PL193499B1 - Izolowane ludzkie przeciwciało, rekombinowane ludzkie przeciwciało, kompozycja farmaceutyczna, sposób hamowania aktywności ludzkiego TNFalfa in vitro, zastosowanie tych izolowanych ludzkich przeciwciał i izolowany kwas nukleinowy - Google Patents

Izolowane ludzkie przeciwciało, rekombinowane ludzkie przeciwciało, kompozycja farmaceutyczna, sposób hamowania aktywności ludzkiego TNFalfa in vitro, zastosowanie tych izolowanych ludzkich przeciwciał i izolowany kwas nukleinowy

Info

Publication number
PL193499B1
PL193499B1 PL97365237A PL36523797A PL193499B1 PL 193499 B1 PL193499 B1 PL 193499B1 PL 97365237 A PL97365237 A PL 97365237A PL 36523797 A PL36523797 A PL 36523797A PL 193499 B1 PL193499 B1 PL 193499B1
Authority
PL
Poland
Prior art keywords
seq
antibody
inhibitors
disease
tnf
Prior art date
Application number
PL97365237A
Other languages
English (en)
Inventor
Jochen G. Salfeld
Deborah J. Allen
Zehra Kaymakcalan
Boris Labkovsky
John A. Mankovich
Brian T. Mcguiness
Andrew J. Roberts
Paul Sakorafas
Hendricus R.J.M. Hoogenboom
David Schoenhaut
Tristan J. Vaughan
Michael White
Alison J. Wilton
Original Assignee
Abbott Biotech Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=26707297&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=PL193499(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Priority claimed from US08/599,226 external-priority patent/US6090382A/en
Application filed by Abbott Biotech Ltd filed Critical Abbott Biotech Ltd
Publication of PL193499B1 publication Critical patent/PL193499B1/pl

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
    • C07K16/241—Tumor Necrosis Factors
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/02—Stomatological preparations, e.g. drugs for caries, aphtae, periodontitis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/16—Central respiratory analeptics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/06—Antigout agents, e.g. antihyperuricemic or uricosuric agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A61P29/02—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID] without antiinflammatory effect
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/04—Anorexiants; Antiobesity agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A61P31/22—Antivirals for DNA viruses for herpes viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P33/00—Antiparasitic agents
    • A61P33/02—Antiprotozoals, e.g. for leishmaniasis, trichomoniasis, toxoplasmosis
    • A61P33/06—Antimalarials
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P39/00—General protective or antinoxious agents
    • A61P39/02—Antidotes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/04—Inotropic agents, i.e. stimulants of cardiac contraction; Drugs for heart failure
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/08—Vasodilators for multiple indications
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/64—General methods for preparing the vector, for introducing it into the cell or for selecting the vector-containing host
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/10—Cells modified by introduction of foreign genetic material
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S424/00—Drug, bio-affecting and body treating compositions
    • Y10S424/81—Drug, bio-affecting and body treating compositions involving autoimmunity, allergy, immediate hypersensitivity, delayed hypersensitivity, immunosuppression, immunotolerance, or anergy

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)

Abstract

1. Izolowane ludzkie przeciwcialo, albo jego czesc wiazaca antygen, które wiaze TNFa i dysocjuje od ludzkiego TNFa z K d równa 1 x 10 -8 M albo mniej i stala szybkosci K off równa 1 x 10 -3 s -1 albo mniej, jak okreslono metoda rezonansu plazmonów powierzchniowych i neutralizuje cytotoksycznosc ludzkiego TNFa w standardowym tescie in vitro L929 z IC 50 równa 1 x 10 -7 M albo mniej. 13. Kompozycja farmaceutyczna zawierajaca substancje czynna i farmaceutycznie dopuszczalny nosnik, znamienna tym, ze zawiera przeciwcialo, albo jego czesc wiazaca antygen, okreslone w zastrz. 1, jako substancje czynna. 20. Sposób hamowania aktywnosci ludzkiego TNFa in vitro, znamienny tym, ze obejmuje kontaktowanie ludzkiego TNFa z przeciwcialem, w wyniku czego aktywnosc ludzkiego TNFa jest hamowana, przy czym przeciwcialo jest izolowa- nym ludzkim przeciwcialem, albo jego czescia wiazaca antygen, które wiaze TNFa i dysocjuje od ludzkiego TNFa z K d równa 1 x 10 -8 M albo mniej i stala szybkosci K off równa 1 x 10 -3 s -1 albo mniej, jak okreslono metoda rezonansu plazmonów powierzchniowych, oraz neutralizuje cytotoksycznosc ludzkiego TNFa w standardowym tescie in vitro L929 z IC 50 równa 1 x 10 -7 M albo mniej. 47. Izolowane ludzkie przeciwcialo, albo jego czesc wiazaca antygen, które wiaze TNFa, o regionie zmiennym lancu- cha lekkiego (LCVR) o domenie CDR3 obejmujacej sekwencje aminokwasowa SEQ ID NO: 3, albo zmodyfikowana na podstawie SEQ ID NO: 3 przez pojedyncze zastapienie alanina w pozycjach 1, 4, 5, 7 lub 8 i o regionie zmiennym lancucha ciezkiego (HCVR) o domenie CDR3 obejmujacej sekwencje aminokwasowa SEQ ID NO: 4, albo zmodyfikowana na pod- stawie SEQ ID NO: 4 przez pojedyncze zastapienie alanina w pozycjach 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10 lub 11. 73. Izolowany kwas nukleinowy kodujacy domene CDR3 lancucha lekkiego obejmujaca sekwencje aminokwasowa SEQ ID NO: 3, albo zmodyfikowana na podstawie SEQ ID NO: 3 przez pojedyncze zastapienie alanina w pozycjach 1, 4, 5, 7 lub 8, albo przez jedno do pieciu konserwatywnych zastapien aminokwasów w pozy cjach 1, 3, 4, 6, 7, 8 i/lub 9. 81. Izolowane przeciwcialo ludzkie albo jego czesc wiazaca antygen, znamienne tym, ze wiaze TNFa i ma region zmienny lancucha lekkiego (LCVR) o domenie CDR3 obejmujacej sekwencje aminokwasowa …………………… 105. Izolowany kwas nukleinowy kodujacy domene CDR3 obejmujaca sekwencje aminokwasowa wybrana z grupy skladajacej sie z: SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 21,…………… PL PL PL PL PL PL PL

