăreia dintre revendicările 30, 31,32, 33, 62, 63, 64 și 65, în care 35 anticorpul uman izolat este administrat cu cel puțin un agent terapeutic suplimentar.
  96. 96. Utilizare a oricăreia dintre revendicările 62, 63, 64 și 65, în care subiectul este 37 uman.
  97. 97. Utilizare a oricăreia dintre revendicările 62, 63, 64 și 65, în care tulburarea este 39 șoc septic.
  98. 98. Utilizare a oricăreia dintre revendicările 62, 63, 64 și 65, în care tulburarea este 41 șoc endotoxic.
  99. 99. Utilizare a oricăreia dintre revendicările 62, 63, 64 și 65, în care tulburarea este 43 sepsis gram negativ.
  100. 100. Utilizare a oricăreia dintre revendicările 62,63,64 și 65, în care tulburarea este 45 sindrom de șoc toxic.
  101. 101. Utilizare a oricăreia dintre revendicările 62,63, 64 și 65, în care tulburarea este 47 malarie.
    RO 119831 Β1
  102. 102. Utilizare a oricăreia dintre revendicările 62,63,64 și 65, în care tulburarea este meningită.
  103. 103. Utilizare a oricăreia dintre revendicările 62,63,64 și 65, în care tulburarea este cașexie.
  104. 104. Utilizare a oricăreia dintre revendicările 62,63,64 și 65, în care tulburarea este SIDA.
  105. 105. Utilizare a oricăreia dintre revendicările 62,63,64 și 65, în care tulburarea este meningită bacteriană.
  106. 106. Utilizare a din oricare dintre revendicările 62, 63, 64 și 65, în care tulburarea este complexul în relație cu SIDA (ARC).
  107. 107. Utilizare a oricăreia dintre revendicările 62,63,64 și 65, în care tulburarea este infecție cu citomegalovirus, ca urmare a transplantului.
  108. 108. Utilizare a oricăreia dintre revendicările 62,63,64 și 65, în care tulburarea este febră și mialgie datorată infecției și cașexie, ca urmare a infecției.
  109. 109. Utilizare a oricăreia dintre revendicările 62,63,64 și 65, în care tulburarea este respingerea alogrefei.
  110. 110. Utilizare a oricăreia dintre revendicările 62, 63, 64 și 65 în care tulburarea este stimularea creșterii tumorale.
  111. 111. Utilizare a oricăreia dintre revendicările 62, 63,64 și 65, în care tulburarea este ameliorarea potențialului metastazic și medierea citotoxicității în malignitate.
  112. 112. Utilizare a oricăreia dintre revendicările 62,63,64 și 65, în care tulburarea este inhibarea creșterii tumorale sau a metastazelor.
  113. 113. Utilizare a oricăreia dintre revendicările 62,63,64 și 65, în care tulburarea este sindromul de insuficiență respiratorie acută, al adultului.
  114. 114. Utilizare a oricăreia dintre revendicările 62,63,64 și 65, în care tulburarea este șoc pulmonar.
  115. 115. Utilizare a oricăreia dintre revendicările 62,63,64 și 65, în care tulburarea este tulburare inflamatorie pulmonară cronică.
  116. 116. Utilizare a oricăreia dintre revendicările 62,63,64 și 65, în care tulburarea este sarcoidoză pulmonară.
  117. 117. Utilizare a oricăreia dintre revendicările 62,63,64 și 65, în care tulburarea este fibroză pulmonară.
  118. 118. Utilizare a oricăreia dintre revendicările 62,63,64 și 65, în care tulburarea este silicoză.
  119. 119. Utilizare a oricăreia dintre revendicările 62,63,64 și 65, în care tulburarea este tulburare intestinală inflamatorie.
  120. 120. Utilizare a oricăreia dintre revendicările 62,63,64 și 65, în care tulburarea este tulburare intestinală inflamatorie idiopatică.
  121. 121. Utilizare a oricăreia dintre revendicările 62,63,64 și 65, în care tulburarea este boala Crohn.
  122. 122. Utilizare a oricăreia dintre revendicările 62,63,64 și 65, în care tulburarea este colită ulcerativă.
  123. 123. Utilizare a oricăreia dintre revendicările 62,63,64 și 65, în care tulburarea este ischemie cardiacă.
  124. 124. Utilizare a oricăreia dintre revendicările 62,63,64 și 65, în care tulburarea este insuficiență cardiacă.
  125. 125. Utilizare a oricăreia dintre revendicările 62,63, 64 și 65, în care tulburarea este hepatită.
RO98-01269A 1996-02-09 1997-02-10 Anticorp uman, care se leagă la tnf alfa, cu acţiune antiinflamatoare RO119831B1 (ro)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US08/599,226 US6090382A (en) 1996-02-09 1996-02-09 Human antibodies that bind human TNFα
US3147696P 1996-11-25 1996-11-25
PCT/US1997/002219 WO1997029131A1 (en) 1996-02-09 1997-02-10 HUMAN ANTIBODIES THAT BIND HUMAN TNF$g(a)

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RO119831B1 true RO119831B1 (ro) 2005-04-29

Family

ID=26707297

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RO98-01269A RO119831B1 (ro) 1996-02-09 1997-02-10 Anticorp uman, care se leagă la tnf alfa, cu acţiune antiinflamatoare
ROA200500050A RO123028B1 (ro) 1996-02-09 1997-02-10 Anticorpi umani, care leagă tnf alpha uman

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
ROA200500050A RO123028B1 (ro) 1996-02-09 1997-02-10 Anticorpi umani, care leagă tnf alpha uman

Country Status (32)

Country Link
US (9) US6258562B1 (ro)
EP (1) EP0929578B1 (ro)
JP (8) JP3861118B2 (ro)
KR (1) KR100317188B1 (ro)
CN (5) CN102070715A (ro)
AT (1) ATE239041T1 (ro)
AU (1) AU722077B2 (ro)
BG (7) BG64564B1 (ro)
BR (3) BRPI9715219B8 (ro)
CA (1) CA2243459C (ro)
CY (2) CY2463B1 (ro)
CZ (1) CZ292465B6 (ro)
DE (4) DE122004000004I1 (ro)
DK (1) DK0929578T3 (ro)
ES (1) ES2198552T3 (ro)
HK (4) HK1214610A1 (ro)
HU (4) HU221984B1 (ro)
IL (4) IL125697A (ro)
LU (1) LU91062I2 (ro)
MX (1) MX336813B (ro)
NL (1) NL300143I2 (ro)
NO (6) NO316711B1 (ro)
NZ (5) NZ536216A (ro)
PL (2) PL193499B1 (ro)
PT (1) PT929578E (ro)
RO (2) RO119831B1 (ro)
RU (3) RU2270030C2 (ro)
SI (1) SI9720020B (ro)
SK (1) SK284040B6 (ro)
TR (1) TR199801532T2 (ro)
UA (2) UA57726C2 (ro)
WO (1) WO1997029131A1 (ro)

Families Citing this family (478)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20030225254A1 (en) * 1989-08-07 2003-12-04 Rathjen Deborah Ann Tumour necrosis factor binding ligands
US5959087A (en) * 1989-08-07 1999-09-28 Peptide Technology, Ltd. Tumour necrosis factor binding ligands
JP3443119B2 (ja) * 1989-08-07 2003-09-02 ペプテック リミテッド 腫瘍壊死因子結合リガンド
US7192584B2 (en) 1991-03-18 2007-03-20 Centocor, Inc. Methods of treating psoriasis with anti-TNF antibodies
US6270766B1 (en) 1992-10-08 2001-08-07 The Kennedy Institute Of Rheumatology Anti-TNF antibodies and methotrexate in the treatment of arthritis and crohn's disease
US6830751B1 (en) * 1994-03-14 2004-12-14 Genetics Institute, Llc Use of IL-12 antagonists in the treatment of rheumatoid arthritis
ZA95960B (en) * 1994-03-14 1995-10-10 Genetics Inst Use of interleukin-12 antagonists in the treatment of autoimmune diseases
US20010055581A1 (en) 1994-03-18 2001-12-27 Lawrence Tamarkin Composition and method for delivery of biologically-active factors
US6090382A (en) 1996-02-09 2000-07-18 Basf Aktiengesellschaft Human antibodies that bind human TNFα
DE122004000004I1 (de) * 1996-02-09 2004-08-12 Abott Biotechnology Ltd Humane Antikörper welche an Humanen TNFalpha binden.
US7129061B1 (en) * 1996-08-07 2006-10-31 Biogen Idec Ma Inc. Tumor necrosis factor related ligand
US20040009166A1 (en) * 1997-04-30 2004-01-15 Filpula David R. Single chain antigen-binding polypeptides for polymer conjugation
JP2002505574A (ja) * 1997-04-30 2002-02-19 エンゾン，インコーポレイテッド ポリアルキレンオキシド修飾された単鎖ポリペプチド
US7229841B2 (en) 2001-04-30 2007-06-12 Cytimmune Sciences, Inc. Colloidal metal compositions and methods
US6407218B1 (en) 1997-11-10 2002-06-18 Cytimmune Sciences, Inc. Method and compositions for enhancing immune response and for the production of in vitro mabs
US7067144B2 (en) * 1998-10-20 2006-06-27 Omeros Corporation Compositions and methods for systemic inhibition of cartilage degradation
ES2277460T3 (es) 1998-12-14 2007-07-01 Genetics Institute, Llc Cadena del receptor de la citoquina.
US7553487B2 (en) 1998-12-14 2009-06-30 Genetics Institute, Llc Method and compositions for treating asthma
AU756677B2 (en) * 1999-03-02 2003-01-23 Centocor Inc. Anti-TNFalpha antibodies in therapy of asthma
US6914128B1 (en) 1999-03-25 2005-07-05 Abbott Gmbh & Co. Kg Human antibodies that bind human IL-12 and methods for producing
US20040220103A1 (en) 1999-04-19 2004-11-04 Immunex Corporation Soluble tumor necrosis factor receptor treatment of medical disorders
CA2386457A1 (en) * 1999-10-06 2001-04-12 Basf Aktiengesellschaft Inhibitors of the endothelin signalling pathway and .alpha.v.beta.3 integrin receptor antagonists for combination therapy
TWI373343B (en) 2000-02-10 2012-10-01 Abbott Gmbh & Co Kg Antibodies that bind human interleukin-18 and methods of making and using
GB0013810D0 (en) 2000-06-06 2000-07-26 Celltech Chiroscience Ltd Biological products
CN101525384A (zh) 2000-06-29 2009-09-09 艾博特公司 双特异性抗体及其制备方法和用途
UA81743C2 (uk) 2000-08-07 2008-02-11 Центокор, Инк. МОНОКЛОНАЛЬНЕ АНТИТІЛО ЛЮДИНИ, ЩО СПЕЦИФІЧНО ЗВ'ЯЗУЄТЬСЯ З ФАКТОРОМ НЕКРОЗУ ПУХЛИН АЛЬФА (ФНПα), ФАРМАЦЕВТИЧНА КОМПОЗИЦІЯ, ЩО ЙОГО МІСТИТЬ, ТА СПОСІБ ЛІКУВАННЯ РЕВМАТОЇДНОГО АРТРИТУ
US20050196755A1 (en) * 2000-11-17 2005-09-08 Maurice Zauderer In vitro methods of producing and identifying immunoglobulin molecules in eukaryotic cells
EP1355666B1 (en) 2000-12-22 2012-06-13 Max-Planck-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. Use of repulsive guidance molecule (RGM) and its modulators
US20090137416A1 (en) 2001-01-16 2009-05-28 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Isolating Cells Expressing Secreted Proteins
WO2002057423A2 (en) * 2001-01-16 2002-07-25 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Isolating cells expressing secreted proteins
CA2440676A1 (en) 2001-03-22 2002-10-03 Abbott Gmbh & Co. Kg Transgenic animals expressing antibodies specific for genes of interest and uses thereof
US6410955B1 (en) * 2001-04-19 2002-06-25 Micron Technology, Inc. Comb-shaped capacitor for use in integrated circuits
CA2385745C (en) * 2001-06-08 2015-02-17 Abbott Laboratories (Bermuda) Ltd. Methods of administering anti-tnf.alpha. antibodies
EP1414517A4 (en) * 2001-06-26 2008-02-06 Photomed Technologies Inc MULTIPLE WAVELENGTH ILLUMINATOR
MY143582A (en) 2001-06-26 2011-05-31 Amgent Fremont Inc Antibodies to opgl
US20050271663A1 (en) * 2001-06-28 2005-12-08 Domantis Limited Compositions and methods for treating inflammatory disorders
TWI334439B (en) 2001-08-01 2010-12-11 Centocor Inc Anti-tnf antibodies, compositions, methods and uses
WO2003024384A2 (en) * 2001-09-20 2003-03-27 Magnum Therapeutics Improved methods for treatment with viral vectors
US20030065382A1 (en) * 2001-10-02 2003-04-03 Fischell Robert E. Means and method for the treatment of coronary artery obstructions
EP1432431B1 (en) 2001-10-04 2017-05-10 Genetics Institute LLC Methods and compositions for modulating interleukin-21 activity
AU2003218432A1 (en) * 2002-03-26 2003-10-13 Centocor, Inc. Diabetes-related immunoglobulin derived proteins, compositions, methods and uses
US20030206898A1 (en) * 2002-04-26 2003-11-06 Steven Fischkoff Use of anti-TNFalpha antibodies and another drug
US20040009172A1 (en) * 2002-04-26 2004-01-15 Steven Fischkoff Use of anti-TNFalpha antibodies and another drug
US20090280065A1 (en) * 2006-04-10 2009-11-12 Willian Mary K Uses and Compositions for Treatment of Psoriasis
AR040603A1 (es) * 2002-07-19 2005-04-13 Abbott Lab S A El uso de un anticuerpo anti-tnfalfa neutralizador de alta afinidad en la fabricacion de un medicamento y conjunto de elementos
US20040033228A1 (en) 2002-08-16 2004-02-19 Hans-Juergen Krause Formulation of human antibodies for treating TNF-alpha associated disorders
WO2004019861A2 (en) * 2002-08-28 2004-03-11 Pharmacia Corporation Stable ph optimized formulation of a modified antibody
MY150740A (en) * 2002-10-24 2014-02-28 Abbvie Biotechnology Ltd Low dose methods for treating disorders in which tnf? activity is detrimental
US9320792B2 (en) 2002-11-08 2016-04-26 Ablynx N.V. Pulmonary administration of immunoglobulin single variable domains and constructs thereof
WO2004041862A2 (en) * 2002-11-08 2004-05-21 Ablynx N.V. Single domain antibodies directed against tumour necrosis factor-alpha and uses therefor
US20060034845A1 (en) 2002-11-08 2006-02-16 Karen Silence Single domain antibodies directed against tumor necrosis factor alpha and uses therefor
US20040162414A1 (en) * 2002-11-22 2004-08-19 Santora Ling C. Method for reducing or preventing modification of a polypeptide in solution
US20040101939A1 (en) * 2002-11-22 2004-05-27 Santora Ling C. Method for reducing or preventing modification of a polypeptide in solution
US7285269B2 (en) 2002-12-02 2007-10-23 Amgen Fremont, Inc. Antibodies directed to tumor necrosis factor
MXPA05007019A (es) * 2002-12-30 2005-08-18 Amgen Inc Terapia de combinacion con factores co-estimuladores.
