PL212108B1 - Związki indazolowe, środek farmaceutyczny i zastosowanie związków indazolowych - Google Patents

Związki indazolowe, środek farmaceutyczny i zastosowanie związków indazolowych

Info

Publication number
PL212108B1
PL212108B1 PL355757A PL35575700A PL212108B1 PL 212108 B1 PL212108 B1 PL 212108B1 PL 355757 A PL355757 A PL 355757A PL 35575700 A PL35575700 A PL 35575700A PL 212108 B1 PL212108 B1 PL 212108B1
Authority
PL
Poland
Prior art keywords
compounds
indazole
phenyl
substituted
found
Prior art date
Application number
PL355757A
Other languages
English (en)
Other versions
PL355757A1 (pl
Inventor
Robert Steven Kania
Steven Lee Bender
Allen J. Borchardt
John F. Braganza
Stephan James Cripps
Ye Hua
Michael David Johnson
Theodore Otto Johnson Jr.
Hiep The Luu
Cynthia Louise Palmer
Siegfried Heinz Reich
Anna Maria Tempczyk-Russell
Min Teng
Christine Thomas
Michael David Varney
Michael Brennan Wallace
Michael Raymond Collins
Original Assignee
Agouron Pharma
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=22498654&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=PL212108(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Agouron Pharma filed Critical Agouron Pharma
Publication of PL355757A1 publication Critical patent/PL355757A1/pl
Publication of PL212108B1 publication Critical patent/PL212108B1/pl

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings
    • C07D403/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/06—Antipsoriatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A61P27/06—Antiglaucoma agents or miotics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D209/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D209/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom condensed with one carbocyclic ring
    • C07D209/04—Indoles; Hydrogenated indoles
    • C07D209/10—Indoles; Hydrogenated indoles with substituted hydrocarbon radicals attached to carbon atoms of the hetero ring
    • C07D209/18—Radicals substituted by carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D231/00—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazole or hydrogenated 1,2-diazole rings
    • C07D231/54—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazole or hydrogenated 1,2-diazole rings condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C07D231/56—Benzopyrazoles; Hydrogenated benzopyrazoles
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/04—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings directly linked by a ring-member-to-ring-member bond
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/06—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings linked by a carbon chain containing only aliphatic carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings
    • C07D403/04—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings directly linked by a ring-member-to-ring-member bond
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D405/00—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom
    • C07D405/02—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings
    • C07D405/04—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings directly linked by a ring-member-to-ring-member bond
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D405/00—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom
    • C07D405/02—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings
    • C07D405/06—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings linked by a carbon chain containing only aliphatic carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D405/00—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom
    • C07D405/14—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D409/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D409/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings
    • C07D409/06—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings linked by a carbon chain containing only aliphatic carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D409/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D409/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D413/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D413/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings
    • C07D413/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D417/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00
    • C07D417/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing two hetero rings
    • C07D417/06—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing two hetero rings linked by a carbon chain containing only aliphatic carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D417/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00
    • C07D417/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing two hetero rings
    • C07D417/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D417/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00
    • C07D417/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D471/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00
    • C07D471/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D471/04—Ortho-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D491/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00
    • C07D491/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D491/04—Ortho-condensed systems

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Ophthalmology & Optometry (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
  • Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Description

