HU228630B1 - Use of human anti bodies that bind human tnf-alpha and process for inhibiting of human tnf-alpha activity - Google Patents

Use of human anti bodies that bind human tnf-alpha and process for inhibiting of human tnf-alpha activity Download PDF

Info

Publication number
HU228630B1
HU228630B1 HU0204115A HUP0204115A HU228630B1 HU 228630 B1 HU228630 B1 HU 228630B1 HU 0204115 A HU0204115 A HU 0204115A HU P0204115 A HUP0204115 A HU P0204115A HU 228630 B1 HU228630 B1 HU 228630B1
Authority
HU
Hungary
Prior art keywords
antibody
use according
seq
disorder
human
Prior art date
Application number
HU0204115A
Other languages
English (en)
Inventor
Deborah J Allen
Hendricus R J M Hoogenboom
Zehra Kaymakcalan
Boris Labkovsky
John A Mankovich
Brian T Mcguiness
Andrew J Roberts
Paul Sakorafas
Jochen G Salfeld
David Schoenhaut
Tristan J Vaughan
Michael White
Alison J Wilton
Original Assignee
Abbott Biotech Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=26707297&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=HU228630(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Priority claimed from US08/599,226 external-priority patent/US6090382A/en
Application filed by Abbott Biotech Ltd filed Critical Abbott Biotech Ltd
Publication of HU0204115D0 publication Critical patent/HU0204115D0/hu
Publication of HU228630B1 publication Critical patent/HU228630B1/hu

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
    • C07K16/241—Tumor Necrosis Factors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/02—Stomatological preparations, e.g. drugs for caries, aphtae, periodontitis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/16—Central respiratory analeptics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/06—Antigout agents, e.g. antihyperuricemic or uricosuric agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A61P29/02—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID] without antiinflammatory effect
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/04—Anorexiants; Antiobesity agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A61P31/22—Antivirals for DNA viruses for herpes viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P33/00—Antiparasitic agents
    • A61P33/02—Antiprotozoals, e.g. for leishmaniasis, trichomoniasis, toxoplasmosis
    • A61P33/06—Antimalarials
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P39/00—General protective or antinoxious agents
    • A61P39/02—Antidotes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/04—Inotropic agents, i.e. stimulants of cardiac contraction; Drugs for heart failure
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/08—Vasodilators for multiple indications
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/64—General methods for preparing the vector, for introducing it into the cell or for selecting the vector-containing host
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/10—Cells modified by introduction of foreign genetic material
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S424/00—Drug, bio-affecting and body treating compositions
    • Y10S424/81—Drug, bio-affecting and body treating compositions involving autoimmunity, allergy, immediate hypersensitivity, delayed hypersensitivity, immunosuppression, immunotolerance, or anergy

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Pulmonology (AREA)

