JP6293907B2 - プレクリーニング工程を用いた免疫グロブリンの精製 - Google Patents
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Description
cell protein)、宿主細胞DNA、ウィルス、凝集体、他の不所望の産物変異体、およびプロセス材料由来の種々の浸出物を伴う。これらの不純物の存在は、患者にとっての潜在的な健康リスクであるため、最終産物からそれらを無くすことが規制要件となる。非常に低い残留量のみが許容されるであろう。
(特許文献2)で用いられる陰イオン交換クロマトグラフィー、陽イオン交換クロマトグラフィー(特許文献3)、疎水性相互作用クロマトグラフィー(特許文献4)、またはクロマトグラフィーの組合せ、例えばイオン交換クロマトグラフィーに続く疎水性相互作用クロマトグラフィー(特許文献5)、陰イオン交換クロマトグラフィーに続く陽イオン交換クロマトグラフィー(特許文献6)、もしくは任意の順序の陽イオン交換クロマトグラフィーおよび混合モードクロマトグラフィー(特許文献7)と関連した。治療抗体に必要とされる純度の全体的な程度は極めて高いため、典型的なプラットホーム精製スキームは、陽イオン交換クロマトグラフィー、フロースルーの陰イオン交換クロマトグラフィー、および疎水性相互作用クロマトグラフィーから通常選択される少なくとも2つのポストプロテインAクロマトグラフィーからなる(非特許文献4、非特許文献1、特許文献4、特許文献8、特許文献5、特許文献9、特許文献6)。
するサンプルからの免疫グロブリンの対費用効果の高い精製の必要性が、継続して存在する。特に、純度および収率に関して、対費用効果が高く、なお効率的で満足のいく精製法の必要性がある。
(a)サンプルを陰イオン交換クロマトグラフィーに曝し、および陰イオン交換クロマトグラフィー樹脂に結合しない免疫グロブリンをフロースルー中に得る工程;
(b)工程(a)において得られたフロースルーを、プロテインA親和性クロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンをプロテインA親和性クロマトグラフィー樹脂に結合させ、およびプロテインA親和性クロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程、または混合モードクロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンを混合モードクロマトグラフィー樹脂に結合させ、および混合モードクロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程;
(c)工程(b)において得られた溶出液、またはそれに由来し、かつ工程(b)の後に実行される1つもしくは複数の更なるプロセシング工程の後に得られた組成物を、陽イオン交換クロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンを陽イオン交換クロマトグラフィー樹脂に結合させ、および陽イオン交換クロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程
を含む。
のビーズとして供給されて、カラム内に充填されてよい。あるいはまた、プレ充填カラムが購入されてもよい。
る。最も適しているのは、例えばヌヴィアQ(Nuvia(商標)Q)によって提供されるような、マトリックスがロバストであり、四級アミノエチル、四級アンモニウム、またはトリメチルアンモニウム部分の群から選択されるリガンドを有する、強陰イオン交換クロマトグラフィー媒体である。フロースルーモードでプレクリーニング陰イオン交換カラムを用いることは、いくつかの利点がある:カラムは比較的小さく維持され得、かつ捕捉カラムに直接連結され得る。この構成は、陰イオン交換溶出液の一時的な採取および貯蔵を回避し、工程数を減らし、かつプロセス経済を向上させる。陰イオン交換カラムは、プロテインA樹脂、または混合モード樹脂(例えば、ベーカーボンドABx(BakerbondABx(商標))、カプトMMC(Capto(商標)MMC)、カプトアドヒア(CaptoAdhere)、またはMEPハイパーセル(MEP HyperCel(商標)))が続いてもよく、または再生するのが困難であるあらゆる他の高価な樹脂が続いてもよい。
(a)サンプルを陰イオン交換クロマトグラフィーに曝し、および陰イオン交換クロマトグラフィー樹脂に結合しない免疫グロブリンをフロースルー中に得る工程;
(b)工程(a)において得られたフロースルーを、プロテインA親和性クロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンをプロテインA親和性クロマトグラフィー樹脂に結合させ、およびプロテインA親和性クロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程、または混合モードクロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンを混合モードクロマトグラフィー樹脂に結合させ、および混合モードクロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程;
(c)工程(b)において得られた溶出液、またはそれに由来し、かつ工程(b)の後に実行される1つもしくは複数の更なるプロセシング工程の後に得られた組成物を、陽イオン交換クロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンを陽イオン交換クロマトグラフィー樹脂に結合させ、および陽イオン交換クロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程
を含む。
(a)サンプルを陰イオン交換クロマトグラフィーに曝し、および陰イオン交換クロマトグラフィー樹脂に結合しない免疫グロブリンをフロースルー中に得る工程;
(b)工程(a)において得られたフロースルーを、免疫グロブリン結合タンパク質/ペプチド親和性クロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンを免疫グロブリン結合タンパク質/ペプチド親和性クロマトグラフィー樹脂に結合させ、および免疫グロブリン結合タンパク質/ペプチド親和性クロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程、または混合モードクロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンを混合モードクロマトグラフィー樹脂に結合させ、および混合モードクロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程;
(c)工程(b)において得られた溶出液、またはそれに由来し、かつ工程(b)の後に実行される1つもしくは複数の更なるプロセシング工程の後に得られた組成物を、陽イオン交換クロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンを陽イオン交換クロマトグラフィー
樹脂に結合させ、および陽イオン交換クロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程
を含む。
(a)サンプルを陰イオン交換クロマトグラフィーに曝し、および陰イオン交換媒体に結合しない免疫グロブリンをフロースルー中に得る工程;
(b)工程(a)において得られたフロースルーを、プロテインA親和性クロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンをプロテインA親和性クロマトグラフィー樹脂に結合させ、およびプロテインA親和性クロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程、または混合モードクロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンを混合モードクロマトグラフィー樹脂に結合させ、および混合モードクロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程;
(c)工程(b)において得られた溶出液、またはそれに由来し、かつ工程(b)の後に実行される1つもしくは複数の更なるプロセシング工程の後に得られた組成物を、陽イオン交換クロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンを陽イオン交換クロマトグラフィー樹脂に結合させ、および陽イオン交換クロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程
を含む。
(a)サンプルを陰イオン交換クロマトグラフィーに曝し、および陰イオン交換媒体に結合しない免疫グロブリンをフロースルー中に得る工程;
(b)工程(a)において得られたフロースルーを、免疫グロブリン結合タンパク質/ペプチド親和性クロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンを免疫グロブリン結合タンパク質/ペプチド親和性クロマトグラフィー樹脂に結合させ、および免疫グロブリン結合タンパク質/ペプチド親和性クロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程、または混合モードクロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンを混合モードクロマトグラフィー樹脂に結合させ、および混合モードクロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程;
(c)工程(b)において得られた溶出液、またはそれに由来し、かつ工程(b)の後に実行される1つもしくは複数の更なるプロセシング工程の後に得られた組成物を、陽イオン交換クロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンを陽イオン交換クロマトグラフィー樹脂に結合させ、および陽イオン交換クロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程
を含む。
ラフィー媒体で実行されてよい。中間クロマトグラフィー工程は、あらゆるクロマトグラフィータイプを利用してよく、カラムクロマトグラフィーおよび膜クロマトグラフィーが挙げられる。
本発明の方法は、プレクリーニング工程として、捕捉工程の前にフロースルーモードの陰イオン交換クロマトグラフィー工程を含む。陰イオン交換クロマトグラフィー媒体は、強陰イオン交換クロマトグラフィー媒体であっても弱陰イオン交換クロマトグラフィー媒体であってもよく、陰イオン交換膜が挙げられる。
)部分(樹脂として、例えば、トヨパール(登録商標)QAE(Toyopearl(登録商標)QAE)(独国トーソー・バイオサイエンス(Tosoh Bioscience)から入手可能)、セレクタセルQAE(Selectacel(商標)QAE)(セルロースの四級アミノエチル誘導体、米国ペンシルバニア州ポリサイエンシズ社(Polysciences Inc.)から入手可能)、QAEセファデックス(QAE Sephadex(登録商標))(独国GEヘルスケア(GE Healthcare)から入手可能)およびその他が挙げられる);四級アンモニウム(Q)部分(樹脂として、例えば、QセファロースXL(Q Sepharose(登録商標)XL)、QセファロースFF(Q Sepharose FF)、QセファロースHP(Q Sepharose HP)、QセファロースCL−4B(Q Sepharose CL−4B)、Qセファロース・ビッグ・ビーズ(Q Sepharose Big Beads)、ソースQ(Source Q)、リソースQ(Resource Q)、カプトQ(Capto(商標)Q)、カプトQインプレス(Capto Q ImPres)(全て独国GEヘルスケア(GE Healthcare)から入手可能)、ポロスHQ(Poros(商標)HQ)(独国アプライド・バイオシステムズ(Applied Biosystems))、Qハイパーセル(Q HyperCel(商標))、バイオセプラQセラミック・ハイパーD(Biosepra(商標)Q Ceramic HyperD)(米国ニューヨーク州ポール(Pall)から入手可能)、マクロ・プレップ・ハイQ(Macro Prep(商標) High Q)(米国カリフォルニア州バイオ−ラッド(Bio−Rad))、トヨパール・スーパQ(Toyopearl(登録商標)Super Q)(独国トーソー・バイオサイエンス(Tosoh Bioscience)から入手可能)、ウノスフェアQ(UNOsphere(商標)Q)(米国カリフォルニア州バイオ−ラッド(Bio−Rad)から入手可能)が挙げられ、トリメチルアンモニウムエチル(TMAE)として、例えば、フラクトゲルEMD TMAE(Fractogel(商標)EMD TMAE)(独国メルク(Merck)KgaA)が挙げられ、およびトリメチルアンモニウム樹脂として、例えば、ヌヴィアQ(Nuvia(商標)Q)(米国カリフォルニア州バイオ−ラッド(Bio−Rad)から入手可能)が挙げられる)を含む。
(a)サンプルを強陰イオン交換クロマトグラフィーに曝し、および強陰イオン交換クロマトグラフィー樹脂に結合しない免疫グロブリンをフロースルー中に得る工程;
(b)工程(a)において得られたフロースルーを、プロテインA親和性クロマトグラフ
ィーに曝して、免疫グロブリンをプロテインA親和性クロマトグラフィー樹脂に結合させ、およびプロテインA親和性クロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程、または混合モードクロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンを混合モードクロマトグラフィー樹脂に結合させ、および混合モードクロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程;
(c)工程(b)において得られた溶出液、またはそれに由来し、かつ工程(b)の後に実行される1つもしくは複数の更なるプロセシング工程の後に得られた組成物を、陽イオン交換クロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンを陽イオン交換クロマトグラフィー樹脂に結合させ、および陽イオン交換クロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程
を含む。
官能基: −N(CH3)3 +
総イオン収容能力 100〜170μmol/ml(100〜170μeq/ml)
動的結合能力 ≧170mg/ml
出荷時のカウンターイオン Cl−
メジアン粒子サイズ 85±15μm
推奨線形流速範囲 50〜600cm/時
化学的安定性
1.0M NaOH(20℃) 最長1週
1.0M HCl(20℃) 最長5週
ゲルベッド圧縮比 1.10〜1.15(固定ベッド容量/充填ベッド容量)
pH安定性
短期間 2〜14
長期間 4〜12
出荷時の溶液20% エタノール+NaCl
再生 1〜2M NaCl
衛生 0.5〜1.0 NaOH
貯蔵条件 20%エタノールまたは0.01 NaOH
好ましい実施形態において、プレクリーニング陰イオン交換カラムの直径は、捕捉カラムの直径よりも大きい。別の好ましい実施形態において、プレクリーニング陰イオン交換カラムのベッド高は、捕捉カラムのベッド高よりも短い。最も好ましい実施形態において、プレクリーニングカラムの直径は、捕捉カラムの直径よりも大きく、およびプレクリーニング陰イオン交換カラムのベッド高は、捕捉カラムのベッド高よりも短い。不純物の最適な捕捉のために、プレクリーニング陰イオン交換カラムについて最低でも約10cmのベッド高が必要とされる。
ムを連続的に通過する。溶液Eは貯蔵用に用いられてよい。逆流で再生を実行することが推奨される。
用語「捕捉工程」は、結合モードで行われる第1のクロマトグラフィー工程と理解される。培養液からの免疫グロブリンの精製のための捕捉工程は、通常、親和性クロマトグラフィー工程として実行される。プロテインAまたはその誘導体が、ほとんどの場合、親和性捕捉として用いられる。しかしながら、他のクロマトグラフィー原理が、捕捉工程として用いられてもよい。本発明に従えば、混合モードクロマトグラフィーが、免疫グロブリンを捕捉するのに問題なく用いられ得る。
(a)サンプルを陰イオン交換クロマトグラフィーに曝し、および陰イオン交換クロマトグラフィー樹脂に結合しない免疫グロブリンをフロースルー中に得る工程;
(b)工程(a)において得られたフロースルーをプロテインA親和性クロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンをプロテインA親和性クロマトグラフィー樹脂に結合させ、およびプロテインA親和性クロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程;
(c)工程(b)において得られた溶出液、またはそれに由来し、かつ工程(b)の後に実行される1つもしくは複数の更なるプロセシング工程の後に得られた組成物を、陽イオン交換クロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンを陽イオン交換クロマトグラフィー樹脂に結合させ、および陽イオン交換クロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程
を含む。
(a)サンプルを陰イオン交換クロマトグラフィーに曝し、および陰イオン交換媒体に結合しない免疫グロブリンをフロースルー中に得る工程;
(b)工程(a)において得られたフロースルーを、免疫グロブリン結合タンパク質/ペプチド親和性クロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンを免疫グロブリン結合タンパク質/ペプチド親和性クロマトグラフィー樹脂に結合させ、および免疫グロブリン結合タンパク質/ペプチド親和性クロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程;
(c)工程(b)において得られた溶出液、またはそれに由来し、かつ工程(b)の後に実行される1つもしくは複数の更なるプロセシング工程の後に得られた組成物を、陽イオン交換クロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンを陽イオン交換クロマトグラフィー樹脂に結合させ、および陽イオン交換クロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程
を含む。
(a)サンプルを陰イオン交換クロマトグラフィーに曝し、および陰イオン交換媒体に結合しない免疫グロブリンをフロースルー中に得る工程;
(b)工程(a)において得られたフロースルーをプロテインA親和性クロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンをプロテインA親和性クロマトグラフィー樹脂に結合させ、およびプロテインA親和性クロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程;