Przedmiotem wynalazku są związki indazolowe, które pośredniczą i/lub hamują aktywność niektórych kinaz białkowych, środek farmaceutyczny zawierający takie związki i terapeutyczne lub profilaktyczne zastosowanie takich związków i środków do leczenia raka, jak również innych stanów chorobowych związanych z niepożądaną angogenezą i/lub proliferacją komórek, poprzez podawanie skutecznych ilości takich związków.
Kinazy białkowe są rodziną enzymów katalizujących fosforylację grup hydroksylowych specyficznych reszt tyrozyny, seryny lub treoniny w białkach. Z reguły taka fosforylacja w znacznym stopniu zaburza działanie białka, dlatego też kinazy białkowe mają kluczowe znaczenie w regulacji różnorodnych procesów komórkowych, w tym metabolizmu, proliferacji komórek, różnicowania komórek i przetrwania komórek. Z wielu różnych funkcji komórkowych, o których wiadomo, że wymagana jest w nich aktywność kinaz białkowych, niektóre procesy stanowią atrakcyjne cele dla interwencji terapeutycznej w pewnych stanach chorobowych. Dwoma przykładami są angiogeneza i kontrola cyklu komórkowego, w których kinazy białkowe odgrywają kluczową rolę; procesy te mają podstawowe znaczenie dla rozwoju guzów litych jak również dla innych chorób.
Angiogeneza jest to mechanizm, w którym nowe włośniczki tworzą się z istniejących naczyń. Gdy jest taka potrzeba, układ naczyniowy ma zdolność tworzenia nowych sieci włośniczek w celu utrzymania właściwego funkcjonowania tkanek i narządów. Jednak w organizmie osoby dorosłej angiogeneza jest w znacznym stopniu ograniczona i ma miejsce tylko w procesie gojenia się ran oraz neowaskularyzacji śluzówki macicy podczas miesiączkowania. Patrz Merenmies i in., Cell Growth & Differentiation, 8, 3-10 (1997). Z drugiej strony, niepożądana angiogeneza jest cechą charakterystyczną pewnych chorób, np. retynopatii, łuszczycy, reumatoidalnego zapalenia stawów, związanego z wiekiem zwyrodnienia plamki (AMD) i raka (guzów litych). Folkman, Nature Med., 1, 27-31 (1995). Do kinaz białkowych, których udział w procesie tworzenia naczyń został wykazany, należy trzech członków rodziny kinaz tyrozynowych receptora czynnika wzrostu: VEGF-R2 (receptor 2 czynnika wzrostu śródbłonka naczyniowego, znany także jako KDR (receptor z domeną insertu kinazy) i jako FLK-1); FGF-R (receptor czynnika wzrostu fibroblastów); oraz TEK (znany także jako Tie-2).
VEGF-R2, którego ekspresja występuje tylko na komórkach śródbłonka, wiąże silny angiogeniczny czynnik wzrostu VEGF i pośredniczy w dalszej transdukcji sygnału poprzez aktywację aktywności kinazy wewnątrzkomórkowej. Tak, więc należy oczekiwać, że bezpośrednie hamowanie aktywności kinazy VEGF-R2 spowoduje osłabienie angiogenezy nawet w obecności egzogennego VEGF (patrz Strawn i in., Cancer Research, 56, 3540-3545 (1996)), jak zostało wykazane w przypadku mutantów VEGF-R2, które nie pośredniczą w transdukcji sygnału. Millauer i in., Cancer Research, 56, 1615-1620 (1996). Oprócz tego okazało się, że VEGF-R2 nie odgrywa w organizmie osoby dorosłej innej roli poza pośredniczeniem w aktywności angiogenicznej VEGF. W związku z tym należy oczekiwać, że selektywny inhibitor aktywności kinazy VEGF-R2 będzie wykazywał niewielką toksyczność.
Podobnie, FGF-R wiąże angiogeniczne czynniki wzrostu aFGF i bFGF oraz pośredniczy w dalszej transdukcji wewnątrzkomórkowego sygnału. Ostatnio zasugerowano, że czynniki wzrostu, takie jak bFGF mogą odgrywać kluczową rolę w wywoływaniu angiogenezy w guzach litych, które osiągnęły pewną wielkość. Yoshiji i in., Cancer Research, 57, 3924-3928 (1997). Jednak w przeciwieństwie do VEGF-R2, FGF-R jest eksprymowany w dużej liczbie różnych rodzajów komórek w całym organizmie i nie jest pewne, czy odgrywa istotne role w innych normalnych procesach fizjologicznych u osoby dorosłej. Niemniej jednak doniesiono, że ogólnoustrojowe podawanie małocząsteczkowego inhibitora aktywności kinazy FGF-R blokuje wywoływaną przez bFGF angiogenezę u myszy bez widocznej toksyczności. Mohammad i in., EMBO Journal, 17, 5996-5904 (1998).
TEK (znany również jako Tie-2) to kolejna receptorowa kinaza tyrozynowa, której ekspresja następuje tylko na komórkach śródbłonka, o której wiadomo, że odgrywa pewną rolę w angiogenezie. W wyniku wiązania czynnika angiopoetyny-1 następuje autofosforylacja domeny kinazy w TEK i proces transdukcji sygnału, który, jak się okazało, pośredniczy w oddziaływaniu komórek śródbłonka z okołośródbłonkowymi komórkami wspierającymi, ułatwiając tym samym dojrzewanie nowoutworzonych naczyń krwionośnych. Z drugiej strony okazało się, że czynnik angiopoetyna-2 antagonizuje działanie angiopoetyny-1 na TEK i przerywa angiogenezę. Maisonpierre i in., Science, 211, 55-60 (1997).
W rezultacie wyżej opisanych zjawisk zaproponowano leczenie angiogenezy poprzez zastosowanie związków hamujących aktywność kinazy VEGF-R2, FGF-R i/lub TEK. Przykładowo w międzyPL 212 108 B1 narodowej publikacji WIPO nr WO 97/34876 ujawniono pewne pochodne cynnoliny będące inhibitorami VEGF-R2, które mogą być zastosowane w leczeniu stanów chorobowych związanych z nieprawidłową angiogenezą i/lub ze zwiększoną przepuszczalnością naczyń, takich jak rak, cukrzyca, łuszczyca, reumatoidalne zapalenie stawów, mięsak Kaposiego, naczyniak krwionośny, ostre i przewlekłe nefropatie, kaszak, restenoza tętnic, choroby autoimmunizacyjne, ostre stany zapalne i choroby oczu z proliferacją naczyń siatkówkowych.
Kinaza fosforylazy uaktywnia fosforylazę glikogenu, w związku z czym wzmaga rozpad glikogenu i uwalnianie glukozy w wątrobie. U osób chorych na cukrzycę typu 2 występują zaburzenia w regulowaniu wytwarzania glukozy w wątrobie, co stanowi główną przyczynę hiperglikemii porannej, która z kolei powoduje szereg wtórnych powikłań u pacjentów dotkniętych tą chorobą. W związku z tym zmniejszenie uwalniania glukozy przez wątrobę powinno spowodować obniżenie zwiększonych poziomów glukozy w osoczu. Dlatego też inhibitory kinazy fosforylazy powinny zmniejszać aktywność fosforylazy i glikogenolizę, a tym samym zmniejszać hiperglikemię u pacjentów.
Inną fizjologiczną odpowiedzią na VEGF jest nadprzepuszczalność naczyń, która, jak to zasugerowano, odgrywa rolę we wczesnych stadiach angiogenezy. W niedokrwionych tkankach, jak to ma miejsce w mózgu w przypadku udaru, niedotlenienie uruchamia ekspresję VEGF, co prowadzi do zwiększonej przepuszczalności i ostatecznie do obrzęku otaczających tkanek. W badaniu szczurzego modelu udaru van Bruggen i inni, J. Clinical Invest., 104, 1613-20 (1999) wykazali, że podawanie monoklonalnych przeciwciał VEGF zmniejsza obszar martwicy niedokrwiennej. W związku z tym oczekuje się, że inhibitory VEGF będą przydatne w leczeniu udaru.
Oprócz angiogenezy, kinazy białkowe odgrywają kluczową rolę w kontroli cyklu komórkowego. Niekontrolowana proliferacja komórek jest oznaką raka. Proliferacja komórek w odpowiedzi na różne bodźce objawia się deregulacją cyklu podziału komórki, procesu, w wyniku którego komórki mnożą się i dzielą. W komórkach guzów zwykle uszkodzone są geny bezpośrednio lub pośrednio regulujące przebieg cyklu podziału komórki.
Kinazy zależne od cyklin (CDK) są to serynowo-treoninowe kinazy białkowe odgrywające kluczową rolę w przejściach między różnymi fazami cyklu komórkowego. Patrz np. artykuły zebrane w Science, 274, 1643-1677 (1996). Kompleksy CDK powstają poprzez asocjację podjednostki regulacyjnej cykliny (np. cyklina A, B1, B2, D1, D2, D3 i E) i podjednostki katalitycznej kinazy (np. cdc2 (CDK1), CDK2, CDK4, CDK5 i CDK6). Jak wskazuje nazwa, CDK wykazuje absolutną zależność od podjednostki cykliny w celu fosforylacji docelowych substratów, a działanie różnych par kinaza/cyklina polega na regulacji przebiegu w określonych fazach cyklu komórkowego.
CDK4 skompleksowany z cyklinami D odgrywa kluczową rolę w zapoczątkowywaniu cyklu podziału komórki z fazy spoczynkowej lub uśpienia do takiej w której rozpoczyna się podział komórki. Przebieg ten podlega różnorodnym mechanizmom regulacji wzrostu, zarówno dodatnim, jak i ujemnym. Aberracje w tym układzie kontroli, szczególnie te które oddziałują na funkcje CDK4, powiązano z przejściem komórek w stan intensywnej proliferacji, charakterystycznym dla stanów złośliwych, szczególnie występującym w czerniaku rodzinnym, raku przełyku i rakach trzustki. Patrz np. Kamb, Trends in Genetics, 11, 136-140 (1995); Kamb i in., Science, 264, 436-440 (1994).
W wielu publikacjach opisano różne związki chemiczne przydatne w przypadku różnych celów terapeutycznych. Tak np. w międzynarodowych publikacjach WIPO nr WO 99/23077 i WO 99/23076, opisano związki zawierające ugrupowanie indazolu, o aktywności inhibitorów fosfodiesterazy typu IV, osiągniętej dzięki bioizosterycznym zastąpieniu katecholu indazolem. W opisie patentowym Stanów Zjednoczonych Ameryki nr 5760028 ujawniono związki heterocykliczne, w tym kwas 3-[1-[3-(imidazolin-2-yloamino)propylo]indazol-5-ilokarbonyloamino]-2-(benzyloksykarbonyloamino)propionowy, przydatne jako antagoniści av33-integryny i pokrewnych receptorów białek adhezyjnych na powierzchni komórki. W międzynarodowych publikacjach WIPO nr WO 98/09961 ujawniono pewne pochodne indazolu i ich zastosowanie jako inhibitorów fosfodiesterazy (PDE) typu IV lub wytwarzania czynnika martwicy nowotworu (TNF) u ssaka. Najnowsze uzupełnienia wirtualnej biblioteki znanych związków obejmują związki określane jako przeciwproliferacyjne środki terapeutyczne hamujące CDK. Zatem np. w opisie patentowym Stanów Zjednoczonych Ameryki nr 5621082, Xiong i inni, ujawniono kwas nukleinowy kodujący inhibitor CDK6, a w europejskiej publikacji patentowej nr 0666270 A2 opisano peptydy i peptydomimetyki działające jako inhibitory CDK1 i CDK2. W międzynarodowej publikacji WIPO nr WO 97/16447 ujawniono pewne analogi chromonów, będące inhibitorami kinaz zależnych od cyklin, w szczególności kompleksów CDK/cyklina, takich jak CDK4/cyklina D1, które można zastosować do hamowania nadmiernej lub nieprawidłowej proliferacji komórek, a co za tym idzie do leczenia raka.
PL 212 108 B1
W międzynarodowej publikacji WIPO nr WO 99/21845 opisano pochodne 4-aminotiazolu, przydatne jako inhibitory CDK.
Nadal istnieje jednak zapotrzebowanie na niskocząsteczkowe związki, które można łatwo syntetyzować, oraz które są skuteczne w hamowaniu aktywności jednego lub większej liczby CDK lub kompleksów CDK/cyklina. Z uwagi na to, że CDK4 może działać jako ogólny aktywator podziału komórki w przypadku większości komórek, a kompleksy CDK4 i cyklin typu D kierują wczesną fazą G1 cyklu komórkowego, istnieje zapotrzebowanie na skuteczne inhibitory CDK4 i ich kompleksy z cyklinami typu D, w celu leczenia jednego lub większej liczby rodzajów guzów. Także kluczowa rola kompleksów cyklina E/kinaza CDK2 i cyklina B/kinaza CDK1, odpowiednio w przejściu między fazami G1/S i G2/M, stwarza dodatkowe cele do interwencji terapeutycznej w tłumieniu rozregulowanego przebiegu cyklu komórkowego w przypadku raka.
Inna kinaza białkowa, CHK1, odgrywa ważną rolę jako punkt kontrolny w przebiegu cyklu komórkowego. Punkty kontrolne są to układy kontrolne, które koordynują przebieg cyklu komórkowego poprzez wywieranie wpływu na tworzenie, aktywację a następnie dezaktywację kinaz zależnych od cyklin. Punkty kontrolne zapobiegają przebiegom cyklu komórkowego w nieodpowiednim czasie, utrzymują równowagę metaboliczną w komórce, gdy komórka jest zahamowana, a w pewnych przypadkach może dojść do apoptozy (zaprogramowanej śmierci komórki) w przypadku gdy wymagania punktu kontrolnego nie zostaną spełnione. Patrz np. O'Connor, Cancer Surveys, 29, 151-182 (1997); Nurse, Cell, 91, 865-867 (1997); Hartwell i in., Science, 266, 1821-1828 (1994); Hartwell i in., Science, 246, 629-634 (1989).
Jedna seria punktów kontrolnych monitoruje integralność genomu i po wykryciu uszkodzenia DNA te „punkty kontroli uszkodzenia DNA blokują przebieg cyklu komórkowego w fazie G1 i G2 oraz zwalniają przebieg w fazie S. O'Connor, Cancer Surveys, 29, 151-182 (1997); Hartwell i in., Science, 266, 1821-1828 (1994). Działanie to umożliwia zakończenie procesu naprawy DNA przed replikacją genomu, a następnie rozdziałem tego materiału genetycznego pomiędzy nowe komórki potomne. Należy podkreślić, że ulegający najczęstszym mutacjom w raku u człowieka gen supresorowy nowotworu p53, wytwarza białko punktu kontrolnego uszkodzeń DNA które, gdy DNA jest uszkodzony, blokuje przebieg cyklu komórkowego w fazie G1 i/lub wywołuje apoptozę (zaprogramowaną śmierć komórki). Hartwell i in., Science, 266, 1821-1828 (1994). Wykazano także, że gen supresorowy nowotworu p53 wzmacnia działanie punktu kontrolnego uszkodzeń DNA w fazie G2 cyklu komórkowego. Patrz np. Bunz i in., Science, 282, 1497-1501 (1998); Winters i in., Oncogene, 17, 673-684 (1998); Thompson, Oncogene, 15, 3025-3035 (1997).
Biorąc pod uwagę kluczową naturę szlaku genu supresorowego nowotworu p53 w raku u człowieka, poszukiwano możliwości interwencji terapeutycznej wykorzystującej słabe miejsca w przypadkach raka spowodowanego defektami genu p53. Jedna z możliwości występuje w działaniu punktu kontrolnego G2 w komórkach rakowych z defektem w genie p53. Z uwagi na to, że brakuje w nich punktu kontrolnego G1, komórki rakowe są szczególnie podatne na zniesienie ostatniej bariery chroniącej je przed niszczącym raka działaniem czynników niszczących DNA: punktu kontrolnego G2. Punkt kontrolny G2 jest regulowany przez układ kontrolny, który znajduje się w komórkach organizmów począwszy od drożdży a skończywszy na ludziach. Ważna w tym zachowanym układzie jest kinaza, CHK1, która transdukuje sygnały od kompleksu wykrywającego uszkodzenia DNA w celu zahamowania aktywacji kinazy cykliny B/Cdc2, która umożliwia rozpoczęcie mitozy. Patrz np., Peng i in., Science, 277, 1501-1505 (1997); Sanchez i in., Science, 277, 1497-1501 (1997). Wykazano, że inaktywacja CHK1 znosi zahamowanie G2 wywołane przez uszkodzenie DNA spowodowane przez środek przeciwrakowy lub przez uszkodzenie endogennego DNA; w jego wyniku następuje również wybiórcze zabijanie wykrytych przez punkt kontrolny uszkodzonych komórek. Patrz np., Nurse, Cell, 91, 865-867 (1997); Weinert, Science, 277, 1450-1451 (1997); Walworth i in., Nature, 363, 368-371 (1993); oraz Al-Khodairy i in., Molec. Biol. Cell, 5, 147-160 (1994).
Selektywne manipulowanie punktami kontrolnymi w komórkach rakowych mogłoby umożliwić szerokie zastosowanie procedur chemioterapeutycznych i radioterapeutycznych oraz wykorzystanie wspólnej cechy raka u ludzi, „niestabilności genomu, jako selektywnej podstawy do niszczenia komórek raka. Wiele czynników powoduje, że CHK1 jest kluczowym celem w wykrywaniu przez punkty kontrolne uszkodzeń DNA. Ustalenie inhibitorów tej kinazy i innych funkcjonalnie pokrewnych kinaz, takich jak Cds1/CHK2, kinazy o której od niedawna wiadomo, że współdziała z CHK1 w regulacji przebiegu fazy S, (patrz Zeng i in., Nature, 395, 507-510 (1998); Matsuoka, Science, 282, 1893-1897 (1998)), mogłoby dostarczyć nowych cennych leków w leczeniu raka.
PL 212 108 B1
Wiązanie receptora integryny z ECM inicjuje sygnały wewnątrzkomórkowe, w których pośredniczy FAK - Kinaza Procesu Ogniskowej Adhezji (ang. Focal Adhesion Kinase, FAK), a które mają udział w ruchliwości komórki, jej proliferacji i przetrwaniu. W przypadku raka u człowieka nadmierna ekspresja FAK ma udział w powstawaniu guzów i w potencjale przerzutowym poprzez swoją rolę w szlakach sygnałów, w których pośredniczy integryna.
Kinazy tyrozynowe mogą być typu receptorowego (z domenami zewnątrzkomórkowymi, transbłonowymi i wewnątrzkomórkowymi) lub typu niereceptorowego (w całości wewnątrzkomórkowe). Sądzi się, że co najmniej jedna z niereceptorowych tyrozynowych kinaz białkowych, mianowicie LCK, pośredniczy w transdukcji w komórkach T sygnału z interakcji białek z powierzchni komórek (Cd4) z usieciowanym przeciwciałem anty-Cd4. Niereceptorowe kinazy tyrozyny zostały bardziej szczegółowo przedyskutowane w: Bolen, Oncogene, 8, 2025-2031 (1993).
Oprócz kinaz białkowych opisanych powyżej, wiele innych kinaz białkowych uważa się za cele terapeutyczne, a w licznych publikacjach opisano inhibitory aktywności kinaz; zostało to omówione w: McMahon i in., Oncologist, 5, 3-10 (2000); Holash i in., Oncogene, 18, 5356-62 (1999); Thomas i in., J. Biol. Chem., 274, 36684-92 (1999); Cohen, Curr. Op. Chem. Biol., 3, 459-65 (1999); Klohs i in., Curr. Op. Chem. Biol., 10, 544-49 (1999); McMahon i in., Current Opinion in Drug Discovery & Development, 1, 131-146 (1998); Strawn i in., Exp. Opin. Invest. Drugs, 7, 553-573 (1998). W międzynarodowej publikacji WIPO nr WO 00/18761 opisano pewne podstawione 3-cyjanochinoliny jako inhibitory kinaz białkowych.
Istnieje jednak w dalszym ciągu zapotrzebowanie na skuteczne inhibitory kinaz białkowych. Ponadto, jak to jest zrozumiałe dla fachowców, pożądane jest, aby inhibitory kinazy wykazywały zarówno wysokie powinowactwo do docelowej kinazy/docelowych kinaz oraz wysoką selektywność w stosunku do innych kinaz białkowych.
Celem wynalazku jest dostarczenie silnych inhibitorów kinaz białkowych. Innym celem wynalazku jest dostarczenie skutecznych inhibitorów kinazy o silnym i selektywnym powinowactwie do jednej lub większej liczby określonych kinaz.
Te i inne cele wynalazku, które staną się oczywiste po zapoznaniu się z poniższym opisem, osiągnięto dzięki odkryciu opisanych poniżej związków indazolowych i ich farmaceutycznie dopuszczalnych soli (przy czym takie związki i sole określa się łącznie jako „środki czynne), które modulują i/lub hamują aktywność kinaz białkowych. Środki farmaceutyczne zawierające takie środki czynne są przydatne w leczeniu chorób pośredniczonych przez aktywność kinaz, takich jak rak, jak również innych stanów chorobowych związanych z niepożądaną angiogenezą i/lub proliferacją komórek, takich jak retynopatia cukrzycowa, jaskra neowaskularna, reumatoidalne zapalenie stawów i łuszczyca. Oprócz tego, środki czynne wykazują korzystne właściwości w odniesieniu do modulowania i/lub hamowania aktywności kinaz związanych z kompleksami VEGF-R, FGF-R, CDK oraz z CHK1, LCK, TEK, FAK i/lub kinazy fosforylazy.
Zatem wynalazek dotyczy związków indazolowych o ogólnym wzorze I:
w którym:
R1 oznacza grupę o wzorze CH=CH-R4, w którym R4 oznacza niepodstawiony fenyl lub niepodstawiony pirydynyl;
Y oznacza S;
2
R2 oznacza atom wodoru; C1-C8-alkil ewentualnie podstawiony podstawnikiem wybranym z grupy obejmującej CF3, grupę cyjanową, grupę NHCH3, C3-C8-cykloalkil, C1-C8-alkoksyl, fenyl podstawiony atomem chlorowca, fenyl podstawiony grupą -NH2, fenyl podstawiony C1-C8-alkoksylem, zwłaszcza metoksylem, pirydyl, furyl, furyl podstawiony C1-C8-alkilem, zwłaszcza metylem, i tienyl; C2-C8-alkenyl ewentualnie podstawiony C1-C8-alkilem; C3-C8-cykloalkil ewentualnie podstawiony fenylem; fenyl
PL 212 108 B1 ewentualnie podstawiony atomem chlorowca, zwłaszcza atomem chloru; fenyl dipodstawiony grupą
CF3 i piperazynylem; chinolinyl podstawiony C1-C8-alkilem, zwłaszcza metylem; tiazolil; C1-C8-alkoksyl ewentualnie podstawiony C2-C8-alkenylem, C3-C8-cykloalkilem lub fenylem; NH-(niepodstawiony piry55 dyl); podstawiony NH(C=O)R5 lub grupę NH2, gdzie R5 jest niezależnie wybrany z grupy obejmującej fenyl podstawiony C1-C8-alkilem, zwłaszcza metylem, pirolil podstawiony C1-C8-alkilem, zwłaszcza metylem i tienyl; a 3
R3 jest niezależnie wybrany z grupy obejmującej atom wodoru i atom chlorowca; oraz ich farmaceutycznie dopuszczalnych soli.
Korzystne są związki oraz ich farmaceutycznie dopuszczalne sole, gdzie:
R1 oznacza grupę o wzorze CH=CH-R4, w którym R4 oznacza niepodstawiony fenyl lub niepodstawiony pirydynyl;
Y oznacza S; a 2
R2 oznacza C1-C8-alkil ewentualnie podstawiony podstawnikiem wybranym z grupy obejmującej CF3, grupę cyjanową, grupę NHCH3, C3-C8-cykloalkil, C1-C8-alkoksyl, fenyl podstawiony atomem chlorowca, fenyl podstawiony grupą -NH2, fenyl podstawiony C1-C8-alkoksylem, zwłaszcza metoksylem, pirydyl, furyl, furyl podstawiony C1-C8-alkilem, zwłaszcza metylem, i tienyl; C1-C8-alkoksyl ewentualnie podstawiony C2-C8-alkenylem, C3-C8-cykloalkilem lub fenylem; lub NH-(niepodstawiony pirydyl).
Szczególnie korzystnymi związkami są związki wybrane z grupy obejmującej
Ponadto wynalazek dotyczy środka farmaceutycznego zawierającego substancję czynną i farmaceutycznie dopuszczalny nośnik, rozcieńczalnik lub zaróbkę, którego cechą jest to, że jako substancję czynną zawiera związek indazolowy o ogólnym wzorze I lub jego farmaceutycznie dopuszczalną sól, zdefiniowane powyżej.
PL 212 108 B1
Korzystnie środek farmaceutyczny jako substancję czynną
zawiera związek lub jego chlorowodorek.
Ponadto wynalazek dotyczy zastosowania związków indazolowych o ogólnym wzorze I oraz ich farmaceutycznie dopuszczalnych soli, określonych powyżej, do wytwarzania leku do leczenia stanu chorobowego u ssaka, pośredniczonego przez aktywność kinazy białkowej, wybranego spośród stanów chorobowych związanych z rozwojem nowotworu, proliferacją komórek lub angiogenezą.
Wynalazek znajduje zatem zastosowanie w sposobie modulowania i/lub hamowania aktywności kinazy VEGF-R, FGF-R, kompleksu CDK, CHK1, TEK, LCK, FAK i/lub kinazy fosforylazy, poprzez podawanie związku o wzorze I lub jego farmaceutycznie dopuszczalnej soli. Korzystne związki według wynalazku charakteryzują się selektywną aktywnością w stosunku do kinaz, czyli odznaczają się znaczną aktywnością w stosunku do jednej lub większej liczby określonych kinaz, natomiast odznaczają się mniejszą lub minimalną aktywnością w stosunku do jednej lub większej liczby innych kinaz. W jednej korzystnej postaci wynalazku, związkami według wynalazku są takie związki o wzorze I, których aktywność względem kinazy tyrozynowej receptora VEGF jest znacząco wyższa niż względem kinazy tyrozynowej receptora FGF-R1. Wynalazek dotyczy także sposobów modulowania aktywności kinazy tyrozynowej receptora VEGF bez znaczącego modulowania aktywności kinazy tyrozynowej receptora FGF.
Związki według wynalazku można także stosować dogodnie w połączeniu z innymi znanymi środkami terapeutycznymi. Zatem np. związki o wzorze I o działaniu przeciwangiogenicznym, można podawać wspólnie z cytotoksycznymi środkami chemioterapeutycznymi, takimi jak taksol, taksoter, winblastyna, cisplatyna, doksorubicyna, adriamycyna itp., w celu osiągnięcia wzmocnionego działania przeciwnowotworowego. Addytywne lub synergistyczne wzmocnienie działania terapeutycznego można również osiągnąć przez współpodawanie związków o wzorze I o działaniu przeciwangiogenicznym z innymi środkami przeciwangiogenicznymi, takimi jak kombretastatyna A-4, endostatyna, prinomastat, celekoksyb, rofokoksyb, EMD121974, IM862, monoklonalne przeciwciała przeciw VEGF i monoklonalne przeciwciała przeciw KDR.
Wynalazek dotyczy także środków farmaceutycznych, z których każdy zawiera skuteczną ilość środka czynnego wybranego spośród związków o wzorze I i ich farmaceutycznie dopuszczalnych soli, oraz farmaceutycznie dopuszczalny nośnik lub zaróbkę dla takiego środka czynnego. Wynalazek dostarcza także zastosowania takiego środka czynnego do wytwarzania leku do leczenia raka jak również innych stanów chorobowych związanych z niepożądaną angiogenezą i/lub proliferacją komórek.
Związki według wynalazku o wzorze I są użyteczne do pośredniczenia aktywności kinaz białkowych. W szczególności związki te działają jako środki przeciw angiogenezie oraz jako środki do modulowania i/lub hamowania aktywności kinaz białkowych, zapewniając w ten sposób leczenie raka lub innych chorób związanych z proliferacją komórek, w których pośredniczą kinazy białkowe.
Określenie „C1-C8-alkil użyte w opisie, odnosi się do grup alkilowych o łańcuchu prostym lub rozgałęzionym, zawierających 1-8 atomów węgla. Przykładowe grupy alkilowe stanowią metyl (Me), etyl (Et), n-propyl, izopropyl, butyl, izobutyl, s-butyl, t-butyl (t-Bu), pentyl, izopentyl, t-pentyl, heksyl, izoheksyl, itp. Do odpowiednich podstawionych alkili należy fluorometyl, difluorometyl, trifluorometyl, 2-fluoroetyl, 3-fluoropropyl, hydroksymetyl, 2-hydroksyetyl, 3-hydroksypropyl itp.
Określenie „C2-C8-alkenyl odnosi się do grup alkenylowych o łańcuchu prostym lub rozgałęzionym, zawierających 2-8 atomów węgla. Do przykładowych grup alkenylowych należy prop-2-enyl, but-2-enyl, but-3-enyl, 2-metyloprop-2-enyl, heks-2-enyl itp.
Określenie „C3-C8-cykloalkil odnosi się do nasyconych lub częściowo nienasyconych karbocyklili, zawierających 3-8 atomów węgla, w tym do cykloalkilowych struktur bicyklicznych i tricyklicznych. Do odpowiednich grup cykloalkilowych należy cyklopropyl, cyklobutyl, cyklopentyl, cykloheksyl, cykloheptyl itp.
Określenia „aryl i „heteroaryl odnoszą się do monocyklicznych i policyklicznych, nienasyconych lub aromatycznych struktur pierścieniowych, przy czym „aryl odnosi się do ugrupowań karbocyklicznych, a „heteroaryl do ugrupowań heterocyklicznych. Do aromatycznych struktur pierścieniowych należy między innymi fenyl, furyl, tienyl, pirolil, pirydynyl, pirazolil, imidazolil, pirazynyl, chinolinyl, itp. Grupy te mogą być ewentualnie podstawione skondensowaną strukturą pierścieniową lub mostkiem, np. OCH2-O.
PL 212 108 B1
Określenie „C1-C8-alkoksyl oznacza grupę -O-C1-C8-alkil. Do przykładowych grup alkoksylowych należy metoksyl, etoksyl, propoksyl, itp.
Określenie „C3-C8-cykloalkoksyl oznacza grupę -O-C3-C8-cykloalkil, gdzie C3-C8-cykloalkil ma powyżej podane znaczenie.
Określenie „atom chlorowca oznacza atom chloru, fluoru, bromu lub jodu. Określenie „chlorowco oznacza chloro-, fluoro-, bromo- lub jodo-.
Na ogół różne reszty lub grupy funkcyjne dla zmiennych we wzorach mogą być ewentualnie podstawione jednym lub większą liczbą odpowiednich podstawników. Do przykładowych podstawników należy atom chlorowca (F, Cl, Br lub I), C1-C8-alkil, -CN, -O-C1-C8-alkil, -aryl, -arylo-C1-C8-alkil, -NH2, chlorowcoalkil (np. -CF3, -CH2CF3), -O-chlorowcoalkil (np. -OCF3, -OCHF2), itp.
Określenia „zawierający i „obejmujący użyte są w otwartym nie ograniczającym znaczeniu.
Należy zdawać sobie sprawę, że jakkolwiek związek o wzorze I może wykazywać zjawisko tautomerii, wzory na rysunkach zamieszczonych w opisie formalnie przedstawiają tylko jedną z możliwych postaci tautomerycznych. W związku z tym należy zdawać sobie sprawę, że w opisie wzory reprezentują dowolną postać tautomeryczną przedstawionego związku i nie ogranicza się on do konkretnej postaci tautomerycznej przedstawionej wzorem na zamieszczonych rysunkach.
Niektóre z nowych związków według wynalazku mogą występować jako pojedyncze stereoizomery (tj. zasadniczo wolne od innych stereoizomerów), racematy i/lub jako mieszaniny enancjomerów i/lub diastereoizomerów. Wszystkie takie pojedyncze stereoizomery, racematy i ich mieszaniny objęte są zakresem wynalazku. Korzystnie optyczne czynne związki według wynalazku stosuje się w postaci optycznie czystej.
Jak to jest ogólnie wiadome fachowcom, optycznie czysty związek zawierający jedno centrum chiralności stanowi zasadniczo jeden z dwóch możliwych enancjomerów (czyli jest enancjomerycznie czysty), a optycznie czystym związkiem zawierającym więcej niż jedno centrum chiralności jest taki, który jest zarówno diastereoizomerycznie czysty, jak i enancjomerycznie czysty. Związki według wynalazku korzystnie stosuje się jako co najmniej w 90% optycznie czyste, czyli w postaci zawierającej co najmniej 90% pojedynczego izomeru (80% nadmiar enancjomeryczny („e.e.) lub nadmiar diastereoizomeryczny („d.e.)), korzystniej co najmniej 95% (90% e.e. lub d.e.), jeszcze korzystniej co najmniej 97,5% (95% e.e. lub d.e.), a najkorzystniej co najmniej 99% (98% e.e. lub d.e.).
Oprócz tego wzory obejmują zarówno solwatowane jak i niesolwatowane postacie zidentyfikowanych struktur. Przykładowo wzór I obejmuje związki o wskazanej strukturze zarówno w postaci uwodnionej, jak i nieuwodnionej. Inne przykłady solwatów obejmują struktury w połączeniu z izopropanolem, etanolem, metanolem, DMSO, octanem etylu, kwasem octowym lub etanoloaminą.
Oprócz związków o wzorze I wynalazek obejmuje farmaceutycznie dopuszczalne sole takich związków.
„Farmaceutycznie dopuszczalna sól oznacza sól, która zachowuje biologiczną skuteczność określonego związku w postaci wolnego kwasu lub zasady, a która nie jest biologicznie ani w inny sposób niepożądana. Związek według wynalazku może posiadać grupy funkcyjne dostatecznie kwasowe lub zasadowe, bądź grupy obu rodzajów, i w związku z tym może reagować z różnymi zasadami nieorganicznymi lub organicznymi oraz kwasami nieorganicznymi lub organicznymi, tworząc w ten sposób farmaceutycznie dopuszczalne sole. Przykładowe farmaceutycznie dopuszczalne sole stanowią sole otrzymane w reakcji związków według wynalazku z kwasami mineralnymi lub organicznymi lub zasadami nieorganicznymi, takie jak siarczany, pirosiarczany, wodorosiarczany, siarczyny, wodorosiarczyny, fosforany, monowodorofosforany, diwodorofosforany, metafosforany, pirofosforany, chlorki, bromki, jodki, octany, propioniany, dekaniany, kaprylany, akrylany, mrówczany, izomaślany, kaproniany, heptaniany, propiolany, szczawiany, maloniany, bursztyniany, suberyniany, sebacyniany, fumarany, maleiniany, butyno-1,4-dioany, heksyno-1,6-dioany, benzoesany, chlorobenzoesany, metylobenzoesany, dinitrobenzoesany, hydroksybenzoesany, metoksybenzoesany, ftalany, sulfoniany, ksylenosulfoniany, fenylooctany, fenylopropioniany, fenylomaślany, cytryniany, mleczany, γ-hydroksymaślany, glikolany, winiany, metanosulfoniany, propanosulfoniany, naftaleno-1-sulfoniany, naftaleno-2-sulfoniany i migdalany.
Jeśli związek według wynalazku jest zasadą, żądaną farmaceutycznie dopuszczalną sól można wytworzyć dowolnym odpowiednim, dostępnym sposobem, np. przez podziałanie na wolną zasadę kwasem nieorganicznym, takim jak kwas chlorowodorowy, kwas bromowodorowy, kwas siarkowy, kwas azotowy, kwas fosforowy itp., lub kwasem organicznym, takim jak kwas octowy, kwas maleinowy, kwas bursztynowy, kwas migdałowy, kwas fumarowy, kwas malonowy, kwas pirogronowy, kwas
PL 212 108 B1 szczawiowy, kwas glikolowy, kwas salicylowy, kwas piranozydylowy, taki jak kwas glukuronowy lub kwas galakturonowy, α-hydroksykwas, taki jak kwas cytrynowy lub kwas winowy, aminokwas, taki jak kwas asparaginowy lub kwas glutaminowy, kwas aromatyczny, taki jak kwas benzoesowy lub kwas cynamonowy, kwas sulfonowy, taki jak kwas p-toluenosulfonowy lub kwas etanosulfonowy itp.
Żądaną farmaceutycznie dopuszczalną sól można wytworzyć dowolnym odpowiednim, dostępnym sposobem, np. przez podziałanie na wolny kwas nieorganiczną lub organiczną zasadą, taką jak amina (pierwszo-, drugo- lub trzeciorzędowa), wodorotlenek metalu alkalicznego, wodorotlenek metalu ziem alkalicznych itp. Przykładami odpowiednich soli są sole organiczne pochodzące od aminokwasów, takich jak glicyna i arginina, amoniaku, pierwszo-, drugo- lub trzeciorzędowych amin oraz amin cyklicznych, np. piperydyny, morfoliny i piperazyny, oraz sole nieorganiczne pochodzące od sodu, wapnia potasu, magnezu, manganu, żelaza, miedzi, cynku, glinu i litu.
W przypadku środków czynnych będących substancjami stałymi, dla fachowca zrozumiałe jest, że związki i sole według wynalazku mogą występować w różnych postaciach krystalicznych i polimorficznych, przy czym wszystkie one objęte są zakresem wynalazku i określonych wzorów.
Terapeutycznie skuteczną ilość środka czynnego według wynalazku można użyć do leczenia chorób pośredniczonych przez modulowanie lub regulowanie kinaz białkowych. „Skuteczna ilość oznacza taką ilość środka czynnego, która podana wymagającemu takiego leczenia ssakowi, wysta rcza do wyleczenia choroby pośredniczonej przez aktywność jednej lub większej liczby kinaz białk o wych, np. kinazy tyrozynowej. Zatem terapeutycznie skuteczną ilość związku o wzorze I lub jego soli stanowi ilość wystarczająca do modulowania, regulowania lub hamowania aktywności jednej lub większej liczby kinaz białkowych, tak że stan chorobowy pośredniczony przez tę aktywność ulega zmniejszeniu lub złagodzeniu.
Ilość danego środka czynnego odpowiadająca takiej ilości będzie zmieniać się w zależności od czynników, takich jak konkretny związek, stan chorobowy i jego ostrość, gatunek (np. waga) ssaka wymagającego leczenia, z tym, że może być ona rutynowo oznaczona przez fachowca. „Leczenie” oznacza co najmniej łagodzenie stanu chorobowego u ssaka, np. u człowieka, na który wpływa, co najmniej częściowo, aktywność jednej lub większej liczby kinaz białkowych, np. kinaz tyrozynowych i obejmuje: zapobieganie wystąpieniu stanu chorobowego u ssaka, szczególnie gdy stwierdza się, że ten ssak jest predysponowany do tej choroby, przy czym jeszcze jej u niego nie zdiagnozowano; modulowanie i/lub hamowanie stanu chorobowego; i/lub łagodzenie stanu chorobowego.
Środki czynne według wynalazku można wytwarzać zgodnie z opisanymi poniżej drogami reakcji i schematami syntezy, z zastosowaniem dostępnych technik i łatwo dostępnych materiałów wyjściowych.
Zgodnie z jednym ogólnym sposobem syntezy, związki według wynalazku wytwarza się według następującego schematu reakcji:
PL 212 108 B1
przy czym na powyższym schemacie R' oznacza grupę
, w której Y oznacza S, NH lub
N-C1-C8-alkil, a R2 i R3 mają wyżej podane znaczenie.
6-Nitroindazol (związek II) poddaje się działaniu jodu i zasady, np. NaOH, w mieszaninie wodno/organicznej, korzystnie z dioksanem. Mieszaninę zakwasza się i produkt wydziela się przez odsączenie. Do otrzymanego 3-jodo-6-nitroindazolu w dichlorometanie-50% wodnym roztworze KOH w 0°C dodaje się odczynnika wprowadzającego grupę zabezpieczającą („Pg) (w którym X = atom chlorowca), korzystnie chlorku trimetylosililoetoksymetylu (SEM-Cl), oraz katalizatora przenoszenia międzyfazowego, np. bromku tetrabutyloamoniowego (TBABr). Po upływie 1-4 godzin układ dwufazowy rozcieńcza się, fazę organiczną oddziela, suszy siarczanem sodu, sączy i zatęża. Surowy produkt oczyszcza się chromatograficznie na żelu krzemionkowym i otrzymuje się związki o wzorze III. W wyniku podziałania na związki o wzorze III w odpowiednim rozpuszczalniku organicznym odpowiednim odczynnikiem R1-metaloorganicznym, korzystnie kwasem R1-boronowym, w obecności wodnego roztworu zasady, np. węglanu sodu, oraz odpowiedniego katalizatora, korzystnie Pd(PPh3)4, otrzymuje się, po obróbce drogą ekstrakcji i chromatografii na żelu krzemionkowym, związki o wzorze IV. Pod1 stawnik R1 można wymienić w związkach o wzorze IV lub w późniejszych związkach pośrednich na tym schemacie, drogą rozszczepiania utleniającego (np. ozonolizy), a następnie addycji do otrzymanej grupy aldehydowej w warunkach reakcji Wittiga lub kondensacji. W wyniku podziałania na związki o wzorze IV środkiem redukującym, korzystnie SnCl2, otrzymuje się, po zwykłej obróbce wodnej i oczyszczaniu, związki o wzorze V. W przypadku serii pochodnych, w których Y = NH lub N-C1-C8alkil, na związki o wzorze V można podziałać chlorkiem, bromkiem, jodkiem lub trifluorometanosulfonianem arylu lub heteroarylu, w obecności zasady, korzystnie Cs2CO3, i katalizatora, korzystnie PdBINAP, (oraz, w przypadku gdy Y = N-C1-C8-alkil, z przeprowadzanym następnie etapem alkilowania), z wytworzeniem związków o wzorze VII. W celu wprowadzenia innych grup łączących Y, do związków o wzorze V dodaje się azotynu sodu w trakcie chłodzenia, w standardowych warunkach w kwaśnym wodnym środowisku, po czym dodaje się jodku potasu i mieszaninę łagodnie ogrzewa się. W wyniku zwykłej obróbki i oczyszczania otrzymuje się jodek o wzorze VI.
W wyniku podziałania na związki o wzorze VI odczynnikiem metaloorganicznym, np. butylolitem, następuje wymiana atomu chlorowca na atom litu. Otrzymany związek pośredni poddaje się następnie reakcji ze związkiem R'-elektrofilowym, np. ze związkiem karbonylowym lub trifluorometanosulfonianem, ewentualnie z udziałem dodatkowych metali i katalizatorów, korzystnie chlorku cynku
PL 212 108 B1 i Pd(PPh3)4, z wytworzeniem związków o wzorze VII. Alternatywnie, na związki o wzorze VI można podziałać odczynnikiem metaloorganicznym, takim jak kwas boroorganiczny, w obecności katalizatora, np. Pd(PPh3)4, w atmosferze tlenku węgla, z wytworzeniem związków o wzorze VII. Natomiast w przypadku pochodnych, w których Y = S, na związki o wzorze VI można podziałać odpowiednimi tiolami w obecności zasady, korzystnie Cs2CO3 lub K3PO4, oraz katalizatora, korzystnie Pd-BINAP lub Pd-(bis-cykloheksylo)bifenylofosfiny, z wytworzeniem związków o wzorze VII. Następnie przeprowadzić można zwykłe reakcje wymiany grup funkcyjnych, takie jak utlenianie, redukcję, alkilowanie, acylowanie, kondensacja i odbezpieczanie, w celu otrzymania kolejnych pochodnych z tej serii i wytworzenia związków końcowych.
Związki według wynalazku można również wytworzyć według ogólnej procedury przedstawionej na poniższym schemacie:
6-Jodoindazol (VIII) poddaje się działaniu jodu i zasady, np. NaOH, w mieszaninie wodno/organicznej, korzystnie z dioksanem. Mieszaninę zakwasza się i produkt o wzorze IX wydziela się przez odsączenie. Do otrzymanego 3,6-dijodoindazolu w dichlorometanie-50% wodnym roztworze KOH w 0°C dodaje się odczynnika wprowadzającego grupę zabezpieczającą, korzystnie SEM-Cl, i katalizatora przenoszenia międzyfazowego, np. TBABr. Układ dwufazowy rozcieńcza się, fazę organiczną oddziela, suszy siarczanem sodu, sączy i zatęża. Surowy produkt oczyszcza się chromatograficznie na żelu krzemionkowym i otrzymuje się związki o wzorze X. W wyniku podziałania na związki o wzorze X w odpowiednim rozpuszczalniku organicznym odpowiednim odczynnikiem R'-metaloorganicznym, np. R'-ZnCl lub borowym odczynnikiem R'-bor i odpowiednim katalizatorem, korzystnie Pd(PPh3)4, otrzymuje się, po obróbce ekstrakcyjnej i chromatografii na żelu krzemionkowym, związki
PL 212 108 B1 o wzorze XI. W wyniku podziałania na związki o wzorze XI w odpowiednim rozpuszczalniku organicznym 1 1 1 odpowiednim odczynnikiem R1-metaloorganicznym (np. borowym odczynnikiem R1-bor lub R1-ZnCl), w obecności wodnego roztworu zasady, węglanu sodu, oraz odpowiedniego katalizatora, korzystnie Pd(PPh3)4, otrzymuje się, po obróbce ekstrakcyjnej i chromatografii na żelu krzemionkowym, związki o wzorze XII. Następnie przeprowadzić można zwykłe reakcje wymiany grup funkcyjnych, takie jak utlenianie, redukcję, alkilowanie, acylowanie, kondensacja i odbezpieczanie, w celu otrzymania kolejnych pochodnych z tej serii i wytworzenia związków końcowych.
Alternatywnie, związki według wynalazku można wytworzyć według następującego ogólnego schematu:
Acetonowy roztwór 3-chlorocykloheks-2-enonu (XIII), H-R', i bezwodnego węglanu potasu ogrzewa się w trakcie mieszania w temperaturze wrzenia w warunkach powrotu skroplin przez 15-24 godziny, chłodzi i przesącza. W wyniku zatężenia i chromatografii przesączu na żelu krzemionkowym otrzymuje się 3-R'-cykloheks-2-enon (XIV).
Ketony o wzorze XIV można poddać reakcji z odpowiednią zasadą (M-B), korzystnie z bis1 (trimetylosililo)amidkiem litu, i reakcji z R1-CO-X (gdzie X = atom chlorowca), w wyniku której po standardowej obróbce kwasem i oczyszczaniu otrzymuje się związki o wzorze XV. Produkt taki łączy się z monohydratem hydrazyny w HOAc/EtOH i ogrzewa w odpowiedniej temperaturze przez odpowiedni okres czasu, korzystnie w 60-80°C przez 2-4 godziny. Po ochłodzeniu mieszaninę wylewa się do nasyconego roztworu wodorowęglanu sodu, przeprowadza ekstrakcję rozpuszczalnikiem organicznym, zatęża i oczyszcza na żelu krzemionkowym, w wyniku czego otrzymuje się związki o wzorze XVI. Związki o wzorze XVI można utlenić różnymi znanymi sposobami do związków końcowych.
PL 212 108 B1
Inne związki o wzorze I można otrzymać sposobami analogicznymi do ogólnych procedur opisanych powyżej lub szczegółowych procedur opisanych w przykładach poniżej. Powinowactwo związków według wynalazku do receptora można zwiększyć poprzez umieszczenie wielu kopii ligandu w bliskim sąsiedztwie, najlepiej poprzez rusztowanie utworzone przez resztę nośnika. Wykazano, że zastosowanie takich wielowartościowych związków z odpowiednimi odstępami między grupami zdecydowanie poprawia wiązanie z receptorem. Patrz np. Lee i in., Biochem, 23, 4255 (1984). Wielowartościowość i odstępy można kontrolować poprzez dobór odpowiedniej reszty nośnika lub jednostek łączących. Reszty takie to nośniki cząsteczkowe zawierające wiele grup funkcyjnych, które mogą reagować z grupami funkcyjnymi połączonymi ze związkami według wynalazku. Oczywiście, można użyć różnych nośników, w tym białka, takie jak BSA lub HAS, wielu peptydów, w tym np. pentapeptydy, dekapeptydy, pentadekapeptydy, itp. Peptydy lub białka mogą zawierać żądaną liczbę reszt aminokwasowych z wolną grupą aminową w łańcuchach bocznych; jednak inne grupy funkcyjne, np. grupa tiolowa lub hydroksylowa, mogą być wykorzystane do otrzymania trwałych połączeń.
Związki, które silnie regulują, modulują lub hamują aktywność kinazy białkowej związanej z receptorami, m.in. VEGF, FGF, kompleksami CDK, TEK, CHK1, LCK i FAK, i kinazy fosforylazy, oraz które hamują angiogenezę i/lub proliferację komórek, są pożądane i tworzą jedną z korzystnych postaci wynalazku. Wynalazek dotyczy ponadto sposobów modulowania lub hamowania aktywności kinaz białkowych, np. w tkankach ssaków, poprzez podawanie środka według wynalazku. Aktywność związków według wynalazku jako modulatorów aktywności kinaz białkowych, takiej jak aktywność kinaz, można zmierzyć dowolną ze znanych metod dostępnych fachowcom, obejmujących testy in vivo i/lub in vitro. Do przykładowych odpowiednich testów służących do pomiaru aktywności należą te opisane w: Parast C. i in., BioChemistry, 37, 16788-16801 (1998); Jeffrey i in., Nature, 376, 313-320 (1995); międzynarodowa publikacja WIPO nr WO 97/34876 i międzynarodowa publikacja WIPO nr WO 96/14843. Właściwości te można oszacować, np. poprzez przeprowadzenie jednego lub większej liczby testów biologicznych przedstawionych w przykładach poniżej.
Środki czynne według wynalazku można formułować w środki farmaceutyczne w sposób opisany poniżej. Środki farmaceutyczne według wynalazku zawierają skutecznie modulującą, regulującą lub hamującą ilość związku o wzorze I oraz obojętny, farmaceutycznie dopuszczalny nośnik lub rozcieńczalnik. W jednej postaci środka farmaceutycznego znajduje się w nim skuteczna ilość środka czynnego według wynalazku, która zapewnia korzyści terapeutyczne, w tym modulowanie kinaz białkowych. „Skuteczna ilość oznacza ilość, przy której aktywność kinazy białkowej jest, co najmniej, regulowana. Środki farmaceutyczne przygotowywane są w dawkach jednostkowych odpowiednich do trybu podawania, np. podawania pozajelitowego lub doustnego.
Środek czynny według wynalazku podawany jest w postaci znanej dawki, otrzymanej przez połączenie terapeutycznie skutecznej ilości środka czynnego (związku o wzorze I) jako substancji czynnej, z odpowiednimi farmaceutycznymi nośnikami lub rozcieńczalnikami, zgodnie ze znanymi procedurami. Procedury te mogą obejmować mieszanie, granulowanie i prasowanie lub rozpuszczanie składników, według potrzeby, w celu wytworzenia żądanego preparatu.
Zastosowany nośnik farmaceutyczny może być stały lub ciekły. Przykładami nośników stałych są: laktoza, sacharoza, talk, żelatyna, agar, pektyna, guma arabska, stearynian magnezu, kwas stearynowy itp. Przykładami nośników ciekłych są: syrop, olej arachidowy, oliwa, woda itp. Podobnie, nośnikami lub rozcieńczalnikami mogą być znane materiały opóźniające lub uwalniające w czasie, takie jak monostearynian gliceryny lub distearynian gliceryny, same lub z woskiem, etyloceluloza, hydroksypropylometyloceluloza, metakrylan metylu, itp.
Zastosować można wiele postaci farmaceutycznych. Zatem np., jeśli stosuje się nośnik stały, preparat można tabletkować, umieszczać w twardej kapsułce żelatynowej jako proszek lub peletka, albo może on być w postaci kołaczyków lub pastylek do ssania. Ilość stałego nośnika może zmieniać się, ale zazwyczaj wynosi od 25 mg do 1 g. Jeśli stosuje się nośnik ciekły, preparat będzie miał postać syropu, emulsji, miękkiej kapsułki żelatynowej, sterylnego roztworu lub zawiesiny do wstrzyknięć w ampułce lub fiolce, lub też ciekłej zawiesiny niewodnej.
W celu otrzymania trwałej, rozpuszczalnej w wodzie postaci dawkowanej, farmaceutycznie dopuszczalna sól środka czynnego według wynalazku rozpuszcza się w wodnym roztworze kwasu organicznego lub nieorganicznego, np. w 0,3 M roztworze kwasu bursztynowego lub kwasu cytrynowego. Jeśli nie jest dostępna rozpuszczalna sól, środek czynny można rozpuścić w odpowiednim współrozpuszczalniku lub w mieszaninie współrozpuszczalników. Do przykładowych odpowiednich współrozpuszczalników należy, między innymi, alkohol, glikol propylenowy, glikol polietylenowy 300, polisorbat 80,
PL 212 108 B1 gliceryna itp., w stężeniu 0-60% obj. W przykładowej postaci związek o wzorze I rozpuszcza się w DMSO i rozcieńcza wodą. Kompozycja może również mieć postać roztworu soli substancji czynnej w odpowiednim nośniku wodnym, takim jak woda lub izotoniczny roztwór soli lub dekstrozy.
Należy zdawać sobie sprawę, że rzeczywiste dawki środka czynnego użytego w środkach farmaceutycznych według wynalazku będą zmieniać się, w zależności od konkretnego użytego kompleksu, konkretnej formułowanej kompozycji, sposobu podawania oraz konkretnego miejsca, gospodarza i leczonej choroby. Optymalne dawki dla danego zestawu warunków fachowiec może ustalić z użyciem konwencjonalnych testów do określania dawki, z uwzględnieniem danych doświadczalnych dla środka czynnego. Dla podawania doustnego, zazwyczaj stosowana przykładowa dzienna dawka wynosi około 0,001 - 1000 mg/kg wagi ciała, korzystnie około 0,001 - 50 mg/kg wagi ciała, z cyklami terapeutycznymi powtarzanymi w odpowiednich odstępach czasu.
Środki według wynalazku można wytwarzać sposobami ogólnie stosowanymi w przypadku środków farmaceutycznych, np. z użyciem zwykłych technik, takich jak mieszanie, rozpuszczanie, granulowanie, drażetkowanie, mielenie na mokro, emulgowanie, kapsułkowanie, immobilizacja lub liofilizowanie. Środki farmaceutyczne można formułować w zwykły sposób, z użyciem jednego lub większej liczby fizjologicznie dopuszczalnych nośników, które można wybrać spośród zaróbek i środków pomocniczych, ułatwiających przetwarzanie substancji czynnych w preparaty, które mogą być stosowane farmaceutycznie.
Odpowiedni preparat uzależniony jest od wybranej drogi podawania. W celu wstrzykiwania, środek czynny według wynalazku można formułować jako roztwór wodny, korzystnie w fizjologicznie zgodnym buforze, np. w roztworze Hanksa, roztworze Ringera lub w fizjologicznym roztworze soli.
W celu podawania przez błonę śluzową, w preparacie stosuje się środki zwiększające penetrację przez barierę którą należy pokonać. Takie środki zwiększające penetrację są ogólnie znane.
W celu podawania doustnego związki można łatwo formułować przez połączenie substancji czynnych ze znanymi, farmaceutycznie dopuszczalnymi nośnikami. Takie nośniki umożliwiają uformowanie związków według wynalazku w postacie tabletek, pigułek, drażetek, kapsułek, płynów, żeli, syropów, zawiesin, suspensji itp., dla doustnego podawania leczonemu pacjentowi. Preparaty farmaceutyczne do podawania doustnego można wytwarzać z użyciem stałej zaróbki, w mieszaninie z substancją czynną (środkiem czynnym), ewentualne zmielenie otrzymanej mieszaniny, oraz przeróbkę mieszaniny granulek po dodaniu w razie potrzeby odpowiednich środków pomocniczych, w celu otrzymania tabletek lub rdzeni drażetek. Do odpowiednich zaróbek należą: wypełniacze, takie jak cukry, w tym laktoza, sacharoza, mannitol lub sorbitol; preparaty z celulozy, np. skrobia kukurydziana, skrobia z pszenicy, skrobia z ryżu, skrobia ziemniaczana, żelatyna, żywica, metyloceluloza, hydroksypropylometyloceluloza, sól sodowa karboksymetylocelulozy lub poliwinylopirolidon (PVP). W razie potrzeby można dodawać środków rozsadzających, np. usieciowanego poliwinylopirolidonu, agaru lub kwasu alginowego lub jego soli, np. alginianu sodu.
Rdzenie drażetek są odpowiednio powlekane. W tym celu można użyć stężonych roztworów cukrów, ewentualnie zawierających gumę arabską, poliwinylopirolidon, żel Carbopol, glikol polietylenowy i/lub ditlenek tytanu, roztwór lakieru oraz odpowiednie organiczne rozpuszczalniki lub mieszaniny rozpuszczalników. Do powłoczek tabletek lub drażetek można dodawać pigmentów lub barwników dla identyfikacji lub dla rozróżnienia różnych połączeń substancji czynnych.
Preparaty farmaceutyczne, które można podawać doustnie, obejmują kapsułki zaciskowe wykonane z żelatyny, jak również miękkie, szczelne kapsułki wykonane z żelatyny i środka uplastyczniającego, np. gliceryny lub sorbitolu. Kapsułki zaciskowe mogą zawierać substancje czynne w mieszaninie z wypełniaczami, takimi jak laktoza, środkami wiążącymi, takimi jak skrobie i/lub środkami poślizgowymi, takimi jak talk lub stearynian magnezu oraz, ewentualnie, ze stabilizatorami. W kapsułkach miękkich, środki czynne mogą być rozpuszczane lub przeprowadzane w zawiesinę w odpowiedniej cieczy, np. tłuszczu ciekłym, ciekłej parafinie lub ciekłym glikolu polietylenowym. Oprócz tego można dodawać stabilizatorów. Wszystkie preparaty do podawania doustnego powinny zostać sporządzone w dawkach odpowiednich do takiego podawania. Dla podawania dopoliczkowego środki farmaceutyczne mogą przyjąć formę tabletek lub pastylek do ssania, sporządzonych w zwykły sposób.
