SK284040B6 - Ľudské protilátky k ľudskému TNFalfa, ich použitie, spôsob ich syntézy a farmaceutické prípravky s ich obsahom - Google Patents

Ľudské protilátky k ľudskému TNFalfa, ich použitie, spôsob ich syntézy a farmaceutické prípravky s ich obsahom Download PDF

Info

Publication number
SK284040B6
SK284040B6 SK1062-98A SK106298A SK284040B6 SK 284040 B6 SK284040 B6 SK 284040B6 SK 106298 A SK106298 A SK 106298A SK 284040 B6 SK284040 B6 SK 284040B6
Authority
SK
Slovakia
Prior art keywords
seq
antibody
amino acid
human
tnfα
Prior art date
Application number
SK1062-98A
Other languages
English (en)
Other versions
SK106298A3 (en
Inventor
Jochen G. Salfeld
Deborah J. Allen
Zehra Kaymakcalan
Boris Labkovsky
John A. Mankovich
Brian T. Mcguinness
Andrew J. Roberts
Paul Sakorafas
Hendricus R. J. M. Hoogenboom
David Schoenhaut
Tristan J. Vaughan
Michael White
Alison J. Wilton
Original Assignee
Abbott Laboratories (Bermuda) Ltd.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=26707297&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=SK284040(B6) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Priority claimed from US08/599,226 external-priority patent/US6090382A/en
Application filed by Abbott Laboratories (Bermuda) Ltd. filed Critical Abbott Laboratories (Bermuda) Ltd.
Publication of SK106298A3 publication Critical patent/SK106298A3/sk
Publication of SK284040B6 publication Critical patent/SK284040B6/sk

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
    • C07K16/241—Tumor Necrosis Factors
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/02—Stomatological preparations, e.g. drugs for caries, aphtae, periodontitis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/16—Central respiratory analeptics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/06—Antigout agents, e.g. antihyperuricemic or uricosuric agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A61P29/02—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID] without antiinflammatory effect
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/04—Anorexiants; Antiobesity agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A61P31/22—Antivirals for DNA viruses for herpes viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P33/00—Antiparasitic agents
    • A61P33/02—Antiprotozoals, e.g. for leishmaniasis, trichomoniasis, toxoplasmosis
    • A61P33/06—Antimalarials
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P39/00—General protective or antinoxious agents
    • A61P39/02—Antidotes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/04—Inotropic agents, i.e. stimulants of cardiac contraction; Drugs for heart failure
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/08—Vasodilators for multiple indications
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/64—General methods for preparing the vector, for introducing it into the cell or for selecting the vector-containing host
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/10—Cells modified by introduction of foreign genetic material
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S424/00—Drug, bio-affecting and body treating compositions
    • Y10S424/81—Drug, bio-affecting and body treating compositions involving autoimmunity, allergy, immediate hypersensitivity, delayed hypersensitivity, immunosuppression, immunotolerance, or anergy

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Pulmonology (AREA)

Abstract

Ľudské protilátky, výhodne rekombinantné ľudské protilátky, ktoré sa špecificky viažu na ľudský faktor nekrózy nádorov alfa (TNFalfa). Izolovaná ľudská protilátka alebo jej antigén-väzbová časť: a. disociuje z ľudského TNFalfa s rýchlostnou konštantou Koff 1 x 10exp(-3) s-1 alebo menšou, stanovené povrchovou plazmónovou rezonanciou; b. má CDR3 doménu ľahkého reťazca obsahujúcu aminokyselinovú sekvenciu SEQ ID NO: 3, alebo sekvenciu modifikovanú zo SEQ ID NO:3 jednou substitúciou alanínu v pozícii 1, 4, 5, 7 alebo 8 alebo jednou až piatimi konzervatívnymi aminokyselinovými substitúciami v pozíciách 1, 3, 4, 6, 7, 8 a/alebo 9; c. má CDR3 doménu ťažkého reťazca obsahujúcu aminokyselinovú sekvenciu SEQ ID NO: 4, alebo sekvenciu modifikovanú zo SEQ ID NO: 4 jednou substitúciou alanínu v pozícii 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10 alebo 11 alebo jednou až piatimi konzervatívnymi aminokyselinovými substitúciami v pozíciách 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10, 11 a/alebo 12. Uvedené protilátky alebo ich časti sú použiteľné na detekciu ľudského TNFalfa, t. j. hTNFalfa a na inhibíciu hTNFalfa u ľudských subjektov trpiacich ochorením, pri ktorom je aktivita hTNFalfa škodlivá. Ďalej sú opísané nukleové kyseliny, vektory a hostiteľské bunky na expresiu rekombinantných ľudských protilátok a spôsob ich syntézy.ŕ