WO2004063335A2 (en) * 2003-01-08 2004-07-29 Applied Molecular Evolution TNF-α BINDING MOLECULES
US7101978B2 (en) * 2003-01-08 2006-09-05 Applied Molecular Evolution TNF-α binding molecules
RU2357974C2 (ru) * 2003-01-10 2009-06-10 Аблинкс Н.В. Терапевтические полипептиды, их гомологи, их фрагменты и их применение для модуляции агрегации, опосредованной тромбоцитами
DE10303974A1 (de) 2003-01-31 2004-08-05 Abbott Gmbh & Co. Kg Amyloid-β(1-42)-Oligomere, Verfahren zu deren Herstellung und deren Verwendung
CA2518371A1 (en) 2003-03-14 2004-09-30 Wyeth Antibodies against human il-21 receptor and uses therefor
EP1460088A1 (en) 2003-03-21 2004-09-22 Biotest AG Humanized anti-CD4 antibody with immunosuppressive properties
WO2004098578A2 (en) * 2003-05-12 2004-11-18 Altana Pharma Ag Composition comprising a pde4 inhibitor and a tnf-alfa antagonist selected from infliximab, adalimumab, cdp870 and cdp517
FR2856075B1 (fr) * 2003-06-16 2007-10-12 Monoclonal Antibodies Therapeu Procede essentiellement automatise de criblage a grande echelle de cellules secretant des anticorps monoclonaux
FR2859725B1 (fr) * 2003-09-16 2006-03-10 Neovacs Procede a haut rendement pour l'obtention d'anticorps humains neutralisant l'activite biologique d'une cytokine humaine
US20050100965A1 (en) 2003-11-12 2005-05-12 Tariq Ghayur IL-18 binding proteins
KR100772800B1 (ko) * 2003-11-17 2007-11-01 주식회사유한양행 인간 종양괴사인자 α를 인식하는 단일클론항체의가변영역 및 이를 코딩하는 유전자
WO2005065121A2 (en) 2003-12-02 2005-07-21 Cytimmune Sciences, Inc. Methods and compositions for the production of monoclonal antibodies
DK2805728T3 (da) 2003-12-23 2020-04-20 Genentech Inc Hidtil ukendte anti-IL13-antistoffer og anvendelser deraf
US7435799B2 (en) * 2004-01-08 2008-10-14 Applied Molecular Evolution TNF-α binding molecules
AU2005227313A1 (en) 2004-03-19 2005-10-06 Amgen Inc. Reducing the risk of human and anti-human antibodies through V gene manipulation
US7625549B2 (en) * 2004-03-19 2009-12-01 Amgen Fremont Inc. Determining the risk of human anti-human antibodies in transgenic mice
TWI439284B (zh) 2004-04-09 2014-06-01 Abbvie Biotechnology Ltd 用於治療ＴＮＦα相關失調症之多重可變劑量療法
CN100427504C (zh) * 2004-06-02 2008-10-22 北京天广实生物技术有限公司 TNFα高亲和力嵌合抗体及其用途
AR049390A1 (es) 2004-06-09 2006-07-26 Wyeth Corp Anticuerpos contra la interleuquina-13 humana y usos de los mismos
US7501121B2 (en) 2004-06-17 2009-03-10 Wyeth IL-13 binding agents
GB0414054D0 (en) 2004-06-23 2004-07-28 Owen Mumford Ltd Improvements relating to automatic injection devices
CA2574848A1 (en) * 2004-08-05 2006-12-21 Wyeth Antagonizing interleukin-21 receptor activity
EP1807111A4 (en) * 2004-10-08 2009-05-27 Abbott Biotech Ltd SYNCYTIAL RESPIRATORY VIRUS INFECTION (RSV)
JP2008517914A (ja) * 2004-10-22 2008-05-29 ジェネンコー・インターナショナル・インク ヒトの抗体の分離方法
WO2006055871A2 (en) 2004-11-19 2006-05-26 Biogen Idec Ma Inc. Treatment for multiple sclerosis
EP3520815B1 (en) 2005-02-08 2021-11-17 Genzyme Corporation Antibodies to tgfbeta
CA2596986A1 (en) * 2005-02-14 2006-08-24 Wyeth Use of il-17f in diagnosis and therapy of airway inflammation
EP2322553A3 (en) * 2005-02-14 2011-11-16 Wyeth LLC Interleukin-17F antibodies and other IL-17F signaling antagonists and uses therefor
US20090124993A1 (en) 2005-02-17 2009-05-14 Burkly Linda C Treating neurological disorders
GT200600148A (es) 2005-04-14 2006-11-22 Metodos para el tratamiento y la prevencion de fibrosis
CA2607697C (en) 2005-05-10 2015-01-06 Biogen Idec Ma Inc. Treating and evaluating inflammatory disorders
AU2012254978C1 (en) * 2005-05-16 2017-06-01 Abbvie Biotechnology Ltd Use of TNF inhibitor for treatment of erosive polyarthritis
AU2006246721B2 (en) 2005-05-16 2012-12-13 Abbvie Biotechnology Ltd Use of TNF inhibitor for treatment of erosive polyarthritis
AU2006254971A1 (en) * 2005-06-06 2006-12-14 Wyeth Expression profiles of peripheral blood mononuclear cells for inflammatory bowel diseases
JP5089582B2 (ja) 2005-06-07 2012-12-05 エスバテック、アン アルコン バイオメディカル リサーチ ユニット、エルエルシー ＴＮＦαを阻害する安定な可溶性抗体
ES2776657T3 (es) 2005-06-14 2020-07-31 Amgen Inc Formulaciones de proteínas autotamponantes
US20060286108A1 (en) * 2005-06-16 2006-12-21 Bell Katherine A Topical compositions for the treatment of chronic wounds
JP2008543449A (ja) * 2005-06-17 2008-12-04 アボット・ラボラトリーズ 変性脊椎疾患の改良型治療方法
EP3725299A1 (en) * 2005-06-24 2020-10-21 Duke University A direct drug delivery system based on thermally responsive biopolymers
BRPI0613784A2 (pt) * 2005-07-21 2011-02-01 Abbott Lab expressão de gene múltipla incluindo constructos sorf e métodos com poliproteìnas, pro-proteìnas e proteólise
TW200726776A (en) * 2005-07-29 2007-07-16 Friedrich Alexander University Of Erlangen Nuremberg CD33-specific single-chain immunotoxin and methods of use
US7612181B2 (en) 2005-08-19 2009-11-03 Abbott Laboratories Dual variable domain immunoglobulin and uses thereof
US20090215992A1 (en) * 2005-08-19 2009-08-27 Chengbin Wu Dual variable domain immunoglobulin and uses thereof
US20070041905A1 (en) * 2005-08-19 2007-02-22 Hoffman Rebecca S Method of treating depression using a TNF-alpha antibody
EP2500357A3 (en) 2005-08-19 2012-10-24 Abbott Laboratories Dual variable domain immunoglobulin and uses thereof
EP2500352A1 (en) 2005-08-19 2012-09-19 Abbott Laboratories Dual variable domain immunoglobulin and uses thereof
US8906864B2 (en) 2005-09-30 2014-12-09 AbbVie Deutschland GmbH & Co. KG Binding domains of proteins of the repulsive guidance molecule (RGM) protein family and functional fragments thereof, and their use
WO2007049286A1 (en) * 2005-10-27 2007-05-03 Tata Memorial Centre A system for ex-vivo separation of apoptotic chromatin particles from blood or plasma
CA2626804A1 (en) 2005-11-01 2007-08-09 Abbott Biotechnology Ltd. Methods and compositions for diagnosing ankylosing spondylitis using biomarkers
PE20070684A1 (es) 2005-11-14 2007-08-06 Amgen Inc MOLECULAS QUIMERICAS DE ANTICUERPO RANKL-PTH/PTHrP
KR20180058863A (ko) 2005-11-30 2018-06-01 애브비 인코포레이티드 아밀로이드 베타 단백질에 대한 모노클로날 항체 및 이의 용도
PT1954718E (pt) 2005-11-30 2014-12-16 Abbvie Inc Anticorpos anti-globulómeros aβ, suas porções de ligação ao antigénio, correspondentes hibridomas, ácidos nucleicos, vectores, células hospedeiras, métodos de produção dos ditos anticorpos, composições compreendendo os ditos anticorpos, usos dos ditos anticorpos e métodos para uso dos ditos anticorpos
US8334257B2 (en) 2005-12-20 2012-12-18 Duke University Methods and compositions for delivering active agents with enhanced pharmacological properties
US8841255B2 (en) 2005-12-20 2014-09-23 Duke University Therapeutic agents comprising fusions of vasoactive intestinal peptide and elastic peptides
US20130172274A1 (en) 2005-12-20 2013-07-04 Duke University Methods and compositions for delivering active agents with enhanced pharmacological properties
EP1987064A4 (en) 2006-02-01 2010-04-07 Arana Therapeutics Ltd DOMAIN ANTIBODY CONSTRUCT
TW200744634A (en) 2006-02-21 2007-12-16 Wyeth Corp Methods of using antibodies against human IL-22
TWI417301B (zh) 2006-02-21 2013-12-01 Wyeth Corp 對抗人類介白素-２２（ｉｌ-２２）之抗體及其用途
MX2008012896A (es) 2006-04-05 2008-10-14 Abbott Biotech Ltd Purificacion de anticuerpos.