Dla podawania wewnątrznosowego lub drogą inhalacji związki według wynalazku można stosować w dogodnej postaci aerozolu w sprayu, z opakowania ciśnieniowego lub rozpylacza, z użyciem odpowiedniego propelenta, np. dichlorodifluorometanu, trichlorofluorometanu, dichlorotetrafluoroetanu, ditlenku węgla lub innego odpowiedniego gazu. W przypadku aerozolu pod ciśnieniem dawka może być odmierzana za pomocą zaworu dozującego odpowiednią ilość. Kapsułki i wkłady żelatynoPL 212 108 B1 we do użycia w inhalatorach lub insuflatorach itp. mogą być formułowane z użyciem mieszaniny proszkowej związku i odpowiedniego podłoża w postaci proszku, np. laktozy lub skrobi.
Związki można formułować do podawania pozajelitowego drogą wstrzyknięcia, np. wstrzyknięcia bolusa lub ciągłego wlewu. Preparaty do wstrzyknięć mogą mieć postać jednostkowych dawek, np. w ampułkach, lub mogą znajdować się w wielodawkowych pojemnikach, z dodatkiem środka konserwującego. Środki farmaceutyczne mogą przyjmować postać zawiesin, roztworów lub emulsji w olejowym lub wodnym nośniku, i mogą zawierać środki pomocnicze do formułowania, np. środki suspendujące, stabilizatory i/lub środki dyspergujące.
Preparaty farmaceutyczne do podawania pozajelitowego obejmują roztwory wodne środków czynnych w postaci rozpuszczalnej w wodzie. Oprócz tego można wytwarzać zawiesiny substancji czynnej jako odpowiednie zawiesiny oleiste do wstrzyknięć. Odpowiednimi rozpuszczalnikami lub zaróbkami lipofilowymi są np. tłuszcze ciekłe, takie jak olej sezamowy lub syntetyczne estry kwasów tłuszczowych, np. oleinian etylu, triglicerydy lub liposomy. Wodne zawiesiny do wstrzyknięć mogą zawierać substancje zwiększające lepkość zawiesiny, takie jak sól sodowa karboksymetylocelulozy, sorbitol lub dekstran. Ewentualnie zawiesina może również zawierać odpowiednie stabilizatory lub środki zwiększające rozpuszczalność związków, tak by można było przygotować roztwory o dużych stężeniach.
Dla podawania do oczu związki o wzorze I stosuje się w farmaceutycznie dopuszczalnych, oftalmicznych zaróbkach umożliwiających kontakt związku z powierzchnią oka na tyle długi, aby mógł on penetrować rogówkowy i wewnętrzny obszar oka, w tym, np. komorę przednią, komorę tylną, ciało szkliste, ciecz wodnistą, ciecz szklistą, rogówkę, tęczówkę/rzęski, soczewkę, naczyniówkę/siatkówkę i twardówkę. Farmaceutycznie dopuszczalną oftalmiczną zaróbką może być maść, olej roślinny lub materiał kapsułkujący. Związek może być wstrzykiwany bezpośrednio do cieczy szklistej lub wodnistej oka.
Alternatywnie, substancja czynna może mieć formę proszku do roztwarzania przed użyciem w odpowiednim nośniku, np. w sterylnej wodzie, wolnej od pirogenów. Związki mogą być także formułowane do podawania doodbytniczo, jako czopki lub wlewy retencyjne, np. zawierające znane podłoża czopkowe, takie jak masło kakaowe lub inne glicerydy.
Oprócz preparatów opisanych wyżej, związki mogą być formułowane jako preparaty depot. Takie preparaty o przedłużonym działaniu mogą być wszczepiane (np. podskórnie lub domięśniowo) lub wstrzykiwane domięśniowo. Tak np. związek można formułować z odpowiednimi polimerowymi lub hydrofobowymi materiałami (np. jako emulsja w dopuszczalnym oleju) lub żywicami jonowymiennymi, lub jako trudno rozpuszczalna pochodna, np. jako trudno rozpuszczalna sól.
Nośnikiem farmaceutycznym dla związków hydrofobowych jest układ współrozpuszczalników zawierający alkohol benzylowy, niepolarny środek powierzchniowo czynny, mieszający się z wodą polimer organiczny i fazę wodą. Układem współrozpuszczalników może być układ współrozpuszczalników VPD. VPD stanowi roztwór 3% wag./obj. alkoholu benzylowego, 8% wag./obj. niepolarnego środka powierzchniowo czynnego polisorbat 80 i 65% wag./obj. glikolu polietylenowego 300, dopełniony absolutnym etanolem. Układ współrozpuszczalników VPD (VPD:5W) zawiera VPD rozcieńczony w stosunku 1:1 5% wodnym roztworem dekstrozy. Ten układ współrozpuszczalników dobrze rozpuszcza związki hydrofobowe, a sam wywiera niską toksyczność po podaniu doustrojowym. Proporcje układu współrozpuszczalników można oczywiście znacząco zmieniać bez naruszenia jego rozpuszczalności i charakterystyki toksykologicznej. Można również zmieniać rodzaj składników układu współrozpuszczalników; tak np. inne niepolarne środki powierzchniowo czynne o niskiej toksyczności można zastosować zamiast polisorbatu 80; udział glikolu polietylenowego może się zmieniać; zamiast glikolu polietylenowego można zastosować inne biokompatybilne polimery, np. poliwinylopirolidon; a dekstrozę można zastąpić innymi cukrami lub polisacharydami.
Alternatywnie, do podawania hydrofobowych związków farmaceutycznych można zastosować inne układy dostarczania. Znanymi przykładami zaróbek lub nośników dla leków hydrofobowych są liposomy i emulsje. Można także zastosować pewne rozpuszczalniki organiczne, np. dimetylosulfotlenek (DMSO), jednak kosztem zwiększonej toksyczności. Związki mogą być również podawane z użyciem układów o przedłużonym uwalnianiu, takich jak półprzepuszczalne matryce ze stałych polimerów hydrofobowych, zawierające środek terapeutyczny. Opracowane i znane są różne materiały służące do zapewnienia przedłużonego uwalniania. Kapsułki o przedłużonym uwalnianiu mogą, w zależności od ich chemicznej natury, uwalniać związek przez okres kilku tygodni, nawet do ponad 100 dni.
PL 212 108 B1
W zależności od charakteru chemicznego i trwałości biologicznej środka terapeutycznego, zastosować można dodatkowe strategie w celu zapewnienia stabilizacji białek.
Środki farmaceutyczne mogą również zawierać odpowiednie stałe lub żelowe nośniki lub zaróbki. Przykładami takich nośników i zaróbek są węglan wapnia, fosforan wapnia, cukry, skrobie, pochodne celulozy, żelatyna i polimery, takie jak glikole polietylenowe.
Pewne związki według wynalazku mogą być dostarczane jako sole z farmaceutycznie zgodnymi przeciwjonami. Farmaceutycznie zgodne sole mogą być tworzone z wieloma kwasami, np. z kwasem chlorowodorowym, siarkowym, octowym, mlekowym, winowym, jabłkowym, bursztynowym itp. Sole na ogół są lepiej rozpuszczalne w wodzie i innych rozpuszczalnikach protonowych niż odpowiadające im postacie wolnej zasady.
Otrzymywanie korzystnych związków według wynalazku szczegółowo opisano w poniższych przykładach, ale fachowiec łatwo zauważy, że opisane reakcje chemiczne można łatwo dopasować w celu wytworzenia wielu różnych inhibitorów kinaz białkowych według wynalazku. Przykładowo syntezę związków według wynalazku, nie opisanych w przykładach, można z powodzeniem przeprowadzić poprzez modyfikacje oczywiste dla fachowców, np. przez odpowiednie zabezpieczanie grup zakłócających, przez zmianę jednych reagentów na inne odpowiednie i znane reagenty, lub przez rutynowe modyfikacje warunków reakcji. Alternatywnie, prowadzić można inne reakcje, ujawnione lub znane jako odpowiednie do otrzymywania związków według wynalazku.
Przykłady
W opisanych niżej przykładach, o ile nie zaznaczono tego inaczej, temperatura jest podana w stopniach Celsjusza, a wszystkie części i procenty są wagowe. Odczynniki zostały nabyte od dostawców handlowych, takich jak Aldrich Chemical Company lub Lancaster Synthesis Ltd. i użyte bez dalszego oczyszczania, o ile nie podano inaczej. Tetrahydrofuran (THF), N,N-dimetyloformamid (DMF), dichlorometan, toluen i dioksan zakupiono w firmie Aldrich w szczelnych butelkach typu Sure i używano w stanie w jakim je otrzymano. Wszystkie rozpuszczalniki oczyszczano znanymi standardowymi metodami, o ile nie zaznaczono tego inaczej.
Reakcje przedstawione poniżej były wykonywane pod nadciśnieniem argonu lub azotu lub z użyciem rurki osuszającej, w temperaturze otoczenia (o ile nie zaznaczono tego inaczej), w rozpuszczalniku bezwodnym, a kolby reakcyjne były zaopatrzone w gumowe korki z przegrodą do wprowadzania substratów i odczynników za pomocą strzykawki. Szkło było suszone w piecu i/lub suszone w wysokiej temperaturze. Analityczną chromatografię cienkowarstwową (TLC) wykonywano na pokrytych żelem krzemionkowym płytkach szklanych 60 F 254 Analtech (0,25 mm); eluowanie prowadzono rozpuszczalnikami w odpowiednich proporcjach (obj./obj.), podanych, gdy było to stosowne. Przebieg reakcji sprawdzano za pomocą TLC, a jej koniec oceniano na podstawie zużycia substancji wyjściowej.
Wizualizację płytek TLC dokonywano przez rozpylanie odczynnika, aldehydu anyżowego lub kwasu fosfomolibdenowego (Aldrich Chemical 20% wag. w etanolu) z aktywowaniem w podwyższonej temperaturze. Obróbkę zazwyczaj dokonywano przez podwojenie objętości mieszaniny reakcyjnej rozpuszczalnikiem użytym do reakcji lub do ekstrakcji, a następnie przemywanie za pomocą wskazanych roztworów wodnych, użytych w ilości odpowiadającej 25% obj. objętości ekstrakcyjnej, o ile nie wskazano inaczej. Roztwory produktu suszono nad bezwodnym Na2SO4 przed przesączeniem i odparowaniem rozpuszczalników przy obniżonym ciśnieniu na wyparce obrotowej, określanym jako usuwanie rozpuszczalników pod próżnią. Rzutową chromatografię kolumnową (Still i in., J. Org. Chem., 43, 2923 (1978)) wykonano z użyciem żelu krzemionkowego do chromatografii typu flash, Baker (47-61 μm) i przy stosunku żel krzemionkowy:surowy materiał wynoszącym od 20:1 do 50:1, o ile nie wskazano inaczej. Hydrogenolizę prowadzono pod ciśnieniem wskazanym w przykładzie lub pod ciśnieniem otoczenia.
1
Widmo 1H-NMR rejestrowano w aparacie Bruker pracującym przy 300 MHz, natomiast widmo 13C-NMR rejestrowano przy 75 MHz. Widma NMR rejestrowano w roztworze CDCI3 (stężenie w ppm) z użyciem chloroformu jako wzorca (7,25 ppm i 77,00 ppm) lub CD3OD (3,4 i 4,8 ppm i 49,3 ppm), lub wzorca wewnętrznego, tetrametylosilanu (0,00 ppm), o ile było to odpowiednie. W razie potrzeby do NMR użyto innych rozpuszczalników. Gdy podawano krotności pliku, stosowano następujące skróty: s (singlet), d (dublet), t (triplet), m (multiplet), br (szeroki), dd (dublet dubletów), dt (dublet tripletów). Stałe sprzężenia, o ile podano, wyrażano w hercach (Hz).
PL 212 108 B1
Widma w podczerwieni (IR) wykonywano za pomocą spektrometru Perkin-Elmer FT-IR dla samego oleju, w pastylkach KBr, lub w roztworach CDCI3, a wartości podawano w liczbach falowych (cm-1). Widma masowe otrzymano metodą LSIMS lub elektrorozpylania. Wszystkie temperatury topnienia (t.t.) podano jako nieskorygowane.
P r z y k ł a d 1: 3-[E-2-(3,4-Dimetoksyfenylo)winylo]-6-(3-metoksy-4-hydroksyfenylo)-1H-indazol
3-[E/Z-2-(3,4-Dimetoksyfenylo)winylo]-6-[3-metoksy-4-(metoksymetoksy)fenylo]-1H-indazol około 205 mg, 0,461 mmola (teoretycznie)) rozpuszczono w tetrahydrofuranie (THF, 10 ml) i poddano działaniu wody (10 ml) oraz kwasu trifluorooctowego (TFA, 20 ml). Mieszaninie reakcyjnej pozwolono wymieszać się w 23°C przez 30 minut (min.). Mieszaninę rozcieńczono toluenem (100 ml) i produkty lotne usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem (0,004 MPa (30 mm Hg), 35°C) i otrzymano zatężoną objętość około 5 ml produktu. Ponownie dodano toluenu (100 ml) i mieszaninę zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem, w wyniku czego otrzymano surowy produkt, który nadal zawierał trochę kwasu. Produkt rozdzielono pomiędzy octan etylu i nasycony wodorowęglan sodu, produkt organiczny oddzielono, wysuszono nad siarczanem sodu, zdekantowano i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość, mieszaninę izomerów olefin (około 185 mg, 0,461 mmola (teoretycznie)) roztworzono w dichlorometanie (50 ml) w 23°C i poddano działaniu jodu (80 mg). Mieszaninie pozwolono wymieszać się w 23°C przez 12 godzin (godz.). Mieszaninę poddano działaniu nasyconego wodorowęglanu sodu (10 ml) i 5% wodnego roztworu wodorosiarczynu sodu (10 ml). Mieszaninę rozcieńczono octanem etylu (200 ml) i produkt organiczny przemyto nasyconym wodorowęglanem sodu (100 ml), wysuszono nad siarczanem sodu, zdekantowano i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem, w wyniku czego otrzymano surowy produkt. Ten surowy produkt oczyszczono na krzemionce (40 ml, 6:4 7:3 octan etylu/heksan) i połączono wszystkie frakcje zawierające pożądany produkt, zatężono i w wyniku wytrącenia z dwuwarstwy dichlorometan/heksan (1:3) otrzymano 3-[E-2-(3,4-dimetoksyfenylo)winylo]-6-(3-metoksy-4-hydroksyfenylo)-1H-indazol w postaci białej substancji stałej (połączone rzuty 93 mg): Rf związku wyjściowego (zw. wyjść.) 0,42, produktu (prod.) 0,35 (octan etylu-heksan 7:3); FTIR (cienki film) 3324, 1600, 1514, 1463, 1422, 1264, 1137, 1024, 959, 852 cm-1; 1H NMR (CDCI3) δ 10,0 (bs, 1H), 8,08 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 7,59 (s, 1H), 7,49 (d, 1H, J = 16,6 Hz), 7,45 (dd, 1H, J = 1,4, 8,4 Hz), 7,34 (d, 1H, J = 16,6 Hz), 7,20-7,12 (m, 4H), 7,03 (d, 1H, J = 8,0 Hz), 6,91 (d, 1H, J = 8,2 Hz), 5,68 (bs, 1H), 3,99 (s, 3H), 3,97 (s, 3H), 3,93 (s, 3H);
13C NMR (CDCI3) δ 149,6, 149,5, 146,0, 144,0, 142,6, 140,8, 133,9, 131,4, 130,7, 121,7, 121,4, 120,9, 120,4, 120,2, 118,6, 115,4, 111,7, 110,8, 109,1, 108,2, 56,4, 56,3, 56,2. HRMS (ES) [m+H]/z obliczono 403,1658, stwierdzono 403,1658. [m-H]/z obliczono 401, stwierdzono 401.
PL 212 108 B1
Związek wyjściowy wytworzono w następujący sposób:
Do 6-aminoindazolu (40,8 g, 0,3065 mola, 1 równoważnik), w 2-litrowej (2 l) okrągłodennej kolbie zawierającej duże mieszadło magnetyczne, dodano lodu (256 g), następnie wody (128 ml) i naczynie reakcyjne wstawiono do łaźni lodowej. Do tej zawiesiny w trakcie mieszania w 0°C dodano stężonego wodnego roztworu HCl (128 ml, 1,53 mola, 5 równoważników). Bezpośrednio potem dodano roztworu NaNO2 (23,3 g, 0,338 mola, 1,1 równoważnika) w wodzie (96 ml). Po 10 minutach mieszania w 0°C, najpierw dodano bardzo wolno KI (61 g, 0,368 mola, 1,2 równoważnika) (ponieważ w czasie dodawania około 100 mg małymi porcjami KI, nagle wydzielał się gaz), potem trochę szybciej (całkowity czas dodawania wyniósł 5 minut). Zimną łaźnię usunięto i mieszaninę reakcyjną ogrzano do 40°C (wydzielił się gaz). Gdy szybkość wydzielania się gazu zmniejszyła się (około 30 minut) mieszaninę reakcyjną ogrzano do 50°C przez 30 minut. Następnie mieszaninę ochłodzono do 23°C i w celu zobojętnienia dodano 3N NaOH (320 ml), następnie 50% nasyconego roztworu NaHCO3 (320 ml). Zawiesinę następnie przesączono przez lejek Bϋchnera i otrzymano ciemno czerwonawo-brązową substancję stałą. Substancję stałą roztworzono w ciepłym THF (800 ml) i dodano w trakcie mieszania krzemionki (600 ml, bezwodna). Do tej zawiesiny dodano heksanu (1,2 litra) i mieszaninę przesączono pod próżnią przez wkład z krzemionki (300 ml) na dużym sączku ze spiekanego szkła. Krzemionkę dodatkowo przemyto 2 litrami 40% THF w heksanie. Przesącze połączono i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem, w wyniku czego otrzymano substancję stałą. Substancję stałą dodatkowo roztarto z octanem etylu (około 100 ml), przesączono i wysuszono pod zmniejszonym ciśnieniem, w wyniku czego otrzymano 6-jodo-1H-indazol w postaci jasnobrązowej substancji stałej (36,1 g, wydajność 48%): Rf zw. wyjść. 0,12, prod. 0,48 (Heks-EtOAc 1:1); 1H NMR (300 MHz, CDCI3) 7,9 (s, 1H), 7,8 (s, 1H), 7,42 (d, 1H), 7,33 (d, 1H); MS (ES) [m+H]/z Obliczono 245, Stwierdzono 245, [m-H]/z Obliczono 243, Stwierdzono 243.
Do roztworu 6-jodo-1H-indazolu (7,35 g, 30,1 mmola, 1 równoważnik) w THF (100 ml) ochłodzonego do 0°C w atmosferze argonu dodano t-butanolanu sodu (2,89 g, 30,1 mmola, 1 równoważnik). Zaobserwowano zmianę barwy z pomarańczowej na czerwoną. W jednej porcji dodano chlorku mezytylenosulfonylu (6,60 g, 30,1 mmola, 1 równoważnik) i łaźnię lodową usunięto pozwalając mieszaninie reakcyjnej ogrzać się do 23°C. Po 40 minutach mieszaninę zadano nasyconym chlorkiem amonu i rozdzielono pomiędzy wodę i octan etylu. Fazę wodną wyekstrahowano łącznie 3 razy octanem etylu. Połączony produkt organiczny przemyto solanką, wysuszono nad siarczanem sodu i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem, w wyniku czego otrzymano 6-jodo-1-(2,4,6-trimetylobenzenosulfonylo)-1H-indazol w postaci pomarańczowej substancji stałej (12,8 g, wydajność 100%, mieszanina 2:1). 1H NMR (CDCI3) 8,51 (s, 1H), 7,95 (s, 0,66H, główny izomer), 7,91 (s, 0,33H, drugorzędowy izomer), 7,47 (d, 0,33H, J = 8,4 Hz), 7,29 (d, 0,33H, J = 8,4 Hz), 7,26 (d, 0,66H, J = 8,9 Hz), 7,18 (d, 0,66H, 8,9 Hz), 6,84 (s, 2H), 2,51 (s, 6H), 2,15 (s, 3H).
PL 212 108 B1
Mieszaninę 6-jodo-1-(2,4,6-trimetylobenzenosulfonylo)-1H-indazolu (5,78 g, 13,56 mmola, 1,00 równoważnik) i kwasu 3-metoksy-4-(metoksymetoksy)benzenoboronowego (3,45 g, 16,27 mmola, 1,20 równoważnika) w atmosferze argonu rozpuszczono w dioksanie (15 ml) i wodzie (2,0 ml). Do tego roztworu dodano trietyloaminy (2,83 ml, 20,3 mmola, 1,5 równoważnika), węglanu potasu (2,8 g, 20,3 mmola, 1,5 równoważnika) i dichlorobis(trifenylofosfina)palladu (476 mg, 0,678 mmola, 0,05 równoważnika). Mieszaninę reakcyjną ogrzano do 90°C przez 2 godziny, a następnie ochłodzono do 23°C. Mieszaninę rozdzielono pomiędzy octan etylu (250 ml) i nasycony wodorowęglan sodu (150 ml). Produkt organiczny wysuszono nad siarczanem sodu, zdekantowano i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem, w wyniku czego otrzymano surowy 6-(3-metoksy-4-metoksymetoksyfenylo)-1-(2,4,6-trimetylobenzenosulfonylo)-1H-indazol, który wysuszono pod wysoką próżnią w ciągu 15 godzin i użyto bez dalszego oczyszczania.
Kwas 3-metoksy-4-(metoksymetoksy)benzenoboronowy wytworzono w następujący sposób: W atmosferze argonu w 100 ml kolbie wytworzono mieszaninę 50% KOH w wodzie (20 g KOH, 7 równoważników, 20 g lodu). Do tej intensywnie mieszanej mieszaniny w 0°C (trzymano w łaźni lodowej) dodano dichlorometanu (50 ml), następnie 4-bromo-2-metoksyfenolu (10,1 g, 50 mmoli, 1,00 równoważnik), chlorku metoksymetylu (MOMCl) (4,00 ml, 42,5 mmola, 1,05 równoważnika) i bromku tetrabutyloamoniowego (322 mg, 1 mmol, 0,02 równoważnika). Łaźnię usunięto i mieszaninę powoli ogrzewano do 23°C w trakcie intensywnego mieszania przez 2 godziny. Mieszaninę przeniesiono do rozdzielacza i rozcieńczono dichlorometanem (350 ml) i wodą (300 ml), których użyto do przeniesienia. Produkt organiczny (warstwę dolną) oddzielono, wysuszono nad siarczanem sodu, zdekantowano i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem, w wyniku czego otrzymano 4-bromo-2-metoksy-1-(metoksy1 metoksy)benzen w postaci żółtej cieczy, który był czysty, jak wykazała analiza 1H NMR (11,9 g, 97%): 1H NMR (CDCI3) δ 7,0 (s, 3H), 5,13 (s, 2H), 3,84 (s, 3H), 3,47 (s, 3H). MS (El) [m+H]/z Obliczono 235, Stwierdzono 235. W 50 ml okrągłodennej kolbie 4-bromo-2-metoksy-1-(metoksymetoksy)benzen (4,80 g, 19,4 mmola, 1,00 równoważnik) roztworzono w THF (35 ml) i ochłodzono do -78°C (20 minut przy tej objętości). Do tego dodano n-BuLi (12,75 ml, 1,6 M w heksanie, 20,4 mmola, 1,05 równoważnika) i mieszaninie pozwolono wymieszać się w -78°C przez 40 minut. Następnie dodano ją przez rurkę do drugiej kolby zawierającej B(OMe)3 (22 ml, 194 mmole, 10 równoważników) w THF (50 ml) w -78°C. Po 20 minutach zimną łaźnię usunięto. Po 15 minutach ogrzewania (około 0°C, lód z boku kolby zaczynał topić się) do mieszaniny reakcyjnej dodano wody (50 ml), potem mieszano przez 45 minut. Mieszaninę zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem w celu usunięcia większości THF, a następnie rozdzielono pomiędzy octan etylu (300 ml) i wodę (150 ml), którą zakwaszono dodawszy małej ilości 20% kwasu cytrynowego (około 10 ml). Produkt organiczny wysuszono nad siarczanem sodu i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem, w wyniku czego otrzymano substancję stałą. W wyniku roztarcia z octanem etylu (10 ml) i heksanem (5 ml), a następnie przesączenia, otrzymano kwas 3-metoksy-4-(metoksymetoksy)benzenoboronowy w postaci białej substancji stałej (3,15 g, 77%): Rf zw. wyjść. 0,59, prod. 0,18 (octan etylu-heksan 1:1); 1H NMR (CDCI3) δ 7,85 (d, 1H, J = 8 Hz), 7,72 (s, 1H), 7,22 (d, 1H, J = 8 Hz), 5,30 (s, 2H), 4,00 (s, 3H), 3,55 (s, 3H).
PL 212 108 B1
Nieoczyszczony 6-(3-metoksy-4-metoksymetoksyfenylo)-1-(2,4,6-trimetylobenzenosulfonylo)-1H-indazol (w atmosferze argonu) rozpuszczono w THF (20 ml) i poddano działaniu 1N NaOH w MeOH (70 ml odgazowano przez przepuszczanie pęcherzykami argonu w ciągu 3-5 minut). Mieszaninę ogrzano do 45°C w ciągu 1 godziny i pozostawiono do ochłodzenia. Mieszaninę zobojętniono dodawszy 1N HCl (50 ml), następnie nasyconego wodorowęglanu sodu (200 ml). Produkt wyekstrahowano octanem etylu (350 ml), wysuszono nad siarczanem sodu i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem, w wyniku czego otrzymano surowy 6-(3-metoksy-4-metoksymetoksyfenylo)-1H-indazol. Po oczyszczeniu drogą chromatografii na żelu krzemionkowym (500 ml krzemionka, 20% octan etylu w benzenie (1,8 litra), 30% octan etylu w benzenie (1,8 litra)) otrzymano 6-(3-metoksy-4-metoksymetoksyfenylo)-1H-indazol (1,19 g, 31%): 1H NMR (CDCI3) δ 7,80 (s, 1H), 7,69 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 7,52 (s, 1H), 7,29 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 7,16 (s, 1H), 7,13 (s, 1H), 7,08 (s, 1H). MS (ES) [m+Na] /z Obliczono 337, Stwierdzono 337; [m+Cl] /z Obliczono 349, Stwierdzono 349.
W 100-ml okrągłodennej kolbie w atmosferze argonu, 6-(3-metoksy-4-metoksymetoksyfenylo)-1H-indazol (1,19 g, 4,18 mmola, 1 równoważnik) rozpuszczono w dioksanie (25 ml) i 3N NaOH (14 ml). Tę mieszaninę poddano działaniu jodu (1,17 g, 14,60 mmola, 1,10 równoważnika), który dodano w około 5 porcjach (przez około 10 minut). Kilka (około 4) dodatkowych porcji jodu (50 mg każda) dodawano do chwili zakończenia reakcji stwierdzonej wizualnie po analizie TLC (3 : 7 octan etylu/heksan). Mieszaninę zakwaszono z użyciem 20% roztworu kwasu cytrynowego (25 ml) i 5% roztworu NaHSO3 (20 ml). Mieszaninę rozdzielono pomiędzy octan etylu (150 ml) i wodę (100 ml). Produkt organiczny przemyto nasyconym wodorowęglanem sodu (80 ml) i solanką (50 ml), po czym wysuszono nad siarczanem sodu i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem. Po oczyszczeniu drogą krystalizacji z octanu etylu (3 ml), następnie heksanu (7 ml), otrzymano czysty 3-jodo-6-(3-metoksy-4-metoksymetoksyfenylo)-1-indazol w postaci substancji stałej (1,33 g, 78%): 1H NMR (CDCl3) δ 10,48 (bs, 1H), 7,62 (s, 1H), 7,57 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 7,47 (dd, 1H, J = 1,3, 8,5 Hz), 7,18 (m, 3H), 5,29 (s, 2H), 3,99 (s, 3H), 3,55 (s, 3H).
W 100 ml okrągłodennej kolbie 3-jodo-6-(3-metoksy-4-metoksymetoksyfenylo)-1H-indazol (921 mg, 2,245 mmola, 1,00 równoważnik) rozpuszczono w THF (36 ml) i ochłodzono do -78°C (w tym układzie pozostawiono na 8 minut). Dodano roztworu PhLi (2,5 ml, 1,8M, 4,49 mmola, 2,00 równoważniki) i mieszaninie pozwolono wymieszać się w ciągu 30 minut. Dodano roztworu s-BuLi (3,63 ml, 4,71 mmola,
PL 212 108 B1
2,1 równoważnika) i mieszaninie reakcyjnej pozwolono wymieszać się przez 1 godzinę w -78°C. Dodano czystego DMF (1,4 ml, 18 mmoli, 8,0 równoważników). Zimną łaźnię usunięto i mieszaninie reakcyjnej pozwolono powoli ogrzać się do 0°C na powietrzu. Gdy lód stopił się dodano nasyconego wodorowęglanu sodu (20 ml). Produkt wyekstrahowano octanem etylu (200 ml) z nasyconego wodorowęglanu sodu (75 ml więcej), wysuszono nad siarczanem sodu, zdekantowano i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem. Po oczyszczeniu drogą chromatografii na żelu krzemionkowym (450 ml krzemionka, 4:6 octan etylu/heksan) otrzymano 6-(3-metoksy-4-metoksymetoksyfenylo)-1H-indazolo-3-karbaldehyd (498 mg, 71%)): Rf zw. wyjść. 0,30, prod. 0,14 (octan etylu-heksan 4:6); 1H NMR (CDCis) δ 10,85 (bs, 1H), 10,25 (s, 1H), 8,37 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 7,67 (s, 1H), 7,60 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 6,26 (d, 1H, J = 8,7 Hz), 7,19 (m, 2H), 5,30 (s, 2H), 3,99 (s, 3H), 3,55 (s, 3H).
6-(3-metoksy-4-metoksymetoksyfenylo)-1H-indazolo-3-karbaldehyd (441 mg, 1,41 mmola, 1,0 równoważnik) roztworzono z uzyskaniem suspensji w dichlorometanie (15 ml) i ochłodzono do 0°C. Tę mieszaninę poddano działaniu chlorku mezytylenosulfonylu (324 mg, 1,48 mmola, 1,05 równoważnika) i dimetyloaminopirydyny (DMAP) (181 mg, 1,48 mmola, 1,05 równoważnika). Mieszaninie pozwolono wymieszać się w ciągu 1 godziny w 0°C i zadano ją dodatkowo wodą. Mieszaninę rozdzielono pomiędzy wodę i warstwę organiczną 1:1 octan etylu/heksan. Produkt organiczny wysuszono nad siarczanem sodu, zdekantowano i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem, w wyniku czego otrzymano surowy produkt, który oczyszczono drogą chromatografii na żelu krzemionkowym (50 ml krzemionka, octan etylu/heksan 3:7), w wyniku czego otrzymano 6-(3-metoksy-4-metoksymetoksyfenylo)-1-(2,4,6-trimetylobenzenosulfonylo)-1 H-indazolo-3-karbaldehyd (374 mg, 54%): Rf zw. wyjść. 0,17, prod. 0,53 (octan etylu-heksan 4:6); 1H NMR (CDCi3) δ 10,20 (s, 1H), 8,41 (s, 1H), 8,37 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 7,73 (dd, 1H, J = 1,4, 8,4 Hz), 7,3 (m, 3H), 7,08 (s, 2H), 5,36 (s, 2H), 4,08 (s, 3H), 3,71 (s, 3H), 2,74 (s, 6H), 2,40 (s, 3H).
Subtelnie rozdrobniony bromek trifenylo(3,4-dimetoksybenzylo)fosfoniowy (1,09 g, 2,22 mmola, 4,0 równoważniki) roztworzono z uzyskaniem zawiesiny w THF (15 ml) i ochłodzono ją do -78°C. Do tej mieszaniny dodano n-BuLi (1,04 ml, 1,6M, 1,66 mmola, 3,0 równoważniki) i otrzymano czerwony/pomarańczowy roztwór. Mieszaninie pozwolono ogrzać się do 23°C w ciągu 1 godziny. Mieszaninę tę następnie
PL 212 108 B1 dodano przez rurkę do roztworu 6-(3-metoksy-4-metoksymetoksyfenylo)-1-(2,4,6-trimetylobenzenosulfonylo)-1H-indazolo-3-karbaldehydu (274 mg, 0,554 mmola, 1,0 równoważnik) o temperaturze 0°C w THF (5 ml). Otrzymanej mieszaninie pozwolono wymieszać się w 0°C w ciągu 10 minut i zadano nasyconym wodorowęglanem sodu. Otrzymaną mieszaninę rozdzielono pomiędzy nasycony wodorowęglan sodu i octan etylu. Produkt organiczny zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem i pozostałość oczyszczono drogą chromatografii na żelu krzemionkowym (50 ml krzemionki, 3:7 4:6 octan etylu/heksan), w wyniku czego otrzymano 2,5:1 mieszaninę cis/trans 3-[2-(3,4-dimetoksyfenylo)winylo]-6-(3-metoksy-4-metoksymetoksyfenylo)-1-(2,4,6-trimetylobenzenosulfonylo)-1H-indazolu (289 mg, 83%); Rf zw. wyjść. 0,53, prod. 0,32 (octan etylu-heksan 4:6); 1H NMR (CDCfe) δ 8,35 (s, 0,3H), 8,32 (s, 0,7H), 8,03 (d, 0,3H, J = 8,4 Hz), 7,60-6,85 (m, H), 6,65 (d, 0,7H, J = 8,4 Hz), 6,60 (d, 0,7H, J = 12,5 Hz), 5,30 (s, 0,6H), 5,29 (s, 1,4H), 4,003,50 (8 singletów, 12H), 2,72 (s, 1,8H), 2,67 (s, 4,2H), 2,34 (s, 3H); MS (ES) [m+H]/z Obliczono 629, Stwierdzono 629, [m-H]/z Obliczono 627, Stwierdzono 627.
(ix)
W atmosferze argonu wytworzono 1M roztwór KOH (1,0 g, 17,8 mmola) w mieszaninie 1:1 woda/MeOH (łącznie 18 ml) i odgazowano pod próżnią/cykle oczyszczania argonem (5 razy). W oddzielnej kolbie 3-[2-(3,4-dimetoksyfenylo)winylo]-6-(3-metoksy-4-metoksymetoksyfenylo)-1-(2,4,6-trimetylobenzenosulfonylo)-1H-indazol (289 mg, 0,461 mmola, 1,0 równoważnik) rozpuszczono w THF (8 ml) w atmosferze argonu. Do tego roztworu dodano powyższy 1M roztwór KOH (10 ml, 1:1 woda/MeOH). Mieszaninę reakcyjną ogrzano do 30°C i pozwolono jej wymieszać się w ciągu 7 godzin. Mieszaninę reakcyjną zobojętniono z użyciem 20% roztworu kwasu cytrynowego (7 ml). Otrzymaną mieszaninę rozdzielono pomiędzy octan etylu (150 ml) i wodę (100 ml). Produkt organiczny oddzielono, wysuszono nad siarczanem sodu, zdekantowano i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem, w wyniku czego otrzymano cis i trans 3-[2-(3,4-dimetoksyfenylo)winylo]-6-(3-metoksy-4-metoksymetoksyfenylo)-1H1
-indazol (użyto surowy): Rf zw. wyjść. 0,46, prod.1 0,17, prod.2 0,23 (octan etylu-heksan 1:1); 1H NMR izomer cis (CDCl3) δ 7,55 (s, 1H), 7,3-7,1 (m, 6H), 7,02 (dd, 1H, J = 1,9, 8,3 Hz), 6,85 (d, 1H, J = 12,5 Hz), 6,78 (d, 1H, J = 12,5 Hz), 6,74 (d, 1H, J = 8,3 Hz), 5,21 (s, 2H), 3,88 (s, 3H), 3,70 (s, 3H), 3,43 (s, 3H), 3,42 (s, 3H). MS (ES) [m+H]/z Obliczono 447, Stwierdzono 447, [m-H]/z Obliczono 445, stwierdzono 445.
mmola) rozpuszczono w THF (0,6 ml) i poddano działaniu fluorku tetrabutyloamoniowego (TBAF, 1M w THF, 0,6 ml). Mieszaninę ogrzano do 60°C w atmosferze argonu w ciągu 4 godzin. Mieszaninę
PL 212 108 B1 ochłodzono, zobojętniono z użyciem nadmiaru nasyconego wodorowęglanu sodu i produkt organiczny wyekstrahowano octanem etylu i zatężono. Tę mieszaninę 3 związków (wizualizacja drogą TLC) poddano działaniu THF-wody-TFA (1:1:2, 4 ml) przez 30 minut. Mieszaninę rozcieńczono toluenem (20 ml), zatężono, zobojętniono z użyciem nadmiaru nasyconego wodorowęglanu sodu i produkt organiczny wyekstrahowano octanem etylu. Produkt organiczny wysuszono nad siarczanem sodu, zdekantowano i zatężono. Po oczyszczeniu drogą chromatografii na żelu krzemionkowym (2:8 octan etylu-heksan) otrzymano 6-(1-fenylowinylo)-3-styrylo-1H-indazol (4,6 mg, 40%): Rf zw. wyjść. 0,62, prod. 0,24 (octan etylu-heksan 3:7); 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 7,99 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 7,60-7,25 (m, 14H), 5,58 (d, 1H, J = 1,1 Hz), 5,56 (d, 1H, J = 1,1 Hz); HRMS (FAB) [m+H]/z; Obliczono 323,1548, Stwierdzono 323,1545.
Związek wyjściowy wytworzono w następujący sposób:
6-Jodoindazol przeprowadzono w 3,6-dijodoindazol (82%) sposobem opisanym w przykładzie 1, etap (v): 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 10,3 (bs, 1H), 7,90 (s, 1H), 7,52 (dd, 1H, J = 1,2, 8,5 Hz), 7,24 (d, 1H, J = 8,5 Hz).
3,6-Dijodoindazolu (755 mg, 2,04 mmola) dodano do 50% KOH (2,5 g w 2,5 ml wody) w 0°C i dodano dichlorometanu (4 ml). Do tej mieszaniny dodano bromku tetrabutyloamoniowego (TBABr, 6,6 mg, 0,02 mmola, 0,01 równoważnika) i w ciągu 3 minut wkroplono chlorek 2-(trimetylosilanylo)etoksymetylu (SEM-Cl, 397 pi, 2,24 mmola, 1,10 równoważnika). Mieszaninę mieszano szybko w 0°C przez 1,5 godziny. Dodano wody (20 ml) i dichlorometanu (20 ml) i produkt organiczny oddzielono, wysuszono nad siarczanem sodu i zatężono. Drogą chromatografii na żelu krzemionkowym (5% octan etylu w heksanie; 150 ml krzemionki) otrzymano 2 związki izomeryczne (1-SEM, 763 mg, 75%; i 2-SEM, 105 mg, 10%): Rf zw. wyjść. 0,08, prod. 0,34 i 0,27 (octan etylu-heksan 1:9); 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8,0 (s, 1H), 7,55 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 7,24 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 5,69 (s, 2H), 3,58 (t, 2H, J = 8,2 Hz), 0,90 (t, 2H, J = 8,2 Hz), -0,1 (s, 9H).
1-Bromostyren (26 pl, 0,20 mmola, 2,0 równoważniki) rozpuszczono w THF (0,75 ml), ochłodzono do -78°C i poddano działaniu t-BuLi (235 pl, 0,40 mmola, 1,70 M, 4,0 równoważniki). Mieszaninie pozwolono ogrzać się do -42°C w ciągu 10 minut i dodano do świeżo wysuszonego chlorku cynku (34 mg, 0,25 mmola, 2,5 równoważnika). Otrzymanemu roztworowi pozwolono ogrzać się do 23°C
PL 212 108 B1 w trakcie mieszania przez 25 minut. Tę mieszaninę dodano do mieszaniny czystego 3,6-dijodo-1-[2-(trimetylosilanylo)etoksymetylo]-1H-indazolu (50 mg, 0,10 mmola, 1 równoważnik) i Pd(PPh3)4 (5 mg, 0,004 mmola, 0,04 równoważnika). Po 10 minutach stwierdzono drogą TLC, że reakcja zakończyła się i mieszaninę zadano nasyconym wodorowęglanem sodu. Produkt organiczny wyekstrahowano octanem etylu, wysuszono nad siarczanem sodu i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem. Drogą chromatografii na żelu krzemionkowym (5:95 octan etylu-heksan) otrzymano 3-jodo-6-(1-fenylowinylo)-1-[2-(trimetylosilanylo)etoksymetylo]-1H-indazol (33,1 mg, 70%): Rf zw. wyjść. 0,39, prod. 0,36 (octan etylu-heksan 1:9); 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 7,50 (s, 1H), 7,42 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 7,33 (m, 5H), 7,22 (dd, 1H, J = 1,2, 8,4 Hz), 5,68 (s, 2H), 5,59 (d, 1H, J = 1,0 Hz), 5,57 (d, 1H, J = 1,0 Hz), 3,58 (t, 2H, J = 8,2 Hz), 0,88 (t, 2H, J = 8,2 Hz), 0,09 (s, 9H); HRMS (FAB) [m+H]/z, Obliczono 477,0859, Stwierdzono 477,0866.
Wytwarzanie 6-(1-fenylowinylo)-3-styrylo-1-[2-(trimetylosilanylo)etoksymetylo]-1H-indazolu: E-2-Bromostyren (23 pi, 0,174 mmola, 2,5 równoważnika) rozpuszczono w THF (1,0 ml) i ochłodzono do -78°C. Dodano n-BuLi (205 pi, 0,348 mmola, 5,00 równoważników) i mieszaninę ogrzano do -42°C przez 7 minut, w wyniku czego otrzymano ciemno czerwoną mieszaninę. Roztwór dodano przez rurkę do świeżo wysuszonego chlorku cynku (29 mg, 0,209 mmoia, 3,00 równoważniki) i mieszaninie pozwolono ogrzać się do 23°C w trakcie mieszania przez 20 minut. Ten roztwór dodano przez rurkę do czystej mieszaniny 3-jodo-6-(1-fenyiowinyio)-1-[2-(trimetyiosiianyio)etoksymetyio]-1H-indazoiu (33,1 mg, 0,0696 mmoia, 1,0 równoważnik) i Pd(PPh3)4 (4 mg, 0,0035 mmoia, 0,05 równoważnika) w 23°C. Temu roztworowi pozwolono wymieszać się przez 15 minut i poddano działaniu nasyconego wodorowęgianu sodu i wyekstrahowano octanem etyiu. Produkt organiczny wysuszono nad siarczanem sodu, zdekantowano i zatężono. Po oczyszczeniu drogą chromatografii na żelu krzemionkowym z użyciem 2 koiumn (5:95 octan etyiu-heksan; 12 mi krzemionki: i 1:99 octan etyiu-benzen; 12 mi krzemionki) otrzymano 6-(1-fenyiowinyio)-3-styryio-1-[2-(trimetyiosiianyio)etoksymetyio]-1H-indazoi (16,2 mg, 51%): Rf zw. wyjść. 0,38, prod. 0,29 (octan etyiu:heksan 1:9); 1H NMR (300 MHz, CDCi3) δ 7,98 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 7,62-7,22 (m, 14H), 5,71 (s, 2H), 5,57 (s, 2H), 3,60 (t, 2H, J = 8,2 Hz), 0,90 (t, 2H, J = 8,2 Hz), -0,08 (s, 9H); HRMS (FAB) [m+H]/z Obiiczono 453,2362. Stwierdzono 453,2354.
P r z y k ł a d 3: N-Metyio-N-(3-styryio-1H-indazoi-6-iio)-benzeno-1,3-diamina
Do N-metyio-N-{3-styryio-1-[2-(trimetyiosiianyio)etoksymetyio]-1H-indazoi-6-iio}benzeno-1,3-diaminy (237 mg, 0,5 mmoia) dodano 1M TBAF w THF (10,1 mi, 10,1 mmola), następnie etylenodiaminy (0,34 mi, 5,04 mmoia, 10 równoważników). Otrzymaną mieszaninę ogrzano do 70°C przez 5 godzin. Reakcję następnie przerwano nasyconym roztworem NaHCO3 (10 mi) i wyekstrahowano 3 x 35 mi EtOAc. Połączone fazy EtOAc przemyto 5 x 20 mi H2O, następnie solanką (20 mi), wysuszono nad Na2SO4, zdekantowano i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem do piany. Surowy produkt oczyszczono drogą chromatografii na żelu krzemionkowym (9:1 dichiorometan/octan etyiu), w wyniku czego otrzymano N-metyio-N-(3-styryio-1H-indazoi-6-iio)benzeno-1,3-diaminę w postaci piany (120 mg, wyPL 212 108 B1 dajność 70%). Rf zw. wyjść. 0,73, Rf prod. 0,27 (dichlorometan:octan etylu 7:3); 13C NMR (75 MHz, CDCl3) δ 150,3, 148,8, 147,5, 147,5, 143,9, 143,4, 137,5, 131,1, 130,3, 129,3, 128,9, 128,2, 127,9,
126,7, 121,0, 120,5, 117,0, 116,0, 112,6, 109,8, 109,0, 98,3, 40,7; LCMS (ESI) [M+H]/z; Obliczono 341. Stwierdzono 341. Analiza, obliczono: C 77,62; H 5,92; N 16,46. Stwierdzono: C 76,16; H 5,88; N 15,95.
Związek wyjściowy wytworzono w następujący sposób:
6-Nitro-1H-indazol przeprowadzono w 3-jodo-6-nitro-1H-indazol sposobem opisanym w przykładzie 1, etap (v) (50,6 g, 87%): FTIR (KBr) 3376, 3076, 2964, 2120, 1739, 1626, 1526, 1439, 1294, 1128, 954 cm-1; 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8,28 (s, 1H), 8,05 (s, 1H), 7,66 (d, 1H, J = 8,13 Hz), 7,45 (dd, 1H, J = 8,33, 1,38 Hz), 7,17 (d, 1H, J = 1,01 Hz), 7,14 (s, 1H), 7,03 (d, 1H, J = 8,04 Hz), 6,89 (s, 2H), 3,82 (s, 3H), 2,55 (s, 6H), 2,21 (s, 3H), 1,32 (s, 9H). MS (FAB) [M+H]/z; Obliczono 311. Stwierdzono 311. Analiza, obliczono: C 69,66; H 5,85; N 9,03. Stwierdzono: C 69,41; H 5,98; N 8,79.
3-Jodo-6-nitro-1H-indazol przeprowadzono w 6-nitro-3-jodo-[2-(trimetylosilanylo)etoksymetylo]-1 Η-indazol sposobem opisanym w przykładzie 2, etap (ii) (10,2 g, wydajność 81%): t.t. 58°C. Analiza, obliczono: C 37,24; H 4,33; N 10,02. Stwierdzono: C 37,21; H, 4,38; N 10,00.
Do 6-nitro-3-jodo-[2-(trimetylosilanylo)etoksymetylo]-1H-indazolu (11,0 g, 26,1 mmola), kwasu styryloboronowego (4,64, 31,4 mmola) i Pd(PPh3)4 (1,25 g, 1,08 mmola) w atmosferze argonu dodano toluenu (192 ml), MeOH (4 ml) i 2N roztworu wodnego NaOH (32,6 ml, 65,3 mmola). Otrzymaną heterogeniczną mieszaninę ogrzano do 90°C. Po 8 godzinach mieszaninę reakcyjną rozcieńczono EtOAc (150 ml) i wodą (50 ml), fazy rozdzielono i fazę organiczną wyekstrahowano 2 x 50 ml EtOAc. Połączoną fazę organiczną przemyto solanką (50 ml), następnie wysuszono nad Na2SO4, przesączono i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem. Surową mieszaninę reakcyjną oczyszczono drogą chromatografii na żelu krzemionkowym (1:9 EtOAc:heksan), w wyniku czego otrzymano 6-nitro-3-styrylo-1-[21
-(trimetylosilanylo)etoksymetylo]-1H-indazol w postaci żółtej substancji stałej (7,65 g, 74%): 1H NMR
PL 212 108 B1 (75 MHz, CDCl3) δ 148,3, 145,0, 141,3, 138,1, 134,2, 130,5, 129,9, 129,8, 129,5, 128,1, 127,4, 123,2,
119,8, 117,8, 108,2, 79,7, 68,5, 19,2, 0,0; MS (FAB) [M+Na]/z; Obliczono 418. Stwierdzono 418. Analiza, obliczono: C 63,77; H 6,37; N 10,62. Stwierdzono: C 64,04; H 6,29; N 10,56.
6-Nitro-3-styrylo-1-[2-(trimetylosilanylo)etoksymetylo]-1H-indazol (8,1 g, 20,5 mmola) rozpuszczono w DMF (75 ml) w 23°C w atmosferze argonu. Dodano SnCl2 (12,9 g, 67,7 mmola), następnie wody (1,7 ml, 92,2 mmola) i otrzymaną mieszaninę ogrzano do 50°C. Po 4 godzinach dodano 3N NaOH (45 ml, 135 mmoli), następnie EtOAc (100 ml). Otrzymaną emulsję przesączono na gorąco przez Celite i wkład Celite przemyto gorącym EtOAc (3x100 ml). Przesącz zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem, pozostałość rozpuszczono w EtOAc, przemyto solanką, wysuszono nad Na2SO4, przesączono i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem, w wyniku czego otrzymano substancję stałą. Surowy produkt oczyszczono drogą chromatografii na żelu krzemionkowym (2:8-7:3 octan etylu:heksan), w wyniku czego otrzymano 3-styrylo-1-[2-(trimetylosilanylo)etoksymetylo]-1H-indazol-6-iloaminę w postaci żółtej substancji stałej (5,1 g, wydajność 68%). MS (FAB) [M+H]/z; Obliczono 366, Stwierdzono 366.
(v)
W atmosferze argonu do 3-styrylo-1-[2-(trimetylosilanylo)etoksymetylo]-1H-indazol-6-iloaminy (1,1 g, 3 mmole, m-nitrojodobenzenu (0,9 g, 3,6 mmola), BINAP (0,07 g, 0,133 mmola), Pd2(dba)3 (34 mg, 0,0375 mmola) i Cs2CO3 (1,37 g, 4,2 mmola) dodano toluenu (6 ml). Otrzymaną heterogeniczną mieszaninę ogrzano do 80°C. Po 46 godzinach mieszaninę reakcyjną ochłodzono do 23°C, rozcieńczono octanem etylu (EtOAc) (20 ml) i przesączono. Dodano wody (5 ml), fazy rozdzielono i fazę organiczną wyekstrahowano 2 x 50 ml EtOAc. Połączony materiał organiczny przemyto solanką, następnie wysuszono nad Na2SO4, przesączono i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem. Surową mieszaninę reakcyjną oczyszczono drogą chromatografii na żelu krzemionkowym (z elucją mieszaniną 9:1 heksan:EtOAc), w wyniku czego otrzymano (3-nitrofenylo)-{3-styrylo-1-[2-(trimetylosilanylo)etoksymetylo]1H-indazol-6-ilo}aminę w postaci żółtej substancji stałej (7,65 g, 74%): TLC (heksan:EtOAc 7:3) Rf zw. wyjść. 0,16, Rf prod. 0,30 (octan etylu:heksan 3:7); FTIR (KBr) 3391, 3059, 2952, 2894, 1614, 1530, 1483, 1346, 1248, 1076, 836, 734 cm-1; 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 7,86 (s, 1H), 7,83 (s, 1H), 7,65 (dt, 1H, J = 2,21, 5,13 Hz), 7,15 - 7,41 (m, 5H), 6,93 (dd, 1H, J = 1,87, 8,67 Hz), 5,56 (s, 2H), 3,51 (t, 2H, J = 8,17 Hz), 0,81 (t, 2H, J = 7,96 Hz), -0,15 (s, 9H); 13C NMR (75 MHz, CDCl3) δ 149,6, 144,8,
143.5, 142,4, 140,9, 137,3, 131,8, 130,3, 129,0, 128,2, 126,7, 122,8, 122,6, 120,1, 119,3, 116,1,
115.6, 111,4, 98,5, 77,9, 66,7, 18,0, -1,2; MS (ESI) [M+H]/z Obliczono 487. Stwierdzono 487. Analiza, obliczono: C 66,64; H 6,21; N 11,51. Stwierdzono: C 66,91; H 6,21; N 11,44.
PL 212 108 B1
W atmosferze argonu do (3-nitrofenylo)-{3-styrylo-1-[2-(trimetylosilanylo)etoksymetylo]-1 H-indazol-6-ilo}aminy (434 mg, 0,89 mmola) w THF (5 ml) ochłodzono do -5°C, dodano siarczanu dimetylu (0,42 ml, 4,5 mmola), następnie LiHMDS (1M w THF) (1,8 ml, 1,8 mmola). Po 20 minutach reakcję przerwano nasyconym roztworem wodnym NH4Cl (2 ml), następnie wyekstrahowano 3 x 20 ml EtOAc. Połączony materiał organiczny przemyto solanką (10 ml), wysuszono nad Na2SO4, zdekantowano i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem. Po oczyszczeniu drogą chromatografii na żelu krzemionkowym (z elucją heksan:EtOAc 9:1) otrzymano metylo-(3-nitrofenylo)-{3-styrylo-1-[2-(trimetylosilanylo)etoksymetylo]-1H-indazol-6-ilo}aminę, w postaci oleju (367 mg, 82%): TLC (heksan:EtOAc 7:3); Rf zw. wyjść. 0,29, Rf prod. 0,39 (octan etylu:heksan 3:7); FTIR (KBr) 2951, 2894, 1611, 1528, 1485, 1348, 1248, 1077 cm-1; 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 7,99 (d, 1H, J = 8,67 Hz), 7,77 (t, 1H, J = 2,25 Hz), 7,72 (dd, 1H, J = 0,79, 2,09 Hz), 7,60, (d, 2H, J = 7,22 Hz), 7,26 - 7,54 (m, 7H), 7,19 (dd, 1H, J = 0,78, 2,41 Hz), 7,07 (dd, 1H, J = 1,85, 8,69 Hz), 5,70 (s, 2H), 3,63 (t, 2H, J = 8,10 Hz), 3,48 (s, 3H), 0,92 (t, 2H, J = 8,10 Hz), -0,04 (s, 9H); 13C NMR (75 MHz, CDCl3) δ 150,2, 149,6, 147,1, 143,5, 142,5, 137,3,
131,9, 129,8, 129,0, 128,2, 126,8, 123,1, 122,6, 120,2, 120,0, 119,7, 114,4, 111,4, 104,5, 78,0, 66,8, 41,1, 18,0, -1,2; LCMS (ESI) [M+H]/z; Obliczono 501, Stwierdzono 510.
Metylo-(3-nitrofenylo)-{3-styrylo-1-[2-(trimetylosilanylo)etoksymetylo]-1H-indazol-6-ilo}aminę przeprowadzono w N-metylo-N-{3-styrylo-1-[2-(trimetylosilanylo)etoksymetylo]-1 H-indazol-6-ilo}benzeno1,3-diaminę sposobem opisanym w przykładzie 3, etap (iv). Rf zw. wyjść. 0,55, Rf prod. 0,31 (octan etylu:heksan 3:7); FTIR (cienki film) 3455, 3360, 2951, 2893, 1621, 1601, 1494, 1449, 1249, 1074 cm-1; 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 7,81 (d, 1H, J = 8,8 Hz), 7,58 (d, 2H, J = 7,21 Hz), 7,26 - 7,50 (m, 5H), 7,12 (t, 1H, J = 7,93 Hz), 7,01 (d, 1H, J = 1,73 Hz), 6,95 (dd, 1H, J = 1,99, 8,85 Hz), 5,67 (s, 2H), 3,63 (t, 2H, J = 8,12 Hz), 3,38 (s, 3H), 0,93 (t, 2H, J = 8,13 Hz), -0,04 (s, 9H); 13C NMR (75 MHz, CDCl3) δ 150,3, 149,0, 147,7, 143,4, 143,0, 137,6, 131,3, 130,4, 128,9, 128,0, 126,7, 121,2, 120,6, 117,3, 117,0, 113,1, 110,1, 109,3, 97,5, 77,8, 66,6, 41,0, 18,0, -1,2; LCMS (ESI) [M+H]/z; Obliczono 471, Stwierdzono 471.
PL 212 108 B1
P r z y k ł a d 4: Metylofenylo-(3-styrylo-1H-indazol-6-ilo)amina
Metylofenylo-{3-styrylo-1-[2-(trimetylosilanylo)etoksymetylo]-1H-indazol-6-ilo}aminę przeprowadzono w metylofenylo-(3-styrylo-1H-indazol-6-ilo)aminę sposobem opisanym w przykładzie 3. MS (ESI) [M+H]/z Obliczono 326, Stwierdzono 326.
Materiał wyjściowy wytworzono w następujący sposób:
Do roztworu 3-styrylo-1-[2-(trimetylosilanylo)etoksymetylo]-1H-indazol-6-iloaminy (1,58 g, 4 mmole) w AcOH (14 ml), wody (3 ml) i stężonego HCl (1,67 ml) ochłodzonego do 2°C dodano roztworu NaNO2 (304 mg, 4,4 mmola) w wodzie (0,5 ml) w ciągu 5 minut. Otrzymany ciemnoczerwony roztwór mieszano w 2°C przez 0,5 godziny, następnie wkroplono roztwór KI (797 mg, 4,8 mmola) i I2 (610 mg, 2,4 mmola) w wodzie (1 ml) tak, że utrzymano temperaturę wewnątrz mieszaniny poniżej 5°C. Po godzinach w 2°C mieszaninie reakcyjnej pozwolono wymieszać się w 23°C w ciągu 17 godzin. Mieszaninę reakcyjną zadano 3N roztworem wodnym NaOH, rozcieńczono EtOAc (50 ml) i H2O (15 ml), fazy rozdzielono i fazę wodną wyekstrahowano 2 x 15 ml EtOAc. Połączoną fazę organiczną przemyto x 20 ml 5% NaHSO3, solanką (15 ml), wysuszono nad Na2SO4, zdekantowano i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem. Surową mieszaninę reakcyjną oczyszczono drogą chromatografii na żelu krzemionkowym (z elucją mieszaniną 1:1 heksan:EtOAc), w wyniku czego otrzymano 6-jodo-3-styrylo-1-[2-(trimetylosilanylo)etoksymetylo-1Η-indazol w postaci białej substancji stałej (1,3 g, wydajność 68%). 1H NMR (300 MHz, CDCh) δ 8,03 (s, 1H), 7,79 (d, 1H, J = 9,0 Hz), 7,30 - 7,60 (m, 8H), 5,73 (s, 2H), 3,63 (t, 2H, J = 6,0 Hz), 0,96 (t, 2H, J = 6,0 Hz), 0,0 (s, 9); 13C NMR (75 MHz, CDCh) δ 143,6, 142,4, 137,2, 132,1, 130,8, 129,0, 128,3, 126,8, 122,5, 122,4, 119,6, 119,5, 92,9, 78,1, 66,9, 18,0, -1,2. Analiza, obliczono: C 52,94; H 5,29; N 5,88. Stwierdzono: C 52,66; H 5,29; N 5,74.
PL 212 108 B1
6-Jodo-3-styrylo-1-[2-(trimetylosilanylo)etoksymetylo]-1 Η-indazol przeprowadzono w metylofenylo-{3-styrylo-1-[2-(trimetylosilanylo)etoksymetylo]-1H-indazol-6-ilo}aminę sposobem opisanym w przykładzie 3, etap (v). Rf zw. wyjść. 0,35 Rf prod. 0,13 (EtOAc-heksan 1:9); IR (KBr) 3031, 2951, 1625, 1595, 1498, 1449, 1326, 1303, 1248, 1212, 1076, 835, 694 cm-1; MS (ESI) [M+H]/z; Obliczono 456, Stwierdzono 456.
P r z y k ł a d 5(a): 6-[2-(Metylokarbamoilo)fenylosulfanylo]-3-E-[2-(pirydyn-2-ylo)etenylo]indazol
Związek z przykładu 5(a) wytworzono z 6-[2-(metylokarbamoilo)fenylosulfanylo]-3-E-[2-(pirydyn-2-ylo)etenylo]-1-[2-(trimetylosilanylo)etoksymetylo]-1H-indazolu sposobem podobnym do opisanego w przykładzie 3. Rf zw. wyjść. 0,8, prod. 0,15 (octan etylu); 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,45 (s, 1H), 8,72 (d, 1H, J = 3,9 Hz), 8,47 (m, 1H), 8,31 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 8,06 (d, 1H, J = 16,4 Hz), 7,92 (dt, 1H, J = 1,7, 7,6 Hz), 7,78 (d, 1H, J = 7,8 Hz), 7,71 (s, 1H), 7,68 (d, 1H, J = 16,5 Hz), 7,61 (dd, 1H, J = 1,7, 7,2 Hz), 7,45-7,36 (m, 3H), 7,31 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 7,17 (m, 1H), 2,89 (d, 3H, J = 4,6 Hz); 13C NMR (75 MHz, DMSO-d6) δ 167,8, 154,8, 149,5, 141,9, 141,8, 137,0, 136,8, 135,4, 132,5,
130,2, 130,0, 129,2, 127,7, 126,1, 125,4, 123,5, 122,5, 122,4, 121,6, 120,2, 114,5; LCMS (100% powierzchni) Rt = 3,5 minuty (dodatni) [M+H]/z; Obliczono 387, stwierdzono 387. Analiza z 0,1 cząst. H2O, 0,1 cząst. EtOAc Obliczono, C (67,78), H (4,82), N (14,11), S (8,08). Stwierdzono: C (67,78), H (4,77), N (14,06), S (8,08).
Związki wyjściowe wytworzono w następujący sposób:
(i)
6-Jodo-3-styrylo-1-[2-(trimetylosilanylo)etoksymetylo]-1H-indazol (30,0 g, 62,9 mmola) wytworzony w przykładzie 4, etap (i), rozpuszczono w dichlorometanie w atmosferze argonu (375 ml) i ochłodzono do -42°C w łaźni acetonitryl-suchy lód. Ozon przepuszczono pęcherzykami przez mieszaninę (1 l/minutę, 60 V, 1,8 A) przez 45 minut. Standardowe wskaźniki nie dały klarownego koloru zmiany związanego z kolorem tła roztworów. W celu uniknięcia nadmiernego utleniania przebieg reakcji monitorowano metodą TLC (1:9 EtOAc-Heks). Zatrzymano dodawanie ozonu i kolbę przepłukano azotem. Następnie dodano dimetylosulfidu (30 ml) i mieszaninę pozostawiono do ogrzania się do 23°C. Tę mieszaninę mieszano przez 4 godziny i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem. Olej umieszczono pod wysoką próżnią na 16 godzin. Pozostałość rozpuszczono w dichlorometanie (15 ml) i rozcieńczono heksanem (100 ml), w wyniku czego otrzymano kilka kryształów (nieoczekiwany produkt). Mieszaninę przesączono i przesącz zatężono. Pozostałość rozpuszczono w 8:2 Heks-EtOAc (250 ml), podziałano 50 ml krzemionki, przesączono i zatężono. Po 72 godzinach pod wysoką próżnią wytworzył się 6-jodo-3-karboksyaldehydo-1-[2-(trimetylosilanylo)etoksymetylo]-1H-indazol w postaci żółtej substancji stałej (24,17 g, około 95% czystość wg NMR, wydajność 91%): Rf zw. wyjść. 0,34, prod. 0,29 (octan etylu-heksan 1:9); 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 10,25 (s, 1H), 8,09 (s, 1H), 8,05 (d, 1H), 7,80 (d, 1H), 5,88 (s, 2H), 3,71 (t, 2H), 0,93 (t, 2H), 0,0 (s, 9H).
PL 212 108 B1
6-Jodo-3-karboksyaldehydo-1-[2-(trimetylosilanylo)etoksymetylo]-1H-indazol (24,0 g, 59,7 mmola) rozpuszczono w THF (350 ml) i ochłodzono do -5°C. Dodano do niego stałego wodorku potasu-chlorku-2-pikolilotrifenylofosfoniowego (45,7 g, 100 mmoli, 1,68 równoważnika). Mieszaninę reakcyjną mieszano przez 45 minut. Do mieszaniny dodano 3N HCl (20 ml), a następnie nasyconego wodnego roztworu wodorowęglanu sodu (50 ml) i uzyskano wartość pH 6. Nadmiar THF usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem, a pozostałość rozdzielono pomiędzy octan etylu i wodę. Warstwy organiczne przemyto nasyconym wodnym roztworem wodorowęglanu sodu, wodą, a warstwę organiczną oddzielono, wysuszono nad siarczanem sodu, zdekantowano i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość roztworzono w mieszaninie 1:9 octan etylu-heksan i przesączono. Przesącz oczyszczono metodą chromatografii na żelu krzemionkowym (2 l krzemionki, 20-30-50% octan etylu-heksan) i otrzymano 6-jodo-3-Ε-[2-(pirydyn-2-ylo)etenylo-1-[2-(trimetylosilanylo)etoksymetylo]-1H-indazol (18,9 g, wydajność 66%): Rf zw. wyjść. 0,52, prod. 0,25 (octan etylu-heksan 2:8); 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8,64 (m, 1H), 8,00 (d, 1H, J = 0,7 Hz), 7,87 (d, 1H, J = 16,4 Hz), 7,80 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 7,69 (td, 1H, J =
7.7, 1,8 Hz), 7,55 (d, 1H, J = 16,4 Hz), 7,55 (dd, 1H, J = 8,5, 1,3 Hz), 7,47 (d, 1H, J = 7,9 Hz), 7,18 (dd, 1H, J = 1,1, 4,8 Hz), 5,70 (s, 2H), 3,59 (t, 2H, J = 8,2 Hz), 0,90 (t, 2H, J = 8,2 Hz), -0,04 (s, 9H); 13C NMR (75 MHz, CDCl3) δ 156,8, 151,2, 144,2, 143,6, 138,0, 132,3, 132,2, 124,4, 124,0, 123,8,
123.7, 123,5, 120,7, 94,1, 79,4, 68,1, 19,17, 0,0.
(iii)