Description

Predkladaný vynález sa týka ľudských protilátok alebo ich antigén-väzbových častí, k ľudskému faktoru nekrózy nádorov a, TNFa a ich použitia. Ďalej sa predkladaný vynález týka nukleových kyselín, vektorov a hostiteľských buniek na expresiu rekombinantných ľudských protilátok a spôsobu syntézy rekombinantných ľudských protilátok.
Doterajší stav techniky
Faktor nekrózy nádorov a (TNFa) je cytokín produkovaný mnohými typmi buniek, vrátane monocytov a makrofágov, ktorý bol pôvodne identifikovaný vďaka jeho schopnosti indukovať nekrózu istých typov nádorov pri myšiach (pozri napríklad Old, L. (1985), Science 230: 630 632). Následne bol faktor nazývaný kachexín, asociovaný s kachexiou, identifikovaný ako rovnaká molekula ako TNFa. Predpokladala sa účasť TNFa v sprostredkovaní šoku (pozri napríklad Beutler, B a Cerami, A (1988) Annu. Rev. Biochem., 57: 505 - 518; Beutler, B a Cerami, A (1989) Annu. Rev. Immunol. 7: 625 - 655). Ďalej sa predpokladá účasť TNFa v patofyziológii mnohých ďalších ľudských ochorení a porúch, vrátane sepsy, infekcií, autoimunitných ochorení, rejekcie transplantátu a reakcie štepu proti hostiteľovi (pozri napríklad Moeller, A. et al., Cytokine 2: 162 až 169 (1990); U. S. patent č. 5231024, Moeller et al.; európska patentová prihláška publikačné č. 260610 Bl, Moeller, A. et al..; Vasilli, P. Annu. Rev. Immunol., 10: 411 až 452 (1992); Tracey, K. J. a Cerami, A. Annu. Rev. Med. 45:491 -503 (1994).
Vzhľadom na škodlivú úlohu ľudského TNFa (hTNFa) v mnohých ľudských ochoreniach boli navrhnuté terapeutické stratégie na inhibíciu alebo zrušenie aktivity hTNFa. Konkrétne, boli navrhnuté protilátky, ktoré sa viažu na a neutralizujú hTNFa ako prostriedok na inhibíciu aktivity hTNFa. Jednými z prvých takých protilátok boli myšie monoklonálne protilátky (mAb), secemované hybridómami pripravenými z lymfocytov myší imunizovaných hTNFa (pozri napríklad Hahn, T. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82: 3814 - 3818 (1985); Liang, C. M. et al., Biochem. Biophys. Res. Commun. 137: 847 - 854 (1986); Hirai, M et al., J. Immunol. Methods 96: 57 - 62 (1987); Fendly, B.M. et al., Hybridoma 6: 359 - 370 (1987); Moeller, A. et al., Cytokine 2: 162 - 169 (1990); U. S. patent č. 5231024, Moeller et al., európska patentová prihláška publikačné č. 186833 Bl, Wallach, D.; európska patentová prihláška publikačné č. 218868 Al, Old et al.; európska patentová prihláška publikačné č. 260610 Al, Moeller et al.). Hoci tieto myšie anti-hTNFa protilátky často mali vysokú afinitu pre hTNFa (napríklad Kd < 10’9M) a boli schopné neutralizovať aktivitu hTNFa, ich použitie in vivo je obmedzené problémami spojenými s podaním myších protilátok ľuďom ako je krátky polčas v sére, neschopnosť spúšťať určité ľudské efektorové funkcie a vyvolanie nežiaducej imunitnej odpovede proti myším protilátkam u ľudí („ľudská antimyšia protilátka“ (HAMA) reakcia).
Pri pokuse o prekonanie týchto problémov spojených s úplnými myšími protilátkami u ľudí boli myšie anti-hTNFa protilátky geneticky spracované tak, aby boli viac podobné ľudským. Napríklad boli pripravené chimérické protilátky, v ktorých sú variabilné regióny protilátkových reťazcov odvodené od myší a konštantné regióny protilátkových reťazcov sú odvodené od ľudí (Knight, D.M. et al., Mol. Immunol. 30: 1443 - 1453 (1993); PCT prihláška č. WO
92/16553 od Daddona, P. E. et al.). Ďalej boli tiež pripravené humanizované protilátky, v ktorých sú hypervariabilné domény variabilných regiónov protilátky odvodené od myší, ale zvyšok variabilných regiónov a konštantné regióny protilátky sú ľudské (PCT prihláška č. WO 92/11383, Adair, J. R. et al.). Ale keďže tieto chimérické a humanizované protilátky majú stále ešte nejaké myšie sekvencie, môžu stále vyvolať nežiaducu imunitnú reakciu, ľudskú reakciu proti chimérickej protilátke (HACA), najmä pokiaľ sú podávané dlhodobo, napríklad v chronických indikáciách, ako je reumatoidná artritída (pozri napríklad Elliot, M. J. et al. Lancet 344: 1125 - 1127 (1994); Elliot, M. J. et al., Lancet 344: 1105 - 1110 (1994).
Výhodným inhibitorom hTNFa k myším mAb alebo ich derivátom (napríklad chimérickým alebo humanizovaným protilátkam) môže byť úplne ľudská anti-hTNFa protilátka, pretože také agens by nemalo vyvolávať HAMA reakciu, ani keď bude používané dlhodobo. Ľudské monoklonálne autoprotilátky proti hTNFa boli pripravené s použitím ľudskej hybridómovej techniky (Boyle, P. et al., Celí. Immunol. 152: 556 - 558, (1993); Boyle, P. et al., Celí. Immunol. 152: 569 - 581, (1993); Medzinárodná patentová prihláška publikačné č. 614984 A2, Boyle et al.). Ale pri týchto od hybridómov odvodených monoklonálnych autoprotilátkach bolo uvedené, že majú afinitu k hTNFa, ktorá je príliš nízka na určenie bežnými spôsobmi, neboli schopné viazať sa na solubilných TNFa a neboli schopné neutralizovať cytotoxicitu indukovanú hTNFa (pozri Boyle et al.). Okrem toho, úspech týchto hybridómnych techník závisí od prirodzenej prítomnosti lymfocytov produkujúcich autoprotilátky špecifické pre hTNFa v ľudskej periférnej krvi. Niektoré štúdie detegovali sérové autoprotilátky proti hTNFa u ľudských subjektov (Fomsgaard, A. et al., Scand. J, Immunol. 30: 219 - 223 (1989); Bendtzen, K. et al., Prog. Leukocyte Biol. 10B: 447 - 452 (1990), zatiaľ čo iné nie (Leusch, H - G., et al., J. Immunol. Methods 139: 145147(1991).
Alternatívou k prirodzene sa vyskytujúcim ľudským anti-hTNFa protilátkam by mala byť rekombinantná hTNFa protilátka. Rekombinantné ľudské protilátky, ktoré viažu hTNFa s relatívne nízkou afinitou (t. j. Kd« 10'7 M) a rýchlosťou (t. j. K^ w 10'2 s'1) boli opísané (Griffiths, A. D. et al., EMBO J., 12: 725 - 734 (1993)). Predsa však, vzhľadom na ich relatívne rýchlu disociačnú kinetiku nie sú tieto protilátky vhodné na terapeutické použitie. Okrem toho bola opísaná rekombinantná ľudská anti-hTNFa protilátka, ktorá neutralizuje aktivitu hTNFa, ale dosť zvyšuje väzbu hTNFa na povrch buniek a zvyšuje intemalizáciu hTNFa (Lidbury, A. et al., Biotechnol. Ther. 5: 27 - 45 (1994); PCT prihláška č. WO 92/03145 od Aston, R. et al.).
V súlade s tým stále existuje potreba ľudských protilátok, ako sú rekombinantné ľudské protilátky, ktoré sa viažu na solubilný hTNFa s vysokou afinitou a ktoré majú pomalú disociačnú kinetiku, a ktoré majú kapacitu pre neutralizáciu aktivity hTNFa, vrátane cytotoxicity indukovanej hTNFa (in vitro a in vivo) a vrátane aktivácie buniek indukovanej hTNFa.
Podstata vynálezu
Predkladaný vynález poskytuje ľudské protilátky, výhodne rekombinantné ľudské protilátky, ktoré sa špecificky viažu na ľudský TNFa. Protilátky podľa predkladaného vynálezu sú charakterizované väzbou na hTNFa s vysokou afinitou a pomalou disociačnou kinetikou a s neutralizáciou aktivity hTNFa, vrátane cytotoxicity indukovanej hTNFa (in vitro a in vivo) a vrátane aktivácie buniek indukovanej hTNFa. Protilátky podľa predkladaného vynálezu sú ďalej charakterizované väzbou na hTNFa, ale nie na hTNFp (lymfotoxín) a tým, že majú tiež schopnosť väzby na TNFa od iných primátov a TNFa od iných zvierat, než sú primáty, okrem väzby na ľudský TNFa.
Protilátky podľa predkladaného vynálezu môžu byť kompletné (napríklad IgGl alebo IgG4 protilátky) alebo môžu byť obmedzené iba na časť viažucu antigén (napr. Fab, F(ab')2 alebo scFv fragment). Najvýhodnejšia rekombinantná protilátka podľa predkladaného vynálezu, nazvaná D2E7, má CDR3 doménu ľahkého reťazca obsahujúcu aminokyselinovú sekvenciu SEQ ID NO: 3 a CDR3 doménu ťažkého reťazca obsahujúcu aminokyselinovú sekvenciu SEQ ID NO: 4. Výhodne má D2E7 protilátka variabilný región ľahkého reťazca (LCVR) obsahujúci aminokyselinovú sekvenciu SEQ ID NO: 1 a variabilný región ťažkého reťazca (HCVR) obsahujúci aminokyselinovú sekvenciu SEQ ID NO:2.
V jednom uskutočnení poskytuje vynález izolovanú ľudskú protilátku alebo jej antigén-väzbovú časť, ktorá disociuje z ľudského TNFa s Kd 1 x 10'8 M alebo menšou a rýchlostnou konštantou 1 x 10‘3s'’ alebo menšou, ako sú obe tieto hodnoty stanovené povrchovou plazmónovou rezonanciou, a ktorá neutralizuje cytotoxicitu ľudského TNFa v štandardnom in vitro L929 teste s IC50 1 x 10‘7 M alebo menšou. Výhodnejšie izolovaná ľudská protilátka alebo jej antigén-väzbová časť, disociuje z ľudského TNFa s Koff 5 x 10V alebo menšou, ešte lepšie s Koff 1 x 10‘4s_1 alebo menšou.
Výhodnejšie izolovaná ľudská protilátka alebo jej antigén-väzbová časť, neutralizuje cytotoxicitu ľudského TNFa v štandardnom in vitro L929 teste s IC501 x 10‘8 M alebo menšou, ešte lepšie s IC5o 1 x 10’9 M alebo menšou a najlepšie s IC50 5 x 1O’10 M alebo menšou.
Predmetom vynálezu je izolovaná ľudská protilátka, alebo jej antigén-väzbová časť, s týmito charakteristikami:
a) disociuje z ľudského TNFa s rýchlostnou konštantou Koff 1 x ÍO’V alebo menšou, stanovené povrchovou plazmónovu rezonanciou;
b) má CDR3 doménu ľahkého reťazca obsahujúcu aminokyselinovú sekvenciu SEQ ID NO: 3 alebo sekvenciu modifikovanú zo SEQ ID NO: 3 jednou substitúciou alaninu v pozícii 1, 4, 5, 7 alebo 8, alebo jednou až piatimi konzervatívnymi aminokyselinovými substitúciami v pozíciách 1, 3,4,6,7, 8 a/alebo 9.ň,
c) má CDR3 doménu ťažkého reťazca obsahujúcu aminokyselinovú sekvenciu SEQ ID NO: 4 alebo sekvenciu modifikovanú zo SEQ ID NO: 4 jednou substitúciou alaninu v pozícii 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10 alebo 11, alebo jednou až piatimi konzervatívnymi aminokyselinovými substitúciami v pozíciách 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10, 11 a/alebo 12.
Lepšie, protilátka, alebo jej antigén-väzbová časť, disociuje z ľudského TNFa s Koff 5 x 10“4s'1 alebo menšou. Ešte lepšie, protilátka, alebo jej antigén-väzbová časť, disociuje z ľudského TNFa s KofI 1 x lOV alebo menšou.
V ešte inom uskutočnení poskytuje vynález ľudskú protilátku alebo jej antigén-väzbovú časť, s LCVR majúcim CDR3 doménu obsahujúcu aminokyselinovú sekvenciu SEQ ID NO: 3 alebo sekvenciu modifikovanú zo SEQ ID NO: 3 jednou substitúciou alaninu v pozícii 1, 4, 5, 7 alebo 8 a s HCVR majúcim CDR3 doménu obsahujúcu aminokyselinovú sekvenciu SEQ ID NO: 4 alebo sekvenciu modifikovanú zo SEQ ID NO: 4 jednou substitúciou alaninu v pozícii 2, 3,4, 5,6, 8, 9,10 alebo 11. Lepšie, LCVR má ďalej
CDR2 doménu obsahujúcu aminokyselinovú sekvenciu SEQ ID NO: 5 a HCVR má ďalej CDR2 doménu obsahujúcu aminokyselinovú sekvenciu SEQ ID NO: 6. Ešte lepšie, LCVR má ďalej CDR1 doménu obsahujúcu aminokyselinovú sekvenciu SEQ ID NO: 7 a HCVR má ďalej CDR1 doménu obsahujúcu aminokyselinovú sekvenciu SEQ ID NO: 8.
V ešte inom uskutočnení poskytuje vynález izolovanú ľudskú protilátku alebo jej antigén-väzbovú časť, s LCVR obsahujúcim aminokyselinovú sekvenciu SEQ ID NO: 1 a HCVR obsahujúcim aminokyselinovú sekvenciu SEQ ID NO: 2. V určitých uskutočneniach má protilátka konštantný región ťažkého reťazca IgGl alebo konštantný región ťažkého reťazca IgG4. V ešte iných uskutočneniach je protilátka Fab fragment, F(ab')2 fragment alebo jednoreťazcový Fv fragment.
V ešte inom uskutočnení poskytuje vynález izolovanú ľudskú protilátku alebo jej antigén-väzbovú časť, s LCVR obsahujúcim CDR3 doménu obsahujúcu aminokyselinovú sekvenciu vybranú zo skupiny skladajúcej sa zo SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 26 alebo s HCVR obsahujúcim CDR3 doménu obsahujúcu aminokyselinovú sekvenciu vybranú zo skupiny skladajúcej sa zo SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 31, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 33, SEQ ID NO: 34 a SEQ ID NO: 35.
V ešte inom uskutočnení poskytuje vynález izolovanú ľudskú protilátku alebo jej antigén-väzbovú časť, ktorá neutralizuje aktivitu ľudského TNFa, ale nie aktivitu ľudského TNFp (lymfotoxínu). Vo výhodnom uskutočnení ľudská protilátka alebo jej antigén-väzbová časť neutralizuje aktivitu ľudského TNFa, šimpanzieho TNFa a aspoň jedného ďalšieho TNFa od primátov, ktorý je vybraný zo skupiny skladajúcej sa z paviánieho TNFa, kosmáčieho TNFa, makak (cynomolgus) TNFa a makak rhesus TNFa. Výhodne protilátka tiež neutralizuje aktivitu aspoň jedného TNFa od iného zvieraťa ako primáta. Napríklad, v jednom poduskutočnení izolovaná ľudská protilátka alebo jej antigén-väzbová časť tiež neutralizuje aktivitu psieho TNFa. V ešte inom poduskutočnení izolovaná ľudská protilátka alebo jej antigén-väzbová časť, tiež neutralizuje aktivitu prasacieho TNFa. V ešte inom poduskutočnení izolovaná ľudská protilátka alebo jej antigén-väzbová časť tiež neutralizuje aktivitu myšieho TNFa.
Iný aspekt vynálezu sa týka molekúl nukleových kyselín kódujúcich protilátky alebo ich antigén-väzbovc časti, podľa predkladaného vynálezu. Preferovaná nukleová kyselina podľa predkladaného vynálezu, kódujúca D2E7 LCVR, má nukleotidovú sekvenciu ukázanú na obrázku 7 a SEQ ID NO: 36. Iná preferovaná nukleová kyselina podľa predkladaného vynálezu, kódujúca D2E7 HCVR, má nukleotidovú sekvenciu ukázanú na obrázku 8 a SEQ ID NO: 37. Vo vynáleze sú tiež obsiahnuté rekombinantné expresné vektory nesúce nukleové kyseliny kódujúce protilátky a hostiteľské bunky, do ktorých môžu byť také vektory zavedené, rovnako ako spôsoby na produkciu protilátok podľa predkladaného vynálezu kultiváciou hostiteľských buniek podľa predkladaného vynálezu.
Ešte iný aspekt predkladaného vynálezu sa týka spôsobov inhibície aktivity ľudského TNFa podľa predkladaného vynálezu s použitím protilátky alebo jej antigén-väzbovej časti, podľa predkladaného vynálezu. V jednom
SK 284040 Β6 uskutočnení spôsob obsahuje kontaktovanie ľudského TNFa s protilátkou podľa predkladaného vynálezu alebo s jej antigén-väzbovou časťou, tak, že aktivita ľudského TNFa je inhibovaná. V inom uskutočnení spôsob obsahuje podanie protilátky podľa predkladaného vynálezu alebo jej antigén-väzbovej časti, ľudskému subjektu trpiacemu chorobou, pri ktorej je aktivita TNFa škodlivá tak, že aktivita TNFa u ľudského subjektu je inhibovaná. Ochorením môže byť, napríklad, sepsa, autoimunitné ochorenie (napríklad reumatoidná artritída, alergia, roztrúsená skleróza, autoimunitný diabetes, autoimunitná uveitída a nefrotický syndróm), infekčné ochorenie, malignita, rejekcia transplantátu alebo reakcia štepu proti hostiteľovi, pľúcne ochorenie, ochorenie kostí, črevné ochorenie alebo ochorenie srdca.
Prehľad obrázkov na výkresoch
Obrázky 1A a 1B ukazujú aminokyselinové sekvencie variabilného regiónu ľahkého reťazca D2E7 (D2E7 VL; tiež ukázané v SEQ ID NO: 1), alanín-vyhľadávacie mutanty D2E7 VL (LD2E7*.A1, LD2E7*.A3, LD2E7*.A4, LD2E7*.A7 a LD2E7*.A8), variabilný región ľahkého reťazca príbuznej protilátky 2SD4 (2SD4 VL; tiež ukázané v SEQ ID NO: 9) a ďalšie variabilné regióny ľahkého reťazca príbuzné k D2E7 (EP B12, VL10E4, VL100A9, VL100D2, VL10F4, LOE5, VLLOF9, VLLOF10, VLLOG7, VLLOG9, VLLOH1, VLLOH10, VL1B7, VL1C1, VL1C7, VL0.1F4, VL0.1H8, LOE7, LOE7.A a L0E7.T). Obrázok 1A ukazuje FR1, CDR1, FR2 a CDR2 domény. Obrázok 1B ukazuje FR3, CDR3 a FR4 domény. CDR1 („CDR Ll“), CDR2 („CDR L2“) a CDR3 („CDR L3) domény ľahkého reťazca sú v rámčeku.
Obrázky 2A a 2B ukazujú aminokyselinové sekvencie variabilného regiónu ťažkého reťazca D2E7 (D2E7 VH; tiež ukázané v SEQ ID NO: 2), alanín-vyhľadávacie mutanty D2E7 VH (HD2E7*.A1, HD2E7*.A2, HD2E7*.A3, HD2E7*.A4, HD2E7*.A5, HD2E7*.A6 HD2E7*.A7, HD2E7*.A8 a HD2E7*.A9), variabilný región ťažkého reťazca príbuznej protilátky 2SD4 (2SD4 VH; tiež ukázané v SEQ ID NO: 10) a ďalšie variabilné regióny ťažkého reťazca príbuzné k D2E7 (VH1B11, VH1D8, VH1A11, VH1B12, VH1-D2, VH1E4, VH1F6, VH1G1, 3C-H2, VH1-D2.N A VH1-D2.Y). Obrázok 2A ukazuje FR1, CDR1, FR2 a CDR2 domény. Obrázok 2B ukazuje FR3, CDR3 a FR4 domény. CDR1 („CDR Ll“), CDR2 („CDR L2“) a CDR3 („CDR L3) domény ťažkého reťazca sú v rámčeku.
Obrázok 3 je graf znázorňujúci inhibíciu TNFa indukovanej L929 cytotoxicity ľudskou anti-hTNFa protilátkou D2E7, v porovnaní s myšou anti-hTNFa protilátkou MAK 195.
Obrázok 4 je graf znázorňujúci inhibíciu rhTNFa väzby na hTNFa receptory na U-937 bunkách ľudskou anti-hTNFa protilátkou D2E7, v porovnaní s myšou anti-hTNFa protilátkou MAK 195.
Obrázok 5 je graf znázorňujúci inhibíciu TNFa-indukovanej expresie ELAM-1 na HUVEC ľudskou anti-hTNFa protilátkou D2E7, v porovnaní s myšou anti-hTNFa protilátkou MAK 195.
Obrázok 6 je stĺpcový graf znázorňujúci ochranu pred TNFa-indukovaňou letalitou pri D-galaktozamínom senzibilizovaných myšiach podaním ľudskej anti-hTNFa protilátky D2E7 (čierne stĺpce), v porovnaní s myšou antihTNFa protilátkou MAK 195 (šrafované stĺpce).
Obrázok 7 ukazuje nukleotidovú sekvenciu variabilného regiónu ľahkého reťazca D2E7, s predpokladanou aminokyselinovou sekvenciou pod nukleotidovou sekvenciou. CDR Ll, CDR L2 a CDR L3 regióny sú podčiarknuté.
Obrázok 8 ukazuje nukleotidovú sekvenciu variabilného regiónu ťažkého reťazca D2E7, s predpokladanou aminokyselinovou sekvenciou pod nukleotidovou sekvenciou. CDR Hl, CDR H2 a CDR H3 regióny sú podčiarknuté.
Obrázok 9 je graf znázorňujúci účinok liečby D2E7 protilátkou na priemernú veľkosť kĺbu pri Tgl97 transgénových myšiach ako modelu polyartritídy.
Tento vynález sa týka izolovaných ľudských protilátok alebo ich antigén-väzbových častí, ktoré sa viažu na ľudský TNFa s vysokou afinitou, nízkou rýchlosťou disociácie a s vysokou neutralizačnou kapacitou. Rôzne aspekty vynálezu sa týkajú protilátok a protilátkových fragmentov a ich farmaceutických prípravkov, rovnako ako nukleových kyselín, rekombinantných expresných vektorov a hostiteľských buniek na výrobu takých protilátok a fragmentov. Vynález tiež obsahuje spôsoby použitia protilátok podľa predkladaného vynálezu na detekciu ľudského TNFa alebo na inhibíciu aktivity ľudského TNFa, tak in vitro, ako in vivo.
Na ľahšie pochopenie predkladaného vynálezu sú najprv definované určité termíny.
Termín „ľudský TNFa (skratka hTNFa alebo jednoducho hTNF), ako je tu použitý, označuje ľudský cytokín, ktorý existuje ako 17 kDa secemovaná forma a 26 kDa membránová forma, ktorého biologicky aktívna forma je zložená z triméru nekovalentne viazaných 17 kDa molekúl. Štruktúra hTNFa je opísaná ďalej v, napríklad, Pennica, D. et al., Náture 312: 724 -729, (1984); Davis, J. M. et al., Biochemistry 26: 1322 - 1326 (1987); a Jones, E. Y. et al., Náture 338: 225 - 228 (1989). Termín ľudský TNFa je mienený tak, že zahrnuje rekombinantný ľudský TNFa (rhTNFa), ktorý môže byť získaný štandardnými rekombinantnými expresnými metódami alebo môže byť získaný komerčne (R & D Systems, katalógové 210-TA, Minneapolis, MN).
Termín „protilátka“, ako je tu použitý, označuje imunoglobulínové molekuly zložené zo štyroch polypeptidových reťazcov, dvoch ťažkých (H) a dvoch ľahkých (L) reťazcov medzi sebou spojených disulfidovou väzbou. Každý ťažký reťazec je zložený z variabilného regiónu ťažkého reťazca (tu skrátené ako HCVR alebo VH) a konštantného regiónu ťažkého reťazca. Konštantný región ťažkého reťazca je zložený z troch domén, CH1, CH2 a CH3. Každý ľahký reťazec je zložený z variabilného regiónu ľahkého reťazca (tu skrátené ako LCVR alebo VL) a konštantného regiónu ľahkého reťazca. Konštantný región ľahkého reťazca je zložený z jednej domény, CL. VH a VL regióny môžu byť ďalej delené na regióny hypervariability, ktoré sa nazývajú komplementaritu určujúce regióny (CDR), medzi ktorými sú vmedzerené regióny, ktoré sú viac konzervované a nazývajú sa regióny pracovných rámčekov (FR). Každý VH a VL sa skladá z troch CDR a štyroch FR, ktoré sú usporiadané z amino-konca v nasledujúcom poradí: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4.
Termín „antigén-väzbová časť“ protilátky (alebo jednoducho „časť protilátky“) ako je tu použitý, označuje jeden alebo viac fragmentov protilátky, ktoré si zachovávajú schopnosť špecifickej väzby na antigén (napr. hTNFa). Bolo ukázané, že funkcia väzby antigénu protilátky môže byť uskutočňovaná fragmentmi kompletnej protilátky. Príklady väzbových fragmentov zahrnutých v termíne „antigén-väzbová časť“ protilátky zahrnujú (i) Fab fragment, monovalentný fragment skladajúci sa z VL, VH, CL a CH1 domén; (ii) F(ab’)2 fragment, bivalentný fragment obsahu júci dva Fab fragmenty viazané disulfídovým mostíkom v pantovom regióne; (iii) Fd fragment skladajúci sa z VH a CH1 domén; (iv) Fv fragment skladajúci sa z VL a VH domén jedného ramena protilátky; (v) dAb fragment (Ward et al., Náture 641: 544 - 546 (1989)), ktorý sa skladá z VH domény; a (vi) izolovaný komplementaritu určujúci región (CDR). Ďalej, hoci dve domény Fv fragmentu, VL a VH, sú kódované rôznymi génmi, môžu byť s použitím rekombinantných metód spojené syntetickým linkerom, ktorý umožňuje ich výrobu ako jediného proteínu, v ktorom sú VL a VH regióny spárované za tvorby monovalentných molekúl (známe ako jednoreťazcové Fv (scFv); pozri napríklad Bird et al Science 242: 423 - 426 (1988); a Huston et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85: 5879 - 5883 (1988)). Také jednoreťazcové protilátky sú tiež zahrnuté termínom „antigén-väzbová časť“ protilátky. Iné formy jednoreťazcových protilátok, ako sú dialátky, sú týmto termínom tiež obsiahnuté. Dialátky sú bivalentné, bišpecifické protilátky, v ktorých sú VH a VL domény exprimované na jednom polypeptidovom reťazci, ale využívajú linker, ktorý je príliš krátky na umožnenie párovania medzi dvoma doménami rovnakého reťazca, čo núti domény k párovaniu s komplementárnymi doménami iného reťazca a tak ku tvorbe dvoch väzbových miest pre antigén (pozri napríklad Hollinger, P. et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 6444 - 6448 (1993); Poljak, R. J. et al., Structure 2: 1121 - 1123 (1994)).
Ešte ďalej môže byť protilátka alebo jej antigén-väzbová časť časťou väčších imunoadhezívnych molekúl, tvorených kovalentnou alebo nekovalentnou asociáciou protilátky alebo časti protilátky s jedným alebo viacerými proteinmi alebo peptidmi. Príklady takých imunoadhezívnych molekúl zahrnujú použitie jadrového regiónu streptavidínu pre tvorbu tetramémej scFv molekuly (Kipriyanov, S. M. et al., Human Antibodies and Hybridomas 6: 93 - 101 (1995)) a použitie cysteínového zvyšku, markerového peptidu a Ckoncovej polyhistidínovej slučky na tvorbu bivalentných a biotinylovaných scFv molekúl (Kipriyanov, S. M. et al., Mol. Immunol. 31: 1047 - 1058 (1994)). Časti protilátky, ako sú Fab a F(ab')2 fragmenty, môžu byť pripravené z celých protilátok s použitím bežných techník, ako je štiepenie celých protilátok papainom, resp. pepsínom. Okrem toho, protilátky, časti protilátok a imunoadhezívne molekuly môžu byť získané s použitím štandardných rekombinantných DNA technik, ako je tu opísané.
Termín „ľudská protilátka“, ako je tu použitý, je mienený tak, že zahrnuje protilátky majúce variabilné a konštantné regióny odvodené od ľudských imunoglobulínových sekvencii zárodočnej línie. Ľudské protilátky podľa predkladaného vynálezu môžu obsahovať aminokyselinové zvyšky, ktoré nie sú kódované ľudskými imunoglobulínovými sekvenciami zárodočnej línie (napr. mutácie zavedené náhodnou alebo miestne riadenou mutagenézou in vitro alebo somatickou mutáciou in vivo), napríklad v CDR a hlavne v CDR3. Ale termín „ľudská protilátka“, ako je tu použitý, nie je mienený tak, aby zahrnoval protilátky, v ktorých boli CDR sekvencie odvodené zo zárodočných línií iných cicavčích druhov, ako sú myši, prenesené k sekvenciám ľudského pracovného rámčeka.
Termín „rekombinantná ľudská protilátka“, ako je tu použitý, je mienený tak, že zahrnuje všetky protilátky, ktoré sú pripravené, exprimované, vytvorené alebo izolované rekombinantnými prostriedkami, ako sú protilátky exprimované s použitím rekombinantného expresného vektora preneseného do hostiteľskej bunky (toto je opísané v časti II, ďalej), protilátky izolované z rekombinantnej kombinatoriálnej knižnice ľudských protilátok (toto je opísané v časti III, ďalej), protilátky izolované od zvieraťa (napríklad od myši), ktorá je transgénová pre ľudské gény pre imunoglobulíny (pozri napríklad Taylor, L. D. et al., Nucl. Acids Res. 20: 6287 - 6295 (1992)) alebo protilátky pripravené, exprimované, vytvorené alebo izolované akýmikoľvek inými prostriedkami obsahujúcimi zostrih sekvencii génov pre ľudské imunoglobulíny s inými DNA sekvenciami. Také rekombinantné ľudské protilátky majú variabilné a konštantné regióny odvodené od ľudských imunoglobulínových sekvencii zárodočnej línie. V určitých uskutočneniach sú však také rekombinatné ľudské protilátky podrobené in vitro mutagenéze (alebo, pokiaľ je použité zviera transgénové pre ľudské IgG sekvencie, in vivo somatickej mutagenéze) a tak sú aminokyselinové sekvencie VH a VL regiónov rekombinantných protilátok sekvencie, ktoré, hoci sú odvodené od a sú príbuzné k ľudským VH a VL sekvenciám, nemusia prirodzene existovať v ľudskom protilátkovom zárodočnom repertoáre in vivo.
„Izolovaná protilátka“ tu označuje protilátku, ktorá je v podstate bez ďalších protilátok majúcich inú antigénovú špecificitu (napríklad izolovaná protilátka, ktorá špecificky viaže hTNFa, je v podstate bez protilátok, ktoré špecificky viažu antigény iné ako hTNFa). Izolovaná protilátka, ktorá špecificky viaže hTNFa, môže však mať skríženú reaktivitu s inými antigénmi, ako sú molekuly TNFa z iných druhov (toto je podrobnejšie prebrané ďalej). Okrem toho izolovaná protilátka neobsahuje ďalší bunkový materiál a/alebo chemikálie.
„Neutralizačná protilátka“, ako je tu použité, (alebo „protilátka, ktorá neutralizuje aktivitu hTNFa“), označuje protilátku, ktorej väzba na hTNFa vedie k inhibícii biologickej aktivity hTNFa. Táto inhibícia biologickej aktivity hTNFa môže byť hodnotená meraním jedného alebo viacerých indikátorov biologickej aktivity hTNFa, ako je hTNFa-indukovaná cytotoxicita (tak in vitro, ako in vivo), hTNFa indukovaná bunková aktivácia a väzba hTNFa na receptory pre hTNFa. Tieto indikátory biologickej aktivity hTNFa môžu byť hodnotené jedným alebo viacerými z niekoľkých štandardných testov známych v odbore (pozri príklad 4). Výhodne je schopnosť protilátky neutralizovať aktivitu hTNFa hodnotená inhibíciou hTNFa-indukovanej cytotoxicity L929 buniek. Ako ďalší alebo alternatívny parameter aktivity hTNFa môže byť hodnotená schopnosť protilátky inhibovať s hTNFa-indukovanú expresiu ELAM-1 na HUVEC, ako mieru hTNFa-indukovanej bunkovej aktivácie.
Termín „povrchová plazmónová rezonancia“, ako je tu použitý, označuje optický jav, ktorý umožňuje analýzu biošpecifických interakcií v reálnom čase detekciou zmien v koncentráciách proteínov v biosenzorovej matrici, napríklad s použitím BIAcore systému (Pharmacia Bio-sensor AB, Uppsala, Sweden a Piscataway, NJ). Pre ďalší opis pozri príklad 1 a Jonsson, U. et al. Ann. Biol. Clin 51: 19-26 (1993); Jonsson, U. et al., Biotechniques 11: 620 - 627 (1991); Johnson, B. et al., J. Mol. Recognit. 8: 125 - 131 (1995); a Johnson, B. et al., Anál. Biochem. 198:268 až 277(1991).
Termín „Koff“, ako je tu použitý, označuje rýchlostnú konštantu pre disociáciu protilátky z komplexu protilátka/antigén.
Termín „Kd“, ako je tu použitý, označuje disociačnú konštantu pre určitú interakciu antigén-protilátka.
Termín „molekula nukleovej kyseliny“, ako je tu použitý, zahrnuje DNA molekuly a RNA molekuly. Molekula nukleovej kyseliny môže byť jednoreťazcová alebo dvojreťazcová, ale výhodne to je dvojreťazcová DNA.
Termín „izolovaná molekula nukleovej kyseliny“, ako je tu použitý v súvislosti s nukleovými kyselinami kódujúcimi protilátky alebo časti protilátok (napr. VH, VL, CDR3), ktoré sa viažu na hTNFa, označuje molekulu nukleovej kyseliny, v ktorej sú nukleotidové sekvencie kódujúce protilátku alebo časti protilátky bez iných nukleotidových sekvencií kódujúcich protilátky alebo časti protilátok, ktoré sa viažu na iný antigén, než na hTNFa, kde tieto iné sekvencie môžu prirodzene susediť s nukleovou kyselinou v ľudskej genómovej DNA. Tak, napríklad, izolovaná nukleová kyselina podľa predkladaného vynálezu kódujúca VH región anti-TNFa protilátky neobsahuje ďalšie sekvencie kódujúce iné VH regióny, ktoré sa viažu na antigény iné než TNFa.
Termín „vektor“, ako je tu použitý, označuje molekulu nukleovej kyseliny schopnú transportu inej nukleovej kyseliny, na ktorú je naviazaný. Jedným typom vektora je „plazmid“, čo označuje cirkulámu dvojreťazcovú DNA slučku, do ktorej môžu byť ligované ďalšie DNA segmenty. Iným typom vektora je vírusový vektor, v ktorom môžu byť ďalšie DNA segmenty ligované do vírusového genómu. Určité vektory sú schopné autonómnej replikácie v hostiteľskej bunke, do ktorej sú vložené (napríklad bakteriálne vektory majúce bakteriálny zdroj replikácie a epizomálne cicavčie vektory). Ďalšie vektory (napríklad neepizomálne cicavčie vektory) môžu byť integrované do genómu hostiteľskej bunky po zavedení do hostiteľskej bunky a tak sú replikované spolu s genómom. Okrem toho, určité vektory sú schopné riadiť expresiu génov, na ktoré sú naviazané. Také vektory sú tu označované ako „rekombinantné expresné vektory“ (alebo jednoducho „expresné vektory“). Všeobecne, expresné vektory použiteľné v rekombinantných DNA technikách sú často vo forme plazmidov. V predkladanej prihláške „plazmid“ a „vektor“ môžu byť zameniteľné, pretože plazmid je najbežnejšie používanou formou vektora. Ale vynález je mienený tak, že zahrnuje tiež iné formy expresných vektorov, ako sú vírusové vektory (napr. replikácie - defícientné retrovirusy, adenovírusy a adenoasociované vírusy), ktoré slúžia ekvivalentnej funkcii.
Termín „rekombinantná hostiteľská bunka“ (alebo jednoducho „hostiteľská bunka“), ako je tu použitý, označuje bunku, do ktorej bol vložený rekombinantný expresný vektor. Malo by byť jasné, že tieto termíny označujú nielen určitú jednotlivú bunku, ale aj potomstvo takej bunky. Pretože v ďalších generáciách môže dôjsť k určitým modifikáciám vďaka mutáciám alebo vplyvu prostredia, nemusí byť takéto potomstvo v skutočnosti identické s rodičovskou bunkou, ale stále spadá do významu termínu „hostiteľská bunka“ ako je tu použitý.
Rôzne aspekty vynálezu sú ďalej podrobnejšie opísané v nasledujúcich sekciách.
I. Ľudské protilátky, ktoré sa viažu na ľudský TNFa
Tento vynález poskytuje izolované ľudské protilátky alebo ich antigén-väzbové časti, ktoré sa viažu na ľudský TNFa s vysokou afinitou, nízkou rýchlostnou konštantou a vysokou neutralizačnou kapacitou. Výhodne sú ľudské protilátky podľa predkladaného vynálezu rekombinantné, neutralizačné ľudské anti-hTNFa protilátky. Najvýhodnejšia rekombinantná, neutralizačná protilátka podľa predkladaného vynálezu je tu označená ako D2E7 a má VL a VH sekvencie ako sú ukázané na obrázkoch ΙΑ, 1B a obrázkoch 2A, 2B v príslušnom poradí (aminokyselinová VL regiónu D2E7 je tiež ukázaná v SEQ ID NO: 1; aminokyselinová VH regiónu D2E7 je tiež ukázaná v SEQ ID NO: 2). Väzbové charakteristiky D2E7 v porovnaní s myšou anti-hTNFa MAK 195 mAb, ktorá má vysokú afinitu a pomalú disociačnú kinetiku a s ďalšou ľudskou anti-hTNFa protilátkou so sekvenciou príbuznou D2E7, 2SD4, sú zhrnuté nižšie:
Protilátka K) Stechio-
s1 M 's' M metria
D2E7 IgGl 8,81 x 105 1,91 x 10s 6,09 x 1010 1,2
2SD4 IgG4 8,4 x 10‘3 4,20x 105 2,00xl0’s 0,8
MAK 195 F(ab’)z 8,70 x 10’5 1,90 x 105 4,60 x 10‘10 1,4
D2E7 protilátka a príbuzné protilátky tiež majú silnú kapacitu pre neutralizáciu aktivity hTNFa, ako je hodnotené niekoľkými in vitro a in vivo testami (pozri príklad 4). Napríklad, tieto protilátky neutralizujú s hTNFa-indukovanú cytotoxicitu L929 buniek s hodnotami IC50 v rozmedzí od asi 10‘7 M do asi 1O'10 M. D2E7, pokiaľ je exprivovaná ako kompletná IgGl protilátka, neutralizuje hTNFaindukovanú cytotoxicitu L929 buniek s IC50 asi 1,25 x 1O'10 M. Navyše, neutralizačná kapacita D2E7 je uchovaná, pokiaľ je protilátka exprivovaná ako Fab, F(ab')2 alebo scFv fragment. D2E7 tiež inhibuje TNFa-indukovanú bunkovú aktiváciu, ako je meraná hTNFa-indukovaňou ELAM expresiou na HUVEC (IC50 = asi 1,85 x 1O10 M), a väzbu hTNFa na receptory pre hTNFa na U-937 bunkách (IC50 = = asi 1,56 x ΙΟ'10 M). Vzhľadom na naposledy uvedené, D2E7 inhibuje väzbu hTNFa tak na p55, ako na p75 receptory pre hTNFa. Okrem toho, protilátka inhibuje hTNFa-indukovanú letalitu in vivo pri myšiach (ED50 = 1 až 2,5 pg/myš).
Čo sa týka väzbovej špecifícity D2E7, táto protilátka sa viaže na ľudský TNFa v rôznych formách, vrátane solubilného hTNFa, transmembránového hTNFa a hTNFa naviazaného na bunkové receptory. D2E7 sa neviaže špecificky na iné cytokiny, ako je lymfotoxín (TNFp), IL-la, IL-Ιβ, IL-2, IL-4, IL-6, IL-8, ΙΕΝγ a TGFft. Ale, D2E7 má skríženú reaktivitu s faktorom nekrózy nádorov z iných druhov. Napríklad, protilátka neutralizuje aktivitu aspoň piatich TNFa od iných primátov (šimpanzieho, paviánieho, kosmáčieho, makaka (cynomolgus) a makaka rhesus) s približne rovnakými hodnotami IC50 ako pre neutralizáciu hTNFa (pozri príklad 4, sekcia E). D2E7 tiež neutralizuje aktivitu myšieho TNFa, asi 1000-krát horšie, než ľudského TNFa (pozri príklad 4, sekcia E). D2E7 sa tiež viaže na psí a prasací TNFa.
V jednom aspekte sa vynález týka D2E7 protilátok a častí protilátok a ďalších ľudských protilátok a častí protilátok so zhodnými vlastnosťami ako má D2E7, tak ako je vysoko afmitná väzba na hTNFa s pomalou disociačnou kinetikou a vysokou neutralizačnou kapacitou. V jednom uskutočnení poskytuje vynález izolovanú ľudskú protilátku alebo jej antigén-väzbovú časť, ktorá disociuje z ľudského TNFa sKd 1 x 10'8 M alebo nižšou, K,)(r rýchlostnou konštantou 1 x 10V alebo nižšou, kde obe tieto hodnoty sú určené povrchovou plazmónovou rezonanciou, a ktorá neutralizuje cytotoxicitu ľudského TNFa v štandardnom in vitro L929 teste s IC50 1 x 10'7 M alebo nižšou. Lepšie, izolovaná ľudská protilátka alebo jej antigén-väzbová časť, disociuje z ľudského TNFa s Koff 5 x ÍO'V alebo nižšou, alebo ešte lepšie s Koff 1 x 10'4s_l alebo nižšou. Lepšie, izolovaná ľudská protilátka alebo jej antigén-väzbová časť, neutralizuje cytotoxicitu ľudského TNFa v štandardnom in vitro L929 teste s IC50 1 x 10’8 M alebo nižšou, ešte lepšie s IC501 x 10’9 M alebo nižšou, a najlepšie s IC501 x 1O'10 M alebo nižšou. Vo výhodných uskutočneniach je protilátka izolovaná ľudská rekombinantná protilátka alebo jej antigén-väzbová časť. V ďalšom výhodnom uskutočnení pro
SK 284040 Β6 tilátka tiež neutralizuje s TNFa-indukovanú bunkovú aktiváciu, ako je hodnotená s použitím štandardného in vitro testu pre TNFa-indukovanú expresiu ELAM-1 na endotelových bunkách ľudskej pupočníkovej žily (HUVEC).
Analýza povrchovou plazmónovou rezonanciou na určenie Kd a Koff môže byť uskutočnená tak, ako je opísané v príklade 1. Štandardný in vitro L929 test na určenie hodnôt IC50 je opísaný v príklade 4, sekcii A. Štandardný in vitro test pre TNFa-indukovanú expresiu ELAM-1 na endotelových bunkách ľudskej pupočníkovej žily (HUVEC) je opísaný v príklade 4, sekcii C. Príklady rekombinantných ľudských protilátok, ktoré spĺňajú uvedené kritériá kinetiky a neutralizácie, zahrnujú protilátky majúce nasledujúce (VH/VL) páry, ktorých sekvencie sú ukázané na obrázkoch 1 A, B, 2A a 2B (pozri tiež príklady 2, 3 a 4 pre analýzu kinetiky a neutralizácie): (D2E7 VH/D2E7 VL); (HD2E7*.A1/D2E7 VL); (HD2E7*.A2/D2E7 VL); (HD2E7*.A3/D2E7 VL); (HD2E7*.A4/D2E7 VL); (HD2E7*.A5/D2E7 VL); (HD2E7».A6/D2E7 VL); (HD2E7*.A7/D2E7 VL); (HD2E7*.A8/D2E7 VL); (HD2E7*.A9/D2E7 VL); (D2E7 VH/LD2E7*.A1); (D2E7 VH/LD2E7*.A4); (D2E7 VH/LD2E7*.A5); (D2E7 VH/LD2E7*.A7); (D2E7 VH/LD2E7*.A8); (HD2E7*.A9/LD2E7*.A1); (VH1-D2/LOE7); (VH1 -D2.N/LOE7.T); (VH1-D2.Y/LOE7.A); (VH1-D2.N/LOE7.A); (VH1-D2/EP B12); a (3C-H2/LOE7A).
V odbore je dobre známe, že CDR3 domény ťažkého a ľahkého reťazca protilátky majú významnú úlohu vo väzbovej špecifícite/afínite protilátky pre antigén. V súlade s tým, v inom aspekte, sa vynález týka ľudských protilátok, ktoré majú pomalú disociačnú kinetiku pre asociáciu s hTNFa a ktoré majú CDR3 domény ťažkého a ľahkého reťazca, ktoré sú štrukturálne identické alebo príbuzné k doménam D2E7. Ako je ukázané v príklade 3, pozícia 9 D2E7 VL CDR3 môže byť obsadená Ala alebo Thr bez významného ovplyvnenia Κο^ V súlade s tým konsenzuálny motív pre D2E7 VL CDR3 obsahuje aminokyselinovú sekvenciu.· Q-R-Y-N-R-A-P-Y-(T/A) (SEQ ED NO: 3). Ďalej, pozícia 12 D2E7 VL CDR3 môže byť obsadená Tyr alebo Asn bez významného ovplyvnenia Koff. V súlade s tým, konsenzuálny motív pre D2E7 VL CDR3 obsahuje aminokyselinovú sekvenciu: V-S-Y-L-S-T-A-S-S-L-D-(Y/N) (SEQ ID NO: 4). Okrem toho, ako je ukázané v príklade 2, CDR3 doména ťažkých a ľahkých reťazcov D2E7 je vhodná pre substitúcie jedným alanínovým zvyškom (v pozíciách 1,4, 5, 7 alebo 8 vo VL CDR3 alebo v pozíciách 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10 alebo 11 vo VH CDR3) bez významného ovplyvnenia KofT. Ešte ďalej, odborníci v odbore ocenia, že pri danej prístupnosti D2E7 VL a VH CDR3 domén k substitúciám alanínom môžu byť možné substitúcie iných aminokyselín v CDR3 doménach za zachovania nízkej rýchlostnej konštanty disociácie protilátky, hlavne substitúcie konzervatívnymi aminokyselinami. „Konzervatívna aminokysclinová substitúcia“, ako je tu použité, je substitúcia, pri ktorej je jeden aminokyselinový zvyšok nahradený iným aminokyselinovým zvyškom majúcim podobný postranný reťazec. Rodiny aminokyselinových zvyškov majúcich podobné postranné reťazce boli v odbore identifikované a zahrnujú bázické postranné reťazce (napríklad lyzín, arginín, histidín), kyslé postranné reťazce (napríklad kyselina aspartová, kyselina glutámová), nenabité poláme postranné reťazce (napríklad glycín, asparagín, glutamín, serín, treonín, tyrozín, cysteín), nepoláme postranné reťazce (napríklad alanín, valín, leucín, izoleucín, prolín, fenylalanín, metionín, tryptofán), β-vetvené postranné reťazce (napríklad treonín, valín, izoleucín) a aromatické postranné re ťazce (napríklad tyrozín, fenylalanín, tryptofán, histidín). Výhodne je uskutočnené nie viac než päť konzervatívnych aminokyselinových substitúcií v D2E7 VL a/alebo VH CDR3 doménach. Lepšie je uskutočnené nie viac než jedna až tri konzervatívne aminokyselinové substitúcie v D2E7 VL a/alebo VH CDR3 doménach. Ďalej by nemali byť uskutočnené konzervatívne aminokyselinové substitúcie v aminokyselinových pozíciách kritických pre väzbu na hTNFa. Ako je ukázané na obrázku 3, pozície 2 a 5 D2E7 VL CDR3 a pozície 1 a 7 D2E7 VH CDR3 sa zdajú byť kritické pre interakciu s hTNFa a preto by výhodne nemali byť konzervatívne aminokyselinové substitúcie uskutočnené v týchto pozíciách (hoci alanínová substitúcia v pozícii 5 D2E7 VL CDR3 je prijateľná, ako je opísané).
V súlade s tým, v inom uskutočnení, poskytuje vynález izolovanú ľudskú protilátku, alebo jej antigén-väzbovú časť, s nasledujúcimi charakteristikami:
a) disociuje z ľudského TNFa s Koff rýchlostnou konštantou 1 x 10“3s“’ alebo menšou, ako je určené povrchovou plazmónovou rezonanciou;
b) má CDR3 doménu ľahkého reťazca obsahujúcu aminokyselinovú sekvenciu SEQ ID NO: 3 alebo sekvenciu modifikovanú zo SEQ ID NO: 3 jednou substitúciou alanínu v pozícii 1,4, 5, 7 alebo 8 alebo jednou až piatimi konzervatívnymi aminokyselinovými substitúciami v pozíciách 1, 3, 4, 6, 7, 8 a/alebo 9.
c) má CDR3 doménu ťažkého reťazca obsahujúcu aminokyselinovú sekvenciu SEQ ID NO: 4, alebo sekvenciu modifikovanú zo SEQ ID NO: 4 jednou substitúciou alanínu v pozícii 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10 alebo 11, alebo jednou až piatimi konzervatívnymi aminokyselinovými substitúciami v pozíciách 2, 3,4, 5,6, 8,9,10,11 a/alebo 12.
Lepšie, protilátka alebo jej antigén-väzbová časť disociuje z ľudského TNFa s Ko;f 5 x 10“4s_I alebo menšou. Ešte lepšie, protilátka alebo jej antigén-väzbová časť disociuje z ľudského TNFa s Koff 1 x lO V1 alebo menšou.
V ešte inom uskutočnení poskytuje vynález izolovanú ľudskú protilátku alebo jej antigén-väzbovú časť, s variabilným regiónom ľahkého reťazca (LCVR) majúcim CDR3 doménu obsahujúcu aminokyselinovú sekvenciu SEQ ID NO: 3 alebo sekvenciu modifikovanú zo SEQ ID NO: 3 jednou substitúciou alanínu v pozícii 1, 4, 5 alebo 8 a s variabilným regiónom ťažkého reťazca (HCVR) majúcim CDR3 doménu obsahujúcu aminokyselinovú sekvenciu SEQ ID NO: 4 alebo sekvenciu modifikovanú zo SEQ ID NO: 4 jednou substitúciou alanínu v pozícii 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10 alebo 11. Lepšie, LCVR má ďalej CDR2 doménu obsahujúcu aminokyselinovú sekvenciu SEQ ID NO: 5 (t. j. D2E7 VL CDR2) a HCVR má ďalej CDR2 doménu obsahujúcu aminokyselinovú sekvenciu SEQ ID NO: 6 (t. j. D2E7 VH CDR2). Ešte lepšie, LCVR má ďalej CDR1 doménu obsahujúcu aminokyselinovú sekvenciu SEQ ID NO: 7 (t. j. D2E7 V L CDR1) a HCVR má ďalej CDR1 doménu obsahujúcu aminokyselinovú sekvenciu SEQ ID NO: 8 (t. j. D2E7 VH CDR1). Regióny pracovného rámčeka pre VL sú výhodne z Vkappal ľudskej zárodočnej rodiny, lepšie z Vk génu A20 ľudskej zárodočnej línie a najlepšie z D2E7 VL sekvencii pracovného rámčeka ukázaných na obrázkoch 1A a 1B. Regióny pracovného rámčeka pre VH sú výhodne z VH3 ľudskej zárodočnej rodiny, lepšie z VH génu DP-31 ľudskej zárodočnej línie a najlepšie z D2E7 VH sekvencii pracovného rámčeka ukázaných na obrázkoch 2A a 2B.
V ešte inom uskutočnení poskytuje vynález izolovanú ľudskú protilátku alebo jej antigén-väzbovú časť, s variabilným regiónom ľahkého reťazca (LCVR) obsahujúcim aminokyselinovú sekvenciu SEQ ID NO: 1 (t. j. D2E7 VL) a variabilným regiónom ťažkého reťazca (HCVR) obsahujúcim
SK 284040 Β6 aminokyselinovú sekvenciu SEQ ID NO: 2 (t. j. D2E7 VH). V určitých uskutočneniach má protilátka konštantný región ťažkého reťazca, ako je konštantný región IgGl, IgG2, IgG3, IgG4, IgA, IgE, IgM alebo IgD. Výhodne je konštantný región ťažkého reťazca konštantný región ťažkého reťazca IgGl alebo konštantný región ťažkého reťazca IgG4. Navyše, protilátka môže obsahovať konštantný región ľahkého reťazca, buď konštantný región kappa ľahkého reťazca, alebo konštantný región lambda ľahkého reťazca. Výhodne protilátka obsahuje konštantný región kappa ľahkého reťazca. Alternatívne, časťou protilátky môže byť napríklad Fab fragment alebo jednoreťazcovýFv fragment.
V ešte iných uskutočneniach poskytuje vynález izolovanú ľudskú protilátku alebo jej antigén-väzbovú časť, majúcu s D2E7-príbuzné VL a VH CDR3 domény, napríklad protilátky alebo ich antigén-väzbové časti, s variabilným regiónom ľahkého reťazca (LCVR) obsahujúcim CDR3 doménu obsahujúcu aminokyselinovú sekvenciu vybranú zo skupiny skladajúcej sa zo SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 25 a SEQ ID NO: 26 alebo s variabilným regiónom ťažkého reťazca (HCVR) obsahujúcim CDR3 doménu obsahujúcu aminokyselinovú sekvenciu vybranú zo skupiny skladajúcej sa zo SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 31, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 33, SEQ ID NO: 34 a SEQ IDNO:35.
V ešte inom uskutočnení poskytuje vynález rekombinantnú ľudskú protilátku alebo jej antigén-väzbovú časť, ktorá neutralizuje aktivitu ľudského TNFa, ale nie ľudského TNFp. Výhodne protilátka alebo jej antigén-väzbová časť neutralizuje tiež aktivitu šimpanzieho TNFa a aspoň jedného ďalšieho TNFa od primátov, ktorý je vybraný zo skupiny skladajúcej sa z paviánieho TNFa, kosmáčieho TNFa, makak (cynomolgus) TNFa a makak rhesus TNFa. Výhodne protilátka alebo jej antigén-väzbová časť neutralizuje ľudský, šimpanzí a/alebo ďalší primátí TNFa v štandardnom in vitro L929 teste s IC50 1 x 10‘8 M alebo menšou, lepšie 1 x 10'9 M alebo menšou a ešte lepšie 5 x 1O10 M alebo menšou. V jednom poduskutočnení protilátka tiež neutralizuje aktivitu psieho TNFa, výhodne v štandardnom in vitro L929 teste s IC5o 1 x 10-7 M alebo menšou, lepšie 1 x 10‘8 M alebo menšou a ešte lepšie 5 x 10'9 M alebo menšou. V inom poduskutočnení protilátka tiež neutralizuje aktivitu prasacieho TNFa, výhodne s IC50 1 x 10 5 M alebo menšou, lepšie 1 x 10'6 M alebo menšou a ešte lepšie 5 x 10‘7 M alebo menšou. V ešte inom poduskutočnení protilátka tiež neutralizuje aktivitu myšieho TNFa, výhodne s IC5o 1 x 10 4 M alebo menšou, lepšie 1 x 105 M alebo menšou a ešte lepšie 5 x 10_6M alebo menšou.
Protilátka alebo časť protilátky podľa predkladaného vynálezu môže byť derivatizovaná alebo môže byť naviazaná na inú funkčnú molekulu (napríklad na iný peptid alebo proteín). V súlade s tým, protilátky a časti protilátok podľa predkladaného vynálezu zahrnujú derivatizované a inak modifikované formy ľudských anti-hTNFa protilátok tu opísané, vrátane imunoadhezných molekúl. Napríklad, protilátka alebo časť protilátky podľa predkladaného vynálezu môže byť funkčne naviazaná (napr. chemickou väzbou, genetickou fúziou, nekovalentnou asociáciou alebo inak) na jednu alebo viac molekulových entít, ako je iná protilátka (napríklad, bišpecifická protilátka alebo dialátka), detegovateľné činidlo, cytotoxické činidlo, farmaceu tické činidlo a/alebo proteín alebo peptid, ktorý môže sprostredkovať asociáciu protilátky alebo časti protilátky s inou molekulou (ako je jadrový región streptavidínu alebo polyhistidínová slučka).
Jeden typ derivatizovanej protilátky je produkovaný skríženou väzbou medzi dvoma alebo viac protilátkami (rovnakého alebo rôzneho typu, napríklad pre tvorbu bišpecifických protilátok). Vhodné činidlá spôsobujúce skríženú väzbu sú tie, ktoré sú heterobifunkčné a majú dve rôzne reaktívne skupiny separované vhodnou vmedzerenou skupinou (napríklad m-maleimidobenzoyl-N-hydroxysukcínimid ester) alebo sú homobifunkčné (napríklad disukcínimidylsuberát). Také činidlá je možné získať od Pierce Chemical Company, Rockford, IL.
Použiteľné detegovateľné činidlá, s ktorými môže byť protilátka alebo časť protilátky viazaná, zahrnujú fluorescentné zlúčeniny. Príklady fluorescentných detegovateľných činidiel zahrnujú fluoresceín, fluoresceín izotiokyanát, rodamín, 5-dimetylamin-l-naftalénsulfonylchlorid, fykoerytrín a podobne. Protilátka môže byť tiež naviazaná na detegovateľné enzýmy, ako je alkalická fosfatáza, chrenová peroxidáza, glukóza-oxidáza a podobne. Pokiaľ je protilátka naviazaná na detegovateľný enzým, potom je detegovaná pridaním ďalších činidiel, ktoré enzým využíva na produkciu detegovateľného reakčného produktu. Napríklad, keď je ako detegovateľné činidlo použitá chrenová peroxidáza, potom pridanie peroxidu vodíka diaminobenzidínu vedie ku vzniku farebného produktu reakcie, ktorý je detegovateľný. Protilátka môže byť tiež naviazaná na biotín a detegovaná pomocou nepriameho merania väzby avidínu alebo streptavidínu.
II. Expresia protilátok
Protilátka alebo časť protilátky, podľa predkladaného vynálezu, môže byť pripravená rekombinantnou expresiou génov pre ľahké a ťažké reťazce imunoglobulinu v hostiteľskej bunke. Pre rekombinantnú expresiu protilátky je hostiteľská bunka transfektovaná jedným alebo viac rekombinantnými expresnými vektormi nesúcimi DNA fragmenty kódujúcimi ľahké a ťažké reťazce imunoglobulínovej protilátky, takže ľahké a ťažké reťazce sú exprivované v hostiteľskej bunke a, výhodne, secemované do média, v ktorom sú hostiteľské bunky kultivované. Na získanie génov pre ľahké a ťažké reťazce protilátky, inkorporáciu týchto génov do rekombinantných expresných vektorov a na vloženie vektorov do hostiteľských buniek sú použité štandardné rekombinantné DNA metódy, ako sú tie, ktoré sú opísané v Sambrook, Fritsch a Maniatis (vyd), Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Second Edition, Cold Spring Harbor, N.Y., (1989), Ausubel, F. M. et al (vyd.), Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing Associates, (1989) a v U. S. patente č. 4816397 od Boss et al.
Na expresiu D2E7 a D2E7-príbuzných protilátok sú najprv získané DNA fragmenty kódujúce variabilné regióny ľahkého a ťažkého reťazca. Tieto DNA môžu byť získané amplifikáciou a modifikáciou variabilných sekvencií ľahkého a ťažkého reťazca zárodočnej línie s použitím polymerázovej reťazovej reakcie (PCR). DNA sekvencie zárodočnej línie pre gény pre variabilné regióny ľahkého a ťažkého reťazca sú v odbore známe (pozri napríklad „Vbáza“ databáza sekvencií ľudskej zárodočnej línie; pozri tiež Kabát, E. A. et al., (1991), Sequences ofProteins of Imrnunological Interest, 5. vydanie, U. S. Department of Health and Human Services, NIH publikácia č. 91-3242; Tomlison, I. M. et al (1992), „The Repertoire of Human Germline VH Sequences Reveals about Fifty Groups of VH Segments with Different Hypervariable Loops“, J. Mol. Biol. 227:
776 - 798; a Cox, J. P. L. et al., (1994), „A Directory of Human Germline Kkappa Segments Reveals a Strong Bias in their Usage“, Eur. J. Immunol. 24: 827 - 836; ktorých obsah je tu uvedený ako odkaz). Na získanie DNA fragmentu kódujúceho variabilný región ťažkého reťazca D2E7 alebo D2E7 príbuznej protilátky je člen VH3 rodiny ľudských zárodočných VH génov amplifikovaný štandardnou PCR. Najlepšie je amplifikovaná DP-31 VH sekvencia zárodočnej línie. Na získanie DNA fragmentu kódujúceho variabilný región ľahkého reťazca D2E7 alebo D2E7 príbuznej protilátky je člen Vkappal rodiny ľudských zárodočných VL génov amplifikovaný štandardnou PCR. Najlepšie je amplifikovaná A20 VL sekvencia zárodočnej línie. PCR priméry vhodné na použitie pri amplifikácii sekvencií DP-31 VH a A20 VL zárodočnej línie môžu byť navrhnuté na základe nukleotidových sekvencií opísaných v citovaných odkazoch, s použitím štandardných metód.
Po získaní VH a VL fragmentov zárodočnej línie môžu byť tieto sekvencie mutované tak, aby kódovali D2E7 alebo D2E7-príbuzné aminokyselinové sekvencie, ktoré sú tu opísané. Aminokyselinové sekvencie kódované zárodočnými VH a VL DNA sekvenciami sú najprv porovnávané s D2E7 a D2E7-príbuznými VH a VL aminokyselinovými sekvenciami na identifikáciu aminokyselinových zvyškov v D2E7 a D2E7-príbuzných sekvenciách, ktoré sa líšia od zárodočnej línie. Potom sú vhodné nukleotidy v zárodočnej DNA sekvencií mutované tak, aby mutovaná zárodočná sekvencia kódovala D2E7 alebo D2E7-príbuznú aminokyselinovú sekvenciu, s využitím genetického kódu na určenie toho, ktoré nukleotidové zmeny majú byť uskutočnené. Mutagenéza zárodočných sekvencií je uskutočnená štandardnými metódami, ako je PCR-sprostredkovaná mutagenéza (v ktorej sú mutované nukleotidy inkorporované do PCR printerov tak, že PCR produkt obsahuje mutácie) alebo miestne riadená mutagenéza.
Okrem toho, malo by byť uvedené, že pokiaľ,zárodočné“ sekvencie získané PCR amplifikáciou kódujú aminokyselinové rozdiely v regiónoch pracovného rámčeka vzhľadom na správnu zárodočnú konfiguráciu (t. j. odlišnosti v amplifikovanej sekvencií pri porovnaní so správnou zárodočnou sekvenciou, napríklad v dôsledku somatických mutácií), môže byť žiaduca zmena týchto aminokyselinových odlišností naspäť na správne zárodočné sekvencie (t. j. „spätná mutácia“ zvyškov v pracovnom rámčeku na konfiguráciu zárodočnej sekvencie).
Po získaní DNA fragmentov kódujúcich D2E7 alebo D2E7-príbuzné VH a VL segmenty (amplifikáciou alebo mutagenézou zo zárodočných VH a VL génov, ako je opísané), môžu byť tieto DNA fragmenty ďalej upravované štandardnými rekombinantnými DNA technikami, napríklad na konverziu génov pre variabilný región na gény pre kompletný reťazec protilátky, nie gény pre Fab fragment alebo na gény pre scFv. Pri týchto úpravách je VL- alebo VH- kódujúci DNA fragment operatívne naviazaný na iný DNA fragment kódujúci iný proteín, ako je konštantný región protilátky alebo flexibilný linker. Termín „operatívne naviazaný“, ako je tu použitý, znamená, že dva DNA fragmenty sú spojené tak, že aminokyselinovú sekvencia kódovaná dvoma DNA fragmentmi zostáva v rámčeku.
Izolovaná DNA kódujúca VH región môže byť premenená na kompletný gén pre ťažký reťazec operatívnou väzbou VH-kódujúcej DNA na inú molekulu DNA kódujúcu konštantné regióny ťažkého reťazca (CH1, CH2 a CH3). Sekvencie ľudských génov pre konštantné regióny ťažkého reťazca sú v odbore známe (Kabat, E. A. et al., (1991), Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5. vydanie, U. S. Department of Health and Human Services, NIH publikácia č. 91 - 3242) a DNA fragmenty obsahujúce tieto regióny môžu byť získané štandardnou PCR amplifikáciou. Konštantné regióny ťažkého reťazca môžu byť konštantné regióny IgGl, lgG2, IgG3, IgG4, IgA, IgE, IgM alebo IgD, ale najlepšie sú to konštantné regióny IgGl alebo IgG4. Pre gén pre Fab fragment ťažkého reťazca môže byť VH-kódujúca DNA operatívne naviazaná na inú DNA molekulu kódujúcu iba CH1 konštantný región ťažkého reťazca.
Izolovaná DNA kódujúca VL región môže byť premenená na kompletný gén pre ľahký reťazec operatívnou väzbou VL-kódujúcej DNA na inú molekulu DNA kódujúcu konštantný región ľahkého reťazca (CL). Sekvencie ľudských génov pre konštantné regióny ľahkého reťazca sú v odbore známe (Kabat, E. A. et al., (1991), Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5. vydanie, U. S. Department of Health and Human Services, NIH publikácia č. 91 - 3242) a DNA fragmenty obsahujúce tieto regióny môžu byť získané štandardnou PCR amplifikáciou. Konštantný región ľahkého reťazca môže byť konštantný región kappa alebo lambda, ale najlepšie to je konštantný región kappa.
Na vytvorenie scFv génu sú VH- a VL- kódujúce DNA fragmenty operatívne naviazané na iný fragment kódujúci flexibilný linker, napríklad kódujúci aminokyselinovú sekvenciu (Gly4-Ser)3 tak, že VL a VH sekvencie môžu byť exprimované ako pokračujúci jednoreťazcový proteín, s VH a VL regiónmi spojenými flexibilným linkerom (pozri napríklad Bird et al., (1988) Science 242: 423 - 426; Houston et al. (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85: 5879 - 5883; McCafferty et al., Náture (1990) 348: 552 - 554).
Na expresiu protilátok alebo častí protilátok podľa predkladaného vynálezu je DNA kódujúca čiastočné alebo úplné ťažké a ľahké reťazce, získaná ako je opísané, inzertovaná do expresných vektorov tak, že gény sú operatívne viazané na transkripčné a translačné kontrolné sekvencie. V tomto kontexte termín „operatívne viazané“ znamená, že gén pre protilátku je ligovaný do takého vektora tak, že transkripčné a translačné kontrolné sekvencie vo vektore slúžia ako regulátory transkripcie a translácie génu pre protilátku. Expresný vektor a expresné kontrolné sekvencie sú vybraté tak, aby boli kompatibilné s expresiou v použitej hostiteľskej bunke. Gén pre ľahký reťazec protilátky a gén pre ťažký reťazec protilátky môžu byť inzertované do jednotlivých vektorov, alebo, častejšie, sú oba gény inzertované do rovnakého expresného vektora. Gény pre protilátku sú inzertované do expresného vektora štandardnými metódami (napr. ligáciou komplementárnych reštrikčných miest na fragmente génu protilátky a vektora, alebo ligáciou tupých koncov, pokiaľ nie sú prítomné žiadne reštrikčné miesta). Pred inzerciou D2E7 alebo D2E7-príbuzných sekvencií ľahkých a ťažkých reťazcov môže už expresný vektor niesť sekvencie pre konštantný región protilátky. Napríklad, jeden prístup pre konverziu D2E7 alebo D2E7-príbuzných VH a VL sekvencií na gény pre kompletnú protilátku je ich inzercia do expresného vektora už kódujúceho konštantné regióny ľahkého a ťažkého reťazca, v príslušnom poradí, takže VH segment je operatívne viazaný na CH segment vo vektore a VL segment je operatívne viazaný na CL segment vo vektore. Ďalšie alebo alternatívne rekombinantné expresné vektory môžu kódovať signálny peptid, ktorý uľahčuje sekréciu protilátkového reťazca z hostiteľskej bunky. Gén pre reťazec protilátky môže byť klonovaný do vektora tak, že signálny peptid je naviazaný v rámčeku s aminokoncom génu pre reťazec protilátky. Signálnym peptidom môže byť imunoglobulinový signálny peptid alebo heterológny signálny peptid (t. j. signálny peptid z neimunoglobulínového proteínu).