Description

Humán TRFa-fcőfcő antitestek alkalmazásai és eljárás Iramán THFa aktivitás gátlására
A találmány egy ín vítro eljárásra vonatkozik humán 1FF« aktivitás gátlására izolált humán TNFa-kötö antitestekkel vagy ezek antígen-kötő részével, valamint az izolált harsán TFFa-kötő antitestek alkalmazásaira.
A tumor nekrőzis faktor a (TKF(X) egy citokin, amelyet számos sejt típus — beleértve a monicitákat és makrofágokat — termel. A TFFa-t eredetileg annak alapján azonosították, hogy bizonyos egér tumorok nekrőzisat (elhalását) tudta indukálni (lásd például; L. Old, Science, 230, 630-632 (1985)j. Ezt követően egy cachexíával összefüggd, cachectinnek nevezett faktorról kiderítették, hogy ez a molekula azonos a TNFa-val. A TNFa résztvesz a sokk közvetítésében [lásd például; B.Beutler, A.Cerami, Annu.
Rév. Biochem., 57, 505-518: (1988); 3-Beutler, A.Cerami, Annu. Rév.
Immunoi., 7, 625-655 (1389)]. A TRW. szerepet játszik még számos humán betegség és rendellenesség patorizíolőgíájá.ban, beleértve a szepszist, a fertőzéseket, az autoimmun betegségeket, a transzplantátum kilökődést és a gráft-versus-hőst betegséget [lásd például ; A.Moeller, et al. , Cyfofcíne, 2, 162-169 {1990);
5,281,024 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás (Roelier et al.) ; 260 610 Bi számon közzétett európai szabadalmi iratok íA.Moeller, et al,]; R.VasiIli, Annu. Rév, Immunoi., 10, 411-452 (1992); K.d.Tracey, A.Cerami, Annu, Rév. Red,, 45, 491w \ χ 3 ?>' ? j ,
Mivel a humán TFFa (hTNFa) a legkülönbözőbb humán beteásé* ♦ ♦ gekben káros hatást fejt ki, terápiás stratégiát dolgoztak ki a hTNFa aktivitásának gátlására vagy elhárítására. Főképpen olyan antitestek segítségévei kísérelték meg a h.TNFa aktivitását gátolni, amelyek kötődnek a hTdFa-hoz és azt neutral 1 zál ják, A legkorábbi ilyen antitestek közé tartoztak az egér monoklonális antitestek (mAt-ek) , amelyeket hTHFa-val immunizált egerek límfocitáiból előállított hi.br idómák szekretálnak [lásd például:
T.Hahn et al., Proc. Háti. Acad. Sói., 32, 3814-3818 (1985); C~M.
Liang et al., Biochem. Biophys, Rés. Cömmun,, 137, 847-854 (1386); M.Bírái, et al., J. Immunoi. Methods., 96, 57-62 (1987);
B.M.Fendiy et al., Hybridoma, 6, 359-370 (1987); A.Moeiler et al., Cytokine, 2, 162-163 (1990); 5,231,024 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás (Moeiler et al,}; 186 833 81 számon közzétett európai .szabadalmi iratok (D.Wallach); 218 868 Al számon közzétett európai szabadalmi bejelentés (Old et al.); 260 610 SÍ számon közzétett európai szabadalmi iratok (A.Moeller et al.}}. Bár ezek az egér antl-hiKFa antitestek gyakran erős affinitást fejtettek ki a. hFNFa-vaí szemben (például: Kji 10“9 M} és képesek voltak a hT'NFa aktivitás neutraiizálására, ín vívó használatukat olyan problémák korlátozhatják, amelyek az egér antitestek embereknél való alkalmazásából fakadnak. Ilyen probléma a szérum felezési Idd, továbbá, hogy az egér antitest nem képes bizonyos hűmén eflektor funkciók beindítására és hogy nem kívánt immunválasz jön létre emberben az egér antitest ellen („humán anti-egér antitest reakció; humán antl-swuse antífeody (HAHA) reaction].
A teljes egér antitest emberben való használatával kapcsol?.
» X *♦ « tos problémák leküzdése végett megkísérelték az egér anti-hlNFu antitestek genetikai manipulálását, ezek „embersserűbbé változtatása céljából. Előállítottak például olyan kiméra antitesteket, amelyekben az antitest láncok variábilis szakaszai egér eredetűek és az antitest láncok konstans szakaszai emberi eredetűek voltak (D.M,Knight et ak, Mól.Immunoi., 30, 1443-1453 (1993); WO 92/16553 számon, közzétett nemzetközi szabadalmi iratok (P.E.Daddona et al.}]·. Előállítottak ezenkívül olyan humanizált antitesteket, amelyekben az antitest variábilis szakaszainak hípervariábilis doménei egér eredetűek voltak, de a megmaradt variábilis szakaszok és az antitest konstans szakaszai emberből származtak {WO 92/11383 számon közzétett nemzetközi szabadalmi iratok tJ.E.Adaír et al.}]. Azonban, mivel ezek a kiméra és humanizált antitestek még mindig tartalmaznak néhány egér szekvenciát, ezek még mindig kiválthatnak nem-kívánt immunreakciókat — humán anti-kiméra antitest reakciót [humán antí-chimeric antibody (MACA} reaction] — különösen ha hosszú időn át alkal-
mázzák, például krónikus indikációk esetén, mint a rheumatoid
arthritis [lásd például: f 4.J.Elliot et al., Láncét, 34 4, 1125-
112? (1994); M.ü tEiliot et ar., táncé t,. 344, 1105-1110 Í -i a q á \
Előnyös hTNFa inhibitor lenne az egér mAt-ekfcel vagy ezek származékaival szemben {például a kiméra vagy humanizált antitestekkel szemben} egy teljesen humán antí-hTNFa antitest, mivel egy ilyen szer nem váltaná ki a HAMA reakciót még hosszú időn át való használat, esetén sem. Humán hi.bridőma technikákkal előállítót tak hTEFu elleni humán monoklonális autó-antitesteket [P.Boyle et al., Cell Immunoi., 152, 556-568 (1993); P.Boyle et
556-568 (1993); P.Boyle * « al., Coll. Inmunol 15.2, 569-581 (1993}; 614 934 számon közzétett európai szabadalmi bejelentés (Boyle et ai«)}. Megállapították azonban, hogy ezen hibridoma eredetű monoklonális antitestek affinitása hTNFa-hoz tűi alacsony — hagyományos xnődszerekkel ezt nem lehetett kiértékelni. — és hogy nem tudják megkötni az oldható TNFa-t és nem tudják centralizálni a hTNFa-indukált cítotoxicitást (Boyle et al·., lásd előbb).. Másrészt a humán h.ibridóma technika sikere a hTNFa-speci.fi kus autoantitesteket termelő limfociták humán perifériás vérben, való természetes jelenlététől függ. Néhány tanulmány beteg emberekben hTNFa elleni szérum-autoantites'teket mutatott ki [A. Fomsgaard, et al.,
Scand. J. Immunoi., 30, 219—223 (1089); K. B-endtzen, et al.,
Prog. Leukocyte Bioi., 10b, 447-432 (1990)], míg mások ezt nem erősítették meg (H-G. Leusch, et al., -J. Immunoi. Metho-ds, 139, 145-147 (1991)].
A természetben előforduló humán. anti-hTNFet antitestek alternatívája egy rekombináns humán anti-hTNFa antitest lenne. Leírtak (A. D.Griffíths et al., SMBO J., 12, 725-734 (1933)} olyan rekombináns humán antitesteket, amelyek viszonylag alacsony affinitással (például: ~ lö7 M) és gyors felbomlási sebesség (off rate) mellett (például ~ Ι0ώ sec! kötik a hTNFa-t. Viszonylag gyors disszo-ciációs kinetikájuk miatt azonban ezek az antitestek valószínűleg nem alkalmasak terápiás használatra. Leírták ezenkívül, hogy a rekombináns· humán anti-hTNFa nem .centralizálja. a hTNFa aktivitást, inkább elősegíti a hTNFa sejtek felületéhez való kötődését és fokozza a hTNFa internálirációját [A. Lidbury et el., Bíoteohnol. Ther., 5, 27-45 (1934); WO # « λ « « *
92/03145 számon közzétett nemzetközi szabadalmi iratok (R.AstOi et al „} ] ,
Fentiek a lapján még m indig igény
például olyan rekomb ináns humán ant.
affinitással é. s lassú diss zociációs k
ható hTNFa-t é s képes ; e k a hTNEo. akti5
dukált citotoi íicitás (in vitro és j
a1ka imazhatők olyan 1 beteg, ségek kezel
szűrne nyék elő éilitására, melyekben '
A P99Ö1874 számú (WG 97/29131 számon közzétett PCT bejelentés) alapbajelentésünkben olyan izolált humán antitesteket ízünk le, előnyösen rekombináns humán antitesteket, amelyek specifikusan kötődnek humán TbPa-hoz. Ezeket az antitesteket az jellemzi, hogy erős affinitással és alacsony disszociáciős kinetikával kötődnek a hTHP'a-hoz és hogy neutralizálják a hTNFa aktivitását, beleértve a hTNFa-indukált citotoxícitást (in. vítro és in vivő) és a hTNFa-indukált sejt aktiválást. Továbbá jellemző rájuk, hogy a hTNFa-hoz kötődnek, de a hTKFp-hoz (limfotcxin) nem és a humán TNFa-.n kivu.l más főemlős TNPa-khoz és nem főemlős TNFákhoz is képesek kötődni.
Ezek az antitestek teljes hosszúságúak lehetnek (például IgGl vagy igG4 antitest) vagy csak egy antigénkötő részt (például Fab, FCafe/jz vagy scFv fragmentumot) tartalmazhatnak.
Az újonnan izolált humán antitest vagy antigén-kötő része azzal jellemezhető, hogy
a) a humán TüFa-től .1 x IQ3 sec1 vagy ennél kisebb KCff érték mellett és 1 x Xö'* M vagy ennél kisebb Ke érték mellett disszociál, mindkettőt, felületi plazmon rezonanciával, meghatározva ;
b) könnyű lánc CDR3 dóménje 3, számú aminosavszekvenciát vagy az
1., 4., 5., 71 vagy 8. pozícióban egyetlen alaninhelyefctesitéssel, vagy az 1.; 31., 4., 6., 7. , 3, és/vagy 9.
pozícióban 1-5 konzervatív amínosav-helyettesitéssel módosított 3. számú aminosavszekvenciát tartalmaz;
c) nehéz lánc CDR3 domenje 4. számú aminosavszekvenciát vagy a
2., 3., 4., 5.., 6, , 8., 9., 10. vagy 11. pozícióban egyetlen alanin-helyettasítéssel, vagy a 2«, 3., 4., 5., 6., 8..., 9.,
10., 11. és/vagy 12. pozícióban 1-5 konzervatív aminosavhelyettesítéssel módosított aminosavszekvenciát tartalmaz? és
d) 1 x ΙΟ' M vagy ennél kisebb XCsc értékkel rendelkezik.
Ezek a2 antitestek a humán TNFa citotoxicitását egy standard in vitro L929 assay-ben neutráliséiják a megadott ICsq vagy ennél kisebb ért é k ke i.
A találmány szempontjából előnyös ar az antitest vagy antigén-kötő része, mely a humán TNFa-tól 5 x IG'”* sec1 vagy kisebb Kotf érték mellett disszociál. Még előnyösebb, ha az. antitest sec vagy Kivagy antigén-kötő része a humán TNFa-től 1 x 10’ ssbb Ko.ff· érték mellett disszociál és értéke a fenti tesztben
X x IQ0 - X x ΙΟ10 M vagy ennél kisebb.
A találmány szempontjából előnyős továbbá az a humán antitestet vagy ennek antigén-kötő része, amelyben a könnyű lánc variábilis· szakaszának (LCVRj CDR3 dóménje a 3. számú szekvencia szerinti aminosavszekvenciát vagy az 1., 4., 5., 7. vagy 8, oo1 φ
2 iciőban egyetlen ί aianin-helyettes itéssel
aminosavszekvenciát tartalmazza, és a nehéz
kaszának (HCVR) Cl )R3 dómén je a 4 számú
amin osavs z ekvenc i á t vagy a 2,, 3,, V f -J » f
11. pozícióban egy rétién alanín-hel Lyettesít
számú aminosavszakv éneiét tartalmazz ,a.
Előnyösebb,, ha az LCVR még egy 5. számi
tartalmazó CDR.2 dómennel és a HCV1
am i η o s.a v s z e kve ne i á t tartalmazó CDR2 dómennel
s zamu .s.anc variáöüis ;a6., 8,r 9., 10, vagy egy számú előnyösebb, ha az LCVR egy 7. számú aminosavszekvenciát tartalmazó CD'Rl doménnei ás a H?CVR egy 8. számú aminosavszekvenciát tartalmazó CDR1 doménnei is rendelkezik.
Egy másik kiviteli alakban az izolált humán TKFa-kotó antitestnek vagy antigén-kötő részének könnyű lánc variábilis szakasza (LCVR) az 1. számú aminosavszekvenciát és nehéz lánc variábilis szakasza (HCVR) a 2, számú aminosavszekvenciát tartalmazza, Ka érteke 1 x 10”á M vagy ennél kisebb és ICjo értéke 1 x Í0~? M vagy ennél kisebb. Bizonyos kiviteli formákban az antitest egy IgGl nehéz lánc konstans szakaszt vagy egy IgG4 nehéz lánc konstans szakaszt tartalmaz. További kiviteli formákban az antitest egy Fab fragmentum, vagy egy E(ab?h fragmentum, vagy egy egyetlen láncból álló Fv fragmentum lehet.
Továbbá « előnyös az az antlt.es t vagy enr iek antigén-kötő
S f amelyben a LCVR CDR3 d ómenje < a 3., 11., 12., 13,, 14.,
t X- X > f •X í « f X V *i & / A v y a. > y zt v y cíí A. > y < í2., 23., 24,, 25. vagy
&rain< >savszekve Juciét tártaim. 5223, Vfi agy a hCvR CDR3 dóménje a
27,, zi 0 % f » , 30., 31., 3 ·“> 7 Ί) íC χ y ** Va^v· .3¼ <. ami no s a v s zekven
♦·>
tartalmazza .
A találmány céljaira előnyösek a. rekombináns antitestek.. A legelőnyösebb rekombináns antitestr melyet D2E7~nek neveztünk el, egy könnyű lánc CER3 doménböl, mely a 3. számú aminosavszekveneiát tartalmazza és egy nehéz lánc CDR3 doménböl áll, mely a 4. számú aminosavszekvenciát tartalmazza. Előnyös, he a D2E7 antitest könnyű lánc variábilis szakasza (LCVR ~ light chain variable region) az 1, számú aminosavs2ekvenciát tartalmazza és nehéz lánc variábilis szakasza (HCVR - heavy chain variable region) a 2. számú smímosavszekveneiát tartalmazza.
A fenti izolált humán antitest vagy ennek antigén-kötő része képes neutralizální a humán TFFöí aktivitását, de a humán TNFp-ét (limfotoxin) nem. Előnyösen a humán antitest vagy antigén-kötő része neutralizáija a humán TNFa, csimpánz TNFtx aktivitását és legalább még egy további, a következő csoportból kiválasztott főemlős TNFa aktivitását: pávián TEFa, seiyemmajom TNFu, közönséges makákő TNFa és rhesus (makákő) TNFa, Az antitest előnyösen egy nem-főemlős, például kutya, sertés vagy egér TNFa aktivitását is .neutralizáija.
A R990.1374 számú alapbejelentésben a fenti humán TMFa-kötő antitesteket vagy antigén-kötő· részüket kódoló nukleinsav morékul a kai ismertetjük. Egyik előnyös nukleinsav nukieotidszekvenciáját, amely a 02E? űCVR-jét kódolja, a 7, ábra és a 36. számú nukleotid-szekvencia. mutatja be, Egy másik előnyös, D2E7 .HCVR-jét kódoló nukleinsav nukieotid-szekvsneíáját a 8. ábra és a 37. számú nukleotid-szekvencia mutatja be. Az antitestet kódoló nuk.lein.sava kát hordozó rekombináns expresszlös vektorok és azok a gazdasejtek, amelyekbe ezeket a vektorokat bevittük, valamint az eljárások, melyek során a fenti antitesteket a gazdasejtek. tenyésztésével állítjuk elő, szintén a leírás részét kéke űj, izolált humán. TNFa~kötŐ antitest vagy antigén-kötő része előnyös tulajdonságai alapján felhasználható egy eljárásban humán TN'Pa aktivitás gátlására, melynek során a. humán TNPa-t úgy hozzuk érintkezésbe egy izolált humán TNFa-kőtő antitesttel vagy antigén-kötő részével, hogy a humán TNFü. aktivitás gátlása végbemenj en.
A fentiek alapján a találmány tárgya egy in vitro eljárás humán TNFa .aktivitás gátlására, amely abban áll, hogy a humán ΤΜΡα-t érintkezésbe hozzuk egy izolált humán TKFa-kötö antitesttel vagy antigén-két© részévei, amely
a) a humán TPPa-től 1 z lö“* sec'1 vagy ennél kisebb Κ,?ίί érték mellett és 1 x löá M vagy ennél kisebb K,? érték mellett dísszoeiál, mindkettőt felületi plazmon rezonanciával méghat ar ozva;
b; könnyű lánc CDx3 doménje 3.. számú aminosavszekvenciát vagy az 1. .. 4., 5>, 7. vagy 8. pozícióban egyetlen aianu.nhelyettesítéssel, vao , 4, 6 . , 7 , , 3 . és/vagy 9 .
pozícióban 1-5 konzervatív aminosav-helyettesíkéssel módosított 3. számú aminosavszekvenciát tartalmaz; ó nehéz lánc CDR.3 doménje 4. számú aminosavszekvenciát vagy a 10. vagy 11. pozícióban egyetlen aianín-helyettesítéssel, vagy es/vagy pozícioban 1-5 . , 5 ., 6 . , 8. , 9 . , konzervatív aminosav10 helyettesítéssel. módosított aminosavszekvenciát tartalmaz; és
d) 1 x 10; M vagy ennél kisebb IC50 értékkel rendelkezik.
A találmány további tárgyát képezi egy ín vitro eljárás humán ?FFa aktivitás gátlására,, amely abban áll, hogy a humán TáPoc-t egy izolált húrén TbFa-kötö antitesttel vagy antigén-kötő részével hozzuk érintkezésbe, amelynek könnyű lánc variábilis szakasza (LCVR) az 1. számú aminosavszekvenciát és nehéz lánc variábilis szakasza (RCVR) a 2. számú aminosavszekvenciát tartalmazza, X;= értéke 1 x 10* M vagy ennél kisebb és lük; értéke 1 x 10' h vagy ennél kisebb.
A találmány további tárgyát izolált, humán TRFa-kötő antitest vagy antigén-kötőrészének alkalmazása képezi egy olyan betegség kezelésére szolgáló gyógyszerkészítmény előállítására, amely betegségben a ThPa aktivitás káros hatású. Ilyen betegségek például a szepszís, autoimmun betegség (például rheumatoid arthritis, allergia, szkierózis multiplex, autoimmun diahet.es, autoimmun uveiirs és nefrózisos szindróma) , fertőző betegség, rosszindulatú daganatos betegség, transzplantátnm kilökődés (rejekeiéi vagy gráft-versus-hőst betegség, tüdőbetegség, csontrendellenesség, bélbetegség, szívbetegség. Az antitestek felhasználási területeit részletesen ismertetjük az V. fejezetben.
Az alábbiakban az ábrák rövid leírása következik..
Az 1A és ÍB ábra a D2E7 könnyű lánc variábilis szakasz aminosavszekvenoiáít (D2E7 Vb; lásd az 1„ számú szekvenciát is), a D2E7 Vb alanín mutánsait íLD2E73.AÍ, bDzEükAr, LD2E7uA4, bD2B7,A5, uD2E?'hA7 és nD2E?'',A8)f a I>2E7-tel rokon 2SD4 antitest könnyű lánc variábilis szakaszát (2S-D4 Vb? lásd a 3. számú
A ♦ szekvenciát is) és a többi D2E7-tel rokon könnyű lánc variábilis szakaszokat (EP 312, VL1GE4, VI1ÖŐA9, VI100D2, VL1ÖF4, LÖE5, VLL0F9, VLLöFiÖ, VLLOG7, VILLOG 9, VLLOHI, VLLOHI0, 7L1B7, VL1C1, VL1C7, VLÖ.1F4, VLO.1HS, LOE7, LÖE7.A és LOF7.T) ábrázolja. Az 1A ábra az FRi, CDR.1, FR2 és CDR2 doméneket tartalmazza. Az 1B ábra az FR3, CD3 és FB4 doméneket tartalmazza. A könnyű lánc CDR1 („CDR Ll), CDR2 („CDR B2) és C-DR3 („CDR L3) doxnéneket bekereteztük.
A 2A és· 2B ábra a D2E7 nehéz lánc variábilis szakasz amino-
savszekvenci ált (D2'S'7 VH; lásd a
VB aianín m; afcánsait (HD2E7*.A1, HB2S7VÁ2
HD2E?\A5, B D2S7\ &S, HD2E7* .2.7 f HD2S7ÁA8
-tel rokon 2SB4 antitest nehéz lánc variábilis szakaszt (2SD4
VH; lásd a 10. számú szekvenciát is·)· és a többi D2£7-tel rokon nehéz lánc variábilis szakasz (VHlBli, VH1D8, VH1A11, VH1B1.2,
731-D2, VH1E4, VH1FB, VH1GI, 3C-H2, VH1-D2.K és VH1-D2.Y) ábrázolja. .A 2A ábra az FAI, CÖR1, FR2 és CDR2 doxnéneket matatja, A 2S ábra az FR3, -CDR3 és FR4 doménefcat mutatja. A nehéz lánc CDR1 („CDR Hl), CDR2 {„CDR H2) é.s CDR3 („CDR H3) dóméneket bekereteztük.
A 3. ábrán grafikusan ábrázoljuk a TNFa~indukált L929 citotoxicitás- D2F7 barnán anti-h.TNFa-val való gátlását, MÁK 195 egér ant i ~hTM Fa-va1 összehasonlításban.
A 4, ábrán grafikusan ábrázoljuk, az rhTNFa-nak az U-937 sejteken lévő hTFFa receptorokhoz való kötődésének D2E7 humán autí-hTNFa antitest által történő gátlását, MÁK 195 egér antihTNFa-val összehasonlításban.
φ x * # * V * * ·*' * „ Λ * Φ * * *
-β *ΦΦ * *χ . _ * * * * φ * * * * φ φ φ φ φ φ fosott hasábok!
A 7, ábra
Az 5;. ábrán grafikusan ábrázoljuk az ELAM-1 HÜVCEC-en való ThFa-indukált expresssiójának D2E7 humán anti-hTNF« antitest által történő gátlását MÁK 195 egér anti~hTNFa~val összehasonlításban.
A 6. ábrán látható diagraimn összehasonlít ja, hogy D-galaktósamin-szenzit.izált egerekben a T^Fot-indukált. letalitás elleni védelmet miként biztosítja a D2E7 humán antí-TNFa antitest (pon>· a MÁK 195 egér anfci-hTNFa (üres hasábok).
D2E? könnyű lánc variábilis szakasz .nukleotid szekvenciáját mutatja, a nukleotid szekvencia alatt az aminosavszekvenciával. A CDR Ll, CDR L2 és CDR L3 szakaszokat aláhúztuk.
A 8. ábra a D2E7 nehéz lánc variábilis szakasz nukleotid szekvenciáját mutatja, a nukleotid szekvencia alatt az aminosavszekvenciával. A CDR Hl, CDR H2 és CDR K3 szakaszokat aláhúztuk,
A 9. ábra grafikusan ábrázolja a D2.S7 antitest kezelés hatását Tg 197 transzgenikus egerek, mint poliarthritises modellek, átlag Ízület méretére.
A találmányban alkalmazott izolált humán antitestek vagy ezek antigén-kötő részei a humán TNFa-hoz nagy affinitással, alacsony disszociáciös sebességgel és magas neutralizáló kapacitssssi. kötődnex. A tatására vagy a humán TNFa aktivitás gátlására szolgáló módszerekben — akár in vitro, akár in vivő — a találmány oltalmi köréhez tartozik..
A. találmány könnyebb megértése érdekében először néhány kifejezést definiálunk.
--ötödnek. Az antitestek felhasználása a humán TNFa kímuX « « ♦ ♦
A „humán TNF«„ (rövidítve: hTNPot vagy egyszerűen .hTNF) kifejezés használatával egy olyan humán ci.toki.nre utalunk,· amely 17 kD tömegű szekretáit formában és 26 kD tömegű Taembrán-asszociált formában fordul elő, amelynek, biológiailag aktív formáját nem kovalensen kötött 17 kD tömegű molekulákból álló trimet alkotja v [A h’TNFa .szerkezetének további leírását például a következő közlemények tartalmazzák: D·. Pennica, et al., Natúré 312, 724-729 (1984) ; J.M.Davis, et al., Bíochemi.stry, 26, 1322-1326 (1987); Ε.ϊ. Jones, et al.., Natúré, 338, 225-228 (1989) j. A humán TNEa meghatározás magába foglalja a rekombináns humán TNFa-t (rhlNRa), amely standard rekombináns expresszié® módszerekkel állítható elő vagy beszerezhető a kereskedelemből (A and D Systems., Minnsapoiis, MN., kát. szám: 210-TA).
Az „antitest''” szó használatával immunglobulin molekulákra utalunk, amelyek négy polípeptid láncból állnak, mégpedig két nehéz (H, heavy) láncból, és két könnyű (1, líght) láncból, amelyek belső diszulfid kötésekkel kapcsolódnak össze. Mindegyik nehéz lánc egy nehéz lánc variábilis szakaszból (rövidítve: HCVR vagy VH) és egy nehéz lánc konstans szakaszból áll. A nehéz lánc konstans szakaszt három dómén alkotja: GHI, CH2 és CHS. Mindegyik könnyű lánc egy könnyű lánc variábilis szakaszból (rövidítve : LCVR vagy VL) és egy könnyű lánc konstans szakaszból áll. A könnyű lánc konstans szakasz egy domént — CL — tartalmaz. A VH és VL szakaszokat tovább osztályozhatjuk hipervariábilis szakaszokra, amelyeket komplementaritást meghatározó szakaszoknak (CD.R ::: complementarity déterminíng region; nevezünk. A CDR-eket átszövik olyan szakaszok, amelyek még- állandóbbak (konzervatí«« X»
X·* * vadba k)· és ezeket framework szakaszoknak (framewo-rk region ~ FR =~ konstans szakasz váz) nevezzük. Minden egyes VH-t és VL-t három CDR és négy FR alkot. Sorrendjük az amino-terminális végtől a karboxi-terminális végig a következő: ?R1, CD.R1, FR2, CDR2, FR3, CDE3, FR4 ,
Egy antitest „antigén-kötő része (vagy egyszerűen „antitest rész) alatt egy antitest egy vagy több olyan fragmentumát értjük, amelyek megtartották azt a képességüket, hogy specifikusan kötődjenek egy antigénhez (például hTNFa-hoz) . Kimutatták, hogy egy antitest antigén-kötő funkciója a teljes hosszúságú antitest fragmentumaival is teljesíthető. Egy antitest „antigén-kötő része kifejezés például a következő kötő fragmentumokra vonatkozik: (i) Fab fragmentum, amely VL, VH, CL és CK1 doménekboi álló
monovalens fra gmentum; (ii) Ffab'Jx fragmentum egy bivalens f rag-
mentőm, amely a kapóé s szakasznál egy diszulf id híddal ös szekö-
tört két Fab fragment umot tartalma z; (iii) Fd fragmentum, amelv
a VH és CH1 d> ©ménből áll; (iv) Fv fragmentum, amely az an bitest
egyik karjának VL és VH dóménjét tartalmazza; (v) d&t fragmentum (i4arő et al., h'afcure, 341, 544-546 (1989)j, amely egy VH doménoöl áll; és (ví) izolált komplementaritást meghatározó szakasz (CDR)- Ezenkívül, jóllehet az Fv fragmentum két dóménjét —VL és VH — két külön gén kódolja, rekombináns módszerek használatával, egy szintetikus linker segítségével ezek összekapcsolhatók és Így lehetővé válik, hogy egyetlen olyan protein lánc keletkezzék, amelyben a VL és VH szakasz-pár monovaiens molekulákat alkot (egyláncú Fv néven ismert; singie Chain Fv ~ scFv). (Lásd például: Bírd et al., Science, ......... ............‘
242, 423-426 (1988)
Hús t or;
IS ♦ K ♦ φ φ φ*
Μ * φ ♦ ·*
Φ X ** φ φ * «φ φ««» al., Proc. Natl. Acad. Sci. , 85, 587.9-5883 (1988)]. Az Ilyen egyíáncú antitestekre is vonatkoztatjok az antitest „antigénkötő része kifejezést. Ide tartoznak az egyíáncú antitestek más formái is, így például a diatestek (dxabodies). A diatestek bivaiens, bispecífikus antitestek, amelyekben a Vfí és VL dóménak egyetlen polipeptid láncon fejeződnek ki, de olyan linken használata mellett, amely tűi rövid ahhoz, hogy ugyanezen a láncon a két doménbő.1 pár képződjék, ezáltal késztetvén a doméneket. arra, hogy egy '.másik lánc komplementer doménjeivel alkossanak párt és igy két antigénkötő helyet hozzanak létre [lásd például: P.Holliger et al., Froc. Kati. Acad. Sci., 90, 6444-8448 (1993); R.u.Foljak, Structure, 2, 1121-1123 (.1994)],
Továbbá, egy antitest vagy ennek antigén-kötő része olyan nagyobb immunadhéziós molekula része lehet, amely az antitest vagy az antitest-rész és egy vagy több más protein vagy peptid kovalens vagy nem kovalens társulása revén jött létre. Ilyen, adhéziós molekulákra példa a sztreptavidin mag-régió használatával előállított tetramer scFv molekula ÍKípriyanov, S.M. et al,, Humán Antibodies and Hyforidomas, 6, 93-101 (1995)], és ilyenek például egy císztein maradék, egy markar peptid és egy C- terminális polihisztidin toldalék használatával előállított blvalens és biot iné zott soFv molekulák (S.B.Kipriyanov, et. al., Mól. Xiwonol., 31, 1Ö47-1058 (1934)}. Az. antitest részeket, mint az Fab~t és Fiaid ).2-t előállíthatjuk teljes antitestekből a szokásos technikákkal, a teljes antitest papainos, illetve pepszines emésztésével. Az antitestek, antitestrészek és immunadhéziós molekulák ezenkívül előállíthatok standard rekombínáns DRS techni* «
Χ·> Φ φ* φ#*φ kák használatával, ahogy itt leírjuk.
A „humán antitest kifejezés — ahogy itt használjuk — olyan antitestekre vonatkozik, amelyek humán csíravonal immunglobulin 'szekvenciákból származó variábilis és konstans szakaszokat tartalmaznak. A találmány szerinti humán antitestekben lehetnek olyan aminosav csoportok — például a CDR-ekben és különösen a CDRű-ban — amelyeket nem csíravonal humán immunglobulin szekvenciák kódolnak (például;: mutációkat viszünk be találomra (random) vagy hely-specifikus mutagenezissel in vítro, vagy szomatikus mutációval in vivő). A „humán antitest kifejezést azonban nem használjuk azokra az antitestekre, amelyekben a humán framework szekvenciákba más emlős faj — például egér — csíravonalfoől származó CDR szekvenciákat ültettünk, be...
A „rekombináns humán antitest kifejezés alatt minden olyan humán antitestet értünk, amelyeknek az előállítását, kifejezését, létrehozását vagy izolálását rekombináns eszközökkel végeztük. Például; az antitestek kifejezéséhez rekombináns expresxszics vektort használunk, amelyet oazdasejtbe transzformálunk (a további leírást lásd alább, a II. fejezetben?, az antitesteket rekombináns, kombinatorikus humán, antitest gyűjteményből izoláljuk (a további leírást lásd alább, a III. fejezetben), az antitestet olyan állatból (például egérből) izoláljuk, amely humán immunglobulin génekre nézve transzgenlkus (lásd például; l.D.Taylor et al., Muci. Aoids Rés., 20, 6287-6295 (19.92)}, vagy pedig az antitestek előállítását, kifejezését, létrehozását vagy izolálását bármilyen más olyan módszerrel végezzük, amely humán immunglobulin génszekvenciáknak más DNS szekvenciákkal való ősz# 9 V * * Λ « « «· *· ·* * * * * s φ í * Φ +
Φ* 9« *.«-*« szeillesztését (splicing) tartalmazza. Szék a rekombínáns: humán antitestek humán csíravonal immunglobulin szekvenciákból származó variábilis és konstans szakaszokat tartalmaznak. Bizonyos megvalósítások esetén azonban, az ilyen rekombínáns humán antitesteket in vitro mutagenizáljuk (vagy, ha humán lg szekvenciák révén.... transzgenikus állatot használunk, in vivő szomatikus mutagenezist végzünk),, amikoris a rekombínáns antitestek Vtí és VL szakaszainak aminossv szekvenciái olyan szekvenciák., amelyek — noha humán csiravonal VB és VL szekvenciákból vagy ezekkel rokon szekvenciákból származnak — a humán antitest csíravonal repertoárban a természetben in vivő valószínűleg nem fordulnak elő.
Az „izolált antitest kifejezés használatával olyan antitestre utalunk, amely lényegében a különböző antigén specifícitású más antitestektől mentes (például: egy izolált antitest, amely specifikusan köti a hTNFa-t, lényegében mentes olyan antitestektől, amelyek a hTNFes-töl eltérő antigéneket kötnek meg) . Egy izolált antitest azonban, amely specifikusan köti a h-TNKa-t, keresztreagáihat más antigénekkel, például más fajból származó TNFa molekulákkal (alább részletesen tárgyaljuk). Az izolált antitest ezenkívül lényegében mentes lehet más celluláris anyagtól és/vagy kémiai anyagoktól.
A „neutraiizáló antitest kifejezés (vagy egy „antitest, amely neutráliséija a hTNFtx aktivitást) egy olyan antitestre vonatkozik, amely, ha a hTNFa-hoz kötődik, a hTNFa biológiai aktivitásának gátlását eredményezi. A hTNFa biológiai aktivitásának gátlása a hTNFa biológiai aktivitás egy vagy több indikátorának mérésével állapitható meg, ilyen aktivitás például a * φ < * * # *
Φ«» Φ ♦* * hTNFa-indukált cítotoxieitás {akár ín vitro,. akár in vívó), a hTNFa-indukált sejt aktiválás és a h'TNFa. hTNFa-receptorokhoz való kötődése. A hTNFa biológiai aktivitásának ezen indikátorait a szakterületen ismert számos standard in vltro vagy in vívó assay közül egy vagy több .assay elvégzésével vizsgálhatjuk (lásd a 4. példát), Azt, hogy egy antitest képes-e neutráliséin! a hlNFa aktivitását, előnyösen a hTNFd-indukált cítotoxieitás gátlásával állapíthatjuk meg, 1,929 sejteken. A hTNFa aktivitás egy további, vagy alternatív paramétereként, meghatározhatjuk, hogy egy antitest képes-e meggátolni az gXAM-1 hTNFa-indukált expressziéját HWEC~en, ugyanis ez, a hTNFa-índukált eeliuláris aktiválás mértékéül szolgál..
A „felületi plazmon rezonancia kifejezés egy olyan optikai, jelenségre vonatkozik, amely lehetővé teszi a valóságos idő alatt lezajló bíospecifikus kölcsönhatások analízisét azáltal, hogy egy foioszenzor mátrixban detektálja a protein koncentrációkban végbemenő változásokat, például. a [Pharmacia. Biosensor AB, Üppsala, Svédország és Fiscataway, SJ., USA) használatával. A módszer további ismertetését lásd az 1. példában és a következő közleményekben: U.Jőnsson et al,, Ann. Siói.Cián., 51, 19-26 (1993); U.Jónáson et al., Biotechniques, 11, 620-627 (1991); S.Johnsson et al., J. Mól. Recognit., Sj 125131 (1995); S.Johnsson et al., Anal. Biochem-., 198, 268-277 (1991).
Az itt használt rövidítés egy antitestnek az antigén/antitest komplexből való disszociációjánál a felbomlás! sefoesséoi állandót jelenti.
BI' Ac o r e s y s t em
JS »<X« «* ** £ # jt * ·* « * * « * * * * -í * * * «««» * * * 4 * * « ♦> .♦'·<. X< *«>X
Az. itt használt ,,K/' rövidítés egy adott antitest-antigén kölcsönhatás disszociációs konstansára vonatkozik.
A „nukleinsav molekula kifejezés alatt DNS és RNS molekulákat értünk. Egy nukleinsav molekula lehet egyszálű vagy kétszálú, de előnyösen kétszálú DNS-re vonatkozik.
Az „izolált nukleinsav molekula kifejezés — itt olyan nukleinsavak vonatkozásában használjuk, amelyek hTNFa-t kötő antitesteket vagy antitest részeket (például: VH, VL, CDR3) kódolnak — olyan nukleinsav molekulára, vonatkozik, amelyben az antitest vagy antitest-részt kódoló nukleotíd szekvenciák, nem tartalmaznak más antigént -— azaz nem. hTNFa-t — kötő antitesteket vagy antitest-részeket kódoló nukleqtid szekvenciákat - Ezalatt olyan szekvenciákat értünk, amelyek normái körülmények között határolják a nukieinsavat a humán genomiális DNS-ben. Tehát, például egy találmány szerinti izolált nukleinsav, amely sgy anti-TNFa antitest VH szakaszát kódolja, nem tartalmaz más olyan szekvenciákat, amelyek nem a TNFa~t, hanem más antigéneket kötő VH szakaszokat kódolnak.
A „vektor kifejezés egy olyan nukleinsav molekulára vonatkozik, amely egy másik nukieinsavat — amelyhez hozzákötötték — képes transzportálni. Az egyik vektor típus a „plazmád, amely egy olyan koraiaké kétszálú DNS huroknak felel meg, amelybe további DNS szegmentumok ligá.lhatók. Egy másik típusú vektor a virális vektor, ahol a virális genomba további DNS szegmentumok ligáihatók. Bizonyos vektorok abban a gazdasejtben, amelybe bevezették, autonóm módon replíkálódnak {például a bakteriális vektorok, amelyek bakteriális repiíkációs origót tartalmaznak és ¢, V V*** φ « ί ·> * » *«# Χ ** * « * * * » ·♦ .
«Μ ft,> ♦'« ·»·*-·>♦ az epíszómális emlős vektorok) . Más vektorok (például a nem epíszómálís vektorok) a gazdasejt genomjába integrálhatók a gazdasejtbe való bevezetésükkor és ezáltal a gazda g@nomm.al együtt repiikálódnak. Széniéiül bizonyos vektorok azoknak a géneknek az expresszíóját tudják irányítani, amelyekhez működőképes módon kapcsolódnak. Az ilyen vektorokat „rekombináns expressziős vektorok~nak (vagy egyszerűen „expressziős vektorok-nak) nevezzük. A rekombináns DNS technikákban általában használatos expressziős vektorok gyakran plazmidok. Ebben a leírásban a „plazmád és „vektor megjelölést egymással felcserélve használhatjuk, minthogy a plazmid a vektor legáltalánosabban használt formája, A találmányban azonban más expressziős formák is szerepeinek, így virális vektorok is (például: replikáciőjuk vonatkozásában hiányos funkciójú retrovirusok, adenovirusok és adeno-asszociált vírusok), amelyek azonos funkciókat töltenek be.
A „rekombináns gazdasejt (vagy egyszerűen „gazdasejt) kifejezés használatával egy olyan sejtre kívánunk utalni, amelybe egy rekombináns expresszíós vektort vezettünk be. Magától értetődik, hogy ezek a kifejezések nemcsak a konkrét ssóbanforgó sejtre, hanem egy ilyen sejt szaporulatára is vonatkoznak, Minthogy a következő generációkban előfordulhatnak bizonyos módosulások, akár mutáció, akár környezeti befolyások következtében, nem: biztos, hogy a szaporulat ténylegesen azonos a szülői sejttel, de még mindig a „gazdasejt fogalomkörébe tartozónak tekintjük.
A találmány számos szempontját részletesen ismertetjük a következő aifejezetekben.
* *·
2i * * * * * v* * «ι » 99Φ * * **.**· ..v* * „♦'* '**»’* ***«
I. Humán TNFc.-t kötő humán antitestek
A találmányban alkalmazott izolált humán antitestek vagy esek .antigén-kötő részei a humán TN Fa-ho-z magas affinitással kötődnek, továbbá alacsony disszociáció® sebességgel és magas neutralizáiő kapacitással rendelkeznek. A találmányban alkalmazott antitestek előnyö-sen rekombináns, neutraüzáló humán anti-TMFa antitestek. A legelőnyösebb rekombináns neutraüzáló antitestnek D2E7 elnevezést adtunk és VL és VE szekvenciáit az IA, 13, illetve 2A, 23 ábrákon, mutatjuk be (a D2S7 VL szakasz aminosavs-zekvenciá ját az 1. számú szekvenciáját az 1. számú szekvencia is bemutatja; a D2E7 VR szakasz aminosavszekvenciáját a 2. számú szekvencia is bemutatja). A D2S7 kötési tulajdonságait, összehasonlítva a magas affinitást és alacsony disszocíációskinetikát mutató MÁK 195 egér antl-hTNFa mát-tel, és egy D2E7-tel rokon szekveneiájú másik humán anti-hTNFa antitesttel, a 2SD4gyel, az alábbiakban foglaljuk össze.
A D2E7 antitest és a rokon antitestek is, nagy hatásfokkal neutralizálják a hTNFot aktivitást számos in vitro és in vivő assay-ve'l (lásd a 4. példát) végzett meghatározás szerint. Például, ezek az antitestek neutralizálják L929 sejteken a hTNFd♦ ♦ X Φ *·# '··
-indukált citotoxicitást körülbelül 10'' M — eső I'Cso értékekkel (IC - inhíbitory conoentration - gátló koncentráció) . A D2F7, ha mint teljes hosszúságú Igei antitest fejeződik ki, L929 sejteken körülbelül 1,25 x lö~i0 M XCso“nel neutraIÍ2álja a hThFa-indukált citotoxicitást. Ezenkívül# a D2E7 megőrzi neutraiizáiő képességét, ha az antitest Fab, E(ab*)2 vagy scFv fragmentum formában fejeződik ki. A D2E7 a TNFa-indukált eelluláris aktiválást is gátolja, amelyet az ELAH-1 HüVEC-en való hTN Fa- indukált expressziója segítségével (ICss körülbelül 1,85 x 10:0 M) mérünk és gátolja a bTNPa kötődését az U-937 sejteken lévő hTEFa réce-porokhoz. (ICss - körülbelül 1,56 x 10~iO M? , Ez utóbbi esetben a D2E7 a hTNFcí-nak mind a p55, mind a p75 hTNFa receptorokhoz való kötődését gátolja. Az antitest gátolja továbbá a hTFFa-indukált ietaiitást in vivő egerekben (FD50 === effektive dose == hatásos dózis), (SLAM ~ endothelial coll
1VEC - humán umbiiicai vein
ieukocyte adhesion molecuie;
endothelial celi).
Ά rvh??·''? t..χ .a Pm / Siötu sp£ se ifiéi fását
TNEa különböző form; álhoz,· így <
rán hTNFa-hoz és a celíuláris
kötődik. A D2S7 nem kötődik sp
nem kötődik a követi ;ezőkhöz: III
2, IL—4, IL-δ, 1L--8., IPdf és TGFp (IL ~ int er lentin; IFh ínterfe-ron; TGF - transzformáló növekedési faktor). A D2F7 azonban más fajokból származó tumor nekrézis faktorokkal keresztreagái, Például; az antitest legalább öt főemlős TNFajának (csimpánz, pávián, seiyemmajom, közönséges makákő és «« ♦««« *< ♦* rhesus majom) aktivitását neutralizáija közel azonos ICsc értékkel, mint a hTHEa neutralizációs értéke (lásd a 4. példa E. alfejezetét) . A D2.É7 az egér TNFa aktivitását is neutráliséija, bár körülbelül ezerszer kevésbbé eredményesen, mint a humán THEa-ét (lásd a 4. példa E. alfejezetét) . A D2E7 a kutya és a sertés ?NFa-hoz is kötődik.
A találmányban alkalmazhatjuk a D2E7 antitesteket és antitest részeket, a D2S7-tel rokon antitesteket és antitest részeket, és más olyan humán antitesteket és antitest részeket, amelyek a D2S7~tel azonos tulajdonságokkal rendelkeznek, ilyen a hTNFa-hoz való kötődés erős affinitással és alacsony disszociációs kinetikával és magas neutralizáciös kapacitással. A találmány szerint alkalmazott izolált humán antitest vagy antigénkötő része a humán TNEa-tó! 1 x 10~s M, vagy ennél kisebb Kd értékkel disszociái, Koft sebességi állandója 1 x l.Ö~3 sec’1 vagy kisebb — mindkét értéket felületi plazmor, rezonanciával határoztuk meg — és a humán TNFa citotoxicitását standard in vítro L929 assay-ben 1 x 10'7 M vagy kisebb ICfo mellett neutral! zál ja. Előnyösebb, ha az izolált humán antitest vagy antigén-kötő része a humán TEFa-töi Koíf - 5 x ICT* sec1 vagy kisebb sebességgel bomlik fel és még előnyösebben Koff ~ i x 10* sec'1' vagy kisebb sebességgel. Előnyösebb, ha az izolált humán antitest vagy antigén-kötő része a humán ThFa eitotoxicitást egy standard in vitro L329 assay-ben ICso ~ 1 x lÖfc M vagy kisebb érték mellett, meg előnyösebben XCsq =» 1 x 1Ö~* M vagy kisebb érték mellett és igen előnyösen IC50 ~ 5 x ΙΟ’1'0 M vagy kisebb érték mellett neutrálisát ja.
Egy előnyös alkalmazás esetében az antitest egy izolál urnán
X * rekombináns antitest vagy ennek antigén-kötő része. Egy másik előnyös megvalósításban az antitest a TMFa-indukált ceíluláris aktiválódást is neutralinálja, amelyet standard ín vitro assayben határozunk meg, amikorra humán köldökvéna endoteliális sejteken. (HüVSC « humán umbilical vein andothelial cell) a TNFaindukált ELAM-1 (endot.heli.al cell leueocyte adhesion molecule-i) expresszióját vizsgáljuk.
A és Kofí meghatározására szolgáló felületi pia rmon rezoanalízist az 1. példában leírtak szerint végezhetjük ei. Az ICso· meghatározására szolgáló sztandard in vitro L929 assay-t a 4. példa A. fejezetében írjuk le. A 4. példa C. fejezete egy olyan standard ín vitro assay-t ír le, amely az SLAM-1 humán köidökvéna endoteliális sejteken való ϊΕΕα-indukált kifejeződését méri. Az előbbiekben említett kinetikának és neutralizácíós kritériumoknak például a következő rekombináns humán antitestek felelnek meg, illetve előreláthatóan meg fognak felelni: [VH/VL] párok, amelyeknek a szekvenciáit az 1A, 13, 2A és 23 ábrák mutatják be (lásd a 2., 3. és 4. példát Is a kinetikai és neutralízáciős analízisek vonatkozásában).: (D2E7 VH/D2E7 VL] ;
LÜD2.E7\AI/D2E7 VL] ; (RD2B7\A2/ D2E7 VL ] ; [HD2E7*.A3/D2E7 V.LJ;
[HD2B7+..A4/D2E7 VL] ; <HD2E71.A5/D2E? VL] ; [HD2E7\A6/D2E? VL] ;
(HD2'E741A7/D2E7 VL] ; [HD2E7*. AS/D2E7 VL] ; (HD2E7 u A9/D2E7 VL] ;
TD2E7 VH/LD2E7*.Alj; (D2E7 VH/LD2E7*.A4}; [3237 VE/LD2E7+.A5];
(.D.2E7 VK/LD2E7\A7 j ; [D2E7 VH/LD2E7'f. A8] ; [HD2E7*'. A9/LD2S7V Al] ; ÍVH1-D2/LOS7j; ÍVHÍ~D2.N/LOE7.T]; ÍVH1-Ő2.Y/L0E7A]; (VH1-D2.N/L0E7.A] ;
[VH1-D2/EP 312] és [3C-H2/LÖE7]·.
A szakterületen jól ismert, hogy az antitest nehéz lánc és β φ Φ
könnyű Ián c CDR3 dóménjei
antigénnel szembeni spécii
leiden egy másik szempont.
titesteket alkalmazunk, a®
val rendel .keznek a hTHFa-
hTNPa-val való asszociáció tekintetében és olyan könnyű és nehéz lánc CDR3 doméneket tartalmaznak, amelyek strukturálisan azonosak vagy rokonságban vannak a D2E7 CDR3 doyenekkel. Mint a 3. példában bemutatjuk, a O2E7 VL CDR.3 9. pozícióját elfoglalhatja egy Alá vagy Thr csoport anélkül, hogy ez lényegesen befolyásolná a KOff értéket. Ennélfogva a D2S? VL CDR3 számára általánosan elfogadott motívum aminosavszekvenciája a következői Q-R-Y-L-S-T-A-P-Y-(Τ/Ά) (3. számú szekvencia). Ezenkívül a D2E7 VH CDR3 12. pozícióját Tyr vagy Asn csoport foglalhatja el anélkül, hogy lényegesen befolyásolná a Köíf értéket. Ennek megfelelően a D2E7 VR CDR3-ra a V-S~Y-L-S-T-A-S-S~L-D- (Y/N) (4, számú szekvencia) «ínosavszskvencia az általánosan elfogadott motívum. Ezenfelül, mint a 2, példában bemutatjuk, a D2E7 nehéz és könnyű láncok CDR.3 doméje elviseli, hogy egyetlen alanín csoporttal szubsztituáljuk (a VL. CDR3~ban az 1., 4., 5,, 7, vagy 8. pozícióban és a VH CDR3~ban a 2., 3,, 4., 5., β., 8,,
9,, 10. vagy 11, pozícióban) anélkül, hogy ez lényegesen befolyásolná a Koxt értéket, A gyakorlattal rendelkező szakember ezenkívül azzal ís tisztában van, hogy mivel a D2E7 VL és VH CDR3 doyenek elviselik az alanínnal való szubsztitúciót, végezhető volna más aminosavak szubsztitúciója is — főképpen konzervatív aminosavak szubsztitúciója — a CDR3 doyeneken beiül úgy, hogy eközben az antitest még megtartsa alacsony Kof£ sebességi
Λ Φ * * állandóját. A „konzervatív aminosavvai való szubsztitúció alatt itt azt értjük, hogy egy aminosavat olyan aminosavakkal helyettesítünk, amelyeknek hasonló- az. oldalláncú. A szakma meghatározta a hasonló olda.llánookat tartalmazó amincsavak családját. Ezek a következők: bázíkus oldaliánook (például: lízin, arginin, hisztidin), savas kémhatású oldalláncok (például: aszparaginsav, glutaminsav), töltetlen poláris oldalláncok (például: -glícin, aszp-aragin, giutamin, szerin, treonin, tirozin, ciszteín), nem poláris oldalláncok (például: alsnin, valin, leucin, izoleucin, prolin, fenilalanin, metionin, triptofán), béta elágazást tartalmazó oldalláncok (például: treonin, valih, izoieuoin) és aromás oldalláncok (például: tirozin, fenilalanin, triptofán, hisztidini. Előnyös, ha ötnél több konzervatív aminosavval való szubsztitúciót nem alkalmazunk a D2E7 VL és/vagy VH CDR3 doméneken belül. Még előnyösebb, ha háromnál több konzervatív aminosavval való szubsztitúciót nem alkalmazunk a D2E7 VL és/vagy VH CDR.3 doménekben. Ezenfelül nem szabad konzervatív aminosavat szubsztituální azokban az aminosav pozíciókban, amelyek kritikusak a hTNFu-hoz való kötődés szempontjából. Mint a
3. példában kimutatjuk, úgy tűnik, hogy a D2S7 VL CDR3 2. é-s 5. pozíciói és a D2S7 VH CDR3 I. és 7. pozíciói kritikusak a hTSFa-val való kölcsönhatás szempontjából, tehát előnyösen nem végzünk szubsztitúciókat ezekben a pozíciókban (bár, mint fent leírtuk, az alanin szubsztitúciója a D2S7 VL CDR3 5. pozíciójában elfogadható).
A találmányban alkalmazható izolált humán antitest vagy ennek antigén-kötő része előnyösen az alábbi tulajdonságokkal ren* λ dél. késik:
a) a humán TdPa-töl lxl0~3 sec'1 Ko« értékkel, és Ixlö3 M vagy ennél, kisebb IQ értékkel dísszociái, mindkettőt felületi piarmon rezonanciával meghatározva;
te) könnyű lánc CDR3 dóménje a 3. számú szekvencia' által leírt aminosavszekvenciát tartalmazza, vagy egy módosított 3. számú szekvenciát, amely egyetlen alanin szubsztitúciót tartalmaz az 1., 4., 5·., 7. vagy 8. pozícióban, vagy .1-5 konzervatív amínosav szubsztitúciót az 1., 3., 4,,
6., 7., 8. és/vagy 9. pozícióban;
c) nehéz lánc CDR3 dóménje a 4. számú szekvencia által leirt aminosav-szekvenciát tartalmazza vagy egy módosított 4. számú szekvenciát, amely egyetlen alanin szubsztitúciót tartalmaz a 2., 3., 4., 5,., 6., 8., 10. vagy 11. pozícióban, vagy 1-5 konzervatív amínosav szubsztitúciót a 2.,
9., 10., 11. és/vagy 12. pozícióban.
Előnyösebb, ha az. antitest vagy ennek antigén-kötő része a humán TNPtx-tól 3 x 1Ö“4 sec1 sebességi állandó mellett dísszociái. Még előnyösebb, ha az antitest, vagy ennek antigén-kötő része a humán TNFa-től ϊ x 18'* sec_i Köff sebességi állandó mellett disszcciái.
A találmány egy következő kiviteli alakjában olyan izolált humán antitestet vagy ennek antigén-kötő részét alkalmazzuk, amelyben a könnyű lánc variábilis szakasz ÚLCVR) olyan CDR3 domént tartalmaz, amelynek az aminosavszekvonciáját a 3. számú szekvencia írja le vagy egy olyan módosított 3. számú szekvencia, amely egyetlen alanin szubsztitúciót tartalmaz az 1.
«.»'« * * ·>
vagy 8. pozícióban:, és amelyben a nehéz lánc variábilis szakasz (HCVR) olyan CDRu dómént tartalmaz, amelynek az aminosavszekvenciáját a 4, számú szekvencia írja le, vagy egy olyan módosított 4. számú szekvencia, amely egyetlen alanín szubsztitúciót tartalmaz a 2., 3., 4<, 5., 8., 9., 10. vagy 11. pozícióban, Előnyősén az LCVR egy olyan CDR2 domént tartalmaz, amelynek az amínosavszekvencíáját az 5. számú szekvencia (azaz: a D2'E? VL CDR2) írja le és a HCVR egy olyan CBR2 domént tartalmaz, amelynek az aminosavszekvencíáját a δ. számú szekvencia (azaz a B.2.E7 VH CDR2) írja le. Még előnyösebb, ha az LCVR C'D-Rl dómén je a 7, számú szekvencia szerinti (azaz a D2E7 VL CDR1) aminosavszekvenciát tartalmazza és ha a HCVR ODRI dóménje a 8, számú szekvencia szerinti (azaz a D2E? VH ODRI) amínosavszekvéneiét tartalmazza. A VL framework szakaszok előnyösen a Vkl humán csíravonal családból származnak, előnyösebben az Α2Ό humán csíravonal Vfc génből és legelőnyösebben az 1A és 1B ábrákon látható Β2Έ7 VL framework szekvenciákból. A VH framework szakaszok előnyösen a Vs3 humán csíravonsi családból származnak, előnyösebben a DP-3I humán csíravonal VH génből és legelőnyösebben a 2A és 28 ábrákon látható D2E7 VH framework szekvenciákból.
A találmány egy még további kiviteli alakjában olyan izolált humán antitestet vagy ennek antigén-kötő részét alkalmazzuk, amelyben a könnyű. lánc variábilis szakasza (LCVR) az 1, számú szekvencia szerinti aminosavszekvenciát (azaz a D2S7 VL) tartalmazza, és a nehéz lánc variábilis szakasz (HCVR) a 2. .számú szekvencia szerinti aminosavszekvenciát (azaz a D2E7 VH) tartalmazza. Bizonyos kiviteli formákban az antitest eov elvan nehéz
Φ* · lánc konstans szakaszt tartalmaz, mint egy IgGl, XgG2, XgS3, ÍgG4, IgA, IgS, IgE, XgM vagy IgD konstans szakasz. A nehéz lánc konstans szakasz előnyösen egy IgGl nehéz lánc konstans szakasz vagy egy IgG4 nehéz lánc konstans szakasz. Ezenkívül az antitest olyan könnyű lánc konstans szakaszt tartalmazhat, amely vagy egy kappa könnyű lánc konstans szakasz vagy egy lambda könnyű lánc konstans szakasz. Az antitest előnyösen kappa könnyű lánc konstans szakaszt tartalmaz, Az antitest rész például vagy egy Fab fragmentum vagy egy egyláncű Fv fragmentum lehet.
A találmány további kiviteli formáiban olyan izolált humán antitestet vagy ennek antigén-kötő formáját alkalmazzuk, amelyben D2E~-tel rokon VL és VH CDR3 dóménak vannak. Itt például olyan antitestekről vagy ezek antigén-kötő részeiről van sző, amelyekben a könnyű lánc variábilis szakaszának (LCVR) CDR3 dóménje olyan smínosavszekvencíát tartalmaz, amelyet a következő csoportból választunk ki; 3. számú szekvencia, 11. számú szekvencia, 12. számú szekvencia, 13. számú szekvencia, 14. számú szekvencia, 15. számú szekvencia, IS. számú szekvencia, 17. számú szekvencia, 18. számú szekvenci:
számú szekvencia, 21. számú szekve
23. számú szekvencia, 24. számú az cía, 26. számú szekvencia, vagy amelyekben a iis szakaszának (HCVR) CDR3 dómén' tartalmaz, amelyet a következő csop< mű szekvencia, 27. számú szekvenci;
számú szekvencia, 30. számú szokva
32. számú szekvencia, 33. számú szekvencia, 34. számú szekvencia
19. számú szék véneia, 20
ra, 22. számú szekvencia
zenei a, 25. szá; mű szökvén
bicén a nehé Iá ;nc variábi·
olyan amit icsavszekvenciá'
;ból v ál a s z t ι-m !z SA * A Λ- ki: 4. szá
23. számú s zek vencia, 29
•ia, 3 1 « ;.· s-· -A. ~ c? ?.V ámú szekvencia
XX ♦
1 a csimpán: z TEFa-
b egy további főemlős
ijóm TKFa, kő zönséges
ntitest vagy antigén-
y egy további főemlős
29 assay-ben. ί x X X< 1.U
x 109 M vagy kisebb,
:so. mellett. S< 3Y másik
a x t í v r t ást i s> neutra-
vagy 35. számú szekvencia.
Egy még további kiviteli formában olyan rekombínáns humán antitestet vagy ennek antigén-kötő részét alkalmazzuk, amely a humán TKFa-t neutralizálja, de a. humán TNF$~t nem. Az antitest vagy ennek antigén-kötő· része előnye aktivitását is neutralizálja és még: iega'j TNFa-t, amely .lehet pávián TE Fa, selyem makákó INFa, vagy rhesus majom TKFa. Az kötő része előnyösen humán, csimpánz, és Λ ThFa-t neutralizál egy standard in vitro L929 M vagy kisebb IC50. mellett, előnyösebben még előnyösebben 5 x ΙΟ1'' M vagy kisebb kiviteli alakban az antitest a kutya TNE lizálja, előnyösen egy standard in vitro L929 assay-ben 1 x 10' M vagy kisebb IC50 mellett, előnyösebben 1 x 10~s M vagy kisebb, még előnyösebben 5 x lö9 M vagy kisebb IC50 mellett. Sgy másik kiviteli alakban az antitest a sertés TNFa aktivitást is neutralízálja, előnyösen 1 x IQ”'3 M vagy kisebb IC50 mellett, előnyösebben 1 x 10“” M vagy kisebb és még előnyösebben 5 x 10' M vagy kisebb ICso mellett. Egy további kiviteli alakban az antitest az egér TNFa aktivitást is neutráliséi ja, előnyösen 1 x 1Ö~4 M vagy kisebb IC=c· mellett, előnyösebben 1 x lö5 M vagy kisebb és még előnyösebben 5 x 1Ö~° M vagy kisebb ICsg-nel.
A találmányban felhasznált antitestnek vagy antitest résznek előállíthatjuk a származékait, vagy az antitestet vagy antitest-részt hozzáköthetjuk más funkciós molekulához (például más neptidhez vaey proteinhez). Ennek megfelelően a találmány sze~
X « rxnti antitestek és antitest-részek magukba foglalják az itt leírt humán anti-TNFa antitestek származékait és más módon módosított formáit, beleértve az inounadhétlös molekulákat is, Például·: egy találmány szerinti antitest vagy antitest-rész működőképesen kapcsolódhat {kémiai kötéssel, genetikai fúzióval, nem-kovalens asszociációval vagy másként) egy vagy több más molekuláris entitáshoz, ilyen egy másik antitest (például egy bispecifikas antitest vagy diatest), egy detektálható anyag, egy ciiotoxikus anyag, egy gyógyszer hatóanyag és/vagy egy olyan protein vagy peptid, amely közvetítheti az antitest vagy antitest-rész egy másik molekulával való asszociációját (ilyen egy sztreptsvidin mag-szakasz vagy egy polihisztidin toldalék),
Az antitest származékok egyik típusát két vagy több (azonos típusú vagy különböző típusú) antitest keresztkötésével állítják elő {például bi spécifikus antitestek előállítása céljából). Keresztkötést létesítő alkalmas Iinkerek lehetnek olyan heterobifunkciös Iinkerek, amelyek két határozottan eltérő, olyan reaktív csoportot tartalmaznak, amelyeket megfelelő betét-szakasz (spacer; például; m-maleímido-berzoíi-b-hidroxi-szukeinimíd észter) választ el egymástól, vagy homokifunkciós linkerek (például; diszukcinimidil-szuherát). Ilyen Iinkerek a Piarcé Chemical Company-töl (Rockford, IL.) beszerezhetők,.
Egy találmányban felhasznált antitest vagy antitest-rész módosításához használható kimutatható reagensek közé tartoznak a fluoreszcens vegyületek. Ilyen kimutatható fluoreszcens reagens például a fluoreszcein, fiuoreszcein—ízotio-cianát, rodamin,
5-dimetil-amin-l-naftalín-szuifonil-kiorid, fikceritrin és haφ« »♦* ί
SO niők. Egy antitestet detektálható enzimekkel is módosíthatunk. Ilyenek például az aikaiikus foszfatáz, torma-peroxidáz, glükóz oxidáz és hasonlók. Egy antitestnek egy 'kimutatható enzimmel alkotott származékát további olyan reagensek hozzáadásával mutatjuk ki, amelyeket az enzim kimutatható reakciótermék előállítására használ. Például: ha a kimutatható anyag torma-peroxídáz, a hidrogén-peroxid és dlamino-benzidin hozzáadása olyan színes reakcióterméket eredményez, ami kimutatható. Egy antitest bíotinnal is módosítható, amely az svidín vagy sztreptavidin. kötődés indirekt mérésével detektálható·.
II. Antitestek felfedezése
Egy találmányban alkalmazott antitestet vagy antitest-részt előállíthatunk immunglobulin könnyű ás nehéz lánc gének gazdasejtben való rekombínáns kifejezésével. Annak érdekében, hogy egy antitestet rekombínáns technikával fejezzünk ki, egy gazdasejtet egy vagy több olyan rekombínáns expressziős vektorral, amelyek az antitest immunglobulin könnyű és nehéz láncokat kódoló DNS fragmentumokat hordozzák, olyan módon transzfektáiunk, hogy a könnyű és nehéz láncok a gazdasejtben kifejeződjenek. Előnyös, ha a kifejeződött láncok abba a táptalajba székrétálódnak, amelyben a gazdasejteket tenyésztjük és amelyből az antitesteket kinyerhetjük, Standard rekombínáns metodikákat használunk az antitest nehéz és könnyű lánc gének izolálásához, e gének rekombi-náns expressziős vektorokba való beépítéséhez, a vektorok gazdasejtekbe való bevezetéséhez. A metodikák leírása megtalálható a következő kiadványokban: Sambrook, Frítsch és Maniatis (szerk.), Moleoular Cl.oning: A 'La bora tory Manual, 2.
kiadás, Cold. Spring Harbor, N.Y, (1389); F.M.Ausubei et ai., (szerk.) Current Brotocols in Molecular Biolcgy, Sreene tublishing Associates (1989); 4,816,397 számú amerikai egyesült államokbel szabadalmi leírás (Boss e-t al.).
A D.2E7 antitest vagy egy D2'E7-tel rokon antitest .kifejezéséhez először a könnyű és nehéz lánc variábilis szakaszokat kódoló DNS fragmentumokat izoláljuk. Ezeket a DNS-eket poiímeráz láncreakció (PCE) használatával a csiravonal könnyű és nehéz lánc variábilis szekvenciák sokszorozásával és módosításával kaphatjuk meg. A humán nehéz és könnyű lánc variábilis szakasz gének csiravonal DNS szekvenciái ismertek ezen a szakterületen (lásd. például: „Vbase' humán csíravonal szekvencia adatbázis; továbbá; E.A.Kábát et al., Sequences of Proteins of Immunologícal Interest,· 5. kiadás, Ü.S. Department of .Health and Humán Services; NIH Pubücation No, 91-3242 (1991); I .M.Tomlinson et al., „The Repertoire of Humán Gsrmline VH Sequences Reveais ábout Fitty Groups of VH Segments víth Different Hypervariahie Loops, J.Mol. Bioi., 2271 776-793 (1992); ŰLP.L.Cox et al., „A Directory of Humán Germline VK Segments Reveais a 31rang Bias ín their Usage, Eur. J. Immuno).., 24, 827-336 (1994); az említett kiadványok tartalmát referenciának tekintjük]. A D2E7, vagy egy D2B7~tel rokon antitest nehéz lánc variábilis szakaszát kódoló egy DNS fragmentum izolálása céljából a humán csiravonal Vs gének VK3 családjának egy tagját standard BCR-rel sokszorozzuk. A legelőnyösebb, ha a DP-31 Va csíravonal szekvenciát sokszorozzuk, A D2E7, vagy egy D2.E7-tei rokon antitest könnyű lánc variábilis szakaszát kódoló eay DNS fragmentum izolálása cél iából a humán, csíravonal VI * >
gének VKI családjának egy tagját standard PCE-rel sokszorozzuk. A legelőnyösebb, ha az Ά20 VL csíravonal szekvenciát sokszorozzuk.
A DP-31 csíra vonal VH. és Α2Ό csíravonal VL -szekvenciák sók-szórózásához alkalmas PCR primere'ket a fent -említett kiadványokban szereplő nukleotid szekvenciák alapján tervezhetjük meg, standard módszerek használatával.
Mihelyt megkaptuk a csíravonal VH és VL fragmentumokat, ezeket a szekvenciákat ágy mutagenlzálhatjak, hogy azok az itt leírt D2E7 vagy D2E7-teI rokon aminosavszekvencíákat kódolják. A. csíravonal VH és VL DNS szekvenciák által kódolt aminosavszekvenciákat először Összehasonlítjuk a D2E7 vagy D2E7--tei rokon VH és VL aminosavszekvencíákkal, hogy azonosítsuk a D2S7-ben vagy a D2E7-tel rokon szekvenciában azokat az aminosavakat, amelyek különböznek a csíravonaltól. Ezután a csíravonal DNS szekvenciák megfelelő nukleotídjaít úgy mutagenízárjuk, hogy a mutált csíravonalszekvencia a D'2S7 vagy a D2E7-tel rokon amínosavszekvencíát kódolja, ami kőris a genetikai kódot használjuk annak meghatározására, hogy milyen nukleotid változtatásokat kell végezni. A csíravonal szekvenciák mutagenizálásához standard módszereket használunk, ilyen a RCR-közvetitett mutsoenezis (itt a mutált nuklaotidokat olyan módon visszük .be a PCR primerekbe, hogy a PCR termék már tartalmazza a mutációkat) vagy a helyre-irányuló mutagenezís.
Ezenkívül meg kell jegyeznünk, hogy ha a PCR amplifíkácíóval kapott „csiravonal szekvenciák olyan aminosavakat kódolnak a framevork szakaszokban, amelyek különböznek a valódi csíravonal ko.n-f iunrácíötöl (azaz: a sokszorozott szekvenciában a valódi «ο *
Φ X «4 » * * * * *
♦. V <
á X* ♦* csíravonal szekvenciához képest előforduló különbségeket például szomatikus mutáció eredményezi), kívánatos lehet,· hogy visszaváltoztassuk ezeket az aminosav különbségeket az eredeti csíravonal szekvenciákra {azaz a framework csoportok „visszamutálása a csíravonal konfigurációra).
Mihelyt megkaptuk a D2E7 vagy D2S7-te.l rokon VH és VL szegmenturnákat kódoló DNS fragmentumokat (a csíravonal VH és VL gének sokssorozásával és mutagenízálásával, mint fent leírtuk), ezeket a DNS fragmentumokat tovább manipulálhatjuk standard rekombináns DNS technikákkal,, például: a variábilis szakasz géneket teljes hosszúságú antitest lánc génekké, Fab fragmentum génekké vagy scFv génekké konvertálhatjuk. Ezekben a manipulációkban a VL- vagy VH-kódoló DNS fragmentumot működőképesen egy más proteint — például antitest konstans szakaszt vagy egy flexibilis linkért — kódoló más DNS fragmentumhoz kapcsoljuk. A „működőképesen összekapcsolt kifejezés — ahogy ebben a kontextusban használjuk — azt jelenti, hogy a két DNS fragmentumot úgy kapcsoljuk össze, hogy a két DNS fragmentum által kódolt aminosavszekvenciák működőképesek maradjanak.
A VH szakaszt kódoló izolált DNS-t teljes hosszúságú nehéz lánc génné változtathatjuk azáltal, hogy a VH-ködO'ló DNS-t egy másik olyan DNS molekulához kapcsoljuk — működőképes módon — amely nehéz lánc konstans szakaszokat (CH1, CH2 és CH3) kódol, A humán nehéz .lánc konstans szakaszok ismertek a szakterületen [lásd például: EuA.Rabat et al. „Sequences of Proteins of Xmmunological Interest, 5. kiadás, U.S.Department of Health and Humán Services, Nití Fublication No. 31-3242 (1391)} és az ezen « S ΦΦ* * ·* ♦ ♦ Μ · * * * ί XX «* ♦· ♦ X ·’X olyan DNS molekulához kapcsolhat juk — ísuxoaoKepe :sa.K szakaszokat tartalmazó DNS fragmentumokat standard PCR sokszorozással kaphatjuk meg. A nehéz lánc konstans szakasz lehet IgGl, LgG2, IgG3, IgG4, Ig.A, IgE, IgM vagy IgD konstans szakasz, de a legelőnyösebb egy IgGl vagy IgG4 konstans szakasz.. Ami a Fab fragmentum nehéz lánc gént illeti, a VH-kódoló DRS-t egy másik — működőképesen — amely nehéz lánc CR1 konstans szakaszt kódolja.
A VL szakaszt .kódoló izolált DNS~t teljes hosszúságú könnyű lánc génné (valamint Fab könnyű lánc génné) konvertálhatjuk azáltal, hogy ha a VI-kódoló DNS-t működőképes módon egy másik olyan DNS molekulával kapcsoljuk össze, amely a CL könnyű lánc konstans szakaszt kódolja. A humán könnyű lánc konstans szakasz gének ismertek ezen a szakterületen (lásd például: E. A.Kábát et
5. kiadás, U,S. Department of Health and. Humán Services, NTH