Do 200 ml okrągłodennej kolby odważono węglan cezu (13,7 g, 41,9 mmola, 2,5 równoważnika) i tę sól wysuszono pod wysoką próżnią z użyciem pistoletu wytwarzającego gorące powietrze. Następnie dodano katalizatora [Pd(dppf)Cl2-CH2Cl2] (1,37 g, 1,68 mmola, 0,1 równoważnika) i 6-jodo-3-E-[2-(pirydyn-2-ylo)etenylo-1-[2-(trimetylosilanylo)etoksymetylo]-1H-indazolu (8,0 g, 16,76 mmola) i mieszaninę roztworzono w DMF (71 ml). Do tej mieszaniny dodano tiosalicylanu metylu (4,62 ml, 33,5 mmola, 2,0 równoważniki) i naczynie ogrzano do 85°C w ciągu 4,5 godziny. Mieszaninę tę ochłodzono do 23°C, rozdzielono pomiędzy octan etylu (350 ml) i 50% nasycony wodny roztwór wodorowęglanu sodu (300 ml). Warstwy organiczne przemyto 10% wodorosiarczynem sodu (200 ml), solanką i warstwę organiczną oddzielono. Materiał organiczny wysuszono nad siarczanem sodu, zdekantowano i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem. W wyniku oczyszczania drogą chromatografii na żelu krzemionkowym (500 ml krzemionki; 30-40-50% octan etylu-heksan) otrzymano 6-[(2-metoksykarbonylofenylo)sulfanylo]-3-E-[2-(pirydyn-2-ylo)etenylo]-1-[2-(trimetylosilanylo)etoksymetylo]-1H-indazol (6,44 g, 74%): Rf zw. wyjść. 0,52, prod. 0,19 (octan etylu-heksan 3:7); FTIR (cienki film) 2950, 2887, 2356, 1713, 1585, 1464, 1433, 1250, 1076, 837 cm-1; 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8,70 (d, 1H), 8,12 (d, 1H), 8,04 (d, 1H), 7,99 (d, 1H, J = 16,4 Hz), 7,90 (s, 1H), 7,88 (t, 1H), 7,76 (d, 1H, J = 16,4 Hz), 7,62 (d, 1H), 7,55 (d, 1H), 7,30-7,15 (m, 3H), 6,92 (d, 1H), 5,80 (s, 2H), 4,01 (s, 3H), 3,78 (t, 2H), 0,96 (t, 2H), -0,03 (s, 9H); 13C NMR (75 MHz, CDCl3) δ 168,3, 156,8, 151,2, 144,3, 144,2, 143,2,
PL 212 108 B1
138,0, 133,8, 133,6, 132,5, 132,4, 129,9, 129,3, 128,5, 126,0, 124,7, 124,6, 123,8, 123,5, 118,3, 79,4, 68,2, 53,7, 19,2, 0,0; LCMS (100% powierzchni) Rt = 4,4 minuty, (dodatni) [M+H]/z Obliczono 518,2,
Do 6-[(2-metoksykarbonylofenylo)sulfanylo]-3-E-[2-(pirydyn-2-ylo)etenylo]-1-[2-(trimetylosilanylo)etoksymetylo]-1H-indazolu (8,50 g, 16,4 mmola) dodano THF (120 ml), metanolu (120 ml), wody (120 ml) i węglanu potasu (15,9 g, 115 mmoli, 7,0 równoważników). Mieszaninę tę ogrzano do 67°C i mieszano przez 22 godziny. Mieszaninę ochłodzono, usunięto nadmiar rozpuszczalników. Pozostałość rozdzielono pomiędzy octan etyIu (300 ml) i wodę (250 ml). Warstwę wodną zakwaszono 20% kwasem cytrynowym do wartości pH 5 (około 70 ml), a warstwę wodną osuszono. Warstwę organiczną przemyto wodą (50 ml) i dodano heksanu (100 ml), w wyniku czego wytworzył się osad w postaci kryształów, które powstały w warstwie octanu etylu. Substancję stałą odsączono i wysuszono, w wyniku czego otrzymano 6-[(2-karboksyfenylo)sulfanylo]-3-E-[2-(pirydyn-2-ylo)etenylo]-1-[2-(trimetylosilanylo)etoksymetylo]-1H-indazol (7,56 g, 91%): Rf zw. wyjść. 0,67, prod. 0,41 (octan etylu-heksan 8:2); 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8,60 (m, 1H), 8,10 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 8,04 (dd, 1H, J = 1,7, 7,7 Hz), 7,85 (d, 1H, J = 16,5 Hz), 7,83 (s, 1H), 7,70 (dt, 1H, J = 1,7, 7,7 Hz), 7,59 (d, 1H, J = 16,5 Hz), 7,52 (d, 1H, J = 7,9 Hz), 7,38 (dd, 1H, J = 1,3, 8,4 Hz), 7,22-7,10 (m, 3H), 6,80 (dd, 1H, J = 1,0, 8,0 Hz), 3,59 (t, 2H, J = 8,1 Hz), 0,85 (t, 2H, J = 8,8,1 Hz), -0,1 (s, 9H).
6-[(2-Karboksyfenylo)sulfanylo]-3-E-[2-(pirydyn-2-ylo)etenylo]-1-[2-(trimetylosilanylo)etoksymetylo]-1H-indazol (820 mg, 1,63 mmola) rozpuszczono w DMF (5 ml) i poddano działaniu metyloaminy (2M w THF, 4,1 ml, 8,13 mmola, 50 równoważników) i HATU (929 mg, 2,44 mmola, 1,5 równoważnika). Mieszaninę tę mieszano przez 30 minut, rozdzielono pomiędzy octan etylu i nasycony wodny roztwór wodorowęglanu sodu i warstwę organiczną oddzielono. Materiał organiczny wysuszono nad siarczanem sodu, zdekantowano i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem. W wyniku oczyszczania drogą chromatografii na żelu krzemionkowym (50 ml krzemionki; 60-70% octan etylu-heksan) otrzymano 6-[2-(metylokarbamoilo)fenylosulfanylo]-3-E-[2-(pirydyn-2-ylo)etenylo]-1-[2-(trimetylosilanylo)-etoksymetylo]-1H-indazol w postaci substancji stałej (795 mg, 94%): Rf zw. wyjść. 0,35, prod. 0,23 (octan etylu-heksan 6:4); FTIR (cienki film) 3306, 2951, 1643, 1606, 1587, 1563, 1469, 1433, 1410, 1303, 1249, 1217, 1075, 836 cm-1; 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8,70 (m, 1H), 8,06 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 7,94 (d, 1H, J = 16,3 Hz), 7,74 (dt, 1H, J = 1,8, 7,7 Hz), 7,70-7,60 (m, 3H), 7,52 (d, 1H, J = 7,9 Hz), 7,35-7,20 (m, 5H), 6,45 (bs, 1H), 5,80 (s, 2H), 3,62 (t, 2H), 3,00 (d, 3H), 0,93 (t, 2H), -0,05 (s, 9H); 13C NMR (75 MHz, CDCl3) δ 179,7, 169,9, 156,8, 151,1, 144,2, 143,0, 138,1, 136,1, 135,4, 133,2, 132,2, 132,1,
130,2, 128,5, 127,2, 124,7, 124,1, 123,8, 123,5, 123,3, 114,9, 68,1, 28,2, 19,2, 0,00; LCMS (100% powierzchni) Rt = 4,15 minuty, (dodatni) [M+H]/z Obliczono 517,2, Stwierdzono 517,2.
P r z y k ł a d 5(b): 6-[2-(2-Metylochinol-6-ilokarbamoilo)fenylosulfanylo]-3-E-[2-(pirydyn-2-ylo)etenylo]-1H-indazol
PL 212 108 B1
Związek z przykładu 5(b) wytworzono sposobem podobnym do opisanego w przykładzie 5(a) 1 z tym, że w etapie (v), użyto 6-amino-2-metyiochinoiiny zamiast metyioaminy: 1H NMR (300 MHz, CDCi3) δ 10,2 (bs, 1H), 8,64 (m, 1H), 8,40 (s, 1H), 8,23 (s, 1H), 7,98-7,80 (m, 4H), 7,69 (dt, 1H, J = 1,7, 7,7 Hz), 7,55-7,40 (m, 7H), 7,25-7,16 (m, 3H), 2,71 (s, 3H).
P r z y k ł a d 5(c): 6-[2-(Fenyiokarbamoiio)fenyiosuifanyio]-3-E-[2-(pirydyn-2-yio)etenyio]-1H-indazoi
Związek z przykładu 5(c) wytworzono sposobem podobnym do opisanego w przykładzie 5(a) z tym, że, w etapie (v), użyto aniliny zamiast metyloaminy: 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,35 (s, 1H), 10,53 (s, 1H), 8,67 (m, 1H), 8,22 (d, 1H, J = 7,5 Hz), 7,99 (d, 1H, J = 16,4 Hz), 7,85 (dt, 1H, J = 1,8, 7,6 Hz), 7,80-7,55 (m, 5H), 7,45-7,10 (m, 9H); LCMS (100% powierzchni) Rt = 3,86, (dodatni) [M+H]/z Obiiczono 449,1, Stwierdzono 449,1. Anaiiza z 0,41 cząst. H2O Obiiczono, C (71,13), H (4,60), N (12,29), S (7,03). Stwierdzono: C (71,04), H (4,62), N (12,31), S (7,01).
P r z y k ł a d 5(d): 6-[2-(3-Chiorofenyiokarbamoiio)fenyiosuifanyio]-3-E-[2-(pirydyn-2-yio)etenyio]-1H-indazoi
Związek z przykładu 5(d) wytworzono sposobem podobnym do opisanego w przykładzie 5(a) 1 z tym, że, w etapie (v), użyto 3-chioroaniiiny zamiast metyioaminy: 1H NMR (300 MHz, CDCi3) δ 8,53 (m, 1H), 7,92 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 7,77 (d, 1H, J = 16,4 Hz), 7,68 (dt, 1H, J = 1,7, 7,7 Hz), 7,64-7,56 (m, 2H), 7,51-7,43 (m, 3H), 7,35-7,28 (m, 4H), 7,19-7,12 (m, 3H), 7,02 (m, 1H); LCMS (100% powierzchni) Rt 3,98 minuty, (dodatni) [M+H]/z Obiiczono 483,1, stwierdzono 483,1. Anaiiza z 0,3 cz. H2O Obiiczono, C (66,40), H (4,05), N (11,47), S (6,57). Stwierdzono: C (66,36), H (4,08), N (11,49), S (6,55).
P r z y k ł a d 5(e): 6-[2-(Cykiopropyiokarbamoiio)fenyiosuifanyio]-3-E-[2-(pirydyn-2-yio)etenyio]-1H-indazoi
PL 212 108 B1
Związek z przykładu 5(e) wytworzono sposobem podobnym do opisanego w przykładzie 5(a) 1 z tym, że, w etapie (v), użyto cyklopropyloaminy zamiast metyloaminy: 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,45 (s, 1H), 8,73 (d, 1H, J = 3,9 Hz), 8,56 (d, 1H, J = 4,3 Hz), 8,31 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 8,08 (d, 1H, J = 16,4 Hz), 7,91 (dt, 1H, J = 1,7, 7,7 Hz), 7,78 (d, 1H, J = 7,8 Hz), 7,70 (m, 2H), 7,57 (m, 1H,), 7,40 (m, 3H), 7,30 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 7,20 (d, 1H, J = 7,8 Hz), 2,94 (m, 1H), 0,80 (m, 2H), 0,65 (m, 2H); LCMS (100% powierzchni) Rt 3,51 minuty, (dodatni) [M+H]/z Obliczono 413,1, Stwierdzono 413,1.
P r z y k ł a d 5(f): 6-[2-(2,2,2-Trifluoroetylokarbamoilo)fenylosulfanylo]-3-E-[2-(pirydyn-2-ylo)etenylo]-1H-indazol
Związek z przykładu 5(f) wytworzono sposobem podobnym do opisanego w przykładzie 5(a) 1 z tym, że w etapie (v) użyto 2,2,2-trifluoroetyloaminy zamiast metyloaminy: 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,5 (s, 1H), 9,29 (t, 1H, J = 6,3 Hz), 8,74 (m, 1H), 8,37 (d, 1H, J = 8,3 Hz), 8,10 (d, 1H, J = 16,4 Hz), 7,94 (dt, 1H, J = 1,8, 7,6 Hz), 7,80 (d, 1H, J = 7,9 Hz), 7,75-7,65 (m, 3H), 7,55-7,40 (m, 3H), 7,33 (d, 1H), 7,22 (d, 1H), 4,22 (m, 2H); LCMS (100% powierzchni) Rt = 3,70 minuty, (dodatni) [M+H]/z Obliczono 455,1, stwierdzono 455,1.
P r z y k ł a d 5(g): Sól tetrabutyloamoniowa 6-[2-(karboksy)fenylosulfanylo]-3-E-[2-(pirydyn-2-ylo)etenylo]-1H-indazolu
Związek z przykładu 5(g) wytworzono sposobem podobnym do opisanego w przykładzie 5(a) 1 z tym, że pominięto etap (v): Rf zw. wyjść. 0,41, prod. 0,0 (octan etylu-heksan 8:2); 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8,75 (m, 1H), 8,25 (d, 1H, J = 8,6 Hz), 8,05 (d, 1H, 16,4 Hz), 7,88 (dt, 1H, J=1,8, 7,8 Hz), 7,83-7,60 (m, 4H), 7,33 (m, 2H), 7,16 (m, 2H), 6,70 (m, 1H), 3,30 (m, 8H), 1,70 (m, 8H), 1,42 (m, 8H), 1,05 (t, 12H); LCMS (100% powierzchni) Rt 3,24 (dodatni) [M+H (tylko składnik kwasowy)]/z Obliczono 374,1, stwierdzono 374,1. Analiza z 0,1 cząst. H2O Obliczono, C (72,07), H (8,21), N (9,09), S (5,20). Stwierdzono: C (72,04), H (8,29), N (9,06), S (5,12).
P r z y k ł a d 5(h): 6-[2-(3-Chlorofenylokarbamoilo)fenylosulfanylo]-3-Z-[2-(pirydyn-2-ylo)etenylo]-1H-indazol
Związek z przykładu 5(h) wytworzono tą samą reakcją co w przykładzie 5(d). Należy zauważyć, że, chociaż związek ten wyodrębniono i określono, że był czysty, to stwierdzono, że uległ izomeryzacji w warunkach reakcji z przykładu 5(d). 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8,82 (m, 1H), 8,31 (s, 1H), 7,86 (m, 2H), 7,77 (m, 2H), 7,61 (t, 1H, J = 2,0 Hz), 7,46 (d, 1H, J = 8,0 Hz), 7,33 (m, 5H), 7,21 (t, 1H, J = 8,0 Hz), 7,13 (dd, 1H, J = 1,5, 8,1 Hz), 7,08 (m, 1H), 6,98 (d, 1H, J = 13,0 Hz), 6,66 (d, 1H, J = 13,1 Hz); LCMS (100% powierzchni) Rt 4,40 minuty, (dodatni) [M+H]/z Obliczono 483,1, Stwierdzono
PL 212 108 B1
483,1. Analiza z 0,3 cząst. H2O Obliczono, C (66,40), H (4,05), N (11,47), S (6,57). Stwierdzono: C (66,36), H (4,08), N (11,49), S (6,55).
P r z y k ł a d 6: 6-[2-((RS-(trans-2-fenylocyklopropylo)karbamoilo)fenylosulfanylo]-3-E-[2-(pirydyn-2-ylo)etenylo]-1H-indazol
Związek z przykładu 5(g) przeprowadzono w związek z przykładu 6 sposobem podobnym do opisanego w przykładzie 5(a), etap (v) z tym, że użyto trans-2-fenylocyklopropyloaminy zamiast metyloaminy: FTIR (cienki film) 1704, 1638, 1584, 1559, 1530, 1497, 1460, 1430, 1339, 1306, 1269, 1223, 1152, 1086, 1061, 966, 844 cm-1; 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 13,3 (s, 1H), 8,71 (d, 1H, J = 4,4 Hz), 8,61 (d, 1H, J = 3,9 Hz), 8,20 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 7,96 (d, 1H, J = 16,4 Hz), 7,81 (dt, 1H, J = 1,7, 7,6 Hz), 7,66 (d, 1H, J = 7,8 Hz), 7,59-7,50 (m, 3H), 7,37-7,25 (m, 5H), 7,21-7,08 (m, 5H), 3,01 (m, 1H), 2,03 (m, 1H), 1,25 (m, 2H); LCMS (100% powierzchni) Rt = 3,72 minuty, (dodatni) [M+H]/z Obliczono
489,2, stwierdzono 489,2. Analiza z 0,6 cząst. MeOH, 0,16 cząst. CH2Cl2 Obliczono, C (70,86), H (5,17), N (10,75), S (6,15). Stwierdzono: C (70,87), H (5,18), N (10,75), S (5,96).
P r z y k ł a d 7(a): 6-[2-(n-Propylokarbamoilo)fenylosulfanylo]-3-E-[2-(pirydyn-2-ylo)etenylo]-1H-indazol
Na 6-[2-(pentafluorofenoksykarbonylo)fenylosulfanylo]-3-E-[2-(pirydyn-2-ylo)etenylo]-1H-indazol (60 mg, 0,1112 mmola) rozpuszczony w DMF (0,8 ml) podziałano n-propyloaminą (11 pl, 0,1335 mmola) i mieszano w temperaturze pokojowej. Po 15 minutach analiza HPLC wykazała, że zużyto wszystkie związki wyjściowe. Mieszaninę reakcyjną zatężono i odparowano na wyparce obrotowej pod wysoką próżnią, w wyniku czego otrzymano substancję stałą. Substancję stałą poddano działaniu ultradźwięków z użyciem CH2Cl2 i otrzymano subtelną suspensję, którą przesączono i przemyto 1
CH2Cl2, w wyniku czego otrzymano 40 mg (wydajność 87%) związku tytułowego. 1H NMR (DMSO-d6) δ 13,31 (s, 1H), 8,60 (d, J = 4,0 Hz, 1H), 8,41 (t, J = 6,2 Hz, 1H), 8,19 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,94 (m, 3H),
7,81 (dt, J = 1,7, 7,5 Hz, 1H), 7,66 (t, J = 8,7 Hz, 1H), 7,56 (m, 2H), 7,47 (m, 1H), 7,30 (m, 3H), 7,18 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 3,20 (q, J = 6,0 Hz, 2H), 1,55 (septet, J = 5,9 Hz, 2H), 0,92 (t, J = 6,0 Hz, 3H). Analiza, Obliczono dla C24H22N4OS^(1,5 H2O, 0,8 DMF): C, 63,41; H, 6,17; N, 13,45; S, 6,41. Stwierdzono: C, 63,37; H, 5,68; N, 13,44; S, 6,32.
Związki wyjściowe wytworzono w następujący sposób:
PL 212 108 B1
Roztwór soli tetrabutyloamoniowej 6-(2-karboksyfenyiosuifanyio)-3-E-[2-(pirydyn-2-yio)etenyio]-1H-indazoiu (615 mg, 1,0 mmoi) rozpuszczony w suchym DMF (10,0 ml) poddano działaniu pirydyny (89 pi, 1,1 mmoia) i trifiuorooctanu pentafiuorofenyiu (206 pi, 1,2 równoważnika) w temperaturze pokojowej, w atmosferze argonu. Anaiiza HPLC, po 45 minutach, wykazała przewagę nieprzereagowanego kwasu karboksylowego, więc dodano dodatkowo pirydyny (89 pi, 1,1 mmoia) i trifiuorooctanu pentafiuorofenyiu (206 pi, 1,2 równoważnika). Analiza HPLC 15 minut później pokazała, że wyjściowy kwas całkowicie przereagował. Mieszaninę reakcyjną zatężono pod wysoką próżnią poprzez odparowanie na wyparce obrotowej, następnie roztarto z CH2Ci2 (około 1 ml) co spowodowało powstanie kryształów, które odsączono, przemyto dodatkową ilością CH2Ci2 i wysuszono. Masa świecących żółtych kryształów wynosiła 336 mg. Pozostały przesącz zatężono i oczyszczono drogą chromatografii rzutowej (10% acetonitryi/CH2Ci2 - 80% acetonitryi/CH2Ci2), w wyniku czego otrzymano dodatkowe 70 mg substancji stałej. Całkowita wydajność 6-[2-(pentafiuorofenoksykarbonyio)fenyiosuifanyio]-3-E-[2-(pirydyn-2-yio)etenyio]-1H-indazoiu wynosi 406 mg iub 89%. 1H NMR (CDCi3) δ 10,22 (1H, bs), 8,66 (1H, d, J = 4,5 Hz), 8,28 (2H, dd, J = 7,7, 1,5 Hz), 8,15 (1H, d, J = 8,5 Hz), 7,97 (1H, d, J = 16,2 Hz), 7,79 (1H, s), 7,15-7,75 (7H, m), 6,92 (1H, d, J = 8,1 Hz).
P r z y k ł a d 7(b): 6-[2-(i-Propyiokarbamoiio)fenyiosuifanyio]-3-E-[2-(pirydyn-2-yio)etenyio]-1H-indazoi
Związek z przykładu 7(b) wytworzono sposobem podobnym do opisanego w przykładzie 7(a) 1 z tym, że użyto izopropyloaminy zamiast n-propyioaminy. 1H NMR (DMSO-d6) δ 13,30 (s, 1H), 8,60 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 8,26 (d, J = 7,34 Hz, 1H), 8,19 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,94 (d, J = 16,4 Hz, 1H), 7,80 (dt, J = 1,7, 7,5 Hz, 1H), 7,66 (d, J = 7,7 Hz, 1H), 7,56 (m, 2H), 7,45 (m, 1H), 7,30 (m, 3H), 7,18 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,08 (m, 1H), 4,04 (septet, J = 7,4 Hz, 1H), 1,15 (d, J = 6,6 Hz, 6H). Anaiiza, Obiiczono dia C24H22N4OS-1.7 H2O: C, 64,75; H, 5,75; N, 12,59; S, 7,20. Stwierdzono: C, 64,79; H, 5,36; N, 12,74; S, 7,08.
P r z y k ł a d 7(c): 6-[2-(Cykiobutyiokarbamoiio)fenyiosuifanyio]-3-E-[2-(pirydyn-2-yio)etenyio]-1H-indazoi
Związek z przykładu 7(c) wytworzono sposobem podobnym do opisanego w przykładzie 7(a) z tym, że użyto cyklobutyloaminy zamiast n-propyioaminy. 1H NMR (DMSO-d6) δ 13,31 (s, 1H), 8,62 (m, 2H), 8,19 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,94 (m, 2H), 7,80 (dt, J = 1,7, 7,5 Hz, 1H), 7,65 (t, J = 8,1 Hz, 1H), 7,56 (s, 1H), 7,47 (m, 1H), 7,30 (m, 3H), 7,17 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 4,36 (septet, J = 8,1 Hz, 1H), 2,22 (m, 2H), 2,03 (m, 2H), 1,67 (m, 2H). Analiza, Obliczono dla C25H22N4OS-(0,5 H2O, 0,9 DMF): C, 66,36; H, 5,89; N, 13,69; S, 6,40. Stwierdzono: C, 66,21; H, 5,78; N, 13,82; S, 6,36.
P r z y k ł a d 7(d): 6-(2-Karbamoilofenylosulfanylo)-3-E-[2-(pirydyn-2-ylo)etenylo]-1H-indazol
PL 212 108 B1
Związek z przykładu 7(d) wytworzono sposobem podobnym do opisanego w przykładzie 7(a) z tym, że użyto amoniaku zamiast n-propyloaminy. 1H NMR (DMSO-d6) δ 8,60 (d, J = 4,9 Hz, 1H), 8,21 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,94 (m, 3H), 7,81 (dt, J = 1,7, 7,5 Hz, 1H), 7,60 (m, 4H), 7,48 (bs, 1H), 7,25 (m, 4H), 7,0 (m, 1H). Analiza, Obliczono dla C21H16N4OSO,25 H2O: C, 66,91; H, 4,41; N, 14,86; S, 8,51. Stwierdzono: C, 66,99; H, 4,40; N, 15,10; S, 8,49.
P r z y k ł a d 7(e): 6-[2-((1-Metylopirol-2-ilohydrazydo)karbonylo)fenylosulfanylo]-3-E-[2-(pirydyn-2-ylo)etenylo]-1H-indazol
Związek z przykładu 7(e) wytworzono sposobem podobnym do opisanego w przykładzie 7(a) 1 z tym, że użyto 1-metylo-pirol-2-ilohydrazydu zamiast n-propyloaminy. 1H NMR (DMSO-d6) δ 13,34 (s, 1H), 10,25 (s, 1H), 10,05 (s, 1H), 8,60 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 8,22 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 7,95 (d, J = 16,2 Hz, 1H), 7,81 (dt, J = 1,7, 7,5 Hz, 1H), 7,66 (m, 3H), 7,57 (d, J = 16,0 Hz, 1H), 7,43-7,18 (m, 4H), 7,07 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 7,00 (d, J = 3,4 Hz, 2H), 6,07 (t, J = 3,2 Hz, 1H), 3,88 (s, 3H). Analiza, Obliczono dla C27H22N6O2S-0,6 H2O: C, 64,17; H, 4,63; N, 16,63; S, 6,34. Stwierdzono: C, 64,24; H, 4,48; N, 16,56; S, 6,28.
P r z y k ł a d 7(f): 6-[2-((2-Fluorobenzylo)karbamoilo)fenylosulfanylo]-3-E-[2-(pirydyn-2-ylo)etenylo]-1H-indazol
Związek z przykładu 7(f) wytworzono sposobem podobnym do opisanego w przykładzie 7(a) 1 z tym, że użyto 2-fluorobenzyloaminy zamiast n-propyloaminy. 1H NMR (DMSO-d6) δ 13,31 (s, 1H), 8,99 (t, J = 5,8 Hz, 1H), 8,61 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 8,19 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,94 (d, J = 16,2 Hz, 1H),
7,81 (dt, J = 1,7, 7,5 Hz, 1H), 7,66 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 7,56 (m, 3H), 7,47 (t, J = 7,9 Hz, 1H), 7,31 (m, 4H), 7,15 (m, 4H), 4,51 (d, J = 5,7 Hz, 2H). Analiza, Obliczono dla C28H21FN4OS-0,25 H2O: C, 69,33; H, 4,47; N, 11,55; S, 6,61. Stwierdzono: C, 69,32; H, 4,41; N, 11,58; S, 6,59.
P r z y k ł a d 7(g): 6-[2-((4-Metoksybenzylo)karbamoilo)fenylosulfanylo]-3-E-[2-(pirydyn-2-ylo)etenylo]-1H-indazol
PL 212 108 B1
Związek z przykładu 7(g) wytworzono sposobem podobnym do opisanego w przykładzie 7(a) 1 z tym, że użyto 4-metoksybenzyloaminy zamiast n-propyloaminy. 1H NMR (DMSO-d6) δ 13,31 (s, 1H), 8,90 (t, J = 5,5 Hz, 1H), 8,60 (d, J = 4,2 Hz, 1H), 8,19 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,95 (d, J = 16,3 Hz, 1H),
7,81 (dt, J = 1,7, 7,5 Hz, 1H), 7,66 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 7,55 (m, 3H), 7,30 (m, 5H), 7,18 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,10 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 4,39 (d, J = 6,0 Hz, 2H), 3,72 (s, 3H). Analiza, Obliczono dla C29H24N4O2S.0,6 H2O: C, 69,19; H, 5,05; N, 11,13; S, 6,37. Stwierdzono: C, 69,12; H, 4,85; N, 11,24; S, 6,35.
P r z y k ł a d 7(h): 6-[2-((5-Metylofur-2-ylo)metylokarbamoilo)fenylosulfanylo]-3-E-[2-(pirydyn-2-ylo)etenylo]-1H-indazol
Związek z przykładu 7(h) wytworzono sposobem podobnym do opisanego w przykładzie 7(a) 1 z tym, że użyto 5-metylofur-2-yloaminy zamiast n-propyloaminy. 1H NMR (DMSO-d6) δ 13,31 (s, 1H), 8,88 (t, J = 5,3 Hz, 1H), 8,60 (d, J = 4,3 Hz, 1H), 8,19 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,95 (d, J = 16,3 Hz, 1H),
7,81 (dt, J = 1,7, 7,5 Hz, 1H), 7,66 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 7,54 (m, 3H), 7,30 (m, 4H), 7,18 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,06 (d, J = 8,1 Hz, 3H). Analiza, Obliczono dla C27H22N4O2S · 0,4 H2O: C, 68,45; H, 4,85; N, 11,83; S, 6,77. Stwierdzono: C, 68,35; H, 4,80; N, 11,85; S, 6,68.
P r z y k ł a d 7(i): 6-[2-(Benzyloksykarbamoilo)fenylosulfanylo]-3-E-[2-(pirydyn-2-ylo)etenylo]-1H-indazol
Związek z przykładu 7(i) wytworzono sposobem podobnym do opisanego w przykładzie 7(a) 1 z tym, że użyto O-benzylohydroksyloaminy zamiast n-propyloaminy. 1H NMR (DMSO-d6) δ 13,31 (s, 1H), 11,64 (s, 1H), 8,90 (t, J = 5,5 Hz, 1H), 8,60 (d, J = 4,1 Hz, 1H), 8,19 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,95 (d, J = 16,3 Hz, 1H), 7,81 (dt, J = 1,7, 7,5 Hz, 1H), 7,66 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 7,56 (m, 2H), 7,50-7,24 (m, 9H), 7,17 (t, J = 8,5 Hz, 2H), 4,94 (s, 2H). Analiza, Obliczono dla C2sH22N4O2SO,8-H2O: C, 68,22; H, 4,83; N, 11,37; S, 6,50. Stwierdzono: C, 68,08; H, 4,65; N, 11,41; S, 6,47.
P r z y k ł a d 7(j): 6-[2-(Alliloksykarbamoilo)fenylosulfanylo]-3-E-[2-(pirydyn-2-ylo)etenylo]-1H-indazol
PL 212 108 B1
Związek z przykładu 7(j) wytworzono sposobem podobnym do opisanego w przykładzie 7(a) 1 z tym, że użyto O-allilohydroksyloaminy zamiast n-propyloaminy. 1H NMR (DMSO-d6) δ 13,32 (s, 1H), 11,56 (s, 1H), 8,60 (d, J = 4,1 Hz, 1H), 8,19 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,95 (d, J = 16,5 Hz, 1H), 7,81 (dt, J = 1,7, 7,5 Hz, 1H), 7,66 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 7,56 (m, 2H), 7,48-7,24 (m, 5H), 7,16 (m, 2H), 6,00 (m, 1H), 5,37 (d, J = 18,3 Hz, 1H), 5,27 (d, J = 11,3 Hz, 1H), 4,42 (d, J = 6,0 Hz, 1H). Analiza, Obliczono dla C24H2ON4O2S/0,2 H2O, 0,2 CH2Cl2): C, 65,35; H, 4,96; N, 12,10; S, 6,92. Stwierdzono: C, 65,24; H, 4,50; N, 12,56; S, 7,17.
P r z y k ł a d 7(k): 6-[2-(Izopropoksykarbamoilo)fenylosulfanylo]-3-E-[2-(pirydyn-2-ylo)etenylo]-1H-indazol
Związek z przykładu 7(k) wytworzono sposobem podobnym do opisanego w przykładzie 7(a) 1 z tym, że użyto O-izopropylohydroksyloaminy zamiast n-propyloaminy. 1H NMR (DMSO-d6) δ 13,30 (s, 1H), 11,33 (s, 1H), 8,60 (d, J = 4,1 Hz, 1H), 8,19 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,95 (d, J = 16,5 Hz, 1H), 7,81 (dt, J = 1,7, 7,5 Hz, 1H), 7,66 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 7,55 (m, 2H), 7,48-7,24 (m, 4H), 7,17 (d, J = 8,3 Hz, 2H), 4,12 (septet, J = 5,7 Hz, 1H), 1,21 (d, J = 6,2 Hz, 6H). Analiza, Obliczono dla C24H22N4O2S. (0,4 H2O, 0,7 CH2Cl2): C, 59,67; H, 4,91; N, 11,27; S, 6,45. Stwierdzono: C, 59,61; H, 4,81; N, 11,42; S, 6,45.
P r z y k ł a d 7(l): 6-[2-((4-Aminobenzylo)metylokarbamoiIo)fenylosulfanylo]-3-E-[2-(pirydyn-2-ylo)etenylo]-1H-indazol
Związek z przykładu 7(l) wytworzono sposobem podobnym do opisanego w przykładzie 7(a) 1 z tym, że użyto 4-aminobenzyloaminy zamiast n-propyloaminy. 1H NMR (DMSO-d6) δ 13,31 (s, 1H), 8,78 (t, J = 6,0 Hz, 1H), 8,60 (d, J = 4,3 Hz, 1H), 8,19 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 7,95 (d, J = 16,3 Hz, 1H), 7,85 (bs, 1H), 7,81 (dt, J = 1,7, 7,5 Hz, 1H), 7,66 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 7,59 (s, 1H), 7,51 (m, 2H), 7,30 (m, 3H), 7,19 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 7,05 (m, 3H), 6,56 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 6,51 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 4,29 (d, J = 6,0 Hz, 2H). Analiza, Obliczono dla C2aH23N5OS-0,6 H2O: C, 68,86; H, 4,99; N, 14,34; S, 6,57. Stwierdzono: C, 68,83; H, 4,80; N, 14,16; S, 6,52.
PL 212 108 B1
P r z y k ł a d 7(m): 6-[2-((Tien-2-ylohydrazydo)karbonylo)fenylosulfanylo]-3-E-[2-(pirydyn-2-ylo)-
Związek z przykładu 7(m) wytworzono sposobem podobnym do opisanego w przykładzie 7(a) 1 z tym, że użyto tien-2-ylohydrazydu zamiast n-propyloaminy. 1H NMR (DMSO-d6) δ 13,49 (bs, 1H), 10,64 (s, 1H), 10,47 (s, 1H), 8,66 (d, J = 4,0 Hz, 1H), 8,22 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 8,08-7,82 (m, 5H), 7,66 (m, 3H), 7,39 (m, 3H), 7,24 (m, 2H), 7,09 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 7,00 (d, J = 3,4 Hz, 2H), 6,07 (t, J = 3,2 Hz, 1H), 3,88 (s, 3H). Analiza, Obliczono dla C26H19N5O2S2.1,5 H2O: C, 59,52; H, 4,23; N, 13,35;
S, 12,22. Stwierdzono: C, 59,56; H, 4,42; N, 13,33; S, 11,75.
2
P r z y k ł a d 7(n): 6-[2-(N2-(Piryd-2-ylohydrazyno)karbonylo)fenylosulfanylo]-3-E-[2-(pirydyn-2-ylo)etenylo]-1H-indazol
Związek z przykładu 7(n) wytworzono sposobem podobnym do opisanego w przykładzie 7(a) 1 z tym, że użyto 2-hydrazynopirydyny zamiast n-propyloaminy. 1H NMR (DMSO-d6) δ 13,31 (s, 1H), 10,30 (s, 1H), 8,60 (d, J = 4,4 Hz, 1H), 8,48 (s, 1H), 8,21 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 8,09 (d, J = 4,9 Hz, 1H), 7,94 (d, J = 16,4 Hz, 1H), 7,81 (dt, J = 1,7, 7,5 Hz, 1H), 7,67 (m, 1H), 7,62-7,47 (m, 3H), 7,40 (m, 2H), 7,31-7,12 (m, 3H), 6,73 (m, 2H). Analiza, Obliczono dla C26H20N6OSO,3 H2O: C, 66,45; H, 4,42; N, 17,88; S, 6,82. Stwierdzono: C, 66,33; H, 4,50; N, 17,78; S, 6,60.
P r z y k ł a d 7(p): 6-[2-((Piryd-4-ylo)metylokarbamoilo)fenylosulfanylo]-3-E-[2-(pirydyn-2-ylo)etenylo]-1H-indazol
Związek z przykładu 7(p) wytworzono sposobem podobnym do opisanego w przykładzie 7(a) 1 z tym, że użyto 4-aminometylopirydyny zamiast n-propyloaminy. 1H NMR (DMSO-d6) δ 13,31 (bs, 1H), 9,07 (t, J = 6,8 Hz, 1H), 8,60 (d, J = 4,2 Hz, 1H), 8,48 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8,19 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 7,95 (d, J = 16,4 Hz, 1H), 7,80 (dt, J = 1,7, 7,5 Hz, 1H), 7,68-7,52 (m, 3H), 7,42 (m, 2H), 7,39-7,31 (m, 3H), 7,27 (m, 1H), 7,20-7,10 (m, 2H), 4,48 (d, J = 6,2 Hz, 2H).
PL 212 108 B1
P r z y k ł a d 7(q): 6-[2-((2-Metylofenylohydrazydo)karbonylo)fenylosulfanylo]-3-E-[2-(pirydyn-2-ylo)etenylo]-1H-indazol
Związek z przykładu 7(q) wytworzono sposobem podobnym do opisanego w przykładzie 7(a) 1 z tym, że użyto 2-metylofenylohydrazydu zamiast n-propyloaminy. H NMR (DMSO-d6) δ 13,43 (bs, 1H), 10,45 (s, 1H), 10,28 (s, 1H), 8,64 (d, J = 4,0 Hz, 1H), 8,22 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 8,01 (d, J = 16,6 Hz, 1H), 7,92 (m, 1H), 7,81 (m, 1H), 7,69 (m, 1H), 7,60 (d, J = 16,4 Hz, 1H), 7,50-7,22 (m, 8H), 7,07 (d, J = 7,7 Hz, 1H), 2,45 (s, 3H).
P r z y k ł a d 7(r): 6-[2-(Metoksykarbamoilo)fenylosulfanylo]-3-E-[2-(pirydyn-2-ylo)etenylo]-1H-indazol
Związek z przykładu 7(r) wytworzono sposobem podobnym do opisanego w przykładzie 7(a) 1 z tym, że użyto O-metylohydroksyloaminy zamiast n-propyloaminy. 1H NMR (DMSO-d6) δ 13,32 (s, 1H), 11,60 (s, 1H), 8,60 (d, J = 3,8 Hz, 1H), 8,19 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,95 (d, J = 16,2 Hz, 1H), 7,81 (dt, J = 1,7, 7,5 Hz, 1H), 7,66 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 7,56 (m, 2H), 7,47 (dd, J = 7,4, 1,7 Hz, 1H), 7,43-7,24 (m, 3H), 7,17 (m, 2H), 3,72 (s, 3H). Analiza, Obliczono dla C22H18N4O2SO,6 CH2Cl2: C, 59,86; H, 4,27; N, 12,36; S, 7,07. Stwierdzono: C, 59,94; H, 4,40; N, 12,00; S, 6,80.
P r z y k ł a d 7(s): 6-[2-((Cyklopropylo)metoksykarbamoilo)fenylosulfanylo]-3-E-[2-(pirydyn-2-ylo)etenylo]-1H-indazol
Związek z przykładu 7(s) wytworzono sposobem podobnym do opisanego w przykładzie 7(a) 1 z tym, że użyto O-cyklopropylohydroksyloaminy zamiast n-propyloaminy. 1H NMR (DMSO-d6) δ 13,38 (s, 1H), 11,51 (s, 1H), 8,64 (d, J = 3,8 Hz, 1H), 8,18 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 8,00 (d, J = 16,4 Hz, 1H), 7,86 (m, 2H), 7,63-7,52 (m, 2H), 7,49-7,29 (m, 4H), 7,17 (m, 2H), 3,70 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 1,10 (m, 1H), 0,53 (m, 2H), 0,27 (m, 2H). Analiza, Obliczono dla C25H22N4O2S-1,6 H2O: C 63,70; H, 5,39; N, 11,89; S, 6,80. Stwierdzono: C, 63,58; H, 4,95; N, 11,71; S, 6,66.
P r z y k ł a d 7(t): 6-[2-(n-Propoksykarbamoilo)fenylosulfanylo]-3-E-[2-(pirydyn-2-ylo)etenylo]-1H-indazol
PL 212 108 B1
Związek z przykładu 7(t) wytworzono sposobem podobnym do opisanego w przykładzie 7(a) 1 z tym, że użyto O-n-propylohydroksyloaminy zamiast n-propyloaminy. 1H NMR (DMSO-d6) δ 13,31 (s, 1H), 11,48 (s, 1H), 8,60 (d, J = 3,8 Hz, 1H), 8,19 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,95 (d, J = 16,2 Hz, 1H), 7,81 (dt, J = 1,7, 7,5 Hz, 1H), 7,66 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 7,60-7,52 (m, 2H), 7,49-7,24 (m, 4H), 7,17 (m, 2H), 3,84 (t, J = 6,6 Hz, 2H), 1,62 (septet, J = 6,4 Hz, 2H), 0,92 (t, J = 6,1 Hz, 3H). Analiza, Obliczono dla C24H22N4O2S.(0,5 H2O, 0,25 CH2Cl2): C, 63,21; H, 5,14; N, 12,16; S, 6,96. Stwierdzono: C, 63,15; H, 5,13; N, 12,17; S, 6,99.
P r z y k ł a d 7(u): 6-[2-(Allilokarbamoilo)fenylosulfanylo]-3-E-[2-(pirydyn-2-ylo)etenylo]-1H-indazol
Związek z przykładu 7(u) wytworzono sposobem podobnym do opisanego w przykładzie 7(a) z tym, że użyto alliloaminy zamiast n-propyloaminy. 1H NMR (DMSO-d6) δ 13,31 (s, 1H), 8,60 (m, 2H), 8,19 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,93 (d, J = 16,3 Hz, 3H), 7,79 (dt, J = 1,7, 7,5 Hz, 1H), 7,64 (m, 1H), 7,60-7,48 (m, 3H), 7,37-7,23 (m, 3H), 7,17 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,07 (m, 1H), 5,87 (m, 1H), 5,25 (dq, J = 17,33, 1,9 Hz, 1H), 5,09 (dq, J = 10,2, 1,9 Hz, 1H), 3,87 (m, 2H). Analiza, Obliczono dla C24H20N4OSO,8 CH2Cl2: C, 62,00; H, 4,53; N, 11,66; S, 6,67. Stwierdzono: C, 62,08; H, 4,73; N, 11,99; S, 6,66. MALDI FTMS (MH+) Obliczono, 413,1431, Stwierdzono 413,1449.
P r z y k ł a d 7(v): 6-[2-(Cyklopropylometylokarbamoilo)fenylosulfanylo]-3-E-[2-(pirydyn-2-ylo)etenylo]-1H-indazol
Związek z przykładu 7(v) wytworzono sposobem podobnym do opisanego w przykładzie 7(a) 1 z tym, że użyto cyklopropylometyloaminy zamiast n-propyloaminy. 1H NMR (DMSO-d6) δ 13,30 (s, 1H), 8,60 (d, J = 4,0 Hz, 1H), 8,48 (t, J = 5,3 Hz, 1H), 8,17 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 7,90 (d, J = 16,4 Hz, 1H),
7,80 (dt, J = 1,7, 7,5 Hz, 1H), 7,67-7,45 (m, 4H), 7,33-7,23 (m, 3H), 7,18 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,06 (m, 1H), 3,13 (t, J = 6,2 Hz, 2H), 1,00 (m, 1H), 0,41 (m, 1H), 0,24 (m, 1H). Analiza, Obliczono dla C25H22N4OSO,5 CH2Cl2: C, 65,30; H, 4,94; N, 11,95; S, 6,84. Stwierdzono: C, 65,10; H, 4,93; N, 12,04; S, 6,82. MALDI FTMS (MH+) Obliczono 427,1587, Stwierdzono 427,1605.
P r z y k ł a d 7(w): 6-[2-(Cyjanometylokarbamoilo)fenylosulfanylo]-3-E-[2-(pirydyn-2-ylo)-etenylo]-1H-indazol
PL 212 108 B1
Związek z przykładu 7(w) wytworzono sposobem podobnym do opisanego w przykładzie 7(a) 1 z tym, że użyto aminoacetonitryIu zamiast n-propyloaminy. 1H NMR (DMSO-d6) δ 13,35 (s, 1H), 9,19 (t, J = 5,3 Hz, 1H), 8,60 (d, J = 4,8 Hz, 1H), 8,20 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 7,94 (d, J = 16,4 Hz, 3H), 7,79 (dt, J = 1,7, 7,5 Hz, 1H), 7,70-7,50 (m, 4H), 7,41-7,23 (m, 3H), 7,18 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,06 (d, J = 6,6 Hz, 1H), 4,32 (d, J = 5,5 Hz, 2H). MALDI FTMS (MH+) Obliczono 412,1227, Stwierdzono 412,1215.
P r z y k ł a d 7(x): 6-[2-(Etylokarbamoilo)fenylosulfanylo]-3-E-[2-(pirydyn-2-ylo)etenylo]-1H-indazol
Związek z przykładu 7(x) wytworzono sposobem podobnym do opisanego w przykładzie 7(a) ή
z tym, że użyto etyloaminy zamiast n-propyloaminy. 1H NMR (DMSO-d6) δ 8,60 (d, J = 4,0 Hz, 1H), 8,40 (t, J = 6,2 Hz, 1H), 8,18 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,94 (m, 3H), 7,81 (dt, J = 1,7, 7,5 Hz, 1H), 7,68-7,44 (m, 3H), 7,56 (m, 2H), 7,30 (m, 3H), 7,17 (dd, J = 8,1, 1,8 Hz, 1H), 7,06 (m, 1H), 3,24 (m, 2H), 1,11 (t, J = 7,0 Hz, 3H). Analiza, Obliczono dla C23H20N4OS-(1,75 H2O, 1,0 DMF): C, 61,82; H, 6,09; N, 13,87; S, 6,35. Stwierdzono: C, 61,58; H, 5,66; N, 13,96; S, 5,93. MALDI FTMS (MH+) Obliczono 401,1431, Stwierdzono 401,1417.
P r z y k ł a d 7(y): 6-[2-(Tiazol-2-ilokarbamoilo)fenylosulfanylo]-3-E-[2-(pirydyn-2-ylo)etenylo]-1H-indazol
Związek z przykładu 7(y) wytworzono sposobem podobnym do opisanego w przykładzie 7(a) z tym, że użyto 2-aminotiazolu zamiast n-propyloaminy. 1H NMR (DMSO-d6) δ 13,32 (s, 1H), 12,67 (s, 1H), 8,60 (d, J = 4,1 Hz, 1H), 8,18 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,93 (d, J = 16,3 Hz, 1H), 7,80 (dt, J = 1,7, 7,5 Hz, 1H), 7,65 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 7,65 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,60-7,51 (m, 3H), 7,49-7,34 (m, 2H), 7,26 (m, 2H), 7,18 (m, 2H). Analiza, Obliczono dla C24H17N5OS2O,75 H2O: C, 61,45; H, 3,98; N, 14,93; S, 13,67. Stwierdzono: C, 61,35; H, 4,10; N, 14,96; S, 13,68.
P r z y k ł a d 7(z): 6-[2-(2-(Etoksy)etylokarbamoilo)fenylosulfanylo]-3-E-[2-(pirydyn-2-ylo)etenylo]-1H-indazol
PL 212 108 B1
Związek z przykładu 7(z) wytworzono sposobem podobnym do opisanego w przykładzie 7(a) z tym, że użyto 2-etoksyetyloaminy zamiast n-propyloaminy. 1H NMR (DMSO-d6) δ 13,30 (s, 1H), 8,60 (d, J = 4,0 Hz, 1H), 8,45 (t, J = 6,2 Hz, 1H), 8,18 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,93 (m, 2H), 7,80 (dt, J = 1,7, 7,5 Hz, 1H), 7,65 (d, J = 7,7 Hz, 1H), 7,60-7,45 (m, 3H), 7,36-7,23 (m, 3H), 7,17 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,07 (m, 1H), 3,50 (m, 6H), 1,10 (d, J = 7,0 Hz, 3H). Analiza, Obliczono dla C25H24N4O2S-0,5 CH2Cl2: C, 62,89; H, 5,17; N, 11,50; S, 6,58. Stwierdzono: C, 62,45; H, 5,33; N, 11,25; S, 6,55.
P r z y k ł a d 7(aa): 6-[2-((3-Metoksybenzylo)karbamoilo)fenylosulfanylo]-3-E-[2-(pirydyn-2-ylo)etenylo]-1H-indazol
Związek z przykładu 7(aa) wytworzono sposobem podobnym do opisanego w przykładzie 7(a) 1 z tym, że użyto 3-metoksybenzyloaminy zamiast n-propyloaminy. 1H NMR (DMSO-d6) δ 13,30 (s, 1H), 8,97 (t, J = 5,5 Hz, 1H), 8,60 (d, J = 4,2 Hz, 1H), 8,18 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 7,93 (d, J = 16,3 Hz, 1H),
7,80 (dt, J = 1,7, 7,5 Hz, 1H), 7,65 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 7,60-7,51 (m, 3H), 7,38-7,15 (m, 5H), 7,08 (m, 1H), 6,94 (m, 2H), 6,80 (dd, J = 8,1, 1,5 Hz, 1H), 4,44 (d, J = 6,6 Hz, 2H), 3,71 (s, 3H). Analiza, Obliczono dla C29H24N4O2S-0,4 H2O: C, 60,25; H, 4,50; N, 17,57; S, 8,04. Stwierdzono: C, 60,14; H, 4,47; N, 17,42; S, 8,00.
P r z y k ł a d 7(bb): 6-[2-((Fur-2-ylo)metylokarbamoilo)fenylosulfanylo]-3-E-[2-(pirydyn-2-ylo)etenylo]-1H-indazol
Związek z przykładu 7(bb) wytworzono sposobem podobnym do opisanego w przykładzie 7(a) 1 z tym, że użyto 2-aminometylofuranu zamiast n-propyloaminy. 1H NMR (DMSO-d6) δ 13,31 (s, 1H), 8,93 (t, J = 5,7 Hz, 1H), 8,60 (d, J = 4,3 Hz, 1H), 8,19 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,93 (d, J = 16,5 Hz, 1H),
7,80 (dt, J = 1,9, 7,4 Hz, 1H), 7,66 (d, J = 7,7 Hz, 1H), 7,59-7,48 (m, 4H), 7,30 (m, 4H), 7,37-7,24 (m, 3H), 7,18 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 7,06 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 6,40 (m, 1H), 6,31 (m, 1H), 4,44 (d, J = 5,3 Hz, 2H). Analiza, Obliczono dla C26H20N4O2S/0,1 H2O, 0,75 CH2Cl2): C, 62,02; H, 4,22; N, 10,82; S, 6,19. Stwierdzono: C, 61,58; H, 4,30; N, 10,55; S, 6,12.
P r z y k ł a d 7(cc): 6-[2-(2-Propynylokarbamoilo)fenylosulfanylo]-3-E-[2-(pirydyn-2-ylo)etenylo]-1H-indazol
PL 212 108 B1
Związek z przykładu 7(cc) wytworzono sposobem podobnym do opisanego w przykładzie 7(a) z tym, że użyto propargiloaminy zamiast propyloaminy (76%): 1H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 8,56 (m, 1H), 7,96 (d, 1H, J = 8,6 Hz), 7,81 (d, 1H, J = 16,4 Hz), 7,68 (dt, 1H, J = 1,8, 7,8 Hz), 7,6 (m, 1H), 7,52-7,45 (m, 3H), 7,3-7,23 (m, 3H), 7,16 (m, 2H), 4,10 (m, 2), 2,20 (t, 1H, J = 2,6 Hz). LCMS (100% powierzchni) Rt = 3,36 minuty, (dodatni) [M+H]/z, Obliczono 411,1, stwierdzono 411,1. Analiza z 0,2 cząst. H2O, 0,17 cząst. DMF, 1,2 cząst. dichlorometanu. Obliczono, C (58,44), H (4,19), N (11,05), S (6,07). Stwierdzono: C (58,18), H (4,11), N (10,98), S (6, 05).
P r z y k ł a d 7(dd): 6-[2-(Etoksykarbamoilo)fenylosulfanylo]-3-E-[2-(pirydyn-2-ylo)etenylo]-1H-indazol
Związek z przykładu 7(dd) wytworzono sposobem podobnym do opisanego w przykładzie 7(a) z tym, że użyto etoksyaminy zamiast propyloaminy: 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 11,60 (s, 1H), 8,71 (d, 1H, J = 7,9 Hz), 8,30 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 8,05 (d, 1H, J = 16,4 Hz), 7,91 (dt, 1H, J = 1,7, 7,7 Hz), 7,76 (d, 1H, J = 7,8 Hz), 7,67 (m, 2H), 7,56 (dd, 1H, J = 1,8, 7,3 Hz), 7,52-7,36 (m, 3H), 7,28 (m, 2H), 4,06 (q, 2H, J = 7,0 Hz), 1,31 (t, 2H, J = 7,0 Hz); LCMS (100% powierzchni) Rt = 3,28 minuty, (dodatni) [M+H]/z, Obliczono 417,1, stwierdzono 417,1. Analiza z 0,2 cząst. H2O Obliczono, C (65,53), H (4,98), N (13,05), S (7,48). Stwierdzono: C (65,66), H (4,91), N (12,75), S (7,44).
P r z y k ł a d 7(ee): 6-[2-(2-Metylo-2-propenylokarbamoilo)fenylosulfanylo]-3-E-[2-(pirydyn-2-ylo)etenylo]-1H-indazol
Związek z przykładu 7(ee) wytworzono sposobem podobnym do opisanego w przykładzie 7(a) z tym, że użyto 2-metyloalliloaminy zamiast propyloaminy: 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8,56 (m, 1H), 7,98 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 7,81 (d, 1H, J = 16,4 Hz), 7,69 (dt, 1H, J = 1,7, 7,7 Hz), 7,60 (m, 1H), 7,53-7,42 (m, 3H), 7,32-7,24 (m, 3H), 7,16 (m, 2H), 6,72 (m, 1H), 4,89 (s, 1H), 4,81 (s, 1H), 3,90 (d, 2H, J = 5,5 Hz), 1,71 (s, 3H). LCMS (100% powierzchni) Rt = 3,37 minuty, (dodatni) [M+H]/z, Obliczono 427,1, stwierdzono 427,1. Analiza z 0,7 cząst. H2O, 0,1 cząst. dichlorometanu; Obliczono, C (67,35), H (5,31), N (12,52), S (7,16). Stwierdzono: C (67,55), H (5,39), N (12,35), S (7,15).
PL 212 108 B1
P r z y k ł a d 7(ff): 6-[2-((3-Fluorobenzylo]karbamoilo)fenylosulfanylo]-3-E-[2-(pirydyn-2-ylo)etenylo]-1H-indazol
Związek z przykładu 7(ff) wytworzono sposobem podobnym do opisanego w przykładzie 7(a) 1 z tym, że użyto 3-fluorobenzyloaminy zamiast propyloaminy: 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8,60 (m, 1H), 7,97 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 7,86 (d, 1H, J = 16,4 Hz), 7,70 (m, 2H), 7,51 (m, 2H), 7,33 (m, 4H), 7,18 (m, 2H), 7,11 (dd, 1H, J = 1,6, 8,5 Hz), 6,95 (m, 3H), 4,51 (d, 2H, J = 5,7 Hz); LCMS (100% powierzchni) Rt = 3,55 minuty, (dodatni) [M+H]/z; Obliczono 481,1, stwierdzono 481,1. Analiza z 0,7 cząst. H2O, 0,5 cząst. dichlorometanu. Obliczono, C (63,91), H (4,40), N (10,46), S (5,99). Stwierdzono: C (63,80), H (4,34), N (10,34), S (5,98).
P r z y k ł a d 7(gg): 6-[2-(2-(Metyloamino)etylokarbamoilo)fenylosulfanylo]-3-E-[2-(pirydyn-2-ylo)etenylo]-1H-indazol
Związek z przykładu 7(gg) wytworzono sposobem podobnym do opisanego w przykładzie 7(a) 1 z tym, że użyto N-metyloetylenodiaminy zamiast propyloaminy: 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8,60 (m, 1H), 7,98 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 7,81 (d, 1H, J = 16,4 Hz), 7,69 (dt, 1H, J = 1,7, 7,7 Hz), 7,52 (m, 1H), 7,50-7,40 (m, 3H), 7,30-7,20 (m, 3H), 7,16 (m, 2H), 3,45 (t, 2H), 2,69 (t, 2H), 2,15 (bs, 3H); LCMS (100% powierzchni) Rt = 3,16 minuty, (dodatni) [M+H]/z; Obliczono 430,1, stwierdzono 430,1. Analiza z 0,2 cząst. H2O, 0,6 cząst. dichlorometanu, 0,06 cząst. heks. Obliczono, C (61,28), H (5,24), N (14,31), S (6,55). Stwierdzono: C (61,26), H (5,14), N (14,22), S (6,56).
P r z y k ł a d 7(hh): 6-[2-(2-(Tien-2-ylo)etylokarbamoilo)fenylosulfanylo]-3-E-[2-(pirydyn-2-ylo)-
Związek z przykładu 7(hh) wytworzono sposobem podobnym do opisanego w przykładzie 7(a) z tym, że użyto 2-(2-aminoetylo)tiofenu zamiast propyloaminy: 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8,56 (m, 1H), 7,98 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 7,81 (d, 1H, J = 16,4 Hz), 7,69 (dt, 1H, J = 1,7, 7,7 Hz), 7,60 (m, 1H), 7,53-7,42 (m, 3H), 7,32-7,24 (m, 3H), 7,16 (m, 2H), 6,72 (m, 1H), 6,63 (m, 1H), 6,52 (m 1H), 3,45
PL 212 108 B1 (q, 2H), 3,00 (t, 2H). Analiza z 0,5 cząst. H2O, 0,07 cząst. dichlorometanu; Obliczono, C (65,35), H (4,69), N (11,26), S (12,82). Stwierdzono: C (65,49), H (4,80), N (11,21), S (12,77).
P r z y k ł a d 7(ii): 6-[2-(Aminokarbamoilo)fenylosulfanylo]-3-E-[2-(pirydyn-2-ylo)etenylo]-1H-indazol
Związek z przykładu 7(ii) wytworzono sposobem podobnym do opisanego w przykładzie 7(a) z tym, że użyto hydrazyny zamiast propyloaminy: 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,3 (s, 1H), 9,57 (s, 1H), 8,54 (d, 1H, J = 3,9 Hz), 8,14 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 7,89 (d, 1H, J = 16,4 Hz), 7,73 (dt, 1H, J = 1,7, 7,6 Hz), 7,60 (d, 1H, J = 7,9 Hz), 7,50 (m, 2H), 7,40 (dd, 1H, J = 1,8, 7,1 Hz), 7,3-7,1 (m, 4H), 7,0 (m, 1H). LCMS (100% powierzchni) Rt = 0,55 minuty, (dodatni) [M+H]/z, Obliczono 388,1, stwierdzono 388,1. Analiza z 0,1 cząst. DMF, 0,55 cząst. EtOAc, 0,12 cząst. Tol (NMR) i 0,15 H2O Obliczono, C (63,98), H (5,15), N (15,63), S (7,02). Stwierdzono: C (63,99), H (5,07), N (15,75), S (6,89).
2
P r z y k ł a d 8(a): 6-[2-(N2-(1-Metyloimidazol-2-ilometylideno)hydrazyno)karbonylo)fenylosulfanylo]-3-E-[2-(pirydyn-2-ylo)etenylo]-1H-indazol
Związek wytworzony w przykładzie 7(ii) (40 mg, 0,103 mmola) poddano działaniu 1-metylo-2-imidazolokarboksyaldehydu (29 mg, 0,258 mmola, 2,5 równoważnika) w etanolu i otrzymano związek z przykładu 8(a): 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8,60 (m, 2H), 8,31 (s, 1H), 8,18 (d, 1H), 8,02 (d, 1H), 7,98 (d, 1H), 7,80 (m, 2H), 7,63 (m, 2H), 7,40 (m, 3H), 7,30 (m, 1H), 7,20 (m, 1H), 7,02 (m, 2H), 6,93 (s, 1H), 4,00 (s, 3H); LCMS (100% powierzchni) Rt = 4,0 minuty, (dodatni) [M+H]/z; Obliczono 480,2, stwierdzono 480,2. Analiza z 1,45 cząst. H2O. Obliczono, C (61,76), H (4,76), N (19,39), S (6,34). Stwierdzono: C (61,78), H (4,67), N (19,34), S (6,39).
2
P r z y k ł a d 8(b): 6-[2-(N2-(Piryd-2-ylometylideno)hydrazyno)karbonylo)fenylosulfanylo]-3-E-[2-(pirydyn-2-ylo)etenylo]-1H-indazol
Związek z przykładu 8(b) wytworzono sposobem podobnym do opisanego w przykładzie 8(a) 1 z tym, że użyto 2-pirydylokarboksyaldehydu zamiast 1-metylo-2-imidazolokarboksyaldehydu: 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8,57 (m, 2H), 8,45 (m, 2H), 8,22 (d, 1H), 8,10 (s, 1H), 7,93 (d, 1H), 7,83 (d, 1H), 7,8-7,1 (m, 11H); LCMS (100% powierzchni) Rt = 4,0 minuty, (dodatni) [M+H]/z; Obliczono 477,1,
PL 212 108 B1 stwierdzono 477,1. Analiza z 0,85 cząst. H2O. Obliczono, C (65,93), H (4,45), N (17,09), S (6,52).
Stwierdzono: C (66,02), H (4,42), N (16,95), S (6,38).
2
P r z y k ł a d 8(c): 6-[2-(N2-(2,2,2-Trifluoroetylideno)hydrazyno)karbonylo)fenylosulfanylo]-3-E-[2-(pirydyn-2-ylo)etenylo]-1H-indazol
Związek z przykładu 8(c) wytworzono sposobem podobnym do opisanego w przykładzie 8(a) 1 z tym, że użyto trifluoroacetaldehydu zamiast 1-metylo-2-imidazolokarboksyaldehydu: 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8,70 (m, 1H), 8,25 (m, 1H), 8,02 (d, 1H), 7,90 (dt, 1H), 7,80-7,20 (m, 10H). LCMS (100% powierzchni) Rt = 5,64 minuty, (dodatni) [M+H]/z; Obliczono 468,1, stwierdzono 468,0. Analiza z 0,75 cząst. H2O. Obliczono, C (57,39), H (3,67), N (14,56), S (6,67). Stwierdzono: C (57,44), H (3,67), N (14,56), S (6,67).
P r z y k ł a d 9(a): 6-[6-Fluoro-2-(etoksykarbamoilo)fenylosulfanylo]-3-E-[2-(pirydyn-2-ylo)etenylo]-1H-indazol
Związek z przykładu 9(a) wytworzono sposobem podobnym do opisanego w przykładzie 7(a) z tym, że użyto związku wyjściowego opisanego poniżej oraz użyto etoksyaminy zamiast propyloaminy: 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8,59 (m, 1H), 8,08 (d, 1H), 7,88 (d, 1H, J = 16,4 Hz), 7,79 (t, 1H), 7,65 (d, 1H), 7,60 (m, 1H), 7,50 (d, 1H, J = 16,4 Hz), 7,40 (t, 1H), 7,36 (d, 1H), 7,28 (s, 1H), 7,23 (m, 1H), 7,10 (d, 1H), 3,90 (q, 2H), 1,19 (t, 3H). LCMS (100% powierzchni) Rt = 4,85 minuty, (dodatni) [M+H]/z, Obliczono 435,1, stwierdzono 435,1, (ujemny) [M-H]/z Obliczono 433,1, stwierdzono 433,1. Analiza z 0,35 cząst. H2O, 0,07 cząst. EtOAc Obliczono, C (62,56), H (4,57), N (12,54), S (7,17). Stwierdzono: C (62,61), H (4,55), N (12,49), S (7, 11).
Związek wyjściowy wytworzono w następujący sposób:
Roztwór 2,3-difluorobenzoesanu etylu (1,07 g, 5,75 mmola) w DMF (10 ml) poddano działaniu siarczku sodu (896 mg, 11,5 mmola, 2,0 równoważniki) w 23°C. Mieszaninę mieszano w atmosferze argonu przez 10 godzin. Roztwór rozcieńczono octanem etylu (50 ml) i wodą (50 ml) oraz 10% kwasem cytrynowym (5 ml). Warstwę organiczną przemyto nasyconym wodnym roztworem wodorowęglanu sodu, wysuszono nad siarczanem sodu, zdekantowano i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem 1 i otrzymano ester etylowy kwasu 3-fluoro-2-merkaptobenzoesowego: 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 7,71 (t, 1H), 7,38 (m, H), 7,12 (m, 1H), 4,41 (q, 2H), 1,40 (t, 3H); LCMS (100% powierzchni) Rt = 4,53 minuty, (dodatni) [M+H]/z; Obliczono 201,0, stwierdzono 200,9.
PL 212 108 B1
Powyższy tioeter wytworzono sposobem podobnym do opisanego w przykładzie 5(a), etap (iii) z tym, że użyto estru etylowego kwasu 3-fluoro-2-merkaptobenzoesowego zamiast tiosalicylanu (320 mg, 39%): FTIR (cienki film) 2952, 1727, 1607, 1586, 1564, 1469, 1433, 1366, 1292, 1249, 182, 1141, 1074, 836 cm-1; 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8,62 (m, 1H), 7,90 (d, 1H, J = 8,6 Hz), 7,85 (d, 1H, J = 16,4 Hz), 7,67 (dt, 1H, J = 1,8, 7,7 Hz), 7,57-7,38 (m, 5H), 7,23-7,10 (m, 3H), 5,65 (s, 2H), 4,34 (q, 2H, J = 7,1 Hz), 3,56 (t, 2H, J = 8,2 Hz), 1,30 (t, 3H, J = 7,1 Hz), 0,88 (t, 2H, J = 8,2 Hz), -0,06 (s, 9H); LCMS (100% powierzchni) Rt = 4,44 minuty, (dodatni) [M+H]/z, Obliczono 549,2, stwierdzono 549,2.
Powyższy kwas karboksylowy wytworzono sposobem podobnym do opisanego w przykładzie 5(a), etap (iv) (303 mg, 99%): FTIR (cienki film) 2953, 2496, 1715, 1643, 1607, 1567, 1470, 1434, 1300, 1250, 1221, 1075, 967, 932, 836 cm-1; 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8,81 (m, 1H), 7,87 (m, 2H), 7,79 (m, 3H), 7,65 (m, 2H), 7,56 (m, 1H), 4,40 (m, 1H), 7,30 (m, 1H), 7,00 (dd, 1H, J = 1,4, 8,5 Hz), 5,58 (s, 2H), 3,59 (t, 2H, J = 8,2 Hz), 0,93 (t, 2H, J = 8,2 Hz), -0,01 (s, 9H). LCMS (100% powierzchni) Rt = 10,47 minuty, (dodatni) [M+H]/z; Obliczono 522,2, stwierdzono 522,2.
1
Powyższą sól wytworzono sposobem podobnym do opisanego w przykładzie 5(g): 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,2 (s, 1H), 8,68 (m, 1H), 8,12 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 7,98 (d, 1H, J = 16,4 Hz), 7,88 (dt, 1H, J = 1,8, 7,6 Hz), 7,73 (d, 1H, J = 7,9 Hz), 7,61 (d, 1H, J = 16,4 Hz), 7,43-7,32 (m, 3H), 7,20 (m, 2H), 7,07 (t, 1H), 3,23 (m, 8H), 1,68 (m, 8H), 1,41 (m, 8H), 1,04 (t, 12H).
PL 212 108 B1
Powyższy ester pentafluorofenylowy wytworzono sposobem podobnym do opisanego w przykładzie 7(a), etap (i): LCMS (100% powierzchni) Rt = 10,53 minuty, (dodatni) [M+H]/z; Obliczono
558,1, stwierdzono 558,1.
P r z y k ł a d 9(b): 6-[6-Fluoro-2-(cyklopropylokarbamoilo)fenylosulfanylo]-3-E-[2-(pirydyn-2-ylo)etenylo]-1H-indazol
Związek z przykładu 9(b) wytworzono sposobem podobnym do opisanego w przykładzie 9(a) z tym, że użyto cyklopropyloaminy zamiast etoksyaminy: 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8,42 (m, 1H), 8,28 (d, 1H), 7,83 (d, 1H), 7,75 (m, 2H), 7,60 (m, 1H), 7,31 (m, 2H), 7,15 (m, 4H), 6,86 (d, 1H), 2,58 (m, 1H), 0,42 (m, 2H), 0,23 (m, 2H). LCMS (100% powierzchni) Rt = 4,91 minuty, (dodatni) [M+H]/z; Obliczono 431,1, stwierdzono 431,1, (ujemny) [M-H]/z; Obliczono 429,1, stwierdzono 429,2. Analiza z 0,55 cząst. H2O. Obliczono, C (65,46), H (4,60), N (12,72), S (7,28). Stwierdzono: C (65,52), H (4,58), N (12,64), S (7,06).
P r z y k ł a d 9(c): 6-[6-Fluoro-2-(izopropoksykarbamoilo)fenylosulfanylo]-3-E-[2-(pirydyn-2-ylo)etenylo]-1H-indazol
Związek z przykładu 9(c) wytworzono sposobem podobnym do opisanego w przykładzie 9(a) 1 z tym, że użyto izopropoksyaminy zamiast etoksyaminy: 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 9,50 (bs, 1H), 8,47 (m, 1H), 7,72 (d, 1H), 7,68 (d, 1H, J = 16,4 Hz), 7,54 (dt, 1H), 7,35 (m, 4H), 7,20 (m, 4H), 4,03 (m, 1H), 1,07 (d, 6H); LCMS (100% powierzchni) Rt = 4,90 minuty, (dodatni) [M+H]/z; Obliczono
449,1, stwierdzono 449,1. Analiza z 0,1 cząst. DMF, 0,3 cząst. H2O. Obliczono, C (63,28), H (4,87), N (12,45), S (6,95). Stwierdzono: C (63,22), H (4,84), N (12,37), S (6,91).
P r z y k ł a d 9(d): 6-[6-Fluoro-2-(metylokarbamoilo)fenylosulfanylo]-3-E-[2-(pirydyn-2-ylo)etenylo]-1H-indazol
Związek z przykładu 9(d) wytworzono sposobem podobnym do opisanego w przykładzie 9(a) z tym, że użyto metyloaminy zamiast etoksyaminy: 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8,37 (m, 1H), 8,18 (m, 1H), 7,87 (d, 1H), 7,67 (d, 1H, J = 16,4 Hz), 7,59 (dt, 1H), 7,40 (d, 1H), 7,30 (m, 2H), 7,20 (m, 4H), 6,85 (d, 1H), 2,49 (d, 3H); LCMS (100% powierzchni) Rt = 4,63 minuty, (dodatni) [M+H]/z; Obliczono
405,1, stwierdzono 405,2, (ujemny) [M-H]/z; Obliczono 403,1, stwierdzono 403,1. Analiza z 0,2 cząst.
PL 212 108 B1
DMF, 0,3 cząst. CH2Cl2 (NMR), 0,3 cząst. H2O. Obliczono, C (61,13), H (4,39), N (13,07), S (7,13). Stwierdzono: C (61,08), H (4,35), N (13,14), S (7,22).
P r z y k ł a d 10(a): 6-[2-(2-Metylochinol-6-ilokarbamoilo)fenylosulfanylo]-3-E-(2-styrylo)-1H-indazol
Związek z przykładu 10(a) wytworzono sposobem podobnym do opisanego w przykładzie 5(b) z tym, że pominięto etapy (i) i (ii): 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8,58 (s, 1H), 8,13 (s, 1H), 7,80 (m, 3H), 7,67 (t, 1H), 7,43 (m, 2H), 7,34-7,16 (m, 9H), 7,13 (d, 1H), 7,07 (d, 1H), 2,60 (s, 3H). LCMS (100% powierzchni) Rt = 3,87 minuty, (dodatni) [M+H]/z; Obliczono 513,1, stwierdzono 513,2.
P r z y k ł a d 10(b): 6-[2-((4-Piperazyn-1-ylo-3-trifluorometylofenylo)karbamoilo)fenylosulfanylo]-3-E-(2-styrylo)-1H-indazol
Związek z przykładu 10(b) wytworzono sposobem podobnym do opisanego w przykładzie 10(a) z tym, że użyto 3-trifluorometylo-4-piperazyn-1-ylofenyloaminy zamiast 6-amino-2-metylochinoliny: 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8,75 (s, 1H), 7,95 (d, 1H), 7,77 (m, 2H), 7,69 (s, 1H), 7,55 (m, 3H), 7,40-7,25 (m, 9H), 7,20 (d, 1H), 3,00 (m, 4H), 2,83 (m, 4H). LCMS (100% powierzchni) Rt = 3,94 minuty, (dodatni) [M+H]/z; Obliczono 600,2, stwierdzono 600,2. Analiza z 0,1 cząst. heks (NMR), 1,4 cząst. H2O Obliczono, C (63,71), H (5,12), N (11,06), S (5,06). Stwierdzono: C (63,67), H (5,06), N (10,98), S (5,00).
P r z y k ł a d 11: 6-(3-Aminobenzoilo)-3-E-[2-(pirydyn-2-ylo)etenylo]-1H-indazol