SK 284040 Β6
Okrem génov pre reťazce protilátky môžu rekombinantné expresné vektory podľa predkladaného vynálezu niesť regulačné sekvencie, ktoré kontrolujú expresiu génov pre reťazce protilátky v hostiteľskej bunke. Termín „regulačné sekvencie“ zahrnuje promótory, enhancery a iné expresné kontrolné elementy (napríklad polyadenylačné signály), ktoré kontrolujú transkripciu a transláciu génov pre reťazce protilátky. Také regulačné sekvencie sú opísané, napríklad, v Goeddel: Gene Expression Technology: Methods in Enzymology 185, Academic Press, San Diego, CA (1990). Odborníkom v odbore bude jasné, že vývoj expresného vektora, vrátane selekcie regulačných sekvencií, môže závisieť od takých faktorov, ako je voľba hostiteľskej bunky, ktorá má byť transformovaná, požadovaná hladina expresie proteínu atď. Výhodné regulačné sekvencie na expresiu v cicavčej hostiteľskej bunke zahrnujú vírusové elementy, ktoré riadia vysokú hladinu proteínovej expresie v cicavčích bunkách, ako sú promótory a/alebo enhancery odvodené od cytomegalovírusu (CMV) (ako je CMV promótor/enhancer), Simian Vírus 40 (SV40) (ako je SV40 promótor/enhancer), adenovírusu (napríklad adenovirusový hlavný neskorý promótor (AdMLP)) a od polyomavírusu. Pre ďalší opis vírusových regulačných elementov a ich sekvencií pozri napríklad U. S. patent č. 5168062 od Stinski(ho), U. S. patent č. 4510245 od Bell(a) et al. a U. S. patent č. 4968615 od Schaffher(a) et al.
Okrem génov pre reťazce protilátok a regulačných sekvencií môžu rekombinantné expresné vektory podľa predkladaného vynálezu niesť ďalšie sekvencie, ako sú sekvencie, ktoré regulujú replikáciu vektora v hostiteľskej bunke (napríklad zdroje replikácií) a gény pre selektovateľné markery. Gén pre selektovateľný marker uľahčuje selekciu hostiteľských buniek, do ktorých bol vektor zavedený (pozri napríklad U. S. patenty č. 4399216, 4634665 a 5179017 od Axel(a) et al.). Napríklad, typicky spôsobuje selektovateľný markerový gén rezistenciu hostiteľskej bunky, do ktorej bol vektor zavedený, na lieky, ako je G418, hygromycín alebo metotrexát. Výhodné gény pre selektovateľný marker zahrnujú gén pre dihydrofolátreduktázu (DHFR) (na použitie pri dhír hostiteľských bunkách so selekciou/amplifikáciou metotrexátom) a neo gén (na selekciu G418).
Na expresiu ťažkých a ľahkých reťazcov je expresný vektor(y) kódujúci ťažké a ľahké reťazce prenesený do hostiteľských buniek štandardnými technikami. Rôzne formy termínu „transfekcia“ zahrnujú širokú škálu techník bežne používaných na vloženie exogénnej DNA do prokaryotických alebo eukaryotických hostiteľských buniek, napríklad elektroporáciu, zrážanie fosforečnanom vápenatým, DEAE-dextranovú transfekciu a podobne. Hoci je teoreticky možné exprivovať protilátky podľa predkladaného vynálezu tak v prokaryotických, ako v eukaryotických hostiteľských bunkách, je expresia protilátok v eukaryotických bunkách, a hlavne v cicavčích hostiteľských bunkách, najviac preferovaná, keďže také eukaryotické bunky, a hlavne cicavčie bunky, sú s väčšou pravdepodobnosťou než prokaryotické bunky schopné zostaviť a secemovať riadne zloženú a imunologický alctívnu protilátku. Prokaryotická expresia génov pre protilátky bola opísaná ako neúčinná na produkciu väčších množstiev aktívnych protilátok (Boss, M. A. a Wood, C. R. (1985) Immunology Today 6: 12 až 13).
Výhodné cicavčie hostiteľské bunky na expresiu rekombinantných protilátok podľa predkladaného vynálezu zahrnujú ovariálne bunky čínskeho škrečka (CHO) (vrátane dhfr CHO buniek, ktoré opisuje Urlaub a Chasin, (1980) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77: 4216 - 4220), použité s DHFR selektovateľným markerom, napríklad ako to opisuje R. J. Kaufman a P. A. Sharp (1982), Mol. Biol. 159: 601 - 621), NSO myelómové bunky, COS bunky a SP2 bunky. Keď sú rekombinantné expresné vektory kódujúce protilátkové gény vložené do cicavčích hostiteľských buniek, tak sú protilátky produkované kultiváciou hostiteľských buniek počas doby dostatočnej na expresiu protilátky v hostiteľských bunkách, alebo, lepšie, pre sekréciu protilátky do kultivačného média, v ktorom sú hostiteľské bunky kultivované. Protilátky môžu byť získané z kultivačného média s použitím štandardných metód na prečistenie proteínov.
Hostiteľské bunky môžu byť tiež použité na produkciu častí intaktných protilátok, ako sú Fab fragmenty alebo scFv molekuly. Malo by byť jasné, že variácie uvedeného postupu spadajú do rozsahu predkladaného vynálezu. Napríklad, môže byť žiaduca transfekcia hostiteľskej bunky DNA kódujúcou buď ľahký reťazec, alebo ťažký reťazec (ale nie oba) protilátky podľa predkladaného vynálezu. Rekombinantná DNA technológia môže byť tiež použitá na odstránenie niektorých alebo všetkých DNA kódujúcich jeden alebo oba z ťažkých a ľahkých reťazcov, ktoré nie sú nevyhnutné pre väzbu na hTNFa. Molekuly exprimované z takých skrátených molekúl DNA sú tiež obsiahnuté v protilátkach podľa predkladaného vynálezu. Okrem toho, môžu byť produkované bifunkčné protilátky, v ktorých je jeden ľahký a jeden ťažký reťazec z protilátky podľa predkladaného vynálezu a iný ťažký a ľahký reťazec sú špecifické pre antigén iný než hTNFa skríženou väzbou protilátky podľa predkladaného vynálezu s druhou protilátkou štandardnými metódami chemickej skríženej väzby.
Vo výhodnom systéme pre rekombinantnú expresiu protilátky alebo jej antigén-väzbovej časti podľa predkladaného vynálezu je rekombinantný expresný vektor kódujúci tak ťažký reťazec protilátky, ako ľahký reťazec protilátky zavedený do dhfr' CHO buniek transfekciou sprostredkovanou fosforečnanom vápenatým. V rekombinantnom expresnom vektore sú gény pre ľahké a ťažké reťazce protilátky operatívne naviazané na enhancerové/promótorové regulačné elementy (napríklad odvodené od SV40, CMV, adenovírusu a podobne, ako je CMV enhancerový/AdNLP promótorový regulačný element alebo SV40 enhancerový/AdNLP promótorový regulačný element) na riadenie vysokých hladín transkripcie génov. Rekombinantný expresný vektor tiež nesie DHFR gén, ktorý umožňuje selekciu CHO buniek, ktoré boli transfektované vektorom, s použitím selekcie/amplifikácie metotrexátom. Selektované transformované hostiteľské bunky sú kultivované na umožnenie expresie ľahkých a ťažkých reťazcov protilátky a intaktná protilátka je získaná z kultivačného média. Štandardné techniky molekulárnej biológie sú použité na prípravu rekombinantného expresného vektora, transfekciu hostiteľských buniek, selekciu transformantov, kultiváciu hostiteľských buniek a získanie protilátky z kultivačného média.
Z pohľadu skôr uvedeného sa ďalší aspekt vynálezu týka prípravkov nukleových kyselín, vektorov a hostiteľských buniek, ktoré môžu byť použité na rekombinantnú expresiu protilátok a častí protilátok podľa predkladaného vynálezu. Nukleotidová sekvencia kódujúca variabilný región ľahkého reťazca D2E7 je ukázaná na obrázku 7 a v SEQ ID NO: 36. CDR1 doména LCVR obsahuje nukleotidy 70 - 102, CDR2 doména obsahuje nukleotidy 148 - 168 a CDR3 doména obsahuje nukleotidy 265 - 291. Nukleotidová sekvencia kódujúca variabilný región ťažkého reťazca D2E7 je ukázaná na obrázku 8 a v SEQ ID NO: 37. CDR1 doména HCVR obsahuje nukleotidy 91 -105, CDR2 doména obsahuje nukleotidy 148 - 198 a CDR3 doména obsahuje nukleotidy 295 - 330. Odborníkom v odbore bude jasné, že nukleotidové sekvencie kódujúce D2E7-príbuzné protilátky alebo časti protilátok (napríklad CDR doménu, ako je CDR3 doména), môžu byť odvodené od nukleotidových sekvencii kódujúcich D2E7 LCVR a HCVR s použitím genetického kódu a štandardných techník molekulárnej biológie.
V jednom uskutočnení poskytuje vynález izolovanú nukleovú kyselinu kódujúcu CDR3 doménu ľahkého reťazca obsahujúcu aminokyselinovú sekvenciu SEQ ID NO: 3 (t. j. D2E7 VL CDR3) alebo sekvenciu modifikovanú zo SEQ ID NO: 3 jednou substitúciou alanínu v pozícii 1,4, 5, 7 alebo 8 a/alebo piatimi konzervatívnymi aminokyselinovými substitúciami v pozíciách 1, 3, 4, 6, 7, 8 a/alebo 9. Táto nukleová kyselina môže kódovať iba CDR3 región, alebo výhodnejšie, kóduje celý variabilný región ľahkého reťazca protilátky (LCVR). Napríklad, nukleová kyselina môže kódovať LCVR majúci CDR2 doménu obsahujúcu aminokyselinovú sekvenciu SEQ ID NO: 5 (t. j. D2E7 VL CDR2) a CDR1 doménu obsahujúcu aminokyselinovú sekvenciu SEQ ID NO: 7 (t. j. D2E7 VL CDR1).
V inom uskutočnení poskytuje vynález izolovanú nukleovú kyselinu kódujúcu CDR3 doménu ťažkého reťazca obsahujúcu aminokyselinovú sekvenciu SEQ ID NO: 4 (t. j. D2E7 VH CDR3) alebo sekvenciu modifikovanú zo SEQ ID NO: 4 jednou substitúciou alanínu v pozícii 2, 3,4, 5,6, 8,9, 10 alebo 11 a/alebo piatimi konzervatívnymi aminokyselinovými substitúciami v pozíciách 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10, 11 a/alebo 12. Táto nukleová kyselina môže kódovať iba CDR3 región, alebo výhodnejšie, kóduje celý variabilný región ťažkého reťazca protilátky (HCVR). Napríklad, nukleová kyselina môže kódovať HCVR majúci CDR2 doménu obsahujúcu aminokyselinovú sekvenciu SEQ ID NO: 6 (t. j. D2E7 VH CDR2) a CDR1 doménu obsahujúcu aminokyselinovú sekvenciu SEQ ID NO: 8 (t. j. D2E7 VH CDR1).
V ešte inom uskutočnení vynález poskytuje izolované nukleové kyseliny kódujúce D2E7-príbuzné CDR3 domény, napríklad obsahujúce aminokyselinové sekvencie vybrané zo skupiny skladajúcej sa zo: SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 31, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO; 33, SEQ ID NO; 34 aSEQIDNO:35.
V ešte inom uskutočnení poskytuje vynález izolovanú nukleovú kyselinu kódujúcu variabilný región ľahkého reťazca protilátky obsahujúci aminokyselinovú sekvenciu SEQ ID NO: I (t. j. D2E7 LCVR). Výhodná nukleová kyselina obsahuje nukleotidovú sekvenciu SEQ ID NO: 36, hoci odborníkom v odbore bude jasné, že vzhľadom na degeneráciu genetického kódu môžu ďalšie nukleotidové sekvencie kódovať aminokyselinovú sekvenciu SEQ ID NO: 1. Nukleová kyselina môže kódovať iba LCVR alebo môže tiež kódovať konštantný región ľahkého reťazca protilátky, operatívne naviazaný na LCVR. V jednom uskutočnení je táto nukleová kyselina v rekombinantnom expresnom vektore.
V ešte inom uskutočnení poskytuje vynález izolovanú nukleovú kyselinu kódujúcu variabilný región ťažkého reťazca protilátky obsahujúci aminokyselinovú sekvenciu SEQ ID NO: 2 (t. j. D2E7 HCVR). Výhodná nukleová kyselina obsahuje nukleotidovú sekvenciu SEQ ID NO: 37, hoci odborníkom v odbore bude jasné, že vzhľadom na degeneráciu genetického kódu môžu ďalšie nukleotidové sekvencie kódovať aminokyselinovú sekvenciu SEQ ID NO: 2. Nukleová kyselina môže kódovať iba HCVR alebo môže tiež kódovať konštantný región ťažkého reťazca protilátky, operatívne naviazaný na HCVR. Napríklad, nukleová kyselina môže obsahovať konštantný región IgGl alebo IgG4.
V jednom uskutočnení je táto nukleová kyselina v rekombinantnom expresnom vektore.
Vynález tiež poskytuje rekombinantné expresné vektory kódujúce tak ľahký reťazec protilátky, ako ťažký reťazec protilátky. Napríklad, v jednom uskutočnení, vynález poskytuje rekombinantný expresný vektor kódujúci:
a) ľahký reťazec protilátky majúci variabilný región obsahujúci aminokyselinovú sekvenciu SEQ TD NO: 1 (t. j. D2E7 LCVR); a
b) ťažký reťazec protilátky majúci variabilný región obsahujúci aminokyselinovú sekvenciu SEQ ID NO: 2 (t. j. D2E7 HCVR).
Vynález ďalej poskytuje hostiteľské bunky, do ktorých môže byť jeden alebo viac z rekombinantných expresných vektorov podľa predkladaného vynálezu zavedený. Výhodne je hostiteľskou bunkou CHO bunka, NSO bunka alebo COS bunka.
Ešte ďalej vynález poskytuje spôsob na syntézu rekombinantnej ľudskej protilátky podľa predkladaného vynálezu kultiváciou hostiteľských buniek podľa predkladaného vynálezu vo vhodnom kultivačnom médiu dovtedy, dokiaľ nie je syntetizovaná rekombinantná ľudská protilátka podľa predkladaného vynálezu. Spôsob môže ďalej obsahovať izoláciu rekombinantnej ľudskej protilátky z kultivačného média.
III. Selekcia rekombinantných ľudských protilátok
Rekombinantné ľudské protilátky podľa predkladaného vynálezu iné než D2E7 alebo D2E7-príbuzné protilátky tu opísané môžu byť izolované vyšetrením rekombinantnej kombinatoriálnej knižnice protilátok, výhodne scFv fágovej zobrazovacej knižnice, pripravenej s použitím ľudskej VH a VL cDNA pripravených z mRNA odvodenej od ľudských lymfocytov. Spôsoby na prípravu a vyšetrovanie takých knižníc sú v odbore známe. Okrem komerčne dostupných kitov pre generovanie fágových zobrazovacích knižníc (napríklad Pharmacia Recombinant Phage Antibody Systém, katalógové č. 27-9400-01; a Stratagene SuríZAP™ phage display kit, katalógové č. 240612), môžu byť príklady spôsobov a činidiel hlavne vhodných na použitie pri generovaní a vyšetrovaní protilátkových zobrazovacích knižníc nájdené v, napríklad, Ladner et ak, U. S. Patent č. 5223409; Kang et ak, PCT prihláška č. WO 92/18619; Dower et ak, PCT prihláška č. WO 91/17271; Winter et ak, PCT prihláška č. WO 92/20791; Markland et al., PCT prihláška č. WO 92/15679; Breitling et al., PCT prihláška č. WO 93/01288; McCafferty et ak, PCT prihláška č. WO 92/01047; Garrad et ak, PCT prihláška č. WO 92/09690; Fuchs et ak, (1991), Bio/Technology 9: 1370 - 1372; Hay et ak, (1992), Hum. Antibod. Hybridomas 3:81-85; Huse et ak, (1989), Science 246: 1275 - 1281; McCafferty et al., Náture (1990), 348: 552 - 554; Grififiths et al (1993), EMBO J. 12: 725 - 734; Hawkins et ak, (1992), J. Mok Biol. 226: 889 - 896; Clackson et ak, (1991), Náture 352: 624 - 628; Gram et ak, (1992) PNAS 89: 3576 - 3580; Garrad et ak, (1991) Bio/Technology 9: 1373 - 1377; Hoogenboom et al., (1991) Nuc. Acids Res. 19: 4133 - 4137; a Barbas et ak, (1991) PNAS 88: 7978 - 7982.
Vo výhodnom uskutočnení, pre izoláciu ľudských protilátok s vysokou afinitou a nízkou rýchlostnou konštantou pre hTNFa je najprv použitá myšia anti-hTNFa protilátka majúca vysokú afinitu a nízku rýchlostnú konštantu pre hTNFa (napríklad MAK 195, ktorej hybridom má prírastkové č. ECACC 87 050801) na selekciu sekvencii pre ľudské ťažké a ľahké reťazce majúce podobnú väzbovú aktivitu pre hTNFa, s použitím epitopového imprintingu a riadenej selekcie, čo sú metódy, ktoré opísal Hoogenboom et al., PCT prihláška č.
WO 93/06213. Protilátkovou knižnicou použitou v tejto metóde sú výhodne scFv knižnice pripravené a vyšetrované ako je opísané v McCafferty et al., PCT prihláška č. WO 92/01047, McCafferty et al., Náture (1990), 348: 552 - 554; Griffiths et al (1993), EMBO J. 12: 725 - 734. scFv protilátkové knižnice sú výhodne vyšetrované s použitím rekombinantného ľudského TNFa ako antigénu.
Po selekcii počiatočných ľudských VH a VL segmentov sú uskutočnené „zmiešaj a páruj“ pokusy, v ktorých sú rôzne páry počiatočné vybraných VL a VH segmentov vyšetrované na väzbu na hTNFa, pre selekciu výhodných kombinácií VL/VH párov. Okrem toho, pre ďalšie zvýšenie afinity a/alebo zníženie rýchlostnej konštanty pre väzbu na hTNFa môžu byť VL a VH segmenty výhodných VL/VH párov náhodne mutované, výhodne v CDR3 regióne VH a/alebo VL, v procese analogickom k in vivo procesu somatických mutácií zodpovednému za afinitné dozrievanie protilátok v priebehu prirodzenej imunitnej odpovede. Toto in vitro afinitne dozrievanie môže byť uskutočnené amplifikáciou VH a VL regiónov s použitím PCR primérov komplementárnych k VH CDR3 alebo VL CDR3, v príslušnom poradí, kedy priméry sú „napichnuté“ náhodnou zmesou štyroch nukleotidových báz v určitých pozíciách, takže vzniknuté PCR produkty kódujú VH a VL segmenty, v ktorých boli náhodné mutácie vložené do VH a/alebo VL CDR3 regiónov. Tieto náhodne mutované VH a VL segmenty môžu byť znovu vyšetrované na väzbu na hTNFa a môžu byť vybraté sekvencie, ktoré majú najvyššiu afinitu a najnižšiu rýchlostnú konštantu pre väzbu na hTNFa.
Aminokyselinové sekvencie vybraných ťažkých a ľahkých reťazcov protilátky môžu byť porovnávané s aminokyselinovými sekvenciami zárodočných ťažkých a ľahkých reťazcov. V prípadoch, kedy sa určité zvyšky pracovných rámčekov vybraných VL a/alebo VH reťazcov líšia od zárodočnej konfigurácie (napríklad v dôsledku somatickej mutácie imunoglobulínových génov použitých v príprave fágovej knižnice), môže byť žiaduca „spätná mutácia“ zmenených zvyškov pracovného rámčeka vybraných protilátok na zárodočnú konfiguráciu (t. j. zmena aminokyselinovej sekvencie pracovného rámčeka vybraných protilátok tak, aby bola rovnaká ako aminokyselinová sekvencia pracovného rámčeka v zárodočnej línii). Taká „spätná mutácia“ (alebo „germlining“) zvyškov pracovného rámčeka môže byť uskutočnená štandardnými metódami molekulárnej biológie na zavedenie špecifických mutácií (napríklad miestne riadenou mutagenézou; PCR-sprostredkovanou mutagenézou a podobne).
Po vyšetrení a izolácii anti-hTNFa protilátky podľa predkladaného vynálezu z rekombinantnej imunoglobulínovej zobrazovacej knižnice môže byť nukleová kyselina kódujúca vybranú protilátku získaná zo zobrazovacieho balíčka (napríklad z fágového genómu) a môže byť subklonovaná do iných expresných vektorov štandardnými rekombinantnými DNA technikami. Pokiaľ je to žiaduce, môže byť nukleová kyselina ďalej upravovaná za tvorby inej formy protilátky podľa predkladaného vynálezu (napríklad môže byť naviazaná na nukleovú kyselinu kódujúcu ďalšie imunoglobulínové domény, ako sú ďalšie konštantné regióny). Na expresiu rekombinantnej ľudskej protilátky izolovanej vyšetrovaním kombinatoriálnej knižnice je DNA kódujúca protilátku klonovaná do rekombinantného expresného vektora a vložená do cicavčích hostiteľských buniek, ako bolo podrobnejšie opísané v časti II.
IV. Farmaceutické prípravky a farmaceutické podanie
Protilátky alebo časti protilátok podľa predkladaného vynálezu môžu byť súčasťou farmaceutických prípravkov vhodných na podanie subjektu. Typicky farmaceutický prípravok obsahuje protilátku alebo časť protilátky podľa predkladaného vynálezu a farmaceutický prijateľný nosič. Ako je tu použitý, zahrnuje termín „farmaceutický prijateľný nosič“ akékoľvek rozpúšťadlá, disperzné médiá, povlaky, antibakteriálne a antimykotické činidlá, izotonické činidlá a činidlá spomaľujúce absorpciu a podobne, ktoré sú fyziologicky kompatibilné. Príklady farmaceutický prijateľných nosičov zahrnujú jeden alebo viac nosičov ako voda, salinický roztok, fosfátom pufrovaný salinický roztok, dextróza, glycerol, etanol a podobne, rovnako ako ich kombinácie. V mnohých prípadoch bude výhodné zahrnúť do prípravku izotonické činidlá, napríklad cukry, polyalkoholy ako je manitol, sorbitol alebo chlorid sodný. Farmaceutický prijateľné nosiče môžu ďalej obsahovať malé množstvá pomocných substancii ako sú zvlhčujúce alebo emulzifikačné činidlá, konzervačné činidlá alebo pufre, ktoré zvyšujú polčas alebo účinnosť protilátky alebo časti protilátky.
Prípravky podľa predkladaného vynálezu môžu byť v rôznych formách. Tieto zahrnujú, napríklad, kvapalné, polotuhé alebo pevné dávkové formy, ako sú kvapalné roztoky (napríklad injikovateľné alebo infuzibilné roztoky), disperzie alebo suspenzie, tablety, pilulky, prášok, lipozómy a čapíky. Výhodná forma závisí od zamýšľaného spôsobu podania a terapeutickej aplikácie. Typické preferované prípravky sú vo forme injikovateľných alebo infuzibilných roztokov, ako sú prípravky, ktoré sa podobajú prípravkom používaným na pasívnu imunizáciu ľudí inými protilátkami. Výhodný spôsob podania je parenterálne (napríklad intravenózne, subkutánne, intraperitoneálne, intramuskulárne). Vo výhodnom uskutočnení je protilátka podaná intravenóznou injekciou alebo infúziou. V inom výhodnom uskutočnení je protilátka podaná intramuskulámou alebo subkutánnou injekciou.
Terapeutické prípravky musia typicky byť sterilné a stabilné za podmienok výroby a skladovania. Prípravok môže byť formulovaný ako roztok, mikroemulzia, disperzia, lipozómový prípravok alebo iná riadna štruktúra vhodná na vysokú koncentráciu liečiva. Sterilné injikovateľné roztoky môžu byť pripravené inkorporáciou aktívnej zlúčeniny (t. j. protilátky alebo časti protilátky) v požadovanom množstve do vhodného rozpúšťadla s jednou alebo s kombináciou vymenovaných prísad, ako je potrebné, a potom filtračnou sterilizáciou. Všeobecne, disperzie sú pripravené inkorporáciou aktívnej zlúčeniny do sterilného vehikulá, ktoré obsahuje základné disperzné médium a ďalšie požadované prísady z tých, ktoré boli uvedené. V prípade sterilných práškov na prípravu sterilných injikovateľných roztokov sú výhodnými spôsobmi prípravy sušenie vákuom a sublimácia zo zmrazeného stavu, ktorými sa získa prášok aktívnej zložky plus akejkoľvek ďalšej požadovanej prísady z ich vopred filtrovaného sterilného roztoku. Riadna tekutosť roztoku môže byť udržovaná, napríklad, použitím povlaku ako je lecitín, udržovaním požadovanej veľkosti častíc v prípade disperzie a použitím surfaktantu. Prolongovaná absorpcia injikovateľných prípravkov môže byť dosiahnutá pridaním činidla spomaľujúceho absorpciu do prípravku, napríklad solí monosterátu a želatíny.
Protilátky a časti protilátok podľa predkladaného vynálezu môžu byť podané rôznymi metódami známymi v odbore, hoci pre veľa terapeutických aplikácií je výhodnou cestou/spôsobom podanie intravenóznej injekcie alebo infúzie. Ako bude odborníkom v odbore zrejmé, cesta a/alebo spôsob podania sa bude veľmi líšiť v závislosti od požadovaného výsledku. V určitých uskutočneniach môže byť aktívna zlúčenina pripravená s nosičom, ktorý bude brániť rýchlemu uvoľňovaniu zlúčeniny, tak, ako je tomu v prí pravkoch s kontrolovaným uvoľňovaním, vrátane implantátov, transdermálnych náplastí a mikroenkapsulovaných systémov pre podanie. Môžu byť použité biodegradovateľné, biokompatibilné polyméry, ako sú etylénvinylacetát, poly-anhydridy, polyglykolové kyseliny, kolagén, polyortoestery a polymliečna kyselina. Veľa metód na prípravu takých prípravkov je patentovaných alebo sú odborníkom v odbore všeobecne známe. Pozri napríklad Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems, J. R. Robinson, vyd., Marcel Dekker, Inc., New York, 1978.
V niektorých uskutočneniach môže byť protilátka alebo časť protilátky podľa predkladaného vynálezu podaná orálne, napríklad, s inertným riedidlom alebo s asimilovateľným požívateľným nosičom. Zlúčenina (alebo ďalšie prísady, pokiaľ sú žiaduce), môže byť tiež obsiahnutá v kapsule z mäkkej alebo tuhej želatíny, komprimovaná do tabliet alebo priamo obsiahnutá v diéte subjektu. Na orálne terapeutické podanie môže byť zlúčenina zmiešaná s prísadami a použitá vo forme tabliet na gastrointestinálne podanie, bukálnych tabliet, pastiliek, kapsúl, elixírov, suspenzií, sirupov, oblátok a podobne. Na podanie zlúčenín podľa predkladaného vynálezu iným spôsobom, než parenterálne, je nevyhnutné povliecť zlúčeninu, alebo podať zlúčeninu súčasne s materiálom, ktorý zabráni jej inaktivácii.
V prípravkoch môžu byť tiež obsiahnuté doplnkové aktívne zlúčeniny. V niektorých uskutočneniach je protilátka alebo časť protilátky podľa predkladaného vynálezu formulovaná spolu s a/alebo podaná spolu s jedným alebo viacerými ďalšími terapeutickými činidlami, ktoré sú užitočné pri liečbe ochorení, pri ktorých je aktivita TNFct poškodzujúca. Napríklad, anti-hTNFa protilátka alebo časť protilátky podľa predkladaného vynálezu môže byť formulovaná spolu s a/alebo podaná spolu s jednou alebo s viac ďalšími protilátkami, ktoré sa viažu na iné ciele (napríklad protilátkami, ktoré sa viažu na iné cytokíny, alebo ktoré sa viažu na bunkové povrchové molekuly), jedným alebo viac cytokínmi, solubilným receptorom pre TNFa (pozri napríklad PCT prihláška č. WO 94/06476) a/alebo s jedným alebo viac chemickými činidlami, ktoré inhibujú produkciu alebo aktivitu hTNFa (ako sú deriváty cyklohexánylidénu ako ich opisuje PCT prihláška č. WO 93/19751). Okrem toho, jedna alebo viac protilátok podľa predkladaného vynálezu môže byť použitá v kombinácii s jedným alebo viac z uvedených terapeutických činidiel. Také kombinované terapie môžu výhodne používať nižšie dávky podaného terapeutického činidla a tak je možné sa vyhnúť možnej toxicite alebo komplikáciám spojeným s rôznymi monoterapiami.
Neobmedzujúce príklady terapeutických činidiel na liečbu reumatoidnej artritídy, s ktorými môže byť protilátka alebo časť protilátky, podľa predkladaného vynálezu kombinovaná, zahrnujú: nesteroidné protizápalové liečivá (NSAID); cytokíny potlačujúce protizápalové liečivá (CSAID); CDP-571/BAY-10-3356 (humanizovaná anti-TNFa protilátka; Celltech/Bayer); cA2 (chimérická anti-TNFa protilátka; Centocor); 75 kd TNFR-IgG (75 kD TNF-receptor - IgG fuzny proteín, Immunex, pozri Arthritis & Rheumatism (1994), zväzok 37: S295; J. Invest. Med. (1996), zväzok 44: 235A); 55 kd TNFR-IgG (55 kD TNFreceptor - IgG fúzny proteín, Hoffmann-LaRochc); IDECCE9.1/SB 210396 (nedepletujúca primátizovaná anti-CD4 protilátka, IDEC/SmithKline, pozri napríklad Arthritis & Rheumatism (1995), zväzok 38: S185); DAB 486-IL-2 a/alebo DAB 389-IL-2 (IL-2 fúzne proteíny, Seragen, pozri napríklad Arthritis & Rheumatism (1993), zväzok 36: 1223); Anti-Tac (humanizovaná anti-IL-2Ra, Proteín Desígn Labs/Roche); IL-4 (protizápalový cytokín, DNAX/Schering);
IL-10 (SCH 52000, rekombinantná IL-10, protizápalový cytokín, DNAX/Schering); agonisty IL-4, IL-10 a/alebo IL4 (napríklad agonistické protilátky); IL-1RA (receptorový antagonista LJIL-1, Synergen/Amgen); TNF-bp/s-TNFR (solubilný TNF väzbový proteín, pozri Arthritis & Rheumatism (1996), zväzok 39, č. 9 (supplement), S284; Amer. J. Physiol. - Heart and Circulatory Physiology (1995), zväzok 268: str. 37 - 42); R973401 (inhibítor fosfodiesterázy typu IV, pozri Arthritis & Rheumatism (1996), zväzok 39, č. 9 (supplement), S282); MK-966 (COX-2 inhibítor, pozri Arthritis & Rheumatism (1996), zväzok 39, č. 9 (supplement), S81); Iloprost (pozri Arthritis & Rheumatism (1996), zväzok 39, č. 9 (supplement), S82); metotrexát; thalidomid (pozri Arthritis & Rheumatism (1996), zväzok 39, č. 9 (supplement), S282) a lieky príbuzné thalidomidu (napríklad Celgen); leflunomid (protizápalový a inhibítor cytokínov, pozri Arthritis & Rheumatism (1996), zväzok 39, č. 9 (supplement), S131); kyselina tranexamová (inhibítor aktivácie plazminogénu, pozri Arthritis & Rheumatism (1996), zväzok 39, č. 9 (supplement), S284); T-614 (inhibítor cytokínov, pozri Arthritis & Rheumatism (1996), zväzok 39, č. 9 (supplement), S282); prostaglandín El (pozri Arthritis & Rheumatism (1996), zväzok 39, č. 9 (supplement), S282); Tenidap (nesteroidný protizápalový liek, pozri napríklad Arthritis & Rheumatism (1996), zväzok 39, č. 9 (supplement), S280); Naproxen (nesteroidné protizápalové liečivo, pozri napríklad Neuro Report (1996), zväzok 7, str. 1209 - 1213); Meloxicam (nesteroidné protizápalové liečivo); Ibuprofén (nesteroidné protizápalové liečivo); Piroxicam (nesteroidné protizápalové liečivo); Diclofenac (nesteroidné protizápalové liečivo); Indometacin (nesteroidné protizápalové liečivo); Sulfasalazin ( pozri napríklad Arthritis & Rheumatism (1996), zväzok 39, č. 9 (supplement), S281); Azathiprin (pozri napríklad Arthritis & Rheumatism (1996), zväzok 39, č. 9 (supplement), S281); ICE inhibítor (inhibítor enzýmu interleukín-ΐβ konvertázy); zap-70 a/alebo lck inhibítor (inhibítor tyrozín kinázy zap70 alebo lck); VEGF inhibítor a/alebo VEGF-R inhibítor (inhibítory rastového faktora vaskulámych endotelových buniek alebo receptora rastového faktora vaskulámych endotelových buniek, inhibítory angiogenézy); kortikoidné protizápalové liečivá (napríklad SB203580); inhibítoryTNF-konvertázy; anti-IL-12 protilátky; interleukín 11 (pozri napríklad Arthritis & Rheumatism (1996), zväzok 39, č. 9 (supplement), S296); interleukín-13 (pozri napríklad Arthritis & Rheumatism (1996), zväzok 39, č. 9 (supplement), S308); interleukín-17 (pozri napríklad Arthritis & Rheumatism (1996), zväzok 39, č. 9 (supplement), S120); zlato, penicilamín; chlorokin; hydroxychlokin; chlorambucil; cyklofosfamid, cyklosporín; ožiarenie všetkého lymfatického tkaniva; anti-tymocytámy globulín; anti-CD-4 protilátky; CD5-toxíny; orálne podané peptidy alebo kolagén; lobenzarid dvojsodný; cytokíny regulujúce činidlá (CRA) HP228 a HP466 (Houghten Pharmaceuticals, Inc.); ICAM1 antisense fosforotioátové oligodeoxynukleotidy (ISIS 2302; Isis Pharmaceutical, Inc.); solubilný komplementový receptor 1 (TP10, T Celí Sciences, Inc.); prednizón; orgotein; glykozaminoglykan polysulfát; minocyklin; anti-IL2R protilátky; morské a botanické lipidy (mastné kyseliny z rýb a rastlinných semien, pozri napríklad DeLucca et al. (1995), Rheum. Dis. Clin. North Am. 21: 759 - 777); auranofín; fenylbutazón; kyselina meklofenamová; intravenózny imunitný globulín; zileuton; kyselina mykofenolová (RS-61443); takrolimus (FK-506); sirolimus (rapamycín); amiprilos (therafektin); kladribin (2-chlorodeoxyadenozín); a azaribin.
SK 284040 Β6
Neobmedzujúce príklady terapeutických činidiel na liečbu zápalových črevných ochorení, s ktorými môže byť protilátka alebo časť protilátky, podľa predkladaného vynálezu kombinovaná, zahrnujú: budenozid; epidermálny rastový faktor; kortikosteroidy; cyklosporín; sulfasalazin; aminosalicyláty; 6-merkaptopurín; azathioprin; metronidazol; inhibítory lipooxygenázy; mesalamin; olsalazin; balsalazin; antioxidanty; inhibítory tromboxánu; antagonistov IL-1 receptora; anti-IL-Ιβ monoklonálne protilátky; anti-IL-6 monoklonálne protilátky; rastové faktory; inhibítory elastázy; pyridinyl-imidazolové zlúčeniny; CDP-571/BAY10-3356 (humanizovaná anti-TNFa protilátka; Celltech/Bayer); cA2 (chimérická anti-TNFa protilátka; Centocor); 75 kd TNFR-IgG (75 kD TNF-receptor - IgG fúzny protein, Immunex, pozri Arthritis & Rheumatism (1994), zväzok 37: S295; J. Invest. Med. (1996), zväzok 44: 235A); 55 kd TNFR-IgG (55 kD TNF-receptor - IgG fúzny protein, Hoffmann-LaRoche); IL-10 (SCH 52000, Schering Plough); agonistov IL-4, IL-10 a/alebo IL-4 (napríklad agonistické protilátky); interleukín 11; proliečivá prednizolónu, dexametazónu alebo budesonidu konjugované s glukuronidom alebo dextranom; ICAM-1 antisense fosforotioátové oligodeoxynukleotidy (ISIS 2302; Isis Pharmaceutical, Inc.); solubilný komplementový receptor 1 (TP10, T Celí Sciences, Inc.); mesalazin so spomaleným uvoľňovaním; metotrexát; antagonistov doštičkového aktivačného faktora (PAF); ciprofloxacin a lignokain.
Neobmedzujúce príklady terapeutických činidiel na liečbu roztrúsenej sklerózy, s ktorými môže byť protilátka alebo časť protilátky podľa predkladaného vynálezu kombinovaná, zahrnujú: kortikosteroidy; prednizolón; metylprednizolón; azatioprin; cyklofosfamid; cyklosporín; metotrexát; 4-aminopyridín; tizanidín; interferón-Pla (Avonex™ Biogen); interferón-pib (flseron™ Chiron/Berlex); Copolymer 1 (Cop-1, Copaxon™, Teva Pharmaceutical Industries, Inc.); hyperbarický kyslík; intravenózny imunoglobulín; kladribin; CDP-571/BAY-10-3356 (humanizovaná anti-TNFa protilátka; Celltech/Bayer); cA2 (chimérická anti-TNFa protilátka; Centocor); 75 kd TNFR-IgG (75 kD TNF-receptor - IgG fúzny protein, Immunex, pozri Arthritis & Rheumatism (1994), zväzok 37: S295; J. Invest. Med. (1996), zväzok 44: 235A); 55 kd TNFR-IgG (55 kD TNF-receptor - IgG fúzny protein, Hoffmann-LaRoche); IL-10 (SCH 52000, Schering Plough); agonisty IL-10, IL-4, IL-10 a/alebo IL-4 (napríklad agonistické protilátky).
Neobmedzujúce príklady terapeutických činidiel na liečbu sepsy, s ktorými môže byť protilátka alebo časť protilátky, podľa predkladaného vynálezu kombinovaná, zahrnujú: hypertonické salinické roztoky; antibiotiká; intravenózny gamaglobulín; kontinuálnu hemofiltráciu; karbapenemy (napríklad meronem); antagonistov cytokínov ako je TNFa, IL-Ιβ, IL-6 a/alebo IL-8; CDP-571/BAY-10-3356 (humanizovaná anti-TNFa protilátka; Celltech/Bayer); cA2 (chimérická anti-TNFa protilátka; Centocor); 75 kd TNFRIgG (75 kD TNF-receptor - IgG fúzny protein, Immunex, pozri Arthritis & Rheumatism (1994), zväzok 37: S295; J. Invest. Med. (1996), zväzok 44: 235A); 55 kd TNFR-IgG (55 kD TNF-receptor - IgG fúzny protein, HoffmannLaRoche); cytokiny regulujúce činidlá (CRA) HP228 a HP466 (Houghten Pharmaceuticals, Inc.); SK&F 107647 (nizkomolekulámy peptid, SmithKline Beecham); tetravalentný guanylhydrazón CNI-1493 (Picower Inštitúte); inhibítor dráhy tkanivového faktora (TFPI, Chiron); PHP (chemicky modifikovaný hemoglobín, APEX Bioscience); chelačné činidlá železa a cheláty, vrátane komplexu dietyléntriaminopentaoctovej kyseliny - železo (III) (DTPA iron (III), Molichem Medicines); lizofylín (syntetická malá molekula metylxantínu, Celí Therapeutics, Inc.); PGG-Glukan (β1,3 glukan rozpustný vo vode, Alpha-β Technology); apolipoproteín A-1 rekonštituovaný lipidmi; chirálne hydroxámové kyseliny (syntetické antibakteriálne činidlá, ktoré inhibujú biosyntézu lipidu A); protilátky proti endotoxínu; E5531 (syntetický anatagonista lipidu A, Eisai America, Inc.); rBPI21 (rekombinantný N-koncový fragment ľudského baktericídneho/permeabilitu zvyšujúceho proteínu); a syntetické anti-endotoxínové peptidy (SAEP, BiosYnth Research Laboratories).
Neobmedzujúce príklady terapeutických činidiel na liečbu syndrómu respiračnej tiesne dospelých (ARDS), s ktorými môže byť protilátka alebo časť protilátky, podľa predkladaného vynálezu kombinovaná, zahrnujú: anti-IL-8 protilátky; surfaktantovú substitučnú terapiu; CDP-571/BAY-10-3356 (humanizovaná anti-TNFa protilátka; Celltech/Bayer); cA2 (chimérická anti-TNFa protilátka; Centocor); 75 kd TNFR-IgG (75 kD TNF-receptor - IgG fúzny protein, Immunex, pozri Arthritis & Rheumatism (1994), zväzok 37: S295; J. Invest. Med. (1996), zväzok 44: 235A); a 55 kd TNFR-IgG (55 kD TNF-receptor - IgG fúzny protein, Hoffmann-LaRoche).
Použitie protilátok alebo častí protilátok, podľa predkladaného vynálezu, v kombinácii s inými terapeutickými činidlami, je ďalej preberané v časti IV.
Farmaceutické prípravky podľa predkladaného vynálezu môžu obsahovať „terapeuticky účinné množstvo“ alebo „profylaktický účinné množstvo“ protilátky alebo časti protilátky podľa predkladaného vynálezu. „Terapeuticky účinné množstvo“ označuje množstvo, ktoré je pri nevyhnutných dávkach a čase podávania účinné na dosiahnutie požadovaného terapeutického výsledku. Terapeuticky účinné množstvo protilátky alebo časti protilátky sa môže veľmi líšiť podľa faktorov ako je typ ochorenia, vek, pohlavie a hmotnosť jedinca, a podľa schopnosti protilátky alebo časti protilátky vyvolať požadovanú odpoveď u jedinca. Terapeuticky účinné množstvo je tiež také, pri ktorom sú akékoľvek toxické alebo škodlivé účinky protilátky alebo časti protilátky prevážené terapeuticky výhodnými účinkami. „Profylaktický účinné množstvo“ označuje množstvo, ktoré je pri nevyhnutných dávkach a čase podávania účinné na dosiahnutie požadovaného profylaktického výsledku. Typicky, pretože profylaktická dávka je použitá u subjektu pred ochorením alebo v skorých štádiách ochorenia, bude profylaktický účinné množstvo nižšie ako terapeuticky účinné množstvo.
Dávkové režimy môžu byť upravené tak, aby dávali optimálnu požadovanú odpoveď (napríklad terapeutickú alebo profylaktickú odpoveď). Napríklad, môže byť podaná jedna bolusová dávka, môže byť podaných niekoľko rozdelených dávok za určitý čas alebo môže byť dávka proporcionálne redukovaná alebo zvyšovaná podľa terapeutickej situácie. Výhodné je najmä formulovanie parenterálnych prípravkov v jednotkovej dávkovej forme pre ľahkosť podania a pre uniformitu dávky. Dávková jednotková forma, ako je tu použité, označuje fyzikálne samostatnú jednotku ako unitámu dávku pre cicavčie subjekty, ktoré sú liečené; každá jednotka obsahuje vopred určené množstvo aktívnej zlúčeniny vypočítané pre vytvorenie požadovaného terapeutického účinku spolu s požadovaným farmaceutickým nosičom. Požiadavky pre jednotkové dávkové formy podľa predkladaného vynálezu sú určované a sú priamo závislé od: (a) jedinečných charakteristík aktívnej zlúčeniny a od určitého terapeutického alebo profylaktického výsledku, ktorý má byť dosiahnutý, a (b) od obmedzení da ných v odbore prípravy takých aktívnych zlúčenín na liečbu senzitivity u jedincov.
Príkladným, neobmedzujúcim rozmedzím pre terapeuticky alebo profylaktický účinné množstvo protilátky alebo časti protilátky podľa predkladaného vynálezu je 0,1 - 20 mg/kg, lepšie 1-10 mg/kg. Malo by byť uvedené, že hodnoty dávky sa môžu veľmi líšiť v závislosti od typu a závažnosti stavu, ktorý je liečený. Malo by byť ďalej jasné, že pre akýkoľvek jednotlivý subjekt by mali byť špecifické režimy dávkovania upravované podľa potrieb jedinca a podľa profesionálnych úvah osoby podávajúcej prípravok alebo dozerajúcej na podanie prípravku, a že dávky tu uvedené sú iba príkladné a neobmedzujú rozsah alebo použitie nárokovaného prípravku.
IV. Použitie protilátok podľa predkladaného vynálezu
Na základe svojej schopnosti viazať hTNFa môžu byť anti-hTNFa protilátky alebo ich časti, použité na detekciu hTNFa (napríklad v biologických vzorkách, ako je sérum alebo plazma), s použitím bežných imunotestov, ako je enzýmovo viazaný imunosorbentný test (ELISA), rádioimunotest (RIA) alebo tkanivová imunohistochémia. Vynález poskytuje spôsob na detekciu hTNFa v biologických vzorkách, kde tento spôsob obsahuje kontaktovanie biologickej vzorky s protilátkou, alebo s časťou protilátky, podľa predkladaného vynálezu, a detegovanie buď protilátky (alebo časti protilátky) naviazanej na hTNFa, alebo nenaviazanej protilátky (alebo časti protilátky), a tým detegovanie hTNFa v biologickej vzorke. Protilátka je priamo alebo nepriamo značená detegovateľnou substanciou na uľahčenie detekcie naviazanej alebo nenaviazanej protilátky. Vhodné detegovateľné substancie zahrnujú rôzne enzýmy, protetické skupiny, fluorescenčné materiály, luminiscenčné materiály a rádioaktívne materiály. Príklady vhodných enzýmov zahrnujú chrenovú peroxidázu, alkalickú fosfatázu, β-galaktozidázu alebo acetylcholínesterázu; príklady vhodných komplexov protetických skupín zahrnujú streptavidín/biotín a avidín/biotin; príklady vhodných fluorescenčných materiálov zahrnujú umbelliferon, fluoresceín, fluoresceín izotiokyanát, rodamín, dichlórotriazinylamín fluorescein, danzylchlorid alebo fykoerytrin; príklady luminiscenčných materiálov zahrnujú luminol; a príklady rádioaktívnych materiálov zahrnujú 125i, 131I; 35s alebo 3H.
Alternatívne ku značeniu protilátky môže byť hTNFa testovaný v biologických tekutinách kompetičným imunotestom využívajúcim rhTNFa štandardy značené detegovateľnou substanciou a neznačené anti-hTNFa protilátky. V tomto teste sú biologická vzorka, značené rhTNFa štandardy a anti-hTNFa protilátka kombinované a je určené množstvo značeného rhTNFa štandardu naviazaného na neznačenú protilátku. Množstvo hTNFa v biologickej vzorke je nepriamo úmerné množstvu značeného rhTNFa štandardu naviazaného na anti-hTNFa protilátku.
D2E7 protilátka podľa predkladaného vynálezu môže byť tiež použitá na detekciu TNFa od iných druhov než od ľudí, hlavne na určenie TNFa od primátov (napríklad šimpanzov, paviánov, kosmáčov, makakov (cynomolgus) a makakov rhesus), prasiat a myší, pretože D2E7 sa môže viazať na TNFa od každého z týchto druhov (podrobne uvedené v príklade 4, sekcii E).
Protilátka alebo časti protilátky podľa predkladaného vynálezu sú schopné neutralizácie aktivity hTNFa tak in vitro, ako in vivo (pozri príklad 4). Okrem toho, aspoň niektoré z protilátok podľa predkladaného vynálezu, ako je D2E7, môžu neutralizovať aktivitu TNFa z iných druhov. V súlade s tým, protilátka alebo časti protilátky podľa predkladaného vynálezu môžu byť použité na inhibovanie aktivity TNFa, napríklad v bunkovej kultúre obsahujúcej hTNFa, u ľudí alebo u iných cicavcov majúcich TNFa, s ktorým je protilátka podľa predkladaného vynálezu reaktívna (napríklad pri šimpanzoch, paviánoch, kosmáčoch, makakoch (cynomolgus) a makakoch rhesus, prasatách alebo myšiach). V jednom uskutočnení poskytuje vynález spôsob na inhibíciu aktivity TNFa uskutočnením kontaktu TNFa s protilátkou alebo časťou protilátky podľa predkladaného vynálezu tak, že aktivita TNFa je inhibovaná. Výhodne je TNFa ľudský TNFa. Napríklad, do bunkovej kultúry obsahujúcej alebo predpokladane obsahujúcej hTNFa môže byť pridaná protilátka alebo časť protilátky podľa predkladaného vynálezu do kultivačného média na inhibíciu aktivity hTNFa v kultúre.
V inom uskutočnení poskytuje vynález spôsob na inhibíciu aktivity TNFa pri subjekte trpiacom ochorením, pri ktorom je aktivita TNFa škodlivá. Účasť TNFa sa predpokladá v patofyziológii mnohých ochorení (pozri napríklad Moeler, A. et al., (1990), Cytokine 2: 162 - 169; U. S. patent č. 5231024 od Moeller et al.; Európska patentová prihláška č. 260610 BI od Moeller, A.). Vynález poskytuje spôsob na inhibíciu aktivity TNFa pri subjekte trpiacom takým ochorením, kde tento spôsob obsahuje podanie protilátky alebo časti protilátky podľa predkladaného vynálezu subjektu, takže je inhibovaná aktivita TNFa pri subjekte. Výhodne je TNFa ľudský TNFa a subjektom je človek. Alternatívne, subjektom môže byť cicavec exprimujúci TNFa, s ktorým je protilátka podľa predkladaného vynálezu reaktívna. Ešte ďalším subjektom môže byť cicavec, do ktorého bol vložený hTNFa (napríklad podaním hTNFa alebo expresiou hTNFa transgénu). Protilátka podľa predkladaného vynálezu môže byť podaná človeku za terapeutickým účelom (ďalej uvedené vyššie). Okrem toho, protilátka podľa predkladaného vynálezu môže byť podaná cicavcom iným ako ľuďom exprivujúcim TNFa, s ktorým je protilátka reaktívna (napr. primátom alebo prasatám, alebo myšiam) na veterinárne účely alebo ako zvierací model ľudského ochorenia. Vzhľadom na ďalej uvedené sú také zvieracie modely užitočné na hodnotenie terapeutickej účinnosti protilátok podľa predkladaného vynálezu (napríklad na testovanie dávok a načasovanie podávania).
Ako je tu použité, termín „ochorenie, v ktorom je aktivita TNFa škodlivá“ zahrnuje ochorenie alebo iné poruchy, pri ktorých je prítomnosť TNFa u subjektu trpiaceho ochorením preukázané alebo pravdepodobne zodpovedná za patofyziológiu ochorenia, alebo je faktorom, ktorý zhoršuje ochorenie. Podľa toho, ochorenie, pri ktorom je aktivita TNFa škodlivá, je ochorenie, pri ktorom sa predpokladá, že inhibícia aktivity TNFa zmierni príznaky a/alebo progresiu ochorenia. Také ochorenie môže byť preukázané, napríklad, zvýšením koncentrácie TNFa v biologických tekutinách subjektu trpiaceho ochorením (napríklad zvýšením koncentrácie TNFa v sére, plazme, synoviálnej tekutine atď. od subjektu), ktoré môže byť detegované, napríklad, s využitím anti-TNFa protilátky ako je opísané. Existuje mnoho príkladov ochorení, pri ktorých je aktivita TNFa škodlivá. Použitie protilátok a častí protilátok podľa predkladaného vynálezu v liečbe jednotlivých ochorení je opísané podrobnejšie ďalej.
A. Sepsa
Faktor nekrózy nádorov má stanovenú úlohu v patofyziológii sepsy, s biologickými účinkami, ktoré zahrnujú hypotenziu, myokardiálnu supresiu, syndróm priepustnosti kapilár, orgánovú nekrózu, stimuláciu uvoľňovania sekundárnych mediátorov a aktiváciu kaskády zrážania krvi (po zri napríklad Moeler, A. et al., (1990), Cytokine 2: 162 až 169; U. S. patent č. 5231024 od Moeller et al.; Európska patentová prihláška č. 260610 BI od Moeller, A.; Tracey,
K. J. a Cerami, A. (1994), Annu. Rev. Med. 45: 491 - 503; Russell, D. a Thompson, R.C. (1993) Curr. Opin. Biotech. 4: 714 - 721). V súlade s tým, ľudské protilátky a časti protilátok podľa predkladaného vynálezu môžu byť použité na sepsu v akejkoľvek jej klinickej forme, vrátane septického šoku, endotoxínového šoku, gram-negatívnej sepsy a syndrómu toxického šoku.
Okrem toho, na liečbu sepsy môže byť anti-hTNFa protilátka alebo časť protilátky podľa predkladaného vynálezu podaná spoločne s jedným alebo viac terapeutickými činidlami, ktoré môžu ďalej zmierňovať sepsu, ako je inhibitor interleukínu-1 (ako je opísaný v PCT prihláškach č. WO 92/16221 a WO 92/17583), cytokín interleukín-6 (pozri napríklad PCT prihlášku č. WO 93/11793) alebo antagonista doštičkového aktivačného faktora (pozri napríklad Európska patentová prihláška č. EP 374 510). Ďalšie kombinované terapie na liečbu sepsy sú podrobnejšie uvedené v sekcii III.
Okrem toho, vo výhodnom uskutočnení, anti-hTNFa protilátka alebo časť protilátky podľa predkladaného vynálezu je podaná ľudskému subjektu patriacemu do podskupiny septických pacientov majúcich v čase liečby sérovú alebo plazmatickú koncentráciu IL-6 vyššiu ako 500 pg/ml a výhodnejšie 1000 pg/ml (pozri PCT prihláška č. WO 95/20978, Daum, L. et al).
B. Autoimunitné ochorenia
Predpokladá sa účasť faktora nekrózy nádorov v patofyziológii rôznych autoimunitných ochorení. Napríklad, TNFa sa predpokladá pri aktivácii tkanivového zápalu a predpokladá sa, že spôsobuje deštrukciu kĺbov pri reumatoidnej artritíde, napríklad Moeler, A. et al., (1990), Cytokine 2: 162 - 169; U. S. patent č. 5231024, Moeller et al.; Európska patentová prihláška č. 260610 BI, Moeller, A.; Tracey, K. J. a Cerami, A. vyššie; Arend, W. P. a Dayer, J. M. (1995) Arth. Rheum. 38: 151 - 160; Fava, R. A. et al. (1993) Clin. Exp. Immunol. 94: 261 - 266). TNFa sa tiež predpokladá v indukcii smrti buniek Langerhansových ostrovčekov a v sprostredkovaní inzulínovej rezistencie pri diabete (pozri napríklad Tracey a Cerami; PCT prihláška č. WO 94/08609). TNFa sa tiež predpokladá v sprostredkovaní cytotoxicity oligodendroglií a v indukcii zápalových plakov pri roztrúsenej skleróze (pozri napríklad Tracey a Cerami). V súčasnosti prebieha klinické testovanie chimérických a humanizovaných myších anti-hTNFa protilátok na liečbu reumatoidnej artritídy (pozri napríklad Elliott, M. J. et al., (1994) Lancet 344: 1125 až 1127; Elliott, M. J. et al., (1994) Lancet 344: 1105 - 1110; Rankin, E. C. et al., (1995) Br. J. Rheumatol. 34:334 až 342).
Ľudské protilátky a časti protilátok podľa predkladaného vynálezu môžu byť použité na liečbu autoimunitných ochorení, hlavne tých, ktoré sú asociované so zápalom, vrátane reumatoidnej artritídy, reumatoidnej spondylitídy, osteoartritídy a dnavej artritídy, alergie, roztrúsenej sklerózy, autoimúnneho diabetu, autoimúnnej uveitídy a nefrotického syndrómu. Typicky jc protilátka alebo časť protilátky podaná systémovo, hoci pri niektorých ochoreniach môže byť výhodné lokálne podanie protilátky alebo časti protilátky do miesta zápalu (napríklad, lokálne podanie do kĺbov pri reumatoidnej artritíde alebo lokálne podanie do diabetických vredov, samostatne alebo v kombinácii s cyklohexánylidénovými derivátmi ako je opísané v PCT prihláške č. WO 93/19751). Protilátka alebo časť protilátky podľa predkladaného vynálezu môže byť tiež podaná spoločne s jedným alebo viac terapeutickými činidlami užitočnými pri liečbe autoimunitných ochorení, ako je podrobnejšie uvedené v sekcii III.
C. Infekčné ochorenia
Faktor nekrózy nádorov sa predpokladá pri sprostredkovaní biologických účinkov pri mnohých infekčných ochoreniach. Napríklad, TNFa sa predpokladá pri sprostredkovaní mozgového zápalu a kapilárnej trombózy a infarktu pri malárii. TNFa sa tiež predpokladá pri sprostredkovaní mozgového zápalu, pri indukcii porušenia hematoencefalickej bariéry, pri spúšťaní syndrómu septického šoku a pri aktivácii venózneho infarktu pri meningitíde. TNFa sa tiež predpokladá v indukcii kachexie, stimulácii proliferácie vírusu a pri poškodení centrálneho nervového systému pri syndróme získanej imunodeficiencie (AIDS). V súlade s tým, protilátky a časti protilátok podľa predkladaného vynálezu môžu byť použité pri liečbe infekčných ochorení, vrátane bakteriálnej meningitídy (pozri napríklad Európska patentová prihláška publík, č. EP 585 705), mozgovej malárie, AIDS a AIDS - príbuzného komplexu (ARC) (pozri napríklad Európska patentová prihláška publík, č. EP 230 574), rovnako ako cytomegalovírusovej infekcie sekundárnej po transplantácii (pozri napríklad Fietze, E. et al., (1994), Transplantation 58: 675 - 680). Protilátky a časti protilátok podľa predkladaného vynálezu môžu byť tiež použité na zmiernenie príznakov spojených s infekčnými ochoreniami, vrátane horúčky a myalgie spôsobenej infekciou (ako je chrípka) a kachexie spôsobenej infekciou (napríklad spojenej s AIDS alebo ARC).
D. Transplantácie
Predpokladá sa, že faktor nekrózy nádorov je kľúčovým mediátorom pri rejekcii alotransplantátu a reakcii štepu proti hostiteľovi (GVHD) a v sprostredkovaní nežiaducich reakcií, ktoré boli pozorované, keď bola krysia protilátka OKT3, namierená proti CD3 komplexu T receptora, použitá na inhibíciu rejekcie obličkových transplantátov (pozri napríklad Eason, J. D. et al., (1995) Transplantation 59: 300 - 305; Suthanthiran, M. a Strom, T. B. (1994) New Engl. J. Med. 331: 365 - 375. V súlade s tým môžu byť protilátky alebo časti protilátok, podľa predkladaného vynálezu, použité na inhibíciu rejekcie transplantátu, vrátane rejekcie alotransplantátov a xenotransplantátov a na inhibíciu GVHD. Hoci môže byť protilátka alebo časť protilátky použitá samostatne, výhodnejšie je použitá v kombinácii s jedným alebo viacerými činidlami, ktoré inhibujú imunitnú odpoveď namierenú proti alotransplantátu alebo ktoré inhibujú GVHD. Napríklad, v jednom uskutočnení je protilátka alebo časť protilátky podľa predkladaného vynálezu použitá v kombinácii s OKT3 na inhibíciu reakcií indukovaných OKT3. V inom uskutočnení je protilátka alebo časť protilátky podľa predkladaného vynálezu použitá v kombinácii s jednou alebo viac protilátkami proti iným cieľom zúčastňujúcim sa v regulácii imunitnej odpovede, ako sú povrchové bunkové molekuly CD25 (α-receptor pre interleukín -2), CD1 la (LFA-1), CD54 (ICAM-1), CD4, CD45, CD28/CTLA4, CD80 (B7-1) a/alebo CD86 (7-2). V ešte inom uskutočnení je protilátka alebo časť protilátky podľa predkladaného vynálezu použitá v kombinácii s jedným alebo viacerými imunosupresívnymi činidlami, ako je cyklosporín A alebo FK506.
E. Malignity
Predpokladá sa úloha faktora nekrózy nádorov v indukcii kachexie, stimulácii nádorového rastu, zvýšení metastatického potenciálu a v sprostredkovaní cytotoxicity pri malignitách. V súlade s tým môžu byť protilátky alebo časti protilátok podľa predkladaného vynálezu použité v liečbe malignít, v inhibícii nádorového rastu a/alebo pri zmiernení sekundárnej kachexie pri malignitách. Protilátka alebo časť protilátky môže byť podaná systémovo alebo lokálne do miesta nádoru.
F. Pľúcne ochorenia
Predpokladá sa úloha faktora nekrózy nádorov v patofyziológii syndrómu respiračnej tiesne dospelých (ARDS), a to v stimulácii leukocytámej-endotelovej aktivácie, v priamej cytotoxicite na pneumocyty a v syndróme priepustnosti kapilár. V súlade s tým môžu byť protilátky alebo časti protilátok podľa predkladaného vynálezu použité v liečbe rôznych pľúcnych ochorení, vrátane syndrómu respiračnej tiesne dospelých (pozri napríklad PCT prihláška č. WO 91/04054), šokové pľúca, chronických zápalových ochoreni pľúc, pľúcnej sarkoidózy, pľúcnej fibrózy a silikózy. Protilátka alebo časť protilátky môže byť podaná systémovo alebo lokálne do pľúc, napríklad vo forme aerosólu. Protilátka alebo časť protilátky môže byť tiež podaná s jedným alebo viacerými terapeutickými činidlami použiteľnými v liečbe pľúcnych ochorení, ako je podrobnejšie uvedené v sekcii III.
G. Črevné ochorenia
Predpokladá sa úloha faktora nekrózy nádorov v patofyziológii zápalových črevných ochorení (pozri napríklad Tracy, K. J. et al. (1986) Science 234: 470 - 474; Sun, X. M. et al., (1988) J. Clin. Invest. 81: 1328 - 1331; MacDonald, T. T. et al., (1990) Clin. Exp. Immunol. 81: 301 -
- 305). Prebieha klinické testovanie chimérických myších anti-hTNFa protilátok pre liečbu Crohnovej choroby (van Dullemen, H. M. et al., (1995), Gastroenterology 109: 129 -
- 135). Ľudské protilátky alebo časti protilátok podľa predkladaného vynálezu môžu byť tiež použité na liečbu črevných ochorení, ako sú idiopatické zápalové črevné ochorenia, ktoré zahrnujú dva syndrómy: Crohnovu chorobu a ulceróznu kolitídu. Protilátka alebo časť protilátky môže byť tiež podaná s jedným alebo viacerými terapeutickými činidlami použiteľnými v liečbe črevných ochorení, ako je podrobnejšie uvedené v sekcii III.
H. Ochorenia srdca
Protilátky alebo časti protilátok podľa predkladaného vynálezu môžu byť tiež použité na liečbu rôznych ochorení srdca, vrátane srdcovej ischémie (pozri napríklad Európska patentová prihláška publikačné č. EP 453 898) a srdcovej insuficiencie (slabosti srdcového svalu) (pozri napríklad PCT prihláška č. WO 94/20139).
I. Iné
Protilátky alebo časti protilátok podľa predkladaného vynálezu môžu byť tiež použité na liečbu rôznych ďalších ochorení, pri ktorých je aktivita TNFa škodlivá. Príklady ďalších ochorení, pri ktorých sa predpokladá účasť aktivity TNFa v patofyziológii, a ktoré tak môžu byť liečené s použitím protilátky alebo časti protilátky podľa predkladaného vynálezu, zahrnujú zápalové ochorenia kostí a ochorenia kosti spojené s ich resorpciou (pozri napríklad Bertolini, D. R. et al., (1986) Náture 319: 516 - 518; Konig, A. et al., (1988) J. Bone Miner. Res. 3: 621 - 627; Lemer, U.H. a Ohlin, A. (1993) J. Bone Miner. Res. 8: 147 - 155; a Shankar, G. a Stem, P. H. (1993) Bone 14: 871 - 876), hepatitídu, vrátane alkoholovej hepatitídy (pozri napríklad McClain, C. J. a Cohen, D. A. (1989) Hepatology 9: 349 až 351; Felver, M.E. et al. (1990) Alcohol. Clin. Exp. Res. 14: 255 - 259; a Hansen, J. et al. (1994) Hepatology 20: 461 až 474), vírusovú hepatitídu (Sheron, N. et al. (1991) J. He patol. 12: 241 - 245; a Hussain, M. J., et al. (1994) J. Clin. Pathol. 47: 1112 -1115), a fulminantné hepatitídy; poruchy koagulácie (pozri napríklad van der Poli, T. et al. (1990) N. Engl. J. Med. 322: 1622 - 1627; a van der Poli, T. et al. (1991) Prog. Clin. Biol. Res. 367: 55 - 60), popáleniny (pozri napríklad Giroir, B. P. et al. (1994) Am. J. Physiol. 267: Hl 18 - 124; a Liu, X. S. et al. (1994) Bums 20: 40 - 44), reperfuzne poškodenie (pozri napríklad Scales, W. E. et al. (1994) Am. J. Physiol. 267: G1122 - 1127; Serrick, C. et al. (1994) Transplantation 58: 1158 - 1162; a Yao, Y. M. et al. (1995) Resuscitation 29: 157 - 168), tvorbu keloidov (pozri napríklad McCauley, R. L. et al. (1992) J. Clin. Immunol. 12: 300 - 308); tvorbu jazvového tkaniva; pyrexiu; ochorenie periodontu; obezitu a radiačnú toxicitu.
Vynález je ďalej ilustrovaný nasledujúcimi príkladmi, ktoré nie sú nijako obmedzujúce. Obsah všetkých referencií, patentov a publikovaných patentových prihlášok citovaných v tejto prihláške je tu uvedený ako odkaz.
Príklady uskutočnenia vynálezu
Príklad 1: Analýza kinetiky väzby ľudských protilátok na hTNFa
