SK19252001A3 - Indazolové zlúčeniny, farmaceutické prípravky na inhibíciu proteínkináz a ich použitie - Google Patents

Indazolové zlúčeniny, farmaceutické prípravky na inhibíciu proteínkináz a ich použitie Download PDF

Info

Publication number
SK19252001A3
SK19252001A3 SK1925-2001A SK19252001A SK19252001A3 SK 19252001 A3 SK19252001 A3 SK 19252001A3 SK 19252001 A SK19252001 A SK 19252001A SK 19252001 A3 SK19252001 A3 SK 19252001A3
Authority
SK
Slovakia
Prior art keywords
group
substituted
alkyl
pharmaceutically acceptable
aryl
Prior art date
Application number
SK1925-2001A
Other languages
English (en)
Other versions
SK286936B6 (sk
Inventor
Robert Steven Kania
Steven Lee Bender
Allen J. Borchardt
John F. Braganza
Stephan James Cripps
Ye Hua
Michael David Johnson
Theodore Otto Johnson Jr.
Hiep The Luu
Cynthia Louise Palmer
Siegfried Heinz Reich
Anna Maria Tempczyk-Russell
Min Teng
Christine Thomas
Michael David Varney
Michael Brennan Wallace
Michael Raymond Collins
Original Assignee
Agouron Pharmaceuticals, Inc.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=22498654&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=SK19252001(A3) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Agouron Pharmaceuticals, Inc. filed Critical Agouron Pharmaceuticals, Inc.
Publication of SK19252001A3 publication Critical patent/SK19252001A3/sk
Publication of SK286936B6 publication Critical patent/SK286936B6/sk

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings
    • C07D403/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/06—Antipsoriatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A61P27/06—Antiglaucoma agents or miotics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D209/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D209/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom condensed with one carbocyclic ring
    • C07D209/04—Indoles; Hydrogenated indoles
    • C07D209/10—Indoles; Hydrogenated indoles with substituted hydrocarbon radicals attached to carbon atoms of the hetero ring
    • C07D209/18—Radicals substituted by carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D231/00—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazole or hydrogenated 1,2-diazole rings
    • C07D231/54—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazole or hydrogenated 1,2-diazole rings condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C07D231/56—Benzopyrazoles; Hydrogenated benzopyrazoles
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/04—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings directly linked by a ring-member-to-ring-member bond
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/06—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings linked by a carbon chain containing only aliphatic carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings
    • C07D403/04—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings directly linked by a ring-member-to-ring-member bond
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D405/00—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom
    • C07D405/02—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings
    • C07D405/04—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings directly linked by a ring-member-to-ring-member bond
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D405/00—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom
    • C07D405/02—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings
    • C07D405/06—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings linked by a carbon chain containing only aliphatic carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D405/00—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom
    • C07D405/14—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D409/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D409/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings
    • C07D409/06—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings linked by a carbon chain containing only aliphatic carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D409/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D409/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D413/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D413/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings
    • C07D413/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D417/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00
    • C07D417/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing two hetero rings
    • C07D417/06—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing two hetero rings linked by a carbon chain containing only aliphatic carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D417/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00
    • C07D417/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing two hetero rings
    • C07D417/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D417/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00
    • C07D417/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D471/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00
    • C07D471/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D471/04—Ortho-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D491/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00
    • C07D491/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D491/04—Ortho-condensed systems

Description

Oblasť techniky
Tento vynález sa týka indazolových zlúčenín, ktoré sprostredkovávajú a/alebo inhibujú aktivitu určitých proteinkináz, a farmaceutických prípravkov, ktoré tieto zlúčeniny obsahujú. Vynález sa tiež týka terapeutického alebo profylaktického použitia týchto zlúčenín a prípravkov a ďalej sa týka liečenia karcinómov a tiež ďalších chorobných stavov spojených s nežiadúcou angiogenézou a/alebo bunečnou proliferáciou podávaním účinného množstva týchto zlúčenín.
Doterajší stav techniky
Proteinkinázy sú skupina enzýmov, ktoré katalyzujú fosforyláciu hydroxylovej skupiny špecifických tyrozínových, serínových alebo treonínových zvyškov v proteínoch. Táto fosforylácia typicky významne naruší funkciu proteínu a proteinkinázy sú teda kľúčovými enzýmami pre reguláciu celého radu bunečných procesov,. vrátane metabolizmu, bunečnej proliferácie, bunečnej diferenciácie a prežívania buniek. Z veľa rôznych bunečných funkcií, o ktorých je známe, že je u nich nezbytná aktivita proteinkinázy, niektoré procesy predstavujú lákavé ciele pre terapeutickú intervenciu u určitých chorobných stavov. Dvomi príkladmi sú angiogenéza a riadenie bunečného cyklu, kde proteinkinázy hrajú hlavnú úlohu, pričom tieto procesy sú esenciálne pre rast solídnych nádorov, ako aj pre ďalšie ochorenia.
mechanizmus, ktorým sú vytvorené nové
Angiogenéza je kapiláry z už existujúcich ciev. Ak je nezbytné, vaskulárny systém má potenciál k vytvoreniu nových kapilárnych sietí, aby bola udržovaná riadna funkcia tkaniva a orgánov. Ale u dospelých je angiogenéza dosť obmedzená, nastáva iba pri procesu hojenia rán a neovaskularizácii endometria počas menštruácie. (Viď Merenmies et al.,
Celí Growth &
Differentiation, 8, 3-10 1997).
Na druhej strane, nežiadúca angiogenéza je charakteristický znak niekolkých ochorení, ako sú napríklad retinopatia, psoriázis, reumatoidná artritída, makulárna degenerácia so vzťahom k veku (AMD) a karcinómy (solídne nádory). (Folkman, Náture Med., 1, 27-31 1995). Proteinkinázy, u ktorých bolo preukázané, že sú zapojené do angiogénneho procesu, zahrnujú troch členov skupiny tyrozinkinázových receptorov rastového faktoru: VEGF-R2 (receptor 2 vaskulárneho endotelového rastového faktoru, tiež známy ako KDR (receptor s kinázovou doménou) a ako FLK-1), FGF-R (receptor fibroblastového rastového faktoru) a TEK (tiež známy ako Tie-2).
VEGF-R2, ktorý je exprimovaný iba na endotelových bunkách, viaže silný angiogénny rastový faktor VEGF a sprostredkováva následnú signálnu transdukciu aktiváciou aktivity svojej intracelulárnej kinázy. Očakáva sa teda, že priama inhibícia aktivity kináza VEGF-R2 bude mať za následok redukciu angiogenézy dokonca aj v prítomnosti exogénneho VEGF (viď Strawn et al., Cancer Research, 56, 3540-3545, 1996), ako bolo ukázané u mutant VEGF-R2, ktoré nevedia sprostredkovať signálnu transdukciu. (Millauer et al., Cancer Research, 56,
1615-1620, 1996). Naviac sa zdá, že VEGF-R2 nemá inú funkciu u dospelých okrem sprostredkovania angiogénnej aktivity VEGF.
Takže sa očakáva, že selektívny inhibítor aktivity kinázy
VEGF-R2 by prejavoval malú toxicitu.
Podobne FGF-R viaže angiogénne rastové faktory aFGF a bFGF a sprostredkováva následnú intracelulárnu signálnu transdukciu. Nedávno bolo navrhnuté, že rastové faktory, ako je napríklad bFGF, môžu mať kľúčovú úlohu v indukcii angiogenézy u solídnych nádorov, ktoré dosiahli určitej veľkosti. (Yoshiji et al., Cancer Research, 57, 3924-3928, 1997). Ale na rozdiel od VEGF-R2 je FGF-R exprimovaný vo veľkom počte rôznych bunečných typov v celom organizme a môže alebo nemusí mať dôležitú úlohu v iných normálnych fyziologických procesoch u dospelých. Jednako len bolo publikované, že systémové podávanie inhibitora s malou molekulou, ktorý inhiboval kinázovou aktivitu FGF-R, blokovalo angiogenézu indukovanú bFGF u myší bez zjavnej toxicity. (Mohamrnad et al., EMBO Journal, 17, 5996-5904, 1998).
TEK (také známa ako Tie-2) je ďalšia receptorová tyrozinkináza exprimovaná iba na endotelových bunkách, o ktorej bolo preukázané, že má úlohu v angiogenéze. Väzba faktoru angiopoietínu-1 má za následok autofosforyláciu kinázovej domény TEK a má za následok signálnu transdukciu, ktorá pravdepodobne sprostredkováva interakciu endotelových buniek s peri-endotelovými podpornými bunkami, a tím uľahčuje maturáciu novo vytvorených krvných ciev. Na druhej strane faktor angiopoietín-2 pravdepodobne antagonizuje účinok angiopoietínu-1 na TEK a narušuje angiogenézu. (Maisonpierre et al., Science, 277, 55-60, 1997).
Ako dôsledok vyššie popísaného výskumu bolo navrhnuté liečiť angiogenézu použitím zlúčenín inhibujúcich kinázovú aktivitu VEGF-R2, FGF-R a/alebo TEK. Napríklad, WIPO medzinárodná publikácia č. WO 97/34876 popisuje určité cinnolínové deriváty, ktoré sú inhibítormi VEGF-R2, ktoré môžu byť použité pre liečenie chorobných stavov združených s abnormálnou angiogenézou a/alebo zvýšenou vaskulárnou permeabilitou, ako sú napríklad karcinómy, diabetes, psoriázis, reumatoidná artritída, Kaposiho sarkóm, hemangióm, akútne a chronické nefropatie, ateróm, arteriálna restenóza, autoimunitné ochorenia, akútne zápaly a očné ochorenia s proliferáciou retinálnych ciev.
Kináza fosforylázy aktivuje glykogénfosforylázu, teda zvyšuje rozpad glykogénu a uvoľňovanie glukózy pečeňou. Regulácia produkcie glukózy pečeňou je narušená u diabetes typu 2 a je primárnou príčinou hyperglykémie nalačno, ktorá má za následok vela sekundárnych komplikácii, ktoré týchto pacientov postihujú. Redukcia uvoľňovania glukózy z pečene by teda znížila zvýšenú hladinu plazmatickej glukózy. Inhibítory kinázy fosforylázy by teda znížili fosforylázovú aktivitu a glykogénolýzu, a tak znížili hyperglykémiu u pacientov.
Ďalšia fyziologická reakcia na VEGF je vaskulárna hyperpermeabilita, o ktorej sa predpokladá, že má úlohu v časných štádiách angiogenézy. V ischemických tkanivách, ako sú napríklad tie, ktoré sa vyskytujú v mozgu obeťou mozgovej mŕtvice, hypoxia spúšťa expresiu VEGF, čo vedie k zvýšenej vaskulárnej permeabilite a konečnému edému susedných tkanív. V modelu mozgová mŕtvica na laboratórnych potkanoch bolo ukázané autormi van Bruggen et al. (J. Clinical Invest., 104, 1613-20, 1999), že podávanie monoklonálnej protilátky k VEGF znižuje objem infarktu. Očakáva sa teda, že inhibítory VEGFR budú použiteľné pre liečenie mozgovej mŕtvice.
Okrem ich úlohy v angiogenéze majú proteinkinázy tiež velmi dôležitú úlohu v riadení bunečného cyklu. Nekontrolované bunečné proliferácie je hlavný znak karcinómu. Bunečná proliferácia ako reakcia na rôzne podnety sa prejavuje dereguláciou cyklu bunečného delenia, procesu, ktorým sa bunky množia a delia. Nádorové bunky majú typicky poškodené gény, ktoré priamo alebo nepriamo regulujú postup cyklu bunečného delenia.
Kinázy závislé na cyklínu (CDKs) sú serintreonínové proteinkinázy, ktoré majú rozhodujúcu úlohu v regulácii prechodov medzi rôznymi fázami bunečného cyklu. (Viď napr. články zobraté v Science, 274, 1643-1677, 1996). CDK komplexy sú vytvorené spojením regulačnej cyklinovej podjednotky (napr.
cyklín A, BI, B2, meno našepkáva,
Dl, D2, D3 a E) a katalytickej kinázovej podjednotky (napr. cdc2 (CDK1), CDK2, CDK4, CDK5 a CDK6). Ako
CDK prejavujú absolútnu závislosť na cyklinovej podjednotke pri fosforylácii svojich cieľových substrátov a rôzne páry kináza/cyklín pôsobia na reguláciu progresie špecifických fáz bunečného cyklu.
Je to komplex CDK4 s cykliny D, ktorý má rozhodujúcu úlohu v iniciácii cyklu bunečného delenia z oddychového alebo pokojného štádia do štádia, kedy bunky počínajú podstupovať bunečné delenie. Táto progresia je podrobená celému radu rastových regulačných mechanizmov, ako negatívnych tak pozitívnych. Odchýlky v tomto kontrolnom systéme, konkrétne tie, ktoré ovplyvňujú funkciu CDK4, sú zapojené do ďalšieho vývoja buniek k vysoko proliferativnemu stavu charakteristickému pre malignity, konkrétne familiárne melanómy, ezofageálne karcinómy a pankreatické karcinómy. (Viď napr. Kamb, Trends in Genetics, 11, 136-140, 1995, Kamb et al., Science, 264, 436-440, 1994).
Nespočetné publikácie popisujú celý rad chemických zlúčenín použiteľných proti veľkému množstvu terapeutických cieľov. Napríklad WIPO medzinárodnej prihlášky č. WO 99/23077 a WO 99/23076 popisujú zlúčeniny obsahujúce indazol majúci inhibični aktivitu pre fosfodiesterázu typu IV, vytvorenej bioizosterickým nahradením katecholu indazolom. Patent Spojených Štátov č. 5 760 028 popisuje heterocyklus zahrnujúci.
3-[1-[3-(imidazolín-2-ylamino)propyl]indazol-5-ylkarbonylamino]-2-(benzyloxykarbonylamino)propiónovú kyselinu, ktoré sú použiteľné ako antagonisti αβ3 integrínu a príbuzných adhezívnych proteínových receptorov bunečného povrchu. WIPO medzinárodná prihláška č. WO 98/09961 popisuje určité deriváty indazolu a ich použitie ako inhibítory fosfodiesterázy (PDE) typ IV alebo produkciu faktor nekrotizujúceho nádory (TNF) u cicavcov. Nedávne príspevky do virtuálnej knižnice známych zlúčenín obsahujú zlúčeniny popísané ako antiproliferatívne terapeutické prípravky, ktoré inhibujú CDR. Napríklad patent Spojených Štátov č. 5 621 082, Xiong et al., popisuje nukleovú kyselinu kódujúcu inhibitor CDK6 a európska patentová prihláška č. 0 666 270 A2 popisuje peptidy a peptidomimetiká, ktoré pôsobí ako inhibítory CDK1 a CDK2. Medzinárodná patentová prihláška č. WO 97/16447 popisuje určité analógy chromanov, ktoré sú inhibítormi kináz závislých na cyklínu, zvlášť komplexov CDK/cyklín, ako je napríklad CDK4/cyklín Dl, ktoré môžu byť použité pre inhibíciu nadmernej alebo abnormálnej bunečnej proliferácie, a teda pre liečbu karcinómu. WIPO medzinárodní prihláška č. WO 99/21845 popisuje deriváty 4-aminotiazolu, inhibítory.
ktoré sú použiteľné ako CDK
Ale stále trvá potreba zlúčenín s malou molekulou (tzv. malých molekúl), ktoré môžu byť ľahko syntetizované a účinne inhibujú jednu alebo viacej CDK alebo komplexy CDK/cyklín. Pretože CDK4 môže slúžiť ako obecný aktivátor bunečného delenia vo väčšine buniek a komplexy CDK4 a cyklínov typu D riadia časnú Gi fázu bunečného cyklu, existuje potreba účinných inhibítorov CDK4 a ich komplexov cyklínov typu D pre liečbu jedného alebo viacej typov nádorov. Tiež podstatná úloha kináz komplexov cyklín E/CDK2 a cyklín B/CDK1 v prechodoch fáz Gi/S a G2/M, v danom poradí, poskytuje ďalšie ciele pre terapeutickú intervenciu pri supresii deregulovanej progresie bunečného cyklu u karcinómu.
Ďalšia proteinkináza, CHK1, má dôležitú úlohu ako kontrolný bod v progresii bunečného cyklu. Kontrolné body sú kontrolné systémy, ktoré koordinujú progresiu bunečného cyklu ovplyvnením formácie, aktivácie a následnej inaktivácie kináz závislých na cyklíne. Kontrolné body zabraňujú progresii bunečného cyklu v nevhodný čas, udržujú metabolickú rovnováhu buniek, keď sú bunky zadržiavané v určitej fáze (arest), a v niektorých prípadoch môžu indukovať apoptózu (programovanú bunečnú smrť), keď nie sú podmienky pre kontrolný bod splnené. (Viď napr. O'Connor, Cancer Surveys, 29, 151-182, 1997), Nurse, Celí, 91, 865-867, 1997), Hartwell et al.,
Science, 266, 1821-1828 (1994), Hartwell et al., Science, 246,
629-634, 1989).
Jeden rad kontrolných bodov sleduje integritu genómu a po zistení poškodenia DNA, tieto „kontrolné body poškodenia DNA blokujú progresiu vo fázach bunečného cyklu Gi a G2 a spomaľujú progresiu S fáze. (O'Connor, Cancer Surveys, 29, 151-182,
1997, Hartwell et al., Science, 266, 1821-1828, 1994). Tento účinok umožňuje opravné procesy DNA, aby bola ich práca ukončená pred replikáciou genómu a kým prebehne následná separácia genetického materiálu do nových dcériných buniek. Je dôležité, že najčastejšie mutovaný gén u ľudských karcinómov, nádorový supresorový gén p53, vytvára proteín pre kontrolný bod poškodenia DNA, ktorý blokuje progresiu bunečného cyklu v Gi fáze a/alebo indukuje apoptózu (programovanú bunečnú smrť) po poškodení DNA. (Hartwell et al., Science, 266, 1821-1828,
1994). Bolo preukázané, že nádorový supresorový gén p53 tiež zosiluje účinok kontrolného bodu pre poškodenie DNA v G2 fáze bunečného cyklu. (Viď napr. Bunz et al., Science, 28, 14971501, 1998), Winters et al., Oncogene, 17, 673-684, 1998),
Thompson, Oncogene, 15, 3025-3035, 1997).
Vďaka podstatnej povahe dráhy ľudských karcinómov intervencie, ktoré nádorového supresorového génu p53 u terapeutické karcinómov sú aktívne vyhľadávané zraniteľnosť využívajú objavená zraniteľnosť leží v operácii p53. bunky zvlášť defektných v p53. Jedna kontrolného bodu G2 u buniek karcinómu defektného v karcinómu, pretože postrádajú kontrolný bod Gi, sú zraniteľné pri odstránení poslednej zvyšnej bariéry chrániacej ich pred nádor likvidujúcimi („cancer-killing) účinkami agens poškodzujúcich DNA: kontrolný bod G2. Kontrolný bod G2 je regulovaný kontrolným systémom, ktorý je zachovaný od kvasiniek k človeku. V tomto zachovanom systéme je dôležitá kináza, CHK1, ktorá transdukuje signály od komplexu citlivého na poškodenia DNA na inhibiciu aktivácie kinázy cyklín B/Cdc2, ktorá podporuje vstup do mitotickej fázy (viď napr. Peng et al., Science, 277, 1501-1505, 1997, Sanchez et al., Science, 277/ 1497-1501, 1997) . Bolo ukázané, že inaktivácia CHK1 ruší jak G2 arest indukovaný poškodením DNA spôsobeným buď protirakovinnými agens alebo endogénnym poškodením DNA, tak aj spôsobuje prednostné usmrtenie následných buniek defektňých v kontrolných bodoch (viď napr. Nurse, Celí, 91, 865-867, 1997, Weinert, Science, 277, 1450-1451, 1997, Walworth et al., Náture, 363, 368-371, 1993, a Al-Khodairy et al., Molec. Biol. Celí, 5, 147-160, 1994).
Selektívna manipulácia kontrolného bodu v karcinómových bunkách by mohla poskytnúť široké, využitie v chemoterapeutických a rádioterapeutických režimoch pri liečbe karcinómu a môže okrem toho poskytnúť obecný charakteristický znak „genómovej nestability ľudských karcinómov ku skúmaniu ako selektívny základ deštrukcie karcinómových buniek. Celý rad faktorov má CHK1 ako podstatný cieľ pre kontrolný bod poškodenia DNA. Objasnenie inhibítorov tieto a funkčne príbuzných kináz, ako je napríklad Cdsl/CHK2, kináza, o ktoré bolo nedávno zistené, že kooperuje s CHK1 pri regulácii progresie S fázy (viď. Zeng et al., Náture, 395, 507-510, 1998, Matsuoka, Science, 282, 1893-1897, 1998), by mohlo poskytnúť cennú novú terapeutickú podstatu pre liečenie karcinómu.
Väzba receptora integrinu k ECM iniciuje intracelulárne signály sprostredkované FAK (kináza fokálnej adhézie), ktoré sú zapojené do motility buniek, bunečnej proliferácie a prežití. U ľudských karcinómov je nadmerná expresia FAK zapojená do genézy tumoru a metastatického potenciálu vďaka svojej úlohe v integrinom sprostredkovaných signálnych dráhach.
majúce extracelulárne, transmembránové
Tyrozinkinázy môžu byť obecne receptorového typu (tzn. a intracelulárne domény) alebo nereceptorového typu (tzn. sú plne intracelulárne) . Má sa za to, že aspoň jedna nereceptorová proteínová tyrozínkináza, menovite
LCK, sprostredkováva v T lymfocytoch transdukciu signálu z interakcie proteínu bunečného povrchu (Cd4) krížovo naviazanou protilátkou anti-Cd4 (detailnejšia diskusia nereceptorových tyrozinkinázach je uvedená
2025-2031, 1993, ktorá je práci autora Bolen, Oncogene, 8, v tomto texte zahrnutá formou odkazu).
Okrem proteinkináz identifikovaných vyššie, bolo zistené, že veľa ďalších proteinkináz sú terapeutické ciele a početné publikácie popisujú inhibítory kinázovej aktivity, ako uvedené v prehľade v nasledujúcich prácach (McMahon et al, Oncologist, 5, 3-10, 2000, Holash et al., Oncogene, 18, 5356-62, 1999,
Thomas et al., J. Biol. Chem., 274, 36684-92, 1999, Cohen,
Curr. Op. Chem. Biol., 3, 459-65, 1999, Klohs. et al., Curr.
Op. Chem. Biol., 10, 544-49, 1999, McMahon et al., Current
Opinion in Drug Discovery & Development, 1, 131-146, 1998,
Strawn et al., Exp. Opin. Invest. Drugs, 7, 553-573, 1998).
Medzinárodná patentová prihláška WO 00/18761 popisuje určité substituované 3-kyanochinoliny ako inhibítory proteinkináz.
Stále ale trvá potreba účinných inhibítorov proteinkináz. Naviac/ ako je odborníkom jasné, je žiadúce, aby inhibítory kináz mali ako vysokú afinitu k cieľovej kináze alebo kinázam, tak boli tiež vysoko selektívne v zrovnaní s ďalšími prpteinkinázami.
Podstata vynálezu
Cielom vynálezu je poskytnúť silné inhibitory proteinkináz. Ďalším cielom vynálezu je poskytnúť účinné inhibitory kináz, ktoré majú silnú a selektívnu afinitu pre jednu alebo viacej konkrétnych kináz.
Týchto a ďalších cieľov vynálezu, ktoré budú jasné z nasledujúceho popisu, bolo dosiahnuté objavením indazolových zlúčenín, ich farmaceutický prijateľných prekurzorov, farmaceutický aktívnych metabolitov a farmaceutický prijateľných solí (tieto zlúčeniny, prekurzory, metabolity a soli sú súhrnne nazývané ako „agens alebo „činidlá) popísaných nižšie, ktoré modulujú a/alebo inhibujú aktivitu proteinkináz. Farmaceutické prípravky obsahujúce tieto činidlá sú použiteľné v liečbe ochorení sprostredkovaných kinázovou aktivitou, ako sú napríklad karcinómy, a tiež ďalšie chorobné stavy združené s nežiadúcou angiogenézou a/alebo bunečnou proliferáciou, ako je napríklad diabetická retinopatia, neovaskulárny glaukóm, reumatoidná artritída a psoriázis. Ďalej činidlá majú výhodné vlastnosti týkajúce sa modulácie a/alebo inhibície kinázovej aktivity združenej s VEGF-R, FGFR, komplexy CDK, CHK1, LCK, TEK, FAK a/alebo kinázou fosforylázy.
V obecnom aspekte sa vynález týka zlúčenín vzorca I:
kde:
R1 je substituovaná alebo nesubstituovaná arylová skupina alebo heteroarylová skupina alebo skupina vzorce CH=CH-R3 alebo CH=N-R3 kde R3 je substituovaná alebo nesubstituovaná alkylová skupina, alkenylová skupina, cykloalkylová skupina, heterocykloalkylová skupina, arylová skupina alebo heteroarylová skupina a
R2 je substituovaná alebo nesubstituovaná arylová skupina, heteroarylová skupina alebo Y-X, kde Y je atóm 0, S, skupina C=CH2, skupina C=O, S=0, S02, alkylidén, skupina NH alebo
N-alkylová skupina obsahujúca 1 až 8 atómov uhlíku a X je substituovaná alebo nesubstituovaná Ar, heteroarylová skupina,
NH-alkylová skupina, NH-cykloalkylová heterocykloalkylová skupina, NH-arylová heteroarylová skupina, NH-alkoxyskupina
skupina, NH-
skupina, NH-
alebo NH-
dialkylamidoskupina, kde Ar je arylová skupina.
Vynález sa tiež týka farmaceutický prijateľných prekurzorov, farmaceutický aktívnych metabolitov a farmaceutický prijateľných solí zlúčeniny vzorca I.
Tiež výhodné spôsoby výroby zlúčenín vzorca I sú popísané.
V ďalšom obecnom aspekte sa vynález
I(a)
H týka zlúčenín vzorca kde:
R1 je substituovaná alebo nesubstituovaná arylová skupina alebo heteroarylové skupina alebo skupina vzorce CH=CH-R3 alebo CH=N-R3 kde R3 je substituovaná alebo nesubstituovaná alkylová skupina, alkenylová skupina, cykloalkylové skupina, heterocykloalkylová skupina, arylová skupina alebo heteroarylové skupina a
R2 je substituovaná alebo nesubstituovaná arylová skupina alebo Y-Ar, kde Y je atóm 0, S, skupina C=CH2, skupina C=O, skupina S=0, skupina S02, skupina CH2, skupina CHCH3, skupina NH alebo N-alkylová skupina obsahujúca 1 až 8 atómov uhlíka a Ar je substituovaná alebo nesubstituovaná arylová skupina.
Vynález sa tiež týka farmaceutický prijateľných prekurzorov, farmaceutický aktívnych metabolitov a farmaceutický prijateľných solí zlúčeniny vzorca I(a). Výhodné spôsoby výroby zlúčenín vzorca I(a) sú tiež popísané.
V jednom výhodnom obecnom prevedení sa vynález týka zlúčenín majúci vzorec II:
kde:
R1 je substituovaná alebo nesubstituovaná arylová skupina alebo heteroarylové skupina alebo skupina vzorca CH=CH-R3 alebo
CH=N-R3, kde R3 je substituovaná alebo nesubstituovaná alkylová skupina, cykloalkylová skupina, heterocykloalkylová skupina, arylová skupina alebo heteroarylová skupina,
R4 a R7 sú každý nezávisle atóm vodíka, skupina OH, atóm halogénu, alkylová skupina obsahujúca 1 až 8 atómov uhlíka, alkoxyskupina obsahujúca 1 až 8 atómov uhlíka, alkenylová skupina obsahujúca 1 až 8 atómov uhlíka, aryloxyskupina, tioarylová skupina, skupina ΟΗ2-ΟΗ, CH2-0-alkylová skupina obsahujúca 1 až 8 atómov uhlíka, CH2-0-arylová skupina, CH2-Salkylová skupina obsahujúca 1 až 8 atómov uhlíka alebo CH2-Sarylová skupina,
R5 a R6 sú každý nezávisle atóm vodíka, skupina OH, atóm halogénu, Z-alkylová skupina, Z-arylová skupina nebo skupina Z-CH2CH=CH2, kde Z je atóm 0, S, skupina NH alebo skupina CH2 a alkylová skupina a arylová skupina z Z-alkylovej skupiny a Zarylovej skupiny je každá voliteľne substituovaná, a ich farmaceutický prijateľných prekurzorov, farmaceutický aktívnych metabolitov a farmaceutický prijateľných soli.
Vo výhodnom prevedení vzorca II: R1 je substituovaná alebo nesubstituovaná bicyklická heteroarylová skupina alebo skupina vzorca CH=CH-R3, kde R3 je substituovaná alebo nesubstituovaná arylová skupina alebo heteroarylová skupina, R4 a R7 sú každý nezávisle atóm vodíka alebo alkylová skupina obsahujúca 1 až 8 atómov uhlíka a R5 a R6 sú každý nezávisle atóm halogénu, Z-alkylová skupina alebo skupina Z-CH2CH=CH2, kde Z je atóm O alebo S.
V ďalšom výhodnom obecnom prevedení sú zlúčeniny podľa vynálezu vzorca III:
kde:
R1 je substituovaná alebo nesubstituovaná arylová skupina alebo heteroarylová skupina alebo skupina vzorca CH=CH-R3 alebo CH=N-R3, kde R3 je substituovaná alebo nesubstituovaná alkylová skupina, cykloalkylová skupina, heterocykloalkylová skupina, arylová skupina alebo heteroarylová skupina,
Y je atóm 0, S, skupina C=CH2, skupina C=0, skupina S=0, skupina SO2, skupina CH2, skupina CHCH3, skupina NH alebo N-alkylová skupina obsahujúca 1 až 8 atómov uhlíka,
R8 je substituovaná alebo nesubstituovaná alkylová skupina, alkenylová skupina, cykloalkylová skupina, heterocykloalkylová skupina, arylová skupina, heteroarylová skupina, alkoxyskupina alebo aryloxyskupina,
R10 je nezávisle vybratý zo skupiny, ktorou tvorí atóm vodíka, atóm halogénu a nižšia alkylová skupina
A ich farmaceutický prijateľné prekurzory, farmaceutický prijateľné metabolity a farmaceutický prijateľné soli.
Výhodnejšie vo vzorci III: R1 je substituovaná alebo nesubstituovaná bicyklická heteroarylová skupina alebo skupina vzorca CH=CH-R3, kde R3 je substituovaná alebo nesubstituovaná arylová skupina alebo heteroarylová skupina, Y je atóm 0, S, skupina C=CH2, skupina C=0, skupina NH alebo N-alkylová skupina obsahujúca 1 až 8 atómov uhlíka,
R8 je substituovaná alebo nesubstituovaná arylová skupina, heteroarylová skupina, alkylová skupina a alkenylová skupina a Rio je atóm vodíka alebo atóm halogénu.
V ďalšom výhodnom obecnom prevedení sú zlúčeniny podlá vynálezu vzorca III (a):
m(a) H kde;
R1 je substituovaná alebo nesubstituovaná arylová skupina alebo heteroarylová skupina alebo skupina vzorca CH=CH-R3 alebo CH=N-R3, kde R3 je substituovaná alebo nesubstituovaná alkylová skupina, cykloalkylová skupina, heterocykloalkylová skupina, arylová skupina alebo heteroarylová skupina,
Y je atóm O, S, skupina C=CH2, skupina C=0, skupina S=O, skupina S02, skupina CH2, skupina CHCH3, skupina NH alebo N-alkylová skupina obsahujúcal až 8 atómov uhlíka,
R8 je substituovaná alebo nesubstituovaná alkylová skupina, alkenylová skupina, cykloalkylová skupina, heterocykloalkylová skupina, arylová skupina, heteroarylová skupina, alkoxyskupina alebo aryloxyskupina,
A ich farmaceutický prijateľné prekurzory, farmaceutický prijateľné metabolity a farmaceutický prijateľné soli.
Výhodnejšie vo vzorci III(a): R1 je substituovaná alebo nesubstituovaná bicyklická heteroarylová skupina alebo skupina vzorca CH=CH-R3, kde R3 je substituovaná alebo nesubstituovaná arylová skupina alebo heteroarylová skupina, Y je atóm 0, S, skupina C=CH2, skupina C=0, skupina NH alebo N-alkylová skupina obsahujúca 1 až 8 atómov uhlíka a R8 je substituovaná alebo nesubstituovaná arylová skupina alebo heteroarylová skupina.
V ďalšom výhodnom obecnom prevedení sú zlúčeniny podlá vynálezu vzorca IV:
R1 je substituovaná alebo nesubstituovaná arylová skupina alebo heteroarylová skupina alebo skupina vzorce CH=CH-R3 alebo CH=N-R3, kde R3 je substituovaná alebo nesubstituovaná alkylová skupina, cykloalkylová skupina, heterocykloalkylová skupina, arylová skupina alebo heteroarylová skupina,
Y je atóm 0, S, skupina C=CH2, skupina C=0, skupina S=0, skupina S02, skupina CH2/ skupina CHCH3, skupina NH alebo N-alkylová skupina obsahujúca 1 až 8 atómov uhlíka,
R9 je substituovaná alebo nesubstituovaná alkylová skupina, cykloalkylová skupina, heterocykloalkylová skupina, arylová skupina, heteroarylová skupina, alkoxyskupina, aryloxyskupina, cykloalkoxyskupina, NH-alkylová skupina obsahujúca 1 až 8 atómov uhlíka, NH-atylová skupina, NH-heteroarylová skupina, N=CH-alkylová skupina, skupina NH(C=0)R1;L alebo skupina NH2, kde R11 je nezávisle vybratý zo skupiny, ktorú tvorí atóm vodíka, substituovaná alebo nesubstituovaná alkylová skupina, cykloalkylová skupina, heterocykloalkylová skupina, arylová skupina a heteroarylová skupina a
R10 je nezávisle vybratý zo skupiny, ktorú tvorí atóm vodíka, atóm halogénu a nižšia alkylová skupina
A ich farmaceutický prijatelné prekurzory, farmaceutický prijateľné metabolity a farmaceutický prijateľné soli.
Výhodnejšie vo vzorci IV: R1 je skupina vzorce CH=CH-R3, kde R3 je substituovaná alebo nesubstituovaná arylová skupina alebo heteroarylová skupina, Y je S alebo skupina NH a
R9 je substituovaná alebo nesubstituovaná alkylová skupina, alkoxyskupina alebo NH-heteroarylová skupina.
Najvýhodnejšie sú zlúčeniny podľa vynálezu vybraté zo skupiny, ktoré tvoria nasledujúce zlúčeniny:
Μ
Vynález sa tiež týka spôsobu modulácie a/alebo inhibície kinázovej aktivity VEGF-R, FGF-R, komplexu CDK, CHK1, LCK,
TEK, FAK a/alebo kinázy fosforylázy podávaním zlúčeniny vzorca alebo IV alebo jej farmaceutický prijateľného farmaceutický aktívneho metabolitu prijateľnej soli. Výhodné zlúčeniny
I, II,
III prekurzora, farmaceutický alebo podía predkladaného aktivitu, tzn.
vynálezu, majú významnú viacej špecifickým kinázam, minimálnu aktivitu proti jednej ktoré majú selektívnu kinázovú aktivitu proti jednej alebo majú malú alebo rôznym kinázam. V zlúčeniny podía zatiaľ čo alebo viacej jednom výhodnom prevedení vynálezu sú predkladaného vynálezu zlúčeniny vzorca I, ktoré majú v podstate vyššiu účinnosť proti tyrozinkináze receptora VEGF ako proti tyrozinkináze receptora FGF-R1. Vynález sa tiež týka spôsobu modulácie tyrozinkinázovej aktivity receptora VEGF bez významnej modulácie tyrozinkinázovej aktivity receptora FGF.
Zlúčeniny podľa vynálezu môžu byť použité výhodne v kombinácii s ďalšími známymi terapeutickými prípravkami. Napríklad zlúčeniny vzorca I, II, III alebo IV, ktoré majú antiangiogénnu aktivitu, môžu byť podávané spoločne s cytotoxickými chemoterapeutickými prípravkami, ako je napríklad taxol, taxotér, vinblastín, cis-platina, doxorubicín, adriamycín apod., aby sa dosiahlo zvýšeného protinádorového účinku. Aditívne alebo synergické zosilnenie terapeutického účinku môže tiež byť získané spoločným podávaním zlúčenín, vzorca I, II, III alebo IV ktoré majú antiangiogénnu aktivitu, s ďalšími antiangiogénnymi prípravkami, ako je napríklad combretastatín A-4, endostatín, prinomastat, celecoxib, rofocoxib, EMD121974, IM862, anti-VEGF monoklonálnej protilátky a anti-KDR monoklonálnej protilátky.
Vynález sa tiež týka farmaceutických prípravkov obsahujúcich účinné množstvo agensa vybratého zo skupiny, ktorú tvoria zlúčeniny vzorca I a jeho solí, farmaceutický aktívnych prijateľných prekurzorov a prij atelných farmaceutický farmaceutický metabolitov a farmaceutický prijateľného nosiča alebo vehikula tohto agensa. Vynález ďalej poskytuje liečbu karcinómu, a tiež ďalších chorobných stavov združených s nežiadúcou angiogenézou a/alebo bunečnou proliferáciou, obsahujúcou podávanie účinného množstva takého agensa pacientovi, ktorý túto liečbu potrebuje.
Detailný popis vynálezu a výhodných prevedení
Zlúčeniny podľa vynálezu vzorca I, II, použiteľné Konkrétnejšie pre sprostredkovaní aktivity sú zlúčeniny použiteľné ako činidlá a ako
III a IV sú proteinkináz. antiangiogénne činidlá pre moduláciu a/alebo inhibíciu aktivity a tak sú užitočné pri liečení karcinómu alebo združených s bunečnou proliferáciou proteinkináz, iných ochorení sprostredkovanou proteinkinázami.
Termín „alkylová skupina, ako sa používa v tomto texte, sa týka alkýlových skupín s priamym a rozvetveným reťazcom, ktoré majú jeden až dvanásť uhlíkových atómov. Príklady alkýlových skupín sú : metylová skupina, (Me), etylová skupina (Et), n-propylová skupina, izopropylová skupina, butylová izobutylová skupina, sek-butylová skupina, tercskupina (t-Bu), pentylová skupina, izopentylová skupina, hexylová skupina, izohexylová „nižšia alkylová skupina označuje . 1 až 8 atómov uhlíka (alkylová skupina atómov uhlíka). Vhodné substituované terc-pentylová apod. Termín skupinu majúcu skupina, butylová skupina, skupina alkylovú obsahujúca 1 až 8 alkylové skupiny sú: fluórmetylová skupina, difluórmetylová skupina, trifluórmetylová skupina, 2-fluóretylová skupina, 324 fluórpropylová skupina, hydroxymetylová skupina, 2hydroxyetylová skupina, 3-hydroxypropylová skupina apod.
Termín „alkylidén sa týka dvojmocného radikálu, ktorý má jeden až dvanásť atómov uhlíka. Príklady alkylidénových skupín zahrnujú skupinu CH2, skupinu CHCH3, skupinu (CH3)2 apod.
Termín „alkenylová skupina sa týka alkenylových skupín s priamym a rozvetveným reťazcom, ktorá má dva až dvanásť atómov uhlíka. Príklady alkenylových skupín zahrnujú prop-2-enylovú skupinu, but-2-enylovú skupinu, but-3-enylovú skupinu, 2metylprop-2-enylovú skupinu, hex-2-enylovú skupinu apod.
Termín „alkynylová skupina sa týka alkynylových skupín s priamym a rozvetveným reťazcom, ktoré majú dva až dvanásť atómov' uhlíka.
Termín „cykloalkylová skupina sa týka saturovaných alebo čiastočne nesaturovaných karbocyklov, ktoré majú tri až dvanásť atómov uhlíka, vrátane bicyklických a tricyklických cykloalkylových štruktúr. Vhodné cykloalkylové skupiny zahrnujú cyklopropylovú skupinu, cyklobutylovú skupinu, cyklopentylovú skupinu, cyklohexylovú skupinu, cykloheptylovú skupinu apod.
Termín „heterocykloalkylová skupina znamená saturovaný alebo čiastočne nesaturovaný monocyklický radikál obsahujúci atómy uhlíka, výhodne 4 alebo 5 atómov uhlíka v kruhu a aspoň jeden heteroatóm vybratý z atómov dusíka, kyslíka a síry.
Termíny „arylová skupina a „heteroarylové skupina sa týkajú monocyklických a polycyklických nesaturovaných alebo aromatických kruhových štruktúr, pričom termín „arylová skupina sa týka karbocyklov a termín „heteroarylová skupina, sa týka heteŕocyklov. Príklady aromatických kruhových štruktúr sú:
fenylová skupina, naftylová skupina,
1,2,3,4tetrahydronaftylová skupina, furylová skupina, tienylová skupina, pyrolylová skupina, pyridinylová skupina, pyrazolylová skupina, imidazolylová skupina, pyrazinylová skupina, pyridazinylová skupina, 1,2,3-triazinylová skupina,
1,2,4-oxadiazolylová skupina, 1,3,4-oxadiazolylová skupina, 1H-tetrazol-5-ylová skupina, indolylová skupina, chinolinylová skupina, benzofuranylová skupina, benzotiofenylová skupina (tianaftenylová skupina) apod. Tieto skupiny môžu byť voliteľne substituované kondenzovanými kruhovými štruktúrami alebo mostíkmi, napríklad skupinou OCH2-O.
Termín „alkoxyskupina znamená radikál-O-alkylovú skupinu. Príklady obsahujú metoxy skupinu, etoxy skupinu, propoxy skupinu apod.
Termín „aryloxyskupina predstavuje -O-arylovú skupinu, pričom arylová skupina je definovaná vyššie.
Termín „cykloalkoxyskupina predstavuje -O-cykloalkylovú skupinu, pričom cykloalkylové skupina je definovaná vyššie.
Termín „atóm halogénu predstavuje atóm chlóru, fluóru, brómu alebo jódu. Termín „halogén predstavuje atóm chlóru, fluóru, brómu alebo jódu.
Obecne, rôzne skupiny alebo funkčné skupiny premenných vo vzorcoch môžu byť voliteľne substituované jedným alebo viacej vhodnými substituentmi. Príklady substituentov sú atóm halogénu (F, Cl, Br alebo I), nižšia alkylová skupina, skupina -OH, skupina -N02, skupina -CN, skupina -CO2H, nižšia -O-alkylová skupinu, -arylová skupina, -arylová-nižšia alkylová skupina, skupina -CO2CH3, skupina -CONH2, skupina OCH2CONH2, skupina -NH2, skupina -SO2NH2, halogénalkylová skupina (napr. skupina -CF3, skupina -CH2CF3), O-halogénalkylová skupina (napr. skupina -OCF3, skupina -OCHF2) apod.
Termíny „obsahujúci” a „zahrnujúci” sú použité otvorene, v neobmedzujúcom význame.
Rozumie sa, že aj keď zlúčenina vzorca I môže mať prejavy tautomérie, obrázky vzorcov v tomto popise úmyselne zobrazujú iba jednu možnú tautomérnu formu. Rozumie sa teda, že vo vynáleze vzorca predstavujú každú tautomérnu formu zobrazenej zlúčeniny a nie sú obmedzené iba na špecifickú tautomérnu formu zobrazenú obrázkami vzorcov.
Niektoré zo zlúčenín podľa vynálezu môžu existovať ako jednoduché stereoizoméry (tzn.
v podstate bez ďalšieho stereoizoméru), racemáty a/alebo zmesi enantiomérov a/alebo diastereomérov.
Všetky tieto jednotlivé stereoizoméry, racemáty a ich zmesi sú obsiahnuté v rozsahu predkladaného vynálezu. Výhodne zlúčeniny podľa vynálezu, ktoré sú opticky aktívne, sú použité v opticky čistej forme.
Ako odborníci všeobecne poznajú, opticky čistá zlúčenina majúca jedno chirálne centrum, je zlúčenina, ktorá obsahuje v podstate jeden z dvoch možných enantiomérov (tzn. je enantiomérne čistá) a opticky čistá zlúčenina majúca viacej ako jedno chirálne centrum je zlúčenina, ktorá je čistá diastereomericky a čistá enantiomérne. Výhodne sú zlúčeniny podlá predkladaného vynálezu použité vo forme, ktorá je aspoň z 90 % opticky čistá, tzn. vo forme, ktorá obsahuje aspoň z 90 % jeden izomér (80% enantiomérny nadbytok („e.e.) alebo diastereomérny nadbytok („d.e.)), výhodnejšie aspoň z 95 % (90% e.e. alebo d.e.), ešte výhodnejšie aspoň z 97,5 % (95 % e.e. alebo d.e.) a najvýhodnejšie aspoň z 99 % (98% e.e. alebo d.e.) .
Okrem toho solvatované, ako Napríklad vzorec v hydratovanej aj solvátov zahrnujú etanolom, metanolom, aj sa predpokladá, že nesolvatované formy zahrnuje zlúčeniny nehydratovanej forme.
štruktúry v kombinácii DMSO, etylacetátom, vzorce označených pokrývajú štruktúr.
určenej
Ďalšie štruktúry príklady s izopropanolom, octovou kyselinou alebo etanolamínom.
Okrem zlúčenín vzorca I, II, III a IV zahrnuje vynález farmaceutický prijateľné prekurzory, farmaceutický aktívne metabolity a farmaceutický prijateľné soli týchto zlúčenín.
„Farmaceutický prijateľný prekurzor je zlúčenina, ktorá môže byť konvertovaná za fyziologických podmienok alebo solvolýzou na špecifickú zlúčeninu alebo na farmaceutický prijateľnú soľ tejto zlúčeniny.
„Farmaceutický aktívny metabolit znamená farmakologicky aktívny produkt vytvorený telesným metabolizmom zo špecifickej zlúčeniny alebo jej soli. Metabolity zlúčeniny môžu byť identifikované s použitím rutinovaných techník v oboru známych a ich aktivity zisťované s použitím testov, ako sú napríklad testy popísané v tomto texte.
Prekurzory a aktívne metabolity zlúčeniny môžu byť identifikované s použitím rutinovaných techník v obore známych. (Viď napr. Bertolini, G. et al., J. Med. Chem., 40, 2011-2016, 1997, Shan, D. et al., J. Pharm. Sci., 86 (7), 765767, Bagshawe K., Drug Dev. Res., 34, 220-230, 1995, Bodor,
N., Advances in Drug Res., 13, 224-331, 1984, Bundgaard, H.,
Design of Prodrugs (Elsevier Press 1985), a Larsen, I. K., Design and Application of Prodrugs, Drug Design and Development, Krogsgaard-Larsen et al., vyd., Harwood Academic Publishers, 1991).
„Farmaceutický prijateľná soľ znamená soľ, ktorá si podržala biologickú účinnosť voľných kyselín a báz špecifikovaných zlúčenín a ktorá nie je biologicky alebo inak nežiadúca. Zlúčenina podľa vynálezu môže mať dostatočne kyslú, dostatočne bázickú alebo obidve funkčné skupiny a podľa toho reagovať s akýmkoľvek počtom anorganických alebo organických báz a anorganických a organických kyselín, za vzniku farmaceutický prijateľnej soli. Príklady farmaceutický prijateľných solí obsahujú soli pripravené reakciou zlúčenín podľa predkladaného vynálezu s minerálnou alebo organickou kyselinou alebo anorganickou bázou, ako sú napríklad tieto soli: sulfáty, pyrosulfáty, bisulfáty, sulfity, bisulfity, fosfáty, monohydrogenfosfáty, dihydrogenfosfáty, metafosfáty, pyrofosfáty, chloridy, bromidy, jodidy, acetáty, propionáty, dekanoáty, kapryláty, kaproáty, sukcináty, heptanoáty, suberáty, sebakáty, dioáty, hexyn-1,6-dioáty, propioláty, oxaláty, fumaráty, maleáty, benzoáty, dinitrobenzoáty, metylbenzoáty, metoxybenzoáty, fenylacetáty, sulfonáty, fenylpropionáty, fenylbutyráty, ftaláty, naftalén-2akryláty, formiáty, izobutyráty, malonáty, butyn-1,4chlórbenzoáty, hydroxybenzoáty, xylénsulfonáty, citráty, laktáty, γ-hydroxybutyráty, glykoláty, tartráty, metánsulfonáty, propánsulfonáty, naftalén-l-sulfonáty, sulfonáty a mandeláty.
Ak je zlúčenina podľa vynálezu báza, požadovaná farmaceutický prijateľná soľ môže byť pripravená akýmkoľvek vhodným spôsobom v obore dostupným, napríklad ošetrením voľnej bázy anorganickou kyselinou, ako je napríklad chlorovodíková kyselina, bromovodíková kyselina, sírová kyselina, dusičná kyselina, fosforečná kyselina apod. Alebo organickou kyselinou, ako je napríklad octová kyselina, maleínová kyselina, jantárová kyselina, mandľová kyselina, fumarová kyselina, malónová kyselina, pyrohroznová kyselina, oxalová kyselina, glykolová kyselina, salicylová kyselina, pyranozidylová kyselina, ako je napríklad glukurónová kyselina alebo galakturónová kyselina, alfa-hydroxykyselina, ako je napríklad kyselina citrónová alebo kyselina vínna, aminokyselina, ako je napríklad asparágová kyselina alebo glutámová kyselina, aromatická kyselina, ako je napríklad benzoová kyselina alebo škoricová kyselina, sulfónová kyselina, ako je napríklad p-toluénsulfónová kyselina alebo etánsulfónová kyselina alebo podobne.
Ak je zlúčenina podľa vynálezu kyselina, požadovaná farmaceutický prijateľná soľ môže byť pripravená akoukoľvek vhodnou metódou, napríklad ošetrením voľnej kyseliny anorganickou alebo organickou bázou, ako je napríklad amín (primárny, sekundárny alebo terciárny), hydroxid alkalického kovu alebo hydroxid kovu alkalických zemín alebo podobne. Ilustratívne príklady vhodných solí zahrnujú organické soli derivované z aminokyselín, ako je napríklad glycín a arginín, čpavok, primárne, sekundárne a terciárne amíny a cyklické amíny, ako je napríklad piperidín, morfolín a piperazín a anorganické soli derivované zo sodíka, kalcia, draslíka, magnézia, mangánu, železa, medi, zinku, alumínia a lítia.
V prípade, že .činidlá sú pevné látky, odborníci vedia, že zlúčeniny a soli podľa vynálezu môžu existovať v rôznych kryštalických alebo polymorfných formách, predpokladá sa teda, že všetky sú zahrnuté v rozsahu predkladaného vynálezu a špecifikovaných vzorcoch.
Terapeuticky účinné množstvá činidiel podľa vynálezu môžu byť použité k liečbe ochorení sprostredkovaných moduláciou alebo reguláciou proteinkinázy. „účinné množstvo znamená množstvo činidla, ktoré, keď je podávané cicavcovi, ktorý toto liečenie potrebuje, je postačujúce pre liečenie choroby sprostredkovanej aktivitou jednej alebo viacej proteinkináz, ako sú napríklad tyrozinkinázy. Tak napr. terapeuticky účinné množstvo zlúčeniny vzorca I, jej soli, aktívneho metabolitu alebo prekurzora je množstvo postačujúce modulovať, regulovať alebo inhibovať aktivitu jednej alebo viacej proteinkináz tak, že chorobný stav, ktorý je sprostredkovaný touto aktivitou, je redukovaný alebo zmiernený.
Množstvo daného činidla, ktoré odpovedá tomuto množstvu, kolísa v závislosti na faktoroch, ako je napríklad konkrétna zlúčenina, chorobný stav a jeho, závažnosť, identita (napr. hmotnosť) cicavca, ktorý túto liečbu potrebuje, ale môže byť napriek tomu rutinovane určené odborníkom v obore. Termín „liečba,, znamená aspoň zmiernenie chorobného stavu cicavca, napríklad človeka, ktorý, je ovplyvnený, aspoň čiastočne, aktivitou jednej alebo viacej proteinkináz, ako sú napríklad tyrozinkinázy, a zahrnuje: prevenciu výskytu chorobného stavu u cicavca, konkrétne keď je zistené, že cicavec má predispozície k výskytu chorobného stavu, ale choroba ešte nebola diagnostikovaná, moduláciu a/alebo inhibíciu chorobného stavu a/alebo úlavu od chorobného stavu.
Činidlá podľa vynálezu môžu byť pripravené s použitím reakcií a podľa schém syntézy, ako je popísané ďalej, s využitím techník v obore dostupných a známych s použitím východzích látok, ktoré, sú ľahko k dispozícii.
V jednom obecnom syntetickom procese sú zlúčeniny vzorca I pripravené podľa nasledujúcich reakčných schém:
^NaOHIa
2JP0-X
8η0ι
1) I sa nahradí M
2) R2 + alebo
R*-M
vn
1) modifikácia
2) -Pg
6-nitroindazol (zlúčenina V) bol podrobený pôsobení jódu a bázy, napr. NaOH, vo vodne/organickej zmesi, dioxánom. Zmes je acidifikovaná a produkt výhodne s izolovaný filtráciou. K výslednému 3-jód-6-nitroindazolu vo zmesi dichlórmetánu a 50% vodného KOH pri teplote 0 °C bolo pridané činidlo chrániace skupiny („Pg) (kde X = halogén), výhodne trimetylsilyletoxymetylchlorid (SEM-C1) a katalyzátor fázového prenosu, napr. tetrabutylamóniumbromid (TBABr). Po 1 až 4 hodinách boli dve fázy nariedené, organické vrstvy boli oddelené, usušené nad sulfátom sodným, filtrované a koncentrované. Hrubý produkt bol purifikovaný chromatografiou na silikagéle za vzniku zlúčeniny vzorca VI. Ošetrenie zlúčenín vzorca VI vo vhodnom organickom rozpúšťadle vhodným R1-organokovovým činidlom, výhodne kyselinou R1-borónovou, v prítomnosti vodnej bázy, napr. uhličitanu sodného, a vhodného katalyzátora, výhodne Pd(PPh3)4 dalo, po extrakčnom spracovaní a chromatografii na silikagéle, zlúčeniny vzorca VII. R1 substituent môže byť vymenený so zlúčeninami vzorca VII alebo neskoršími medziproduktmi uvedenými v týchto schémach oxidačným štepením (napr. ozonolýzou), potom nasledovala adícia k výslednej aldehydovej funkčnej skupine Wittigovou alebo kondenzačnou transformáciou (typické príklady 42(a-e)). Ošetrenie zlúčenín vzorca VII redukujúcim činidlom, výhodne SnCl2, poskytuje, po zvyčajnom vodnom spracovaní a purifikácii, zlúčeniny vzorca VIII. Pre rad derivátov, kde Y = NH alebo N-nižšia alkylová skupina, môžu byť zlúčeniny vzorca VIII podrobené pôsobeniu arylchloridmi alebo heteroarylchloridmi, bromidmi, jodidmi alebo triflátmi v prítomnosti bázy, výhodne Cs2CO3 a katalyzátora, výhodne Pd-BINAP, (a kde Y = N-nižšia alkylová skupina, s následným alkylačným krokom) za vzniku zlúčenín vzorca X. Aby sa vytvorili ďalšie Y väzby, bol k zlúčeninám vzorca VIII pridaný dusitan sodný v chladených štandardných vodných kyslých podmienkach, potom nasledovalo pridanie jodidu draselného a mierne zohrievanie. Štandardné spracovanie a purifikácia dalo vznik jodidovým zlúčeninám vzorca IX.
Ošetrenie zlúčenín vzorca IX organokovovým činidlom, napr. butyllitiom, podporuje výmenu halogénu za lítium. Tento medziprodukt reagoval s R2 elektrofílom, napr. karbonylovou skupinou alebo triflátom, prostredníctvom možného sprostredkovania ďalšími kovmi a katalyzátormi, výhodne chloridom zinočnatým a Pd(PPh3)4 za vzniku zlúčenín vzorca X. Alternatívne môžu byt zlúčeniny vzorca IX podrobené pôsobeniu organokovového činidla, ako je napríklad organoborónová kyselina v prítomnosti katalyzátora, napr. Pd(PPh3)4, v atmosfére oxidu uhoľnatého za vzniku zlúčenín vzorca X. Alternatívne u derivátov, kde Y = NH alebo S, môžu byť zlúčeniny vzorca IX podrobené pôsobeniu vhodných amínov alebo tiolov v prítomnosti bázy, výhodne CS2CO3 alebo K3PO4 a katalyzátora, výhodne Pd-BINAP alebo Pd-(biscyklohexyl)bifenylfosfinu za vzniku zlúčenín vzorca X. Zvyčajné výmeny funkčných skupín, ako sú napríklad oxidácia, redukcia, alkylácia, acylácia, kondenzácia a deprotekcia, potom môžu byť použité k ďalšej derivatizácii tohto radu za vzniku konečných zlúčenín vzorca I.
Zlúčeniny podľa vynálezu vzorca I môžu tiež byť pripravené podľa obecného postupu ukázaného v nasledujúcej schéme:
r’-m katalyzátor
6-jódindazol (XI) bol podrobený pôsobeniu jódu a bázy, napr. NaOH, vo vodne/organickej zmesi, výhodne s dioxánom. Zmes je acidifikovaná a produkt XII bol izolovaný filtráciou. K výslednému 3,6-dijódindazolu vo zmesi dichlórmetánu a 50% vodného KOH pri teplote 0 °C bolo pridané činidlo chrániace skupiny, výhodne SEM-C1, a katalyzátor fázového prenosu, napr. TBABr. Dve fázy boli nariedené, organické vrstvy boli oddelené, usušené nad sulfátom sodným, filtrované a koncentrované. Hrubý produkt bol purifikovaný chromatografiou na silikagéle za vzniku zlúčeniny vzorca XIII. Ošetrenie zlúčenín vzorca XIII vo vhodnom organickom rozpúšťadle vhodnom R2-organokovovým činidlom, napr. R2-ZnCl alebo bór-R2-borónovým činidlom, a vhodného katalyzátora, výhodne Pd(PPh3)4 dalo, po extrakčnom spracovaní a chromatografii na silikagéle, zlúčeniny vzorca XIV. Ošetrenie zlúčenín vzorca XIV vo vhodnom organickom rozpúšťadle vhodnom R1-organokovovým. činidlom (napr. bór-F^-borónovým činidlom alebo R^ZnCl), v prítomnosti vodnej bázy, uhličitanu sodného, a vhodného katalyzátora, výhodne Pd(PPh3)4 dalo, po extrakčnom spracovaní a chromatografii na silikagéle, zlúčeniny vzorca XV. Zvyčajné výmeny funkčných skupín, ako sú napríklad oxidácia, redukcia, alkylácia, acylácia, kondenzácia a deprotekcia, potom môžu byť použité k ďalší derivatizácii tohto radu za vzniku konečných zlúčenín vzorca I.
Alternatívne môžu byť zlúčeniny vzorca I, kde R2 je substituovaná alebo nesubstituovaná skupina Y-Ar, kde Y je atóm 0 alebo S, pripravené podľa nasledujúcej obecnej schémy:
MÍ.XCO-R1 jäy xvu
XVI katalyzátor, zohrievanie alebo
DDQ modifikácia /θ' R I
Miešaný acetónový roztok 3-chlórcyklohex-2-enónu (XV), H-R2 a bezvodný uhličitan draselný bol zohrievaný k varu pod spätným chladičom po dobu 15-24 hodín, ochladený a filtrovaný. Koncentrácia a chromatografia filtrátu na silikagéle poskytla
3-R2-cyklohex-2-enón (XVI).
Ketóny vzorca XVI môžu reagovať s vhodnou bázou (M-B), výhodne lítiumbis(trimetylsilyl)amidom a reagovať so skupinou R1-CO-X (kde X = halogén), ktoré po štandardnom kyslom spracovaní a purifikácii poskytli zlúčeniny vzorca XVII. Tento produkt, vo zmesi HOAc a EtQH, zmiešaný s monohydrátom hydrazínu, bol zohrievaný pri vhodnej teplote po vhodnú dobu, výhodne v 60-80 °C po dobu 2-4 hodín. Po ochladení bola zmes naliata do saturovaného roztoku hydrouhličitanu sodného, extrahovaná organickým rozpúšťadlom, koncentrovaná a purifikovaná na silikagéle za vzniku zlúčeniny vzorca XVIII.
Zlúčeniny vzorca XVIII môžu byť oxidované s použitím veľkého počtu známych metód za vzniku zlúčenín vzorca I.
spôsobom postupmi zlúčenín
Ďalšie zlúčeniny vzorca I môžu byť pripravené analogickým k obecným postupom popísaným vyššie alebo detailnými popísanými v príkladoch v tomto texte.
podľa vynálezu k receptoru môže byť zvýšená veľa kópií ligandu kostry poskytnutej poskytnutie priestormi
Afinita zaistením použitím takých medzi v tesnej blízkosti, výhodne s nosičovou skupinou. Bolo ukázané, že multivalentných zlúčenín s optimálnymi skupinami dramaticky zlepšuje väzbu k (Viď napr. Lee et al., Biochem, 23, receptoru.
Multivalentnosť a priestorové
4255, 1984).
oddelenie môžu selekciou vhodných nosičových jednotiek. Také skupiny zahrnujú byť riadené spojovacích skupín alebo molekulárnych nosičov, ktoré obsahujú veľký počet funkčných skupín, ktoré môžu reagovať s funkčnými skupinami združenými so zlúčeninami podľa vynálezu. Samozrejme môže byť použitý veľký počet nosičov, vrátane proteínov, ako je napríklad BSA alebo HAS, rozličné peptidy napríklad pentapeptidov, dekapeptidov, pentadekapeptidov apod.
Peptidy alebo proteíny môžu obsahovať požadovaný počet amynokyselinových zvyškov majúcich voľné aminoskupiny vo svojich postranných reťazcoch, ale môžu tiež byť použité ďalšie funkčné skupiny, ako sú napríklad sulfhydrylové skupiny alebo hydroxylové skupiny, za zisku stabilných väzieb.
Zlúčeniny, ktoré silno regulujú, modulujú alebo inhibujú proteinkinázovú aktivitu združenú s receptormi VEGF, FGF, komplexmi CDK, TEK, CHK1, LCK, FAX a kinázou fosforylázy, okrem iných, a ktoré inhibujú angiogenézu a/alebo bunečnú proliferáciu sú žiadúce a sú jedným výhodným prevedením predkladaného vynálezu. Predkladaný vynález sa ďalej týka spôsobu modulácie alebo inhibície proteinkinázovej aktivity, napríklad v cicavčom tkanive, podávaním činidla podlá vynálezu. Aktivita zlúčenín podľa vynálezu ako modulátorov proteinkinázovej aktivity, ako je napríklad aktivita kináz, môže byť meraná akoukoľvek metódou odborníkom dostupnou, vrátane testov in vivo a/alebo in vitro. Príklady vhodných testov pre meranie aktivity obsahujú testy popísané v prácach Parast C. et al., Biochemistry, 37, 16788-16801, 1998, Jeffrey et al., Náture, 376, 313-320, 1995, WIPO medzinárodná patentová prihláška č. WO 97/34876 a WIPO medzinárodná patentová prihláška č. WO 96/14843. Tieto vlastnosti môžu byť stanovené, napríklad s použitím jedného alebo niekoľkých biologických testovacích postupov uvedených v príkladoch nižšie.
Aktívne činidlá podľa vynálezu môžu byť formulované do farmaceutických prípravkov, ako je popísané ďalej. Farmaceutické prípravky podľa tohto vynálezu obsahujú účinné modulačné, regulačné alebo inhibičné množstvo zlúčenín vzorca I, II, III alebo IV a inertný, farmaceutický prijateľný nosič alebo riedidlo. V jednom prevedení farmaceutických prípravkov sú poskytnuté účinné hladiny činidiel podľa vynálezu tak, aby bolo dosiahnuté terapeuticky prospešného účinku týkajúceho sa modulácii proteinkináz. „Účinnými hladinami sú mienené hladiny, pri ktorých je účinok proteinkináz regulovaný na minimum. Tieto prípravky sú pripravené v jednotkovej liekovej forme vhodnej pre požadovaný spôsob podávania, napr. parenterálne alebo perorálne podávanie.
Činidlo podľa vynálezu je podávané v zvyčajnej liekovej forme pripravenej kombináciou terapeuticky účinného množstva činidla (napr. zlúčeniny vzorca I) ako účinnej zložky s vhodnými farmaceutickými nosičmi alebo riedidlami podľa obvyklých postupov. Tieto postupy môžu zahrnovať miešanie, granuláciu a lisovanie, alebo rozpustenie zložiek, ako je to treba v závislosti oď požadovaného prípravku.
Použitý farmaceutický tekutý. Príklady pevných nosič môže byť buď pevný alebo nosičov sú laktóza, sacharóza, mastenec, želatína, agar, pektín, arabská guma, stearát horečnatý, kyselina stearová apod. Príklady tekutých nosičov sú sirup, arašidový olej, olivový olej, voda apod.
Podobne nosič alebo riedidlo môže zahrnovať látku umožňujúcu časovo opozdené alebo časovo riadené uvoľňovanie, ktorá je obore známa, ako je napríklad glycerylmonostearát alebo voskom, samotnou, alebo s glyceryldistearát, a síce etylcelulózou, hydroxypropylmetylcelulózou, metyl-metakrylátom apod.
Môže byť použitý celý rad farmaceutických foriem. Teda, ak bol použitý pevný nosič, prípravok môže byť formulovaný do tvrdých želatínových toboliek vo forme alebo môže tabliet, vložený do prášku alebo peliet, byť vo forme pastiliek alebo zdravotných bonbónov.
Množstvo pevného nosiča môže kolísať, mg do približne 1 g. Ak bol je vo forme sirupu, ale obecne je približne od 25 použitý tekutý nosič, prípravok mäkkej želatínovej tobolky, sterilného roztoku pre emulzie, inj ekciu alebo suspenzie v ampulke alebo fľaštičke alebo nevodnej tekutej suspenzie.