Związek z przykładu 11 wytworzono sposobem podobnym do opisanego w przykładzie 3. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,5 (s, 1H), 8,62 (d, 1H, J = 3,86 Hz), 8,34 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 8,01 (d, 1H, J = 16,36 Hz), 7,87 (s, 1H), 7,83 (td, 1H, J = 7,69 Hz, J = 1,81 Hz), 7,58-7,71 (m, 3H), 7,29 (qd, 1H, J = 7,39 Hz, J = 0,98 Hz), 7,21 (t, 1H, J = 7,77), 7,00 (t, 1H, J = 1,86 Hz), 6,90 (dt, 1H, J = 6,15 Hz, J = 1,40 Hz), 6,86 (m, 1H), 5,40 (bs, 2H). MS (ESI+) [M+H]/z; Obliczono 446, stwierdzono 446. Obliczono: C, 74,10; H, 4,74; N, 16,46. Stwierdzono: C, 72,72; H, 4,87; N, 16,02.
Związek wyjściowy wytworzono w następujący sposób:
PL 212 108 B1
Do kwasu m-aminofenyloboronowego (8,22 g, 60 mmoli) w dimetyloformamidzie (60 ml) w 23°C w atmosferze argonu dodano trietyloaminy (10 ml, 72 mmole) i 4-(dimetyloamino)pirydyny (0,366 g, 3 mmole). Otrzymany roztwór ogrzano do 50°C. Dodano 5 x 4 g porcji estru 2-trimetylosilanyloetylowego estru 4-nitrofenylowego kwasu węglowego (20,4 g, 72 mmole) w ciągu 18 godzin. Po 44 godzinach dodano estru 2-trimetylosilanyloetylowego estru 4-nitrofenylowego kwasu węglowego (3,4 g, 12 mmoli), a następnie trietyloaminy (1,7 ml, 12 mmoli). Po 63 godzinach mieszaninę reakcyjną zatężono do oleju. W wyniku oczyszczania drogą chromatografii na żelu krzemionkowym z elucją 3-7 7-3 octan etylu-heksan otrzymano ester 2-trimetylosilanyloetylowy kwasu (3-boronofenylo)karbaminowego (8,12 g, 48%): Rf zw. wyjść. 0,067, prod. 0,33 (octan etylu-heksan 1:1); 1H NMR (300 MHz, CD3OD) δ 7,64 (s, 1H), 7,49 (d, 1H, J = 8,94 Hz), 7,26 (m, 2H), 4,23 (t, 2H, J = 8,28 Hz), 1,06 (t, 2H,
Mieszaninę 6-jodo-3-((E)-2-pirydyn-2-ylowinylo)-1-(2-trimetylosilanyloetoksymetylo)-1H-indazolu (7,1 g, 14,8 mmola), estru 2-trimetylosilanyloetylowego kwasu (3-boronofenylo)karbaminowego (8,32 g, 29,6 mmola), dichlorobis-(trifenylofosfina)palladu(II) (312 mg, 0,44 mmola), węglanu potasu (6,13 g, 44,4 mmola) i trietyloaminy (2,1 ml, 14,8) w anizolu (60 ml) ogrzano do 80°C w atmosferze monotlenku węgla. Po 24 godzinach dodano więcej trietyloaminy (2,1 ml, 14,8 mmola). Po 33 godzinach oznaczono zajście reakcji do końca metodą TLC (octan etylu-heksan 7-3). Mieszaninę reakcyjną ochłodzono do 23°C, następnie rozcieńczono nasyconym, wodnym roztworem NaHCO3 (40 ml) i octanem etylu (300 ml). Fazy oddzielono, a warstwę wodną wyekstrahowano octanem etylu (2 x 100 ml). Zebrany octan etylu przemyto solanką (100 ml) i wysuszono nad Na2SO4, przesączono i zatężono. W wyniku oczyszczania drogą chromatografii na żelu krzemionkowym otrzymano ester 2-trimetylosilanyloetylowy kwasu (3-{1-[3-(2-pirydyn-2-yloetylo)-1-(2-trimetylosilanyloetoksymetylo)-1H-indazol-61
-ilo]metanoilo}fenylo)karbaminowego w postaci żółtego szkła (7,22 g, 79%). 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8,65 (d, 1H, J = 3,93 Hz), 8,10 (d, 1H, J = 8,54 Hz), 8,04 (s, 1H), 7,94 (d, 1H, J = 16,33 Hz), 7,82 (s, 1H), 7,66-7,77 (m, 3H), 7,61 (d, 1H, J = 16,35 Hz), 7,40-7,51 (m, 3H), 7,19 (m, 1H), 7,00 (s, 1H), 5,77 (s, 2H), 4,25 (t, 2H, J = 6,93 Hz), 3,60 (t, 2H, J = 8,10 Hz), 1,04 (t, 2H, J = 6,79 Hz), 1,00 (t, 2H, J = 8,13 Hz), 0,04 (s, 9H), 0,0 (s, 9H). MS (ESI+) [M+H]/z; Obliczono 615, stwierdzono 615.
P r z y k ł a d 12: 6-[3-((1-Etylo-3-metylo-1H-pirazol-5-ilo)karboksyamido)benzoilo]-3-E-[2-(pirydyn-2-ylo)etenylo]-1H-indazol
PL 212 108 B1
Do roztworu kwasu 2-etylo-5-metylo-2H-pirazolo-3-karboksylowego (323 mg, 2,1 mmola, 2,1 równoważnika) w DMF (5 ml) w 23°C w atmosferze argonu dodano diizopropyloetyloaminy (365 μ!, 2,1 mmola, 2,1 równoważnika), HATU (798 mg, 2,1 mmola, 2,1 równoważnika) i DMAP (ilość katalityczna). Do otrzymanego roztworu dodano 6-(3-aminobenzoilo)-3-E-(2-pirydyn-2-ylo)etenylo)-1H-indazolu (przykład 11, 340 mg, 1 mmol, 1 równoważnik). Mieszaninę reakcyjną poddawano HPLC do momentu, aż wszystkie związki wyjściowe zużyły się w ciągu około 2 godzin (w ten sposób otrzymano mieszaninę związków mono- i bis-acylowanych). Mieszaninę reakcyjną zadano nasyconym NaHCO3, następnie rozcieńczono wodą i wyekstrahowano octanem etylu. Zebrany EtOAc przemyto wodą, solanką, wysuszono Na2SO4, przesączono i zatężono do oleju. Olej rozpuszczono w metanolu (10 ml), dodano K2CO3 (290 mg, 2,1 mmola, 2,1 równoważnika) i otrzymaną mieszaninę mieszano w temperaturze 23°C do momentu, aż związek bis-acylowany przereagował (przez około 30 minut). Mieszaninę reakcyjną zatężono do oleju, następnie rozdzielono pomiędzy wodę i EtOAc. Fazę organiczną przemyto solanką, wysuszono z użyciem Na2SO4, przesączono i zatężono. W wyniku oczyszczania drogą chromatografii na żelu krzemionkowym (1:1 - 8:2 octan etylu-dichlorometan) otrzymano związek z przykładu 12. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,6 (s, 1H), 10,3 (s, 1H), 8,62 (d, 1H, J = 3,88 Hz), 8,38 (d, 1H, J = 8,51 Hz), 8,20 (s, 1H), 8,12 (td, 1H, J = 7,58 Hz, J = 1,78 Hz), 8,02 (d, 1H, J = 16,36 Hz), 7,93 (s, 1H), 7,83 (td, 1H, J = 7,61 Hz, J = 1,7 Hz), 7,70 (d, 1H, J = 7,78 Hz), 7,65 (d, 1H, J = 16,23 Hz), 7,65-7,53 (m, 3H), 7,30 (m, 1H), 4,43 (q, 2H, J = 7,07 Hz), 2,21 (s, 3H), 1,31 (t, 3H, J = 7,07 Hz). MS (ESI+) [M+H]/z; Obliczono 477, stwierdzono 477. Analiza, Obliczono: C, 70,57; H, 5,08; N, 7,64. Stwierdzono: C, 70,46; H, 5,11; N, 17,61.
P r z y k ł a d 13(a): Chlorowodorek 6-[3-((1-etylo-3-metylo-1H-pirazol-5-ilo)karboksyamido)-benzoilo]-3-E-[2-(pirydyn-2-ylo)etenylo]-1H-indazolu
Związek z przykładu 12 (4,57 g, 9,59 mmola, 1 równoważnik) roztworzono w metanolu (96 ml) i zabezpieczono przed światłem za pomocą folii aluminiowej. Drugą kolbę z metanolem (20 ml) potraktowano chlorkiem acetylu (684 μ^ 1,00 równoważnik) w ciągu 5 minut. Kwaśny roztwór następnie dodano do pierwszej mieszaniny z kilkoma popłuczynami metanolowymi (około 20 ml). Substancje lotne usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem, a pozostałość roztarto mieszaniną 1:1 octan etylu-heksan i otrzymano, po przesączeniu i wysuszeniu, żółty proszek (4,82 g, 98%): Analiza z 1,0 cząst. H2O. Obliczono, C (61,85), H (5,07), N (15,46). Stwierdzono: C (61,15), H (5,15), N (15,38).
P r z y k ł a d 13(b): Chlorowodorek 6-[2-(metylokarbamoilo)fenylosulfanylo]-3-E-[2-(pirydyn-2-ylo)etenylo]indazolu
Związek z przykładu 13(b) wytworzono sposobem podobnym do opisanego w przykładzie 13(a) z tym, że użyto związku z przykładu 5(a) zamiast związku z przykładu 12. Analiza z 2,0 cząst. H2O Obliczono C, 57,58; H, 5,05; N, 12,21; Cl, 6,99. Stwierdzono: C, 57,24; H, 5,048; N, 11,91: Cl, 6,63.
Poniżej opisano w jaki sposób można zbadać aktywność opisanych powyżej przykładowych związków.
PL 212 108 B1
Testy biologiczne: testy enzymatyczne
Stymulacja proliferacji komórek czynnikami wzrostu, takimi jak VEFG, FGF i inne, zależy od indukcji przez nie autofosforylacji każdej z kinaz tyrozynowych ich odpowiednich receptorów. Dlatego też zdolność inhibitora kinaz białkowych do blokowania autofosforylacji można zmierzyć jako hamowanie substratów peptydowych. W celu zmierzenia zdolności związków do hamowania kinazy białkowej, zaprojektowano następujące konstrukty.
Konstrukt VEGF-R2 do badań: Konstrukt ten określa zdolność badanego związku do hamowania aktywności kinazy tyrozynowej. Ekspresję konstruktu (VEGF-Ρ2Δ50) domeny cytozolowej receptora 2 ludzkiego naczyniowego śródbłonkowego czynnika wzrostu (VEGF-R2), bez 50 środkowych reszt spośród 68 reszt domeny insertu kinazy przeprowadzono w układzie bakulowirus/komórka owadzia. Z pełnej długości VEGF-R2 o 1356 resztach, VEGF-R2Δ50 zawiera reszty 806-939 oraz 990-1171, jak również jedną mutację punktową (E990V) w obrębie domeny insertu kinazy w stosunku do VEGF-R2 typu dzikiego. Autofosforylację oczyszczonego konstruktu wykonano poprzez inkubację enzymu w stężeniu 4 μΜ w obecności 3 mM ATP oraz 40 mM MgCl2 w 100 mM HEPES, pH 7,5, zawierającym 5% gliceryny oraz 5 mM DTT, w temperaturze 4°C przez 2 godziny. Stwierdzono, że po autofosforylacji konstrukt wykazywał aktywność katalityczną, zasadniczo równoważną aktywności autofosforylowanego konstruktu domeny kinazy dzikiego typu. Zobacz: Parast i inni, Biochemistry, 37, 16788-16801 (1998).
Konstrukt FGF-R1 do badań:
Ekspresję wewnątrzkomórkowej domeny kinazy ludzkiego FGF-R1 osiągnięto przy użyciu układu ekspresyjnego opartego na wektorze bakulowirusowym, zaczynając od endogennej reszty metioniny 456 do glutaminianu 766, zgodnie z systemem numeracji reszt Mohammadiego i innych, Mol. Cell Biol., 16, 977-989 (1996). Dodatkowo konstrukt posiada następujące 3 substytucje aminokwasowe: L457Y, C488A oraz C584S.
Konstrukt LCK do badań:
Ekspresję kinazy tyrozynowej LCK osiągnięto w komórkach owadzich jako N-końcową delecję, zaczynając od reszty aminokwasowej 223 do końca białka przy reszcie 509, z następującymi dwiema substytucjami aminokwasowymi na N-końcu: P233M oraz C224D.
Konstrukt CHK-1 do badań:
Ekspresję C-końcowo His-oznakowanego ludzkiego CHK1 pełnej długości (FL-CHK1) osiągnięto przy użyciu układu bakulowirus/komórka owadzia. Zawiera on 6 reszt histydyny (6 x His-tag) na C-końcu ludzkiego CHK1 o 476 aminokwasach. Białko oczyszczono przy użyciu konwencjonalnych technik chromatograficznych.
Konstrukt CDK2/Cyklina A do badań:
CDK2 oczyszczono przy użyciu metod opisanych w literaturze (Rosenblatt i in., J. Mol. Biol., 230, 1317-1319 (1993)) z komórek owadzich zarażonych wektorem ekspresji bakulowirusa. Cyklinę A oczyszczono z komórek E. coli z ekspresją zrekombinowanej cykliny A o pełnej długości, a skrócony konstrukt cykliny A otrzymano poprzez ograniczoną proteolizę i oczyszczono w sposób opisany powyżej (Jeffrey i in., Nature, 376, 313-320 (27 czerwca 1995)).
Konstrukt CDK4/Cyklina D do badań:
Kompleks ludzkiego CDK4 i cykliny D3 lub kompleks cykliny D1 i białka fuzyjnego ludzkiego CDK4 oraz S-transferazy glutationowej (GST-CDK4) oczyszczono z użyciem tradycyjnych biochemicznych technik chromatograficznych, z komórek owadzich, wspólnie zarażonych odpowiednimi bakulowirusowymi wektorami ekspresyjnymi.
Konstrukt FAK do badań.
Ekspresję katalitycznej domeny ludzkiego FAK (FAKcd409) osiągnięto używając układu ekspresyjnego opartego na wektorze bakulowirusowym. Ta domena o 280 aminokwasach zawierała reszty od metioniny 409 do glutaminianu 689. Występuje jedna substytucja aminokwasowa (P410T) w stosunku do sekwencji o numerze dostępu L13616, opublikowanej przez Whithey, G.S. i inni, DNA Cell Biol 9, 823-830, 1993. Białko oczyszczono używając klasycznych technik chromatograficznych.
Konstrukt TIE-2 (TEK) do badań
Ekspresję domeny TIE-2 kinazy tyrozynowej osiągnięto w komórkach owadzich jako N-końcową delecję, poczynając od reszty aminokwasowej 774 do reszty aminokwasowej 1124 na końcu białka. Konstrukt ten zawiera również mutację R773M, która służy jako inicjująca reszta metioninowa przy translacji.
PL 212 108 B1
Test VEGF-R2
Sprzężony spektrofotometryczny test (FLVK-P)
Powstawanie ADP z ATP towarzyszące przenoszeniu fosforyIu sprzężono z utlenianiem NADH przy użyciu pirogronianu fosfoenolu (PEP) oraz układu zawierającego kinazę pirogronianową (PK) i dehydrogenezę mleczanową (LDH). Utlenianie NADH monitorowano śledząc spadek absorbancji
-1 -1 przy 340 nm (e340 = 6,22 cm-1 mM-1) przy użyciu spektrofotometru Beckman DU 650. Warunki testu dla fosforylowanego VEGF-R2Δ50 (oznaczonego jako FLVK-P w poniższych tabelach) były następujące: 1 mM PEP; 250 μΜ NADH; 50 jednostek LDH/ml; 20 jednostek PK/ml; 5 mM DTT; 5,1 mM poli(E4Y1); 1 mM ATP; oraz 25 mM MgCl2 w 200 mM HEPES, pH 7,5. Warunki testu dla niesfosforylowanego VEGF-R2Δ50 (oznaczonego jako FLVK w poniższych tabelach) były następujące. 1 mM PEP; 250 μΜ NADH; 50 jednostek LDH/ml; 20 jednostek PK/ml; 5 mM DTT; 20 mM poli(E4Y1); 3 mM ATP; oraz 60 mM MgCl2 i 2 mM MnCl2 w 200 mM HEPES, pH 7,5. Testy inicjowano 5-40 nM enzymu. Wartości Ki określono mierząc aktywność enzymu w obecności zmieniających się stężeń badanych związków. Dane zostały opracowane przy użyciu oprogramowania Enzyme Kinetic oraz Kaleidagraph.
Test ELISA
Powstawanie fosfogastryny monitorowano przy użyciu biotynylowanego peptydu gastryny (1-17) jako substratu. Immobilizację biotynylowej fosfogastryny przeprowadzono przy użyciu 96-studzienkowych płytek do mikromiareczkowania pokrytych streptawidyną, a następnie przeprowadzono detekcję przy użyciu przeciwciała przeciw fosfotyrozynie sprzężonego z peroksydazą chrzanową. Aktywność peroksydazy chrzanowej monitorowano przy użyciu soli 2,2'-azynodi-[3-etylobenzatiazolinosulfoniano(6)]diamonu (ABTS). Typowe roztwory użyte do oznaczania zawierały: 2 μΜ biotynylowany peptyd gastryny; 5 mM DTT; 20 μΜ ATP; 26 mM MgCl2; oraz 2 mM MnCl2 w 200 mM HEPES, pH 7,5. Test zainicjowano 0,8 μΜ fosforylowanym VEGF-R2Δ50. Peroksydazę chrzanową oznaczono przy użyciu ABTS, 10 mM. Reakcję peroksydazy chrzanu przerwano poprzez dodanie kwasu (H2SO4), a następnie dokonano odczytu absorbancji przy 405 nm. Wartości Ki określono mierząc aktywność enzymu w obecności zmieniających się stężeń badanych związków. Dane zostały opracowane przy użyciu oprogramowania Enzyme Kinetic oraz Kaleidagraph.
Oznaczanie FGF-R
Oznaczanie spektrofotometryczne przeprowadzono w sposób analogiczny do opisanego powyżej oznaczania VEGF-R2, z wyjątkiem następujących zmian stężeń: FGF-R = 50 nM, ATP = 2 mM, oraz poli(E4Y1) = 15 mM.
Oznaczanie LCK
Oznaczanie spektrofotometryczne przeprowadzono w sposób analogiczny do opisanego powyżej oznaczania VEGF-R2, z wyjątkiem następujących zmian stężeń: LCK = 60 nM, MgCl2 = 0 mM, poli(E4Y1) = 20 mM.
Oznaczanie CHK-1
Wytwarzanie ADP z ATP towarzyszące przenoszeniu fosforyIu do syntetycznego substratu peptydowego Syntide-2 (PLARTLSVAGLPGKK) sprzężono z oksydazą NADH przy użyciu pirogronianu fosfoenolu (PEP) poprzez działanie kinazy pirogronianowej oraz dehydrogenezy mleczanowej (LDH).
-1 -1
Oksydazę NADH monitorowano śledząc spadek absorbancji przy 340 nm (e340 = 6,22 cm- mM) przy użyciu spektrofotometru HP8452. Typowe roztwory reakcyjne zawierały: 4 mM PEP; 0,15 mM NADH; 28 jednostek LDH/ml; 16 jednostek PK/ml; 3 mM DTT; 0,125 mM Syntide-2; 0,15 mM ATP; 25 mM MgCl2 w 50 mM TRIS, pH 7,5; oraz 400 mM NaCl. Oznaczanie zainicjowano 10 nM FL-CHK1. Wartości Ki określono mierząc początkową aktywność enzymu w obecności zmieniających się stężeń badanych związków. Dane zostały opracowane przy użyciu oprogramowania Enzyme Kinetic oraz Kaleidagraph.
Oznaczanie CDK2/Cyklina A i CDK4/Cyklina D
Cyklino-zależną aktywność kinazy zmierzono poprzez ilościowe oznaczenie zależnej od czasu, katalizowanej enzymatycznie inkorporacji radioaktywnego fosforanu z [32P]ATP do rekombinowanego fragmentu białka glejaka siatkówki. Jeśli nie zaznaczono inaczej, oznaczanie przeprowadzano w 96studzienkowych płytkach w całkowitej objętości 50 gl, w obecności 10 mM HEPES (kwasu N-[2-hydroksyetylo]piperazyno-N'-[2-etanosulfonowego]) (pH 7,4), 10 mM MgCl2, 25 μΜ adenozynotrifosforanu (ATP), 1 mg/ml albuminy jaja kurzego, 5 μg/ml leupeptyny, 1 mM ditiotreitolu, 10 mM β-glicerofosforanu, 0,1 mM wanadanu sodu, 1 mM fluorku sodu, 2,5 mM kwasu etylenoglikolo-bis(e-aminoetyloetero)Ν,Ν,Ν'Ν'-tetraoctowego (EGTA), 2% (obj./obj.) dimetylosulfotlenku oraz 0,03-0,2 gCi [32P]ATP. Substrat (0,3-0,5 μg) stanowił oczyszczony rekombinowany fragment białka glejaka siatkówki (Rb) (reszty 386-928 natywnego białka glejaka siatkówki; 62,3 kDa, zawierającej większość miejsc fosforyzacji wyPL 212 108 B1 stępujących w natywnym białku o 106-kDa, jak również znacznik sześciu reszt histydynowych dla ułatwienia oczyszczenia). Reakcje inicjowano CDK2 (150 nM kompleksu CDK2/Cyklina A) lub CDK4 (50 nM kompleksu CDK4/Cyklina D3), z inkubowaniem w temperaturze 30°C i zakończono po 20 minutach poprzez dodanie kwasu etylenodiaminotetraoctowego (EDTA) do 250 mM. Fosforylowany substrat został następnie wychwycony na membranie nitrocelulozowej przy użyciu 96-studzienkowej filtracyjnej rurki rozgałęźnej, a radioaktywność niewbudowaną usunięto poprzez wielokrotne przemywanie 0,85% kwasem fosforowym. Radioaktywność zmierzono wstawiając wysuszone membrany nitrocelulozowe do aparatu phosphorimager. Pozorne wartości Ki wyznaczono mierząc aktywność enzymatyczną w obecności różnych stężeń związku i odejmując radioaktywność tła zmierzoną przy nieobecności enzymu. Parametry kinetyczne (kcat, Km dla ATP) zmierzono dla każdego enzymu w normalnych warunkach pomiaru, poprzez określenie zależności początkowych wartości od stężenia ATP. Dane były dopasowywane do równania konkurencyjnego hamowania przy użyciu programu Kaleidagraph (firmy Synergy Software) lub do równania konkurencyjnego hamowania silnego wiązania przy użyciu programu KineTic (firmy BioKin, Ltd.). Zmierzone wartości Ki dla znanych inhibitorów w porównaniu z CDK4 i CDK2 były zgodne z opublikowanymi wartościami IC50. Aktywność właściwa CDK4 była taka sama zarówno w kompleksie konstruktu pełnej cykliny D3 jak i obciętej cykliny D3; w przypadku obydwu kompleksów otrzymano również bardzo podobne wartości Ki dla wybranych inhibitorów.
Oznaczanie FAK
W oznaczaniu FAK HTS wykorzystano zestawy oznaczania polaryzacji fluoroscencyjnej dostarczone przez LJL Biosystems. Mieszanina do reakcji kinazy zawierała: 100 mM Hepes pH 7,5, 10 mM MgCl2, 1 mM DTT, 1 mM ATP oraz 1 mg/ml poli Glu-Tyr (4:1). Reakcję zainicjowano poprzez dodanie 5 nM FAKcd409. Reakcję zakończono poprzez dodanie EDTA, a następnie peptydu znaczonego fluorem i przeciwciał przeciw fosfotyrozynie, dostarczonych przez firmę LJL Biosystems. Wyniki inhibicji rejestrowano detektorem Analyst (firmy LJL).
Spektrofotometryczne oznaczanie TiE-2
Katalizowane przez kinazę powstawanie ADP z ATP, któremu towarzyszy przeniesienie fosforylu do statystycznego kopolimeru Poli(Glu4Tyr) sprzężono z utlenianiem NADH poprzez działanie kinazy pirogronianowej oraz dehydrogenezy mleczanowej (LDH). Konwersję NADH do NAD+ monitorowano mierząc
-1 -1 spadek absorbancji przy 340 nm (ε = 6,22 cm-1 mM-1), z użyciem spektrofotometru Beckman DU650. Typowe roztwory reakcyjne zawierały 1 mM pirogronian fosfoenolu, 0,24 mM NADH, 40 mM MgCl2, 5 mM DTT, 2,9 mg/ml poli(Glu4Tyr), 0,5 mM ATP, 15 jednostek/ml PK, 15 jednostek/ml LDH w 100 mM HEPES, pH 7,5. Oznaczanie inicjowano przez dodanie 4-12 nM fosforylowanego Tie-2 (aminokwasy 775-1122). Procent hamowania oznaczano dla 3 próbek przy stężeniu inhibitora 1 μΜ.
Oznaczanie TiE-2 DELFiA
Powstawanie fosfotyrozyny monitorowano z użyciem biotynylowanego peptydu p34cdc2 (aminokwasy 6-20= KVEKiGEGTYGVVYK) jako substratu. Biotynylowany peptyd unieruchomiono na 96-studzienkowych płytkach do mikromianowania pokrytych NeutrAvidin™, po czym przeprowadzono wykrywanie za pomocą przeciwciała przeciw fosfotyrozynie (PY20) sprzężonego z chelatem europu N1. Typowe roztwory pomiarowe zawierały 1 μΜ biotynylowany peptyd p34cdc2, 150 μΜ ATP, 5 mM MgCl2, 1 mM DTT, 0,01% BSA, 5% gliceryny, 2% DMSO, 25 mM HEPES, pH 7,5. Pomiary inicjowano na płytce NeutrAvidin przez dodanie 50 nM wewnątrzkomórkowej domeny TIE2. Reakcję kinazy kończono za pomocą 50 mM EDTA. Płytki przemywano następnie i dodawano przeciwciała z europem. Po inkubacji przemywano je ponownie i dodawano roztworu wzmacniającego DELFIA™ Enhancement Solution. Płytki odczytywano metodą czasowo-rozdzielczej spektroskopii przy standardowej nastawie dla europu (wzbudzanie 340 nm, emisja 615 nm, opóźnienie 400 ps, przedział 400 ps). Procent hamowania obliczano w odniesieniu do wewnętrznych studzienek, do których dodano DMSO zamiast związku w DMSO, z odejmowaniem tła od wartości doświadczalnej i kontrolnej w odniesieniu do wewnętrznej studzienki, do której dodano EDTA przed dodaniem enzymu.
Test proliferacji HUVEC
W teście tym określa się zdolność badanego związku do hamowania stymulowanej czynnikiem wzrostu proliferacji ludzkich komórek śródbłonkowych z żyły pępkowej („HUVEC”). Komórki HUVEC (pasaż 3-4, Clonetics, Corp.) rozmrożono w pożywce EGM2 (Clonetics Corp) w kolbach T75. Po 24 godzinach dodano do kolb świeżej pożywki EGM2. Cztery lub pięć dni później komórki wystawiono na działanie innej pożywki (pożywka F12K uzupełniona 10% surowicy płodu bydlęcego (FBS), 60 pg/ml suplementu wzrostu komórek śródbłonkowych (ECGS) oraz 0,1 mg/ml heparyny). Od tej pory w eksperymentach używano wykładniczo rozwijających się komórek HUVEC. Dziesięć do dwu56
PL 212 108 B1 nastu tysięcy komórek HUVEC wysiano na 96-studzienkowych płytkach w 100 μl bogatej pożywki (opisanej powyżej). Komórki pozostawiono do przyczepienia się na 24 godziny w tej pożywce. Następnie usunięto pożywkę poprzez odessanie, a do każdej studzienki dodano 105 μl pożywki „głodowej (F12K+1% FBS). Po 24 godzinach 15 μl badanego środka, rozpuszczonego w 1% DMSO w pożywce głodowej lub sam ten nośnik dodano do każdej studzienki testowej; ostateczne stężenie DMSO wynosiło 0,1%. Godzinę później, 30 μl VEGF (30 ng/ml) w pożywce głodowej dodano do wszystkich studzienek z wyjątkiem nietestowych studzienek kontrolnych; ostateczne stężenie VEGF wynosiło 6 ng/ml. Proliferację komórek oznaczono ilościowo 72 godziny później poprzez redukcję barwnika MTT, przy czym komórki były przez cztery godziny wystawione na działanie MTT (firmy Promega Corp.). Redukcję barwnika przerwano dodając roztwór przerywający (firmy Promega Corp.), a absorbancję przy λ 595 określono przy pomocy spektrofotometrycznego czytnika 96-studzienkowych płytek.
595
Wartości IC50 obliczono poprzez dopasowywanie krzywej odpowiedzi A595 dla różnych stężeń badanego środka; typowo zastosowano siedem stężeń różniących się logarytmicznie o 0,5, z trzema studzienkami dla każdego stężenia. W przypadku przeszukiwania płytek z bibliotekami związków, zastosowano jedno lub dwa stężenia (jedna studzienka płytki na stężenie), a % hamowania obliczono z następującego wzoru:
hamowanie (%) = (kontrolne - testowe) + (kontrolne - głodowe) gdzie
595 kontrolne = A595 kiedy VEGF jest obecne bez badanego środka
595 testowe = A595 kiedy VEGF jest obecne z badanym środkiem
595 głodowe = A595 bez VEGF i badanego środka.
Test proliferacji komórek rakowych (MV522)
Procedura oceny proliferacji komórek w przypadku komórek nowotworowych jest podobna do zastosowanej w ocenie komórek HUVEC. 2000 komórek raka płuc (linia MV522, sprowadzone z American Tissue Cultural Collection) wysiano w pożywce (pożywka RPMI1640 uzupełniona 2 mM glutaminą i 10% FBS). Komórki pozostawiono na 1 dzień do przyczepienia się, przed dodaniem badanych środków i/lub nośników. Komórki potraktowano równocześnie tymi samymi badanymi środkami, które zastosowano w teście HUVEC. Proliferację komórek określano ilościowo w próbie redukcji barwnika MTT, w 72 godziny po wystawieniu na działanie badanych środków. Całkowity czas trwania próby wynosił 4 dni w porównaniu z 5 dniami w przypadku komórek HUVEC, gdyż komórek MV522 nie wystawiano na działanie pożywki głodowej.
Test PK na myszach
Farmakokinetykę (czyli wchłanianie i eliminację) leków przez myszy zanalizowano w następującym doświadczeniu. Badane związki przygotowano w postaci roztworu lub suspensji w mieszaninie 30:70 (PEG 400: zakwaszona H2O) jako nośniku lub w postaci zawiesiny w 0,5% CMC. Podawano je doustnie (p.o.) i śródotrzewnowo (i.p.) w różnych dawkach dwóm różnym grupom (n = 4) samic myszy B6. Próbki krwi pobierano z oczodołu w punktach czasowych: 0 godzin (przed podaniem), 0,5, 1,0, 2,0, 4,0 i 7,0 godzin po podaniu. Z każdej próbki otrzymano osocze przez wirowanie z szybkością 2500 obrotów/minutę w ciągu 5 minut. Badany związek ekstrahowano z osocza metodą wytrącania białka rozpuszczalnikiem organicznym. W przypadku każdego momentu pobierania krwi 50 μl połączono z 1,0 ml acetonitrylu, mieszano w aparacie Vortex przez 2 minuty, po czym odwirowywano z szybkością 4000 obrotów/minutę przez 15 minut, w celu wytrącenia białka i wyekstrahowania badanego związku. Następnie supernatant acetonitrylowy (ekstrakt zawierający badany związek) wlewano do nowych probówek i odparowywano na płytce grzejnej (25°C) w strumieniu gazowego N2. Do każdej probówki zawierającej wysuszony ekstrakt badanego związku dodawano 125 μl fazy ruchomej (60:40, 0,025 M NH4H2PO4 + 2,5 ml/litr TEA:acetonitryl). Badany związek przeprowadzono ponownie w stan suspensji przez mieszanie w aparacie Vortex, a dodatkową ilość białka usunięto przez wirowanie z szybkością 4000 obrotów/minutę w ciągu 5 minut. Każdą próbkę wlewano do fiolki do HPLC w celu wykonania analizy badanego związku w aparacie HPLC Hewlett Packard 1100 z detekcją UV. W przypadku każdej próbki porcję 95 μl wstrzykiwano do kolumny z odwróconym układem faz Phenomenex-Prodigy C-18, 150 x 3,2 mm i prowadzono eluowanie z gradientem 45-50% acetonitrylu przez 10 minut.
Stężenie badanego związku w osoczu ^g/ml) wyznaczano przez porównanie z krzywą wzorcową (powierzchnia piku w funkcji stężenia w μg/ml) wykonaną z użyciem znanych stężeń badanego związku, wyekstrahowanego z próbek osocza w sposób opisany powyżej. Wraz z wzorcami i próbkami o nieznanym stężeniu analizowano również 3 grupy (n = 4) próbek do kontroli jakości (0,25 μg/ml, 1,5 μg/ml i 7,5 μg/ml) w celu zapewnienia zgodności analizy. Wartość R2 dla krzywej wzorcowej wynosiła > 0,99, a wartości dla wszystkich próbek do kontroli jakości mieściły się w granicach 10% warPL 212 108 B1 tości oczekiwanych. Z użyciem oprogramowania Kalidagraph wykonano wykresy wyników oznaczeń ilościowych w badanych próbkach, w celu przedstawienia prezentacji wizualnej, a parametry farmakokinetyczne wyliczono z użyciem oprogramowania WIN NONLIN.
Test z mikrosomami ludzkiej wątroby (HLM)
Metabolizm związków w mikrosomach ludzkiej wątroby zmierzono zgodnie z procedurami analitycznego testu LC-MS w następujący sposób. Najpierw mikrosomy ludzkiej wątroby (HLM) rozmrożono i rozcieńczono do stężenia 5 mg/ml zimnym buforem, 100 mM fosforanem potasu (KPO4). Odpowiednie ilości buforu KPO4, roztworu regenerującego NADPH (zawierającego B-NADP, glukozo-6-fosforan, dehydrogenazę glukozo-6-fosforanu i MgCl2) oraz HLM wstępnie inkubowano w szklanych probówkach 13 x 100 mm w 37°C przez 10 minut (3 probówki/badany związek - 3 powtórki). Badany związek (ostateczne stężenie 5 μΜ) dodawano do każdej probówki w celu zainicjowania reakcji i łagodnie mieszano aparatem Vortex, po czym mieszaniny inkubowano w 37°C. W czasie t = 0, 2 godziny z każdej probówki inkubacyjnej pobrano próbkę 250 μl do odrębnych szklanych probówek 12 x 75 mm, zawierających 1 ml lodowatego acetonitrylu z 0,05 μΜ rezerpiną. Próbki odwirowano z szybkością 4000 obrotów/minutę przez 20 minut w celu wytrącenia białek i soli (Beckman Allegra 6KR, S/N ALK98D06, #634). Supernatant przeniesiono do nowej szklanej probówki 12 x 75 mm i odparowano w odśrodkowej wyparce próżniowej Speed-Vac. Próbki roztworzono w 200 μl mieszaniny 0,1% kwas mrówkowy/acetonitryl (90/10) i energicznie mieszano w aparacie Vortex w celu rozpuszczenia. Próbki przeniesiono następnie do odrębnych polipropylenowych probówek do mikrowirowania i wirowano przy 14000 x g przez 10 minut (Fisher Micro 14, S/N M0017580). Dla każdej powtórki (#1-3) w każdym punkcie czasowym (0 i 2 godziny), próbki podwielokrotne każdego badanego związku połączono w fiolce stanowiącej pojedynczy wkład HPLC (łącznie 6 próbek) do analizy LC-MS, którą opisano poniżej.
Połączone próbki wstrzyknięto do układu LC-MS, złożonego z aparatu HPLC Hewlett-Packard HP1100 z wskaźnikiem diodowym i potrójnego kwadrupolowego spektrometru masowego Micromass Quattro II, pracującego w układzie rozpylania jonów dodatnich w polu elektrycznym w trybie SIR (zaprogramowanego tak, aby poszukiwać jonu cząsteczkowego każdego z badanych związków). Pik każdego badanego związku całkowano dla każdego punktu czasowego. Dla każdego związku powierzchnię piku w każdym punkcie czasowym (n = 3) uśrednionio i średnią powierzchnię piku w czasie 2 godziny podzielono przez średnią powierzchnię piku w czasie 0 godzin, otrzymując w ten sposób procentową pozostałość badanego związku po 2 godzinach.
Wyniki badania związków w różnych testach zestawiono w poniższej tabeli, w której wartości ,* oznaczają K (nM) lub hamowanie (%) przy stężeniu związku wynoszącym 1 μΜ w przypadku * lub 50 nM w przypadku **, o ile nie zaznaczono tego inaczej. „NI” oznacza brak znaczącego hamowania.
T a b e l a 1
Przykł. nr FLVK ** FLVK p** Lck- P* CHK -1* FGF- P* CDK2 * CDK4 * HUVEC IC50 (nM) HUVEC + albumina IC50 (nM) MV522 IC50 (μΜ) Pozostałość (%) (HLM, 2 h)
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
10(a) 0,22 77% 74% 4,5 20 10,7 72
10(b) 72% 79
5(b) 0,66 76% 63% 77% 0,8 11,5 15 45
5(a) 3,8 42% 9% 0 56 2% 7% 0,5 2,7 >10 29
5(c) 0,28 26% 76% 6,6 >10 16
5(d) 0,14 55% 24 >300 8 22
5(e) 1,7 70% 2% 68% 0,46 5 >10 54
5(f) 8 17 31
7(u) 79% 2,8 27
7(gg) 23% >100
5(g) 15%
6 97% 78% 95% 15 28
7(v) 72% 11% 59% 22 26
PL 212 108 B1 cd. tabeli 1
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
7(w) 59% 35
7(x) 75% 2 37
7(a) 76% 12% 59% 2,1 33
7(b) 49% 12% 59% 35
7(c) 76% 11% 42% 6,3 17
7(y) 99% 29% 82% 1 do 3 7
7(d) 76% >100
7(e) 99% 56% 69% 4,8 >10 34
7(f) 100% 8 15
7(g) 100% ok. 15 53
7(h) 100% 3,6 9
7(i) 100% 4,7
7(j) 99% 1,5 5
7(k) 85% 6% 0 34% 8% 7% 2,2 >10 14
7(z) 95% 7,1 2
7(aa) 99% 5 15
7(l) 90% 12
7(cc) 89% 15% 0 74% 5% 6% 0,05 1,6 31
7(ee) 82% 3 13
7(ff) 0,11 25% 75% 5,8 31
7(dd) 0,6 17% 0 75 7% 8% 0,18 2,9 >10 26
7(bb) 87% 4,1 8
7(hh) 100% 34% 73% 7
7(m) 0,04 61% 82% 35
7(n) 0,83 58% 23% 92 4% 10% 0,11 11 5,1 47
8(b) 85% 22% 43% >30
9(d) 26% 10% 38% >100
9(c) 83% 12% 39% 12 21
9(b) 48% 8% 36% 30-100
8(c) 89% 28% 60% >30
8(a) 87% 19% 38% 19 58
7(p) 62% 5% 11% >30
7(q) 92% 42% 51% 18
9(a) 57% 6% 35% 15 21
7(r) 0,11 16% 20 0,36 2,3 >10 51
7(s) 60%* 18% 64% 4,6 16
7(t) 59%* 12% 63% 4 7
7(ii) 44%
Przykład wytwarzania biblioteki I W przypadku, gdy we wzorze I Y=S
PL 212 108 B1
6-[2-(Pentafluorofenoksykarbonylo)fenylosulfanylo]-3-E-[2-(pirydyn-2-ylo)etenylo]-1H-indazol (Y = S) otrzymano w sposób opisany w przykładzie 7(a). Roztwory 261 amin (1,5 μmola) i Et3N (0,1393 pl, 1,0 pmola), rozpuszczone w DMF (15 pl), rozprowadzono do studzienek w 96-studzienkowej płytce. W przypadku, gdy stosowano aminę w postaci chlorowodorku, dodawano więcej Et3N (0,4179 pl, 3,0 pmola) w celu uwolnienia wolnej zasady. Do każdej studzienki dodano roztworu estru pentafluorofenylowego (0,5395 mg, 1,0 pmola) rozpuszczonego w DMF (30 pl), po czym całość mieszano przez 24 godziny w temperaturze pokojowej. Surowe mieszaniny reakcyjne zatężono w aparacie GeneVac™, po czym rozpuszczono je w DMSO do końcowego stężenia 10 mM.
Związki w tabeli biblioteki I zbadano pod względem zdolności do hamowania proliferacji HUVEC przy nominalnym stężeniu wynoszącym 0,5 i 2 nM w przypadku Y=S, a w tabeli I zamieszczono wyniki obliczone z zależności:
hamowanie (%) = (kontrolne - testowe) + (kontrolne - głodowe) x 100
W takich warunkach badania hamowanie w > 50% uważa się za znaczące.
PL 212 108 B1
Tabela biblioteki I
R 0,5 nM 2nM
19 89
Z 38 2
37 16
M CH. Z 39 15
ιμ43ι„™. χ“· *1 35 10
Xi 32 31
*{ 5 14
XJ 14 55
1 F 23 L 44
rF 25 35
30 23
5 19
z 70 105
Xi 25 15
O, P *! 44 19
φΗ, rv H-CH» Xf CH, 36 5
OH i 23 6
PL 212 108 B1 cd. tabeli
%-GH 4 20
fi 21 60
fi 34 61
rO xf 23 23
AZ Λ 26 37
V' ζ 2 6
32 24
Xf ΟΗ 32 6
fir* 48 8
xrO'm' 45 88
Ma^U> χ/ ΝΗ« 17 4
Ρ», χί 8 21
X' *ί 15 27
Ησ~\-χ 22 I 24
22 23
ζ° 16 20
-~0Η fi Α1 10 24
fi 28 22
fi Χί 37 12
,7 49 91
-fi 40 31
PL 212 108 B1 cd. tabeli
Χί 10 32
6 43
/4 30 78
34 50
22 20
haJ X? 19 28
Τ' CH, *ί β 1
^-CH, Χί 20 10
CH, r+NH« χί CH, 31 3
7 X n»c 32 ... 10
/-CH, /—Ν y—A '-CH» Χί 31 -1
Λ' 6 4
CH, χί CH« 4 29
23 61
ζΗ...... 18 24
V χΛ ΝΗβ 21 15
Η-CH, χΓ° -1 26
HlC-O χί •6 0
^Η, Ν—, JO Αι 18 5
^N-CH, χί 23 17
PL 212 108 B1 cd. tabeli
r<Q 20 2
Η·βΧ«Χ T CH, X,' 37 15
Xf 0 4
5 1
%-NHa x; 8 18
o Xf 3 15
H,C N-CH, χί 23 16
M.O. __ m-CH, Z 42 22
^W-CH, Z0* -9 1
z^O Xf 25 •5
X Y 0 16 7
ęf-o X 27 2
OH _rs ° Xf 49 -9
z 18 40
n-oh Λ 5 9
8 23
Os?-0H Z 16 21
f-CH. Z°» 13 23
rf- < CH, 8 22
H»C^ ęy^CH, 2 -19
PL 212 108 B1 cd. tabeli
17 1
NH, xC«H 7 -1
CH, /fe* 5 -6
£ 26 -19
23 -32
2 -3
P H.C-W X? 18 25
c'O Xi 1 13
z 4 4
Xi
Xf 18 22
Η-Χ1 9 30
S 7 25
AA 16 17
Ύ>, 13 31
hcYY 95 106
59 97
30 66
Y, 22 43
33 64
28 29
£ 31 20
42 80
<T* 25 53
'hT' “· I 65 110
PL 212 108 B1 cd. tabeli
29 58
52 107
'ΊΟ 31 36
V' 4 10
8 23
13 20
33 18
Ό> 20 25
κ,σ^ 62 99
P-N ---X, 8 16
“75 17 13
<Λ 19 22
<ζ 39 18
44 5
<F 43 96
19 55
29 92
—, 49 109
25 14
Η,α^ζρχ, 24 84
»<. 19 24
47 107
35 40
ȴS,^x^ 26 31
53 75
8 21
<Γ* 70 112
72 109
κ 26 31
PL 212 108 B1 cd. tabeli
y°**N 28 14
-6 41
Ος 12 76
Ο, 33 94
α, 27 17
α, 44 28
,ΛΛ 55 50
21 90
12 53
<Λ 21 64
fi 35 63
^ycH, 21 -5
1 65
28 103
51 105
44 97
X 44 40
47 -4
s<r0Y^ ^CH, 47 89
Z' 12 29
X 44 100
[X~> 35 69
16 2
fi 32 92
92 103
PL 212 108 B1 cd. tabeli
<Χ-, 38 68
25 40
34 99
σ^ 30 94
24 99
19 101
20 92
15 99
ί* σ' 16 37
α, 17 23
CUs 70 111
cy, €0 99
ÓT‘ 75 114
81 95
24 66
-3 64
<y, 26 71
CC 14 60
Η,σ^^^χ, 51 108
cc* 8 37
15 23
,Λ-Α 20 32
35 63
PL 212 108 B1 cd. tabeli
9 1
Κ' 56 96
26 2
39 13
•vyy 19 5
tW'''---- 24 31
35 106
łC 15 35
ά, 69 59
*o, -11 42
yk] 16 42
'k?.. 15 95
-tt, 20 92
*ΥΊ 19 -1
31 30
-1 14
9 34
6 44
U' 1 52
*τ6 18 -2
Κ 9 *
ν^-γΆ 40 94
PL 212 108 B1 cd. tabeli
uf AA 28 47
26 16
Σ, 18 11
Y 13 7
28 69 43
18
11 47
19 86
28 63
Y· 50 111
A 45 103
A 53 95
Ογ-χ. 31 108
νγ Ó 69 104
A 36 106
58 100
63 104
?' 12 55
CY~* 16 73
PL 212 108 B1 cd. tabeli
ί m.c-·’/ 18 -3
16 17
32 35
36 66
2ϊ% 68 49
CH. 26 39
/.CH, 15 4
F. 25 31
Oys 65 90
α UfAo 21 39
10 29
i· 16 2
^cjC^ 22 36
CF' 18 29
// 25 25
σ°'' 27 60
30 70
ó 10 23
Ο-A 50 40
51 67
ny 23 . 51
PL 212 108 B1 cd. tabeli
αν* 31 66
X) 86 107
46 103
cc 26 59
**Υ%ς “ό 30 61
41 16
15 Θ
74 101
m.«\Łh,° 78 60
CC ^OH 58 37
34 90
er* 34 69
0C‘ 19 35
cA' 15 -1
11 15
15 -9
x\ 12
H,C H,C 8
A 38
PL 212 108 B1
Przykład wytwarzania biblioteki II
Przygotowano osobno 0,1 M roztwory amin, trietyloaminy i 4-dimetyloaminopirydyny w bezwodnym DMF i przeniesiono do komory rękawicowej. W komorze rękawicowej przygotowano 0,1 M roztwór 6-[2-(karboksy)fenylosulfanylo]-3-E-[2-(pirydyn-2-ylo)etenylo]-1H-indazolu, przykład 5(g), soli tetrabutyloamoniowej i heksafluorofosforanu o-(7-azabenzotriazol-1-ilo)-N,N,N',N'-tetrametylouroniowego. Do każdej probówki w układzie 8 x 11 probówek do hodowli (10 x 75 mm) dodano 100 (gl (0,01 mmola) roztworu innej aminy, po czym dodano 100 gl (0,01 mmola) roztworu 2-{3-[(E)-2-(2-pirydynylo)etylilo]-1H-indazol-6-ilo}sulfanylo)benzoesanu tetrabutyloamoniowego, 100 gl (0,01 mmola) roztworu trietyloaminy, 100 gl (0,01 mmola) roztworu 4-dimetyloaminopirydyny i 100 gl (0,01 mmola) roztworu heksafluorofosforanu o-(7-azabenzotriazol-1-ilo)-N,N,N',N'-tetrametylouroniowego. Mieszaniny reakcyjne mieszano w ogrzewanym bloku w 50°C przez 1 godzinę. Mieszaniny reakcyjne przeniesiono następnie na 96-studzienkową płytkę o pojemności 1 ml za pomocą manipulatora cieczowego. Rozpuszczalniki usunięto w aparacie SpeedVac™ i surowe mieszaniny reakcyjne ponownie rozpuszczono w DMSO, do osiągnięcia końcowego teoretycznego stężenia 10 mM.
Związki zamieszczone w tabeli zbadano pod względem zdolności do hamowania proliferacji HUVEC przy nominalnym stężeniu wynoszącym 0,5 nM, a w tabeli II zamieszczono wyniki obliczone z zależności:
hamowanie (%) = (kontrolne - testowe) + (kontrolne - głodowe) x 100
W takich warunkach badania hamowanie w > 30% uważa się za znaczące.
PL 212 108 B1
Tabela biblioteki II
R Hamowanie (%)
-1
A -17
ay 4
17
X CH, 6
R Hamowanie (%)
X, 22
ho4 W'CH, -19
X F 9
'φ CH, 2
5
PL 212 108 B1 cd. tabeli
PL 212 108 B1 cd. tabeli
Η,Ζ -22
Λ -4
Φ H,C'° 4
A cZcH, -29
X. -6
,χο *1 -8
π,Ογό CM, ) 8
Ά hct^ 1
£ F -38
A -36
-11
A hZ -14
\=N -20
1 . -5
PL 212 108 B1 cd. tabeli
4 •43
H»C CH, -5
Λ F 0
c HjtZcH, 6
0
i HQ N N -28
*13
A «.eJ-H M.C CH. -21
•iCC -15
0
ηοΑΛοη -18
JE: θ' o=nf 0 -15
JOO -1
-11
PL 212 108 B1 cd. tabeli
¢9 X, 3
χ Η,ίΤ'ΌΗ, 1
Λ 17 ^H, -27
f Λ-™. <r -47
33
17
js ó F^-j—F 20
X p cc -29
-17
.«ΧΤρη. CH, -7
rAp Z“N H,C W 0
X -1
<*< H.C'°
X 4
<0. 43
PL 212 108 B1 cd. tabeli
PL 212 108 B1 cd. tabeli
“ύ 2
4
{. •μπρι Nys» H,C'° 20
4 2
ęę* -3
-9
ó -9
Z -1
OH 4
12
-7 H,C'6 9
fi -6
i' T O^NH, -2
H,CyÓ O 5
PL 212 108 B1 cd. tabeli
ct^ch, 6
,Λ» 18
20
cc, -23
-12
Η,Ο^χί’ OH 22
9
n^-oAA 7
-4
OH 4
7
o°4 7
18
A 11
A 0 -31
PL 212 108 B1 cd. tabeli
PL 212 108 B1 cd. tabeli
PL 212 108 B1 cd. tabeli
1
ϊ’ Η·°ςΧ ?η -5
Λ -60
0^0 CH, •46
«. 1 1 -22
χΑ· -20
χχί -7
Λ CH, -28
γ 0Η -10
£ -13
& 13
Μ. -7
-13
Λ CH, -45
PL 212 108 B1 cd. tabeli
?. Η,Ζ °π -40
-2
£ -11
«/ -31
-30
Λ CH, 11
H.C-4-CH, HOT -2
-- X “o z 18
/ CH, 7
7 1
Λ CH, 0
1’ Η,Ο'θ'γ'ΧΗ, H,C'° 0
f. y F 24
PL 212 108 B1 cd. tabeli
A h°hJ Oh 14
HO J ^CH, HO * 61
ΗΟγΧ,ΧΗ, HO'M ^CH, 9
,χώ 1
1
A 4
co X, 1
i» Cl β
-15
§ Cl -12
52
O=S-CH, 19
“Ó 13
°ί6 -7
ςσ· -26
PL 212 108 B1 cd. tabeli
X, Ην 7
$ 9
i,.· 18
Z 10
CO -37
•2
ć> «-ΝΗ 43
Z F 5
& 1
F4f -3
j. nZ -13
«.sAT* -1
PL 212 108 B1 cd. tabeli
CH, -1
16
£30 X, 4
-23
-20
A y -15
10
-18
-9
29
co X. 1
X* ¢/ 10
H,Ć 0
cA 9
PL 212 108 B1 cd. tabeli
ο*· -3
-11
n-nh 22
& 9
A -5
X, h,cyS CH, OH -19
A -6
Y' -12
A -1
-7
£ HO„ Z rTl 2
ΗΟ«γ -34
jX) -13
H,C»oJAC^ CH, 13
PL 212 108 B1 cd. tabeli
πο-,Λ Cl 48
36
z -β
-11
θΧΗ, 1
“Z, -4
ί φ H,C'° 10
A -1
CQ χ, -33
ο -19
ϊ CH, -6
fi °'CH, 2
trS -21
fi Cl -16
PL 212 108 B1 cd. tabeli
PL 212 108 B1 cd. tabeli
V CH, -6
Z 13
X» CH, -1
J, 9 H,CJ -11
11
15
ψΟΟ CH, •8
σο CH, 1
3
9
χΑ 2
8
15
PL 212 108 B1 cd. tabeli
14
H,Cy» 3
ό -31
ό -2
ό 11
H,C CH, 13
X 10
ά 3
ό Ν 6
Ο Ϋι 2
φΑ0 CH, -1
ΠΑοΛ^ 3
ςΑ 18
(Λ. -17
Α -β
“ύ 3
PL 212 108 B1 cd. tabeli
X 0
φ ηΧ'οη, 18
7
-6
ό 2
Ο^ΝΗ,
trS 3
14
? ΟΗ 10
Φ Η,Ο'θ -20
ό Ν -10
Η,ΜγΧ^Ι 4
10
Η*Αη, 0 9
PL 212 108 B1 cd. tabeli
-7
J’ γΊ) ®'CH, -3
4
CH, 8
H,C'6 CH« 10
oh, 7
oj A -9
A 46
/ 2
23
& 11
-10
Y -4
PL 212 108 B1 cd. tabeli
7
9
.,γ 10
ο 15
*18
/ ΗΟ -2
5
ά -13
α Η,ί -9
Α w O=<^CH, CH, -2
Λ H,ĆCHJ -6
A V 17
PL 212 108 B1 cd. tabeli
£ H,C 19
£ 1β
η,Α -24
0
ί
“ό -6
Λ ηοΑΑοη 3
Λ Ο h,c-\n CH, -20
* r° CH, -16
?· CH, -19
1
MC^X, 3
A 6
Y 13
PL 212 108 B1 cd. tabeli
JS H-cą H° ^OH -18
•Z H,C'° -9
ot 2
y 14
H-c'^ -10
Φ H,C' -7
A 4
A ĆH, 11
4- H,C H 11
A 8
y. H.C+CH, CH, 23
CO H,cAx, 1
go -20
0
PL 212 108 B1 cd. tabeli
fi 57
fi 24
A 1
f» V CH, -10
-8
z -2
5
„Z 3
PL 212 108 B1
T a b e l a 2
Hamowanie (%) przy 1 μΜ
Przykład nr Tie2-P FAK
5(a) 35 12
7(k) 55 7
7(dd) 48 4
7(n) 82 1
7(cc) 47 7
- wartości podane w powyższej tabeli dotyczą wyników analizy spektrofotometrycznej
Oznaczanie stężenia inhibitora w mysim osoczu po podaniu śródotrzewnowym i doustnym.
Roztwory do podawania zawierały inhibitor rozpuszczony w jednym z następujących nośników: 30% lub 60% wodny roztwór glikolu polipropylenowego z molowym równoważnikiem HCl w wodzie lub 0,5% roztwór karboksymetylocelulozy w wodzie. Ostateczne stężenie wynosiło zazwyczaj 5 mg/ml, a podawana objętość 5 lub 10 ml/kg. Samicom myszy Taconic (Germantown, NY) podawano związek w ilości liczonej jako stosunek masy związku do masy ciała wynoszący zazwyczaj 50 lub 25 mg/kg. Krew pobierano drogą z oczodołu po 0,5, 1 i 4 godzinach oraz w ostatnim punkcie czasowym, po 7 godzinach, przez nakłucie serca. Krew odwirowywano w celu zebrania osocza, które następnie przechowywano w -80°C do wykonania analizy. Próbki przygotowywano do analizy z użyciem wzorca wewnętrznego i wodorotlenku sodu. Po wymieszaniu w aparacie Vortex dodano octanu etylu i mieszano przez 15-20 minut w temperaturze otoczenia. Po odwirowaniu otrzymaną warstwę organiczną odparowano, a następnie roztworzono w acetonitrylu i buforze. Próbki analizowano metodami HPLC lub LC-MS.
Poziomy związków określano ilościowo przez generowanie krzywej wzorcowej dla znanych stężeń związku w mysim osoczu. Wykreślano zależność zawartości związku w funkcji czasu i wyznaczano powierzchnię pod krzywą stężenia (AUC ng*h/ml), stężenie maksymalne (Cmax ng/ml), stężenie minimalne (Cmin lub stężenie po 7 h, ng/ml), oraz końcowy okres półtrwania (T1/2, h). Wyniki przedstawiono w tabeli 3.
T a b e l a 3
Przykład nr Droga Dawka mg/kg AUClast (ng*h/ml) Cmax (ng/ml) Cmin (stęż. 7 h) (ng/ml) Ty2 8 (h) Nośnik PEG400:H2O pH 2,3
1 2 3 4 5 6 7 8
5(a) IP 25 13813 13794 54 1,1 30:70
5(a) PO 100 3556 90 0,5% CMC
5(a) PO 25 721 66 0,5% CMC
5(a) PO 50 19067 23562 25 0,8 30:70
5(b) IP 25 11245 1990 902 3,0 60:40
5(b) PO 50 3925 1496 76 3,0 60:40
5(c) IP 25 697 505 7 1,2 30:70
5(c) PO 50 183 94 5 3,0 30:70
5(d) IP 25 5080 1738 113 1,6 60:40
5(d) PO 50 4744 1614 8 0,9 60:40
5(e) IP 25 14323 9938 94 1,0 30:70
5(e) PO 50 13290 9967 12 0,7 30:70
5(f) IP 25 1887 1699 6 2,4 30:70
5(f) PO 50 1436 1186 3 0,7 30:70
100
PL 212 108 B1 cd. tabeli 3
1 2 3 4 5 6 7 8
7(a) IP 25 2032 2138 24 1,4 30:70
7(a) PO 50 2445 1780 10 0,9 30:70
7(aa) PO 25 4036 4168 106 2,1 30:70
7(b) IP 25 2840 1509 12 0,8 30:70
7(b) PO 50 4048 5595 13 0,8 30:70
7(c) IP 25 9408 1976 465 3,2 30:70
7(c) PO 50 4744 909 321 4,9 30:70
7(cc) IP 25 2223 3183 6 1,4 30:70
7(cc) PO 50 1718 1439 5 0,9 30:70
7(dd) IP 25 > 23046 >4000 1364 4,1 30:70
7(dd) PO 25 1360 444 58 2,0 0,5% CMC
7(dd) PO 25 >6521 >4000 114 1,4 30:70
7(e) IP 25 2409 1272 65 1,8 30:70
7(e) PO 50 1503 1043 6 0,9 30:70
7(ee) IP 25 546 579 2 1,5 30:70
7(ee) PO 25 157 77 9 14,6 30:70
7(f) IP 25 397 131 25 3,8 30:70
7(f) PO 50 358 93 27 3,6 30:70
7(ff) IP 25 >6301 >4000 72 1,7 30:70
7(ff) PO 25 Blq Blq blq blq 30:70
7(g) PO 25 231 61 28 18,1 30:70
7(h) IP 25 59 46 1 1,5 30:70
7(h) PO 50 26 7 2 * 30:70
7(hh) PO 25 292 221 5 1,7 30:70
7(i) PO 25 30:70
7(j) IP 25 9531 8606 52 1,3 30:70
7(j) PO 50 1328 2176 5 4,5 30:70
7(k) IP 25 2640 2189 35 1,4 30:70
7(k) PO 50 5529 4524 33 1,4 30:70
7(m) IP 25 226 58 17 4,0 30:70
7(m) PO 25 10 7 0 * 30:70
7(n) PO 25 4818 3545 55 1,4 30:70
7(p) PO 25 1435 1958 5 1,3 30:70
7(r) PO 25 4261 2601 67 1,3 30:70
7(s) PO 25 7425 3371 86 2,2 30:70
7(t) PO 25 3199 2801 41 1,1 30:70
7(u) PO 25 30:70
7(v) IP 25 4865 2215 16 0,9 30:70
PL 212 108 B1
101 cd. tabeli 3
1 2 3 4 5 6 7 8
7(v) PO 50 >2946 >2000 26 1,0 30:70
7(x) IP 25 951 781 48 3,2 30:70
7(x) PO 50 3516 2313 16 0,9 30:70
7(y) IP 25 159 135 2 1,2 30:70
7(y) PO 50 58 45 1 1,2 30:70
7(z) IP 25 837 556 22 1,8 30:70
7(z) PO 50 1001 806 14 1,6 30:70
8(a) PO 25 605 445 17 1,5 30:70
9(a) PO 25 30:70
9(c) PO 25 2419 2338 9 1,2 30:70
Test in vivo rozwoju naczyniowego siatkówki u nowonarodzonych szczurów
Rozwój naczyń siatkówki u szczurów następuje od pierwszego dnia po urodzeniu do 14 dnia po urodzeniu (P1-P14). Proces ten jest zależny od aktywności VEGF (J. Stone i inni, J. Neurosci., 15, 4738 (1995)). Wcześniejsze prace wykazały, że VEGF działa również jako czynnik przetrwania dla naczyń siatkówki podczas wczesnego okresu rozwoju naczyń (Alon i inni, Nat. Med., 1, 1024 (1995)). Aby ocenić zdolność związków do hamowania aktywności VEGF in vivo, związki formułowano w odpowiednim nośniku, zazwyczaj w mieszaninie 50% glikolu polietylenowym o średniej masie cząsteczkowej 400 daltonów i 50% roztworu 300 mM roztworu sacharozy w wodzie dejonizowanej. Zazwyczaj 2 mikrolitry (2 μθ roztworu leku wstrzykiwano do ciała szklistego oka młodych szczurów w 8 lub 9 dniu po urodzeniu. W sześć dni po wstrzyknięciu do ciała szklistego, zwierzęta uśmiercano i odcinano siatkówki od reszty tkanki ocznej. Wyizolowane siatkówki poddawano następnie procedurze barwienia histochemicznego, w której następuje specyficzne zabarwienie komórek śródbłonka (Lutty i McLeod, Arch. Ophthalmol., 110, 267 (1992)), w celu uwidocznienia stopnia unaczynienia w próbce tkanki. Poszczególne siatkówki mocowano następnie na płasko na szkiełkach przedmiotowych i badano w celu określenia stopnia unaczynienia. Skuteczne związki hamują dalszy rozwój unaczynienia siatkówki i wywołują regresję wszystkich naczyń siatkówki, z wyjątkiem największych. Stopień regresji naczyn wykorzystano do oceny względnej skuteczności związków po podawaniu in vivo. Regresję naczyń oceniano w subiektywnej skali od jednego do trzech plusów, przy czym jeden plus oznacza wykrywalną regresję szacowaną na około 25% lub poniżej, dwa plusy oznaczają regresję szacowaną na 25-75%, a 3 plusy dotyczą siatkówek z prawie całkowitą regresją (około 75% lub więcej).
W celu zanalizowania regresji w sposób bardziej ilościowy, obrazy barwionych ADPazą, zamocowanych na płasko siatkówek rejestrowano kamerą cyfrową przytwierdzoną do mikroskopu do preparowania. Obrazy siatkówek wprowadzano następnie do programu do analizy obrazu (Image Pro Plus 4.0, Media Cybernetics, Silver Spring, MD). Program zastosowano do obliczania procentu powierzchni siatkówki, z zabarwionymi naczyniami.
Takie wartości dla doświadczalnego oka porównywano z wartościami zmierzonymi dla przeciwległego oka tego samego zwierzęcia, do którego wstrzyknięto nośnik. Zmniejszenie powierzchni naczyń zaobserwowane w przypadku oka, do którego podano związek, w porównaniu z okiem, do którego wstrzyknięto nośnik, przedstawiano następnie jako „procent regresji” dla danej próbki. Wartości procentowe regresji uśredniano dla grupy 5-8 zwierząt.
W przypadku próbek, dla których obserwacja pod mikroskopem wskazywała na prawie całkowitą regresję, zazwyczaj oznaczana wartość procentowa regresji wynosiła 65-70%. Spowodowane jest to tym, że środek barwiący osadza się w fałdach siatkówki, które to fałdy powstały na skutek działania nośnika stosowanego przy wstrzykiwaniu leku. Oprogramowanie do analizy obrazu interpretuje te fałdy zawierające środek barwiący jako naczynia. Nie dokonywano korekty związanej z tymi fałdami, gdyż pomiędzy poszczególnymi oczami następowały znaczne ich wahania. W związku z tym należy podkreślić, że podane wartości procentowe regresji wynikają z konserwatywnego pomiaru, który prawidłowo uszeregowuje związki, ale nie doszacowuje ich bezwzględnej skuteczności.
102
PL 212 108 B1
Test in vivo rozwoju naczyniowego siatkówki w modelu retynopatii wcześniaczej u nowonarodzonych szczurów
Do ocenienia aktywności serii związków zastosowano drugi model neowaskularyzacji siatkówki, zależnego od VEGF. W tym modelu (Penn i inni, Invest. Ophthalmol. Vis. Sci., 36, 2063, (1995)), młode szczury (n=16) i ich matkę umieszczono w kontrolowanej komputerowo komorze, w której regulowano stężenie tlenu. Zwierzęta zostały przez 24 godziny wystawione na działanie tlenu w stężeniu 50%, a następnie przez 24 godziny na działanie tlenu w stężeniu 10%. Ten naprzemienny cykl nadmiaru tlenu, a następnie niedotlenienia powtórzono 7 razy, po czym zwierzęta przeniesiono do powietrza otoczenia (P14). Po przeniesieniu do powietrza otoczenia podano związki poprzez wstrzyknięcie do ciała szklistego, a 6 dni później zwierzęta uśmiercono (P20). Następnie siatkówki wyizolowano, zabarwiono i zamocowano, po czym analizowano w sposób szczegółowo opisany powyżej dla modelu rozwojowego. Skuteczność oceniono również w sposób opisany dla modelu rozwojowego.
T a b e l a 4
Przykład nr Model Ocena początkowa Stężenie (%) Stężenie (mg/ml) Nośnik PEG/woda
5(b) ROP ++ 55% 10 70:30
5(b) ROP +/- 14% 1 70:30
5(b) P6-P10 37% IP* 70:30
5(e) P8 22% 5 70:30
5(f) P8 20% 5 50:50
7(a) P8 4% 5 50:50
7(aa) P8 - 5 50:50
7(c) P8 0% 5 50:50
7(cc) P8 +/++ 5 50:50
7(dd) P8 ++/+++ różn. 5 50:50
7(ee) P8 +/++ 5 50:50
7(h) P8 +/- 5 50:50
7(i) P8 +/++ 5 50:50
7(j) P8 7% 5 50:50
7(k) P8 - 5 50:50
7(k) P8 ++ 5 50:50
7(v) P8 20% 5 50:50
10(a) ROP +++ 55% 10 70:30
10(a) ROP + 16% 1 70:30
Kinaza fosforylazy
Konstrukt kinazy fosforylazy do badań
Ekspresję skróconej podjednostki katalitycznej (podjednostki γ) kinazy fosforylazy (aminokwasy 1-298) osiągnięto w E. coli, po czym wyodrębniono ją z ciał inkluzyjnych. Następnie kinazę fosforylazy ponownie pofałdowano i przechowywano w glicerynie w -20°C.
Test z kinazą fosforylazy. W teście tym oczyszczoną katalityczną podjednostkę zastosowano do fosforylowania fosforylazy b z użyciem radioznaczonego ATP. W skrócie, 1,5 mg/ml fosforylazy b inkubowano z 10 nM kinazą fosforylazy w 10 mM MgCl2, 50 mM Hepes pH 7,4, w 37°C. Reakcję zainicjowano przez dodanie ATP do osiągnięcia stężenia 100 μΜ i mieszaninę inkubowano przez 15 minut w 25 lub 37°C. Reakcję zakończono i białka wytrącano przez dodanie TCA do osiągnięcia końcowego stężenia 10%. Wytrącone białka wydzielano na 96-studzienkowej płytce filtracyjnej Millipore MADP NOB. Następnie płytkę filtracyjną dokładnie przemywano 20% TCA i wysuszono. Na płytkę dodawano płynu scyntylacyjnego i wbudowany radioznacznik zliczano w liczniku Wallac microbeta.
PL 212 108 B1
103
Przykładowe związki opisane powyżej można formułować jako środki farmaceutyczne według następujących ogólnych przykładów.
Przykład preparatu 1: Środek do podawania pozajelitowego
W celu wytworzenia środka farmaceutycznego do podawania pozajelitowego, przydatnego do podawania drogą wstrzyknięcia, 100 mg rozpuszczalnej w wodzie soli związku o wzorze I rozpuszczono w DMSO, a następnie zmieszano z 10 ml 0,9% soli fizjologicznej. Mieszaninę przygotowano jako jednostkową postać dawkowaną, odpowiednią do podawania drogą wstrzyknięcia.
Przykład preparatu 2: Środek do podawania doustnego
W celu wytworzenia, środka farmaceutycznego do podawania doustnego, 100 mg związku o wzorze I zmieszano z 750 mg laktozy. Mieszaninę przygotowano jako jednostkową postać dawkowaną, odpowiednią do podawania doustnego, np. jako twardą kapsułkę żelatynową.
Przykład preparatu 3: Środek do podawania do oczu
W celu wytworzenia środka farmaceutycznego do podawania do oczu, wytworzono suspensję związku o wzorze I w obojętnym, izotonicznym roztworze kwasu hialuronowego (o stężeniu 1,5%) w buforze fosforanowym (pH 7,4) w postaci 1% suspensji.