Description

Opis wynalazku
Przedmiotem wynalazku są izolowane ludzkie przeciwciało, rekombinowane ludzkie przeciwciało, kompozycja farmaceutyczna, sposób hamowania aktywności ludzkiego TNFa in vitro, zastosowanie tych izolowanych ludzkich przeciwciał i izolowany kwas nukleinowy.
Czynnik martwicy nowotworu a (TNFa) jest cytokiną wytwarzaną przez wiele rodzajów komórek, w tym przez monocyty i makrofagi, która została początkowo zidentyfikowana w oparciu o jej zdolność do wywoływania martwicy pewnych nowotworów mysich (patrz np. L. Old (1985) Science 230:630-632). Następnie wykazano, że czynnik określany jako kachektyna związany z kacheksją, jest tą samą cząsteczką, co TNFa. Wskazano na udział TNFa jako mediatora wstrząsu (patrz np. B. Beutler i A. Cerami (1988) Annu. Rev. Biochem. 57:505-518; B. Beutler i A. Cerami (1989) Annu. Rev. Immunol. 7:625-655). Ponadto wskazano na udział TNFa w patofizjologii różnych innych chorób i zaburzeń u człowieka, w tym posocznicy, infekcji, chorób autoimmunologicznych, odrzuceniu przeszczepu i reakcji przeszczepu przeciwko gospodarzowi (patrz np. A. Moeller i in., (1990) Cytokine 2:162169; opis patentowy US nr 5231024, Moeller i in.; publikacja patentu europejskiego nr 260610 B1, A. Moeller i in.; P. Vasilli (1992) Annu. Rev. Immunol. 10:411-452; K.J. Tracey i A. Cerami (1994) Annu. Rev. Med. 45:491-503).
Z uwagi na szkodliwą rolę ludzkiego TNFa (hTNFa) w różnych zaburzeniach u człowieka, opracowano strategie terapeutyczne w celu zahamowania lub przeciwdziałania czynności hTNFa. W szczególności poszukiwano przeciwciał, które wiążą i neutralizują hTNFa, jako środków hamujących działanie hTNFa. Pewne z wcześniejszych takich przeciwciał stanowiły mysie przeciwciała monoklonalne (mAb), wydzielane przez hybrydoma wytworzone z limfocytów myszy immunizowanych hTNFa (patrz np. T. Hahn i in., (1985) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82:3814-3818; C.M. Liang i in., (1986) Biochem. Biophys. Res. Commun. 137:847-854; M. Hirai i in., (1987) J. Immunol. Methods 96:57-62; B.M. Fendly i in., (1987) Hybridoma 6:359-370; A. Moeller i in., (1990) Cytokine 2:162-169; opis patentowy US nr 5231024, Moeller i in.; publikacja patentu europejskiego nr 186833 B1, D. Wallach; publikacja europejskiego zgłoszenia patentowego nr 218868 A1, Old i in.; publikacja patentu europejskiego nr 260610 B1, A. Moeller i in. Jakkolwiek takie mysie przeciwciała przeciw-hTNFa wykazywały często wysokie powinowactwo względem hTNFa (np. Kd £ 10-9 M) i były zdolne do neutralizacji aktywności hTNFa, ich zastosowanie in vivo może być ograniczone przez problemy związane z podawaniem mysich przeciwciał ludziom, takie jak krótki okres półtrwania w surowicy, niezdolność do wywołania niektórych ludzkich funkcji efektorowych i wywoływanie u ludzi niepożądanej odpowiedzi immunologicznej przeciw mysim przeciwciałom (reakcja ludzkich przeciwciał przeciw mysim przeciwciałom; HAMA).
W celu przezwyciężenia problemów związanych ze stosowaniem u ludzi całkowicie mysich przeciwciał, mysie przeciwciała przeciw hTNFa zmodyfikowano technikami inżynierii genetycznej, aby stały się bardziej podobne do ludzkich. Przykładowo, wytworzono przeciwciała chimeryczne, w których zmienne regiony łańcuchów przeciwciał są pochodzenia mysiego, a stałe regiony łańcuchów przeciwciał są pochodzenia ludzkiego (D.M. Knight i in., (1993) Mol. Immunol. 30:1443-1453; publikacja PCT WO 92/16553, P.E. Daddona i in.). Wytworzono również przeciwciała humanizowane, w których hiperzmienne domeny zmiennych regionów przeciwciał są pochodzenia mysiego, pozostała zaś część zmiennych regionów oraz stałe regiony przeciwciała są pochodzenia ludzkiego (publikacja PCT WO 92/11383, J.R. Adair i in.). Z uwagi na to, że takie chimeryczne i humanizowane przeciwciała wciąż zachowują nieco sekwencji mysich, nadal mogą wywoływać niepożądaną reakcję immunologiczną, reakcję ludzkich przeciwciał przeciw przeciwciałom chimerycznym (HACA), zwłaszcza przy podawaniu przez dłuższy czas, np. przy wskazaniach przewlekłych, takich jak reumatoidalne zapalenie stawów (patrz np. M.J. Elliot i in., (1994) Lancet 344:1125-1127; M.J. Elliot i in., (1994) Lancet 344:1105-1110).
Środek hamujący hTNFa, korzystniejszy od mysich mAb lub ich pochodnych (np. przeciwciał chimerycznych lub humanizowanych), powinien być całkowicie ludzkim przeciwciałem przeciw hTNFa, gdyż środek taki nie powinien wywoływać reakcji HAMA, nawet gdy podawany jest przez dłuższy czas. Ludzkie przeciwciała monoklonalne przeciw hTNFa wytworzono stosując techniki ludzkich hybrydoma (P. Boyle i in., (1993) Cell Immunol. 152:556-568; P. Boyle i in., (1993) Cell Immunol. 152:569-581; publikacja europejskiego zgłoszenia patentowego nr 614984A2, Boyle i in.). Jednakże podano, że te autoprzeciwciała monoklonalne pochodzące z hybrydoma wykazują względem hTNFa powinowactwo zbyt niskie, by można je było określić znanymi metodami oraz są niezdolne do wiązania rozpuszczalnego hTNFa i neutralizacji cytotoksyczności wywołanej hTNFa (patrz, Boyle i in., wyPL 193 499 B1 żej). Ponadto powodzenie techniki ludzkich hybrydoma zależy od naturalnej obecności w ludzkiej krwi obwodowej limfocytów wytwarzających autoprzeciwciała przeciw hTNFa. Podczas gdy w pewnych badaniach wykryto surowicze autoprzeciwciała przeciw hTNFa u osobników ludzkich (A. Fomsgaard i in., (1989) Scand. J. Immunol. 30:219-223; K. Bendtzen i in., (1990) Prog. Leukocyte Biol. 10B:447-452), w innych ich nie wykryto (H.G. Leusch i in., (1991) J. Immunol. Meth. 139:145-147).
Alternatywę dla naturalnie występujących ludzkich przeciwciał przeciw hTNFa powinno stanowić rekombinowane przeciwciało przeciw hTNFa. Opisano rekombinowane ludzkie przeciwciała, które wiążą hTNFa ze stosunkowo niskim powinowactwem (tj. Kd ~ 10-7 M) i dużą szybkością odłączania (tj. Koff ~ 10-2 s-1) (A.D. Griffiths i in., (1993) EMBO J. 12:725-734). Jednakże z powodu dość szybkiej kinetyki dysocjacji, przeciwciała te mogą nie być przydatne do zastosowań terapeutycznych. Opisano ponadto rekombinowane ludzkie przeciwciała przeciw hTNFa, które nie neutralizują aktywności hTNFa, ale raczej zwiększają wiązanie hTNFa z powierzchnią komórek oraz zwiększają internalizację hTNFa (A. Lidbury i in., (1994) Biotechnol. Ther. 5:27-45; publikacja PCT nr WO 92/03145, R. Aston i in.).
W WO 93/06213 omówiono metodę „odcisku epitopu, czyli kierowanej selekcji, stosowaną do uzyskiwania ludzkich przeciwciał z przeciwciał mysich. W wyniku tej selekcji otrzymuje się jednak ludzkie przeciwciało mające powinowactwo i specyficzność podobne do wyjściowego przeciwciała mysiego.
W WO 93/06213 nie ujawniono, ani nie zasugerowano możliwości otrzymania ludzkiego przeciwciała przeciw TNFa, które jednocześnie neutralizowałoby cytotoksyczność ludzkiego TNFa, a w przykładzie 1 WO 93/06213 opisano przeciwciało przeciw TNFa, które nie neutralizuje TNFa.
Istnieje więc nadal zapotrzebowanie na przeciwciała ludzkie, takie jak rekombinowane przeciwciała ludzkie, które wiązałyby rozpuszczalny hTNFa z wysokim powinowactwem i powolną kinetyką dysocjacji, oraz które miałyby zdolność do neutralizacji aktywności hTNFa, w tym cytotoksyczności wywołanej hTNFa (in vitro i in vivo) oraz aktywacji komórek wywołanej hTNFa.
Wynalazek dotyczy zatem izolowanego ludzkiego przeciwciała, albo jego części wiążącej antygen, które wiąże TNFa i dysocjuje od ludzkiego TNFa z Kd równą 1x 10-8 M albo mniej i stałą szybko-3 -1 ści Koff równą 1 x 10-3 s-1 albo mniej, jak określono metodą rezonansu plazmonów powierzchniowych i neutralizuje cytotoksyczność ludzkiego TNFa w standardowym teście in vitro L929 z IC50 równą 1 x 10-7 M albo mniej.
Korzystnie izolowane ludzkie przeciwciało albo jego część wiążąca antygen dysocjuje od ludzkiego TNFa ze stałą Koff równą 5 x 10-4 s-1 albo mniej, a korzystniej ze stałą Koff równą 1x 10-4 s-1 albo mniej.
Korzystnie izolowane ludzkie przeciwciało albo jego część wiążąca antygen neutralizuje cytotoksyczność ludzkiego TNFa w standardowym teście in vitro L929 z IC50 równą 1 x 10-8 M albo mniej, korzystniej z IC50 równą 1x 10-9 M albo mniej, a zwłaszcza z IC50 równą 5 x 10-10 M albo mniej.
Korzystnie izolowane ludzkie przeciwciało albo jego część wiążąca antygen jest przeciwciałem rekombinowanym albo jego częścią wiążącą antygen.
Korzystnie izolowane ludzkie przeciwciało albo jego część wiążąca antygen hamuje wywołaną ludzkim TNFa ekspresję ELAM-1 na ludzkich komórkach śródbłonka żyły pępowinowej.
Korzystnie ludzkie przeciwciało albo jego część wiążąca antygen neutralizuje aktywność ludzkiego TNFa, ale nie neutralizuje aktywności ludzkiego TNFb.
Korzystniej rekombinowane przeciwciało ludzkie, albo jego część wiążąca antygen neutralizuje także aktywność TNFa szympansa i co najmniej jednego dodatkowego TNFa naczelnych wybranego z grupy obejmującej TNFa pawiana, TNFa marmozety, TNFa cynomolgusa iTNFa rezusa.
Najkorzystniej rekombinowane przeciwciało ludzkie, albo jego część wiążąca antygen również neutralizuje aktywność TNFa psa.
Najkorzystniej rekombinowane przeciwciało ludzkie, albo jego część wiążąca antygen również neutralizuje aktywność TNFa świni.
Wynalazek ponadto dotyczy kompozycji farmaceutycznej zawierającej substancję czynną i farmaceutycznie dopuszczalny nośnik, charakteryzującej się tym, że zawiera przeciwciało, albo jego część wiążącą antygen, określone powyżej, jako substancję czynną.
Korzystnie kompozycja farmaceutyczna zawiera ponadto co najmniej jeden dodatkowy środek terapeutyczny do leczenia choroby, w której aktywność TNFa jest szkodliwa, przy czym korzystnie dodatkowy środek terapeutyczny jest wybrany z grupy obejmującej środki przeciwzapalne hamujące cytokiny, CDP-571/BAY-10-3356, cA2, 75 kdTNFR-IgG, 55 kdTNFR-IgG, IDEC-CE9.1/SB 210396, DAB 486-IL-2, DAB 389-IL-2, Anti-Tac, IL-4, IL-10, agonistów IL-4, agonistów IL-10, IL-1RA, TNFbp/s-TNFR, S284, R973401, MK-966, Iloprost, talidomid, środki pokrewne talidomidowi, kwas traneksamowy, T-614, prostaglandynę E1, tenidap, meloksykam, piroksykam, indometacynę, inhibitory ICE,
PL 193 499 B1 inhibitory zap-70, inhibitory lck, inhibitory VEGF, inhibitory VEGF-R, inhibitory TNF-konwertazy, przeciwciała przeciw IL-12, inhibitory interleukiny 11, inhibitory interleukiny 13, inhibitory interleukiny-17, penicylaminę, chlorambucyl, cyklofosfamid, globulinę antytymocytarną, przeciwciała przeciw CD4, CD5-toksyny, doustnie podawane peptydy, kolagen, disodową sól lobenzarytu, czynniki regulujące cytokiny HP228 i HP466, antysensowne fosforotionianowe oligodeoksynukleotydy ICAM-1, rozpuszczalny receptor 1 dopełniacza, orgoteinę, polisiarczan glikozoaminoglikanu, minocyklinę, przeciwciała przeciw IL2R, lipidy morskie, lipidy roślinne, auranofinę, fenylobutazon, kwas meklofenamowy, kwas flufenamowy, dożylną immunoglobulinę, zileuton, kwas mykofenolowy, takrolimus, sirolimus, amiprilos, kladribinę, azarybinę, budenozyd, czynnik wzrostu naskórka, aminosalicylany, 6-merkaptopurynę, metronidazol, inhibitory lipoksygenazy, mesalaminę, olsalazynę, balsalazyd, przeciwutleniacze, inhibitory tromboksanu, antagonistów receptora IL-1, przeciwciała monoklonalne przeciw IL-1b, przeciwciała monoklonalne przeciw IL-6, czynniki wzrostu, inhibitory elastazy, związki pirydynylo-imidazolu, prednizolonowe proleki skoniugowane z glukuronidem, deksametazon lub budezonid, prednizolonowe proleki skoniugowane z dekstranem, powolnie uwalnianą mesalazynę, ciprofloksacynę, lignokainę, prednizolon, cyklofosfamid, 4-aminopirydynę, tizanidynę, interferon b1a, interferon b1b, kopolimer 1, tlen hiperbaryczny, klabribinę, hipertoniczny roztwór soli, antybiotyki, ciągłą hemofiltrację, karbapenemy, antagonistów cytokin, takich jak TNFa, IL-1b, IL-8, SK&F 107647, czterowartościowy guanylohydrazon CNI-1493, inhibitor szlaku czynnika tkankowego, PHP, czynniki chelatujące żelazo oraz chelaty, łącznie z kompleksem kwas dietylenotriaminopentaoctowy żelazo (III), lizofilinę, PGG-glukan, apolipoproteinę A-1 rekonstytuowaną lipidami, chiralne kwasy hydroksamowe, przeciwciała przeciw endotoksynie, E5531, rBPI21, syntetyczne peptydydy przeciw endotoksynie, surfaktanty terapii zastępczej oraz przeciwciała przeciw IL-8.
Korzystnie w kompozycji farmaceutycznej dodatkowym innym środkiem terapeutycznym jest metotreksat.
Korzystnie w kompozycji farmaceutycznej dodatkowym innym środkiem terapeutycznym jest niesteroidowy środek przeciwzapalny.
Korzystnie w kompozycji farmaceutycznej dodatkowym innym środkiem terapeutycznym jest chlorochina lub hydroksychlorochina.
Korzystnie w kompozycji farmaceutycznej dodatkowym innym środkiem terapeutycznym jest sulfasalazyna, złoto, kortykosteroidy, prednizon, leflunomid, naproksen, diklofenak, metyloprednizolon lub azatiopryna.
Wynalazek dotyczy również sposobu hamowania aktywności ludzkiego TNFa in vitro charakteryzującego się tym, że obejmuje kontaktowanie ludzkiego TNFa z przeciwciałem, w wyniku czego aktywność ludzkiego TNFa jest hamowana, przy czym przeciwciało jest izolowanym ludzkim przeciwciałem, albo jego częścią wiążącą antygen, które wiąże TNFa i dysocjuje od ludzkiego TNFa z Kd równą 1x 10-8 M albo mniej i stałą szybkości Koff równą 1x 10-3 s-1 albo mniej, jak określono metodą rezonansu plazmonów powierzchniowych, oraz neutralizuje cytotoksyczność ludzkiego TNFa w standardowym teście in vitro L929 zIC50 równą 1x 10-7 M albo mniej.
Korzystnie w sposobie tym przeciwciało jest izolowanym ludzkim przeciwciałem, albo jego częścią wiążącą antygen, które ma następujące dodatkowe cechy charakterystyczne:
a) ma domenę CDR3 łańcucha lekkiego obejmującą sekwencję aminokwasową SEQ ID NO: 3, albo zmodyfikowaną na podstawie SEQ ID NO: 3 przez pojedyncze zastąpienie alaniną w pozycjach 1, 4, 5, 7 lub 8 albo przez jedno do pięciu konserwatywnych zastąpień aminokwasów w pozycjach 1, 3, 4, 6, 7, 8 i/lub 9;
b) ma domenę CDR3 łańcucha ciężkiego obejmującą sekwencję aminokwasową SEQ ID NO: 4, albo zmodyfikowaną na podstawie SEQ ID NO: 4 przez pojedyncze zastąpienie alaniną w pozycjach 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10 lub 11 albo przez jedno do pięciu konserwatywnych zastąpień aminokwasów w pozycjach 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10, 11 i/lub 12.
Korzystniej w sposobie tym przeciwciało jest izolowanym ludzkim przeciwciałem, albo jego częścią wiążącą antygen, o regionie zmiennym łańcucha lekkiego (LCVR) obejmującym sekwencję aminokwasową SEQ ID NO: 1 i regionie zmiennym łańcucha ciężkiego (HCVR) obejmującym sekwencję aminokwasową SEQ ID NO: 2.
Wynalazek dotyczy także przeciwciała, albo jego części wiążącej antygen, określonego powyżej, do stosowania jako lck, korzystnie do stosowania jako lek w hamowaniu aktywności ludzkiego TNFa u człowieka cierpiącego na chorobę, w której aktywność TNFa jest szkodliwa.
PL 193 499 B1
Korzystnie to przeciwciało stosuje się w kombinacji z co najmniej jednym dodatkowym środkiem terapeutycznym, przy czym korzystnie ten środek terapeutyczny jest wybrany z grupy obejmującej środki przeciwzapalne hamujące cytokiny, CDP-571/BAY-10-3356, cA2, 75 kdTNFR-IgG, 55 kdTNFRIgG, IDEC-CE9.1/SB 210396, DAB 486-IL-2, DAB 389-IL-2, Anti-Tac, IL-4, IL-10, agonistów IL-4, agonistów IL-10, IL-1RA, TNF-bp/s-TNFR, S284, R973401, MK-966, Iloprost, talidomid, środki pokrewne talidomidowi, kwas traneksamowy, T-614, prostaglandynę E1, tenidap, meloksykam, piroksykam, indometacynę, inhibitory ICE, inhibitory zap-70, inhibitory lck, inhibitory VEGF, inhibitory VEGFR, inhibitory TNF-konwertazy, przeciwciała przeciw IL-12, inhibitory interleukiny 11, inhibitory interleukiny 13, inhibitory interleukiny-17, penicylaminę, chlorambucyl, cyklofosfamid, globulinę antytymocytarną, przeciwciała przeciw CD4, CD5-toksyny, doustnie podawane peptydy, kolagen, disodową sól lobenzarytu, czynniki regulujące cytokiny HP228 i HP466, antysensowne fosforotionianowe oligodeoksynukleotydy ICAM-1, rozpuszczalny receptor 1 dopełniacza, orgoteinę, polisiarczan glikozoaminoglikanu, minocyklinę, przeciwciała przeciw IL2R, lipidy morskie, lipidy roślinne, auranofinę, fenylobutazon, kwas meklofenamowy, kwas flufenamowy, dożylną immunoglobulinę, zileuton, kwas mykofenolowy, takrolimus, sirolimus, amiprilos, kladribinę, azarybinę, budenozyd, czynnik wzrostu naskórka, aminosalicylany, 6-merkaptopurynę, metronidazol, inhibitory lipoksygenazy, mesalaminę, olsalazynę, balsalazyd, przeciwutleniacze, inhibitory tromboksanu, antagonistów receptora IL-1, przeciwciała monoklonalne przeciw IL-1b, przeciwciała monoklonalne przeciw IL-6, czynniki wzrostu, inhibitory elastazy, związki pirydynyloimidazolu, prednizolonowe proleki skoniugowane z glukuronidem, deksametazon lub budezonid, prednizolonowe proleki skoniugowane z dekstranem, powolnie uwalnianą mesalazynę, ciprofloksacynę, lignokainę, prednizolon, cyklofosfamid, 4-aminopirydynę, tizanidynę, interferon b1a, interferon b1b, kopolimer 1, tlen hiperbaryczny, klabribinę, hipertoniczny roztwór soli, antybiotyki, ciągłą hemofiltrację, karbapenemy, antagonistów cytokin, takich jak TNFa, IL-1b, IL-8, SK&F 107647, czterowartościowy guanylohydrazon CNI-1493, inhibitor szlaku czynnika tkankowego, PHP, czynniki chelatujące żelazo oraz chelaty, łącznie z kompleksem kwas dietylenotriaminopentaoctowy-żelazo (III), lizofilinę, PGG-glukan, apolipoproteinę A-1 rekonstytuowaną lipidami, chiralne kwasy hydroksamowe, przeciwciała przeciw endotoksynie, E5531, rBPI21, syntetyczne peptydydy przeciw endotoksynie, surfaktanty terapii zastępczej oraz przeciwciała przeciw IL-8.
Korzystnie to przeciwciało stosuje się w kombinacji z dodatkowym innym środkiem terapeutycznym, którym jest metotreksat.
Korzystnie to przeciwciało stosuje się w kombinacji z dodatkowym innym środkiem terapeutycznym, którym jest niesteroidowy środek przeciwzapalny.
Korzystnie to przeciwciało stosuje się w kombinacji z dodatkowym innym środkiem terapeutycznym, którym jest chlorochina lub hydroksychlorochina.
Korzystnie to przeciwciało stosuje się w kombinacji z dodatkowym innym środkiem terapeutycznym, którym jest sulfasalazyna, złoto, kortykosteroidy, prednizon, leflunomid, naproksen, diklofenak, metyloprednizolon lub azatiopryna.
Wynalazek dotyczy także zastosowania izolowanego ludzkiego przeciwciała, albo jego części wiążącej antygen, które wiąże TNFa i dysocjuje od ludzkiego TNFa z Kd równą 1 x 10-8 M albo mniej -3 -1 i stałą szybkości Koff równą 1 x 10-3 s-1 albo mniej, jak określono metodą rezonansu plazmonów powierzchniowych i neutralizuje cytotoksyczność ludzkiego TNFa w standardowym teście in vitro L929 zIC50 równą 1 x 10-7 M albo mniej, do wytwarzania leku do leczenia choroby, w której aktywność TNFa jest szkodliwa.
Korzystnie ten lek jest przeznaczony do leczenia choroby wybranej spośród choroby zakaźnej, odrzucenia przeszczepu albo reakcji przeszczepu przeciwko gospodarzowi, choroby nowotworowej, płuc, serca, posocznicy, zapalenia kości i stawów, dnawego zapalenia stawów, alergii, stwardnienia rozsianego, autoimmunologicznej cukrzycy, autoimmunologicznego zapalenia błony naczyniowej oka, zespołu nerczycowego, chorób zapalnych kości, chorób resorpcyjnych kości, poalkoholowego zapalenia wątroby, wirusowego zapalenia wątroby, zaburzeń krzepnięcia, oparzeń, uszkodzenia poreperfuzyjnego, tworzenia bliznowca, tworzenia tkanki bliznowatej, gorączki, wstrząsu septycznego, wstrząsu endotoksycznego, posocznicy Gram-ujemnej, zespołu wstrząsu toksycznego, malarii, zapalenia opon mózgowych, kacheksji, AIDS, bakteryjnego zapalenia opon mózgowych, zespołu związanego z AIDS (ARC), wtórnej infekcji wirusem cytomegalii po przeszczepie, gorączki i mięśniobóli z powodu infekcji i wtórnej kacheksji w wyniku infekcji, odrzucenia przeszczepu allogenicznego, stymulowania wzrostu nowotworu, wzmacniania potencjału przerzutowego oraz mediowania cytotoksyczności w chorobach nowotworowych, hamowania wzrostu nowotworu lub przerzutów, zespołu zaburzeń oddechowych
PL 193 499 B1 dorosłych, płuca wstrząsowego, przewlekłej zapalnej choroby płuc, sarkoidozy płuc, zwłóknienia płuc, krzemicy, choroby zapalnej jelit, idiopatycznej choroby zapalnej jelit, wrzodziejącego zapalenia okrężnicy, niedokrwienia mięśnia sercowego, niewydolności mięśnia sercowego oraz zapalenia wątroby.
W szczególności tą chorobą jest choroba jelit, choroba Crohna, choroba autoimmunologiczna, reumatoidalne zapalenie stawów lub zesztywniające zapalenie stawów kręgosłupa.
W szczególności chorobą jest posocznica, a przeciwciało podaje się człowiekowi razem z cytokiną, interleukiną-6 (IL-6), lub podaje się je człowiekowi, u którego stężenie IL-6 w surowicy lub osoczu wynosi powyżej 500 pg/ml.
Korzystnie to izolowane ludzkie przeciwciało jest połączone z farmaceutycznie dopuszczalnym nośnikiem.
Korzystnie to izolowane ludzkie przeciwciało jest podawane razem z co najmniej jednym dodatkowym środkiem terapeutycznym, przy czym korzystnie ten środek terapeutyczny jest wybrany z grupy obejmującej środki przeciwzapalne hamujące cytokiny, CDP-571/BAY-10-3356, cA2, 75 kdTNFRIgG, 55 kdTNFR-IgG, IDEC-CE9.1/SB 210396, DAB 486-IL-2, DAB 389-IL-2, Anti-Tac, IL-4, IL-10, agonistów IL-4, agonistów IL-10, IL-1RA, TNF-bp/s-TNFR, S284, R973401, MK-966, Iloprost, talidomid, środki pokrewne talidomidowi, kwas traneksamowy, T-614, prostaglandynę E1, tenidap, meloksykam, piroksykam, indometacynę, inhibitory ICE, inhibitory zap-70, inhibitory lck, inhibitory VEGF, inhibitory VEGF-R, inhibitory TNF-konwertazy, przeciwciała przeciw IL-12, inhibitory interleukiny 11, inhibitory interleukiny 13, inhibitory interleukiny-17, penicylaminę, chlorambucyl, cyklofosfamid, globulinę anty-tymocytarną, przeciwciała przeciw CD4, CD5-toksyny, doustnie podawane peptydy, kolagen, disodową sól lobenzarytu, czynniki regulujące cytokiny HP228 i HP466, antysensowne fosforotionianowe oligodeoksynukleotydy ICAM-1, rozpuszczalny receptor 1 dopełniacza, orgoteinę, polisiarczan glikozoaminoglikanu, minocyklinę, przeciwciała przeciw IL2R, lipidy morskie, lipidy roślinne, auranofinę, fenylobutazon, kwas meklofenamowy, kwas flufenamowy, dożylną immunoglobulinę, zileuton, kwas mykofenolowy, takrolimus, sirolimus, amiprilos, kladribinę, azarybinę, budenozyd, czynnik wzrostu naskórka, aminosalicylany, 6-merkaptopurynę, metronidazol, inhibitory lipoksygenazy, mesalaminę, olsalazynę, balsalazyd, przeciwutleniacze, inhibitory tromboksanu, antagonistów receptora IL-1, przeciwciała monoklonalne przeciw IL-1b, przeciwciała monoklonalne przeciw IL-6, czynniki wzrostu, inhibitory elastazy, związki pirydynylo-imidazolu, prednizolonowe proleki skoniugowane z glukuronidem, deksametazon lub budezonid, prednizolonowe proleki skoniugowane z dekstranem, powolnie uwalnianą mesalazynę, ciprofloksacynę, lignokainę, prednizolon, cyklofosfamid, 4-aminopirydynę, tizanidynę, interferon b1a, interferon b1b, kopolimer 1, tlen hiperbaryczny, klabribinę, hipertoniczny roztwór soli, antybiotyki, ciągłą hemofiltrację, karbapenemy, antagonistów cytokin, takich jak TNFa, IL-1b, IL-8, SK&F 107647, czterowartościowy guanylohydrazon CNI-1493, inhibitor szlaku czynnika tkankowego, PHP, czynniki chelatujące żelazo oraz chelaty, łącznie z kompleksem kwas dietylenotriaminopentaoctowy-żelazo (III), lizofilinę, PGG-glukan, apolipoproteinę A-1 rekonstytuowaną lipidami, chiralne kwasy hydroksamowe, przeciwciała przeciw endotoksynie, E5531, rBPI21, syntetyczne peptydydy przeciw endotoksynie, surfaktanty terapii zastępczej oraz przeciwciała przeciw IL-8.
Korzystnie to izolowane ludzkie przeciwciało jest podawane razem z dodatkowym innym środkiem terapeutycznym, którym jest metotreksat.
Korzystnie to izolowane ludzkie przeciwciało jest podawane razem z dodatkowym innym środkiem terapeutycznym, którym jest niesteroidowy środek przeciwzapalny.
Korzystnie to izolowane ludzkie przeciwciało jest podawane razem z dodatkowym innym środkiem terapeutycznym, którym jest chlorochina lub hydroksychlorochina.
Ponadto korzystnie to izolowane ludzkie przeciwciało jest podawane razem z dodatkowym innym środkiem terapeutycznym, którym jest sulfasalazyna, złoto, kortykosteroidy, prednizon, leflunomid, naproksen, diklofenak, metyloprednizolon lub azatiopryna.
Korzystnie pacjentem jest człowiek.
Ponadto wynalazek dotyczy izolowanego ludzkiego przeciwciała, albo jego części wiążącej antygen, które wiąże TNFa, o regionie zmiennym łańcucha lekkiego (LCVR) o domenie CDR3 obejmującej sekwencję aminokwasową SEQ ID NO: 3, albo zmodyfikowaną na podstawie SEQ ID NO: 3 przez pojedyncze zastąpienie alaniną w pozycjach 1, 4, 5, 7 lub 8 io regionie zmiennym łańcucha ciężkiego (HCVR) o domenie CDR3 obejmującej sekwencję aminokwasową SEQ ID NO: 4, albo zmodyfikowaną na podstawie SEQ IDNO: 4 przez pojedyncze zastąpienie alaniną w pozycjach 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10 lub 11.
Korzystnie LCVR ma ponadto domenę CDR2 obejmującą sekwencję aminokwasową SEQ ID NO: 5 i HCVR ma ponadto domenę CDR2 obejmującą sekwencję aminokwasową SEQ ID NO: 6.
PL 193 499 B1
Korzystnie LCVR ma ponadto domenę CDR1 obejmującą sekwencję aminokwasową SEQ ID NO: 7 i HCVR ma domenę CDR1 obejmującą sekwencję aminokwasową SEQ ID NO: 8.
Wynalazek dotyczy ponadto kompozycji farmaceutycznej zawierającej substancję czynną i farmaceutycznie dopuszczalny nośnik, charakteryzującej się tym, że jako substancję czynną zawiera przeciwciało, albo jego część wiążącą antygen, które wiąże TNFa, o regionie zmiennym łańcucha lekkiego (LCVR) o domenie CDR3 obejmującej sekwencję aminokwasową SEQ ID NO: 3, albo zmodyfikowaną na podstawie SEQ ID NO: 3 przez pojedyncze zastapienie alaniną w pozycjach 1, 4, 5, 7 lub 8 i o regionie zmiennym łańcucha ciężkiego (HCVR) o domenie CDR3 obejmującej sekwencję aminokwasową SEQ ID NO: 4, albo zmodyfikowaną na podstawie SEQ ID NO: 4 przez pojedyncze zastąpienie alaniną w pozycjach 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10lub 11.
Korzystnie ta kompozycja farmaceutyczna zawiera ponadto co najmniej jeden dodatkowy środek terapeutyczny do leczenia choroby, w której aktywność TNFa jest szkodliwa, przy czym korzystnie ten dodatkowy środek terapeutyczny jest wybrany z grupy obejmującej środki przeciwzapalne hamujące cytokiny, CDP-571/BAY-10-3356, cA2, 75 kdTNFR-IgG, 55 kdTNFR-IgG, IDEC-CE9.1/SB 210396, DAB 486-IL-2, DAB 389-IL-2, Anti-Tac, IL-4, IL-10, agonistów IL-4, agonistów IL-10, IL-1RA, TNF-bp/s-TNFR, S284, R973401, MK-966, Iloprost, talidomid, środki pokrewne talidomidowi, kwas traneksamowy, T-614, prostaglandynę E1, tenidap, meloksykam, piroksykam, indometacynę, inhibitory ICE, inhibitory zap-70, inhibitory lck, inhibitory VEGF, inhibitory VEGF-R, inhibitory TNF-konwertazy, przeciwciała przeciw IL-12, inhibitory interleukiny 11, inhibitory interleukiny 13, inhibitory interleukiny17, penicylaminę, chlorambucyl, cyklofosfamid, globulinę antytymocytarną, przeciwciała przeciw CD4, CD5-toksyny, doustnie podawane peptydy, kolagen, disodową sól lobenzarytu, czynniki regulujące cytokiny HP228 i HP466, antysensowne fosforotionianowe oligodeoksynukleotydy ICAM-1, rozpuszczalny receptor 1 dopełniacza, orgoteinę, polisiarczan glikozoaminoglikanu, minocyklinę, przeciwciała przeciw IL2R, lipidy morskie, lipidy roślinne, auranofinę, fenylobutazon, kwas meklofenamowy, kwas flufenamowy, dożylną immunoglobulinę, zileuton, kwas mykofenolowy, takrolimus, sirolimus, amiprilos, kladribinę, azarybinę, budenozyd, czynnik wzrostu naskórka, aminosalicylany, 6-merkaptopurynę, metronidazol, inhibitory lipoksygenazy, mesalaminę, olsalazynę, balsalazyd, przeciwutleniacze, inhibitory tromboksanu, antagonistów receptora IL-1, przeciwciała monoklonalne przeciw IL-1b, przeciwciała monoklonalne przeciw IL-6, czynniki wzrostu, inhibitory elastazy, związki pirydynylo-imidazolu, prednizolonowe proleki skoniugowane z glukuronidem, deksametazon lub budezonid, prednizolonowe proleki skoniugowane z dekstranem, powolnie uwalnianą mesalazynę, ciprofloksacynę, lignokainę, prednizolon, cyklofosfamid, 4-aminopirydynę, tizanidynę, interferon b1a, interferon b1b, kopolimer 1, tlen hiperbaryczny, klabribinę, hipertoniczny roztwór soli, antybiotyki, ciągłą hemofiltrację, karbapenemy, antagonistów cytokin, takich jak TNFa, IL-1b, IL-8, SK&F 107647, czterowartościowy guanylohydrazon CNI-1493, inhibitor szlaku czynnika tkankowego, PHP, czynniki chelatujące żelazo oraz chelaty, łącznie z kompleksem kwas dietylenotriaminopentaoctowy-żelazo (III), lizofilinę, PGG-glukan, apolipoproteinę A-1 rekonstytuowaną lipidami, chiralne kwasy hydroksamowe, przeciwciała przeciw endotoksynie, E5531, rBPI21, syntetyczne peptydydy przeciw endotoksynie, surfaktanty terapii zastępczej oraz przeciwciała przeciw IL-8.
Korzystnie w kompozycji farmaceutycznej dodatkowym innym środkiem terapeutycznym jest metotreksat.
Korzystnie w kompozycji farmaceutycznej dodatkowym innym środkiem terapeutycznym jest niesteroidowy środek przeciwzapalny.
Korzystnie w kompozycji farmaceutycznej dodatkowym innym środkiem terapeutycznym jest chlorochina lub hydroksychlorochina.
Korzystnie w kompozycji farmaceutycznej dodatkowym innym środkiem terapeutycznym jest sulfasalazyna, złoto, kortykosteroidy, prednizon, leflunomid, naproksen, diklofenak, metyloprednizolon lub azatiopryna.
Wynalazek dotyczy również sposobu hamowania aktywności ludzkiego TNFa in vitro charakteryzującego się tym, że obejmuje kontaktowanie ludzkiego TNFa z przeciwciałem, albo jego częścią wiążącą antygen, które wiąże TNFa, o regionie zmiennym łańcucha lekkiego (LCVR) o domenie CDR3 obejmującej sekwencję aminokwasową SEQ ID NO: 3, albo zmodyfikowaną na podstawie SEQ ID NO: 3 przez pojedyncze zastąpienie alaniną w pozycjach 1, 4, 5, 7 lub 8i o regionie zmiennym łańcucha ciężkiego (HCVR) o domenie CDR3 obejmującej sekwencję aminokwasową SEQ ID NO: 4, albo zmodyfikowaną na podstawie SEQ ID NO: 4 przez pojedyncze zastąpienie alaniną w pozycjach 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10 lub 11,w wyniku czego aktywność TNFa jest zahamowana.
PL 193 499 B1
Wynalazek dotyczy także przeciwciała, albo jego części wiążącej antygen, które wiąże TNFa, o regionie zmiennym łańcucha lekkiego (LCVR) o domenie CDR3 obejmującej sekwencję aminokwasową SEQ ID NO: 3, albo zmodyfikowaną na podstawie SEQ ID NO: 3 przez pojedyncze zastąpienie alaniną w pozycjach 1, 4, 5, 7 lub 8 io regionie zmiennym łańcucha ciężkiego (HCVR) o domenie CDR3 obejmującej sekwencję aminokwasową SEQ ID NO:4, albo zmodyfikowaną na podstawie SEQ ID NO:4 przez pojedyncze zastąpienie alaniną w pozycjach 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10 lub 11, do stosowania jako lck, korzystnie do stosowania w hamowaniu aktywności ludzkiego TNFa u człowieka cierpiącego na chorobę, w której aktywność TNFa jest szkodliwa.
Korzystnie to przeciwciało stosuje się w kombinacji z co najmniej jednym dodatkowym środkiem terapeutycznym, przy czym korzystnie ten dodatkowy środek terapeutyczny jest wybrany z grupy obejmującej środki przeciwzapalne hamujące cytokiny, CDP-571/BAY-10-3356, cA2, 75 kdTNFR-IgG, 55 kdTNFR-IgG, IDEC-CE9.1/SB 210396, DAB 486-IL-2, DAB 389-IL-2, Anti-Tac, IL-4, IL-10, agonistów IL-4, agonistów IL-10, IL-1RA, TNF-bp/s-TNFR, S284, R973401, MK-966, Iloprost, talidomid, środki pokrewne talidomidowi, kwas traneksamowy, T-614, prostaglandynę E1, tenidap, meloksykam, piroksykam, indometacynę, inhibitory ICE, inhibitory zap-70, inhibitory lck, inhibitory VEGF, inhibitory VEGF-R, inhibitory TNF-konwertazy, przeciwciała przeciw IL-12, inhibitory interleukiny 11, inhibitory interleukiny 13, inhibitory interleukiny-17, penicylaminę, chlorambucyl, cyklofosfamid, globulinę antytymocytarną, przeciwciała przeciw CD4, CD5-toksyny, doustnie podawane peptydy, kolagen, disodową sól lobenzarytu, czynniki regulujące cytokiny HP228 i HP466, antysensowne fosforotionianowe oligodeoksynukleotydy ICAM-1, rozpuszczalny receptor 1 dopełniacza, orgoteinę, polisiarczan glikozoaminoglikanu, minocyklinę, przeciwciała przeciw IL2R, lipidy morskie, lipidy roślinne, auranofinę, fenylobutazon, kwas meklofenamowy, kwas flufenamowy, dożylną immunoglobulinę, zileuton, kwas mykofenolowy, takrolimus, sirolimus, amiprilos, kladribinę, azarybinę, budenozyd, czynnik wzrostu naskórka, aminosalicylany, 6-merkaptopurynę, metronidazol, inhibitory lipoksygenazy, mesalaminę, olsalazynę, balsalazyd, przeciwutleniacze, inhibitory tromboksanu, antagonistów receptora IL-1, przeciwciała monoklonalne przeciw IL-1b, przeciwciała monoklonalne przeciw IL-6, czynniki wzrostu, inhibitory elastazy, związki pirydynylo-imidazolu, prednizolonowe proleki skoniugowane z glukuronidem, deksametazon lub budezonid, prednizolonowe proleki skoniugowane z dekstranem, powolnie uwalnianą mesalazynę, ciprofloksacynę, lignokainę, prednizolon, cyklofosfamid, 4-aminopirydynę, tizanidynę, interferon b1a, interferon b1b, kopolimer 1, tlen hiperbaryczny, klabribinę, hipertoniczny roztwór soli, antybiotyki, ciągłą hemofiltrację, karbapenemy, antagonistów cytokin, takich jak TNFa, IL-1b, IL-8, SK&F 107647, czterowartościowy guanylohydrazon CNI-1493, inhibitor szlaku czynnika tkankowego, PHP, czynniki chelatujące żelazo oraz chelaty, łącznie z kompleksem kwas dietylenotriaminopentaoctowy-żelazo (III), lizofilinę, PGG-glukan, apolipoproteinę A-1 rekonstytuowaną lipidami, chiralne kwasy hydroksamowe, przeciwciała przeciw endotoksynie, E5531, rBPI21, syntetyczne peptydydy przeciw endotoksynie, surfaktanty terapii zastępczej oraz przeciwciała przeciw IL-8.
Korzystnie to przeciwciało stosuje się w kombinacji z dodatkowym innym środkiem terapeutycznym, którym jest metotreksat.
Korzystnie to przeciwciało stosuje się w kombinacji z dodatkowym innym środkiem terapeutycznym, którym jest niesteroidowy środek przeciwzapalny.
Korzystnie to przeciwciało stosuje się w kombinacji z dodatkowym innym środkiem terapeutycznym, którym jest chlorochina lub hydroksychlorochina.
Korzystnie to przeciwciało stosuje się w kombinacji z dodatkowym innym środkiem terapeutycznym, którym jest sulfasalazyna, złoto, kortykosteroidy, prednizon, leflunomid, naproksen, diklofenak, metyloprednizolon lub azatiopryna.
Wynalazek dotyczy ponadto zastosowania przeciwciała, albo jego części wiążącej antygen, które wiąże TNFa, o regionie zmiennym łańcucha lekkiego (LCVR) o domenie CDR3 obejmującej sekwencję aminokwasową SEQ ID NO:3, albo zmodyfikowaną na podstawie SEQ ID NO: 3 przez pojedyncze zastąpienie alaniną w pozycjach 1, 4, 5, 7 lub 8 i o regionie zmiennym łańcucha ciężkiego (HCVR) o domenie CDR3 obejmującej sekwencję aminokwasową SEQ ID NO:4, albo zmodyfikowaną na podstawie SEQ ID NO:4 przez pojedyncze zastąpienie alaniną w pozycjach 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10 lub 11, do wytwarzania leku do leczenia choroby, w której aktywność TNFa jest szkodliwa.
W szczególności ten lek jest przeznaczony do leczenia choroby wybranej spośród choroby zakaźnej, odrzucenia przeszczepu albo reakcji przeszczepu przeciwko gospodarzowi, choroby nowotworowej, płuc, serca, posocznicy, zapalenia kości i stawów, dnawego zapalenia stawów, alergii, stwardnienia rozsianego, autoimmunologicznej cukrzycy, autoimmunologicznego zapalenia błony naczynioPL 193 499 B1 wej oka, zespołu nerczycowego, chorób zapalnych kości, chorób resorpcyjnych kości, poalkoholowego zapalenia wątroby, wirusowego zapalenia wątroby, zaburzeń krzepnięcia, oparzeń, uszkodzenia poreperfuzyjnego, tworzenia bliznowca, tworzenia tkanki bliznowatej, gorączki, wstrząsu septycznego, wstrząsu endotoksycznego, posocznicy Gram-ujemnej, zespołu wstrząsu toksycznego, malarii, zapalenia opon mózgowych, kacheksji, AIDS, bakteryjnego zapalenia opon mózgowych, zespołu związanego z AIDS (ARC), wtórnej infekcji wirusem cytomegalii po przeszczepie, gorączki i mięśniobóli z powodu infekcji i wtórnej kacheksji w wyniku infekcji, odrzucenia przeszczepu allogenicznego, stymulowania wzrostu nowotworu, wzmacniania potencjału przerzutowego oraz mediowania cytotoksyczności w chorobach nowotworowych, hamowania wzrostu nowotworu lub przerzutów, zespołu zaburzeń oddechowych dorosłych, płuca wstrząsowego, przewlekłej zapalnej choroby płuc, sarkoidozy płuc, zwłóknienia płuc, krzemicy, choroby zapalnej jelit, idiopatycznej choroby zapalnej jelit, wrzodziejącego zapalenia okrężnicy, niedokrwienia mięśnia sercowego, niewydolności mięśnia sercowego oraz zapalenia wątroby.
W szczególności chorobą jest choroba jelit, choroba Crohna, choroba autoimmunologiczna, reumatoidalne zapalenie stawów lub zesztywniające zapalenie stawów kręgosłupa.
Wynalazek dotyczy także izolowanego kwasu nukleinowego kodującego domenę CDR3 łańcucha lekkiego obejmującą sekwencję aminokwasową SEQ ID NO: 3, albo zmodyfikowaną na podstawie SEQ ID NO:3 przez pojedyncze zastąpienie alaniną w pozycjach 1, 4, 5, 7 lub 8, albo przez jedno do pięciu konserwatywnych zastąpień aminokwasów w pozycjach 1, 3, 4, 6, 7, 8 i/lub 9.
Korzystnie ten izolowany kwas nukleinowy koduje region zmienny łańcucha lekkiego (LCVR) przeciwciała, przy czym korzystnie domena CDR2 LCVR przeciwciała obejmuje sekwencję aminokwasową SEQ ID NO:5, najkorzystniej domena CDR1 LCVR przeciwciała obejmuje sekwencję aminokwasową SEQ ID NO:7.
Wynalazek dotyczy również izolowanego kwasu nukleinowego kodującego domenę CDR3 łańcucha ciężkiego obejmującą sekwencję aminokwasową SEQ ID NO: 4 albo zmodyfikowana na podstawie SEQ ID NO:4 przez pojedyncze zastąpienie alaniną w pozycjach 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10 albo 11, albo przez jedno do pięciu zastąpień konserwatywnych aminokwasów w pozycjach 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10, 11 i/lub 12.
Korzystnie ten izolowany kwas nukleinowy koduje region zmienny łańcucha ciężkiego (HCVR) przeciwciała, przy czym korzystnie domena CDR2 HCVR przeciwciała obejmuje sekwencję aminokwasową SEQ ID NO:6, najkorzystniej domena CDR1 HCVR przeciwciała obejmuje sekwencję aminokwasową SEQ ID NO:8.
Wynalazek dotyczy ponadto izolowanego przeciwciała ludzkiego albo jego części wiążącej antygen, charakteryzującego się tym, że wiąże TNFa i ma region zmienny łańcucha lekkiego (LCVR) o domenie CDR3 obejmującej sekwencję aminokwasową wybraną z grupy składającej się z: SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 26, albo region zmienny łańcucha ciężkiego (HCVR) o domenie CDR3 obejmującej sekwencję aminokwasową wybraną z grupy składającej się z: SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 31, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 33 i SEQ ID NO: 34.
Wynalazek dotyczy ponadto kompozycji farmaceutycznej zawierającej substancję czynną i farmaceutycznie dopuszczalny nośnik, charakteryzującej się tym, że jako substancję czynną zawiera przeciwciało, albo jego część wiążącą antygen, które wiąże TNFa i ma region zmienny łańcucha lekkiego (LCVR) o domenie CDR3 obejmującej sekwencję aminokwasową wybraną z grupy składającej się z: SEQ ID NO:3, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 26, albo region zmienny łańcucha ciężkiego (HCVR) o domenie CDR3 obejmującej sekwencję aminokwasową wybraną z grupy składającej się z: SEQ ID NO:4, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 31, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO:33 i SEQ ID NO: 34.
Korzystnie ta kompozycja farmaceutyczna zawiera ponadto co najmniej jeden dodatkowy środek terapeutyczny do leczenia choroby, w której aktywność TNFa jest szkodliwa, przy czym korzystnie ten dodatkowy środek terapeutyczny jest wybrany z grupy obejmującej środki przeciwzapalne hamujące cytokiny, CDP-571/BAY-10-3356, cA2, 75 kdTNFR-IgG, 55 kdTNFR-IgG, IDEC-CE9.1/SB 210396, DAB 486-IL-2, DAB 389-IL-2, Anti-Tac, IL-4, IL-10, agonistów IL-4, agonistów IL-10, IL-1RA,
PL 193 499 B1
TNF-bp/s-TNFR, S284, R973401, MK-966, Iloprost, talidomid, środki pokrewne talidomidowi, kwas traneksamowy, T-614, prostaglandynę E1, tenidap, meloksykam, piroksykam, indometacynę, inhibitory ICE, inhibitory zap-70, inhibitory lck, inhibitory VEGF, inhibitory VEGF-R, inhibitory TNF-konwertazy, przeciwciała przeciw IL-12, inhibitory interleukiny 11, inhibitory interleukiny 13, inhibitory interleukiny17, penicylaminę, chlorambucyl, cyklofosfamid, globulinę antytymocytarną, przeciwciała przeciw CD4, CD5-toksyny, doustnie podawane peptydy, kolagen, disodową sól lobenzarytu, czynniki regulujące cytokiny HP228 i HP466, antysensowne fosforotionianowe oligodeoksynukleotydy ICAM-1, rozpuszczalny receptor 1 dopełniacza, orgoteinę, polisiarczan glikozoaminoglikanu, minocyklinę, przeciwciała przeciw IL2R, lipidy morskie, lipidy roślinne, auranofinę, fenylobutazon, kwas meklofenamowy, kwas flufenamowy, dożylną immunoglobulinę, zileuton, kwas mykofenolowy, takrolimus, sirolimus, amiprilos, kladribinę, azarybinę, budenozyd, czynnik wzrostu naskórka, aminosalicylany, 6-merkaptopurynę, metronidazol, inhibitory lipoksygenazy, mesalaminę, olsalazynę, balsalazyd, przeciwutleniacze, inhibitory tromboksanu, antagonistów receptora IL-1, przeciwciała monoklonalne przeciw IL-1b, przeciwciała monoklonalne przeciw IL-6, czynniki wzrostu, inhibitory elastazy, związki pirydynylo-imidazolu, prednizolonowe proleki skoniugowane z glukuronidem, deksametazon lub budezonid, prednizolonowe proleki skoniugowane z dekstranem, powolnie uwalnianą mesalazynę, ciprofloksacynę, lignokainę, prednizolon, cyklofosfamid, 4-aminopirydynę, tizanidynę, interferon b1a, interferon b1b, kopolimer 1, tlen hiperbaryczny, klabribinę, hipertoniczny roztwór soli, antybiotyki, ciągłą hemofiltrację, karbapenemy, antagonistów cytokin, takich jak TNFa, IL-1b, IL-8, SK&F 107647, czterowartościowy guanylohydrazon CNI-1493, inhibitor szlaku czynnika tkankowego, PHP, czynniki chelatujące żelazo oraz chelaty, łącznie z kompleksem kwas dietylenotriaminopentaoctowy-żelazo (III), lizofilinę, PGG-glukan, apolipoproteinę A-1 rekonstytuowaną lipidami, chiralne kwasy hydroksamowe, przeciwciała przeciw endotoksynie, E5531, rBPI21, syntetyczne peptydydy przeciw endotoksynie, surfaktanty terapii zastępczej oraz przeciwciała przeciw IL-8.
Korzystnie w tej kompozycji farmaceutycznej dodatkowym innym środkiem terapeutycznym jest metotreksat.
Korzystnie w tej kompozycji farmaceutycznej dodatkowym innym środkiem terapeutycznym jest niesteroidowy środek przeciwzapalny.
Korzystnie w tej kompozycji farmaceutycznej dodatkowym innym środkiem terapeutycznym jest chlorochina lub hydroksychlorochina.
Korzystnie w tej kompozycji farmaceutycznej dodatkowym innym środkiem terapeutycznym jest sulfasalazyna, złoto, kortykosteroidy, prednizon, leflunomid, naproksen, diklofenak, metyloprednizolon lub azatiopryna.
Wynalazek dotyczy również sposobu hamowania aktywności ludzkiego TNFa in vitro charakteryzującego się tym, że obejmuje kontaktowanie ludzkiego TNFa z przeciwciałem, albo jego częścią wiążącą antygen, które wiąże TNFa i ma region zmienny łańcucha lekkiego (LCVR) o domenie CDR3 obejmującej sekwencję aminokwasową wybraną z grupy składającej się z: SEQ ID NO:3, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 26, albo region zmienny łańcucha ciężkiego (HCVR) o domenie CDR3 obejmującej sekwencję aminokwasową wybraną z grupy składającej się z: SEQ ID NO:4, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 31, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO:33 i SEQ ID NO: 34, w wyniku czego aktywność TNFa jest zahamowana.
Wynalazek dotyczy też przeciwciała, albo jego części wiążącej antygen, które wiąże TNFa i ma region zmienny łańcucha lekkiego (LCVR) o domenie CDR3 obejmującej sekwencję aminokwasową wybraną z grupy składającej się z: SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 26, albo region zmienny łańcucha ciężkiego (HCVR) o domenie CDR3 obejmującej sekwencję aminokwasową wybraną z grupy składającej się z: SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 31, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 33 i SEQ ID NO: 34, do stosowania jako lek.
Korzystnie to przeciwciało jest przeznaczone do stosowania w hamowaniu aktywności ludzkiego TNFa u człowieka cierpiącego na chorobę, w której aktywność TNFa jest szkodliwa, zwłaszcza do stosowania w kombinacji z co najmniej jednym dodatkowym środkiem terapeutycznym, przy czym korzystnie ten dodatkowy środek terapeutyczny jest wybrany z grupy obejmującej środki przeciwzaPL 193 499 B1 palne hamujące cytokiny, CDP-571/BAY-10-3356, cA2, 75 kdTNFR-IgG, 55 kdTNFR-IgG, IDECCE9.1/SB 210396, DAB 486-IL-2, DAB 389-IL-2, Anti-Tac, IL-4, IL-10, agonistów IL-4, agonistów IL10, IL-1RA, TNF-bp/s-TNFR, S284, R973401, MK-966, Iloprost, talidomid, środki pokrewne talidomidowi, kwas traneksamowy, T-614, prostaglandynę E1, tenidap, meloksykam, piroksykam, indometacynę, inhibitory ICE, inhibitory zap-70, inhibitory lck, inhibitory VEGF, inhibitory VEGF-R, inhibitory TNF-konwertazy, przeciwciała przeciw IL-12, inhibitory interleukiny 11, inhibitory interleukiny 13, inhibitory interleukiny-17, penicylaminę, chlorambucyl, cyklofosfamid, globulinę anty-tymocytarną, przeciwciała przeciw CD4, CD5-toksyny, doustnie podawane peptydy, kolagen, disodową sól lobenzarytu, czynniki regulujące cytokiny HP228 i HP466, antysensowne fosforotionianowe oligodeoksynukleotydy ICAM-1, rozpuszczalny receptor 1 dopełniacza, orgoteinę, polisiarczan glikozoaminoglikanu, minocyklinę, przeciwciała przeciw IL2R, lipidy morskie, lipidy roślinne, auranofinę, fenylobutazon, kwas meklofenamowy, kwas flufenamowy, dożylną immunoglobulinę, zileuton, kwas mykofenolowy, takrolimus, sirolimus, amiprilos, kladribinę, azarybinę, budenozyd, czynnik wzrostu naskórka, aminosalicylany, 6-merkaptopurynę, metronidazol, inhibitory lipoksygenazy, mesalaminę, olsalazynę, balsalazyd, przeciwutleniacze, inhibitory tromboksanu, antagonistów receptora IL-1, przeciwciała monoklonalne przeciw IL-1b, przeciwciała monoklonalne przeciw IL-6, czynniki wzrostu, inhibitory elastazy, związki pirydynylo-imidazolu, prednizolonowe proleki skoniugowane z glukuronidem, deksametazon lub budezonid, prednizolonowe proleki skoniugowane z dekstranem, powolnie uwalnianą mesalazynę, ciprofloksacynę, lignokainę, prednizolon, cyklofosfamid, 4-aminopirydynę, tizanidynę, interferon b1a, interferon b1b, kopolimer 1, tlen hiperbaryczny, klabribinę, hipertoniczny roztwór soli, antybiotyki, ciągłą hemofiltrację, karbapenemy, antagonistów cytokin, takich jak TNFa, IL-1b, IL-8, SK&F 107647, czterowartościowy guanylohydrazon CNI-1493, inhibitor szlaku czynnika tkankowego, PHP, czynniki chelatujące żelazo oraz chelaty, łącznie z kompleksem kwas dietylenotriaminopentaoctowy-żelazo (III), lizofilinę, PGG-glukan, apolipoproteinę A-1 rekonstytuowaną lipidami, chiralne kwasy hydroksamowe, przeciwciała przeciw endotoksynie, E5531, rBPI21, syntetyczne peptydydy przeciw endotoksynie, surfaktanty terapii zastępczej oraz przeciwciała przeciw IL-8.
Korzystnie to przeciwciało stosuje się w kombinacji z dodatkowym innym środkiem terapeutycznym, którym jest metotreksat.
Korzystnie to przeciwciało stosuje się w kombinacji z dodatkowym innym środkiem terapeutycznym, którym jest niesteroidowy środek przeciwzapalny.
Korzystnie to przeciwciało stosuje się w kombinacji z dodatkowym innym środkiem terapeutycznym, którym jest chlorochina lub hydroksychlorochina.
Korzystnie to przeciwciało stosuje się w kombinacji z dodatkowym innym środkiem terapeutycznym, którym jest sulfasalazyna, złoto, kortykosteroidy, prednizon, leflunomid, naproksen, diklofenak, metyloprednizolon lub azatiopryna.
Wynalazek dotyczy ponadto zastosowania tego przeciwciała, albo jego części wiążącej antygen, do wytwarzania leku do leczenia choroby, w której aktywność TNFa jest szkodliwa.
W szczególności jest to choroba wybrana spośród choroby zakaźnej, odrzucenia przeszczepu albo reakcji przeszczepu przeciwko gospodarzowi, choroby nowotworowej, płuc, serca, posocznicy, zapalenia kości i stawów, dnawego zapalenia stawów, alergii, stwardnienia rozsianego, autoimmunologicznej cukrzycy, autoimmunologicznego zapalenia błony naczyniowej oka, zespołu nerczycowego, chorób zapalnych kości, chorób resorpcyjnych kości, poalkoholowego zapalenia wątroby, wirusowego zapalenia wątroby, zaburzeń krzepnięcia, oparzeń, uszkodzenia poreperfuzyjnego, tworzenia bliznowca, tworzenia tkanki bliznowatej, gorączki, wstrząsu septycznego, wstrząsu endotoksycznego, posocznicy Gram-ujemnej, zespołu wstrząsu toksycznego, malarii, zapalenia opon mózgowych, kacheksji, AIDS, bakteryjnego zapalenia opon mózgowych, zespołu związanego z AIDS (ARC), wtórnej infekcji wirusem cytomegalii po przeszczepie, gorączki i mięśniobóli z powodu infekcji i wtórnej kacheksji w wyniku infekcji, odrzucenia przeszczepu allogenicznego, stymulowania wzrostu nowotworu, wzmacniania potencjału przerzutowego oraz mediowania cytotoksyczności w chorobach nowotworowych, hamowania wzrostu nowotworu lub przerzutów, zespołu zaburzeń oddechowych dorosłych, płuca wstrząsowego, przewlekłej zapalnej choroby płuc, sarkoidozy płuc, zwłóknienia płuc, krzemicy, choroby zapalnej jelit, idiopatycznej choroby zapalnej jelit, wrzodziejącego zapalenia okrężnicy, niedokrwienia mięśnia sercowego, niewydolności mięśnia sercowego oraz zapalenia wątroby.
W szczególności tą chorobą jest choroba jelit, choroba Crohna, choroba autoimmunologiczna, reumatoidalne zapalenie stawów lub zesztywniające zapalenie stawów kręgosłupa.
PL 193 499 B1
Wynalazek dotyczy także izolowanego kwasu nukleinowego kodującego domenę CDR3 obejmującą sekwencję aminokwasową wybraną z grupy składającej się z: SEQ ID NO:3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 31, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO:33 i SEQ ID NO: 34.
Krótki opis figur