Aby sa získala stabilná vo vode rozpustná lieková forma, je farmaceutický prijateľná soľ činidla podľa vynálezu rozpustená vo vodnom roztoku organickej alebo anorganickej kyseliny, ako je napríklad 0, 3M roztok jantárovej kyseliny alebo kyseliny citrónovej. Ak nie je dostupná forma rozpustnej soli, činidlo môže byť rozpustené vo ' vhodnom ďalšom rozpúšťadle alebo kombinácii ďalších rozpúšťadiel. Príklady vhodných ďalších rozpúšťadiel bez obmedzenia zahrnujú alkohol, propylénglykol, polyetylénglykol 300, polysorbát 80, glycerín apod. v koncentráciách v rozmedzí od 0 do 60 % celkového objemu. V príkladnom prevedení bola zlúčenina vzorca I rozpustená v DMSO a nariedená vodou. Prípravok môže tiež byť vo forme roztoku soli účinnej zložky vo vhodnom vodnom vehikule, ako je napríklad voda alebo izotonický fyziologický roztok alebo roztok dextrózy.
Je známe, že aktuálne dávky činidiel použitých v prípravkoch podľa tohto vynálezu kolisajú podľa konkrétneho použitého komplexu, formulovaného konkrétneho prípravku, spôsobu podávania a konkrétneho miesta podávania, príjemca a liečenej choroby. Optimálne dávky pre dané chorobné stavy môžu byť stanovené odborníkmi s použitím obvyklých testov pre stanovenie dávky so zreteľom k experimentálnym dátam pre dané činidlo. Pre perorálne podávanie príkladná denná dávka obecne použitá je približne od 0,001 približne do 1000 mg/kg telesnej hmotnosti, výhodnejšie približne od 0,001 približne do 50 mg/kg telesnej hmotnosti, s kôrami liečenia opakovanými vo vhodných intervaloch. Podávania prekurzorov sú typicky dávkované v hmotnostných hladinách, ktoré sú chemicky ekvivalentné k hmotnostným hladinám plne aktívne formy.
Prípravky podľa vynálezu môžu byť vyrábané metódami obecne známymi pre prípravu farmaceutických prípravkov, napr. zvyčajnými technikami, ako je napríklad miešanie, rozpúšťanie, granulácia, dražovanie, „levigating, emulgácia, enkapsulácia, vychytávanie alebo lyofilizácia. Farmaceutické prípravky môžu byť formulované zvyčajným spôsobom s použitím jedného alebo viacej fyziologicky prijateľných nosičov, ktoré môžu byť vybrané zo skupiny, ktorú tvoria excipienty a ďalšie látky, ktoré uľahčujú spracovanie účinných zlúčenín do prípravkov, ktoré môžu byť použité farmaceutický.
Vlastná formulácia je závislá na vybranom spôsobe podávania. Pre injekcie môžu byť činidlá podľa vynálezu formulovaná do vodných roztokov, výhodne vo fyziologicky kompatibilných pufroch, ako je napríklad Hanksov roztok, Ringerov roztok alebo fyziologický roztok. Pre podávanie cez sliznice sú vo formuláciách použité penetrujúce činidlá vhodné k prestúpeniu bariéry. Také penetrujúce činidlá sú v obore obecne známe.
Pre perorálne podávanie môžu byť zlúčeniny ľahko formulované kombináciou účinných zlúčenín s farmaceutický prijateľnými nosičmi v obore známymi. Také nosiče umožňujú, že zlúčeniny podľa vynálezu sú formulované ako tablety, pilulky, dražé, tobolky, tekutiny, gély, sirupy, suspenzie apod. pre perorálne požívanie liečeným pacientom. Farmaceutické prípravky pre perorálne použitie môžu byť získané s použitím pevného excipienta vo zmesi s účinnou zložkou (činidlom), voliteľne namletím výslednej zmesi a spracovaním zmesi granúl po pridaní vhodných pomocných látok, ak je to žiadúce, pre prípravu jadier pre tablety alebo dražé. Vhodné excipienty obsahujú: plnidlá, ako sú napríklad sacharidy, vrátane laktózy, sacharózy, mannitolu alebo sorbitolu, a celulózové prípravky, napríklad, kukuričný škrob, pšeničný škrob, ryžový škrob, zemiakový škrob, želatína, guma, metylcelulóza, hydroxypropylmetylcelulóza, karboxymetylcelulóza sodná alebo polyvinylpyrolidón (PVP). Ak je to treba, môžu byť pridané rozvoľňovadlá, ako je napríklad zosietený polyvinylpyrolidón, agar nebo kyselina algínová alebo jej soľ, ako je napríklad alginát sodný.
Jadrá dražé sú opatrené vhodnými obalmi. Pre tento účel môžu byť použité koncentrované roztoky sacharidov, ktoré voliteľne zahrnujú arabskú gumu, polyvinylpyrolidón, gélový základ Carbopol, polyetylénglykol a/alebo oxid titaničitý, roztok laku a vhodné organické rozpúšťadlá alebo zmesi rozpúšťadiel, farbivá alebo pigmenty môžu byť pridané do obalov (poťahov) tabliet alebo dražé pre identifikáciu alebo pre charakterizáciu odlišných kombinácií aktívnych činidiel.
Farmaceutické prípravky, ktoré môžu byť použité perorálne, zahrnujú „push-fit tobolky vytvorené zo želatíny, a tiež mäkké uzatvorené tobolky vytvorené zo želatíny a zmäkčovadla, ako je napríklad glycerol alebo sorbitol. „Push-fit tobolky môžu obsahovať účinné zložky vo zmesi s plnidlami, ako je napríklad laktóza, spojivami, ako sú napríklad škroby, a/alebo lubrikanty, ako je napríklad mastenec alebo stearát horečnatý a, voliteľne, stabilizátory. V mäkkých tobolkách môžu byť aktívne činidlá rozpustené alebo suspendované vo vhodných tekutinách, ako sú napríklad mastné oleje, tekutý parafín alebo tekuté polyetylénglykoly. Okrem toho môžu byť pridané stabilizátory. Všetky formulácie pre perorálne podávanie by mali byť v dávkach vhodných pre toto podávanie. Pre bukálne podávanie môžu mať prípravky formu tablety alebo pastilky formulovanej zvyčajným spôsobom.
Pre podávanie intranazálne alebo inhaláciou boli zlúčeniny pre použitie podía predkladaného vynálezu zvyčajne formulované do aerosólového spreja, ktorý je aplikovaný z tlakového balenia alebo rozprašovača za pomoci vhodného hnacieho plynu (propelentu), napr. dichlórdifluórmetánu, trichlórfluórmetánu, dichlórtetrafluóretánu, oxidu uhličitého alebo ďalšieho vhodného plynu. V prípade tlakového aerosólového balenia môže byť jednotková dávka určená pomocou vhodného dávkovacieho ventilu pre aplikáciu odmeranej dávky. Tobolky a zásobníky zo želatíny pre použitia v inhalátore alebo prístroji pre insufláciu apod. môžu byť formulované tak, že obsahujú práškovou zmes zlúčeniny a vhodnú práškovú bázu, ako je napríklad laktóza alebo Škrob.
Zlúčeniny môžu byť formulované pre parenterálne podávanie injekciou, napr. injekciou bolusu alebo kontinuálnou infúziou. Formulácie pre injekcie môžu byť predložené v jednotkovej liekovej forme, napr. v ampulách alebo v nádobkách s viacej dávkami, s pridanými konzervačnými činidlami. Prípravky môžu mať tiež formy ako suspenzie, roztoky alebo emulzie v olejových alebo vodných vehikulách a môžu obsahovať formulačné činidlá, ako sú napríklad suspendujúce činidlá, stabilizátory a/alebo dispergačné činidlá.
Farmaceutické formulácie pre parenterálne podávanie zahrnujú vodné roztoky účinných zlúčenín vo forme rozpustné vo vode. Okrem toho môžu byť pripravené suspenzie účinných činidiel ako príslušné olejové injekčné suspenzie. Vhodné lipofilné rozpúšťadlá alebo vehikulá obsahujú mastné oleje, ako je napríklad sezamový olej alebo syntetické estery mastných kyselín, ako je napríklad etyloleát alebo triglyceridy alebo lipozómy.
Vodné injekčné suspenzie môžu obsahovať látky, ktoré zvyšujú viskozitu suspenzie, ako je napríklad karboxymetylcelulóza sodná, sorbitol alebo dextrán. Volitelne suspenzie môžu tiež obsahovať vhodné stabilizátory alebo činidlá, ktoré zvyšujú rozpustnosť zlúčenín, aby bola umožnená príprava vysoko koncentrovaných roztokov.
Pre podávanie do oka je zlúčenina vzorca I, II, III alebo IV dodávaná vo farmaceutický prijateľnom očnom vehikule, preto je zlúčenina udržovaná v kontakte s očným povrchom po dostatočne dlhú dobu, aby sa umožnilo zlúčenine penetrovať rohovkovú oblasť a vnútorné oblasti oka, vrátané, napríklad, prednej komory, zadnej komory, sklovca, komorovej vody, tekutiny sklovca, rohovky, dúhovky/riasnatého telesa, šošovky, cievnatky/sietnice. Farmaceutický prijateľné očné vehikulum môžu byť masť, rastlinný olej alebo opúzdrovacia látka. Zlúčenina podľa vynálezu môžu tiež byť injikovaná priamo do sklovca a komorovej vody.
Alternatívne môžu byť účinná zložka v práškovej forme pre rekonštitúciu s vhodným vehikulom, napr. sterilnou vodou bez pyrogénu, tesne pred použitím. Zlúčeniny môžu tiež byť formulované v rektálnych prípravkoch, ako sú napríklad čapíky alebo retenčné klystíry, napr. obsahujúce zvyčajné čapíkové bázy, ako je napríklad kakaové maslo alebo ďalšie glyceridy.
Krom formulácií popísaných vyššie môžu tiež byť zlúčeniny formulované ako depotné prípravky.
Také dlhodobo pôsobiace subkutánne alebo intramuskulárne) alebo intramuskulárnou formulácie môžu byť podávané implantáciou (napríklad, injekciou. Tak napríklad zlúčeniny môžu byť formulované s vhodnými polymérnymi alebo hydrofóbnymi látkami (napríklad, ako emulzie v prijateľnom oleji) alebo iónovymieňačovej živice alebo ako pomaly rozpustné deriváty, napríklad, ako pomaly rozpustná sol.
Farmaceutickým nosičom pre hydrofóbne zlúčeniny je systém ďalších rozpúšťadiel (ko-solventov), obsahujúce benzylalkohol, nepolárny surfaktant, organický polymér miešateľný s vodou a vodná fáza. Systém ďalších rozpúšťadiel môžu byť VPD systém ďalších rozpúšťadiel. VPD je roztok 3% (hmotnosť/objem) benzylalkoholu, 8% (hmotnosť/objem) nepolárneho surfaktantu polysorbátu 80 a 65% (hmotnosť/objem) polyetylénglykolu 300, doplnený do objemu absolútnym etanolom. VPD systém ďalších rozpúšťadiel (VPD:5W) obsahuje VPD nariedený 1:1 roztokom 5% dextrózy vo vode. Tento systém ďalších rozpúšťadiel rozpúšťa dobre hydrofóbne zlúčeniny a samý je málo toxický po systémovom podávaní. Prirodzene vzájomný pomer systému ďalších rozpúšťadiel môže byť značne zmenený bez porušenia jeho charakteristickej rozpustnosti a toxicity. Naviac môže byť zmenená identita zložiek systému ďalších rozpúšťadiel: napríklad môžu byť použité ďalšie nepoláme surfaktanty s nízkou toxicitou namiesto polysorbátu 80, môže byť zmenená veľkosť frakcie polyetylénglykolu, ďalšie biokompatibilné polyméry môžu nahradiť polyetylénglykol, napr. polyvinylpyrolidón a dextróza môže byť substituovaná ďalšími sacharidmi alebo polysacharidmi.
Alternatívne môžu byť použité pre hydrofóbne farmaceutické zlúčeniny ďalšie aplikačné systémy. Lipozómy a emulzie sú známe príklady aplikačných vehikúl alebo nosičov pre hydrofóbne lieky. Môžu byť tiež použité určité organické rozpúšťadlá, ako je napríklad dimetylsulfoxid, hoci zvyčajne za cenu vyššej toxicity. Okrem toho môžu byť zlúčeniny aplikované s použitím systému s predĺženým uvoľňovaním, ako sú napríklad semipermeabilné matrice pevných hydrofóbnych polymérov obsahujúce terapeutické činidlo. Boli zavedené tiež rôzne materiály umožňujúce predĺžené uvoľňovanie, ktoré sú odborníkom známe. Tobolky s predĺženým uvoľňovaním môžu , v závislosti od svojej chemickej povahy, uvoľňovať zlúčeniny po niekoľko týždňov až 100 dní. V závislosti od chemickej povahy a biologickej stability terapeutického činidla môžu byť použité pre stabilizáciu proteínu ďalšej stratégie.
Farmaceutické prípravky tiež môžu obsahovať vhodné pevné alebo gélové nosiče alebo excipienty. Príklady takých nosičov alebo excipientov obsahujú uhličitan vápenatý, fosfát vápenatý, sacharidy, škroby, deriváty celulózy, želatínu a polyméry, ako sú napríklad polyetylénglykoly.
Niektoré zo zlúčenín podľa vynálezu môžu byť poskytnuté ako soli s farmaceutický kompatibilnými protiióny (counterióny). Farmaceutický kompatibilné soli môžu byť vytvorené s veľa kyselinami, vrátane chlorovodíkovej, sírovej, octovej, mliečnej, vínnej, jablčnej, jantárovej, apod. Soli majú tendenciu k tomu, že sú rozpustnejšie vo vodných alebo ďalších protónových rozpúšťadlách ako odpovedajúce formy s voľnou bázou.
Príprava výhodných zlúčenín podľa predkladaného vynálezu je popísaná detailne v nasledujúcich príkladoch, ale odborník rozpozná, ktoré popísané chemické reakcie môžu byť ľahko upravené k príprave celého radu ďalších inhibítorov proteinkináz podľa vynálezu. Napríklad syntéza zlúčenín podľa vynálezu, ktoré nie sú uvedené v príkladoch, môžu byť úspešne prevádzané modifikáciou odborníkom známou, napr. užitím vhodnej ochrany pre interferujúce skupiny, zámennou vhodných reagencií v oboru známych alebo vytvorením rutinových modifikácii reakčných podmienok. Alternatívne ďalšie reakcie popísané v tomto texte alebo v obore známe sú považované za použiteľné pre prípravu ďalších zlúčenín podľa vynálezu.
Príklady prevedenia vynálezu
V príkladoch popísaných ďalej, ak nie je uvedené inak, sú všetky teploty udávané v stupňoch Celsia a všetky časti a percenta sú hmotnostné. Reagencie boli zakúpené od komerčných dodávateľov, ako je napríklad firma Aldrich Chemical Company alebo firma Lancaster Synthesis Ltd. a boli použité bez ďalšej purifikácie, ak nie je uvedené inak. Tetrahydrofurán (THF), N,N-dimetylformamid (DMF), dichlórmetán, toluén a dioxán boli zakúpené od firmy Aldrich v zapečatených fľašiach a použité hneď po obdržaní. Všetky rozpúšťadlá boli purifikované s použitím štandardných metód odborníkom známych, ak nie je uvedené inak.
Reakcie uvedené nižšie boli obecne prevádzané pod pretlakom argónu alebo dusíka alebo s vysúšaním skúmavky, pri izbovej teplote (ak nie je uvedené inak), v bezvodných rozpúšťadlách, a reakčné banky boli uzatvorené gumovými štupľami pre zavádzanie substrátov a reagencií prostredníctvom injekčnej striekačky. Chemické sklo bolo sušené v piecke a/alebo bolo sušené zohrievaním. Analytická chromatografia na tenkej vrstve (TLC) bola prevádzaná na tepelne ošetrených sklenených doštičkách so silikagélom 60 F 254 Analtech (0,25 mm) a pomocou elúcie vhodnými pomermi rozpúšťadiel (objem/objem) a sú uvedené na patričnom mieste. Reakcie boli testované TLC a ukončené potom, čo bolo usúdené, že východzia látka je spotrebovaná.
Vizualizácia TLC doštičiek bola prevádzaná postrekom p-anizaldehydovým činidlom alebo fosfomolybdénovou kyselinou (Aldrich Chemical 20 % (hmotnostných) v etanole) a aktiváciou zohrievaním. Spracovanie bolo typicky prevádzané zdvojením reakčného objemu reakčným rozpúšťadlom alebo extrakčným rozpúšťadlom, a potom premytím uvedenými vodnými roztokmi s použitím 25 % objemu z extrakčného objemu, ak nie je uvedené inak. Roztoky s produktom boli usušené nad bezvodným Na2SO4 pred filtráciou a evaporáciou rozpúšťadiel pri zníženom tlaku na rotačnej odparovačke, potom sa uvádza, že rozpúšťadlá boli odstránené vo vákuu. Veľmi rýchla chromatografia (flash chromatography) na kolóne (Still et al., J. Org. Chem., 43, 2923 1978) bola prevádzaná s použitím silikagélu pre veľmi rýchlu chromatografiu (47-61 μιη, Baker) a silikagélu: pomer hrubej látky približne 20:1 až 50:1, ak nie je uvedené inak. Hydrogenolýza bola prevádzaná pri tlaku uvedenom v príkladoch alebo pri tlaku okolia.
1H-NMR spektrá boli zaznamenávané na Brukerove prístroji pracujúcom v 300 MHz a 13C-NMR spektrá boli zaznamenávané v 75 MHz. NMR spektrá boli získané ako roztoky CDC13 (udávané v ppm), s použitím chloroformu ako referenčného štandardu (7,25 ppm a 77,00 ppm) alebo CD3OD (3,4 a 4,8 ppm a 49,3 ppm) alebo vnútorne ťetrametylsilán (0,00 ppm), kde to bolo potrebné. Ďalšie NMR rozpúšťadlá boli použité podľa potreby. Kde je uvedený väčší počet vrcholov, boli použité nasledujúce skratky: s (singlet), d (dublet), t (triplet), m (multiplet), š (široký), dd (dublet dubletov), dt (dublet tripletov) . Kde sú uvedené kondenzačné konštanty, sú v jednotkách Hertz (Hz) .
Infračervené (IR) spektrá boli zaznamenávané na spektrometru Perkin-Elmer FT-IR pre čisté oleje, ako KBr pelety alebo ako roztoky CDCI3 a kde sú uvedené, sú udávané vo vlnočte (cm-1) . Hmotnostné spektrá boli získané s použitím LSIMS alebo elektrosprejovej metódy. Všetky teploty topenia (tt) boli nekorigované.
Príklad 1(a)
3-[E-2-(3,4-dimetoxyfenyl)vinyl]- 6-(3-metoxy-4-hydroxyfenyl)lH-indazol ~205 mg (0,461 mmol) (teoreticky) 3-[E/Z-2-(3,4dimetoxyfenyl)vinyl]-6-[3-metoxy-4-(metoxymetoxy)fenyl]-1Hindazolu bolo rozpustené v 10 ml tetrahydrofuránu (THF) a bolo podrobené pôsobeniu 10 ml vody a 20 ml trifluóroctovej kyseliny (TFA). Reakčná zmes bola ponechaná za miešania vo 23 °C po dobu 30 minút. Zmes bola nariedená 100 ml toluénu a tekavé látky boli odstránené pri zníženom tlaku 3,99 kPa (30 mm Hg, 35 °C) za vzniku koncentrovaného objemu ~5 ml. Opäť bolo pridané 100 ml toluénu a zmes bola koncentrovaná pri zníženom tlaku za vzniku surovej látky, ktorá ešte obsahovala čiastočne kyselinu. Látka bola rozdelená medzi etylacetát a saturovaný hydrouhličitan sodný, organická látka bola oddelená, usušená nad sulfátom sodným,’ dekantovaná a koncentrovaná pri zníženom tlaku. ~185 mg (0,461 mmol) (teoreticky)) zvyšku, zmesi olefinových izomérov, bolo nabrané do 50 ml dichlórmetánu v 23 °C a bolo podrobené pôsobeniu 80 mg jódu. Zmes bola ponechaná za miešania v 23 °C po dobu 12 hodín. Zmes bola podrobená pôsobeniu 10 ml saturovaného hydrouhličitanu sodného 10 ml a 5% vodného bisulfitu sodného. Zmes bola nariedená 200 ml etylacetátu a organická látka bola premytá 100 ml saturovaného hydrouhličitanu sodného, usušená nad sulfátom sodným, dekantovaná a koncentrovaná pri zníženom tlaku za vzniku surového produktu. Surový produkt bol purifikovaný na 40 ml silikagéle (zmes etylacetátu a hexánu
6:4 -> 7:3) a všetky frakcie obsahujúce požadovaný produkt boli spojené, koncentrované a precipitované z dvojvrstvy dichlórmetánu a hexánu (1:3) za vzniku 93 mg (spojené výťažky) 3-[E-2- (3,4-dimetoxyfenyl)vinyl]-6-(3-metoxy-4-hydroxyfenyl)ΙΗ-indazolu ako bielej pevnej látky: Rf sm 0,42, p 0,35 (zmes etylacetátu a hexánu 7:3), FTIR (tenký film) 3324, 1600, 1514, 1463, 1422, 1264, 1137, 1024, 959, 852 cm1, 2H NMR (CDC13) δ
10,0 (š s, 1H), 8,08 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 7,59 (s, 1H) , 7,49 (d, 1H, J = 16,6 Hz), 7,45 (dd, 1H, J = 1,4, 8,4 Hz), 7,34 (d,
1H, J = 16,6 Hz), 7,20-7,12 (m, 4H) , 7,03 (d, 1H, J = 8,0 Hz),
6,91 (d, 1H, J = 8,2 Hz), 5,68 (š s, 1H) , 3,99 (s, 3H), 3,97 (s, 3H) , 3,93 (s, 3H) , 13C NMR (CDCI3) δ 149, 6, 149, 5, 146, 0,
144,0, 142,6, 140,8, 133,9, 131,4, 130,7, 121,7, 121,4, 120,9, 120, 4, 120,2, 118, 6, 115, 4, 111,7, 110, 8, 109, 1, 108, 2, 56, 4,
56,3, 56,2. HRMS (ES) [M+H]/z vypočítané 403,1658, namerané
403,1658. [M-H]/z vypočítané 401, namerané 401.
Východzia látka bola pripravená takto:
(i)
NaNOj, HCI ΚΙ, H20,0až50*C >
Ku 40,8 g (0, 3065 mol, 1 ekv.) 6-aminoindazolu v banke s guľatým dnom o objeme 2 litrov (2 1) obsahujúcej veľké magnetické miešadlo bolo pridané 256 g ľadu, potom nasledovalo 128 ml vody a reakčná nádoba bola ponorená do ľadového kúpeľa. K tejto miešanej suspenzii bolo pri teplote 0 °C pridané 128 ml (1,53 mol, 5 ekv.) koncentrovanej vodnej HCI. Hneď potom bolo pridané 23,3 g (0,338 mol, 1,1 ekv.) roztoku NaN02 v 96 ml vody. Po 10 minútach miešania pri teplote 0 °C bolo pridané 61 g (0,368 mol, 1,2 ekv.) KI spočiatku velmi pomaly (naraz po ~100 mg, pretože prvé malé dávky KI spôsobujú prudký vývin plynu), a potom rýchlejšie (celková doba 5 minút). Chladný kúpeľ bola odstránený a reakčná zmes bola zohriatá na 40 °C (vyvíjal sa plyn). Keď klesla rýchlosť vývoja plynu (~30 minút), reakčná zmes bola zohriata na 50 °C po dobu 30 minút. Zmes potom bola ochladená na 23 °C a bolo pridané 320 ml 3N NaOH pre neutralizáciu, a potom nasledovalo 320 ml 50% saturovaného NaHCC>3. Suspenzia potom bola filtrovaná cez Buchnerov lievik za vzniku tmavo červenohnedej pevnej látky. Pevná látka bola nabraná do 800 ml ohriateho THF a za miešania bolo pridané 600 ml suchého silikagélu. K tejto suspenzii bolo pridané 1,2 1 hexánu a zmes bola vákuovo filtrovaná cez krátky stĺpec 300 ml silikagélu vo veľkom filtre s fritou. Silikagél bol ďalej premytý 2 1 40% THF v hexáne. Filtráty boli spojené a koncentrované pri zníženom tlaku za vzniku pevnej látky. Pevná látka bola ďalej triturovaná ~100 ml etylacetátu, filtrôvaná a usušená pri zníženom tlaku za vzniku 36,1 g (48% výťažok) 6-jód-lH-indazolu ako svetlo hnedej pevnej látky: Rf
sm 0,12, p 0,48 (zmes CDC13) 7,9 (s, 1H), 7,8 (ES) [M+H]/z vypočítané 243, namerané 243. hexánu a EtOAc 1:1), 1H NMR (300 MHz, (s, 1H), 7,42 (d, 1H), 7,33 (d, 1H), MS 245, namerané 245, [M-H]/z vypočítané
ώ£τ NaO-tBu, MtoCI, THF, 0*0,40 min ------► ΐοτ
(ii)
K roztoku 7,35 g (30,1 mmol, 1 ekv.) 6-jód-lH-indazolu vo 100 ml THF ochladeného na 0 °C v argónovej atmosfére bolo pridané 2,89 g (30,1 mmol, 1 ekv.) t-butoxidu sodného. Bola pozorovaná zmena farby z oranžovej na Červenú. V jednej dávke bolo pridané 6,60 g (30,1 mmol, 1 ekv.) mezitylénsulfonylchloridu a ľadový kúpeľ bol odstránený a reakčná zmes bola ponechaná ohriať sa na 23 °C. Po 40 minútach bola zmes zastavená saturovaným chloridom amónnym a rozdelená medzi vodu a etylacetát. Vodná vrstva bola extrahovaná celkom 3 krát etylacetátom. Spojené organické látky boli premyté soľankou, usušené nad sulfátom sodným a koncentrované pri zníženom tlaku za vzniku 12,8 g (100 % výťažok, zmes 2:1) 6-jód-l-(2,4,6trimetylbenzénsulfonyl)-lH-indazolu ako oranžovo pevnej látky. 1H NMR (CDCI3) 8.,51 (s, 1H) , 7,95 (s, 0,66H, hlavný izomér),
7,91 (s, 0,33H, vedľajší izomér), 7,47 (d, 0,33H, J = 8,4 Hz), 7,29 (d, 0,33H, J = 8,4 Hz), 7,26 (d, 0, 66H, J = 8,9 Hz), 7,18 (d, 0, 66H, 8,9 Hz), 6,84 (s, 2H) , 2,51 (s, 6H) , 2,15 (s, 3H) .
(iii)
Zmes 5,78 g (13,56 mmol, 1,00 ekv.) 6-jód-l-(2,4,6trimetylbenzénsulfonyl)-ΙΗ-indazolu a 3,45 g (16,27 mmol, 1,20
3-metoxy-4-(metoxymetoxy)benzénborónovej kyseliny v argónovej atmosfére bola rozpustená v 15 ml dioxánu a 2,0 ml vody. K tomuto roztoku bolo pridané 2,83 ml (20,3 mmol, 1,5 ekv.) trietylamínu, 2,8 g (20,3 mmol, 1,5 ekv.) uhličitanu draselného a 476 mg (0,678 mmol, 0,05 ekv.) dichlórbis(trifenylfosfín)paládia. Reakčná zmes bola zohrievaná na 90 °C po dobu 2 hodín, a potom bola ochladená na 23 °C. Zmes bola oddelená medzi 250 ml etylacetátu a 150 ml saturovaného hydrouhličitanu sodného. Organická látka bola usušená nad sulfátom sodným, dekantovaná a koncentrovaná pri zníženom tlaku za vzniku surového 6-(3-metoxy-4-metoxymetoxyfenyl)-1(2,4,6-trimetylbenzénsulfonyl)-ΙΗ-indazolu, ktorý bol sušený za vysokého vákua po dobu 15 hodín a bol použitý bez ďalšej purifikácie.
3-metoxy-4-(metoxymetoxy)benzenborónová kyselina bola pripravená takto: v banke o objemu 100 ml bola pripravená zmes 50% KOH vo vode (20 g KOH, 7 ekv., 20 g ľadu) v argónovej atmosfére. K tejto rýchlo miešanej zmesi pri teplote 0 °C (udržovanej v ľadovom kúpeli) bolo pridané 50 ml dichlórmetánu, potom nasledovalo 10,1 g (50 mmol, 1,00 ekv.)
4-bróm-2-metoxyfenolu, 4,00 ml (42,5 mmol, 1,05 ekv.) metoxymetylchloridu (MOMC1) a 322 mg (1 mmol, 0,02 ekv.) tetrabutylamóniumbromidu. Kúpeľ bola odstránená a zmes bola pomaly ponechaná zohriať sa na 23 °C za rýchleho miešania po dobu 2 hodín. Zmes bola prenesená do deliaceho lievika a nariadená 350 ml dichlórmetánu a 300 ml vody, ktoré sú použité k uľahčeniu prenosu. Organická látka (teraz spodná vrstva) bola oddelená, usušená nad sulfátom sodným, dekantovaná a koncentrovaná pri zníženom tlaku za vzniku 11,9 g (97 %)
4-bróm-2-metoxy-l-(metoxymetoxy)benzénu ako žltej kvapaliny, ktorá je prečistená XH NMR: 1H NMR ' (CDC13) δ 7,0 (s, 3H) , 5,13 (s, 2H), 3,84 (s, 3H), 3,47 (s, 3H) . MS (El) [M+H]/z vypočítané 235, namerané 235. Do banky s guľatým dnom o objeme 50 ml bolo nabrané 4,80 g (19,4 mmol, 1,00 ekv.) 4-bróm-2metoxy-1-(metoxymetoxy) benzénu v 35 ml THF a bolo ochladené na -78 °C (20 minút pre tento objem) . K tejto zmesi bolo pridané 12,75 ml 1,6M v hexáne (20,4 mmol, 1,05 ekv.) n-BuLi a zmes bola ponechaná za miešania v -78 °C po dobu 40 minút. Zmes potom bola pridaná kanylou do druhej banky obsahujúcej 22 ml (194 mmol, 10 ekv.) B(OMe)3 v 50 ml THF v -78 °C. Po 20 minútach bol chladný kúpeľ odstránený. Po 15 minútach zohrievania (-0 °C, ľad na boku banky sa začal topiť) bolo pridané 50 ml vody k reakčnej zmesi, ktorá bola miešaná po dobu 45 minút. Zmes bola koncentrovaná pri zníženom tlaku, aby sa odstránila väčšina THF, a potom bola rozdelená medzi 300 ml etylacetátu a 150 ml vody, ktorá bola acidifikovaná pridaním malého množstva, ~10 ml, 20% kyseliny citrónovej. Organická látka bola usušená nad sulfátom sodným a koncentrovaná pri zníženom tlaku za vzniku pevnej látky. Triturácia 10 ml etylacetátu a 5 ml hexánu nasledovaná filtráciou poskytla 3,15 g (77 %) 3metoxy-4-(metoxymetoxy)benzénborónovej kyseliny ako bielej pevnej látky: Rf sm 0,59, p 0,18 (zmes etylacetátu a hexánu
1:1), :H NMR (CDC13) δ 7,85 (d, 1Η, J = 8 Hz), 7,72 (s, 1H) ,
7,22 (d, 1H, J = 8 Hz), 5,30 (s, 2H) , 4,00 (s, 3H) , 3,55 (s, 3H) .
(iv)
Nepurifikovaný 6-(3-metoxy-4-metoxymetoxyfenyl)-1-(2,4,6trimetylbenzénsulfonyl)-ΙΗ-indazol (v argónovej atmosfére) bol rozpustený v 20 ml THF a bol podrobený pôsobeniu 70 ml IN NaOH v MeOH (ovplyvnené prebublávanim cez argón po dobu 3 až 5 minút) . Zmes bola zohrievaná na 45 °C po dobu 1 hodiny a ponechaná vychladnúť. Zmes bola neutralizovaná pridaním 50 ml IN HC1, potom nasledovalo 200 ml saturovaného hydrouhličitanu sodného. Produkt bol extrahovaný 350 ml etylacetátu, usušený nad sulfátom sodným a koncentrovaný pri zníženom tlaku za vzniku surového 6-(3-metoxy-4-metoxymetoxyfenyl)-lH-indazolu. Purifikácia chromatografiou na silikagéle (500 ml silikagélu,
1,8 1 20% etylacetátu v benzéne, 1,8 1 30% etylacetátu v benzéne) poskytla 1,19 g (31 %) 6-(3-metoxy-4-metoxymetoxyfenyl)-ΙΗ-indazolu: 1H NMR (CDCI3) δ 7,80 (s, 1 H), 7,69 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 7,52 (s, 1H) , 7,29 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 7,16 (s, 1H) , 7,13 (s, 1H) , 7,08 (s, 1H) . MS (ES) [m+Na]/z vyrátané 337, namerané 337, [m+Cl]/z, vypočítané 349, namerané
349.
Ij. NaOH, Cdioxan
23-0,1 h
(v)
V banke s guľatým dnom o objeme 100 ml v argónovej atmosfére bolo rozpustené 1,19 g (4,18 mmol, 1 ekv.) 6-(3metoxy-4-metoxymetoxyfenyl)-lH-indazolu vo 25 ml dioxánu a 14 ml 3N NaOH. Táto zmes bola podrobená pôsobeniu 1,17 g (14,60 mmol, 1,10 ekv.) jódu, pridávaného v ~5 dávkach (~10 minút). Niekoľko ďalších dávok (~4) jódu po 50 mg bolo pridávané, dokiaľ nebola reakcia ukončená, ako bolo vizualizované TLC (3:7 zmes etylacetátu a hexánu). Zmes bola acidifikovaná 25 ml 20% kyseliny citrónovej a bolo pridané 20 ml 5% NaHSO3. Zmes bola rozdelená medzi 150 ml etylacetátu a 100 ml vody. Organická látka bola premytá 80 ml saturovaného hydrouhličitanu sodného a 50 ml soľanky a bola usušená nad sulfátom sodným a koncentrovaná pri zníženom tlaku. Purifikácia kryštalizáciou zo 3 ml etylacetátu, a potom 7 ml hexánu poskytla 1,33 g (78 %) čistého 3-jód-6-(3-metoxy-4metoxymetoxyfenyl)-ΙΗ-indazolu ako pevnej látky: 1H NMR (CDC13) δ 10,48 (š s, 1H) , 7,62 (s, 1H) , 7,57 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 7,47 (dd, 1H, J = 1,3, 8,5 Hz), 7,18 (m, 3H), 5,29 (s, 2H) , 3,99 (s, 3H), 3,55 (s, 3H) .
V banke s guľatým dnom o objeme 100 ml bolo rozpustené 921 mg (2,245 mmol, 1,00 ekv.) 3-jód-6-(3-metoxy-4-metoxymetoxyfenyl)-ΙΗ-indazolu vo 36 ml THF a ochladené na -78 °C (ponechané 8 minút v tomto množstve). Bolo pridané 2,5 ml 1,8M roztoku (4,49 mmol, 2,00 ekv.) PhLi a zmes bola ponechaná za miešania po dobu 30 minút. Bolo pridané 3,63 ml (4,71 mmol, 2,1 ekv.) roztoku s-BuLi a reakčná zmes bola ponechaná za miešania po dobu 1 hodiny v -78 °C. Bolo pridané 1,4 ml (18 mmol, 8,0 ekv.) čistého DMF. Chladný kúpeľ bol odstránený a reakcia bola ponechaná ohriať sa pomaly na 0 °C na vzduchu. Keď sa lad topil, bolo pridané 20 ml saturovaného hydrouhličitanu sodného. Produkt bol extrahovaný 200 ml etylacetátu z ďalších 75 ml saturovaného hydrouhličitanu sodného, usušený nad sulfátom sodným, dekantovaný a koncentrovaný pri zníženom tlaku. Purifikácia chromatografiou na silikagéle (450 ml silikagélu, 4:6 zmes etylacetátu a hexánu) poskytla 498 mg (71 %) 6-(3-metoxy-4-metoxymetoxyfenyl)-lH-indazol-3-karbaldehydu: Rf sm 0,30, p 0,14 (zmes etylacetátu a hexánu 4:6), 1H NMR (CDC13) δ 10,85 (š s, 1H), 10,25 (s, 1H), 8,37 (d, 1H, J = 8,4. Hz), 7,67 (s, 1H) , 7,60 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 6,26 (d, 1H, J = 8,7 Hz), 7,19 (m, 2H) , 5,30 (s, 2H) , 3,99 (s, 3H) , 3,55 (s, 3H) .
(vii)
441 mg (1,41 mmol, 1,0 ekv.) 6- (3-metoxy-4-metoxymetoxyfenyl)-lH-indazol-3-karbaldehydu bolo nabrané ako suspenzia do 15 ml dichlórmetánu a bolo ochladené na 0 °C. Táto zmes bola podrobená pôsobeniu 324 mg (1,48 mmol, 1,05 ekv.) mezitylénsulfonylchloridu a 181 mg (1,48 mmol, 1,05 ekv.) dimetylaminopyridínu (DMAP). Zmes bola ponechaná za miešania po dobu 1 hodiny pri teplote 0 °C a bola zastavená pridaním vody. Zmes bola rozdelená medzi vodu a organickú vrstvu zmesi etylacetátu a hexánu 1:1. Organická látka bola usušená nad sulfátom sodným, dekantovaná a koncentrovaná pri zníženom tlaku za vzniku surovej látky, ktorá bola purifikovaná chromatografiou na silikagéle (50 ml silikagélu, 3:7 zmes etylacetátu a hexánu) za vzniku 374 mg (54 %) 6-(3 metoxy-4-metoxymetoxyfenyl)-1-(2,4,6-trimetylbenzénsulfonyl)lH-indazol-3-karbaldehydu: Rf sm 0,17, p 0,53 (zmes etylacetátu a hexánu 4:6), 3H NMR (CDC13) δ 10,20 (s, 1H), 8,41 (s, 1H), 8,37 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 7,73 (dd, 1H, J = 1,4, 8,4 Hz), 7,3 (m, 3H) , 7,08 (s, 2H) , 5,36 (s, 2H) , 4,08 (s, 3H) , 3,71 (s, 3H), 2,74 (s, 6H),2,40 (s, 3H).
(viii)
1,09 g (2,22 mmol, 4,0 ekv.) jemne mletého trifenyl(3,4dimetoxybenzyl) fosfóniumbromidu bolo nabrané ako suspenzia do 15 ml THF a bola ochladená na -78 °C. K tejto zmesi bolo pridané 1,04 ml 1,6M (1,66 mmol, 3,0 ekv.) n-BuLi za vzniku červenooranžového roztoku. Zmes bola ponechaná ohriať sa na 23 °C po dobu 1 hodiny. Táto zmes potom bola pri teplote 0 °C pridaná kanylou k roztoku 274 mg (0,554 mmol, 1,0 ekv.) 6—(3— metoxy-4-metoxymetoxyfenyl)-1-(2,4,6-trimetylbenzénsulfonyl)lH-indazol-3-karbaldehydu v 5 ml THF. Výsledná zmes bola ponechaná za miešania pri teplote 0 °C po dobu 10 minút a bola zastavená saturovaným hydrouhličítanom sodným. Výsledná zmes bola rozdelená medzi saturovaný hydrouhličitan sodný a etylacetát. Organická látka bola koncentrovaná pri zníženom tlaku a zvyšok bol purifikovaný chrómatografiou na silikagéle (50 ml silikagélu, 3:7-> 4:6 zmes etylacetátu a hexánu) za vzniku 289 mg (83 %) 2,5:1 zmesi cis/trans 3-(2-(3,4dimetoxyfenyl)vinyl]-6-(3-metoxy-4-metoxymetoxyfenyl)-1(2,4,6-trimetylbenzénsulfonyl)-ΙΗ-indazolu: Rf sm 0,53, p 0,32 (zmes etylacetátu a hexánu 4:6), 1H NMR (CDC13) δ 8,35 (s,
0,3H), 8,32 (s, 0, 7H), 8,03 (d, 0,3H, J = 8,4 Hz), 6,60-6,85 (m, H), 6,65 (d, 0,7H, J 8,4 Hz), 6,60 (d, 0,7H, J = 12,5 Hz),
5,30 (s, 0, 6H) , 5,29 (s, 1,4H), 4, 00-3, 50 (8 singletov, 12H) ,
2,72 (s, 1,8H), 2,67 (s, 4,2H), 2,34 (s, 3H) , MS (ES) [M+H]/z vypočítané 629, namerané 629, [M-H]/z vypočítané 627, namerané
627.
(ix)
Roztok 1,0 g (17,8 mmol) IM KOH vo zmesi vody a MeOH 1:1 (18 ml celkom) bol pripravený v argónovej atmosfére a bol odplynený cyklami vákuum/argón (5 krát). V samostatnej banke bolo rozpustené 289 mg (0,461 mmol, 1,0 ekv.) 3-[2-(3,4dimetoxyfenyl)vinyl]-6-(3-metoxy-4-metoxymetoxyfenyl)-1(2,4,6-trimetylbenzénsulfonyl)-ΙΗ-indazolu v 8 ml THF v argónovej atmosfére. K tomuto roztoku bolo pridané 10 ml vyššie uvedeného IM roztoku KOH vo zmesi vody a MeOH 1:1. Reakcia bola zohriatá na 30 °C a bola ponechaná za miešania po dobu 7 hodín. Reakčná zmes bola neutralizovaná pridaním 7 ml 20% kyseliny citrónovej. Výsledná zmes bola rozdelená medzi 150 ml etylacetátu a 100 ml vody. Organická látka bola oddelená, usušená nad sulfátom sodným, dekantovaná a koncentrovaná pri zníženom tlaku za vzniku cis a trans 3—[2— (3,4-dimetoxyfenyl)vinyl]-6-(3-metoxy-4-metoxymetoxyfenyl)-1Hindazolu (použitý surový produkt): Rf sm 0,46, pl 0,17, p2 0,23 (zmes etylacetátu a hexánu 1:1), 2H NMR cis izomér (CDC13) δ
7,55 (s, 1H) , 7,3-7,1 (m, 6H) , 7,02 (dd, 1H, J = 1,9, 8, 3 Hz) ,
6,85 (d, 1H, J = 12,5 Hz), 6,78 ( d, 1H, J = 12,5 Hz) , 6, 74 (d,
1H, J = 8,3 Hz), 5,21 (s, 2H) , 3, 88 (s, 3H), 3,70 (S, 3H) ,
3,43 (s, 3H), 3,42 (s, 3H) . MS (ES) [M+H]/z vypočítané 447, namerané 447, [M-H]/z vypočítané 445, namerané 445.
Príklad 1(b)
3-(E-styryl)-6-(3-benzyloxy-4-hydroxyfenyl)-lH-indazol
Zlúčenina z príkladu 1 (b) bola pripravená podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 1 (a) okrem toho, že
4-bróm-2-benzyloxyfenol bol použitý v kroku (iii) namiesto
4-bróm-2-metoxyfenolu. Rf sm 0,35, p 0,30 (zmes etylacetátu a hexánu 4:6), NMR (CDC13) δ 8,06 (d, 1H, J = 8,6 Hz), 7,637,18 (m, 17H), 7,05 (d, 1H, J = 8,2 Hz), 5,19 (s, 2H) . MS (Cn [M+H]/z vypočítané 419, namerané 419, [M-H]/z vypočítané 417, namerané 417.
Príklad 1(c)
3-[E-2-(3,4-dimethoxyfenyl)vinyl]-6-(3-allyloxy-4hydroxyfenyl)-lH-indazol
Zlúčenina z príkladu l(c) bola pripravená podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 1 (a) okrem toho, že 3-allyloxy-4-(metoxymetoxy)benzénborónová kyselina bola použitá namiesto 3-metoxy-4-(metoxymetoxy)benzénborónovej kyseliny v kroku (iii). MS (ESI) [M+H]/z vypočítané 429, namerané 429, MS (ESI) (M-H]/z vypočítané 427, namerané 427.
Príklad 2(a)
3-(naftalén-2-yl)-6-(3-metoxy-4-hydroxyfenyl)-lH-indazol mg (0,055 mmol) 6-(4-benzyloxy-3-metoxyfenyl)-3naftalén-2-yl-lH-indazolu bolo rozpustené vo zmesi 2 ml etylacetátu, 2 ml benzénu a 2 ml metanolu. K tomuto roztoku bolo pridané 25 mg 10% (hmotnostných) paládia na uhlí a reakčná nádoba bola odplynená cyklami vákuum/vodík (päť cyklov) . Reakčná zmes bola ponechaná za miešania po dobu 3 dní v 23 °C a bola filtrovaná cez krátky stĺpec celitu. Koncentrácia a purifikácia chromatografiou na silikagéle poskytla 8 mg (40 %) 3-(naftalén-2-yl)-6-(3-metoxy-4hydroxyfenyl)-lH-indazolu: NMR (CDC13) δ 10,3 (b s, 1H),
8,50 (s, 1H) , 8,20 (d, 1H, J = 8 Hz), 7,98 (d, 1H, J = 8 Hz), 7,90 (m, 1H), 7,7-6,8 (m, 9H) , 3,98 (s, 3H) . MS (ES) [M+H]/z vypočítané 367, namerané 367, [M-H]/z vypočítané 365, namerané
365.
Východzia látka bola pripravená takto:
(i) ιΜΜΛΖηα. M(PPfX)*TKF
117 mg (0, 564 mmol, 6,0 ekv.) 2-brómnaftalénu bolo rozpustené v 0,75 ml THF a ochladené na -78 °C. Zmes bola podrobená pôsobeniu 226 μΐ 2,5M (6,0 ekv.) n-BuLi a bola ponechaná za miešania v -78 °C po dobu 30 minút. Zmes potom bola kanylou pridaná ku 139 mg (0,80 mmol, 8,5 ekv.) čerstvo usušeného pevného ZnCl2 a výsledná zmes bola ponechaná ohriať sa na 23 °C (počas pridávania vymizlo žlté sfarbenie) . Po 30 minútach v 23 °C bola zmes pridaná kanylou ku zmesi 60 mg (0,094 mmol, 1 ekv.) 6-(4-benzyloxy-3-metoxyfenyl)-3-jód-l(2,4, 6-trimetylbenzénsulfonyl)-ΙΗ-indazolu a 6 mg (0,005 mmol, 0,05 ekv.) Pd(PPh3)4. Výsledný roztok bol ponechaný za miešania po dobu 16 hodín. Bol pridaný saturovaný hydrouhličitan sodný a zmes bola rozdelená medzi 15 ml saturovaného hydrouhličitanu sodného a 15 ml etylacetátu. Organická látka bola usušená nad sulfátom sodným, dekantovaná a koncentrovaná. Purifikácia chromatografiou na silikagéle (1:9-2:8 zmes etylacetátu a hexánu) poskytla 42 mg (70 %) 6-(4-benzyloxy-3-metoxyfenyl)-3naftalén-2-yl-l-(2,4,6-trimetylbenzénsulfonyl)-ΙΗ-indazolu ako pevnej látky: Rf sm 0,4, p 0,4 (zmes etylacetátu a hexánu 3:7), :H NMR (CDC13) δ 8,44 (s, 1H) , 8,41 (s, 1H) , 8,12 (d, 1H, J = 8 Hz), 8,05-7, 00 (m, 17H) , 5,30 (s, 2H) , 4,02 (s, 3H) , 2,80 (s, 3H), 2,34 (s, 3H).
6-(4-benzyloxy-3-metoxyfenyl)-3-jód-l-(2,4,6-trimetylbenzénsulfonyl) -lH-indazol bol pripravený podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 1(a), kroky (i) až (v).
(ii)
6-(4-benzyloxy-3-metoxyfenyl)-3-naftalén-2-yl~l-(2, 4,6trimetylbenzénsulfonyl)-ΙΗ-indazol bol konvertovaný na 6-(4benzyloxy-3-metoxyfenyl)-3-naftalén-2-yl-lH-indazol, ako bolo
popísané v príklade 1 (a), krok (ix) . Rf sm 0,40, P o ,17 (zmes
etylacetátu a hexánu 3:7), XH NMR (CDC13) δ 8,40 (s, 1H) , 8,12
(d, 1H, J = 8,5 Hz), 8,10 (dd, 1H, J = 1,6, 8,4 Hz) , 7,93 (d,
1H, J = 8,3 Hz), 7, 88 (m, 2H) , 7, 61 (m, 1H) 7,56 (s, 1H), 7,43
(m, 5H) , 7,30 (m 3H) , 7,15 (d, 1H, J = 2,0 Hz), 7,08 (dd , 1H,
J = 2,1, 8, 3 Hz) , 6, 91 (d, 1H, J = 8,3 Hz) , 5,16 (s, 2H) , 3, 91
(s, 3H) .
Príklad 2(b)
3-fenyl-6-(3-metoxy-4-hydroxyfenyl)-lH-indazol
Zlúčenina z príkladu 2 (b) bola pripravená podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 2(a) okrem toho, že fenyllítium bolo použité namiesto 2-naftyllítia vzniklého z 2brómnaftylénu v kroku (i) . 1H NMR (300 MHz, CDC13) δ 7,87 (d,
1H), 7,83 (d, 2H), 7, 55-7,27 (m, 5H) , 7,01 (m, 2H) , 6,80 (d, 1H) , 3,83 (s, 3H) . MS (ES) [M+H]/z vypočítané 317, namerané 317, [M-H]/z vypočítané 315, namerané 315.
Príklad 2(c)
3-(3,4,5-trimetoxyfenyl)-6-(3-metoxy-4-hydroxyfenyl)-lH-indazol
Zlúčenina z príkladu 2 (c) bola pripravená podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 2 (a) okrem toho, že namiesto
3,4,5-trimetoxyfenylbromid bol použitý v kroku (i)
2-brómnaftylénu. Rf sm 0,67, p 0,38 (zmes etylacetátu a hexánu
8:2) , XH NMR (cdci3: ) δ 7,93 (d, 1H, J = 8 Hz) , 7,58 (s, 1H)
7, 39 (d, 1H, J = 8 Hz), 7,10 (m, 4H), 6,92 (d, 1H, J = 8 Hz)
3, 90 (s, 9H) , 3,85 (s, 3H), MS (ES) [M+H]/z vypočítané 407
namerané407, [M-H]/z vypočítané 405, namerané 405.
Príklad 2(d)
3-(lH-indol-2-yl)-6-(3-metoxy-4-hydroxyfenyl)-lH-indazol
Zlúčenina z príkladu 2 (d) bola pripravená podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 2 (a) uvedenom vyššie, okrem toho, že 1-fenylsulfonylindazol bol použitý namiesto 2brómnaftylénu v kroku (i). Rf sm 0,20, p 0,15 (zmes etylacetátu a hexánu 4:6), XH NMR (CDC13) δ 10,0 (š s, 1H) , 9,05 (š s, 1H) , 8,01 (d, 1H, J = 8,0 Hz), 7,55 (d, 1H, J = 8,0 Hz), 7,49 (s, 1H), 7,37 (d, 1H, J = 8 Hz), 7,29 (d, 1H, J = 8 Hz), 7,2-7,1 (m, 5H), 6,92 (d, 1H, J = 8 Hz), 5,63 (š s, 1H) , MS (ES) [M+H]/z vypočítané 356, namerané 356, [M-H]/z vypočítané 354, namerané 354.
Príklad 2(e)
3-(benzofurán-2-yl)-6-(3-benzyloxy-4-hydroxyfenyl)-lH-indazol
Zlúčenina z príkladu 2 (e) bola pripravená podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 2 (a) uvedenom vyššie, okrem toho, že benzofurán bol použitý namiesto 2-brómnaftylénu v kroku (i). XH NMR (CDC13) δ 8,21 (d, 1H, J = 8,0 Hz), 7,60 (m, 3H), 7,30-7,10 (m, 12H), 7,01 (d, 1H, J = 8 Hz), 5,82 (š s, 1H) , 5,15 (s, 3H) .
Príklad 3
3-(lH-indol-2-yl)-6-(3-metoxy-4-hydroxyfenyl)-lH-indazol
3-(lH-benzimidazol-2-yl)-6-(3-metoxy-4-metoxymetoxyfenyl) lH-indazol bol konvertovaný na 3,5 mg (28 %) 4-[3-(lHbenzimidazol-2-yl)-lH-indazol-6-yl]-2-metoxyfenolu podlá postupu popísaného v príklade l(a). HRMS (FAB) [M+H]/z vypočítané 357,1351, namerané 357,1349.
Východzia látka bola pripravená takto:
CC
CuAc> AcOH ΜΟΗ,Η^Ο
mg (0,064 mmol, 1 ekv.) 6-(3-metoxy-4-metoxymetoxyfenyl)-lH-indazol-3-karbaldehydu (z príkladu l(a), krok (vi)) bolo rozpustené v 0,7 ml odplynenej zmesi MeOH a vody 1:1 a bolo podrobené pôsobeniu 19 μΐ (5 ekv.) octovej kyseliny, 8,3 mg (1,2 ekv.) 1,2-diaminobenzénu a 18 mg (1,4 ekv.) octanu meďnatého v 23 °C. Zmes bola miešaná po dobu 30 minút, bola nariedená 3 ml etanolu a 2 ml vody a bola podrobená prebublávanie prúdom SH2 po dobu 3 minút, čo poskytlo čierny precipitát. Zmes bola ponechaná za miešania po dobu 12 hodín. Zmes bola filtrovaná a koncentrovaná. Purifikácia chromatografiou na silikagéle (6:4 zmes etylacetátu a hexánu) poskytla 14 mg (54 %) 3-(lH-benzimidazol-2-yl)-6-(3-metoxy-4metoxymetoxyfenyl)-ΙΗ-indazolu ako pevnej látky, Rf sm 0,39, p 0,24 (zmes etylacetátu a hexánu 6:4), XH NMR (CDCI3) δ 8,69 (d, IH, f = 8 Hz), 7,70 (š s, 2H), 7,58 (s, IH) , 7,53 (d, IH, J = 8 Hz), 7,30-7,15 (m, 7H) , 5,30 (s, 2H) , 3,97 (s, 3H) , 3,58 (s, 3H) , MS (ES) [M+H]/z vypočítané 401, namerané 401, [M-H]/z vypočítané 399, namerané 399.
Príklad 4(a)
N-[3-(3-styryl-lH-indazol-6-yloxy)fenyl]benzamid
Roztok 0,09 g (0,17 mmol) N-[3-(2-benzoyl-3-styryl-lHindazol-6-yloxy) fenyl]benzamidu v 2 ml 6N vodnej HCI a 3 ml
MeOH bol zohrievaný v 65 °C po dobu približne 4 hodín. Ochladený roztok bol naliatý opatrne do saturovaného roztoku hydrouhličitanu sodného. Precipitát bol filtrovaný, zbieraný a podrobený chromatografii na silikagéle za elúcie zmesou hexánu a EtOAc (1:1). Bolo získané 32 mg (50 %) N-[3-(3-styryl-lHindazôl-6-yloxy)fenylJbenzamidu ako béžovej pevnej látky: ΧΗ NMR (DMSO-d6) δ 13,50 (s, 1H) , 10,32 (s, 1H) , 8,23 (d, 1H, J = 8,7 Hz), 7,92 (d, 2H, J = 6,8 Hz), 7,72 (d, 2H, J = 7,3 Hz), 7,71-751 (m, 7H) , 7,51-7,47 (m, 3H), 7,30 (t, 1H, J = 7,2 Hz), 7,05 (s, 1H), 7,01 (d, 1H, J = 8,7 Hz), 6,86 (dd, 1H, J = 8,2,
2,3 Hz). Anál, výpočet pre C28H21N3O2 · 0,3H2O: C, 76, 97, H,
4,98: N, 9,62.Namerané: C, 76,94, H, 5,13, N, 9,40.
Východzia látka bola pripravená takto:
(i)
acetón reflux. -———►
Suspenzia
10,47 g (38,3 mmol) 3-(benzhydrylidénamino)fenolu,
5,00 g (38,3 mmol)
3-chlórcyklohex-2-enónu a
5,82 g (42,1 mmol) uhličitanu draselného v 150 ml acetónu bola cez noc zohrievaná k varu pod spätným chladičom. Ochladená reakčná zmes bola filtrovaná a koncentrovaná za zníženého tlaku.
Zvyšok bol podrobený chromatografii na silikagéle za elúcie zmesou hexánu a EtOAc (2:1) .
Týmto spôsobom bolo získané
8, 82 (63
%) amino)fenoxy]cyklohex-2-enónu ako žltej
3-[3-(benzhydrylidénpevnej látky: 1H
NMR (CDCla) δ 7,78 (d, 2H, J = 7,0 Hz), 7,50 (d, 1H, J = 7,1 Hz),
7,45 (d, 2H, J = 7,7 HŽ) , 734-7,10 (m, 6H) , 6, 69 (d, 1H, J ;
8, 0 Hz), 6, 61 (d, 1H, J = 8, 0 Hz), 6,38 (s, 1H), 4, 89 (s, 1H)
2,55 (t, 2H, J = 6, 2 Hz) , 2,34 (t, 2H, J = 6,2 Hz ) , 2,06 (m
2Η) . Anál, výpočet pre C25H21NO2 · 0,2H2O: C, 80, 92, H, 5,81, N,
3,78.Namerané: C, 81,12, H, 5,81, N, 3,72.
3-(benzhydrylidénamino)fenol bol pripravený takto: miešaný roztok 15,0 g (82,8 mmol) benzofenónimínu a 9,03 g (82,8 mmol) 3-aminofenolu v 25 ml toluénu bol zohrievaný k varu pod spätným chladičom s odstránením. H20 Dean-Starkovou záchytkou po dobu 3,5 hodiny. Kryštály, ktoré vznikli z ochladenej reakčnej zmesi, boli zbierané vákuovou filtráciou, premyté hexánom a usušené na vzduchu. Týmto spôsobom bolo získané 17,3 g (76 %) 3-(benzhydrylidénamino)fenolu ako svetlo žltej pevnej látky: 1H NMR (CDCI3) δ 7,64 (d, 2H, J = 7,1 Hz), 7,38 (d, IH, J = 7,1
Hz), 7,34-7,15 (m, 7H), 7,04 (d, 2H, J= 7,2 Hz), 6,88 (t, IH, J = 8,1 Hz), 6,82 (d, IH, J = 8,2 Hz), 6,23 (s, IH) , 6,21 (d, IH, J = 7,8 Hz). Anál, výpočet pre C19H15NO: C, 83,49, H, 5,53, N, 5,12.Namerané: C, 83,51, H, 5,65, N, 5,03.
(ii)
1) UHMDS,-7TC
2) cinnamoytehlorid
Roztok 4,37 g (11,89 mmol) 3-[3-(benzhydrylidénamino) fenoxy]cyklohex-2-enónu v 20 ml THF bol pridaný pomaly k 25,0 ml roztoku LiHMDS (l,0M roztok v THF) v 10 ml THF v -78 °C. Päť minút po skončení pridávaní bolo naraz pridané 1,98 g (11,89 mmol) trans-cinnamoylchloridu a miešanie pokračovalo v -78 °C po dobu 30 minút. Reakcia bola zastavená saturovaným roztokom NH4C1 a extrahovaná EtOAc (2 x) . Spojené organické vrstvy boli premyté saturovaným roztokom NaCl, usušené (MgSOJ a koncentrované pri zníženom tlaku. Zvyšok bol podrobený chromatografii na silikagéle za elúcie zmesi hexánu a EtOAc (5:1). Týmto spôsobom bolo získané 3,34 g (56 %) 3—[3— (benzhydrylidénamino)fenol)-6-(3-fenylakryloyl)cyklohex-2enónu ako žltooranžovej pevnej látky: 1H NMR(CDC13) δ 15,69 (s,
1H) , 7,80 (d, 2H, J = 7,1 Hz), 7
1H, J = 15,6 Hz), 6,75 (d, 1H, 8,0 Hz) , 6, 46 (s, 1H) , 4, 92 (s, 2,62 (t, 2H, J = 7,2 Hz). Anál.
H, 5,47, N, 2,82.Namerané: C, ,63-7,01 (m, 15H), 6,93 (d,
J = 7,6 Hz) , 6,66 (d, 1H, J =
1H) , 2, 85 (t, 2H, J = 7,2 Hz) , výpočet pre C34H27NO3: C, 82, 07,
81,88, H, 5,53, N, 2,81.
(iii)
IWfcO.HOAe,
BOH.78C —-——► roztoku •Cr·^0
1,81 g (3,64 mmol)
3- [3(benzhydrylidénamino)fenol]-6-(3-fenylakryloyl)cyklohex-2enónu rozpustenému v 10 ml zmesi HOAc/EtOH (1:1) boli pridané 2,0 ml (41,23 mmol) hydrátu hydrazínu. Roztok bol zohrievaný v 75 °C po dobu 25 minút. Po ochladení bola reakčná zmes opatrne naliata do saturovaného roztoku hydrouhličitanu sodného a extrahovaná EtOAc (2 x) . Spojené organické vrstvy boli premyté saturovaným roztokom NaCl, usušené (MgSO4) a koncentrované pri zníženom tlaku. Zvyšok bol podrobený chromatografii na silikagéle za elúcie zmesou hexánu a EtOAc (1:1). Bolo získané 539 mg (45 %) 3-(3-styryl-4,5-dihydro-lHindazol-6-yloxy)fenylamínu ako žltej pevnej látky. 2H NMR (DMSO-dg) δ 7,55 (d, 2H, J = 7,2 Hz), 7,38 (t, 2H, J = 7,2 Hz), 7,27 (t, 1H, J = 7,2 Hz), 7,05 (m, 3H) , 6,38 (d, 1H, J = 8,0
Hz), 6,31 (s, 1H) , 6,23 (d, 1H, J = 7,9 Hz), 5,52 (s, 1H) ,
5,26 (s, 2H) , 2,92 (t, 2H, J = 8,0 Hz), 2,58 (t, 2H, J = 8,1
Hz). Anál, výpočet pre C21H19N3O· 0,3H2O: C, 75, 33, H, 5,90, N,
12,55.Ňamerané: C, 75, 46, H, 5,96, N, 12,35.
(iv)
K miešanému roztoku 50 mg (0,15 nimol)
3- (3-styryl-4,5dihydro-lH-indazol-6-yloxy)fenylamínu a 54 μΐ (0,31 mmol)
Ν,Ν-diizopropyletylaminu v 5 ml CH2C12 bolo pridané 36 μΐ (0,31 mmol) benzoylchloridu. Po 15 minútach bola reakčná zmes nariedená CH2C12 a premytá postupne 0,5N HCI, saturovaným roztokom hydrouhličitanu sodného a solankou, usušená (MgSO4) a koncentrovaná pri zníženom tlaku. K miešanému roztoku zvyšku v 1,4-dioxánu bolo pridané 35 mg (0,15 mmol) 2,3-dichlór-5,6dikyano-1,4-benzochinónu (DDQ). Po 1 hodine bola reakčná zmes koncentrovaná pri zníženom tlaku a zvyšok bol podrobený chromatografii na silikagéle za elúcie zmesou hexánu a EtOAc (2:1). Týmto zpôsobom bolo pripravené 90 mg (kvantitatívne) N-[3-(2-benzoyl-3-styryl-lH-indazol-6-yloxy)fenyl]benzamidu ako hrdzavo sfarbenej pevnej látky: 1H NMR(CDC13) δ 8,13 (s,
1H) , 8,02 (d, 2H, J = 7,0 Hz), 7,94 (d, 1H, J = 8,7 Hz), 7,74 (d, 2H, J = 6,8 Hz), 7,57-7,19 (m, 17H) , 6,84 (d, 1H, J = 8,3
Hz) .
N [3-(3-styryl-lH-indazol-6-yloxy)fenyl]acetamid
Príklad 4(b)
Zlúčenina z príkladu 4 (b) bola pripravená podobným spôsobom, ako bylo popísané v príklade 4 (a) uvedenom vyššie, okrem toho, že acetanhydrid bol použitý namiesto benzoylchloridu v kroku (iv) . 1H NMR(DMSO-dg) δ 13,08 (š s, 1H), 10,03 (s, 1H) , 8,22 (d, 1H, J = 8,7 Hz), 7,72(d, 2H, J =
7,3 Hz), 7,52 (s, 2H) , 7, 44-7,27 (m, 6H) , 7,01 (s, 1H) , 6,96 (dd, 1H, J = 8,7, 2,1 Hz), 6,78 (d, 1H, J = 6,9 Hz), 2,01 (s, 3H) . Anál, výpočet pre C23H19N3O2 · 0,25 H2O: C, 73, 88, H, 5,26, N, 11,24.Namerané: C, 74,20, H, 5,57, N, 10,82.
Príklad 5(a) {3-(3-styryl-lH-indazol-6-yloxy)fenyl}amid 5-metyltiazol-2karboxylovej kyseliny
Suspenzia 57 mg (0,10 mmol) {3-[1-(5-metyltiazol-2karbonyl)-3-styryl-ÍH-indazol-6-yloxylfenyl}amidu 5-metyltiazol-2-karboxylovej kyseliny a 50 mg (0,36 mmol) uhličitanu draselného v MeOH bola miešané v 23 °C po dobu 20 minút. Roztok bol filtrovaný, nariedený EtOAc a premytý solankou (2 x) . Organická vrstva bola usušená (MgSO4) a koncentrovaná pri zníženom tlaku. Týmto spôsobom bol pripravený {3-(3-styryl-lHindazol-6-yloxy)fenyljamid 5-metyltiazol-2-karboxylovej kyseliny ako žltohnedá pevná látka pri výťažku 47 %: NMR (DMSO-dg) δ 13,00 (s, 1H) , 10,80 (s, 1H) , 8,23 (d, 1H, J = 8,8
Hz), 7,79 (s, 2H) , 7,71 (t, 2H, J = 8,6 Hz), 7,53 (s, 2H) ,
7,41-7,27 (m, 5H) , 7,04 (s, 1H) , 7,00 (d, 1H, J = 8,7 Hz),
6,89 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 2,54 (s, 3H) . Anál, výpočet pre
C26H20N4O2S 1,15 H2O: C, 65, 98, H, 4,75, N, 11,84, S, 6,78. Namerané: C, 65,99, H, 4,71, N, 11,58, S, 6,76.