Claims (6)

1. Związki indazolowe o ogólnym wzorze I:
w którym:
R1 oznacza grupę o wzorze CH=CH-R4, w którym R4 oznacza niepodstawiony fenyl lub niepodstawiony pirydynyl;
Y oznacza S;
2
R2 oznacza atom wodoru; C1-C8-alkil ewentualnie podstawiony podstawnikiem wybranym z grupy obejmującej CF3, grupę cyjanową, grupę NHCH3, C3-C8-cykloalkil, C1-C8-alkoksyl, fenyl podstawiony atomem chlorowca, fenyl podstawiony grupą -NH2, fenyl podstawiony C1-C8-alkoksylem, zwłaszcza metoksylem, pirydyl, furyl, furyl podstawiony C1-C8-alkilem, zwłaszcza metylem, i tienyl; C2-C8-alkenyl ewentualnie podstawiony C1-C8-alkilem; C3-C8-cykloalkil ewentualnie podstawiony fenylem; fenyl ewentualnie podstawiony atomem chlorowca, zwłaszcza atomem chloru; fenyl dipodstawiony grupą CF3 i piperazynylem; chinolinyl podstawiony C1-C8-alkilem, zwłaszcza metylem; tiazolil; C1-C8-alkoksyl ewentualnie podstawiony C2-C8-alkenylem, C3-C8-cykloalkilem lub fenylem; NH-(niepodstawiony piry55 dyl); podstawiony NH(C=O)R5 lub grupę NH2, gdzie R5 jest niezależnie wybrany z grupy obejmującej fenyl podstawiony C1-C8-alkilem, zwłaszcza metylem, pirolil podstawiony C1-C8-aIkilem, zwłaszcza metylem i tienyl; a 3
R3 jest niezależnie wybrany z grupy obejmującej atom wodoru i atom chlorowca; oraz ich farmaceutycznie dopuszczalne sole.
2. Związki oraz ich farmaceutycznie dopuszczalne sole według zastrz. 1, gdzie:
R1 oznacza grupę o wzorze CH=CH-R4, w którym R4 oznacza niepodstawiony fenyl lub niepodstawiony pirydynyl;
Y oznacza S; a 2
R2 oznacza C1-C8-alkil ewentualnie podstawiony podstawnikiem wybranym z grupy obejmującej CF3, grupę cyjanową, grupę NHCH3, C3-C8-cykloalkil, C1-C8-alkoksyl, fenyl podstawiony atomem chlorowca, fenyl podstawiony grupą -NH2, fenyl podstawiony C1-C8-alkoksylem, zwłaszcza metoksylem,
104
PL 212 108 B1 pirydyl, furyl, furyl podstawiony C1-C8-alkilem, zwłaszcza metylem, i tienyl; C1-C8-alkoksyl ewentualnie podstawiony C2-C8-alkenylem, C3-C8-cykloalkilem lub fenylem; lub NH-(niepodstawiony pirydyl).
3. Związki wybrane z grupy obejmującej oraz jego chlorowodorek.
5. Środek farmaceutyczny zawierający substancję czynną i farmaceutycznie dopuszczalny nośnik, rozcieńczalnik lub zaróbkę, znamienny tym, że jako substancję czynną zawiera związek indazolowy o ogólnym wzorze I lub jego farmaceutycznie dopuszczalną sól, zdefiniowane w zastrz. 1.
6. Środek farmaceutyczny według zastrz. 5, znamienny tym, że jako substancję czynną zawiera związek zdefiniowany w zastrz. 4 lub jego chlorowodorek.
7. Zastosowanie związków indazolowych o ogólnym wzorze I oraz ich farmaceutycznie dopuszczalnych soli, określonych w zastrz. 1, do wytwarzania leku do leczenia stanu chorobowego u ssaka, pośredniczonego przez aktywność kinazy białkowej, wybranego spośród stanów chorobowych związanych z rozwojem nowotworu, proliferacją komórek lub angiogenezą.
PL355757A 1999-07-02 2000-06-30 Związki indazolowe, środek farmaceutyczny i zastosowanie związków indazolowych PL212108B1 (pl)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US14213099P 1999-07-02 1999-07-02
PCT/US2000/018263 WO2001002369A2 (en) 1999-07-02 2000-06-30 Indazole compounds and pharmaceutical compositions for inhibiting protein kinases, and methods for their use