Figury 1A i 1B przedstawiają sekwencje aminokwasowe regionu zmiennego łańcucha lekkiego D2E7 (VL D2E7; pokazane również na SEQ ID NO: 1), mutanty otrzymane metodą skanowania alaniną VL D2E7 (LD2E7*.A1, LD2E7*.A3, LD2E7*.A4, LD2E7*.A5, LD2E7*.A7 i LD2E7*.A8), regionu zmiennego łańcucha lekkiego przeciwciała pokrewnego z D2E7, 2SD4 (VL 2SD4; pokazane również na SEQ ID NO: 9) i inne pokrewne z D2E7 regiony zmienne łańcucha lekkiego (EP B12, VL10E4, VL100A9, VL100D2, VL10F4, LOE5, VLLOF9, VLLOF10, VLLOG7, VLLOG9, VLLOH1, VLLOH10, VL1B7, VL1C1, VL1C7, VL0.1F4, VL0.1H8, LOE7, LOE7.A i LOE7.T). Figura 1A pokazuje domeny FR1, CDR1, FR2 i CDR2. Figura 1B pokazuje domeny FR3, CDR3 i FR4. Domeny łańcucha lekkiego CDR1 („CDR L1), CDR2 („CDR L2) i CDR3 („CDR L3) zaznaczono ramkami.
Figury 2A i 2B przedstawiają sekwencje aminokwasowe regionu zmiennego łańcucha ciężkiego D2E7 (VH D2E7; pokazane również na SEQ ID NO: 2), mutanty otrzymane metodą skanowania alaniną VH D2E7 (HD2E7*.A1, HD2E7*.A2, HD2E7*.A3, HD2E7*.A4, HD2E7*.A5, HD2E7*.A6, HD2E7*.A7, HD2E7*.A8, HD2E7*.A9), regionu zmiennego łańcucha ciężkiego przeciwciała pokrewnego z D2E7, 2SD4 (VH 2SD4; pokazane również na SEQ ID NO: 10) i inne regiony zmienne łańcuchów ciężkich pokrewne z D2E7 (VH1B11, VH1D8, VH1A11, VH1B12, VH1-D2, VH1E4, VH1F6, VH1G1, 3C-H2, VH1-D2.N i VH1-D2.Y). Figura 2A pokazuje domeny FR1, CDR1, FR2 i CDR2. Figura 2B pokazuje domeny FR3, CDR3 i FR4. Domeny łańcucha ciężkiego CDR1 („CDR H1), CDR2 („CDR H2) i CDR3 („CDR H3) zaznaczono ramkami.
Figura 3 stanowi wykres przedstawiający zahamowanie cytotoksyczności komórek L929 wywołanej TNFa, przez ludzkie przeciwciała przeciw hTNFa, D2E7, w porównaniu z przeciwciałem mysim przeciw hTNFa, MAK 195.
Figura 4 jest wykresem przedstawiającym zahamowanie wiązania rhTNFa z receptorami hTNFa na komórkach U-937 przez ludzkie przeciwciała przeciw hTNFa, D2E7, w porównaniu z przeciwciałem mysim przeciw hTNFa, MAK 195.
Figura 5 jest wykresem przedstawiającym zahamowanie ekspresji ELAM-1 na komórkach HUVEC wywołanej TNFa, przez ludzkie przeciwciała przeciw hTNFa, D2E7, w porównaniu z przeciwciałem mysim przeciw hTNFa, MAK 195.
Figura 6 jest wykresem słupkowym przedstawiającym ochronę przed działaniem letalnym wywołanym TNFa u myszy uczulonych D-galaktozaminą po podaniu ludzkiego przeciwciała przeciw hTNFa, D2E7 (słupki czarne), w porównaniu z przeciwciałem mysim przeciw hTNFa, MAK 195 (słupki kreskowane).
Figura 7 pokazuje sekwencję nukleotydową regionu zmiennego łańcucha lekkiego D2E7, z przewidywaną sekwencją aminokwasową poniżej sekwencji nukleotydowej. Podkreślono regiony CDR L1, CDR L2 i CDR L3.
Figura 8 pokazuje sekwencję nukleotydową regionu zmiennego łańcucha ciężkiego D2E7, z przewidywaną sekwencją aminokwasową poniżej sekwencji nukleotydowej. Podkreślono regiony CDR H1, CDR H2 i CDR H3.
Figura 9 jest wykresem przedstawiającym wpływ leczenia przeciwciałem D2E7 na średnią wielkość stawu transgenicznych myszy Tg197, jako modelu zapalenia wielostawowego.
W celu lepszego wyjaśnienia wynalazku, zostaną najpierw zdefiniowane pewne określenia.
Stosowane tu określenie „ludzki TNFa (w skrócie hTNFa, albo po prostu hTNF) dotyczy ludzkiej cytokiny, która występuje jako postać wydzielnicza 17 kDa oraz postać związana z błoną 26 kDa, której biologicznie czynna postać składa się z trimeru niekowalencyjnie związanych cząsteczek 17 kDa. Strukturę hTNFa opisano bliżej np. w Pennica i in., (1984) Nature 312:724-729; J.M. Davis i in., (1987) Biochemistry 26:1322-1326; oraz E.Y. Jones i in., (1989) Nature 338:225-228. Określenie ludzki TNFa obejmuje rekombinowany ludzki TNFa (rhTNFa), który można wytworzyć standardowymi metodami ekspresji rekombinacyjnej albo nabyć w handlu (R&D Systems, nr kat. 210-TA, Minneapolis, MN).
Stosowane tu określenie „przeciwciało dotyczy cząsteczek immunoglobulin zbudowanych z czterech łańcuchów polipeptydowych, dwóch łańcuchów ciężkich (H) i dwóch lekkich (L) połączoPL 193 499 B1 nych ze sobą wiązaniami disiarczkowymi. Każdy łańcuch ciężki obejmuje region zmienny łańcucha ciężkiego (w skrócie HCVR albo VH) oraz region stały łańcucha ciężkiego. Region stały łańcucha ciężkiego obejmuje trzy domeny, CH1, CH2 i CH3. Każdy łańcuch lekki obejmuje region zmienny łańcucha lekkiego (w skrócie LCVR albo VL) i region stały łańcucha lekkiego. Region stały łańcucha lekkiego obejmuje jedną domenę CL. Regiony VH i VL można dalej podzielić na regiony hiperzmienności, określane jako regiony określające komplementarność (CDR), przedzielone regionami w większym stopniu konserwowanymi, określanymi jako regiony zrębowe (FR). Każdy VL i VH składa się z trzech CDR i czterech FR, ustawionych od końca aminowego do końca karboksylowego w następującej kolejności: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4.
Stosowane tu określenie „część wiążąca antygen przeciwciała (albo po prostu „część przeciwciała) dotyczy jednego lub większej liczby fragmentów przeciwciała, które zachowują zdolność do swoistego wiązania z antygenem (np. hTNFa). Wykazano, że funkcja wiązania antygenu przeciwciała może być wykonywana przez fragmenty przeciwciała pełnej długości. Przykłady fragmentów wiążących objęte określeniem „część wiążąca antygen przeciwciała obejmują (i) fragment Fab, monowalentny fragment obejmujący domeny VL, VH, CL i CH1; (ii) fragment F(ab')2, biwalentny fragment obejmujący dwa fragmenty Fab połączone mostkiem disiarczkowym w regionie zawiasowym; (iii) fragment Fd obejmujący domeny VH i CH1; (iv) fragment Fv obejmujący domeny VL i VH jednego ramienia przeciwciała, (v) fragment dAb (Ward i in., (1989) Nature 341:544-546), który obejmuje domenę VH; oraz (vi) izolowany region determinujący dopasowanie (CDR). Ponadto jakkolwiek dwie domeny fragmentu Fv, VL i VH, kodowane są przez osobne geny, mogą być one połączone przy użyciu metod rekombinacyjnych łącznikiem syntetycznym, który umożliwia ich wytwarzanie jako pojedynczy łańcuch białka, w których para regionów VL i VH tworzy monowalentną cząsteczkę (znaną również jako jednołańcuchowy Fv (scFv); patrz, Bird i in., (1988) Science 242:423-426; oraz Huston i in., (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883). Takie przeciwciała jednołańcuchowe objęte są również określeniem „część wiążąca antygen przeciwciała. Inne postaci przeciwciał jednołańcuchowych, takie jak przeciwciała o podwójnej swoistości są również nim objęte. Przeciwciała takie są biwalentnymi przeciwciałami o podwójnej swoistości, w których domeny VH i VL eksprymowane są jako pojedynczy łańcuch polipeptydowy, ale z użyciem łącznika, który jest na tyle krótki, że uniemożliwia tworzenie par pomiędzy domenami tego samego łańcucha, zmuszając je do tworzenia pary z komplementarnymi domenami innego łańcucha i tworzenia dwóch miejsc wiążących antygen (patrz, P. Holliger i in. (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:6444-6448; R.J. Poljak i in., (1994) Structure 2:1121-1123).
Ponadto przeciwciało albo jego część wiążąca antygen może stanowić część większej cząsteczki immunoadhezyjnej, wytworzonej przez połączenie kowalencyjne lub niekowalencyjne przeciwciała lub części przeciwciała z jednym lub większą liczbą białek albo peptydów. Przykłady takich cząsteczek immunoadhezyjnych obejmują zastosowanie regionu rdzeniowego streptawidyny do wytworzenia tetramerycznej cząsteczki scFv (S.M. Kipriyanov i in., (1995) Human Antibodies and Hybridomas 6:93-101) i zastosowanie reszty cysteinowej, peptydu znacznikowego oraz C-końcowego znacznika polihistydynowego do wytworzenia biwalentnych i biotynylowanych cząsteczek scFv (S.M. Kipriyanov i in., (1994) Mol. Immunol. 31:1047-1058). Części przeciwciał, takie jak fragmenty Fab lub F(ab')2, można wytworzyć z całych przeciwciał stosując znane techniki, takie jak, odpowiednio, trawienie papainą albo pepsyną całych przeciwciał. Ponadto przeciwciała, części przeciwciał i cząsteczki immunoadhezyjne można otrzymać stosując standardowe techniki rekombinacji DNA, jak to tu opisano.
Stosowane tu określenie „przeciwciało ludzkie dotyczy przeciwciał o regionach stałych i zmiennych pochodzących z ludzkich zarodkowych sekwencji immunoglobulin. Przeciwciała ludzkie według wynalazku mogą obejmować reszty aminokwasowe nie kodowane przez ludzkie zarodkowe sekwencje immunoglobulin (np. mutacje wprowadzone przez losową albo ukierunkowaną mutagenezę in vitro albo przez mutację somatyczną in vivo), przykładowo w CDR, a zwłaszcza w CDR3. Jednakże stosowane tu określenie „przeciwciało ludzkie nie ma w zamierzeniu obejmować przeciwciał, w których sekwencje CDR pochodzące z linii zarodkowej ssaka innego gatunku, takiego jak mysz, zostały przeszczepione do ludzkich sekwencji zrębowych.
Stosowane tu określenie „rekombinowane ludzkie przeciwciało obejmuje wszystkie ludzkie przeciwciała, które są wytwarzane, eksprymowane, tworzone lub izolowane sposobami rekombinacyjnymi, takie jak przeciwciała eksprymowane przy użyciu rekombinowanych wektorów ekspresyjnych transfekowanych do komórek gospodarza (opisane dalej w rozdziale II, poniżej), przeciwciała wyizolowane z rekombinacyjnej kombinatoryjnej ludzkiej biblioteki przeciwciał (opisanej dalej w rozdziale III, poniżej), przeciwciała wyizolowane ze zwierząt (np. myszy) transgenicznych pod względem ludzkich
PL 193 499 B1 genów immunoglobulin (patrz np. L.D. Taylor i in., (1992) Nucl. Acids Res. 20:6287-6295) albo przeciwciała wytworzone, eksprymowane, tworzone albo izolowane jakimkolwiek innym sposobem, który obejmuje składanie sekwencji genu ludzkiej immunoglobuliny z innymi sekwencjami DNA. Takie rekombinowane ludzkie przeciwciała mają regiony zmienne i stałe pochodzące z ludzkich sekwencji zarodkowych immunoglobulin. W pewnych postaciach, jednakże, takie rekombinowane przeciwciała ludzkie poddawane są mutagenezie in vitro (albo, gdy stosuje się zwierzę transgeniczne pod względem sekwencji ludzkich Ig, mutagenezie somatycznej in vivo), stąd sekwencje aminokwasowe regionów VH i VL przeciwciał rekombinowanych są sekwencjami, które pochodząc albo będąc spokrewnionymi z ludzkimi sekwencjami zarodkowymi VH i VL, mogą nie występować naturalnie w repertuarze ludzkich przeciwciał zarodkowych in vivo.
Stosowane tu określenie „izolowne przeciwciało dotyczy przeciwciała, które jest zasadniczo wolne od innych przeciwciał, mających inne swoistości antygenowe (np. izolowane przeciwciało wiążące swoiście hTNFa jest zasadniczo wolne od przeciwciał, które swoiście wiążą antygeny inne niż hTNFa). Jednakże izolowane przeciwciało, które swoiście wiąże hTNFa, może wykazywać aktywność krzyżową z innymi antygenami, takimi jak cząsteczki TNFa innych gatunków (co jest dyskutowane szczegółowo poniżej). Ponadto izolowane przeciwciało może być zasadniczo wolne od innych składników komórkowych i/lub związków chemicznych.
Stosowane tu określenie „przeciwciało neutralizujące (albo „przeciwciało neutralizujące aktywność hTNFa) dotyczy przeciwciała, którego związanie się z hTNFa powoduje zahamowanie aktywności biologicznej hTNFa. To zahamowanie aktywności biologicznej hTNFa można określić przez zmierzenie jednego lub większej liczby wskaźników aktywności biologicznej hTNFa, takich jak cytotoksyczność wywołana hTNFa (in vitro jak i in vivo), aktywacja komórkowa wywołana hTNFa i wiązanie się hTNFa z receptorem hTNFa. Te wskaźniki aktywności biologicznej można określić jednym albo wieloma znanymi standardowymi testami in vitro albo in vivo (patrz przykład 4). Korzystnie, zdolność przeciwciała do neutralizacji aktywności hTNFa oceniana jest przez zahamowanie cytotoksyczności komórek L929 wywołanej hTNFa. Jako dodatkowy lub alternatywny parametr aktywności hTNFa można ocenić zdolność przeciwciała do zahamowania wywołanej hTNFa ekspresji ELAM-1 na HUVEC, jako miary pobudzenia komórkowego wywołanego hTNFa.
Stosowane tu określenie „metoda rezonansu plazmonów powierzchniowych dotyczy zjawiska optycznego, które umożliwia analizę swoistych oddziaływań biologicznych w czasie rzeczywistym, przez wykrywanie zmian w stężeniu białka w matrycy sensora biologicznego, przykładowo, stosując układ BIAcore (Pharmacia Biosensor AB, Uppsala, Szwecja i Piscataway, NJ). Dla dalszego opisu, patrz przykład 1 oraz U. Jonsson i in., (1993) Ann. Biol. Clin. 51:19-26; U. Jonsson i in., (1991) Biotechniques 11:620-627; B. Johnsson i in., (1995) J. Mol. Recognit. 8:125-131; i B. Johnsson i in., (1991) Anal. Biochem. 198:268-277.
Stosowane tu określenie „Koff dotyczy stałej szybkości odłącznia dla dysocjacji przeciwciała z kompleksu przeciwciało/antygen.
Stosowane tu określenie „Kd dotyczy stałej dysocjacji konkretnego oddziaływania przeciwciało-antygen.
Stosowane tu określenie „cząsteczka kwasu nukleinowego obejmuje cząsteczki DNA i cząsteczki RNA. Cząsteczka kwasu nukleinowego może być jednoniciowa lub dwuniciowa, ale korzystnie jest dwuniciowym DNA.
Stosowane tu określenie „izolowana cząsteczka kwasu nukleinowego w odniesieniu do kwasów nukleinowych kodujących przeciwciała albo części przeciwciał (np. VH, VL, CDR3), które wiążą hTNFa, dotyczy cząsteczki kwasu nukleinowego, w której sekwencje nukleotydowe kodujące przeciwciało lub część przeciwciała są wolne od innych sekwencji nukleotydowych kodujących przeciwciała albo części przeciwciał wiążących antygeny inne n iż hTNFa, które to sekwencje mogą w naturze flankować kwas nukleinowy w ludzkim genomowym DNA. Tak więc przykładowo, izolowany kwas nukleinowy według wynalazku kodujący region VH przeciwciała przeciw hTNFa nie zawiera innych sekwencji kodujących inne regiony VH, które wiążą antygeny inne niż TNFa.
Stosowane tu określenie „wektor dotyczy cząsteczki kwasu nukleinowego zdolnej do transportowania innego kwasu nukleinowego, do którego została przyłączona. Jednym z rodzajów wektora jest „plazmid, który jest kolistą pętlą dwuniciowego DNA, do której można włączyć dodatkowy segment DNA. Innym rodzajem wektora jest wektor wirusowy, w którym dodatkowe segmenty DNA można poddać ligacji w genomie wirusowym. Pewne wektory są zdolne do autonomicznej replikacji w komórce gospodarza, do którego je wprowadzono (np. wektory bakteryjne mające bakteryjny początek repliPL 193 499 B1 kacji i episomalne wektory ssaków). Inne wektory (np. nieepisomalne wektory ssaków) mogą ulegać integracji z genomem komórki gospodarza po wprowadzeniu do komórki gospodarza i w ten sposób ulegają replikacji wraz z genomem gospodarza. Ponadto, pewne wektory są zdolne do kierowania ekspresją genów, do których zostały funkcjonalnie przyłączone. Wektory takie określane są jako „rekombinacyjne wektory ekspresyjne (albo po prostu „wektory ekspresyjne). Ogólnie, wektory ekspresyjne przydatne w technikach rekombinacji DNA są często w postaci plazmidów. W niniejszym opisie „plazmid i „wektor mogą być używane zamiennie, ponieważ plazmid jest najczęściej stosowaną postacią wektora. Jednakże, wynalazek ma obejmować inne postaci wektorów ekspresyjnych, takich jak wektory wirusowe (np. niezdolne do replikacji retrowirusy, adenowirusy i wirusy związane z adenowirusami), które pełnią funkcje równoważne.
Określenie „rekombinowana komórka gospodarza (lub po prostu „komórka gospodarza) dotyczy komórki, do której został wprowadzony rekombinowany wektor ekspresyjny. Należy rozumieć, że takie określenia mają dotyczyć nie tylko konkretnej komórki, ale również jej potomstwa. Ponieważ mogą wystąpić pewne modyfikacje w kolejnych pokoleniach z powodu mutacji albo wpływów środowiska, potomstwo takie może nie być w rzeczywistości identyczne z komórką macierzystą, ale wciąż zawiera się w zakresie określenia „komórka gospodarza.
Różne aspekty wynalazku zostaną opisane dalej szczegółowo poniżej.
I. Przeciwciała ludzkie, które wiążą ludzki TNFa
Korzystnie ludzkie przeciwciała według wynalazku są rekombinowanymi, neutralizującymi ludzkimi przeciwciałami przeciw hTNFa, które wiążą TNFa. Wiążą one ludzki TNFa z dużym powinowactwem, małą szybkością odłączania i wysoką zdolnością neutralizacji.
Najkorzystniejsze rekombinowane przeciwciało neutralizujące według wynalazku określane jest jako D2E7 i ma sekwencje VL i VH pokazane odpowiednio na fig. 1A i 1B oraz fig. 2A i 2B (sekwencja aminokwasowa regionu VL D2E7 pokazana jest również na SEQ ID NO:1; sekwencja aminokwasowa regionu VH D2E7 pokazana jest na SEQ ID NO: 2). Właściwości wiązania D2E7, w porównaniu z mysim mAb MAK 195 przeciw hTNFa, które wykazuje wysokie powinowactwo i powolną kinetykę dysocjacji oraz innego ludzkiego przeciwciała przeciw hTNFa, pokrewnego sekwencją z D2E7, 2SD4 podsumowano poniżej:
Przeciwciało Koff s 1 kon M1s1 Kd M Stechiometria
D2E7 IgG1 8,81x105 1,91x105 6,09x1010 1,2
2SD4 IgG4 8,4x10-3 4,20x105 2,00x10 8 0,8
MAK 195 F(ab')2 8,70x10 5 1,90x105 4,60x1010 1,4
Przeciwciało D2E7 i przeciwciała pokrewne wykazują również silną zdolność do neutralizacji aktywności hTNFa, jak oceniono w kilku testach in vitro i in vivo (patrz, przykład 4). Przykładowo, przeciwciała te neutralizują wywołaną hTNFa cytotoksyczność komórek L929 z IC50 w zakresie od około
-7 -10
10-7 M do około 10-10 M. D2E7, eksprymowane jako przeciwciało IgG1 pełnej długości, neutralizuje -10 wywołaną hTNFa cytotoksyczność komórek L929 z IC50 około 1,25x10-10 M. Ponadto zdolność do neutralizacji D2E7 jest zachowana, gdy przeciwciało jest eksprymowane jako fragment Fab, F(ab')2 albo scFv. D2E7 hamuje również aktywację komórek wywołaną TNFa, jak zmierzono wywołaną -10 hTNFa ekspresją ELAM-1 na HUVEC (IC50 = około 1,85x10-10 M) i wiązanie hTNFa z receptorami -10 hTNFa na komórkach U-937 (IC50 = około 1,56x10-10 M). W odniesieniu do tego ostatniego, D2E7 hamuje wiązanie hTNFa z receptorem p55 jak i p75. Ponadto, przeciwciało hamuje wywołany hTNFa efekt letalny in vivo u myszy (ED50 = 1-2,5 μg/mysz).
W odniesieniu do swoistości wiązania D2E7, przeciwciało to wiąże się z ludzkimTNFa w różnych postaciach, w tym z rozpuszczalnym hTNFa, śródbłonowym hTNFa oraz hTNFa związanym z receptorami komórkowymi. D2E7 nie wiąże się swoiście z innymi cytokinami, takimi jak limfotoksyna (TNFb), IL-1a, IL-1b, IL-2, IL-4, IL-6, IL-8, IFNgi TGFb.Jednakże D2E7 wykazuje aktywność krzyżową z postaciami czynnika martwicy nowotworu innych gatunków. Przykładowo przeciwciało neutralizuje aktywność co najmniej pięciu TNFa naczelnych (szympansa, pawiana, marmozety, cynomolgusa irezusa), z wartościami IC50 w przybliżeniu równoważnymi, jak w przypadku neutralizacji hTNFa (patrz przykład 4, podrozdział E). D2E7 neutralizuje również aktywność mysiego TNFa, aczkolwiek około 1000-krotnie słabiej niż ludzkiTNFa(patrz, przykład 4 podrozdział E). D2E7 wiąże się również z TNFa psa i świni.
PL 193 499 B1
Oprócz przeciwciał D2E7 i części takich przeciwciał, wynalazek dostarcza przeciwciał pokrewnych D2E7 i części takich przeciwciał oraz innych ludzkich przeciwciał i części przeciwciał o właściwościach równoważnych z D2E7, takich jak wysokie powinowactwo wiązania z hTNFa z powolną kinetyką dysocjacji i wysoką zdolnością neutralizacji.
Jak już wspomniano, izolowane przeciwciało ludzkie albo jego część wiążącą antygen, dysocjuje z ludzkiego TNFa z Kd równą 1x10-8 M albo mniejszą i stałą szybkości Koff równą 1x10-3 s-1 lub
-4 -1 -4 -1 mniejszą, korzystnie 5x10-4 s-1 lub mniejszą, najkorzystniej 1x10-4 s-1 lub mniejszą, przy czym obie wartości wyznaczono metodą rezonansu plazmonów powierzchniowych, oraz neutralizuje cytotoksyczność ludzkiego TNFa wobec komórek L929 w standardowym teście in vitro z IC50 równym 1x10-7
M lub mniej, korzystnie 1x10-8 M lub mniej, korzystniej z IC50 = 1x10-9 M lub mniej, a najkorzystniej -10 zIC50 = 5x10-10 M lub mniej. Korzystnie przeciwciało jest izolowanym ludzkim rekombinowanym przeciwciałem albo jego częścią wiążącą antygen. Korzystnie przeciwciało neutralizuje również aktywację komórkową wywołaną TNFa, jak oceniono stosując standardowy test in vitro na wywołaną TNFa ekspresję ELAM-1 na ludzkich komórkach śródbłonka żyły pępowinowej (HUVEC).
Analizę rezonansu plazmonów powierzchniowych do określania Kd i Koff można wykonać jak to opisano w przykładzie 1. Standardowy test in vitro z komórkami L929 na określenie wartości IC50 opisano w przykładzie 4, podrozdział A. Standardowy test in vitro na wywołaną TNFa ekspresję ELAM-1 na ludzkich komórkach śródbłonka żyły pępowinowej (HUVEC) opisano w przykładzie 4, podrozdział C. Przykłady rekombinowanych ludzkich przeciwciał, które odpowiadają wyżej wspomnianym kryteriom kinetyki i neutralizacji obejmują przeciwciała mające następujące pary [VH/LH], których sekwencje pokazano na fig. 1A, 1B, 2A i 2B (patrz, również przykład 2, 3 i 4, analiza kinetyki i neutralizacji): [D2E7 VH/D2E7 VL]; [HD2E7*.A1/D2E7 VL], [HD2E7*.A2/D2E7 VL], [HD2E7*.A3/D2E7 VL], [HD2E7*.A4/D2E7 VL], [HD2E7*.A5/D2E7 VL], [HD2E7*.A6/D2E7 VL], [HD2E7*.A7/D2E7 VL], [HD2E7*.A8/D2E7 VL], [HD2E7*.A9/D2E7 VL], [D2E7 VH/LD2E7*.A1], [D2E7 VH/LD2E7*.A4], [D2E7 VH/LD2E7*.A5], [D2E7 VH/LD2E7*.A7], [D2E7 VH/LD2E7*.A8], [HD2E7*.A9/LD2E7*.A1], [VH1-D2/LOE7], [VH1-D2.N/LOE7.T], [VH1-D2.Y/LOE7.A], [VH1-D2.N/LOE7.A], [VH1-D2/EP B12] i [3C-H2/LOE7].
Wiadomo, że domeny CDR3 łańcucha lekkiego i ciężkiego odgrywają istotną rolę w swoistości/powinowactwie wiązania przeciwciała z antygenem. Zgodnie z wynalazkiem dostarcza się ludźkich przeciwciał wykazujących powolną kinetykę dysocjacji w przypadku asocjacji z hTNFa i których domeny CDR3 łańcucha lekkiego i ciężkiego strukturalnie są identyczne albo pokrewne z D2E7. Jak pokazano w przykładzie 3, pozycja 9 CDR3 VL D2E7 może być zajęta przez A1a albo Thr bez istotnego wpływu na Koff. Odpowiednio motyw zgodności dla CDR3 VL D2E7 obejmuje sekwencję aminokwasową: Q-R-Y-N-R-A-P-Y- (T/A) (SEQ ID NO: 3). Dodatkowo pozycja 12 CDR3 VH D2E7 może być zajmowana przez Tyr albo Asn bez istotnego wpływu na Koff. Odpowiednio, motyw zgodności dla CDR3 VH D2E7 obejmuje sekwencję aminokwasową: Y-S-Y-L-S-T-A-S-S-L-D-(Y/N) (SEQ ID NO: 4). Ponadto, jak pokazano w przykładzie 2, domena CDR3 łańcuchów lekkich i ciężkich D2E7 może być podstawiona pojedynczymi resztami alaniny (w pozycjach 1, 4, 5, 7 lub 8 w CDR3 VL albo w pozycjach 2, 3, 4, 5,6, 8, 9, 10 lub 11 w CDR3 VH) bez istotnego wpływu na Koff. Ponadto fachowiec zauważy, że wziąwszy pod uwagę możliwość podstawienia domen CDR3 VL i VH D2E7 alaniną, możliwe jest zastąpienie innych aminokwasów w domenach CDR3 przy zachowaniu niskiej stałej odłączania przeciwciała, w szczególności przy konserwatywnych zastąpieniach aminokwasów. „Konserwatywne zastąpienie aminokwasu w znaczeniu tu użytym oznacza, że jedna reszta aminokwasowa zastępowana jest inną resztą aminokwasową mającą podobny łańcuch boczny. Zdefiniowano rodziny reszt aminokwasowych mających podobne łańcuchy boczne, w tym łańcuchy boczne zasadowe (np. lizyna, arginina, histydyna), łańcuchy boczne kwasowe (np. kwas asparaginowy, kwas glutaminowy), nienaładowane polarne łańcuchy boczne (np. glicyna, asparagina, glutamina, seryna, treonina, tyrozyna, cysteina), niepolarne łańcuchy boczne (np. alanina, walina, leucyna, izoleucyna, prolina, fenyloalanina, metionina, tryptofan), łańcuchy boczne rozgałęzione w pozycji beta (np. treonina, walina, izoleucyna) i łańcuchy boczne aromatyczne (np. tyrozyna, fenyloalanina, tryptofan, histydyna). Korzystnie wykonuje się nie więcej jak od 1do 5 konserwatywnych zastąpień aminokwasów w domenach CDR3 VL i/lub VH D2E7. Jeszcze korzystniej, wykonuje się nie więcej jak od 1do 3 konserwatywnych zastąpień aminokwasów w domenach CDR3 VL i/lub VH D2E7. Dodatkowo konserwatywnych zastąpień aminokwasów nie powinno wykonywać się w miejscach krytycznych dla wiązania hTNFa. Jak pokazano w przykładzie 3, pozycje 2 i 5 w CDR3 VL D2E7 i pozycje 1 i 7 CDR3 VH D2E7 wydają się być pozycjami krytycznymi dla oddziaływania z hTNFa, stąd korzystnie nie wykonuje się konserwatywnych
PL 193 499 B1 zastąpień aminokwasów w tych pozycjach (jakkolwiek dopuszczalne jest zastąpienie alaniną w pozycji 5 CDR3 VL D2E7, jak to opisano wyżej).
Wynalazek dostarcza też izolowane ludzkie przeciwciało albo jego część wiążącą antygen, które wiąże TNFa, z regionem zmiennym łańcucha lekkiego (LCVR) o domenie CDR3 obejmującej sekwencję aminokwasową SEQ ID NO:3 albo zmodyfikowaną na podstawie SEQ ID NO:3 przez zastąpienie alaniną w pozycjach 1, 4, 5, 7 albo 8 i z regionem zmiennym łańcucha ciężkiego (HCVR) o domenie CDR3 obejmującej sekwencję aminokwasową SEQ ID NO: 4 albo zmodyfikowaną na podstawie SEQ ID NO: 4 przez zastąpienie alaniną w pozycjach 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10 albo 11. Korzystnie LCVR ma ponadto domenę CDR2 obejmującą sekwencję aminokwasową SEQ ID NO: 5 (tj. CDR2 VL D2E7), zaś HCVR ma ponadto domenę CDR2 obejmującą sekwencję aminokwasową SEQ ID NO: 6 (tj. CDR2 VH D2E7). Jeszcze korzystniej, LCVR ma ponadto domenę CDR1 obejmującą sekwencję aminokwasową SEQ ID NO: 7 (tj. CDR1 VL D2E7), zaś HCVR ma ponadto domenę CDR1 obejmującą sekwencję aminokwasową SEQ ID NO: 8 (tj. CDR1 VH D2E7). Regiony zrębowe VL korzystnie pochodzą z ludzkiej rodziny zarodkowej VKI, korzystniej z genu Vk ludzkiej linii zarodkowej A20, zaś najkorzystniej z sekwencji zrębowych VL D2E7 pokazanych na fig. 1A i 1B. Regiony zrębowe dla VH korzystnie pochodzą z ludzkiej rodziny zarodkowej VH3, korzystniej z genu VH ludzkiej linii zarodkowej DP31, zaś najkorzystniej z sekwencji zrębowych VH D2E7 pokazanych na fig. 2A i 2B.
Zgodnie z wynalazkiem dostarcza się izolowane przeciwciało ludzkie albo jego część wiążącą antygen, które wiąże TNFa, mające domeny CDR3 VL i VH pokrewne z D2E7, przykładowo przeciwciała albo ich części wiążące antygen z regionem zmiennym łańcuchów lekkich (LCVR) o domenach CDR3 obejmujących sekwencję aminokwasową wybraną z grupy obejmującej SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 25 i SEQ ID NO: 26 albo z regionem zmiennym łańcucha ciężkiego (HCVR) o domenach CDR3 obejmujących sekwencję aminokwasową wybraną z grupy obejmującej SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 31, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 33, SEQ ID NO: 34 i SEQ ID NO: 35.
Korzystne rekombinowane ludzkie przeciwciało albo jego część wiążącą antygen, neutralizuje aktywność ludzkiego TNFa, ale nie ludzkiego TNFb, a korzystnie również aktywność TNFa szympansa i co najmniej jednego dodatkowego TNFa naczelnych wybranego z grupy obejmującej TNFa pawiana, TNFa marmozety, TNFa cynomolgusa i TNFa rezusa. Korzystnie przeciwciało albo jego część wiążąca antygen neutralizuje TNFa człowieka, szympansa i/lub dodatkowego gatunku naczelnych w standardowym teście in vitro z komórkami L929 z wartością IC50 równą 1x10-8 M albo mniejszą, korzystniej równą 1x10-9 M albo mniejszą, zaś jeszcze korzystniej równą 5x10-10 M albo mniejszą. Przeciwciało neutralizuje również aktywność TNFa psa, korzystnie w standardowym teście in vitro z komórkami L929 z wartością IC50 równą 1x10-7 M albo mniejszą, korzystniej równą 1x10-8 M albo mniejszą, zaś jeszcze korzystniej równą 5x10-9 M albo mniejszą. Przeciwciało neutralizuje także aktywność TNFa świni, korzystnie z wartością IC50 równą 1x10-5 M albo mniejszą, korzystniej równą 1x10-6 M albo mniejszą, zaś jeszcze korzystniej równą 5x10-7 M albo mniejszą. Przeciwciało neutralizuje też aktywność TNFa myszy, korzystnie z wartością IC50 równą 1x10-4 M albo mniejszą, korzystniej równą 1x10-5 Malbo mniejszą, zaś jeszcze korzystniej równą 5x10-6 M albo mniejszą.
Przeciwciało albo jego część wiążącą antygen można derywatyzować albo łączyć z inną funkcjonalną cząsteczką (np. innym peptydem lub białkiem). Przeciwciała albo ich części wiążące antygen według wynalazku obejmują derywatyzowane i zmienione w inny sposób postaci ludzkich przeciwciał przeciw hTNFa, w tym cząsteczki immunoadhezyjne. Przykładowo przeciwciało albo jego część wiążąca antygen według wynalazku może być funkcjonalnie połączone (wiązaniem chemicznym, fuzją genową, połączeniem niekowalencyjnym albo jeszcze inaczej) z jedną lub większą liczbą cząsteczek, takich jak inne przeciwciało (np. przeciwciało bispecyficzne lub przeciwciało o podwójnej swoistości), środek wykrywalny, środek cytotoksyczny, środek farmaceutyczny i/lub białko albo peptyd, który może pośredniczyć w wiązaniu przeciwciała lub części przeciwciała z inną cząsteczką (taką jak region rdzeniowy streptawidyny lub znacznik polihistydynowy).
Jeden z rodzajów derywatyzowanego przeciwciała wytwarza się przez sieciowanie dwóch lub większej liczby przeciwciał (tego samego rodzaju albo różnych rodzajów, np. w celu wytworzenia bispecyficznych przeciwciał). Odpowiednie środki sieciujące obejmują łączniki heterobifunkcjonalne, mające dwie wyraźnie reaktywne grupy oddzielone odpowiednim przerywnikiem (np. ester
PL 193 499 B1 m-maleimidobenzoilo-N-hydroksysukcynimidowy) albo homobifunkcjonalne (np. suberynian disukcynimidylu). Łączniki takie dostępne są z Pierce Chemical Company, Rockford, IL.
Przydatne wykrywalne środki, którymi przeciwciała albo ich części przeciwciał mogą być derywatyzowane, obejmują związki fluorescencyjne. Przykładowe fluorescencyjne wykrywalne środki obejmują fluoresceinę, izotiocyjanian fluoresceiny, rodaminę, chlorek 5-dimetyloamino-1-naftalenosulfonylu, fikoerytrynę itp. Przeciwciało może być również derywatyzowane wykrywalnymi enzymami, takimi jak fosfataza alkaliczna, peroksydaza chrzanowa, oksydaza glukozy itp. Gdy przeciwciało jest derywatyzowane wykrywalnym enzymem, wykrywa się je przez dodanie dodatkowych reagentów, które enzym wykorzystuje do wytworzenia wykrywalnego produktu reakcji. Przykładowo, gdy występuje wykrywalny środek, peroksydaza chrzanowa, dodanie nadtlenku wodoru i diaminobenzydyny prowadzi do powstania barwnego produktu reakcji, który jest wykrywalny. Przeciwciało może być również derywatyzowane biotyną i wykrywane przez pośredni pomiar wiązania awidyny lub streptawidyny.
II. Ekspresja przeciwciał
Przeciwciało albo jego część według wynalazku można wytworzyć przez rekombinacyjną ekspresję genów łańcuchów lekkich i ciężkich immunoglobuliny w komórce gospodarza. W celu rekombinacyjnego eksprymowania przeciwciała, komórkę gospodarza transfekuje się jednym lub większą liczbą rekombinowanych wektorów ekspresyjnych, niosących fragmenty DNA kodujące łańcuchy lekkie i ciężkie przeciwciała, tak że łańcuchy lekkie i ciężkie ulegają ekspresji w komórce gospodarza i korzystnie wydzielane są do pożywki, w której komórki gospodarza są hodowane, i z której można odzyskiwać przeciwciała. Standardową metodykę rekombinacji DNA można zastosować w celu uzyskania genów łańcucha lekkiego i ciężkiego przeciwciała, wbudowania tych genów do rekombinacyjnych wektorów ekspresyjnych i wprowadzenia wektorów do komórek gospodarza, tak jak to opisano w Sambrook, Fritsch and Maniatis (wyd.) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, wydanie drugie, Cold Spring Harbor, NY, (1989), F.M. Ausubel i in., (wyd.) Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing Associates, (1989) oraz Boss i in., opis patentowy US nr 4816397.
W celu eksprymowania D2E7 lub przeciwciała pokrewnego D2E7, otrzymuje się najpierw fragmenty DNA kodujące zmienne regiony lekkiego i ciężkiego łańcucha. Takie DNA można otrzymać przez amplifikację i modyfikację sekwencji łańcucha ciężkiego i lekkiego linii zarodkowej drogą reakcji łańcuchowej polimerazy (PCR). Sekwencje zarodkowe DNA dla ludzkich genów regionów zmiennych łańcuchów lekkich i ciężkich są znane (patrz np. baza danych sekwencji ludzkiej linii zarodkowej „Vbase; patrz również, E.A. Kabat i in., (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, wydanie piąte, US Department of Health and Human Services, NIH Publication nr 91-3242; I.M. Tomlinson i in., (1992) „The Repertoire of Human Germline VH Sequences Reveals about Fifty Groups of VH Segments with Different Hypervariable Loops, J. Mol. Biol. 227:776-798; J.P.L. Cox i in., (1994) „A Directory of Human Germline VK Segments Reveals a Strong Bias in their Usage Eur. J. Immunol. 24:827-836; których treść załączono tu przez odniesienie). Dla otrzymania fragmentu DNA kodującego region zmienny łańcucha ciężkiego D2E7, albo przeciwciała pokrewnego D2E7, jednego z członków rodziny VH3 ludzkiej linii zarodkowej VH amplifikuje się standardową PCR. Korzystniej, amplifikuje się sekwencję VH linii zarodkowej DP-31. Dla otrzymania fragmentu DNA kodującego region zmienny łańcucha lekkiego D2E7, albo przeciwciała pokrewnego D2E7, jednego z członków rodziny VKI ludzkiej linii zarodkowej genów VL amplifikuje się standardową PCR. Korzystniej, amplifikuje się sekwencję VL linii zarodkowej A20. Startery PCR przydatne do zastosowania w amplifikacji sekwencji linii zarodkowej VH DP-31 i VL A20 można zaprojektować w oparciu o sekwencje nukleotydowe ujawnione w odnośnikach cytowanych wyżej, standardowymi sposobami.
Gdy uzyska się fragmenty VL i VH linii zarodkowej, sekwencje te można zmutować w taki sposób, by kodowały ujawnione tu sekwencje aminokwasowe D2E7 albo pokrewne D2E7. Sekwencje aminokwasowe kodowane przez sekwencje DNA VH i VL linii zarodkowej najpierw porównuje się z sekwencjami aminokwasowymi VH i VL D2E7 albo pokrewnymi z D2E7 w celu identyfikacji reszt aminokwasowych, które różnią sekwencje D2E7 albo pokrewne D2E7 od linii zarodkowej. Następnie mutuje się odpowiednie nukleotydy w sekwencji DNA linii zarodkowej w taki sposób, że zmutowane sekwencje linii zarodkowej kodują sekwencję aminokwasową D2E7 albo pokrewną D2E7, stosując kod genetyczny w celu określenia, jakie należy wykonać zmiany nukleotydowe. Mutagenezę sekwencji zarodkowych przeprowadza się metodami standardowymi, takimi jak mutageneza metodą PCR (w której zmutowane nukleotydy wbudowywane są do starterów PCR w taki sposób, że produkt PCR zawiera mutacje) albo ukierunkowaną mutagenezą.
PL 193 499 B1
Ponadto należy zaznaczyć, że jeżeli sekwencje „zarodkowe otrzymane przez amplifikację PCR kodują aminokwasy odmienne w regionach zrębowych od oryginalnej konfiguracji zarodkowej (tj. różnice w sekwencji amplifikowanej względem rzeczywistej sekwencji zarodkowej, przykładowo, z powodu mutacji somatycznej), może być konieczna zmiana tych różnic aminokwasowych z powrotem do sekwencji zarodkowych (tj. „mutacja wsteczna reszt zrębowych do konfiguracji zarodkowej).
Gdy uzyska się fragmenty DNA kodujące segmenty VH i VL D2E7 albo pokrewne D2E7 (przez amplifikację i mutagenezę genów VL i VH linii zarodkowej, jak to opisano wyżej), fragmentami tymi można dalej manipulować standardowymi technikami rekombinacji DNA, przykładowo, w celu przekształcenia genów regionu zmiennego w geny łańcucha przeciwciała pełnej długości, geny fragmentu Fab lub geny scFv. W tych manipulacjach, fragment DNA kodujący VL i VH jest łączony funkcjonalnie z innym fragmentem DNA kodującym inne białko, takim jak region stały przeciwciała albo giętki łącznik. Stosowane tu określenie „połączone funkcjonalnie oznacza, że dwa fragmenty DNA są połączone w taki sposób, że sekwencje aminokwasowe kodowane przez dwa fragmenty DNA pozostają w ramce odczytu.
Izolowany DNA kodujący region VH można przekształcić w gen łańcucha ciężkiego pełnej długości przez funkcjonalne połączenie DNA kodującego VH z inną cząsteczką DNA kodującą regiony stałe łańcucha ciężkiego. (CH1, CH2 i CH3). Sekwencje genów regionu stałego łańcucha ciężkiego są znane (patrz np. E.A. Kabat i in., (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, wydanie piąte, US Department of Health and Human Services, NIH Publication nr 91-3242), zaś fragmenty DNA obejmujące te regiony można uzyskać przez standardową amplifikację PCR. Region stały łańcucha ciężkiego może być regionem stałym IgGl, IgG2, IgG3, IgG4, IgA, IgE, IgM lub IgD, ale najkorzystniej jest regionem stałym IgGl lub IgG4. Dla genu łańcucha ciężkiego fragmentu Fab, DNA kodujący VH można połączyć funkcjonalnie z inną cząsteczką DNA kodującą tylko region stały CH1 łańcucha ciężkiego.
Izolowany DNA kodujący region VL można przekształcić w gen łańcucha lekkiego pełnej długości (jak również w gen łańcucha ciężkiego Fab) przez funkcjonalne połączenie DNA kodującego VL z inną cząsteczką DNA kodującą region stały CL łańcucha lekkiego. Sekwencje ludzkich genów regionu stałego łańcucha lekkiego są znane (patrz np. E.A. Kabat i in., (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, wydanie piąte, US Department of Health and Human Services, NIH Publication nr 91-3242), zaś fragmenty DNA obejmujące te regiony można uzyskać przez standardową amplifikację PCR. Region stały łańcucha lekkiego może być regionem stałym kappa lub lambda, ale najkorzystniej jest regionem stałym kappa.
W celu wytworzenia genu scFv, fragmenty DNA kodujące VH i VL są łączone funkcjonalnie z innym fragmentem kodującym giętki łącznik, np. kodującym sekwencję aminokwasową (Gly4-Ser)3 wtaki sposób, że sekwencje VH i VL mogą ulegać ekspresji jako ciągłe białko jednołańcuchowe, z regionami VL i VH połączonymi giętkim łącznikiem (patrz np. Bird i in., (1988) Science 242:423-426; oraz Huston i in., (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883; McCafferty i in., Nature (1990) 348:552-554).
W celu eksprymowania przeciwciał lub części przeciwciał według wynalazku DNA kodujące łańcuchy lekkie i ciężkie częściowe lub pełnej długości, uzyskane w opisany wyżej sposób, wprowadza się do wektorów ekspresyjnych w taki sposób, że geny są funkcjonalnie połączone z sekwencjami kontrolującymi transkrypcję i translację. W tym kontekście, określenie „połączone funkcjonalnie oznacza, że gen przeciwciała jest poddany ligacji do wektora w taki sposób, że sekwencje kontrolujące transkrypcję i translację w wektorze służą w wyznaczonej im funkcji regulowania transkrypcji i translacji genu przeciwciała. Wektor ekspresyjny i sekwencje kontrolujące ekspresję są wybrane w taki sposób, że są zgodne z zastosowaną komórką gospodarza, w której zachodzi ekspresja. Gen łańcucha lekkiego przeciwciała i gen łańcucha ciężkiego przeciwciała można wprowadzić do osobnego wektora albo, częściej, oba geny są wprowadzone do tego samego wektora ekspresyjnego. Geny przeciwciał są wprowadzone do wektora ekspresyjnego standardowymi metodami (np. ligacji komplementarnych miejsc restrykcyjnych we fragmencie genu przeciwciała i wektorze, albo poddane ligacji tępymi końcami jeżeli nie występują żadne miejsca restrykcyjne). Przed wprowadzeniem sekwencji łańcucha lekkiego lub ciężkiego D2E7 albo pokrewnego D2E7, wektor ekspresyjny może już nieść sekwencje regionu stałego przeciwciała. Przykładowo, jedno z podejść do przekształcenia sekwencji VH lub VL D2E7 albo pokrewnych D2E7 w geny przeciwciała pełnej długości obejmuje wprowadzenie ich do wektorów ekspresyjnych kodujących już, odpowiednio, regiony stałe łańcucha lekkiego i łańcucha ciężkiego w taki sposób, że segment VH jest połączony funkcjonalnie z segmentem (segmentami) CH w wektorze, zaś segment VL jest połączony funkcjonalnie z segmentem CL w wektorze. Dodatkowo lub alternatywnie, rekombinowany wektor ekspresyjny może kodować peptyd sygnałowy, który ułatwia wydzielanie łańcucha przeciwciała z komórki gospodarza. Gen łańcucha przeciwciała można klonować do
PL 193 499 B1 wektora w taki sposób, że peptyd sygnałowy jest połączony w ramce z końcem aminowym genu łańcucha przeciwciała. Peptyd sygnałowy może być peptydem sygnałowym immunoglobuliny albo peptydem sygnałowym heterologicznym (tj. peptydem sygnałowym z białka nie będącego immunoglobuliną).
Oprócz genów łańcucha przeciwciała rekombinowane wektory ekspresyjne niosą sekwencje regulacyjne, które kontrolują ekspresję genów łańcucha przeciwciała w komórce gospodarza. Określenie „sekwencja regulatorowa obejmuje promotory, wzmacniacze i inne elementy kontrolujące ekspresję (np. sygnały polidenylacji), które kontrolują transkrypcję lub translację genów łańcucha przeciwciała. Takie sekwencje regulatorowe opisane są, przykładowo w Goeddel; Gene Expression Technology: Methods in Enzymology 185, Academic Press, San Diego, CA (1990). Fachowiec zauważy, że projektowanie wektora ekspresyjnego, w tym wybór sekwencji regulatorowych może zależeć od takich czynników jak wybór transformowanej komórki gospodarza, poziom ekspresji pożądanego białka, itp. Korzystne sekwencje regulatorowe dla komórek gospodarza ssaków, w których zachodzi ekspresja, obejmują elementy wirusowe, które kierują wysokimi poziomami ekspresji białka w komórkach ssaczych, takie jak promotory i/lub wzmacniacze pochodzące z wirusa cytomegalii (CMV) (takie jak wzmacniacz/promotor CMV), wirusa małpiego 40 (SV40) (takie jak promotor/wzmacniacz SV40), adenowirusa (np. główny późny promotor adenowirusowy (AdMLP)) oraz polioma. Inne opisy wirusowych elementów regulatorowych i ich sekwencji zamieszczono np. w opisie patentowym US nr 5168062, Stinski; US nr 4510245, Bell i in.; US nr 4968615, Schaffner i in.
Oprócz genów łańcuchów przeciwciał i sekwencji regulatorowych, rekombinowane wektory ekspresyjne mogą nieść dodatkowe sekwencje, takie jak sekwencje regulujące replikację wektora w komórce gospodarza (np. początek replikacji) i geny markerów selekcyjnych. Gen markera selekcyjnego ułatwia selekcję komórek gospodarza, do których wprowadzono wektor (patrz np. opisy patentowe US nr 4399216, 4634665 i 5179017, Axel i in.). Przykładowo, zwykle gen markera selekcyjnego zapewnia oporność na leki, takie jak G418, higromycynę albo metotreksat, komórce gospodarza, do której wprowadzono wektor. Korzystne geny markerów selekcyjnych obejmują gen reduktazy dihydrofolianu (DHFR) (do zastosowania w komórkach dhfr- z selekcją/amplifikacją z użyciem metotreksatu) oraz gen neo (do selekcji z użyciem G418).
W celu ekspresji łańcuchów lekkich i ciężkich, wektorem (wektorami) ekspresyjnym kodującym łańcuchy lekkie i ciężkie transfekuje się komórki gospodarza standardowymi sposobami. Różne postaci określenia „transfekcja obejmują wielką różnorodność technik stosowanych powszechnie do wprowadzania egzogennego DNA do komórek gospodarza prokariotycznego lub eukariotycznego, np. transfekcja przez elektroporację, precypitację fosforanem wapnia, dekstran-DEAE itp. Jakkolwiek możliwe jest teoretycznie eksprymowanie przeciwciał według wynalazku w innych komórkach gospodarza prokariotycznego lub eukariotycznego, ekspresja przeciwciał w komórkach eukariotycznych, zaś korzystnie w ssaczych komórkach gospodarza jest najkorzystniejsza, ponieważ takie komórki eukariotyczne, a szczególnie ssacze, w porównaniu z komórkami prokariotycznymi dają większe prawdopodobieństwo wytworzenia i wydzielenia prawidłowo pofałdowanego i immunologicznie czynnego przeciwciała. Ekspresja prokariotyczna genów przeciwciał opisana została jako nieskuteczna do wytwarzania znacznych ilości aktywnego przeciwciała (M.A. Boss i C.R. Wood (1985) Immunology Today 6:12-13).
Korzystne komórki gospodarza ssaczego do eksprymowania rekombinowanych przeciwciał według wynalazku obejmują komórki jajnika chomika chińskiego (komórki CHO) (w tym komórki CHO dhfr-, opisane przez Urlaub i Chasin, (1980) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216-4220, zastosowane z markerem selekcyjnym DHFR, jak np. opisano w R.J. Kaufman i P.A. Sharp (1982) Mol. Biol. 159:601-621), komórki szpiczaka NSO, komórki COS i SP2. Gdy rekombinowane wektory ekspresyjne kodujące geny przeciwciała wprowadzi się do ssaczych komórek gospodarza, przeciwciała są wytwarzane przez hodowanie komórek gospodarza przez okres wystarczający do ekspresji przeciwciała przez komórki gospodarza albo jeszcze korzystniej, wydzielenie przeciwciał do pożywki hodowlanej, w której hodowana jest komórka gospodarza. Przeciwciała można odzyskiwać z pożywki hodowlanej stosując standardowe metody oczyszczania białek.
Komórki gospodarza można zastosować do wytworzenia części całych przeciwciał, takich jak fragmenty Fab lub cząsteczki scFv. Będzie zrozumiałe, że odmiany powyższej procedury wchodzą w zakres wynalazku. Przykładowo, może być pożądane transfekowanie komórki gospodarza DNA kodującym łańcuch lekki lub łańcuch ciężki (albo nie oba) przeciwciała według wynalazku. Technologię rekombinacji DNA można również zastosować w celu usunięcia części albo całości DNA kodującego jeden albo oba łańcuchy, lekki i ciężki, niepotrzebnych do wiązania hTNFa. Cząsteczki eksprymowane z takich okrojonych cząsteczek DNA należą do przeciwciał według wynalazku. Ponadto
PL 193 499 B1 można wytworzyć przeciwciała o podwójnej swoistości, w których jeden łańcuch ciężki i jeden łańcuch lekki są przeciwciałem według wynalazku, zaś drugi łańcuch ciężki i drugi łańcuch lekki są swoiste dla antygenu innego niż hTNFa, przez sieciowanie przeciwciała według wynalazku z drugim przeciwciałem, standardowymi metodami sieciowania chemicznego.
W korzystnym układzie rekombinacyjnej ekspresji przeciwciała albo jego części wiążącej antygen według wynalazku, rekombinowany wektor ekspresyjny kodujący oba łańcuchy przeciwciała, lekki i ciężki, wprowadzany jest do komórek CHO dhfr-metodą transfekcji przy udziale fosforanu wapnia. Wrekombinowanym wektorze ekspresyjnym geny łańcuchów lekkiego i ciężkiego przeciwciała połączone są funkcjonalnie każdy z elementami regulatorowymi wzmacniacz/promotor (np. pochodzącymi z SV40, CMV, adenowirusa itp. jak element regulatorowy wzmacniacz CMV/promotor AdMLP albo element regulatorowy wzmacniacz SV40/promotor AdMLP), aby spowodować wymuszenie wysokich poziomów transkrypcji genów. Rekombinowany wektor ekspresyjny niesie również gen DHFR, który umożliwia selekcję komórek CHO, które zostały transfekowane wektorem, drogą selekcji/amplifikacji zużyciem metotreksatu. Wyselekcjonowane transformanty komórek gospodarza hoduje się w celu umożliwienia im ekspresji łańcuchów lekkich i ciężkich przeciwciała i całe przeciwciało odzyskuje się z pożywki hodowlanej. Standardowe techniki biologii molekularnej stosuje się w celu wytworzenia rekombinowanych wektorów ekspresyjnych, transfekowania komórek gospodarza, selekcjonowania transformantów, hodowania komórek gospodarza i odzyskiwania przeciwciała z pożywki hodowlanej.
W świetle powyższego kompozycje kwasu nukleinowego, wektora i komórki gospodarza można zastosować do rekombinacyjnej ekspresji przeciwciał i części przeciwciał według wynalazku. Sekwencja nukleotydowa kodująca region zmienny łańcucha lekkiego D2E7 pokazana jest na fig. 7 iSEQ ID NO:36. Domena CDR1 LCVR obejmuje nukleotydy 70-102, domena CDR2 obejmuje nukleotydy 148168, zaś domena CDR3 obejmuje nukleotydy 265-291. Sekwencja nukleotydowa kodująca region zmienny łańcucha ciężkiego D2E7 pokazana jest na fig. 8 i SEQ ID NO: 37. Domena CDR1 HCVR obejmuje nukleotydy 91-105, domena CDR2 obejmuje nukleotydy 148-198, zaś domena CDR3 obejmuje nukleotydy 295-330. Fachowiec zauważy, że sekwencje nukleotydowe kodujące przeciwciała pokrewne zD2E7 albo ich części (np. domenę CDR, taką jak domena CDR3), można otrzymać z sekwencji nukleotydowych kodujących LCVR i HCVR D2E7 przy użyciu kodu genetycznego i standardowych technik biologii molekularnej.
Wynalazek dostarcza również izolowany kwas nukleinowy kodujący domenę CDR3 łańcucha lekkiego obejmującą sekwencję aminokwasową SEQ ID NO: 3 (tj. CDR3 VL D2E7) albo zmodyfikowaną na podstawie SEQ ID NO:3 przez pojedyncze zastąpienie alaniną w pozycjach 1, 4, 5, 7 lub 8 albo przez jedno do pięciu konserwatywnych zastąpień aminokwasów w pozycjach 1, 3, 4, 6, 7, 8 i/lub 9. Ten kwas nukleinowy może kodować wyłącznie region CDR3 albo korzystniej, koduje cały region zmienny łańcucha lekkiego przeciwciała (LCVR). Przykładowo, kwas nukleinowy może kodować LCVR o domenie CDR2 obejmującej sekwencję aminokwasową SEQ ID NO: 5 (tj. CDR2 VL D2E7) idomenę CDR1obejmującą sekwencję aminokwasową SEQ ID NO:7 (tj. CDR1VL D2E7).
Wynalazek dostarcza ponadto izolowany kwas nukleinowy kodujący domenę CDR3 łańcucha ciężkiegoobejmującą sekwencję aminokwasową SEQ ID NO:4 (tj. CDR3 VH D2E7), albo zmodyfikowaną na podstawie SEQ ID NO:4 przez pojedyncze zastąpienie alaniną w pozycji 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10 lub 11 albo przez jedno do pięciu konserwatywnych zastąpień aminokwasów w pozycjach 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10, 11 i/lub 12. Ten kwas nukleinowy może kodować wyłącznie region CDR3 albo korzystniej, cały region zmienny łańcucha ciężkiego przeciwciała (HCVR). Przykładowo, kwas nukleinowy może kodować HCVR o domenie CDR2 obejmującej sekwencję aminokwasową SEQ ID NO: 6 (tj. CDR2 VH D2E7) i domenę CDR1 obejmującą sekwencję aminokwasową SEQ ID NO:8(tj. CDR1VH D2E7).
Wynalazek dostarcza kwasy nukleinowe kodujące domenę CDR3 pokrewną z D2E7, np. obejmującą sekwencję aminokwasową wybraną z grupy obejmującej SEQ ID NO:3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO:11, SEQ ID NO:12, SEQ ID NO:13, SEQ ID NO:14, SEQ ID NO:15, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO:22, SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 31, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 33, SEQ ID NO:34 i SEQ ID NO:35.
Do kodowania łańcuchów ciężkiego, jak i lekkiego przeciwciała można stosować również rekombinowane wektory ekspresyjne.
Przykładowo, rekombinowany wektor ekspresyjny koduje:
PL 193 499 B1
a) łańcuch lekki przeciwciała o regionie zmiennym obejmującym sekwencję aminokwasową SEQ ID NO:1 (tj. LCVR D2E7); i
b) łańcuch ciężki przeciwciała o regionie zmiennym obejmującym sekwencję aminokwasową SEQ ID NO:2 (tj. HCVR D2E7).
Stosuje się także komórki gospodarza, do których wprowadzono jeden albo wiele rekombinowanych wektorów ekspresyjnych. Korzystnie, komórka gospodarza jest ssaczą komórką gospodarza, jeszcze korzystniej komórka gospodarza jest komórką CHO, komórką NSO albo komórką COS.
Sposób syntetyzowania rekombinowanego ludzkiego przeciwciała według wynalazku polega na hodowaniu komórek gospodarza w odpowiedniej pożywce, dopóki nie zostanie zsyntetyzowane rekombinowane ludzkie przeciwciało według wynalazku. Sposób ten może ponadto obejmować izolowanie rekombinowanego ludzkiego przeciwciała z pożywki hodowlanej.
