ES2296014T3 - Compuestos de indazol y composiciones farmaceuticas para inhibir proteinas quinasas y metodos para su uso. - Google Patents

Compuestos de indazol y composiciones farmaceuticas para inhibir proteinas quinasas y metodos para su uso. Download PDF

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John F. Braganza
Stephan James Cripps
Theodore Otto Johnson Jr.
Hiep The Luu
Cynthia Louise Palmer
Siegfried Heinz Reich
Min Teng
Christine Thomas
Michael David Varney
Michael Brennan Wallace
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Abstract

Un compuesto de la fórmula I(a): en donde: R1 es un arilo o heteroarilo sustituido o no sustituido o un grupo de la fórmula CH=CH-R3 o CH=N-R3, en donde R3 es un alquilo, alquenilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, arilo o heteroarilo sustituido o no sustituido; y R2 es Y-Ar, en donde Y es NH y Ar es un arilo sustituido o no sustituido; en donde el término alquilo se refiere a grupos alquilo C1-C12 de cadena lineal y ramificada, el término alquenilo se refiere a grupos alquenilo C2-C12 de cadena lineal y ramificada, el término cicloalquilo se refiere a carbociclos C3-C12 saturados o parcialmente insaturados, el término heterocicloalquilo se refiere a un radical monocíclico saturado o parcialmente insaturado que contiene átomos de carbono y al menos un heteroátomo, seleccionado de nitrógeno, oxígeno y azufre, los términos arilo y heteroarilo se refieren a estructuras de anillos aromáticos monocíclicos y policíclicos, denominándose arilo a los que son carbociclos y heteroarilo a los que sonheterociclos y los grupos arilo y heteroarilo pueden estar opcionalmente sustituidos con una estructura de anillos condensados o un puente, o una de sus sales farmacéuticamente aceptables.

Description

Compuestos de indazol y composiciones farmacéuticas para inhibir proteínas quinasas y métodos para su uso.
Campo de la invención
Esta invención se refiere a compuestos de indazol que median y/o inhiben la actividad de ciertas proteínas quinasas y a composiciones farmacéuticas que contienen dichos compuestos. La invención se refiere también al uso terapéutico o profiláctico de dichos compuestos y composiciones y a métodos para tratar el cáncer, así como otros estados morbosos asociados a la angiogénesis y/o proliferación celular no deseadas, administrando cantidades eficaces de dichos compuestos.
Fundamento de la invención
Las proteínas quinasas son una familia de enzimas que catalizan la fosforilación del grupo hidroxilo de los residuos tirosina, serina o treonina específicos de las proteínas. Típicamente, dicha fosforilación perturba drásticamente la función de la proteína y por tanto las proteínas quinasas son cruciales en la regulación de una amplia variedad de procesos celulares, que incluyen metabolismo, proliferación celular, diferenciación celular y supervivencia celular. De las muchas funciones celulares diferentes de las que se sabe que se requiere la actividad de las proteínas quinasas, algunos procesos representan objetivos atractivos para la intervención terapéutica en ciertos estados morbosos. Dos ejemplos son la angiogénesis y el control del ciclo celular, en los que las proteínas quinasas ejercen un papel crucial; estos procesos son esenciales para el crecimiento de tumores sólidos como para otras enfermedades.
La angiogénesis es el mecanismo por el cual se forman nuevos capilares a partir de vasos ya existentes. Cuando se requiere, el sistema vascular tiene la capacidad de generar nuevas redes capilares para mantener el funcionamiento apropiado de tejidos y órganos. En el adulto, sin embargo, la angiogénesis está bastante limitada, teniendo lugar sólo en el proceso de curado de heridas y neovascularización del endometrio durante la menstruación. Véase Merenmies et al., Cell Growth & Differentiation, 8, 3-10 (1997). Por otro lado, la angiogénesis no deseada es una característica de diversas enfermedades, tales como retinopatías, psoriasis, artritis reumatoide, degeneración macular senil (DMS) y cáncer (tumores sólidos). Folkman, Nature Med., 1, 27-31 (1995). Las proteínas quinasas que han demostrado estar implicadas en el proceso angiogénico incluyen tres miembros de la familia de las tirosinas quinasas receptoras del factor de crecimiento: el receptor del factor de crecimiento endotelial vascular 2 [(abreviadamente VEGF-R2, por la expresión inglesa vascular endothelial growth factor receptor 2), conocido también como receptor del dominio de inserción de quinasa (abreviadamente KDR, por la expresión inglesa kinase insert domain receptor) y como FLK-1]; el receptor del factor de crecimiento de fibroblastos (abreviadamente FGF-R, por la expresión inglesa fibroblast growth factor receptor); y TEK (conocido también como Tie-2).
VEGF-R2, que se expresa sólo en células endoteliales, se une al potente factor de crecimiento angiogénico VEGF y media la transducción de la señal subsiguiente por la activación de su actividad de quinasa intracelular. Así, se espera que la inhibición directa de la actividad de quinasa de VEGF-R2 dará como resultado la reducción de la angiogénesis incluso en presencia de VEGF exógeno (véase, Strawn et al., Cancer Research, 56, 3540-3545 (1996)), como se ha demostrado con mutantes de VEGF-R2 que no son capaces de mediar la transducción de la señal. Millauer et al., Cancer Research, 56, 1615-1620 (1996). Además, parece que VEGF-R2 no tiene una función en el adulto más allá de la mediación en la actividad angiogénica de VEGF. Por consiguiente, se esperaría que un inhibidor selectivo de la actividad de quinasa de VEGF-R2 presente poco toxicidad.
Igualmente, el FGF-R se une a los factores de crecimiento angiogénicos aFGF y bFGF y media la transducción de la señal intracelular subsiguiente. Recientemente, se ha sugerido que factores de crecimiento, tal como el bFGF, pueden tener un papel crítico en la inducción de la angiogénesis en tumores sólidos que han alcanzado cierto tamaño. Yoshiji et al., Cancer Research, 57, 3924-3928 (1997). Sin embargo, a diferencia del VEGF-R2, el FGF-R se expresa en varios tipos diferentes de células en todo el cuerpo y puede o no tener papeles importantes en otros procesos fisiológicos normales en el adulto. No obstante, se ha demostrado que la administración sistémica de un inhibidor de pequeño tamaño molecular de la actividad de quinasa de FGF-R bloquea la angiogénesis inducida por bFGF en ratones sin toxicidad evidente. Mohammad et al., EMBO Journal, 17, 5996-5904 (1998).
TEK (también denominado Tie-2) es otro receptor tirosina quinasa que se expresa sólo en células endoteliales que se ha demostrado que tiene un papel en la angiogénesis. La unión del factor angiopoyetina-1 da como resultado la autofosforilación del dominio de quinasa de TEK y da como resultado un proceso de transducción de la señal que parece mediar la interacción de células endoteliales con células soporte peri-endoteliales, facilitando con ello la maduración de los vasos sanguíneos recién formados. Por otro lado, parece que el factor angiopoyetina-2, antagoniza la acción de la angiopoyetina-1 sobre TEK e interrumpe la angiogénesis. Maisonpierre et al., Science, 277, 55-60 (1997).
Como resultado de los estudios antes descritos, se ha propuesto tratar la angiogénesis utilizando compuestos que inhiban la actividad de quinasa de VEGF-R2, FGF-R y/o TEK. Por ejemplo, la publicación de solicitud de patente internacional WIPO Nº WO 97/34876 describe ciertos derivados de la cinolina que son inhibidores de VEGF-R2, que pueden usarse para el tratamiento de estados morbosos asociados a angiogénesis anormal y/o permeabilidad vascular creciente, tales como cáncer, diabetes, psoriasis, artritis reumatoide, sarcoma de Kaposi, hemangioma, nefropatías aguda y crónica, ateroma, reestenosis arterial, enfermedades autoinmunes, inflamación aguda y enfermedades oculares con proliferación de vasos retinales.
La fosforilasa quinasa activa la glucógeno fosforilasa, aumentando así la rotura del glucógeno y la liberación de glucosa hepática. La producción de glucosa hepática se des-regula en la diabetes tipo 2 y es la causa principal de hiperglucemia en ayunas, que produce muchas de las complicaciones secundarias que afectan a estos pacientes. Así, la reducción en la liberación de glucosa del hígado disminuiría los elevados niveles de glucosa en plasma. Por consiguiente los inhibidores de la fosforilasa quinasa deberían disminuir la actividad de fosforilasa y la glucogenolisis, reduciendo así la hiperglucemia en los pacientes.
Otra respuesta fisiológica al VEGF es la hiperpermeabilidad vascular, que se ha propuesto que desempeña un papel en las primeras etapas de la angiogénesis. En tejidos isquémicos, tales como los que existen en el cerebro de las víctimas de ictus, la expresión de VEGF desencadenante de hipoxia, conduce al aumento de la permeabilidad vascular y en último lugar a edema en los tejidos circundantes. En un modelo de rata para el estudio del ictus, van Bruggen et al., J. Clinical Invest., 104, 1613-20 (1999) han demostrado que la administración de un anticuerpo monoclonal para VEGF reduce el volumen de infarto. Así, se anticipa que los inhibidores de VEGFR son útiles en el tratamiento del ictus.
Además de su papel en la angiogénesis, las proteínas quinasas tienen también un papel crucial en el control del ciclo celular. La proliferación celular incontrolada es la característica del cáncer. La proliferación celular en respuesta a diversos estímulos se manifiesta por una des-regulación del ciclo de división celular, el proceso por el que las células se multiplican y dividen. Las células de tumores presentan típicamente lesiones en los genes que regulan directa o indirectamente la progresión por el ciclo de división celular.
Las quinasas dependientes de la ciclina (CDK) son las proteínas quinasas serina-treonina que tienen papeles críticos en la regulación de las transiciones entre diferentes fases del ciclo celular. Véase, por ejemplo, los artículos compilados en Science, 274, 1643-1677 (1996). Los complejos de CDK se forman por asociación de una subunidad de ciclina reguladora (por ejemplo, ciclina A, B1, B2, D1, D2, D3 y E) y una subunidad de quinasa catalítica (por ejemplo, cdc2 (CDK1), CDK2, CDK4, CDK5 y CDK6). Como el nombre indica, las CDK presentan una absoluta dependencia de la subunidad ciclina para fosforilar sus sustratos objetivo y diferentes pares de quinasa/ciclina actúan para regular la progresión a través de fases específicas del ciclo celular.
La CDK4 que forma complejo con las ciclinas D es la que tiene un papel crítico en la iniciación del ciclo de división celular a partir de una etapa de reposo o quiescente hasta otra en la que las células llegan a implicarse en la división celular. Esta progresión está sometida a una variedad de mecanismos reguladores del crecimiento, tanto negativos como positivos. Anomalías en este sistema de control, particularmente las que afectan la función de CDK4, han estado implicadas en el avance de las células hasta el estado altamente proliferante característico de los cánceres, particularmente melanomas familiares, carcinomas esofágicos y cánceres pancreáticos. Véase, por ejemplo, Kamb, Trends in Genetics, 11, 136-140 (1995); Kamb et al., Science, 264, 436-440 (1994).
Gran número de publicaciones describen una variedad de compuestos químicos útiles contra una variedad de objetivos terapéuticos. Por ejemplo, las publicaciones de solicitudes de patentes internacionales WIPO Nº WO 99/23077 y WO 99/23076 describen compuestos que contienen indazol que presentan actividad inhibidora de fosfodiesterasa tipo IV producida por una sustitución bioisóstera de indazol por catecol. La patente de EE.UU. Nº 5.760.028 describe heterociclos que incluyen ácido 3-[1-[3-(imidazolin-2-ilamino)propil]indazol-5-ilcarbonilamino]-2-(benciloxicarbonil-
amino)-propiónico, que son útiles como antagonistas de la integrina \alpha_{v}\beta_{3} y están relacionados con los receptores de las proteínas adherentes a la superficie celular. La publicación de solicitud de patente internacional WIPO Nº WO 98/09961 describe ciertos derivados del indazol y su uso como inhibidores de la fosfodiesterasa (PDE) tipo IV o la producción del factor de necrosis tumoral (TNF) en un mamífero. Las adiciones recientes a la colección virtual de compuestos conocidos incluyen los descritos como agentes terapéuticos anti-proliferantes que inhiben las CDK. Por ejemplo, la Patente de EE.UU. Nº 5.621.082 de Xiong et al. describe un ácido nucleico que codifica un inhibidor de CDK6, y la Publicación de patente europea Nº 0 666 270 A2 describe péptidos e imitadores de péptidos que actúan como inhibidores de CDK1 y CDK2. La publicación de solicitud de patente internacional WIPO Nº WO 97/16447 describe ciertos análogos de cromonas que son inhibidores de las quinasas dependientes de ciclinas, en particular de complejos CDK/ciclina, tal como CDK4/ciclina D1, que pueden usarse para inhibir la proliferación excesiva o anormal de las células y por consiguiente para tratar el cáncer. La publicación de solicitud de patente internacional WIPO Nº WO 99/21845 describe derivados de 4-aminotiazol que son útiles como inhibidores de CDK.
Sin embargo, todavía se necesitan compuestos de moléculas pequeñas que puedan ser sintetizados fácilmente y sean eficaces en la inhibición de una o más CDK o de los complejos CDK/ciclina. Debido a que CDK4 puede servir como activador general de la división celular en la mayoría de las células y que los complejos de CDK4 y las ciclinas de tipo D regulan la fase temprana G_{1} del ciclo celular, se necesitan inhibidores eficaces de la CDK4 y sus complejos con la ciclina tipo D, para tratar uno o más tipo de tumores. También, los papeles cruciales de las quinasas ciclina E/CDK2 y ciclina B/CDK1 en las transiciones de las fases G_{1}/S y G_{2}/M, respectivamente, ofrecen más objetivos para la intervención terapéutica en la supresión de la progresión des-regulada del ciclo celular en el cáncer.
Otra proteína quinasa, CHK1, tiene un papel importante como punto de control en la progresión del ciclo celular. Los puntos de control son sistemas de control que coordinan la progresión del ciclo celular influyendo en la formación, activación e inactivación subsiguiente de las quinasas dependientes de la ciclina. Los puntos de control evitan la progresión del ciclo celular en tiempos inapropiados, mantienen el equilibrio metabólico de las células mientras está detenida la célula y en algunos casos pueden inducir la apoptosis (muerte celular programada) cuando no se han cumplido los requisitos del punto de control. Véase, por ejemplo, O'Connor, Cancer Surveys, 29, 151-182 (1997); Nurse, Cell, 91, 865-867 (1997); Hartwell et al., Science, 266, 1821-1828 (1994); Hartwell et al., Science, 246, 629-634 (1989).
Una serie de puntos de control regula la integridad del genoma y, al percibir el daño del DNA, estos "puntos de control del daño de DNA" bloquean la progresión del ciclo celular en las fases G_{1} y G_{2}, y retrasan la progresión a través de la fase S. O'Connor, Cancer Surveys, 29, 151-182 (1997); Hartwell et al., Science, 266, 1821-1828 (1994). Esta acción permite que se completen los procesos de reparación del DNA antes de la replicación del genoma y que tenga lugar la separación subsiguiente de este material genético en nuevas células hijas. En gran medida, la mayoría de los genes generalmente mutados en el cáncer humano, el gen supresor de tumores p53, produce una proteína que hace de punto de control del daño de DNA que bloquea la progresión del ciclo celular en la fase G_{1} y/o induce la apoptosis (muerte celular programada) después del daño de DNA. Hartwell et al., Science, 266, 1821-1828 (1994). También se ha demostrado que el supresor de tumores p53 refuerza la acción de un punto de control del daño de DNA en la fase G_{2} del ciclo celular. Véase, por ejemplo, Bunz et al., Science, 28, 1497-1501 (1998); Winters et al., Oncogene, 17, 673-684 (1998); Thompson, Oncogene, 15, 3025-3035 (1997).
Dada la naturaleza crucial de la vía del supresor de tumores p53 en el cáncer humano, se han buscado activamente las intervenciones terapéuticas que aprovechan las vulnerabilidades del cáncer defectuoso en p53. Una vulnerabilidad emergente reside en la operación del punto de control G_{2} en las células cancerígenas defectuosas en p53. Las células cancerígenas, debido a la falta del control de punto de control G_{1}, son particularmente vulnerables a la anulación de la última barrera remanente que las protege de los efectos nocivos del cáncer de los agentes que dañan el DNA: el punto de control G_{2.} El punto de control G_{2} es regulado por un sistema control que ha sido mantenido desde la levadura a los seres humanos. Importante en este sistema mantenido es una quinasa, CHK1, que transduce señales desde el complejo sensorial que daña el DNA para inhibir la activación de la quinasa ciclina B/Cdc2, que promueve la entrada en la fase mitótica. Véase, por ejemplo, Peng et al., Science, 277, 1501-1505 (1997): Sanchez et al., Science, 277, 1497-1501 (1997). Se ha demostrado que la inactivación de CHK1 anula tanto la detención de G_{2} inducida por el daño al DNA inflingido por los agentes anticancerígenos como el daño endógeno al DNA, dando así como resultado la eliminación preferencial de las células defectuosas del punto de control resultantes. Véase, por ejemplo, Nurse, Cell, 91, 865-867 (1997); Weinert, Science, 277, 1450-1451 (1997); Walworth et al., Nature, 363, 368-371 (1993); y Al-Khodairy et al., Molec. Biol. Cell, 5, 147-160 (1994).
La manipulación selectiva del control del punto de control en las células cancerígenas podría proporcionar amplia utilización en los regímenes quimioterapéuticos y de radioterapia del cáncer y puede, además, ofrecer un contraste usual de la "inestabilidad genómica" del cáncer humano que sea aprovechado como la base selectiva para la destrucción de las células cancerígenas. Varios factores hacen de CHK1 un objetivo crucial en el control del punto de control del daño a DNA. La dilucidación de inhibidores de esta quinasa y las quinasas funcionalmente relacionadas, tal como Cds1/CHK2, una quinasa recientemente descubierta que coopera con CHK1 para regular la progresión de la fase S (véase, Zeng et al., Nature, 395, 507-510 (1998); Matsuoka, Science, 282, 1893-1897 (1998)), podría proporcionar nuevos productos terapéuticos valiosos para el tratamiento del cáncer.
El receptor de la integrina que se une a ECM inicia las señales intracelulares mediadas por la quinasa de adherencia focal (abreviadamente FAK, del inglés Focal Adhesion Kinase) que están implicadas en la motilidad celular, proliferación celular y supervivencia. En cánceres humanos, la sobreexpresión de FAK está implicada en la tumorigénesis y el potencial metastásico a través de su papel en las vías de señalización mediadas por la integrina.
Las tirosina quinasas pueden ser del tipo receptor (que tienen dominios extracelular, transmembránico e intracelular) o del tipo no receptor (que es totalmente intracelular). Al menos una de las proteínas tirosina quinasas no receptoras, principalmente, LCK, se cree que media la transducción en los linfocitos T de una señal procedente de la interacción de una proteína de la superficie celular (Cd4) con un anticuerpo anti-Cd4 reticulado. Bolen, Oncogene, 8, 2025-2031 (1993), proporciona un estudio más detallado de las tirosina quinasas no receptoras que se incorpora aquí como referencia.
Además de las proteínas quinasas antes identificadas, muchas otras proteínas quinasas han sido consideradas como objetivos terapéuticos y numerosas publicaciones describen inhibidores de la actividad de quinasa, como se revisa en los artículos siguientes: Mc-Mahon et al, Oncologist, 5, 3-10 (2000); Holash et al., Oncogene, 18, 5356-62 (1999); Thomas et al., J. Biol. Chem., 274, 36684-92 (1999); Cohen, Curr. Op. Chem. Biol., 3, 459-65 (1999); Klohs et al., Curr. Op. Chem. Biol., 10, 544-49 (1999); McMahon et al., Current Opinion in Drug Discovery & Development, 1, 131-146 (1998); Strawn et al., Exp. Opin. Invest. Drugs, 7, 553-573 (1998). La publicación de solitud de patente internacional WIPO WO 00/18761 describe ciertas 3-cianoquinolinas sustituidas como inhibidores de proteínas quinasas.
Sin embargo se siguen necesitando inhibidores eficaces de proteínas quinasas. Por otra parte, como entenderán los expertos en la técnica, es deseable que los inhibidores de las quinasas posean tanto una elevada afinidad por la quinasa o quinasas objetivo así como una elevada selectividad frente a otras proteínas quinasas.
Sumario de la invención
Por tanto, un objetivo de la invención es descubrir potentes inhibidores de proteínas quinasas. Otro objetivo de la invención es descubrir inhibidores eficaces de las quinasas que posean una afinidad fuerte y selectiva para una o más quinasas particulares.
Estos y otros objetivos de la invención, que serán evidentes de la siguiente descripción, se han alcanzado por el descubrimiento de los compuestos de indazol y sus sales farmacéuticamente aceptables (dichos compuestos y sales se denominan colectivamente "agentes") descritos a continuación, que modulan y/o inhiben la actividad de proteínas quinasas. Las composiciones farmacéuticas que contienen dichos agentes son útiles en el tratamiento de enfermedades mediadas por la actividad de la quinasa, tal como el cáncer, así como otros estados morbosos asociado a angiogénesis no deseada y/o proliferación celular, tales como retinopatía diabética, glaucoma neovascular, artritis reumatoide y psoriasis. Además, los agentes poseen propiedades ventajosas relacionadas con la modulación y/o inhibición de la actividad de quinasa asociada a VEGFR, FGF-R, complejos de CDK, CHK1, LCK, TEK, FAK, y/o fosforilasa quinasa.
En un aspecto general, la invención se refiere a compuestos de la Fórmula I(a):
1
en donde:
\quad
R^{1} es un arilo o heteroarilo sustituido o no sustituido o un grupo de la fórmula CH=CH-R^{3} o CH=N-R^{3}, en donde R^{3} es un alquilo, alquenilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, arilo o heteroarilo sustituido o no sustituido; y
\quad
R^{2} es Y-Ar, en donde Y es NH y Ar es un arilo sustituido o no sustituido.
La invención se refiere también a sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos de Fórmula I(a). También se describen métodos ventajosos para la preparación de los compuestos de Fórmula I(a).
En una realización general preferida, los compuestos de la invención tienen la Fórmula III:
2
en donde:
\quad
R^{1} es un arilo o heteroarilo sustituido o no sustituido, o un grupo de la fórmula CH=CH-R^{3} o CH=N-R^{3}, en donde R^{3} es un alquilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, arilo o heteroarilo sustituido o no sustituido;
\quad
Y es NH;
\quad
R^{8} es un alquilo, alquenilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, arilo, heteroarilo, alcoxilo o ariloxilo sustituido o no sustituido;
\quad
R^{10} se selecciona independientemente de hidrógeno, halógeno y alquilo inferior;
y sus sales farmacéuticamente aceptables.
Más preferiblemente, en la Fórmula III: R^{1} es un heteroarilo bicíclico sustituido o no sustituido o un grupo de la fórmula CH=CH-R^{3}, en donde R^{3} es un arilo o heteroarilo sustituido o no sustituido; Y es NH; R^{8} es un arilo, heteroarilo, alquilo y alquenilo sustituido o no sustituido, y R^{10} es hidrógeno o halógeno.
En otra realización general preferida, los compuestos de la invención tienen la Fórmula III(a):
3
en donde:
\quad
R^{1} es un arilo o heteroarilo sustituido o no sustituido o un grupo de la fórmula CH=CH-R^{3} o CH=N-R^{3}, en donde R^{3} es un alquilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, arilo o heteroarilo sustituido o no sustituido;
\quad
Y es NH;
\quad
R^{8} es un alquilo, alquenilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, arilo, heteroarilo, alcoxilo o ariloxilo sustituido o no sustituido;
y sus sales farmacéuticamente aceptables.
\vskip1.000000\baselineskip
Más preferiblemente, en la Fórmula III(a): R^{1} es un heteroarilo bicíclico sustituido o no sustituido o un grupo de la Fórmula CH=CH-R^{3}, en donde R^{3} es un arilo o heteroarilo sustituido o no sustituido; Y es NH; y R^{8} es un arilo o heteroarilo sustituido o no sustituido.
En otra realización general preferida, los compuestos de la invención tienen la Fórmula IV:
\vskip1.000000\baselineskip
4 
\vskip1.000000\baselineskip
en donde:
\quad
R^{1} es un arilo o heteroarilo sustituido o no sustituido o un grupo de la fórmula CH=CH-R^{3} o CH=N-R^{3}, en donde R^{3} es un alquilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, arilo o heteroarilo sustituido o no sustituido;
\quad
Y es NH;
\quad
R^{9} es un alquilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, arilo, heteroarilo, alcoxilo, ariloxilo, cicloalcoxilo sustituido o no sustituido, NH-(alquilo C_{1}-C_{8}), NH-(arilo), NH-(heteroarilo), N=CH-(alquilo), NH(C=O)R^{11} o NH_{2}, en donde R^{11} se selecciona independientemente de hidrógeno, alquilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, arilo y heteroarilo sustituido o no sustituido; y
\quad
R^{10} se selecciona independientemente de hidrógeno, halógeno y alquilo inferior;
y sus sales farmacéuticamente aceptables.
\vskip1.000000\baselineskip
Más preferiblemente, en la Fórmula IV: R^{1} es un grupo de la fórmula CH=CH-R^{3}, en donde R^{3} es un arilo o heteroarilo sustituido o no sustituido; Y es NH y R^{9} es un alquilo, alcoxilo sustituido o no sustituido o NH-(heteroarilo).
\newpage
Más preferidos son los compuestos de la invención seleccionados de:
5 
\vskip1.000000\baselineskip
6
Los compuestos de la invención pueden usarse en un método para modular y/o inhibir la actividad de quinasa de VEGF-R, FGF-R, un complejo de CDK, CHK1, LCK, TEK, FAK y/o fosforilasa quinasa administrando un compuesto de la Fórmula I(a), III, III(a) o IV, o una de sus sales farmacéuticamente aceptables. Los compuestos preferidos de la presente invención que presentan actividad selectiva de quinasa, es decir, poseen actividad significativa contra una o más quinasas específicas poseyendo al mismo tiempo una actividad inferior o mínima contra una o más quinasas diferentes. En una realización preferida de la invención, los compuestos de la presente invención son los de Fórmula I(a) que poseen una actividad sustancialmente mayor contra la tirosina quinasa receptora del VEGF que contra la tirosina quinasa receptora del FGF-R1. Los compuestos de la invención pueden usarse en métodos para modular la actividad de la tirosina quinasa receptora del VEGF sin modular significativamente la actividad de la tirosina quinasa receptora del FGF.
Los compuestos de la invención pueden usarse ventajosamente en combinación con otros agentes terapéuticos conocidos. Por ejemplo, los compuestos de Fórmula I(a), III, III(a) o IV, que poseen actividad anti-angiogénica, pueden administrarse conjuntamente con agentes quimioterapéuticos citotóxicos, tales como taxol, taxotero, vinblastina, cis-platino, doxorubicina, adriamicina y similares, produciendo un efecto antitumoral mejorado. Puede obtenerse también una mejora aditiva o sinérgica del efecto terapéutico por administración conjunta de los compuestos de Fórmula I(a), III, III(a) o IV, que poseen actividad anti-angiogénica, con otros agentes anti-angiogénicos, tales como combretastatina A-4, endostatina, prinomastat, celecoxib, rofocoxib, EMD121974, IM862, anticuerpos monoclonales anti-VEGF y anticuerpos monoclonales anti-KDR.
La invención se refiere también a composiciones farmacéuticas que contienen cada una cantidad eficaz de un agente seleccionado de compuestos de Fórmula I(a) y sus sales farmacéuticamente aceptables; y un excipiente o vehículo farmacéuticamente aceptable para dicho agente. La invención proporciona además métodos para tratar el cáncer, así como otros estados morbosos asociados a la angiogénesis y/o proliferación celular no deseadas, que comprende administrar cantidades eficaces de dicho agente a un paciente que necesite dicho tratamiento.
Descripción detallada de la invención y de las realizaciones preferidas
Los compuestos de la invención de las Fórmulas I(a), III, III(a) y IV son útiles para mediar en la actividad de las proteínas quinasas. Más particularmente, los compuestos son útiles como agentes anti-angiogénesis y como agentes para modular e/o inhibir la actividad de las proteínas quinasas, proporcionando así tratamientos para el cáncer u otras enfermedades asociadas a la proliferación celular mediada por las proteínas quinasas.
El término "alquilo" como se usa en la presente memoria se refiere a grupos alquilo de cadena lineal y ramificada que tienen de uno a doce átomos de carbono. Ejemplos de grupos alquilo incluyen metilo (Me), etilo (Et), n-propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, sec-butilo, terc.butilo (t-Bu), pentilo, isopentilo, terc.pentilo, hexilo, isohexilo y similares. La expresión "alquilo inferior" designa un alquilo que tiene de 1 a 8 átomos de carbono (un alquilo C_{1-8}). Los alquilos sustituidos adecuados incluyen fluorometilo, difluorometilo, trifluorometilo, 2-fluoroetilo, 3-fluoropropilo, hidroximetilo, 2-hidroxietilo, 3-hidroxipropilo y similares.
El término "alquilideno" se refiere a un radical divalente que tiene de uno a doce átomos de carbono. Los grupos alquilideno ilustrativos incluyen CH_{2}, CHCH_{3}, (CH_{3})_{2} y similares.
El término "alquenilo" se refiere a grupos alquenilo de cadena lineal y ramificada de dos a doce átomos de carbono. Los grupos alquenilo ilustrativos incluyen prop-2-enilo, but-2-enilo, but-3-enilo, 2-metilprop-2-enilo, hex-2-enilo y similares.
El término "alquinilo" se refiere a grupos alquinilo de cadena lineal y ramificada que tienen de dos a doce átomos de carbono.
El término "cicloalquilo" se refiere a carbociclos saturados o parcialmente insaturados que tienen de tres a doce átomos de carbono, incluyendo estructuras de cicloalquilo bicíclico y tricíclico. Los cicloalquilos adecuados incluyen ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, cicloheptilo y similares.
Un grupo "heterocicloalquilo" se entiende que significa un radical monocíclico saturado o parcialmente insaturado que contiene átomos de carbono, preferiblemente 4 ó 5 átomos de carbono en el anillo, y al menos un heteroátomo seleccionado de nitrógeno, oxígeno y azufre.
Los términos "arilo" y "heteroarilo" se refieren a estructuras de anillos aromáticos monocíclicos y policíclicos, refiriéndose "arilo" a los que son carbociclos y "heteroarilo" a los que son heterociclos. Ejemplos de estructuras de anillos aromáticos incluyen fenilo, naftilo, 1,2,3,4-tetrahidronaftilo, furilo, tienilo, pirrolilo, piridinilo, pirazolilo, imidazolilo, pirazinilo, piridazinilo, 1,2,3-triazinilo, 1,2,4-oxadiazolilo, 1,3,4-oxadiazolilo, 1-H-tetrazol-5-ilo, indolilo, quinolinilo, benzofuranilo, benzotiofenilo (tianaftenilo) y similares. Dichos restos pueden estar opcionalmente sustituidos con una estructura o puente de anillos condensados, por ejemplo OCH_{2}-O.
El término "alcoxi" se entiende que significa el radical -O-alquilo. Ejemplos ilustrativos incluyen metoxi, etoxi, propoxi y similares.
El término "ariloxi" representa -O-arilo, en donde arilo es como se ha definido antes.
El término "cicloalcoxilo" representa -O-cicloalquilo, en donde cicloalquilo es como se ha definido antes.
El término "halógeno" representa cloro, flúor, bromo o yodo. El término "halo" representa cloro, fluoro, bromo o yodo.
En general, los diversos restos o grupos funcionales para las variables de las fórmulas pueden estar opcionalmente sustituidos con uno o más sustituyentes adecuados. Ejemplos de dichos sustituyentes incluyen halógeno (F, Cl, Br o I), alquilo inferior, -OH, -NO_{2}, -CN, -CO_{2}H, -O-alquilo inferior, -arilo, -aril-alquilo inferior, -CO_{2}CH_{3}, -CONH_{2}, -OCH_{2}CONH_{2}, -NH_{2}, -SO_{2}NH_{2}, haloalquilo (por ejemplo, -CF_{3}, -CH_{2}CF_{3}), -O-haloalquilo (por ejemplo, -OCF_{3},
-OCHF_{2}) y similares.
Las expresiones "que comprenden" y "que incluyen" se usan en sentido amplio no limitativo.
Ha de entenderse que cuando un compuesto de Fórmula I(a) presente el fenómeno de tautomería, la fórmula incluida en esta memoria sólo representa expresamente una de las posibles formas tautómeras. Por consiguiente ha de entenderse que en la invención las fórmulas pretenden representar cualquier forma tautómera del compuesto representado y no están limitadas únicamente a una forma tautómera específica representada por la fórmula incluida.
Algunos de los compuestos de la invención pueden existir como un único estereoisómero (es decir, esencialmente libre de otros estereoisómeros), racemato y/o mezcla de enantiómeros y/o diaestereisómeros. Se pretende que dichos estereoisómero único, racemato y sus mezclas estén abarcados por el alcance de la presente invención. Preferiblemente, los compuestos de la invención que son ópticamente activos se usan en forma ópticamente pura.
Como entenderán en general los expertos en la técnica, un compuesto ópticamente puro que tiene un centro quiral es el que consiste esencialmente en uno de los dos enantiómeros posibles (es decir, es enantiómeramente puro) y un compuesto ópticamente puro que tiene más de un centro quiral es aquel que es tanto diastereoisómeramente puro como enantiómeramente puro. Preferiblemente, los compuestos de la presente invención se usan en forma que sea ópticamente puro en al menos 90%, es decir, una forma que contenga al menos 90% de un único isómero (exceso enantiómero ("e.e.") o exceso diastereoisómero ("d.e.") del 80%), más preferiblemente al menos 95% (e.e. o d.e. del 90%), incluso más preferiblemente al menos 97,5% (e.e. o d.e. del 95%) y más preferiblemente al menos 99% (e.e. o d.e. del 98%).
Adicionalmente, se pretende que las fórmulas abarquen las formas solvatadas, así como las no solvatadas de las estructuras identificadas. Por ejemplo, la Fórmula I(a) incluye compuestos de la estructura indicada tanto en formas hidratadas como no hidratadas. Otros ejemplos de solvatos incluyen las estructuras en combinación con isopropanol, etanol, metanol, DMSO, acetato de etilo, ácido acético o etanolamina.
Además de los compuestos de las Fórmulas I(a), III, III(a) y IV, la invención incluye sales farmacéuticamente aceptables de dichos compuestos.
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"Una sal farmacéuticamente aceptable" se entiende que significa una sal que retiene la eficacia biológica de los ácidos y bases libres del compuesto especificado y no es biológica ni de cualquier otra forma indeseable. Un compuesto de la invención puede poseer grupos funcionales suficientemente ácidos, suficientemente básicos, o ambos, y reaccionar por consiguiente con cualquiera de las bases inorgánicas u orgánicas y de los ácidos inorgánicos u orgánicos, formando una sal farmacéuticamente aceptable. Los ejemplos de sales farmacéuticamente aceptables incluyen las sales preparadas por reacción de los compuestos de la presente invención con un ácido mineral u orgánico o una base inorgánica, tales como las sales que incluyen sulfatos, pirosulfatos, bisulfatos, sulfitos, bisulfitos, fosfatos, monohidrogenofosfatos, dihidrogenofosfatos, metafosfatos, pirofosfatos, cloruros, bromuros, yoduros, acetatos, propionatos, decanoatos, caprilatos, acrilatos, formiatos, isobutiratos, caproatos, heptanoatos, propiolatos, oxalatos, malonatos, succinatos, suberatos, sebacatos, fumaratos, maleatos, butino-1,4-dioatos, hexino-1,6-dioatos, benzoatos, clorobenzoatos, metilbenzoatos, dinitrobenzoatos, hidroxibenzoatos, metoxibenzoatos, ftalatos, sulfonatos, xilenosulfonatos, fenilacetatos, fenilpropionatos, fenilbutiratos, citratos, lactatos, \gamma-hidroxibutiratos, glicolatos, tartratos, metano-sulfonatos, propanosulfonatos, naftaleno-1-sulfonatos, naftaleno-2-sulfonatos y mandelatos.
Si el compuesto de la invención es un base, la sal farmacéuticamente aceptable deseada puede prepararse por cualquier método adecuado disponible en la técnica, por ejemplo, tratamiento de la base libre con un ácido inorgánico, tal como ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido sulfúrico, ácido nítrico, ácido fosfórico y similares, o con un ácido orgánico, tal como ácido acético, ácido maleico, ácido succínico, ácido mandélico, ácido fumárico, ácido malónico, ácido pirúvico, ácido oxálico, ácido glicólico, ácido salicílico, un ácido piranosidílico, tal como ácido glucurónico o ácido galacturónico, un ácido alfa-hidroxi, tal como ácido cítrico o ácido tartárico, un aminoácido, tal como ácido aspártico o ácido glutámico, un ácido aromático, tal como ácido benzoico o ácido cinámico, un ácido sulfónico, tal como ácido p-toluenosulfónico o ácido etanosulfónico o similares.
Si el compuesto de la invención es un ácido, la sal farmacéuticamente aceptable deseada puede prepararse por cualquier método adecuado, por ejemplo, por tratamiento del ácido libre con una base inorgánica u orgánica, tal como una amina (primaria, secundaria o terciaria), un hidróxido de metal alcalino o hidróxido de metal alcalino-térreo, o similares. Ejemplos ilustrativos de sales orgánicas adecuada incluyen sales orgánicas derivadas de aminoácidos, tal como glicina y arginina, amoniaco, aminas primarias, secundarias y terciarias, y aminas cíclicas, tal como piperidina, morfolina y piperazina, y sales inorgánicas derivadas de sodio, calcio, potasio, magnesio, manganeso, hierro, cobre, zinc, aluminio y litio.
En el caso de agentes que son sólidos, los expertos en la técnica entenderán que los compuestos y sales de la invención pueden existir en diferentes formas cristalinas o polimórficas, pretendiéndose que todas estén incluidas en el alcance de la presente invención y las fórmulas especificadas.
Pueden usarse cantidades terapéuticamente eficaces de la invención para tratar enfermedades mediadas por modulación o regulación de proteínas quinasas. Una "cantidad eficaz" se entiende que significa la cantidad de un agente que, cuando se administra a un mamífero que necesita dicho tratamiento, es suficiente para efectuar el tratamiento de una enfermedad mediada por la actividad de una o más proteínas quinasas, tales como tirosinas quinasas. Así, por ejemplo, una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de la Fórmula I(a), o su sal, es una cantidad suficiente para modular, regular o inhibir la actividad de una o más proteínas quinasas, tal que se reduzca o alivie un estado morboso que es mediado por dicha actividad.
La cantidad de un agente dado que corresponderá a dicha cantidad variará dependiendo de factores tales como el compuesto particular, el estado morboso y su gravedad, la identidad (por ejemplo, el peso) del mamífero que necesita dicho tratamiento, pero no obstante habitualmente puede ser determinado por el experto en la técnica. "Tratar" se entiende que significa al menos la mitigación de un estado morboso de un mamífero, tal como un ser humano, que se ve afectado, al menos en parte, por la actividad de una o más proteínas quinasas, tal como tirosinas quinasas, e incluye: evitar la aparición del estado morboso en un mamífero, particularmente cuando el mamífero está predispuesto a padecer dicho estado morboso pero al que no le ha sido diagnosticado; modular e/o inhibir el estado morboso; y/o aliviar el estado morboso.
Los agentes de la invención pueden prepararse por las vías de reacción y los esquemas de síntesis descritos a continuación, empleando los métodos disponibles en la técnica que usan materiales de partida fácilmente disponibles.
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En un proceso de síntesis general, los compuestos de Fórmula I(a) se preparan de acuerdo con el siguiente esquema de reacción:
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7
Se trata 6-nitroindazol (compuesto V) con yodo y una base, por ejemplo, NaOH, en una mezcla acuosa/orgánica, preferiblemente con dioxano. La mezcla se acidifica y el producto se aísla por filtración. Al 3-yodo-6-nitroindazol resultante en diclorometano-KOH acuoso al 50% a 0ºC se añade un reactivo con un grupo protector ("Pg") (en donde X = halo), preferiblemente cloruro de trimetilsililetoximetilo (SEM-Cl) y un catalizador para transferencia de fases, por ejemplo, bromuro de tetrabutilamonio (TBABr). Después de 1-4 horas, las dos fases se diluyen, la fase orgánica se separa, se seca con sulfato de sodio, se filtra y se concentra. El producto en bruto se purifica por cromatografía en columna de gel de sílice obteniéndose los compuestos de fórmula VI. El tratamiento de los compuestos de fórmula VI en un disolvente orgánico adecuado con un reactivo R^{1}-organometálico adecuado, preferiblemente un ácido R^{1}-borónico, en presencia de una base acuosa, por ejemplo, carbonato de sodio, y un catalizador adecuado, preferiblemente Pd(PPh_{3})_{4} da, después de tratamiento extractor y cromatografía en columna de gel de sílice, los compuestos of fórmula VII. El sustituyente R^{1} puede intercambiarse en los compuestos de fórmula VII o en los compuestos intermedios posteriores de este esquema por escisión oxidante (por ejemplo, ozonolisis) seguida por adiciones a la función aldehído resultante con transformaciones de Wittig o por condensación (ilustradas en el Ejemplo 42(a-e)). El tratamiento de los compuestos de fórmula VII con un agente reductor, preferiblemente SnCl_{2}, proporciona, después de tratamiento acuoso y purificación convencionales, los compuestos de fórmula VIII. Los compuestos de fórmula VIII pueden tratarse con cloruros, bromuros, yoduros o triflatos de arilo o heteroarilo en presencia de una base, preferiblemente Cs_{2}CO_{3}, y un catalizador, preferiblemente Pd-BINAP, obteniéndose los compuestos de fórmula X. Para producir otros enlaces Y, se añade nitrito de sodio a los compuestos de fórmula VIII en condiciones ácidas acuosas frías típicas seguido por la adición de yoduro de potasio y calentamiento suave. El tratamiento y la purificación típicos producen compuestos yoduro de fórmula IX.
El tratamiento de los compuestos de fórmula IX con un reactivo organometálico, por ejemplo, butil-litio, promueve el intercambio halógeno-litio. Este compuesto intermedio se hace reaccionar a continuación con un agente electrófilo R^{2}, por ejemplo, un carbonilo o triflato, con la posible mediación de metales y catalizadores adicionales, preferiblemente cloruro de zinc y Pd(PPh_{3})_{4} proporcionando los compuestos de Fórmula X. Alternativamente, los compuestos de fórmula IX pueden tratarse con un reactivo organometálico, tal como un ácido órgano-borónico en presencia de un catalizador, por ejemplo, Pd(PPh_{3})_{4}, bajo atmósfera de monóxido de carbono obteniéndose los compuestos de fórmula X. Alternativamente, los compuestos de fórmula IX pueden tratarse con aminas apropiadas en presencia de una base, preferiblemente Cs_{2}CO_{3} o K_{3}PO_{4} y un catalizador, preferiblemente Pd-BINAP o Pd-(bis-ciclohexil)bifenilfosfina obteniéndose los compuestos de fórmula X. Pueden emplearse intercambios convencionales de los grupos funcionales, tales como oxidaciones, reducciones, alquilaciones, acilaciones, condensaciones y desprotecciones para obtener más derivados de esta serie dando los compuestos finales de Fórmula I(a).
Los compuestos de la invención de Fórmula I(a) pueden prepararse también de acuerdo con el procedimiento general mostrado en el siguiente esquema:
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8
Se trata 6-yodoindazol (XI) con yodo y una base, por ejemplo, NaOH, en una mezcla acuosa/orgánica, preferiblemente con dioxano. La mezcla se acidifica y el producto XII se aísla por filtración. Al 3,6 di-yodoindazol resultante en diclorometano-KOH acuoso al 50% a 0ºC se añade un reactivo con un grupo protector, preferiblemente SEM-Cl, y un catalizador para transferencia de fases, por ejemplo, TBABr. Las dos fases se diluyen, la fase orgánica se separa, se seca sobre sulfato de sodio, se filtra y se concentra. El producto en bruto se purifica por cromatografía en columna de gel de sílice obteniéndose los compuestos de la fórmula XIII. El tratamiento de los compuestos de fórmula XIII en un disolvente orgánico adecuado con un reactivo R^{1}-organometálico adecuado, por ejemplo, reactivo R^{2}-ZnCl o boro R^{2}-boro y un catalizador adecuado, preferiblemente Pd(PPh_{3})_{4} proporciona, después de tratamiento de extracción y cromatografía en columna de gel de sílice, los compuestos de fórmula XIV. El tratamiento de los compuestos de fórmula XIV en un disolvente orgánico adecuado con un reactivo R^{1}-organometálico adecuado (por ejemplo, reactivo boro R^{1}-boro o R^{1}-ZnCl), en presencia de una base acuosa, carbonato de sodio, y un catalizador adecuado, preferiblemente Pd(PPh_{3})_{4} da, después de tratamiento de extracción y cromatografía en columna de gel de sílice, los compuestos de fórmula XV. Pueden emplearse intercambios convencionales de los grupos funcionales, tales como oxidaciones, reducciones, alquilaciones, acilaciones, condensaciones y desprotecciones para obtener más derivados de esta serie dando los compuestos finales de Fórmula I(a).
Otros compuestos de Fórmula I(a) pueden prepararse de manera análoga a los procedimientos generales antes descritos o los procedimientos detallados descritos en los ejemplos de la presente memoria. La afinidad de los compuestos de la invención para un receptor puede mejorarse proporcionando múltiples copias del ligando muy próximas, preferiblemente usando un entramado proporcionado por un resto de vehículo. Se ha demostrado que proporcionar dichos compuestos de valencia múltiple con un espaciamiento óptimo entre los restos mejora drásticamente la unión a un receptor. Véase, por ejemplo, Lee et al., Biochem, 23, 4255 (1984). La multivalencia y el espaciamiento pueden ser controlados por la selección de un resto de vehículo adecuado o unidades enlazadoras. Dichos restos incluyen soportes moleculares que contienen una multiplicidad de grupos funcionales que pueden hacerse reaccionar con grupos funcionales asociados con los compuestos de la invención. Naturalmente, puede usarse una variedad de vehículos, incluyendo proteínas, tal como BSA o HAS, una multiplicidad de péptidos incluyendo, por ejemplo, pentapéptidos, decapéptidos, pentadecapéptidos y similares. Los péptidos o proteínas pueden contener el número deseado de residuos aminoácidos que tienen grupos amino libres en sus cadenas laterales; sin embargo, otros grupos funcionales, tal como grupos sulfhidrilo o grupos hidroxilo, también pueden usarse para obtener enlaces estables.
Son deseables compuestos que regulen, modulen o inhiban potencialmente la actividad de proteína quinasa asociada con los receptores VEGF, FGF, complejos de CDK, TEK, CHK1, LCK, FAK y fosforilasa quinasa entre otras, y que inhiben la angiogénesis y/o proliferación celular y es una realización preferida de la presente invención. La presente invención se refiere además a métodos para modular o inhibir la actividad de proteína quinasa, por ejemplo en tejido de mamíferos, administrando un agente de la invención. La actividad de los compuestos de la invención como moduladores de la actividad de proteína quinasa, tal como la actividad de quinasa, puede medirse por cualquiera de los métodos disponibles para los expertos en la técnica, incluyendo las valoraciones in vivo y/o in vitro. Ejemplos de valoraciones adecuadas para las medidas de la actividad incluyen las descritas por Parast C. et al., en BioChemistry, 37, 16788-16801 (1998); Jeffrey et al., Nature, 376, 313-320 (1995); Publicación de solicitud de patente internacional WIPO Nº WO 97/34876; y Publicación de solicitud de patente internacional WIPO Nº WO 96/14843. Estas propiedades pueden determinarse, por ejemplo, por uno o más de los procedimientos de ensayos biológicos recogidos en los ejemplos siguientes.
Los agentes activos de la invención pueden formularse en forma de composiciones farmacéuticas como se describe a continuación. Las composiciones farmacéuticas de esta invención comprenden una cantidad eficaz moduladora, reguladora o inhibidora de un compuesto de Fórmula I(a), III, III(a) o IV y un vehículo o diluyente inerte farmacéuticamente aceptable. En una realización de las composiciones farmacéuticas, se proporcionan niveles eficaces de los agentes de la invención para obtener beneficios terapéuticos que implican la modulación de las proteínas quinasas. Por "niveles eficaces" se entiende niveles en los que están regulados, en un mínimo, los efectos de las proteínas quinasas. Estas composiciones se preparan en forma de dosis unitaria apropiada para el modo de administración, por ejemplo, administración parenteral u oral.
Un agente de la invención se administra en forma farmacéutica convencional preparada combinando una cantidad terapéuticamente eficaz de un agente (por ejemplo, un compuesto de Fórmula I(a)) como principio activo con vehículos o diluyentes farmacéuticos apropiados de acuerdo con procedimientos convencionales. Estos procedimientos pueden implicar mezclamiento, granulación y compresión o disolución de los principios según sea apropiado para la preparación deseada.
El vehículo farmacéutico empleado puede ser sólido o líquido. Ejemplos de vehículos sólidos son lactosa, sacarosa, talco, gelatina, agar-agar, pectina, goma arábiga, estearato de magnesio, ácido esteárico y similares. Ejemplos de vehículos líquidos son jarabe, aceite de cacahuete, aceite de oliva, agua y similares. Igualmente, el vehículo o diluyente puede incluir material de liberación retardada o lenta conocido en la técnica, tal como monoestearato de glicerilo o diestearato de glicerilo solo o con cera, etilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa, metacrilato de metilo y
similares.
Puede usarse una variedad de formas farmacéutica. Así, si se usa un vehículo sólido, la preparación puede ser comprimida, colocada en una cápsula de gelatina dura en forma de polvo o pelet o en forma de trocisco o pastilla para chupar. La cantidad de vehículo sólido puede variar, pero generalmente será de aproximadamente 25 mg a aproximadamente 1 g. Si se usa un vehículo líquido, la preparación estará en forma de jarabe, emulsión, cápsula de gelatina blanda, solución o suspensión inyectable estéril en una ampolla o vial o suspensión líquida no acuosa.
Para obtener una forma farmacéutica soluble en agua estable, se disuelve una sal farmacéuticamente aceptable de un agente de la invención en una solución acuosa de un ácido orgánico o inorgánico, tal como solución 0,3M de ácido succínico o ácido cítrico. Si no se dispone de una forma de sal soluble, el agente puede disolverse en un co-disolvente adecuado o combinaciones de co-disolventes. Ejemplos de co-disolventes adecuados incluyen, aunque sin estar limitados a ellos, alcohol, propilenglicol, polietilenglicol 300, polisorbato 80, glicerina y similares en concentraciones que varían entre 0-60% del volumen total. En una realización ilustrativa, se disuelve un compuesto de Fórmula I(a) en DMSO y se diluye con agua. La composición puede también estar en forma de una solución de una forma de sal del principio activo en un vehículo acuoso apropiado, tal como agua o solución salina isotónica o solución en dextrosa.
Se apreciará que las dosis reales de los agentes usados en las composiciones de esta invención variarán de acuerdo con el complejo particular que se usa, la composición particular formulada, el modo de administración y el sitio particular, hospedador y enfermedad que ha de tratarse. Las dosificaciones óptimas para un conjunto de condiciones dadas pueden ser establecidas por los expertos en la técnica usando ensayos de determinación de la dosificación convencionales a la luz de los datos experimentales para un agente. Para administración oral, una dosis diaria ilustrativa empleada en general es de aproximadamente 0,001 a aproximadamente 1000 mg/kg de peso, más preferiblemente de aproximadamente 0,001 a aproximadamente 50 mg/kg de peso, repitiendo el tratamiento a intervalos apropiados.
Las composiciones de la invención pueden fabricarse de manera generalmente conocida para preparar composiciones farmacéuticas, por ejemplo, usando técnicas convencionales, tal como mezclamiento, disolución, granulación, formación de grageas, levigación, emulsificación, encapsulación, atrapamiento o liofilización. Las composiciones farmacéuticas pueden formularse de manera convencional usando uno o más vehículos fisiológicamente aceptables, que pueden seleccionarse de excipientes y auxiliares que facilitan el tratamiento de los compuestos activos en preparaciones que pueden usarse farmacéuticamente.
La formulación apropiada depende de la vía de administración elegida. Para preparaciones inyectables, los agentes de la invención pueden formularse en soluciones acuosas, preferiblemente en tampones fisiológicamente compatibles, tales como solución de Hanks, solución de Ringer o tampón salino fisiológico. Para administración transmucosal, se emplean en la formulación agentes penetrantes apropiados a la barrera que han de atravesar. Dichos agentes penetrantes generalmente son conocidos en la técnica.
Para administración oral, los compuestos pueden formularse fácilmente combinando los compuestos activos con vehículos farmacéuticamente aceptables conocidos en la técnica. Dichos vehículos facilitan que los compuestos de la invención sean formulados en forma de comprimidos, píldoras, grageas, cápsulas, líquidos, geles, jarabes, papillas, suspensiones y similares, para digestión oral por un paciente que ha de ser tratado. Las preparaciones farmacéuticas para uso oral pueden obtenerse usando un excipiente sólido mezclado con el principio activo (agente), triturando opcionalmente la mezcla resultante y tratando la mezcla de gránulos después de añadir los agentes auxiliares adecuados, si se desea, para obtener comprimidos o núcleos de grageas. Los excipientes adecuados incluyen: cargas, tal como azúcares, incluyendo lactosa, sacarosa, manitol o sorbitol; y preparaciones de celulosa, por ejemplo, almidón de maíz, almidón de trigo, almidón de arroz, almidón de patata, gelatina, goma, metilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa, carboximetilcelulosa sódica o polivinilpirrolidona (PVP). Si se desea, pueden añadirse agentes disgregantes, tal como polivinilpirrolidona reticulada, agar-agar o ácido algínico o una de sus sales, tal como alginato de sodio.
Los núcleos de grageas se proporcionan con recubrimientos adecuados. Para este fin, pueden usarse soluciones de azúcar concentradas, que pueden contener opcionalmente goma arábiga, polivinilpirrolidona, gel Carbopol, polietilenglicol y/o dióxido de titanio, soluciones de lacas y disolventes orgánicos adecuados o mezclas de dichos disolventes. Pueden añadirse colorantes o pigmentos a los recubrimientos de comprimidos o grageas para su identificación o para caracterizar las diferentes combinaciones de los agentes activos.
Las preparaciones farmacéuticas que pueden usarse por vía oral incluyen cápsulas de ajuste suave hechas de gelatina, así como cápsulas selladas blandas hechas de gelatina y un plastificante, tal como glicerol o sorbitol. Las cápsulas de ajuste suave pueden contener los principios activos mezclados con cargas, tal como lactosa, aglutinantes, tales como almidones, y/o lubricantes, tal como talco o estearato de magnesio y, opcionalmente, estabilizantes. En las cápsulas blandas, los agentes activos pueden disolverse o ponerse en suspensión en líquidos adecuados, tales como aceites grasos, parafina líquida o polietilenglicoles líquidos. Además, pueden añadirse estabilizantes. Todas las formulaciones para administración por vía oral deben estar en dosificaciones adecuadas para dicha administración. Para administración bucal, las composiciones pueden tomar la forma de comprimidos o pastillas para chupar formuladas de manera convencional.
Para administración intranasal o por inhalación, los compuestos para uso de acuerdo con la presente invención se suministran convenientemente en forma de una presentación para pulverización por aerosol a partir de envases presurizados o un nebulizador, usando un gas propulsor adecuado, por ejemplo, diclorodifluorometano, triclorofluorometano, diclorotetrafluoroetano, dióxido de carbono u otro gas adecuado. En el caso de un aerosol presurizado la unidad de dosificación puede ser determinada proporcionando una válvula para suministrar una cantidad dosificada. Las cápsulas y cartuchos de gelatina para uso en un inhalador o insuflador y similares pueden formularse de modo que contengan una mezcla en polvo del compuesto y una base en polvo adecuada, tal como lactosa o almidón.
Los compuestos pueden formularse para administración parenteral por inyección, por ejemplo, por inyección de un bolo o infusión continua. Las formulaciones para preparaciones inyectables pueden presentare en forma de dosificación unitaria, por ejemplo, en ampollas o en envases multidosis, con adición de un conservante. Las composiciones pueden tomar formas tales como suspensiones, soluciones o emulsiones en vehículos oleosos o acuosos, y pueden contener agentes de formulación, tales como agentes de puesta en suspensión, estabilizadores y/o dispersantes.
Las formulaciones farmacéuticas para administración parenteral incluyen soluciones acuosas de los compuestos activos en forma soluble en agua. Adicionalmente, las suspensiones de los agentes activos pueden prepararse como suspensiones inyectables oleosas apropiadas. Los disolventes o vehículos lipófilos adecuados incluyen aceites grasos, tal como aceite de sésamo, o ésteres de ácidos grasos sintéticos, tal como oleato de etilo o triglicéridos o liposomas. Las suspensiones inyectables acuosas pueden contener sustancias que aumentan la viscosidad de la suspensión, tal como carboximetilcelulosa sódica, sorbitol o dextrano. Opcionalmente, la suspensión puede contener también estabilizadores o agentes adecuados que aumenten la solubilidad de los compuestos para obtener de la preparación soluciones muy concentradas.
Para administración oftálmica, un compuesto de la Fórmula I(a), III, III(a) o IV se suministra en un vehículo oftálmico farmacéuticamente aceptable, de tal forma que el compuesto se mantenga en contacto con la superficie ocular durante un período de tiempo suficiente para permitir que el compuesto penetre en las regiones corneal e interna del ojo, incluyendo, por ejemplo, la cámara anterior, la cámara posterior, cuerpo vítreo, humor acuoso, humor vítreo, córnea, iris/cuerpo ciliar, cristalino, coroides/retina y esclerótica. El vehículo oftálmico farmacéuticamente aceptable puede ser pomada, aceite vegetal o un material encapsulante. Un compuesto de la invención puede inyectarse también directamente en el humor vítreo y acuoso.
Alternativamente, el principio activo puede estar en forma de polvo para su reconstitución con un vehículo adecuado, por ejemplo, agua estéril exenta de pirógenos, antes de su uso. Los compuestos pueden formularse también en composiciones rectales, tales como supositorios o enemas de retención, por ejemplo, que contengan bases de supositorio convencionales, tal como manteca de cacao u otros glicéridos.
Además de las formulaciones antes descritas, los compuestos pueden formularse también como una preparación de liberación lenta. Dichas formulaciones que actúan a largo plazo pueden administrarse por implantación (por ejemplo, subcutánea o intramuscular) o por inyección intramuscular. Así, por ejemplo, los compuestos pueden formularse con materiales polímeros o hidrófobos adecuados (por ejemplo, como una emulsión en un aceite aceptable) o resinas de intercambio iónico, o como derivados escasamente solubles, por ejemplo, como un sal escasamente soluble.
Un vehículo farmacéutico para compuestos hidrófobos es un sistema co-disolvente que comprende alcohol bencílico, un tensioactivo no polar, un polímero orgánico miscible en agua y una fase acuosa. El sistema co-disolvente puede ser un sistema co-disolvente VPD. VPD es una solución de alcohol bencílico al 3% p/v, 8% p/v del tensioactivo no polar polisorbato 80 al y polietilenglicol 300 al 65% p/v, completado hasta su volumen con etanol absoluto. El sistema co-disolvente VPD (VPD:5W) contiene VPD diluido 1:1 con una solución de dextrosa al 5% en agua. Este sistema co-disolvente disuelve bien los compuestos hidrófobos, y él mismo produce baja toxicidad por administración sistémica. Naturalmente, las proporciones de un sistema co-disolvente pueden variar considerablemente sin destruir sus características de solubilidad y toxicidad. Además, puede variar la identidad de los componentes co-disolventes: por ejemplo, pueden usarse otros tensioactivos no polares de baja toxicidad en lugar de polisorbato 80; puede variar el tamaño de fracción del polietilenglicol; otros polímeros biocompatibles pueden sustituir al polietilenglicol, por ejemplo, polivinilpirrolidona; y otros azúcares o polisacáridos pueden sustituir a la dextrosa.
Alternativamente, pueden emplearse otros sistemas de suministro para los compuestos farmacéuticos hidrófobos. Los liposomas y las emulsiones son ejemplos conocidos de vehículos o excipientes de suministro para fármacos hidrófobos. También pueden emplearse ciertos disolventes orgánicos, tal como dimetilsulfóxido, aunque generalmente a costa de mayor toxicidad. Adicionalmente, los compuestos pueden suministrarse usando un sistema de liberación prolongada, tal como matrices semipermeable de polímeros hidrófobos sólidos que contienen el agente terapéutico. Se han establecidos diversos materiales de liberación prolongada que son conocidos por los expertos en la técnica. Las cápsulas de liberación prolongada pueden liberar, dependiendo de su naturaleza química, los compuestos durante algunas semanas hasta más de 100 días. Dependiendo de la naturaleza química y la estabilidad biológica del reactivo terapéutico, pueden aplicarse otras estrategias para la estabilización de las proteínas.
Las composiciones farmacéuticas pueden contener también vehículos o excipientes en fase sólida o de gel. Ejemplos de dichos vehículos o excipientes incluyen carbonato de calcio, fosfato de calcio, azúcares, almidones, derivados de celulosa, gelatina y polímeros, tal como polietilenglicoles.
Algunos de los compuestos de la invención pueden ser proporcionados como sales con contraiones farmacéuticamente compatibles. Las sales farmacéuticamente compatibles pueden formarse con muchos ácidos, que incluyen ácido clorhídrico, sulfúrico, acético, láctico, tartárico, málico, succínico, etc. Las sales tienden a ser más solubles en disolventes acuosos u otros disolventes protónicos que las formas en base libre correspondientes.
La preparación de los compuestos preferidos de la presente invención se describe con detalle en los siguientes ejemplos, pero el técnico reconocerá que las reacciones químicas descritas pueden ser adaptadas fácilmente para preparar otros inhibidores de las proteínas quinasas de la invención. Por ejemplo, la síntesis de compuestos no ilustrados de acuerdo con la invención puede realizarse con éxito por modificaciones evidentes para los expertos en la técnica, por ejemplo, protegiendo apropiadamente los grupos que interfieren, cambiando por otros reactivos conocidos en la técnica o realizando modificaciones habituales de las condiciones de reacción. Alternativamente, se reconocerá que otras reacciones descritas en la presente invención o conocidas en la técnica pueden aplicarse para preparar otros compuestos de la invención.
Ejemplos
En los ejemplos descritos a continuación, salvo indicación contraria, todas las temperaturas están en grados Celsius y todas las partes y porcentajes en peso. Los reactivos fueron adquiridos a firmas comerciales, tal como Aldrich Chemical Company o Lancaster Synthesis Ltd. y se utilizaron sin más purificación salvo indicación contraria. Tetrahidrofurano (THF), N,N-dimetilformamida (DMF), diclorometano, tolueno y dioxano fueron adquiridos a Aldrich en frascos sellados seguros y usados, tal como se recibían. Todos los disolventes se purificaron usando métodos habituales fácilmente conocidos por los expertos en la técnica, salvo indicación contraria.
Las reacciones indicadas a continuación se realizaron generalmente bajo presión positiva de argón o nitrógeno o con un tubo secador, a temperatura ambiente (salvo indicación contraria), en disolventes anhidros, y los matraces de reacción estaban provistos de tabiques de caucho para la introducción de sustratos y reactivos por medio de una jeringa. Los aparatos de vidrio se secaron en estufa y/o al calor. La cromatografía en capa fina (abreviadamente en los sucesivo TLC, del inglés Thin Layer Chromatography) analítica se realizó en placas 60 F 254 de gel de sílice revestidas de vidrio Analtech (0,25 mm) y la elución se realizó con las relaciones de disolventes apropiadas (v/v) que se citan cuando sea apropiado. Las reacciones se valoraron por TLC y se terminaron cuando se creyó conveniente por consumo del material de partida.
La visualización de las placas de TLC se realizó con un reactivo para pulverización de p-anisaldehído o un reactivo de ácido fosfomolíbdico (Aldrich Chemical, al 20% en peso en etanol) y se activó con calor. Los tratamientos se realizaron típicamente doblando el volumen de reacción con el disolvente de reacción o el disolvente de extracción y lavando luego con las soluciones acuosas indicadas usando 25% en volumen del volumen de extracción salvo indicación contraria. Las soluciones del producto se secaron sobre Na_{2}SO_{4} anhidro antes de la filtración y evaporación de los disolventes bajo presión reducida en un evaporador giratorio y se denominan disolventes separados a vacío. La cromatografía en columna de desarrollo rápido (Still et al., J. Org. Chem., 43, 2923 (1978)) se realizó usando gel de sílice tipo Baker (47-61 \mum) y una relación gel de sílice:material en bruto de aproximadamente 20:1 a 50:1 salvo indicación contraria. La hidrogenolisis se realizó a la presión indicada en los ejemplos o a presión ambiente.
Los espectros de ^{1}H-RMN (resonancia magnética nuclear protónica) se registraron con un instrumento Bruker que trabajaba a 300 MHz y los espectros de ^{13}C-RMN se registraron trabajando a 75 MHz. Los espectros de RMN se obtuvieron como soluciones en CDCl_{3} (expresados en ppm), usando cloroformo como patrón de referencia (7,25 ppm y 77,00 ppm) o CD_{3}OD (3,4 y 4,8 ppm y 49,3 ppm) o internamente tetrametilsilano (0,00 ppm) cuando sea apropiado. Cuando fue necesario se usaron otros disolventes para RMN. Cuando se registran multiplicidad de picos, se usan las siguientes abreviaturas: s (singulete), d (doblete), t (triplete), m (multiplete), br (ancho), dd (doblete de dobletes), dt (doblete de tripletes). Las constantes de acoplamiento, cuando se dan, se expresan en hertcios (Hz).
Los espectros de infrarrojos (IR) se registraron en un espectrómetro Perkin-Elmer de infrarrojos con transformada de Fourier (abreviadamente FTIR, del inglés Fourier Transform Infrared) como aceites netos, como pelets de KBr o como soluciones en CDCl_{3}, y cuando se dan se expresan en número de ondas (cm^{-1}). Los espectros de masa (abreviadamente MS, del inglés Mass Sprectrum) se obtuvieron usando Espectros de masas de ion secundario líquido (abreviadamente LSIMS, del inglés Liquid Secondary Ion Mass Spectrum) o con ionización por electropulverización (abreviadamente ESI, del inglés ElectroSpray Ionization). Los puntos de fusión (p.f.) no están corregidos.
Ejemplo de referencia 1(a)
3-[E-2-(3,4-dimetoxi-fenil)vinil]-6-(3-metoxi-4-hidroxifenil)-1H-indazol
9
El 3-[E/Z-2-(3,4-dimetoxi-fenil)vinil]-6-[3-metoxi-4-(metoximetoxi)fenil]-1H-indazol (\sim205 mg, 0,461 mmol
(teórico)) se disolvió en tetrahidrofurano (THF, 10 mL) y se trató con agua (10 mL) y ácido trifluoroacético (TFA, 20 mL). La mezcla de reacción se dejó en agitación a 23ºC durante 30 minutos (min). La mezcla se diluyó con tolueno (100 mL) y los materiales volátiles se separaron bajo presión reducida (30 mm de Hg, 35ºC) obteniéndose un volumen concentrado de \sim5 mL. De nuevo, se añadió tolueno (100 mL) y la mezcla se concentró bajo presión reducida obteniéndose el material en bruto que todavía contenía algo de ácido. El material se repartió entre acetato de etilo y hidrogenocarbonato de sodio saturado, se separó el material orgánico, se secó sobre sulfato de sodio, se decantó y se concentró bajo presión reducida. El residuo, una mezcla de isómeros de olefina, (\sim185 mg, 0,461 mmol (teórico)) se extrajo con diclorometano (50 mL) a 23ºC y se trató con yodo (80 mg). La mezcla se dejó en agitación a 23ºC durante 12 horas (h). La mezcla se trató con hidrogenocarbonato de sodio saturado (10 mL) y bisulfito de sodio acuoso al 5% (10 mL). La mezcla se diluyó con acetato de etilo (200 mL) y el material orgánico se lavó con hidrogenocarbonato de sodio saturado (100 mL), se secó sobre sulfato de sodio, se decantó y se concentró bajo presión reducida obteniéndose el producto en bruto. Dicho producto en bruto se purificó sobre sílice (40 mL, acetato de etilo/hexano 6:4 ->7:3) y todas las fracciones deseadas se reunieron, se concentraron y se precipitaron en una bicapa de diclorometano/hexano (1:3) obteniéndose 3-[E-2-(3,4-dimetoxi-fenil)vinil]-6-(3-metoxi-4-hidroxi-fenil)-1H-indazol en forma de un sólido blanco (las cosechas reunidas fueron 93 mg): Rf sm = 0,42, p = 0,35 (acetato de etilo-hexano 7:3); FTIR (película fina) 3324,1600, 1514, 1463, 1422, 1264, 1137, 1024, 959, 852 cm^{-1}; ^{1}HRMN (CDCl_{3}) \delta: 10,0 (s ancho, 1H), 8,08 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 7,59 (s, 1H), 7,49 (d, 1H, J = 16,6 Hz), 7,45 (dd, 1H, J = 1,4, 8,4 Hz), 7,34 (d, 1H, J = 16,6 Hz), 7,20-7,12 (m, 4H), 7,03 (d, 1H, J = 8,0 Hz), 6,91 (d, 1H, J = 8,2 Hz), 5,68 (s ancho, 1H), 3,99 (s, 3H), 3,97 (s, 3H), 3,93 (s, 3H); ^{13}CRMN (CDCl_{3}) \delta: 149,6, 149,5, 146,0, 144,0, 142,6, 140,8, 133,9, 131,4, 130,7, 121,7, 121,4, 120,9, 120,4, 120,2, 118,6, 115,4, 111,7, 110,8, 109,1, 108,2, 56,4, 56,3, 56,2. Espectro de masas de alta resolución (abreviadamente HRMS, del inglés High Resolution Mass Spectrum) (ES) [M+H]/z Calculado 403,1658, encontrado 403,1658. [M-H]/z Calculado 401, encontrado 401.
El material de partida se preparó como sigue:
10
A 6-aminoindazol (40,8 g, 0,3065 mol, 1 equivalente) en un matraz de fondo redondo de 2 litros (2 L) que contenía una barra de agitación magnética se añadió hielo (256 g), seguido de agua (128 mL) y el recipiente de reacción se introdujo en un baño de hielo. A esta suspensión agitada a 0ºC se añadió HCl acuoso concentrado (128 mL, 1,53 moles, 5 equivalentes). Inmediatamente después, se añadió una solución de NaNO_{2} (23,3 g, 0,338 moles, 1,1 equivalentes) en agua (96 mL). Después de 10 min de agitación a 0ºC, se añadió KI (61 g, 0,368 moles, 1,2 equivalentes) muy lentamente al principio (\sim100 mg de una vez debido a que los primeros trozos pequeños de KI provocan un brusco desprendimiento de gas) y luego más rápidamente (tiempo total 5 min). Se separó el baño frío y la mezcla de reacción se calentó hasta 40ºC (desprendimiento de gas). Cuando disminuyó la velocidad de desprendimiento de gas (\sim30 min) la mezcla de reacción se calentó hasta 50ºC durante 30 min. A continuación se enfrió la mezcla hasta 23ºC y se añadió NaOH 3N (320 mL) para su neutralización seguido por NaHCO_{3} saturado al 50% (320 mL). A continuación se filtró la suspensión por un embudo Buchner obteniéndose un sólido pardo-rojizo oscuro. Se recogió el sólido en THF templado (800 mL) y se añadió sílice (600 mL seca) con agitación. A esta suspensión se añadió hexano (1,2 L) y la mezcla se filtró a vacío por una almohadilla de sílice (300 mL) en un filtro sinterizado ancho. La sílice se lavó además con 2 L de THF al 40% en hexano. Los filtrados se reunieron y se concentraron bajo presión reducida obteniéndose un sólido. El sólido se trituró con acetato de etilo (\sim100 mL), se filtró y se secó bajo presión reducida obteniéndose 6-yodo-1H-indazol en forma de un sólido pardo claro (36,1 g, rendimiento 48%): R_{f} sm = 0,12, p = 0,48 (Hex-EtOAc 1:1); ^{1}HRMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta: 7,9 (s, 1H), 7,8 (s, 1H), 7,42 (d, 1H), 7,33 (d, 1H); MS (ES) [M+H]/z Calculado 245, encontrado 245, [M-H]/z Calculado 243, encontrado 243.
11
A una solución de 6-yodo-1H-indazol (7,35 g, 30,1 mmol, 1 equivalente) en THF (100 mL) enfriada hasta 0ºC bajo argón, se añadió t-butóxido de sodio (2,89 g, 30,1 mmol, 1 equivalente). Se observó un cambio de color del anaranjado al rojo. Se añadió en una porción cloruro de mesitilenosulfonilo (6,60 g, 30,1 mmol, 1 equivalente) y se retiró el baño de hielo dejando que se calentara la mezcla de reacción hasta 23ºC. Después de 40 min la reacción se detuvo bruscamente añadiendo a la mezcla cloruro de amonio saturado y se repartió entre agua y acetato de etilo. La fase acuosa se extrajo un total de 3 veces con acetato de etilo. El material orgánico reunido se lavó con salmuera, se secó sobre sulfato de sodio y se concentró bajo presión reducida obteniéndose 6-yodo-1-(2,4,6-trimetil-bencenosulfonil)-1H-indazol en forma de un sólido anaranjado (12,8 g, rendimiento 100%, mezcla 2:1). ^{1}HRMN (CDCl_{3}) \delta: 8,51 (s, 1H), 7,95 (s, 0,66H, isómero mayoritario), 7,91 (s, 0,33H, isómero minoritario), 7,47 (d, 0,33H, J = 8,4 Hz), 7,29 (d, 0,33H, J = 8,4 Hz), 7,26 (d, 0,66H, J = 8,9 Hz), 7,18 (d, 0,66H, 8,9 Hz), 6,84 (s, 2H), 2,51 (s, 6H), 2,15 (s, 3H).
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Una mezcla de 6-yodo-1-(2,4,6-trimetil-bencenosulfonil)-1H-indazol (5,78 g, 13,56 mmol, 1,00 equivalente) y ácido 3-metoxi-4-(metoximetoxi)benceno-borónico (3,45 g, 16,27 mmol, 1,20 equivalentes) bajo argón se disolvió en dioxano (15 mL) y agua (2,0 mL). A esta solución se añadió trietilamina (2,83 mL, 20,3 mmol, 1,5 equivalentes), carbonato de potasio (2,8 g, 20,3 mmol, 1,5 equivalentes) y diclorobis(trifenilfosfina)paladio (476 mg, 0,678 mmol, 0,05 equivalentes). La mezcla de reacción se calentó hasta 90ºC durante 2 h y a continuación se enfrió hasta 23ºC. La mezcla se repartió entre acetato de etilo (250 mL) y hidrogenocarbonato de sodio saturado (150 mL). El material orgánico se secó sobre sulfato de sodio, se decantó y se concentró bajo presión reducida obteniéndose 6-(3-metoxi-4-metoximetoxi-fenil)-1-(2,4,6-trimetil-bencenosulfonil)-1H-indazol en bruto que se secó bajo alto vacío durante 15 h y se usó sin más purificación.
Se preparó ácido 3-metoxi-4-(metoximetoxi)bencenoborónico como sigue: en un matraz de 100 mL se preparó bajo argón una mezcla de KOH al 50% en agua (20 g de KOH, 7 equivalentes, 20 g de hielo). A esta mezcla rápidamente agitada a 0ºC (mantenida en un baño de hielo) se añadió diclorometano (50 mL) seguido por 4-bromo-2-metoxifenol (10,1 g, 50 mmol, 1,00 equivalente), cloruro de metoximetilo (MOMCl) (4,00 mL, 42,5 mmol, 1,05 equivalentes) y bromuro de tetrabutilamonio (322 mg, 1 mmol, 0,02 equivalentes). Se retiró el baño y la mezcla se dejó calentar lentamente hasta 23ºC con agitación rápida durante 2 h. La mezcla se transfirió a un embudo separador y se diluyó con diclorometano (350 mL) y agua (300 mL) que se usó para mejorar la transferencia. El material orgánico (ahora la capa de fondo) se separó, se secó sobre sulfato de sodio, se decantó y se concentró bajo presión reducida obteniéndose 4-bromo-2-metoxi-1-(metoximetoxi)benceno en forma de un líquido amarillo, que se comprobó que era puro por ^{1}HRMN (11,9 g, 97%): ^{1}HRMN (CDCl_{3}) \delta: 7,0 (s, 3H), 5,13 (s, 2H), 3,84 (s, 3H), 3,47 (s, 3H). MS (EI, del inglés Electron Ionization) [M+H]/z Calculado 235, encontrado 235. En un matraz de fondo redondo de 50 mL, se recogió 4-bromo-2-metoxi-1-(metoximetoxi)benceno (4,80 g, 19,4 mmol, 1,00 equivalente) con THF (35 mL) y se enfrió hasta -78ºC (20 min para este volumen). A esto se añadió n-BuLi (12,75 mL, 1,6M en hexano, 20,4 mmol, 1,05 equivalentes) y la mezcla se dejó en agitación a -78ºC durante 40 min. Se añadió por medio de una cánula a un segundo matraz que contenía B(OMe)_{3} (22 mL, 194 mmol, 10 equivalentes) en THF (50 mL) a -78ºC. Después de 20 min, se retiró el baño frío. Después de 15 min de calentamiento (\sim0ºC, el hielo en contacto con el matraz empieza a fundir) se añadió agua (50 mL) a la mezcla de reacción que se agitó durante 45 min. La mezcla se concentró bajo presión reducida eliminando la mayor parte de THF y a continuación se repartió entre acetato de etilo (300 mL) y agua (150 mL) que se volvió ácida por adición de una pequeña cantidad de ácido cítrico al 20% (\sim10 mL). El material orgánico se secó sobre sulfato de sodio y se concentró bajo presión reducida obteniéndose un sólido. La trituración con acetato de etilo (10 mL) y hexano (5 mL) seguido por filtración dio ácido 3-metoxi-4-(metoximetoxi)benceno-borónico en forma de un sólido blanco (3,15 g, 77%): R_{f} sm = 0,59, p = 0,18 (acetato de etilo-hexano 1:1); ^{1}HRMN (CDCl_{3}) \delta: 7,85 (d, 1H, J = 8 Hz), 7,72 (s, 1H), 7,22 (d, 1H, J = 8 Hz), 5,30 (s, 2H), 4,00 (s, 3H), 3,55 (s, 3H).
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6-(3-Metoxi-4-metoximetoxi-fenil)-1-(2,4,6-trimetil-bencenosulfonil)-1H-indazol sin purificar (bajo argón) se disolvió en THF (20 mL) y se trató con NaOH 1N en MeOH (70 mL desgasificado burbujeando argón a su través durante 3 a 5 min). La mezcla se calentó hasta 45ºC durante 1 h y se dejó enfriar. La mezcla se neutralizó por adición de HCl 1N (50 mL) seguido de hidrogenocarbonato de sodio saturado (200 mL). El producto se extrajo con acetato de etilo (350 mL), se secó sobre sulfato de sodio y se concentró bajo presión reducida obteniéndose 6-(3-metoxi-4-metoximetoxi-fenil)-1H-indazol en bruto. La purificación por cromatografía en columna de gel de sílice (500 mL de sílice, acetato de etilo al 20% en benceno (1,8 L), acetato de etilo al 30% en benceno (1,8 L)) dio 6-(3-metoxi-4-metoximetoxifenil)-1H-indazol (1,19 g, 31%): ^{1}HRMN (CDCl_{3}) \delta: 7,80 (s, 1H), 7,69 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 7,52 (s, 1H), 7,29 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 7,16 (s, 1H), 7,13 (s, 1H), 7,08 (s, 1H). MS (ES) [M+Na]/z Calculado 337, encontrado 337; [M+Cl^{-}]/z Calculado 349, encontrado 349.
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En un matraz de fondo redondo de 100 mL bajo argón, se disolvió 6-(3-metoxi-4-metoximetoxi-fenil)-1H-indazol (1,19 g, 4,18 mmol, 1 equivalente) en dioxano (25 mL) y NaOH 3N (14 mL). Esta mezcla se trató con yodo (1,17 g, 14,60 mmol, 1,10 equivalente) añadido en \sim5 porciones (\sim10 min). Se añadieron varias porciones más (\sim4) de yodo (50 mg cada una) hasta que la reacción se completó visualizándose por TLC (acetato de etilo/hexano 3:7). La mezcla se acidificó con ácido cítrico al 20% (25 mL) y se añadió NaHSO_{3} al 5% (20 mL). La mezcla se repartió entre acetato de etilo (150 mL) y agua (100 mL). El material orgánico se lavó con hidrogenocarbonato de sodio saturado (80 mL) y salmuera (50 mL) y se secó sobre sulfato de sodio y se concentró bajo presión reducida. La purificación por cristalización en acetato de etilo (3 mL) y luego en hexano (7 mL) dio 3-yodo-6-(3-metoxi-4-metoximetoxifenil)-1H-indazol puro en forma de un sólido (1,33 g, 78%): ^{1}H RMN (CDCl_{3}) \delta: 10,48 (s ancho, 1H), 7,62 (s, 1H), 7,57 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 7,47 (dd, 1H, J = 1,3, 8,5 Hz), 7,18 (m, 3H), 5,29 (s, 2H), 3,99 (s, 3H), 3,55 (s, 3H).
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En un matraz de fondo redondo de 100 mL, se disolvió 3-yodo-6-(3-metoxi-4-metoximetoxifenil)-1H-indazol (921 mg, 2,245 mmol, 1,00 equivalente) en THF (36 mL) y se enfrió hasta -78ºC (dejándolo 8 min a esta temperatura). Se añadió una solución de PhLi (2,5 mL, 1,8 M, 4,49 mmol, 2,00 equivalentes) y la mezcla se dejó en agitación 30 min. Se añadió una solución of s-BuLi (3,63 mL, 4,71 mmol, 2,1 equivalentes) y la mezcla de reacción se dejó en agitación durante 1 h a -78ºC. Se añadió DMF puro (1,4 mL, 18 mmol, 8,0 equivalentes). Se retiró el baño frío y la mezcla de reacción se dejó calentar lentamente hasta 0ºC al aire. A medida que fundía el hielo se añadía hidrogenocarbonato de sodio saturado (20 mL). El producto se extrajo con acetato de etilo (200 mL) del hidrogenocarbonato de sodio saturado (75 mL más), se secó sobre sulfato de sodio, se decantó y se concentró bajo presión reducida. La purificación por cromatografía en columna de gel de sílice (450 mL de sílice, acetato de etilo/hexano 4:6) dio 6-(3-metoxi-4-metoximetoxi-fenil)-1H-indazol-3-carbaldehído (498 mg, 71%)): R_{f} sm = 0,30, p = 0,14 (acetato de etilo-hexano 4:6); ^{1}HRMN (CDCl_{3}) \delta: 10,85 (s ancho, 1H), 10,25 (s, 1H), 8,37 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 7,67 (s, 1H), 7,60 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 6,26 (d, 1H, J = 8,7 Hz), 7,19 (m, 2H), 5,30 (s, 2H), 3,99 (s, 3H), 3,55 (s, 3H).
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Se recogió 6-(3-metoxi-4-metoximetoxi-fenil)-1H-indazol-3-carbaldehído (441 mg, 1,41 mmol, 1,0 equivalente) en forma de suspensión en diclorometano (15 mL) y se enfrió hasta 0ºC. Esta mezcla se trató con cloruro de mesitilensulfonilo (324 mg, 1,48 mmol, 1,05 equivalentes) y dimetilaminopiridina (DMAP) (181 mg, 1,48 mmol, 1,05 equivalentes). La mezcla se dejó en agitación durante 1 h a 0ºC y la reacción se detuvo bruscamente con adición de agua. La mezcla se repartió entre agua y una capa orgánica de acetato de etilo/hexano 1:1. El material orgánico se secó sobre sulfato de sodio, se decantó y se concentró bajo presión reducida obteniéndose material en bruto que se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (50 mL de sílice, acetato de etilo/hexano 3:7) obteniéndose 6-(3-metoxi-4-metoximetoxi-fenil)-1-(2,4,6-trimetilbencenosulfonil)-1H-indazol-3-carbaldehído (374 mg, 54%): R_{f} sm = 0,17, p = 0,53 (acetato de etilo-hexano 4:6); ^{1}HRMN (CDCl_{3}) \delta: 10,20 (s, 1H), 8,41 (s, 1H), 8,37 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 7,73 (dd, 1H, J = 1,4, 8,4 Hz), 7,3 (m, 3H), 7,08 (s, 2H), 5,36 (s, 2H), 4,08 (s, 3H), 3,71 (s, 3H), 2,74 (s, 6H), 2,40 (s, 3H).