Publications (2)

Publication Number Publication Date
PL355757A1 PL355757A1 (pl) 2004-05-17
PL212108B1 true PL212108B1 (pl) 2012-08-31

Family

ID=22498654

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PL355757A PL212108B1 (pl) 1999-07-02 2000-06-30 Związki indazolowe, środek farmaceutyczny i zastosowanie związków indazolowych

Country Status (51)

Country Link
EP (2) EP1614683B1 (pl)
JP (2) JP3878849B2 (pl)
KR (1) KR100529639B1 (pl)
CN (2) CN1137884C (pl)
AP (1) AP1486A (pl)
AR (2) AR035554A1 (pl)
AT (1) ATE376543T1 (pl)
AU (1) AU777701B2 (pl)
BE (1) BE2013C015I2 (pl)
BG (1) BG66070B1 (pl)
BR (1) BRPI0012352B8 (pl)
CA (1) CA2383630C (pl)
CO (1) CO5190686A1 (pl)
CR (2) CR6517A (pl)
CY (3) CY1107147T1 (pl)
CZ (1) CZ301667B6 (pl)
DE (2) DE60037211T2 (pl)
DK (2) DK1614683T3 (pl)
DZ (1) DZ3191A1 (pl)
EA (1) EA004460B1 (pl)
EE (1) EE05585B1 (pl)
ES (2) ES2293906T3 (pl)
FR (1) FR13C0010I2 (pl)
GE (1) GEP20063885B (pl)
GT (1) GT200000107A (pl)
HR (1) HRP20020109B1 (pl)
HU (1) HU228502B1 (pl)
IL (1) IL146710A0 (pl)
IS (1) IS2791B (pl)
JO (1) JO2319B1 (pl)
LU (1) LU92154I2 (pl)
MA (1) MA26803A1 (pl)
ME (1) ME00385B (pl)
MX (1) MXPA01012795A (pl)
MY (2) MY139999A (pl)
NO (3) NO322507B1 (pl)
NZ (1) NZ516676A (pl)
OA (1) OA11980A (pl)
PA (1) PA8498001A1 (pl)
PE (1) PE20010306A1 (pl)
PL (1) PL212108B1 (pl)
PT (2) PT1614683E (pl)
RS (1) RS50339B (pl)
SI (2) SI1614683T1 (pl)
SK (1) SK286936B6 (pl)
SV (1) SV2002000121A (pl)
TN (1) TNSN00146A1 (pl)
UA (1) UA66933C2 (pl)
UY (1) UY26231A1 (pl)
WO (1) WO2001002369A2 (pl)
ZA (1) ZA200110061B (pl)