Väzbové interakcie - v reálnom čase - medzi ligandom (biotinylovaným rekombinantným ľudským TNFa (rhTNFa) imobilizovaným na biosenzorovej matrici) a analytom (protilátkami v roztoku) boli merané povrchovou plazmónovou rezonanciou (SPR) s použitím BIAcore systému (Pharmacia Biosensor, Piscataway, NJ). Systém využíva optické vlastnosti SPR na detekciu zmien v koncentrácii proteínov v dextranovej biosenzorovej matrici. Proteíny sú kovalentne naviazané na dextranovú matricu v známych koncentráciách. Protilátky sú injikované do dextranovej matrice a špecifická väzba medzi injikovanými protilátkami a imobilizovanými ligandmi vedie ku zvýšenej koncentrácii proteínov v matrici a tým ku zmene SPR signálu. Tieto zmeny SPR signálu sú zaznamenávané ako jednotky rezonancie (RU) a sú vyjadrené v závislosti od času na Y-osi senzorgramu.
Na uľahčenie imobilizácie biotinylovaného rhTNFa na biosenzorovú matricu je streptavidín kovalentne naviazaný cez voľné aminoskupiny na dextranovú matricu najprv aktiváciou karboxylových skupín matrice 100 mM N-hydroxysukcínimidu (NHS) a 400 mM N-etyl-N'-(3-dietylaminopropyl)karbodiimidhydrochloridu (EDC). Potom je streptavidín injikovaný do aktivovanej matrice. Tridsaťpäť mikrolitrov streptavidínu (25 pg/ml), riedeného v octane sodnom, pH 4,5, je injikované do aktivovaného biosenzora a voľné amíny na proteíne sú naviazané priamo na aktivované karboxylové skupiny. Nezrcagované EDC-estery matrice sú inaktivované injekciou 1 M etanolamínu. Biosenzorové čipy s naviazaným streptavidínom sú tiež komerčne dostupné (Pharmacia BR-1000-16, Pharmacia Biosensor, Piscataway, NJ).
Biotinylovaný rhTNFa bol pripravený najprv rozpustením 5,0 mg biotínu (N-hydroxysukcínimid ester D-biotinyl-epsilon-aminokaprónovej kyseliny; Boehringer Mannheim katalógové č. 1008 960) v 500 μΐ dimetylsulfoxidu na výrobu roztoku 10 mg/ml. 10 μΐ biotínu sa pridá na ml rhTNFa (pri 2,65 mg/ml) na získanie molámeho pomeru 2 : 1 biotínu k rhTNFa. Reakčná zmes sa jemne mieša a inkubuje sa počas dvoch hodín pri izbovej teplote v tme. PD-120 kolóna, Sephadex G-25M (Pharmacia katalógové č. 17-0851-01) sa ekvilibruje s 25 ml chladného PBS aplní sa s 2 ml rhTNFa-biotín na kolónu. Kolóna sa eluuje 10 x 1 ml chladným PBS. Odoberú sa frakcie a odčítajú sa pri OD28o (1,0 OD = 1,25 mg/ml). Vhodné frakcie sa zhromaždia a skladujú sa pri -80 °C do použitia. Biotinylovaný rhTNFa je tiež komerčne dostupný (R & D Systems, katalógové č. FTA00, Minneapolis, MN).
Biotinylovaný rhTNFa, ktorý má byť imobilizovaný na matrici pomocou streptavidínu, sa riedi v PBS nosnom pufre (Gibco, katalógové č. 14190-144, Gibco BRL, Grand Island, NY) doplnenom 0,05 % (BIAcore) surfaktantom P20 (Pharmacia BR-1000-54, Pharmacia Biosensor, Piscataway, NJ). Na určenie kapacity rhTNFa-špecifických protilátok viazať sa na imobilizovaný rhTNFa je uskutočnený nasledujúcim spôsobom väzbový test. Aliquoty biotinylovaného rhTNFa (25 nM; 10 μΐ aliquoty) sa injikujú cez dextranovú matricu s naviazaným streptavidínom rýchlosťou 0,5 μΐ/min. Pred injekciou proteínu a ihneď po nej sa nechá cez každú prietokovú kyvetu prejsť PBS pufer samotný. Rozdiel v signáli medzi základným stavom a asi 30 s po dokončení injekcie biotinylovaného rhTNFa sa berie ako hodnota väzby (približne 500 RU). Meria sa priama rhTNFa-špecifická protilátka viažuca sa na imobilizovaný biotinylovaný rhTNFa. Protilátky (20 pg/ml) sa riedia v PBS v nosnom pufre a 25 μΐ aliquoty sa injikujú cez matrice s imobilizovaným proteínom rýchlosťou 5 μΐ/min. Pred injekciou protilátky a ihneď po nej sa nechá cez každú prietokovú kyvetu prejsť PBS pufer samotný. Rozdiel v signáli medzi základným stavom a signálom po dokončení injekcie protilátky sa berie ako hodnota väzby pre určitú vzorku. Biosenzorové matrice sa regenerujú 100 mM HC1 pred injekciou ďalšej vzorky. Na určenie rýchlosti disociácie (KofI), rýchlosti asociácie (Kon), asociačnej konštanty (Ka) a disociačnej konštanty (Kd) bol použitý BIAcore kinetic evaluation softvér (verzia 2.1).
Reprezentatívne výsledky väzby D2E7 (IgG4 kompletná protilátka) na biotinylovaný rhTNFa v porovnaní s myšou mAb 195 (F(ab’)2 fragment), sú ukázané v tabuľke 1.
Tabuľka 1: Väzba D2E7 IgG4 alebo MAK 195 na biotinylovaný rhTNFa
Protilátka (Ab),nM rhTNFa väzba, RU Ab, väzba RU rhTNFa/Ab Koff, s 1 (priemer)
D2E7 267 373 1215 1,14 8,45 x ΙΟ 5
133 420 1569 1,30 5,42 x ΙΟ 5
67 434 1633 1,31 4,75 x W5
33 450 1532 1,19 4,46 x 10‘5
17 460 1296 0,98 3,47 x 10’5
8 486 936 0,67 2,63 x W5
4 489 536 0,38 2,17 x ÍO-5
2 470 244 0,18 3,68 x 10’5 (4,38 x ÍO*5)
MAK 195 400 375 881 1,20 5,38 x 10’5
200 400 1080 1,38 4,54 x 10‘5
100 419 1141 1,39 3,54 x W5
50 427 1106 1,32 3,67 x 10’5
25 446 957 1,09 4,41 x 10’5
13 464 708 0,78 3,66 x 10 5
6 474 433 0,47 7,37xl0'3
3 451 231 0,26 6,95 x 10'5 (4,94 x 10’5)
V druhej sérii pokusov boli kvantitatívne analyzované molekulárne kinetické interakcie medzi IgGl kompletnou D2E7 a biotinylovaným rhTNF, s použitím BIAcore technológie, ako je opísaná, a boli odvodené kinetické rýchlostné konštanty, zhrnuté ďalej v tabuľkách 2, 3 a 4.
Tabuľka 2: Určené disociačné rýchlostné konštanty interakcie medzi D2E7 a biotinylovaným rhTNF
Pokus Ka(s~‘) ”i 9,58 x10'
9,26x10'
7,60x10' priemer 8,81 ±1,06 x 10~5
Tabuľka 3: Určené asociačné rýchlostné konštanty interakcie medzi D2E7 a biotinylovaným rhTNF
Pokus Ka(M~‘, s'1) ~
Ί 1,33 x 105
1,05 x 105
3,36x 105 priemer 1,91 ±1,26 x 105
Tabuľka 4: Určené rýchlostné a afínitné konštanty D2E7 a biotinylovaného rhTNF
Pokus MM·1, s'1) Kd(s-') Ki(M)
1 1,33 x 105 9,58 x 10'5 7,20x10·'°
2 1,05 x 10s 9,26 x ÍO’5 8,82 x ÍO'10
3 3,36x10’ 7,60 x 10'5 2,26 x 10'°
priemer 1,91 ± 1,26 x 105 8,81 ±1,06 x 10’5 6,09 ±3,42 x 10'”
Disociačné a asociačné rýchlostné konštanty boli kalkulované na základe analýzy disociačných a asociačných oblastí senzorgramov s použitím BIA analysis softvéru. Pre interakcie medzi D2E7 a biotinylovanou molekulou rhTNF boli predpokladané bežné kinetiky chemických reakcií: kinetika nultého rádu pre disociáciu a kinetika prvého rádu pre asociáciu. Pre analýzu boli uvažované interakcie iba medzi jedným ramenom bivalentnej D2E7 protilátky a jednou jednotkou trimérického biotinylovaného rhTNF, pri vyberaní molekulového modelu pre analýzu kinetiky. Boli uskutočnené tri nezávislé pokusy a výsledky boli analyzované jednotlivo. Priemerná určená disociačná konštanta (kd) interakcií medzi D2E7 a biotinylovaným rhTNF bola 8,81 ± 1,06 x 10'5 s'1 a priemerná určená asociačná konštanta (ka) bola 1,91 ± 1,26 x 105 M^s'1. Priemerná skutočná disociačná konštanta (Kd) bola počítaná podľa vzorca
Kd = k/ka· Tak, priemerná Kd D2E7 protilátky pre rhTNF odvodená z parametrov kinetiky bola 6,09 ± 3,42 x 10-10 M. Malé rozdiely v hodnotách kinetiky pre IgGl formu D2E7 (uvedené v tabuľkách 2, 3 a 4) a IgG4 formu D2E7 (uvedené v tabuľke 1 a v príkladoch 2 a 3) nie sú pravdepodobne rozdiely vychádzajúce z prítomnosti buď IgGl, alebo IgG4 konštantného regiónu, ale skôr je možné ich prisúdiť presnejšiemu meraniu koncentrácie protilátky použitému pre analýzu kinetiky IgGl. V súlade s tým, hodnoty kinetiky pre IgGl formu D2E7 tu uvedené sa považujú za najpresnejšie parametre kinetiky pre D2E7 protilátku.
Príklad 2: Alanín vyhľadávacia mutagenéza D2E7 CDR3 domén
Série mutácií jedného alanínu boli štandardnými metódami vložené do CDR3 domén D2E7 VL a D2E7 VH regiónov. Mutácie v ľahkom reťazci sú zobrazené na obrázku IB (LD2E7*.A1, LD2E7*.A3, LD2E7*.A4, LD2E7*.A5, LD2E7*.A7 a LD2E7*.A8 majúce alanínovú mutáciu v pozícii 1, 3, 4, 5, 7 alebo 8, v príslušnom poradí, D2E7 VL CDR3 domény). Mutácie v ťažkom reťazci sú zobrazené na obrázku 2B (HD2E7*.A1, HD2E7*,A2, HD2E7*.A3, HD2E7*.A4, HD2E7*.A5, HD2E7’.A6, HD2E7*.A7, HD2E7*.A8 a HD2E7 .A9 majúce alanínovú mutáciu v pozícii 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10 alebo 11, v príslušnom poradí, D2E7 VH CDR3 domény). Kinetika rhTNFa interakcii s protilátkou zloženou z prirodzených D2E7 VL a VH bola porovnávaná s kinetikou protilátok zložených z 1. D2E7 VL prirodzeného typu s alanínom substituovaným D2E7 VH; 2. D2E7 VHL prirodzeného typu s alanínom substituovaným D2E7 VLH; alebo 3. alanínom substituovaného D2E7 VL s alanínom substituovaným D2E7 VH. Všetky protilátky boli testované ako kompletné IgG4 molekuly.
Kinetika interakcií protilátok s rhTNFa bola určená povrchovou plazmónovou rezonanciou ako je opísaná v príklade 1. Koff rýchlosti pre rôzne VH/VL páry sú zhrnuté v tabuľke 5.
Tabuľka 5: Väzba D2E7 Alanín-vyhľadávacích mutantov na biotinylovaný rhTNFa
VH VL Ws1)
D2E7 VH D2E7 VL 9,65 x 10-5
HD2E7*.A1 D2E7VL 1,4 x 10-4
HD2E7*.A2 D2E7 VL 4,6 x1ο-4
HD2E7*.A3 D2E7 VL 8,15 x 10 4
HD2E7*.A4 D2E7 VL 1,8 x 10-4
HD2E7*.A5 D2E7 VL 2,35 x 10-4
HD2E7*.A6 D2E7 VL 2,9x10-4
HD2E7*.A7 D2E7 VL 1,0 x 10-4
HD2E7*.A8 D2E7 VL 3,1 x 10-4
HD2E7*.A9 D2E7 VL δ,ΙχΙΟ-4
D2E7 VH LD2E7*.A1 6,6 x 10-5
D2E7VH LD2E7*.A3 nedetegovateľné
D2E7 VH LD2E7*.A4 1,75 x 104
D2E7 VH LD2E7*.A5 1,8 x 10-4
D2E7 VH LD2E7*.A7 1,4 x1ο-4
D2E7 VH LD2E7*.A8 3,65 x 10-4
HD2E7*.A9 LD2E7*.A1 1,05x10-4
Tieto výsledky ukazujú, že väčšina z pozícií v CDR3 doménach D2E7 VL a VH regiónov je vhodná pre substitúciu jedným alanínovým zvyškom. Substitúcia jedným alanínovým zvyškom v pozícii 1, 4, 5 alebo 7 D2E7 VL CDR3 domény alebo v pozícii 2, 5, 6, 8, 9 alebo 10 D2E7 VH
CDR3 domény neovplyvňuje signifikantne rýchlosť disociácie väzby na hTNFa oproti prirodzenej pôvodnej D2E7 protilátke. Substitúcia alanínu v pozícii 8 D2E7 VL CDR3 alebo v pozícii 3 D2E7 VH CDR3 dáva 4-krát rýchlejšiu Koff a alanínová substitúcia v pozícii 4 alebo 11 D2E7 VH CDR3 dáva 8-krát rýchlejšiu Koft, čo naznačuje, že tieto pozície sú významnejšie pre väzbu na hTNFa. Predsa však, substitúcia jedného alanínu v pozícii 1, 4, 5, 7 alebo 8 D2E7 VL CDR3 domény alebo v pozícii 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10 alebo 11 D2E7 VH CDR3 domény stále vedie k anti-hTNFa protilátke majúcej Koff 1 x 10-3 s'1 alebo menšiu.
Príklad 3: Analýza väzby D2E7-príbuzných protilátok
Séria protilátok príbuzných vo svojej sekvencii k D2E7 bola analyzovaná na svoju väzbu na rhTNFa a boli porovnávané s D2E7, pomocou povrchovej plazmónovej rezonancie ako bola opísaná v príklade 1. Aminokyselinové sekvencie testovaných VL regiónov sú ukázané na obrázkoch IA a IB. Aminokyselinové sekvencie testovaných VH regiónov sú ukázané na obrázkoch 2A a 2B. Kofr rýchlosti pre rôzne páry VH/VL (ako je ukázané v stĺpci formát, buď ako kompletné IgGl, alebo lgG4 protilátky, alebo ako scFv) sú zhrnuté v nasledujúcej tabuľke 6.
Tabuľka 6: Väzba D2E7-príbuzných protilátok na biotinylovaný rhTNFa
VH VL Formát W)
D2E7VH D2E7 VL IgGl/IgG4 9,65 x 10-5
VH1-D2 LOE7 IgGl/IgG4 7,7 x 10-3
VH1-D2 LOE7 scFv 4,6 x1ο-4
VH1-D2.N LOE7.T IgG4 2,1 x 10-5
VH1-D2.Y LOE7.A IgG4 2,7x10-3
VH1-D2.N LOE7.A IgG4 3,2 x 10-5
VH1-D2 EPB12 scFv 8,0 x 10-4
VH1-D2 2SD4 VL scFv 1,94 x 10-3
3C-H2 LOE7 scFv 1,5 x 10-3
2SD4 VH LOE7 scFv 6,07 x 10-3
2SD4 VH 2SD4 VL scFv 1,37 x 10-2
VH1A11 2SD4 VL scFv 1,34 x 10-2
VH1B12 2SD4 VL scFv 1,01 x 10-2
VH1B11 2SD4 VL scFv 9,8 x 10-3
VH1E4 2SD4 VL scFv 1,59 x 10-2
VH1F6 2SD4 VL scFv 2,29 x 10-2
VH1D8 2SD4 VL scFv 9,5 x 10-3
VH1G1 2SD4 VL scFv 2,14 x 10-2
2SD4 VH EPB12 scFv 6,7 x 10-3
2SD4 VH VL10E4 scFv 9,6 x 10-3
2SD4 VH VL100A9 scFv 1,33 x 10 2
2SD4VH VL100D2 scFv 1,41 x 10-2
2SD4 VH VL10F4 scFv 1,11 x 10-2
2SD4 VH VLLOE5 scFv 1,16 x 102
2SD4 VH VLL0F9 scFv 6,09 x 10-3
2SD4 VH VLL0F10 scFv 1,34 x 10-2
2SD4 VH VLL0G7 scFv 1,56 x 102
2SD4VH VLL0G9 scFv 1,46 x 10-2
2SD4 VH VLL0H1 scFv 1,17 x 10-2
2SD4 VH VLL0H10 scFv 1,12 x 102
2SD4 VH VL1B7 scFv 1,3 x 10-2
2SD4 VH VL1C1 scFv 1,36 x 10-2
2SD4 VH VL1C7 scFv 2,0x10-2
2SD4 VH VL0.1F4 scFv 1,76 x IO-2
2SD4 VH VL0.1H8 scFv 1,14 x 10-2
Pomalé rýchlosti disociácie (t. j. Koff < 1 x 10‘4s !) pre kompletné protilátky (t. j. IgG formát) majúce VL vybraný z D2E7, LOE7, LOE7.T a LOE7.A, ktoré majú buď treo nín, alebo alanín v pozícii 9, naznačuje, že pozícia 9 D2E7 VL CDR3 môže byť obsadená jedným z týchto dvoch zvyškov bez významného ovplyvnenia Koff. V súlade s tým konsenzuálny motív pre D2E7 VL CDR3 obsahuje aminokyselinovú sekvenciu: Q-R-Y-N-R-A-P-Y-(T/A) (SEQ ID NO: 3). Ďalej, pomalé rýchlosti disociácie (t. j. Koff < 1 x x 10‘4s') pre protilátky majúce VH vybraný z D2E7, VH1.D2.N a VH1-D2.Y, ktoré majú buď tyrozín, alebo asparagín v pozícii 12, naznačujú, že pozícia 12 D2E7 VH CDR3 môže byť obsadená jedným z týchto dvoch zvyškov bez významného ovplyvnenia Kofr. V súlade s tým konsenzuálny motív pre D2E7 VH CDR3 obsahuje aminokyselinovú sekvenciu: V-S-Y-L-S-T-A-S-S-L-D-(Y/N) (SEQ ID NO: 4).
Výsledky ukázané v tabuľke 6 ukazujú, že v scFv formáte protilátky obsahujúce 2SD4 VL alebo VH CDR3 regióny majú rýchlejšiu KofI(t. j. Kllff > 1 x 10'3 s’1) v porovnaní s protilátkami obsahujúcimi D2E7 VL alebo VH CDR3 región. Vo VL CDR3 sa 2SD4 líši od D2E7 v pozíciách 2, 5 a 9. Ale, ako bolo uvedené, pozícia 9 môže byť obsadená Ala (ako je tomu pri 2SD4) alebo Thr (ako je tomu pri D2E7) bez významného ovplyvnenia KofT. Tak, porovnaním 2SD4 a D2E7 môžu byť pozície 2 a 5 D2E7 VL CDR3, obe obsadené argininom, identifikované ako kritické pre asociáciu protilátky s hTNFa. Tieto zvyšky sa môžu priamo zúčastniť ako kontaktné zvyšky vo väzbovom mieste protilátky, alebo môžu byť zásadné pre udržanie architektúry molekuly protilátky v tomto regióne. Vzhľadom na význam pozície 2 akceleruje nahradenie Arg (v LOE7, ktorá má rovnaký VL CDR3 ako D2E7) s Lys (v EP B12) rýchlosť disociácie dvakrát. Vzhľadom na význam pozície 5 akceleruje nahradenie Arg (v D2E7) s Ala (v LD2E7* . A5) B12) rýchlosť disociácie dvakrát, ako je opísané v príklade 2. Okrem toho, bez arginínov v pozíciách 2 a 5 (v 2SD4) je rýchlosť disociácie päťkrát rýchlejšia. Predsa však, malo by byť uvedené, že hoci je pozícia 5 významná na vylepšenie väzby na hTNFa, môže byť zmena v tejto pozícii negovaná zmenami v iných pozíciách, ako tomu je pri VLLOE4, VLLOH1 a VL0.1H8.
Vo VH CDR3 sa 2SD4 líši od D2E7 v pozíciách 1,7 a 12. Ale ako bolo uvedené, pozícia 12 môže byť obsadená Asn (ako je tomu pri 2SD4) alebo Tyr (ako je tomu pri D2E7) bez významného ovplyvnenia Koft. Tak, porovnaním 2SD4 a D2E7 môžu byť pozície 1 a 7 D2E7 VH CDR3 identifikované ako kritické pre asociáciu protilátky s hTNFa. Ako bolo uvedené, tieto zvyšky sa môžu priamo zúčastniť ako kontaktné zvyšky vo väzbovom mieste protilátky, alebo môžu byť zásadné na udržanie architektúry molekuly protilátky v tomto regióne. Obe pozície sú významné pre väzbu na hTNFa, pretože keď je použitá 3C-H2 VH CDR3 (ktorá má zmenu valínu na alanín v pozícii 1 vzhľadom na D2E7 VH CDR3), tak má scFv 3-krát rýchlejšiu rýchlosť disociácie, než keď je použitá D2E7 VH CDR3, ale táto rýchlosť disociácie je stále štyrikrát pomalejšia, ako keď je použitá 2SD4 VH CDR3 (ktorá má zmenu v oboch pozíciách 1 a 7 vzhľadom na D2E7 VH CDR3).
Príklad 4: Funkčná aktivita D2E7
Na vyšetrenie funkčnej aktivity D2E7 bola protilátka použitá v niekoľkých testoch na meranie schopnosti protilátky inhibovať aktivitu hTNFa, buď in vitro, alebo in vivo.
A. Neutralizácia TNFa-indukovanej cytotoxicity pri L929 bunkách
Ľudský rekombinantný TNFa (rhTNFa) spôsobuje bunkovú cytotoxicitu pri myších L929 bunkách po inkubačnom čase 18-24 hodín. Ľudské anti-hTNFa protilátky boli hodnotené v L929 testoch spoločnou inkubáciou protilátok s rhTNFa a bunkami nasledujúcim spôsobom. 96-jamková mikrotitračná platňa obsahujúca 100 μΐ antihTNFa Ab bola sériovo riedená 1/3 smerom dolu v platni v dvojitom vyhotovení s použitím RPM1 média obsahujúceho 10 % fetálne hovädzie sérum (FBS). Päťdesiat mikrolitrov rhTNFa bolo pridané do konečnej koncentrácie 500 pg/ml do každej jamky. Platne boli potom inkubované počas 30 minút pri izbovej teplote. Ďalej bolo pridané 50 μΐ TNFasenzitívnych L929 myších fibroblastov v konečnej koncentrácii 5 x 104 buniek na jamku spolu s 1 pg/ml Aktinomycínu D. Kontroly obsahovali médium plus bunky a rhTNFa plus bunky. Tieto kontroly, a TNFa štandardná krivka, v rozmedzí od 2 ng/ml do 8,2 pg/ml, boli použité na určenie kvality testu a na získanie okienka pre neutralizáciu. Platne boli potom inkubované cez noc (18 - 24 hodín) pri 37 °C v 5 % CO2.
100 μΐ média bolo odobratých z každej jamky a bolo pridané 50 μΐ 5 mg/ml 3,(4,4-dimetyltiazol-2-yl)2,5-difenyltetrazóliumbromidu (MTT; komerčne dostupný od Sigma Chemical Co., St. Louis, MO) v PBS. Platne boli potom inkubované počas 4 hodín pri 37 °C. Potom bolo pridané do každej jamky 50 μΐ 20 % dodecyl síranu sodného (SDS) a platne boli inkubované cez noc pri 37 °C. Bola meraná optická hustota pri 570/630 nm, krivky boli pre každú vzorku zapísané do grafu a hodnoty IC50 boli určené štandardnými spôsobmi.
Reprezentatívne výsledky pre ľudské protilátky majúce rôzne VH a VL páry, v porovnaní s myšou MAK 195 mAb, sú ukázané na obrázku 3 a v nasledujúcej tabuľke 7.
Tabuľka 7: Neutralizácia TNFa-indukovanej L929 cytotoxicity
VH VL Štruktúra ic50,m
D2E7 D2E7 scFv 1,1 x 10w
D2E7 D2E7 IgG4 4,7 x 1011
2SD4 2SD4 scFv/IgGl/IgG4 3,0x10‘7
2SD4 LOE7 scFv 4,3 x 10'8
VH1-D2 2SD4 scFv 1,0 x 10'8
VH1-D2 LOE7 scFv/IgGl/IgG4 3,4 x 10’10
VH1-D2.Y LOE7.T IgG4 8,1 x 10
VH1-D2.N LOE7.T IgG4 1,3 x W'0
VH1-D2.Y L0E7.A IgG4 2,8 x 10
VH1-D2.N L0E7.A IgG4 6,2 x ÍO’11
MAK 195 MAK 195 scFv 1,9 x ÍO’8
MAK 195 MAK 195 F(ab')2 6,2x10
Výsledky na obrázku 3 a v tabuľke 7 ukazujú, že D2E7 ľudská anti-hTNFa protilátka a rôzne D2E7-príbuzné protilátky, môžu neutralizovať TNFa-indukovanú L929 cytotoxicitu s kapacitou približne ekvivalentnou kapacite myšej anti-hTNFa mAb MAK 195.
V inej sérii pokusov bola testovaná schopnosť IgGl formy D2E7 neutralizovať TNFa-indukovanú L929 cytotoxicitu spôsobom, ktorý bol opísaný. Výsledky z troch nezávislých pokusov a ich priemer sú zhrnuté v nasledujúcej tabuľke 8.
Tabuľka 8: Neutralizácia TNFa-indukovanej L929 cytotoxicity spôsobená D2E7 IgGl
Pokus IC50(M)
1 1,26 x 10'10
2 1,33 x 10’10
3 1,15 x 1O'10
priemer 1,25 ±0,01 x 10
Táto séria pokusov potvrdila, že D2E7, vo forme kompletného IgGI, neutralizuje TNFa-indukovanú L929 cytotoxicitu s priemernou hodnotou IC50(M) 1,25 ±0,01 x 1O'10.
B. Inhibícia väzby TNFa na receptory pre TNFa na U-937 bunkách
Schopnosť ľudských anti-hTNFa protilátok inhibovať väzbu hTNFa na receptory pre hTNFa na povrchu buniek bola vyšetrovaná s použitím bunkovej línie U-937 (ATCC č. CRL 1593), ľudskej histiocytámej línie, ktorá exprivuje receptory pre hTNFa. U-937 bunky boli kultivované v RPMI 1640 médiu doplnenom 10 % fetálnym hovädzím sérom (Hyclone A-l 111, Hyclone Laboratories, Logan, UT), L-glutamínom (4 nM), HEPES pufrovacím roztokom (10 mM), penicilínom (100 pg/ml) a streptomycínom (10 pg/ml). Pre vyšetrenie aktivity kompletných IgG protilátok boli U-937 bunky vopred inkubované s PBS doplneným 1 mg/ml ľudského IgG (Sigma 1-4506, Sigma Chemical Co., St. Louis, MO) počas 45 minút na ľade a potom boli bunky trikrát premyté väzobným pufrom. Pre test väzby na receptor boli U937 bunky (5 x 106 buniek na jamku) inkubované vo väzbovom pufre (PBS doplnený 0,2 % hovädzím sérovým albumínom) v 96-jamkových mikrotitračných platniach (Costar 3799, Costar Corp., Cambridge, MA) spolu so l25I-značeným rhTNFa (3 x 10'10 M; 25 pCi/ml; získaný od NEN Research Products, Wilmington, DE), s alebo bez anti-hTNFa protilátok, v celkovom objeme 0,2 ml.
Platne boli inkubované na ľade počas 1,5-hodiny. Potom bolo 75 μΐ každej vzorky prenesené do 1,0 ml skúmaviek (Sarsted 72.700, Sarsted Corp., Princeton, NJ) obsahujúcich dibutylftalát (Sigma D-2270, Sigma Chemical Co., St. Louis, MO) a dinonylftalát (ICN 210733, ICN, Irvine, CA). Skúmavky obsahovali 300 μΐ zmesi dibutylflalátu a dinonylftalátu, v objemovom pomere 2 : 1, v príslušnom poradí. Voľný (t. j. nenaviazaný) 125I-značený rh TNFa bol odstránený mikrocentrifugáciou počas 5 minút. Potom bol koniec každej skúmavky obsahujúcej bunkovú peletu odstrihnutý pomocou nožníc na skúmavky (Bel-Art 210180001, Bel-Art Products, Pequannock, NJ). Bunková peleta obsahovala 125I-značený rhTNFa naviazaný na p60 alebo p80 receptor pre TNFa, zatiaľ čo vodná fáza nad olejovou zmesou obsahovala prebytok voľného l25I-značeného rhTNFa. Všetky bunkové pelety boli zhromaždené v odčítacej trubici (Falcon 2052, Becton Dickinson Labware, Lincoln Park, NJ) a odčítané v scintilačnej komôrke.
Reprezentatívne výsledky sú ukázané na obrázku 4. Hodnota IC50 pre D2E7 inhibíciu väzby hTNFa na receptory pre hTNFa na U-937 bunkách je v týchto pokusoch približne 3 x 10’10 M. Tieto výsledky ukazujú, že D2E7 ľudská anti-hTNFa protilátka inhibuje väzbu rhTNFa na receptory pre hTNFa na U-937 bunkách v koncentráciách približne ekvivalentných koncentráciám myšej anti-hTNFa mAb MAK 195.
V inej sérii pokusov bola testovaná schopnosť IgGI formy D2E7 inhibovať väzbu rhTNFa na receptory pre hTNFa na U-937 bunkách spôsobom, ktorý bol opísaný. Výsledky z troch nezávislých pokusov a ich priemer sú zhrnuté v nasledujúcej tabuľke 9.
Tabuľka 9: Inhibícia väzby na TNF receptor na U-937 bunkách spôsobená D2E7 IgGI______________
Pokus IC3o(M)
1 1,70 x 10’10
2 1,49 x 10’'°
3 1,50 x 10’10
priemer 1,56 ±0,12 x 10'10
Táto séria pokusov potvrdila, že D2E7, vo forme kompletného IgGI, inhibuje väzbu na receptor pre TNF na U-937 bunkách s priemernou hodnotou IC50 (M) 1,56 ± 0,12 x 1010.
Pre výskum inhibičného potenciálu D2E7 vo väzbe 125I-rhTNa väzby na jednotlivé p55 a p75 receptory bol uskutočnený rádioimunotest na pevnej fáze. Na meranie IC50 hodnôt D2E7 pre jednotlivé receptory pre TNF boli rôzne koncentrácie protilátky inkubované s 3 x 1010 koncentráciami 125I-rhTNFa. Zmes bola potom testovaná na separátnych platniach obsahujúcich buď p55, alebo p75 receptory pre TNF v závislosti od dávky. Výsledky sú zhrnuté v tabuľke 10.
Tabuľka 10: Inhibícia väzby na TNF receptor pre p55 a p75 TNFR spôsobená D2E7 IgGI
Reagens p55 TNFR IC50(M) p75 TNFR D2E7 1,47 x 10’9 1,26x10” rhTNF 2,31 x 10'9 2,70 x 10”
Inhibícia väzby 125I-rhTNF na p55 a p75 receptory na U-937 bunkách spôsobená D2E7 sledovala jednoduchú esovitú krivku, čo ukazuje na podobné IC50 hodnoty pre oba receptory. V rádioimunoteste na pevnej fáze (RIA) pre rekombinantné TNF receptory boli hodnoty IC50 na inhibíciu väzby 125I-rhTNF na p55 a p75 receptory spôsobenú D2E7 vypočítané ako l,47x 109 a 1,26 x 10”, v príslušnom poradí. Zníženie hodnôt ICS0 v pevnej fáze bolo pravdepodobne spôsobené vyššou hustotou receptorov v RIA formáte, pretože neznačený rhTNF tiež inhiboval s rovnakými hodnotami IC5o- IC5o hodnoty pre inhibíciu väzby I25I-rhTNF na p5 5 a p75 receptory podľa neznačeného rhTNF boli 2,3 1 x 10-9 a 2,70 x 10” M, v príslušnom poradí.
C. Inhibícia ELAM-1 expresie na HUVEC
Endotelové bunky ľudskej pupočníkovej žily (HUVEC) môžu byť indukované k expresii leukocytovej adhéznej molekuly endotelových buniek 1 (ELAM-1) na svojom povrchu ošetrením rhTNFa, kde tieto molekuly môžu byť detegované reakciou HUVEC ošetrených rhTNFa s myšou protilátkou proti ľudskej ELAM-1. Schopnosť ľudských anti-hTNFa protilátok inhibovať túto TNFa-indukovanú expresiu ELAM-1 na HUVEC bola vyšetrovaná nasledujúcim spôsobom: HUVEC (ATCC č. CRL 1730) boli umiestnené v 96 jamkových platniach (5 x 104 buniek na jamku) a boli inkubované cez noc pri 37 °C. Nasledujúci deň boli v mikrotitračnej platni pripravené sériové riedenia ľudskej anti-hTNFa protilátky (1 : 10), počínajúc 20 - 10 pg/ml protilátky. Zásobný roztok rhTNFa bol pripravený v koncentrácii 4,5 ng/ml, aliquoty rhTNFa boli pridané do každej jamky obsahujúcej protilátku a obsahy jamiek boli dobre premiešané. Kontroly obsahovali médium samotné, médium plus anti-hTNFa protilátku a médium plus rhTNFa. HUVEC platne boli vybraté z inkubácie cez noc pri 37 °C a médium bolo opatrne aspirované z každej jamky. 200 μΐ zmesi protilátka-rhTNFa bolo prenesené do každej jamky HUVEC platní. HUVEC platne boli ďalej inkubované pri 37 °C počas 4 hodín. Potom bola myšia anti-ELAM-1 protilátka riedená 1 : 1000 v RPMI. Médium v každej jamke HUVEC platne bolo opatrne aspirované, pridalo sa 50 μΐ/jamku roztoku anti-ELAM-1 protilátky a HUVEC platne sa inkubovali počas 60 minút pri izbovej teplote. Roztok 125I-značenej anti-myšej Ig protilátky bol pripravený v RPMI (približne 50000 cpm v 50 μΐ). Médium v každej jamke HUVEC platní bolo opatrne aspirované, jamky boli dvakrát premyté RPMI a do každej jamky sa pridalo 50 μΐ roztoku 125I-značeného anti-myšieho Ig. Platne boli inkubované počas 1 hodiny pri izbovej teplote a každá jamka bola potom premytá trikrát RPMI. Do každej jamky sa pridalo 180 μΐ 5 % SDS pre lýzu buniek. Lyzát buniek z každej jamky sa potom preniesol do skúmavky a bol odčítaný v scintilačnej komôrke.
Reprezentatívne výsledky sú ukázané na obrázku 5. IC50 hodnota pre D2E7 inhibiciu hTNFa-indukovanej expresie ELAM-1 na HUVEC je v týchto pokusoch približne 6 x 10’11 M. Tieto výsledky ukazujú, že ľudská anti-hTNFa protilátka D2E7 inhibuje hTNFa-indukovanú expresiu ELAM-1 na HUVEC v koncentráciách približne ekvivalentných koncentráciám myšej anti-hTNFa mAb MAK 195.
V inej sérii pokusov bola testovaná schopnosť IgGl formy D2E7 inhibovať hTNFa-indukovanú expresiu ELAM-1 na HUVEC spôsobom, ktorý bol opísaný. Výsledky z troch nezávislých pokusov a ich priemer sú zhrnuté v tabuľke 11.
Tabuľka 11: Inhibícia TNFa-indukovanej expresie ELAM-1 na HUVEC spôsobená D2E7 IgGl.
Pokus ICso(M)
1 1,95 x ÍO10
2 1,69x1010
3 1,90 x 10 10
priemer 1,85 ±0,14 x 10'10
Táto séria pokusov potvrdila, že D2E7, vo forme kompletného IgGl, inhibuje TNFa-indukovanú expresiu ELAM-1 na HUVEC s priemernou hodnotou IC50 (M) 1,85 + 0,14 ÍO'10.
Neutralizačný potenciál D2E7 IgGl bol tiež testovaný pre rhTNFa indukovanú expresiu dvoch ďalších adhéznych molekúl, ICAM-1 a VCAM-1. Pretože rhTNF titračná krivka pre ICAM-1 expresiu bola v 16 hodinách veľmi podobná krivke pre ELAM-1 expresiu, boli v teste neutralizácie protilátkou použité rovnaké koncentrácie rhTNF. HUVEC boli inkubované s rhTNF za prítomnosti rôznych koncentrácii D2E7 pri 37 °C v CO2 inkubátore počas 16 hodín a expresia ICAM-1 bola meraná myšou anti-ICAM-1 protilátkou nasledovanou 125I-značenou ovčou anti-myšou protilátkou. Boli uskutočnené dva nezávislé pokusy a boli vypočítané hodnoty IC5o. Nepribuzná ľudská IgGl protilátka neinhibovala expresiu ICAM-1.
Postup testovania inhibície expresie VCAM-1 bol rovnaký ako postup pre expresiu ELAM-1 s tou výnimkou, že namiesto anti-ELAM-1 MAb bola použitá anti-VCAM-1 MAb. Boli uskutočnené tri nezávislé pokusy a boli vypočítané hodnoty IC50. Nepribuzná ľudská IgGl protilátka neinhibovala expresiu VCAM-1.
Výsledky sú zhrnuté v nasledujúcej tabuľke 12.
Tabuľka 12: Inhibícia expresie ICAM-1 a VCAM-1 spôsobená D2E7 IgGl
Inhibícia ICAM-1 Inhibícia VCAM-1
Pokus IC50 (M) Pokus IC50 (M)
1 1,84 x 10’10 1 1,03 x ÍO10
2 2,49 x 10‘10 2 9,26 x 10
3 3 1,06 x ÍO10
priemer 2,17 ±0,46 x 10’10 priemer 1,01 ±0,01 x 1010
Tieto pokusy ukazujú, že ošetrenie endotelových buniek primárnej ľudskej pupočníkovej žily s rhTNF vedie k optimálnej expresii adhéznych molekúl: ELAM-1 a
VCAM-1 vo štvrtej hodine a k maximálnemu zvýšeniu expresie ICAM-1 v 16 hodine. D2E7 bola schopná inhibovať expresiu troch adhéznych molekúl spôsobom závislým od dávky. Hodnoty IC5o pre inhibiciu ELAM-1, ICAM-1 a VCAM-1 boli 1,85 x 1010, 2,17 x ÍO'10 a 1,01 x 10'10 M, v príslušnom poradí. Tieto hodnoty sú veľmi podobné, čo ukazuje na podobné požiadavky pre dávku rhTNF aktivačného signálu pre indukciu expresie ELAM-1, ICAM-1 a VCAM-1. Je zaujímavé, že D2E7 bola podobne účinná v dlhšom teste inhibície expresie ICAM-1. Test inhibície ICAM-1 vyžaduje 16 hodinovú spoločnú inkubáciu rhTNF a D2E7 s HUVEC, oproti 4 hodinám nutným pre test inhibície ELAM-1 a VCAM-1. Pretože má D2E7 pomalú rýchlosť disociácie pre rhTNF je predstaviteľné, že počas 16 hodinovej inkubačnej doby tu nebola signifikantná kompetícia TNF receptorov na HUVEC.
D. In vivo neutralizácia hTNFa
Tri rôzne in vivo systémy boli použité na demonštráciu toho, že D2E7 je účinná v inhibícii aktivity hTNFa in vivo.
L Inhibícia letality indukovanej TNF pri D-galaktozamínom senzibilizovaných myšiach
Injekcia rekombinantného ľudského TNFa (rhTNFa) myšiam senzibilizovaným D-galaktozaminom spôsobuje letalitu počas 24 hodín. Činidlá neutralizujúce TNFa bránia letalite v tomto modeli. Na vyšetrenie schopnosti ľudských anti-hTNFa protilátok neutralizovať hTNFa in vivo v tomto modeli boli C57B1/6 myšiam injikované rôzne koncentrácie D2E7 IgGl alebo kontrolný proteín, v PBS intraperitoneálne (i. p). Myšiam bol o 30 hodín neskoršie podaný 1 pg rhTNFa a 20 mg D-galaktozamínu v PBS i. p. a pozorovanie myší bolo uskutočnené o 24 hodín neskoršie. Toto množstvo rhTNFa a D-galaktozamínu bolo vopred určené na dosiahnutie 80 - 90 % letality pri týchto myšiach.
Reprezentatívne výsledky, znázornené ako stĺpcový graf % prežívania verzus koncentrácia protilátky, sú ukázané na obrázku 6. Čierne stĺpce predstavujú D2E7, zatiaľ čo šrafované stĺpce predstavujú MAK 195. Injekcia 2,5-25 pg D2E7 protilátky na myš chráni zvieratá pred TNFa-indukovanou letalitou. Hodnota ED50 je približne 1 - 2,5 pg/myš. Pozitívna kontrolná protilátka, MAK 195, bola podobná vo svojej protektivnej schopnosti. Injekcia D2E7 za absencie rhTNFa nemala na myš žiadne škodlivé účinky. Injekcia nešpecifickej ľudskej IgG protilátky nespôsobovala žiadnu ochranu pred TNFa-indukovanou letalitou.
V druhom pokuse bolo 49 myší rozdelených do 7 rovnakých skupín. Každá skupina dostala rôzne dávky D2E7 tridsať minút pred podaním LDg0 dávky zmesi rhTNF/D-galaktozamínu (1 pg rhTNF a 20 mg D-galaktozamínu na myš). Kontrolná skupina č. 7 dostala normálnu ľudskú IgGl kappa protilátku v dávke 25 pg/myš. Myši boli vyšetrované o 24 hodín neskoršie. Prežívanie pre každú skupinu je zhrnuté v tabuľke 13.
Tabuľka 13: 24 hodinové prežívanie po podaní D2E7
Skupina Prežívanie (živé/celkom) Prežívanie (%)
1 (bez protilátky) 0/7 0
2 (1 Pg) 1/7 14
3 (2,6 pg) 5/7 71
4 (5,2 pg) 6/7 86
5 (26 pg) 6/7 86
6 (26 pg; bez rhTNF) 7/7 100
7(25 pgHu IgGl) 1/7 14
2. Inhibicia pyrexie pri králikoch indukovanej TNF
Bola vyšetrovaná účinnosť D2E7 v inhibícii rhTNF indukovanej pyretickej odpovede pri králikoch. Skupine troch samíc NZW králikov, každá samica s váhou približne 2,5 kg, bola podaná injekčné D2E7, rhTNF a imunitné komplexy D2E7 a rhTNF. Termistorovou sondou bola meraná rektálna teplota na Kayeovom snímači teplôt každú minútu počas približne 4 hodín. Rekombinantný ľudský TNF v salinickom roztoku, injikovaný v koncentrácii 5 pg/kg, zvyšoval teplotu o viac než 0,4 °C v asi 45 minúte po injekcii. Prípravok protilátky samotnej, v salinickom roztoku v dávke 138 pg/kg, nezvyšoval teplotu pri králikoch do 140 minúty po podaní. Vo všetkých ďalších pokusoch bola D2E7 alebo kontrolné činidlo (ľudský IgGl alebo salinické vehikulum) podané injekčné i. v. králikom a potom nasledovala po 15 minútach injekcia rhTNF v salinickom roztoku v dávke 5 pg/kg i. v. Reprezentatívne výsledky z niekoľkých pokusov sú zhrnuté v tabuľke 14.
Tabuľka 14: D2E7 sprostredkovaná inhibicia pyrexie indukovanej rhTNF pri králikoch
dávka D2E7 (úgdcg) Vzostup teploty °C Molámy pomer Vrcholná teplota
rhTNF rhTNF + D2E7 % inhibície** D2E7: rhTNF minúty po rhTNF
14 0,53 0,25 53 1 60
24 0,43 0,13 70 1,6 40
48 0,53 0,03 94 3,3 50
137 0,53 0,00 100 9,5 60
792 0,80 0,00 100 55 60
* = Vrcholná teplota ** = % inhibície = (1-(vzostup teploty s rhTNF a D2E7/vzostup teploty s rhTNF samotným)) x 100
Intravenózne predošetrenie D2E7 v dávke 14 pg/kg čiastočne inhibovalo pyrogénnu odpoveď v porovnaní s králikmi ošetrenými samotným salinickým roztokom. D2E7 podaná v dávke 137 pg/kg úplne potlačila pyrogénnu odpoveď na rhTNF v rovnakom pokuse. V druhom pokuse D2E7 podaná v dávke 24 pg/kg tiež čiastočne potlačovala pyrogénnu odpoveď, v porovnaní s králikmi ošetrenými iba salinickým roztokom. Molámy pomer D2E7 k rhTNF bol v tomto pokuse 1/6 : 1. V treťom pokuse úplne potlačovala D2E7 injikovaná i. v. v dávke 48 pg/kg (molámy pomer D2E7 : rhTNF = 3,3 : 1) pyrogénnu odpoveď, v porovnaní s králikmi ošetrenými kontrolným ľudským IgGl v salinickom roztoku v dávke 30 pg/kg. V poslednom pokuse, králiky ošetrené D2E7 (792 pg/kg) vo veľmi vysokom molárnom pomere k rhTNF (55 : 1) nemali akékoľvek zvýšenie teploty počas 4 hodín pozorovania. Ošetrenie králikov imunitnými komplexami generovanými zo zmesi D2E7 a rhTNF inkubovanej počas 1 hodiny pri 37 °C v molámom pomere 55 : 1, bez následného podania rhTNF, tiež nevyvolalo akýkoľvek vzostup teploty v rovnakom pokuse.
3. Prevencia polyartritídy pri Tgl97 transgénových myšiach
Účinok D2E7 na vývoj ochorení bol skúmaný v transgénovom myšom modeli artritídy. Boli vytvorené transgénové myši (Tgl97), ktoré exprivujú ľudský prirodzený TNF (modifikovaný v 3' regióne za kódujúcou sekvenciou) a pri týchto myšiach sa vyvíjala chronická polyartritída so 100 % incidenciou vo veku 4-7 týždňov (pre ďalší opis Tgl97 modelu polyartritídy pozri EMBO J. (1991) 10: 4025 až 4031).
Transgénové zvieratá boli identifikované PCR vo veku 3 dní. Vrhy transgénových myší boli rozdelené do šiestich skupín. Liečebné protokoly pre šesť skupín boli nasledujúce: Skupina 1 = bez liečby; Skupina 2 - salinický roztok (vehikulum); Skupina 3 - D2E7 v dávke 1,5 pg/g; Skupina 4 - D2E7 v dávke 15 pg/g: Skupina 5 - D2E7 v dávke 30 pg/g; a Skupina 6 - IgGl kontrola v dávke 30 pg/g. Do štúdie boli zahrnuté tiež vrhy netransgénových myší a slúžili ako kontroly (Skupina 7'- netransgénové; bez liečby). Každá skupina dostávala tri injekcie za týždeň i. p. ukázanej liečby. Injekcie pokračovali počas 10 týždňov. Každý týždeň boli pri každom zvierati zaznamenávané makroskopické zmeny v morfológii kĺbov. V 10 týždňoch boli myši usmrtené a tkanivo bolo uchovávané vo formalíne. Urobilo sa mikroskopické vyšetrenie tkaniva.
Pri každej myši bola na začiatku každého týždňa zaznamenaná hmotnosť v gramoch. V rovnakom čase bolo tiež urobené meranie veľkosti kĺbov (v mm), ako meranie závažnosti ochorenia. Veľkosť kĺbu bola určená ako priemer troch meraní na členku pravej labky s použitím mikrometra. Artritické skóre bolo zaznamenávané týždenne nasledujúcim spôsobom: 0 = žiadna artritída (normálny vzhľad a flexia); + = mierna artritída (deformácia kĺbu); ++ = stredná artritída (opuch, deformácia kĺbu) a +++ = ťažká artritída (detegovaná ankylóza pri flexii a závažná porucha hybnosti). Na základe farbenia rezov kĺbu hematoxylínom/eozínom bolo stanovené histopatologické skóre: 0 = = bez detegovateľného ochorenia; 1 = proliferácia synoviálnej membrány; 2 = ťažké zhrubnutie synoviálnej membrány; 3 = deštrukcia chrupavky a erózia kosti.
Účinok ošetrenia D2E7 na priemernú veľkosť kĺbu Tgl97 transgénových artritických myší je ukázaný graficky na obrázku 9. Histopatologické a artritické skóre Tgl97 transgénových myší, vo veku 11 týždňov, je uvedené v tabuľke 15, ďalej.
Tabuľka 15: Účinok D2E7 na histopatologické a artritické skóre pri Tgl97 myšiach
Skupina Liečba Histopatologické skóre Artritické skóre
1 žiadna 3 (7/7) +++ (7/7)
2 salin. roztok 3 (8/8) +++ (8/8)
6 IgGl kontrola 3 (9/9) +++ (7/9)
3 D2E7 1,5 pg/g 0 (6/8) 0 (8/8)
4 D2E7 15 pg/g 0 (7/8) 0 (8/8)
5 D2E7 30 pg/g 0 (8/8) 0 (8/8)
Tento pokus ukazuje, že D2E7 protilátka má výrazné pozitívne účinky na transgénové myši exprimujúce prirodzený ľudský TNF (Tgl97) bez prítomnosti artritídy na konci študovaného času.
E. D2E7 neutralizácia TNFa od iných druhov
Väzbová špecificita D2E7 bola vyšetrovaná meraním jej schopnosti neutralizovať faktor nekrózy nádorov od iných druhov primátov a od myší, s použitím testu L929 cytotoxicity (ako je opísaný v príklade 4, sekcia A). Výsledky sú zhrnuté v tabuľke 16.
Tabuľka 16: Schopnosť D2E7 neutralizovať TNF od iných druhov v L929 teste
TNFa* Zdroj IC5o pre D2E7 neutralizáciu (M)**
ľudská šimpanzia paviánia rekombinantný LPS-stimulované PBMC rekombinantný 7,8x10 5,5 x 10’ 6,0 x ΙΟ'11
kosmáčia LPS-stimulované PBMC 4,0x10’'°
makak (cynomolgus) LPS-stimulované PBMC 8,0x10
makak rhesus LPS-stimulované PBMC 3,0x 10’
psia LPS-stimulované |ft
PBMC 2,2 x 10
prasacia rekombinantný 1,0 x 10'7
myšia rekombinantný > 1,0x10'
Výsledky v tabuľke 16 ukazujú, že D2E7 môže neutralizovať aktivitu piatich primátích TNFa približne rovnako ako ľudského TNFa a, navyše, môže neutralizovať aktivitu psieho TNFa (približne desaťkrát menej než ľudského TNFa) a prasacieho a myšieho TNFa (približne 1000-krát menej než ľudského TNFa). Okrem toho, väzba D2E7 na rhTNFa vo fáze roztoku nebola inhibovaná ďalšími cytokínmi, ako je lymfotoxín (TNFP), IL-Ία, IL-1 β, IL-2, IL-4, IL-6, IL-8, IFNy a TGF3, čo ukazuje, že D2E7 je veľmi špecifická pre svoj ligand TNFa.
F. Chýbanie uvoľňovania cytokínov ľudskou plnou krvou inkubovanou s D2E7
V tomto príklade bola vyšetrovaná schopnosť D2E7 indukovať, samostatne, sekréciu cytokínov alebo expresiu povrchových molekúl na normálnych bunkách ľudskej krvi. D2E7 bola inkubovaná s riedenou plnou krvou od troch rôznych normálnych darcov v rôznych koncentráciách počas 24 hodín. LPS pozitívna kontrola bola uskutočnená v rovnakom čase, v koncentrácii vopred určenej pre stimuláciu sekrécie cytokínov imunokompetentnými bunkami. Boli získané supematanty a boli testované v paneli desiatich solubilných cytokínov, receptorov a adhéznych molekúl v ELISA kite: IL-Ία, IL-1 β, antagonista IL-1 receptora, IL-6,1L-8, TNFa, solubilný TNF receptor I, solubilný TNF receptor II, solubilný ICAM-1 a solubilný E-selektín. Žiadne signifikantne množstvo cytokínov alebo povrchových bunkových molekúl nebolo merané v dôsledku spoločnej inkubácie D2E7 protilátky, v koncentráciách do 343 pg/ml. Kontrolné kultúry bez pridania protilátky tiež nemali žiadne merateľné množstvo cytokínov, zatiaľ čo LPS-kontrola mala zvýšené hladiny v rozmedzí mnohých pikogramov až nanogramov. Tieto výsledky ukazujú, že D2E7 neindukuje sekréciu cytokínov alebo povrchových bunkových proteínov bunkami plnej krvi nad normálnu hladinu v kultúrach ex vivo.
Časťou predkladanej prihlášky je pripojený zoznam sekvencií, ktorého obsah je zhrnutý v nasledujúcej tabuľke:
SEQ ID NO: Reťazec protilátky Región Typ sekvencie
1 D2E7 VL aminokyselina
2 D2E7 VH aminokyselina
3 D2E7 VLCDR3 aminokyselina
4 D2E7 VH CDR3 aminokyselina
5 D2E7 VLCDR2 aminokyselina
6 D2E7 VHCDR2 aminokyselina
7 D2E7 VLCDR1 aminokyselina
8 D2E7 VH CDR1 aminokyselina
9 2SD4 VL aminokyselina
10 2SD4 VH aminokyselina
11 2SD4 VLCDR3 aminokyselina
12 EPB12 VLCDR3 aminokyselina
13 VL10E4 VLCDR3 aminokyselina
14 VL100A9 VL CDR3 aminokyselina
15 VLL100D2 VLCDR3 aminokyselina
16 VLL0F4 VLCDR3 aminokyselina
17 LOE5 VLCDR3 aminokyselina
18 VLLOG7 VLCDR3 aminokyselina
19 VLLOG9 VL CDR3 aminokyselina
20 VLLOH1 VLCDR3 aminokyselina
21 VLLOH10 VLCDR3 aminokyselina
22 VL1B7 VLCDR3 aminokyselina
23 VL1C1 VLCDR3 aminokyselina
24 VL0.1F4 VLCDR3 aminokyselina
25 VL0.1H8 VLCDR3 aminokyselina
26 LOE7.A VLCDR3 aminokyselina
27 2SD4 VHCDR3 aminokyselina
28 VH1B11 VH CDR3 aminokyselina
29 VH1D8 VH CDR3 aminokyselina
30 VH1A11 VH CDR3 aminokyselina
31 VH1B12 VH CDR3 aminokyselina
32 VH1E4 VH CDR3 aminokyselina
33 VH1F6 VHCDR3 aminokyselina
34 3C-H2 VH CDR3 aminokyselina
35 VH1-D2.N VH CDR3 aminokyselina
36 D2E7 VL nukleová kyselina
37 D2E7 VH nukleová kyselina
Odborníci v odbore poznajú alebo budú schopní zistiť bežným experimentovaním veľa ekvivalentov špecifických uskutočnení vynálezu, ktoré sú tu opísané. Také ekvivalenty sú zahrnuté nasledujúcimi patentovými nárokmi.
Zoznam sekvencií (1) Všeobecné informácie:
(i) Prihlasovateľ:
(A) Meno: BASF Akticngesellschaft (B) Ulica: Carl-Bosch Str. 38 (C) Mesto: 67056 Ludwigshafen (D) Krajina: Rheinland-Pfalz (E) Štát: Nemecká Spolková Republika (ii) Názov vynálezu: Ľudské protilátky k ľudskému TNFa (iii) Počet sekvencií: 37 (iv) Adresa pre korešpondenciu (A) Adresa: Lahive & Cocfield (B) Ulica: 60 State Street, suite 510 (C) Mesto: Boston (D) Štát: Massachusetts (E) Krajina: USA (F) ZIP: 02109-1875 (v) Počítačová čítacia forma:
(A) Typ média: Floppy disk (B) Počítač: IBM PC kompatibilný (C) Operačný systém: PC-DOS/MS-DOS (D) Softvér: Patentln Release #1.0, verzia #1.25 (vi) Údaje o súčasnej prihláške:
(A) Číslo prihlášky:
(B) Dátum podania:
(C) Klasifikácia:
(vii) Predchádzajúce dáta prihlášky:
(A) Číslo prihlášky: US 08/599226 (B) Dátum podania: 9. 2. 1996 (C) Klasifikácia:
(vii) Predchádzajúce dáta prihlášky:
(A) Číslo prihlášky: US 60/031476 (B) Dátum podania: 25. 11. 1996 (C) Klasifikácia:
(viii) Zástupca/agent - informácie (A) Meno: DeConti, Giulio A., Jr.
(B) Registračné číslo: 31503 (C) Referencie/číslo registra: BBI-043CPPC (ix) Telekomunikačné informácie:
(A) Telefón: (617)227-7400 (B) Telefax: (617)227-5941 (2) Informácie o SEQ ID NO: 1:
(1) Charakteristiky sekvencie:
(A) Dĺžka: 107 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (D) Topológia: lineárna (ii) Typ molekuly: peptid (v) Typ fragmentu: vnútorný (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 1:
Asp íle Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 1015
Asp Arg Val Thr íle Thr Cys Arg Ala Ser Gin Gly íle Arg Asn Tyr 20 2530
Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu íle 35 4045
Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 5560
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr íle Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 7580
Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Arg Tyr Asn Arg Ala Pro Tyr 85 9095
Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu íle Lys
100 '105 (2) Informácie o SEQ ID NO: 2:
(1) Charakteristiky sekvencie:
(A) Dĺžka: 121 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (D) Topológia: lineárna (ii) Typ molekuly: peptid (v) Typ fragmentu: vnútorný (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 2:
Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Arg 1 5 1015
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr 20 2530
Ala Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 4045
Ser Ala íle Thr Trp Asn Ser Gly His íle Asp Tyr Ala Asp Ser Val 50 5560
Glu Gly Arg Phe Thr íle Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 7580
Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 9095
Ala Lys Val Ser Tyr Leu Ser Thr Ala Ser Ser Leu Asp Tyr Trp Gly 100 105110
Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115120 (2) Informácie o SEQ ID NO: 3:
(i) Charakteristiky sekvencie:
(A) Dĺžka: 9 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (D) Topológia: lineárna (ii) Typ molekuly: peptid (v) Typ fragmentu: vnútorný (ix) Vlastnosti:
(A) Meno/kľúč: modifikované miesto (B) Umiestnenie: 9 (C) Iné informácie: /„Xaa je Thr alebo Ala“ (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 3:
Gin Arg Tyr Asn Arg Ala Pro Tyr Xaa
5 (2) Informácie o SEQ ID NO: 4:
(1) Charakteristiky sekvencie:
(A) Dĺžka: 12 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (D) Topológia: lineárna (ii) Typ molekuly: peptid (v) Typ fragmentu: vnútorný (ix) Vlastnosti:
(A) Meno/kľúč: modifikované miesto (B) Umiestnenie: 12 (C) Iné informácie: /„Xaa je Thr alebo Ala“ (xi)Opis sekvencie: SEQ K) NO: 4:
Val Ser Tyr Leu Ser Thr Ala Ser Ser Leu Asp Xaa
5 10 (2) Informácie o SEQ ID NO: 5:
(1) Charakteristiky sekvencie:
(A) Dĺžka: 7 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (D) Topológia: lineárna (ii) Typ molekuly: peptid (v) (v) Typ fragmentu: vnútorný (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 5:
Ala Ala Ser Thr Leu Gin Ser
5 (2) Informácie o SEQ ID NO: 6:
(1) Charakteristiky sekvencie:
(A) Dĺžka: 17 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (D) Topológia: lineárna (ii) Typ molekuly: peptid (v) Typ fragmentu: vnútorný (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 6:
Ala íle Thr Trp Asn Ser Gly His íle Asp Tyr Ala Asp Ser Val Glu 1 5 10 15
Gly (2) Informácie o SEQ ID NO: 7:
(1) Charakteristiky sekvencie:
(A) Dĺžka: 11 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (D) Topológia: lineárna (ii) Typ molekuly: peptid (v) Typ fragmentu: vnútorný (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 7:
Arg Ala Ser Gin Gly íle Arg Asn Tyr Leu Ala
5 10 (2) Informácie o SEQ ED NO: 8:
(i) Charakteristiky sekvencie:
(A) Dĺžka: 5 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (D) Topológia: lineárna
SK 284040 Β6 (ii) Typ molekuly: peptid (v) Typ fragmentu: vnútorný (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 8:
Asp Tyr Ala Met His
5 (2) Informácie o SEQ ID NO: 9:
(1) Charakteristiky sekvencie:
(A) Dĺžka: 107 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (D) Topológia: lineárna (ii) Typ molekuly: peptid (v) Typ fragmentu: vnútorný (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 9:
Asp íle Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser íle Gly 15 1015
Asp Arg Val Thr Íle Thr Cys Arg Ala Ser Gin Gly íle Arg Asn Tyr 20 2530
Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu íle
4045
Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 5560
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr íle Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 7580
Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Lys Tyr Asn Ser Ala Pro Tyr 85 9095
Ala Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu íle Lys
100105 (2) Informácie o SEQ ID NO: 10:
(1) Charakteristiky sekvencie:
(A) Dĺžka: 121 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (D) Topológia: lineárna (ii) Typ molekuly: peptid (v) Typ fragmentu: vnútorný (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 10:
Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Arg 1 5 1015
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr 20 2530
Ala Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Asp Trp Val 35 4045
Ser Ala íle Thr Trp Asn Ser Gly His íle Asp Tyr Ala Asp Ser Val 50 5560
Glu Gly Arg Phe Ala Val Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ala Leu Tyr 65 70 7580
Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 9095
Thr Lys Ala Ser Tyr Leu Ser Thr Ser Ser Ser Leu Asp Asn Trp Gly 100 105110
Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115120 (2) Informácie o SEQ ID NO: 11:
(1) Charakteristiky sekvencie:
(A) Dĺžka: 9 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (D) Topológia: lineárna (ii) Typ molekuly: peptid (v) Typ fragmentu: vnútorný (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 11:
Gin Lys Tyr Asn Ser Ala Pro Tyr Ala
5 (2) Informácie o SEQ ID NO: 12:
(1) Charakteristiky sekvencie:
(A) Dĺžka: 9 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (D) Topológia: lineárna (ii) Typ molekuly: peptid (v) Typ fragmentu: vnútorný (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 12:
Gin Lys Tyr Asn Arg Ala Pro Tyr Ala
5 (2) Informácie o SEQ LD NO: 13:
(1) Charakteristiky sekvencie:
(A) DÍžka: 9 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (D) Topológia: lineárna (ii) Typ molekuly: peptid (v) Typ fragmentu: vnútorný (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 13:
Gin Lys Tyr Gin Arg Ala Pro Tyr Thr
5 (2) Informácie o SEQ ID NO: 14:
(1) Charakteristiky sekvencie:
(A) DÍžka: 9 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (D) Topológia: lineárna (ii) Typ molekuly: peptid (v) Typ fragmentu: vnútorný (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 14:
Gin Lys Tyr Ser Ser Ala Pro Tyr Thr
5 (2) Informácie o SEQ ID NO: 15:
(1) Charakteristiky sekvencie:
(A) Dĺžka: 9 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (D) Topológia: lineárna (ii) Typ molekuly: peptid (v) Typ fragmentu: vnútorný (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 15:
Gin Lys Tyr Asn Ser Ala Pro Tyr Thr
5 (2) Informácie o SEQ ID NO: 16:
(1) Charakteristiky sekvencie:
(A) DÍžka: 9 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (D) Topológia: lineárna (ii) Typ molekuly: peptid (v) Typ fragmentu: vnútorný (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 16:
Gin Lys Tyr Asn Arg Ala Pro Tyr Thr 1 5 (2) Informácie o SEQ ID NO: 17:
(i) Charakteristiky sekvencie:
(A) DÍžka: 9 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (D) Topológia: lineárna (ii) Typ molekuly: peptid (v) Typ fragmentu: vnútorný (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 17:
Gin Lys Tyr Asn Ser Ala Pro Tyr Tyr
5 (2) Informácie o SEQ ID NO: 18:
(1) Charakteristiky sekvencie:
(A) Dĺžka: 9 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (D) Topológia: lineárna (ii) Typ molekuly: peptid (v) Typ fragmentu: vnútorný (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 18: Gin Lys Tyx Asn Ser Ala Pro Tyr Asn 1 5 (2) Informácie o SEQ ID NO: 19:
(1) Charakteristiky sekvencie:
(A) Dĺžka: 9 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (D) Topológia: lineárna (ii) Typ molekuly: peptid (v) Typ fragmentu: vnútorný (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 19:
Gin Lys Tyr Thr Ser Ala Pro Tyx Thr
5 (2) Informácie o SEQ ID NO: 20:
(1) Charakteristiky sekvencie:
(A) Dĺžka: 9 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (D) Topológia: lineárna (ii) Typ molekuly: peptid (v) Typ fragmentu: vnútorný (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 20: Gin Lys Tyr Asn Arg Ala Pro Tyr Asn 1 5 (2) Informácie o SEQ ID NO: 21:
(1) Charakteristiky sekvencie:
(A) Dĺžka: 9 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (D) Topológia: lineárna (ii) Typ molekuly: peptid (v) Typ fragmentu: vnútorný (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 21 : Gin Lys Tyr Asn Ser Ala Ala Tyr Ser 1 5 (2) Informácie o SEQ ID NO: 22:
(i) Charakteristiky sekvencie:
(A) Dĺžka: 9 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (D) Topológia: lineárna (ii) Typ molekuly: peptid (v) Typ fragmentu: vnútorný (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 22:
Gin Gin Tyr Asn Ser Ala Pro Asp Thr
5 (2) Informácie o SEQ ID NO: 23:
(1) Charakteristiky sekvencie:
(A) Dĺžka: 9 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (D) Topológia: lineárna (ii) Typ molekuly: peptid (v) Typ fragmentu: vnútorný (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 23:
Gin Lys Tyr Asn Ser Asp Pro Tyr Thr
5 (2) Informácie o SEQ ID NO: 24:
(1) Charakteristiky sekvencie:
(A) Dĺžka: 9 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (D) Topológia: lineárna (ii) Typ molekuly: peptid (v) Typ fragmentu: vnútorný (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 24:
Gin Lys Tyr íle Ser Ala Pro Tyr Thr
5 (2) Informácie o SEQ ID NO: 25:
(1) Charakteristiky sekvencie:
(A) Dĺžka: 9 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (D) Topológia: lineárna (ii) Typ molekuly: peptid (v) Typ fragmentu: vnútorný (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 25:
Gin Lys Tyr Asn Arg Pro Pro Tyr Thr
5 (2) Informácie o SEQ ID NO: 26:
(1) Charakteristiky sekvencie:
(A) Dĺžka: 9 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (D) Topológia: lineárna (ii) Typ molekuly: peptid (v) Typ fragmentu: vnútorný (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 26:
Gin Arg Tyr Asn Arg Ala Pro Tyr Ala
5 (2) Informácie o SEQ ID NO: 27:
(i) Charakteristiky sekvencie:
(A) Dĺžka: 12 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (D) Topológia: lineárna (ii) Typ molekuly: peptid (v) Typ fragmentu: vnútorný (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 27:
Ala Ser Tyr Leu Ser Thr Ser Ser Ser Leu Asp Asn
5 10
SK 284040 Β6 (2) Informácie o SEQ ID NO: 28:
(1) Charakteristiky sekvencie:
(A) Dĺžka: 12 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (D) Topológia: lineárna (ii) Typ molekuly: peptid (v) Typ fragmentu: vnútorný (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 28:
Ala Ser Tyr Leu Ser Thr Ser Ser Ser Leu Asp Lys
5 10 (2) Informácie o SEQ ID NO: 29:
(1) Charakteristiky sekvencie:
(A) Dĺžka: 12 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (D) Topológia: lineárna (ii) Typ molekuly: peptid (v) Typ fragmentu: vnútorný (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 29:
Ala Ser Tyr Leu Ser Thr Ser Ser Ser Leu Asp Tyr
5 10 (2) Informácie o SEQ ED NO: 30:
(1) Charakteristiky sekvencie:
(A) Dĺžka: 12 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (D) Topológia: lineárna (ii) Typ molekuly: peptid (v) Typ fragmentu: vnútorný (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 30:
Ala Ser Tyr Leu Ser Thr Ser Ser Ser Leu Asp Asp
5 10 (2) Informácie o SEQ ID NO: 31:
(1) Charakteristiky sekvencie:
(A) Dĺžka: 12 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (D) Topológia: lineárna (ii) Typ molekuly: peptid (v) Typ fragmentu: vnútorný (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 31:
Ala Ser Tyr Leu Ser Thr Ser Phe Ser Leu Asp Tyr
5 10 (2) Informácie o SEQ ID NO: 32:
(i) Charakteristiky sekvencie:
(A) Dĺžka: 12 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (D) Topológia: lineárna (ii) Typ molekuly: peptid (v) Typ fragmentu: vnútorný (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 32:
Ala Ser Tyr Leu Ser Thr Ser Ser Ser Leu His Tyr
5 10 (2) Informácie o SEQ ID NO: 33:
(1) Charakteristiky sekvencie:
(A) Dĺžka: 12 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (D) Topológia: lineárna (ii) Typ molekuly: peptid (v) Typ fragmentu: vnútorný (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 33:
Ala Ser Phe Leu Ser Thr Ser Ser Ser Leu Glu Tyr
5 10 (2) Informácie o SEQ ID NO: 34:
(1) Charakteristiky sekvencie:
(A) Dĺžka: 12 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (D) Topológia: lineárna (ii) Typ molekuly: peptid (v) Typ fragmentu: vnútorný (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 34:
Ala Ser Tyr Leu Ser Thr Ala Ser Ser Leu Glu Tyr
5 10 (2) Informácie o SEQ ID NO: 35:
(1) Charakteristiky sekvencie:
(A) Dĺžka: 12 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (D) Topológia: lineárna (ii) Typ molekuly: peptid (v) Typ fragmentu: vnútorný (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 35:
Val Ser Tyr Leu Ser Thr Ala Ser Ser Leu Asp Asn 1 5 10 (2) Informácie o SEQ ID NO: 36:
(1) Charakteristiky sekvencie:
(A) Dĺžka: 321 párov báz (B) Typ: nukleová kyselina (C) Reťazec: dvojitý (D) Topológia: lineárna (ii) Typ molekuly: cDNA (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 36:
GACATCCAGA ATCACTTGTC GGGAAAGCCC CGGTTCAGTG GAAGATGTTG GGGACCAAGG
TGACCCAGTC GGGCAAGTCA CTAAGCTCCT GCAGTGGATC CAACTTATTA TGGAAATCAA
TCCATCCTCC GGGCATCAGA GATCTATGCT TGGGACAGAT CTGTCAAAGG A
CTGTCTGCAT AATTACTTAG GCATCCACTT TTCACTCTCA TATAACCGTG
CTGTAGGGGA CCTGGTATCA TGCAATCAGG CCATCAGCAG CACCGTATAC
CAGAGTCACC GCAAAAACCA GGTCCCATCT CCTACAGCCT TTTTGGCCAG
120
180
240
300
321 (2) Informácie o SEQ ID NO: 37:
(i) Charakteristiky sekvencie:
(A) Dĺžka: 363 párov báz (B) Typ: nukleová kyselina (C) Reťazec: dvojitý (D) Topológia: lineárna (ii) Typ molekuly: cDNA (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 37:
GAGGTGCAGC TGGTGGAGTC TGGGGGAGGC TTGGTACAGC CCGGCAGGTC CCTGAGACTC 60 TCCTGTGCGG CCTCTGGATT CACCTTTGAT GATTATGCCA TGCACTGGGT CCGGCAAGCT 120 CCAGGGAAGG GCCTGGAATG GGTCTCAGCT ATCACTTGGA ATAGTGGTCA CATAGACTAT 180 GCGGACTCTG TGGAGGGCCG ATTCACCATC TCCAGAGACA ACGCCAAGAA CTCCCTGTAT 240 CTGCAAATGA ACAGTCTGAG AGCTGAGGAT ACGGCCGTAT ATTACTGTGC GAAAGTCTCG 300 TACCTTAGCA CCGCGTCCTC CCTTGACTAT TGGGGCCAAG GTACCCTGGT CACCGTCTCG 360 AGT 363