Východzia látka bola pripravená takto:
(i)
3-(3-styryl-4,5-dihydro-lH-indazol-6-yloxy)fenylamin bol konvertovaný na {3-[1-(5-metyltiazol-2-karbonyl)-3-styryl-lHindazol-6-yloxylfenyl}amid 5-metyltiazol-2-karboxylovej kyseliny pôsobením 5-metyltiazol-2-karboxylovej kyseliny a HATU (o-(2-azabenzotriazol-l-yl)-N,N,N',N'-tetrametyluróniumhexafluórfosfát) v DMF a spracovaniu, pôsobenie DDQ a izolácia boli analogické k príkladu 4(a), krok (iv) (50% výťažok): 1H NMR (DMSO-d6) δ 10,85 (s, 1H) , 8,45 (d, 1H, J = 9,8 Hz), 8,24 (m, 3H) , 7, 99-7, 62 (m, 6H) , 7,54-7, 34 (m, 5H) , 6,96 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 2,64 (s, 3H) , 2,54 (s, 3H) .
Príklad 5(b)
3-metyl-N-[3-(3-styryl-lH-indazol-6-yloxy)fenyl]benzamid
Zlúčenina z príkladu 5 (b) bola pripravená podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 5 (a) uvedenom vyššie, okrem toho, že m-tolylchlorid bol použitý namiesto 5-metyl-
tiazol-2-karboxylovéj kyseliny a HATU v kro) ku (i) · XH NMR
(DMSO-de) δ 13,04 (s, 1H), 10,28 (s, 1H) , 8,23 (d, 1H, J = 8,8
Hz), 7,73-7,30 (m, 14 H), 7,05 (s, 1H), 6,99 (d, 1H, J = 8,5
Hz) , 6,87 (d, 1H, J = 7,7 Hz), 2,38 (s, 3H) . Anál, výpočet pre C29H23N3O2 · 0,2 H2O · 0,2 hexán: C, 77, 78, H, 5,66, N, 9,01.Namerané: C, 77,80, H, 5,84, N, 8,93.
Príklad 6(a)
N-(3-{3-[2-(4-chlórfenyl)vinyl]-lH-indazol-6yloxy}fenyl)benzamid
Za použitia N-(3-{l-benzoyl-3-[2-(4-chlórfenyl)vinyl]-1Hindazol-6-yloxyl}fenyl)benzamidu bol použitý obecný postup z príkladu 5 (a) pre prípravu zlúčeniny uvedenej v názve ako špinavo bielej pevnej látky pri 72% výťažku: JH NMR (DMSO-d6) δ 13,07 (s, 1H) , 10,32 (s, 1H), 8,24 (d, 1H, J = 8,8 Hz), 7,92 (d, 2H, J = 7,1 Hz), 7,76 (d, 2H, J = 8,5 Hz), 7,59-740 (m, 10H), 7,05 (s, 1H), 7,00 (d, 1H, J = 8,7 Hz), 6,87 (d, 1H, J =
7,9 Hz). Anál. výpočet pre C28H2oC1N302 · 0,4 H2O ’ 0,15 hexán, C, 71,41, H, 4,75, N, 8,65. Namerané: C, 71,62, H, 14,83, N, 8,45.
Východzia látka bola pripravená takto:
(i) ο
Za použitia 3-[3-(benzhydrylidénamino)fenoxy]cyklohex-2enónu a 3-(4-chlórfenyl)akryloylchloridu (pripraveného, ako popísané nižšie) bol použitý obecný postup z príkladu 4 (a) , krok (ii). Produkt bol použitý bez purifikácie pri cyklizácii hydrazinu, príklad 4 (a), krok (iii), za vzniku 3—{3—[2—(4— chlórfenyl)vinyl]-4,5-dihydro-lH-indazol-6-yloxyl}fenylamínu ako žltej pevnej látky pri 30% výťažku. 1H NMR (DMSO-dg) δ 12,45 (s, 1H), 7,58 (d, 2H, J = 8,5 Hz), 7,43 (d, 2H, J = 8,5 Hz), 5,52 (s, 1H), 5,26 (s, 2H) , 2,92 (t, 2H, J = 8,0 Hz), 2,58 (t, 2H, J = 8,0 Hz). Anál, výpočet pre C2iHi8C1N3O ’ 0,75 H20: C, 66, 84, H, 5,21, N, ll, 14 .Namerané: C, 66,73, H, 4,89, N, 11,01.
3-(4-chlórfenyl)akryloylchlorid bol pripravený takto: k miešanej suspenzii 2,51 g (13,77 mmol)4-chlór-transškoricovej kyseliny v benzéne bolo pridané 1,1 ml (15,14 mmol) tionylchloridu a katalytické množstvo DMAP. Reakčná zmes bola zohrievaná k varu pod spätným chladičom po dobu 1,5 hodiny. Tekavé látky boli odstránené pri zníženom tlaku. Biely zvyšok bol rozpustený v Et2O a koncentrovaný opäť pri zníženom tlaku za vzniku 2,78 g (kvantitatívne) 3—(4— chlórfenyl)akryloylchloridu ako bielej pevnej látky: ľH NMR (CDC13) δ 7,81 (d, 1H, J = 15,6 Hz), 7,54 (d, 2H, J = 8,6 Hz), 7,44 (d, 2H, J = 8, 6 Hz) , 6, 65 (d, 1H, J = 15,6 Hz) .
3—{3—[2-(4-chlórfenyl)vinyl]-4,5-dihydro-lH-indazol-6yloxyl}fenylamin bol konvertovaný na N-(3-{l-benzoyl-3- [2-(4chlórfenyl)vinyl]-lH-indazol-6-yloxyl}fenyl)benzamid postupom
popísaným v príklade 4 (a) , krok (iv) (85% výťažok). ľH NMR
(DMSO-de) δ 10,37 (s, 1H) , 8,43 (d, 1H, J = 8,8 Hz) , 8, 00-7,39
(m, 21H), 7,34 (d, 1H, J = 8, 8 Hz), 6,93 (d, 1H, J = 8,8 Hz) .
Príklad 6(b)
N-{3-[3-(2-indolyl)-lH-indazol-6-yloxy]fenyl}-3-metylbenzamid
Zlúčenina z príkladu 6 (b) bola pripravená podobným
spôsobom, ako bolo popísané v príklade 6 (a) uvedenom vyššie,
okrem toho, že l-SEM-indazol-2-karboxylová kyselina bola
použitá v kroku (i) namiesto 4-chlór- -trans-škoricovej
kyseliny. JH NMR (DMSO-de) δ 13,19 (s, 1H) , 11,59 (s, 1H) ,
10,29 (s, 1H) , 8,23 (d, 1H, J = 8,7 Hz) , 7, 73-7, 38 (m, 9H) ,
7,12 (s, 1H) , 7,03 (d, 2H, J = 7,3 Hz) , 6,88 (d, 1H, J = 7,8
Hz), 2,38 (s, 1H) . HRMS [M+H]/z vypočítané: 459,1821, namerané
459,1836.
Príklad 7
3-(styryl-lH-indazol-6-yloxy)fenylamin
Suspenzia 75 mg (0,23 mmol) 3-(3-styryl~4,5-dihydro-lHindazol-6-yloxy) fenylamínu a 90 mg 5% paládia na uhlí (Pd/C) bola zohrievaná v 155 °C. Po 4 hodinách bolo pridané ešte 39 mg 5% Pd/C. Po 22 hodinách bolo pridané ešte 30 mg 5% Pd/C. Reakčná zmes bola filtrovaná za horúca po 26 hodinách. Katalyzátor bol premytý a filtrát koncentrovaný pri zníženom tlaku. Zvyšok bol podrobený chromatografii na silikagéle za elúcie zmesou hexánu a EtOAc (1:1). Vhodné frakcie boli koncentrované a triturované zmesou CH2C12 a hexánu za vzniku 20 mg (27 %) zlúčeniny uvedenej v názve ako špinavo bielej
pevnej látky: 3Η NMR (DMSO- d6) δ 8,16 (d, 1H, J = 8, 5 Hz), 7,71
(d, 2H, J = 6,7 Hz) , 7, 50 (S, 2H), 7,40 (t, 2H, J = 7,0 Hz),
7,30 (d, 1H, J = 6,5 HZ) , 7, 06-6, 92 (m, 3H) , 6,35 (d, 1H, J =
8,3 Hz), 6,23 (s, 2H) , 5,26 (s, 2H) . Anál, výpočet pre C2iH17N3O • 0,15 CH2C12: C, 74, 69, H, 5,13, N, 12,36. Namerané: C, 74,64, H, 5,23, N, 12,25.
Príklad 8(a)
3-(E-styryl)-6-fenoxy-lH-indazol
Suspenzia 200 mg (0,64 mmol) 3-(E-styryl)-6-fenoxy-4,5dihydro-lH-indazolu a 200 mg 5% Pd/C v 10 ml tetralínu bola zohrievaná v 155 °C po dobu 18 hodín. Katalyzátor bol odstránený filtráciou horúceho roztoku a premytý TFA, EtOAc a MeOH. Filtrát bol koncentrovaný pri zníženom tlaku a zvyšok bol podrobený chromatografii na silikagéle za elúcie zmesí hexánu a EtOAc (2:1) za vzniku 110 mg (55 %) 3-(E-styryl)-6fenoxy-lH-indazolu ako špinavo bielej pevnej látky. XH NMR
(DMSO-de) δ 6, 96 (s , 2H) , 7,10 (d, 2H, J = 7,7 Hz) , 7,20 (t,
1H, J = 7,1 Hz) , 7, 30 (t, 1H, J = 7,1 Hz), 7,44 (m, 6H) , 7,71
(d, 2H, J = 7,5 Hz) , 8,20 (d, 1H, J = 9,2 Hž), 12,90 (s, 1H) .
Anál, výpočet pre C2iHi6N2O · 0,1 H20: C, 80,28, H, 5,20, N,
8,92.Namerané: C, 80,20, H, 5,21, N, 8,93.
Východzia látka bola pripravená takto:
(i) K miešanému roztoku 3,00 g (23,0 mmol)3-chlórcyklohex-2enónu a 2,16 g (23,0 mmol) fenolu v 25 ml acetónu bolo pridané
3,81 g (27,6 mmol) práškového bezvodného K2CO3. Po zohrievaní k varu pod spätným chladičom po dobu 18 hodín bola zmes ochladená a filtrovaná. Filtrát bol koncentrovaný pri zníženom tlaku a podrobený chromatografii na silikagéle za elúcie zmesí
hexánu a EtOAc (4:1) za vzniku 3- fenoxycyklohex-2-enónu ako
bielej pevnej látky: XH NMR (CDC13) δ 2,10 (kvintet, 2H, J =
6,3 Hz), 2,40 (t, 2H, J = 6,2 Hz), 2,68 (t, 2H, J = 6,3 Hz) ,
5,14 (s, 1H), 7,05 (d, 2H, J = 7,5 Hz), 7,26 (t, 1H, J = 7,3
Hz), 7,41 (t, 2H, J = 7,6 Hz) .
(ii) Roztok 301 mg (1,6 mmol) 3-fenoxycyklohex-2-enónu v 1 ml
THF bol pridaný k miešanému roztoku l,0M roztoku lítiumbis (trimetylsilyl) amidu v 3,2 ml THF v -78°C. Po 15 minútach bolo naraz pridané 266 mg (1,6 mmol) cinnamoylchloridu. Po 15 minútach bola reakčná zmes naliata do 0,5N HCI a extrahovaná EtOAc (2 x). Spojené organické vrstvy boli premyté saturovaným roztokom NaCl, usušené (MgSOj filtrované a koncentrované pri zníženom tlaku. Chromatografia zvyšku zmesí hexánu a etylacetátu 4:1 ako eluenta poskytla 220 mg (43 %) 3-fenoxy-6-(3-fenylakryloyl)cyklohex-2-enónu ako žltej pevnej látky: ΧΗ NMR (CDC13) δ (enolová forma) 2,66 (t, 2H, J = 7,2 Hz), 2,84 (t, 2H, J = 7,1 Hz), 5,11 (s, 1 H), 6,86 (d, 1H, J = 15,6 Hz), 7,02 (d, 2H, J = 8,1 Hz), 7,20 (m, 2H) , 7,28-7, 38 (m, 3H) . HRMS M+H+ vypočítané 319, 1334, namerané
319,1340.
(iii) K miešanému roztoku 1,13 g (3,55 mmol) 3-fenoxy-6-(3fenylakryloyl)cyklohex-2-enónu v 20 ml zmesi HOAc/EtOH (1:1) bolo pridané 0,21 ml (4,3 mmol) monohydrátu hydrazínu. Reakcia bola zohrievaná v 70 °C po dobu 3 hodín, ochladená a naliata opatrne do saturovaného roztoku NaHCO3 a extrahovaná EtOAc (2 x) . Spojené organické vrstvy boli premyté saturovaným roztokom NaCl, usušené (MgSOJ a koncentrované pri zníženom tlaku. Zvyšok bol podrobený chromatografii na silikagéle za elúcie zmesí hexánu a EtOAc (2:1) za vzniku 406 mg (36 %) 6-fenoxy-3styryl-4,5-dihydro-lH-indazolu (3) ako špinavo bielej pevnej látky: NMR (DMSO-de) δ 2,64 (t, 2H, J = 8,0 Hz), 2,95 (t,
2H, J = 8, 0 Hz), 5, 46 (s, 1H) , 7,04 (AB, 2H, J = 16,8 Hz),
7, 15 (d, 2H, J = 8,1 Hz) , 7, 25 (m, 2H), 7,42 (m, 4H) , 7,55 (d,
2H, J = 7,7 Hz), 12 ,44 (s, 1H) . Anál, výpočet pre C2Hi8N2O ·
0,2 H2O: c, 79,32, H, 5, 83 , N, 8,81.Namerané: C, 79,36, H,
5,85, N, 8,84.
Príklad 8(b)
3-(E-styryl)-6-[4-(metoxymetoxy)fenoxy]-lH-indazol
Zlúčenina z príkladu 8 (b) bola pripravená podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 8 (a) uvedenom vyššie, okrem toho, že 4-(metoxymetoxy)fenol bol použitý namiesto fenolu v kroku (i). ΤΗ NMR (DMSO-d6) δ 12,90 (s, 1 H), 8,17 (d, 1H, J = 8,8 Hz), 7,71 (d, 2H, J = 7 r6 Hz), 7,50 (s, 3H) , 7,41 (t, 2H, J = 7,6 Hz), 7,31 (d, 1H, J = 7,4 Hz), 7,10 (s, 3H) , 6,95 (dd, 1H, j = 8,8, 1,9 Hz), 6,84 (s, 1H) , 5,20 (s, 2H) , 3,42 (s, 3H) . 2\nal. výpočet pre C23H20N2O3: C, 74,17, H, 5,41,
N, 7,52.Namerané: C, 74,21, H, 5,59, N, 7,46.
Príklad 8(c)
3-(E-styryl)-6-fenylsulfanyl-lH-indazol
Zlúčenina z príkladu 8 ( spôsobom, ako bolo popísané v okrem toho, že tiofenol bol príklade použitý fenolu. XH NMR (DMSO-de) δ 7,29 (d, 1H, pripravená podobným (a) uvedenom vyššie, v kroku (i) namiesto (m, 9H) , 7,67 (s, 2H) , 7,86 (d, 2H, J = 7,2 Hz), 8,35 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 13,30 (s, 1H) . Anál, výpočet pre C2iH16N2S · 0,25 H2O: C, 75,76, H, . 5,00, N, 8,41, S, 9,63. Namerané: C, 75,79,
H, 4,99, N, 8,16, S, 9,63.
Príklad 8(d)
6-(3-bróm-fenoxy)-3-styryl-lH-indazol
Zlúčenina z príkladu 8(d) bola pripravená analogickým spôsobom, ako bolo popísané v príklade 8 (a) uvedenom vyššie,
okrem toho, že 3-brómfenol bol použitý v kroku (i) namiesto
fenolu. 1H NMR (DMSO-de) δ 13 , 08 (s, 1H), 8 ,23 (d , 1H, J = 8,8
Hz), 7,72 (d, 2H, J = 7,3 Hz) , 7,53 (s, 2H) , 7,43-7,35 (m,
4H), 7,30 (t, 2H, J = 7,2 Hz ), 7 ,11 (d, 1H , J = 7,2 Hz), 7,09
(s, 1H), 6,98 (d, 1H, J - 8, 8 Hz) . Anál. výpočet pre
C2iHi5BrN2O: C, 64, 46, H, 3,86; , Br, , 20, 42, N, 7,16. Namerané: C,
64,31, H, 3,99, Br, 20, 52, N, 7,11.
Príklad 9 (a)
3-(E-styryl)-6-[3-hydroxyfenoxy]-lH-indazol
K miešanému roztoku 50 mg (0,13 mmol) 3-(E-styryl)-6-[3(metoxymetoxy) fenoxy]-ΙΗ-indazolu v 5 ml CH2C12 v -25°C bolo pridané 75 μΐ (0,57 mmol) trimetylsilylbromidu. Po 1,5 hodine bol pridaný saturovaný roztok NaHCO3 a produkt bol extrahovaný EtOAc (2 x). Spojené organické vrstvy boli premyté saturovaným roztokom NaCI, usušené (MgSO4) a koncentrované pri zníženom tlaku. Zvyšok bol podrobený chromatografii na silikagéle za elúcie zmesí hexánu a EtOAc (1:1) za vzniku po triturácii zmesí CH2C12 a hexánu 22 mg (50 %) 3-(E-styryl)-6-[3hydroxyfenoxy]-ΙΗ-indazolu ako špinavo bielej pevnej látky: 1H
NMR (DMS !O-d6) δ 6,37 (S, 1H), 6,43 (d, 1H, J = 8,1 Hz) , 6,50
(d, 1H, J = 8,1 Hz), 6,88 (d, 1H, J = 8,8 Hz) , 6,92 (s , 1H),
7,12 (t, 1H, J = 8,1 Hz), 7,24 (t, 1H, J = = 7, 3 Hz) , 7, 31 (t,
2H, J = 7,6 : Hz), 7,44 (s, 2H), 7,64 (d, 2H, J = 7,5 Hz) , θ,12
(d, 1H, J = = 8,7 Hz) , 9,54 (s, 1H), 12, 92 (s, 11 H) . Anál.
výpočet pre C2iHi6N2O2 • 0,3H2O: C, 75, 57, H, 5,01, N, 8,39.
Namerané : C, 75, 74, H, 5,11, N, 8,25.
Východzia látka, 3-(E-styryl)-6-[3-(metoxymetoxy)fenoxy]ΙΗ-indazol, bola pripravená, ako bolo popísané v príklade (b) .
ľH NMR (CDC13) δ 3 ,42 (s, 3H), 5,10 (s, 2H), 6,64 (d, 1H , J =
8,2 Hz) , 6, 72 (s, 1H) , 6, 80 (d, 1H, J = 8,3 Hz) , 6,98 (s, 1H) ,
7,00 (d, 1H, J = 8, 8 Hz) , 7,19-7,38 (m, 5H) , 7,53 (m, 3H) ,
7,92 (d, 1H, J = 8,9 Hz) . Anál, výpočet pre C23H20N2O3: M+H+:
373,1552, namerané 73, : 1546
Príklad 9(b)
3-(E-styryl)-6-[4-hydroxyfenoxy]-lH-indazol
Zlúčenina z príkladu 9 (b) bola pripravená ako v príklade (a) uvedenom vyššie, okrem toho, že 3-(E-styryl)-6-[4(metoxymetoxy)fenoxy]-lH-indazol bol použitý styryl)-6-[3-(metoxymetoxy)fenoxy]-lH-indazolu.
namiesto 3-(EXH
NMR
(DMSO-d6) δ 12 ,95 (s, 1H), 9,58 (s, 1 H), 8,33 (d, 1H , J
Hz), 7,89 (d, 2H, J = 7,1 Hz) , 7, 68 (s, 1H) , 7, 58 (t, , 1H
7,3 Hz) , 7, 48 (d, 1H, J = 7,3 Hz) , 7,24 (s, 1H) , 7, 13 (m,
6,99 (d, 2H, J = 8,8 Hz). HRMS [M+H]/z vypočítané 329,
9,0
3H) ,
Namerané:
1290
329,1293. Anál, výpočet pre , J
C2iHi6N2O2 · 0,35H2O: C,
75, 36, H,
5,03, N, 8,37. Namerané: C, 75,35, H, 5,22, N, 8,24.
Príklad 10
6- (1-fenylvinyl)-3-styryl-lH-indazol
16,2 mg ((0,0358 mmol) 6-(1-fenylvinyl)-3-styryl-l-[2(trimetylsilanyl)etoxymetyl]-ΙΗ-indazolu bolo rozpustené v 0, 6 ml THF a bolo podrobené pôsobeniu 0,6 ml IM tetrabutylamóniumfluoridu (TBAF) v THF. Zmes bola zohrievaná na 60 °C v argónovej atmosfére po dobu 4 hodín. Zmes bola ochladená, neutralizovaná nadbytkom saturovaného hydrouhličitanu sodného a organická látka bola extrahovaná etylacetátom a koncentrovaná. Táto zmes 3 zlúčenín (vizualizácia TLC) bola podrobená pôsobeniu 4 ml zmesi THFvoda-TFA (1:1:2) po dobu 30 minút. Zmes bola nariedená 20 ml toluénu, koncentrovaná, neutralizovaná nadbytkom saturovaného hydrouhličitanu sodného a organická látka bola extrahovaná etylacetátom. Organická látka bola usušená nad sulfátom sodným, dekantovaná a koncentrovaná. Purifikácia chromatografiou na silikagéle (2:8 zmes etylacetátu a hexánu) poskytla 4,6 mg (40 %) 6-(1-fenylvinyl)-3-styryl-lH-indazolu:
Rf sm 0,62, p 0,24 (zmes etylacetátu a hexánu 3:7), XH NMR (300 MHz, CDC13) δ 7,99 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 7, 60-7,25 (m, 14H) ,
5,58 (d, 1H, J = 1,1 Hz), 5,56 (d, 1H, J = 1,1 Hz), HRMS (FAB) [M+H]/z vypočítané 323,1548, namerané 323,1545.
Východzia látka bola pripravená takto:
(i) ôy ísl , jáy
6-jódindazol bol konvertovaný na 3,6-dijódindazol (82 %) ako bolo popísané v príklade 1(a) , krok (v): XH NMR (300 MHz, CDCI3) δ 10,3 (š s, 1H) , 7,90 (s, 1H) , 7,52 (dd, 1H, J = 1,2,
8,5 Hz), 7,24 (d, 1H, J = 8,5 Hz).
SEMBr.TBABr /-Cr
755 mg (2,04 mmol) 3,6-dijódindazolu bolo pridané k 2,5 g 50% KOH v 2,5 ml vody pri teplote 0 °C a boli pridané 4 ml dichlórmetánu. K tejto zmesi bolo pridané 6,6 mg (0,02 mmol, 0,01 ekv.) tetrabutylamóniumbromidu (TBABr) a po kvapkách bolo pridané 397 μΐ (2,24 mmol, 1,10 ekv.) 2-(trimetylsilanyl)etoxymetylchloridu (SEM-C1) po dobu 3 minút. Zmes bola rýchlo miešahá pri teplote 0 °C po dobu 1,5 hodiny. Bolo pridané 20 ml vody a 20 ml dichlórmetánu a organická látka bola oddelená, usušená nad sulfátom sodným a koncentrovaná. Chromatografia na silikagéle (5% etylacetát v hexáne, 150 ml silikagélu) poskytla 2 izomérne zlúčeniny (1-SEM, 763 mg, 75 % a 2-SEM,
105 mg, 10 %) : Rf sm 0,08, p 0,34 a 0,27 (zmes etylacetátu a hexánu 1:9), 2H NMR (300 MHz, CDC13) δ 8,0 (s, IH) , 7,55 (d,
IH, J = 8,5 Hz), 7,24 (d, IH, J = 8,5 Hz), 5,69 (s, 2H) , 3,58 (t, 2H J = 8,2 Hz), 0,90 (t, 2H, J = 8,2 Hz), -0,1 (s, 9H) .
(iii)
μΐ (0,20 mmol, 2,0 ekv.) 1-brómstyrénu bolo rozpustené v 0,75 ml THF, ochladené na -78 °C a bolo podrobené pôsobenie 235 μΐ (0,40 mmol, 4,0 ekv.) l,70M t-BuLi. Zmes bola ponechaná ohriať sa na -42 °C po dobu 10 minút a bola pridaná k 34 mg (0,25 mmol, 2,5 ekv.) čerstvo usušeného chloridu zinočnatého. Výsledný roztok bol ponechaný ohriať sa na 23 °C za miešania po dobu 25 minút. Táto zmes bola pridaná k zmesi 50 mg (0,10 mmol, 1 ekv.) čistého 3,6-dijód-1-[2-(trimetylsilanyl)etoxymetyl]-ΙΗ-indazolu a Pd(PPh3)4 5 mg (0, 004 mmol, 0,04 ekv.). Po 10 minútach bolo sledovaním TLC zistené, že reakcia bola ukončená a reakcia bola zastavená saturovaným hydrouhličitanom sodným. Organická látka bola extrahovaná etylacetátom, usušená nad sulfátom sodným a koncentrovaná pri zníženom tlaku. Chromatografia na silikagéle (5:95 zmes etylacetátu a hexánu) poskytla 33,1 mg (70 %) 3-jód-6-(1-fenylvinyl)-1-[2-(trimetylsilanyl) etoxymetyl]-ΙΗ-indazolu: Rf sm 0,39, p 0,36 (zmes etylacetátu a hexánu 1:9), 1H NMR (300 MHz, CDC13) δ 7,50 (s, IH), 7,42 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 7,33 (m, 5H), 7,22 (dd, IH, J =
1,2, 8,4 Hz), 5,68 (s, 2H) , 5,59 (d, IH, J = 1,0 Hz), 5,57 (d,
IH, J = 1,0 Hz), 3,58 (t, 2H, J = 8,2 Hz), 0,88 (t, 2H, J =
8,2 Hz), -,09 (s, 9H), HRMS (FAB) [M+H]/z vypočítané 477,0859, namerané 477,0866.
(iv)
FBuU,2nCls, THF, Pd(PPh,)«
Príprava 6-(1-fenylvinyl)-3-styryl-l-[2-(trimetylsilanyl)etoxymetyl]-lH-indazolu: 23 μΐ (0,174 mmol, 2,5 ekv.) E-2brómstyrénu bolo rozpustené v 1,0 ml THF a bolo ochladené na 78 °C. Bolo pridané 205 μΐ (0, 348 mmol, 5,00 ekv.) t-BuLi a zmes bola zohriatá na -42 °C po dobu 7 minút za vzniku sýto červenej zmesi. Roztok bol kanylou pridaný k 29 mg (0,209 mmol, 3,00 ekv.) čerstvo usušeného chloridu zinočnatého a zmes bola ponechaná ohriať sa na 23 °C za miešania po dobu 20 minút. Tento roztok bol kanylou pridaný k čistej zmesi 33,1 mg (0,0696 mmol, 1,0 ekv.) 3-jód-6-(1-fenylvinyl)-1-[2-(trimetylsilanyl) etoxymetyl]-ΙΗ-indazolu a 4 mg (0,0035 mmol, 0,05 ekv.) Pd(PPh3)4 v 23 °C. Tento roztok bol ponechaný za miešania po dobu 15 minút a bol podrobený pôsobeniu saturovaného hydrouhličitanu sodného a extrahovaná etylacetátom. Organická látka bola usušená nad sulfátom sodným, dekantovaná a koncentrovaná. Purifikácia chromatografiou na silikagéle s použitím dvoch kolón (5:95 zmes etylacetátu a hexánu, 12 ml silikagélu, a 1:99 zmes etylacetátu a benzénu, 12 ml silikagélu) poskytla 16,2 mg (51 %) 6-(1-fenylvinyl)-3-styryl1-[2-(trimetylsilanyl)etoxymetyl]-lH-indazolu: Rf sm 0,38, p
0,29 (zmes etylacetátu a hexánu 1:9), XH NMR (300 MHz, CDC13) δ
7,98 (d, IH, J = 8,4 Hz), 7, 62-7,22 (m, 14H) , 5,71 (s, 2H) ,
5,57 (s, 2H), 3,60 (t, 2H, J = 8,2 Hz), 0,90 (t, 2H, J = 8,2 Hz), -,08 (s, 9H) , HRMS (FAB) [M+H]/z vypočítané 453,2362, namerané 453,2354.
Príklad 11
N-metyl-N-(3-styryl-lH-indazol-6-yl)benzén-1,3-diamín
K 237 mg (0,5 mmol) N-metyl-N-{3-styryl-l-[2-(trimetylsilanyl)etoxymetyl]-lH-indazol-6-yl}benzén-l,3-diamínu bolo pridané 10,1 ml (10,1 mmol) IM TBAF v THF, potom nasledovalo 0,34 ml (5,04 mmol) 10 ekv.) etyléndiamínu. Výsledná zmes bola zohrievaná na 70 °C po dobu 5 hodín. Reakcia potom bola zastavená 10 ml saturovaného NaHCO3 a extrahovaná 3 x 35 ml EtOAc. Zlúčené EtOAc fázy boli premyté 5 x 20 ml H2O, potom 20 ml soľanky, usušené nad Na2SO4, dekantované a koncentrované pri zníženom tlaku do peny. Surová látka bola purifikovaná chrómatografiou na silikagéle (9:1 zmes dichlórmetánu a etylacetátu) za vzniku 120 mg (70% výťažok) N-metyl-N-(3styryl-lH-indazol-6-yl)benzén-1,3-diamínu ako peny. Rf sm 0,73, Rf p 0,27 (zmes dichlórmetánu a etylacetátu 7:3), 13C NMR (75 MHz, CDC13) Ô 150, 3, 148, 8, 147,5, 147, 5, 143, 9, 143, 4, 137,5,
131,1, 130, 3, 129,3, 128, 9, 128,2, 127,9, 126,7, 121,0, 120,5, 117, 0, 116,0, 112, 6, 109, 8, 109, 0, 98, 3, 40,7, LCMS (ESI) [M+H]/z vypočítané 341, namerané 341. Anál, výpočet: C, 77,62, H, 5,92, N,16,46. Namerané: C, 76,16, H, 5,88, N, 15,95.
Východzia látka bola pripravená takto:
(i)
l2,3Ν NaOH dioxan, 23 *C
.....'K
6-nitro-lH-indazol bol konvertovaný na 50,6 g (87 %)3jód-6-nitro-lH-indazol, ako bolo popísané v príklade 1(a), krok (v): FTIR (KBr) 3376, 3076, 2964, 2120, 1739, 1626, 1526, 1439, 1294, 1128, 954 cm'1, XH NMR (300 MHz, CDC13) Ô 8,28(s,
1H), 8,05 (s, 1H) , 7,66 (d, 1H, J = 8,13 Hz), 7,45 (dd, 1H, J
= 8, 33, 1,38 Hz), 7,17 (d, 1H, J = 1,01 Hz), 7,14 (s, 1H),
7,03 (d, 1H, J = 8,04 Hz), 6,89 (s, 2H) , 3,82 (s, 3H) , 2,55
(s, 6H), 2,21 (s, 3H), 1,32 (s, 9H) , MS (FAB) [M+H]/z
vypočítané 311, nameraný 311. Anál. výpočet: C, 69, 66, H,
5,85, N, 9,03. Namerané: C, 69,41, H, 5,98, N, 8,79.
(ii)
SEMCI.'TBAB 50% KOH, CH. CL Oto 23 C
3-jód-6-nitro-lH-indazol bol konvertovaný na 10,2 g (81% výťažok) 6-nitro-3-jód-[2-(trimetylsilanyl)etoxymetyl]-1Hindazol, ako bolo popísané v príklade 10, krok (ii): tt 58 °C. Anál, výpočet: C, 37,24, H, 4,33, N, 10,02. Namerané: C, 37,21, H, 4,38, N, 10,00.
(iii) &r“·
PdfPPhj^JNNlaCO,
TokMaOH (B:1),MTC
6-nitro-3-jód-[2-(trimetylK zmesi 11,0 g (26,1 silanyl)etoxymetyl]-lH-indazolu, 4,64 (31,4 mmol) styrylborónovej kyseliny a 1,25 g (1,08 mmol) Pd(PPh3)4 v argónovej atmosfére bolo pridané 192 ml toluénu, 4 ml MeOH a 32,6 ml (65,3 mmol) 2N vodného NaOH. Výsledná heterogénna zmes bola zohrievaná na 90 °C. Po 8 hodinách bola reakcia nariedená 150 ml EtOAc a 50 ml vody, fázy boli oddelené a organická fáza bola extrahovaná 2 x 50 ml EtOAc. Zlúčené organické fázy boli premyté 50 ml solanky, potom usušené nad Na2SO4, filtrované a koncentrované pri zníženom tlaku. Surová reakčná zmes bola purifikovaná chromatografiou na silikagéle (1:9 zmes EtOAc a hexánu) za vzniku 7,65 g (74 %) 6-nitro-3-styryl-l-[2(trimetylsilanyl)etoxymetyl]-ΙΗ-indazolu ako žltej pevnej látky: 13C NMR (75 MHz, CDC13) δ 148, 3, 145, 0, 141,3, 138,1,
134,2, 130,5, 129, 9, 129,8, 129, 5, 128,1, 127, 4, 123,2, 119, 8, 117, 8, 108,2, 79, 7, 68, 5, 19,2, 0, 0, MS (FAB) [M+Na]/z vypočítané 418, namerané 418. Anál, výpočet: C, 63,77, H, 6,37, N, 10,62. Namerané: C, 64,04, H, 6,29, N, 10,56.
(iv)
8,1 g (20,5 mmol) 6-nitro-3-styryl-l-[2-(trimetylsilanyl)etoxymetyl]-lH-indazolu bolo rozpustené v 75 ml DMF v 23 °C v argónovej atmosfére. Bolo pridané 12,9 g (67,7 mmol) SnC12, potom nasledovalo 1,7 ml (92,2 mmol) vody a výsledná zmes bola zohrievaná na 50 °C. Po 4 hodinách bolo pridané 45 ml (135 mmol) 3N NaOH nasledované 100 ml EtOAc. Výsledná emulzia bola filtrovaná za horúca cez celit a lôžko celitu bolo premyté za horúca 3 x 100 ml EtOAc. Filtrát bol koncentrovaný pri zníženom tlaku, zvyšok bol rozpustený v EtOAc, premytý soľankou, usušený nad Na2SO4, filtrovaný a koncentrovaný pri zníženom tlaku za vzniku pevnej látky. Surová látka bola purifikovaná chromatografiou na silikagéle (2:8 až 7: 3 zmes etylacetátu a hexánu) za vzniku 5,1 g (68% výťažok) 3-styryl-
1-[2-(trimetylsilanyl)etoxymetyl]-lH-indazol-6-ylamínu ako žltej pevnej látky. MS (FAB) [M+H]/z vypočítané 366, namerané 366.
(v)
K zmesi 1,1 g (3 mmol) 3-styryl-l-[2-(trimetylsilanyl)etoxymetyl]-lH-indazol-6-ylaminu, 0,9 g (3,6 mmol) mnítrojódbenzénu, 0,07 g (0,133 mmol) BINAP, 34 mg (0,0375 mmol) Pd2(dba)3 a 1,37 g (4,2 mmol) CS2CO3 v argónovej atmosfére bolo pridané 6 ml toluénu. Výsledná heterogénna zmes bola zohrievaná na 80 °C. Po 46 hodinách bola reakcia ochladená na 23 °C, nariedená 20 ml etylacetátu (EtOAc) a filtrovaná. Bolo pridané 5 ml vody, fázy boli oddelené a organická fáza bola extrahovaná 2 x 50 ml EtOAc. Zlúčené organické látky boli premyté solankou, potom usušené nad Na2SO4, filtrované a koncentrované pri zníženom tlaku. Surová reakčná zmes bola purifikovaná chromatografiou na silikagéle (za elúcie 9:1 zmesou hexánu a EtOAc) za vzniku 7,65 g (74 %) (3-nitrofenyl)[3-styryl-l-[2-(trimetylsilanyl)etoxymetyl]-lH-indazol-6yl}amínu ako žltej pevnej látky: TLC (zmes hexánu a EtOAc 7:3) Rf sm 0,16, Rf p 0,30 (zmes etylacetátu a hexánu 3:7), FTIR (KBr) 3391, 3059, 2952, 2894, 1614, 1530, 1483, 1346, 1248, 1076, 836, 734 cm-1, XH NMR (300 MHz, CDC13) δ 7,86 (s, 1H) ,
7,83 (s, 1H), 7,65 (dt, 1H, J = 2,21, 5,13 Hz), 7,15-7,41 (m,
5H), 6,93 (dd, 1H, J = 1,87, 8, 67 Hz), 5,56 (s, 2H) , 3,51 (t,
2H, J = 8,17 Hz), 0,81 (t, 2H, J = 7,96 Hz), -0,15 (s, 9H) , 13C NMR (75 MHz, CDCI3) δ 149, 6, 144,8, 143, 5, 142,4, 140, 9, 137,3,
131,8, 130, 3, 129, 0, 128,2, 126,7, 122, 8, 122, 6, 120, 1, 119, 3,
116, 1, 115, 6, 111,4, 98,5, 77,9, 66,7, 18,0, -1, 2, MS (ESI) [M+H]/z vypočítané 487, namerané 487. Anál. výpočet: C, 66,64, H, 6,21, N, 11,51. Namerané: C, 66,91, H, 6,21, N, 11,44.
(vi)
UHMDS.M^SO.
THF,-0¾
K 434 mg (0,89 mmol) (3-nitrofenyl)-{3-styryl-l-[2(trimetylsilanyl)etoxymetyl]-lH-indazol-6-yl}amínu v 5 ml THF ochladeného na -5 °C v argónovej atmosfére, bolo pridané 0,42 ml (4,5 mmol) dimetylsulfátu, nasledované 1,8 ml (1,8 mmol) LiHMDS (IM v THF) . Po 20 minútach bola reakcia zastavená 2 ml saturovaného vodného NH4C1, potom extrahovaná 3 x 20 ml EtOAc. Zlúčené organické látky boli premyté 10 ml solanky, usušené nad Na2SO4, dekantované a koncentrované pri zníženom tlaku. Purifikácia chromatografiou na silikagéle (ža elúcie zmesí hexánu a EtOAc 9:1) poskytla 367 mg (82 %) metyl-(3nitrofenyl)-{3-styryl-l-[2-(trimetylsilanyl)etoxymetyl]-1Hindazol-6-yl}amínu. ako oleja: TLC (zmes hexánu a EtOAc 7:3) Rf sm 0,29, Rf p 0,39 (etylacetát: hexán 3:7), FTI'R (KBr) 2951,
2894 , 1611, 1528, 1485, 1348, 1248, 1077 cm-1, NMR (300 MHz,
CDC1 3) δ 7,99 (d, 1H, J = 8,67 Hz) 7,77 (t, 1H, J = 2,25 Hz) ,
7, 72 (dd, 1H, J = - 0,79, 2,09 Hz) , 7,60, (d, 2H, J = 7,22 Hz) ,
7,26 -7,54 (m, 7H) , 7,19 (dd, 1H, J = 0,78, 2 ,41 Hz) 7,07 (dd,
1H, J = 1,85, 8, 69 Hz), 5,70 (s, 2H), 3,63 (t, 2H, J = 8,10
Hz) , 3,48 (s, 3H) , 0,92 (t, 2H, J = 8,10 Hz ), - -0,04 (s, 9H) ,
13C NMR (75 MHz, CDC13) δ 150, 2, 149, 6, 147 ,1, 143, 5, 1- 42,5,
137,3, 131, 9, 129, 8, 129, 0, 128,2, 126, 8, 123, 1, 122, 6, 120,2,
120,0, 119, 7, 114,4, 111,4, 104,5, 78, 0, 66, 8, 41, 1, 18,0,
-1,2, LCMS (ESI) [M+H]/z vypočítané 501, namerané 510.
(vii)
Metyl-(3-nitrofenyl)-{3-styryl-l-[2-(trimetylsilanyl)etoxymetyl]-lH-indazol-6-yl]amin bol konvertovaný ňa N-metylN-{3-styryl-l-[2-(trimetylsilanyl)etoxymetyl]-lH-indazol-6yl}benzén-l,3-diamín, ako bolo popísané v príklade 11, krok (iv) . Rf sm 0,55, Rf p 0,31 (zmes etylacetátu a hexánu 3:7), FTIR (tenký film) 3455, 3360, 2951, 2893, 1621, 1601, 1494, 1449, 1249, 1074 cm-1, NMR (300 MHz, CDC13) δ 7,81 (d, 1H, J = 8,8 Hz), 7,58 (d, 2H, J = 7,21 Hz), 7,26-7, 50 (m, 5H) , 7,12 (t, 1H, J = 7,93 Hz), 7,01 (d, 1H, J = 1,73 Hz), 6,95 (dd, 1H,
J = 1, 99, 8,85 Hz: ), 5,67 (s, 2H) , 3, 63 (t, 2H, J = 8, 12 Hz),
3, 38 (s, 3H), 0,93 (t, 2H, J = 8, 13 Hz), -0,04 (s, 9H), 13C NMR
(75 MHz, CDC13) δ 150, 3, 149, 0, 147,7, 143,4, 143, 0, 137,6,
131, 3, 130,4, 128, 9, 128,0, 126,7 , 121,2 , 120,6, 117,3, 117,0,
113, 1, 110,1, 109, 3, 97, 5, 77, 8, 66, 6, 41,0, 18,0, -1, 2, LCMS
(ESI) [M+H]/z vypočítané 471, namerané 471.
Príklad 12(a)
N-{3-[metyl-(3-styryl-lH-indazol-6-yl)amino]fenyl}acetamid
mg (0,041 mmol) N-metyl-N-{3-styryl-l-[2-(trimetylsilanyl)etoxymetyl]-lH-indazol-6-yl}benzén-l,3-diamínu, pripraveného v príklade 11, bolo suspendované v 0,5 ml CH2CI2 v 23 °C v argónovej atmosfére. Bolo pridané 81 μΐ (1,0 mmol) pyridínu, 94 μΐ (1,0 mmol) Ac2O a katalytické množstvo DMAP. Reakcie sa okamžite stala homogénnou. Po 1 hodine analýza TLC (CH2C12:EtOAc 4:1) nepreukázala žiadnu východziu látku. Reakcia bola zastavená 2 ml vodného saturovaného NaHCO3, potom bola nariedená 15 ml EtOAc a organické fázy boli premyté 3 ml solanky, dekantované a koncentrované pri zníženom tlaku na olej. Olej bol suspendovaný v 2 ml MeOH a bolo pridané 83 mg (0,6 mmol) K2CO3. Výsledná zmes bola miešaná v 23 °C v argónovej atmosfére. Po 1 hodine bola reakcia nariedená 15 ml EtOAc a organické fázy boli premyté 3 ml solanky, dekantované a koncentrované pri zníženom tlaku. Surová látka bola pu;:ifikovaná semipreparatívnou HPLC za vzniku 8,4 mg (22 %) N-{3-[metyl-(3-styryl-lH-indazol-6-yl)amino]fenyljacetamidu. XH NMR (300 MHz, CDC13) δ 7,86 (d, 1H, J = 8,68 Hz),
7,58 (d, 1H, J = 7,17 Hz), 7,16-7,45 (m, 7H) , 7,15 (d, 1H, J =
8,29 Hz), 6,98 (m, 1H) , 6,95 (d, 1H, J = 1,92 Hz), 6,8 (dd,
1H,.J = 1,16, 8,05 Hz), 3,37 (s, 3H), 2,14 (s, 3H). LCMS (ESI) [M+H]/z vypočítané 383, namerané 383. Anál, výpočet: C, 75,37,
H, 5,80, N, 14,65. Namerané: C, 73,53, H, 6,01, N, 13,73.
Príklad 12(b)
N-{3-[metyl-(3-styryl-lH-indazol-6-yl)amino]fenylJbenzamid
Zlúčenina z príkladu 12(b) bola pripravená podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 12(a) uvedenom vyššie, okrem toho, že benzoylchlorid bol použitý .namiesto acetanhydridu. LCMS (ESI) [M+H]/z vypočítané 475, namerané 475. Anál, výpočet: C (78,36), H (5,44), N (12,60). Namerané: C (76,57), H (5,50), N (12,12).
Príklad 12(c)
Benzylester {3- [metyl-(3-styryl-lH-indazol-6-yl)amino]fenyl}karbámovej kyseliny
Zlúčenina z príkladu 12(c) bola pripravená podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 12(a) uvedenom vyššie, okrem toho, že karbobenzyloxychlorid bol použitý namiesto acetanhydridu. Rf sm 0,30, Rf p 0,57 (CH2CI2:EtOAc 8:2), LCMS (ESI+) [M+H]/z vypočítané 475 namerané 475, Anál, výpočet: C (75, 93), H (5,52), N (11,81), namerané, C (75, 60), H (5,96), N (10,75) .
Príklad 12 (d) [3-[metyl-(3-styryl-lH-indazol-6-yl)amino]fenyljamid 5-metyltiazol-2-karboxylovej kyseliny
K roztoku 26 mg (0,075 mmol) N-metyl-N-(3-styryl-lH-indazol-6-yl)benzén-1,3-diamínu, pripraveného v príklade 11, a 64 mg (0,45 mmol) 5-metyltiazol-2-karboxylovej kyseliny v 0,375 ml DMF v 23 °C v argónovej atmosfére bolo pridané 171 mg (0,45 mmol) HATU. Po 1 hodine analýza TLC (CH2C12:EtOAc 8:2) nepreukázala východziu látku. Reakcia bola zastavená 2 ml saturovaného vodného NaHCO3, potom bola nariedená 15 ml EtOAc a organické fázy boli premyté 3 ml solanky, dekantované a koncentrované pri zníženom tlaku. Olej bol suspendovaný v 2 ml MeOH a bolo pridané 62 mg (0,45 mmol) K2CO3. Výsledná zmes bola miešaná v 23 °C v argónovej atmosfére. Po 1 hodine analýza TLC (CH2C12:EtOAc 8:2) nepreukázala východziu látku. Reakcia bola nariedená 15 ml EtOAc a organické fázy boli premyté 3 ml solanky, dekantované a koncentrované pri zníženom tlaku na pevnú látku. Surová látka bola purifikovaná chromatografiou na silikagéle (za elúcie zmesí CH2Cl2:EtOAc 85:15) za vzniku 9,9 mg (28 %) zlúčeniny uvedené v názve po purifikácii semipreparatívnou HPLC. Rf sm 0,25, Rfp 0,39 (zmes hexánu a
EtOAc 8:2), LCMS (ESI+) [M+H]/z vypočítané 466, zmerané 466.
Anál, výpočet: C (69, 65), H (4,98), N (15,04), S (6,89).
Namerané: C (69,24), H (5,35), N (13,97), S (5,95).
Príklad 13
N-[3-(3-styryl-lH-indazol-6-ylamino)fenyl] benzamid
N-(3-{3-styryl-l-[2-(trimetylsilanyl)etoxymetyl]-lH-indazol-6-ylamino}fenyl)benzamid bol konvertovaný na N-[3-(3styryl-lH-indazol-6-ylamino)fenyl]benzamid, ako bolo popísané v príklade 11. LCMS (ESI) [M+H]/z vypočítané 431, namerané 431. Anál, výpočet: C, 78,12, H, 5,15, N, 13,01. Namerané: C, 77, 06, H, 6,91, N, 9,88.
Východzia látka bola pripravená takto:
(i)
(3-nitrofenyl)-{3-styryl-l-[2-(trimetylsilanyl)etoxymetyl ] -lH-indazol-6-yl } amín, pripravený v príklade 11, krok (vi), bol konvertovaný na N-{3-styryl-l-[2-(trimetylsilanyl)etoxymetyl]-lH-indazol-6-yl}benzén-l, 3-diamín, ako bolo popísané v príklade 11, krok (iv) . LCMS (ESI) [M+H]/z vypočítané 457, zmerané 457.
(ii)
K roztoku 91 mg (0,2 mmol) N-{3-styryl-l-[2-(trimetyl silanyl) etoxymetyl]-lH-indazol-6-yl}benzén-l, 3-diaminu a 0,081 ml (1,0 mmol) pyridínu v 0,5 ml CH2CI2 ochladenému na -5 °C v argónovej atmosfére bolo pridané 0,028 ml (0,24 mmol) benzoylchloridu. Po 0,5 hodine bola reakcia zastavená saturovaným vodným NaHC03, potom extrahovaný 2 x 5 ml CH2C12.
Zlúčené organické látky boli premyté 5 ml solanky, usušené nad
Na2SO4, dekantované a koncentrované pri zníženom tlaku za vzniku oleja.
na silikagéle
Surová látka bola purifikované chromatografiou (za elúcie zmesou hexánu a EtOAc 3:2) za vzniku
108 mg (96% výťažok) N-(3-{3-styryl-l-[2-(trimetylsilanyl)etoxymetyl]-lH-indazol-6-ylamino}fenyl)benzamidu. Rf sm 0,35, Rf p 0,44 (zmes etylacetátu a hexánu 1:1), FTIR (tenký film) 3320, 2951, 2893, 1657, 1604, 1537, 1493, 1409, 1303, 1248, 1074 cm-1, LCMS (ESI) [M+H]/z vypočítané 561, namerané 561.
Anál, výpočet: C, 72,82, H, 6,47, N, 9,99. Namerané: C, 72,33, H, 6,39, N, 9,81.
Príklad 14
Metylfenyl-(3-styryl-lH-indazol-6-yl)amín
Metylfenyl-[3-styryl-l-[2-(trimetylsilanyl)etoxymetyl]-1Hindazol-6-yl}amín bol konvertovaný na metylfenyl-(3-styryl-lHindazol-6-yl)amín, ako bolo popísané v príklade 11. MS (ESI) [M+H]/z vypočítané 326, namerané 326.
Východzia látka bola pripravená takto:
(i)
1) NaNO2 (vod.) AcOH, tone. HCI 0*C
2) Kl/I2 (vod.) 0-23 ”C
K roztoku 1,58 g (4 mmol) 3-styryl-l-[2-(trimetylsilanyl)etoxymetyl]-lH-indazol-6-ylamínu v 14 ml AcOH, 3 ml vody a 1,67 ml koncentrovanej HC1 ochladenému na 2 °C bolo pridané 304 mg (4,4 mmol) roztoku NaNO2 v 0,5 ml vody po dobu 5 minút. Výsledný tmavo červený roztok bol miešaný v 2 ’C po dobu 0,5 hodiny, potom bolo pridané 797 mg (4,8 mmol) roztoku KI a 610 mg (2,4 mmol) I2 v 1 ml vody po kvapkách tak, aby sa udržala vnútorná teplota pod 5 °C. Po 2 hodinách v 2 °C bola reakcia ponechaná za miešania v 23 °C po dobu 17 hodín. Reakcia bola zastavená 3N vodným NaOH, nariedená 50 ml EtOAc a 15 ml H2O, fázy boli oddelené a vodná fáza bola extrahovaná 2 x 15 ml EtOAc. Zlúčené organické fázy boli premyté 3 x 20 ml 5% NaHSO3, 15 ml solanky, usušené nad Na2SO4, dekantované a koncentrované pri zníženom tlaku. Surová reakčná zmes bola purifikovaná chromatografiou na silikagélu (za elúcie 1:1 zmesí hexánu a EtOAc) za vzniku 1,3 g (68% výťažok) 6-jód-3-styryl-l-[2(trimetylsilanyl)etoxymetyl]-lH-indazolu ako bielej pevnej látky. ΧΗ NMR (300 MHz, CDC13) δ 8,03 (s, 1H) , 7,79 (d, 1H, J = 9,0 Hz), 7,30-7, 60 (m, 8H), 5,73 (s, 2H) , 3,63 (t, 2H, J = 6,0 Hz), 0,96 (t, 2H, J = 6,0 Hz), 0,0 (s, 9), 13C NMR (75 MHz, CDCI3) □ 143, 6, 142, 4, 137,2, 132,1, 130, 8, 129, 0, 128, 3,
126, 8, 122,5, 122,4, 119, 6, 119, 5, 92,9, 78,1, 66, 9, 18, 0, 1,2. Anál, výpočet: C, 52,94, H, 5,29, N, 5,88. Namerané: C,
52, 66, H, 5,29, N, 5,74.
(ϋ)
6-jód-3-styryl-l-[2-(trimetylsilanyl)etoxymetyl]-lH-indazol bol konvertovaný na metylfenyl-{3-styryl-l-[2-(trimetylsilanyl )etoxymetyl]-lH-indazol-6-yl} amin, ako bolo popísané v príklade 11, krok (v). Rf sm 0,35 Rf p 0,13 (zmes EtOAc a hexánu 1:9), IR (KBr) 3031, 2951, 1625, 1595, 1498, 1449, 1326, 1303, 1248, 1212, 1076, 835, 694 cm-1, MS (ESI) [M+H]/z vypočítané 456, namerané 456.
Príklad 15
N-[3-(2-benzo[1,3]dioxol-5-ylvinyl)-lH-indazol-6-yl]N-metylbenzén-1,3-diamín
[3-(2-benzo[1,3]dioxol-5-ylvinyl)-lH-indazol-6-yl]metyl(3-nitrofenyl)amin bol konvertovaný na N-[3—(2 — benzo[1,3]dioxol-5-ylvinyl)-lH-indazol-6-yl]-N-metylbenzén1,3-diamín, ako bolo popísané v príklade 11, krok (iv) . LCMS (ESI) [M+H]/z vypočítané 385, namerané 385. Anál, výpočet: C, 71,86, H, 5,24, N, 14,57 .Namerané: C, 70, 99, H, 5,60, N, 13,80.
Východzia látka bola pripravená takto:
(i)
MfPPhj^žNNajCO,
Diox»ne,90*C
K zmesi 4,2 g (10 mmol) 6-nitro-3-jód-[2-(trimetylsilanyl)etoxymetyl]-lH-indazolu, 3,46 g (15 mmol) borónovej kyseliny a 0,58 g (0,5 mmol) Pd(PPh3)4 v 23 °C v argónovej atmosfére bolo pridané 38 ml 1,4-dioxánu a 12,5 ml (25 mmol) 2N vodného NaOH. Výsledná zmes bola zohrievaná na 90 °C. Po 2 hodinách bola reakcia nariedená 100 ml EtOAc a 70 ml vody, fázy boli oddelené a organická fáza bola extrahovaná 2 x 100 ml EtOAc. Zlúčené organické fázy boli premyté 20 ml soľanky, a potom usušené nad Na2SO4, filtrované a koncentrované pri zníženom tlaku. Surová zmes bola purifikovaná chromatografiou na silikagélu (za elúcie 9:1 zmesí hexánu a EtOAc) za vzniku
4,15 g (94% výťažok) 3-(2-benzo[1,3]dioxol-5-ylvinyl)-6-nitro1-[2-(trimetylsilanyl)etoxymetyl]-ΙΗ-indazolu ako žltej pevnej látky. FTIR (tenký film) 2950, 2898, 1523, 1501, 1483,1446,
1344, 1249, 1080, 1043, 927 cm-1, XH NMR (300 MHz, CDC13) δ 8,56 (dd, 1H, J = 0, 68, 1, 75 Hz), 8,14 (d, 1H, J = 1,78 Hz), 8,13 (d, 1H, J = 0,67 Hz), 7,50 (d, 1H, 16,53 Hz), 7,25 (d,1H,
16,52 Hz), 7,18 (d, 1H, J = 1,67 Hz), 7,07 (dd, 1H, J = 1,65,
8,13 Hz), 6,88 (d, 1H, J = 8,0 Hz), 6,05 (s, 2H) , 5,84(s,
2H), 3,66 (t, 2H, J = 7,33 Hz), 0,97 (t, 2H, J = 7,24 Hz), 0,0 (s, 9H), 13C NMR (75 MHz, CDC13) δ 148, 5, 148,2, 147, 0, 143, 9, 140, 1, 132,7, 131,3, 126, 1, 122,3, 121,9, 116,7, 116, 5, 108,7, 106, 9, 105, 7, 101, 5, 78, 4, 67,2, 17, 9, -1,3, LCMS (ESI) [M+H]/z vypočítané 531, namerané 531.
100 (ii)
3-(2-benzo[1,3]dioxol-5-ylvinyl)-6-nitro-l-[2-(trimetylsilanyl) etoxymetyl] -ΙΗ-indazol bol konvertovaný na 3-(2benzo[1, 3]dioxol-5-ylvinyl)-1-[2-(trimetylsilanyl)etoxymetyl]lH-indazol-6-ylamin, ako bolo popísané v príklade 11, krok
(ÍV) . JH NMR (300 MHz, CDC13) Ô 7,73 (d, 1H, J = 8,56 Hz), 7, 52
(d, 1H, J = 16,57 Hz), 7,18 (d, 1H, J = 16,56 Hz), 7,10 (d,
1H, J = 1,49 Hz) , 6,98 (dd, 1H, J = 1, 52, 8,06 Hz) , 6,80 (d,
1H, J = 8,01 Hz) , 6, 68 (d, 1H, J = 1,44 Hz), 6,63 (dd, 1H, J =
1,86 , 8, 57 Hz), 5,95 (s, 2H) , 5,59 (s, 2H), 3,59 (t, 2H, J =
8, 17 Hz) , 0,9 • 1 (t, 2H, J = 8, 33 Hz) , 0, 04 (s, 9H) , 13C NMR (75
MHz, CDC13) δ 148, 3, 147, 6, 146, 4, 143, 4, 143, 0, 132, 0, 130, 8, 122,0, 121, 7, 118,8, 116,5, 113, 1, 108, 5, 105, 5, 101,3, 92, 9,
77, 6, 66, 3, 17,9, -.1,3, LCMS (ESI) [M+H]/z vypočítané 410, namerané 410.
(iii)
3-(2-benzo[1,3]dioxol-5-ylvinyl)-1-(2-(trimetylsilanyl)etoxymetyl]-lH-indazol-6-ylamín bol konvertovaný na {3—(2— benzo[1,3]dioxol-5-ylvinyl)-1-[2-(trimetylsilanyl)etoxymetyl]lH-indazol-6-yl}-(3-nitrofenyl)amín, ako bolo popísané
101 v príklade 11, krok (v) . 13C
NMR (75 MHz, CDC13) δ
150,8,
149,7,
149,1,
146, 0,
144,8,
143,6,
142,1,
133,1,
132,7,
131,6,
124,0,
123,8,
123,1,
120,4,
119,5,
117,2,
116,8,
112,6,
109,9,
106,9,
102,6,
99,7,
79,1,
67,9,
19,2,
0,0,
MS [M+H]/z vypočítané 531, namerané 531. Anál.
výpočet:
C, 63,38, H,
5,70, N, 10,56.
Namerané: C, 63,49, H,
5,76, N,
10, 42
{3-(2-benzo[1,3]dioxol-5-ylvinyl)-1-[2-(trimetylsilanyl)etoxymetyl]-lH-indazol-6-yl}-(3-nitrofenyl)amín bol konvertovaný na {3-(2-benzo[1,3]dioxol-5-ylvinyl)-1-[2(trimetylsilanyl)etoxymetyl]-lH-indazol-6-yl}metyl-(3nitrofenyl)amín, ako bolo popísané v príklade 11, krok (vi). FTIR (KBr) 2952, 2894, 1612, 1529, 1503, 1489, 1446, 1407,
1348, 1306, 1251, 1077, 1039 cm-1, 13C NMR (75 MHz, CDCI3) δ
150, 1, 149, 5, 148,4, 147, 8, 147, 0, 143, 5, 142, 4, 131, 8, 131,5, 129, 8, 123, 0, 122,49, 121,9, 120, 1, 119, 5, 118,2, 114,3, 11,3, 108, 7, 105, 7, 104, 5, 101,4, 78,0, 66, 8, 41, 0, 17, 9, -1,2, MS (FAB) [M+H]/z vypočítané 545, namerané 545. Anál, výpočet: C, 63, 95, H, 5,92, N, 10,29. Namerané : C, 62, 63, H, 5,72, N, 9,62.
(v)
102
{3-(2-benzo[1,3]dioxol-5-ylvinyl)-1-[2-(trimetylsilanyl)etoxymetyl]-lH-indazol-6-ylJmetyl-(3-nitrofenyl)amín bol konvertovaný na [3-(2-benzo[1,3]dioxol-5-ylvinyl)-lH-indazol6-yl]metyl-(3-nitrofenyl)amín, ako bolo popísané v prikladá 11. LCMS (ESI) [M+H]/z vypočítané 415, namerané 415. Anál, výpočet: C, 66,66, H, 4,38, N, 13,52. Namerané: C, 66,56, H, 4,48, N, 13,35.
Príklad 16(a)
N-(3-{[3-(2-benzo[1,3]dioxol-5-ylvinyl)-lH-indazol-6-yl]metylamino}fenyl)benzamid
N-[3-(2-benzo[1,3]dioxol-5-ylvinyl)-lH-indazol-6-yl]N-metylbenzén-1,3-diamín (pripravený, ako bolo popísané v príklade 15) bol konvertovaný na N—(3—{[3—(2— benzo[1,3]dioxol-5-ylvinyl)-lH-indazol-6-yl]metylamino}fenyl)benzamid spôsobom popísaným v príklade 12(a). LCMS (ESI) [M+H]/z vypočítané 489, namerané 489. Anál. výpočet: C, 73,76, H, 4,95, N, 11,47. Namerané: C, 73,19, H, 5,09, N, 11,20.
103
Príklad 16(b)
N-(3-{[3-(2-benzo[1,3]dioxol-5-ylvinyl)-lH-indazol-6-yl]metylamino]fenyl)-3-metylbenzamid
Zlúčenina z príkladu 16(b) bola pripravená podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 16(a) uvedenom vyššie, okrem toho, že m-toluylchlorid bol použitý namiesto benzoylchloridu. LCMS (ESI) [M+H]/z vypočítané 504, namerané 504. Anál, výpočet: C, 74,09, H, 5,21, N, 11,15. Namerané: C, 73, 04, H, 5,84, N, 10,29.
Príklad 16(c)
N-(3-{[3-(2-benzo[1,3]dioxol-5-ylvinyl)-lH-indazol-6-yl]metylamino}fenyl)-3-dimetylamino-benzamid
Zlúčenina z príkladu
16(c) bola pripravená podobným spôsobom, ako bolo popísané m-dimetylaminobenzoylchlorid v príklade 16(a) okrem bol použitý namiesto toho, že benzoylchloridu. LCMS (ESI) [M+H]/z vypočítané 532, namerané 532.
104
Anál, výpočet: C, 72,30, H, 5,50, N, 13,17. Namerané: C,
71,61, H, 5,80, N, 12,75.
Príklad 16 (d)
N-(3—{[3-(2-benzo[1,3]dioxol-5-ylvinyl)-lH-indazol-6-yl]metylamino}fenyl)-3-trifluórmetylbenzamid
Zlúčenina z príkladu 16(d) bola pripravená podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 16(a) okrem toho, že m-trifluórmetylbenzoylchlorid bol použitý namiesto benzoylchloridu. LCMS (ESI) [M+H]/z vypočítané 557, namerané 557. Anál, výpočet: C, 66,90, H, 4,17, N, 10,07. Namerané: C, 66, 64, H, 4,34, N, 9,82.
Príklad 16(e)
3-acetyl-N-(3-{[3-(2-benzo[1,3]dioxol-5-ylvinyl)-lH-indazol-6 yl]metylamino}fenyl)benzamid
Zlúčenina z príkladu 16(e) bola pripravená podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 16(a) okrem toho, že
105 m-acetylbenzoylchlorid bol použitý namiesto benzoylchloridu.
LCMS (ESI) [M+H]/z vypočítané 531, namerané 531. Anál, výpočet: C, 72,44, H, 4,94, N, 1056. Namerané: C, 55,51, H,
4,21, N, 7,58.
Príklad 16(f)
6-[N-(3-(4-terc-butyl-3-hydroxybenzamido)fenyl)-N-metylamino]3-E-[(3,4-metyléndioxyfenyl)etenyl]-lH-indazol
Zlúčenina z príkladu 16(f) bola p ripravená podobným
spôsobom, ako bolo popísané v príklade 16 (a) okrem toho , že
3-terc-butyl-4 -hydroxybenzoová kyselina, HATU a TEA boli
použité namiesto benzoylchloridu. XH NMR (300 MHz, CD3OD) δ
7, 90 (d, 1H, J = 8,91 Hz), 7,83 (d, 1H, J = 2,29 Hz) , 7, 63
(dd, 1H, J = 8,36, J = 2,31 Hz) , 7,54 (t, 1H, J = 1, 97 Hz),
7,25 - 7,43 ( m, 4H) , 7,14 - 7,20 (m, 2H) , 7,06 (dd , 1H, J =
8,11 Hz, J = 1,55 Hz), 6,96 (dd, , 1H, J = = 8,93 Hz, 1 = 1, 97
Hz) , 6,90 (m, 1H) , 6,82 (t, 2H, J = 8, 18 Hz), 6,0 (s, 2H) ,
3, 41 (s, 3H), 1,42 (s, 9H).