Pubiication No. 91-3242 (1991) ]: és az ezen szakaszokat tartalmazó DNS fragmentumokat standard PCR sokszorozásával kaphatjuk meg, A könnyű lánc konstans szakasz lehet kappa vagy lambda konstans szakasz, de legelőnyösebb egy kappa konstans szakasz.
Egy sérv gén létrehozása céljából a VH- és VL-kódoló DNS .fragmentumokat működőképes módon hozzákapcsoljuk egy flexibilis linkért kódoló másik fragmentumhoz -..... például (Gly^-Ser)3 aminosavakat kódoló szekvenciához — mégpedig úgy, hogy a VH és VL szekvenciák folytonos egyláncű proteinként linkerrel összekötött VL és VH szakaszokkal — (lásd például: Bírd et al., Science, 242, 423-426 Í.1S8S); Muston et al., Proc. Natl. Acad. Sci,, 83, 5879-5883 (1.988) ; HeCafferty a flexibilis fejeződhessenek ki
p esen össze ka pcsolt
antitest gént úgy Ii
transzlációs szabályi
nak megfelelően műl<
transzkripció; ját és
expresszíós s zabályo
i.
használt gazd ase jtts)
nyű lánc gént és az
beépíthetjük, de alti
ugyanabba az express
két standard módszer*
et ai,, Natúré, 348, 552-554 (1350) ] ,
A találmányban felhasznált antitestek vagy antitest-részek kifejezése végett a részleges vagy teljes hosszúságú könnyű, és nehéz láncokat kódoló DNS-eket -..... amelyeket a fentiekben leírt módón kaptunk — expresszíós vektorokba építjük be úgy, hogy a. gének működőképesen kapcsolódjanak transzkripciós és transzlációs szabályozó szekvenciákhoz. Ebben a kontextusban a „működőkéént úgy ligáinak a vektorba, hegy a transzkripciós és a vektoron belül funkciójukirányítsák az antitest gén Az expresszíós vektort és az úgy választjuk meg, hogy a legyenek. Az antitest könyánc gént külön vektorokba is járunk el,, hogy mindkét gént rítjük be. Az antitest généz antitest génen és a vektoron lévő komplementer restrikciós helyek ligálásával, vagy, ha nincsenek restrikciós helyek, a tompa végek ligálásával) építjük be az expresszíós vektorba. A D2'E7 vagy a D2E.7-tel rokon könnyű vagy nehéz lánc szekvenciák beépítését megelőzően az expresszíós vektor már tartalmazhat antitest konstans szakasz szekvenciákat.
Például: a D2E7 vagy a D2S7~tel rokon VH és VL szekvenciák teljes hosszúságú antitest génekké való konvertálásának egyik megoldása abból áll, hogy a nehéz lánc konstans, illetve könnyű lánc konstans szakaszokat már kódoló exoresszíós vektorokba építjük be .őket úgy, hogy a VH szegmentum működőképesen kapcsolódjon a CH szegmentum(ok) hoz a vektoron belöl és a VL szegmentum működőképesen kapcsolódjon a Cl szegmentumhoz a vektoron belül. Egy további, vagy alternatív megoldás szerint a rekombináns expressziés vektor egy olyan szignál pepiidet kódolhat, amely elősegíti az antitest lánc gázdasejthől való szekrécióját. Az antitest lánc gént a vektorba úgy kiónozhatjuk be, hogy a szignál peptid működőképesen kapcsolódjék az antitest lánc gén aminotermínálís végéhez. A szignál peptid lehet egy immunglobulin szignál peptid vagy egy heterológ szignál peptid (azaz egy nem immunglobulin. proteinból származó szignál peptid) ,
Az itt alkalmazott refcombínáns expxessziós vektorok az antitest lánc géneken kívül olyan szabályozó szekvenciákat hordoznak, amelyek az antitest lánc gének expresszi-óját irányítják. A „szabályozó szekvencia kifejezés alatt promotereket, enhancere-kat és más olyan expresszió irányító elemeket (például; poliadenilációs szignál) értünk, amelyek az antitest lánc gének transzkripcióját vagy transzlációját irányítják. Ilyen szabályozó szekvenciákat ír le például a következő kiadány: Goeddél: Gene Expression Technology, Methods in Shzymology-, 185, Academio Éress, San Diego, CA. (1990). A szakterületen jártas szakemberek tudják, hogy az expresszíős vektor tervezése, beleértve a szabályozó szekvenciák kiválasztását, olyan faktoroktól függhet, mint a transzformálandó gazdasejt kiválasztása, a kívánt protein expresszlójának szintje, stfo. Emlős gazdasejtben történő expresszióhoz előnyös szabályozó: szekvenciák közé sorolhatók az olyan viralis elemek, amelyek emlős sejtekben a magas szintű pro< « tein expresszíót vezérlik, ilyenek a cítomegalovírus (CMV) (mint a CMV promoter/enhancer5, a Sírnian vírus 40 (SV4Ö) {mint -az SV40 promoter/enhancer), adenovirus [például az adenovirus fő késői promoter (AdMLP) 1 és a polyoma. eredetű promoterek és/vagy enhancerek. A virális szabályozó elemeknek és ezek szekvenciáinak további leírását lásd: 5,168,062 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás (Stinskí); 4,510,245 (Bell et al.) és 4,963, 615 (S-chaffner et al.) számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi, leírás..
A találmány szerinti vektorok az antitest lánc géneken és szabályozó szekvenciákon kívül további szekvenciákat tartalmazhatnak, például olyan szekvenciákat, amelyek a vektor replika c lóját szabályozzák a gazda-sejtben (például a replikációs origók} és szelekciós markor géneket. A szelekciós marker gének elősegítik azoknak a gazdasejteknek a szelektálását, amelyekbe a vektort bevezettük (lásd például a 4,399,216; 4,634,665 és 5,179,017 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírásokat, ezek mind Axe'l és munkatársaitól származnak}. Például a szelekciós marker gén rendszerint gyógyszerek — ilyenek a £413, higromicin vagy metotrexát ·— elleni rezisztenciát kölcsönöz, annak a gazdasejtnek, amelybe a vektort bevezettük. Előnyős szelekciós marker gén például a dihídrofolát-reduktáz (DKFR) gén (dhfr“ gazdasejtekben való felhasználáshoz metotrexát. szelekció/amplifiká.cíó esetén) és a neo gén (G418 szelekcióhoz}.
Könnyű és nehéz láncok expressziója végett a könnyű és nehéz láncokat kódoló e-xpresszíós- vektort {vektorokat} egy gazdasejtbe transzfektáliuk standard technikákkal„ A „transzfekció kifejezés különböző formái olyan technikák széles változatát foglalják magúidba, amelyeket általánosan használnak exogén DNS bevezetésére egy prokariőta vagy eukarióta gazdasejtbe. Ilyen technika például az elektroporáciő, kalcium-foszfátos precipitácíö, DEAE-dextrános transzfekeíő és hasonlók. Bár a találmány szerinti antitesteket elméletileg lehetséges .akár prokariéte, akár eukarióta gazdasejtekben kifejezni, mégis a legelőnyösebbnek tartjuk, ha az antitesteket eukarióta sejtekben és leginkább emlős gazdasejtökben fejezzük ki, mivel, valószínűbb, hogy a prokariőta sejtekkel ellentétben az eukarióta sejtek és főképpen az emlős sejtek tudják összeszerelni és .szakretálni a megfelelően felgombolyodott és lmmunológiailag aktív antitestet. Közölték, hogy az antitest gének prokariőta expressziőja képtelen magas kib.ozata.llal aktív .antitest termelésére [PLA. Boss, C.R.Nood, Immunoiogy Today, 6, 12-13
A találmány szerinti rekombináns antitestek kifejezéséhez előnyös emlős gazdasejtek közé tartoznak a kínai hörcsög petefészek (Chinese Hamster Ovary - CHGí sejtek [beleértve a dhfr CHG sejteket; lásd: Ürlaub és Chasin, Proc. ftatl. Acad. Sei., 77, 4216-4220 (1960}], amelyeket DHFR szelekciós markerrel használnak például R.J.Kanfmann és p.A.Sharp leírása szerint: Kői. Bioi., 159, 601-621 (1982), az NSO mieióma sejtek, COS sejtek és SP2 sejtek. Amikor antitest géneket kódoló rekombináns vektorokat vezetnek be emlős gazdasejbekbe, az antitestek termelése úgy történik, hogy a gazdasejbeket annyi ideig tenyésztik, amennyi elégséges ahhoz, hogy az antitest kifejeződjék a gazdasejtben, előnyöantitest abba a táptalajba szekretáiódjék, sebben, az amelyben a ♦ « »χ gazdasejtek növekednek. Az antitestek standard protein tisztítás módszerek használatával nyerhetők, ki a táptalajhői.
A gazdasejtek arra is felhasználhatók, hogy az ép antitestek részeit — ilyenek a Fab fragmentumok, vagy scFv molekulák — megtermeljék. Magától értetődik, hogy a fenti eljárásban végrehajtottváitoztatások a találmány oltalmi köréhez tartpznak. Például kívánatos .lehet,· hogy az antitest akár könnyű láncát, akár nehéz láncát (de nem mindkettőt), kódoló DNS-sel egy gazdasejtet transzformáijunk. & rekombináns DNS technológiát arra is használhatjuk, hogy azt a könnyű láncot, vagy azt a nehéz láncot kódoló DNS részt eltávolítsuk, amelyre nincs szükség a hTNFa megkötéséhez, de használhatjuk mind a könnyű, mind a nehéz láncot kódoló teljes DNS eltávolításéra is, ha a hTNFa kötésénél ezekre sincs szükség. Az Ilyen csonka DNS-hől kifejeződő molekulákat szintén a találmány szerinti antitesteknek tekintjük. Ezenkívül, termelhetünk olyan bifunkciós antitesteket, amelyekben egy nehéz lánc és egy könnyű lánc a találmány szerinti antitestnek felei meg és a másik nehéz és könnyű lánc nem a hTNFara, hanem egy másik antigénre specifikus, ha ágy járunk ei, hogy standard kémiai kötési módszerekkel egy találmány szerinti antitestet egy másik antitesthez kapcsolunk.
Egy előnyös rendszerben a találmány szerinti antitestnek, vagy antigén-kötő részének re. kombi náns expressziója végett mind az antitest nehéz láncot, mind az antitest könnyű láncot kódoló rekombináns expressziös vektort dhfr~ CHO sejtekbe vezetjük be kalciumfoszfát-közvetített transzfekciőval. A rekombináns sziös vektorban az antitest nehéz és könnvü lánc gének expres antitest nehéz és könnyű mindegyikét működőképesen kapcsoljuk össze enhancer/promoter szabályozó elemekkel (ezek például SV40, CMV, adsnovírus, stb. eredetűek lehetnek, mint egy CMV enhancer/AdMLR ptromoter szabályozó elem, vagy egy SV4G enhancer/AdML? promoter szabályozó elem), hogy a gének magas szintű transzkripcióját irányítsák. A rekom-bináns expressziás vektor DHFR gént is tartalmaz, amely a vektorral transzfektált C.HO sejtek szelekcióját teszi lehetővé metotrexát szelekciö/amplifíkáclő használatával. A szelektált transzformáit gazdasejteket tenyészthetjük, hogy lehetővé tegyük az antitest, nehéz és könnyű láncok expresszióját, majd az antitestet kinyerjük a táptalajból. Standard molekuláris biológiai technikákat használunk a rekombináns expressziós vektor előállításához, a gazdasejtek transzfektáiásához, a transzformált sejtek szelekciójához, a gazdasejtek tenyésztéséhez és az antitest táptalajból való elkülönítéséhez,
Tekintettel az előbbiekre, a továbbiakban leírjuk azokat a nnkieínsav, vektor és gazdasejt Összetételeket, amelyek az antitestek és antitest részek rekombináns exprsssziöjához hasznaiba-
lánc variábilis szakaszt a 7. ábra és a 36.
mitatja be. Az LCVR CDRl doménje a 70-102
laija magába, CDR2 dóménj e a 148-168
laija magába, CDR3 doménje a 265-291
íja magába. A. D23 27 nehéz lánc variáb ilis sza-
tid szekvenciát a 8. ábra és a 37. sz ámú szék-
A HCVR CDRl tío ménje a 91-105 neki éé ti dókat
foglalja magába, a CDR2 doménje a 148-138 nukleotidokat foglalja magába és a CDR3 doménje a 295-330 nukleotidőkát foglalja magába, '·* β φ
A gyakorlott szakemberek, számára magától értetődik, hogy a D2E7-tel rokon antitesteket vagy ezek részeit (például egy CDR domént, mint egy CDR3 domént) a D2E7 LCVR-t és HCVR-t kódoló nukieotid szekvenciákból leszármaztathatják a genetikai kód és standard molekuláris biológiai technikák alkalmazáséval.
Sgy kiviteli alakban a találmány olyan Izolált nukieinsavat biztosít, amely egy könnyű lánc CDR3· domént kódol. Ez a dómén a 3. számú szekvencia szerinti aminosavszekvenciát, azaz a D2E7 VL CDR3~at tartalmazza, vagy egy egyetlen alanín szubsztitúcióval — az I., 4,, 5., 7, vagy 8. pozícióban — vagy 1-5 konzervatív aminosav szubsztitúcióval — az 1», 3., 4., 61, 7., 8. és/vagy 9, pozícióban — rendelkező módosított 3. számú szekvenciát tartalmaz. Ez a nukleinsav csak a CDR3 szakaszt, vagy előnyösebben egy
teljes antitest. könnyű lánc variábilis : szakaszt
ní. Rél nukleinsav e; jy olyan LCV 'R-t tud
a CDR3 <ΙθιΏθπ ή e az 5. számú szekvencia szerinti
ci elét (azaz a D2E7 VL CDR2~t) tartalmazza és CDR1 doménje a 7.
számú szekvencia szerinti aminosavszekvenciát (azaz a D2:E? VL
CDRl-et) tartalmazza.
Egy másik kiviteli alakban a találmány olyan izolált nukleinsavat biztosit, amely nehéz lánc CDR3 domént kódol. Ez a dómén a
4. számú szekvencia szerinti aminosavszekvenciát (azaz a D2E7 VH
CDR3-at) tartalmazza, vagy egy egyetlen alanin szubsztitúcióval —
2., 3., 4., 5„, 6., 8., 9., 10,, 11. pozícióban — vagy 1-5 kon^.ervativ aalnosav szubsztitúcióval — & 2„, 3., 5., 6>
9., 10., li. és/vagy 12. pozícióban — rendelkező módosított <
számú szekvenciát tartalmaz. Ez a nukleinsav csak a CDR3 sza« φ kaszt, vagy előnyösebben egy teljes antitest nehéz .lánc variábilis szakaszt (ECVR) tud kódolni. Például: a nukleinsav egy olyan HCVR-t kódolhat, amelynek a CDR2 dóménje a 6. számú szekvencia szerinti aminosavszekvenciát (azaz a .D2S7 VH CDR2-t) tartalmazza és CDR1 dóménje a 8. számú szekvencia szerinti aminosavszekvenciát (azaz a D.2E7 VH CDRl-etj tartalmazza.
Egy további kiviteli alakban a találmány olyan izolált nukleinsavakat biztosít, amelyek D2S?-tel rokon CDR3 domént kódolnak.
példán 1 amelyeknek : az ami no sa vs z e k vénei .á ját a. köv etkező csoport-
.bői vá lasztink ki: 3. számú szekvencia. 4. számú szekvencia, 11.
számú szekvencia. ·; S számú szekvencia, 13. számú szekvencia, 14.
számú szekvencia. 15. számú szekvencia, 16. számú szekvencia, 17.
számú szekvencia, IS. számú szekvencia, 19, számú szekvencia. Oft Λμ V <
számú szekvencia, 21, számú s 22 kv e η ca. a, ’b il < számú szekvencia, 23,
számú szekvencia, 24 . s zámű szekvencia, 25 > számú szekvencia. Λ* <7 C *
s zárná szekvencia, 27. számú szekvencia. 23. számú szekvencia, 29.
számú szekvencia, 30. számú szekvencia, 31. számú szekvencia, 32 .
számú S fiC X ci ,> 3 3. számú s 22kven c1a , 34 . s 2sro ú szekvencia S 5
35. sz ám-ű szekvenc ia.
Egy még másik kiviteli alakban a találmány egy 1. számú szekvencia szerinti aminosavszekvenciát {azaz a D2E.7 LCVE-t) tartalmazó antitest könnyű lánc variábilis szakaszt kódoló izolált n.ukle.insavat biztosít. Ez a nukleinsav előnyösen a 36. számú szekvencia szerinti nokleínsavszekvenciát tartalmazza, bár a gyakorlott szakemberek tudták, hogy a genetikai kód degeneráitsága következtében más nukieotíd szekvenciák is kódolhatják az 1. számú szekvencia szerinti aminosavszekvenciát. A nukleinsav csak az .♦ ♦
LCVR-t kódolhatja vagy kódolhat egy olyan antitest könnyű lánc konstans szakaszt is, amely működőképesen kapcsolódik az LCVR-hez. Egy kiviteli alakban ez a nukleinsav egy rekombínáns axpressziós ve k t o.rb a n va n.
Egy még további kiviteli alakban a találmány egy 2, számú szekvencia szerinti aisinosavszefcvenciát (azaz a D2E7 HCVR~t) tartalmazó antitest nehéz lánc variábilis szakaszt kódoló izolált nukleinsavat biztosit. Ez a nukleinsav előnyösen a 37. számú szekvencia szerinti nukleínsavszekvanciát tartalmazza, bár a gyakorlott szakemberek tudják, hogy a genetikai köd degeneráltsaga következtében más nukleotid szekvenciák is kódolhatják a 2, számú szekvencia szerinti aminosavszekvenciát. A nukleinsav csak a
HCVR-t kódolhatja, vagy kódolhat egy olyan antitest nehéz lánc konstans szakaszt is, amely működőképesen kapcsolódik a HCVR-hez. Például a nukleinsav egy IgGl vagy IgG4 konstans szakaszt tartalmazhat. Egyik kiviteli alakban ez a nukleinsav egy rekombínáns expressziős vektorban van.
Olyan expressziós vektorokat ís ismertetünk, amelyek antitest nehéz láncot és antitest könnyű láncot is kódolnak. így például egy kiviteli alakban az expressziós vektor
a) olyan a:
számú szekvencia szerinti aminosavszekvenciát (az-
a) olyan antitest
za kasza az 1. számú s
'Z H £.< 7 LCVR tz jí ·Κ* CA .i» ¢1
>0} ól. y ti iu is<s<3 ti
b) olyan antitest nehéz láncot kódol, amelynek a variábilis szakasza a 2. számú szekvencia szerinti aminosavszekvenciát (azaz a D2E7 HCV'R-t) tartalmazza.
4ö < » » »
A találmányban alkalmazott antitestek kifejezésére szolgálnak azok a gazdasejtek, amelyekbe egy vagy több fenti rekombináns expresszibe vektort vezetünk be. Előnyös, ha a gazdasejt emlős gazdasejt, előnyösebb, ha a gazdasejt egy GEO sejt, egy ESŐ sejt vagy egy COS sejt.
A találmány továbbá módszert ad egy találmány szerinti a fenti rekombináns humán antitest szintetizálásához, ami koris gazdasejtet megfelelő táptalajban addig tenyésztjük, amíg egy találmány szerinti rekombínáns humán antitest nem szintetízálodik. A módszer tartalmazhatja még a rekombínáns humán antitest táptalajból való izolálását is.
XXI. Rekombínáns humán antitestek szelektálása
A D2E7 vagy D2S?~teI rokon antitesteken kívül a találmányban felhasznált rekombináns humán antitesteket rekombínáns kombinatorikus antitest gyűjtemény szűrése révén izolálhatjuk, előnyösen olyan rág által bemutatott scFv gyűjtemény (phage display library? szűrésével, amelyet humán limfocitákből származó mRNS-böl készített humán VL és VH. cDNS-e'k használatával állítottunk elő. Az ilyen gyűjtemények készítésének és szűrésének metodikái ismertek ezen a szakterületen. Fág által bemutatott gyűjtemények létesítéséhez a kereskedelemben rendelkezésre állő kiteken (például; a Pharmacia által gyártott Recombínant Phage Antibody System, kát. szám: 27--940Ö-01; és a Stratagene féle SurfZÁR™ phage display kit, kát.szám; 240612) kívül az antitest bemutató gyűjtemények .létrehozásában és szűrésében különösen alkalmas reagensekre és módszerekre találhatunk példákat a következő szabadalmi leírásokban és közleményekben: 5,223,409 számú amerikai egyesült
4/ *Λ ♦
1370-1372 (1991); Hay (1992) Ruse ec al, , államokbeli szabadalmi leírás (Eaörer et al. } : WC> 92/18619 számú nemzetközi PCT közzétételi iratok (Kang et al.); WO 91/17271 számú nemzetközi PCT közzétételi íratok (Dower et al.}; WO 92/20791 számú nemzetközi PCT közzétételi iratok (Winter et al.}; WO
92/15679 számú nemzetközi PCT közzétételi iratok (Msrklanö et.
al.} ; WO 93/01288 számú nemzetközi PCT közzétételi iratok (Breitlíng et al.}; WO 92/01047 számú nemzetközi PCT közzétételi iratok (McCafferfy et al.}; WO 92/09690 számú nemzetközi PCT közzétételi íratok (Garrarö et al.,}; Fuehs et al ., , Bio/Technology 9, et al. , Hua. Antibod, hybrídomas. 3, 81-85
Science, 2 4 6, 1275-1281 (1989); McCafferty > et al., EWBO Cl,
tn L- 6.Λ .Natúré, 343, 552·· -554 (199 0} ; Griff!'
! z *-> } 7 '25-734 (19930 ; Hawkí ,ns et a! , , J . Mól.
i 19 .z <'-> ); Clackson et al. , ]\!ci VAU’ θ f 352, 624-
al. f PNAS, 89, 3576- -3580 (1992); G>S.kTXS.CÍ ot
9, 1373-1377 {1991}; Hoooenboom et al,( Nucl. Acids. Rés., 19.
1133-4137 (1991}: Barkas et al·., PWAS, 88, 7978-7982 (1991).
Egy előnyös kiviteli alakban a hTNFa vonatkozásában magas affinitással és alacsony felbomlási sebességi állandóval (off rate constant· rendelkező humán antitestek izolálása céljából egy, a hXWa vonatkozásában magas affinitásé és alacsony felbomlás! sebességi állandóval rendelkező egér anti-hTNFa-t {pl... M&K 195, a hibridóm letéti száma: ECACC 87050801; 1937) használtunk először olyan humán nehéz és könnyű lánc szekvenciák szelektálásához, amelyeknek hasonló a kötési aktivitása hTNFa-val szemben. A szelektálásra a Hoogenboom és munkatársai által leirt (WO 93/06213 számú nemzetközi PCT közzétételi íratok; eoítöp lenvoma48 ♦ ♦
Los (epitope imprínting) vagy irányított szelekciós (guided selection) módszereket használtunk. Az ebben az eljárásban használt antitest gyűjtemények előnyösen scFv tárak voltak [a tárakat a kővetkező szerzők által leírtak szerint hoztuk létre és szűrtök: McCafferty et al., NO 92/0104? számú nemzetközi FCT közzétételi iratok; McCaffertí et al., Natúré, 34 8, 552-5S4 (1990);
Grffiths et al,, SMBQ J., .12, 725-734 (1993)], Az scFv antitest tárak szűréséhez előnyösen rekombináns humán hTNFa antigént használtunk.
Mihelyt az első humán VL és VH szegmentumokat kiszűrtök, „mix and máteh (keverés és illesztés) kísérleteket végeztünk. Ezekben a kísérletekben az elsőként szelektált VL és VH szegmentumokat különböző párosításban hTNFa kötésre szűrtük, hogy kiválasszuk az előnyös VL/VH pár-kombinációkat. Ezenkívül, hogy tovább javíthassuk az affinitást és/vagy hogy csökkentsük a felbomlás! sebességi állandó értékét a hTNFa vonatkozásában, az előnyös VL/VH pár(ok) VL és VH szegmentumait találomra mutagenizálhatjuk, előnyösen a VH és/vagy VL CDR3 szakaszában, egy olyan eljárásban,· amely analóg az ín vivő szomatikus mutációs folyamattal. Ez. az in. vivő folyamat felelős az antitestek affinitásának éréséért a természetes immunválasz folyamán. Ilyen in vivő affinitás érést úgy viteleztünk ki, hogy a VH és VL szakaszokat olyan PC.R primerek használatával sokszoroztuk, amelyek a. VH €DR3-mal, illetve VL CöR3-mai komplementerek. Ezeket a prímereket bizonyos pozíciókban a négy nukleotíd bázis egy random keverékével, úgy „spékeltünk meg, hogy a kapott PCR termékek olyan VH és VL szegmentumokat kódoljanak, amelyekbe random mutációk kerülnek bevezetésre, éspedig a VH ♦ ♦ és/vagy VL CDE3 szakaszokban. Ezeket a véletlenszerűen mutagenizált VH és VI« szegmentumokat újra szűrhetjük hTNFa kötésre és kiválaszthatjuk azokat a szekvenciákat, amelyek magas affinitást és alacsony felbomlási sebességet mutatnak a hTNFd-vai való kötődés vonatkozásában.
A kiválasztott antitest nehéz és könnyű láncok amínsavszekvenciáit összehasonlithatjuk a esíra.vonal nehéz és könnyű lánc aminosavszekvenciákkal. Azokban az esetekben, amelyekben a szelektált VL és/vagy VH láncok némely framework csoportja különbözik a csiravonal konfigurációtól (például a rág gyűjtemény létesítéséhez használt immunglobulin gének szomatikus mutációja következményeként) f kívánatos lehet, hogy „visszamutáijuk a szelektált antitestek megváltozott framework csoportjait a csiravonal konfigurációhoz (azaz, hogy úgy változtassuk meg a szelektált antitestek framework amínosavszekvencíáit, hegy azok a csíravonal framework aminosavszekvenciákkal egyezzenek meg}. A framework csoportok ezen „visszamutálását (vagy csiravonalhoz igazítását; „germlining) standard molekuláris biológiai módszerekkel, specifikus mutációk bevezetésével (például: helyre irányuló mutagenezis; PCR-közvetített mutagenezis; és hasonlók) végezhetjük el.
Miután egy megfelelő antitestet egy rekombináns immunglobulin bemutató gyűjteményből kiszűrtünk és izoláltunk, a kiválasztott antitestet ködőié nukleinsavat kinyerhetjük a display csomagból (például a tág genomból) és más expresszíós vektorokba kiónozhatjuk be standard rekombináns DNS technikák segítségével. Ha kívánt, a nukleinsavat tovább manipulálhatjuk, hogy más találmány szerinti antitest formákat hozzunk létre (például: további
X ' * Χ * * * * * «Λ . A »#» * ** . *
Τ- ‘ η. .ί·. . , < ** **
immung lobulín c lömének;
kódoló nukiein. savhoz
ménybő 1 szűrés révén
séhez az antitestet k
klónoz zuk be, is aajd em
II. fe rezeiben .i. e .1- r t u i
például további konstans szakaszokat —~ sózhatjuk) . Sgy kombinatorikus gyűjtelt rekomhináns humán antitest kifejezéDdS-t rekombináns expressziós vektorba
IV, Gyógyszerkészítmények és alkalmazásuk
A fenti antitesteket és antitest részeket betegnek való beadásra alkalmas gyógyszerkészítményekbe vihetjük be. A gyógyszerkészítmény általában egy találmány szerinti antitestet vagy antitest-részt es egy gyógyszerészetileg elfogadható vivőanyagot tartalmaz. A „gyógyszerészetileg elfogadható vívóanyag alatt bármilyen és minden olyan oldószer, diszpergháió szer, bevonó szer, antibakteriális· és antifungálís szer, 1zotonicítást biztosító és abszorpciót késleltető szer és hasonló értendő, amelyek fiziológiailag kompatibilisek. Gyógyszerészeti szempontból elfogadott vivőanyag például a víz, konyhasó oldat, foszfáttal pufférőit konyhasó oldat, dextróz oldat, glicerin, etanol és hasonlók, valamint ezek kombinációi. Sok esetben előnyös lehet, ha tonicitást befolyásoló szereket adunk a készítményhez, például cukrokat, polialkoholokat — mint a menüit és szóróit — vagy nátriumkioridot. A gyógyszerészetileg elfogadható vivőanyagok tartalmazhatnak még kis mennyiségű segédanyagokat is, mint például nedvesítő vagy emulgeálő szereket, konzerváló szereket vagy puffereket, amelyek az antitest vagy antitest-rész tárolási idejét növelik és hatásosságát fokozzák.,
A találmány szerinti gyógyszerkészítmény változatos formákban.
állhat rendelkezésre. Ilyenek például a folyadék, félig szilára és szilárd dózis formák, azaz a folyékony oldatok (például injekciós és infúziós oldatok), diszperziók vagy szuszpenzlők, tabletták, pirulák, porok, liposzőmák és kúpok. Az előnyös forma a bevitel és a terápiás alkalmazás tervezett módjától függ. Az előnyös készítmények rendszerint injekciós vagy infúziós oldatok formájában állnak rendelkezésre. Az ilyen készítmények hasonlóak azokhoz, -amelyeket emberek más antitestekkel való passzív immunizálásához használnak. A beadás előnyösen parentorálisan (például intravénásán, s zubkután, íntraperítoneálisan, intramus zkuiárisan) történik. Sgy előnyös kiviteli forma szerint az antitestet intravénás infúzióval vagy injekcióval juttatjuk be, Sgy másik előnyös kiviteli forma szerint az antitestet. intramuszkuiáris vagy szubkután injekcióban adjuk be.
A terápiás készítményeknek az előállítás és tárolás körülményei között sterilnek és stabilnak keli lenniük. A készítmény oldat, mikroemulzíó, diszperzió, liposzőma gyógyszerformában formalátható, vagy más olyan formában, amely alkalmas magas hatóanyagkoncentrációhoz . Steril injekciós oldatokat ágy készítünk, hogy as aktív vegyület (azaz antitest vagy antitest-rész) előírt menynyiségét bevisszűk megfelelő oldószerbe, a fent felsorolt egy vagy több alkotórésszel kombinálva és ha szükséges, ezután szűréssel sterilizáljuk, A diszperziókat általában úgy készítjük, hogy az aktív vegyületet olyan steril vivőanyagba visszük be, amely egy bázikus diszpergáló anyagot és a fent felsoroltak közül a szükséges egyéb alkotórészeket tartalmazza, Steril porok esetében, amelyekből steril Injekciós oldatokat készítünk, a készítés *♦ előnyös módszere a vákuum szárítás és liofilizálás. A líofilizálássa! port. állítunk elő az aktív hatóanyag plusz az összes többi kívánt alkotórész előzőleg sterilre szűrt oldatából. Egy oldat megfelelő fluidítása például bevonó-anyag — Ilyen a lecitin — használatával tartható fenn, továbbá diszperziók esetében a kívánt részecske-nagyság fenntartásával és felületaktív anyagok használatával. Az· injekciós készítmények meghosszabbított abszorpciója úgy biztosítható·, hogy a készítménybe sgy olyan szert viszünk be, amely késlelteti az abszorpciót, például monosztearát-sőkkal és zselatinnal.
A humán TNFa-kÖtő antitestek és antitest-részek a szakma által ismert számos módszerrel alkalmazhatók, bár ami a sokféle terápiás használatot illeti, az alkalmazás előnyben részesített módja ez intravénás injekció vagy infúzió, A szakterületen jártas szakemberek tudják, hogy az alkalmazás útja és/vagy módja a kívánt eredményektől függően változik. Bizonyos kiviteli alakokban az aktív vegyületet olyan vivőanyaggal készíthetjük, amely megvédi a vegyületet a gyors felszabadulástól. Ilyenek a szabályozott leadást biztosító gyógyszerformák, például az implantátumok, a transzdermális tapaszok és a mikrokapszul.ás leadó rendszerek. Használhatók biodegradálható, biofcompatibílis polimerek, ilyenek az stíién-vínil-aoetát, polianhidridek, ppliglikol savak, .kollagén, poll-orto-észterek és poli-tejsav. Ezen gyógyszerformák előállításának számos módszerét szabadalmaztatták vagy pedig általánosan ismertek a gyakorlott szakemberek előtt. Lásd például: Sustained and Controlled Release örug Delivery Systems, J.R. Robinson (szerk,) Marcel Dekkor, Inc,, New York, 1973.
χ « ♦ « JÍ ♦
A humán TNFa-kötő antitestet vagy antigén-kötő részét olyan gyógyszerkészítmények előállítására használhatjuk, amelyek orálisan alkalmazhatók, például inért oldatban vagy asszimilálhatok ehető vívöanyagban. Az antitestet (és más alkotórészeket is, ha kívánt) bevihetjük kemény vagy légy falu zselatin kapszulákba, tablettazhatjak, vagy közvetlenül a beteg ételébe is bekeverhetjük. Orális terápiás alkalmazáshoz az antitesteket kötőanyagokkal együtt formuiázhatjuk és lenyelhető tabletták, bukkálís tabletták, pasztillák, kapszulák, elixirek, szuszpenziőfc, szirupok, ostyák és hasonló formákban használhatjuk. Amennyiben az előállított gyógyszerkészítményt nem parenterál.isan alkalmazzuk, szükség lehet arra, hogy a vegyületet olyan anyaggal vonjuk be, vagy a vegyüietet olyan anyaggal együtt adjuk be, amely megvédi az ina k t i vá1ődá s tó1.
Kiegészítő aktív vegyületeket is bevihetünk a készítményekbe. Bizonyos kiviteli formákban a találmány szerinti antitest vagy antitest-részt együtt formulázzuk és/vagy együtt alkalmazzuk egy vagy több további olyan terápiás szerrel, amelyek hasznosak az olyan rendellenességek kezelésében, amelyekben a TNFa aktivitás ártalmas. Midéül: a találmány szerinti snti-hTKFa antitestet vagy antitest-részt együtt formulazhatjuk egy vagy több további olyan antitesttel, amelyek más célantigénekhez kötődnek (például: olyan antitestekkel, amelyek más citokineket kötnek meg, vagy amelyek sejt felületi molekulákhoz kötődnek), például egy vagy több citokinheZf oldható TNFa receptorhoz (pi. WO 94/06476 irat) és/vagy egy vagy több olyan kémiai anyaghoz, amelyek gátolják a hTNFot termelődést vagy aktivitást (ilyenek a cikiohexán-ilidén ** « származékok, amelyeket a ikO 93/19751 számon közzétett nemzetközi PCT szabadalmi irat ismertet). Ezenkívül, egy vagy több találmány szerinti antitest két vagy több előzőekben említett terápiás szerrel kombinálva használható,. Az ilyen kombinált terápiákban, az alkalmazott terápiás szerekből eredményesen használhatunk alacsonyabb adagokat, miáltal elkerüljük a lehetséges toxikus tüneteket, vagy azokat a szövődményeket, amelyek a különböző monoterápiákhoz társulnak,
A találmány szerinti antitest vagy antitest-rész például a következő (nem kizárólag) rheumatoid arthritis-néi használt terápiás szerekkel kombinálható; nem szteroid gyulladásgátló szerek (non-steraiddai antí-inflammatory drug(s) - NSAlDs); citokin szuppressziv gyulladásgátló szerek (cytokine suppressive antí-inflammatory drug(s) - CSAIDs); CDP~571/BAY~lö~3356 (humanizált anti-TNFa antitest; Celltech/Bayer); cA2. (kiméra antí-TNFa antitest; Centocor); 75 kdTNFR-igG (75 kD TNF receptor-lgG fúziós protein; Immunex; lásd például: Arthritis and Rheumatísm, 37, S29S (1994); J. Invest .Med., 44, 235A (1996) Ϊ; S5 kdTNER-lgG (55 kD TNF receptor-lgG fúziós protein; Hoffmann-LaRoche); IDEC-CE9.I/SB 210396 (nem kimerített primatizáit anti~CD4 antitest; IDEC/Smithhlins, lásd például: Arthritis and Rheumatísm, 38, S185 (1995)); DAB 486-11-2 és/vagy DAB 389-IL-2 (1L-2 fúziós proteinek; Seragen; lásd például: Arthritis and Rheumatísm, 36, 1223 (1993); Anti-Tac (humanizált anti-lL-ZRa; Protein Desíng Labs/Roohe); 1L-4 (gyulladásgátló citokin; DNAX/Scheríng) ; IL-.Iö (SCH 52000; rekombináns IL-10, gyuliadásgátló citokin; DhAX/Echeríng); IL-4, IL-10 és/vagy IL-4 agonisták (például ago55 nista antitestek); I1-1RA (IL-Ί receptor antagonista? Synergen/Amgen); TléE-hp/s-TNFR (oldható 7NF kötő protein; lásd például: Arthritis and Rheumatism, 39, 9, szuppiementum, S284;
Amer.J.Fhysiol.-Heart and Circulatory Physiology, 268, 37-42 (1995)]; R9734ÖI (foszfo-diészteráz IV típusú inhibitor; lásd például: Arthritis and Rheumatism, _39, 9. szuppiementum, S282 (1996)]; MK-966 [COX-2 Inhibitor; lásd például: Arthritis and
Rheumatism, 39, 9. szupp lemen tűm, 581 (1996)]; Iloprost (lásd például: Arthritis and Rheumatism, 38, 91 szuppiementum, S82 (1996) j? metotrexát; talidomld [lásd például: Arthritis and Rheumatism, 39, 9. szupplement.um, 5282 (1996)] és a talidomid-dal rokon gyógyszerek (például: Celgen); iefiunomid (gyulladásgátló és citokin inhibitor; lásd például: Arthritis and Rhenmatism, 39, 9, szuppiementum, S13 (1996); Xnflauanation. Research, 45, 103-107 {1296)); tranexamin sav (a piazminogén aktiválódás Inhibitora? lásd például: Arthritis and Rhenmatism, 39, 9. szuppiementum, S284 (1996)]; X-614 (citokin inhibitor, lásd például: Arthritis and Rheumatísm, 39, 9. szupplementum, 5282 (1996)]; prosztaglandin El (lásd például: Arthritis and Rheumatism, 39, 9. szuppiementum, S282 (1996)]; Tenidap [nem-szteroid gyulladásgátló szer; lásd például: Arthritis and Rheumatism, 39, 9. szupplementűm, S2.8Ü (1996)]; Naproxen [nem-szteroid gyulladásgátló szer; lásd. például: Neuro Report, 7, 1209-1213 (1996)); Meloxicam (nem-szteroid gyulladás-gátló szer); Ibuprofen (nem-szteroid gyulladásgátló szer); Ríroxicam (nem-szteroid gyulladásgátló szer); Diclofena-c (nem-szteroid gyulladásgátló szer); Indomethacin (nem-szteroid gyulladásgátló szer); Sulfasalazine [lásd például:
4
Arthritis and Rheumatisxr, 39, 9. szuppl ement ura, S281 (1996)]? Azathioprine [lásd például; Arthritis and Rheumatisra, 39, 9. szuppleraentura, S281 (1996)]; ICE inhibitor (az interleukin-lfö konvertáló enzim inhibitora); zap-70 és/vagy lek inhibitor <zap~?Ö vagy lek tírozin kinéz inhibitor); VEGF inhibitor és/vagy VEGF-R inhibitor [vaszkuiáris endoteiiális sejt növekedési faktor vagy vaszkuláris endoteiiális. sejt növekedési faktor receptor inhibitorok; angiogenezis inhibitorok); kortikoszteroid gyűl1adásgátló szerek (például SB2G3580); THF-konvertáz inhibitorok; anti-IL-1.2 antitestek? interXeukin-11 (lásd például: Arthritis and Rheuraatism, 39, .9. sznpplementum, 3296 (1996)1; inte.rleukin-13 [lásd például: Arthritis and Rheumatisra, 39, 9. s.zuppleraentum, S308 (1996)]; interleukín-l7 inhibitorok [lásd például:: Arthritis and Rheumatisra, 39, 9. szuppiementnm, 312Ό (1996)} ? gold? penícillaiain; klorokin? hídrozíkiorokin; klorarabucii; ciklofoszfamid; ciklo-sporin., teljes 1 infoid besugárzás; anti-timocita globul in; anti-CD4 antitestek? CDö-toxinok; orálisan alkalmazott pepiíde-k. és kollagén; lobenzarlt dinátrium só; Cvtokíne
Reguláting Agents (CRAs) ceuticals, Inc.)?
BP228 és RR4 66 (Houqhten PharanaICAM-l antiszensz foszforotioéfc oligodezoxinukleotidok (ISIS 2302; Isis Pharmaceuticais, Inc.); oldható komplement receptor 1 (TRIÓ; T Ceii Sciences, Inc.); prédáizon; orgotein; glükozarainoglökán poliszalfát? mínociklin; anti-lL2R antitestek; hal-félékből származó és botanikai lipidek [hal és növényi mag eredetű zsírsavak; például DeLuca et aí din. North. Am. , 21, 759-777 (1995)]
Rheum. Dis, auranofin; feniIbutazon;
meklofenarain sav; flufenarain sav; intravénás immunglobulin;
*'* *χ
X » * zí.leutcn; mikofenoi sav (RS~€1443); takroiimusz (FK-506);
szirolimusz (rapamicin); amipríióz (terafektin); kiadribin (2-klőr-dezoxí-adenozin); és azaribin.
Egy humán TNFa-kötö antitest vagy antitest-rész például a következő (nem kizárólag} gyulladásos béibetegségnél használt terápiás szerekkel kombinálható; budenozid; epídermális növekedési faktor; kortifcoszteroidok; cíklosporin; szulfaszalazin; aminoszalicilotok; 6-merkapto-purin; azatioprin; met.ronidaz.ol; Xípoxigenáz inhibitorok; mezalamin; olszalazin; balszalazíd; antioxídánsok; tromboxán inhibitorok; IL-1 receptor antaconisták;
anti-IL-lfö monoklonális antitestek; anti-IL-β monoklonális antitestek; növekedési faktorok; elasztáz inhibitorok; pridinilimidazol vegyületek; CDR-571/SAy-3356 (humanizált anti-TNFa antitest; Ce'lltech/Bayer) ; cA2 (kiméra antl-TMFa antitest; Centocor); 75 kd.TNFR~IgG (75 kD TNF reeeptor-IgS fúziós- protein; Xmmune-x, lásd például; Arthritis and Rheumatísm, 3'7, S295 (1924); J.
In-vest. Med., 44, 235A (1996)}; 55 kdTNFR-IgS (55 kD INF receptor-IgG fúziós protein; Ho-ffmann-La Rocké); interieukin-ÍO (SCK 52000; Schering-Plough); 1L--4, IL~Í0 és/vagy IL-4 antagonisták (például; agonísta antitestek); interleukin-11; a pradnizolon, dexametazon vagy öudezonid glukuroniddal vagy dextránnai konjugált gyógyszer előtermékei; ICAM-1 antiszensz f oszf orotioát oligo-dezoxinukleotido-k (ISIS 2302; Isisi P'harmaceut'icals, Inc.); oldható komplement receptor. 1 (ΤΡΙΟ; T Cell Sciences, Inc»); lassan felszabaduló meszalazín; metotrexát; Fiatalét Activating Factor (RAF) antagonisták; oiprofioxaeín; és lígnokain.
e. f * ** * .»· *..* ·«* ·«* ügy humán TJMFa-kötő antitest vagy antitest-rész. például a következő {nem kizárólag) szkierózis multiplsx-nél használt terápiás szerekkel kombinálható: korti koszteroidc-k; prednizolon; me ti1p redni z ο I ο n; a zatiopri n; oikiofoszfamid; cikiospórin?
metotrexát; 4-amin.opiridin? tisanidín; interferon-^la. (Avonex'55; Biogen); interferon-Slb {Bet a ser orr”'5? Chiron/Berlex); Copol.ymer 1 (Cop-1; Ccpaxone™? Teva Pharmaceutícai Industries, Inc.}; magas nyomású oxigén; intravénás immunglobulin; klabribin; CDP-5.71/BAY-10-3356 (humanizált anti-TNFu antitest? Celltech/Bayer); cA2 (kiméra anti-TNFö. antitest; Cenfocor); 75 kdTNFR-IgG [75 kD TNF receptor-.IgG fúziós protein; Iwnunex? lásd például Arthritis and Rheumatísm, 37, S.295 (1994) ; öl In.vest. Med., 4 4, 235Α (1996) 3 ?
kdTNFR-IgG (55 kD TNF receptor-IgG fúziós protein; Hoffmann-ha •Roche); I.L-10, 1L-4; és I.L-lö és/vagy IL-4 agonisták (például agonista antitestek}.
Egy humán TNFa-kötö antitest vagy antitest-rész például a következő {nem kizárólag szepszis-nél használt terápiás szerekkel kombinálható: hipertóniás só-oldatok; antibiotikumok; intravénás gammaglobulin; folyamatos hemo-f üt ráció; karbapenemek (például:: meropenem); citokin antagonisták, mint INFa, IL-lb, lü-6 és/vagy IL-8: antagonisták; CDP~S71/BAY~'lö~3356 (humanizált anti-TKFa anantitest;
bitest; Cell- tech/Bayer); cA2 (kiméra anti- -T^Fa
Cento-cor} ; ? Ö kdTNFR-lgG (75 kD receptor~IgG fúzió
Immunex; lásd például: Arthritis 3 and Rheumatism, 3 .’ f S.
•J. Invest. Med., 44, 235A (1396)}; 55 kdTNFR-lgG [55 kD TNF receptor-IgG fúziós protein; Hoffmann-LaRoche) ; Cyto'kine Regulafing Agents (CRAs) HF228 és HP466 (Houghten Pharmaceuticals, Inc,);
HP4 66 » 4 * *· * #' ♦·< *♦·*♦
SKötF 107647 (alacsony molekulatömegű peptíd; Smith-Kiíne Beecham); tetravalens guanil-hídra zon. CNX-1493 ÍPicowar Institute); Yissue Factor Pathway Inhibitor (TPP1, Chiron); PHP (kémiailag módosított hemoglobin; APEX Bioscience}; vas kelátképzők és kelitek, beleértve a dietilén-triamin—pentaecetsavvas(XXI) komplexet (DTPA vas(lil); Meri eh s® Medicines) ; lizofillin (szintetikus kis molekulájú metíl-xantin; Cell Therspeutícs, Inc.); PGG-Glucan (vízben oldódó SÍ, 3 glukán; Alpha-Beta Technology); apolipoproteín A~l, lipídekkel feltöltve; kúrális hidroxám savak (szintetikus anti-bakteríális· szerek, amelyek gátolják a lípid A bioszintézisét); anti-endotoxin antitestek; £5531 (szintetikus lípid A antagonis-ték; Eisaí America, Inc.); eBPI^í (humán BacteríoldalZPermeability- -Increasing Protein rekombináns ^-terminális fragmentuma); és Synthetic AntiEndotox.ín Peptídes (SAEP; BiosYnth Research Laboratories) Sgy találmány szerinti antitest vagy antitest-rész például a kővetkező (nem kizárólag) felnőttkori respirációs dísztressz szindróma (aduit respiratory dísirass syndrome - ARDS) esetén használt terápiás szerekkel kombinálható: anfci-XL-8 antitestek; felületaktív anyag bejuttatásával (pótlásával) végzett terápia; CDP-57I/BAY~lö~3356 (humanizált an ti-ΤΝΡα antitest; Celitech/Rayer); cA2 (kiméra anti-TKFa antitest; Centocor); 75 kdTNFR-XgG (75 k.D TNF receptor-IgS fúziós protein; Xmmunex, lásd például: Arthritis and Rheumatism, 37, 3295 (1994), J, Jnvest. Med., 44, 235A (1996)1; és 55 kdTNFR-IgG (55 kD TNF receptor IgG fúziós protein; Hoffmann-La Roche)>
ÖÖ ”S« *.ζ
A találmányban alkalmazott antitestek vagy antitest-részek, más terápiás szerekkel való kombinálását a továbbiakban a IV. alté ja zetben tárgyaljuk.
A találmány szerinti készítmények egy találmány szerinti antitest vagy antitest-rész „terápiásán hatásos mennyiségét vagy „profilaktikusan hatásos mennyiségét'''' tartalmazhat ják. A „terápiásán hatásos mennyiség olyan hatásos mennyiségre utal, amelyÍvel a szükséges adagolás mellett és időtartam alatt elérhető a kívánt terápiás eredmény. Az antitest vagy antitest-rész terápiásán hatásos mennyisége például a következő faktorok szerint változhat: a betegség státusától, az egyén korától, nemétől, súlyától és az antitest vagy antitest-rész azon képességétől, hogy kiváltja-e a kívánt választ az egyénben. A terápiásán hatásos menynyiség olyan mennyiség, amelyben az antitest vagy antitest-rész minden toxikus vagy káros hatását ellensúlyozzák a terápiásán jótékony hatások. Egy „profílaktikusan hatásos mennyiség olyan hatásos mennyiséget jelent, amellyel a szükséges adagolás mellett és időtartam alatt elérhető a kívánt profítaktikus eredmény. Minthogy prof Hektikus dózist a betegeknél a betegség előtt vagy a betegség egy korai szakaszában használunk, a prof Hektikusan hatásos mennyiség általában kevesebb lesz, mint a terápiásán hatásos mennyiség,
A dozirozásí protokollt úgy állíthatjuk be, hogy az az optimálisan kívánt választ nyújtsa {például egy terápiás vagy profiiaktíkus választ). Például alkalmazhatunk egyetlen boiuszt, alkalmazhatunk több osztott dózist egy bizonyos ideig, vagy pedig arányosan csökkenthetjuk vagy neveihatjuk a dózist a terápiás * «·*** ** * 9 ♦ ·*·.* ♦ » «'»» * ** **»* * * * *sfr.X sí ** ·*·*** helyset követelményeinek megfelelően. A parenterális készítmények egyadagos .formulázása különösen előnyös az alkalmazás megkönnyítése és .az adagolás egyenletessége miatt. Az ezen leírásban szereplő egyadagos forma fizikailag különálló egységeket jelent, amelyek., mint egységes adagok, megfelelőek a kezelendő emlős betegek számára; mindegyik egység az aktív vegyüiet egy előre meghatározott mennyiségét tartalmazza, amely számítás szerint a kívánt terápiás hatást eredményezi az előirt gyógyszerészeti vivőanyaggal együtt. A találmány szerinti egyadagos formákra vonatkozó előírást (a) az aktív vegyüiet jellemző tulajdonságai és az elérendő speciális terápiás vagy profHektikus hatás és (bj az egyének érzékenységének megfelelő kezeléshez szolgáló ezen. aktív vegyületek elkészítési módjával együttjáró megszorítások szabják, meg és az említett előírás ezektől függ.
A találmány szerinti antitest vagy antitest-rész terápiásán vagy prof Hektikusan hatásos mennyisége — nem kizárólag — 0,1-20 mg/kg, előnyösen 1-10 mg/kg tartományban van. Megjegyzendő, hogy az adagolási értékek az enyhítendő állapot típusa és súlyossága szerint változhatnak. Továbbá magától értetődik, hogy minden konkrét beteg számára specifikus doziro-zási protokollt kell. időre beállítani az egyén szükséglete szerint és az alkalmazást végző vagy a készítmény alkalmazását ellenőrző személy szakszerű megítélése szerint. Magától értetődik továbbá, hogy az itt ismertetett adagtartományok csupán példák, amelyekkel nem óhajtjuk korlátozni a találmány szerinti készítmény alkalmazási területét vagy gyakorlatát .
» ,»% ♦»*: «*% β * >** *' Λ* ♦** *φ»* ν ***»
V. A humán WFot-köfcő antitestek alkalmazási
A bevezetőben megadott tulajdonságokkal rendelkező humán TNFa-kötő antitestek és antitest-részek képesek a hTNFa aktivitás neutralizálására mind in vitro, mind in vivő (lásd a 4. példát) , Ezenfelül legalább néhány antitest — ilyen a D2S7 — más fajok TJJFa aktivitását is képes centralizálni. Ennek megfelelően a fenti antitesteket és antitest-részeket fel tudjuk használni a ThFa aktivitás gátlására például hTHFa-t tartalmazó sejt tenyészetekben, és olyan ThFa-kat tartalmazó emberekben és más emlősökben (ilyenek a csimpánz, pávián, selyemmajom, közönséges makákő és rh.esus majom, a sertés vagy egér), amelyekkel egy fenti antitest keresztreagál. Egy kiviteli formában a találmány módszert ad a TNFa aktivitás gátlására, Ez abból áll, hogy a ΤΝΕα-t olyan módon hozzuk érintkezésbe egy humán TNFa-kötő antitesttel vagy antitest-résszel, hogy ez gátolja a TNFa aktivitását. Előnyös, ha a TNF«. humán TOFa. Például egy olyan sejt-tenyészet esetén, amely hTNFa-t tartalmaz, vagy gyanítjuk, hogy hThFa-t tartalmaz, egy humán TNFa-kötő antitestet vagy antitest-részt adhatunk a táptalajhoz, hogy a tenyészetben meggátoljuk a hTNFa aktivitását,
A találmány tárgya továbbá egy humán TNFa-köto antitest vagy antigén-kötő részének alkalmazása, gyógyszerkészítmény előállítására olyan rendellenesség kezelésére, amelyben a TNFíx aktivitás káros hatású. A TNFa a. rendellenességek széles változatának patofizíolőgíájában szerepel [lásd például: A.Moeller et al.,
Owt· ni zo.kzne
62-169 (IS9O3; 5,231,024 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás (Moeller et al,), 260 610 81 számon közzétett európai szabadalmi leírás (A. Moeller)t. A találmány módszert ismertet a TMFa aktivitás gátlására egy olyan betegben, aki ilyen rendellenességben szenved. A módszer szerint a betegnél egy találmány szerinti antitestet vagy antitest-részt olyan módon alkalmazunk, hogy a betegben a TNFa aktivitását gátolják. Előnyös, ha a TNFa humán WFa és ha a beteg egy beteg ember. A beteg egy ?NFa-t kifejező olyan emlős is lehet, amellyel a találmány szerinti antitest keresztreakciót. ad. A beteg egy olyan emlős is lehet# amelybe hTBFa-t vittek be (például hTNFa bevitelével vagy egy hTNFa transzgén expresszi ója. révén} . Egy találmány szerinti antitest beteg embernél is alkalmazható terápiás célból (alább még tárgyaljak). A humán ThFa-kötő antitestet ezenkívül TNFa-t kifejező nem humán emlősnél (ilyen egy főemlős, sertés vagy egér) is alkalmazhatjuk — amennyiben ezen antitest a TNFa-val keresztreagál — állatorvosi céllal, vagy, ha az emlős egy humán betegség állat-modellje. Ami ez utóbbit illeti, az ilyen állatmódé llek hasznosak lehetnek az antitestek terápiás hatékonyságának kiértékelésében (például:: az adagolás és az alkalmazás időtartamának tesztelésében).
„ügy rendellenesség, amelyben a TNFa aktivitás káros hatású megállapítással olyan betegségekre és más rendellenességekre uta™
rendellenességben szenvedő
feltételezhetően : felelős a
/an faktor, amely h oz zajárul
nek megfelelően egy rendel-
káros hatást fejt ki, egy
. aktivitás gátlása föltene—
•agy a körfolyamat súlyosbít-
dását. Az ilyen fajta zavarokat például .aszal támaszthatjuk alá, ha a betegségben szenvedő beteg egy biológiai folyadékában a TNFa koncentráció megnő (például: egy beteg szérumában, plazmájában, szinoviálís folyadékában, stb. megnő a TNFa koncentráció), és ez — például a fent leírtak szerint — egy antí-TNFa antitesttel kimutatható. Az olyan betegségekre számos példa van, amelyekben a
TMFa aktivitás káros hatású. A bThFa-kötő antitestek és antitestrészek használatát speciális betegségek kezelésére szolgáló gyógyszerkészítmények előállítására az alábbiakban tárgyaljuk.
.ekrozís faktornak meghatározó szerepe van a .szepszis patofíziológiájáfcan, amely olyan biológiai hatásokkal jár, mint az alacsony vérnyomás, miokardíális szuppresszió (szívizom gátlás) , érrendszeri szivárgási szindróma, szerv elhalás, toxikus, másodlagos mediátorok felszabadulásának stimuiálása, és az alvadási kaszkád aktiválódása [lásd például: A. Moeiier et el., Cytokine, 2, 162-169 (1990); 5,231,024 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás (Moeiier et ai.) 260 610 B1 számon leírás (A. Moeiier); K.JzTracey, :-503 (1934); D.Rassel, R.C.Thomp14-721 (19:93) j. A fenti TNFa-kötő szék tehát felhasználhatók a szépklinikai megnyilvánulásánál, beleközzétett európai szabadalmi
Ά. Ger< ami, Anno.Rév.Med. 45,
són, Curr.Opín. Riotech - 1
humán antitestek és ant. ítest
szis ke 2«lésére, annak mind:
értve a szeptikus sokko t, e:
s z i s f és a toxikus sokk szín
A szepszis kezelésében ezenkívül egy fenti TMEa-köto humán antitestet vagy antifest-részt együtt alkalmazhatunk egy vagy *
több egyéb olyan terápiás szerrel, amelyek tovább enyhíthetik a szepszist, ilyen egy interieukin-1 inhibitor (lásd a WO 92/16221 és WO 92/17583 számon közzétett PCT nemzetközi szabadalmi leírásokat) , a citokin ínterleuki.n—6 (lásd a WO 93/11793 számon közzétett PCT nemzetközi szabadalmi leírást), vagy egy trombocita aktiváló faktor antagonista (lásd például az EP 374 510 számon közzétett európai szabadalmi bejelentést), A szepszis kezelésére szolgáló kombinációs terápiákat a 111. alfejezetben tárgyaljuk.
Egy előnyös kiviteli alakban a hWFa-kötő antitestet vagy antitest-részt olyan gyógyszer előállítására alkalmazzuk, melyet a szepszíses betegek egy alcsoportjához tartozó olyan betegnek adunk be, akinek a szérumában vagy plazmájában a kezelés időpontjában az 1L-6 koncentrációja 500 pg/ml felett van és előnyösebben 1000 pg/ml (lásd a WO 95/20973 számon közzétett PCT nemzetközi szabadalmi leírást (L.Daum et al.}1.
S. Áutoiramm be rémségek
Megállapították, hogy a tumor nekrözis faktor szerepet játszik a különböző autoimmun betegségek kórélettanában., A TN Fa részivesz például a szövet-gyulladás aktiválásában és rheumatoid arthritis-ben izületi károsodást okoz [lásd például; A.Moeller et al., Cytokine, 2, 162-169 (1990); 5,231,024 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás (Boeiler et al,); 260 610 B1 számon közzétett európai szabadalmi leírás (A.Moeller); Tracey és Cerami, lásd fentebb; W.P.Arend, J.h.Dayer, Arth.Rheum., 38,
151-160 (1995); R.A.Fava et al., Cl in.. Fzp. I®unol. , 94, 261-266 (1993)] . A TNFa-nak szerepe van a szigetsejtsk elhalásának előmozdításában és az inzulin rezisztencia közvetítésében cukorbe66 «»
·.« * ♦♦ * fenségben [lásd például: Tracey és Garami, lásd fentebb; WO 94/68609 számon közzétett nemzetközi PCT szabadalmi leírás]. TNEa játszik szerepet az oiigodendrocítákkal szembeni citotoxicltés közvetítésében és a gyulladásos plakkok indikációjában szkierózls multiplexben (például; Tracey és Garami, lásd fentebb) . Kimére, és humanizált egér anti-hTNPa antitesteket teszteltek már klinikán rheumatoid arthritis kezelésében (lásd például: M.J.Eliiott et al.. Láncét, 344, 1125-1127 (1994); M.J.Eliiott et al., Láncét, 344, 1105-1110 (1994); E.C.Rankin et al.,· Br. J. Rheumátol., 34, 334-342 (1995)].
Ά humán TWFa-köto antitestek és antitest-részek felhasználhatók autoimmun betegségek kezelésére alkalmas gyógyszerkészítmények előállítására, különösen szókéra., amelyek gyulladással járnak. Ilyenek a rheumatoid arthritis, rheumatoid spondylitis, osteoarthritís és köszvény-arthritis, allergia, sskierőzis multiplex, autoimmun diabefces, autoimmun uveifcis és vese szindróma.
Az antitestet vagy antitest-részt általában szisztémásán alkalmazzuk, bár néhány betegség esetén az antitest vagy antitest-rész lokális alkalmazása a gyulladás helyén, jótékony hatású lehet (ilyen például rheumatoid arthritis-ben az Ízületekben való lokális adás, vagy helyi alkalmazás diabetikus fekélyekre, vagy egyedül, vagy egy ciklohexán-ilidén származékkal kombinálva, ahogyan ezt a WO 93/19751 számon közzétett PCT nemzetközi szabadalmi iratban ismertetik). Egy hTNFa-fcöto antitest vagy antitest-rész egy vagy több további olyan terápiás szerrel együtt is alkalmazható, amelyek az autoimmun betegségek kezelésére alkalmasak, mint ezt alább a III. fejezetben tárgyaljuk.
* <*·
Ρο
C. Fextdarő beteg-ságok ζ j
Megállapították, hogy a tumor nekrőzis.. faktor egy sor fertőző betegségben észlelt biológiai hatást közvetít. A ΤΝΕά résztvesz például maláriában az agyvelcgyuiladás, kapilláris trombózis és infarktus kialakulásának közvetítésében, TNFa. szerepei meningitísben az agyveiőgyu'iladás közvet ítélésében, a vér-liguoxgát összeomlás indukciójában, a szeptikus sokk szindróma kiváltásában és a vénás infarktus aktiválásában. A TNRa résztvesz a cachexia indukciójában, a viráiis prolíferáció stimulálásában és szerzett ímmunhiányos szindrómában (AIDS-ben) a központi idegrendszer károsodás mediákásában. Tehát a humán TNFa-kötő antitestek és antitest-részek fertőző betegségek ........ beleértve a meningitis~t (lásd például a EF 535 705 számon közzétett európai szabadalmi bejelentést), a oerebrális maláriát, az AlDS~t és AIDS-szel összefüggő komplex-et (ARC) (lásd például az FF 230 574 számon közzétett európai szabadalmi bejelentést), valamint a transzplantáció utáni szekunder cítomegolovirus fertőzést [lásd például: E.Eietze et al.,. Transpiantation, 58, 675-630 (2394)] — kezelésére szolgáló, továbbá a fertőző betegségekkel járó tünetek — beleértve a lázat és a fertőzés okozta {például influenza) izomfájdalmat — enyhítésére és a fertőzés utáni (például az AIDS vagy ARC utáni} másodlagosan kialakult cachexia. csökkentésére alkalmas gyógyszerkészítmények előállítására is felhasználhatók.
£h Txanszplantáexó
Megállapították, hogy a tumor nekrózis faktor kulcs-mediátorként vesz részt az allográft kilökődésében, a graft versus hőst betegségben (GVDH} és egy olyan adverz reakció közvetítésében.
* V amelyet akkor figyeltek meg, amikor a T sejt reeeptor-CD3 komplex elleni OKT.3 patkány antitestet használták transzplantált vesék kilökődésének gátlására [lásd például: J.D.Sason et al.,
Transplanfcation, 59, 300-305 (1995); M, Suthanthi ran, T.B.Stroia, New EngI. J., bed., 331, 365-375 {1994)}.. így a humán TNFa-kötő antitesteket és antitest-részeket felhasználhatjuk a transzplantátum kilökődésének gátlására — beleértve az allograftokát és xenograftokát — és a GVDH gátlásra. Jóllehet az. antitestet és antitest-részt magában is használhatjuk, előnyösebb, ha egy vagy több más olyan szerrel együtt használjuk, amelyek az allograft elleni immunválaszt gátolják, vagy a GVDH-t gátolják. Például: az egyik kiviteli alakban egy humán TNFa-kötő antitestet vagy antitest-részt 0KT3-mal kombinálva használunk az.OKT-indukált reakciók gátlására. Sgy másik kiviteli alakban a humán TNFa-kötő antitestet es antitest-részt egy vagy több olyan antitesttel kombinálva használjuk, amelyek más — az immunválaszok szabályozásában résztvevő — célok ellen irányulnak, Ilyenek a sejtfelületi molekulák, a CD25 (interleukin-2 reoeptor-a) , CDlla (LFA-l), CD54 (1CAM-1), CD4, CD45, CD2S/CTLA4, CD80 (B7-1) és/vagy CDS6 {37-2}. Egy még további kiviteli formában a humán TNFa-kötö antitestet vagy antitest-részt egy vagy több általános immunszuppressziv szerrel, mint a ciklosporin A vagy az FK506 kombinálva használjuk.
Rosszindulatú betegségekben a tumor nekrőzis faktor a cachexia megindításában, a tumor növekedés stimuiálásában, a metasztatikus potenciál fokozásában és a citotoxicitás közvetítésében vesz részt. Tehát a humán TNFa-kötő antitesteket és antl* * test-részeket felhasználhatjuk a rosszindulatú daganatos betegségek kezelésében a tumor növekedés vagy xnetasztázis gátlására és/vagy a malignitás másodlagos betegségének, a cachexiának az enyhítésére. Az antitest vagy antitest-rész szisztémásán vihető be vagy lokálisan, a tumor helyére adható.
Ft Tüdőbetérségek
Tumor nekrőzis faktor szerepel a. felnőttkori distress szindróma (ARDSj patofiziolőgiájában, beleértve a ieufcoeitaendoteliális aktiválás stimulációját, a pneumociták elleni citotöxíeitás irányítását és a vaszkuláris szivárgási szindróma indukcióját. A humán TNFa-kötő antitesteket és antitest-részeket tehát fel lehet használni a különböző pulmonális zavarok kezelésére , beleértve a felnőttkori respirációs distressz szindrómát (lásd például a WO 31/04054 számon közzétett nemzetközi FÜT szabadalmi leírást), a sokk tüdőt, a krónikus tüdőgyulladást, a pulmonsiis sarcoidosis-t, pulmonsiis fibrózist és szilikózist. Az antitest vagy antitest-rész szisztémásán adható, vagy lokálisan vihető be a tüdő felszínére, például aeroszol formában. A humán TNFa-fcötö antitest vagy antitest-rész egy vagy több olyan további terápiás szerrel alkalmazható, amelyeket pulmonsiis zavarok kezelésében használnak. A továbbiakra vonatkozóan lásd a XII. alregezetet.
S. Bélbe tegség-ek
A tumor n< skrózis faktor a gyulladásos bélbetegségek pato-
fiziológiájában is szerepel [lásd például: K.J.Traey et al,,
Science, 234, 4 70—474 (1986); X-M. Sun et al J. din. Invest.,
81, 1328-1331 ( 1988); T.T.Mac Oc* ·'·' *' t *’ 1 din. Exo. Immunoi.,
» * * <
χ·« *
81, 301-305 (1950) 1 . A kimére egér anti-hTNFa antitestek klinikai tesztelése a Crohn betegség kezelésében van Dullemen et al., Gastroentero'iogy, 109, 129-135 (1595)3 már megtörtént. A humán IFFa-kötö antitestek és antitest-részek a bélrendszer zavarainak kezelésére is használhatók. Ilyen a gyulladásos bélbeteg'ség, amelyet két tönetegyüttes jellemez: a Crohn betegség és a. colitis ulcerosa. Egy humán TNId-kötő antitest vagy antitest-rész egy vagy több olyan további terápiás szerrel együtt alkalmazható·, amelyeket bélrendszeri zavarok kezelésében használnak. A továbbiakra vonatkozóan lásd a III. alfejezetet.
A humán TNFa-kötő antitestek és antitest-részek különböző szívbetegségek kezelésére is használhatók. Ilyen a szív ísémia (lásd például az £9 453 858 számon közzétett európai szabadalmi bejelentést) és a szívelégtelenség (a szívizom gyengesége) (lásd .például a WO 94/20135 számon közzétett nemzetközi szabadalmi bejelentést) ..
J. Egyéb
A humán TNFa-kötő antitesteket és antitest-részeket különböző más olyan betegségek kezelésére ugyancsak használhatjuk, amelyekben a TNE'a aktivitásnak káros hatása van. A patofí zoológia számon, tart más olyan betegségekre és rendellenességekre vonatkozó példákat, amelyekben szerepet játszik a INFa aktivitás, így ezek is kezelhetők a találmány szerinti antitest vagy antitest-réss használatával. Ilyenek például a gyulladásos csont betegségek és a csont ressorpciős betegség [lásd például: D.R. Bertolíni et a.
Natúré, 319, 516-518 (1986); A.Konig et al . Boné
Transplantatíon, 58,
Miner.Res., 3, 621-627 (1988); U,Η.bemer, A.öhíin, J.Bone Ménem
Rés,, 9, 147-155 (1993); és G.Shankar, P.B.Stern, Boné, 14,
871-876 (1393)]:, a hepatitis, beleértve az alkoholos hepatitis-t [lásd például: C.J, McClain, O.A.Cohen, Hepatology, 9, 348-351 (1989); M.S.Felver et al«, Alcohol,Clin.Exp.Rés.., 14, 2:55—259 (1990) ; J.Hansan et al., Hepatology, 20, 461-474 (1994)],- a vírus hepatitis-t [lásd: N.Sheron et al., J.Hepatol.> 12, 241-245 (1991); M.dlHussain et al., J. Cián. Pathol., 47, 1112-1115 (1994)], és a fnlmlnáns hepatitis-t; továbbá az alvadási zavarok [lásd például: T. van dér Roll et .al., N, Sngl. J. Med., 322, 1622-1627 -(19:9-0.); 1, van dér Roll et al., Prog, Cl in. Siói, Rés., 367, 55-60 (1931)], az égések [lásd például: B.R.Giroir et al.,