WO2007120626A2 (en) * 2006-04-10 2007-10-25 Abbott Biotechnology Ltd. Uses and compositions for treatment of ankylosing spondylitis
US20090317399A1 (en) * 2006-04-10 2009-12-24 Pollack Paul F Uses and compositions for treatment of CROHN'S disease
US20080118496A1 (en) * 2006-04-10 2008-05-22 Medich John R Uses and compositions for treatment of juvenile rheumatoid arthritis
WO2007120656A2 (en) 2006-04-10 2007-10-25 Abbott Biotechnology Ltd. Uses and compositions for treatment of rheumatoid arthritis
EP2708242A3 (en) 2006-04-10 2014-03-26 Abbott Biotechnology Ltd Uses and compositions for treatment of ankylosing spondylitis
US9605064B2 (en) 2006-04-10 2017-03-28 Abbvie Biotechnology Ltd Methods and compositions for treatment of skin disorders
CA2564435A1 (en) 2006-04-10 2007-10-10 Abbott Biotechnology Ltd. Methods for monitoring and treating intestinal disorders
EP2666472A3 (en) 2006-04-10 2014-04-02 Abbott Biotechnology Ltd Uses and compositions for treatment of psoriatic arthritis
US20080131374A1 (en) * 2006-04-19 2008-06-05 Medich John R Uses and compositions for treatment of rheumatoid arthritis
US20100021451A1 (en) 2006-06-08 2010-01-28 Wong Robert L Uses and compositions for treatment of ankylosing spondylitis
US20080311043A1 (en) * 2006-06-08 2008-12-18 Hoffman Rebecca S Uses and compositions for treatment of psoriatic arthritis
CN103316402A (zh) 2006-06-30 2013-09-25 艾伯维生物技术有限公司 自动注射装置
KR101544108B1 (ko) 2006-09-08 2015-08-13 애브비 바하마스 리미티드 인터루킨-13 결합 단백질
US8911964B2 (en) 2006-09-13 2014-12-16 Abbvie Inc. Fed-batch method of making human anti-TNF-alpha antibody
EP2500416A1 (en) 2006-09-13 2012-09-19 Abbott Laboratories Cell culture improvements
BRPI0716762A2 (pt) 2006-09-13 2013-09-24 Abbott Lab melhorias da cultura celular
NZ576133A (en) 2006-10-27 2012-10-26 Abbott Biotech Ltd Crystalline anti-htnfalpha antibodies
US8754107B2 (en) 2006-11-17 2014-06-17 Abbvie Inc. Aminopyrrolidines as chemokine receptor antagonists
CN101605547A (zh) 2006-11-21 2009-12-16 卡罗拜奥斯制药公司 使用gm-csf拮抗剂治疗慢性炎症疾病的方法
US8455626B2 (en) 2006-11-30 2013-06-04 Abbott Laboratories Aβ conformer selective anti-aβ globulomer monoclonal antibodies
WO2008082651A2 (en) 2006-12-29 2008-07-10 Abbott Laboratories Dual-specific il-1a/ il-1b antibodies
AU2008205512B2 (en) * 2007-01-16 2014-06-12 Abbvie Inc. Methods for treating psoriasis
JP2008209378A (ja) * 2007-01-31 2008-09-11 Fujifilm Corp バイオセンサー基板
WO2008097525A2 (en) 2007-02-05 2008-08-14 Potentia Pharmaceuticals, Inc. Local complement inhibition for treatment of complement-mediated disorders
US20100311767A1 (en) 2007-02-27 2010-12-09 Abbott Gmbh & Co. Kg Method for the treatment of amyloidoses
JP5622397B2 (ja) * 2007-03-12 2014-11-12 エスバテック− ア ノバルティス カンパニー エルエルシー 一本鎖抗体の配列に基づく操作および最適化
TW200902064A (en) * 2007-03-28 2009-01-16 Wyeth Corp Methods and compositions for modulating IL-17F/IL-17A biological activity
US7807168B2 (en) * 2007-04-10 2010-10-05 Vaccinex, Inc. Selection of human TNFα specific antibodies
WO2008124858A2 (en) * 2007-04-11 2008-10-23 F-Star Biotechnologische Forschungs- Und Entwicklungsges. M.B.H. Targeted receptor
WO2008150491A2 (en) 2007-05-31 2008-12-11 Abbott Laboratories BIOMARKERS PREDICTIVE OF THE RESPONSIVENESS TO TNFα INHIBITORS IN AUTOIMMUNE DISORDERS
EP2152318A4 (en) * 2007-06-01 2011-12-07 Abbott Biotech Ltd COMPOSITIONS AND USES FOR THE TREATMENT OF PSORIASIS AND CROHN'S DISEASE
WO2008149147A2 (en) * 2007-06-06 2008-12-11 Domantis Limited Polypeptides, antibody variable domains and antagonists
EA200901494A1 (ru) * 2007-06-06 2010-06-30 Домантис Лимитед Способы селекции протеазоустойчивых полипептидов
WO2008154543A2 (en) 2007-06-11 2008-12-18 Abbott Biotechnology Ltd. Methods for treating juvenile idiopathic arthritis
ES2707815T3 (es) * 2007-06-14 2019-04-05 Biogen Ma Inc Formulaciones de anticuerpo natalizumab
AU2008267733B2 (en) * 2007-06-25 2013-11-14 Esbatech, An Alcon Biomedical Research Unit Llc Sequence based engineering and optimization of single chain antibodies
DK2158315T3 (en) 2007-06-25 2016-06-06 Esbatech Alcon Biomed Res Unit Methods of modifying antibodies and modified antibodies with improved functional properties
EP2173380A4 (en) * 2007-07-13 2011-08-31 Abbott Biotech Ltd METHOD AND COMPOSITIONS FOR PULMONARY ADMINISTRATION OF A TNFa HEMMER
WO2009020654A1 (en) 2007-08-08 2009-02-12 Abbott Laboratories Compositions and methods for crystallizing antibodies
CA3128656A1 (en) 2007-08-22 2009-02-26 The Regents Of The University Of California Activatable binding polypeptides and methods of identification and use thereof
WO2009032128A1 (en) * 2007-08-28 2009-03-12 Abbott Biotechnology Ltd. Compositions and methods comprising binding proteins for adalimumab
KR101666228B1 (ko) 2007-09-28 2016-10-13 인트렉손 코포레이션 생물치료학적 분자를 발현시키기 위한 치료학적 유전자-스위치 작제물 및 생물반응기, 및 이의 용도
JP2009082033A (ja) * 2007-09-28 2009-04-23 Kaneka Corp 完全ヒト型抗体生産法
EP2219458B1 (en) 2007-11-08 2015-07-15 Cytimmune Sciences, Inc. Compositions and methods for generating antibodies
NZ622583A (en) 2007-11-30 2015-08-28 Abbvie Biotechnology Ltd Protein formulations and methods of making same
US8883146B2 (en) 2007-11-30 2014-11-11 Abbvie Inc. Protein formulations and methods of making same
CN101965514A (zh) * 2008-01-03 2011-02-02 艾博特生物技术有限公司 预测化合物在治疗银屑病中的长期功效
BRPI0907186A2 (pt) 2008-01-15 2015-07-14 Abbott Gmbh & Co Kg Composições proteicas pulverizadas e métodos para sua produção
US8962803B2 (en) 2008-02-29 2015-02-24 AbbVie Deutschland GmbH & Co. KG Antibodies against the RGM A protein and uses thereof
RU2540018C2 (ru) 2008-03-13 2015-01-27 Биотест Аг Средство для лечения заболевания
CN102027016A (zh) 2008-03-13 2011-04-20 生物测试股份公司 一种治疗疾病的试剂
EP2265643B1 (en) 2008-03-13 2016-10-19 Biotest AG Dosing regimen for treating psoriasis and rheumatoid arthritis
KR20100126515A (ko) 2008-03-18 2010-12-01 아보트 러보러터리즈 건선의 치료방법
JP5646457B2 (ja) 2008-04-29 2014-12-24 アッヴィ・インコーポレイテッド 二重可変ドメイン免疫グロブリン及びその使用
US20100260668A1 (en) * 2008-04-29 2010-10-14 Abbott Laboratories Dual Variable Domain Immunoglobulins and Uses Thereof
EP2113568A1 (en) 2008-04-30 2009-11-04 Deutsches Rheuma-Forschungszentrum Berlin Knock-in mouse for modelling blockade of human TNFalpha
KR101649168B1 (ko) 2008-05-09 2016-08-18 애브비 인코포레이티드 최종 당화 산물의 수용체(ｒａｇｅ)에 대한 항체 및 이의 용도
US20110112281A1 (en) * 2008-05-20 2011-05-12 Kaneka Corporation Cytotoxic composition
JP2011523853A (ja) * 2008-06-03 2011-08-25 アボット・ラボラトリーズ 二重可変ドメイン免疫グロブリン及びその使用
AR072000A1 (es) 2008-06-03 2010-07-28 Abbott Lab Proteinas de union multivalentes con capacidad de unir dos o mas antigenos y usos de la misma
US9556265B2 (en) 2008-06-25 2017-01-31 Esbatech, An Alcon Biomedical Research Unit Llc Solubility optimization of immunobinders
RU2653753C1 (ru) 2008-06-25 2018-05-14 ИЭсБиЭйТЕК, ЭН АЛЬКОН БАЙОМЕДИКАЛ РИСЕРЧ ЮНИТ ЭлЭлСи СТАБИЛЬНЫЕ И РАСТВОРИМЫЕ АНТИТЕЛА, ИНГИБИРУЮЩИЕ TNFα
HUE032894T2 (hu) 2008-06-25 2017-11-28 Esbatech Alcon Biomed Res Unit VEGF-gátló, stabilis és oldható antitestek
EP3412300A1 (en) 2008-06-27 2018-12-12 Duke University Therapeutic agents comprising elastin-like peptides
WO2010003118A1 (en) * 2008-07-02 2010-01-07 Trubion Pharmaceuticals, Inc. Tgf-b antagonist multi-target binding proteins
BRPI0915448A2 (pt) 2008-07-08 2015-11-10 Abbott Lab imunoglobulinas de domínio variável duplo para prostaglandina e2 e usos das mesmas
BRPI0915825A2 (pt) 2008-07-08 2015-11-03 Abbott Lab proteínas de ligação à prostaglandina e2 usos das mesmas
RU2011105466A (ru) * 2008-08-28 2012-10-10 ВАЙЕТ ЭлЭлСи (US) Применения цитокинов семейств il-22, il-17 и il-1 при аутоиммунных заболеваниях
CA2739794A1 (en) * 2008-10-07 2010-04-15 National Cheng Kung University Use of il-20 antagonists for treating rheumatoid arthritis and osteoporosis
KR20110079693A (ko) 2008-10-29 2011-07-07 와이어쓰 엘엘씨 단일 도메인 항원 결합 분자의 정제 방법
EP2362767B1 (en) 2008-10-29 2017-12-06 Ablynx N.V. Formulations of single domain antigen binding molecules
US8415291B2 (en) 2008-10-31 2013-04-09 Centocor Ortho Biotech Inc. Anti-TNF alpha fibronectin type III domain based scaffold compositions, methods and uses
CN101419224B (zh) * 2008-11-06 2012-08-22 复旦大学附属华山医院 一种同时测定人血浆中霉酚酸酯、霉酚酸及其代谢物的方法
AU2009319856A1 (en) * 2008-11-28 2010-06-03 Abbvie Inc. Stable antibody compositions and methods for stabilizing same
CN101766602B (zh) * 2008-12-30 2012-01-11 中国医学科学院血液病医院（血液学研究所） 取代芳香基腙类化合物在作为肿瘤坏死因子抑制剂药物方面的应用
KR20110110247A (ko) 2008-12-30 2011-10-06 센토코 오르토 바이오테크 인코포레이티드 강직성 척추염 환자에서 항-ＴＮＦα 항체에 대한 임상적 반응을 예측하는 혈청 마커
EP3543256A1 (en) 2009-01-12 2019-09-25 Cytomx Therapeutics Inc. Modified antibody compositions, methods of making and using thereof
BRPI1011384A2 (pt) 2009-02-23 2016-03-15 Cytomx Therapeutics Inc pro-proteinas e seus metodos de uso
US8030026B2 (en) 2009-02-24 2011-10-04 Abbott Laboratories Antibodies to troponin I and methods of use thereof
SG173705A1 (en) 2009-03-05 2011-09-29 Abbott Lab Il-17 binding proteins
CA2758964A1 (en) * 2009-04-16 2010-10-21 Abbott Biotherapeutics Corp. Anti-tnf-.alpha. antibodies and their uses
CN101875694B (zh) * 2009-04-28 2014-04-02 中国医学科学院基础医学研究所 TNFα的抗体及其用途
CN102458517B (zh) 2009-04-29 2014-07-23 阿布维生物技术有限公司 自动注射装置
RU2560701C2 (ru) * 2009-05-04 2015-08-20 Эббви Байотекнолоджи Лтд. Стабильные композиции с высокими концентрациями белков антител человека против tnf-альфа
WO2010132872A1 (en) * 2009-05-15 2010-11-18 Novimmune S.A Combination therapies and methods using anti-cd3 modulating agents and anti-tnf antagonists
UY32808A (es) * 2009-07-29 2011-02-28 Abbott Lab Inmunoglobulinas como dominio variable dual y usos de las mismas
WO2011020091A1 (en) 2009-08-14 2011-02-17 Phasebio Pharmaceuticals, Inc. Modified vasoactive intestinal peptides
CN102711820A (zh) * 2009-08-21 2012-10-03 吉联亚生物科技有限公司 治疗肺纤维化疾病的方法和组合物
MX336152B (es) 2009-08-29 2016-01-08 Abbvie Inc Proteinas terapeutico de union a dll4.
KR20120060877A (ko) 2009-09-01 2012-06-12 아보트 러보러터리즈 이원 가변 도메인 면역글로불린 및 이의 용도
SG179135A1 (en) * 2009-09-14 2012-05-30 Abbott Lab Methods for treating psoriasis
US20110071276A1 (en) * 2009-09-24 2011-03-24 Xbiotech, Inc. Method of modifying a monoclonal antibody
AU2010298036B2 (en) 2009-09-25 2015-05-21 Xoma Technology Ltd. Screening methods
US8926976B2 (en) 2009-09-25 2015-01-06 Xoma Technology Ltd. Modulators
TW201119676A (en) 2009-10-15 2011-06-16 Abbott Lab Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
MX2012004877A (es) * 2009-10-26 2012-05-23 Prometheus Lab Inc Analisis para la deteccion de farmacos anti-tnf y autoanticuerpos.