Claims (75)

  1. PATENTOVÉ NÁROKY
    1. Izolovaná ľudská protilátka alebo jej antigén-väzbová časť, s týmito charakteristikami:
    a) disociuje z ľudského TNFa s rýchlostnou konštantou Koff 1 x 10'3s’1 alebo menšou, stanovené povrchovou plazmónovou rezonanciou;
    b) má CDR3 doménu ľahkého reťazca obsahujúcu aminokyselinovú sekvenciu SEQ ID NO: 3 alebo sekvenciu modifikovanú zo SEQ ID NO: 3 jednou substitúciou alanínu v pozícii 1,4, 5, 7 alebo 8, alebo jednou až piatimi konzervatívnymi aminokyselinovými substitúciami v pozíciách 1, 3,4, 6, 7, 8 a/alebo 9,
    c) má CDR3 doménu ťažkého reťazca obsahujúcu aminokyselinovú sekvenciu SEQ ID NO: 4 alebo sekvenciu modifikovanú zo SEQ ID NO: 4 jednou substitúciou alanínu v pozícii 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10 alebo 11, alebo jednou až piatimi konzervatívnymi aminokyselinovými substitúciami v pozíciách 2,3,4,5, 6, 8,9,10,11 a/alebo 12.
  2. 2. Izolovaná ľudská protilátka alebo jej antigén-väzbová časť, podľa nároku 1, ktorá disociuje z ľudského TNFa s Kd 1 x 10'8 M alebo nižšou a rýchlostnou konštantou IQff 1 x 10'3 s1 alebo menšou, oboje stanovené povrchovou plazmónovou rezonanciou, a neutralizuje cytotoxicitu ľudského TNFa v štandardnom in vitro L929 teste s IC50 1 x 10 7 M alebo menšou.
  3. 3. Izolovaná ľudská protilátka alebo jej antigén-väzbová časť, podľa nároku 1, ktorá neutralizuje cytotoxicitu ľudského TNFa v štandardnom in vitro L929 teste s IC5o 1 x 10_8M alebo menšou.
  4. 4. Izolovaná ľudská protilátka alebo jej antigén- väzbová časť, podľa nároku 1, ktorá neutralizuje cytotoxicitu ľudského TNFa v štandardnom in vitro L929 teste s IC50 1 x 10 ’M alebo menšou.
  5. 5. Izolovaná ľudská protilátka alebo jej antigén-väzbová časť, podľa nároku 1, ktorá neutralizuje cytotoxicitu ľudského TNFa v štandardnom in vitro L929 teste s IC501 x 1010M alebo menšou.
  6. 6. Izolovaná ľudská protilátka alebo jej antigén-väzbová časť, podľa nároku 1, ktorou je rekombinantná protilátka alebo jej antigén- väzbová časť.
  7. 7. Izolovaná ľudská protilátka alebo jej antigén-väzbová časť, podľa nároku 1, ktorá inhibuje ľudským TNFa indukovanú expresiu ELAM-1 na endotelových bunkách ľudskej pupočníkovej žily.
  8. 8. Izolovaná ľudská protilátka podľa nároku 1 alebo 2, alebo jej antigén-väzbová časť, ktorá disociuje z ľudského TNFa s Koff rýchlostnou konštantou 5 x 10 4 s’1 alebo menšou.
  9. 9. Izolovaná ľudská protilátka podľa nároku 1 alebo 2, alebo jej antigén-väzbová časť, ktorá disociuje z ľudského TNFa s KOff rýchlostnou konštantou 1 x 10“4 s'1 alebo menšou.
  10. 10. Izolovaná ľudská protilátka alebo jej antigén-väzbová časť, podľa nároku 1, s variabilným regiónom ľahkého reťazca (LCVR) majúcim CDR3 doménu obsahujúcu aminokyselinovú sekvenciu SEQ ID NO: 3, alebo modifikovanú zo SEQ ID NO: 3 jednou alanínovou substitúciou v pozícii 1, 4, 5, 7 alebo 8 a s variabilným regiónom ťažkého reťazca (HCVR) majúcim CDR3 doménu obsahujúcu aminokyselinovú sekvenciu SEQ ID NO: 4, alebo modifikovanú zo SEQ ID NO: 4 jednou alanínovou substitúciou v pozícii 2, 3,4, 5, 6, 8, 9, 10 alebo 11.
  11. 11. Izolovaná ľudská protilátka alebo jej antigén-väzbová časť, podľa nároku 10, kde LCVR má ďalej CDR2 doménu obsahujúcu aminokyselinovú sekvenciu SEQ ID NO: 5 a HCVR má ďalej CDR2 doménu obsahujúcu aminokyselinovú sekvenciu SEQ ID NO: 6.
  12. 12. Izolovaná ľudská protilátka alebo jej antigén-väzbová časť, podľa nároku 11, kde LCVR má ďalej CDR1 doménu obsahujúcu aminokyselinovú sekvenciu SEQ ID NO: 7 a HCVR má ďalej CDR1 doménu obsahujúcu aminokyselinovú sekvenciu SEQ ID NO: 8.
  13. 13. Izolovaná ľudská protilátka alebo jej antigén-väzbová časť, s variabilným regiónom ľahkého reťazca (LCVR), obsahujúcim aminokyselinovú sekvenciu SEQ ID NO: 1 a s variabilným regiónom ťažkého reťazca (HCVR) obsahujúcim aminokyselinovú sekvenciu SEQ ID NO: 2.
  14. 14. Izolovaná ľudská protilátka podľa nároku 13, ktorá má konštantný región ťažkého reťazca IgG L
  15. 15. Izolovaná ľudská protilátka podľa nároku 13, ktorá má konštantný región ťažkého reťazca IgG4.
  16. 16. Izolovaná ľudská protilátka podľa nároku 13, ktorou je Fab fragment.
  17. 17. Izolovaná ľudská protilátka podľa nároku 13, ktorou je jednoreťazcový Fv fragment.
  18. 18. Izolovaná ľudská protilátka alebo jej antigén-väzbová časť, podľa nároku 1, s variabilným regiónom ľahkého reťazca (LCVR) majúcim CDR3 doménu obsahujúcu aminokyselinovú sekvenciu vybranú zo skupiny skladajúcej sa zo SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 26 alebo s variabilným regiónom ťažkého reťazca (HCVR) majúcim CDR3 doménu obsahujúcu aminokyselinovú sekvenciu vybranú zo skupiny skladajúcej sa zo SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 29, SEQ
    ID NO: 30, SEQ ID NO: 31, SEQ IDNO: 32, SEQ ID NO: 33 a SEQ ID NO: 34.
  19. 19. Rekombinantná ľudská protilátka alebo jej antigén-väzbová časť, ktorá neutralizuje aktivitu ľudského TNFa, ale nie aktivitu ľudského TNF[5, a má identifikačné charakteristiky protilátky podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 18.
  20. 20. Rekombinantná ľudská protilátka alebo jej antigén-väzbová časť, podľa nároku 19, ktorá tiež neutralizuje aktivitu šimpanzieho TNFa a aspoň jedného ďalšieho TNFa primátov, vybraného zo skupiny skladajúcej sa z paviánieho TNFa, kosmáčieho TNFa, TNFa makaka (cynomolgus) a TNFa makaka rhesus.
  21. 21. Rekombinantná ľudská protilátka alebo jej antigén-väzbová časť, podľa nároku 20, ktorá tiež neutralizuje aktivitu psieho TNFa.
  22. 22. Rekombinantná ľudská protilátka alebo jej antigén-väzbová časť, podľa nároku 20, ktorá tiež neutralizuje aktivitu prasacieho TNFa.
  23. 23. Izolovaná nukleová kyselina kódujúca ľahký reťazec protilátky, podľa nároku 1, kde CDR3 doména obsahuje aminokyselinovú sekvenciu SEQ ID NO: 3, alebo modifikovanú zo SEQ ID NO: 3 jednou alanínovú substitúciou v pozícii 1, 4, 5, 7 alebo 8, alebo jednou až piatimi konzervatívnymi aminokyselinovými substitúciami v pozíciách 1, 3, 4, 6, 7, 8 a/alebo 9.
  24. 24. Izolovaná nukleová kyselina podľa nároku 23, ktorá kóduje variabilný región ľahkého reťazca (LCVR) protilátky.
  25. 25. Izolovaná nukleová kyselina podľa nároku 24, kde CDR2 doména LCVR protilátky obsahuje aminokyselinovú sekvenciu SEQ ID NO: 5.
  26. 26. Izolovaná nukleová kyselina podľa nároku 25, kde CDR1 doména LCVR protilátky obsahuje aminokyselinovú sekvenciu SEQ ID NO: 7.
  27. 27. Izolovaná nukleová kyselina kódujúca ťažký reťazec protilátky podľa nároku 1, kde CDR3 doména obsahuje aminokyselinovú sekvenciu SEQ ID NO: 4 alebo modifikovanú zo SEQ ID NO: 4 jednou alanínovú substitúciou v pozícii 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10 alebo 11, alebo jednou až piatimi konzervatívnymi aminokyselinovými substitúciami v pozíciách 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10, 11 a/alebo 12.
  28. 28. Izolovaná nukleová kyselina podľa nároku 27, ktorá kóduje variabilný región ťažkého reťazca (HCVR) protilátky.
  29. 29. Izolovaná nukleová kyselina podľa nároku 28, kde CDR2 doména HCVR protilátky obsahuje aminokyselinovú sekvenciu SEQ ID NO: 6.
  30. 30. Izolovaná nukleová kyselina podľa nároku 29, kde CDR1 doména HCVR protilátky obsahuje aminokyselinovú sekvenciu SEQ ID NO: 8.
  31. 31. Izolovaná nukleová kyselina kódujúca ľahký alebo ťažký reťazec protilátky podľa nároku 1, kde CDR3 doména obsahuje aminokyselinovú sekvenciu vybranú zo skupiny skladajúcej sa zo: SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 31, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 33 a SEQ ID NO: 34.
  32. 32. Izolovaná nukleová kyselina kódujúca variabilný región ľahkého reťazca protilátky obsahujúci aminokyselinovú sekvenciu SEQ ID NO: 1.
  33. 33. Izolovaná nukleová kyselina podľa nároku 32, ktorá kóduje variabilný región ľahkého reťazca protilátky a konštantný región ľahkého reťazca protilátky.
  34. 34. Izolovaná nukleová kyselina podľa nároku 33, ktorá je v rekombinantnom expresnom vektore.
  35. 35. Izolovaná nukleová kyselina kódujúca variabilný región ťažkého reťazca protilátky obsahujúci aminokyselinovú sekvenciu SEQ ID NO: 2.
  36. 36. Izolovaná nukleová kyselina podľa nároku 35, ktorá kóduje variabilný región ťažkého reťazca protilátky a konštantný región ťažkého reťazca protilátky.
  37. 37. Izolovaná nukleová kyselina podľa nároku 36, kde konštantným regiónom ťažkého reťazca protilátky je konštantný región IgGl.
  38. 38. Izolovaná nukleová kyselina podľa nároku 36, kde konštantným regiónom ťažkého reťazca protilátky je konštantný región IgG4.
  39. 39. Izolovaná nukleová kyselina podľa nároku 36, ktorá je v rekombinantnom expresnom vektore.
  40. 40. Rekombinantný expresný vektor kódujúci:
    a) ľahký reťazec protilátky majúci variabilný región obsahujúci aminokyselinovú sekvenciu SEQ IDN O: 1 a
    b) ťažký reťazec protilátky majúci variabilný región obsahujúci aminokyselinovú sekvenciu SEQ ID NO: 2.
  41. 41. Hostiteľská bunka, do ktorej bol vložený rekombinantný expresný vektor podľa nároku 40.
  42. 42. Spôsob syntézy ľudskej protilátky, ktorá sa viaže na ľudský TNFa, vyznačujúci sa tým, že zahrnuje kultiváciu hostiteľskej bunky podľa nároku 41 v kultivačnom médiu, dokiaľ nie je ľudská protilátka, ktorá sa viaže na ľudský TNFa, syntetizovaná bunkou.
  43. 43. Farmaceutický prípravok, vyznačujúci sa tým, že zahrnuje protilátku alebo jej antigén väzbovú časť, podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 22 a farmaceutický prijateľný nosič.
  44. 44. Farmaceutický prípravok podľa nároku 43, vyznačujúci sa tým, že ďalej zahrnuje aspoň jedno ďalšie terapeutické činidlo na liečbu ochorenia, pri ktorom je aktivita TNFa škodlivá.
  45. 45. Spôsob inhibície aktivity ľudského TNFa, vyznačujúci sa tým, že sa ľudský TNFa kontaktuje in vitro s protilátkou alebo jej antigén-väzbovou časťou, podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 2, takže je aktivita ľudského TNFa inhibovaná.
  46. 46. Protilátka alebo jej antigén-väzbová časť, podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 22 na použitie pri inhibícii aktivity ľudského TNFa u ľudského subjektu trpiaceho ochorením, pri ktorom je aktivita TNFa škodlivá.
  47. 47. Protilátka podľa nároku 46 na použitie pri liečbe sepsy.
  48. 48. Protilátka podľa nároku 46 na podávanie spoločne s cytokínom interleukínom-6 (IL-6) alebo podávanie ľudskému subjektu so sérovou alebo plazmovou koncentráciou IL-6 nad 500 pg/ml.
  49. 49. Protilátka podľa nároku 46 na použitie pri liečbe autoimunitného ochorenia.
  50. 50. Protilátka podľa nároku 49, kde autoimunitné ochorenie je vybrané zo skupiny skladajúcej sa z reumatoidnej artritídy, reumatoidnej spondylitídy, osteoartritídy a dnavej artritídy.
  51. 51. Protilátka podľa nároku 49, kde autoimunitné ochorenie je vybrané zo skupiny skladajúcej sa z alergie, roztrúsenej sklerózy, autoimunitného diabetu, autoimunitnej uveitídy a nefrotického syndrómu.
  52. 52. Protilátka podľa nároku 46 na použitie pri liečbe infekčného ochorenia.
  53. 53. Protilátka podľa nároku 46 na použitie pri liečbe rejekcie transplantátu alebo reakcie štepu proti hostiteľovi.
  54. 54. Protilátka podľa nároku 46 na použitie pri liečbe malignity.
  55. 55. Protilátka podľa nároku 46 na použitie pri liečbe pľúcneho ochorenia.
  56. 56. Protilátka podľa nároku 46 na použitie pri liečbe črevného ochorenia.
  57. 57. Protilátka podľa nároku 46 na použitie pri liečbe srdcového ochorenia.
  58. 58. Protilátka podľa nároku 46 na použitie pri liečbe ochorenia, ktoré je vybrané zo skupiny skladajúcej sa zo zápalových ochorení kostí, resorpčných ochorení kostí, alkoholickej hepatitídy, vírusovej hepatitídy, fulminantnej hepatitídy, porúch koagulácie, popálenín, reperfúzneho poškodenia, tvorby keloidov, tvorby jazvovitého tkaniva, pyrexie, ochorenia periodontu, obezity a radiačnej toxicity.
  59. 59. Použitie protilátky alebo jej antigén väzbovej časti, podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 22 na výrobu liečiva na liečenie ochorenia, pri ktorom je aktivita TNFa škodlivá.
  60. 60. Použitie podľa nároku 59, kde ochorením je sepsa.
  61. 61. Použitie podľa nároku 60, kde protilátka sa podáva ľudskému subjektu spoločne s cytokínom interleukínom-6 (IL-6) alebo sa podáva ľudskému subjektu so sérovou alebo plazmovou koncentráciou IL-6 nad 500 pg/ml.
  62. 62. Použitie podľa nároku 59, kde ochorením je autoimunitné ochorenie.
  63. 63. Použitie podľa nároku 62, kde auto imunitné ochorenie je vybrané zo skupiny skladajúcej sa z reumatoidnej artritídy, reumatoidnej spondylitídy, osteoartritídy a dnavej artritídy.
  64. 64. Použitie podľa nároku 62, kde autoimunitné ochorenie je vybrané zo skupiny skladajúcej sa z alergie, roztrúsenej sklerózy, autoimunitného diabetu, autoimunitnej uveitídy a nefrotického syndrómu.
  65. 65. Použitie podľa nároku 59, kde ochorením je infekčné ochorenie.
  66. 66. Použitie podľa nároku 59, kde ochorením je rejekcia transplantátu alebo reakcia štepu proti hostiteľovi.
  67. 67. Použitie podľa nároku 59, kde ochorením je maligníta.
  68. 68. Použitie podľa nároku 59, kde ochorením je pľúcne ochorenie.
  69. 69. Použitie podľa nároku 59, kde ochorením je črevné ochorenie.
  70. 70. Použitie podľa nároku 59, kde ochorením je srdcové ochorenie.
  71. 71. Použitie podľa nároku 59, kde ochorenie je vybrané zo skupiny skladajúcej sa zo zápalových ochorení kostí, resorpčných ochorení kostí, alkoholickej hepatitídy, vírusovej hepatitídy, fulminantnej hepatitídy, porúch koagulácie, popálenín, reperfúzneho poškodenia, tvorby keloidov, tvorby jazvovitého tkaniva, pyrexie, ochorenia periodontu, obezity a radiačnej toxicity.
  72. 72. Farmaceutický prípravok podľa nároku 44, vyznačujúci sa tým, že ďalšie terapeutické činidlo je vybrané zo skupiny zahrnujúcej nesteroidné protizápalové liečivá, cytokíny potlačujúce protizápalové liečivá, CDP-571/BAY-10-3356, cA2, 75 kd TNFR-IgG, 55 kd TNFR-IgG, IDEC-CE9.1/SB 210396, DAB 486-IL-2, DAB 389-IL-2, Anti-Tac, IL-4, IL-10, agonisty IL-4, agonisty IL-10, IL-1RA, TNF-bp/s-TNFR, S284, R973401, MK-966, Iloprost, metotrexát, thalidomid, lieky príbuzné thalidomidu, leflunomid, kyselinu tranexamovú, T-614, prostaglandín El, Tenidap, Naproxen, Meloxicam, Piroxicam, Diclofenac, Indomethacin, Sulfasalazin, Azathioprín, ICE inhibítory, zap-70 inhibítory, lck inhibítory, VEGF inhibítory , VEGF-R inhibítory, kortikosteroidy, inhibítory TNF-konvertázy, anti-IL-12 protilátky, interleukín-11, interleukín-13, inhibítory interleukínu-17, zlato, penicilamin, chlorochin, hydroxychlorochin, chlorambucil, cyklofosfamid, cyklosporín, anti-tymocytámy globulín, anti-CD-4 protilátky, CD5-toxíny, orálne podávané peptidy, kolagén, lobenzarit dvojsodný, cytokíny regulujúce činidlá HP228 a HP466, ICAM-1 antisense fosforotioátové oligodeoxynukleotidy, solubilný komplementový receptor 1, prednizón, orgoteín, glykozaminoglykan polysulfát, minocyklín, anti-IL-2R protilátky, morské lipidy, botanické lipidy, auranofín, fenylbutazón, kyselinu meklofenamovú, kyselinu flufenamovú, intravenózny imunitný globulín, zileuton, kyselinu mykofenolovú, takrolimus, sirolimus, amiprilos, kladribin, azaribin, budenosid, epidermálny rastový faktor, aminosalicyláty, 6-merkaptopurín, metronidazol, inhibítory lipooxygenázy, mesalamín, olsalazín, balsalazid, antioxidanty, inhibítory tromboxánu, antagonisty IL-1 receptora, anti-lL-β monoklonálne protilátky, anti-IL-6 monoklonálne protilátky, rastové faktory, inhibítory elastázy, pyridinyl-imidazolové zlúčeniny, prekurzory prednizolónu, dexametazónu alebo budesonidu konjugované s glukuronidom, prekurzory prednizolónu, dexametazónu alebo budesonidu konjugované s dextranom, solubilný komplementový receptor 1, mesalazin so spomaleným uvoľňovaním, antagonisty doštičkového aktivačného faktora (PAF), ciproíloxacín, lignokaín, prednizolón, metylprednizolón, cyklofosfamid, 4-aminopyridín, tizanidín, interferón-β 1 a, interferón-β 1 b, Copolymer 1, hyperbarický kyslík, intravenózny imunoglobulín, kladribin, hypertonické salinické roztoky, antibiotiká, kontinuálnu hemofiltráciu, karbapenemy, antagonisty cytokínov ako je TNFa, IL-Ιβ, IL-6 a/alebo IL-8, SK&F 107647, tetravalentný guanylhydrazón CNI-1493, inhibítor dráhy tkanivového faktora, PHP, chelatačné činidlá železa a cheláty, vrátane komplexu dietyléntriamínpentaoctová kyselina-železo (III), lizofylín, PGG-Glukan, apolipoproteín A-l rekonštituovaný lipidmi, chirálne hydroxámové kyseliny, protilátky proti endotoxínu, E5531, rBPfyi, syntetické anti-endotoxínové peptidy, surfaktantovú substitučnú terapiu a anti-IL-8 protilátky.
  73. 73. Protilátka alebo jej antigén väzbová časť podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 22 na použitie v terapii.
  74. 74. Protilátka alebo jej antigén väzbová časť podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 22 v kombinácii s aspoň jedným ďalším terapeutickým činidlom na použitie pri liečbe ochorenia, pri ktorom je aktivita TNFa škodlivá.
  75. 75. Protilátka podľa nároku 74, kde ďalšie terapeutické činidlo je vybrané zo skupiny zahrnujúcej nesteroidné protizápalové liečivá, cytokíny potlačujúce protizápalové liečivá, CDP-571/BAY-10-3356, cA2, 75 kd TNFR-IgG, 55 kd TNFR-IgG, IDEC-CE9.1/SB 210396, DAB 486-IL-2, DAB 389-IL-2, Anti-Tac, IL-4, IL-10, agonisty IL-4, agonisty IL-10, IL-1RA, TNF-bp/s-TNFR, S284, R973401, MK-966, Iloprost, metotrexát, thalidomid, lieky príbuzné thalidomidu, leflunomid, kyselinu tranexamovú, T-614, prostaglandín El, Tenidap, Naproxen, Meloxicam, Piroxicam, Diclofenac, Indometacin, Sulfasalazin, Azathioprín, ICE inhibítory, zap-70 inhibítory, lck inhibítory, VEGF inhibítory, VEGF-R inhibítory, kortikosteroidy, inhibítory TNF-konvertázy, anti-IL-12 protilátky, interleukín-11, interleukín-13, inhibítory interleukínu-17, zlato, penicilamin, chlorochin, hydroxychlorochin, chlorambucil, cyklofosfamid, cyklosporín, anti-tymocytámy globulín, anti-CD-4 protilátky, CD5-toxíny, orálne podávané peptidy, kolagén, lobenzarit disodný, cytokíny regulujúce činidlá HP228 a EDP466, ICAM-1 antisense fosforotioátové oligodeoxy31 nukleotidy, solubilný komplementový receptor 1, prednizón, orgotein, glykozaminoglykan polysulfat, minocyklin, anti-IL-2R protilátky, morské lipidy, botanické lipidy, auranofin, fenylbutazón, kyselinu meklofenamovú, kyselinu flufenamovú, intravenózny imunitný globulín, zileuton, kyselinu mykofenolovú, takrolimus, sirolimus, amiprilos, kladribin, azaribin, budenosid, epidermálny rastový faktor, aminosalicyláty, 6-merkaptopurín, metronidazol, inhibítory lipoxygenázy, mesalamin, olsalazin, balsalazid, antioxidanty, inhibítory tromboxánu, antagonisty IL-1 receptora, anti-IL-β monoklonálne protilátky, anti-IL-6 monoklonálne protilátky, rastové faktory, inhibítory elastázy, pyridinylimidazolové zlúčeniny, prekurzory prednizolónu, dexametazónu alebo budesonidu konjugované s glukuronidom, prekurzory prednizolónu, dexametazónu alebo budesonidu konjugované s dextranom, solubilný komplementový receptor 1, mesalazin so spomaleným uvoľňovaním, antagonisty doštičkového aktivačného faktora (PAF), ciprofloxacin, lignokain, prednizolón, metylprednizolón, cyklofosfamid, 4-aminopyridin, tizanidín, interferencia, interfeΓόη-βΐό, Copolymer 1, hyperbarický kyslík, intravenózny imunoglobulín, kladribin, hypertonické salinické roztoky, antibiotiká, kontinuálnu hemofiltráciu, karbapenemy, antagonisty cytokínov ako je TNFa, IL-Ιβ, IL-6 a/alebo IL-8, SK&F 107647, tetravalentný guanylhydrazón CNI-1493, inhibítor dráhy tkanivového faktora, PHP, chelatačné činidlá železa a cheláty, vrátane komplexu dietyléntriamínpentaoctová kyselina-železo (III), lizofylin, PGG-Glukan, apolipoproteín A-l rekonštituovaný lipidmi, chirálne hydroxámové kyseliny, protilátky proti endotoxínu, E5531, rBPI2i, syntetické anti-endotoxínové peptidy, surfaktantovú substitučnú terapiu a anti-IL-8 protilátky.
SK1062-98A 1996-02-09 1997-02-10 Ľudské protilátky k ľudskému TNFalfa, ich použitie, spôsob ich syntézy a farmaceutické prípravky s ich obsahom SK284040B6 (sk)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US08/599,226 US6090382A (en) 1996-02-09 1996-02-09 Human antibodies that bind human TNFα
US3147696P 1996-11-25 1996-11-25
PCT/US1997/002219 WO1997029131A1 (en) 1996-02-09 1997-02-10 HUMAN ANTIBODIES THAT BIND HUMAN TNF$g(a)