Am. J. Rhysioi, , 267, H113-124 (1994) ; X.S.Liu et al., Burns, 20,
40-44 (1994)1, a. reperfűziós sérülés (lásd például: W.S.Scales et al., Am. J. Physiol., 267, G1122-1127 (1994); C.Serrick et al.,
1158--1162 (1934); Y.M.Yao et al. ,
Resusoítation, 29, 157-168 (1995)], a kelőid képződés [lásd például: R.L.McCauiey et al., J. Clin, Immunoi., 12, 300-308 (1992)], a hegszövet képződés, pyrexia, a periodontáiis betegség, a kóros elhízás és a besugárzásos toxlcítás.
A találmányt a következő példákkal szemléltetjük. Szék azonban a« érteimezendők úgy, hogy korlátozzák á találmány oltalmi korét. Az Idézett szakirodalmi közleményeket és szabadalmi iratokat ebben a bejelentésben referenciaként tekintjük.
1.
Humán antitestek hTNFa-ho® való kötődésének kinetikai analízise «φ ♦ * « * * »φ ·* dietíl-amino-propil)-karbodümid hidroklorid-dai (EDC)
A ligandum (bioszenzor mátrixon immobilizált bíotinezett rekombináns humán TEFa (rhTHFai] és a vizsgáit anyag (oldatban lévő antitestek) között valós idő alatt lezajló kölcsönhatásokat (real-time internet íons): felületi plazmon rezonancia (SPR surface plasmon resonanoe) segítségével mértük, BIAcore rendszer (Pharmacia, Píscataway, EJ., ü'SA.) használatával. /Plazmon - egy sejt teljes extrakromoszómális állományának. gyűjtőneve) . A rendszer egy dextrán bioszenzor mátrixban a bekövetkező protein koncentráció változások észlelésére a SPR optikai tulajdonságait használja fel. A proteineket — ismert koncentrációk, mellett — kovalens kötéssel kötjük a dextrán mátrixhoz. Amikor antitesteket injektálunk a dextrán mátrixon át, az injektált antitestek és az immobilizált liga η-dum között létrejött specifikus kötés megnövekedett mátrix protein koncentrációt eredményez, amely változást idéz elő az SPR szignálban. Az SPR szignál ezen változatait rezonancia egységként (Rü = resonanoe unit) regisztráljuk és egy szenzogramm y-tengelyén az idő függvényében ábrázoljuk.
Annak érdekében, hogy a biot iné zett. rhTHFa immobiiizálását a bioszenzor mátrixon elősegítsük,· sztreptavidint kapcsolunk kovalens kötéssel a dextrán mátrixhoz szabad amin. csoportokon keresztül ügy, hogy először aktiváljuk a mátrix karboxil csoportjait 100 mM N-hidroxi-szukcinimid-del (NHS) ás 400 roM N-etii-N’-(3Ezután sztreptavidint nyomatunk át az aktivált mátrixon. Harmincöt mikroliter sztreptavidint — 25 gg/ml; nátrium-acetátban oldva, pH
4,5 — nyomunk át az aktíváit bioszenzoron és a proteinen, lévő szabad -aminok közvetlenül kötődnek az aktivált karboxil esooor·*·♦*·
Λ>
« * * »*« ♦ tokhoz. A lereagálatlan EDC~é.sz tere két 1 M etano-lamin injektálásával dezaktivéljük. A sztreptavidínnel konjógáit bíossenzor csípek a kereskedelemből is beszerezhetők. (Pharmacia, SR~10Qö-~16; Pharmacia Biosensor, Piscataway, N<J. USA) .
A foiotinezett rhWPa~t a kővetkezőképpen készítjük; először feloldunk 5,0 mg biotint (B-biütinil-s-amino-kapronaav - N-szukcinimid észter; Boehringer Mannheim, kát,szám: 1008 960) 500 pl dimetil-szulfoxidfoan, és igy egy 10 mg/ml koncentrációjú oldatot kapunk. Tíz míkroliter biotint adunk, az rhTNFa 1 mi-éhez (2,65 mg/ml mellett), hogy egy 2:1 bitón:rhTNFa arányt kapjunk. A reakcióelegyet óvatosan elkeverjük és 2 órán át szobahőmérsékleten, sötét helyen inkubáljuk. Egy PD-10 oszlopot — töltet; Sephadex G--25M (Pharmacia, kát.szám: 17-0351-01) — 25. mi hideg .PBS-sel hozunk egyensúlyba és falviszánk rá 2 ml rhTNPa-biotin-t. Az oszlo-
pót 10 x 1 ml hideg PBS-sel
ΟΡ2δδ:-οη olvassuk le (1,0 OD - 1
egyesítj ük és fel ha sználásig
rhTNFa szintén kapható a
mg/ml). A megfelelő frakciókat -OÖ°C~on tároljuk. Bíotinezett
Minneapolís, MN.,· USA? kát. szám: FTAQOj.
A mátrixon sztreptavidin útján izmobliizáiandő bíotinezett rhTNFa-t 0,05 % (BIAcore) P20 felületaktív szerrel (Pharmacia
BR-1000-54, Pharmacia Biosensor, Piscataway, NJ., USA) kiegészített PSS futtató pufferrel (running buffer) (Gibco SRL, Grand
and, NY., USA; kát.szám: 14190-14 4) hi gátjuk. Az rhTNFa-spe-
'ikus antitestek . meghatározására k< ötési vizsgálatot végzünk a
•étkezőképpen: a· bíotinezett rhThFd. részi .ete.it (25 nM; 10 μΐ-es
;z letek) át nyoma tjük a sztreptavídi .nnel konj ugált dextrán mát-
* * '*«·*·e redménye kkei, rlxon 5 μΐ/perc átfolyási sebességgel. A protein injekciója előtt és közvetlenül utána egyedül PBS puffért folyatunk át minden cellán. Az alap-szignál és a híotínesett rhTNFa injekció befejezése után körülbelül 30 másodperccel kapott szignál közötti nettó különbséget tekintjük a kötési érték {körülbelül 500 RU) mértékének. Mértük az rhTN Fa-specifikus: antitestek immobilizált bioelnézett rhTNFa-hoz való közvetlen kötődését is. Az antitesteket PBS futtató pufferben (2ö pg/ml) hígítottuk és 25 μϊ-es részleteket nyomattunk át az immobilíráit protein mátrixokon 5 μΐ/pere átfolyási sebességgel. Az antitest injekciója előtt és közvetlenül utána csak PBS puffért folyattunk át az egyes cellákon. Az alap szignál és az antitest injekció befejezése utáni szignál nettó különbsége mutatja a szóbanforgó minta kötési értékét. A bíoszensor mátrixokat löö mM sósav oldattal regeneráljuk a következő minta injektálása előtt. A felbomlási sebességi állandó (off rafe; constant) , a kötődési sebességi állandó (on rate; Kon constant) , az asszociációs sebességi állandó (assoeiation rate; Ka constant) és a disszociációs sebességi állandó (dissociation rate; Kd constant) meghatározására BIAcore kinetikai kiértékelő software-t (2,1 verzió) használtunk.
A D2F7 (lgG4 teljes hosszúságú antitest) bíotinezetf rhTKFa-hoz való kötődésének reprezentatív eredményeit összehasonlítva az egér MÁK 1SS mAt [Fíab'h fragmentum]: használatával kapott
1. táblázatban foglaljuk össze.
az
4Φ
1, táblázat
A D2E7 IgG4 vagy a MÁK 195 kötődése biotínezett rhTKFa-hoz
Antitest Afc, nM JzhWb,h5tbt£ J® 1 At,kötött 1 0*9 sec’·’ j (középért.) j
1
(D2E7 267 I 373 1215 1.14 8,45 x ÍO-5
133 420 j 1569 j tio 5,42x10^ I
. . ,6? 434 1633 1,31 4,75x10-3
33 j 450 1532 1.19 4,46x10-3
: 17 460 1296 ' 0.98 3,47x10-3
8 486 936 ' O? ' 2,63x10-3
. 4 j 489 536 Ö .38 ' ......'2,Í7 x 10-5
2 | 470 244 0.18 i 3,6030*3
(438x10-3) j
1 MÁK 195 ... 400 I 375 SS 1 ; .t..,h2<> | 53SX10-3 |
,..,200 1 400 1080 1,38 434x10-3
| ·· : J - IÖÖ ΐ 419 1141 . 1 1.39 3,54x30-3
j 1 50 i 427 nőt | 1.32,, 1 3^67x10-3
25 | 446 937 1.09 j 4,41 x 10-3 1
[ | '13 - | 404 708 “] 0,78 j ~,66”xWrj
6 | 474 433 Ί 0.47 i 7,37x10^
1 j 3 451 23! ~í 0.26 j 6,95 x 10-3
I 7ζ$4 xIP>.....|
Egy második kísérlet-sorozatban a D2E7 egy IgGl teljes hosszúságú formája és a bio-tinezett rhTKFa közötti molekuláris kinetikai kölcsönhatások kvantitatív analízisét végeztük el a BIAcore technológiát használva, mint fent leírtuk. A kinetikai sebességi állandókat a 2., 3. és 4. táblázatban foolaljuk össze.
» κ
2. táblázat
A D2S7 és a biotinezett rhTNFa közötti kölcsönhatása kiszámított disszociáciös sebességi állandók
3. táblázat
A D2S7 és a biotinezett rhTNFa közötti kölcsönhatásra kiszámított asszociációs sebességi állandók
4. táblásat.
A D2E7~r© és biotinezett rfeTNFa-ra kiszámított.
reakció állandók
A dísszociácíös és asszociációs sebességi állandókat ügy számítottuk ki, hogy B1A analízis software-rei analizáltuk a szenzogramm disszocíációs és asszociációs szakaszait. Feltételeztük, hogy a D2E7 és a biotinaséit rhTKFa molekula közötti kölcsönhatás a szokásos kémiai reakeiófcínetíkát követi: a disszociáció zérus rendű reakció és az asszociáció el sórendű reakció szerint megy végbe. A kinetikai adatok analíziséhez szükséges molekuláris modellek megválasztásában, az analízis kedvéért, csak a bivalens D2S7 antitest egyik karja és a trimer bíotínezett rh'TNFa egy egysége közötti kölcsönhatást vettük számításba. Három -egymástól független kísérletet végeztünk és az eredményeket külön analizáltuk. A D2E7 és a biotinezett rhTNFa közötti kölcsönhatás számított dísssociációs sebességi állandójának (¾) középértéke 8,81 ± 1,06 x lÖ^.sec'1 és az asszociációs sebességi állandó Ks - 1,31 ± 1,26 x 10* fcíR.sec* volt, Az intrinszik dísszocíácíős állandó <Ka~t5 ezután a & = ká/k« képlettel számítottuk ki. Tehát ♦ * « a D2E-7 antitest rh.TNFa-ra vonatkoztatott közepes Kd értékére a kinetikai paraméterekből 6,09 ± 3,42 x 10iy M értéket kaptunk. A D2E7 IgGl formájára (lásd a 2., 3. és 4. táblázatot) és a D2E7
IgG4 formájára (lásd az 1. táblázatot és a 2. és 3. példát) kapott kinetikai értékekben lévő kis különbségeket nem tekintjük valódi olyan különbségeknek, amelyeket vagy egy IgGl vagy egy lgG4 konstans szakasz jelenléte okoz, inkább azt gondoljuk, hogy ez a pontosabb antitest koncentráció méréseknek tulajdonítható, amelyeket az IgGl kinetikai analízisénél használtunk. Ezért azt gondoljuk, hogy a 02E7 IgGl formájára kapott kinetikai értékek a D2E7 antitest legpontosabb kinetikai paramétereinek tekinthetők.
A D2E7 CDA3 dóménak alaninnal végzett pásztázó mntagenizálása
Standard technikák használatával a D2E7 VL és D2E7 VH szaka-
azok CBR3 de ménjei hosszában e gyetien aia
soro zat mutagenizálá- st végeztünk, A könnyű
ábra mutat , el oe i. a z LD2B7+.A1, LD3Ε7+.Α3,
L Dk E 7 *. A7 éS LD2£?u A8 szefcvenci ..&k. Oíjy sictn
nak a B2E7 VI , CDR3 d ómén 1., 3., 4 · 7 Zi 9 f 9 f f *
bán) A n· ebé z lánc mutációk a 2B ábrán 1
HD2E 7^.A2, Hl i2.A~t.A3 , HD2E7'\A4, HB2E7+.A5,
Hb2E7+.A§ és HD2E.7 + .A9 szekvenciák egy alanin mutációt tartalmaznak a D2E7 VR CDR3 dómén 2, , 3., 4.,, 5., 8., 8., 9., 10» illetve 11. pozíciójában. Az rhTNFu vad típusú D2E7 Vb-bal és VH-ból álló antitesttel végbemenő reakciójának a kinetikáját Összehasonlítot tűk olyan antitestekkel történő reakciójának a kinetikájával, . 1» amelyekben 1) egy vad típusú D2E7 VI. egy alanínnal szubsztituált D2E7 VH-val párosodott; 2} egy vad típusú D2S? VH egy alaninnal szubsztituált D2E7 VL-lel párosodott; vagy 3) egy alanínnal szubsztituált D2S7 VI egy alaninnal s.zubsziít uált D2E7 VH-val párosodott. Mindegyik antitestet teljes hosszúságú IgGá molekulaként teszteltük.
Az antitestek rhTHFa-vai való kölcsönhatásának kinetikáját felületi plazmon rezonanciával határoztuk meg az 1. példában leirt módon. A különböző VH/VL párok felbomlási sebességi állandóját (Eoff) az 5. táblázatban foglaljuk össze.
5. táblázat
D2S7 alania-scan mutánsok kötődése biotxnezett rhTNFa-hoz
VH KaOÍÍÜSS?*)
Γ D2E7 VH................ D2E7 VL 9,65x10·*
[. |
L HD2E7\AÍ - D2E7 VL 13 * ít........................J
I HÖ2£7*.A2 ............. D2E7 VL 4,6 χ 104
í HD2E7\Á3 Γ D2E7VL 8,15x10-* Ϊ
| HD2E7*.A4............. D2É7 VL LSxlö*4
HD2É7*jK5 D2E7VL ί 2,35 x lö-4
r~~ HD2£?\A6................. D2E7VL 1 2,9x10-4
í HD2E7* A7 D2E7 VL 1,0x10-4
HD2E7*AS .......... B2E7 VL ( 3,1 x 10-4
' “~KD2EKa9 B2E7 VL | 8fI x 10-4
I - 1 -
D2E7 VH LD2E?\A1 1 6,6 x 10-3
D2E7VH LD2E7*A3
í D2E7 VH LD2E7*A4 | 1,75x10-4
B2E7VH LD2E7*Á5 . f~——
Ezek az eredmények art mutatják, hogy a D-2E7 Vb és VH szakaszok CDR3 doméjében a pozíciók többsége alkalmas egyetlen alanin csoporttal való szubsztitaáiásra. Egyetlen alanin szubsztitúciója a D-2.S? Vb CDR3 dómén 1,, 4., 5. vagy 7. pozíciójában vagy a. D2E7 VH CDR3 2.# 5., 6·., 8-, 9. vagy 10. pozíciójában lényegesen nem. befolyásolja a rhTNFa kötés felbomlási sebességét, összehasonlítva a vad típusú szülői D2E7 antitesttel. A D2E7 Vb CDR3 8. oozíciojáoan vagy
VH CDR3 3. pozíciójában végzett alanin szubsztí-túció 4-szer gyorsabb Κΰ£έ· értéket és egy alanin sznbszti-
t vi Cv .1. o <λ i.· i2S7 VH CDR3 4. vagy 11. pozíciójában 8-szór gy orsabb
Koff értéket adott, ami azt mutatja. hogy ezek a pozíciók a krit.i-
rhTNFa-hoz való kötőd ősre nézve. Egyetlen aianin
szubsztitúció a D2E-7 VL CDR3 dómén 1., 4,, 5,, 7,. vagy 8. pozíciójában, vagy a D2E7 VH CDR3 dómén 2., 3., 4., 5., 6«, 8., 9., 13. vagy 11, pozíciójában még mindig olyan anti-rhTNPa antitestet eredményez, amelynek Kcí.f értéke 1 x 10“3 sec1 vagy ennél kisebb.
D2S7-tel rokon, antitestek kötési analízise
Az 1. példában leirt felületi plazmon rezonancia segítségévei egy sor D2E?-tel rokon szekvenciája antitestet analizáltunk — a
D2.E7-tei összehasonlítva — rhTWa-hoz való kötődésükre nézve. A vizsgált Vb szakaszok aminosavszekvenciáít az 1A és 1B ábra mutatja. A vizsgáit VH szakaszok aminosavszekvenciáít a 2A és 2B ábra mutatja. A különböző VH/VL párok (a jelzett formában, vagy mint teljes hosszúságú IgGl vagy ig€-4 antitest, vagy mint egy scFv) Koff sebességi állandóit a S. táblázatban foglaljuk össze.
* ♦
S„ táblázat
D2E7-tel rokon antitestek kötődése blotiaeaett rUTWFa-hoz
VH VL j Forma, &off£sec;4
D2E7 VH O2E7VL IsGMgG4 9,65 χ 10-*
VH1-D2 LOE7 ÍgGVlgG4 | 7,7x10-3
VH1-D2 LOE7 scFv s 4,6 x lö”4
VHI-D2.N LOE7.T IgG4 j
YH1-D2.Y LOÉ7.A 7gG4 | .......2,7 x To7^-
VHHD2.N LGE7.A IgC.4 | ~~ X2 x ío*3
VH1-D2 EFB12 scFv 1
VHI-D2 2SD4 VL Stfv 1 1,94 x IÖ”3
3C-H2 LGE7 scFv | UxKN '
2SO4 VH LOE7 scFv 6,07 x 10-3
2SD4 VH 2SD4 VL scFv 1,37x10*3
VHIÁH 2SD4VL scFv 1,34 xlö*2
VH1BI2 = 2SD4 VL scFv LOÍx 10*3 —
vhibii 2SO4.VL scFv 9,8 x 10*3
' VH1E4 2SD4 VL scFv
VH1F6 2SD4.VE scFv i ΐΒ71Ρ“ '
VH1D8 2SD4 VL scFv ; 9,5x10*3
VHIGl . 2SD4 VL scFv 2,Í4x 10-í..........
2SD4 VH EFB12 · scFv .........’ Cz x ícP ;
2SD4 VH VL10E4 scFv ' ......9,6x103.............Ί
2SD4 VH VL1Ö0A9 scFv
2SD4 VH VL100D2 scFv L4ÍX 10^ ~ΐ
2SD4 VH VL10F4 scFv ULxHH
2SD4 VH VLLGE5 scFv l,16x!0*2 -
2SD4 VH r~ VLL8F9 scFv 6,09x10*3
2SD4 VH i VLLOFlö scFv 1,34 x 10-3
25D4VH | VLLGG7 scFv 1,56x10*3
2S D4 V H 1 VLLOG9 scFv 1,46 x 10*3
j 2SD4 VH VLLOH1 f scFv
2SD4 VH VLLGHIÖ 1 scFv 1,12x10*3
2SD4VH VLIB7 1 scFv 1,3 x IÖ”2
2SD4 VH VLICl { scFv Γ 136x10-3
2SD4 VH VLIC7 | scFv 2,0 χ 10”2
2SD4 VH VL0.1F4 | scFv i 1,76x10*3
f 2SD4 VH VLCUHS | scFv t 1,14 x IQ*2............|
♦ φ
antíte >s f e mer (azaz IgG formáknál) - — am
L0L7, L0E7.T és L0E7.A szekvenciák Vo '*? i A-U»·..
vagy egy tr> eonín vagy egy alanin van
Továbbá a kapott als' azt mutatják, hogy a
9, pozícióban — kapott alacsony sebességi állandók (például:
x ÍÖ4 sec'-) azt mutatják, hogy a D2E7 VL CDR3 9. pozícióját e két csoport közül bármelyik elfoglalhatja anélkül, hogy lényegesen befolyásonák a Κ,,ο- értékét. Ennek megfelelően a D2E7 VL CGRS-ra általánosan elfogadott motívum a Q-R-Y-N-R-A-?-Y~(T/A) (3. számú szekvencia) aminosavszekvencís osony sebességi állandók (például: 1 x I0~4 sec*1} azoknál az antitesteknél, amelyeknél a VH~t a G2E7, VH1-D2N és VH1-D2.4-bői választottuk — amelyek vagy egy tiroz int vagy eg\· aszparagínt tartalmaztak a 12. pozícióba:
D2.E7 VH CDR3 12. pozícióját e két csoport közül bármelyik elfoglalhatja anélkül, hogy lényegesen befolyásolnák a értékét. Ennek megfelelően a D2E7 VH CDR3-ra általánosan elfogadott motívum a V-S-Y-L-S-T-A-S-S-L-G-(Y/N) (4, számú szekvencia) aminosavszekvenica.
A 6. táblázatban bemutatott eredmények azt bizonyítják, hogy scEv formában a 2SD4 VL vagy VH CDR3 szakaszt tartalmazó antitestek gyorsabb KCfí értéket (például: Kert 1 x 10~s sec3', mutatnak, összehasonlítva a D2E7 VL vagy VH CDR.3 szakaszt tartalmazó antitestekkel. A 2SD4 a VL CDR3-ban a G2B7~töl a 2», 5. és 9. pozíciónál különbözik. Mint fent megtárgyaltuk, a 9. pozíciót azonban elfoglalhatja az alanín (mint a 2SD4-ben) vagy a treonin (mint a D2S7-ben) anélkül, hogy lényegesen befolyásolnák a értékét. Tehát, a 2SD4 és D2E7 összehasonlításából kitűnik, hogy a D2S7 VL
« * * ♦ * * « , * * « V * · « * A ♦ * * * * * Φ * ♦ * * „ > X * < · * ♦ * ♦ ♦ 0* «♦*>
. kapó sóletban meg-
sst hTNFa-val váró
mint kontakt cső-
iák az antitest ké-
tőhelyén vagy komoly mértékben járulnak hozzá az antitestmolekuls ezen szakaszának szerkezeti, felépítéséhez, Amí a 2. pozíció fontosságát illeti:. az Arg csoport helyettesítése (a LOE7-ben, amelyben a VL CDR.3 azonos a- D2E7-ével) Lys csoporttal (az
SF Dl Z. ben) kétszeresére gyorsítja a .felből alasr sebességet. Amí
az 5. pozicí .6 fontosságát illeti: az Arg c sopőrt he1ye11 e s í tése
(a D2E7 -ben) Alá csoporti al (az LD2E7*.A5~ben), mint a 2. példa-
bán lei r juk. szintén kötszere sére gyors ítja a felbomlási sebessé-
get » x v-> vábbá , Arg csoport nélkül úgy a 2., : mint az 5. pozícióban
y 3 2SD4 -ben) a felbomlási sebesség ötször g; yorsafob. Meg kell jβ-
gye zni azonban, hogy bár az 5. pozíció fon ίο s a hTNFra-hoz való
kötődés javítása szempontjából, egy ebben a pozícióban végrehajtott változtatás más pozícióknál végzett változtatásokkal hatálytalanítható, mint ezt a VLLÖE4, VLLÖH1, vagy VLO.1H3 szekvenciák eset én láthat j uk.
A VH CDR3 szakaszban a 2SD4 a D2E7-tőI az 1., 7. és 12. pozícióban különbözik, Azonban, mint fent megbeszéltük, a 12. pozíciót elfoglalhatja az Asn (mint a 2.SD4~ben) vagy a Tyr (mint a D2£7~ben) anélkül, hogy lényegesen befolyásolnák a értékét, A 2SD4 és a D2S7 összehasonlításából megállapítható tehát, hogy a D2E:7 VH CDR3 1. és 7. pozíciói kritikusak a hlbPa kötése szempontjából. Mint fent említettük, ezek a csoportok közvetlen szerepet játszhatnak kontakt csoportok gyanánt az antitest kötőbe84 lyén vagy komoly mértékben járulhatnak hozzá az antitest molekula szerkezeti felépítéséhez ebben a szakaszban. Mind a két pozíció fontos a. hTNFa-hoz való kötődésre nézve, mivel ha 3C-H2 VH CDR3~at {ebben egy valint cseréltünk a laninra az 1-es pozícióban a
O2E7 VH CDR3~ra vonatkozóan) használunk, az scFv-nak háromszor gyorsabb a felbomlást sebessége, mint amikor D2.E7 VB CDR3-at használunk, de ez a felbomlási sebesség még mindig négyszer lassúbb, mint amikor 2SD4 VH CDR3~at használunk (amely a D2E7 VH CDR3-hoz viszonyítva, mind az 1., mind a 7, pozícióban változtatásokat tartalmaz.í .
A D2B7 funkciós aktivitása
A Ο2Έ7 funkciós aktivitásának vizsgálata céljából számos •assay-ben mértük az antitest hTKFa aktivitást gátló képességét mind ín vitro, mint in vivő.
A. Wcíindukált cítotoxieitás neutr&lísálás L929 sejtekben A humán rekorahínáns TNEa (rhlNBo) sejt-citotoxicitást idéz elő egér L929 sejteken 18-24 órás inkubációs időtartam után. Humán anti-hTNFa antitesteket értékeltünk L929 assay-kben úgy, hogy az antitesteket rhTNFa-vai és a sejtekkel együtt inkubáltuk a következőképpen: 96-tartályos mikrotitráló lemezeken 100 μΐ anti- h'TNFa antitestből 1/3-os párhuzamos sorozathígifásokat készítettünk 10 % fetális marha szérumot (FBS) tartalmazó RPMI táptalaj használatával. .Minden mintát tartalmazó tartályba 50 μΐ r.hTNFa~t mértünk, és így 500 pg/ral végső· koncentrációt kaptunk. A lemezeket ezután 3Ö percig szobahőmérsékleten inkubáltuk. Ezt kővetően μΐ-ben ΤΝΕα-szenzítiv L929 egér fibroblaszt sejteket adtunk minden tartályhoz — Így 5 χ 104 sejt·/tartály végső koncentrációt értünk el — és 1 ug/ml aktihomiein-D-t. A kontrollok táptalajt plusz sejteket és rhTNFa-t plusz sejteket tartalmaztak. Ezek a kontrollok és egy TNFa standard görbe — 2 ng/ml-toi 8,2 pg/ml-ig — biztosították az assay minőségét és azt, hogy rálátást kapjunk a
.ízáciőra. A lemeze két egy éjszakán át (18-24
i, 5 % CG·-. tart almú a tmo s z f é r áh a n i n'kübá.11 u k.
nden tartálvbc il 100 μΐ táptalajt vettünk ki és h
FES-ben. S0 m g/ml 3 koncent rác í ój ű 3-(4,4- •dimetil
-il)-2,5~difenil~tetrazoXlum bromidot (M.TT? beszerezhető a kereskedelemben, a Sigma Chemical. Co., cégtől; St.Louis, MQ., USA). A lemezeket ezután 4 órán át 37*C-on inkuháltuk. Minden tartályba 50 hí 20 %-os nátríum-dodecil-szulfátot (SOS) mértünk, majd a lemezeket egy éjszakán át 37°C~on inkuháltuk. Az. optikai sűrűséget 570/630 nm~en mértük, minden mintára görbét vettünk fel és az ICso értékét standard módszerekkel határoztuk meg.
A különböző VL és VH párokat tartalmazó humán antitestek reprezentatív eredményeit a MÁK. 195 m&t~te.l kapott eredményekkel összehasonlítva, a 3. ábrán és az. alábbi 7. táblázatban mutatjuk.
be.
A 3. ábra és a 7- táblázat adatai bizonyítják, hogy a E2E7 humán antí-hTNFa antitest és a különböző D.2E7-tel rokon antitestek, a· TNFet-indukáit L929 citotoxicitást megközelítőleg hasonló kapacitással neutralizéiják, mint a MÁK 195 egér antihTMFa mát
7, fcáfeláis&fc
A ΤΝΡα-indukált L92S citotoxxcitás neutxaXizálása
2.SD4 | LOE7 | SCC v 4,3 x 1Ö“8'
VH1-D2 1 2SD4 1 soFv 1, 0 x 108
VÜ1-D2 j LOS 7 i j scFv/IgGl/IgG4 | 3,- 4 x 10“15
VH1.D2.Y 1 LOS7,T ) IgG4 ] 8,1 x 10“iJ 1
i r-t·'·*'
MÁK 195
MÁK 195
Egy másik kísérlet sorozatban a D-2E7 dukált L929 citotoxioltást nentralízáló fentiek szerint. Károm független vizsgál;
L'gGl formájának TNBa-inképességét vizsgáltuk a .; eredményét és ezek át. t ab1ázat fog1a1ja ö ssze.
8. táblásat
A Wö-indukált 1.929 tlfotoasicitás xxeutK’&XxKáXása U2E7 IgGX-gyel
Sz a kísérletsorozat megerősítette, hogy a D2E7 teljes koszszúságú IgGl formája 1,25 ± 0,51 x 10iW M IGSS átlagérték mellett neutralizálja a TNFa-indukált 1929 citotoxicitást.
Β. Λ Wa U-927 sejteken léve TSíFöf-receptorokhoz való kötődésének gátlása
Megvizsgáltuk, hogy a humán anti-hTNFíX antitestek képesek-e gátolni a bTFFa kötődését a sejtek felületén lévő hTNFa-receptorokhoz , A vizsgálatban 0-937 sejtvonalat ÍATCC CRL 1593; 1974; használtunk, amely egy hTOFa-recentorokat kifejező humán hisztio oltás sejtvonal. Az U-937 sejteket 10 % fatális marha szérummal (Hyclone A-llll; Hycone Laboratories, Logan, OT. , USA), L-glutamlnnal (4 nM) , HSPSS pufferrel (10 tíí), penicillinnel (100 p.g/ml} és sztreptomicínnel (100 pg/mi} kiegészített RPMi táptalajon tenyésztettük. A teljes hosszúságú IgG antitestek aktivitásának
v xZaQáia ta végett az ü-937 sejteket 1. mg /mi humán
T /ί * Sigma Ch.es rácai Co., St.,Louis , MO. , USA) kit
-ben 45 nercig j é< jen élőink ubáltuk é: s ezután a sejt
* * # » raos-t.uk kötő pufferrel. A receptor-kötési assay-hez az U-937 sejteket 9ő-tartályos míkro-titráló lemezeken {Costar 3799; Costa r Corp., Cambridge, USA) (5 x 106 sejt/tartáiy) kötő-pufferben (0,2 % marha szérum albuminnai kiegészített PB'Sj ^-I-jelzett rhTNFa-vai együtt (3 x lö·*0 M? 55 μ€ί/ϊ&1; NEN Research Products, Wilmington, DE., USA) inkubáltuk antí-hTN'Fa antitestek jelenlétében, vagy anélkül, összesen 0,2 ml-ben. A lemezeket jégen inkubáltuk. másfél órán át. Ezután minden mintából 75 μΐ-t vittünk át dibutii-ftalát (Sigma D-227Ü;- Sigma Chemical Co,, St.Louis, MO., USA) és dinonil-ftalát (1CM 210733; T.CN, Irvine, CA, , USA) keverékét tartalmazó 1,0 ml~es teszt-csövekbe. A teszt-csövek a dibutil-ftálét és dinonil-ftalát 2:1 arányú keverékéből 300 μΐ-t tartalmaztak. A szabad (azaz kötetlen) ii:5I~j elzett rhtNFa-t 5 perces mikrocentrifugálássai távolítottak ei. Ezután minden egyes teszt-cső végét, amely a. sejt-üledéket tartalmazza, egy mikrocsőollő (Bel-Art 210180001; Bei-Art Products, Peguanno-ck Ne., USA) segítségével levágtuk. A sejt-üledék p60 vagy p80 TNFa-receptorhoz kötött *2aI-jelzett rhiNFa-t tartalmaz, míg az olajos keverék feletti vizes fázis a feleslegben lévő szabad a251~ jelzett rhTNFa-t tartalmazza. A sejt üledékeket számláló csőbe (Falcon 2052; Becton Dickinson Labware, Lincoln Park, NJ., USA) gyűjtöttük össze és szcintiliációs számlálóban számláltuk.
A 4. ábrán láthatók a reprezentatív eredmények. Ezekben a vizsgálatokban a hTNFa-nak U-937 sejteken megjelenő hTNFa-receptorokhoz való kötődését a D.2E7 3 x 10”:0 M 1C$q érték, mellett gátolta. Ezek az eredmények igazolják, hogy a D2S? humán antihTNFa antitestek olyan koncentrációk mellett «utolják az rhTNFa φ φ * kötődését 0-937 sejteken lévő· hTEFa-receptorokhoz, amelyek azonosak az egér MÁK 195 anti-hTNFa koncentrációival.
Egy másik kisérletsorozatban a D2E7 IgGl formájának a hTNFo ü-937 sejteken lévő hldFa-reoeptorokhoz való kötődése elleni gátló hatását vizsgáltuk, mint fent leírtuk. Három független vizsgálat eredményét és ezek átlagát a 9. táblázat foglalja össze.
G-337 sejteken D2E7 IgGl-gyei
Ez a kísérletsorozat igazolta, hogy a D2S? teljes hosszúságú IgGl formája átlag 1,56 ± 0,12 κ 10*s (M) IC5o értékkel gátolja U-937 sejteken a ThF-receptorhoz való kötődést.
A D2H7 gátló hatását a i23I-rhTdFa individuális p55 és p?5 receptorokhoz való kötődésére szilárd fázisú radioímmunassay-ben (EIA) vizsgáltuk. A D2E7-nek a különböző INF-receptorokra vonatkozó ics<f értékeinek méréséhez az antitest változó koncentrációit a i2~I-rh?NF 3 x 10“x° koncentrációjával ínkubáltuk. A keveréket ezután külön lemezeken — az egyik a pS5, a másik a p75
TNt-re90 ♦ * φφ φφ ceptor tartalmazta — teszteltük dózis függő módon, Az eredményeket a 10. táblázat fooialia össze.
IMF receptor — p55 és p7S TNFR
IgGl-gyel
A ^“'I-rhTNF ör937 sejteken kifejeződő pS5 és p75 TÉT-receptorhoz való kötődésének gátlása D2E7-tel egy egyszerű S alakú görbét ír le, ami az egyes receptoroknál hasonló IC50 értékekre utal. A rekombináns TNF-receptörokkal szilárd fázisú radioiramunassay-vel (RIA) végzett kísérletekben a ix!b-I“rhTNF pSS és p75 receptorokhoz való kötődésének D2E?~tei való gátlására 1,47 x 10~9 M, illetve 1,26 x löi! M ICjo értékeket számítottunk ki. Az IC50 értékek csökkenését a szilárd fázisba·; valószínűleg az okozta, hogy a receptorok sűrűsége nagyobb a R1A alakban, ugyanígy az .rhTNF-é, amely hasonló ICs© értékekkel volt gátolt. A 125I~rhTNF p55 és p75 receptorhoz való kötődésének gátlása jelzetlen rhTNF-fel a következő IC5.3 értékeket adta: 2,31 x 10~s M, illetve 2,70 x 10's umbilical vein
KLáM-l eroresszio gátlása WSC-ea humán köldökvéna endoteliális sejtek (HUVEC ~ humán . endotheiial eeil) sejtjeik felületén endoteliális #<·♦ ** sejt leufcocíta adhéziós molekula-! (ELAM-l ~ endothelia! cell leukocyte adhesion molecula 1) kifejezésére indukálhatok rhT'NFa kezeléssel. A jelenséget úgy tudjuk kimutatni, hogy az rhTNFa-vai kezelt HüVEC-et egy egér anti-humán ELAM-1 antitesttel reagálhatjuk. A humán anti-hTNFa antitestek azon képességét, miszerint az ELAM-1 HÜVEC-en történő TNFa-indukált expresszlóját gátolják, a következőképpen határozzuk meg: HUVSC-et (ATGC CÉL 1730) viszünk 9S-tartályos lemezekre (5 x lö* sejt/tartály) és a lemezeket egy éjszakán át 3?a'C-cn inkubáijuk. A következő napon egy mikrotitrálő lemezen a humán anti-hTNFa antitestből sorozathigitásokat (1:10) készítünk. A híígításokat 2Ö-1ÖÖ pgZml antitesttel kezdjük, Egy 4,5 ng/ml koncentrációjú rhTHEa törzsoldatot készítünk, majd az antitestet tartalmazó tartályokhoz hozzáadjuk az rhTNFa alikvot részleteit és tartalmukat jól összekeverjük. A kontrollok csak táptalajt, táptalajt plusz anti-hTNFa antitestet és táptalajt plusz rhTNFa-t tartalmaznak. A HüVEC lemezeket kivesszük az inkubátorból (ahol egy éjszakán át 37’C-on tartottuk) és a táptalajt óvatosan leszivatjuk a tartályokból. Ekkor a HüVEC lemezek minden tartályához 200 μΐ antitest - rhTNFa keveréket adunk. A HüVEC lemezeket ezután tovább inkubáijuk 37°C-on 4 órán át. Ezt követően egy egér a.nti-ELAM-1 antitest törzsoldatot l:1000~re hígítunk RPAl-ben, A HüVEC lemez tartályaiból óvatosan kiszívjuk a táptalajt, az anti-ELAM-1 antitest oldatból 50 μΐ-t mérünk be. tartályonként ás a HÜVEC lemezeket 60 percig szobahőmérsékleten inkubáijuk. Készítünk egy i23X-j-slzetfc anti-egér lg antitest oldatot EEMi-ben íkörülbelül 50,000 cpm 50 μΐ-ben). A HÜVEC lemezek minden tartályából óvatosan kiszívjak a táptalajt, a tartályokat
6?
. ** * » φ * * * « ♦ ·*ϊ „ *« .·*» * * φ φ
.«ί*’·.* kétszer mossuk RPMI-vel. és minden tartályhoz 50 μΐ i2*I-jelzett anti-egér lg oldatot adunk. A lemezeket 1 óra hosszat szobahőmérsékleten inkubáljuk, majd minden tartályt háromszor mosunk RPM1-vel. Ezután minden tartályhoz: 180 μΐ 5 %-os SDS~t adunk a sejtek lizárása céljából. Ezután minden tartályból csőbe visszük át a sejt lizátuaokat és szcintillációs számlálóban számlálunk.
Az 5, ábrán a reprezentatív eredményeket mutatjuk be. Ezekben a kísérletekben a SLAM-l HWEC-en való hTNFa-indukált expressziójának D2E7-tel végzett gátlásának ICso értéke körülbelül 6 x 10~u M. Ezek az eredmények igazolják, hogy a D2E7 humán anti-hTNFa antitest olyan, koncentrációban, gátolja az ELAM.-1 HUVSC-en való
b?NFa~.in< lukéit e xp r e s s z í .ó j á t ,.
195 egér a nt i— hThFsx mát gátló
ff x ? másik k í s é r I e t s o r o z a t
HWEC-en való hTNFa-índukált
vizsgált! uk, ml ,nt fent leírtuk
nyét és ezek középértékét a 11.. táblázat foglalja össze,
XI. táblázat
Wa-indukált Sh&M-X expresszió gátlása D2E7 XgGl-gyeX
Kísérlet ICso [Ml
; 1 1 l,95x 1010
1,69 x 10i0
3 : 1,90 χ 10“1δ
: Középérték j 1,85 ± 0,14 χ 1Ό20
ο « * * * ' *« *
Ez a kísérletsorozat megerősítette, hogy a D2E7, teljes hoszszúságú IgGl formában, a TNFa-Indukált SLAM-1 expresszióját HUVEC-en 1,85 ± 0,14 x 10iü IC50 (M) értékkel gátolja.
A D2E7 IgGl neutralizációs hatékonyságát két másik adhéziós molekula -- ICAM-I és VCAM-l - rhWFa- indukált expressziójára is megvizsgáltuk. {ICÁM - intercellular adhesion mclecule; VCAM = vaseular coli adhesion molecuie). Minthogy az rhTNF titrálási görbe ICAM-1 expresszióra a 16. órában nagyon hasonló volt az SLAM-1 expressziős görbéhez, az rhTNF ugyanazon koncentrációját használtuk az antitest neutraiizáeiós kísérletekben. A HUVEC-et rhTNF-fei inkubáltuk a D2E7 különböző koncentrációival egy 37 ®C hőmérsékletű CCg-inkubátorban 16 órán át. Az 1CAM-1 expressziót
‘“P' í-ICAM-I antitest, majd jelzett birka an
test seg • ítségével m értük. Két független kísérletet
kiszámít· ottuk az IC5 0 értékeket. Egy nem-rokon humán
nem gátolta -az ICAM-1 expressziót.
A VCAM-l expresszíő gátlását tesztelő kísérleti eljárás azonos volt az EIAM-1 expressziét tesztelő eljárással, kivéve., hogy anti-VCAM-l mAt-st használtunk anti-ELAM-1 mát helyett. Három független kísérletet végeztünk és kiszámítottuk az IC^0 értékeket. Sgy nem-rokon IgGl antitest nem gátolta a VCAM-l expressz lóját..
Az eredményeket a 12.. táblázatban foglaljuk össze.
< « » * ♦·«:
12. táblázat
Ezek a kísérletek azt bizonyították, hogy a primer humán köldókvéna endotellális sejtek kezelése rhTNF-fe'l az adhéziós molekulák optimális expressziéját eredményezi. BlAM-i és 'VCAM-1 esetén a 4, éránál, ICAM-l-nél pedig a 16. óránál éri el maximumát a felerősített expresszió. A D2E7 meg tudta gátolni dózis függően a három adhéziós molekula expresszióját. Az SLAM-l, ICAM-1 és VCAM-l gátlására kapott ICss értékek a következők voltak: 1,85 x löi0, 2,17 x Í0~iö, illetve 1,01 x XŐ~iU M. Ezek az értékek nagyon hasonlóak, ami arra utal, hogy a.z ELAM-l, ICAM-l és VCAM-l expresszié indukálásához szükséges aktiválási szignál az rhTNF dózisa iránt hasonló igényeket támaszt. Érdekes módon, a D2E7 az ICAM-1 hoszszabb inhibíciós vizsgálatában hasonlóan hatásos volt. Az ICAH-l gátlás! assay-ben az rhTNF-efc és D2S7~et 16 órán át kellett együtt inkubálni HdVEC-cel, ezzel szemben 4 órára volt szükség az ELAM-l és VCAM-i gátlás! assay-kben. Minthogy a D2E7~nek alacsony a disszocíációs sebessége rhTNF vonatkozásában, elképzelhető, ί » , *·«. ,* » ·· * ·«« * — hasáb diagramm formában koncentráció függvényében.
hogy a 16 órás ko-inkubációs időtartam alatt nem volt jelentős versengés a HGVEC-en lévő TNF-receptorok iránt,
B. A hZWhx in vivő neutxalizáXásta
Három különböző ín vivő rendszert használtunk annak bizonyítására, hogy a D2E7 hatékonyan gátolja a hTNFa aktivitást ín vivő.
I. TNF-lndukélt letsiirás gátlása D-gaiaktózaajínnai szenzitizált egerekben
Rekombináns TNFa (rhTNFa) injekciója D-galaktózaminnal szenzitizált egereknek 24 órán belül halált okoz. Kimutatták, hogy a TNFa neutraiizáló szerek meggátolják a letalitást ebben a modellben. Vizsgáltuk ebben a modellben a humán antí-hTNFa antitestek hTNFa neutraiizáló képességét in vívó. Ennek érdekében C573I/6 egereknek intraperitoneálís (i.p.) injekcióval különböze koncentrációjú D2E7~IgGl~et, vagy egv kontroli proteint adtunk RBS-ben. Az egereket 30 perccel később 1 pg hTNFa-val. és 20 mg D-galaktőzaminnal — PSS-ben i.p. — chaliergeitük, majd 24 órával később megfigyeltük az állatokat. Előzőleg meghatároztuk, hogy ezen rhTNEa és D-galaktőzamin mennyiségek 80-90 % letalitást értek el ezekben az egerekben.
A 6. ábrán azokat a. reprezentatív eredményeket mutatjuk be — amelyek a %-os túlélést az antitest ábrázolják, A pontozott hasábok képviselik a D2E7~et, míg az üres hasábok a MÁK 195-öt. Egerenként 2,5-25 pg D2E7 injekciója megvédte az állatokat a TNFa-indukált ietalitástől. Az EDSo: érték körülbelül 1-2,5 pg/egér, A pozitív kontroll antitest, a RAK 195, hasonlóan protektív hatást fejtett « « ««»« »' ***» ,'*** «»« ·. *» ,
K.J
A ΰζ:
inge.tcioj<
NFa távollétében nem hatott károsan az
egerekre. .Az aspecifíkus humán x (gGl s mtltest injekciója nem nyug -
tott védelmet a TN Fa-indukált le tallt. ás ellen.
Egy második 1 kísérletben 49 egers 2t osztottunk 7 egyenlő csó-
portba. Mindegyik csoport külön böző dózisé D.2£7-et kapott, rna j d
30 perc múlva egy LDgo dőzisú rl iTNF/1 ϊ-galaktózamin keveréket (1,0
gg rhTbF és 20 mg 0~gal akt ó zárai; a per egér). A 7-es kontroll cső-
port normál humán IgGl kappa a ntite stböl 25 ug/egér dózist ka-
pott, Az egereket z 4 orava.s. Kese >bb el .lenőriztük. Az egyes cs opor-
tokban talált túli blést az alább 2 7 'h ·* í •t··** . táblázatban foglaljuk ös z—
sze.
13. táblásat
Huszonnégy órás túlélés D2H7~tel való kaselés után
A
1ako a n
D2S7 hatását rhTNF v iz sgá11ak .· Há rom,
-indukált, pirexia n körülbelül 2,5 kg •álasz gátlásában nyu~os N2W nőstény nyúlX*♦*
X* « » « » φ · ««XX hói álló csoportokat oltottunk intravénásén D2E7-tel., rhTNF-fe. ás D2S7-bői és rhTNF-ből álló immunkompluxokke1, Végbél hőmérsékleteket mértünk közei 4 órán át percenként, termisstor szondákkal, egy Kaye féle hőmérséklet regisztrálón. A rekombináns humán TNF-ből — normál konyhasó oldatban — 5 μρ/kg injekciója Ö,4°C-nál nagyobb hőmérséklet emelkedést váltott ki az injekció után körülbelül 4.5 perc múlva. Maga az antitest készítmény — normál konyhasó oldatban — 138 pg/kg dózisban való alkalmazás után 140 percen át nem váltott ki a nyulakban hőmérséklet emelkedést. Minden további kísérletben a D2E7-et vagy a kontroll reagenseket {.humán IgGl vagy a konyhasó oldat, mint vivőanyag)· i.v. oltottuk ezt 5 perccel később egy rfoTNF injekció követte - 5 {tg/kg dózisban, i.v. Számos kísérletet végeztünk és a jellemző eredményeket a 14. táblázatban, alább, foglaljuk össze.
«·—í a nyálakba, — normál konyhasó oldatban r >·
14. táblázat rhTNF-índukált pirexia gátlása D2S7-tel nyulakban
Hőmérséklet emelkedés* <*e> I 1 bárány j Csúcs hős.
D2E7 dózis I rhTKF
(pg/kg) rhTNF rhTNF + D>2£7 | Gátlás** {%) D2E7irhTHF í 1 ! $ in j.után (perc)
14 0,53 | 0,25 53 I í » tv Ö
1 0,43 ! 0,13 70 η £ ; f V ; 40
A c ·:< : Π fi· Q Λ c A
ί —' ? -· ;
137 0,53 | 0,00 i η π } ^4.. \S V í Q : 60
! 732 0,80 1 0,00 1 100 -f ...l................1.1..........Jl 80
« »» ♦ ♦ >
csúcs hőmérséklet hőmérs. emeik. rhTNF~fel t D2E7'-tel) x lOí hőmérs. emeik. csak rhTNF-fel
A D2E7-tel végzett előkezelés 14 pg/kg dózissal részlegesen gátolta a pirogén választ, azokhoz a nyulakhoz képest, amelyek előkezelésként csak normál konyhasó oldatot kaptak. A D2E7 137 ug/kg dózisban alkalmazva- teljesen gátolta az rhTNF-re adott pirogén választ ugyanebben a kísérletben. Egy második kísérletben a D2E7 alkalmazása 24 ug/kg-os dózisban szintén részlegesen szuppresszálta a pirogén választ, azokhoz a nyálakhoz viszonyítva, amelyek előkezelésként csak normál konyhasó oldatot kaptak. Ebben a kísérletben a Ώ2Ε7 mólaránya az rhTNF-hez l/€:i volt. Egy harmadik kísérletben 48 μο/kg (mölarány: D2B7:rhTNF - 3,3:1) D2E7 i.v. injekciója teljesen gátolta a pirogén hatást, összehasonlítva azokkal a nyuiakkal, amelyek kontroli humán XgGl-et kaptak előkezelésként, éspedig 30 pg/kg-ot normál konyhasó oldatban. Az utolsó kísérletben a nyulak előkezelését O2E7-tel (792: ug/kg; az rhTN-F-hez viszonyítva nagyon, magas mólarány mellett (55ti) végeztük. Itt nem alakult ki hőmérséklet emelkedés egyszer sem a 4 órán át tartó megfigyelés alatt. A nyulak immunkomplexekkel való kezelése további rhTNF alkalmazása nélkül szintén nem váltott ki hőmérséklet emelkedést ugyanebben a kísérletben.. Az immunkomplexet úgy állítottuk elő, hogy a D2E7 és az rhTNF 5-5:1 mólaránvű keverékét 3·7°0-οη. 1 órán át inkubá-ltuk.
·**
X « «
QQ
III. Hlyarthrifls megelőzése Tgl97 transzgeníkus egerekben
A :D2S7~nek a betegség kialakulására gyakorolt hatását tanulmányoztuk egy arthritís-es transzgeníkus egér modellben. Olyan transzgeníkus egereket (Tgl97) hoztak létre, amelyek humán vad típusú TNF-et (a kódoló szekvencián belüli 3' szakasz módosított) fejeznek ki és ezekben az egerekben 4-7 hetes korukra 100 %-os gyakorisággal krónikus polyarthrítis alakul ki fa Tgl97 poiyarthritis modell további leírását lásd: EMBO J., 10, 4025-4031 (1991)1,
A transzgeníkus állatokat 3 napos korukban PCR-rei azonosítottuk. A transzgeníkus egér almokat 6 csoportra osztottuk. A transzgeníkus egereket 15 napos korukban „slot-blot hibridizációs analízissel ellenőriztük. A hat csoportra vonatkozó kezelési protokoll a következő volt: 1-es csoport: kezelést nem kapott; 2-es csoport: normál konyhasó oldatot (vivőanyag) kapott; 3-as csoport; 1,5 μο/g D2S7; i-es csoport; 15 ug/g D2E7? 5-ös csoport; 30 μσ/g D2B7; 6-os csoport: 30 ng/g IgGl ízotípus, kontrollként. Egy nem transzgeníkus egéralmot is bevontuk a vizsgálatba kontroll gyanánt (7~es csoport: nem transzgeníkus állatok, kezelést nem kaptak). Mindegyik csoport hetenként három i.p, injekciót kapott az említett anyagokból. Az injekciózást 10 hétig folytattuk. Minden héten minden állatnál feljegyeztük az ízület morfológiájában végbement makroszkópos változásokat. A 10, héten minden állatot elöltünk és az egérszövetet formaiínba tettük. A szövet vizsgálatát mikroszkóppal végeztük.
Minden hét elején lemértük az Ízület méretét (mm-ben), amely a betegség súlyosságának a mértékét adja meg. A jobb hátsó bokaWO
«. ♦ « « X
X' » .»'« ♦ ízületen mikrométerrel végzett, három mérés átlaga adja meg az Ízület méretét. Az arthrítis-t hetenként, a következőképpen értékeltük ki: 0 = nincs arthritis (normái küllem és hajlékonyság) ; 4 - enyhe arthritis (izületi dísztorzió); ++ « mérsékelt arthritis (duzzanat, ízület deformáció); 4+4 - erős arthritis (ankíiózís ·— izületi merevség -— észlelhető hajlításko-r és erősen csökkent mozgás). Az ízület metszeteinek hematoxilin/eozin íesté-
són <3lapts.ro pontozás a következőképpen
ható betegség; 1 ~ a szinoviális membr.
tő; 2 == erős szinovíá lis zavarosodas;
J.Ö£Í } és csont erózió (lepusztulás),
A Ö2S7 kezelés hatását a Tgi97
egerek ízület méretének átlag értékére a 9. ábrán mutatjuk be. A Tg 197 transzgenikus egerek — II hetes — kórszövettani és arthrití s-~es pcntssémáit alább, a 15-. táblázat foglalja össze.
15. táblázat
A D2S7 hatása kórszövettani ás arthrítis-es pontozásra
Csoport Kezelés j Kórszövettani Arthritis t
| | pontozás 5 { pontozása |
1 * néikü1 ] 3 (7/70) { 1 +4 4 (7/7)
! ΐ 2 j norm. konyhatő old.. j 2 (8/3) i 4~4~4* { 3 í 3 } ;
IgGl kontroll | 3 (9/3) | ++4 (7/3) )
3 1 1,5 ug/g D2E7-nél 1 0 (6/3) 1 0 (8 / 3 ) )
4 15 pg/g D2E7~nél | 0 (7/8) ] 1 0 (8/8) |
5 30 pg/g D2£7~nél ] 8 (8/8) 1 0 (8/8) |
X '*
101 a kísérlet azt szemlélteti, hogy a D2E7 antitestek határo-
zott jótékony hatást gyakorol: nak azon transzgenikus egerekre,
amelyek vad típusú humán TNF-et fejeznek ki (Tgl97). A. vizsgálati
idő után nyilvánvaló arthritist nem észleltünk.
st Más fájókból arárssaró TMFö-i neutraliráláaa £Ü?Z7-~fel
A D2E7 kötő kapacitását úgy tanulmányoztuk, hogy megmértük a különböző főemlős fajokból és egerekből származó tumor nekrőzis faktorokra gyakorolt centralizáló képességét L929 cltotoxikus assay-t használva (lásd fentebb, a 4, példában az A. aifej esetet) . Az eredményeket a 16. táblázatban foglaljuk össze.
16. táblázat
Hogyan képes a E2E7 a különböző fajokból származó THF centralizálására L329 assay-ben
T»F<x* Ember ( Eredet j Rekombináns D2E7 centralizálás ICje értéke <M}** j
7,8 X ICC11 j
Csimpánz LPS-stImoláit FBMC 5,5 X ιο:': 1
Pávián Rekombináns 6, 0 X 1 ί X V :
Selyemmajóm LPS-stímulált PBMC 4,0 X ιο~1δ |
Közönséges makákó LPS-stimuált PBMC 8,0 X X V 1
Rhesus majom LPS-stimulált PBMC .5, O X 10'n
nutya APS-stimulált WBC ·> a. / X 1(5-ig
Sertés Rekombináns 1,0 X 10? 1
Egér Rekombináns >1, J X 10~7 j
«»« **
102 .PBMC = perifériás vér mononukleárís sejt; WBC = teljes vér sejt]
A 16. táblázatban közölt eredmények igazolják# hogy a D2E7 öt főemlős THFa aktivitását képes neutrailzálni, nagyjából azonos módon, mint a humán TNFa-t, ezenfelül neut.ralizál ja a kutya TNFa aktivitását (körülbelül tízszer kisebb mértékben, mint a humán TNFa-t} és a sertés és egér TNFa-t (körülbelül mintegy ezerszer kevésbé jól# mint a humán TUFa-t). Továbbá; a D2E7 kötődését az oldatban lévő rhTNFa-hoz nem gátolták más citokinek, azaz a limfotoxín (TNFh}, az IL-la, IL-Ιβ, IL-2, IL-4, TL-6, TL-8, IFNy és TGFfi és ez arra utal, hogy a D2E7 erősen specifikus TNFo ligándumára »
F. A D2F7Pe2 iakabáíb búzáén teljes vérből sea svabadul Fel eicokin.
Ebben a példában azt tanulmányoztuk# hogy a D2E7 maga képes-e a normái humán vérsejteket citokinek sz-ekretálására vagy a sejt felszíni molekulákat leválásra késztetni. Három különböző donortól levett és hígított teljes vért a D2F7 változó koncentrációival ínkubáituk 24 órán át. Ugyanakkor egy LFS pozitív kontrollt is futtattunk, olyan koncentrációval, amelyről előzőleg megállapítottuk, hogy az immunkompetens vérsejteket citokinek szekretálására stimulálja. A felül úszókat learattuk és tízféle oldható cítckin, receptor és adhéziós molekula ELT3A kit panellel teszteltük, úgyisint IL-Ία, 11-1S, 1L-1 receptor antagonista, 1L-6,
IL-Ö, TNFa, oldható TUF receptor 1, oldható TNF receptor il, old
103 *
ható ICAM-l, és oldható S-sselektin. A D2E7 antitesttel — egészen. 34 3 pgz'ml-.ig. — való ko-inkubálás eredményeként szignifikáns menynyi ségben sem citokineket, sem levált sejt felületi molekulákat nem észleltünk. A kontroll tenyészetekben, antitest hozzáadása nélkül, egyetlen citokínből sem kaptunk mérhető mennyiségeket, míg az EPS kontroli tenyészetekben magas értékeket kaptunk, a magas pikogrammtői az alacsony nanogrsmm tartományig. Ezekből az eredményekből arra a következtetésre jutottunk, hogy a D2S7 nem indukálja a teljes vér sejtjeit citokin szekretálásra vagy sejt felületi proteinek elhuilatására a normál értékeken felül, ex vivő tenyészetekben,
A mellékeit szekvencia-jegyzék — amely a találmány részét képezi — tartalmát az alábbi táblázatban foglaljuk össze:
104
24 ) VLG , LF4 | VL CDR3 aminosav
25 j VL0.XH8 1 VL CDR3 aminosav {
26 LOE7.Á | VL CDR3 aminosav 1
'2 ? | 2 SD4. 1 VH CDR.3 aminosav |
28 j VHlSil j VH CDR3 aminosav J
29 | YK1D8 { VH CDR3 aminosav
3 0 | VK1&I1 | VH CDR3 aminosav
31 i VH1SI2 ΐ VH CDR3 t........... ...... . : .... · ................................. aminosav
32 I VH1E4 } VH CDR3 aminosav 1
.............3 3 j VH1F6 T VtTcLRT™™™’ aminosav |
| 34 | 3C-H2 :i- VH CDR3 aminosav )
3 5 VH2-D2.H VH CDR.3 aminosav |
D2S7
7
D2E7
VL
VH nukleinsav nukleinsav
105
SZEKVENCIÁK JEGYZÉKE
SEQUSNCE L-ISTING (I) GENERAL INFORMATION:
(i) APPLICANT:
(A) NAMF: BASF Aktiengeseilschaft (B) STREET: Carl-Bosch Sfcr. 38 (C) CITY: 67056 Ludwigshafen CD) STATE: Rheínland-Pfalz (E) COUNTRY: Federal Repufolí c of Gerraany (iii) NÜMBER OF SEQUENCES: 37 (ÍV) CORRESPONDENCE ADDRESS:
{A) ADDRES5EE: LAÖIVE & COCKFIELD (B) STREET: 60 State Street, suifce 5IÖ tC) CITY: Boston (D) STATE: Massachusetts (E) COUNTRY: USA (F) 2IP: 02109-187.5 (v) COMPUTER READABLS FORM:
(A) MÉDIUM ΤΥΡΕ: Floppy disk ÍB) COMPUTER; IBM PC compatifole (C) OPERÁTING SYSTEM: PC-DOS/MS-DOS íD) SOFTWARE: Patentln Release #1.-0, Version #1.25 (vi) CURRSNT APPLICATION DATA;
(A) APPLICATION NUMBER;
(δ) FILI.NG ΒΑΤΕ:
(C) CLAS S1 FI CATION:
ívii) PRIOR APPLICATION DATA:
(A) APPLICATION NUMBSR: OS 08/599,226 (3) FILING DATE: OS-ESB-1996 iC) CLASSIFICATION:
ívii) PRIOR APPLICATION DATA:
• A) APPLICATION NUMBSR: US 60/031,476 ÍB) ElLING OATS: 25-NOV-1996 ÍC) CLASSIFICATION:
(vili) ATTORNEY/AGSNT INFORMATION:
Í.A) NAME; DeConti, Giulío A., , Jr.
(B) REG1STRATION NUM8EE: 31,503 (C) RSFERENCE/DOCKÉT NEMBER: BBI-Ö43CPPC (íx) TELSCQMMDNICATION INFORMATION:
(A) TELEPHONÉ: (617)227-7408 ÍB) TELEFAX: (617)227-5941 ♦ X «
106
♦.* « * (2) INFORMATION FÓR SE-Q ID NO:1:
(i) SEQUENC'S ChARACTERISTICS:
(A) LENGIK: 107 amino acids (B) ΤΥΡΕ:: amino aci-d (D) TOROLOGY: linear (íi) MOLECOLE ΤΥΡΕ: peptide (v) FRAGMSNT ΤΥΡΕ: internál (xi) SSQUENCE DESCR.IPTI.CN: SEQ ID NO:1;
,í'\Sp 1 lis Gin Met Thr 5 Gin Ser Pro Ser Ser Len Ser Alá Ser Val Gly
10 15
Asp Arg Val Thr lle Thr Cys Arg Alá Ser Gin Oly He Arg Asn Tyr
20 25 30
Len Alá Trp Tyr Gin Gin Lys Pro. Gly Lys Alá Pro Lys Leu Len Ile
35 40 45
Tyr Alá Alá Ser Thr Len Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 00
Ser Oly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Len Thr He Ser Ser .Leu Gin Pro
65 70 75 80
Gin Asp Val Alá Thr Tyr Tyr Cys Gin. Ara Tyr Asn Arg Alá Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe -Gly Gin Gly Thr Lys Val Gin Ile Lys
100 105
INFORMATION FÓR SEQ ID NO:2:
(i f SEQUENCE CHARAC1ERISTICS:
(A) LENGTE: 121 amino acids
(S) ΤΥΡΕ: amino- a-cid
(D) TOPOLOGY: linear
(ii) dOLECULE ΤΥΡΕ: peptide
(V ) FRAGdENT ΤΥΡΕ: internál
(xi) SEQÜSNCE DES'CRIPTICN: SEQ ID NO: 2:
Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Gly Gly Len Val Gin Pro Gly Arg
1 .5 1δ“ 15*
Ser Leu Arg. Lee Ser Cys- Alá Alá Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tvr
20 25 30
Alá Met 0.1 s Trp Val Arg Gin Alá Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
107
35 40 45
S Θ £' Alá Ile Thr Trp Asn Ser Gly Kis Ile Asp Tyr Alá Asp Ser Val
50 55 SO
Glu Gly Arg Phe Thr de Ser Arg Asp Asn Alá Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 30
Len Gin Met Asn Ser Leu Arg Alá Gin Asp Thr Alá Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ara Lys Val Ser Tyr Len Ser Thr Alá Ser Ser Leu Asp Tyr Trp Gly
10Q 105 110
Gin oly Thr Leu Val Thr Var Ser Ser
115 120
(2) INFORMATION FÓR SEQ ID NO : 3:
(!) SEQUENCE CHARACTERISIICS: (A) LENGTH: 9 amino acids (8) ΤΥΡΕ: amino acid
(O) TOPOLOGY: linear
tii) MOLECULE ΤΥΡΕ: peptide
ív) FRAGMENT ΤΥΡΕ: internál
(ix) FSAIDRE: (A) NAME/KEY: (B) LOCATION: Módiiled 9
(D) OTHSR INFORMATION: Znote- Xaa is Thr or Alá” (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 3;
•Gin Arg Tyr Asn Áru Alá Pro Tyr Xaa 1 5 (2) INFORMATION EOR SEQ ID NO:4:
(i; SEQUENCE· ORARACTERISTIOS:
(A) LENGTE: 12 amino adás (Β) ΤΥΡΕ; amino add (D) TOPOLOGY: ünser (Ül MOLECULS TYPF: pept ide (vj FRAGMENT ΤΥΡΕ: internál íix.) FEATURE:
(A) NAME/KEY: Modified-süe (B) LOCATION: 12 (D) OTHER INFORMATION: Znote- ”Xaa is Tyr or Asn' * « ί 08 (κί) 3SQÜENCE DESCRIPIION: SEQ ID NO:i:
Val Ser Tyr Leu Ser Thr Alá Ser Ser Leu Asp Xaa 1 5 10 (2) INFORMATION FOR SEQ ID NO: 5:
U) SEQÜSNCE CHARACTERISTICS:
(A) LENGTH: 7 amino· acids (S) ΤΥΡΕ.: amino acid (D) TOPOLOGY: linear
Úí) MOLSCüLE ΤΥΡΕ: peptide
(V) FRAGMENT ΤΥΡΕ: internál
(xi) SEQÜENCE DESCRIPTION: SEQ
Alá Alá Ser Thr Leu Gin. Ser
5 (2) INFORMATION FOR SEQ ID NO: δ:
(£) SEQÜSNCE CHARACTERISTICS:
(A) LENGTE: 17 amino acids CB) ΤΥΡΕ; amino acid (D) TOPOLOGY; linear (ii) MOLSCüLE ΤΥΡΕ; peptide (v) FRAGMENT ΤΥΡΕ; internál (xi) SSQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 6:
Alá Iie Thr Trp Asn Ser Oly His He Asp Tyr Alá Asp Ser Val Glu 1 -5 ~ lö 15 (2) INFORMATION FOR SEQ ID NO:7:
(i) SEQÜENCE CHARACTERISTICS:
(A) LENGTE: II amino acids (8) ΤΥΡΕ: amino acid (0) TOPOLOGY: linear ;íi) MOLECDLE ΤΥΡΕ: peptide
ÍV) FRAGMENT ΤΥΡΕ: internál (xi) SEQÜENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 7:
109
Arg Alá Ser Gin Glv Ile Arg Asn Tyr Len Alá 1 5 10 (2) INFORMATION FÓR SSQ ID NO: 8:
(í) SEQCJSNCE CHARACTERISTICS:
(A) LENGTE: 5 amino acíds (Β) ΤΥΡΕ: amíno acid (D) TOPOLOGY: linear (íí) MOLSCOLE ΤΥΡΕ: peptids ív) FPAGMENT ΤΥΡΕ: internál (xí) SEQUENCE DESCBIFTIÖN: SEQ ID NO;8:
Asp Tyr Ara Met His 1 5 (2) INFORMATION FÓR SEQ ID NO: 9:
(i) S EQUENCE CHARACTERISTICS:
(A) LENGTE: 107 amino acíds (Β) ΤΥΡΕ: aíBino acid (3) TOPOLOGY: linear (íi) MOLECOLE ΤΥΡΕ: pepiidé (v) F.EAGMSNT ΤΥΡΕ: internál (xi) SEQOENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 9:
Asp Ile Gin Met. Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Alá Ser He Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr He Thr Cys Arg Alá Ser Gin Gly He Arg Asn Tyr
20 25 30
Leu ÁXŐ. Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Alá Pro Lys Leu Leu He
35 40 45
Tyr Ara Alá Ser Thr Len Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser G1.Y Thr Asp Phe Thr Len Thr He Ser Ser Len Gin Pro
S5 70 75 80
Glu Asp Val Alá Thr Tyr Tyr Cys Gin Lys Tyr Asn Ser Alá Pro Tyr
85 90 95
Alá Phe Gly Gin Gly Thr Lys Vai Glu He Lys ICO 105 * * no (2) INFORMATION FÓR SSQ TD NO:10:
(1) SEQÖENCE CHARACTERISTICS:
(A) EENGTH: 121 amino aeids (B) TYPE: amino acíd CD) TOPO1OGY: linear
Uí; MOLECDLE TYPE: pepiide (V) FRAGMENT TY.PS: Internál <xi) SEQÖENCE DESGRIPTION: SSQ ID NO:10:
Gin 1 Val Gin Len Val 5 Gin Ser Gly Giy Gly 10 len Val Gin Pro Gly 15 Arg
Ser leu Arg Leu 20 Ser Cys Ara Alá Ser 25 Gly Phe Thr Phe Asp 30 Asp Tyr
Alá Mát Hls 35 Trp Val Arg Gin Alá 40 Pro Gly Lys Gly leu 45 Asp Trp Val
Ser Alá 50 He Thr Trp Asn Ser 55 Gly Hrs He Asp Tyr SÖ Alá Asp Ser Val
GIu 65 Gly Arg Phe Alá Val 70 Ser Arg Asp Asn. Alá 75 lys Asn Alá leu Tyr 80
leu Gin Mát Asa Ser SS Leu Arg Pro Gin Asp 90* Thr .Alá Val Tyr Tyr 95 Cys
Thr nys Alá Ser I0ö Tyr Lee Ser Thr Ser 105 Ser Ser Leu Asp Asn 110 Trp Gly
Gin Gly Thr 115 Leu Val Thr Val Ser 120 Ser
(2) INFORMATION FÓR SEQ ID NO:11:
(i> SEQÖENCE CHARACTERISTICS:
(A) EENGTH: 9 amino aeids (B) TYPE: amino acid (D) TOPOLOGY: linear fii) MOlECüLE TYPE: paptide (v) FRAGMENT TYPE: internál (xi) SEQÖENCE DESCR1PTION: SSQ ID NO:11:
Gin Lys Tyr Asn Ser Alá. Pro Tyr .Alá I ' 5 *·**♦· **
III « » **'♦ :♦ « «« φ * **< « * «ί «
**
INFORMATION FÓR SEQ ID NO:12:
di SEQOENCE CHARACTERISTICS:
(A) LENGTE: 9 amin© acids (B) ΤΥΡΕ: amino acid (D) TOPOLOGY: linear (ií) MOLECOLE ΤΥΡΕ: peptide Ív) FRAGMFNT ΤΥΡΕ: internál (xi) SEQUENCE DESCR1PTION: SEQ ID NO:12:
Gin Lys Tyr Asm Arg Alá Pro Tyr Alá 1 5
2) INFORMATION FÓR SEQ ID NO:13:
(i) SEQÜSNCE CHARACTEEISTICS:
(A) LENGTH: 9 amino- acids (B) ΤΥΡΕ: amin© acid (D) TOPOLOGY: linear (Li.) MOLECULE ΤΥΡΕ: peptide (v) FRAGMENT ΤΥΡΕ: internál (xi) SEQÜENCS DSSCPIPTION: SSQ II) NO:13:
Gin Lys Tyr Gin Arg Alá Pro Tyr Thr 1 5
2) INFORMATION FÓR SSQ ID NO:14;
íl) SEODENCE OHARACTERISTICS:
(A) LENGTH: 9 amino acids (B) ΤΥΡΕ: amin© acid (D) TOPOLOGY: linear (ií) MOLSCOLE ΤΥΡΕ: peptide ív) FRAGMSNT ΤΥΡΕ; internál (xi) SEQOSMCE DESCRIRTION: SEQ ID NO:14:
Gin. Lys Tyr Ser Ser Alá Pro Tyr Thr 1 5
2) INFORMATION FÓR SEQ ID NO; IS::
(i) SEQÜENCE GHARAOTS.RISTIC.S:
(A) LENGTH: 9 amin© acids (B) ΤΥΡΕ: amin© acid (D) TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULE ΤΥΡΕ: peptide ívj FRAGMENT ΤΥΡΕ; internál (xi) SEQÜENCE DESCRIPTTON: SEQ 1D NO:15:
Gin Lys Tyr Asn Ser Alá Pro Tyr Thr í 5 (2) INFORMATION POR SSQ ID NO:16:
(i) SEQCENCE CHARACTERISTICS:
(A) LENGTE; 9 amino aeids (B) ΤΥΡΕ: amino acid
ÍD) TOPOLOGY: linear
(ii) MOLSCULE ΤΥΡΕ: pepiide
(v) FRAGMENT ΤΥΡΕ: internál
(xi) SEQÜENCE DESCRIPTTON: SSQ ID
Gin 1 Lys Tyr Asn Arg 5 Alá Pro Tyr Thr
(2) INFORMATION FÓR SSQ ID NO:17:
(i) SEQÜENCE CHARACTERXSTTCS;
(A) LENGTE: 9 .amino a-cids (B) ΤΥΡΕ: amino aoid (D) TOPO1OGY: 1inear (ii) MOLECULE TYRE; peptide ív) FRAGMENT ΤΥΡΕ: internál (xi) SEQÜENCE DESCRIPTTON: SEQ ID NO·: 17::
Gin Lys Tyr Asn Ser Alá Pro Tyr Tyr 1 * 5 (2) INFORMATION FÓR SEQ ID NO:18:
íi) SEQÜENCE CHARACTERTSTTCS:
(A) LENGTE: 9 amino aeids (S) ΤΥΡΕ: amino acíd (D) TOPOLOGY: linear (ii) MOLECUL.E ΤΥΡΕ: peptide ív) FRAGMENT ΤΥΡΕ: internál * X
Π3 (xi) SEQöBNCE DESCRIRTION': SEQ IDHO:18:
Gin Lys Tyr Asn Ser Alá Pro Tyr Asn 1 ~ S {2} INFORMATION FÓR SEQ ID NO : .19:
<i) 3EQÜENCS CHARACTERISTICS:
(A) LENGTE: 9 amino acids (S) ΤΥΡΕ; amino aqíd (D) TOPGLOGY: linear
Uí) MOLECüLE ΤΥΡΕ: peptide (V) FRAGMSNT ΤΥΡΕ: internál (xl? SEQÜENCE DSSCRIPTION: SEQ ID NO:19;
Gin Lys Tyr Thr Ser Alá Pro Tyr Thr 1 5
Í2> INFORMATION FÓR S'S'Q ID NO:2ö:
(i) SEQÜENCS CHARACTERISTICS:
(A) LENGTH; 9 amino acids (B) ΤΥΡΕ: amino acíd (B) TOPGLOGY: linear (il; MQLECÜLE ΤΥΡΕ: peptide (v) FRAGMENT ΤΥΡΕ: internál
Ui> SEQUENCE DESCRIPTION; SEQ ID NO:20;
Gin Lys Tyr Asn Arg Alá Pro Tyr Asn.
5 (2) INFORMATION FÓR SEQ ID NO:21:
(1) SEQUSNCE CHARACTERISTICS:
(A) LENGTH; 9 amino acids ÍS) ΤΥΡΕ; amino acid ÍD) TO'POLOGY: linear (il) MOLSCULE ΤΥΡΕ: peptide (V) FRAGMENT ΤΥΡΕ: internál fxi) 3EQUENCE DSSCRIFIION: SEQ ID NO:21:
Gin Lys Tyr Asn Sex: Alá Alá Tyr Ser 1 5 (2) INFORMATION FÓR SEQ ID NO:22:
íi) SEQDENCE CHARAOTSRISTIOS:
(A) LENGTH: 9 amino acids (3) ΤΥΡΕ: amino acid ÍD) TOPOLOGY: línear íii) MOLEODLE' ΤΥΡΕ: peptíde ív) FRAGMENT ΤΥΡΕ: internál (zi) SEQDENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO:22:
Gin Gin Tyr Asn Ser Alá Pro Asp T'hr 1 ” .5 {2} INFORMATION FÓR SEQ ID NO:23:
íi) SEQDENCE CHARACTER1STICS:
(A) LENGTH; 9 amino acids (B) 'ΤΥΡΕ; amino acid (Di TOPOLOGY: láncar (il) MOLECDLE ΤΥΡΕ: peptide (v) FRAGMENT ΤΥΡΕ: internál (xi): SEQDENCE DESORIPTION: SEQ ID NO: 23:
Gin Lvs Tyr Asn Ser Aso Pro Tyr Tőr 1 * 5 (2) INFORMATION FÓR SEQ ID NO:24:
(í) SEQDENCE CHARACTERISTICS:
(A) LENGTH: 9 amino acids (B’i ΤΥΡΕ: amino acid
(D) TOPOLOGY:: linear
(ií; MOLECDLE ΤΥΡΕ: papáidé
(v) FRAGMENT ΤΥΡΕ: internál
(xi) SEQDENCE DESCRIPTION: SEQ ID
Gin 1 Lys Tyr II e Sor 5 Ara Pro Tyr Thr
(2) INFORMATION FÓR SEQ ID NO;25:
ti) SEQDENCE CKAEACTERISTICS: (A) LENGTE:: S amino acids (3) ΤΥΡΕ: amino acid (D) TOPOLOGY; línear
(ii) MOLECQLS ΤΥΡΕ: peptid©
ív) FRAGMENT TYPS: internál
(xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO:25:
Gin .1 Lys Tyr Asn Arc Pro Pro Tyr Tir 5
INFORMATION FÓR SEQ ID NO: 2:6:
(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS: (A) LENGTH: 9 amino acids (3) ΤΥΡΕ: amino a cici (D) TOPOLOGY: iinear
(ii) MOLECULE ΤΥΡΕ: peptide
(V) FRAGMENT ΤΥΡΕ: internál
(xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO:26:
Gin Arg Tyr Asn Arg Alá Pro Tyr Alá 1 ' 5
2). INFORMATION FOK SEQ ID NO:27:
U) SEQUENCE CHARACTERISTICS: (A) LENGTH: 12 amino acids ÍB) ΤΥΡΕ: amino acid (ü) TOPOLOGY: Iinear
(ii) MOLECULE ΤΥΡΕ: peptíde
(v) FRAGMENT ΤΥΡΕ: internál
(xi 5 SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO:2/;
Alá Ser Tyr Len Ser Thr Ser Ser Ser Len Asp
1 S 10
2) INFORMATION FÓR SEQ ID NO:28:
(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:
(A) LENGTH: 12 amino acids (3) ΤΥΡΕ: amino acid (D) TOPOLOGY: iinear (ii) MOLECULE ΤΥΡΕ: peptide (v) FRAGMENT ΤΥΡΕ: internál ·*
116 »·*♦* ♦ * <φ * > * A + Α» φ * * * Φ Φ lxi) SSQEENCE DESCRIRTION: SEQ ID NO:28:
Alá Ser Tyr Len Ser Thr Ser Ser Ser Len Asp Lys 15 10
2} INFORMATION FÓR SEQ ID NO:29:
(í) SEQDENCS CHARACTERIS7ICS:
(A) LENGTH: 12 aml.no acids (S) ΤΥΡΕ.: amino acid (D) TOPOLOGY: linear
íii) MOLEGÜLE ΤΥΡΕ: peptide
ÍV) ERAGMENT ΤΥΡΕ: internál
íxi) SEQUENCE DESCRIRTION: SEQ ID NO:29:
Alá Ser Tyr Len Ser Thr Ser Ser Ser Len Asp
1 5 10
2} INFORMATION FÓR SEQ ID NO:30:
(í) SEQUENCE CHAEACTERISTICS;
(A) LENGTH: 12 amino scids CB) ΤΥΡΕ: amino acid (D) TOPOLOGY; linear íii) MOLECÜLE ΤΥΡΕ: peptide ív; FRAGMENT ΤΥΡΕ: Internál (xí) SEQUENCE DESCRIRTION: SEQ 10 NO:30:
Alá Ser Tyr Len Ser Thr Ser Ser Ser Leu Asp Asp 1*5 10 ’
2) INFORMATION FÓR SEQ ID NO:31:
{15 SEQUENCE CHARACTERISTTCS:
íA) LENGTH: 12 amino acid3 (Β) ΤΥΡΕ: amino acid •D) TOPOLOGY: linear íii) MO1ECULE ΤΥΡΕ; peptide (V) FRAGMENT ΤΥΡΕ: internál (xi) SEQUENCE DESCRIRTION: SEQ ID NO:31:
Alá Ser Tyr Len Ser Thr Ser Phe Ser Len Asp Tyr 1 5 10 • · ♦ * *
Π7 «♦.ír (2) INFORMATION FÓR SEQ ID NO:32:
(i) SEQÜENCE CHARACTERISTICS:
(A) LENGTE: 12 amino acid's (B) ΤΥΡΕ: amino acid
£D) 10PÓLÓSY: 1Inea r
(ii) MOLECÜLE ΤΥΡΕ: peptlde
(v) FRAGMENT ΤΥΡΕ.: internál
(xi) SEGÜENCE. DESCRIPTION: SEQ ID NO:32:
Alá 1 Ser Tyr Len Ser 5 Thr Ser Ser Ser Leu fíis 1Ö
(2) INFORMATION FÓR SEQ ID NO:33:
íí) SEQÜENCE CHARACTERTSTICS:
(A) LENGTE: 12 amino adás B) ΤΥΡΕ: amino acid (D) TOPOLOGY: linear (ii) MOLECÜLE ΤΥΡΕ: peptide (v) FRAGMENT ΤΥΡΕ: internál (xi) SEQUSNCE DESCRIPTION: SEQ ID NO:33:
Alá Ser Phe Len. Ser Thr Ser Ser Ser Leu Glu Tyr 1 5 10 (2) INFORMATION FÓR SSQ ID NO:34:
(i) SEQüENCS CHARACTERISTICS:
(A) LENGTK.:· 12 amino acids (B) ΤΥΡΕ: amino acid
(D) TOPOLOGY: linear
(ü) MOLECÜLE ΤΥΡΕ: peptide
(V) FRAGMENT ΤΥΡΕ: internál
íxi.) SEQuENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO:34:
Alá I Ser Tyr Leu Ser 5 Thr Alá Ser Ser Lea Gin 10
(2) INFORMATION FÓR SEQ ID NO:35:
(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:
(A: LENGTE: 12 amino acids (B) ΤΥΡΕ: amino acid (D) TQPOLOGY: linöai «» **«
(íí) MOLECÜLE ΤΥΡΕ: peptide
(V) FRAGMENT ΤΥΡΕ: internál
(xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO:35:
Val 1 Ser Tyr leu Ser Thr Alá Ser Ser 5 Leu Asp Asn 10
(2) INFORMATION FÓR SEQ ID NO:36:
(i) SEQOENCE C.HARACTSR1ST1CS:
(A) LENGTE: 321 hasé pairs (S) ΤΥΡΕ: nucleic acid (C) STRANDÉDNESS: double (D) TOPOLOGY: linear (ii) MOLSCULE ΤΥΡΕ: cUNA (xi) SEQOENCE DE3CRIPT1GN: SEQ ID NO:36:
GACAICCAGA TGACOCAGTC TCCAICCICC CTGTCTGCAT CIGIAGGGGA GAGAGTCACC 60
ATCACTTGIC GGGCAAGTCA GGGCAYCAGA AATTACTTAG CCTGGTATCA GCAAAAACCA 120
GGGAAAGCCC CTAAGCTCCT GATCYAYGCT GCATCCACTT TGCAAYCACG GGTOCCATCT 180
CGGTTCAG1G GCAGTGGATC TGGGACAGAT TTCACTCTCA CCATCAGCAG CCTACAGCCT 240
GAAGATGTTG CAACTIATTA CTGTCAAAGG TATAACCGIG CACCGTATAC TTTTGGCCAG 300
CGGACCAAGG TGGAAATCAA A 321 (2) INFORMATION FOK SEQ I.D NO 33:
(i) SEQUENCE CRARACTER1STICS:
(A) LENGTE: 363 basa pairs (B) ΤΥΡΕ: nucleic acíd (C) STRANDEDNESS: double (D) TOPOLOGY: linear (ii; MOLECOLE ΤΥΡΕ: CDNA (xi) SEQUENCE DSSCRTPTION: SEQ ID NO:37:
GAGGTGCAGC TGGIGGAGTC TGGGGGAGGC TTGGTACSGC COGGGAGGTC CCTGAGACTC 60
TCCTGTGCGG CCTCTGGATT CACCTTTGAT GATTATGCCA TGCACTGGGT GCGGCAAGCT 120
CCAGGGAAGG GCCTGGAAIG GGTCTCAGCT ATCACTIGGA ATAGTGGTCA CATAGACIAT ISO
GCGGACTCTG TGGAGGGCGG ATTCACCATC TCCAGAGACA ACGCCAAGAA CTCCCTGTAT 240
CTGCAAATGA ACAGTCTGAG AGCTGAGGAT ACGGGCGTAT ATTACTGTGO GAAAGTCTCG 300
IACCITAGCA CCG1GTCCTC CCTTGAGTAT TGGGGCCAAG GTACCCTGGT CACCGTCICG 360
AGY