UY32979A (es) 2009-10-28 2011-02-28 Abbott Lab Inmunoglobulinas con dominio variable dual y usos de las mismas
EP2493923A1 (en) * 2009-10-30 2012-09-05 Abbott Laboratories Sorf constructs and multiple gene expression
US8420083B2 (en) 2009-10-31 2013-04-16 Abbvie Inc. Antibodies to receptor for advanced glycation end products (RAGE) and uses thereof
WO2011058087A1 (en) 2009-11-11 2011-05-19 Gentian As Immunoassay for assessing related analytes of different origin
GB0920944D0 (en) 2009-11-30 2010-01-13 Biotest Ag Agents for treating disease
US8871208B2 (en) * 2009-12-04 2014-10-28 Abbvie Inc. 11-β-hydroxysteroid dehydrogenase type 1 (11β-HSD1) inhibitors and uses thereof
MX2012006560A (es) 2009-12-08 2012-10-05 Abbott Gmbh & Co Kg Anticuerpos monoclonales contra la proteina rgm a para utilizarse en el tratamiento de degeneracion de capa de fibra de nervio retinal.
NZ600069A (en) 2009-12-15 2015-02-27 Abbvie Biotechnology Ltd Improved firing button for automatic injection device
JP2013514388A (ja) 2009-12-16 2013-04-25 フィリップ ボッシュ， 間質性膀胱炎の処置の方法
USRE49251E1 (en) 2010-01-04 2022-10-18 Mapi Pharma Ltd. Depot systems comprising glatiramer or pharmacologically acceptable salt thereof
WO2011092715A2 (en) * 2010-01-27 2011-08-04 Tata Memorial Centre Method for in-vivo binding of chromatin fragments
EP2531613A2 (en) 2010-02-02 2012-12-12 Abbott Biotechnology Ltd. Methods and compositions for predicting responsiveness to treatment with tnf-alpha inhibitor
CN102167741B (zh) * 2010-02-25 2014-05-14 上海百迈博制药有限公司 一种全人源抗TNF-α单克隆抗体、其制备方法及用途
EP3072904A1 (en) 2010-03-02 2016-09-28 Abbvie Inc. Therapeutic dll4 binding proteins
EP3372617B1 (en) 2010-04-02 2024-07-24 Amunix Pharmaceuticals, Inc. Binding fusion proteins, binding fusion protein-drug conjugates, xten-drug conjugates and methods of making and using same
CN102958537B (zh) 2010-04-07 2015-09-16 Abbvie公司 TNF-α结合蛋白
MX336196B (es) 2010-04-15 2016-01-11 Abbvie Inc Proteinas de union a amiloide beta.
HUE050858T2 (hu) 2010-04-16 2021-01-28 Biogen Ma Inc VLA-4 ellenes antitestek
NZ702172A (en) 2010-04-21 2016-03-31 Abbvie Biotechnology Ltd Wearable automatic injection device for controlled delivery of therapeutic agents
MY161302A (en) 2010-05-14 2017-04-14 Abbvie Inc IL-1 binding proteins
US20110287018A1 (en) 2010-05-19 2011-11-24 Philip Bosch Methods of Treating Interstitial Cystitis
HUE039740T2 (hu) 2010-06-03 2019-01-28 Abbvie Biotechnology Ltd Alkalmazások és készítmények hidradenitis suppurativa (HS) kezelésére
US20120009196A1 (en) 2010-07-08 2012-01-12 Abbott Laboratories Monoclonal antibodies against hepatitis c virus core protein
UY33492A (es) 2010-07-09 2012-01-31 Abbott Lab Inmunoglobulinas con dominio variable dual y usos de las mismas
US20120100166A1 (en) 2010-07-15 2012-04-26 Zyngenia, Inc. Ang-2 Binding Complexes and Uses Thereof
EP3252072A3 (en) 2010-08-03 2018-03-14 AbbVie Inc. Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
EP3533803B1 (en) 2010-08-14 2021-10-27 AbbVie Inc. Anti-amyloid-beta antibodies
JP6121903B2 (ja) 2010-08-19 2017-04-26 ゾエティス・ベルジャム・エス・アー 抗ｎｇｆ抗体およびその使用
SG187938A1 (en) 2010-08-26 2013-04-30 Abbvie Inc Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
AR083495A1 (es) 2010-10-22 2013-02-27 Esbatech Alcon Biomed Res Unit Anticuerpos estables y solubles
CA2811805A1 (en) 2010-10-29 2012-05-03 Abbvie Inc. Solid dispersions containing an apoptosis-inducing agent
UA113500C2 (xx) 2010-10-29 2017-02-10 Одержані екструзією розплаву тверді дисперсії, що містять індукуючий апоптоз засіб
EP2635694A4 (en) * 2010-11-02 2015-11-11 Abbott Lab VARIABLE DOUBLE DOMAIN IMMUNOGLOBULINS AND USES THEREOF
AU2011325974B2 (en) 2010-11-11 2016-10-27 Abbvie Biotechnology Ltd. Improved high concentration anti-TNFalpha antibody liquid formulations
SG190399A1 (en) 2010-11-23 2013-06-28 Abbvie Inc Methods of treatment using selective bcl-2 inhibitors
CN107266435A (zh) 2010-11-23 2017-10-20 Abbvie 公司 细胞凋亡诱导剂的盐和晶形
AR084210A1 (es) * 2010-12-08 2013-05-02 Abbott Lab PROTEINAS DE UNION AL TNF-a
AU2011361720B2 (en) 2010-12-21 2017-04-27 Abbvie Inc. IL-1 -alpha and -beta bispecific dual variable domain immunoglobulins and their use
TW201307388A (zh) 2010-12-21 2013-02-16 Abbott Lab Ｉｌ－１結合蛋白
EP2490024A1 (en) 2010-12-22 2012-08-22 Proteomika, S.L. Method to optimize the treatment of patients with biological drugs
EP3187216B1 (en) 2011-01-24 2019-08-21 AbbVie Biotechnology Ltd. Automatic injection devices having overmolded gripping surfaces
AU2012209222B2 (en) 2011-01-24 2015-07-09 Abbvie Biotechnology Ltd Removal of needle shields from syringes and automatic injection devices
US8992477B2 (en) 2011-01-24 2015-03-31 Elcam Agricultural Cooperative Association Ltd. Injector
RU2455025C1 (ru) * 2011-02-10 2012-07-10 Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Белгородский государственный национальный исследовательский университет" (НИУ "БелГУ") Способ фармакологической коррекции ишемии конечности смесью растворов гомеопатических разведений
US20130344081A1 (en) 2011-03-07 2013-12-26 The University Of Tokushima Method of treating amyotrophic lateral sclerosis
MX2013010699A (es) 2011-03-18 2014-03-27 Abbvie Inc Sistemas, dispositivosy metodos para ensamblar dispositivos de inyeccion automaticos y sub-ensambles de los mismos.
TWI588156B (zh) 2011-03-28 2017-06-21 賽諾菲公司 具有交叉結合區定向之雙重可變區類抗體結合蛋白
JP2014515658A (ja) 2011-03-29 2014-07-03 アッヴィ・インコーポレイテッド 自動注射装置における改善されたシュラウド展開
AU2012245211B2 (en) 2011-04-21 2016-03-10 Abbvie Inc. Wearable automatic injection device
EP2702077A2 (en) 2011-04-27 2014-03-05 AbbVie Inc. Methods for controlling the galactosylation profile of recombinantly-expressed proteins
EP2714738B1 (en) 2011-05-24 2018-10-10 Zyngenia, Inc. Multivalent and monovalent multispecific complexes and their uses
KR102292563B1 (ko) 2011-05-31 2021-08-24 바이오젠 엠에이 인코포레이티드 Pml의 위험을 판단하는 방법
EP2717902B1 (en) 2011-06-06 2018-01-24 Phasebio Pharmaceuticals, Inc. Use of modified vasoactive intestinal peptides in the treatment of hypertension
AU2012283039A1 (en) 2011-07-13 2014-01-30 Abbvie Inc. Methods and compositions for treating asthma using anti-IL-13 antibodies
GB201112429D0 (en) * 2011-07-19 2011-08-31 Glaxo Group Ltd Antigen-binding proteins with increased FcRn binding
WO2013019889A2 (en) * 2011-08-01 2013-02-07 Avaxia Biologics, Inc. Bovine polyclonal antibody specific for human tnf
CN109608543A (zh) * 2011-10-20 2019-04-12 艾斯巴技术-诺华有限责任公司 稳定的多抗原结合抗体
UY34411A (es) 2011-10-24 2013-05-31 Abbvie Inc Inmunoenlazantes dirigidos contra esclerostina
MX2014004980A (es) 2011-10-24 2014-09-11 Abbvie Inc Inmunoaglutinantes biespecificos dirigidos contra tnf e il-17.
HK1200464A1 (en) 2011-10-24 2015-08-07 Abbvie Inc. Immunobinders directed against tnf
HK1202628A1 (en) 2011-11-30 2015-10-02 Abbvie Deutschland Gmbh & Co Kg Methods and compositions for determining responsiveness to treatment with a tnf-alpha inhibitor
JP6342812B2 (ja) 2011-12-14 2018-06-13 アッヴィ・ドイチュラント・ゲー・エム・ベー・ハー・ウント・コー・カー・ゲー 鉄関連障害を診断および治療するための組成物および方法
CA2855570A1 (en) 2011-12-14 2013-06-20 AbbVie Deutschland GmbH & Co. KG Composition and method for the diagnosis and treatment of iron-related disorders
US20140359902A1 (en) 2011-12-16 2014-12-04 Synthon Biopharmaceuticals B.V. EXPRESSION OF SECRETORY IgA ANTIBODIES IN DUCKWEED
CN104159920A (zh) 2011-12-30 2014-11-19 艾伯维公司 针对il-13和/或il-17的双重可变结构域免疫球蛋白
AR090047A1 (es) 2011-12-30 2014-10-15 Abbvie Inc Dominio variable dual de inmunoglobulinas y sus usos
PE20190907A1 (es) 2012-01-27 2019-06-26 AbbVie Deutschland GmbH and Co KG Composicion y metodo para el diagnostico y el tratamiento de las enfermedades asociadas a la degeneracion de las neuritas
JP2015509526A (ja) 2012-03-07 2015-03-30 カディラ ヘルスケア リミティド 医薬製剤
US9067990B2 (en) 2013-03-14 2015-06-30 Abbvie, Inc. Protein purification using displacement chromatography
US9181572B2 (en) 2012-04-20 2015-11-10 Abbvie, Inc. Methods to modulate lysine variant distribution
US9334319B2 (en) 2012-04-20 2016-05-10 Abbvie Inc. Low acidic species compositions
US9505833B2 (en) 2012-04-20 2016-11-29 Abbvie Inc. Human antibodies that bind human TNF-alpha and methods of preparing the same
EP2657334B1 (en) 2012-04-26 2016-07-06 GeneFrontier Corporation Efficient method for displaying protein multimer
WO2013176754A1 (en) 2012-05-24 2013-11-28 Abbvie Inc. Novel purification of antibodies using hydrophobic interaction chromatography
US9617334B2 (en) 2012-06-06 2017-04-11 Zoetis Services Llc Caninized anti-NGF antibodies and methods thereof
ES2718478T3 (es) 2012-06-08 2019-07-02 Sutro Biopharma Inc Anticuerpos que comprenden restos de aminoácidos no naturales de localización específica, métodos para su preparación y métodos para su uso
WO2014011955A2 (en) 2012-07-12 2014-01-16 Abbvie, Inc. Il-1 binding proteins
SG11201501464TA (en) 2012-08-31 2015-03-30 Sutro Biopharma Inc Modified amino acids comprising an azido group
US9512214B2 (en) 2012-09-02 2016-12-06 Abbvie, Inc. Methods to control protein heterogeneity
HK1211981A1 (en) 2012-09-02 2016-06-03 Abbvie Inc. Methods to control protein heterogeneity
AU2013312300A1 (en) 2012-09-07 2015-04-16 Coherus Biosciences, Inc. Stable aqueous formulations of adalimumab
RU2648141C2 (ru) * 2012-09-19 2018-03-22 Эббви Биотерапьютикс Инк. Способы идентификации антител с пониженной иммуногенностью
MY171664A (en) 2012-11-01 2019-10-22 Abbvie Inc Anti-dll4/vegf dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
AU2013337644A1 (en) 2012-11-01 2015-05-07 Abbvie Inc. Stable Dual Variable Domain Immunoglobulin protein formulations
TWI675044B (zh) 2012-11-14 2019-10-21 美商再生元醫藥公司 重組細胞表面捕捉蛋白質
US9550986B2 (en) 2012-12-21 2017-01-24 Abbvie Inc. High-throughput antibody humanization
EP2938634A2 (en) 2012-12-28 2015-11-04 AbbVie Inc. Dual specific binding proteins having a receptor sequence
US9856319B2 (en) 2012-12-28 2018-01-02 Abbvie Inc. Monovalent binding proteins
AU2014215639B2 (en) 2013-01-25 2017-03-23 Thymon, Llc Compositions for selective reduction of circulating bioactive soluble TNF and methods for treating TNF-mediated disease
CN105308068A (zh) 2013-02-13 2016-02-03 法国化学与生物科技实验室 高度半乳糖基化的抗TNF-α抗体及其用途
US20140275082A1 (en) 2013-03-14 2014-09-18 Abbvie Inc. Apoptosis-inducing agents for the treatment of cancer and immune and autoimmune diseases
BR112015023239A8 (pt) 2013-03-14 2018-04-17 Abbott Lab ensaio de combinação de anticorpo-antígeno de hcv e métodos e composições para uso do mesmo
WO2014151878A2 (en) 2013-03-14 2014-09-25 Abbvie Inc. Methods for modulating protein glycosylation profiles of recombinant protein therapeutics using monosaccharides and oligosacharides
MX2015012824A (es) 2013-03-14 2016-06-24 Abbott Lab Antigenos recombinantes ns3 del vhc y mutantes de los mismos para la deteccion mejorada de anticuerpos.