Príklad 17
Fenyl-(3-styryl-lH-indazol-6-yl)metanón
TBAF, THF, 67*C
NH,
106
Fenyl-{3-styryl-l-[2-(trimetylsilanyl)etoxymetyl]-lH-indazol-6-ylJmetanón bol konvertovaný na 30 mg (78 %) fenyl-(3styryl-lH-indazol-6-yl)metanónu, ako bolo popísané v príklade
11. MS (ESI) [M+H]/z vypočítané 325, namerané 325. Anál, výpočet: C, 81,46, H, 4,97, N, 8,46. Namerané: C, 80,36, H,
5,16, N,
8,51.
Východzia látka bola pripravená takto:
K roztoku 143 mg (0,3 mmol) 6-jód-3-styryl-l-[2-(trimetylsilanyl) etoxymetyl) -lH-indazolu, pripraveného v príklade 14, krok (i), v 1 ml THF, ochladenému na -78 °C v argónovej atmosfére bolo po kvapkách pridané 0,2 ml (0,315 mmol) n-BuLi. Výsledná, zmes bola miešaná v -78 °C po dobu 30 minút, potom bolo rýchlo kanylou pridané 0,035 ml (0,33 mmol) roztoku benzaldehydu v 0,5 ml THF. Po 0,5 hodine bola reakcia zastavená saturovaným vodným NH4C1 a nariedená 10 ml EtOAc a 3 ml H2O. Fázy boli oddelené a vodná fáza bola extrahovaná 2 x 10 ml EtOAc. Zlúčené EtOAc vrstvy boli premyté 5 ml solanky, usušené nad Na2SO4, dekantované a koncentrované pri zníženom tlaku. Surová zmes bola purifikovaná chromatografiou na silikagéle (za elúcie zmesí hexánu a EtOAc 4:1) za vzniku 68 mg (50% výťažok) fenyl-{3-styryl-l-[2-(trimetylsilanyl)etoxymetyl) -lH-indazol-6-yl }metanolu . Rf sm = 0,72, Rf p = 0,39 (7:3 zmes hexánu a EtOAc), FTIR (tenký film) 3368, 2952, 2893,
1621, 1478, 1449, 1374, 1307, 1249, 1216, 1078, 960, 859, 835 cm-1. MS (ESI) [M+H]/z vypočítané 457, namerané 457.
(ii)
107
K roztoku 68 mg (0,15 mmol) fenyl-{3-styryl-l-[2(trimetylsilanyl)etoxymetyl}-lH-indazol-6-yl]metanolu v 3 ml dichlórmetánu v 23 °C v argónovej atmosfére bolo pridané 190 mg (0,45 mmol) jodistanu (Dess-Martinovo činidlo). Výsledná zmes bola miešaná v 23 °C po dobu 1 hodiny. Roztok potom bol nariedený 3 ml hexánu, potom filtrovaný cez celit a koncentrovaný pri zníženom tlaku na pevnú látku. Surová zmes bola purifikovaná chromatografiou na silikagéle (za elúcie zmesí hexánu a EtOAc 9:1) za vzniku 54 mg (79% výťažok) fenyl{3-styryl-l-[2-(trimetylsilanyl)etoxymetyl}-lH-indazol-6-yl}metanónu. Rf sm = 0,41, Rf p = 0,63 (7:3 zmes hexánu a EtOAc), FTIR (tenký film) 3059, 2952, 2894, 1659, 1474, 1448, 1307,
1249, 1078, 836, 649 cm-1. MS (ESI) [M+H]/z vypočítané 455, namerané 455.
Príklad 18 (3-aminofenyl)-(3-styryl-lH-indazol-6-yl)metanón
(3-aminofenyl)-{3-styryl-l-[2-(trimetylsilanyl)etoxymetyl]-1Hindazol-6-ylJmetanón bol konvertovaný na (3-aminofenyl)-(3styryl-lH-indazol-6-yl)metanón, ako bolo popísané v príklade 11. XH NMR (300 MHz, CDC13) δ 8,07 (dd, 1H, J = 0,71, 8,50 Hz),
7,91 (s, 1H) , 7,64 (dd, 1H, J = 1, 35, 8, 48 Hz), 7,54-7, 60 (m,
108
2Η), 7,46 (d, 2H, J = 12,84 Hz), 7,35-7,40 (m, 2H) , 7,22-7,31 (m, 2H) , 7,16-7,13 (m, 2H) , 6,91 (ddd, IH, J= 1,08, 7,89 Hz). LCMS (ESI) [M+H]/z vypočítané 340, namerané 340.
Východzia látka bola pripravená takto:
(i)
6-jód-3-styryl-l-[2-(trimetylsilanyl) etoxymetyl)-lH-indazol bol konvertovaný na (3-nitrofenyl)-{3-styryl-l-[2(trimetylsilanyl)etoxymetyl)-lH-indazol-6-ylJmetanol, ako bolo popísané v príklade 17, krok (i). Rf sm = 0,71, Rf p = 0,25 (7:3 zmes hexánu a EtOAc) , FTIR (tenký film) 3369, 3061, 2952, 2894, 2361, 1620, 1578, 1530, 1478, 1449, 1350, 1308, 1249,
1215, 1080, 961, 859 cm-1, XH NMR (300 MHz, CDC13) δ 8,35 (s, IH), 8,14 (dd, IH, J = 1,34, 8,14 Hz), 7,99 (d, IH, J = 8,38
Hz) , 7,76 (d, IH, J = 7,72 Hz), 7,68 (S, IH), 7,59-7,30 (m,
8H) , 7,21 (d, IH, J = 8,33 Hz) , 6,09 (s, IH) , 5,73 (s, 2H) ,
3, 61 (t, 2H, J = 8,30 Hz) , 0, 90 (t, 2H, J = 8, , 30 Hz) , -0, 06
(S, 9H) . 13C NMR (75 MHz, CDC13) δ 148, 5, 145, 9, 143, 4, 142, 4, 141,3, 137, 1, 132,7, 132, 0, 129, 5,. 128, 9, 128,2, 126, 7, 122, 6, 122, 6, 121,8, 121,5, 120, 8, 119, 6, 107, 8, 77,7, 75, 4, 66, 8,
17,8, -1,3. Anál. výpočet: C, 67,04, H, 6,23, N, 8,38.
Namerané: C, 66,93, H, 6,20, N, 8,41.
(ii)
109
(3-nitrofenyl)-(3-styryl-l-[2-(trimetylsilanyl)etoxymetyl] -lH-indazol-6-ylJmetanol bol konvertovaný na (3nitrofenyl)-{3-styryl-l-[2-(trimetylsilanyl)etoxymetyl]-1Hindazol-6-ylJmétanón, ako bolo popísané v príklade 17, krok (ii) 129 mg 91 %). Rf sm = 0,46, Rf p = 0,23 (7:3 zmes hexánu a EtOAc), FTIR (tenký film) 3082, 2952, 2894, 1665, 1613, 1532, 1476, 1349, 1298, 1250, 1080, 836, 718 cm-1, LCMS (ESI) [M+H]/z vypočítané 500, namerané 500.
(iii)
(3-nitrofenyl)-{3-styryl-l-[2-(trimetylsilanyl)etoxymetyl] -lH-indazol-6-yl }metanón bol konvertovaný na (3aminofenyl)-{3-styryl-l-[2-(trimetylsilanyl)etoxymetyl]-1Hindazol^6-yl}metanón, ako bolo popísané v príklade 11, krok (iv) 102 mg (84 %). LCMS (ESI) [M+H]/z vypočítané 340, namerané 340.
Príklad 19(a)
N- [3-(3-styryl-lH-indazol-6-karbonyl)fenyl]acetamid
110
(3-aminofenyl)-(3-styryl-lH-indazol-6-yl)metanón, pripravený v príklade 18, bol konvertovaný na 12,2 mg (78 %) N-[3-(3-styryl-lH-indazol-6-karbonyl)fenyl]acetamidu, ako bolo popísané v príklade 12(a) . Rf srn = 0,16, Rf p = 0,35 (8:2
CH2C12:EtOAc), LCMS (ESI) [M+H]/z vypočítané 382, namerané 382. Anál, výpočet: C, 75,57, H, 5,02, N, 11,02. Namerané: C, 74, 32, H, 5,41, N, 10,54.
Príklad 19(b)
N-[3-(3-styryl-lH-indazol-6-karbonyl)fenyl]benzamid
Zlúčenina z príkladu 19 (b) bola pripravená podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 19(a) okrem toho, že benzoylchlorid bol použitý namiesto acetanhydridu. :H NMR (300 MHz, (CDCI3) δ 8,40 (s, 1H) , 8,02 (d, 1H, J = 8,49 Hz), 7,98 (d, 1H, J = 1,01 Hz), 7,95 (s, 1H) , 7,95 (s, 1H) , 7,83-7,88 (m, 3H) , 7,65 (dd, 1H, J = 1,04, 8, 48 Hz), 7, 29-7, 56 (m, 11H) . MS (ESI) [M+H]/z vypočítané 444, namerané 444. Anál, výpočet: C, 78, 54, H, 4,77, N, 9,47. Namerané: C, 78,01, H, 4,87, N,
9,32.
Príklad 19(c) lll
Benzylester [3- (3-styryl-lH-indazol-6karbonyl)fenyl]karbámovej kyseliny
Zlúčenina uvedená v názve bola pripravená podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 19(a) okrem toho, že karboxybenzyloxychlorid bol použitý namiesto acetanhydridu. XH NMR (300 MHz, DMSO-ds) δ 8,37 (d, 1H, J = 8,48 Hz), 7,98 (s,
1H) , 7,88 (s, 1H), 7,79 (s, 1H) , 7,75 (d, 2H, J = 7,44 Hz),
7, 61 (d, 2H, J = 1,81 Hz), 7,58 (s, 1H) , 7,51 (t, 1H, J = 7,79
Hz), 7,42 (t, 5H, J = 6,56 Hz), 7,31-7,37 (m, 4H) , 5,16 (s,
2H), LCMS (ESI) [M+H]/z vypočítané 474, namerané 474. Anál.
výpočet: C, 76,09, H, 4,90, N, 8,87. Namerané: C, 73,82, H,
4,93, N, 8,27.
Príklad 19(d) [3-(3-styryl-lH-indazol-6-karbonyl)fenyl]amid 5-metyltiazol-
2-karboxylovej kyseliny
(3-aminofenyl)-(3-styryl-lH-indazol-6-yl)metanón bol konvertovaný na 9,9 mg 28 %) [3-(3-styryl-lH-indazol-6karbonyl)fenyl]amidu 5-metyltiazol-2-karboxylovej kyseliny, ako bolo popísané v príklade 12 (d) . XH NMR (300 MHz, CDCI3) δ
8,15 (d, 1H, J = 8,49 Hz), 8,09 (t, 1H, J = 1,86 Hz), 8,04
112
(dd, 1H, J = 1,0, 7, 98 Hz) , 7,99 (s, 1H), 7,75 (dd, 1H, J =
1,31, 8,47 Hz) 1 , 7, 67 (s, 1H) , 7, 63 (d, 2H, J = 7,30 Hz), 7, 54-
7,58 (m, 3H) , 7,50 (s, 1H) , 7,42 (t, 3H, J = 8,09 Hz) , LCMS
(ESI) [M+H]/z vypočítané 465, namerané 465.
Príklad 19(e)
6- [3- (5-metylpyridín-3-ylkarboxamido)benzoyl] -3-E-styryl-lHindazol
19(e)
Zlúčenina z príkladu bola pripravená podobným spôsobom ako v príklade
19(d) okrem toho, že 5-metylnikotinová kyselina bola použitá namiesto 5-metyltiazol-2karboxylovej kyseliny. 1H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 9,22 (s, 1H) ,
8,99 (d, 1H, J = 0,59 Hz), 8,67 (s, 1H) , 8,24 (s, 1H) , 8,16 (d, 1H, J = 8,32 Hz), 2,97 (dd, 1H, J = 8,3 Hz, J = 0,94 Hz), 7,72 (d, 1H, J = 16,65 Hz), 7,64 (d, 2H, J = 7,21 Hz), 7,197,47 (m, 8H) , 6,95 (d, 1H, J = 6,43 Hz), 2,49 (s, 3H) . MS (ESI+) [M+H]/z vypočítané 459, namerané 459. Anál, výpočet: C,
75,97. H, 4,84. N, 12,22. Namerané
C, 75, 86. H, 4,94. N,
12,10.
6- [3- (indol-4-ylkarboxamido)benzoyl]-3-E-styryl-lH-indazol
Príklad 19(f)
113
Zlúčenina z príkladu 19(f) bola pripravená podobným spôsobom ako v príklade 19 (d) okrem toho, že lH-indol-4karboxylová kyselina bola použitá namiesto 5-metyltiazol-2karboxylovej kyseliny. LCMS (ESI+) [M+H]/z vypočítané 483, namerané 483. Anál, výpočet: C, 77,16, H, 4,60, N, 11,61. Namerané : C, 76,15, H, 4,49, N, 11,31.
Príklad 19(g)
6-[3- (pyridín-2-ylacetamido)benzoyl]-3-E-styryl-lH-indazol
Zlúčenina z príkladu 19(g) bola pripravená podobným spôsobom ako v príklade 19(d) okrem toho, že pyridín-2yloctová kyselina bola použitá namiesto uvedené zlúčeniny. XH NMR (300 MHz, CDC13) δ 8,50 (dd, 1H, J = 4,86 Hz, J = 0,91 Hz), 8,37 (d, 1H, J = 8,51 Hz), 8,09 (s, 1H) , 7,94 (d, 1H, J = 7,89 Hz), 7,87 (s, 1H), 7,73-7,79 (m, 3H) , 7,25-7, 60 (m, 10H) , 3,86 (s, 2H). MS (ESI) [M+H]/z vypočítané 459, namerané 459. Anál, výpočet: C, 75,97, H, 4,84, N, 12,22. Namerané: C, 74,70, H, 4,83, N, 11,99.
Príklad 19(h)
6- [3- (2-metylpropionamido)benzoyl]-3-E-styryl-lH-indazol
114
Zlúčenina spôsobom ako v z príkladu príklade namiesto acetylchloridu.
(h) bola pripravená podobným (a). Izobutyrylchlorid bol použitý XH NMR (300 MHz, DMSO-de) δ 8,38 (d, (t, 1H), 7,96
7,75 (d, 2H,
7, 61 (d, (m, 1H), 2,60 (m, 1H, J
6,82 Hz), 1,1 (d, 6H, J = 6,82 Hz). (MS (ESI+) [M+Na]/z vypočítané 432, namerané 432. Anál, výpočet: C,
76,26. H,
5,66. N, 10,26.Namerané: C, 75,14. H, 5,62. N, 10,08.
Príklad 19(i)
6-[3-(2-acetamido-2-fenylacetamido)benzoyl]-3-E-styryl-lHindazol
Zlúčenina z príkladu 19 (i) bola pripravená podobným spôsobom ako v príklade 19(d) okrem toho, že acetylamino-2fenyloctová kyselina bola použitá namiesto 5-metyltiazol-2karboxylovej kyseliny. 1H NMR (300 MHz, DMSO-de) δ 13,5 (s,
1H), 10, 6 (s, 1H), 8, 66 (d, 1H, J = 7,66 Hz ), 8,36 (d, 1H, J =
8,47 Hz) , 8,07 (s, 1H) , 7,92 (d, 1H, J = 7,63 Hz), 7,86 (s,
1H) , 7,75 (d, 2H, J - 7,33 Hz), 7,29-7,60 (m, 13H, 5,61 (d,
1H, J = 7, 6 Hz) , 1 , 92 (s, 3H). LCMS (ESI+) [M+H]/z vypočítané
515, namerané 515. Anál . výpočet: C, 74, 69. H, 5,09. N, 10, 89.
Namerané: C, 73,01. H, 5,01. N, 10,60.
115
Príklad 19(j)
6-[3-(pyridín-4-ylkarboxamido)benzoyl]-3-E-styryl-lH-indazol
Zlúčenina z príkladu 19(j) bola pripravená podobným spôsobom ako v príklade 19(d) okrem toho, že izonikotínová kyselina bola použitá namiesto 5 metyltiazol-2-karboxylovej kyseliny. MS (ESI+) [M+Na]/z vypočítané 467, namerané 467. Anál, výpočet: C, 75,66, H, 4,54, N, 12,60. Namerané: C, 74,17, H, 4,62, N, 12,31.
Príklad 19(k)
6-[3-(pyridín-2-ylkarboxamido)benzoyl]-3-E-styryl-lH-indazol
19(k)
Zlúčenina z príkladu bola pripravená podobným spôsobom ako v príklade karboxylová kyselina bola karboxylovej kyseliny. MS
19(d) okrem toho, použitá namiesto (ESI+) [M+Na]/z že pyridín-25-metyltiazol-2vypočítané 467, namerané 467. Anál, výpočet: C, 75,66, H,
454, N, 12,60.
Namerané: C, 74,17, H, 4,61, N, 12,44.
Príklad 19(1)
6-[3-(izoxazol-4-ylkarboxamido)benzoyl]-3-E-styryl-lH-indazol
116
Zlúčenina z príkladu 19(1) bola pripravená podobným spôsobom ako v príklade 19(d) okrem toho, že izoxazol-5karboxylová kyselina bola použitá namiesto 5-metyltiazol-2karboxylovej kyseliny. MS (ESI+) [M+H]/z vypočítané 435, namerané 435. Anál, výpočet: C, 71,88, H, 4,18, N, 12,90.
Namerané: C, 71,36, H, 4,33, N, 12,47.
Príklad 19(m)
6-[3-(6-chlórpyridín-2-ylkarboxamido)benzoyl]-3-E-styryl-lHindazol
Zlúčenina z príkladu 19(m) bola pripravená podobným spôsobom ako v príklade 19(d) okrem toho, že 6-chlórpyridín-2karboxylová kyselina bola použitá namiesto 5-metyltiazol-2karboxylovej kyseliny. MS (ESI+) [M+Na]/z vypočítané 501, namerané 501.
Príklad 19(n)
6- [3- (4-chlórpyridín-2j-ylkarboxamido) benzoyl] -3-E-styryl-lHindazol
117
Zlúčenina z príkladu 19(n) bola pripravená podobným spôsobom ako v príklade 19(d) okrem toho, že 4-chlórpyridin-2karboxylová kyselina bola použitá namiesto 5-metyltiazol-2karboxylovej kyseliny. MS (ESI+) [M+H]/z vypočítané 479, namerané 479. Anál, výpočet: C, 70,22, H, 4,00, N, 11,70. Namerané: C, 70,07, H, 4,09, N, 11,64,
Príklad 19(o)
6-[3-(2-chlórpyridín-4-ylkarboxamido)benzoyl]-3-E-styryl-lHindazol
Zlúčenina z príkladu 19(o) bola pripravená podobným spôsobom ako v príklade 19(d) okrem toho, že 2-chlórizonikotinová kyselina bola použitá namiesto 5-metyltiazol-2karboxylovej kyseliny. MS (ESI+) [M+H]/z vypočítané 479, namerané 479.
Príklad 19 (p)
6- [3-(2-metylamino-2-fenylacetamido)benzoyl]-3-E-styryl-lHindazol
118
K roztoku 115 mg (0,2 mmol) 6- [3-(2-(N-t-butoxykarbonylN-metylamino)-2-fenylacetamido)benzoyl]-3-E-styryl-lH-indazolu v 2 ml CH2CI2 ochladenému na 0 °C boli pridané 2 ml TFA. Po 40 minútach bola reakčná zmes zastavená saturovaným vodným NaHCO3, potom extrahovaná 2 x 10 ml CH2CI2. Organické vrstvy boli premyté solankou, usušené nad Na2SO4, dekantované a koncentrované. Purifikácia chromatografiou na silikagéle (1:10 zmes metanolu a dichlórmetánu) poskytla 38 mg (39 %) 6-(3-(2metylamino-2-fenylacetamido)benzoyl]-3-E-styryl-lH-indazolu.
MS (ESI+) [M+H]/z vypočítané 487, namerané 487. Anál, výpočet: C, 76,52, H, 5,39, N, 11,51. Namerané: C, 74, 99, H, 5,76, N, 10,89.
Východzia látka bola pripravená, ako popísané nižšie:
(i) 6-[3-(2-(N-t-butoxykarbonyl-N-metylamino)-2-fenylacetamido)benzoyl]-3-E-styryl-lH-indazol
6-[3-(2-(N-t-butoxykarbonyl-N-metylamino)-2-fenylacetamido)benzoyl]-3-E-styryl-lH-indazol bol pripravený podobným spôsobom ako v príklade 19(d) okrem toho, že (t-butoxykarbonyl-metylamino)fenyloctová kyselina bola použitá namiesto
5-metyltiazol-2-karboxylovej kyseliny. MS (ESI+) [M+H]/z vypočítané 587, namerané 587.
119
Príklad 20(a)
6-(3-acetamidofenylsulfanyl)-3-styryl-lH-indazol
-------->
6-(3-acetamidofenylsulfanyl)-3-styryl-l-[2-(trimetylsilanyl) etoxymetyl]-ΙΗ-indazol bol konvertovaný na 6-(3-acetamidofenylsulfanyl) -3-styryl-lH-indazol, ako bolo popísané v príklade 11 30 mg (81 %) : Rf sm 0,65, p 0,35 (10% metanol v dichlórmetánu), ΤΗ NMR (300 MHz, CDC13) δ 7,81 (d, 1H, J =
8,5 Hz), 7,59 (Š s, 1H) , 7,48-7,0 (m, 13H) , 1,98 (s, 3H) , HRMS (FAB) [M+Na]/z vypočítané 408,1147, namerané 408,1156.
Východzia látka bola pripravená takto:
(i)
K 1,4 ekv. 9-BBN adičnej zlúčenine 3-ftalamidotiofenolu, ktorá bola pripravená in situ, ako je popísané nižšie, bolo pridané 250 mg (0,5 mmol) 3,6-dijód-l-[2-(trimetylsilanyl) etoxymetyl]-lH-indazolu, 87 mg (0,2 ekv.) Pd(dppf)Cl2 a 339 mg (1,6 mmol, 3,00 ekv.) fosfátu draselného v 3,0 ml DMF. Reakčná zmes bola zohrievané na 90 °C po dobu 9 hodín. Zmes bola ochladená a rozdelená medzi etylacetát a saturovaný hydrouhličitan sodný. Organická látka bola usušená nad
120 sulfátom sodným, dekantovaná a koncentrovaná. Purifikácia chromatografiou na silikagéle (2:8 zmes etylacetátu a hexánu) poskytla 159 mg (50 %) 6-(3-ftalamidofenylsulfanyl)-3-jód-lHindazolu ako oleja: 1H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 7,93 (m, 2H), 7,79 (m, 2H) , 7,62 (s, 1H) , 7,5-7,3 (m, 5H) , 7,22 (d, 1H) , 5,68 (s, 2H) , 3,55 (t, 2H, J = 8,2 Hz), 0,87 (t, 2H, J = 8,2 Hz), -,06 (s, 9H), HRMS (FAB) [M+Cs]/z vypočítané 759,9563, namerané 759,9571.
Borónová reagencia bola pripravená takto: v Schlenkove banke o objeme 10 ml bol usušený 3-ftalamidotiofenol za vysokého vákua. Bol pridaný roztok 1,6 ml (1,0 ekv.) 9-BBN (0,5M v THF) . Zmes bola zohrievané na 55 °C po dobu 2 hodín. Tekavá látka bola odstránené v argónovej atmosfére v 70 °C po dobu 1,5 hodiny. Zvyšok bol použitý bez ďalšej manipulácie.
(ii)
6-(3-ftalamidofenylsulfanyl)-3-jod-lH-indazol bol konvertovaný na 6-(3-ftalamidofenylsulfanyl)-3-styryl-lH-indazol, ako bolo popísané v príklade 11, krok (iii). 1H NMR (300 MHz, CDCla) δ 7,93 (m, 3H) , 7,78 (m 2H) , 7,7 (s, 1H) , 7,58 (m, 2H), 7, 47-7,26 (m, 10H) , 5,71 (s, 2H) , 3,59 (t, 2H, J = 8,2 Hz), 0,89 (t, 2H, J = 8,2 Hz), -0,06 (s, 9H) , HRMS (FAB) [M+Cs]/z vypočítané 736,1066, namerané 736,1058.
(iii)
121
K roztoku 121 mg (0,2 mmol) 6-(3-ftalamidofenylsulfanyl)-
3-styryl-lH-indazolu v 3,5 ml etanolu bolo pridané 63 μΐ (2,0 mmol) 10 ekv.) hydrazinu. Reakčná zmes bola ponechaná za miešania v 23 °C po dobu 45 minút a bola nariedená saturovaným hydrouhličitanom sodným a etylacetátom. Organická látka bola usušená nad sulfátom sodným, dekantovaná a koncentrovaná.
Purifikácia chromatografiou na silikagéle (3:7 zmes etylacetátu a hexánu) poskytla 79 mg (90 %) 6-(3aminofenylsulfanyl)-3-styryl-lH-indazolu ako oleja: 1H NMR (300 MHz, CDC13) δ 7,92 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 7,57 (m, 3H) , 7,49 (d, 1H, J = 16,8 Hz), 7,4-7,25 (m, 4H) , 7,23 (dd, 1H, J = 1,5,8,5
Hz), 7,11 (t, 1H, J = 7,9 Hz), 6,79 (m, 1H) , 6,70 (t, 1H,J =
1,9 Hz), 6,59 (m, 1H) , 5,66 (s, 2H) , 3,60 (š S, 2H) , 3,59(t,
2H, J = 8,2 Hz), 0,90 (t, 2H, J = 8,2 Hz), -0,05 (s, 9H) , HRMS (FAB) [M+H]/z vypočítané 474,2035, namerané 474,2019.
(iv)
K roztoku 43,7 mg (0,10 mmol) 6-(3-aminofenylsulfanyl)-3styryl-lH-indazolu v 0,5 ml dichlórmetánu bolo pridané 81 μΐ (1,0 mmol, 10 ekv.) pyridínu a 47 μΐ (0,5 mmol, 5 ekv.) acetanhydridu. Zmes bola ponechaná za miešania po dobu 10 minút v 23 °C. Zmes bola nariedená vodou a produkt bol extrahovaný 30% hexánom v etylacetáte. Organická látka bola premytá 5% kyselinou citrónovou a saturovaným hydrouhličitanem
122 sodným. Organická látka bola usušená nad sulfátom sodným, dekantovaná a koncentrovaná. Purifikácia chromatografiou na silikagéle (3:7 zmes etylacetátu a hexánu) poskytla 50 mg (97 %) 6-(3-acetamidofenylsulfanyl)-3-styryl-lH-indazolu ako oleja: Rf sm 0,33, Rf p 0,18 (zmes etylacetátu a hexánu 3:7), ’Ή NMR (300 MHz, CDC13) δ 7,94 (d, 1 H), 7,65-7,1 (m, 13H) ,
5,70 (s, 2H), 3,62 (t, 2H, J = 8,2 Hz), 2,18 (s, 3H), 0,93 (t, 2H, J = 8,2 Hz), -0,05 (s, 9H). HRMS (FAB) [M+Cs]/z vypočítané 648,1117, namerané 648,1098.
Príklad 20(b)
6- (3-(benzoylamido)fenylsulfanyl)-3-styryl-lH-indazol
Zlúčenina uvedená v názve bola pripravená ako v príklade 20 (a) okrem toho, že benzoylchlorid bol použitý namiesto acetanhydridu v kroku (iv) . 1H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 8,03 (s, 1H) , 7,73 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 7,63 (m, 2H) , 7,47 (m, 1H) ,
7,42 (t, 1H, J = 1,9 Hz), 7,37 (m, 3H) , 7,31 (m, 1H) , 7,286,98 (m, 9H), HRMS (FAB) [M+H]/z vypočítané 448,1484, namerané 448,1490.
Príklad 21
6- (1- (3-aminofenyl)vinyl)-3-styryl-lH-indazol
123
6-(1-(3-aminofenyl)vinyl)-3-styryl-l-[2-(trimetylsilanyl)etoxymetyl]-lH-indazol bol konvertovaný na 85 mg (85 %) zlúčeniny uvedené v názve, ako bolo popísané v príkladu 11: Rf sm 0,72, p 0,37 (zmes etylacetátu a hexánu 1:1), FTIR (tenký film) 3385, 3169, 2953, 1621, 1581, 1489, 1447, 1349, 1251,
1165, 1071, 959, 906, 870, 817 cm-1, 1H (300 MHz, CDC13) δ 7,98 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 7,60 (m, 2H) , 7,51 (s, 1H) , 7,48 (s, 1H) , 7,40 (m, 3H) , 7,29 (m, 2H) , 7,15 (m, 1H) , 6,78 (m, 1H) , 6,68 (m, 2H) , 5,50 (s, 2H) , 3,65 (š s, 2H) , MS (ES) [M+H]/z vypočítané 338, namerané 338, MS (ES) [M-H]/z vypočítané 336, namerané 336.
Východzia látka bola pripravená takto:
(i)
K roztoku 330 mg (0,693 mmol) 6-jód-3-styryl-l-[2(trimetylsilanyl)etoxymetyl]-ΙΗ-indazolu, pripraveného v príklade 14, krok (i), v 3,0 ml THF bolo v -78 °C pridané 0,56 ml (1,2 ekv.) 1,5M n-butyllítia. Po 20 minútach bol tento roztok potom pridaný k 170 mg bezvodného chloridu zinočnatého a zmes bola zahriata na 23 °C a miešaná po dobu 15 minút. K tejto zmesi bolo pridané 146 μΐ (1,05 ekv.) 1-(3-nitrofenyl)vinyltrif látu a 40 mg (0,05 ekv.) Pd(PPh3)4. Táto zmes bola miešaná po dobu 30 minút, bola rozdelená medzi etylacetát a saturovaný hydrouhličitan sodný a organická vrstva bola oddelená. Organická látka bola usušená nad sulfátom sodným, dekantované a koncentrovaná pri zníženom tlaku. Purifikácia chromatografiou na silikagéle (1:9 zmes etylacetátu a hexánu) potom druhá kolóna (1% zmes etylacetátu a benzénu) poskytla 180 mg (52 %) 6-(1-(3-nitrofenyl)vinyl)-3-styryl-l-[2(trimetylsilanyl)etoxymetyl]-ΙΗ-indazolu ako oleja: FTIR
124
(tenký film) 2951, 1616, 1530, 1477, 1448, 1348, 7305, 1248,
1217, 1077, 961, 913, 859 cm-1, 1H (300 MHz, CDCI3) □ 8,26 (t,
1H, J = 1,9 Hz) , 8 ,21 (m, 1H) , 8,00 (d, 1H, J = 8,5 Hz) , 7, 69
(dt, 1H, J = = 1,4, 7,8), 7 , 62-7 ,28 (m, 9H) , 7, 19 (dd, 1H, J =
1,4, 8,4 Hz) , 5,72 (s, 3H) , 5,69 (s, 1H) , 3, 60 (t, 2H, J = 8,2
Hz), 0,89 (t , 2H, J = 8,2 Hz) , -0,05 (s, 9H) f 13C NMR (75 MHz,
CDC13) δ 149, 9, 149, 6, 144,7, 144,5, 142,8, 140, 7, 138, 6,
135, 6, 133, 1, 130, 7, 130, 2, 129, 4, 128, 0, 124,4, 124,2, 124,1,
123, 8, 122, 6, 121,2, 118, 9, 111, 0, 79,2, 68, 0, 19,2, 0, 0, HRMS (FAB) [M+Na]/z vypočítané 520,2031, namerané 520,2046.
(ii)
6-(1-(3-nitrofenyl)vinyl)-3-styryl-l-[2-(trimethylsilanyl)etoxymetyl]-lH-indazol bol konvertovaný na 6-(1-(3aminofenyl)vinyl)-3-styryl-l-[2-(trimetylsilanyl)etoxymetyl]ΙΗ-indazol, ako bolo popísané v príklade 11, krok (iv) 140 mg (95 %) : Rf sm 0,59, p 0,46 (zmes etylacetátu a hexánu
4:6) ,
FTIR (tenký film) 3460, 3366, 3223, 3084, 3028, 2952, 2894,
2246, 1616, 1601, 1581, 1489, 1474, 1448, 1359. 1303, 1249,
1217, 1076, 961, 909, 860, 836, 733, 692 cm' Λ 2H NMR (300 MHz,
CDCI3) δ 7,96 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 7,59 (m, 3H), 7,50 (s, 1H) ,
7,46 (s, 1H), 7,40 (m, 2H) , 7, 30 (m, 1H) , 7,25 (m, 1H), 7,14
(m, 1H) , 6,77 (m, 1H) , 6,68 (m, 2H) , 13C NMR (75 MHz, CDC13) δ
151,6, 147,7, 144,6, 143,9, 142,8,
130,2, 129,3, 128,0, 124,4, 123,6,
116,1, 110,8, 79,0, 67,9, 19,2,
142,4, 138, 6, 132, 8, 130, 6,
121,9, 121,5, 120,2, 116,4,
0,0, HRMS (FAB) [M+Na]/z vypočítané 490,2291, namerané 490,2302.
125
Príklad 22(a)
6- (1- (3- (5-metyltiaxol-2-karboxoylamido) fenyl) vinyl) -3-styryllH-indazol
6-(1-(3-aminofenyl)vinyl)-3-styryl-lH-indazolbol konvertovaný na 20 mg (72 %) zlúčeniny uvedené v názve, ako bolo popísané v príklade 12(d): FTIR (tenký film) 3271,1673,
1605, 1585, 1538, 1486, 1428, 1349, 1304, 1090, 960, 907, 871 cm-1, XH NMR (300 MHz, CDC13) δ 10,7 (š s, 1H) , 9,09 (s,1H) ,
8,0 (d, 1H) , 7,79 (m, 1H) , 7,60 (m, 3H) , 7,51 (m, 3H) ,7,44-
7,15 (m, 7H) , 5,59 (s, 2H) , 2,54 (s, 3H) , 13C NMR (75 MHz, CDCI3) δ 162, 2, 157, 9, 149, 8, 144,4, 142, 8, 142, 2, 141, 9,
141,5, 140, 6, 137, 63, 137,56, 131, 6, 129, 5, 129, 1, 128,3,
126, 9, 125,1, 122, 6, 121,2, 120, 9, 120, 5, 120, 2, 119, 8, 116, 1,
110,2, 12,8, HRMS (FAB) [M+H]/z vypočítané 463,1593, namerané
463,1582.
Príklad 22(b)
6-(1-(3-(benzoylamido)fenyl)vinyl)-3-styryl-lH-indazol
Zlúčenina
pripravená z príkladu 22(b)
22(a) okrem spôsobom, ako bolo popísané v príklade podobným toho, že benzoylchlorid bol použitý namiesto
5-metyltiazol-2karboxylovej kyseliny a HATU. FTIR (tenký film) 3243, 1651,
1606, 1580, 1538, 1485, 1447, 1428, 1349, 1307, 1258, 1073,
126
959, 907 cm1, XH NMR (300 MHz, CDC13) δ 9,09 (s, 1H) , 7,99 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 7,78 (m, 1H) , 7,60 (m, 3H) , 7,51 (m, 3H) ,
7,43-7,15 (m, 10H) , 5,56 (d, 2H, J = 3,2 Hz), 13C NMR (75 MHz, CDCI3) δ 166, 5, 149,7, 144,3, 142,7, 142,1, 140, 6, 138,1, 137, 6, 135, 0, 132,3, 131, 6, 129, 4, 129, 1, 128, 3, 127, 4, 126, 9, 125, 0, 122,5, 120, 9, 120, 8, 120, 6, 120, 5, 115, 9, 110, 2, HRMS (FAB) [M+H]/z vypočítané 442,1919, namerané 442,1919.
Príklad 22(c)
6-(1-(3-(benzoylamido)fenyl)vinyl)-3-styryl-lH-indazol
Zlúčenina uvedená v názve bola pripravená podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 22 (a) okrem toho, že karbobenzyloxychlorid bol použitý namiesto 5-metyltiazol-2karboxylovej kyseliny a HATU. FTIR (tenký film) 3305, 1712,
1606, 1586, 1537, 1487, 1445, 1348, 1216, 1059, 959, 908 cm-1, XH NMR (300 MHz, CDCI3) δ 7,99 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 7,6-7,0 (m, 18H), 5,55 (s, 2H) , 5,19 (s, 2H) , 13C NMR (75 MHz, CDC13) δ
153, 9, 149, 8, 144,3, 142, 7, 142, 1, 140, 7, 138,2, 137, 6, 136, 3,
131,7, 129,4, 129, 1, 129, 0, 128,7, 128,7, 128,3, 126, 9, 124,0,
122, 6, 121, 1, 120, 8, 120, 4, 115, 9, 110, 1, 67,4, HRMS (FAB) [M+H]/z vypočítané 472,025, namerané 472,2026.
Príklad 23
6-(1-(3-acetamidofenyl)vinyl)-3-styryl-lH-indazol
127
6-(1-(3-acetamidofenyl)vinyl)-3-styryl-l-[2-trimetylsilanyletoxymetyl]-lH-indazol bol konvertovaný na 6-(1-(3acetamidofenyl)vinyl)-3-styryl-lH-indazol, ako bolo popísané v príklade 11: FTIR (tenký film) 3252, 1667, 1606, 1557, 1486 cm-1, XH NMR (300 MHz, CDC13) δ 10,4 (š s, IH) , 7,91 (d, IH, J =
8,5 Hz), 7,5-7,0 (m, 13H) , 5,47 (s, 2H) , 2,10 (s, 3H) , MS (ES) [M+H]/z vypočítané 380, namerané 380, [M-H]/z vypočítané 378, namerané 378.
Východzia látka bola pripravená takto:
6-(1-(3-aminofenyl)vinyl)-3-styryl-l-[2-trimetylsilanyletoxymetyl]-ΙΗ-indazol bol konvertovaný na 6-(1-(3-acetamidofenyl) vinyl) -3-styryl-l-[2-trimetylsilanyletoxymetyl]-lH-indazol, ako bolo popísané v príklade 12 (a): Rf sm 0,42, p 0,26 (zmes etylacetátu a hexánu 4:6), FTIR (tenký film) 3305, 3059, 2952, 1667, 1608, 1585, 1555, 1486, 1448, 1433, 1369, 1306,
1249, 1076, 912, 859, 836, 748, 693 cm-1, XH NMR (30Ω MHz.
CDCI3) δ 7,98 (d, IH, J = 8,5 Hz), 7,7-7,4 (m, 9H) , 7,35 (m, 2H), 7,26 (dd, IH, J = 1,3, 8,4 Hz), 7,16 (bd, IH, J = 7,8 Hz), 5,75 (s, 2H) , 5,62 (s, IH) , 5,61 (s, IH) , 3,66 (t, 2H, J = 8,2 Hz), 2,16 (s, 3H), 0,98 (t, 2H, J = 8,2 Hz), -0,02 (s,
9H) , 13C NMR (75 MHz, CDC13) δ 169, 8, 150, 9, 144, 6, 143, 5,
142,8, 142, 0, 139, 4, 138, 6, 132,9, 130, 3, 129, 3, 127, 9, 125, 6,
124,2, 123, 7, 122, 0, 121,3, 121,0, 117, 1, 110, 8, 68, 0, 25, 8,
128
19,1, 0,0, HRMS (FAB) [M+Na]/z vypočítané 532,2396, namerané
532,2410.
Príklad 24(a)
4-[3-(l-H-benzimidazol-2-yl)-lH-indazol-6-yl]-2-metoxy-5- metylfenol
326 mg (0,43 mmol) 6-{5-metoxy-2-metyl-4-[2-(trimetylsilanyl) etoxymetoxy]fenyl}-l-[2-(trimetylsilanyl)etoxymetyl]-
3—{1—[2-(trimetylsilanyl)etoxymetyl]-lH-benzamidazol-2-yl}-lHindazolu bolo miešané v 4,5 ml IM roztoku TBAF v THF, ktorý bol koncentrovaný vo vákuu na 2,5 ml, a 0,6 ml (8,9 mmol) etyléndiaminu vo varu pod spätným chladičom po dobu 40 hodín. Reakcia bola nariedená 40 ml/5 ml zmesi etylacetátu a THF a premytá 20 ml H2O a 20 ml solanky. Organické vrstvy boli usušené (MgSO4) a koncentrované vo vákuu. Purifikácia chromatografiou na silikagéle (60% zmes THF a hexánu) a potom precipitácia z chloroformu poskytla 108 mg (68 %) 4—[3—(1—H— benzimidazol-2-yl)-lH-indazol-6-yl]-2-metoxy-5-metylfenolu ako bielej pevnej látky. 1H NMR (300 MHz, DMSO-de) δ 13,62 (s, 1H) , 13,05 (š s, 1H) , 9,01 (s, 1H) , 8,50 (d, 1H, J = 8,4 Hz),7,62 (š s, 2H) , 7,49 (s, 1H) , 7,28-7, 20 (m, 3H) , 6,85 (s, 1H) ,6,74 (s, 1H) , 3,77 (s, 3H), 2,15 (s, 3H) . Anál. (C22H18N4O2 · 1,3H
C, H, N. Vypočítané C, 67,10, H, 5,27, N, 14,23. Namerané: C,
67,30, H, 5,27, N, 14,11.
Východzie látky boli pripravené takto:
(i)
129
1) frBuLi.THF
«) h
Príprava 2-jód-l-[2-(trimetylsilanyl)etoxymetyl]-1Hbenzimidazolu. Roztok 5,029 g (20,25 mmol) 1-[2-(trimetylsilanyl) etoxymetyl] -lH-benzimidazolu (viď Witten et al., J. Org. Chem., 51, 1891-1894 1986) v 50 ml THF bol ochladený na 78 °C a pridávaný po kvapkách po dobu 12 minút kanylou do banky obsahujúcej 12,2 ml 2,5M n-butyllítia v hexáne, v 30 ml THF v -78 °C v argónovej atmosfére. Po miešaní po dobu 25 minút v -78 °C, banka bola zohriatá na 0 °C po dobu 10 minút, potom bola opäť ochladená na -7 8 °C. Tento roztok potom bol pridaný kanylou do druhej banky obsahujúcej 25,7 g (101 mmol) jódu v 50 ml THF v -78 °C. Ako bolo pridávanie ukončené (~5 minút), chladiaci kúpel bol odstránený a miešania pokračovalo po dobu 30 minút. Reakčná zmes bola rozdelená medzi 500 ml etylacetátu a 100 ml vody. Organická vrstva bola premytá 2 x 100 ml saturovaného vodného metabisulfitu sodného, aby sa odstránila tmavá farba jódu, usušená (MgSO4) a koncentrovaná vo vákuu. Purifikácia veľmi rýchlou chromatografiou (10% až 50% zmes etylacetátu a hexánu) poskytla 4,79 g (63 %) čistého 2jód-1-[2-(trimetylsilanyl)etoxymetyl]-ΙΗ-benzimidazolu ako žltej pevnej látky. 1H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 7,76-7,72 (m,
1H) , 7,54-7,51 (m, 1H) , 7,29-7,25 (m, 2H) , 5,54 (s, 2H) , 3,59 (t, 2H, J = 8,1 Hz), 0,92 (t, 2H, J = 8,1 Hz), -0,03 (s, 9H) .
Anál. (C13H19IN2OS) C, H. Vypočítané C, 41,71, H, 5,12, I, 33, 90, N, 7,48. Namerané: C, 41,90, H, 5,09, I, 34, 00, N, 7,37.
(ii)
130
Príprava 6-nitro-l-[2-(trimetylsilanyl)etoxymetyl]-3(trimetylstannanyl)-lH-indazolu: 10,0 g (23,9 mmol) 3-jód-6nitro-1-[2-(trimetylsilanyl)etoxymetyl]-lH-indazolu a 10,0 g (30,5 mmol) hexametyldicinu bolo vložené do 45 ml suchého toluénu v banke prebublávanej argónom. Bolo pridané 300 mg (0,26 mmol) tetrakis(trifenylfosfín)paládia(0) a reakcia bola miešaná vo varu pod spätným chladičom v argónovej atmosfére po dobu 2,5 hodiny. Reakcia bola ochladená na 23 °C a nariedená 60 ml éteru. Organické vrstvy boli premyté 20 ml 0,lN HCI a 20 ml solanky, usušené (MgSO4) a koncentrované. Purifikácia chromatografiou na silikagéle (3% až 8% zmes éteru a hexánu) poskytla 7,70 g (71 %) 6-nitro-l-[2-(trimetylsilanyl)etoxymetyl] -3-(trimetylstannanyl)-lH-indazolu, ako svetlo žltej
pevnej látky. rH NMR (300 MHz, CDC13) δ 8,53 (d, IH, J = 1,8
Hz), 8, 03 (dd, IH, J = 8,7, 1,8 Hz), 7,81 (d, IH, J = 8, 7 Hz),
5,84 (s, 2H), 3,58 (t, 2H, J = 8,1 Hz), 0,90 (t, 2H, J = 8,1
Hz), 0,50 (t , 9H, J = 28,2 Hz), -0,05 (s, 9H) • Anál.
(Ci6H27N3O3SiSn) C, H, N. Vypočíta mé C, 42,13, H , 5, 97, N, 9,21.
Namerané: C, 42,39, H, 6,01, N, 9,26.
(iii)
Príprava 6-nitro-l-[2-(trimetylsilanyl)etoxymetyl]-3-{1- [2(trimetylsilanyl)etoxymetyl]-lH-benzimidazol-2-yl}-lH-inda
131 zolu: 7,50 g (16,4 mmol) 6-nitro-l-[2-(trimetylsilanyl)etoxymetyl] -3- (trimetylstannanyl) -lH-indazolu, 6,50 g (17,4 mmol)
3-jód-l-[2-(trimetylsilanyl)etoxymetyl]-lH-benzimidazolu a 313 mg (1,64 mmol) jodidu medného bolo vložené do 150 ml suchého THF v banke prebublávanej argónom. Bolo pridané tetrakis(trifenylfosfin)paládium(O) a reakcia bola miešaná vo vare pod spätným chladičom v argónovej atmosfére po dobu 23 hodín. Reakcia bola ochladená a adsorbovaná priamo na silikagéle (~16 g) . Purifikácia chromatografiou na silikagéle (4% až 15% zmes etylacetátu a hexánu) poskytla 7,28 g (82 %) 6-nitro-l-[2-(trimetylsilanyl)etoxymetyl]-3-{1-[2(dimetylsilanyl)etoxymetyl]-lH-benzimidazol-2-yl]-lH-indazolu, ako svetlo žltej pevnej látky. 1H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 8,91 (d, 1H, J = 9,0 Hz), 8,59 (d, 1H, J = 1,8 Hz), 8,22 (dd, 1H, J = 8,7, 1,8 Hz), 7, 92-7, 89 (m, 1H) , 7, 66-7, 62 (m, 1H), 7,40-
7,36 (m, 2H) , 6,24 (s, 2H) , 5,90 (s, 2H) , 3, 68-3,59 (m, 4H) , 0,94 (t, 2H, J = 8,1 Hz), 0,86 (t, 2H, J = 8,1 Hz), -0,04 (s, 9H) , -0,15 (s, 9H) . Anál. (C26H37N5O4SÍ2) C, H, N. Vypočítané C, 57,85, H, 6,91, N, 12,97.Namerané: C, 57, 60, H, 6,81, N,
12,82.
(iv)
Príprava 6-amino-l-[2-(trimetylsilanyl)etoxymetyl]-3-{1[2- (trimetylsilanyl)etoxymetyl]-lH-benzimidazol-2-yl}~lH-indazolu: 12,0 g (63,3 mmol) chloridu cínatého bolo pridané k roztoku 7,18 g (13,3 mmol) 6-nitro-l-(2-(trimetylsilanyl)etoxymetyl]-3-{1-[2-(trimetylsilanyl)etoxymetyl]-1Hbenzimidazol-2-yl}-ΙΗ-indazolu v 160 ml/10 ml zmesi DMF/H20 a
132 reakcia bola miešaná v 50 °C po dobu 2,5 hodiny. Reakcia bola ochladená na 0 °C a bol pomaly pridaný saturovaný hydrouhličitan sodný, za miešania, dokial všetka pena zo zastavenia reakcie nepoklesla. Látka bola koncentrovaná vo vákue a nabraná do 100 ml éteru. Nerozpustná látka bola odstránená filtráciou a premytá 50 ml éteru. Filtrát bol premytý 50 ml solanky, usušený (Na2SO4) a koncentrovaný vo vákuu. Purifikácia chromatografiou na silikagéle (25% zmes etylacetátu a hexánu) poskytla 6,05 g (89 %) 6-amino-l-[2(trimetylsilanyl)etoxymetyl]-3-{1-[2-(trimetylsilanyl)etoxymetyl]-lH-benzimidazol-2-yl}-lH-indazolu, ako svetlo žltej voskovej pevnej látky. XH NMR (300 MHz, CDCI3) δ 8,40 (d, 1H, J = 9,0 Hz), 7, 89-7, 86 (m, 1H) , 7, 63-7, 60 (m, 1H) , 7,35-7,31(m,
2H) , 6,78 (dd, 1H, J = 8,7, 1,8 Hz), 6,75 (s, 1H) , 6,25(s,
2H), 5,69 (s, 2H), 3,93 (š s, 2H) , 3, 65-355 (m, 4H) , 0,93(t,
2H, J = 8,1 Hz), 0,85 (t, 2H, J = 8,1 Hz), -0,04 (s, 9H) , 0,15 (s, 9H) . Anál. (C26H39N5O2Si2) C, H, N. Vypočítané C, 61,26, H, 7,71, N, 13,74. Namerané: C, 61,18, H, 7,65, N, 13,82.
133 (v)
Príprava 6-jód-l-[2-(trimetylsilanyl)etoxymetyl]-3-{1-[2(trimetylsilanyl)etoxymetyl]-lH-benzimidazol-2-yl}-lH-indazolu: Roztok 500 mg (0,98 mmol) 6-amino-l-[2-(trimetylsilanyl) etoxymetyl]-3-{1-[2-(trimetylsilanyl)etoxymetyl]-1Hbenzimidazol-2-yl}-lH-indazolu v 1,5 ml octovej kyseliny bol nariedený 1,0 ml H2O a miešaný pri teplote 0 °C. Bolo pridané 250 μΐ (~3 mmol) koncentrovanej HC1 250 μΐ v H20. Bolo pridané 90 mg (1,3 mmol) dusičnanu sodného v 300 μΐ H2O a reakcia bola miešaná po dobu 8 minút. Bolo pridané 10 mg jódu a roztok 250 mg (1,3 mmol) jodidu draselného v 250 μΐ H2O a peniaca reakcia bola miešaná po dobu 30 minút v 23 °C. Reakcia bola nariedená 25 ml H2O a extrahovaná 2 x 20 ml etylacetátu. Organické vrstvy boli premyté 10 ml saturovaného roztoku metabisulfitu sodného a 10 ml solanky, usušená (Na2SO4) a koncentrovaná vo vákuu. Purifikácia chromatografiou na silikagéle (8% zmes etylacetátu a hexánu) poskytla 316 mg (52 %) 6-jód-l-[2-(trimetylsilanyl)etoxymetyl]-3-{1-[2-(trimetylsilanyl)etoxymetyl]-1Hbenzimidazol-2-yl}-lH-indazolu, ako svetlo žltého oleja, ktorý pomaly kryštalizoval na bielu pevnú látku. 1H NMR (300 MHz, CDCI3) Ô 8,45 (d, 1H, J = 9,0 Hz), 8,05 (s, 1H) , 7,91-7,88 (m, 1H), 7, 67-7, 62 (m, 2H) , 7, 38-7, 34 (m, 2H) , 6,24 (s, 2H) , 5,77 (s, 2H) , 3, 65-3,57 (m, 4H) , 0,93 (t, 2H, J = 8,1 Hz), 0,85 (t,
2H, J = 8,1 Hz), -0,04 (s, 9H) , -0,15 (s, 9H) . Anál.
(C26H37lN4O2SÍ2) C, H, N. Vypočítané C, 50,31, H, 6,01, N, 9,03. Namerané: C, 50,55, H, 6,08, N, 9,00.
134 (vi)
Príprava [2- (4-bróm-2-metoxy-5-metylfenoxymetoxy) etyl] -
trimetylsilánu: 4-bróm-2-metoxy-5-metylfenol (viď Chien-Hsun
et al., Syn. Lett., 12, 1351-1352, 1997) bol miešaný v 100 ml suchého CH2CI2 v 23 °C. Bolo pridané 6,05 ml (34,6 mmol) DIELA, a potom 5,6 ml (31,7 mmol) 2-(trimetylsilyl)etoxymetylchloridu. Po miešaní po dobu 1 hodiny bol roztok premytý
H20, 0, IN HCI, H20, saturovaným NaHCO3 a
Organické vrstvy boli usušené (Na2SO4) vákuu. Purifikácia chromatografiou na solankou, po 25 ml.
a koncentrované vo silikagéle (6% zmes etylacetátu a hexánu) poskytla 9,06 g metoxy-5-metylfenoxymetoxy)etyl]trimetylsilánu (91 %) [2-(4-bróm-2ako číreho oleja. XH NMR (300
MHz, CDCI3) 8 7,06 (s, 1H) ,
7, 02 (s, 1H),
3, 84 (s, 3H) , 3,79 (t, 2H, J = 8,4
Hz) ,
2,31 (s,
3H) , 0,96 (t,
2H,
8, 4 Hz), 0,01 (s, 9H) .
(vii)
Príprava 5-metoxy-2-metyl-4-[2-(trimetylsilanyl)etoxymetoxy]fenylborónovej kyseliny: 2,6 g (7,5 mmol) [2-(4-bróm-2metoxy-5-metylfenoxymetoxy)etyl]trimetylsilánu bolo miešané v 10 ml suchého TFA v -78 °C v argónovej atmosfére. Po kvapkách bolo pridané 3,75 ml (9,36 mmol) 2,5M n-butyllitia v hexáne, a reakcia bola miešaná po dobu 30 minút predtým, ako bola prenesená kanylou do banky s 8,4 ml (75 mmol)
135 trimetylborátu v 15 ml THF, ktorá bola tiež miešaná v -78 °C v argónovej atmosfére. Potom, čo bolo pridávanie ukončené, bola reakcia miešaná 30 minút v -78 °C, a potom 30 minút pri zohrievaní na 0 °C. Reakcia potom bola zastavená 20 ml H2O, acidifikovaná 0, IN HC1 a extrahovaná 2 x 25 ml etylacetátu. Organické vrstvy boli premyté 20 ml solanky, usušené (Na2SO4) a koncentrované vo vákuu. Purifikácia chrómatografiou na silikagéle (20% až 50% zmes etylacetátu a hexánu) poskytla
1,11 g (47 %) 5-metoxy-2-metyl-4-[2-(trimetylsilanyl)etoxymetoxy]fenylborónovej kyseliny ako bielej pevnej látky. TH NMR (300 MHz, CDC13) Ô 7,78 (s, 1H) , 7,10 (s, 1H) , 5,36 (s, 2H) ,
3,93 (s, 3H) , 3,83 (t, 2H, J = 8,4 Hz), 2,79 (s, 3H) , 0,98 (t, 2H, J = 8,4 Hz), 0,01 (s, 9H) . Anál. (Ci4H25BOsSi-H2O) C, H.
Vypočítané C, 57,15, H, 7,88. Namerané: C, 56,89, H, 7,87.
(viii)
-t
Príprava 6-{5-metoxy-2-metyl-4-[2-(trimetylsilanyl)etoxymetoxy]fenyl}-l-[2-(trimetylsilanyl)etoxymetyl]—3—{1— [2— (trimetylsilanyl)etoxymetyl]-lH-benzimidazo1-2-yl}-lH-indazolu. 350 mg (0,56 mmol) 6-jód-1-[2-(trimetylsilanyl)etoxymetyl]-3-{l-[2-(trimetylsilanyl)etoxymetyl]-lH-benzimidazol-2yl}-lH-indazolu, 211 mg (0,68 mmol) 5-metoxy-2-metyl-4-[2(trimetylsilanyl)etoxymetoxy]fenylborónovej kyseliny a 72 mg (0,68 mmol) uhličitanu sodného boli miešané v zmesi 5 ml benzénu, 330 μΐ H2O a 1 ml metanolu v banke prebublávanej
136 argónom. Bolo pridané tetrakis(trifenylfosfín)paládium(O) a reakcia bola miešaná vo varu pod spätným chladičom v argónovej atmosfére po dobu 16 hodín. Po ochladení na 23 °C bola reakcia nariedená 20 ml éteru, premytá 10 ml H2O a 10 ml solanky, usušená (Na2SO4) a koncentrovaná vo vákuu. Purifikácia chromatografiou na silikagéle (15% zmes etylacetátu a hexánu) poskytla 382 mg (89 %) 6-{5-metoxy-2-metyl-4-[2-(trimetylsilanyl) etoxymetoxy]fenyl}-l-[2-(trimetylsilanyl)etoxymetyl]-
3-{1-[2-(trimetylsilanyl)etoxymetyl]-lH-benzimidazol-2-yl}-lH-
indazolu, ako bielej pevnej látky. 1H NMR (300 MHZ, CDC13, ) δ
8,68 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 7,93-7,90 (m, 1H) , 7, 67- -7, 63 (m,
1H), 7,54 (s, 1H) , 7, 38-7,32 (m, 3H), 7, 13 (s, 1H), 6, 86 (s,
1H) , 6,29 (s, 2H) , 5,83 (s, 2H) , 5,34 (s, 2H) , 3, 89 (s, 3H),
3, 86 (t, 2H, J = 8,4 Hz), 3,69-3,58 (m, 4H) , 2,22 (s, 3H) ,
1,01 (t, 2H, J = 8,4 Hz), 0, 95-0, 83 (m, 4H) , 0,03 (s, 9H) , 0,05 (s, 9H) , -0,15 (s, 9H) . Anál. (C4oH6oN405Si3) C, H, N. Vypočítané C, 63,12, H, 7,95, N, 7,36. Namerané: C, 63,22, H, 7,93, N, 7,46.
Príklad 24 (b)
4-[3-(l-H-benzimidazol-2-yl)-lH-indazol-6-yl]-3-metylfenol
TBAF ------> •ttiyfomdlwilM THF, reflux,40h
Pre prípravu zlúčeniny uvedenej v názve bol nasledovaný postup popísaný v príklade 24(a), kde 2-metyl-4-[2-(trimetylsilanyl ) etoxymetoxy] f enylborónová kyselina (pripravená, ako popísané nižšie) bola použitá namiesto 5-metoxy-2-metyl-4-[2
137 (trimetylsilanyl)etoxymetoxy]fenylborónovej kyseliny v kroku (viii). XH NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,60 (s, 1H) , 12,99 (š S, 1H) , 9,41 (s, 1H), 8,49 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 7,72 (š s, 1H) ,
7,52 (š s, 1H), 7,45 (s, 1H), 7,25-7,21 (m, 3H), 7,12 (d, 1H, J = 8,1 Hz), 6,73-6, 67 (m, 2H) , 2,20 (s, 3H) . Anál. (C2iH16N4O · 0,7 H2O) C, H, N. Vypočítané C, 71,45, H, 4,97, N, 15,87. Namerané: C, 71,44, H, 4,96, N, 15,77.
2-metyl-4-[2-(trimetylsilanyl)etoxymetoxy]fenylborónová kyselina bola pripravená takto:
(i) [2-(4-bróm-3-metylfenoxymetoxy)etyl]trimetylsilán bol pripravený pri 86% výťažku z 4-bróm-3-metylfenolu podlá postupu pre [2-(4-bróm-2~metoxy-5-metylfenoxymetoxy)etyl]trimetylsilán. XH NMR (300 MHz, CDC13) δ 7,39 (d, 1H, J = 8,7 Hz), 6,93 (d, 1H, J = 2,7 Hz), 6,75 (dd, 1H, J = 8,7, 2,7 Hz),
5,16 (s, 2H) , 3,74 (t, 2H, J = 8,4 Hz), 2,36 (s, 3H) , 0,95 (t, 2H, J = 8,4 Hz), 0,01 (s, 9H) . Anál. (Ci3H21BrO2Si) C, H.
Vypočítané C, 49,21, H, 6,67. Namerané: C, 49,33, H, 6,67.
(ii)
3) Η,Ο
SEM
2-metyl-4-[2-(trimetylsilanyl)etoxymetoxy]fenylborónová kyselina bola pripravená pri 52% výťažku z [2-(4-bróm-3metylfenoxymetoxy)etyl]trimetylsilánu podlá postupu pre 5138 metoxy-2-metyl-4-[2-(trimetylsilanyl)etoxymetoxy]fenylborónovú kyselinu uvedeného vyššie.
XH NMR (300 MHz, CDC13) δ 8,15 (d,
1H, J = 8,1 Hz) , 6, 98-6, 92 (m, 2H), 5,29 (s, 2H) , 3,78 (t, 2H,
8,4 Hz), 2,78 (s, 3H),
0,98 (t, 2H, J = 8,4 Hz), 0,01 (s,
9H) . Anál. (C13H23BO4S1 - H2O) C, H. Vypočítané C, 59,10, H,
8,01. Namerané: C, 59,07, H, 8,08.
Príklad 24(c)
4-[3-(lH-benzimidazol-2-yl)-lH-indazol-6-yl]-2-chlór-5- metylfenol
Pre prípravu zlúčeniny uvedenej v názve, 5-chlór-2-metyl-
4- [2-(trimetylsilanyl)etoxymetoxy]fenylborónová kyselina, pripravená, ako popísané nižšie, bola použitá namiesto 5metoxy-2-metyl-4-[2-(trimetylsilanyl)etoxy- metoxy] f enylborónove j kyseliny z postupu popísaného v príklade 24 (a), krok (viii) . ľH NMR (300 MHz, DMSO-de) δ 13,61 (s, 1H) , 13,00 (š s, 1H), 10,22 (s, 1H) , 8,51 (d, 1H, J= 8,4 Hz), 7,64 (Š s, 2H), 7,50 (s, 1H) , 7,26-7,21 (m, 4H) , 6,95 (s, 1H) , 2,19 (s, 3H).
5- chlór-2-metyl-4-[2-(trimetylsilanyl)etoxymetoxy]fenylborónová kyselina bola pripravená takto:
(i)
139
6,68 g (46,9 mmol) 2-chlór-5-metylfenolu bolo miešané v 200 ml acetonitrilu. Bolo pridané 8,5 g (47,8 mmol) N-brómsukcinimidu a reakcia bola miešaná po dobu 45 minút. Roztok bol koncentrovaný vo vákuu a opäť rozpustený v 100 ml chloroformu. Organické vrstvy boli premyté 50 ml saturovaného NaHCO3 a 50 ml solanky, usušené (MgSO4) a koncentrované vo vákuu. Purifikácia chromatografiou na silikagéle (8% zmes etylacetátu a hexánu) poskytla 7,98 g (77 %) 4-bróm-3-chlór-5metylfenolu ako číreho oleja. 1H NMR (300 MHz, CDC13) δ 7,47 (s, 1H) , 6,91 (s, 1H) , 5,52 (š s, 1H), 2,32 (s, 3H) . Anál. (C7H6ClBrO · 0,1 H2O) C, H. Vypočítané C, 37,66, H, 2,80. Namerané: C, 37,57, H, 2,82.
[2-(4-bróm-2-chlór-5-metylfenoxymetoxy)etyl]trimetylsilán bol pripravený pri 83% výťažku z 4-bróm-3-chlór-5-metylfenolu podie postupu pre [2-(4-bróm-2-metoxy-5metylfenoxymetoxy) etyl] trimetylsilán. 1H NMR (300 MHz, CDC13) δ
7,51 (s, 1H), 7,09 (s, 1H) , 5,26 (s, 2H) , 3,79 (t, 2H, J= 8,4 Hz), 2,35 (s, 3H), 0,95 (t, 2H, J = 8,4 Hz), 0,02 (s, 9H) . Anál. (Ci3H2oClBr02Si) C, H. Vypočítané C, 44, 39, H, 5,73. Namerané: C, 45,08, H, 5,91.
(iii)
140 ., 1) «BuU.THF
J--- — » ' 2)B<OM·), sem »)H1O
5-chlór-2-metyl-4-[2-(trimetylsilanyl)etoxymetoxy]- fenylborónová kyselina bola pripravená pri 54% výťažku z [2(4-bróm-2-chlór-5-metylfenoxymetoxy)etyl]trimetylsilánu podía postupu pre 5-metoxy-2-metyl-4-[2-(trimetylsilanyl)etoxymetoxy] fenylborónovú kyselinu. 1H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 8,11 (s, 1H) , 7,09 (s, 1H) , 5,37 (s, 2H) , 3,84 (t, 2H, J = 8,4 Hz),
2,76 (s, 3H), 0,98 (t, 2H, J = 8,4 Hz), 0,01 (s, 9H) . Anál. (C13H22BCIO4SÍ - H2O) C, H. Vypočítané C, 52,28, H, 6,75. Namerané: C, 51,98, H, 6,84.
Príklad 24(d)
3-lH-benzimidazol-2-yl-6-(4-hydroxy-2-metoxyfenyl)-lH-indazol
Zlúčenina z príkladu 24(d) bola pripravená podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 24 (a) okrem toho, že
4-bróm-3-metoxyfenol, pripravený, ako bolo popísané autormi Carreno et. Al., Syn. Lett., 11, 1241-42, 1997, bol použitý namiesto 4-bróm-2-metoxy-5-metylfenolu v kroku (vi). 1H NMR (300 MHz, DMSO-dg) δ 1352 (s, 1H) , 12,98 (s, 1H) , 9,63 (s, 1H) ,
8,44 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 7,72 (d, 1H, J = 6,9 Hz), 7,61(s, 1H), 7,50 (d, 1H, J = 6,9 Hz), 7,36 (dd, 1H, J = 8,4, 1,5 Hz), 7,18-7,22 (m, 3H) , 6,55 (d, 1H, J = 2,1 Hz), 6,48 (dd, 1H, J =
141
8,1, 2,1 Hz), 3,74 (s, 3H) . MS (ES) [M+H]/z vypočítané 357, namerané 357, [M-H]/z vypočítané 355, namerané 355.