III. Selekcja rekombinowanych ludzkich przeciwciał
Rekombinowane ludzkie przeciwciała według wynalazku oprócz ujawnionych tu przeciwciał D2E7 i pokrewnych z D2E7 mogą być izolowane przez przesiewanie rekombinacyjnych bibliotek kombinatoryjnych przeciwciał, korzystnie fagowych bibliotek ekspresyjnych scFv, wytworzonych przy użyciu ludzkich cDNA VL i VH, wytworzonych z mRNA pochodzących z ludzkich limfocytów. Metodyki wytwarzania i przesiewania takich bibliotek są znane. Oprócz zestawów dostępnych w handlu do wytwarzania fagowych bibliotek ekspresyjnych (np. Recombinant Phage Antibody System, Pharmacia, nr kat. 27-9400-01; i zestaw prezentacji fagowej SurfZAP™ - Stratagene, nr kat. 240612) przykłady sposobów i reagentów szczególnie przydatnych do zastosowania w wytwarzaniu i przesiewaniu bibliotek ekspresyjnych przeciwciał można znaleźć, przykładowo, w Ladner i in., opis patentowy US nr 5223409; Kang i in., publikacja PCT WO 92/18619; Dower i in., publikacja PCT WO 91/17271; Winter i in., publikacja PCT WO 92/20791; Markland i in., publikacja PCT WO 92/15679; Breitling i in., publikacja PCT WO 93/01288; McCafferty i in. publikacja PCT WO 92/01047; Garrard i in., publikacja PCT WO 92/09690; Fuchs i in., (1991) Bio/Technology 9:1370-1372; Hay i in., (1992) Hum. Antibod. Hybridomas 3:81-85; Huse i in., (1989) Science 246:1275-1281; McCafferty i in., (1990) 348:552-554; Griffiths i in., (1993) EMBO J. 12:725-735; Hawkins i in., (1992) J. Mol. Biol. 226:889-896; Clackson i in., (1991) Nature 352:624-628; Gram i in., (1992) PNAS 89:3576-3580; Garrard i in., (1991) Bio/Technology 9:1373-1377; Hoogenboom i in., (1991) Nuc. Acids Res. 19:4133-4137 oraz Barbas i in., (1991) PNAS 88:7978-7982.
Najkorzystniejszej w celu izolowania ludzkich przeciwciał o wysokim powinowactwie i niskiej stałej szybkości odłączania od hTNFa mysie przeciwciało przeciw hTNFa wykazujące wysokie powinowactwo i niską stałą szybkości odłączania od TNFa (np. MAK 195, hybrydoma o numerze dostępu depozytu ECACC 87 050801) zastosowano najpierw do selekcjonowania ludzkich sekwencji łańcuchów lekkich i ciężkich mających podobną aktywność wiązania z hTNFa, stosując metodę „odcisku epitopu, albo kierowaną selekcję, w sposób opisany w Hoogenboom i in., publikacja PCT WO 93/06213. Biblioteki przeciwciał zastosowane w tym sposobie są korzystnie bibliotekami scFv wytworzonymi i przesiewanymi jak to opisano w McCafferty i in., publikacja PCT WO 92/01047; McCafferty i in., (1990) Nature 348:552-554; oraz Griffiths i in., (1993) EMBO J. 12:725-734. Biblioteki przeciwciał scFv korzystnie przesiewa się stosując jako antygen rekombinowany ludzki TNFa.
Gdy wybierze się wstępnie ludzkie segmenty VL i VH, wykonuje się doświadczenia „mieszania i dopasowania, w których różne pary początkowo wybranych segmentów VL i VH przesiewa się pod względem wiązania hTNFa, w celu wyselekcjonowania korzystnych kombinacji par VL/VH. Oprócz tego, w celu dalszej poprawy powinowactwa i/lub niskiej stałej szybkości odłączania podczas wiązania hTNFa, segmenty VL i VH korzystnej pary VL/VH można losowo mutować, korzystnie w regionie CDR3 VH i/lub VL, w procesie analogicznym do procesu mutacji somatycznej in vivo odpowiedzialnej za dojrzewanie powinowactwa przeciwciał podczas naturalnej reakcji odpornościowej. To dojrzewanie powinowactwa in vitro można osiągnąć przez amplifikację regionów VH i VL stosując startery PCR komplementarne odpowiednio do CDR3 VH albo CDR3 VL, które „wyostrzono losową mieszaniną czterech zasad nukleotydowych w pewnych pozycjach, w taki sposób, że powstałe produkty PCR kodują segmenty VH i VL, w których wprowadzono losowe mutacje do regionów CDR3 VH i/lub VL. Te losowo zmutowane segmenty VH i VL można ponownie przesiewać pod kątem wiązania z hTNFa i można selekcjonować sekwencje, które wykazują wysokie powinowactwo wiązania i niską stałą szybkości odłączania hTNFa.
Sekwencje aminokwasowe wyselekcjonowanych łańcuchów lekkich i ciężkich przeciwciała można porównać z zarodkowymi sekwencjami aminokwasowymi łańcuchów lekkich i ciężkich.
PL 193 499 B1
W przypadkach, gdy konkretne reszty zrębowe wyselekcjonowanych łańcuchów VL i/lub VH różnią się od konfiguracji zarodkowej (np. w wyniku mutacji somatycznej genów immunoglobuliny zastosowanych do wytworzenia biblioteki fagowej) może być pożądane „mutowanie wsteczne zmienionych reszt zrębowych wyselekcjonowanych przeciwciał do konfiguracji zarodkowej (tj. zmiana sekwencji aminokwasowej regionu zrębowego wyselekcjonowanego przeciwciała w taki sposób, że są takie same jak sekwencje aminokwasowe zarodkowego regionu zrębowego). Takie „mutowanie wsteczne (albo „upodabnianie do linii zarodkowej) reszt zrębowych można osiągnąć standardowymi metodami biologii molekularnej wprowadzania konkretnych mutacji (np. ukierunkowanej mutagenezy; mutagenezy z użyciem PCR itp.).
Po przesiewaniu i izolacji przeciwciał przeciw hTNFa według wynalazku z biblioteki ekspresyjnej rekombinowanych immunoglobulin, kwas nukleinowy kodujący wyselekcjonowane przeciwciało można odzyskać z pakietu ekspresyjnego (np. z genomu faga) i klonować do innych wektorów ekspresyjnych standardowymi technikami rekombinacji DNA. Jeżeli jest to konieczne, kwasem nukleinowym można dalej manipulować w celu stworzenia innych postaci przeciwciał według wynalazku (np. przyłączać kwas nukleinowy kodujący dodatkowe domeny immunoglobuliny, takie jak dodatkowe regiony stałe). W celu eksprymowania rekombinowanych ludzkich przeciwciał wyizolowanych przez przesiewanie biblioteki kombinatoryjnej, DNA kodujący przeciwciało klonuje się do rekombinowanego wektora ekspresyjnego i wprowadza do ssaczej komórki gospodarza, jak opisano szczegółowo w rozdziale II powyżej.
IV. Kompozycje farmaceutyczne i podawanie
Przeciwciała i części przeciwciał według wynalazku można wprowadzać do kompozycji farmaceutycznych przydatnych do podawania pacjentom. Zwykle kompozycja farmaceutyczna obejmuje przeciwciało lub część przeciwciała według wynalazku i farmaceutycznie dopuszczalny nośnik. W znaczeniu tu użytym „farmaceutycznie dopuszczalny nośnik obejmuje dowolne rozpuszczalniki, ośrodki dyspersyjne, powłoki, środki przeciwbakteryjne i przeciwgrzybicze, środki izotoniczne i opóźniające wchłanianie itp., które są dopuszczalne fizjologicznie. Przykłady farmaceutycznie dopuszczalnych nośników obejmują jeden lub większą liczbę spośród następujących: wodę, roztwór soli, roztwór soli buforowany fosforanem, dekstrozę, glicerynę, etanol itp., jak również ich kombinacje. W wielu przypadkach korzystne jest wprowadzenie do kompozycji środków izotonicznych, przykładowo cukrów, polialkoholi, takich jak mannitol, sorbitol albo chlorku sodu. Farmaceutycznie dopuszczalne nośniki mogą ponadto zawierać mniejsze ilości substancji dodatkowych, takich jak środki zwilżające lub emulgujące, konserwanty lub bufory, które zwiększają okres przechowywania albo skuteczność przeciwciała lub części przeciwciała.
Kompozycje według wynalazku mogą występować w wielu postaciach. Są to np. płynne, półstałe i stałe postacie dawkowane, takie jak roztwory (np. roztwory do wstrzykiwań lub wlewów), dyspersje lub suspensje, tabletki, pigułki, proszki, liposomy lub czopki. Korzystna postać zależy od zamierzonego sposobu podania i zastosowania leczniczego. Typowe korzystne kompozycje występują w postaci roztworów do wstrzykiwań lub wlewów, takie jak kompozycje podobne do stosowanych w immunizacji biernej ludzi innymi przeciwciałami. Korzystnym sposobem podawania jest podawanie pozajelitowe (np. dożylne, podskórne, dootrzewnowe, domięśniowe). Korzystnie przeciwciało podaje się przez wlew lub wstrzyknięcie dożylne. Innym korzystnym sposobem jest podawanie przeciwciała przez wstrzyknięcie domięśniowe lub podskórne.
Kompozycje terapeutyczne zwykle muszą być sterylne i trwałe w warunkach wytwarzania i przechowywania. Kompozycje można wytwarzać jako roztwory, mikroemulsje, dyspersje, liposomy lub inne uporządkowane struktury przydatne do osiągania wysokiego stężenia leku. Sterylne roztwory do wstrzykiwań można wytworzyć przez wprowadzenie substancji czynnej (tj. przeciwciała lub części przeciwciała) w pożądanej ilości do odpowiedniego rozpuszczalnika z jednym składnikiem lub połączeniem składników wymienionych powyżej, jeżeli to konieczne, a następnie sterylizowanie przez filtrowanie. Ogólnie dyspersje wytwarza się przez wprowadzenie substancji czynnej do sterylnego nośnika, który zawiera podstawowy ośrodek dyspersyjny i wymagane inne składniki, takie jak wymienione powyżej. W przypadku sterylnych proszków do wytwarzania sterylnych roztworów do wstrzykiwań, korzystnym sposobem wytwarzania jest suszenie pod próżnią i suszenie przez zamrożenie, które pozwala uzyskać proszek substancji czynnej z dodatkowym pożądanym składnikiem z uprzednio przefiltrowanego sterylnie roztworu. Właściwą płynność roztworu można zachować np. przez użycie powłoki, np. z lecytyny, przez zachowanie pożądanej wielkości cząstek w przypadku dyspersji i zastoso24
PL 193 499 B1 wanie surfaktantów. Przedłużone wchłanianie kompozycji do wstrzykiwań można wywołać przez wprowadzenie do kompozycji środka opóźniającego wchłanianie, np. soli monostearynianu i żelatyny.
Przeciwciała i części przeciwciał według wynalazku można podawać różnymi znanymi sposobami, jakkolwiek do wielu zastosowań terapeutycznych korzystną drogą/metodą podawania jest wstrzyknięcie lub wlew dożylny. Będzie zrozumiałe dla fachowca, że droga i/lub sposób podawania będzie różny w zależności od pożądanych wyników. Substancję czynną można połączyć z nośnikiem, który zapobiegnie gwałtownemu uwalnianiu się związku, tak jak w postaci do kontrolowanego uwalniania, w tym wszczepach, plastrach przezskórnych i mikrokapsułkowanych układach dostarczających. Można zastosować ulegające biodegradacji biologicznie zgodne polimery, takie jak kopolimer etylenu i octanu winylu, polibezwodniki, poli(kwas glikolowy), kolagen, poliortoestry i poli(kwas mlekowy). Opatentowano oraz znanych jest wiele sposobów wytwarzania takich preparatów. Patrz np. Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems, J.R. Robinson (wyd.), Marcel Dekker, Inc., Nowy York, 1978.
Przeciwciała lub część przeciwciał można podawać doustnie, np. z obojętnym rozcieńczalnikiem lub przyswajalnym jadalnym nośnikiem. Związek (oraz inne składniki, jeżeli to pożądane) można również zamknąć w twardej lub miękkiej kapsułce żelatynowej, prasować w tabletki albo włączyć bezpośrednio do diety osobnika. Do podawania doustnego, związki można wprowadzać do zarobki i zastosować w postaci jadalnych tabletek, tabletek podpoliczkowych, kołaczyków, kapsułek, eliksirów, zawiesin, syropów, opłatków itp. Dla podawania substancji czynnej według wynalazku innymi sposobami niż podawanie pozajelitowe, może być konieczne jej pokrycie substancją zapobiegającą inaktywacji albo jej podawanie równocześnie z substancją zapobiegającą inaktywacji.
Do kompozycji można wprowadzać dodatkowe składniki terapeutyczne. Przeciwciała lub części przeciwciał według wynalazku są współformułowane i/lub podawane wspólnie z dodatkowymi środkami, które są przydatne do leczenia zaburzeń, w których szkodliwa jest aktywność hTNFa. Przykładowo przeciwciało przeciw hTNFa lub część przeciwciała według wynalazku można współformułować i/lub podawać równocześnie z jednym lub większą liczbą dodatkowych przeciwciał, które wiążą inne cele (np. przeciwciał, które wiążą inne cytokiny albo wiążą cząsteczki powierzchniowe komórek), jedną lub większą liczbą cytokin, rozpuszczalnymi receptorami TNFa (patrz np. publikacja PCT WO 94/D6476) i/lub jednym lub większą liczbą środków chemicznych, które hamują wytwarzanie albo aktywność hTNFa (takimi jak pochodne cykloheksanylidenu opisane w publikacji PCT WO 93/19751). Ponadto, jedno lub większą liczbę przeciwciał według wynalazku można zastosować w kombinacji z dwoma lub większą liczbą powyższych środków terapeutycznych. W takich terapiach skojarzonych można korzystnie stosować mniejsze dawki podawanych środków terapeutycznych, umożliwiając uniknięcie możliwych toksyczności lub powikłań związanych z różnymi monoterapiami.
Nieograniczające przykłady środków do leczenia reumatoidalnego zapalenia stawów, z którymi mogą być łączone przeciwciała lub części przeciwciał według wynalazku, obejmują: niesteroidowe środki przeciwzapalne (NSAID); środki przeciwzapalne hamujące cytokiny (CSAID); CDP-571/BAY10-3356 (humanizowane przeciwciało przeciw hTNFa; Celltech/Bayer); cA2 (chimeryczne przeciwciało przeciw hTNFa; Centocor); 75 kdTNFR-IgG (białko fuzyjne receptora TNF 75 kDa i IgG; Immunex; patrz, Arthritis & Rheumatism (1994) 37:S295; J. Invest. Med. (1996) 44;235A); 55 kdTNFR-IgG (białko fuzyjne receptora TNF 55 kDa i IgG; Hoffmann-La Roche); IDEC-CE9.1/SB 210396 (niezużywalne prymatyzowane przeciwciało przeciw CD4; IDEC/SmithKline; patrz np. Arthritis & Rheumatism (1995) 38:S185); DAB 486-IL-2 i/lub DAB 389-IL-2 (białko fuzyjne IL-2; Seragen; patrz np. Arthritis & Rheumatism (1993) 36:1223); Anti-Tac (humanizowane przeciwciało przeciw IL-2Ra; Protein Design Labs/Roche); IL-4 (cytokina przeciwzapalna; DNAX/Schering); IL-10 (SCH 52000; rekombinowana IL10, cytokina przeciwzapalna; DNAX/Schering); IL-4; agonistów IL-10 i/lub IL-4 (np. przeciwciała agonistyczne); IL-1RA (antagonista receptora IL-1; Synergen/Amgen); TNF-bp/s-TNFR (rozpuszczalne białko wiążące TNF; patrz np. Arthritis & Rheumatism (1996) 39:9 (suplement), S284; Amer. J. Physiol. - Heart and Circulatory Physiology (1995) 268:37-42); R973401 (inhibitor fosfodiesterazy typu IV; patrz np. Arthritis & Rheumatism (1996) 39:9 (suplement) S282); MK-966 (inhibitor COX-2; patrz np. Arthritis & Rheumatism (1996) 39:9 (suplement), S81); Iloprost (patrz np. Arthritis & Rheumatism (1996) 39:9 (suplement), S82); metotreksat; talidomid (patrz np. Arthritis & Rheumatism (1996) 39:9 (suplement), S282) i leki pokrewne do talidomidu (np. Celgen); leflunomid (przeciwzapalny i inhibitor cytokin; patrz np. Arthritis & Rheumatism (1996) 39:9 (suplement), S131; Inflammation Research (1996) 45:103-107); kwas traneksamowy (inhibitor aktywacji plazminogenu; patrz np. Arthritis & Rheumatism (1996) 39:9 (suplement), S284); T-614 (inhibitor cytokin; patrz np. Arthritis & RheumatiPL 193 499 B1 sm(1996) 39:9 (suplement), S282); prostaglandyna E1(patrz np. Arthritis & Rheumatism (1996) 39:9 (suplement), S282); Tenidap (niesteroidowy lek przeciwzapalny; patrz np. Arthritis & Rheumatism (1996) 39:9 (suplement), S280); naproksen (niesteroidowy lek przeciwzapalny; patrz np. Neuro Report (1996) 7:1209-1213); meloksykam (niesteroidowy lek przeciwzapalny); ibuprofen (niesteroidowy lek przeciwzapalny); piroksykam (niesteroidowy lek przeciwzapalny); diklofenak (niesteroidowy lek przeciwzapalny); indometacynę (niesteroidowy lek przeciwzapalny); sulfasalazynę (patrz np. Arthritis & Rheumatism (1996) 39:9 (suplement), S281); azatioprynę (patrz np. Arthritis & Rheumatism (1996) 39:9 (suplement), S281); inhibitor ICE (inhibitor enzymu konwertującego interleukinę-1b); inhibitor zap-70 i/lub lck (inhibitor kinazy tyrozynowej zap-70 albo lck); inhibitor VEGF i/lub inhibitor VEGF-R (inhibitory naczyniowo-śródbłonkowego czynnika wzrostu albo receptora naczyniowo-śródbłonkowego czynnika wzrostu; inhibitory angiogenezy); kortykosteroidowe leki przeciwzapalne (np. SB203580); inhibitory TNF-konwertazy; przeciwciała przeciw IL-12; interleukinę 11 (patrz np. Arthritis & Rheumatism (1996) 39:9 (suplement), S296); interleukinę-13 (patrz np. Arthritis & Rheumatism (1996) 39:9 (suplement), S308); inhibitory interleukiny-17 (patrz np. Arthritis & Rheumatism (1996) 39:9 (suplement), S120); złoto; penicylaminę; chlorochinę; hydroksychlorochinę; chlorambucyl; cyklofosfamid; cyklosporynę; całkowite napromieniowanie narządów limfatycznych; globulinę anty-tymocytarną; przeciwciała przeciw CD4; CD5-toksyny; doustnie podawane peptydy i kolagen; sól disodową lobenzarytu; czynniki regulujące cytokiny (CRA) HP228 i HP466 (Houghten Pharmaceuticals, Inc.); antysensowne fosforotionianowe oligodezoksynukleotydy ICAM-1 (ISIS 2302; Isis Pharmaceuticals, Inc.); rozpuszczalny dopełniacz receptora 1 (TP10; T CellSciences, Inc.); prednizon; orgoteinę; polisiarczan glikozaminoglikanu; minocyklinę; przeciwciała przeciw IL-2R; lipidy morskie i roślinne (kwasy tłuszczowe z ryb i nasion roślin; patrz np. DeLuca i in. (1995) Rheum. Dis. Clin. North Am. 21:759777); auranofinę; fenylobutazon; kwas meklofenamowy; kwas flufenamowy; dożylne globuliny odpornościowe; zileuton; kwas mykofenolowy (RS-61443); takrolimus (FK-506); sirolimus (rapamycyna); amiprilos (terafektyna); kladribinę (2-chlorodezoksyadenozyna) i azarybinę.
Nieograniczające przykłady środków leczących chorobę zapalną jelita grubego, z którymi mogą być łączone przeciwciała lub części przeciwciał według wynalazku, obejmują: budenozyd; czynnik wzrostu naskórka; kortykosteroidy; cyklosporynę; sulfasalazynę; aminosalicylany; 6-merkaptopurynę; azatioprynę; metronidazol; inhibitory lipooksygenazy; mesalaminę; olsalazynę; balsalazyd; przeciwutleniacze; inhibitory tromboksanu; antagonistów receptora IL-1; przeciwciała monoklonalne przeciwko IL-1 b; przeciwciała monoklonalne przeciwko IL-6; czynniki wzrostu; inhibitory elastazy; związki pirydynyloimidazolu; CDP-571/BAY-10-3356 (humanizowane przeciwciało przeciw TNFa; CeIl-tech/Bayer); cA2 (chimeryczne przeciwciało przeciw TNFa; Centocor); 75 kdTNFR-IgG (białko fuzyjne receptora TNF 75 kDa i IgG; Immunex; patrz np. Arthritis & Rheumatism (1994) 37:S295; J. Invest. Med. (1996) 44:235A); 55 kdTNFR-IgG (białko fuzyjne receptora TNF 55 kDa i IgG; Hoffmann-La Roche); interleukinę-10(SCH 52000; Schering/Plough); IL-4; agonistów IL-10 i/lub IL-4 (np. przeciwciała agonistyczne); interleukinę-11; prednizolonowe proleki skoniugowane z glukuronidem, deksametazonu lub budezonidu, albo prednizolonowe proleki skoniugowane z dekstranem, antysensowne oligodezoksynukleotydy fosforotionianowe ICAM-1 (ISIS 2302; Isis Pharmaceuticals, Inc.); rozpuszczalny dopełniacz receptora 1 (TP10; T Cell Sciences, Inc.); powolnie uwalnianą mesalazynę; metotreksat; antagonistów czynnika aktywującego płytki (PAF); ciprofloksacynę i lignokainę.
Nieograniczające przykłady środków terapeutycznych do leczenia stwardnienia rozsianego, z którymi można łączyć przeciwciała lub części przeciwciał według wynalazku, obejmują: kortykosteroidy; prednizolon; metyloprednizolon; azatioprynę; cyklofosfamid; cyklosporynę; metotreksat; 4-aminopirydynę; tizanidynę; interferon-b1a (Avonex™, Biogen), interferon-b1b (Betaseron™, Chiron/Berlex), kopolimer 1 (Cop-1, Copaxone™, Teva Pharmaceutical Industries, Inc.); tlen hiperbaryczny, dożylną immunoglobulinę, klabrybinę; CDP-571/BAY-10-3356 (humanizowane przeciwciało przeciw TNFa; Celltech/Bayer); cA2 (chimeryczne przeciwciało przeciw TNFa; Centocor); 75 kdTNFR-IgG (białko fuzyjne receptora TNF 75 kDa i IgG; Immunex; patrz, Arthritis & Rheumatism (1994) 37:S295; J.Invest. Med. (1996) 44;235A); 55 kdTNFR-IgG (białko fuzyjne receptora TNF 55 kDa iIgG; HoffmannLa Roche); IL-10, IL-4; oraz agonistów IL-10 i/lub IL-4 (np. przeciwciała agonistyczne).
Nieograniczające przykłady środków terapeutycznych do leczenia posocznicy, z którymi mogą być łączone przeciwciała lub części przeciwciał według wynalazku, obejmują: hipertoniczne roztwory soli; antybiotyki, dożylną gammaglobulinę, ciągłą hemofiltrację, karbapenemy (np. meropenem), antagonistów cytokin, takich jak TNFa, IL-1b, IL-6 i/lub IL-8; CDP-571 /BAY-1 0-3356 (humanizowane przeciwciało przeciw TNFa; Celltech/Bayer); cA2 (chimeryczne przeciwciało przeciw TNFa Centocor);
PL 193 499 B1 kdTNFR-IgG (białko fuzyjne receptora TNF 75 kDa i IgG; Immunex; patrz np. Arthritis & Rheumatism (1994) 37:S295; J. Invest. Med. (1996) 44;235A); 55 kdTNFR-IgG (białko fuzyjne receptora TNF 55 kDa i IgG; Hoffmann-La Roche), środki regulujące cytokiny (CRA) HP228 i HP466 (Houghten Pharmaceuticals, Inc.), SK&F 107647 (peptyd o małej masie cząsteczkowej; SmithKline Beecham), czterowartościowy guanylohydrazon CNI-1493 (Picower Institute); inhibitor szlaku czynnika tkankowego (TFPI, Chiron), PHP (hemoglobina modyfikowana chemicznie, APEX Bioscience); czynniki chelatujące żelaza i chelaty, w tym kompleks kwas dietylenotriaminopentaoctowy-żelazo (III) (DTPA-żelazo(III); Molichem Medicines); lizofilina (syntetyczna metyloksantyna drobnocząsteczkowa; Cell Therapeutics, Inc.), PGG-glukan (rozpuszczalny w wodzie (b1,3-glukan, Alpha-Beta Technology), apolipoproteina A1 rekonstytuowana lipidami, chiralne kwasy hydroksamowe (syntetyczne środki przeciwbakteryjne hamujące biosyntezę lipidu A); przeciwciała przeciw endotoksynie; E5531 (syntetyczny antagonista lipidu A, Eisai America, Inc.), rBPI21 (rekombinowany fragment N-terminalny ludzkiego białka bakteriobójczego/zwiększającego przepuszczalność) i syntetyczne peptydy przeciwko endotoksynom (SAEP, BiosYnth Research Laboratories).
Nieograniczające przykłady środków terapeutycznych do leczenia zespołu niewydolności oddechowej dorosłych (ARDS), z którymi mogą być łączone przeciwciała lub części przeciwciał według wynalazku, obejmują: przeciwciała przeciw IL-8, surfaktanty terapii zastępczej, CDP-571/BAY-10-3356 (humanizowane przeciwciało przeciw TNFa; Celltech/Bayer); cA2 (chimeryczne przeciwciało przeciw TNFa; Centocor); 75 kdTNFR-IgG (białko fuzyjne receptora TNF 75 kDa i IgG; Immunex; patrz np. Arthritis & Rheumatism (1994) 37:S295; J. Invest. Med. (1996) 44;235A); 55 kdTNFR-IgG (białko fuzyjne receptora TNF 55 kDa i IgG; Hoffmann-La Roche).
Zastosowanie przeciwciał lub części przeciwciał według wynalazku w kombinacji z innymi środkami terapeutycznymi przedyskutowano szerzej w podrozdziale IV.
Kompozycja farmaceutyczna według wynalazku może zawierać „terapeutycznie skuteczną ilość lub „profilaktycznie skuteczną ilość przeciwciała lub części przeciwciała według wynalazku. Określenie „terapeutycznie skuteczna ilość dotyczy ilości skutecznej, podawanej w niezbędnych dawkach i przez odpowiedni czas, do uzyskania pożądanego efektu terapeutycznego. Terapeutycznie skuteczna ilość przeciwciała lub części przeciwciała może się różnić w zależności od takich czynników jak stan choroby, wiek, płeć i masa ciała osobnika, oraz zdolności przeciwciała lub części przeciwciała do wywołania pożądanej reakcji u osobnika. Terapeutycznie skuteczna ilość jest również taką ilością, przy której efekty toksyczne albo szkodliwe nie przeważają nad efektami korzystnymi terapeutycznie. Określenie „profilaktycznie skuteczna ilość dotyczy ilości skutecznej, w niezbędnych dawkach i przez odpowiedni czas, do uzyskania pożądanego efektu profilaktycznego. Zwykle, ponieważ dawka profilaktyczna jest stosowana u osobnika przed albo na wczesnym etapie choroby, profilaktycznie skuteczna ilość będzie mniejsza niż terapeutycznie skuteczna ilość.
Schematy dawkowania można dostosować w celu zapewnienia optymalnej pożądanej reakcji (np. reakcji terapeutycznej albo profilaktycznej). Przykładowo, można podawać pojedynczy bolus, kilka dawek podzielonych w czasie albo dawkę można proporcjonalnie zmniejszać albo zwiększać według wskazań konieczności sytuacji terapeutycznej. Jest szczególnie korzystne wytworzenie kompozycji pozajelitowej w postaci jednostki dawkowanej w celu ułatwienia podawania i jednolitości dawkowania. Postać jednostki dawkowanej w znaczeniu tu użytym dotyczy fizycznie odrębnych jednostek przydatnych jako pojedyncze dawki dla leczonych osobników, będących ssakami, każda jednostka zawiera uprzednio określoną ilość składnika czynnego obliczoną w celu wywołania pożądanego efektu terapeutycznego w połączeniu z wymaganym nośnikiem farmaceutycznym. Wymagania dla postaci jednostek dawkowanych są narzucane przez i bezpośrednio zależne od (a) wyjątkowej charakterystyki składnika czynnego i konkretnego efektu terapeutycznego lub profilaktycznego, który ma być osiągnięty, i (b) ograniczeń właściwych dla dziedziny formułowania, takich jak składnik czynny do leczenia wrażliwości u osobników.
Przykładowy i nieograniczający zakres ilości skutecznej terapeutycznie albo profilaktycznie przeciwciała lub części przeciwciała według wynalazku wynosi 0,1-20 mg/kg, korzystnie 1-10 mg/kg. Należy zaznaczyć, że wartości dawek mogą się różnić w zależności od rodzaju i ciężkości stanu, który ma być złagodzony. Należy również rozumieć, że dla dowolnego konkretnego osobnika konkretny schemat dawkowania powinien być dopasowany w czasie według indywidualnych potrzeb i profesjonalnej oceny osoby podającej albo nadzorującej podawanie kompozycji oraz zakresu dawek podanych tu jako przykładowe i nie mające na celu ograniczania zakresu ani praktyki stosowania zastrzeganej kompozycji.
PL 193 499 B1
IV. Zastosowanie przeciwciał według wynalazku
W oparciu o ich zdolność do wiązania hTNFa, przeciwciała przeciw hTNF a lub ich części według wynalazku można zastosować do wykrywania hTNFa (np. w próbce biologicznej, takiej jak surowica albo osocze), przy użyciu znanych testów immunologicznych, takich jak enzymatyczny test immunosorpcyjny (ELISA), test radioimmunologiczny (RIA) albo immunohistochemia tkankowa. Zgodnie z wynalazkiem dostarcza się sposób wykrywania hTNFa w próbce biologicznej polegający na kontaktowaniu próbki biologicznej z przeciwciałem lub częścią przeciwciała według wynalazku i wykrywaniu przeciwciała (albo części przeciwciała) związanego z hTNFa albo przeciwciała niezwiązanego (albo części przeciwciała), tym samym wykrywanie hTNFa w próbce biologicznej. Przeciwciało jest bezpośrednio albo pośrednio znakowane substancją wykrywalną w celu ułatwienia wykrywania przeciwciała związanego albo niezwiązanego. Odpowiednie wykrywalne substancje obejmują różne enzymy, grupy prostetyczne, substancje fluorescencyjne, luminescencyjne i radioaktywne. Przykłady przydatnych enzymów obejmują peroksydazę chrzanową, fosfatazę alkaliczną, b-galaktozydazę albo acetylocholinesterazę; przykłady przydatnych kompleksów grup prostetycznych obejmują streptawidynę/biotynę i awidynę/biotynę; przykłady przydatnych substancji fluorescencyjnych obejmują umbelliferon, fluoresceinę, izotiocyjanian fluoresceiny, rodaminę, fluoresceinę dichlorotriazynoaminową, chlorek danzylu i fikoerytrynę; przykłady substancji luminescencyjnych obejmują luminol; zaś przykłady przydatnych substancji promieniotwórczych obejmują 125I, 131I, 35S i 3H.
Alternatywnie do znakowania przeciwciał, hTNFa można badać w płynach ustrojowych kompetycyjnym testem immunologicznym, wykorzystującym wzorce rhTNFa znakowane wykrywalną substancją i nieznakowane przeciwciało przeciw rhTNFa. W tym teście łączy się próbkę biologiczną, znakowany wzorzec rhTNFa i przeciwciało przeciw rhTNFa i określa się ilość znakowanego wzorca rhTNFa związanego z nieznakowanym przeciwciałem. Ilość hTNFa w próbce biologicznej jest odwrotnie proporcjonalna do ilości znakowanego wzorca rhTNFa związanego z przeciwciałem przeciw hTNFa.
Przeciwciało D2E7 można również stosować do wykrywania TNFa gatunków innych niż człowiek, w szczególności TNFa naczelnych (np. szympansa, pawiana, marmozety, cynomolgusa i rezusa), świni i myszy, ponieważ D2E7 może wiązać się z każdym z tych TNFa (dyskutowane dalej w przykładzie 4, podrozdział E).
Przeciwciała i części przeciwciał według wynalazku są zdolne do neutralizacji aktywności hTNFa in vitro i in vivo (patrz, przykład 4). Ponadto co najmniej niektóre przeciwciała według wynalazku, takie jak D2E7, mogą neutralizować aktywność TNFa u innych gatunków. Przeciwciała i części przeciwciał według wynalazku można zastosować do hamowania aktywności TNFa, np. w hodowli komórkowej zawierającej hTNFa, u osobników ludzkich albo innych osobników, będących ssakami mających TNFa, z którym przeciwciało według wynalazku reaguje krzyżowo (np. szympansa, pawiana, marmozety, cynomolgusa, rezusa, świni lub myszy). Wynalazek dostarcza także sposób hamowania aktywności TNFa przez kontaktowanie TNFa z przeciwciałem albo częścią przeciwciała według wynalazku w taki sposób, że aktywność TNFa jest zahamowana. Korzystnie, TNFa jest ludzkim TNFa. Przykładowo w przypadku hodowli komórkowej zawierającej, albo podejrzewanej o to, że zawiera hTNFa, można dodać przeciwciało lub część przeciwciała według wynalazku do pożywki hodowlanej w celu zahamowania aktywności hTNFa w hodowli.
Wynalazek dostarcza również sposób hamowania aktywności TNFa u osobnika cierpiącego na zaburzenie, w którym aktywność TNFa jest szkodliwa. TNFa powiązany jest z patofizjologią wielu zaburzeń (patrz np. Moeller i in., (1990) Cytokine 2:162-169; opis patentowy US nr 5231024, Moeller i in.; publikacja patentu europejskiego nr 260610 B1, Moeller i in.). Wynalazek dostarcza sposób hamowania aktywności TNFa u osobnika cierpiącego na takie zaburzenie, który polega na podawaniu osobnikowi przeciwciała lub części przeciwciała według wynalazku w taki sposób, że aktywność TNFa osobnika jest zahamowana. Korzystnie TNFa jest ludzkim TNFa, a osobnik jest człowiekiem. Alternatywnie, osobnik może być ssakiem eksprymującym TNFa, z którym przeciwciało według wynalazku reaguje krzyżowo. Ponadto osobnik może być ssakiem, do organizmu którego wprowadzono hTNFa (np. przez podawanie hTNFa albo ekspresję transgenu hTNFa). Przeciwciało według wynalazku można podawać osobnikowi ludzkiemu w celach terapeutycznych (co szerzej omówiono poniżej). Ponadto przeciwciało według wynalazku można podawać ssakowi nie będącemu człowiekiem i eksprymującemu TNFa, z którym przeciwciało według wynalazku reaguje krzyżowo (np. naczelny, świnia lub mysz) w celach weterynaryjnych albo jako model zwierzęcy choroby ludzkiej. W odniesieniu do tego ostatniego, takie zwierzęce modele mogą być przydatne do badania skuteczności terapeutycznej przeciwciał według wynalazku (np. badanie dawkowania i przebiegu czasowego podawania).
PL 193 499 B1
W znaczeniu tu stosowanym „zaburzenie, w którym aktywność TNFa jest szkodliwa obejmuje choroby i inne zaburzenia, w których wykazano obecność TNFa w organizmie osobnika cierpiącego na zaburzenia albo podejrzewa się, że TNFa jest odpowiedzialny za patofizjologię choroby albo jest czynnikiem powodującym pogorszenie choroby. Choroba, w której aktywność TNFa jest szkodliwa, jest taką chorobą, w której zahamowanie aktywności TNFa powinno złagodzić objawy i/lub postęp choroby. Takie zaburzenia można określić, przykładowo, przez wzrost stężenia TNFa w płynie ustrojowym osobnika cierpiącego na zaburzenie (np. wzrost stężenia TNFa w surowicy, osoczu, płynie maziowym itp. osobnika), który można stwierdzić, przykładowo, stosując przeciwciało przeciw TNFa jak to opisano wyżej. Istnieją liczne przykłady zaburzeń, w których aktywność TNFa jest szkodliwa. Zastosowanie przeciwciał i części przeciwciał do leczenia konkretnych zaburzeń dyskutowane jest szerzej poniżej.
A. Posocznica
Czynnik martwicy nowotworu ma ustaloną rolę w patofizjologii posocznicy, z efektami biologicznymi obejmującymi niedociśnienie, zahamowanie czynności mięśnia sercowego, zespół przeciekania naczyń, martwicę narządu, pobudzenie uwalniania wtórnych mediatorów toksycznych i aktywację kaskady krzepnięcia (patrz np. Moeller i in., (1990) Cytokine 2:162-169; opis patentowy US nr 5231024, Moeller i in.; publikacja patentu europejskiego nr 260610 B1, A. Moeller i in.; K.J. Tracey i A. Cerami (1994) Annu. Rev. Med. 45:491-503; D. Russel i R.C. Thompson (1993) Curr. Opin. Biotech. 4:714-721). Przeciwciała ludzkie i części przeciwciał według wynalazku można zastosować do leczenia posocznicy w dowolnej jej postaci klinicznej, w tym wstrząsu septycznego, wstrząsu endotoksycznego, posocznicy Gram-ujemnej i zespołu wstrząsu toksycznego.
Ponadto, w celu leczenia posocznicy, przeciwciało przeciw hTNFa, albo część przeciwciała według wynalazku można podawać równocześnie z jednym lub większą liczbą dodatkowych środków terapeutycznych, które mają dalej łagodzić posocznicę, takich jak inhibitor interleukiny-1 (taki jak opisano w publikacji PCT WO 92/16221 i WO 92/17583) cytokina, interleukina-6 (patrz np. publikacja PCT WO 93/11793) albo antagonista czynnika aktywującego płytki (patrz np. publikacja europejskiego zgłoszenia patentowego nr EP 374510). Inne terapie skojarzone w celu leczenia posocznicy dyskutowane są w podrozdziale III.
Oprócz tego, w najkorzystniejszym przypadku, przeciwciało lub część przeciwciała przeciw TNFa według wynalazku podaje się osobnikowi ludzkiemu w podgrupie pacjentów z posocznicą mających stężenie IL-6 w osoczu albo surowicy powyżej 500 pg/ml, korzystniej 1000 pg/ml w trakcie leczenia (patrz publikacja PCT nr WO 95/20978, Daum i in.).
B. Choroby autoimmunologiczne
Czynnik martwicy nowotworu związany jest z patofizjologią różnych chorób autoimmunologicznych. Przykładowo, TNFa wiąże się z aktywacją stanu zapalnego w tkankach i powodowaniem uszkodzenia stawów w reumatoidalnym zapaleniu stawów (patrz np. Moeller i in., (1990) Cytokine 2:162-169; opis patentowy US nr 5231024, Moeller i in.; publikacja patentu europejskiego nr 260610 B1, A. Moeller i in.; Tracey i Cerami, supra; W.P. Arend i J.M. Dayer (1995) Arth, Rheum. 38:151-160; Fava iin., (1993) Clin. Exp. Immunol. 94:261-266). TNFa wiąże się również z promowaniem śmierci komórek wysepek trzustkowych i wywoływaniem oporności na insulinę w cukrzycy (patrz np. Tracey i Cerami, supra; publikacja PCT WO 94/08609). TNFa wiąże się również z wywoływaniem cytotoksyczności wobec oligodendrocytów i wywoływaniem płytek zapalnych w stwardnieniu rozsianym (patrz np. Tracey i Cerami, supra). Chimeryczne i humanizowane mysie przeciwciała przeciw hTNFa poddawane są badaniom klinicznym w leczeniu reumatoidalnego zapalenia stawów (patrz np. M.J. Elliot iin., (1994), Lancet 344:1125-1127; Elliot i in., (1994) Lancet 344:1105-1110; Rankin i in., (1995) Br.J. Rheumatol. 34:334-342).
Ludzkie przeciwciała lub części przeciwciał według wynalazku można zastosować do leczenia chorób autoimmunologicznych, w szczególności tych związanych ze stanem zapalnym, w tym reumatoidalnym zapaleniem stawów, zesztywniającym zapaleniem stawów, zapaleniem kości i stawów i dnawym zapaleniem stawów, alergią, stwardnieniem rozsianym, cukrzycą autoimmunologiczną, autoimmunologicznym zapaleniem błony naczyniowej oka i zespołem nerczycowym. Zwykle, przeciwciało lub część przeciwciał podaje się układowo, jakkolwiek w pewnych chorobach może być korzystne podawanie przeciwciała lub części przeciwciała w miejsce stanu zapalnego (np. podawanie miejscowe do stawów w reumatoidalnym zapaleniu stawów albo podawanie miejscowe w owrzodzeniach cukrzycowych, samego albo w połączeniu z pochodną cykloheksanylidenu, jak opisano w publikacji PCT WO 93/19751). Przeciwciało lub część przeciwciała według wynalazku można również podawać
PL 193 499 B1 z jednym lub większą liczbą dodatkowych środków terapeutycznych przydatnych w leczeniu chorób autoimmunologicznych, jak to szerzej dyskutowano w podrozdziale III.
C. Choroby zakaźne
Czynnik martwicy nowotworu wiąże się z wywoływaniem efektów biologicznych obserwowanych w różnych chorobach zakaźnych. Przykładowo, TNFa wiąże się z wywoływaniem zapalenia mózgu i zakrzepicą włośniczkową oraz zawałem mięśnia sercowego w malarii. Bierze również udział w wywoływaniu zapalenia mózgu, w tym przełamaniu bariery krew-mózg, wyzwalaniu zespołu wstrząsu septycznego i wywoływaniu zawałów żylnych w zapaleniu opon mózgowych. Jest również związany z wywoływaniem kacheksji, pobudzaniem proliferacji wirusa i wywoływaniem uszkodzenia ośrodkowego układu nerwowego w zespole nabytego niedoboru odporności (AIDS). Przeciwciała i części przeciwciał według wynalazku można więc zastosować w leczeniu różnych chorób zakaźnych, w tym bakteryjnego zapalenia opon mózgowych (patrz np. publikacja europejskiego zgłoszenia patentowego EP 585705), mózgowej malarii, AIDS i zespołu związanego z AIDS (ARC) (patrz publikacja europejskiego zgłoszenia patentowego EP 230574), jak również wtórnej infekcji wirusem cytomegalii po przeszczepie (patrz np. E. Fietze i in. (1994) Transplantation 53:675-680). Przeciwciała lub części przeciwciała według wynalazku można więc zastosować do łagodzenia objawów związanych z chorobami zakaźnymi, w tym gorączki, mięśniobóli z powodu infekcji (takiej jak grypa) i wtórnej kacheksji po infekcji (np. po zakażeniu AIDS lub ARC).
D. Przeszczepianie
Czynnik martwicy nowotworu jest uważany za kluczowy mediator odrzucania przeszczepów allogenicznych i reakcji przeszczep przeciwko gospodarzowi (GVHD) oraz mediator niekorzystnych reakcji obserwowanych, gdy w celu zahamowania odrzucania przeszczepu nerki podaje się szczurze przeciwciało OKT3, skierowane przeciwko kompleksowi CD3 receptora limfocytu T (patrz np. J.D. Eason i in., (1995) Transplantation 59:300-305; M. Suthanthiran i T.B. Storm (1994) New Engl. J. Med. 331:365-375). Przeciwciała i części przeciwciał według wynalazku można zastosować w celu zahamowania odrzucania przeszczepu, w tym odrzucania przeszczepów allogenicznych i ksenogenicznych oraz hamowania GVHD. Jakkolwiek przeciwciało lub część przeciwciała można zastosować pojedynczo, bardziej korzystne jest zastosowanie go w kombinacji z jednym lub większą liczbą innych środków, które hamują reakcję odpornościową przeciwko przeszczepowi allogenicznemu albo hamują GVHD. Przykładowo, w jednej postaci przeciwciało lub część przeciwciała według wynalazku stosuje się w kombinacji z OKT3 dla zahamowania reakcji wywołanych OKT3. W innej postaci, przeciwciało lub część przeciwciała według wynalazku stosuje się w kombinacji z jednym lub większą liczbą przeciwciał skierowanych przeciw innym celom związanym z regulacją reakcji odpornościowej, takim jak cząsteczka powierzchniowa CD25 (receptor a IL-2), CD11a (LFA-1), CD54 (ICAM-1), CD4, CD45, CD28/CTLA4, CD80 (B7-1) i/lub (CD86 (B7-2). W jeszcze innej postaci, przeciwciało lub część przeciwciała według wynalazku stosuje się w kombinacji z jednym lub większą liczbą powszechnych środków immunosupresyjnych, takich jak cyklosporyna A albo FK506.
E. Choroby nowotworowe
Czynnik martwicy nowotworu wiąże się z wywoływaniem kacheksji, pobudzaniem wzrostu nowotworu, zwiększaniem potencjału przerzutowego i wywoływaniem cytotoksyczności w chorobach nowotworowych. Przeciwciała lub części przeciwciał według wynalazku można zastosować w leczeniu chorób nowotworowych, hamowaniu wzrostu nowotworu albo przerzutu i/lub dla złagodzenia wtórnej kacheksji po chorobie nowotworowej. Przeciwciało lub część przeciwciała można podawać układowo lub miejscowo do nowotworu.
F. Choroby płuc
Czynnik martwicy nowotworu wiąże się z patofizjologią zespołu niewydolności oddechowej dorosłych (ARDS), w tym z pobudzaniem aktywacji leukocytów śródbłonka, kierowaniem cytotoksyczności na pneumocyty i wywoływaniem zespołu przeciekania naczyń. Przeciwciała i części przeciwciała według wynalazku można więc zastosować do leczenia różnych chorób płuc, w tym zespołu niewydolności oddechowej dorosłych (patrz np. publikacja PCT WO 91/04054), „płuca wstrząsowego, przewlekłej choroby zapalnej płuc, sarkoidozy płuc, zwłóknienia płuc i krzemicy. Przeciwciało lub część przeciwciała według wynalazku można podawać układowo lub miejscowo do płuc, przykładowo w postaci aerozolu. Przeciwciało lub część przeciwciała według wynalazku można również podawać z jednym lub większą liczbą środków terapeutycznych przydatnych w leczeniu chorób płuc, jak to szerzej dyskutowano w podrozdziale III.
PL 193 499 B1
G. Choroby jelit
Czynnik martwicy nowotworu wiąże się z patofizjologią chorób zapalnych jelit (patrz np. K.J.Tracy i in., (1986) Science 234:470~474; X.M. Sun i in., (1988) J. Clin. Invest. 81:1328-1331; T.T. MacDonald i in., (1990) Clin. Exp. Immunol., 81:301-305) Chimeryczne mysie przeciwciała przeciw hTNFa poddawane są badaniom klinicznym w leczeniu choroby Crohn'a (H.M. van Dullemen i in., (1995) Gastroenterology 109:129-135). Przeciwciała ludzkie i części przeciwciał według wynalazku można również stosować do leczenia chorób jelit, takich jak idiopatyczna choroba zapalna jelit, która obejmuje dwa zespoły: chorobę Crohn'a i wrzodziejące zapalenie okrężnicy. Przeciwciało lub część przeciwciała według wynalazku można również podawać z jednym lub większą liczbą dodatkowych środków terapeutycznych, przydatnych w leczeniu chorób jelit, jak to szerzej dyskutowano w podrozdziale III.
H. Choroby serca
Przeciwciała i części przeciwciał według wynalazku można również zastosować do leczenia różnych chorób serca, w tym niedokrwienia mięśnia sercowego (patrz np. publikacja europejskiego zgłoszenia patentowego nr EP 453898) i niewydolności mięśnia sercowego (słabości mięśnia sercowego) (patrz np. publikacja PCT WO 94/20139).
I. Inne choroby
Przeciwciała i części przeciwciał według wynalazku można również zastosować do leczenia różnych zaburzeń w których szkodliwe jest działanie TNFa. Przykłady innych chorób i zaburzeń w których aktywnośćTNFa wiąże się z patofizjologią i które można leczyć stosując przeciwciało albo części przeciwciała według wynalazku obejmują: choroby zapalne kości i choroby resorpcyjne kości (patrz np. D.R. Bertolini i in., (1986) Nature 319:516-518; A. Konig i in., (1988) J. Bone Miner. Res. 3:621-627; U.H. Lerner i A. Ohlin (1993) J. BoneMiner. Res. 8: 147-155; Shankar i Stern (1993) Bone 14:871-876), zapalenie wątroby, w tym poalkoholowe zapalenie wątroby (patrz np. C.J. McClain iD.A. Cohen (1989) Hepatology 9:349-351; M.E. Felver i in., (1990) Alcohol. Clin. Exp. Res. 14:255259; iHansen i in., (1994) Hepatology 20:461-474), wirusowe zapalenie wątroby (N. Sheron i in., (1991) J. Hepatol. 12:241-245; i M.J. Hussain i in., (1994) J. Clin. Pathol. 47:1112-1115) oraz piorunujące zapalenie wątroby; zaburzenia krzepnięcia (patrz np. T. van der Polli in., (1990) N. Engl. J. Med. 322:1622-1627; i T. van der Poll (1991) Prog. Clin. Biol. Res. 367:55-60), oparzenia (patrz np. B.P.Giroir i in., (1994) Am. J. Physiol. 267: H118-124; i X.S. Liu i in., (1994) Burns 20:40-44), uszkodzenia poreperfuzyjne (patrz np. W.E. Scales i in., (1994) Am. J. Physiol. 267:G1122-1127; C. Serrick i in., (1994) Transplantation 58:1158-1162; i Y.M. Yao i in., (1995) Resuscitation 29:157-168), tworzenie bliznowca (patrz np. R.L. McCauley i in., (1992) J. Clin. Immunol. 12:300-308) tworzenie tkanki blizny, gorączkę, choroby przyzębia, otyłość i toksyczność popromienną.
Wynalazek ilustrują poniższe przykłady, które nie stanowią jego ograniczenia. Treść wszystkich odnośników, patentów i opublikowanych zgłoszeń cytowanych w opisie jest włączona jako odnośniki.
Przykład 1: Analiza kinetyki wiązania ludzkich przeciwciał z hTNFa
Oddziaływanie wiązania pomiędzy ligandem (biotynylowanym rekombinowanym ludzkim TNFa (rhTNFa) unieruchomionym w matrycy czujnika biologicznego) i odczynnikiem analitycznym (przeciwciała w roztworze) mierzono w czasie rzeczywistym metodą rezonansu plazmonów powierzchniowych (SPR) stosując układ BIAcore (Pharmacia Biosensor, Piscataway, NJ). Układ wykorzystuje właściwości optyczne SPR do wykrywania zmian w stężeniu białka w dekstranowej matrycy czujnika biologicznego. Białka są kowalencyjnie związane z matrycą dekstranową w znanym stężeniu. Przeciwciała są wstrzykiwane przez matrycę dekstranową, zaś swoiste wiązanie pomiędzy wstrzykiwanymi przeciwciałami i unieruchomionym ligandem powoduje wzrost stężenia białka w matrycy i zmianę w sygnale SPR. Te zmiany w sygnale SPR są rejestrowane jako jednostki rezonansu (RU) i wyświetlane w odniesieniu do czasu na osi y sensorogramu.
W celu ułatwienia unieruchomienia biotynylowanego rhTNFa na matrycy czujnika biologicznego, streptawidynę wiąże się kowalencyjnie z wolnymi grupami aminowymi matrycy dekstranowej przez aktywację grup karboksylowych na matrycy z użyciem 100 mM N-hydroksysukcynimidu (NHS) i400 mM chlorowodorku N-etylo-N'-(3-dietyloaminopropylo)karbodiimidu (EDC). Następnie, przez aktywowaną matrycę wstrzykuje się streptawidynę. 35 μl streptawidyny (25 μg/ml) rozcieńczonej octanem sodu, pH 4,5, wstrzykuje się przez aktywowany czujnik biologiczny i wiąże się wolne grupy aminowe na białku bezpośrednio z aktywowanymi grupami karboksylowymi. Nieprzereagowane estry EDC matrycy dezaktywuje się przez wstrzyknięcie 1M etanoloaminy. Układy czujnika biologicznego sprzęgnięte ze streptawidyną są również dostępne w handlu (Pharmacia BR-1000-16, Pharmacia Biosensor, Piscataway, NY).
PL 193 499 B1
Biotynylowany rhTNFa wytworzono przez rozpuszczenie 5,0 mg biotyny (ester kwasu D-biotynylo-e-aminokapronowego i N-hydroksysukcynimidu; Boehringer Mannheim nr kat. 1008 960) w 500 μl dimetylosulfotlenku tworząc roztwór 10 mg/ml. Dodano 10 μl biotyny na ml rhTNFa (w stężeniu 2,65 mg/ml) co dało stosunek molowy biotyny do rhTNFa 2:1. Mieszaninę mieszano delikatnie i inkubowano przez dwie godziny w temperaturze pokojowej w ciemności. Kolumnę PD-10, Sephadex G25M (Pharmacia nr kat. 17-0851-01) zrównoważono 25 ml zimnego PBS i załadowano 2 ml rhTNFa-biotyny na kolumnę. Kolumnę eluowano 10x 1ml zimnego PBS. Frakcje zbierano i odczytywano przy OD280 (1,0 OD =1,25 mg/ml). Odpowiednie frakcje łączono i przechowywano w temperaturze -80°C do momentu zastosowania. Biotynylowany rhTNFa jest również dostępny w handlu (R&D Systems nr kat. FTA00, Minneapolis, MN).
Biotynylowany rhTNFa, który ma być unieruchomiony na matrycy przez streptawidynę, rozcieńczono w buforze roboczym PBS (Gibco nr kat. 14190-144, Gibco BRL, Grand Island, NY) z dodatkiem 0,05% (BIAcore) surfaktantu P20 (Pharmacia BR-1000-54, Pharmacia Biosensor, Piscataway, NJ). Dla określenia zdolności wiązania unieruchomionego rhTNFa przez przeciwciała swoiste wobec rhTNFa, test wiązania przeprowadzano w następujący sposób. Porcje biotynylowanego rhTNFa (25 nM; porcje po 10 μθ wstrzykiwano przez matrycę dekstranową sprzęgniętą ze streptawidyną przy szybkości 5 pl/min. Przed wstrzyknięciem białka i zaraz potem, przez każdą komorę przepływową przepuszczano sam PBS. Różnicę sygnału pomiędzy poziomem podstawowym i poziomem około 30 sekund po zakończeniu wstrzykiwania biotynylowanego rhTNFa przyjęto jako wartość wiązania (około 500 RU). Mierzono bezpośrednio wiązanie przeciwciała swoistego wobec rhTNFa z unieruchomionym biotynylowanym rhTNFa. Przeciwciała (20 pg/ml) rozcieńczono w buforze roboczym PBS i porcje po 25 pl wstrzykiwano przez matryce unieruchomionego białka przy szybkości 5 pl/min. Przed wstrzyknięciem białka i zaraz potem, przez każdą komorę przepływową przepuszczano sam PBS. Różnicę sygnału pomiędzy poziomem podstawowym i poziomem po zakończeniu wstrzykiwania przeciwciała przyjęto jako wartość wiązania dla konkretnej próbki. Matryce czujnika biologicznego regenerowano stosując 100 mM HCl przed wstrzyknięciem następnej próbki. Dla określenia stałej odłączania (Koff), stałej przyłączania (Kon), stałej asocjacji (Ka) i stałej dysocjacji (Kd) zastosowano oprogramowanie badające kinetykę BIAcore (wersja 2.1).
Reprezentatywne wyniki wiązania D2E7 (IgG4 pełnej długości) z biotynylowanym rhTNFa, wporównaniu z mAb MAK 195 (fragment F(ab')2) pokazano w tabeli 1poniżej.
Tabela 1
Wiązanie IgG4 D2E7 albo MAK 195 z biotynylowanym rhTNFa
Przeciwciało Stężenie przeciwciała, nM Związany rhTNFa, RU Związane przeciwciało, RU rhTNF a/przeciwciało Koff, s 1 (średnia)
1 2 3 4 5 6
D2E7 267 373 1215 1,14 8,45 x 10-5
133 420 1569 1,30 5,42 x 105
67 434 1633 1,31 4,75 x 10-5
33 450 1532 1,19 4,46 x 10-5
17 460 1296 0,98 3,47 x 105
8 486 936 0,67 2,63 x 10-5
4 489 536 0,38 2,17x 105
2 470 244 0,18 3,68 x 10-5
(4,38 x 10-5)
MAK 195 400 375 881 1,20 5,38 x 105
200 400 1080 1,38 4,54 x 105
PL 193 499 B1 cd tabeli 1
1 2 3 4 5 6
100 419 1141 1,39 3,54 x 10-5
50 427 1106 1,32 3,67 x 10-5
25 446 957 1,09 4,41 x 10-5
13 464 708 0,78 3,66 x 10-5
6 474 433 0,47 7,37 x 10-5
3 451 231 0,26 6,95 x 10-5
(4,94 x 10-5)
W drugiej serii doświadczeń, analizowano ilościowo kinetykę oddziaływań cząsteczkowych pomiędzy postacią IgG1 pełnej długości D2E7 i biotynylowanym rhTNF, przy użyciu technologii BIAcore, jak to opisano wyżej. Wyniki stałych szybkości kinetycznych podsumowano niżej w tabelach 2, 3 i 4.
T a b el a 2
Pozorne stałe szybkości dysocjacji oddziaływania pomiędzy D2E7 i biotynylowanym rhTNFa
Doświadczenie Kd (s-1)
1 9,58 x 10-5
2 9,26 x 10-5
3 7,60 x 10-5
Średnia 8,81 ± 1,06 x 10-5
T a b el a 3
Pozorne stałe szybkości asocjacji oddziaływania pomiędzy D2E7 i biotynylowanym rhTNFa
Doświadczenie Ka(M-1.s-1)
1 1,33 x 105
2 1,05 x 105
3 3,36 x 105
Średnia 1,91 ± 1,26 x 105
T a b el a 4
Pozorne stałe szybkości kinetycznych i stałe powinowactwa pomiędzy D2E7 i biotynylowanym rhTNFa
Doświadczenie Ka(M-1.s-1) Kd (s-1) Kd(M)
1 1,33 x 105 9,58 x 10-5 7,20 x 10-10
2 1,05 x 105 9,26 x 10-5 8,82 x 10-10
3 3,36 x 105 7,60 x 10-5 2,26 x 10-10
Średnia 1,91 ± 1,26 x 105 8,81 ± 1,06 x 10-5 6,09 ± 3,42 x10-10
Stałe szybkości asocjacji i dysocjacji obliczono poprzez analizę oprogramowaniem BIAcore regionów asocjacji i dysocjacji sensorogramów. Dla oddziaływania pomiędzy D2E7 i biotynylowaną cząsteczką rhTNFa przyjęto znaną kinetykę reakcji chemicznych; kinetykę dysocjacji zerowego rzędu i kinetykę asocjacji pierwszego rzędu. W celu analizy, w wyborze modeli cząsteczkowych do analizy kinetyki uwzględniano jedynie oddziaływanie jednego ramienia dwuwartościowego przeciwciała D2E7 i jednej jednostki trimerycznego biotynylowanego rhTNFa. Wykonywano trzy niezależne doświadczenia i osobno analizowano wyniki. Średnia stałej szybkości dysocjacji (kd) oddziaływania pomiędzy D2E7 i biotynylowanym rhTNFa wynosiła 8,81 ± 1,06 x 10-5 s-1, zaś średnia stałej szybkości asocjacji ka wynosiła 1,91 ± 1,26 x 105 M-1s-1. Rzeczywistą stałą dysocjacji (Kd) obliczono ze wzoru Kd=kd/ka.