MX376492B (es) 2013-03-14 2025-03-07 Abbott Lab Anticuerpos monoclonares que se unen al dominio de unión a lípidos de la proteína de la cápside del virus de la hepatitis c (vhc)
HK1213919A1 (zh) 2013-03-14 2016-07-15 Abbvie Inc. 低酸性物質組合物和利用置換色譜技術製備該組合物的方法
AU2013384204B2 (en) 2013-03-14 2017-03-16 Abbvie Inc. Low acidic species compositions and methods for producing and using the same
US9017687B1 (en) 2013-10-18 2015-04-28 Abbvie, Inc. Low acidic species compositions and methods for producing and using the same using displacement chromatography
WO2014159579A1 (en) * 2013-03-14 2014-10-02 Abbvie Inc. MUTATED ANTI-TNFα ANTIBODIES AND METHODS OF THEIR USE
EP3424530A1 (en) 2013-03-15 2019-01-09 Zyngenia, Inc. Multivalent and monovalent multispecific complexes and their uses
US9469686B2 (en) 2013-03-15 2016-10-18 Abbott Laboratories Anti-GP73 monoclonal antibodies and methods of obtaining the same
WO2014144299A2 (en) 2013-03-15 2014-09-18 Abbvie Inc. DUAL SPECIFIC BINDING PROTEINS DIRECTED AGAINST TNFα
JP2016522793A (ja) 2013-03-15 2016-08-04 アッヴィ・インコーポレイテッド ＩＬ−１βおよび／またはＩＬ−１７に対して指向された二重特異的結合タンパク質
JP2016520595A (ja) * 2013-05-22 2016-07-14 メタボリック エンジニアリング ラボラトリーズ カンパニー リミテッド 抗ＴＮＦ−α／ＣＸＣＬ１０二重ターゲット抗体及びその用途
US10183988B2 (en) 2013-06-07 2019-01-22 Duke University Anti-Complement factor H antibodies
US9764039B2 (en) 2013-07-10 2017-09-19 Sutro Biopharma, Inc. Antibodies comprising multiple site-specific non-natural amino acid residues, methods of their preparation and methods of their use
US20150038454A1 (en) * 2013-07-31 2015-02-05 Mary Malast Antimicrobial compositions and methods of use
KR102332302B1 (ko) 2013-09-13 2021-12-01 제넨테크, 인크. 세포주에서 숙주 세포 단백질 및 재조합 폴리펩티드 생성물을 검출 및 정량화하기 위한 조성물 및 방법
SG10201802525QA (en) 2013-09-13 2018-04-27 Genentech Inc Methods and compositions comprising purified recombinant polypeptides
WO2015051293A2 (en) 2013-10-04 2015-04-09 Abbvie, Inc. Use of metal ions for modulation of protein glycosylation profiles of recombinant proteins
JP2016535765A (ja) 2013-10-06 2016-11-17 アビー・インコーポレイテッドＡｂｂＶｉｅ Ｉｎｃ． 免疫細胞受容体及び自己抗原を対象とする二重特異性結合タンパク質
WO2015054658A1 (en) 2013-10-11 2015-04-16 Sutro Biopharma, Inc. Modified amino acids comprising tetrazine functional groups, methods of preparation, and methods of their use
WO2015057910A1 (en) 2013-10-16 2015-04-23 Oncobiologics, Inc. Buffer formulations for enhanced antibody stability
US8946395B1 (en) 2013-10-18 2015-02-03 Abbvie Inc. Purification of proteins using hydrophobic interaction chromatography
US9085618B2 (en) 2013-10-18 2015-07-21 Abbvie, Inc. Low acidic species compositions and methods for producing and using the same
US9181337B2 (en) 2013-10-18 2015-11-10 Abbvie, Inc. Modulated lysine variant species compositions and methods for producing and using the same
US20150139988A1 (en) 2013-11-15 2015-05-21 Abbvie, Inc. Glycoengineered binding protein compositions
CA2931978A1 (en) 2013-12-02 2015-06-11 Abbvie Inc. Compositions and methods for treating osteoarthritis
CN103965357B (zh) 2013-12-31 2016-08-17 嘉和生物药业有限公司 一种抗人rankl抗体
EP3757224A3 (en) 2014-02-27 2021-03-17 Biogen MA Inc. Method of assessing risk of pml
JP6293907B2 (ja) 2014-03-10 2018-03-14 リヒター ゲデオン エヌワイアールティー． プレクリーニング工程を用いた免疫グロブリンの精製
TWI731535B (zh) 2014-03-21 2021-06-21 美商艾伯維有限公司 抗-egfr抗體及抗體藥物結合物
AR099625A1 (es) * 2014-03-21 2016-08-03 Lilly Co Eli Anticuerpos de il-21
CA2944330A1 (en) * 2014-04-02 2015-10-08 Intas Pharmaceuticals Limited Liquid pharmaceutical composition of adalimumab
US11052132B2 (en) 2014-05-08 2021-07-06 Phasebio Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for treating cystic fibrosis
EP2946766B1 (en) 2014-05-23 2016-03-02 Ares Trading S.A. Liquid pharmaceutical composition
ES2607489T3 (es) 2014-05-23 2017-03-31 Ares Trading S.A. Composición farmacéutica líquida
HUE029849T2 (en) 2014-05-23 2017-04-28 Ares Trading Sa Liquid pharmaceutical composition
FR3022462B1 (fr) * 2014-06-18 2018-04-27 Laboratoire Francais Du Fractionnement Et Des Biotechnologies Composition orale d'anticorps anti-tnfalpha
EP3145951A1 (en) 2014-06-24 2017-03-29 InSight Biopharmaceuticals Ltd. Methods of purifying antibodies
EP3160996B1 (en) * 2014-06-30 2022-06-08 Merck Patent GmbH Anti-tnfa antibodies with ph-dependent antigen binding
US20170226552A1 (en) 2014-07-03 2017-08-10 Abbvie Inc. Methods for modulating protein glycosylation profiles of recombinant protein therapeutics using cobalt
WO2016007764A1 (en) 2014-07-09 2016-01-14 Abbvie Inc. Methods for modulating the glycosylation profile of recombinant proteins using non-commonly used sugars
EP3167396B1 (en) 2014-07-11 2024-01-17 Iogenetics, LLC. Immune recognition motifs
MY192824A (en) 2014-09-03 2022-09-12 Boehringer Ingelheim Int Compound targeting il-23a and tnf-alpha and uses thereof
US10435464B1 (en) 2014-09-05 2019-10-08 Coherus Biosciences, Inc. Methods for making recombinant proteins
HUP1400510A1 (hu) 2014-10-28 2016-05-30 Richter Gedeon Nyrt Gyógyászati TNFalfa ellenes antitest készítmény
WO2016094881A2 (en) 2014-12-11 2016-06-16 Abbvie Inc. Lrp-8 binding proteins
EP3237000A1 (en) 2014-12-23 2017-11-01 Pfizer Inc Stable aqueous antibody formulation for anti tnf alpha antibodies
EP3085709B1 (en) 2014-12-28 2019-08-21 Genor Biopharma Co., Ltd Humanized anti-human rankl antibody, pharmaceutical composition and use thereof
US10696735B2 (en) 2015-01-21 2020-06-30 Outlook Therapeutics, Inc. Modulation of charge variants in a monoclonal antibody composition
EP3053572A1 (en) 2015-02-06 2016-08-10 Ares Trading S.A. Liquid pharmaceutical composition
CA2976038A1 (en) 2015-02-09 2016-08-18 Phasebio Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for treating muscle disease and disorders
CN105777905B (zh) * 2015-03-24 2019-06-25 广东东阳光药业有限公司 一种全人源抗TNF-α单克隆抗体及其应用
EP3078675A1 (en) 2015-04-10 2016-10-12 Ares Trading S.A. Induction dosing regimen for the treatment of tnf alpha mediated disorders
WO2016179469A1 (en) * 2015-05-07 2016-11-10 Abbvie Inc. Methods and compositions for diagnosing and treating inflammatory bowel disease
RU2715597C2 (ru) 2015-05-29 2020-03-02 Эббви Инк. Антитела к cd40 и способы их применения
TW201710286A (zh) 2015-06-15 2017-03-16 艾伯維有限公司 抗ｖｅｇｆ、ｐｄｇｆ及／或其受體之結合蛋白
FR3038517B1 (fr) 2015-07-06 2020-02-28 Laboratoire Francais Du Fractionnement Et Des Biotechnologies Utilisation de fragments fc modifies en immunotherapie
HU231463B1 (hu) 2015-08-04 2024-01-28 Richter Gedeon Nyrt. Módszer rekombináns proteinek galaktóz tartalmának növelésére
US11583584B1 (en) 2015-10-28 2023-02-21 Coherus Biosciences, Inc. Stable protein compositions and methods of their use
US11229702B1 (en) 2015-10-28 2022-01-25 Coherus Biosciences, Inc. High concentration formulations of adalimumab
GB201522394D0 (en) 2015-12-18 2016-02-03 Ucb Biopharma Sprl Antibodies
EP3411401A1 (en) 2016-02-03 2018-12-12 Oncobiologics, Inc. Buffer formulations for enhanced antibody stability
US10465003B2 (en) 2016-02-05 2019-11-05 Janssen Biotech, Inc. Anti-TNF antibodies, compositions, methods and use for the treatment or prevention of type 1 diabetes
JP6978427B2 (ja) * 2016-03-17 2021-12-08 ヌマブ セラピューティクス アクチェンゲゼルシャフト 抗ＴＮＦα抗体とその機能性フラグメント
EP3219726B1 (en) * 2016-03-17 2020-12-02 Tillotts Pharma AG Anti-tnf alpha-antibodies and functional fragments thereof
CA3019003A1 (en) 2016-04-08 2017-10-12 Gilead Sciences, Inc. Compositions and methods for treating cancer, inflammatory diseases and autoimmune diseases
US11071782B2 (en) 2016-04-20 2021-07-27 Coherus Biosciences, Inc. Method of filling a container with no headspace
EA037960B1 (ru) 2016-04-27 2021-06-15 Эббви Инк. Способ лечения эозинофильного эзофагита с применением антитела против il-13
SG10202001787QA (en) 2016-06-02 2020-04-29 Abbvie Inc Glucocorticoid receptor agonist and immunoconjugates thereof
JP2019526529A (ja) 2016-06-08 2019-09-19 アッヴィ・インコーポレイテッド 抗ｂ７−ｈ３抗体及び抗体薬物コンジュゲート
CN109641962A (zh) 2016-06-08 2019-04-16 艾伯维公司 抗b7-h3抗体和抗体药物偶联物
AU2017277914A1 (en) 2016-06-08 2019-01-03 Abbvie Inc. Anti-CD98 antibodies and antibody drug conjugates
CA3027173A1 (en) 2016-06-08 2017-12-14 Abbvie Inc. Anti-egfr antibody drug conjugates
AU2017277534A1 (en) 2016-06-08 2019-01-03 Abbvie Inc. Anti-EGFR antibody drug conjugates
RS61828B1 (sr) 2016-06-08 2021-06-30 Abbvie Inc Anti-b7-h3 antitela i antitelske konjugacije lekova
EP3472197A1 (en) 2016-06-15 2019-04-24 Sutro Biopharma, Inc. Antibodies with engineered ch2 domains, compositions thereof and methods of using the same
WO2018018613A1 (zh) 2016-07-29 2018-02-01 广东东阳光药业有限公司 一种提高抗体纯度的细胞培养基和培养方法
US12097292B2 (en) 2016-08-28 2024-09-24 Mapi Pharma Ltd. Process for preparing microparticles containing glatiramer acetate
AU2017319728B2 (en) 2016-08-31 2024-09-05 Mapi Pharma Ltd Depot systems comprising glatiramer acetate
WO2018045258A1 (en) * 2016-09-02 2018-03-08 The University Of Chicago TREATMENT OF TNF-alpha CYTOTOXICITY
JP2020501508A (ja) * 2016-09-15 2020-01-23 クアドルセプト バイオ リミテッド 多量体、四量体および八量体
WO2018067468A1 (en) 2016-10-03 2018-04-12 Abbott Laboratories Improved methods of assessing uch-l1 status in patient samples
WO2018075408A1 (en) 2016-10-17 2018-04-26 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Methods of treating acute myeloid leukemia (aml) with combinations of anti-cd200 antibodies, cytarabine, and daunorubicin
EP3528787B1 (en) 2016-10-21 2026-01-07 Amgen Inc. Pharmaceutical formulations and methods of making the same
WO2018102594A1 (en) 2016-12-01 2018-06-07 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Methods of treating solid tumors with anti-cd200 antibodies
CA3046489A1 (en) 2016-12-07 2018-06-14 Progenity Inc. Gastrointestinal tract detection methods, devices and systems
KR102616436B1 (ko) 2016-12-14 2023-12-27 비오라 쎄라퓨틱스, 인크. Tnf 저해제로의 위장관 질환의 치료
JP7350313B2 (ja) 2016-12-16 2023-09-26 ブルーフィン バイオメディシン， インコーポレイテッド 抗ｃｕｂドメイン含有タンパク質１（ｃｄｃｐ１）抗体、抗体薬物コンジュゲート、およびその使用方法
EP3824906A1 (en) 2016-12-21 2021-05-26 Amgen Inc. Anti-tnf alpha antibody formulations
JOP20190162A1 (ar) 2016-12-30 2019-06-27 Biocad Joint Stock Co تركيبة صيدلانية مائية من جسم مضاد لـ tnf? أحادي النسيلة معاود الارتباط الجيني
CN120392659A (zh) 2017-01-11 2025-08-01 赛特瑞恩股份有限公司 稳定的液体调配物
TW202506185A (zh) 2017-01-20 2025-02-16 法商賽諾菲公司 抗TGF-β抗體及其用途
AR110755A1 (es) 2017-01-20 2019-05-02 Genzyme Corp Anticuerpos dirigidos a hueso
EP3573658A4 (en) 2017-01-30 2021-07-21 Janssen Biotech, Inc. ANTI-TNF ANTIBODIES, COMPOSITIONS, AND METHODS FOR TREATMENT OF ACTIVE PSORIATIC ARTHRITIS
KR20190115042A (ko) 2017-02-07 2019-10-10 얀센 바이오테크 인코포레이티드 활성 강직성 척추염의 치료를 위한 항-tnf 항체, 조성물, 및 방법
US11608357B2 (en) 2018-08-28 2023-03-21 Arecor Limited Stabilized antibody protein solutions
EP3372241A1 (en) 2017-03-06 2018-09-12 Ares Trading S.A. Liquid pharmaceutical composition
EP3372242A1 (en) 2017-03-06 2018-09-12 Ares Trading S.A. Liquid pharmaceutical composition
CA3052513A1 (en) 2017-03-23 2018-09-27 Abbott Laboratories Methods for aiding in the diagnosis and determination of the extent of traumatic brain injury in a human subject using the early biomarker ubiquitin carboxy-terminal hydrolase l1
MX2019010174A (es) 2017-03-26 2019-10-15 Mapi Pharma Ltd Sistemas de deposito de glatiramer para el tratamiento de formas progresivas de esclerosis multiple.