Príklad 24(e)
3-lH-benzimidazol-2-yl-6-(2-etyl-4-hydroxyfenyl)-lH-indazol
OH
Zlúčenina z príkladu 24 (e) bola pripravená podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 24 (a) okrem toho, že
4-bróm-3-etyl-fenol, pripravený pri 80% výťažku podía postupu popísaného autormi Carreno et. Al., Syn. Lett., 11, 1241-42,
1997, pre syntézu 4-bróm-3-metylfenolu, bol použitý namiesto
4-bróm-2-metoxy-5-metylfenolu v kroku (vi) . 1H NMR (300 MHz, DMSO-de) δ 13,66 (s, 1H) , 13,02 (s, 1H) , 9,43 (s, 1H) , 8,49 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 7,72 (d, 1H, J = 6, 9 Hz) , 7,53 (d, 1H, J =
6,9 Hz), 7,44 (s, 1H, 7,18-7,25 (m, 3H) , 7,06 (d, 1H, J = 8,1
Hz), 6,75 (d, 1H, J = 2,1 Hz), 6,66 (dd, 1H, J = 8,1, 2,1 Hz),
2,50 (q, 2H, J = 7,5 Hz), 1,04 (t, 3H, J = 7,5 Hz). MS (ES) [M+H]/z vypočítané 355, namerané 355, [M-H]/z vypočítané 353, namerané 353.
Príklad 24(f)
3-lH-benzimidazol-2-yl-6-(2, 4-dihydroxyfenyl)-lH-indazol
142
mg (0,13 mmol) 6-(2-metoxy-4-hydroxyfenyl)-3-1Hbenzimidazol-2-yl-lH-indazolu, pripraveného v príklade 24(d), bolo zohrievané v 0,5 g pyridiniumchloridu v 180 °C po dobu 2 hodín. Reakcia bola ponechaná vychladnúť a bola zastavená 15 ml saturovaného NaHCO3 a extrahovaná 2 x 20 ml EtOAc. Organické vrstvy boli usušené (Na2SO4) a koncentrované vo vákuu. Purifikácia chromatografiou na silikagéle (60% zmes THF a hexánu) poskytla 26 mg (59 %) zlúčeniny uvedenej v názve ako
bielej pevnej látky. rH NMR (300 MHz, DMSO-de) δ 13,49 (s, 1H),
12,94 (s, 1H) , 9,49 (s, 1H), 9,39 (s, 1H), 8,43 (d, 1H, J =
8,4 Hz), 7,71 7,74 (m, 2H) , 7,50 (d, 1H, J = 6,9 Hz), 7,43
(dd, 1H, J = 8,4, 1, 2 Hz ), 7,16-7,23 (m, 3H), 6,45 (d, 1H, J =
2,1 Hz) , 6,35 (dd, 1H, J = 8,4, 2,1 Hz) . MS (ES) (M+H]/z
vypočítané 343, namerané 343, [M-H]/z vypočítané 341, namerané
341.
Príklad 24(g)
3-lH-benzimidazol-2-yl-6-(2-fenoxy-4-hydroxyfenyl)-lH-indazol
Zlúčenina z príkladu 24 (g) bola pripravená podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 24(c) okrem toho, že
143
3-fenoxyfenol bol použitý namiesto 2-chlór-5-metylfenolu v kroku (i). 3H NMR (300 MHz, DMSO-de) δ 13,54 (s, 1H) , 12,95
(s, 1H) , 9,78 (s, 1H), 8, 43 (d, 1H, J = 8, 4 Hz), 7,67-7,72 (m,
2H), 7,49 (dd, 1H, J = 6/3, 2,1 Hz), 7,43 (d, 2H, J = 8,4 Hz) ,
7,33 (t, 2H, J = 7,5 Hz) , 7, 17-7,22 (m, 2H) , 6, 96-7, 07 (m,
3H), 6, 72 (dd, 1H, J = 8,4, 2,1 Hz), 6,40 (d, 1H, J = 2,1 Hz) .
MS (ES) [M+H]/z vypočítané 419, namerané 419, [M-H]/z
vypočítané 417, namerané 417.
Príklad 24(h)
3-lH-benzimidazol-2-yl-6-(2-(2-metoxyethyl)-4-hydroxyfenyl)lH-indazol
Zlúčenina z príkladu 24 (h) bola pripravená podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 24(a) okrem toho, že {2-[4-bróm-3-(2-metoxyetyl)fenoxymetoxy]etyl}trimetylsilán, pripravený, ako popísané nižšie, bol použitý namiesto [2—(4— bróm-2-metoxy-5-metylfenoxymetoxy)etyl]trimetylsilánu v kroku (vii) . ΧΗ NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,60 (s, 1H) , 13,01 (s,
1H), 9,44 (s, 1H) , 8,49 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 7,73 (š s, 1H) ,
7,51 (š s, 1H) , 7,46 (s, 1H), 7,21 (približne d, 3H, J = 8,1
Hz), 7,09 (d, H, J = 8,1 Hz), 6,78 (d, 1H, J = 2,4Hz), 6,70 (dd, 1H, J = 8,1, 2,4 Hz), 3,40 (t, 2H, J = 7,2 Hz), 3,12 (s,
3H) , 2,75 (t, 2H, J = 7,2 Hz). MS (ES) [M+H]/z vypočítané 385, namerané 385, [M-H]/z vypočítané 383, namerané 383.
Východzia látka bola pripravená takto:
(i)
144
4-bróm-3- (2-hydroxyetyl) fenol bol pripravený pri 88% výťažku substitúciou 3-(2-hydroxyetyl)fenolu v postupe popísanom v príklade 24 (c), krok (i) . 1H NMR (300 MHz, CDCI3) δ
9,56 (s, 1H) , 7,29 (d, 1H, J = 8,7 Hz), 6,74 (d, 1H, J = 3,0 Hz), 6,55 (dd, 1H, J = 8,7, 3,0 Hz), 4,71(t, 1H, J = 5,4 Hz), 3, 52-3, 59 (m, 2H) , 2,73 (t, 2H, J= 7,2 Hz).
ii)
OlEA.CHaÔa Y
OH “'SEM
Príprava 2-[2-bróm-5-(2-trimetylsilanyletoxymetoxy)fenylu]: bol pripravený pri 65% výťažku substitúciou 4-bróm-3(2-hydroxyetyl)fenolu v postupe popísanom v príklade 24(a),
krok (vi) . XH NMR (300 MHz, CDC13) δ 7,43 (d, 1H, J = 8, 7 Hz) ,
6,97 (d, 1H, J = 3,0 Hz), 6,82 (dd, 1H, J = 8,7, 3,0 Hz) f 5,19
(s, 2H), 3,88 (q, 2H, J = 6, 6 Hz) , 3,74 (t, 2H, J = 8, 4 Hz) ,
2,99 (t, 2H, J = 6,6 Hz) , 1,42 (t, 1H, J = 6, 6. Hz) . 0, 94 (t,
2H, J = 8 ,4 Hz), -0,01 (s, 9H).
(iii)
145 {2-[4-bróm-3-(2-metoxyetyl)fenoxymetoxy]etyl}trimetylsilán: 1,9 g (6,0 mmol) 2-[2-bróm-5-(2-trimetylsilanyletoxymetoxy)fenyl]etanolu bolo pridané k roztoku 1,35 g (24 mmol) hydroxidu draselného v 16 ml DMSO. Bolo pridané 1,12 ml (18 mmol) jódmetánu a roztok bol miešaný po dobu 16 hodín. Reakcia bola nariedená 50 ml vody a extrahovaná 2 x 40 ml éteru. Organické vrstvy boli premyté 40 ml solanky, usušené (Na2SO4) a koncentrované vo vákuu. Purifikácia chromatografiou na silikagéle (10% zmes éteru a hexánu) poskytla 1,28 g {2—[4— bróm-3-(2-metoxyetyl)fenoxymetoxy]etyl}trimetylsilánu ako číreho oleja. ΣΗ NMR (300 MHz, CDC13) δ 7,40 (d, 1H, J = 8,7
Hz) , 6, 96 (d, 1H, J = 3,0 Hz), 6, 80 (dd, 1H, J = 8,7, 3,0 Hz) ,
5,18 (s, 2H) , 3,74 (t, 2H, J = 8,4 Hz) , 3,60 (t, 2H, J = 7,2
Hz) , 3,37 (s, 3H) , 2, 98 (t, 2H, J = 7,2 Hz) , 0,95 (t, 2H, J =
8,4 Hz), · -0, 01 (s, 9H) .
Príklad 24<i)
3-lH-benzimidazol-2-yl-6-(2-(2-hydroxyetyl)-4-hydroxyfenyl) lH-indazol
mg (0,26 mmol) 3-lH-benzimidazol-2-yl-6-(2-(2-metoxyetyl) -4-hydroxyfenyl)-ΙΗ-indazolu, z príkladu 24 (i), bolo rozpustené v 20 ml EtOAc a ochladené na -78 °C v argónovej atmosfére. Po kvapkách bol pridaný bromid boritý a reakcia bola ponechaná za miešania pri zohrievaní na izbovú teplotu po
146 dobu 3 hodín. Roztok bol nariedený 60 ml EtOAc a premytý saturovaným NaHCO3 a soľankou, po 20 ml. Organické vrstvy boli usušené (Na2SO4) a koncentrované vo vákuu. Purifikácia chromatografiou na silikagéle (THF) poskytla 56 mg (59 %) zlúčeniny uvedenej v názve ako bielej pevnej látky. 1H NMR (300 MHz, DMSO-de) δ 13,60 (s, 1H) , 13,01 (s, 1H) , 9,41 (s, 1H) , 8,49 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 7,71 (š s, 1H) , 7,51 (š s, 1H) , 7,46 (s, 1H), 7,21 (približne d, 3H, J = 8,1 Hz), 7,08 (d, 1H, J =
8,4 Hz), 6,77 (d, 1H, J = 2,1 Hz), 6,69 (dd, 1H, J = 8,1, 2,1 Hz), 4,57 (š s, 1H) , 3,46 (t, 2H, J = 7,2 Hz), 2,68 (t, 2H, J = 7,2 Hz). MS (ES) [M+H]/z vypočítané 371, namerané 371, [Μ-
Η]/z vypočítané 369, namerané 369.
Príklad 24(j)
3-lH-benzimidazol-2-yl-6-(2,6-dimetyl-4-hydroxyfenyl)-lH-inda- zol
Zlúčenina z príkladu 24 (j) bola pripravená podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 24(a) okrem toho, že
4-bróm-3,5-dimetylfenol bol použitý namiesto
4-bróm-2-metoxy-
5-metylfenolu v kroku (vi). 1H NMR (300 MHz, DMSO-de) δ 13,57 (s, 1H) , 12,99 (s, 1H) , 9,22 (s, 1H) , 8,52 (d, 1H, J = 8, 4
Hz), 7,72 (d, 1H, J = 6,6 Hz), 7,51 (d, 1H, J = 6,6 Hz), 7,31 (s, 1H), 7,16-7,25 (m, 2H) , 7,02 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 6,55 (s, 2H), 1,93 (s, 6H) . MS (ES) [M+H]/z vypočítané 355, namerané
355, [M-H]/z vypočítané 353, namerané 353.
147
Príklad 24(k)
3-lH-benzimidazol-2-yl-6-(2-metylsulfanyl-4-hydroxyfenyl)-1H- indazol
Zlúčenina z príkladu 24 (k) bola pripravená podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 24(c) okrem toho, že
3-metylsulfanylfenol, pripravený, ako popísané nižšie, bol použitý namiesto 2-chlór-5-metylfenolu v kroku (i). 1H NMR (300 MHz, DMSO-de) δ 13,59 (s, 1H) , 12,98 (s, 1H) , 9,64 (s, 1H) , 8,48 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 7,71 (š s, 1H) , 7,52 (približne s, 2H), 7,20-7,27 (m, 3H), 7,12 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 6,76 (d, 1H, J = 2,1 Hz), 6,65 (dd, 1H, J = 8,4, 2,1 Hz), 2,34 (s, 3H) . MS (ES) [M+H]/z vypočítané 373, namerané 373, [M-H]/z vypočítané
371, namerané 371.
Východzia látka bola pripravená takto:
(i)
acetóne
Príprava 3-metylsulfanylfenolu..5,0 g (39,7 mmol)
3-hydroxytiofenolu a 6,03 g (43,6 mmol) uhličitanu draselného boli miešané v 80 ml acetónu pri teplote 0 °C. Po kvapkách bolo pridané 2,5 ml (40 mmol) jódmetánu a reakcia bola miešaná po dobu 45 minút. Roztok bol nariedený 150 ml H2O a extrahovaný
148 x 100 ml EtOAc. Organické vrstvy boli premyté 100 ml solanky, usušené (NasSOJ a koncentrované vo vákuu. Purifikácia chromatografiou na silikagéle (25% zmes EtOAc a hexánu) poskytla 5,08 g (91 %) 3-metylsulfanylfenolu ako číreho oleja. XH NMR (300 MHz, CDC13) δ 7,15 (t, 1H, J = 8,1 Hz), 6,82 (d, 1H, J = 8,1 Hz), 6,74 (t, 1H, J = 1,8 Hz), 6,60 (dd, 1H, J =
8,1, 1,8 Hz), 4,86 (s, 1H) , 2,47 (s, 3H) .
Príklad 24(1)
3-lH-benzimidazol-2-yl-6-(2-(etoxymetyl)-5-metoxy-4hydroxyfenyl)-lH-indazol
Zlúčenina z príkladu 24(1) bola pripravená podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 24(a) okrem toho, že [2-(4-bróm-5-etoxymetyl-2-metoxyfenoxymetoxy)etyl]trimetylsilán, pripravený, ako popísané nižšie, bol použitý namiesto [2-(4-bróm-2-metoxy-5-metylfenoxymetoxy)etyl]trimetylsilánu v kroku (vii) . XH NMR (300 MHz, DMSO-de) δ 13,63 (s, 1H) , 12,99
(s, 1H) 9,15 (s, 1H) , 8,50 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 7,73 (dd, 1H,
J = 6,6, 2,1 Hz), 7, 59 (s, 1H), 7,51 (dd, 1H, J = 6,6, 2,1
Hz), 7,32 (d, 1H, J = θ/4 Hz), 7,19- 7,24 (m, 2H) , 6,94 (s,
1H), 6,91 (s, 1H), 4,22 (s, 2H), 3,81 (s, 3H), 3,39 (q, 2H, J
= 6,9 Hz), 1,13 (t, 3H, J = 6,9 Hz) . MS (ES) [M+H]/z
vypočítané 415, namerané 415 •
Východzia látka bola pripravená takto:
(i)
149
SEM-CI
ΟΙΕΑ,ΟΗ^
2-bróm-4-metoxy-5-(2-trimetylsilanyletoxymetoxy)benzaldehyd bol pripravený pri 79% výťažku substitúciou 4bróm-3-formyl-2-metoxyfenolu (Hazlet et. Al., J. Org. Chem., 27, 3253-55, 1962) v postupe popísanom v príklade 24(a), krok (vi). XH NMR (300 MHz, CDC13) Ô 10,16 (s, IH) , 7,68 (s, IH) , 7,07 (s, IH), 5,28 (s, 2H) , 3,94 (s, 3H) , 3,77 (t, 2H, J = 8,4 Hz), 0,94 (t, 2H, J = 8,4 Hz), -0,03 (s, 9H).
(ii)
DNaBH^MeQH
2) EH, KOH, DMSO
Príprava [2-(4-bróm-5-etoxymetyl-2-metoxyfenoxymetoxy)etyl]trimetylsilánu: 275 mg (7,2 mmol) borohydridu sodného bolo pridané v dávkach po dobu 10 minút k roztoku 1,3 g (3,6 mmol) 2-bróm-4-metoxy-5-(2-trimetylsilanyletoxymetoxy Jbenzaldehydu v 20 ml MeOH pri teplote 0 °C. Po 30 minútach bola reakcia nariedená 4Ό ml H2O a extrahovaná 2 x 30 ml EtOAc. Organické vrstvy boli premyté 30 ml solanky, usušené (Na2SO4) a koncentrované vo vákuu za vzniku 1,31 g [2-bróm-4metoxy-5-(2-trimetylsilanyletoxymetoxy)fenyl]metanolu čírého oleja. XH NMR (300 MHz, CDC13) δ 7,29 (s, IH), ako
7,05 (s,
IH),
5,27 (s, 2H), 4,66 (d, 2H, J = 6,6 Hz), 3,87 (s, 3H),
3, 79 (t, 2H, J = 8, 4 Hz)
0,96 (t,
2H, J = 8,4 Hz) , 0, 01 (s,
9H) .
150
Surový benzylalkohol bol miešaný s roztokom 800 mg (14,4 mmol) hydroxidu draselného v 8 ml DMSO. Bolo pridané 580 ml (7,2 mmol) jódetánu a reakcia bola miešaná po dobu 16 hodín predtým, ako bola nariedená 30 ml H20 a extrahovaná 2 x 30 ml éteru. Organické vrstvy boli premyté 20 ml solanky, usušené (Na2SO4) a koncentrované vo vákuu. Purifikácia chromatografiou na silikagéle (15% zmes EtOAc a hexánu) poskytla 1,30 g (92 %) zlúčeniny uvedené v názve ako číreho oleja. 1H NMR (300 MHz, CDC13) δ 7,29 (s, IH), 7,03 (s, IH) , 5,26 (s, 2H) , 4,48 (s, 2H), 3,85 (s, 3H), 3,79 (t, 2H, J = 8,4 Hz), 3,58 (q, 2H, J =
6,9 Hz), 1,26 (t, 3H, J = 6,9 Hz), 0,95 (t, 2H, J = 8,4 Hz), 0,01 (s, 9H) .
Príklad 24(m)
3-lH-benzimidazol-2-yl-6-(2-(hydroxymetyl)-4-etoxy-5metoxyfenyl)-lH-indazol
Zlúčenina z príkladu 24 (m) bola pripravená podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 24(a) okrem toho, že [2- (2-bróm-5-etoxy-4-metoxybenzyloxymetoxy)etyl]trimetylsilán, pripravený, ako popísané nižšie, bol použitý namiesto [2-(4bróm-2-metoxy-5-metylfenoxymetoxy)etyl]trimetylsilánu v kroku
(vii) . XH NMR (300 MHz, DMSO-de) δ 13,64 (s, IH), 13, 00 (s,
IH) , 8, 50 (d, IH, J = 8, 4 Hz), 7, 73 (d, IH, J = 8,4 Hz) , 7, 62
(s, IH), 7, 52 (dd, IH, J = 6,0, 1,8 Hz), 7,32 (dd, IH, J =
8,4, 1, 2 Hz) , 7, 19- 7,24 (m, 2H), 7,15 (s, IH), 6,91 (s, IH) ,
5, 11 (t, IH, J = 5, 1 Hz) , 4,37 (d, 2H, J = = 5,1 Hz) , 4, 08 (q,
151
2Η, J = 6,9 Hz), 3,80 (s, 3H) , 1,37 (t, 3H, J = 6,9 Hz). MS (ES) [M+H]/z vypočítané 415, namerané 415.
Východzia látka bola pripravená takto:
(i)
Príprava 4-bróm~2-metoxy-5-(2-trimetylsilanyletoxymetyl)fenolu: [2-bróm-4-metoxy-5-(2-trimetylsilanyletoxymetoxy)fenyl]metanol, po jednom týždni státia, kedy prebiehala SEM-migrácia z fenolického na benzylový alkohol za vzniku zlúčeniny uvedenej v názve. XH NMR (300 MHz, CDCI3) δ 7,04 (s,
1H) , 7, 01 (s, 1H) , 5,54 (s, 1H), 4,77 (s, 2H) , 4,57 (s, 2H),
3, 88 (s, 3H) , 3, 68 (t, 2H, J = 8,4 Hz) , 0,97 (t, 2H, J = 8,4
Hz), 0, 02 (s, 9H) .
(ii)
Príprava [2-(2-bróm-5-etoxy-4-metoxybenzyloxymetoxy)etyl]trimetylsilánu: 1,28 g (3,53 mmol)4-bróm-2-metoxy-5-(2trimetylsilanyletoxymetyl)fenolu bolo miešané s roztokom 790 mg (14,1 mmol) hydroxidu draselného v 8 ml DMSO. Bolo pridané 565 ml (7,1 mmol) jódetánu a reakcia bola miešaná po dobu 16 hodín predtým, ako bola nariedená 30 ml H2O a extrahovaná 2 x 30 ml éteru. Organické vrstvy boli premyté 20 ml solanky, usušené (Na2SO4) a koncentrované vo vákuu. Purifikácia
152 chromatografiou na silikagéle (15% zmes EtOAc a hexánu) poskytla 1,26 g (91 %) zlúčeniny uvedenej v názve ako číreho oleja. XH NMR (300 MHz, CDC13) δ 7,02 (s, 1H), 6,98 (s, 1H),
4,78 (s, 2H) , 4,60 (s, 2H) , 4,09 (q, 2H, J = 6,6 Hz), 3,86 (s, 3H) , 3,69 (t, 2H, J = 8,4 Hz), 1,46 (t, 3H, J = 6,6 Hz), 0,97 (t, 2H, J =8,4 Hz), 0,04 (s, 9H).
Príklad 24(n)
3-lH-benzimidazol-2-yl-6-(2-(hydroxymetyl)-5-metoxy-4hydroxyfenyl)-lH-indazol
OH .OH
OMe
Zlúčenina z príkladu 24(n) bola pripravená podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 24(a) okrem toho, že
6-[5-metoxy-2-hydroxymetyl-4-(2-trimetylsilanyletoxymetoxy)fenyl]-1-(2-trimetylsilanyletoxymetyl)-3-[1-(2trimetylsilanyletoxymetyl) -lH-benzimidazol-2-yl]-lH-indazol, pripravený, ako popísané nižšie, bol použitý namiesto 6—[5— metoxy-2-metyl-4-(2-trimetylsilanyletoxymetoxy)fenyl]-1-(2trimetylsilanyletoxymetyl) -3-[1-(2-trimetylsilanyletoxymetyl)lH-benzimidazol-2-yl]-ΙΗ-indazolu. XH NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ
13,59 (s, 1H), 12,95 (s, 1H) , 9,05 (s, 1H) , 8,49 (d, 1H, J =
8,4 Hz), 7,72 (dd, 1H, J = 6,3, 2,1 Hz), 7,60 (s, 1H) , 7,51 (dd, 1H, J = 6,3, 2,1 Hz), 7,31 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 7,20-7,24 (m, 2H) , 7,02 (s, 1H) , 6,87 (s, 1H) , 5,02 (t, 1H, J = 5,4 Hz),
4,32 (d, 2H, J = 5,4 Hz), 3,80 (s, 3H) . MS (ES) [M+H]/z vypočítané 387, namerané 387, [M-H]/z vypočítané 385, namerané 385.
153
Východzia látka bola pripravená takto:
(i)
Príprava 4-metoxy-5-(2-trimetylsilanyletoxymetoxy)-2trimetylstannanylbenzaldehydu: 3,36 g (9,3 mmol) 2-bróm-4metOxy-5-(2-trimetylsilanyletoxymetoxy)benzaldehydu a 5,0 g (15,3 mmol) hexametyldicínu bolo miešané v 60 ml suchého toluénu v banke probublávanej argónom. Bolo pridané 500 mg (0,45 mmol) tetrakis(trifenylfosfín)paládia(0) a reakcia bola miešaná v 100 °C po dobu 23 hodín. Reakcia bola ochladená a koncentrovaná vo vákúu. Purifikácia chromatografiou na silikagéle (5% zmes EtOAc a hexánu) poskytla 2,77 g (67 %)
4-metoxy-5-(2-trimetylsilanyletoxymetoxy)-2-trimetylstannanylbenzaldehydu ako číreho oleja. 1H NMR (300 MHz, CDCls,) δ 9,81 (dd, 1H, J = 3,0, 0,9 Hz), 7,66 (t, 1H, J = 6,6 Hz), 7,21 (t, 1H, J = 9,0 Hz), 5,35 (s, 2H) , 3,99 (s, 3H) ,
3,82 (t, 2H, J = 8,4 Hz), 0,25 (t, 9H, J = 26,7 Hz), 0,98 (t, 2H, J = 8,4 Hz), -0,01 (s, 9H) .
(ii)
Príprava [4-metoxy-5-(2-trimetylsilanyletoxymetoxy)-2trimetylstannanylfenyljmetanolu: 2,36 g (5,3 mmol)4-metoxy-5(2-trimetylsilanyletoxymetoxy) -2-trimetylstannanylbenzaldehydu
154 bolo miešané v 30 ml MeOH pri teplote 0 °C. Bolo pridané 400 mg (10,6 mmol) borohydridu sodného a reakcia bola miešaná po dobu 1 hodiny. Roztok bol nariedený 60 ml H20 a extrahovaný 2 x ml. EtOAc. Organické vrstvy boli premyté 50 ml solanky, usušené (Na2SO4) a koncentrované vo vákuu za vzniku 2,16 g (91 %) [4-metoxy-5-(2-trimetylsilanyletoxymetoxy)-2trimetylstannanylfenyljmetanolu ako čirého oleja. 3H
NMR
MHz, CDC13) δ 7,18 (t, 1H, J = 6,9 Hz), 7,03 (t, 1H,
9,3
Hz), 5,27 (s, 2H) , 4,58-4, 63 (m, 2H) , 3,89 (s, 3H),
3, 80 (t,
1, 53 (t, 1H, J = 6,0
Hz) ,
0,96 (t,
2H,
9H, J
27,3 (s,
9H) .
(iii)
Príprava 6-[5-metoxy-2-hydroxymetyl-4-(2-trimetylsilanyletoxymetoxy)fenyl]-1-(2-trimetylsilanyletoxymetyl)-3[1-(2-trimetylsilanyletoxymetyl)-lH-benzimidazol-2-yl]-1Hindazolu: 300 mg (0,48 mmol) 6-jód-l-[2-(trimetylsilanyl)etoxymetyl]-3-{1-[2-(trimetylsilanyl)etoxymetyl]-1Hbenzimidazol-2-yl}-lH-indazolu [príklad 24(a), krok (v)] a 282 mg (0,63 mmol) [4-metoxy-5-(2-trimetylsilanyletoxymetoxy)-2trimetylstannanylfenyl]metanolu boli miešané v 8 ml dioxánu v argónovej atmosfére v 98 °C po dobu 16 hodín. Reakcia bola ponechaná vychladnúť a bola nariedené EtOAc. Organické vrstvy boli premyté saturovaným NaHCO3 a solankou, usušené (Na2SO4) a koncentrované vo vákuu. Purifikácia chromatografiou na
155 silikagéle (20% zmes EtOAc a hexánu) poskytla 224 mg (60 %) 6[5-metoxy-2-hydroxymetyl-4-(2-trimetylsilanyletoxymetoxy) fenyl]-1-(2-trimetylsilanyletoxymetyl}-3-[1-(2trimetylsilanyletoxymetyl)-1HBenzimidazol-2-yl]-ΙΗ-indazolu, ako svetlo žltého oleja. 1H NMR
(300 MHz, CDC13) δ 8,70 (d, 1H, J = 8,4 Hz) , 7,89-7,92 (m, 1H) ,
7,63-7,66 (m, 2H) , 7,34-7,41 (m, 4H) , 6, 91 (s, ih: 1, 6,29 (S,
2H) , 5,83 (s, 2H) , 5,36 (s, 2H) , 4,55 (S, 2H), 3, 78-3,92 (m,
5H) , 3,59- 3, 70 (m, 4H), 0,83-1,04 (m, 6H) , 0,03 (s, 9H) , - 0, 04
(s, 9H), - 0,13 (s, 9 Hz) .
Príklad 24 (o)
3-lH-benzimidazol-2-yl-6-(3-hydroxyfenyl)-lH-indazol
Zlúčenina z príkladu 24 (o) bola pripravená podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 24(f) okrem toho, že
6-(3-metoxyfenyl)-3-lH-benzimidazol-2-yl-lH-indazol, pripravený podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 24(a) okrem toho, že 3-metoxyfenylborónová kyselina bola použitá namiesto 5-metoxy-2-metyl-4-[2-(trimetylsilanyl)etoxymetoxy]fenylborónovej kyseliny v kroku (viii), bol použitý namiesto 6-(2-metoxy-4-hydroxyfenyl)-3-lH-benzimidazol-2-ylΙΗ-indazolu. XH NMR (300 MHz, DMSO-de) δ 13,67 (s, 1H) , 13,00 (s, 1H) , 9,58 (s, 1H), 8,55 (d, 1H, J= 8,4 Hz), 7,71-7,75 (m, 2H), 7, 49-7,57 (m, 2H) , 7,30 (t, 1H, J = 7,8 Hz), 7,12-7,24 (m, 4H) , 6,80 (dd, 1H, J = 8,1, 1,5 Hz). MS (ES) [M+H]/z
156 vypočítané 327, namerané 327, [M-H]/z vypočítané 325, namerané
325.
Príklad 24(p)
3-lH-benzimidazol-2-yl-6-(2-metoxy-3-hydroxyfenyl)-lH-indazol
Zlúčenina z príkladu 24 (p) bola pripravená podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 24(a) okrem toho, že 3-bróm-2-metoxyfenol, pripravený, ako bolo popísané autormi Aristoff et al., Tet. Lett., 25, 3955-58, 1984 bol použitý namiesto 4-bróm-2-metoxy-5-metylfenolu v kroku (vi). XH NMR (300 MHz, DMSO-dg) δ 13,60 (s, 1H) , 12,97 (s, 1H), 9,37 (s, 1H), 8,52 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 7, 69-7, 74 (m, 2H) , 7,51 (dd, 1H, J = 7,8, 1,8 Hz), 7,43 (dd, 1H, J = 8,4, 1,2 Hz), 7,197,24 (m, 2H) , 7,02 (t, 1H, J = 7,8 Hz), 6,85-6, 93 (m, 2H) ,
3,50 (s, 3H) . MS (ES) [M+H]/z vypočítané 357, namerané 355, [M-H]/z vypočítané 357, namerané 355.
Príklad 25(a)
3-(3H-imidazol[4,5-c]pyridin-2-yl)-6-(4-hydroxy-2-metoxyfenyl)-lH-indazol
157
Roztok 68 mg (0,11 mmol) 6-[5-metoxy-2-metyl-4-(2trimetylsilanyletoxymetoxy)fenyl]-1-(2-trimetylsilanyletoxymetyl)-3-[3-(2-trimetylsilanyletoxymetyl)-3H-imidazo[4,5c] pyridin-2-yl]-ΙΗ-indazolu v 1,2 ml (1,2 mmol) TBAF (IM v THF) sa 150 ml (2,2 mmol) etyléndiamínu bol miešaný v 68 °C po dobu 48 hodín. Roztok bol koncentrovaný vo vákuu a purifikovaný chromatografiou na silikagéle (2:1 zmes EtOH a EtOAc). Precipitácia z acetonitrilu poskytla 21 mg (53 %) 3(3H-imidazo[4, 5-c]pyridin-2-yl)-6-(4-hydroxy-2-metoxyfenyl)ΙΗ-indazolu, ako bielej pevnej látky. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) Ô 13,70 (s, 1H), 13,49 (š s, 1H) , 9,62 (s, 1H) , 9,01 (š s, 1H) ,
8,43 (d, 1H, J = 8,7 Hz), 8,34 (d, 1H, J = 5,7 Hz), 7,64
1H) , 7,57 (š s, 1H) , 7,39 (dd, 1H, J = 8,7, 1,5 Hz), 7,21
1H, J = 8, 1 Hz) , 6,55 (d, 1H, J = 2,1 Hz), 6,49 (dd, 1H,
8,1, 2,1 Hz), 3,74 (s, 3H) . MS (ES) [m+H]/z vypočítané 358, namerané 358, [M-H]/z vypočítané 356, namerané 356.
Medziprodukty boli pripravené takto:
(i)
1)Qs CH2Cl2.MeOH
ÍJM^S
3)H*CH(OMe)9
3- (1,1-dimetoxymetyl)-6-jód-l-(2-trimetylsilanyletoxymetyl) -lH-indazol. Roztok 1,28 g (2,69 mmol) 6-jód-3-styryl-l[2-(trimetylsilanyl)etoxymetyl]-ΙΗ-indazolu [príklad 14, krok (i)] v 40 ml CH2CI2/40 ml MeOH bol miešaný v -78 °C. Reakcia bola podrobená pôsobenia ozónu, dokiaľ trvalo modré sfarbenie, a potom bola prebublávaná argónom. Bolo pridané 4 ml metylsulfidu a reakcia bola miešaná 4 hodiny pri zohrievaní na izbovú teplotu. Koncentrácia, vo vákuu poskytla surovú zmes
158 acetalu a aldehydu, ktorá bola konvertovaná kompletne na acetal miešaním v 10 ml trimetylortoformiátu s 0,8 g kyslej iónovymieňačovej živice Amberlyst 15 (vlhkej) po dobu 1 hodiny. Živica bola odstránená filtráciou a roztok bol koncentrovaný vo vákuu. Purifikácia chromatografiou na silikagéle poskytla 1,11 g (92 %) 3-(1,1-dimetoxymetyl)-6-jód-
1-(2-trimetylsilanyletoxymetyl)-lH-indazolu ako číreho oleja. ľH NMR (300 MHz, CDC13) δ 7,98 (s, 1H) , 7,68 (d, 1H, J = 8,4
Hz), 7,48 (dd, 1H, J = 8,4, 1,2 Hz), 5,77 (s, 1H) , 5,69 (s, 2H) , 3,53 (t, 2H, J = 8,4 Hz), 3,43 (s, 6H) , 0,88 (t, 2H, J =
8,4 Hz) , -0,06 (s, 9H) .
(ii)
3-(1,1-dimetoxymetyl)-6-[2-metoxy-4-(2-trimetylsilanyletoxymetoxy)fenyl]-1-(2-trimetylsilanyletoxymetyl)-1Hindazol. 1,06 g (2,37 mmol) 3-(1,1-dimetoxymetyl)-6-jód-l-(2trimetylsilanyletoxymetyl)-lH-indazolu, 0,99 g (3,32 mmol) 2metoxy-4-(trimetylsilanyletoxymetoxy)fenylborónovej kyseliny a 352 mg (1,4 mmol) uhličitanu sodného boli miešané v zmesi 15 ml benzénu, 3 ml MeOH a 1 ml vody v banke prebublávané argónom. Bolo pridané 220 mg (0,19 mmol) tetrakis(trifenylfosfín)paládia (0) a reakcia bola miešaná vo vare pod spätným chladičom po dobu 16 hodín. Reakcia bola ponechaná vychladnúť a bola nariedená 70 ml éteru. Organické vrstvy boli premyté 30 ml H2O a 30 ml solanky, usušenej
159 (Na2SO4) a koncentrovanej vo vákuu. Purifikácia chrómatografiou na silikagéle (15% zmes EtOAc a hexánu) poskytla 1,12 g (82 %) 3- (1,1-dimetoxymetyl)-6- [2-metoxy-4- (2-trimetylsilanyletoxymetoxy)fenyl]-1-(2-trimetylsilanyletoxymetyl)-lH-indazolu, ako svetlo žltého oleja. 3H NMR (300 MHz, CDC13) δ 7,91 (d, 1H, J =
8,4 Hz) , 7, 64 (s, 1H), 7,37 (dd, 1H, J = 8, 4, 1,2 Hz), 7,29
(d, 1H, J = Q, 4 Hz) , 6,71-6,77 (m, 2H), 5,82 (s, 1H), 5,75 (s,
2H) , 5,28 (s, 2H) , 3, 77-3, 83 (m, 5H) , 3,57 (t, 2H, J = 8,4
Hz) , 3, 46 (s, 6H) , 1,00 (t, 2H, J = 8,4 Hz) , 0,88 (t, 2H, J =
8,4 Hz), 0,03 (s, 9H), -0,05 (s, 9H) .
(iii)
1%TFA
CHCb
6- [2-metoxy-4- (2-trimetyl.silanyletoxymetoxy) fenyl ] -1- (2trimetylsilanyletoxymetyl)-lH-indazol-3-karbaldehyd. 1,1 g (1,92 mmol) 3-(1,1-dimetoxymetyl)-6-[2-metoxy-4-(2-trimetylsilanyletoxymetoxy)fenyl]-1-(2-trimetylsilanyletoxymetyl)-1Hindazolu bolo miešané v 20 ml 1% zmesi TFA a CH2C12 po dobu 1 hodiny pri izbovej teplote. Koncentrácia vo vákuu poskytla 1,01 g (100%) 6-[2-metoxy-4-(2-trimetylsilanyletoxymetoxy)fenyl]-1-(2-trimetylsilanyletoxymetyl)-lH-indazol-3karbaldehydu ako číreho oleja, 1H NMR (3 MHz, CDC13) δ 10,27 (s, 1H), 8,28 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 7,73 (s, 1H) , 7,55 (dd, 1H, J = 8,4, 1,2 Hz), 7,29 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 6,72-6,79 (m, 2H) ,
5,82 (s, 2H) , 5,28 (s, 2H) , 3,78-3, 84 (m, 5H) , 3,61 (t, 2H, J = 8,1 Hz), 0, 89-1, 03 (m, 4H) , 0,03 (s, 9H) , -0,05 (s, 9H) .
(iv)
160
6-[5-metoxy-2-metyl-4-(2-trimetylsilanyletoxymetoxy)fenyl] -1- (2-trimetylsilanyletoxymetyl) -3- [3- (2-trimetylsilanyletoxymetyl) -3H-imidazo[4,5-c]pyridín-2-yl]-ΙΗ-indazol. 320 mg (0,61 mmol) 6-[2-metoxy-4-(2-trimetylsilanyletoxymetoxy) fenyl]-1-(2-trimetylsilanyletoxymetyl)-lH-indazol-3karbaldehydu, 68 mg (0,62 mmol) 3,4-diaminopyridinu a 23 mg (0,73 mmol) síry bolo vložené do 2 ml suchého DMF a miešané v 90 °C po dobu 16 hodín v argónovej atmosfére. Reakcia bola ponechaná vychladnúť a bola nariedená 20 ml EtOAc. Organické vrstvy boli premyté saturovaným NaHC03 a solankou, po 15 ml, usušené (NažSOJ a koncentrované vo vákuu. Purifikácia chromatografiou na silikagéle (75% až 100% zmes EtOAc a hexánu) poskytla 78 mg (21 %) 6-[5-metoxy-2-metyl-4-(2trimetylsilanyletoxymetoxy)fenyl]-1-(2-trimetylsilanyletoxymetyl) -3-[3-(2-trimetylsilanyletoxymetyl)-3H-imidazo[4,5-
c]pyridín-2-yl]-lH-indazolu, ako bielej pevnej látky. XH NMR (300 MHz, CDC13) δ 10,69 (š s, 1H) , 9,21 (s, 1H) , 8,63 (dd, 1H, J = 8,4, 0,3 Hz), 8,50 (d, 1H, J = 5,4 Hz), 7,73 (s, 1H) , 7,47 (š s, 1H), 7,57 (dd, 1H, J = 8,7,1,2 Hz), 7,33 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 6,74-6, 80 (m, 2H), 5,80 (s, 2H), 5,29 (s, 2H) , 3,78-3,85 (m, 5H) , 3,63 (t, 2H, J = 8,1 Hz), 0,89-1,04 (m, 4H) , 0,04 (s, 9H), -0,06 (s, 9H) .
Príklad 25(b)
3- [6- (2-morfolín-4-yletylkarbamoyl)-lH-benzimidazol-2-yl]-6- (2-metoxy-4-hydroxyfenyl)-1H-indazol
161
Zlúčenina z príkladu 25(b) bola pripravená podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 25(a) okrem toho, že 3, 4-diamino-N-(2-morfolín-4-yletyl)benzamid pripravený, ako je popísané nižšie, bol použitý namiesto 3,4-diaminopyridínu v kroku (iv) . Ή NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,61 (s, 0,5H),
13,59 (s, 0,5H), 13,22 (s, 0,5H), 13,18 (s, 0,5H), 9,59 (s,
1H) , 8, 35-8, 46 (m, 2H) , 8,27 (s, 0,5H) , 8,02 (s, 0,5H), 7,71-
7,79 (m, 1,5H), 7,63 (s, 1H), 7,53 (d, 0,5H, J = 8,7 Hz) , 7,38
(d, 1H, J = 8,7 Hz), 7,21 (d, 1H, J = 8,7 Hz), ť 5,55 (d, 1H, J
= 2, 1 Hz), 6,49 (dd, 1H, J = 8,4, 2,1 Hz), 3,75 (s, 3H), 3,58
(t, 4H, J = 4,5 Hz) , 3,42 (q, 2H, J = = 6,0 Hz), 2,43-2,51 (m,
6H) . MS (ES) [M+H]/z ; vypočítané 513, namerané 513, [m-H]/z
vypočitané 511, namerané 511.
3,4-diamino-N-(2-morfolín-4-yletyl) benzamid bol pripravený takto:
BX^aeA,D»**P,tW
3,4-diamino-N-(2-morfolin-4-ylethyl)benzamid. 5 g (32,9 mmol) 3,4-diaminobenzoovej kyseliny, 5,2 ml (39,4 mmol) 4-(2aminoethyl)morfolínu, 9,2 ml (66 mmol) trietylamínu a DMAP 0,40 g (3,3 mmol) bolo vložené do 80 ml suchého DMF pri teplote 0 °C. Bolo pridané 9,45 g (49,3 mmol) EDC a reakcia bola miešaná po dobu 24 hodín pri izbovej teplote. Koncentrácia vo vákuu a purifikácia chromatografiou na silikagéle (10% zmes MeOH a CH2C12 s 0,2% NH4OH) poskytla 2,6 g
162 (31 %) 3,4-diamino-N-(2-morfolín-4-yletyl)benzamidu ako svetlo hnedej pevnej látky. *Η NMR (300 MHz, DMSO-dg) δ 7,72 (t, 1H, J = 5,4 Hz), 7,02 (d, 1H, J = 1,8 Hz), 6,92 (dd, 1H, J = 8,1,
1,8 Hz), 6,46 (d, 1H, J = 8,1 Hz), 4,89 (š s, 2H) , 4,51 (š s, 2H) , 3,55 (t, 4H, J = 4,8 Hz), 3,29 (q, 2H, J = 7,2 Hz), 2,362, 43 (m, 6H) .
Príklad 25(c)
3-[6-(4-metylpiperazín-l-yl)-lH-benzimidazol-2-yl]-6-(2metoxy-4-hydroxyfenyl)-lH-indazol
OH
Zlúčenina z príkladu 25(c) bola pripravená podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 25(a), okrem toho, že
4-(4-metylpiperazín-l-yl)benzén-1,2-diamín (Harapanhalli et al., J. Med. Chem., 39, 4804-09, 1996) bol použitý namiesto
3,4-diaminopyridínu v kroku (iv) . NMR (300 MHz, DMSO-dg) δ
13,51 (s, 0,33H), 13,38 (s, 0,67H) , 12,66 (s, 0,33H), 12,59 (s, 0, 67H), 9,58 (s, 1H) , 8,42 (d, 0,33H, J = 8,4 Hz), 8,41 (d, 0,67H, J = 8,4 Hz), 7,59 (s, 1H) , 7,55 (d, 0, 67H, J= 8,7
Hz), 7,31-7,37 (m, 1,33H), 7,20 (približne d, 1,33H, J= 8,4
Hz), 6,92-7,01 (m, 1, 67H) , 6,55 (d, 1H, J = 1,5 Hz), 6,48 (dd,
1H, J = 8,4, 2,1 Hz), 3,74 (s, 3H) , 3,12 (š s, 4H) , 2,50(š s,
4H), 2,22 (s, 3H) . MS (ES) [M+H]/z vypočítané 455, namerané
455, [M-H]/z vypočítané 453, namerané 453.
Príklad 25(d)
3- [4-(4-metylpiperazín-l-yl)-lH-benzimidazol-2-yl]-6-(2metoxy-4-hydroxyfenyl)-lH-indazol
163
Zlúčenina z príkladu 25 (d) bola pripravená podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 25(a), okrem toho, že 3-(4-metylpiperazin-l-yl)benzén-l,2-diamín (Harapanhalli et al., J. Med. Chem., 39, 4804-09, 1996), analogický k 4-izoméru, bol použitý namiesto 3,4-diaminopyridínu v kroku (iv) . XH NMR (300 MHz, DMSO-de) δ 13,41 (š s, 1H) , 12,79 (š s, 1H), 9,60 (š s, 1H), 8,37 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 7,60 (s, 1H) ,
7,36 (dd, 1H, J = 8,4, 1,2 Hz), 7,22 (d, 1H, J = 8,4 Hz),
7, 03-7,07 (m, 2H) , 6,46-6,56 (m, 3H) , 3,75 (s, 3H) , 3,62 (š s,
4H) , 2,62 (š s, 4H) , 2,28 (s, 3H) . MS (ES) [M+H]/z vypočítané
455, namerané 455, [M-H]/z vypočítané 453, namerané 453.
Príklad 25(e)
3-imidazol-2-yl-6-(2-metoxy-4-hydroxyfenyl)-lH-indazol
Zlúčenina z príkladu 25(e) bola pripravená podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 25(a), okrem toho, že 6-[5-metoxy-2-metyl-4-(2-trimetylsilanyletoxymetoxy)fenyl]-1(2-trimetylsilanyletoxymetyl)-3-imidazol-2-yl-lH-indazol bol použitý namiesto 6-[5-metoxy-2-metyl-4-(2-trimetylsilanyletoxymetoxy)fenyl]-1-(2-trimetylsilanyletoxymetyl)-3[3-(2-trimetylsilanyletoxymetyl)-3H-imidazo[4,5-c]pyridin-2164
yl]-lH-indazolu . ςΗ NMR (300 MHz, DMSO-dg) δ 13,10 (s, 1H),
12,59 (s, 1H), 9,56 (s, 1H) , 8,27 (d, 1H, J = 8,4 Hz) , 7, 53
(s, 1H), 7,25 (dd, 1H, J = 8 ,4, 1 ,2 Hz), 7,13-7,20 (m, 3H),
6,54 (d, 1H, J = 2,1 Hz) , 6,47 (dd, 1H, J = 8,4, 2,1 Hz), 3,73
(s, 3H) . MS (ES) [M+H]/z vypočítané 307, namerané 307.
Východzia látka bola pripravená takto:
0,4 ml (3,5 mmol) 40% (hmotnostných) glyoxalu v H2O bolo pridáno po kvapkách k roztoku 420 mg (0,8 mmol) 6-[2-metoxy-4(2-trimetylsilanyletoxymetoxy)fenyl]-1-(2-trimetylsilanyletoxymetyl)-lH-indazol-3-karbaldehydu, z príkladu 25(a) krok (iii) a 0,6 ml 28% vodného čpavku v 8 ml THF/8 ml MeOH a roztok bol miiešaný pri izbovej teplote po dobu 16 hodín. Reakcia bola koncentrovaná vo vákuu a rozpustená v 50 ml CHC13. Organické vrstvy boli premyté Η2Ο a solankou, po 25 ml, usušené (Na2SO4) a koncentrované vo vákuu. Purifikácia chromatografiou na silikagéle (40% zmes EtOAc a hexánu) poskytla 120 mg (27 %) 6-[5-metoxy-2-metyl-4-(2-trimetylsilanyletoxymetoxy)fenyl]-1(2-trimetylsilanyletoxymetyl)-3-imidazol-2-yl-lH-indazolu, ako číreho oleja. XH NMR (300 MHz, CDC13) δ 10,03 (s, 1H) , 8,48 (d,
1H, J = 8,4 Hz), 7,65 (s, 1H) , 7,46 (dd, 1H, J = 8,4, 1,5 Hz),
7,29-7, 48 (m, 2H) , 7,13 (d, 1H, J = 1,5 Hz), 6,73-6,78(m,
2H) , 5,73 (s, 2H) , 5,28 (s, 2H) , 3, 78-3, 86 (m, 5H) , 3,60(t,
2H, J = 8,4 Hz), 0,88-1,03 (m, 4H) , 0,03 (s, 9H) , -0,05(s,
9H) .
Príklad 25(f)
165
3-[4-(2-hydroxyetylsulfanyl)-lH-benzimidazol-2-yl]-6-(2metoxy-4-hydroxyfenyl)-ΙΗ-indazol
Zlúčenina z príkladu 25 (f) bola pripravená podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 25(a) okrem toho, že
2-(2,3-diaminofenylsulfanyl)etanol bol použitý namiesto 3,4diaminopyridínu v kroku (iv) . 1H NMR (300 MHz, DMSO-de) δ 13,51 (s, 1H) , 13,02 (s, 1H) , 9,59 (s, 1H) , 8,45 (d, 1H, J = 8,4
Hz), 7,61 (s, 1H) , 7,32-7, 40 (m, 2H) , 7,11-7,23 (m, 3H) , 6,55
(d, 1H, J = 2,4 Hz) , 6,48 (dd, 1H, J = 8,1, 2,4 Hz), 4,96 (š
s, 1H), 3,75 (s, 3H) , 3,65 (š s, 2H), 3,33 (t, 2H, J = 6,9
Hz) . MS (ES) [m+Na]/z vypočítané 455, namerané 455, [M-H]/z
vypočítané 431, namerané 431.
Východzia látka bola pripravená takto:
KjCQ.DMF
BOA:
2-(3-amino-2-nitrofenylsulfanyl)etanol. 1,12 g (6,5 mmol)
3-chlór-2-nitroanilínu, 0,60 ml (8,6 mmol) 2-merkaptoetanolu a 0,99 g (7,1 mmol) uhličitanu draselného bolo vložené do 15 ml suchého DMF a miešané v 130 °C po dobu 4 hodín. Roztok bol ponechaný vychladnúť a bol koncentrovaný vo vákuu. Purifikácia chromatografiou na silikagéle (70% zmes EtOAc a hexánu) poskytla 1,29 g (93 %) 2-(3-amino-2-nitrofenylsulfanyl)etanolu ako jasne červenej pevnej látky. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ
7,20 (t, 1H, J = 8,1 Hz), 6,80 (s, 2H) , 6,73 (dd, 1H, J = 8,4,
166
0,9 Hz), 6,63 (dd, 1H, J = 7,8, 1,2 Hz), 4,92 (t, 1H, J = 6,0 Hz), 3,58 (q, 2H, J = 6, 0 Hz) , 2,98 (t, 2H, J = 6,0 Hz) .
2-(2,3-diaminofenylsulfanyl)etanol. 1,02 g (4,8 mmol)
2-(3-amino-2-nitrofenylsulfanyl)etanolu bolo redukované hydrogenáciou s použitím 310.26 kPa (45 psi) H2 sa 180 mg 10% Pd/C v 25 ml EtOAc po dobu 6 hodín. Po filtrácii cez celit bolo rozpúšťadlo odstránené vo vákuu. Purifikácia chromatografiou na silikagéle (EtOAc) poskytla 762 mg (87 %)
2-(2,3-diaminofenylsulfanyl)etanolu ako svetlo žltej pevnej látky. 2H NMR (300 MHz, CDC13) δ 6,98 (dd, 1H, J = 7,5, 1,5 Hz), 6, 60-6, 72 (m, 2H) , 3,65 (t, 2H, J = 5,7 Hz), 3,55 (š s, 5H), 2,91 (t, 2H, J = 5,7 Hz) .
Príklad 25(g)
3-(5-metylkarbamoyl-lH-benzimidazol-2-yl)-6-(2-metoxy-4hydroxyfenyl)-lH-indazol
Zlúčenina z príkladu 25(g) bola pripravená podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 25(a), okrem toho, že
3,4-diamino-N-metylbenzamid (Kumar, et. Al. J. Med. Chem., 27, 1083-89 1984) bol použitý namiesto 3,4-diaminopyridinu v kroku (iv) . 2H NMR (300 MHz, DMSO-de) δ 13,59 (s, 0, 5H) , 13,55(s,
0,5H), 13,21 (s, 0,5H), 13,14 (s, 0,5H), 9,60 (s, 1H) ,8,389,46 (m, 2H), 8,26 (s, 0,5H), 8,03 (s, 0,5H), 7,71-7,79(m,
1,5H), 7,63 (s, 1H) , 7,52 (d, 0,5H, J = 8,4 Hz), 7,35-7,40 (m, 1H) , 7,21 (d, 1H, J = 2,1 Hz), 6,55 (d, 1H, J = 2,4 Hz), 6,49 (dd, 1H, J = 8,4, 2,4 Hz), 3,75 (s, 3H) , 2,82 (d, 1,5H,J =
167
0,5 Hz), 2,81 (d, 1,5H, J = 1,5 Hz). MS (ES) [M+H]/z vypočítané 414, namerané 414, [M-H]/z vypočítané 412, namerané 412.
Príklad 25(h)
3-(5-dimetylamino-lH-benzimidazol-2-yl)-6-(2-metoxy-4hydroxyfenyl)-lH-indazol
Zlúčenina z príkladu 25 (h) bola pripravená podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 25(a), okrem toho, že
3,4-diamino-N,N-dimety'lanilín (Cazaux, et. Al., Can. J. Chem., 71, 1236-46 1993) bol použitý namiesto 3,4-diaminopyridínu v kroku (iv) . 7H NMR (300 MHz, DMSO-de) δ 13,36 (s, 1H) , 12,51 (š s, 1, 9,58 (s, 1H), 8,42 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 7,59 (s, 1H),
7,49 (š s, 1H), 7,33 (dd, 1H, J = 8,4, 1,2 Hz) , 7,20 (d, 1H, J
= 8,1 Hz) , 6, 87 (br d, 2H, J = 8,1 Hz! 1 , 6,55 (d, 1H, J = 2,1
Hz), 6,48 (dd, 1H, J = 8,1, 2,1 Hz), 3,73 (s, 3H), 2,92 (s,
6H) . MS (ES) [M+H]/z vypočítané 400, namerané 400, [M-H]/z vypočítané 398, namerané 398.
Príklad 25(i)
3-(5-aminosulfonyl-lH-benzimidazol-2-yl)-6-(2-metoxy-4hydroxyfenyl)-lH-indazol
168
Zlúčenina z príkladu pripravená podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade
25(a), okrem toho, že namiesto 3,4-diamino3,4-diaminobenzénsulfonamid bol použitý
pyridínu v kroku (iv) . 1H NMR (300 MHz, DMSO-de)
0,5H), 13 ;,64 (s, 0,5H) , 13 ,39 (s, 0,5H), 13, 35 (s
(s, 1H) , 8,43 (d, 1H, J = 8,1 Hz) , 8,18 (d, 0, 5H,
7, 99 (d, 0, 5H, J = 1/5 Hz] 1, 7,86 (d, 0,5H, J = 8
7,72 (m, 2, 5 Hz) , 7, 29 (d, 1H, J = 8,4 Hz) , 7,20-
6,55 (d, 1H, J = 2,1 Hz ), 6,49 (dd, 1H, J = 8,4,
(s, 3H) . MS (ES) [M+H]/z vypočítané 436, namerané
namerané 434.
δ 13,67 (s,
7,28 (m,
2,1 Hz) , ,4 Hz) , , 0,5H), 9,60
436, [M-H]/z vypočítané 434,
3,75
Príklad 25(j)
3-(4-metylkarbamoyl-lH-benzimidazol-2-yl)-6-(2-metoxy-4- hydroxyfenyl)-lH-indazol
Zlúčenina z príkladu 25(i) bola pripravená podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 25(a), 2,3-diaminoN-metylbenzamid bol použitý namiesto 3,4-diaminopyridínu v kroku (iv) . XH NMR (300 MHz, DMSO-de) δ 13,71 (s, 1H) , 13,46 (s, 1H) , 9,85 (br d, 1H, J = 4,8 Hz), 9,61 (s, 1H) , 8,38 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 7,89 (dd, 1H, J = 7,5, 1,2 Hz), 7,66-7,72 (m,
169
2H) , 7, 47 (dd, 1H, J = 8,4, 1,2 Hz), 7,36 (t, 1H, J = 7,8 Hz) ,
7,23 (d, 1H, J = 8,1 Hz), 6,56 (d, 1H, J = 2,4 Hz) , 6, 50 (dd,
1H, J = 8,4, 2,4 Hz) , 3,76 (s, 3H) , 3,10 (d, 3H, J = 1,8 Hz) .
MS (ES) [m+H]/z vypočítané 414, namerané 414, [M- -H]/z
vypočítané 412, namerané 412.
2,3-diamino-N-metylbenzamid bol pripravený takto:
2-amino-N-metyl-3-nitro-benzamid.
1,8 g (9,9 mmol)
2-amino-3-nitrobenzoovej kyseliny a
1,33 g (19,8 mmol) metylamínu hydrochloridu bolo miešané v 30 ml suchého CH2CI2/5 ml DMF pri teplote 0 °C.
Bolo pridané 2,83 g (14,8 mmol) EDC a
4,92 ml (27,7 mmol) DIEA a roztok bol miešaný 3 hodiny pri zohrievaní na izbovú teplotu. Reakcia bola koncentrovaná vo vákuu a purifikovaná chromatografiou na silikagéle (8% zmes
MeOH a CHCI3) za vzniku 1,42 g (74 %) 2-amino-N-metyl-3-
nitrobenzamidu ako žltej pevnej látky. NMR (300 MHz,
DMSO-dg) δ 8,58 (š s, 1F, 8,23 (š s, 2H), 8,15 (dd, 1H, J =
8,1, 1,8 Hz), 7, 82 (dd, 1H, J = 8,1 , 1,8 Hz) , 6,68 (t, 1H, J =
8,1 Hz), 2,76 (d, 3H, J = 4,5 Hz).
2,3-diamino-N-metylbenzamid. 1,4 g (7,2 mmol) 2-aminoN-metyl-3-nitrobenzamidu bolo redukované hydrogenáciou s použitím 344.74 kPa (50 psi) H2 s 250 mg 10% Pd-C v 25 ml EtOAc po dobu 5 hodín. Po filtrácii cez celit bolo rozpúšťadlo odstránené vo vákuu. Purifikácia chromatografiou na silikagéle (10% zmes MeOH a CHC13) poskytla 1,08 mg (91 %) 2,3-diamino-
N-metylbenzamid ako svetlo žltej pevnej látky. NMR (300 MHz, CDCI3) δ 6,87 (dd, 1H, J = 7,8, 1,5 Hz), 6,76 (dd, 1H, J = 7,8,
1,5 Hz), 6,59 (t, 1H, J = 7,8 Hz), 6,14 (š s, 1H) , 4,28 (š s, 4H) , 2,95 (d, 3H, J = 5,1 Hz).
170
Príklad 26
6-(4-hydroxy-3-metoxyfenyl)-3-[E-2-(4-glycylaminofenyl) etenyl]-lH-indazol
Zlúčenina z príkladu 26 bola pripravená z východzej látky popísanej nižšie podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 1 (a) : rH NMR (300 MHz, CDC13) δ 8,29 (d, 1H), 7,80 (m, 5H), 7,58 (m, 3H) , 7,38 (s, H), 7,27 (d, 1H), 7,01 (d, 1H), 4,00 (s, 3H), 3,42 (s, 2H), LCMS (100% oblasť) Rt = 3,44 minúty (poz) [M+H]/z vypočítané 415,1, namerané 415,2.
Východzia látka bola pripravená takto:
(i)
3-jód-6-{3-metoxy-4-metoxymetoxyfenyl)-1-[2-(trimetylsilanyl) etoxymetyl] -lH-indazol bol pripravený zo zlúčeniny pripravenej v príklade l(a), krok (v), podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 10, krok (ii) : Rf sm 0,11, p 0,43 (zmes etylacetátu a hexánu 3:7), XH NMR (300 MHz, CDCI3) δ 7,71 (s, 1H), 7,55 (m, 2H) , 7,33 (m, 1H) , 7,20 (m, 2H) , 5,82 (s, 2H), 5,33 (s, 2H) , 4,02 (s, 3H) , 3,64 (t, 2H) , 3,59 (s, 3H) , 0,95 (t, 2H), -,03 (s, 9H) .
(ii)
171
3-styryl-6- (3-metoxy-4-metoxymetoxyfenyl) -1- [2- (trimetylsilanyl ) etoxymetyl] -ΙΗ-indazol bol pripravený podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 11, krok (iii) : Rf sm 0,41, p 0,35 (zmes etylacetátu a hexánu 2:8), NMR (300 MHz,
CDC13) δ 8,12 (d, 1H), 7,73 (S, 1H) , 7,62 (m, 2H), 7,51 (m, 2
hodín), 7,46 (m, 2H), 7,38 (m, 1H), 7,30 (m, 4H), 5,85 (s,
2H) , 5,38 (s, 2H), 4,03 (s, 3H) , 3,70 (t, 2H) r 3,62 (s, 3H),
0,98 (t, 2H) , -0,02 (s, 9H) .
3-karboxaldehyd-6-(3-metoxy-4-metoxymetoxyfenyl)-1-[2(trimetylsilanyl)etoxymetyl]-ΙΗ-indazol bol pripravený
podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 33 (a) , krok
(i): XH NMR (300 MHz, CDCI3) δ 10,33 (s, 1H), 8,34 (d, 1H) ,
7,82 (s, 1H), 7,65 (d, 1H) , 7,25 (m, 3H) , 5,90 (s, 2H) , 5,36
(s, 2H), 4,02 (s, 3H), 3, 67 (t, 2H), 3,51 (s, 3H) , 0, 98 (t,
2H), -0,02 (s, 9H).
(iv)
172
3-(4-nitrostyryl)-6-(3-metoxy-4-metoxymetoxyfenyl)-1-[2- (trimetylsilanyl)etoxymetyl]-lH-indazol bol pripravený podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 33 (a), krok (ii), okrem toho, že 4-nitrobenzyltrifenylfosfóniumbromid a lítiumhexametyldisilazid boli použité namiesto
2-pikolyltrifenylfosfóniumchloridu/hydridu draselného: LCMS (100% oblast) Rt = 6,89 minúty (poz) [M+H]/z vypočítané
562,4, namerané 562,4.
(v)
3-(4-nitrostyryl)-6-(3-metoxy-4-metoxymetoxyfenyl)-1Hindazol bol pripravený podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 11: FTIR (tenký film) 3335, 3178, 2954, 1592, 1512, 1338, 1257, 1136, 1257, 1136, 987 cm’1, ΧΗ NMR (300 MHz, CDC13) δ 8,22 (d, 2H, J = 8,8 Hz), 8,02 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 7,70 (d, 2H, J = 8,8 Hz), 7,58 (m, 3H) , 7,45 (dd, 1H, J = 1,3, 8,5 Hz),
7,20 (m, 4H), 7,26 (s, 2H) , 3,95 (s, 3H) , 3,53 (s, 3H) , LCMS (100% oblasť) Rt = 5,13 minúty (poz) [M+H]/z vypočítané 432,1, namerané 432,1.
(vi)
173
3-(4-aminostyryl)-6-(3-metoxy-4-metoxymetoxyfenyl)-1Hindazol bol pripravený podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 11, krok (iv) : Rf sm 0,39, p 0,26 (zmes etylacetátu a hexánu 6:4), FTIR (tenký film) 3366, 3210, 2954, 1608, 1517, 1465, 1412, 1259, 1157, 1077, 989, 912 cm1, 3H NMR (300 MHz, CDC13) δ 8,11 (d, 1H), 7,63 (s, 1H) , 7,50-7,15 (m, 8H) , 6,71 (d, 2H) , 5,36 (s, 2H) , 3,97 (s, 3H) , 3,61 (s, 3H) , LCMS (100% oblast) Rt = 4,40 minúty (poz) [M+H]/z vypočítané 402,2, namerané 402,2.
(vii)
mg (0,224 mmol) 3-(4-aminostyryl)-6-(3-metoxy-4-metoxymetoxyfenyl)-lH-indazolu bolo rozpustené v 2 ml dichlórmetánu a bolo podrobené pôsobeniu 196 mg (1,12 mmol, 5 ekv.) Bocglycínu, 82 mg (3 ekv.) DMAP a 426 mg (5 ekv.) HATU. Zmes bola ponechaná za miešania po dobu 30 minút. Zmes bola rozdelená medzi etylacetát a vodu. Organická látka bola koncentrovaná, nabraná do 5 ml metanolu a bola podrobená pôsobeniu 100 mg uhličitanu draselného. Zmes bola zohrievaná na 50 °C po dobu 3 dní. Výsledná zmes bola opäť rozdelená medzi etylacetát a vodu. Organická látka bola koncentrovaná a purifikované na silikagéle, 109 mg (66 %): Rf sm 0,32, p 0,46 (zmes etylacetátu a hexánu 6:4), XH NMR (300 MHz, CDC13) δ 8,18 (š s, 1H) , 8,03
174 (d, 1H, J = 8,1 Hz), 7,56 (m,
5,29 (s, 2H) , 5,20 (š s, 1H) , (s, 3H), 1,48 (s, 9H).
5H), 7,40 (m, 3H) , 7,20 (m, 3H)
3,98 (s, 3H) , 3,96 (d, 2H) , 3,54
Príklad 27(a)
6-fenyl-3-E-styryl-lH-indazol
345 mg (0,81 mmol) 6-fenyl-3-styryl-l-[2-(trimetylsilanyl)etoxymetyl]-ΙΗ-indazolu bolo podrobené pôsobením 16 ml (16 mmol) roztok TBAF, IM roztok v THF, a 0,53 ml (8,1 mmol) etyléndiamínu a zohrievané v 70 °C po dobu 2 hodín. Roztok bol potom naliatý do 200 ml solanky a extrahovaný 3 x 30 ml etylacetátu. Organická vrstva bola usušená nad MgSO4 a koncentrovaná pri zníženom tlaku. Purifikácia chromatografiou na silikagéle poskytla 80 mg (34 %) 6-fenyl-3-E-styryl-lHindazolu ako bielej pevnej látky: 1H NMR (300 MHz, CDCI3) δ
8,10 (d, 1H, J = 8,5 Hz), HRMS (FAB) [M+H]/z vypočítané 297,1392, namerané 297,1393. Anál, výpočet: C (85,10), H (5,44), N (9,45) .Namerané : C (85,10), H (5,46), N (9,43).