(c)工程(b)において得られた溶出液、またはそれに由来し、かつ工程(b)の後に実行される1つもしくは複数の更なるプロセシング工程の後に得られた組成物を、陽イオン交換クロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンを陽イオン交換クロマトグラフィー樹脂に結合させ、および陽イオン交換クロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程
を含む。
(a)サンプルを陰イオン交換クロマトグラフィーに曝し、および陰イオン交換媒体に結合しない免疫グロブリンをフロースルー中に得る工程;
(b)工程(a)において得られたフロースルーを免疫グロブリン結合タンパク質/ペプチド親和性クロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンを免疫グロブリン結合タンパク質/ペプチド親和性クロマトグラフィー樹脂に結合させ、および免疫グロブリン結合タンパク質/ペプチド親和性クロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程;
(c)工程(b)において得られた溶出液、またはそれに由来し、かつ工程(b)の後に実行される1つもしくは複数の更なるプロセシング工程の後に得られた組成物を、陽イオン交換クロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンを陽イオン交換クロマトグラフィー樹脂に結合させ、および陽イオン交換クロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程
を含む。
(a)サンプルを強陰イオン交換クロマトグラフィーに曝し、および強陰イオン交換クロマトグラフィー樹脂に結合しない免疫グロブリンをフロースルー中に得る工程;
(b)工程(a)において得られたフロースルーをプロテインA親和性クロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンをプロテインA親和性クロマトグラフィー樹脂に結合させ、およびプロテインA親和性クロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程;
(c)工程(b)において得られた溶出液、またはそれに由来し、かつ工程(b)の後に実行される1つもしくは複数の更なるプロセシング工程の後に得られた組成物を曝して、陽イオン交換クロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程
を含む。
順序で以下の工程:
(a)サンプルを、強陰イオン交換クロマトグラフィー樹脂のリガンドが−N(CH3)3 +である強陰イオン交換クロマトグラフィーに曝し、および強陰イオン交換クロマトグラフィー樹脂に結合しない免疫グロブリンをフロースルー中に得る工程;
(b)工程(a)において得られたフロースルーをプロテインA親和性クロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンをプロテインA親和性クロマトグラフィー樹脂に結合させ、およびプロテインA親和性クロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程;
(c)工程(b)において得られた溶出液、またはそれに由来し、かつ工程(b)の後に実行される1つもしくは複数の更なるプロセシング工程の後に得られた組成物を、陽イオン交換クロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンを陽イオン交換クロマトグラフィー樹脂に結合させ、および陽イオン交換クロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程
を含む。
陰イオン交換プレクリーニングクロマトグラフィー工程の後の捕捉工程としてプロテインA親和性クロマトグラフィー工程を用いることによって、本発明の方法は、対費用効果の高い免疫グロブリン精製法を提供すると同時に、免疫グロブリンの精製におけるプロテインA親和性クロマトグラフィーの大きな結合特異性を利用する。
、プロセスもより節約される。
マトリックス 硬質、高度に架橋されたアガロース
リガンド アルカリ安定化プロテインA由来(大腸菌(E.coli))
リガンドカップリング 単一点付着
リガンドカップリング エポキシ
平均粒子サイズ(d50v)* 85μm
動的結合能力 6分の滞留時間にておよそ60mgヒトlgG/ml媒体
最大移動相速度 500cm/時
pH作動(working)範囲 3〜12
化学的安定性 プロテインAクロマトグラフィーにおいて通常用いられる全ての水溶性バッファ中で安定
定位置クリーニング安定性 0.1〜0.5M NaOH
送達条件 20%エタノール
プロテインA親和性クロマトグラフィーとプロテインAカラムからの免疫グロブリンの溶出との間の、特別な洗浄バッファを利用する1つまたはいくつかの洗浄工程が含まれてよい。洗浄バッファは、プロテインA樹脂から不純物を除去するのに用いられるバッファであり、プロテインAに結合した注目する免疫グロブリンを著しい量除去することはない。洗浄バッファは、塩および洗剤(例えばポリソルベート);塩および溶媒(例えばヘキシレングリコール);高濃度塩(例えば高モル濃度トリスバッファ);または塩およびポリマー(例えばポリエチレングリコール)を含んでよい。さらに、洗浄バッファは、カオトロピック試薬(例えばウレアまたはアルギニン)および/またはプロテアーゼ阻害剤(例えばEDTA)を含んでよい。
特定の実施形態において、本発明は、免疫グロブリンおよび少なくとも1つの不純物を含むサンプルから免疫グロブリンを精製する方法を提供し、この方法は、以下の順序で以下の工程:
(a)サンプルを陰イオン交換クロマトグラフィーに曝し、および陰イオン交換クロマトグラフィー樹脂に結合しない免疫グロブリンをフロースルー中に得る工程;
(b)工程(a)において得られたフロースルーを、プロテインA親和性クロマトグラフィー樹脂のリガンドがアルカリ安定化プロテインA誘導体(例えばマブセレクト・シュア(MabSelect SuRe))であるプロテインA親和性クロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンをプロテインA親和性クロマトグラフィー樹脂に結合させ、およびプロテインA親和性クロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程;
(c)工程(b)において得られた溶出液、またはそれに由来し、かつ工程(b)の後に実行される1つもしくは複数の更なるプロセシング工程の後に得られた組成物を、陽イオン交換クロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンを陽イオン交換クロマトグラフィー樹脂に結合させ、および陽イオン交換クロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程
を含む。
(a)サンプルを、強陰イオン交換クロマトグラフィーのリガンドが−N(CH3)3 +である強陰イオン交換クロマトグラフィーに曝し、および強陰イオン交換クロマトグラフィー樹脂に結合しない免疫グロブリンをフロースルー中に得る工程;
(b)工程(a)において得られたフロースルーを、プロテインA親和性クロマトグラフィー樹脂のリガンドがアルカリ安定化プロテインA誘導体(例えばマブセレクト・シュア(MabSelect SuRe))であるプロテインA親和性クロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンをプロテインA親和性クロマトグラフィー樹脂に結合させ、およびプロテインA親和性クロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程;
(c)工程(b)において得られた溶出液、またはそれに由来し、かつ工程(b)の後に実行される1つもしくは複数の更なるプロセシング工程の後に得られた組成物を、陽イオン交換クロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンを陽イオン交換クロマトグラフィー樹脂に結合させ、および陽イオン交換クロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程
を含む。
更なる実施形態において、本発明は、免疫グロブリンおよび少なくとも1つの不純物を含むサンプルから免疫グロブリンを精製する方法を提供し、この方法は、以下の順序で以下の工程:
(a)サンプルを陰イオン交換クロマトグラフィーに曝し、および陰イオン交換クロマトグラフィー樹脂に結合しない免疫グロブリンをフロースルー中に得る工程;
(b)工程(a)において得られたフロースルーを混合モードクロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンを混合モードクロマトグラフィー樹脂に結合させ、および混合モードクロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程;
(c)工程(b)において得られた溶出液、またはそれに由来し、かつ工程(b)の後に実行される1つもしくは複数の更なるプロセシング工程の後に得られた組成物を、陽イオン交換クロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンを陽イオン交換クロマトグラフィー樹脂に結合させ、および陽イオン交換クロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程
を含む。
(a)サンプルを強陰イオン交換クロマトグラフィーに曝し、および強陰イオン交換クロマトグラフィー樹脂に結合しない免疫グロブリンをフロースルー中に得る工程;
(b)工程(a)において得られたフロースルーを混合モードクロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンを混合モードクロマトグラフィー樹脂に結合させ、および混合モードクロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程;
(c)工程(b)において得られた溶出液、またはそれに由来し、かつ工程(b)の後に実行される1つもしくは複数の更なるプロセシング工程の後に得られた組成物を、陽イオン交換クロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンを陽イオン交換クロマトグラフィー樹脂に結合させ、および陽イオン交換クロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程
を含む。
raphy)は、リガンドとサンプルの分子との間の複数の形態の相互作用を利用する。混合モード樹脂と呼ばれる樹脂は、帯電した疎水性イオン交換リガンド、または結晶質ミネラル、例えばヒドロキシアパタイトからなる官能基を有するクロマトグラフィー材料である。「混合モードクロマトグラフィー」の代わりに、用語「マルチモードクロマトグラフィー」または「疎水性帯電誘導クロマトグラフィー」がときに用いられている。混合モードクロマトグラフィーは、通常、少なくとも2つの原理の相互作用、疎水性相互作用およびイオン交換、または金属親和性相互作用およびイオン交換である。混合モードクロマトグラフィーは、イオン交換または疎水性相互作用クロマトグラフィー等の単一モードのクロマトグラフィー法によってそれぞれ再現され得ない、あまり予想できない選択性を提供する。正に帯電する疎水性リガンドは、陰イオン交換体混合モード(例えばカプトMMC(Capto(商標)MMC))のグループに属し、負に帯電するリガンドは、陽イオン交換体混合モード(例えばカプトアドヒア(CaptoAdhere))に属する。一部の混合モード樹脂は、双極性イオン特性(例えばベーカーボンドABx(Bakerbond ABx(商標)))を有する。他の混合モード樹脂は、イオン化可能であり、かつpHを低くすることによって非帯電から正に帯電するように変換される疎水性リガンドを有する(例えばMEPハイパーセル(MEP HyperCel(商標)))。最後に、ヒドロキシアパタイト樹脂は、正に帯電するカルシウムイオンおよび負に帯電するリン酸基を有することによって、混合モード機能がより複雑となる。
粒子サイズ(平均) 80〜100μm
ヒトIgGに対する動的結合能力(10%破過) ≧20mg/ml
リガンド 4−メルカプト−エチル−ピリジン
リガンド密度 80〜125μmo1/mL
作動pH(長期) 2〜12
クリーニングpH(6時間未満) 2〜14
耐圧性 <300kPag(3barg(44psig))
典型的な作動圧 <100kPag(1barg(14psig))
リガンドとして4−メルカプト−エチル−ピリジンを含む混合モードクロマトグラフィー樹脂(MEPハイパーセル(MEP HyperCel))は、pHが約6.5〜9.9であるバッファ、例えばPBS、pH7.4または50mMトリス−HCl、pH8で平衡化されてよい。
.5〜約pH6、より好ましくは約pH4〜約pH5.5の範囲にある。アルギニン(0.1〜1.0M、0.2〜0.8M、0.4〜0.6M)が溶出バッファ(MEP HyperCel溶出バッファ等)に加えられて、免疫グロブリンの凝集を減らし、かつ酸性pHにおいて溶解度のロスを防止し得る。
(a)サンプルを陰イオン交換クロマトグラフィーに曝し、および陰イオン交換クロマトグラフィー樹脂に結合しない免疫グロブリンをフロースルー中に得る工程;
(b)工程(a)において得られたフロースルーを、リガンドが4−メルカプト−エチル−ピリジンである混合モードクロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンを混合モードクロマトグラフィー樹脂に結合させ、および混合モードクロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程;
(c)工程(b)において得られた溶出液、またはそれに由来し、かつ工程(b)の後に実行される1つもしくは複数の更なるプロセシング工程の後に得られた組成物を、陽イオン交換クロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンを陽イオン交換クロマトグラフィー樹脂に結合させ、および陽イオン交換クロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程
を含む。
(a)サンプルを強陰イオン交換クロマトグラフィーに曝し、および強陰イオン交換クロマトグラフィー樹脂に結合しない免疫グロブリンをフロースルー中に得る工程;
(b)工程(a)において得られたフロースルーを、リガンドが4−メルカプト−エチル−ピリジンである混合モードクロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンを混合モードクロマトグラフィー樹脂に結合させ、および混合モードクロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程;
(c)工程(b)において得られた溶出液、またはそれに由来し、かつ工程(b)の後に実行される1つもしくは複数の更なるプロセシング工程の後に得られた組成物を、陽イオン交換クロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンを陽イオン交換クロマトグラフィー樹脂に結合させ、および陽イオン交換クロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程
を含む。
(a)サンプルを、リガンドが−N(CH3)3 +である強陰イオン交換クロマトグラフィーに曝し、および強陰イオン交換クロマトグラフィー樹脂に結合しない免疫グロブリンをフロースルー中に得る工程;
(b)工程(a)において得られたフロースルーを、リガンドが4−メルカプト−エチル−ピリジンである混合モードクロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンを混合モードクロマトグラフィー樹脂に結合させ、および混合モードクロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程;
(c)工程(b)において得られた溶出液、またはそれに由来し、かつ工程(b)の後に実行される1つもしくは複数の更なるプロセシング工程の後に得られた組成物を、陽イオン交換クロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンを陽イオン交換クロマトグラフィー樹脂に結合させ、および陽イオン交換クロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程
を含む。
(a)サンプルを陰イオン交換クロマトグラフィーに曝し、および陰イオン交換クロマトグラフィー樹脂に結合しない免疫グロブリンをフロースルー中に得る工程;
(b)工程(a)において得られたフロースルーを混合モードクロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンを混合モードクロマトグラフィー樹脂に結合させ、および混合モードクロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程;
(b2)工程(b)において得られたフロースルーをプロテインA親和性クロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンをプロテインA親和性クロマトグラフィー樹脂に結合させ、およびプロテインA親和性クロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程;
(c)工程(b2)において得られた溶出液、またはそれに由来し、かつ工程(b2)の後に実行される1つもしくは複数の更なるプロセシング工程の後に得られた組成物を、陽イオン交換クロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンを陽イオン交換クロマトグラフィー樹脂に結合させ、および陽イオン交換クロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程
を含む。
イオン収容能力 0.07〜0.09mmol H+/ml媒体
化学的安定性 通常用いられる全ての水溶性バッファ、1M酢酸、1M水酸化ナトリウム、8Mウレア、6M塩酸グアニジン、および70%エタノール1)
貯蔵条件 4〜30℃、20%エタノール
pH安定性作動範囲 2〜12
マトリックス 高度に架橋されたアガロース
pH安定性定位置クリーニング(CIP:Cleaning−in−Place) 2〜14
イオン交換体タイプ マルチモード弱陽イオン交換体
結合能力/mlクロマトグラフィー媒体 30mS/cm2にて>45mgBSA/ml媒体)