Families Citing this family (376)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DK1553097T3 (da) 1999-02-10 2010-12-13 Astrazeneca Ab Quinazolinderivat som angiogeneseinhibitor og mellemprodukter dertil
PE20010306A1 (es) * 1999-07-02 2001-03-29 Agouron Pharma Compuestos de indazol y composiciones farmaceuticas que los contienen utiles para la inhibicion de proteina kinasa
WO2001047922A2 (en) 1999-12-24 2001-07-05 Aventis Pharma Limited Azaindoles
EP1268472B1 (en) 2000-02-07 2004-10-13 Bristol-Myers Squibb Company 3-aminopyrazole inhibitors of cyclin dependent kinases
WO2001068585A1 (en) * 2000-03-14 2001-09-20 Fujisawa Pharmaceutical Co., Ltd. Novel amide compounds
ES2236217T3 (es) 2000-04-25 2005-07-16 Bristol-Myers Squibb Company Uso de 5.tio.,sulfinil- y sulfonilpirazolo 3,4-b)-piridinas como inhibidores de la quinasa dependiente de la ciclina.
WO2002012228A1 (en) 2000-08-09 2002-02-14 Astrazeneca Ab Cinnoline compounds
JP2004505964A (ja) 2000-08-09 2004-02-26 アストラゼネカ　アクチボラグ Ｖｅｇｆ阻害活性を有するキノリン誘導体
ES2334641T3 (es) 2000-09-01 2010-03-15 Novartis Vaccines And Diagnostics, Inc. Derivados aza heterociclicos y su uso terapeutico.
PL211125B1 (pl) 2000-09-11 2012-04-30 Novartis Vaccines & Diagnostic Pochodne chinolinonu jako inhibitory kinazy tyrozynowej, kompozycje je zawierające i ich zastosowanie
ATE419239T1 (de) 2000-10-20 2009-01-15 Eisai R&D Man Co Ltd Verfahren zur herstellung von 4-phenoxy chinolin derivaten
TWI243164B (en) 2001-02-13 2005-11-11 Aventis Pharma Gmbh Acylated indanyl amines and their use as pharmaceuticals
GB0115109D0 (en) 2001-06-21 2001-08-15 Aventis Pharma Ltd Chemical compounds
US7642278B2 (en) 2001-07-03 2010-01-05 Novartis Vaccines And Diagnostics, Inc. Indazole benzimidazole compounds
JP2004536113A (ja) * 2001-07-03 2004-12-02 カイロン コーポレイション チロシンキナーゼおよびセリン／スレオニンキナーゼのインヒビターとしてのインダゾールベンズイミダゾール化合物
US7101884B2 (en) 2001-09-14 2006-09-05 Merck & Co., Inc. Tyrosine kinase inhibitors
MXPA04003954A (es) * 2001-10-26 2004-11-29 Aventis Pharma Inc Bencimidazoles.
FR2831536A1 (fr) * 2001-10-26 2003-05-02 Aventis Pharma Sa Nouveaux derives de benzimidazoles, leur procede de preparation, leur application a titre de medicament, compositions pharmaceutiques et nouvelle utilisation notamment comme inhibiteurs de kdr
US6897208B2 (en) * 2001-10-26 2005-05-24 Aventis Pharmaceuticals Inc. Benzimidazoles
FR2831537B1 (fr) * 2001-10-26 2008-02-29 Aventis Pharma Sa Nouveaux derives de benzimidazoles, leur procede de preparation, leur application a titre de medicament, compositions pharmaceutiques et nouvelle utilisation
DK1474420T3 (da) 2002-02-01 2012-05-21 Astrazeneca Ab Quinazolinforbindelser
US7166293B2 (en) 2002-03-29 2007-01-23 Carlsbad Technology, Inc. Angiogenesis inhibitors
US20050119278A1 (en) * 2002-05-16 2005-06-02 Che-Ming Teng Anti-angiogenesis methods
BR0313396A (pt) 2002-08-12 2005-06-28 Sugen Inc 3-pirrolil-piridopirazóis e 3-pirrolil-indazóis, como inibidores de quinase
BR0313743A (pt) 2002-08-23 2005-07-05 Chiron Corp Benzimidazol quinolinonas e usos destas
AU2003289287A1 (en) * 2002-12-03 2004-06-23 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Jnk inhibitor
PL377713A1 (pl) * 2002-12-19 2006-02-06 Pfizer Inc. Związki 2-(1H-indazol-6-iloamino)benzamidowe jako inhibitory kinaz białkowych użyteczne w leczeniu chorób oczu
US7192976B2 (en) 2002-12-21 2007-03-20 Angion Biomedica Corporation Small molecule modulators of hepatocyte growth factor (scatter factor) activity
US7135575B2 (en) 2003-03-03 2006-11-14 Array Biopharma, Inc. P38 inhibitors and methods of use thereof
JP4617299B2 (ja) 2003-03-03 2011-01-19 アレイ バイオファーマ、インコーポレイテッド ｐ３８阻害剤及びその使用法
AU2004226586B2 (en) * 2003-04-03 2008-12-11 Pfizer Inc. Dosage forms comprising AG013736
WO2004092217A1 (en) * 2003-04-17 2004-10-28 Pfizer Inc. Crystal structure of vegfrkd: ligand complexes and methods of use thereof
FR2854159B1 (fr) * 2003-04-25 2008-01-11 Aventis Pharma Sa Nouveaux derives de l'indole, leur preparation a titre de medicaments, compositions pharmaceutiques et notamment comme inhibiteurs de kdr
TWI372050B (en) 2003-07-03 2012-09-11 Astex Therapeutics Ltd (morpholin-4-ylmethyl-1h-benzimidazol-2-yl)-1h-pyrazoles
NZ544756A (en) 2003-07-22 2009-09-25 Astex Therapeutics Ltd 3,4-Disubstituted 1H-pyrazole compounds and their use as cyclin dependent kinases (CDK) and glycogen synthase kinase-3 (GSK-3) modulators
CA2532800C (en) * 2003-07-23 2013-06-18 Exelixis, Inc. Anaplastic lymphoma kinase modulators and methods of use
CA2518951A1 (en) * 2003-07-30 2005-02-10 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Protein kinase inhibitors
KR20060119705A (ko) * 2003-07-30 2006-11-24 교와 핫꼬 고교 가부시끼가이샤 인다졸 유도체
WO2005025568A1 (en) * 2003-09-04 2005-03-24 Merck & Co., Inc. Ophthalmic compositions for treating ocular hypertension
WO2005028624A2 (en) * 2003-09-15 2005-03-31 Plexxikon, Inc. Molecular scaffolds for kinase ligand development
WO2005039564A1 (en) * 2003-10-02 2005-05-06 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Phthalimide compounds useful as protein kinase inhibitors
WO2005047244A2 (en) 2003-11-07 2005-05-26 Chiron Corporation Inhibition of fgfr3 and treatment of multiple myeloma
CN101337930B (zh) 2003-11-11 2010-09-08 卫材R&D管理有限公司 脲衍生物的制备方法
CA2546493A1 (en) * 2003-11-19 2005-06-09 Signal Pharmaceuticals, Llc Indazole compounds and methods of use thereof as protein kinase inhibitors
GB0330002D0 (en) 2003-12-24 2004-01-28 Astrazeneca Ab Quinazoline derivatives
RU2006134022A (ru) * 2004-02-27 2008-04-10 Ф.Хоффманн-Ля Рош Аг (Ch) Производные индазола и содержащие их фармацевтические композиции
EP1720855A4 (en) * 2004-03-02 2008-12-17 Smithkline Beecham Corp HEMMER OF ACT ACTIVITY
JPWO2005094823A1 (ja) * 2004-03-30 2007-08-16 協和醗酵工業株式会社 Ｆｌｔ−３阻害剤
WO2005108370A1 (ja) * 2004-04-16 2005-11-17 Ajinomoto Co., Inc. ベンゼン化合物
CA2565965A1 (en) 2004-05-06 2006-07-27 Plexxikon, Inc. Pde4b inhibitors and uses therefor
EP1758895A1 (en) * 2004-06-17 2007-03-07 Wyeth a Corporation of the State of Delaware Gonadotropin releasing hormone receptor antagonists
CA2570693A1 (en) 2004-06-17 2006-01-26 Wyeth Processes for preparing gonadotropin releasing hormone receptor antagonists
WO2006021886A1 (en) * 2004-08-26 2006-03-02 Pfizer Inc. Aminoheteroaryl compounds as protein tyrosine kinase inhibitors
EP1786813A2 (en) 2004-09-03 2007-05-23 Plexxikon, Inc. Bicyclic heteroaryl pde4b inhibitors
JP4834553B2 (ja) 2004-09-17 2011-12-14 エーザイ・アール・アンド・ディー・マネジメント株式会社 医薬組成物
EP1647549A1 (en) * 2004-10-14 2006-04-19 Laboratoire Theramex Indazoles, benzisoxazoles and benzisothiazoles as estrogenic agents
RU2007114112A (ru) * 2004-11-02 2008-12-10 Пфайзер Инк. (US) Способ получения индазольных соединений
WO2006048761A2 (en) * 2004-11-02 2006-05-11 Pfizer Inc. Methods for preparing indazole compounds
EP1819696A1 (en) * 2004-11-02 2007-08-22 Pfizer, Inc. Polymorphic forms of 6-2-(methylcarbamoyl)phenysulfanyl|-3-e-2-(pyridin-2-yl)ethenyl indazole
US9512125B2 (en) 2004-11-19 2016-12-06 The Regents Of The University Of California Substituted pyrazolo[3.4-D] pyrimidines as anti-inflammatory agents
FR2878442B1 (fr) * 2004-11-29 2008-10-24 Aventis Pharma Sa THIENO(2,3-c)PYRAZOLES SUBSTITUES, PROCEDE DE PREPARATION, COMPOSITIONS LES CONTENANT ET UTILISATION
US20060142247A1 (en) * 2004-12-17 2006-06-29 Guy Georges Tricyclic heterocycles
EP2395000A1 (en) 2004-12-30 2011-12-14 Astex Therapeutics Limited Benzimidazole compounds that modulate the activity of CDK, GSK and aurora kinases
US7622583B2 (en) 2005-01-14 2009-11-24 Chemocentryx, Inc. Heteroaryl sulfonamides and CCR2
AU2006207321B2 (en) 2005-01-21 2012-09-06 Astex Therapeutics Limited Pharmaceutical compounds
EP1845973B1 (en) 2005-01-21 2015-08-12 Astex Therapeutics Limited Pharmaceutical compounds
AR054425A1 (es) 2005-01-21 2007-06-27 Astex Therapeutics Ltd Sales de adicion de piperidin 4-il- amida de acido 4-(2,6-dicloro-benzoilamino) 1h-pirazol-3-carboxilico.
US8404718B2 (en) 2005-01-21 2013-03-26 Astex Therapeutics Limited Combinations of pyrazole kinase inhibitors
CN101146796A (zh) * 2005-01-26 2008-03-19 先灵公司 作为蛋白激酶抑制剂用于治疗癌症的3-(吲唑-5-基)-(1,2,4)三嗪衍生物及相关化合物
CN101111483B (zh) * 2005-01-27 2011-12-14 协和发酵麒麟株式会社 Igf-1r抑制剂
US7582634B2 (en) 2005-02-18 2009-09-01 Wyeth 7-substituted imidazo[4,5-c]pyridine antagonists of gonadotropin releasing hormone receptor
US7538113B2 (en) 2005-02-18 2009-05-26 Wyeth 4-substituted imidazo[4,5-c]pyridine antagonists of gonadotropin releasing hormone receptor
US7534796B2 (en) 2005-02-18 2009-05-19 Wyeth Imidazo[4,5-b]pyridine antagonists of gonadotropin releasing hormone receptor
PT1888556E (pt) 2005-05-17 2012-02-03 Novartis Ag Métodos para sintetizar compostos heterocíclicos
US7531542B2 (en) 2005-05-18 2009-05-12 Wyeth Benzooxazole and benzothiazole antagonists of gonadotropin releasing hormone receptor
CA2608952A1 (en) * 2005-05-19 2006-11-23 Dwayne Thomas Friesen Pharmaceutical compostions comprising an amorphous form of a vegf-r inhibitor
NZ564065A (en) * 2005-05-20 2011-03-31 Vertex Pharma Pyrrolopyridines useful as inhibitors of protein kinase
US7582636B2 (en) 2005-05-26 2009-09-01 Wyeth Piperazinylimidazopyridine and piperazinyltriazolopyridine antagonists of Gonadotropin Releasing Hormone receptor
WO2006130673A1 (en) 2005-05-31 2006-12-07 Janssen Pharmaceutica, N.V. 3-benzoimidazolyl-pyrazolopyridines useful in treating kinase disorders
US7888381B2 (en) 2005-06-14 2011-02-15 Bristol-Myers Squibb Company Modulators of glucocorticoid receptor, AP-1, and/or NF-κB activity, and use thereof
EP1925676A4 (en) 2005-08-02 2010-11-10 Eisai R&D Man Co Ltd TEST METHOD FOR THE EFFECT OF A VASCULARIZATION INHIBITOR
PL1957074T3 (pl) 2005-11-29 2014-08-29 Novartis Ag Preparaty chinolinonów
TW200732305A (en) * 2005-12-23 2007-09-01 Yung Shin Pharmaceutical Ind Cancer chemotherapy
SI1981851T1 (sl) 2006-01-31 2012-05-31 Array Biopharma Inc Kinazni inhibitorji in postopki za njihovo uporabo
CA2645892A1 (en) * 2006-03-23 2007-09-27 F. Hoffmann-La Roche Ag Substituted indazole derivatives, their manufacture and use as pharmaceutical agents
KR101499783B1 (ko) 2006-04-04 2015-03-09 더 리젠트스 오브 더 유니이버시티 오브 캘리포니아 키나제 길항물질
RU2448708C3 (ru) 2006-05-18 2017-09-28 Эйсай Ар Энд Ди Менеджмент Ко., Лтд. Противоопухолевое средство против рака щитовидной железы
JPWO2008001885A1 (ja) 2006-06-30 2009-11-26 協和発酵キリン株式会社 Ａｂｌキナーゼ阻害剤
EP2036894A4 (en) 2006-06-30 2011-01-12 Kyowa Hakko Kirin Co Ltd AURORA INHIBITOR
US8519135B2 (en) 2006-07-14 2013-08-27 Chemocentryx, Inc. Heteroaryl sulfonamides and CCR2/CCR9
WO2008020606A1 (en) * 2006-08-16 2008-02-21 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Antiangiogenic agent
US8865737B2 (en) 2006-08-28 2014-10-21 Eisai R&D Management Co., Ltd. Antitumor agent for undifferentiated gastric cancer
CL2007002617A1 (es) 2006-09-11 2008-05-16 Sanofi Aventis Compuestos derivados de pirrolo[2,3-b]pirazin-6-ilo; composicion farmaceutica que comprende a dichos compuestos; y su uso para tratar inflamacion de las articulaciones, artritis reumatoide, tumores, linfoma de las celulas del manto.
WO2008093855A1 (ja) 2007-01-29 2008-08-07 Eisai R & D Management Co., Ltd. 未分化型胃癌治療用組成物
US20100104567A1 (en) 2007-03-05 2010-04-29 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Pharmaceutical composition
CN101730703B (zh) * 2007-03-16 2012-12-26 中国人民解放军军事医学科学院放射与辐射医学研究所 具有抗增殖活性的苯甲酰胺类衍生物及其药用制剂
EP4249063A3 (en) * 2007-04-05 2024-03-13 Pfizer Products Inc. Crystalline forms of 6-[2-(methylcarbamoyl)phenylsulfanyl]-3-e-[2-(pyridin-2-yl)ethenyl]indazole suitable for the treatment of abnormal cell growth in mammals
EP2002836B1 (en) 2007-05-31 2010-10-20 Nerviano Medical Sciences S.r.l. Cyclocondensed azaindoles active as kinase inhibitors
CA2692761C (en) 2007-07-12 2013-04-30 Chemocentryx, Inc. Fused heteroaryl pyridyl and phenyl benzenesulfonamides as ccr2 modulators for the treament of inflammation
US20110160232A1 (en) 2007-10-04 2011-06-30 Pingda Ren Certain chemical entities and therapeutic uses thereof
RU2010118467A (ru) * 2007-10-11 2011-11-20 Вертекс Фармасьютикалз Инкорпорейтед (Us) Ариламиды, пригодные в качестве ингибиторов потенциалзависимых натриевых каналов
CA2704266A1 (en) 2007-11-02 2009-06-11 Vertex Pharmaceuticals Incorporated [1h- pyrazolo [3, 4-b] pyridine-4-yl] -phenyle or -pyridin-2-yle derivatives as protein kinase c-theta
KR101513326B1 (ko) 2007-11-09 2015-04-17 에자이 알앤드디 매니지먼트 가부시키가이샤 혈관 신생 저해 물질과 항종양성 백금 착물의 병용
US8193182B2 (en) 2008-01-04 2012-06-05 Intellikine, Inc. Substituted isoquinolin-1(2H)-ones, and methods of use thereof
AU2009204483B2 (en) 2008-01-04 2014-03-13 Intellikine, Llc Certain chemical entities, compositions and methods
US8993580B2 (en) 2008-03-14 2015-03-31 Intellikine Llc Benzothiazole kinase inhibitors and methods of use
JP5547099B2 (ja) 2008-03-14 2014-07-09 インテリカイン， エルエルシー キナーゼ阻害剤および使用方法
EP2272832A4 (en) 2008-04-28 2011-09-07 Asahi Kasei Pharma Corp PHENYLPROPIONIC ACID DERIVATIVE AND USE THEREOF
US20110224223A1 (en) 2008-07-08 2011-09-15 The Regents Of The University Of California, A California Corporation MTOR Modulators and Uses Thereof
MX2011000216A (es) 2008-07-08 2011-03-29 Intellikine Inc Inhibidores de cinasa y metodos para su uso.
WO2010005580A2 (en) 2008-07-10 2010-01-14 Angion Biomedica Corp. Methods and compositions of small molecule modulators of hepatocyte growth factor (scatter factor) activity
WO2010036380A1 (en) 2008-09-26 2010-04-01 Intellikine, Inc. Heterocyclic kinase inhibitors
WO2010045542A2 (en) 2008-10-16 2010-04-22 The Regents Of The University Of California Fused ring heteroaryl kinase inhibitors
US8476431B2 (en) 2008-11-03 2013-07-02 Itellikine LLC Benzoxazole kinase inhibitors and methods of use
AU2010233917B2 (en) 2009-04-02 2015-07-02 Merck Serono S.A. Dihydroorotate dehydrogenase inhibitors
WO2010129816A2 (en) 2009-05-07 2010-11-11 Intellikine, Inc. Heterocyclic compounds and uses thereof
PL2464232T3 (pl) 2009-08-10 2016-04-29 Samumed Llc Indazolowe inhibitory szlaku sygnałowego Wnt i ich zastosowania terapeutyczne
TH121482A (th) 2009-08-19 2013-02-28 นางสาวปัณณพัฒน์ เหลืองธาตุทอง องค์ประกอบทางเภสัชกรรมที่ประกอบด้วยอนุพันธ์ของควิโนลีน
WO2011047384A2 (en) 2009-10-16 2011-04-21 The Regents Of The University Of California Methods of inhibiting ire1
WO2011073521A1 (en) 2009-12-15 2011-06-23 Petri Salven Methods for enriching adult-derived endothelial progenitor cells and uses thereof
US8450340B2 (en) 2009-12-21 2013-05-28 Samumed, Llc 1H-pyrazolo[3,4-b]pyridines and therapeutic uses thereof
US9180127B2 (en) 2009-12-29 2015-11-10 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Type II Raf kinase inhibitors
UY33236A (es) 2010-02-25 2011-09-30 Novartis Ag Inhibidores dimericos de las iap
CN103080093A (zh) * 2010-03-16 2013-05-01 达纳－法伯癌症研究所公司 吲唑化合物及其应用
JP5951600B2 (ja) 2010-05-21 2016-07-13 インフィニティー ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド キナーゼ調節のための、化合物、組成物および方法
AU2011270165B2 (en) 2010-06-25 2015-12-24 Eisai R&D Management Co., Ltd. Antitumor agent using compounds having kinase inhibitory effect in combination
WO2012012750A1 (en) 2010-07-23 2012-01-26 Trustees Of Boston University ANTI-DEsupR INHIBITORS AS THERAPEUTICS FOR INHIBITION OF PATHOLOGICAL ANGIOGENESIS AND TUMOR CELL INVASIVENESS AND FOR MOLECULAR IMAGING AND TARGETED DELIVERY
US8901133B2 (en) 2010-11-10 2014-12-02 Infinity Pharmaceuticals, Inc. Heterocyclic compounds and uses thereof
UY33794A (es) 2010-12-13 2012-07-31 Novartis Ag Inhibidores diméricos de las iap
JP2014501235A (ja) 2010-12-13 2014-01-20 ノバルティス アーゲー 二量体ｉａｐ阻害剤
WO2012088266A2 (en) 2010-12-22 2012-06-28 Incyte Corporation Substituted imidazopyridazines and benzimidazoles as inhibitors of fgfr3
KR20180080358A (ko) 2011-01-10 2018-07-11 인피니티 파마슈티칼스, 인코포레이티드 이소퀴놀린온 및 이의 고체 형태의 제조 방법
JP6130305B2 (ja) 2011-02-23 2017-05-17 インテリカイン， エルエルシー キナーゼ阻害剤の組み合わせおよびそれらの使用
US8569511B2 (en) 2011-04-01 2013-10-29 University Of Utah Research Foundation Substituted 3-(1H-benzo[d]imidazol-2-yl)-1H-indazole analogs as inhibitors of the PDK1 kinase
WO2012144463A1 (ja) 2011-04-18 2012-10-26 エーザイ・アール・アンド・ディー・マネジメント株式会社 腫瘍治療剤
EP3444363B1 (en) 2011-06-03 2020-11-25 Eisai R&D Management Co., Ltd. Biomarkers for prediciting and assessing responsiveness of thyroid and kidney cancer subjects to lenvatinib compounds
CN103930422A (zh) 2011-07-19 2014-07-16 无限药品股份有限公司 杂环化合物及其用途
EP2734530A1 (en) 2011-07-19 2014-05-28 Infinity Pharmaceuticals, Inc. Heterocyclic compounds and uses thereof
US8575336B2 (en) 2011-07-27 2013-11-05 Pfizer Limited Indazoles
CN103998442B (zh) 2011-08-29 2016-09-14 无限药品股份有限公司 杂环化合物及其用途
MX370814B (es) 2011-09-02 2020-01-08 Univ California Pirazolo[3,4-d]pirimidinas sustituidas y usos de las mismas.
CN102432595B (zh) * 2011-09-14 2013-09-25 湖南有色凯铂生物药业有限公司 N-吲哚-1-酰胺类化合物及作为抗癌药物的应用
EP3473099A1 (en) 2011-09-14 2019-04-24 Samumed, LLC Indazole-3-carboxamides and their use as wnt/b-catenin signaling pathway inhibitors
EP2771337B1 (en) 2011-09-27 2017-08-02 Novartis AG 3-(pyrimidin-4-yl)-oxazolidin-2-ones as inhibitors of mutant idh
CA2856291C (en) 2011-11-17 2020-08-11 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Inhibitors of c-jun-n-terminal kinase (jnk)
MX2014006736A (es) 2011-12-05 2014-08-29 Novartis Ag Derivados de urea ciclicos como antagonistas de los receptores de androgeno.
FR2985257B1 (fr) * 2011-12-28 2014-02-14 Sanofi Sa Composes dimeres agonistes des recepteurs des fgfs (fgfrs), leur procede de preparation et leur application en therapeutique
CA2860676A1 (en) 2012-01-09 2013-07-18 Novartis Ag Organic compositions to treat beta-catenin-related diseases
US8815926B2 (en) 2012-01-26 2014-08-26 Novartis Ag Substituted pyrrolo[3,4-D]imidazoles for the treatment of MDM2/4 mediated diseases
PH12017500997A1 (en) 2012-04-04 2018-02-19 Samumed Llc Indazole inhibitors of the wnt signal pathway and therapeutic uses thereof
US8940742B2 (en) 2012-04-10 2015-01-27 Infinity Pharmaceuticals, Inc. Heterocyclic compounds and uses thereof
CN107417707A (zh) 2012-05-04 2017-12-01 萨穆梅德有限公司 1H‑吡唑并[3,4‑b]吡啶及其治疗应用
US9611267B2 (en) 2012-06-13 2017-04-04 Incyte Holdings Corporation Substituted tricyclic compounds as FGFR inhibitors
JP6231262B2 (ja) * 2012-06-20 2017-11-15 大日本印刷株式会社 ピタバスタチンカルシウムの前駆体の製造法
US8828998B2 (en) 2012-06-25 2014-09-09 Infinity Pharmaceuticals, Inc. Treatment of lupus, fibrotic conditions, and inflammatory myopathies and other disorders using PI3 kinase inhibitors
US9388185B2 (en) 2012-08-10 2016-07-12 Incyte Holdings Corporation Substituted pyrrolo[2,3-b]pyrazines as FGFR inhibitors
WO2014052669A1 (en) 2012-09-26 2014-04-03 The Regents Of The University Of California Modulation of ire1
EP2909194A1 (en) 2012-10-18 2015-08-26 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Inhibitors of cyclin-dependent kinase 7 (cdk7)
WO2014063054A1 (en) 2012-10-19 2014-04-24 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Bone marrow on x chromosome kinase (bmx) inhibitors and uses thereof
US9758522B2 (en) 2012-10-19 2017-09-12 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Hydrophobically tagged small molecules as inducers of protein degradation
CN103804349A (zh) * 2012-11-01 2014-05-21 杨子娇 一类治疗青光眼的化合物及其用途
IL291945B2 (en) 2012-11-01 2025-11-01 Infinity Pharmaceuticals Inc Treatment of cancers using pi3 kinase isoform modulators
US9266892B2 (en) 2012-12-19 2016-02-23 Incyte Holdings Corporation Fused pyrazoles as FGFR inhibitors
RU2015115397A (ru) 2012-12-21 2017-01-25 Эйсай Ар Энд Ди Менеджмент Ко., Лтд. Аморфная форма производного хинолина и способ его получения
WO2014110086A2 (en) 2013-01-08 2014-07-17 Samumed, Llc 3-(benzoimidazol-2-yl)-indazole inhibitors of the wnt signaling pathway and therapeutic uses thereof
CN104370889A (zh) * 2013-01-24 2015-02-25 韩冰 一类降低眼压的化合物及其制备方法和用途
ES2716617T3 (es) * 2013-02-02 2019-06-13 Chia Tai Tianqing Pharmaceutical Group Co Ltd Inhibidor de proteína quinasa de 2-aminopiridina sustituida
EP2958907B1 (en) 2013-02-19 2018-02-28 Novartis AG Benzothiophene derivatives and compositions thereof as selective estrogen receptor degraders
BR112015022483A2 (pt) 2013-03-14 2017-07-18 Novartis Ag 3-pirimidin-4-il-oxazolidin-2-onas como inibidores de idh mutante
WO2014141104A1 (en) 2013-03-14 2014-09-18 Novartis Ag 3-pyrimidin-4-yl-oxazolidin-2-ones as inhibitors of mutant idh
US9481667B2 (en) 2013-03-15 2016-11-01 Infinity Pharmaceuticals, Inc. Salts and solid forms of isoquinolinones and composition comprising and methods of using the same
WO2014147586A1 (en) 2013-03-22 2014-09-25 Novartis Ag 1-(2-(ethylamino)pyrimidin-4-yl)pyrrolidin-2-ones as inhibitors of mutant idh
TWI649318B (zh) 2013-04-19 2019-02-01 英塞特控股公司 作為ｆｇｆｒ抑制劑之雙環雜環
ES2687968T3 (es) 2013-05-14 2018-10-30 Eisai R&D Management Co., Ltd. Biomarcadores para pronosticar y evaluar la reactividad de sujetos con cáncer de endometrio a compuestos con lenvatinib
US20150018376A1 (en) * 2013-05-17 2015-01-15 Novartis Ag Pyrimidin-4-yl)oxy)-1h-indole-1-carboxamide derivatives and use thereof
CN103387565B (zh) * 2013-07-29 2014-10-29 苏州明锐医药科技有限公司 阿西替尼的制备方法
MX389256B (es) 2013-10-04 2025-03-20 Infinity Pharmaceuticals Inc Compuestos heterociclicos y usos de los mismos.
WO2015051241A1 (en) 2013-10-04 2015-04-09 Infinity Pharmaceuticals, Inc. Heterocyclic compounds and uses thereof
AU2014337122B2 (en) 2013-10-18 2019-01-03 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Heteroaromatic compounds useful for the treatment of proliferative diseases
US10047070B2 (en) 2013-10-18 2018-08-14 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Polycyclic inhibitors of cyclin-dependent kinase 7 (CDK7)
CN103570696B (zh) * 2013-11-06 2016-02-24 湖南欧亚生物有限公司 一种阿西替尼中间体的制备方法以及在制备阿西替尼中的应用
WO2015067224A1 (en) 2013-11-08 2015-05-14 Zentiva, K.S. Salts of 6-[2-(methylcarbamoyl)phenylsulfanyl]-3-e-[2-(pyridin-2-yl)ethanyl] indazole
WO2015092634A1 (en) 2013-12-16 2015-06-25 Novartis Ag 1,2,3,4-tetrahydroisoquinoline compounds and compositions as selective estrogen receptor antagonists and degraders
JO3517B1 (ar) 2014-01-17 2020-07-05 Novartis Ag ان-ازاسبيرو الكان حلقي كبديل مركبات اريل-ان مغايرة وتركيبات لتثبيط نشاط shp2
US10093646B2 (en) 2014-01-17 2018-10-09 Novartis Ag 1-pyridazin-/triazin-3-yl-piper(-azine)/idine/pyrolidine derivatives and compositions thereof for inhibiting the activity of SHP2
ES2699354T3 (es) 2014-01-17 2019-02-08 Novartis Ag Derivados de 1-(triazin-3-il/piridazin-3-il)-piper(-azin)idina y composiciones de las mismas para inhibir la actividad de SHP2
EP4066834A1 (en) 2014-03-19 2022-10-05 Infinity Pharmaceuticals, Inc. Heterocyclic compounds for use in the treatment of pi3k-gamma mediated disorders
CA2942888C (en) * 2014-03-31 2021-09-07 Senju Pharmaceutical Co., Ltd. Alkynyl indazole derivative and use thereof
US20150320755A1 (en) 2014-04-16 2015-11-12 Infinity Pharmaceuticals, Inc. Combination therapies
WO2015164614A1 (en) 2014-04-23 2015-10-29 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Janus kinase inhibitors and uses thereof
US9862688B2 (en) 2014-04-23 2018-01-09 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Hydrophobically tagged janus kinase inhibitors and uses thereof
CA2947939A1 (en) 2014-05-28 2015-12-03 Idenix Pharmaceuticals Llc Nucleoside derivatives for the treatment of cancer
CN104072484B (zh) * 2014-07-07 2016-07-06 渤海大学 氮-(4-(芳巯基)-1氢-吲唑-3-基)-1-(芳杂环取代)甲基亚胺类化合物及其药学上可接受的盐及其制备方法和应用
AR101196A1 (es) 2014-07-16 2016-11-30 Gruenenthal Gmbh Compuestos de pirimidina sustituidos
AR101198A1 (es) 2014-07-16 2016-11-30 Gruenenthal Gmbh Pirimidinas 2,5-sustituidas como inhibidores de pde4b
KR20230043234A (ko) 2014-08-28 2023-03-30 에자이 알앤드디 매니지먼트 가부시키가이샤 고순도의 퀴놀린 유도체 및 이를 제조하는 방법
WO2016040188A1 (en) 2014-09-08 2016-03-17 Samumed, Llc 3-(3h-imidazo[4,5-c]pyridin-2-yl)-1h-pyrazolo[3,4-c]pyridine and therapeutic uses thereof
WO2016040184A1 (en) 2014-09-08 2016-03-17 Samumed, Llc 3-(3h-imidazo[4,5-b]pyridin-2-yl)-1h-pyrazolo[3,4-c]pyridine and therapeutic uses thereof
WO2016040193A1 (en) 2014-09-08 2016-03-17 Samumed, Llc 3-(1h-imidazo[4,5-c]pyridin-2-yl)-1h-pyrazolo[3,4-b]pyridine and therapeutic uses thereof
WO2016040180A1 (en) 2014-09-08 2016-03-17 Samumed, Llc 3-(1h-benzo[d]imidazol-2-yl)-1h-pyrazolo[3,4-c]pyridine and therapeutic uses thereof
WO2016040185A1 (en) 2014-09-08 2016-03-17 Samumed, Llc 2-(1h-indazol-3-yl)-3h-imidazo[4,5-b]pyridine and therapeutic uses thereof
WO2016040190A1 (en) 2014-09-08 2016-03-17 Samumed, Llc 3-(3h-imidazo[4,5-b]pyridin-2-yl)-1h-pyrazolo[3,4-b]pyridine and therapeutic uses thereof
WO2016040181A1 (en) 2014-09-08 2016-03-17 Samumed, Llc 3-(1h-imidazo[4,5-c]pyridin-2-yl)-1h-pyrazolo[3,4-c]pyridine and therapeutic uses thereof
WO2016040182A1 (en) 2014-09-08 2016-03-17 Samumed, Llc 2-(1h-indazol-3-yl)-1h-imidazo[4,5-c]pyridine and therapeutic uses thereof
ES2751464T3 (es) 2014-09-17 2020-03-31 Celgene Quanticel Res Inc Inhibidores de histona desmetilasa
WO2016054491A1 (en) 2014-10-03 2016-04-07 Infinity Pharmaceuticals, Inc. Heterocyclic compounds and uses thereof
US10851105B2 (en) 2014-10-22 2020-12-01 Incyte Corporation Bicyclic heterocycles as FGFR4 inhibitors
WO2016089833A1 (en) 2014-12-05 2016-06-09 Merck Sharp & Dohme Corp. Novel tricyclic compounds as inhibitors of mutant idh enzymes
US10508108B2 (en) 2014-12-05 2019-12-17 Merck Sharp & Dohme Corp. Tricyclic compounds as inhibitors of mutant IDH enzymes
EP3226688B1 (en) 2014-12-05 2020-07-01 Merck Sharp & Dohme Corp. Tricyclic compounds as inhibitors of mutant idh enzymes
MA41140A (fr) 2014-12-12 2017-10-17 Cancer Research Tech Ltd Dérivés de 2,4-dioxo-quinazoline-6-sulfonamide en tant qu'inhibiteurs de la parg
MA41179A (fr) 2014-12-19 2017-10-24 Cancer Research Tech Ltd Composés inhibiteurs de parg
EP3236959B1 (en) 2014-12-23 2025-09-24 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Inhibitors of cyclin-dependent kinase 7 (cdk7)
SG11201705767PA (en) 2015-01-13 2017-08-30 Univ Kyoto Agent for preventing and/or treating amyotrophic lateral sclerosis
AU2016219822B2 (en) 2015-02-20 2020-07-09 Incyte Holdings Corporation Bicyclic heterocycles as FGFR inhibitors
MA41551A (fr) 2015-02-20 2017-12-26 Incyte Corp Hétérocycles bicycliques utilisés en tant qu'inhibiteurs de fgfr4
WO2016134294A1 (en) 2015-02-20 2016-08-25 Incyte Corporation Bicyclic heterocycles as fgfr4 inhibitors
LT3263106T (lt) 2015-02-25 2024-01-10 Eisai R&D Management Co., Ltd. Chinolino darinių kartumo sumažinimo būdas
KR102662228B1 (ko) 2015-03-04 2024-05-02 머크 샤프 앤드 돔 코포레이션 암을 치료하기 위한 pd-1 길항제 및 vegfr/fgfr/ret 티로신 키나제 억제제의 조합
AU2016243529B2 (en) 2015-03-27 2021-03-25 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Inhibitors of cyclin-dependent kinases
US9580406B2 (en) 2015-04-28 2017-02-28 Signa S.A. De C.V. Processes for the preparation of axitinib
CN108368147A (zh) 2015-05-27 2018-08-03 南方研究院 用于治疗癌症的核苷酸
MX393691B (es) 2015-06-06 2025-03-24 Cloudbreak Therapeutics Llc Composiciones y metodos para tratar pterigion.
US10702527B2 (en) 2015-06-12 2020-07-07 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Combination therapy of transcription inhibitors and kinase inhibitors
MX373231B (es) 2015-06-16 2020-05-08 Eisai R&D Man Co Ltd Agente anticancerigeno.
EP3310779B1 (en) 2015-06-19 2019-05-08 Novartis AG Compounds and compositions for inhibiting the activity of shp2
ES2824576T3 (es) 2015-06-19 2021-05-12 Novartis Ag Compuestos y composiciones para inhibir la actividad de SHP2
ES2805232T3 (es) 2015-06-19 2021-02-11 Novartis Ag Compuestos y composiciones para inhibir la actividad de SHP2
GB201511382D0 (en) 2015-06-29 2015-08-12 Imp Innovations Ltd Novel compounds and their use in therapy
GB201511790D0 (en) 2015-07-06 2015-08-19 Iomet Pharma Ltd Pharmaceutical compound
US10604512B2 (en) 2015-08-03 2020-03-31 Samumed, Llc 3-(1H-indol-2-yl)-1H-indazoles and therapeutic uses thereof
WO2017023972A1 (en) 2015-08-03 2017-02-09 Samumed, Llc. 3-(1h-imidazo[4,5-c]pyridin-2-yl)-1h-pyrazolo[4,3-b]pyridines and therapeutic uses thereof
WO2017023989A1 (en) 2015-08-03 2017-02-09 Samumed, Llc. 3-(1h-benzo[d]imidazol-2-yl)-1h-pyrazolo[4,3-b]pyridines and therapeutic uses thereof
WO2017023993A1 (en) 2015-08-03 2017-02-09 Samumed, Llc. 3-(1h-indol-2-yl)-1h-pyrazolo[4,3-b]pyridines and therapeutic uses thereof
WO2017023975A1 (en) 2015-08-03 2017-02-09 Samumed, Llc. 3-(1h-pyrrolo[2,3-c]pyridin-2-yl)-1h-pyrazolo[3,4-c]pyridines and therapeutic uses thereof
WO2017023980A1 (en) 2015-08-03 2017-02-09 Samumed, Llc. 3-(1h-pyrrolo[2,3-b]pyridin-2-yl)-1h-pyrazolo[3,4-c]pyridines and therapeutic uses thereof
WO2017023988A1 (en) 2015-08-03 2017-02-09 Samumed, Llc. 3-(3h-imidazo[4,5-c]pyridin-2-yl)-1h-pyrazolo[4,3-b]pyridines and therapeutic uses thereof
US10206908B2 (en) 2015-08-03 2019-02-19 Samumed, Llc 3-(1H-pyrrolo[3,2-C]pyridin-2-YL)-1H-pyrazolo[3,4-C]pyridines and therapeutic uses thereof
WO2017024021A1 (en) 2015-08-03 2017-02-09 Samumed, Llc 3-(1h-pyrrolo[2,3-b]pyridin-2-yl)-1h-indazoles and therapeutic uses thereof
WO2017023996A1 (en) 2015-08-03 2017-02-09 Samumed, Llc. 3-(1h-pyrrolo[2,3-b]pyridin-2-yl)-1h-pyrazolo[3,4-b]pyridines and therapeutic uses thereof
WO2017024015A1 (en) 2015-08-03 2017-02-09 Samumed, Llc. 3-(3h-imidazo[4,5-b]pyridin-2-yl)-1h-pyrazolo[4,3-b]pyridines and therapeutic uses thereof
US10519169B2 (en) 2015-08-03 2019-12-31 Samumed, Llc 3-(1H-pyrrolo[2,3-C]pyridin-2-yl)-1 H-pyrazolo[4,3-B]pyridines and therapeutic uses thereof
WO2017024003A1 (en) 2015-08-03 2017-02-09 Samumed, Llc 3-(1h-pyrrolo[3,2-c]pyridin-2-yl)-1h-pyrazolo[4,3-b]pyridines and therapeutic uses thereof
US10206909B2 (en) 2015-08-03 2019-02-19 Samumed, Llc 3-(1H-pyrrolo[2,3-B]pyridin-2-yl)-1H-pyrazolo[4,3-B]pyridines and therapeutic uses thereof
WO2017024026A1 (en) 2015-08-03 2017-02-09 Samumed, Llc 3-(1h-indol-2-yl)-1h-pyrazolo[3,4-c]pyridines and therapeutic uses thereof
WO2017023987A1 (en) 2015-08-03 2017-02-09 Samumed, Llc. 3-(1h-pyrrolo[3,2-c]pyridin-2-yl)-1h-pyrazolo[3,4-b]pyridines and therapeutic uses thereof
WO2017024010A1 (en) 2015-08-03 2017-02-09 Samumed, Llc. 3-(1h-pyrrolo[3,2-c]pyridin-2-yl)-1h-indazoles and therapeutic uses thereof
MA42608A (fr) 2015-08-13 2018-06-20 Merck Sharp & Dohme Composés de di-nucléotide cyclique en tant qu'agonistes sting (stimulateur de gène interféron)
US11453697B1 (en) 2015-08-13 2022-09-27 Merck Sharp & Dohme Llc Cyclic di-nucleotide compounds as sting agonists
CA2994925C (en) 2015-08-20 2023-08-29 Eisai R&D Management Co., Ltd. Tumor therapeutic agent
EP4019515A1 (en) 2015-09-09 2022-06-29 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Inhibitors of cyclin-dependent kinases
CN108349985A (zh) 2015-09-14 2018-07-31 无限药品股份有限公司 异喹啉酮的固体形式、其制备方法、包含其的组合物及其使用方法
US10736885B2 (en) * 2015-10-07 2020-08-11 Aiviva Biopharma, Inc. Compositions and methods of treating dermal fibrotic disorders
MX2018004879A (es) * 2015-10-22 2019-02-28 Selvita S A Nuevos derivados de piridona y su uso como inhibidores de quinasas.
NZ742200A (en) 2015-11-06 2023-01-27 Samumed Llc Treatment of osteoarthritis
WO2017106062A1 (en) 2015-12-15 2017-06-22 Merck Sharp & Dohme Corp. Novel compounds as indoleamine 2,3-dioxygenase inhibitors
US10759806B2 (en) 2016-03-17 2020-09-01 Infinity Pharmaceuticals, Inc. Isotopologues of isoquinolinone and quinazolinone compounds and uses thereof as PI3K kinase inhibitors
AR108325A1 (es) 2016-04-27 2018-08-08 Samumed Llc Isoquinolin-3-il carboxamidas y preparación y uso de las mismas
CA3023032A1 (en) 2016-05-04 2017-11-09 Genoscience Pharma Substituted 2,4-diamino-quinoline derivatives for use in the treatment of proliferative diseases
SI3464285T1 (sl) 2016-06-01 2023-02-28 Biosplice Therapeutics, Inc. Postopek za pripravo N-(5-(3-(7-(3-fluorofenil)-3H-imidazo(4,5-C)piridin-2-il)-1H-indazol-5- il)piridin-3-il)-3-metilbutanamida
AU2017274195B2 (en) 2016-06-02 2022-04-07 Ads Therapeutics Llc Compositions and methods of using nintedanib for improving glaucoma surgery success
WO2017214269A1 (en) 2016-06-08 2017-12-14 Infinity Pharmaceuticals, Inc. Heterocyclic compounds and uses thereof
CN109415360B (zh) 2016-06-14 2021-11-02 诺华股份有限公司 用于抑制shp2活性的化合物和组合物
CA3028718A1 (en) 2016-06-24 2017-12-28 Infinity Pharmaceuticals, Inc. Combination therapies
RS62410B1 (sr) 2016-10-04 2021-10-29 Merck Sharp & Dohme Benzo[b]tiofenska jedinjenja kao agonisti sting
EP3528808B1 (en) 2016-10-21 2021-10-06 BioSplice Therapeutics, Inc. Methods of using indazole-3-carboxamides and their use as wnt/b-catenin signaling pathway inhibitors
KR102558716B1 (ko) 2016-11-07 2023-07-21 사뮤메드, 엘엘씨 단일-투여량, 즉시-사용가능한 주사용 제제
EP3541825A1 (en) 2016-11-21 2019-09-25 Idenix Pharmaceuticals LLC. Cyclic phosphate substituted nucleoside derivatives for the treatment of liver diseases
MX388165B (es) 2016-11-23 2025-03-19 Chemocentryx Inc Método para tratar glomeruloesclerosis segmentaria focal
US11021511B2 (en) 2017-01-27 2021-06-01 Janssen Biotech, Inc. Cyclic dinucleotides as sting agonists
EP3573718B1 (en) 2017-01-27 2022-06-01 Janssen Biotech, Inc. Cyclic dinucleotides as sting agonists
US12303505B2 (en) 2017-02-08 2025-05-20 Eisai R&D Management Co., Ltd. Tumor-treating pharmaceutical composition
US20190388407A1 (en) 2017-02-12 2019-12-26 Aiviva Biopharma, Inc. Multikinase inhibitors of vegf and tfg beta and uses thereof
EP3584241B1 (en) * 2017-02-14 2023-04-26 FUJIFILM Corporation Method for producing indazole compound, and indazole compound
US11466047B2 (en) 2017-05-12 2022-10-11 Merck Sharp & Dohme Llc Cyclic di-nucleotide compounds as sting agonists
BR112019023064A2 (pt) 2017-05-16 2020-06-09 Eisai R&D Man Co Ltd tratamento de carcinoma hepatocelular
CN108947970B (zh) * 2017-05-18 2022-04-05 四川大学 吲唑类衍生物及其制备方法和用途
AR111960A1 (es) 2017-05-26 2019-09-04 Incyte Corp Formas cristalinas de un inhibidor de fgfr y procesos para su preparación
JP2020530838A (ja) 2017-08-04 2020-10-29 メルク・シャープ・アンド・ドーム・コーポレーションＭｅｒｃｋ Ｓｈａｒｐ ＆ Ｄｏｈｍｅ Ｃｏｒｐ． がん治療のためのベンゾ［ｂ］チオフェンＳＴＩＮＧアゴニスト
WO2019027857A1 (en) 2017-08-04 2019-02-07 Merck Sharp & Dohme Corp. COMBINATIONS OF PD-1 ANTAGONISTS AND STING BENZO [B] THIOPHENIC AGONISTS FOR THE TREATMENT OF CANCER
TWI847306B (zh) 2017-08-24 2024-07-01 丹麥商諾佛 儂迪克股份有限公司 Ｇｌｐ-１組成物及其用途
TW202517628A (zh) 2017-09-11 2025-05-01 美商克魯松藥物公司 Shp2之八氫環戊烷并[c]吡咯別構抑制劑
US11052065B2 (en) 2017-09-27 2021-07-06 Merck Sharp & Dohme Corp. Compositions and methods for treating cancer with a combination of programmed death receptor (PD-1) antibodies and a CXCR2 antagonist
BR112020007183A2 (pt) 2017-10-11 2020-09-24 Chemocentryx, Inc. tratamento de glomeruloesclerose focal segmentado com antagonistas de ccr2
WO2019089412A1 (en) 2017-11-01 2019-05-09 Merck Sharp & Dohme Corp. Novel substituted tetrahydroquinolin compounds as indoleamine 2,3-dioxygenase (ido) inhibitors
WO2019099294A1 (en) 2017-11-14 2019-05-23 Merck Sharp & Dohme Corp. Novel substituted biaryl compounds as indoleamine 2,3-dioxygenase (ido) inhibitors
CN111344287B (zh) 2017-11-14 2023-12-19 默沙东有限责任公司 作为吲哚胺2，3-双加氧酶(ido)抑制剂的新型取代的联芳基化合物
EP3724205B1 (en) 2017-12-15 2022-06-22 Janssen Biotech, Inc. Cyclic dinucleotides as sting agonists
WO2019125974A1 (en) 2017-12-20 2019-06-27 Merck Sharp & Dohme Corp. Cyclic di-nucleotide compounds as sting agonists
WO2019177873A1 (en) 2018-03-13 2019-09-19 Merck Sharp & Dohme Corp. Arginase inhibitors and methods of use
WO2019195063A1 (en) 2018-04-03 2019-10-10 Merck Sharp & Dohme Corp. Aza-benzothiophene compounds as sting agonists
WO2019195124A1 (en) 2018-04-03 2019-10-10 Merck Sharp & Dohme Corp. Benzothiophenes and related compounds as sting agonists
EP3781687A4 (en) 2018-04-20 2022-02-09 Merck Sharp & Dohme Corp. NEW RIG-I SUBSTITUTED AGONISTS: COMPOSITIONS AND METHODS THEREOF
ES2991427T3 (es) 2018-05-04 2024-12-03 Incyte Corp Formas sólidas de un inhibidor de FGFR y procedimientos para preparar las mismas
TW201946630A (zh) 2018-05-04 2019-12-16 美商英塞特公司 Fgfr抑制劑之鹽
CN110452176A (zh) * 2018-05-07 2019-11-15 四川大学 吲唑类衍生物及其制备方法和用途
US11352320B2 (en) 2018-05-31 2022-06-07 Merck Sharp & Dohme Corp. Substituted [1.1.1] bicyclo compounds as indoleamine 2,3-dioxygenase inhibitors
US11274111B2 (en) 2018-06-20 2022-03-15 Merck Sharp & Dohme Corp. Arginase inhibitors and methods of use
JP7590185B2 (ja) 2018-06-25 2024-11-26 ダナ－ファーバー キャンサー インスティテュート， インコーポレイテッド Ｔａｉｒｅファミリーキナーゼインヒビターおよびそれらの使用
US12502391B2 (en) 2018-08-15 2025-12-23 Aiviva Biopharma, Inc. Multi-kinase inhibitors of VEGF and TGF beta and uses thereof
CN112996795B (zh) 2018-09-18 2024-11-12 尼坎治疗公司 作为src同源-2磷酸酶抑制剂的稠合的三环衍生物
WO2020068867A1 (en) 2018-09-25 2020-04-02 Black Diamond Therapeutics, Inc. Quinazoline derivatives as tyrosine kinase inhibitor, compositions, methods of making them and their use
JP2022502496A (ja) 2018-09-25 2022-01-11 ブラック ダイアモンド セラピューティクス，インコーポレイティド チロシンキナーゼ阻害剤組成物、作製方法、および使用方法
IL305106B2 (en) 2018-09-29 2025-08-01 Novartis Ag Process of manufacture of a compound for inhibiting the activity of shp2
EP3873464B1 (en) 2018-11-01 2025-07-30 Merck Sharp & Dohme LLC Novel substituted pyrazole compounds as indoleamine 2,3-dioxygenase inhibitors
WO2020096871A1 (en) 2018-11-06 2020-05-14 Merck Sharp & Dohme Corp. Novel substituted tricyclic compounds as indoleamine 2,3-dioxygenase inhibitors
CN111205227A (zh) * 2018-11-22 2020-05-29 四川大学 3-乙烯基吲唑类衍生物及其制备方法和用途
WO2020112581A1 (en) 2018-11-28 2020-06-04 Merck Sharp & Dohme Corp. Novel substituted piperazine amide compounds as indoleamine 2, 3-dioxygenase (ido) inhibitors
US12240867B2 (en) 2018-12-18 2025-03-04 Merck Sharp & Dohme Llc Arginase inhibitors and methods of use
AU2019413694B2 (en) 2018-12-28 2025-03-20 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Inhibitors of cyclin-dependent kinase 7 and uses thereof
US12577217B2 (en) 2019-01-08 2026-03-17 Kyorin Pharmaceutical Co., Ltd. 15-PGDH inhibitor
JP7532385B2 (ja) * 2019-01-31 2024-08-13 杏林製薬株式会社 １５－ｐｇｄｈ阻害薬
US11628162B2 (en) 2019-03-08 2023-04-18 Incyte Corporation Methods of treating cancer with an FGFR inhibitor
EP3946324B1 (en) 2019-04-04 2025-07-30 Merck Sharp & Dohme LLC Inhibitors of histone deacetylase-3 useful for the treatment of cancer, inflammation, neurodegeneration diseases and diabetes
JP2022526827A (ja) 2019-04-11 2022-05-26 アンジオン バイオメディカ コーポレーション （ｅ）－３－［２－（２－チエニル）ビニル］－１ｈ－ピラゾールの固体形態
EA202192731A1 (ru) 2019-04-18 2022-02-04 Синтон Б.В. СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АКСИТИНИБА, СПОСОБ ОЧИСТКИ ПРОМЕЖУТОЧНОГО СОЕДИНЕНИЯ 2-((3-ЙОД-1H-ИНДАЗОЛ-6-ИЛ)ТИО)-N-МЕТИЛБЕНЗАМИДА, СПОСОБ ОЧИСТКИ АКСИТИНИБА ЧЕРЕЗ HCl СОЛЬ АКСИТИНИБА, ТВЕРДАЯ ФОРМА HCl СОЛИ АКСИТИНИБА
US12290601B2 (en) 2019-05-09 2025-05-06 Synthon B.V. Pharmaceutical composition comprising axitinib
EP3990635A1 (en) 2019-06-27 2022-05-04 Rigontec GmbH Design method for optimized rig-i ligands
WO2021007269A1 (en) 2019-07-09 2021-01-14 Incyte Corporation Bicyclic heterocycles as fgfr inhibitors
KR20220056176A (ko) 2019-08-02 2022-05-04 메르사나 테라퓨틱스, 인코포레이티드 암 치료를 위한 sting(인터페론 유전자의 자극인자) 작용제로서의 비스-[n-((5-카바모일)-1h-벤조[d]이미다졸-2-일)-피라졸-5-카복사미드] 유도체 및 관련 화합물
WO2021030711A1 (en) 2019-08-15 2021-02-18 Black Diamond Therapeutics, Inc. Alkynyl quinazoline compounds
EP4021912A4 (en) 2019-08-30 2023-08-23 Risen (Suzhou) Pharma Tech Co., Ltd. TYROSINE KINASE INHIBITOR PRODRUGS FOR THE TREATMENT OF CANCER
CN112442010B (zh) * 2019-08-30 2023-10-03 润佳（苏州）医药科技有限公司 一类前药化合物及其在治疗癌症方面的应用
CN112442011B (zh) * 2019-08-30 2023-11-14 润佳（苏州）医药科技有限公司 一种前药化合物及其在治疗癌症方面的应用
WO2021067374A1 (en) 2019-10-01 2021-04-08 Incyte Corporation Bicyclic heterocycles as fgfr inhibitors
GEAP202415945A (en) 2019-10-14 2024-04-25 Incyte Corp Bicyclic heterocycles as fgfr inhibitors
WO2021076728A1 (en) 2019-10-16 2021-04-22 Incyte Corporation Bicyclic heterocycles as fgfr inhibitors
CN112694474B (zh) * 2019-10-23 2022-03-18 四川大学 吲唑类衍生物及其制备方法和用途
JP7558267B2 (ja) 2019-10-25 2024-09-30 ギリアード サイエンシーズ， インコーポレイテッド Ｇｌｐ－１ｒ調節化合物
AU2020395185A1 (en) 2019-12-04 2022-06-02 Incyte Corporation Derivatives of an FGFR inhibitor
CA3163875A1 (en) 2019-12-04 2021-06-10 Incyte Corporation Tricyclic heterocycles as fgfr inhibitors
EP4069683A1 (en) 2019-12-06 2022-10-12 Mersana Therapeutics, Inc. Dimeric compounds as sting agonists
EP4076443B1 (en) 2019-12-17 2025-09-10 Merck Sharp & Dohme LLC Substituted 1,3,8-triazaspiro[4,5]decane-2,4-dione compound as indoleamine 2,3-dioxygenase (ido) and/or tryptophan 2,3-dioxygenase (tdo) inhibitors
US20230140132A1 (en) 2020-01-07 2023-05-04 Merck Sharp & Dohme Llc Arginase inhibitors and methods of use
WO2021146424A1 (en) 2020-01-15 2021-07-22 Incyte Corporation Bicyclic heterocycles as fgfr inhibitors
CN111829859B (zh) * 2020-01-20 2024-01-05 北京林业大学 一种高效杨树种子透明染色及其三维成像的方法
CN120518596A (zh) 2020-01-29 2025-08-22 吉利德科学公司 Glp-1r调节化合物
BR112022013795A2 (pt) 2020-02-18 2022-09-13 Novo Nordisk As Composição farmacêutica líquida, e, kit
BR102020005423A2 (pt) * 2020-03-18 2021-09-28 Faculdades Catolicas Compostos n-acil-hidrazônicos, uso no tratamento de agregopatias degenerativas amiloides e não-amiloides, e composição farmacêutica
WO2021195206A1 (en) 2020-03-24 2021-09-30 Black Diamond Therapeutics, Inc. Polymorphic forms and related uses
AU2021248635B2 (en) 2020-04-02 2025-10-23 Mersana Therapeutics, Inc. Antibody drug conjugates comprising STING agonists
MX2022013843A (es) 2020-05-06 2022-11-30 Merck Sharp & Dohme Llc Inhibidores de il4i1 y metodos de uso.
WO2021232367A1 (zh) * 2020-05-21 2021-11-25 四川大学 3-乙烯基吲唑类衍生物及其制备方法和用途
CN113943271B (zh) * 2020-07-15 2023-11-14 鲁南制药集团股份有限公司 一种阿昔替尼晶型及其制备方法
CN112028831A (zh) * 2020-09-24 2020-12-04 山东大学 一种苯并吡唑类化合物、其制备方法及作为抗肿瘤药物的应用
US11851419B2 (en) 2020-11-20 2023-12-26 Gilead Sciences, Inc. GLP-1R modulating compounds
CA3200439A1 (en) * 2020-12-08 2022-06-16 Disarm Therapeutics, Inc. Benzopyrazole inhibitors of sarm1
WO2022140472A1 (en) 2020-12-22 2022-06-30 Nikang Therapeutics, Inc. Compounds for degrading cyclin-dependent kinase 2 via ubiquitin proteosome pathway
MX2023008296A (es) 2021-01-13 2023-09-29 Monte Rosa Therapeutics Inc Compuestos de isoindolinona.
WO2022170052A1 (en) 2021-02-05 2022-08-11 Black Diamond Therapeutics, Inc. Quinazoline derivatives, pyridopyrimidine derivatives, pyrimidopyrimidine derivatives, and uses thereof
EP4323405A1 (en) 2021-04-12 2024-02-21 Incyte Corporation Combination therapy comprising an fgfr inhibitor and a nectin-4 targeting agent
WO2022219412A1 (en) 2021-04-14 2022-10-20 Monte Rosa Therapeutics Ag Isoindolinone amide compounds useful to treat diseases associated with gspt1
WO2022219407A1 (en) 2021-04-14 2022-10-20 Monte Rosa Therapeutics Ag Isoindolinone compounds
IL306110A (en) 2021-04-21 2023-11-01 Gilead Sciences Inc Carboxy-benzimidazole glp-1r modulating compounds
WO2022227015A1 (en) 2021-04-30 2022-11-03 Merck Sharp & Dohme Corp. Il4i1 inhibitors and methods of use
AR126101A1 (es) 2021-06-09 2023-09-13 Incyte Corp Heterociclos tricíclicos como inhibidores de fgfr
CA3220274A1 (en) 2021-06-09 2022-12-15 Incyte Corporation Tricyclic heterocycles as fgfr inhibitors
WO2023284730A1 (en) 2021-07-14 2023-01-19 Nikang Therapeutics, Inc. Alkylidene derivatives as kras inhibitors
CN115701423B (zh) * 2021-08-02 2025-03-25 沈阳化工大学 三氟乙基硫醚（亚砜）取代苯类化合物的制备方法及其中间体
AR128846A1 (es) 2022-03-23 2024-06-19 Ideaya Biosciences Inc Compuestos de indazol sustituidos con piperazina como inhibidores de parg
IL315603A (en) 2022-03-28 2024-11-01 Nikang Therapeutics Inc Sulfonamido derivatives as cycle-dependent KINASE 2 inhibitors
EP4282415A1 (en) 2022-05-26 2023-11-29 Genepharm S.A. A stable tablet composition of axitinib
EP4536363A1 (en) 2022-06-08 2025-04-16 Nikang Therapeutics, Inc. Sulfamide derivatives as cyclin-dependent kinase 2 inhibitors
WO2024032584A1 (zh) * 2022-08-08 2024-02-15 苏州必扬医药科技有限公司 一种蛋白酪氨酸激酶抑制剂及其医疗用途
TW202434563A (zh) 2022-11-11 2024-09-01 美商尼坎醫療公司 用於經由泛素蛋白酶體途徑降解週期蛋白依賴性激酶２的含有２，５－取代的嘧啶衍生物之雙功能化合物
TW202502311A (zh) 2023-03-29 2025-01-16 美商默沙東有限責任公司 Il4i1抑制劑及其使用方法
TW202502382A (zh) 2023-06-30 2025-01-16 美商默沙東有限責任公司 治療組合及其用途和治療方法
WO2025072462A1 (en) 2023-09-27 2025-04-03 Nikang Therapeutics, Inc. Sulfonamide derivatives as cyclin-dependent kinase 2 inhibitors
WO2025082316A1 (zh) * 2023-10-17 2025-04-24 苏州必扬医药科技有限公司 一种眼用制剂及其制备方法和应用
WO2025117616A1 (en) 2023-11-27 2025-06-05 Nikang Therapeutics, Inc. Bifunctional compounds containing 2,5-substituted pyrimidine derivatives for degrading cyclin-dependent kinase 2 and cyclin-dependent kinase 4 via ubiquitin proteasome pathway
WO2025117981A1 (en) 2023-12-02 2025-06-05 Nikang Therapeutics, Inc. Bifunctional compounds containing 2,5-substituted pyrimidine derivatives for degrading cyclin-dependent kinase 2 via ubiquitin proteasome pathway
WO2025212828A1 (en) 2024-04-03 2025-10-09 Nikang Therapeutics, Inc. Bifunctional compounds containing 2,5-substituted pyrimidine derivatives for degrading cyclin-dependent kinase 2 and cyclin-dependent kinase 4 via ubiquitin proteasome pathway
WO2025240536A1 (en) 2024-05-15 2025-11-20 Nikang Therapeutics, Inc. Bifunctional compounds containing 2,5-substituted pyrimidine derivatives for degrading cyclin-dependent kinase 2 and/or cyclin-dependent kinase 4 via ubiquitin proteasome pathway
WO2025253311A1 (en) 2024-06-04 2025-12-11 Hetero Labs Limited 1,2-dicarboxamide compounds as kinase inhibitors
CN118994101B (zh) * 2024-08-08 2025-10-31 安徽医科大学 一种芳基吲唑环类化合物、制备方法、药物组合物及用途
EP4707274A1 (en) * 2024-09-10 2026-03-11 Universidad Autónoma de Madrid Sp3-analogues of axitinib and medical uses thereof

Family Cites Families (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5625031A (en) * 1994-02-08 1997-04-29 Bristol-Myers Squibb Company Peptide inhibitors of the p33cdk2 and p34cdc2 cell cycle regulatory kinases and human papillomavirus E7 oncoprotein
US5631156A (en) * 1994-06-21 1997-05-20 The University Of Michigan DNA encoding and 18 KD CDK6 inhibiting protein
KR970706813A (ko) * 1994-11-10 1997-12-01 찰스 홈시 단백질 키나아제의 억제물질로서 유용한 제약용 피라졸 조성물(pharmaceutical pyrazole compositions useful as inhibitors of protein kinases)
ZA951822B (en) * 1994-12-23 1996-09-26 Glaxo Group Ltd Chemical compounds
US5710173A (en) * 1995-06-07 1998-01-20 Sugen, Inc. Thienyl compounds for inhibition of cell proliferative disorders
US5733920A (en) * 1995-10-31 1998-03-31 Mitotix, Inc. Inhibitors of cyclin dependent kinases
US5760028A (en) * 1995-12-22 1998-06-02 The Dupont Merck Pharmaceutical Company Integrin receptor antagonists
WO1997034876A1 (en) * 1996-03-15 1997-09-25 Zeneca Limited Cinnoline derivatives and use as medicine
WO1997048697A1 (en) * 1996-06-19 1997-12-24 Rhone-Poulenc Rorer Limited Substituted azabicylic compounds and their use as inhibitors of the production of tnf and cyclic amp phosphodiesterase
CA2264798A1 (en) * 1996-09-04 1998-03-12 Pfizer Inc. Indazole derivatives and their use as inhibitors of phosphodiesterase (pde) type iv and the production of tumor necrosis factor (tnf)
US6569878B1 (en) * 1997-10-27 2003-05-27 Agouron Pharmaceuticals Inc. Substituted 4-amino-thiazol-2-yl compounds as cyclin-dependent kinase inhibitors
US6391872B1 (en) * 1997-11-04 2002-05-21 Pfizer Inc Indazole bioisostere replacement of catechol in therapeutically active compounds
US6716978B2 (en) * 1997-11-04 2004-04-06 Pfizer Inc Therapeutically active compounds based on indazole bioisostere replacement of catechol in PDE4 inhibitors
PE20010306A1 (es) * 1999-07-02 2001-03-29 Agouron Pharma Compuestos de indazol y composiciones farmaceuticas que los contienen utiles para la inhibicion de proteina kinasa

Also Published As

Publication number Publication date
AP1486A (en) 2005-11-01
DE60036879T2 (de) 2008-02-14
MXPA01012795A (es) 2002-09-02
JO2319B1 (en) 2005-09-12
GT200000107A (es) 2001-12-21
IL146710A0 (en) 2002-07-25
KR20020027379A (ko) 2002-04-13
SK19252001A3 (sk) 2002-11-06
SV2002000121A (es) 2002-12-02
JP2006348043A (ja) 2006-12-28
CY2013009I1 (el) 2016-04-13
CY1107148T1 (el) 2012-01-25
EP1614683A1 (en) 2006-01-11
JP3969669B2 (ja) 2007-09-05
CY2013009I2 (el) 2016-04-13
SK286936B6 (sk) 2009-07-06
NZ516676A (en) 2003-09-26
ZA200110061B (en) 2003-02-06
SI1218348T1 (sl) 2008-02-29
HRP20020109B1 (en) 2008-07-31
ES2296014T3 (es) 2008-04-16
BE2013C015I2 (pl) 2019-05-21
NO20015797D0 (no) 2001-11-28
AR035554A1 (es) 2004-06-16
WO2001002369A2 (en) 2001-01-11
CN1495171A (zh) 2004-05-12
AU777701B2 (en) 2004-10-28
DE60037211T2 (de) 2008-12-11
NO2013004I1 (no) 2013-03-18
EE200100717A (et) 2003-02-17
HK1048813A1 (en) 2003-04-17
SI1614683T1 (sl) 2008-02-29
BRPI0012352B8 (pt) 2021-05-25
IS6207A (is) 2001-12-19
HK1085470A1 (en) 2006-08-25
CZ20014634A3 (cs) 2002-09-11
MEP45108A (en) 2011-05-10
DK1614683T3 (da) 2008-03-25
CR10194A (es) 2008-09-30
LU92154I2 (fr) 2013-04-22
CN1374950A (zh) 2002-10-16
RS50339B (sr) 2009-11-10
JP2003503481A (ja) 2003-01-28
BG106380A (bg) 2002-09-30
CY1107147T1 (el) 2012-10-24
EA004460B1 (ru) 2004-04-29
NO20060596L (no) 2002-03-01
EE05585B1 (et) 2012-10-15
HRP20020109A2 (en) 2003-12-31
ME00385B (me) 2011-05-10
OA11980A (en) 2006-04-18
UY26231A1 (es) 2001-01-31
MY137622A (en) 2009-02-27
MY139999A (en) 2009-11-30
FR13C0010I1 (pl) 2013-03-22
BRPI0012352B1 (pt) 2016-08-16
EP1614683B1 (en) 2007-11-21
AP2002002392A0 (en) 2002-03-31
IS2791B (is) 2012-06-15
CN1137884C (zh) 2004-02-11
BG66070B1 (bg) 2011-01-31
PT1218348E (pt) 2007-12-14
ES2293906T3 (es) 2008-04-01
CA2383630C (en) 2008-11-18
NO322507B1 (no) 2006-10-16
EP1218348B1 (en) 2007-10-24
TNSN00146A1 (fr) 2005-11-10
PL355757A1 (pl) 2004-05-17
NO2013004I2 (no) 2014-06-02
UA66933C2 (uk) 2004-06-15
HUP0202490A3 (en) 2003-01-28
BR0012352A (pt) 2002-05-14
FR13C0010I2 (fr) 2013-08-16
DK1218348T3 (da) 2008-02-25
CN1234693C (zh) 2006-01-04
JP3878849B2 (ja) 2007-02-07
WO2001002369A3 (en) 2002-04-25
CZ301667B6 (cs) 2010-05-19
CA2383630A1 (en) 2001-01-11
HK1065037A1 (en) 2005-02-08
KR100529639B1 (ko) 2006-01-16
DZ3191A1 (fr) 2001-01-11
MA26803A1 (fr) 2004-12-20
EP1218348A2 (en) 2002-07-03
DE60036879D1 (de) 2007-12-06
PA8498001A1 (es) 2002-08-26
DE60037211D1 (de) 2008-01-03
AR065937A2 (es) 2009-07-15
CO5190686A1 (es) 2002-08-29
GEP20063885B (en) 2006-08-10
PE20010306A1 (es) 2001-03-29
AU5785200A (en) 2001-01-22
HUP0202490A2 (hu) 2002-11-28
ATE376543T1 (de) 2007-11-15
HU228502B1 (en) 2013-03-28
PT1614683E (pt) 2008-01-24
NO20015797L (no) 2002-03-01
EA200200120A1 (ru) 2002-08-29
YU92901A (sh) 2004-09-03
CR6517A (es) 2006-09-21

Similar Documents

Publication Publication Date Title
PL212108B1 (pl) Związki indazolowe, środek farmaceutyczny i zastosowanie związków indazolowych
US6531491B1 (en) Indazole compounds and pharmaceutical compositions for inhibiting protein kinases, and methods for their use
EP1585743B1 (en) 2-(1h-indazol-6-ylamino)- benzamide compounds as protein kinases inhibitors useful for the treatment of ophthalmic diseases
US6462069B2 (en) Compounds, pharmaceutical compositions, and methods for inhibiting protein kinases
CN1980918A (zh) 取代的吲唑，含有它们的组合物，制备方法与用途
HK1085470B (en) Indazole compounds and pharmaceutical compositions for inhibiting protein kinases, and methods for their use

Legal Events

Date Code Title Description
RECP Rectifications of patent specification
RECP Rectifications of patent specification