Východzia látka bola pripravená takto:
(i)
Roztok 476 mg
(1,0 mmol)
6-jód-3-styryl-l-[2-(trimetylsilanyl) etoxymetyl]-ΙΗ-indazolu, z príkladu 14 krok (i), v 3
175 ml dioxánu (odplyneného sonikáciou a prebublávanim argónom), 23 mg (0,05 mmol) Pd(PPh3)4, 302 mg (2,5 mmol) fenylborónovej kyseliny a 1,25 ml 2M vodného roztoku Na2CO3 (odplyneného ako uvedené vyššie) bol zohrievaný v 90 °C po dobu 2 hodín. Roztok potom bol nariedený 100 ml etylacetátu a premytý 2 x 20 ml solanky. Organická vrstva bola usušená nad MgSO4 a koncentrovaná pri zníženom tlaku. Purifikácia chromatografiou na silikagéle poskytla 345 mg (81 %) 6-fenyl-3-styryl-l-[2(trimetylsilanyl)etoxymetyl]-lH-indazolu ako hnedého oleja. XH NMR (300 MHz, CDC13) δ 8,09 (dd, IH, J = 8,5, 0,7 Hz), 7,75 (s, IH), 7,70 (d, IH, J = 7,0 Hz), 7, 64-7,58 (m, 2H) , 7,56-7,51 (m, 2H), 7, 50-7, 45 (m, 2H) , 7, 45-7, 36 (m, 4H), 7,34-7,27 (m, IH), 5,80 (s, 2H) , 3,73 (t, 2H, J = 8,3 Hz), 1,12 (t,. 2H, J =
8,3 Hz) .
Príklad 27(b)
6-(3-metoxyfenyl)-3-E-styryl-lH-indazol
Zlúčenina z príkladu 27 (b) bola pripravená podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 27(a) okrem toho, že 3-metoxyfenylborónová kyselina byla použitá namísto fenylboronové kyseliny v kroku (i) . XH NMR (300 MHz, MeOH-d4) δ
8,16 (d, IH, J = 8,4 Hz), 7,70 (s, IH) , 7,67-7,61 (m, 2H) , 7, 60-7, 43 (m, 3H) , 7, 43-7, 33 (m, 3H) , 7,32-7,21 (m, 3H) , 6,99-
6,92 (m, IH) , 3,88 (s, 3H) . HRMS (FAB) [M+Na]/z vypočítané
349,1317, namerané 349,1342. Analyzované s 0,1 H20, vypočítané: C (80, 50), H (5,59), N (8,55) .Namerané : C (80, 44.), H (5,49), N (8,55).
6-(4 metoxyfenyl)-3-E-styryl-lH-indazol
176
Príklad 27(c)
Zlúčenina z príkladu 27 (b) bola pripravená podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 27(a) okrem toho, že
4-metoxyfenylborónová kyselina bola použitá namiesto fenylborónovej kyseliny v kroku (i) . ΧΗ NMR (300 MHz, DMSO-d6) Ô 13,20 (s, IH) , 8,23 (d, IH, J = 8,4 Hz), 7,76-7, 64 (m, 5H) , 7,54 (s, IH), 7, 50-7,37 (m, 3H) , 7, 33-7,25 (m, IH) , 7,07 (d,
2H, J = 8,8 Hz), 3,82 (s, 3H) HRMS (FAB) [M+H]/z vypočítané
327,1497, namerané 327,1502. Anál, výpočet: C (80,96), H (5,56), N (8,58). Namerané: C (80,71), H (5,42), N (8,47).
Príklad 27(d)
6-naft-l-yl-3-E-styryl-lH-indazol
Zlúčenina z príkladu 27 spôsobom, ako bolo popísané v
1-naftalénborónová kyselina fenylborónovej kyseliny v kroku δ 10,11 (s, IH) , 8,45 (d, IH,
7,66-7,37 (m, 13H), 7,35-7,28 vypočítané 369,1368, namerané (d) bola pripravená podobným príklade 27(a) okrem toho, že bola použitá namiesto (i) . 1H NMR (300 MHz, DMSO-de) J = 8,41), 7, 97-7,87 (m, 3H) , (m, IH) . HRMS (FAB) [M+Na]/z
369,1359. Anál. výpočet: C
177 (86, 68), Η (5,32), N (8,19). Namerané: C (86, 52), H (5,32), N (8,19) .
Príklad 27(e)
6-pyridín-3-yl-3-E-styryl-lH-indazol
bola
Zlúčenina z príkladu
pripravená podobným príklade bola (a) okrem toho, že namiesto použitá kyselina spôsobom, ako bolo popísané v
3-pyridinborónová
fenylborónovej kyseliny v kroku (i) . NMR (300 MHz,
δ 8,97 (s, 1H) , 8,63 (d, 1H, J = = 4,8 Hz) , 8,30 (d, 1H,
Hz), 8,27 (d, 1H, J = 8,1 Hz) , 7,86 (s, 1H), 7,72 (d,
MeOH-dí)
H
2H, J
7,5
8,5
754-7, 42 (m, 2H), 7, 40-7, 32 (m,
HRMS (FAB) [M+H]/z vypočítané 298,1344, namerané
298,1356. Analyzované s 0,25
H2O, vypočítané: C (79,58), H
Príklad 27(f)
6-pyridin-4-yl-3-E-styryl-lH-indazol
Zlúčenina z príkladu 27 (f) bola pripravená podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 27 (a) okrem toho, že
4-pyridínborónová kyselina bola použitá namiesto fenylborónovej kyseliny v kroku (i) ľH NMR (300 MHz, MeOH-dJ
178 δ 8,69 (š s, 2H) , 8,30 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 7,96 (s, 1H) , 7,87 (d, 2H, H = 5,6 Hz), 7, 75-7, 68 (m, 3H) , 7, 68-7, 50 (m, 2H) ,
7,50-7,42 (m, 2H), 7,40-7,31 (m, 1H). HRMS (FAB) [M+H]/z vypočítané 298,1344, namerané 298,1357. Analyzované s 0,3 H2O, vypočítané: C (79,34), H (5,19), N (13,88). Namerané: C (79,14) , H (5,08) , N (13,84) .
Príklad 27(g)
6-indol-4-yl-3-E-styryl-lH-indazol
Zlúčenina z príkladu 27(g) bola pripravená podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 27(a) okrem toho, že
4-indolborónová kyselina bola použitá namiesto fenylborónovej kyseliny v kroku (i) . 1H NMR (300 MHz, MeOH-d4) δ 8,25 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 7,85 (s, 1H) , 7,75-7, 67 (m, 3H) , 7,67-7,52 (m, 2H), 7,52-7,42 (m, 3H) , 7,39-7,22 (m, 4H) , 6,72 (d, 1H, J =
3,2 Hz). HRMS (FAB) [M+H]/z vypočítané 336,1501, namerané 336,1506. Analyzované s 0,3 H2O, vypočítané: C (78,97), H (5,36), N (12,01). Namerané: C (78, 95), H (5,20), N (12,03).
Príklad 27(h)
6-[3-etoxy-4-hydroxyfenyl]-3-E-styryl-lH-indazol
179
Zlúčenina z príkladu 27 (h) bola pripravená podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 27 (a) okrem toho, že 3-etoxy-4-(2-trimetylsilanyletoxymetoxy)benzénborónová kyselina bola použitá namiesto fenylboróhovej kyseliny v kroku (i). 3H NMR (300 MHz, CDC13) δ 8,10 (d, 1H, J = 8,7 Hz), 7,74 (s, 1H), 7,74-7,16 (m, 10H) , 7,07 (d, 1H, J = 8,15 Hz), 4,27 (q, 2H, J = 14,0 Hz), 1,54 (t, 3H, J = 14,0 Hz). HRMS (FAB) [M+H]/z vypočítané 357,1603, namerané 357,1611. Analyzované s 0,2 H2O, vypočítané: C (76,73), H (5,71), N (7,78). Namerané: C (76,72) , H (5,91) , N (7, 63) .
Východzia látka bola pripravená takto:
(i)
4-bróm-2-etoxy-fenol (Smith et al., Soc. PI, 1877-78, 1992) bol konvertovaný na 3-etoxy-4-(2-trimetylsilanyletoxymetoxy) benzénborónovú kyselinu podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 24(a) krokmi (vi)-(vii). 1H NMR (300 MHz, (CDCI3) δ 7,82 (d, 1H, J = 8,0 Hz), 7,72 (s, 1H) , 7,31 (d,
1H, J = 8,1 Hz), 5,37 (s, 2H) , 4,29 (q, 2H, J = 14,0 Hz), 3,87 (t, 2H, J = 16,8 Hz), 1,54 (t, 2H, J = 14,0 Hz), 0,99 (t, 2H,
J = 16, 8 Hz) , 0, 03 (s, 9H) .
180
Príklad 27(i)
6-[3-(2-hydroxyetoxy)-4-hydroxyfenyl]-3-E-styryl-lH-indazol
Zlúčenina z príkladu 27(i) bola pripravená podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 27(a) okrem toho, že
3- [2- (trimetylsilanyletoxymetoxy)etoxy)-4-(2-trimetylsilanyletoxymetoxy)benzénborónová kyselina, pripravená z 2-(2hydroxyetoxy)fenolu (Yamaguchi et al., Bull. Chem. Soc. Jpn., 61, 2047-54, 1988) podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 24 (c), krokmi (i)-(iii), bola použitá namiesto fenylborónovej kyseliny v kroku (i) . XH NMR (300 MHz, ĽMSO-d6) δ 8,17 (d, 1H, J = 8,7 Hz), 7,73-7,17 (m, 11H), 6,92 (d, 1H, J = 8,2 Hz), 4,13 (t, 2H, J = 9,7 Hz), 3,8 (t, 2H, J = 9,7 Hz). HRMS (FAB) [M+H]/z vypočítané 373,1552, namerané 373,1563. Analyzované s 0,05 trifluóroctovou kyselinou, vypočítané: C (73,37), H (5,35), N (7,41). Namerané: C (73,11), H (5,33), N (7,39) .
Príklad 27(j)
6-(3,4-dimetoxyfenyl)-3-E-styryl-lH-indazol
Zlúčenina z príkladu 27 (j) bola pripravená podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 27(a) okrem toho, že
3,4-dimetoxyfenylborónová kyselina bola použitá namiesto
181 fenylborónovej kyseliny v kroku (i). 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8,01 (d, 1H, J· = 8,1 Hz), 7,51-7,05 (m, 11H) , 6,86 (d, 1H, J = 8,0 Hz), 3,58 (s, 3H) , 3,65 (s, 3H) . HRMS (FAB) [M+H]/z vypočítané 357,1598, namerané 357,1508. Analyzované s 0,2 H2O, vypočítané: C (76,73), H (5,71), N (7,78). Namerané: C (76, 45) , H (5,70) , N (7, 68) .
Príklad 27(k)
6-(2-metoxypyridín-5-yl)-3-E-styryl-lH-indazol
OMe
6-(2-metoxypyridín-5-yl)-3-((E)styryl)-1-(2-trimetylsilanyletoxymetyl) -lH-indazol bol konvertovaný na 6—(2— metoxypyridín-5-yl)-3-E-styryl-lH-indazol podobným spôsobom, ako bolo popísané v príkladu 27 (a) . XH NMR (300 MHz, CDC13) δ
8,53 (d, 1H, J = 2,1 Hz), 8,15 (d, 1H, J = 9,2 Hz), 7,97 (dd, 1H, J = 2,6, 8,6 Hz), 7,79 (s, 1H) , 7,74-7,34 (m, 8H) , 6,94 (d, 1H, J = 8,6 Hz). HRMS (FAB) [M+H]/z vypočítané 328,1450, namerané 328,1462. Anál, výpočet: C (77,04), H (5,23), N (12,83). Namerané: C (77,00), H (5,28), N (12,65).
Východzia látka bola pripravená takto:
(i)
Roztok 2,00 g (6,10 mmol) 5-bróm-2-metoxypyridínu, 1,15 g (6,10 mmol) hexametyldicínu a 0,28 g (0,24 mmol) Pd(PPh3)4 v 10
182 ml odplyneného dioxánu bol zohrievaný k varu pod spätným chladičom po dobu 16 hodín. 2,90 g (6,10 mmol) 6-jód-3( (E) styryl)-1-(2-trimetylsilanyletoxymetyl)-lH-indazolu bolo pridané k vyššie uvedenej zmesi, nasledované 0,35 g (0,31 mmol) Pd(PPh3)4. Reakčná zmes bola zohrievaná k varu pod spätným chladičom po dobu 16 hodín. Zmes potom bola nariedená 150 ml etylacetátu a premytá 30 ml solanky. Organické vrstvy boli usušené nad MgSO4, a potom koncentrované pri zníženom tlaku. Purifikácia chromatografiou na silikagéle poskytla 1,12 g (40 %) 6-{2-metoxypyridín-5-yl)-3-((E)styryl)-1-(2-trimetylsilanyletoxymetyl) -lH-indazolu ako žltej pevnej látky. 1H NMR (300 MHz, CDC13) δ 8,51 (d, 1H, J = 2,5 Hz), 8,50 (d, 1H, J =
9,1 Hz), 7,93 (dd, 1H, J = 2,5, 8,6 Hz), 7,69 (s, 1H) , 7,69-
7,28 (m, 8H) , 6,89 (d, 1H, J = 8,6 Hz), 5,83 (s, 2H) , 4,03 (s, 3H) , 3,64 (t, 2H, J = 8,3 Hz), 0,93 (t, 2H, J = 8,3 Hz), -0,03 (s, 9H) .
Príklad 28(a)
6-(3-hydroxyfenyl)-3-E-styryl-lH-indazol indazolu, podrobený v CH2CI2).
mmol) z príkladu pôsobeniu 1,8 ml
27(b),
Výsledný roztok bol minút, potom bol zohriatý na 0 bolo pridané ml hydrouhličitanu sodného,
6-(3-metoxyfenyl)-3-E-styryl-lH-78 °C a bol ochladený na (1,8 mmol) BBr3 (IM roztok udržovaný v -7 8 °C °C a udržovaný 3 hodiny. Potom po dobu 15 roztoku nasledované saturovaného vodného ml etylacetátu.
Organická vrstva bola premytá 20 ml solanky, a potom
183 koncentrovaná pri zníženom tlaku. Purifikácia chromatografiou na silikagéle poskytla 55 mg (59 %) 6-(3-hydroxyfenyl)-3-Estyryl-lH-indazolu ako bielej pevnej látky. 2H NMR (300 MHz, MeOH-dJ δ 8,16 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 7,71-7,62 (m, 3H), 7,61-
7,44 (m, 3H), 7, 43-7, 35 (m, 2H) , 7, 33-7,25 (m, 2H) , 7,20-7,10 (m, 2H), 6, 85-6,79 (m, 1H) , δ 13,14 (s, 1H) , 9,60 (s, 1H) , 8,20 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 7,73 (d, 2H, J = 7, 3), 7, 64-7, 52 (m, 5H) , 7, 47-7,37 (m, 3H), 7,33-7,25 (m, 1H), 6,89 (d, 2H, J = 8,6
Hz) .
Príklad 28(b)
6-(4-hydroxyfenyl)-3-E-styryl-lH-indazol
6-(4-metoxyfenyl)-3-E-styryl-lH-indazol, z príkladu 27(c), bol konvertovaný na 6-(4-hydroxyfenyl)-3-E-styryl-lH-indazol podobnýnl spôsobom, ako bolo popísané v príklade 28 (a). 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,14 (s, 1H) , 9,60 (s, 1H), 8,20 (d, 1H,
J = 8,4 Hz), 7,73 (d, 2H, J = 7,3 Hz), 7, 64-7,52 (m, 5H) ,
7, 47-7, 37 (m, 3H) , 7, 33-7,25 (m, 1H) , 6,89 (d, 2H, J = 8, 6
Hz). HRMS (FAB) [M+Na]/z vypočítané 313,1341, namerané
313,1347. Analyzované s 0,5 H20, vypočítané: C (78,48), H (5,33), N (8,72). Namerané: C (78,35), H (5,26), N (8,49).
Príklad 28(c)
6-(2-hydroxypyridin-5-yl)-3-E-styryl-lH-indazol
184
6-(2-metoxypyridín-5-yl)-3-E-styryl-lH-indazol, z príkladu 27(k), bol konvertovaný na 6-(2-hydroxypyridín-5-yl)-3-Estyryl-lH-indazol podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 28 (a) . TH NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8,22 (d, 1H, J =
8,4 Hz), 7,96 (dd, 1H, J = 2,6, 9,65 Hz), 7,81 (d, 1H, J = 2,0 Hz), 7,74-7,30 (m, 9H) , 6,50 (d, 2H, J = 9,4 Hz). HRMS (FAB) [M+H]/z vypočítané 314,1293, namerané 314,1280. Analyzované s 0,1 trifluóroctovou kyselinou, vypočítané: C (72,69), H (4,86), N (12,59). Namerané: C (72,77), H (4,81), N (12,65).
Príklad 28(d)
6-(3,4-dihydroxyfenyl)-3-E-styryl-lH-indazol
6-(3,4-dimetoxyfenyl)-3-E-styryl-lH-indazol, z príkladu 27(j), bol konvertovaný na 6-(3,4-dihydroxyfenyl)-3-E-styrylΙΗ-indazol podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 28(3).,^ NMR (300 MHz, DMSO-de) δ 9,09 (š s, 1H) , 9,07 (š s,
1H) , 8,20 (d, 1H, J = 8,5), 7,73 (d, 2H, J = 7,5 Hz), 7,56 (d,
2H, J = 10,1 Hz), 7,53 (s, 1H) , 7, 43-7,29 (m, 4H) , 7,11 (s,
1H), 7,04 (d, 1H, J = 8,2 Hz), 6,86 (d, 1H, J = 8,2 Hz). HRMS (FAB) [M+H]/z vypočítané 329,1290, namerané 329,1274.
185
Analyzované s 1,0 H2O, vypočítané: C (66, 79), H (4,73), N (7,15). Namerané: C (66, 54), H (4,56), N (7,36).
Príklad 29(a)
6-pyrid-4-yl-3-E-[2-(2,6-dichlórfenyl)etenyl]-lH-indazol
6-pyrid-4-yl-3-E-[2-(2, 6-dichlórfenyl)etenyl]-1-(2-trimetylsilanyletoxymetyl)-lH-indazol bol konvertovaný na 6pyrid-4-yl-3-E-[2-(2,6-dichlórfenyl)etenyl]-lH-indazol podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 27(a). 1H NMR (300 MHz, CDC13) δ 13,55 (s, 1H) , 8,68 (dd, 2H, J = 4, 6, 1,6 Hz), 8,21 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 7,96 (s, 1H) , 7,81 (dd, 2H, J = 4,5, 1,6 Hz), 7,66 (dd, 1H, J1 = 8,5, 1,4 Hz), 7,58 (d, 2H, J
8,0 Hz),
7,51 (s, 2H), 7,39-7,32 (FAB) [M+H]/z vypočítané
366, namerané 366.
Analyzované s 0,7 H2O, vypočítané:
N (11,09) .
Namerané: C
Východzia látka bola pripravená takto:
(i) čer*
1,20 g (5 mmol) 2,6-dichlórbenzylbromidu bolo zmiešané s 1,66 g (10 mmol) trietylfosfitu a zohrievané v 150 °C po dobu 2 hodín. Výsledná zmes potom bola destilovaná v 160 ° C pri zníženom tlaku 1,33 kPa (10 mm Hg) , aby sa odstránil nadbytok trietylfosforitanu. Bolo získané 1,46 g (100 %)
186 dietylesteru (2,6-dichlórbenzyl)fosfónovej kyseliny ako bezfarebnej kvapaliny. 1H NMR (300 MHz, CDC13) δ 7,33-7,28 (m,
2H) , 7,15-7,07 (m, 1H) , 4,14-4,02 (m, 4H) , 3,60 (d, 2H, J =
22,4 Hz), 1,27 (t, 6H, J =7,0 Hz).
Ozón bol prebublávaný cez roztok 2,13 g (5,0 mmol) 6-pyrid-4-yl-3-E-styryl-l-(2-trimetylsilanyletoxymetyl)-lfíindazolu v 25 ml THF a 25 ml MeOH v -78 °C po dobu 15 minút. Cez roztok potom bol prebublávaný argón po dobu 10 minút v -78 °C, potom bolo pridané 1,46 ml (20 mmol) dimetylsulfidu. Roztok bol ponechaný ohriať sa na izbovú teplotu a udržovaný po dobu 2 hodín. Roztok bol naliatý do 300 ml solanky, a potom extrahovaný 3 x 100 ml etylacetátu. Organické vrstvy boli usušené nad MgSO4, a pak evaporované pri zníženom tlaku. Purifikácia chromatografiou na silikagéle poskytla 2,2 g (75 %) 6-pyridín-4-yl-l-(2-trimetylsilanyletoxymetyl)-lH-indazol-3-karbaldehydu ako bielej pevnej látky. 1H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 10,39 (s, 1H) , 8,75 (d, 2H, J = 1,6 Hz), 8,45 (d, 1H, J = 2,8 Hz), 7,91 (s, 1H), 7,75-7, 66 (m, 3H) , 5,90 (s, 2H) ,
3,63 (t, 2H, J = 2,7 Hz), 0,93 (t, 2H, J = 2,8 Hz), 0,00 (s, 9H) .
(iii)
187
Roztok 582 mg (2,0 mmol) dietylesteru (2,6-dichlórbenzyl)fosfínovej kyseliny v 15 ml DMF bol ochladený na 0 °C a podrobený pôsobeniu 160 mg (4,0 mmol) NaH (60% v minerálnom oleji). Výsledný roztok bol udržovaný pri teplote 0 °C po dobu 30 minút, a potom bol podrobený pôsobeniu 353 mg (1,0 mmol) 6-pyridin-4-yl-l-(2-trimetylsilanyletoxymetyl)-lH-indažol-3karbaldehydu. Výsledný roztok bol ponechaný ohriať sa na izbovú teplotu po dobu 1 hodiny, a potom bol udržován pri izbovej teplote 2 hodiny. Roztok bol naliatý do 250 ml solanky, a potom extrahovaný 3 x 80 ml etylacetátu. Organické vrstvy boli usušené nad MgSO4, a potom koncentrované pri zníženom tlaku. Purifikácia chromatografiou na silikagéle poskytla 330 mg (67 %) 6-pyrid-4-yl-3-E-[2-(2,6-dichlórfenyl)etenyl]-1-(2-trimetylsilanyletoxymetyl-lH-indazolu ako žltého
oleja. 1H NMR (300 MHz, CDC13) δ 7,72 (dd, 2H, J = 4,6, 1,5
Hz), 8,16 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 7,84 (s, 1H), 7,62 (ss, 2H, J =
4,5,1,6 Hz), 7,60 (s, 2H) , 7,56 (dd, 1H, J = 8,5, 1,5 Hz),
7,39 (d, 1H, J = 8,1 Hz), 7,18-7,12 (m, 1H) , 3, 64 (t, 2H, J =
8,3 Hz), 0,92 (t, 2H, J =8,3 Hz), 0,00 (s, 9H) .
Príklad 29(b)
6-pyrid-4-yl-3-E-[2-(3-metylfenyl)etenyl]-lH-indazol
6-pyridín-4-yl-l-(2-trimetylsilanyletoxymetyl)-lH-indazol3-karbaldehyd bol konvertovaný na požadovaný produkt podobným
188 spôsobom, ako bolo popísané v príklade 29 (a). 1H NMR (300 MHz,
MeOH-d4) 8,88 (d, 1H, J = 6,7 Hz), 8,41-8,35 (m, 3H) , 8,16 (s,
1H), 7,80 (dd, 1H, J = 8,6, 1,6 Hz), 7, 67-7, 48 (m, 4H) , 7,35 (t, 1H, J = 7,6 Hz), 7,22-7,17 (m, 1H), 4,88 (s, 3H) . MS (FAB) [M+H]/z vypočítané 312, namerané 312. Analyzované s 0,2 H2O,
1,1 trifluóroctovou kyselinou, vypočítané C (63,27), H (4,23), N (9,54). Namerané: C (63, 08), H (4,18), N (9,80).
Príklad 29(c)
6-pyrid-4-yl-3-E-[2-(4-chlórfenyl)etenyl]-lH-indazol
Cľ
6-pyridín-4-yl-l-(2-trimetylsilanyletoxymetyl)-lH-indazol3-karbaldehyd bol konvertovaný na požadovaný produkt podobným spôsobom, ako bolo popísané v príkladu 29 (a). XH NMR (300 MHz, DMSO-de) δ 13,40 (s, 1H) , 8,67 (dd, 2H, J = 4,6, 1,6 Hz), 8,33' (d, 1H, J = 8,5 Hz), 7,92 (s, 1H) , 7,81 (dd, 2H, J = 4,6, 1,6 Hz), 7,78 (d, 2H, J = 8,5 Hz), 7, 67-7,56 (m, 3H) , 7,46 (d, 2H, J = 8,5 Hz). Analyzované s 0,15 H2O, vypočítané: C (71,81), H (4,31), N (12,56). Namerané: C (71,85), H (4,26), N (12,48).
Príklad 29(d)
6-pyrid-4-yl-3-E-[2-(bifenyl-4-yl)etenyl]-lH-indazol
189
6-pyridín-4-yl-l-(2-trimetylsilanyletoxymetyl)-lH-indazol3-karbaldehyd bol konvertovaný na zlúčeninu z príkladu 29 (d) podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 29 (a). 1H NMR (300 MHz, DMSO-de) δ 13,40 (s, 1H) , 8,68 (d, 2H, J = 4,6,1,5
Hz), 8,35 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 7,93 (s, 1H) , 7, 87-7, 79(m,
4H), 7,73 (d, 4H, J = 8,1 Hz), 7, 66-7,60 (m, 3H) , 7,45(m,
2H) , 7,41-7,34 (m, 1H) . MS (FAB) [M+H]/z vypočítané 374, namerané 374. Analyzované s 0,20 H2O, vypočítané: C (82,82), H (5,19), N (11,15). Namerané: C (82, 82), H (5,19), N (11,16).
Príklad 29(e)
6-pyrid-4-yl-3-E-[2-(3-metoxyfenyl)etenyl]-lH-indazol
6-pyridín-4-yl-l-(2-trimetylsilanyletoxymetyl)-lH-indazol3-karbaldehyd bol konvertovaný na zlúčeninu z príkladu 29 (e) podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 29(a). XH NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,39 (s, 1H) , 8,67 (d, 2H, J = 5,3 Hz),
8,33 (d, 2H, J = 8,5 Hz), 7,92 (s, 1H) , 7,81 (dd, 2H, J = 4,6,
1,5 Hz), 7, 65-7,54 (m, 3H) , 7,35-7,28 (m, 3H) , 3,83 (s, 3H) .
MS (FAB) [M+H]/z vypočítané 328, namerané 328. Analyzované s 0,20 H2O, vypočítané: C (76,20), H (5,30), N (12,70) .Namerané : C (76,17), H (5,34), N (12,65).
Príklad 29(f)
6-pyrid-4-yl-3-E-[2-(pyrid-2-yl)etenyl]-lH-indazol
190
6-pyridín-4-yl-l-(2-trimetylsilanyletoxymetyl)-lH-indazol3-karbaldehyd bol konvertovaný na zlúčeninu z príkladu 29 (f) podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 29(a). 1H NMR (300 MHz, DMSO-de) δ 8,68 (dd, 2H, J = 4,5, 1,6 Hz), 8,62 (d, 1H, J = 3,8 Hz), 8,33 (d, 1H, J = 8, 5 Hz) , 7,99 (d, 1H, J =
16,4 Hz), 7,94 (s, 1H), 7,86-7,78 (m, 3H), 7,73-7,57 (m, 3H) , 7, 32-7, 26 (m, 1H) . Analyzované s 0,05 H2O, vypočítané: C (76,26), H (4,75), N (18,72). Namerané: C (76,22), H (4,79), N (18,76) .
Príklad 29(g)
6-pyrid-4-yl-3-E-[2-(3-fluórfenyl)etenyl]-lH-indazol
6-pyridín-4-yl-l-(2-trimetylsilanyletoxymetyl)-lH-indazol3-karbaldehyd bol konvertovaný na zlúčeninu z príkladu 29 (g) podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 29 (a). 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,40 (s, 1H) , 8,68 (dd, 2H, J = 4,5, 1,6
Hz), 8,34 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 7,92 (s, 1H) , 7,81 (dd, 2H, J1 = 4,5, 1,6 Hz), 7,74-7,52 (m, 5H) , 7,49-7,40 (m, 1H) , 7,16(m, 1H) . MS (FAB) [M+H]/z vypočítané 316, namerané 316.
Anál, výpočet: C (76,17), H (4,48), N (13,33). Namerané: C (76, 07) , H (4,53) , N (13,36) .
191
Príklad 29(h)
6-pyrid-4-yl-3-E-[2-(2-fluórfenyl)etenyl]-lH-indazol
6-pyridín-4-yl-l-(2-trimetylsilanyletoxymetyl)-lH-indazol3-karbaldehyd bol konvertovaný na zlúčeninu z príkladu 29 (h) podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 29(a). XH NMR (300 MHz, DMSO-de) δ 13,43 (s, 1H) , 8,66 (dd, 2H, J = 4,5, 1,6 Hz), 8,23 (d, 1H, J = 8,2 Hz), 7, 98-7,90 (m, 2H) , 7,80 (dd,
2H, J = 4,5, 1,7 Hz), 7,73-7,54 (m, 3H) , 7,40-7,31 (m, 1H) ,
7,30-7,21 (m, 2H). MS (FAB) [M+H]/z vypočítané 316, namerané 316. Anál, výpočet: C (76,17), H (4,48), N (13,33). Namerané: C (76,12) , H (4,51) , N (13,29) .
Príklad 29(i)
6-pyrid-4-yl-3-E-[2-(3-chlórfenyl)etenyl]-lH-indazol
6-pyridín-4-yl-l-(2-trimetylsilanyletoxymetyl)-IH-indazol3-karbaldehyd bol konvertovaný na zlúčeninu z príkladu 29 (i) podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 29(a). XH NMR (300 MHz, DMSO-de) δ'13,42 (s, 1H) , 8,68 (dd, 2H, J = 4,5, 1,6 Hz), 8,35 (d, 1H, J = 8,1 Hz), 7,92 (s, 1H) , 7,86 (s, 1H) ,
7,82 (dd, 2H, J = 4,5, 1,7 Hz), 7,74-7,51 (m, 4H) , 7,43 (t, 1H, J = 7,8 Hz), 7,37-7,21 (m, 1H) . MS (FAB) [M+H]/z vypočítané
192
332, namerané 332. Anál, výpočet: C (72,40), H (4,25), N (12,67).Namerané : C (72,52), H (4,28), N (12,57).
Príklad 29(j)
6-pyrid-4-yl-3-E-[2-(2-metyltiazol-4-yl)etenyl]-lH-indazol
6-pyridin-4-yl-l-(2-trimetylsilanyletoxymetyl)-lH-indazol3-karbaldehyd bol konvertovaný na zlúčeninu z príkladu 29 (j) podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 29 (a). ľH NMR
(300 MHz, DMS0-d6) δ 13,38 (S, 1H), 8, 67 (dd, 2H, J = 4,5, 1,6
Hz), 8,25 (d, 1H, J = 8,5 Hz) , 7, 92 (s, 1H) , 7,81 (dd, 2H, J =
4,5, 1,6 Hz), 7, 70-7,50 (m, 4H), 2,72 (s, 3H). MS (FAB)
[M+H]/z vypočítané 319, namerané 319.
Analyzované s 0,15
H (4,25), N trifluóroctovou kyselinou, vypočítané: C (65,51) , (16,70). Namerané: C (65,56), H (4,37), N 16,53).
Príklad 29(k)
6-pyrid-4-yl-3-E-[2-(naftalén-2-yl)etenyl]-lH-indazol
6-pyridín-4-yl-l-(2-trimetylsilanyletoxymetyl)-lH-indazol3-karbaldehyd bol konvertovaný na zlúčeninu z príkladu 29 (k) podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 29(a). XH NMR
193
(300 MHz, DMSO-d6) δ 13,40 (s, 1H) , 8,68 (dd, 2H, J = 4,6, 1,4
Hz), 8,39 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 8,17 (s, 1H) , 8,09 -7,89 (m,
8H), 7,83 (dd, 2H, J = 4, 6, 1,6 Hz) , 7,74 (s, 2H), 7, 65 (dd,
1H, J = 8,5, 1,4 Hz), 7, 60-7, 46 (m, 4H) . MS (FAB ) [M+H]/z
vypočítané 348, namerané 348. Analyzované s 1, 05
trifluóroctovou kyselinou, vypočítané: C (67,10), H (3,89), N (9,00). Namerané: C (67,20), H (3,93), N (9,05).
Príklad 29(1)
6-pyrid-4-yl-3-E-[2-(2,3-difluórfenyl)etenyl]-lH-indazol
6-pyridín-4-yl-l-(2-trimetylsilanyletoxymetyl)-lH-indazol3-karbaldehyd bol konvertovaný na zlúčeninu z príkladu 29(1) podobným spôsobom, ako bylo popísané v príklade 29(a). 1H NMR (300 MHz, CDC13 + MeOH-d4) δ 8,68 (d, 2H, J = 5,6 Hz,), 8,02 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 7,70 (s, 1H) , 7,58 (dd, 2H, J = 4,8, 1,5 Hz), 7,57-7,39 (m, 3H) , 7,38-7,31 (m, 1H) , 7,06-6,96 (m, 2H) .
MS (FAB) [M+H]/z vypočítané 334, namerané 334. Analyzované s 0,80 H2O, vypočítané: C (69,08), H (4,23), N (12,08). Namerané: C (68,77), H (3,93), N (11,85).
Príklad 29(m)
6-pyrid-4-yl-3-E-[2-(3,5-difluórfenyl)etenyl]-lH-indazol
194
6-pyridín-4-yl-l-(2-trimetylsilanyletoxymetyl)-lH-indazol3-karbaldehyd bol konvertovaný na zlúčeninu z príkladu 29 (m) podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 29(a). 1H NMR (300 MHz, MeOH-d4) δ 8,69 (d, 2H, J = 6,3 Hz), 8,34 (d, IH, J =
8,5 Hz), 7,97 (s, IH), 7,97 (d, 2H, J = 6,3 Hz), 7,71 (d, IH, J = 10,0 Hz), 7,62 (s IH) , 7,60 (s, IH) , 7,36 (d, IH, J = 11, 11), 6, 95-6, 89 (m, IH) . MS (ES) [M+H]/z vypočítané 334, namerané 334. Anál, výpočet: C (72,06), H (3,93), N (12,61). Namerané: C (72,20), H (4,01), N (12,58).
Príklad 29(n)
6-pyrid-4-yl-3-E-[2-(bifenyl-3-yl)etenyl]-lH-indazol
6-pyridín-4-yl-l-(2-trimetylsilanyletoxymetyl)-lH-indazol3-karbaldehyd byl konvertovaný na zlúčeninu z príkladu 29 (n) podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 29(x). XH NMR (300 MHz, DMSO-de) δ 8,68 (d, 2H, J = 6,1 Hz), 8,39 (d, IH, J = 8,5), 8,04 (s, IH) , 7,92 (s, IH) , 7,82 (d, 2H, J = 6,2 Hz), 7,79-7, 37 (m, 11H) . MS (ES) [M+H]/z vypočítané 374, namerané 374. Anál, výpočet: C (83,62), H (5,13), N (11,25). Namerané: C (83, 47) , H (5,08) , N (11,32) .
Príklad 29(o)
6-pyrid-4-yl-3-E-[2-(2,6-difluórfenyl)etenyl]-lH-indazol
195
6-pyridin-4-yl-l-(2-trimetylsilanyletoxymetyl)-lH-indazol
3-karbaldehyd bol konvertovaný na zlúčeninu z príkladu 29 (o) podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 29(a). 1H NMR (300 MHz, MeOH-dJ δ 8,69 (d, 2H, J = 6,3 Hz), 8,21 (d, 1H, J =
8,6 Hz), 7,97 (s, 1H) , 7,88 (d, 2H, J = 6,3 Hz), 7,83 (d, 1H, J = 17,1 Hz), 7,71 (1H, J = 8,6 Hz), 7,65 (d, 1H, J = 17,1
Hz), 7, 40-7,35 (m, 1H) , 7,13-7,08 (m, 2H) .
MS (ES) [M+H]/z vypočítané 334, namerané 334.
Analyzované s 0,1 H2O, vypočítané:
C (71,67), H (3,97),
N (12,54).
Namerané: C (71,37), H (3,90), N (12,31) .
Príklad 29(p)
6-pyrid-4-yl-3-E-[2-(3-trifluórmetoxyfenyl)etenyl]-lH-indazol
6-pyridín-4-yl-l-(2-trimetylsilanyletoxymetyl)-lH-indazol3-karbaldehyd bol konvertovaný na zlúčeninu z príkladu 29 (p) podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 29(a). 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8,84 (d, 2H, J = 6,4 Hz), 8,43 (d, 1H, J =
8,5 Hz), 8,19 (d, 2H, J = 6,4 Hz), 8,07 (s, 1H) , 7,81-7,27 (m, 5H) , 7,78 (s, 1H) . MS (ES) [M+H]/z vypočítané 382, namerané 382. Analyzované s 1,0 trifluóroctovou kyselinou, vypočítané: C (55, 76), H (3,05), N (8,48). Namerané: C (55, 84), H (3,09), N (8,45) .
196
Príklad 29(q)
6-pyrid-4-yl-3-E-[2-(benzimidazol-2-yl)etenyl]-lH-indazol
6-pyridín-4-yl-l-(2-trimetylsilanyletoxymetyl)-lH-indazol3-karbaldehyd bol konvertovaný na zlúčeninu z príkladu 29 (q) podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 29(a). 1H NMR (300 MHz, DMSO-de) δ 8,69 (d, 2H, J = 6,1 Hz), 8,25 (d, 1H, J =
8,5 Hz), 8,03 (d, 1H, J = 16,7 Hz), 7,97 (s, 1H) , 7,84 (d, 2H, J = 6,2), 7,72 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 7, 60-7,57 (m, 2H), 7,53 (d, 1H, J = 16,7 Hz), 7,22-7,19 (m, 2H) . MS (ES) [M+H]/z vypočítané 338, namerané 338. Analyzované s 2,0 trifluóroctovou kyselinou, 0,2 H2O, vypočítané: C (52,77), H (3,08), N (12,31). Namerané: C (52,59), H (3,17), N (12,18).
Príklad 29(r)
6-pyrid-4-yl-3-E-[2-(3,4-metyléndioxyfenyl)etenyl]-lH-indazol
6-pyridín-4-yl-l-(2-trimetylsilanyletoxymetyl) -lH-indazol3-karbaldehyd bol konvertovaný na zlúčeninu z príkladu 29 (r) podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 29(a). XH NMR (300 MHz, DMSO-de) δ 8,67 (d, 2H, J = 6,1 Hz), 8,30 (d, 1H, J =
8,5 Hz), 7,89 (s, 1H), 7,81 (d, 2H, J = 6,1 Hz), 7,61 (d, 1H, J = 9,9 Hz), 7,46-7,42 (m, 3H) , 7,18 (d, 1H, J = 9,6 Hz), 6,95 (d, 1H, 8,0 Hz), 6,05 (s, 2H) . MS (ES) [M+H]/z vypočítané 342,
197 namerané 342. Anál, výpočet: C (73,89), H (4,43), N (12,31). Namerané: C (73,74), H (4,52), N (12,40).
Príklad 29(s)
6-pyrid-4-yl-3-E-[2-(2,5-difluórfenyl)etenyl]-lH-indazol
6-pyridín-4-yl-l-(2-trimetylsilanyletoxymetyl) -lH-indazol3-karbaldehyd bol konvertovaný na zlúčeninu z príkladu 29 (s) podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 29(a). 1H NMR (300 MHz, MeOH-dí) δ 8,53 (d, 2H, J = 6,0 Hz), 8,03 (d, 1H, J =
8,5 Hz), 7,60 (d, 2H, J, 2 Hz), 7, 56-7, 35 (m, 3H) , 7,34-7,26 (m, 1H), 7,03-6,93 (m, 1H) , 6,90-6,81 (m, 1H) . MS (ES) [M+H]/z vypočítané 334, namerané 334. Analyzované s 0,30 H20, vypočítané: C (70,91), H (4,05), N (12,37). Namerané: C (70, 97) , H (4,17) , N (12,37) ,
Príklad 29(t)
6-pyrid-4-yl-3-E-[2-(lH-pyrol-2-yl)etenyl]-lH-indazol
6-pyridín-4-yl-l-(2-trimetylsilanyletoxymetyl) -lH-indazol3-karbaldehyd bol konvertovaný na zlúčeninu z príkladu 29 (t) podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 29(a). 1H NMR (300 MHz, MeOH-dJ δ 8,60 (d, 2H, J = 6,3 Hz), 8,13 (d, 1H, J =
8,5 Hz), 7,86 (s, 1H) , 7,79 (d, 2H, · J = 6,2 Hz), 7,57 (dd, 1H,
198
J1 = 8,5 Hz, J2 = 1,5 Hz), 7,40 (d, 1H, J = 16,8 Hz), 7,09 (d, 1H, J = 16,7 Hz), 6, 87-6, 82 (m, 1H) , 6, 40-6,35 (m, 1H) , 6,16 (t, 1H, J = 2,9 Hz). MS (ES) [M+H]/z vypočítané 287, namerané 287. Analyzované s 0,5 etylacetátom, 0,3 tetrahydrofuránom, 0,1 hexánom, 0,1 etyléndiaminom, vypočítané: C (72,07), H (6,21), N (16,05). Namerané: C (71,95), H (6,20), N (15,76).
Východzia látka bola pripravená takto:
,H (i) Roztok 9,5 g (100 mmol) lH-pyrol-2-karbaldehydu a 500 ml THF bol ochladený v ladovom kúpeli. Bolo pridané 19,2 g (200 mmol) BuťONa a reakčná zmes bola miešaná pri teplote 0 °C po dobu 1 hodiny. Potom bolo pridané 32,7 g (150 mmol) MtsCl. Reakčná zmes bola ponechaná ohriať sa na izbovú teplotu a udržovaná po dobu 2 hodín pri izbovej teplote. Roztok potom bol podrobený pôsobeniu 100 ml saturovaného vodného NH4C1 a zmes bola naliata do 2 1 solanky. Zmes bola extrahovaná 3 x 300 ml EtOAc. Spojené organické vrstvy boli usušené nad MgSO4 a koncentrované pri zníženom tlaku. Výsledný olej bol purifikovaný chromatografiou na silikagéle za vzniku 15,7 g (57 %) 1-(2,4,6-trimetylbenzénsulfonyl)-lH-pyrol-2-karb- aldehydu ako svetlo žltého oleja. ΤΗ NMR (CDC13) δ 9,50 (s,
1H), 7, 79-7, 74 (m, 1H) , 7,12 (dd, 1H, J = 3,7, 1,8 Hz), 6,95 (s, 2H), 6,38 (t, 1H, J =3,4 Hz), 2,50 (s, 6H), 2,30 (s, 3H).
OH
MT·
199 (ii) 2,77 g (10 mmol) 1-(2,4,6-trimetylbenzénsulfonyl)-1Hpyrol-2-karbaldehydu v 100 ml THF bolo podrobené pôsobeniu 0,44 g (20 mmol) LiBH4 pri izbovej teplote. Výsledný roztok bol udržovaný pri izbovej teplote po dobu 1 hodiny. Potom bolo pridané 10 ml MeOH a výsledná zmes bola naliata do 600 ml solanky a extrahovaná 3 x 200 ml EtOAc. Spojené organické vrstvy boli usušené nad MgSO4 a koncentrované pri zníženom tlaku. Výsledný olej potom bol purifikovaný na kolóne so silikagélom za vzniku 2,43 g (870) [1-(2,4,6-trimetylbenzénsulfonyl) -lH-pyrol-2-yl]metanolu ako svetlo hnedého oleja. XH NMR (CDC13) δ 7,17 (dd, 1H, J = 3,3, 1,8 Hz), 6,99 (s, 2H) , 6, 28-6,23 (m, IH) , 6,18 (t, IH, J = 3,3 Hz), 4,42 (s, 2H) , 2,50 (s, 6H, 2,30 (s, 3H) .
MTe (iii) Roztok 1,4 g (5,0 mmol) [1-(2,4,6-trimetylbenzénsulfonyl) -lH-pyrol-2-yl)metanolu v 25 ml CHC13 bol ochladený v ladovom kúpeli. Bolo pomaly pridané 1,1 ml (15 mmol) SOC12. Roztok bol ponechaný ohriať sa na izbovú teplotu a udržovaný ďalších 45 minút. Roztok potom bol koncentrovaný pri zníženom tlaku. Bolo získané 1,5 g (100 %) 2-chlórmetyl-l-(2,4,6- trimetylbenzénsulfonyl)-ΙΗ-pyrolu ako hnédej pevnej látky. rH NMR (CDC13) δ 7,28 (dd, IH, J = 3,3, 1,7 Hz), 6,98 (s, 2H) , 6, 38-6, 34 (m, IH) , 6,19 (t, 1H, J = 3,4 Hz), 4,58 (s, 2H) ,
2,50 (s, 6H), 2,30 (s, 3H).
Príklad 29(u)
6-pyrid-4-yl-3-E-[2-(3-metylkarbamoylmetoxyfenyl)etenyl)-1Hindazol
200
6-pyridín-4-yl-l-(2-trimetylsilanyletoxymetyl)-lH-indazol3-karbaldehyd bol konvertovaný na zlúčeninu z príkladu 29 (u) podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 29(a). 1H NMR (300 MHz, MeOH-d4) δ 8,68 (d, 2H, J = 5,9 Hz), 8,51 (š s, 1H) ,
8,37 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 8,19 (s, 1H) , 7,93 (s, 1H) , 7,87 (d, 1H, J = 7,7 Hz), 7,85 (d, 2H, J = 6,1 Hz), 7,62 (d, 1H, J =
8,1 Hz), 7, 65-7,63 (m, 3H) , 7,51 (t, 1H, J = 7,6 Hz). MS (ES) [M+H]/z vypočítané 355, namerané 355. Analyzované s 0,4 trifluóroctovou kyselinou, 0,50 H2O, vypočítané: C (69,67), H (4,98), N (14,26). Namerané: C (69,78), H (5,18), N (14,08).
Príklad 30(a)
6-[3-benzamidofenoxy]-3-E-[2-(tien-2-yl)etenyl]-lH-indazol
Zlúčenina z príkladu 30(a) bola pripravená podobným spôsobom ako v príklade 6 (a) okrem toho, že (E)-3-tiofén-2ylakryloylchlorid bol použitý namiesto 3-(4-chlórfenyl)akryloylchloridu v kroku (i). 1H NMR (DMSO-de) δ 13,05 (s, 1H) ,
10, 33 (s, 1H), 8,19 (d, 1H , J = 8,8 Hz), 7,92 (d, 2H, J = 6,9
Hz) , 7,70 (d, 1H, J = 16, 5 Hz) , 7,65-7,49 (m, 6H) , 7,40 (t,
1H, J = 8 ,1 Hz), 7,35 (s, 1H, s jemným delením) , 7,20 (d, 1H,
J = 16, 5 Hz) , 7, 10 (m, 1H) , 7, 04 (s, 1H), 6,98 (d, 1H, J = 8,8
Hz) , 6,86 (s, 1H, J = 9,8 Hz) . Anál. výpočet pre C26H19N3O2S ·
201
0,6 H2O: C, 69, 65, Η, 4,54, N, 9,37, S, 7,15. Namerané: C,
69,77, H, 4,45, N, 9,52, S, 7,02.
Príklad 30(b)
6-[3-(l-acetylpiperidín-4-ylkarboxamido)fenoxy]-3-E-[2-(4chlórfenyl)etenyl]-lH-indazol
Cl-^sss/ _ N-NH
*
Zlúčenina z príkladu 30 (b) bola pripravená podobným
spôsobom, ako bol popísaný pre príklad 6 (a) okrem toho, že
l-acetylpiperidín-4-karboxylová kyselina a HATU boli použité namiesto benzoylchloridu v kroku (ii) . 1H NMR (DMSO-d6) (J =
8,6 Hz) δ 7,76, (d, J = 8,6 Hz), 7,53 (d, J = 6,2 Hz), 7,46 (d, J = 8,4 Hz), 7,37 (m, 3H), 7,01 (s, 1H, s jemným delením),
6,97 (d, J = 8,8 Hz), 6,78 (d, J = 7,7 Hz), 4,38 (m, 1H) , 3,85 (m, 1H), 3, 09-2, 96 (m, 1H) , 2,58 (m, 2H) , 1,99 (s, 3H) , 1,77 (m, 2H) , 1,55 (m, 1H) , 1,37 (m, 1H) . Anál, výpočet pre C29H27CIN4O3 · 1/3 H2O: C, 64,69, H, 5,54, N, 10,41. Namerané: C, 64, 64, H, 5,51, N, 10,23.
Príklad 30(c)
6- [3-benzamidofenoxy]-3-E-[2-(fur-2-yl)etenyl]-lH-indazol
202
Zlúčenina z príkladu 30(c) bola pripravená podobným spôsobom ako v príklade 6 (a) okrem toho, že (E)-3-furán-2ylakryloylchlorid, pripravený podía Collect, Czech. Chem. Comm., 52, 409-24, 1987), bol použitý namiesto 3-(4chlórfenyl)akryloylchloridu v kroku (i). 1H NMR (DMSO-de) δ 13,00 (s, 1H) , 10,32 (s, 1H) , 8,14 (d, 1H, J = 8,8 Hz), 7,91 (d, 2H, J = 7,0 Hz), 7,73 (s, 1H), 7,70-7,51 (m, 5H), 7,40 (t,
1H, J = 8,4 Hz), 7,30 (AB, 2H, J = 16,7 Hz), 7,04 (s, 1H) ,
6,98 (d, 1H, J = 8,7 Hz), 6,86 (d, 1H, J = 8,0 Hz), 6,65 (s, 1H, s jemným delením), 6,60 (s, 1H, s jemným delením). Anál. výpočet pre C26H19N3O2 · 0,7 H20: C, 71,94, H, 4,74, N, 9,68. Namerané: C, 72,17, H, 4,83, N, 9,44.
Príklad 30(d)
6-[3-(indol-4-ylkarboxamido)fenoxy]-3-E-styrylindazol
z príkladu 30 (d)
Zlúčenina bola pripravená podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 30 (a) s použitím
3-(styryl-lH-indazol-6-yloxy)fenylamínu namiesto 3-(3-styryl-
4,5-dihydro-lH-indazol-6-yloxy)fenylamínu a lH-indol-4-karboxylovej kyseliny namiesto benzoovej kyseliny v kroku (ii). TH NMR (DMSO-de) δ 12,99 (s, 1H) , 11,33 (s, 1H) , 10,24 (s, 1H) ,
8,22 (d, 1H, J = 8,7 Hz), 7,72-7,38 (m, 10H), 7,30 (d, 1H, J =
7,1 Hz), 7,19 (m, 2H) , 7,04 (m, 3H) , 6,82 (m, 2H) . Anál, výpočet pre C30H22N4O2 · 0,6 H2O: C, 74, 86, H, 4,86, N, 11,64.
Namerané: C, 74,90, H, 5,01, N, 11,33.
Príklad 30(e)
203
6-[3-((l-etyl-3-metyl-lH-pyrazol-5-yl)karboxamido)fenoxy]-3-Estyrylindazol
Zlúčenina z príkladu 30(e) bola pripravená podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 30 (a) s použitím
3-(styryl-lH-indazol-6-yloxy)fenylaminu namiesto 3-(3-styryl-
4,5-dihydro-lH-indazol-6-yloxy)fenylaminu a l-etyl-3-metyl-lHpyrazol-5-karboxylovej kyseliny namiesto benzoovej kyseliny v kroku (ii).
Príklad 31(a)
6-[3-benzamidofenoxy]-3-E-[2-(pyridín-2-yl)etenyl]-lH-indazol
K miešanému roztoku 492 mg (1,13 mmol) 6-[3-benzamidofenoxy] -3-E-[2-(pyridín-2-yl)etenyl]-4,5-dihydro-lH-indazolu v 15 ml 1,4-dioxánu bolo pridané 386 mg (1,7 mmol) 2,3-dichlór-5,6-dikyano-l,4-benzochinónu (DDQ). Reakčná zmes bola miešaná . po dobu 30 minút pri izbovej teplote, potom bola naliata do saturovaného roztoku NaHCO3 a EtOAc. Vrstvy boli oddelené a vodná vrstva bola opäť extrahovaná EtOAc. Spojené organické vrstvy boli premyté postupne saturovaným roztokom NaHCO3 a saturovaným roztokom NaCl, usušené nad MgSO4 a koncentrované pri zníženom tlaku. Zvyšok bol podrobený veľmi rýchlej chromatografii na silikagéle za elúcie zmesí CH2C12/EtOAc:MeOH (1:1:0,1). Získaný olej bol triturovaný zo
204 zmesi EtOAc a hexánu za vzniku 420 mg (86 %) zlúčeniny uvedenej v názve ako žltohnedej pevnej látky. 1H NMR (DMSO-de) Ô 13,12 (s, 1H) , 10,30 (s, 1H) , 8,60 (d, 1H, J = 3,8 Hz), 8,22 (d, 1H, J = 8,8 Hz), 7,93 (m, 3H), 7,82 (t, 1H, J = 7,7 Hz), 7, 68-7,49 (m, 7H) , 7,40 (t, 1H, J = 8,1 Hz), 7,27 (m, 1H) , 7,08 (s, 1H), 7,03 (s, 1H) , 7,03 (d, 1H, J= 8,7 Hz), 6,87 (d, 1H, J = 8,1 Hz, s jemným delením). Anál, výpočet pre C27H20N4O2 • 0,65 EtOAc: C, 72, 59, H, 5,19, N, 11,44 .Namerané: C, 72, 34, H, 5,11, N, 11,82.
Východzia látka bola pripravená takto:
Krok (i)
1)UHMDS
2) hydrochlorid (E)-3-pyridin-2ylakroylchtoridu
3) NA · HjO
Roztok 4,00 g (10,9 mmol) 3-[3-(benzhydrylidénamino) fenoxy) cyklohex-2-enónu v 20 ml THF bol pridaný pomaly k roztoku 36 ml LiHMDS (1,0 M roztok v THF) pri teplote 78 °C. 15 minút potom, čo bolo pridávanie ukončené, bol pridaný hydrochlorid (E)-3-pyridín-2-ylakryloylchloridu a miešanie pokračovalo v 78 °C po dobu 30 minút. Reakcia bola zastavená saturovaným roztokom NH4C1 a extrahovaná 3 x EtOAc. Spojené organické vrstvy boli premyté saturovaným roztokom NaCI, usušené nad MgSO4 a koncentrované pri zníženom tlaku. Zvyšok bol podrobený veľmi rýchlej chromatografii na silikagéle za elúcie zmesí hexánu a EtOAc (2:1). Vhodné frakcie boli koncentrované pri zníženom tlaku a rozpustené v 8 ml zmesi EtOH a HOAc (1:1) . K tomuto roztoku bolo v 80 °C pridané 3,4 ml (70,0 mmol) hydrátu hydrazínu. Po 15 minútach bola všetka východzia látka spracovaná a reakčná zmes bola opatrne naliata do saturovaného NaHCO3 a extrahovaná 2 x EtOAc.
205
Spojené organické vrstvy boli premyté saturovaným roztokom NaCI, usušené nad MgSO4 a koncentrované pri zníženom tlaku. Zvyšok bol podrobený veľmi rýchlej chromatografii na silikagéle za elúcie zmesí CH2Cl2/MeOH (9:1) za vzniku 676 mg (19 %) 6-(3-aminofenoxy)-3-E-[2-(pyridin-2-yl)etenyl)-4,5-
dihydro-lH-indazolu . XH NMR (DMSO-d6) δ 12,51 (s, 1H) , 8, 57 (d,
1H, J = 3,8 Hz) , 7, ,78 (t, 1H, J = 7,8 Hz) , 7,51 (m, 2H) , 7,25
(m, 1H) , 7,05 (m, 2H) , 6,35 (d, 1H, J = 7,9 Hz, s j emným
delením), 6,32 (t, 1H, J = 2,1 Hz) , 6, 23 (d, 1H, J = 7, 9 Hz),
5,54 (s, 1H), 5,23 (s, 2H) , 2, 95 (t, 2H, J = 8,2 Hz) , 2, 60 (t,
2H, J = 8,2 Hz), MS [M+H]/z vypočítané 331. N amer ané : 331.
Anál. výpočet pre C20H! θΝ4Ο · 0,15 H2O: C, 72,12, H, 5, 54, N,
16,82. Namerané: C, 72, 11, H, 5,55, N, 16,61.
Krok (ii)
K miešanému roztoku 350 mg (1,06 mmol) dihydroanilínu a 776 mg (6,36 mmol) benzoovej kyseliny v 15 ml DMF bolo pridané
2,42 g (6,36 mmol) HATU a 1,8 ml (12,71 mmol) NEt3. Reakčná zmes bola zohrievaná v 50°C po dobu 1,5 hodiny, ochladená a naliata do zmesi ľadu a saturovaného roztoku NaCI. Ppt bol zbieraný vákuovou filtráciou, premytý H2O a usušený na vzduchu. K tomuto filtračnému koláči rozpustenému v 10 ml zmesi MeOH a THF (1:1) bolo pridané 650 mg K2CC>3 a 1 ml H2O. Po 1 hodine bola reakčná zmes naliata do saturovaného roztoku NaCI a extrahovaná 2 x EtOAc. Spojené organické vrstvy boli premyté saturovaným roztokom NaCI, usušené nad MgSO4 a koncentrované pri zníženom tlaku. Zvyšok bol podrobený veľmi rýchlej chromatografii na silikagéle za elúcie zmesí CH2Cl2/EtOAc/MeOH
206 (1:1:0,1) za vzniku 333 mg (72 %) 6-[3-benzamidofenoxy]-3-E[2-(pyridín-2-yl)etenyl]-4,5-dihydro-lH-indazolu. 1H NMR (DMSO-de) δ 12,58 (š s, 1H) , 10,34 (s, 1H) , 8,57 (d, 1H, J =
3,8 Hz), 7,95 (d, 2H, J = 6,8 Hz), 7,81-7,70 (m, 2H), 7,63-
7,50 (m, 6H) , 7,40 (t, 1H, J = 8,1 Hz), 7,25 (m, 1H), 7,09 (d,
1H, J = 16,3 Hz), 6,89 (d, 1H, J = 8,0 Hz), 5,64 (s, 1H) , 2,99 (t, 2H, J = 8,1 Hz), 2,66 (t, 2H, J = 8,1 Hz). Anál, výpočet pre C27H22N4O2 · 0,1 CH2C12: C, 73, 48, H, 5,05, N, 12,65. Namerané: C, 73,48, H, 5,05, N, 12,48.
Príklad 31(b)
6-[3-((1,5-dimetyl-lH-pyrazol-3-yl)karboxamido)fenoxy]-3-E-[2(pyridin-2-yl)etenyl]-lH-indazol
Zlúčenina z príkladu 31(b) bola pripravená podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 31(a) okrem toho, že
1,5-dimetyl-lH-pyrazol-3-karboxylová kyselina bola použitá namiesto benzoovej kyseliny v kroku (ii). 1H NMR (DMSO-de) δ
13,13 (s, 1H), 10,07 (s, 1H) , 8,60 (d, 1H, J = 4,3 Hz), 8,21 (d, 1H, J = 8,7 Hz), 7,93 (d, 1H, J = 16,3 Hz), 7,82 (t, 1H, J = 7,4 Hz), 7,69 (m, 3H), 7,56 (d, 1H, J = 16,3 Hz), 7,32 (m, 2H) , 7,05 (s, 1H) , 7,01 (d, 1H, J = 8,7 Hz), 6,80 (m, 1H) ,
6,52 (s, 1H) , 3,81 (s, 3H) 2,29 (s, 3H) . Anál. výpočet pre C26H22N6O2 · 0,1 CH2Cl2/0,l hexán: C, 68, 58, H, 5,09, N, 17,97.
Namerané: C, 68,26, H, 5,25, N, 17,61.
Príklad 31(c)
207
6- [3- ( (5-inetylsulfonyltien-2-yl) karboxamido) fenoxy] -3-E- [2(pyridin-2-yl)etenyl]-lH-indazol
Zlúčenina z príkladu 31(c) bola pripravená podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 31 (a) okrem toho, že
5-metánsulfonyl-tiofén-2-karboxylová kyselina bola použitá namiesto benzoovej kyseliny v kroku (ii) . 1H NMR (DMSO-de) δ
13,17 (s, 1H) , 10,58 (s, 1H) , 8,61 (d, 1H, J = 4,0 Hz), 8,24 (d, 1H, J = 8,8 Hz), 8,05 (d, 1H, J = 4,1 Hz), 7,97-7,79 (m,
3H), 7,68 (d, 1H, J= 7,8 Hz), 7, 60-7,48 (m, 3H) , 7,43 (t, 1H,
J = 8,2 Hz), 7,28 (m, 1H) , 7,10 (s, 1H, s jemným delením), 7,00 (d, 1H, J = 8,7 Hz), 6,92 (d, 1H, J - 8,1 Hz, s jemným delením), 3,41 (s, 3H) . Anál, výpočet pre C26H20N4O4S2 · 0,4
EtOAc: C, 60, 07, H, 4,24, N, 10,15, S, 11,62. Namerané: C, 60,22, H, 4,48, N, 10,05, S, 11,49.
Príklad 31(d)
6-[3-((l-etyl-3-metyl-lH-pyrazol-5-yl)karboxamido)fenoxy]-3-E- [2-(pyridín-2-yl)etenyl]-lH-indazol
208
Zlúčenina z príkladu 31(d) bola pripravená podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 31(a) okrem toho, že l-etyl-3-metyl-lH-pyrazol-5-karboxylová kyselina bola použitá namiesto benzoovej kyseliny v kroku (ii) . 1H NMR (DMSO-d6) δ 13,15 (s, 1H) , 10,18 (s, 1H) , 8,61 (d, 1H, J = 3,7 Hz), 8,22 (d, 1H, J = 8,8 Hz), 7,94 (d, 1H, J = 16,3 Hz), 7,82 (t, 1H, J = 7,5 Hz), 7,67 (d, 1H, J = 7,7 Hz), 7,55 (m, 3H) , 7,40 (t,
1H, J = 8,1 Hz), 7,28 (m, 1H), 7,06 (s, 1H), 7,01 (d, 1H, J =
8,8 Hz), 6,89 (d, 1H, J = 7,9 Hz), 6,78 (s, 1H) , 4,38 (q, 2H, J = 7,1 Hz), 2,19 (s, 3H) , 1,29 (t, 3H, J = 7,1 Hz). Anál, výpočet pre C27H24N6O2 · 0,6 EtOAc: C, 68,25, H, 5,61, N, 16,24. Namerané: C, 68,28, H, 5,88, N, 16,01.
Príklad 31(e)
6-[3-((l-metylimidazol-2-yl)karboxamido)fenoxy]-3-E-[2(pyridín-2-yl)etenyl]-lH-indazol
Zlúčenina z príkladu (e) bola pripravená podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 31 (a) l-metyl-lH-imidazol-2-karboxylová kyselina okrem, toho, že bola použitá namiesto benzoovej kyseliny v kroku (ii). ΧΗ NMR (DMSO-dg) δ
13,1 3 (s, 1H) , 10,47 (s, 1H) , 8,60 (d , 1H, J = 3,9 Hz), 8,21
(d, 1H, J = 8,7 HZ) , 7,93 (d, 1H, J = 16,3 Hz) , 7,82 (t, 1H, J
= 7, 6 Hz) , 7,65 (m, 3H) , 7,56 (d, 1H, J = 16, 3 Hz) , 7,43 (s,
1H) , 7,37 (t, 1H, J = 8, 1 Hz), 7, 28 (m, 1H) , 7,04 (m, 3H) ,
6, 84 (d, 1H, J = 7, 7 Hz ), 3,95 ( s, 3H) . Tinal . výpočet pre
C25H20N6O2
0,4 H2O: C, 67,49, H, 4,80,
N, 18,65. Namerané: C,
67, 68, H, 4,73, N, 18,94.
209
Príklad 31(f)
6-[3-((l-etyl-3-metyl-lH-pyrazol-5-yl)karboxamido)fenoxy]- 3E-[2-(1,2-dimetyl-lH-imidazol-4-yl)etenyl]-lH-indazol
Zlúčenina z príkladu 31(f) bola pripravená podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 31(a) okrem toho, že hydrochlorid (E)-3-(1,2-dimetyl-lH-imidazol-4-yl)akryloyl chlorid bol použitý namiesto hydrochloridu (E)-3-pyridín-2ylakryloylchloridu v kroku (i) a l-etyl-3-metyl-lH-pyrazol-5karboxylová kyselina bola použitá namiesto benzoovej kyseliny v kroku (ii) XH NMR (DMSO-de) δ 12,82 (s, 1H) , 10,17 (s, 1H),
8,05 (d, 1H, J = 8, .8 Hz), 7,58 (d, 1H, , J = 8, 4 Hz), 7,48 (s,
1H), 7, 38 (t, 1H, J = 8,1 Hz), 7,25 (s, 2H), 7,20 (s, 1H),
7,01 (s, 1H), 6,92 (d, 1H, J = 8,7 Hz] ), 6, , 85 (d, 1H, J = 8,7
Hz) , 6,78 (s, 1H), 4,37 (q, 2H, J = 7,0 Hz) , 3, 56 (s, 3H),
2,31 (s, 3H), 2,19 (s, 3H), 1,29 (t, 3H, J = 7,0 Hz ) . Anál.
výpočet pre C27H27N7O2 · 1,0 H20 · 0,3 EtOAc: C, 64,39, H, 6,02,
N, 18,64. Namerané: C, 64,52, H, 5,98, N, 18,52.