Claims (11)

  1. Szabadalmi igénypontok
    1. Egy in vitro eljárás 'humán. TbFa aktivitás gátlására, azzal jellemezve, hogy humán TNFa-t egy izolált humán TMFíX-kötö -antitesttel vagy antigén-kötő részével hozunk érintkezésbe, amely
    a) a humán TbFa-tól I x iö‘d M vagy ennél kisebb Ká értékkel és 1 χ 105 sec1 vagy ennél kisebb Kqí=?. értékkel disszociált mindkettőt felületi plazmon rezonanciával meghatározva;
    b; könnyű lánc CDR3 dóménje 3. számú aminosavszekvenciát vagy az
    1., 4., 5., 7. vagy 8. pozícióban egyetlen alaninhelyettesítéssel, vagy az 1„, 3.. 4., 6., 7., 8. és/vagy 9.
    pozícióban 1~5 konzervatív aminosav-helyettesítéssel módosított 3. számú aminosavszekvenciát tartalmaz:
    c) nehéz lánc CDR3 dóménje 4, számú, aminosavszekvenciát vagy a
  2. 2., 3., 4., 5., 6., B., '3., löt vagy 11. pozícióban egyetlen alanin-helyettesíté-ssel, vagy a 2,, 3., 4., 5., 6., 8., 9.,
    10., 11. és/vagy 12. pozícióban 1-5 konzervatív aminosavhelyettesítéssel módos!tett aminosavszekvenciát tartalmaz; és d; 1 x 10' M vagy ennél kisebb IC&e. értékkel rendelkezik,
    2. Sgy ín vitro eljárás humán TNFa aktivitás gátlására, azzal jellemezve, hogy humán ThFa-t egy izolált humán TNFa-kötö antitesttel vagy antigén-kötő részével, amelynek könnyű lánc variábilis szakasza (LCVE) az 1, számú, aininosavszekvenciát és nehéz lánc variábilis szakasza (HCVR) a 2. számú aEiinosavszekvenoiát tartalmazza, K.« értéke 1 x 1Q° b vagy ennél kisebb és ICsíj értéke 1 χ lö7 M vagy ennél kisebb, TbFíX-aktivi tás c gátló «« «χ «« «»« módon hozunk érintkezésbe.
  3. 3. Egy izolált humán THFa-kötő antitest vagy antigén-kötő részének alkalmazása káros TN.?a aktivitással összefüggő rendellenesség kezelésére alkalmas gyógyszerkészítmény előállítására, ahol az említett antitest vagy antigén-kötő része
    a) a humán THFa-től I x 10”* M vagy ennél kisebb Ká értékkel és 1 x 10; sec”'· vagy ennél kisebb &>·« értékkel dísszociái, mindkettőt felületi niazmon rezonanciával meghatározva;
    bő könnyű lánc CDK3 dóménje 3. számú aminosavszekvenciát vagy az
    1.,
  4. 4., 5., 7. vagy 8. pozícióban egyetlen alaninheiyettesítéssel, vagy az 1,, 3., i,:, 8,, 7., 8. és/vagy 9, pozícióban 1--.5 konzervatív aminosav-helyett eset éssel módosított 3. számú aminosavszekvenciát tartalmaz;
    c) nehéz lánc CBS..3 dómén je 4. számú aminosavszekvenciát vagy a .2... 3., 4., 5., 6'., 8., 9. , lö. vagy 11. pozícióban egyetlen alanín-helyettesí réssel, vagy a 2 . , 3 . , 4. , 5 ., 6 . , 8 . , 9., lö., 11. és/vagy 12. pozícióban 1-5 konzervatív amínosavhelyettesítéssel módosított aminosavszekvenciát. tartalmaz; és d: 1 x 10”z M vagy ennél kisebb IC5Ö értékkel rendelkezik.
    i. Egy izolált humán TWFa-kötő· antitest vagy antigén-kötő részének alkalmazása káros BFa aktivitással összefüggő rendellenesség kezelésére alkalmas győgyszerkészitmény előállítására, ahol az említett antitest vagy antigén-kötő részének, egy könnyű lánc variábilis szakasza íbCVK) az í. számú aminosav-szekvenciát és egy nehéz lánc variábilis szakasza (HCVR) a. 2. számú aminosavszekvenciát tartalmazza, értéke 1 χ ΙΌ8 H vagy ennél kisebb és JCSc, értéke 1 x 10'- H vagy ennél kisebb.
    121
  5. 5. A 4. igénypont szerinti alkalmazás, amelyben az antitest
    D2E7 antitest.
    5. A 3. vagy 4. igénypont szerinti alkalmazás, azzal jelie- mezve, hogy a rendellenesség egy autoimmun betegség, 7 , A 3 . vagy 4. igénypont szerinti alkalmazás, azzal jelle- mezve, hogy a rendellenesség egy fertőző betegség. 8. A 3. vagy 4, igénypont szerinti alkalmazás, azzal jelle- mesve, hogy a rendellenesség transzplantátum kilökődés vagy
    gr a ft-verses-hőst bet egs ég,
    9. A 3. vagy 4, igénypont szerinti alkalmazás, azzal jellemezve, hogy a rendellenesség egy rosszindulatú daganatos betegség.
    10. A .3. vagy 4. igénypont szerinti alkalmazás, azzal jellemezve, hogy a rendellenesség egy tüdőbetegség,
    11. A 3. vagy 4. igénypont szerinti alkalmazás, azzal jellemezve, hogy a rendellenesség egy bélbetegség.
    12. A 3. vagy 4. igénypont szerinti alkalmazás, azzal jellemezve, hogy a rendellenesség egy szívbetegség.
    13. A 3. vagy 4. igénypont szerinti alkalmazás, azzal jellemezve , hogy a rendellenesség szepszis.
    14. A 1.3, igénypont szerinti alkalmazás, azzal jellemezve, hogy az antitestet vagy antigén-kötő részét interlenkín-6 {Ib-ö) citokinnel· együtt alkalmazzuk, vagy olyan rendellenesség esetén, amelyben az egyén IL-6 szérum- vagy plazma-koncentrá-ciója >500 pg/ml,
    15. A 3. vagy 4. igénypont szerinti alkalmazás, azzal jellemezve, hogy a rendellenesség rheumatoid arthritis.
    ί '“λ''-'1
    ».·'.♦ .«'* *'♦· ♦ «** ·'*
    -X ♦ ♦ * » * *'
    0 «» ♦··»«
    0 * * * * ♦
    16. A 3 .
    mezve, hogy «
    17. A 3.
    mezve, hogy s
    IS. A 3.
    mezve, hogy e
    19. A 3.
    mezve, hogy s
    20. A 3..
    mezve, hogy ;
    21. A 3.
    ráesve, hogy c
    22. A 3, mezve, hogy = .il . :-k 3 <
    mezve, hogy <
    24. A 2.
    mezve, hogy ség.
    2 5 . A 3 mezve,· hogy «
    26 . A 3 mezve, hogy <
    27. A 3 mezve, hogy ;
    28 . A 3 hogy : mezve, vagy 4. igénypont szerinti alkalmazás, rendellenesség rheumatoid, spondyiitis. vagy 4. igénypont szerinti alkalmazás, rendellenesség osteoaxthritis.
    vagy 4. igénypont szerinti alkalmazás, rendellenesség köszvényes arthritis, vagy 4. igénypont szerinti alkalmazás, rendellenesség allergia.
    vagy 4, igénypont szerinti alkalmazás, azzal jelieazzal jelre— azzal jelleaszal jelleazzal mellérendel lenesség multiplex szkierőzis.
    vagy 4. igénypont szerinti alkalmazás, azzal jellerendellenesség autoimmun diabetes.
    vagy 4. igénypont szerinti alkalmazás. azzal jellerendei lenes ség· autoimmun nve.it is.
    vagy 4. igénypont szerinti alkalmazás, azzal jellerendellenesség' nefrózisos szindróma.
    vagy 4. igénypont szerinti, alkalmazás.
    azzal jelrea rendellenesség egy gyulladásos osontrendez lenesvacry 4. igénypont szerinti alkalmazás, azzal jellerendeilenesség csontreszorpci.ós .betegség.
    vagy 4. igénypont szerinti alkalmazás, azzal jellerendellenesseg alkoholos hepatitis.
    vagy 4. igénypont szerinti alkalmazás, azzal jellerenöellsnesség vírusos hepatitis.
    . vagy 4. igénypont szerinti alkalmazás, rendel lenes ség véralvadás1 zavar.
    azzal ieile123
    0 *
    0 0« 00« ♦'** 0 0Χ * 0 X » 0 * *
    0Χ 0 0 ** 000 0 0
    29. A 3. vagy 4. igénypont szerinti alkalmazás, azzal jeile· merve, hogy a rendellenesség égési sérülés.
    mezve, hogy a rendellenesség reperfúziós sérülés. 31. A 3 . vagy 4. igénypont szerinti alkalmazás, azzal jeile mez ve, hogy a rendellenesség kelőid képződés. 32. A 3. vagy 4. igénypont szerinti alkalmazás, azzal jelie- mez ve, hogy a rendellenesség hegszövet képződés.
    3. Α 3. vagy 4. igénypont szerinti alkalmazás, azzal jelle
    n&m, hogy a rendellenesség pyrexia... ‘ / Λ *> .> úí , .id. H v vagy 4, igénypont szerinti alkalmazás, azzal jelle
    36, A 3. vagy 4. igénypont szerinti alkalmazás, azzal jelle mezve, hogy a rendellenesség szeptikus sokk. 3 7 , A 3 , vagy 4. igénypont szerinti alkalmazás, azzal jelie mezve, hogy a rendellenesség endotoxíkas sokk. 38. A 3. vagy 4. igénypont szerinti alkalmazás, azzal jelle
    3 9 . A 3 vagy 4. igénypont szerinti alkalmazás, azzal jelie mezve, hogy a rendellenesség toxikus sokk szindróma. 40. A 3. vagy 4. igénypont szerinti alkalmazás, azzal jelre
    mezve, hogy a rendellenesség malária.
    41. A 3. vagy 4. igénypont szerinti alkalmazás, azzal jel
    124 mezve, hogy a rendel.lenesség meningitis.
    42. A 3. vagy 4. igénypont szerinti alkalmazás, azzal jellemezve, hogy a rendellenesség cachexia.
    43. A 3. vagy 4. igénypont szerinti alkalmazás, azzal jellemezve, hogy a rendellenesség AIDS.
    44. A 3. vagy 4. igénypont szerinti alkalmazás, azzal jellemezve, hogy a rendellenesség bakteriális meningítis.
    45. A 3, vagy 4. igénypont szerinti alkalmazás, azzal jellemezve, hogy a rendellenesség AIDS-.szel összefüggő komplex (ARC) .
    45. A 3, vagy 4. igénypont szerinti alkalmazás, azzal jellemezve, hogy a rendellenesség transzplantáció utáni másodlagos citoiaegalovi.rus fertőzés.
    47. A 3. vagy 4. igénypont szerinti alkalmazás, azzal jellemezve, hogy a rendellenesség fért ozás-okozta, láz és izomfáj dalom vagy fertőzés utáni másodlagos cachexia.
    18. A 3. vagy 1. igénypont szerinti alkalmazás, azzal jellemezve, hogy a rendellenesség allograft kilökődés,
    49. A 3. vagy 4. igénypont szerinti alkalmazás, azzal jellemezve, hogy a rendellenesség tumornövekedés szimulálása.
    50. A 3. vagy 4. igénypont szerinti alkalmazás, azzal jellemezve, hogy a rendellenesség metasztatikus potenciál fokozódása és citotoxi citás közvetítése maiígnífásokban,
    51. A 3. vagy 4, igénypont szerinti alkalmazás, azzal jellemezve, hogy a rendellenesség tmomövekedés vagy metasztszis gátlás.
    52. A 3, vagy 4. igénypont szerinti alkalmazás, azzal jellemezve, hogy a rendellenesség felnőttkori respirációs distress * » *'« X s z-indrőma.
    5 3 . A 3 . vagy 4 . igénypont szerinti alkalmazás, azzal me z ve, hogy a rendel lenesség sokk tüdő. o 4. A , vagy 4 . igénypont szerinti alkalmazás. azzal mezve, hogy a rendel lenesség krónikus tüdőgyulladás. s 5. A vagy 4 . igénypont szerinti alkalmazás, azzal mezve, hogy a rendel lenesség pulmonális sareoidosis. 5 6 , A. 3. vagy 4 . igénypont szerinti alkalmazás, azzal merve, hogy a rendel lenesség púiménális fíbrózís. 5 7 , A 3 . vagy 4 . igénypont szerinti alkalmazás, a z. z a 1 mezve. hogy a rendel. lenesség szilikózis.
    ! «.!. .1. tí' ·· eüe ille
    58, A 3. vagy 4. igénypont szerinti alkalmazás, azzal jellemez ve, hogy a rendellenesség gyulladásos bélbetegség.
    59, A 3. vagy 4. igénypont szerinti alkalmazás, azzal jellemezve, hogy a rendellenesség idiopatíkus gyulladásos bél.beteg ség.
    60, A 3, vagy 4. igénypont szerinti alkalmazás, azzal jelle mezve, hogy a rendellenesség Crohn-féle betegség.
  6. 6 r. A 3 .
    vagy 4. igénypont szerinti alkalmazás, azzal rendel1 enesség colitís ulcexosa. vagy 4. igénypont szerinti alkalmazás, azzal rendel1 enesseg szív isémia. vagy 4. igénypont szerinti, alkalmazás, azzal. rendel1 ene ss ég szí ve i ég t e l en s ég. vagy 4. igénypont szerinti, alkalmazás, azzal
    : ez l e i ette rell« i ellő mezve, hogy a rendellenesség hepatitis.
    65,. Egy izolált humán antitest vagy antigén-kötő része » ♦ V V * * * * « A #.#*<·* * ·♦ * «< w ♦ «ί * * amely a humán TNFa-tóI K~ - 1 x ΙΟ* M vagy kisebb disszociáció-s állandó mellett és KOff - 1 x 10'' sec1 vagy kisebb felbomlást sebességi állandó mellett disszociál, mindkét érték felületi plazmon rezonancia segítségével meghatározva, és a humán TNF« citotoxioltását egy standard in vitro L929 assay-ben. ICSC - 1 x lö·' H vagy kisebb érték mellett nsa.tr ali zár ja.
    66.. A 65. igénypont szerinti izolált humán, antitest vagy antigén-kötő része, amely a humán TOTa-tól K,3£f -- 5 x 10* sec'1 vagy kisebb felbomlási -sebességi állandó mellett disssooéál.
    67. A 65. igénypont szerinti izolált humán antitest vagy antigén-kötő része, amely a humán TNPa-től ~ 1 x 10* s-ec“ vagy kisebb felbomlási sebességi állandó mellett disszociál.
    66.. A 65. igénypont szerinti, izolált humán antitest vagy antigén-kötő része, amely a humán TNFíx citotoxicitását egy standard in vitro L929 assay-ben JC5Ö = 1 x 10* b vagy kisebb érték mellett neutralizálja.
    69. A 65. igénypont szerinti izolált humán antitest vagy antigén-kötő része, amely a humán TWíx oitotoxicisását egy standard in vitro L929 assay-ben IC50 - 1 x 10s ti vagy kisebb érték mellett n-eutralízálja.
    70. A 65. igénypont szerinti izolált humán antitest vagy antigén-kötő része,, .amely a humán TN.FS& citotoxicitását egy standard in vitro L929 assay-ben XCás- - 5 x .10 iU M vagy kisebb értek mellett neutrálisáig a..
    71. A 65. igénypont szerinti Izolált humán antitest vagy antigén-kötő része, amely egy rekombináns antitest vagy ennek antigén-kötő része.
    127
    72. A 65. igénypont szerinti izolált humán antitest vagy antigén-kötő része, amely gátolja, az ELAM-1 humán TNF«~ indukál t expressziéját humán köldbkvéua endoteliális sejteken.
    73. Egy rekombináus humán antitest vagy antigén-kötő résre, amely neutralizál ja a. csimpánz TNFa aktivitását és legalább még egy további főemlős TMFse-ét a következő csoportból; pávián TMFa, selyeramajom TNFa, közönséges makákó majom TMFd és rhesus majom
    TMFa.
    74. A 73. igénypont szerinti rekombínáns humán antitest vagy antigén-kötő része, amely a kutya Tára aktivitását is neutrali75. A 73. igénypont szerinti rekombináns humán antitest vagy antigén-kötő része, amely a sertés TNFa aktivitását is neutrali76. Egy izolált iraki einsav, amely egy olyan könnyű lánc CDR3 dómént kódol, amely a 3. számú aminosavszekvenciát tartalmazza, vagy egy módosított 3. számú aminosavszekvenciát egyetlen aianin-helyettesi beesel az 1.4., 5., 7. vagv 3. pozícióban, vagy 1-5 konzervatív aminosav-helyetcesíléssel az 1., 3.
    Zi. £
  7. 7., 8. és/vagy 9, pozícióban.
    77. a 76. igénypont szerinti izolált nnkleinsav, amely egy antitest könnyű lánc variábilis szakaszt (LCVR) kódol.
    73. A 77. igénypont szerinti izolált nnkleinsav, amelyben az antitest LCVR CDR2 dóménje az 5. számú aminosavszekvenciát tart. vi .j. ϊΤ>;ζλ xj Ot Λ
    79. a 77. igénypont szerinti izolált nnkleinsav, amelyben az antitest LCVR CDEl dóménje a 7. számú aminosavszekvenciát tar128 talmazza.
  8. 8ϋ. Egy izolált nukleinsav, amely egy olyan nehéz lánc CDR3 doniént kódol, amely a 4. száma aminosavszekvenciát tartalmazza, vagy egy módosított 4. számú aminosavszekvenciát egyetlen alanin-helyettesitéssel a 2., 3., 4., 5., 6., 8.,
  9. 9·.,
  10. 10, vagy
  11. 11, pozícióban, vagy 1-5 konzervatív aminosav-helyettesítéssel a
    2., 3., 4., 5., 6., 8,, 9., 10., 11. és/vagy 12. pozícióban.
    .81. A 60. igénypont szerinti izolált nukleínsav, amely egy antitest nehéz lánc variábilis szakaszt (HCVR) kódol...
    82. Ά 81.. igénypont szerinti izolált nukleínsav, amelyben az antitest HCVR CDR2 doménje a 6. számú aminosavszekvenciát tartalmazza .
    83. A 82. igénypont szerinti izolált nukleínsav, amelyben az antitest HCVR CDRl doménje a 8, számú aminosavszekvenciát tartalmazza.
    84. Sgy izolált nukleínsav, amely egy olyan CDR3 domént kódol, amely az alábbi csoportból kiválasztott aminosavrámú szekvencia, 4. számú szekvencia, „2. számú szekvencia, 13. számú szekvenszekvenciat tartalmaz: 3
    11. számú szekvencia, cia, 14. számú szekvencia, 15. számú szekvencia, 16. számú szekvencia, 17. számú szekvencia, 18. számú szekvencia, 18. számú szekvencia, 20. számú szekvencia, 21. számú szekvencia, 22. számú szekvencia, 23, számú, szekvencia, 24. számú, szekvencia, 25.
    számú szekvencia,
    28. számú szekvencia, 29. számú szekvencia, 30. számú, szekvencia, 31. számú szekvencia, 32. számú szekvencia, 33. számú szekvencia es ,:;4. számú szekvencia .
    számú szekvencia, 26. számú szekvencia, 2'
    129 * * * « >χ$·
    85, Gyógyszerkészítmény, amely a 65-72. igénypontok bármelyike szerinti antitestet vagy antigén-kötő részét és egy gyógyszérészet.ileg elfogadható hordozót tartalmaz,
    86, A 85. igénypont szerinti gyógyszerkészítmény alkalmazása, amely legalább még egy további terápiás szert tartalmaz,, káros TNFa aktivitással összefüggő rendellenesség kezelésére alkalmas gyógyszer előállítására,
    87, Eljárás humán TNFa aktivitás in vitro gátlására, azzal jellemezve, hogy a humán TNFcx-t a 65-72. igénypontok bármelyike szerinti antitesttel vagy ennek egy antigén-kötő részével TNF<xaktívitást gátló módon hozzuk értínkezésbe.
    88, A 65-72. igénypontok bármelyike szerinti antitest vagy antigén-kötő részének alkalmazása káros TbFa aktivitással összefüggő rendellenesség kezelésére alkalmas gyógyszer előállítására .
    89, A 88. igénypont szerinti alkalmazás, amelyben a rendellenesség autoimmun betegség, fertőző betegség, transzplantátum kilökődés vagy graft verses hőst betegség, daganatos betegség, tüdőbetegség, bélbetegség, szívbetegség vagy szepszis.
    80. A 88. igénypont szerinti alkalmazás, amelyben az antitestet inter lénk in 6 cítokinnel (ii-6-tál; együtt alkalmazzuk vagy olyan betegségben, ahol az il-6 szérum- vagy plazmakoncentrációja 500 pg/ml felett van,
    91 A 88, igénypont szerinti alkalmazás, amelyben a betegség rheumatoid arthritis.
    92, A 88. igénypont szerinti alkalmazás, amelyben a betegség Crohn-féle betegség.
    130
    93. A 83,. igénypont szerinti, alkalmazás, amelyben a betegség az alábbiak betegségek egyike: rheumatoid .sppndiiitisz, oszteoarth.rit.iss, koszvényes arthritisz, allergia, multiplex ssklerózis, autoimmun diabétesz, nefrózisos szindróma, gyulladásos csontrendellenességek, csontrsszorpciós betegség, alkoholos hepatitisz, vitális hepatitisz, véralvadási zavarok, égések, reperfúziós sérülés, kelőid képződés, hegszövet képződés, pyrexia, szeptikus sokk, enöctoxíkvs sokk, negatív ssepszis, toxikus sokk szindróma, malária, meningitisz, kachexia, AIDS, bakteriális meníngitiss, AIDS·-rokon komplex (ARC) , transzplantációt kővető másodlagos oitomegalovírus fertőzés, fertőzésre visszavezethető láz és mialgiák, ailograft kilökődés, tumornövekedés stimulálás, növekvő metasztatikus potenciái és közvetített citotoxicitás rosszindulatú tumorokban, tumornövekedés és metasztázis gátlás, felnőtt légzési szorongás szindróma, tüdősokk, krónikus tüdőgyulladás, tüdö-szarkoldózis, tüdő-fibrőzís, tüdő-szilikózis, gyulladásos bélbetegség, idiopatikus gyulladásos bélbetegség, feké'lyes kolitisz, szív-lsémia, szívelégtelenség, hepatitisz és fertőzés következtében fellépő másodlagos kachexia.
    94. A 86. Igénypont szerinti alkalmazás, amelyben a további terápiás szert as alábbi csoportból választjuk ki: nem-szteroid gyulladásgátló szerek, citokin szuppressziv gyűliadásgátló szerek, CDP-57l/BAy~Í0~3356, cA2, 7SkdTNFR-IgG, 55kdTNFR~IgG, IDECCE9.1/SB 210396, DAB 486-IL-2, RAB 389-II-2, Anti-Tac, IL--4, 1L10, iL-4 anbagonisták, 11-10 antagonísták, IL-1RA, TRF-bp/sTNPH, S284, R973401, MR-966, iloprost, metotrexát, talídomid,
    131
    Φ » X φ » Φ X X » « · « W *
    Φ >Χ ΦΦΦ ΦΧΧ * φ V * Φ »« ΦΦ Μ’Χ ΧνΦ
    Φ«Φ φ
    * * talidomiddal rokon szerek, leflunomid, tranexamln sav, T~614, prosztaglandin El, tenidap [(+/} -S-klór-i:,3-dihidro-3-(hidroxi2-tíenil-metilén) ~2-oxo~-iH-indol-l-karboxamíál, naproxen í (-0 -2naf tal-én~eeets&v™5-metoxi~a-metii~és-3ter j , iteloxicara (4-hidroxi2- metil-k- (5-meti 1-2-tiazolil} ~2n-l,2 “benzotiaz'in~3~karböxamiá1,1-dioxídí, piroxicam í4.-.hi.droxi-2-metil-iV-2-piridinii-2H-l, 2benzcbiazín-S-karboxamí-d-l, i-dioxití] áiclofenac (2--((2,6diklór-fenil) -amino] -fenil-ecetsav-mononátrinm- vagy monokál.iumsö], indome-tacin fi- (ó-klór-benzoll) -5-metoxi-2-iset il-lB~indöl3- ecet-savi , sulfasalazin [5- (p- (2-píridíl-ssulfamoil} ••-fenilazo) -szalicílsav], azathiop-rin (6- ( (i-metil-4-nitro-i.mid;azöl-5il:-tio) -purln 1, I'CS-inhibitorok, zap-70 inhibitorok, lekinhibitorok, VEGF-inhifoi torok, VEGF-E- inhibitorok., kortíkoszter-oi-dok, TNF-konvertáz inhibitorok, anti-XX—12 antitestek, intet 1-eukin-11-, interleukin-13-, intet leukin-17 inhibitorok, arany, penicillamin, klorokin, hidroxi-klorokin, klorambucil, cikiofoszfamid, ciklo-sporin, anti-timocita globulin, anti-CD4 antitestek, CD5-tcxinok, orálisan beadható peptidek, kollagén, diná-.trium-lobenzarit', HF2 88 és HP466 citokint szabályozd szentek, ICAM-l antiszánsz foszforo-tioát oligodezoxinukle-otidok, oldható komp letten tér receptor 1, prednizon, orgotein, giükozamino-glükán-poliszulfát, minociklin, anti-lbzx antitestek, haleredetü lipidek, növényi eredetű lipidek, auranof in, fenilbtba-zon, flufenaminsav, intravénás immunglobulin, sav, takrol.imusz, szirolimusz, amíprilóz, me ki o f en - amin sav, sileuton, mikofenolkladribín, azaribin, budenozid, epidermális növekedési faktor, amino-szal.iciláto-k, 6132 <* ·?« ♦ * «V 9 V * mer kap to -pur 1 n, me t r omi da z ο1, 1 i p ox i g ená z - i nh í bi torok, mezalamin, oissalazin, balszalazid, antioxidán-sok, trojnboxán inhibitorok, 1L-1-receptor antagonisták, anti-lL-ΐβ .monok! ónál is antitestek, anti-lb-6 monoklonálís antitestek, növekedési faktorok, eiasztaz-inhibitorok, pirídinii-ímidazoi vegyületek, a prednizoion, dexametazon vagy budenozid glükuroniddal konjngáüc előterméfceí, prednizoion, dexametazor· vagy budenozid dextránnal konjugáit eidtermékei, oldható komplement receptor 1, lassan felszabaduló mesalazin, várlemezke aktiváld faktor (PAF) antagonisták, ciprofloxaein, lignokain, prednizoion, metiiprednizolon, ciklofoszfaraid, 4-aminopiridin, tizanídin, intérferon-Slainterferon-Slfo, copolymer--1, magas nyomású oxigén, intravénás immunglobulin, klabribin, bipertó-níás sóoldatok, antibiotikumok, folyamatos hamofiitrálás, karbapenemek, oitokinantagonisták, mint a THFcx, Γο-ΐβ, ib~6 és/vagy T.L-8, SK&.F 107647, négyértékő guanii-hidrazon CNI-1493, szöveti faktor pathway inhibitor, PH?, vaskelát-képzők és -kelátok, beleértve a diétáién-trísmin-pentaeeetsav-vas(III)komplexet, lizofIliin, PGG-glükán, apolipoprotein A-l lipídekhen feloldva, királ.is hidroxámssvak, anti-endotoxin antitestek, 15531, rBPIn, szintetikus anti-endotoxin pép tidek, felületaktív szer bevitellel végzett terápia és anti-11,-8 antitestek.
    35. A 65-72, igénypontok bármelyike szerinti antitest vagy antigén-kötő része terápiában történő alkalmazásra.
    36. A 65-72. igénypontok bármelyike szerinti antitest vagy antigén-kötő részének alkalmazása káros THFa aktivitással összefüggő rendellenesség kezelésére alkalmas gyógyszer előállítására kombinációban legalább egy további terápiás szerrel.
    97, A 96. igénypont szerinti alkalmazás, azzal jellemezve, hogy a további terápiás szert, a következő csoportból válasz fejül kí: .nem-sz tereid. gyulladás-gátló szerek, -cl tokin szuppresszí: gynlladásgátlő szerek, CBR~571/3AY~10~3356, cA2, FtkdTNFR-lgG, 55kdTNFR-TgG, 1DEC-CE9.1/SB 210336, DAB 4S6-1L-2, SAB 309-1L-2, Anti-Tac, IL-4, IL-lö, ib-4 antagon isták., 1L-10 antaaonisták, ÖL-1BA, TdF-bp/s-TEFR, 7284, R9734Ö1, EK-906, iloprost, metotrexat, taiidomid, taiídomiddal rokon szerek, ieflunomíd, tranaxamin sav, T-614, prosztaglandln El, tenidap f (+ / -) -5-klőr~2,3--dihidro~3- íhidroxi-2-tienIl-meLllén) -2 -oxo-iHináol.-l-karboxamidj, naoroxen ({ + ) -2-naítalén-ecetsav-S-metoxíα --met x i - és z t ér meloxicam [ 4-hldroxi.-2-me.til-M- ( *-s — re <:x f' · ti ázol il} -2Ή-1,2-benzotiazín--3-karboxamid-Í, l-díoxid] , piroxiea: [4-hidroxi~3-metil~W2 --piridi.niI-2H~I,2-be.nzotiz3.zi.n-3karboxamíd-1, l-dioxid] , diclofenac [2- [ (2 , S-diklőr-fen.il) · amíno]-fenil--ececsav-mononátrium-- vagy monokálium--só] , indomet a c1η {I - (4 - ki ó r-benzo i1)~ 5-metoxí-2-meti1-1H - i ndo1 -3-ec et-sav] sultasalazin [5- (p- (2-piri.díl-szulfamoí 1; -feníl-azo) szalicilsav] , azathioprin (6-í(l-metil~4“nltro~imid.azol-o-íi) tioz-purin), IGE inhibitorok, zap-70 inhibitorok, lek inhibitorok, VEGE inhibitorok, VEGF-R inhibitorok, kortikoszteroidok
    TNF-konvertáz inhibitorok, anti-XL-12 antitestek, interleukin~li á.nt.erleukín-13, interleukin-17 inhibitorok, arany, penicíll&min kiorokin, hidroxi-klorokín, kioramhnei1, ciklofosztanád ciklosporín, ant.i-timocita giofoulin, anti-CDá antitestek, CD.5 toxinok, orálisan beadható peptídek, kollagén. dinátrium
    134
    X* « «
    Χ»« lobenzarit, c.x tok in szabályozó szerek ΗΡ.228 és KP466, 1CAA-1 antíszensz foszforotioáf oligodezoxinukleotidok, oldható komplementer receptor 1, prednizon, or-go teán, glükozamino-glükánpolíszul.f át, minoo.ik~li.n, anti~xb2F. antitestek, hal eredetű lipidek, növényi eredetű lipidek, anranofin, feniibutazon, meklofenamin sav, flufenamin sav, intravénás immunglobulin , zíleuton, míkofenol sav,, takrolinusz, szírolimusz, amiprílöz, kladrifoin, azarifoín, budenozíd, epídsrmálís növekedési faktor, amíno-szabiéilátok, 6-mer kap te--parin, metroeidazoi, üpoxigeráz inhibitorok, mezalamin, olszalazin, balszalazid, ant xo-xi dánsok., tromboxán inhibitorok, IL-I receptor antagonisták, ant.i-IL-ϊβ monokionális antitestek, antíi-lL-6 monokionális antitestek, növekedési faktorok, elasztáz inhibitorok, piridinil-imidazoi vegyületek, prednizolon, dexa.met.azon vagy budenoti.d glukuroniddal konjugált előtermékei, prednizolon, dexametazon vagy budenozíd dextránnal konjugált előtérmékéi, oldható komplement receptor 1, lassan felszabaduló meszalazín, vérlemezke aktiváló faktor (PAF) antagonisták, ciprofloxacin, lignokain, prednizolon, metilprednizolon, ciklofoszfamid, 4-aminopiri-din, tizanidin, ínterferon-Sla, ínterferon-Slfo, copolymer 1, magas nyomású oxigén, intravénás immunglobulin, klabríbin, hipertóniás sóoldatok, antibiotikumok, folyamatos hemofiitrálás, karbapenemek, cítokén antagonisták, mint a TPFa, IL-ΐβ, XL.-6 és/vagy il~8, SK&.F 107647, tetravalens guanil-hidrazon CLI-I493, növekedési faktor pathwav inhibitor PHP, vaskelát-képzok és kelátok, beleértve a dietilén-triamln-pentaecetsav-vas(Ili)komplexet, lizofillin, PGG-glükán, apolipoprotein A-l lipi etekben feloldva, kírálís 'ί
    135 η hidroxámsavak, anti-endotoxín antitestek, S'5531, rBPL·., szintetikus anti-endotoxín peptídek, felületaktív szer bevitellel végzett terápia és anti-IL-8 antitestek,
    98. A 65-72. igénypontok, bármelyike szerinti antitest vagy antigén-kötő részének alkalmazása rheumatoid arthritis kezelésére alkalmas gyógyszer előállítására metotrexattai kombinációban.
    99. Egy izolált humán anfci-TNFö antitest vagy egy antigénkötő része, amely tartalmaz egy könnyű lánc variábilis szakaszt ÍLCVE9, amely az 1, számú szekvencia szerinti aminosavszekvenciát tartalmazza, és egy nehéz lánc variábilis szakaszt (HC'VR) . amely a zt számú szekvencia szerinti aminosavszekvenciát tartalmazza, ahol az antitest vagy antigén-kötő része egy IgGl nehéz lánc konstans szakaszt és egy kappa könnyű lánc konstans szakaszt tartalmas.
HU0204115A 1996-02-09 1997-02-10 Use of human anti bodies that bind human tnf-alpha and process for inhibiting of human tnf-alpha activity HU228630B1 (en)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US08/599,226 US6090382A (en) 1996-02-09 1996-02-09 Human antibodies that bind human TNFα
US3147696P 1996-11-25 1996-11-25