Publications (2)

Publication Number Publication Date
SK106298A3 SK106298A3 (en) 1999-03-12
SK284040B6 true SK284040B6 (sk) 2004-08-03

Family

ID=26707297

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SK1062-98A SK284040B6 (sk) 1996-02-09 1997-02-10 Ľudské protilátky k ľudskému TNFalfa, ich použitie, spôsob ich syntézy a farmaceutické prípravky s ich obsahom

Country Status (32)

Country Link
US (9) US6258562B1 (sk)
EP (1) EP0929578B1 (sk)
JP (8) JP3861118B2 (sk)
KR (1) KR100317188B1 (sk)
CN (5) CN101712720A (sk)
AT (1) ATE239041T1 (sk)
AU (1) AU722077B2 (sk)
BG (7) BG64564B1 (sk)
BR (3) BRPI9715219B8 (sk)
CA (1) CA2243459C (sk)
CY (2) CY2463B1 (sk)
CZ (1) CZ292465B6 (sk)
DE (4) DE122004000004I1 (sk)
DK (1) DK0929578T3 (sk)
ES (1) ES2198552T3 (sk)
HK (8) HK1019452A1 (sk)
HU (4) HU230048B1 (sk)
IL (4) IL125697A (sk)
LU (1) LU91062I2 (sk)
MX (1) MX336813B (sk)
NL (1) NL300143I2 (sk)
NO (6) NO316711B1 (sk)
NZ (5) NZ331579A (sk)
PL (2) PL193499B1 (sk)
PT (1) PT929578E (sk)
RO (2) RO123028B1 (sk)
RU (3) RU2270030C2 (sk)
SI (1) SI9720020B (sk)
SK (1) SK284040B6 (sk)
TR (1) TR199801532T2 (sk)
UA (2) UA57726C2 (sk)
WO (1) WO1997029131A1 (sk)