17
Se recogió bromuro de trifenil(3,4-dimetoxibencil)fosfonio (1,09 g, 2,22 mmol, 4,0 equivalentes) finamente triturado en forma de una suspensión en THF (15 mL) y se enfrió hasta -78ºC. A esta mezcla se añadió n-BuLi (1,04 mL, 1,6 M, 1,66 mmol, 3,0 equivalentes) que dio una solución rojo/anaranjada. La mezcla se dejó calentar hasta 23ºC durante 1 h. Esta mezcla se añadió a continuación a una solución a 0ºC de 6-(3-metoxi-4-metoximetoxi-fenil)-1-(2,4,6-trimetil-bencenosulfonil)-1H-indazol-3-carbaldehído (274 mg, 0,554 mmol, 1,0 equivalente) en THF (5 mL) por medio de una cánula. La mezcla resultante se dejó en agitación a 0ºC durante 10 min y la reacción se detuvo bruscamente añadiendo a la mezcla hidrogenocarbonato de sodio saturado. La mezcla resultante se repartió entre hidrogenocarbonato de sodio saturado y acetato de etilo. El material orgánico se concentró bajo presión reducida y el residuo de purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (50 mL de sílice, acetato de etilo/hexano 3:7 -> 4:6) obteniéndose una mezcla 2,5:1 de cis/trans 3-[2-(3,4-dimetoxi-fenil)-vinil]-6-(3-metoxi-4-metoximetoxifenil)-1-(2,4,6-trimetil-bencenosulfonil)-1H-indazol (289 mg, 83%): R_{f} sm = 0,53, p = 0,32 (acetato de etilo-hexano 4:6); ^{1}HRMN (CDCl_{3}) \delta: 8,35 (s, 0,3H), 8,32 (s, 0,7H), 8,03 (d, 0,3H, J = 8,4 Hz), 7,60-6,85 (m, H), 6,65 (d, 0,7H, J = 8,4 Hz), 6,60 (d, 0,7H, J = 12,5 Hz), 5,30 (s, 0,6H), 5,29 (s, 1,4H), 4,00-3,50 (8 singuletes, 12H), 2,72 (s, 1,8H), 2,67 (s, 4,2H), 2,34 (s, 3H); MS (ES) [M+H]/z Calculado 629, encontrado 629, [M-H]/z Calculado 627, encontrado 627.
18
Se preparó bajo argón una solución 1M de KOH (1,0 g, 17,8 mmol) en agua/MeOH 1:1 (18 mL total) y se desgasificó por ciclos de vacío/purga con argón (5 veces). En un matraz separado, se disolvió 3-[2-(3,4-dimetoxi-fenil)-vinil]-6-(3-metoxi-4-metoximetoxi-fenil)-1-(2,4,6-trimetil-bencenosulfonil)-1H-indazol (289 mg, 0,461 mmol, 1,0 equivalente) en THF (8 mL) bajo argón. A esta solución se añadió la solución 1M de KOH anterior (10 mL, agua/MeOH 1:1). La mezcla de reacción se calentó hasta 30ºC y se dejó en agitación durante 7 h. La mezcla de reacción se neutralizó por adición de ácido cítrico al 20% (7 mL). La mezcla resultante se repartió entre acetato de etilo (150 mL) y agua (100 mL). El material orgánico se separó, se secó sobre sulfato de sodio, se decantó y se concentró bajo presión reducida obteniéndose cis y trans 3-[2-(3,4-dimetoxi-fenil)-vinil]-6-(3-metoxi-4-metoximetoxifenil)-1H-indazol (usado en bruto): Rf sm = 0,46, p1 = 0,17, p2 = 0,23 (acetato de etilo-hexano 1:1); ^{1}HRMN isómero cis (CDCl_{3}) \delta: 7,55 (s, 1H), 7,3-7,1 (m, 6H), 7,02 (dd, 1H, J = 1,9, 8,3 Hz), 6,85 (d, 1H, J = 12,5 Hz), 6,78 (d, 1H, J = 12,5 Hz), 6,74 (d, 1H, J = 8,3 Hz), 5,21 (s, 2H), 3,88 (s, 3H), 3,70 (s, 3H), 3,43 (s, 3H), 3,42 (s, 3H). MS (ES) [M+H]/z Calculado 447, encontrado 447, [M-H]/z Calculado 445, encontrado 445.
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Ejemplo de referencia 1(b)
3-(E-estiril)-6-(3-benciloxi-4-hidroxi-fenil)-1H-indazol
19
El compuesto del Ejemplo de referencia 1(b) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 1(a), excepto que, en la etapa (iii), se usó 4-bromo-2-benciloxi-fenol en lugar de 4-bromo-2-metoxi-fenol. Rf sm = 0,35, p = 0,30 (acetato de etilo-hexano 4:6); ^{1}HRMN (CDCl_{3}) \delta: 8,06 (d, 1H, J = 8,6 Hz), 7,63-7,18 (m, 17H), 7,05 (d, 1H, J = 8,2 Hz), 5,19 (s, 2H). MS (CI, del inglés Chemical Ionization) [M+H]/z Calculado 419, encontrado 419, [M-H]/z Calculado 417, encontrado 417.
\newpage
Ejemplo de referencia 1(c)
3-[E-2-(3,4-dimetoxi-fenil)vinil]-6-(3-aliloxi-4-hidroxifenil)-1H-indazol
20
El compuesto del Ejemplo de referencia 1 (c) se preparó de manera similar a la descrita en el ejemplo de referencia 1(a), excepto que, en la etapa (iii), se usó ácido 3-aliloxi-4-(metoximetoxi)benceno-borónico en lugar de ácido 3-metoxi-4-(metoximetoxi)benceno-borónico. MS (ESI, del inglés Electrospray Ionization) [M+H]/z Calculado 429, encontrado 429; MS (ESI) [M-H]/z Calculado 427, encontrado 427.
Ejemplo de referencia 2(a)
3-(naftalen-2-il)-6-(3-metoxi-4-hidroxi-fenil)-1H-indazol
21
Se disolvió 6-(4-benciloxi-3-metoxi-fenil)-3-naftalen-2-il-1H-indazol (25 mg, 0,055 mmol) en una mezcla de acetato de etilo (2 mL), benceno (2 mL) y metanol (2 mL). A esta solución se añadió paladio sobre carbón (25 mg, 10% en peso) y el recipiente de reacción se sometió a vacío/se purgó con hidrógeno gaseoso durante cinco ciclos. La mezcla de reacción se dejó en agitación durante 3 días (d) a 23ºC y se filtró a través de una almohadilla de Celite. La concentración y purificación por cromatografía en columna de gel de sílice proporcionó 3-(naftalen-2-il)-6-(3-metoxi-4-hidroxi-fenil)-1H-indazol (8 mg, 40%): ^{1}H RMN (CDCl_{3}) \delta: 10,3 (s ancho, 1H), 8,50 (s, 1H), 8,20 (d, 1H, J = 8 Hz), 7,98 (d, 1H, J = 8Hz), 7,90 (m, 1H), 7,7-6,8 (m, 9H), 3,98 (s, 3H). MS (ES, del inglés Emission Spectroscopy) [M+H]/z Calculado 367, encontrado 367, [M-H]/z Calculado 365, encontrado 365.
El material de partida se preparó como sigue:
22
Se disolvió 2-bromonaftaleno (117 mg, 0,564 mmol, 6,0 equivalentes) en THF (0,75 mL) y se enfrió hasta -78ºC. La mezcla se trató con n-BuLi (226 \muL, 2,5 M, 6,0 equivalentes) y se dejó en agitación a -78ºC durante 30 min. A continuación se añadió la mezcla a ZnCl_{2} seco recién preparado sólido (139 mg, 0,80 mmol, 8,5 equivalentes) por medio de una cánula y la mezcla resultante se dejó calentar hasta 23ºC (durante la adición desaparece el color amarillo). Después de 30 min a 23ºC la mezcla se añadió a una mezcla de 6-(4-benciloxi-3-metoxi-fenil)-3-yodo-1-(2,4,6-trimetil-bencenosulfonil)-1H-indazol (60 mg, 0,094 mmol, 1 equivalente) y Pd(PPh_{3})_{4} (6 mg, 0,005 mmol, 0,05 equivalentes) por medio de una cánula. La solución resultante se dejó en agitación durante 16 h. Se añadió hidrogenocarbonato de sodio saturado y la mezcla se repartió entre hidrogenocarbonato de sodio saturado (15 mL) y acetato de etilo (15 mL). El material orgánico se secó sobre sulfato de sodio, se decantó y se concentró. La purificación por cromatografía en columna de gel de sílice (acetato de etilo-hexano 1:9-2:8) dio 6-(4-benciloxi-3-metoxifenil)-3-naftalen-2-il-1-(2,4,6-trimetil-bencenosulfonil)-1H-indazol en forma de un sólido (42 mg, 70%): R_{f} sm = 0,4, p = 0,4 (acetato de etilo-hexano 3:7); ^{1}HRMN (CDCl_{3}) \delta: 8,44 (s, 1H), 8,41 (s, 1H), 8,12 (d, 1H, J = 8 Hz), 8,05-7,00 (m, 17H), 5,30 (s, 2H), 4,02 (s, 3H), 2,80 (s, 3H), 2,34 (s, 3H).
6-(4-Benciloxi-3-metoxi-fenil)-3-yodo-1-(2,4,6-trimetilbencenosulfonil)-1H-indazol se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 1(a), etapas (i) a (v).
23 
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6-(4-Benciloxi-3-metoxi-fenil)-3-naftalen-2-il-1-(2,4,6-trimetilbencenosulfonil)-1H-indazol se convirtió en 6-(4-benciloxi-3-metoxi-fenil)-3-naftalen-2-il-1H-indazol como se ha descrito en el Ejemplo de referencia 1(a), etapa (ix). Rf sm = 0,40, p = 0,17 (acetato de etilo-hexano 3:7); ^{1}HRMN (CDCl_{3}) \delta: 8,40 (s, 1H), 8,12 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 8,10 (dd, 1H, J = 1,6, 8,4 Hz), 7,93 (d, 1H, J = 8,3 Hz), 7,88 (m, 2H), 7,61 (m, 1H) 7,56 (s, 1H), 7,43 (m, 5H), 7,30 (m 3H), 7,15 (d, 1H, J = 2,0 Hz), 7,08 (dd, 1H, J = 2,1, 8,3 Hz), 6,91 (d, 1H, J = 8,3 Hz), 5,16 (s, 2H), 3,91 (s, 3H).
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Ejemplo de referencia 2(b)
3-fenil-6-(3-metoxi-4-hidroxi-fenil)-1H-indazol 
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24 
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El compuesto del Ejemplo de referencia 2(b) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 2(a), excepto que, en la etapa (i), se usó fenil-litio en lugar de 2-naftil-litio obtenido a partir de 2-bromonaftileno. ^{1}HRMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta: 7,87 (d, 1H), 7,83 (d, 2H), 7,55-7,27 (m, 5H), 7,01 (m, 2H), 6,80 (d, 1H), 3,83 (s, 3H). MS (ES) [M+H]/z Calculado 317, encontrado 317, [M-H]/z Calculado 315, encontrado 315.
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Ejemplo de referencia 2(c)
3-(3,4,5-trimetoxifenil)-6-(3-metoxi-4-hidroxi-fenil)-1H-indazol 
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25 
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El compuesto del Ejemplo de referencia 2(c) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 2(a), excepto que, en la etapa (i), se usó bromuro de 3,4,5-trimetoxifenilo en lugar de 2-bromonaftileno. R_{f} sm = 0,67, p = 0,38 (acetato de etilo-hexano 8:2); ^{1}H RMN (CDCl_{3}) \delta: 7,93 (d, 1H, J = 8 Hz), 7,58 (s, 1H), 7,39 (d, 1H, J = 8 Hz), 7,10 (m, 4H), 6,92 (d, 1H, J = 8 Hz), 3,90 (s, 9H), 3,85 (s, 3H); MS (ES) [M+H]/z Calculado 407, encontrado 407, [M-H]/z Calculado 405, encontrado 405.
\newpage
Ejemplo de referencia 2(d)
3-(1H-indol-2-il)-6-(3-metoxi-4-hidroxi-fenil)-1H-indazol
26
El compuesto del Ejemplo de referencia 2(d) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 2(a) anterior, excepto que, en la etapa (i), se usó 1-fenilsulfonil-indazol en lugar de 2-bromonaftileno. R_{f} sm = 0,20, p = 0,15 (acetato de etilo-hexano 4:6); ^{1}HRMN (CDCl_{3}) \delta: 10,0 (s ancho, 1H), 9,05 (s ancho, 1H), 8,01 (d, 1H, J = 8,0 Hz), 7,55 (d, 1H, J = 8,0 Hz), 7,49 (s, 1H), 7,37 (d, 1H, J = 8 Hz), 7,29 (d, 1H, J = 8 Hz), 7,2-7,1 (m, 5H), 6,92 (d, 1H, J = 8 Hz), 5,63 (s ancho, 1H); MS (ES) [M+H]/z Calculado 356, encontrado 356; [M-H]/z Calculado 354, encontrado 354.
Ejemplo de referencia 2(e)
3-(benzofuran-2-il)-6-(3-benciloxi-4-hidroxi-fenil)-1H-indazol
27
El compuesto del Ejemplo de referencia 2(e) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 2(a) anterior, excepto que, en la etapa (i), se usó benzofurano en lugar de 2-bromonaftileno. ^{1}HRMN (CDCl_{3}) \delta: 8,21 (d, 1H, J = 8,0 Hz), 7,60 (m, 3H), 7,30-7,10 (m, 12H), 7,01 (d, 1H, J = 8 Hz), 5,82 (s ancho, 1H), 5,15 (s, 3H).
Ejemplo de referencia 3
3-(1H-indol-2-il)-6-(3-metoxi-4-hidroxi-fenil)-1H-indazol
28
3-(1H-Benzoimidazol-2-il)-6-(3-metoxi-4-metoximetoxi-fenil)-1H-indazol se convirtió en 4-[3-(1H-benzoimida-
zol-2-il)-1H-indazol-6-il]-2-metoxi-fenol de acuerdo con el procedimiento descrito en el Ejemplo de referencia 1(a) (3,5 mg, 28%). HRMS [bombardeo con átomos rápidos (abreviadamente FAB, del inglés Fast Atom Bombardment) [M+H]/z Calculado 357,1351, encontrado 357,1349.
El material de partida se preparó como sigue:
29
6-(3-Metoxi-4-metoximetoxi-fenil)-1H-indazol-3-carbaldehído (del Ejemplo de referencia 1(a), etapa (vi)) (20 mg, 0,064 mmol, 1 equivalente) se disolvió en MeOH-agua 1:1 desgasificado (0,7 mL) y se trató con ácido acético (19 \muL, 5 equivalentes), 1,2-diaminobenceno (8,3 mg, 1,2 equivalentes) y acetato de cobre(II) (18 mg, 1,4 equivalentes) a 23ºC. La mezcla agitada durante 30 min, se diluyó con etanol (3 mL) y agua (2 mL) y se trató con una corriente burbujeante de SH_{2} durante 3 min, lo que proporcionó un precipitado negro. La mezcla se dejó en agitación durante 12 h. La mezcla se filtró y se concentró. La purificación por cromatografía en columna de gel de sílice (acetato de etilo-hexano 6:4) dio 3-(1H-benzoimidazol-2-il)-6-(3-metoxi-4-metoximetoxi-fenil)-1H-indazol en forma de un sólido (14 mg, 54%); Rf sm = 0,39, p = 0,24 (acetato de etilo-hexano 6:4); ^{1}HRMN (CDCl_{3}) \delta: 8,69 (d, 1H, J = 8Hz), 7,70 (s ancho, 2H), 7,58 (s, 1H), 7,53 (d, 1H, J = 8 Hz), 7,30-7,15 (m, 7H), 5,30 (s, 2H), 3,97 (s, 3H), 358 (s, 3H); MS (ES) [M+H]/z Calculado 401, encontrado 401, [M-H]/z Calculado 399, encontrado 399.
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Ejemplo de referencia 4(a)
N-[3-(3-estiril-1H-indazol-6-iloxi)-fenil]-benzamida 
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30
Una solución de N-[3-(2-benzoil-3-estiril-1H-indazol-6-iloxi)-fenil]-benzamida (0,09 g, 0,17 mmol) en 2 mL de HCl 6N (acuosa) y 3 mL de MeOH se calentó a 65ºC durante aproximadamente 4 h. La solución enfriada se vertió con precaución sobre solución saturada de hidrogenocarbonato de sodio. El precipitado se filtró, se recogió y se cromatografió sobre gel de sílice eluyendo con hexanos/EtOAc (1:1). Se obtuvo N-[3-(3-estiril-1H-indazol-6-iloxi)-fenil]-benzamida en forma de un sólido beige (32 mg, 50%): ^{1}HRMN (DMSO-d_{6}) \delta: 13,50 (s, 1H), 10,32 (s, 1H), 8,23 (d, 1H, J = 8,7 Hz), 7,92 (d, 2H, J = 6,8 Hz), 7,72 (d, 2H, J = 7,3 Hz), 7,71-7,51 (m, 7H), 7,51-7,47 (m, 3H), 7,30 (t, 1H, J = 7,2 Hz), 7,05 (s, 1H), 7,01 (d, 1H, J = 8,7 Hz), 6,86 (dd, 1H, J = 8,2, 2,3 Hz). Anal. Calc. para C_{28}H_{21}N_{3}O_{2}\cdot0,3 H_{2}O: C, 76,97; H, 4,98; N, 9,62. Encontrado: C, 76,94; H, 5,13; N, 9,40.
El material de partida se preparó como sigue:
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31
Una suspensión del 3-(benzhidrilideno-amino)-fenol (10,47 g, 38,3 mmol), 3-cloro-ciclohex-2-enona (5,00 g, 38,3 mmol) y carbonato de potasio (5,82, 42,1 mmol) en 150 mL de acetona se calentó a reflujo durante una noche. La mezcla de reacción enfriada se filtró y se concentró bajo presión reducida. El residuo se cromatografió sobre gel de sílice eluyendo con hexanos/EtOAc (2:1). De esta manera, se obtuvo 3-[3-(benzhidrilideno-amino)-fenoxi]-ciclohex-2-enona en forma de un sólido amarillo, (8,82 g, 63%): ^{1}HRMN (CDCl_{3}) \delta: 7,78 (d, 2H, J = 7,0 Hz), 7,50 (d, 1H, J = 7,1 Hz), 7,45 (d, 2H, J = 7,7 Hz), 7,34-7,10 (m, 6H), 6,69 (d, 1H, J = 8,0 Hz), 6,61 (d, 1H, J = 8,0 Hz), 6,38 (s, 1H), 4,89 (s, 1H), 2,55 (t, 2H, J = 6,2 Hz), 2,34 (t, 2H, J = 6,2 Hz), 2,06 (m, 2H). Anal. Calc. para C_{25}H_{21}NO_{2}\cdot0,2H_{2}O: C, 80,92; H, 5,81; N, 3,78. Encontrado: C, 81,12; H, 5,81; N, 3,72.
Se preparó 3-(benzhidrilideno-amino)-fenol como sigue: una solución agitada de benzofenona-imina (15,0 g, 82,8 mmol) y 3-aminofenol (9,03 g, 82,8 mmol) en 25 mL de tolueno se calentó a reflujo con retirada de H_{2}O con una trampa Dean-Stark durante 3,5 h. Los cristales que se formaron en la mezcla de reacción enfriada se recogieron por filtración a vacío, se lavaron con hexanos y se secaron al aire. De esta manera, se obtuvo 3-(benzhidrilideno-amino)-fenol en forma de un sólido amarillo claro (17,3 g, 76%): ^{1}HRMN (CDCl_{3}) \delta: 7,64 (d, 2H, J = 7,1 Hz), 7,38 (d. 1H, J = 7,1 Hz), 7,34-7,15 (m, 7H), 7,04 (d, 2H, J = 7,2 Hz), 6,88 (t, 1H, J = 8,1 Hz), 6,82 (d, 1H, J = 8,2 Hz), 6,23 (s, 1H), 6,21 (d, 1H, J = 7,8 Hz). Anal. Calc. para C_{19}H_{15}NO: C, 83,49; H, 5,53; N, 5,12. Encontrado: C, 83,51; H, 5,65; N, 5,03.
\newpage
1032
32
Una solución de 3-[3-(benzhidrilideno-amino)-fenoxi]-ciclohex-2-enona (4,37 g, 11,89 mmol) en 20 mL de THF se añadió lentamente a una solución de LiHMDS (25,0 mL de solución 1,0M en THF) en 10 mL de THF a -78ºC. Cinco minutos después de haberse completado la adición se añadió de una vez cloruro de trans-cinamoilo (1,98 g, 11,89 mmol) y se continuó la agitación a -78ºC durante 30 min. La reacción se detuvo bruscamente añadiendo a la mezcla una solución saturada de NH_{4}Cl y se extrajo con EtOAc (2x). Las capas orgánicas reunidas se lavaron con solución saturada de NaCl, se secaron (MgSO_{4}) y se concentraron bajo presión reducida. El residuo se cromatografió sobre gel de sílice eluyendo con hexanos/EtOAc (5:1). De esta manera, se obtuvo 3-[3-(benzhidrilideno-amino)-fenol]-6-(3-fenil-acriloil)-ciclohex-2-enona en forma de un sólido amarillo-anaranjado (3,34 g, 56%): ^{1}HRMN(CDCl_{3}) \delta: 15,69 (s, 1H), 7,80 (d, 2H, J = 7,1 Hz), 7,63-7,01 (m, 15H), 6,93 (d, 1H, J = 15,6 Hz), 6,75 (d, 1H, J = 7,6 Hz), 6,66 (d, 1H, J = 8,0 Hz), 6,46 (s, 1H), 4,92 (s, 1H), 2,85 (t, 2H, J = 7,2 Hz), 2,62 (t, 2H, J = 7,2 Hz). Anal. Calc. para C_{34}H_{27}NO_{3}: C, 82,07; H, 5,47; N, 2,82. Encontrado: C, 81,88; H, 5,53; N, 2,81.
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33
A una solución agitada de 3-[3-(benzhidrilideno-amino)-fenol]-6-(3-fenilacriloil)-ciclohex-2-enona (1,81 g, 3,64 mmol) disuelta en 10 mL de HOAc/EtOH (1:1) se añadió hidrato de hidrazina (2,0 mL, 41,23 mmol). La solución se calentó a 75ºC durante 25 min. Después de enfriamiento, la mezcla de reacción se vertió con precaución sobre una solución saturada de hidrogenocarbonato de sodio y se extrajo con EtOAc (2x). Las capas orgánicas reunidas se lavaron con solución saturada de NaCl, se secó (MgSO_{4}) y se concentró bajo presión reducida. El residuo se cromatografió sobre gel de sílice eluyendo con hexanos/EtOAc (1:1). Se obtuvo 3-(3-estiril-4,5-dihidro-1H-indazol-6-iloxi)-fenilamina en forma de un sólido amarillo (539 mg, 45%). ^{1}H RMN (DMSO-d_{6}) \delta: 7,55 (d, 2H, J = 7,2Hz), 7,38 (t, 2H, J = 7,2 Hz), 7,27 (t, 1H, J = 7,2 Hz), 7,05 (m, 3H), 6,38 (d, 1H, J = 8,0 Hz), 6,31 (s, 1H), 6,23 (d, 1H, J = 7,9 Hz), 5,52 (s, 1H), 5,26 (s, 2H), 2,92 (t, 2H, J = 8,0 Hz), 2,58 (t, 2H, J = 8,1 Hz). Anal. Calc. para C_{21}H_{19}N_{3}O\cdot0,3H_{2}O: C, 75,33; H, 5,90; N, 12,55. Encontrado: C, 75,46; H, 5,96; N, 12,35.
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34
A una solución agitada de 3-(3-estiril-4,5-dihidro-1H-indazol-6-iloxi)-fenilamina (50 mg, 0,15 mmol) y N,N-diisopropiletilamina (54 \muL, 0,31 mmol) en 5 mL de CH_{2}Cl_{2}, se añadió cloruro de benzoílo (36 \mul, 0,31 mmol). Después de 15 min, la mezcla de reacción se diluyó con CH_{2}Cl_{2} y se lavó secuencialmente con HCl 0,5N, solución saturada de hidrogenocarbonato de sodio y salmuera, se secó (MgSO_{4}) y se concentró bajo presión reducida. A una solución agitada del residuo en 1,4-dioxano se añadió 2,3-dicloro-5,6-diciano-1,4-benzoquinona (DDQ) (35 mg, 0,15 mmol). Después de 1 h, la mezcla de reacción se concentró bajo presión reducida y el residuo se cromatografió sobre gel de sílice eluyendo con hexanos/EtOAc (2:1). De esta manera, se preparó N-[3-(2-benzoil-3-estiril-1H-indazol-6-iloxi)-fenil]-benzamida en forma de sólido color teja (90 mg, rendimiento casi cuantitativo): ^{1}HRMN (CDCl_{3}) \delta: 8,13 (s, 1H), 8,02 (d, 2H, J = 7,0 Hz), 7,94 (d, 1H, J = 8,7 Hz), 7,74 (d, 2H, J = 6,8 Hz), 7,57-7,19 (m, 17H), 6,84 (d, 1H, J = 8,3 Hz).
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Ejemplo de referencia 4(b)
N-[3-(3-estiril-1H-indazol-6-iloxi)-fenil]-acetamida 
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35 
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El compuesto del Ejemplo de referencia 4(b) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 4(a) anterior, excepto que, en la etapa (iv), se usó anhídrido acético en lugar de cloruro de benzoílo. ^{1}HRMN(DMSO-d_{6}) \delta: 13,08 (s ancho, 1H), 10,03 (s, 1H), 8,22 (d, 1H, J = 8,7 Hz), 7,72 (d, 2H, J = 7,3 Hz), 7,52 (s, 2H), 7,44-7,27 (m, 6H), 7,01 (s, 1H), 6,96 (dd, 1H, J = 8,7, 2,1 Hz), 6,78 (d, 1H, J = 6,9 Hz), 2,01 (s, 3H). Anal. Calc. para C_{23}H_{19}N_{3}O_{2}\cdot0,25 H_{2}O: C, 73,88; H, 5,26; N, 11,24. Encontrado: C, 74,20; H, 5,57; N, 10,82.
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Ejemplo de referencia 5(a)
{3-(3-estiril-1H-indazol-6-iloxi)-fenil]-amida del ácido 5-metil-tiazol-2-carboxílico 
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36
Una suspensión de {3-[1-(5-metiltiazol-2-carbonil)-3-estiril-1H-indazol-6-iloxil-fenil}amida del ácido 5-metil-tiazol-2-carboxílico (57 mg, 0,10 mmol) y carbonato de potasio (50 mg, 0,36 mmol) en MeOH se agitó a 23ºC durante 20 min. La solución se filtró, se diluyó con EtOAc y se lavó con salmuera (2x). La capa orgánica se secó (MgSO_{4}) y se concentró bajo presión reducida. De esta manera, se preparó {3-(3-estiril-1H-indazol-6-iloxi)-fenil]-amida del ácido 5-metil-tiazol-2-carboxílico en forma de un sólido color canela con un rendimiento del 47%.: ^{1}HRMN (DMSO-d_{6}) \delta: 13,00 (s, 1H), 10,80 (s, 1H), 8,23 (d, 1H, J = 8,8 Hz), 7,79 (s, 2H), 7,71 (t, 2H, J = 8,6 Hz), 7,53 (s, 2H), 7,41-7,27 (m, 5H), 7,04 (s, 1H), 7,00 (d, 1H, J = 8,7 Hz), 6,89 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 2,54 (s, 3H). Anal. Calc. para C_{26}H_{20}N_{4}O_{2}S\cdot1,15 H_{2}O: C, 65,98; H, 4,75: N, 11,84; S, 6,78. Encontrado: C, 65,99; H, 4,71; N, 11,58; S, 6,76.
El material de partida se preparó como sigue:
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37
3-(3-Estiril-4,5-dihidro-1H-indazol-6-iloxi)-fenilamina se convirtió en {3-[1-(5-metil-tiazol-2-carbonil)-3-estiril-1H-indazol-6-iloxil-fenil}amida del ácido 5-metil-tiazol-2-carboxílico por tratamiento con ácido 5-metil-tiazol-2-carboxílico y HATU (hexafluorofosfato de o-(2-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronio) en DMF y tratamiento con DDQ y aislamiento análogos al Ejemplo 4(a), etapa (iv) (rendimiento 50%): ^{1}HRMN(DMSO-d_{6}) \delta: 10,85 (s, 1H), 8,45 (d, 1H, J = 9,8 Hz), 8,24 (m, 3H), 7,99-7,62 (m, 6H), 7,54-7,34 (m, 5H), 6,96 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 2,64 (s, 3H), 2,54 (s, 3H).
\newpage
Ejemplo de referencia 5(b)
3-metil-N-[3-(3-estiril-1H-indazol-6-iloxi)-fenil]-benzamida
38
El compuesto del Ejemplo de referencia 5(b) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 5(a) anterior, excepto que, en la etapa (i), se usó cloruro de m-tolilo en lugar de ácido 5-metil-tiazol-2-carboxílico y HATU. ^{1}HRMN (DMSO-d_{6}) \delta: 13,04 (s, 1H), 10,28 (s, 1H), 8,23 (d, 1H, J = 8,8 Hz), 7,73-7,30 (m, 14 H), 7,05 (s, 1H), 6,99 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 6,87 (d, 1H, J = 7,7 Hz), 2,38 (s, 3H). Anal. Calc. para C_{29}H_{23}N_{3}O_{2}\cdot0,2 H_{2}O\cdot0,2 hexanos: C, 77,78; H, 5,66; N, 9,01. Encontrado: C, 77,80; H, 5,84; N, 8,93.
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Ejemplo de referencia 6(a)
N-(3-{3-[2-(4-cloro-fenil)-vinil]-1H-indazol-6-iloxi]-fenil)-benzamida
39
A partir de N-(3-{1-benzoil-3-[2-(4-cloro-fenil)-vinil]-1H-indazol-6-iloxil}-fenil)-benzamida, se usó el procedimiento general del Ejemplo de referencia 5(a) para preparar el compuesto del epígrafe en forma de un sólido blancuzco con un rendimiento del 72%: ^{1}HRMN (DMSO-d_{6}) \delta: 13,07 (s, 1H), 10,32 (s, 1H), 8,24 (d, 1H, J = 8,8 Hz), 7,92 (d, 2H, J = 7,1 Hz), 7,76 (d, 2H, J = 8,5 Hz), 7,59-7,40 (m, 10H), 7,05 (s, 1H), 7,00 (d, 1H, J = 8,7 Hz), 6,87 (d, 1H, J = 7,9 Hz). Anal. Calc. para C_{28}H_{20}ClN_{3}O_{2}\cdot0,4 H_{2}O\cdot0,15 hexanos; C, 71,41; H, 4,75; N, 8,65. Encontrado: C, 71,62; H, 14,83; N, 8,45.
El material de partida se preparó como sigue:
1040
40
A partir de 3-[3-(benzhidrilideno-amino)-fenoxi]-ciclohex-2-enona y cloruro de 3-(4-cloro-fenil)-acriloilo (preparado como se describe a continuación), se empleó el procedimiento general del Ejemplo de referencia 4(a), etapa (ii). El producto se usó sin purificación en el procedimiento de ciclación con hidrazina, Ejemplo de referencia 4(a) etapa (iii), obteniéndose 3-{3-[2-(4-clorofenil)-vinil]-4,5-dihidro-1H-indazol-6-iloxil}-fenilamina en forma de un sólido amarillo con un rendimiento del 30%. ^{1}HRMN (DMSO-d_{6}) \delta: 12,45 (s, 1H), 7,58 (d, 2H, J = 8,5 Hz), 7,43 (d, 2H, J = 8,5 Hz), 5,52 (s, 1H), 5,26 (s, 2H), 2,92 (t, 2H, J = 8,0 Hz), 2,58 (t, 2H, J = 8,0 Hz). Anal. Calc. para C_{21}H_{18}CIN_{3}O\cdot0,75 H_{2}O: C, 66,84; H, 5,21; N, 11,14. Encontrado: C, 66,73; H, 4,89; N, 11,01.
Cloruro de 3-(4-cloro-fenil)-acriloilo se preparó como sigue: a una suspensión agitada de ácido 4-cloro-trans-cinámico (2,51 g, 13,77 mmol) en benceno se añadió cloruro de tionilo (1,1 mL, 15,14 mmol) y una cantidad catalítica de DMAP. La mezcla de reacción se calentó a reflujo durante 1,5 h. Los materiales volátiles se separaron bajo presión reducida. El residuo blanco se disolvió en Et_{2}O y se concentró de nuevo bajo presión reducida, obteniéndose cloruro de 3-(4-cloro-fenil)-acriloilo (2,78 g, rendimiento cuantitativo) en forma de un sólido blanco : ^{1}HRMN (CDCl_{3}) \delta: 7,81 (d, 1H, J = 15,6 Hz), 7,54 (d, 2H, J = 8,6 Hz), 7,44 (d, 2H, J = 8,6 Hz), 6,65 (d, 1H, J = 15,6 Hz).
41
3-{3-[2-(4-Cloro-fenil)-vinil]-4,5-dihidro-1H-indazol-6-iloxil}-fenilamina se convirtió en N-(3-{1-benzoil-3-[2-(4-cloro-fenil)-vinil]-1H-indazol-6-iloxil}-fenil)-benzamida por el procedimiento descrito en el Ejemplo de referencia 4(a), etapa (iv) (rendimiento 85%). ^{1}HRMN (DMSO-d_{6}) \delta: 10,37 (s, 1H), 8,43 (d, 1H, J = 8,8 Hz), 8,00-7,39 (m, 21H), 7,34 (d, 1H, J = 8,8 Hz), 6,93 (d, 1H, J = 8,8 Hz).
Ejemplo de referencia 6(b)
N-{3-[3-(2-indolil)-1H-indazol-6-iloxi]-fenil}-3-metil-benzamida
42
El compuesto del Ejemplo de referencia 6(b) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 6(a) anterior, excepto que, en la etapa (i), se usó ácido 1-SEM-indazol-2-carboxílico en lugar de ácido 4-cloro-trans-cinámico. ^{1}HRMN (DMSO-d_{6}) \delta: 13,19 (s, 1H), 11,59 (s, 1H), 10,29 (s,1H), 8,23 (d, 1H, J = 8,7 Hz), 7,73-7,38 (m, 9H), 7,12 (s,1H), 7,03 (d, 2H, J = 7,3 Hz), 6,88 (d, 1H, J = 7,8 Hz), 2,38 (s, 1H). HRMS [M+H]/z Calculado: 459,1821, encontrado: 459,1836.
Ejemplo de referencia 7
3-(estiril-1H-indazol-6-iloxi)-fenilamina
43
Una suspensión de 3-(3-estiril-4,5-dihidro-1H-indazol-6-iloxi)-fenilamina (75 mg, 0,23 mmol) y 90 mg de paladio al 5% sobre carbón (Pd/C) se calentó a 155ºC. Después de 4 h, se añadió más Pd al 5%/C (39 mg). Después de 22 h, se añadió más Pd al 5%/C (30 mg). La mezcla de reacción se filtró en caliente después de 26 h. El catalizador se lavó y el filtrado se concentró bajo presión reducida. El residuo se cromatografió sobre gel de sílice eluyendo con hexanos/EtOAc (1:1). Las fracciones apropiadas se concentraron y se trituraron con CH_{2}Cl_{2}/hexanos obteniéndose el compuesto del epígrafe en forma de un sólido blancuzco (20 mg, 27%): ^{1}HRMN (DMSO-d_{6}) \delta: 8,16 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 7,71 (d, 2H, J = 6,7 Hz), 7,50 (s, 2H), 7,40 (t, 2H, J = 7,0 Hz), 7,30 (d, 1H, J = 6,5 Hz), 7,06-6,92 (m, 3H), 6,35 (d, 1H, J = 8,3 Hz), 6,23 (s, 2H), 5,26 (s, 2H). Anal. Calc. para C_{21}H_{17}N_{3}O\cdot0,15 CH_{2}Cl_{2}: C, 74,69; H, 5,13; N, 12,36. Encontrado: C, 74,64; H, 5,23; N, 12,25.
Ejemplo de referencia 8(a)
3-(E-estiril)-6-fenoxi-1H-indazol 
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44
Una suspensión de 3-(E-estiril)-6-fenoxi-4,5-dihidro-1H-indazol (200 mg, 0,64 mmol) y Pd al 5%/C (200 mg) en 10 mL de tetralina se calentó a 155ºC durante 18 h. El catalizador se separó filtrando la solución caliente y se lavó con THF. EtOAc y MeOH. El filtrado se concentró bajo presión reducida y el residuo se cromatografió sobre gel de sílice eluyendo con hexanos/EtOAc (2:1) obteniéndose 3-(E-estiril)-6-fenoxi-1H-indazol en forma de un sólido blancuzco (110 mg, 55%). ^{1}HRMN (DMSO-d_{6}) \delta: 6,96 (s, 2H), 7,10 (d, 2H, J = 7,7 Hz), 7,20 (t, 1H, J = 7,1 Hz), 7,30 (t, 1H, J = 7,1 Hz), 7,44 (m, 6H), 7,71 (d, 2H, J = 7,5 Hz), 8,20 (d, 1H, J = 9,2 Hz), 12,90 (s, 1H). Anal. Calc. para C_{21}H_{16}N_{2}O\cdot0,1 H_{2}O: C, 80,28; H, 5,20; N, 8,92. Encontrado: C, 80,20; H, 5,21; N, 8,93.
El material de partida se preparó como sigue:
(i) A una solución agitada de 3-cloro-ciclohex-2-enona (3,00 g, 23,0 mmol) y fenol (2,16 g, 23,0 mmol) en 25 mL de acetona se añadió K_{2}CO_{3} anhidro en polvo (3,81 g, 27,6 mmol). Después de llevar a reflujo durante 18 h, la mezcla se enfrió y se filtró. El filtrado se concentró bajo presión reducida y se cromatografió sobre gel de sílice eluyendo con hexanos/EtOAc (4:1) obteniéndose 3-fenoxi-ciclohex-2-enona en forma de un sólido blanco : ^{1}HRMN (CDCl_{3}) \delta: 2,10 (quintete, 2H, J = 6,3 Hz), 2,40 (t, 2H, J = 6,2 Hz), 2,68 (t, 2H, J = 6,3 Hz), 5,14 (s, 1H), 7,05 (d, 2H, J = 7,5 Hz), 7,26 (t, 1H, J = 7,3 Hz), 7,41 (t, 2H, J = 7,6 Hz).
(ii) Una solución de 3-fenoxi-ciclohex-2-enona (301 mg, 1,6 mmol) en 1 mL de THF se añadió a una solución agitada de solución 1,0M de bis(trimetilsilil)amida de litio en THF (3,2 mL) a -78ºC. Después de 15 min, se añadió de una vez cloruro de cinamoilo (266 mg, 1,6 mmol). Después de 15 min, la mezcla de reacción se vertió sobre HCl 0,5N y se extrajo con EtOAc (2x). Las capas orgánicas reunidas se lavaron con solución saturada de NaCl, se secó (MgSO_{4}), se filtró y se concentró bajo presión reducida. La cromatografía del residuo con hexanos/acetato de etilo 4:1 como eluyente proporcionó 220 mg (43%) de 3-fenoxi-6-(3-fenil-acriloil)-ciclohex-2-enona en forma de un sólido amarillo (220 mg, (43%): ^{1}H RMN (CDCl_{3}) (forma enol) \delta: 2,66 (t, 2H, J = 7,2 Hz), 2,84 (t, 2H, J = 7,1 Hz), 5,11 (s, 1H), 6,86 (d, 1H, J = 15,6 Hz), 7,02 (d, 2H, J = 8,1 Hz), 7,20 (m, 2H), 7,28-7,38 (m, 3H). HRMS M+H^{+} calculado: 319,1334, encontrado: 319,1340.
(iii) A una solución agitada de 3-fenoxi-6-(3-fenil-acriloil)-ciclohex-2-enona (1,13 g, 3,55 mmol) en 20 ml de HOAc/ EtOH (1:1) se añadió hidrazina monohidrato (0,21 mL, 4,3 mmol). La mezcla de reacción se calentó a 70ºC durante 3 h, se enfrió y se vertió con precaución sobre solución saturada de NaHCO_{3} y se extrajo con EtOAc (2x). Las capas orgánicas reunidas se lavaron con solución saturada de NaCl, se secó (MgSO_{4}) y se concentró bajo presión reducida. El residuo se cromatografió sobre gel de sílice eluyendo con hexanos/EtOAc (2:1) obteniéndose 6-fenoxi-3-estiril-4,5-dihidro-1H-indazol (3) en forma de un sólido blancuzco (406 mg, 36%): ^{1}HRMN (DMSO-d_{6}) \delta: 2,64 (t, 2H, J = 8,0 Hz), 2,95 (t, 2H, J = 8,0 Hz), 5,46 (s, 1H), 7,04 (AB, 2H, J = 16,8 Hz), 7,15 (d, 2H, J = 8,1 Hz), 7,25 (m, 2H), 7,42 (m, 4H), 7,55 (d, 2H, J = 7,7 Hz), 12,44 (s, 1H). Anal. Calc. para C_{2}H_{18}N_{2}O\cdot0,2 H_{2}O: C, 79,32; H, 5,83, N, 8,81. Encontrado: C, 79,36; H, 5,85; N, 8,84.
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Ejemplo de referencia 8(b)
3-(E-estiril)-6-[4-(metoximetoxi)fenoxi]-1H-indazol
45
El compuesto del Ejemplo de referencia 8(b) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 8(a) anterior, excepto que, en la etapa (i), se usó 4-(metoximetoxi)fenol en lugar de fenol. ^{1}HRMN (DMSO-d_{6}) \delta: 12,90 (s, 1H), 8,17 (d, 1H, J = 8,8 Hz), 7,71 (d, 2H, J = 7,6 Hz), 7,50 (s, 3H), 7,41 (t, 2H, J = 7,6 Hz), 7,31 (d, 1H, J = 7,4 Hz), 7,10 (s, 3H), 6,95 (dd, 1H, J = 8,8, 1,9 Hz), 6,84 (s, 1H), 5,20 (s, 2H), 3,42 (s, 3H). Anal. Calc. para C_{23}H_{20}N_{2}O_{3}: C, 74,17; H, 5,41, N, 7,52. Encontrado: C, 74,21; H, 5,59; N, 7,46.
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Ejemplo de referencia 8(c)
3-(E-estiril)-6-fenilsulfanil-1H-indazol
46
El compuesto del Ejemplo de referencia 8(c) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 8(a) anterior, excepto que, en la etapa (i), se usó tiofenol en lugar de fenol. ^{1}H RMN (DMSO-d_{6}) \delta: 7,29 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 7,45-7,59 (m, 9H), 7,67 (s, 2H), 7,86 (d, 2H, J = 7,2 Hz). 8,35 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 13,30 (s, 1H). Anal. Calc. para C_{21}H_{16}N_{2}S\cdot0,25 H_{2}O: C, 75,76; H, 5,00; N, 8,41; S, 9,63. Encontrado: C, 75,79; H, 4,99; N, 8,16; S, 9,63.
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Ejemplo de referencia 8(d)
6-(3-bromo-fenoxi)-3-estiril-1H-indazol
47
El compuesto del Ejemplo de referencia 8(d) se preparó de manera análoga a la descrita en el Ejemplo de referencia 8(a) anterior, excepto que, en la etapa (i), se usó 3-bromofenol en lugar de fenol. ^{1}HRMN (DMSO-d_{6}) \delta: 13,08 (s, 1H), 8,23 (d, 1H, J = 8,8 Hz), 7,72 (d, 2H, J = 7,3 Hz), 7,53 (s, 2H), 7,43-7,35 (m, 4H), 7,30 (t, 2H, J = 7,2 Hz), 7,11 (d, 1H, J = 7,2 Hz), 7,09 (s, 1H), 6,98 (d, 1H, J = 8,8 Hz). Anal. Calc. para C_{21}H_{15}BrN_{2}O: C, 64,46; H, 3,86; Br, 20,42; N, 7,16. Encontrado: C, 64,31: H, 3,99; Br, 20,52; N, 7,11.
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Ejemplo de referencia 9 (a)
3-(E-estiril)-6-[3-hidroxifenoxi]-1H-indazol
48
A una solución agitada de 3-(E-estiril)-6-[3-(metoximetoxi)fenoxi]-1H-indazol (50 mg, 0,13 mmol) en 5 mL de CH_{2}Cl_{2} a -25ºC se añadió bromuro de trimetilsililo (75 \mul, 0,57 mmol). Después de 1,5 h, se añadió una solución saturada de NaHCO_{3} y el producto se extrajo con EtOAc (2x). Las capas orgánicas reunidas se lavaron con solución saturada de NaCl, se secaron (MgSO_{4}) y se concentraron bajo presión reducida. El residuo se cromatografió sobre gel de sílice eluyendo con hexanos/EtOAc (1:1) obteniéndose, después de trituración con CH_{2}Cl_{2}/hexanos, 3-(E-estiril)-6-[3-hidroxifenoxi]-1H-indazol en forma de un sólido blancuzco (22 mg, 50%): ^{1}HRMN (DMSO-d_{6}) \delta: 6,37 (s, 1H), 6,43 (d, 1H, J = 8,1 Hz), 6,50 (d, 1H, J = 8,1Hz), 6,88 (d, 1H, J = 8,8 Hz), 6,92 (s, 1H), 7,12 (t, 1H, J = 8,1 Hz), 7,24 (t, 1H, J = 7,3 Hz), 7,31 (t, 2H, J = 7,6 Hz), 7,44 (s, 2H), 7,64 (d, 2H, J = 7,5 Hz), 8,12 (d, 1H, J = 8,7 Hz), 9,54 (s, 1H), 12,92 (s, 1H). Anal. Calc. para C_{21}H_{16}N_{2}O_{2}\cdot0,3 H_{2}O: C, 75,57; H, 5,01; N, 8,39. Encontrado: C, 75,74; H, 5,11; N, 8,25.
El material de partida, 3-(E-estiril)-6-[3-(metoximetoxi)fenoxi]-1H-indazol, se preparó como se ha descrito en el Ejemplo de referencia 8(b).
49
^{1}H RMN (CDCl_{3}) \delta: 3,42 (s, 3H), 5,10 (s, 2H), 6,64 (d, 1H, J = 8,2 Hz), 6,72 (s, 1H), 6,80 (d, 1H, J = 8,3 Hz), 6,98 (s, 1H), 7,00 (d, 1H, J = 8,8 Hz), 7,19-7,38 (m, 5H), 7,53 (m, 3H), 7,92 (d, 1H, J = 8,9 Hz). Anal. Calc. para C_{23}H_{20}N_{2}O_{3}: M+H^{+}: 373,1552, encontrado 373,1546.
\newpage
Ejemplo de referencia 9(b)
3-(E-estiril)-6-[4-hidroxifenoxi]-1H-indazol 
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50 
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El compuesto del Ejemplo de referencia 9(b) se preparó como el Ejemplo de referencia 9(a) anterior, excepto que se usó 3-(E-estiril)-6-[4-(metoximetoxi)fenoxi]-1H-indazol en lugar de 3-(E-estiril)-6-[3-(metoximetoxi)fenoxi]-1H-indazol. ^{1}HRMN (DMSO-d_{6}) \delta: 12,95 (s, 1H), 9,58 (s, 1H), 8,33 (d, 1H, J = 9,0 Hz), 7,89 (d, 2H, J = 7,1 Hz), 7,68 (s, 1H), 7,58 (t, 1H, J = 7,3 Hz), 7,48 (d, 1H, J = 7,3 Hz), 7,24 (s, 1H), 7,13 (m, 3H), 6,99 (d, 2H, J = 8,8 Hz). HRMS [M+H]/z Calculado: 329,1290. Encontrado: 329,1293. Anal. Calc. para C_{21}H_{16}N_{2}O_{2}\cdot0,35 H_{2}O: C, 75,36; H, 5,03; N, 8,37. Encontrado: C, 75,35; H, 5,22; N, 8,24.
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Ejemplo de referencia 10
6-(1-fenil-vinil)-3-estiril-1H-indazol 
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51 
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Se disolvió 6-(1-fenil-vinil)-3-estiril-1-[2-(trimetil-silanil)-etoximetil]-1H-indazol (16,2 mg, 0,0358 mmol) en THF (0,6 mL) y se trató con fluoruro de tetrabutilamonio (TBAF, 1M en THF, 0,6 mL). La mezcla se calentó hasta 60ºC bajo argón durante 4 h. La mezcla se enfrió, se neutralizó con hidrogenocarbonato de sodio saturado en exceso y el material orgánico se extrajo con acetato de etilo y se concentró. Esta mezcla de 3 compuestos (visualizados por TLC) se trató con THF-agua-TFA (1:1:2,4 mL) durante 30 min. La mezcla se diluyó con tolueno (20 mL), se concentró, se neutralizó con hidrogenocarbonato de sodio saturado en exceso y el material orgánico se extrajo con acetato de etilo. El material orgánico se secó sobre sulfato de sodio, se decantó y se concentró. La purificación por cromatografía en columna de gel de sílice (acetato de etilo-hexano 2:8) dio 6-(1-fenil-vinil)-3-estiril-1H-indazol (4,6 mg, 40%): R_{f} sm = 0,62, p = 0,24 (acetato de etilo-hexano 3:7); ^{1}HRMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta: 7,99 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 7,60-7,25 (m, 14H), 5,58 (d, 1H, J = 1,1 Hz), 5,56 (d, 1H, J = 1,1 Hz); HRMS (FAB) [M+H]/z Calculado 323,1548, encontrado 323,1545.
El material de partida se preparó como sigue:
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52 
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6-Yodoindazol se convirtió en 3,6-diyodoindazol (82%) como se ha descrito en el Ejemplo de referencia 1(a), etapa (v): ^{1}HRMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta: 10,3 (s ancho, 1H), 7,90 (s, 1H), 7,52 (dd, 1H, J = 1,2, 8,5 Hz), 7,24 (d, 1H, J = 8,5 Hz).
53
Se añadió 3,6-diyodoindazol (755 mg, 2,04 mmol) a KOH al 50% (2,5 g en 2,5 mL de agua) a 0ºC y se añadió diclorometano (4 mL). A esta mezcla se añadió bromuro de tetrabutilamonio (TBABr, 6,6 mg, 0,02 mmol, 0,01 equivalente) y se añadió gota a gota cloruro de 2-(trimetil-silanil)-etoximetil (SEM-Cl, 397 \muL, 2,24 mmol, 1,10 equivalentes) durante un periodo de 3 min. La mezcla se agitó rápidamente a 0ºC durante 1,5 h. Se añadieron agua (20 mL) y diclorometano (20 mL) y el material orgánico se separó, se secó sobre sulfato de sodio y se concentró. La cromatografía en columna de gel de sílice (acetato de etilo al 5% en hexano; 150 mL de sílice) dio 2 compuestos isómeros (1-SEM, 763 mg, 75%; y 2-SEM, 105 mg, 10%): Rf sm = 0,08, p = 0,34 y 0,27 (acetato de etilo-hexano 1:9); ^{1}HRMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta: 8,0 (s, 1H), 7,55 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 7,24 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 5,69 (s, 2H), 3,58 (t, 2H J = 8,2 Hz), 0,90 (t, 2H, J = 8,2 Hz), -0,1 (s, 9H).
54 
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Se disolvió 1-bromoestireno (26 \muL, 0,20 mmol, 2,0 equivalentes) en THF (0,75 mL), se enfrió hasta -78ºC y se trató con t-BuLi (235 \muL, 0,40 mmol, 1,70M, 4,0 equivalentes). La mezcla se dejó calentar hasta -42ºC durante 10 min y se añadió a cloruro de zinc recién secado (34 mg, 0,25 mmol, 2,5 equivalentes). La solución resultante se dejó calentar hasta 23ºC con agitación durante 25 min. Esta mezcla se añadió a una mezcla de 3,6-diyodo-1-[2-(trimetil-silanil)-etoximetil]-1H-indazol puro (50 mg, 0,10 mmol, 1 equivalente) y Pd(PPh_{3})_{4} (5 mg, 0,004 mmol, 0,04 equivalentes). Después de 10 min se determinó la finalización de la reacción por TLC y la reacción se detuvo bruscamente añadiendo a la mezcla hidrogenocarbonato de sodio saturado. El material orgánico se extrajo con acetato de etilo, se secó sobre sulfato de sodio y se concentró bajo presión reducida. La cromatografía en columna de gel de sílice (acetato de etilo-hexano 5:95) proporcionó 3-yodo-6-(1-fenil-vinil)-1-[2-(trimetil-silanil)-etoximetil]-1H-indazol (33,1 mg, 70%): R_{f} sm = 0,39, p = 0,36 (acetato de etilo-hexano 1:9); ^{1}HRMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta: 7,50 (s, 1H), 7,42 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 7,33 (m, 5H), 7,22 (dd, 1H, J = 1,2, 8,4 Hz), 5,68 (s, 2H), 5,59 (d, 1H, J = 1,0 Hz), 5,57 (d, 1H, J = 1,0 Hz), 3,58 (t, 2H, J = 8,2 Hz), 0,88 (t, 2H, J = 8,2 Hz), -0,09 (s, 9H); HRMS (FAB) [M+H]/z Calculado 477,0859, encontrado 477,0866.
55 
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Preparación de 6-(1-fenil-vinil)-3-estiril-1-[2-(trimetil-silanil)-etoximetil]-1H-indazol: se disolvió E-2-bromoestireno (23 \muL, 0,174 mmol, 2,5 equivalentes) en THF (1,0 mL) y se enfrió hasta -78ºC. Se añadió t-BuLi (205 \muL, 0,348 mmol, 5,00 equivalentes) y la mezcla se calentó hasta -42ºC durante 7 min obteniéndose un mezcla roja oscura. La solución se añadió a cloruro de zinc recién secado (29 mg, 0,209 mmol, 3,00 equivalentes) por medio de una cánula y la mezcla se dejó calentar hasta 23ºC con agitación durante 20 min. Esta solución se añadió a una mezcla pura de 3-yodo-6-(1-fenil-vinil)-1-[2-(trimetil-silanil)-etoximetil]-1H-indazol (33,1 mg, 0,0696 mmol, 1,0 equivalente) y Pd(PPh_{3})_{4} (4 mg, 0,0035 mmol, 0,05 equivalentes) a 23ºC por medio de una cánula. Esta solución se dejó en agitación durante 15 min y se trató con hidrogenocarbonato de sodio saturado y se extrajo con acetato de etilo. El material orgánico se secó sobre sulfato de sodio, se decantó y se concentró. La purificación por cromatografía en columna de gel de sílice usando dos columnas (acetato de etilo-hexano 5:95; 12 mL de sílice: y acetato de etilo-benceno 1:99; 12 mL de sílice) dio 6-(1-fenil-vinil)-3-estiril-1-[2-(trimetil-silanil)-etoximetil]-1H-indazol (16,2 mg, 51%): R_{f} sm = 0,38, p = 0,29 (acetato de etilo-hexano 1:9); ^{1}HRMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta: 7,98 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 7,62-7,22 (m, 14H), 5,71 (s, 2H), 5,57 (s, 2H), 3,60 (t, 2H, J = 8,2 Hz), 0,90 (t, 2H, J = 8,2 Hz), -0,08 (s, 9H); HRMS (FAB) [M+H]/z Calculado 453,2362, encontrado 453,2354.
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Ejemplo de referencia 11
N-metil-N-(3-estiril-1H-indazol-6-il)-benceno-1,3-diamina
56
A N-metil-N-{3-estiril-1-[2-(trimetil-silanil)-etoximetil]-1H-indazol-6-il}-benceno-1,3-diamina (237 mg, 0,5
mmol) se añadió TBAF 1M en THF (10,1 mL, 10,1 mmol), seguido de etilendiamina (0,34 mL, 5,04 mmol, 10 equivalentes). La mezcla resultante se calentó hasta 70ºC durante 5 h. La reacción se detuvo bruscamente añadiendo a la mezcla NaHCO_{3} saturado (10 mL) y se extrajo 3x35 mL de EtOAc. Las fases de EtOAc reunidas se lavaron 5 x 20 mL de H_{2}O, a continuación con salmuera (20 mL), se secaron con Na_{2}SO_{4}, se decantaron y se concentraron bajo presión reducida hasta obtener una espuma. El material en bruto se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (diclorometano/acetato de etilo 9:1) obteniéndose N-metil-(3-estiril-1H-indazol-6-il)-benceno-1,3-diamina en forma de una espuma (120 mg, rendimiento 70%). R_{f} sm = 0,73, R_{f} p = 0,27 (diclorometano:acetato de etilo 7:3); ^{13}CRMN (75 MHz, CDCl_{3}) \delta: 150,3, 148,8, 147,5, 147,5, 143,9, 143,4, 137,5, 131,1, 130,3, 129,3, 128,9, 128,2, 127,9, 126,7, 121,0, 120,5, 117,0, 116,0, 112,6, 109,8, 109,0, 98,3, 40,7; espectro magnético de baja energía (abreviadamente LEMS, del inglés Low Energy Magnetic Spectrum) (ESI) [M+H]/z Calculado 341, encontrado 341. Anal. Calculado: C, 77,62; H, 5,92; N, 16,46. Encontrado: C, 76,16; H, 5,88; N, 15,95.
El material de partida se preparó como sigue:
1057
57
6-Nitro-1H-indazol se convirtió en 3-yodo-6-nitro-1H-indazol como se ha descrito en el Ejemplo de referencia 1(a), etapa (v) (50,6 g, 87%): FTIR (KBr) 3376, 3076, 2964, 2120, 1739, 1626, 1526, 1439, 1294, 1128, 954 cm^{-1};^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta: 8,28 (s, 1H), 8,05 (s, 1H), 7,66 (d, 1H, J = 8,13 Hz), 7,45 (dd, 1H, J = 8,33, 1,38 Hz), 7,17 (d, 1H, J = 1,01 Hz), 7,14 (s, 1H), 7,03 (d, 1H, J = 8,04 Hz), 6,89 (s, 2H), 3,82 (s, 3H), 2,55 (s, 6H), 2,21 (s, 3H) 1,32 (s, 9H). MS (FAB) [M+H]/z Calculado 311, encontrado 311. Anal. Calculado: C, 69,66; H, 5,85; N, 9,03. Encontrado: C, 69,41; H, 5,98; N, 8,79.
58
3-Yodo-6-nitro-1H-indazol se convirtió en 6-nitro-3-yodo-[2-(trimetilsilanil)-etoximetil]-1H-indazol como se ha descrito en el Ejemplo de referencia 10, etapa (ii) (10,2 g, rendimiento 81%): p.f. 58ºC. Anal. Calculado: C, 37,24; H, 4,33; N, 10,02. Encontrado: C, 37,21; H, 4,38; N, 10,00.
59
A 6-nitro-3-yodo-[2-(trimetil-silanil)-etoximetil]-1H-indazol (11,0 g, 26,1 mmol), ácido estiril-borónico (4,64, 31,4 mmol) y Pd(PPh_{3})_{4} (1,25 g, 1,08 mmol) bajo una atmósfera de argón se añadió tolueno (192 mL), MeOH (4 mL) y NaOH 2N (acuoso) (32,6 mL, 65,3 mmol). La mezcla heterogénea resultante se calentó hasta 90ºC. Después de 8 h la mezcla de reacción se diluyó con EtOAc (150 mL) y agua (50 mL), las fases se separaron y el material orgánico se extrajo 2x50 mL de EtOAc. La mezcla de las fases orgánicas se lavó con salmuera (50 mL), a continuación se secó con Na_{2}SO_{4}, se filtró y se concentró bajo presión reducida. La mezcla de reacción en bruto se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (EtOAc:hexano 1:9) obteniéndose 6-nitro-3-estiril-1-[2-(trimetil-silanil)-etoximetil]-1H-indazol en forma de un sólido amarillo (7,65 g, 74%): ^{13}CRMN (75 MHz, CDCl_{3}) \delta: 148,3, 145,0, 141,3, 138,1, 134,2, 130,5, 129,9, 129,8, 129,5, 128,1, 127,4, 123,2, 119,8, 117,8, 108,2, 79,7, 68,5, 19,2, 0,0; MS (FAB) [M+Na]/z Calculado 418, encontrado 418. Anal. Calculado: C, 63,77; H, 6,37; N, 10,62. Encontrado: C, 64,04; H, 6,29; N, 10,56.
60
6-Nitro-3-estiril-1-[2-(trimetil-silanil)-etoximetil]-1H-indazol (8,1 g, 20,5 mmol) se disolvió en DMF (75 mL) a 23ºC bajo una atmósfera de argón. Se añadió SnCl_{2} (12,9 g, 67,7 mmol) seguido por agua (1,7 mL, 92,2 mmol) y la mezcla resultante se calentó hasta 50ºC. Después de 4 h, se añadió NaOH 3N (45 mL, 135 mmol) seguido por EtOAc (100 mL). La emulsión resultante se filtró en caliente a través de Celite y el lecho de Celite se lavó con EtOAc caliente (3 x 100 mL). El filtrado se concentró bajo presión reducida, el residuo se disolvió en EtOAc, se lavó con salmuera, se secó con Na_{2}SO_{4}, se filtró y se concentró bajo presión reducida obteniéndose un sólido. El material en bruto se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (acetato de etilo:hexano 2:8-7:3), obteniéndose 3-estiril-1-[2-(trimetil-silanil)-etoximetil]-1H-indazol-6-ilamina en forma de un sólido amarillo (5,1 g, rendimiento 68%). MS (FAB) [M+H]/z Calculado 366, encontrado 366.
61
A 3-estiril-1-[2-(trimetil-silanil)-etoximetil]-1H-indazol-6-ilamina (1,1 g, 3 mmol, m-nitro-yodobenceno (0,9 g, 3,6 mmol), BINAP (0,07 g, 0,133 mmol), Pd_{2}(dba)_{3} (34 mg, 0,0375 mmol) y Cs_{2}CO_{3} (1,37 g, 4,2 mmol) bajo atmósfera de argón se añadió tolueno (6 mL). La mezcla heterogénea resultante se calentó hasta 80ºC. Después de 46 h la mezcla de reacción se enfrió hasta 23ºC, se diluyó con acetato de etilo (EtOAc) (20 mL) y se filtró. Se añadió agua (5 mL), se separaron las fases y el material orgánico se extrajo con 2 x 50 mL de EtOAc. La mezcla de material orgánico se lavó con salmuera, a continuación se secó con Na_{2}SO_{4}, se filtró y se concentró bajo presión reducida. La mezcla de reacción en bruto se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (eluyendo con hexano:EtOAc 9:1) obteniéndose (3-nitro-fenil)-{3-estiril-1-[2-(trimetil-silanil)-etoximetil]-1H-indazol-6-il}-amina en forma de un sólido amarillo (7,65 g, 74%): TLC (Hexano:EtOAc 7:3) Rf sm = 0,16, Rf p = 0,30 (acetato de etilo:hexano 3:7); FTIR (KBr) 3391, 3059, 2952, 2894, 1614, 1530, 1483, 1346, 1248, 1076, 836, 734 cm^{-1};^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta: 7,86 (s, 1H), 7,83 (s, 1H), 7,65 (dt, 1H, J = 2,21, 5,13 Hz), 7,15 - 7,41 (m, 5H), 6,93 (dd, 1H, J = 1,87, 8,67 Hz), 5,56 (s, 2H), 3,51 (t, 2H, J = 8,17 Hz), 0,81 (t, 2H, J = 7,96 Hz), -0,15 (s, 9H); ^{13}CRMN (75 MHz, CDCl_{3}) \delta: 149,6, 144,8, 143,5, 142,4, 140,9, 137,3, 131,8, 130,3, 129,0, 128,2, 126,7, 122,8, 122,6, 120,1, 119,3, 116,1, 115,6, 111,4, 98,5, 77,9, 66,7, 18,0, -1,2; MS (ESI) [M+H]/z Calculado 487, encontrado 487. Anal. Calculado: C, 66,64; H, 6,21; N, 11,51. Encontrado: C, 66,91; H, 6,21; N, 11,44.
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62 
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A (3-nitro-fenil)-{3-estiril-1-[2-(trimetil-silanil)-etoximetil]-1H-indazol-6-il}-amina (434 mg, 0,89 mmol) en THF (5 mL) enfriada hasta -5ºC bajo atmósfera de argón, se añadió sulfato de dimetilo (0,42 mL, 4,5 mmol) seguido por LiHMDS (1M en THF) (1,8 mL, 1,8 mmol). Después de 20 min la mezcla de reacción se detuvo bruscamente añadiendo a la mezcla NH_{4}Cl (acuoso) saturado (2 mL), a continuación se extrajo 3x20 mL de EtOAc. La mezcla de materiales orgánicos se lavó con salmuera (10 mL), se secó con Na_{2}SO_{4}, se decantó y se concentró bajo presión reducida. La purificación por cromatografía en columna de gel de sílice (eluyendo con hexano:EtOAc 9:1) dio metil-(3-nitro-fenil)-{3-estiril-1-[2-(trimetil-silanil)-etoximetil]-1H-indazol-6-il}-amina, en forma de un aceite (367 mg, 82%): TLC (Hexano:EtOAc 7:3) Rf sm = 0,29, Rf p = 0,39 (acetato de etilo:hexano 3:7); FTIR (KBr) 2951, 2894, 1611, 1528, 1485, 1348, 1248, 1077 cm^{-1}; ^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta: 7,99 (d, 1H, J = 8,67 Hz), 7,77 (t, 1H, J = 2,25 Hz), 7,72 (dd, 1H, J = 0,79, 2,09 Hz), 7,60, (d, 2H, J = 7,22 Hz), 7,26-7,54 (m, 7H), 7,19 (dd, 1H, J = 0,78, 2,41 Hz) 7,07 (dd, 1H, J = 1,85, 8,69 Hz), 5,70 (s, 2H), 3,63 (t, 2H, J = 8,10 Hz), 3,48 (s, 3H), 0,92 (t, 2H, J = 8,10 Hz), -0,04 (s, 9H); ^{13}CRMN (75 MHz, CDCl_{3}) \delta: 150,2, 149,6, 147,1, 143,5, 142,5, 137,3, 131,9, 129,8, 129,0, 128,2, 126,8, 123,1, 122,6, 120,2, 120,0, 119,7, 114,4, 111,4, 104,5, 78,0, 66,8, 41,1, 18,0, -1,2; LCMS (ESI) [M+H]/z Calculado 501, encontrado 510.
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63 
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Metil-(3-nitro-fenil)-{3-estiril-1-[2-(trimetil-silanil)-etoximetil)-1H-indazol-6-il}-amina se convirtió en N-metil-N-{3-estiril-1-[2-(trimetil-silanil)-etoximetil]-1H-indazol-6-il}-benceno-1,3-diamina como se ha descrito en el Ejemplo de referencia 11, etapa (iv). Rf sm = 0,55, Rf p = 0,31 (acetato de etilo:hexano 3:7); FTIR (película fina) 3455, 3360, 2951, 2893, 1621, 1601, 1494, 1449, 1249, 1074 cm^{-1}; ^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta: 7,81 (d, 1H, J = 8,8 Hz), 7,58 (d, 2H, J = 7,21 Hz), 7,26 - 7,50 (m 5H), 7,12 (t, 1H, J = 7,93 Hz), 7,01 (d, 1H, J = 1,73 Hz), 6,95 (dd, 1H, J = 1,99, 8,85 Hz), 5,67 (s, 2H), 3,63 (t, 2H, J = 8,12 Hz), 3,38 (s, 3H), 0,93 (t, 2H, J = 8,13 Hz), -0,04 (s, 9H); ^{13}CRMN (75 MHz, CDCl_{3}) \delta: 150,3, 149,0, 147,7, 143,4, 143,0, 137,6, 131,3, 130,4, 128,9, 128,0, 126,7, 121,2, 120,6, 117,3, 117,0, 113,1, 110,1, 109,3, 97,5, 77,8, 66,6, 41,0, 18,0, -1,2; LCMS (ESI) [M+H]/z Calculado 471,
Encontrado 471.
\newpage
Ejemplo de referencia 12(a)
N-{3-[metil-(3-estiril-1H-indazol-6-il)-amino]-fenil}-acetamida
64
N-Metil-N-{3-estiril-1-[2-(trimetil-silanil)-etoximetil]-1H-indazol-6-il}-benceno-1,3-diamina, preparada en el
Ejemplo de referencia 11 (34 mg, 0,041 mmol) se puso en suspensión en CH_{2}Cl_{2} (0,5 mL) a 23ºC bajo atmósfera de argón. Se añadieron piridina (81 \mul, 1,0 mmol), Ac_{2}O (94 \mul, 1,0 mmol) y DMAP (cat.). La mezcla de reacción se volvió homogénea inmediatamente. Después de 1 h, el análisis por TLC (CH_{2}Cl_{2}:EtOAc 4:1) no indicó material de partida. La reacción se detuvo bruscamente añadiendo a la mezcla NaHCO_{3} (acuoso) saturado (2 mL) y a continuación se diluyó con EtOAc (15 mL) y la fase orgánica se lavó con salmuera (3 mL), se decantó y se concentró bajo presión reducida hasta formar un aceite. El aceite se puso en suspensión en MeOH (2 mL) y se añadió K_{2}CO_{3} (83 mg, 0,6 mmol). La mezcla resultante se agitó a 23ºC bajo atmósfera de argón. Después de 1 h, la mezcla de reacción se diluyó con EtOAc (15 mL) y la fase orgánica se lavó con salmuera (3 mL), se decantó y se concentró bajo presión reducida. El material en bruto se purificó por cromatografía de líquidos de alta resolución (abreviadamente HPLC del inglés High Performance Liquid Chromatography) semi-preparativa obteniéndose N-{3-[metil-(3-estiril-1H-indazol-6-il)-amino]-fenil}-acetamida (8,4 mg, 22%). ^{1}HRMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta: 7,86 (d, 1H, J = 8,68 Hz), 7,58 (d, 1H, J = 7,17 Hz), 7,16-7,45 (m, 7H), 7,15 (d, 1H, J = 8,29 Hz), 6,98 (m, 1H), 6,95 (d, 1H, J = 1,92 Hz), 6,8 (dd, 1H, J = 1,16, 8,05 Hz), 3,37 (s, 3H), 2,14 (s, 3H). LCMS (ESI) [M+H]/z Calculado 383, Encontrado 383. Anal. Calculado: C, 75,37; H, 5,80; N, 14,65. Encontrado: C, 73,53; H, 6,01; N, 13,73.
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Ejemplo de referencia 12(b)
N-{3-[metil-(3-estiril-1H-indazol-6-il)-amino]-fenil}-benzamida
65
El compuesto del Ejemplo de referencia 12(b) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 12(a) anterior, excepto que se usó cloruro de benzoílo en lugar de anhídrido acético. LCMS (ESI) [M+H]/z Calculado 475, encontrado 475. Anal. Calculado: C (78,36), H (5,44), N (12,60). Encontrado: C (76,57), H (5,50), N (12,12).
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Ejemplo de referencia 12(c)
Éster bencílico del ácido {3-[metil-(3-estiril-1H-indazol-6-il)-amino]-fenil}-carbámico
66
El compuesto del Ejemplo de referencia 12(c) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 12(a) anterior, excepto que se usó cloruro de carbobenciloxi en lugar de anhídrido acético. Rf sm = 0,30, Rf p = 0,57 (CH_{2}Cl_{2}:EtOAc 8:2); LCMS (ESI+) [M+H]/z Calculado 475, encontrado 475; Anal. Calculado: C (75,93), H (5,52), N (11,81). Encontrado C (75,60), H (5,96), N (10,75).
\newpage
Ejemplo de referencia 12(d)
{3-[metil-(3-estiril-1H-indazol-6-il)-amino]-fenil}-amida del ácido 5-metil-tiazol-2-carboxílico
67
A una solución de N-metil-N-(3-estiril-1H-indazol-6-il)-benceno-1,3-diamina, preparada en el Ejemplo de referencia 11, (26 mg, 0,075 mmol) y ácido 5-metil-tiazol-2-carboxílico (64 mg, 0,45 mmol) en DMF (0,375 mL) a 23ºC bajo atmósfera de argón se añadió HATU (171 mg, 0,45 mmol). Después de 1 h, el análisis por TLC (CH_{2}Cl_{2}:EtOAc 8:2) no indicó material de partida. La reacción se detuvo bruscamente añadiendo a la mezcla NaHCO_{3} (acuoso) saturado (2 mL) y a continuación se diluyó con EtOAc (15 mL) y la fase orgánica se lavó con salmuera (3 mL), se decantó y se concentró bajo presión reducida. El aceite se puso en suspensión en MeOH (2 mL) y se añadió K_{2}CO_{3} (62 mg, 0,45 mmol). La mezcla resultante se agitó a 23ºC bajo atmósfera de argón. Después de 1 h el análisis por TLC (CH_{2}Cl_{2}:EtOAc 8:2) no indicó material de partida. La mezcla de reacción se diluyó con EtOAc (15 mL) y la fase orgánica se lavó con salmuera (3 mL), se decantó y se concentró bajo presión reducida hasta obtener un sólido. El material en bruto se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (eluyendo con CH_{2}Cl_{2}:EtOAc 85:15) obteniéndose el compuesto del epígrafe después de purificación por HPLC semi-preparativa (9,9 mg, 28%). Rf sm = 0,25, Rf p = 0,39 (hexano:EtOAc 8:2); LCMS (ESI+) [M+H]/z Calculado 466, encontrado 466. Anal. Calculado: C (69,65), H (4,98), N (15,04) S (6,89). Encontrado: C (69,24), H (5,35), N (13,97) S (5,95)_{.}
Ejemplo 13
N-[3-(3-estiril-1H-indazol-6-ilamino)-fenil]-benzamida
68
N-(3-{3-Estiril-1-[2-(trimetil-silanil)-etoximetil]-1H-indazol-6-ilamino}-fenil)-benzamida se convirtió en N-[3-(3-estiril-1H-indazol-6-ilamino)-fenil]-benzamida como se ha descrito en el Ejemplo de referencia 11. LCMS (ESI) [M+H]/z Calculado 431, encontrado 431. Anal. Calculado: C, 78,12; H, 5,15; N, 13,01. Encontrado: C, 77,06; H, 6,91; N, 9,88.
El material de partida se preparó como sigue:
69
(3-Nitro-fenil)-{3-estiril-1-[2-(trimetil-silanil)-etoximetil]-1H-indazol-6-il}-amina, preparada en el Ejemplo de referencia 11, etapa (vi), se convirtió en N-{3-estiril-1-[2-(trimetil-silanil)-etoximetil]-1H-indazol-6-il}-benceno-1,3-diamina como se ha descrito en el Ejemplo de referencia 11, etapa (iv). LCMS (ESI) [M+H]/z Calculado 457, encontrado 457.
70
A una solución de N-{3-estiril-1-[2-(trimetil-silanil)-etoximetil]-1H-indazol-6-il}-benceno-1,3-diamina (91 mg, 0,2 mmol) y piridina (0,081 mL, 1,0 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (0,5 mL) enfriada hasta -5ºC bajo atmósfera de argón se añadió cloruro de benzoílo (0,028 mL, 0,24 mmol). Después de 0,5 h la reacción se detuvo bruscamente añadiendo a la mezcla NaHCO_{3} (acuoso) saturado y a continuación se extrajo 2 x 5 mL de CH_{2}Cl_{2}. La mezcla de los materiales orgánicos se lavó con salmuera (5 mL), se secó con Na_{2}SO_{4}, se decantó y se concentró bajo presión reducida obteniéndose un aceite. El material en bruto se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (eluyendo con hexano:EtOAc 3:2) obteniéndose N-(3-{3-estiril-1-[2-(trimetil-silanil)-etoximetil]-1H-indazol-6-ilamino}-fenil)-benzamida (108 mg, rendimiento 96%). Rf sm = 0,35, Rf p = 0,44 (acetato de etilo:hexano 1:1); FTIR (película fina) 3320, 2951, 2893, 1657, 1604, 1537, 1493, 1409, 1303, 1248, 1074 cm^{-1}; LCMS (ESI) [M+H]/z Calculado 561, encontrado 561. Anal. Calculado: C, 72,82; H, 6,47; N, 9,99. Encontrado: C, 72,33; H, 6,39; N, 9,81.
Ejemplo de referencia 14
Metil-fenil-(3-estiril-1H-indazol-6-il)-amina
71
Metil-fenil-{3-estiril-1-[2-(trimetil-silanil)-etoximetil]-1H-indazol-6-il}-amina se convirtió en metil-fenil-(3-estiril-1H-indazol-6-il)-amina como se ha descrito en el Ejemplo de referencia 11. MS (ESI) [M+H]/z Calculado 326, encontrado 326.
El material de partida se preparó como sigue:
72
A una solución de 3-estiril-1-[2-(trimetil-silanil)-etoximetil]-1H-indazol-6-ilamina (1,58 g, 4 mmol) en AcOH (14 mL), agua (3 mL) y HCl concentrado (1,67 mL) enfriada hasta 2ºC, se añadió una solución de NaNO_{2} (304 mg, 4,4 mmol) en agua (0,5 mL) durante 5 min. La solución roja oscura resultante se agitó a 2ºC durante 0,5 h, y a continuación se añadió gota a gota una solución de KI (797 mg, 4,8 mmol) e I_{2} (610 mg, 2,4 mmol) en agua (1 mL) de modo que se mantuviera la temperatura interna por debajo de 5ºC. Después de 2 h a 2ºC la mezcla de reacción se dejó en agitación a 23ºC durante 17 h. La reacción se detuvo bruscamente añadiendo a la mezcla NaOH 3N (acuoso), se diluyó con EtOAc (50 mL) y H_{2}O (15 mL), se separaron las fases y la fase acuosa se extrajo 2 x 15 mL de EtOAc. La mezcla de fases orgánicas se lavó 3 x 20 mL de NaHSO_{3} al 5% y con salmuera (15 mL), se secó con Na_{2}SO_{4}, se decantó y se concentró bajo presión reducida. La mezcla de reacción en bruto se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (eluyendo con hexano:EtOAc 1:1) obteniéndose 6-yodo-3-estiril-1-[2-(trimetil-silanil)-etoximetil]-1H-indazol en forma de un sólido blanco (1,3 g, rendimiento 68%). ^{1}HRMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta: 8,03 (s, 1H), 7,79 (d, 1H, J = 9,0 Hz), 7,30-7,60 (m, 8H), 5,73 (s, 2H), 3,63 (t, 2H, J = 6,0 Hz), 0,96 (t, 2H, J = 6,0 Hz), 0,0 (s, 9); ^{13}CRMN (75 MHz, CDCl_{3}) \delta: 143,6, 142,4, 137,2, 132,1, 130,8, 129,0, 128,3, 126,8, 122,5, 122,4, 119,6, 119,5, 92,9, 78,1, 66,9, 18,0, -1,2. Anal. Calculado: C, 52,94; H, 5,29; N, 5,88. Encontrado: C, 52,66; H, 5,29; N, 5,74.
73
6-Yodo-3-estiril-1-[2-(trimetil-silanil)-etoximetil]-1H-indazol se convirtió en metil-fenil-{3-estiril-1-[2-(trimetil-silanil)-etoximetil]-1H-indazol-6-il}-amina como se ha descrito en el Ejemplo de referencia 11, etapa (v). Rf sm = 0,35 Rf p = 0,13 (EtOAc:hexano 1:9); IR (KBr) 3031, 2951, 1625, 1595, 1498, 1449, 1326, 1303, 1248, 1212, 1076, 835, 694 cm^{-1}; MS (ESI) [M+H]/z Calculado 456, encontrado 456.
Ejemplo de referencia 15
N-[3-(2-benzo[1,3]dioxol-5-il-vinil)-1H-indazol-6-il]-N-metilbenceno-1,3-diamina
74
[3-(2-Benzo[1,3]dioxol-5-il-vinil)-1H-indazol-6-il]-metil-(3-nitro-fenil)-amina se convirtió en N-[3-(2-benzo[1,3]dioxol-5-il-vinil)-1H-indazol-6-il]-N-metil-benceno-1,3-diamina como se ha descrito en el Ejemplo de referencia 11, etapa (iv). LCMS (ESI) [M+H]/z Calculado 385, encontrado 385. Anal. Calculado: C, 71,86; H, 5,24; N, 14,57. Encontrado: C, 70,99; H, 5,60; N, 13,80.
El material de partida se preparó como sigue:
75
A una mezcla de 6-nitro-3-yodo-[2-(trimetil-silanil)-etoximetil]-1H-indazol (4,2 g, 10 mmol), ácido borónico (3,46 g, 15 mmol) y Pd(PPh_{3})_{4} (0,58 g, 0,5 mmol) a 23ºC bajo atmósfera de argón se añadió 1,4-dioxano (38 mL) y NaOH 2N (acuoso) (12,5 mL, 25 mmol). La mezcla resultante se calentó hasta 90ºC. Después de 2 h la mezcla de reacción se diluyó con EtOAc (100 mL) y agua (70 mL), se separaron las fases y la fase orgánica se extrajo 2 X 100 mL de EtOAc. La mezcla de fases orgánicas se lavó con salmuera (20 mL) y a continuación se secó con Na_{2}SO_{4}, se filtró y se concentró bajo presión reducida. La mezcla en bruto se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (eluyendo con hexano:EtOAc 9:1) obteniéndose 3-(2-benzo[1,3]dioxol-5-il-vinil)-6-nitro-1-[2-(trimetil-silanil)-etoximetil]-1H-indazol en forma de un sólido amarillo (4,15 g, rendimiento 94%). FTIR (película fina) 2950, 2898, 1523, 1501, 1483, 1446, 1344, 1249, 1080, 1043, 927 cm^{-1}; ^{1}HRMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta: 8,56 (dd, 1H, J = 0,68, 1,75 Hz), 8,14 (d, 1H, J = 1,78 Hz), 8,13 (d, 1H, J = 0,67 Hz), 7,50 (d, 1H, 16,53 Hz), 7,25 (d, 1H, 16,52 Hz), 7,18 (d, 1H, J = 1,67 Hz), 7,07 (dd, 1H, J = 1,65, 8,13 Hz), 6,88 (d, 1H, J = 8,0 Hz), 6,05 (s, 2H), 5,84 (s, 2H), 3,66 (t, 2H, J = 7,33 Hz), 0,97 (t, 2H, J = 7,24 Hz), 0,0 (s, 9H); ^{13}C RMN (75 MHz, CDCl_{3}) \delta: 148,5, 148,2, 147,0, 143,9, 140,1, 132,7, 131,3, 126,1, 122,3, 121,9, 116,7, 116,5, 108,7, 106,9, 105,7, 101,5, 78,4, 67,2, 17,9, -1,3; LCMS (ESI) [M+H]/z Calculado 531, encontrado 531.