WO2018184692A1 (en) 2017-04-07 2018-10-11 Ares Trading S.A. Liquid pharmaceutical composition
ES3055047T3 (en) 2017-04-15 2026-02-09 Abbott Lab Methods for aiding in the hyperacute diagnosis and determination of traumatic brain injury in a human subject using early biomarkers
US10865238B1 (en) 2017-05-05 2020-12-15 Duke University Complement factor H antibodies
WO2018218169A1 (en) 2017-05-25 2018-11-29 Abbott Laboratories Methods for aiding in the determination of whether to perform imaging on a human subject who has sustained or may have sustained an injury to the head using early biomarkers
WO2018222783A1 (en) 2017-05-30 2018-12-06 Abbott Laboratories Methods for aiding in diagnosing and evaluating a mild traumatic brain injury in a human subject using cardiac troponin i and early biomarkers
EP3649474A1 (en) 2017-07-03 2020-05-13 Abbott Laboratories Improved methods for measuring ubiquitin carboxy-terminal hydrolase l1 levels in blood
US11761963B2 (en) 2017-09-27 2023-09-19 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Biomarker signature for predicting tumor response to anti-CD200 therapy
CA3082356A1 (en) 2017-12-01 2019-06-06 Abbvie Inc. Glucocorticoid receptor agonist and immunoconjugates thereof
CN109879962B (zh) * 2017-12-06 2022-10-11 北京科立思维生物科技有限公司 抗tnf单链抗体、抗il-6单链抗体及其融合蛋白及其应用
US11016105B2 (en) 2017-12-09 2021-05-25 Abbott Laboratories Methods for aiding in diagnosing and evaluating a traumatic brain injury in a human subject using a combination of GFAP and UCH-L1
EP3721233A2 (en) 2017-12-09 2020-10-14 Abbott Laboratories Methods for aiding in the diagnosis and evaluation of a subject who has sustained an orthopedic injury and that has or may have sustained an injury to the head, such as mild traumatic brain injury (tbi), using glial fibrillary acidic protein (gfap) and/or ubiquitin carboxy-terminal hydrolase l1 (uch-l1)
US11802154B2 (en) 2017-12-20 2023-10-31 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Humanized anti-CD200 antibodies and uses thereof
WO2019126133A1 (en) 2017-12-20 2019-06-27 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Liquid formulations of anti-cd200 antibodies
CA3093772C (en) 2018-03-12 2024-04-16 Zoetis Services Llc Anti-ngf antibodies and methods thereof
WO2019190877A1 (en) 2018-03-26 2019-10-03 Alexion Pharmaceuticals, Inc. High throughput method for measuring the protease activity of complement c3 convertase
KR102848349B1 (ko) 2018-06-04 2025-08-21 바이오젠 엠에이 인코포레이티드 감소된 효과기 기능을 갖는 항-ｖｌａ-4 항체
EP3810095A1 (en) 2018-06-20 2021-04-28 Progenity, Inc. Treatment of a disease of the gastrointestinal tract with a tnf inhibitor
CA3103664A1 (en) 2018-07-03 2020-01-09 Novartis Ag Methods of treating or selecting a treatment for a subject resistant to tnf inhibitor using a nlrp3 antagonist
CN113329769A (zh) 2018-10-11 2021-08-31 斯克里普斯研究学院 具有反应性精氨酸的抗体化合物及相关的抗体药物缀合物
EP3870168A1 (en) 2018-10-24 2021-09-01 Novartis AG Compounds and compositions for treating conditions associated with nlrp activity
KR20210088611A (ko) * 2018-11-05 2021-07-14 베이징 한미 파마슈티컬 컴퍼니 리미티드 항TNFα/항IL-17A 천연항체 구조 형태의 헤테로다이머 이중특이성 항체 및 그 제조방법
HU231514B1 (hu) 2018-11-07 2024-07-28 Richter Gedeon Nyrt. Sejttenyészetben előállított rekombináns glikoprotein glikozilációs mintázatának megváltoztatására szolgáló módszer
US12134611B2 (en) 2018-11-13 2024-11-05 Novartis Ag Compounds and compositions for treating conditions associated with NLRP activity
ES2974842T3 (es) 2018-11-13 2024-07-01 Novartis Ag Compuestos y composiciones para el tratamiento de afecciones asociadas a la actividad de nlrp
CN116726361A (zh) 2018-11-19 2023-09-12 比奥拉治疗股份有限公司 用生物治疗剂治疗疾病的方法和装置
US12428484B2 (en) 2018-12-06 2025-09-30 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Anti-ALK2 antibodies and uses thereof
EP3960858B1 (en) 2018-12-25 2025-05-07 Beijing Baishihekang Pharmaceutical Technology (BSJpharma) Co., Ltd. Small rna medicament for prevention and treatment of inflammation-related diseases and combination thereof
WO2020154321A1 (en) 2019-01-22 2020-07-30 Novartis Inflammasome Research, Inc. Compounds and compositions for treating conditions associated with nlrp activity
HU231498B1 (hu) 2019-04-04 2024-05-28 Richter Gedeon Nyrt Immunglobulinok affinitás kromatográfiájának fejlesztése kötést megelőző flokkulálás alkalmazásával
KR102323342B1 (ko) * 2019-04-26 2021-11-08 주식회사 와이바이오로직스 IL-17A 및 TNF-α에 특이적으로 결합하는 이중표적 항체
US11780911B2 (en) 2019-05-23 2023-10-10 Janssen Biotech, Inc. Method of treating inflammatory bowel disease with a combination therapy of antibodies to IL-23 and TNF alpha
WO2021002887A1 (en) 2019-07-02 2021-01-07 Novartis Inflammasome Research, Inc. Gut-targeted nlrp3 antagonists and their use in therapy
CN114401988A (zh) * 2019-07-09 2022-04-26 国家生物技术研究所公司 具有降低的免疫原性的抗体
WO2021119482A1 (en) 2019-12-13 2021-06-17 Progenity, Inc. Ingestible device for delivery of therapeutic agent to the gastrointestinal tract
FR3104582A1 (fr) 2019-12-17 2021-06-18 Commissariat A L'energie Atomique Et Aux Energies Alternatives Variants de l’adalimumab au potentiel immunogène réduit
WO2021159024A1 (en) 2020-02-05 2021-08-12 Larimar Therapeutics, Inc. Tat peptide binding proteins and uses thereof
US20230095053A1 (en) 2020-03-03 2023-03-30 Sutro Biopharma, Inc. Antibodies comprising site-specific glutamine tags, methods of their preparation and methods of their use
CA3175523A1 (en) 2020-04-13 2021-10-21 Antti Virtanen Methods, complexes and kits for detecting or determining an amount of a .beta.-coronavirus antibody in a sample
CA3177830A1 (en) 2020-05-13 2021-11-18 Maria BECONI Anti-hemojuvelin (hjv) antibodies for treating myelofibrosis
CN115768466A (zh) 2020-05-21 2023-03-07 詹森生物科技公司 用抗IL-23和TNFα抗体的联合疗法治疗炎性肠病的方法
CA3188349A1 (en) 2020-08-04 2022-02-10 A. Scott Muerhoff Improved methods and kits for detecting sars-cov-2 protein in a sample
CN111944052B (zh) * 2020-08-26 2022-02-11 中国药科大学 抗TNF-α/PD-1双特异性抗体及其应用
CN112010970B (zh) * 2020-10-30 2021-01-12 迈威(上海)生物科技股份有限公司 一种去除重组表达抗体聚体和降解产物的方法
WO2023102384A1 (en) 2021-11-30 2023-06-08 Abbott Laboratories Use of one or more biomarkers to determine traumatic brain injury (tbi) in a subject having received a head computerized tomography scan that is negative for a tbi
CA3198161A1 (en) 2020-12-01 2022-06-09 Beth MCQUISTON Use of one or more biomarkers to determine traumatic brain injury (tbi) in a subject having received a head computerized tomography scan that is negative for a tbi
US11672929B2 (en) 2020-12-02 2023-06-13 Breathe Restore, Inc. Product delivery devices and methods
CN117440967A (zh) 2020-12-09 2024-01-23 怡诺安有限公司 抗OX40L抗体、抗OX40L/抗TNFα双特异性抗体及其用途
EP4263603A4 (en) * 2020-12-18 2024-12-11 Elanco US Inc. ANTI-TNF? AND NGF ANTIBODIES FOR VETERINARY USE
EP4271998A1 (en) 2020-12-30 2023-11-08 Abbott Laboratories Methods for determining sars-cov-2 antigen and anti-sars-cov-2 antibody in a sample
AR124681A1 (es) 2021-01-20 2023-04-26 Abbvie Inc Conjugados anticuerpo-fármaco anti-egfr
CA3207134A1 (en) 2021-02-19 2022-08-25 Jeffrey A. Ledbetter Dnase fusion polypeptides and related compositions and methods
AU2022264509A1 (en) 2021-04-27 2023-12-14 Generation Bio Co. Non-viral dna vectors expressing therapeutic antibodies and uses thereof
EP4329884A1 (en) 2021-04-27 2024-03-06 Generation Bio Co. Non-viral dna vectors expressing anti-coronavirus antibodies and uses thereof
AU2022279156A1 (en) 2021-05-18 2023-11-02 Abbott Laboratories Methods of evaluating brain injury in a pediatric subject
EP4356129A1 (en) 2021-06-14 2024-04-24 Abbott Laboratories Methods of diagnosing or aiding in diagnosis of brain injury caused by acoustic energy, electromagnetic energy, an over pressurization wave, and/or blast wind
WO2022271782A1 (en) * 2021-06-22 2022-12-29 University Of Virginia Patent Foundation Compositions and methods for detecting and regulating fibronectin-integrin interactions and signaling
CN120463762A (zh) 2021-08-26 2025-08-12 映恩生物科技(上海)有限公司 一种甾体化合物及其缀合物
CN118715440A (zh) 2021-08-31 2024-09-27 雅培实验室 诊断脑损伤的方法和系统
JP2024534849A (ja) 2021-08-31 2024-09-26 アボット・ラボラトリーズ 脳の損傷を診断する方法及びシステム
JP2024538608A (ja) 2021-09-30 2024-10-23 アボット・ラボラトリーズ 脳の損傷を診断する方法及びシステム
AU2022413677A1 (en) 2021-12-17 2024-06-27 Abbott Laboratories Systems and methods for determining uch-l1, gfap, and other biomarkers in blood samples
EP4473311A1 (en) 2022-02-04 2024-12-11 Abbott Laboratories Lateral flow methods, assays, and devices for detecting the presence or measuring the amount of ubiquitin carboxy-terminal hydrolase l1 and/or glial fibrillary acidic protein in a sample
CN119072330A (zh) 2022-03-14 2024-12-03 世代生物公司 异源初免加强疫苗组合物和使用方法
WO2024006681A1 (en) * 2022-06-28 2024-01-04 Adafre Biosciences, Llc Anti-tnf-αlpha antibodies and compositions
AU2023298134A1 (en) 2022-06-29 2024-11-28 Abbott Laboratories Magnetic point-of-care systems and assays for determining gfap in biological samples