マルチモード弱陽イオン交換クロマトグラフィー樹脂からの注目する免疫グロブリンの溶出のために、バッファのpHおよび/または塩濃度が上げられてよい。好ましくは、pHおよび塩濃度の両方が上げられてよい。溶出バッファの塩濃度は、0.25M〜1.75M、好ましくは0.5M〜1Mに及んでよい。溶出に用いられる例示的な塩/バッファは、リン酸ナトリウム、トリス−HCl、NaCl、および/またはNH4C1であってよい。イオン強度は、0.02〜0.3Mに及んでよい。バッファのpHは、pH6〜pH9、好ましくはpH7〜8に及んでよく、より好ましくは、pHが5.5〜7.5である付加的な洗浄工程が溶出前に適用される。
(a)サンプルを陰イオン交換クロマトグラフィーに曝し、および陰イオン交換クロマトグラフィー樹脂に結合しない免疫グロブリンをフロースルー中に得る工程;
(b)工程(a)において得られたフロースルーを、混合モードクロマトグラフィー樹脂のリガンドが負に帯電している混合モードクロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンを混合モードクロマトグラフィー樹脂に結合させ、および混合モードクロマトグラフィー
樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程;
(b2)工程(b)において得られたフロースルーをプロテインA親和性クロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンをプロテインA親和性クロマトグラフィー樹脂に結合させ、およびプロテインA親和性クロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程;
(c)工程(b2)において得られた溶出液、またはそれに由来し、かつ工程(b2)の後に実行される1つもしくは複数の更なるプロセシング工程の後に得られた組成物を、陽イオン交換クロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンを陽イオン交換クロマトグラフィー樹脂に結合させ、および陽イオン交換クロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程
を含む。
(a)サンプルを陰イオン交換クロマトグラフィーに曝し、および陰イオン交換クロマトグラフィー樹脂に結合しない免疫グロブリンをフロースルー中に得る工程;
(b)工程(a)において得られたフロースルーを混合モードクロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンを混合モードクロマトグラフィー樹脂に結合させ、および混合モードクロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程;
(b2)工程(b)において得られたフロースルーをプロテインA親和性クロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンをプロテインA親和性クロマトグラフィー樹脂に結合させ、およびプロテインA親和性クロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程;
(c)工程(b2)において得られた溶出液、またはそれに由来し、かつ工程(b2)の後に実行される1つもしくは複数の更なるプロセシング工程の後に得られた組成物を、陽イオン交換クロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンを陽イオン交換クロマトグラフィー樹脂に結合させ、および陽イオン交換クロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程
を含み、工程(b)の混合モードクロマトグラフィー樹脂のリガンドは、以下の式を有する。
陽イオン交換クロマトグラフィーは、サンプル中のタンパク質と樹脂上に固定された電荷との間の電荷−電荷相互作用に依存する。陽イオン交換クロマトグラフィーにおいて、結合することになる分子は正に帯電しており、固定された官能基(リガンド)は負に帯電
している。通常用いられる陽イオン交換樹脂は、S−樹脂(スルホネート)、SP樹脂(スルホプロピル)、SE樹脂(スルホエチル)、およびCM樹脂(カルボキシメチル)である。
サポートマトリックス 架橋ポリ(スチレンジビニルベンゼン)
表面機能性 スルホプロピル(−CH2CH2CH2SO3)
1000cm/時における動的結合能力 リゾチーム、pH6.2 55mg/ml
収縮/膨化 0〜100%溶媒で<1%
粒子サイズ 50μm
10cmベッド長での推奨最大流速 1,000cm/時
機械的抵抗性 10MPa(1500psi、100bar)
媒体背圧 1,000cm/時(10cmベッド高)にて<300kPa(3bar)
ポロス50HS(Poros 50 HS)の代わりの好ましい材料が、スルホネート基および高度に架橋されたアガロースマトリックスに基づく強陽イオン交換体ヌヴィアHR−S(Nuvia HR−S)である。
免疫グロブリンは、免疫グロブリンの等電点(pI)未満のpH値、かつ低い導電率にて、樹脂に結合し得る。
陽イオン交換クロマトグラフィーの性能に好ましい実施形態は、4〜6のpH作動範囲であり、より好ましくは4.5〜5.5のpH範囲である。バッファ物質として炭酸が用いられてよい。クエン酸が最も好ましい。
陽イオン交換クロマトグラフィー樹脂は、3〜5カラム容量の1M NaClにより再生され得る。さらに、以下の工程を含む定位置クリーニング手順が適用されてよい:(a)1〜5カラム容量の1M NaOH、1M NaClによる洗浄、(b)1〜5カラム
容量の1M酢酸またはTFAによる洗浄、(c)再平衡化。
(a)サンプルを陰イオン交換クロマトグラフィーに曝し、および陰イオン交換クロマトグラフィー樹脂に結合しない免疫グロブリンをフロースルー中に得る工程;
(b)工程(a)において得られたフロースルーを、プロテインA親和性クロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンをプロテインA親和性クロマトグラフィー樹脂に結合させ、およびプロテインA親和性クロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程、または混合モードクロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンを混合モードクロマトグラフィー樹脂に結合させ、および混合モードクロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程;
(c)工程(b)において得られた溶出液、またはそれに由来し、かつ工程(b)の後に実行される1つもしくは複数の更なるプロセシング工程の後に得られた組成物を、陽イオン交換クロマトグラフィー樹脂のリガンドがスルホプロピルである陽イオン交換クロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンを陽イオン交換クロマトグラフィー樹脂に結合させ、および陽イオン交換クロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程
を含む。
(a)サンプルを強陰イオン交換クロマトグラフィーに曝し、および強陰イオン交換クロマトグラフィー樹脂に結合しない免疫グロブリンをフロースルー中に得る工程;
(b)工程(a)において得られたフロースルーをプロテインA親和性クロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンをプロテインA親和性クロマトグラフィー樹脂に結合させ、およびプロテインA親和性クロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程;
(c)工程(b)において得られた溶出液、またはそれに由来し、かつ工程(b)の後に実行される1つもしくは複数の更なるプロセシング工程の後に得られた組成物を、陽イオン交換クロマトグラフィー樹脂のリガンドがスルホプロピルである陽イオン交換クロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンを陽イオン交換クロマトグラフィー樹脂に結合させ、および陽イオン交換クロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程
を含む。
(a)サンプルを、強陰イオン交換クロマトグラフィー樹脂のリガンドが−N(CH3)3 +である強陰イオン交換クロマトグラフィーに曝し、および強陰イオン交換クロマトグラフィー樹脂に結合しない免疫グロブリンをフロースルー中に得る工程;
(b)工程(a)において得られたフロースルーをプロテインA親和性クロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンをプロテインA親和性クロマトグラフィー樹脂に結合させ、およびプロテインA親和性クロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程;
(c)工程(b)において得られた溶出液、またはそれに由来し、かつ工程(b)の後に
実行される1つもしくは複数の更なるプロセシング工程の後に得られた組成物を、陽イオン交換クロマトグラフィー樹脂のリガンドがスルホプロピルである陽イオン交換クロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンを陽イオン交換クロマトグラフィー樹脂に結合させ、および陽イオン交換クロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程
を含む。
(a)サンプルを、強陰イオン交換クロマトグラフィー樹脂のリガンドが−N(CH3)3 +である強陰イオン交換クロマトグラフィーに曝し、および強陰イオン交換クロマトグラフィー樹脂に結合しない免疫グロブリンをフロースルー中に得る工程;
(b)工程(a)において得られたフロースルーを、プロテインA親和性クロマトグラフィー樹脂のリガンドがアルカリ安定化プロテインA誘導体(例えばマブセレクト・シュア(MabSelect SuRe))であるプロテインA親和性クロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンをプロテインA親和性クロマトグラフィー樹脂に結合させ、およびプロテインA親和性クロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程;
(c)工程(b)において得られた溶出液、またはそれに由来し、かつ工程(b)の後に実行される1つもしくは複数の更なるプロセシング工程の後に得られた組成物を、陽イオン交換クロマトグラフィー樹脂のリガンドがスルホプロピルである陽イオン交換クロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンを陽イオン交換クロマトグラフィー樹脂に結合させ、および陽イオン交換クロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程
を含む。
更なる実施形態において、本発明は、免疫グロブリンおよび少なくとも1つの不純物を含むサンプルから免疫グロブリンを精製する方法を提供し、この方法は、以下の順序で以下の工程:
(a)サンプルを陰イオン交換クロマトグラフィーに曝し、および陰イオン交換クロマトグラフィー樹脂に結合しない免疫グロブリンをフロースルー中に得る工程;
(b)工程(a)において得られたフロースルーを、プロテインA親和性クロマトグラフ
ィーに曝して、免疫グロブリンをプロテインA親和性クロマトグラフィー樹脂に結合させ、およびプロテインA親和性クロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程、または混合モードクロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンを混合モードクロマトグラフィー樹脂に結合させ、および混合モードクロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程;
(c)工程(b)において得られた溶出液、またはそれに由来し、かつ工程(b)の後に実行される1つもしくは複数の更なるプロセシング工程の後に得られた組成物を、陽イオン交換クロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンを陽イオン交換クロマトグラフィー樹脂に結合させ、および陽イオン交換クロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程
(d)工程(c)において得られた溶出液を混合モードクロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンを混合モードクロマトグラフィー樹脂に結合させ、および混合モードクロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程
を含む。
(a)サンプルを陰イオン交換クロマトグラフィーに曝し、および陰イオン交換クロマトグラフィー樹脂に結合しない免疫グロブリンをフロースルー中に得る工程;
(b)工程(a)において得られたフロースルーをプロテインA親和性クロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンをプロテインA親和性クロマトグラフィー樹脂に結合させ、およびプロテインA親和性クロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程;
(c)工程(b)において得られた溶出液、またはそれに由来し、かつ工程(b)の後に実行される1つもしくは複数の更なるプロセシング工程の後に得られた組成物を、陽イオン交換クロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンを陽イオン交換クロマトグラフィー樹脂に結合させ、および陽イオン交換クロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程;
(d)工程(c)において得られた溶出液を混合モードクロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンを混合モードクロマトグラフィー樹脂に結合させ、および混合モードクロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程
を含む。
(a)サンプルを陰イオン交換クロマトグラフィーに曝し、および陰イオン交換クロマトグラフィー樹脂に結合しない免疫グロブリンをフロースルー中に得る工程;
(b)工程(a)において得られたフロースルーを免疫グロブリン結合タンパク質/ペプチド親和性クロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンを免疫グロブリン結合タンパク質/ペプチド親和性クロマトグラフィー樹脂に結合させ、および免疫グロブリン結合タンパク質/ペプチド親和性クロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程;
(c)工程(b)において得られた溶出液、またはそれに由来し、かつ工程(b)の後に実行される1つもしくは複数の更なるプロセシング工程の後に得られた組成物を、陽イオン交換クロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンを陽イオン交換クロマトグラフィー
樹脂に結合させ、および陽イオン交換クロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程;
(d)工程(c)において得られた溶出液を混合モードクロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンを混合モードクロマトグラフィー樹脂に結合させ、および混合モードクロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程
を含む。
(a)サンプルを陰イオン交換クロマトグラフィーに曝し、および陰イオン交換媒体に結合しない免疫グロブリンをフロースルー中に得る工程;
(b)工程(a)において得られたフロースルーをプロテインA親和性クロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンをプロテインA親和性クロマトグラフィー樹脂に結合させ、およびプロテインA親和性クロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程;
(c)工程(b)において得られた溶出液、またはそれに由来し、かつ工程(b)の後に実行される1つもしくは複数の更なるプロセシング工程の後に得られた組成物を、陽イオン交換クロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンを陽イオン交換クロマトグラフィー樹脂に結合させ、および陽イオン交換クロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程;
(d)工程(c)において得られた溶出液を混合モードクロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンを混合モードクロマトグラフィー樹脂に結合させ、および混合モードクロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程
を含む。
(a)サンプルを陰イオン交換クロマトグラフィーに曝し、および陰イオン交換媒体に結合しない免疫グロブリンをフロースルー中に得る工程;
(b)工程(a)において得られたフロースルーを免疫グロブリン結合タンパク質/ペプチド親和性クロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンを免疫グロブリン結合タンパク質/ペプチド親和性クロマトグラフィー樹脂に結合させ、および免疫グロブリン結合タンパク質/ペプチド親和性クロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程;
(c)工程(b)において得られた溶出液、またはそれに由来し、かつ工程(b)の後に実行される1つもしくは複数の更なるプロセシング工程の後に得られた組成物を、陽イオン交換クロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンを陽イオン交換クロマトグラフィー樹脂に結合させ、および陽イオン交換クロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程;
(d)工程(c)において得られた溶出液を混合モードクロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンを混合モードクロマトグラフィー樹脂に結合させ、および混合モードクロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程
を含む。
含むサンプルから免疫グロブリンを精製する方法を提供し、この方法は、以下の順序で以下の工程:
(a)サンプルを陰イオン交換クロマトグラフィーに曝し、および陰イオン交換クロマトグラフィー樹脂に結合しない免疫グロブリンをフロースルー中に得る工程;