Príklad 32(a)
6- [3-benzamidofenoxy]-3-E-[2-(lH-imidazol-4-yl)etenyl]-1Hindazol
210
K miešanému roztoku 213 mg (0,39 mmol) 6-(3-benzamidofenoxy)-3-E-[2- (1-(2-trimetylsilanyletoxy)metyl-imidazol-4yl) etenyl]-ΙΗ-indazolu v 5 ml THF bolo pridané 6,0 ml (6,0 mmol) l,0M TBAF v THF a 0,26 ml (3,86 mmol) etyléndiamínu. Po zohrievaní v 70 °C po dobu 18 hodín bola reakčná zmes ochladená, nariedená EtOAc a premytá opakovane saturovaným roztokom NaHCOa. Organická vrstva bola usušená nad MgSO4 a koncentrovaná pri zníženom tlaku. Zvyšok bol podrobený veľmi rýchlej chromatografii na silikagéle za elúcie zmesí CH2C12:EtOAc: MeOH (1:1:0,2). Získaný olej bol triturovaný zo zmesi EtOAc a hexánu za vzniku 65 mg (40 %) AG13853. 1H NMR (DMSO-de) δ 12,90 (s, 1H) , 12,35 (s, 1H) , 10,32 (s, 1H) , 8,08 (d, 1H, J = 8,7 Hz), 7,91 (d, 2H, J = 6,8 Hz), 7,81 (s, 1H) ,
7, 64-7, 49 (m, 5H) , 7,42-7,31 (m, 4H) , 7,03 (s, 1H) , 6,96 (d,
1H, J = 8,7 Hz), 6,85 (d, 1H, J = 8,1 Hz). Anál. výpočet pre C25Hi9N502 · 0,7 H2O · 4,4 EtOAc: C, 68, 07, H, 5,07, N, 14,92.
Namerané: C, 67,93, H, 4,89, N, 15,06.
Vychodzia látka bola pripravená podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 31(a) okrem toho, že hydrochlorid (E)-[1-(2-trimetylsilanyl)etoxymetyl)-lH-imidazol-4yl]akryloylchlorid bol použitý namiesto hydrochloridu (E)-3pyridin-2-ylakryloylchloridu v kroku (i).
Príklad 32(b)
6-[3-((l-etyl-3-metyl-lH-pyrazol-5-yl)karboxamido)fenoxy]-3-E[2-(lH-imidazol-4-yl)etenyl]-lH-indazol
Hl
211
Zlúčenina z príkladu 32(b) byla pripravená podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 32(a) okrem toho, že l-etyl-3-metyl-lH-pyrazol-5-karboxylová kyselina bola použitá namiesto benzoovej kyseliny v kroku (ii) . XH NMR (DMSO-de) δ
12,89 (s, 1H), 12,37 (s, 1H) , 10,18 (s, 1H) , 8,07 (d, 1H, J =
8,9 Hz), 7,74 (s, 1H) , 7,58 (d, 1H, J = 8,3 Hz), 7,49 (s, 1H) , 7,44-732 (m, 3H), 7,28 (s, 1H), 7,01 (s, 1H), 6,95 (d, 1H, J =
8,9 Hz), 6,86 (d, 1H, J = 8,6 Hz), 6,78 (s, 1H) , 4,38 (q, 2H, J = 7,1 Hz), 2,19 (s, 3H) , 1,29 (t, 3H, J = 7,1 Hz). Anál, výpočet pre C25H23N7O2 · 0,8 H2O · 0,1 EtOAc: C, 63, 99, H, 5,37, N, 20,57. Namerané: C, 63,72, H, 5,12, N, 20,25.
Príklad 32(c)
6-[3-((l-etyl-3-metyl-lH-pyrazol-5-yl)karboxamido)fenoxy]-3-E[2-(2-metylimidazol-4-yl)etenyl]-lH-indazol
Zlúčenina z príkladu 32(c) bola pripravená podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 32(b) okrem toho, že hydrochlorid (E)-3-[2-metyl-l-(2-trimetylsilanyl)etoxymetyl)lH-imidazol-4-yl]akryloylchlorid bol použitý namiesto hydrochloridu (E)-3-[1-(2-trimetylsilanyl)etoxymetyl)-1HXH NMR (DMSO-de) δ imidazol-4-yl]akryloylchloridu v kroku (i).
12,85 (š s, 1H), 11,80 (š s, 1H), 10,18 (s, 1H) , 8,05 (d, 1H,
J = 8,7 Hz) , 7,58 (d, 1H, J = 8, 4 Hz), 7,48 (s, 1H), 7,39 (t,
1H, J = 8,2 Hz), 7,33-7,05 (m, 3H) , 7,00 (s, 1H) , 6,93 (d, 1H,
212
J = 8,7 Hz), 6,86 (d, 1H, J = 8,2 Hz), 6,78 (s, 1H) , 4,38 (q, 2H, J = 7,1 Hz), 2,31 (s, 3H), 2,19 (s, 3H) , 1,29 (t, 3H, J =
7,1 Hz). Anál, výpočet pre C26H25N7O2 · 0,9 H20 · 0,4 EtOAc: C, 63,87, H, 5,83, N, 18,89. Namerané: C, 63,64, H, 5,76, N, 18,85.
Príklad 33(a)
6-[2-(metylkarbamoyl)fenylsulfanyl]-3-E-[2-(pyridin-2-yl)etenyl]indazol
Zlúčenina z príkladu 33(a) bola pripravená z 6—[2— (metylkarbamoyl)fenylsulfanyl]-3-E-[2-(pyridín-2-yl)etenyl]-1[2-(trimetylsilanyl)etoxymetyl]-ΙΗ-indazolu podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 11. Rf sm 0,8, p 0,15 (etylacetát), XH NMR (300 MHz, DMSO-de) δ 13,45 (s, 1H), 8,72 (d, 1H, J = 3,9 Hz), 8,47 (m, 1H) , 8,31 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 8,06 (d, 1H, J = 16,4 Hz), 7,92 (dt, 1H, J = 1,7, 7,6 Hz), 7,78 (d, 1H, J = 7,8 Hz), 7,71 (s, 1H) , 7,68 (d, 1H, J = 16,5
Hz), 7,61 (dd, 1H, J = 1,7 , 7,2 Hz), 7,45-7,36 (m, 3H) , 7,31
(d, 1H, J = 8,5 Hz) , 7,17 (m, 1H) , 2,89 (d, 3H, J = 4, 6 Hz) ,
13C NMR (75 MHz, DMSO -d6) δ 167, 8, 154, 8, 149, 5, 141,9, 141,8,
137, 0, 136, 8, 135, 4, 132,5, 130,2, 130, 0, 129,2, 127,7, 126,1,
125, 4, 123,5, 122,5, 122,4, 121, 6, 1202, 114, 5, LCMS (100% oblast) Rt = 3,5 minút (poz) [M+H]/z vypočítané 387, namerané 387. Analyzované s 0,1 H2O, 0,1 EtOAc vypočítané: C (67,78), H (4,82), N (14,11), S (8,08). Namerané: C (67,78), H (4,77), N (14,06), S (8,08).
Východzia látka bola pripravená takto:
213 (i)
V argónovej atmosfére bolo 30,0 g (62,9 mmol) 6-jód-3styryl-1-[2-(trimetylsilanyl)etoxymetyl]-lH-indazolu, pripraveného v príklade 14, krok (i), rozpustené v 375 ml dichlórmetánu a bolo ochladené na -42 °C v kúpeli s acetonitrilom a suchým ladom. Zmesou potom bol prebublávaný ozón (1 1/min, 60 V, 1,8 A) po dobu 45 minút. Štandardné indikátory neudávali jasnú zmenu farby voči farbe pozadia roztokov. Aby sa zabránilo nadmernej oxidácii, bol postup reakcie monitorovaný TLC (1:9 zmes EtOAc a hexánu). Pridávanie ozónu bolo zastavené a banka bola naplnená argónom. Potom bolo pridané 30 ml dimetylsulfidu a zmes bola ponechaná ohriať sa na 23 °C. Táto zmes bola miešaná po dobu 4 hodín a bola koncentrovaná pri zníženom tlaku. Olej bol vložený do vysokého vákua po dobu 16 hodín. Zvyšok bol rozpustený v 15 ml dichlórmetánu a bol nariedený 100 ml hexánu za vzniku niekoľkých kryštálov (nebol požadovaný produkt). Zmes bola filtrovaná a filtrát bol koncentrovaný. Zvyšok bol rozpustený v 250 ml zmesi 8:2 hexánu a EtOAc, podrobený pôsobeniu 50 ml silikagélu, filtrovaný a koncentrovaný. Po 72 hodinách za vysokého vákua vzniklo 24,17 g (~95% čistej dle NMR, 91% výťažok) 6-jód-3-karboxaldehyd-l-[2-(trimetylsilanyl)etoxymetyl] -ΙΗ-indazolu ako žltej pevnej látky: Rf sm 0,34, p 0,29 (zmes etylacetátu a hexánu 1:9), XH NMR (300 MHz, CDC13) δ 10,25 (s, IH), 8,09 (s, IH), 8,05 (d, IH) , 7,80 (d, IH) , 5,88 (s, 2H), 3,71 (t, 2H), 0,93 (t, 2H), 0,0 (s, 9H).
(ii)
214
24,0 g (59,7 mmol) 6-jód-3-karboxaldehyd-l-[2-(trimetylsilanyl)etoxymetyl]-ΙΗ-indazolu bolo rozpustené vo 350 ml THF a bolo ochladené na 5 °C. K tejto zmesi bolo pridané 45,7 g (100 mmol, 1,68 ekv.) pevného 2-pikolyltrienylfosfóniumchloridu/hydridu draselného. Reakčná zmes bola ponechaná za miešania po dobu 45 minút. K zmesi bolo pridané 20 ml 3N HCI, nasledované 50 ml saturovaného vodného hydrouhličitanu sodného za dosiahnutia pH 6. Nadbytok THF bol odstránený pri zníženom tlaku a zvyšok bol rozdelený medzi etylacetát a vodu. Organické vrstvy boli premyté saturovaným vodným hydrouhličitanom sodným, vodou a organická vrstva bola oddelená, usušená nad sulfátom sodným, dekantovaná a koncentrovaná pri zníženom tlaku. Zvyšok bol nahraný do zmesi etylacetátu a hexánu 1:9 a bol filtrovaný. Filtrát bol purifikovaný chromatografiou na silikagéle (2 1 silikagélu, 20 až 30 až 50% zmes etylacetátu a hexánu) za vzniku 18,9 g (66% výťažok) 6-jód-3-E-[2-(pyridín-2-yl)etenyl-1-[2-(trimetylsilanyl)etoxymetyl]-ΙΗ-indazolu: Rf sm 0,52, p 0,25 (zmes etylacetátu a hexánu 2:8), 1H NMR (300 MHz, CDC13) δ 8,64 (m,
1H), 8,00 (d, 1H, J = 0,7 Hz), 7,87 (d, 1H, J = 16,4 Hz), 7,80 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 7,69 (td, 1H, J = 7,7, 1,8 Hz), 7,55 (d, 1H, J = 16,4 Hz), 7,55 (dd, 1H, J = 8,5, 1,3 Hz), 7,47 (d, 1H, J = 7,9 Hz), 7,18 (dd, 1H, J = 1,1, 4,8 Hz), 5,70 (s, 2H) ,
3,59 (t, 2H, J = 8,2 Hz), 0,90 (t, 2H> J = 8,2 Hz), -0,04 (s, 9H), 13C NMR (75 MHz, CDCI3) δ 156, 8, 151,2, 144,2, 143, 6,
138,0, 132, 3, 132,2, 124,4, 124, 0, 123, 8, 123,7, 123, 5, 120, 7, 94, 1, 79, 4, 68, 1, 19, 17, 0, 0.
215 (iii)
V banke s gulatým dnom o objeme 200 ml bolo odvážené 13,7 g (41,9 mmol, 2,5 ekv.) uhličitanu cesného a táto sol bola usušená za vysokého vákua a zohrievaná horúcovzdušnou pištolou. Potom bolo pridané 1,37 g (1,68 mmol, 0,1 eky.) katalyzátora [Pd(dppf) C12-CH2C12] a 8,0 g (16,76 mmol) 6-jód-3E-[2-(pyridin-2-yl)etenyl-1-[2-(trimetylsilanyl)etoxymetyl]ΙΗ-indazolu a zmes bola nabraná do 71 ml DMF. K tejto zmesi bolo pridané 4,62 ml (33,5 mmol, 2,0 ekv.) metyltiosalicylátu a nádoba bola zohrievaná na 85 °C po dobu 4,5 hodiny. Táto zmes bola ochladená na 23 °C, bola rozdelená medzi 350 ml etylacetátu a 300 ml 50% saturovaného vodného hydrouhličitanu sodného. Organické vrstvy boli premyté 200 ml 10% bisulfitu sodného, solankou a organická vrstva bola oddelená. Organická látka bola usušená nad sulfátom sodným, dekantovaná a koncentrovaná pri zníženom tlaku. Purifikácia chromatografiou na silikagéle (500 ml silikagélu, 30 až 40 až 50% zmes etylacetátu a hexánu) poskytla 6,44 g (74 %) 6-[(2metoxykarbonylfenyl)sulfanyl]-3-E-[2-(pyridín-2-yl)etenyl]-1[2-(trimetylsilanyl)etoxymetyl]-ΙΗ-indazolu: Rf sm 0,52, p 0,19 (zmes etylacetátu a hexánu 3:7), FTIR (tenký film) 2950, 2887, 2356, 1713, 1585, 1464, 1433, 1250, 1076, 837 cm-1, ΤΗ NMR (300
MHz, CDC13) δ 8,70 (d, 1H), 8,12 (d, 1H), 8,04 (d, 1H) , 7, 99
(d, . 1H, J = 16 ,4 Hz), 7 ,90 (s, 1H), , 7, 88 (t, 1H) , 7,76 (d, 1H,
J = 16,4 Hz), 7, 62 (d, 1H) , 7,55 (d, 1H), 7,30-7,15 (m, 3H) ,
6,92 (d, 1H), 5, 80 (s, 2H) , 4,01 (s, 3H) , 3,78 (t, 2H) , 0, 96
(t, 2H), -0,03 (s, 9H) , 13C NMR (75 MHz, CDCI3) δ 168,3, 156, 8,
151,2, 144,3, 144, 2 , 143,2, 138, 0, 133 , 8, 133, 6, 132, 5, 132,4,
216
129, 9, 129, 3, 128,5, 126, 0, 124, 7, 124, 6, 123, 8, 123, 5, 118, 3,
79, 4, 68,2, 53,7, 19,2, 0,0, LCMS (100% oblasť) Rt = 4,4 minútach (poz) [M+H]/z vypočítané 518,2, namerané 518,2.
(iv)
K 8,50 g (16,4 mmol) 6-[ (2-metoxykarbonylfenyl)sulfanyl)3-E-[2-(pyridin-2-yl)etenyl]-1-[2-(trimetylsilanyl)etoxymetyl] -lH-indazolu bolo pridané 120 ml THF, 120 ml metanolu, 120 ml vody a 15,9 g (115 mmol, 7,0 ekv.) uhličitanu draselného. Táto zmes bola zohrievaná na 67 °C a bola miešaná po dobu 22 hodín. Zmes bola ochladená a nadbytok rozpúšťadla bol odstránený. Zvyšok bol rozdelený medzi 300 ml etylacetátu a 250 ml vody. Vodná vrstva bola acidifikovaná 20% kyselinou citrónovou na pH 5 (~70 ml) a vodná vrstva bola odčerpaná.
Organická vrstva bola premytá 50 ml vody a bolo pridané 100 ml hexánu, aby sa pomohlo precipitácii kryštálov, ktoré boli vytvorené v etylacetátovej vrstve. Pevná látka bola filtrovaná a usušená za vzniku 7,56 g (91 %) 6-[(2-karboxyfenyl)sulfanyl]-3-E-[2-(pyridín-2-yl)etenyl]-1-[2-(trimetylsilanyl)etoxymetyl]-ΙΗ-indazolu: Rf sm 0,67, p 0,41 (zmes etylacetátu a
hexá nu 8:2), XH NMR (300 MHz, CDC13) δ 8,60 (m, 1H) , 8,10 (d,
1H, J = 8,4 Hz), 8,04 (dd, 1H, J = 1,7, 7,7 Hz) , 7,8 5 (d, 1H,
J = 16,5 Hz ), 7,83 (s, 1H), 7,70 (dt, 1H, J = 1,7, 7,7 Hz) ,
7, 59 (d, 1H, J = 16,5 Hz), 7,52 (d, 1H, J = 7,9 Hz) , 7, 38 (dd,
1H, J = 1,3 , 8,4 Hz), 7,22-7,10 (m, 3H) , 6,80 (dd, 1H, J =
1,0, 8,0 Hz) , 3,59 (t, 2H, J = 8,1 Hz), 0,85 (t , 2H, J = 8,81
Hz) , -0,1 (S, , 9H) .
217 (v)
820 mg (1,63 mmol) 6-[(2-karboxyfenyl)sulfanyl]-3-E-[2(pyridin-2-yl)etenyl]-1-[2-(trimetylsilanyl)etoxymetyl]-1Hindazolu bolo rozpustené v 5 ml DMF a bolo podrobené pôsobeniu
4,1 ml (8,13 mmol, 50 ekv.) metylamínu (2M v THF a 929 mg (2,44 mmol, 1,5 ekv.) HATU. Táto zmes bola miešaná po dobu 30 minút, bola rozdelená medzi etylacetát a saturovaný vodný hydrouhličitan sodný a organická vrstva bola oddelená. Organická látka bola usušená nad sulfátom sodným, dekantovaná a koncentrovaná pri zníženom tlaku. Purifikácia chromatografiou na silikagéle (50 ml silikagélu, 60 až 70% zmes etylacetátu a hexánu) poskytla 795 mg (94 %) 6—[2— (metylkarbamoyl)fenylsulfanyl]-3-E-[2-(pyridín-2-yl)etenyl]-1[2-(trimetylsilanyl)etoxymetyl]-ΙΗ-indazolu ako pevnej látky: Rf sm 0,35, p 0,23 (zmes etylacetátu a hexánu 6:4), FTIR (tenký film) 3306, 2951, 1643, 1606, 1587, 1563, 1469, 1433, 1410,
1303, 1249, 1217, 1075, 836 cm1, ľH NMR (300 MHz, CDC13) δ 8,70
(m, 1H), 8,06 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 7,94 (d, 1H, J = 16,3 Hz) ,
7,74 (dt, 1H, J = 1,8, 7,7 Hz), 7,70-7, 60 (m, 3H), 7,52 (d,
1H, J = 7,9 Hz) , 7,35-7 , 20 (m, 5H) , 6,45 (š s, 1H) , 5, 80 (s,
2H), 3,62 (t, 2H), 3,00 (d, 3H), 0,93 (t, 2H), -0, 05 (s, 9H) ,
13C NMR (75 MHz, CDC13) Ô 179, 7, 169, 9, 156, 8, 151, 1, 144,2, 143, 0, 138, 1, 136, 1, 135, 4, 133,2, 132,2, 132,1, 130, 2, 128, 5,
127.2, 124,7, 124, 1, 123,8, 123, 5, 123, 3, 114, 9, 68,1, 28,2,
19.2, 0,00, LCMS (100% oblast) Rt = 4,15 minúty (poz) [M+H]/z vypočítané 517,2, namerané 517,2.
218
Príklad 33(b)
6-[2-(2-metylchinol-6-ylkarbamoyl)fenylsulfanyl]-3-E-[2(pyridín-2-yl)etenyl]-lH-indazol
Zlúčenina z príkladu 33(b) bola pripravená podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 33 (a) okrem toho, že v kroku (v) , 6-amino-2-metylchinolín bol použitý namiesto metylamínu: 3H NMR (300 MHz, CDC13) δ 10,2 (š s, 1H), 8,64 (m, 1H), 8,40 (s, 1H), 8,23 (s, 1H) , 7,98-7, 80 (m, 4H) , 7,69 (dt, 1H, J = 1,7, 7,7 Hz), 7,55-7,40 (m, 7H) , 7,25-7,16 (m, 3H) ,
2,71 (s, 3H).
Príklad 33(c)
6-[2-(fenylkarbamoyl)fenylsulfanyl]-3-E-[2-(pyridín-2-yl)etenyl]-lH-indazol
Zlúčenina z príkladu 33(c) bola pripravená podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 33(a) okrem toho, že v kroku (v), anilín bol použitý namiesto metylamínu: 1H NMR (300 MHz, DMSO-de) δ 13,35 (s, 1H) , 10,53 (s, 1H) , 8,67 (m, 1H) , 8,22 (d, 1H, J = 7,5 Hz), 7,99 (d, 1H, J = 16,4 Hz), 7,85 (dt, 1H, J = 1,8, 7,6 Hz), 7, 80-7,55 (m, 5H) , 7,45-7,10 (m,
219
9Η) , LCMS (100% oblasť) Rt = 3,86, (poz) [M+H]/z vypočítané
449,1, namerané 449,1. Analyzované s 0,41 H2O, vypočítané: C (71,13), H (4,60), N (12,29), S (7,03). Namerané : C (71,04), H (4,62), N (12,31), S (7,01) .
Príklad 33(d)
6- [2- (3-chlórfenylkarbamoyl) fenylsulfanyl] -3-E- [2- (pyričlin-2yl)etenyl]-lH-indazol
Zlúčenina z príkladu 33(d) bola pripravená podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 33 (a) okrem toho, že v kroku (v) , 3-chlóranilín bol použitý namiesto metylamínu: NMR (300 MHz, CDC13) δ 8,53 (m, 1H) , 7,92 (d, 1H, J = 8,4 Hz),
7,77 (d, 1H, J = 16,4 Hz), 7,68 (dt, 1H, J = 1,7, 7,7 Hz), 7,64-7,56 (m, 2H), 7,51-7,43 (m, 3H), 7,35-7,28 (m, 4H), 7,19-
7,12 (m, 3H), 7,02 (m, 1H) , LCMS (100% oblasť) Rt 3,98 minúty (poz) [M+H]/z vypočítané 483,1, namerané 483,1. Analyzované s 0,3 H2O, vypočítané: C (66, 40), H (4,05), N (11,47), S (6,57). Namerané: C (66, 36), H (4,08), N (11,49), S (6,55).
Príklad 33(e)
6- [2-(cyklopropylkarbamoyl)fenylsulfanyl]-3-E-[2-(pyridin-2yl)etenyl]-lH-indazol
220
Zlúčenina z príkladu 33 (e) bola pripravená podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 33(a) okrem toho, že v kroku (v), cyklopropylamín bol použitý namiesto metylaminu: :H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,45 (s, 1H) , 8,73 (d, 1H, J = 3,9 Hz), 8,56 (d, 1H, J = 4,3 Hz), 8,31 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 8,08 (d, 1H, J = 16,4 Hz), 7,91 (dt, 1H, J = 1,7, 7,7 Hz), 7,78 (d, 1H, J = 7,8 Hz), 7,70 (m, 2H) , 7,57 (m, 1H, ) , 7,40 (m, 3H) ,
7,30 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 7,20 (d, 1H, J = 7,8 Hz), 2,94 (m, 1H), 0,80 (m, 2H) , 0,65 (m, 2H) , LCMS (100% oblasť) Rt 3,51 minúty (poz) [M+H]/z vypočítané 413,1, namerané 413,1.
Príklad 33(f)
6- [2-(2,2,2-trifluóretylkarbamoyl)fenylsulfanyl]-3-E-[2pyridín-2-yl)etenyl]-lH-indazol
Zlúčenina z príkladu 33 (f) bola pripravená podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 33(a) okrem toho, že v kroku (v), 2,2,2-trifluóretylamin bol použitý namiesto metylaminu: ΤΗ NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,5 (s, 1H) , 9,29 (t,
1H, J = 6,3 Hz), 8,74 (m, 1H) , 8,37 (d, 1H, J = 8,3 Hz), 8,10 (d, 1H, J = 16,4 Hz), 7,94 (dt, 1H, J = 1,8, 7,6 Hz), 7,80 (d,
221
1Η, J = 7,9 Hz), 7,75-7, 65 (m, 3H) , 7, 55-7, 40 (m, 3H) , 7,33 (d, 1H) , 7,22 (d, 1H) , 4,22 (m, 2H) , LCMS (100% oblasť) Rt =
3,70 minúty (poz) [M+H]/z vypočítané 455,1, namerané 455,1.
Príklad 33(g)
Tetrabutylamónium-6-[2-(karboxy)fenylsulfanyl]-3-E-[2(pyridín-2-yl)etenyl]-lH-indazolu
Zlúčenina z príkladu 33(g) bola pripravená podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 33(a) okrem toho, že bol vynechaný krok (v): Rf sm 0,41, p 0,0 (zmes etylacetátu a hexánu 8:2), 2H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8,75 (m, 1H) , 8,25 (d, 1H, J = 8,6 Hz), 8,05 (d, 1H, 16,4 Hz), 7,88 (dt, 1H, J = 1,8,
7,8 Hz), 7, 83-7, 60 (m, 4H) , 7,33 (m, 2H) , 7,16 (m, 2H) , 6,70 (m, 1H) , 3,30 (m, 8H) , 1,70 (m, 8H) , 1,42 (m, 8H) , 1,05 (t, 12H), LCMS (100% oblasť) Rt 3,24 (poz) [M+H (kyslá zložka iba)]/z vypočítané 374,1, namerané 374,1. Analyzované s 0,1 H20, vypočítané : C (72, 07), H (8,21), N (9,09), S (5,20). Namerané: C (72,04), H (8,29), N (9,06), S (5,12).
Príklad 33(h)
6-[2-(3-chlórfenylkarbamoyl)fenylsulfanyl]-3-Z-[2-(pyridín-2yl)etenyl]-lH-indazol
222
K
Zlúčenina z príkladu 33(h) bola pripravená rovnakou reakciou ako zlúčenina z príkladu 33(d). Je nutno poznamenať, že aj keď táto zlúčenina bola izolovaná a charakterizovaná ako čistá, bolo zistené, že vytvárala izomér k príkladu 33(d) v podmienkach testu. XH NMR (300 MHz, CDC13,) δ 8,82 (m, 1H),
8,31 (s, 1H) , 7,86 (m, 2H) , 7,77 (m, 2H) , 7,61 (t, 1H, J = 2,0 Hz), 7,46 (d, 1H, J = 8,0 Hz), 7,33 (m, 5H) , 7,21 (t, 1H, J = 8,0 Hz), 7,13 (dd, 1H, J = 1,5, 8,1 Hz), 7,08 (m, 1H) , 6,98 (d, 1H, J = 13,0 Hz), 6,66 (d, 1H, J = 13,1 Hz), LCMS (100% oblast) Rt 4,40 minúty (poz) (M+H]/z vypočítané 483,1, namerané 483, 1. Analyzované s 0,3 H2O, vypočítané: C (66, 40), H (4,05), N (11,47), S (6,57). Namerané: C (66, 36), H (4,08), N (11,49) , S (6,55) .
Príklad 34
6-[2-((RS-(trans-2-fenylcyklopropyl)karbamoyl)fenylsulfanyl]3-E-[2-(pyridín-2-yl)etenyl]-lH-indazol
Zlúčenina z príkladu 33(g) bola konvertovaná na zlúčeninu z príkladu 34 podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 33(a), krok (v), okrem toho, že trans-2-fenylcyklopropylamin bol použitý namiesto metylamínu: FTIR (tenký film) 1704, 1638, 1584, 1559, 1530, 1497, 1460, 1430, 1339, 1306, 1269, 1223,
1152, 1086, 1061, 966, 844 cm“1, XH NMR (300 MHz, CDC13) δ 13,3
223
(S, 1H) , 8,71 (d, 1H, J = 4,4 Hz), 8,61 (d, 1H, J = 3,9 Hz) ,
8,20 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 7,96 (d, 1H, J = 16,4 Hz) , 7,81 (dt,
1H, J = 1,7, 7,6 Hz), 7,66 (d, 1H, J = 7,8 Hz), 7, 59-7,50 (m,
3Η) , 7,37-7,25 (m, 5H) , 7,21-7,08 (m, 5H) , 3,01 (m, 1H), 2,03 (m, 1H) , 1,25 (m, 2H) , LCMS (100% oblasť) Rt = 3,72 minúty (poz) [M+H]/z vypočítané 489,2, namerané 489,2. Analyzované s 0,6 MeOH, 0,16 CH2CI2 vypočítané: C (70, 86), H (5,17), N (10,75), S (6,15).Namerané: C (70,87), H (5,18), N (10,75), S (5,96).
Príklad 35(a)
6-[2-(n-propylkarbamoyl)fenylsulfanyl]-3-E-[2-(pyridín-2-yl)etenyl]-lH-indazol
mg (0,1112 mmol) 6-[2-(pentafluórfenoxykarbonyl)fenylsulfanyl]-3-E-[2-(pyridin-2-yl)ethenyl]-ΙΗ-indazolu bolo rozpustené v 0,8 ml DMF, podrobené pôsobeniu 11 μΐ (0,1335 mmol) n-propylaminu a miešané pri izbovej teplote. HPLC analýza po 15 minútach preukázala, že všetka východzia látka bola spotrebovaná. Reakčná zmes bola koncentrovaná na rotačnej odparke za vysokého vákua, za vzniku pevnej látky. Pevná látka bola sonikovaná s CH2C12 za vzniku jemnej suspenzie, ktorá bola filtrovaná a premytá CH2C12 za vzniku 40 mg (87% výťažok) zlúčeniny uvedenej v názve. 1H NMR (DMSO-dg) δ 13,31 (s, 1H) ,
8,60 (d, J = 4,0 Hz, 1H) , 8,41 (t, J = 6,2 Hz, 1H) , 8,19 (d, J = 8,5 Hz, 1H) , 7,94 (m, 3H) , 7,81 (dt, J = 1,7, 7,5 Hz, 1H) ,
7,66 (t, J 8,7 Hz, 1H) , 7,56 (m, 2H) , 7,47 (m, 1H) , 7,30 (m, 3H) , 7,18 (d, T = 8,3 Hz, 1H) , 3,20 (q, J = 6,0 Hz, 2H) , 1,55
224 (septet, J = 5,9 Hz, 2H) , 0,92 (t, J = 6,0 Hz, 3H) . Anál, výpočet pre C24H22N4OS · (1,5 H20, 0,8 DMF): C, 63,41, H, 6,17, N, 13,45, S, 6,41. Namerané: C, 63, 37, H, 5,68, N, 13,44, S, 6,32.
Východzia látka bola pripravená takto:
Roztok 615 mg (1,0 mmol) tetrabutylamóniuin-6-(2karboxyfenylsulfanyl)-3-E-[2-(pyridin-2-yl)etenyl]-lH-indazolu rozpusteného v 10,0 ml suchého DMF bol podrobený pôsobeniu 89 μΐ (1,1 mmol) pyridínu a 206 μΐ (1,2 ekv.) pentafluórfenyltrifluóracetátu, pri izbovej teplote, v argónovej atmosfére. HPLC analýza po 45 minútach preukázala hlavne nezreagovanú karboxylovú kyselinu, preto bolo pridané ďalších 89 μΐ (1,1 mmol) pyridínu a 206 μΐ (1,2 ekv.) pentafluórfenyltrifluóracetátu. HPLC analýza 15 minút neskoršie ukázala, že východzia kyselina bola plne spotrebovaná. Reakčná zmes bola koncentrovaná za vysokého vákua na rotačnej odparke, potom triturovaná CH2CI2 H ml), čo spôsobilo vytvorenie kryštálov, ktoré boli zbierané filtráciou, premyté ďalším CH2C12 a usušené. Hmotnosť jasne žltých kryštálov bola 336 mg. Zvyšný filtrát bol koncentrovaný a purifikovaný velmi rýchlou chromatografiou (10% zmes acetontrilu a CH2CI2 až 80% zmes acetonitrilu a CH2CI2) , poskytujúci ďalších 70 mg pevnej látky. Celkový výťažok 6-[2-(pentafluórfenoxykarbonyl)fenylsulfanyl]3-E-[2-(pyridin-2-yl)etenyl]-ΙΗ-indazolu bolo 406 mg alebo 89 %. XH NMR (CDCI3) δ 10,22 (1H, bs) , 8,66 (1H, d, J = 4,5
Hz), 8,28 (2H, dd, J = 7,7. 1,5 Hz), 8,15 (1H, d, J = 8,5 Hz),
225
7,97 (1Η, d, J = 16,2 Hz), 7,79 (1H, s), 7,15-7,75 (7H, m),
6,92 (1H, d, J = 8,1 Hz) .
Príklad 35(b)
6-[2-(i-propylkarbamoyl)fenylsulfanyl]-3-E-[2-(pyridín-2-yl) etenyl-lH-indazol
Zlúčenina z príkladu 35(b) bola pripravená podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 35(a) okrem toho, že izopropylamin bol použitý namiesto n-propylamínu. XH NMR (DMSO-de) δ 13,30 (s, 1H) , 8,60 (d, J = 4,5 Hz, 1H) , 8,26 (d, J = 7,34 Hz, 1H) , 8,19 (d, J = 8,3 Hz, 1H) , 7,94 (d, J = 16,4 Hz, 1H) , 7,80 (dt, J = 1,7, 7,5 Hz, 1H) , 7,66 (d, J = 7,7 Hz,
1H) , 7,56 (m, 2H) , 7,45 (m, 1H) , 7,30 (m, 3H) , 7,18 (d, J =
8,5 Hz, 1H) , 7,08 (m, 1H) , 4,04 (septet, J = 7,4 Hz, 1H), 1,15 (d, J = 6,6 Hz, 6H) . Anál, výpočet pre C24H22N4OS · 1,7 H2O: C, 64,75, H, 5,75, N, 12,59, S, 7,20. Namerané: C, 64,79, H, 5,36, N, 12,74, S, 7,08.
Príklad 35(c)
6-[2-(cyklobutylkarbamoyl)fenylsulfanyl]-3-E-[2-(pyridín-2yl)etenyl]-lH-indazol
226
Zlúčenina z príkladu 35(c) bola pripravená podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 35(a) okrem toho, že cyklobutylamín bol použitý namiesto n-propylamínu. XH NMR (DMSO-d6) δ 13,31 (s, IH) , 8,62 (m, 2H) , 8,19 (d, J = 8,5 Hz,
IH) , 7,94 (m, 2H) , 7,80 (dt = 1,7, 7,5 Hz, IH) , 7,65 (t, J =
8,1 Hz, IH), 7,56 (s, IH) , 7,47 (m, IH) , 7,30 (m, 3H) , 7,17 (d, J = 8,3 Hz, IH) , 4,36 (septet, J = 8,1 Hz, IH), 2,22 (m, 2H), 2,03 (m, 2H) , 1,67 (m, 2H) . Anál, výpočet pre C25H22N4OS · (0,5 H2O, 0,9 DMF): C, 66, 36, H, 5,89, N, 13,69, S, 6,40.
Namerané: C, 66,21, H, 5,78, N, 13,82, S, 6,36.
Príklad 35(d)
6-(2-karbamoylfenylsulfanyl)-3-E-[2-(pyridín-2-yl)etenyl]-1Hindazol
Zlúčenina z príkladu 35(d) bola pripravená podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 35(a) okrem toho, že čpavok bol použitý namiesto n-propylamínu. XH NMR (DMSO-d6) δ
8,60 (d, J = 4,9 Hz, IH) , 8,21 (d, J = 8,3 Hz, IH) , 7,94 (m,
3H) , 7,81 (dt, J = 1,7, 7,5 Hz, IH) , 7,60 (m, 4H) , 7,48 (š s,
IH), 7,25 (m, 4H) , 7,0 (m, IH) . Tknal. výpočet pre C21H16N4OS ·
0,25 H2O: C, 66,91, H, 4,41, N, 14,86, S, 8,51. Namerané: C,
66, 99, H, 4,40, N, 15,10, S, 8,49.
227
Príklad 35(e)
6-[2-((l-metylpyrol-2-ylhydrazido)karbonyl)fenylsulfanyl]-3-E[2-(pyridín-2-yl)etenyl]-lH-indazol
Zlúčenina z príkladu 35 (e) bola pripravená podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 35 (a) okrem toho, že l-metylpyrol-2-ylhydrazid bol použitý namiesto n-propylamínu. XH NMR (DMSO-d6) δ 13,34 (s, IH) , 10,25 (s, IH) , 10,45 (s, IH) ,
8,60 (d, J = 4,5 Hz, IH) , 8,22 (d, J = 8,7 Hz, IH) , 7,95 (d, J = 16,2 Hz, IH), 7,81 (dt, J = 1,7, 7,5 Hz, IH), 7,66 (m, 3H) ,
7,57 (d, J = 16,0 Hz, IH) , 7,43-7,18 (m, 4H) , 7,07 (d, J = 7,9 Hz, IH), 7,00 (d, J = 3,4 Hz, 2H) , 6,07 (t, J = 3,2 Hz, IH) ,
3,88 (s, 3H) . Anál, výpočet pre C27H22N6O2S · 0,6 H2O: C, 64,17, H, 4,63, N, 16,63, S, 6,34. Namerané: C, 64,24, H, 4,48, N, 16,56, S, 6,28.
Príklad 35(f)
6- [2-((2-fluórbenzyl)metylkarbamoyl)fenylsulfanyl]-3-E-[2(pyridín-2-yl)etenyl]-lH-indazol
Zlúčenina z príkladu
35(f) bola pripravená podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 35(a) okrem toho, že
2-fluórbenzylamín bol použitý namiesto n-propylaminu. 1H NMR
228 (DMSO-de) δ 13,31 (s, 1H) , 8,99 (t, J = 5,8 Hz, 1H) , 8,61 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 8,19 (d, J = 8,5 Hz, 1H) , 7,94 (d, J = 16,2 Hz, 1H) , 7,81 (dt, J = 1,7, 7,5 Hz, 1H) , 7,66 (d, J = 8,1 Hz, 1H) , 7,56 (m, 3H), 7,47 (t, J = 7,9 Hz, 1H) , 7,31 (m, 4H) , 7,15 (m, 4H) , 4,51 (d, J = 5,7 Hz, 2H) . Anál, výpočet pre C28H2iFN4OS · 0,25 H2O: C, 69, 33, H, 4,47, N, 11,55, S, 6,61. Namerané: C, 69,32, H, 4,41, N, 11,58, S, 6,59.
Príklad 35(g)
6- [2-((4-metoxybenzyl)metylkarbamoyl)fenylsulfanyl]-3-E-[2(pyridín-2 yl)etenyl]-lH-indazol
Zlúčenina z príkladu 35(g) bola pripravená podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 35(a) okrem toho, že
4-metoxybenzylamín bol použitý namiesto n-propylaminu. 1H NMR (DMSO-de) δ 13,31 (s, 1H) , 8,90 (t, J = 5,5 Hz, 1H) , 8,60 (d, J = 4,2 Hz, 1H), 8,19 (d, J = 83 Hz, 1H) , 7,95 (d, J = 16,3 Hz, 1H), 7,81 (dt, J = 1,7, 7,5 Hz, 1H) , 7,66 (d, J = 7,9 Hz, 1H) , 7,55 (m, 3H), 7,30 (m, 5H) , 7,18 (d, J = 8,5 Hz, 1H) , 7,10 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 4,39 (d, J = 6,0 Hz, 2H) , 3,72 (s, 3H) . Anál, výpočet pre C29H24N4O2S · 0,6 H2O: C, 69,19, H, 5,05, N, 11,13, S, 6,37. Namerané: C, 69,12, H, 4,85, N, 11,24, S, 6,35.
Príklad 35(h)
6- [2-((5-metylfur-2-yl)metylkarbamoyl)fenylsulfanyl]-3-E- [2(pyridín-2-yl)etenyl]-lH-indazol
Zlúčenina z príkladu 35(h) bola pripravená podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 35 (a) okrem toho, že
5-metylfur-2-ylamín bol použitý namiesto n-propylamínu. 1H NMR (DMSO-de) δ 13,31 (s, 1H) , 8,88 (t, J = 5,3 Hz, 1H) , 8,60 (d, J
229
= 4,3 Hz, 1H) , 8,19 (d, J = 8,3 Hz, 1H) , 7,95 (d, J = 16,3 Hz,
1H), 7,81 (dt, J = 1,7, 7,5 Hz, 1H), 7, 66 (d, J = 8,1 Hz, 1H) ,
7,54 (m, 3H), 7,30 (m, 4H), 7,18 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7, 06 (d,
J = 8,1 Hz, 3H) . Anál, výpočet, pre C27H22N4O2S · 0,4 H2O: C,
68, 45, H, 4,85, N, 11,83, S, 6,77. Namerané: C, 68, 35, H, 4,80, N, 11,85, S, 6,68.
Príklad 35(i)
6-[2-(benzyloxykarbamoyl)fenylsulfanyl]-3-E-[2-(pyridín-2-yl)etenyl]-lH-indazol
Zlúčenina z príkladu 35 (i) bola pripravená podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 35(a) okrem toho, že O-benzylhydroxylamín bol použitý namiesto n-propylamínu. 1H NMR
(DMSO-de) δ 13,31 (s, 1H) , 11,64 (s, 1H) , 8,90 (t, J = 5, 5 Hz,
1H) , 8, 60 (d, J = = 4,1 Hz, 1H) , 8,19 (d, J = 8, 3 Hz, 1H) , 7, 95
(d, J = 16,3 Hz, 1H) , 7, 81 (dt, J = 1,7, 7, 5 Hz, 1H) , 7, 66 (d,
J = 7, 9 Hz, 1H), 7, 56 (m, 2H), 7,50- •7,24 (m, 9H) , 7, 17 (t, J =
8,5 Hz, 2H) , 4,94 (s, 2H) . Anál, výpočet pre C28H22N4O2S · 0,8
230
H2O: C, 68,22, Η, 4,83, N, 11,37, S, 6,50. Namerané: C, 68,08, H, 4,65, N, 11,41, S, 6,47.
Príklad 35(j)
6-[2-(allyloxykarbamoyl)fenylsulfanyl]-3-E-[2-(pyridin-2-yl)etenyl]-lH-indazol
Zlúčenina z príkladu 35 (j) bola pripravená podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 35(a) okrem toho, že O-allylhydroxylamín bol použitý namiesto n-propylamínu. 1H NMR (DMSO-de) δ 13,32 (s, 1H) , 11,56 (s, 1H) , 8,60 (d, J = 4,1 Hz, 1H) , 8,19 (d, J = 8,3 Hz, 1H) , 7,95 (d, J = 16,5 Hz, 1H) , 7,81 (dt, J = 1,7, 7,5 Hz, 1H), 7,66 (d, J = 7,9 Hz, 1H) , 7,56 (m, 2H), 7,48-7,24 (m, 5H), 7,16 (m, 2H), 6,00 (m, 1H) , 5,37 (d, J = 18,3 Hz, 1H) , 5,27 (d, J = 11,3 Hz, 1H) , 4,42 (d, J = 6,0
Hz, 1H) . Anál, výpočet pre C24H20N4O2S · (0,2 H2O, 0,2 CH2C12: C, 65, 35, H, 4,96, N, 12,10, S, 6,92. Namerané: C, 65,24, H, 4,50, N, 12,56, S, 7,17.
Príklad 35(k)
6-[2-(izopropoxykarbamoyl)fenylsulfanyl]-3-E-[2-(pyridín-2yl)etenyl]-lH-indazol
231
Zlúčenina z príkladu 35(k) bola pripravená podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 35(a) okrem toho, že O-izopropylhydroxylamín bol použitý namiesto n-propylamínu. 1H
NMR (DMSO-de) δ 13,30 (s, 1H) , 11,33 (s, 1H) , 8,60 (d, J = 4,1 Hz, 1H), 8,19 (d, J 8,3 Hz, 1H) , 7,95 (d, J = 16,5 Hz, 1H) ,
7,81 (dt, J = 1,7, 7,5 Hz, 11, 7,66 (d, J = 7,9 Hz, 1H) , 7,55 (m, 2H), 7,48-7,24 (m, 4H) , 7,17 (d, J = 8,3 Hz, 2H) , 4,12 (septet, J = 5,7 Hz, 1H) , 1,21 (d, J = 6,2 Hz, 6H. Anál, výpočet pre C24H22N4O2S · (0,4 H2O, 0,7 CH2C12) : C, 59, 67, H,
4,91, N, 11,27, S, 6,45. Namerané: C, 59,61, H, 4,81, N,
11,42, S, 6,45.
Príklad 35(1)
6-[2-((4-aminobenzyl)metylkarbamoyl)fenylsulfanyl]-3-E-[2(pyridín-2-yl)etenyl]-lH-indazol
Príklad 35(1) bol pripravený podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 35(a) okrem toho, že 4-aminobenzylamín bol použitý namiesto n-propylaminu. 1H NMR (DMSO-d6) δ 13,31 (s,
1H) , 8,78 (t, J = 6,0 Hz, 1 H) , 8, 60 (d, J = 4,3 Hz, 1H) , 8,19
(d, J = 8,1 Hz, 1H), 7,95 (d, J = 16,3 Hz, 1H), 7,85 (š s,
1H), 7, 81 (dt , J = 1,7, 7,5 Hz, 1H) , 7, 66 (d, J = 7,9 Hz, 1H) ,
7,59 (s, 1H) , 7,51 (m, 2H) , 7,30 (m, 3H) , 7,19 (d, J = 8,7 Hz,
1H) , 7, 05 (m, 3H) , 6,56 (d, J = 8,7 Hz, 1H) , 6,51 (d, J = 8,5
Hz, 2H), 4,29 (d, J = 6>0 Hz, 2H) . Anál, výpočet pre C28H23N5OS
232 • 0,6 H2O: C, 68, 86, Η, 4,99, N, 14,34, S, 6,57. Namerané: C, 68, 83, H, 4,80, N, 14,16, S, 6,52.
Príklad 35(m)
6-[2-((tien-2-ylhydrazido)karbonyl)fenylsulfanyl]-3-E-[2(pyridín-2-yl)etenyl]-lH-indazol
Zlúčenina z príkladu 35(m) bola pripravená podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 35 (a) okrem toho, že tien-2-ylhydrazid bol použitý namiesto n-propylamínu. XH NMR (DMSO-de) δ 13,49 (š s, 1H) , 10,64 (s, 1H) , 10,47 (s, 1H) , 8,66 (d, J = 4,0 Hz, 1H, 8,22 (d, J = 85 Hz, 1H) , 8,08-7,82 (m, 5H), 7,66 (m, 3H) , 7,39 (m, 3H) , 7,24 (m, 2H) , 7,09 (d, J =
8,1 Hz, 1H), 7,00 (d, J = 3,4 Hz, 2H) , 6,07 (t, J = 3,2 Hz, 1H), 3,88 (s, 3H) . Anál, výpočet pre C26H19N5O2S2 · 1,5 H2O: C, 59,52, H, 4,23, N, 13,35, S, 12,22. Namerané: C, 59,56, H,
4,42, N, 13,33, S, 11,75.
Príklad 35(n)
6- [2- (N2- (pyrid-2-ylhydrazino)karbonyl)fenylsulfanyl]-3-E-[2(pyridín-2-yl)etenyl)-lH-indazol
233
Zlúčenina z príkladu 35(n) bola pripravená podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 35 (a) okrem toho, že
2-hydrazinopyridín bol použitý namiesto n-propylamínu. XH NMR (DMSO) δ 1'3,31 (s, 1H) , 10,30 (s, 1H) , 8,60 (d, J = 4,4 Hz,
1H) , 8,48 (s, 1H) , 8,21 (d, J = 8,5 Hz, 1H) , 8,09 (d, J = 4,9 Hz, 1H), 7,94 (d, J = 16,4 Hz, 1H) , 7,81 (dt, J = 1,7, 7,5 Hz, 1H), 7,67 (m, 1H) , 7, 62-7, 47 (m, 3H) , 7,40 (m, 2H), 7,31 7,12 (m, 3H), 6,73 (m, 2H) . Anál, výpočet pre C26H20NeOS · 0,3 H2O:
C, 66, 45, H, 4,42, N, 17,88, S, 6,82. Namerané: C, 66, 33, H, 4,50, N, 17,78, S, 6,60.
Príklad 35(o)
6-[2-(N-hydroxy-N-metylkarbamoyl)fenylsulfanyl]-3-E-[2(pyridín-2-yl)etenyl]-lH-indazol
z príkladu 35 (o)
Zlúčenina bola pripravená podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 35(a) okrem toho, že
N-metylhydroxylamín bol použitý namiesto n-propylamínu. 3H NMR
(DMSO-de) δ 13,24 (s, 1H) , 9,94 (s, 1H) , 8,60 (d , J = 4,0 Hz,
1H) , 8,14 (d, J = 8,3 Hz, 1H), Ί 7,92 (d, J = 16,2 Hz, 1H), 7,80
(dt, J = 1,7, 7,5 Hz, 1H), 7,65 (t, J = 8,5 Hz, 1H), 7,54 (d,
J = 16,5 Hz, 1H), 7,47 -7,24 (m, 6H), 7,16 (d, J = - 8,5 Hz, 1H) ,
3,24 (š s, 1H) . Anál. výpočet pre C22HigN4O2S · (0,5 H2O, 0,3
CH2C12) : C, 61,29, H, 4,52, N, 12,82, S, 7,34. Namerané: C,
61,24, H, 4,33, N, 12,67, S, 7,34.
Príklad 35(p)
234
6-[2-((pyrid-4-yl)metylkarbamoyl)fenylsulfanyl]-3-E-[2(pyridín-2-yl)etenyl]-lH-indazol
Zlúčenina z príkladu 35(p) bola pripravená podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 35(a) okrem toho, že
4-aminometylpyridín bol použitý namiesto n-propylamínu. 1H NMR
(DMSO-de) δ 13,31 (š s, 1H), 9,07 (t, J = 6,8 Hz, 1H) , 8,60 (d,
J = 4,2 Hz, 1H) , 8,48 (d, J = 5,0 Hz, 1H) , 8,19 (d, J = 8,7
Hz, 1H) , 7,95 (d, J = 1 6, 4 Hz, 1H) , 7, 80 (dt, J = 1,7, 7,5 Hz,
1H) , 7,68-7,52 (m, , 3H), 7,42 (m, 2H), 7, .39-7,31 (m, 3H), ' 7,27
(m, 1H) , 7,20 7,10 (m, 2H), 4,48 (d, J= 6,2 Hz, 2H) .
Príklad 35(q)
6-[2-((2-metylfenylhydrazido)karbonyl)fenylsulfanyl]-3-E-[2(pyridín-2-yl)etenyl]-lH-indazol
Zlúčenina z príkladu 35(q) bola pripravená podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 35(a) okrem toho, že
2-metylfenylhydrazid bol použitý namiesto n-propylamínu. 1H NMR (DMSO-de) δ 13,43 (š s, 1H), 10,45 (s, 1H) , 10,28 (s, 1H) , 8,64 (d, J = 4,0 Hz, 1H), 8,22 (d, J = 8,2 H?, 1H) , 8,01 (d, J =
16,6 Hz, 1H) , 7,92 (m, 1H) , 7,81 (m, 1H) , 7,69 (m, 1H) , 7,60
235 (d, J = 16,4 Hz, 1H), 7, 50-7,22 (m, 8H) , 7,07 (d, J = 7,7 Hz,
1H), 2,45 (s, 3H).
Príklad 35(r)
6- [2- (metoxykarbamoyl) fenylsulfanyl] -3-E- [2- (pyridin-2-yl) etenyl]-lH-indazol
Zlúčenina z príkladu 35(r) bola pripravená podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 35(a) okrem toho, že O-metylhydroxylamín bol použitý namiesto n-propylaminu. 1H NMR
(DMSO -d6) δ 13,32 (s, 1H) , 11,60 (s, 1H) , 8,60 (d , J = 3,8 Hz,
1H) , 8,19 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,95 (d, J = 16,2 Hz, 1H) , 7,81
(dt, J = 1,7, 7,5 Hz, 1H), 7,66 (d, J = 7,9 Hz, 1H) , 7, 56 (m,
2H) , 7,47 (dd, J = 7, ,4, 1,7 Hz, 1H) , 7,43-7,24 (m, 3H) , 7,17
(m, 2H) , 3,72 (s, 3H) . Anál, výpočet pre C22H18N4O2S · 0,6
CH2C12: C, 59, 86, H, 4,27, N, 12,36, S, 7,07. Namerané: C, 59,94, H, 4,40, N, 12,00, S, 6,80.
Príklad 35(s)
6-[2-((cyklopropyl)methoxykarbamoyl)fenylsulfanyl]-3-E-[2(pyridín-2-yl)etenyl]-lH-indazol
236
Zlúčenina z príkladu 35(s) bola pripravená podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 35(a) okrem toho, že O-cyklopropylhydroxylamín bol použitý namiesto n-propylamínu. 1H NMR (DMSO-d6) δ 13,38 (s, 1H) , 11,51 (s, 1H) , 8,64 (d, J =
3,8 Hz, 1H) , 8,18 (d, J = 8,4 Hz, 1H) , 8,00 (d, J = 16,4 Hz,
1H), 7,86 (m, 2H) , 7, 63-7,52 (m, 2H) , 7, 49-7,29 (m, 4H) , 7,17 (m, 2H) , 3,70 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 1,10 (m, 1H), 0,53 (m, 2H) ,
0,27 (m, 2H) . Anál, výpočet pre C25H22N4O2S · 1,6 H2O: C, 63,70, H, 5,39, N, 11,89, S, 6,80. Namerané: C, 63, 58, H, 4,95, N, 11,71, S, 6,66.
Príklad 35(t)
6-[2-(n-propoxykarbamoyl)fenylsulfanyl]-3-E-[2-(pyridín-2-yl)etenyl]-lH-indazol
Zlúčenina z príkladu 35(t) bola pripravená podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 35(a) okrem toho, že O-n-propylhydroxylamin bol použitý namiesto n-propylamínu. 1H NMR (DMSO-de) δ 13,31 (s, 1H) , 11,48 (s, 1H) , 8,60 (d, J = 3,8 Hz, 1H), 8,19 (d, J = 8,4 Hz, 1H) , 7,95 (d, J = 16,2 Hz, 1H) ,
7,81 (dt, J = 1,7, 7,5 Hz, 1H), 7,66 (d, J = 7,9 Hz, 1H) ,
7, 60-7, 52 (m, 2H) , 7, 49-7,24 (m, 4H) , 7,17 (m, 2H) , 3,84 (t, J = 6,6 Hz, 2H) , 1,62 (septet, J = 6,4 Hz, 2H) , 0,92 (t, J = 6,1
Hz, 3H) . J\nal. výpočet pre C24H22N4O2S · (0,5 H2O, 0,25 CH2C12) :
C, 63,21, H, 5,14, N, 12,16, S, 6,96. Namerané: C, 63,15, H, 5,13, N, 12,17, S, 6,99.
237
Príklad 35(u)
6-[2-(allylkarbamoyl)fenylsulfanyl]-3-E-[2-(pyridín-2-yl)etenyl]-lH-indazol
Zlúčenina z príkladu 35(u) bola pripravená podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 35(a) okrem toho, že allylamín bol použitý namiesto n-propylamínu. XH NMR (DMS0-d6) δ 13,31 (s, 1H), 8,60 (m, 2H) , 8,19 (d, J = 8,5 Hz, 1H) , 7,93 (d, J = 16,3 Hz, 3H), 7,79 (dt, J = 1,7, 7,5 Hz, 1H) , 7,64 (m, 1H, 7, 60-7,48 (m, 3H) , 7,37-7,23 (m, 3H) , 7,17 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,07 (m, 1H) , 5,87 (m, 1H) , 5,25 (dq, J = 17,33, 1,9 Hz, 1H) , 5,09 (dq, J = 10,2, 1,9 Hz, 1H) , 3,87 (m, 2H) . Anál, výpočet pre C24H20N4OS · 0,8 CH2C12: C, 62, 00, H, 4,53, N, 11,66, S, 6,67. Namerané: C, 62,08, H, 4,73, N, 11,99, S, 6,66. MALDI FTMS (MH+) vypočítané: 413,1431, namerané 413,1449.
Príklad 35(v)
6-[2-(cyklopropylmetylkarbamoyl)fenylsulfanyl]-3-E-[2(pyridín-2-yl)etenyl]-lH-indazol
Zlúčenina z príkladu 35(v) bola pripravená podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 35(a) okrem toho, že cyklopropylmetylamín bol použitý namiesto n-propylamínu. 1H NMR
238 (DMSO-d6) δ 13,30 (s, ΙΗ) , 8,60 (d, J = 4,0 Hz, 1H) , 8,48 (t, J = 5,3 Hz, 1H), 8,17 (d, J = 8,7 Hz, 1H) , 7,90 (d, J = 16,4 Hz, 1H) , 7,80 (dt, J = 1,7, 7,5 Hz, 1H) , 7,67-7, 45 (m, 4H) , 733-
7,23 (m, 3H), 7,18 (d, J = 83 Hz, 1H) , 7,06 (m, 1H) , 3,13 (t, J = 6,2 Hz, 2Ή), 1,00 (m, 1H) , 0,41 (m, 1H), 0,24 (m, 1H) . Anál, výpočet pre C25H22N4OS · 0,5 CH2C12: C, 65, 30, H, 4,94, N, 11,95, S, 6,84. Namerané: C, 65,10, H, 4,93, N, 12,04, S,
6,82. MALDI FTMS (MH+) vypočítané 427,1587, namerané 427,1605.
Príklad 35(w)
6-[2-(kyanometylkarbamoyl)fenylsulfanyl]-3-E-[2-(pyridin-2yl)etenyl]-lH-indazol
Zlúčenina z príkladu 35(w) bola pripravená podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 35(a) okrem toho, že aminoacetonitril bol použitý namiesto n-propylamínu. 1H NMR
(DMSO-de) 8 13,35 (s, 1H), 9,19 (t, J = 5,3 Hz, 1H) , 8,60 (d, J
= 4,8 Hz, 1H), 8,20 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 7,94 (d, J = 16,4 Hz,
3H), 7,79 (dt, J = 1,7, 7,5 Hz, 1H), 7,70-7,50 (m, 4H), 7,41-
7,23 (m, 3H), 7,18 (d, J = 8, 5 HZ, 1H) , 7,06 (d, J = 6, 6 Hz,
1H) , 4,32 (d, J = 5,5 Hz, 2H) . MALDI FTMS (MH+) vypočítané
412,1227, namerané 412,1215.
Príklad 35(x)
6- [2-(etylkarbamoyl)fenylsulfanyl]-3-E-[2-(pyridín-2-yl)etenyl]-lH-indazol
239
Zlúčenina z príkladu 35(x) bola pripravená podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 35(a) okrem toho, že etylamín bol použitý namiesto n-propylamínu. 1H NMR (DMSO-de) δ
8,60 (d, J = 4,0 Hz, 1H) , 8,40 (t, J = 6,2 Hz, 1H) , 8,18 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,94 (m, 3H) , 7,81 (dt, J = 1,7, 7,5 Hz, 1H) , 7, 68-7, 44 (m, 3H) , 7,56 (m, 2H) , 7,30 (m, 3H) , 7,17 (dd, J =
8,1, 1,8 Hz, 1H) , 7,06 (m, 1H) , 3,24 (m, 2H) , 1,11 (t, J = 7,0 Hz, 3H) . Anál, výpočet pre C23H20N4OS · (1,75 H2O, 1,0 DMF): C,
61,82, H, 6,09, N, 13,87, S, 6,35. Namerané: C, 61,58, H, 5,66, N, 13,96, S, 5,93. MALDI FTMS (MH+) vypočítané 401, 1431, namerané 401,1417.
Príklad 35(y)
6-[2-(tiazol-2-ylkarbamoyl)fenylsulfanyl]-3-E-[2-(pyridín-2yl)etenyl]-lH-indazol
Zlúčenina z príkladu 35(y) bola pripravená podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 35(a) okrem toho, že
2-aminotiazol bol použitý namiesto n-propylamínu. XH NMR
(DMSO-de) δ 13,32 (s, 1H], 12,67 (s, 1H) , 8. 60 (d, J = 4,1 Hz,
1H) , 8,18 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7 ,93 (d, J = 16,3 Hz, 1H), 7,80
(dt, J = 1,7, 7,5 Hz, 1H) , 7,65 (d, J = 7, 9 Hz, 1H) , 7,65 (d,
J = 8, 3 Hz, 1H) , 7,60-7, 51 (m, 3H) , 7, 49-7, 34 (m, 2H), 7,26
240 (m, 2H) , 7,18 (m, 2H) . Anál, výpočet pre C24Hi7N5OS2 · 0,75 H20: C, 61,45, H, 3,98, N, 14,93, S, 13,67. Namerané: C, 61,35, H, 4,10, N, 14,96, S, 13,68.
Príklad 35(z)
6-[2-(2-(etoxy)etylkarbamoyl)fenylsulfanyl]-3-E-[2-(pyridín-2yl)etenyl]-lH-indazol
Zlúčenina z príkladu 35 (z) bola pripravená podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 35(a) okrem toho, že
2-etoxyetylamín bol použitý namiesto n-propylamínu. 1H NMR (DMSO-de) δ 13,30 (s, 1H) , 8,60 (d, J = 4,0 Hz, 1H) , 8,45 (t, J = 6,2 Hz, 1H) , 8,18 (d, J = 8,5 Hz, 1H) , 7,93 (m, 2H) , 7,80 (dt, J = 1,7, 7,5 Hz, 1H), 7,65 (d, J = 7,7 Hz, 1H) , 7,60-7,45 (m, 3H), 7, 36-7,23 (m, 3H), 7,17 (d, J= 8,3 Hz, 1H), 7,07 (m, 1H), 3,50 (m, 6H), 1,10 (d, J = 7,0 Hz, 3H) . Anál. výpočet pre CH2,N4O2S0,5 CH2C12: C, 62,89, H, 5,17, N, 11,50, S, 6,58.
Namerané: C, 62,45, H, 5,33, N, 11,25, S, 6,55.
Príklad 35(aa)
6-[2-((3-metoxybenzyl)metylkarbamoyl)fenylsulfanyl]-3-E-[2(pyridín-2-yl)etenyl]-lH-indazol
241
Zlúčenina z príkladu 35(aa) bola pripravená podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 35(a) okrem toho, že
3-metoxybenzylamín bol použitý namiesto n-propylamínu. 1H NMR (DMSO-de) δ 13,30 (s, 1H) , 8,97 (t, J - 5,5 Hz, 1H) , 8,60 (d, J = 4,2 Hz, 1H) , 8,18 (d, J = 8,7 Hz, 1H) , 7,93 (d, J = 16,3 Hz,
1H) , 7,80 (dt, J = 1,7, 7,5 Hz, 1H) , 7,65 (d, J = 7,9 Hz,1H) ,
7,60-7,51 (m, 3H), 7,38-7,15 (m, 5H) , 7,08 (m, 1H) , 6,94(m,
2H) , 6,80 (dd, J = 8,1, 1,5 Hz, 1H) , 4,44 (d, J = 6,6 Hz,2H) ,
3,71 (s, 3H) . Anál, výpočet pre C2gH24N4O2S · 0,4 H20: C, 60,25, H, 4,50, N, 17,57, S, 8,04. Namerané: C, 60,14, H, 4,47, N,
17,42, S, 8,00.
Príklad 35(bb)
6-[2-((fur-2-yl)metylkarbamoyl)fenylsulfanyl]-3-E-[2-(pyridín-
2-yl)etenyl]-lH-indazol
Zlúčenina z príkladu 35(bb) bola pripravená podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 35(a) okrem toho, že
2-aminometylfurán bol použitý namiesto n-propylamínu. 1H NMR (DMSO-de) δ 13,31 (s, 1H) , 8,93 (t, J = 5,7 Hz, 1H) , 8,60 (d,J = 4,3 Hz, 1H) , 8,19 (d, J = 8,0 Hz, 1H) , 7,93 (d, J = 16,5 Hz,
1H), 7,80 (dt, J = 1,9, 7,4 Hz, 1H) , 7,66 (d, J = 7,7 Hz, 1H),
7,59-7,48 (m, 4H), 7,30 (m, 4H), 7,37-7,24 (m, 3H) , 7,18 (d,J = 9,2 Hz, 1H), 7,06 (d, J = 8,1 Hz, 1H) , 6,40 (m, 1H) ,6,31 (m, 1H) , 4,44 (d, J = 5,3 Hz, 2H) . Anál, výpočet. Alebo
C26H2oN402S · (0,1 H20, 0, 75 CH2C12) : C, 62, 02, H, 4,22, N,
10,82, S, 6,19 .Namerané : C, 61,58, H, 4,30, N, 10,55, S,
6,12.
242
Príklad 35(cc)
6-[2-(2-propynylkarbamoyl)fenylsulfanyl]-3-E-[2-(pyridín-2yl)etenyl]-lH-indazol
Zlúčenina z príkladu 35 (cc) bola pripravená podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 35(a) okrem toho, že propargylamín bol použitý namiesto propylamínu (76 %): XH NMR (300 MHz, CDCla) δ 8,56 (m, 1H) , 7,96 (d, 1H, J = 8,6 Hz), 7,81 (d, 1H, 16,4 Hz), 7,68 (dt, 1H, J- = 1,8, 7,8 Hz), 7,6 (m, 1H), 7,52-7, 45 (m, 3H) , 7,3-7,23 (m, 3H) , 7,16 (m, 2H), 4,10 (m,
2), 2,20 (t, 1H. J = 2,6 Hz). LCMS (100% oblast) Rt = 3,36 minúty (poz) [M+H]/z vypočítané 411,1, namerané 411,1. Analyzované s 0,2 H2O, 0,17 DMF, 1,2 dichlórmetán, vypočítané: C (58,44), H (4,19), N (11,05), S (6,07). Namerané: C (58,18), H (4:11), N (10,98), S (6,05).