76 
\vskip1.000000\baselineskip
3-(2-Benzo[1,3]dioxol-5-il-vinil)-6-nitro-1-[2-(trimetil-silanil)-etoximetil]-1H-indazol se convirtió en 3-(2-benzo[1,3]dioxol-5-il-vinil)-1-[2-(trimetil-silanil)-etoximetil]-1H-indazol-6-ilamina como se ha descrito en el Ejemplo de referencia 11, etapa (iv). ^{1}HRMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta: 7,73 (d, 1H, J = 8,56 Hz), 7,52 (d, 1H, J = 16,57 Hz), 7,18 (d, 1H, J = 16,56 Hz), 7,10 (d, 1H, J = 1,49 Hz), 6,98 (dd, 1H, J = 1,52, 8,06 Hz), 6,80 (d, 1H, J = 8,01 Hz), 6,68 (d, 1H, J = 1,44 Hz), 6,63 (dd, 1H, J = 1,86, 8,57 Hz), 5,95 (s, 2H), 5,59 (s, 2H), 3,59 (t, 2H, J = 8,17 Hz), 0,91 (t, 2H, J = 8,33 Hz), 0,04 (s, 9H); ^{13}CRMN (75 MHz, CDCl_{3}) \delta: 148,3, 147,6, 146,4, 143,4, 143,0, 132,0, 130,8, 122,0, 121,7, 118,8, 116,5, 113,1, 108,5, 105,5, 101,3, 92,9, 77,6, 66,3, 17,9, -1,3; LCMS (ESI) [M+H]/z Calculado 410, encontrado 410.
77 
\vskip1.000000\baselineskip
3-(2-Benzo[1,3]dioxol-5-il-vinil)-1-[2-(trimetil-silanil)-etoximetil]-1H-indazol-6-ilamina se convirtió en {3-(2-benzo[1,3]dioxol-5-il-vinil)-1-[2-(trimetil-silanil)-etoximetil]-1H-indazol-6-il}-(3-nitro-fenil)-amina como se ha descrito en el Ejemplo de referencia 11, etapa (v). ^{13}CRMN (75 MHz, CDCl_{3}) \delta: 150,8, 149,7, 149,1, 146,0, 144,8, 143,6, 142,1, 133,1, 132,7, 131,6, 124,0, 123,8, 123,1, 120,4, 119,5, 117,2, 116,8, 112,6, 109,9, 106,9, 102,6, 99,7, 79,1, 67,9, 19,2, 0,0; MS (FAB) [M+H]/z Calculado 531, encontrado 531. Anal. Calculado: C, 63,38; H, 5,70; N, 10,56. Encontrado: C, 63,49; H, 5,76; N, 10,42.
78 
\vskip1.000000\baselineskip
{3-(2-Benzo[1,3]dioxol-5-il-vinil)-1-[2-(trimetil-silanil)-etoximetil]-1H-indazol-6-il}-(3-nitro-fenil)-amina se
convirtió en {3-(2-benzo[1,3]dioxol-5-il-vinil)-1-[2-(trimetil-silanil)-etoximetil]-1H-indazol-6-il}-metil-(3-nitro-fenil)-amina como se ha descrito en el Ejemplo de referencia 11, etapa (vi). FTIR (KBr) 2952, 2894, 1612, 1529, 1503, 1489, 1446, 1407, 1348, 1306, 1251, 1077, 1039 cm^{-1}; ^{13}CRMN (75 MHz, CDCl_{3}) \delta: 150,1, 149,5, 148,4, 147,8, 147,0, 143,5, 142,4, 131,8, 131,5, 129,8, 123,0, 122,49, 121,9, 120,1, 119,5, 118,2, 114,3, 113, 108,7, 105,7, 104,5, 101,4, 78,0, 66,8, 41,0, 17,9, -1,2; MS (FAB) [M+H]/z Calculado 545, encontrado 545. Anal. Calculado: C, 63,95; H, 5,92; N, 10,29. Encontrado: C, 62,63; H, 5,72; N, 9,62.
79 
\vskip1.000000\baselineskip
{3-(2-Benzo[1,3]dioxol-5-il-vinil)-1-[2-(trimetil-silanil)-etoximetil]-1H-indazol-6-il}-metil-(3-nitro-fenil)-amina se convirtió en [3-(2-benzo[1,3]dioxol-5-il-vinil)-1H-indazol-6-il]-metil-(3-nitro-fenil)-amina como se ha descrito en el Ejemplo de referencia 11. LCMS (ESI) [M+H]/z Calculado 415, encontrado 415. Anal. Calculado: C, 66,66; H, 4,38; N, 13,52. Encontrado: C, 66,56; H, 4,48; N, 13,35.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo de referencia 16(a)
N-(3-{[3-(2-benzo[1,3]dioxol-5-il-vinil)-1H-indazol-6-il]-metil-amino}-fenil)-benzamida 
\vskip1.000000\baselineskip
80 
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N-[3-(2-Benzo[1,3]dioxol-5-il-vinil)-1H-indazol-6-il]-N-metil-benceno-1,3-diamina (preparada como se ha descrito en el Ejemplo de referencia 15) se convirtió en N-(3-{[3-(2-benzo[1,3]dioxol-5-il-vinil)-1H-indazol-6-il]-metil-amino}-fenil)-benzamida de la manera descrita en el Ejemplo de referencia 12(a). LCMS (ESI) [M+H]/z Calculado 489, encontrado 489. Anal. Calculado: C, 73,76; H, 4,95; N, 11,47. Encontrado: C, 73,19; H, 5,09; N, 11,20.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo de referencia 16(b)
N-(3-{[3-(2-benzo[1,3]dioxol-5-il-vinil)-1H-indazol-6-il]-metil-amino}-fenil)-3-metil-benzamida 
\vskip1.000000\baselineskip
81 
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El compuesto del Ejemplo de referencia 16(b) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 16(a) anterior, excepto que se usó cloruro m-toluilo en lugar de cloruro de benzoílo. LCMS (ESI) [M+H]/z Calculado 504, encontrado 504. Anal. Calculado: C, 74,09; H, 5,21; N, 11,15. Encontrado: C, 73,04; H, 5,84; N, 10,29.
\newpage
Ejemplo de referencia 16(c)
N-(3-{[3-(2-benzo[1,3]dioxol-5-il-vinil)-1H-indazol-6-il]-metil-amino}-fenil)-3-dimetilamino-benzamida
82
El compuesto del Ejemplo de referencia 16(c) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 16(a), excepto que se usó cloruro de m-dimetilaminobencilo en lugar de cloruro de benzoílo. LCMS (ESI) [M+H]/z Calculado 532, encontrado 532. Anal. Calculado: C, 72,30; H, 5,50; N, 13,17. Encontrado: C, 71,61; H, 5,80; N, 12,75.
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Ejemplo de referencia 16(d)
N-(3-{[3-(2-benzo[1,3]dioxol-5-il-vinil)-1H-indazol-6-il]-metil-amino}-fenil)-3-trifluorometil-benzamida
83
El compuesto del Ejemplo de referencia 16(d) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 16(a), excepto que se usó cloruro de m-trifluorometilbenzoílo en lugar de cloruro de benzoílo. LCMS (ESI) [M+H]/z Calculado 557, encontrado 557. Anal. Calculado: C, 66,90; H, 4,17; N, 10,07. Encontrado: C, 66,64; H, 4,34; N, 9,82.
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Ejemplo de referencia 16 (e)
3-acetil-N-(3-{[3-(2-benzo[1,3]dioxol-5-il-vinil)-1H-indazol-6-il]-metil-amino}-fenil)-benzamida
84
El compuesto del Ejemplo de referencia 16(e) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 16(a), excepto que se usó cloruro de m-acetilbenzoílo en lugar de cloruro de benzoílo. LCMS (ESI) [M+H]/z Calculado 531, encontrado 531. Anal. Calculado: C, 72,44; H, 4,94; N, 10,56. Encontrado: C, 55,51; H, 4,21; N, 7,58.
\newpage
Ejemplo de referencia 16(f)
6-[N-(3-(4-terc.butil-3-hidroxibenzamido)fenil)-N-metilamino]-3-E-[(3,4-metilenedioxifenil)etenil]-1H-indazol
85
El compuesto del Ejemplo de referencia 16(f) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 16(a), excepto que se usaron ácido 3-terc.butil-4-hidroxibenzoico, HATU y TEA en lugar de cloruro de benzoílo. ^{1}H RMN (300 MHz, CD_{3}OD) \delta: 7,90 (d, 1H, J = 8,91 Hz), 7,83 (d, 1H, J = 2,29 Hz), 7,63 (dd, 1H, J = 8,36 Hz, J = 2,31 Hz), 7,54 (t, 1H, J = 1,97 Hz), 7,25-7,43 (m, 4H), 7,14-7,20 (m, 2H), 7,06 (dd, 1H, J = 8,11 Hz, J = 1,55 Hz), 6,96 (dd, 1H, J = 8,93 Hz, J = 1,97 Hz), 6,90 (m, 1H), 6,82 (t, 2H, J = 8,18 Hz), 6,0 (s, 2H), 3,41 (s, 3H), 1,42 (s, 9H).
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo de referencia 17
Fenil-(3-estiril-1H-indazol-6-il)-metanona
86
Fenil-{3-estiril-1-[2-(trimetil-silanil)-etoximetil]-1H-indazol-6-il}-metanona se convirtió en fenil-(3-estiril-1H-
indazol-6-il)-metanona como se ha descrito en el Ejemplo de referencia 11 (30 mg, 78%). MS (ESI) [M+H]/z Calculado 325, encontrado 325. Anal. Calculado: C, 81,46; H, 4,97; N, 8,46. Encontrado: C, 80,36; H, 5,16; N, 8,51.
El material de partida se preparó como sigue:
87
A una solución de 6-yodo-3-estiril-1-[2-(trimetil-silanil)-etoximetil]-1H-indazol, preparado en el Ejemplo de referencia 14, etapa (i), (143 mg, 0,3 mmol) en THF (1 mL) enfriada hasta -78ºC bajo atmósfera de argón se añadió gota a gota n-BuLi (0,2 mL, 0,315 mmol). La mezcla resultante se agitó a -78ºC durante 30 min, a continuación se añadió rápidamente por medio de una cánula una solución of benzaldehído (0,035 mL, 0,33 mmol) en THF (0,5 mL). Después de 0,5 h la reacción se detuvo bruscamente añadiendo a la mezcla NH_{4}Cl (acuoso) saturado y se diluyó con EtOAc (10 mL) y H_{2}O (3 mL). Se separaron las fases y la fase acuosa se extrajo 2x10 mL de EtOAc. La mezcla de EtOAc se lavó con salmuera (5 mL), se secó con Na_{2}SO_{4}, se decantó y se concentró bajo presión reducida. La mezcla en bruto se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (eluyendo con hexano:EtOAc 4:1) obteniéndose fenil-{3-estiril-1-[2-(trimetil-silanil)-etoximetil]-1H-indazol-6-il}-metanol (68 mg, rendimiento 50%). Rf sm = 0,72; Rf p = 0,39 (hexano:EtOAc 7:3); FTIR (capa fina) 3368, 2952, 2893, 1621, 1478, 1449, 1374, 1307, 1249, 1216, 1078, 960, 859, 835 cm^{-1}. MS (ESI) [M+H]/z Calculado 457, encontrado 457.
88
A una solución de fenil-{3-estiril-1-[2-(trimetil-silanil)-etoximetil]-1H-indazol-6-il}-metanol (68 mg, 0,15 mmol) en diclorometano (3 mL) a 23ºC bajo atmósfera de argón se añadió peryodinano (reactivo de Dess-Martin) (190 mg, 0,45 mmol). La mezcla resultante se agitó a 23ºC durante 1 hora. A continuación la solución se diluyó con hexano (3 mL) y a continuación se filtró a través de Celite y se concentró bajo presión reducida hasta obtener un sólido. La mezcla en bruto se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (eluyendo con hexano:EtOAc 9:1) obteniéndose fenil-{3-estiril-1-[2-(trimetil-silanil)-etoximetil)-1H-indazol-6-il}-metanona (54 mg, rendimiento 79%). Rf sm = 0,41, Rf p = 0,63 (hexano:EtOAc 7:3); FTIR (película fina) 3059, 2952, 2894, 1659, 1474, 1448, 1307, 1249, 1078, 836, 649 cm^{-1}. MS (ESI) [M+H]/z Calculado 455, encontrado 455.
Ejemplo de referencia 18
(3-amino-fenil)-(3-estiril-1H-indazol-6-il)-metanona
89
(3-Amino-fenil)-{3-estiril-1-[2-(trimetil-silanil)-etoximetil]-1H-indazol-6-il)-metanona se convirtió en (3-amino-fenil)-(3-estiril-1H-indazol-6-il)-metanona como se ha descrito en el Ejemplo de referencia 11. ^{1}HRMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta: 8,07 (dd, 1H, J = 0,71, 8,50 Hz), 7,91 (s, 1H), 7,64 (dd, 1H, J = 1,35, 8,48 Hz), 7,54-7,60 (m, 2H), 7,46 (d, 2H, J = 12,84 Hz). 7,35-7,40 (m, 2H), 7,22-7,31 (m, 2H), 7,16-7,13 (m, 2H), 6,91 (ddd, 1H, J = 1,08, 7,89 Hz). LCMS (ESI) [M+H]/z Calculado 340, encontrado 340.
El material de partida se preparó como sigue:
90
6-Yodo-3-estiril-1-[2-(trimetil-silanil)-etoximetil]-1H-indazol se convirtió en (3-nitro-fenil)-{3-estiril-1-[2-(tri-
metil-silanil)-etoximetil]-1H-indazol-6-il}-metanol como se ha descrito en el Ejemplo de referencia 17, etapa (i). Rf sm = 0,71, Rf p = 0,25 (hexano:EtOAc 7:3); FTIR (película fina) 3369, 3061, 2952, 2894, 2361, 1620, 1578, 1530, 1478, 1449, 1350, 1308, 1249, 1215, 1080, 961, 859 cm^{-1}; ^{1}HRMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta: 8,35 (s, 1H), 8,14 (dd, 1H, J = 1,34, 8,14 Hz), 7,99 (d, 1H, J = 8,38 Hz), 7,76 (d, 1H, J = 7,72 Hz), 7,68 (s, 1H), 7,59-7,30 (m, 8H), 7,21 (d, 1H, J = 8,33 Hz), 6,09 (s, 1H), 5,73 (s, 2H), 3,61 (t, 2H, J = 8,30 Hz), 0,90 (t, 2H, J = 8,30 Hz), -0,06 (s, 9H). ^{13}CRMN (75 MHz, CDCl_{3}) \delta: 148,5, 145,9, 143,4, 142,4, 141,3, 137,1, 132,7, 132,0, 129,5, 128,9, 128,2, 126,7, 122,6, 122,6, 121,8, 121,5, 120,8, 119,6, 107,8, 77,7, 75,4, 66,8, 17,8, -1,3. Anal. Calculado: C, 67,04; H, 6,23; N, 8,38. Encontrado: C, 66,93; H, 6,20; N, 8,41.
91
(3-Nitro-fenil)-{3-estiril-1-[2-(trimetil-silanil)-etoximetil]-1H-indazol-6-il}-metanol se convirtió en (3-nitro-fenil)-{3-estiril-1-[2-(trimetilsilanil)-etoximetil]-1H-indazol-6-il}-metanona como se ha descrito en el Ejemplo de referencia 17, etapa (ii) (129 mg, 91%). Rf sm = 0,46, Rf p = 0,23 (hexano:EtOAc 7:3); FTIR (película fina) 3082, 2952, 2894, 1665, 1613, 1532, 1476, 1349, 1298, 1250, 1080, 836, 718 cm^{-1}; LCMS (ESI) [M+H]/z Calculado 500, encontrado 500.
92
(3-Nitro-fenil)-{3-estiril-1-[2-(trimetil-silanil)-etoximetil]-1H-indazol-6-il}-metanona se convirtió en (3-amino-fenil)-{3-estiril-1-[2-(trimetil-silanil)-etoximetil]-1H-indazol-6-il}-metanona como se ha descrito en el Ejemplo de referencia 11, etapa (iv) (102 mg, 84%). LCMS (ESI) [M+H]/z Calculado 340, encontrado 340.
Ejemplo de referencia 19(a)
N-[3-(3-estiril-1H-indazol-6-carbonil)-fenil]-acetamida
93
(3-Amino-fenil)-(3-estiril-1H-indazol-6-il)-metanona, preparada en el Ejemplo de referencia 18, se convirtió en N-[3-(3-estiril-1H-indazol-6-carbonil)-fenil]-acetamida como se ha descrito en el Ejemplo de referencia 12(a) (12,2 mg, 78%). Rf sm = 0,16, Rf p = 0,35 (CH_{2}Cl_{2}:EtOAc 8:2); LCMS (ESI) [M+H]/z Calculado 382, encontrado 382. Anal. Calculado: C, 75,57; H, 5,02; N, 11,02. Encontrado: C, 74,32; H, 5,41; N, 10,54.
Ejemplo de referencia 19(b)
N-[3-(3-estiril-1H-indazol-6-carbonil)-fenil)-benzamida
94
El compuesto del Ejemplo de referencia 19(b) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 19(a), excepto que se usó cloruro de benzoílo en lugar de anhídrido acético. ^{1}HRMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta: 8,40 (s, 1H), 8,02 (d, 1H, J = 8,49 Hz), 7,98 (d, 1H, J = 1,01 Hz), 7,95 (s, 1H), 7,95 (s, 1H), 7,83-7,88 (m, 3H), 7,65 (dd, 1H, J = 1,04, 8,48 Hz), 7,29-7,56 (m, 11H). MS (ESI) [M+H]/z Calculado 444, encontrado 444. Anal. Calculado: C, 78,54; H, 4,77; N, 9,47. Encontrado: C, 78,01; H, 4,87; N, 9,32.
Ejemplo de referencia 19(c)
Éster bencílico del ácido [3-(3-estiril-1H-indazol-6-carbonil)-fenil]-carbámico
95
El compuesto del epígrafe se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 19(a), excepto que se usó cloruro de carboxibenciloxi en lugar de anhídrido acético. ^{1}HRMN (300 MHz, DMSO-d_{6}) \delta: 8,37 (d, 1H, J = 8,48 Hz), 7,98 (s, 1H), 7,88 (s, 1H), 7,79 (s, 1H), 7,75 (d, 2H, J = 7,44 Hz), 7,61 (d, 2H, J = 1,81 Hz), 7,58 (s, 1H), 7,51 (t, 1H, J = 7,79 Hz), 7,42 (t, 5H, J = 6,56 Hz), 7,31-7,37 (m, 4H), 5,16 (s, 2H); LCMS (ESI) [M+H]/z Calculado 474, encontrado 474. Anal. Calculado: C, 76,09; H, 4,90; N, 8,87. Encontrado: C, 73,82; H, 4,93; N, 8,27.
Ejemplo de referencia 19(d)
[3-(3-estiril-1H-indazol-6-carbonil)-fenil]-amida del ácido 5-metil-tiazol-2-carboxílico
96
(3-Amino-fenil)-(3-estiril-1H-indazol-6-il)-metanona se convirtió en [3-(3-estiril-1H-indazol-6-carbonil)-fenil]-amida del ácido 5-metil-tiazol-2-carboxílico como se ha descrito en el Ejemplo de referencia 12(d) (9,9 mg, 28%). ^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta: 8,15 (d, 1H, J = 8,49 Hz), 8,09 (t, 1H, J = 1,86 Hz), 8,04 (dd, 1H, J = 1,0, 7,98 Hz), 7,99 (s, 1H), 7,75 (dd, 1H, J = 1,31, 8,47 Hz), 7,67 (s, 1H), 7,63 (d, 2H, J = 7,30 Hz), 7,54-7,58 (m, 3H), 7,50 (s, 1H), 7,42 (t, 3H, J = 8,09 Hz); LCMS (ESI) [M+H]/z Calculado 465, encontrado 465.
Ejemplo de referencia 19(e)
6-[3-(5-metilpiridin-3-ilcarboxamido)bencil]-3-E-estiril-1H-indazol
97
El compuesto del Ejemplo de referencia 19(e) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 19(d) excepto que se usó ácido 5-metil-nicotínico en lugar de ácido 5-metil-tiazol-2-carboxílico. ^{1}HRMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta: 9,22 (s, 1H), 8,99 (d, 1H, J = 0,59 Hz), 8,67 (s, 1H), 8,24 (s, 1H), 8,16 (d, 1H, J = 8,32 Hz), 2,97 (dd, 1H, J = 83 Hz, J = 0,94 Hz), 7,72 (d, 1H, J = 16,65 Hz), 7,64 (d, 2H, J = 7,21 Hz), 7,19-7,47 (m, 8H), 6,95 (d, 1H, J = 6,43 Hz), 2,49 (s, 3H). MS (ESI+) [M+H]/z Calculado 459, encontrado 459. Anal. Calculado: C, 75,97, H, 4,84, N, 12,22. Encontrado: C, 75,86, H, 4,94, N, 12,10.
Ejemplo de referencia 19(f)
6-[3-(indol-4-ilcarboxamido)benzoil]-3-E-estiril-1H-indazol
98
El compuesto del Ejemplo de referencia 19 (f) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 19 (d) excepto que se usó ácido 1H-indol-4-carboxílico en lugar de ácido 5-metil-tiazol-2-carboxílico. LCMS (ESI+) [M+H]/z Calculado 483, encontrado 483. Anal. Calculado: C, 77,16; H, 4,60; N, 11,61. Encontrado: C, 76,15; H, 4,49; N, 11,31.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo de referencia 19(g)
6-[3-(piridin-2-ilacetamido)benzoil]-3-E-estiril-1H-indazol
99
El compuesto del Ejemplo de referencia 19(g) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 19(d), excepto que se usó ácido piridin-2-il-acético. ^{1}HRMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta: 8,50 (dd, 1H, J = 4,86 Hz, J = 0,91 Hz), 8,37 (d, 1H, J = 8,51 Hz), 8,09 (s, 1H), 7,94 (d, 1H, J = 7,89 Hz), 7,87 (s, 1H), 7,73-7,79 (m, 3H), 7,25-7,60 (m, 10H), 3,86 (s, 2H). MS (ESI) [M+H]/z Calculado 459, encontrado 459. Anal. Calculado: C, 75,97, H, 4,84, N, 12,22. Encontrado: C, 74,70, H, 4,83, N, 11,99.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo de referencia 19(h)
6-[3-(2-metilpropionamido)benzoil]-3-E-estiril-1H-indazol
100
El compuesto del Ejemplo de referencia 19(h) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 19(a). Se usó cloruro de isobutirilo en lugar de cloruro de acetilo. ^{1}HRMN (300 MHz, DMSO-d_{6}) \delta: 8,38 (d, 1H, J = 8,13 Hz), 8,08 (t, 1H), 7,96 (s, 1H, J = 7,8 Hz, J = 1,91 Hz), 7,88 (s, 1H), 7,75 (d, 2H, J = 7,25 Hz), 7,61 (d, 2H, 2,05 Hz), 7,40-7,58 (m, 5H), 7,31 (m, 1H), 2,60 (m, 1H, J = 6,82 Hz), 1,1 (d, 6H, J = 6,82 Hz). MS (ESI+) [M+Na]/z Calculado 432, encontrado 432. Anal. Calculado: C, 76,26, H, 5,66, N, 10,26. Encontrado: C, 75,14, H, 5,62, N, 10,08.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo de referencia 19(i)
6-[3-(2-acetamido-2-fenilacetamido)benzoil]-3-E-estiril-1H-indazol
101
El compuesto del Ejemplo de referencia 19(i) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 19(d) excepto que se usó ácido acetilamino-2-fenil-acético en lugar de ácido 5-metil-tiazol-2-carboxílico. ^{1}HRMN (300 MHz, DMSO-d_{6}) \delta: 13,5 (s, 1H), 10,6 (s, 1H), 8,66 (d, 1H, J = 7,66 Hz), 8,36 (d, 1H, J = 8,47 Hz), 8,07 (s, 1H), 7,92 (d, 1H, J = 7,63 Hz), 7,86 (s, 1H), 7,75 (d, 2H, J = 7,33 Hz), 7,29-7,60 (m, 13H), 5,61 (d, 1H, J = 7,6 Hz), 1,92 (s, 3H). LCMS (ESI+) [M+H]/z Calculado 515, encontrado 515. Anal. Calculado: C, 74,69, H, 5,09, N, 10,89. Encontrado: C, 73,01, H, 5,01, N, 10,60.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo de referencia 19(j)
6-[3-(piridin-4-ilcarboxamido)benzoil]-3-E-estiril-1H-indazol
102 
\vskip1.000000\baselineskip
El compuesto del Ejemplo de referencia 19(j) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 19(d) excepto que se usó ácido isonicotínico en lugar de ácido 5-metil-tiazol-2-carboxílico. MS (ESI+) [M+Na]/z Calculado 467, encontrado 467. Anal. Calculado: C, 75,66; H, 4,54; N, 12,60. Encontrado: C, 74,17; H, 4,62; N, 12,31.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo de referencia 19(k)
6-[3-(piridin-2-ilcarboxamido)benzoil]-3-E-estiril-1H-indazol
103 
\vskip1.000000\baselineskip
El compuesto del Ejemplo de referencia 19(k) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 19(d) excepto que se usó ácido piridina-2-carboxílico en lugar de ácido 5-metil-tiazol-2-carboxílico. MS (ESI+) [M+Na]/z Calculado 467, encontrado 467. Anal. Calculado: C, 75,66; H, 4,54; N, 12,60. Encontrado: C, 74,17; H, 4,61; N, 12,44.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo de referencia 19(l)
6-[3-(isoxazol-4-ilcarboxamido)benzoil)-3-E-estiril-1H-indazol
104 
\vskip1.000000\baselineskip
El compuesto del Ejemplo de referencia 19(l) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 19(d) excepto que se usó ácido isoxazol-5-carboxílico en lugar de ácido 5-metil-tiazol-2-carboxílico. MS (ESI+) [M+H]/z Calculado 435, encontrado 435. Anal. Calculado: C, 71,88; H, 4,18; N, 12,90. Encontrado: C, 71,36; H, 4,33; N, 12,47.
\newpage
Ejemplo de referencia 19(m)
6-[3-(6-cloropiridin-2-ilcarboxamido)benzoil]-3-E-estiril-1H-indazol
105
El compuesto del Ejemplo de referencia 19(m) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 19(d) excepto que se usó ácido 6-cloro-piridina-2-carboxílico en lugar de ácido 5-metil-tiazol-2-carboxílico. MS (ESI+) [M+Na]/z Calculado 501, encontrado 501.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo de referencia 19(n)
6-[3-(4-cloropiridin-2-ilcarboxamido)benzoil]-3-E-estiril-1H-indazol
106
El compuesto del Ejemplo de referencia 19(n) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 19(d) excepto que se usó ácido 4-cloro-piridina-2-carboxílico en lugar de ácido 5-metil-tiazol-2-carboxílico. MS (ESI+) [M+H]/z Calculado 479, encontrado 479. Anal. Calculado: C, 70,22; H, 4,00; N, 11,70. Encontrado: C, 70,07; H, 4,09; N, 11,64.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo de referencia 19(o)
6-[3-(2-cloropiridin-4-ilcarboxamido)benzoil]-3-E-estiril-1H-indazol
107
El compuesto del Ejemplo de referencia 19(o) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 19(d) excepto que se usó ácido 2-cloro-isonicotínico en lugar de ácido 5-metil-tiazol-2-carboxílico. MS (ESI+) [M+H]/z Calculado 479, encontrado 479.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo de referencia 19(p)
6-[3-(2-metilamino-2-fenilacetamido)benzoil]-3-E-estiril-1H-indazol
108
A una solución de 6-[3-(2-(N-t-butoxicarbonil-N-metilamino)-2-fenil-acetamido)benzoil]-3-E-estiril-1H-indazol (115 mg, 0,2 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (2 ml), enfriada hasta 0ºC, se añadió TFA (2 ml). Después de 40 min, la reacción se detuvo bruscamente añadiendo a la mezcla NaHCO_{3} (acuoso) saturado y a continuación se extrajo con CH_{2}Cl_{2} (2 x 10 ml). Los materiales orgánicos se lavaron con salmuera, se secaron con Na_{2}SO_{4}, se decantaron y se concentraron. La purificación por cromatografía en columna de gel de sílice (metanol-diclorometano 1:10) dio 6-[3-(2-metilamino-2-fenilacetamido)benzoil]-3-E-estiril-1H-indazol (38 mg, 39%). MS (ESI+) [M+H]/z Calculado 487, encontrado 487. Anal. Calculado: C, 76,52; H, 5,39; N, 11,51. Encontrado: C, 74,99; H, 5,76; N, 10,89.
El material de partida se preparó como se describe a continuación:
(i) 6-[3-(2-(N-t-butoxicarbonil-N-metilamino)-2-fenil-acetamido)benzoil]-3-E-estiril-1H-indazol
109
6-[3-(2-(N-t-Butoxicarbonil-N-metilamino)-2-fenil-acetamido)benzoil]-3-E-estiril-1H-indazol se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 19(d) excepto que se usó ácido (t-butoxicarbonil-metil-amino)-fenil-acético en lugar de ácido 5-metil-tiazol-2-carboxílico. MS (ESI+) [M+H]/z Calculado 587, encontrado 587.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo de referencia 20(a)
6-(3-acetamido-fenilsulfanil)-3-estiril-1H-indazol
110
6-(3-Acetamido-fenilsulfanil)-3-estiril-1-[2-(trimetil-silanil)-etoximetil]-1H-indazol se convirtió en 6-(3-acetamido-fenilsulfanil)-3-estiril-1H-indazol como se ha descrito en el Ejemplo de referencia 11 (30 mg, 81%): R_{f} sm = 0,65, p = 0,35 (metanol al 10% en diclorometano); ^{1}HRMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta: 7,81 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 7,59 (s ancho, 1H), 7,48-7,0 (m, 13H), 1,98 (s, 3H); HRMS (FAB) [M+Na]/z Calculado 408,1147, encontrado 408,1156.
El material de partida se preparó como sigue:
1111
111
Al aducto con 9-BBN de 3-ftalamido-tiofenol (1,4 equivalentes), que se preparó in situ como se describe a continuación, se añadió 3,6-diyodo-1-[2-(trimetil-silanil)-etoximetil]-1H-indazol (250 mg, 0,5 mmol), Pd(dppf)Cl_{2} (87 mg, 0,2 equivalentes) y fosfato de potasio (339 mg, 1,6 mmol, 3,00 equivalentes) en DMF (3,0 mL). La mezcla de reacción se calentó hasta 90ºC durante 9 h. La mezcla se enfrió y repartió entre acetato de etilo e hidrogenocarbonato de sodio saturado. El material orgánico se secó sobre sulfato de sodio, se decantó y se concentró. La purificación por cromatografía en columna de gel de sílice (acetato de etilo-hexano 2:8) dio 6-(3-ftalamido-fenilsulfanil)-3-yodo-1H-indazol en forma de un aceite (159 mg, 50%): ^{1}HRMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta: 7,93 (m, 2H), 7,79 (m, 2H), 7,62 (s, 1H), 7,5-7,3 (m, 5H), 7,22 (d, 1H), 5,68 (s, 2H), 3,55 (t, 2H, J = 8,2 Hz), 0,87 (t, 2H, J = 8,2 Hz), -0,06 (s, 9H); HRMS (FAB) [M+Cs]/z Calculado 759,9563, encontrado 759,9571.
El reactivo de boro se preparó como sigue: en un matraz Schlenk de 10 mL se secó 3-ftalamido-tiofenol bajo alto vacío. A esto se añadió una solución de 9-BBN (0,5 M en THF, 1,6 mL, 1,0 equivalente). La mezcla se calentó hasta 55ºC durante 2 h. El material volátil se separó bajo una corriente de argón a 70ºC durante 1,5 h. El residuo se usó sin más manipulación.
112 
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6-(3-Ftalamido-fenilsulfanil)-3-yodo-1H-indazol se convirtió en 6-(3-ftalamido-fenilsulfanil)-3-estiril-1H-indazol como se ha descrito en el Ejemplo de referencia 11, etapa (iii). ^{1}HRMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta: 7,93 (m, 3H), 7,78 (m 2H), 7,7 (s, 1H), 7,58 (m. 2H), 7,47-7,26 (m, 10H), 5,71 (s, 2H), 3,59 (t, 2H, J = 8,2 Hz), 0,89 (t, 2H, J = 8,2 Hz), -0,06 (s, 9H); HRMS (FAB) [M+Cs]/z Calculado 736,1066, encontrado 736,1058.
113 
\vskip1.000000\baselineskip
A una solución de 6-(3-ftalamidofenilsulfanil)-3-estiril-1H-indazol (121 mg, 0,2 mmol) en etanol (3,5 mL) se añadió hidrazina (63 \muL, 2,0 mmol, 10 equivalentes). La mezcla de reacción se dejó en agitación a 23ºC durante 45 min y se diluyó con hidrogenocarbonato de sodio saturado y acetato de etilo. El material orgánico se secó sobre sulfato de sodio, se decantó y se concentró. La purificación por cromatografía en columna de gel de sílice (acetato de etilo-hexano 3:7) dio 6-(3-aminofenilsulfanil)-3-estiril-1H-indazol en forma de un aceite (79 mg, 90%): ^{1}HRMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta: 7,92 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 7,57 (m, 3H), 7,49 (d, 1H, J = 16,8 Hz), 7,4-7,25 (m, 4H), 7,23 (dd, 1H, J = 1,5, 8,5 Hz), 7,11 (t, 1H, J = 7,9 Hz), 6,79 (m, 1H), 6,70 (t, 1H, J = 1,9 Hz), 6,59 (m, 1H), 5,66 (s, 2H), 3,60 (s ancho, 2H), 3,59 (t, 2H, J = 8,2 Hz), 0,90 (t, 2H, J = 8,2 Hz). -0,05 (s, 9H); HRMS (FAB) [M+H]/z Calculado 474,2035, encontrado 474,2019.
114 
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A una solución de 6-(3-aminofenilsulfanil)-3-estiril-1H-indazol (43,7 mg, 0,10 mmol) en diclorometano (0,5 mL) se añadió piridina (81 \muL, 1,0 mmol, 10 equivalentes) y anhídrido acético (47 \muL, 0,5 mmol, 5 equivalentes). La mezcla se dejó en agitación durante 10 min a 23ºC. La mezcla se diluyó con agua y el producto se extrajo con hexano al 30% en acetato de etilo. El material orgánico se lavó con ácido cítrico al 5% e hidrogenocarbonato de sodio saturado. El material orgánico se secó sobre sulfato de sodio, se decantó y se concentró. La purificación por cromatografía en columna de gel de sílice (acetato de etilo - hexano 3:7) dio 6-(3-acetamido-fenilsulfanil)-3-estiril-1H-indazol en forma de un aceite (50 mg, 97%): R_{f} sm = 0,33, Rf p = 0,18 (acetato de etilo-hexano 3:7); ^{1}HRMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta: 7,94 (d, 1H), 7,65-7,1 (m, 13H), 5,70 (s, 2H), 3,62 (t, 2H, J = 8,2 Hz), 2,18 (s, 3H), 0,93 (t, 2H, J = 8,2 Hz), -0,05 (s, 9H). HRMS (FAB) [M+Cs]/z Calculado 648,1117, encontrado 648,1098.
\newpage
Ejemplo de referencia 20(b)
6-(3-(bencilamido)-fenilsulfanil)-3-estiril-1H-indazol
115
El compuesto del epígrafe se preparó como el Ejemplo de referencia 20(a) excepto que, en la etapa (iv), se usó cloruro de benzoílo en lugar de anhídrido acético. ^{1}HRMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta: 8,03 (s, 1H), 7,73 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 7,63 (m, 2H). 7,47 (m, 1H), 7,42 (t, 1H, J = 1,9 Hz), 7,37 (m, 3H), 7,31 (m, 1H), 7,28-6,98 (m, 9H); HRMS (FAB) [M+H]/z Calculado 448,1484, encontrado 448,1490.
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Ejemplo de referencia 21
6-(1-(3-aminofenil)-vinil)-3-estiril-1H-indazol
116
6-(1-(3-Aminofenil)-vinil)-3-estiril-1-[2-(trimetil-silanil)-etoximetil]-1H-indazol se convirtió en el compuesto del epígrafe como se ha descrito en el Ejemplo de referencia 11 (85 mg, 85%): R_{f} sm = 0,72, p = 0,37 (acetato de etilo-hexano 1:1); FTIR (película fina) 3385, 3169, 2953, 1621, 1581, 1489, 1447, 1349, 1251, 1165, 1071, 959, 906, 870, 817 cm^{-1}; ^{1}HRMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta: 7,98 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 7,60 (m, 2H), 7,51 (s, 1H), 7,48 (s, 1H), 7,40 (m, 3H), 7,29 (m, 2H), 7,15 (m, 1H), 6,78 (m, 1H), 6,68 (m, 2H), 5,50 (s, 2H), 3,65 (s ancho, 2H); MS (ES) [M+H]/z Calculado 338, encontrado 338; MS (ES) [M-H]/z Calculado 336, encontrado 336.
El material de partida se preparó como sigue:
117
A una solución de 6-yodo-3-estiril-1-[2-(trimetil-silanil)-etoximetil]-1H-indazol, preparado en el Ejemplo de referencia 14, etapa (i), (330 mg, 0,693 mmol) en THF (3,0 mL) a -78ºC se añadió n-butil-litio (0,56 mL, 1,5 M, 1,2 equivalentes). Después de 20 min, se añadió a continuación esta solución a cloruro de zinc anhidro (170 mg) y la mezcla se calentó hasta 23ºC y se agitó durante 15 min. A esta mezcla se añadió triflato de 1-(3-nitro-fenil)vinilo (146 \muL, 1,05 equivalentes) y Pd(PPh_{3})_{4} (40 mg, 0,05 equivalentes). Esta mezcla se agitó durante 30 min, se repartió entre acetato de etilo e hidrogenocarbonato de sodio saturado y se separó la capa orgánica. El material orgánico se secó sobre sulfato de sodio, se decantó y se concentró bajo presión reducida. La purificación por cromatografía en columna de gel de sílice (acetato de etilo-hexano 1:9) y a continuación en una segunda columna (acetato de etilo al 1%/benceno) dio 6-(1-(3-nitrofenil)-vinil)-3-estiril-1-[2-(trimetil-silanil)-etoximetil]-1H-indazol en forma de un aceite (180 mg, 52%): FTIR (película fina) 2951, 1616, 1530, 1477, 1448, 1348, 1305, 1248, 1217, 1077, 961, 913, 859 cm^{-1}; ^{1}HRMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta: 8,26 (t, 1H, J = 1,9 Hz), 8,21 (m, 1H), 8,00 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 7,69 (dt, 1H, J = 1,4, 7,8), 7,62-7,28 (m, 9H), 7,19 (dd, 1H, J = 1,4, 8,4 Hz), 5,72 (s, 3H), 5,69 (s, 1H), 3,60 (t, 2H, J = 8,2 Hz), 0,89 (t, 2H, J = 8,2 Hz), -0,05 (s, 9H); ^{13}CRMN (75 MHz, CDCl_{3}) \delta: 149,9, 149,6, 144,7, 144,5, 142,8, 140,7, 138,6, 135,6, 133,1, 130,7, 130,2, 129,4, 128,0, 124,4, 124,2, 124,1, 123,8, 122,6, 121,2, 118,9, 111,0, 79,2, 68,0, 19,2, 0,0; HRMS (FAB) [M+Na]/z Calculado 520,2031, encontrado 520,2046.
118
6-(1-(3-Nitrofenil)-vinil)-3-estiril-1-[2-(trimetil-silanil)-etoximetil]-1H-indazol se convirtió en 6-(1-(3-aminofenil)-vinil)-3-estiril-1-[2-(trimetilsilanil)-etoximetil]-1H-indazol como se ha descrito en el Ejemplo de referencia 11, etapa (iv) (140 mg, 95%): Rf sm = 0,59, p = 0,46 (acetato de etilo-hexano 4:6); FTIR (película fina) 3460, 3366, 3223, 3084, 3028, 2952, 2894, 2246, 1616, 1601, 1581, 1489, 1474, 1448, 1359, 1303, 1249, 1217, 1076, 961, 909, 860, 836, 733, 692 cm^{-1}; ^{1}HRMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta: 7,96 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 7,59 (m, 3H), 7,50 (s, 1H), 7,46 (s, 1H), 7,40 (m, 2H), 7,30 (m, 1H), 7,25 (m, 1H), 7,14 (m, 1H), 6,77 (m, 1H), 6,68 (m, 2H); ^{13}CRMN (75 MHz, CDCl_{3}) \delta: 151,6, 147,7, 144,6, 143,9, 142,8, 142,4, 138,6, 132,8, 130,6, 130,2, 129,3, 128,0, 124,4, 123,6, 121,9, 121,5, 120,2, 116,4, 116,1, 110,8, 79,0, 67,9, 19,2, 0,0; HRMS (FAB) [M+Na]/z Calculado 490,2291, encontrado 490,2302.
Ejemplo de referencia 22(a)
6-(1-(3-(5-metil-tiaxol-2-carboxilamido)fenil)-vinil)-3-estiril-1H-indazol
119
6-(1-(3-Aminofenil)-vinil)-3-estiril-1H-indazol se convirtió en el compuesto del epígrafe como se ha descrito en el Ejemplo de referencia 12(d) (20 mg, 72%): FTIR (película fina) 3271, 1673, 1605, 1585, 1538, 1486, 1428, 1349, 1304, 1090, 960, 907, 871 cm^{-1}; ^{1}HRMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta: 10,7 (s ancho, 1H), 9,09 (s, 1H), 8,0 (d, 1H), 7,79 (m, 1H), 7,60 (m, 3H), 7,51 (m, 3H), 7,44-7,15 (m, 7H), 5,59 (s, 2H), 2,54 (s, 3H); ^{13}CRMN (75 MHz, CDCl_{3}) \delta: 162,2, 157,9, 149,8, 144,4, 142,8, 142,2, 141,9, 141,5, 140,6, 137,63, 137,56, 131,6, 129,5, 129,1, 128,3, 126,9, 125,1, 122,6, 121,2, 120,9, 120,5, 120,2, 119,8, 116,1, 110,2, 12,8; HRMS (FAB) [M+H]/z Calculado 463,1593, encontrado 463,1582.
Ejemplo de referencia 22(b)
6-(1-(3-(benzoilamido)fenil)-vinil)-3-estiril-1H-indazol
120
El compuesto del Ejemplo de referencia 22(b) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 22(a), excepto que se usó cloruro de benzoílo en lugar de ácido 5-metil-tiazol-2-carboxílico y HATU. FTIR (película fina) 3243, 1651, 1606, 1580, 1538, 1485, 1447, 1428, 1349, 1307, 1258, 1073, 959, 907 cm^{-1}; ^{1}HRMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta: 9,09 (s, 1H), 7,99 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 7,78 (m, 1H), 7,60 (m, 3H), 7,51 (m, 3H), 7,43-7,15 (m, 10H), 5,56 (d, 2H, J = 3,2 Hz); ^{13}CRMN (75 MHz, CDCl_{3}) \delta: 166,5, 149,7, 144,3, 142,7, 142,1, 140,6, 138,1, 137,6, 135,0, 132,3, 131,6, 129,4, 129,1, 128,3, 127,4, 126,9, 125,0, 122,5, 120,9, 120,8, 120,6, 120,5, 115,9, 110,2; HRMS (FAB) [M+H]/z Calculado 442,1919, encontrado 442,1919.
Ejemplo de referencia 22(c)
6-(1-(3-(benzoilamido)fenil)-vinil)-3-estiril-1H-indazol
121
El compuesto del epígrafe se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 22(a), excepto que se usó cloruro de carbobenciloxi en lugar de ácido 5-metiltiazol-2-carboxílico y HATU. FTIR (película fina) 3305, 1712, 1606, 1586, 1537, 1487, 1445, 1348, 1216, 1059, 959, 908 cm^{-1}; ^{1}HRMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta: 7,99 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 7,6-7,0 (m, 18H), 5,55 (s, 2H), 5,19 (s, 2H); ^{13}CRMN (75 MHz, CDCl_{3}) \delta: 153,9, 149,8, 144,3, 142,7, 142,1, 140,7, 138,2, 137,6, 136,3, 131,7, 129,4, 129,1, 129,0, 128,7, 128,7, 128,3, 126,9, 124,0, 122,6, 121,1, 120,8, 120,4, 115,9, 110,1, 67,4; HRMS (FAB) [M+H]/z Calculado 472,025, encontrado 472,2026.
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Ejemplo de referencia 23
6-(1-(3-acetamido-fenil)-vinil)-3-estiril-1H-indazol 
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122 
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6-(1-(3-Acetamido-fenil)-vinil)-3-estiril-1-[2-trimetilsilanil-etoximetil]-1H-indazol se convirtió en 6-(1-(3-acetamido-fenil)-vinil)-3-estiril-1H-indazol como se ha descrito en el Ejemplo de referencia 11: FTIR (película fina) 3252, 1667, 1606, 1557, 1486 cm^{-1}; ^{1}HRMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta: 10,4 (s ancho, 1H), 7,91 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 7,5-7,0 (m, 13H), 5,47 (s, 2H), 2,10 (s, 3H); MS (ES) [M+H]/z Calculado 380, encontrado 380; [M-H]/z Calculado 378, encontrado 378.
El material de partida se preparó como sigue:
123 
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6-(1-(3-Aminofenil)-vinil)-3-estiril-1-[2-trimetilsilanil-etoximetil]-1H-indazol se convirtió en 6-(1-(3-acetamido-fenil)-vinil)-3-estiril-1-[2-trimetilsilanil-etoximetil]-1H-indazol como se ha descrito en el Ejemplo de referencia 12(a): R_{f} sm = 0,42, p = 0,26 (acetato de etilo-hexano 4:6); FTIR (película fina) 3305, 3059, 2952, 1667, 1608, 1585, 1555, 1486, 1448, 1433, 1369, 1306, 1249, 1076, 912, 859, 836, 748, 693 cm^{-1}; ^{1}HRMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta: 7,98 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 7,7-7,4 (m, 9H), 7,35 (m, 2H), 7,26 (dd, 1H, J = 1,3, 8,4 Hz), 7,16 (d ancho, 1H, J = 7,8 Hz), 5,75 (s, 2H), 5,62 (s, 1H), 5,61 (s, 1H), 3,66 (t, 2H, J = 8,2 Hz), 2,16 (s, 3H), 0,98 (t, 2H, J = 8,2 Hz), -0,02 (s, 9H); ^{13}CRMN (75 MHz, CDCl_{3}) \delta: 169,8, 150,9, 144,6, 143,5, 142,8, 142,0, 139,4, 138,6, 132,9, 130,3, 129,3, 127,9, 125,6, 124,2, 123,7, 122,0, 121,3, 121,0, 117,1, 110,8, 68,0, 25,8, 19,1, 0,0; HRMS (FAB) [M+Na]/z Calculado 532,2396, encontrado 532,2410.
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Ejemplo de referencia 24(a)
4-[3-(1-H-benzoimidazol-2-il)-1-H-indazol-6-il]-2-metoxi-5-metil-fenol
124
6-{5-Metoxi-2-metil-4-[2-(trimetil-silanil)-etoximetoxi]-fenil}-1-[2-(trimetil-silanil)-etoximetil]-3-{1-[2-(trime-
til-silanil)-etoximetil]-1H-benzamidazol-2-il}-1H-indazol (326 mg, 0,43 mmol) se agitó en una solución de TBAF (4,5 mL de 1M en THF, que se concentró a vacío hasta 2,5 mL) y etilendiamina (0,6 mL, 8,9 mmol) a reflujo durante 40 h. La mezcla de reacción se diluyó con acetato de etilo/THF (40 mL/5 mL) y se lavó con H_{2}O (20 mL) y salmuera (20 mL). Los materiales orgánicos se secaron (MgSO_{4}) y se concentraron a vacío. La purificación por cromatografía en columna de gel de sílice (THF al 60%/hexanos) y la precipitación posterior en cloroformo dio 108 mg (68%) de 4-[3-(1H-benzoimidazol-2-il)-1H-indazol-6-il]-2-metoxi-5-metil-fenol en forma de un sólido blanco. ^{1}H RMN (300 MHz, DMSO-d_{6}) \delta: 13,62 (s, 1H), 13,05 (s ancho, 1H), 9,01 (s, 1H), 8,50 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 7,62 (s ancho, 2H), 7,49 (s, 1H), 7,28-7,20 (m, 3H), 6,85 (s, 1H), 6,74 (s, 1H), 3,77 (s, 3H), 2,15 (s, 3H), Anal. (C_{22}H_{18}N_{4}O_{2}\cdot1,3 H_{2}O) C, H, N. Calculado: C, 67,10; H, 5,27; N, 14,23. Encontrado: C, 67,30; H, 5,27; N, 14,11.
El material de partidas se preparó como sigue:
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Preparación de 2-yodo-1-[2-(trimetil-silanil)-etoximetil]-1H-benzoimidazol: una solución de 1-[2-(trimetil-silanil)-etoximetil]-1H-benzoimidazol (5,029 g, 20,25 mmol) (véase Witten et al., J. Org. Chem., 51, 1891-1894 (1986)) en THF (50 mL) se enfrió hasta -78ºC y se añadió gota a gota durante 12 min por medio de una cánula a un matraz que contenía n-butil-litio (2,5 M en hexanos, 12,2 mL) en THF (30 mL) a -78ºC bajo argón. Después de agitar durante 25 min a -78ºC, el matraz se calentó hasta 0ºC durante 10 min, y a continuación se enfrió de nuevo hasta -78ºC. Esta solución se añadió a continuación por medio de una cánula a un segundo matraz que contenía yodo (25,7 g, 101 mmol) en THF (50 mL) a -78ºC. Una vez completada la adición (\sim5 min), se retiró el baño de enfriamiento y se continuó la agitación durante 30 min. La mezcla de reacción se repartió entre acetato de etilo (500 mL) y agua (100 mL). La capa orgánica se lavó con metabisulfito de sodio acuoso saturado (2 x 100 mL) para eliminar el color oscuro del yodo, se secó (MgSO_{4}) y se concentró a vacío. La purificación por cromatografía de desarrollo rápido (acetato de etilo del 10% al 50% /hexanos) proporcionó 4,79 g (63%) de 2-yodo-1-[2-(trimetil-silanil)-etoximetil]-1H-benzoimidazol puro en forma de un sólido amarillo. ^{1}HRMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta: 7,76-7,72 (m, 1H), 7,54-7,51 (m, 1H), 7,29-7,25 (m, 2H), 5,54 (s, 2H), 3,59 (t, 2H, J = 8,1 Hz), 0,92 (t, 2H, J = 8,1 Hz), -0,03 (s, 9H). Anal. (C_{13}H_{18}IN_{2}OS) C, H. Calculado: C, 41,71; H, 5,12; I, 33,90; N, 7,48. Encontrado: C, 41,90; H, 5,09; I, 34,00; N, 7,37.
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Preparación de 6-nitro-1-[2-(trimetil-silanil)-etoximetil]-3-(trimetil-estannanil)-1H-indazol: 3-yodo-6-nitro-1-[2-(trimetil-silanil)-etoximetil]-1H-indazol (10,0 g, 23,9 mmol) y hexametildiestaño (10,0 g, 30,5 mmol) se mezclaron con tolueno anhidro (45 mL) en un matraz purgado con argón.
Se añadió tetrakis(trifenilfosfina)-paladio(0) (300 mg, 0,26 mmol) y la mezcla de reacción se agitó a reflujo bajo argón durante 2,5 h. La mezcla de reacción se enfrió hasta 23ºC y se diluyó con éter (60 mL). Se lavaron los materiales orgánicos con HCl 0,1N (20 mL) y salmuera (20 mL), se secaron (MgSO_{4}) y se concentraron. La purificación por cromatografía en columna de gel de sílice (éter del 3% al 8%/hexanos) dio 7,70 g (71%) de 6-nitro-1-[2-(trimetil-silanil)-etoximetil]-3-(trimetil-estannanil)-1-H-indazol en forma de un sólido ligeramente amarillo. ^{1}HRMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta: 8,53 (d, 1H, J = 1,8 Hz), 8,03 (dd, 1H, J = 8,7, 1,8 Hz), 7,81 (d, 1H, J = 8,7 Hz), 5,84 (s, 2H), 3,58 (t, 2H, J = 8,1 Hz), 0,90 (t, 2H, J = 8,1 Hz), 0,50 (t, 9H, J = 28,2 Hz), -0,05 (s, 9H). Anal. (C_{18}H_{27}N_{3}O_{3}SiSn) C, H, N. Calculado: C, 42,13; H, 5,97; N, 9,21. Encontrado: C, 42,39; H, 6,01; N, 9,26.
127
Preparación de 6-nitro-1-[2-(trimetil-silanil)-etoximetil]-3-{1-[2-(trimetil-silanil)-etoximetil]-1H-benzoimidazol-2-il}-1H-indazol: 6-nitro-1-[2-(trimetil-silanil)-etoximetil]-3-(trimetil-estannanil)-1H-indazol (7,50 g, 16,4 mmol), 3-yodo-1-[2-(trimetil-silanil)-etoximetil]-1H-bencimidazol (6,50 g, 17,4 mmol) y yoduro de cobre(I) (313 mg, 1,64 mmol) se mezclaron con THF anhidro (150 mL) en un matraz purgado con argón. Se añadió tetrakis(trifenilfosfina)paladio(0) y la mezcla de reacción se agitó a reflujo bajo argón durante 23 h. La mezcla de reacción se enfrió y adsorbió directamente sobre gel de sílice (\sim16 g). La purificación por cromatografía en columna de gel de sílice (acetato de etilo del 4% al 15%/ hexanos) dio 7,28 g (82%) de 6-nitro-1-[2-(trimetil-silanil)-etoximetil]-3-{1-[2-(trimetil-silanil)-etoximetil]-1H-benzoimidazol-2-il)-1-H-indazol en forma de un sólido amarillo claro. ^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta: 8,91 (d, 1H, J = 9,0 Hz), 8,59 (d, 1H, J = 1,8 Hz), 8,22 (dd, 1H, J = 8,7, 1,8 Hz), 7,92-7,89 (m, 1H), 7,66-7,62 (m, 1H), 7,40-7,36 (m, 2H), 6,24 (s, 2H), 5,90 (s, 2H), 3,68-3,59 (m, 4H), 0,94 (t, 2H, J = 8,1 Hz), 0,86 (t, 2H, J = 8,1 Hz), -0,04 (s, 9H), -0,15 (s, 9H). Anal. (C_{26}H_{37}N_{5}O_{4}Si_{2}) C, H, N. Calculado: C, 57,85; H, 6,91; N, 12,97. Encontrado: C, 57,60; H, 6,81; N, 12,82.
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128
Preparación de 6-amino-1-[2-(trimetil-silanil)-etoximetil]-3-{1-[2-(trimetil-silanil)-etoximetil]-1H-benzoimida-
zol-2-il}-1H-indazol: cloruro de estaño(II) (12,0 g, 63,3 mmol) se añadió a una solución de 6-nitro-1-[2-(trimetil-silanil)-etoximetil]-3-{1-[2(trimetil-silanil)-etoximetil]-1H-benzoimidazol-2-il}-1H-indazol (7,18 g, 13,3 mmol) en DMF/H_{2}O (160 mL/10 mL) y la mezcla de reacción se agitó a 50ºC durante 2,5 h. La mezcla de reacción se enfrió hasta 0ºC y se añadió lentamente hidrogenocarbonato de sodio saturado, con mezclamiento, hasta que desaparece toda la espuma producida por el enfriamiento brusco. El material se concentró a vacío y se recogió con éter (100 mL). El material insoluble se separó por filtración y se lavó con éter (50 mL). El filtrado se lavó con salmuera (50 mL), se secó (Na_{2}SO_{4}) y se concentró a vacío. La purificación por cromatografía en columna de gel de sílice (acetato de etilo al 25%/hexano) dio 6,05 g (89%) de 6-amino-1-[2-(trimetil-silanil)-etoximetil]-3-{1-[2-(trimetil-silanil)-etoximetil]-1H-benzoimidazol-2-il}-1H-indazol en forma de un sólido céreo ligeramente amarillo. ^{1}HRMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta: 8,40 (d, 1H, J = 9,0 Hz), 7,89-7,86 (m, 1H), 7,63-7,60 (m, 1H), 7,35-7,31 (m, 2H), 6,78 (dd, 1H, J = 8,7, 1,8 Hz), 6,75 (s, 1H), 6,25 (s, 2H), 5,69 (s, 2H), 3,93 (s ancho, 2H), 3,65-3,55 (m, 4H), 0,93 (t, 2H, J = 8,1 Hz), 0,85 (t, 2H, J = 8,1 Hz), -0,04 (s, 9H), -0,15 (s, 9H). Anal. (C_{24}H_{39}N_{3}O_{2}Si_{2}) C, H, N. Calculado: C, 61,26; H, 7,71; N, 13,74. Encontrado: C, 61,18; H, 7,65; N, 13,82.
129
Preparación de 6-yodo-1-[2-(trimetil-silanil)-etoximetil]-3-{1-[2-(trimetil-silanil)-etoximetil]-1H-benzoimidazol-2-il}-1H-indazol: una solución de 6-amino-1-[2-(trimetil-silanil)-etoximetil]-3-{1-[2-(trimetil-silanil)-etoximetil]-1H-benzoimidazol-2-il}-1H-indazol (500 mg, 0,98 mmol) en ácido acético (1,5 mL) se diluyó con H_{2}O (1,0 mL) y se agitó a 0ºC. Se añadió HCl concentrado (250 \muL, \sim3 mmol) en H_{2}O (250 \muL). Se añadió nitrato de sodio (90 mg, 1,3 mmol) en H_{2}O (300 \muL) y la mezcla de reacción se agitó durante 8 min. Se añadieron yodo (10 mg) y una solución de yoduro de potasio (250 mg, 1,3 mmol) en H_{2}O (250 \muL) y la mezcla de reacción espumosa se agitó durante 30 min a 23ºC. La mezcla de reacción se diluyó con H_{2}O (25 mL) y se extrajo con acetato de etilo (2 x 20 mL). Los materiales orgánicos se lavaron con una solución saturada de metabisulfito de sodio (10 mL) y salmuera (10 mL), se secaron (Na_{2}SO_{4}), y se concentraron a vacío. La purificación por cromatografía en columna de gel de sílice (acetato de etilo al 8%/hexanos) dio 316 mg (52%) de 6-yodo-1-[2-(trimetil-silanil)-etoximetil]-3-{1-[2-(trimetil-silanil)-etoximetil]-1H-benzoimidazol-2-il}-1H-indazol en forma de un aceite ligeramente amarillo, que cristalizó lentamente dando un sólido blanco. ^{1}HRMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta: 8,45 (d, 1H, J = 9,0 Hz), 8,05 (s, 1H), 7,91-7,88 (m, 1H), 7,67-7,62 (m, 2H), 7,38-7,34 (m, 2H), 6,24 (s, 2H), 5,77 (s, 2H), 3,65-3,57 (m, 4H), 0,93 (t, 2H, J = 8,1 Hz), 0,85 (t, 2H, J = 8,1 Hz), -0,04 (s, 9H), -0,15 (s, 9H). Anal. (C_{26}H_{37}IN_{4}O_{2}Si_{2}) C, H, N. Calculado: C, 50,31; H, 6,01; N, 9,03. Encontrado: C, 50,55; H, 6,08; N, 9,00.
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130 
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Preparación de [2-(4-bromo-2-metoxi-5-metil-fenoximetoxi)-etil]-trimetil-silano: 4-bromo-2-metoxi-5-metil-fenol (véase Chien-Hsun et al, Syn. Lett., 12, 1351-1352 (1997)) se agitó en CH_{2}Cl_{2} anhidro (100 mL) a 23 C. Se añadieron DIEA (diisopropiletilamina) (6,05 mL, 34,6 mmol) y a continuación cloruro de 2-(trimetilsilil)etoximetilo (5,6 mL, 31,7 mmol). Después de agitar durante 1 h, la solución se lavó con H_{2}O, HCl 0,1N, H_{2}O, NaHCO_{3} saturado, y salmuera (25 mL de cada uno). Los materiales orgánicos se secaron (Na_{2}SO_{4}) y se concentraron a vacío. La purificación por cromatografía en columna de gel de sílice (acetato de etilo al 6%/hexanos) dio 9,06 g (91%) de [2-(4-bromo-2-metoxi-5-metil-fenoximetoxi)-etil]-trimetil-silano en forma de un aceite transparente. ^{1}HRMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta: 7,06 (s, 1H). 7,02 (s, 1H), 5,24 (s, 2H), 3,84 (s, 3H), 3,79 (t, 2H, J = 8,4 Hz), 2,31 (s, 3H), 0,96 (t, 2H, J = 8,4 Hz), 0,01 (s, 9H).
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131 
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Preparación de ácido 5-metoxi-2-metil-4-[2-(trimetil-silanil)-etoximetoxi]-fenil-borónico: [2-(4-bromo-2-metoxi-5-metil-fenoximetoxi)-etil]-trimetil-silano (2,6 g, 7,5 mmol) se agitó en THF anhidro (10 mL) a -78ºC bajo argón. Se añadió gota a gota n-butil-litio (3,75 mL, 2,5 M en hexanos, 9,36 mmol) y la mezcla de reacción agitada previamente durante 30 min se transfirió por medio de una cánula a un matraz de borato de trimetilo (8,4 mL, 75 mmol) en THF (15 mL), que también se agitó a -78ºC bajo argón. Después que se completó la adición, la mezcla de reacción se agitó 30 min a -78ºC y a continuación 30 min calentando mientras a 0ºC. A continuación la reacción se detuvo bruscamente añadiendo a la mezcla H_{2}O (20 mL), se acidificó con HCl 0,1N y se extrajo con acetato de etilo (2 x 25 mL). Los materiales orgánicos se lavaron con salmuera (20 mL), se secaron (Na_{2}SO_{4}) y se concentraron a vacío. La purificación por cromatografía en columna de gel de sílice (acetato de etilo del 20% al 50% /hexanos) dio 1,11 g (47%) de ácido 5-metoxi-2-metil-4-[2-(trimetil-silanil)-etoximetoxi]-fenil-borónico en forma de un sólido blanco. ^{1}HRMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta: 7,78 (s, 1H), 7,10 (s, 1H), 5,36 (s, 2H), 3,93 (s, 3H), 3,83 (t, 2H, J = 8,4 Hz), 2,79 (s, 3H), 0,98 (t, 2H, J = 8,4 Hz), 0,01 (s, 9H). Anal. (C_{14}H_{25}BO_{5}Si-H_{2}O) C, H. Calculado: C, 57,15; H, 7,88. Encontrado: C, 56,89; H, 7,87.
132 
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Preparación de 6-{5-metoxi-2-metil-4-[2-(trimetil-silanil)-etoximetoxi]-fenil}-1-[2-(trimetil-silanil)-etoximetil]-3-{1-[2-(trimetil-silanil)-etoximetil]-1H-benzamidazol-2-il}-1H-indazol: 6-yodo-1-[2-(trimetil-silanil)-etoximetil]-3-{1-[2-(trimetil-silanil)-etoximetil]-1H-benzoimidazol-2-il}-1H-indazol (350 mg, 0,56 mmol), ácido 5-metoxi-2-metil-4-[2-(trimetil-silanil)-etoximetoxi]-fenil-borónico (211 mg, 0,68 mmol) y carbonato de sodio (72 mg, 0,68 mmol) se agitaron en una mezcla de benceno (5 mL), H_{2}O (330 \muL) y metanol (1 mL) en un matraz purgado con argón. Se añadió tetrakis(trifenilfosfina)paladio(0) y la mezcla de reacción se agitó a reflujo bajo argón durante 16 h. Después de enfriar hasta 23ºC, la mezcla de reacción se diluyó con éter (20 mL), se lavó con H_{2}O (10 mL) y salmuera (10 mL), se secó (Na_{2}SO_{4}) y se concentró a vacío. La purificación por cromatografía en columna de gel de sílice (acetato de etilo al 15%/hexanos) dio 382 mg (89%) de 6-{5-metoxi-2-metil-4-[2-(trimetil-silanil)-etoximetoxi]-fenil}-1-[2-(trimetil-silanil)-etoximetil]-3-{1-[2-(trimetil-silanil)-etoximetil]-1H-benzamidazol-2-il}-1H-indazol en forma de un sólido blanco. ^{1}HRMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta: 8,68 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 7,93-7,90 (m, 1H), 7,67-7,63 (m, 1H), 7,54 (s, 1H), 7,38-7,32 (m, 3H), 7,13 (s, 1H), 6,86 (s, 1H), 6,29 (s, 2H), 5,83 (s, 2H), 5,34 (s, 2H), 3,89 (s, 3H), 3,86 (t, 2H, J = 8,4 Hz), 3,69-3,58 (m, 4H), 2,22 (s, 3H), 1,01 (t, 2H, J = 8,4 Hz), 0,95-0,83 (m, 4H), 0,03 (s, 9H), -0,05 (s, 9H), -0,15 (s, 9H). Anal. (C_{40}H_{60}N_{4}O_{5}Si_{3}) C, H, N. Calculado: C, 63,12; H, 7,95; N, 7,36, Encontrado: C, 63,22; H, 7,93; N, 7,46.
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Ejemplo de referencia 24(b)
4-[3-(1-H-benzoimidazol-2-il)-1H-indazol-6-il]-3-metilfenol 
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133 
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Para preparar el compuesto del epígrafe, se siguió el procedimiento descrito en el Ejemplo de referencia 24(a), excepto que, en la etapa (viii), se usó ácido 2-metil-4-[2-(trimetil-silanil)-etoximetoxi]-fenil-borónico (preparado como se describe a continuación) en lugar de ácido 5-metoxi-2-metil-4-[2-(trimetil-silanil)-etoximetoxi]-fenil-borónico. ^{1}HRMN (300 MHz, DMSO-d_{6}) \delta: 13,60 (s, 1H), 12,99 (s ancho, 1H), 9,41 (s, 1H), 8,49 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 7,72 (s ancho, 1H), 7,52 (s ancho, 1H), 7,45 (s, 1H), 7,25-7,21 (m, 3H), 7,12 (d, 1H, J = 8,1 Hz), 6,73-6,67 (m, 2H), 2,20 (s, 3H). Anal. (C_{21}H_{16}N_{4}O\cdot0,7 H_{2}O) C, H, N. Calculado: C, 71,45; H, 4,97; N, 15,87. Encontrado: C, 71,44; H, 4,96; N, 15,77.
\newpage
El ácido 2-metil-4-[2-(trimetil-silanil)-etoximetoxi]-fenil-borónico se preparó como sigue:
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134 
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Se preparó [2-(4-bromo-3-metil-fenoximetoxi)-etil]-trimetil-silano con un rendimiento del 86% a partir de 4-bromo-3-metil-fenol de acuerdo con el procedimiento descrito para [2-(4-bromo-2-metoxi-5-metil-fenoximetoxi)-etil]-trimetil-silano. ^{1}HRMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta: 7,39 (d, 1H, J = 8,7 Hz), 6,93 (d, 1H, J = 2,7 Hz), 6,75 (dd, 1H, J = 8,7, 2,7 Hz), 5,16 (s, 2H), 3,74 (t, 2H, J = 8,4 Hz), 2,36 (s, 3H), 0,95 (t, 2H, J = 8,4 Hz), 0,01 (s, 9H). Anal. (C_{13}H_{21}BrO_{2}Si)C, H. Calculado: C, 49,21; H, 6,67. Encontrado: C, 49,33; H, 6,67.
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135 
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Se preparó ácido 2-metil-4-[2-(trimetil-silanil)-etoximetoxi]-fenil-borónico con un rendimiento del 52% a partir de [2-(4-bromo-3-metil-fenoximetoxi)-etil]-trimetil-silano de acuerdo con el procedimiento descrito para el ácido 5-metoxi-2-metil-4-[2-(trimetil-silanil)-etoximetoxi]-fenil-borónico anterior. ^{1}HRMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta: 8,15 (d, 1H, J = 8,1 Hz), 6,98-6,92 (m, 2H), 5,29 (s, 2H), 3,78 (t, 2H, J = 8,4 Hz), 2,78 (s, 3H), 0,98 (t, 2H, J = 8,4 Hz), 0,01 (s, 9H). Anal. (C_{13}H_{23}BO_{4}Si-H_{2}O) C, H. Calculado: C, 59,10; H, 8,01. Encontrado: C, 59,07; H, 8,08.
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Ejemplo de referencia 24(c)
4-[3-(1-H-benzoimidazol-2-il)-1H-indazol-6-il]-2-cloro-5-metil-fenol 
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136 
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Para preparar el compuesto del epígrafe, se usó ácido 5-cloro-2-metil-4-[2-(trimetil-silanil)-etoximetoxi]-fenil-borónico, preparado como se describe a continuación, en lugar de ácido 5-metoxi-2-metil-4-[2-(trimetil-silanil)-etoximetoxi]-fenil-borónico en el procedimiento descrito en el Ejemplo de referencia 24(a), etapa (viii). ^{1}HRMN (300 MHz, DMSO-d_{6}) \delta: 13,61 (s, 1H), 13,00 (s ancho, 1H), 10,22 (s, 1H), 8,51 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 7,64 (s ancho, 2H), 7,50 (s, 1H), 7,26-7,21 (m, 4H), 6,95 (s, 1H), 2,19 (s, 3H).
\newpage
El ácido 5-cloro-2-metil-4-[2-(trimetil-silanil)-etoximetoxi]-fenil-borónico se preparó como sigue:
137
Se agitó 2-cloro-5-metil-fenol (6,68 g, 46,9 mmol) en acetonitrilo (200 mL). Se añadió N-bromosuccinimida (8,5 g, 47,8 mmol) y la mezcla de reacción se agitó durante 45 min. La solución se concentró a vacío y se volvió a disolver en cloroformo (100 mL). Los materiales orgánicos se lavaron con NaHCO_{3} saturado (50 mL) y salmuera (50 mL), se secaron (MgSO_{4}) y se concentraron a vacío. La purificación por cromatografía en columna de gel de sílice (acetato de etilo al 8%/hexanos) dio 7,98 g (77%) de 4-bromo-3-cloro-5-metil-fenol en forma de un aceite transparente. ^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta: 7,47 (s, 1H), 6,91 (s, 1H), 5,52 (s ancho, 1H), 2,32 (s, 3H). Anal. (C_{7}H_{6}ClBrO\cdot0,1 H_{2}O) C, H. Calculado: C, 37,66; H, 2,80. Encontrado: C, 37,57; H, 2,82.
1138
138
Se preparó [2-(4-bromo-2-cloro-5-metil-fenoximetoxi)-etil]-trimetil-silano con un rendimiento del 83% a partir de 4-bromo-3-cloro-5-metil-fenol de acuerdo con el procedimiento para [2-(4-bromo-2-metoxi-5-metil-fenoximetoxi)-etil]-trimetil-silano. ^{1}HRMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta: 7,51 (s, 1H), 7,09 (s, 1H), 5,26 (s, 2H), 3,79 (t, 2H, J = 8,4 Hz), 2,35 (s, 3H), 0,95 (t, 2H, J = 8,4 Hz), 0,02 (s, 9H). Anal. (C_{13}H_{20}ClBrO_{2}Si) C, H. Calculado: C, 44,39; H, 5,73. Encontrado: C, 45,08; H, 5,91.
139
Se preparó ácido 5-cloro-2-metil-4-[2-(trimetil-silanil)-etoximetoxi]-fenil-borónico con un rendimiento del 54% a partir de [2-(4-bromo-2-cloro-5-metil-fenoximetoxi)-etil]-trimetil-silano de acuerdo con el procedimiento para el ácido 5-metoxi-2-metil-4-[2-(trimetil-silanil)-etoximetoxi]-fenil-borónico. ^{1}HRMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta: 8,11 (s, 1H), 7,09 (s, 1H), 5,37 (s, 2H), 3,84 (t, 2H, J = 8,4 Hz), 2,76 (s, 3H), 0,98 (t, 2H, J = 8,4 Hz), 0,01 (s, 9H). Anal. (C_{13}H_{22}BClO_{4}Si-H_{2}O) C, H. Calculado: C, 52,28; H, 6,75. Encontrado: C, 51,98; H, 6,84.
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Ejemplo de referencia 24(d)
3-1H-benzoimidazol-2-il-6-(4-hidroxi-2-metoxifenil)-1H-indazol
140
El compuesto del Ejemplo de referencia 24 (d) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 24(a), excepto que, en la etapa (vi), se usó 4-bromo-3-metoxi-fenol, preparado como ha sido descrito por Carreno et. al., Syn. Lett., 11, 1241-42 (1997), en lugar de 4-bromo-2-metoxi-5-metil-fenol. ^{1}HRMN (300 MHz, DMSO-d_{6}) \delta: 13,52 (s, 1H), 12,98 (s, 1H), 9,63 (s, 1H), 8,44 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 7,72 (d, 1H, J = 6,9 Hz), 7,61 (s, 1H), 7,50 (d, 1H, J = 6,9 Hz), 7,36 (dd, 1H, J = 8,4, 1,5 Hz), 7,18-7,22 (m, 3H), 6,55 (d, 1H, J = 2,1 Hz), 6,48 (dd, 1H, J = 8,1, 2,1 Hz), 3,74 (s, 3H). MS (ES) [M+H]/z calculado 357, encontrado 357; [M-H]/z calculado 355, encontrado 355.
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Ejemplo de referencia 24(e)
3-1H-benzoimidazol-2-il-6-(2-etil-4-hidroxifenil)-1H-indazol 
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141 
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El compuesto del Ejemplo de referencia 24 (e) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 24(a), excepto que, en la etapa (vi), se usó 4-bromo-3-etil-fenol, preparado con un rendimiento del 80% de acuerdo con el procedimiento descrito por Carreno et. al., Syn. Lett., 11, 1241-42 (1997) para la síntesis de 4-bromo-3-metil-fenol, en lugar de 4-bromo-2-metoxi-5-metil-fenol. ^{1}H RMN (300 MHz, DMSO-d_{6}) \delta: 13,66 (s, 1H), 13,02 (s. 1H), 9,43 (s, 1H), 8,49 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 7,72 (d, 1H, J = 6,9 Hz), 7,53 (d, 1H, J = 6,9 Hz), 7,44 (s, 1H), 7,18-7,25 (m, 3H), 7,06 (d, 1H, J = 8,1 Hz), 6,75 (d, 1H, J = 2,1 Hz), 6,66 (dd, 1H, J = 8,1, 2,1 Hz), 2,50 (q, 2H, J = 7,5 Hz), 1,04 (t, 3H, J = 7,5 Hz). MS (ES) [M+H]/z calculado 355, encontrado 355; [M-H]/z calculado 353, encontrado 353.
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Ejemplo de referencia 24(f)
3-1H-benzoimidazol-2-il-6-(2,4-dihidroxifenil)-1H-indazol 
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142 
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Se calentó 6-(2-metoxi-4-hidroxifenil)-3-1H-benzoimidazol-2-il-1H-indazol, preparado en el Ejemplo de referencia 24(d), (46 mg, 0,13 mmol) en cloruro de piridinio (0,5 g) a 180ºC durante 2 h. La mezcla de reacción se dejó enfriar y la reacción se detuvo bruscamente añadiendo NaHCO_{3} sat. (15 mL) y se extrajo con EtOAc (2 x 20 mL). Los materiales orgánicos se secaron (Na_{2}SO_{4}) y se concentraron a vacío. La purificación por cromatografía en columna de gel de sílice (THF al 60%/hexanos) dio 26 mg (59%) del compuesto del epígrafe en forma de un sólido blanco. ^{1}HRMN (300 MHz, DMSO-d_{6}) \delta: 13,49 (s, 1H), 12,94 (s, 1H), 9,49 (s, 1H), 9,39 (s, 1H), 8,43 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 7,71-7,74 (m, 2H), 7,50 (d, 1H, J = 6,9 Hz), 7,43 (dd, 1H, J = 8,4, 1,2 Hz), 7,16-7,23 (m, 3H), 6,45 (d, 1H, J = 2,1 Hz), 6,35 (dd, 1H, J = 8,4, 2,1 Hz). MS (ES) [M+H]/z calculado 343, encontrado 343; [M-H]/z calculado 341, encontrado 341.
\newpage
Ejemplo de referencia 24(g)
3-1H-benzoimidazol-2-il-6-(2-fenoxi-4-hidroxifenil)-1H-indazol
143
El compuesto del Ejemplo de referencia 24 (g) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 24(c), excepto que, en la etapa (i), se usó 3-fenoxifenol en lugar de 2-cloro-5-metilfenol. ^{1}HRMN (300 MHz, DMSO-d_{6}) \delta: 13,54 (s, 1H), 12,95 (s, 1H), 9,78 (s, 1H), 8,43 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 7,67-7,72 (m, 2H), 7,49 (dd, 1H, J = 6,3, 2,1 Hz), 7,43 (d, 2H, J = 8,4 Hz), 7,33 (t, 2H, J = 7,5 Hz), 7,17-7,22 (m, 2H), 6,96-7,07 (m, 3H), 6,72 (dd, 1H, J = 8,4, 2,1 Hz), 6,40 (d, 1H, J = 2,1 Hz). MS (ES) [M+H]/z calculado 419, encontrado 419; [M-H]/z calculado 417, encontrado 417.
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Ejemplo de referencia 24(h)
3-1H-benzoimidazol-2-il-6-(2-(2-metoxietil)-4-hidroxifenil)-1H-indazol
144
El compuesto del Ejemplo de referencia 24 (h) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 24(a), excepto que, en la etapa (vii), se usó [2-[4-bromo-3-(2-metoxi-etil)-fenoximetoxi]-etil}-trimetil-silano, preparado como se describe a continuación, en lugar de [2-(4-bromo-2-metoxi-5-metil-fenoximetoxi)-etil]-trimetil-silano. ^{1}HRMN (300 MHz, DMSO-d_{6}) \delta: 13,60 (s, 1H), 13,01 (s, 1H), 9,44 (s, 1H), 8,49 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 7,73 (s ancho, 1H), 7,51 (s ancho, 1H), 7,46 (s, 1H), 7,21 (app d, 3H, J = 8,1 Hz), 7,09 (d, 1H, J = 8,1 Hz), 6,78 (d, 1H, J = 2,4 Hz), 6,70 (dd, 1H, J = 8,1, 2,4 Hz), 3,40 (t, 2H, J = 7,2 Hz), 3,12 (s, 3H), 2,75 (t, 2H, J = 7,2 Hz). MS (ES) [M+H]/z calculado 385, encontrado 385; [M-H]/z calculado 383, encontrado 383.
El material de partida se preparó como sigue:
145
Se preparó 4-bromo-3-(2-hidroxi-etil)-fenol con un rendimiento del 88% por la sustitución de 3-(2-hidroxi-etil)-fenol en el procedimiento descrito en el Ejemplo de referencia 24(c), etapa (i). ^{1}HRMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta: 9,56 (s, 1H), 7,29 (d, 1H, J = 8,7 Hz), 6,74 (d, 1H, J = 3,0 Hz), 6,55 (dd, 1H, J = 8,7, 3,0 Hz), 4,71 (t, 1H, J = 5,4 Hz), 3,52-3,59 (m, 2H), 2,73 (t, 2H, J = 7,2 Hz).
146
Se preparó 2-[2-bromo-5-(2-trimetil-silanil-etoximetoxi)-fenilo] con un rendimiento del 65% por la sustitución de 4-bromo-3-(2-hidroxi-etil)-fenol en el procedimiento descrito en el Ejemplo de referencia 24(a), etapa (vi). ^{1}HRMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta: 7,43 (d, 1H, J = 8,7 Hz), 6,97 (d, 1H, J = 3,0 Hz), 6,82 (dd, 1H, J = 8,7, 3,0 Hz), 5,19 (s, 2H), 3,88 (q, 2H, J = 6,6 Hz), 3,74 (t, 2H, J = 8,4 Hz), 2,99 (t, 2H, J = 6,6 Hz), 1,42 (t, 1H, J = 6,6 Hz). 0,94 (t, 2H, J = 8,4 Hz), -0,01 (s, 9H).
1147
147
{2-[4-Bromo-3-(2-metoxi-etil)-fenoximetoxi]-etil}-trimetil-silano: se añadió 2-[2-bromo-5-(2-trimetilsilanil-etoximetoxi)-fenil]-etanol (1,9 g, 6,0 mmol) a una solución de hidróxido de potasio (1,35 g, 24 mmol) en DMSO (16 mL). Se añadió yodometano (1,12 mL, 18 mmol) y la solución se agitó durante 16 h. La mezcla de reacción se diluyó con agua (50 mL) y se extrajo con éter (2 x 40 mL). Los materiales orgánicos se lavaron con salmuera (40 mL), se secaron (Na_{2}SO_{4}) y se concentraron a vacío. La purificación por cromatografía en columna de gel de sílice (éter al 10%/hexanos) dio 1,28 g de {2-[4-bromo-3-(2-metoxi-etil)-fenoximetoxi]-etil}-trimetil-silano en forma de un aceite transparente. ^{1}HRMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta: 7,40 (d, 1H, J = 8,7 Hz), 6,96 (d, 1H, J = 3,0 Hz), 6,80 (dd, 1H, J = 8,7, 3,0 Hz), 5,18 (s, 2H), 3,74 (t, 2H, J = 8,4 Hz), 3,60 (t, 2H, J = 7,2 Hz), 3,37 (s, 3H), 2,98 (t, 2H, J = 7,2 Hz), 0,95 (t, 2H, J = 8,4 Hz), -0,01 (s, 9H).
Ejemplo de referencia 24(i)
3-1H-benzoimidazol-2-il-6-(2-(2-hidroxietil)-4-hidroxifenil)-1H-indazol
148
Se disolvió 3-1H-benzoimidazol-2-il-6-(2-(2-metoxietil)-4-hidroxifenil)-1H-indazol, del Ejemplo de referencia 24(i), (99 mg, 0,26 mmol) en EtOAc (20 mL) y se enfrió hasta -78ºC bajo argón. Se añadió gota a gota tribromuro de boro y la mezcla de reacción se dejó en agitación mientras se calentaba a la temperatura ambiente durante 3 h. La solución se diluyó con EtOAc (60 mL) y se lavó con NaHCO_{3} sat. y salmuera (20 mL de cada uno). Los materiales orgánicos se secaron (Na_{2}SO_{4}) y se concentraron a vacío. La purificación por cromatografía en columna de gel de sílice (THF) dio 56 mg (59%) del compuesto del epígrafe en forma de un sólido blanco. ^{1}HRMN (300 MHz, DMSO-d_{6}) \delta: 13,60 (s, 1H), 13,01 (s, 1H), 9,41 (s, 1H), 8,49 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 7,71 (s ancho, 1H), 7,51 (s ancho, 1H), 7,46 (s, 1H), 7,21 (app d, 3H, J = 8,1 Hz), 7,08 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 6,77 (d, 1H, J = 2,1 Hz), 6,69 (dd, 1H, J = 8,1, 2,1 Hz), 4,57 (s ancho, 1H), 3,46 (t, 2H, J = 7,2 Hz), 2,68 (t, 2H, J = 7,2 Hz). MS (ES) [M+H]/z calculado 371, encontrado 371; [M-H]/z calculado 369, encontrado 369.
Ejemplo de referencia 24(j)
3-1H-benzoimidazol-2-il-6-(2,6-dimetil-4-hidroxifenil)-1H-indazol
149
El compuesto del Ejemplo de referencia 24 (j) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 24(a), excepto que, en la etapa (vi), se usó 4-bromo-3,5-dimetil-fenol en lugar de 4-bromo-2-metoxi-5-metil-fenol. ^{1}H RMN (300 MHz, DMSO-d_{6}) \delta: 13,57 (s, 1H), 12,99 (s, 1H), 9,22 (s, 1H), 8,52 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 7,72 (d, 1H, J = 6,6 Hz), 7,51 (d, 1H, J = 6,6 Hz), 7,31 (s, 1H), 7,16-7,25 (m, 2H), 7,02 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 6,55 (s, 2H), 1,93 (s, 6H). MS (ES) [M+H]/z calculado 355, encontrado 355; [M-H]/z calculado 353, encontrado 353.
Ejemplo de referencia 24(k)
3-1H-benzoimidazol-2-il-6-(2-metilsulfanil-4-hidroxifenil)-1H-indazol
150
El compuesto del Ejemplo de referencia 24 (k) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 24(c), excepto que, en la etapa (i), se usó 3-metilsulfanil-fenol, preparado como se describe a continuación, en lugar de 2-cloro-5-metil-fenol. ^{1}HRMN (300 MHz, DMSO-d_{6}) \delta: 13,59 (s, 1H), 12,98 (s, 1H), 9,64 (s, 1H), 8,48 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 7,71 (s ancho, 1H), 7,52 (app s, 2H), 7,20-7,27 (m, 3H), 7,12 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 6,76 (d, 1H, J = 2,1 Hz), 6,65 (dd, 1H, J = 8,4, 2,1 Hz), 2,34 (s, 3H). MS (ES) [M+H]/z calculado 373, encontrado 373; [M-H]/z calculado 371, encontrado 371.