CN116903738A (zh) * 2022-08-02 2023-10-20 北京绿竹生物技术股份有限公司 一种低甘露糖型抗人肿瘤坏死因子-α单抗及其用途
AU2023338402A1 (en) 2022-09-07 2025-03-13 Mdx Management Llc Shp-1 inhibitors for treating cancer
KR20250068723A (ko) 2022-09-15 2025-05-16 아보트 러보러터리즈 경증 및 초경증 외상성 뇌 손상을 구분하기 위한 바이오마커 및 방법
WO2024097804A1 (en) 2022-11-02 2024-05-10 Mdx Management Llc Combination of a tyrosine kinase inhibitor and a pro-inflammatory agent for treating cancer
KR20260016906A (ko) 2023-03-17 2026-02-04 엠디엑스 메니지먼트 엘엘씨 요법의 유해효과를 개선하기 위한 조성물 및 방법
WO2024211475A1 (en) 2023-04-04 2024-10-10 Abbott Laboratories Use of biomarkers to determine whether a subject has sustained, may have sustained or is suspected of sustaining a subacute acquired brain injury (abi)
WO2024226969A1 (en) 2023-04-28 2024-10-31 Abbott Point Of Care Inc. Improved assays, cartridges, and kits for detection of biomarkers, including brain injury biomarkers
WO2025038745A1 (en) 2023-08-16 2025-02-20 Mdx Management Llc Compositions and methods for activating immune cells
WO2025188909A1 (en) 2024-03-06 2025-09-12 Mdx Management Llc Shp-1 inhibitor conjugates with pro-inflammatory compounds
WO2025238106A1 (en) 2024-05-15 2025-11-20 M6P Therapeutics (Switzerland) GmbH Lysosome-targeting degradation fusion design
WO2026043823A2 (en) 2024-08-19 2026-02-26 Sutro Biopharma, Inc. Antibodies comprising site-specific non-natural amino acid residues, methods of preparation and uses thereof

Family Cites Families (114)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4680276A (en) * 1977-05-25 1987-07-14 Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale Metal polypeptides
CA1208546A (en) 1981-09-08 1986-07-29 Anthony Cerami Lipoprotein lipase suppression by endotoxin-induced mediator (shock assay)
US5672347A (en) 1984-07-05 1997-09-30 Genentech, Inc. Tumor necrosis factor antagonists and their use
IL73883A (en) 1984-12-20 1990-12-23 Yeda Res & Dev Monoclonal antibodies against tnf-alpha,hybridomas producing them and method for the purification of tnf-alpha
US4661016A (en) * 1985-04-11 1987-04-28 Mobil Oil Corporation Subsea flowline connector
EP0613006A1 (en) 1985-08-16 1994-08-31 The Rockefeller University Antibodies to cachectin and immunoassays
DE3631229A1 (de) 1986-09-13 1988-03-24 Basf Ag Monoklonale antikoerper gegen humanen tumornekrosefaktor (tnf) und deren verwendung
GB8630273D0 (en) * 1986-12-18 1987-01-28 Til Medical Ltd Pharmaceutical delivery systems
JP2638652B2 (ja) 1988-07-18 1997-08-06 カイロン・コーポレーション カケクチンと反応するモノクロナール抗体
GB8823869D0 (en) * 1988-10-12 1988-11-16 Medical Res Council Production of antibodies
US4940723A (en) * 1988-10-20 1990-07-10 University Of North Carolina, Chapel Hill Use of bis-(5-amidino-2-benzimidazolyl) methane (BABIM) to treat arthritis
DE68914244T2 (de) 1988-10-24 1994-10-27 Otsuka Pharma Co Ltd Monoklonaler Antikörper.
US5530101A (en) * 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
ZA902949B (en) * 1989-05-05 1992-02-26 Res Dev Foundation A novel antibody delivery system for biological response modifiers
DE3918082A1 (de) * 1989-06-02 1991-01-24 Max Planck Gesellschaft Mittel gegen autoimmunerkrankungen
US5959087A (en) * 1989-08-07 1999-09-28 Peptide Technology, Ltd. Tumour necrosis factor binding ligands
US6448380B2 (en) 1989-08-07 2002-09-10 Peptech Limited Tumor necrosis factor antibodies
JP3443119B2 (ja) 1989-08-07 2003-09-02 ペプテック リミテッド 腫瘍壊死因子結合リガンド
GB8928874D0 (en) 1989-12-21 1990-02-28 Celltech Ltd Humanised antibodies
US5859205A (en) 1989-12-21 1999-01-12 Celltech Limited Humanised antibodies
US6075181A (en) 1990-01-12 2000-06-13 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US6673986B1 (en) * 1990-01-12 2004-01-06 Abgenix, Inc. Generation of xenogeneic antibodies
US6150584A (en) * 1990-01-12 2000-11-21 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
GB9014932D0 (en) 1990-07-05 1990-08-22 Celltech Ltd Recombinant dna product and method
US5625126A (en) * 1990-08-29 1997-04-29 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5661016A (en) 1990-08-29 1997-08-26 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes
US5545806A (en) * 1990-08-29 1996-08-13 Genpharm International, Inc. Ransgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5789650A (en) * 1990-08-29 1998-08-04 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US7084260B1 (en) * 1996-10-10 2006-08-01 Genpharm International, Inc. High affinity human antibodies and human antibodies against human antigens
US6300129B1 (en) * 1990-08-29 2001-10-09 Genpharm International Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US6255458B1 (en) * 1990-08-29 2001-07-03 Genpharm International High affinity human antibodies and human antibodies against digoxin
ES2108048T3 (es) * 1990-08-29 1997-12-16 Genpharm Int Produccion y utilizacion de animales inferiores transgenicos capaces de producir anticuerpos heterologos.
US5770429A (en) * 1990-08-29 1998-06-23 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5633425A (en) * 1990-08-29 1997-05-27 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
GB9022547D0 (en) 1990-10-17 1990-11-28 Wellcome Found Purified immunoglobulin
US5994510A (en) 1990-12-21 1999-11-30 Celltech Therapeutics Limited Recombinant antibodies specific for TNFα
GB9109645D0 (en) 1991-05-03 1991-06-26 Celltech Ltd Recombinant antibodies
GB2279077B (en) 1990-12-21 1995-06-14 Celltech Ltd Therapeutic compositions comprising recombinant antibodies specific for the TNFalpha
GB9028123D0 (en) 1990-12-28 1991-02-13 Erba Carlo Spa Monoclonal antibodies against human tumor necrosis factor alpha
EP1097945B1 (en) 1991-03-18 2007-07-04 New York University Monoclonal and chimeric antibody specific for human tumor necrosis factor
US5656272A (en) 1991-03-18 1997-08-12 New York University Medical Center Methods of treating TNF-α-mediated Crohn's disease using chimeric anti-TNF antibodies
US20040120952A1 (en) 2000-08-07 2004-06-24 Centocor, Inc Anti-TNF antibodies and peptides of human tumor necrosis factor
US5698195A (en) * 1991-03-18 1997-12-16 New York University Medical Center Methods of treating rheumatoid arthritis using chimeric anti-TNF antibodies
US20070298040A1 (en) 1991-03-18 2007-12-27 Centocor, Inc. Methods of treating seronegative arthropathy with anti-TNF antibodies
US7192584B2 (en) 1991-03-18 2007-03-20 Centocor, Inc. Methods of treating psoriasis with anti-TNF antibodies
US20060246073A1 (en) 1991-03-18 2006-11-02 Knight David M Anti-TNF antibodies and peptides of human tumor necrosis factor
US6277969B1 (en) 1991-03-18 2001-08-21 New York University Anti-TNF antibodies and peptides of human tumor necrosis factor
US5328985A (en) 1991-07-12 1994-07-12 The Regents Of The University Of California Recombinant streptavidin-protein chimeras useful for conjugation of molecules in the immune system
ATE181571T1 (de) * 1991-09-23 1999-07-15 Medical Res Council Methoden zur herstellung humanisierter antikörper
US5869619A (en) * 1991-12-13 1999-02-09 Xoma Corporation Modified antibody variable domains
US6270766B1 (en) 1992-10-08 2001-08-07 The Kennedy Institute Of Rheumatology Anti-TNF antibodies and methotrexate in the treatment of arthritis and crohn's disease
ATE155043T1 (de) * 1992-10-08 1997-07-15 Kennedy Inst Of Rheumatology Behandlung von autoimmun- und entzundungskrankheiten
DE69427928T3 (de) * 1993-03-05 2012-05-10 Bayer Healthcare Llc Humane monoklonale anti-TNF alpha Antikörper
CA2162689C (en) 1993-05-12 2000-07-18 Xoma Corporation Immunotoxins comprising gelonin and an antibody
ATE183513T1 (de) 1993-06-03 1999-09-15 Therapeutic Antibodies Inc Herstellung von antikörperfragmenten
WO1995011317A1 (en) 1993-10-19 1995-04-27 The Scripps Research Institute Synthetic human neutralizing monoclonal antibodies to human immunodeficiency virus
EP0659766A1 (en) 1993-11-23 1995-06-28 Schering-Plough Human monoclonal antibodies against human cytokines and methods of making and using such antibodies
WO1995023813A1 (en) 1994-03-04 1995-09-08 Merck & Co., Inc. In vitro antibody affinity maturation using alanine scanning mutagenesis
JPH07289288A (ja) * 1994-04-27 1995-11-07 L T T Kenkyusho:Kk 抗リウマチ薬の効果評価方法
EP0766564A4 (en) 1994-06-24 1998-09-23 Immunex Corp SLOW RELEASE POLYPEPTIDES COMPOSITIONS AND METHODS FOR TREATING INFLAMMATORY BOWEL CONDITIONS
US5561053A (en) 1994-08-05 1996-10-01 Genentech, Inc. Method for selecting high-expressing host cells
GB9416721D0 (en) * 1994-08-18 1994-10-12 Short Brothers Plc A bias yarn assembly forming device
US6113898A (en) 1995-06-07 2000-09-05 Idec Pharmaceuticals Corporation Human B7.1-specific primatized antibodies and transfectomas expressing said antibodies
US6090382A (en) 1996-02-09 2000-07-18 Basf Aktiengesellschaft Human antibodies that bind human TNFα
DE122004000004I1 (de) * 1996-02-09 2004-08-12 Abott Biotechnology Ltd Humane Antikörper welche an Humanen TNFalpha binden.