(b)工程(a)において得られたフロースルーを、プロテインA親和性クロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンをプロテインA親和性クロマトグラフィー樹脂に結合させ、およびプロテインA親和性クロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程、または混合モードクロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンを混合モードクロマトグラフィー樹脂に結合させ、および混合モードクロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程;
(c)工程(b)において得られた溶出液、またはそれに由来し、かつ工程(b)の後に実行される1つもしくは複数の更なるプロセシング工程の後に得られた組成物を、陽イオン交換クロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンを陽イオン交換クロマトグラフィー樹脂に結合させ、および陽イオン交換クロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程;
(d)工程(c)において得られた溶出液を混合モードクロマトグラフィーに曝して、混合モードクロマトグラフィー樹脂に結合しない免疫グロブリンをフロースルー中に得る工程
を含む。
(a)サンプルを陰イオン交換クロマトグラフィーに曝し、および陰イオン交換クロマトグラフィー樹脂に結合しない免疫グロブリンをフロースルー中に得る工程;
(b)工程(a)において得られたフロースルーをプロテインA親和性クロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンをプロテインA親和性クロマトグラフィー樹脂に結合させ、およびプロテインA親和性クロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程;
(c)工程(b)において得られた溶出液、またはそれに由来し、かつ工程(b)の後に実行される1つもしくは複数の更なるプロセシング工程の後に得られた組成物を、陽イオン交換クロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンを陽イオン交換クロマトグラフィー樹脂に結合させ、および陽イオン交換クロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程;
(d)工程(c)において得られた溶出液を、混合モードクロマトグラフィー樹脂のリガンドがマルチモード強陰イオン交換体である混合モードクロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンを混合モードクロマトグラフィー樹脂に結合させ、および混合モードクロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程
を含む。
(a)サンプルを陰イオン交換クロマトグラフィーに曝し、および陰イオン交換クロマトグラフィー樹脂に結合しない免疫グロブリンをフロースルー中に得る工程;
(b)工程(a)において得られたフロースルーをプロテインA親和性クロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンをプロテインA親和性クロマトグラフィー樹脂に結合させ、およびプロテインA親和性クロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによっ
て溶出液中に免疫グロブリンを得る工程;
(c)工程(b)において得られた溶出液、またはそれに由来し、かつ工程(b)の後に実行される1つもしくは複数の更なるプロセシング工程の後に得られた組成物を、陽イオン交換クロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンを陽イオン交換クロマトグラフィー樹脂に結合させ、および陽イオン交換クロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程;
(d)工程(c)において得られた溶出液を、混合モードクロマトグラフィー樹脂のリガンドがマルチモード強陰イオン交換体である混合モードクロマトグラフィーに曝して、混合モードクロマトグラフィー樹脂に結合しない免疫グロブリンをフロースルー中に得る工程
を含む。
(a)サンプルを、陰イオン交換クロマトグラフィーのリガンドが−N(CH3)3 +である陰イオン交換クロマトグラフィーに曝し、および陰イオン交換クロマトグラフィー樹脂に結合しない免疫グロブリンをフロースルー中に得る工程;
(b)工程(a)において得られたフロースルーを、プロテインA親和性クロマトグラフィー樹脂のリガンドがアルカリ安定化プロテインA誘導体であるプロテインA親和性クロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンをプロテインA親和性クロマトグラフィー樹脂に結合させ、およびプロテインA親和性クロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程;
(c)工程(b)において得られた溶出液、またはそれに由来し、かつ工程(b)の後に実行される1つもしくは複数の更なるプロセシング工程の後に得られた組成物を、陽イオン交換クロマトグラフィーのリガンドがスルホプロピルである陽イオン交換クロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンを陽イオン交換クロマトグラフィー樹脂に結合させ、および陽イオン交換クロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程;
(d)工程(c)において得られた溶出液を、混合モードクロマトグラフィー樹脂のリガンドがマルチモード強陰イオン交換体である混合モードクロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンを混合モードクロマトグラフィー樹脂に結合させ、および混合モードクロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程
を含む。
(a)サンプルを、陰イオン交換クロマトグラフィーのリガンドが−N(CH3)3 +である陰イオン交換クロマトグラフィーに曝し、および陰イオン交換クロマトグラフィー樹脂に結合しない免疫グロブリンをフロースルー中に得る工程;
(b)工程(a)において得られたフロースルーを免疫グロブリン結合タンパク質/ペプチド親和性クロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンを免疫グロブリン結合タンパク質/ペプチド親和性クロマトグラフィー樹脂に結合させ、および免疫グロブリン結合タンパク質/ペプチド親和性クロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程;
(c)工程(b)において得られた溶出液、またはそれに由来し、かつ工程(b)の後に実行される1つもしくは複数の更なるプロセシング工程の後に得られた組成物を、陽イオン交換クロマトグラフィーのリガンドがスルホプロピルである陽イオン交換クロマトグラ
フィーに曝して、免疫グロブリンを陽イオン交換クロマトグラフィー樹脂に結合させ、および陽イオン交換クロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程;
(d)工程(c)において得られた溶出液を、混合モードクロマトグラフィー樹脂のリガンドがマルチモード強陰イオン交換体である混合モードクロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンを混合モードクロマトグラフィー樹脂に結合させ、および混合モードクロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程
を含む。
(a)サンプルを陰イオン交換クロマトグラフィーに曝し、および陰イオン交換媒体に結合しない免疫グロブリンをフロースルー中に得る工程;
(b)工程(a)において得られたフロースルーを、プロテインA親和性クロマトグラフィー樹脂のリガンドがアルカリ安定化プロテインA誘導体であるプロテインA親和性クロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンをプロテインA親和性クロマトグラフィー樹脂に結合させ、およびプロテインA親和性クロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程;
(c)工程(b)において得られた溶出液、またはそれに由来し、かつ工程(b)の後に実行される1つもしくは複数の更なるプロセシング工程の後に得られた組成物を、陽イオン交換クロマトグラフィーのリガンドがスルホプロピルである陽イオン交換クロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンを陽イオン交換クロマトグラフィー樹脂に結合させ、および陽イオン交換クロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程;
(d)工程(c)において得られた溶出液を、混合モードクロマトグラフィー樹脂のリガンドがマルチモード強陰イオン交換体である混合モードクロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンを混合モードクロマトグラフィー樹脂に結合させ、および混合モードクロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程
を含む。
(a)サンプルを陰イオン交換クロマトグラフィーに曝し、および陰イオン交換媒体に結合しない免疫グロブリンをフロースルー中に得る工程;
(b)工程(a)において得られたフロースルーを免疫グロブリン結合タンパク質/ペプチド親和性クロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンを免疫グロブリン結合タンパク質/ペプチド親和性クロマトグラフィー樹脂に結合させ、および免疫グロブリン結合タンパク質/ペプチド親和性クロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程;
(c)工程(b)において得られた溶出液、またはそれに由来し、かつ工程(b)の後に実行される1つもしくは複数の更なるプロセシング工程の後に得られた組成物を、陽イオン交換クロマトグラフィーのリガンドがスルホプロピルである陽イオン交換クロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンを陽イオン交換クロマトグラフィー樹脂に結合させ、および陽イオン交換クロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程;
(d)工程(c)において得られた溶出液を、混合モードクロマトグラフィー樹脂のリガ
ンドがマルチモード強陰イオン交換体である混合モードクロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンを混合モードクロマトグラフィー樹脂に結合させ、および混合モードクロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程
を含む。
(a)サンプルを、陰イオン交換クロマトグラフィーのリガンドが−N(CH3)3 +である陰イオン交換クロマトグラフィーに曝し、および陰イオン交換クロマトグラフィー樹脂に結合しない免疫グロブリンをフロースルー中に得る工程;
(b)工程(a)において得られたフロースルーを、プロテインA親和性クロマトグラフィー樹脂のリガンドがアルカリ安定化プロテインA誘導体であるプロテインA親和性クロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンをプロテインA親和性クロマトグラフィー樹脂に結合させ、およびプロテインA親和性クロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程;
(c)工程(b)において得られた溶出液、またはそれに由来し、かつ工程(b)の後に実行される1つもしくは複数の更なるプロセシング工程の後に得られた組成物を、陽イオン交換クロマトグラフィーのリガンドがスルホプロピルである陽イオン交換クロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンを陽イオン交換クロマトグラフィー樹脂に結合させ、および陽イオン交換クロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程;
(d)工程(c)において得られた溶出液を、混合モードクロマトグラフィー樹脂のリガンドがマルチモード強陰イオン交換体である混合モードクロマトグラフィーに曝して、混合モードクロマトグラフィー樹脂に結合しない免疫グロブリンをフロースルー中に得る工程
を含む。
(a)サンプルを、陰イオン交換クロマトグラフィーのリガンドが−N(CH3)3 +である陰イオン交換クロマトグラフィーに曝し、および陰イオン交換クロマトグラフィー樹脂に結合しない免疫グロブリンをフロースルー中に得る工程;
(b)工程(a)において得られたフロースルーを免疫グロブリン結合タンパク質/ペプチド親和性クロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンを免疫グロブリン結合タンパク質/ペプチド親和性クロマトグラフィー樹脂に結合させ、および免疫グロブリン結合タンパク質/ペプチド親和性クロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程;
(c)工程(b)において得られた溶出液、またはそれに由来し、かつ工程(b)の後に実行される1つもしくは複数の更なるプロセシング工程の後に得られた組成物を、陽イオン交換クロマトグラフィーのリガンドがスルホプロピルである陽イオン交換クロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンを陽イオン交換クロマトグラフィー樹脂に結合させ、および陽イオン交換クロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程;
(d)工程(c)において得られた溶出液を、混合モードクロマトグラフィー樹脂のリガンドがマルチモード強陰イオン交換体である混合モードクロマトグラフィーに曝して、混合モードクロマトグラフィー樹脂に結合しない免疫グロブリンをフロースルー中に得る工程
を含む。
(a)サンプルを陰イオン交換クロマトグラフィーに曝し、および陰イオン交換媒体に結合しない免疫グロブリンをフロースルー中に得る工程;
(b)工程(a)において得られたフロースルーを、プロテインA親和性クロマトグラフィー樹脂のリガンドがアルカリ安定化プロテインA誘導体であるプロテインA親和性クロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンをプロテインA親和性クロマトグラフィー樹脂に結合させ、およびプロテインA親和性クロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程;
(c)工程(b)において得られた溶出液、またはそれに由来し、かつ工程(b)の後に実行される1つもしくは複数の更なるプロセシング工程の後に得られた組成物を、陽イオン交換クロマトグラフィーのリガンドがスルホプロピルである陽イオン交換クロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンを陽イオン交換クロマトグラフィー樹脂に結合させ、および陽イオン交換クロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程;
(d)工程(c)において得られた溶出液を、混合モードクロマトグラフィー樹脂のリガンドがマルチモード強陰イオン交換体である混合モードクロマトグラフィーに曝して、混合モードクロマトグラフィー媒体に結合しない免疫グロブリンをフロースルー中に得る工程
を含む。
(a)サンプルを陰イオン交換クロマトグラフィーに曝し、および陰イオン交換媒体に結合しない免疫グロブリンをフロースルー中に得る工程;
(b)工程(a)において得られたフロースルーを免疫グロブリン結合タンパク質/ペプチド親和性クロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンを免疫グロブリン結合タンパク質/ペプチド親和性クロマトグラフィー樹脂に結合させ、および免疫グロブリン結合タンパク質/ペプチド親和性クロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程;
(c)工程(b)において得られた溶出液、またはそれに由来し、かつ工程(b)の後に実行される1つもしくは複数の更なるプロセシング工程の後に得られた組成物を、陽イオン交換クロマトグラフィーのリガンドがスルホプロピルである陽イオン交換クロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンを陽イオン交換クロマトグラフィー樹脂に結合させ、および陽イオン交換クロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程;
(d)工程(c)において得られた溶出液を、混合モードクロマトグラフィー樹脂のリガンドがマルチモード強陰イオン交換体である混合モードクロマトグラフィーに曝して、混合モードクロマトグラフィー媒体に結合しない免疫グロブリンをフロースルー中に得る工程
を含む。
(a)サンプルを陰イオン交換クロマトグラフィーに曝し、および陰イオン交換クロマト
グラフィー樹脂に結合しない免疫グロブリンをフロースルー中に得る工程;
(b)工程(a)において得られたフロースルーを混合モードクロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンを混合モードクロマトグラフィー樹脂に結合させ、および混合モードクロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程;
(b2)工程(b)において得られたフロースルーをプロテインA親和性クロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンをプロテインA親和性クロマトグラフィー樹脂に結合させ、およびプロテインA親和性クロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程;
(c)工程(b2)において得られた溶出液、またはそれに由来し、かつ工程(b2)の後に実行される1つもしくは複数の更なるプロセシング工程の後に得られた組成物を、陽イオン交換クロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンを陽イオン交換クロマトグラフィー樹脂に結合させ、および陽イオン交換クロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程;