El material de partida se preparó como sigue:
151
Preparación de 3-metilsulfanil-fenol: 3-hidroxitiofenol (5,0 g, 39,7 mmol) y carbonato de potasio (6,03 g, 43,6 mmol) se agitaron en acetona (80 mL) a 0ºC. Se añadió gota a gota yodometano (2,5 mL, 40 mmol) y la mezcla de reacción se agitó durante 45 min. La solución se diluyó con H_{2}O (150 mL) y se extrajo con EtOAc (2 x 100 mL). Los materiales orgánicos se lavaron con salmuera (100 mL), se secaron (Na_{2}SO_{4}) y se concentraron a vacío. La purificación por cromatografía en columna de gel de sílice (EtOAc al 25%/hexanos) dio 5,08 g (91%) de 3-metilsulfanil-fenol en forma de un aceite transparente. ^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta: 7,15 (t, 1H, J = 8,1 Hz), 6,82 (d, 1H, J = 8,1 Hz), 6,74 (t, 1H, J = 1,8 Hz), 6,60 (dd, 1H, J = 8,1, 1,8 Hz), 4,86 (s, 1H), 2,47 (s, 3H).
\newpage
Ejemplo de referencia 24(l)
3-1H-benzoimidazol-2-il-6-(2-(etoximetil)-5-metoxi-4-hidroxi-fenil)-1H-indazol
152
El compuesto del Ejemplo de referencia 24 (l) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 24(a), excepto que, en la etapa (vii), se usó [2-(4-bromo-5-etoximetil-2-metoxi-fenoximetoxi)-etil]-trimetil-silano, preparado como se describe a continuación, en lugar de [2-(4-bromo-2-metoxi-5-metil-fenoximetoxi)-etil]-trimetilsilano. ^{1}HRMN (300 MHz, DMSO-d_{6}) \delta: 13,63 (s, 1H), 12,99 (s, 1H), 9,15 (s, 1H), 8,50 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 7,73 (dd, 1H, J = 6,6, 2,1 Hz), 7,59 (s, 1H), 7,51 (dd, 1H, J = 6,6, 2,1 Hz), 7,32 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 7,19-7,24 (m, 2H), 6,94 (s, 1H), 6,91 (s, 1H), 4,22 (s, 2H), 3,81 (s, 3H), 3,39 (q, 2H, J = 6,9 Hz), 1,13 (t, 3H, J = 6,9 Hz). MS (ES) [M+H]/z calculado 415, encontrado 415.
El material de partida se preparó como sigue:
153
Se preparó 2-bromo-4-metoxi-5-(2-trimetil-silanil-etoximetoxi)-benzaldehído con un rendimiento del 79% sustituyendo 4-bromo-3-formil-2-metoxi-fenol (Hazlet et. al., J. Org. Chem., 27, 3253-55 (1962)) en el procedimiento descrito en el Ejemplo de referencia 24(a), etapa (vi). ^{1}HRMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta: 10,16 (s, 1H), 7,68 (s, 1H), 7,07 (s, 1H), 5,28 (s, 2H), 3,94 (s, 3H), 3,77 (t, 2H, J = 8,4 Hz), 0,94 (t, 2H, J = 8,4 Hz), -0,03 (s, 9H).
154
Preparación de [2-(4-bromo-5-etoximetil-2-metoxi-fenoximetoxi)-etil]-trimetil-silano: se añadió en porciones borohidruro de sodio (275 mg, 7,2 mmol) durante 10 min a una solución de 2-bromo-4-metoxi-5-(2-trimetilsilanil-etoximetoxi)-benzaldehído (1,3 g, 3,6 mmol) en MeOH (20 mL) a 0ºC. Después de 30 min, la mezcla de reacción se diluyó con H_{2}O (40 mL) y se extrajo con EtOAc (2 x 30 mL). Los materiales orgánicos se lavaron con salmuera (30 mL), se secaron (Na_{2}SO_{4}) y se concentraron a vacío obteniéndose 1,31 g de [2-bromo-4-metoxi-5-(2-trimetilsilanil-etoximetoxi)-fenil]-metanol en forma de un aceite transparente. ^{1}HRMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta: 7,29 (s, 1H), 7,05 (s, 1H), 5,27 (s, 2H), 4,66 (d, 2H, J = 6,6 Hz), 3,87 (s, 3H), 3,79 (t, 2H, J = 8,4 Hz), 1,92 (t, 1H, J = 6,6 Hz), 0,96 (t, 2H, J = 8,4 Hz), 0,01 (s, 9H).
El alcohol bencílico en bruto se agitó con una solución de hidróxido de potasio (800 mg, 14,4 mmol) en DMSO (8 mL). Se añadió yodoetano (580 mL, 7,2 mmol) y la mezcla de reacción agitada previamente durante 16 h se diluyó con H_{2}O (30 mL) y se extrajo con éter (2 x 30 mL). Los materiales orgánicos se lavaron con salmuera (20 mL), se secaron (Na_{2}SO_{4}) y se concentraron a vacío. La purificación por cromatografía en columna de gel de sílice (EtOAc al 15%/hexanos) dio 1,30 g (92%) del compuesto del epígrafe en forma de un aceite transparente. ^{1}HRMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta: 7,29 (s, 1H), 7,03 (s, 1H), 5,26 (s, 2H), 4,48 (s, 2H), 3,85 (s, 3H), 3,79 (t, 2H, J = 8,4 Hz), 3,58 (q, 2H, J = 6,9 Hz), 1,26 (t, 3H, J = 6,9 Hz), 0,95 (t, 2H, J = 8,4 Hz), -0,01 (s, 9H).
\newpage
Ejemplo de referencia 24(m)
3-1H-benzoimidazol-2-il-6-(2-(hidroximetil)-4-etoxi-5-metoxi-fenil)-1H-indazol 
\vskip1.000000\baselineskip
155 
\vskip1.000000\baselineskip
El compuesto del Ejemplo de referencia 24 (m) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 24(a), excepto que, en la etapa (vii), se usó [2-(2-bromo-5-etoxi-4-metoxi-benciloximetoxi)-etil]-trimetil-silano, preparado como se describe a continuación, en lugar de [2-(4-bromo-2-metoxi-5-metil-fenoximetoxi)-etil]-trimetilsilano. ^{1}HRMN (300 MHz, DMSO-d_{6}) \delta: 13,64 (s, 1H), 13,00 (s, 1H), 8,50 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 7,73 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 7,62 (s, 1H), 7,52 (dd, 1H, J = 6,0, 1,8 Hz), 7,32 (dd, 1H, J = 8,4, 1,2 Hz), 7,19-7,24 (m, 2H), 7,15 (s, 1H), 6,91 (s, 1H), 5,11 (t, 1H, J = 5,1 Hz), 4,37 (d, 2H, J = 5,1 Hz), 4,08 (q, 2H, J = 6,9 Hz), 3,80 (s, 3H), 1,37 (t, 3H, J = 6,9 Hz). MS (ES) [M+H]/z calculado 415, encontrado 415.
El material de partida se preparó como sigue:
\vskip1.000000\baselineskip
156 
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Preparación de 4-bromo-2-metoxi-5-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-fenol: [2-bromo-4-metoxi-5-(2-trimetilsilanil-etoximetoxi)-fenil]-metanol, por reposo durante periodos de hasta una semana, experimentó una migración de SEM desde el alcohol fenólico hasta el bencílico obteniéndose el compuesto del epígrafe. ^{1}HRMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta: 7,04 (s, 1H), 7,01 (s, 1H), 5,54 (s, 1H), 4,77 (s, 2H), 4,57 (s, 2H), 3,88 (s, 3H), 3,68 (t, 2H, J = 8,4 Hz), 0,97 (t, 2H, J = 8,4 Hz), 0,02 (s, 9H).
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157 
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Preparación de [2-(2-bromo-5-etoxi-4-metoxi-benciloximetoxi)-etil]-trimetil-silano: se agitó 4-bromo-2-metoxi-5-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-fenol (1,28 g, 3,53 mmol) con una solución de hidróxido de potasio (790 mg, 14,1 mmol) en DMSO (8 mL). Se añadió yodoetano (565 mL, 7,1 mmol) y la mezcla de reacción agitada previamente durante 16 h se diluyó con H_{2}O (30 mL) y se extrajo con éter (2 x 30 mL). Los materiales orgánicos se lavaron con salmuera (20 mL), se secaron (Na_{2}SO_{4}) y se concentraron a vacío. La purificación por cromatografía en columna de gel de sílice (EtOAc al 15%/hexanos) dio 1,26 g (91%) del compuesto del epígrafe en forma de un aceite transparente. ^{1}HRMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta: 7,02 (s, 1H), 6,98 (s, 1H), 4,78 (s, 2H), 4,60 (s, 2H), 4,09 (q, 2H, J = 6,6 Hz), 3,86 (s, 3H), 3,69 (t, 2H, J = 8,4 Hz), 1,46 (t, 3H, J = 6,6 Hz), 0,97 (t, 2H, J = 8,4 Hz), 0,04 (s, 9H).
\newpage
Ejemplo de referencia 24(n)
3-1H-benzoimidazol-2-il-6-(2-(hidroximetil)-5-metoxi-4-hidroxi-fenil)-1H-indazol
158
El compuesto del Ejemplo de referencia 24(n) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 24(a), excepto que se usó 6-[5-metoxi-2-hidroximetil-4-(2-trimetilsilanil-etoximetoxi)-fenil]-1-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-3-[1-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-1H-benzoimidazol-2-il]-1H-indazol, preparado como se describe a continuación, en lugar de 6-[5-metoxi-2-metil-4-(2-trimetilsilanil-etoximetoxi)-fenil]-1-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-3-[1-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-1H-benzoimidazol-2-il]-1H-indazol. ^{1}H RMN (300 MHz, DMSO-d_{6}) \delta: 13,59 (s, 1H), 12,95 (s, 1H), 9,05 (s, 1H), 8,49 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 7,72 (dd, 1H, J = 6,3, 2,1 Hz), 7,60 (s, 1H), 7,51 (dd, 1H, J = 6,3, 2,1 Hz), 7,31 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 7,20-7,24 (m, 2H), 7,02 (s, 1H), 6,87 (s, 1H), 5,02 (t, 1H, J = 5,4 Hz), 4,32 (d, 2H, J
= 5,4 Hz), 3,80 (s, 3H). MS (ES) [M+H]/z calculado 387, encontrado 387; [M-H]/z calculado 385, encontrado 385.
El material de partida se preparó como sigue:
159
Preparación de 4-metoxi-5-(2-trimetilsilanil-etoximetoxi)-2-trimetilestannanil-benzaldehído: 2-bromo-4-metoxi-5-(2-trimetilsilanil-etoximetoxi)-benzaldehído (3,36 g, 9,3 mmol) y hexametildiestaño (5,0 g, 15,3 mmol) se agitaron en tolueno anhidro (60 mL) en un matraz purgado con argón. Se añadió tetrakis(trifenilfosfina)paladio(0) (500 mg, 0,45 mmol) y la mezcla de reacción se agitó a 100ºC durante 23 h. La mezcla de reacción se enfrió y se concentró a vacío. La purificación por cromatografía en columna de gel de sílice (EtOAc al 5%/hexanos) dio 2,77 g (67%) de 4-metoxi-5-(2-trimetilsilanil-etoximetoxi)-2-trimetilestannanil-benzaldehído en forma de un aceite transparente. ^{1}HRMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta: 9,81 (dd, 1H, J = 3,0, 0,9 Hz), 7,66 (t, 1H, J = 6,6 Hz), 7,21 (t, 1H, J = 9,0 Hz), 5,35 (s, 2H), 3,99 (s, 3H), 3,82 (t, 2H, J = 8,4 Hz), 0,25 (t, 9H, J = 26,7 Hz), 0,98 (t, 2H, J = 8,4 Hz), -0,01 (s, 9H).
160
Preparación de [4-metoxi-5-(2-trimetilsilanil-etoximetoxi)-2-trimetil-estannanil-fenil]-metanol: 4-metoxi-5-(2-trimetilsilanil-etoximetoxi)-2-trimetil-estannanil-benzaldehído (2,36 g, 5,3 mmol) se agitó en MeOH (30 mL) a 0ºC. Se añadió borohidruro de sodio (400 mg, 10,6 mmol) y la mezcla de reacción se agitó durante 1 h. La solución se diluyó con H_{2}O (60 mL) y se extrajo con EtOAc (2 x 50 mL). Los materiales orgánicos se lavaron con salmuera (50 mL), se secaron (Na_{2}SO_{4}) y se concentraron a vacío obteniéndose 2,16 g (91%) de [4-metoxi-5-(2-trimetilsilanil-etoximetoxi)-2-trimetilestannanil-fenil]-metanol en forma de un aceite transparente. ^{1}HRMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta: 7,18 (t, 1H, J = 6,9 Hz), 7,03 (t, 1H, J = 9,3 Hz). 5,27 (s, 2H), 4,58-4,63 (m, 2H), 3,89 (s, 3H), 3,80 (t, 2H, J = 8,4 Hz), 1,53 (t, 1H, J = 6,0 Hz), 0,96 (t, 2H, J = 8,4 Hz), 0,31 (t, 9H, J = 27,3 Hz), 0,01 (s, 9H).
161
Preparación de 6-[5-metoxi-2-hidroximetil-4-(2-trimetilsilanil-etoximetoxi)-fenil]-1-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-3-[1-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-1H-benzoimidazol-2-il]-1H-indazol: 6-yodo-1-[2-(trimetil-silanil)-etoximetil]-3-
{1-[2-(trimetil-silanil)-etoximetil]-1H-benzoimidazol-2-il}-1H-indazol [Ejemplo de referencia 24 (a), etapa (v)] (300 mg, 0,48 mmol) y [4-metoxi-5-(2-trimetilsilanil-etoximetoxi)-2-trimetilestannanil-fenil]-metanol (282 mg, 0,63 mmol) se agitaron en dioxano (8 mL) bajo argón a 98ºC durante 16 h. La mezcla de reacción se dejó enfriar y se diluyó con EtOAc. Los materiales orgánicos se lavaron con NaHCO_{3} sat. y salmuera, se secaron (Na_{2}SO_{4}) y se concentraron a vacío. La purificación por cromatografía en columna de gel de sílice (EtOAc al 20%/hexanos) dio 224 mg (60%) de 6-[5-metoxi-2-hidroximetil-4-(2-trimetilsilanil-etoximetoxi)-fenil]-1-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-3-[1-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-1H-benzoimidazol-2-il]-1H-indazol en forma de un aceite amarillo claro. ^{1}HRMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta: 8,70 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 7,89-7,92 (m, 1H), 7,63-7,66 (m, 2H), 7,34-7,41 (m, 4H), 6,91 (s, 1H), 6,29 (s. 2H), 5,83 (s, 2H), 5,36 (s, 2H), 4,55 (s, 2H), 3,78-3,92 (m, 5H), 3,59-3,70 (m, 4H), 0,83-1,04 (m, 6H), 0,03 (s, 9H), -0,04 (s, 9H), -0,13 (s, 9H).
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Ejemplo de referencia 24(o)
3-1H-benzoimidazol-2-il-6-(3-hidroxifenil)-1H-indazol
162
El compuesto del Ejemplo de referencia 24(o) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 24(f), excepto que se usó 6-(3-metoxifenil)-3-1H-benzoimidazol-2-il-1H-indazol, preparado de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 24(a) excepto que en la etapa (viii), se usó ácido 3-metoxi-fenilborónico en lugar de ácido 5-metoxi-2-metil-4-[2-(trimetilsilanil)-etoximetoxi]-fenilborónico, en lugar de 6-(2-metoxi-4-hidroxifenil)-3-1H-benzoimidazol-2-il-1H-indazol. ^{1}HRMN (300 MHz, DMSO-d_{6}) \delta: 13,67 (s, 1H), 13,00 (s, 1H), 9,58 (s, 1H), 8,55 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 7,71-7,75 (m, 2H), 7,49-7,57 (m, 2H), 7,30 (t, 1H, J = 7,8 Hz), 7,12-7,24 (m, 4H), 6,80 (dd, 1H, J = 8,1, 1,5 Hz). MS (ES) [M+H]/z calculado 327, encontrado 327; [M-H]/z calculado 325, encontrado 325.
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Ejemplo de referencia 24(p)
3-1H-benzoimidazol-2-il-6-(2-metoxi-3-hidroxifenil)-1H-indazol
163
El compuesto del Ejemplo de referencia 24(p) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 24(a), excepto que, en la etapa (vi), se usó 3-bromo-2-metoxi-fenol, preparado como ha sido descrito por Aristoff et al., Tet. Lett., 25, 3955-58 (1984) en lugar de 4-bromo-2-metoxi-5-metil-fenol. ^{1}H RMN (300 MHz, DMSO-d_{6}) \delta: 13,60 (s, 1H), 12,97 (s, 1H), 9,37 (s, 1H), 8,52 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 7,69-7,74 (m, 2H), 7,51 (dd, 1H, J = 7,8, 1,8 Hz), 7,43 (dd, 1H, J = 8,4, 1,2 Hz), 7,19-7,24 (m, 2H), 7,02 (t, 1H, J = 7,8 Hz), 6,85-6,93 (m, 2H), 3,50 (s, 3H). MS (ES) [M+H]/z calculado 357, encontrado 355. [M-H]/z Calculado 357, encontrado 355.
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Ejemplo de referencia 25(a)
3-(3H-imidazo[4,5-c]piridin-2-il)-6-(4-hidroxi-2-metoxifenil)-1H-indazol 
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164 
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Una solución de 6-[5-metoxi-2-metil-4-(2-trimetil-silanil-etoximetoxi)-fenil]-1-(2-trimetil-silaniletoximetil)-3-[3-(2-trimetil-silanil-etoximetil)-3H-imidazo[4,5-c]piridin-2-il]-1H-indazol (68 mg, 0,11 mmol) en TBAF (1M en THF, 1,2 mL, 1,2 mmol) con etilendiamina (150 mL, 2,2 mmol) se agitó a 68ºC durante 48 h. La solución se concentró a vacío y se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (EtOH/EtOAc 2:1). La precipitación en acetonitrilo dio 21 mg (53%) de 3-(3H-imidazo[4,5-c]piridin-2-il)-6-(4-hidroxi-2-metoxifenil)-1H-indazol en forma de un sólido blanco. ^{1}HRMN (300 MHz, DMSO-d_{6}) \delta: 13,70 (s, 1H), 13,49 (s ancho, 1H), 9,62 (s, 1H), 9,01 (s ancho, 1H), 8,43 (d, 1H, J = 8,7Hz), 8,34 (d, 1H, J = 5,7Hz), 7,64 (s, 1H), 7,57 (s ancho, 1H), 7,39 (dd, 1H, J = 8,7, 1,5Hz), 7,21 (d, 1H, J = 8,1Hz), 6,55 (d, 1H, J = 2,1Hz), 6,49 (dd, 1H, J = 8,1, 2,1Hz), 3,74 (s, 3H). MS (ES) [M+H]/z, calculado 358, encontrado 358; [m-H]/z, calculado 356, encontrado 356.
Los compuestos intermedios se prepararon como sigue:
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165 
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3-(1,1-Dimetoxi-metil)-6-yodo-1-(2-trimetil-silanil-etoximetil)-1H-indazol. Una solución de 6-yodo-3-estiril-1-[2-(trimetil-silanil)-etoximetil]-1H-indazol [Ejemplo de referencia 14, etapa (i)] (1,28 g, 2,69 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (40 mL)/MeOH (40 mL) se agitó a -78ºC. La mezcla de reacción se trató con ozono hasta que persistía un color azul y a continuación se purgó con argón. Se añadió sulfuro de metilo (4 mL) y la mezcla de reacción se agitó 4 h mientras se calentaba hasta la temperatura ambiente. La concentración a vacío dio una mezcla en bruto de acetal y aldehído, que se convirtió completamente en el acetal por agitación en ortoformiato de trimetilo (10 mL) con resina ácida intercambiadora de iones Amberlyst 15 (húmeda) (0,8 g) durante 1 h. La resina se separó por filtración y la solución se concentró a vacío. La purificación por cromatografía en columna de gel de sílice dio 1,11 g (92%) de 3-(1,1-dimetoxi-metil)-6-yodo-1-(2-trimetil-silanil-etoximetil)-1H-indazol en forma de un aceite transparente. ^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta: 7,98 (s, 1H), 7,68 (d, 1H, J = 8,4Hz), 7,48 (dd, 1H, J = 8,4, 1,2Hz), 5,77 (s, 1H), 5,69 (s, 2H), 3,53 (t, 2H, J = 8,4Hz), 3,43 (s, 6H), 0,88 (t, 2H, J = 8,4Hz), -0,06 (s, 9H).
166
3-(1,1-Dimetoxi-metil)-6-[2-metoxi-4-(2-trimetil-silanil-etoximetoxi)-fenil]-1-(2-trimetil-silanil-etoximetil)-1H-indazol. 3-(1,1-Dimetoximetil)-6-yodo-1-(2-trimetil-silanil-etoximetil)-1H-indazol (1,06 g, 2,37 mmol), ácido 2-metoxi-4-(trimetil-silanil-etoximetoxi)-fenil-borónico (0,99 g, 3,32 mmol) y carbonato de sodio (352 mg, 1,4 mmol) se agitaron en una mezcla de benceno (15 mL), MeOH (3 mL) y agua (1 mL) en un matraz purgado con argón. Se añadió tetrakis(trifenilfosfina)paladio(0) (220 mg, 0,19 mmol) y la mezcla de reacción se agitó a reflujo durante 16 h. La mezcla de reacción se dejó enfriar y se diluyó con éter (70 mL). Los materiales orgánicos se lavaron con H_{2}O y salmuera (30 mL cada vez), se secaron (Na_{2}SO_{4}) y se concentraron a vacío. La purificación por cromatografía en columna de gel de sílice (EtOAc al 15%/hexanos) dio 1,12 g (82%) de 3-(1,1-dimetoxi-metil)-6-[2-metoxi-4-(2-trimetil-silanil-etoximetoxi)-fenil]-1-(2-trimetil-silanil-etoximetil)-1H-indazol en forma de un aceite ligeramente amarillo. ^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta: 7,91 (d, 1H, J = 8,4Hz), 7,64 (s, 1H), 7,37 (dd, 1H, J = 8,4, 1,2Hz), 7,29 (d, 1H, J = 8,4Hz), 6,71-6,77 (m, 2H), 5,82 (s, 1H), 5,75 (s, 2H), 5,28 (s, 2H), 3,77-3,83 (m, 5H), 3,57 (t, 2H, J = 8,4Hz), 3,46 (s, 6H), 1,00 (t, 2H, J = 8,4Hz), 0,88 (t, 2H, J = 8,4Hz), 0,03 (s, 9H), -0,05 (s, 9H).
1167
167
6-[2-Metoxi-4-(2-trimetil-silanil-etoximetoxi)-fenil]-1-(2-trimetil-silanil-etoximetil)-1H-indazol-3-carbaldehído.
3-(1,1-Dimetoximetil)-6-[2-metoxi-4-(2-trimetil-silanil-etoximetoxi)-fenil]-1-(2-trimetil-silanil-etoximetil)-1H-inda-
zol (1,1 g, 1,92 mmol) se agitó en TFA al 1%/CH_{2}Cl_{2} (20 mL) durante 1 h a la temperatura ambiente. La concentración a vacío proporcionó 1,01 g (100%) de 6-[2-metoxi-4-(2-trimetil-silanil-etoximetoxi)-fenil]-1-(2-trimetil-silanil-etoximetil)-1H-indazol-3-carbaldehído en forma de un aceite transparente. ^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta: 10,27 (s, 1H), 8,28 (d, 1H, J = 8,4Hz), 7,73 (s, 1H), 7,55 (dd, 1H, J = 8,4, 1,2Hz), 7,29 (d, 1H, J = 8,4Hz), 6,72-6,79 (m, 2H), 5,82 (s, 2H), 5,28 (s, 2H), 3,78-3,84 (m, 5H), 3,61 (t, 2H, J = 8,1 Hz), 0,89-1,03 (m, 4H), 0,03 (s, 9H), -0,05 (s, 9H).
168
6-[5-metoxi-2-metil-4-(2-trimetil-silanil-etoximetoxi)-fenil]-1-(2-trimetil-silanil-etoximetil)-3-[3-(2-trimetil-sila-nil-etoximetil)-3H-imidazo[4,5-c]piridin-2-il]-1H-indazol. 6-[2-Metoxi-4-(2-trimetil-silanil-etoximetoxi)-fenil]-1-(2-trimetil-silanil-etoximetil)-1H-indazol-3-carbaldehído (320 mg, 0,61 mmol), 3,4-diamino-piridina (68 mg, 0,62 mmol) y azufre (23 mg, 0,73 mmol) se mezclaron en DMF anhidra (2 mL) y se agitaron a 90ºC durante 16 h bajo argón. La mezcla de reacción se dejó enfriar y se diluyó con EtOAc (20 mL). Los materiales orgánicos se lavaron con NaHCO_{3} sat. y salmuera (15 mL cada vez), se secaron (Na_{2}SO_{4}) y se concentraron a vacío. La purificación por cromatografía en columna de gel de sílice (EtOAc del 75% al 100% /hexanos) dio 78 mg (21%) de 6-[5-metoxi-2-metil-4-(2-trimetil-silanil-etoximetoxi)-fenil]-1-(2-trimetil-silanil-etoximetil)-3-[3-(2-trimetil-silanil-etoximetil)-3H-imidazo[4,5-c]piridin-2-il]-1H-indazol en forma de un sólido blanco. ^{1}HRMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta: 10,69 (s ancho, 1H), 9,21 (s, 1H), 8,63 (dd, 1H J = 8,4, 0,3Hz), 8,50 (d, 1H, J = 5,4Hz), 7,73 (s, 1H), 7,47 (s ancho, 1H), 7,57 (dd, 1H, J = 8,7, 1,2Hz), 7,33 (d, 1H, J = 8,4Hz), 6,74-6,80 (m, 2H), 5,80 (s, 2H), 5,29 (s, 2H), 3,78-3,85 (m, 5H), 3,63 (t, 2H, J = 8,1 Hz), 0,89-1,04 (m, 4H), 0,04 (s, 9H), -0,06 (s, 9H).
Ejemplo de referencia 25(b)
3-[6-(2-morfolin-4-il-etilcarbamoil)-1H-benzoimidazol-2-il]-6-(2-metoxi-4-hidroxifenil)-1H-indazol
169
El compuesto del Ejemplo de referencia 25(b) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 25(a), excepto que la 3,4-diamino-N-(2-morfolin-4-il-etil)-benzamida, se preparó como se describe a continuación. ^{1}HRMN (DMSO-d_{6}) \delta: 13,61 (s, 0,5H), 13,59 (s, 0,5H), 13,22 (s, 0,5H), 13,18 (s, 0,5H), 9,59 (s, 1H), 8,35-8,46 (m, 2H), 8,27 (s, 0,5H), 8,02 (s, 0,5H), 7,71-7,79 (m, 1,5H), 7,63 (s, 1H), 7,53 (d, 0,5H, J = 8,7Hz), 7,38 (d, 1H, J = 8,7Hz), 7,21 (d, 1H, J = 8,7Hz), 6,55 (d, 1H, J = 2,1Hz), 6,49 (dd, 1H, J = 8,4, 2,1Hz), 3,75 (s, 3H), 3,58 (t, 4H, J = 4,5Hz), 3,42 (q, 2H, J = 6,0 Hz), 2,43-2,51 (m, 6H). MS (ES) [M+H]/z, calculado 513, encontrado 513; [m-H]/z, calculado 511, encontrado 511.
3,4-Diamino-N-(2-morfolin-4-il-etil)-benzamida se preparó como sigue:
170
3,4-Diamino-N-(2-morfolin-4-il-etil)-benzamida. Ácido 3,4-diaminobenzoico (5 g, 32,9 mmol), 4-(2-aminoetil)morfolina (5,2 mL, 39,4 mmol), trietilamina (9,2 mL, 66 mmol) y DMAP (0,40 g, 3,3 mmol) se mezclaron en DMF anhidra (80 mL) a 0ºC. Se añadió EDC (9,45 g, 49,3 mmol) y la mezcla de reacción se agitó durante 24 h a la temperatura ambiente. La concentración a vacío y la purificación por cromatografía en columna de gel de sílice (MeOH al 10%/CH_{2}Cl_{2} con NH_{4}OH al 0,2%) dio 2,6 g (31%) de 3,4-diamino-N-(2-morfolin-4-il-etil)-benzamida en forma de un sólido pardo claro. ^{1}HRMN (300 MHz, DMSO-d_{6}) \delta: 7,72 (t, 1H, J = 5,4Hz), 7,02 (d, 1H, J = 1,8Hz), 6,92 (dd, 1H, J = 8,1, 1,8Hz), 6,46 (d, 1H, J = 8,1Hz), 4,89 (s ancho, 2H), 4,51 (s ancho, 2H), 3,55 (t, 4H, J = 4,8Hz), 3,29 (q, 2H, J = 7,2Hz), 2,36-2,43 (m, 6H).
Ejemplo de referencia 25(c)
3-[6-(4-metilpiperazin-1-il)-1H-benzoimidazol-2-il]-6-(2-metoxi-4-hidroxifenil)-1H-indazol
171
El compuesto del Ejemplo de referencia 25(c) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 25(a), excepto que, en la etapa (iv), se usó 4-(4-metil-piperazin-1-il)-benceno-1,2-diamina (Harapanhalli et al., J. Med. Chem., 39, 4804-09 (1996)) en lugar de 3,4-diaminopiridina. ^{1}HRMN (300 MHz, DMSO-d_{6}) \delta: 13,51 (s, 0,33H), 13,38 (s, 0,67H), 12,66 (s, 0,33H), 12,59 (s, 0,67H), 9,58 (s, 1H), 8,42 (d, 0,33H, J = 8,4Hz), 8,41 (d, 0,67H, J = 8,4Hz), 7,59 (s, 1H), 7,55 (d, 0,67H, J = 8,7Hz), 7,31-7,37 (m, 1,33H), 7,20 (app d, 1,33H, J = 8,4Hz), 6,92-7,01 (m, 1,67H), 6,55 (d, 1H, J = 1,5Hz), 6,48 (dd, 1H, J = 8,4, 2,1Hz), 3,74 (s, 3H), 3,12 (s ancho, 4H), 2,50 (s ancho, 4H), 2,22 (s, 3H). MS (ES) [M+H]/z, calculado 455, encontrado 455; [m-H]/z, calculado 453, encontrado 453.
Ejemplo de referencia 25(d)
3-[4-(4-metilpiperazin-1-il)-1H-benzoimidazol-2-il]-6-(2-metoxi-4-hidroxifenil)-1H-indazol
172
El compuesto del Ejemplo de referencia 25(d) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 25(a), excepto que, en la etapa (iv), se usó 3-(4-metil-piperazin-1-il)-benceno-1,2-diamina (Harapanhalli et al., J. Med. Chem., 39, 4804-09 (1996)), análoga a la preparación del isómero 4) en lugar de 3,4-diaminopiridina. ^{1}H RMN (300 MHz, DMSO-d_{6}) \delta: 13,41 (s ancho, 1H), 12,79 (s ancho, 1H), 9,60 (s ancho, 1H), 8,37 (d, 1H, J = 8,4Hz), 7,60 (s, 1H), 7,36 (dd, 1H, J = 8,4, 1,2Hz), 7,22 (d, 1H, J = 8,4Hz), 7,03-7,07 (m, 2H), 6,46-6,56 (m, 3H), 3,75 (s, 3H), 3,62 (s ancho, 4H), 2,62 (s ancho, 4H), 2,28 (s, 3H). MS (ES) [M+H]/z, calculado 455, encontrado 455; [m-H]/z, calculado 453, encontrado 453.
Ejemplo de referencia 25(e)
3-imidazol-2-il-6-(2-metoxi-4-hidroxifenil)-1H-indazol
173
El compuesto del Ejemplo de referencia 25(e) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 25(a), excepto que se usó 6-[5-metoxi-2-metil-4-(2-trimetil-silanil-etoximetoxi)-fenil]-1-(2-trimetil-silanil-etoximetil)-3-imidazol-2-il-1H-indazol en lugar de 6-[5-metoxi-2-metil-4-(2-trimetil-silanil-etoximetoxi)-fenil]-1-(2-trimetil-silanil-etoximetil)-3-[3-(2-trimetil-silanil-etoximetil)-3H-imidazo[4,5-c]piridin-2-il]-1H-indazol. ^{1}HRMN (300 MHz, DMSO-d_{6}) \delta: 13,10 (s, 1H), 12,59 (s, 1H), 9,56 (s, 1H), 8,27 (d, 1H, J = 8,4Hz), 7,53 (s, 1H), 7,25 (dd, 1H, J = 8,4, 1,2Hz), 7,13-7,20 (m, 3H), 6,54 (d, 1H, J = 2,1Hz), 6,47 (dd, 1H, J = 8,4, 2,1Hz), 3,73 (s, 3H). MS (ES) [M+H]/z, calculado 307, encontrado 307.
El material de partida se preparó como sigue:
174
Se añadió gota a gota glioxal (40% en peso en H_{2}O, 0,4 mL, 3,5 mmol) a una solución de 420 mg (0,8 mmol) de 6-[2-metoxi-4-(2-trimetil-silanil-etoximetoxi)-fenil]-1-(2-trimetil-silanil-etoximetil)-1H-indazol-3-carbaldehído, del Ejemplo de referencia 25(a) etapa (iii), y amoniaco acuoso al 28% (0,6 mL) en THF (8 mL)/MeOH (8 mL) y la solución se agitó a la temperatura ambiente durante 16 h. La mezcla de reacción se concentró a vacío y se disolvió en CHCl_{3} (50 mL). Los materiales orgánicos se lavaron con H_{2}O y salmuera (25 mL cada vez), se secaron (Na_{2}SO_{4}) y se concentraron a vacío. La purificación por cromatografía en columna de gel de sílice (EtOAc al 40%/hexanos) dio 120 mg (27%) de 6-[5-metoxi-2-metil-4-(2-trimetil-silanil-etoximetoxi)-fenil]-1-(2-trimetil-silanil-etoxime-til)-3-imidazol-2-il-1H-indazol en forma de un aceite transparente. ^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta: 10,03 (s, 1H), 8,48 (d, 1H, J = 8,4Hz), 7,65 (s, 1H), 7,46 (dd, 1H, J = 8,4, 1,5Hz), 7,29-7,48 (m, 2H), 7,13 (d, 1H, J = 1,5Hz), 6,73-6,78 (m, 2H), 5,73 (s, 2H), 5,28 (s, 2H), 3,78-3,86 (m, 5H), 3,60 (t, 2H, J = 8,4Hz), 0,88-1,03 (m, 4H), 0,03 (s, 9H),
-0,05 (s, 9H).
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Ejemplo de referencia 25(f)
3-[4-(2-hidroxietilsulfanil)-1H-benzoimidazol-2-il]-6-(2-metoxi-4-hidroxifenil)-1H-indazol 
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175 
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El compuesto del Ejemplo de referencia 25 (f) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 25(a), excepto que, en la etapa (iv), se usó 2-(2,3-diaminofenilsulfanil)-etanol) en lugar de 3,4-diaminopiridina. ^{1}HRMN (300 MHz, DMSO-d_{6}) \delta: 13,51 (s, 1H), 13,02 (s, 1H), 9,59 (s, 1H), 8,45 (d, 1H, J = 8,4Hz), 7,61 (s, 1H), 7,32-7,40 (m, 2H), 7,11-7,23 (m, 3H), 6,55 (d, 1H, J = 2,4Hz), 6,48 (dd, 1H, J = 8,1, 2,4Hz), 4,96 (s ancho, 1H), 3,75 (s, 3H), 3,65 (s ancho, 2H), 3,33 (t, 2H, J = 6,9Hz). MS (ES) [M+Na]/z, calculado 455, encontrado 455, [m-H]/z, calculado 431, encontrado 431.
El material de partida se preparó como sigue:
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176 
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2-(3-Amino-2-nitro-fenilsulfanil)-etanol. 3-Cloro-2-nitro-anilina (1,12 g, 6,5 mmol), 2-mercaptoetanol (0,60 ml, 8,6 mmol) y carbonato de potasio (0,99 g, 7,1 mmol) se mezclaron en DMF anhidra (15 ml) y se agitaron a 130ºC durante 4 h. La solución se dejó enfriar y se concentró a vacío. La purificación por cromatografía en columna de gel de sílice (EtOAc al 70%/hexanos) dio 1,29 g (93%) de 2-(3-amino-2-nitro-fenilsulfanil)-etanol en forma de un sólido rojo vivo. ^{1}HRMN (300 MHz, DMSO-d_{6}) \delta: 7,20 (t, 1H, J = 8,1Hz), 6,80 (s, 2H), 6,73 (dd, 1H, J = 8,4, 0,9Hz), 6,63 (dd, 1H, J = 7,8, 1,2Hz), 4,92 (t, 1H, J = 6,0 Hz), 3,58 (q, 2H, J = 6,0 Hz), 2,98 (t, 2H, J = 6,0 Hz).
2-(2,3-Diamino-fenilsulfanil)-etanol. 2-(3-Amino-2-nitro-fenilsulfanil)-etanol (1,02 g, 4,8 mmol) se redujo por hidrogenación usando 0,31 MPa de H_{2} con Pd al 10%/C (180 mg) en EtOAc (25 mL) durante 6 h. Después de filtrar a través de Celite, el disolvente se separó a vacío. La purificación por cromatografía en columna de gel de sílice (EtOAc) dio 762 mg (87%) de 2-(2,3-diamino-fenilsulfanil)-etanol en forma de un sólidos ligeramente amarillo. ^{1}HRMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta: 6,98 (dd, 1H, J = 7,5, 1,5Hz), 6,60-6,72 (m, 2H), 3,65 (t, 2H, J = 5,7Hz), 3,55 (s ancho, 5H), 2,91 (t, 2H, J = 5,7Hz).
\newpage
Ejemplo de referencia 25(g)
3-(5-metilcarbamoil-1H-benzoimidazol-2-il)-6-(2-metoxi-4-hidroxifenil)-1H-indazol
177
El compuesto del Ejemplo de referencia 25 (g) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 25(a), excepto que, en la etapa (iv), se usó 3,4-diamino-N-metilbenzamida (Kumar, et al., J. Med. Chem., 27, 1083-89 (1984)) en lugar de 3,4-diaminopiridina. ^{1}H RMN (300 MHz, DMSO-d_{6}) \delta: 13,59 (s, 0,5H), 13,55 (s, 0,5H), 13,21 (s, 0,5H), 13,14 (s, 0,5H), 9,60 (s, 1H), 8,38-9,46 (m, 2H), 8,26 (s, 0,5H), 8,03 (s, 0,5H), 7,71-7,79 (m, 1,5H), 7,63 (s, 1H), 7,52 (d, 0,5H, J = 8,4Hz), 7,35-7,40 (m, 1H), 7,21 (d, 1H, J = 2,1Hz), 6,55 (d, 1H, J = 2,4Hz), 6,49 (dd, 1H, J = 8,4, 2,4Hz), 3,75 (s, 3H), 2,82 (d, 1,5H, J = 1,5Hz), 2,81 (d, 1,5H, J = 1,5Hz). MS (ES) [M+H]/z, calculado 414, encontrado 414, [m-H]/z, calculado 412, encontrado 412.
Ejemplo de referencia 25(h)
3-(5-dimetilamino-1H-benzoimidazol-2-il)-6-(2-metoxi-4-hidroxi-fenil)-1H-indazol
178
El compuesto del Ejemplo de referencia 25(h) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 25(a), excepto que, en la etapa (iv), se usó 3,4-diamino-N,N-dimetil-anilina (Cazaux, et. al., Can. J. Chem., 71, 1236-46 (1993)) en lugar de 3,4-diaminopiridina. ^{1}H RMN (300 MHz, DMSO-d_{6}) \delta: 13,36 (s, 1H), 12,51 (s ancho, 1H), 9,58 (s, 1H), 8,42 (d, 1H, J = 8,4Hz), 7,59 (s, 1H), 7,49 (s ancho, 1H), 7,33 (dd, 1H, J = 8,4, 1,2Hz), 7,20 (d, 1H, J = 8,1Hz), 6,87 (d ancho, 2H, J = 8,1Hz), 6,55 (d, 1H, J = 2,1Hz), 6,48 (dd, 1H, J = 8,1, 2,1Hz), 3,73 (s, 3H), 2,92 (s, 6H). MS (ES) [M+H]/z, calculado 400, encontrado 400, [m-H]/z, calculado 398, encontrado 398.
Ejemplo de referencia 25(i)
3-(5-aminosulfonil-1H-benzoimidazol-2-il)-6-(2-metoxi-4-hidroxi-fenil)-1H-indazol
179
El compuesto del Ejemplo de referencia 25(i) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 25(a), excepto que, en la etapa (iv), se usó 3,4-diamino-bencenosulfonamida en lugar de 3,4-diaminopiridina. ^{1}HRMN (300 MHz, DMSO-d_{6}) \delta: 13,67 (s, 0,5H), 13,64 (s, 0,5H), 13,39 (s, 0,5H), 13,35 (s, 0,5H), 9,60 (s, 1H), 8,43 (d, 1H, J = 8,1Hz), 8,18 (d, 0,5H, J = 1,5Hz), 7,99 (d, 0,5H, J = 1,5Hz), 7,86 (d, 0,5H, J = 8,4Hz), 7,62-7,72 (m, 2,5H), 7,29 (d, 1H, J = 8,4Hz), 7,20-7,28 (m, 3H), 6,55 (d, 1H, J = 2,1Hz), 6,49 (dd, 1H, J = 8,4, 2,1Hz), 3,75 (s, 3H). MS (ES) [M+H]/z, calculado 436, encontrado 436, [m-H]/z, calculado 434, encontrado 434.
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Ejemplo de referencia 25(j)
3-(4-metilcarbamoil-1H-benzoimidazol-2-il)-6-(2-metoxi-4-hidroxi-fenil)-1H-indazol
180
El compuesto del Ejemplo de referencia 25(i) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 25(a), excepto que, en la etapa (iv), se usó 2,3-diamino-N-metil-benzamida en lugar de 3,4-diaminopiridina. ^{1}HRMN (300 MHz, DMSO-d_{6}) \delta: 13,71 (s, 1H), 13,46 (s, 1H), 9,85 (d ancho, 1H, J = 4,8Hz), 9,61 (s, 1H), 8,38 (d, 1H, J = 8,4Hz), 7,89 (dd, 1H, J = 7,5, 1,2Hz), 7,66-7,72 (m, 2H), 7,47 (dd, 1H, J = 8,4, 1,2Hz), 7,36 (t, 1H, J = 7,8Hz), 7,23 (d, 1H, J = 8,1Hz), 6,56 (d, 1H, J = 2,4Hz), 6,50 (dd, 1H, J = 8,4, 2,4Hz), 3,76 (s, 3H), 3,10 (d, 3H, J = 1,8H). MS (ES) [M+H]/z, calculado 414, encontrado 414, [m-H]/z, calculado 412, encontrado 412.
La 2,3-diamino-N-metil-benzamida se preparó como sigue:
181 
\vskip1.000000\baselineskip
2-Amino-N-metil-3-nitro-benzamida. Ácido 2-amino-3-nitro-benzoico (1,8 g, 9,9 mmol) e hidrocloruro de metilamina (1,33 g, 19,8 mmol) se agitaron en CH_{2}Cl_{2} anhidro (30 ml)/DMF (5 mL) a 0ºC. Se añadieron EDC (2,83 g, 14,8 mmol) y DIEA (4,92 mL, 27,7 mmol) y la solución se agitó 3 h mientras se calentaba hasta la temperatura ambiente. La mezcla de reacción se concentró a vacío y se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (MeOH al 8%/CHCl_{3}) obteniéndose 1,42 g (74%) de 2-amino-N-metil-3-nitrobenzamida en forma de un sólido amarillo. ^{1}HRMN (300 MHz, DMSO-d_{6}) \delta: 8,58 (s ancho, 1H), 8,23 (s ancho, 2H), 8,15 (dd, 1H, J = 8,1, 1,8Hz), 7,82 (dd, 1H, J = 8,1, 1,8Hz), 6,68 (t, 1H, J = 8,1Hz), 2,76 (d, 3H, J = 4,5Hz).
2,3-Diamino-N-metil-benzamida. 2-Amino-N-metil-3-nitro-benzamida (1,4 g, 7,2 mmol) se redujo por hidrogenación usando 0,345 MPa de H_{2} con Pd al 10%/C (250 mg) en EtOAc (25 mL) durante 5 h. Después de filtración a través de Celite, el disolvente se separó a vacío. La purificación por cromatografía en columna de gel de sílice (MeOH al 10%/CHCl_{3}) dio 1,08 mg (91%) de 2,3-diamino-N-metil-benzamida en forma de un sólido ligeramente amarillo. ^{1}HRMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta: 6,87 (dd, 1H, J = 7,8, 1,5Hz), 6,76 (dd, 1H, J = 7,8, 1,5Hz), 6,59 (t, 1H, J = 7,8Hz), 6,14 (s ancho, 1H), 4,28 (s ancho, 4H), 2,95 (d, 3H, J = 5,1Hz).
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Ejemplo de referencia 26
6-(4-hidroxi-3-metoxifenil)-3-[E-2-(4-glicilamino-fenil)-etenil]-1H-indazol
182
El compuesto del Ejemplo de referencia 26 se preparó a partir del material de partida descrito a continuación de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 1(a): ^{1}HRMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta: 8,29 (d, 1H), 7,80 (m, 5H), 7,58 (m, 3H), 7,38 (s, H), 7,27 (d, 1H), 7,01 (d, 1H), 4,00 (s, 3H), 3,42 (s, 2H); LCMS (área 100%) Rt = 3,44 min, (pos) [M+H]/z, calculado 415,1, encontrado 415,2.
El material de partida se preparó como sigue:
183
Se preparó 3-yodo-6-(3-metoxi-4-metoximetoxi-fenil)-1-[2-(trimetil-silanil)-etoximetil]-1H-indazol a partir del compuesto preparado en el Ejemplo de referencia 1(a), etapa (v) de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 10, etapa (ii): Rf sm = 0,11, p = 0,43 (acetato de etilo-hexano 3:7); ^{1}HRMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta: 7,71 (s, 1H), 7,55 (m, 2H), 7,33 (m, 1H), 7,20 (m, 2H), 5,82 (s, 2H), 5,33 (s, 2H), 4,02 (s, 3H), 3,64 (t, 2H), 3,59 (s, 3H), 0,95 (t, 2H), -0,03 (s, 9H).
184
Se preparó 3-estiril-6-(3-metoxi-4-metoximetoxi-fenil)-1-[2-(trimetil-silanil)-etoximetil]-1H-indazol de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 11, etapa (iii): R_{f} sm = 0,41, p = 0,35 (acetato de etilo-hexano 2:8); ^{1}HRMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta: 8,12 (d, 1H), 7,73 (s, 1H), 7,62 (m, 2H), 7,51 (m, 2H), 7,46 (m, 2H), 7,38 (m, 1H), 7,30 (m, 4H), 5,85 (s, 2H), 5,38 (s, 2H), 4,03 (s, 3H). 3,70 (t, 2H), 3,62 (s, 3H), 0,98 (t, 2H), -0,02 (s, 9H).
185
Se preparó 3-carboxaldehído-6-(3-metoxi-4-metoximetoxi-fenil)-1-[2-(trimetil-silanil)-etoximetil]-1H-indazol de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 33(a), etapa (i): ^{1}HRMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta: 10,33 (s, 1H), 8,34 (d, 1H), 7,82 (s, 1H), 7,65 (d, 1H), 7,25 (m, 3H), 5,90 (s, 2H), 5,36 (s, 2H), 4,02 (s, 3H), 3,67 (t, 2H), 3,51 (s, 3H), 0,98 (t, 2H), -0,02 (s, 9H).
186
Se preparó 3-(4-nitroestiril)-6-(3-metoxi-4-metoximetoxi-fenil)-1-[2-(trimetil-silanil)-etoximetil]-1H-indazol de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 33(a), etapa (ii) excepto que se usó bromuro de 4-nitrobenciltrifenilfosfonio y hexametildisilazida de litio en lugar de cloruro de 2-picoliltrifenilfosfonio-hidruro de potasio: LCMS (área 100%) Rt = 6,89 min, (pos) [M+H]/z, calculado 562,4, encontrado 562,4.
187
Se preparó 3-(4-nitroestiril)-6-(3-metoxi-4-metoximetoxi-fenil)-1H-indazol de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 11: FTIR (película fina) 3335, 3178, 2954, 1592, 1512, 1338, 1257, 1136, 1257, 1136, 987 cm^{-1}; ^{1}HRMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta: 8,22 (d, 2H, J = 8,8 Hz), 8,02 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 7,70 (d, 2H, J = 8,8 Hz), 7,58 (m, 3H), 7,45 (dd, 1H, J = 1,3, 8,5 Hz), 7,20 (m, 4H), 7,26 (s, 2H), 3,95 (s, 3H), 3,53 (s, 3H); LCMS (área 100%) Rt = 5,13 min, (pos) [M+H]/z, calculado 432,1, encontrado 432,1.
188
Se preparó 3-(4-aminoestiril)-6-(3-metoxi-4-metoximetoxi-fenil)-1H-indazol de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 11, etapa (iv): Rf sm = 0,39, p = 0,26 (acetato de etilo-hexano 6:4); FTIR (película fina) 3366, 3210, 2954, 1608, 1517, 1465, 1412, 1259, 1157, 1077, 989, 912 cm^{-1}; ^{1}HRMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta: 8,11 (d, 1H), 7,63 (s, 1H), 7,50-7,15 (m, 8H), 6,71 (d, 2H), 5,36 (s, 2H), 3,97 (s, 3H), 3,61 (s, 3H); LCMS (área 100%) Rt = 4,40 min, (pos) [M+H]/z, calculado 402,2, encontrado 402,2.
189
Se disolvió 3-(4-aminoestiril)-6-(3-metoxi-4-metoximetoxi-fenil)-1H-indazol (90 mg, 0,224 mmol) en diclorometano (2 mL) y se trató con Boc-glicina (196 mg, 1,12 mmol, 5 equivalentes), DMAP (82 mg, 3 equivalentes) y HATU (426 mg, 5 equivalentes). La mezcla se dejó en agitación durante 30 min. La mezcla se repartió entre acetato de etilo y agua. El material orgánico se concentró, se recogió con metanol (5 mL) y se trató con carbonato de potasio (100 mg). La mezcla se calentó hasta 50ºC durante 3 días. La mezcla resultante se repartió de nuevo entre acetato de etilo y agua. El material orgánico se concentró y se purificó por sílice (109 mg, 66%): R_{f} sm = 0,32, p = 0,46 (acetato de etilo-hexano 6:4); ^{1}HRMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta: 8,18 (s ancho, 1H), 8,03 (d, 1H, J = 8,1 Hz), 7,56 (m, 5H), 7,40 (m, 3H), 7,20 (m, 3H), 5,29 (s, 2H), 5,20 (s ancho, 1H), 3,98 (s, 3H), 3,96 (d, 2H), 3,54 (s, 3H), 1,48 (s, 9H).
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Ejemplo de referencia 27(a)
6-fenil-3-E-estiril-1H-indazol
190 
\newpage
Se trató 6-fenil-3-estiril-1-[2-(trimetil-silanil)etoximetil]-1H-indazol (345 mg, 0,81 mmol) con una solución de TBAF (16 ml de una solución 1M en THF, 16 mmol) y etilendiamina (0,53 ml, 8,1 mmol) y se calentó a 70ºC durante 2 h. La solución se vertió a continuación en salmuera (200 ml) y se extrajo con acetato de etilo (3x30 ml). La capa orgánica se secó sobre MgSO_{4} y se concentró bajo presión reducida. La purificación por cromatografía en columna de gel de sílice dio 6-fenil-3-E-estiril-1H-indazol en forma de un sólido blanco (80 mg, 34%): ^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta: 8,10 (d, 1H, J = 8,5 Hz); HRMS (FAB) [M+H]/z, calculado 297,1392, encontrado 297,1393. Anal. Calculado, C (85,10), H (5,44), N (9,45). Encontrado: C (85,10), H (5,46), N (9,43).
El material de partida se preparó como sigue:
191
Una solución de 476 mg (1,0 mmol) de 6-yodo-3-estiril-1-[2-(trimetil-silanil)etoximetil]-1H-indazol, del Ejemplo de referencia 14 etapa (i), en dioxano (3 ml, desgasificado por tratamiento con ultrasonidos y burbujeo de argón), Pd(PPh_{3})_{4} (23 mg, 0,05 mmol), ácido fenil-borónico (302 mg, 2,5 mmol) y Na_{2}CO_{3} (1,25 ml de una solución acuosa 2M, desgasificada como se ha indicado anteriormente) se calentó a 90ºC durante 2 h. La solución se diluyó a continuación con acetato de etilo (100 ml) y se lavó con salmuera (2x20 ml). La capa orgánica se secó sobre MgSO_{4} y se concentró bajo presión reducida. La purificación por cromatografía en columna de gel de sílice dio 6-fenil-3-estiril-1-[2-(trimetil-silanil)etoximetil]-1H-indazol en forma de un aceite pardo (345 mg, 81%). ^{1}HRMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta: 8,09 (dd, 1H, J = 8,5, 0,7 Hz), 7,75 (s, 1H), 7,70 (d, 1H, J = 7,0 Hz), 7,64-7,58 (m, 2H), 7,56-7,51 (m, 2H), 7,50-7,45 (m, 2H), 7,45-736 (m, 4H), 7,34-7,27 (m, 1H), 5,80 (s, 2H), 3,73 (t, 2H, J = 8,3Hz), 1,12 (t, 2H, J = 8,3Hz).
Ejemplo de referencia 27(b)
6-(3-metoxifenil)-3-E-estiril-1H-indazol
192
El compuesto del Ejemplo de referencia 27(b) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 27(a), excepto que, en la etapa (i), se usó ácido 3-metoxifenil-borónico en lugar de ácido fenil-borónico. ^{1}H RMN (300 MHz, MeOH-d_{4}) \delta: 8,16 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 7,70 (s, 1H), 7,67-7,61 (m, 2H), 7,60-7,43 (m, 3H), 7,43-7,33 (m, 3H), 7,32-7,21 (m, 3H), 6,99-6,92 (m, 1H), 3,88 (s, 3H). HRMS (FAB) [M+Na]/z, calculado 349,1317, encontrado 349,1342. Analizado con 0,1 H_{2}O: Calculado, C (80,50), H (5,59), N (8,55). Encontrado: C (80,44), H (5,49), N (8,55).
Ejemplo de referencia 27(c)
6-(4-metoxifenil)-3-E-estiril-1H-indazol
193
El compuesto del Ejemplo de referencia 27(b) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 27(a), excepto que, en la etapa (i), se usó ácido 4-metoxifenil-borónico en lugar de ácido fenil-borónico. ^{1}HRMN (300 MHz, DMSO-d_{6}) \delta: 13,20 (s, 1H), 8,23 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 7,76-7,64 (m, 5H), 7,54 (s, 1H), 7,50-7,37 (m, 3H), 7,33-7,25 (m, 1H), 7,07 (d, 2H, J = 8,8 Hz), 3,82 (s, 3H). HRMS (FAB) [M+H]/z, calculado 327,1497, encontrado 327,1502. Anal. Calculado, C (80,96), H (5,56), N (8,58). Encontrado: C (80,71), H (5,42), N (8,47).
Ejemplo de referencia 27(d)
6-naft-1-il-3-E-estiril-1H-indazol 
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194 
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El compuesto del Ejemplo de referencia 27(d) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 27(a), excepto que, en la etapa (i), se usó ácido 1-naftalenoborónico en lugar de ácido fenil-borónico. ^{1}HRMN (300 MHz, DMSO-d_{6}) \delta: 10,11 (s, 1H), 8,45 (d, 1H. J = 8,41), 7,97-7,87 (m, 3H), 7,66-7,37 (m, 13H), 7,35-7,28 (m, 1H). HRMS (FAB) [M+Na]/z, calculado 369,1368, encontrado 369,1359. Anal. Calculado C (86,68), H (5,32), N (8,19). Encontrado: C (86,52), H (5,32), N (8,19).
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Ejemplo de referencia 27(e)
6-piridin-3-il-3-E-estiril-1H-indazol 
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195 
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El compuesto del Ejemplo de referencia 27(e) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 27(a), excepto que, en la etapa (i), se usó ácido 3-piridinborónico en lugar de ácido fenil-borónico. ^{1}HRMN (300 MHz, MeOH-d_{4}) \delta: 8,97 (s, 1H), 8,63 (d, 1H, J = 4,8 Hz), 8,30 (d, 1H, H=8,5 Hz), 8,27 (d, 1H, J = 8,1 Hz), 7,86 (s, 1H), 7,72 (d. 2H, J = 7,5 Hz), 7,69-7,56 (m, 4H), 7,54-7,42 (m, 2H), 7,40-7,32 (m, 1H). HRMS (FAB) [M+H]/z, calculado 298,1344, encontrado 298,1356. Analizado con 0,25 H_{2}O: Calculado, C (79,58), H (5,18), N (13,92). Encontrado: C (79,53), H (5,16), N (13,80).
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Ejemplo de referencia 27(f)
6-piridin-4-il-3-E-estiril-1H-indazol 
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196 
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El compuesto del Ejemplo de referencia 27(f) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 27(a), excepto que, en la etapa (i), se usó ácido 4-piridinborónico en lugar de ácido fenil-borónico. ^{1}HRMN (300 MHz, McOH-d_{4}) \delta: 8,69 (s ancho, 2H), 8,30 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 7,96 (s, 1H), 7,87 (d, 2H, H=5,6 Hz), 7,75-7,68 (m, 3H), 7,68-7,50 (m, 2H), 7,50-7,42 (m, 2H), 7,40-7,31 (m, 1H). HRMS (FAB) [M+H]/z, calculado 298,1344, encontrado 298,1357. Analizado con 0,3 H_{2}O: Calculado, C (79,34), H (5,19), N (13,88). Encontrado: C (79,14), H (5,08), N (13,84).
\newpage
Ejemplo de referencia 27(g)
6-indol-4-il-3-E-estiril-1H-indazol
197
El compuesto del Ejemplo de referencia 27(g) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 27(a), excepto que, en la etapa (i), se usó ácido 4-indolborónico en lugar de ácido fenil-borónico. ^{1}H RMN (300 MHz, MeOH-d_{4}) \delta: 8,25 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 7,85 (s, 1H), 7,75-7,67 (m, 3H), 7,67-7,52 (m, 2H), 7,52-7,42 (m, 3H), 7,39-7,22 (m, 4H), 6,72 (d, 1H, J = 3,2 Hz). HRMS (FAB) [M+H]/z, calculado 336,1501, encontrado 336,1506. Analizado con 0,3 H_{2}O: Calculado, C (78,97), H (5,36), N (12,01). Encontrado: C (78,95), H (5,20), N (12,03).
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Ejemplo de referencia 27(h)
6-[3-etoxi-4-hidroxifenil]-3-E-estiril-1H-indazol
198
El compuesto del Ejemplo de referencia 27(h) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 27(a), excepto que, en la etapa (i), se usó ácido 3-etoxi-4-(2-trimetil-silanil-etoximetoxi)benceno-borónico en lugar de ácido fenil-borónico. ^{1}HRMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta: 8,10 (d, 1H, J = 8,7 Hz). 7,74 (s, 1H), 7,74-7,16 (m, 10H), 7,07 (d, 1H, J = 8,15 Hz). 4,27 (q, 2H, J = 14,0 Hz), 1,54 (t, 3H, J = 14,0 Hz). HRMS (FAB) [M+H]/z, calculado 357,1603, encontrado 357,1611. Analizado con 0,2 H_{2}O: Calculado, C (76,73), H (5,71), N (7,78). Encontrado: C (76,72), H (5,91), N (7,63).
El material de partida se preparó como sigue:
199
4-Bromo-2-etoxi-fenol (Smith et al., Soc. Pl., 1877-78 (1992)) se convirtió en ácido 3-etoxi-4-(2-trimetil-silaniletoximetoxi)-benceno-borónico de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 24(a) etapas (vi)-(vii). ^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta: 7,82 (d, 1H, J = 8,0 Hz), 7,72 (s, 1H), 7,31 (d, 1H, J = 8,1 Hz), 5,37 (s, 2H), 4,29 (q, 2H, J = 14,0 Hz), 3,87 (t, 2H, J = 16,8 Hz), 1,54 (t, 2H, J = 14,0 Hz), 0,99 (t, 2H, J = 16,8 Hz), 0,03 (s, 9H).
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Ejemplo de referencia 27(i)
6-[3-(2-hidroxietoxi)-4-hidroxifenil]-3-E-estiril-1H-indazol
200
El compuesto del Ejemplo de referencia 27(i) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 27(a), excepto que, en la etapa (i), se usó ácido 3-[2-(trimetil-silanil-etoximetoxi)-etoxi]-4-(2-trimetil-silanil-etoximetoxi)-benceno-borónico, preparado a partir de 2-(2-hidroxi-etoxi)-fenol (Yamaguchi et al., Bull. Chem. Soc. Jpn., 61, 2047-54 (1988)) de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 24(c) etapas (i)-(iii), en lugar de ácido fenil-borónico. ^{1}HRMN (300 MHz, DMSO-d_{6}) \delta: 8,17 (d, 1H, J = 8,7 Hz), 7,73- 7,17 (m, 11 H), 6,92 (d, 1H, J = 8,2 Hz), 4,13 (t, 2H, J = 9,7 Hz), 3,8 (t, 2H, J = 9,7 Hz). HRMS (FAB) [M+H]/z, calculado 373,1552, encontrado 373,1563. Analizado con 0,05 ácido trifluoroacético: Calculado, C (73,37), H (5,35), N (7,41). Encontrado: C (73,11), H (5,33), N (7,39).
Ejemplo de referencia 27(j)
6-(3,4-dimetoxifenil)-3-E-estiril-1H-indazol
201
El compuesto del Ejemplo de referencia 27(j) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 27(a), excepto que, en la etapa (i), se usó ácido 3,4-dimetoxifenil-borónico en lugar de ácido fenil-borónico. ^{1}HRMN (300 MHz, DMSO-d_{6}) \delta: 8,01 (d, 1H, J = 8,1 Hz), 7,51-7,05 (m, 11H), 6,86 (d, 1H, J = 8,0 Hz) 3,58 (s, 3H), 3,65 (s, 3H). HRMS (FAB) [M+H]/z, calculado 357,1598, encontrado 357,1508. Analizado con 0,2 H_{2}O: Calculado, C (76,73), H (5,71), N (7,78). Encontrado: C (76,45), H (5,70), N (7,68).
Ejemplo 27(k)
6-(2-metoxipiridin-5-il)-3-E-estiril-1H-indazol
202
6-(2-Metoxipiridin-5-il)-3-((E)-estiril)-1-(2-trimetil-silanil-etoximetil)-1H-indazol se convirtió en 6-(2-metoxipiridin-5-il)-3-E-estiril-1H-indazol de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 27(a). ^{1}HRMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta: 8,53 (d, 1H, J = 2,1 Hz), 8,15 (d, 1H, J = 9,2 Hz), 7,97 (dd, 1H, J = 2,6, 8,6 Hz), 7,79 (s, 1H), 7,74-7,34 (m, 8H), 6,94 (d, 1H, J = 8,6 Hz). HRMS (FAB) [M+H]/z, calculado 328,1450, encontrado 328,1462. Anal. Calculado, C (77,04), H (5,23), N (12,83). Encontrado: C (77,00), H (5,28), N (12,65).
El material de partida se preparó como sigue:
203
Una solución de 5-bromo-2-metoxipiridina (2,00 g, 6,10 mmol), hexametildiestaño (1,15 g, 6,10 mmol) y Pd(PPh_{3})_{4}(0,28 g, 0,24 mmol) en dioxano desgasificado (10 ml) se llevó a reflujo durante 16 h. Se añadió 6-yodo-3-((E)-estiril)-1-(2-trimetil-silanil-etoximetil)-1H-indazol (2,90 g, 6,10 mmol) a la mezcla anterior, seguido por Pd(PPh_{3})_{4} (0,35 g 0,31 mmol). La mezcla de reacción se llevó a reflujo durante 16 h. La mezcla se diluyó a continuación con acetato de etilo (150 ml) y se lavó con salmuera (30 ml). Los materiales orgánicos se secaron sobre MgSO_{4}, y a continuación se concentraron bajo presión reducida. La purificación por cromatografía en columna de gel de sílice dio 6-(2-metoxipiridin-5-il)-3-((E)-estiril)-1-(2-trimetil-silanil-etoximetil)-1H-indazol en forma de un sólido amarillo (1,12 g, 40%). ^{1}HRMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta: 8,51 (d, 1H, J = 2,5 Hz), 8,50 (d, 1H, J = 9,1 Hz), 7,93 (dd, 1H, J = 2,5, 8,6 Hz), 7,69 (s,1H), 7,69-7,28 (m, 8H), 6,89 (d, 1H, J = 8,6 Hz), 5,83 (s, 2H), 4,03 (s, 3H), 3,64 (t, 2H, J = 8,3 Hz), 0,93 (t, 2H, J = 8,3 Hz), -0,03 (s, 9H).
Ejemplo de referencia 28(a)
6-(3-hidroxifenil)-3-E-estiril-1H-indazol 
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204 
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Una solución de 100 mg (0,3 mmol) 6-(3-metoxifenil)-3-E-estiril-1H-indazol, del Ejemplo de referencia 27(b), se enfrió hasta -78ºC y se trató con BBr_{3} (1,8 ml de una solución 1M en CH_{2}Cl_{2}, 1,8 mmol). La solución resultante se mantuvo a -78ºC durante 15 min, y a continuación se calentó hasta 0ºC y se mantuvo 3 h. A continuación se añadió una solución de hidrogenocarbonato de sodio acuoso saturado (10 ml), seguido por acetato de etilo (50 ml). La capa orgánica se lavó con salmuera (20 ml), y a continuación se concentró bajo presión reducida. La purificación por cromatografía en columna de gel de sílice dio 6-(3-hidroxifenil)-3-E-estiril-1H-indazol en forma de un sólido blanco (55 mg, 59%). ^{1}HRMN (300 MHz, MeOH-d_{4}) \delta: 8,16 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 7,71-7,62 (m, 3H), 7,61-7,44 (m, 3H), 7,43-7,35 (m, 2H), 7,33-7,25 (m, 2H), 7,20-7,10 (m, 2H), 6,85-6,79 (m, 1H); 313,14 (s, 1H), 9,60 (s, 1H), 8,20 (d, 1H, J = 8,4Hz), 7,73 (d, 2H, J = 7,3), 7,64-7,52 (m, 5H), 7,47-7,37 (m, 3H), 7,33-7,25 (m, 1H), 6,89 (d. 2H, J = 8,6Hz).
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Ejemplo de referencia 28(b)
6-(4-hidroxifenil)-3-E-estiril-1H-indazol 
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205 
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6-(4-metoxifenil)-3-E-estiril-1H-indazol, del Ejemplo de referencia 27(c), se convirtió en 6-(4-hidroxifenil)-3-E-estiril-1H-indazol de mantera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 28(a). ^{1}HRMN (300 MHz, DMSO-d_{6}) \delta: 13,14 (s, 1H), 9,60 (s, 1H), 8,20 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 7,73 (d, 2H, J = 7,3 Hz), 7,64-7,52 (m, 5H), 7,47-7,37 (m, 3H), 7,33-7,25 (m, 1H), 6,89 (d, 2H, J = 8,6 Hz). HRMS (FAB) [M+Na]/z, calculado 313,1341, encontrado 313,1347. Analizado con 0,5 H_{2}O: Calculado, C (78,48), H (5,33), N (8,72). Encontrado: C (78,35), H (5,26), N (8,49).
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Ejemplo de referencia 28(c)
6-(2-hidroxipiridin-5-il)-3-E-estiril-1H-indazol 
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206 
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6-(2-Metoxipiridin-5-il)-3-E-estiril-1H-indazol, del Ejemplo de referencia 27(k), se convirtió en 6-(2-hidroxipiridin-5-il)-3-E-estiril-1H-indazol de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 28(a). ^{1}HRMN (300 MHz, DMSO-d_{6}) \delta: 8,22 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 7,96 (dd, 1H, J = 2,6, 9,65 Hz), 7,81 (d, 1H, J = 2,0 Hz), 7,74-7,30 (m, 9H), 6,50 (d, 1H, J = 9,4 Hz). HRMS (FAB) [M+H]/z, calculado 314,1293, encontrado 314,1280. Analizado con 0,1 ácido trifluoroacético: Calculado, C (72,69), H (4,86), N (12,59). Encontrado: C (72,77), H (4,81), N (12,65).
\newpage
Ejemplo de referencia 28(d)
6-(3,4-dihidroxifenil)-3-E-estiril-1H-indazol
207
6-(3,4-Dimetoxifenil)-3-E-estiril-1H-indazol, del Ejemplo de referencia 27(j), se convirtió 6-(3,4-dihidroxifenil)-3-E-estiril-1H-indazol de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 28(a). ^{1}HRMN (300 MHz, DMSO-d_{6}) \delta: 9,09 (s ancho, 1H), 9,07 (s ancho, 1H), 8,20 (d, 1H, J = 8,5), 7,73 (d, 2H, J = 7,5 Hz), 7,56 (d, 2H, J = 10,1 Hz), 7,53 (s, 1H), 7,43-7,29 (m, 4H), 7,11 (s, 1H), 7,04 (d, 1H, J = 8,2 Hz), 6,86 (d, 1H, J = 8,2 Hz). HRMS (FAB) [M+H]/z, calculado 329,1290, encontrado 329,1274. Analizado con 1,0 H_{2}O: Calculado, C (66,79), H (4,73), N (7,15). Encontrado: C (66,54), H (4,56), N (7,36).
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Ejemplo de referencia 29(a)
6-pirid-4-il-3-E-[2-(2,6-diclorofenil)etenil]-1H-indazol
208 
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6-Pirid-4-il-3-E-[2-(2,6-diclorofenil)etenil]-1-(2-trimetil-silanil-etoximetil)-1H-indazol se convirtió en 6-pirid-4-il-3-E-[2-(2,6-diclorofenil)etenil]-1H-indazol de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 27(a).
^{1}HRMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta: 13,55 (s, 1H), 8,68 (dd, 2H, J = 4,6, 1,6 Hz), 8,21 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 7,96 (s, 1H), 7,81 (dd, 2H, J = 4,5, 1,6 Hz), 7,66 (dd, 1H, J1=8,5, 1,4 Hz), 7,58 (d, 2H, J = 8,0 Hz), 7,51 (s, 2H), 7,39-7,32 (m, 1H). MS (FAB) [M+H]/z, calculado 366, encontrado 366. Analizado con 0,7 H_{2}O: Calculado, C (63,40), H (3,83), N (11,09). Encontrado: C (63,63), H (3,75). N (10,83).
El material de partida se preparó como sigue:
209
Bromuro de 2,6-diclorobencilo (1,20 g, 5 mmol) se mezcló con fosfito de trietilo (1,66 g, 10 mmol) y se calentó a 150ºC durante 2 h. La mezcla resultante se destiló a continuación a 160ºC bajo presión reducida (10 mm de Hg) para eliminar el exceso de fosfito de trietilo. Se obtuvo el éster dietílico del ácido (2,6-dicloro-bencil)-fosfónico en forma de un líquido incoloro (1,46 g, 100%). ^{1}HRMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta: 7,33-7,28 (m, 2H), 7,15-7,07 (m, 1H), 4,14-4,02 (m, 4H), 3,60 (d, 2H, J = 22,4Hz), 1,27 (t, 6H, J = 7,0Hz).
210
Se burbujeó ozono gaseoso a través de una solución de 6-pirid-4-il-3-E-estiril-1-(2-trimetil-silanil-etoximetil)-1H-indazol (2,13 g, 5,0 mmol) en THF (25 ml) y MeOH (25 ml) a -78ºC durante 15 min. A continuación se burbujeo argón a través de la solución durante 10 min a -78ºC durante 10 min, y a continuación se añadió sulfuro de dimetilo (1,46 ml, 20 mmol). La solución se dejó calentar hasta la temperatura ambiente y se mantuvo durante 2 h. La solución se vertió en salmuera (300 ml), y a continuación se extrajo con acetato de etilo (3x100 ml). Los materiales orgánicos se secaron sobre MgO_{4}, y a continuación se evaporaron bajo presión reducida. La purificación por cromatografía en columna de gel de sílice dio 6-piridin-4-il-1-(2-trimetil-silanil-etoximetil)-1H-indazol-3-carbaldehído en forma de un sólido blanco (2,2 g, 75%). ^{1}HRMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta: 10,39 (s, 1H), 8,75 (d, 2H, J = 1,6 Hz), 8,45 (d, 1H, J = 2,8 Hz), 7,91 (s, 1H), 7,75-7,66 (m, 3H), 5,90 (s, 2H), 3,63 (t, 2H, J = 2,7 Hz), 0,93 (t, 2H, J = 2,8 Hz), 0,00 (s, 9H).
211
Una solución de éster dietílico del ácido (2,6-diclorobencil)fosfínico (582 mg, 2,0 mmol) en DMF (15 ml) se enfrió hasta 0ºC y se trató con NaH (160 mg del 60% en aceite mineral, 4,0 mmol). La solución resultante se mantuvo a 0ºC durante 30 min, y luego se trató con 6-piridin-4-il-1-(2-trimetil-silanil-etoximetil)-1H-indazol-3-carbaldehído (353 mg, 1,0 mmol). La solución resultante se dejó calentar hasta la temperatura ambiente durante 1 h y a continuación se mantuvo a esta temperatura 2 h. La solución se vertió en salmuera (250 ml) y a continuación se extrajo con acetato de etilo (3x80 ml). Los materiales orgánicos se secaron sobre MgSO_{4} y a continuación se concentraron bajo presión reducida. La purificación por cromatografía en columna de gel de sílice dio 6-pirid-4-il-3-E-[2-(2,6-diclorofenil)etenil]-1-(2-trimetil-silanil-etoximetil)-1H-indazol en forma de un aceite amarillo (330 mg, 67%). ^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta: 7,72 (dd, 2H, J = 4,6, 1,5 Hz), 8,16 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 7,84 (s, 1H), 7,62 (ss, 2H, J = 4,5, 1,6 Hz), 7,60 (s, 2H), 7,56 (dd, 1H, J = 8,5, 1,5 Hz), 7,39 (d, 1H, J = 8,1 Hz), 7,18-7,12 (m, 1H), 3,64 (t, 2H, J = 8,3 Hz), 0,92 (t, 2H, J = 8,3 Hz), 0,00 (s, 9H).
Ejemplo de referencia 29(b)
6-pirid-4-il-3-E-[2-(3-metilfenil)etenil]-1H-indazol
212
6-Piridin-4-il-1-(2-trimetil-silanil-etoximetil)-1H-indazol-3-carbaldehído se con-virtió en el producto deseado de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 29(a). ^{1}HRMN (300 MHz, MeOH-d_{4}) \delta: 8,88 (d, 1H, J = 6,7 Hz), 8,41-8,35 (m, 3H), 8,16 (s, 1H), 7,80 (dd, 1H, J = 8,6,1,6 Hz), 7,67-7,48 (m, 4H), 7,35 (t, 1H, J = 7,6 Hz), 7,22-7,17 (m, 1H), 4,88 (s, 3H). MS (FAB) [M+H]/z, calculado 312, encontrado 312. Analizado con 0,2 H_{2}O, 1,1 ácido trifluoroacético: Calculado, C (63,27), H (4,23), N (9,54). Encontrado: C (63,08), H (4,18), N (9,80).
Ejemplo de referencia 29(c)
6-pirid-4-il-3-E-[2-(4-clorofenil)etenil]-1H-indazol
213
6-Piridin-4-il-1-(2-trimetil-silanil-etoximetil)-1H-indazol-3-carbaldehído se convirtió en el producto deseado de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 29(a). ^{1}H RMN (300 MHz, DMSO-d_{6}) \delta: 13,40 (s, 1H), 8,67 (dd, 2H, J = 4,6, 1,6 Hz), 8,33 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 7,92 (s, 1H), 7,81 (dd, 2H, J = 4,6, 1,6 Hz), 7,78 (d, 2H, J = 8,5 Hz), 7,67-7,56 (m, 3H), 7,46 (d, 2H, J = 8,5Hz). Analizado con 0,15 H_{2}O: Calculado, C (71,81), H (4,31), N (12,56). Encontrado: C (71,85), H (4,26), N (12,48).
Ejemplo de referencia 29(d)
6-pirid-4-il-3-E-[2-(bifenil-4-il)etenil]-1H-indazol
214
6-Piridin-4-il-1-(2-trimetil-silanil-etoximetil)-1H-indazol-3-carbaldehído se convirtió en el compuesto del Ejemplo de referencia 29(d) de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 29(a). ^{1}H RMN (300 MHz. DMSO-d_{6}) \delta: 13,40 (s, 1H), 8,68 (d, 2H, J = 4,6, 1,5 Hz), 8,35 (d, 1H, J = 8,5Hz), 7,93 (s, 1H), 7,87-7,79 (m, 4H), 7,73 (d, 4H, J = 8,1 Hz), 7,66-7,60 (m, 3H), 7,45 (m, 2H), 7,41-7,34 (m, 1H). MS (FAB) [M+H]/z, calculado 374, encontrado 374. Analizado con 0,20 H_{2}O: Calculado, C (82,82), H (5,19), N (11,15). Encontrado: C (82,82), H (5,19), N (11,16).
Ejemplo de referencia 29(e)
6-pirid-4-il-3-E-[2-(3-metoxifenil)etenil]-1H-indazol
215
6-Piridin-4-il-1-(2-trimetil-silanil-etoximetil)-1H-indazol-3-carbaldehído se convirtió en el compuesto del Ejemplo de referencia 29(e) de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 29(a). ^{1}HRMN (300 MHz, DMSO-d_{6}) \delta: 13,39 (s, 1H), 8,67 (d, 2H, J = 5,3 Hz), 833 (d, 2H, J = 8,5 Hz), 7,92 (s, 1H), 7,81 (dd, 2H, J = 4,6, 1,5 Hz), 7,65-7,54 (m, 3H), 7,35-7,28 (m, 3H). 3,83 (s, 3H). MS (FAB) [M+H]/z, calculado 328, encontrado 328. Analizado con 0,20 H_{2}O: Calculado, C (76,20), H (5,30), N (12,70). Encontrado: C (76,17), H (5,34), N (12,65).
Ejemplo de referencia 29(f)
6-pirid-4-il-3-E-[2-(pirid-2-il)etenil]-1H-indazol
216
6-Piridin-4-1-(2-trimetil-silanil-etoximetil)-1H-indazol-3-carbaldehído se convirtió en el compuesto del Ejemplo de referencia 29(f) de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 29(a). ^{1}H RMN (300 MHz, DMSO-d_{6}) \delta: 8,68 (dd, 2H, J = 4,5, 1,6 Hz), 8,62 (d, 1H, J = 3,8 Hz), 833 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 7,99 (d, 1H, J = 16,4 Hz), 7,94 (s, 1H), 7,86-7,78 (m, 3H), 7,73-7,57 (m. 3H), 7,32-7,26 (m, 1H). Analizado con 0,05 H_{2}O. Calculado, C (76,26), H (4,75), N (18,72). Encontrado: C (76,22). H (4,79). N (18,76).
Ejemplo de referencia 29(g)
6-pirid-4-il-3-E-[2-(3-fluorofenil)etenil]-1H-indazol 
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217 
\newpage
6-Piridin-4-il-1-(2-trimetil-silanil-etoximetil)-1H-indazol-3-carbaldehído se convirtió en el compuesto del Ejemplo de referencia 29(g) de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 29(a). ^{1}HRMN (300 MHz, DMSO-d_{6}) \delta: 13,40 (s, 1H), 8,68 (dd, 2H, J = 4,5, 1,6 Hz), 8,34 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 7,92 (s, 1H), 7,81 (dd, 2H, J1 = 4,5, 1,6 Hz), 7,74-7,52 (m, 5H), 7,49-7,40 (m, 1H), 7,16-7,07 (m, 1H). MS (FAB) [M+H]/z, calculado 316, encontrado 316. Anal. Calculado, C (76,17), H (4,48), N (13,33). Encontrado: C (76,07), H (4,53). N (13,36).
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Ejemplo de referencia 29(h)
6-pirid-4-il-3-E-[2-(2-fluorofenil)etenil]-1H-indazol 
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218
6-Piridin-4-il-1-(2-trimetil-silanil-etoximetil)-1H-indazol-3-carbaldehído se convirtió en el compuesto del Ejemplo de referencia 29(h) de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 29(a). ^{1}HRMN (300 MHz, DMSO-d_{6}) \delta: 13,43 (s, 1H), 8,66 (dd, 2H, J = 4,5, 1,6 Hz), 8,23 (d, 1H, J = 8,2 Hz), 7,98-7,90 (m, 2H), 7,80 (dd, 2H, J = 4,5, 1,7 Hz), 7,73-7,54 (m, 3H), 7,40-7,31 (m, 1H), 7,30-7,21 (m, 2H). MS (FAB) [M+H]/z, calculado 316, encontrado 316. Anal. Calculado, C (76,17), H (4,48), N (13,33). Encontrado: C (76,12), H (4,51), N (13,29).
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Ejemplo de referencia 29(i)
6-pirid-4-il-3-E-[2-(3-clorofenil)etenil]-1H-indazol 
\vskip1.000000\baselineskip
219
6-Piridin-4-il-1-(2-trimetil-silanil-etoximetil)-1H-indazol-3-carbaldehído se convirtió en el compuesto del Ejemplo de referencia 29(i) de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 29(a). ^{1}HRMN (300 MHz, DMSO-d_{6}) \delta: 13,42 (s, 1H), 8,68 (dd, 2H, J = 4,5, 1,6 Hz), 8,35 (d, 1H, J = 8,1 Hz), 7,92 (s, 1H), 7,86 (s, 1H), 7,82 (dd, 2H, J = 4,5, 1,7 Hz). 7,74-7,51 (m, 4H), 7,43 (t, 1H, J = 7,8 Hz), 7,37-7,21 (m, 1H). MS (FAB) [M+H]/z, calculado 332, encontrado 332. Anal. Calculado, C (72,40), H (4,25), N (12,67). Encontrado: C (72,52), H (4,28), N (12,57).
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Ejemplo de referencia 29(j)
6-pirid-4-il-3-E-[2-(2-metiltiazol-4-il)etenil]-1H-indazol 
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220
6-Piridin-4-il-1-(2-trimetil-silanil-etoximetil)-1H-indazol-3-carbaldehído se convirtió en el compuesto del Ejemplo de referencia 29(j) de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 29(a). ^{1}HRMN (300 MHz, DMSO-d_{6}) \delta: 13,38 (s, 1H), 8,67 (dd, 2H, J = 4,5, 1,6 Hz), 8,25 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 7,92 (s, 1H), 7,81 (dd, 2H, J = 4,5, 1,6 Hz), 7,70-7,50 (m, 4H), 2,72 (s, 3H). MS (FAB) [M+H]/z, calculado 319, encontrado 319. Analizado con 0,15 ácido trifluoroacético: Calculado, C (65,51), H (4,25), N (16,70). Encontrado: C (65,56), H (4,37), N 16,53).