WO2000058362A1 (en) * 1999-03-26 2000-10-05 Human Genome Sciences, Inc. Neutrokine-alpha binding proteins and methods based thereon
US20050249735A1 (en) 2000-08-07 2005-11-10 Centocor, Inc. Methods of treating ankylosing spondylitis using anti-TNF antibodies and peptides of human tumor necrosis factor
UA81743C2 (uk) 2000-08-07 2008-02-11 Центокор, Инк. МОНОКЛОНАЛЬНЕ АНТИТІЛО ЛЮДИНИ, ЩО СПЕЦИФІЧНО ЗВ'ЯЗУЄТЬСЯ З ФАКТОРОМ НЕКРОЗУ ПУХЛИН АЛЬФА (ФНПα), ФАРМАЦЕВТИЧНА КОМПОЗИЦІЯ, ЩО ЙОГО МІСТИТЬ, ТА СПОСІБ ЛІКУВАННЯ РЕВМАТОЇДНОГО АРТРИТУ
US20060018907A1 (en) 2000-08-07 2006-01-26 Centocor, Inc. Anti-TNF antibodies and peptides of human tumor necrosis factor
US20030012786A1 (en) 2001-05-25 2003-01-16 Teoh Leah S. Use of anti-TNF antibodies as drugs in treating septic disorders of anemic patients
CA2385745C (en) 2001-06-08 2015-02-17 Abbott Laboratories (Bermuda) Ltd. Methods of administering anti-tnf.alpha. antibodies
US20030161828A1 (en) 2002-02-19 2003-08-28 Abbott Gmbh & Co. Kg Use of TNF antagonists as drugs for the treatment of patients with an inflammatory reaction and without suffering from total organ failure
US20030206898A1 (en) 2002-04-26 2003-11-06 Steven Fischkoff Use of anti-TNFalpha antibodies and another drug
US20040009172A1 (en) 2002-04-26 2004-01-15 Steven Fischkoff Use of anti-TNFalpha antibodies and another drug
US20090280065A1 (en) * 2006-04-10 2009-11-12 Willian Mary K Uses and Compositions for Treatment of Psoriasis
AR040603A1 (es) * 2002-07-19 2005-04-13 Abbott Lab S A El uso de un anticuerpo anti-tnfalfa neutralizador de alta afinidad en la fabricacion de un medicamento y conjunto de elementos
US20040033228A1 (en) 2002-08-16 2004-02-19 Hans-Juergen Krause Formulation of human antibodies for treating TNF-alpha associated disorders
US20040054414A1 (en) * 2002-09-18 2004-03-18 Trieu Hai H. Collagen-based materials and methods for augmenting intervertebral discs
MY150740A (en) 2002-10-24 2014-02-28 Abbvie Biotechnology Ltd Low dose methods for treating disorders in which tnf? activity is detrimental
TWI439284B (zh) 2004-04-09 2014-06-01 Abbvie Biotechnology Ltd 用於治療ＴＮＦα相關失調症之多重可變劑量療法
EP1807111A4 (en) 2004-10-08 2009-05-27 Abbott Biotech Ltd SYNCYTIAL RESPIRATORY VIRUS INFECTION (RSV)
AU2006246721B2 (en) * 2005-05-16 2012-12-13 Abbvie Biotechnology Ltd Use of TNF inhibitor for treatment of erosive polyarthritis
US20070041905A1 (en) 2005-08-19 2007-02-22 Hoffman Rebecca S Method of treating depression using a TNF-alpha antibody
CA2626804A1 (en) 2005-11-01 2007-08-09 Abbott Biotechnology Ltd. Methods and compositions for diagnosing ankylosing spondylitis using biomarkers
MX2008012896A (es) 2006-04-05 2008-10-14 Abbott Biotech Ltd Purificacion de anticuerpos.
WO2007120626A2 (en) * 2006-04-10 2007-10-25 Abbott Biotechnology Ltd. Uses and compositions for treatment of ankylosing spondylitis
US20080118496A1 (en) 2006-04-10 2008-05-22 Medich John R Uses and compositions for treatment of juvenile rheumatoid arthritis
US9605064B2 (en) 2006-04-10 2017-03-28 Abbvie Biotechnology Ltd Methods and compositions for treatment of skin disorders
US20090317399A1 (en) * 2006-04-10 2009-12-24 Pollack Paul F Uses and compositions for treatment of CROHN'S disease
EP2666472A3 (en) * 2006-04-10 2014-04-02 Abbott Biotechnology Ltd Uses and compositions for treatment of psoriatic arthritis
WO2007120656A2 (en) * 2006-04-10 2007-10-25 Abbott Biotechnology Ltd. Uses and compositions for treatment of rheumatoid arthritis
US20080131374A1 (en) 2006-04-19 2008-06-05 Medich John R Uses and compositions for treatment of rheumatoid arthritis
US20100021451A1 (en) * 2006-06-08 2010-01-28 Wong Robert L Uses and compositions for treatment of ankylosing spondylitis
US20080311043A1 (en) 2006-06-08 2008-12-18 Hoffman Rebecca S Uses and compositions for treatment of psoriatic arthritis
CN103316402A (zh) * 2006-06-30 2013-09-25 艾伯维生物技术有限公司 自动注射装置
BRPI0716762A2 (pt) 2006-09-13 2013-09-24 Abbott Lab melhorias da cultura celular
NZ576133A (en) * 2006-10-27 2012-10-26 Abbott Biotech Ltd Crystalline anti-htnfalpha antibodies
MX2009010361A (es) 2007-03-29 2009-10-16 Abbott Lab Anticuerpos il-12 anti-humanos cristalinos.
WO2008150491A2 (en) 2007-05-31 2008-12-11 Abbott Laboratories BIOMARKERS PREDICTIVE OF THE RESPONSIVENESS TO TNFα INHIBITORS IN AUTOIMMUNE DISORDERS
EP2152318A4 (en) * 2007-06-01 2011-12-07 Abbott Biotech Ltd COMPOSITIONS AND USES FOR THE TREATMENT OF PSORIASIS AND CROHN'S DISEASE
WO2008154543A2 (en) * 2007-06-11 2008-12-18 Abbott Biotechnology Ltd. Methods for treating juvenile idiopathic arthritis
EP2173380A4 (en) * 2007-07-13 2011-08-31 Abbott Biotech Ltd METHOD AND COMPOSITIONS FOR PULMONARY ADMINISTRATION OF A TNFa HEMMER
WO2009020654A1 (en) * 2007-08-08 2009-02-12 Abbott Laboratories Compositions and methods for crystallizing antibodies
NZ622583A (en) * 2007-11-30 2015-08-28 Abbvie Biotechnology Ltd Protein formulations and methods of making same
CN101965514A (zh) * 2008-01-03 2011-02-02 艾博特生物技术有限公司 预测化合物在治疗银屑病中的长期功效
NZ600979A (en) * 2008-01-15 2014-01-31 Abbott Lab Improved mammalian expression vectors and uses thereof
BRPI0907186A2 (pt) * 2008-01-15 2015-07-14 Abbott Gmbh & Co Kg Composições proteicas pulverizadas e métodos para sua produção
JP2011511777A (ja) 2008-01-30 2011-04-14 アボット・ラボラトリーズ 抗体断片を結晶化するための組成物及び方法
US20100040630A1 (en) * 2008-03-24 2010-02-18 Aake Elden Methods and compositions for treating bone loss
CN102458517B (zh) 2009-04-29 2014-07-23 阿布维生物技术有限公司 自动注射装置
RU2560701C2 (ru) * 2009-05-04 2015-08-20 Эббви Байотекнолоджи Лтд. Стабильные композиции с высокими концентрациями белков антител человека против tnf-альфа
EP2531613A2 (en) 2010-02-02 2012-12-12 Abbott Biotechnology Ltd. Methods and compositions for predicting responsiveness to treatment with tnf-alpha inhibitor
HUE039740T2 (hu) 2010-06-03 2019-01-28 Abbvie Biotechnology Ltd Alkalmazások és készítmények hidradenitis suppurativa (HS) kezelésére
US9085618B2 (en) * 2013-10-18 2015-07-21 Abbvie, Inc. Low acidic species compositions and methods for producing and using the same

Also Published As

Publication number Publication date
HU221984B1 (hu) 2003-03-28
JP4890997B2 (ja) 2012-03-07
HU230515B1 (hu) 2016-10-28
US20130115224A1 (en) 2013-05-09
WO1997029131A1 (en) 1997-08-14
NZ576716A (en) 2011-02-25
IL218518A0 (en) 2012-04-30
JP2007045828A (ja) 2007-02-22
CZ292465B6 (cs) 2003-09-17
IL206994A0 (en) 2010-12-30
PL328411A1 (en) 1999-01-18
US8206714B2 (en) 2012-06-26
HU230048B1 (hu) 2015-06-29
JP2003177130A (ja) 2003-06-27
KR19990082430A (ko) 1999-11-25
NO2017038I1 (no) 2017-08-01
HK1214609A1 (en) 2016-07-29
BRPI9707379C8 (pt) 2017-12-12
PL193499B1 (pl) 2007-02-28
HK1125972A1 (en) 2009-08-21
US8753633B2 (en) 2014-06-17
CN1215407A (zh) 1999-04-28
NO20026202D0 (no) 2002-12-23
TR199801532T2 (xx) 1998-11-23
BG112042A (bg) 2015-10-30
MX336813B (es) 2016-02-02
HK1214608A1 (en) 2016-07-29
US20130330356A1 (en) 2013-12-12
NO20026202L (no) 1998-10-07
DE69721548D1 (de) 2003-06-05
CN1504752A (zh) 2004-06-16
US7541031B2 (en) 2009-06-02
CY2005011I1 (el) 2011-06-08
US20100040604A1 (en) 2010-02-18
US20030092059A1 (en) 2003-05-15
NZ562935A (en) 2009-06-26
DK0929578T3 (da) 2003-08-25
AU2122997A (en) 1997-08-28
MX9806347A (es) 1998-10-31
JP5951056B2 (ja) 2016-07-13
BRPI9715219B8 (pt) 2015-07-07
UA82823C2 (en) 2008-05-26
RU2270030C2 (ru) 2006-02-20
JP2015108011A (ja) 2015-06-11
NO319955B1 (no) 2005-10-03
BG107537A (bg) 2003-09-30
RU2005113954A (ru) 2006-11-20
IL125697A (en) 2005-03-20
ATE239041T1 (de) 2003-05-15
LU91062I2 (fr) 2004-04-26
SK284040B6 (sk) 2004-08-03
CN101712720A (zh) 2010-05-26
BG64776B1 (bg) 2006-03-31
NZ536216A (en) 2006-08-31
HK1019452A1 (en) 2000-02-11
NO2004002I2 (no) 2008-02-04
NZ512006A (en) 2005-05-27
BG109311A (en) 2006-03-31
NO983627D0 (no) 1998-08-07
IL151641A0 (en) 2003-04-10
NL300143I2 (nl) 2004-07-01
US6258562B1 (en) 2001-07-10
JP2016104798A (ja) 2016-06-09
CN100429232C (zh) 2008-10-29
US7223394B2 (en) 2007-05-29
SI9720020B (en) 2001-12-31
SK106298A3 (en) 1999-03-12
JP2014055150A (ja) 2014-03-27
NO322755B1 (no) 2006-12-04
CY2463B1 (en) 2005-06-03
BR9707379A (pt) 1999-04-13
JP3861118B2 (ja) 2006-12-20
BG64564B1 (bg) 2005-07-29
RU2012102323A (ru) 2013-07-27
NL300143I1 (nl) 2004-05-03
BG110703A (en) 2010-10-29
EP0929578B1 (en) 2003-05-02
PT929578E (pt) 2003-09-30
NO2017038I2 (no) 2017-11-17
HK1125951A1 (en) 2009-08-21
HUP9901874A3 (en) 2000-05-29
CA2243459C (en) 2002-09-17
HK1066860A1 (en) 2005-04-01
NO320657B1 (no) 2006-01-09
NZ331579A (en) 2001-06-29
AU722077B2 (en) 2000-07-20
KR100317188B1 (ko) 2002-02-19
NO20040052L (no) 1998-10-07
IL125697A0 (en) 1999-04-11
JP2013091666A (ja) 2013-05-16
JP4404181B2 (ja) 2010-01-27
JP2010209119A (ja) 2010-09-24
JP2000507810A (ja) 2000-06-27
US20070249813A1 (en) 2007-10-25
JP5689902B2 (ja) 2015-03-25
HK1214610A1 (en) 2016-07-29
JP5422501B2 (ja) 2014-02-19
JP5759526B2 (ja) 2015-08-05
US8372400B2 (en) 2013-02-12
BG102755A (en) 1999-05-31
BR9707379B1 (pt) 2009-08-11
PL188192B1 (pl) 2004-12-31
RU2003120859A (ru) 2005-01-10
NO983627L (no) 1998-10-07
NO20040154L (no) 1998-10-07
HU228630B1 (en) 2013-04-29
ES2198552T3 (es) 2004-02-01
BRPI9707379B8 (pt) 2015-07-07
DE122004000003I1 (de) 2004-09-23
DE69721548T2 (de) 2004-04-01
UA57726C2 (uk) 2003-07-15
CN103275221A (zh) 2013-09-04
CN102070715A (zh) 2011-05-25
DE122004000004I1 (de) 2004-08-12
BR9715219B1 (pt) 2010-02-23
NO316711B1 (no) 2004-04-13
BG66509B1 (bg) 2015-11-30
CA2243459A1 (en) 1997-08-14
CZ247698A3 (cs) 1998-11-11
US20130330357A1 (en) 2013-12-12
BG66195B1 (bg) 2012-01-31
CN1300173C (zh) 2007-02-14
EP0929578A1 (en) 1999-07-21
DE122004000003I2 (de) 2007-03-29
RO123028B1 (ro) 2010-07-30
CN103275221B (zh) 2016-08-17
US20090155205A1 (en) 2009-06-18
HUP1500179A2 (en) 1999-09-28
SI9720020A (sl) 1999-10-31
US20120258114A1 (en) 2012-10-11
RU2458704C2 (ru) 2012-08-20
HU0204115D0 (en) 2003-02-28
RU2458704C9 (ru) 2012-12-10
HUP9901874A2 (hu) 1999-09-28
HK1214607A1 (en) 2016-07-29

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RO119831B1 (ro) Anticorp uman, care se leagă la tnf alfa, cu acţiune antiinflamatoare
CN101343324B (zh) 体外抑制人TNFα活性的方法
PL217217B1 (pl) Zastosowanie izolowanego ludzkiego przeciwciała anty-TNFα lub jego części wiążącej antygen oraz zestaw i gotowa strzykawka
MXPA98006347A (en) Human antibodies that link human tnfalfa
AU2004202769A1 (en) Human antibodies that bind human TNFalpha
AU6664900A (en) Human antibodies that bind human TNFalpha