(d)工程(c)において得られた溶出液を混合モードクロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンを混合モードクロマトグラフィー樹脂に結合させ、および混合モードクロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程
を含む。
(a)サンプルを陰イオン交換クロマトグラフィーに曝し、および陰イオン交換クロマトグラフィー樹脂に結合しない免疫グロブリンをフロースルー中に得る工程;
(b)工程(a)において得られたフロースルーを混合モードクロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンを混合モードクロマトグラフィー樹脂に結合させ、および混合モードクロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程;
(b2)工程(b)において得られたフロースルーをプロテインA親和性クロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンをプロテインA親和性クロマトグラフィー樹脂に結合させ、およびプロテインA親和性クロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程;
(c)工程(b2)において得られた溶出液、またはそれに由来し、かつ工程(b2)の後に実行される1つもしくは複数の更なるプロセシング工程の後に得られた組成物を、陽イオン交換クロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンを陽イオン交換クロマトグラフィー樹脂に結合させ、および陽イオン交換クロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程;
(d)工程(c)において得られた溶出液を混合モードクロマトグラフィーに曝して、混合モードクロマトグラフィー樹脂に結合しない免疫グロブリンをフロースルー中に得る工程
を含む。
(a)サンプルを陰イオン交換クロマトグラフィーに曝し、および陰イオン交換クロマトグラフィー樹脂に結合しない免疫グロブリンをフロースルー中に得る工程;
(b)工程(a)において得られたフロースルーを、リガンドが4−メルカプト−エチル−ピリジンである混合モードクロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンを混合モード
クロマトグラフィー樹脂に結合させ、および混合モードクロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程;
(c)工程(b)において得られた溶出液、またはそれに由来し、かつ工程(b)の後に実行される1つもしくは複数の更なるプロセシング工程の後に得られた組成物を、陽イオン交換クロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンを陽イオン交換クロマトグラフィー樹脂に結合させ、および陽イオン交換クロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程;
(d)工程(c)において得られた溶出液を混合モードクロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンを混合モードクロマトグラフィー樹脂に結合させ、および混合モードクロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程
を含む。
(a)サンプルを陰イオン交換クロマトグラフィーに曝し、および陰イオン交換クロマトグラフィー樹脂に結合しない免疫グロブリンをフロースルー中に得る工程;
(b)工程(a)において得られたフロースルーを、リガンドが4−メルカプト−エチル−ピリジンである混合モードクロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンを混合モードクロマトグラフィー樹脂に結合させ、および混合モードクロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程;
(c)工程(b)において得られた溶出液、またはそれに由来し、かつ工程(b)の後に実行される1つもしくは複数の更なるプロセシング工程の後に得られた組成物を、陽イオン交換クロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンを陽イオン交換クロマトグラフィー樹脂に結合させ、および陽イオン交換クロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程;
(d)工程(c)において得られた溶出液を混合モードクロマトグラフィーに曝して、混合モードクロマトグラフィー樹脂に結合しない免疫グロブリンをフロースルー中に得る工程
を含む。
混合モードクロマトグラフィー樹脂カプトアドヒア(CaptoAdhere)の特徴は、以下の通りである。
官能基 マルチモード強陰イオン交換体
総イオン収容能力 0.09〜0.12mmol Cl−/ml媒体
粒子サイズ 75μm(d50v)
流速 粘性が<0.3MPa(3bar)にて水と同じプロセスバッファを用いて、20cmベッド高の1m直径カラム内で20℃にて少なくとも600cm/時。
−短期間 2〜14
−長期間 3〜12
作動温度 4〜30℃
化学的安定性 通常用いられる全ての水溶性バッファ、1M酢酸、1M水酸化ナトリウム
回避 酸化剤、陰イオン性洗剤
混合モードクロマトグラフィー樹脂カプトアドヒア(CaptoAdhere)を結合端部溶出モードでロードする場合に、以下の条件が適用されてよい:pH6〜pH9、好ましくはpH7.0〜8.5;導電率0.5〜10mS/cm、好ましくは1〜4mS/cm。1つまたは複数の洗浄工程が用いられてよい。条件は、免疫グロブリンのpIによって決まる。
(a)サンプルを、陰イオン交換クロマトグラフィーのリガンドが−N(CH3)3 +である陰イオン交換クロマトグラフィーに曝し、および陰イオン交換クロマトグラフィー樹脂に結合しない免疫グロブリンをフロースルー中に得る工程;
(b)工程(a)において得られたフロースルーを、プロテインA親和性クロマトグラフィー樹脂のリガンドがアルカリ安定化プロテインA誘導体であるプロテインA親和性クロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンをプロテインA親和性クロマトグラフィー樹脂に結合させ、およびプロテインA親和性クロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程;
(c)工程(b)において得られた溶出液、またはそれに由来し、かつ工程(b)の後に実行される1つもしくは複数の更なるプロセシング工程の後に得られた組成物を、陽イオン交換クロマトグラフィーのリガンドがスルホプロピルである陽イオン交換クロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンを陽イオン交換クロマトグラフィー樹脂に結合させ、および陽イオン交換クロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程;
(d)工程(c)において得られた溶出液を、混合モードクロマトグラフィー樹脂のリガンドがN−ベンジル−N−メチルエタノールアミンである混合モードクロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンを混合モードクロマトグラフィー樹脂に結合させ、および混合モードクロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程
を含む。
(a)サンプルを、陰イオン交換クロマトグラフィーのリガンドが−N(CH3)3 +である陰イオン交換クロマトグラフィーに曝し、および陰イオン交換クロマトグラフィー樹
脂に結合しない免疫グロブリンをフロースルー中に得る工程;
(b)工程(a)において得られたフロースルーを免疫グロブリン結合タンパク質/ペプチド親和性クロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンを免疫グロブリン結合タンパク質/ペプチド親和性クロマトグラフィー樹脂に結合させ、および免疫グロブリン結合タンパク質/ペプチド親和性クロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程;
(c)工程(b)において得られた溶出液、またはそれに由来し、かつ工程(b)の後に実行される1つもしくは複数の更なるプロセシング工程の後に得られた組成物を、陽イオン交換クロマトグラフィーのリガンドがスルホプロピルである陽イオン交換クロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンを陽イオン交換クロマトグラフィー樹脂に結合させ、および陽イオン交換クロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程;
(d)工程(c)において得られた溶出液を、混合モードクロマトグラフィー樹脂のリガンドがN−ベンジル−N−メチルエタノールアミンである混合モードクロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンを混合モードクロマトグラフィー樹脂に結合させ、および混合モードクロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程
を含む。
(a)サンプルを陰イオン交換クロマトグラフィーに曝し、および陰イオン交換媒体に結合しない免疫グロブリンをフロースルー中に得る工程;
(b)工程(a)において得られたフロースルーを、プロテインA親和性クロマトグラフィー樹脂のリガンドがアルカリ安定化プロテインA誘導体であるプロテインA親和性クロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンをプロテインA親和性クロマトグラフィー樹脂に結合させ、およびプロテインA親和性クロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程;
(c)工程(b)において得られた溶出液、またはそれに由来し、かつ工程(b)の後に実行される1つもしくは複数の更なるプロセシング工程の後に得られた組成物を、陽イオン交換クロマトグラフィーのリガンドがスルホプロピルである陽イオン交換クロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンを陽イオン交換クロマトグラフィー樹脂に結合させ、および陽イオン交換クロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程;
(d)工程(c)において得られた溶出液を、混合モードクロマトグラフィー樹脂のリガンドがN−ベンジル−N−メチルエタノールアミンである混合モードクロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンを混合モードクロマトグラフィー樹脂に結合させ、および混合モードクロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程
を含む。
(a)サンプルを陰イオン交換クロマトグラフィーに曝し、および陰イオン交換媒体に結合しない免疫グロブリンをフロースルー中に得る工程;
(b)工程(a)において得られたフロースルーを免疫グロブリン結合タンパク質/ペプチド親和性クロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンを免疫グロブリン結合タンパク質/ペプチド親和性クロマトグラフィー樹脂に結合させ、および免疫グロブリン結合タン
パク質/ペプチド親和性クロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程;
(c)工程(b)において得られた溶出液、またはそれに由来し、かつ工程(b)の後に実行される1つもしくは複数の更なるプロセシング工程の後に得られた組成物を、陽イオン交換クロマトグラフィーのリガンドがスルホプロピルである陽イオン交換クロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンを陽イオン交換クロマトグラフィー樹脂に結合させ、および陽イオン交換クロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程;
(d)工程(c)において得られた溶出液を、混合モードクロマトグラフィー樹脂のリガンドがN−ベンジル−N−メチルエタノールアミンである混合モードクロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンを混合モードクロマトグラフィー樹脂に結合させ、および混合モードクロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程
を含む。
別の実施形態において、精製は、第1のクロマトグラフィー工程の前に1つまたは複数の濾過工程を含んでよい。さらに好ましい実施形態において、精製は、1つの遠心分離工程および1つまたは複数の濾過工程を含んでよい。好ましい実施形態において、第1のクロマトグラフィー工程は、デプス濾過および精密濾過工程の後にある。より好ましい実施形態において、第1のクロマトグラフィー工程は、細胞分離工程、デプス濾過工程、および精密濾過工程の後にある。
(i)サンプルを遠心分離して、上澄み中に免疫グロブリンを得る工程;
(ii)工程(i)において得られた上澄みをデプス濾過して、濾液中に免疫グロブリンを得る工程;
(iii)工程(ii)において得られた免疫グロブリンを精密濾過して、濾液中に免疫グロブリンを得る工程;
(a)工程(iii)の濾液を陰イオン交換クロマトグラフィーに曝し、および陰イオン交換クロマトグラフィー樹脂に結合しない免疫グロブリンをフロースルー中に得る工程;(b)工程(a)において得られたフロースルーを、プロテインA親和性クロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンをプロテインA親和性クロマトグラフィー樹脂に結合させ、およびプロテインA親和性クロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程、または混合モードクロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンを混合モードクロマトグラフィー樹脂に結合させ、および混合モードクロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程;
(c)工程(b)において得られた溶出液、またはそれに由来し、かつ工程(b)の後に
実行される1つもしくは複数の更なるプロセシング工程の後に得られた組成物を、陽イオン交換クロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンを陽イオン交換クロマトグラフィー樹脂に結合させ、および陽イオン交換クロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程
を含む。
(i)サンプルを遠心分離して、上澄み中に免疫グロブリンを得る工程;
(ii)工程(i)において得られた上澄みをデプス濾過して、濾液中に免疫グロブリンを得る工程;
(iii)工程(ii)において得られた免疫グロブリンを精密濾過して、濾液中に免疫グロブリンを得る工程;
(a)工程(iii)の濾液を陰イオン交換クロマトグラフィーに曝し、および陰イオン交換クロマトグラフィー樹脂に結合しない免疫グロブリンをフロースルー中に得る工程;(b)工程(a)において得られたフロースルーを混合モードクロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンを混合モードクロマトグラフィー樹脂に結合させ、および混合モードクロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程;
(b2)工程(b)において得られたフロースルーをプロテインA親和性クロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンをプロテインA親和性クロマトグラフィー樹脂に結合させ、およびプロテインA親和性クロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程;
(c)工程(b2)において得られた溶出液、またはそれに由来し、かつ工程(b2)の後に実行される1つもしくは複数の更なるプロセシング工程の後に得られた組成物を、陽イオン交換クロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンを陽イオン交換クロマトグラフィー樹脂に結合させ、および陽イオン交換クロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程;
(d)工程(c)において得られた溶出液を混合モードクロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンを混合モードクロマトグラフィー樹脂に結合させ、および混合モードクロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程
を含む。
(i)サンプルを遠心分離して、上澄み中に免疫グロブリンを得る工程;
(ii)工程(i)において得られた上澄みをデプス濾過して、濾液中に免疫グロブリンを得る工程;
(iii)工程(ii)において得られた免疫グロブリンを精密濾過して、濾液中に免疫グロブリンを得る工程;
(a)工程(iii)の濾液を陰イオン交換クロマトグラフィーに曝し、および陰イオン交換クロマトグラフィー樹脂に結合しない免疫グロブリンをフロースルー中に得る工程;(b)工程(a)において得られたフロースルーを混合モードクロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンを混合モードクロマトグラフィー樹脂に結合させ、および混合モードクロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程;
(b2)工程(b)において得られたフロースルーをプロテインA親和性クロマトグラフ
ィーに曝して、免疫グロブリンをプロテインA親和性クロマトグラフィー樹脂に結合させ、およびプロテインA親和性クロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程;
(c)工程(b2)において得られた溶出液、またはそれに由来し、かつ工程(b2)の後に実行される1つもしくは複数の更なるプロセシング工程の後に得られた組成物を、陽イオン交換クロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンを陽イオン交換クロマトグラフィー樹脂に結合させ、および陽イオン交換クロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程;