Tak wiec średnia Kd przeciwciała D2E7 dla rhTNFa otrzymana z tych parametrów kinetycznych wyno-10 siła 6,09 ± 3,42 x 10-10 M. Niewielkie różnice w wartościach kinetycznych dla postaci IgG1 D2E7 (przedstawione w tabelach 2, 3 i 4) i postaci IgG4 D2E7 (przedstawione w tabeli 1 oraz w przykładach 2 i 3) nie stanowią przyczyny istotnych różnic spowodowanych występowaniem regionów stałych IgG1 albo
PL 193 499 B1
IgG4, ale raczej można je przypisać dokładniejszemu pomiarowi stężenia przeciwciała zastosowanego do analizy kinetyki IgG1. Wartości kinetyczne dla postaci IgG1 D2E7 przedstawionej tu wydają się więc najdokładniej odpowiadać rzeczywistym parametrom kinetycznym przeciwciała D2E7.
Przykład 2: Mutageneza za pomocą skanowania alaniną domen CDR3 D2E7
Standardowymi metodami wprowadzono szereg pojedynczych mutacji do alaniny wzdłuż domeny CDR3 regionów VL D2E7 i VH D2E7. Mutacje w łańcuchu lekkim przedstawiono na fig. 1B (LD2E7*.A1, LD2E7*.A3, LD2E7*.A4, LD2E7*.A5, LD2E7*.A7 i LD2E7*.A8 z mutacją do alaniny w pozycjach, odpowiednio, 1, 3, 4, 5, 7 albo 8 domeny CDR3 VL D2E7). Mutacje w łańcuchu ciężkim pokazano na fig. 2B (HD2E7*.A1, HD2E7*.A2, HD2E7*.A3, HD2E7*.A4, HD2E7*.A5, HD2E7*.A6, HD2E7*.A7, HD2E7*.A8, HD2E7*.A9 z mutacją do alaniny w pozycjach, odpowiednio 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10 lub 11 domeny CDR3 VH D2E7). Kinetykę oddziaływania rhTNFa z przeciwciałem składającym się z VL i VH D2E7 typu dzikiego porównano z kinetyką dla przeciwciałami składającymi się z 1) VL D2E7 typu dzikiego sparowanego z VH D2E7 podstawionym alaniną; 2) VH D2E7 typu dzikiego sparowanego z VL D2E7 podstawionym alaniną; albo 3) VL D2E7 podstawionego alaniną sparowanego zVH D2E7 podstawionym alaniną. Wszystkie przeciwciała badano jako cząsteczki IgG4 pełnej długości.
Kinetykę oddziaływania przeciwciał z rhTNFa określano metodą rezonansu plazmonów powierzchniowych jak to opisano w przykładzie 1. Wartości Koff dla różnych par VL/VH podsumowano poniżej w tabeli 5.
T a b e l a 5
Wiązanie mutantów powstałych przez skanowanie alaniną D2E7 z biotynylowanym rhTNFa
VH VL Koff (s-1)
D2E7 VH D2E7 VL 9,65 x 10-5
HD2E7*A1 D2E7 VL 1,4 x 10-4
HD2E7*A2 D2E7 VL 4,6 x 10-4
HD2E7*A3 D2E7 VL 8,15 x 10-4
HD2E7*A4 D2E7 VL 1,8 x 10-4
HD2E7*A5 D2E7 VL 2,35 x 10-4
HD2E7*A6 D2E7 VL 2,9 x 10-4
HD2E7*A7 D2E7 VL 1,0 x 10-4
HD2E7*A8 D2E7 VL 3,1 x 10-4
HD2E7*A9 D2E7 VL 8,1 x 10-4
D2E7 VH LD2E7*A1 6,6 x 10-5
D2E7 VH LD2E7*A3 niewykrywalna
D2E7 VH LD2E7*A4 1,75 x 10-4
D2E7 VH LD2E7*A5 1,8 x 10-4
D2E7 VH LD2E7*,A7 1,4 x 10-4
D2E7 VH LD2E7*A8 3,65 x 10-4
HD2E7*A9 LD2E7*A1 1,05 x 10-4
Wyniki te przedstawiają, że większość pozycji domen CDR3 regionu VL i VH D2E7 jest możliwa do zastąpienia pojedynczą resztą alaniny. Zastąpienie pojedynczą alaniną w pozycji 1, 4, 5 lub 7 CDR3 VL D2E7 albo pozycji 2, 5, 6, 8, 9 lub 10 CDR3 VH D2E7 nie wpływa znacząco na szybkość odłączania wiązania z hTNFa w porównaniu z przeciwciałem macierzystym dzikiego typu D2E7. Zastąpienie alaniną w pozycji 8 CDR3 VL D2E7 albo w pozycji 3 CDR3 VH D2E7 daje 4-krotnie wyższą wartość Koff, zaś zastąpienie alaniną w pozycji 4 lub 11 CDR3 VH D2E7 daje 8-krotnie wyższą wartość Koff, co wskazuje, że te pozycje są bardziej krytyczne dla wiązania z hTNFa. Jednakże, pojedyncze zastąpienie alaniną w pozycji 1, 4, 5, 7 lub 8 CDR3 VL D2E7 albo pozycji 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10 lub 11 CDR3 VH D2E7 wciąż powoduje wiązanie przeciwciała przeciw hTNFa z szybkością odłączania wiązania Koff wynoszącą 1 x10-3 s-1 albo mniej.
Przykład 3: Analiza wiązania przeciwciał pokrewnych z D2E7
Szereg przeciwciał pokrewnych sekwencją z D2E7 analizowano pod względem ich wiązania z rhTNFa, w porównaniu z D2E7, metodą rezonansu plazmonów powierzchniowych, jak to opisano
PL 193 499 B1 w przykładzie 1. Sekwencje aminokwasowe badanych regionów VL pokazano na fig. 1A i 1B. Sekwencje aminokwasowe badanych regionów VH pokazano na fig. 2A i 2B. Wartości Koff dla różnych par VH/VL (w zaznaczonym formacie, jako przeciwciało IgG1 albo IgG4 pełnej długości, albo jako scFv) podsumowano poniżej w tabeli 6:
Tabel a 6
Wiązanie przeciwciał pokrewnych z D2E7 z biotynylowanym rhTNFa
VH VL Format Koff (s-1)
D2E7 VH D2E7 VL IgG1/IgG4 9,65 x 10 5
VH1-D2 LOE7 IgG1/IgG4 7,7 x 10 5
VH1-D2 LOE7 scFv 4,6 x 104
VH1-D2.N LOE7.T IgG4 2,1 x 105
VH1-D2.Y LOE7.A IgG4 2,7 x 10 5
VH1-D2.N LOE7.A IgG4 3,2 x 10 5
VH1-D2 EPB12 scFv 8,0 x 104
VH1-D2 2SD4 VL scFv 1,94 x 10 3
3C-H2 LOE7 scFv 1,5 x 10 3
2SD4 VH LOE7 scFv 6,07 x 10 3
2SD4 VH 2SD4 VL scFv 1,37 x 10 2
VH1A11 2SD4 VL scFv 1,34 x 10 2
VH1B12 2SD4 VL scFv 1,01 x 10'
VH1B11 2SD4 VL scFv 9,8 x 10 3
VH1E4 2SD4 VL scFv 1,59 x 10 2
VH1F6 2SD4 VL scFv 2,29 x 10'
VH1D8 2SD4 VL scFv 9,5 x 10 3
VH1G1 2SD4 VL scFv 2,14 x 10'
2SD4 VH EPB12 scFv 6,7 x 10 3
2SD4 VH VL10E4 scFv 9,6 x 10 3
2SD4 VH VL100A9 scFv 1,33 x 10'
2SD4 VH VL100D2 scFv 1,41 x 10'
2SD4 VH VL10F4 scFv 1,11 x 10'
2SD4 VH VLLOE5 scFv 1,16 x 10'
2SD4 VH VLLOF9 scFv 6,09 x 10 3
2SD4 VH VLLOF10 scFv 1,34 x 10'
2SD4 VH VLLOG7 scFv 1,56 x 10'
2SD4 VH VLLOG9 scFv 1,46 x 10'
2SD4 VH VLLOH1 scFv 1,17x 10'
2SD4 VH VLLOH10 scFv 1,12x 10'
2SD4 VH VL1B7 scFv 1,3 x 10'
2SD4 VH VL1C1 scFv 1,36 x 10'
2SD4 VH VL1C7 scFv 2,0 x 10'
2SD4 VH VL0.1F4 scFv 1,76 x 10'
2SD4 VH VL0.1H8 scFv 1,14x 10'
-4 -1
Powolne szybkości odłączania (tj. Koff £ 1 x 10-4 s-1) dla przeciwciał pełnej długości (tj. formatu IgG) mających VL wybrany z grupy obejmującej D2E7, LOE7, LOE7.T i LOE7.A, które mają treoninę lub alaninę w pozycji 9, wskazują że pozycja 9 CDR3 VL D2E7 może być zajmowana przez jedną z tych dwóch reszt bez istotnego wpływu na Koff. Motyw zgodności dla CDR3 VL D2E7 obejmuje sekwencję aminokwasu Q-R-Y-N-R-A-P-Y-(T/A) (SEQ ID NO: 3). Ponadto, powolne szybkości odłączania (tj. Koff £ 1 x 10-4 s-1) dla przeciwciał mających VH wybrany z grupy obejmującej D2E7, VH1-D2.N
PL 193 499 B1 i VH1-D2.Y, które mają tyrozynę lub asparaginę w pozycji 12, wskazują, że pozycja 12 CDR3 VH D2E7 może być zajmowana przez te dwie reszty bez wpływu na Koff. Motyw zgodności dla CDR3 VH D2E7 obejmuje więc sekwencję aminokwasową: V-S-Y-L-S-T-A-S-S-L-D-(Y/N) (SEQ ID NO: 4).
Wyniki pokazane na tabeli 6 przedstawiają, że w formacie scFv przeciwciała zawierające CDR3 regionu VL lub VH 2SD4 wykazują szybszą Koff (tj. Koff £ 1 x 10-3 s-1) w porównaniu z przeciwciałami zawierającymi CDR3 regionu VLlub VH D2E7. W CDR3 VL, 2SD4 różni się od D2E7 w pozycjach 2, 5 i 9. Jednakże, jak to dyskutowano powyżej, pozycje 9 mogą być zajmowane przez Ala (podobnie jak w 2SD4) lub Thr (jak w D2E7) bez istotnego wpływu na Koff. Tak więc, przez porównanie 2SD4 i D2E7, pozycje 2 i 5 CDR3 VL D2E7, obie argininy, można zidentyfikować jako kluczowe dla wiązania przeciwciała z hTNFa. Reszty te mogą być bezpośrednio zaangażowane jako reszty kontaktowe w miejscu wiązania przeciwciała albo mogą wpływać kluczowo na utrzymanie architektury rusztowania cząsteczki przeciwciała w tym regionie. Uwzględniając ważność pozycji 2, zastąpienie Arg (w LOE7, które ma to samo CDR3 co D2E7) przez Lys (w EP B12) zwiększa szybkość odłączania dwukrotnie. Uwzględniając ważność pozycji 5, zastąpienie Arg (w D2E7) przez Ala (w LD2E7*.A5), jak to opisano w przykładzie 2, również zwiększa szybkość odłączania dwukrotnie. Ponadto, bez Arg w pozycji 2 i 5 (w 2SD4) szybkość odłączania jest pięciokrotnie większa. Jednakże, należy zaznaczyć, że jakkolwiek pozycja 5 jest istotna dla poprawy wiązania z hTNFa, zmiana w tej pozycji może być zniesiona przez zmiany w innych pozycjach, jak to widać w VLLOE4, VLLOH1 albo VL0.1H8.
W CDR3 VH, 2SD4 różni się od D2E-7 w pozycjach 1, 7 i 12. Jednakże jak omówiono powyżej, pozycja 12 może być zajmowana przez Asn (jak w 2SD4) lub Tyr (jak w D2E7) bez istotnego wpływu na Koff. Tak więc, przez porównanie 2SD4 i D2E7, pozycje 1i 7 CDR3 VH D2E7 można zidentyfikować jako kluczowe dla wiązania z hTNFa. Jak omówiono powyżej, reszty te mogą być bezpośrednio zaangażowane jako reszty kontaktowe w miejscu wiązania przeciwciała albo mogą wpływać kluczowo na utrzymanie architektury rusztowania cząsteczki przeciwciała w tym regionie. Obie pozycje są istotne dla wiązania z hTNFa ponieważ, gdy stosuje się CDR3 VH 3C-H2 (który ma zamienioną walinę na alaninę w pozycji 1 względem CDR3 VH D2E7) scFv wykazuje trzykrotnie szybsze odłączanie niż zCDR3 VH D2E7, ale szybkość ta jest wciąż czterokrotnie niższa niż gdy stosuje się CDR3 VH 2SD4 (który ma zmiany w pozycji 1i 7 względem CDR3 VH D2E7).
Przykład 4: Aktywność funkcjonalna D2E7
W celu zbadania aktywności funkcjonalnej D2E7, zastosowano przeciwciało w kilku testach, które mierzą zdolność przeciwciała do hamowania aktywności hTNFa in vitro jak i in vivo.
A. Neutralizacja wywołanej przez TNFa cytotoksyczności wobec komórek L929
Ludzki rekombinowany TNFa (rhTNFa) powoduje cytotoksyczność komórkową mysich komórek L929 po inkubacji przez okres 18-24 godzin. Ludzkie przeciwciała przeciw hTNFa badano w teście zL929 przez równoczesną inkubację przeciwciał z rhTNFa i komórek w następujący sposób. Zawartość 96-studzienkowej płytki do mikromiareczkowania zawierającej 100 μΐ przeciwciał przeciw hTNFa seryjnie rozcieńczano 1/3 wzdłuż płytki, podwójnie, stosując pożywkę RPMI zawierającą 10% płodową surowicę bydlęcą (FBS). Dodano 50 μl rhTNFa do stężenia końcowego równego 500 pg/ml w każdej studzience. Płytki inkubowano przez 30 minut w temperaturze pokojowej. Następnie dodano 50 μl fibroblastów mysich L929 wrażliwych naTNFa w stężeniu końcowym równym 5 x 104 komórek na studzienkę, w tym 1 μg/ml aktynomycyny-D. Kontrole obejmowały pożywkę z komórkami oraz rhTNFa z komórkami. Te kontrole oraz krzywą wzorcową TNFa, w zakresie od 2 ng/ml do 8,2 pg/ml, zastosowano do określenia jakości testu i zapewnienia okienka neutralizacji. Płytki inkubowano przez noc (1824 godziny) w temperaturze 37°C z 5% CO2.
Pobrano z każdej ze studzienek 100 μl pożywki i dodano po 50 μl bromku 3-(4,4-dimetylotiazol2-ilo)-2,5-difenylotetrazoliowego (MTT, dostępny w handlu z Sigma Chemical Co., St. Louis, MO) 5 mg/ml w PBS. Płytki ponownie inkubowano przez 4 godziny w 37°C. Następnie do każdej studzienki dodano 50 μl 20% dodecylosiarczanu sodu (SDS) i płytki inkubowano przez noc w 37°C. Mierzono gęstość optyczną przy długościach fali 570/630 nm, wykreślano krzywe dla każdej próbki i określano IC50 standardowymi metodami.
Reprezentatywne wyniki dla ludzkich przeciwciał obejmujących różne pary VL i VH, w porównaniu z mysim mAb MAK 195, pokazano na fig. 3 oraz w tabeli 7, poniżej.
PL 193 499 B1
Tabel a 7
Neutralizacja cytotoksyczności L929 wywołanej TNFa
VH VL Struktura IC50, M
D2E7 D2E7 scFv 1,1 x 10-10
D2E7 D2E7 IgG4 4,7 x 1011
2SD4 2SD4 scFv/IgG1/IgG4 3,0 x 10 '
2SD4 LOE7 scFv 4,3 x 10 8
VH1-D2 2SD4 scFv 1,0 x 10 8
VH1-D2 LOE7 scFv/IgG1/IgG4 3,4 x 10-10
VH1.D2.Y LOE7.T IgG4 8,1 x 10-11
VH1-D2.N LOE7.T IgG4 1,3 x 10-10
VH1-D2.Y LOE7.A IgG4 2,8 x 1011
VH1-D2.N LOE7.A IgG4 6,2 x 1011
MAK 195 MAK 195 scFv 1,9 x 108
MAK 195 MAK 195 F(ab')2 6,2 x 1011
Wyniki na fig. 3 i w tabeli 7 przedstawiają, że ludzkie przeciwciało D2E7 przeciw hTNFa oraz różne przeciwciała pokrewne D2E7 neutralizują cytotoksyczność L929 wywołaną TNFa ze zdolnością w przybliżeniu odpowiadającą zdolności mysiego mAb przeciw hTNFa MAK 195.
W innej serii doświadczeń, zdolność postaci IgG1 D2E7 do neutralizacji wywołanej przez TNFa cytotoksyczności L929 badano w opisany wyżej sposób. Wyniki z trzech niezależnych doświadczeń oraz ich średnie podano w tabeli 8.
Tabel a 8
Neutralizacja wywołanej TNFa cytotoksyczności L929 przez IgG1 D2E7
Doświadczenie IC50 [M]
1 1,26 x 10-10
2 1,33 x 10-10
3 1,15x 10-10
Średnia 1,25 ± 0,01 x 10-10
Ta seria doświadczeń potwierdziła, że D2E7 w postaci IgG1 pełnej długości neutralizuje cyto-10 toksyczność L929 wywołaną TNFa ze średnią IC50 równą 1,25 ± 0,01x 10-10 M.
B. Zahamowanie wiązania TNFa z receptorami TNFa na komórkach U-937
Zdolność ludzkich przeciwciał przeciw hTNFa do zahamowania wiązania hTNFa z receptorami hTNFa na powierzchni komórek badano stosując linię komórkową U-937 (ATCC CRL 1593), ludzką linię histiocytów eksprymujących receptory hTNFa. Komórki U-937 hodowano w pożywce RPMI 1640 z 10% płodową surowicą bydlęcą (Hyclone A-1111, Hyclone Laboratories, Logan, UT), L-glutaminą (4 nM), roztworem buforu HEPES (10 mM), penicyliną (100 μg/ml) i streptomycyną (100 μg/ml). Dla zbadania aktywności przeciwciał IgG pełnej długości, komórki U-937 inkubowano wstępnie z PBS z dodatkiem 1 mg/ml ludzkich IgG (Sigma L-4506, Sigma Chemical Co., St. Louis, MO) przez 45 minut na lodzie, a następnie komórki płukano trzykrotnie buforem do wiązania. Dla badania wiązania, komórki U-937 (5 x 106 komórek/studzienkę) inkubowano w buforze do wiązania (PBS z dodatkiem 0,2% albuminy surowicy bydlęcej) w 96-studzienkowych płytkach do mikromiareczkowania (Costar 3799, Costar Corp., Cambridge, MA) wraz z rhTNFa znakowanym 125I (3 x 10-10 M; 25 pCi/ml; NEN Research Products, Wilmington, DE), z przeciwciałami przeciw hTNFa albo bez nich, w objętości końcowej 0,2 ml. Płytki inkubowano na lodzie przez 1,5 godziny. Następnie, 75 pl każdej próbki przeniesiono do 1,0 ml probówek (Sarstedt 72.700, Sarstedt Corp., Princeton, NJ) zawierających ftalan dibutylu (Sigma
PL 193 499 B1
D-2270, Sigma Chemical Co., St.Louis, MO) i ftalan dinonylu (ICN 210733, ICN, Irvine, CA). Probówki zawierały 300 μl mieszaniny ftalan dibutylu i ftalanu dinonylu w stosunku objętościowym odpowiednio
125
2:1. Wolny (tj. niezwiązany) rhTNFa znakowany 125I usunięto przez odwirowanie przez 5 minut. Następnie, dno każdej probówki zawierające osad komórek odcięto przy użyciu nożyczek do probówek (Bel-Art 210180001, Bel-Art Products, Pequannock, NJ). Osad komórek zawierał rhTNFa znakowany
125 125Izwiązany z receptoramiTNFa p60 lub p80, podczas gdy faza wodna powyżej mieszaniny oleju zawie125 rała nadmiar wolnego rhTNFa znakowanego 125I. Wszystkie osady komórek zebrano w probówkach do zliczeń (Falcon 2052, Becton Dickinson Labware, Lincoln Park, NJ) i zliczono wliczniku scyntylacyjnym.
Reprezentatywne wyniki pokazano na fig. 4. Wartość dla zahamowania wiązania hTNFa z re-10 ceptorami hTNFa na komórkach U-937 przez D2E7 wynosi około 3 x 10-10 M. Wyniki przedstawiają, że ludzkie przeciwciało przeciw hTNFa D2E7 hamuje wiązanie rhTNFa z receptorami hTNFa na komórkach U-937 w stężeniu w przybliżeniu równym stężeniu mysiego mAb przeciw hTNFa MAK 195.
W innej serii doświadczeń, badano zdolność postaci IgG1 D2E7 do hamowania wiązania rhTNFa z receptorami hTNFa na komórkach U-937, jak to opisano powyżej. Wyniki z trzech niezależnych doświadczeń oraz ich średnie podsumowano w tabeli 9.
Tabela 9
Zahamowanie wiązania TNF z receptorem na komórkach U-937 przez IgG1 D2E7
Doświadczenie IC50 [M]
1 1,70 x 10
2 1,49 x 10-10
3 1,50 x 10-10
Średnia 1,56 ± 0,12 x1010
Ta seria doświadczeń potwierdziła, że D2E7 w postaci IgG1 pełnej długości hamuje wiązanie
TNF z receptoremna komórkach U-937 ze średnią IC50 równą 1,56 ± 0,12 x 10-10 M.
125
W celu badania siły hamującej D2E7 wiązania 125I-rhTNFa z poszczególnymi receptorami p55 ip75, wykonano test radioimmunologiczny na podłożu stałym. Dla zmierzenia wartości IC50 D2E7
125 wobec osobnych receptorów TNF, przeciwciało w różnych stężeniach inkubowano z 125I-rhTNFa ostężeniu równym 3 x 10-10. Mieszaninę badano w osobnych płytkach zawierających receptory p55 albo p75 w sposób zależny od dawki. Wyniki podsumowano w tabeli 10.
Tabela 10
Zahamowanie wiązania TNF z receptorami p55 i p75 TNFR przez IgG1 D2E7
IC50 [M]
Reagent p55 TNFR p75 TNFR
D2E7 1,47 x 109 1,26 x 109
rhTNF 2,31 x 10'9 2,70 x 109
125
Zahamowanie wiązania 125I-rhTNFa z receptorami TNF p55 i p75 na komórkach U-937 przez D2E7 następowało w postaci zwykłej krzywej esowatej, co wskazuje na wartości IC50 podobne dla każdego receptora. W teście radioimmunologicznym na podłożu stałym (RIA) z rekombinowanymi
125 receptorami TNF, wartości IC50 dla zahamowania wiązania 125I-rhTNFa z receptorami p55 i p75 przez D2E7 obliczono jako wynoszące, odpowiednio, 1,47 x 10-9 i 1,25 x 10-9 M. Zmniejszenie wartości IC50 w teście na podłożu stałym spowodowane było prawdopodobnie wyższą gęstością receptorów w formacieRIA, ponieważ nie znakowany rhTNFa również hamował z podobnymi wartościami IC50. Wartości IC50 dla zahamowania wiązania 125l-rhTNFa z receptorami p55 i p75 przez nie znakowany rhTNFa wynosiły, odpowiednio, 2,31 x 10-9 i 2,70 x 10-9 M.
C. Zahamowanie ekspresji ELAM-1 na HUVEC
Ludzkie komórki śródbłonka żyły pępowinowej (HUVEC) można indukować do ekspresji cząsteczki przywierającej doleukocytów komórek śródbłonka 1 (ELAM-1) na ich powierzchni przez traktowanie rhTNFa, którą można wykrywać w reakcji traktowanych rhTNFa HUVEC z mysim przeciwcia38
PL 193 499 B1 łem przeciwko ludzkiej ELAM-1. Zdolność ludzkich przeciwciał przeciw hTNFa do hamowania wywołanejTNFa ekspresji ELAM-1 na HUVEC badano w następujący sposób: HUVEC (ATCC CRL 1730) wysiano do 96-studzienkowych płytek (5 x 104 komórek/studzienkę) i inkubowano przez noc w temperaturze 37°C. Następnego dnia, wykonano seryjne rozcieńczenia ludzkiego przeciwciała przeciw hTNFa (1:10) w płytkach do mikromiareczkowania, począwszy od 20-100 μg/ml przeciwciała. Roztwór wyjściowy rhTNFa wykonano w stężeniu 4,5 ng/ml, porcje rhTNFa dodano do każdej studzienki zawierającej przeciwciało i zawartość dobrze wymieszano. Kontrole zawierały samą pożywkę, pożywkę z przeciwciałem przeciw hTNFa i pożywkę z rhTNFa. Płytki z HUVEC wyjęto z całonocnej inkubacji w 37°C i z każdej studzienki delikatnie pobrano pożywkę. 200 μl mieszaniny przeciwciała i rhTNFa przeniesiono do każdej studzienki płytek z HUVEC. Płytki HUVEC inkubowano dalej w temperaturze 37°C przez 4 godziny. Następnie, roztwór wyjściowy mysich przeciwciał przeciw ELAM-1 rozcieńczono 1:1000 w RPMI. Pożywkę w każdej studzience płytki HUVEC delikatnie odessano i dodano po μl/studzienkę roztworu przeciwciała przeciw ELAM-1 i inkubowano płytki HUVEC przez 60 minut
125 w temperaturze pokojowej. Wykonano roztwór przeciwciała przeciw mysim IgG znakowanego 125I w RPMI (około 50000 zliczeń na minutę w 50 μ^. Pożywkę z każdej ze studzienek delikatnie odessano, studzienki przepłukano dwukrotnie RPMI i do każdej studzienki dodano po 50 μl roztworu przeciw125 ciała przeciw mysim Ig znakowanego 125I. Płytki inkubowano przez godzinę w temperaturze pokojowej, a następnie każdą studzienkę przepłukano RPMI. Do każdej studzienki dodano po 180 μl 5% roztworu SDS w celu rozłożenia komórek. Lizat komórek z każdej studzienki przeniesiono do probówki i zliczano w liczniku scyntylacyjnym.
Reprezentatywne wyniki pokazano na fig. 5. Wartość IC50 dla zahamowania przez D2E7 wywołanej hTNFa ekspresji ELAM-1na HUVEC wynosiła około 6 x 10-11 M. Wyniki te przedstawiają, że ludzkie przeciwciało D2E7 przeciw hTNFa hamuje wywołaną hTNFa ekspresję ELAM-1 na HUVEC w stężeniach w przybliżeniu równoważnych z mysim mAb przeciw hTNFa MAK 195.
W innej serii doświadczeń zdolność postaci IgG1 D2E7 do hamowania wywołanej hTNFa ekspresji ELAM-1 na HUVEC badano w opisany wyżej sposób. Wyniki z trzech niezależnych doświadczeń i ich średnie podsumowano w tabeli 11.
Tabela 11
Zahamowanie wywołanej TNFa ekspresji ELAM-1 przez receptor IgG1 D2E7
Doświadczenie IC50 [M]
1 1,95 x 10-10
2 1,69 x 10-10
3 1,90 x 10-10
Średnia 1,85 ± 0,14 x1010
Ta seria doświadczeń potwierdziła, że D2E7 w postaci IgG1 pełnej długości hamuje wywołaną TNFaekspresję ELAM-1 na HUVEC ze średnią IC50równą 1,85 ± 0,14 x 10-10M.
Siłę neutralizacji IgG1 D2E7 badano również dla wywołanej rhTNFa ekspresji dwóch innych cząsteczek adhezyjnych, ICAM-1 i VCAM-1. Ponieważ krzywa miareczkowania rhTNFa dla ekspresji ICAM-1 w 16 godzinie była bardzo podobna do krzywej ekspresji ELAM-1, to samo stężenie rhTNFa zastosowano w doświadczeniach nad neutralizacją przeciwciałem. HUVEC inkubowano z rhTNF w obecności różnych stężeń D2E7 w inkubatorze CO2 w temperaturze 37°C przez 16 godzin, zaś ekspresję ICAM-1 mierzono przeciwciałem mysim przeciwko ICAM-1 i przeciwciałem owczym przeciw
125 mysim przeciwciałom, znakowanym 125I. Wykonano dwa niezależne doświadczenia i obliczono wartości IC50. Niespokrewnione przeciwciało IgG1 nie hamowało ekspresji ICAM-1.
Procedura doświadczalna w celu badania ekspresji VCAM-1 była identyczna co procedura badania ekspresji ELAM-1 z takim wyjątkiem, że zamiast MAb przeciwko ELAM-1 zastosowano MAb przeciwko VCAM-1. Wykonano trzy niezależne doświadczenia i obliczono wartości IC50. Niespokrewnione ludzkie przeciwciało IgG1 nie hamowało ekspresji VCAM-1.
Wyniki podsumowano w tabeli 12.
PL 193 499 B1
Tabela 12
Zahamowanie ekspresji ICAM-1 i VCAM-1 przez IgG1D2E7
Zahamowanie ICAM-1 IC50 [M]
Doświadczenie IC50 [M] Doświadczenie IC50 [M]
1 1,84 x 10-10 1 1,03 x 10-10
2 2,49 x 10-10 2 9,26 x 10-11
3 1,06 x 10-10
Średnia 2,17 ± 0,46 x1010 Średnia 1,01 ± 0,01 x 10-10
Doświadczenia te przedstawiają, że traktowanie pierwotnych ludzkich komórek śródbłonka żyły pępowinowej przy użyciu rhTNF prowadzi do optymalnej ekspresji cząsteczek adhezyjnych: ELAM-1 i VCAM-1 po 4 godzinach, i maksymalnej nadregulowanej ekspresji ICAM-1 po 16 godzinach. D2E7 było zdolne do zahamowania ekspresji trzech cząsteczek adhezyjnych w sposób zależny od dawki.
Wartości IC50 dla zahamowania ELAM-1, ICAM-1 i VCAM-1 wynosiły, odpowiednio, 1,85 x 10-10,
-10 -10
2,17x 10-10 i 1,01 x 10-10 M. Wartości te są bardzo podobne, co wskazuje na podobne wymagania co do dawki sygnału aktywacji ze strony rhTNF do wywołania ekspresji ELAM-1, ICAM-1 i VCAM-1. Co ciekawe, D2E7 było równie skuteczne w dłuższym teście zahamowania ekspresji ICAM-1. Test zahamowania ICAM-1 wymagał 16 godzin inkubacji rhTNF z D2E7 z HUVEC w porównaniu z 4 godzinami dla testu zahamowania ELAM-1 i VCAM-1. Ponieważ D2E7 ma powolne tempo odłączania rhTNF, można sobie wyobrazić, że podczas 16 godzinnej inkubacji nie występowało istotne współzawodnictwo o receptor dla TNF na HUVEC.
D. Neutralizacja hTNFa in vivo
W celu wykazania skuteczności D2E7 w hamowaniu aktywności hTNFa in vivo zastosowano trzy różne układy in vivo.
I. Zahamowanie efektu letalnego wywołanego TNF u myszy uczulonych D-galaktozaminą
Wstrzyknięcie rekombinowanego ludzkiego TNFa (rhTNFa) myszom uczulonym D-galaktozaminą powoduje u nich śmierć w ciągu24 godzin. Wykazano, że środki neutralizujące TNFa zapobiegają śmiertelności w tym modelu. W celu zbadania zdolności ludzkich przeciwciał przeciw hTNFa do neutralizacji hTNFa in vivo w tym modelu, myszom C57B1/6 wstrzyknięto różne stężenia D2E7-IgG1, albo białka kontrolnego, w PBS dootrzewnowe (i.p.). Myszy eksponowano 30 minut później na 1 μg rhTNFa i20mg D-galaktozaminy w PBS i.p. i obserwowano przez 24 godziny. Określono wstępnie, że te ilości rhTNFa i D-galaktozaminy wywołują około 80-90% śmiertelność u tych myszy.
Reprezentatywne wyniki przedstawione jako wykres słupkowy % przeżywalności w stosunku do stężenia przeciwciała pokazano na fig. 6. Czarne słupki przedstawiają D2E7, zaś kreskowane słupki przedstawiają MAK 195. Wstrzyknięcie 2,5-25 μg przeciwciała D2E7 na mysz chroniło zwierzęta przed efektem letalnym wywołanym TNFa. Wartość ED50 wynosiła około 1-2,5 μg/mysz. Przeciwciało stanowiące kontrolę pozytywną, MAK 195, miało podobną zdolność ochrony. Wstrzyknięcie D2E7 pod nieobecność rhTNFa nie wywoływało szkodliwych skutków dla myszy. Wstrzyknięcie nieswoistego ludzkiego przeciwciała IgG1nie zapewniało ochrony przed TNFa.
W drugim doświadczeniu 49 myszy podzielono na 7 równych grup. Każda grupa otrzymała różne dawki D2E7 30 minut przed otrzymaniem dawki LD80 mieszaniny rhTNF/D-galaktozamina (1,0 μg rhTNF i 20 mg D-galaktozaminy na mysz). Grupa kontrolna 7 otrzymała normalne ludzkie przeciwciało IgG1 kappa w dawce 25 μg/mysz. Myszy zbadano w 24 godziny później. Przeżywalność każdej grupy podsumowano niżej w tabeli 13.
Tabela 13
Przeżywalność w ciągu 24 godzin po leczeniu D2E7
Grupa Przeżywalność (żywe/wszystkie) Przeżywalność (%)
1 2 3
1 (bez przeciwciała) 0/7 0
2 (1 pg) 1/7 14
PL 193 499 B1 cd tabeli 13
1 2 3
3 (2,6 pg) 5/7 71
4 (5,2 pg) 6/7 86
5 (26 pg) 6/7 86
6 (26 pg; bez rhTNF) 7/7 100
7 (25 pg Hu IgG1) 1/7 14
II. Zahamowanie gorączki u królików wywołanej TNF
Skuteczność D2E7 w hamowaniu gorączki wywołanej rhTNF badano na królikach. Grupom po trzy samice królików NZW, ważącym około 2,5 kg, wstrzykiwano dożylnie D2E7, rhTNF i kompleksy immunologiczne D2E7 i rhTNF. Temperaturę w odbycie mierzono sondami termistorowymi na rejestratorze termicznym Kaye co minutę przez około 4 godziny. Rekombinowany ludzki TNF w roztworze soli wstrzykiwano w dawce 5 pg/kg, wywołując wzrost temperatury większy niż 0,4°C w około 45 minut po wstrzyknięciu. Sam preparat przeciwciał, w roztworze soli w dawce 138 pg/kg nie wywoływał wzrostu temperatury przez 140 minut po wstrzyknięciu. W dalszych doświadczeniach D2E7 lub reagent kontrolny (ludzkie IgG1lub nośnik) wstrzykiwano królikom i.v. w 15 minut po wstrzyknięciu rhTNF w roztworze soli w stężeniu 5 pg/kg i.v. Reprezentatywne wyniki kilku doświadczeń podsumowano w tabeli 14.
Tabela 14
Zahamowanie gorączki wywołanej rhTNFau królików przez D2E7
Wzrost temperatury*, °C Stosunek molowy Temperatura szczytowa
Dawka D2E7 (pg/kg) rhTNF rhTNF + D2E7 % zahamowania** D2E7:rhTNF minuty po rhTNF
14 0,53 0,25 53 1 60
24 0,43 0,13 70 1,6 40
48 0,53 0,03 94 3,3 50
137 0,53 0,00 100 9,5 60
792 0,80 0,00 100 55 60
* = temperatura szczytowa ** = % zahamowania = (1-{wzrost temperatury z rhTNFa + D2E7/wzrost temperatury z samym rhTNFa}) x 100
Dożylne traktowanie D2E7 w dawce 14 pg/kg częściowo hamowało reakcję pirogenną, w porównaniu z królikami traktowanymi samym roztworem soli. D2E7 podawane w dawce 137 pg/kg całkowicie hamowało reakcję pirogenną na rhTNF w tym samym doświadczeniu. W drugim doświadczeniu, D2E7 podawane w dawce 24 pg/kg również częściowo hamowało reakcję pirogenną w porównaniu z królikami traktowanymi samym roztworem soli. Stosunek molowy D2E7 do rhTNF wynosił w tym doświadczeniu 1/6:1. W trzecim doświadczeniu, D2E7 wstrzyknięte i.v. wdawce 48 pg/kg (stosunek molowy D2E7 do rhTNF = 3,3:1) całkowicie hamowało reakcję pirogenną w porównaniu z królikami traktowanymi kontrolną ludzką IgG1w roztworze soli w dawce 30 pg/kg. Wkońcowym doświadczeniu, króliki traktowane D2E7 (792 pg/kg) w bardzo wysokim stosunku molowym do rhTNF (55:1) nie wykazały żadnego wzrostu temperatury w ciągu 4 godzin obserwacji. Traktowanie królików komleksami immunologicznymi wytworzonymi z mieszaniny D2E7 i rhTNF przez inkubację w temperaturze 37°C przez godzinę w stosunku molowym 55:1, bez późniejszego podawania rhTNFa również nie wywołało żadnego wzrostu temperatury w tym samym doświadczeniu.
III. Zapobieganie wystąpieniu zapalenia wielostawowego u transgenicznych myszy Tg197
Wpływ D2E7 na rozwój choroby badano na modelu zapalenia stawów u myszy transgenicznych. Wytworzono myszy transgeniczne (Tg197), które eksprymują ludzki TNF typu dzikiego (zmodyfikowany w regionie 3' poza sekwencją kodującą), i myszy te zapadały na przewlekłe zapalenie wielostawowe ze 100% częstością występowania w wieku 4-7 tygodni (patrz, EMBO J (1991) 10:40254031, dalszy opis modelu Tg197).
PL 193 499 B1
Zwierzęta transgeniczne zidentyfikowano metodą PCR w wieku 3 dni. Mioty zwierząt transgenicznych podzielono na sześć grup. Myszy transgeniczne zweryfikowano metodą analityczną hybrydyzacji „slot-blot w 15 dniu życia. Protokoły terapii dla sześciu grup były następujące: grupa 1= bez leczenia; grupa 2 = roztwór soli (nośnik), grupa 3 = D2E7 1,5 μg/g, grupa 4 = D2E7 15 μg/g, grupa 5 = D2E7 30 μg/g, i grupa 6 = kontrola izotypu IgG1 30 μg/g. Do badania włączono również miot nietransgeniczny jako kontrolę ((grupa 7 = nietransgeniczne, bez terapii). Każda grupa otrzymywała trzy wstrzyknięcia i.p. tygodniowo, określonej terapii. Wstrzyknięcia prowadzono przez 10 tygodni. Każdego tygodnia u każdego zwierzęcia rejestrowano makroskopowe zmiany w morfologii stawów. W wieku 10 tygodni wszystkie myszy uśmiercono i pobrano tkanki mysie do formaliny. Wykonano badanie mikroskopowe tkanek.
Na początku każdego tygodnia wszystkie myszy indywidualnie ważono. W tym samym czasie dokonywano pomiaru rozmiarów stawów (w mm), jako miarę ciężkości choroby. Wielkość stawów oceniano jako średnią z trzech pomiarów na prawym tylnym stawie skokowym przy użyciu mikrometru. Oceny artretyzmu dokonywano co tydzień w następujący sposób: 0 = brak artretyzmu (normalny wygląd i zgięcie); + = łagodny artretyzm (zniekształcenie stawu); ++ = umiarkowany artretyzm (obrzęk, deformacja stawu) i +++ = ciężki artretyzm (zesztywnienie stawu wykrywane podczas zginania i ciężkie upośledzenie możliwości poruszania). Oceny histopatologicznej w oparciu o barwienie skrawków stawów hematoksyliną/eozyną dokonywano w następujący sposób: 0 = brak wykrywalnej choroby; 1= proliferacja błony maziowej; 2= znaczne zgrubienie maziówki i 3= zniszczenie chrząstki i erozja kości.
Wpływ leczenia D2E7 na średnią wielkość stawu transgenicznych myszy Tg197 pokazano na fig. 9. Oceny histopatologiczne i artretyzmu myszy transgenicznych Tg197 w 11 tygodniu życia podsumowano niżej w tabeli 15.
Tabela 15
Wpływ D2E7 na ocenę histopatologiczną i ocenę artretyzmu u myszy Tg197
Grupa Leczenie Ocena histopatologiczna Ocena artretyzmu
1 żadne 3 (7/7) +++ (7/7)
2 roztwór soli 3 (8/8) +++ (8/8)
6 kontrola IgG1 3 (9/9) +++ (7/9)
3 D2E7 1,5 pg/g 0 (6/8) 0 (8/8)
4 D2E7 15 pg/g 0 (7/8) 0 (8/8)
5 D2E7 30 pg/g 0 (8/8) 0 (8/8)
Doświadczenie to pokazało, że przeciwciało D2E7 ma zdecydowanie korzystny wpływ na transgeniczne myszy eksprymujące ludzki TNF typu dzikiego (Tg197) bez widocznego artretyzmu w trakcie badania.
E. NeutralizacjaTNFainnych gatunków przez D2E7
Swoistość wiązania D2E7 badano przez pomiar jego zdolności do neutralizacji czynnika martwicy nowotworu różnych gatunkównaczelnych oraz myszy, przy użyciu testu cytotoksyczności L929 (jak to opisano w przykładzie 4, podrozdział A, wyżej). Wyniki podsumowano w tabeli 16 poniżej.
Tabela 16
Zdolność D2E7 do neutralizacji TNF różnych gatunków w teście L929
TNFa* Źródło IC50 dla neutralizacji przez D2E7 [M]**
1 2 3
człowiek rekombinowany 7,8 x 10-11
szympans PBMC pobudzone LPS 5,5 x 10-11
pawian rekombinowany 6,0 x 10-11
marmozeta PBMC pobudzone LPS 4,0 x 10-10
cynomolgus PBMC pobudzone LPS 8,0 x 10-11
PL 193 499 B1 cd tabeli16
1 2 3
rezus PBMC pobudzone LPS 3,0 x 10-11
pies WBC pobudzone LPS 2,2 x 10-10
świnia rekombinowany 1,0 x 10-7
mysz rekombinowany >1,0x 10-11
Wyniki w tabeli 16 przedstawiają, że D2E7 może neutralizować aktywność TNFa pięciu gatunków naczelnych w sposób równoważny jak dla ludzkiego TNFa i ponadto może neutralizować aktywność psiego TNFa (około 10-krotnie słabiej niż ludzkiego TNFa) oraz świńskiego i mysiego TNFa (około 1000-krotnie słabiej niż ludzkiego TNFa). Ponadto, wiązanie D2E7 z rhTNFa w roztworze nie było hamowane przez inne cytokiny, takie jak limfotoksyna (TNFb), IL-1a, IL-1b, IL-2, IL-4, IL-6, IL-8, IFNg i TGFb, co wskazuje, że D2E7 jest swoisty wobec ligandu TNFa.
F. Brak uwalniania cytokin przez pełną krew ludzką inkubowaną z D2E7
W tym przykładzie badano zdolność D2E7 do wywołania wydzielania cytokin albo złuszczania cząsteczek powierzchniowych przez komórki normalnej krwi ludzkiej. D2E7 inkubowano z rozcieńczoną krwią pełną pobraną od trzech różnych normalnych dawców w różnych stężeniach przez 24 godziny. W tym samym czasie przeprowadzono kontrolę pozytywną z LPS w stężeniu, które jak wcześniej określono, pobudza immunokompetentne komórki krwi do wydzielania cytokin. Supernatanty pobierano i badano w panelu 10 zestawów ELISA na rozpuszczalne cytokiny, receptory i cząsteczki adhezyjne: IL-1a, IL-1b, antagonista receptora IL-1, IL-6, IL-8, TNFa, rozpuszczalny receptor I TNF, rozpuszczalny receptor II TNF, rozpuszczalna ICAM-1 i rozpuszczalna selektyna E. Nie wykryto istotnych ilości cytokin albo złuszczonych cząsteczek powierzchniowych w wyniku inkubacji z D2E7 w stężeniu do 343 μg/ml. Hodowle kontrolne bez dodania przeciwciała również nie dały wykrywalnych ilości cytokin, podczas gdy hodowla z kontrolą LPS dała podwyższone wartości w wyższych zakresach ilości pikogramowych i niższych nanogramowych. Wyniki te wskazują, że D2E7 nie wywołuje wydzielenia cytokin i złuszczenia białek powierzchniowych komórek krwi powyżej wartości normalnie spotykanych w hodowlach ex vivo.
Częścią ujawnienia jest lista sekwencji, której zawartość podsumowano w poniższej tabeli:
SEQ ID NO: Łańcuch przeciwciała Region Rodzaj sekwencji
1 2 3 4
1 D2E7 VL aminokwas
2 D2E7 VH aminokwas
3 D2E7 VL CDR3 aminokwas
4 D2E7 VH CDR3 aminokwas
5 D2E7 VLCDR2 aminokwas
6 D2E7 VH CDR2 aminokwas
7 D2E7 VL CDR1 aminokwas
8 D2E7 VH CDR1 aminokwas
9 2SD4 VL aminokwas
10 2SD4 VH aminokwas
11 2SD4 VL CDR3 aminokwas
12 EPB12 VL CDR3 aminokwas
13 VL10E4 VL CDR3 aminokwas
14 VL100A9 VL CDR3 aminokwas
15 VLL100D2 VL CDR3 aminokwas
PL 193 499 B1 cd tabeli
1 2 3 4
16 VLLOF4 VL CDR3 aminokwas
17 LOE5 VL CDR3 aminokwas
18 VLLOG7 VL CDR3 aminokwas
19 VLLOG9 VL CDR3 aminokwas
20 VLLOH1 VL CDR3 aminokwas
21 VLLOH10 VL CDR3 aminokwas
22 VL1B7 VL CDR3 aminokwas
23 VL1C1 VL CDR3 aminokwas
24 VL0.1F4 VL CDR3 aminokwas
25 VL0.1H8 VL CDR3 aminokwas
26 LOE7.A VL CDR3 aminokwas
27 2SD4 VH CDR3 aminokwas
28 VH1B11 VH CDR3 aminokwas
29 VH1D8 VH CDR3 aminokwas
30 VH1A11 VH CDR3 aminokwas
31 VH1B12 VH CDR3 aminokwas
32 VH1E4 VH CDR3 aminokwas
33 VH1F6 VH CDR3 aminokwas
34 3C-H2 VH CDR3 aminokwas
35 VH1-D2.N VH CDR3 aminokwas
36 D2E7 VL kwas nukleinowy
37 D2E7 VH kwas nukleinowy
PL 193 499 B1
LISTA SEKWENCJI (1) INFORMACJE OGÓLNE:
(i) ZGŁASZAJĄCY:
(A) NAZWA: BASF Aktiengesellschaft (B) ULICA: Carl-Bosch Str. 38 (C) MIASTO: 67056 Ludwigshafen (D) STAN: Rheinland-Pfalz (E) KRAJ: Niemcy (ii) TYTUŁ WYNALAZKU: przeciwciała wiążące TNFa (iii) LICZBA SEKWENCJI: 37 (iv) ADRES DO KORESPONDENCJI:
(A) ADRESAT: LAHIVE S COCKFIELD (B) ULICA: 60 State Street, suitę 510 (C) MIASTO: Boston.
(D) STAN: Massachusetts (E) KRAJ: USA < F> KOD: 02109-1875 (v) POSTAĆ MOŻLIWA DO ODCZYTANIA PRZEZ KOMPUTER:
(A) RODZAJ NOŚNIKA: Floppy disk (B) KOMPUTER: IBM PC compatible (C) SYSTEM OPERACYJNY: PC-DOS/MS-DOS (D) OPROGRAMOWANIE: Patentln Release #1.0, Version #1.25 (Ti) DANE DOTYCZĄCE OBECNEGO ZGŁOSZENIA:
(A) NUMER ZGŁOSZENIA:
(B) DATA ZGŁOSZENIA:
(C) KLASYFIKACJA:
(rii) DANE DOTYCZĄCE POPRZEDNIEGO ZGŁOSZENIA:
(A) NUMER ZGŁOSZENIA: US 06/599,22 6 (B) DATA ZGŁOSZENIA: 09-FEB-1996 (C) KLASYFIKACJA:
(τϋ) DANE DOT. POPRZEDNIEGO ZGŁOSZENIA:
(A) NUMER ZGŁOSZENIA: US 60/031,476 (B) DATA ZGŁOSZENIA: 25-N0V-1996 (C) KLASYFIKACJA:
(viii) INFORMACJE DOTYCZĄCE RZECZNKIA:
(A) NAZWA: DeConti, Giulio A., Jr.
(B) NUMER REJESTRACYJNY: 31,503 (C) NUMER SPRAWY: BBI-043CPPC (ix) INFORMACJE TELEKOMMUNIKACY JNE:
(A) TELEFONE: (617)227-7400 (B| TELEFAX: (617)227-5941 (2) INFORMACJA DLA IDENTYFIKATORA SEKW. NR: 1 li) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(Al DŁUGOŚĆ: 107 aminokwasów (B) RODZAJ: aminokwas (D) TOPOLOGIA: liniowa
PL 193 499 B1 (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: peptyd (v) RODZAJ FRAGMENTU: wewnętrzny (xi) OPIS SEKWENCJI: IDENTYFIKATOR SERW. NR:1
Asp 1 Ile Gin Met Thr 5 Gin Ser Pro Ser Ser 10 Leu Ser Ala Ser Val 15 Gly
Asp Arg Val Thr 20 Ile Thr Cys Arg Ala 25 Ser Gin Gly Ile Arg 30 Asn Tyr
Leu Ala Trp 35 Tyr Gin Gin Lys Pro 40 Gly lys Ala Pro Lys 45 Leu Leu Ile
Tyr Ala 50 Ala Ser Thr Leu Gin 55 Ser Gly Val Pro Ser 60 Arg Phe Ser Gly
Ser 65 Gly Ser Gly Thr Asp 70 Phe Thr Leu Thr Ile 75 Ser Ser Leu Gin Pro 80
Glu Asp Val Ala Thr 85 Tyr Tyr Cys Gin Arg 90 Tyr Asn Arg Ala Pro 95 Tyr
Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 (2) INFORMACJA DLA IDENTYFIKATORA SEKW. NR:2
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI: (A) DŁUGOŚĆ: 121 aminokwasów (B) RODZAJ: aminokwas
(D) TOPOLOGIA: liniowa
(ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: peptyd
(V) RODZAJ FRAGMENTU: wewnętrzny
(xi) OPIS SEKWENCJI: IDENTYFIKATOR SEKW. NR:2:
Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr
20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Thr Trp Asn Ser Gly His Ile Asp Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Glu Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
PL 193 499 B1
Ala Lys Val Ser Tyr Leu Ser Thr Ala Ser Ser Leu Asp Tyr Trp Gly 100 105 110
Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 .
(2) INFORMACJA DLA IDENTYFIKATORA SEKW. NR: 3 :
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 9 aminokwasów (B) RODZAJ: aminokwas (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: peptyd (v) RODZAJ FRAGMENTU: wewnętrzny (ix) CECHA:
(A) NAZWA/KLUCZ: Miejsce zmodyfikowane (B) LOKALIZACJA: 9 (D) INNE INFORMACJE: /uwaga— Xaa to Thr lub Ala (xi) OPIS SEKWENCJI: IDENTYFIKATOR SEKW. NR:3:
Gin Arg Tyr Asn Arg Ala Pro Tyr Xaa 1 5 .
(2) INFORMACJA DLA IDENTYFIKATORA SEKW. NR: 4:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 12 aminokwasów (B) RODZAJ: aminokwas (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: peptyd (v) RODZAJ FRAGMENTU: wewnętrzny (ix) CECHA:
(A) NAZWA/KLUCZ: Miejsce zmodyfikowane (B) LOKALIZACJA: 12 (D) INNE INFORMACJE: /uwaga— Xaa to Tyr lub Asn (xi) OPIS SEKWENCJI: IDENTYFIKATOR SEKW. NR: 4:
Val Ser Tyr Leu Ser Thr Ala Ser Ser Leu Asp Xaa 1 5 10 (2) INFORMACJA DLA IDENTYFIKATORA SEKW. NR:5:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 7 aminokwasów (B) RODZAJ: aminokwas (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: peptyd
PL 193 499 B1 (ν) RODZAJ FRAGMENTU: wewnętrzny (xi) OPIS SEKWENCJI: IDENTYFIKATOR SEKW. NR:5:
Ala Ala Ser Thr Leu Gin Ser
5 (2| INFORMACJA DLA IDENTYFIKATORA SEKW. NR: 6:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 17 aminokwasów (B) RODZAJ: aminokwas (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: peptyd (v) RODZAJ FRAGMENTU: wewnętrzny (Xi) OPIS SEKWENCJI: IDENTYFIKATOR SEKW. NR: 6:
Ala Ile Thr Trp Asn Ser Gly His Ile Asp Tyr Ala Asp Ser Val Glu 1 5 10 15 (2) INFORMACJA DLA IDENTYFIKATORA SEKW. NR:7:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 11 amino kwasów (B) RODZAJ: aminokwas (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: peptyd (v) RODZAJ FRAGMENTU: wewnętrzny (xi) OPIS SEKWENCJI: IDENTYFIKATOR SEKW. NR:7
Arg Ala Ser Gin Gly Ile Arg Asn Tyr Leu Ala 15 io
12) INFORMACJA DLA IDENTYFIKATORA SEKW. NR:8:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 5 aminokwasów (B) RODZAJ: aminokwas (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: peptyd (v) RODZAJ FRAGMENTU: wewnętrzny (xi) OPIS SEKWENCJI: IDENTYFIKATOR SEKW. NR:8:
Asp Tyr Ala Met His 1 5
PL 193 499 B1 (2) INFORMACJA DLA IDENTYFIKATORA SEKW. NR:9:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 107 aminokwasów (B) RODZAJ: aminokwas (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: peptyd (v) RODZAJ FRAGMENTU: wewnętrzny (XX) OPIS SEKWENCJI: IDENTYFIKATOR SEKW. NR: 9:
Asp Ile Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Ile Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Gly Ile Arg Asu Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gin Pro
65 70 75 30
Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Lys Tyr Asn Ser Ala Pro Tyr
35 90 95
Ala Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
(2) INFORMACJA DLA IDENTYFIKATORA SEKW. NR: 10:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 121 aminokwasów (B) RODZAJ: aminokwas (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: peptyd (v> RODZAJ FRAGMENTU: wewnętrzny (xi) OPIS SEKWENCJI: IDENTYFIKATOR SEKW. NR:10:
Gin 1 Val Gin Leu Val 5 Glu Ser Gly Gly Gly 10 Leu Val Gin Pro Gly 15 Arg
Ser Leu Arg Leu 20 Ser Cys Ala Ala Ser 25 Gly Phe Thr Phe Asp 30 Asp Tyr
Ala Met His 35 Trp Val Arg Gin Ala 40 Pro Gly Lys Gly Leu 45 Asp Trp Val
Ser Ala Ile Thr Trp Asn Ser Gly His Ile Asp Tyr Ala Asp Ser Val
PL 193 499 B1
55 60
Glu 65 Gly Arg Phe Ala Val 70 Ser Arg Asp Asn Ala 75 Lys Asn Ala Leu Tyr 80
Leu Gin Met Asn Ser 85 Leu Arg Pro Glu Asp 90 Thr Ala Val Tyr Tyr 95 Cys
Thr Lys Ala Ser 100 Tyr Leu Ser Thr Ser 105 Ser Ser Leu Asp Asn 110 Trp Gly
Gin Gly Thr 115 Leu Val Thr Val Ser 120 Ser
(2| INFORMACJA DLA IDENTYFIKATORA SEKW. NR: 11:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 9 aminokwasów (B) RODZAJ: aminokwas (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: peptyd (v) RODZAJ FRAGMENTU: wewnętrzny (xi) OPIS SEKWENCJI: IDENTYFIKATOR SEKW. NR: 11:
Gin lys Tyr Asn Ser Ala Pro Tyr Ala 1 5 (2) INFORMACJA DLA IDENTYFIKATORA SEKW. NR: 12:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 9 aminokwasów (B) RODZAJ: aminokwas (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: peptyd (v) RODZAJ FRAGMENTU: wewnętrzny (xi) OPIS SEKWENCJI: IDENTYFIKATOR SEKW. NR: 12:
Gin Lys Tyr Asn Arg Ala Pro Tyr Ala 1 5 (2) INFORMACJA DLA IDENTYFIKATORA SEKW. NR: 13:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 9 aminokwasów (B) RODZAJ: aminokwas (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: peptyd (v) RODZAJ FRAGMENTU: wewnętrzny
PL 193 499 B1 (xi) OPIS SEKWENCJI: IDENTYFIKATOR SEKW. NR:13:
Gin Lys Tyr Gin Arg Ala Pro Tyr Thr
5 (2) INFORMACJA DLA IDENTYFIKATORA SEKW. NR: 14:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 9 aminokwasów (B) RODZAJ: aminokwas (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: peptyd (V) RODZAJ FRAGMENTU: wewnętrzny (xi) OPIS SEKWENCJI: IDENTYFIKATOR SEKW. NR: 14:
Gin Lys Tyr Ser Ser Ala Pro Tyr Thr 1 S (2) INFORMACJA DLA IDENTYFIKATORA SEKW. NR: 15:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 9 aminokwasów (B) RODZAJ: aminokwas (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: peptyd (v) RODZAJ FRAGMENTU: wewnętrzny (xi) OPIS SEKWENCJI: IDENTYFIKATOR SEKW. NR: 15
Gin Lys Tyr Asn Ser Ala Pro Tyr Thr 1 5 (21 INFORMACJA DLA IDENTYFIKATORA SEKW. NR: 16:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 9 aminokwasów (E) RODZAJ: aminokwas (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: peptyd (v) RODZAJ FRAGMENTU: wewnętrzny (xi) OPIS SEKWENCJI: IDENTYFIKATOR SEKW. NR:16:
Gin Lys Tyr Asn Arg Ala Pro Tyr Thr 1 5 (2) INFORMACJA DLA IDENTYFIKATORA SEKW. NR: 17 (i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
PL 193 499 B1 (A) DŁUGOŚĆ: 9 aminokwasów (B) RODZAJ: aminokwas (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: peptyd (v) RODZAJ FRAGMENTU: wewnętrzny (Ki) OPIS SEKWENCJI: IDENTYFIKATOR SEKW. NR: 17
Gin Lys Tyr Asn Ser Ala Pro Tyr Tyr 1 5 (2) INFORMACJA DLA IDENTYFIKATORA SEKW. NR: 18:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 9 aminokwasów (B) RODZAJ: aminokwas (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: peptyd {V) RODZAJ FRAGMENTU: wewnętrzny (xi) OPIS SEKWENCJI: IDENTYFIKATOR SEKW. NR: 18:
Gin Lys Tyr Asn Ser Ala Pro Tyr Asn 1 5 (2) INFORMACJA DLA IDENTYFIKATORA SEKW. NR:19:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 9 aminokwasów IB) RODZAJ: aminokwas (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: peptyd (v) RODZAJ FRAGMENTU: wewnętrzny |xi) OPIS SEKWENCJI: IDENTYFIKATOR SEKW. NR: 19
Gin Lys Tyr Thr Ser Ala Pro Tyr Thr 1 5 (2) INFORMACJA DLA IDENTYFIKATORA SEKW. NR: 20:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 9 aminokwasów (B) RODZAJ: aminokwas (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: peptyd (v) RODZAJ FRAGMENTU: wewnętrzny (xi) OPIS SEKWENCJI: IDENTYFIKATOR SEKW. NR:20
PL 193 499 B1
Gin lys Tyr Asn Arg Ala Pro Tyr Asn 1 5 (2) INFORMACJA DLA IDENTYFIKATORA SEKW. NR:2I:
(i) CHARAKTERYSTYKA. SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 9 aminokwasów (B) RODZAJ: aminokwas (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: peptyd (vj RODZAJ FRAGMENTU: wewnętrzny (xi| OPIS SEKWENCJI: IDENTYFIKATOR SEKW. NR:21:
Gin Lys Tyr Asn Ser Ala Ala Tyr Ser 1 5 (2) INFORMACJA DLA IDENTYFIKATORA SEKW. NR: 22:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 9 aminokwasów (B) RODZAJ: aminokwas (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: peptyd (v) RODZAJ FRAGMENTU: wewnętrzny (xi) OPIS SEKWENCJI: IDENTYFIKATOR SEKW. NR:22:
Gin Gin Tyr Asn Ser Ala Pro Asp Thr 1 5 (2) INFORMACJA DLA IDENTYFIKATORA SEKW. NR:23:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 9 aminokwasów (B, RODZAJ: aminokwas (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: peptyd (v) RODZAJ FRAGMENTU: wewnętrzny (xi) OPIS SEKWENCJI: IDENTYFIKATOR SEKW. NR:23:
Gin Lys Tyr Asn Ser Asp Pro Tyr Thr 1 5 (2) INFORMACJA DLA IDENTYFIKATORA SEKW. NR:24 (i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 9 aminokwasów
PL 193 499 B1 (B) RODZAJ: aminokwas (D) TOPOLOGIA: liniowa lii) RODZAJ CZĄSTECZKI: peptyd (v) RODZAJ FRAGMENTU: wewnętrzny (xi) OPIS SEKWENCJI: IDENTYFIKATOR SEKW. NR: 24:
Gin Lys Tyr Ile Ser Ala Pro Tyr Thr
5 (2) INFORMACJA DLA IDENTYFIKATORA SEKW. NR:25:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 9 aminokwasów (B) RODZAJ: aminokwas (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: peptyd (v) RODZAJ FRAGMENTU: wewnętrzny (xi) OPIS SEKWENCJI: IDENTYFIKATOR SEKW. NR:25:
Gin Lys Tyr Asn Arg Pro Pro Tyr Thr 1 5 (2) INFORMACJA DLA IDENTYFIKATORA SEKW. NR:26:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 9 aminokwasów (B) RODZAJ: aminokwas (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: peptyd (v) RODZAJ FRAGMENTU: wewnętrzny (xi) OPIS SEKWENCJI: IDENTYFIKATOR SEKW. NR:26
Gin Arg Tyr Asn Arg Ala Pro Tyr Ala 1 5 (2) INFORMACJA DLA IDENTYFIKATORA SEKW. NR:27:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 12 aminokwasów (B) RODZAJ: aminokwas (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: peptyd (v) RODZAJ FRAGMENTU: wewnętrzny (Xi) OPIS SEKWENCJI: IDENTYFIKATOR SEKW. NR: 27
PL 193 499 B1
Ala Ser Tyr Leu Ser Thr Ser Ser Ser Leu Asp Asn 1 5 10 (2) INFORMACJA DLA IDENTYFIKATORA SEKW. NR:28:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 12 aminokwasów (B) RODZAJ: aminokwas (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: peptyd (v) RODZAJ FRAGMENTU: wewnętrzny (xi) OPIS SEKWENCJI: IDENTYFIKATOR SEKW. NR:28:
Ala Ser Tyr Leu Ser Thr Ser Ser Ser Leu Asp Lys 1 5 io (2) INFORMACJA DLA IDENTYFIKATORA SEKW. NR:29:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 12 aminokwasów (B) RODZAJ: aminokwas (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: peptyd (v) RODZAJ FRAGMENTU: wewnętrzny (xi) OPIS SEKWENCJI: IDENTYFIKATOR SEKW. NR:29:
Ala Ser Tyr Leu Ser Thr Ser Ser Ser Leu Asp Tyr 1 5 io (2) INFORMACJA DLA IDENTYFIKATORA SEKW. NR: 30:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 12 aminokwasów (B) RODZAJ: aminokwas (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: peptyd (v) RODZAJ FRAGMENTU: wewnętrzny (Xi) OPIS SEKWENCJI: IDENTYFIKATOR SEKW. NR:30:
Ala Ser Tyr Leu Ser Thr Ser Ser Ser Leu Asp Asp 1 5 10 (2) INFORMACJA DLA IDENTYFIKATORA SEKW. NR:31 (i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 12 aminokwasów (B) RODZAJ: aminokwas
PL 193 499 B1 (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: peptyd (v) RODZAJ FRAGMENTU: wewnętrzny (xi) OPIS SEKWENCJI: IDENTYFIKATOR SEKW. NR: 31:
Ala Ser Tyr Leu Ser Thr Ser Phe Ser Leu Asp Tyr 15 10 (2) INFORMACJA DLA IDENTYFIKATORA SEKW. NR:32:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 12 aminokwasów (B) RODZAJ: aminokwas (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: peptyd (v) RODZAJ FRAGMENTU: wewnętrzny (xi) OPIS SEKWENCJI: IDENTYFIKATOR SEKW. NR:32:
Ala Ser Tyr Leu Ser Thr Ser Ser Ser Leu His Tyr 1 5 10 (2) INFORMACJA DLA IDENTYFIKATORA SEKW. NR: 33:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 12 aminokwasów IB) RODZAJ: aminokwas (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: peptyd (v) RODZAJ FRAGMENTU: wewnętrzny (xi) OPIS SEKWENCJI: IDENTYFIKATOR SEKW. NR:33:
Ala Ser Phe Leu Ser Thr Ser Ser Ser Leu Glu Tyr 1 5 io (2) INFORMACJA DLA IDENTYFIKATORA SEKW. NR:34:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 12 aminokwasów (B) RODZAJ: aminokwas (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: peptyd (v) RODZAJ FRAGMENTU: wewnętrzny (xi) OPIS SEKWENCJI: IDENTYFIKATOR SEKW. NR:34: Ala Ser Tyr Leu Ser Thr Ala Ser Ser Leu Glu Tyr
PL 193 499 B1
5 10 (2] INFORMACJA DLA IDENTYFIKATORA SEKW. NR: 35:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 12 aminokwasów (B) RODZAJ: aminokwas (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: peptyd (v) RODZAJ FRAGMENTU: wewnętrzny (xi) OPIS SEKWENCJI: IDENTYFIKATOR SEKW. NR:35:
Val Ser Tyr Leu Ser Thr Ala Ser Ser Leu Asp Asn 15 io i 2) INFORMACJA DLA IDENTYFIKATORA SEKW. NR: 36:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 321 par zasad (B) RODZAJ: kwas nukleinowy (0) NICIOWOŚĆ: podwójna (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii] RODZAJ CZĄSTECZKI: cDNA (xi) OPIS SEKWENCJI: IDENTYFIKATOR SEKW. NR:36:
GACATCCAGA TGACCCAGTC TCCATCCTCC CTGTCTGCAT CTGTAGGGGA CAGAGTCACC 60
ATCACTTGTC GGGCAAGTCA GGGCATCAGA AATTACTTAG CCTGGTATCA GCAAAAACCA 120
GGGAAAGCCC CTAAGCTCCT GATCTATGCT GCATCCACTT TGCAATCAGG GCTCCCATCT 180
CGGTTCAGTG GCAGTGGATC TGGGACAGAT TTCACTCTCA CCATCAGCAG CCTACAGCCT 240
GAAGATGTTG CAACTTATTA CTGTCAAAGG TATAACCGTG CACCGTATAC TTTTGGCCAG 300
GGGACCAAGG TGGAAATCAA A (2) INFORMACJA DLA IDENTYFIKATORA SEKW. NR 37:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 363 par zasad (B) RODZAJ: kwas nukleinowy (C) NICIOWOŚĆ: podwójna (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: cDNA (xi) OPIS SEKWENCJI: IDENTYFIKATOR SEKW. NR:37:
GAGGTGCAGC TGGTGGAGTC TGGGGGAGGC TTGGTACAGC CCGGCAGGTC CCTGAGACTC 60
TCCTGTGCGG CCTCTGGATT CACCTTTGAT GATTATGCCA TGCACTGGGT CCGGCAAGCT 120
CCAGGGAAGG GCCTGGAATG GGTCTCAGCT ATCACTTGGA ATAGTGGTCA CATAGACTAT 180
GCGGACTCTG TGGAGGGCCG ATTCACCATC TCCAGAGACA ACGCCAAGAA CTCCCTGTAT 240
CTGCAAATGA ACAGTCTGAG AGCTGAGGAT ACGGCCGTAT ATTACTGTGC GAAAGTCTCG 300
TACCTTAGCA CCGCGTCCTC CCTTGACTAT TGGGGCCAAG GTACCCTGGT CACCGTCTCG 360
AGT 363
PL 193 499 B1