Publications (2)

Publication Number Publication Date
HU0204115D0 HU0204115D0 (en) 2003-02-28
HU228630B1 true HU228630B1 (en) 2013-04-29

Family

ID=26707297

Family Applications (4)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU1300152A HU230048B1 (hu) 1996-02-09 1997-02-10 Humán TNFalfa-kötő antitestek alkalmazása
HU9901874A HU221984B1 (hu) 1996-02-09 1997-02-10 Humán TNFalfa-t kötő antitestek, ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények és alkalmazásuk
HU0204115A HU228630B1 (en) 1996-02-09 1997-02-10 Use of human anti bodies that bind human tnf-alpha and process for inhibiting of human tnf-alpha activity
HU1500179A HU230515B1 (hu) 1996-02-09 1997-02-10 Humán TNFalfa-kötő antitestek alkalmazásai

Family Applications Before (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU1300152A HU230048B1 (hu) 1996-02-09 1997-02-10 Humán TNFalfa-kötő antitestek alkalmazása
HU9901874A HU221984B1 (hu) 1996-02-09 1997-02-10 Humán TNFalfa-t kötő antitestek, ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények és alkalmazásuk

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU1500179A HU230515B1 (hu) 1996-02-09 1997-02-10 Humán TNFalfa-kötő antitestek alkalmazásai

Country Status (32)

Country Link
US (9) US6258562B1 (hu)
EP (1) EP0929578B1 (hu)
JP (8) JP3861118B2 (hu)
KR (1) KR100317188B1 (hu)
CN (5) CN101712720A (hu)
AT (1) ATE239041T1 (hu)
AU (1) AU722077B2 (hu)
BG (7) BG64564B1 (hu)
BR (3) BRPI9715219B8 (hu)
CA (1) CA2243459C (hu)
CY (2) CY2463B1 (hu)
CZ (1) CZ292465B6 (hu)
DE (4) DE122004000004I1 (hu)
DK (1) DK0929578T3 (hu)
ES (1) ES2198552T3 (hu)
HK (8) HK1019452A1 (hu)
HU (4) HU230048B1 (hu)
IL (4) IL125697A (hu)
LU (1) LU91062I2 (hu)
MX (1) MX336813B (hu)
NL (1) NL300143I2 (hu)
NO (6) NO316711B1 (hu)
NZ (5) NZ331579A (hu)
PL (2) PL193499B1 (hu)
PT (1) PT929578E (hu)
RO (2) RO123028B1 (hu)
RU (3) RU2270030C2 (hu)
SI (1) SI9720020B (hu)
SK (1) SK284040B6 (hu)
TR (1) TR199801532T2 (hu)
UA (2) UA57726C2 (hu)
WO (1) WO1997029131A1 (hu)