\newpage
Ejemplo de referencia 29(k)
6-pirid-4-il-3-E-[2-(naftalen-2-il)etenil]-1H-indazol
221
El 6-piridin-4-il-1-(2-trimetil-silanil-etoximetil)-1H-indazol-3-carbaldehído se convirtió en el compuesto del Ejemplo de referencia 29(k) de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 29(a). ^{1}HRMN (300 MHz, DMSO-d_{6}) \delta: 13,40 (s, 1H), 8,68 (dd, 2H, J = 4,6, 1,4 Hz), 8,39 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 8,17 (s, 1H), 8,09-7,89 (m, 8H), 7,83 (dd, 2H, J = 4,6, 1,6 Hz), 7,74 (s, 2H), 7,65 (dd, 1H, J = 8,5, 1,4 Hz), 7,60-7,46 (m, 4H). MS (FAB) [M+H]/z, calculado 348, encontrado 348. Analizado con 1,05 ácido trifluoroacético: Calculado, C (67,10), H (3,89), N (9,00). Encontrado: C (67,20), H (3,93), N (9,05).
Ejemplo de referencia 29(l)
6-pirid-4-il-3-E-[2-(2,3-difluorofenil)etenil]-1H-indazol
1000
El 6-piridin-4-il-1-(2-trimetil-silanil-etoximetil)-1H-indazol-3-carbaldehído se convirtió en el compuesto del Ejemplo de referencia 29(l) de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 29(a). ^{1}HRMN (300 MHz, CDCl_{3} + MeOH-d_{4}) \delta: 8,68 (d, 2H, J = 5,6 Hz,), 8,02 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 7,70 (s, 1H), 7,58 (dd, 2H, J = 4,8, 1,5 Hz), 7,57-7,39 (m, 3H), 7,38-7,31 (m, 1H), 7,06-6,96 (m, 2H). MS (FAB) [M+H]/z, calculado 334, encontrado 334. Analizado con 0,80 H_{2}O: Calculado, C (69,08), H (4,23). N (12,08). Encontrado: C (68,77), H (3,93), N (11,85).
Ejemplo de referencia 29(m)
6-pirid-4-il-3-E-[2-(3,5-difluorofenil)etenil]-1H-indazol
222
El 6-piridin-4-il-1-(2-trimetil-silanil-etoximetil)-1H-indazol-3-carbaldehído se convirtió en el compuesto del Ejemplo de referencia 29(m) de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 29(a). ^{1}HRMN (300 MHz, MeOH-d_{4}) \delta: 8,69 (d, 2H, J = 6,3 Hz), 8,34 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 7,97 (s, 1H), 7,97 (d, 2H, J = 6,3 Hz), 7,71 (d, 1H, J = 10,0 Hz), 7,62 (s 1H), 7,60 (s, 1H), 7,36 (d, 1H, J = 11,11), 6,95-6,89 (m, 1H). MS (ES) [M+H]/z, calculado 334, encontrado 334. Anal. Calculado, C (72,06), H (3,93), N (12,61). Encontrado: C (72,20), H (4,01), N (12,58).
Ejemplo de referencia 29(n)
6-pirid-4-il-3-E-[2-(bifenil-3-il)etenil]-1H-indazol
223 
\newpage
6-Piridin-4-il-1-(2-trimetil-silanil-etoximetil)-1H-indazol-3-carbaldehído se convirtió en el compuesto del Ejemplo de referencia 29(n) de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 29(a). ^{1}HRMN (300 MHz, DMSO-d_{6}) \delta: 8,68 (d, 2H, J = 6,1 Hz), 8,39 (d, 1H, J = 8,5), 8,04 (s, 1H), 7,92 (s, 1H), 7,82 (d, 2H, J = 6,2 Hz), 7,79-7,37 (m, 11 H). MS (ES) [M+H]/z, calculado 374, encontrado 374. Anal. Calculado, C (83,62), H (5,13), N (11,25). Encontrado: C (83,47), H (5,08), N (11,32).
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Ejemplo de referencia 29(o)
6-pirid-4-il-3-E-[2-(2,6-difluorofenil)etenil]-1H-indazol 
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224
6-Piridin-4-il-1-(2-trimetil-silanil-etoximetil)-1H-indazol-3-carbaldehído se convirtió en el compuesto del Ejemplo de referencia 29(o) de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 29(a). ^{1}HRMN (300 MHz, MeOH-d_{4}) \delta: 8,69 (d, 2H, J = 6,3 Hz), 8,21 (d, 1H, J = 8,6 Hz), 7,97 (s, 1H), 7,88 (d, 2H. J = 6,3 Hz), 7,83 (d, 1H, J = 17,1 Hz), 7,71 (1H, J = 8,6 Hz), 7,65 (d, 1H, J = 17,1 Hz), 7,40- 7,35 (m, 1H), 7,13-7,08 (m, 2H). MS (ES) [M+H]/z, calculado 334, encontrado 334. Analizado con 0,1 H_{2}O: Calculado, C (71,67), H (3,97). N (12,54). Encontrado: C (71,37), H (3,90), N (12,31).
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Ejemplo de referencia 29(p)
6-pirid-4-il-3-E-[2-(3-trfluorometoxifenil)etenil]-1H-indazol 
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225
El 6-piridin-4-il-1-(2-trimetil-silanil-etoximetil)-1H-indazol-3-carbaldehído se convirtió en el compuesto del Ejemplo de referencia 29(p) de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 29(a). ^{1}HRMN (300 MHz, DMSO-d_{6}) \delta: 8,84 (d, 2H, J = 6,4 Hz), 8,43 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 8,19 (d, 2H, J = 6,4 Hz), 8,07 (s, 1H), 7,81-7,27 (m, 5H), 7,78 (s, 1H). MS (ES) [M+H]/z, calculado 382, encontrado 382. Analizado con 1,0 ácido trifluoroacético: Calculado, C (55,76), H (3,05), N (8,48). Encontrado: C (55,84), H (3,09), N (8,45).
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Ejemplo de referencia 29(q)
6-pirid-4-il-3-E-[2-(bencimidazol-2-il)etenil]-1H-indazol 
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226
El 6-piridin-4-il-1-(2-trimetil-silanil-etoximetil)-1H-indazol-3-carbaldehído se convirtió en el compuesto del Ejemplo de referencia 29(q) de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 29(a). ^{1}HRMN (300 MHz, DMSO-d_{6}) \delta: 8,69 (d, 2H, J = 6,1 Hz), 8,25 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 8,03 (d, 1H, J = 16,7 Hz), 7,97 (s, 1H), 7,84 (d, 2H, J = 6,2), 7,72 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 7,60-7,57 (m, 2H), 7,53 (d, 1H, J = 16,7 Hz), 7,22-7,19 (m, 2H). MS (ES) [M+H]/z, calculado 338, encontrado 338. Analizado con 2,0 ácido trifluoroacético, 0,2 H_{2}O: Calculado, C (52,77), H (3,08), N (12,31). Encontrado: C (52,59), H (3,17), N (12,18).
\newpage
Ejemplo de referencia 29(r)
6-pirid-4-il-3-E-[2-(3,4-metilendioxi-fenil)etenil]-1H-indazol
227
El 6-piridin-4-il-1-(2-trimetil-silanil-etoximetil)-1H-indazol-3-carbaldehído se convirtió en el compuesto del Ejemplo de referencia 29(r) de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 29(a). ^{1}HRMN (300 MHz, DMSO-d_{6}) \delta: 8,67 (d, 2H, J = 6,1 Hz), 8,30 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 7,89 (s,1H), 7,81 (d, 2H, J = 6,1 Hz), 7,61 (d, 1H, J = 9,9 Hz), 7,46-7,42 (m, 3H), 7,18 (d, 1H, J = 9,6 Hz), 6,95 (d, 1H, 8,0 Hz), 6,05 (s, 2H). MS (ES) [M+H]/z, calculado 342, encontrado 342. Anal. Calculado, C (73,89), H (4,43), N (12,31). Encontrado: C (73,74), H (4,52), N (12,40).
Ejemplo de referencia 29(s)
6-pirid-4-il-3-E-[2-(2,5-difluorofenil)etenil]-1H-indazol
228
El 6-piridin-4-il-1-(2-trimetil-silanil-etoximetil)-1H-indazol-3-carbaldehído se convirtió en el compuesto del Ejemplo de referencia 29(s) de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 29(a). ^{1}HRMN (300 MHz, MeOH-d_{4}) \delta: 8,53 (d, 2H, J = 6,0 Hz), 8,03 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 7,60 (d, 2H, J = 6,2 Hz), 7,56-7,35 (m, 3H), 7,34-7,26 (m, 1H), 7,03-6,93 (m, 1H), 6,90-6,81 (m, 1H). MS (ES) [M+H]/z, calculado 334, encontrado 334. Analizado con 0,30 H_{2}O: Calculado, C (70,91), H (4,05), N (12,37). Encontrado: C (70,97), H (4,17), N (12,37).
Ejemplo de referencia 29(t)
6-pirid-4-il-3-E-[2-(1H-pirrol-2-il)etenil]-1H-indazol
229
El 6-piridin-4-il-1-(2-trimetil-silanil-etoximetil)-1H-indazol-3-carbaldehído se convirtió en el compuesto del Ejemplo de referencia 29(t) de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 29(a). ^{1}HRMN (300 MHz, MeOH-d_{4}) \delta: 8,60 (d, 2H, J = 6,3 Hz), 8,13 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 7,86 (s, 1H), 7,79 (d, 2H, J = 6,2 Hz), 7,57 (dd, 1H, J1=8,5 Hz, J2=1,5 Hz), 7,40 (d, 1H, J = 16,8 Hz), 7,09 (d, 1H, J = 16,7 Hz), 6,87-6,82 (m, 1H), 6,40-6,35 (m, 1H), 6,16 (t, 1H, J = 2,9 Hz). MS (ES) [M+H]/z, calculado 287, encontrado 287. Analizado con 0,5 acetato de etilo, 0,3 tetrahidrofurano, 0,1 hexanos, 0,1 etilendiamina: Calculado, C (72,07), H (6,21), N (16,05). Encontrado: C (71,95), H (6,20), N (15,76).
El material de partida se preparó como sigue:
230
(i) Una solución de 1H-pirrol-2-carbaldehído (9,5 g, 100 mmol) y THF (500 ml) se enfrió con un baño de hielo. Se añadió Bu^{t}ONa (19,2 g, 200 mmol) y la mezcla de reacción se agitó a 0ºC durante 1 h. A continuación se añadió MtsCl (32,7 g, 150 mmol). La mezcla de reacción se dejó calentar hasta la temperatura ambiente y se mantuvo durante 2 h a la temperatura ambiente. La solución se trató a continuación con NH_{4}Cl acuoso saturado (100 ml) y la mezcla se vertió en salmuera (2 L). La mezcla se extrajo con EtOAc (3x300 ml). Las capas orgánicas reunidas se secaron sobre MgSO_{4} y se concentró bajo presión reducida. El aceite resultante se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice obteniéndose 1-(2,4,6-trimetil-bencenosulfonil)-1H-pirrol-2-carbaldehído en forma de un aceite amarillo claro (15,7 g, 57%). ^{1}HRMN (CDCl_{3}) \delta: 9,50 (s, 1H), 7,79-7,74 (m, 1H), 7,12 (dd, 1H, J = 3,7, 1,8 Hz), 6,95 (s, 2H), 6,38 (t, 1H, J = 3,4 Hz), 2,50 (s, 6H), 2,30 (s, 3H).
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231
(ii) 1-(2,4,6-Trimetil-bencenosulfonil)-1H-pirrol-2-carbaldehído (2,77 g, 10 mmol) en THF (100 ml) se trató con LiBH_{4} (0,44 g, 20 mmol) a la temperatura ambiente. La solución resultante se mantuvo a la temperatura ambiente durante 1 h. A continuación se añadió MeOH (10 ml) y la mezcla resultante se vertió en salmuera (600 ml) y se extrajo con EtOAc (3x200 ml). Las capas orgánicas reunidas se secaron sobre MgSO_{4} y se concentraron bajo presión reducida. El aceite resultante se purificó a continuación sobre una columna de gel de sílice obteniéndose [1-(2,4,6-trimetil-bencenosulfonil)-1H-pirrol-2-il]-metanol en forma de un aceite pardo claro (2,43 g, 87%). ^{1}HRMN (CDCl_{3}) \delta: 7,17 (dd, 1H, J = 3,3, 1,8 Hz), 6,99 (s, 2H), 6,28-6,23 (m, 1H), 6,18 (t, 1H, J = 33 Hz), 4,42 (s, 2H), 2,50 (s, 6H), 2,30 (s, 3H).
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232
(iii) Una solución de [1-(2,4,6-trimetil-bencenosulfonil)-1H-pirrol-2-il]-metanol (1,4 g, 5,0 mmol) en CHCl_{3} (25 ml) se enfrió en un baño de aceite. Se añadió lentamente SOCl_{2} (1,1 ml, 15 mmol). La solución se dejó calentar hasta la temperatura ambiente y se mantuvo 45 min más. A continuación se concentró la solución bajo presión reducida. Se obtuvo 2-clorometil-1-(2,4,6,trimetil-bencenosulfonil)-1H-pirrol en forma de un sólido pardo (1,5 g, 100%). ^{1}HRMN (CDCl_{3}) \delta: 7,28 (dd, 1H, J = 3,3, 1,7 Hz), 6,98 (s, 2H), 6,38-6,34 (m, 1H), 6,19 (t, 1H, J = 3,4 Hz), 4,58 (s, 2H), 2,50 (s, 6H), 2,30 (s, 3H).
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Ejemplo de referencia 29(u)
6-pirid-4-il-3-E-[2-(3-metilcarbamoilmetoxi-fenil)etenil]-1H-indazol
233
El 6-piridin-4-il-1-(2-trimetil-silanil-etoximetil)-1H-indazol-3-carbaldehído se convirtió en el compuesto del Ejemplo de referencia 29(u) de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 29(a). ^{1}HRMN (300 MHz, MeOH-d_{4}) \delta: 8,68 (d, 2H, J = 5,9 Hz), 8,51 (s ancho, 1H), 8,37 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 8,19 (s, 1H), 7,93 (s,1H), 7,87 (d, 1H, J = 7,7 Hz), 7,85 (d, 2H, J = 6,1 Hz), 7,62 (d, 1H, J = 8,1 Hz), 7,65-7,63(m, 3H), 7,51 (t, 1H, J = 7,6Hz). MS (ES) [M+H]/z, calculado 355, encontrado 355. Analizado con 0,4 ácido trifluoroacético, 0,50 H_{2}O: Calculado, C (69,67), H (4,98), N (14,26). Encontrado: C (69,78), H (5,18), N (14,08).
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Ejemplo de referencia 30(a)
6-[3-benzamidofenoxi]-3-E-[2-(tien-2-il)etenil]-1H-indazol
234
El compuesto del Ejemplo de referencia 30(a) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 6(a) excepto que, en la etapa (i), se usó cloruro de (E)-3-tiofen-2-il-acriloilo en lugar de cloruro de 3-(4-clorofenil)acriloilo. ^{1}HRMN (DMSO-d_{6}) \delta: 13,05 (s, 1H), 10,33 (s, 1H), 8,19 (d, 1H, J = 8,8 Hz), 7,92 (d, 2H, J = 6,9 Hz), 7,70 (d, 1H, J = 16,5 Hz), 7,65-7,49 (m, 6H), 7,40 (t, 1H, J = 8,1 Hz), 7,35 (s, 1H, con división fina), 7,20 (d, 1H, J = 16,5 Hz), 7,10 (m, 1H), 7,04 (s, 1H), 6,98 (d, 1H, J = 8,8 Hz), 6,86 (s, 1H, J = 9,8 Hz). Anal. Calc. para C_{26}H_{19}N_{3}O_{2}S\cdot0,6 H_{2}O: C, 69,65; H, 4,54; N, 9,37; S, 7,15. Encontrado: C, 69,77; H, 4,45; N, 9,52; S, 7,02.
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Ejemplo de referencia 30(b)
6-[3-(1-acetilpiperidin-4-ilcarboxamido)fenoxi]-3-E-[2-(4-clorofenil)etenil]-1H-indazol
235
El compuesto del Ejemplo de referencia 30(b) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 6(a) excepto que, en la etapa(ii), se usó ácido 1-acetil-piperidina-4-carboxílico y HATU en lugar de cloruro de benzoílo. ^{1}HRMN (DMSO-d_{6}) (J = 8,6 Hz) \delta: 7,76, (d, J = 8,6 Hz), 7,53 (d, J = 6,2 Hz), 7,46 (d, J = 8,4 Hz), 737 (m, 3H), 7,01 (s, 1H, con división fina), 6,97 (d, J = 8,8 Hz), 6,78 (d, J = 7,7 Hz), 4,38 (m, 1H), 3,85 (m, 1H), 3,09-2,96 (m, 1H), 2,58 (m, 2H), 1,99 (s, 3H), 1,77 (m, 2H), 1,55 (m, 1H), 1,37 (m, 1H). Anal. Calc. para C_{29}H_{27}ClN_{4}O_{3}\cdot13 H_{2}O: C, 64,69; H, 5,54; N, 10,41. Encontrado: C, 64,64; H, 5,51; N, 10,23.
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Ejemplo de referencia 30(c)
6-[3-benzamidofenoxi]-3-E-[2-(fur-2-il)etenil]-1H-indazol
236
El compuesto del Ejemplo de referencia 30(c) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 6(a) excepto que, en la etapa (i), se usó cloruro de (E)-3-furan-2-il-acriloilo, preparado de acuerdo con Collect, Czech. Chem. Comm., 52, 409-24 (1987), en lugar de cloruro de 3-(4-clorofenil)-acriloilo. ^{1}HRMN (DMSO-d_{6}) \delta: 13,00 (s, 1H), 10,32 (s, 1H), 8,14 (d, 1H, J = 8,8 Hz), 7,91 (d, 2H, J = 7,0 Hz), 7,73 (s, 1H), 7,70-7,51 (m, 5H), 7,40 (t, 1H, J = 8,4 Hz), 7,30 (AB, 2H, J = 16,7 Hz), 7,04 (s, 1H), 6,98 (d, 1H, J = 8,7 Hz), 6,86 (d, 1H, J = 8,0 Hz), 6,65 (s, 1H, con división fina), 6,60 (s, 1H, con división fina). Anal. Calc. para C_{26}H_{19}N_{3}O_{2}\cdot0,7 H_{2}O: C, 71,94; H, 4,74; N, 9,68. Encontrado: C, 72,17; H, 4,83; N, 9,44.
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Ejemplo de referencia 30(d)
6-[3-(indol-4-ilcarboxamido)fenoxi]-3-E-estirilindazol
237
El compuesto del Ejemplo de referencia 30(d) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 30(a) excepto que, en la etapa (ii), se usaron 3-(estiril-1H-indazol-6-iloxi)-fenilamina en lugar de 3-(3-estiril-4,5-dihidro-1H-indazol-6-iloxi)fenilamina y ácido 1H-indol-4-carboxílico en lugar de ácido benzoico. ^{1}HRMN (DMSO-d_{6}) \delta: 12,99 (s, 1H), 11,33 (s, 1H), 10,24 (s, 1H), 8,22 (d, 1H, J = 8,7 Hz), 7,72-7,38 (m, 10H), 7,30 (d, 1H, J = 7,1 Hz), 7,19 (m, 2H), 7,04 (m, 3H), 6,82 (m, 2H). Anal. Calc. para C_{30}H_{22}N_{4}O_{2}\cdot0,6 H_{2}O: C, 74,86; H, 4,86; N, 11,64. Encontrado: C, 74,90; H, 5,01; N, 11,33.
\newpage
Ejemplo de referencia 30(e)
6-[3-((1-etil-3-metil-1H-pirazol-5-il)carboxamido)fenoxi]-3-E-estirilindazol
238
El compuesto del Ejemplo de referencia 30(e) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 30(a) excepto que, en la etapa (ii), se usaron 3-(estiril-1H-indazol-6-iloxi)-fenilamina en lugar de 3-(3-estiril-4,5-dihidro-1H-indazol-6-iloxi)fenilamina y ácido 1-etil-3-metil-1H-pirazol-5-carboxílico en lugar de ácido benzoico.
Ejemplo de referencia 31(a)
6-[3-benzamidofenoxi]-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]-1H-indazol
239
A una solución agitada de 6-[3-benzamidofenoxi]-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]-4,5-dihidro-1H-indazol (492 mg, 1,13 mmol) en 15 mL de 1,4-dioxano se añadieron 386 mg (1,7 mmol) de 2,3-dicloro-5,6-diciano-1,4-benzoquinona (DDQ). La mezcla de reacción se agitó durante 30 min a la temperatura ambiente y a continuación se vertió en solución saturada de NaHCO_{3} y EtOAc. Se separaron las capas y la capa acuosa se volvió a extraer con EtOAc. Las capas orgánicas reunidas se lavaron secuencialmente con solución saturada de NaHCO_{3} y solución saturada de NaCl, se secaron sobre MgSO_{4} y se concentraron bajo presión reducida. El residuo se sometió a cromatografía de desarrollo rápido sobre gel de sílice eluyendo con CH_{2}Cl_{2}/EtOAc/MeOH (1:1:0,1). El aceite obtenido se trituró en EtOAc/hexanos obteniéndose el compuesto del epígrafe en forma de un sólido color canela (420 mg, 86%). ^{1}HRMN (DMSO-d_{6}) \delta: 13,12 (s, 1H), 10,30 (s, 1H), 8,60 (d, 1H, J = 3,8 Hz), 8,22 (d, 1H, J = 8,8 Hz), 7,93 (m, 3H), 7,82 (t, 1H, J = 7,7 Hz), 7,68 -7,49 (m, 7H), 7,40 (t, 1H, J = 8,1 Hz), 7,27 (m, 1H), 7,08 (s, 1H), 7,03 (s,1H), 7,03 (d, 1H, J = 8,7 Hz), 6,87 (d, 1H, J = 8,1 Hz, con división fina). Anal. Calc. para C_{27}H_{20}N_{4}O_{2}\cdot0,65 EtOAc: C, 72,59; H, 5,19; N, 11,44. Encontrado: C, 72,34; H, 5,11; N, 11,82.
El material de partida se preparó como sigue:
Etapa (i)
240
Una solución de 3-[3-(benzhidrilideno-amino)-fenoxi]-ciclohex-2-enona (4,00 g, 10,9 mmol) en 20 mL de THF se añadió lentamente a una solución a -78ºC de LiHMDS (36 mL de solución 1,0M en THF). Quince minutos después que se completó la adición, se añadió hidrocloruro de cloruro de (E)-3-piridin-2-il-acriloilo y se continuó la agitación a -78ºC durante 30 min. La reacción se detuvo bruscamente añadiendo a la mezcla una solución saturada de NH_{4}Cl y se extrajo con EtOAc (3x). Las capas orgánicas reunidas se lavaron con solución saturada de NaCl, se secaron sobre MgSO_{4} y se concentraron bajo presión reducida. El residuo se sometió a cromatografía de desarrollo rápido sobre gel de sílice eluyendo con hexanos/EtOAc (2:1). Las fracciones apropiadas se concentraron bajo presión reducida y se disolvieron en EtOH/HOAc (1:1, 8ml). A esta solución a 80ºC se añadió hidrato de hidrazina (3,4 ml, 70,0 mmol). Después de 15 min, había desaparecido todo el material de partida y la mezcla de reacción se vertió cuidadosamente sobre NaHCO_{3} saturado y se extrajo con EtOAc (2x). Las capas orgánicas reunidas se lavaron con solución saturada de NaCl, se secaron sobre MgSO_{4} y se concentraron bajo presión reducida. El residuo se sometió a cromatografía de desarrollo rápido sobre gel de sílice eluyendo con CH_{2}Cl_{2}/MeOH (9:1) obteniéndose 6-(3-aminofenoxi)-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]-4,5-dihidro-1H-indazol (676 mg, 19%). ^{1}HRMN (DMSO-d_{6}) \delta: 12,51 (s, 1H), 8,57 (d, 1H, J = 3,8 Hz), 7,78 (t, 1H, J = 7,8 Hz), 7,51 (m, 2H), 7,25 (m, 1H), 7,05 (m, 2H), 6,35 (d, 1H, J = 7,9 Hz, con división fina), 6,32 (t, 1H, J = 2,1 Hz), 6,23 (d, 1H, J = 7,9 Hz), 5,54 (s, 1H), 5,23 (s, 2H), 2,95 (t, 2H, J = 8,2 Hz), 2,60 (s, 2H, J = 8,2 Hz); MS [M+H]/z, calculado 331, Encontrado: 331. Anal. Calc. para C_{20}H_{18}N_{4}O\cdot0,15 H_{2}O: C, 72,12; H, 5,54; N, 16,82. Encontrado: C, 72,11; H, 5,55; N, 16,61.
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Etapa (ii)
241
A una solución agitada de dihidroanilina (350 mg, 1,06 mmol) y ácido benzoico (776 mg, 6,36 mmol) en 15 mL de DMF, se añadió HATU (2,42 g, 6,36 mmol) y NEt_{3} (1,8 ml, 12,71 mmol). La mezcla de reacción se calentó a 50ºC durante 1,5 h, se enfrió y se vertió sobre hielo/solución saturada de NaCl. El precipitado se recogió por filtración a vacío, se lavó con H_{2}O y se secó al aire. A esta torta filtrante disuelta en 10 mL de MeOH/THF (1:1), se añadió K_{2}CO_{3} (650 mg) y 1 mL de H_{2}O. Después de 1 h, la mezcla de reacción se vertió sobre una solución saturada de NaCl y se extrajo con EtOAc (2x). Las capas orgánicas reunidas se lavaron con solución saturada de NaCl, se secaron sobre MgSO_{4} y se concentraron bajo presión reducida. El residuo se sometió a cromatografía de desarrollo rápido sobre gel de sílice eluyendo con CH_{2}Cl_{2}/EtOAc/MeOH (1:1:0,1) obteniéndose 6-[3-benzamidofenoxi]-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]-4,5-dihidro-1H-indazol (333 mg, 72%). ^{1}HRMN (DMSO-d_{6}) \delta: 12,58 (s ancho, 1H), 10,34 (s, 1H), 8,57 (d, 1H, J = 3,8 Hz), 7,95 (d, 2H, J = 6,8 Hz), 7,81-7,70 (m, 2H), 7,63-7,50 (m, 6H), 7,40 (t, 1H, J = 8,1 Hz), 7,25 (m, 1H), 7,09 (d,1H, J = 16,3 Hz), 6,89 (d, 1H, J = 8,0 Hz ), 5,64 (s, 1H), 2,99 (t, 2H, J = 8,1 Hz), 2,66 (t, 2H, J = 8,1 Hz). Anal. Calc. para C_{27}H_{22}N_{4}O_{2}\cdot0,1 CH_{2}Cl_{2}: C, 73,48; H, 5,05; N, 12,65. Encontrado: C, 73,48; H, 5,05; N, 12,48.
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Ejemplo de referencia 31(b)
6-[3-((1,5-dimetil-1H-pirazol-3-il)carboxamido)fenoxi]-3-E-[2-(piridin-2-)etenil]-1H-indazol
242
El compuesto del Ejemplo de referencia 31(b) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 31(a) excepto que, en la etapa (ii), se usó ácido 1,5-dimetil-1H-pirazol-3 carboxílico en lugar de ácido benzoico. ^{1}HRMN (DMSO-d_{6}) \delta: 13,13 (s, 1H), 10,07 (s, 1H), 8,60 (d, 1H, J = 4,3 Hz), 8,21 (d, 1H, J = 8,7 Hz), 7,93 (d, 1H, J = 16,3 Hz), 7,82 (t, 1H, J = 7,4 Hz), 7,69 (m, 3H), 7,56 (d, 1H, J = 16,3 Hz), 7,32 (m, 2H), 7,05 (s, 1H), 7,01 (d, 1H, J = 8,7 Hz), 6,80 (m, 1H), 6,52 (s,1H), 3,81 (s, 3H) 2,29 (s, 3H). Anal. Calc. para C_{26}H_{22}N_{6}O_{2}\cdot0,1 CH_{2}Cl_{2}\cdot/0,1 hexanos: C, 68,58; H, 5,09; N, 17,97. Encontrado: C, 68,26; H, 5,25; N, 17,61.
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Ejemplo de referencia 31(c)
6-[3-((5-metilsulfoniltien-2-il)carboxamido)fenoxi]-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]-1H-indazol
243
El compuesto del Ejemplo de referencia 31(c) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 31(a) excepto que, en la etapa (ii), se usó ácido 5-metanosulfonil-tiofeno-2-carboxílico en lugar de ácido benzoico. ^{1}HRMN (DMSO-d_{6}) \delta: 13,17 (s, 1H), 10,58 (s, 1H), 8,61 (d, 1H, J = 4,0 Hz), 8,24 (d, 1H, J = 8,8 Hz), 8,05 (d, 1H, J = 4,1 Hz), 7,97 -7,79 (m, 3H), 7,68 (d, 1H, J = 7,8 Hz), 7,60-7,48 (m, 3H), 7,43 (t, 1H, J = 8,2 Hz), 7,28 (m, 1H), 7,10 (s,1H, con división fina), 7,00 (d, 1H, J = 8,7 Hz), 6,92 (d, 1H, J = 8,1 Hz, con división fina), 3,41 (s, 3H). Anal. Calc. para C_{28}H_{20}N_{4}O_{4}S_{2}\cdot0,4 EtOAc: C, 60,07; H, 4,24; N, 10,15; S, 11,62. Encontrado: C, 60,22; H, 4,48; N, 10,05; S, 11,49.
Ejemplo de referencia 31(d)
6-[3-((1-etil-3-metil-1H-pirazol-5-il)carboxamido)fenoxi]-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]-1H-indazol 
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244
El compuesto del Ejemplo de referencia 31 (d) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 31(a) excepto que, en la etapa (ii), se usó ácido 1-etil-3-metil-1H-pirazol-5-carboxílico en lugar de ácido benzoico. ^{1}HRMN (DMSO-d_{6}) \delta: 13,15 (s, 1H). 10,18 (s, 1H), 8,61 (d, 1H, J = 3,7 Hz), 8,22 (d, 1H, J = 8,8 Hz), 7,94 (d, 1H, J = 16,3 Hz), 7,82 (t, 1H, J = 7,5 Hz), 7,67 (d, 1H, J = 7,7 Hz), 7,55 (m, 3H), 7,40 (t, 1H, J = 8,1 Hz), 7,28 (m, 1H), 7,06 (s, 1H), 7,01 (d, 1H, J = 8,8 Hz), 6,89 (d, 1H, J = 7,9 Hz), 6,78 (s, 1H), 4,38 (q, 2H, J = 7,1 Hz), 2,19 (s, 3H), 1,29 (t, 3H, J = 7,1 Hz). Anal. Calc. para C_{27}H_{24}N_{6}O_{2}\cdot0,6EtOAc: C, 68,25; H, 5,61; N. 16,24. Encontrado: C, 68,28; H, 5,88; N, 16,01.
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Ejemplo de referencia 31(e)
6-[3-((1-metilimidazol-2-il)carboxamido)fenoxi]-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]-1H-indazol 
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245
El compuesto del Ejemplo de referencia 31(e) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 31(a) excepto que, en la etapa (ii), se usó ácido 1-metil-1H-imidazol-2-carboxílico en lugar de ácido benzoico. ^{1}H RMN (DMSO-d_{6}) \delta: 13,13 (s, 1H), 10,47 (s, 1H), 8,60 (d, 1H, J = 3,9 Hz), 8,21 (d, 1H, J = 8,7 Hz), 7,93 (d, 1H, J = 16,3 Hz), 7,82 (t, 1H, J = 7,6 Hz), 7,65 (m, 3H), 7,56 (d, 1H, J = 16,3 Hz), 7,43 (s, 1H), 7,37 (t, 1H, J = 8,1 Hz), 7,28 (m,1H), 7,04 (m, 3H), 6,84 (d, 1H, J = 7,7 Hz), 3,95 (s, 3H). Anal. Calc. para C_{25}H_{20}N_{6}O_{2}\cdot0,4 H_{2}O: C, 67,49; H, 4,80; N, 18,65. Encontrado: C, 67,68; H, 4,73; N, 18,94.
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Ejemplo de referencia 31(f)
6-[3-((1-etil-3-metil-1H-pirazol-5-il)carboxamido)fenoxi]-3-E-[2-(1,2-dimetil-1H-imidazol-4-il)etenil]-1H-indazol 
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246
El compuesto del Ejemplo de referencia 31(f) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 31(a) excepto que, en la etapa (i), se usó hidrocloruro de cloruro de (E)-3-(1,2-dimetil-1H-imidazol-4-il)acriloilo en lugar de hidrocloruro de cloruro de (E)-3-piridin-2-il-acriloilo y, en la etapa (ii), se usó ácido 1-etil-3-metil-1H-pirazol-5-carboxílico en lugar de ácido benzoico. ^{1}HRMN (DMSO-d_{6}) \delta: 12,82 (s, 1H), 10,17 (s, 1H), 8,05 (d, 1H, J = 8,8 Hz), 7,58 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 7,48 (s, 1H), 7,38 (t, 1H, J = 8,1 Hz), 7,25 (s, 2H), 7,20 (s, 1H), 7,01 (s, 1H), 6,92 (d, 1H, J = 8,7 Hz), 6,85 (d, 1H, J = 8,7 Hz), 6,78 (s, 1H), 437 (q, 2H, J = 7,0 Hz), 3,56 (s, 3H), 2,31 (s, 3H), 2,19 (s, 3H), 1,29 (t, 3H, J = 7,0 Hz). Anal. Calc. para C_{27}H_{27}N_{7}O_{2}\cdot1,0 H_{2}O\cdot0,3 EtOAc: C, 64,39; H, 6,02; N, 18,64. Encontrado: C, 64,52; H, 5,98; N, 18,52.
\newpage
Ejemplo de referencia 32(a)
6-[3-benzamidofenoxi]-3-E-[2-(1H-imidazol-4-il)etenil]-1H-indazol
247
A una solución agitada del compuesto 6-(3-benzamidofenoxi)-3-E-[2-(1-(2-trimetil-silanil-etoxi)-metil-imidazol-4-il)etenil]-1H-indazol (213 mg, 0,39 mmol) en 5 mL de THF se añadió TBAF 1,0M en THF (6,0 ml, 6,0 mmol) y etilendiamina (0,26 ml, 3,86 mmol). Después de calentamiento a 70ºC durante 18 h, la mezcla de reacción se enfrió, se diluyó con EtOAc y se lavó repetidamente con solución saturada de NaHCO_{3}. La capa orgánica se secó sobre MgSO_{4} y se concentró bajo presión reducida. El residuo se sometió a cromatografía de desarrollo rápido sobre gel de sílice eluyendo con CH_{2}Cl_{2}:EtOAc:MeOH (1:1:0,2). El aceite obtenido se trituró en EtOAc/hexanos obteniéndose AG13853 (65 mg, 40%). ^{1}H RMN (DMSO-d_{6}) \delta: 12,90 (s, 1H), 12,35 (s, 1H), 10,32 (s, 1H), 8,08 (d, 1H, J = 8,7 Hz), 7,91 (d, 2H, J = 6,8 Hz), 7,81 (s, 1H), 7,64-7,49 (m, 5H), 7,42-7,31 (m, 4H), 7,03 (s, 1H), 6,96 (d, 1H, J = 8,7 Hz), 6,85 (d, 1H, J = 8,1 Hz). Anal. Calc. para C_{25}H_{19}N_{5}O_{2}\cdot0,7 H_{2}O\cdot0,4 EtOAc: C, 68,07; H, 5,07; N, 14,92. Encontrado: C, 67,93; H, 4,89; N, 15,06.
El material de partida se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 31(a) excepto que, en la etapa (i), se usó hidrocloruro de cloruro de (E)-3-[1-(2-trimetil-silanil)-etoximetil)-1H-imidazol-4-il]-acriloilo en lugar de hidrocloruro de cloruro de (E)-3-piridin-2-il-acriloilo.
Ejemplo de referencia 32(b)
6-[3-((1-etil-3-metil-1H-pirazol-5-il)carboxamido)fenoxi]-3-E-[2-(1H-imidazol-4-il)etenil]-1H-indazol
248
El compuesto del Ejemplo de referencia 32(b) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 32(a) excepto que, en la etapa (ii), se usó ácido 1-etil-3-metil-1H-pirazol-5-carboxílico en lugar de ácido benzoico. ^{1}HRMN (DMSO-d_{6}) \delta: 12,89 (s, 1H), 12,37 (s, 1H), 10,18 (s, 1H), 8,07 (d, 1H, J = 8,9 Hz), 7,74 (s, 1H), 7,58 (d, 1H, J = 8,3 Hz), 7,49 (s, 1H), 7,44-7,32 (m, 3H), 7,28 (s, 1H), 7,01 (s,1H), 6,95 (d, 1H, J = 8,9 Hz), 6,86 (d, 1H, J = 8,6 Hz), 6,78 (s, 1H), 438 (q, 2H, J = 7,1 Hz), 2,19 (s, 3H), 1,29 (t, 3H, J = 7,1 Hz). Anal. Calc. para C_{25}H_{23}N_{7}O_{2}\cdot0,8 H_{2}O\cdot0,1 EtOAc: C, 63,99; H, 5,37; N, 20,57. Encontrado: C, 63,72; H, 5,12; N, 20,25.
Ejemplo de referencia 32(c)
6-[3-((1-etil-3-metil-1H-pirazol-5-il)carboxamido)fenoxi]-3-E-[2-(2-metilimidazol-4-il)etenil]-1H-indazol
249
El compuesto del Ejemplo de referencia 32(c) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 32(b) excepto que, en la etapa (i), se usó hidrocloruro de cloruro de (E)-3-[2-metil-1-(2-trimetil-silanil)-etoximetil-1H-imidazol-4-il]-acriloilo en lugar de hidrocloruro de cloruro de (E)-3-[1-(2-trimetil-silanil)etoximetil)-1H-imidazol-4-il]-acriloilo. ^{1}HRMN (DMSO-d_{6}) \delta: 12,85 (s ancho, 1H), 11,80 (s ancho, 1H), 10,18 (s, 1H), 8,05 (d, 1H, J = 8,7 Hz), 7,58 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 7,48 (s, 1H), 7,39 (t, 1H, J = 8,2 Hz), 7,33-7,05 (m, 3H), 7,00 (s,1H), 6,93 (d, 1H, J = 8,7 Hz), 6,86 (d, 1H, J = 8,2 Hz), 6,78 (s, 1H), 4,38 (q, 2H, J = 7,1 Hz), 2,31 (s, 3H), 2,19 (s, 3H), 1,29 (t, 3H, J = 7,1 Hz). Anal. Calc. para C_{26}H_{25}N_{7}O_{2}\cdot0,9 H_{2}O\cdot0,4 EtOAc: C, 63,87; H, 5,83; N, 18,89. Encontrado: C, 63,64; H, 5,76; N, 18,85.
Ejemplo de referencia 33(a)
6-[2-(metilcarbamoil)fenilsufanil]-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]indazol
250
El compuesto del Ejemplo de referencia 33(a) se preparó a partir de 6-[2-(metilcarbamoil)fenilsulfanil]-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]-1-[2-(trimetil-silanil)etoximetil)-1H-indazol de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 11. R_{f} sm = 0,8, p = 0,15 (acetato de etilo); ^{1}HRMN (300 MHz, DMSO-d_{6}) \delta: 13,45 (s, 1H), 8,72 (d, 1H, J = 3,9 Hz), 8,47 (m, 1H), 8,31 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 8,06 (d, 1H, J = 16,4 Hz), 7,92 (dt, 1H, J = 1,7,7,6 Hz), 7,78 (d, 1H, J = 7,8 Hz), 7,71 (s, 1H), 7,68 (d, JH, J = 16,5 Hz), 7,61 (dd, 1H, J = 1,7, 7,2 Hz), 7,45-7,36 (m, 3H), 731 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 7,17 (m, 1H), 2,89 (d, 3H, J = 4,6 Hz); ^{13}C RMN (75 MHz, DMSO-d_{6}) \delta: 167,8, 154,8, 149,5, 141,9, 141,8, 137,0, 136,8, 135,4, 132,5, 130,2, 130,0, 129,2, 127,7, 126,1, 125,4, 123,5, 122,5, 122,4, 121,6, 120,2, 114,5; LCMS (área 100%) Rt = 3,5 min (pos) [M+H]/z, calculado 387, encontrado 387. Analizado con 0,1 H_{2}O, 0,1 EtOAc: Calculado, C (67,78), H (4,82), N (14,11), S (8,08). Encontrado: C (67,78), H (4,77), N (14,06), S (8,08).
El material de partida se preparó como sigue:
251
Bajo argón, se disolvió 6-yodo-3-estiril-1-[2-(trimetil-silanil)-etoximetil]-1H-indazol (30,0 g, 62,9 mmol) preparado en el Ejemplo de referencia 14, etapa (i), en diclorometano (375 mL) y se enfrió hasta -42ºC en un baño de acetonitrilo-nieve carbónica. A continuación se burbujeó ozono a través de la mezcla (1 L/min, 60 V, 1,8 Amps) durante 45 min. Los indicadores patrón no mostraron un cambio neto debido al color de fondo de las soluciones. Para evitar la sobre-oxidación, el progreso de las reacciones se controló por TLC (EtOAc-Hex 1:9). Se detuvo la adición de ozono y el matraz se barrió con argón. A continuación se añadió sulfuro de dimetilo (30 mL) y la mezcla se dejó calentar hasta 23ºC. Esta mezcla se agitó durante 4 h y se concentró bajo presión reducida. El aceite se colocó a alto vacío durante 16 h. El residuo se disolvió en diclorometano (15 mL) y se diluyó con hexano (100 mL) obteniéndose algunos cristales (producto no deseado). La mezcla se filtró y el filtrado se concentró. El residuo se disolvió en Hex-EtOAc 8:2 (250 mL), se trató con 50 mL de sílice, se filtró y se concentró. Se obtuvo 6-yodo-3-carboxaldehído-1-[2-(trimetil-silanil)-etoximetil]-1H-indazol en forma de un sólido amarillo al cabo de 72 h a alto vacío (24,17 g, pureza de \sim95% por RMN, rendimiento 91%): Rf sm = 0,34, p = 0,29 (acetato de etilo-hexano 1:9); ^{1}HRMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta: 10,25 (s, 1H), 8,09 (s,1H), 8,05 (d, 1H), 7,80 (d, 1H), 5,88 (s, 2H), 3,71 (t, 2H). 0,93 (t, 2H), 0,0 (s, 9H).
252
6-Yodo-3-carboxaldehído-1-[2-(trimetil-silanil)-etoximetil]-1H-indazol (24,0 g, 59,7 mmol) se disolvió en THF (350 mL) y se enfrió hasta -5ºC. A esto se añadió cloruro de 2-picoliltrifenilfosfonio-hidruro de potasio sólido (45,7 g, 100 mmol, 1,68 equivalentes). La mezcla de reacción se dejó en agitación durante 45 min. A la mezcla, se añadió HCl 3N (20 mL) seguido de hidrogenocarbonato de sodio acuoso saturado (50 mL) obteniéndose un pH de 6. Se separó el exceso de THF bajo presión reducida y el residuo se repartió entre acetato de etilo y agua. Los materiales orgánicos se lavaron con hidrogenocarbonato de sodio acuoso saturado, agua y la capa orgánica se separó, se secó sobre sulfato de sodio, se decantó y se concentró bajo presión reducida. El residuo se extrajo con acetato de etilo-hexano 1:9 y se filtró. El filtrado se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (sílice 2L, acetato de etilo del 20 al 30 al 50%-hexano) obteniéndose 6-yodo-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil-1-[2-(trimetil-silanil)-etoximetil]-1H-indazol (18,9 g, rendimiento 66%): R_{f} sm = 0,52, p = 0,25 (acetato de etilo-hexano 2:8); ^{1}HRMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta: 8,64 (m, 1H), 8,00 (d, 1H, J = 0,7 Hz), 7,87 (d, 1H, J = 16,4 Hz), 7,80 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 7,69 (td, 1H, J = 7,7, 1,8 Hz), 7,55 (d, 1H, J = 16,4 Hz). 7,55 (dd, 1H, J = 8,5, 1,3 Hz), 7,47 (d, 1H, J = 7,9 Hz), 7,18 (dd, 1H, J = 1,1, 4,8 Hz), 5,70 (s, 2H), 3,59 (s, 2H, J = 8,2 Hz), 0,90 (t, 2H, J = 8,2 Hz), -0,04 (s, 9H); ^{13}CRMN (75 MHz. CDCl_{3}) \delta: 156,8, 151,2, 144,2, 143,6, 138,0, 132,3, 132,2, 124,4, 124,0, 123,8, 123,7, 123,5, 120,7, 94,1, 79,4, 68,1, 19,17, 0,0.
253
En un matraz de fondo redondo de 200 mL se pesó carbonato de cesio (13,7 g, 41,9 mmol, 2,5 equivalentes) y esta sal se secó a alto vacío con una pistola de aire caliente. A continuación se añadieron el catalizador [Pd(dppf)Cl_{2}-CH_{2}Cl_{2}] (1,37 g, 1,68 mmol, 0,1 equivalente) y 6-yodo-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil-1-[2-(trimetil-silanil)-etoximetil]-1H-indazol (8,0 g, 16,76 mmol) y la mezcla se recogió con DMF (71 mL). A esta mezcla se añadió tiosalicilato de metilo (4,62 mL, 33,5 mmol, 2,0 equivalentes) y el recipiente se calentó hasta 85ºC durante 4,5 h. Esta mezcla se enfrió hasta 23ºC, se repartió entre acetato de etilo (350 mL) e hidrogenocarbonato de sodio acuoso saturado al 50% (300 mL). Los materiales orgánicos se lavaron con bisulfito de sodio al 10% (200 mL), salmuera y se separó la capa orgánica. El material orgánico se secó sobre sulfato de sodio, se decantó y se concentró bajo presión reducida. La purificación por cromatografía en columna de gel de sílice (500 mL de sílice; acetato de etilo del 30 al 40 al 50%-hexano) dio 6-[(2-metoxicarbonilfenil)sulfanil]-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]-1-[2-(trimetil-silanil)-etoximetil]-1H-indazol (6,44 g, 74%): Rf sm = 0,52, p = 0,19 (acetato de etilo-hexano 3:7); FTIR (película fina) 2950, 2887, 2356, 1713, 1585, 1464, 1433, 1250, 1076, 837 cm^{-1}; ^{1}HRMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta: 8,70 (d, 1H), 8,12 (d, 1H), 8,04 (d, 1H), 7,99 (d, 1H, J = 16,4 Hz), 7,90 (s, 1H), 7,88 (t, 1H), 7,76 (d, 1H, J = 16,4 Hz), 7,62 (d, 1H), 7,55 (d, 1H), 7,30-7,15 (m, 3H), 6,92 (d, 1H), 5,80 (s, 2H), 4,01 (s, 3H), 3,78 (t, 2H), 0,96 (t, 2H), -0,03 (s, 9H); ^{13}CRMN (75 MHz, CDCl_{3}) \delta: 168,3, 156,8, 151,2, 144,3, 144,2, 143,2, 138,0, 133,8, 133,6, 132,5,
132,4, 129,9, 129,3, 128,5, 126,0, 124,7, 124,6, 123,8, 123,5, 118,3, 79,4, 68,2, 53,7, 19,2, 0,0; LCMS (área 100%) Rt = 4,4 min, (pos) [M+H]/z, calculado 518,2, encontrado 518,2.
254
A 6-[(2-metoxicarbonilfenil)sulfanil]-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]-1-[2-(trimetil-silanil)-etoximetil]-1H-indazol
(8,50 g,16,4 mmol) se añadió THF (120 mL), metanol (120 mL), agua (120 mL) y carbonato de potasio (15,9 g, 115 mmol, 7,0 equivalentes). Esta mezcla se calentó hasta 67ºC y se agitó durante 22 h. La mezcla se enfrió y se eliminó el exceso de disolventes. El residuo se repartió entre acetato de etilo (300 mL) y agua (250 mL). La capa acuosa se acidificó con ácido cítrico al 20% hasta pH 5 (\sim70 mL) y se escurrió. La capa orgánica se lavó con agua (50 mL) y se añadió hexano (100 mL) para mantener precipitados los cristales que se formaron en la capa de acetato de etilo. El sólido se filtró y se secó obteniéndose 6-[(2-carboxifenil)sulfanil]-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]-1-[2-(trimetil-silanil)etoxi-metil]-1H-indazol (7,56 g, 91%): R_{f} sm = 0,67, p = 0,41 (acetato de etilo-hexano 8:2); ^{1}HRMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta: 8,60 (m, 1H), 8,10 (d, 1H, J = 8,4 Hz). 8,04 (dd, 1H, J = 1,7, 7,7 Hz), 7,85 (d, 1H, J = 16,5 Hz), 7,83 (s, 1H), 7,70 (dt, 1H, J = 1,7, 7,7 Hz), 7,59 (d, 1H, J = 16,5 Hz), 7,52 (d, 1H, J = 7,9 Hz), 7,38 (dd, 1H, J = 1,3, 8,4 Hz), 7,22-7,10 (m, 3H), 6,80 (dd, 1H, J = 1,0, 8,0 Hz), 3,59 (t, 2H, J = 8,1 Hz), 0,85 (t, 2H, J = 8,8,1 Hz), -0,1 (s, 9H).
1255
255
6-[(2-Carboxifenil)sulfanil]-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]-1-[2-(trimetil-silanil)-etoxi-metil]-1H-indazol (820 mg,
1,63 mmol) se disolvió en DMF (5 mL) y se trató con metilamina (2M en THF, 4,1 mL, 8,13 mmol, 50 equivalentes) y con HATU (929 mg, 2,44 mmol, 1,5 equivalentes). Esta mezcla se agitó durante 30 min, se repartió entre acetato de etilo e hidrogenocarbonato de sodio acuoso saturado y se separó la capa orgánica. El material orgánico se secó sobre sulfato de sodio, se decantó y se concentró bajo presión reducida. La purificación por cromatografía en columna de gel de sílice (50 mL de sílice; acetato de etilo del 60 al 70%-hexano) dio 6-[2-(metilcarbamoil)fenilsulfanil]-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]-1-[2-(trimetil-silanil)-etoximetil]-1H-indazol en forma de un sólido (795 mg, 94%): R_{f} sm = 0,35, p = 0,23 (acetato de etilo-hexano 6:4); FTIR (película fina) 3306, 2951, 1643, 1606, 1587, 1563, 1469, 1433, 1410, 1303, 1249, 1217, 1075, 836 cm^{-1}; ^{1}HRMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta: 8,70 (m, 1H), 8,06 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 7,94 (d, 1H, J = 16,3 Hz), 7,74 (dt, 1H, J = 1,8, 7,7 Hz), 7,70-7,60 (m, 3H), 7,52 (d, 1H, J = 7,9 Hz), 7,35-7,20 (m, 5H), 6,45 (s ancho, 1H), 5,80 (s, 2H), 3,62 (t, 2H), 3,00 (d, 3H), 0,93 (t, 2H), -0,05 (s, 9H); ^{13}CRMN (75 MHz, CDCl_{3}) \delta: 179,7, 169,9, 156,8, 151,1, 144,2, 143,0, 138,1, 136,1, 135,4, 133,2, 132,2, 132,1, 130,2, 128,5, 127,2, 124,7, 124,1, 123,8, 123,5, 123,3, 114,9, 68,1, 28,2, 19,2, 0,00; LCMS (área 100%) Rt = 4,15 min, (pos) [M+H]/z, calculado 517,2, encontrado 517,2.
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Ejemplo de referencia 33(b)
6-[2-(2-metilquinol-6-ilcarbamoil)fenilsulfanil]-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]-1H-indazol
256
El compuesto del Ejemplo de referencia 33(b) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 33(a) excepto que, en la etapa (v), se usó 6-amino-2-metilquinolina en lugar de metilamina: ^{1}HRMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta: 10,2 (s ancho, 1H), 8,64 (m, 1H), 8,40 (s, 1H), 8,23 (s, 1H), 7,98-7,80 (m, 4H), 7,69 (dt, 1H, J = 1,7, 7,7 Hz), 7,55-7,40 (m, 7H), 7,25-7,16 (m, 3H), 2,71 (s, 3H).
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Ejemplo de referencia 33(c)
6-[2-(fenilcarbamoil)fenilsulfanil]-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]-1H-indazol
257
El compuesto del Ejemplo de referencia 33(c) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 33(a) excepto que, en la etapa (v), se usó anilina en lugar de metilamina: ^{1}HRMN (300 MHz, DMSO-d_{6}) \delta: 13,35 (s, 1H), 10,53 (s, 1H), 8,67 (m, 1H), 8,22 (d, 1H, J = 7,5 Hz), 7,99 (d, 1H, J = 16,4 Hz), 7,85 (dt, 1H, J = 1,8, 7,6 Hz), 7,80-7,55 (m, 5H), 7,45-7,10 (m, 9H); LCMS (área 100%) Rt = 3,86, (pos) [M+H]/z, calculado 449,1, encontrado 449,1. Analizado con 0,41 H_{2}O: Calculado, C (71,13), H (4,60), N (12,29), S (7,03). Encontrado: C (71,04), H (4,62), N (12,31), S (7,01).
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Ejemplo de referencia 33(d)
6-[2-(3-clorofenilcarbamoil)fenilsulfanil]-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]-1H-indazol
258
El compuesto del Ejemplo de referencia 33(d) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 33(a) excepto que, en la etapa (v), se usó 3-cloroanilina en lugar de metilamina: ^{1}HRMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta: 8,53 (m, 1H), 7,92 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 7,77 (d, 1H, J = 16,4 Hz), 7,68 (dt, 1H, J = 1,7, 7,7 Hz), 7,64-7,56 (m, 2H), 7,51-7,43 (m, 3H), 7,35-7,28 (m, 4H), 7,19-7,12 (m, 3H), 7,02 (m, 1H); LCMS (área 100%) Rt 3,98 min, (pos) [M+H]/z, calculado 483,1, encontrado 483,1. Analizado con 0,3 H_{2}O: Calculado, C (66,40), H (4,05), N (11,47), S (6,57). Encontrado: C (66,36), H (4,08), N (11,49), S (6,55).
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Ejemplo de referencia 33(e)
6-[2-(ciclopropilcarbamoil)fenilsulfanil]-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]-1H-1H-indazol
259
El compuesto del Ejemplo de referencia 33(e) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 33(a) excepto que, en la etapa (v), se usó ciclopropilamina en lugar de metilamina: ^{1}H RMN (300 MHz, DMSO-d_{6}) \delta: 13,45 (s, 1H), 8,73 (d, 1H, J = 3,9 Hz), 8,56 (d, 1H, J = 4,3 Hz), 8,31 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 8,08 (d, 1H, J = 16,4 Hz), 7,91 (dt, 1H, J = 1,7, 7,7 Hz), 7,78 (d, 1H, J = 7,8 Hz), 7,70 (m, 2H), 7,57 (m, 1H,), 7,40 (m, 3H), 7,30 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 7,20 (d, 1H, J = 7,8 Hz), 2,94 (m, 1H), 0,80 (m, 2H), 0,65 (m, 2H); LCMS (área 100%) Rt 3,51 min, (pos) [M+H]/z, calculado 413,1, encontrado 413,1.
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Ejemplo de referencia 33(f)
6-[2-(2,2,2-trifluoroetilcarbamoil)fenilsulfanil]-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]-1H-indazol
260
El compuesto del Ejemplo de referencia 33(f) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 33(a) excepto que, en la etapa (v), se usó 2,2,2-trifluoroetilamina en lugar de metilamina: ^{1}HRMN (300 MHz, DMSO-d_{6}) \delta: 13,5 (s, 1H), 9,29 (t, 1H, J = 6,3 Hz), 8,74 (m, 1H), 837 (d, 1H, J = 8,3 Hz), 8,10 (d, 1H, J = 16,4 Hz), 7,94 (dt, 1H, J = 1,8, 7,6 Hz), 7,80 (d, 1H, J = 7,9 Hz), 7,75-7,65 (m, 3H), 7,55-7,40 (m, 3H), 7,33 (d, 1H), 7,22 (d, 1H), 4,22 (m, 2H); LCMS (área 100%) Rt = 3,70 min, (pos) [M+H]/z, calculado 455,1, encontrado 455,1.
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Ejemplo de referencia 33(g)
Sal de tetrabutilamonio de 6-[2-(carboxi)fenilsulfanil]-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]-1H-1H-indazol
261
El compuesto del Ejemplo de referencia 33(g) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 33(a) excepto que se omitió la etapa (v): R_{f} sm = 0,41, p = 0,0 (acetato de etilo-hexano 8:2); ^{1}HRMN (300 MHz, DMSO-d_{6}) \delta: 8,75 (m, 1H), 8,25 (d, 1H, J = 8,6 Hz), 8,05 (d, 1H, 16,4 Hz), 7,88 (dt, 1H, J =1,8, 7,8 Hz), 7,83-7,60 (m, 4H), 7,33 (m, 2H), 7,16 (m, 2H),6,70 (m, 1H), 3,30 (m, 8H), 1,70 (m, 8H), 1,42 (m, 8H), 1,05 (t, 12H); LCMS (área 100%) Rt = 3,24 (pos) [M+H (sólo el componente ácido)]/z, calculado 374,1, encontrado 374,1. Analizado con 0,1 H_{2}O: Calculado, C (72,07), H (8,21), N (9,09), S (5,20). Encontrado: C (72,04), H (8,29), N (9,06), S (5,12).
\newpage
Ejemplo de referencia 33(h)
6-[2-(3-clorofenilcarbamoil)fenilsulfanil]-3Z-[2-(piridin-2-il)etenil]-1H-indazol 
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262
El compuesto del Ejemplo de referencia 33(h) se preparó en la misma reacción que el compuesto del Ejemplo de referencia 33(d). Debe observarse que, aunque este compuesto se aisló y caracterizó puro, se encontró que se isomeriza al compuesto del Ejemplo de referencia 33(d) en las condiciones de valoración. ^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta: 8,82 (m, 1H), 8,31 (s, 1H), 7,86 (m, 2H), 7,77 (m, 2H), 7,61 (t, 1H, J = 2,0 Hz), 7,46 (d, 1H, J = 8,0 Hz), 7,33 (m, 5H), 7,21 (t, 1H, J = 8,0 Hz), 7,13 (dd, 1H, J = 1,5, 8,1 Hz), 7,08 (m, 1H), 6,98 (d, 1H, J = 13,0 Hz), 6,66 (d, 1H, J = 13,1 Hz); LCMS (área 100%) Rt = 4,40 min, (pos) [M+H]/z, calculado 483,1, encontrado 483,1. Analizado con 0,3 H_{2}O: Calculado, C (66,40), H (4,05), N (11,47), S (6,57). Encontrado: C (66,36), H (4,08), N (11,49), S (6,55).
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Ejemplo de referencia 34
6-[2-((RS-(trans-2-fenilciclopropil)carbamoil)fenilsulfanil]-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]-1H-indazol 
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263
El compuesto del Ejemplo de referencia 33(g) se convirtió en el compuesto del Ejemplo de referencia 34 de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 33(a), etapa (v) excepto que se usó trans-2-fenilciclopropilamina en lugar de metilamina: FTIR (película fina) 1704, 1638, 1584, 1559, 1530, 1497, 1460, 1430, 1339, 1306, 1269, 1223, 1152, 1086, 1061, 966, 844 cm^{-1}; ^{1}HRMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta: 13,3 (s, 1H), 8,71 (d, 1H, J = 4,4 Hz), 8,61 (d, 1H, J = 3,9 Hz), 8,20 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 7,96 (d, 1H, J = 16,4 Hz), 7,81 (dt, 1H, J = 1,7, 7,6 Hz), 7,66 (d, 1H, J = 7,8 Hz), 7,59-7,50 (m, 3H), 7,37-7,25 (m, 5H), 7,21-7,08 (m, 5H), 3,01 (m, 1H), 2,03 (m, 1H), 1,25 (m, 2H); LCMS (área 100%) Rt = 3,72 min, (pos) [M+H]/z, calculado 489,2, encontrado 489,2. Analizado con 0,6 MeOH, 0,16 CH_{2}Cl_{2}: Calculado, C (70,86), H (5,17), N (10,75), S (6,15). Encontrado: C (70,87), H (5,18), N (10,75), S (5,96).
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Ejemplo de referencia 35(a)
6-[2-(n-propilcarbamoil)fenilsulfanil]-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]-1H-indazol 
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264
Se disolvió 6-[2-(pentafluorofenoxicarbonil)fenilsulfanil]-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]-1H-indazol (60 mg, 0,1112 mmol) en DMF (0,8 mL), se trató con n-propilamina (11 \muL, 0,1335 mmol) y se agitó a la temperatura ambiente. El análisis por HPLC después de 15 minutos indicó que se había consumido todo el material de partida. La mezcla de reacción se concentró por evaporación giratoria a alto vacío dando un sólido. El sólido se trató con ultrasonidos con CH_{2}Cl_{2} dando una suspensión fina, que se filtró y lavó con CH_{2}Cl_{2} proporcionando 40 mg (rendimiento 87%) del compuesto del epígrafe. ^{1}HRMN (DMSO-d_{6}) \delta: 13,31 (s, 1H), 8,60 (d, J = 4,0 Hz, 1H), 8,41 (t, J = 6,2 Hz, 1H), 8,19 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,94 (m, 3H), 7,81 (dt, J = 1,7, 7,5 Hz, 1H), 7,66 (t, J = 8,7 Hz, 1H), 7,56 (m, 2H), 7,47 (m, 1H), 7,30 (m, 3H), 7,18 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 3,20 (q, J = 6,0 Hz, 2H), 1,55 (septete, J = 5,9 Hz, 2H), 0,92 (t, J = 6,0 Hz, 3H). Anal. Calc. para C_{24}H_{22}N_{4}OS\cdot(1,5 H_{2}O, 0,8 DMF): C, 63,41; H, 6,17; N, 13,45; S, 6,41. Encontrado: C, 63,37; H, 5,68; N, 13,44; S, 6,32.
\newpage
El material de partida se preparó como sigue:
265
Una solución de la sal de tetrabutilamonio de 6-(2-carboxifenilsulfanil)-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]-1H-indazol) (615 mg, 1,0 mmol) disuelta en DMF anhidra (10,0 ml) se trató con piridina (89 \muL, 1,1 mmol) y trifluoroacetato de pentafluorofenilo (206 \muL, 1,2 equivalentes), a temperatura ambiente, bajo atmósfera de argón. El análisis por HPLC después de 45 minutos mostró la mayor parte del ácido carboxílico sin reaccionar, así que se añadieron más piridina (89 \muL, 1,1 mmol) y trifluoroacetato de pentafluorofenilo (206 mL, 1,2 equivalentes). El análisis por HPLC 15 minutos después indicó que se había consumido completamente el ácido de partida. La mezcla de reacción se concentró por evaporación giratoria a alto vacío, a continuación se trituró con CH_{2}Cl_{2} (\sim1 mL) provocando la formación de cristales, que se recogieron por filtración, se lavaron con más CH_{2}Cl_{2} y se secaron. La masa de los cristales de color amarillo vivo era 336 mg. El filtrado restante se concentró y purificó por cromatografía de desarrollo rápido (acetonitrilo al 10%/CH_{2}Cl_{2} a acetonitrilo al 80%/CH_{2}Cl_{2}), obteniéndose 70 mg más de sólido. El rendimiento total de 6-[2-(pentafluorofenoxicarbonil)fenilsulfanil]-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]-1H-indazol fue 406 mg u 89%. ^{1}HRMN (CDCl_{3}) \delta: 10,22 (1H, s ancho), 8,66 (1H, d, J = 4,5 Hz), 8,28 (2H, dd, J = 7,7, 1,5 Hz), 8,15 (1H, d, J = 8,5 Hz), 7,97 (1H, d, J = 16,2 Hz), 7,79 (1H, s), 7,15-7,75 (7H, m), 6,92 (1H, d, J = 8,1 Hz).
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Ejemplo de referencia 35(b)
6-[2-(i-propilcarbamoil)fenilsulfanil]-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]-1H-indazol
266
El compuesto del Ejemplo de referencia 35(b) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 35(a) excepto que se usó isopropilamina en lugar de n-propilamina. ^{1}HRMN (DMSO-d_{6}) \delta: 13,30 (s, 1H), 8,60 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 8,26 (d, J = 7,34 Hz, 1H), 8,19 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,94 (d, J = 16,4 Hz, 1H), 7,80 (dt, J = 1,7, 7,5 Hz, 1H), 7,66 (d, J = 7,7 Hz, 1H), 7,56 (m, 2H), 7,45 (m, 1H), 7,30 (m, 3H), 7,18 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,08 (m, 1H), 4,04 (septete, J = 7,4 Hz, 1H), 1,15 (d, J = 6,6 Hz, 6H). Anal. Calc. para C_{24}H_{22}N_{4}OS\cdot1,7 H_{2}O: C, 64,75; H, 5,75; N. 12,59; S, 7,20. Encontrado: C, 64,79; H, 5,36; N, 12,74; S, 7,08.
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Ejemplo de referencia 35(c)
6-[2-(ciclobutilcarbamoil)fenilsulfanil]-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]-1H-indazol
267
El compuesto del Ejemplo de referencia 35(c) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 35(a) excepto que se usó ciclobutilamina en lugar de n-propilamina. ^{1}HRMN (DMSO-d_{6}) \delta: 13,31 (s, 1H), 8,62 (m, 2H), 8,19 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,94 (m, 2H), 7,80 (dt, J =1,7, 7,5 Hz, 1H), 7,65 (t, J = 8,1 Hz, 1H), 7,56 (s, 1H), 7,47 (m, 1H), 7,30 (m, 3H), 7,17 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 4,36 (septete, J = 8,1 Hz, 1H), 2,22 (m, 2H), 2,03 (m, 2H), 1,67 (m, 2H). Anal. Calc. para C_{25}H_{22}N_{4}OS\cdot(0,5 H_{2}O, 0,9 DMF): C, 66,36; H, 5,89; N, 13,69; S, 6,40. Encontrado: C, 66,21; H, 5,78; N, 13,82; S, 6,36.
\newpage
Ejemplo de referencia 35(d)
6-(2-carbamoilfenilsulfanil)-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]-1H-indazol 
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268 
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El compuesto del Ejemplo de referencia 35(d) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 35(a) excepto que se usó amoniaco en lugar de n-propilamina. ^{1}HRMN (DMSO-d_{6}) \delta: 8,60 (d, J = 4,9 Hz, 1H), 8,21 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,94 (m, 3H), 7,81 (dt, J = 1,7, 7,5 Hz, 1H), 7,60 (m, 4H), 7,48 (s ancho, 1H), 7,25 (m, 4H), 7,0 (m, 1H). Anal. Calc. para C_{21}H_{16}N_{4}OS\cdot0,25H_{2}O: C, 66,91; H, 4,41; N, 14,86; S, 8,51. Encontrado: C, 66,99; H, 4,40; N, 15,10; S, 8,49.
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Ejemplo de referencia 35(e)
6-[2-((1-metilpirrol-2-ilhidrazido)carbonil)fenilsulfanil]-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]-1H-indazol 
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269 
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El compuesto del Ejemplo de referencia 35(e) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 35(a) excepto que se usó 1-metilpirrol-2-ilhidrazida en lugar de n-propilamina. ^{1}HRMN (DMSO-d_{6}) \delta: 13,34 (s, 1H), 10,25 (s, 1H), 10,05 (s, 1H), 8,60 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 8,22 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 7,95 (d, J = 16,2 Hz, 1H), 7,81 (dt, J = 1,7, 7,5 Hz, 1H), 7,66 (m, 3H), 7,57 (d, J = 16,0 Hz, 1H), 7,43-7,18 (m, 4H), 7,07 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 7,00 (d, J = 3,4 Hz, 2H), 6,07 (t, J = 3,2 Hz, 1H), 3,88 (s, 3H). Anal. Calc. para C_{27}H_{22}N_{6}O_{2}S\cdot0,6 H_{2}O: C, 64,17; H, 4,63; N, 16,63; S, 6,34. Encontrado: C, 64,24; H, 4,48; N, 16,56; S, 6,28.
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Ejemplo de referencia 35(f)
6-[2-((2-fluorobencil)metilcarbamoil)fenilsulfanil]-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]-1H-indazol 
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270 
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El compuesto del Ejemplo de referencia 35(f) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 35(a) excepto que se usó 2-fluorobencilamina en lugar de n-propilamina. ^{1}HRMN (DMSO-d_{6}) \delta: 13,31 (s, 1H), 8,99 (t, J = 5,8 Hz, 1H), 8,61 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 8,19 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,94 (d, J = 16,2 Hz, 1H), 7,81 (dt, J = 1,7, 7,5 Hz, 1H), 7,66 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 7,56 (m, 3H), 7,47 (t, J = 7,9 Hz, 1H), 7,31 (m, 4H), 7,15 (m, 4H), 4,51 (d, J = 5,7 Hz, 2H). Anal. Calc. para C_{28}H_{21}FN_{4}OS\cdot0,25H_{2}O: C, 69,33; H, 4,47; N, 11,55; S, 6,61. Encontrado: C, 69,32; H, 4,41; N, 11,58; S, 6,59.
\newpage
Ejemplo de referencia 35(g)
6-[2-((4-metoxibencil)metilcarbamoil)fenilsulfanil]-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]-1H-indazol 
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El compuesto del Ejemplo de referencia 35(g) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 35(a) excepto que se usó 4-metoxibencilamina en lugar de n-propilamina. ^{1}HRMN (DMSO-d_{6}) \delta: 13,31 (s, 1H), 8,90 (t, J = 5,5 Hz, 1H), 8,60 (d, J = 4,2 Hz, 1H), 8,19 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,95 (d, J = 16,3 Hz, 1H), 7,81 (dt, J = 1,7, 7,5 Hz, 1H), 7,66 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 7,55 (m, 3H), 7,30 (m, 5H), 7,18 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,10 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 4,39 (d, J = 6,0 Hz, 2H), 3,72 (s, 3H). Anal. Calc. para C_{29}H_{24}N_{4}O_{2}S\cdot0,6 H_{2}O: C, 69,19; H, 5,05; N, 11,13; S, 6,37. Encontrado: C, 69,12; H, 4,85; N, 11,24; S, 6,35.
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Ejemplo de referencia 35(h)
6-[2-((5-metilfur-2-il)metilcarbamoil)fenilsulfanil]-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]-1H-indazol 
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272 
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El compuesto del Ejemplo de referencia 35(h) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 35(a) excepto que se usó 5-metilfur-2-ilamina en lugar de n-propilamina. ^{1}HRMN (DMSO-d_{6}) \delta: 13,31 (s, 1H), 8,88 (t, J = 5,3 Hz, 1H), 8,60 (d, J = 4,3 Hz, 1H), 8,19 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,95 (d, J = 16,3 Hz, 1H), 7,81 (dt, J = 1,7, 7,5 Hz, 1H), 7,66 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 7,54 (m, 3H), 7,30 (m, 4H), 7,18 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,06 (d, J = 8,1 Hz, 3H). Anal. Calc. para C_{27}H_{22}N_{4}O_{2}S\cdot0,4 H_{2}O: C, 68,45; H, 4,85; N, 11,83; S, 6,77. Encontrado: C, 68,35; H, 4,80; N, 11,85; S, 6,68.
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Ejemplo de referencia 35(i)
6-[2-(benciloxicarbamoil)fenilsulfanil]-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]-1H-indazol 
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273 
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El compuesto del Ejemplo de referencia 35(i) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 5(a) excepto que se usó O-bencil-hidroxilamina en lugar de n-propilamina. ^{1}H RMN (DMSO-d_{6}) \delta: 13,31 (s, 1H), 11,64 (s, 1H), 8,90 (t, J = 5,5 Hz, 1H), 8,60 (d, J = 4,1 Hz, 1H), 8,19 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,95 (d, J = 16,3 Hz, 1H), 7,81 (dt, J = 1,7, 7,5 Hz, 1H), 7,66 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 7,56 (m, 2H), 7,50-7,24 (m, 9H), 7,17 (t, J = 8,5 Hz, 2H), 4,94 (s, 2H). Anal. Calc. para C_{28}H_{22}N_{4}O_{2}S\cdot0,8H_{2}O: C, 68,22; H, 4,83; N, 11,37; S, 6,50. Encontrado: C, 68,08; H, 4,65; N, 11,41; S, 6,47.
\newpage
Ejemplo de referencia 35(j)
6-[2-(aliloxicarbamoil)fenilsulfanil]-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]-1H-indazol 
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274 
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El compuesto del Ejemplo de referencia 35(j) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 35(a) excepto que se usó O-alilhidroxilamina en lugar de n-propilamina. ^{1}HRMN (DMSO-d_{6}) \delta: 13,32 (s, 1H), 11,56 (s, 1H), 8,60 (d, J = 4,1 Hz, 1H), 8,19 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,95 (d, J = 16,5 Hz, 1H), 7,81 (dt, J = 1,7, 7,5 Hz, 1H), 7,66 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 7,56 (m, 2H), 7,48-7,24 (m, 5H), 7,16 (m, 2H), 6,00 (m, 1H), 5,37 (d, J = 18,3 Hz, 1H), 5,27 (d, J = 11,3 Hz, 1H), 4,42 (d, J = 6,0 Hz, 1H). Anal. Calc. para C_{24}H_{20}N_{4}O_{2}S (0,2 H_{2}O, 0,2CH_{2}Cl_{2}): C, 65,35; H, 4,96; N, 12,10; S, 6,92. Encontrado: C, 65,24; H, 4,50; N, 12,56; S, 7,17.
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Ejemplo de referencia 35(k)
6-[2-(isopropoxicarbamoil)fenilsulfanil]-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]-1H-indazol 
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275 
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El compuesto del Ejemplo de referencia 35(k) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 35(a) excepto que se usó O-isopropil-hidroxilamina en lugar de n-propilamina. ^{1}HRMN (DMSO-d_{6}) \delta: 13,30 (s, 1H), 11,33 (s, 1H), 8,60 (d, J = 4,1 Hz, 1H), 8,19 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,95 (d, J = 16,5 Hz, 1H), 7,81 (dt, J = 1,7, 1,5 Hz, 1H), 7,66 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 7,55 (m, 2H), 7,48-7,24 (m, 4H), 7,17 (d, J = 8,3 Hz, 2H), 4,12 (septete, J = 5,7 Hz, 1H), 1,21 (d, J = 6,2 Hz, 6H. Anal. Calc. para C_{24}H_{22}N_{4}O_{2}S\cdot(0,4 H_{2}O, 0,7 CH_{2}Cl_{2}): C, 59,67; H, 4,91; N, 11,27; S, 6,45. Encontrado: C, 59,61; H, 4,81; N, 11,42; S, 6,45.
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Ejemplo de referencia 35(l)
6-[2-((4-aminobencil)metilcarbamoil)fenilsulfanil]-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]-1H-indazol 
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276 
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El compuesto del Ejemplo de referencia 35(l) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 35(a) excepto que se usó 4-amino-bencilamina en lugar de n-propilamina. ^{1}H RMN (DMSO-d_{6}) \delta: 13,31 (s, 1H), 8,78 (t, J = 6,0 Hz, 1H), 8,60 (d, J = 4,3 Hz, 1H), 8,19 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 7,95 (d, J = 16,3 Hz, 1H), 7,85 (s ancho, 1H), 7,81 (dt, J = 1,7, 7,5 Hz, 1H), 7,66 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 7,59 (s, 1H), 7,51 (m, 2H), 7,30 (m, 3H), 7,19 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 7,05 (m, 3H), 6,56 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 6,51 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 4,29 (d, J = 6,0 Hz, 2H). Anal. Calc. para C_{28}H_{23}N_{5}OS\cdot0,6 H_{2}O: C, 68,86; H, 4,99; N, 14,34; S, 6,57. Encontrado: C, 68,83; H, 4,80; N, 14,16; S, 6,52.
\newpage
Ejemplo de referencia 35(m)
6-[2-((tien-2-ilhidrazido)carbonil)fenilsulfanil]-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]-1H-indazol 
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277 
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El compuesto del Ejemplo de referencia 35(m) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 35(a) excepto que se usó tien-2-ilhidrazida en lugar de n-propilamina. ^{1}HRMN (DMSO-d_{6}) \delta: 13,49 (s ancho, 1H), 10,64 (s, 1H), 10,47 (s, 1H), 8,66 (d, J = 4,0 Hz, 1H), 8,22 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 8,08-7,82 (m, 5H), 7,66 (m, 3H), 7,39 (m, 3H), 7,24 (m, 2H), 7,09 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 7,00 (d, J = 3,4 Hz, 2H), 6,07 (t, J = 3,2 Hz, 1H), 3,88 (s, 3H). Anal. Calc. para C_{26}H_{19}N_{5}O_{2}S_{2}\cdot1,5H_{2}O: C, 59,52; H, 4,23; N, 13,35; S, 12,22. Encontrado: C, 59,56; H, 4,42; N, 13,33; S, 11,75.
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Ejemplo de referencia 35(n)
6-[2-(N^{2}-(pirid-2-ilhidrazino)carbonil)fenilsulfanil]-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]-1H-indazol 
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278 
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El compuesto del Ejemplo de referencia 35(n) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 35(a) excepto que se usó 2-hidrazinopiridina en lugar de n-propilamina. ^{1}HRMN (DMSO-d_{6}) \delta: 13,31 (s, 1H), 10,30 (s, 1H), 8,60 (d, J = 4,4 Hz, 1H), 8,48 (s, 1H), 8,21 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 8,09 (d, J = 4,9 Hz, 1H), 7,94 (d, J = 16,4 Hz, 1H), 7,81 (dt, J = 1,7, 7,5 Hz, 1H), 7,67 (m, 1H), 7,62-7,47 (m, 3H), 7,40 (m, 2H), 7,31-7,12 (m, 3H), 6,73 (m, 2H). Anal. Calc. para C_{26}H_{20}N_{6}OS\cdot0,3H_{2}O: C, 66,45; H, 4,42; N, 17,88; S, 6,82. Encontrado: C, 66,33; H, 4,50; N, 17,78; S, 6,60.
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Ejemplo de referencia 35(o)
6-[2-(N-hidroxi-N-metilcarbamoil)fenilsulfanil]-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]-1H-indazol 
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279 
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El compuesto del Ejemplo de referencia 35(o) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 35(a) excepto que se usó N-metil-hidroxilamina en lugar de n-propilamina. ^{1}HRMN (DMSO-d_{6}) \delta: 13,24 (s, 1H), 9,94 (s, 1H), 8,60 (d, J = 4,0 Hz, 1H), 8,14 (d, J = 83 Hz, 1H), 7,92 (d, J = 16,2 Hz, 1H), 7,80 (dt, J = 1,7, 7,5 Hz, 1H), 7,65 (t, J = 8,5 Hz, 1H), 7,54 (d, J = 16,5 Hz, 1H), 7,47-7,24 (m, 6H), 7,16 (d, J = 8,5 Hz, 1H) 3,24 (s ancho, 1H). Anal. Calc. para C_{22}H_{18}N_{4}O_{2}S\cdot(0,5H_{2}O, 0,3 CH_{2}Cl_{2}): C, 61,29; H, 4,52; N, 12,82; S, 7,34. Encontrado: C, 61,24; H, 4,33; N, 12,67; S, 7,34.
\newpage
Ejemplo de referencia 35(p)
6-[2-((pirid-4-il)metilcarbamoil)fenilsulfanil]-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]-1H-indazol
280
El compuesto del Ejemplo de referencia 35(p) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 35(a) excepto que se usó 4-aminometilpiridina en lugar de n-propilamina. ^{1}HRMN (DMSO-d_{6}) \delta: 13,31 (s ancho, 1H), 9,07 (t, J = 6,8 Hz, 1H), 8,60 (d, J = 4,2 Hz, 1H), 8,48 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8,19 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 7,95 (d, J = 16,4 Hz, 1H), 7,80 (dt, J = 1,7, 7,5 Hz, 1H), 7,68-7,52 (m, 3H), 7,42 (m, 2H), 7,39-7,31 (m, 3H), 7,27 (m, 1H), 7,20-7,10 (m, 2H), 4,48 (d, J = 6,2 Hz, 2H).
Ejemplo de referencia 35(q)
6-[2-((2-metilfenilhidrazido)carbonil)fenilsulfanil]-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]-1H-indazol
281
El compuesto del Ejemplo de referencia 35(q) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 35(a) excepto que se usó 2-metil-fenilhidrazida en lugar de n-propilamina. ^{1}HRMN (DMSO-d_{6}) \delta: 13,43 (s ancho, 1H), 10,45 (s, 1H), 10,28 (s, 1H), 8,64 (d, J = 4,0 Hz, 1H), 8,22 (d, J = 8,2 Hz, 1N), 8,01 (d, J = 16,6 Hz, 1H), 7,92 (m, 1H), 7,81 (m, 1H), 7,69 (m, 1H), 7,60 (d, J = 16,4 Hz, 1H), 7,50-7,22 (m, 8H), 7,07 (d, J = 7,7 Hz, 1H), 2,45 (s, 3H).
Ejemplo de referencia 35(r)
6-[2-(metoxicarbamoil)fenilsulfanil]-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]-1H-indazol
282
El compuesto del Ejemplo de referencia 35(r) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 35(a) excepto que se usó O-metil-hidroxilamina en lugar de n-propilamina. ^{1}HRMN (DMSO-d_{6}) \delta: 13,32 (s, 1H), 11,60 (s, 1H), 8,60 (d, J = 3,8 Hz, 1H), 8,19 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,95 (d, J = 16,2 Hz, 1H), 7,81 (dt, J = 1,7, 7,5 Hz, 1H), 7,66 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 7,56 (m, 2H), 7,47 (dd, J = 7,4, 1,7 Hz, 1H), 7,43-7,24 (m, 3H), 7,17 (m, 2H), 3,72 (s, 3H). Anal. Calc. para C_{22}H_{18}N_{4}O_{2}S\cdot0,6CH_{2}Cl_{2}: C, 59,86; H, 4,27; N, 12,36; S, 7,07. Encontrado: C, 59,94; H, 4,40; N, 12,00; S, 6,80.
Ejemplo de referencia 35(s)
6-[2-((ciclopropil)metoxicarbamoil)fenilsulfanil]-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]-1H-indazol
283
El compuesto del Ejemplo de referencia 35(s) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 35(a) excepto que se usó O-ciclopropil-hidroxilamina en lugar de n-propilamina. ^{1}HRMN (DMSO-d_{6}) \delta: 13,38 (s, 1H), 11,51 (s, 1H), 8,64 (d, J = 3,8 Hz, 1H), 8,18 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 8,00 (d, J = 16,4 Hz, 1H), 7,86 (m, 2H), 7,63-7,52 (m, 2H), 7,49-7,29 (m, 4H), 7,17 (m, 2H), 3,70 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 1,10 (m, 1H), 0,53 (m, 2H), 0,27 (m, 2H). Anal. Calc. para C_{25}H_{22}N_{4}O_{2}S\cdot1,6H_{2}O: C, 63,70; H, 5,39; N, 11,89; S, 6,80. Encontrado: C, 63,58; H, 4,95; N, 11,71; S, 6,66.
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Ejemplo de referencia 35(t)
6-[2-(n-propoxicarbamoil)fenilsulfanil]-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]-1H-indazol
284
El compuesto del Ejemplo de referencia 35(t) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 35(a) excepto que se usó O-n-propil-hidroxilamina en lugar de n-propilamina. ^{1}HRMN (DMSO-d_{6}) \delta: 13,31 (s, 1H), 11,48 (s, 1H), 8,60 (d, J = 3,8 Hz, 1H), 8,19 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,95 (d, J = 16,2 Hz, 1H), 7,81 (dt, J =1,7, 7,5 Hz, 1H), 7,66 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 7,60-7,52 (m, 2H), 7,49-7,24 (m, 4H), 7,17 (m, 2H), 3,84 (t, J = 6,6 Hz, 2H), 1,62 (septete, J = 6,4 Hz, 2H), 0,92 (t, J = 6,1 Hz, 3H). Anal. Calc. para C_{24}H_{22}N_{4}O_{2}S\cdot(0,5 H_{2}O, 0,25 CH_{2}Cl_{2}): C, 63,21: H, 5,14; N, 12,16; S, 6,96. Encontrado: C, 63,15; H, 5,13; N, 12,17; S, 6,99.