(d)工程(c)において得られた溶出液を混合モードクロマトグラフィーに曝して、混合モードクロマトグラフィー樹脂に結合しない免疫グロブリンをフロースルー中に得る工程
を含む。
さらに、本発明の方法は、1つまたは複数のデプス濾過工程を含んでよい。膜の表面上に粒子を保持することによって分離する膜フィルタと対照的に、デプスフィルタは、繊維またはビーズのマトリックスからなり、表面上というよりもむしろマトリックスの全体を通して分離が行われる。デプスフィルタの例として、限定されないが、SXLP700416およびSXLPDE2408SPフィルタカプセル(ポール・コーポレーション(Pall Corporation))、ミリスタックプラス(Millistak+)XOHC、FOHC、DOHC、AIHCおよびBIHCポッド(Pod)フィルタ(EMDミリポア(EMD Millipore))、またはゼータ20プラス(Zeta 20 Plus)30ZA/60ZA、60ZN90ZA、デリピド(delipid)、VR07およびVR05フィルタ(3M)が挙げられる。
さらに、本発明の方法は、1つまたは複数の精密濾過、限外濾過、および/またはナノ濾過工程を含んでよい。限外濾過は、静水圧が液体を半透膜に押しつける膜濾過の形態である。高分子量の懸濁固体および溶質が保持される一方で、水および低分子量の溶質が膜を通過する。限外濾過は、巨大分子溶液、とりわけタンパク質溶液を分離、精製、かつ濃縮する、通常使用される方法である。限外濾過は、透析濾過と組み合わされてよい。このモードは、反復される、または連続的な希釈および再濃縮を介して溶液から塩および他の小種を除去するためのバッファ交換に適している。限外濾過は、とりわけ大サンプル容量をプロセシングするためのタンジェント流濾過系またはクロスタンジェント流濾過系(TFFまたはTF−UF)における積層膜で実行されてよい。あるいはまた、中空の繊維系が限外濾過に通常用いられる。膜カットオフサイズは、約1.66×10−24〜4.98×10−22kg(1〜300kD)に及ぶ。免疫グロブリンについて、限外濾過膜の典型的なカットオフは約1.66×10−23〜1.66×10−22kg(10〜100kD)である。本発明の枠組みにおいて、UF膜について、約4.98×10−23または8.30×10−23kg(30または50kD)の分子量カットオフが好ましい。精密濾過は、孔サイズが約0.1〜10μmである膜を用いる粒子濾過法である。環境に特別な要件を与える滅菌濾過について、孔サイズが約0.2μmである滅菌済みミクロフ
ィルタが用いられる。孔サイズがより大きい(0.45μm、3μm)付加的なプレフィルタの使用が一般的である。これは、小さな孔サイズのフィルタの迅速なブロッキングによって、流の減少を防止する。最後に、生物薬剤生産において、ナノ濾過が主にウィルス濾過に用いられ、哺乳類の細胞培養において生産される治療タンパク質の安全性に必要とされる。ナノ濾過工程は通常、大半が精製済み免疫グロブリンで満たされているダウンストリーミングの終わりに実行される。頻繁に用いられるナノフィルタの孔サイズは、15〜35nmに及ぶ(プラノバ(Planova(商標))、日本旭化成株式会社(Asahi Kasei);またはビレソルブ(Viresolve(商標))、独国EMD−ミリポア(EMD−Millipore))。
ナノ濾過工程は、エンベロープウィルスに関して少なくとも4のlog10減少率を、かつ/または非エンベロープウィルスに関して少なくとも5のlog10減少率をもたらし得る。
(a)サンプルを陰イオン交換クロマトグラフィーに曝し、および陰イオン交換クロマトグラフィー樹脂に結合しない免疫グロブリンをフロースルー中に得る工程;
(b)工程(a)において得られたフロースルーをプロテインA親和性クロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンをプロテインA親和性クロマトグラフィー樹脂に結合させ、およびプロテインA親和性クロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程;
(c)工程(b)において得られた溶出液を2.5〜4.5の低いpHにおいて、規定された時間にわたりインキュベートする工程
を含み、この方法は、工程(a)および工程(c)について、エンベロープウィルスに関して少なくとも10の累積log10減少率をもたらす。
(a)サンプルを陰イオン交換クロマトグラフィーに曝し、および陰イオン交換クロマトグラフィー樹脂に結合しない免疫グロブリンをフロースルー中に得る工程;
(b)工程(a)において得られたフロースルーをプロテインA親和性クロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンをプロテインA親和性クロマトグラフィー樹脂に結合させ、およびプロテインA親和性クロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程;
(c)工程(b)において得られた溶出液を2.5〜4.5の低いpHにおいて、規定さ
れた時間にわたりインキュベートする工程;
(d)工程(c)のインキュベーション後の溶出液、またはそれに由来し、かつ工程(c)の後に実行される1つもしくは複数の更なるプロセシング工程の後に得られた組成物を、ナノ濾過に曝す工程
を含み、この方法は、工程(a)および工程(d)について、非エンベロープウィルスに関して少なくとも10の累積log10減少率をもたらし、かつ/またはこの方法は、工程、(a)、工程(c)および工程(d)について、非エンベロープウィルスおよび/もしくはエンベロープウィルスに関して少なくとも15の累積log10減少率をもたらす。
(a)サンプルを陰イオン交換クロマトグラフィーに曝し、および陰イオン交換クロマトグラフィー樹脂に結合しない免疫グロブリンをフロースルー中に得る工程;
(b)工程(a)において得られたフロースルーをプロテインA親和性クロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンをプロテインA親和性クロマトグラフィー樹脂に結合させ、およびプロテインA親和性クロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程;
(c)工程(b)において得られた溶出液を2.5〜4.5の低いpHにおいて、規定された時間にわたりインキュベートする工程;
(c2)工程(c)において得られた溶出液、またはそれに由来し、かつ工程(c)の後に実行される1つもしくは複数の更なるプロセシング工程の後に得られた組成物を、陽イオン交換クロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンを陽イオン交換クロマトグラフィー樹脂に結合させ、および陽イオン交換クロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程
を含み、この方法は、工程(a)、工程(c)および工程(c2)について、エンベロープウィルスに関して少なくとも15の累積log10減少率をもたらす。
(a)サンプルを陰イオン交換クロマトグラフィーに曝し、および陰イオン交換クロマトグラフィー樹脂に結合しない免疫グロブリンをフロースルー中に得る工程;
(b)工程(a)において得られたフロースルーをプロテインA親和性クロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンをプロテインA親和性クロマトグラフィー樹脂に結合させ、およびプロテインA親和性クロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程;
(c)工程(b)において得られた溶出液を2.5〜4.5の低いpHにおいて、規定された時間にわたりインキュベートする工程;
(c2)工程(c)において得られた溶出液、またはそれに由来し、かつ工程(c)の後に実行される1つもしくは複数の更なるプロセシング工程の後に得られた組成物を、陽イオン交換クロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンを陽イオン交換クロマトグラフィー樹脂に結合させ、および陽イオン交換クロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程;
(d)工程(c2)のインキュベーション後の溶出液、またはそれに由来し、かつ工程(c2)の後に実行される1つもしくは複数の更なるプロセシング工程の後に得られた組成物を、ナノ濾過に曝す工程
を含み、この方法は、工程(a)、工程(c)および工程(c2)について、エンベロープウィルスに関して少なくとも15の累積log10減少率をもたらし、かつ/または工程(a)、工程(c)、工程(c2)および工程(d)について、エンベロープウィルスに関して少なくとも20の累積log10減少率をもたらし、かつ/または工程(a)、
工程(c2)および工程(d)について、非エンベロープウィルスに関して少なくとも12の累積log10減少率をもたらす。
(a)サンプルを陰イオン交換クロマトグラフィーに曝し、および陰イオン交換クロマトグラフィー樹脂に結合しない免疫グロブリンをフロースルー中に得る工程;
(b)工程(a)において得られたフロースルーを、プロテインA親和性クロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンをプロテインA親和性クロマトグラフィー樹脂に結合させ、およびプロテインA親和性クロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程、または混合モードクロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンを混合モードクロマトグラフィー樹脂に結合させ、および混合モードクロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程;および
工程(b)において得られた溶出液、またはそれに由来し、かつ工程(b)の後に実行される1つもしくは複数の更なるプロセシング工程の後に得られた組成物を、ナノ濾過に曝す工程
を含み、この方法は、工程a)および工程d)について、エンベロープウィルスおよび/または非エンベロープウィルスに関して少なくとも10の累積log10減少率をもたらす。
(a)サンプルを陰イオン交換クロマトグラフィーに曝し、および陰イオン交換クロマトグラフィー樹脂に結合しない免疫グロブリンをフロースルー中に得る工程;
(b)工程(a)において得られたフロースルーをプロテインA親和性クロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンをプロテインA親和性クロマトグラフィー樹脂に結合させ、およびプロテインA親和性クロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程、または混合モードクロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンを混合モードクロマトグラフィー樹脂に結合させ、および混合モードクロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程;
(c2)工程(b)において得られた溶出液、またはそれに由来し、かつ工程(b)の後に実行される1つもしくは複数の更なるプロセシング工程の後に得られた組成物を、陽イオン交換クロマトグラフィーに曝して、免疫グロブリンを陽イオン交換クロマトグラフィー樹脂に結合させ、および陽イオン交換クロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に免疫グロブリンを得る工程;および
工程(c2)において得られた溶出液、またはそれに由来し、かつ工程(c2)の後に実行される1つもしくは複数の更なるプロセシング工程の後に得られた組成物を、ナノ濾過に曝す工程
を含み、この方法は、工程a)、工程c2)および工程d)について、エンベロープウィルスに関して少なくとも15の累積log10減少率をもたらし、および/またはこの方法は、工程(a)、工程(c2)および工程(d)について、非エンベロープウィルスに関して少なくとも13の累積log10減少率をもたらす。
本明細書中で言及する用語「規定された時間」のインキュベーションは、少なくとも30分間、少なくとも40分間、少なくとも50分間、少なくとも60分間のインキュベーション、好ましくは30分〜90分間、より好ましくは45分〜75分間、最も好ましく
は60分間のインキュベーションを指す。
用語「エンベロープウィルス」は、リポタンパク質エンベロープがウィルスの核タンパク質コアを取り囲んでいるあらゆるウィルスを、例えば、ヘルペスウィルス(Herpesvirus)、サイトウィルス(Cytovirus)、ポックスウィルス(Poxvirus)、アレナウィルス(Arenavirus)、アルテリウィルス(Arterivirus)、ヘパドナウィルス(Hepadnavirus)、フラビウィルス(Flavivirus)、トガウィルス(Togavirus)、コロナウィルス(Coronavirus)、オルソミクソウィルス(Orthomyxovirus)、パラミクソウィルス(Paramyxovirus)、ラブドウィルス(Rhabdovirus)、ブニアウィルス(Bunyavirus)、フィロウィルス(Filovirus)、バキュロウィルス(Baculovirus)、イリドウィルス(Iridovirus)、およびレトロウィルス(Retrovirus)を指し、ヒト病原体、および実験に用いられたモデルウィルスのマウス白血病ウィルス(MuLV:Murine Leukemia Virus)が挙げられる。
用語「免疫グロブリン」および「抗体」は、本明細書中で互換的に用いられる。免疫グロブリンは、所望の抗原結合活性を示す、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多特異的抗体(例えば二重特異的抗体)、およびそれらのフラグメントであってよい。天然の抗体は、様々な構造を有する分子である。例えば、天然のIgG抗体は、ジスルフィド
結合によって連結される2つの同じ軽鎖および2つの同じ重鎖で構成される約150,000グラム/モル(150,000ダルトン)のヘテロ四量体糖タンパク質である。N末端からC末端まで、各重鎖は、可変ドメイン(VH)を有し、3つまたは4つの定常ドメイン(CH1、CH2、CH3、および場合によってはCH4)が続く可変重ドメインまたは重鎖可変ドメインとも呼ばれる。同様に、N末端からC末端まで、各軽鎖は、可変ドメイン(VL)を有し、定常軽鎖(CL)ドメインが続く可変軽ドメインまたは軽鎖可変ドメインとも呼ばれる。抗体の軽鎖は、定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパ(κ)およびラムダ(λ)と呼ばれる2タイプの1つに割り当てられ得る。
molecule−3)、ロイコインテグリン接着因子、血小板糖タンパク質gp I
lb/IIIa、心臓ミオシン重鎖、副甲状腺ホルモン、スクレロスチン、MHC I、癌胚抗原(CEA:carcinoembryonic antigen)、アルファ−フェトプロテイン(AFP:alpha−fetoprotein)、腫瘍壊死因子(TNF:tumour necrosis factor)、Fc−y−1受容体、HLA−DR 10ベータ、HLA−DR抗原、L−セレクチン、ならびにIFN−γ。
本明細書中のモノクローナル抗体は、具体的に、重鎖および/または軽鎖の一部が、特定の種に由来する、または特定の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体中の対応する配列と同一である、あるいは相同である一方で、鎖の残りが、別の種に由来する、または別の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体中の対応する配列と同一である、あるいは相同である「キメラ」抗体(免疫グロブリン)、ならびに、所望の生物活性を示す限りにおいて、そのような抗体のフラグメントを含む。
好ましい実施形態において、サンプルは、組換えCHO細胞培養から得られる細胞培養上澄みに由来する。好ましくは、サンプルは、増殖相にある組換え細胞培養から得られる。
特異的な実施形態において、工程(a)の陰イオン交換クロマトグラフィー樹脂は、再使用可能である。
用語「マトリックス」または「固相」が意味するところは、リガンドが付着し得る非水性マトリックスである。本明細書中の注目するマトリックスは、通常、ガラス、セラミック、シリカ、セルロース、アガロース、メタクリレートポリマー、またはポリスチレンを含むものである。
「樹脂」は、タンパク質または少なくとも1つの夾雑物と相互作用し得る官能基(リガンド)が結合したマトリックスを含む、ビーズの形態のあらゆるクロマトグラフィー材料を意味する。例外は、典型的にはいかなるリガンドも付着していない、サイズ排除クロマトグラフィー用のゲルクロマトグラフィー樹脂である。樹脂は、異なるサイズのビーズとして供給されて、カラム内に充填されてよい。あるいはまた、プレ充填カラムが購入されてもよい。
「小規模」(「研究室規模」とも表される)は、免疫グロブリンを50g未満、免疫グロブリンを10g未満、または免疫グロブリンを1g未満含有するサンプルの精製を指す。「小規模」はまた、捕捉工程のカラムから溶出されたタンパク質が免疫グロブリン50g未満、免疫グロブリン10g未満、または免疫グロブリン1g未満になる精製プロセスを指す。
リンを300g超含有するサンプルの精製を指す。「大規模」はまた、捕捉工程のカラムから溶出されたタンパク質が免疫グロブリン50g超、免疫グロブリン100g超、免疫グロブリン200g超、または免疫グロブリン300g超になる精製プロセスを指す。
免疫グロブリンを精製する本発明の方法は、以下の実施例を参照することによって支持され、かつ例示される。これらの実施例が本発明の範囲を限定するものとして決して解釈されるべきでないことが強調されなければならない。
本発明の方法は、特定の抗体や、免疫グロブリンの発現のために用いる特定の宿主細胞には依存しない。収集における最大収率のために最適化された発現モードおよび選択された培養条件についても同様である。様々なモノクローナル抗体が、本発明の方法の開発中に用いられた。これらは、本発明の方法に従って、種々の規模で成功裡に精製された。表に示される選択実験のほとんどが、リツキシマブ、マウス−ヒトキメラ、抗CD20、IgG1抗体で実行された。また、一部の他の実験が、アダリムマブ、完全ヒト、抗TNFα、IgG1抗体で実行された。抗体は両方とも、様々な規模の流加培養において増殖するCHO細胞において、組換えにより発現させた。開発段階の実験は、主に、100Lの研究室規模から収集した培養液で実行した。実施例において用いた生産規模および最大培養容量は、1000Lであった。特に明記しない限り、規模は常に培養容量を指す。