Claims (105)

  1. Zastrzeżenia patentowe
    1. Izolowane ludzkie przeciwciało, albo jego część wiążąca antygen, które wiążeTNFa i dysocjuje od ludzkiegoTNFa z Kd równą 1x 10-8 M albo mniej i stałą szybkości Koff równą 1x 10-3 s-1 albo mniej, jak określono metodą rezonansu plazmonów powierzchniowych i neutralizuje cytotoksyczność ludzkiegoTNFa w standardowym teście in vitroL929 z IC50 równą 1x 10-7 M albo mniej.
  2. 2. Izolowane ludzkie przeciwciało albo jego część wiążąca antygen, według zastrz. 1, znamienne tym, że dysocjuje od ludzkiegoTNFa ze stałą Koff równą 5 x 10-4 s-1 albo mniej.
  3. 3. Izolowane ludzkie przeciwciało albo jego część wiążąca antygen, według zastrz. 1, znamienne tym, że dysocjuje od ludzkiegoTNFa ze stałą Koff równą 1x 10-4 s-1 albo mniej.
  4. 4. Izolowane ludzkie przeciwciało albo jego część wiążąca antygen, według zastrz. 1, znamienne tym, że neutralizuje cytotoksyczność ludzkiegoTNFa w standardowym teście in vitroL929 zIC50 równą 1x 10-8 M albo mniej.
  5. 5. Izolowane ludzkie przeciwciało albo jego część wiążąca antygen, według zastrz. 1, znamienne tym, że neutralizuje cytotoksyczność ludzkiegoTNFa w standardowym teście in vitroL929 zIC50 równą 1x 10-9 M albo mniej.
  6. 6. Izolowane ludzkie przeciwciało albo jego część wiążąca antygen, według zastrz. 1, znamienne tym, że neutralizuje cytotoksyczność ludzkiegoTNFa w standardowym teście in vitroL929 zIC50 rów-10 ną 5 x 10-10 M albo mniej.
  7. 7. Izolowane ludzkie przeciwciało albo jego część wiążąca antygen, według zastrz. 1, znamienne tym, że jest przeciwciałem rekombinowanym albo jego częścią wiążącą antygen.
  8. 8. Izolowane ludzkie przeciwciało albo jego część wiążąca antygen, według zastrz. 1, znamienne tym, że hamuje wywołaną ludzkim TNFa ekspresję ELAM-1 na ludzkich komórkach śródbłonka żyły pępowinowej.
  9. 9. Ludzkie przeciwciało albo jego część wiążąca antygen według zastrz. 1, znamienne tym, że neutralizuje aktywność ludzkiego TNFa, ale nie neutralizuje aktywności ludzkiego TNFb.
  10. 10. Rekombinowane przeciwciało ludzkie, albo jego część wiążąca antygen, według zastrz. 9, znamienne tym, że neutralizuje także aktywność TNFa szympansa i co najmniej jednego dodatkowegoTNFa naczelnych wybranego z grupy składającej się zTNFa pawiana,TNFa marmozety,TNFa cynomolgusa iTNFa rezusa.
  11. 11. Rekombinowane przeciwciało ludzkie, albo jego część wiążąca antygen, według zastrz. 10, znamienne tym, że również neutralizuje aktywność TNFa psa.
  12. 12. Rekombinowane przeciwciało ludzkie, albo jego część wiążąca antygen, według zastrz. 10, znamienne tym, że również neutralizuje aktywność TNFa świni.
  13. 13. Kompozycja farmaceutyczna zawierająca substancję czynną i farmaceutycznie dopuszczalny nośnik, znamienna tym, że zawiera przeciwciało, albo jego część wiążącą antygen, określone wzastrz. 1, jako substancję czynną.
  14. 14. Kompozycja farmaceutyczna według zastrz. 13, znamienna tym, że ponadto zawiera co najmniej jeden dodatkowy środek terapeutyczny do leczenia choroby, w której aktywność TNFa jest szkodliwa.
  15. 15. Kompozycja farmaceutyczna według zastrz. 14, znamienna tym, że dodatkowy środek terapeutyczny jest wybrany z grupy obejmującej środki przeciwzapalne hamujące cytokiny, CDP571/BAY-10-3356, cA2, 75 kdTNFR-IgG, 55 kdTNFR-IgG, IDEC-CE9.1/SB 210396, DAB 486-IL-2, DAB 389-IL-2, Anti-Tac, IL-4, IL-10, agonistów IL-4, agonistów IL-10, IL-1RA, TNF-bp/s-TNFR, S284, R973401, MK-966, Iloprost, talidomid, środki pokrewne talidomidowi, kwas traneksamowy, T-614, prostaglandynę E1, teni-dap, meloksykam, piroksykam, indometacynę, inhibitory ICE, inhibitory zap-70, inhibitory lck, inhibitory VEGF, inhibitory VEGF-R, inhibitory TNF-konwertazy, przeciwciała przeciw IL-12, inhibitory interleukiny 11, inhibitory interleukiny 13, inhibitory interleukiny-17, penicylaminę, chlorambucyl, cyklofosfamid, globulinę antytymocytarną, przeciwciała przeciw CD4, CD5-toksyny, doustnie podawane peptydy, kolagen, disodową sól lobenzarytu, czynniki regulujące cytokiny HP228 i HP466, antysensowne fosforotionianowe oligodeoksynukleotydy ICAM-1, rozpuszczalny receptor 1 dopełniacza, orgoteinę, polisiarczan glikozoaminoglikanu, minocyklinę, przeciwciała przeciw IL2R, lipidy morskie, lipidy roślinne, auranofinę, fenylobutazon, kwas meklofenamowy, kwas flufenamowy, dożylną immunoglobulinę, zileuton, kwas mykofenolowy, takrolimus, sirolimus, amiprilos, kladribinę, azarybinę, budenozyd, czynnik wzrostu naskórka, aminosalicylany, 6-merkaptopurynę, metronidazol, inhibitory lipoksygenazy, mesalaminę, olsalazynę, balsalazyd, przeciwutleniacze, inhibitory trombok58
    PL 193 499 B1 sanu, antagonistów receptora IL-1, przeciwciała monoklonalne przeciw IL-1 b, przeciwciała monoklonalne przeciw IL-6, czynniki wzrostu, inhibitory elastazy, związki pirydynylo-imidazolu, prednizolonowe proleki skoniugowane zglukuronidem, deksametazon lub budezonid, prednizolonowe proleki skoniugowane z dekstranem, powolnie uwalnianą mesalazynę, ciprofloksacynę, lignokainę, prednizolon, cyklofosfamid, 4-aminopirydynę, tizanidynę, interferon b1a, interferon b1b, kopolimer 1, tlen hiperbaryczny, klabribinę, hipertoniczny roztwór soli, antybiotyki, ciągłą hemofiltrację, karbapenemy, antagonistów cytokin, takich jak TNFa, IL-1b, IL-8, SK&F 107647, czterowartościowy guanylohydrazon CNI1493, inhibitor szlaku czynnika tkankowego, PHP, czynniki chelatujące żelazo oraz chelaty, łącznie zkompleksem kwas dietylenotriaminopentaoctowy-żelazo (III), lizofilinę, PGG-glukan, apolipoproteinę A-1 rekonstytuowaną lipidami, chiralne kwasy hydroksamowe, przeciwciała przeciw endotoksynie, E5531, rBPI21, syntetyczne peptydydy przeciw endotoksynie, surfaktanty terapii zastępczej oraz przeciwciała przeciw IL-8.
  16. 16. Kompozycja farmaceutyczna według zastrz. 14, znamienna tym, że dodatkowym środkiem terapeutycznym jest metotreksat.
  17. 17. Kompozycja farmaceutyczna według zastrz. 14, znamienna tym, że dodatkowym środkiem terapeutycznym jest niesteroidowy środek przeciwzapalny.
  18. 18. Kompozycja farmaceutyczna według zastrz. 14, znamienna tym, że dodatkowym środkiem terapeutycznym jest chlorochina lub hydroksychlorochina.
  19. 19. Kompozycja farmaceutyczna według zastrz. 14, znamienna tym, że dodatkowy środek terapeutyczny jest wybrany z grupy obejmującej sulfasalazynę, złoto, kortykosteroidy, prednizon, leflunomid, naproksen, diklofenak, metyloprednizolon i azatioprynę.
  20. 20. Sposób hamowania aktywności ludzkiego TNFa in vitro, znamienny tym, że obejmuje kontaktowanie ludzkiegoTNFa z przeciwciałem, w wyniku czego aktywność ludzkiegoTNFa jest hamowana, przy czym przeciwciało jest izolowanym ludzkim przeciwciałem, albo jego częścią wiążącąantygen, które wiążeTNFa i dysocjuje od ludzkiegoTNFa z Kd równą 1x 10-8 M albo mniej i stałą szyb-3 -1 kości Koff równą 1 x 10-3 s-1 albo mniej, jak określono metodą rezonansu plazmonów powierzchniowych, oraz neutralizuje cytotoksyczność ludzkiego TNFa w standardowym teście in vitro L929 z IC50 równą 1x 10-7 M albo mniej.
  21. 21. Sposób według zastrz. 20, znamienny tym, że przeciwciało jest izolowanym ludzkim przeciwciałem, albo jego częścią wiążącą antygen, które ma następujące dodatkowe cechy charakterystyczne:
    a) ma domenę CDR3 łańcucha lekkiego obejmującą sekwencję aminokwasową SEQ ID NO:3, albo zmodyfikowaną na podstawie SEQ ID NO: 3 przez pojedyncze zastąpienie alaniną w pozycjach
    1, 4, 5, 7 lub 8albo przez jedno do pięciu konserwatywnych zastąpień aminokwasów w pozycjach 1,
    3, 4, 6, 7, 8 i/lub 9;
    b) madomenę CDR3 łańcucha ciężkiego obejmującą sekwencję aminokwasową SEQID NO: 4, albo zmodyfikowaną na podstawie SEQ ID NO:4 przez pojedyncze zastąpienie alaniną w pozycjach
    2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10 lub 11 albo przez jedno do pięciu konserwatywnych zastąpień aminokwasów w pozycjach 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10, 11 i/lub 12.
  22. 22. Sposób według zastrz. 20, znamienny tym, że przeciwciało jest izolowanym ludzkim przeciwciałem, albo jego częścią wiążącą antygen, o regionie zmiennym łańcucha lekkiego (LCVR) obejmującym sekwencję aminokwasową SEQ ID NO:1 i regionie zmiennym łańcucha ciężkiego (HCVR) obejmującym sekwencję aminokwasową SEQ ID NO:2.
  23. 23. Przeciwciało, albo jego część wiążąca antygen, określone w zastrz. 1do stosowania jako lek.
  24. 24. Przeciwciało, albo jego część wiążąca antygen, według zastrz. 23 do stosowania jako lek whamowaniu aktywności ludzkiego TNFa u człowieka cierpiącego na chorobę, w której aktywność TNFa jest szkodliwa.
  25. 25. Przeciwciało, albo jego część wiążąca antygen, według zastrz. 24 do stosowania w kombinacji z co najmniej jednym dodatkowym środkiem terapeutycznym.
  26. 26. Zastosowanie według zastrz. 25, znamienne tym, że dodatkowy środek terapeutyczny jest wybrany z grupy obejmującej środki przeciwzapalne hamujące cytokiny, CDP-571/BAY-10-3356,cA2, 75 kdTNFR-IgG, 55 kdTNFR-IgG, IDEC-CE9.1/SB 210396, DAB 486-IL-2, DAB 389-IL-2, Anti-Tac, IL4, IL-10, agonistów IL-4, agonistów IL-10, IL-1RA, TNF-bp/s-TNFR, S284, R973401, MK-966, Iloprost, talidomid, środki pokrewne talidomidowi, kwas traneksamowy, T-614, prostaglandynę E1, tenidap, meloksykam, piroksykam, indometacynę, inhibitory ICE, inhibitory zap-70, inhibitory lck, inhibitory VEGF, inhibitory VEGF-R, inhibitory TNF-konwertazy, przeciwciała przeciw IL-12, inhibitory interleukiny 11, inhibitory interleukiny 13, inhibitory interleukiny-17, penicylaminę, chlorambucyl, cyklofosfamid,
    PL 193 499 B1 globulinę antytymocytarną, przeciwciała przeciw CD4, CD5-toksyny, doustnie podawane peptydy, kolagen, disodową sól lobenzarytu, czynniki regulujące cytokiny HP228 i HP466, antysensowne fosforotionianowe oligodeoksynukleotydy ICAM-1, rozpuszczalny receptor 1 dopełniacza, orgoteinę, polisiarczan glikozoaminoglikanu, minocyklinę, przeciwciała przeciw IL2R, lipidy morskie, lipidy roślinne, auranofinę, fenylobutazon, kwas meklofenamowy, kwas flufenamowy, dożylną immunoglobulinę, zileuton, kwas mykofenolowy, takrolimus, sirolimus, amiprilos, kladribinę, azarybinę, budenozyd, czynnik wzrostu naskórka, aminosalicylany, 6-merkaptopurynę, metronidazol, inhibitory lipoksygenazy, mesalaminę, olsalazynę, balsalazyd, przeciwutleniacze, inhibitorytromboksanu, antagonistów receptora IL-1, przeciwciała monoklonalne przeciw IL-1b, przeciwciała monoklonalne przeciw IL-6, czynniki wzrostu, inhibitory elastazy, związki pirydynyloimidazolu, prednizolonowe proleki skoniugowane zglukuronidem, deksametazon lub budezonid, prednizolonowe proleki skoniugowane z dekstranem, powolnie uwalnianą mesalazynę, ciprofloksacynę, lignokainę, prednizolon, cyklofosfamid, 4-aminopirydynę, tizanidynę,interferon b1ainterferon b1b, kopolimer 1, tlen hiperbaryczny, klabribinę, hipertoniczny roztwór soli, antybiotyki, ciągłą hemofiltrację, karbapenemy, antagonistów cytokin, takich jak TNFa, IL-1b, IL-8, SK&F 107647, czterowartościowy guanylohydrazon CNI-1493, inhibitor szlaku czynnika tkankowego, PHP, czynniki chelatujące żelazo oraz chelaty, łącznie z kompleksem kwas dietylenotriaminopentaoctowy-żelazo (III), lizofilinę, PGG-glukan, apolipoproteinę A-1 rekonstytuowaną lipidami, chiralne kwasy hydroksamowe, przeciwciała przeciw endotoksynie, E5531, rBPI21, syntetyczne peptydydy przeciw endotoksynie, surfaktanty terapii zastępczej oraz przeciwciała przeciw IL-8.
  27. 27. Zastosowanie według zastrz. 25, znamienne tym, że dodatkowym środkiem terapeutycznym jest metotreksat.
  28. 28. Zastosowanie według zastrz. 25, znamienne tym, że do datkowym środkiem terapeutycznym jest niesteroidowy środek przeciwzapalny.
  29. 29. Zastosowanie według zastrz. 25, znamienne tym, że dodatkowym środkiem terapeutycznym jest chlorochina lub hydroksychlorochina.
  30. 30. Zastosowanie według zastrz. 25, znamienne tym, że dodatkowy środek terapeutyczny jest wybrany z grupy obejmującej sulfasalazynę, złoto, kortykosteroidy, prednizon, leflunomid, naproksen, diklofenak, metyloprednizolon i azatioprynę.
  31. 31. Zastosowanie izolowanego ludzkiego przeciwciała, albojego części wiążącej antygen, które wiążeTNFa i dysocjuje od ludzkiegoTNFa z Kd równą 1x 10-8 M albo mniej i stałą szybkości Koff równą 1x 10-3 s-1 albo mniej, jak określono metodą rezonansu plazmonów powierzchniowych i neutralizuje cytotoksyczność ludzkiegoTNFaw standardowym teście in vitroL929 z IC50równą 1x 10-7 M albo mniej, do wytwarzania leku do leczenia choroby, w której aktywnośćTNFa jest szkodliwa.
  32. 32. Zastosowanie według zastrz. 31, znamienne tym, że choroba jest wybrana spośród choroby zakaźnej, odrzucenia przeszczepu albo reakcji przeszczepu przeciwko gospodarzowi, choroby nowotworowej, płuc, serca, posocznicy, zapalenia kości i stawów, dnawego zapalenia stawów, alergii, stwardnienia rozsianego, autoimmunologicznej cukrzycy, autoimmunologicznego zapalenia błony naczyniowej oka, zespołu nerczycowego, chorób zapalnych kości, chorób resorpcyjnych kości, poalkoholowego zapalenia wątroby, wirusowego zapalenia wątroby, zaburzeń krzepnięcia, oparzeń, uszkodzenia poreperfuzyjnego, tworzenia bliznowca, tworzenia tkanki bliznowatej, gorączki, wstrząsu septycznego, wstrząsu endotoksycznego, posocznicy Gram-ujemnej, zespołu wstrząsu toksycznego, malarii, zapalenia opon mózgowych, kacheksji, AIDS, bakteryjnego zapalenia opon mózgowych, zespołu związanego z AIDS (ARC), wtórnej infekcji wirusem cytomegalii po przeszczepie, gorączki imięśniobóli z powodu infekcji i wtórnej kacheksji w wyniku infekcji, odrzucenia przeszczepu allogenicznego, stymulowania wzrostu nowotworu, wzmacniania potencjału przerzutowego oraz mediowania cytotoksyczności w chorobach nowotworowych, hamowania wzrostu nowotworu lub przerzutów, zespołu zaburzeń oddechowych dorosłych, płuca wstrząsowego, przewlekłej zapalnej choroby płuc, sarkoidozy płuc, zwłóknienia płuc, krzemicy, choroby zapalnej jelit, idiopatycznej choroby zapalnej jelit, wrzodziejącego zapalenia okrężnicy, niedokrwienia mięśnia sercowego, niewydolności mięśnia sercowego oraz zapalenia wątroby.
  33. 33. Zastosowanie według zastrz. 31, znamienne tym, że chorobą jest choroba jelit.
  34. 34. Zastosowanie według zastrz. 31, znamienne tym, że chorobą jest choroba Crohna.
  35. 35. Zastosowanie według zastrz. 31, znamienne tym, że chorobą jest choroba autoimmunologiczna.
  36. 36. Zastosowaniewedług zastrz. 31, znamienne tym, że chorobą jest reumatoidalne zapalenie stawów.
    PL 193 499 B1
  37. 37. Zastosowanie według zastrz. 31, znamienne tym, że chorobą jest zesztywniające zapalenie stawów kręgosłupa.
  38. 38. Zastosowanie według zastrz. 31, znamienne tym, że chorobą jest posocznica, a przeciwciało podaje się człowiekowi razem z cytokiną, interleukiną-6 (IL-6), lub podaje się człowiekowi, uktórego stężenie IL-6 w surowicy lub osoczu wynosi powyżej 500pg/ml.
  39. 39. Zastosowanie według zastrz. 31, znamienne tym, że izolowane ludzkie przeciwciało jest połączone z farmaceutycznie dopuszczalnym nośnikiem.
  40. 40. Zastosowanie według zastrz. 31, znamienne tym, że izolowane ludzkie przeciwciało jest podawane razem z co najmniej jednym dodatkowym środkiem terapeutycznym.
  41. 41. Zastosowanie według zastrz. 40, znamienne tym, że dodatkowy środek terapeutyczny jest wybrany z grupy obejmującej środki przeciwzapalne hamujące cytokiny, CDP-571/BAY-10-3356, cA2, 75 kdTNFR-IgG, 55 kdTNFR-IgG, IDEC-CE9.1/SB 210396, DAB 486-IL-2, DAB 389-IL-2, Anti-Tac, IL4, IL-10, agonistów IL-4, agonistów IL-10, IL-1RA, TNF-bp/s-TNFR, S284, R973401, MK-966, Iloprost, talidomid, środki pokrewne talidomidowi, kwas traneksamowy, T-614, prostaglandynę E1, tenidap, meloksykam, piroksykam, indometacynę, inhibitory ICE, inhibitory zap-70, inhibitory lck, inhibitory VEGF, inhibitory VEGF-R, inhibitory TNF-konwertazy, przeciwciała przeciw IL-12, inhibitory interleukiny 11, inhibitory interleukiny 13, inhibitory interleukiny-17, penicylaminę, chlorambucyl, cyklofosfamid, globulinę antytymocytarną, przeciwciała przeciw CD4, CD5-toksyny, doustnie podawane peptydy, kolagen, disodową sól lobenzarytu, czynniki regulujące cytokiny HP228 i HP466, antysensowne fosforotionianowe oligodeoksynukleotydy ICAM-1, rozpuszczalny receptor 1 dopełniacza, orgoteinę, polisiarczan glikozoaminoglikanu, minocyklinę, przeciwciała przeciw IL2R, lipidy morskie, lipidy roślinne, auranofinę, fenylobutazon, kwas meklofenamowy, kwas flufenamowy, dożylną immunoglobulinę, zileuton, kwas mykofenolowy, takrolimus, sirolimus, amiprilos, kladribinę, azarybinę, budenozyd, czynnik wzrostu naskórka, aminosalicylany, 6-merkaptopurynę, metronidazol, inhibitory lipoksygenazy, mesalaminę, olsalazynę, balsalazyd, przeciwutleniacze, inhibitory tromboksanu, antagonistów receptora IL-1, przeciwciała monoklonalne przeciw IL-1b, przeciwciała monoklonalne przeciw IL-6, czynniki wzrostu, inhibitory elastazy, związki pirydynyloimidazolu, prednizolonowe proleki skoniugowane zglukuronidem, deksametazon lub budezonid, prednizolonowe proleki skoniugowane z dekstranem, powolnie uwalnianą mesalazynę, ciprofloksacynę, lignokainę, prednizolon, cyklofosfamid, 4-aminopirydynę, tizanidynę,interferon b1a, interferon b1b, kopolimer 1, tlen hiperbaryczny, klabribinę, hipertoniczny roztwór soli, antybiotyki, ciągłą hemofiltrację, karbapenemy, antagonistów cytokin, takich jak TNFa, IL-1b, IL-8, SK&F 107647, czterowartościowy guanylohydrazon CNI-1493, inhibitor szlaku czynnika tkankowego, PHP, czynniki chelatujące żelazo oraz chelaty, łączniez kompleksem kwas dietylenotriaminopentaoctowy-żelazo (III), lizofilinę,PGG-glukan, apolipoproteinę A-1 rekonstytuowaną lipidami, chiralne kwasy hydroksamowe, przeciwciała przeciw endotoksynie, E5531, rBPI21, syntetyczne peptydydy przeciw endotoksynie, surfaktanty terapii zastępczej oraz przeciwciała przeciw IL-8.
  42. 42. Zastosowanie według zastrz. 40, znamienne tym, że do datkowym środkiem terapeutycznym jest metotreksat.
  43. 43. Zastosowanie według zastrz. 40, znamienne tym, że dodatkowym środkiem terapeutycznym jest niesteroidowy środek przeciwzapalny.
  44. 44. Zastosowanie według zastrz. 40, znamienne tym, że dodatkowym środkiem terapeutycznym jest chlorochina lub hydroksychlorochina.
  45. 45. Zastosowanie według zastrz. 40, znamienne tym, że dodatkowy środek terapeutyczny jest wybrany z grupy obejmującej sulfasalazynę, złoto, kortykosteroidy, prednizon, leflunomid, naproksen, diklofenak, metyloprednizolon i azatioprynę.
  46. 46. Zastosowanie według zastrz. 31, znamienne tym, że pacjentem jest człowiek.
  47. 47. Izolowane ludzkie przeciwciało, albo jego część wiążąca antygen, które wiąże TNFa, o regionie zmiennym łańcucha lekkiego (LCVR) o domenie CDR3 obejmującej sekwencję aminokwasową SEQ ID NO: 3, albo zmodyfikowaną na podstawie SEQ ID NO: 3 przez pojedyncze zastąpienie alaniną w pozycjach 1, 4, 5, 7 lub 8 io regionie zmiennym łańcucha ciężkiego (HCVR) o domenie CDR3 obejmującej sekwencję aminokwasową SEQ ID NO: 4, albo zmodyfikowaną na podstawie SEQ ID NO: 4 przez pojedyncze zastąpienie alaniną w pozycjach 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10 lub 11.
  48. 48. Izolowane przeciwciało ludzkie albo jego część wiążąca antygen, według zastrz. 47, znamienne tym, że LCVR ma ponadto domenę CDR2 obejmującą sekwencję aminokwasową SEQ ID NO: 5 i HCVR ma ponadto domenę CDR2 obejmującą sekwencję aminokwasową SEQ ID NO:6.
    PL 193 499 B1
  49. 49. Izolowane przeciwciało ludzkie albo jego część wiążąca antygen, według zastrz. 47, znamienne tym, że LCVR ma ponadto domenę CDR1 obejmującą sekwencję aminokwasową SEQ ID NO:7 i HCVR ma domenę CDR1 obejmującą sekwencję aminokwasową SEQ ID NO:8.
  50. 50. Kompozycja farmaceutyczna zawierająca substancję czynną i farmaceutycznie dopuszczalny nośnik, znamienna tym, że zawiera przeciwciało, albo jego część wiążącą antygen, określone wzastrz. 47, jako substancję czynną.
  51. 51. Kompozycja farmaceutyczna według zastrz. 50, znamienna tym, że ponadto zawiera co najmniej jeden dodatkowy środek terapeutyczny do leczenia choroby, w której aktywność TNFa jest szkodliwa.
  52. 52. Kompozycja farmaceutyczna według zastrz. 51, znamienna tym, że dodatkowy środek terapeutyczny jest wybrany z grupy obejmującej środki przeciwzapalne hamujące cytokiny, CDP571/BAY-10-3356, cA2, 75 kdTNFR-IgG, 55 kdTNFR-IgG, IDEC- CE9.1/SB 210396, DAB 486-IL-2, DAB 389-IL-2, Anti-Tac, IL-4, IL-10, agonistów IL-4, agonistów IL-10, IL-1RA, TNF-bp/s-TNFR, S284, R973401, MK-966, Iloprost, talidomid, środki pokrewne talidomidowi, kwas traneksamowy, T-614, prostaglandynę E1, tenidap, meloksykam, piroksykam, indometacynę, inhibitory ICE, inhibitory zap-70, inhibitory lck, inhibitory VEGF, inhibitory VEGF-R, inhibitory TNF-konwertazy, przeciwciała przeciw IL-12, inhibitory interleukiny 11, inhibitory interleukiny 13, inhibitory interleukiny-17, penicylaminę, chlorambucyl, cyklofosfamid, globulinę antytymocytarną, przeciwciała przeciw CD4, CD5toksyny, doustnie podawane peptydy, kolagen, disodową sól lobenzarytu, czynniki regulujące cytokiny HP228 iHP466, antysensowne fosforotionianowe oligodeoksynukleotydy ICAM-1, rozpuszczalny receptor 1 dopełniacza, orgoteinę, polisiarczan glikozoaminoglikanu, minocyklinę, przeciwciała przeciw IL2R, lipidy morskie, lipidy roślinne, auranofinę, fenylobutazon, kwas meklofenamowy, kwas flufenamowy, dożylną immunoglobulinę, zileuton, kwas mykofenolowy, takrolimus, sirolimus, amiprilos, kladribinę, azarybinę, budenozyd, czynnik wzrostu naskórka, aminosalicylany, 6-merkaptopurynę, metronidazol, inhibitory lipoksygenazy, mesalaminę, olsalazynę, balsalazyd, przeciwutleniacze, inhibitory tromboksanu, antagonistów receptora IL-1, przeciwciała monoklonalne przeciw IL-1 b, przeciwciała monoklonalne przeciw IL-6, czynniki wzrostu, inhibitory elastazy, związki pirydynyloimidazolu, prednizolonowe proleki skoniugowane z glukuronidem, deksametazon lub budezonid, prednizolonowe proleki skoniugowane z dekstranem, powolnie uwalnianą mesalazynę, ciprofloksacyne, lignokainę, prednizolon, cyklofosfamid, 4-aminopirydynę, tizanidynę, interferon b1a, interferon b1b, kopolimer 1, tlen hiperbaryczny, klabribinę, hipertoniczny roztwór soli, antybiotyki, ciągłą hemofiltrację, karbapenemy, antagonistów cytokin, takich jak TNFa, IL-1 b, IL-8, SK&F 107647, czterowartościowy guanylohydrazon CNI-1493, inhibitor szlaku czynnika tkankowego, PHP, czynniki chelatujące żelazo oraz chelaty, łącznie zkompleksem kwas dietylenotriaminopentaoctowy-żelazo (III), lizofilinę, PGG-glukan, apolipoproteinę A-1 rekonstytuowaną lipidami, chiralne kwasy hydroksamowe, przeciwciała przeciw endotoksynie, E5531, rBPI21, syntetyczne peptydydy przeciw endotoksynie, surfaktanty terapii zastępczej oraz przeciwciała przeciw IL-8.
  53. 53. Kompozycja farmaceutyczna według zastrz. 51, znamienna tym, że dodatkowym środkiem terapeutycznym jest metotreksat.
  54. 54. Kompozycja farmaceutyczna według zastrz. 51, znamienna tym, że dodatkowym środkiem terapeutycznym jest niesteroidowy środek przeciwzapalny.
  55. 55. Kompozycja farmaceutyczna według zastrz. 51, znamienna tym, że dodatkowym środkiem terapeutycznym jest chlorochina lub hydroksychlorochina.
  56. 56. Kompozycja farmaceutyczna według zastrz. 51, znamienna tym, że dodatkowy środek terapeutyczny jest wybrany z grupy obejmującej sulfasalazynę, złoto, kortykosteroidy, prednizon, leflunomid, naproksen, diklofenak, metyloprednizolon i azatioprynę.
  57. 57. Sposób hamowania aktywności ludzkiego TNFa in vitro, znamienny tym, że obejmuje kontaktowanie ludzkiego TNFa z przeciwciałem, albo jego częścią wiążącą antygen, określonym w zastrz.47, w wyniku czego aktywnośćTNFajest zahamowana.
  58. 58. Przeciwciało, albo jego część wiążąca antygen, określone w zastrz. 47 do stosowania jako lek.
  59. 59. Przeciwciało, albo jego część wiążąca antygen, według zastrz. 58 do stosowania w hamowaniu aktywności ludzkiegoTNFau człowieka cierpiącego na chorobę, w której aktywnośćTNFajest szkodliwa.
  60. 60. Przeciwciało, albo jego część wiążąca antygen, według zastrz. 59 do stosowania w kombinacji z co najmniej jednym dodatkowym środkiem terapeutycznym.
  61. 61. Zastosowanie według zastrz. 60, znamienne tym, że dodatkowy środek terapeutyczny jest wybrany z grupy obejmującej środki przeciwzapalne hamujące cytokiny, CDP-571/BAY-10-3356, cA2,
    PL 193 499 B1
    75 kdTNFR-IgG, 55 kdTNFR-IgG, IDEC-CE9.1/SB 210396, DAB 486-IL-2, DAB 389-IL-2, Anti-Tac, IL-4, IL-10, agonistów IL-4, agonistów IL-10, IL-1RA, TNF-bp/s-TNFR, S284, R973401, MK-966, Iloprost, talidomid, środki pokrewne talidomidowi, kwas traneksamowy, T-614, prostaglandynę E1, tenidap, meloksykam, piroksykam, indometacynę, inhibitory ICE, inhibitory zap-70, inhibitory lck,inhibitory VEGF, inhibitory VEGF-R, inhibitory TNF-konwertazy, przeciwciała przeciw IL-12, inhibitory interleukiny 11, inhibitory interleukiny 13, inhibitory interleukiny-17, penicylaminę, chlorambucyl, cyklofosfamid, globulinę antytymocytarną, przeciwciała przeciw CD4, CD5-toksyny, doustnie podawane peptydy, kolagen, disodową sól lobenzarytu, czynniki regulujące cytokiny HP228 i HP466, antysensowne fosforotionianowe oligodeoksynukleotydy ICAM-1, rozpuszczalny receptor 1 dopełniacza, orgoteinę, polisiarczan glikozoaminoglikanu, minocyklinę, przeciwciała przeciw IL2R, lipidy morskie, lipidy roślinne, auranofinę, fenylobutazon, kwas meklofenamowy, kwas flufenamowy, dożylną immunoglobulinę, zileuton, kwas mykofenolowy, takrolimus, sirolimus, amiprilos, kladribinę, azarybinę, budenozyd, czynnik wzrostu naskórka, aminosalicylany, 6-merkaptopurynę, metronidazol, inhibitory lipoksygenazy, mesalaminę, olsalazynę, balsalazyd, przeciwutleniacze, inhibitory tromboksanu, antagonistów receptora IL-1, przeciwciała monoklonalne przeciw IL-1b, przeciwciała monoklonalne przeciw IL-6, czynniki wzrostu, inhibitory elastazy, związki pirydynyloimidazolu, prednizolonowe proleki skoniugowane zglukuronidem, deksametazon lub budezonid, prednizolonowe proleki skoniugowane z dekstranem, powolnie uwalnianą mesalazynę, ciprofloksacynę, lignokainę, prednizolon, cyklofosfamid, 4-aminopirydynę, tizanidynę, interferon b1a, interferon b1b, kopolimer 1, tlen hiperbaryczny, klabribinę, hipertoniczny roztwór soli, antybiotyki, ciągłą hemofiltrację, karbapenemy, antagonistów cytokin, takich jak TNFa, IL-1b, IL-8, SK&F 107647, czterowartościowy guanylohydrazon CNI-1493, inhibitor szlaku czynnika tkankowego, PHP, czynniki chelatujące żelazo oraz chelaty, łącznie z kompleksem kwas dietylenotriaminopentaoctowy-żelazo (III), lizofilinę, PGG-glukan, apolipoproteinę A-1 rekonstytuowaną lipidami,chiralne kwasy hydroksamowe, przeciwciała przeciw endotoksynie, E5531, rBPI21, syntetyczne peptydydy przeciw endotoksynie, surfaktanty terapii zastępczej oraz przeciwciała przeciw IL-8.
  62. 62. Zastosowanie według zastrz. 60, znamienne tym, że dodatkowym środkiem terapeutycznym jest metotreksat.
  63. 63. Zastosowanie według zastrz. 60, znamienne tym, że dodatkowym środkiem terapeutycznym jest niesteroidowy środek przeciwzapalny.
  64. 64. Zastosowanie według zastrz. 60, znamienne tym, że dodatkowym środkiem terapeutycznym jest chlorochina lub hydroksychlorochina.
  65. 65. Zastosowanie według zastrz. 60, znamienne tym, że dodatkowy środek terapeutyczny jest wybrany z grupy obejmującej sulfasalazynę, złoto, kortykosteroidy, prednizon, leflunomid, naproksen, diklofenak, metyloprednizolon i azatioprynę.
  66. 66. Zastosowanie przeciwciała, albo jego części wiążącej antygen, określonego w zastrz. 47, do wytwarzania leku do leczenia choroby, w której aktywnośćTNFa jest szkodliwa.
  67. 67. Zastosowanie według zastrz. 66, znamienne tym, że choroba jest wybrana spośród choroby zakaźnej, odrzucenia przeszczepu albo reakcji przeszczepu przeciwko gospodarzowi, choroby nowotworowej, płuc, serca, posocznicy, zapalenia kości i stawów, dnawego zapalenia stawów, alergii, stwardnienia rozsianego, autoimmunologicznej cukrzycy, autoimmunologicznego zapalenia błony naczyniowej oka, zespołu nerczycowego, chorób zapalnych kości, chorób resorpcyjnych kości, poalkoholowego zapalenia wątroby, wirusowego zapalenia wątroby, zaburzeń krzepnięcia, oparzeń, uszkodzenia poreperfuzyjnego, tworzenia bliznowca, tworzenia tkanki bliznowatej, gorączki, wstrząsu septycznego, wstrząsu endotoksycznego, posocznicy Gram-ujemnej, zespołu wstrząsu toksycznego, malarii, zapalenia opon mózgowych, kacheksji, AIDS, bakteryjnego zapalenia opon mózgowych, zespołu związanego z AIDS (ARC), wtórnej infekcji wirusem cytomegalii po przeszczepie, gorączki imięśniobóli z powodu infekcji i wtórnej kacheksji w wyniku infekcji, odrzucenia przeszczepu allogenicznego, stymulowania wzrostu nowotworu, wzmacniania potencjału przerzutowego oraz mediowania cytotoksyczności w chorobach nowotworowych, hamowania wzrostu nowotworu lub przerzutów, zespołu zaburzeń oddechowych dorosłych, płuca wstrząsowego, przewlekłej zapalnej choroby płuc, sarkoidozy płuc, zwłóknienia płuc, krzemicy, choroby zapalnej jelit, idiopatycznej choroby zapalnej jelit, wrzodziejącego zapalenia okrężnicy, niedokrwienia mięśnia sercowego, niewydolności mięśnia sercowego oraz zapalenia wątroby.
  68. 68. Zastosowanie według zastrz. 66, znamienne tym, że chorobą jest choroba jelit.
  69. 69. Zastosowanie według zastrz. 66, znamienne tym, że chorobą jest choroba Crohna.
  70. 70. Zastosowanie według zastrz. 66, znamienne tym, że chorobą jest choroba autoimmunologiczna.
    PL 193 499 B1
  71. 71. Zastosowanie według zastrz. 66, znamienne tym, że chorobą jest reumatoidalne zapalenie stawów.
  72. 72. Zastosowanie według zastrz. 66, znamienne tym, że chorobą jest zesztywniające zapalenie stawów kręgosłupa.
  73. 73. Izolowany kwas nukleinowy kodujący domenę CDR3 łańcucha lekkiego obejmującą sekwencję aminokwasową SEQ ID NO: 3, albo zmodyfikowaną na podstawie SEQ ID NO: 3 przez pojedyncze zastąpienie alaniną w pozycjach 1, 4, 5, 7 lub 8, albo przez jedno do pięciu konserwatywnych zastąpień aminokwasów w pozy cjach 1, 3, 4, 6, 7, 8 i/lub 9.
  74. 74. Izolowany kwas nukleinowy według zastrz. 73, znamienny tym, że koduje region zmienny łańcucha lekkiego (LCVR) przeciwciała.
  75. 75. Izolowany kwas nukleinowy według zastrz. 74, znamienny tym, że domena CDR2 LCVR przeciwciała obejmuje sekwencję aminokwasową SEQ ID NO: 5.
  76. 76. Izolowany kwas nukleinowy według zastrz. 75, znamienny tym, że domena CDR1 LCVR przeciwciała obejmuje sekwencję aminokwasową SEQ ID NO: 7.
  77. 77. Izolowany kwas nukleinowy kodujący domenę CDR3 łańcucha ciężkiego obejmującą sekwencję aminokwasową SEQ ID NO: 4 albo zmodyfikowana na podstawie SEQ ID NO: 4 przez pojedyncze zastąpienie alaniną w pozycjach 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10 albo 11, albo przez jedno do pięciu zastąpień konserwatywnych aminokwasów w pozycjach 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10, 11 i/lub 12.
  78. 78. Izolowany kwas nukleinowy według zastrz. 77, znamienny tym, że koduje region zmienny łańcucha ciężkiego (HCVR) przeciwciała .
  79. 79. Izolowany kwas nukleinowy według zastrz. 78, znamienny tym, że domena CDR2 HCVR przeciwciała obejmuje sekwencję aminokwasową SEQ ID NO:6.
  80. 80. Izolowany kwas nukleinowy według zastrz. 79, znamienny tym, że domena CDR1 HCVR przeciwciała obejmuje sekwencję aminokwasową SEQ ID NO:8.
  81. 81. Izolowane przeciwciało ludzkie albo jego część wiążąca antygen, znamienne tym, że wiąże TNFa i ma region zmienny łańcucha lekkiego (LCVR) o domenie CDR3 obejmującej sekwencję aminokwasową wybraną z grupy składającej się z: SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO:13, SEQ ID NO:14, SEQ ID NO:15, SEQ ID NO:16, SEQ ID NO:17, SEQ ID NO:18, SEQ ID NO:19, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO:21, SEQ ID NO:22, SEQ ID NO:23, SEQ ID NO:24, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 26, albo region zmienny łańcucha ciężkiego (HCVR) o domenie CDR3 obejmującej sekwencję aminokwasową wybraną z grupy składającej się z: SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO:28, SEQ ID NO:29, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 31, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 33 i SEQ ID NO: 34.
  82. 82. Kompozycja farmaceutyczna zawierająca substancję czynna i farmaceutycznie dopuszczalny nośnik, znamienna tym, że zawiera przeciwciało, albo jego część wiążącą antygen, określone wzastrz. 81, jako substancję czynną.
  83. 83. Kompozycja farmaceutyczna według zastrz. 82, znamienna tym, że ponadto zawiera co najmniej jeden dodatkowy środek terapeutyczny do leczenia choroby, w której aktywność TNFa jest szkodliwa.
  84. 84. Kompozycja farmaceutyczna według zastrz. 83, znamienna tym, że dodatkowy środek terapeutyczny jest wybrany z grupy obejmującej środki przeciwzapalne hamujące cytokiny, CDP571/BAY-10-3356, cA2, 75 kdTNFR-IgG, 55 kdTNFR-IgG, IDEC- CE9.1/SB 210396, DAB 486-IL-2, DAB 389-IL-2, Anti-Tac, IL-4, IL-10, agonistów IL-4, agonistów IL-10, IL-1RA, TNF-bp/s-TNFR, S284, R973401, MK-966, Iloprost, talidomid, środki pokrewne talidomidowi, kwas traneksamowy, T-614, prostaglandynę E1, tenidap, meloksykam, piroksykam, indometacynę, inhibitory ICE, inhibitory zap-70, inhibitory lck, inhibitory VEGF, inhibitory VEGF-R, inhibitory TNF-konwertazy, przeciwciała przeciw IL-12, inhibitory interleukiny 11, inhibitory interleukiny 13, inhibitory interleukiny-17, penicylaminę, chlorambucyl, cyklofosfamid, globulinę antytymocytarną, przeciwciała przeciw CD4, CD5-toksyny, doustnie podawane peptydy, kolagen, disodową sól lobenzarytu, czynniki regulujące cytokiny HP228 i HP466, antysensowne fosforotionianowe oligodeoksynukleotydy ICAM-1, rozpuszczalny receptor 1 dopełniacza, orgoteinę, polisiarczan glikozoaminoglikanu, minocyklinę, przeciwciała przeciw IL2R, lipidy morskie, lipidy roślinne, auranofinę, fenylobutazon, kwas meklofenamowy, kwas flufenamowy, dożylną immunoglobulinę, zileuton, kwas mykofenolowy, takrolimus, sirolimus, amiprilos, kladribinę, azarybinę, budenozyd, czynnik wzrostu naskórka, aminosalicylany, 6-merkaptopurynę, metronidazol, inhibitory lipoksygenazy, mesalaminę, olsalazynę, balsalazyd, przeciwutleniacze, inhibitory tromboksanu, antagonistów receptora IL-1, przeciwciała monoklonalne przeciw IL-1 b, przeciwciała monoklo64
    PL 193 499 B1 nalne przeciw IL-6, czynniki wzrostu, inhibitory elastazy, związki pirydynylo-imidazolu, prednizolonowe proleki skoniugowane z glukuronidem, deksametazon lub budezonid, prednizolonowe proleki skoniugowane z dekstranem, powolnie uwalnianą mesalazynę, ciprofloksacynę, lignokainę, prednizolon, cyklofosfamid, 4-aminopirydynę, tizanidynę, interferon b1a, interferon b1b, kopolimer 1, tlen hiperbaryczny, klabribinę, hipertoniczny roztwór soli, antybiotyki, ciągłą hemofiltrację, karbapenemy, antagonistów cytokin, takich jak TNFa, IL-1b, IL-8, SK&F 107647, czterowartościowy guanylohydrazon CNI1493, inhibitor szlaku czynnika tkankowego, PHP, czynniki chelatujące żelazo oraz chelaty, łącznie z kompleksem kwas dietylenotriaminopentaoctowy-żelazo (III), lizofilinę, PGG-glukan, apolipoproteinę A-1 rekonstytuowaną lipidami, chiralne kwasy hydroksamowe, przeciwciała przeciw endotoksynie, E5531, rBPI21, syntetyczne peptydydy przeciw endotoksynie, surfaktanty terapii zastępczej oraz przeciwciała przeciw IL-8.
  85. 85. Kompozycja farmaceutyczna według zastrz. 83, znamienna tym, że dodatkowym środkiem terapeutycznym jest metotreksat.
  86. 86. Kompozycja farmaceutyczna według zastrz. 83, znamienna tym, że dodatkowym środkiem terapeutycznym jest niesteroidowy środek przeciwzapalny.
  87. 87. Kompozycja farmaceutyczna według zastrz. 83, znamienna tym, że dodatkowym środkiem terapeutycznym jest chlorochina lub hydroksychlorochina.
  88. 88. Kompozycja farmaceutyczna według zastrz. 83, znamienna tym, że dodatkowy środek terapeutyczny jest wybrany z grupy obejmującej sulfasalazynę, złoto, kortykosteroidy, prednizon, leflunomid, naproksen, diklofenak, metyloprednizolon i azatioprynę.
  89. 89. Sposób hamowania aktywności ludzkiego TNFa in vitro, znamienny tym, że obejmuje kontaktowanie ludzkiego TNFa z przeciwciałem, albo jego częścią wiążącą antygen, określonym w zastrz. 81, w wyniku czego aktywność TNFa jest zahamowana.
  90. 90. Przeciwciało, albo jego część wiążąca antygen, określone w zastrz. 81 do stosowania jako lek.
  91. 91. Przeciwciało, albo jego część wiążąca antygen, według zastrz. 90 do stosowania w hamowaniu aktywności ludzkiego TNFa u człowieka cierpiącego na chorobę, w której aktywnośćTNFa jest szkodliwa.
  92. 92. Przeciwciało, albo jego część wiążąca antygen, według zastrz. 91 do stosowania w kombinacji z co najmniej jednym do datkowym środkiem terapeutycznym.
  93. 93. Zastosowanie według zastrz. 92, znamienne tym, że dodatkowy środek terapeutyczny jest wybrany z grupy obejmującej środki przeciwzapalne hamujące cytokiny, CDP-571/BAY-10-3356, cA2, 75 kdTNFR-IgG, 55 kdTNFR-IgG, IDEC-CE9.1/SB 210396, DAB 486-IL-2, DAB 389-IL-2, Anti-Tac, IL-4, IL-10, agonistów IL-4, agonistów IL-10, IL-1RA, TNF-bp/s-TNFR, S284, R973401, MK-966, Iloprost, talidomid, środki pokrewne talidomidowi, kwas traneksamowy, T-614, prostaglandynę E1, tenidap, meloksykam, piroksykam, indometacynę, inhibitory ICE, inhibitory zap-70, inhibitory lck, inhibitory VEGF, inhibitory VEGF-R, inhibitory TNF-konwertazy, przeciwciała przeciw IL-12, inhibitory interleukiny 11, inhibitory interleukiny 13, inhibitory interleukiny-17, penicylaminę, chlorambucyl, cyklofosfamid, globulinę antytymocytarną, przeciwciała przeciw CD4, CD5-toksyny, doustnie podawane peptydy, kolagen, disodową sól lobenzarytu, czynniki regulujące cytokiny HP228 i HP466, antysensowne fosforotionianowe oligodeoksynukleotydy ICAM-1, rozpuszczalny receptor 1 dopełniacza, orgoteinę, polisiarczan glikozoaminoglikanu, minocyklinę, przeciwciała przeciw IL2R, lipidy morskie, lipidy roślinne, auranofinę, fenylobutazon, kwas meklofenamowy, kwas flufenamowy, dożylną immunoglobulinę, zileuton, kwas mykofenoIowy, takrolimus, sirolimus, amiprilos, kladribinę, azarybinę, budenozyd, czynnik wzrostu naskórka, aminosalicylany, 6-merkaptopurynę, metronidazol, inhibitory lipoksygenazy, mesalaminę, olsalazynę, balsalazyd, przeciwutleniacze, inhibitory tromboksanu, antagonistów receptora IL-1, przeciwciała monoklonalne przeciw IL-1b, przeciwciała monoklonalne przeciw IL-6, czynniki wzrostu, inhibitory elastazy, związki pirydynyloimidazolu, prednizolonowe proleki skoniugowane z glukuronidem, deksametazon lub budezonid, prednizolonowe proleki skoniugowane z dekstranem, powolnie uwalnianą mesalazynę, ciprofloksacynę, lignokainę, prednizolon, cyklofosfamid, 4-aminopirydynę, tizanidynę, interferon b1a, interferon b1b, kopolimer 1, tlen hiperbaryczny, klabribinę, hipertoniczny roztwór soli, antybiotyki, ciągłą hemofiltrację, karbapenemy, antagonistów cytokin, takich jak TNFa, IL-1b, IL-8, SK&F 107647, czterowartościowy guanylohydrazon CNI-1493, inhibitor szlaku czynnika tkankowego, PHP, czynniki chelatujące żelazo oraz chelaty, łącznie z kompleksem kwas dietylenotriaminopentaoctowy-żelazo (III), lizofilinę, PGG-glukan, apolipoproteinę A-1 rekonstytuowaną lipidami, chiralne kwasy hydroksamowe, przeciwciała przeciw endotoksynie, E5531, rBPI21, syntetyczne peptydydy przeciw endotoksynie, surfaktanty terapii zastępczej oraz przeciwciała przeciw IL-8.
    PL 193 499 B1
  94. 94. Zastosowanie według zastrz. 92, znamienne tym, że dodatkowym środkiem terapeutycznym jest metotreksat.
  95. 95. Zastosowanie według zastrz. 92, znamienne tym, że dodatkowym środkiem terapeutycznym jest niesteroidowy środek przeciwzapalny.
  96. 96. Zastosowanie według zastrz. 92, znamienne tym, że dodatkowym środkiem terapeutycznym jest chlorochina lub hydroksychlorochina.
  97. 97. Zastosowanie według zastrz. 92, znamienne tym, że dodatkowy środek terapeutyczny jest wybrany z grupy obejmującej sulfasalazynę, złoto, kortykosteroidy, prednizon, leflunomid, naproksen, diklofenak, metyloprednizolon i azatioprynę.
  98. 98. Zastosowanie przeciwciała, albo jego części wiążącej antygen, określonego w zastrz. 81, do wytwarzania leku do leczenia choroby, w której aktywność TNFa jest szkodliwa.
  99. 99. Zastosowanie według zastrz. 98, znamienne tym, że choroba jest wybrana spośród choroby zakaźnej, odrzucenia przeszczepu albo reakcji przeszczepu przeciwko gospodarzowi, choroby nowotworowej, płuc, serca, posocznicy, zapalenia kości i stawów, dnawego zapalenia stawów, alergii, stwardnienia rozsianego, autoimmunologicznej cukrzycy, autoimmunologicznego zapalenia błony naczyniowej oka, zespołu nerczycowego, chorób zapalnych kości, chorób resorpcyjnych kości, poalkoholowego zapalenia wątroby, wirusowego zapalenia wątroby, zaburzeń krzepnięcia, oparzeń, uszkodzenia poreperfuzyjnego, tworzenia bliznowca, tworzenia tkanki bliznowatej, gorączki, wstrząsu septycznego, wstrząsu endotoksycznego, posocznicy Gram-ujemnej, zespołu wstrząsu toksycznego, malarii, zapalenia opon mózgowych, kacheksji, AIDS, bakteryjnego zapalenia opon mózgowych, zespołu związanego z AIDS (ARC), wtórnej infekcji wirusem cytomegalii po przeszczepie, gorączki i mięśniobóli z powodu infekcji i wtórnej kacheksji w wyniku infekcji, odrzucenia przeszczepu allogenicznego, stymulowania wzrostu nowotworu, wzmacniania potencjału przerzutowego oraz mediowania cytotoksyczności w chorobach nowotworowych, hamowania wzrostu nowotworu lub przerzutów, zespołu zaburzeń oddechowych dorosłych, płuca wstrząsowego, przewlekłej zapalnej choroby płuc, sarkoidozy płuc, zwłóknienia płuc, krzemicy, choroby zapalnej jelit, idiopatycznej choroby zapalnej jelit, wrzodziejącego zapalenia okrężnicy, niedokrwienia mięśnia sercowego, niewydolności mięśnia sercowego i zapalenia wątroby.
  100. 100. Zastosowanie według zastrz. 98, znamienne tym, że chorobą jest choroba jelit.
  101. 101. Zastosowanie według zastrz. 98, znamienne tym, że chorobą jest choroba Crohna.
  102. 102. Zastosowanie według zastrz. 98, znamienne tym, że chorobą jest choroba autoimmunologiczna.
  103. 103. Zastosowanie według zastrz. 98, znamienne tym, że chorobą jest reumatoidalne zapalenie stawów.
  104. 104. Zastosowanie według zastrz. 98, znamienne tym, że chorobą jest zesztywniające zapalenie stawów kręgosłupa.
  105. 105. Izolowany kwas nukleinowy kodujący domenę CDR3 obejmującą sekwencję aminokwasową wybraną z grupy składającej się z: SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:11, SEQ ID NO: 12,
    SEQ ID NO:13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO:15, SEQ ID NO:16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18,
    SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 24,
    SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 30,
    SEQ ID NO: 31, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 33 iSEQ ID NO: 34.
PL97365237A 1996-02-09 1997-02-10 Izolowane ludzkie przeciwciało, rekombinowane ludzkie przeciwciało, kompozycja farmaceutyczna, sposób hamowania aktywności ludzkiego TNFalfa in vitro, zastosowanie tych izolowanych ludzkich przeciwciał i izolowany kwas nukleinowy PL193499B1 (pl)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US08/599,226 US6090382A (en) 1996-02-09 1996-02-09 Human antibodies that bind human TNFα
US3147696P 1996-11-25 1996-11-25
PCT/US1997/002219 WO1997029131A1 (en) 1996-02-09 1997-02-10 HUMAN ANTIBODIES THAT BIND HUMAN TNF$g(a)