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Ejemplo de referencia 35(u)
6-[2-(alilcarbamoil)fenilsulfanil]-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]-1H-indazol
285
El compuesto del Ejemplo de referencia 35(u) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 35(a) excepto que se usó alilamina en lugar de n-propilamina. ^{1}H RMN (DMSO-d_{6}) \delta: 13,31 (s, 1H), 8,60 (m, 2H), 8,19 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,93 (d, J = 16,3 Hz, 3H), 7,79 (dt, J = 1,7, 7,5 Hz, 1H), 7,64 (m, 1H), 7,60-7,48 (m, 3H), 7,37-7,23 (m, 3H), 7,17 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,07 (m, 1H), 5,87 (m, 1H), 5,25 (dq, J = 17,33, 1,9 Hz, 1H), 5,09 (dq, J = 10,2, 1,9 Hz, 1H), 3,87 (m, 2H). Anal. Calc. para C_{24}H_{20}N_{4}OS\cdot0,8 CH_{2}Cl_{2}: C, 62,00; H, 4,53; N, 11,66; S, 6,67. Encontrado: C, 62,08; H, 4,73; N, 11,99; S, 6,66. Espectrometría de masas con transformada de Fourier y desorción/ionización por láser (abreviadamente MALDI FTMS, del inglés Matrix-Assisted Laser Desorption/Ionization Fourier Transform Mass Spectrum) (MH^{+}) Calculado, 413,1431, encontrado 413,1449.
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Ejemplo de referencia 35(v)
6-[2-(ciclopropilmetil-carbamoil)fenilsulfanil]-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]-1H-indazol
286
El compuesto del Ejemplo de referencia 35(v) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 35(a) excepto que se usó ciclopropil-metilamina en lugar de n-propilamina. ^{1}HRMN (DMSO-d_{6}) \delta: 13,30 (s, 1H), 8,60 (d, J = 4,0 Hz, 1H), 8,48 (t, J = 5,3 Hz, 1H), 8,17 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 7,90 (d, J = 16,4 Hz, 1H), 7,80 (dt, J = 1,7, 7,5 Hz, 1H), 7,67-7,45 (m, 4H), 7,33-7,23 (m, 3H), 7,18 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,06 (m, 1H), 3,13 (t, J = 6,2 Hz, 2H), 1,00 (m, 1H), 0,41 (m, 1H), 0,24 (m, 1H). Anal. Calc. para C_{25}H_{22}N_{4}OS\cdot0,5 CH_{2}Cl_{2}: C, 65,30; H, 4,94; N, 11,95; S, 6,84. Encontrado: C, 65,10; H, 4,93; N, 12,04; S, 6,82. MALDI FTMS (MH^{+}) Calculado 427,1587, encontrado 427,1605.
Ejemplo de referencia 35(w)
6-[2-(cianometilcarbamoil)fenilsulfanil]-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]-1H-indazol
287
El compuesto del Ejemplo de referencia 35(w) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 35(a) excepto que se usó aminoacetonitrilo en lugar de n-propilamina. ^{1}HRMN (DMSO-d_{6}) \delta: 13,35 (s, 1H), 9,19 (t, J = 5,3 Hz, 1H), 8,60 (d, J = 4,8 Hz, 1H), 8,20 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 7,94 (d, J = 16,4 Hz, 3H), 7,79 (dt, J = 1,7, 7,5 Hz, 1H), 7,70-7,50 (m, 4H), 7,41-7,23 (m, 3H), 7,18 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,06 (d, J = 6,6 Hz, 1H), 4,32 (d, J = 5,5 Hz, 2H). MALDI FTMS (MH^{+}) Calculado 412,1227, encontrado 412,1215.
Ejemplo de referencia 35(x)
6-[2-(etilcarbamoil)fenilsulfanil]-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]-1H-indazol
288
El compuesto del Ejemplo de referencia 35(x) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 35(a) excepto que se usó etilamina en lugar de n-propilamina. ^{1}HRMN (DMSO-d_{6}) \delta: 8,60 (d, J = 4,0 Hz, 1H), 8,40 (t, J = 6,2 Hz, 1H), 8,18 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,94 (m, 3H), 7,81 (dt, J = 1,7, 7,5 Hz, 1H), 7,68-7,44 (m, 3H), 7,56 (m, 2H), 7,30 (m, 3H), 7,17 (dd, J = 8,1, 1,8 Hz, 1H), 7,06 (m, 1H), 3,24 (m, 2H), 1,11 (t, J = 7,0 Hz, 3H). Anal. Calc. para C_{23}H_{20}N_{4}OS\cdot(1,75H_{2}O, 1,0 DMF): C, 61,82; H, 6,09; N, 13,87; S, 6,35. Encontrado: C, 61,58; H, 5,66; N, 13,96; S, 5,93. MALDI FTMS (MH^{+}) Calculado 401,1431, encontrado 401,1417.
Ejemplo de referencia 35(y)
6-[2-(tiazol-2-ilcarbamoil)fenilsulfanil]-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]-1H-indazol
289
El compuesto del Ejemplo de referencia 35(y) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 35(a) excepto que se usó 2-aminotiazol en lugar de n-propilamina. ^{1}HRMN (DMSO-d_{6}) \delta: 13,32 (s, 1H), 12,67 (s, 1H), 8,60 (d, J = 4,1 Hz, 1H), 8,18 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,93 (d, J = 16,3 Hz, 1H), 7,80 (dt, J = 1,7, 7,5 Hz, 1H), 7,65 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 7,65 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,60-7,51 (m, 3H), 7,49-7,34 (m, 2H), 7,26 (m, 2H), 7,18 (m, 2H). Anal. Calc. para C_{24}H_{17}N_{5}OS_{2}\cdot0,75H_{2}O: C, 61,45; H, 3,98; N, 14,93; S, 13,67. Encontrado: C, 61,35; H, 4,10; N, 14,96; S, 13,68.
Ejemplo de referencia 35(z)
6-[2-(2-(etoxi)etilcarbamoil)fenilsulfanil]-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]-1H-indazol
290
El compuesto del Ejemplo de referencia 35(z) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 35(a) excepto que se usó 2-etoxietilamina en lugar de n-propilamina. ^{1}HRMN (DMSO-d_{6}) \delta: 13,30 (s, 1H), 8,60 (d, J = 4,0 Hz, 1H), 8,45 (t, J = 6,2 Hz, 1H), 8,18 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,93 (m, 2H), 7,80 (dt, J = 1,7, 7,5 Hz, 1H), 7,65 (d, J = 7,7 Hz, 1H), 7,60-7,45 (m, 3H), 7,36-7,23 (m, 3H), 7,17 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,07 (m, 1H), 3,50 (m, 6H), 1,10 (d, J = 7,0 Hz, 3H). Anal. Calc. para C_{25}H_{24}N_{4}O_{2}S\cdot0,5 CH_{2}Cl_{2}: C, 62,89; H, 5,17; N, 11,50; S, 6,58. Encontrado: C, 62,45; H, 5,33; N, 11,25; S, 6,55.
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Ejemplos de referencia 35(aa)
6-[2-((3-metoxibencil)metilcarbamoil)-fenilsulfanil]-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]-1H-indazol
291
El compuesto del Ejemplo de referencia 35(aa) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 35(a) excepto que se usó 3-metoxibencilamina en lugar de n-propilamina. ^{1}HRMN (DMSO-d_{6}) \delta: 13,30 (s, 1H), 8,97 (t, J = 5,5 Hz, 1H), 8,60 (d, J = 4,2 Hz, 1H), 8,18 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 7,93 (d, J = 16,3 Hz, 1H), 7,80 (dt, J = 1,7, 7,5 Hz, 1H), 7,65 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 7,60-7,51 (m, 3H), 7,38-7,15 (m, 5H), 7,08 (m, 1H), 6,94 (m, 2H), 6,80 (dd, J = 8,1, 1,5 Hz, 1H), 4,44 (d, J = 6,6 Hz, 2H), 3,71 (s. 3H). Anal. Calc. para C_{29}H_{24}N_{4}O_{2}S\cdot0,4 H_{2}O: C, 60,25; H, 4,50; N, 17,57; S, 8,04. Encontrado: C, 60,14; H, 4,47; N, 17,42; S, 8,00.
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Ejemplo de referencia 35(bb)
6-[2-((fur-2-il)metilcarbamoil)fenilsulfanil]-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]-1H-indazol
292
El compuesto del Ejemplo de referencia 35(bb) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 35(a) excepto que se usó 2-aminometilfurano en lugar de n-propilamina. ^{1}HRMN (DMSO-d_{6}) \delta: 13,31 (s, 1H), 8,93 (t, J = 5,7 Hz, 1H), 8,60 (d, J = 4,3 Hz, 1H), 8,19 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,93 (d, J = 16,5 Hz, 1H), 7,80 (dt, J = 1,9, 7,4 Hz, 1H), 7,66 (d, J = 7,7 Hz, 1H), 7,59-7,48 (m, 4H), 7,30 (m, 4H), 7,37-7,24 (m, 3H), 7,18 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 7,06 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 6,40 (m, 1H), 6,31 (m, 1H), 4,44 (d, J = 53 Hz, 2H). Anal. Calc. para C_{26}H_{20}N_{4}O_{2}S\cdot(0,1H_{2}O, 0,75 CH_{2}Cl_{2}): C, 62,02; H, 4,22; N, 10,82; S, 6,19. Encontrado: C, 61,58; H, 4,30; N, 10,55; S, 6,12.
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Ejemplo de referencia 35(cc)
6-[2-(2-propinilcarbamoil)fenilsulfanil]-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]-1H-indazol
293
El compuesto del Ejemplo de referencia 35(cc) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 35(a) excepto que se usó propargilamina en lugar de propilamina (76%): ^{1}HRMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta: 8,56 (m, 1H), 7,96 (d, 1H, J = 8,6 Hz), 7,81 (d, 1H, 16,4 Hz), 7,68 (dt, 1H, J = 1,8, 7,8 Hz), 7,6 (m, 1H), 7,52-7,45 (m, 3H), 7,3-7,23 (m, 3H), 7,16 (m, 2H), 4,10 (m, 2), 2,20 (t, 1H, J = 2,6 Hz). LCMS (área 100%) Rt = 3,36 min, (pos) [M+H]/z, calculado 411,1, encontrado 411,1. Analizado con 0,2 H_{2}O, 0,17 DMF, 1,2-diclorometano: Calculado, C (58,44), H (4,19), N (11,05), S (6,07). Encontrado: C (58,18), H (4,11), N (10,98). S (6,05).
\newpage
Ejemplo de referencia 35(dd)
6-[2-(etoxicarbamoil)fenilsulfanil]-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]-1H-indazol 
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294 
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El compuesto del Ejemplo de referencia 35(dd) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 35(a) excepto que se usó etoxiamina en lugar de propilamina: ^{1}HRMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta: 11,60 (s, 1H), 8,71 (d, 1H, J = 7,9 Hz), 8,30 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 8,05 (d, 1H, J = 16,4 Hz), 7,91 (dt, 1H, J = 1,7, 7,7 Hz), 7,76 (d, 1H, J = 7,8 Hz), 7,67 (m, 2H), 7,56 (dd, 1H, J = 1,8, 7,3 Hz), 7,52-7,36 (m, 3H), 7,28 (m, 2H) 4,06 (q, 2H, J = 7,0 Hz), 1,31 (t, 2H, J = 7,0 Hz); LCMS (área 100%) Rt = 3,28 min, (pos) [M+H]/z, calculado 417,1, encontrado 417,1. Analizado con 0,2 H_{2}O: Calculado, C (65,53), H (4,98), N (13,05), S (7,48). Encontrado: C (65,66), H (4,91), N (12,75), S (7,44).
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Ejemplo de referencia 35(ee)
6-[2-(2-metil-2-propenilcarbamoil)fenilsulfanil]-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]-1H-indazol 
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295 
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El compuesto del Ejemplo de referencia 35(ee) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 35(a) excepto que se usó 2-metilalilamina en lugar de propilamina: ^{1}HRMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta: 8,56 (m, 1H), 7,98 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 7,81 (d, 1H, J = 16,4 Hz), 7,69 (dt, 1H, J = 1,7, 7,7 Hz), 7,60 (m, 1H), 7,53-7,42 (m, 3H), 7,32-7,24 (m, 3H), 7,16 (m, 2H), 6,72 (m, 1H), 4,89 (s, 1H), 4,81 (s, 1H), 3,90 (d, 2H, J = 5,5 Hz), 1,71 (s, 3H). LCMS (área 100%) Rt = 3,37 min, (pos) [M+H]/z, calculado 427,1, encontrado 427,1. Analizado con 0,7 H_{2}O, 0,1 diclorometano: Calculado, C (67,35). H (5,31), N (12,52), S (7,16). Encontrado: C (67,55), H (5,39), N (12,35), S (7,15).
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Ejemplo de referencia 35(ff)
6-[2-((3-fluorobencil)metilcarbamoil)fenilsulfanil]-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]-1H-indazol 
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296 
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El compuesto del Ejemplo de referencia 35(ff) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 35(a) excepto que se usó 3-fluorobencilamina en lugar de propilamina: ^{1}HRMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta: 8,60 (m, 1H), 7,97 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 7,86 (d, 1H, J = 16,4 Hz), 7,70 (m, 2H), 7,51 (m, 2H), 7,33 (m, 4H), 7,18 (m, 2H), 7,11 (dd, 1H, J = 1,6, 8,5 Hz), 6,95 (m, 3H), 4,51 (d, 2H, J = 5,7 Hz); LCMS (área 100%) Rt = 3,55 min, (pos) [M+H]/z, calculado 481,1, encontrado 481,1. Analizado con 0,7 H_{2}O, 0,5 diclorometano: Calculado, C (63,91), H (4,40), N (10,46), S (5,99). Encontrado: C (63,80), H (4,34), N (10,34), S (5,98).
\newpage
Ejemplo de referencia 35(gg)
6-[2-(2-(metilamino)etilcarbamoil)fenilsulfanil]-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]-1H-indazol 
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297 
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El compuesto del Ejemplo de referencia 35(gg) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 35(a) excepto que se usó N-metiletilendiamina en lugar de propilamina: ^{1}HRMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta: 8,60 (m, 1H), 7,98 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 7,81 (d, 1H, J = 16,4 Hz), 7,69 (dt, 1H, J = 1,7, 7,7 Hz), 7,52 (m, 1H), 7,50-7,40 (m, 3H), 7,30-7,20 (m, 3H), 7,16 (m, 2H), 3,45 (t, 2H), 2,69 (t, 2H), 2,15 (s ancho, 3H); LCMS (área 100%) Rt = 3,16 min, (pos) [M+H]/z, calculado 430,1, encontrado 430,1. Analizado con 0,2 H_{2}O, 0,6 diclorometano, 0,06 hexano: Calculado, C (61,28), H (5,24), N (14,31), S (6,55). Encontrado: C (61,26), H (5,14), N (14,22), S (6,56).
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Ejemplo de referencia 35(hh)
6-[2-(2-(tien-2-il)etilcarbamoil)fenilsulfanil]-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]-1H-indazol 
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298 
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El compuesto del Ejemplo de referencia 35(hh) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 35(a) excepto que se usó 2-(2-aminoetil)tiofeno en lugar de propilamina: ^{1}HRMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta: 8,56 (m, 1H), 7,98 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 7,81 (d, 1H, J = 16,4 Hz), 7,69 (dt, 1H, J = 1,7, 7,7 Hz), 7,60 (m, 1H), 7,53-7,42 (m, 3H), 7,32-7,24 (m, 3H), 7,16 (m, 2H), 6,72 (m, 1H), 6,63 (m, 1H), 6,52 (m 1H). 3,45 (q, 2H), 3,00 (t, 2H). Analizado con 0,5 H_{2}O, 0,07 diclorometano: Calculado, C (65,35), H (4,69), N (11,26), S (12,82). Encontrado: C (65,49), H (4,80), N (11,21), S (12,77).
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Ejemplo de referencia 35(ii)
6-[2-(aminocarbamoil)fenilsulfanil]-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]-1H-indazol 
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299 
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El compuesto del Ejemplo de referencia 35(ii) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 35(a) excepto que se usó hidrazina en lugar de propilamina: ^{1}HRMN (300 MHz, DMSO-d_{6}) \delta: 13,3 (s, 1H), 9,57 (s, 1H), 8,54 (d, 1H, J = 3,9 z), 8,14 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 7,89 (d, 1H, J = 16,4 Hz), 7,73 (dt, 1H, J =1,7, 7,6 Hz), 7,60 (d, 1H, J = 7,9 Hz), 7,50 (m, 2H), 7,40 (dd, 1H, J = 1,8, 7,1 Hz), 7,3-7,1 (m, 4H), 7,0 (m, 1H). LCMS (área 100%) Rt = 0,55 min, (pos) [M+H]/z, calculado 388,1, encontrado 388,1. Analizado con 0,1 DMF, 0,55 EtOAc, 0,12 Tol (RMN) y 0,15 H_{2}O: Calculado, C (63,98), H (5,15), N (15,63), S (7,02). Encontrado: C (63,99), H (5,07), N (15,75), S (6,89).
\newpage
Los compuestos de los Ejemplos de referencia 35(jj)-35(nn) pueden prepararse de manera similar a la descrita en el Ejemplo 35(a).
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Ejemplo de referencia 35(jj)
300 
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Ejemplo de referencia 35(kk)
301 
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Ejemplo de referencia 35(ll)
302 
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Ejemplo de referencia 35(mm)
303 
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Ejemplo de referencia 35(nn)
304 
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Ejemplo de referencia 36(a)
6-[2-(N^{2}-(1-metilimidazol-2-ilmetiliden)hidrazino)carbonil)-fenilsulfanil]-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]-1H-indazol 
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305 
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El compuesto preparado en el Ejemplo de referencia 35(ii) (40 mg, 0,103 mmol) se trató con 1-metil-2-imidazolcarboxaldehído (29 mg, 0,258 mmol, 2,5 equivalentes) en etanol obteniéndose el compuesto del Ejemplo de referencia 36(a): ^{1}H RMN (300 MHz, DMSO-d_{6}) \delta: 8,60 (m, 2H), 8,31 (s, 1H), 8,18 (d, 1H), 8,02 (d, 1H), 7,98 (d, 1H), 7,80 (m, 2H), 7,63 (m, 2H), 7,40 (m, 3H), 7,30 (m, 1H), 7,20 (m, 1H), 7,02 (m, 2H), 6,93 (s, 1H), 4,00 (s, 3H); LCMS (área 100%) Rt = 4,0 min, (pos) [M+H]/z, calculado 480,2, encontrado 480,2. Analizado con 1,45 H_{2}O: Calculado, C (61,76), H (4,76), N (19,39), S (6,34). Encontrado: C (61,78), H (4,67), N (19,34), S (6,39).
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Ejemplo de referencia 36(b)
6-[2-(N^{2}-(pirid-2-ilmetiliden)hidrazino)carbonil)-fenilsulfanil]-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]-1H-indazol 
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306 
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El compuesto del Ejemplo de referencia 36(b) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 36(a) excepto que se usó 2-piridilcarboxaldehído en lugar de 1-metil-2-imidazolcarboxaldehído: ^{1}HRMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta: 8,57 (m, 2H), 8,45 (m, 2H), 8,22 (d, 1H), 8,10 (s, 1H), 7,93 (d, 1H), 7,83 (d, 1H), 7,8-7,1 (m, 11H); LCMS (área 100%) Rt = 4,0 min, (pos) [M+H]/z, calculado 477,1, encontrado 477,1. Analizado con 0,85 H_{2}O: Calculado, C (65,93), H (4,45), N (17,09), S (6,52). Encontrado: C (66,02), H (4,42), N (16,95), S (6,38).
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Ejemplo de referencia 36(c)
6-[2-(N^{2}-(2,2,2-trifluroetiliden)hidrazino)carbonil)-fenilsulfanil]-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]-1H-indazol 
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307 
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El compuesto del Ejemplo de referencia 36(c) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 36(a) excepto que se usó trifluoroacetaldehído en lugar de 1-metil-2-imidazolcarboxaldehído: ^{1}HRMN (300 MHz, DMSO-d_{6}) \delta: 8,70 (m, 1H), 8,25 (m, 1H), 8,02 (d, 1H), 7,90 (dt, 1H), 7,80-7,20 (m, 10H). LCMS (área 100%) Rt = 5,64 min, (pos) [M+H]/z, calculado 468,1, encontrado 468,0. Analizado con 0,75 H_{2}O: Calculado, C (57,39), H (3,67), N (14,56), S (6,67). Encontrado: C (57,44), H (3,67), N (14,56), S (6,67).
\newpage
Ejemplo de referencia 37(a)
6-[6-fluoro-2-(etoxicarbamoil)fenilsulfanil)-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]-1H-indazol
308
El compuesto del Ejemplo de referencia 37(a) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 35(a) excepto que se usó el material de partida descrito a continuación y que se usó etoxiamina en lugar de propilamina: ^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta: 8,59 (m, 1H), 8,08 (d, 1H), 7,88 (d, 1H, J = 16,4 Hz), 7,79 (t, 1H), 7,65 (d, 1H), 7,60 (m, 1H), 7,50 (d, 1H, J = 16,4 Hz), 7,40 (t, 1H), 7,36 (d, 1H), 7,28 (s, 1H), 7,23 (m, 1H), 7,10 (d, 1H), 3,90 (q, 2H), 1,19 (t, 3H). LCMS (área 100%) Rt = 4,85 min, (pos) [M+H]/z, calculado 435,1, encontrado 435,1, (neg) [M-H]/z, calculado 433,1, encontrado 433,1. Analizado con 0,35 H_{2}O, 0,07 EtOAc: Calculado, C (62,56), H (4,57), N (12,54), S (7,17). Encontrado: C (62,61), H (4,55), N (12,49), S (7,11).
El material de partida se preparó como sigue:
309
Una solución de 2,3-difluorobenzoato de etilo (1,07 g, 5,75 mmol) en DMF (10 mL) se trató con sulfuro de sodio (896 mg, 11,5 mmol, 2,0 equivalentes) a 23ºC. La mezcla se agitó bajo argón durante 10 h. La solución se diluyó con acetato de etilo (50 mL) y agua (50 mL) y ácido cítrico al 10% (5 mL). La capa orgánica se lavó con hidrogenocarbonato de sodio acuoso saturado, se secó sobre sulfato de sodio, se decantó y se concentró bajo presión reducida obteniéndose éster etílico del ácido 3-fluoro-2-mercapto-benzoico: ^{1}HRMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta: 7,71 (t, 1H), 7,38 (m, H), 7,12 (m, 1H), 4,41 (q, 2H), 1,40 (t, 3H); LCMS (área 100%) Rt = 4,53 min, (pos) [M+H]/z, calculado 201,0, encontrado 200,9.
310
El tioéter anterior se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 33(a), etapa (iii) excepto que se usó éster etílico del ácido 3-fluoro-2-mercapto-benzoico en lugar de tiosalicilato (320 mg, 39%): FTIR (película fina) 2952, 1727, 1607, 1586, 1564, 1469, 1433, 1366, 1292, 1249, 182, 1141, 1074, 836 cm^{-1}; ^{1}HRMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta: 8,62 (m, 1H), 7,90 (d, 1H, J = 8,6 Hz), 7,85 (d, 1H, J = 16,4 Hz), 7,67 (dt, 1H, J = 1,8, 7,7 Hz), 7,57-7,38 (m, 5H), 7,23-7,10 (m, 3H), 5,65 (s, 2H), 4,34 (q, 2H, J = 7,1 Hz), 3,56 (t, 2H, J = 8,2 Hz), 1,30 (t, 3H, J = 7,1 Hz), 0,88 (t, 2H, J = 8,2 Hz), -0,06 (s, 9H); LCMS (área 100%) Rt = 4,44 min, (pos) [M+H]/z, calculado 549,2, encontrado 549,2.
311
El ácido carboxílico anterior se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 33(a), etapa (iv) (303 mg, 99%): FTIR (película fina) 2953, 2496, 1715, 1643, 1607, 1567, 1470, 1434, 1300, 1250, 1221, 1075, 967, 932, 836 cm^{-1}; ^{1}HRMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta: 8,81 (m, 1H), 7,87 (m, 2H), 7,79 (m, 3H), 7,65 (m, 2H), 7,56 (m, 1H), 4,40 (m, 1H), 7,30 (m, 1H), 7,00 (dd, 1H, J = 1,4, 8,5 Hz), 5,58 (s, 2H), 3,59 (t, 2H, J = 8,2 Hz), 0,93 (t, 2H, J = 8,2 Hz), -0,01 (s, 9H). LCMS (área 100%) Rt = 10,47 min, (pos) [M+H]/z, calculado 522,2, encontrado 522,2.
312
La sal anterior se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo 33(g): ^{1}HRMN (300 MHz, DMSO-d_{6}) \delta: 13,2 (s, 1H), 8,68 (m, 1H), 8,12 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 7,98 (d, 1H, J J = 16,4 Hz), 7,88 (dt, 1H, J = 1,8, 7,6 Hz), 7,73 (d, 1H, J = 7,9 Hz), 7,61 (d, 1H, J = 16,4 Hz), 7,43-7,32 (m, 3H), 7,20 (m, 2H), 7,07 (t, 1H), 3,23 (m, 8H), 1,68 (m, 8H), 1,41 (m, 8H), 1,04 (t, 12H).
313
El éster pentafluorofenílico anterior se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 35(a), etapa (i): LCMS (área 100%) Rt = 10,53 min, (pos) [M+H]/z, calculado 558,1, encontrado 558,1.
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Ejemplo de referencia 37(b)
6-[6-fluoro-2-(ciclopropilcarbamoil)fenilsulfanil]-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]-1H-indazol
314
El compuesto del Ejemplo de referencia 37(b) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 37(a) excepto que se usó ciclopropilamina en lugar de etoxiamina: ^{1}HRMN (300 MHz, DMSO-d_{6}) \delta: 8,42 (m, 1H), 8,28 (d, 1H), 7,83 (d, 1H), 7,75 (m, 2H), 7,60 (m, 1H), 7,31 (m, 2H), 7,15 (m, 4H), 6,86 (d, 1H), 2,58 (m, 1H), 0,42 (m, 2H), 0,23 (m, 2H). LCMS (área 100%) Rt = 4,91 min, (pos) [M+H]/z, calculado 431,1, encontrado 431,1, (neg) [M-H]/z, calculado 429,1, encontrado 429,2. Analizado con 0,55 H_{2}O: Calculado, C (65,46), H (4,60), N (12,72), S (7,28). Encontrado: C (65,52), H (4,58), N (12,64), S (7,06).
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Ejemplo de referencia 37(c)
6-[6-fluoro-2-(isopropoxicarbamoil)fenilsulfanil]-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]-1H-indazol
315
El compuesto del Ejemplo de referencia 37(c) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 37(a) excepto que se usó isopropoxiamina en lugar de etoxiamina: ^{1}HRMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta: 9,50 (s ancho, 1H), 8,47 (m, 1H), 7,72 (d, 1H), 7,68 (d, 1H, J = 16,4 Hz), 7,54 (dt, 1H), 7,35 (m, 4H), 7,20 (m, 4H), 4,03 (m, 1H), 1,07 (d, 6H); LCMS (área 100%) Rt = 4,90 min, (pos) [M+H]/z, calculado 449,1, encontrado 449,1. Analizado con 0,1 DMF, 0,3 H_{2}O: Calculado, C (63,28), H (4,87), N (12,45), S (6,95). Encontrado: C (63,22), H (4,84), N (12,37), S (6,91).
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Ejemplo de referencia 37(d)
6-[6-fluoro-2-(metilcarbamoil)fenilsulfanil]-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]-1H-indazol
316
El compuesto del Ejemplo de referencia 37(d) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 37(a) excepto que se usó metilamina en lugar de etoxiamina: ^{1}HRMN (300 MHz, DMSO-d_{6}) \delta: 8,37 (m, 1H), 8,18 (m, 1H), 7,87 (d, 1H), 7,67 (d, 1H, J = 16,4 Hz), 7,59 (dt, 1H), 7,40 (d, 1H), 7,30 (m, 2H), 7,20 (m, 4H), 6,85 (d, 1H), 2,49 (d, 3H); LCMS (área 100%) Rt = 4,63 min, (pos) [M+H]/z, calculado 405,1, encontrado 405,2, (neg) [M+H]/z, calculado 403,1, encontrado 403,1. Analizado con 0,2 DMF, 0,3 CH_{2}Cl_{2} (RMN), 0,3 H_{2}O: Calculado, C (61,13), H (4,39), N (13,07), S (7,13). Encontrado: C (61,08), H (4,35), N (13,14), S (7,22).
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Ejemplo de referencia 38(a)
6-[2-(2-metilquinol-6-ilcarbamoil)fenilsulfanil]-3-E-(2-estiril)-1H-indazol
317
El compuesto del Ejemplo de referencia 38(a) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 33(b) excepto que se omitieron las etapas (i) y (ii): ^{1}HRMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta: 8,58 (s, 1H), 8,13 (s, 1H), 7,80 (m, 3H), 7,67 (t, 1H), 7,43 (m, 2H), 7,34-7,16 (m, 9H), 7,13 (d, 1H), 7,07 (d, 1H), 2,60 (s, 3H). LCMS (área 100%) Rt = 3,87 min, (pos) [M+H]/z, calculado 513,1, encontrado 513,2.
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Ejemplo de referencia 38(b)
6-[2-((4-piperizin-1-il-3-trifluorometilfenil)-carbamoil)fenilsulfanil]-3-E-(2-estiril)-1H-indazol
318
El compuesto del Ejemplo de referencia 38(b) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 38(a) excepto que se usó 3-trifluorometil-4-piperazin-1-il-fenilamina en lugar de 6-amino-2-metilquinolina: ^{1}HRMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta: 8,75 (s, 1H), 7,95 (d, 1H), 7,77 (m, 2H), 7,69 (s, 1H), 7,55 (m, 3H), 7,40-7,25 (m, 9H), 7,20 (d, 1H), 3,00 (m, 4H), 2,83 (m, 4H). LCMS (área 100%) Rt = 3,94 min, (pos) [M+H]/z, calculado 6002, encontrado 600,2. Analizado con 0,1 hex (RMN), 1,4 H_{2}O. Calculado, C (63,71), H (5,12), N (11,06), S (5,06). Encontrado: C (63,67), H (5,06), N (10,98), S (5,00).
\newpage
Ejemplo 39(a)
6-[2-(metilcarbamoil)fenilamino]-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]-1H-indazol
319
Una solución de N-metil-2-[3-((E)-2-piridin-2-il-vinil)-1-(2-trimetil-silanil-etoximetil)-1H-indazol-6-ilamino]-
benzamida (39 mg, 0,07820 mmol) (síntesis descrita a continuación), etilendiamina (21 \muL, 0,3128 mmol) y TBAF 1M en THF (0,63 ml, 0,6256 mmol), se agitó en un baño de aceite a 90ºC durante 2 h. La mezcla de reacción en bruto se diluyó con acetato de etilo (50 mL), se extrajo con solución 1M de hidrogenocarbonato de sodio (2 x 20 ml), salmuera (5 x 20 ml), se secó con sulfato de magnesio, se filtró y se concentró hasta obtener un sólido. El sólido se disolvió en THF, se concentró hasta obtener un aceite y a continuación se trituró con CH_{2}Cl_{2}/Et_{2}O, provocando la precipitación de un polvo. El polvo se recogió por filtración, se lavó con Et_{2}O y se secó a alto vacío. La masa de sólido recogida fue 20 mg (rendimiento 70%). ^{1}HRMN (DMSO-d_{6}) \delta: 12,91 (s ancho, 1H), 9,86 (s, 1H), 8,60 (d, J = 4,0 Hz, 1H), 8,52 (m, 1H), 8,08 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,90 (d, J = 16,4 Hz, 1H), 7,80 (dt, J = 1,7, 7,5 Hz, 1H), 7,65 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 7,51 (d, J = 16,1 Hz, 1H), 7,47-7,34 (m, 2H), 7,25 (m, 2H), 7,00 (d, J = 9,6 Hz, 1H), 6,89 (t, J = 7,0 Hz, 1H), 2,79 (d, J = 4,7 Hz, 3H). Anal. Calc. para C_{22}H_{19}N_{5}O\cdot0,5CH_{2}Cl_{2}: C, 65,61; H, 4,89; N, 17,00. Encontrado: C, 65,52; H, 5,08; N, 16,78.
El material de partida se preparó como sigue:
320
Una solución de 191 mg (0,4 mmol) de 6-yodo-3-carboxaldehído-1-[2-(trimetil-silanil)-etoximetil]-1H-indazol (del Ejemplo 33(a), etapa(ii)), antranilato de metilo (120,1 mg, 0,8 mmol), 2-(diciclohexilfosfino)bifenilo (28 mg,0,08 mmol), Pd_{2}(dba)_{3} (18,4 mg, 0,02 mmol), K_{3}PO_{4} (212,3 mg, 1,0 mmol), disuelta en DME anhidro (1,0 mL), se inundó a vacío con argón (3X), a continuación se agitó bajo atmósfera de argón durante 3 días en un baño de aceite a 80ºC. La mezcla en bruto se filtró a través de un lecho de SiO_{2}, se eluyó con acetato de etilo y a continuación se purificó por cromatografía radial "cromatotrón" eluyendo con CH_{3}CN al 25%/CH_{2}Cl_{2}. La masa de las fracciones puras fue 42 mg. También se recogieron 120 mg más del producto que tenía una pureza de \sim90%. El rendimiento total de N-metil-2-[3-((E)-2-piridin-2-il-vinil)-1-(2-trimetil-silanil-etoximetil)-1H-indazol-6-ilamino]-benzamida fue 162 mg o \sim81%.
Ejemplo 39(b)
6-[2-(prop-2-inilcarbamoil)fenilamino]-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]-1H-indazol
321
El compuesto del Ejemplos 39(b) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo 39(a) excepto que se usó propargilamina en lugar de metilamina. ^{1}HRMN (CDCl_{3}) \delta: 9,50 (s, 1H), 8,64 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 7,98 (d, J = 8,9 Hz, 1H), 7,90 (d, J = 16,4 Hz, 1H), 7,70 (dt, J = 1,7, 7,5 Hz, 1H), 7,57 (d, J = 16,3 Hz, 1H), 7,52-7,43 (m, 3H), 7,34 (dt, J = 1,5, 7,2 Hz, 1H), 7,26 (m, 3H), 7,34 (ddd, J = 1,0, 4,9, 7,5 Hz, 1H), 7,09 (dd, J = 1,7, 9,0 Hz, 1H), 6,85 (dt, J = 1,0, 7,0 Hz, 1H), 6,33 (s ancho, 1H), 4,24 (dd, J = 2,6, 53 Hz, 2H), 2,30 (t, J = 5,5 Hz, 1H). Anal. Calc. para C_{24}H_{19}N_{5}O\cdot0,25CH_{2}Cl_{2}: C, 70,24; H, 4,74; N, 16,89. Encontrado: C, 70,72; H, 4,96; N, 16,55.
Ejemplo de referencia 40(a)
6-(3-amino-benzoil)-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]-1H-indazol
322
El compuesto del Ejemplo de referencia 40(a) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 11. ^{1}HRMN (300 MHz, DMSO-d_{6}) \delta: 13,5 (s, 1H), 8,62 (d, 1H, J = 3,86 Hz), 8,34 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 8,01 (d, 1H, J = 16,36 Hz), 7,87 (s, 1H), 7,83 (td, 1H, J = 7,69 Hz, J = 1,81 Hz), 7,58-7,71 (m, 3H), 7,29 (qd, 1H, J = 739 Hz, J = 0,98 Hz), 7,21 (t, 1H, J = 7,77), 7,00 (t, 1H, J = 1,86 Hz), 6,90 (dt, 1H, J = 6,15 Hz, J = 1,40 Hz), 6,86 (m, 1H), 5,40 (s ancho, 2H). MS (ESI+) [M+H]/z, calculado 446, encontrado 446. Calculado: C, 74,10; H, 4,74; N, 16,46. Encontrado: C, 72,72; H, 4,87; N, 16,02.
El material de partida se preparó como sigue:
323
A ácido m-amino-fenil-borónico (8,22 g, 60 mmol) en dimetilformamida (60 ml) a 23ºC bajo atmósfera de argón se añadió trietilamina (10 ml, 72 mmol) y 4-(dimetilamino)piridina (0,366 g, 3 mmol). La solución resultante se calentó hasta 50ºC. Se añadió éster 2-trimetil-silanil-etílico del éster 4-nitro-fenílico del ácido carbónico (20,4 g, 72 mmol) en 5 porciones de 4 g durante 18 horas. Después de 44 h se añadió éster 2-trimetil-silanil-etílico del éster 4-nitro-fenílico del ácido carbónico (3,4 g, 12 mmol) seguido de trietilamina (1,7 ml, 12 mmol). Después de 63 h la mezcla de reacción se concentró hasta obtener un aceite. La purificación por cromatografía en columna de gel de sílice eluyendo con acetato de etilo-hexano de 3-7 a 7-3 dio éster 2-trimetil-silanil-etílico del ácido (ácido 3-borónico-fenil)-carbámico (8,12 g, 48%): R_{f} sm = 0,067, p = 0,33 (acetato de etilo-hexano 1:1); ^{1}HRMN (300 MHz, CD_{3}OD) \delta: 7,64 (s, 1H), 7,49 (d, 1H, J = 8,94 Hz), 7,26 (m, 2H), 4,23 (t, 2H, J = 8,28 Hz), 1,06 (t, 2H, J = 8,21 Hz) 0,72 (s, 9H). MS (ESI) [M+Na]/z, calculado 304, encontrado 304.
324
Una mezcla de 6-yodo-3-((E)-2-piridin-2-il-vinil)-1-(2-trimetil-silanil-etoximetil)-1H-indazol (7,1 g, 14,8 mmol), éster 2-trimetil-silanil-etílico del ácido (ácido 3-borónico-fenil)-carbámico (8,32 g, 29,6 mmol), diclorobis(trifenilfosfina)-paladio(II) (312 mg, 0,44 mmol), carbonato de potasio (6,13 g, 44,4 mmol) y trietilamina (2,1 ml, 14,8) en anisol (60 ml) se calentó hasta 80ºC bajo atmósfera de monóxido de carbono. Después de 24 h se añadió más trietilamina (2,1 ml, 14,8 mmol). Después de 33 h la finalización de la reacción se determinó por análisis por TLC (acetato de etilo-hexano 7-3). La mezcla de reacción se enfrió hasta 23ºC, a continuación se diluyó con NaHCO_{3} saturado (aq) (40 ml) y acetato de etilo (300 ml). Se separaron las fases y la fase acuosa se extrajo con acetato de etilo (2 x 100 ml). La mezcla de acetato de etilo se lavó con salmuera (100 ml), se secó sobre Na_{2}SO_{4}, se filtró y se concentró. La purificación por cromatografía en columna de gel de sílice dio éster 2-trimetil-silanil-etílico del ácido (3-{1-[3-(2-piridin-2-il-etil)-1-(2-trimetil-silanil-etoximetil)-1H-indazol-6-il]-metanoil}-fenil)-carbámico en forma de un cristal amarillo (7,22 g, 79%). ^{1}HRMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta: 8,65 (d, 1H, J = 3,93 Hz), 8,10 (d, 1H, J = 8,54 Hz), 8,04 (s, 1H), 7,94 (d, 1H, J = 16,33 Hz), 7,82 (s, 1H), 7,66-7,77 (m, 3H), 7,61 (d, 1H, J = 16,35 Hz), 7,40-7,51 (m, 3H), 7,19 (m, 1H), 7,00 (s, 1H), 5,77 (s, 2H), 4,25 (t, 2H, J = 6,93 Hz), 3,60 (t, 2H, J = 8,10 Hz), 1,04 (t, 2H, J = 6,79 Hz), 1,00 (t, 2H, J = 8,13 Hz), 0,04 (s, 9H), 0,0 (s, 9H). MS (ESI+) [M+H]/z, calculado 615, encontrado 615.
\newpage
Ejemplo de referencia 40(b)
6-(3-amino-4-metil-benzoil)-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]-1H-indazol
325
El compuesto del Ejemplo de referencia 40(b) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 40(a) excepto que, en la etapa (i), se usó ácido 4-metil-3-amino-fenil-borónico, preparado como se describe a continuación, en lugar de ácido m-amino-fenil-borónico. ^{1}HRMN (DMSO-d_{6}) \delta: 13,6 (s, 1H), 8,62 (d, 1H, J = 3,81 Hz), 8,33 (d, 1H, J = 8,47 Hz), 8,01 (d, 1H, J = 16,36 Hz), 7,85 (s, 1H), 7,82 (dd, 1H, J = 7,60 Hz, J = 1,80 Hz), 7,70 (d, 1H, J = 7,81 Hz), 7,63 (d, 1H, J = 16,36 Hz), 7,57 (dd, 1H, J = 8,47 Hz, J = 1,2 Hz), 7,29 (m, 1H), 7,12 (d, 1H, J = 7,82 Hz), 7,09 (d, 1H, J = 1,64 Hz), 6,90 (dd, 1H, J = 7,59 Hz, J = 1,65 Hz), 5,16 (s ancho, 1H), 2,16 (s, 1H). MS (ESI+) [M+H]/z, calculado 355. Anal. Calculado: C, 74,56; H, 5,12; N, 15,81. Encontrado: C, 73,86; H, 5,25; N, 15,34.
El material de partida se preparó como sigue:
326
Una mezcla de ácido 4-metil-3-nitro-fenil-borónico (3,34 g, 18,45 mmol) y Pd al 10%/C (334 mg) en MeOH (30 ml) se hidrogenó (1 atm) a 23ºC. Después de 22 h la mezcla de reacción se filtró a través de Celite y se concentró obteniéndose ácido 3-amino-4-metilfenil-borónico (2,53 g, 91%). ^{1}HRMN (300 MHz, DMSO-d_{6}) \delta: 7,21 (s, 1H), 7,08 (d, 1H, J = 7,5 Hz), 6,92 (d, 1H, J = 7,46 Hz), 4,81 (s ancho, 2H), 2,09 (s, 3H). MS (ESI) [M+H]/z, calculado 152, encontrado 152.
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Ejemplo de referencia 40(c)
6-(5-amino-2,4-dimetil-benzoil)-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]-1H-indazol
327
El compuesto del Ejemplo de referencia 40(c) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 40(a) excepto que, en la etapa (i), se usó ácido 2,4-dimetil-3-aminofenil-borónico (preparado como se describe a continuación) en lugar de ácido m-amino-fenil-borónico: ^{1}HRMN (DMSO-d_{6}) \delta: 8,62 (d, 1H, J = 3,78 Hz), 8,32 (d, 1H, J = 8,48 Hz), 7,99 (d, 1H, J = 16,35 Hz), 7,83 (td, 1H, J = 7,68 Hz, J = 1,8 Hz), 7,80 (s, 1H), 7,69 (d, 1H, J = 7,80 Hz), 7,64 (dd, 1H, J = 8,47 Hz, J = 1,27 Hz), 7,62 (d, 1H, J = 16,36 Hz), 7,29 (m, 1H), 6,94 (s, 1H), 6,64 (s, 1H), 4,87 (s ancho, 2H), 2,12 (s, 3H), 2,10 (s, 3H). LCMS (ESI+) [M+H]/z, calculado 369, encontrado 369. Anal. Caculado: C, 74,98; H, 5,47; N, 15,21. Encontrado: C, 73,85; H, 5,56: N, 14,49.
El material de partida se preparó como sigue:
328
El ácido 2,4-dimetilfenil-borónico se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 24(a), etapa (vii), excepto que se usó 2,4-dimetilbromo-benceno como material de partida. ^{1}HRMN (CD_{3}OD) \delta: 7,13 (d, 1H, J = 7,43 Hz), 7,00 (s, 1H), 6,97 (d, 1H, J = 7,49 Hz), 2,28 (s, 3H), 2,28 (s, 3H). LCMS (ESI+) [M+H]/z, calculado 151, encontrado 151.
1329
329
A ácido nítrico fumante (1 ml) enfriado hasta -40ºC se añadió TFA (1 ml). La mezcla resultante se dejó calentar ligeramente hasta -35ºC y se añadió en una porción ácido 2,4-dimetilfenil-borónico (150 mg, 1 mmol). Después de 1 h, se añadió hielo y se filtró la mezcla heterogénea. El sólido resultante se puso en suspensión en Et_{2}O y se extrajo con NaOH 3N (aq) (1 ml) y a continuación agua (2 ml). La fase acuosa se acidificó con HCl 3N (aq) (1 ml) y se volvió a extraer con EtOAc (3 x 5 ml). La mezcla de materiales orgánicos se lavó con salmuera, se secó con Na_{2}SO_{4}, se decantó y se concentró obteniéndose ácido 2,4-dimetil-5-nitro-fenil-borónico (93 mg, 47%). LCMS (ESI+) [M+H]/z, calculado 196, encontrado 196.
330
El ácido 3-amino-4,6-dimetilfenil-borónico se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo 40(b), etapa (i). ^{1}H RMN (CD_{3}OD) \delta: 6,83 (s, 2H), 6,64 (s, 1H), 2,17 (s, 3H), 2,13 (s, 3H).
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Ejemplo de referencia 41(a)
6-[3-((1-etil-3-metil-1H-pirazol-5-il)carboxamido)-benzoil]-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]-1H-indazol
331
A una solución de ácido 2-etil-5-metil-2H-pirazol-3-carboxílico (323 mg, 2,1 mmol, 2,1 equivalentes) en DMF (5 ml) a 23ºC bajo argón se añadió diisopropiletilamina (365 \mul, 2,1 mmol, 2,1 equivalentes), HATU (798 mg, 2,1 mmol, 2,1 equivalentes) y DMAP (cat.). A la solución resultante se añadió 6-(3-amino-benzoil)-3-E-(2-piridin-2-il)etenil)-1H-indazol (Ejemplo de referencia 40(a), 340 mg, 1 mmol, 1 equivalente). La reacción se siguió por HPLC hasta que se había consumido toda la anilina de partida \sim2 h (esto dio una mezcla de compuestos mono- y bis-acilados). La reacción se detuvo bruscamente añadiendo a la mezcla NaHCO_{3} saturado, a continuación se diluyó con agua y se extrajo con acetato de etilo. La mezcla de EtOAc se lavó con agua, con salmuera, se secó con Na_{2}SO_{4}, se filtró y se concentró hasta obtener un aceite. El aceite se disolvió en metanol (10 ml), se añadió K_{2}CO_{3} (290 mg, 2,1 mmol, 2,1 equivalentes) y la mezcla resultante se agitó a 23ºC hasta que se consumió el compuesto bis-acilado (\sim30 min.). La mezcla de reacción se concentró hasta obtener un aceite que se repartió a continuación entre agua y EtOAc. La fase orgánica se lavó con salmuera, se secó con Na_{2}SO_{4}, se filtró y se concentró.
La purificación por cromatografía en columna de gel de sílice (acetato de etilo-diclorometano 1:1-8:2) dio el compuesto del Ejemplo 41(a). ^{1}H RMN (300 MHz, DMSO-d_{6}) \delta: 13,6 (s, 1H), 10,3 (s, 1H), 8,62 (d, 1H, J = 3,88 Hz), 8,38 (d, 1H, J = 8,51 Hz), 8,20 (s, 1H), 8,12 (td, 1H, J = 7,58 Hz, J = 1,78 Hz), 8,02 (d, 1H, J = 16,36 Hz), 7,93 (s, 1H), 7,83 (td, 1H, J = 7,61 Hz, J = 1,7 Hz), 7,70 (d, 1H, J = 7,78 Hz), 7,65 (d, 1H, J = 16,23 Hz), 7,65-7,53 (m, 3H), 7,30 (m, 1H), 4,43 (q, 2H, J = 7,07 Hz), 2,21 (s, 3H), 1,31 (t, 3H, J = 7,07 Hz). MS (ESI+) [M+H]/z, calculado 477, encontrado 477. Anal. Calculado: C, 70,57; H, 5,08; N, 7,64. Encontrado: C, 70,46; H, 5,11; N, 17,61.
Ejemplo 41 de referencia (b)
6-[3-(piridin-4-ilcarboxamido)benzoil]-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]-1H-indazol 
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332 
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El compuesto del Ejemplo de referencia 41(b) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 41(a), excepto que se usó ácido isonicotínico en lugar de ácido 2-etil-5-metil-2H-pirazol-3-carboxílico. ^{1}HRMN (300 MHz, CD_{3}OD) \delta: 8,74 (d, 2H, J = 6,04 Hz), 8,56 (d, 1H, J = 4,14 Hz), 8,27 (m, 2H), 8,05 (dt, 1H, J = 7,97 Hz, J = 1,64 Hz), 8,02 (s, 1H), 7,95 (d, 1H, J = 16,55 Hz), 7,83-7,91 (m, 3H), 7,73 (m, 2H), 7,56-7,67 (m, 3H), 7,32 (m, 1H). MS (ESI+) [M+H]/z, calculado 446, encontrado 446. Anal. Calculado: C, 72,80; H, 4,30; N, 15,72. Encontrado: C, 71,59; H, 4,43; N, 15,33.
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Ejemplo de referencia 41(c)
6-(3-crotonilamidobenzoil)-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]-1H-indazol 
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333 
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El compuesto del Ejemplo de referencia 41(c) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 41(a), excepto que se usó ácido crotónico en lugar de ácido 2-etil-5-metil-2H-pirazol-3-carboxílico. ^{1}HRMN (300 MHz, DMSO-d_{6}) \delta: 13,6 (s, 1H), 10,2 (s, 1H), 8,63 (d, 1H, J = 3,81 Hz), 8,37 (d, 1H, J = 8,49 Hz), 8,12 (s, 1H), 8,02 (d, 1H, J = 16,34 Hz), 7,99 (d, 1H, J = 7,88 Hz), 7,83 (td, 1H, J = 7,67 Hz, J = 1,78 Hz), 7,70 (d, 1H, J = 7,85 Hz), 7,65 (d, 1H, J = 16,40 Hz), 7,63 (dd, 1H, J = 8,43 Hz, J = 1,23 Hz), 7,47-7,56 (m, 2H), 7,29 (qd, 1H, J = 7,39 Hz, J = 0,99 Hz), 6,82 (m, 1H, J = 6,9 Hz), 6,11 (dd, J = 15,21 Hz, J = 1,68 Hz), 1,87 (d, 3H, J = 6,89 Hz). MS (ESI+) [M+H]/z, calculado 409, encontrado 409. Anal. Calculado: C, 73,51; H, 4,94; N, 13,72. Encontrado: C, 72,15; H, 4,97; N, 13,39.
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Ejemplo de referencia 41(d)
6-[3-(indol-4-ilcarboxamido)benzoil]-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]-1H-indazol 
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334 
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El compuesto del Ejemplo de referencia 41(d) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 41(a), excepto que se usó ácido 1H-indol-4-carboxílico en lugar de ácido 2-etil-5-metil-2H-pirazol-3-carboxílico. LCMS (ESI+) [M+H]/z, calculado 484, encontrado 484.
\newpage
Ejemplo de referencia 41(e)
6-[3-((5-acetiltien-2-il)carboxamido)benzoil)-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]-1H-indazol
335 
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El compuesto del Ejemplo de referencia 41(e) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 41(a), excepto que se usó ácido 5-acetiltiofen-2-carboxílico en lugar de ácido 2-etil-5-metil-2H-pirazol-3-carboxílico. ^{1}HRMN (300 MHz, DMSO-d_{6}) \delta: 13,6 (s, 1H), 10,6 (s, 1H), 8,63 (d, 1H, J = 3,83 Hz), 8,39 (d, 1H, J = 8,51 Hz), 8,20 (s, 1H), 8,14 (dt, 1H, J = 7,25 Hz, J = 2,05 Hz). 8,07 (d, 1H, J = 4,09 Hz), 8,02 (d, 1H, J = 16,42 Hz), 8,00 (d, 1H, J = 4,01 Hz), 7,94 (s, 1H), 7,83 (td, 1H, J = 7,69 Hz, J = 1,78 Hz), 7,59-7,65 (m, 5H). 7,30 (qd, 1H, J = 7,40 Hz, J = 0,96 Hz), 2,58 (s, 3H). MS (ESI+) [M+H]/z, calculado 493, encontrado 493. Anal. Calculado: C, 68,28; H. 4,09; N, 11,37; S, 6,51. Encontrado: C, 66,07; H, 4,34; N, 10,91; S, 6,14.
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Ejemplo de referencia 41(f)
6-[3-(3,5-difluorofenilacetamido)benzoil]-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]-1H-indazol
336 
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El compuesto del Ejemplo de referencia 41(f) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 41(a) excepto que se usó ácido (3,5-difluoro-fenil)-acético en lugar de ácido 2-etil-5-metil-2H-pirazol-3-carboxílico. ^{1}HRMN (300 MHz, DMSO-d_{6}) \delta: 13,6 (s ancho, 1H), 10,5 (s, 1H). 8,62 (d, 1H, J = 4,02 Hz), 8,36 (d, 1H, J = 8,51 Hz), 8,05 (s, 1H), 8,01 (d, 1H, J = 16,38 Hz), 7,93 (d, 1H, J = 7,88 Hz), 7,90 (s, 1H), 7,83 (td, 1H, J = 7,61 Hz, J = 1,77 Hz), 7,70 (d, 1H, J = 7,85 Hz), 7,64 (d, 1H, J = 16,33 Hz), 7,61 (dd, 1H, J = 8,45 Hz, J = 1,15 Hz), 7,48-7,57 (m, 2H), 7,15-7,31 (m, 5H), 3,77 (s, 2H). MS (ESI+) [M+H]/z, calculado 495, encontrado 495.
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Ejemplo de referencia 41(g)
6-[3-((5-metil-1H-pirazol-3-il)carboxamido)benzoil]-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]-1H-indazol
337 
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El compuesto del Ejemplo de referencia 41 (g) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 41 (a) excepto que se usó ácido 5-metil-2H-pirazol-3-carboxílico en lugar de ácido 2-etil-5-metil-2H-pirazol-3-carboxílico. ^{1}HRMN (300 MHz, DMSO-d_{6}) \delta: 13,6 (s ancho, 1H), 13,0 (s ancho, 1H), 10,3 (s ancho, 1H), 8,63 (d, 1H, J = 3,95 Hz), 8,37 (d, 1H, J = 8,66 Hz), 8,36 (s, 1H), 8,16 (d, 1H, J = 7,55 Hz), 8,02 (d, 1H, J = 16,37 Hz), 7,93 (s, 1H), 7,83 (dt, 1H, J = 7,61 Hz, J = 1,73 Hz), 7,70 (d, 1H, J = 7,82 Hz), 7,65 (d, 1H, J = 16,36 Hz), 7,65 (dd, 1H, J = 8,55 Hz, J = 1,12 Hz), 7,52 (m, 2H), 7,29 (m, 1H), 6,50 (s, 1H), 2,29 (s, 3H). MS (ESI+) [M+H]/z, calculado 449, encontrado 449. Anal. Calculado: C, 69,63; H, 4,49; N, 18,74. Encontrado: C, 68,53; H, 4,95; N, 17,47.
\newpage
Ejemplo de referencia 41(h)
6-[3-((2-RS-trans-metilciclopropil)carboxamido)-benzoil]-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]-1H-indazol
338 
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El compuesto del Ejemplo de referencia 41 (h) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 41 (a) excepto que se usó ácido 2-metilciclopropanocarboxílico en lugar de ácido 2-etil-5-metil-2H-pirazol-3-carboxílico. R_{f} sm = 0,32, R_{f} p = 0,42 (acetato de etilo-diclorometano 8:2). ^{1}HRMN (300 MHz, DMSO-d_{6}) \delta: 13,6 (s, 1H), 10,4 (s, 1H), 8,62 (dd, 1H, J = 4,75 Hz, J = 0,96 Hz), 8,36 (d, 1H, J = 8,47 Hz), 8,06 (t, 1H, J = 1,67 Hz), 8,01 (d, 1H, J = 16,37 Hz), 7,90 (m, 2H), 7,83 (td, 1H, J = 7,68 Hz, J = 1,79 Hz), 7,70 (d, 1H, J = 7,84 Hz), 7,64 (d, 1H, J = 16,35 Hz), 7,61 (dd, 1H, J = 8,47 Hz, J = 1,32 Hz), 7,51 (t, 1H, J = 7,69 Hz), 7,45 (dt, 1H, J = 7,68 Hz, J = 1,50 Hz), 7,29 (dq, 1H, J = 7,41 Hz, J = 1,04 Hz), 1,51 (m, 1H), 1,23 (m, 1H), 1,09 (d, 3H, J = 5,93). 1,01 (m, 1H), 0,65 (m, 1H). MS (ESI+) [M+H]/z, calculado 423, encontrado 423. Anal. Calculado: C, 73,92; H, 5,25; N, 13,26. Encontrado: C, 71,41; H, 5,56; N. 13,27.
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Ejemplo de referencia 41(i)
6-[3-((1,5-dimetil-1H-pirazol-3-il)carboxamido)-benzoil]-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]-1H-indazol
339 
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El compuesto del Ejemplo de referencia 41 (i) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 41(a) excepto que se usó ácido 1,5-dimetil-1H-pirazol-3-carboxílico en lugar de ácido 2-etil-5-metil-2H-pirazol-3-carboxílico. ^{1}HRMN (300 MHz, DMSO-d_{6}) \delta: 13,6 (s, 1H), 10,2 (s, 1H), 8,63 (d, 1H, J = 3,87 Hz), 8,37 (d, 1H, J = 8,49 Hz), 8,34 (d, 1H, J = 1,63 Hz), 8,16 (td, 1H, J = 7,43 Hz, J = 1,96 Hz), 8,02 (d, 1H, J = 16,35 Hz), 7,92 (s, 1H), 7,83 (dt, 1H, J = 7,68 Hz, J = 1,79 Hz), 7,70 (d, 1H, J = 7,84 Hz), 7,65 (d, 1H, J = 16,35 Hz), 7,65 (dd, 1H, J = 8,52 Hz, J = 1,2 Hz), 7,52 (m, 2H), 7,29 (m, 1H), 6,55 (s, 1H), 3,83 (s, 3H), 2,30 (s, 3H). MS (ESI+) [M+H]/z, calculado 463, encontrado 463. Anal. Calculado: C, 70,12; H, 4,79; N, 18,17. Encontrado: C, 69,59; H, 4,88; N, 17,86.
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Ejemplo de referencia 41(j)
6-[3-((3-metilpiridin-4-il)carboxamido)benzoil]-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]-1H-indazol
340 
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El compuesto del Ejemplo de referencia 41(j) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 41(a) excepto que se usó ácido 3-metilisonicotínico en lugar de ácido 2-etil-5-metil-2H-pirazol-3-carboxílico. ^{1}HRMN (300 MHz, DMSO-d_{6}) \delta: 13,6 (s, 1H), 10,7 (s, 1H), 8,62 (dd, 1H, J = 4,72 Hz, J = 0,86 Hz), 8,57 (s, 1H), 8,55 (d, 1H, J = 4,91 Hz), 8,37 (d, 1H, J = 8,46 Hz), 8,20 (s, 1H), 8,07 (dt, 1H, J = 7,27 Hz, J = 1,99 Hz), 8,02 (d, 1H, J = 16,37 Hz), 7,93 (s, 1H), 7,83 (td, 1H, J = 7,69 Hz, J = 1,79 Hz), 7,70 (d, 1H, J = 7,84 Hz), 7,64 (d, 1H, J = 16,27 Hz), 7,55-7,65 (m, 3H), 7,48 (d, 1H, J = 4,89 Hz), 7,30 (qd, 1H, J = 7,39 Hz, J = 1,02 Hz), 2,38 (s, 3H). MS (ESI+) [M+H]/z, calculado 460, encontrado 460.
\newpage
Ejemplo de referencia 41(k)
6-[3-(ciclopropilcarboxamido)benzoil]-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]-1H-indazol
341
El compuesto del Ejemplo de referencia 41(k) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 41(a) excepto que se usó ácido ciclopropanocarboxílico en lugar de ácido 2-etil-5-metil-2H-pirazol-3-carboxílico. ^{1}HRMN (CDCl_{3}/MeOD) \delta: 8,52 (d, 1H, J = 3,9 Hz), 8,09 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 7,93 (s, 1H), 7,85-7,80 (m, 3H), 7,71-7,63 (m, 2H), 7,55-7,48 (m, 3H), 7,39 (1H, t, J = 7,8 Hz), 7,16 (1H, qd, J = 6,3, 1,5 Hz), 1,62-1,57 (m, 1H), 1,25-1,84 (m, 2H), 0,87-0,81 (m, 2H). HRMS (MALDI) C_{25}H_{20}N_{4}O_{2} [M+H^{+}]/z, calculado 409,1659, encontrado 409,1660.
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Ejemplo de referencia 41(l)
6-[3-((2-RS-trans-fenilciclopropil)carboxamido)-benzoil]-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]-1H-indazol
342
El compuesto del Ejemplo de referencia 41(l) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 41(a) excepto que se usó ácido (1S,2S)-2-fenil-ciclopropanocarboxílico en lugar de ácido 2-etil-5-metil-2H-pirazol-3-carboxílico. ^{1}HRMN (CDCl_{3}/MeOD) \delta: 8,60 (d, 1H, J = 4,2 Hz), 8,17 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 8,02 (s, 1H), 7,91 (t, 3H, J = 8,1 Hz), 7,78-7,71 (m, 2H), 7,63-7,56 (m, 3H), 7,47 (t, 1H), 7,32-7,12 (m, 5H), 2,60-2,54 (m, 1H), 1,94-1,90 (m, 1H), 1,69 (q, 1H, J = 4,8 Hz), 1,37-1,32 (m, 1H). HRMS C_{31}H_{24}N_{4}O_{2}. Calculado [M+H^{+}]/z 485,1993, encontrado 485,1995.
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Ejemplo de referencia 41(m)
6-[3-((3-metilisoxazol-5-il)carboxamido)benzoil]-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]-1H-indazol
343
El compuesto del Ejemplo de referencia 41(m) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 41(a) excepto que se usó ácido 3-metil-isoxazol-5-carboxílico en lugar de ácido 2-etil-5-metil-2H-pirazol-3-carboxílico. ^{1}HRMN (DMSO-d_{6}) \delta: 10,95 (1H, s), 8,68 (1H, d, J = 4,2 Hz), 8,44 (d, 1H, J = 8,7 Hz), 8,35 (s, 1H), 8,21-8,18 (m, 1H,), 8,08 (d, 1H, J = 16,2 Hz), 7,98 (s, 1H), 7,87 (td, 1H, J = 7,5, 1,8 Hz), 7,76-7,64 (m, 6H), 7,37-7,33 (m, 1H), 6,72 (s, 1H) 3,36 (s, 3H). HRMS (MALDI) C_{26}H_{19}N_{5}O_{3} [M+H^{+}]/z: Calculado 450,1561, encontrado 450,1570.
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Ejemplo de referencia 41(n)
6-[3-((3-t-butil-1-metil-1H-pirazol-5-il)carboxamido)benzoil]-3-E-[2-piridin-2-il)etenil]-1H-indazol
344
El compuesto del Ejemplo de referencia 41(n) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 41(a) excepto que se usó ácido 5-terc.butil-2-metil-2H-pirazol-3-carboxílico en lugar de ácido 2-etil-5-metil-2H-pirazol-3-carboxílico. ^{1}H RMN (CDCl_{3}/MeOD) \delta: 8,59 (d, 1H, J = 4,8 Hz), 8,14 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 8,08-8,04 (m, 1H,), 7,98-7,92 (m, 3H), 7,75 (td, 1H, J = 7,8, 1,8 Hz), 7,68 (dd, 1H, J = 8,4 Hz), 7,61-7,56 (m, 3H), 7,52 (t, 1H, J = 8,70 Hz), 7,25-7,21 (m, 1H,), 6,75 (s, 1H,), 4,12 (s, 3H), 1,30 (s, 9H). HRMS (MALDI) C_{30}H_{28}N_{6}O_{2} [M+H^{+}]/z: Calculado 505,2347, encontrado 505,2353.
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Ejemplo de referencia 41(o)
6-[3-((5-clorotien-2-il)carboxamido)benzoil]-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]-1H-indazol
345
El compuesto del Ejemplo de referencia 41(o) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 41(a) excepto que se usó ácido 5-cloro-tiofen-2-carboxílico en lugar de ácido 2-etil-5-metil-2H-pirazol-3-carboxílico. ^{1}HRMN (DMSO-d_{6}) \delta: 10,58 (s, 1H,), 8,68 (d, 1H, J = 4,2 Hz), 8,43 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 8,22 (s, 1H,), 8,15 (dt, 1H, J = 7,5, 2,0 Hz), 8,08 (d, 1H, J = 16,4 Hz), 8,00-7,98 (m, 3H), 7,88 (td, 1H, J = 7,7, 1,9 Hz), 7,78-7,62 (m, 4H,), 7,33 (d, 2H, J = 4,1 Hz). HRMS (MALDI) C_{26}H_{17}N_{4}O_{2}ClS [M+H^{+}] /z: Calculado 485,0843, encontrado 485,0853.
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Ejemplo de referencia 41(p)
6-[3-((1,3-dimetil-1H-pirazol-5-il)carboxamido)-benzoil]-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]-1H-indazol
346
El compuesto del Ejemplo de referencia 41(p) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 41(a) excepto que se usó ácido 2,5-dimetil-2H-pirazol-3-carboxílico en lugar de ácido 2-etil-5-metil-2H-pirazol-3-carboxílico. HPLC: R_{t} = 3,90 min (área 100%). ^{1}H RMN (CDCl_{3}) \delta: 8,52 (d, 1H, J = 4,8 Hz), 8,10 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 7,98 (d, 1H, J = 8,1 Hz), 7,93 (s, 1H,), 7,88-7,80 (m, 3H), 7,71-7,62 (m, 2H), 7,56-7,49 (m, 4H), 7,44 (t, 1H, J = 7,8 Hz), 7,16 (dd, 1H, J = 7,1, 4,8 Hz). HRMS (MALDI) C_{27}H_{22}N_{6}O_{2}, [M+H^{+}]/z: Calculado 463,1877, encontrado 465,1889.
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Ejemplo de referencia 41(q)
6-[3-((2-cloro-6-metilpiridin-4-il)carboxamido)-benzoil]-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]-1H-indazol
347
El compuesto del Ejemplo de referencia 41(q) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 41(a) excepto que se usó ácido 2-cloro-6-metil-isonicotínico en lugar de ácido 2-etil-5-metil-2H-pirazol-3-carboxílico. HPLC: R_{f} = 4,11 min. (área 100%). ^{1}HRMN (DMSO-d_{6}) \delta: 10,77 (s, 1H), 8,68 (d, 1H, J = 3,9 Hz), 8,44 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 8,28 (s, 1H), 8,21 (dt, 1H, J = 6,9, 2,1 Hz), 8,08 (d, 1H, J = 16,2 Hz), 7,98 (s, 1H), 7,92-7,64 (m, 9H), 7,35 (dd, 1H, J = 6,6, 4,8 Hz), 2,61 (s, 3H).
\newpage
Ejemplo de referencia 41(r)
6-[3-((1-n-propil-3-metil-1H-pirazol-5-il)carboxamido)benzoil]-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]-1H-indazol
348
El compuesto del Ejemplo de referencia 41(r) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 41(a) excepto que se usó ácido 5-metil-2-propil-2H-pirazol-3-carboxílico en lugar de ácido 2-etil-5-metil-2H-pirazol-3-carboxílico. ^{1}H RMN (DMSO-d_{6}) \delta: 10,29 (s, 1H), 8,58 (d, 1H, J = 3,9 Hz), 8,33 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 8,13 (s, 1H), 8,10 (dt, 1H, J = 5,4, 2,1 Hz), 7,96 (d, 1H, J = 16,5 Hz), 7,87 (s, 1H), 7,78 (td, 1H, J = 7,5, 1,5 Hz), 7,61-7,49 (m, 6H), 7,24 (dd, 1H, J = 6,9, 1,8 Hz), 4,32 (t, 2H, J = 6,90 Hz), 1,69 (q, 2H, J = 7,2 Hz), 0,77 (t, 3H, 7,5 Hz). HRMS (MALDI) C_{28}H_{20}ClN_{5}O_{2}, [M+H^{+}]/z: Calculado 491,2190, encontrado 491,2203.
Ejemplo de referencia 41(s)
6-[3-(4-t-butilbenzamido)benzoil]-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]-1H-indazol
349
El compuesto del Ejemplo de referencia 41(s) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 41(a) excepto que se usó ácido 4-terc.butil-benzoico en lugar de ácido 2-etil-5-metil-2H-pirazol-3-carboxílico. HPLC: R_{t} = 4,67 min. (área 100%). ^{1}HRMN (DMSO) \delta: 10,45 (s, 1H), 8,44 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 8,32 (s, 1H), 8,22 (d, 1H, J = 7,5 Hz), 8,07 (d, 1H, J = 16,5 Hz), 7,99-7,95 (m, 3H), 7,88 (td, 1H, J = 7,7, 1,5 Hz), 7,69-7,59 (m, 7H), 7,38 (dd, 1H, 13,5, 5,1 Hz), 1,36 (s, 9H).
Ejemplo de referencia 41(t)
6-[3-((1-alil-3-metil-1H-pirazol-5-il)carboxamido)benzoil]-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]-1H-indazol
350
El compuesto del Ejemplo de referencia 41(t) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 41(a) excepto que se usó ácido 2-alil-5-metil-2H-pirazol-3-carboxílico en lugar de ácido 2-etil-5-metil-2H-pirazol-3-carboxílico. HPLC: R_{t} = 4,11 min (área 100%). ^{1}H RMN (DMSO) \delta: 10,46 (s, 1H), 8,74 (t, 1H, J = 5,1 Hz), 8,48 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 8,28 (s, 1H), 8,22 (t, 1H, J = 5,4, 2,1 Hz), 8,15-8,01 (m, 3H), 7,39 (td, 1H, J = 7,8, 1,8 Hz), 7,82-7,63 (m, 6H) 7,39 (td, 1H, J = 7,7, 1,5 Hz), 6,14-6,02 (m, 1H), 5,22-5,03 (m, 4H), 2,38 (s, 3H). HRMS (MALDI) C_{29}H_{24}N_{6}O_{2} [M+H^{+}]/z, calculado 489,2034, encontrado 489,2035.
Ejemplo de referencia 41(u)
6-[3-((2-cloro-6-metoxipiridin-4-il)carboxamido)-benzoil]-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]-1H-indazol
351
El compuesto del Ejemplo de referencia 41(u) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 41(a) excepto que se usó ácido 2-cloro-6-metoxi-isonicotínico en lugar de ácido 2-etil-5-metil-2H-pirazol-3-carboxílico. HPLC R_{t} = 4,37 min. (área 100%). ^{1}HRMN (DMSO-d_{6}) \delta: 10,74 (s, 1H), 8,68 (d, 1H, J = 3,6 Hz), 8,44 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 8,28 (s, 1H), 8,20 (td, 1H, J = 6,6, 2,4 Hz), 8,07 (d, 1H, J = 16,2 Hz), 7,98 (s, 1H), 7,89 (td, 1H, J = 7,7, 1,8 Hz), 7,77-7,62 (m, 6H), 7,38 (s, 1H), 7,35 (dd, 1H, J = 6,9, 1,8 Hz), 3,98 (s, 3H).
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Ejemplo de referencia 41(v)
6-[3-((3-etil-1-metil-1H-pirazol-5-il)carboxamido)-benzoil]-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]-1H-indazol
352
El compuesto del Ejemplo de referencia 41(v) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 41(a) excepto que se usó ácido 5-etil-2-metil-2H-pirazol-3-carboxílico en lugar de ácido 2-etil-5-metil-2H-pirazol-3-carboxílico. R_{t} = 4,16 min (área 100%). ^{1}HRMN (DMSO-d_{6}) \delta: 10,44 (s, 1H), 8,73 (d, 1H, J = 3,0 Hz), 8,78 (d, 1H, 8,7 Hz), 8,30 (s, 1H), 8,23 (d, 1H, J = 6,9 Hz), 8,14-8,03 (m, 2H), 7,93 (t, 1H, 6,9 Hz), 7,82-7,63 (m, 6H), 7,40 (t, 1H, J = 6,3 Hz), 7,01 (s, 1H), 4,12 (s, 1H), 2,68 (q, 2H, 7,8 Hz), 1,30 (t, 3H, J = 7,5 Hz). HRMS (MALDI) C_{28}H_{24}N_{6}O_{2} [M+H^{+}]/z, calculado 477,2034, encontrado 477,2054.
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Ejemplo de referencia 41(w)
6-[3-((2-cloropiridin-4-il)carboxamido)benzoil]-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]-1H-indazol
353
El compuesto del Ejemplo de referencia 41(w) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 41(a) excepto que se usó ácido 2-cloro-isonicotínico en lugar de ácido 2-etil-5-metil-2H-pirazol-3-carboxílico. HPLC R_{t} = 3,99 min (área 100%). ^{1}HRMN (DMSO-d_{6}) \delta: 10,88 (s, 1H), 7,33 (d, 2H, J = 4,8 Hz), 8,49 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 8,33 (s, 1H), 8,26 (td, 1H, J = 6,9, 3,0 Hz), 8,12-7,91 (m, 5H), 7,82-7,63 (m, 5H), 7,40 (t, 1H, J = 4,8 Hz).
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo de referencia 41(x)
6-[3-((1-isopropil-3-metil-1H-pirazol-5-il)carboxamido)benzoil]-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]-1H-indazol
354
El compuesto del Ejemplo de referencia 41(x) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 41(a) excepto que se usó ácido 2-isopropil-5-metil-2H-pirazol-3-carboxílico en lugar de ácido 2-etil-5-metil-2H-pirazol-3-carboxílico. HPLC: R_{t} = 4,19 min (área 100%). ^{1}H RMN (DMSO) \delta: 10,46 (s, 1H), 8,72 (t, 1H, J = 4,80 Hz), 8,48 (d, 1H, J = 9,0 Hz), 8,31 (s. 1H), 8,21 (td, 1H, J = 9,6, 2,1 Hz), 8,15-7,98 (m, 2H), 7,96-7,84 (m, 1H), 7,82-7,65 (m, 5H), 7,42-7,38 (m, 1H), 6,88 (s, 1H), 5,64-5,38 (m, 1H), 2,32 (s, 3H), 1,48 (d, 1H, J = 6,6 Hz). HRMS (MALDI) C_{29}H_{26}N_{6}O_{2} [M+H^{+}]/z, calculado 491,2190, encontrado 491,2194.
\newpage
Ejemplo de referencia 41(y)
6-[3-(isopropoxicarbonilamino)benzoil]-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]-1H-indazol
355
El compuesto del Ejemplo de referencia 41(y) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 41 (a) excepto que se usó cloroformiato de isopropilo en lugar de ácido 2-etil-5-metil-2H-pirazol-3-carboxílico. ^{1}H RMN (DMSO-d_{6}) \delta: 9,97 (s, 1H), 8,72 (t, 2H, J = 4,8 Hz), 8,47 (d, 1H, J = 8,7 Hz), 8,34-7,96 (m, 3H), 8,01-7,87 (m, 2H), 7,82-7,69 (m, 2H), 7,52 (dt, 1H, J = 7,5, 1,2 Hz), 7,42-7,36 (m, 2H), 3,68 (d, 2H, J = 6,6 Hz), 2,02 (m, 1H), 1,02 (d, 6H, J = 6,6 Hz). HRMS (MALDI) C_{26}H_{24}N_{4}O_{3} [M+H^{+}]/z, calculado 441,1921, encontrado 441,1937
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Ejemplo de referencia 41(z)
6-[3-((4-cloropiridin-2-il)carboxamido)benzoil]-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]-1H-indazol
356
El compuesto del Ejemplo de referencia 41(z) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 41(a) excepto que se usó ácido 4-cloro-piridina-2-carboxílico en lugar de ácido 2-etil-5-metil-2H-pirazol-3-carboxílico. HPLC R_{t} = 4,40 min (área 100%). ^{1}HRMN (DMSO-d_{6}) \delta: 10,99 (s, 1H), 8,72 (d, 1H, J = 5,4 Hz), 8,63 (d, 1H, J = 3,9 Hz), 8,44 (s, 1H), 8,38 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 8,25 (dt, 1H, J = 6,6, 2,4 Hz), 8,16 (d, 1H, J = 1,8 Hz), 8,02 (d, 1H, J = 16,2 Hz), 7,94 (s, 1H), 7,86-7,80 (m, 2H), 7,72-7,58 (m, 5H), 7,29 (dd, 1H, J = 6,9, 6,0Hz).
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Ejemplo de referencia 41(aa)
6-[3-(piridin-2-ilcarboxamido)benzoil]-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]-1H-indazol
357
El compuesto del Ejemplo de referencia 41(aa) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 41(a) excepto que se usó ácido piridina-2-carboxílico en lugar de ácido 2-etil-5-metil-2H-pirazol-3-carboxílico. ^{1}HRMN (300 MHz, DMF-d_{6}) \delta: 10,9 (s, 1H), 8,74 (m, 1H), 8,63 (dd, 1H, J = 4,78 Hz, 0,94 Hz), 8,46 (s, 1H), 8,38 (d, 1H, J = 8,48 Hz), 8,25 (dt, 1H, J = 7,17 Hz, J = 2,05 Hz), 8,16 (dt, 1H, J = 7,73 Hz, J = 1,04 Hz), 8,07 (td, 1H, J = 7,56 Hz, J = 1,67 Hz), 8,02 (d, 1H, J = 16,28 Hz), 7,95 (s, 1H), 7,83 (td, 1H, J = 7,65 Hz, J = 1,81 Hz), 7,22-7,66 (m, 4H), 7,30 (qd, 1H, J = 7,40 Hz, J = 1,02 Hz). MS (ESI+) [M+H]/z, calculado 446, encontrado 446.
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Ejemplo de referencia 41(bb)
6-[3-(3-metoxibenzamido)benzoil]-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]-1H-indazol
358
El compuesto del Ejemplo de referencia 41(bb) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 41(a) excepto que se usó ácido 3-metoxi-benzoico en lugar de ácido 2-etil-5-metil-2H-pirazol-3-carboxílico. ^{1}HRMN (DMSO-d_{6}) \delta: 10,50 (s, 1H,), 8,67 (d, 1H, J = 3,9 Hz), 8,46 (d, 1H, J = 8,7 Hz), 8,33 (s, 1H), 8,22 (dt, 1H, J = 7,8, 1,8 Hz), 8,08 (d, 1H, J = 15,0 Hz), 8,00 (s, 1H,), 7,78-7,54 (m, 8H), 7,51 (t, 1H, 7,8 Hz), 7,38-7,33 (m, 1H), 7,23 (dd, 1H, J = 7,5, 1,5 Hz), 3,90 (s, 3H). HRMS (MALDI) C_{29}H_{22}N_{4}O_{3,} [M+H^{+}]/z, calculado 475,1765, encontrado 475,1763.
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Ejemplo de referencia 41(cc)
6-[3-(fenoxiamido)benzoil]-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]-1H-indazol
359
El compuesto del Ejemplo de referencia 41(cc) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 41(a) excepto que se usó cloroformiato de fenilo en lugar de ácido 2-etil-5-metil-2H-pirazol-3-carboxílico. P.f. 212-217ºC. ^{1}HRMN (300 MHz, DMSO-d_{6}) \delta: 13,63 (s, 1H), 10,51 (s, 1H), 8,62 (d, 1H, J = 4,3 Hz), 8,36 (d, 1H, J = 8,6 Hz), 8,04-7,81 (m, 5H), 7,71-7,40 (m, 7H), 7,31-7,22 (m, 4H). ESI-MS m/z 461 [M+H^{+}]. Anal. Calculado para C_{28}H_{20}N_{4}O_{3} x 0,3 H_{2}O (465,9 g mol^{-1}): C, 72,18; H, 4,46; N, 11,33. Encontrado: C, 72,41; H, 4,63; N, 11,57.
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Ejemplo de referencia 41(dd)
6-[3-(3,3-dimetilacrilamido)benzoil]-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]-1H-indazol
360
El compuesto del Ejemplo de referencia 41(dd) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 41(a) excepto que se usó ácido 3,3-dimetilacrílico en lugar de ácido 2-etil-5-metil-2H-pirazol-3-carboxílico. ^{1}HRMN (300 MHz, DMSO-d_{6}) \delta: 13,6 (s, 1H), 10,2 (s, 1H), 8,63 (d, 1H, J = 3,81 Hz), 8,37 (d, 1H, J = 8,49 Hz), 8,12 (s, 1H), 8,02 (d, 1H, J = 16,34 Hz), 7,99 (d, 1H, J = 7,88 Hz), 7,83 (td, 1H, J = 7,67 Hz, J = 1,78 Hz), 7,70 (d, 1H, J = 7,85 Hz), 7,63 (dd, 1H, J = 8,43 Hz, J = 1,23 Hz), 7,47-7,56 (m, 2H), 7,29 (qd, 1H, J = 7,39 Hz, J = 0,99 Hz), 6,82 (m, 1H, J = 6,9 Hz), 5,85 (s, 1H), 2,12 (s, 3H), 1,85 (s, 3H). MS (ESI+) [M+H]/z, calculado 409, encontrado 409. Anal. Calculado para C_{26}H_{22}N_{4}O_{2} x 0,33 terc.butil-metil-éter (TBME): C, 73,54; H, 5,80; N, 12,41. Encontrado: C, 73,26; H, 5,76; N, 12,36.
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Ejemplo de referencia 41(ee)
6-[3-((1-etil-3-metil-1H-pirazol-5-il)carboxamido)-4-metilbenzoil]-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]-1H-indazol
361
El compuesto del Ejemplo de referencia 41(ee) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 41(a) excepto que se usó el compuesto del Ejemplo de referencia 40(b) en lugar del compuesto del Ejemplo de referencia 40(a). ^{1}HRMN (DMSO-d_{6}) \delta: 13,6 (s, 1H), 9,94 (s, 1H), 8,62 (d, 1H, J = 3,8 Hz), 8,36 (d, 1H, J = 8,51 Hz), 8,01 (d, 1H, J = 16,36 Hz), 7,91 (s, 1H), 7,84 (dd, 1H, J = 7,66 Hz, J = 1,74 Hz), 7,81 (s, 1H), 7,70 (d, 1H, J = 7,9 Hz), 7,64 (d, 1H, J = 16,45 Hz), 7,62 (m, 2H), 7,50 (d, 1H, J = 7,83 Hz), 7,29 (m, 1H), 6,82 (s, 1H), 4,42 (q, 2H, J = 7,06 Hz), 2,36 (s, 3H), 2,21 (s, 3H), 1,30 (t, 3H, J = 7,09 Hz). MS (ESI+) [M+H]/z, calculado 491, encontrado 491. Anal. Calculado: C, 71,00; H, 5,34; N, 17,13. Encontrado: C, 70,80; H, 5,38; N, 17,00.
Ejemplo de referencia 41(ff)
6-[3-((1-alil-3-metil-1H-pirazol-5-il)carboxamido)-4-metilbenzoil]-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]-1H-indazol
362
El compuesto del Ejemplo de referencia 41(ff) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 41(ee) excepto que se usó ácido 2-alil-5-metil-2H-pirazol-3-carboxílico en lugar de ácido 2-etil-5-metil-2H-pirazol-3-carboxílico. ^{1}HRMN (DMSO-d_{6}) \delta: 13,6 (s, 1H), 9,98 (s, 1H), 8,62 (d, 1H, J = 4,60 Hz), 8,36 (d, 1H, J = 8,46 Hz), 8,01 (d, 1H, J = 16,37 Hz), 7,91 (s, 1H), 7,83 (td, 1H, J = 7,69 Hz, J = 1,77 Hz), 7,78 (d, 1H, J = 1,73), 7,70 (d, 1H, J = 7,78 Hz), 7,59-7,70 (m, 3H), 7,50 (d, 1H, J = 8,01 Hz), 7,29 (qd, 1H, J = 7,46 Hz, J = 1,02 Hz), 6,86 (s, 1H), 5,95 (m, 1H), 4,93-5,10 (m, 4H), 2,34 (s, 3H), 2,22 (s, 3H). LCMS (ESI+) [M+H]/z, calculado 503, encontrado 503. Anal. Calculado: C, 71,70; H, 5,21; N, 16,72. Encontrado: C, 70,98; H, 5,42; N, 15,94.