以下の方法は、1000L規模について記載する。細胞および細胞残渣は、9600rpmにて100L/時の流速のLAPX404セパレータ(アルファ・ラヴァル(Alfa Laval))を用いて分離することによって除去した。分離した培養液は、以下のフィルタ(ポール・コーポレーション(Pall Corporation))によって順次濾過した:(i)フィルタカプセルSXLP700416SP、(ii)フィルタカプセルSXLPDE2408SP、および(iii)再度、フィルタカプセルSXLPDE2408SP。デプス濾過および精密濾過の両方の原理は、このフィルタ構成によって達成される。第1のクロマトグラフィーに先立って、濾過した培養液は、追加的に、ザルトポア(Sartopore)(商標)2/0.2μm膜フィルタ装置(ザルトリウス(Sartorius))を用いて、精密濾過にかけた。
様々な供給者からの一般的で潜在的に有用なプロセスクロマトグラフィー樹脂の比較的大きなコレクションを、プレクリーニング工程、捕捉工程、およびポリッシング工程としての広いスクリーニングプログラムにおける効率について、試験した(図2Aおよび図2C参照)。これは、本発明の開発の初期のステージ中に実行した。小さなカラム(10〜20ml)内に樹脂を充填し、リツキシマブを含むサンプルを、100Lの研究室規模から、分離および濾過(プレクリーニングおよび捕捉工程)後に直接的に、または、プロテインA溶出液(結合モードのポリッシング工程)からとった。プロテインAおよびプレクリーニングクロマトグラフィーの後に得られた陽イオン交換クロマトグラフィープールを、フロースルーモードのポリッシング工程に用いた。クロマトグラフィーランは、アクタ浄化システム(Akta Purifier System)(GEヘルスケア(GE Healthcare))で実行した。
E)、ポロスHQ(Poros HQ)、Qハイパーセル(Q HyperCel)、およびトヨパール・スーパQ650(Toyopearl Super Q 650)であった。充填カラムは、10mMトリスHCl、pH8.0で平衡化した。試験基準は、(i)夾雑物の破過までの通過サンプル容量に関する最大収容能力、(ii)再生(退色を含む)、および(iii)採取フロースルーのpH5.0未満の酸性化後の沈殿の程度であった。4つの樹脂が、プレクリーニング工程に用いるのに最も適していることが分かり(表1)、ヌヴィアQ(Nuvia Q)以外は類似した結果をもたらした。しかしながら、ヌヴィアQ(Nuvia Q)が明らかに優れていると判明し、好ましい樹脂である(表2)。
Pハイパーセル(MEP HyperCel)であった(表2)。
70S)、ウノスフェア・ラピッドS(Unosphere Rapid S)、ウノスフェア・ラピッドS40(Unosphere Rapid S40)、ヌヴィアS(Nuvia S)、ヌヴィアHR−S(Nuvia HR−S)、トヨパールSP650S(Toyopearl SP 650S)、トヨパール・ギガキャップS650S(Toyopearl GigaCap S 650S)、ミリポア・プロレスS(Millipore ProRes S)、およびフラクトゲルEMD SO3(Fractogel EMD SO3)。リツキシマブおよび少量の夾雑物を含み、平衡バッファで10mg/mlタンパク質濃度に調整したプロテインA(マブセレクト・シュア(MabSelect SuRe))溶出液をカラムにロードした。全ての樹脂を同程度に試験したわけではなかった。動的かつ特異的な結合能力(破過判定)の他にも、残留HCPおよび生産関連不純物(凝集体、不所望の電荷変異体)を分離する能力もまた研究した。溶出は、塩および/またはpH勾配を上げることで実行した。樹脂は、酸(電荷変異体)画分および塩基(凝集体)画分中の不純物の分離に関して、著しい差異を示した。この基準は、免疫グロブリンポリッシング工程の意図する目的であるため、重きを置いた。合計6つの樹脂が、ポリッシング工程に適していることが分かった(表1)。ポロス50HS(Poros 50 HS)、SPセファロースHP(SP Sepharose HP)、カプトSPインプレス(Capto SP ImpRes)、ヌヴィアHR−S(Nuvia
HR−S)、トヨパールSP650S(Toyopearl SP 650S)、およびフラクトゲルEMDSO3(Fractogel EMD SO3)の内、アプライド・バイオシステムズ(Applied Biosystems)の陽イオン交換体、ポロスHS50(Poros HS 50)、およびバイオ−ラッド(Bio−Rad)の一樹脂、ヌヴィアHR−S(Nuvia HR−S)が、夾雑物のHCP、凝集体、不所望の電荷変異体、および浸出プロテインAの最良の除去可能性を示した。加えて、GEヘルスケア(GE Healthcare)の正に帯電する混合モード樹脂であるカプトアドヒア(CaptoAdhere)を、結合モードのポリッシング工程としての有用性について研究した。陽イオン交換体と同じようにして、同じサンプル、カラムサイズ、および基準を適用した。平衡バッファは、20mMリン酸Na、pH8.2であり、サンプルのpHをNaOHで8.2に調整し、さらに平衡バッファで希釈した。樹脂は、より多い量を結合し得るが、効率的な分離には、20〜23mg/mlのリツキシマブのロードが必要とされる。結合タンパク質の溶出は、20mMリン酸Na、pH6.0で実行した。結合モードのカプトアドヒア(CaptoAdhere)樹脂は、夾雑物について非常に有望な除去力を示し、ポリッシング工程に好ましい樹脂として選択した(表2)。
交換体(ポロスHS(Poros HS))プールをカラムにロードした。
図2A〜図2Cに示す下流シーケンスによって、100L規模(リツキシマブまたはアダリムマブ)および1000L規模(リツキシマブ)を精製した。プレクリーニングクロマトグラフィー工程に好ましい樹脂は、フロースルーモードで実行するヌヴィアQ(Nuvia Q)である。このプロセス工程は、実施例2に記載したプレクリーニング濾過手順の後に得られた培養液で実行した。プレクリーニングクロマトグラフィーは、以降の捕捉工程のために、不純物のロード(HCP、HCDNA、凝集体、脂質、色素その他)を減らすためのヌヴィアQ(Nuvia Q)陰イオン交換クロマトグラフィー樹脂によりフロースルーモードで実行した。樹脂を充填したカラム(1000L規模の寸法=60cm直径×16cm高、充填容量約45L;100L規模の寸法=14cm直径×27cm高、充填容量約4.1L)は、WFI(2CV)、1Mトリス酢酸pH6.0(3CV)、および20mMトリス酢酸pH7.2(4CV)で連続的に平衡化した。産物溶液が、カラム(17g/L樹脂)を通過し、約200cm/時の流速のWFI(2CV)が続く。ヌヴィアQ(Nuvia Q)樹脂の再生は、(i)40mM NaH2PO4、10mM EDTA、2Mウレア、1.5M NaCl、pH7.2(4CV)、(ii)100mMクエン酸、2M NaCl(10CV)、(iii)WFI(4CV)、(iv)1M NaOH(4CV)、および(v)10mM NaOH(2CV)で連続的に逆方向に洗浄することによって、実行した。カラムはその後、10mM NaOH溶液中に貯蔵した。
MEPハイパーセル(MEP HyperCel)は、以降にプロテインA親和性工程があっても(図2B)なくても(図2C)、大規模プロセスに適用し得る捕捉工程にとって好ましい非親和性樹脂である。MEPハイパーセル(MEP HyperCel)カラムの汚染(ファウリング)は、極めて不利益であることが分かった。しかしながら、これは、本実施例ではヌヴィアQ(Nuvia Q)であったプレクリーニング陰イオン交換カラムを適用することによって、抑制または強く軽減し得る。ヌヴィアQ(Nuvia Q)プレカラムがないと、MEPハイパーセル(MEP HyperCel)の再使用は、苛酷で、長期にわたり、かつ費用のかかる再生手順を必要とし、その場合には寿命も制限される。表2の実験は、ヌヴィアQ(Nuvia Q)およびMEPハイパーセル(MEP HyperCel)をそれぞれ充填した小さなモデルカラム(20ml)で実行する。ヌヴィアQ(Nuvia Q)クロマトグラフィーのサンプルロードおよび性能は、実施例4に記載した。フロースルーは、MEPハイパーセル(MEP HyperCel
)上に調整なく直ちにロードした。並行して、第2の捕捉カラムに直接、すなわち、ヌヴィアQ(Nuvia Q)工程をバイパスして、実施例2に従う培養液をロードした。捕捉カラムは、最大収容能力に達し、および産物がフロースルー中に現れる(破過)まで、ロードした。結合したIgGは、pHの低下(pH4)によって、MEPハイパーセル(MEP HyperCel)カラムから溶出した。結合能力は、破過までの容量から算出した。混合モード樹脂は、次のランのために簡単に再生かつ再平衡化した。MEPハイパーセル(MEP HyperCel)の再生は、100mMクエン酸溶液に続いて1M NaOHを逆流で通すことによって実行した。NaOHとの接触時間は60分であり、その後カラムを、次の使用のために、再平衡化およびNaOH(pH制御)の完全除去によって調製した。ヌヴィアQ(Nuvia Q)カラムは、実施例4に記載するようにして再生した。合計8サイクルを実行した(7回の再使用)。結果は表3に要約した。結果は、ヌヴィアQ(Nuvia Q)工程の優位性を支持している。ヌヴィアQ(Nuvia
Q)プレクリーニングを適用した場合に結合能力の変化はなかった。対照的に、そのような工程がないと、ランからランで結合能力が低下し、8サイクル後には64%にまで下がった。
カプトMMC(Capto MMC)樹脂は、負に帯電する混合モードクロマトグラフィー媒体であり(表2参照)、図2B(5カラムプロセス)および図2C(4カラムプロセス)のプロセスフロースキームにおいて示す下流シーケンス内で適用した。これらのシーケンスにおいて、カプトMMC(Capto MMC)は、原理上、サンプルを精製し、かつ、以降のプロテインA親和性クロマトグラフィー樹脂を害するおそれがあるプロテアーゼ等の重大な夾雑物を取り除く、第2のプレクリーニング工程として機能する。また、この工程は、著しいサンプル濃縮を可能にするため、プロテインAクロマトグラフィーのプロセス時間を引き下げる。カプトMMC(Capto MMC)クロマトグラフィーは、結合モードで実行し、酢酸でpH5に調整された実施例4に記載したヌヴィアQ(Nuvia Q)フロースルーをロードした。リツキシマブの100L規模および1000L規模の両方を、この方法に従って精製した。1000L規模のカラム寸法は、60cm直径×15cm高(充填容量約42L)であり、100L規模について、20×14cm(充填容量約4.4L)であった。樹脂は、20mM酢酸Na(pH5.0)で平衡化し、リツキシマブ結合カラムは、40mMリン酸Na(pH6.5)で洗浄した。溶出は、回収が最大になるように最適化し、40mMリン酸Na、250mM NaCl、pH7
.5で実行した。流速は150〜200cm/時であった。溶出液は、プロテインAカラム上に直接ロードした。
プロテインA捕捉クロマトグラフィーは、マブセレクト・シュア(MabSelect
SuRe)(100L規模)またはマブセレクト・シュアLX(MabSelect SuRe LX)(1000L)で実行した。カラムの規模を除いて、プロセシングパラメータは同じであった。サンプルは、実施例4において適用した方法(図2Aのプロセス、ヌヴィアQ(Nuvia Q)フロースルー)の後に、または実施例6において適用した方法(図2Bのプロセス、カプトMMC(Capto MMC)溶出液)の後に採った。1000L規模のカラム寸法は、40cm直径×30cm高(充填容量約38L)であり、100L規模について、20×10.4cm(充填容量約3.2L)であった。プロテインAカラムは、40mMリン酸Na、150mM NaCl、pH7.4で平衡化した。特に明記しない限り、産物溶液は、20gタンパク質/L樹脂(100L規模)または35gタンパク質/L樹脂(1000L規模)でロードした。カラムは、平衡バッファ(2CV)に続いて、40mMリン酸Na、1.5M NaCl、2Mウレア、10mM
EDTA、pH7.4で洗浄した。溶出は、100mMクエン酸Na(pH3.5)で実行した。流速は140cm/時であった。マブセレクト・シュア(MabSelect
SuRe)樹脂またはマブセレクト・シュアLX(MabSelect SuRe LX)樹脂の再生は、(i)0.2M NaOH(2CV)、(ii)WFI(2CV)、3.5%酢酸、100mM硫酸Na(2CV)、および(iii)WFI(2CV)で連続的に逆方向に洗浄することによって実行した。カラムは次のランのために再平衡化し、または20%エタノール中に貯蔵した。
プロテインA(マブセレクト・シュアLX(MabSelect SuRe LX))の浸出に及ぼす、プレクリーニングクロマトグラフィー(ヌヴィアQ(Nuvia Q))および温度の効果を調査するために、規模を縮小したプロテインA親和性クロマトグラフィーにおいて一連の実験を実行した。用いたカラムは、容量が12mlであった。クロマトグラフィーランにアクタ浄化システム(Akta Purifier System)(GEヘルスケア(GE Healthcare))を適用した。サンプルは、リツキシマブの1000Lバッチから採った小アリコートであった。サンプルは、実施例2に記載した手順(ヌヴィアQ(Nuvia Q)プレクリーニング工程前)の後に得られたプロセス工程から、または実施例3に記載した手順(ヌヴィアQ(Nuvia Q)プレクリーニング工程後)の後に、採った。プロテインA親和性クロマトグラフィー法は、実施例7に従って実行した。カラムは、25〜30mgタンパク質/ml樹脂でロードした。サンプルおよびプロテインA親和性クロマトグラフィーは、室温(20〜25℃)にて維持し、または冷却チャンバ(2〜8℃)内に置いた。2つの並行サンプルは、2つの異なるアリコートからそれぞれ採り、並行して精製かつ試験した。結果は、表4に示す。先行するヌヴィアQ(Nuvia Q)工程のない室温での浸出の2つの並行ランの平均値は、23.4ng/mg(1mg IgGあたりのプロテインA当量)であった。プレクリーニング工程の効果は明らかである(表4)。室温にて、サンプルがプロテインA工程の前にヌヴィアQ(Nuvia Q)カラムを通過した場合、わずか9.1ng/mg(=39%)の浸出を生じた。その効果は、浸出に及ぼす著しい効果をそれ自体が有している低温においても見られる。平均して、ヌヴィアQ(Nuvia Q)なしでの浸出は5.0ng/mgであり、ヌヴィアQ(Nuvia Q)ありでの浸出は3.4ng/mg(68%)であった(表4)。ヌヴィアQ(Nuvia Q)工程により、プロテインA浸出は著しく低下し、親和性クロマトグラフィー工程にとってより好ましい室温を用いることができる。プロテインA浸出に及ぼすヌヴィアQ(Nuvia Q)の効果は、ヌヴィ
アQ(Nuvia Q)樹脂に結合するタンパク質分解活性能の捕捉によって、最も説明される。
ヌヴィアQ(Nuvia Q)によるプレクリーニング陰イオン交換工程をフロースルーで実行するとともに、続くプロテインA親和性樹脂(マブセレクト・シュアLX(MabSelect SuRe LX))がこのフロースルーから免疫グロブリンを効率的に捕捉することが可能であるため、ヌヴィアQ(Nuvia Q)カラムをマブセレクト・シュアLX(MabSelect SuRe LX)カラムと直接連結することが可能であった。図2Aおよび図2Bにおいて要約した下流プロセスは、1000L規模(リツキシマブ)から、このようなプレクリーニングカラムおよび捕捉カラムを連結してランした。しかし、100L規模のプロセスも、特に明記しない限り、連結カラムで実行した。2つのカラムは別々に平衡化し、その後、バルブスイッチングによって連結した。産物溶液は、ヌヴィアQ(Nuvia Q)について実施例4に記載したように、約100L/時(1000L規模)または約10L/時(100L規模)でアップフロー方向に連結カラム上にロードした。WFI(2CV)による洗浄後、ヌヴィアQ(Nuvia Q)カラムは、クロマトグラフィースキッドにてバルブスイッチングによってバイパスし、実施例4に記載したように、逆流で再生した。プロテインAカラムの更なるプロセシング、すなわち洗浄、溶出、および再生は、実施例7に記載した、連結を断った構成において実行した。
図1および図2に示すように、プロテインA親和性クロマトグラフィー後に、ウィルスの不活化工程を行う。親和性マトリックスからの低pH溶出を利用する。そのような水性酸環境では、多くのウィルス、とりわけエンベロープタイプのウィルスは不安定であり、分解する。本発明について開発したプロテインA法は、pHが3.5である溶出液が生じる(実施例7参照)。同様に、混合モード捕捉カラム(MEPハイパーセル(MEP HyperCel)またはカプトMMC(Capto MMC))の溶出液は、pHが4と低い(実施例5および実施例6参照)。以降、マブセレクト・シュアLX(MabSelect SuRe LX)溶出液(1000L規模、リツキシマブ)のための不活化を記載する。プロテインAカラムからモノクローナル抗体を、100mMクエン酸Naバッファ、pH3.5中で、ウィルス不活化タンクA内に直接溶出した。タンクA内で直接、WFIによって溶出液を約2倍に希釈した。溶液のpHは、必要に応じて、100mMクエン酸で制御して3.5に再調整し、続いて溶液をウィルス不活化タンクBに移し、そこで
、65rpmで20〜24℃の温度にて60分間撹拌した。その後、50mM NaOHで溶液のpHをpH4.5に調整して、以降の陽イオン交換クロマトグラフィー工程のための出発条件を与えた。
夾雑物および生産関連物質、例えば電荷変異体の分離は、第1のポリッシング工程である陽イオン交換クロマトグラフィーによって実行した。この工程は、全ての精製シーケンス(100Lリツキシマブおよびアダリムマブ、1000Lリツキシマブ)に含まれた。ポロス50HS(Poros 50 HS)樹脂による充填カラム(1000L規模の寸法=60cm直径×32cm高、充填容量約90L;100L規模の寸法=25cm直径×15cm高、充填容量約約7.3L)は、(i)WFI(注射用水、2CV)および(ii)20mMクエン酸Na、pH5.5(4CV)によって連続的に平衡化した。実施例10に記載したウィルス不活化およびサンプル調整(pH4.5)後に得た産物溶液を、約8gタンパク質/L樹脂でカラム上にロードすることによって、0.45μmクリーンパック・ノバ(Kleenpak Nova)プレフィルタ(ポール・コーポレーション(Pall Corporation))に通した。続く勾配溶出の前に、カラムをWFI(1CV)で洗浄した。20mMクエン酸Na、pH5.5(バッファA)、および40mMリン酸Na、pH7.8(バッファB)を以下の比率およびシーケンスで混合することによって、勾配を形成した:(i)100% A(0.2CV)、(ii)40%
A+60% B(2CV)への線形勾配;(iii)100% B(6CV)への線形勾配;(iv)100% B(2CV)。流速は150cm/時であった。溶出液は、画分に分離して、特異的プーリングを可能にした。ポロス50HS(Poros 50 HS)樹脂の再生は、(i)2M NaCl(1CV)および(ii)1M NaOH(2CV)で連続的に洗浄することによって実行した。カラムはその後、10mM NaOH中に貯蔵した。