Families Citing this family (463)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0486526B2 (en) 1989-08-07 2001-03-07 Peptech Limited Tumour necrosis factor binding ligands
US5959087A (en) * 1989-08-07 1999-09-28 Peptide Technology, Ltd. Tumour necrosis factor binding ligands
US20030225254A1 (en) * 1989-08-07 2003-12-04 Rathjen Deborah Ann Tumour necrosis factor binding ligands
US7192584B2 (en) 1991-03-18 2007-03-20 Centocor, Inc. Methods of treating psoriasis with anti-TNF antibodies
US6270766B1 (en) 1992-10-08 2001-08-07 The Kennedy Institute Of Rheumatology Anti-TNF antibodies and methotrexate in the treatment of arthritis and crohn's disease
US6830751B1 (en) 1994-03-14 2004-12-14 Genetics Institute, Llc Use of IL-12 antagonists in the treatment of rheumatoid arthritis
ZA95960B (en) * 1994-03-14 1995-10-10 Genetics Inst Use of interleukin-12 antagonists in the treatment of autoimmune diseases
US20010055581A1 (en) 1994-03-18 2001-12-27 Lawrence Tamarkin Composition and method for delivery of biologically-active factors
US6090382A (en) 1996-02-09 2000-07-18 Basf Aktiengesellschaft Human antibodies that bind human TNFα
DE122004000004I1 (de) * 1996-02-09 2004-08-12 Abott Biotechnology Ltd Humane Antikörper welche an Humanen TNFalpha binden.
US7129061B1 (en) * 1996-08-07 2006-10-31 Biogen Idec Ma Inc. Tumor necrosis factor related ligand
US20040009166A1 (en) * 1997-04-30 2004-01-15 Filpula David R. Single chain antigen-binding polypeptides for polymer conjugation
WO1998049198A1 (en) * 1997-04-30 1998-11-05 Enzon, Inc. Single-chain antigen-binding proteins capable of glycosylation, production and uses thereof
US7229841B2 (en) 2001-04-30 2007-06-12 Cytimmune Sciences, Inc. Colloidal metal compositions and methods
US6407218B1 (en) 1997-11-10 2002-06-18 Cytimmune Sciences, Inc. Method and compositions for enhancing immune response and for the production of in vitro mabs
US7067144B2 (en) * 1998-10-20 2006-06-27 Omeros Corporation Compositions and methods for systemic inhibition of cartilage degradation
US7553487B2 (en) 1998-12-14 2009-06-30 Genetics Institute, Llc Method and compositions for treating asthma
EP1141286B1 (en) 1998-12-14 2006-10-18 Genetics Institute, LLC Cytokine receptor chain
DE60045240D1 (de) * 1999-03-02 2010-12-30 Centocor Inc Antikörper gegen tnf alpha zur therapie von steroidresistentem asthma
US6914128B1 (en) 1999-03-25 2005-07-05 Abbott Gmbh & Co. Kg Human antibodies that bind human IL-12 and methods for producing
US20040220103A1 (en) 1999-04-19 2004-11-04 Immunex Corporation Soluble tumor necrosis factor receptor treatment of medical disorders
AU7912600A (en) * 1999-10-06 2001-05-10 Basf Aktiengesellschaft Inhibitors of the endothelin signalling pathway and alphavbeta3 integrin receptor antagonists for combination therapy
KR101111103B1 (ko) 2000-02-10 2012-02-13 아보트 러보러터리즈 사람 인터류킨-18에 결합하는 항체 및 이를 제조하고 사용하는 방법
GB0013810D0 (en) 2000-06-06 2000-07-26 Celltech Chiroscience Ltd Biological products
CN101525384A (zh) 2000-06-29 2009-09-09 艾博特公司 双特异性抗体及其制备方法和用途
UA81743C2 (uk) * 2000-08-07 2008-02-11 Центокор, Инк. МОНОКЛОНАЛЬНЕ АНТИТІЛО ЛЮДИНИ, ЩО СПЕЦИФІЧНО ЗВ'ЯЗУЄТЬСЯ З ФАКТОРОМ НЕКРОЗУ ПУХЛИН АЛЬФА (ФНПα), ФАРМАЦЕВТИЧНА КОМПОЗИЦІЯ, ЩО ЙОГО МІСТИТЬ, ТА СПОСІБ ЛІКУВАННЯ РЕВМАТОЇДНОГО АРТРИТУ
US20050196755A1 (en) * 2000-11-17 2005-09-08 Maurice Zauderer In vitro methods of producing and identifying immunoglobulin molecules in eukaryotic cells
AU2002231736A1 (en) 2000-12-22 2002-07-08 Max-Planck-Gesellschaft Zur Forderung Der Wissenschaften E.V. Use of repulsive guidance molecule (rgm) and its modulators
US6919183B2 (en) * 2001-01-16 2005-07-19 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Isolating cells expressing secreted proteins
US20090137416A1 (en) 2001-01-16 2009-05-28 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Isolating Cells Expressing Secreted Proteins
CA2440676A1 (en) 2001-03-22 2002-10-03 Abbott Gmbh & Co. Kg Transgenic animals expressing antibodies specific for genes of interest and uses thereof
US6410955B1 (en) * 2001-04-19 2002-06-25 Micron Technology, Inc. Comb-shaped capacitor for use in integrated circuits
CA2385745C (en) * 2001-06-08 2015-02-17 Abbott Laboratories (Bermuda) Ltd. Methods of administering anti-tnf.alpha. antibodies
AU2002316384A1 (en) * 2001-06-26 2003-03-03 Photomed Technologies, Inc. Multiple wavelength illuminator
US7364736B2 (en) 2001-06-26 2008-04-29 Amgen Inc. Antibodies to OPGL
US20050271663A1 (en) * 2001-06-28 2005-12-08 Domantis Limited Compositions and methods for treating inflammatory disorders
TWI327597B (en) 2001-08-01 2010-07-21 Centocor Inc Anti-tnf antibodies, compositions, methods and uses
WO2003024384A2 (en) * 2001-09-20 2003-03-27 Magnum Therapeutics Improved methods for treatment with viral vectors
US20030065382A1 (en) * 2001-10-02 2003-04-03 Fischell Robert E. Means and method for the treatment of coronary artery obstructions
CA2460916A1 (en) 2001-10-04 2003-04-10 Laura Carter Methods and compositions for modulating interleukin-21 receptor activity
EP1494710A4 (en) * 2002-03-26 2007-03-21 Centocor Inc DIABETES-RELEVANT IMMUNOGLOBULIN-BASED PROTEINS, COMPOSITIONS, PROCESSES AND USES
US20030206898A1 (en) * 2002-04-26 2003-11-06 Steven Fischkoff Use of anti-TNFalpha antibodies and another drug
US20040009172A1 (en) * 2002-04-26 2004-01-15 Steven Fischkoff Use of anti-TNFalpha antibodies and another drug
CN102764436A (zh) 2002-07-19 2012-11-07 艾博特生物技术有限公司 TNF α相关疾病的治疗
US20090280065A1 (en) * 2006-04-10 2009-11-12 Willian Mary K Uses and Compositions for Treatment of Psoriasis
US20040033228A1 (en) 2002-08-16 2004-02-19 Hans-Juergen Krause Formulation of human antibodies for treating TNF-alpha associated disorders
WO2004019861A2 (en) * 2002-08-28 2004-03-11 Pharmacia Corporation Stable ph optimized formulation of a modified antibody
MY150740A (en) * 2002-10-24 2014-02-28 Abbvie Biotechnology Ltd Low dose methods for treating disorders in which tnf? activity is detrimental
US9320792B2 (en) 2002-11-08 2016-04-26 Ablynx N.V. Pulmonary administration of immunoglobulin single variable domains and constructs thereof
CA2505316C (en) 2002-11-08 2014-08-05 Ablynx N.V. Single domain antibodies directed against tumour necrosis factor-alpha and uses therefor
US20060034845A1 (en) 2002-11-08 2006-02-16 Karen Silence Single domain antibodies directed against tumor necrosis factor alpha and uses therefor
US20040101939A1 (en) * 2002-11-22 2004-05-27 Santora Ling C. Method for reducing or preventing modification of a polypeptide in solution
US20040162414A1 (en) * 2002-11-22 2004-08-19 Santora Ling C. Method for reducing or preventing modification of a polypeptide in solution
RU2377253C2 (ru) * 2002-12-02 2009-12-27 Амген Фремонт,Инк. Антитела, специфичные к фактору некроза опухолей, и их применение
EP1578782A4 (en) * 2002-12-30 2007-09-12 Amgen Inc COSTIMULATING FACTORIAL THERAPY
JP2007525409A (ja) * 2003-01-08 2007-09-06 アプライド モレキュラー エボリューション，インコーポレイテッド ＴＮＦ−α結合分子
US7101978B2 (en) * 2003-01-08 2006-09-05 Applied Molecular Evolution TNF-α binding molecules
CA2512545C (en) * 2003-01-10 2015-06-30 Karen Silence Recombinant vhh single domain antibody from camelidae against von willebrand factor (vwf)
DE10303974A1 (de) 2003-01-31 2004-08-05 Abbott Gmbh & Co. Kg Amyloid-β(1-42)-Oligomere, Verfahren zu deren Herstellung und deren Verwendung
RU2005131852A (ru) * 2003-03-14 2006-04-20 Уайт (Us) Антитела против человеческого рецептора il-21 и их применение
EP1460088A1 (en) 2003-03-21 2004-09-22 Biotest AG Humanized anti-CD4 antibody with immunosuppressive properties
WO2004098578A2 (en) * 2003-05-12 2004-11-18 Altana Pharma Ag Composition comprising a pde4 inhibitor and a tnf-alfa antagonist selected from infliximab, adalimumab, cdp870 and cdp517
FR2856075B1 (fr) * 2003-06-16 2007-10-12 Monoclonal Antibodies Therapeu Procede essentiellement automatise de criblage a grande echelle de cellules secretant des anticorps monoclonaux
FR2859725B1 (fr) * 2003-09-16 2006-03-10 Neovacs Procede a haut rendement pour l'obtention d'anticorps humains neutralisant l'activite biologique d'une cytokine humaine
US20050100965A1 (en) 2003-11-12 2005-05-12 Tariq Ghayur IL-18 binding proteins
KR100772800B1 (ko) * 2003-11-17 2007-11-01 주식회사유한양행 인간 종양괴사인자 α를 인식하는 단일클론항체의가변영역 및 이를 코딩하는 유전자
CA2548179A1 (en) 2003-12-02 2005-07-21 Cytimmune Sciences, Inc. Methods and compositions for the production of monoclonal antibodies
US7674459B2 (en) 2003-12-23 2010-03-09 Genentech, Inc. Treatment of cancer with a novel anti-IL13 monoclonal antibody
US7435799B2 (en) * 2004-01-08 2008-10-14 Applied Molecular Evolution TNF-α binding molecules
US7625549B2 (en) 2004-03-19 2009-12-01 Amgen Fremont Inc. Determining the risk of human anti-human antibodies in transgenic mice
EP2418224A3 (en) 2004-03-19 2013-07-24 Amgen Inc. Reducing the risk of human and anti-human antibodies through V gene manipulation
TWI556829B (zh) * 2004-04-09 2016-11-11 艾伯維生物技術有限責任公司 用於治療ＴＮＦα相關失調症之多重可變劑量療法
CN100427504C (zh) * 2004-06-02 2008-10-22 北京天广实生物技术有限公司 TNFα高亲和力嵌合抗体及其用途
US7501121B2 (en) 2004-06-17 2009-03-10 Wyeth IL-13 binding agents
AR049390A1 (es) 2004-06-09 2006-07-26 Wyeth Corp Anticuerpos contra la interleuquina-13 humana y usos de los mismos
GB0414054D0 (en) 2004-06-23 2004-07-28 Owen Mumford Ltd Improvements relating to automatic injection devices
EP1773394A2 (en) * 2004-08-05 2007-04-18 Wyeth a Corporation of the State of Delaware Antagonizing interleukin-21 receptor activity
WO2006041970A2 (en) * 2004-10-08 2006-04-20 Abbott Biotechnology Ltd. Treatment of respiratory syncytial virus (rsv) infection
CN101048426A (zh) * 2004-10-22 2007-10-03 金克克国际有限公司 分离人抗体
CN101102792A (zh) 2004-11-19 2008-01-09 比奥根艾迪克Ma公司 治疗多发性硬化
CA2930677A1 (en) 2005-02-08 2006-08-17 Genzyme Corporation Antibodies to tgfbeta
EP1849011A2 (en) * 2005-02-14 2007-10-31 University of Pittsburgh of the Commonwealth System of Higher Education Use of il-17f in diagnosis and therapy of airway inflammation
EP1848743A2 (en) * 2005-02-14 2007-10-31 Wyeth Interleukin-17f antibodies and other il-17f signaling antagonists and uses therefor
WO2006089095A2 (en) 2005-02-17 2006-08-24 Biogen Idec Ma Inc. Treating neurological disorders
GT200600148A (es) * 2005-04-14 2006-11-22 Metodos para el tratamiento y la prevencion de fibrosis
AU2006244014B2 (en) * 2005-05-10 2011-03-17 Biogen Ma Inc. Treating and evaluating inflammatory disorders
AU2012254978C1 (en) * 2005-05-16 2017-06-01 Abbvie Biotechnology Ltd Use of TNF inhibitor for treatment of erosive polyarthritis
TWI399384B (zh) * 2005-05-16 2013-06-21 Abbott Biotech Ltd ＴＮＦα抑制劑於治療侵蝕型多發性關節炎之用途
WO2006133287A2 (en) * 2005-06-06 2006-12-14 Wyeth Expression profiles of peripheral blood mononuclear cells for inflammatory bowel diseases
WO2006131013A2 (en) 2005-06-07 2006-12-14 Esbatech Ag STABLE AND SOLUBLE ANTIBODIES INHIBITING TNFα
US20080311078A1 (en) 2005-06-14 2008-12-18 Gokarn Yatin R Self-Buffering Protein Formulations
US20060286108A1 (en) * 2005-06-16 2006-12-21 Bell Katherine A Topical compositions for the treatment of chronic wounds
US20080045949A1 (en) * 2005-06-17 2008-02-21 Hunt Margaret M Method of treating degenerative spinal disorders
JP5253159B2 (ja) * 2005-06-24 2013-07-31 デューク・ユニヴァーシティ 熱応答性バイオポリマーに基づく直接的ドラッグデリバリーシステム
EP2484774A3 (en) 2005-07-21 2012-11-14 Abbott Laboratories Multiple gene expression including sorf contructs and methods with polyproteins, pro-proteins, and proteolysis
TW200726776A (en) * 2005-07-29 2007-07-16 Friedrich Alexander University Of Erlangen Nuremberg CD33-specific single-chain immunotoxin and methods of use
US20070041905A1 (en) * 2005-08-19 2007-02-22 Hoffman Rebecca S Method of treating depression using a TNF-alpha antibody
US7612181B2 (en) * 2005-08-19 2009-11-03 Abbott Laboratories Dual variable domain immunoglobulin and uses thereof
EP2500353A3 (en) 2005-08-19 2012-10-10 Abbott Laboratories Dual variable domain immunoglobulin and uses thereof
US20090215992A1 (en) * 2005-08-19 2009-08-27 Chengbin Wu Dual variable domain immunoglobulin and uses thereof
KR20140053410A (ko) 2005-08-19 2014-05-07 아보트 러보러터리즈 이원 가변 도메인 면역글로불린 및 이의 용도
US8906864B2 (en) 2005-09-30 2014-12-09 AbbVie Deutschland GmbH & Co. KG Binding domains of proteins of the repulsive guidance molecule (RGM) protein family and functional fragments thereof, and their use
WO2007049286A1 (en) * 2005-10-27 2007-05-03 Tata Memorial Centre A system for ex-vivo separation of apoptotic chromatin particles from blood or plasma
CN101663048A (zh) 2005-11-01 2010-03-03 艾博特生物技术有限公司 使用生物标志物诊断强直性脊柱炎的方法和组合物
AR056806A1 (es) 2005-11-14 2007-10-24 Amgen Inc Moleculas quimericas de anticuerpo rankl- pth/ pthrp
KR20080090408A (ko) 2005-11-30 2008-10-08 아보트 러보러터리즈 항-Ａβ 글로불로머 항체, 이의 항원-결합 잔기, 상응하는하이브리도마, 핵산, 벡터, 숙주 세포, 당해 항체의 제조방법, 당해 항체를 포함하는 조성물, 당해 항체의 용도 및당해 항체의 사용 방법
KR101439828B1 (ko) 2005-11-30 2014-09-17 애브비 인코포레이티드 아밀로이드 베타 단백질에 대한 모노클로날 항체 및 이의 용도
US8334257B2 (en) 2005-12-20 2012-12-18 Duke University Methods and compositions for delivering active agents with enhanced pharmacological properties
US20130172274A1 (en) 2005-12-20 2013-07-04 Duke University Methods and compositions for delivering active agents with enhanced pharmacological properties
US8841255B2 (en) 2005-12-20 2014-09-23 Duke University Therapeutic agents comprising fusions of vasoactive intestinal peptide and elastic peptides
EA017417B1 (ru) 2006-02-01 2012-12-28 Сефалон Астралия Пти Лтд. КОНСТРУКТ ОДНОДОМЕННОГО АНТИТЕЛА, КОТОРЫЙ СВЯЗЫВАЕТСЯ С ЧЕЛОВЕЧЕСКИМ TNF-α, И ЕГО ПРИМЕНЕНИЕ
TWI417301B (zh) 2006-02-21 2013-12-01 Wyeth Corp 對抗人類介白素-２２（ｉｌ-２２）之抗體及其用途
TW200744634A (en) 2006-02-21 2007-12-16 Wyeth Corp Methods of using antibodies against human IL-22
KR20150064254A (ko) * 2006-04-05 2015-06-10 애브비 바이오테크놀로지 리미티드 항체 정제
US9605064B2 (en) * 2006-04-10 2017-03-28 Abbvie Biotechnology Ltd Methods and compositions for treatment of skin disorders
US20080118496A1 (en) * 2006-04-10 2008-05-22 Medich John R Uses and compositions for treatment of juvenile rheumatoid arthritis
EP2012586A4 (en) 2006-04-10 2010-08-18 Abbott Biotech Ltd USES AND COMPOSITIONS FOR THE TREATMENT OF ANKYLOSANTE SPONDYLARTHRITIS
EP2010214A4 (en) 2006-04-10 2010-06-16 Abbott Biotech Ltd USES AND COMPOSITIONS FOR THE TREATMENT OF RHEUMATOID ARTHRITIS
US20090317399A1 (en) * 2006-04-10 2009-12-24 Pollack Paul F Uses and compositions for treatment of CROHN'S disease
EP2666472A3 (en) 2006-04-10 2014-04-02 Abbott Biotechnology Ltd Uses and compositions for treatment of psoriatic arthritis
EP2666479A3 (en) 2006-04-10 2014-03-26 Abbott Biotechnology Ltd Uses and compositions for treatment of juvenile rheumatoid arthritis
CA2564435A1 (en) 2006-04-10 2007-10-10 Abbott Biotechnology Ltd. Methods for monitoring and treating intestinal disorders
US20080131374A1 (en) * 2006-04-19 2008-06-05 Medich John R Uses and compositions for treatment of rheumatoid arthritis
US20080311043A1 (en) * 2006-06-08 2008-12-18 Hoffman Rebecca S Uses and compositions for treatment of psoriatic arthritis
US20100021451A1 (en) * 2006-06-08 2010-01-28 Wong Robert L Uses and compositions for treatment of ankylosing spondylitis
TWI542374B (zh) 2006-06-30 2016-07-21 艾伯維生物技術有限責任公司 自動注射裝置
RU2472807C2 (ru) 2006-09-08 2013-01-20 Эбботт Лэборетриз Интерлейкин-13-связывающие белки
EP2500415A1 (en) 2006-09-13 2012-09-19 Abbott Laboratories Cell culture improvements
US8911964B2 (en) 2006-09-13 2014-12-16 Abbvie Inc. Fed-batch method of making human anti-TNF-alpha antibody
MX2009002748A (es) 2006-09-13 2009-03-26 Abbott Lab Mejoras de cultivos celulares.
KR20150002896A (ko) * 2006-10-27 2015-01-07 애브비 바이오테크놀로지 리미티드 결정형 항-ｈＴＮＦ알파 항체
EP2099454A4 (en) 2006-11-17 2010-11-10 Abbott Lab AMINOPYRROLIDINES AS CHEMOKINE RECEPTOR ANTAGONISTS
EP2101780B1 (en) 2006-11-21 2013-10-09 Kalobios Pharmaceuticals, Inc. Methods of treating chronic inflammatory diseases using a gm-csf antagonist
US8455626B2 (en) 2006-11-30 2013-06-04 Abbott Laboratories Aβ conformer selective anti-aβ globulomer monoclonal antibodies
WO2008082651A2 (en) 2006-12-29 2008-07-10 Abbott Laboratories Dual-specific il-1a/ il-1b antibodies
WO2008088823A2 (en) * 2007-01-16 2008-07-24 Abbott Laboratories Methods for treating psoriasis
JP2008209378A (ja) * 2007-01-31 2008-09-11 Fujifilm Corp バイオセンサー基板
AU2008214359B2 (en) 2007-02-05 2014-01-16 Apellis Pharmaceuticals, Inc. Local complement inhibition for treatment of complement-mediated disorders
US8895004B2 (en) 2007-02-27 2014-11-25 AbbVie Deutschland GmbH & Co. KG Method for the treatment of amyloidoses
NZ579594A (en) 2007-03-12 2012-03-30 Esbatech Alcon Biomed Res Unit Sequence based engineering and optimization of single chain antibodies
TW200902064A (en) * 2007-03-28 2009-01-16 Wyeth Corp Methods and compositions for modulating IL-17F/IL-17A biological activity
US7807168B2 (en) * 2007-04-10 2010-10-05 Vaccinex, Inc. Selection of human TNFα specific antibodies
WO2008124858A2 (en) * 2007-04-11 2008-10-23 F-Star Biotechnologische Forschungs- Und Entwicklungsges. M.B.H. Targeted receptor
EP2679995A1 (en) 2007-05-31 2014-01-01 AbbVie Inc. Biomarkers predictive of the responsiveness to TNF-alfa inhibitors in autoimmune disorders
WO2008150490A2 (en) * 2007-06-01 2008-12-11 Abbott Biotechnology Ltd. Uses and compositions for treatment of psoriasis and crohn's disease
MX2009013137A (es) * 2007-06-06 2010-04-30 Domantis Ltd Metodos para seleccionar polipeptidos resistentes a la proteasa.
BRPI0812398A2 (pt) * 2007-06-06 2019-09-24 Domantis Ltd domínio variável simples de imunoglobulina anti-vegf, antagonista anti-vegf, domínio variável simples de imunoglobulina resistente à protease, uso do antagonista vegf, método para a dispensação oral ou dispensação de um medicamento ao trato gi de um paciente ou ao pulmão ou tecido pulmonar ou olho de um paciente, dispositivo de dispensação pulmonar, formulação oral, ligando específico duplo, ácido nucleico isolado ou recombinante, vetor, célula hospedeira, método para produzir polipeptídeo, composição farmacêutica, polipeptídeo, e, proteína de fusão
WO2008154543A2 (en) 2007-06-11 2008-12-18 Abbott Biotechnology Ltd. Methods for treating juvenile idiopathic arthritis
SI2170390T1 (sl) 2007-06-14 2019-02-28 Biogen Ma Inc. Oblike protitelesa natalizumab
HUE027507T2 (hu) * 2007-06-25 2016-10-28 Esbatech Alcon Biomed Res Unit Eljárások ellenanyagok módosítására és javított funkcionális tulajdonságú módosított ellenanyagok
ES2532725T3 (es) * 2007-06-25 2015-03-31 Esbatech, An Alcon Biomedical Research Unit Llc Modificación por ingeniería genética basada en secuencia y optimización de anticuerpos de cadena sencilla
WO2009011782A2 (en) * 2007-07-13 2009-01-22 Abbott Biotechnology Ltd. METHODS AND COMPOSITIONS FOR PULMONARY ADMINISTRATION OF A TNFa INHIBITOR
CN101980722A (zh) 2007-08-08 2011-02-23 雅培制药有限公司 结晶抗体的组合物和方法
CA3128656A1 (en) 2007-08-22 2009-02-26 The Regents Of The University Of California Activatable binding polypeptides and methods of identification and use thereof
MX2010002269A (es) * 2007-08-28 2010-03-25 Abbott Biotech Ltd Composiciones y metodos que comprenden proteinas de union para adalimumab.
RU2499599C2 (ru) 2007-09-28 2013-11-27 Интрексон Корпорейшн Конструкции терапевтического переключения генов и биореакторы для экспрессии биотерапевтических молекул и их применение
JP2009082033A (ja) * 2007-09-28 2009-04-23 Kaneka Corp 完全ヒト型抗体生産法
CA2706700A1 (en) 2007-11-08 2009-05-14 Cytimmune Sciences, Inc. Compositions and methods for generating antibodies
CN101969971A (zh) 2007-11-30 2011-02-09 雅培制药有限公司 蛋白制剂及其制备方法
US8883146B2 (en) 2007-11-30 2014-11-11 Abbvie Inc. Protein formulations and methods of making same
WO2009086550A1 (en) * 2008-01-03 2009-07-09 Abbott Laboratories Predicting long-term efficacy of a compound in the treatment of psoriasis
CA2711984A1 (en) 2008-01-15 2009-07-23 Abbott Gmbh & Co. Kg Powdered protein compositions and methods of making same
US8962803B2 (en) 2008-02-29 2015-02-24 AbbVie Deutschland GmbH & Co. KG Antibodies against the RGM A protein and uses thereof
RU2540018C2 (ru) 2008-03-13 2015-01-27 Биотест Аг Средство для лечения заболевания
EP2265643B1 (en) 2008-03-13 2016-10-19 Biotest AG Dosing regimen for treating psoriasis and rheumatoid arthritis
WO2009124815A1 (en) 2008-03-13 2009-10-15 Biotest Ag Agent for treating disease
US8178092B2 (en) 2008-03-18 2012-05-15 Abbott Laboratories Methods of treating psoriasis by administration of antibodies to the p40 subunit of IL-12 and/or IL-23
MX2010011955A (es) 2008-04-29 2011-01-21 Abbott Lab Inmunoglobulinas de dominio variable doble y usos de las mismas.
US20100260668A1 (en) * 2008-04-29 2010-10-14 Abbott Laboratories Dual Variable Domain Immunoglobulins and Uses Thereof
EP2113568A1 (en) 2008-04-30 2009-11-04 Deutsches Rheuma-Forschungszentrum Berlin Knock-in mouse for modelling blockade of human TNFalpha
AR071698A1 (es) 2008-05-09 2010-07-07 Abbott Gmbh & Co Kg Anticuerpos contra el receptor de productos finales de glicosilacion avanzada (rage) y usos de los mismos
WO2009142186A1 (ja) * 2008-05-20 2009-11-26 株式会社カネカ 細胞障害性組成物
NZ589436A (en) 2008-06-03 2012-12-21 Abbott Lab Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
MX2010013239A (es) * 2008-06-03 2011-02-24 Abbott Lab Inmunoglobulinas de dominio variable doble y usos de las mismas.
KR102095257B1 (ko) 2008-06-25 2020-04-01 노바르티스 아게 Ｖｅｇｆ를 억제하는 안정하고 가용성인 항체
PT3444274T (pt) 2008-06-25 2021-03-17 Novartis Ag Anticorpos que inibem tnf estáveis e solúveis
ES2629345T3 (es) 2008-06-25 2017-08-08 Esbatech, An Alcon Biomedical Research Unit Llc Optimización de la solubilidad de agentes de unión inmunológica
CN105727261A (zh) 2008-06-27 2016-07-06 杜克大学 包含弹性蛋白样肽的治疗剂
KR20110044992A (ko) * 2008-07-02 2011-05-03 이머전트 프로덕트 디벨롭먼트 시애틀, 엘엘씨 ＴＧＦ-β 길항제 다중-표적 결합 단백질
JP2011527579A (ja) 2008-07-08 2011-11-04 アボット・ラボラトリーズ プロスタグランジンｅ２結合タンパク質およびこの使用
CN102149825B (zh) 2008-07-08 2015-07-22 Abbvie公司 前列腺素e2双重可变结构域免疫球蛋白及其用途
EP2337799A2 (en) * 2008-08-28 2011-06-29 Wyeth LLC Uses of il-22, il-17, and il-1 family cytokines in autoimmune diseases
CN102281898B (zh) * 2008-10-07 2015-06-03 成功大学 Il-20拮抗剂在治疗类风湿性关节炎和骨质疏松症中的应用
MX2011004558A (es) 2008-10-29 2011-06-01 Wyeth Llc Procedimientos para la purificacion de moleculas de union a antigeno de un unico dominio.
EP2362767B1 (en) 2008-10-29 2017-12-06 Ablynx N.V. Formulations of single domain antigen binding molecules
US8415291B2 (en) 2008-10-31 2013-04-09 Centocor Ortho Biotech Inc. Anti-TNF alpha fibronectin type III domain based scaffold compositions, methods and uses
CN101419224B (zh) * 2008-11-06 2012-08-22 复旦大学附属华山医院 一种同时测定人血浆中霉酚酸酯、霉酚酸及其代谢物的方法
KR20110096553A (ko) * 2008-11-28 2011-08-30 아보트 러보러터리즈 안정한 항체 조성물 및 이의 안정화 방법
MX2011007030A (es) 2008-12-30 2011-07-20 Centocor Ortho Biotech Inc Marcadores sericos que predicen la respuesta clinica a los anticuerpos anti-factor de necrosis tumoral alfa en pacientes con espondilitis anquilosante.
CN101766602B (zh) * 2008-12-30 2012-01-11 中国医学科学院血液病医院（血液学研究所） 取代芳香基腙类化合物在作为肿瘤坏死因子抑制剂药物方面的应用
RU2636046C2 (ru) 2009-01-12 2017-11-17 Сайтомкс Терапьютикс, Инк Композиции модифицированных антител, способы их получения и применения
EP2398494A4 (en) 2009-02-23 2015-10-28 Cytomx Therapeutics Inc Proproteins and their methods of use
US8030026B2 (en) 2009-02-24 2011-10-04 Abbott Laboratories Antibodies to troponin I and methods of use thereof
JP5836807B2 (ja) 2009-03-05 2015-12-24 アッヴィ・インコーポレイテッド Ｉｌ−１７結合タンパク質
US20120135005A1 (en) * 2009-04-16 2012-05-31 Harding Fiona A ANTI-TNF-a ANTIBODIES AND THEIR USES
CN101875694B (zh) * 2009-04-28 2014-04-02 中国医学科学院基础医学研究所 TNFα的抗体及其用途
EP2424594A4 (en) 2009-04-29 2014-12-24 Abbvie Biotechnology Ltd AUTOMATIC INJECTION DEVICE
RU2560701C2 (ru) * 2009-05-04 2015-08-20 Эббви Байотекнолоджи Лтд. Стабильные композиции с высокими концентрациями белков антител человека против tnf-альфа
WO2010132872A1 (en) * 2009-05-15 2010-11-18 Novimmune S.A Combination therapies and methods using anti-cd3 modulating agents and anti-tnf antagonists
TW201109438A (en) * 2009-07-29 2011-03-16 Abbott Lab Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
PT3311828T (pt) 2009-08-14 2021-05-05 Phasebio Pharmaceuticals Inc Péptidos intestinais vasoativos modificados
US20110044981A1 (en) * 2009-08-21 2011-02-24 Spangler Rhyannon Methods and compositions for treatment of pulmonary fibrotic disorders
CN102741288B (zh) 2009-08-29 2015-08-19 Abbvie公司 治疗用dll4结合蛋白
PE20121530A1 (es) 2009-09-01 2012-12-22 Abbvie Inc Inmunoglobulinas con dominio variable dual
AU2010291927A1 (en) * 2009-09-14 2012-04-12 AbbVie Deutschland GmbH & Co. KG Methods for treating psoriasis
US20110071054A1 (en) * 2009-09-24 2011-03-24 Xbiotech, Inc. Panel of monoclonal antibody containing pharmaceutical compositions
CA2772945A1 (en) 2009-09-25 2011-03-31 Xoma Technology Ltd. Screening methods
JP2013507928A (ja) 2009-10-15 2013-03-07 アボット・ラボラトリーズ 二重可変ドメイン免疫グロブリンおよびその使用
MX343328B (es) * 2009-10-26 2016-11-01 Nestec Sa Analisis para la deteccion de farmacos anti-tnf y anticuerpos.
UY32979A (es) * 2009-10-28 2011-02-28 Abbott Lab Inmunoglobulinas con dominio variable dual y usos de las mismas
US20110150861A1 (en) 2009-10-30 2011-06-23 Abbott Laboratories Sorf constructs and multiple gene expression
TW201121568A (en) 2009-10-31 2011-07-01 Abbott Lab Antibodies to receptor for advanced glycation end products (RAGE) and uses thereof
US9244063B2 (en) 2009-11-11 2016-01-26 Gentian As Immunoassay for assessing related analytes of different origin
GB0920944D0 (en) 2009-11-30 2010-01-13 Biotest Ag Agents for treating disease
US8871208B2 (en) * 2009-12-04 2014-10-28 Abbvie Inc. 11-β-hydroxysteroid dehydrogenase type 1 (11β-HSD1) inhibitors and uses thereof
CN102656190A (zh) 2009-12-08 2012-09-05 雅培股份有限两合公司 用于在视网膜神经纤维层变性治疗中使用的针对rgm a蛋白质的单克隆抗体
NZ600069A (en) 2009-12-15 2015-02-27 Abbvie Biotechnology Ltd Improved firing button for automatic injection device
US20110150891A1 (en) * 2009-12-16 2011-06-23 Philip Bosch Methods of Treating Interstitial Cystitis
USRE49251E1 (en) 2010-01-04 2022-10-18 Mapi Pharma Ltd. Depot systems comprising glatiramer or pharmacologically acceptable salt thereof
WO2011092715A2 (en) * 2010-01-27 2011-08-04 Tata Memorial Centre Method for in-vivo binding of chromatin fragments
CA2789168A1 (en) 2010-02-02 2011-08-11 Abbott Biotechnology Ltd. Methods and compositions for predicting responsiveness to treatment with tnf-.alpha. inhibitor
CN102167741B (zh) * 2010-02-25 2014-05-14 上海百迈博制药有限公司 一种全人源抗TNF-α单克隆抗体、其制备方法及用途
AU2011223919B2 (en) 2010-03-02 2015-03-19 Abbvie Inc. Therapeutic DLL4 binding proteins
SG184473A1 (en) 2010-04-07 2012-11-29 Abbvie Inc Tnf-alpha binding proteins
WO2011130377A2 (en) 2010-04-15 2011-10-20 Abbott Laboratories Amyloid-beta binding proteins
EP3466977B1 (en) 2010-04-16 2022-01-05 Biogen MA Inc. Anti-vla-4 antibodies
NZ702172A (en) 2010-04-21 2016-03-31 Abbvie Biotechnology Ltd Wearable automatic injection device for controlled delivery of therapeutic agents
KR101848225B1 (ko) 2010-05-14 2018-04-12 애브비 인코포레이티드 Ｉｌ－１ 결합 단백질
WO2011146727A1 (en) 2010-05-19 2011-11-24 Philip Bosch Methods of treating interstitial cystitis
PT2575884T (pt) 2010-06-03 2018-10-31 Abbvie Biotechnology Ltd Utilizações e composições para o tratamento de hidradenite supurativa (hs)
WO2012006500A2 (en) 2010-07-08 2012-01-12 Abbott Laboratories Monoclonal antibodies against hepatitis c virus core protein
UY33492A (es) 2010-07-09 2012-01-31 Abbott Lab Inmunoglobulinas con dominio variable dual y usos de las mismas
US20120100166A1 (en) 2010-07-15 2012-04-26 Zyngenia, Inc. Ang-2 Binding Complexes and Uses Thereof
WO2012018790A2 (en) 2010-08-03 2012-02-09 Abbott Laboratories Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
CN103298833B (zh) 2010-08-14 2015-12-16 Abbvie公司 β淀粉样蛋白结合蛋白
EP2606067B1 (en) 2010-08-19 2018-02-21 Zoetis Belgium S.A. Anti-ngf antibodies and their use
CN103260639A (zh) 2010-08-26 2013-08-21 Abbvie公司 双重可变结构域免疫球蛋白及其用途
AR083495A1 (es) 2010-10-22 2013-02-27 Esbatech Alcon Biomed Res Unit Anticuerpos estables y solubles
UA113500C2 (xx) 2010-10-29 2017-02-10 Одержані екструзією розплаву тверді дисперсії, що містять індукуючий апоптоз засіб
JP6068352B2 (ja) 2010-10-29 2017-01-25 アッヴィ・インコーポレイテッド アポトーシス誘発剤を含む固体分散体
BR112013010857A2 (pt) * 2010-11-02 2016-09-13 Abbott Laboratoires imonoglubulinas de duplo domínio variável e usos das mesmas
DK2637690T3 (da) 2010-11-11 2017-01-02 Abbvie Biotechnology Ltd Flydende ANTI-TNF-alpha-antistofformuleringer med høj koncentration
SG190399A1 (en) 2010-11-23 2013-06-28 Abbvie Inc Methods of treatment using selective bcl-2 inhibitors
BR112013012740A2 (pt) 2010-11-23 2016-09-13 Abbvie Inc sais e formas cristalinas de um agente que induz apoptose
AR084210A1 (es) * 2010-12-08 2013-05-02 Abbott Lab PROTEINAS DE UNION AL TNF-a
US20120275996A1 (en) 2010-12-21 2012-11-01 Abbott Laboratories IL-1 Binding Proteins
AU2011361720B2 (en) 2010-12-21 2017-04-27 Abbvie Inc. IL-1 -alpha and -beta bispecific dual variable domain immunoglobulins and their use
EP2490024A1 (en) 2010-12-22 2012-08-22 Proteomika, S.L. Method to optimize the treatment of patients with biological drugs
JP6478214B2 (ja) 2011-01-24 2019-03-06 アッヴィ バイオテクノロジー リミテッド オーバーモールド把持面を有する自動注射器
CA2824454C (en) 2011-01-24 2018-10-23 Abbvie Biotechnology Ltd. Removal of needle shields from syringes and automatic injection devices
AU2012210170B2 (en) 2011-01-24 2016-09-29 Elcam Medical Agricultural Cooperative Association Ltd. Injector
RU2455025C1 (ru) * 2011-02-10 2012-07-10 Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Белгородский государственный национальный исследовательский университет" (НИУ "БелГУ") Способ фармакологической коррекции ишемии конечности смесью растворов гомеопатических разведений
JP2014508715A (ja) 2011-03-07 2014-04-10 国立大学法人徳島大学 筋萎縮性側索硬化症の治療方法
US20120233834A1 (en) 2011-03-18 2012-09-20 Abbott Biotechnology Ltd. Systems, devices and methods for assembling automatic injection devices and sub-assemblies thereof
TWI588156B (zh) 2011-03-28 2017-06-21 賽諾菲公司 具有交叉結合區定向之雙重可變區類抗體結合蛋白
MX2013011263A (es) 2011-03-29 2014-03-27 Abbvie Inc Despliegue de cubierta mejorado en dispositivos de inyeccion automaticos.
EP4299093A3 (en) 2011-04-21 2024-03-13 AbbVie Inc. Wearable automatic injection device for controlled administration of therapeutic agents
WO2012149197A2 (en) 2011-04-27 2012-11-01 Abbott Laboratories Methods for controlling the galactosylation profile of recombinantly-expressed proteins
AU2012258637B2 (en) 2011-05-24 2017-07-20 Zyngenia, Inc. Multivalent and monovalent multispecific complexes and their uses
SI3575792T1 (sl) 2011-05-31 2023-04-28 Biogen Ma Inc. Metoda ocenjevanja tveganja progresivne multifokalne levkoencefalopatije
WO2012170524A1 (en) 2011-06-06 2012-12-13 Phasebio Pharmaceuticals, Inc. Use of modified vasoactive intestinal peptides in the treatment of hypertension
CA2841970A1 (en) 2011-07-13 2013-01-17 Abbvie Inc. Methods and compositions for treating asthma using anti-il-13 antibodies
GB201112429D0 (en) * 2011-07-19 2011-08-31 Glaxo Group Ltd Antigen-binding proteins with increased FcRn binding
BR112014002133A2 (pt) * 2011-08-01 2017-02-21 Avaxia Biologics Inc anticorpo policlonal bovino específico para tnf humano
TWI577696B (zh) * 2011-10-20 2017-04-11 Ｅｓｂａ科技 諾華有限責任公司 穩定的多重抗原結合抗體
RU2014120981A (ru) 2011-10-24 2015-12-10 Эббви Инк. Иммунные связывающие агенты против склеростина
IN2014CN03936A (hu) 2011-10-24 2015-09-04 Abbvie Inc
EP2771361A1 (en) 2011-10-24 2014-09-03 AbbVie Inc. Bispecific immunobinders directed against tnf and il-17
US20140017174A1 (en) 2011-11-30 2014-01-16 Raja Atreya Methods and compositions for determining responsiveness to treatment with a tnf-alpha inhibitor
US10118958B2 (en) 2011-12-14 2018-11-06 AbbVie Deutschland GmbH & Co. KG Composition and method for the diagnosis and treatment of iron-related disorders
JP6336397B2 (ja) 2011-12-14 2018-06-06 アッヴィ・ドイチュラント・ゲー・エム・ベー・ハー・ウント・コー・カー・ゲー 鉄関連障害を診断および治療するための組成物および方法
WO2013087912A1 (en) 2011-12-16 2013-06-20 Synthon Biopharmaceuticals B.V. Compounds and methods for treating inflammatory diseases
UY34556A (es) 2011-12-30 2013-07-31 Abbvie Inc Dominio variable dual de inmunoglobulinas y sus usos
BR112014015851A2 (pt) 2011-12-30 2019-09-24 Abbvie Inc proteínas de ligação específicas duplas direcionadas contra il-13 e/ou il-17
JP6271441B2 (ja) 2012-01-27 2018-01-31 アッヴィ・ドイチュラント・ゲー・エム・ベー・ハー・ウント・コー・カー・ゲー 神経突起変性に関連する疾患を診断および治療するための組成物および方法
JP2015509526A (ja) 2012-03-07 2015-03-30 カディラ ヘルスケア リミティド 医薬製剤
US9067990B2 (en) 2013-03-14 2015-06-30 Abbvie, Inc. Protein purification using displacement chromatography
US9181572B2 (en) 2012-04-20 2015-11-10 Abbvie, Inc. Methods to modulate lysine variant distribution
WO2013158279A1 (en) 2012-04-20 2013-10-24 Abbvie Inc. Protein purification methods to reduce acidic species
EP2657334B1 (en) 2012-04-26 2016-07-06 GeneFrontier Corporation Efficient method for displaying protein multimer
US9249182B2 (en) 2012-05-24 2016-02-02 Abbvie, Inc. Purification of antibodies using hydrophobic interaction chromatography
CA2875783C (en) 2012-06-06 2018-12-11 Zoetis Llc Caninized anti-ngf antibodies and methods thereof
EP2859017B1 (en) 2012-06-08 2019-02-20 Sutro Biopharma, Inc. Antibodies comprising site-specific non-natural amino acid residues, methods of their preparation and methods of their use
US9670276B2 (en) 2012-07-12 2017-06-06 Abbvie Inc. IL-1 binding proteins
SG11201501464TA (en) 2012-08-31 2015-03-30 Sutro Biopharma Inc Modified amino acids comprising an azido group
CA2883272A1 (en) 2012-09-02 2014-03-06 Abbvie Inc. Methods to control protein heterogeneity
US9512214B2 (en) 2012-09-02 2016-12-06 Abbvie, Inc. Methods to control protein heterogeneity
HUE049282T2 (hu) 2012-09-07 2020-09-28 Coherus Biosciences Inc Adalimumab stabil vizes formulációi
SI2897978T1 (sl) * 2012-09-19 2017-05-31 Abbvie Biotherapeutics Inc. Postopki za identifikacijo protiteles z zmanjšano imunogenostjo
KR20210111353A (ko) 2012-11-01 2021-09-10 애브비 인코포레이티드 항-ｖｅｇｆ／ｄｌｌ4 이원 가변 도메인 면역글로불린 및 이의 용도
AU2013337644A1 (en) 2012-11-01 2015-05-07 Abbvie Inc. Stable Dual Variable Domain Immunoglobulin protein formulations
TWI745610B (zh) 2012-11-14 2021-11-11 美商再生元醫藥公司 重組細胞表面捕捉蛋白質
US9550986B2 (en) 2012-12-21 2017-01-24 Abbvie Inc. High-throughput antibody humanization
US9856319B2 (en) 2012-12-28 2018-01-02 Abbvie Inc. Monovalent binding proteins
EP2938634A2 (en) 2012-12-28 2015-11-04 AbbVie Inc. Dual specific binding proteins having a receptor sequence
EP2948178A4 (en) 2013-01-25 2016-07-20 Thymon Llc COMPOSITIONS FOR THE SELECTIVE REDUCTION OF CIRCULATING BIOACTIVE SOLUBLE TNF AND METHODS OF TREATING A TNF MEDIATION DISEASE
EP2956480B1 (en) 2013-02-13 2019-09-04 Laboratoire Français du Fractionnement et des Biotechnologies Highly galactosylated anti-tnf-alpha antibodies and uses thereof
EP2830651A4 (en) 2013-03-12 2015-09-02 Abbvie Inc HUMAN ANTIBODIES THAT BIND TNF-ALPHA AND PREPARATION METHODS
US9194873B2 (en) 2013-03-14 2015-11-24 Abbott Laboratories HCV antigen-antibody combination assay and methods and compositions for use therein
WO2014159579A1 (en) * 2013-03-14 2014-10-02 Abbvie Inc. MUTATED ANTI-TNFα ANTIBODIES AND METHODS OF THEIR USE
US20140275082A1 (en) 2013-03-14 2014-09-18 Abbvie Inc. Apoptosis-inducing agents for the treatment of cancer and immune and autoimmune diseases
JP2016512241A (ja) 2013-03-14 2016-04-25 アボット・ラボラトリーズＡｂｂｏｔｔ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ 改良された抗体検出のためのｈｃｖｎｓ３組換え抗原およびこの突然変異体
WO2014158231A1 (en) 2013-03-14 2014-10-02 Abbvie Inc. Low acidic species compositions and methods for producing and using the same
WO2014151878A2 (en) 2013-03-14 2014-09-25 Abbvie Inc. Methods for modulating protein glycosylation profiles of recombinant protein therapeutics using monosaccharides and oligosacharides
US9017687B1 (en) 2013-10-18 2015-04-28 Abbvie, Inc. Low acidic species compositions and methods for producing and using the same using displacement chromatography
AU2014240431A1 (en) 2013-03-14 2015-08-27 Abbvie Inc. Low acidic species compositions and methods for producing the same using displacement chromatography
CN113549148A (zh) 2013-03-14 2021-10-26 雅培制药有限公司 Hcv核心脂质结合结构域单克隆抗体
US9469686B2 (en) 2013-03-15 2016-10-18 Abbott Laboratories Anti-GP73 monoclonal antibodies and methods of obtaining the same
EP2968541A4 (en) 2013-03-15 2017-02-08 Zyngenia, Inc. Multivalent and monovalent multispecific complexes and their uses
AU2014227664A1 (en) 2013-03-15 2015-09-24 Abbvie Inc. Dual specific binding proteins directed against TNFalpha
MX2015013166A (es) 2013-03-15 2015-12-11 Abbvie Inc Proteinas de union especificas duales dirigidas contra il-1 beta y/o il-17.
KR101671955B1 (ko) * 2013-05-22 2016-11-07 메타볼랩(주) 항 ＴＮＦ-α/ＣＸＣＬ10 이중 타겟 항체 및 그의 용도
JP6581572B2 (ja) 2013-06-07 2019-09-25 デューク ユニバーシティ 補体因子ｈ阻害薬
WO2015006555A2 (en) 2013-07-10 2015-01-15 Sutro Biopharma, Inc. Antibodies comprising multiple site-specific non-natural amino acid residues, methods of their preparation and methods of their use
WO2015017683A1 (en) * 2013-07-31 2015-02-05 Malast Mary Antimicrobial compositions and methods of use
JP6546178B2 (ja) 2013-09-13 2019-07-17 ジェネンテック， インコーポレイテッド 細胞株中の宿主細胞タンパク質及び組換えポリペプチド産物を検出及び定量化するための組成物並びに方法
KR102373930B1 (ko) 2013-09-13 2022-03-11 제넨테크, 인크. 정제된 재조합 폴리펩티드를 포함하는 방법 및 조성물
US9598667B2 (en) 2013-10-04 2017-03-21 Abbvie Inc. Use of metal ions for modulation of protein glycosylation profiles of recombinant proteins
CA2926644A1 (en) 2013-10-06 2015-04-09 Abbvie Inc. Dual specific binding proteins directed against immune cell receptors and autoantigens
US9840493B2 (en) 2013-10-11 2017-12-12 Sutro Biopharma, Inc. Modified amino acids comprising tetrazine functional groups, methods of preparation, and methods of their use
WO2015057910A1 (en) 2013-10-16 2015-04-23 Oncobiologics, Inc. Buffer formulations for enhanced antibody stability
US9181337B2 (en) 2013-10-18 2015-11-10 Abbvie, Inc. Modulated lysine variant species compositions and methods for producing and using the same
US8946395B1 (en) 2013-10-18 2015-02-03 Abbvie Inc. Purification of proteins using hydrophobic interaction chromatography
US9085618B2 (en) 2013-10-18 2015-07-21 Abbvie, Inc. Low acidic species compositions and methods for producing and using the same
US20150139988A1 (en) 2013-11-15 2015-05-21 Abbvie, Inc. Glycoengineered binding protein compositions
JP2016540761A (ja) 2013-12-02 2016-12-28 アッヴィ・インコーポレイテッド 変形性関節症を治療するための組成物及び方法
CN103965357B (zh) 2013-12-31 2016-08-17 嘉和生物药业有限公司 一种抗人rankl抗体
EP3110976B1 (en) 2014-02-27 2020-05-13 Biogen MA Inc. Method of assessing risk of pml
EP3116891B1 (en) 2014-03-10 2020-02-12 Richter Gedeon Nyrt. Immunoglobulin purification using pre-cleaning steps
IL295906A (en) 2014-03-21 2022-10-01 Abbvie Inc Antibodies against egfr and drug antibody conjugates
AR099625A1 (es) 2014-03-21 2016-08-03 Lilly Co Eli Anticuerpos de il-21
WO2015151115A1 (en) * 2014-04-02 2015-10-08 Intas Pharmaceuticals Limited Liquid pharmaceutical composition of adalimumab
CA2947982C (en) 2014-05-08 2022-11-29 Phasebio Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for treating cystic fibrosis
ES2607489T3 (es) 2014-05-23 2017-03-31 Ares Trading S.A. Composición farmacéutica líquida
HUE029849T2 (hu) 2014-05-23 2017-04-28 Ares Trading Sa Folyékony gyógyászati készítmény
EP2946766B1 (en) 2014-05-23 2016-03-02 Ares Trading S.A. Liquid pharmaceutical composition
FR3022462B1 (fr) * 2014-06-18 2018-04-27 Laboratoire Francais Du Fractionnement Et Des Biotechnologies Composition orale d'anticorps anti-tnfalpha
US20170183376A1 (en) 2014-06-24 2017-06-29 Insight Biopharmaceuticals Ltd. Methods of purifying antibodies
US10183994B2 (en) * 2014-06-30 2019-01-22 Merck Patent Gmbh Anti-TNFα antibodies with pH-dependent antigen binding for improved target clearence
WO2016004197A1 (en) 2014-07-03 2016-01-07 Abbvie Inc. Methods for modulating protein glycosylation profiles of recombinant protein therapeutics using cobalt
WO2016007764A1 (en) 2014-07-09 2016-01-14 Abbvie Inc. Methods for modulating the glycosylation profile of recombinant proteins using non-commonly used sugars
EP4379725A2 (en) 2014-07-11 2024-06-05 Iogenetics, LLC. Immune recognition motifs
TWI711629B (zh) * 2014-09-03 2020-12-01 德商包林格因蓋爾漢國際股份有限公司 靶向IL-23A與TNF-α之化合物及其用途
US10435464B1 (en) 2014-09-05 2019-10-08 Coherus Biosciences, Inc. Methods for making recombinant proteins
HUP1400510A1 (hu) 2014-10-28 2016-05-30 Richter Gedeon Nyrt Gyógyászati TNFalfa ellenes antitest készítmény
WO2016094881A2 (en) 2014-12-11 2016-06-16 Abbvie Inc. Lrp-8 binding proteins
EP3237000A1 (en) 2014-12-23 2017-11-01 Pfizer Inc Stable aqueous antibody formulation for anti tnf alpha antibodies
EP3085709B1 (en) 2014-12-28 2019-08-21 Genor Biopharma Co., Ltd Humanized anti-human rankl antibody, pharmaceutical composition and use thereof
WO2016118707A1 (en) 2015-01-21 2016-07-28 Oncobiologics, Inc. Modulation of charge variants in a monoclonal antibody composition
EP3053572A1 (en) 2015-02-06 2016-08-10 Ares Trading S.A. Liquid pharmaceutical composition
CN114652817A (zh) 2015-02-09 2022-06-24 费斯生物制药公司 用于治疗肌肉疾病和病症的方法和组合物
CN105777905B (zh) * 2015-03-24 2019-06-25 广东东阳光药业有限公司 一种全人源抗TNF-α单克隆抗体及其应用
EP3078675A1 (en) 2015-04-10 2016-10-12 Ares Trading S.A. Induction dosing regimen for the treatment of tnf alpha mediated disorders
WO2016179469A1 (en) * 2015-05-07 2016-11-10 Abbvie Inc. Methods and compositions for diagnosing and treating inflammatory bowel disease
KR102661078B1 (ko) 2015-05-29 2024-05-23 애브비 인코포레이티드 항-ｃｄ40 항체 및 그의 용도
TW201710286A (zh) 2015-06-15 2017-03-16 艾伯維有限公司 抗ｖｅｇｆ、ｐｄｇｆ及／或其受體之結合蛋白
HU231463B1 (hu) 2015-08-04 2024-01-28 Richter Gedeon Nyrt. Módszer rekombináns proteinek galaktóz tartalmának növelésére
US11583584B1 (en) 2015-10-28 2023-02-21 Coherus Biosciences, Inc. Stable protein compositions and methods of their use
US11229702B1 (en) 2015-10-28 2022-01-25 Coherus Biosciences, Inc. High concentration formulations of adalimumab
GB201522394D0 (en) 2015-12-18 2016-02-03 Ucb Biopharma Sprl Antibodies
WO2017136433A1 (en) 2016-02-03 2017-08-10 Oncobiologics, Inc. Buffer formulations for enhanced antibody stability
US10465003B2 (en) 2016-02-05 2019-11-05 Janssen Biotech, Inc. Anti-TNF antibodies, compositions, methods and use for the treatment or prevention of type 1 diabetes
SG11201808041UA (en) * 2016-03-17 2018-10-30 Numab Innovation Ag ANTI-TNFa-ANTIBODIES AND FUNCTIONAL FRAGMENTS THEREOF
RS61374B1 (sr) * 2016-03-17 2021-02-26 Tillotts Pharma Ag Anti-tnf alfa-antitela i njihovi funkcionalni fragmenti
JP2019513737A (ja) 2016-04-08 2019-05-30 ギリアード サイエンシーズ， インコーポレイテッド がん、炎症性疾患および自己免疫疾患を処置するための組成物および方法
US11071782B2 (en) 2016-04-20 2021-07-27 Coherus Biosciences, Inc. Method of filling a container with no headspace
LT3448391T (lt) 2016-04-27 2024-06-25 AbbVie Manufacturing Management Unlimited Company Ligų, kurių atveju il-13 aktyvumas yra žalingas, gydymo būdas, panaudojant anti-il-13 antikūnus
KR20220119529A (ko) 2016-06-02 2022-08-29 애브비 인코포레이티드 글루코코르티코이드 수용체 작용제 및 이의 면역접합체
TWI762487B (zh) 2016-06-08 2022-05-01 美商艾伯維有限公司 抗-b7-h3抗體及抗體藥物結合物
US20190153108A1 (en) 2016-06-08 2019-05-23 Abbvie Inc. Anti-egfr antibody drug conjugates
JP2019521114A (ja) 2016-06-08 2019-07-25 アッヴィ・インコーポレイテッド 抗ｅｇｆｒ抗体薬物コンジュゲート
CA3027033A1 (en) 2016-06-08 2017-12-14 Abbvie Inc. Anti-cd98 antibodies and antibody drug conjugates
CA3027044A1 (en) 2016-06-08 2017-12-14 Abbvie Inc. Anti-b7-h3 antibodies and antibody drug conjugates
CN109641962A (zh) 2016-06-08 2019-04-16 艾伯维公司 抗b7-h3抗体和抗体药物偶联物
WO2017218698A1 (en) 2016-06-15 2017-12-21 Sutro Biopharma, Inc. Antibodies with engineered ch2 domains, compositions thereof and methods of using the same
WO2018018613A1 (zh) 2016-07-29 2018-02-01 广东东阳光药业有限公司 一种提高抗体纯度的细胞培养基和培养方法
US10751324B2 (en) 2016-09-02 2020-08-25 The University Of Chicago Treatment of TNF- alpha cytotoxicity
EP3512875A2 (en) * 2016-09-15 2019-07-24 Quadrucept Bio Limited Multimers, tetramers&octamers
EP3519825A1 (en) 2016-10-03 2019-08-07 Abbott Laboratories Improved methods of assessing gfap status in patient samples
WO2018075408A1 (en) 2016-10-17 2018-04-26 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Methods of treating acute myeloid leukemia (aml) with combinations of anti-cd200 antibodies, cytarabine, and daunorubicin
MX2019004580A (es) 2016-10-21 2019-08-12 Amgen Inc Formulaciones farmaceuticas y metodos para prepararlas.
WO2018102594A1 (en) 2016-12-01 2018-06-07 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Methods of treating solid tumors with anti-cd200 antibodies
US20180193003A1 (en) 2016-12-07 2018-07-12 Progenity Inc. Gastrointestinal tract detection methods, devices and systems
EP3554342A1 (en) 2016-12-14 2019-10-23 Progenity, Inc. Treatment of a disease of the gastrointestinal tract with a tnf inhibitor
WO2018112334A1 (en) * 2016-12-16 2018-06-21 Bluefin Biomedicine, Inc. Anti-cub domain-containing protein 1 (cdcp1) antibodies, antibody drug conjugates, and methods of use thereof
JOP20190162A1 (ar) 2016-12-30 2019-06-27 Biocad Joint Stock Co تركيبة صيدلانية مائية من جسم مضاد لـ tnf? أحادي النسيلة معاود الارتباط الجيني
CA3049857A1 (en) 2017-01-11 2018-07-19 Celltrion Inc. Stable liquid formulation
TWI787230B (zh) 2017-01-20 2022-12-21 法商賽諾菲公司 抗ＴＧＦ-β抗體及其用途
AR110755A1 (es) 2017-01-20 2019-05-02 Genzyme Corp Anticuerpos dirigidos a hueso
MX2019008989A (es) 2017-01-30 2019-10-09 Janssen Biotech Inc Anticuerpos anti-tnf, composiciones y metodos para el tratamiento de la artritis psoriasica activa.
AU2017398101A1 (en) 2017-02-07 2019-08-01 Janssen Biotech, Inc. Anti-TNF antibodies, compositions, and methods for the treatment of active Ankylosing Spondylitis
US11608357B2 (en) 2018-08-28 2023-03-21 Arecor Limited Stabilized antibody protein solutions
EP3372241A1 (en) 2017-03-06 2018-09-12 Ares Trading S.A. Liquid pharmaceutical composition
EP3372242A1 (en) 2017-03-06 2018-09-12 Ares Trading S.A. Liquid pharmaceutical composition
WO2018175942A1 (en) 2017-03-23 2018-09-27 Abbott Laboratories Methods for aiding in the diagnosis and determination of the extent of traumatic brain injury in a human subject using the early biomarker ubiquitin carboxy-terminal hydrolase l1
WO2018178973A1 (en) 2017-03-26 2018-10-04 Mapi Pharma Ltd. Glatiramer depot systems for treating progressive forms of multiple sclerosis
WO2018184692A1 (en) 2017-04-07 2018-10-11 Ares Trading S.A. Liquid pharmaceutical composition
CN110546513A (zh) 2017-04-15 2019-12-06 雅培实验室 使用早期生物标记物帮助超急性诊断和确定人类受试者中的创伤性脑损伤的方法
US10865238B1 (en) 2017-05-05 2020-12-15 Duke University Complement factor H antibodies
CN110651190A (zh) 2017-05-25 2020-01-03 雅培实验室 用早期生物标记物帮助确定是否对已遭受或可能已遭受头部损伤的人受试者执行成像的方法
CN110720041B (zh) 2017-05-30 2024-04-26 雅培实验室 用心肌肌钙蛋白i和早期生物标记物帮助诊断和评价人受试者中轻度创伤性脑损伤的方法
EP3649474A1 (en) 2017-07-03 2020-05-13 Abbott Laboratories Improved methods for measuring ubiquitin carboxy-terminal hydrolase l1 levels in blood
WO2019067499A1 (en) 2017-09-27 2019-04-04 Alexion Pharmaceuticals, Inc. BIOMARKER SIGNATURE FOR PREDICTING A TUMOR RESPONSE TO ANTI-CD200 THERAPY
ES2877659T3 (es) 2017-12-01 2021-11-17 Abbvie Inc Agonista del receptor de glucocorticoides y sus inmunoconjugados
CN109879962B (zh) * 2017-12-06 2022-10-11 北京科立思维生物科技有限公司 抗tnf单链抗体、抗il-6单链抗体及其融合蛋白及其应用
JP7379165B2 (ja) 2017-12-09 2023-11-14 アボット・ラボラトリーズ Ｇｆａｐとｕｃｈ－ｌ１との組合せを使用する、ヒト対象における外傷性脳損傷を診断及び査定する一助となるための方法
JP7344801B2 (ja) 2017-12-09 2023-09-14 アボット・ラボラトリーズ グリア原線維性酸性タンパク質（ｇｆａｐ）及び／又はユビキチンカルボキシ末端ヒドロラーゼｌ１（ｕｃｈ－ｌ１）を使用する、整形外科損傷を負っており、軽度外傷性脳損傷（ｔｂｉ）などの頭部への損傷を負ったか又は負った可能性がある対象についての診断及び査定の一助となるための方法
WO2019126536A1 (en) 2017-12-20 2019-06-27 Alexion Pharmaceuticals Inc. Humanized anti-cd200 antibodies and uses thereof
WO2019126133A1 (en) 2017-12-20 2019-06-27 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Liquid formulations of anti-cd200 antibodies
CA3093772C (en) 2018-03-12 2024-04-16 Zoetis Services Llc Anti-ngf antibodies and methods thereof
US11913951B2 (en) 2018-03-26 2024-02-27 Alexion Pharmaceuticals, Inc. High throughput method for measuring the protease activity of complement C3 convertase
US20210238289A1 (en) 2018-06-04 2021-08-05 Biogen Ma Inc. Anti-vla-4 antibodies having reduced effector function
EP3810095A1 (en) 2018-06-20 2021-04-28 Progenity, Inc. Treatment of a disease of the gastrointestinal tract with a tnf inhibitor
JP2021529780A (ja) 2018-07-03 2021-11-04 ノバルティス アーゲー Ｎｌｒｐ３アンタゴニストを使用するｔｎｆ阻害剤に対して抵抗性の対象のための治療の方法又は治療を選択する方法
CN113329769A (zh) 2018-10-11 2021-08-31 斯克里普斯研究学院 具有反应性精氨酸的抗体化合物及相关的抗体药物缀合物
WO2020086728A1 (en) 2018-10-24 2020-04-30 Novartis Inflammasome Research, Inc. Compounds and compositions for treating conditions associated with nlrp activity
EP3878870A4 (en) * 2018-11-05 2022-08-03 Beijing Hanmi Pharmaceutical Co., Ltd. ANTI-TNFA/ANTI-IL-17A NATURAL ANTIBODY STRUCTURE-LIKE HETERODIMER FORM OF A BISPECIFIC ANTIBODY AND METHODS FOR ITS PRODUCTION
HUP1800376A2 (hu) 2018-11-07 2020-05-28 Richter Gedeon Nyrt Sejttenyészetben elõállított rekombináns glikoprotein glikozilációs-mintázatának megváltoztatására szolgáló módszer
JP2022506891A (ja) 2018-11-13 2022-01-17 ノバルティス アーゲー Ｎｌｒｐ活性に関連する状態を処置するための化合物及び組成物
CN113166081A (zh) 2018-11-13 2021-07-23 诺华股份有限公司 用于治疗与nlrp活性相关的病症的化合物和组合物
US20220249814A1 (en) 2018-11-19 2022-08-11 Progenity, Inc. Methods and devices for treating a disease with biotherapeutics
US20220098310A1 (en) 2018-12-06 2022-03-31 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Anti-alk2 antibodies and uses thereof
CA3124730A1 (en) 2018-12-25 2020-07-02 Institute Of Basic Medical Sciences Chinese Academy Of Medical Sciences Small rna medicament for prevention and treatment of inflammation-related diseases and combinations thereof
JP2022533287A (ja) 2019-01-22 2022-07-22 ノバルティス アーゲー Ｎｌｒｐ活性に関連する状態を処置するための化合物及び組成物
HU231498B1 (hu) 2019-04-04 2024-05-28 Richter Gedeon Nyrt Immunglobulinok affinitás kromatográfiájának fejlesztése kötést megelőző flokkulálás alkalmazásával
KR102323342B1 (ko) * 2019-04-26 2021-11-08 주식회사 와이바이오로직스 IL-17A 및 TNF-α에 특이적으로 결합하는 이중표적 항체
BR112021023295A2 (pt) 2019-05-23 2022-02-08 Janssen Biotech Inc Método de tratamento de doença inflamatória intestinal com uma terapia de combinação de anticorpos para il-23 e tnf-alfa
WO2021002887A1 (en) 2019-07-02 2021-01-07 Novartis Inflammasome Research, Inc. Gut-targeted nlrp3 antagonists and their use in therapy
CA3143478A1 (en) * 2019-07-09 2021-01-14 Tomer Hertz Antibodies with reduced immunogenicity
EP3870261B1 (en) 2019-12-13 2024-01-31 Biora Therapeutics, Inc. Ingestible device for delivery of therapeutic agent to the gastrointestinal tract
FR3104582A1 (fr) 2019-12-17 2021-06-18 Commissariat A L'energie Atomique Et Aux Energies Alternatives Variants de l’adalimumab au potentiel immunogène réduit
EP4100435A1 (en) 2020-02-05 2022-12-14 Larimar Therapeutics, Inc. Tat peptide binding proteins and uses thereof
WO2021178597A1 (en) 2020-03-03 2021-09-10 Sutro Biopharma, Inc. Antibodies comprising site-specific glutamine tags, methods of their preparation and methods of their use
CA3175523A1 (en) 2020-04-13 2021-10-21 Antti Virtanen Methods, complexes and kits for detecting or determining an amount of a .beta.-coronavirus antibody in a sample
KR20230042301A (ko) 2020-08-04 2023-03-28 애벗트 라보라토리이즈 샘플에서 sars-cov-2 단백질을 검출하기 위한 개선된 방법 및 키트
CN111944052B (zh) * 2020-08-26 2022-02-11 中国药科大学 抗TNF-α/PD-1双特异性抗体及其应用
CN112010970B (zh) * 2020-10-30 2021-01-12 迈威(上海)生物科技股份有限公司 一种去除重组表达抗体聚体和降解产物的方法
US20220170948A1 (en) 2020-12-01 2022-06-02 Abbott Laboratories Use of one or more biomarkers to determine traumatic brain injury (tbi) in a human subject having received a head computerized tomography scan that is negative for a tbi
WO2023102384A1 (en) 2021-11-30 2023-06-08 Abbott Laboratories Use of one or more biomarkers to determine traumatic brain injury (tbi) in a subject having received a head computerized tomography scan that is negative for a tbi
US11672929B2 (en) 2020-12-02 2023-06-13 Breathe Restore, Inc. Product delivery devices and methods
JP2023554200A (ja) 2020-12-09 2023-12-26 エイチケー イノ．エヌ コーポレーション 抗ＯＸ４０Ｌ抗体、抗ＯＸ４０Ｌ及び抗ＴＮＦαの二重特異性抗体、並びにこれらの用途
AU2021401815A1 (en) * 2020-12-18 2023-07-06 Elanco Us Inc. Tnf alpha and ngf antibodies for veterinary use
WO2022147147A1 (en) 2020-12-30 2022-07-07 Abbott Laboratories Methods for determining sars-cov-2 antigen and anti-sars-cov-2 antibody in a sample
UY39610A (es) 2021-01-20 2022-08-31 Abbvie Inc Conjugados anticuerpo-fármaco anti-egfr
CA3207134A1 (en) * 2021-02-19 2022-08-25 Jeffrey A. Ledbetter Dnase fusion polypeptides and related compositions and methods
CA3216585A1 (en) 2021-04-27 2022-11-03 Nathaniel SILVER Non-viral dna vectors expressing therapeutic antibodies and uses thereof
WO2022232286A1 (en) 2021-04-27 2022-11-03 Generation Bio Co. Non-viral dna vectors expressing anti-coronavirus antibodies and uses thereof
US20220381796A1 (en) 2021-05-18 2022-12-01 Abbott Laboratories Methods of evaluating brain injury in a pediatric subject
US20240118279A1 (en) 2021-06-14 2024-04-11 Abbott Laboratories Methods of diagnosing or aiding in diagnosis of brain injury caused by acoustic energy, electromagnetic energy, an over pressurization wave, and/or blast wind
US20240210419A1 (en) * 2021-06-22 2024-06-27 University Of Virginia Patent Foundation Compositions and methods for detecting and regulating fibronectin-integrin interactions and signaling
CN117500816A (zh) 2021-08-26 2024-02-02 映恩生物制药（苏州）有限公司 一种甾体化合物及其缀合物
AU2022339759A1 (en) 2021-08-31 2024-03-07 Abbott Laboratories Methods and systems of diagnosing brain injury
AU2022354059A1 (en) 2021-09-30 2024-03-28 Abbott Laboratories Methods and systems of diagnosing brain injury
CA3240822A1 (en) 2021-12-17 2023-06-22 Tony Lee Systems and methods for determining uch-l1, gfap, and other biomarkers in blood samples
WO2023129942A1 (en) 2021-12-28 2023-07-06 Abbott Laboratories Use of biomarkers to determine sub-acute traumatic brain injury (tbi) in a subject having received a head computerized tomography (ct) scan that is negative for a tbi or no head ct scan
WO2023150652A1 (en) 2022-02-04 2023-08-10 Abbott Laboratories Lateral flow methods, assays, and devices for detecting the presence or measuring the amount of ubiquitin carboxy-terminal hydrolase l1 and/or glial fibrillary acidic protein in a sample
WO2023177655A1 (en) 2022-03-14 2023-09-21 Generation Bio Co. Heterologous prime boost vaccine compositions and methods of use
WO2024006681A1 (en) * 2022-06-28 2024-01-04 Adafre Biosciences, Llc Anti-tnf-αlpha antibodies and compositions
WO2024006876A1 (en) 2022-06-29 2024-01-04 Abbott Laboratories Magnetic point-of-care systems and assays for determining gfap in biological samples
CN116903738A (zh) * 2022-08-02 2023-10-20 北京绿竹生物技术股份有限公司 一种低甘露糖型抗人肿瘤坏死因子-α单抗及其用途
WO2024054934A1 (en) 2022-09-07 2024-03-14 Mdx Management Llc Shp-1 inhibitors for treating cancer
WO2024059708A1 (en) 2022-09-15 2024-03-21 Abbott Laboratories Biomarkers and methods for differentiating between mild and supermild traumatic brain injury
WO2024097804A1 (en) 2022-11-02 2024-05-10 Mdx Management Llc Combination of a tyrosine kinase inhibitor and a pro-inflammatory agent for treating cancer