Families Citing this family (463)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0486526B2 (en) 1989-08-07 2001-03-07 Peptech Limited Tumour necrosis factor binding ligands
US5959087A (en) * 1989-08-07 1999-09-28 Peptide Technology, Ltd. Tumour necrosis factor binding ligands
US20030225254A1 (en) * 1989-08-07 2003-12-04 Rathjen Deborah Ann Tumour necrosis factor binding ligands
US7192584B2 (en) 1991-03-18 2007-03-20 Centocor, Inc. Methods of treating psoriasis with anti-TNF antibodies
US6270766B1 (en) 1992-10-08 2001-08-07 The Kennedy Institute Of Rheumatology Anti-TNF antibodies and methotrexate in the treatment of arthritis and crohn's disease
US6830751B1 (en) 1994-03-14 2004-12-14 Genetics Institute, Llc Use of IL-12 antagonists in the treatment of rheumatoid arthritis
ZA95960B (en) * 1994-03-14 1995-10-10 Genetics Inst Use of interleukin-12 antagonists in the treatment of autoimmune diseases
US20010055581A1 (en) 1994-03-18 2001-12-27 Lawrence Tamarkin Composition and method for delivery of biologically-active factors
US6090382A (en) 1996-02-09 2000-07-18 Basf Aktiengesellschaft Human antibodies that bind human TNFα
DE122004000004I1 (de) * 1996-02-09 2004-08-12 Abott Biotechnology Ltd Humane Antikörper welche an Humanen TNFalpha binden.
US7129061B1 (en) * 1996-08-07 2006-10-31 Biogen Idec Ma Inc. Tumor necrosis factor related ligand
US20040009166A1 (en) * 1997-04-30 2004-01-15 Filpula David R. Single chain antigen-binding polypeptides for polymer conjugation
WO1998049198A1 (en) * 1997-04-30 1998-11-05 Enzon, Inc. Single-chain antigen-binding proteins capable of glycosylation, production and uses thereof
US7229841B2 (en) 2001-04-30 2007-06-12 Cytimmune Sciences, Inc. Colloidal metal compositions and methods
US6407218B1 (en) 1997-11-10 2002-06-18 Cytimmune Sciences, Inc. Method and compositions for enhancing immune response and for the production of in vitro mabs
US7067144B2 (en) * 1998-10-20 2006-06-27 Omeros Corporation Compositions and methods for systemic inhibition of cartilage degradation
US7553487B2 (en) 1998-12-14 2009-06-30 Genetics Institute, Llc Method and compositions for treating asthma
EP1141286B1 (en) 1998-12-14 2006-10-18 Genetics Institute, LLC Cytokine receptor chain
DE60045240D1 (de) * 1999-03-02 2010-12-30 Centocor Inc Antikörper gegen tnf alpha zur therapie von steroidresistentem asthma
US6914128B1 (en) 1999-03-25 2005-07-05 Abbott Gmbh & Co. Kg Human antibodies that bind human IL-12 and methods for producing
US20040220103A1 (en) 1999-04-19 2004-11-04 Immunex Corporation Soluble tumor necrosis factor receptor treatment of medical disorders
AU7912600A (en) * 1999-10-06 2001-05-10 Basf Aktiengesellschaft Inhibitors of the endothelin signalling pathway and alphavbeta3 integrin receptor antagonists for combination therapy
KR101111103B1 (ko) 2000-02-10 2012-02-13 아보트 러보러터리즈 사람 인터류킨-18에 결합하는 항체 및 이를 제조하고 사용하는 방법
GB0013810D0 (en) 2000-06-06 2000-07-26 Celltech Chiroscience Ltd Biological products
CN101525384A (zh) 2000-06-29 2009-09-09 艾博特公司 双特异性抗体及其制备方法和用途
UA81743C2 (uk) * 2000-08-07 2008-02-11 Центокор, Инк. МОНОКЛОНАЛЬНЕ АНТИТІЛО ЛЮДИНИ, ЩО СПЕЦИФІЧНО ЗВ'ЯЗУЄТЬСЯ З ФАКТОРОМ НЕКРОЗУ ПУХЛИН АЛЬФА (ФНПα), ФАРМАЦЕВТИЧНА КОМПОЗИЦІЯ, ЩО ЙОГО МІСТИТЬ, ТА СПОСІБ ЛІКУВАННЯ РЕВМАТОЇДНОГО АРТРИТУ
US20050196755A1 (en) * 2000-11-17 2005-09-08 Maurice Zauderer In vitro methods of producing and identifying immunoglobulin molecules in eukaryotic cells
AU2002231736A1 (en) 2000-12-22 2002-07-08 Max-Planck-Gesellschaft Zur Forderung Der Wissenschaften E.V. Use of repulsive guidance molecule (rgm) and its modulators
US6919183B2 (en) * 2001-01-16 2005-07-19 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Isolating cells expressing secreted proteins
US20090137416A1 (en) 2001-01-16 2009-05-28 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Isolating Cells Expressing Secreted Proteins
CA2440676A1 (en) 2001-03-22 2002-10-03 Abbott Gmbh & Co. Kg Transgenic animals expressing antibodies specific for genes of interest and uses thereof
US6410955B1 (en) * 2001-04-19 2002-06-25 Micron Technology, Inc. Comb-shaped capacitor for use in integrated circuits
CA2385745C (en) * 2001-06-08 2015-02-17 Abbott Laboratories (Bermuda) Ltd. Methods of administering anti-tnf.alpha. antibodies
AU2002316384A1 (en) * 2001-06-26 2003-03-03 Photomed Technologies, Inc. Multiple wavelength illuminator
US7364736B2 (en) 2001-06-26 2008-04-29 Amgen Inc. Antibodies to OPGL
US20050271663A1 (en) * 2001-06-28 2005-12-08 Domantis Limited Compositions and methods for treating inflammatory disorders
TWI327597B (en) 2001-08-01 2010-07-21 Centocor Inc Anti-tnf antibodies, compositions, methods and uses
WO2003024384A2 (en) * 2001-09-20 2003-03-27 Magnum Therapeutics Improved methods for treatment with viral vectors
US20030065382A1 (en) * 2001-10-02 2003-04-03 Fischell Robert E. Means and method for the treatment of coronary artery obstructions
CA2460916A1 (en) 2001-10-04 2003-04-10 Laura Carter Methods and compositions for modulating interleukin-21 receptor activity
EP1494710A4 (en) * 2002-03-26 2007-03-21 Centocor Inc DIABETES-RELEVANT IMMUNOGLOBULIN-BASED PROTEINS, COMPOSITIONS, PROCESSES AND USES
US20030206898A1 (en) * 2002-04-26 2003-11-06 Steven Fischkoff Use of anti-TNFalpha antibodies and another drug
US20040009172A1 (en) * 2002-04-26 2004-01-15 Steven Fischkoff Use of anti-TNFalpha antibodies and another drug
CN102764436A (zh) 2002-07-19 2012-11-07 艾博特生物技术有限公司 TNF α相关疾病的治疗
US20090280065A1 (en) * 2006-04-10 2009-11-12 Willian Mary K Uses and Compositions for Treatment of Psoriasis
US20040033228A1 (en) 2002-08-16 2004-02-19 Hans-Juergen Krause Formulation of human antibodies for treating TNF-alpha associated disorders
WO2004019861A2 (en) * 2002-08-28 2004-03-11 Pharmacia Corporation Stable ph optimized formulation of a modified antibody
MY150740A (en) * 2002-10-24 2014-02-28 Abbvie Biotechnology Ltd Low dose methods for treating disorders in which tnf? activity is detrimental
US9320792B2 (en) 2002-11-08 2016-04-26 Ablynx N.V. Pulmonary administration of immunoglobulin single variable domains and constructs thereof
CA2505316C (en) 2002-11-08 2014-08-05 Ablynx N.V. Single domain antibodies directed against tumour necrosis factor-alpha and uses therefor
US20060034845A1 (en) 2002-11-08 2006-02-16 Karen Silence Single domain antibodies directed against tumor necrosis factor alpha and uses therefor
US20040101939A1 (en) * 2002-11-22 2004-05-27 Santora Ling C. Method for reducing or preventing modification of a polypeptide in solution
US20040162414A1 (en) * 2002-11-22 2004-08-19 Santora Ling C. Method for reducing or preventing modification of a polypeptide in solution
RU2377253C2 (ru) * 2002-12-02 2009-12-27 Амген Фремонт,Инк. Антитела, специфичные к фактору некроза опухолей, и их применение
EP1578782A4 (en) * 2002-12-30 2007-09-12 Amgen Inc COSTIMULATING FACTORIAL THERAPY
JP2007525409A (ja) * 2003-01-08 2007-09-06 アプライド モレキュラー エボリューション，インコーポレイテッド ＴＮＦ−α結合分子
US7101978B2 (en) * 2003-01-08 2006-09-05 Applied Molecular Evolution TNF-α binding molecules
CA2512545C (en) * 2003-01-10 2015-06-30 Karen Silence Recombinant vhh single domain antibody from camelidae against von willebrand factor (vwf)
DE10303974A1 (de) 2003-01-31 2004-08-05 Abbott Gmbh & Co. Kg Amyloid-β(1-42)-Oligomere, Verfahren zu deren Herstellung und deren Verwendung
RU2005131852A (ru) * 2003-03-14 2006-04-20 Уайт (Us) Антитела против человеческого рецептора il-21 и их применение
EP1460088A1 (en) 2003-03-21 2004-09-22 Biotest AG Humanized anti-CD4 antibody with immunosuppressive properties
WO2004098578A2 (en) * 2003-05-12 2004-11-18 Altana Pharma Ag Composition comprising a pde4 inhibitor and a tnf-alfa antagonist selected from infliximab, adalimumab, cdp870 and cdp517
FR2856075B1 (fr) * 2003-06-16 2007-10-12 Monoclonal Antibodies Therapeu Procede essentiellement automatise de criblage a grande echelle de cellules secretant des anticorps monoclonaux
FR2859725B1 (fr) * 2003-09-16 2006-03-10 Neovacs Procede a haut rendement pour l'obtention d'anticorps humains neutralisant l'activite biologique d'une cytokine humaine
US20050100965A1 (en) 2003-11-12 2005-05-12 Tariq Ghayur IL-18 binding proteins
KR100772800B1 (ko) * 2003-11-17 2007-11-01 주식회사유한양행 인간 종양괴사인자 α를 인식하는 단일클론항체의가변영역 및 이를 코딩하는 유전자
CA2548179A1 (en) 2003-12-02 2005-07-21 Cytimmune Sciences, Inc. Methods and compositions for the production of monoclonal antibodies
US7674459B2 (en) 2003-12-23 2010-03-09 Genentech, Inc. Treatment of cancer with a novel anti-IL13 monoclonal antibody
US7435799B2 (en) * 2004-01-08 2008-10-14 Applied Molecular Evolution TNF-α binding molecules
US7625549B2 (en) 2004-03-19 2009-12-01 Amgen Fremont Inc. Determining the risk of human anti-human antibodies in transgenic mice
EP2418224A3 (en) 2004-03-19 2013-07-24 Amgen Inc. Reducing the risk of human and anti-human antibodies through V gene manipulation
TWI556829B (zh) * 2004-04-09 2016-11-11 艾伯維生物技術有限責任公司 用於治療ＴＮＦα相關失調症之多重可變劑量療法
CN100427504C (zh) * 2004-06-02 2008-10-22 北京天广实生物技术有限公司 TNFα高亲和力嵌合抗体及其用途
US7501121B2 (en) 2004-06-17 2009-03-10 Wyeth IL-13 binding agents
AR049390A1 (es) 2004-06-09 2006-07-26 Wyeth Corp Anticuerpos contra la interleuquina-13 humana y usos de los mismos
GB0414054D0 (en) 2004-06-23 2004-07-28 Owen Mumford Ltd Improvements relating to automatic injection devices
EP1773394A2 (en) * 2004-08-05 2007-04-18 Wyeth a Corporation of the State of Delaware Antagonizing interleukin-21 receptor activity
WO2006041970A2 (en) * 2004-10-08 2006-04-20 Abbott Biotechnology Ltd. Treatment of respiratory syncytial virus (rsv) infection
CN101048426A (zh) * 2004-10-22 2007-10-03 金克克国际有限公司 分离人抗体
CN101102792A (zh) 2004-11-19 2008-01-09 比奥根艾迪克Ma公司 治疗多发性硬化
CA2930677A1 (en) 2005-02-08 2006-08-17 Genzyme Corporation Antibodies to tgfbeta
EP1849011A2 (en) * 2005-02-14 2007-10-31 University of Pittsburgh of the Commonwealth System of Higher Education Use of il-17f in diagnosis and therapy of airway inflammation
EP1848743A2 (en) * 2005-02-14 2007-10-31 Wyeth Interleukin-17f antibodies and other il-17f signaling antagonists and uses therefor
WO2006089095A2 (en) 2005-02-17 2006-08-24 Biogen Idec Ma Inc. Treating neurological disorders
GT200600148A (es) * 2005-04-14 2006-11-22 Metodos para el tratamiento y la prevencion de fibrosis
AU2006244014B2 (en) * 2005-05-10 2011-03-17 Biogen Ma Inc. Treating and evaluating inflammatory disorders
AU2012254978C1 (en) * 2005-05-16 2017-06-01 Abbvie Biotechnology Ltd Use of TNF inhibitor for treatment of erosive polyarthritis
TWI399384B (zh) * 2005-05-16 2013-06-21 Abbott Biotech Ltd ＴＮＦα抑制劑於治療侵蝕型多發性關節炎之用途
WO2006133287A2 (en) * 2005-06-06 2006-12-14 Wyeth Expression profiles of peripheral blood mononuclear cells for inflammatory bowel diseases
WO2006131013A2 (en) 2005-06-07 2006-12-14 Esbatech Ag STABLE AND SOLUBLE ANTIBODIES INHIBITING TNFα
US20080311078A1 (en) 2005-06-14 2008-12-18 Gokarn Yatin R Self-Buffering Protein Formulations
US20060286108A1 (en) * 2005-06-16 2006-12-21 Bell Katherine A Topical compositions for the treatment of chronic wounds
US20080045949A1 (en) * 2005-06-17 2008-02-21 Hunt Margaret M Method of treating degenerative spinal disorders
JP5253159B2 (ja) * 2005-06-24 2013-07-31 デューク・ユニヴァーシティ 熱応答性バイオポリマーに基づく直接的ドラッグデリバリーシステム
EP2484774A3 (en) 2005-07-21 2012-11-14 Abbott Laboratories Multiple gene expression including sorf contructs and methods with polyproteins, pro-proteins, and proteolysis
TW200726776A (en) * 2005-07-29 2007-07-16 Friedrich Alexander University Of Erlangen Nuremberg CD33-specific single-chain immunotoxin and methods of use
US20070041905A1 (en) * 2005-08-19 2007-02-22 Hoffman Rebecca S Method of treating depression using a TNF-alpha antibody
US7612181B2 (en) * 2005-08-19 2009-11-03 Abbott Laboratories Dual variable domain immunoglobulin and uses thereof
EP2500353A3 (en) 2005-08-19 2012-10-10 Abbott Laboratories Dual variable domain immunoglobulin and uses thereof
US20090215992A1 (en) * 2005-08-19 2009-08-27 Chengbin Wu Dual variable domain immunoglobulin and uses thereof
KR20140053410A (ko) 2005-08-19 2014-05-07 아보트 러보러터리즈 이원 가변 도메인 면역글로불린 및 이의 용도
US8906864B2 (en) 2005-09-30 2014-12-09 AbbVie Deutschland GmbH & Co. KG Binding domains of proteins of the repulsive guidance molecule (RGM) protein family and functional fragments thereof, and their use
WO2007049286A1 (en) * 2005-10-27 2007-05-03 Tata Memorial Centre A system for ex-vivo separation of apoptotic chromatin particles from blood or plasma
CN101663048A (zh) 2005-11-01 2010-03-03 艾博特生物技术有限公司 使用生物标志物诊断强直性脊柱炎的方法和组合物
AR056806A1 (es) 2005-11-14 2007-10-24 Amgen Inc Moleculas quimericas de anticuerpo rankl- pth/ pthrp
KR20080090408A (ko) 2005-11-30 2008-10-08 아보트 러보러터리즈 항-Ａβ 글로불로머 항체, 이의 항원-결합 잔기, 상응하는하이브리도마, 핵산, 벡터, 숙주 세포, 당해 항체의 제조방법, 당해 항체를 포함하는 조성물, 당해 항체의 용도 및당해 항체의 사용 방법
KR101439828B1 (ko) 2005-11-30 2014-09-17 애브비 인코포레이티드 아밀로이드 베타 단백질에 대한 모노클로날 항체 및 이의 용도
US8334257B2 (en) 2005-12-20 2012-12-18 Duke University Methods and compositions for delivering active agents with enhanced pharmacological properties
US20130172274A1 (en) 2005-12-20 2013-07-04 Duke University Methods and compositions for delivering active agents with enhanced pharmacological properties
US8841255B2 (en) 2005-12-20 2014-09-23 Duke University Therapeutic agents comprising fusions of vasoactive intestinal peptide and elastic peptides
EA017417B1 (ru) 2006-02-01 2012-12-28 Сефалон Астралия Пти Лтд. КОНСТРУКТ ОДНОДОМЕННОГО АНТИТЕЛА, КОТОРЫЙ СВЯЗЫВАЕТСЯ С ЧЕЛОВЕЧЕСКИМ TNF-α, И ЕГО ПРИМЕНЕНИЕ
TWI417301B (zh) 2006-02-21 2013-12-01 Wyeth Corp 對抗人類介白素-２２（ｉｌ-２２）之抗體及其用途
TW200744634A (en) 2006-02-21 2007-12-16 Wyeth Corp Methods of using antibodies against human IL-22
KR20150064254A (ko) * 2006-04-05 2015-06-10 애브비 바이오테크놀로지 리미티드 항체 정제
US9605064B2 (en) * 2006-04-10 2017-03-28 Abbvie Biotechnology Ltd Methods and compositions for treatment of skin disorders
US20080118496A1 (en) * 2006-04-10 2008-05-22 Medich John R Uses and compositions for treatment of juvenile rheumatoid arthritis
EP2012586A4 (en) 2006-04-10 2010-08-18 Abbott Biotech Ltd USES AND COMPOSITIONS FOR THE TREATMENT OF ANKYLOSANTE SPONDYLARTHRITIS
EP2010214A4 (en) 2006-04-10 2010-06-16 Abbott Biotech Ltd USES AND COMPOSITIONS FOR THE TREATMENT OF RHEUMATOID ARTHRITIS
US20090317399A1 (en) * 2006-04-10 2009-12-24 Pollack Paul F Uses and compositions for treatment of CROHN'S disease
EP2666472A3 (en) 2006-04-10 2014-04-02 Abbott Biotechnology Ltd Uses and compositions for treatment of psoriatic arthritis
EP2666479A3 (en) 2006-04-10 2014-03-26 Abbott Biotechnology Ltd Uses and compositions for treatment of juvenile rheumatoid arthritis
CA2564435A1 (en) 2006-04-10 2007-10-10 Abbott Biotechnology Ltd. Methods for monitoring and treating intestinal disorders
US20080131374A1 (en) * 2006-04-19 2008-06-05 Medich John R Uses and compositions for treatment of rheumatoid arthritis
US20080311043A1 (en) * 2006-06-08 2008-12-18 Hoffman Rebecca S Uses and compositions for treatment of psoriatic arthritis
US20100021451A1 (en) * 2006-06-08 2010-01-28 Wong Robert L Uses and compositions for treatment of ankylosing spondylitis
TWI542374B (zh) 2006-06-30 2016-07-21 艾伯維生物技術有限責任公司 自動注射裝置
RU2472807C2 (ru) 2006-09-08 2013-01-20 Эбботт Лэборетриз Интерлейкин-13-связывающие белки
EP2500415A1 (en) 2006-09-13 2012-09-19 Abbott Laboratories Cell culture improvements
US8911964B2 (en) 2006-09-13 2014-12-16 Abbvie Inc. Fed-batch method of making human anti-TNF-alpha antibody
MX2009002748A (es) 2006-09-13 2009-03-26 Abbott Lab Mejoras de cultivos celulares.
KR20150002896A (ko) * 2006-10-27 2015-01-07 애브비 바이오테크놀로지 리미티드 결정형 항-ｈＴＮＦ알파 항체
EP2099454A4 (en) 2006-11-17 2010-11-10 Abbott Lab AMINOPYRROLIDINES AS CHEMOKINE RECEPTOR ANTAGONISTS
EP2101780B1 (en) 2006-11-21 2013-10-09 Kalobios Pharmaceuticals, Inc. Methods of treating chronic inflammatory diseases using a gm-csf antagonist
US8455626B2 (en) 2006-11-30 2013-06-04 Abbott Laboratories Aβ conformer selective anti-aβ globulomer monoclonal antibodies
WO2008082651A2 (en) 2006-12-29 2008-07-10 Abbott Laboratories Dual-specific il-1a/ il-1b antibodies
WO2008088823A2 (en) * 2007-01-16 2008-07-24 Abbott Laboratories Methods for treating psoriasis
JP2008209378A (ja) * 2007-01-31 2008-09-11 Fujifilm Corp バイオセンサー基板
AU2008214359B2 (en) 2007-02-05 2014-01-16 Apellis Pharmaceuticals, Inc. Local complement inhibition for treatment of complement-mediated disorders
US8895004B2 (en) 2007-02-27 2014-11-25 AbbVie Deutschland GmbH & Co. KG Method for the treatment of amyloidoses
NZ579594A (en) 2007-03-12 2012-03-30 Esbatech Alcon Biomed Res Unit Sequence based engineering and optimization of single chain antibodies
TW200902064A (en) * 2007-03-28 2009-01-16 Wyeth Corp Methods and compositions for modulating IL-17F/IL-17A biological activity
US7807168B2 (en) * 2007-04-10 2010-10-05 Vaccinex, Inc. Selection of human TNFα specific antibodies
WO2008124858A2 (en) * 2007-04-11 2008-10-23 F-Star Biotechnologische Forschungs- Und Entwicklungsges. M.B.H. Targeted receptor
EP2679995A1 (en) 2007-05-31 2014-01-01 AbbVie Inc. Biomarkers predictive of the responsiveness to TNF-alfa inhibitors in autoimmune disorders
WO2008150490A2 (en) * 2007-06-01 2008-12-11 Abbott Biotechnology Ltd. Uses and compositions for treatment of psoriasis and crohn's disease
MX2009013137A (es) * 2007-06-06 2010-04-30 Domantis Ltd Metodos para seleccionar polipeptidos resistentes a la proteasa.
BRPI0812398A2 (pt) * 2007-06-06 2019-09-24 Domantis Ltd domínio variável simples de imunoglobulina anti-vegf, antagonista anti-vegf, domínio variável simples de imunoglobulina resistente à protease, uso do antagonista vegf, método para a dispensação oral ou dispensação de um medicamento ao trato gi de um paciente ou ao pulmão ou tecido pulmonar ou olho de um paciente, dispositivo de dispensação pulmonar, formulação oral, ligando específico duplo, ácido nucleico isolado ou recombinante, vetor, célula hospedeira, método para produzir polipeptídeo, composição farmacêutica, polipeptídeo, e, proteína de fusão
WO2008154543A2 (en) 2007-06-11 2008-12-18 Abbott Biotechnology Ltd. Methods for treating juvenile idiopathic arthritis
SI2170390T1 (sl) 2007-06-14 2019-02-28 Biogen Ma Inc. Oblike protitelesa natalizumab
HUE027507T2 (en) * 2007-06-25 2016-10-28 Esbatech Alcon Biomed Res Unit Procedures for Modifying Antibodies and Modified Antibodies with Improved Functional Properties
ES2532725T3 (es) * 2007-06-25 2015-03-31 Esbatech, An Alcon Biomedical Research Unit Llc Modificación por ingeniería genética basada en secuencia y optimización de anticuerpos de cadena sencilla
WO2009011782A2 (en) * 2007-07-13 2009-01-22 Abbott Biotechnology Ltd. METHODS AND COMPOSITIONS FOR PULMONARY ADMINISTRATION OF A TNFa INHIBITOR
CN101980722A (zh) 2007-08-08 2011-02-23 雅培制药有限公司 结晶抗体的组合物和方法
CA3128656A1 (en) 2007-08-22 2009-02-26 The Regents Of The University Of California Activatable binding polypeptides and methods of identification and use thereof
MX2010002269A (es) * 2007-08-28 2010-03-25 Abbott Biotech Ltd Composiciones y metodos que comprenden proteinas de union para adalimumab.
RU2499599C2 (ru) 2007-09-28 2013-11-27 Интрексон Корпорейшн Конструкции терапевтического переключения генов и биореакторы для экспрессии биотерапевтических молекул и их применение
JP2009082033A (ja) * 2007-09-28 2009-04-23 Kaneka Corp 完全ヒト型抗体生産法
CA2706700A1 (en) 2007-11-08 2009-05-14 Cytimmune Sciences, Inc. Compositions and methods for generating antibodies
CN101969971A (zh) 2007-11-30 2011-02-09 雅培制药有限公司 蛋白制剂及其制备方法
US8883146B2 (en) 2007-11-30 2014-11-11 Abbvie Inc. Protein formulations and methods of making same
WO2009086550A1 (en) * 2008-01-03 2009-07-09 Abbott Laboratories Predicting long-term efficacy of a compound in the treatment of psoriasis
CA2711984A1 (en) 2008-01-15 2009-07-23 Abbott Gmbh & Co. Kg Powdered protein compositions and methods of making same
US8962803B2 (en) 2008-02-29 2015-02-24 AbbVie Deutschland GmbH & Co. KG Antibodies against the RGM A protein and uses thereof
RU2540018C2 (ru) 2008-03-13 2015-01-27 Биотест Аг Средство для лечения заболевания
EP2265643B1 (en) 2008-03-13 2016-10-19 Biotest AG Dosing regimen for treating psoriasis and rheumatoid arthritis
WO2009124815A1 (en) 2008-03-13 2009-10-15 Biotest Ag Agent for treating disease
US8178092B2 (en) 2008-03-18 2012-05-15 Abbott Laboratories Methods of treating psoriasis by administration of antibodies to the p40 subunit of IL-12 and/or IL-23
MX2010011955A (es) 2008-04-29 2011-01-21 Abbott Lab Inmunoglobulinas de dominio variable doble y usos de las mismas.
US20100260668A1 (en) * 2008-04-29 2010-10-14 Abbott Laboratories Dual Variable Domain Immunoglobulins and Uses Thereof
EP2113568A1 (en) 2008-04-30 2009-11-04 Deutsches Rheuma-Forschungszentrum Berlin Knock-in mouse for modelling blockade of human TNFalpha
AR071698A1 (es) 2008-05-09 2010-07-07 Abbott Gmbh & Co Kg Anticuerpos contra el receptor de productos finales de glicosilacion avanzada (rage) y usos de los mismos
WO2009142186A1 (ja) * 2008-05-20 2009-11-26 株式会社カネカ 細胞障害性組成物
NZ589436A (en) 2008-06-03 2012-12-21 Abbott Lab Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
MX2010013239A (es) * 2008-06-03 2011-02-24 Abbott Lab Inmunoglobulinas de dominio variable doble y usos de las mismas.
KR102095257B1 (ko) 2008-06-25 2020-04-01 노바르티스 아게 Ｖｅｇｆ를 억제하는 안정하고 가용성인 항체
PT3444274T (pt) 2008-06-25 2021-03-17 Novartis Ag Anticorpos que inibem tnf estáveis e solúveis
ES2629345T3 (es) 2008-06-25 2017-08-08 Esbatech, An Alcon Biomedical Research Unit Llc Optimización de la solubilidad de agentes de unión inmunológica
CN105727261A (zh) 2008-06-27 2016-07-06 杜克大学 包含弹性蛋白样肽的治疗剂
KR20110044992A (ko) * 2008-07-02 2011-05-03 이머전트 프로덕트 디벨롭먼트 시애틀, 엘엘씨 ＴＧＦ-β 길항제 다중-표적 결합 단백질
JP2011527579A (ja) 2008-07-08 2011-11-04 アボット・ラボラトリーズ プロスタグランジンｅ２結合タンパク質およびこの使用
CN102149825B (zh) 2008-07-08 2015-07-22 Abbvie公司 前列腺素e2双重可变结构域免疫球蛋白及其用途
EP2337799A2 (en) * 2008-08-28 2011-06-29 Wyeth LLC Uses of il-22, il-17, and il-1 family cytokines in autoimmune diseases
CN102281898B (zh) * 2008-10-07 2015-06-03 成功大学 Il-20拮抗剂在治疗类风湿性关节炎和骨质疏松症中的应用
MX2011004558A (es) 2008-10-29 2011-06-01 Wyeth Llc Procedimientos para la purificacion de moleculas de union a antigeno de un unico dominio.
EP2362767B1 (en) 2008-10-29 2017-12-06 Ablynx N.V. Formulations of single domain antigen binding molecules
US8415291B2 (en) 2008-10-31 2013-04-09 Centocor Ortho Biotech Inc. Anti-TNF alpha fibronectin type III domain based scaffold compositions, methods and uses
CN101419224B (zh) * 2008-11-06 2012-08-22 复旦大学附属华山医院 一种同时测定人血浆中霉酚酸酯、霉酚酸及其代谢物的方法
KR20110096553A (ko) * 2008-11-28 2011-08-30 아보트 러보러터리즈 안정한 항체 조성물 및 이의 안정화 방법
MX2011007030A (es) 2008-12-30 2011-07-20 Centocor Ortho Biotech Inc Marcadores sericos que predicen la respuesta clinica a los anticuerpos anti-factor de necrosis tumoral alfa en pacientes con espondilitis anquilosante.
CN101766602B (zh) * 2008-12-30 2012-01-11 中国医学科学院血液病医院（血液学研究所） 取代芳香基腙类化合物在作为肿瘤坏死因子抑制剂药物方面的应用
RU2636046C2 (ru) 2009-01-12 2017-11-17 Сайтомкс Терапьютикс, Инк Композиции модифицированных антител, способы их получения и применения
EP2398494A4 (en) 2009-02-23 2015-10-28 Cytomx Therapeutics Inc Proproteins and their methods of use
US8030026B2 (en) 2009-02-24 2011-10-04 Abbott Laboratories Antibodies to troponin I and methods of use thereof
JP5836807B2 (ja) 2009-03-05 2015-12-24 アッヴィ・インコーポレイテッド Ｉｌ−１７結合タンパク質
US20120135005A1 (en) * 2009-04-16 2012-05-31 Harding Fiona A ANTI-TNF-a ANTIBODIES AND THEIR USES
CN101875694B (zh) * 2009-04-28 2014-04-02 中国医学科学院基础医学研究所 TNFα的抗体及其用途
EP2424594A4 (en) 2009-04-29 2014-12-24 Abbvie Biotechnology Ltd AUTOMATIC INJECTION DEVICE
RU2560701C2 (ru) * 2009-05-04 2015-08-20 Эббви Байотекнолоджи Лтд. Стабильные композиции с высокими концентрациями белков антител человека против tnf-альфа
WO2010132872A1 (en) * 2009-05-15 2010-11-18 Novimmune S.A Combination therapies and methods using anti-cd3 modulating agents and anti-tnf antagonists
TW201109438A (en) * 2009-07-29 2011-03-16 Abbott Lab Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
PT3311828T (pt) 2009-08-14 2021-05-05 Phasebio Pharmaceuticals Inc Péptidos intestinais vasoativos modificados
US20110044981A1 (en) * 2009-08-21 2011-02-24 Spangler Rhyannon Methods and compositions for treatment of pulmonary fibrotic disorders
CN102741288B (zh) 2009-08-29 2015-08-19 Abbvie公司 治疗用dll4结合蛋白
PE20121530A1 (es) 2009-09-01 2012-12-22 Abbvie Inc Inmunoglobulinas con dominio variable dual
AU2010291927A1 (en) * 2009-09-14 2012-04-12 AbbVie Deutschland GmbH & Co. KG Methods for treating psoriasis
US20110071054A1 (en) * 2009-09-24 2011-03-24 Xbiotech, Inc. Panel of monoclonal antibody containing pharmaceutical compositions
CA2772945A1 (en) 2009-09-25 2011-03-31 Xoma Technology Ltd. Screening methods
JP2013507928A (ja) 2009-10-15 2013-03-07 アボット・ラボラトリーズ 二重可変ドメイン免疫グロブリンおよびその使用
MX343328B (es) * 2009-10-26 2016-11-01 Nestec Sa Analisis para la deteccion de farmacos anti-tnf y anticuerpos.
UY32979A (es) * 2009-10-28 2011-02-28 Abbott Lab Inmunoglobulinas con dominio variable dual y usos de las mismas
US20110150861A1 (en) 2009-10-30 2011-06-23 Abbott Laboratories Sorf constructs and multiple gene expression
TW201121568A (en) 2009-10-31 2011-07-01 Abbott Lab Antibodies to receptor for advanced glycation end products (RAGE) and uses thereof
US9244063B2 (en) 2009-11-11 2016-01-26 Gentian As Immunoassay for assessing related analytes of different origin
GB0920944D0 (en) 2009-11-30 2010-01-13 Biotest Ag Agents for treating disease
US8871208B2 (en) * 2009-12-04 2014-10-28 Abbvie Inc. 11-β-hydroxysteroid dehydrogenase type 1 (11β-HSD1) inhibitors and uses thereof
CN102656190A (zh) 2009-12-08 2012-09-05 雅培股份有限两合公司 用于在视网膜神经纤维层变性治疗中使用的针对rgm a蛋白质的单克隆抗体
NZ600069A (en) 2009-12-15 2015-02-27 Abbvie Biotechnology Ltd Improved firing button for automatic injection device
US20110150891A1 (en) * 2009-12-16 2011-06-23 Philip Bosch Methods of Treating Interstitial Cystitis
USRE49251E1 (en) 2010-01-04 2022-10-18 Mapi Pharma Ltd. Depot systems comprising glatiramer or pharmacologically acceptable salt thereof
WO2011092715A2 (en) * 2010-01-27 2011-08-04 Tata Memorial Centre Method for in-vivo binding of chromatin fragments
CA2789168A1 (en) 2010-02-02 2011-08-11 Abbott Biotechnology Ltd. Methods and compositions for predicting responsiveness to treatment with tnf-.alpha. inhibitor
CN102167741B (zh) * 2010-02-25 2014-05-14 上海百迈博制药有限公司 一种全人源抗TNF-α单克隆抗体、其制备方法及用途
AU2011223919B2 (en) 2010-03-02 2015-03-19 Abbvie Inc. Therapeutic DLL4 binding proteins
SG184473A1 (en) 2010-04-07 2012-11-29 Abbvie Inc Tnf-alpha binding proteins
WO2011130377A2 (en) 2010-04-15 2011-10-20 Abbott Laboratories Amyloid-beta binding proteins
EP3466977B1 (en) 2010-04-16 2022-01-05 Biogen MA Inc. Anti-vla-4 antibodies
NZ702172A (en) 2010-04-21 2016-03-31 Abbvie Biotechnology Ltd Wearable automatic injection device for controlled delivery of therapeutic agents
KR101848225B1 (ko) 2010-05-14 2018-04-12 애브비 인코포레이티드 Ｉｌ－１ 결합 단백질
WO2011146727A1 (en) 2010-05-19 2011-11-24 Philip Bosch Methods of treating interstitial cystitis
PT2575884T (pt) 2010-06-03 2018-10-31 Abbvie Biotechnology Ltd Utilizações e composições para o tratamento de hidradenite supurativa (hs)
WO2012006500A2 (en) 2010-07-08 2012-01-12 Abbott Laboratories Monoclonal antibodies against hepatitis c virus core protein
UY33492A (es) 2010-07-09 2012-01-31 Abbott Lab Inmunoglobulinas con dominio variable dual y usos de las mismas
US20120100166A1 (en) 2010-07-15 2012-04-26 Zyngenia, Inc. Ang-2 Binding Complexes and Uses Thereof
WO2012018790A2 (en) 2010-08-03 2012-02-09 Abbott Laboratories Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
CN103298833B (zh) 2010-08-14 2015-12-16 Abbvie公司 β淀粉样蛋白结合蛋白
EP2606067B1 (en) 2010-08-19 2018-02-21 Zoetis Belgium S.A. Anti-ngf antibodies and their use
CN103260639A (zh) 2010-08-26 2013-08-21 Abbvie公司 双重可变结构域免疫球蛋白及其用途
AR083495A1 (es) 2010-10-22 2013-02-27 Esbatech Alcon Biomed Res Unit Anticuerpos estables y solubles
UA113500C2 (xx) 2010-10-29 2017-02-10 Одержані екструзією розплаву тверді дисперсії, що містять індукуючий апоптоз засіб
JP6068352B2 (ja) 2010-10-29 2017-01-25 アッヴィ・インコーポレイテッド アポトーシス誘発剤を含む固体分散体
BR112013010857A2 (pt) * 2010-11-02 2016-09-13 Abbott Laboratoires imonoglubulinas de duplo domínio variável e usos das mesmas
DK2637690T3 (da) 2010-11-11 2017-01-02 Abbvie Biotechnology Ltd Flydende ANTI-TNF-alpha-antistofformuleringer med høj koncentration
SG190399A1 (en) 2010-11-23 2013-06-28 Abbvie Inc Methods of treatment using selective bcl-2 inhibitors
BR112013012740A2 (pt) 2010-11-23 2016-09-13 Abbvie Inc sais e formas cristalinas de um agente que induz apoptose
AR084210A1 (es) * 2010-12-08 2013-05-02 Abbott Lab PROTEINAS DE UNION AL TNF-a
US20120275996A1 (en) 2010-12-21 2012-11-01 Abbott Laboratories IL-1 Binding Proteins
AU2011361720B2 (en) 2010-12-21 2017-04-27 Abbvie Inc. IL-1 -alpha and -beta bispecific dual variable domain immunoglobulins and their use
EP2490024A1 (en) 2010-12-22 2012-08-22 Proteomika, S.L. Method to optimize the treatment of patients with biological drugs
JP6478214B2 (ja) 2011-01-24 2019-03-06 アッヴィ バイオテクノロジー リミテッド オーバーモールド把持面を有する自動注射器
CA2824454C (en) 2011-01-24 2018-10-23 Abbvie Biotechnology Ltd. Removal of needle shields from syringes and automatic injection devices
AU2012210170B2 (en) 2011-01-24 2016-09-29 Elcam Medical Agricultural Cooperative Association Ltd. Injector
RU2455025C1 (ru) * 2011-02-10 2012-07-10 Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Белгородский государственный национальный исследовательский университет" (НИУ "БелГУ") Способ фармакологической коррекции ишемии конечности смесью растворов гомеопатических разведений
JP2014508715A (ja) 2011-03-07 2014-04-10 国立大学法人徳島大学 筋萎縮性側索硬化症の治療方法
US20120233834A1 (en) 2011-03-18 2012-09-20 Abbott Biotechnology Ltd. Systems, devices and methods for assembling automatic injection devices and sub-assemblies thereof
TWI588156B (zh) 2011-03-28 2017-06-21 賽諾菲公司 具有交叉結合區定向之雙重可變區類抗體結合蛋白
MX2013011263A (es) 2011-03-29 2014-03-27 Abbvie Inc Despliegue de cubierta mejorado en dispositivos de inyeccion automaticos.
EP4299093A3 (en) 2011-04-21 2024-03-13 AbbVie Inc. Wearable automatic injection device for controlled administration of therapeutic agents
WO2012149197A2 (en) 2011-04-27 2012-11-01 Abbott Laboratories Methods for controlling the galactosylation profile of recombinantly-expressed proteins
AU2012258637B2 (en) 2011-05-24 2017-07-20 Zyngenia, Inc. Multivalent and monovalent multispecific complexes and their uses
SI3575792T1 (sl) 2011-05-31 2023-04-28 Biogen Ma Inc. Metoda ocenjevanja tveganja progresivne multifokalne levkoencefalopatije
WO2012170524A1 (en) 2011-06-06 2012-12-13 Phasebio Pharmaceuticals, Inc. Use of modified vasoactive intestinal peptides in the treatment of hypertension
CA2841970A1 (en) 2011-07-13 2013-01-17 Abbvie Inc. Methods and compositions for treating asthma using anti-il-13 antibodies
GB201112429D0 (en) * 2011-07-19 2011-08-31 Glaxo Group Ltd Antigen-binding proteins with increased FcRn binding
BR112014002133A2 (pt) * 2011-08-01 2017-02-21 Avaxia Biologics Inc anticorpo policlonal bovino específico para tnf humano
TWI577696B (zh) * 2011-10-20 2017-04-11 Ｅｓｂａ科技 諾華有限責任公司 穩定的多重抗原結合抗體
RU2014120981A (ru) 2011-10-24 2015-12-10 Эббви Инк. Иммунные связывающие агенты против склеростина
IN2014CN03936A (sk) 2011-10-24 2015-09-04 Abbvie Inc
EP2771361A1 (en) 2011-10-24 2014-09-03 AbbVie Inc. Bispecific immunobinders directed against tnf and il-17
US20140017174A1 (en) 2011-11-30 2014-01-16 Raja Atreya Methods and compositions for determining responsiveness to treatment with a tnf-alpha inhibitor
US10118958B2 (en) 2011-12-14 2018-11-06 AbbVie Deutschland GmbH & Co. KG Composition and method for the diagnosis and treatment of iron-related disorders
JP6336397B2 (ja) 2011-12-14 2018-06-06 アッヴィ・ドイチュラント・ゲー・エム・ベー・ハー・ウント・コー・カー・ゲー 鉄関連障害を診断および治療するための組成物および方法
WO2013087912A1 (en) 2011-12-16 2013-06-20 Synthon Biopharmaceuticals B.V. Compounds and methods for treating inflammatory diseases
UY34556A (es) 2011-12-30 2013-07-31 Abbvie Inc Dominio variable dual de inmunoglobulinas y sus usos
BR112014015851A2 (pt) 2011-12-30 2019-09-24 Abbvie Inc proteínas de ligação específicas duplas direcionadas contra il-13 e/ou il-17
JP6271441B2 (ja) 2012-01-27 2018-01-31 アッヴィ・ドイチュラント・ゲー・エム・ベー・ハー・ウント・コー・カー・ゲー 神経突起変性に関連する疾患を診断および治療するための組成物および方法
JP2015509526A (ja) 2012-03-07 2015-03-30 カディラ ヘルスケア リミティド 医薬製剤
US9067990B2 (en) 2013-03-14 2015-06-30 Abbvie, Inc. Protein purification using displacement chromatography
US9181572B2 (en) 2012-04-20 2015-11-10 Abbvie, Inc. Methods to modulate lysine variant distribution
WO2013158279A1 (en) 2012-04-20 2013-10-24 Abbvie Inc. Protein purification methods to reduce acidic species
EP2657334B1 (en) 2012-04-26 2016-07-06 GeneFrontier Corporation Efficient method for displaying protein multimer
US9249182B2 (en) 2012-05-24 2016-02-02 Abbvie, Inc. Purification of antibodies using hydrophobic interaction chromatography
CA2875783C (en) 2012-06-06 2018-12-11 Zoetis Llc Caninized anti-ngf antibodies and methods thereof
EP2859017B1 (en) 2012-06-08 2019-02-20 Sutro Biopharma, Inc. Antibodies comprising site-specific non-natural amino acid residues, methods of their preparation and methods of their use
US9670276B2 (en) 2012-07-12 2017-06-06 Abbvie Inc. IL-1 binding proteins
SG11201501464TA (en) 2012-08-31 2015-03-30 Sutro Biopharma Inc Modified amino acids comprising an azido group
CA2883272A1 (en) 2012-09-02 2014-03-06 Abbvie Inc. Methods to control protein heterogeneity
US9512214B2 (en) 2012-09-02 2016-12-06 Abbvie, Inc. Methods to control protein heterogeneity
HUE049282T2 (hu) 2012-09-07 2020-09-28 Coherus Biosciences Inc Adalimumab stabil vizes formulációi
SI2897978T1 (sl) * 2012-09-19 2017-05-31 Abbvie Biotherapeutics Inc. Postopki za identifikacijo protiteles z zmanjšano imunogenostjo
KR20210111353A (ko) 2012-11-01 2021-09-10 애브비 인코포레이티드 항-ｖｅｇｆ／ｄｌｌ4 이원 가변 도메인 면역글로불린 및 이의 용도
AU2013337644A1 (en) 2012-11-01 2015-05-07 Abbvie Inc. Stable Dual Variable Domain Immunoglobulin protein formulations
TWI745610B (zh) 2012-11-14 2021-11-11 美商再生元醫藥公司 重組細胞表面捕捉蛋白質
US9550986B2 (en) 2012-12-21 2017-01-24 Abbvie Inc. High-throughput antibody humanization
US9856319B2 (en) 2012-12-28 2018-01-02 Abbvie Inc. Monovalent binding proteins
EP2938634A2 (en) 2012-12-28 2015-11-04 AbbVie Inc. Dual specific binding proteins having a receptor sequence
EP2948178A4 (en) 2013-01-25 2016-07-20 Thymon Llc COMPOSITIONS FOR THE SELECTIVE REDUCTION OF CIRCULATING BIOACTIVE SOLUBLE TNF AND METHODS OF TREATING A TNF MEDIATION DISEASE
EP2956480B1 (en) 2013-02-13 2019-09-04 Laboratoire Français du Fractionnement et des Biotechnologies Highly galactosylated anti-tnf-alpha antibodies and uses thereof
EP2830651A4 (en) 2013-03-12 2015-09-02 Abbvie Inc HUMAN ANTIBODIES THAT BIND TNF-ALPHA AND PREPARATION METHODS
US9194873B2 (en) 2013-03-14 2015-11-24 Abbott Laboratories HCV antigen-antibody combination assay and methods and compositions for use therein
WO2014159579A1 (en) * 2013-03-14 2014-10-02 Abbvie Inc. MUTATED ANTI-TNFα ANTIBODIES AND METHODS OF THEIR USE
US20140275082A1 (en) 2013-03-14 2014-09-18 Abbvie Inc. Apoptosis-inducing agents for the treatment of cancer and immune and autoimmune diseases
JP2016512241A (ja) 2013-03-14 2016-04-25 アボット・ラボラトリーズＡｂｂｏｔｔ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ 改良された抗体検出のためのｈｃｖｎｓ３組換え抗原およびこの突然変異体
WO2014158231A1 (en) 2013-03-14 2014-10-02 Abbvie Inc. Low acidic species compositions and methods for producing and using the same
WO2014151878A2 (en) 2013-03-14 2014-09-25 Abbvie Inc. Methods for modulating protein glycosylation profiles of recombinant protein therapeutics using monosaccharides and oligosacharides
US9017687B1 (en) 2013-10-18 2015-04-28 Abbvie, Inc. Low acidic species compositions and methods for producing and using the same using displacement chromatography
AU2014240431A1 (en) 2013-03-14 2015-08-27 Abbvie Inc. Low acidic species compositions and methods for producing the same using displacement chromatography
CN113549148A (zh) 2013-03-14 2021-10-26 雅培制药有限公司 Hcv核心脂质结合结构域单克隆抗体
US9469686B2 (en) 2013-03-15 2016-10-18 Abbott Laboratories Anti-GP73 monoclonal antibodies and methods of obtaining the same
EP2968541A4 (en) 2013-03-15 2017-02-08 Zyngenia, Inc. Multivalent and monovalent multispecific complexes and their uses
AU2014227664A1 (en) 2013-03-15 2015-09-24 Abbvie Inc. Dual specific binding proteins directed against TNFalpha
MX2015013166A (es) 2013-03-15 2015-12-11 Abbvie Inc Proteinas de union especificas duales dirigidas contra il-1 beta y/o il-17.
KR101671955B1 (ko) * 2013-05-22 2016-11-07 메타볼랩(주) 항 ＴＮＦ-α/ＣＸＣＬ10 이중 타겟 항체 및 그의 용도
JP6581572B2 (ja) 2013-06-07 2019-09-25 デューク ユニバーシティ 補体因子ｈ阻害薬
WO2015006555A2 (en) 2013-07-10 2015-01-15 Sutro Biopharma, Inc. Antibodies comprising multiple site-specific non-natural amino acid residues, methods of their preparation and methods of their use
WO2015017683A1 (en) * 2013-07-31 2015-02-05 Malast Mary Antimicrobial compositions and methods of use
JP6546178B2 (ja) 2013-09-13 2019-07-17 ジェネンテック， インコーポレイテッド 細胞株中の宿主細胞タンパク質及び組換えポリペプチド産物を検出及び定量化するための組成物並びに方法
KR102373930B1 (ko) 2013-09-13 2022-03-11 제넨테크, 인크. 정제된 재조합 폴리펩티드를 포함하는 방법 및 조성물
US9598667B2 (en) 2013-10-04 2017-03-21 Abbvie Inc. Use of metal ions for modulation of protein glycosylation profiles of recombinant proteins
CA2926644A1 (en) 2013-10-06 2015-04-09 Abbvie Inc. Dual specific binding proteins directed against immune cell receptors and autoantigens
US9840493B2 (en) 2013-10-11 2017-12-12 Sutro Biopharma, Inc. Modified amino acids comprising tetrazine functional groups, methods of preparation, and methods of their use
WO2015057910A1 (en) 2013-10-16 2015-04-23 Oncobiologics, Inc. Buffer formulations for enhanced antibody stability
US9181337B2 (en) 2013-10-18 2015-11-10 Abbvie, Inc. Modulated lysine variant species compositions and methods for producing and using the same
US8946395B1 (en) 2013-10-18 2015-02-03 Abbvie Inc. Purification of proteins using hydrophobic interaction chromatography
US9085618B2 (en) 2013-10-18 2015-07-21 Abbvie, Inc. Low acidic species compositions and methods for producing and using the same
US20150139988A1 (en) 2013-11-15 2015-05-21 Abbvie, Inc. Glycoengineered binding protein compositions
JP2016540761A (ja) 2013-12-02 2016-12-28 アッヴィ・インコーポレイテッド 変形性関節症を治療するための組成物及び方法
CN103965357B (zh) 2013-12-31 2016-08-17 嘉和生物药业有限公司 一种抗人rankl抗体
EP3110976B1 (en) 2014-02-27 2020-05-13 Biogen MA Inc. Method of assessing risk of pml
EP3116891B1 (en) 2014-03-10 2020-02-12 Richter Gedeon Nyrt. Immunoglobulin purification using pre-cleaning steps
IL295906A (en) 2014-03-21 2022-10-01 Abbvie Inc Antibodies against egfr and drug antibody conjugates
AR099625A1 (es) 2014-03-21 2016-08-03 Lilly Co Eli Anticuerpos de il-21
WO2015151115A1 (en) * 2014-04-02 2015-10-08 Intas Pharmaceuticals Limited Liquid pharmaceutical composition of adalimumab
CA2947982C (en) 2014-05-08 2022-11-29 Phasebio Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for treating cystic fibrosis
ES2607489T3 (es) 2014-05-23 2017-03-31 Ares Trading S.A. Composición farmacéutica líquida
HUE029849T2 (en) 2014-05-23 2017-04-28 Ares Trading Sa Liquid pharmaceutical composition
EP2946766B1 (en) 2014-05-23 2016-03-02 Ares Trading S.A. Liquid pharmaceutical composition
FR3022462B1 (fr) * 2014-06-18 2018-04-27 Laboratoire Francais Du Fractionnement Et Des Biotechnologies Composition orale d'anticorps anti-tnfalpha
US20170183376A1 (en) 2014-06-24 2017-06-29 Insight Biopharmaceuticals Ltd. Methods of purifying antibodies
US10183994B2 (en) * 2014-06-30 2019-01-22 Merck Patent Gmbh Anti-TNFα antibodies with pH-dependent antigen binding for improved target clearence
WO2016004197A1 (en) 2014-07-03 2016-01-07 Abbvie Inc. Methods for modulating protein glycosylation profiles of recombinant protein therapeutics using cobalt
WO2016007764A1 (en) 2014-07-09 2016-01-14 Abbvie Inc. Methods for modulating the glycosylation profile of recombinant proteins using non-commonly used sugars
EP4379725A2 (en) 2014-07-11 2024-06-05 Iogenetics, LLC. Immune recognition motifs
TWI711629B (zh) * 2014-09-03 2020-12-01 德商包林格因蓋爾漢國際股份有限公司 靶向IL-23A與TNF-α之化合物及其用途
US10435464B1 (en) 2014-09-05 2019-10-08 Coherus Biosciences, Inc. Methods for making recombinant proteins
HUP1400510A1 (hu) 2014-10-28 2016-05-30 Richter Gedeon Nyrt Gyógyászati TNFalfa ellenes antitest készítmény
WO2016094881A2 (en) 2014-12-11 2016-06-16 Abbvie Inc. Lrp-8 binding proteins
EP3237000A1 (en) 2014-12-23 2017-11-01 Pfizer Inc Stable aqueous antibody formulation for anti tnf alpha antibodies
EP3085709B1 (en) 2014-12-28 2019-08-21 Genor Biopharma Co., Ltd Humanized anti-human rankl antibody, pharmaceutical composition and use thereof
WO2016118707A1 (en) 2015-01-21 2016-07-28 Oncobiologics, Inc. Modulation of charge variants in a monoclonal antibody composition
EP3053572A1 (en) 2015-02-06 2016-08-10 Ares Trading S.A. Liquid pharmaceutical composition
CN114652817A (zh) 2015-02-09 2022-06-24 费斯生物制药公司 用于治疗肌肉疾病和病症的方法和组合物
CN105777905B (zh) * 2015-03-24 2019-06-25 广东东阳光药业有限公司 一种全人源抗TNF-α单克隆抗体及其应用
EP3078675A1 (en) 2015-04-10 2016-10-12 Ares Trading S.A. Induction dosing regimen for the treatment of tnf alpha mediated disorders
WO2016179469A1 (en) * 2015-05-07 2016-11-10 Abbvie Inc. Methods and compositions for diagnosing and treating inflammatory bowel disease
KR102661078B1 (ko) 2015-05-29 2024-05-23 애브비 인코포레이티드 항-ｃｄ40 항체 및 그의 용도
TW201710286A (zh) 2015-06-15 2017-03-16 艾伯維有限公司 抗ｖｅｇｆ、ｐｄｇｆ及／或其受體之結合蛋白
HU231463B1 (hu) 2015-08-04 2024-01-28 Richter Gedeon Nyrt. Módszer rekombináns proteinek galaktóz tartalmának növelésére
US11583584B1 (en) 2015-10-28 2023-02-21 Coherus Biosciences, Inc. Stable protein compositions and methods of their use
US11229702B1 (en) 2015-10-28 2022-01-25 Coherus Biosciences, Inc. High concentration formulations of adalimumab
GB201522394D0 (en) 2015-12-18 2016-02-03 Ucb Biopharma Sprl Antibodies
WO2017136433A1 (en) 2016-02-03 2017-08-10 Oncobiologics, Inc. Buffer formulations for enhanced antibody stability
US10465003B2 (en) 2016-02-05 2019-11-05 Janssen Biotech, Inc. Anti-TNF antibodies, compositions, methods and use for the treatment or prevention of type 1 diabetes
SG11201808041UA (en) * 2016-03-17 2018-10-30 Numab Innovation Ag ANTI-TNFa-ANTIBODIES AND FUNCTIONAL FRAGMENTS THEREOF
RS61374B1 (sr) * 2016-03-17 2021-02-26 Tillotts Pharma Ag Anti-tnf alfa-antitela i njihovi funkcionalni fragmenti
JP2019513737A (ja) 2016-04-08 2019-05-30 ギリアード サイエンシーズ， インコーポレイテッド がん、炎症性疾患および自己免疫疾患を処置するための組成物および方法
US11071782B2 (en) 2016-04-20 2021-07-27 Coherus Biosciences, Inc. Method of filling a container with no headspace
LT3448391T (lt) 2016-04-27 2024-06-25 AbbVie Manufacturing Management Unlimited Company Ligų, kurių atveju il-13 aktyvumas yra žalingas, gydymo būdas, panaudojant anti-il-13 antikūnus
KR20220119529A (ko) 2016-06-02 2022-08-29 애브비 인코포레이티드 글루코코르티코이드 수용체 작용제 및 이의 면역접합체
TWI762487B (zh) 2016-06-08 2022-05-01 美商艾伯維有限公司 抗-b7-h3抗體及抗體藥物結合物
US20190153108A1 (en) 2016-06-08 2019-05-23 Abbvie Inc. Anti-egfr antibody drug conjugates
JP2019521114A (ja) 2016-06-08 2019-07-25 アッヴィ・インコーポレイテッド 抗ｅｇｆｒ抗体薬物コンジュゲート
CA3027033A1 (en) 2016-06-08 2017-12-14 Abbvie Inc. Anti-cd98 antibodies and antibody drug conjugates
CA3027044A1 (en) 2016-06-08 2017-12-14 Abbvie Inc. Anti-b7-h3 antibodies and antibody drug conjugates
CN109641962A (zh) 2016-06-08 2019-04-16 艾伯维公司 抗b7-h3抗体和抗体药物偶联物
WO2017218698A1 (en) 2016-06-15 2017-12-21 Sutro Biopharma, Inc. Antibodies with engineered ch2 domains, compositions thereof and methods of using the same
WO2018018613A1 (zh) 2016-07-29 2018-02-01 广东东阳光药业有限公司 一种提高抗体纯度的细胞培养基和培养方法
US10751324B2 (en) 2016-09-02 2020-08-25 The University Of Chicago Treatment of TNF- alpha cytotoxicity
EP3512875A2 (en) * 2016-09-15 2019-07-24 Quadrucept Bio Limited Multimers, tetramers&octamers
EP3519825A1 (en) 2016-10-03 2019-08-07 Abbott Laboratories Improved methods of assessing gfap status in patient samples
WO2018075408A1 (en) 2016-10-17 2018-04-26 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Methods of treating acute myeloid leukemia (aml) with combinations of anti-cd200 antibodies, cytarabine, and daunorubicin
MX2019004580A (es) 2016-10-21 2019-08-12 Amgen Inc Formulaciones farmaceuticas y metodos para prepararlas.
WO2018102594A1 (en) 2016-12-01 2018-06-07 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Methods of treating solid tumors with anti-cd200 antibodies
US20180193003A1 (en) 2016-12-07 2018-07-12 Progenity Inc. Gastrointestinal tract detection methods, devices and systems
EP3554342A1 (en) 2016-12-14 2019-10-23 Progenity, Inc. Treatment of a disease of the gastrointestinal tract with a tnf inhibitor
WO2018112334A1 (en) * 2016-12-16 2018-06-21 Bluefin Biomedicine, Inc. Anti-cub domain-containing protein 1 (cdcp1) antibodies, antibody drug conjugates, and methods of use thereof
JOP20190162A1 (ar) 2016-12-30 2019-06-27 Biocad Joint Stock Co تركيبة صيدلانية مائية من جسم مضاد لـ tnf? أحادي النسيلة معاود الارتباط الجيني
CA3049857A1 (en) 2017-01-11 2018-07-19 Celltrion Inc. Stable liquid formulation
TWI787230B (zh) 2017-01-20 2022-12-21 法商賽諾菲公司 抗ＴＧＦ-β抗體及其用途
AR110755A1 (es) 2017-01-20 2019-05-02 Genzyme Corp Anticuerpos dirigidos a hueso
MX2019008989A (es) 2017-01-30 2019-10-09 Janssen Biotech Inc Anticuerpos anti-tnf, composiciones y metodos para el tratamiento de la artritis psoriasica activa.
AU2017398101A1 (en) 2017-02-07 2019-08-01 Janssen Biotech, Inc. Anti-TNF antibodies, compositions, and methods for the treatment of active Ankylosing Spondylitis
US11608357B2 (en) 2018-08-28 2023-03-21 Arecor Limited Stabilized antibody protein solutions
EP3372241A1 (en) 2017-03-06 2018-09-12 Ares Trading S.A. Liquid pharmaceutical composition
EP3372242A1 (en) 2017-03-06 2018-09-12 Ares Trading S.A. Liquid pharmaceutical composition
WO2018175942A1 (en) 2017-03-23 2018-09-27 Abbott Laboratories Methods for aiding in the diagnosis and determination of the extent of traumatic brain injury in a human subject using the early biomarker ubiquitin carboxy-terminal hydrolase l1
WO2018178973A1 (en) 2017-03-26 2018-10-04 Mapi Pharma Ltd. Glatiramer depot systems for treating progressive forms of multiple sclerosis
WO2018184692A1 (en) 2017-04-07 2018-10-11 Ares Trading S.A. Liquid pharmaceutical composition
CN110546513A (zh) 2017-04-15 2019-12-06 雅培实验室 使用早期生物标记物帮助超急性诊断和确定人类受试者中的创伤性脑损伤的方法
US10865238B1 (en) 2017-05-05 2020-12-15 Duke University Complement factor H antibodies
CN110651190A (zh) 2017-05-25 2020-01-03 雅培实验室 用早期生物标记物帮助确定是否对已遭受或可能已遭受头部损伤的人受试者执行成像的方法
CN110720041B (zh) 2017-05-30 2024-04-26 雅培实验室 用心肌肌钙蛋白i和早期生物标记物帮助诊断和评价人受试者中轻度创伤性脑损伤的方法
EP3649474A1 (en) 2017-07-03 2020-05-13 Abbott Laboratories Improved methods for measuring ubiquitin carboxy-terminal hydrolase l1 levels in blood
WO2019067499A1 (en) 2017-09-27 2019-04-04 Alexion Pharmaceuticals, Inc. BIOMARKER SIGNATURE FOR PREDICTING A TUMOR RESPONSE TO ANTI-CD200 THERAPY
ES2877659T3 (es) 2017-12-01 2021-11-17 Abbvie Inc Agonista del receptor de glucocorticoides y sus inmunoconjugados
CN109879962B (zh) * 2017-12-06 2022-10-11 北京科立思维生物科技有限公司 抗tnf单链抗体、抗il-6单链抗体及其融合蛋白及其应用
JP7379165B2 (ja) 2017-12-09 2023-11-14 アボット・ラボラトリーズ Ｇｆａｐとｕｃｈ－ｌ１との組合せを使用する、ヒト対象における外傷性脳損傷を診断及び査定する一助となるための方法
JP7344801B2 (ja) 2017-12-09 2023-09-14 アボット・ラボラトリーズ グリア原線維性酸性タンパク質（ｇｆａｐ）及び／又はユビキチンカルボキシ末端ヒドロラーゼｌ１（ｕｃｈ－ｌ１）を使用する、整形外科損傷を負っており、軽度外傷性脳損傷（ｔｂｉ）などの頭部への損傷を負ったか又は負った可能性がある対象についての診断及び査定の一助となるための方法
WO2019126536A1 (en) 2017-12-20 2019-06-27 Alexion Pharmaceuticals Inc. Humanized anti-cd200 antibodies and uses thereof
WO2019126133A1 (en) 2017-12-20 2019-06-27 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Liquid formulations of anti-cd200 antibodies
CA3093772C (en) 2018-03-12 2024-04-16 Zoetis Services Llc Anti-ngf antibodies and methods thereof
US11913951B2 (en) 2018-03-26 2024-02-27 Alexion Pharmaceuticals, Inc. High throughput method for measuring the protease activity of complement C3 convertase
US20210238289A1 (en) 2018-06-04 2021-08-05 Biogen Ma Inc. Anti-vla-4 antibodies having reduced effector function
EP3810095A1 (en) 2018-06-20 2021-04-28 Progenity, Inc. Treatment of a disease of the gastrointestinal tract with a tnf inhibitor
JP2021529780A (ja) 2018-07-03 2021-11-04 ノバルティス アーゲー Ｎｌｒｐ３アンタゴニストを使用するｔｎｆ阻害剤に対して抵抗性の対象のための治療の方法又は治療を選択する方法
CN113329769A (zh) 2018-10-11 2021-08-31 斯克里普斯研究学院 具有反应性精氨酸的抗体化合物及相关的抗体药物缀合物
WO2020086728A1 (en) 2018-10-24 2020-04-30 Novartis Inflammasome Research, Inc. Compounds and compositions for treating conditions associated with nlrp activity
EP3878870A4 (en) * 2018-11-05 2022-08-03 Beijing Hanmi Pharmaceutical Co., Ltd. ANTI-TNFA/ANTI-IL-17A NATURAL ANTIBODY STRUCTURE-LIKE HETERODIMER FORM OF A BISPECIFIC ANTIBODY AND METHODS FOR ITS PRODUCTION
HUP1800376A2 (hu) 2018-11-07 2020-05-28 Richter Gedeon Nyrt Sejttenyészetben elõállított rekombináns glikoprotein glikozilációs-mintázatának megváltoztatására szolgáló módszer
JP2022506891A (ja) 2018-11-13 2022-01-17 ノバルティス アーゲー Ｎｌｒｐ活性に関連する状態を処置するための化合物及び組成物
CN113166081A (zh) 2018-11-13 2021-07-23 诺华股份有限公司 用于治疗与nlrp活性相关的病症的化合物和组合物
US20220249814A1 (en) 2018-11-19 2022-08-11 Progenity, Inc. Methods and devices for treating a disease with biotherapeutics
US20220098310A1 (en) 2018-12-06 2022-03-31 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Anti-alk2 antibodies and uses thereof
CA3124730A1 (en) 2018-12-25 2020-07-02 Institute Of Basic Medical Sciences Chinese Academy Of Medical Sciences Small rna medicament for prevention and treatment of inflammation-related diseases and combinations thereof
JP2022533287A (ja) 2019-01-22 2022-07-22 ノバルティス アーゲー Ｎｌｒｐ活性に関連する状態を処置するための化合物及び組成物
HU231498B1 (hu) 2019-04-04 2024-05-28 Richter Gedeon Nyrt Immunglobulinok affinitás kromatográfiájának fejlesztése kötést megelőző flokkulálás alkalmazásával
KR102323342B1 (ko) * 2019-04-26 2021-11-08 주식회사 와이바이오로직스 IL-17A 및 TNF-α에 특이적으로 결합하는 이중표적 항체
BR112021023295A2 (pt) 2019-05-23 2022-02-08 Janssen Biotech Inc Método de tratamento de doença inflamatória intestinal com uma terapia de combinação de anticorpos para il-23 e tnf-alfa
WO2021002887A1 (en) 2019-07-02 2021-01-07 Novartis Inflammasome Research, Inc. Gut-targeted nlrp3 antagonists and their use in therapy
CA3143478A1 (en) * 2019-07-09 2021-01-14 Tomer Hertz Antibodies with reduced immunogenicity
EP3870261B1 (en) 2019-12-13 2024-01-31 Biora Therapeutics, Inc. Ingestible device for delivery of therapeutic agent to the gastrointestinal tract
FR3104582A1 (fr) 2019-12-17 2021-06-18 Commissariat A L'energie Atomique Et Aux Energies Alternatives Variants de l’adalimumab au potentiel immunogène réduit
EP4100435A1 (en) 2020-02-05 2022-12-14 Larimar Therapeutics, Inc. Tat peptide binding proteins and uses thereof
WO2021178597A1 (en) 2020-03-03 2021-09-10 Sutro Biopharma, Inc. Antibodies comprising site-specific glutamine tags, methods of their preparation and methods of their use
CA3175523A1 (en) 2020-04-13 2021-10-21 Antti Virtanen Methods, complexes and kits for detecting or determining an amount of a .beta.-coronavirus antibody in a sample
KR20230042301A (ko) 2020-08-04 2023-03-28 애벗트 라보라토리이즈 샘플에서 sars-cov-2 단백질을 검출하기 위한 개선된 방법 및 키트
CN111944052B (zh) * 2020-08-26 2022-02-11 中国药科大学 抗TNF-α/PD-1双特异性抗体及其应用
CN112010970B (zh) * 2020-10-30 2021-01-12 迈威(上海)生物科技股份有限公司 一种去除重组表达抗体聚体和降解产物的方法
US20220170948A1 (en) 2020-12-01 2022-06-02 Abbott Laboratories Use of one or more biomarkers to determine traumatic brain injury (tbi) in a human subject having received a head computerized tomography scan that is negative for a tbi
WO2023102384A1 (en) 2021-11-30 2023-06-08 Abbott Laboratories Use of one or more biomarkers to determine traumatic brain injury (tbi) in a subject having received a head computerized tomography scan that is negative for a tbi
US11672929B2 (en) 2020-12-02 2023-06-13 Breathe Restore, Inc. Product delivery devices and methods
JP2023554200A (ja) 2020-12-09 2023-12-26 エイチケー イノ．エヌ コーポレーション 抗ＯＸ４０Ｌ抗体、抗ＯＸ４０Ｌ及び抗ＴＮＦαの二重特異性抗体、並びにこれらの用途
AU2021401815A1 (en) * 2020-12-18 2023-07-06 Elanco Us Inc. Tnf alpha and ngf antibodies for veterinary use
WO2022147147A1 (en) 2020-12-30 2022-07-07 Abbott Laboratories Methods for determining sars-cov-2 antigen and anti-sars-cov-2 antibody in a sample
UY39610A (es) 2021-01-20 2022-08-31 Abbvie Inc Conjugados anticuerpo-fármaco anti-egfr
CA3207134A1 (en) * 2021-02-19 2022-08-25 Jeffrey A. Ledbetter Dnase fusion polypeptides and related compositions and methods
CA3216585A1 (en) 2021-04-27 2022-11-03 Nathaniel SILVER Non-viral dna vectors expressing therapeutic antibodies and uses thereof
WO2022232286A1 (en) 2021-04-27 2022-11-03 Generation Bio Co. Non-viral dna vectors expressing anti-coronavirus antibodies and uses thereof
US20220381796A1 (en) 2021-05-18 2022-12-01 Abbott Laboratories Methods of evaluating brain injury in a pediatric subject
US20240118279A1 (en) 2021-06-14 2024-04-11 Abbott Laboratories Methods of diagnosing or aiding in diagnosis of brain injury caused by acoustic energy, electromagnetic energy, an over pressurization wave, and/or blast wind
US20240210419A1 (en) * 2021-06-22 2024-06-27 University Of Virginia Patent Foundation Compositions and methods for detecting and regulating fibronectin-integrin interactions and signaling
CN117500816A (zh) 2021-08-26 2024-02-02 映恩生物制药（苏州）有限公司 一种甾体化合物及其缀合物
AU2022339759A1 (en) 2021-08-31 2024-03-07 Abbott Laboratories Methods and systems of diagnosing brain injury
AU2022354059A1 (en) 2021-09-30 2024-03-28 Abbott Laboratories Methods and systems of diagnosing brain injury
CA3240822A1 (en) 2021-12-17 2023-06-22 Tony Lee Systems and methods for determining uch-l1, gfap, and other biomarkers in blood samples
WO2023129942A1 (en) 2021-12-28 2023-07-06 Abbott Laboratories Use of biomarkers to determine sub-acute traumatic brain injury (tbi) in a subject having received a head computerized tomography (ct) scan that is negative for a tbi or no head ct scan
WO2023150652A1 (en) 2022-02-04 2023-08-10 Abbott Laboratories Lateral flow methods, assays, and devices for detecting the presence or measuring the amount of ubiquitin carboxy-terminal hydrolase l1 and/or glial fibrillary acidic protein in a sample
WO2023177655A1 (en) 2022-03-14 2023-09-21 Generation Bio Co. Heterologous prime boost vaccine compositions and methods of use
WO2024006681A1 (en) * 2022-06-28 2024-01-04 Adafre Biosciences, Llc Anti-tnf-αlpha antibodies and compositions
WO2024006876A1 (en) 2022-06-29 2024-01-04 Abbott Laboratories Magnetic point-of-care systems and assays for determining gfap in biological samples
CN116903738A (zh) * 2022-08-02 2023-10-20 北京绿竹生物技术股份有限公司 一种低甘露糖型抗人肿瘤坏死因子-α单抗及其用途
WO2024054934A1 (en) 2022-09-07 2024-03-14 Mdx Management Llc Shp-1 inhibitors for treating cancer
WO2024059708A1 (en) 2022-09-15 2024-03-21 Abbott Laboratories Biomarkers and methods for differentiating between mild and supermild traumatic brain injury
WO2024097804A1 (en) 2022-11-02 2024-05-10 Mdx Management Llc Combination of a tyrosine kinase inhibitor and a pro-inflammatory agent for treating cancer