Publications (1)

Publication Number Publication Date
PL193499B1 true PL193499B1 (pl) 2007-02-28

Family

ID=26707297

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PL97365237A PL193499B1 (pl) 1996-02-09 1997-02-10 Izolowane ludzkie przeciwciało, rekombinowane ludzkie przeciwciało, kompozycja farmaceutyczna, sposób hamowania aktywności ludzkiego TNFalfa in vitro, zastosowanie tych izolowanych ludzkich przeciwciał i izolowany kwas nukleinowy
PL97328411A PL188192B1 (pl) 1996-02-09 1997-02-10 Izolowane ludzkie przeciwciało albo jego część wiążąca antygen, rekombinowane ludzkie przeciwciało albo jego część wiążąca antygen, kompozycje farmaceutyczne, izolowane kwasy nukleinowe, rekombinowany wektor ekspresyjny, komórka gospodarza, sposób syntetyzowania przeciwciała ludzkiego, które wiąże ludzki TNFalfa, sposób hamowania aktywności ludzkiego TNFalfa in vitro, przeciwciało albo jego częśćwiążąca antygen, zastosowanie przeciwciała albo jego części wiążącej antygen

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PL97328411A PL188192B1 (pl) 1996-02-09 1997-02-10 Izolowane ludzkie przeciwciało albo jego część wiążąca antygen, rekombinowane ludzkie przeciwciało albo jego część wiążąca antygen, kompozycje farmaceutyczne, izolowane kwasy nukleinowe, rekombinowany wektor ekspresyjny, komórka gospodarza, sposób syntetyzowania przeciwciała ludzkiego, które wiąże ludzki TNFalfa, sposób hamowania aktywności ludzkiego TNFalfa in vitro, przeciwciało albo jego częśćwiążąca antygen, zastosowanie przeciwciała albo jego części wiążącej antygen

Country Status (32)

Country Link
US (9) US6258562B1 (pl)
EP (1) EP0929578B1 (pl)
JP (8) JP3861118B2 (pl)
KR (1) KR100317188B1 (pl)
CN (5) CN101712720A (pl)
AT (1) ATE239041T1 (pl)
AU (1) AU722077B2 (pl)
BG (7) BG64776B1 (pl)
BR (3) BRPI9707379C8 (pl)
CA (1) CA2243459C (pl)
CY (2) CY2463B1 (pl)
CZ (1) CZ292465B6 (pl)
DE (4) DE69721548T2 (pl)
DK (1) DK0929578T3 (pl)
ES (1) ES2198552T3 (pl)
HK (4) HK1214607A1 (pl)
HU (4) HU221984B1 (pl)
IL (4) IL125697A (pl)
LU (1) LU91062I2 (pl)
MX (1) MX336813B (pl)
NL (1) NL300143I2 (pl)
NO (6) NO316711B1 (pl)
NZ (5) NZ562935A (pl)
PL (2) PL193499B1 (pl)
PT (1) PT929578E (pl)
RO (2) RO123028B1 (pl)
RU (3) RU2270030C2 (pl)
SI (1) SI9720020B (pl)
SK (1) SK284040B6 (pl)
TR (1) TR199801532T2 (pl)
UA (2) UA57726C2 (pl)
WO (1) WO1997029131A1 (pl)

Families Citing this family (477)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20030225254A1 (en) * 1989-08-07 2003-12-04 Rathjen Deborah Ann Tumour necrosis factor binding ligands
EP0486526B2 (en) 1989-08-07 2001-03-07 Peptech Limited Tumour necrosis factor binding ligands
US5959087A (en) * 1989-08-07 1999-09-28 Peptide Technology, Ltd. Tumour necrosis factor binding ligands
US7192584B2 (en) 1991-03-18 2007-03-20 Centocor, Inc. Methods of treating psoriasis with anti-TNF antibodies
US6270766B1 (en) 1992-10-08 2001-08-07 The Kennedy Institute Of Rheumatology Anti-TNF antibodies and methotrexate in the treatment of arthritis and crohn's disease
US6830751B1 (en) * 1994-03-14 2004-12-14 Genetics Institute, Llc Use of IL-12 antagonists in the treatment of rheumatoid arthritis
ZA95960B (en) * 1994-03-14 1995-10-10 Genetics Inst Use of interleukin-12 antagonists in the treatment of autoimmune diseases
US20010055581A1 (en) 1994-03-18 2001-12-27 Lawrence Tamarkin Composition and method for delivery of biologically-active factors
US6090382A (en) * 1996-02-09 2000-07-18 Basf Aktiengesellschaft Human antibodies that bind human TNFα
BRPI9707379C8 (pt) * 1996-02-09 2017-12-12 Abbott Biotech Ltd composições farmacêuticas compreendendo anticorpo humano recombinante geneticamente engenheirado, e anticorpo humano recombinante geneticamente engenheirado.
US7129061B1 (en) * 1996-08-07 2006-10-31 Biogen Idec Ma Inc. Tumor necrosis factor related ligand
US20040009166A1 (en) * 1997-04-30 2004-01-15 Filpula David R. Single chain antigen-binding polypeptides for polymer conjugation
CA2288994C (en) 1997-04-30 2011-07-05 Enzon, Inc. Polyalkylene oxide-modified single chain polypeptides
US6407218B1 (en) 1997-11-10 2002-06-18 Cytimmune Sciences, Inc. Method and compositions for enhancing immune response and for the production of in vitro mabs
US7229841B2 (en) 2001-04-30 2007-06-12 Cytimmune Sciences, Inc. Colloidal metal compositions and methods
US7067144B2 (en) * 1998-10-20 2006-06-27 Omeros Corporation Compositions and methods for systemic inhibition of cartilage degradation
WO2000036103A1 (en) 1998-12-14 2000-06-22 Genetics Institute, Inc. Cytokine receptor chain
US7553487B2 (en) 1998-12-14 2009-06-30 Genetics Institute, Llc Method and compositions for treating asthma
CA2364026C (en) * 1999-03-02 2012-08-21 Centocor, Inc. Anti-tnf.alpha. antibodies in therapy of asthma
US6914128B1 (en) 1999-03-25 2005-07-05 Abbott Gmbh & Co. Kg Human antibodies that bind human IL-12 and methods for producing
US20040220103A1 (en) 1999-04-19 2004-11-04 Immunex Corporation Soluble tumor necrosis factor receptor treatment of medical disorders
CA2386457A1 (en) * 1999-10-06 2001-04-12 Basf Aktiengesellschaft Inhibitors of the endothelin signalling pathway and .alpha.v.beta.3 integrin receptor antagonists for combination therapy
BR0108188A (pt) 2000-02-10 2003-02-25 Abbott Lab Anticorpos que se ligam a interleucina-18 humana e métodos de produção e uso
GB0013810D0 (en) 2000-06-06 2000-07-26 Celltech Chiroscience Ltd Biological products
MXPA02012867A (es) 2000-06-29 2003-09-05 Abbott Lab Anticuerpos de especificidad doble y metodos para la elaboracion y el uso de los mismos.
UA81743C2 (uk) * 2000-08-07 2008-02-11 Центокор, Инк. МОНОКЛОНАЛЬНЕ АНТИТІЛО ЛЮДИНИ, ЩО СПЕЦИФІЧНО ЗВ'ЯЗУЄТЬСЯ З ФАКТОРОМ НЕКРОЗУ ПУХЛИН АЛЬФА (ФНПα), ФАРМАЦЕВТИЧНА КОМПОЗИЦІЯ, ЩО ЙОГО МІСТИТЬ, ТА СПОСІБ ЛІКУВАННЯ РЕВМАТОЇДНОГО АРТРИТУ
US20050196755A1 (en) * 2000-11-17 2005-09-08 Maurice Zauderer In vitro methods of producing and identifying immunoglobulin molecules in eukaryotic cells
EP1355666B1 (en) 2000-12-22 2012-06-13 Max-Planck-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. Use of repulsive guidance molecule (RGM) and its modulators
WO2002057423A2 (en) * 2001-01-16 2002-07-25 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Isolating cells expressing secreted proteins
US20090137416A1 (en) 2001-01-16 2009-05-28 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Isolating Cells Expressing Secreted Proteins
EP1379125A4 (en) 2001-03-22 2004-12-08 Abbott Gmbh & Co Kg TRANSGENIC ANIMALS THAT EXPRESS SPECIFIC ANTIBODIES FOR INTERESTING GENES AND THEIR USE
US6410955B1 (en) * 2001-04-19 2002-06-25 Micron Technology, Inc. Comb-shaped capacitor for use in integrated circuits
CA2385745C (en) 2001-06-08 2015-02-17 Abbott Laboratories (Bermuda) Ltd. Methods of administering anti-tnf.alpha. antibodies
AU2002316384A1 (en) * 2001-06-26 2003-03-03 Photomed Technologies, Inc. Multiple wavelength illuminator
PL222211B1 (pl) 2001-06-26 2016-07-29 Amgen Fremont Inc Przeciwciało przeciwko OPGL, kompozycja je zawierająca, jego zastosowanie i sposób jego wytwarzania, sposób wykrywania poziomu OPGL, kompozycja obejmująca polinukleotydy i komórka gosodarza
US20050271663A1 (en) * 2001-06-28 2005-12-08 Domantis Limited Compositions and methods for treating inflammatory disorders
TWI327597B (en) 2001-08-01 2010-07-21 Centocor Inc Anti-tnf antibodies, compositions, methods and uses
AU2002341766A1 (en) * 2001-09-20 2003-04-01 Genstar Therapeutics Corporation Improved methods for treatment with viral vectors
US20030065382A1 (en) * 2001-10-02 2003-04-03 Fischell Robert E. Means and method for the treatment of coronary artery obstructions
EP1432431B1 (en) 2001-10-04 2017-05-10 Genetics Institute LLC Methods and compositions for modulating interleukin-21 activity
US20040018195A1 (en) * 2002-03-26 2004-01-29 Griswold Don Edgar Diabetes-related immunoglobulin derived proteins, compositions, methods and uses
US20030206898A1 (en) * 2002-04-26 2003-11-06 Steven Fischkoff Use of anti-TNFalpha antibodies and another drug
US20040009172A1 (en) * 2002-04-26 2004-01-15 Steven Fischkoff Use of anti-TNFalpha antibodies and another drug
MY151032A (en) * 2002-07-19 2014-03-31 Abbott Lab S A Treatment of tnf? related disorders
US20090280065A1 (en) * 2006-04-10 2009-11-12 Willian Mary K Uses and Compositions for Treatment of Psoriasis
US20040033228A1 (en) * 2002-08-16 2004-02-19 Hans-Juergen Krause Formulation of human antibodies for treating TNF-alpha associated disorders
WO2004019861A2 (en) * 2002-08-28 2004-03-11 Pharmacia Corporation Stable ph optimized formulation of a modified antibody
MY150740A (en) * 2002-10-24 2014-02-28 Abbvie Biotechnology Ltd Low dose methods for treating disorders in which tnf? activity is detrimental
NZ540194A (en) 2002-11-08 2008-07-31 Ablynx Nv Single domain antibodies directed against tumour necrosis factor-alpha and uses therefor
US20060034845A1 (en) 2002-11-08 2006-02-16 Karen Silence Single domain antibodies directed against tumor necrosis factor alpha and uses therefor
US9320792B2 (en) 2002-11-08 2016-04-26 Ablynx N.V. Pulmonary administration of immunoglobulin single variable domains and constructs thereof
US20040162414A1 (en) * 2002-11-22 2004-08-19 Santora Ling C. Method for reducing or preventing modification of a polypeptide in solution
US20040101939A1 (en) * 2002-11-22 2004-05-27 Santora Ling C. Method for reducing or preventing modification of a polypeptide in solution
CA2508375C (en) * 2002-12-02 2014-05-27 Abgenix, Inc. Antibodies directed to tumor necrosis factor and uses thereof
MXPA05007019A (es) * 2002-12-30 2005-08-18 Amgen Inc Terapia de combinacion con factores co-estimuladores.
US7101978B2 (en) * 2003-01-08 2006-09-05 Applied Molecular Evolution TNF-α binding molecules
WO2004063335A2 (en) * 2003-01-08 2004-07-29 Applied Molecular Evolution TNF-α BINDING MOLECULES
JP2006517789A (ja) * 2003-01-10 2006-08-03 アブリンクス エン．ヴェー． 治療用ポリペプチド、その相同物、その断片、および血小板媒介凝集の調節での使用
DE10303974A1 (de) 2003-01-31 2004-08-05 Abbott Gmbh & Co. Kg Amyloid-β(1-42)-Oligomere, Verfahren zu deren Herstellung und deren Verwendung
BRPI0408315A (pt) 2003-03-14 2006-03-07 Wyeth Corp anticorpo isolado, composição farmacêutica, ácido nucleico isolado, vetor de expressão, célula hospedeira, métodos de produzir um anticorpo, de gerar um anticorpo ou fragmento de ligação de antìgeno, de regular uma resposta imune, de tratar ou prevenir um distúrbio associado com célula imune em um paciente, de tratar ou prevenir um distúrbio hiperproliferativo em um paciente, e, kit de diagnóstico
EP1460088A1 (en) 2003-03-21 2004-09-22 Biotest AG Humanized anti-CD4 antibody with immunosuppressive properties
WO2004098578A2 (en) * 2003-05-12 2004-11-18 Altana Pharma Ag Composition comprising a pde4 inhibitor and a tnf-alfa antagonist selected from infliximab, adalimumab, cdp870 and cdp517
FR2856075B1 (fr) * 2003-06-16 2007-10-12 Monoclonal Antibodies Therapeu Procede essentiellement automatise de criblage a grande echelle de cellules secretant des anticorps monoclonaux
FR2859725B1 (fr) * 2003-09-16 2006-03-10 Neovacs Procede a haut rendement pour l'obtention d'anticorps humains neutralisant l'activite biologique d'une cytokine humaine
US20050100965A1 (en) 2003-11-12 2005-05-12 Tariq Ghayur IL-18 binding proteins
KR100772800B1 (ko) * 2003-11-17 2007-11-01 주식회사유한양행 인간 종양괴사인자 α를 인식하는 단일클론항체의가변영역 및 이를 코딩하는 유전자
JP2008504216A (ja) 2003-12-02 2008-02-14 サイトイミューン サイエンシズ インコーポレイテッド モノクローナル抗体の生成のための方法および組成物
DK3718564T3 (da) 2003-12-23 2023-11-06 Genentech Inc Nye anti-IL-13-antistoffer og anvendelser
US7435799B2 (en) * 2004-01-08 2008-10-14 Applied Molecular Evolution TNF-α binding molecules
MXPA06010673A (es) 2004-03-19 2007-06-20 Amgen Inc Reduccion del riesgo de anticuerpos humanos anti-humano a traves de manipulacion del gen v.
US7625549B2 (en) * 2004-03-19 2009-12-01 Amgen Fremont Inc. Determining the risk of human anti-human antibodies in transgenic mice
TW201705980A (zh) 2004-04-09 2017-02-16 艾伯維生物技術有限責任公司 用於治療ＴＮＦα相關失調症之多重可變劑量療法
CN100427504C (zh) * 2004-06-02 2008-10-22 北京天广实生物技术有限公司 TNFα高亲和力嵌合抗体及其用途
US7501121B2 (en) 2004-06-17 2009-03-10 Wyeth IL-13 binding agents
AR049390A1 (es) 2004-06-09 2006-07-26 Wyeth Corp Anticuerpos contra la interleuquina-13 humana y usos de los mismos
GB0414054D0 (en) 2004-06-23 2004-07-28 Owen Mumford Ltd Improvements relating to automatic injection devices
MX2007001509A (es) * 2004-08-05 2007-03-27 Wyeth Corp Antagonismo de la actividad del receptor de interleuquina 21.
WO2006041970A2 (en) * 2004-10-08 2006-04-20 Abbott Biotechnology Ltd. Treatment of respiratory syncytial virus (rsv) infection
WO2007001420A2 (en) * 2004-10-22 2007-01-04 Genencor International, Inc. Isolating human antibodies
EP1827491A4 (en) 2004-11-19 2010-07-14 Biogen Idec Inc TREATMENT OF MULTIPLE SCLEROSIS
ES2711213T3 (es) 2005-02-08 2019-04-30 Genzyme Corp Anticuerpos de TGFbeta
JP2008532493A (ja) * 2005-02-14 2008-08-21 ワイス Ｉｌ−１７ｆとｉｌ−１７ｒとの間の相互作用の特性解析
TW200641353A (en) * 2005-02-14 2006-12-01 Wyeth Corp Interleukin-17F antibodies and other IL-17F signaling antagonists and uses therefor
EP1859277A4 (en) 2005-02-17 2010-03-17 Biogen Idec Inc TREATMENT OF NEUROLOGICAL DISORDERS
GT200600148A (es) 2005-04-14 2006-11-22 Metodos para el tratamiento y la prevencion de fibrosis
JP5339901B2 (ja) 2005-05-10 2013-11-13 バイオジェン・アイデック・エムエイ・インコーポレイテッド 炎症傷害の処置および評価
KR20150055116A (ko) 2005-05-16 2015-05-20 애브비 바이오테크놀로지 리미티드 미란성 다발관절염의 치료를 위한 ｔｎｆ 억제제의 용도
AU2012254978C1 (en) * 2005-05-16 2017-06-01 Abbvie Biotechnology Ltd Use of TNF inhibitor for treatment of erosive polyarthritis
US20070020660A1 (en) * 2005-06-06 2007-01-25 Burczynski Michael E Expression profiles of peripheral blood mononuclear cells for inflammatory bowel diseases
RS52861B (sr) 2005-06-07 2013-12-31 Esbatech - A Novartis Company Llc Stabilna i rastvorljiva antitela koja inhibiraju tnf (alfa)
JP2008543839A (ja) 2005-06-14 2008-12-04 アムジェン インコーポレーテッド 自己緩衝タンパク質製剤
US20060286108A1 (en) * 2005-06-16 2006-12-21 Bell Katherine A Topical compositions for the treatment of chronic wounds
WO2006138690A2 (en) * 2005-06-17 2006-12-28 Abbott Laboratories Improved method of treating degenerative spinal disorders
KR101446503B1 (ko) * 2005-06-24 2014-10-06 듀크 유니버시티 열 반응성 생중합체에 기초한 직접 약물 전달 시스템
KR20080031024A (ko) 2005-07-21 2008-04-07 아보트 러보러터리즈 폴리단백질, 프로단백질 및 단백질분해를 사용한 ｓＯＲＦ작제물 포함 다중 유전자 발현 및 방법
TW200726776A (en) * 2005-07-29 2007-07-16 Friedrich Alexander University Of Erlangen Nuremberg CD33-specific single-chain immunotoxin and methods of use
US7612181B2 (en) * 2005-08-19 2009-11-03 Abbott Laboratories Dual variable domain immunoglobulin and uses thereof
US20070041905A1 (en) * 2005-08-19 2007-02-22 Hoffman Rebecca S Method of treating depression using a TNF-alpha antibody
EP2500357A3 (en) 2005-08-19 2012-10-24 Abbott Laboratories Dual variable domain immunoglobulin and uses thereof
AU2006283532B2 (en) 2005-08-19 2012-04-26 Abbvie Inc. Dual variable domain immunoglobin and uses thereof
US20090215992A1 (en) * 2005-08-19 2009-08-27 Chengbin Wu Dual variable domain immunoglobulin and uses thereof
CA2624562A1 (en) 2005-09-30 2007-04-12 Abbott Gmbh & Co. Kg Binding domains of proteins of the repulsive guidance molecule (rgm) protein family and functional fragments thereof, and their use
WO2007049286A1 (en) * 2005-10-27 2007-05-03 Tata Memorial Centre A system for ex-vivo separation of apoptotic chromatin particles from blood or plasma
NZ567286A (en) 2005-11-01 2012-03-30 Abbott Biotechnolgy Ltd Methods and compositions for diagnosing ankylosing spondylitis using biomarkers
TW200736277A (en) 2005-11-14 2007-10-01 Amgen Inc RANKL antibody-PTH/PTHrP chimeric molecules
CA2628703C (en) 2005-11-30 2019-10-29 Abbott Laboratories Anti-a.beta. globulomer antibodies, antigen-binding moieties thereof, corresponding hybridomas, nucleic acids, vectors, host cells, methods of producing said antibodies, compositions comprising said antibodies, uses of said antibodies and methods of using said antibodies
DK1976877T4 (en) 2005-11-30 2017-01-16 Abbvie Inc Monoclonal antibodies to amyloid beta protein and uses thereof
US20130172274A1 (en) 2005-12-20 2013-07-04 Duke University Methods and compositions for delivering active agents with enhanced pharmacological properties
US8841255B2 (en) 2005-12-20 2014-09-23 Duke University Therapeutic agents comprising fusions of vasoactive intestinal peptide and elastic peptides
ES2779992T3 (es) 2005-12-20 2020-08-21 Univ Duke Métodos y composiciones para suministrar agentes activos con propiedades farmacológicas potenciadas
WO2007087673A1 (en) 2006-02-01 2007-08-09 Arana Therapeutics Limited Domain antibody construct
TWI417301B (zh) 2006-02-21 2013-12-01 Wyeth Corp 對抗人類介白素-２２（ｉｌ-２２）之抗體及其用途
TW200744634A (en) 2006-02-21 2007-12-16 Wyeth Corp Methods of using antibodies against human IL-22
NZ611859A (en) 2006-04-05 2014-12-24 Abbvie Biotechnology Ltd Antibody purification
CA2564435A1 (en) 2006-04-10 2007-10-10 Abbott Biotechnology Ltd. Methods for monitoring and treating intestinal disorders
WO2007120626A2 (en) * 2006-04-10 2007-10-25 Abbott Biotechnology Ltd. Uses and compositions for treatment of ankylosing spondylitis
WO2007120656A2 (en) 2006-04-10 2007-10-25 Abbott Biotechnology Ltd. Uses and compositions for treatment of rheumatoid arthritis
US20080118496A1 (en) * 2006-04-10 2008-05-22 Medich John R Uses and compositions for treatment of juvenile rheumatoid arthritis
US20090317399A1 (en) * 2006-04-10 2009-12-24 Pollack Paul F Uses and compositions for treatment of CROHN'S disease
US9605064B2 (en) * 2006-04-10 2017-03-28 Abbvie Biotechnology Ltd Methods and compositions for treatment of skin disorders
EP2666472A3 (en) 2006-04-10 2014-04-02 Abbott Biotechnology Ltd Uses and compositions for treatment of psoriatic arthritis
EP2666478A3 (en) 2006-04-10 2014-10-22 AbbVie Biotechnology Ltd Uses and compositions for treatment of psoriasis
US20080131374A1 (en) * 2006-04-19 2008-06-05 Medich John R Uses and compositions for treatment of rheumatoid arthritis
US20100021451A1 (en) 2006-06-08 2010-01-28 Wong Robert L Uses and compositions for treatment of ankylosing spondylitis
US20080311043A1 (en) * 2006-06-08 2008-12-18 Hoffman Rebecca S Uses and compositions for treatment of psoriatic arthritis
JP5535623B2 (ja) 2006-06-30 2014-07-02 アッヴィ バイオテクノロジー リミテッド 自動注射装置
KR101625961B1 (ko) 2006-09-08 2016-05-31 애브비 바하마스 리미티드 인터루킨-13 결합 단백질
CN103276033A (zh) 2006-09-13 2013-09-04 雅培制药有限公司 细胞培养改良
US8911964B2 (en) 2006-09-13 2014-12-16 Abbvie Inc. Fed-batch method of making human anti-TNF-alpha antibody
EP2500416A1 (en) 2006-09-13 2012-09-19 Abbott Laboratories Cell culture improvements
EP2684895A1 (en) * 2006-10-27 2014-01-15 AbbVie Biotechnology Ltd Crystalline anti-hTNFalpha antibodies
CN101534824A (zh) 2006-11-17 2009-09-16 艾博特公司 作为化学活素受体拮抗剂的氨基吡咯烷
US20080206241A1 (en) 2006-11-21 2008-08-28 Kalobios Pharmaceuticals Inc. Methods of Treating Chronic Inflammatory Diseases Using a GM-CSF Antagonist
US8455626B2 (en) 2006-11-30 2013-06-04 Abbott Laboratories Aβ conformer selective anti-aβ globulomer monoclonal antibodies
US8324350B2 (en) 2006-12-29 2012-12-04 Abbott Laboratories Dual-specific IL-1α/IL-1β antibodies
CA2675233A1 (en) * 2007-01-16 2008-07-24 Abbott Laboratories Methods for treating psoriasis
JP2008209378A (ja) * 2007-01-31 2008-09-11 Fujifilm Corp バイオセンサー基板
DK2148691T3 (en) 2007-02-05 2015-08-17 Apellis Pharmaceuticals Inc Compstatinanaloger for use in the treatment of inflammatory states of the respiratory system
WO2008104386A2 (en) 2007-02-27 2008-09-04 Abbott Gmbh & Co. Kg Method for the treatment of amyloidoses
US8280711B2 (en) * 2007-03-12 2012-10-02 ESBATech, an Alcon Biomedical Research Unit, LLC. Sequence based engineering and optimization of single chain antibodies
CL2008000883A1 (es) * 2007-03-28 2008-10-03 Wyeth6 3 Metodo de deteccion de compuestos capaces de antagonizar la senalizacion de il-17f/il-17a; compuesto identificado por dicho metodo; uso de una cantidad de un antagonista de senalizacion de il-17f/il-17a, composicion farmaceutica que comprende dicho a
US7807168B2 (en) * 2007-04-10 2010-10-05 Vaccinex, Inc. Selection of human TNFα specific antibodies
WO2008124858A2 (en) * 2007-04-11 2008-10-23 F-Star Biotechnologische Forschungs- Und Entwicklungsges. M.B.H. Targeted receptor
EP2165194A4 (en) 2007-05-31 2010-09-08 Abbott Lab BIOMARKERS FOR PREDICTING RESPONSABILITY TO TNF ALPHA INHIBITORS IN AUTOIMMUNE DISEASES
WO2008150490A2 (en) * 2007-06-01 2008-12-11 Abbott Biotechnology Ltd. Uses and compositions for treatment of psoriasis and crohn's disease
CA2683791A1 (en) * 2007-06-06 2008-12-11 Domantis Limited Polypeptides, antibody variable domains & antagonists
AU2008259513B2 (en) * 2007-06-06 2014-07-24 Domantis Limited Polypeptides, antibody variable domains and antagonists
WO2008154543A2 (en) 2007-06-11 2008-12-18 Abbott Biotechnology Ltd. Methods for treating juvenile idiopathic arthritis
LT2170390T (lt) 2007-06-14 2019-01-10 Biogen Ma Inc. Natalizumabo antikūnų kompozicijos
WO2009000099A2 (en) * 2007-06-25 2008-12-31 Esbatech Ag Methods of modifying antibodies, and modified antibodies with improved functional properties
DK2164961T3 (en) * 2007-06-25 2015-03-02 Esbatech Alcon Biomed Res Unit Sequence based forward position and optimization of single chain ​​antibodies
CA2693771A1 (en) * 2007-07-13 2009-01-22 Abbott Biotechnology Ltd. Methods and compositions for pulmonary administration of a tnf.alpha. inhibitor
WO2009020654A1 (en) 2007-08-08 2009-02-12 Abbott Laboratories Compositions and methods for crystallizing antibodies
JP6035009B2 (ja) 2007-08-22 2016-11-30 ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ カリフォルニア 活性化可能な結合ポリペプチドおよびその同定方法ならびに使用
WO2009032128A1 (en) * 2007-08-28 2009-03-12 Abbott Biotechnology Ltd. Compositions and methods comprising binding proteins for adalimumab
JP2009082033A (ja) * 2007-09-28 2009-04-23 Kaneka Corp 完全ヒト型抗体生産法
KR101666228B1 (ko) 2007-09-28 2016-10-13 인트렉손 코포레이션 생물치료학적 분자를 발현시키기 위한 치료학적 유전자-스위치 작제물 및 생물반응기, 및 이의 용도
WO2009062151A1 (en) 2007-11-08 2009-05-14 Cytimmune Sciences, Inc. Compositions and methods for generating antibodies
US8883146B2 (en) 2007-11-30 2014-11-11 Abbvie Inc. Protein formulations and methods of making same
TWI543768B (zh) 2007-11-30 2016-08-01 艾伯維生物技術有限責任公司 蛋白質調配物及製造其之方法
CA2710333A1 (en) * 2008-01-03 2009-07-09 Abbott Biotechnology Ltd. Predicting long-term efficacy of a compound in the treatment of psoriasis
SG2013054218A (en) 2008-01-15 2014-10-30 Abbott Gmbh & Co Kg Powdered protein compositions and methods of making same
US8962803B2 (en) 2008-02-29 2015-02-24 AbbVie Deutschland GmbH & Co. KG Antibodies against the RGM A protein and uses thereof
KR20100135257A (ko) 2008-03-13 2010-12-24 바이오테스트 아게 질병 치료제
ES2569217T3 (es) 2008-03-13 2016-05-09 Biotest Ag Agente para tratar enfermedades
ES2610327T3 (es) 2008-03-13 2017-04-27 Biotest Ag Régimen de dosificación de anticuerpos anti-CD4 para el tratamiento de enfermedades autoinmunitarias
US8557239B2 (en) * 2009-09-14 2013-10-15 Abbvie Inc. Methods for treating psoriasis using antibodies that bind to the P40 subunit of IL-12 and/or IL-23
TWI461210B (zh) 2008-03-18 2014-11-21 Abbvie Inc 治療牛皮癬的方法
EP2899209A1 (en) 2008-04-29 2015-07-29 Abbvie Inc. Dual Variable Domain Immunoglobulins and uses thereof
US20100260668A1 (en) * 2008-04-29 2010-10-14 Abbott Laboratories Dual Variable Domain Immunoglobulins and Uses Thereof
EP2113568A1 (en) 2008-04-30 2009-11-04 Deutsches Rheuma-Forschungszentrum Berlin Knock-in mouse for modelling blockade of human TNFalpha
CA2723219A1 (en) 2008-05-09 2009-11-12 Abbott Gmbh & Co. Kg Antibodies to receptor of advanced glycation end products (rage) and uses thereof
WO2009142186A1 (ja) * 2008-05-20 2009-11-26 株式会社カネカ 細胞障害性組成物
BRPI0913406A2 (pt) 2008-06-03 2018-01-09 Abbott Lab imunoglobulinas de domínio variável duplo e usos das mesmas
EP2297208A4 (en) 2008-06-03 2012-07-11 Abbott Lab DUAL VARIABLE DOMAIN IMMUNOGLOBULINS AND ITS USES
CN110372792A (zh) 2008-06-25 2019-10-25 艾斯巴技术-诺华有限责任公司 抑制vegf的稳定和可溶的抗体
PT3241843T (pt) 2008-06-25 2021-09-10 Novartis Ag Otimização da solubilidade de imunoligantes
LT3444274T (lt) 2008-06-25 2021-03-25 Novartis Ag Stabilūs ir tirpūs antikūnai, slopinantys tnf
WO2009158704A2 (en) 2008-06-27 2009-12-30 Duke University Therapeutic agents comprising elastin-like peptides
US20110177070A1 (en) * 2008-07-02 2011-07-21 Emergent Product Development Seatlle, LLC TGF-Beta Antagonist Multi-Target Binding Proteins
BRPI0915825A2 (pt) 2008-07-08 2015-11-03 Abbott Lab proteínas de ligação à prostaglandina e2 usos das mesmas
US8822645B2 (en) 2008-07-08 2014-09-02 Abbvie Inc. Prostaglandin E2 dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
US20110159011A1 (en) * 2008-08-28 2011-06-30 Wyeth Llc Uses of il-22, il-17, and il-1 family cytokines in autoimmune diseases
CN102281898B (zh) * 2008-10-07 2015-06-03 成功大学 Il-20拮抗剂在治疗类风湿性关节炎和骨质疏松症中的应用
KR101593285B1 (ko) 2008-10-29 2016-02-11 아블린쓰 엔.브이. 단일 도메인 항원 결합 분자의 제형
WO2010056550A1 (en) 2008-10-29 2010-05-20 Wyeth Llc Methods for purification of single domain antigen binding molecules
US8415291B2 (en) 2008-10-31 2013-04-09 Centocor Ortho Biotech Inc. Anti-TNF alpha fibronectin type III domain based scaffold compositions, methods and uses
CN101419224B (zh) * 2008-11-06 2012-08-22 复旦大学附属华山医院 一种同时测定人血浆中霉酚酸酯、霉酚酸及其代谢物的方法
EP2350649A4 (en) * 2008-11-28 2012-11-14 Abbott Lab STABLE ANTIBODY COMPOSITIONS AND METHODS FOR STABILIZING THE SAME
CN101766602B (zh) * 2008-12-30 2012-01-11 中国医学科学院血液病医院（血液学研究所） 取代芳香基腙类化合物在作为肿瘤坏死因子抑制剂药物方面的应用
KR20110110247A (ko) 2008-12-30 2011-10-06 센토코 오르토 바이오테크 인코포레이티드 강직성 척추염 환자에서 항-ＴＮＦα 항체에 대한 임상적 반응을 예측하는 혈청 마커
EP3543256A1 (en) * 2009-01-12 2019-09-25 Cytomx Therapeutics Inc. Modified antibody compositions, methods of making and using thereof
EP2398494A4 (en) 2009-02-23 2015-10-28 Cytomx Therapeutics Inc Proproteins and their methods of use
US8030026B2 (en) 2009-02-24 2011-10-04 Abbott Laboratories Antibodies to troponin I and methods of use thereof
TW201613969A (en) * 2009-03-05 2016-04-16 Abbvie Inc IL-17 binding proteins
KR20110138412A (ko) 2009-04-16 2011-12-27 애보트 바이오테라퓨틱스 코포레이션 항-ΤΝＦ-α 항체 및 그의 용도
CN101875694B (zh) * 2009-04-28 2014-04-02 中国医学科学院基础医学研究所 TNFα的抗体及其用途
JP5677411B2 (ja) 2009-04-29 2015-02-25 アッヴィ バイオテクノロジー リミテッド 自動注入機器
WO2010129469A1 (en) * 2009-05-04 2010-11-11 Abbott Biotechnology Ltd. Stable high protein concentration formulations of human anti-tnf-alpha-antibodies
WO2010132872A1 (en) * 2009-05-15 2010-11-18 Novimmune S.A Combination therapies and methods using anti-cd3 modulating agents and anti-tnf antagonists
TW201109438A (en) * 2009-07-29 2011-03-16 Abbott Lab Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
HUE054744T2 (hu) 2009-08-14 2021-12-28 Phasebio Pharmaceuticals Inc Módosított vazoaktív intesztinális peptidek
AU2010283997B2 (en) * 2009-08-21 2015-04-09 Gilead Biologics, Inc. Methods and compositions for treatment of pulmonary fibrotic disorders
CA2771575A1 (en) 2009-08-29 2011-03-03 Abbott Laboratories Therapeutic dll4 binding proteins
RU2012112550A (ru) 2009-09-01 2013-10-10 Эбботт Лэборетриз Иммуноглобулины с двумя вариабельными доменами и их применение
CA2775291A1 (en) * 2009-09-24 2011-03-31 Xbiotech, Inc. Methods, compositions, and kits for reducing anti-antibody responses
JP5885664B2 (ja) 2009-09-25 2016-03-15 ゾーマ テクノロジー リミテッド スクリーニング法
US8926976B2 (en) 2009-09-25 2015-01-06 Xoma Technology Ltd. Modulators
US8716450B2 (en) 2009-10-15 2014-05-06 Abbvie Inc. Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
ES2796530T3 (es) * 2009-10-26 2020-11-27 Prometheus Biosciences Inc Ensayos para la detección de fármacos anti-TNF y autoanticuerpos
UY32979A (es) 2009-10-28 2011-02-28 Abbott Lab Inmunoglobulinas con dominio variable dual y usos de las mismas
WO2011053699A1 (en) * 2009-10-30 2011-05-05 Abbott Laboratories Sorf constructs and multiple gene expression
US8420083B2 (en) 2009-10-31 2013-04-16 Abbvie Inc. Antibodies to receptor for advanced glycation end products (RAGE) and uses thereof
US9244063B2 (en) 2009-11-11 2016-01-26 Gentian As Immunoassay for assessing related analytes of different origin
GB0920944D0 (en) 2009-11-30 2010-01-13 Biotest Ag Agents for treating disease
WO2011068927A2 (en) * 2009-12-04 2011-06-09 Abbott Laboratories 11-β-HYDROXYSTEROID DEHYDROGENASE TYPE 1 (11B-HSD1) INHIBITORS AND USES THEREOF
BR112012013734A2 (pt) 2009-12-08 2017-01-10 Abbott Gmbh & Co Kg anticorpos monoclonais contra a proteína rgm a para uso no tratamento da degeneração da camada de fibras nervosas da retina.
NZ600069A (en) 2009-12-15 2015-02-27 Abbvie Biotechnology Ltd Improved firing button for automatic injection device
JP2013514388A (ja) 2009-12-16 2013-04-25 フィリップ ボッシュ， 間質性膀胱炎の処置の方法
USRE49251E1 (en) 2010-01-04 2022-10-18 Mapi Pharma Ltd. Depot systems comprising glatiramer or pharmacologically acceptable salt thereof
WO2011092715A2 (en) * 2010-01-27 2011-08-04 Tata Memorial Centre Method for in-vivo binding of chromatin fragments
US20120014956A1 (en) 2010-02-02 2012-01-19 Hartmut Kupper Methods and compositions for predicting responsiveness to treatment with tnf-alpha inhibitor
CN102167741B (zh) * 2010-02-25 2014-05-14 上海百迈博制药有限公司 一种全人源抗TNF-α单克隆抗体、其制备方法及用途
CA2791631A1 (en) 2010-03-02 2011-09-09 Abbvie Inc. Therapeutic dll4 binding proteins
EP3372617B1 (en) 2010-04-02 2024-07-24 Amunix Pharmaceuticals, Inc. Binding fusion proteins, binding fusion protein-drug conjugates, xten-drug conjugates and methods of making and using same
KR20130010123A (ko) 2010-04-07 2013-01-25 아비에 인코포레이티드 ＴＮＦ-α 결합 단백질
CN104744591B (zh) 2010-04-15 2022-09-27 Abbvie德国有限责任两合公司 β淀粉样蛋白结合蛋白
ES2805873T3 (es) 2010-04-16 2021-02-15 Biogen Ma Inc Anticuerpos anti-VLA-4
SG10201503130UA (en) 2010-04-21 2015-06-29 Abbvie Biotechnology Ltd Wearable automatic injection device for controlled delivery of therapeutic agents
US8841417B2 (en) 2010-05-14 2014-09-23 Abbvie Inc. IL-1 binding proteins
US20110287018A1 (en) 2010-05-19 2011-11-24 Philip Bosch Methods of Treating Interstitial Cystitis
RS57543B1 (sr) 2010-06-03 2018-10-31 Abbvie Biotechnology Ltd Primene i kompozicije za lečenje hidradenitis suppurativa (hs)
WO2012006500A2 (en) 2010-07-08 2012-01-12 Abbott Laboratories Monoclonal antibodies against hepatitis c virus core protein
UY33492A (es) 2010-07-09 2012-01-31 Abbott Lab Inmunoglobulinas con dominio variable dual y usos de las mismas
WO2012009705A1 (en) 2010-07-15 2012-01-19 Zyngenia, Inc. Ang-2 binding complexes and uses thereof
TW201206473A (en) 2010-08-03 2012-02-16 Abbott Lab Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
WO2012024187A1 (en) 2010-08-14 2012-02-23 Abbott Laboratories Amyloid-beta binding proteins
EP3333188B1 (en) 2010-08-19 2022-02-09 Zoetis Belgium S.A. Anti-ngf antibodies and their use
PE20140229A1 (es) 2010-08-26 2014-03-27 Abbvie Inc Inmunoglobulinas con dominio variable dual y usos de las mismas
AR083495A1 (es) 2010-10-22 2013-02-27 Esbatech Alcon Biomed Res Unit Anticuerpos estables y solubles
UA113500C2 (xx) 2010-10-29 2017-02-10 Одержані екструзією розплаву тверді дисперсії, що містять індукуючий апоптоз засіб
EP2632436B1 (en) 2010-10-29 2018-08-29 Abbvie Inc. Solid dispersions containing an apoptosis-inducing agent
JP2014500712A (ja) * 2010-11-02 2014-01-16 アッヴィ・インコーポレイテッド 二重可変ドメイン免疫グロブリンおよびその使用
JP5919606B2 (ja) 2010-11-11 2016-05-18 アッヴィ バイオテクノロジー リミテッド 改良型高濃度抗ｔｎｆアルファ抗体液体製剤
WO2012071336A1 (en) 2010-11-23 2012-05-31 Abbott Laboratories Salts and crystalline forms of an apoptosis-inducing agent
PT2642999T (pt) 2010-11-23 2017-01-05 Abbvie Ireland Unlimited Co Métodos de tratamento que utilizam inibidores seletivos de bcl-2
AR084210A1 (es) * 2010-12-08 2013-05-02 Abbott Lab PROTEINAS DE UNION AL TNF-a
US20120275996A1 (en) 2010-12-21 2012-11-01 Abbott Laboratories IL-1 Binding Proteins
KR20130133247A (ko) 2010-12-21 2013-12-06 애브비 인코포레이티드 Ｉｌ-1-알파 및 -베타 이특이적 이원 가변 도메인 면역글로불린 및 이의 용도
EP2490024A1 (en) 2010-12-22 2012-08-22 Proteomika, S.L. Method to optimize the treatment of patients with biological drugs
CN106075664B (zh) 2011-01-24 2019-07-02 艾伯维生物技术有限公司 具有模制抓握面的自动注射装置
AU2012210170B2 (en) 2011-01-24 2016-09-29 Elcam Medical Agricultural Cooperative Association Ltd. Injector
MX342163B (es) 2011-01-24 2016-09-19 Abbvie Biotechnology Ltd Separacion de protectores de aguja de jeringas y dispositivos de inyeccion automaticos.
RU2455025C1 (ru) * 2011-02-10 2012-07-10 Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Белгородский государственный национальный исследовательский университет" (НИУ "БелГУ") Способ фармакологической коррекции ишемии конечности смесью растворов гомеопатических разведений
WO2012121403A1 (en) 2011-03-07 2012-09-13 The University Of Tokushima The method of treating amyotrophic lateral sclerosis
JP2014511711A (ja) 2011-03-18 2014-05-19 アッヴィ・インコーポレイテッド 自動注入デバイスおよびそのサブアセンブリを組み立てるためのシステム、デバイス、および方法
TWI671315B (zh) 2011-03-28 2019-09-11 法商賽諾菲公司 具有交叉結合區定向之雙重可變區類抗體結合蛋白
ES2669198T5 (es) 2011-03-29 2021-07-20 Abbvie Inc Despliegue de envolvente mejorado en dispositivos de inyección automáticos
WO2012145752A2 (en) 2011-04-21 2012-10-26 Abbott Laboratories Wearable automatic injection device for controlled administration of therapeutic agents
EP2702077A2 (en) 2011-04-27 2014-03-05 AbbVie Inc. Methods for controlling the galactosylation profile of recombinantly-expressed proteins
DK2714738T3 (en) 2011-05-24 2019-01-28 Zyngenia Inc MULTIVALENT AND MONOVALENT MULTISPECIFIC COMPLEXES AND THEIR APPLICATIONS
DK2715352T3 (da) 2011-05-31 2019-05-20 Biogen Ma Inc Fremgangsmåde til vurdering af risiko for pml
EP2717902B1 (en) 2011-06-06 2018-01-24 Phasebio Pharmaceuticals, Inc. Use of modified vasoactive intestinal peptides in the treatment of hypertension
CN103857411A (zh) 2011-07-13 2014-06-11 阿布维公司 使用抗il-13抗体治疗哮喘的方法和组合物
GB201112429D0 (en) * 2011-07-19 2011-08-31 Glaxo Group Ltd Antigen-binding proteins with increased FcRn binding
CA2843315A1 (en) * 2011-08-01 2013-02-07 Avaxia Biologics, Inc. Bovine polyclonal antibody specific for human tnf
CN109608543A (zh) * 2011-10-20 2019-04-12 艾斯巴技术-诺华有限责任公司 稳定的多抗原结合抗体
CN104203978A (zh) 2011-10-24 2014-12-10 艾伯维股份有限公司 针对硬化蛋白的免疫结合剂
HK1200321A1 (en) 2011-10-24 2015-08-07 Abbvie Inc. Bispecific immunobinders directed against tnf and il-17
IN2014CN03936A (pl) 2011-10-24 2015-09-04 Abbvie Inc
WO2013080050A2 (en) 2011-11-30 2013-06-06 Universitaetsklinikum Erlangen Methods and compositions for determining responsiveness to treatment with a tnf-alpha inhibitor
JP6342812B2 (ja) 2011-12-14 2018-06-13 アッヴィ・ドイチュラント・ゲー・エム・ベー・ハー・ウント・コー・カー・ゲー 鉄関連障害を診断および治療するための組成物および方法
EP2791175A2 (en) 2011-12-14 2014-10-22 Abbvie Deutschland GmbH & Co. KG Composition and method for the diagnosis and treatment of iron-related disorders
US20140359902A1 (en) 2011-12-16 2014-12-04 Synthon Biopharmaceuticals B.V. EXPRESSION OF SECRETORY IgA ANTIBODIES IN DUCKWEED
TW201333035A (zh) 2011-12-30 2013-08-16 Abbvie Inc 針對ｉｌ－１３及／或ｉｌ－１７之雙特異性結合蛋白
TW201333033A (zh) 2011-12-30 2013-08-16 Abbvie Inc 雙可變域免疫球蛋白及其用途
EP2807192B1 (en) 2012-01-27 2018-04-18 Abbvie Deutschland GmbH & Co. KG Composition and method for diagnosis and treatment of diseases associated with neurite degeneration
MX363700B (es) 2012-03-07 2019-03-29 Cadila Healthcare Ltd Formulaciones farmaceuticas de anticuerpos tnf-alfa.
WO2013158273A1 (en) 2012-04-20 2013-10-24 Abbvie Inc. Methods to modulate c-terminal lysine variant distribution
US9067990B2 (en) 2013-03-14 2015-06-30 Abbvie, Inc. Protein purification using displacement chromatography
US9150645B2 (en) 2012-04-20 2015-10-06 Abbvie, Inc. Cell culture methods to reduce acidic species
EP2657334B1 (en) 2012-04-26 2016-07-06 GeneFrontier Corporation Efficient method for displaying protein multimer
US9249182B2 (en) 2012-05-24 2016-02-02 Abbvie, Inc. Purification of antibodies using hydrophobic interaction chromatography
ES2894852T3 (es) 2012-06-06 2022-02-16 Zoetis Services Llc Anticuerpos anti-NGF caninizados y métodos de los mismos
ES2718478T3 (es) 2012-06-08 2019-07-02 Sutro Biopharma Inc Anticuerpos que comprenden restos de aminoácidos no naturales de localización específica, métodos para su preparación y métodos para su uso
UY34905A (es) 2012-07-12 2014-01-31 Abbvie Inc Proteínas de unión a il-1
AU2013308494B2 (en) 2012-08-31 2018-03-01 Sutro Biopharma, Inc. Modified amino acids comprising an azido group
AU2013309506A1 (en) 2012-09-02 2015-03-12 Abbvie Inc. Methods to control protein heterogeneity
US9512214B2 (en) 2012-09-02 2016-12-06 Abbvie, Inc. Methods to control protein heterogeneity
SG11201501715QA (en) 2012-09-07 2015-05-28 Coherus Biosciences Inc Stable aqueous formulations of adalimumab
AU2013318147B2 (en) * 2012-09-19 2018-01-04 Abbvie Biotherapeutics Inc. Methods for identifying antibodies with reduced immunogenicity
SG11201503324WA (en) 2012-11-01 2015-05-28 Abbvie Inc Stable dual variable domain immunoglobulin protein formulations
UY35110A (es) 2012-11-01 2014-05-30 Abbvie Inc Inmunoglobulinas de dominio variable dual anti-vegf/dll4 y usos de las mismas
TWI745610B (zh) 2012-11-14 2021-11-11 美商再生元醫藥公司 重組細胞表面捕捉蛋白質
US9550986B2 (en) 2012-12-21 2017-01-24 Abbvie Inc. High-throughput antibody humanization
US9856319B2 (en) 2012-12-28 2018-01-02 Abbvie Inc. Monovalent binding proteins
WO2014106001A2 (en) 2012-12-28 2014-07-03 Abbvie, Inc. Dual specific binding proteins having a receptor sequence
WO2014123696A1 (en) 2013-01-25 2014-08-14 Thymon, Llc Compositions for selective reduction of circulating bioactive soluble tnf and methods for treating tnf-mediated disease
JP2016508515A (ja) 2013-02-13 2016-03-22 ラボラトワール フランセ デュ フラクショヌマン エ デ ビオテクノロジーＬａｂｏｒａｔｏｉｒｅ Ｆｒａｎｃａｉｓ ｄｕ Ｆｒａｃｔｉｏｎｎｅｍｅｎｔ ｅｔ ｄｅｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ 高ガラクトシル化抗ＴＮＦ−α抗体およびその使用
EP2830651A4 (en) 2013-03-12 2015-09-02 Abbvie Inc HUMAN ANTIBODIES THAT BIND TNF-ALPHA AND PREPARATION METHODS
US9499614B2 (en) 2013-03-14 2016-11-22 Abbvie Inc. Methods for modulating protein glycosylation profiles of recombinant protein therapeutics using monosaccharides and oligosaccharides
US9194873B2 (en) 2013-03-14 2015-11-24 Abbott Laboratories HCV antigen-antibody combination assay and methods and compositions for use therein
SG11201507365VA (en) 2013-03-14 2015-10-29 Abbvie Inc Low acidic species compositions and methods for producing the same using displacement chromatography
CA2926384A1 (en) 2013-03-14 2014-10-02 Abbvie Inc. Low acidic species compositions and methods for producing and using the same
US9017687B1 (en) 2013-10-18 2015-04-28 Abbvie, Inc. Low acidic species compositions and methods for producing and using the same using displacement chromatography
WO2014159579A1 (en) * 2013-03-14 2014-10-02 Abbvie Inc. MUTATED ANTI-TNFα ANTIBODIES AND METHODS OF THEIR USE
US20140275082A1 (en) 2013-03-14 2014-09-18 Abbvie Inc. Apoptosis-inducing agents for the treatment of cancer and immune and autoimmune diseases
WO2014143342A1 (en) 2013-03-14 2014-09-18 Abbott Laboratories Hcv ns3 recombinant antigens and mutants thereof for improved antibody detection
WO2014143343A1 (en) 2013-03-14 2014-09-18 Abbott Laboratories Hcv core lipid binding domain monoclonal antibodies
TW201446800A (zh) 2013-03-15 2014-12-16 Abbvie Inc 針對ＴＮＦα之雙特異性結合蛋白
MX2015013163A (es) 2013-03-15 2016-04-04 Zyngenia Inc Complejos multiespecificos multivalente y monovalentes y sus usos.
CA2904448A1 (en) 2013-03-15 2014-09-18 Tariq Ghayur Dual specific binding proteins directed against il-1.beta. and/or il-17
US9469686B2 (en) 2013-03-15 2016-10-18 Abbott Laboratories Anti-GP73 monoclonal antibodies and methods of obtaining the same
AU2014269287B2 (en) * 2013-05-22 2016-08-25 Seoul National University Hospital Anti-TNF-alpha/CXCL10 double-targeting antibody and use thereof
CA2914566A1 (en) 2013-06-07 2014-12-11 Duke University Inhibitors of complement factor h
ES2865473T3 (es) 2013-07-10 2021-10-15 Sutro Biopharma Inc Anticuerpos que comprenden múltiples residuos de aminoácidos no naturales sitio-específicos, métodos para su preparación y métodos de uso
WO2015017683A1 (en) * 2013-07-31 2015-02-05 Malast Mary Antimicrobial compositions and methods of use
ES2915378T3 (es) 2013-09-13 2022-06-22 Hoffmann La Roche Procedimientos para detectar y cuantificar una proteína de célula huésped en líneas celulares
KR102571391B1 (ko) 2013-09-13 2023-08-29 제넨테크, 인크. 정제된 재조합 폴리펩티드를 포함하는 방법 및 조성물
EP3052640A2 (en) 2013-10-04 2016-08-10 AbbVie Inc. Use of metal ions for modulation of protein glycosylation profiles of recombinant proteins
CA2926644A1 (en) 2013-10-06 2015-04-09 Abbvie Inc. Dual specific binding proteins directed against immune cell receptors and autoantigens
WO2015054658A1 (en) 2013-10-11 2015-04-16 Sutro Biopharma, Inc. Modified amino acids comprising tetrazine functional groups, methods of preparation, and methods of their use
WO2015057910A1 (en) 2013-10-16 2015-04-23 Oncobiologics, Inc. Buffer formulations for enhanced antibody stability
US9181337B2 (en) 2013-10-18 2015-11-10 Abbvie, Inc. Modulated lysine variant species compositions and methods for producing and using the same
US9085618B2 (en) 2013-10-18 2015-07-21 Abbvie, Inc. Low acidic species compositions and methods for producing and using the same
US8946395B1 (en) 2013-10-18 2015-02-03 Abbvie Inc. Purification of proteins using hydrophobic interaction chromatography
US20150139988A1 (en) 2013-11-15 2015-05-21 Abbvie, Inc. Glycoengineered binding protein compositions
CA2931978A1 (en) 2013-12-02 2015-06-11 Abbvie Inc. Compositions and methods for treating osteoarthritis
CN103965357B (zh) 2013-12-31 2016-08-17 嘉和生物药业有限公司 一种抗人rankl抗体
US10955422B2 (en) 2014-02-27 2021-03-23 Biogen Ma, Inc. Method of assessing risk of PML
EP3674310A1 (en) 2014-03-10 2020-07-01 Richter Gedeon Nyrt. Immunoglobulin purification using pre-cleaning steps
JP2017511376A (ja) 2014-03-21 2017-04-20 アッヴィ・インコーポレイテッド 抗ｅｇｆｒ抗体及び抗体薬物コンジュゲート
AR099625A1 (es) * 2014-03-21 2016-08-03 Lilly Co Eli Anticuerpos de il-21
US10688187B2 (en) 2014-04-02 2020-06-23 Intas Pharmaceuticals Ltd. Liquid pharmaceutical composition of adalimumab
ES2818824T3 (es) 2014-05-08 2021-04-14 Phasebio Pharmaceuticals Inc Composiciones que comprenden una proteína de fusión de VIP-ELP para su uso en el tratamiento de fibrosis quística
LT2946765T (lt) 2014-05-23 2016-11-25 Ares Trading S.A. Skysta farmacinė kompozicija
EP2946767B1 (en) 2014-05-23 2016-10-05 Ares Trading S.A. Liquid pharmaceutical composition
EP2946766B1 (en) 2014-05-23 2016-03-02 Ares Trading S.A. Liquid pharmaceutical composition
FR3022462B1 (fr) * 2014-06-18 2018-04-27 Laboratoire Francais Du Fractionnement Et Des Biotechnologies Composition orale d'anticorps anti-tnfalpha
EP3145951A1 (en) 2014-06-24 2017-03-29 InSight Biopharmaceuticals Ltd. Methods of purifying antibodies
AU2015283270B9 (en) * 2014-06-30 2021-04-01 Merck Patent Gmbh Anti-TNFa antibodies with pH-dependent antigen binding
US20170226552A1 (en) 2014-07-03 2017-08-10 Abbvie Inc. Methods for modulating protein glycosylation profiles of recombinant protein therapeutics using cobalt
US20160185848A1 (en) 2014-07-09 2016-06-30 Abbvie Inc. Methods for modulating the glycosylation profile of recombinant proteins using sugars
US10755801B2 (en) 2014-07-11 2020-08-25 Iogenetics, Llc Identifying peptides having T-cell-exposed motifs with known frequency of occurrence in a reference database
UA123624C2 (uk) * 2014-09-03 2021-05-05 Бьорінґер Інґельхайм Інтернаціональ Ґмбх Сполука, специфічна до іл-23а та фнп-альфа, та її застосування
US10435464B1 (en) 2014-09-05 2019-10-08 Coherus Biosciences, Inc. Methods for making recombinant proteins
HUP1400510A1 (hu) 2014-10-28 2016-05-30 Richter Gedeon Nyrt Gyógyászati TNFalfa ellenes antitest készítmény
WO2016094881A2 (en) 2014-12-11 2016-06-16 Abbvie Inc. Lrp-8 binding proteins
WO2016103093A1 (en) 2014-12-23 2016-06-30 Pfizer Inc. Stable aqueous antibody formulation for anti tnf alpha antibodies
EP3085709B1 (en) 2014-12-28 2019-08-21 Genor Biopharma Co., Ltd Humanized anti-human rankl antibody, pharmaceutical composition and use thereof
EP3247718B1 (en) 2015-01-21 2021-09-01 Outlook Therapeutics, Inc. Modulation of charge variants in a monoclonal antibody composition
EP3053572A1 (en) 2015-02-06 2016-08-10 Ares Trading S.A. Liquid pharmaceutical composition
CN114652817A (zh) 2015-02-09 2022-06-24 费斯生物制药公司 用于治疗肌肉疾病和病症的方法和组合物
CN105777905B (zh) * 2015-03-24 2019-06-25 广东东阳光药业有限公司 一种全人源抗TNF-α单克隆抗体及其应用
EP3078675A1 (en) 2015-04-10 2016-10-12 Ares Trading S.A. Induction dosing regimen for the treatment of tnf alpha mediated disorders
WO2016179469A1 (en) * 2015-05-07 2016-11-10 Abbvie Inc. Methods and compositions for diagnosing and treating inflammatory bowel disease
UY36692A (es) 2015-05-29 2016-12-30 Abbvie Inc Anticuerpos anti-cd40 y usos de los mismos
TW201710286A (zh) 2015-06-15 2017-03-16 艾伯維有限公司 抗ｖｅｇｆ、ｐｄｇｆ及／或其受體之結合蛋白
FR3038517B1 (fr) 2015-07-06 2020-02-28 Laboratoire Francais Du Fractionnement Et Des Biotechnologies Utilisation de fragments fc modifies en immunotherapie
HU231463B1 (hu) 2015-08-04 2024-01-28 Richter Gedeon Nyrt. Módszer rekombináns proteinek galaktóz tartalmának növelésére
US11583584B1 (en) 2015-10-28 2023-02-21 Coherus Biosciences, Inc. Stable protein compositions and methods of their use
US11229702B1 (en) 2015-10-28 2022-01-25 Coherus Biosciences, Inc. High concentration formulations of adalimumab
GB201522394D0 (en) 2015-12-18 2016-02-03 Ucb Biopharma Sprl Antibodies
WO2017136433A1 (en) 2016-02-03 2017-08-10 Oncobiologics, Inc. Buffer formulations for enhanced antibody stability
US10465003B2 (en) 2016-02-05 2019-11-05 Janssen Biotech, Inc. Anti-TNF antibodies, compositions, methods and use for the treatment or prevention of type 1 diabetes
WO2017158101A1 (en) * 2016-03-17 2017-09-21 Numab Innovation Ag ANTI-TNFα-ANTIBODIES AND FUNCTIONAL FRAGMENTS THEREOF
LT3219726T (lt) * 2016-03-17 2021-01-25 Tillotts Pharma Ag Anti-tnf alfa antikūnai ir jų funkciniai fragmentai
EP3440113A1 (en) 2016-04-08 2019-02-13 Gilead Sciences, Inc. Compositions and methods for treating cancer, inflammatory diseases and autoimmune diseases
US11071782B2 (en) 2016-04-20 2021-07-27 Coherus Biosciences, Inc. Method of filling a container with no headspace
KR102460040B1 (ko) 2016-04-27 2022-11-01 애브비 인코포레이티드 항-il-13 항체를 이용한 il-13 활성이 유해한 질환의 치료 방법
LT3464318T (lt) 2016-06-02 2021-06-25 Abbvie Inc. Gliukokortikoidų receptorių agonistas ir jo imunokonjugatai
MX2018015285A (es) 2016-06-08 2019-09-18 Abbvie Inc Anticuerpos anti-b7-h3 y conjugados de anticuerpo y farmaco.
US20200002432A1 (en) 2016-06-08 2020-01-02 Abbvie Inc. Anti-cd98 antibodies and antibody drug conjugates
EP3468615A1 (en) 2016-06-08 2019-04-17 AbbVie Inc. Anti-egfr antibody drug conjugates
CA3027181A1 (en) 2016-06-08 2017-12-14 Abbvie Inc. Anti-egfr antibody drug conjugates
UY37278A (es) 2016-06-08 2018-01-31 Abbvie Inc Anticuerpos anti-b7-h3 y conjugados de fármaco y anticuerpos
JP2019526529A (ja) 2016-06-08 2019-09-19 アッヴィ・インコーポレイテッド 抗ｂ７−ｈ３抗体及び抗体薬物コンジュゲート
EP3472197A1 (en) 2016-06-15 2019-04-24 Sutro Biopharma, Inc. Antibodies with engineered ch2 domains, compositions thereof and methods of using the same
WO2018018613A1 (zh) 2016-07-29 2018-02-01 广东东阳光药业有限公司 一种提高抗体纯度的细胞培养基和培养方法
US12097292B2 (en) 2016-08-28 2024-09-24 Mapi Pharma Ltd. Process for preparing microparticles containing glatiramer acetate
LT3506921T (lt) 2016-08-31 2023-08-10 Mapi Pharma Ltd Ilgesnio atpalaidavimo sistemos, kuriose yra glatiramero acetato
WO2018045258A1 (en) * 2016-09-02 2018-03-08 The University Of Chicago TREATMENT OF TNF-alpha CYTOTOXICITY
US11453726B2 (en) * 2016-09-15 2022-09-27 Quadrucept Bio Limited Multimers, tetramers and octamers
CN110383068A (zh) 2016-10-03 2019-10-25 雅培实验室 评估患者样品中uch-l1状态的改进方法
WO2018075408A1 (en) 2016-10-17 2018-04-26 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Methods of treating acute myeloid leukemia (aml) with combinations of anti-cd200 antibodies, cytarabine, and daunorubicin
WO2018075818A1 (en) 2016-10-21 2018-04-26 Amgen Inc. Pharmaceutical formulations and methods of making the same
WO2018102594A1 (en) 2016-12-01 2018-06-07 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Methods of treating solid tumors with anti-cd200 antibodies
US10610104B2 (en) 2016-12-07 2020-04-07 Progenity, Inc. Gastrointestinal tract detection methods, devices and systems
JP7150724B2 (ja) 2016-12-14 2022-10-11 ビオラ・セラピューティクス・インコーポレイテッド 消化管疾病のｔｎｆ阻害薬による治療
CN110234348B (zh) 2016-12-16 2024-06-25 蓝鳍生物医药公司 抗-含cub结构域蛋白1(cdcp1)抗体、抗体药物缀合物及其使用方法
EP3558363A1 (en) 2016-12-21 2019-10-30 Amgen Inc. Anti-tnf alpha antibody formulations
JOP20190162A1 (ar) 2016-12-30 2019-06-27 Biocad Joint Stock Co تركيبة صيدلانية مائية من جسم مضاد لـ tnf? أحادي النسيلة معاود الارتباط الجيني
CA3049857A1 (en) * 2017-01-11 2018-07-19 Celltrion Inc. Stable liquid formulation
TWI787230B (zh) 2017-01-20 2022-12-21 法商賽諾菲公司 抗ＴＧＦ-β抗體及其用途
TW202421659A (zh) 2017-01-20 2024-06-01 美商健臻公司 骨靶向抗體
CA3052095A1 (en) 2017-01-30 2018-08-02 Janssen Biotech, Inc. Anti-tnf antibodies, compositions, and methods for the treatment of active psoriatic arthritis
IL319561A (en) 2017-02-07 2025-05-01 Janssen Biotech Inc Anti-TNF antibodies, compositions and methods for treating active ankylosing spondylitis
US11608357B2 (en) 2018-08-28 2023-03-21 Arecor Limited Stabilized antibody protein solutions
EP3372241A1 (en) 2017-03-06 2018-09-12 Ares Trading S.A. Liquid pharmaceutical composition
EP3372242A1 (en) 2017-03-06 2018-09-12 Ares Trading S.A. Liquid pharmaceutical composition
CA3052513A1 (en) 2017-03-23 2018-09-27 Abbott Laboratories Methods for aiding in the diagnosis and determination of the extent of traumatic brain injury in a human subject using the early biomarker ubiquitin carboxy-terminal hydrolase l1
AU2018242998B2 (en) 2017-03-26 2023-11-02 Mapi Pharma Ltd. Glatiramer depot systems for treating progressive forms of multiple sclerosis
WO2018184692A1 (en) 2017-04-07 2018-10-11 Ares Trading S.A. Liquid pharmaceutical composition
US10877048B2 (en) 2017-04-15 2020-12-29 Abbott Laboratories Methods for aiding in the hyperacute diagnosis and determination of traumatic brain injury in a human subject using early biomarkers
US10865238B1 (en) 2017-05-05 2020-12-15 Duke University Complement factor H antibodies
CN110651190A (zh) 2017-05-25 2020-01-03 雅培实验室 用早期生物标记物帮助确定是否对已遭受或可能已遭受头部损伤的人受试者执行成像的方法
WO2018222783A1 (en) 2017-05-30 2018-12-06 Abbott Laboratories Methods for aiding in diagnosing and evaluating a mild traumatic brain injury in a human subject using cardiac troponin i and early biomarkers
CA3068041C (en) 2017-07-03 2024-06-25 Abbott Laboratories Improved methods for measuring ubiquitin carboxy-terminal hydrolase l1 levels in blood
WO2019067499A1 (en) 2017-09-27 2019-04-04 Alexion Pharmaceuticals, Inc. BIOMARKER SIGNATURE FOR PREDICTING A TUMOR RESPONSE TO ANTI-CD200 THERAPY
PE20201286A1 (es) 2017-12-01 2020-11-24 Abbvie Inc Agonista del receptor de glucocorticoides e inmunoconjugados de este
CN109879962B (zh) * 2017-12-06 2022-10-11 北京科立思维生物科技有限公司 抗tnf单链抗体、抗il-6单链抗体及其融合蛋白及其应用
CN111094983A (zh) 2017-12-09 2020-05-01 雅培实验室 使用胶质细胞原纤维酸性蛋白(gfap)和/或泛素羧基末端水解酶l1(uch-l1)帮助诊断和评价已遭受骨科损伤并已遭受或可能已遭受头部损伤诸如轻度创伤性脑损伤(tbi)的患者的方法
JP7379165B2 (ja) 2017-12-09 2023-11-14 アボット・ラボラトリーズ Ｇｆａｐとｕｃｈ－ｌ１との組合せを使用する、ヒト対象における外傷性脳損傷を診断及び査定する一助となるための方法
WO2019126133A1 (en) 2017-12-20 2019-06-27 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Liquid formulations of anti-cd200 antibodies
WO2019126536A1 (en) 2017-12-20 2019-06-27 Alexion Pharmaceuticals Inc. Humanized anti-cd200 antibodies and uses thereof
MX2020009526A (es) 2018-03-12 2020-10-28 Zoetis Services Llc Anticuerpos anti-ngf y metodos de estos.
JP7331000B2 (ja) 2018-03-26 2023-08-22 アレクシオン ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド 補体ｃ３転換酵素のプロテアーゼ活性を測定するためのスループットの高い方法
CN112867394B9 (zh) 2018-06-04 2024-12-06 马萨诸塞州渤健公司 具有降低的效应功能的抗vla-4抗体
US20230312700A1 (en) 2018-06-20 2023-10-05 Progenity, Inc. Treatment of a disease of the gastrointestinal tract with a tnf inhibitor
CA3103664A1 (en) 2018-07-03 2020-01-09 Novartis Ag Methods of treating or selecting a treatment for a subject resistant to tnf inhibitor using a nlrp3 antagonist
CN113329769A (zh) 2018-10-11 2021-08-31 斯克里普斯研究学院 具有反应性精氨酸的抗体化合物及相关的抗体药物缀合物
EP3870168A1 (en) 2018-10-24 2021-09-01 Novartis AG Compounds and compositions for treating conditions associated with nlrp activity
AU2019374190B2 (en) 2018-11-05 2024-02-22 Beijing Hanmi Pharmaceutical Co., Ltd. Anti-TNFα/anti IL-17A natural antibody structure-like heterodimer form of bispecific antibody and preparation method therefor
HU231514B1 (hu) 2018-11-07 2024-07-28 Richter Gedeon Nyrt. Sejttenyészetben előállított rekombináns glikoprotein glikozilációs mintázatának megváltoztatására szolgáló módszer
WO2020102098A1 (en) 2018-11-13 2020-05-22 Novartis Inflammasome Research, Inc. Compounds and compositions for treating conditions associated with nlrp activity
WO2020102100A1 (en) 2018-11-13 2020-05-22 Novartis Inflammasome Research, Inc. Compounds and compositions for treating conditions associated with nlrp activity
WO2020106757A1 (en) 2018-11-19 2020-05-28 Progenity, Inc. Ingestible device for delivery of therapeutic agent to the gastrointestinal tract
WO2020118011A1 (en) 2018-12-06 2020-06-11 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Anti-alk2 antibodies and uses thereof
ES3031988T3 (en) 2018-12-25 2025-07-14 Beijing Baishihekang Pharmaceutical Tech Bsjpharma Co Ltd Small rna medicament for prevention and treatment of inflammation-related diseases and combination thereof
WO2020154321A1 (en) 2019-01-22 2020-07-30 Novartis Inflammasome Research, Inc. Compounds and compositions for treating conditions associated with nlrp activity
HU231498B1 (hu) 2019-04-04 2024-05-28 Richter Gedeon Nyrt Immunglobulinok affinitás kromatográfiájának fejlesztése kötést megelőző flokkulálás alkalmazásával
KR102323342B1 (ko) * 2019-04-26 2021-11-08 주식회사 와이바이오로직스 IL-17A 및 TNF-α에 특이적으로 결합하는 이중표적 항체
MX2021014302A (es) 2019-05-23 2022-01-04 Janssen Biotech Inc Metodo para tratar la enfermedad inflamatoria del intestino con una terapia de combinacion de anticuerpos contra il-23 y tnf alfa.
WO2021002887A1 (en) 2019-07-02 2021-01-07 Novartis Inflammasome Research, Inc. Gut-targeted nlrp3 antagonists and their use in therapy
EP3997124A4 (en) * 2019-07-09 2024-01-03 National Institute for Biotechnology in the Negev Ltd. ANTIBODIES WITH REDUCED IMMUNOGENICITY
CN115666704B (zh) 2019-12-13 2025-09-26 比特比德科有限责任公司 用于将治疗剂递送至胃肠道的可摄取装置
FR3104582A1 (fr) 2019-12-17 2021-06-18 Commissariat A L'energie Atomique Et Aux Energies Alternatives Variants de l’adalimumab au potentiel immunogène réduit
IL295387A (en) 2020-02-05 2022-10-01 Larimar Therapeutics Inc Tat peptide binding proteins and uses thereof
WO2021178597A1 (en) 2020-03-03 2021-09-10 Sutro Biopharma, Inc. Antibodies comprising site-specific glutamine tags, methods of their preparation and methods of their use
EP4136459A1 (en) 2020-04-13 2023-02-22 Abbott Laboratories Methods, complexes and kits for detecting or determining an amount of a ss-coronavirus antibody in a sample
EP4149548A4 (en) 2020-05-13 2024-05-08 Disc Medicine, Inc. ANTI-HEMOJUVELIN ANTIBODIES (HJV) FOR THE TREATMENT OF MYELOFIBROSIS
CN115768466A (zh) 2020-05-21 2023-03-07 詹森生物科技公司 用抗IL-23和TNFα抗体的联合疗法治疗炎性肠病的方法
KR20230042301A (ko) 2020-08-04 2023-03-28 애벗트 라보라토리이즈 샘플에서 sars-cov-2 단백질을 검출하기 위한 개선된 방법 및 키트
CN111944052B (zh) * 2020-08-26 2022-02-11 中国药科大学 抗TNF-α/PD-1双特异性抗体及其应用
CN112010970B (zh) * 2020-10-30 2021-01-12 迈威(上海)生物科技股份有限公司 一种去除重组表达抗体聚体和降解产物的方法
CA3198161A1 (en) 2020-12-01 2022-06-09 Beth MCQUISTON Use of one or more biomarkers to determine traumatic brain injury (tbi) in a subject having received a head computerized tomography scan that is negative for a tbi
WO2023102384A1 (en) 2021-11-30 2023-06-08 Abbott Laboratories Use of one or more biomarkers to determine traumatic brain injury (tbi) in a subject having received a head computerized tomography scan that is negative for a tbi
US11672929B2 (en) 2020-12-02 2023-06-13 Breathe Restore, Inc. Product delivery devices and methods
US20240270859A1 (en) 2020-12-09 2024-08-15 Hk Inno.N Corporation ANTI-OX40L ANTIBODY, ANTI-OX40L/ANTI-TNFa BISPECIFIC ANTIBODY, AND USES THEREOF
CA3202331A1 (en) * 2020-12-18 2022-06-23 Stephanie A. Pierce Tnf alpha and ngf antibodies for veterinary use
EP4271998A1 (en) 2020-12-30 2023-11-08 Abbott Laboratories Methods for determining sars-cov-2 antigen and anti-sars-cov-2 antibody in a sample
AR124681A1 (es) 2021-01-20 2023-04-26 Abbvie Inc Conjugados anticuerpo-fármaco anti-egfr
EP4294827A1 (en) 2021-02-19 2023-12-27 Theripion, Inc. Paraoxonase fusion polypeptides and related compositions and methods
WO2022232286A1 (en) 2021-04-27 2022-11-03 Generation Bio Co. Non-viral dna vectors expressing anti-coronavirus antibodies and uses thereof
MX2023012643A (es) 2021-04-27 2024-01-05 Generation Bio Co Vectores de adn no virales que expresan anticuerpos terapéuticos y usos de estos.
JP2024519858A (ja) 2021-05-18 2024-05-21 アボット・ラボラトリーズ 小児対象における脳損傷を査定する方法
CA3222291A1 (en) 2021-06-14 2022-12-22 Jaime MARINO Methods of diagnosing or aiding in diagnosis of brain injury caused by acoustic energy, electromagnetic energy, an over pressurization wave, and/or blast wind
WO2022271782A1 (en) * 2021-06-22 2022-12-29 University Of Virginia Patent Foundation Compositions and methods for detecting and regulating fibronectin-integrin interactions and signaling
US20250002527A1 (en) 2021-08-26 2025-01-02 Duality Biologics (Suzhou) Co., Ltd. Steroid compound and conjugate thereof
JP2024534849A (ja) 2021-08-31 2024-09-26 アボット・ラボラトリーズ 脳の損傷を診断する方法及びシステム
CN118715440A (zh) 2021-08-31 2024-09-27 雅培实验室 诊断脑损伤的方法和系统
WO2023056268A1 (en) 2021-09-30 2023-04-06 Abbott Laboratories Methods and systems of diagnosing brain injury
JP2025503439A (ja) 2021-12-17 2025-02-04 アボット・ラボラトリーズ 血液試料におけるｕｃｈ－ｌ１、ｇｆａｐ及び他のバイオマーカーを決定するためのシステム及び方法
CN119256227A (zh) 2022-02-04 2025-01-03 雅培实验室 用于检测样品中泛素羧基末端水解酶l1和/或胶质纤维酸性蛋白的存在或测量其量的侧向流方法、测定和装置
KR20240161965A (ko) 2022-03-14 2024-11-13 제너레이션 바이오 컴퍼니 이종 프라임 부스트 백신 조성물 및 사용 방법
EP4547714A1 (en) * 2022-06-28 2025-05-07 Adafre BioSciences, LLC Anti-tnf-alpha antibodies and compositions
CN120167040A (zh) 2022-06-29 2025-06-17 雅培实验室 用于确定生物样本中的gfap的磁性定点照护型系统和测定
CN116903738A (zh) * 2022-08-02 2023-10-20 北京绿竹生物技术股份有限公司 一种低甘露糖型抗人肿瘤坏死因子-α单抗及其用途
EP4583855A1 (en) 2022-09-07 2025-07-16 MDX Management LLC Shp-1 inhibitors for treating cancer
WO2024059708A1 (en) 2022-09-15 2024-03-21 Abbott Laboratories Biomarkers and methods for differentiating between mild and supermild traumatic brain injury
WO2024097804A1 (en) 2022-11-02 2024-05-10 Mdx Management Llc Combination of a tyrosine kinase inhibitor and a pro-inflammatory agent for treating cancer
AU2024239074A1 (en) 2023-03-17 2025-10-02 Mdx Management Llc Compositions and methods for ameliorating adverse effects of therapies
WO2024211475A1 (en) 2023-04-04 2024-10-10 Abbott Laboratories Use of biomarkers to determine whether a subject has sustained, may have sustained or is suspected of sustaining a subacute acquired brain injury (abi)
WO2024226971A1 (en) 2023-04-28 2024-10-31 Abbott Point Of Care Inc. Improved assays, cartridges, and kits for detection of biomarkers, including brain injury biomarkers
WO2025038745A1 (en) 2023-08-16 2025-02-20 Mdx Management Llc Compositions and methods for activating immune cells
WO2025188921A1 (en) 2024-03-06 2025-09-12 Mdx Management Llc Shp-1 inhibitors and activators of t cells
WO2025238106A1 (en) 2024-05-15 2025-11-20 M6P Therapeutics (Switzerland) GmbH Lysosome-targeting degradation fusion design