Family Cites Families (114)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4680276A (en) * 1977-05-25 1987-07-14 Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale Metal polypeptides
EP0609722A1 (en) 1981-09-08 1994-08-10 The Rockefeller University An in vitro method for detecting the presence of invasive stimuli in mammals
US5672347A (en) 1984-07-05 1997-09-30 Genentech, Inc. Tumor necrosis factor antagonists and their use
IL73883A (en) 1984-12-20 1990-12-23 Yeda Res & Dev Monoclonal antibodies against tnf-alpha,hybridomas producing them and method for the purification of tnf-alpha
US4661016A (en) * 1985-04-11 1987-04-28 Mobil Oil Corporation Subsea flowline connector
ATE114673T1 (de) 1985-08-16 1994-12-15 Univ Rockefeller Modulator der anabolischen aktivität und seine verwendungen.
DE3631229A1 (de) 1986-09-13 1988-03-24 Basf Ag Monoklonale antikoerper gegen humanen tumornekrosefaktor (tnf) und deren verwendung
GB8630273D0 (en) * 1986-12-18 1987-01-28 Til Medical Ltd Pharmaceutical delivery systems
AU626572B2 (en) 1988-07-18 1992-08-06 Chiron Corporation Monoclonal antibodies reactive with cachectin
GB8823869D0 (en) * 1988-10-12 1988-11-16 Medical Res Council Production of antibodies
US4940723A (en) * 1988-10-20 1990-07-10 University Of North Carolina, Chapel Hill Use of bis-(5-amidino-2-benzimidazolyl) methane (BABIM) to treat arthritis
EP0366043B1 (en) 1988-10-24 1994-03-30 Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd. Monoclonal antibody
US5530101A (en) * 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
IE63847B1 (en) * 1989-05-05 1995-06-14 Res Dev Foundation A novel antibody delivery system for biological response modifiers
DE3918082A1 (de) * 1989-06-02 1991-01-24 Max Planck Gesellschaft Mittel gegen autoimmunerkrankungen
EP0486526B2 (en) 1989-08-07 2001-03-07 Peptech Limited Tumour necrosis factor binding ligands
US5959087A (en) * 1989-08-07 1999-09-28 Peptide Technology, Ltd. Tumour necrosis factor binding ligands
US6451983B2 (en) 1989-08-07 2002-09-17 Peptech Limited Tumor necrosis factor antibodies
GB8928874D0 (en) 1989-12-21 1990-02-28 Celltech Ltd Humanised antibodies
US5859205A (en) 1989-12-21 1999-01-12 Celltech Limited Humanised antibodies
US6075181A (en) 1990-01-12 2000-06-13 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US6673986B1 (en) * 1990-01-12 2004-01-06 Abgenix, Inc. Generation of xenogeneic antibodies
US6150584A (en) * 1990-01-12 2000-11-21 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
GB9014932D0 (en) 1990-07-05 1990-08-22 Celltech Ltd Recombinant dna product and method
US6255458B1 (en) * 1990-08-29 2001-07-03 Genpharm International High affinity human antibodies and human antibodies against digoxin
US5633425A (en) * 1990-08-29 1997-05-27 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US7084260B1 (en) * 1996-10-10 2006-08-01 Genpharm International, Inc. High affinity human antibodies and human antibodies against human antigens
DE69133476T2 (de) * 1990-08-29 2006-01-05 GenPharm International, Inc., Palo Alto Transgene Mäuse fähig zur Produktion heterologer Antikörper
US5545806A (en) * 1990-08-29 1996-08-13 Genpharm International, Inc. Ransgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5789650A (en) * 1990-08-29 1998-08-04 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5770429A (en) * 1990-08-29 1998-06-23 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5661016A (en) 1990-08-29 1997-08-26 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes
US5625126A (en) * 1990-08-29 1997-04-29 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US6300129B1 (en) * 1990-08-29 2001-10-09 Genpharm International Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
GB9022547D0 (en) 1990-10-17 1990-11-28 Wellcome Found Purified immunoglobulin
GB2279077B (en) * 1990-12-21 1995-06-14 Celltech Ltd Therapeutic compositions comprising recombinant antibodies specific for the TNFalpha
GB9109645D0 (en) 1991-05-03 1991-06-26 Celltech Ltd Recombinant antibodies
US5994510A (en) 1990-12-21 1999-11-30 Celltech Therapeutics Limited Recombinant antibodies specific for TNFα
GB9028123D0 (en) 1990-12-28 1991-02-13 Erba Carlo Spa Monoclonal antibodies against human tumor necrosis factor alpha
US7192584B2 (en) * 1991-03-18 2007-03-20 Centocor, Inc. Methods of treating psoriasis with anti-TNF antibodies
US20060246073A1 (en) 1991-03-18 2006-11-02 Knight David M Anti-TNF antibodies and peptides of human tumor necrosis factor
US5656272A (en) * 1991-03-18 1997-08-12 New York University Medical Center Methods of treating TNF-α-mediated Crohn's disease using chimeric anti-TNF antibodies
US20040120952A1 (en) 2000-08-07 2004-06-24 Centocor, Inc Anti-TNF antibodies and peptides of human tumor necrosis factor
US20070298040A1 (en) 1991-03-18 2007-12-27 Centocor, Inc. Methods of treating seronegative arthropathy with anti-TNF antibodies
CA2736076A1 (en) * 1991-03-18 1992-09-19 New York University Monoclonal and chimeric antibodies specific for human tumor necrosis factor
US6277969B1 (en) 1991-03-18 2001-08-21 New York University Anti-TNF antibodies and peptides of human tumor necrosis factor
US5698195A (en) * 1991-03-18 1997-12-16 New York University Medical Center Methods of treating rheumatoid arthritis using chimeric anti-TNF antibodies
US5328985A (en) * 1991-07-12 1994-07-12 The Regents Of The University Of California Recombinant streptavidin-protein chimeras useful for conjugation of molecules in the immune system
CA2119930C (en) 1991-09-23 2002-10-01 Hendricus R. J. M. Hoogenboom Production of chimeric antibodies - a combinatorial approach
US5869619A (en) * 1991-12-13 1999-02-09 Xoma Corporation Modified antibody variable domains
US6270766B1 (en) 1992-10-08 2001-08-07 The Kennedy Institute Of Rheumatology Anti-TNF antibodies and methotrexate in the treatment of arthritis and crohn's disease
EP0663836B1 (en) * 1992-10-08 1997-07-09 The Kennedy Institute Of Rheumatology Treatment of autoimmune and inflammatory disorders
DE122009000074I1 (de) 1993-03-05 2011-12-01 Bayer Healthcare Ag Humane monoklonale anti-TNF alpha Antikorper.
JPH08510642A (ja) 1993-05-12 1996-11-12 ゾマ コーポレイション ゲロニンおよび抗体から成る免疫毒素
RU2139092C1 (ru) 1993-06-03 1999-10-10 Терапьютик Антибодиз Инк. Фрагменты антител в терапии
US6261558B1 (en) 1993-10-19 2001-07-17 The Scripps Research Institute Synthetic human neutralizing monoclonal antibodies to human immunodeficiency virus
EP0659766A1 (en) 1993-11-23 1995-06-28 Schering-Plough Human monoclonal antibodies against human cytokines and methods of making and using such antibodies
JPH09509835A (ja) 1994-03-04 1997-10-07 メルク エンド カンパニー インコーポレーテッド アラニン走査型突然変異誘発によるｉｎ ｖｉｔｒｏ抗体アフィニティー成熟
JPH07289288A (ja) * 1994-04-27 1995-11-07 L T T Kenkyusho:Kk 抗リウマチ薬の効果評価方法
NZ288997A (en) 1994-06-24 1999-01-28 Immunex Corp Controlled release pharmaceutical formulation comprising polypeptide encapsulated in alginate
US5561053A (en) 1994-08-05 1996-10-01 Genentech, Inc. Method for selecting high-expressing host cells
GB9416721D0 (en) * 1994-08-18 1994-10-12 Short Brothers Plc A bias yarn assembly forming device
US6113898A (en) 1995-06-07 2000-09-05 Idec Pharmaceuticals Corporation Human B7.1-specific primatized antibodies and transfectomas expressing said antibodies
US6090382A (en) 1996-02-09 2000-07-18 Basf Aktiengesellschaft Human antibodies that bind human TNFα
DE122004000004I1 (de) * 1996-02-09 2004-08-12 Abott Biotechnology Ltd Humane Antikörper welche an Humanen TNFalpha binden.
AU3633000A (en) * 1999-03-26 2000-10-16 Human Genome Sciences, Inc. Neutrokine-alpha binding proteins and methods based thereon
US20050249735A1 (en) 2000-08-07 2005-11-10 Centocor, Inc. Methods of treating ankylosing spondylitis using anti-TNF antibodies and peptides of human tumor necrosis factor
UA81743C2 (uk) 2000-08-07 2008-02-11 Центокор, Инк. МОНОКЛОНАЛЬНЕ АНТИТІЛО ЛЮДИНИ, ЩО СПЕЦИФІЧНО ЗВ'ЯЗУЄТЬСЯ З ФАКТОРОМ НЕКРОЗУ ПУХЛИН АЛЬФА (ФНПα), ФАРМАЦЕВТИЧНА КОМПОЗИЦІЯ, ЩО ЙОГО МІСТИТЬ, ТА СПОСІБ ЛІКУВАННЯ РЕВМАТОЇДНОГО АРТРИТУ
US20060018907A1 (en) 2000-08-07 2006-01-26 Centocor, Inc. Anti-TNF antibodies and peptides of human tumor necrosis factor
US20030012786A1 (en) 2001-05-25 2003-01-16 Teoh Leah S. Use of anti-TNF antibodies as drugs in treating septic disorders of anemic patients
CA2385745C (en) * 2001-06-08 2015-02-17 Abbott Laboratories (Bermuda) Ltd. Methods of administering anti-tnf.alpha. antibodies
US20030161828A1 (en) 2002-02-19 2003-08-28 Abbott Gmbh & Co. Kg Use of TNF antagonists as drugs for the treatment of patients with an inflammatory reaction and without suffering from total organ failure
US20040009172A1 (en) 2002-04-26 2004-01-15 Steven Fischkoff Use of anti-TNFalpha antibodies and another drug
US20030206898A1 (en) 2002-04-26 2003-11-06 Steven Fischkoff Use of anti-TNFalpha antibodies and another drug
US20090280065A1 (en) * 2006-04-10 2009-11-12 Willian Mary K Uses and Compositions for Treatment of Psoriasis
CN102764436A (zh) 2002-07-19 2012-11-07 艾博特生物技术有限公司 TNF α相关疾病的治疗
US20040033228A1 (en) 2002-08-16 2004-02-19 Hans-Juergen Krause Formulation of human antibodies for treating TNF-alpha associated disorders
US20040054414A1 (en) * 2002-09-18 2004-03-18 Trieu Hai H. Collagen-based materials and methods for augmenting intervertebral discs
MY150740A (en) 2002-10-24 2014-02-28 Abbvie Biotechnology Ltd Low dose methods for treating disorders in which tnf? activity is detrimental
TWI556829B (zh) 2004-04-09 2016-11-11 艾伯維生物技術有限責任公司 用於治療ＴＮＦα相關失調症之多重可變劑量療法
WO2006041970A2 (en) 2004-10-08 2006-04-20 Abbott Biotechnology Ltd. Treatment of respiratory syncytial virus (rsv) infection
TWI399384B (zh) * 2005-05-16 2013-06-21 Abbott Biotech Ltd ＴＮＦα抑制劑於治療侵蝕型多發性關節炎之用途
US20070041905A1 (en) 2005-08-19 2007-02-22 Hoffman Rebecca S Method of treating depression using a TNF-alpha antibody
CN101663048A (zh) * 2005-11-01 2010-03-03 艾博特生物技术有限公司 使用生物标志物诊断强直性脊柱炎的方法和组合物
KR20150064254A (ko) * 2006-04-05 2015-06-10 애브비 바이오테크놀로지 리미티드 항체 정제
US20080118496A1 (en) 2006-04-10 2008-05-22 Medich John R Uses and compositions for treatment of juvenile rheumatoid arthritis
US9605064B2 (en) * 2006-04-10 2017-03-28 Abbvie Biotechnology Ltd Methods and compositions for treatment of skin disorders
EP2666472A3 (en) * 2006-04-10 2014-04-02 Abbott Biotechnology Ltd Uses and compositions for treatment of psoriatic arthritis
US20090317399A1 (en) * 2006-04-10 2009-12-24 Pollack Paul F Uses and compositions for treatment of CROHN'S disease
EP2010214A4 (en) * 2006-04-10 2010-06-16 Abbott Biotech Ltd USES AND COMPOSITIONS FOR THE TREATMENT OF RHEUMATOID ARTHRITIS
EP2012586A4 (en) * 2006-04-10 2010-08-18 Abbott Biotech Ltd USES AND COMPOSITIONS FOR THE TREATMENT OF ANKYLOSANTE SPONDYLARTHRITIS
US20080131374A1 (en) 2006-04-19 2008-06-05 Medich John R Uses and compositions for treatment of rheumatoid arthritis
US20100021451A1 (en) * 2006-06-08 2010-01-28 Wong Robert L Uses and compositions for treatment of ankylosing spondylitis
US20080311043A1 (en) 2006-06-08 2008-12-18 Hoffman Rebecca S Uses and compositions for treatment of psoriatic arthritis
TWI542374B (zh) * 2006-06-30 2016-07-21 艾伯維生物技術有限責任公司 自動注射裝置
MX2009002748A (es) 2006-09-13 2009-03-26 Abbott Lab Mejoras de cultivos celulares.
KR20150002896A (ko) * 2006-10-27 2015-01-07 애브비 바이오테크놀로지 리미티드 결정형 항-ｈＴＮＦ알파 항체
MX2009010361A (es) 2007-03-29 2009-10-16 Abbott Lab Anticuerpos il-12 anti-humanos cristalinos.
EP2679995A1 (en) 2007-05-31 2014-01-01 AbbVie Inc. Biomarkers predictive of the responsiveness to TNF-alfa inhibitors in autoimmune disorders
WO2008150490A2 (en) * 2007-06-01 2008-12-11 Abbott Biotechnology Ltd. Uses and compositions for treatment of psoriasis and crohn's disease
WO2008154543A2 (en) * 2007-06-11 2008-12-18 Abbott Biotechnology Ltd. Methods for treating juvenile idiopathic arthritis
WO2009011782A2 (en) * 2007-07-13 2009-01-22 Abbott Biotechnology Ltd. METHODS AND COMPOSITIONS FOR PULMONARY ADMINISTRATION OF A TNFa INHIBITOR
CN101980722A (zh) * 2007-08-08 2011-02-23 雅培制药有限公司 结晶抗体的组合物和方法
CN101969971A (zh) * 2007-11-30 2011-02-09 雅培制药有限公司 蛋白制剂及其制备方法
WO2009086550A1 (en) * 2008-01-03 2009-07-09 Abbott Laboratories Predicting long-term efficacy of a compound in the treatment of psoriasis
EP2784089A1 (en) * 2008-01-15 2014-10-01 AbbVie Inc. Improved mammalian expression vectors and uses thereof
CA2711984A1 (en) * 2008-01-15 2009-07-23 Abbott Gmbh & Co. Kg Powdered protein compositions and methods of making same
WO2009099545A1 (en) 2008-01-30 2009-08-13 Abbott Laboratories Compositions and methods for crystallizing antibody fragments
CA2717905A1 (en) * 2008-03-24 2009-10-01 Abbott Biotechnology Ltd. Methods and compositions for treating bone loss
EP2424594A4 (en) 2009-04-29 2014-12-24 Abbvie Biotechnology Ltd AUTOMATIC INJECTION DEVICE
RU2560701C2 (ru) * 2009-05-04 2015-08-20 Эббви Байотекнолоджи Лтд. Стабильные композиции с высокими концентрациями белков антител человека против tnf-альфа
CA2789168A1 (en) 2010-02-02 2011-08-11 Abbott Biotechnology Ltd. Methods and compositions for predicting responsiveness to treatment with tnf-.alpha. inhibitor
PT2575884T (pt) 2010-06-03 2018-10-31 Abbvie Biotechnology Ltd Utilizações e composições para o tratamento de hidradenite supurativa (hs)
US9085618B2 (en) * 2013-10-18 2015-07-21 Abbvie, Inc. Low acidic species compositions and methods for producing and using the same

Also Published As

Publication number Publication date
HU230515B1 (hu) 2016-10-28
HUP1500179A2 (en) 1999-09-28
HK1019452A1 (en) 2000-02-11
NL300143I1 (nl) 2004-05-03
RO119831B1 (ro) 2005-04-29
JP2000507810A (ja) 2000-06-27
BG112042A (bg) 2015-10-30
SK106298A3 (en) 1999-03-12
BR9707379A (pt) 1999-04-13
NO20040154L (no) 1998-10-07
NO20026202D0 (no) 2002-12-23
NZ512006A (en) 2005-05-27
NL300143I2 (nl) 2004-07-01
BR9707379B1 (pt) 2009-08-11
JP5422501B2 (ja) 2014-02-19
BG64564B1 (bg) 2005-07-29
CY2463B1 (en) 2005-06-03
UA82823C2 (en) 2008-05-26
DE69721548T2 (de) 2004-04-01
HU0204115D0 (en) 2003-02-28
US20130330357A1 (en) 2013-12-12
RU2012102323A (ru) 2013-07-27
NZ562935A (en) 2009-06-26
CA2243459C (en) 2002-09-17
NO319955B1 (no) 2005-10-03
PT929578E (pt) 2003-09-30
CN103275221B (zh) 2016-08-17
JP5951056B2 (ja) 2016-07-13
JP2015108011A (ja) 2015-06-11
NO20040052L (no) 1998-10-07
SI9720020B (en) 2001-12-31
US20120258114A1 (en) 2012-10-11
BRPI9715219B8 (pt) 2015-07-07
JP2014055150A (ja) 2014-03-27
US6258562B1 (en) 2001-07-10
HK1066860A1 (en) 2005-04-01
ATE239041T1 (de) 2003-05-15
CN103275221A (zh) 2013-09-04
RU2458704C2 (ru) 2012-08-20
HK1214610A1 (zh) 2016-07-29
JP5689902B2 (ja) 2015-03-25
US20100040604A1 (en) 2010-02-18
JP3861118B2 (ja) 2006-12-20
DE122004000003I1 (de) 2004-09-23
MX9806347A (es) 1998-10-31
IL125697A (en) 2005-03-20
MX336813B (es) 2016-02-02
HK1214608A1 (zh) 2016-07-29
NO2004002I2 (no) 2008-02-04
WO1997029131A1 (en) 1997-08-14
HU230048B1 (hu) 2015-06-29
IL206994A0 (en) 2010-12-30
JP2010209119A (ja) 2010-09-24
JP2003177130A (ja) 2003-06-27
IL151641A0 (en) 2003-04-10
CN1504752A (zh) 2004-06-16
BG110703A (en) 2010-10-29
US20130115224A1 (en) 2013-05-09
SK284040B6 (sk) 2004-08-03
RU2270030C2 (ru) 2006-02-20
CZ292465B6 (cs) 2003-09-17
NZ576716A (en) 2011-02-25
CN1215407A (zh) 1999-04-28
CZ247698A3 (cs) 1998-11-11
EP0929578A1 (en) 1999-07-21
PL188192B1 (pl) 2004-12-31
RU2003120859A (ru) 2005-01-10
BG107537A (en) 2003-09-30
DE122004000003I2 (de) 2007-03-29
BG66195B1 (bg) 2012-01-31
BG102755A (en) 1999-05-31
UA57726C2 (uk) 2003-07-15
HK1214609A1 (zh) 2016-07-29
JP2007045828A (ja) 2007-02-22
HUP9901874A2 (hu) 1999-09-28
US8206714B2 (en) 2012-06-26
ES2198552T3 (es) 2004-02-01
HU221984B1 (hu) 2003-03-28
US8372400B2 (en) 2013-02-12
DE122004000004I1 (de) 2004-08-12
RU2005113954A (ru) 2006-11-20
US7223394B2 (en) 2007-05-29
HK1214607A1 (zh) 2016-07-29
NO983627L (no) 1998-10-07
HUP9901874A3 (en) 2000-05-29
CN101712720A (zh) 2010-05-26
NO20026202L (no) 1998-10-07
CN102070715A (zh) 2011-05-25
BRPI9707379C8 (pt) 2017-12-12
NO316711B1 (no) 2004-04-13
KR100317188B1 (ko) 2002-02-19
NZ536216A (en) 2006-08-31
CA2243459A1 (en) 1997-08-14
AU722077B2 (en) 2000-07-20
US7541031B2 (en) 2009-06-02
IL125697A0 (en) 1999-04-11
CN100429232C (zh) 2008-10-29
PL193499B1 (pl) 2007-02-28
IL218518A0 (en) 2012-04-30
KR19990082430A (ko) 1999-11-25
NZ331579A (en) 2001-06-29
CY2005011I1 (el) 2011-06-08
PL328411A1 (en) 1999-01-18
HK1125972A1 (en) 2009-08-21
US20090155205A1 (en) 2009-06-18
EP0929578B1 (en) 2003-05-02
NO2017038I2 (no) 2017-11-17
CN1300173C (zh) 2007-02-14
RO123028B1 (ro) 2010-07-30
JP2013091666A (ja) 2013-05-16
HK1125951A1 (en) 2009-08-21
SI9720020A (sl) 1999-10-31
US20130330356A1 (en) 2013-12-12
BG66509B1 (bg) 2015-11-30
DE69721548D1 (de) 2003-06-05
NO320657B1 (no) 2006-01-09
NO2017038I1 (no) 2017-08-01
NO983627D0 (no) 1998-08-07
BRPI9707379B8 (pt) 2015-07-07
DK0929578T3 (da) 2003-08-25
BR9715219B1 (pt) 2010-02-23
US8753633B2 (en) 2014-06-17
US20030092059A1 (en) 2003-05-15
AU2122997A (en) 1997-08-28
NO322755B1 (no) 2006-12-04
BG109311A (en) 2006-03-31
TR199801532T2 (xx) 1998-11-23
BG64776B1 (bg) 2006-03-31
JP5759526B2 (ja) 2015-08-05
JP2016104798A (ja) 2016-06-09
LU91062I2 (fr) 2004-04-26
RU2458704C9 (ru) 2012-12-10
JP4890997B2 (ja) 2012-03-07
US20070249813A1 (en) 2007-10-25
JP4404181B2 (ja) 2010-01-27

Similar Documents

Publication Publication Date Title
HU228630B1 (en) Use of human anti bodies that bind human tnf-alpha and process for inhibiting of human tnf-alpha activity
EP2397494B1 (en) Human antibodies that bind human TNFalpha
PL217217B1 (pl) Zastosowanie izolowanego ludzkiego przeciwciała anty-TNFα lub jego części wiążącej antygen oraz zestaw i gotowa strzykawka

Legal Events

Date Code Title Description
HC9A Change of name, address

Owner name: ABBVIE BIOTECHNOLOGY LTD., BM

Free format text: FORMER OWNER(S): BASF AKTIENGESELLSCHAFT, DE; ABBOTT BIOTECHNOLOGY LTD., BM; ABBOTT LABORATORIES (BERMUDA) LTD., BM