Family Cites Families (114)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4680276A (en) * 1977-05-25 1987-07-14 Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale Metal polypeptides
EP0609722A1 (en) 1981-09-08 1994-08-10 The Rockefeller University An in vitro method for detecting the presence of invasive stimuli in mammals
US5672347A (en) 1984-07-05 1997-09-30 Genentech, Inc. Tumor necrosis factor antagonists and their use
IL73883A (en) 1984-12-20 1990-12-23 Yeda Res & Dev Monoclonal antibodies against tnf-alpha,hybridomas producing them and method for the purification of tnf-alpha
US4661016A (en) * 1985-04-11 1987-04-28 Mobil Oil Corporation Subsea flowline connector
ATE114673T1 (de) 1985-08-16 1994-12-15 Univ Rockefeller Modulator der anabolischen aktivität und seine verwendungen.
DE3631229A1 (de) 1986-09-13 1988-03-24 Basf Ag Monoklonale antikoerper gegen humanen tumornekrosefaktor (tnf) und deren verwendung
GB8630273D0 (en) * 1986-12-18 1987-01-28 Til Medical Ltd Pharmaceutical delivery systems
AU626572B2 (en) 1988-07-18 1992-08-06 Chiron Corporation Monoclonal antibodies reactive with cachectin
GB8823869D0 (en) * 1988-10-12 1988-11-16 Medical Res Council Production of antibodies
US4940723A (en) * 1988-10-20 1990-07-10 University Of North Carolina, Chapel Hill Use of bis-(5-amidino-2-benzimidazolyl) methane (BABIM) to treat arthritis
EP0366043B1 (en) 1988-10-24 1994-03-30 Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd. Monoclonal antibody
US5530101A (en) * 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
IE63847B1 (en) * 1989-05-05 1995-06-14 Res Dev Foundation A novel antibody delivery system for biological response modifiers
DE3918082A1 (de) * 1989-06-02 1991-01-24 Max Planck Gesellschaft Mittel gegen autoimmunerkrankungen
EP0486526B2 (en) 1989-08-07 2001-03-07 Peptech Limited Tumour necrosis factor binding ligands
US5959087A (en) * 1989-08-07 1999-09-28 Peptide Technology, Ltd. Tumour necrosis factor binding ligands
US6451983B2 (en) 1989-08-07 2002-09-17 Peptech Limited Tumor necrosis factor antibodies
GB8928874D0 (en) 1989-12-21 1990-02-28 Celltech Ltd Humanised antibodies
US5859205A (en) 1989-12-21 1999-01-12 Celltech Limited Humanised antibodies
US6075181A (en) 1990-01-12 2000-06-13 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US6673986B1 (en) * 1990-01-12 2004-01-06 Abgenix, Inc. Generation of xenogeneic antibodies
US6150584A (en) * 1990-01-12 2000-11-21 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
GB9014932D0 (en) 1990-07-05 1990-08-22 Celltech Ltd Recombinant dna product and method
US6255458B1 (en) * 1990-08-29 2001-07-03 Genpharm International High affinity human antibodies and human antibodies against digoxin
US5633425A (en) * 1990-08-29 1997-05-27 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US7084260B1 (en) * 1996-10-10 2006-08-01 Genpharm International, Inc. High affinity human antibodies and human antibodies against human antigens
DE69133476T2 (de) * 1990-08-29 2006-01-05 GenPharm International, Inc., Palo Alto Transgene Mäuse fähig zur Produktion heterologer Antikörper
US5545806A (en) * 1990-08-29 1996-08-13 Genpharm International, Inc. Ransgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5789650A (en) * 1990-08-29 1998-08-04 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5770429A (en) * 1990-08-29 1998-06-23 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5661016A (en) 1990-08-29 1997-08-26 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes
US5625126A (en) * 1990-08-29 1997-04-29 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US6300129B1 (en) * 1990-08-29 2001-10-09 Genpharm International Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
GB9022547D0 (en) 1990-10-17 1990-11-28 Wellcome Found Purified immunoglobulin
GB2279077B (en) * 1990-12-21 1995-06-14 Celltech Ltd Therapeutic compositions comprising recombinant antibodies specific for the TNFalpha
GB9109645D0 (en) 1991-05-03 1991-06-26 Celltech Ltd Recombinant antibodies
US5994510A (en) 1990-12-21 1999-11-30 Celltech Therapeutics Limited Recombinant antibodies specific for TNFα
GB9028123D0 (en) 1990-12-28 1991-02-13 Erba Carlo Spa Monoclonal antibodies against human tumor necrosis factor alpha
US7192584B2 (en) * 1991-03-18 2007-03-20 Centocor, Inc. Methods of treating psoriasis with anti-TNF antibodies
US20060246073A1 (en) 1991-03-18 2006-11-02 Knight David M Anti-TNF antibodies and peptides of human tumor necrosis factor
US5656272A (en) * 1991-03-18 1997-08-12 New York University Medical Center Methods of treating TNF-α-mediated Crohn's disease using chimeric anti-TNF antibodies
US20040120952A1 (en) 2000-08-07 2004-06-24 Centocor, Inc Anti-TNF antibodies and peptides of human tumor necrosis factor
US20070298040A1 (en) 1991-03-18 2007-12-27 Centocor, Inc. Methods of treating seronegative arthropathy with anti-TNF antibodies
CA2736076A1 (en) * 1991-03-18 1992-09-19 New York University Monoclonal and chimeric antibodies specific for human tumor necrosis factor
US6277969B1 (en) 1991-03-18 2001-08-21 New York University Anti-TNF antibodies and peptides of human tumor necrosis factor
US5698195A (en) * 1991-03-18 1997-12-16 New York University Medical Center Methods of treating rheumatoid arthritis using chimeric anti-TNF antibodies
US5328985A (en) * 1991-07-12 1994-07-12 The Regents Of The University Of California Recombinant streptavidin-protein chimeras useful for conjugation of molecules in the immune system
CA2119930C (en) 1991-09-23 2002-10-01 Hendricus R. J. M. Hoogenboom Production of chimeric antibodies - a combinatorial approach
US5869619A (en) * 1991-12-13 1999-02-09 Xoma Corporation Modified antibody variable domains
US6270766B1 (en) 1992-10-08 2001-08-07 The Kennedy Institute Of Rheumatology Anti-TNF antibodies and methotrexate in the treatment of arthritis and crohn's disease
EP0663836B1 (en) * 1992-10-08 1997-07-09 The Kennedy Institute Of Rheumatology Treatment of autoimmune and inflammatory disorders
DE122009000074I1 (de) 1993-03-05 2011-12-01 Bayer Healthcare Ag Humane monoklonale anti-TNF alpha Antikorper.
JPH08510642A (ja) 1993-05-12 1996-11-12 ゾマ コーポレイション ゲロニンおよび抗体から成る免疫毒素
RU2139092C1 (ru) 1993-06-03 1999-10-10 Терапьютик Антибодиз Инк. Фрагменты антител в терапии
US6261558B1 (en) 1993-10-19 2001-07-17 The Scripps Research Institute Synthetic human neutralizing monoclonal antibodies to human immunodeficiency virus
EP0659766A1 (en) 1993-11-23 1995-06-28 Schering-Plough Human monoclonal antibodies against human cytokines and methods of making and using such antibodies
JPH09509835A (ja) 1994-03-04 1997-10-07 メルク エンド カンパニー インコーポレーテッド アラニン走査型突然変異誘発によるｉｎ ｖｉｔｒｏ抗体アフィニティー成熟
JPH07289288A (ja) * 1994-04-27 1995-11-07 L T T Kenkyusho:Kk 抗リウマチ薬の効果評価方法
NZ288997A (en) 1994-06-24 1999-01-28 Immunex Corp Controlled release pharmaceutical formulation comprising polypeptide encapsulated in alginate
US5561053A (en) 1994-08-05 1996-10-01 Genentech, Inc. Method for selecting high-expressing host cells
GB9416721D0 (en) * 1994-08-18 1994-10-12 Short Brothers Plc A bias yarn assembly forming device
US6113898A (en) 1995-06-07 2000-09-05 Idec Pharmaceuticals Corporation Human B7.1-specific primatized antibodies and transfectomas expressing said antibodies
US6090382A (en) 1996-02-09 2000-07-18 Basf Aktiengesellschaft Human antibodies that bind human TNFα
DE122004000004I1 (de) * 1996-02-09 2004-08-12 Abott Biotechnology Ltd Humane Antikörper welche an Humanen TNFalpha binden.
AU3633000A (en) * 1999-03-26 2000-10-16 Human Genome Sciences, Inc. Neutrokine-alpha binding proteins and methods based thereon
US20050249735A1 (en) 2000-08-07 2005-11-10 Centocor, Inc. Methods of treating ankylosing spondylitis using anti-TNF antibodies and peptides of human tumor necrosis factor
UA81743C2 (uk) 2000-08-07 2008-02-11 Центокор, Инк. МОНОКЛОНАЛЬНЕ АНТИТІЛО ЛЮДИНИ, ЩО СПЕЦИФІЧНО ЗВ'ЯЗУЄТЬСЯ З ФАКТОРОМ НЕКРОЗУ ПУХЛИН АЛЬФА (ФНПα), ФАРМАЦЕВТИЧНА КОМПОЗИЦІЯ, ЩО ЙОГО МІСТИТЬ, ТА СПОСІБ ЛІКУВАННЯ РЕВМАТОЇДНОГО АРТРИТУ
US20060018907A1 (en) 2000-08-07 2006-01-26 Centocor, Inc. Anti-TNF antibodies and peptides of human tumor necrosis factor
US20030012786A1 (en) 2001-05-25 2003-01-16 Teoh Leah S. Use of anti-TNF antibodies as drugs in treating septic disorders of anemic patients
CA2385745C (en) * 2001-06-08 2015-02-17 Abbott Laboratories (Bermuda) Ltd. Methods of administering anti-tnf.alpha. antibodies
US20030161828A1 (en) 2002-02-19 2003-08-28 Abbott Gmbh & Co. Kg Use of TNF antagonists as drugs for the treatment of patients with an inflammatory reaction and without suffering from total organ failure
US20040009172A1 (en) 2002-04-26 2004-01-15 Steven Fischkoff Use of anti-TNFalpha antibodies and another drug
US20030206898A1 (en) 2002-04-26 2003-11-06 Steven Fischkoff Use of anti-TNFalpha antibodies and another drug
US20090280065A1 (en) * 2006-04-10 2009-11-12 Willian Mary K Uses and Compositions for Treatment of Psoriasis
CN102764436A (zh) 2002-07-19 2012-11-07 艾博特生物技术有限公司 TNF α相关疾病的治疗
US20040033228A1 (en) 2002-08-16 2004-02-19 Hans-Juergen Krause Formulation of human antibodies for treating TNF-alpha associated disorders
US20040054414A1 (en) * 2002-09-18 2004-03-18 Trieu Hai H. Collagen-based materials and methods for augmenting intervertebral discs
MY150740A (en) 2002-10-24 2014-02-28 Abbvie Biotechnology Ltd Low dose methods for treating disorders in which tnf? activity is detrimental
TWI556829B (zh) 2004-04-09 2016-11-11 艾伯維生物技術有限責任公司 用於治療ＴＮＦα相關失調症之多重可變劑量療法
WO2006041970A2 (en) 2004-10-08 2006-04-20 Abbott Biotechnology Ltd. Treatment of respiratory syncytial virus (rsv) infection
TWI399384B (zh) * 2005-05-16 2013-06-21 Abbott Biotech Ltd ＴＮＦα抑制劑於治療侵蝕型多發性關節炎之用途
US20070041905A1 (en) 2005-08-19 2007-02-22 Hoffman Rebecca S Method of treating depression using a TNF-alpha antibody
CN101663048A (zh) * 2005-11-01 2010-03-03 艾博特生物技术有限公司 使用生物标志物诊断强直性脊柱炎的方法和组合物
KR20150064254A (ko) * 2006-04-05 2015-06-10 애브비 바이오테크놀로지 리미티드 항체 정제
US20080118496A1 (en) 2006-04-10 2008-05-22 Medich John R Uses and compositions for treatment of juvenile rheumatoid arthritis
US9605064B2 (en) * 2006-04-10 2017-03-28 Abbvie Biotechnology Ltd Methods and compositions for treatment of skin disorders
EP2666472A3 (en) * 2006-04-10 2014-04-02 Abbott Biotechnology Ltd Uses and compositions for treatment of psoriatic arthritis
US20090317399A1 (en) * 2006-04-10 2009-12-24 Pollack Paul F Uses and compositions for treatment of CROHN'S disease
EP2010214A4 (en) * 2006-04-10 2010-06-16 Abbott Biotech Ltd USES AND COMPOSITIONS FOR THE TREATMENT OF RHEUMATOID ARTHRITIS
EP2012586A4 (en) * 2006-04-10 2010-08-18 Abbott Biotech Ltd USES AND COMPOSITIONS FOR THE TREATMENT OF ANKYLOSANTE SPONDYLARTHRITIS
US20080131374A1 (en) 2006-04-19 2008-06-05 Medich John R Uses and compositions for treatment of rheumatoid arthritis
US20100021451A1 (en) * 2006-06-08 2010-01-28 Wong Robert L Uses and compositions for treatment of ankylosing spondylitis
US20080311043A1 (en) 2006-06-08 2008-12-18 Hoffman Rebecca S Uses and compositions for treatment of psoriatic arthritis
TWI542374B (zh) * 2006-06-30 2016-07-21 艾伯維生物技術有限責任公司 自動注射裝置
MX2009002748A (es) 2006-09-13 2009-03-26 Abbott Lab Mejoras de cultivos celulares.
KR20150002896A (ko) * 2006-10-27 2015-01-07 애브비 바이오테크놀로지 리미티드 결정형 항-ｈＴＮＦ알파 항체
MX2009010361A (es) 2007-03-29 2009-10-16 Abbott Lab Anticuerpos il-12 anti-humanos cristalinos.
EP2679995A1 (en) 2007-05-31 2014-01-01 AbbVie Inc. Biomarkers predictive of the responsiveness to TNF-alfa inhibitors in autoimmune disorders
WO2008150490A2 (en) * 2007-06-01 2008-12-11 Abbott Biotechnology Ltd. Uses and compositions for treatment of psoriasis and crohn's disease
WO2008154543A2 (en) * 2007-06-11 2008-12-18 Abbott Biotechnology Ltd. Methods for treating juvenile idiopathic arthritis
WO2009011782A2 (en) * 2007-07-13 2009-01-22 Abbott Biotechnology Ltd. METHODS AND COMPOSITIONS FOR PULMONARY ADMINISTRATION OF A TNFa INHIBITOR
CN101980722A (zh) * 2007-08-08 2011-02-23 雅培制药有限公司 结晶抗体的组合物和方法
CN101969971A (zh) * 2007-11-30 2011-02-09 雅培制药有限公司 蛋白制剂及其制备方法
WO2009086550A1 (en) * 2008-01-03 2009-07-09 Abbott Laboratories Predicting long-term efficacy of a compound in the treatment of psoriasis
EP2784089A1 (en) * 2008-01-15 2014-10-01 AbbVie Inc. Improved mammalian expression vectors and uses thereof
CA2711984A1 (en) * 2008-01-15 2009-07-23 Abbott Gmbh & Co. Kg Powdered protein compositions and methods of making same
WO2009099545A1 (en) 2008-01-30 2009-08-13 Abbott Laboratories Compositions and methods for crystallizing antibody fragments
CA2717905A1 (en) * 2008-03-24 2009-10-01 Abbott Biotechnology Ltd. Methods and compositions for treating bone loss
EP2424594A4 (en) 2009-04-29 2014-12-24 Abbvie Biotechnology Ltd AUTOMATIC INJECTION DEVICE
RU2560701C2 (ru) * 2009-05-04 2015-08-20 Эббви Байотекнолоджи Лтд. Стабильные композиции с высокими концентрациями белков антител человека против tnf-альфа
CA2789168A1 (en) 2010-02-02 2011-08-11 Abbott Biotechnology Ltd. Methods and compositions for predicting responsiveness to treatment with tnf-.alpha. inhibitor
PT2575884T (pt) 2010-06-03 2018-10-31 Abbvie Biotechnology Ltd Utilizações e composições para o tratamento de hidradenite supurativa (hs)
US9085618B2 (en) * 2013-10-18 2015-07-21 Abbvie, Inc. Low acidic species compositions and methods for producing and using the same

Also Published As

Publication number Publication date
HU230515B1 (hu) 2016-10-28
HUP1500179A2 (en) 1999-09-28
HK1019452A1 (en) 2000-02-11
NL300143I1 (nl) 2004-05-03
RO119831B1 (ro) 2005-04-29
JP2000507810A (ja) 2000-06-27
BG112042A (bg) 2015-10-30
SK106298A3 (en) 1999-03-12
BR9707379A (pt) 1999-04-13
NO20040154L (no) 1998-10-07
NO20026202D0 (no) 2002-12-23
NZ512006A (en) 2005-05-27
NL300143I2 (nl) 2004-07-01
BR9707379B1 (pt) 2009-08-11
JP5422501B2 (ja) 2014-02-19
BG64564B1 (bg) 2005-07-29
CY2463B1 (en) 2005-06-03
UA82823C2 (en) 2008-05-26
DE69721548T2 (de) 2004-04-01
HU0204115D0 (en) 2003-02-28
US20130330357A1 (en) 2013-12-12
RU2012102323A (ru) 2013-07-27
NZ562935A (en) 2009-06-26
CA2243459C (en) 2002-09-17
NO319955B1 (no) 2005-10-03
PT929578E (pt) 2003-09-30
CN103275221B (zh) 2016-08-17
JP5951056B2 (ja) 2016-07-13
JP2015108011A (ja) 2015-06-11
NO20040052L (no) 1998-10-07
SI9720020B (en) 2001-12-31
US20120258114A1 (en) 2012-10-11
BRPI9715219B8 (pt) 2015-07-07
JP2014055150A (ja) 2014-03-27
US6258562B1 (en) 2001-07-10
HK1066860A1 (en) 2005-04-01
ATE239041T1 (de) 2003-05-15
CN103275221A (zh) 2013-09-04
RU2458704C2 (ru) 2012-08-20
HK1214610A1 (zh) 2016-07-29
JP5689902B2 (ja) 2015-03-25
US20100040604A1 (en) 2010-02-18
JP3861118B2 (ja) 2006-12-20
DE122004000003I1 (de) 2004-09-23
MX9806347A (es) 1998-10-31
IL125697A (en) 2005-03-20
MX336813B (es) 2016-02-02
HK1214608A1 (zh) 2016-07-29
NO2004002I2 (no) 2008-02-04
WO1997029131A1 (en) 1997-08-14
HU230048B1 (hu) 2015-06-29
IL206994A0 (en) 2010-12-30
JP2010209119A (ja) 2010-09-24
JP2003177130A (ja) 2003-06-27
IL151641A0 (en) 2003-04-10
CN1504752A (zh) 2004-06-16
BG110703A (en) 2010-10-29
US20130115224A1 (en) 2013-05-09
RU2270030C2 (ru) 2006-02-20
CZ292465B6 (cs) 2003-09-17
NZ576716A (en) 2011-02-25
CN1215407A (zh) 1999-04-28
CZ247698A3 (cs) 1998-11-11
EP0929578A1 (en) 1999-07-21
PL188192B1 (pl) 2004-12-31
RU2003120859A (ru) 2005-01-10
BG107537A (en) 2003-09-30
DE122004000003I2 (de) 2007-03-29
BG66195B1 (bg) 2012-01-31
BG102755A (en) 1999-05-31
UA57726C2 (uk) 2003-07-15
HK1214609A1 (zh) 2016-07-29
JP2007045828A (ja) 2007-02-22
HUP9901874A2 (hu) 1999-09-28
US8206714B2 (en) 2012-06-26
ES2198552T3 (es) 2004-02-01
HU221984B1 (hu) 2003-03-28
US8372400B2 (en) 2013-02-12
DE122004000004I1 (de) 2004-08-12
RU2005113954A (ru) 2006-11-20
US7223394B2 (en) 2007-05-29
HK1214607A1 (zh) 2016-07-29
NO983627L (no) 1998-10-07
HUP9901874A3 (en) 2000-05-29
CN101712720A (zh) 2010-05-26
NO20026202L (no) 1998-10-07
CN102070715A (zh) 2011-05-25
BRPI9707379C8 (pt) 2017-12-12
NO316711B1 (no) 2004-04-13
KR100317188B1 (ko) 2002-02-19
NZ536216A (en) 2006-08-31
CA2243459A1 (en) 1997-08-14
AU722077B2 (en) 2000-07-20
US7541031B2 (en) 2009-06-02
IL125697A0 (en) 1999-04-11
CN100429232C (zh) 2008-10-29
PL193499B1 (pl) 2007-02-28
IL218518A0 (en) 2012-04-30
KR19990082430A (ko) 1999-11-25
NZ331579A (en) 2001-06-29
CY2005011I1 (el) 2011-06-08
PL328411A1 (en) 1999-01-18
HK1125972A1 (en) 2009-08-21
US20090155205A1 (en) 2009-06-18
EP0929578B1 (en) 2003-05-02
NO2017038I2 (no) 2017-11-17
CN1300173C (zh) 2007-02-14
RO123028B1 (ro) 2010-07-30
JP2013091666A (ja) 2013-05-16
HK1125951A1 (en) 2009-08-21
SI9720020A (sl) 1999-10-31
US20130330356A1 (en) 2013-12-12
BG66509B1 (bg) 2015-11-30
DE69721548D1 (de) 2003-06-05
NO320657B1 (no) 2006-01-09
NO2017038I1 (no) 2017-08-01
HU228630B1 (en) 2013-04-29
NO983627D0 (no) 1998-08-07
BRPI9707379B8 (pt) 2015-07-07
DK0929578T3 (da) 2003-08-25
BR9715219B1 (pt) 2010-02-23
US8753633B2 (en) 2014-06-17
US20030092059A1 (en) 2003-05-15
AU2122997A (en) 1997-08-28
NO322755B1 (no) 2006-12-04
BG109311A (en) 2006-03-31
TR199801532T2 (xx) 1998-11-23
BG64776B1 (bg) 2006-03-31
JP5759526B2 (ja) 2015-08-05
JP2016104798A (ja) 2016-06-09
LU91062I2 (fr) 2004-04-26
RU2458704C9 (ru) 2012-12-10
JP4890997B2 (ja) 2012-03-07
US20070249813A1 (en) 2007-10-25
JP4404181B2 (ja) 2010-01-27

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US8753633B2 (en) Human antibodies that bind human TNFα
EP2357200B1 (en) Human antibodies that bind human TNFalpha
AU2004202769B2 (en) Human antibodies that bind human TNFalpha
AU775499B2 (en) Human antibodies that bind human TNFalpha
MXPA98006347A (en) Human antibodies that link human tnfalfa

Legal Events

Date Code Title Description
TC4A Change of owner's name

Owner name: ABBVIE BIOTECHNOLOGY LTD., HAMILTON, BM

Effective date: 20131014

MK4A Patent expired

Expiry date: 20170210

SPCE Expiry of an spc

Free format text: PRODUCT NAME: ADALIMUMAB

Spc suppl protection certif: 22 5005-2004

Expiry date: 20181022