第2のポリッシング工程は任意選択的であり、リツキシマブの100L規模および1000L規模に適用した。2つのポリッシング工程があるプロセス(図2Aおよび図2B)において最終クロマトグラフィーに選択した樹脂は、カプトアドヒア(CaptoAdhere)であった。これは、リガンドN−ベンジル−N−メチルエタノールアミンを使用する。リガンドは、正に帯電する基を有するため、疎水性相互作用に加えて、陰イオン交換体の機能も実現する。クロマトグラフィーは、残っている微量の夾雑物、例えばHCDNAおよびHCPをさらに減らすことが可能である。残留浸出プロテインA、産物凝集体、および産物フラグメントもまた、この工程によって除去し得る。カプトアドヒア(CaptoAdhere)ポリッシング工程は、フロースルーモードおよび結合モードで実行した。
mMクエン酸、2M NaCl(2CV)、(ii)2M NaCl(1CV)、(iii)1M NaOH(2CV)、および(iv)10mM NaOH(2CV)で連続的に洗浄することによって実行した。カラムはその後、10mM NaOH中に貯蔵した。
最後のクロマトグラフィーと、最終バルクの薬剤物質の充填との間に、選択した貯蔵バッファ中に調合し、所望の濃度を固定し、かつウィルスを除去するために要求される、いくつかの濾過工程がある。免疫グロブリン用の本発明の精製法は、これらの濾過法には依存しない。従って、本実施例における方法、装置、および選択した膜は、ほんの1つの選択肢と理解されなければならず、自由裁量の変更が可能である。2つのポリッシング工程があるプロセスについての1000L規模用の方法を、以下で簡潔に記載する。
Corporation))で実行した。
図2Aの従来のプロセス(例えば、ファーナRL(Fahrner RL)2001年に従う)および図2Bの新たなプロセスによって生産した2つの代表的なバッチの最終純度に関する結果を、表5に要約する。免疫グロブリンはリツキシマブであり、100L規模から精製した。従来の精製法のプロセス工程(プロセス1B)は、3つのクロマトグラフィー、(i)マブセレクト・シュア(MabSelect SuRe)(捕捉)、(ii)ポロス50HS(Poros 50 HS)(結合モード)、および(iii)ポロス50HQ(Poros 50 HQ)(フロースルーモード)からなる。新たなプロセス(プロセス2B)のクロマトグラフィーシーケンスは、(i)ヌヴィアQ(Nuvia
Q)(プレクリーニング)、(ii)カプトMMC(Capto MMC)(捕捉)、(iii)マブセレクト・シュア(MabSelect SuRe)(中間)、(iv)ポロス50HS(Poros 50 HS)(結合モード、ポリッシング1)、および(v)カプトアドヒア(CaptoAdhere)(フロースルーモード、ポリッシング2)からなる。個々の工程は、実施例1、2、4、6、7、および10〜13に記載したように実行した。表5について、選択した純度パラメータは、(i)IgGモノマーの相対量(%)、(ii)残留宿主細胞タンパク質(HCP、ng/mg IgG)、および(iii)残留宿主細胞DNA(HCDNA、pg/g IgG)である。分析方法は、以下の実施例15に記載する。新たなプロセス2Bに従って精製したバッチは、3つ全てのパラメータで見られるように、従来のプロセス1Bに従って精製したバッチと比較して、純度がより高かった(表5)。
精製した免疫グロブリンの品質を特徴付けるために、プロセス中およびプロセス終了後の両方にていくつかの分析方法を適用した。これらの方法は、標準的な方法であり、例え
ばユーロ・ファーム(Eur.Pharm)といった文献に記載されていた。表の結果をもたらした方法の原理を、以下で簡潔に記載する。
色素は、PCR反応の合成産物に比例する蛍光を発する。測定では、CHO宿主細胞DNAの適切な領域の量を増幅させるCHO特異的なプローブおよびプライマーが測定に用いられる。この工程中に、蛍光シグナルは増大して、あるサイクル数の後、蛍光は閾値を上回る。このサイクル数は、DNAの出発量に比例する。サンプルで得たサイクル数を較正曲線と比較することによって、サンプル中の宿主細胞DNAの絶対量を判定することが可能である。
細胞培養によって生産されるモノクローナル抗体等の組換えタンパク質薬剤の製造工程には、ウィルスの除去および/または不活化が必要とされる。なぜなら、原材料または生産工程からのウィルスによる汚染が懸念されるためである。結果として、細胞培養に由来する生物学的治療タンパク質をもたらす製造プロセス毎のウィルス安全性について相当な規制要求がある。下流プロセスは、それぞれの規制当局、例えば欧州医薬品庁(EMA:European Medicine Agency)および米国食品医薬品局(FDA:Food And Drug Administration)の既存のガイドラインに従って、潜在的ウィルス汚染を除去かつ/または不活化する能力が確認されなければならない。実行するウィルスクリアランス研究の目的は、細胞培養源からの組換えタンパク質薬剤の安全性全体の実証の一部として、製造プロセス中のウィルスの有効な除去および不活化を実証することであった。
b)低いpHのプロテインA溶出液のウィルス不活化(実施例10参照)
c)ポロスHS(Poros HS)による陽イオン交換クロマトグラフィー(実施例11参照)
d)バイアソルブ・プロ(Viresolve Pro)によるナノ濾過(実施例13参照)
ウィルスの選択:頻繁に用いられる2つのモデルウィルスを選択した。
b)マウス微小ウィルス(MVM)
MuLVは、レトロウィルス科のメンバであり、エンベロープを有し、約80〜100nmのサイズである一本鎖RNAウィルスである。MVMは、パーボウィルス科のメンバであり、非エンベロープ一本鎖DNAウィルスである。パーボウィルスは、知られている最も小さなウィルスに属し、サイズが20〜24nmである。両方のウィルスとも、米国菌培養採取所(ATCC:American Type Culture Collection)から得られる。
対する干渉について、全ての試験材料をプレ調査し、並行制御インキュベーションにより、実験の期間中のウィルスの安定性が証明される。感染性アッセイは、感染性ウィルスのみを検出するが、qPCRは、感染性ウィルスおよび不活化ウィルスの両方を含む。プロセス工程毎およびウィルスタイプ毎に、二重のランを実行した。プロセス済みサンプルが、検出可能なウィルス力価を含有しなかった場合、アッセイの算出検出限界を最大力価として用いた。その場合、減少率は、少なくともlog10「≧」と表した。
Claims (6)
- 免疫グロブリンおよび少なくとも1つの不純物を含むサンプルから前記免疫グロブリンを精製する方法であって、以下の順序で以下の工程:
(a)前記サンプルを陰イオン交換クロマトグラフィーに曝し、および陰イオン交換クロマトグラフィー樹脂に結合しない前記免疫グロブリンをフロースルー中に得る工程;
(b)工程(a)において得られた前記フロースルーを、プロテインA親和性クロマトグラフィーに曝して、前記免疫グロブリンをプロテインA親和性クロマトグラフィー樹脂に結合させ、および前記プロテインA親和性クロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に前記免疫グロブリンを得る工程、または混合モードクロマトグラフィーに曝して、前記免疫グロブリンを混合モードクロマトグラフィー樹脂に結合させ、および前記混合モードクロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に前記免疫グロブリンを得る工程;
(c)工程(b)において得られた前記溶出液を、2.5〜4.5の低いpHにおいて規定された時間にわたりインキュベートする工程
を含み、工程(a)および工程(c)について、エンベロープウィルスに関して少なくとも10の累積log10減少率をもたらす、方法。 - 免疫グロブリンの製造プロセスにおいてウィルス安全性を高める方法であって、以下の順序で以下の工程:
(a)サンプルを陰イオン交換クロマトグラフィーに曝して、および陰イオン交換クロマトグラフィー樹脂に結合しない前記免疫グロブリンをフロースルー中に得る工程;
(b)工程(a)において得られた前記フロースルーをプロテインA親和性クロマトグラフィーに曝して、前記免疫グロブリンをプロテインA親和性クロマトグラフィー樹脂に結合させ、および前記プロテインA親和性クロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に前記免疫グロブリンを得る工程、または混合モードクロマトグラフィーに曝して、前記免疫グロブリンを混合モードクロマトグラフィー樹脂に結合させ、および前記混合モードクロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に前記免疫グロブリンを得る工程;
(c)工程(b)において得られた前記溶出液を、2.5〜4.5の低いpHにおいて規定された時間にわたりインキュベートする工程
を含み、工程(a)および工程(c)について、エンベロープウィルスに関して少なくとも10の累積log10減少率をもたらす、方法。 - さらに以下の工程:
(d)工程(c)の前記インキュベーション後の前記溶出液、またはそれに由来しかつ工程(c)の後に実行される1つもしくは複数の更なるプロセシング工程の後に得られた組成物を、ナノ濾過に曝す工程
を含む、請求項1または2に記載の方法であって、
工程(a)および工程(d)について、非エンベロープウィルスに関して少なくとも10の累積log10減少率をもたらし、または、工程(a)、工程(c)、および工程(d)について、エンベロープウィルスに関して少なくとも15の累積log10減少率をもたらし、あるいは、それらの両方をもたらす、方法。 - さらに以下の工程:
(c2)工程(c)において得られた前記溶出液、またはそれに由来しかつ工程(c)の後に実行される1つもしくは複数の更なるプロセシング工程の後に得られた組成物を、陽イオン交換クロマトグラフィーに曝して、前記免疫グロブリンを陽イオン交換クロマトグラフィー樹脂に結合させ、および前記陽イオン交換クロマトグラフィー樹脂からタンパク質を溶出することによって溶出液中に前記免疫グロブリンを得る工程
を含む、請求項1〜3のいずれか一項に記載の方法であって、
工程(a)、工程(c)、および工程(c2)について、エンベロープウィルスに関して少なくとも15の累積log10減少率をもたらす、方法。 - 工程(a)、工程(c)、工程(c2)、および工程(d)について、エンベロープウィルスに関して少なくとも20の累積log10減少率をもたらし、または、工程(a)、工程(c2)、および工程(d)について、非エンベロープウィルスに関して少なくとも12の累積log10減少率をもたらし、あるいは、それらの両方をもたらす、請求項4に記載の方法。
- 工程(a)の前記陰イオン交換クロマトグラフィーは、メタクリレートポリマーマトリックスに結合するトリメチルアンモニウムエチル以外の強陰イオン交換クロマトグラフィーリガンドであるリガンドを含む強陰イオンクロマトグラフィーであり、前記リガンドは、四級アミノエチル(QAE)部分、四級アンモニウム部分、およびトリメチルアンモニウム部分からなる群から選択され、前記リガンドは好ましくはトリメチルアンモニウム(−N(CH3)3 +)である、請求項1〜5のいずれか一項に記載の方法。
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GB201805142D0 (en) * | 2018-03-29 | 2018-05-16 | Ge Healthcare Bioprocess R&D Ab | Separation method |
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WO2021220252A1 (en) * | 2020-05-01 | 2021-11-04 | Kashiv Biosciences, Llc | An improved process of purification of protein |
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Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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WO1991018975A1 (en) | 1990-05-31 | 1991-12-12 | The United States Of America, Represented By The Secretary, United States Department Of Commerce | Method for purifying hiv reverse transcriptase |
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DE69329503T2 (de) | 1992-11-13 | 2001-05-03 | Idec Pharma Corp | Therapeutische Verwendung von chimerischen und markierten Antikörpern, die gegen ein Differenzierung-Antigen gerichtet sind, dessen Expression auf menschliche B Lymphozyt beschränkt ist, für die Behandlung von B-Zell-Lymphoma |
US5429746A (en) | 1994-02-22 | 1995-07-04 | Smith Kline Beecham Corporation | Antibody purification |
CN101712720A (zh) | 1996-02-09 | 2010-05-26 | 艾博特生物技术有限公司 | 结合人TNFα的人抗体 |
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DE10155984A1 (de) | 2001-11-15 | 2003-05-28 | Boehringer Ingelheim Pharma | Verfahren zur Reduktion des Liganden-leakage von Affinitätschromatographie-Matrices |
DK1501369T3 (en) | 2002-04-26 | 2015-09-28 | Genentech Inc | Non-affinity purification of proteins |
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EP1614693A4 (en) | 2003-03-31 | 2006-07-19 | Kirin Brewery | PURIFICATION OF A HUMAN MONOCLONAL ANTIBODY AND A HUMAN POLYCLONAL ANTIBODY |
WO2005016968A2 (en) | 2003-07-28 | 2005-02-24 | Genentech, Inc. | Reducing protein a leaching during protein a affinity chromatography |
DE602004006157T2 (de) * | 2003-11-05 | 2008-01-03 | Ares Trading S.A. | Verfahren zur aufreinigung von il-18-bindendem protein |
EP1718386A1 (en) | 2004-02-27 | 2006-11-08 | GE Healthcare Bio-Sciences AB | A process for the purification of antibodies |
CA2581208A1 (en) * | 2004-08-30 | 2006-03-09 | Lonza Biologics Plc. | Affinity- plus ion exchange- chromatography for purifying antibodies |
ES2666170T3 (es) | 2007-10-30 | 2018-05-03 | Genentech, Inc. | Purificación de anticuerpos mediante cromatografía de intercambio catiónico |
CN103396480A (zh) | 2008-05-15 | 2013-11-20 | 诺沃—诺迪斯克有限公司 | 抗体纯化方法 |
SG10201702922VA (en) | 2008-10-20 | 2017-06-29 | Abbvie Inc | Isolation and purification of antibodies using protein a affinity chromatography |
EP2360183B1 (en) * | 2008-12-19 | 2016-07-27 | Takeda Pharmaceutical Company Limited | Antibody purification method by mixed mode chromatography utilizing an arginine-containing loading solution |
US20120177640A1 (en) * | 2009-07-24 | 2012-07-12 | Josef Burg | Optimizing the production of antibodies |
IN2012DN00338A (ja) * | 2009-08-07 | 2015-05-22 | Millipore Corp | |
WO2011028753A1 (en) * | 2009-09-01 | 2011-03-10 | Genentech, Inc. | Enhanced protein purification through a modified protein a elution |
US20120208986A1 (en) | 2009-10-20 | 2012-08-16 | Wenger Marc D | Use of mixed mode chromatography for the capture and purification of basic antibody products |
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JP6023715B2 (ja) * | 2010-10-11 | 2016-11-09 | アッヴィ・バハマズ・リミテッド | タンパク質の精製方法 |
CN107915775B (zh) * | 2011-07-11 | 2022-07-12 | 伊克诺斯科学公司 | 结合ox40的抗体及其用途 |
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CA2854330A1 (en) | 2011-11-02 | 2013-05-10 | Genentech, Inc. | Overload and elute chromatography |
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