Family Cites Families (114)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4680276A (en) * 1977-05-25 1987-07-14 Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale Metal polypeptides
JPS58501544A (ja) 1981-09-08 1983-09-16 ザ　ロツクフエラ−　ユニヴア−シテイ エンドトキシン誘発メディエ−タ−（ショック検定）によるリポプロティンリパ−ゼの抑圧
US5672347A (en) 1984-07-05 1997-09-30 Genentech, Inc. Tumor necrosis factor antagonists and their use
IL73883A (en) 1984-12-20 1990-12-23 Yeda Res & Dev Monoclonal antibodies against tnf-alpha,hybridomas producing them and method for the purification of tnf-alpha
US4661016A (en) * 1985-04-11 1987-04-28 Mobil Oil Corporation Subsea flowline connector
EP0212489B1 (en) 1985-08-16 1994-11-30 The Rockefeller University Anabolic activity modulator and uses thereof
DE3631229A1 (de) 1986-09-13 1988-03-24 Basf Ag Monoklonale antikoerper gegen humanen tumornekrosefaktor (tnf) und deren verwendung
GB8630273D0 (en) * 1986-12-18 1987-01-28 Til Medical Ltd Pharmaceutical delivery systems
AU626572B2 (en) 1988-07-18 1992-08-06 Chiron Corporation Monoclonal antibodies reactive with cachectin
GB8823869D0 (en) 1988-10-12 1988-11-16 Medical Res Council Production of antibodies
US4940723A (en) * 1988-10-20 1990-07-10 University Of North Carolina, Chapel Hill Use of bis-(5-amidino-2-benzimidazolyl) methane (BABIM) to treat arthritis
EP0366043B1 (en) 1988-10-24 1994-03-30 Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd. Monoclonal antibody
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
ZA902949B (en) * 1989-05-05 1992-02-26 Res Dev Foundation A novel antibody delivery system for biological response modifiers
DE3918082A1 (de) * 1989-06-02 1991-01-24 Max Planck Gesellschaft Mittel gegen autoimmunerkrankungen
US6451983B2 (en) 1989-08-07 2002-09-17 Peptech Limited Tumor necrosis factor antibodies
EP0486526B2 (en) 1989-08-07 2001-03-07 Peptech Limited Tumour necrosis factor binding ligands
US5959087A (en) * 1989-08-07 1999-09-28 Peptide Technology, Ltd. Tumour necrosis factor binding ligands
GB8928874D0 (en) 1989-12-21 1990-02-28 Celltech Ltd Humanised antibodies
US5859205A (en) 1989-12-21 1999-01-12 Celltech Limited Humanised antibodies
US6150584A (en) 1990-01-12 2000-11-21 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US6673986B1 (en) 1990-01-12 2004-01-06 Abgenix, Inc. Generation of xenogeneic antibodies
US6075181A (en) 1990-01-12 2000-06-13 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
GB9014932D0 (en) 1990-07-05 1990-08-22 Celltech Ltd Recombinant dna product and method
US5789650A (en) 1990-08-29 1998-08-04 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
JP2938569B2 (ja) 1990-08-29 1999-08-23 ジェンファーム インターナショナル，インコーポレイティド 異種免疫グロブリンを作る方法及びトランスジェニックマウス
US5545806A (en) 1990-08-29 1996-08-13 Genpharm International, Inc. Ransgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5633425A (en) 1990-08-29 1997-05-27 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US6300129B1 (en) 1990-08-29 2001-10-09 Genpharm International Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US6255458B1 (en) 1990-08-29 2001-07-03 Genpharm International High affinity human antibodies and human antibodies against digoxin
US5770429A (en) 1990-08-29 1998-06-23 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5625126A (en) 1990-08-29 1997-04-29 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US7084260B1 (en) 1996-10-10 2006-08-01 Genpharm International, Inc. High affinity human antibodies and human antibodies against human antigens
US5661016A (en) 1990-08-29 1997-08-26 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes
GB9022547D0 (en) 1990-10-17 1990-11-28 Wellcome Found Purified immunoglobulin
GB2279077B (en) 1990-12-21 1995-06-14 Celltech Ltd Therapeutic compositions comprising recombinant antibodies specific for the TNFalpha
US5994510A (en) 1990-12-21 1999-11-30 Celltech Therapeutics Limited Recombinant antibodies specific for TNFα
GB9109645D0 (en) 1991-05-03 1991-06-26 Celltech Ltd Recombinant antibodies
GB9028123D0 (en) 1990-12-28 1991-02-13 Erba Carlo Spa Monoclonal antibodies against human tumor necrosis factor alpha
US20040120952A1 (en) 2000-08-07 2004-06-24 Centocor, Inc Anti-TNF antibodies and peptides of human tumor necrosis factor
US5698195A (en) 1991-03-18 1997-12-16 New York University Medical Center Methods of treating rheumatoid arthritis using chimeric anti-TNF antibodies
US6277969B1 (en) 1991-03-18 2001-08-21 New York University Anti-TNF antibodies and peptides of human tumor necrosis factor
US20060246073A1 (en) 1991-03-18 2006-11-02 Knight David M Anti-TNF antibodies and peptides of human tumor necrosis factor
US20070298040A1 (en) 1991-03-18 2007-12-27 Centocor, Inc. Methods of treating seronegative arthropathy with anti-TNF antibodies
US5656272A (en) 1991-03-18 1997-08-12 New York University Medical Center Methods of treating TNF-α-mediated Crohn's disease using chimeric anti-TNF antibodies
DE69233701T2 (de) * 1991-03-18 2008-04-10 New York University Monoklonale und chimäre Antikörper spezifisch für menschlichen Tumornekrosefaktor
US7192584B2 (en) 1991-03-18 2007-03-20 Centocor, Inc. Methods of treating psoriasis with anti-TNF antibodies
US5328985A (en) 1991-07-12 1994-07-12 The Regents Of The University Of California Recombinant streptavidin-protein chimeras useful for conjugation of molecules in the immune system
EP0605522B1 (en) * 1991-09-23 1999-06-23 Medical Research Council Methods for the production of humanized antibodies
US5869619A (en) * 1991-12-13 1999-02-09 Xoma Corporation Modified antibody variable domains
US6270766B1 (en) 1992-10-08 2001-08-07 The Kennedy Institute Of Rheumatology Anti-TNF antibodies and methotrexate in the treatment of arthritis and crohn's disease
US5741488A (en) * 1992-10-08 1998-04-21 The Kennedy Institute For Rheumatology Treatment of rheumatoid arthritis with anti-CD4 antibodies in conjunction with anti-TNF antibodies
DE122009000074I1 (de) 1993-03-05 2011-12-01 Bayer Healthcare Ag Humane monoklonale anti-TNF alpha Antikorper.
DE69432412T2 (de) 1993-05-12 2004-01-29 Xoma Corp Gelonin und einen antikörper entahltende immuntoxine
WO1994029347A1 (en) 1993-06-03 1994-12-22 Therapeutic Antibodies Inc. Antibody fragments in therapy
EP0724651B1 (en) 1993-10-19 2008-08-20 The Scripps Research Institute Synthetic human neutralizing monoclonal antibodies to human immunodeficiency virus
EP0659766A1 (en) 1993-11-23 1995-06-28 Schering-Plough Human monoclonal antibodies against human cytokines and methods of making and using such antibodies
JPH09509835A (ja) 1994-03-04 1997-10-07 メルク エンド カンパニー インコーポレーテッド アラニン走査型突然変異誘発によるｉｎ ｖｉｔｒｏ抗体アフィニティー成熟
JPH07289288A (ja) * 1994-04-27 1995-11-07 L T T Kenkyusho:Kk 抗リウマチ薬の効果評価方法
CA2192821A1 (en) 1994-06-24 1996-01-04 Wayne R. Gombotz Controlled release polypeptide compositions and methods of treating inflammatory bowel disease
US5561053A (en) 1994-08-05 1996-10-01 Genentech, Inc. Method for selecting high-expressing host cells
GB9416721D0 (en) * 1994-08-18 1994-10-12 Short Brothers Plc A bias yarn assembly forming device
US6113898A (en) 1995-06-07 2000-09-05 Idec Pharmaceuticals Corporation Human B7.1-specific primatized antibodies and transfectomas expressing said antibodies
US6090382A (en) * 1996-02-09 2000-07-18 Basf Aktiengesellschaft Human antibodies that bind human TNFα
BRPI9707379C8 (pt) 1996-02-09 2017-12-12 Abbott Biotech Ltd composições farmacêuticas compreendendo anticorpo humano recombinante geneticamente engenheirado, e anticorpo humano recombinante geneticamente engenheirado.
WO2000058362A1 (en) * 1999-03-26 2000-10-05 Human Genome Sciences, Inc. Neutrokine-alpha binding proteins and methods based thereon
US20060018907A1 (en) 2000-08-07 2006-01-26 Centocor, Inc. Anti-TNF antibodies and peptides of human tumor necrosis factor
US20050249735A1 (en) 2000-08-07 2005-11-10 Centocor, Inc. Methods of treating ankylosing spondylitis using anti-TNF antibodies and peptides of human tumor necrosis factor
UA81743C2 (uk) 2000-08-07 2008-02-11 Центокор, Инк. МОНОКЛОНАЛЬНЕ АНТИТІЛО ЛЮДИНИ, ЩО СПЕЦИФІЧНО ЗВ'ЯЗУЄТЬСЯ З ФАКТОРОМ НЕКРОЗУ ПУХЛИН АЛЬФА (ФНПα), ФАРМАЦЕВТИЧНА КОМПОЗИЦІЯ, ЩО ЙОГО МІСТИТЬ, ТА СПОСІБ ЛІКУВАННЯ РЕВМАТОЇДНОГО АРТРИТУ
US20030012786A1 (en) 2001-05-25 2003-01-16 Teoh Leah S. Use of anti-TNF antibodies as drugs in treating septic disorders of anemic patients
CA2385745C (en) 2001-06-08 2015-02-17 Abbott Laboratories (Bermuda) Ltd. Methods of administering anti-tnf.alpha. antibodies
US20030161828A1 (en) 2002-02-19 2003-08-28 Abbott Gmbh & Co. Kg Use of TNF antagonists as drugs for the treatment of patients with an inflammatory reaction and without suffering from total organ failure
US20040009172A1 (en) 2002-04-26 2004-01-15 Steven Fischkoff Use of anti-TNFalpha antibodies and another drug
US20030206898A1 (en) 2002-04-26 2003-11-06 Steven Fischkoff Use of anti-TNFalpha antibodies and another drug
US20090280065A1 (en) 2006-04-10 2009-11-12 Willian Mary K Uses and Compositions for Treatment of Psoriasis
MY151032A (en) 2002-07-19 2014-03-31 Abbott Lab S A Treatment of tnf? related disorders
US20040033228A1 (en) 2002-08-16 2004-02-19 Hans-Juergen Krause Formulation of human antibodies for treating TNF-alpha associated disorders
US20040054414A1 (en) * 2002-09-18 2004-03-18 Trieu Hai H. Collagen-based materials and methods for augmenting intervertebral discs
MY150740A (en) 2002-10-24 2014-02-28 Abbvie Biotechnology Ltd Low dose methods for treating disorders in which tnf? activity is detrimental
TW201705980A (zh) 2004-04-09 2017-02-16 艾伯維生物技術有限責任公司 用於治療ＴＮＦα相關失調症之多重可變劑量療法
WO2006041970A2 (en) 2004-10-08 2006-04-20 Abbott Biotechnology Ltd. Treatment of respiratory syncytial virus (rsv) infection
KR20150055116A (ko) * 2005-05-16 2015-05-20 애브비 바이오테크놀로지 리미티드 미란성 다발관절염의 치료를 위한 ｔｎｆ 억제제의 용도
US20070041905A1 (en) 2005-08-19 2007-02-22 Hoffman Rebecca S Method of treating depression using a TNF-alpha antibody
NZ567286A (en) 2005-11-01 2012-03-30 Abbott Biotechnolgy Ltd Methods and compositions for diagnosing ankylosing spondylitis using biomarkers
NZ611859A (en) 2006-04-05 2014-12-24 Abbvie Biotechnology Ltd Antibody purification
WO2007120656A2 (en) 2006-04-10 2007-10-25 Abbott Biotechnology Ltd. Uses and compositions for treatment of rheumatoid arthritis
WO2007120626A2 (en) 2006-04-10 2007-10-25 Abbott Biotechnology Ltd. Uses and compositions for treatment of ankylosing spondylitis
EP2666472A3 (en) 2006-04-10 2014-04-02 Abbott Biotechnology Ltd Uses and compositions for treatment of psoriatic arthritis
US20090317399A1 (en) 2006-04-10 2009-12-24 Pollack Paul F Uses and compositions for treatment of CROHN'S disease
US9605064B2 (en) 2006-04-10 2017-03-28 Abbvie Biotechnology Ltd Methods and compositions for treatment of skin disorders
US20080118496A1 (en) 2006-04-10 2008-05-22 Medich John R Uses and compositions for treatment of juvenile rheumatoid arthritis
US20080131374A1 (en) 2006-04-19 2008-06-05 Medich John R Uses and compositions for treatment of rheumatoid arthritis
US20100021451A1 (en) 2006-06-08 2010-01-28 Wong Robert L Uses and compositions for treatment of ankylosing spondylitis
US20080311043A1 (en) 2006-06-08 2008-12-18 Hoffman Rebecca S Uses and compositions for treatment of psoriatic arthritis
JP5535623B2 (ja) 2006-06-30 2014-07-02 アッヴィ バイオテクノロジー リミテッド 自動注射装置
CN103276033A (zh) 2006-09-13 2013-09-04 雅培制药有限公司 细胞培养改良
EP2684895A1 (en) 2006-10-27 2014-01-15 AbbVie Biotechnology Ltd Crystalline anti-hTNFalpha antibodies
AU2008233173B2 (en) 2007-03-29 2013-09-19 Abbvie Inc. Crystalline anti-human IL-12 antibodies
EP2165194A4 (en) 2007-05-31 2010-09-08 Abbott Lab BIOMARKERS FOR PREDICTING RESPONSABILITY TO TNF ALPHA INHIBITORS IN AUTOIMMUNE DISEASES
WO2008150490A2 (en) 2007-06-01 2008-12-11 Abbott Biotechnology Ltd. Uses and compositions for treatment of psoriasis and crohn's disease
WO2008154543A2 (en) 2007-06-11 2008-12-18 Abbott Biotechnology Ltd. Methods for treating juvenile idiopathic arthritis
CA2693771A1 (en) 2007-07-13 2009-01-22 Abbott Biotechnology Ltd. Methods and compositions for pulmonary administration of a tnf.alpha. inhibitor
WO2009020654A1 (en) 2007-08-08 2009-02-12 Abbott Laboratories Compositions and methods for crystallizing antibodies
TWI543768B (zh) 2007-11-30 2016-08-01 艾伯維生物技術有限責任公司 蛋白質調配物及製造其之方法
CA2710333A1 (en) 2008-01-03 2009-07-09 Abbott Biotechnology Ltd. Predicting long-term efficacy of a compound in the treatment of psoriasis
WO2009091912A2 (en) 2008-01-15 2009-07-23 Abbott Laboratories Improved mammalian expression vectors and uses thereof
SG2013054218A (en) 2008-01-15 2014-10-30 Abbott Gmbh & Co Kg Powdered protein compositions and methods of making same
JP2011511777A (ja) 2008-01-30 2011-04-14 アボット・ラボラトリーズ 抗体断片を結晶化するための組成物及び方法
EP2271671A2 (en) 2008-03-24 2011-01-12 Abbott Biotechnology Ltd. Tnf-alpha inhibitors for treating bone loss
JP5677411B2 (ja) 2009-04-29 2015-02-25 アッヴィ バイオテクノロジー リミテッド 自動注入機器
WO2010129469A1 (en) 2009-05-04 2010-11-11 Abbott Biotechnology Ltd. Stable high protein concentration formulations of human anti-tnf-alpha-antibodies
US20120014956A1 (en) 2010-02-02 2012-01-19 Hartmut Kupper Methods and compositions for predicting responsiveness to treatment with tnf-alpha inhibitor
RS57543B1 (sr) 2010-06-03 2018-10-31 Abbvie Biotechnology Ltd Primene i kompozicije za lečenje hidradenitis suppurativa (hs)
US9085618B2 (en) * 2013-10-18 2015-07-21 Abbvie, Inc. Low acidic species compositions and methods for producing and using the same

Also Published As

Publication number Publication date
UA57726C2 (uk) 2003-07-15
US20070249813A1 (en) 2007-10-25
RU2012102323A (ru) 2013-07-27
CN1504752A (zh) 2004-06-16
NO20026202L (no) 1998-10-07
US8206714B2 (en) 2012-06-26
US8753633B2 (en) 2014-06-17
WO1997029131A1 (en) 1997-08-14
BG66509B1 (bg) 2015-11-30
SK106298A3 (en) 1999-03-12
AU2122997A (en) 1997-08-28
RU2458704C2 (ru) 2012-08-20
US20130330357A1 (en) 2013-12-12
CA2243459C (en) 2002-09-17
HK1214607A1 (en) 2016-07-29
CZ247698A3 (cs) 1998-11-11
SI9720020B (en) 2001-12-31
CA2243459A1 (en) 1997-08-14
BRPI9707379B8 (pt) 2015-07-07
BG66195B1 (bg) 2012-01-31
JP5422501B2 (ja) 2014-02-19
MX9806347A (es) 1998-10-31
IL206994A0 (en) 2010-12-30
NO983627D0 (no) 1998-08-07
NO983627L (no) 1998-10-07
JP2003177130A (ja) 2003-06-27
CZ292465B6 (cs) 2003-09-17
KR19990082430A (ko) 1999-11-25
ES2198552T3 (es) 2004-02-01
HU0204115D0 (en) 2003-02-28
US20100040604A1 (en) 2010-02-18
CN103275221A (zh) 2013-09-04
NO320657B1 (no) 2006-01-09
BR9707379A (pt) 1999-04-13
JP2013091666A (ja) 2013-05-16
LU91062I2 (fr) 2004-04-26
HK1214610A1 (en) 2016-07-29
EP0929578B1 (en) 2003-05-02
NO20026202D0 (no) 2002-12-23
NZ576716A (en) 2011-02-25
NL300143I1 (nl) 2004-05-03
RU2458704C9 (ru) 2012-12-10
KR100317188B1 (ko) 2002-02-19
US20030092059A1 (en) 2003-05-15
JP5689902B2 (ja) 2015-03-25
HU230048B1 (hu) 2015-06-29
IL151641A0 (en) 2003-04-10
HK1019452A1 (en) 2000-02-11
DK0929578T3 (da) 2003-08-25
NO319955B1 (no) 2005-10-03
UA82823C2 (en) 2008-05-26
MX336813B (es) 2016-02-02
JP4404181B2 (ja) 2010-01-27
NL300143I2 (nl) 2004-07-01
EP0929578A1 (en) 1999-07-21
RO119831B1 (ro) 2005-04-29
DE122004000003I2 (de) 2007-03-29
US6258562B1 (en) 2001-07-10
HUP9901874A3 (en) 2000-05-29
DE122004000003I1 (de) 2004-09-23
NO2004002I2 (no) 2008-02-04
JP2000507810A (ja) 2000-06-27
US7541031B2 (en) 2009-06-02
CY2463B1 (en) 2005-06-03
HU230515B1 (hu) 2016-10-28
BR9707379B1 (pt) 2009-08-11
RO123028B1 (ro) 2010-07-30
BR9715219B1 (pt) 2010-02-23
JP2010209119A (ja) 2010-09-24
HUP1500179A2 (en) 1999-09-28
US20130330356A1 (en) 2013-12-12
BRPI9715219B8 (pt) 2015-07-07
BG109311A (en) 2006-03-31
NO2017038I1 (no) 2017-08-01
HUP9901874A2 (hu) 1999-09-28
HK1125951A1 (en) 2009-08-21
BG107537A (bg) 2003-09-30
JP5951056B2 (ja) 2016-07-13
DE69721548T2 (de) 2004-04-01
NO2017038I2 (no) 2017-11-17
CN102070715A (zh) 2011-05-25
IL125697A (en) 2005-03-20
NZ512006A (en) 2005-05-27
JP2007045828A (ja) 2007-02-22
TR199801532T2 (xx) 1998-11-23
IL218518A0 (en) 2012-04-30
BG102755A (en) 1999-05-31
BRPI9707379C8 (pt) 2017-12-12
RU2270030C2 (ru) 2006-02-20
BG64564B1 (bg) 2005-07-29
NO20040154L (no) 1998-10-07
JP3861118B2 (ja) 2006-12-20
CY2005011I1 (el) 2011-06-08
JP5759526B2 (ja) 2015-08-05
DE69721548D1 (de) 2003-06-05
NO322755B1 (no) 2006-12-04
SK284040B6 (sk) 2004-08-03
PT929578E (pt) 2003-09-30
HK1214608A1 (en) 2016-07-29
JP4890997B2 (ja) 2012-03-07
US7223394B2 (en) 2007-05-29
HK1214609A1 (en) 2016-07-29
HK1066860A1 (en) 2005-04-01
JP2016104798A (ja) 2016-06-09
HK1125972A1 (en) 2009-08-21
CN101712720A (zh) 2010-05-26
DE122004000004I1 (de) 2004-08-12
NO20040052L (no) 1998-10-07
HU221984B1 (hu) 2003-03-28
CN103275221B (zh) 2016-08-17
BG112042A (bg) 2015-10-30
AU722077B2 (en) 2000-07-20
SI9720020A (sl) 1999-10-31
RU2005113954A (ru) 2006-11-20
PL328411A1 (en) 1999-01-18
PL188192B1 (pl) 2004-12-31
RU2003120859A (ru) 2005-01-10
CN100429232C (zh) 2008-10-29
BG64776B1 (bg) 2006-03-31
NO316711B1 (no) 2004-04-13
NZ331579A (en) 2001-06-29
BG110703A (en) 2010-10-29
US20120258114A1 (en) 2012-10-11
JP2014055150A (ja) 2014-03-27
CN1215407A (zh) 1999-04-28
NZ562935A (en) 2009-06-26
US20090155205A1 (en) 2009-06-18
CN1300173C (zh) 2007-02-14
HU228630B1 (en) 2013-04-29
NZ536216A (en) 2006-08-31
JP2015108011A (ja) 2015-06-11
ATE239041T1 (de) 2003-05-15
US20130115224A1 (en) 2013-05-09
US8372400B2 (en) 2013-02-12
IL125697A0 (en) 1999-04-11

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP4404181B2 (ja) ヒトＴＮＦαに結合するヒト抗体
EP2930186A1 (en) Human antibodies that bind human tnfalpha
PL217217B1 (pl) Zastosowanie izolowanego ludzkiego przeciwciała anty-TNFα lub jego części wiążącej antygen oraz zestaw i gotowa strzykawka
MXPA98006347A (en) Human antibodies that link human tnfalfa
AU6664900A (en) Human antibodies that bind human TNFalpha
AU2004202769A1 (en) Human antibodies that bind human TNFalpha