Ejemplo de referencia 41(gg)
6-(3-acetamido-4-metilbenzoil)-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]-1H-indazol
363
El compuesto del Ejemplo de referencia 41(gg) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 41(ee) excepto que se usó cloruro de acetilo en lugar de ácido 2-etil-5-metil-2H-pirazol-3-carboxílico. ^{1}HRMN (CD_{3}OD) \delta: 8,57 (d, 1H, J = 4,90 Hz), 8,13 (d, 1H, J = 8,49 Hz), 7,99 (s, 1H), 7,95 (d, 1H, J = 16,53 Hz), 7,89 (d, 1H, J = 1,46 Hz), 7,86 (td, 1H, J = 7,64 Hz, J = 1,73 Hz), 7,73 (d, 1H, J = 7,05 Hz), 7,62-7,69 (m, 2H), 7,65 (d, 1H, J = 16,48 Hz), 7,44 (d, 1H, J = 7,97 Hz), 7,32 (qd, 1H, J = 7,44 Hz, J = 1,03 Hz), 2,38 (s, 3H), 2,18 (s, 3H). LCMS (ESI+) [M+H]/z, calculado 397, encontrado 397. Anal. Calculado: C, 72,71; H, 5,08; N, 14,13. Encontrado: C, 72,29; H, 5,09; N, 13,98.
Ejemplo de referencia 41(hh)
6-[3-((1,3-dimetil-1H-pirazol-5-il)carboxamido)-4-metilbenzoil]-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]-1H-indazol
364
El compuesto del Ejemplos de referencia 41 (hh) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 41(ee) excepto que se usó ácido 2,5-dimetil-2H-pirazol-3-carboxílico en lugar de ácido 2-etil-5-metil-2H-pirazol-3-carboxílico. HPLC R_{t} = 3,92 min (área 100%). ^{1}HRMN (DMSO) \delta: 10,02 (s, 1H), 8,74 (d, 1H, J = 3,6 Hz), 8,49 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 8,13 (d, 1H, J = 16,3 Hz), 8,03 (s, 1H), 7,96-7,93 (m, 2H), 7,84-7,72 (m, 4H), 7,63 (d, 1H , 8,1 Hz), 7,42 (dd, 1H, J = 6,8, 1,5 Hz), 6,95 (s, 1H), 4,11 (s, 1H), 2,48 (s, 1H), 2,32 (s, 1H).
Ejemplo de referencia 41(ii)
6-[3-((1-n-propil-3-metil-1H-pirazol-5-il)carboxamido)-4-metilbenzoil]-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]-1H-indazol
365
El compuesto del Ejemplo de referencia 41(ii) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 41 (ee) excepto que se usó ácido 5-metil-2-propil-2H-pirazol-3-carboxílico en lugar de ácido 2-etil-5-metil-2H-pirazol-3-carboxílico. HPLC: R_{t} = 4,16 min (área 100%). ^{1}HRMN (DMSO-d_{6}) \delta: 10,29 (s, 1H), 8,58 (d, 1H, 3,9 Hz), 8,33 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 8,13 (s, 1H), 8,10 (dt, 1H, J = 5,4, 2,1 Hz), 7,96 (d, 1H, J = 16,5 Hz), 7,87 (s, 1H), 7,78 (td, 1H, J = 7,5, 1,5 Hz), 7,61-7,49 (m, 6H), 7,24 (dd, 1H, J = 6,9, 1,8 Hz), 4,32 (t, 2H, J = 6,90 Hz), 2,58 (s, 3H), 2,22 (s, 3H) 1,69 (q, 2H, J = 7,2 Hz), 0,77 (t, 3H, 7,5 Hz). HRMS (MALDI) C_{30}H_{26}N_{6}O_{2} [M+H^{+}]/z, calculado 505,2347, encontrado 505,2343.
Ejemplo de referencia 41(jj)
6-[3-((3-etil-1-metil-1H-pirazol-5-il)carboxamido)-4-metilbenzoil]-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]-1H-indazol
366
El compuesto del Ejemplo de referencia 41(jj) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 41(ee) excepto que se usó ácido 5-etil-2-metil-2H-pirazol-3-carboxílico en lugar de ácido 2-etil-5-metil-2H-pirazol-3-carboxílico. ^{1}HRMN (DMSO-d_{6}) \delta: 10,78 (s, 1H), 9,43 (d, 1H, J = 3,0 Hz), 9,15 (t, 1H, J = 9,6 Hz), 8,82 (dd, 1H, J = 16,4, 1,5 Hz), 8,72-8,61 (m, 2H), 8,52-8,30 (m, 4H), 8,10 (dd, 1H, J = 6,9, 5,7 Hz), 7,93-7,89 (m, 1H), 7,72-7,69 (m, 1H), 4,85 (s, 3H), 3,39 (q, 2H, J = 7,8 Hz), 3,17 (s, 3H), 2,10 (t, 3H, J = 7,5 Hz). HRMS (MALDI) C_{29}H_{26}N_{6}O_{2} [M+H^{+}] m/z: calculado 491,2190, encontrado 491,2211.
Ejemplo de referencia 41(kk)
6-[3-((1-isopropil-3-metil-1H-pirazol-5-il)carboxamido)-4-metilbenzoil]-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]-1H-indazol
367
El compuesto del Ejemplo de referencia 41(kk) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 41(ee) excepto que se usó ácido 2-isopropil-5-metil-2H-pirazol-3-carboxílico en lugar de ácido 2-etil-5-metil-2H-pirazol-3-carboxílico. HPLC: R_{t} = 4,11 min. (área 100%). ^{1}HRMN (DMSO-d_{6}) \delta: 9,99 (s, 1H), 8,68 (d, 1H, J = 3,6 Hz), 8,42 (d, 1H, J = 8,7 Hz), 8,07 (d, 1H, J = 16,4 Hz), 7,98 (s, 1H), 7,67-7,86 (m, 2H), 7,77-7,65 (m, 4H), 7,56 (d, 1H, J = 7,8 Hz), 7,37-7,33 (m, 1H), 6,82 (s, 1H), 5,44-5,36 (m, 1H), 2,42 (s, 3H), 2,28 (s, 3H), 1,42 (d, 6H, J = 6,6 Hz). Anal. (C_{30}H_{28}N_{6}O_{2}\cdot0,2H_{2}O) Calculado: C, 5,63; N, 16,54. Encontrado C, 70,57; H, 5,70; N, 16,35.
Ejemplo de referencia 41(ll)
6-[2,4-dimetil-5-((1-etil-3-metil-1H-pirazol-5-il)carboxamido)-benzoil]-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]-1H-indazol
368
El compuesto del Ejemplo de referencia 41(ll) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 41(a) excepto que se usó el compuesto del Ejemplo de referencia 40(c) en lugar del compuesto del Ejemplo de referencia 40(a). ^{1}HRMN (DMSO-d_{6}) \delta: 13,6 (s, 1H), 9,82 (s, 1H), 8,63 (d, 1H, J = 3,84 Hz), 8,35 (d, 1H, J = 8,54 Hz), 8,00 (d, 1H, J = 16,37 Hz), 7,83 (s, 1H), 7,83 (td, 1H, J = 7,65 Hz, J = 1,82 Hz), 7,69 (d, 1H, J = 7,89 Hz), 7,65 (dd, 1H, J = 8,52 Hz, J = 1,36 Hz), 7,62 (d, 1H, J = 16,34 Hz), 7,35 (s, 1H), 7,32 (s, 1H), 7,29 (qd, 1H, J = 7,42 Hz, J = 1,09 Hz), 6,78 (s, 1H), 4,39 (q, 2H, J = 7,15 Hz), 2,30 (s, 3H), 2,25 (s, 3H), 2,19 (s, 3H), 1,27 (t, 3H, J = 7,15 Hz). LCMS (ESI+) [M+H]/z, calculado 505, encontrado 505.
Ejemplo de referencia 41(mm)
6-[2,4-dimetil-5-((1,3-dimetil-1H-pirazol-5-il)carboxamido)-benzoil]-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]-1H-indazol
369 
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El compuesto del Ejemplo de referencia 41(mm) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 41(ll) excepto que se usó ácido 2,5-dimetil-2H-pirazol-3-carboxílico en lugar de ácido 2-etil-5-metil-2H-pirazol-3-carboxílico. ^{1}HRMN (DMSO-d_{6}) \delta: 13,6 (s, 1H), 9,81 (s, 1H), 8,62 (d, 1H, J = 3,81 Hz), 8,35 (d, 1H, J = 8,6 Hz), 8,00 (d, 1H, J = 16,36 Hz), 7,83 (dt, 1H, J = 7,65 Hz, J = 1,8 Hz), 7,8 (s, 1H), 7,69 (d, 1H, J = 7,88 Hz), 7,65 (dd, 1H, J = 8,53 Hz, J = 1,36 Hz), 7,62 (d, 1H, J = 16,35 Hz), 7,36 (s, 1H), 7,32 (s, 1H), 7,29 (qd, 1H, J = 7,41 Hz, J = 1,03 Hz), 6,79 (s, 1H), 3,96 (s, 3H), 2,30 (s, 3H), 2,25 (s, 3H), 2,18 (s, 3H). LCMS (ESI+) [M+H]/z, calculado 491, encontrado 491. Anal. Calculado: C, 71,00; H, 5,34; N, 17,13. Encontrado: C, 70,69; H, 5,57; N, 16,26.
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Ejemplo de referencia 41(nn)
6-(5-acetamido-2,4-dimetilbenzoil)-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]-1H-indazol
370 
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El compuesto del Ejemplo de referencia 41(nn) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 41(ll) excepto que se usó cloruro de acetilo en lugar de ácido 2-etil-5-metil-2H-pirazol-3-carboxílico. ^{1}HRMN (DMSO-d_{6}) \delta: 13,6 (s ancho, 1H), 9,34 (s, 1H), 8,62 (d, 1H, J = 4,15 Hz), 8,33 (d, 1H, J = 8,6 Hz), 7,86 (d, 1H, J = 16,36 Hz), 7,83 (td, 1H, J = 7,71 Hz, J = 1,82 Hz), 7,81 (s, 1H), 7,69 (d, 1H, J = 7,84 Hz), 7,64 (dd, 1H, J = 1,38 Hz), 7,62 (d, 1H, J = 16,46 Hz), 7,48 (s, H), 7,29 (qd, 1H, J = 7,44 Hz, J = 1,02 Hz), 7,24 (s, 1H), 2,27 (s, 3H), 2,23 (s, 3H), 2,02 (s, 3H). LCMS (ESI+) [M+H]/z, calculado 411, encontrado 411.
Los Ejemplos de referencia 41 (oo)-41(lll) pueden prepararse de manera similar a la descrita en el Ejemplo 41(a).
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Ejemplo de referencia 41(oo)
371 
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Ejemplo de referencia 41(pp)
372 
\newpage
Ejemplo de referencia 41(qq)
373 
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Ejemplo de referencia 41(rr)
374 
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Ejemplo de referencia 41(ss)
375 
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Ejemplo de referencia 41(tt)
376 
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Ejemplo de referencia 41(uu)
377 
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Ejemplo de referencia 41(vv)
378 
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Ejemplo de referencia 41(ww)
379 
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Ejemplo de referencia 41(xx)
380 
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Ejemplo de referencia 41(yy)
381 
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Ejemplo de referencia 41(zz)
382 
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Ejemplo de referencia 41(aaa)
383 
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Ejemplo de referencia 41(bbb)
384 
\newpage
Ejemplo de referencia 41(ccc)
385 
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Ejemplo de referencia 41(ddd)
386 
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Ejemplo de referencia 41(eee)
387 
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Ejemplo de referencia 41(fff)
388 
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Ejemplo de referencia 41(ggg)
389 
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Ejemplo de referencia 41(hhh)
390 
\newpage
Ejemplo de referencia 41(iii)
391 
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Ejemplo de referencia 41(jjj)
392 
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Ejemplo de referencia 41(kkk)
393 
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Ejemplo de referencia 41(lll)
394 
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Ejemplo de referencia 42(a)
6-(3-benzamidobenzoil)-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]-1H-indazol
395
El compuesto del Ejemplo de referencia 42(a) se preparó a partir de 6-(3-benzamidobenzoil)-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]-1-(2-trimetil-silaniletoximetil)-1H-indazol de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 12 (0,58 g, 80,6%). HPLC 4,13 min (área 98%). ^{1}H RMN (CDCl_{3}) \delta: 8,66 (d, 1H, J = 4,1 Hz), 8,24 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 8,11-8,10 (m, 3H), 8,01-7,98 (m, 4H), 7,83 (t, 2H, J = 7,1 Hz), 7,72-7,53 (m, 7H), 7,30 (qd, 1H, J = 5,2, 1,1 Hz). HRMS (MALDI) C_{28}H_{20}N_{4}O_{2,} [M+H^{+}]/z, calculado 445,1664, encontrado 445,1659. Anal. (C_{26}H_{19}N_{5}O_{2}\cdot0,2 EtOAc): C, 75,87; H, 4,78; N, 12,39.
\newpage
El material de partida se preparó como sigue:
396
A una solución agitada de 6-yodo-3-((E)-estiril)-1-(2-trimetil-silanil-etoximetil)-1H-indazol (4,00 g, 8,40 mmol), del Ejemplo de referencia 14 etapa (i), en anisol (48 mL) bajo atmósfera de argón se añadieron dicloruro de bis(trifenilfosfina)paladio (176 mg, 0,25 mmol), TBACl (288 mg, 1,0 mmol), 2-butanol (1,54 mL, 16,8 mmol) y carbonato de potasio (3,48 g, 25,2 mmol). La mezcla resultante se agitó bajo atmósfera de monóxido de carbono a 80ºC durante 100 h. Después de eliminación del disolvente por concentración a vacío, el residuo obtenido se diluyó con EtOAc (400 mL) y se extrajo con NaCl saturado (2 x 150 mL), NaHCO_{3} saturado (2 x 50 mL) y agua (2 x 50 mL) y a continuación la capa orgánica se filtró a través de 20 mL de sílice. A continuación el filtrado orgánico se concentró a vacío, obteniéndose un aceite color ámbar: la purificación por cromatografía de desarrollo rápido con hexano:EtOAc (7:3) proporcionó 6-(3-aminobenzoil)-3-((E)-estiril)-1-(2-trimetil-silaniletoximetil)-1H-indazol que por concentración tomó forma de un aceite color ámbar (2,38 g, rendimiento 61%). ^{1}HRMN (CDCl_{3}) \delta: 8,84 (dd, 1H, J = 8,70, 0,90 Hz), 8,02 (s, 1H), 7,77 (dd, 1H, J = 8,40, 1,50 Hz), 7,62-7,59 (m, 2H), 7,40 (t, 2H, J = 7,20 Hz), 7,38-7,24 (m, 4H), 7,22-7,19 (m, 3H), 6,98 (dq, 1H, J = 8,30, 0,90 Hz), 3,83 (s ancho, 2H,), 3,61 (t, 2H. J = 8,10 Hz), 0,91 (t, 2H, J = 7,20 Hz), -0,17 (s, 9H).
397
A una solución agitada de 6-(3-aminobenzoil)-3-((E)-estiril)-1-(2-trimetil-silanil-etoximetil)-1H-indazol (3,22 g, 6,87 mmol) en cloruro de metileno (10 mL) bajo atmósfera de argón se añadió cloruro de benzoílo (0,95 mL, 8,37 mmol) y piridina (0,67 mL, 3,22 mmol). Después de 2 h la solución se diluyó con 100 mL de EtOAc y se lavó con NaCl saturado (1 x 50 mL), ácido cítrico (1M, pH 2,5, 2 x 50 mL) y NaHCO_{3}/agua (50:50) (2 x 50 mL). La capa orgánica se secó sobre Na_{2}SO_{4} y se filtró a través de 20 mL de sílice. La capa orgánica se concentró a vacío, obteniéndose el producto en forma de un sólido amarillo. La purificación mediante cromatografía de desarrollo rápido a través de sílice eluyendo con hexano: EtOAc (7:3) proporcionó 6-(3-benzamidobenzoil)-3-((E)-estiril)-1-(2-trimetil-silanil-etoximetil)-1H-indazol en forma de una espuma amarilla (3,22 g, 85,1% rendimiento). ^{1}H RMN (CDCl_{3}) \delta: 8,19 (d, 1H, J = 8,7 Hz), 8,16 (s, 1H,), 8,11-8,10 (m, 2H), 8,03-7,93 (m, 3H), 7,82(dd, 1H, J = 8,4, 1,2 Hz), 7,70-7,67 (m, 3H), 7,64-7,54 (m, 5H), 7,48 (t, 2H, J = 14,1 Hz) 7,39 (1H, d, J = 7,2 Hz).
398
Una solución agitada de 6-(3-benzamidobenzoil)-3-((E)-estiril)-1-(2-trimetil-silanil-etoxi-metil)-1H-indazol (2,35 g, 4,07 mmol) en cloruro de metileno (45,6 mL) se enfrió hasta -45ºC usando un baño de acetonitrilo/dióxido de carbono sólido. A continuación se hizo burbujear ozono a través de la solución a un caudal de 1,5 litro por minuto (lpm), 60 amperios durante 15 minutos. La reacción se detuvo bruscamente añadiendo a la mezcla sulfuro de hidrógeno (2,5 mL) y se calentó hasta 25ºC. La eliminación del cloruro de metileno se realizó por concentración a vacío. El residuo se purificó a través de sílice eluyendo con hexano:EtOAc (7:3) proporcionando 6-(3-benzamidobenzoil)-1-(2-trimetil-silanil-etoxi-metil)-1H-indazol-3-carboxaldehído en forma de una espuma blancuzca (1,74 g, rendimiento 85%). HPLC 3,78 min (área 100%); ^{1}HRMN (DMSO-d_{6}) \delta: 10,77 (s, 1H), 10,42 (s, 1H), 8,46-8,39 (m, 2H), 8,31 (dt, 1H, J = 6,0, 1,8 Hz), 8,19 (s, 1H,), 8,11-8,07 (m, 2H,), 7,91 (dd, 1H, J = 6,0, 1,2 Hz), 7,70-7,64 (m, 5H), 5,81 (s, 2H) 3,68 (t, 2H, J = 6,9 Hz), 0,98 (t, 2H, J = 6,7 Hz), 0,02 (s, 9H).
399 
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A una solución agitada de cloruro de 2-picoliltrifenilfosfonio e hidruro de sodio (2,23 g, 4,91 mmol) enfriada hasta -78ºC se añadió 6-(3-benzamidobenzoil)-1-(2-trimetil-silanil-etoxi-metil)-1H-indazol-3-carboxaldehído (1,26 g, 2,46 mmol) en 5 mL de THF anhidro bajo una purga de argón, se agitó durante 1 h a 0ºC y la reacción se detuvo bruscamente añadiendo CH_{3}COOH/MeOH (1:1, 1 mL). La mezcla de reacción se diluyó con 100 mL de EtOAc y se repartió entre NaCl saturado (1 x 50 mL) y NaHCO_{3} saturado (2 x 50 mL) y a continuación la capa orgánica se secó sobre Na_{2}O_{4} y se filtró a través de 20 mL de un tapón de sílice (mezcla trans/cis 3:1). La purificación con un lecho de sílice de 4 mm eluyendo con hexano/EtOAc (1:1) proporcionó 6-(3-benzamidobenzoil)-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]-1-(2-trimetil-silanil-etoximetil)-1H-indazol después de concentración en forma de un sólido amarillo (1,05 g, 62%). ^{1}HRMN (CDCl_{3}) \delta: 8,62 (d, 1H, J = 4,1 Hz), 8,22 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 8,11-8,10 (m, 3H), 8,01-7,98 (m, 4H), 7,83 (t, 2H, J = 7,1 Hz), 7,72-7,53 (m 7H), 7,30 (qd, 1H, J = 5,2, 1,1 Hz), 5,81 (s, 2H) 3,68 (t, 2H, J = 6,9 Hz), 0,98 (t, 2H, J = 6,7 Hz), 0,02 (s, 9H).
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Ejemplo de referencia 42(b)
6-(3-benzamidobenzoil)-3-(1H-benzoimidazol-2-il)-1H-indazol 
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400 
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El compuesto del Ejemplo de referencia 42(b) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 42(a) excepto que se sustituyó la etapa (iv) por la siguiente: Al aldehído preparado en el Ejemplo de referencia 42(a); etapa (iii) se añadió 1,2-diaminobenceno (0,011 g, 011 mmol), azufre elemental (calidad USP, 0,4 g, 0,1201 mmol), 2 mL de DMF anhidra y la mezcla se calentó hasta 90ºC durante 18 h y se enfrió hasta 25ºC. La mezcla de reacción se diluyó con 10 mL de acetato de etilo y se lavó con NaCl saturado (1 X 10 mL), NaHCO_{3} (1 X 10 mL) y 10 mL de agua, se secó sobre NaSO_{4}, se filtró a través de un filtro de teflón 0,22 mM y se concentró hasta obtener un aceite color ámbar. La purificación por cromatografía radial seguido de precipitación en 2 mL de cloruro de metileno y hexano (2 mL) proporcionó un compuesto intermedio en forma de un precipitado blanco. ^{1}HRMN (Acetona-d_{6}) \delta: 8,81 (d, 1H, J = 8,6), 8,30-8,25 (m, 2H), 8,11 (s, 1H), 8,02-7,99 (m, 2H), 7,79 (td, 2H, J = 12,2, 1,2 Hz), 7,63-7,47 (m, 7H), 7,28-7,40 (m, 2H). HRMS (MALDI) m/z, c_{28}H_{19}N_{3}O_{2} Calculado [M+H^{+}]: 458,1617, encontrado 458,1632.
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Ejemplo de referencia 42(c)
6-(3-benzamidobenzoil)-3-E-[2-(2-metiltiazol-4-il)etenil]-1H-indazol 
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401 
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El compuesto del Ejemplo de referencia 42(c) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 42(a) excepto que, en la etapa (iv), se usó cloruro de 4-(2-metiltiazil)-metiltrifenilfosfonio en lugar de cloruro de 2-picoliltrifenilfosfonio. ^{1}H RMN (DMSO) \delta: 8,11-8,01 (m, 4H), 7,92 (d, 2H, J = 6,9 Hz), 7,76-7,71 (m, 2H), 7,65-7,62 (m, 1H), 7,56-7,48 (m, 5H,), 7,15 (s, 1H,). 2,81 (s, 3H). HRMS (MALDI) C_{27}H_{20}N_{4}O_{2}S [M+H^{+}]/z: Calculado 465,1380, encontrado 465,1373.
\newpage
Ejemplo de referencia 42(d)
6-(3-benzamidobenzoil)-3-(3H-imidazo[4,5-b]piridin-2-il)-1H-indazol
402
El compuesto del Ejemplo de referencia 42(d) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 42(b) excepto que se usó 1,2-diamina-2-piridina en lugar de 1,2-diaminobenceno. HPLC: 3,88 min (área 95%); ^{1}HRMN (DMSO-d_{6}) \delta: 10,62 (s, 1H), 8,83 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 8,53 (s, 1H), 8,43 (s, 1H), 8,32 (dt, 1H, J = 6,9, 1,8 Hz), 8,15 (d, 1H, J = 12,9 Hz), 8,11-8,10 (m, 2H), 7,91 (d, 1H, J = 9,0 Hz), 7,72-7,65 (m, 6H), 7,43 (dd, 1H, J = 6,3, 4,8 Hz). HRMS (MALDI) m/z, c_{27}H_{18}N_{6}O_{2}. Calculado [M+H^{+}]: 459,1564, encontrado 459,1558. Anal. (C_{27}H_{18}N_{6}O_{2}\cdot0,4 CH_{2}Cl_{2}): Calculado C, 66,83; H, 3,85; N, 17,07. Encontrado: C, 66,93; H, 4,04, N, 16,68.
Ejemplo 42(e)
6-(3-benzamidobenzoil)-3-E-[N-(4H-1,2,4-triazol-4-il)iminometil]-1H-indazol
403
El compuesto del Ejemplo 42(e) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 42(a) excepto que se usaron 4-amino-1,2,4-triazol y PPTS a 80ºC en lugar de cloruro de 2-picoliltrifenilfosfonio e hidruro de potasio a 23ºC. HPLC R_{t} = 4,05 min (área 96%); ^{1}HRMN (DMSO-d_{6}) \delta: 10,58 (s, 1H), 9,53 (s, 1H), 9,40 (s, 2H), 8,56 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 8,38 (s, 1H), 8,26 (dt, 1H, J = 7,2, 2,1 Hz), 8,13 (s, 1H), 8,08-8,05 (m, 2H), 7,73-7,67 (m, 5H). HRMS (MALDI) C_{24}H_{17}N_{7}O_{2} [M+H^{+}]/z, calculado 436,1516, encontrado 436,1510. Anal. (C_{24}H_{17}N_{7}O_{2}\cdot0,4 hexano) Calculado C, 66,18; H, 4,67; N, 20,47. Encontrado: C, 65,78; H, 4,87, N, 20,47.
Ejemplo de referencia 43
6-(3-benzamidobenzoil-)-3-E-[2-(2-formamidofenil)etenil]-1H-indazol
404
El compuesto del Ejemplo de referencia 43 se preparó a partir de 6-(3-benzamidobenzoil)-3-E-(2-formamidofenil)etenil-1-(g2-trimetil-silanil-etoximetil)-1H-indazol de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 11. 18 mg (36%). HPLC R_{t} = 4,19 min. ^{1}H RMN (CDCl_{3}) \delta: 8,43-7,92 (m, 6H), 7,68-7,49 (m, 4H) 7,39-7,36 (m, 3H), 7,32-7,21 (m, 2H), 7,09-7,00 (m, 2H), 6,91-6,84 (m, 1H). HRMS (MALDI) C_{30}H_{22}N_{4}O_{3} [M+H]/z, calculado 509,1590, encontrado 509,1580. Anal. (C_{30}H_{22}N_{4}O_{3}\cdot0,3H_{2}O) Calculado: C, 73,25; H, 4,63; N, 11,39. Encontrado: C, 73,10; H, 4,58; N, 11,28.
El material de partida se preparó como sigue:
405
6-(3-Benzamidobenzoil)-1-(2-trimetil-silanil-etoxi-metil)-1H-indazol-3-carboxaldehído (preparado en el Ejemplo de referencia 42(a), etapa (iii)) se convirtió en 6-(3-benzamidobenzoil)-3-E-(2-nitrofenil)etenil-1-(2-trimetil-silaniletoximetil)-1H-indazol de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 42(a), etapa (iv) excepto que se usó bromuro de (2-nitrobencil)trifenilfosfonio monohidrato en lugar de cloruro de 2-picoliltrifenilfosfonio (0,19 g, 79%). ^{1}H RMN (CDCl_{3}) \delta: 8,15-7,93 (m, 5H), 7,89-7,86 (m, 3H), 7,54-7,41 (m, 6H), 7,36-7,35 (m, 2H), 7,21-7,18 (m, 2H), 7,03-6,91 (m, 1H), 3,64-3,46 (m, 2H), 0,96-0,79 (m, 2H), -0,06 (s, 9H).
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406 
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6-(3-Benzamidobenzoil)-3-E-(2-nitrofenil)etenil-1-(2-trimetil-silanil-etoximetil)-1H-indazol (0,19 g, 0,32 mmol) se disolvió en 3 mL de DMF, se trató con SnCl_{2} (0,26 g, 1,40 mmol) y agua (0,037 mL, 1,87 mmol) y se agitó durante 3 h a 50ºC. La reacción se detuvo bruscamente añadiendo a la mezcla a 25ºC 0,5 mL de NaOH 3N y el precipitado se separó por filtración a través de Celite. La solución se repartió a continuación entre NaHCO_{3} saturado/agua 50/50 (2 x 30 mL) y la capa orgánica se filtró a través de un tapón de sílice obteniéndose 6-(3-benzamidobenzoil)-3-E-(2-aminofenil)etenil-1-(2-trimetil-silanil-etoximetil)-1H-indazol en forma de un aceite de color ámbar (0,17 g, 92%). El producto se usó sin más purificación.
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407 
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6-(3-Benzamidobenzoil)-3-E-(2-aminofenil)etenil-1-(2-trimetil-silanil-etoximetil)-1H-indazol (0,17 g, 0,28 mmol) se disolvió en 3 mL de cloruro de metileno. A esto se añadió gota a gota éster pentafluorofenílico del ácido fórmico (0,12 g, 0,56 mmol). Después de 3 h, la mezcla de reacción se diluyó con 40 mL de EtOAc y se lavó con NaHCO_{3} 50/50 (2 x 30 mL) y la capa orgánica se filtró a través de un tapón de sílice. El residuo se purificó por cromatografía radial a través de sílice eluyendo con hexano:EtOAc/CH_{2}Cl_{2} (1:1:1) obteniéndose 6-(3-benzamidobenzoil)-3-E-(2-formamidofenil)etenil-1-(2-trimetil-silanil-etoximetil)-1H-indazol en forma de un aceite transparente (63 mg, 40%). ^{1}H RMN (CDCl_{3}) \delta: 8,48-8,36 (m, 1H), 8,20-7,84 (m, 4H), 7,61-7,52 (m, 5H), 7,41-7,32 (m, 4H), 7,26-7,01 (m, 4H), 6,82 (t, 1H, J = 14,2 Hz), 3,48-3,23 (m, 2H), 0,95-0,87 (m, 2H), -0,05 (s, 9H).
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Ejemplo de referencia 44
6-(3-aminobencil)-3-E-[N-(pirrol-1-il)iminometil]-1H-indazol 
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408 
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El compuesto del Ejemplo de referencia 44 se preparó a partir del material de partida descrito a continuación de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 12, R_{f} sm = 0,6, p = 0,5 (acetato de etilo): ^{1}HRMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta: 8,8 (s, 1H), 8,5 (d, 1H), 7,95 (s, 1H), 7,75 (d, 1H), 7,45-7,3 (m, 7H), 7,2 (m, 1H), 6,40 (s, 2H).
\newpage
El material de partida se preparó como sigue:
1409
409
El aldehído preparado en el Ejemplo de referencia 33(a), etapa (i) (204 mg, 0,507 mmol) y 1-aminopirrol (67 \muL, 0,66 mmol, 1,3 equivalentes) se agitaron juntos en tolueno (2 mL). A esta mezcla se añadió PPTS (1 mg) y la solución se calentó hasta 80ºC durante 1 h. La mezcla se enfrió y se repartió entre acetato de etilo-hexano 2:8 y agua. El material orgánico se secó sobre sulfato de sodio, se decantó y se concentró bajo presión reducida. El producto se cristalizó en diclorometano (0,5 mL) y metanol (2 mL) (215,7 mg, 91%): ^{1}HRMN (300 MHz, C_{6}D_{6}) \delta: 8,71 (s, 1H), 8,25 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 8,08 (s, 1H), 7,75 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 6,35 (s, 2H), 5,85 (s, 2H).
410
Una mezcla del yoduro anterior (535 mg, 1,15 mmol, 1 equivalente), ácido 3-aminofenil-borónico (236 mg, 1,72 mmol, 1,5 equivalentes), PdCl_{2}(PPh_{3})_{2} (24 mg, 0,034 mg, 0,03 equivalentes) y carbonato de potasio se recogieron con anisol (6,7 mL) bajo monóxido de carbono (1 atm). La mezcla se calentó hasta 80ºC durante 14 h. La mezcla se enfrió, se repartió entre acetato de etilo y agua. Los materiales orgánicos se lavaron con hidrogenocarbonato de sodio acuoso saturado, agua y salmuera y se separó la capa orgánica. El material orgánico se secó sobre sulfato de sodio, se decantó y se concentró bajo presión reducida. La purificación por cromatografía en columna de gel de sílice (50 mL de sílice: acetato de etilo-hexano de 2:8 a 3:7) dio el derivado de anilina en forma de un sólido (331 mg, 63%): R_{f} sm = 0,60, p = 0,21 (acetato de etilo-hexano 3:7); ^{1}HRMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta: 8,75 (s, 1H), 8,51 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 8,06 (s, 1H), 7,76 (dd, 1H, J = 1,3, 8,4 Hz), 7,26 (m, 3H), 7,17 (m, 2H), 6,92 (m, 1H), 6,31 (t, 1H, J = 2,3 Hz), 5,79 (s, 2H), 3,84 (s ancho, 2H), 3,60 (t, 2H, J = 8,2 Hz), 0,91 (t, 2H, J = 8,2 Hz), -0,08 (s, 9H). LCMS 4,98 min (pos) [M+H]/z, calculado 460, encontrado 460.
Ejemplo de referencia 45(a)
6-[3-(indol-4-ilcarboxamido)benzoil]-3-E-[N-(pirrol-1-il)iminometil]-1H-indazol
411
El compuesto del Ejemplo de referencia 45(a) se preparó a partir del compuesto del Ejemplo de referencia 44 de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 12(d), excepto que se usó ácido indol-4-carboxílico en lugar de ácido 5-metil-tiazol-2-carboxílico: Rf sm = 0,0, p = 0,2 (acetato de etilo-benceno 1:3); ^{1}HRMN (300 MHz, DMSO-d_{6}) \delta: 9,84 (s, 1H), 8,92 (s, 1H), 8,66 (s, 1H), 8,39 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 8,02 (s, 1H), 7,86 (m, 2H), 7,66 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 7,52-7,40 (m, 4H), 7,27-7,07 (m, 5H), 6,83 (s, 1 H), 6,21 (s, 2H).
Ejemplo de referencia 45(b)
6-(3-benzamidobenzoil)-3-E-[N-(pirrol-1-il)iminometil]-1H-indazol
412
El compuesto del Ejemplo de referencia 45(b) se preparó a partir del Ejemplo de referencia 44 de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 12(d), excepto que se usó cloruro de benzoílo en lugar de ácido 5-metil-tiazol-2-carboxílico y HATU: ^{1}HRMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta: 11,9 (s ancho, 1H), 8,70 (s, 1H), 8,43 (s, 1H), 8,39 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 7,99 (s, 1H), 7,9-7,8 (m, 4H), 7,65 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 7,48 (t, 2H, J = 7,8 Hz), 7,42-7,35 (m, 3H), 7,20 (t, 2H, 2,2 Hz), 6,28 (t, 2H, J = 2,2 Hz).
Ejemplo 46
6-[N-(3-aminofenil)amino]-3-E-estiril-1H-indazol
413
El compuesto del Ejemplo 46 se preparó a partir del material de partida descrito a continuación de manera similar a la descrita en el Ejemplo 13(i). ^{1}HRMN (300 MHz, DMSO-d_{6}) \delta: 12,6 (s, 1H), 8,07 (s, 1H), 7,97 (d, 1H, J = 8,73 Hz), 7,69 (d, 1H, J = 8,49 Hz), 7,40 (m, 4H), 7,28 (m, 1H), 7,06 (d, 1H, J = 1,49 Hz), 6,44 (t, 1H, J = 1,98 Hz), 6,34 (m, 1H), 6,14 (dd, 1H, J = 7,88 Hz, J = 1,26 Hz), 5,01 (s ancho, 2H).
1414
414
El compuesto preparado en el Ejemplo de referencia 11, etapa (v), se convirtió en 6-[N-(3-nitrofenil)amino]-3-E-estiril-1H-indazol de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 12. ^{1}HRMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta: 8,0 (m, 2H), 7,77 (m, 1H), 7,64 (d, 2H, J = 7,86 Hz), 7,41-7,56 (m, 6H), 7,33 (m, 2H), 7,08 (d, 1H, J = 8,67 Hz). MS (ESI+) [M+H]/z, calculado 357, encontrado 357. Calculado: C, 70,77; H, 4,53; N, 15,72. Encontrado: C, 69,18; H, 4,51; N, 15,30.
Ejemplo 47
6-[N-(3-benzamido-4-fluorofenil)amino]-3-E-estiril-1H-indazol
415
6-[N-(3-Benzamido-4-fluorofenil)amino]-1-(2-trimetil-silanil-etoximetil-3-E-estiril-1H-indazol se convirtió en el compuesto del Ejemplo 47 de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 11. ^{1}HRMN (300 MHz, DMSO-d_{6}) \delta: 12,6 (s, 1H), 10,0 (s, 1H)), 8,38 (s ancho, 1H), 8,02 (d, 1H, J = 8,78), 7,98 (d, 2H, J = 6,87 Hz), 7,69 (d, 2H, J = 7,27 Hz), 7,48-7,61 (m, 4H), 7,45 (s, 2H), 7,40 (t, 2H, J = 7,28 Hz), 7,53-7,30 (t, 2H. J = 7,28 Hz), 7,53-7,30 m, 2H), 7,07 (d, 1H, J = 1,55 Hz), 7,03 (m, 1H), 6,95 (dd, 1H, J = 8,79 Hz, J = 1,85 Hz). MS (ESI+) [M+H]/z, calculado 449, encontrado 449. Anal. Calculado: C, 74,98, H, 4,72, N, 12,49. Encontrado: C, 74,29, H, 4,76, N, 12,12.
El material de partida se preparó como sigue:
416
A una solución de 2-fluoro-5-nitro-fenilamina (3,12 g, 20 mmol) en diclorometano (20 ml) a 23ºC bajo argón se añadió piridina (1,94 ml, 24 mmol) y cloruro de benzoílo (2,8 ml, 24 mmol). Después de 45 minutos se formó un precipitado blanco. La mezcla de reacción se concentró a vacío y a continuación se diluyó conagua y se filtró obteniéndose un sólido blanco que se volvió a poner en suspensión en MeOH y se filtró de nuevo dando N-(2-fluoro-5-nitro-fenil)-benzamida (4,86 g, 93%). ^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta: 9,48 (dd, 1H, J = 6,8 Hz, J = 2,81 Hz), 8,17 (s ancho, 1H), 8,03 (m, 1H), 7,92 (m, 2H), 7,52-7,65 (m, 3H), 7,31 (d, 1H, J = 9,2 Hz).
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417 
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Una mezcla de N-(2-fluoro-5-nitro-fenil)-benzamida (4,86 g, 18,7 mmol) y Pd al 10%/C (486 mg) en una mezcla 1:1 de THF-MeOH (80 ml) se hidrogenó a 23ºC. Después de 2,5 h la mezcla de reacción se filtró a través de Celite y se concentró obteniéndose N-(5-amino-2-fluoro-fenil)-benzamida (3,92 g, 91%). MS (ESI+) [M+H]/z, calculado 231, encontrado 231.
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418 
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6-[N-(3-Benzamido-4-fluorofenil)amino]-1-(2-trimetil-silanil-etoximetil-3-E-estiril-1H-indazol se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 48(a), etapa (iii) excepto que se usaron como materiales de partida N-(5-amino-2-fluoro-fenil)-benzamida y el compuesto preparado en el Ejemplo 14, etapa (i). ^{1}HRMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta: 8,38 (dd, 1H, J = 6,84 Hz, J = 2,73 Hz), 8,09 (d, 1H, J = 3,08 Hz), 7,86-7,91 (m, 3H), 7,48-7,61 (m, 5H), 7,28-7,45 (m, 4H), 7,19 (d, 1H, J = 1,7 Hz), 7,08 (dd, 1H, J = 10,48 Hz), 6,90-6,96 (m, 2H), 6,03 (s ancho, 1H), 5,66 (s, 2H), 3,62 (t, 2H, J = 8,14 Hz), 0,91 (t, 2H, J = 8,32 Hz), 0,0 (s, 9H). MS (ESI+) [M+H]/z, calculado 579, encontrado 579. Anal. Calculado: C, 70,56, H, 6,10, N, 9,68. Encontrado: C, 20,26, H, 6,08, N, 9,16.
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Ejemplo 48(a)
6-[N-(5-((1-etil-3-metil-1H-pirazol-5-il)carboxamido)-2-fluoro-4-metilfenil)amino]-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]-1H-indazol 
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419 
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El compuesto del Ejemplo 48(a) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 41(a) a partir del material de partida descrito a continuación. ^{1}H RMN (300 MHz, CD_{3}OD) \delta: 8,54 (d, 1H, J = 4,8 Hz), 7,95 (d, 1H, J = 9,49 Hz), 7,84 (td, 1H, J = 7,71 Hz, J = 1,78 Hz), 7,70 (d, 1H, J = 7,95 Hz), 7,53 (d, 1H, J = 16,59 Hz), 7,40 (d, 1H, J = 7,92 Hz), 7,29 (qd, 1H, J = 7,45 Hz, J = 1,07 Hz), 7,11 (d, 1H, J = 11,8), 7,03-7,06 (m, 2H), 6,71 (s, 1H), 4,50 (q, 2H, J = 7,16 Hz), 2,27 (s, 3H), 2,26 (s, 3H), 1,38 (t, 3H, J = 7,11 Hz). MS (ESI+) [M+H]/z, calculado 496, encontrado 496. Anal. Calculado: C, 67,86; H, 5,29; N, 19,79. Encontrado: C, 66,24; H, 5,50; N, 18,61.
\newpage
El material de partida se preparó como sigue:
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420 
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Una mezcla de 1-fluoro-5-metil-2,4-dinitro-benceno (1,0 g, 5 mmol) y Pd al 10%/C (200 mg) en MeOH (20 ml) se hidrogenó a 23ºC durante 24 h. La mezcla de reacción se filtró a través de Celite y se concentró. La purificación por cromatografía en columna de gel de sílice (acetato de etilo-hexano 1:1) dio 4-fluoro-6-metil-benceno-1,3-diamina (613 mg, 87%).
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421 
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A una solución de éster 2-trimetil-silanil-etílico del éster 4-nitro-fenílico del ácido carbónico (566 mg, 2 mmol) en DMF (4 ml) a 23ºC bajo atmósfera de argón se añadió DMAP (12 mg, 0,1 mmol), DIEA (0,35 ml, 2 mmol) y 4-fluoro-6-metil-benceno-1,3-diamina. La solución resultante se calentó hasta 50ºC durante 48 h. La reacción se detuvo bruscamente añadiendo a la mezcla NaHCO_{3} saturado (acuoso) y se extrajo con EtOAc (3x 20 ml). El EtOAc se separó a vacío y el residuo se volvió a disolver en Et_{2}O y a continuación se lavó con NaOH 3N (acuoso), agua, salmuera, se secó con Na_{2}SO_{4}, se filtró y se concentró. La purificación por cromatografía en columna de gel de sílice (acetato de etilo-hexano 2:8-7:3) dio éster 2-trimetil-silanil-etílico del ácido (5-amino-4-fluoro-2-metil-fenil)-carbámico (160 mg, 28%). MS (ESI+) [M+H]/z, calculado 634, encontrado 634.
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1422
422 
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A una mezcla de 6-yodo-3-((E)-2-piridin-2-il-vinil)-1-(2-trimetil-silanil-etoximetil)-1H-indazol (224 mg, 0,47 mmol), éster 2-trimetil-silanil-etílico del ácido 5-amino-4-fluoro-2-metilfenil)-carbámico (160 mg, 0,56 mmol),
Cs_{2}CO_{3} (214 mg, 0,66 mmol), PdCl_{2}(PPh_{3})_{2} (5,4 mg, 0,0059 mmol) y BINAP (10 mg, 0,0176 mmol) bajo argón a 23ºC se añadió tolueno (0,5 ml). La mezcla resultante se calentó hasta 80ºC durante 16 h. La mezcla de reacción se enfrió hasta 23ºC y a continuación se diluyó con agua (20 ml) y se extrajo con EtOAc (3 x 50 ml). Los materiales orgánicos se lavaron con agua (30 ml), salmuera (30 ml), se secaron con Na_{2}SO_{4}, se filtraron y se concentraron hasta obtener una espuma. La cromatografía en columna de gel de sílice (acetato de etilo-hexano 3:7) proporcionó éster 2-trimetil-silanil-etílico del ácido {4-fluoro-2-metil-5-[3-((E)-2-piridin-2-il-vinil)-1-(2-trimetil-silanil-etoximetil)-1H-indazol-6-ilamino]-fenil}-carbámico (98 mg, 33%). TLC (hexano-acetato de etilo7-3) R_{f} sm = 0,42, R_{f} p = 0,23. ^{1}HRMN (CDCl_{3}) \delta: 8,64 (dd, 1H, J = 4,79Hz, J = 0,86 Hz), 7,94 (d, 1H, J = 8,71 Hz), 7,91 (s ancho, 1H), 7,86 (d, 1H, J = 16,41 Hz), 7,69 (td, 1H, J = 7,72 Hz, J = 1,8 Hz), 7,55 (d, 1H, J = 16,44 Hz), 7,49 (d, 1H, J = 7,91 Hz), 7,17 (qd, 1H, J = 7,44 Hz, J = 0,98 Hz), 6,99 (dd, 1H, J = 8,67 Hz, J = 1,89 Hz), 6,93 (d, 1H, J = 11,2 Hz), 6,25 (s ancho, 1H), 5,95 (d, 1H, J = 1,97 Hz), 5,70 (s, 2H), 4,25 (t, 2H, J = 8,53 Hz), 3,60 (t, 2H, J = 8,24 Hz), 2,22 (s, 3H) 1,04 (t, 2H, J = 8,54 Hz), 0,9 (t, 2H, J = 8,25 Hz), 0,05 (s, 9H), 0,0 (s, 9H). ^{13}C RMN (CDCl_{3}, 75 MHz) \delta: 156,0, 154,4, 149,8, 142,9, 142,8, 142,5, 136,6, 132,1, 130,1, 130,5, 128,7, 128,5, 124,3, 122,2, 122,0, 121,8, 118,2, 117,3, 117,0, 115,1, 95,2, 77,6, 77,4, 66,5, 63,7, 17,9, 17,2, -1,3. FTIR cm^{-1}: 3326, 2947, 1716, 1617, 1534, 1514, 1244, 1057. MS (ESI+) [M+H]/z, calculado 634, encontrado 634.
423
La anilina anterior se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 11. ^{1}HRMN (300 MHz, CD_{3}OD) \delta: 8,54 (m, 1H), 7,91 (dd, 1H, J = 8,74 Hz, J = 0,58 Hz), 7,83 (td, 1H, J = 7,72 Hz, J = 1,79 Hz), 7,80 (d, 1H, J = 16,52 Hz), 7,69 (d, 1H, J = 7,98 Hz), 7,52 (d, 1H, J = 16,58 Hz), 7,29 (qd, 1H, J = 7,43 Hz, J = 1,07 Hz), 6,94-6,99 (m, 2H), 6,83 (d, 1H, J = 11,98 Hz), 6,82 (d, 1H, J = 7,49 Hz), 2,15 (s, 3H). MS (ESI+) [M+H]/z, calculado 360, encontrado 360.
Ejemplo 48(b)
6-[N-(5-((1,3-dimetil-1H-pirazol-5-il)carboxamido)-2-fluoro-4-metilfenil)amino]-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]-1H-indazol
424
El compuesto del Ejemplo 48(b) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo 48(a) excepto que se usó ácido 2,5-dimetil-2H-pirazol-3-carboxílico en lugar de ácido 2-etil-5-metil-2H-pirazol-3-carboxílico. ^{1}HRMN (300 MHz, DMSO-d_{6}) \delta: 12,8 (s, 1H), 9,71 (s, 1H), 8,59 (m, 1H), 8,11 (s, 1H), 8,00 (d, 1H, J = 8,75 Hz), 7,87 (d, 1H, J = 16,37 Hz), 7,80 (td, 1H, J = 7,66 Hz, J = 1,81 Hz), 7,64 (d, 1H, J = 7,88 Hz), 7,49 (d, 1H, J = 16,38 Hz), 7,34 (d, 1H, J = 8,16 Hz), 7,26 (m, 1H), 7,21 (d, 1H, J = 12,14 Hz), 6,97 (dd, 1H, J = 8,76 Hz), 6,88 (s, 1H), 6,79 (s, 1H), 3,98 (s, 3H), 2,20 (s, 3H), 2,19 (s, 3H). MS (ESI+) [M+H]/z, calculado 482, encontrado 482. Anal. Calculado: C, 67,35; H, 5,02; N, 20,36. Encontrado: C, 66,83; H, 5,25; N, 19,68.
Ejemplo 49(a)
6-[N-(3-((1,3-dimetil-1H-pirazol-5-il)carboxamido)-4-fluorofenil)amino]-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]-1H-indazol
425
El compuesto del Ejemplo 49(a) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo 48(a) excepto por lo siguiente: se usó ácido 2,5-dimetil-2H-pirazol-3-carboxílico en lugar de ácido 2-etil-5-metil-2H-pirazol-3-carboxílico; en la etapa (iii), se usó éster 2-trimetil-silanil-etílico del ácido (5-amino-2-fluorofenil)-carbámico, preparado como se describe a continuación, en lugar de éster 2-trimetil-silanil-etílico del ácido (5-amino-4-fluoro-2-metil-fenil)-carbámico, como disolvente se usó DME y como ligando bifenil-2-il-diciclohexil-fosfano. ^{1}HRMN (300 MHz, CD_{3}OD) \delta: 12,7 (s, 1H), 9,94 (s, 1H), 8,48 (m, 1H), 8,40 (s, 1H), 8,02 (d, 1H, J = 6,77 Hz), 7,87 (d, 1H, J = 16,37 Hz), 7,80 (d, 1H, J = 7,63 Hz, J = 1,81 Hz), 7,64 (d, 1H, J = 7,88 Hz), 7,49 (d, 1H, J = 16,39 Hz), 7,42 (dd, 1H, J = 6,65 Hz, J = 2,68 Hz), 7,24 (m, 2H), 7,06 (m, 2H), 6,96 (dd, 1H, J = 8,81 Hz, J = 1,82 Hz), 6,85 (s, 1H), 4,0 (s, 3H), 2,20 (s, 3H). MS (ESI+) [M+H]/z, calculado 468, encontrado 468. Anal. Calculado: C, 66,80; H, 4,74; N, 20,97. Encontrado: C, 66,01; H, 4,72; N, 20,81.
426
A una solución de 1-fluoro-2-isocianato-4-nitro-benceno (9,82 g, 54 mmol) en THF (40 ml) a 23ºC bajo atmósfera de argón se añadió 2-trimetil-silanil-etanol (7,72 ml, 54 mmol). La mezcla resultante se agitó durante 11 horas y a continuación se calentó hasta 50ºC durante 2 horas. La mezcla de reacción se dejó enfriar hasta 23ºC, y la reacción se detuvo bruscamente añadiendo a la mezcla NaHCO_{3} saturado (acuoso) y se extrajo con EtOAc (3 x 100 ml). La mezcla de las fracciones de acetato de etilo se lavó con HCl 1N (acuoso) (2 x 90 ml), agua (90 ml) y salmuera (90 ml), se secó con Na_{2}SO_{4}, se filtró y se concentró hasta obtener sólido amarillo. La cromatografía en columna de gel de sílice (acetato de etilo-hexano 2:8) proporcionó éster 2-trimetil-silanil-etílico del ácido (2-fluoro-5-nitro-fenil)-carbámico (12,3 g, 77%). ^{1}HRMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta: 9,06 (dd, 1H, J = 6,89 Hz, J = 2,63 Hz), 7,89 (m, 1H), 7,20 (m, 1H), 6,91 (s ancho, 1H), 4,31 (t, 2H, J = 8,67 Hz), 1,06 (t, 2H, J = 8,67 Hz), 0,05 (s, 9H). LCMS (ESI-) [M+H]/z, calculado 299, encontrado 299.
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427
Una mezcla de éster 2-trimetil-silanil-etílico del ácido (2-fluoro-5-nitro-fenil)-carbámico (3,00 g, 10 mmol) y Pd al 10%/C (300 mg) en metanol (30 ml) se hidrogenó a 23ºC. La mezcla resultante se agitó durante 24 h. La mezcla de reacción se filtró a través de Celite y se concentró obteniéndose éster 2-trimetil-silanil-etílico del ácido (5-amino-2-fluorofenil)-carbámico (2,62 g, 97%). ^{1}HRMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta: 7,52 (m, 1H), 6,85 (dd, 1H, J = 10,8 Hz, J = 8,69 Hz), 6,73 (s ancho, 1H), 6,28 (m, 1H), 4,27 (t, 2H, J = 8,57 Hz), 3,0-4,4 (s ancho, 2H), 1,06 (t, 2H, J = 8,58 Hz), 0,07 (s, 9H).
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Ejemplo 49(b)
6-[N-(3-((1,3-dimetil-1H-pirazol-5-il)-carboxamido)-4-metilfenil) amino]-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]-1H-indazol 
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428 
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El compuesto del Ejemplo 49(b) se preparó de manera similar al Ejemplo 49(a) excepto que se usó, en la etapa (i), 1-metil-2-isocianato-4-nitrobenceno en lugar de 1-fluoro-2-isocianato-4-nitrobenceno. ^{1}HRMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta: 8,59 (m, 1H), 8,35 (s, 1H), 8,00 (d, 1H, J = 8,73 Hz), 7,87 (d, 1H, J = 16,38 Hz), 7,80 (td, 1H, J = 7,66 Hz, J = 1,85 Hz), 7,64 (d, 1H, J = 7,85 Hz), 7,49 (d, 1H, J = 16,35 Hz), 7,26 (m, 1H), 7,19 (m, 2H), 7,09 (d, 1H, J = 1,48 Hz), 7,02 (dd, 1H, J = 8,17 Hz, J = 2,24 Hz), 6,97 (dd, 1H, J = 8,79 Hz, J = 1,80 Hz), 6,81 (s ancho, 1H), 4,00 (s, 3H), 2,20 (s, 3H), 2,18 (s, 3H). LCMS (ESI+) [M+H]/z, calculado 464, encontrado 464.
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Ejemplo 49(c)
6-[N-(3-acetamido-4-fluorofenil)amino]-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]-1H-indazol 
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429 
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El compuesto del Ejemplo 49(c) se preparó de manera similar al Ejemplo 49(a) excepto que se usó anhídrido acético en lugar de ácido 2,5-dimetil-2H-pirazol-3-carboxílico: ^{1}HRMN (300 MHz, CD_{3}OD) \delta: 8,44 (m, 1H), 7,82 (d, 1H), 7,70 (m, 3H), 7,55 (d, 1H), 7,41 (d, 1H, J = 16,4 Hz), 7,19 (m, 1H), 7,03 (s, 1H), 6,94 (m, 1H), 6,87 (m, 2H), 2,11 (s, 3H). LCMS (área 100%) Rt = 4,53 min, (pos) [M+H]/z, calculado 388,4, encontrado 388,4.
Los compuestos de los Ejemplos 49(d)-49(x) pueden prepararse de manera similar a la descrita en el Ejemplo 49(a).
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Ejemplo 49(d)
430 
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Ejemplo 49(e)
431 
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Ejemplo 49(f)
432 
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Ejemplo 49(g)
433 
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Ejemplo 49(h)
434 
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Ejemplo 49(i)
435 
\newpage
Ejemplo 49(j)
436 
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Ejemplo 49(k)
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437 
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Ejemplo 49(l)
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438 
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Ejemplo 49(m)
439 
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Ejemplo 49(n)
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440 
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Ejemplo 49(o)
441 
\newpage
Ejemplo 49(p)
442 
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Ejemplo 49(q)
443 
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Ejemplo 49(r)
444 
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Ejemplo 49(s)
445 
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Ejemplo 49(t)
446 
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Ejemplo 49(u)
447 
\newpage
Ejemplo 49(v)
448 
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Ejemplo 49(w)
449 
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Ejemplo 49(x)
450 
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Ejemplo de referencia 50
6-[3-(5-amino-2-fluorofenil)carbamoil-5-metil-2-etil-2H-pirazol-4-il]-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]-1H-indazol
451 
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El compuesto del Ejemplo de referencia 50 se preparó a partir del material de partida descrito a continuación de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 11. MS (ESI+) [M+H]/z, calculado 482, encontrado 482. Calculado: C, 67,35; H, 5,02; N, 20,36. Encontrado: C, 66,70; H, 5,09; N, 19,95.
452 
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La (2-fluoro-5-nitro-fenil)-amida del ácido 2-etil-5-metil-2H-pirazol-3-carboxílico se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo 47, etapa (i) excepto que se usaron ácido 2-etil-5-metil-2H-pirazol-3-carboxílico y HATU en lugar de cloruro de benzoilo. MS (ESI+) [M+H]/z, calculado 293, encontrado 293.
453
La (2-fluoro-5-nitro-fenil)-amida del ácido 2-etil-5-metil-2H-pirazol-3-carboxílico se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 40(b), etapa (i). MS (ESI+) [M+H]/z, calculado 263, encontrado 263.
454
6-[3-(5-Amino-2-fluorofenil)carbamoil-5-metil-2-etil-2H-pirazol-4-il]-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]-1-(2-trimetil-silanil-etoximetil)-1H-indazol se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo 48(a), etapa (iii) excepto que se usó (5-amino-2-fluoro-fenil)-amida del ácido 2-etil-5-metil-2H-pirazol-3-carboxílico como material de partida. MS (ESI+) [M+H]/z, calculado 612, encontrado 612.
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Ejemplo de referencia 51
6-pirid-4-il-3-E-(N-(pirrol-1-il)iminometil)-1H-indazol
455
El 6-pirid-4-il-3-E-(N-(pirrol-1-il)iminometil)-1-(2-trimetil-silanil-etoximetil)-1H-indazol se convirtió en 6-pirid-4-il-3-E-(N-(pirrol-1-il)iminometil)-1H-indazol de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 29(a). ^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta: 8,76 (s, 1H), 8,67 (d, 2H, J = 6,1 Hz), 8,53 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 7,74 (s, 1H), 7,61 (d, 2H, J = 6,2 Hz), 7,54 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 7,27-7,25 (m, 2H), 6,31- 6,29 (m, 2H). MS (ES) [M+H]/z, calculado 288, encontrado 288. Anal. Calculado, C (71,07), H (4,56), N (24,37). Encontrado: C (70,81), H (4,57), N (24,14).
El material de partida se preparó como sigue:
456
Una solución de 6-piridin-4-il-1-(2-trimetil-silanil-etoximetil)-1H-indazol-3-carbaldehído (208 mg, 0,59 mmol), N-aminopirrol (145 mg, 1,76 mmol) y ácido acético (5,8 ml) en etanol (1 ml) se calentó a 95ºC durante 16 h. A continuación se evaporó la solución bajo presión reducida y se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice obteniéndose 6-pirid-4-il-3-E-(N-(pirrol-1-il)iminometil)-1-(2-trimetil-silanil-etoximetil)-1H-indazol en forma de un aceite (140 mg, 57%). ^{1}HRMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta: 9,08 (s, 1H), 8,71 (d, 2H, J = 6,1 Hz), 8,46 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 8,34 (s, 1H), 7,85 (d, 2H, J = 6,2 Hz), 7,80 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 7,56 (t, 2H, J = 2,3 Hz), 6,25 (t, 2H, J = 2,3 Hz), 5,93 (s, 1H), 5,74 (s, 2H), 3,64 (t, 2H, J = 7,9 Hz), 0,86 (t, 2H, J = 7,9 Hz), 0,00 (s, 9H).
\newpage
Ejemplo de referencia 52(a)
6-(7-azaindazol-4-il)-3-E-estiril-1H-indazol
457
El compuesto sem del Ejemplo de referencia 52(a) se convirtió en el compuesto del Ejemplo 52(a) de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 27 (a). ^{1}HRMN (300 MHz, DMSO-d_{6}) \delta: 8,63 (d, 1H, J = 4,8 Hz), 8,41 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 8,37 (s, 1H), 7,99 (s, 1H), 7,76 (d, 2H, J = 7,3 Hz), 7,70 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 7,60-7,85 (m, 6H). HRMS (FAB) [M+H]/z, calculado 338,1400, encontrado 338,1389. Analizado con 1,1 ácido trifluoroacético: Calculado, C (60,21), H (3,51), N (15,13). Encontrado: C (59,93), H (3,59), N (14,86).
El material de partida se preparó como sigue:
458
Una solución de 3-estiril-1-(2-trimetil-silanil-etoximetil)-6-trimetilestannil-1H-indazol (1,0 g, 1,90 mmol), 1-(4-yodo-pirazolo[3,4-b]piridin-1-il)-etanona (0,56 g, 1,90 mmol), AsPh_{3} (116 mg, 0,38 mmol) y Pd_{2}dba_{3} (87 mg, 0,09 mmol) en dioxano desgasificado (10 ml) se calentó a 110ºC durante 3 h. La solución se diluyó a continuación con acetato de etilo (50 ml), se lavó con salmuera (2x10 ml), se secó sobre MgSO_{4} y se concentró bajo presión reducida. La purificación por cromatografía en columna de gel de sílice dio el Ejemplo de referencia 52(a) en forma de un sólido blanco (412 mg, 46%). ^{1}HRMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta: 8,82 (d, 1H, J = 5,8 Hz), 8,52 (s, 1H), 8,29 (d, 1H, J = 8,2 Hz), 8,05 (s, 1H), 7,73- 7,32 (m, 10H), 5,86 (s, 2H), 3,69 (t, 2H, J = 8,2 Hz), 0,97 (t, 2H, J = 8,2 Hz), -0,03 (s, 9H).
459
Una solución de 6-yodo-3-estiril-1-(2-trimetil-silanil-etoximetil)-1H-indazol (2,90 g, 6,10 mmol), hexametildiestaño (2,00 g, 6,12 mmol) y Pd(PPh_{3})_{4} (282 mg, 0,24 mmol) en dioxano desgasificado (10 ml) se calentó a 110ºC durante 3 h. La solución se diluyó a continuación con acetato de etilo (200 ml), se lavó con salmuera (2x20 ml), se secó sobre MgSO_{4} y se evaporó bajo presión reducida. La purificación por cromatografía en columna de gel de sílice dio 3-estiril-1-(2-trimetil-silaniletoximetil)-6-trimetilestannil-1H-indazol en forma de un aceite amarillo (3 g, 96%). ^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta: 8,02 (d, 1H, J = 7,4 Hz), 7,71 (s, 1H), 7,71- 7,29 (m, 8H), 5,77 (s, 2H), 3,65 (t, 2H, J = 16,3 Hz), 0,95 (t, 2H, J = 16,4 Hz), 0,38 (s, 9H), -0,03 (s, 9H).
460
Una mezcla de 4-cloro-1H-pirazolo[3,4-b]piridina (820 mg, 5,30 mmol), yoduro de sodio (2,4 mg, 16,0 mmol) y cloruro de acetilo (0,8 ml) en acetonitrilo (6 ml) se llevó a reflujo durante 8 h. La mezcla se trató a continuación con una solución acuosa al 10% de NaCO_{3} (10 ml) y una solución acuosa al 10% de NaHSO_{3} (10 ml) y se mantuvo 10 min. La mezcla se extrajo con acetato de etilo (50 ml) y los materiales orgánicos se lavaron con salmuera (10 ml), se secaron sobre MgSO_{4} y se evaporaron bajo presión reducida. La purificación por cromatografía en columna de gel de sílice dio 1-(4-yodo-pirazolo[3,4-b]piridin-1-il)-etanona en forma de un sólido amarillo (650 mg, 42%). ^{1}HRMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta: 8,39 (d, 1H, J =5,0 Hz), 8,04 (s, 1H), 7,76 (d, 1H, J = 5,0 Hz), 2,88 (s, 3H).
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461 
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La 1,7-dihidro-pirazolo[3,4-b]piridin-4-ona (1,2 g, 8,8 mmol) (Dorn, H. et al., Prakt. Chem., 324, 557-62 (1982)) en POCl_{3} (15 ml) a 0ºC se trató con PCl_{5} (2,5 mg, 0,01 mmol). La solución se dejó calentar hasta la temperatura ambiente durante 1 h, a continuación se calentó hasta 90ºC y se mantuvo 3 h. La solución se concentró bajo presión reducida, a continuación se trató con hielo y agua (50 ml). La mezcla resultante se extrajo con acetato de etilo (100 ml) y la capa orgánica se lavó con una solución acuosa saturada de hidrogenocarbonato de sodio (30 ml). La capa orgánica se secó sobre MgSO_{4}, a continuación se evaporó bajo presión reducida obteniéndose 4-cloro-1H-pirazolo[3,4-b]piridina en forma de un sólido amarillo (820 mg, 60%). ^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta: 8,57 (d, 1H, J = 5,2 Hz), 8,25 (s, 1H), 7,28 (d, 1H, J = 5,2 Hz).
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Ejemplo de referencia 52(b)
6-(7-azaindol-4-il)-3-E-estiril-1H-indazol 
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462 
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El sem-yodoindazol se convirtió en el compuesto del Ejemplo de referencia 52(b) de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 27(a). ^{1}H RMN (300 MHz, MeOH-d_{4}) \delta: 8,40 (d, 1H, J = 5,3 Hz), 8,53 (d, 1H, J = 8,6 Hz), 7,74-7,35 (m, 10 H), 6,90 (s, 1H). HRMS (FAB) [M+H]/z, calculado 337,1448, encontrado 337,1457. Analizado con 0,3 H_{2}O: Calculado, C (77,31), H (4,90), N (1639). Encontrado: C (77,51), H (4,88), N (16,27).
El material de partida se preparó como sigue:
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463 
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La 4-cloro-1H-pirrolo[2,3-b]piridina (Clark, B. A. et al., J. Chem. Soc. P1, 2270-74 (1974)) se convirtió en 4-yodo-1H-pirrolo[2,3-b]piridina de manera similar a la descrita en el Ejemplo 52(a). ^{1}HRMN (300 MHz, MeOH-d_{4}) \delta: 8,10 (m, 1H), 7,89 (d, 1H, J = 5,0 Hz), 7,58 (m, 1H), 7,50 (d, 1H, J = 5,0 Hz), 6,26 (s ancho, 1H).
\newpage
Ejemplo de referencia 53(a)
3-(1H-benzoimidazol-2-il)-N-(4-hidroxifenil)-1H-indazol-6-carboxamida 
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464 
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A una solución de ácido 3-(1H-benzoimidazol-2-il)-1H-indazol-6-carboxílico (208 mg, 0,7 mmol) en dimetilformamida anhidra (6 mL) se añadió 4-aminofenol (82 mg, 0,7 mmol) seguido por HATU (312 mg, 0,8 mmol) y a continuación se añadió trietilamina (20 gotas). La mezcla de reacción se agitó durante una noche a la temperatura ambiente. LC/MS mostró el producto deseado como componente principal. El disolvente se separó a vacío. El residuo remanente se recogió en agua y acetato de etilo. Se separaron las capas y la capa orgánica se concentró a vacío. El residuo se disolvió en metanol (10 mL) y la mitad de esta solución se purificó por HPLC usando un gradiente de acetonitrilo al 5%/agua hasta acetonitrilo al 55%/agua durante 60 minutos con ácido trifluoroacético al 0,1% en agua. El compuesto del epígrafe se aíslo en forma de un sólido (20 mg). ^{1}HRMN (metanol-d_{4}) \delta: 6,87 (2H, d, 8,8 Hz), 7,55 (2H, d, 8,7 Hz), 7,61 (2H, m), 7,87 (2H, s ancho), 8,00 (1H, d, 8,4 Hz), 8,35 (1H, s), 8,52 (1H, d, 8,6 Hz). MS [Ionización química a presión atmosférica, abreviadamente APCI por la expresión inglesa Atmospheric Pressure Chemical Ionization) pos] 370,1.
El material de partida se preparó como sigue:
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465 
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A ácido 1H-indol-6-carboxílico (2,0 g, 12,42 mmol) en agua (100 mL) se añadió NaNO_{2} (8,56 g, 124,2 mmol). A esta suspensión se añadió a continuación lentamente y gota a gota mediante un embudo de adición HCl 6N (16 mL). La suspensión resultante se dejó en agitación a la temperatura ambiente durante una noche. El precipitado sólido se filtró y se lavó con agua (50 mL) obteniéndose 2,35 g (100%) de ácido 3-formil-1H-indazol-6-carboxílico. ^{1}HRMN (DMSO-d_{6}) \delta: 14,46 (1H, s), 10,21 (1H, s), 8,26 (1H, s), 8,20 (1H, d, J = 8,5 Hz), 7,90 (1H, d, J = 8,3 Hz). MS (APCI positivo) 205 (éster metílico).
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466 
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A ácido 3-formil-1H-indazol-6-carboxílico (2,35 g, 12,42 mmol) en DMF (60 mL) se añadió 1,2-fenilendiamina (12,42 mmol, 1,34 g) y azufre en polvo (1,1 equivalentes, 13,66 mmol). Esta mezcla se calentó a reflujo a continuación durante 6 horas. La reacción se siguió por TLC y LC-MS. Después de enfriamiento, se añadió agua (50 mL) a la mezcla de reacción y el precipitado pardo que se formó se filtró y se recogió obteniéndose 3,1 g (90%) de ácido 3-(1H-benzoimidazol-2-il)-1H-indazol-6-carboxílico. ^{1}HRMN (DMSO-d_{6}) \delta: 14,01 (1H, s), 8,58 (1H, d, J = 8,5 Hz), 8,24 (1H, s), 7,87 (1H, d, J = 8,7 Hz), 7,64 (2H, m), 7,25 (2H, m). MS (APCI positivo) 279.
\newpage
Ejemplo de referencia 53(b)
3-(1H-benzoimidazol-2-il)-N-ciclopropil-1H-indazol-6-carboxamida
467
A ácido 3-(1H-benzoimidazol-2-il)-1H-indazol-6-carboxílico (200 mg, 0,719 mmol) en DMF (30 mL) se añadió ciclopropilamina (98 mg, 0,719 mmol), HATU (0,719 mmol, 273 mg) y trietilamina (0,726 mmol, 0,1 mL). Esta solución se dejó en agitación a la temperatura ambiente durante una noche. La mezcla de reacción se lavó con un líquido acuoso y se extrajo con acetato de etilo (3x50 mL). La capa orgánica se secó a continuación con MgSO_{4}, se filtró y se concentró obteniéndose un aceite oscuro. La cromatografía en columna de desarrollo rápido (acetato de etilo/éter de petróleo 30-70%) proporcionó 3-(1H-benzoimidazol-2-il)-N-ciclopropil-1H-indazol-6-carboxamida en forma de un sólido amarillo (0,130 g, 57%). ^{1}HRMN (DMSO-d_{6}) \delta: 13,88 (1H, s), 8,63 (1H, m), 8,51 (1H, d, J = 8,5 Hz), 8,09 (1H, s), 7,75 (1H, d, J = 8,7 Hz), 7,63 (2H, s ancho), 7,21 (2H, m). 2,89 (1H, m), 0,72 (2H, m), 0,63 (2H, m). MS (APCI positivo) 318,1.
Ejemplo de referencia 53(c)
3-(1H-benzoimidazol-2-il)-N-(4-hidroxi-3-metilfenil)-1H-indazol-6-carboxamida
468
El compuesto del Ejemplo de referencia 53(c) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 53(a) excepto que se usó 3-metil-4-aminofenol en lugar de 4-aminofenol. ^{1}HRMN (DMSO-d_{6}) \delta: 8,59 (1H, d, J = 8,3 Hz), 8,25 (1H, s), 7,89 (1H, dd, J = 1,3, 8,5 Hz), 7,68 (2H, s ancho), 7,28 (2H, m), 7,14 (1H, d, J = 8,5 Hz), 6,74 (1H, s), 6,68 (2H, dd, J = 3,0, 8,3 Hz). MS (APCI positivo) 384,1.
Ejemplo de referencia 53(d)
3-(1H-benzoimidazol-2-il)-N-(4-hidroxi-2,3-dimetilfenil)-1H-indazol-6-carboxamida
469
El compuesto del Ejemplo de referencia 53(d) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 53(a) excepto que se usó 2,3-dimetil-4-aminofenol en lugar de 4-aminofenol. ^{1}HRMN (DMSO-d_{6}) \delta: 9,93 (1H, s), 9,22 (1H, s), 8,56 (1H, d, J = 8,5 Hz), 8,25 (1H, s), 7,90 (1H, d, J = 8,5 Hz), 7,73 (1H, s ancho), 7,53 (1H, s ancho), 7,23 (2H, s ancho), 6,92 (1H, d, J = 8,3 Hz), 6,68 (1H, d, J = 8,5 Hz), 2,09 (6H, s ancho). MS (APCI positivo) 398,4.
Ejemplo de referencia 53(e)
3-(1H-Benzoimidazol-2-il)-1H-indazol-6-carboxamida
470
El compuesto del Ejemplo de referencia 53(e) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 53(a) excepto que se usó 1,1,1,3,3,3-hexametildisilazano en lugar de 4-aminofenol. ^{1}HRMN (DMSO-d_{6}) \delta: 13,91 (1H, s), 13,04 (1H, s), 8,52 (1H, d, J = 8,3 Hz), 8,20 (1H, s ancho), 8,15 (1H, s), 7,81 (1H, d, J = 7,7 Hz), 7,75 (1H, d, J = 6,6 Hz), 7,51 (2H, m), 7,21 (2H, m). MS (APCI positivo) 278,1.
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Ejemplo de referencia 53(f)
3-(1H-benzoimidazol-2-il)-N-benciloxi-1H-indazol-6-carboxamida
471
El compuesto del Ejemplo de referencia 53(f) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 53(a) excepto que se usó O-bencil-hidroxilamina en lugar de 4-aminofenol. ^{1}HRMN (DMSO-d_{6}) \delta: 13,94 (1H, s), 13,06 (1H, s), 11,97 (1H, s), 8,55 (1H, d, J = 8,8 Hz), 8,02 (1H, s), 7,78 (1H, d, J = 8,3 Hz), 7,52 (1H, d, J = 8,3 Hz), 7,50 (3H, m), 7,40 (3H, m), 7,22 (2H, m), 4,97 (2H, s). MS (APCI positivo) 384,2.
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Ejemplo de referencia 53(g)
3-(1H-benzoimidazol-2-il)-N-(3-fluoro-4-hidroxifenil)-1H-indazol-6-carboxamida
472
El compuesto del Ejemplo de referencia 53(g) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 53(a) excepto que se usó 3-fluoro-4-aminofenol en lugar de 4-aminofenol. ^{1}HRMN (CH_{3}OD) \delta: 8,58 (1H, d, J = 8,5 Hz), 8,20 (1H, s), 7,84 (1H, d, J = 8,7 Hz), 7,68 (2H, s ancho), 7,63 (1H, dd, J = 2,4, 13 Hz), 7,29 (3H, m), 6,92 (1H, t, J = 9,2 Hz). MS (APCI positivo) 388,3.
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Ejemplo de referencia 54(a)
3-(5,6-difluoro-1H-benzoimidazol-2-il)-N-(4-hidroxifenil)-1H-indazol-6-carboxamida
473
Aplicando el mismo procedimiento que para la síntesis del ácido 3-(1H-benzoimidazol-2-il)-1H-indazol-6-carboxílico del Ejemplo de referencia 53(a), etapa (ii), N-(4-hidroxifenil)-3-formil-1H-indazol-6-carboxamida y 4,5-difluoro-1,2-fenilendiamina dieron 3-(5,6-difluoro-1H-benzoimidazol-2-il)-N-(4-hidroxifenil)-1H-indazol-6-carboxamida en forma de un sólido de color canela. ^{1}H RMN (DMSO-d_{6}) \delta: 13,99 (1H, s), 13,27 (1H, s), 10,21 (1H, s), 9,25 (1H, s), 8,52 (1H, d, J = 8,7 Hz), 8,21 (1H, s), 7,85 (1H, d, J = 9,0 Hz), 7,80 (1H, t, J = 9,8 Hz), 7,55 (2H, d, J = 8,7 Hz), 7,47 (1H, t, J = 9,8 Hz), 6,75 (2H, d, J = 8,7 Hz). MS (APCI positivo) 406.
\newpage
El material de partida se preparó como sigue:
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474
A una solución de ácido 3-formil-1H-indazol-6-carboxílico (1,6 g, 8,4 mmol) y 4-aminofenol (1,8 g, 16,8 mmol) en dimetilformamida anhidra (35 mL) se añadió HATU (3,8 g, 16,8 mmol) seguido de trietilamina (1,4 mL, 10,1 mmol). La mezcla de reacción se agitó a la temperatura ambiente y se controló por TLC y LC/MS. Después de dos horas se completó la reacción. Se separó el disolvente a vacío y el producto se purificó por cromatografía en columna de desarrollo rápido usando acetato de etilo:éter de petróleo 1:1 hasta acetato de etilo puro. Se aisló N-(4-hidroxifenil)-3-formil-1H-indazol-6-carboxamida en forma de un sólido de color canela. ^{1}HRMN (DMSO-d_{6}) \delta: 6,79 (2H, d, 8,9 Hz), 7,59 (2H, d, 8,9 Hz), 7,94 (1H, d, 9,8 Hz), 8,24 (1H, d, 8,2 Hz), 8,31 (1H, s), 9,31 (1H, s ancho), 10,27 (2H, s). MS (APCI pos) 282,1.
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Ejemplo de referencia 54(b)
3-(5,6-dicloro-1H-benzoimidazol-2-il)-N-(4-hidroxifenil)-1H-indazol-6-carboxamida 
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475
El compuesto del Ejemplo de referencia 54(b) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 54(a) excepto que se usó 4,5-dicloro-1,2-fenilendiamina en lugar de 4,5-difluoro-1,2-fenilendiamina. ^{1}HRMN (DMSO-d_{6}) \delta: 14,08 (1H, s), 13,38 (1H, s), 10,22 (1H, s), 9,27 (1H, s), 8,52 (1H, d, J = 8,7 Hz), 8,23 (1H, s), 8,02 (1H, s), 7,86 (1H, d, J = 8,7 Hz), 7,70 (1H, s), 7,55 (2H, d, J = 8,7 Hz), 6,75 (2H, d, J = 8,7Hz). MS (APCI positivo) 438.
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Ejemplo de referencia 54(c)
3-(5-metoxi-1H-benzoimidazol-2-il)-N-(4-hidroxifenil)-1H-indazol-6-carboxamida 
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476
El compuesto del Ejemplo de referencia 54(c) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 54(a) excepto que se usó 4-metoxi-1,2-fenilendiamina en lugar de 4,5-difluoro-1,2-fenilendiamina. ^{1}HRMN (DMSO-d_{6}) \delta: 13,76 (1H, s), 12,77 (1H, s), 10,13 (1H, s), 9,17 (1H, s), 8,45 (1H, d, J = 8,3 Hz), 8,11 (1H, s), 7,75 (1H, d, J = 8,6 Hz), 7,46 (2H, d, J = 8,7 Hz), 7,32 (1H, d, J = 8,3 Hz), 6,91 (1H, s), 6,77 (1H, m), 6,67 (2H, d, J = 8,7Hz), 3,72 (3H, s). MS (APCI positivo) 400.
\newpage
Ejemplo de referencia 54(d)
3-[1H-nafto(2,3-d)imidazol-2-il]-N-(4-hidroxifenil)-1H-indazol-6-carboxamida
477
El compuesto del Ejemplo de referencia 54(d) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 54(a) excepto que se usó 2,3-naftalendiamina en lugar de 4,5-difluoro-1,2-fenilendiamina. ^{1}HRMN (DMSO-d_{6}) \delta: 14,11 (1H, s), 13,10 (1H, s), 10,24 (1H, s), 9,27 (1H, s), 8,64 (1H, d, J = 8,7 Hz), 8,28 (1H, s), 8,25 (1H, s), 7,97 (2H, m), 7,73 (1H, s ancho), 7,89 (1H, d, J = 8,6 Hz), 7,56 (2H, d, J = 8,7 Hz), 7,38 (2H, b), 6,76 (2H, d, J = 8,7 Hz). MS (APCI positivo) 420.
Ejemplo de referencia 54(e)
3-[1H-nafto(1,2-d)imidazol-2-il]-N-(4-hidroxifenil)-1H-indazol-6-carboxamida
478
El compuesto del Ejemplo de referencia 54(e) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 54(a) excepto que se usó 1,2-naftalendiamina en lugar de 4,5-difluoro-1,2-fenilendiamina. ^{1}HRMN (DMSO-d_{6}) \delta: 13,93 (1H, s), 13,38 (1H, s), 10,23 (1H, s), 9,27 (1H, s), 8,70 (2H, m), 8,22 (1H, s), 8,00 (1H, d, J = 8,0Hz), 7,87 (1H, m), 7,72 (3H, m), 7,57 (2H, d, J = 8,7 Hz), 6,76 (2H, d, J = 8,6 Hz): MS (APCI positivo) 420.
Ejemplo de referencia 54(f)
3-(4,5-dimetil-1H-benzoimidazol-2-il)-N-(4-hidroxifenil)-1H-indazol-6-carboxamida
479
El compuesto del Ejemplo de referencia 54(f) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 54(a) excepto que se usó 3,4-dimetil-1,2-fenilendiamina en lugar de 4,5-difluoro-1,2-fenilendiamina. ^{1}HRMN (DMSO-d_{6}) \delta: 13,77 (1H, d, tautómeros), 12,70 (1H, d, tautómeros), 10,11 (1H, s), 9,16 (1H, s), 8,48 (1H, d, J = 8,3 Hz), 8,09 (1H, s), 7,73 (1H, d, J = 8,6 Hz), 7,47 (2H, d, J = 8,7 Hz), 7,10 (1H, d, J = 8,3 Hz), 6,93 (1H, d, J = 83 Hz), 6,65 (2H, d, J = 8,7Hz), 2,49 (3H, s), 2,24 (3H, s). MS (APCI positivo) 398,4.
Ejemplo de referencia 54(g)
3-(5-terc.butil-1H-benzoimidazol-2-il)-N-(4-hidroxifenil)-1H-indazol-6-carboxamida
480
El compuesto del Ejemplo de referencia 54(g) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 54(a) excepto que se usó 4-terc.butil-1,2-fenilendiamina en lugar de 4,5-difluoro-1,2-fenilendiamina. ^{1}HRMN (acetona-d_{6}) \delta: 12,88 (1H, s), 9,47 (1H, s), 8,63 (1H, d, J = 8,7 Hz), 8,18 (1H, s), 7,82 (1H, d, J = 8,3 Hz), 7,57 (4H, m), 7,26 (1H, d, J = 8,4 Hz), 6,74 (1H, d, J = 8,3Hz), 1,31 (9H, s). MS (APCI positivo) 426.
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Ejemplo de referencia 54(h)
3-(4-trifluorometil-1H-benzoimidazol-2-il)-N-(4-hidroxifenil)-1H-indazol-6-carboxamida
481 
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El compuesto del Ejemplo de referencia 54(h) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 54(a) excepto que se usó 4-trifluorometil-1,2-fenilendiamina en lugar de 4,5-difluoro-1,2-fenilendiamina. ^{1}HRMN (metanol-d_{4}) \delta: 6,86 (2H, d, 8,9 Hz), 7,54 (2H, d, 8,9 Hz), 7,6 (1H, dd, 8,5 Hz), 7,83 (1H, d, 8,3 Hz), 7,89 (1H, dd, 8,6 Hz), 8,04 (1H, s ancho), 8,25 (1H, s), 8,61 (1H, d, 8,6 Hz). MS (APCI pos) 438,1.
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Ejemplo de referencia 54(i)
3-(5-fluoro-1H-benoimidazol-2-il)-N-(4-hidroxifenil)-1H-indazol-6-carboxamida
482 
\vskip1.000000\baselineskip
El compuesto del Ejemplo de referencia 54(i) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 54(a) excepto que se usó 4-fluoro-1,2-fenilendiamina en lugar de 4,5-difluoro-1,2-fenilendiamina. ^{1}HRMN (acetona-d_{6}) \delta: 13,40 (1H, b), 12,47 (1H, b), 9,74 (1H, s), 8,67 (1H, d, J = 8,6 Hz), 8,66 (1H, s), 8,29 (1H, s), 7,94 (1H, d, J = 8,5 Hz), 7,67 (2H, J = 8,4 Hz), 7,64 (1H, m), 7,40 (1H, m), 7,05 (1H, t, J = 8,5 Hz), 6,83 (2H, d, J = 8,4 Hz). MS (APCI pos) 388.
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Ejemplo de referencia 54(j)
3-(5H-[1,3]dioxolo[4,5-f]benzoimidazol-6-il)-N-(4-hidroxifenil)-1H-indazol-6-carboxamida
483 
\vskip1.000000\baselineskip
El compuesto del Ejemplo de referencia 54(j) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 54(a) excepto que se usó 4,5-metilendioxi-1,2-fenilendiamina en lugar de 4,5-difluoro-1,2-fenilendiamina. ^{1}H RMN (metanol-d_{4}) \delta: 6,85 (2H, d, 8,9 Hz), 7,15 (2H, s), 7,54 (2H, d, 8,9 Hz), 7,86 (1H, dd, 8,6 Hz), 8,23 (1H, s), 8,55 (1H, dd, 8,5 Hz). MS (APCI pos) 414,1.
\newpage
Ejemplo de referencia 54(k)
3-(5,6-dimetoxi-1H-benzoimidazol-2-il)-N-(4-hidroxifenil)-1H-indazol-6-carboxamida
484
El compuesto del Ejemplo de referencia 54(k) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 54(a) excepto que se usó 4,5-dimetoxi-1,2-fenilendiamina en lugar de 4,5-difluoro-1,2-fenilendiamina. ^{1}HRMN (metanol-d_{4}) \delta: 3,98 (6H, s), 6,85 (2H, d, 8,78 Hz), 7,29 (2H, s ancho), 7,54 (2H, d, 8,73 Hz), 7,86 (1H, d, 8,57 Hz), 8,24 (1H, s), 8,57 (1H, d, 8,58 Hz). MS (APCI pos) 430,1.
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Ejemplo de referencia 54(l)
3-(5-cloro-1H-benzoimidazol-2-il)-N-(4-hidroxifenil)-1H-indazol-6-carboxamida
485
El compuesto del Ejemplo de referencia 54(l) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 54(a) excepto que se usó 4-cloro-1,2-fenilendiamina en lugar de 4,5-difluoro-1,2-fenilendiamina. ^{1}HRMN (metanol-d_{4}) \delta: 8,62 (1H, d, J = 8,6 Hz), 8,30 (1H, s), 7,90 (1H, dd, J1 = 8,6 Hz, J2 = 1,3 Hz), 7,69 (s ancho, 2H), 7,56 (2H, d, J = 6,89 Hz), 7,33 (1H, dd, J1 = 8,59, J2 = 1,97 Hz), 6,88 (2H, d, J = 6,89 Hz). MS (APCI pos) 404,1.
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Ejemplo de referencia 55
3-1H-benzoimidazol-2-il-6-piridin-4-il-1H-indazol
486
El compuesto sem del Ejemplo de referencia 55 se convirtió en el compuesto del Ejemplo de referencia 55 de manera similar a la descrita en el Ejemplo 27(a). ^{1}HRMN (300 MHz, CDCl_{3} + MeOH-d_{4}+ DMSO-d_{6}) \delta: 8,71-8,64 (m, 3H), 8,03 (s, 1H), 7,86 (dd, 2H, J = 4,7, 1,6 Hz), 7,77-7,72 (m, 3H), 7,32 (dd, 2H, J = 6,0, 3,1 Hz). HRMS (FAB) [M+H]/z, calculado 312,1244, encontrado 312,1253. Analizado con 1,40 H_{2}O: Calculado, C (67,80), H (4,73), N (20,81). Encontrado: C (68,06), H (4,45), N (20,68).
El material de partida se preparó como sigue:
487
Una solución de 6-piridin-4-il-1-(2-trimetil-silanil-etoximetil)-1H-indazol-3-carbaldehído (0,70 g, 2,0 mmol), benceno-1,2-diamina (0,26 g, 2,4 mmol) y azufre (77 mg, 2,4 mmol) en DMF (10 ml) se calentó en un baño de aceite a 90ºC durante una noche. La mezcla resultante se vertió en salmuera (200 ml) y a continuación se extrajo con EtOAc (3x60 ml). Las capas orgánicas reunidas se secaron sobre MgSO_{4} y se concentraron bajo presión reducida. El aceite resultante se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice obteniéndose 6-piridin-4-il-1-(2-trimetil-silanil-etoximetil)-3-[1-(2-trimetil-silanil-etoximetil)-1H-benzoimidazol-2-il]-1H-indazol en forma de un aceite pardo claro (0,75 g, 65%). ^{1}HRMN (CDCl_{3}) \delta: 8,82 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 8,73 (d, 1H, J = 5,8 Hz), 7,94-7,89 (m, 2H), 7,87 (s, 1H), 7,69-7,62 (m, 4H), 7,40-7,34 (m, 2H), 3,70-3,49 (m, 4H), 0,94 (t, 2H, J = 8,3 Hz), 0,67 (t, 2H, J = 8,2 Hz), -0,03 (s, 9H), -0,13 (s, 9H).
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Ejemplo de referencia 56
6-[3-(propin-3-ilcarbamoil)benzoil]-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]-1H-indazol
488 
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Una solución de ácido 2-{1-[3-((E)-2-piridin-2-il-vinil)-1H-indazol-6-il]-metanoil}-benzoico (55,4 mg, 0,15
mmol) (síntesis descrita a continuación), propargilamina (15,4 mL, 0,225 mmol) y trietilamina (41,8 mL, 0,30 mmol), disuelta en DMF (1,5 mL), se trató con hexafluoro-fosfato de O-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronio (62,7 mg, 0,165 mmol). Después de agitar durante una hora la mezcla se concentró a alto vacío y se purificó por cromatografía en columna en fase inversa C18 preparativa. Los 40 mg resultante del producto se purificaron más por cromatografía radial "cromatotrón" eluyendo con CH_{3}CN al 25%/CH_{2}Cl_{2}, dando 16,5 mg del producto en forma de un sólido blanco (rendimiento 27%). ^{1}HRMN (DMSO-d_{6}) \delta: 13,30 (s, 1H), 8,58 (d, J = 5,00 Hz, 1H), 8,05 (d, J = 8,29 Hz, 1H), 7,92 (d, J = 16,2 Hz, 1H), 7,79 (m, 3H), 7,63 (d, J = 8,25 Hz, 1H) 7,53 (m, 3H), 7,32 (s, 1H), 7,27 (m, 2H), 6,89 (d, J = 8,48 Hz, 1H). Anal. Calc. para C_{25}H_{13}N_{4}O_{2}\cdot0,5H_{2}O: C, 72,27; H, 4,61; N, 13,49. Encontrado: C, 72,39; H, 4,62; N, 13,69.
1489
489
Síntesis del ácido 2-{1-[3-((E)-2-piridin-2-il-vinil)-1H-indazol-6-il]-metanoil}-benzoico. Una solución de ácido 2-{1-[3-((E)-2-piridin-2-il-vinil)-1-(2-trimetil-silanil-etoximetil)-1H-indazol-6-il]-metanoil}-benzoico (402 mg, 0,805 mmol) (síntesis descrita a continuación), etilendiamina (215 \muL, 3,22 mmol), y TBAF 1M en THF (6,44 ml, 6,44 mmol), se agitó en un baño de aceite a 90ºC durante 4 h. La reacción se detuvo bruscamente añadiendo a la mezcla en bruto ácido acético (386 mL, 6,44 mmol), se diluyó con acetato de etilo (100 mL), se extrajo con una solución 1M de hidrogenocarbonato de sodio (2 x 20 ml), salmuera (5 x 20 ml), se secó con sulfato de magnesio, se filtró y se concentró hasta un volumen de 3 mL. El material resultante en bruto se purificó por cromatografía en columna en fase inversa C18 preparativa, dando 211 mg del compuesto del epígrafe en forma de un sólido amarillo (rendimiento 71%). ^{1}HRMN (DMSO-d_{6}) \delta: 13,50 (s ancho, 1H), 8,68 (d, J = 5,27 Hz, 1H), 8,29 (d, J = 8,86 Hz, 1H), 8,13-7,90 (m, 4H), 7,81-7,43 (m, 7H).
490
Síntesis del ácido 2-{1-[3-((E)-2-piridin-2-il-vinil)-1-(2-trimetil-silanil-etoximetil)-1H-indazol-6-il]-metanoil}-
benzoico. Una solución de 6-yodoindazol (477 mg, 1,0 mmol) disuelto en THF (10 mL), a -100ºC se trató gota a gota con n-butil-litio 2,5M en hexanos (440 \mul, 1,10 mmol), se agitó durante 5 minutos a esta temperatura y a continuación se trató con una solución de anhídrido ftálico (222 mg, 1,5 mmol) en THF (1,0 mL). La mezcla resultante se dejó calentar lentamente hasta la temperatura ambiente, a la que se separó de THF, se diluyó con acetato de etilo, se extrajo con ácido cítrico 1N, se extrajo con salmuera, se secó sobre sulfato de magnesio y se concentró hasta obtener un aceite. El aceite se trituró con cloruro de metileno y éter dietílico dando 484 mg (rendimiento 81%) del compuesto del epígrafe en forma de un sólido blanco. ^{1}HRMN (DMSO-d_{6}) \delta: 8,67 (d, J = 5,09 Hz, 1H), 8,31 (d, J = 8,85 Hz, 1H), 8,08-7,55 (m, 4H), 7,50-7,37 (m, 2H), 5,81 (s, 2H), 3,53 (t, J = 8,10 Hz, 2H), 0,78 (t, J = 8,15 Hz, 2H), -0,12 (s, 9H).
Ejemplo de referencia 57
6-[3-((1,3-dimetil-1H-pirazol-5-il)carboxamido)fenoxi]-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]-1H-indazol
491
El compuesto del Ejemplo de referencia 57 se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 58. ^{1}HRMN (300 MHz, DMSO-d_{6}) \delta: 13,15 (s, 1H), 10,17 (s, 1H), 8,60 (d, 1H, J = 4,2 Hz), 8,22 (d, 1H, J = 8,7 Hz), 7,94 (d, 1H, J = 16,4 Hz), 7,84-7,79 (m, 1H), 7,68-7,50 (m, 4H), 7,40 (t, 1H, J = 8,1 Hz), 7,30-7,26 (m, 1H), 7,06 (s, 1H), 7,00 (dd, 1H, J = 8,8, 1,9 Hz), 6,87 (dd, 1H, J = 8,0, 1,9 Hz), 6,79 (s, 1H), 3,96 (s, 3H), 2,17 (s, 3H); ESI-MS m/z 451 [M+H^{+}]. Anal. Calc. para C_{26}H_{22}N_{6}O_{2} x 0,5 H_{2}O x 0,4 hexanos (494,0 g/mol): C, 69,05; H, 5,84; N, 17,01. Encontrado: C, 68,78; H, 5,55; N, 17,05.
Ejemplo de referencia 58
6-[3-((1-Etil-3-metil-1H-pirazol-5-il)carboxamido)fenoxi]-3-E-[2-(1H-imidazol-2-il)etenil]-1H-indazol
492
Una solución de fluoruro de tetrabutilamonio (7,5 mL, 1,0 M en THF, 7,5 mmol, 15,0 equivalentes) y 1,2-diaminoetano (0,33 mL, 5,0 mmol, 10 equivalentes) se añadió a la [2-metil-5-(1-(2-trimetil-silanil-etoximetil)-3-{(E)-2-[1-(2-trimetil-silanil-etoximetil)-1H-imidazol-2-il]-vinil}-1H-indazol-6-iloxi)-fenil]-amida del ácido 2-etil-5-metil-2H-pirazol-3-carboxílico (360 mg, 0,5 mmol, 1,0 equivalente) en 1,4-dioxano (5 mL) y la mezcla de reacción se calentó hasta 90ºC durante 18 horas. Al acabar este tiempo la mezcla de reacción se concentró bajo presión reducida y el aceite anaranjado resultante se diluyó con acetato de etilo (50 mL). La capa orgánica se lavó enérgicamente con hidrogenocarbonato de sodio saturado (5 x 50 mL), salmuera, se secó sobre sulfato de magnesio y se concentró bajo presión reducida obteniéndose un sólido amarillo (287 mg). El producto en bruto se purificó por cromatografía radial sobre gel de sílice usando como eluyente metanol al 5%-cloroformo con hidróxido de amonio al 0,1% (R_{f} 0,1) obteniéndose (5-{3-[(E)-2-(1H-imidazol-2-il)-vinil]-1H-indazol-6-iloxi)-2-metil-fenil)-amida del ácido 2-etil-5-metil-2H-pirazol-3-carboxílico (140 mg, 61%) en forma de un sólido amarillo claro: HPLC R_{t} = 11,8 min.; TLC Rf = 0,8 (metanol al 10%-cloroformo con hidróxido de amonio al 0,1%); ^{1}HRMN (300 MHz, DMSO-d_{6}) \delta: 13,03 (s, 1H), 12,30 (s ancho, 1H), 9,78 (s, 1H), 8,00 (d, 1H, J = 8,6 Hz), 7,54 (d, 1H, J = 16,8 Hz), 7,32 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 7,27 (d, 1H, J = 16,9 Hz), 7,13-7,12 (m, 3H), 7,00-6,94 (m, 3H), 6,78 (s, 1H), 4,39 (q, 2H, J = 7,1 Hz), 2,23 (s, 3H), 2,19 (s, 3H), 1,28 (t, 3H, J = 7,1 Hz). Anal. Calc. para C_{26}H_{25}N_{7}O_{2} x 0,5 H_{2}O x 0,4 hexanos (511,0 g/mol): C, 66,75; H, 6,23; N, 19,19. Encontrado: C, 66,95; H, 6,25; N, 18,83.
Los materiales de partidas se prepararon como sigue:
(i) Preparación de 1-(2-trimetil-silanil-etoximetil)-1H-imidazol
493
1H-Imidazol (2,0 g, 29,4 mmol, 1,0 equivalente) en THF (70 mL) se añadió a una suspensión a 0ºC de hidruro de sodio (1,5 g, 60% en aceite mineral, 38,2 mmol, 1,3 equivalente) en THF (30 mL). Después que hubo cesado el desprendimiento de gas, la mezcla se calentó hasta la temperatura ambiente durante 45 minutos y a continuación se enfrió hasta 0ºC. Se añadió cloruro de [2-(trimetilsilil)etoxi]metilo (5,4 mL, 30,2 mmol, 1,0 equivalente) y la mezcla se calentó hasta temperatura ambiente durante una noche. La reacción se detuvo bruscamente añadiendo a la mezcla hidrogenocarbonato de sodio saturado, el THF se separó bajo presión reducida y la suspensión beige resultante se extrajo con acetato de etilo. Los extractos se reunieron, se lavaron con salmuera, se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron obteniéndose 6,9 g de un aceite color ámbar. El aceite se purificó por cromatografía de desarrollo rápido sobre gel de sílice usando como eluyente metanol al 2%-cloroformo obteniéndose 1-(2-trimetil-silanil-etoximetil)-1H-imidazol en forma de un aceite color ámbar claro (4,7 g, 81%): TLC R_{f} = 0,3 (metanol al 5%-cloroformo); ^{1}HRMN (300 MHz, DMSO-d_{6}) \delta: 7,77 (s, 1H), 7,26 (d, 1H, J = 1,2 Hz), 6,93 (s, 1H), 532 (s, 2H), 3,45 (t, 2H, J = 8,0 Hz), 0,83 (t, 2H, J = 8,0 Hz), -0,05 (s, 9H); ^{13}CRMN (75 MHz, DMSO-d_{6}) \delta: 137,9, 128,8, 119,6, 74,8, 65,1, 17,1, -1,4.
(ii) Preparación de [1-(2-trimetil-silanil-etoximetil)-1H-imidazol-2-il]-metanol
494
1-(2-Trimetil-silanil-etoximetil)-1H-imidazol (3,0 g, 15,4 mmol, 1,0 equivalente) se disolvió en THF (150 mL) y se enfrió hasta -78ºC. Se añadió nBuLi (10,6 mL, 1,6M en hexanos, 16,9 mmol, 1,1 equivalentes) y la temperatura se dejó que aumentara hasta -40ºC durante 15 minutos. La solución amarilla clara se agitó durante 30 minutos más a -40ºC y a continuación la reacción se detuvo bruscamente con DMF (1,3 mL, 16,9 mmol, 1,1 equivalentes). La mezcla de reacción se calentó hasta la temperatura ambiente durante una noche y a continuación la reacción se detuvo bruscamente con agua. Se separó el disolvente y la mezcla se extrajo con diclorometano. La capa orgánica se lavó con agua, se secó con salmuera y sulfato de magnesio, se filtró y se concentró obteniéndose el producto en bruto (3,5 g; TLC R_{f} = 0,5 (metanol al 5%-cloroformo). El espectro de RMN protónica dio el protón aldehídico a 9,73 ppm (300 MHz, DMSO-d_{6}). El producto en bruto se disolvió en metanol (15 mL), se enfrió hasta 0ºC y se trató con borohidruro de sodio (1,2 g, 30,8 mmol, 2,0 equivalentes). La mezcla de reacción se calentó hasta la temperatura ambiente durante una noche. Se separó el disolvente y el producto en bruto se diluyó con cloroformo, se lavó con agua, se secó con salmuera y sulfato de magnesio, se filtró y se concentró obteniéndose un aceite transparente (3,6 g). El aceite se purificó por cromatografía de desarrollo rápido sobre gel de sílice usando como eluyente metanol-cloroformo 3-6% con hidróxido de amonio al 0,1% obteniéndose [1-(2-trimetil-silanil-etoximetil)-1H-imidazol-2-il]-metanol en forma de un sólido blanco (1,4 g, 41% 2-etapas): TLC R_{f} = 0,4 (metanol al 8%-cloroformo); ^{1}H RMN (300 MHz, DMSO-d_{6}) \delta: 7,22 (d, 1H, J = 1,1 Hz), 6,81 (d, 1H, J = 1,0 Hz), 5,36 (s, 2H), 5,31 (t ancho, 1H, J = 5,2 Hz), 4,50 (d, 2H, J = 4,8 Hz), 3,48 (t, 2H, J = 8,0 Hz), 0,83 (t, 2H, J = 8,0 Hz), -0,05 (s, 9H); ^{13}CRMN (75 MHz, DMSO-d_{6}) \delta: 148,9, 127,8, 122,5, 75,5, 66,5, 56,9, 18,5, 0,0.
(iii) Preparación de hidrocloruro de 2-clorometil-1-(2-trimetil-silanil-etoximetil)-1H-imidazol
495
Una solución de cloruro de tionilo (0,87 mL, 12,0 mmol, 3,0 equivalentes) en cloroformo (8 mL) se enfrió hasta 0ºC y se trató con una solución de [1-(2-trimetil-silanil-etoximetil)-1H-imidazol-2-il]-metanol (0,92 g, 4,0 mmol, 1,0 equivalente) en cloroformo (2 mL). La solución transparente se agitó a 0ºC durante 30 minutos y a continuación a la temperatura ambiente durante 2 horas. Se separó el disolvente y el producto se puso en suspensión secuencialmente y se concentró usando cloroformo, tolueno y ciclohexano obteniéndose hidrocloruro de 2-clorometil-1-(2-trimetil-silanil-etoximetil)-1H-imidazol en forma de un sólido beige (1,1 g, 97%): ^{1}HRMN (300 MHz, DMSO-d_{6}) \delta: 7,85 (d, 1H, J = 1,9 Hz), 7,70 (d, 1H, J = 1,9 Hz), 5,62 (s, 2H), 5,14 (s, 2H), 3,57 (t, 2H, J = 8,3 Hz), 0,90 (t, 2H, J = 83 Hz), -0,02 (s, 9H); ^{13}CRMN (75 MHz, DMSO-d_{6}) \delta: 142,1, 123,2, 120,2, 76,5, 66,8, 31,7, 17,3, -1,4.
(iv) Preparación de 3-amino-4-metil-fenol
496
Sólido negro (95%); HPLC R_{f} = 4,4min.; ^{1}HRMN (300 MHz, DMSO-d_{6}) \delta: 8,61 (s, 1H), 6,64 (d, 1H, J = 8,1 Hz), 6,05 (d, 1H, J = 2,4 Hz), 5,88 (dd, 1H, J = 8,0, 2,4 Hz), 4,64 (s ancho, 2H), 1,92 (s, 3H); ^{13}CRMN (75 MHz, DMSO-d_{6}) \delta: 156,1, 147,2, 130,2, 111,7, 103,3, 101,1, 16,6.
(v) Preparación de 3-(benzhidriliden-amino)-4-metil-fenol 
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497 
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Sólido amarillo (49%); p.f. 106-108ºC; HPLC R_{t} = 15,3 min.; TLC R_{f} = 0,2 (acetato de etilo al 10%-ciclohexano); ^{1}HRMN (300 MHz, DMSO-d_{6}) \delta: 8,91 (s, 1H), 7,67-7,56 (m, 2H), 7,53-7,43 (m, 3H), 7,35-7,31 (m, 3H), 7,13-7,10 (m, 2H), 6,82 (d, 1H, J = 8,3 Hz), 6,22 (dd, 1H, J = 8,1, 2,5 Hz), 5,88 (d. 1H, J = 2,5 Hz), 1,97 (s, 3H); ^{13}CRMN (75 MHz, DMSO-d_{6}) \delta: 166,4, 155,2, 150,6, 138,9, 136,0, 130,8, 130,2, 128,7, 128,4, 128,2, 128,0, 117,3, 109,9, 106,2, 17,0.
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(vi) Preparación de benzhidriliden-{2-metil-5-[3-((E)-estiril)-1-(2-trimetil-silanil-etoximetil)-1H-indazol-6-iloxi]-fenil}-amina 
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498 
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Un matraz de fondo redondo se cargó con fosfato de potasio (5,5 g, 26,0 mmol, 2,0 equivalentes), 3-(benzhidriliden-amino)-4-metil-fenol (3,9 g, 13,6 mmol, 1,1 equivalentes), 6-yodo-3-((E)-estiril)-1-(2-trimetil-silanil-etoximetil)-1H-indazol (6,2 g, 13,0 mmol, 1,0 equivalente) y o-xileno (130 mL). La suspensión resultante se desgasificó, se purgó con argón y se trató con una mezcla de tris(dibencilidenacetona)dipaladio(0) (916 mg, 1,1 mmol, 8% en moles) y bifenil-2-il-diterc.butil-fosfano (656 mg, 2,2 mmol, 16% en moles). El matraz se sumergió en un baño de aceite y se agitó a 100ºC durante 18 horas. La suspensión negra se enfrió hasta la temperatura ambiente, se filtró a través de Celite y se concentró. El aceite negro se disolvió en cloroformo, se lavó con agua, salmuera, se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se concentró obteniéndose un aceite negro (12,1 g). El producto en bruto se purificó por cromatografía de desarrollo rápido en gel de sílice usando como eluyente éter-ciclohexano al 10-15% obteniéndose benzhidriliden-{2-metil-5-[3-((E)-estiril)-1-(2-trimetil-silanil-etoxi-metil)-1H-indazol-6-iloxi]-fenil}-amina en forma de una espuma amarilla en éter (1,4 g, 16%): HPLC R_{t} = 24,3 min.; TLC Rf = 0,5 (éter al 20%-ciclohexano); ^{1}HRMN (300 MHz, DMSO-d_{6}) \delta: 8,10 (d, 1H, J = 8,8 Hz), 7,75-7,66 (m, 4H), 7,53-7,31 (m, 11H), 7,14-7,08 (m, 4H), 6,62 (dd, 1H, J = 8,8, 2,0 Hz), 6,55 (dd, 1H, J = 8,2, 2,5 Hz), 6,20 (d, 1H, J = 2,4 Hz), 5,64 (s, 2H), 3,51 (t, 2H, J = 7,8 Hz), 2,12 (s, 3H), 0,78 (t, 2H, J = 7,7 Hz), -0,14 (s, 9H).
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(vii) Preparación de 2-metil-5-[3-((E)-estiril)-1-(2-trimetil-silanil-etoximetil)-1H-indazol-6-iloxi]-fenilamina 
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499 
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Aceite color ámbar (80%); HPLC R_{t} = 21,0 min; TLC Rf = 0,4 (acetato de etilo al 20%-ciclohexano); ^{1}HRMN (300 MHz, DMSO-d_{6}) \delta: 8,18 (d, 1H, J = 8,8 Hz), 7,74-7,71 (m, 2H), 7,52 (s, 2H), 7,43-7,38 (m, 2H), 7,33-7,28 (m, 1H), 7,20 (d, 1H, J = 2,0 Hz), 6,97-6,90 (m, 2H), 6,33 (d, 1H, J = 2,4 Hz), 6,16 (dd, 1H, J = 8,0, 2,5 Hz), 5,66 (s, 2H), 5,01 (s ancho, 2H), 3,52 (t, 2H, J = 8,0 Hz), 2,03 (s, 3H), 0,80 (t, 2H, J = 8,0 Hz), -0,11 (s, 9H).
(viii) Preparación de {2-metil-5-[3-((E)-estiril)-1-(2-trimetil-silaniletoximetil)-1H-indazol-6-iloxi]-fenil}-amida del ácido 2-etil-5-metil-2H-pirazol-3-carboxílico
500
Espuma blanca (85%); HPLC R_{t} = 21,5 min; TLC Rf = 0,2 (acetato de etilo al 20%-ciclohexano); ^{1}HRMN (300 MHz, DMSO-d_{6}) \delta: 9,75 (s, 1H), 8,24 (d, 1H, J = 8,8 Hz), 7,74-7,72 (m, 2H), 7,53 (s. 2H), 7,43-7,38 (m, 2H), 7,34-7,28 (m, 3H), 7,12 (d, 1H, J = 2,6 Hz), 7,00 (dd, 1H, J = 8,8, 2,0 Hz), 6,92 (dd, 1H, J = 8,3, 2,5 Hz), 6,78 (s, 1H), 5,69 (s, 2H), 4,40 (q, 2H, J = 7,1 Hz), 3,53 (t, 2H, J = 7,9 Hz), 2,22 (s, 3H), 2,19 (s, 3H), 1,27 (t, 3H, J = 7,1 Hz), 0,78 (t, 2H, J = 7,9 Hz), -0,15 (s, 9H).
(ix) Preparación de {5-[3-formil-1-(2-trimetil-silanil-etoximetil)-1H-indazol-6-iloxi]-2-metil-fenil}-amida del ácido 2-etil-5-metil-2H-pirazol-3-carboxílico
501
Una solución de {2-metil-5-[3-((E)-estiril)-1-(2-trimetil-silaniletoximetil)-1H-indazol-6-iloxi]-fenil}-amida del
ácido 2-etil-5-metil-2H-pirazol-3-carboxílico (774 mg, 1,28 mmol, 1,0 equivalente) en 1,4-dioxano (8 mL) y agua (2 mL) se trató con tetraóxido de osmio (7 mg, 0,03 mmol, 0,02 equivalente). La solución se agitó durante 5 minutos y luego se trató con peryodato de sodio (822 mg, 3,84 mmol, 3,0 equivalentes). La suspensión espesa color canela resultante se agitó a la temperatura ambiente durante una noche, se vertió en Na_{2}S_{2}O_{3} al 15% (100 mL) y se extrajo con acetato de etilo. La capa orgánica se lavó con hidrogenocarbonato de sodio saturado, salmuera, se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se concentró obteniéndose un aceite color ámbar (902 mg). El producto en bruto se purificó por cromatografía radial sobre gel de sílice usando como eluyente acetato de etilo al 10-50%-ciclohexano obteniéndose {5-[3-formil-1-(2-trimetil-silanil-etoximetil)-1H-indazol-6-iloxi]-2-metil-fenil}-amida del ácido 2-etil-5-metil-2H-pirazol-3-carboxílico en forma de un sólido beige en éter (590 mg, 86%): HPLC R_{t} = 18,9 min; TLC R_{f} = 0,2 (acetato de etilo al 40%-ciclohexano); ^{1}HRMN (300 MHz, DMSO-d_{6}) \delta: 10,16 (s, 1H), 9,75 (s, 1H), 8,14 (d, 1H, J = 8,8 Hz), 7,48 (d, 1H, J = 1,8 Hz), 7,32 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 7,16-7,13 (m, 2H), 6,93 (dd, 1H, J = 8,3, 2,6 Hz), 6,78 (s, 1H), 5,84 (s, 2H), 4,39 (q, 2H, J = 7,1 Hz), 3,55 (t, 2H, J = 7,8 Hz), 2,23 (s, 3H), 2,19 (s, 3H), 1,27 (t, 3H, J = 7,2 Hz), 0,79 (t, 2H, J = 7,8 Hz), -0,15 (s, 9H).
(x) Preparación de [2-metil-5-(1-(2-trimetil-silanil-etoximetil)-3-{(E)-2-[1-(2-trimetil-silanil-etoximetil)-1H-imi-dazol-2-il]-vinil}-1H-indazol-6-iloxi)-fenil]-amida del ácido 2-etil-5-metil-2H-pirazol-3-carboxílico
502
Una solución de hidrocloruro de 2-clorometil-1-(2-trimetil-silanil-etoximetil)-1H-imidazol (344 mg, 1,22 mmol, 2,0 equivalentes) en cloroformo (20 mL) se convirtió en la base libre con hidrogenocarbonato de sodio saturado. La capa orgánica se secó con salmuera y sulfato de magnesio, se filtró y se concentró obteniéndose un aceite color ámbar (301 mg, 100%). El aceite resultante se disolvió en acetonitrilo (12 mL), se trató con trifenilfosfina (304 mg, 1,16 mmol, 1,9 equivalentes) y se calentó hasta 70ºC durante 18 horas. Se separó el disolvente y el cloruro de 1-(2-trimetil-silanil-etoximetil)-2-[(trifenil-\lambda^{5}-fosfanil)-metil]-1H-imidazol en bruto se disolvió en THF (12 mL), se enfrió hasta -78ºC y se trató con terc.butóxido de potasio (1,2 mL, 1,0M en THF, 1,22 mmol, 2,0 equivalentes). Después de 15 minutos, se añadió {5-[3-formil-1-(2-trimetil-silanil-etoximetil)-1H-indazol-6-iloxi]-2-metil-fenil)-amida de ácido 2-etil-5-metil-2H-pirazol-3-carboxílico (325 mg, 0,61 mmol, 1,0 equivalente) en THF (1 mL) hasta obtener el iluro a -78ºC. La solución amarilla transparente se calentó hasta la temperatura ambiente durante una noche, la reacción se detuvo bruscamente con agua y se extrajo con acetato de etilo. La capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se concentró obteniéndose el producto en bruto en forma de un aceite color ámbar (1,0 g). El producto en bruto se purificó más por cromatografía radial sobre gel de sílice usando como eluyente metanol-cloroformo al 0-5% obteniéndose [2-metil-5-(1-(2-trimetil-silanil-etoximetil)-3-[(E)-2-[1-(2-trimetil-silanil-etoximetil)-1H-imidazol-2-il]-vinil}-1H-indazol-6-iloxi)-fenil]-amida del ácido 2-etil-5-metil-2H-pirazol-3-carboxílico en forma de un sólido color canela por reposo durante una noche (390 mg, 88%): HPLC R_{t} = 20,6 min.; TLC R_{f} = 0,4 (metanol al 4%-diclorometano); ^{1}H RMN (300 MHz, DMSO-d_{6}) \delta: 9,75 (s, 1H), 8,14 (d, 1H, J = 8,8 Hz), 7,64 (d, 1H, J = 16,2 Hz), 7,42 (d, 1H, J = 16,3 Hz), 7,39-7,35 (m, 3H), 7,30 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 7,12 (d, 1H, J = 2,5 Hz), 7,03 (s, 1H), 6,99 (dd, 1H, J = 8,8, 1,9 Hz), 6,78 (s, 1H), 5,70 (s, 2H), 5,55 (s, 2H), 4,40 (q, 2H, J = 7,1 Hz), 3,55-3,48 (m, 4H), 2,22 (s, 3H),
2,19 (s, 3H), 1,27 (t, 3H, J = 7,1 Hz), 0,84 (t, 2H, J = 7,9 Hz), 0,77 (t, 2H, J = 7,9 Hz), -0,11 (s, 9H), -0,15 (s, 9H).
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Ejemplo de referencia 59(a)
Hidrocloruro de 6-[3-((1-etil-3-metil-1H-pirazol-5-il)carboxamido)benzoil]-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]-1H-indazol
503
El compuesto del Ejemplo de referencia 41(a) (4,57 g, 9,59 mmol, 1 equivalente) se recogió con metanol (96 mL) y se protegió de la luz con una lámina de aluminio. En un segundo matraz se trató metanol (20 mL) con cloruro de acetilo (684 mL, 1,00 equivalente) durante 5 min. A continuación se añadió la solución ácida a la primera mezcla lavando varias veces con metanol (\sim20 mL). El material volátil se separó bajo presión reducida y el residuo se trituró con acetato de etilo-hexano 1:1 obteniéndose, después de filtración y secado, un polvo amarillo (4,82 g, 98%): Analizado con 1,0 H_{2}O: Calculado, C (61,85), H (5,07), N (15,46). Encontrado: C (61,15), H (5,15). N (15,38).
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Ejemplo de referencia 59(b)
Hidrocloruro de 6-[3-((1,3-dimetil-1H-pirazol-5-il)carboxamido)-benzoil]-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]-1H-indazol
504
El compuesto del Ejemplo de referencia 59(b) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 59(a) excepto que se usó el compuesto del Ejemplo de referencia 41(p) en lugar del compuesto del Ejemplo de referencia 41(a). HPLC: 3,92 min (área 100%); ^{1}HRMN (DMSO) \delta: 10,45 (s, 1H), 8,85 (d, 1H, J = 4,8 Hz), 8,49 (d, 1H, J = 8,7 Hz), 8,38-8,30 (m, 4H), 8,21 (dt, 1H, J = 7,5, 2,1 Hz), 8,01(s, 1H), 7,90-7,79 (m, 2H), 7,72-7,64 (m, 3H), 6,70 (s, 1H), 4,10 (s. 3H), 2,33 (s, 3H). Anal. (C_{27}H_{20}N_{4}O_{2}S\cdot1,3H_{2}O, 0,2 EtOAc): Calculado C, 62,15; H, 5,18; N, 15,64. Encontrado C, 61,81; H, 5,01; N, 15,64.
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Ejemplo 59(c)
Hidrocloruro de 6-[N-(5-((1-etil-3-metil-1H-pirazol-5-il)carboxamido)-2-fluoro-4-metilfenil)amino]-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]-1H-indazol
505
El compuesto del Ejemplo 59(c) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 59(a) excepto que se usó el compuesto del Ejemplo de referencia 48(a) en lugar del compuesto del Ejemplo 41(a). Anal. Calculado: C, 63,21; H, 5,12; N, 18,43; Cl, 6,66. Encontrado: C, 60,86; H, 5,38; N, 17,28: Cl, 6,52.
Ejemplo 59(d)
Hidrocloruro de 6-[N-(3-((1,3-dimetil-1H-pirazol-5-il)carboxamido)-4-fluoro-fenil)amino]-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]-1H-indazol
506
El compuesto del Ejemplo 59(d) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 59(a) excepto que se usó el compuesto del Ejemplo de referencia 49(a) en lugar del compuesto del Ejemplo 41(a). ^{1}HRMN (300 MHz, DMSO-d_{6}) \delta: 13,2 (b, 1H), 9,97 (s, 1H), 8,75 (d, 1H, J = 5,44 Hz), 8,51 (s ancho, 1H), 8,35 (m, 2H), 8,20 (d, 1H, J = 16,59 Hz), 8,06 (d, 1H, J = 8,81 Hz), 7,71 (d, 1H, J = 16,59 Hz), 7,70 (m, 1H), 7,44 (dd, 1H, J = 6,65 Hz, J = 2,67 Hz), 7,24 (t, 1H, J = 9,54 Hz), 7,12 (d, 1H, J = 1,46 Hz), 7,05 (m, 2H), 6,86 (s, 1H), 4,0 (s, 3H), 3,84 (s ancho, 1H), 2,20 (s, 3H).
Ejemplo de referencia 59(e)
Hidrocloruro de 6-[3-((1-etil-3-metil-1H-pirazol-5-il)carboxamido)fenoxi]-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]-1H-indazol
507
El compuesto del Ejemplo de referencia 59(e) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 59(a) excepto que se usó el compuesto del Ejemplo de referencia 31(d) en lugar del compuesto del Ejemplo de referencia 41(a). ^{1}HRMN (DMSO-d_{6}) \delta: 13,53 (s, 1H), 10,23 (s, 1H) 8,78 (d, 1H, J = 5,5 Hz), 8,30 (m, 4H), 7,80 (m, 2H), 7,59 (d, 1H, J = 7,7 Hz), 7,55 (s, 1H), 7,41 (t, 1H, J = 8,1 Hz). 7,11 (s, 2H), 6,88 (d, 1H, J = 6,7 Hz), 6,81 (s, 1H), 4,38(q, 2H, J = 7,0 Hz), 3,75 (s ancho, 1H), 2,19 (s, 3H), 1,29 (t, 3H, J = 7,0 Hz). Anal. Calc. para C_{27}H_{25}ClN_{6}O_{2}\cdot1,7 H_{2}O, 0,1 EtOAc: C. 60,89; H. 5,45; N, 15,55. Encontrado: C, 60,88; H, 5,51; N, 15,27.
Ejemplo de referencia 59(f)
Hidrocloruro de 6-[2-(metilcarbamoil)fenilsulfanil]-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]indazol
508
El compuesto del Ejemplo de referencia 59(f) se preparó de manera similar a la descrita en el Ejemplo de referencia 59(a) excepto que se usó el compuesto del Ejemplo de referencia 33(a) en lugar del compuesto del Ejemplo de referencia 41(a). Analizado con 2,0 H_{2}O: Calculado C, 57,58; H, 5,05; N, 12,21; Cl, 6,99. Encontrado: C, 57,24; H, 5,048; N, 11,91: Cl, 6,63.
En los compuestos como ejemplos descritos anteriormente puede determinarse su actividad aplicando los ensayos descritos a continuación.
Ensayos biológicos: valoraciones enzimáticas
La estimulación de la proliferación celular por factores de crecimiento, tales como VEFG, FGF y otros, depende de su inducción de autofosforilación de cada una de sus tirosina quinasas de los receptores respectivos. Por consiguiente, la capacidad de un inhibidor de las proteínas quinasas para bloquear la autofosforilación puede medirse por inhibición de los sustratos peptídicos. Para medir la actividad de inhibición de las proteínas quinasas de los compuestos, se idearon las construcciones siguientes.
Construcción VEGF-R2 para valoración. Esta construcción determina la capacidad de un compuesto de ensayo para inhibir la actividad de las tirosinas quinasas. Una construcción (VEGF-R2\Delta50) del dominio citosólico del receptor 2 del factor de crecimiento endotelial vascular humano (VEGF-R2) a la que le faltan los 50 residuos centrales de los 68 residuos del dominio de inserción de quinasa se expresó en un sistema baculovirus/célula de insecto. De los 1356 residuos de la longitud completa de VEGF-R2, VEGF-R2\Delta50 contiene los residuos 806-939 y 990-1171, y también una mutación puntual (E990V) en el dominio de inserción de quinasa con relación al VEGF-R2 natural. La autofosforilación de la construcción purificada se realizó por incubación de la enzima a una concentración de 4 \muM en presencia de ATP 3 mM y MgCl_{2} 40 mM en HEPES 100 mM, pH 7,5, que contenía glicerol al 5% y DTT 5 mM, a 4ºC durante 2 h. Después de autofosforilación, se demostró que esta construcción poseía actividad catalítica esencialmente equivalente a la construcción del dominio de quinasa autofosforilada natural. Véase Parast et al., Biochemistry, 37, 16788-16801 (1998).
Construcción FGF-R1 para valoración. El dominio de quinasa intracelular de FGF-R1 humano se expresó usando el sistema de expresión del vector de baculovirus desde el residuo de metionina endógeno 456 hasta el glutamato 766, de acuerdo con el sistema de numeración de residuos de Mohammadi et al., Mol. Cell. Biol., 16, 977-989 (1996). Además, la construcción posee también las 3 siguientes sustituciones de aminoácidos: L457V, C488A y C584S.
Construcción LCK para valoración. La tirosina quinasa LCK se expresó en células de insectos como una deleción en el extremo N desde el residuo de aminoácido 223 hasta el extremo de la proteína en el residuo 509, con las dos siguientes sustituciones de aminoácidos en el extremo N: P233M y C224D.
Construcción CHK1 para valoración. CHK1 (FL-CHK1) humano de longitud completa marcado con una cola de His en el extremo C se expresó usando el sistema baculovirus/célula de insecto. Contiene 6 residuos de histidina (6 x cola de His) en el extremo C del CHK1 humano de 476 aminoácidos. La proteína se purificó por técnicas cromatográficas convencionales.
Construcción CDK2/ciclina A para valoración. Se purificó CDK2 aplicando la metodología publicada (Rosenblatt et al., J. Mol. Biol., 230, 1317-1319 (1993)) a partir de células de insectos que habían sido infectadas con un vector de expresión de baculovirus. La ciclina A se purificó a partir de células de E. coli queexpresan la longitud completa de la ciclina A recombinante y se generó una construcción de ciclina A truncada por proteolisis limitada y se purificó como se ha descrito anteriormente (Jeffrey et al., Nature, 376, 313-320 (1995)).
Construcción CDK4/ciclina D para valoración. Un complejo de CDK4 humana y ciclina D3, o un complejo de ciclina D1 y una proteína de fusión de CDK4 humana y glutatión-S-transferasa (GST-CDK4), se purificó mediante técnicas cromatográficas bioquímicas tradicionales a partir de células de insectos que habían sido infectados conjuntamente con los vectores de expresión de baculovirus correspondientes.
Construcción FAK para valoración. El dominio catalítico de FAK humana (FAKcd409) se expresó mediante el sistema de expresión del vector de baculovirus. El dominio de 280 aminoácidos expresado comprende los residuos metionina 409 a glutamato 689. Se produce una sustitución de aminoácidos (P410T) con relación a la secuencia con el número de acceso L13616 publicado por Whithey, G.S. et al., DNA Cell Biol, 9, 823-30 (1993). La proteína se purificó mediante técnicas cromatográficas clásicas.
Construcción TIE-2 (TEK) para valoración
El dominio de tirosina quinasa TTE-2 se expresó en células de insectos como una deleción en el extremo N desde el residuo de aminoácidos 774 hasta el extremo de la proteína en el residuo 1124. Esta construcción lleva también una mutación R774M, que sirve como el residuo de metionina iniciador de la traducción.
Valoración de VEGF-R2 Valoración espectrofotométrica acoplada (FLVK-P)
La producción de ADP a partir de ATP que acompaña la trasferencia de fosforilo se acopló a la oxidación de NADH usando fosfoenolpiruvato (PEP) y un sistema que tiene piruvato quinasa (PK) y lactato-deshidrogenasa (LDH). La oxidación de NADH se controló siguiendo la disminución de la absorbancia a 340 nm (e_{340} = 6,22 cm^{-1} mM^{-1}) usando un espectrofotómetro Beckman DU 650. Las condiciones de valoración para el VEGF-R2\Delta50 fosforilado (indicado como FLVK-P en las siguientes tablas) fueron las siguientes: PEP 1 mM; NADH 250 \muM; 50 unidades de LDH/mL; 20 unidades de PK/mL; DTT 5 mM; poli(E_{4}Y_{1}) 5,1 mM; ATP 1 mM; y MgCl_{2} 25 mM en HEPES 200 mM, pH 7,5. Las condiciones de valoración para VEGF-R2\Delta50 no fosforilado (indicado como FLVK en las tablas) fueron las siguientes: PEP 1 mM; NADH 250 \muM; 50 unidades de LDH/mL; 20 unidades de PK/mL; DTT 5 mM; poli(E_{4}Y_{1}) 20 mM; ATP 3 mM; y MgCl_{2} 60 mM y MnCl_{2} 2 mM en HEPES 200 mM, pH 7,5. Las valoraciones se iniciaron con 5 a 40 nM de enzima. Los valores K_{i} se determinaron midiendo la actividad enzimática en presencia de concentraciones variables de los compuestos de ensayo. Los datos se analizaron mediante cinética enzimática y usando el programa informático Kaleidagraph.
Valoración ELISA
La formación de fosfogastrina se controló usando como sustrato el péptido gastrina biotinilada (1-17). La fosfogastrina biotinilada se inmovilizó usando placas de microtitulación de 96 pocillos recubiertas con estreptavidina seguido de la detección con anticuerpo anti-fosfotirosina conjugado con peroxidasa de rábano picante. La actividad de la peroxidasa de rábano picante se controló con la sal de diamonio de 2,2'-azino-di-[sulfonato de 3-etilbenzatiazolina (6)] (ABTS). Las soluciones típicas para valoración contenían: péptido gastrina biotinilada 2 \muM; DTT 5 mM; ATP 20 \muM; MgCl_{2} 26 mM; y MnCl_{2} 2 mM en HEPES 200 mM, pH 7,5. La valoración se inició con 0,8 nM de VEGF-R2\Delta50 fosforilado. La actividad de la peroxidasa de rábano picante se valoró con ABTS, 10 mM. La reacción con la peroxidasa de rábano picante se detuvo bruscamente por adición de ácido (H_{2}SO_{4}), seguido por la lectura de la absorbancia a 405 nm. Los valores K_{i} se determinaron midiendo la actividad enzimática en presencia de concentraciones variables de los compuestos de ensayo. Los datos se analizaron mediante cinética enzimática y usando el programa informático Kaleidagraph.
Valoración de FGF-R
La valoración espectrofotométrica se realizó como se ha descrito antes para VEGF-R2, excepto con los siguientes cambios en la concentración: FGF-R = 50 nM, ATP = 2 mM y poli(E4Y1) = 15 mM.
Valoración de LCK
La valoración espectrofotométrica se realizó como se ha descrito antes para VEGF-R2, excepto con los siguientes cambios de concentración: LCK = 60 nM, MgCl_{2} = 0 mM, poli(E4Y1) = 20 mM.
Valoración de CHK1
La producción de ADP a partir de ATP que acompaña la trasferencia de fosforilo al péptido sustrato sintético Syntide-2 (PLARTLSVAGLPGKK) se acopló a la oxidación de NADH usando fosfoenolpiruvato (PEP) por la acción de piruvato quinasa (PK) y lactato-deshidrogenasa (LDH). La oxidación de NADH se monitorizó siguiendo la disminución de la absorbancia a 340 nm (\varepsilon_{340} = 6,22 cm^{-1} mM^{-1}) usando un espectrofotómetro HP8452. Las soluciones de reacción típicas contenían: PEP 4 mN; NADH 0,15 mM; 28 unidades de LDH/mL; 16 unidades de PK/mL; DTT 3 mM; Syntide-2 0,125 mM; ATP 0,15 mM; MgCl_{2} 25 mM en TRIS 50 mM, pH 7,5; y NaCl 400 mM. Las valoraciones se iniciaron con 10 nM de FL-CHK1. Los valores K_{i} se determinaron midiendo la actividad enzimática inicial en presencia de concentraciones variables de los compuestos de ensayo. Los datos se analizaron mediante cinética enzimática y usando el programa informático Kaleidagraph.
Valoraciones de CDK2/ciclina A y CDK4/ciclina D
La actividad de quinasa dependiente de ciclina se midió cuantificando la incorporación, dependiente del tiempo y catalizada por una enzima, de fosfato radiactivo a partir de [^{32}P]ATP en un fragmento recombinante de la proteína del retinoblastoma. Salvo indicación contraria, las valoraciones se realizaron en placas de 96 pocillos en un volumen total de 50 \muL, en presencia de HEPES (N-[2-hidroxietil]piperazina-N'-[ácido 2-etanosulfónico]) 10 mM (pH 7,4), MgCl_{2} 10 mM, trifosfato de adenosina (ATP) 25 \muM, 1 mg/mL de ovoalbúmina, 5 \mug/mL de leupeptina, ditiotreitol 1 mM, \beta-glicerofosfato 10 mM, vanadato de sodio 0,1 mM, fluoruro de sodio 1 mM, ácido etilenglicol-bis(\beta-aminoetil-éter)-N,N,N',N'-tetraacético (EGTA) 2,5 mM, dimetilsulfóxido al 2% (v/v) y 0,03-0,2 \muCi de [^{32}P]ATP. El sustrato (0,3-0,5 \mug) fue un fragmento de proteína del retinoblastoma recombinante purificado (Rb) (residuos 386-928 de la proteína del retinoblastoma natural; 62,3 kDa, que contenía la mayor parte de los sitios de fosforilación encontrados en la proteína de 106-kDa natural, así como una cola de seis residuos de histidina para facilitar la purificación). Las reacciones se iniciaron con CDK2 (complejo CDK2/ciclina A 150 nM) o CDK4 (complejo CDK4/ciclina D3 50 nM), incubada a 30ºC y se terminaron después de 20 minutos (min) por adición de ácido etilendiaminotetraacético (EDTA) hasta 250 mM. A continuación se capturó el sustrato fosforilado en una membrana de nitrocelulosa usando un colector de filtración de 96 pocillos y se eliminó la radiactividad no incorporada lavando repetidamente con ácido fosfórico al 0,85%. La radiactividad se cuantificó exponiendo las membranas de nitrocelulosa a un fosforimager. Los valores K_{i} aparentes se midieron valorando la actividad enzimática en presencia de diferentes concentraciones del compuesto y restando la radiactividad de fondo medida en ausencia de la enzima. Se midieron los parámetros cinéticos (kcat, Km para ATP) de cada enzima en las condiciones de valoración usuales determinando la dependencia de las velocidades iniciales de la concentración de ATP. Los datos se ajustaron a una ecuación de la inhibición competitiva usando Kaleidagraph (programa informático sinérgico) o se ajustaron a una ecuación de la inhibición de la unión estrecha competitiva usando el programa informático KineTic (BioKin, Ltd.). Los valores K_{i} medidos para inhibidores conocidos de CDK4 y CDK2 están de acuerdo con los valores de CI_{50} publicados. La actividad específica de CDK4 era la misma para el complejo tanto con la ciclina D3 de longitud completa como con la construcción truncada de Ciclina D3; ambos complejos proporcionaron también valores K_{i} muy similares para los inhibidores seleccionados.
Valoración de FAK
FAK HTS utilizó la valoración de polarización de la fluorescencia proporcionada por LJL Biosystems. La mezcla de reacción con quinasa contenía: Hepes 100 mM, pH 7,5, MgCl_{2} 10 mM, DTT 1 mM, ATP 1 mM y 1 mg/ml de poliGlu-Tyr (4:1). La reacción se inicia por adición de FAKcd409 5 nM. La reacción se termina por adición de EDTA seguido por adición de péptido marcado con flúor y de anticuerpo anti-fosfotirosina, ambos proporcionados por LJL Biosystems. Los resultados de la inhibición se leyeron con un detector Analyst (LJL).
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Valoración espectrofotométrica de TIE-2
La producción de ADP catalizada por quinasa a partir de ATP que acompaña la transferencia de fosforilo al copolímero aleatorio poli(Glu_{4}Tyr) se acopló a la oxidación de NADH por medio de las actividades de piruvato quinasa (PK) y lactato-deshidrogenasa (LDH). La conversión de NADH en NAD^{+} se controló por la disminución de la absorbancia a 340 nm (\varepsilon = 6,22 cm^{-1} mM^{-1}) con un espectrofotómetro Beckman DU650. Las soluciones de reacción típicas contenían fosfoenolpiruvato 1 mM, NADH 0,24 mM, MgCl_{2} 40 mM, DTT 5 mM, 2,9 mg/mL de poli(Glu_{4}Tyr), ATP 0,5 mM, 15 unidades/mL de PK, 15 unidades/mL de LDH en HEPES 100 mM, pH 7,5. Las valoraciones se iniciaron con la adición de Tie-2 fosforilado de 4 a 12 nM (aa 775-1122). El porcentaje de inhibición se determinó por triplicado a un nivel de inhibidor de 1 \muM.
DELFIA (Disociation Enhanced Lanthanide Fluoro Immuno Assay) de TIE-2
La formación de fosfotirosina se controló usando como sustrato el péptido p34cdc2 biotinilado (aa6-20 = KVEKIGEGTYGVVYK). El péptido biotinilado se inmovilizó usando placas de microtitulación de 96 pocillos recubiertas de NeutrAvidin^{TM} seguido por la detección con anticuerpo anti-fosfotirosina (PY20) conjugado al quelato de europio N1. Las soluciones para valoración típicas contenían: péptido p34cdc2 biotinilado 1 \muM, ATP 150 \muM, MgCl_{2} 5 mM, DTT 1 mM, BSA al 0,01%, glicerol al 5%, DMSO al 2%, HEPES 25 mM a pH 7,5. La valoración se inició en la placa de NeutrAvidin con 50 nM de dominio intracelular de TIE2. La reacción con quinasa se terminó con EDTA 50 mM. A continuación se lavaron las placas y se añadió anticuerpo de europio. Después de incubación, se lavaron de nuevo y se añadió la solución potenciadora de DELFIA^{TM}. Las placas se leyeron a ajustes típicos resueltos en el tiempo de europio (ex 340 nm, em 615 nm, retraso 400 \musec, ventana 400 \musec). El porcentaje de inhibición se calculó con referencia a los pocillos entre placas a los que se había añadido DMSO en lugar del compuesto en DMSO, restando el fondo tanto del ensayo experimental como del control con referencia a un pocillo entre placas al que se había añadido EDTA antes de la adición de la enzima.
Valoración de la proliferación de células HUVEC
Esta valoración determina la capacidad de un compuesto de ensayo para inhibir la proliferación estimulada por el factor de crecimiento de las células endoteliales de la vena del cordón umbilical humano ("HUVEC"). Las células HUVEC (3-4 pases, Clonetics, Corp.) se descongelaron en el medio de cultivo EGM2 (Clonetics Corp) en matraces T75. 24 horas más tarde se añadió a los matraces el medio EGM2 recién preparado. Cuatro o cinco días más tarde, se expusieron las células a otro medio de cultivo (medio F12K suplementado con suero bovino fetal (FBS) al 10%, 60 \mug/mL de suplemento del crecimiento celular endotelial (ECGS) y 0,1 mg/mL de heparina). En los siguientes experimentos se usaron células HUVEC que crecen exponencialmente. Se extendieron sobre placas de 96 pocillo de diez a doce mil células HUVEC en 100 \mul de medio de cultivo rico (antes descrito). Se dejó que las células fueran atacadas durante 24 horas en este medio. A continuación se separó el medio por aspiración y a cada pocillo se añadieron 105 \mul de medios de inanición (F12K+ FBS al 1%). Después de 24 horas, se añadieron a cada pocillo de tratamiento 15 \mul del agente de ensayo disuelto en DMSO al 1% en medio de inanición o este vehículo solo; la concentración final de DMSO fue 0,1%. Una hora más tarde, se añadieron a los pocillos 30 \mul de VEGF (30 ng/mL) en los medios de inanición excepto a los que contenían los controles no tratados; la concentración final de VEGF fue 6 ng/mL. La proliferación celular se cuantificó 72 horas más tarde por reducción del colorante MTT, en cuyo momento se expusieron las células durante 4 horas a MTT (Promega Corp.). La reducción del colorante se detuvo por adición de una solución de parada (Promega Corp.) y se determinó la absorbancia a 595 \lambda por espectrofotometría con lector de placas de 96 pocillos.
Los valores de CI_{50} se calcularon por el ajuste a la curva de la respuesta de A^{595} a diversas concentraciones del agente de ensayo; típicamente, se emplearon siete concentraciones separadas por 0,5 log, estando triplicados los pocillos en cada concentración. Para escrutar las placas de la colección de compuestos, se emplearon una o dos concentraciones (un pocillo por concentración) y se calculó el porcentaje de inhibición por la siguiente fórmula:
% de inhibición = (control - ensayo) / (control - inanición)
en donde
control = A^{595} cuando está presente VEGF sin agente de ensayo
ensayo = A^{595} cuando está presente VEGF con agente de ensayo
inanición = A^{595} cuando están ausentes tanto VEGF como el agente de ensayo.
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Valoración de la proliferación de las células cancerígenas (MV522)
El protocolo para evaluar la proliferación celular en las células cancerígenas es similar al usado para evaluar las células HUVEC. Se sembraron dos mil células cancerígenas de pulmón (línea MV522, adquiridas a American Tissue Cultural Collection) en medios de crecimiento (medio RPMI1640 suplementado con glutamina 2 mM y FBS al 10%). Se dejó que las células fueran atacadas durante 1 día antes de la adición de los agentes de ensayo y/o los vehículos. Las células se trataron simultáneamente con los mismos agentes de ensayo usados en la valoración de células HUVEC. La proliferación celular se cuantifica por la valoración de la reducción del colorante MTT 72 horas después de exposición a los agentes de ensayo. La duración total de la valoración es 4 días frente a los 5 para las células HUVEC debido a que las células MV522 no se exponen al medio de inanición.
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Valoración de PK de ratón
La farmacocinética (por ejemplo, absorción y eliminación) de fármacos en ratones se analizó aplicando los siguientes experimentos. Los compuestos de ensayo se formularon como una solución o suspensión en un vehículo 30:70 (PEG 400:H_{2}O acidificada) o como una suspensión en CMC al 0,5%. Esta se administró por vía oral (p.o.) y por vía intraperitoneal (i.p.) en dosis variables a dos grupos distintos (n=4) de ratones hembra B6. Se recogieron muestras de sangre por medio de una extracción del seno orbital a: 0 hora (pre-dosis), 0,5 h, 1,0 h, 2,0 h, y 4,0 h, y 7,0 h post-dosis. De cada muestra se obtuvo el plasma por centrifugación a 2500 rpm durante 5 min. El compuesto de ensayo se extrajo del plasma por un método de precipitación con proteínas orgánicas. Para cada tiempo de extracción se mezclaron 50 \muL de plasma con 1,0 mL de acetonitrilo, se introdujeron en un mezclador de vórtice durante 2 min y a continuación se centrifugaron a 4000 rpm durante 15 min para precipitar la proteína y extraer el compuesto de ensayo. A continuación, el líquido sobrenadante de acetonitrilo (el extracto que contenía el compuesto de ensayo) se vertió en nuevos tubos de ensayo y se evaporó sobre una placa caliente (25ºC) bajo una corriente de N_{2} gaseoso. A cada tubo que contenía el extracto del compuesto de ensayo seco se añadieron 125 \muL de fase móvil (NH_{4}H_{2}PO_{4} 0,025 M + 2,5 mL/L de TEA: acetonitrilo 60:40). El compuesto de ensayo se volvió a poner en suspensión en la fase móvil por mezclamiento con vórtice y se separó más cantidad de proteína por centrifugación a 4000 rpm durante 5 min. Cada muestra se vertió en un vial para HPLC para el análisis del compuesto de ensayo en un instrumento de HPLC Hewlett Packard serie 1100 con detección por UV. De cada muestra, se inyectaron 95 \muL en una columna en fase inversa Phenomenex-Prodigy C-18, de 150 x 3,2 mm y se eluyeron con un recorrido en gradiente de acetonitrilo al 45-50% durante 10 min. Las concentraciones en plasma del compuesto de ensayo (\mug/mL) se determinaron por comparación con una curva patrón (área máxima frente a concentración \mug/mL) usando concentraciones conocidas del compuesto de ensayo extraído de las muestras de plasma de la manera descrita anteriormente. Junto con los patrones y grupos desconocidos, se analizaron tres grupos (n=4) de controles de calidad (0,25 \mug/mL, 1,5 \mug/mL y 7,5 \mug/mL) para garantizar la homogeneidad de los análisis. La curva patrón tenía un R2 > 0,99 y los controles de calidad se encontraban todos en el 10% de los valores esperados. Las muestras de ensayo cuantificadas se representaron para su visualización utilizando el programa informático Kalidagraph y sus parámetros farmacocinéticos se determinaron utilizando el programa informático WIN NONLIN. El Ejemplo 1(a) proporcionó los siguientes resultados: 0,69 [pK de ratón, área bajo
la curva (abreviadamente AUC, del inglés Area Under Curve, ip, \mug-h/ml]; 0,33 (pK de ratón, AUC, po, \mug-h/ml).
Valoración del microsoma de hígado humano (HLM)
El metabolismo de los compuestos en los microsomas de hígado humano se midió por los procedimiento analíticos de valoración LC-MS como sigue. En primer lugar, se descongelaron microsomas de hígado humano (HLM) y se diluyeron hasta 5 mg/mL con tampón de fosfato de potasio (KPO_{4}) 100 mM frío. Cantidades apropiadas de tampón de KPO_{4}, solución regeneradora de NADPH (que contenía B-NADP, glucosa-6-fosfato, glucosa-6-fosfato-deshidrogenasa y MgCl_{2}) y HLM se incubaron previamente en tubos de vidrio de 13 x 100 mm a 37ºC durante 10 min (3 tubos por compuesto de ensayo-triplicado). Para iniciar la reacción se añadió a cada tubo el compuesto de ensayo (5 \muM final) y se mezcló con un vórtice suave, seguido de incubación a 37ºC. A t = 0, 2 h, se retiró de cada tubo de incubación una muestra de 250 \muL transfiriéndola a tubos de vidrio de 12 x 75 mm que contenían 1 mL de acetonitrilo enfriado con hielo con reserpina 0,05 \muM. Las muestras se centrifugaron a 4000 rpm durante 20 min para precipitar las proteínas y sal (Beckman Allegra 6KR, S/N ALK98D06, #634). El líquido sobrenadante se transfirió a nuevos tubos de vidrio de 12 x 75 mm y se evaporaron por un evaporador a vacío centrífugo Speed-Vac. Se reconstituyeron las muestras en 200 \muL de ácido fórmico al 0,1%/acetonitrilo (90/10) y se mezclaron con vórtice enérgicamente hasta su disolución. A continuación se transfirieron las muestras a tubos de microcentrífuga de polipropileno separados y se centrifugaron a 14000 x g durante 10 min (Fisher Micro 14, S/N M0017580). Para cada repetición (nº 1-3) en cada momento (0 y 2 h), se mezcló una muestra alícuota de cada compuesto de ensayo en un único vial de HPLC (6 muestras en total) para el análisis por LC-MS, que se describe a continuación.
Las muestras de compuesto reunidas se inyectaron en el sistema de LC-MS, compuesto de una HPLC con detector con diodos Hewlett-Packard HP1100 y un espectrómetro de masas triple/cuádruple Micromass Quattro II que trabaja de modo SIR con electropulverización positiva (programado para escanear específicamente el ion molecular de cada compuesto de ensayo). En cada momento se incorporó cada pico de cada compuesto de ensayo. Para cada compuesto, se halló la media del área de los picos en cada momento (n=3) y esta área media de los picos a las 2 h se dividió por el área media de los picos en el tiempo 0 hora para obtener el porcentaje de compuesto de ensayo que permanece
a las 2 h.
Los resultados de los ensayos de los compuestos usando varias valoraciones se resumen en la tabla siguiente, en la que la anotación "% @" indica el porcentaje de inhibición a la concentración establecida, los valores "*" representan K_{i} (nM) o el % de inhibición a una concentración de compuesto de 1 \muM para * o 50 nM para **, salvo indicación contraria. "NI" indica que no se ha producido inhibición significativa.
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TABLA 2
518
TABLA 3
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TABLA 3 (continuación)
520
Ejemplo I de quimioteca
521
Los tres módulos de quimioteca ("moldes de amina") 6-(3-aminofenoxi)-3-E-estiril-1H-indazol (Y = O), 6-(3-aminobenzoil)-3-E-estiril-1H-indazol (Y = CO) y 6-(3-aminofenil)amino-3-E-estiril-1H-indazol (Y = NH) se prepararon como se ha descrito en el Ejemplo 7 (Ejemplo de referencia), Ejemplo 18 (Ejemplo de referencia) y Ejemplo 46 respectivamente. Soluciones 0,1 M del ácido, el molde de amina, hexafluorofosfato de o-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetra-metiluronio y trietilamina se prepararon por separado en DMF anhidro. A cada tubo en una disposición de 8 X 11 tubos de cultivo (10 x 75 mm) se añadieron 105 \muL (0,0105 mmol) de un ácido diferente. A esto se añadieron 100 \muL (0,01 mmol) de la solución de amina, 105 \muL (0,0105 mmol) de la solución de trietilamina seguido de 105 \muL (0,0105 mmol) de la solución dehexafluorofosfato de o-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetra-metiluronio. Las mezclas de reacción se agitaron en un bloque de calentamiento a 50ºC durante 3 h. Las mezclas de reacción se transfirieron a una placa de 96 pocillos de 1 mL usando un manipulador líquido. Se separaron los disolventes usando el aparato Speed Vac^{TM} y las mezclas de reacción en bruto se volvieron a disolver en DMSO obteniéndose una concentración teórica final de 10 mM.
Se analizaron los compuestos de la tabla para determinar la inhibición de la proliferación de células HUVEC a una concentración nominal de 10 nM y los resultados se recogen en la Tabla I siguiente, calculados por la ecuación:
% de inhibición = (control-tratado)/(control-inanición) x 100
Bajo estas condiciones de ensayo, una inhibición >50% se considera significativa.
TABLA I DE LA QUIMIOTECA
522
523
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525 
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526 
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Ejemplo II de quimioteca
(a) Cuando Y = S en la Fórmula I (como referencia; no de acuerdo con la invención)
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1526 
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Se preparó 6-[2-(pentafluorofenoxicarbonil)fenilsulfanil]-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]-1H-indazol (Y = S) como se ha descrito en el Ejemplo 35(a). Soluciones de 261 aminas (1,5 \mumol) y Et_{3}N (0,1393 \muL, 1,0 \mumol), disueltas en DMF (15 \muL), se distribuyeron en los pocillos de de una placa de 96 pocillos. En los casos en los que la amina se usó como sal hidrocloruro, se añadió más Et_{3}N (0,4179 \muL, 3,0 \mumol) para liberar la base libre. Cada uno de los pocillos se trató con una solución de éster pentafluorofenílico (0,5395 mg, 1,0 \mumol) disuelto en DMF (30 \muL) y a continuación se agitó durante 24 h a la temperatura ambiente. Las mezclas de reacción en bruto se concentraron usando un aparato GeneVac^{TM} y a continuación se diluyeron con DMSO hasta una concentración final de 10 mM.
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(b) Cuando Y = NH en la Fórmula I
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527 
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Soluciones de 263 aminas (2,0 \mumol) y Et_{3}N (0,4181 \muL, 3,0 \mumol) se disolvieron en DMF (20 \muL) y se distribuyeron en los pocillos de una placa de 96 pocillos. En los casos en los que se usó la amina en forma de sal hidrocloruro, se añadió más Et_{3}N (0,5575 \muL, 4,0 \mumol) para liberar la base libre. Cada uno de los pocillos se trató con una solución de: 6-[2-carboxifenil-amino]-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]-1H-indazol (0,447 mg, 0,75 \mumol) disuelto en DMF (20 \muL), seguido de una solución de HATU (0,570 mg, 1,5 \mumol) disuelto en DMF (10 \muL) y a continuación se agitó durante 72 h a la temperatura ambiente. Las mezclas de reacción en bruto se concentraron usando un aparato GeneVac^{TM} y a continuación se diluyeron con DMSO hasta una concentración final de 10 mM.
Se analizaron los compuestos de la Tabla II de Quimioteca para determinar la inhibición de la proliferación de células HUVEC a una concentración nominal de 0,5 y 2 nM para Y = S (Ejemplo de referencia) y los resultados se recogen a continuación, calculados por la ecuación:
% de inhibición = (control-tratado)/(control-inanición) x 100
En estas condiciones de ensayo, una inhibición > 50% se considera significativa.
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(Tabla pasa a página siguiente)
TABLA II DE QUIMIOTECA (como referencia)
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533
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535
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537 
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538
539
Ejemplo III de quimioteca
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(Como referencia)
540
Se prepararon por separado soluciones 0,1 M de las aminas, trietilamina y 4-dimetilaminopiridina en DMF anhidra y se transfirieron a una caja de manipulación con guantes. En dicha caja se preparó una solución 0,1 M de 6-[2-(carboxi)fenilsulfanil]-3-E-[2-(piridin-2-il)etenil]-1H-indazol, Ejemplo 33(g), sal de tetrabutilamonio y hexafluorofosfato de o-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetra-metiluronio. A cada tubo en la disposición de 8 X 11 tubos de cultivo (10x75 mm) en la caja de manipulación con guantes se añadieron 100 \muL (0,01 mmol) de las diferentes soluciones de amina seguido por la adición de 100 \muL (0,01 mmol) de solución de 2-{3-[(E)-2-(2-piridinil)etilil]-1H-indazol-6-il}sulfanil)benzoato de tetrabutilamonio, 100 \muL (0,01 mmol) de la solución de trietilamina, 100 \muL (0,01 mmol) de la solución de 4-dimetilaminopiridina y 100 \muL (0,01 mmol) de la solución dehexafluorofosfato de o-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetra-metiluronio. Las mezclas de reacción se agitaron en un bloque de calentamiento a 50ºC durante 1 h. Las mezclas de reacción se transfirieron a una placa de 96 pocillos de 1 mL usando un manipulador de líquidos. Se separaron los disolventes usando el aparato SpeedVac^{TM} y las mezclas de reacción en bruto se volvieron a disolver en DMSO obteniéndose una concentración teórica final de 10 mM.
Se analizaron los compuestos de la tabla para determinar la inhibición de la proliferación de células HUVEC a una concentración nominal de 0,5 nM y los resultados se recogen a continuación en la Tabla III, calculados por la ecuación:
% de inhibición = (control-tratado)/(control-inanición) x 100
En estas condiciones de ensayo, una inhibición >30% se considera significativa.
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TABLA III DE QUIMIOTECA (como referencia)
541
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TABLA 4 (como referencia)
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561
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TABLA 5
563
TABLA 5 (continuación)
564 
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Determinación de la concentración inhibidora en plasma de ratón después de dosificación por vía intraperitoneal y oral
La solución de dosificación consistía en el inhibidor disuelto en uno de los vehículos siguientes: solución acuosa de polipropilenglicol al 30% o 60% con un equivalente molar de HCl en agua o carboximetilcelulosa al 0,5% en agua. La concentración final era normalmente 5 mg/ml con un volumen de dosificación de 5 o 10 ml/kg. A ratones hembras Taconic (Germantown, NY) se les administró la dosis en función de la masa de compuesto por masa corporal, generalmente 50 o 25 mg/kg. La recogida de sangre se realizó por extracción ocular a 0,5, 1, 4 h y la extracción final, 7 hora, por punción intracardiaca. La sangre se centrifugó para recoger el plasma, que se conservó a -80ºC hasta su análisis.
Las muestras se prepararon para análisis usando un patrón interno e hidróxido de sodio. Después de mezclamiento con vórtice, se añadió acetato de etilo y se mezcló durante 15-20 minutos a la temperatura ambiente. Después de centrifugación, se evaporó la capa orgánica resultante y se reconstituyó posteriormente en acetonitrilo y tampón. A continuación se analizaron las muestras por HPLC o LC-MS.
Los niveles de compuesto se cuantificaron generando una curva patrón de concentración de compuestos conocidos en plasma de ratón. Los niveles de compuesto se representaron en función del tiempo y se analizaron para obtener el área bajo la curva de concentración (AUC ng*h/ml), la concentración máxima (C_{max} ng/ml), la concentración mínima (C_{min} o 7 hora en ng/ml) y la semi-vida terminal (T_{1/2} h). los resultados se muestran en la Tabla 6.
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(Tabla pasa a página siguiente)
TABLA 6
565
TABLA 6 (continuación)
566
TABLA 6 (continuación)
567
TABLA 6 (continuación)
568
TABLA 6 (continuación)
569 
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Valoración in vivo del desarrollo vascular retinal en ratas neonatales
El desarrollo vascular retinal en ratas tiene lugar desde el día 1 después del nacimiento hasta el día 14 (P1-P14). Este proceso depende de la actividad del VEGF (J. Stone, et al, J. Neurosci., 15, 4738 (1995)). Trabajos anteriores han demostrado que el VEGF actúa también como factor de supervivencia para los vasos de la retina durante el desarrollo vascular temprano (Alon, et. al, Nat. Med., 1, 1024 (1995)). Para determinar la capacidad de compuestos específicos para inhibir la actividad del VEGF in vivo, se formularon los compuestos en un vehículo apropiado, generalmente polietilenglicol al 50%, peso molecular medio 400 daltones y solución al 50% de sacarosa 300 mM en agua desionizada. Típicamente, se inyectaron dos microlitros (2 \mul) de la solución del fármaco en el cuerpo vítreo medio del ojo de crías de rata el día 8 o 9 después de su nacimiento. Seis días después de la inyección intravítrea, se sacrificaron los animales y se separaron las retinas del resto del tejido ocular. Las retinas aisladas se sometieron a continuación a un protocolo de tinción histoquímica que tiñe específicamente las células endoteliales (Lutty y McLeod, Arch. Oftalmol., 110, 267 (1992)), revelando el grado de vascularización en la muestra de tejido. A continuación se montaron en plano las retinas individuales sobre portaobjetos de vidrio y se examinaron para determinar el grado de vascularización. Los compuestos eficaces inhiben el desarrollo adicional de la vasculatura retinal e inducen una regresión de casi todos los vasos grandes de la retina. La cantidad de regresión de los vasos se usó para determinar la potencia relativa de los compuestos después de administración in vivo. La regresión de los vasos se clasifica en una escala subjetiva de uno a tres impulsos, correspondiendo un impulso a la regresión detectable que se considera que tiene un valor de aproximadamente 25 por ciento o inferior, dos impulsos a una regresión de aproximadamente 25-75% y tres impulsos a una regresión de la retina casi total (aproximadamente 75% o superior).
Para análisis de regresión más cuantitativos, se tomaron imágenes de retinas montadas en plano teñidas con ADPasa con una cámara digital acoplada a un microscopio de disección. A continuación se importaron las imágenes retinales a un programa informático de análisis de imágenes (Image Pro Plus 4,0, Media Cybernetics, Silver Spring, MD). El programa informático se empleó para determinar el porcentaje del área de la retina que contenía vasos teñidos. Este valor para el ojo del experimento se comparó con el medido en el otro ojo del mismo animal al que se ha inyectado vehículo. La reducción de la zona vascular observada en el ojo que recibió el compuesto en comparación con el ojo al que se ha inyectado el vehículo se expresó a continuación como el "porcentaje de regresión" para dicha muestra. Se obtuvo la media de los valores en porcentaje de regresión para grupos de 5-8 animales.
En las muestras en las que la observación por el microscopio indicaba una regresión casi total, se midió habitualmente un valor en porcentaje de regresión de 65-70%. Esto era debido a la tinción de depósitos en los pliegues de la retina, pliegues que fueron inducidos por el vehículo usado para la inyección del fármaco. El programa informático de análisis de imagen interpretaba estos pliegues que contenían colorante como vasos. No se realizó ningún intento de corregir estos pliegues puesto que variaban de un ojo a otro. Así, debe observarse que los valores en porcentaje de regresión obtenidos resultan de una medida conservadora que clasifica exactamente la ordenación de los compuestos, pero que subestima su potencia absoluta.
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Valoración in vivo del desarrollo vascular retinal en modelo de rata neonatal de retinopatía de prematuridad
Se empleó un segundo modelo de neovascularización retinal dependiente del VEGF para evaluar las actividades de esta serie de compuestos. En este modelo (Penn et al, Invest. Ophthalmol. Vis. Sci., 36, 2063, (1995)), se colocan crías de ratas (n=16) con sus madres en una cámara controlada por ordenador que regula la concentración de oxígeno. Los animales se expusieron durante 24 horas a una concentración de oxígeno al 50% seguido por 24 horas a una concentración de oxígeno al 10%. Este ciclo alternativo de hiperoxia seguido de hipoxia se repite 7 veces después que los animales son sacados al aire ambiente (P14). Se administran los compuestos por inyección intravítrea eliminando el aire ambiente y los animales se sacrifican 6 días más tarde (P20). Las retinas extraídas se aíslan a continuación, se montan teñidas y se analizan como se ha detallado anteriormente en el modelo de desarrollo. La eficacia se clasificó igualmente como se ha descrito para el modelo de desarrollo.
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TABLA 7
570
TABLA 7 (continuación)
571
TABLA 7 (continuación)
572 
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Fosforilasa quinasa Construcción de fosforilasa quinasa para valoración
La subunidad catalítica truncada (subunidad gamma) de fosforilasa quinasa (aminoácidos 1-298) se expresó en E. coli y se aisló de los cuerpos de inclusión. A continuación se volvió a replegar la fosforilasa quinasa y se conservó en glicerol a -20ºC.
Valoración de fosforilasa quinasa. En la valoración, se usó la subunidad catalítica purificada para fosforilar la fosforilasa b usando ATP radiomarcado. En resumen, 1,5 mg/ml de fosforilasa b se incuba con fosforilasa quinasa 10 nM en MgCl_{2} 10 mM, Hepes 50 mM pH 7,4, a 37ºC. La reacción comienza con la adición de ATP a 100 nM y se incuba durante 15 min a 25ºC o 37ºC. La reacción se terminó y precipitaron las proteínas por adición de TCA hasta una concentración final del 10%. Las proteínas precipitadas se aislaron sobre una placa filtrante Millipore MADP NOB de 96 pocillos. La placa filtrante se lavó a continuación exhaustivamente con TCA al 20% y se secó. A continuación se añadió a la placa fluido de centelleo y se contó el radiomarcador incorporado con un contador Wallac microbeta. El % de inhibición de transferencia de fosforilo desde ATP a la fosforilasa b en presencia de 10 \muM de compuesto se muestra en la Tabla 8 siguiente.
TABLA 8
573
Los compuestos ilustrativos descritos anteriormente pueden formularse en forma de composiciones farmacéuticas de acuerdo con los siguientes ejemplos generales.
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Ejemplo 1 Composición parenteral
Para preparar una composición farmacéutica parenteral adecuada para administración por inyección, se disolvieron 100 mg de una sal soluble en agua de un compuesto de Fórmula I(a) en DMSO y a continuación se mezclaron con 10 mL de solución salina estéril al 0,9%. La mezcla se incorpora a una forma farmacéutica adecuada para administración por inyección.
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Ejemplo 2 Composición oral
Para preparar una composición farmacéutica para administración oral, se mezclan 100 mg de un compuesto de Fórmula I(a) con 750 mg de lactosa. La mezcla se incorpora a una unidad de dosificación oral, tal como una cápsula de gelatina dura, que sea adecuada para administración oral.
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Ejemplo 3 Composición intraocular
Para preparar una composición farmacéutica de liberación prolongada para administración intraocular, se pone en suspensión un compuesto de Fórmula I(a) en una a solución isotónica neutra de ácido hialurónico (conc. 1,5%) en tampón de fosfato (pH 7,4) para formar una suspensión al 1%.
Ha de entenderse que la descripción anterior es ilustrativa y explicatoria y sólo pretende ilustrar la invención y sus realizaciones preferidas. Por experimentación habitual, el técnico podrá realizar modificaciones y variaciones evidentes sin separarse del espíritu de la invención. Así, se pretende que la invención no sea definida por la descripción anterior, sino por las siguientes reivindicaciones y sus equivalentes.

Claims (13)

1. Un compuesto de la fórmula I(a):
574
en donde:
R^{1}
es un arilo o heteroarilo sustituido o no sustituido o un grupo de la fórmula CH=CH-R^{3} o CH=N-R^{3}, en donde R^{3} es un alquilo, alquenilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, arilo o heteroarilo sustituido o no sustituido; y
R^{2}
es Y-Ar, en donde Y es NH y Ar es un arilo sustituido o no sustituido;
en donde
el término alquilo se refiere a grupos alquilo C_{1}-C_{12} de cadena lineal y ramificada,
el término alquenilo se refiere a grupos alquenilo C_{2}-C_{12} de cadena lineal y ramificada,
el término cicloalquilo se refiere a carbociclos C_{3}-C_{12} saturados o parcialmente insaturados,
el término heterocicloalquilo se refiere a un radical monocíclico saturado o parcialmente insaturado que contiene átomos de carbono y al menos un heteroátomo, seleccionado de nitrógeno, oxígeno y azufre,
los términos arilo y heteroarilo se refieren a estructuras de anillos aromáticos monocíclicos y policíclicos, denominándose arilo a los que son carbociclos y heteroarilo a los que son heterociclos y los grupos arilo y heteroarilo pueden estar opcionalmente sustituidos con una estructura de anillos condensados o un puente,
o una de sus sales farmacéuticamente aceptables.
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2. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, de la fórmula III:
575
en donde
R^{1}
es un arilo o heteroarilo sustituido o no sustituido o un grupo de la fórmula CH=CH-R^{3} o CH=N-R^{3}, en donde R^{3} es un alquilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, arilo o heteroarilo sustituido o no sustituido;
Y
es NH;
R^{8}
es un alquilo, alquenilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, arilo, heteroarilo, alcoxilo o ariloxilo sustituido o no sustituido; y
R^{10}
se selecciona independientemente de hidrógeno, halógeno y alquilo C_{1}-C_{8};
o una de sus sales farmacéuticamente aceptables.
3. Un compuesto o una de sus sales farmacéuticamente aceptables de acuerdo con la reivindicación 2, en donde:
R^{1}
es un heteroarilo bicíclico sustituido o no sustituido o un grupo de la fórmula CH=CH-R^{3}, en donde R^{3} es un arilo o heteroarilo sustituido o no sustituido;
Y
es NH;
R^{8}
es un arilo o heteroarilo, alquilo y alquenilo sustituido o no sustituido, y
R^{10}
es hidrógeno o halógeno.
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4. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 2, de la fórmula III(a):
576
en donde:
R^{1}
es un arilo o heteroarilo sustituido o no sustituido o un grupo de la fórmula CH=CH-R^{3} o CH=N-R^{3}, en donde R^{3} es un alquilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, arilo o heteroarilo sustituido o no sustituido;
Y
es NH;
R^{8}
es un alquilo, alquenilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, arilo, heteroarilo, alcoxilo o ariloxilo sustituido o no sustituido;
o una de sus sales farmacéuticamente aceptables.
\vskip1.000000\baselineskip
5. Un compuesto o una de sus sales farmacéuticamente aceptables de acuerdo con la reivindicación 4, en donde:
R^{1}
es un heteroarilo bicíclico sustituido o no sustituido o un grupo de la fórmula CH=CH-R^{3}, en donde R^{3} es un arilo o heteroarilo sustituido o no sustituido;
Y
es NH; y
R^{8}
es un arilo, heteroarilo, alquilo o alquenilo sustituido o no sustituido.
\vskip1.000000\baselineskip
6. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, de fórmula IV:
577
en donde:
R^{1}
es un arilo o heteroarilo sustituido o no sustituido o un grupo de la fórmula CH=CH-R^{3} o CH=N-R^{3}, en donde R^{3} es un alquilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, arilo o heteroarilo sustituido o no sustituido;
Y
es NH;
R^{9}
es un alquilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, arilo, heteroarilo, alcoxilo, ariloxilo, cicloalcoxilo sustituido o no sustituido, NH-(alquilo C_{1}-C_{8}), NH-(arilo), NH-(heteroarilo), N=CH-(alquilo), NH(C=O)R^{11} o NH_{2}, en donde R^{11} se selecciona independientemente de hidrógeno, alquilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, arilo y heteroarilo sustituido o no sustituido; y
R^{10}
se selecciona independientemente de hidrógeno, halógeno y alquilo C_{1-}C_{8};
o una de sus sales farmacéuticamente aceptables.
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7. Un compuesto o una de sus sales farmacéuticamente aceptables de acuerdo con la reivindicación 6, en donde:
R^{1}
es un grupo de la fórmula CH=CH-R^{3}, en donde R^{3} es un arilo o heteroarilo sustituido o no sustituido;
Y
es NH; y
R^{9}
es un alquilo, alcoxilo o NH-(heteroarilo) sustituido o no sustituido.
\vskip1.000000\baselineskip
8. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, seleccionado de:
578
o una de sus sales farmacéuticamente aceptables.
9. Una composición farmacéutica que comprende:
(a)
una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto o una de sus sales farmacéuticamente aceptables como se ha definido en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8; y
(b)
un excipiente, diluyente o vehículo para dicho compuesto farmacéuticamente aceptable.
10. El uso de un compuesto o una de sus sales farmacéuticamente aceptables como se ha definido en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, para la preparación de un medicamento para el tratamiento de un estado morboso en un mamífero mediado por la actividad de proteína quinasa.
11. El uso de acuerdo con la reivindicación 10, en donde el estado morboso de un mamífero está asociado al crecimiento de un tumor, a la proliferación celular o a angiogénesis.
12. El uso de un compuesto o una de sus sales farmacéuticamente aceptables como se ha definido en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, para la preparación de un medicamento para modular la actividad de un receptor de proteína quinasa.
13. El uso de acuerdo con la reivindicación 12, en donde el receptor de proteína quinasa es un receptor del VEGF.
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