Príklad 35(dd)
6-[2-(etoxykarbamoyl)fenylsulfanyl]-3-E-[2-(pyridín-2-yl)etenyl]-lH-indazol
Zlúčenina z príkladu bola pripravená podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 35(a) okrem toho, že
243 etoxyamín bol použitý namiesto propylaminu: 1H NMR (300 MHz, CDC13) δ 11,60 (s, 1H) , 8,71 (d, 1H, J = 7,9 Hz), 8,30 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 8,05 (d, 1H, J = 16,4 Hz), 7,91 (dt, 1H, J = 1,7,
7,7 Hz), 7,76 (d, 1H, J = 7,8 Hz), 7,67 (m, 2H) , 7,56 (dd, 1H,
J = 1,8, 7,3 Hz), 7,52-7,36 (m, 3H) , 7,28 (m, 2H) , 4,06 (q,
2H, J = 7,0 Hz), 1,31 (t, 2H, J = 7,0 Hz), LCMS (100% oblasť)
Rt = 3,28 minúty (poz) [M+H]/z vypočítané 417,1, namerané
417,1. Analyzované s 0,2 H2O, vypočítané: C (65,53), H (4,98), N (13,05), S (7,48). Namerané: C (65,66), H (4,91), N (12,75), S (7,44).
Príklad 35(ee)
6-[2-(2-metyl-2-propenylkarbamoyl)fenylsulfanyl]-3-E-[2(pyridín-2-yl)etenyl]-lH-indazol
Zlúčenina z príkladu 35(ee) bola pripravená podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 35(a) okrem toho, že 2-metylallylamín bol použitý namiesto propylaminu: ľH NMR (300 MHz, CDCI3) δ 8,56 (m, 1H) , 7,98 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 7,81 (d, 1H, J = 16,4 Hz), 7,69 (dt, 1H, J = 1,7, 7,7 Hz), 7,60 (m,
1H) , 7, 53-7,42 (m, 3H) , 7,32-7,24 (m, 3H) , 7,16 (m, 2H) , 6,72 (m, 1H) , 4,89 (s, 1H) , 4,81 (s, 1H) , 3,90 (d, 2H, J = 5, 5 Hz) ,
1,71 (s, 3H) . LCMS (100% oblasť) Rt = 3,37 minúty (poz) [M+H]/z vypočítané 427,1, namerané 427,1. Analyzované s 0,7 H2O, 0,1 dichlórmetán, vypočítané C (67,35), H (5,31), N
244 (12,52), S (7,16). Namerané: C (67, 55), H (5,39), N (12,35), S (7,15) .
Príklad 35(ff)
6-[2-((3-fluórbenzyl)metylkarbamoyl)fenylsulfanyl]-3-E-[2(pyridín-2 yl)etenyl]-lH-indazol
Zlúčenina z príkladu 35(ff) bola pripravená podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 35(a) okrem toho, že
3-fluórbenzylamín bol použitý namiesto propylamínu: XH NMR (300 MHz, CDCla) δ 8,60 (m, IH) , 7,97 (d, IH, J = 8,5 Hz), 7,86 (d,
IH, J = 16,4 Hz), 7,70 (m, 2H) , 7,51 (m, 2H) , 7,33 (m, 4H) ,
7,18 (m, 2H), 7,11 (dd, IH, J = 1,6, 8,5 Hz), 6,95 (m, 3H) ,
4,51 (d, 2H, J = 5,7 Hz), LCMS (100% oblasť) Rt = 3,55 minúty (poz) [M+H]/z vypočítané 481,1, namerané 481,1. Analyzované s 0,7 H20, 0,5 dichlórmetán, vypočítané: C (63,91), H (4,40), N (10,46), S (5,99). Namerané : C (63, 80), H (4,34), N (10,34), S (5, 98) .
Príklad 35(gg)
6-[2-(2-(metylamino)etylkarbamoyl)fenylsulfanyl]-3-E-[2(pyridín-2-yl)etenyl]-lH-indazol
245
Zlúčenina z príkladu 35(gg) bola pripravená podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 35(a) okrem toho, že N-metyletyléndiamin bol použitý namiesto propylaminu: XH NMR (300 MHz, CDC13) Ô 8,60 (m, IH) , 7,98 (d, IH, J = 8,5 Hz), 7,81 (d, IH, J = 16,4 Hz), 7,69 (dt, IH, J = 1,7, 7,7 Hz), 7,52 (m, IH), 7,50-7, 40 (m, 3H) , 7,30-7,20 (m, 3H) , 7,16 (m, 2H) , 3,45 (t, 2H), 2,69 (t, 2H), 2,15 (š S, 3H), LCMS (100% oblasť) Rt =
3,16 minúty (poz) [M+H]/z vypočítané 430,1, namerané 430,1. Analyzované s 0,2 H2O, 0,6 dichlórmetán, 0,06 hexán, vypočítané: C (61,28), H (5,24), N (14,31), S (6,55).
Namerané: C (61,26), H (5,14), N (14,22), S (6,56).
Príklad 35(hh)
6-[2-(2-(tien-2-yl)etylkarbamoyl)fenylsulfanyl]-3-E-[2(pyridín-2-yl)etenyl]-lH-indazol
Zlúčenina z príkladu 35(hh) bola pripravená podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 35(a) okrem toho, že 2-(2-aminoetyl)tiofén bol použitý namiesto propylaminu: XH NMR (300 MHz, CDCI3) Ô 8,56 (m, IH) , 7,98 (d, IH, J = 8,5 Hz), 7,81 (d, IH, J = 16,4 Hz), 7,69 (dt, 1H, J = 1,7, 7,7 Hz), 7,60 (m, IH), 7, 53-7, 42 (m, 3H) , 7, 32-7, 24 (m, 3H) , 7,16 (m, 2H) , 6,72 (m, IH) , 6,63 (m, IH) , 6,52 (m, IH) , 3,45 (q, 2H), 3,00 (t, 2H) . Analyzované s 0,5 H2O, 0,07 dichlórmetán, vypočítané, C (65, 35), H (4,69), N (11,26), S (12,82). Namerané: C (65, 49), H (4,80), N (11,21), S (12,77) .
246
Príklad 35(ii)
6-(2-(aminokarbamoyl)fenylsulfanyl]-3-E-[2-(pyridin-2-yl)etenyl]-lH-indazol
Zlúčenina z príkladu 35 (ii) bola pripravená podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 35(a) okrem toho, že hydrazín bol použitý namiesto propylamínu: 1H NMR (300 MHz, DMSO-de) δ 13,3 (s, 1H) , 9,57 (s, 1H) , 8,54 (d, 1H, J = 3, 9
Hz), 8,14 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 7,89 (d, 1H, J = 16,4 Hz), 7,73 (dt, 1H, J = 1,7, 7,6 Hz), 7,60 (d, 1H, J = 7,9 Hz), 7,50 (m,
2H), 7,40 (dd, 1H, J = 1,8, 7,1 Hz), 7,3-7,1 (m, 4H) , 7,0 (m, 1H). LCMS (100% oblast) Rt = 0,55 minúty (poz) [M+H]/z vypočítané 388,1, namerané 388,1. Analyzované s 0,1 DMF, 0,55
EtOAc, 0,12 toluén (NMR) a 0,15 H2O, vypočítané: C (63,98), H (5,15), N (15,63), S (7,02). Namerané: C (63, 99), H (5,07), N (15,75), S (6,89).
Príklady 35(jj)-35(nn) môžu byť pripravené podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 35(a).
N
247
Príklad 35(kk)
Príklad 35(mm)
Príklad 35(nn)
248
Príklad 36(a)
6- [2- (N2- (l-metylimidazol-2-ylmetylidén) hydrazino) karbonyl) fenylsulfanyl]-3-E-[2-(pyridín-2-yl)etenyl]-lH-indazol
mg (0,103 minol) zlúčeniny pripravené v príklade 35 (ii) bolo podrobené pôsobeniu 29 mg (0,258 mmol, 2,5 ekv.) 1-metyl2-imidazolkarboxaldehydu v etanole za vzniku zlúčeniny z príkladu 36 (a): ΣΗ NMR (300 MHz, DMSO-de) δ 8,60 (m, 2H) ,
8,31 (s, 1H) , 8,18 (d, 1H) , 8,02 (d, 1H) , 7,98 (d, 1H) , 7,80 (m, 2H), 7,63 (m, 2H) , 7,40 (m, 3H) , 7,30 (m, 1H) , 7,20 (m, 1H) , 7,02 (m, 2H) , 6,93 (s, 1H) , 4,00 (s, 3H) , LCMS (100% oblasť) Rt = 4,0 minúty (poz) [M+H]/z vypočítané 480,2, namerané 480,2. Analyzované s 1,45 H2O, vypočítané: C (61,76), H (4,76), N (19,39), S (6,34). Namerané: C (61,78), H (4,67), N (19,34) , S (6,39) .
Príklad 36(b)
6- [2- (N2-(pyrid-2-ylmetylidén)hydrazino)karbonyl)fenylsulfanyl ]-3-E-[2-(pyridín-2-yl)etenyl]-lH-indazol
249
Zlúčenina z príkladu 36 (b) bola pripravená podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 36(a) okrem toho, že 2-pyridylkarboxaldehyd bol použitý namiesto l-metyl-2imidazolkarboxaldehydu: 1H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 8,57 (m, 2H) ,
8,45 (m, 2H), 8,22 (d, 1H) , 8,10 (s, 1H) , 7,93 (d, 1H) , 7,83 (d, 1H), 7,8-7,1 (m, 11H), LCMS (100% oblasť) Rt = 4,0 minúty (poz) [M+H]/z ' vypočítané 477,1, namerané 477, 1, Analyzované s 0,85 H2O, vypočítané: C (65, 93), H (4,45), N (17,09), S (6,52) .Namerané: C (66, 02), H (4,42), N (16,95), S (6,38).
Príklad 36(c)
6- [2- (N2- (2,2,2-trifluroetylidén)hydrazino)karbonyl)fenylsulfanyl] -3-E- [2-(pyridín-2-yl)etenyl)-lH-indazol
Zlúčenina z príkladu 36(c) bola pripravená podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 36(a) okrem toho, že trifluóracetaldehyd bol použitý namiesto l-metyl-2-imidazolkarboxaldehydu: 2H NMR (300 MHz, DMSO-dg) δ 8,70 (m, 1H) , 8,25 (m, 1H) , 8,02 (d, 1H) , 7,90 (dt, 1H) , 7, 80-7,20 (m, 10H) . LCMS (100% oblasť) Rt = 5,64 minúty (poz) [M+H]/z vypočítané 468,1, namerané 468,0. Analyzované s 0,75 H2O, vypočítané: C (57,39), t
250
H (3,67), N (14,56), S (6,67). Namerané: C (57,44), H (3,67),
N (14,56), S (6,67) .
Príklad 37(a)
6-[6-fluór-2-(etoxykarbamoyl)fenylsulfanyl]-3-E-[2-(pyridín-2yl)etenyl]-lH-indazol
Zlúčenina z príkladu 37(a) bola pripravená podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 35(a) okrem toho, že bola použitá východzia látka popísaná nižšie a že etoxyamín bol použitý namiesto propylaminu: 1H NMR (300 MHz, CDCI3) δ
8,59 (m, 1H) , 8, 08 (d, 1H) , 7,88 (d, 1H, J = 16,4 Hz), 7,79
(t, 1H) , 7, 65 (d, 1H) , 7, 60 (m, 1H), 7,50 (d, 1H, J = 16,4
Hz) , 7, 40 (t, 1H) , 7,36 (d, 1H), 7,28 (s, 1H), 7,23 (m, 1H) ,
7,10 (d, 1H), 3, 90 (q, 2H) , 1,19 (t, 3H). LCMS (100% oblasť)
Rt = 4,85 minúty (poz) [M+H]/z vypočítané 435,1, namerané
435,1, (neg) [M-H]/z vypočítané 433,1, namerané 433,1. Analyzované s 0,35 H2O, 0,07 EtOAc vypočítané: C (62, 56), H (4,57), N (12,54), S (7,17). Namerané: C (62,61), H (4,55), N (12,49), S (7,11) .
Východzia látka bola pripravená takto:
(i)
251
Roztok 1,07 g (5,75 mmol) etyl-2,3-difluórbenzoátu v 10 ml DMF bol podrobený pôsobeniu 896 mg (11,5 mmol, 2,0 ekv.) sulfidu sodného v 23 °C. Zmes bola miešaná v argónovej atmosfére po dobu 10 hodín. Roztok bol nariedený 50 ml etylacetátu a 50 ml vody a 5 ml 10% kyseliny citrónovej. Organická vrstva bola premytá saturovaným vodným hydrouhličitanom sodným, usušená nad sulfátom sodným, dekantovaná a koncentrovaná pri zníženom tlaku za vzniku etylesteru 3-fluór-2-merkaptobenzoovej kyseliny: 1H NMR (300 MHz, CDC13) δ 7,71 (t, 1H), 7,38 (m, H), 7,12 (m, 1H), 4,41 (q, 2H) , 1,40 (t, 3H), LCMS (100% oblasť) Rt = 4,53 minúty (poz) [M+H]/z vypočítané 201,0, namerané 200,9.
(ii)
320 mg (39 %) vyššie uvedeného tioéteru bolo pripravené podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 33(a), krok (iii), okrem toho, že etylester 3-fluór-2-merkaptobenzoovej kyseliny bol použitý namiesto tiosalicylátu: FTIR (tenký film) 2952, 1727, 1607, 1586, 1564, 1469, 1433, 1366, 1292, 1249,
182, 1141, 1074, 836 cm-1, XH NMR (300 MHz, CDCI3) δ 8,62 (m,
1H), 7,90 (d, 1H, J = 8,6 Hz), 7,85 (d, 1H, J = 16,4 Hz), 7,67 (dt, 1H, J = 1,8, 7,7 Hz), 7,57-7,38 (m, 5H) , 7,23-7,10 (m,
3H), 5,65 (s, 2H), 4,34 (q, 2H, J = 7,1 Hz), 3,56 (t, 2H, J =
8,2 Hz), 1,30 (t, 3H, J = 7,1 Hz), 0,88 (t, 2H, J = 8,2 Hz), -
0,06 (s, 9H) , LCMS (100% oblasť) Rt = 4,44 minúty (poz) [M+H]/z vypočítané 549,2, namerané 549,2.
252 (iii)
303 mg (99 %) karboxylovej kyseliny uvedenej vyššie bolo pripravené podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 33 (a), krok (iv) : FTIR (tenký film) 2953, 2496, 1715,1643,
1607, 1567, 1470, 1434, 1300, 1250, 1221, 1075, 967, 932,836 cm’1, 3H NMR (300 MHz, CDC13) Ô 8,81 (m, 1H) , 7,87 (m, 2H) , 7,79 (m, 3H), 7,65 (m, 2H), 7,56 (m, 1H), 4,40 (m, 1H), 7,30(m,
1H), 7,00 (dd, 1H, J = 1,4, 8,5 Hz), 5,58 (s, 2H) , 3,59(t,
2H, J = 8,2 Hz), 0,93 (t, 2H, J = 8,2 Hz), -0,01 (s, 9H) , LCMS (100% oblasť) Rt = 10,47 minútach (poz) [M+H]/z vypočítané
522,2, namerané 522,2.
(iv)
Vyššie uvedená sol bola pripravená podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 33 (g) : XH NMR (300 MHz, DMSO-de) δ
13,2 (s, 1H) , 8,68 (m, 1H) , 8,12 (d, 1H, J = 8,5 Hz) , 7, 98 (d,
1H, J = 16,4 Hz) , 7 , 88 (dt, 1H, J = 1,8, 7,6 Hz), 7,73 (d, 1H,
J = 7,9 Hz), 7,61 (d, 1H, J = 16,4 Hz: ), 7, 43-7,32 (m, 3H) ,
7,20 (m, 2H), 7,07 (t, 1H) , 3,23 (m, 8H) , 1,68 (m, 8H) ,
1,41(m, 8H), 1,04 (t, 12H) .
(v)
253
Vyššie uvedený pentafluórfenylester bol pripravený podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 35(a), krok (i): LCMS (100% oblasť) Rt = 10,53 minúty (poz) [M+H]/z vypočítané 558,1, namerané 558,1.
Príklad 37(b)
6-[6-fluór-2-(cyklopropylkarbamoyl)fenylsulfanyl]-3-E-[2(pyridín-2-yl)etenyl]-lH-indazol
Zlúčenina z príkladu 37(b) bola pripravená podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 37(a) okrem toho, že cyklopropylamín bol použitý namiesto etoxyamínu: 1H NMR (300 MHz, DMSO-de) δ 8,42 (m, 1H) , 8,28 (d, 1H) , 7,83 (d, 1H) , 7,75 (m, 2H) , 7,60 (m, 1H) , 7,31 (m, 2H) , 7,15 (m, 4H) , 6,86 (d, 1H) , 2,58 (m, 1H) , 0,42 (m, 2H) , 0,23 (m, 2H) . LCMS (100% oblasť) Rt = 4,91 minúty (poz) [M+H]/z vypočítané 431,1, namerané 431,1, (neg) . [M-H]/z vypočítané 429,1, namerané
429,2. Analyzované s 0,55 H2O, vypočítané: C (65,46), H (4,60),
N (12,72), S (7,28). Namerané: C (65,52), H (4,58), N (12,64),
S (7,06) .
Príklad 37(c)
6- [6-fluór-2-(izopropoxykarbamoyl)fenylsulfanyl]-3-E-[2(pyridín-2-yl)etenyl]-lH-indazol
254
Zlúčenina z príkladu 37(c) bola pripravená podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 37(a) okrem toho, že izopropoxyamín bol použitý namiesto etoxyamínu: 1H NMR (300
MHz,
CDC13) δ 9,50
1H) ,
7,72 (d,
1H), 7,68 (d,
1H, J = 16,4
Hz), 7,54 (dt, 1H) ,
7,35 (m, 4H) ,
7,20 (m,
4H) ,
4,03 (m,
1H),
1,07 (d, 6H) , LCMS (100% oblasť)
Rt = 4,90 minúty (poz) [M+H]/z vypočítané 449,1, namerané 449,1.
Analyzované s
0,1 DMF, (4,87), N (12,45), S (6,95). Namerané: C (63,22), H (4,84), N (12,37), S (6,91).
Príklad 37(d)
6-[6-fluór-2-(metylkarbamoyl)fenylsulfanyl]-3-E-[2-(pyridín-2yl)etenyl]-lH-indazol
Zlúčenina z príkladu 37(d) bola pripravená podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 37(a) okrem toho, že metylamín bol použitý namiesto etoxyamínu: 1H NMR (300 MHz, DMSO-de) δ 8,37 (m, 1H) , 8,18 (m, 1H) , 7,87 (d, 1H) , 7,67 (d,
1H, J = 16,4 Hz), 7,59 (dt, 1H) , 7,40 (d, 1H) , 7,30 (m, 2H) ,
7,20 (m, 4H) , 6,85 (d, 1H) , 2,49 (d, 3H), LCMS (100% oblasť)
Rt = 4,63 minúty (poz) [M+H]/z vypočítané 405,1, namerané
405,2, (neg) [M-H]/z vypočíta'né 403, 1, namerané 403, 1.
255
Analyzované s 0,2 DMF, 0,3 CH2CI2 (nmr) , 0,3 H2O, vypočítané: C (61,13), H (4,39), N (13,07), S (7,13). Namerané: C (61,08), H (4,35), N (13,14), S (7,22) .
Príklad 38(a)
6-[2-(2-metylchinol-6-ylkarbamoyl)fenylsulfanyl]-3-E-(2styryl)-lH-indazol
Zlúčenina z príkladu 38(a) bola pripravená podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 33(b) okrem toho, že kroky (i) a (ii) boli vynecháné: 1H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 8,58 (s, 1H), 8,13 (s, 1H) , 7,80 (m, 3H) , 7,67 (t, 1H) , 7,43 (m,
2H), 7,34-7,16 (m, 9H) , 7,13 (d, 1H) , 7,07 (d, 1H) , 2,60 (s,
3H). LCMS (100% oblasť) Rt = 3,87 minúty (poz) [M+H]/z vypočítané 513,1, namerané 513,2.
Príklad 38(b)
6—[2—((4-piperazín-l-yl-3-trifluórmetylfenyl)karbamoyl)fenylsulfanyl] -3-E-(2-styryl)-lH-indazol
NH
Zlúčenina z príkladu (b) bola pripravená spôsobom, ako bolo popísané v príklade 38(a) okrem
3-trifluórmetyl-4-piperazín-l-yl-fenylamin bol podobným toho, že použitý
256
namiesto 6-amino-2-me ty1chino1ínu: XH NMR (300 MHz, CDCI3) δ
8,75 (s, 1H), 7,95 (d, 1H), 7,77 (m, 2H) , 7, 69 (s, 1H), 7,55
(m, 3H) , 7,40-7,25 (m, 9H) , 7,20 (d, 1H) , 3,00, (m, 4H), 2,83
(m, 4H) . LCMS (100% oblasť) Rt = : 3, 94 minúty (poz ) [M+H]/z
vypočítané 600,2, namerané 600,2. Analyzované s 0,1 hexán (nmr) , 1,4 H20, vypočítané: C (63,71), H (5,12), N (11,06), S (5,06). Namerané: C (63, 67), H (5,06), N (10,98), S (5,00).
Príklad 39(a)
6-[2-(metylkarbamoyl)fenylamino]-3-E-[2-(pyridín-2-yl)etenyl]lH-indazol
Roztok 39 mg (0,07820 mmol) N-metyl-2-[3-((E)-2-pyridín-2ylvinyl)-1-(2-trimetylsilanyletoxymetyl)-lH-indazol-6ylaminojbenzamidu (syntéza popísaná nižšie), 21 μΐ (0,3128 mmol) etylendiamínu a 0,63 ml (0, 6256 mmol) IM TBAF v THF bol miešaný v olejovom kúpeli v 90 °C po dobu 2 hodín. Surová reakčná zmes bola nariedená 50 ml etylacetátu, extrahovaná 2 x 20 ml IM roztoku hydrouhličitanu sodného, 5 x 20 ml solanky, usušená nad sulfátom horečnatým, filtrovaná a koncentrovaná na pevnú látku. Pevná látka bola rozpustená v THF, koncentrovaná na olej, potom triturovaná zmesou CH2CI2 a Et2O, čo spôsobilo precipitáciu prášku. Prášok bol zbieraný filtráciou, premytý Et2O a usušený za vysokého vákua. Hmotnosť zobratej pevnej látky bola 20 mg (70 % výťažok). 1H NMR (DMSO-dg) δ 12,91 (š s, 1H) , 9,86 (s, 1H) , 8,60 (d, J = 4,0 Hz, 1H) , 8,52 (m, 1H) ,
257
8,08 (d, J = 8,5 Hz, 1H) , 7,90 (d, J = 16,4 Hz, 1H) , 7,80 (dt, J = 1,7, 7,5 Hz, 1H) , 7,65 (d, J = 7,9 Hz, 1H) , 7,51 (d, J =
16,1 Hz, 1H), 7, 47-7,34 (m, 2H) , 7,25 (m, 2H) , 7,00 (d, J =
9,6 Hz, 1H) , 6,89 (t, J = 7,0 Hz, 1H) , 2,79 (d, J = 4,7 Hz,
3H) . 7\nal. výpočet pre C22H19N5O · 0,5 CH2C12: C, 65,61, H, 4,89, N, 17,00. Namerané: C, 65,52, H, 5,08, N, 16,78.
Východzia látka bola pripravená takto:
258 (i)
Roztok 191 mg (0,4 mmol) 6-jód-3-karboxaldehyd-l-[2(trimetylsilanyl)etoxymetyl]-lH-indazolu (z príkladu 33 (a), krok (ii) ) , 120,1 mg (0,8 mmol) metylantranilátu, 28 mg (0,08 mmol) 2-(dicyklohexylfosfino)bifenylu, 18,4 mg (0,02 mmol) Pd2(dba)3, 212,3 mg (1,0 mmol) K3PO4, rozpustený v 1,0 ml suchého DME, bol vo vákuu 3 x prebublávaný argónom, potom miešaný v argónovej atmosfére po dobu 3 dní v olejovom kúpeli v 80 °C. Surová zmes bola filtrovaná cez krátky stĺpec SiO2 za elúcie etylacetátom, a potom purifikovaná chromatografiou na chromatotróne s kruhovou doskou za elúcie zmesí 25% CH3CN a CH2C12. Hmotnosť čistých frakcií bola 42 mg. Bolo tiež zobraté ďalších 120 mg produktu, ktorý bol čistý ~90 %. Celkový výťažok N-metyl-2-[3-((E)-2-pyridín-2-ylvinyl)-1-(2-trimetylsilanyletoxymetyl)-lH-indazol-6-ylamino]benzamidu bolo 162 mg alebo ~81 %.
Príklad 39(b)
6- [2- (prop-2-ynylkarbamoyl) fenylamino] -3-E- [2-’(pyridín-2-yl) etenyl]-lH-indazol
Zlúčenina z príkladu 39(b) bola pripravená podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 39(a) okrem toho, že
259 propargylamín bol použitý namiesto metylaminu. 1H NMR (CDCI3) δ
9,50 (s, 1H), 8,64 (d, J = 4,5 Hz, 1H) , 7,98 (d, J = 8,9 Hz,
1H), 7,90 (d, J = 16,4 Hz, 1H) , 7,70 (dt, J = 1,7, 7,5 Hz,
1H), 7,57 (d, J = 16,3 Hz, 1H) , 7,52-7, 43 (m, 3H) , 7,34 (dt, J = 1,5, 7,2 Hz, 1H) , 7,26 (m, 3H) , 7,34 (ddd, J = 1,0, 4,9, 7,5
Hz, 1H) , 7,09 (dd, J = 1,7, 9,0 Hz, 1H) , 6,85 (dt, J = 1,0,
7,0 Hz, 1H), 6,33 (š s, 1H) , 4,24 (dd, J = 2,6, 5,3 Hz, 2H) , 2,30 (t, J = 5,5 Hz, 1H) . Anál, výpočet pre C24H19N5O · 0,25 CH2CI2: c, 70,24, H, 4,74, N, 16,89. Namerané: C, 70,72, H, 4,96, N, 16,55.
Príklad 40(a)
6-(3-aminobenzoyl)-3-E-[2-(pyridin-2-yl)etenyl-lH-indazol
NH2
Zlúčenina z príkladu 40 (a) bola pripravená podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 11. 1H NMR (300 MHz, DMSO-dg) δ 13,5 (s, 1H) , 8,62 (d, 1H, J = 3,86 Hz), 8,34 (d,
1H, J = 8,5 Hz), 8,01 (d,
7,83 (td, 1H, J = 7,69 Hz,
7,29 (qd, 1H, J = 7,39 Hz,
7, 77) , 7, 00 (t, 1H, J = 1,86 = 1,40 Hz), 6,86 (m, 1H) , í
1H, J - 16,36 Hz) , 7, 87 (s, 1H) ,
J = 1,81 Hz) , 7,58-7,71 (m, 3H) ,
J = 0,98 Hz), 7, 21 (t, 1H, . J =
Hz), 6,90 (dt, 1H, J = 6, 15 Hz, J
>,40 (š s, 2H) . MS (ESI+) [M+H]/z
vypočítané 446, namerané 446. Vypočítané: C, 74,10, H, 4,74,
N, 16,46. Namerané: C, 72,72, H, 4,87, N, 16,02.
Východzia látka bola pripravená takto:
260 (i)
BÍOHfe
K 8,22 g (60 mmol) m-aminofenylborónovej kyseliny v 60 ml dimetylformamidu v 23 °C v argónovej atmosfére bolo pridané 10 ml (72 mmol) trietylaminu a 0, 366 g (3 mmol) 4-(dimetylamino)pyridinu. Výsledný roztok bol zohrievaný na 50 °C. Bolo pridané 20,4 g (72 mmol) 4-nitrofenylester-2-trimetylsilanyletylesteru kyseliny uhličitej v 5 dávkach po 4 g po dobu 18 hodín. Po 44 hodinách bolo pridané 3,4 g (12 mmol)
4-nitrofenylester-2-trimetylsilanyletylesteru uhličitej kyseliny nasledované 1,7 ml (12 mmol) trietylaminu. Po 63 hodinách reakčná zmes bola koncentrovaná na olej. Purifikácia chrómatografiou na silikagéle za elúcie zmesí etylacetátu a hexánu 3:7 až 7:3 poskytla 8,12 g (48 %) 2-trimetylsilanyletylesteru (3-borónfenyl)karbámovej kyseliny: Rf sm 0,067, p 0,33 (zmes etylacetátu a hexánu 1:1), 2H NMR (300 MHz, CD3OD) δ 7,64 (s, 1H), 7,49 (d, 1H, J = 8,94 Hz), 7,26 (m, 2H) ,
4,23 (t, 2H, J = 8,28 Hz), 1,06 (t, 2H, J = 8,21 Hz) 0,72 (s, 9H). MS (ESI) [M+Na]/z vypočítané 304, namerané 304.
(ii)
Zmes 7,1 g (14,8 mmol) 6-jód-3-((E)-2-pyridín-2-ylvinyl)-
1-(2-trimetylsilanyletoxymetyl)-lH-indazolu, 8,32 g (29,6 mmol) 2-trimetylsilanyletylesteru (3-borónová kyselinafenyl)karbámovej kyseliny, 312 mg (0,44 mmol) dichlórbis-
261 (trifenylfosfin)paládia(II), 6,13 g (44,4 mmol) uhličitanu draselného a 2,1 ml (14,8) trietylaminu v 60 ml anizolu bola zohrievaná na 80 °C v atmosfére oxidu uhoľnatého. Po 24 hodinách bolo pridané ďalších 2,1 ml (14,8 mmol) trietylaminu. Po 33 hodinách bolo zistené analýzou TLC, že reakcia bola ukončená (zmes etylacetátu a hexánu 7:3). Reakčná zmes bola ochladená na 23 °C, a potom nariedená 40 ml saturovaného vodného NaHCO3 a 300 ml etylacetátu. Fázy boli oddelené a vodná fáza bola extrahovaná 2 x 100 ml etylacetátu. Zlúčené etylacetátové vrstvy boli premyté 100 ml soľanky, a usušené nad Na2SO4, filtrované a koncentrované. Purifikácia chromatografiou na silikagéle poskytla 7,22 g (79 %) 2trimetylsilanyletylesteru (3-{1-[3-(2-pyridín-2-yletyl)-1-(2trimetylsilanyletoxymetyl)-lH-indazol-6-yl]metanoyl}fenyl)karbámovej kyseliny ako žltého skla. 3H NMR (300 MHz,
CDC13 ) δ 8,65 (d, 1H , J = 3, 93 Hz), 8,10 (d, 1H, J = 8,54 Hz) ,
8, 04 (s, 1H) , 7,94 (d, 1H, J = 16,33 Hz) , 7,82 ( S, 1H), 7 , 66-
7,77 (m, 3H) , 7, 61 (d, 1H, J = 16,35 Hz) , 7,40- 7,51 (m, 3H) ,
7,19 (m, 1H) , 7,00 (s, 1H) , 5,77 (s, 2H) , 4,25 (t, 2H, J =
6, 93 Hz) , 3,6 0 (t, 2H, J = = 8,10 Hz), 1,04 (t, 2H, J = 6,79
Hz) , 1,0 0 (t, 2H, J = 8 /13 Hz), 0,04 (s, 9H), 0, 0 (s, 9H) . MS
(ESI+) [M+H]/z vypočítané 615, namerané 615.
Príklad 40(b)
6- (3-amino-4-metylbenzoyl)-3-E-[2-(pyridín-2-yl)etenyl]-1Hindazol
NHj
62
Zlúčenina z príkladu 40 (b) bola pripravená podobným spôsobom, ako v príklade 40(a) okrem toho, že v kroku (i) 4-metyl-3-aminofenylborónová kyselina, pripravená ako je popísané nižšie, bola použitá namiesto m-aminofenylborónovej kyseliny. XH NMR (DMSO-d6) δ 13, 6 (s, 1H) , 8, 62 (d, 1H, J =
3,81 Hz), 8,33 (d, 1H, J = 8,47 Hz), 8,01 (d, 1H, J = 16,36
Hz), 7,85 (s, 1H), 7,82 (dd, 1H, J = 7,60 Hz, J = 1,80 Hz),
7,70 (d, 1H, J = 7,81 Hz), 7,63 (d, 1H, J = 16,36 Hz), 7,57 (dd, 1H, J = 8,47 Hz, J = 1,2 Hz), 7,29 (m, 1H) , 7,12 (d, 1H, J = 7,82 Hz), 7,09 (d, 1H, J = 1,64 Hz), 6,90 (dd, 1H, J =
7,59 Hz, J = 1,65 Hz), 5,16 (š s, 1H) , 2,16 (s, 1H) . MS (ESI+) [M+H]/z vypočítané 355, Anál, výpočet: C, 74,56, H, 5,12, N, 15,81. Namerané: C, 73,86, H, 5,25, N, 15,34.
Východzia látka bola pripravená takto:
Zmes 3,34 g (18,45 mmol) 4-metyl-3-nitrofenylborónovej kyseliny a 334 mg 10% Pd/C v 30 ml MeOH bola hydrogenovaná 101.325 kPa (1 atm) v 23 °C. Po 22 hodinách bola reakčná zmes filtrovaná cez celit a koncentrovaná za vzniku 2,53 g (91 %)
3-amino-4-metylfenylborónovej kyseliny. 1H NMR (300 MHz, DMSO-de) δ 7,21 (s, 1H) , 7,08 (d, 1H, J = 7,5 Hz), 6,92 (d, 1H, J = 7,46 Hz), 4,81 (š s, 2H) , 2,09 (s, 3H) . MS (ESI) [M+H]/z vypočítané 152, namerané 152.
Príklad 40(c)
6- (5-amino-2,4-dimetylbenzoyl)-3-E-[2-(pyridín-2-yl)etenyl]lH-indazol
263
Zlúčenina z príkladu 40(c) bola pripravená podobným spôsobom ako v príklade 40 (a) okrem toho, že v kroku (i) 2,4dimetyl-3-aminofenylborónová kyselina (pripravená ako je popísané nižšie) bola použitá namiesto m-aminofenylborónovej kyseliny: 2H NMR (DMSO-dg) δ 8,62 (d, 1H, J = 3,78 Hz), 8,32 (d, 1H, J = 8,48 Hz), 7,99 (d, 1H, J = 16,35 Hz), 7,83 (td, 1H, J = 7,68 Hz, J = 1,8 Hz), 7,80 (s, 1H) , 7,69 (d, 1H, J = 7,80 Hz), 7,64 (dd, 1H, J = 8,47 Hz, J = 1,27 Hz), 7,62 (d, 1H, J = 16,36 Hz), 7,29 (m, 1H) , 6,94 (s, 1H) , 6,64 (s, 1H) , 4,87 (š s, 2H), 2,12 (s, 3H), 2,10 (s, 3H). LCMS (ESI+) [M+H]/z vypočítané 369, namerané 369. Anál, výpočet: C, 74,98, H, 5,47, N, 15,21. Namerané: C, 73,85, H, 5,56, N, 14,49.
Východzia látka bola pripravená takto:
(i)
2,4-dimetylfenylborónová kyselina bola vytvorená podobným spôsobom ako v príklade 24 (a), krok (vii), okrem toho, že 2,4dimetylbrómbenzén bol použitý ako východzia látka. 1H NMR (CD3OD) δ 7,13 (d, 1H, J = 7,43 Hz), 7,00 (s, 1H) , 6,97 (d, 1H, J = 7,49 Hz), 2,28 (s, 3H), 2,28 (s, 3H). LCMS (ESI+) [M+H]/z vypočítané 151, namerané 151.
264 (ϋ) ·
BíOHk
K 1 ml dymovej kyseline dusičnej ochladenej na -40 °C bol pridaný 1 ml TFA. Výsledná zmes bola ponechaná ohriať sa trochu na -35 °C a v jednej dávke bolo pridané 150 mg (1 mmol)
2,4-dimetylfenylborónovej kyseliny. Po 1 hodine bol pridaný lad a heterogénna zmes bola filtrovaná. Výsledná pevná látka bola suspendovaná v Et2O a extrahovaná 1 ml 3N vodného NaOH, potom 2 ml vody. Vodná fáza bola acidifikovaná 1 ml 3N vodnej HCI a opäť extrahovaná 3 x 5 ml EtOAc. Zlúčené organické vrstvy boli premyté solankou, usušené nad Na2SO4/ dekantované a koncentrované za vzniku 93 mg (47 %) 2,4-dimetyl-5-nitrofenylborónovej kyseliny. LCMS (ESI+) [M+H]/z vypočítané 196, namerané 196.
(iii)
3-amino-4,6-dimetylfenylborónová kyselina bola pripravená podobným spôsobom ako, bolo popísaná v príklade 40(b), krok (i). ľH NMR (CD3OD) δ 6,83 (s, 2H) , 6,64 (s, 1H) , 2,17 (s, 3H) ,
2,13 (s, 3H) .
Príklad 41(a)
6- [3- ( (l-etyl-3-metyl-lH-pyrazol-5-yl)karboxamido)benzoyl]-3E-[2-(pyridín-2-yl)etenyl]-lH-indazol
265
K roztoku 323 mg (2,1 mmol, 2,1 ekv.) 2-etyl-5-metyl-2Hpyrazol-3-karboxylovej kyseliny v 5 ml DMF v 23 °C v argónovej atmosfére, bolo pridané 365 μΐ (2,1 mmol, 2,1 ekv.) diizopropyletylaminu, 798 mg (2,1 mmol, 2,1 ekv.) HATU a katalytické množstvo DMAP. K výslednému roztoku bolo pridané 340 mg (1 mmol, 1 ekv.) 6-(3-aminobenzoyl)-3-E-(2-pyridín-2yl)etenyl)-ΙΗ-indazolu (príklad 40(a)). Reakcia potom bola sledovaná HPLC, dokial nebol všetok východzí analín spotrebovaný, ~2 hodiny (čo poskytlo zmes mono a bis acylovaných zlúčenín). Reakčná zmes bola zastavená saturovaným NaHCO3, potom neriedená vodou a extrahovaná etylacetátom. Zlúčené EtOAc vrstvy boli premyté vodou, solankou, usušené nad Na2SO4, filtrované a koncentrované na olej. Olej bol rozpustený v 10 ml metanolu, bolo pridané 290 mg (2,1 mmol, 2,1 ekv.) K2CO3 a výsledná zmes bola miešaná v 23 °C, dokial nebola spotrebovaná bis-acylovaná zlúčenina (~30 minút). Reakčná zmes bola koncentrovaná na olej, potom rozdelená medzi vodu a EtOAc. Organické fázy boli premyté solankou, usušené nad Na2SO4, filtrované a koncentrované. Purifikácia chromatografiou na silikagéle (1:1-8:2 etylacetát-dichlórmetán) poskytla zlúčeninu z príkladu 41 (a) . 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,6 (s, 1H), 10,3 (s, 1H), 8,62 (d, 1H, J= 3,88 Hz), 8,38 (d, 1H, J = 8,51 Hz), 8,20 (s, 1H) , 8,12 (td, 1H, J = 7,58 Hz, J =
1,78 Hz), 8,02 (d, 1H, J = 16,36 Hz), 7,93 (s, 1H) , 7,83 (td,
1H, J = 7,61 Hz, J = 1,7 Hz), 7,70 (d, 1H, J = 7,78 Hz), 7,65 (d, 1H, J = 16,23 Hz), 7, 65-7,53 (m, 3H) , 7,30 (m, 1H) , 4,43 (q, 2H, J = 7,07 Hz), 2,21 (s, 3H) , 1,31 (t, 3H, J = 7,07 Hz).
MS (ESI+) [M+HJ/z vypočítané 477, namerané 477. Anál, výpočet:
266
C, 70, 57, H, 5,08, N, 7,64. Namerané: C, 70, 46, H, 5,11, N,
17,61.
Príklad 41(b)
6-[3-(pyridín-4-ylkarboxamido)benzoyl]-3-E-[2-(pyridín-2-yl)etenyl]-lH-indazol
Zlúčenina z príkladu 41(b) bola pripravená podobným spôsobom ako, bolo popísané v príklade 41(a) okrem toho, že izonikotinová kyselina bola použitá namiesto 2-etyl-5-metyl2H-pyrazol-3-karboxylovej kyseliny. NMR (300
8,74 (d, 2H, J = 6,04 Hz), 8,56 (d, 1H, J = 4,14
2H),
8,05 (dt, 1H, J
7,97 Hz, J = 1, 64
7,95 (d, 1H,
J = 16,55
3H) ,
MHz, CD30D) δ
Hz) , 8,27 (m,
8, 02 (s, 1H),
7,73 (m, 2H),
7, 56-7, 67 (m,
3H) ,
7,32 (m, 1H) . MS (ESI+) [M+H]/z vypočítané
446, namerané
446.
Anál.
výpočet: C, 72,80,
H, 4,30, N, 15,72.
Namerané: C, 71,59,
H, 4,43, N, 15,33.
Príklad 41(c)
6- (3-krotonylamidobenzoyl)-3-E-[2-(pyridín-2-yl)etenyl]-1H-
Zlúčenina z príkladu 41(c) bola pripravená podobným spôsobom ako, bolo popísané v príklade 41(a) okrem toho, že
267 krotónová kyselina bola použitá namiesto 2-etyl-5-metyl-2Hpyrazol-3-karboxylovej kyseliny. 1H NMR (300 MHz, DMSO-de) δ
13,6 (s, 1H) , 10,2 (s, 1H) , 8,63 (d, 1H, J = 3,81 Hz),8,37 (d, 1H, J = 8,49 Hz), 8,12 (s, 1H) , 8,02 (d, 1H, J =16,34
Hz), 7,99 (d, 1H, J = 7,88 Hz), 7,83 (td, 1H, J = 7,67 Hz, J =
1,78 Hz), 7,70 (d, 1H, J = 7,85 Hz), 7,65 (d, 1H, J =16,40
Hz), 7,63 (dd, 1H, J = 8,43 Hz, J = 1,23 Hz), 7,47-7,56(m,
2H) , 7,29 (qd, 1H, J = 7,39 Hz, J = 0,99 Hz), 6,82 (m, 1H, J =
6,9 Hz), 6,11 (dd, J = 15,21 Hz, J = 1,68 Hz), 1,87 (d, 3H, J = 6,89 Hz). MS (ESI+) [M+H]/z vypočítané 409, namerané 409. 7\nal. výpočet: C, 73,51, H, 4,94, N, 13,72. Namerané: C, 72,15, H, 4,97, N, 13,39.
Príklad 41(d)
6-[3-(indol-4-ylkarboxamido)benzoyl]-3-E-[2-(pyridín-2-yl)etenyl]-lH-indazol
Zlúčenina z príkladu 41 (d) bola pripravená podobným spôsobom ako, bolo popísané v príklade 41(a) okrem toho, že lH-indol-4-karboxylová kyselina bola použitá namiesto 2-etyl-
5-metyl-2H-pyrazol-3-karboxylovej kyseliny. LCMS (ESI+) [M+H]/z vypočítané 484, namerané 484.
Príklad 41(e)
6-[3-((5-acetyltien-2-yl)karboxamido)benzoyl]-3-E-[2-(pyridin-
2-yl)etenyl]-lH-indazol
268
Zlúčenina z príkladu 41(e) bola pripravená podobným spôsobom ako, bolo popísané v príklade 41(a) okrem toho, že
5-acetyltiofén-2-karboxylová kyselina bola použitá namiesto 2-etyl-5-metyl-2H pyrazol-3-karboxylovej kyseliny. 1H NMR (300 MHz, DMSO-de) Ô 13,6 (s, 1H) , 10,6 (s, 1H) , 8,63 (d, 1H, J =
3, 83 Hz) , 8,39 (d, 1H, J = 8,51 Hz), 8, 20 (s, 1H), 8,14 (dt,
1H, J = 7, 25 Hz, J = 2, 05 Hz), 8, 07 (d, 1H, J = 4, 09 Hz) , 8,02
(d, 1H, J = 16,42 Hz), 8,00 (d, 1H, J = 4,01 Hz) , 7, 94 (s,
1H) , 7, 83 (td, 1H, J = 7,69 Hz, J = 1, 78 Hz) , 7,59 7, 65 (m,
5H) , 7,30 (qd, 1H, J = 7,40 Hz, J = 0,96 Hz ), 2, 58 (s , 3H) . MS
(ESI+) [M+H]/z vypočítané 493, namerané 493. Anál, výpočet: C,
68,28, H, 4,09, N, 11,37, S, 6,51. Namerané: C, 66,07, H, 4,34, N, 10,91, S, 6,14.
Príklad 41(f)
6-[3-(3,5-difluórfenylacetamido)benzoyl]-3-E-[2-(pyridín-2- yl)etenyl]-lH-indazol
Zlúčenina z príkladu 41(f) bola pripravená podobným spôsobom ako, bolo popísané v príklade 41(a) okrem toho, že (3,5-difluórfenyl)octová kyselina bola použitá namiesto 2etyl-5-metyl-2H-pyrazol-3-karboxylovej kyseliny. XH NMR (300 MHz, DMSO-de) δ 13,6 (š s, 1H) , 10,5 (s, 1H) , 8,62 (d, 1H, J =
269
4,02 Hz), 8,36 (d, IH, J = 8,51 Hz), 8,05 (s, IH) , 8,01 (d, IH, J = 16,38 Hz), 7,93 (d, IH, J = 7,88 Hz), 7,90 (s, IH),
7,83 (td, IH, J = 7,61 Hz, J = 1,77 Hz), 7,70 (d, IH, J = 7,85 Hz), 7,64 (d, IH, J = 16,33 Hz), 7,61 (dd, IH, J = 8,45 Hz, J = 1,15 Hz), 7, 48-7, 57 (m, 2H) , 7, 15-7,31 (m, 5H) , 3,77 (s, 2H) . MS (ESI+) [M+H]/z vypočítané 495, namerané 495.
Príklad 41(g)
6-[3-((5-metyl-lH-pyrazol-3-yl)karboxamido)benzoyl]-3-E- [2(pyridín-2-yl)etenyl]-lH-indazol
Zlúčenina z príkladu 41(g) bola pripravená podobným spôsobom ako, bolo popísané v príklade 41(a) okrem toho, že
5-metyl-2H-pyrazol-3-karboxylová kyselina bola použitá namiesto 2-etyl-5-metyl-2H-pyrazol-3-karboxylovej kyseliny. XH
NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,6 (š s, IH) , 13,0 (š s, IH) , 10,3 (š s, IH), 8,63 (d, IH, J = 3,95 Hz), 8,37 (d, IH, J = 8,66 Hz), 8,36 (s, IH), 8,16 (d, IH, J = 7,55 Hz), 8,02 (d, IH, J =
16,37 Hz), 7,93 (s, IH), 7,83 (dt, IH, J = 7,61 Hz, J = 1,73
Hz) , 7,70 (d, IH, J = 7,82 Hz) , 7, 65 (d, IH, J = 16,36 Hz),
7, 65 (dd, IH, J = 8, 55 Hz, J = 1,12 Hz), 7,52 (m, 2H), 7,29
(m, IH) , 6,50 (s, IH) , 2 ,29 (s, 3H) . MS (ESI+) [M+H]/z
vypočítané 449, namerané 449. Anál, výpočet: C, 69,63, H,
4,49, N, 18,74. Namerané: C, 68, 53, H, 4,95, N, 17,47.
270
Príklad 41(h)
6-[3-((2-RS-trans-metylcyklopropyl)karboxamido)benzoyl]-3-E- [2-(pyridín-2-yl)etenyl]-lH-indazol
Zlúčenina z príkladu 41(h) bola pripravená podobným spôsobom ako, bolo popísané v príklade 41(a) okrem toho, že 2-metyl-cyklopropánkarboxylová kyselina bola použitá namiesto 2-etyl-5-metyl-2H-pyrazol-3-karboxylovej kyseliny. Rf sm 0,32, Rf p 0,42 (zmes etylacetátu a dichlórmetánu 8:2), 1H NMR (300
MHz, DMSO-de) δ 13,6 (s, 1H) , 10,4 (s, 1H) , 8,62 (dd, 1H, J =
4,75 Hz, J = 0,96 Hz), 8,36 (d, 1H, J = 8,47 Hz), 8,06 (t, 1H,
J = 1,67 Hz), 8,01 (d, 1H, J = 16,37 Hz), 7,90 (m, 2H) , 7, 83
(td, 1H, J = 7, 68 Hz, J = 1,79 Hz), 7,70 (d, 1H, J = 7,84 Hz),
7,64 (d, 1H, J = 16,35 Hz), 7,61 (dd, 1H, J = 8,47 Hz, J =
1,32 Hz), 7,51 (t, 1H, J = 7,69 Hz), 7,45 (dt, 1H, J = 7, 68
Hz, J = 1,50 Hz), 7,29 (dq, 1H, J = 7,41 Hz, J = 1,04 Hz) ,
1,51 (m, 1H) , 1,23 (m, 1H) , 1,09 (d, 3H, J = 5,93), 1,01 (m,
1H), 0,65 (m, 1H) . MS 1 (ESI+) [M+H]/z vypočítané 423, namerané
423. Anál, výpočet: c, 73, 92, H, 5,25, N, 13,26. Namerané : C,
71,41, H, 5,56, N, 13,27.
Príklad 41(i)
6- [3-((1,5-dimetyl-lH-pyrazol-3-yl)karboxamido)benzoyl]-3-E[2-(pyridín-2-yl)etenyl]-lH-indazol
271
Zlúčenina z príkladu 41 (i) bola pripravená podobným spôsobom ako, bolo popísané v príklade 41(a) okrem toho, že
1,5-dimetyl-lH-pyrazol-3-karboxylová kyselina bola použitá namiesto 2-etyl-5-metyl-2H-pyrazol-3-karboxylovej kyseliny. 1H NMR (300 MHz, DMSO-de) δ 13,6 (s, 1H) , 10,2 (s, 1H) , 8,63 (d,
1H, J = 3,87 Hz), 8,37 (d, 1H, 3 = 8,49 Hz), 8,34 (d, 1H, J =
1,63 Hz), 8,16 (td, 1H, J = 7,43 Hz, J = 1,96 Hz), 8,02 (d,
1H, J = 16,35 Hz), 7,92 (s, 1H) , 7,83 (dt, 1H, J = 7,68 Hz, J = 1,79 Hz), 7,70 (d, 1H, J = 7,84 Hz), 7,65 (d, 1H, J = 16,35 Hz), 7,65 (dd, 1H, J = 8,52 Hz, J = 1,2 Hz), 7,52 (m, 2H) ,
7,29 (m, 1H), 6,55 (s, 1H) , 3,83 (s, 3H) , 2,30 (s, 3H) . MS (ESI+) [M+H]/z vypočítané 463, namerané 463. Anál, výpočet: C, 70,12, H, 4,79, N, 18,17. Namerané: C, 69,59, H, 4,88, N, 17:86.
Príklad 41 (j)
6-[3-((3-metylpyridín-4-yl)karboxamido)benzoyl]-3-E-[2(pyridin-2-yl)etenyl]-lH-indazol
Zlúčenina z príkladu 41 (j) bola pripravená podobným spôsobom ako, bolo popísané v príklade 41(a) okrem toho, že
3-metylizonikotínová kyselina bola použitá namiesto 2-etyl-5metyl-2H-pyrazol-3-karboxylovej kyseliny. 1H NMR (300 MHz, DMSO-de) δ 13,6 (s, 1H) , 10,7 (s, 1H) , 8,62 (dd, 1H, J = 4,72
Hz, J = 0,86 Hz), 8,57 (s, 1H) , 8,55 (d, 1H, J - 4,91 Hz),
8,37 (d, 1H, J = 8,46 Hz), 8,20 (s, 1H) , 8,07 (dt, 1H, J = 7,27 Hz, J = 1,99 Hz), 8,02 (d, 1H, J = 16,37 Hz), 7,93 (s,
1H) , 7,83 (td, 1H, J = 7,69 Hz, J = 1,79 Hz), 7,70 (d, 1H, J =
7,84 Hz), 7,64 (d, 1H, J = 16,27 Hz), 7,55-7, 65 (m, 3H) , 7,48
272 (d, 1H, J = 4,89 Hz), 7,30 (qd, 1H, J = 7,39 Hz, 3 = 1,02 Hz),
2,38 (s, 3H). MS (ESI+) [M+H]/z vypočítané 460, namerané 460.
Príklad 41(k)
6-[3-(cyklopropylkarboxamido)benzoyl]-3-E-[2-(pyridín-2-yl)etenyl]-lH-indazol
Zlúčenina z príkladu 41(k) bola pripravená podobným spôsobom ako, bolo popísané v príklade 41(a) okrem toho, že cyklopropánkarboxylová kyselina bola použitá namiesto 2-etyl-
5- metyl-2H-pyrazol-3-karboxylovej kyseliny. 1H NMR (CDCls/MeOD) δ 8,52 (d, 1H, J = 3,9 Hz), 8,09 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 7,93 (s, 1H) , 7,85-7,80 (m, 3H) , 7,71-7,63 (m, 2H) , 7, 55-7, 48 (m, 3H) ,
7,39 (1H, t, J = 7,8 Hz), 7,16 (1H, qd, J = 6,3,1,5 Hz), 1,62-
1,57 (m, 1H) , 1,25-1, 84 (m, 2H) , 0,87-0,81 (m, 2H) . HRMS (MALDI) C25H20N4O2 [M+H]+/z vypočítané 409, 1659, namerané
409,1660.
Príklad 41(1)
6- [ 3- ( (2-RS-tŕáns-f ériyľcýklópŕopýl)'karbóxam’ido) béňzoýl ]’-3-É[2-(pyridín-2-yl)etenyl]-lH-indazol
Zlúčenina z príkladu 41 (1) bola pripravená podobným spôsobom ako, bolo popísané v príklade 41 (a) okrem toho, že
273 (IS,2S)-2-fenylcyklopropánkarboxylová kyselina bola použitá namiesto 2-etyl-5-metyl-2H-pyrazol-3-karboxylovej kyseliny. 1H NMR (CDCl3/MeOD) δ 8,60 (d, 1H, J = 4,2 Hz), 8,17 (d, 1H, J =
8,4 Hz), 8,02 (s, 1H), 7,91 (t, 3H, J= 8,1 Hz), 7,78-7,71 (m, 2H), 7,63-7,56 (m, 3H), 7,47 (t, 1H), 7,32-7,12 (m, 5H), 2,60-
2,54 (m, 1H), 1, 94-1, 90 (m, 1H) , 1,69 (q, 1H, J = 4,8 Hz), 1, 37-1,32 (m, 1H) . HRMS C31H24N4O2 vypočítané (M+H+)/z 485, 1993, namerané 485,1995.
Príklad 41(m)
6-[3-((3-metylizoxazol-5-yl)karboxamido)benzoyl]-3-E-[2(pyridin-2-yl)etenyl]-lH-indazol
Zlúčenina z príkladu 41(m) bola pripravená podobným spôsobom ako, bolo popísané v príklade 41 (a) okrem toho, že
3-metylizoxazol-5-karboxylová kyselina bola použitá namiesto 2-etyl-5-metyl-2H-pyrazol-3-karboxylovej kyseliny. 1H NMR (DMSO-de) δ 10,95 (1H, s), 8,68 (1H, d, J 4,2 Hz), 8,44 (d, 1H, J = 8,7 Hz), 8,35 (s, 1H), 8/21-8,18 (m, 1H) , 8,08 (d, 1H, J =
16,2 Hz), 7,98 (s, 1H) , 7,87 (td, 1Η, J = 7,5, 1,8 Hz), 7,76-
7,64 (m, 6H), 7, 37-7, 33 (m, 1H) , 6,72 (s, 1H) 3,36 (s, 3H) .
HRMS (MALDI) C26Hi9N5O3 [M+H+]/z: vypočítané 450, 1561, namerané 450,1570.
Príklad 41(n)
274
6-[3-((3-t-butyl-l-metyl-lH-pyrazol-5-yl)karboxamido)benzoyl]3-E-[2-(pyridín-2-yl)etenyl]-lH-indazol
Zlúčenina z príkladu 41(n) bola pripravená podobným spôsobom ako, bolo popísané v príklade 41(a) okrem toho, že
5- terc-butyl-2-metyl-2H-pyrazol-3-karboxylová kyselina bola použitá namiesto 2-etyl-5-metyl-2H-pyrazol-3-karboxylovej kyseliny. XH NMR (CDCl3/MeOD) δ 8,59 (d, 1H, J = 4,8 Hz),8,14 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 8, 08-8, 04 (m, 1H, ) , 7,98-7,92 (m,3H) ,
7,75 (td, 1H, J = 7,8, 1,8 Hz), 7,68 (dd, 1H, J = 8,4Hz),
7,61-7,56 (m, 3H) , 7,52 (t, 1H, J = 8,70 Hz), 7,25-7,21(m,
1H, ) , 6,75 (s, 1H, ) , 4,12 (s, 3H) , 1,30 (s, 9H) . HRMS (MALDI) C3oH20NeO2 [M+H+]/z: vypočítané 505,2347, namerané 505,2353.
Príklad 41(o)
6- [3-((5-chlórtien-2-yl)karboxamido)benzoyl]-3-E- [2-(pyridín2-yl)etenyl]-lH-indazol
Zlúčenina z príkladu 41 (o) bola pripravená podobným spôsobom ako, bolo popísané v príklade 41(a) okrem toho, že
5-chlór-tiofén-2-karboxylová kyselina bola použitá namiesto 2etyl-5-metyl-2H-pyrazol-3-karboxylovej kyseliny. 1H NMR (DMSO-de) δ 10,58 (s, 1H) , 8,68 (d, 1H, J = 4,2 Hz), 8,43 (d,
1H, J = 8,5 Hz), 8,22 (s, 1H, ) , 8,15 (dt, 1H, J = 7,5, 2,0
Hz), 8,08 (d, 1H, J = 16,4 Hz), 8, 00-7, 98 (m, 3H) , 7,88 (td,
275
1Η, J = 7,7, 1,9 Hz), 7,78-7, 62 (m, 4H, ) , 7,33 (d, 2H, J = 4,1 Hz). HRMS (MALDI) C26H17N4O2C1S [M+H+]/z: vypočítané 485, 0843, namerané 485,0853.
Príklad 41(p)
6-[3-((1, 3-dimetyl-lH-pyrazol-5-yl)karboxamido)benzoyl]-3-E- [2-(pyridín 2-yl)etenyl]-lH-indazol
Zlúčenina z príkladu 41(p) bola pripravená podobným spôsobom ako, bolo popísané v príklade 41 (a) okrem toho, že
2,5-dimetyl-2H-pyrazol-3-karboxylová kyselina bola použitá namiesto 2-etyl-5-metyl-2H-pyrazol-3-karboxylovej kyseliny. HPLC: Rt 3,90 minút (100% oblasť). 7H NMR (CDC13) δ 8,52 (d,
1H, J = 4,8 Hz), 8,10 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 7,98 (d, 1H, J =
8,1 Hz), 7,93 (s, 1H,), 7, 88-7, 80 (m, 3H), 7,71-7,62 (m, 2H) , 7,56-7,49 (m, 4H), 7,44 (t, 1H, J = 7,8 Hz), 7,16 (dd, 1H, J =
7,1, 4,8 Hz). HRMS (MALDI) C27H22N6O2. [M+H+]/z: vypočítané
463,1877, namerané 465,1889.
Príklad- 41(q)
6-[3-((2-chlór-6-metylpyridín-4-yl)karboxamido)benzoyl]-3-E[2-(pyridín-2-yl)etenyl]-lH-indazol
Cl
276
Zlúčenina z príkladu 41(q) bola pripravená podobným spôsobom ako, bolo popísané v príklade 41 (a) okrem toho, že 2-chlór-6-metylizonikotínová kyselina bola použitá namiesto 2etyl-5-metyl-2H-pyrazol-3-karboxylovej kyseliny. HPLC: Rt 4,11 minút (100% oblasť). XH NMR (DMSO-de) δ 10,77 (s, 1H) , 8,68 (d, 1H, J = 3,9 Hz), 8,44 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 8,28 (s, 1H) , 8,21 (dt, 1H, J = 6,9, 2,1 Hz), 8,08 (d, 1H, J = 16,2 Hz), 7,98 (s, 1H), 7, 92-7, 64 (m, 9H) , 7,35 (dd, 1H, J = 6,6, 4,8 Hz), 2,61 (s, 3H).
Príklad 41 (r)
6-[3-((l-n-propyl-3-metyl-lH-pyrazol-5-yl)karboxamido)benzoyl]-3-E-[2-(pyridín-2-yl)etenyl]-lH-indazol
Zlúčenina z príkladu 41(r) bola pripravená podobným spôsobom ako, bolo popísané v príklade _ 41 (a) okrem toho, že
5-metyl-2-propyl-2H-pyrazol-3-karboxylová kyselina bola použitá namiesto 2-etyl-5-metyl-2H-pyrazol-3-karboxylovej
kyseliny. ςΗ NMR (DMSO-de) δ 10,29 (s, 1H) , 8,58 (d, 1H, J =
3, 9 Hz), 8,33 (d, 1H, J = 8,4 Hz) , 8,13 (s, 1H), 8, 10 (dt, 1H,
J = 5,4, 2,1 Hz) , 7,96 (d, 1H, J = 16,5 Hz), 7, 87 (s, 1H) ,
7,78 (td, 1H, J = 7,5, 1,5 Hz) , 7 ,61-7,49 (m, 6H), 7 ,24 (dd,
1H, J = 6 z 9/ 1/8 Hz), 4,32 (t, 2H, J = 6, 90 Hz) , 1,69 (q, 2H,
277
J = 7,2 Hz), 0,77 (t, 3H, 7,5 Hz). HRMS (MALDI) C28H20CIN5O2.
[M+H+]/z: vypočítané 491,2190, namerané 491,2203.
Príklad 41(s)
6-[3-(4-t-butylbenzamido)benzoýl]-3-E-[2-(pyridín-2-yl) etenyl]-lH-indazol
Zlúčenina z príkladu 41 (s) bola pripravená podobným spôsobom ako v príklade 41(a) okrem toho, že 4-tercbutylbenzoová kyselina bola použitá namiesto 2-etyl-5-metyl2H-pyrazol-3-karboxylovej kyseliny. HPLC: Rt 4,67 minút (100% oblasť). /H NMR (DMSO) δ 10,45 (s, 1H) , 8,44 (d, 1H, J = 8,4
Hz), 8,32 (s, 1H), 8,22 (d, 1H, J = 7,5 Hz), 8,07 (d, 1H, J =
16,5 Hz), 7, 99-7, 95 (m, 3H), 7,88 (td, 1H, J = 7,7, 1,5 Hz), 7, 69-7,59 (m, 7H) , 7,38 (dd, 1H, 13,5, 5,1 Hz), 1,36 (s, 9H) .
Príklad 41(t)
6-[3-((l-allyl-3-metyl-lH-pyrazol-5-yl)karboxamido)benzoyl]-3E- [2-(pyridín-2-yl)etenyl]-lH-indazol
Zlúčenina z príkladu 41 (t) bola pripravená podobným spôsobom ako v príklade 41(a) okrem toho, že 2-allyl-5-metyl2H-pyrazol-3-karboxylová kyselina bola použitá namiesto 2278 etyl-5-metyl-2H-pyrazol-3-karboxylovej kyseliny. HPLC: Rt 4,11 minút (100% oblasť). XH NMR (DMSO) δ 10,46 (s, 1H) , 8,74 (t, 1H, J = 5,1 Hz), 8,48 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 8,28 (s, 1H) , 8,22 (t, 1H, J = 5,4, 2,1 Hz), 8,15-8,01 (m, 3H) , 7,39 (td, 1H, J =
7,8, 1,8 Hz), 7,82-7, 63 (m, 6H) , 7,39 (td, 1H, J = 7,7, 1,5 Hz), 6,14-6,02 (m, 1H) , 5,22-5, 03 (m, 4H) , 2,38 (s, 3H) . HRMS (MALDI) C29H24N6O2 (M+H+)/z: vypočítané 489,2034, namerané
489,2035.
Príklad 41(u)
6-(3-((2-chlór-6-metoxypyridín-4-yl)karboxamido)benzoyl]-3-E[2-(pyridín-2-yl)etenyl]-lH-indazol
Zlúčenina z príkladu 41 (u) bola pripravená podobným spôsobom, ako v príklade 41(a) okrem toho, že 2-chlór-6metoxyizonikotínová kyselina bola použitá namiesto 2-etyl-5metyl-2H-pyrazol-3-karboxylovej kyseliny. HPLC: Rt = 4,37
minút (100% oblasť). 1 H NMR (DMSO-de) δ 10,74 (s, 1HL r 8, 68 (d,
1H, J = 3,6 Hz), 8,44 (d, 1H, J = 8,4 Hz) , 8,28 (s, 1H) , 8,20
(td, 1H, J = 6,6, 2,4 Hz) , 8,07 (d, 1H, J = 16,2 Hz) , r 7, 98 (s,
1H), 7,89 (td, 1H, J = 7,7, 1,8 Hz), 7,77-7,62 (m, 6H) , 7,38
(s, 1H), 7,35 (dd, 1H, J = 6, 9, 1,8 Hz), 3,98 (s, 3H) •
Príklad 41(v)
279
6-(3-((3-etyl-l-metyl-lH-pyrazol-5-yl)karboxamido]benzoyl]-3E-[2-(pyridín-2-yl)etenyl]-lH-indazol
Zlúčenina z príkladu (v) bola pripravená podobným spôsobom, ako v príklade 41(a) okrem toho, že 5-etyl-2-metyl
2H-pyrazol-3-karboxylová kyselina bola použitá namiesto 2etyl-5-metyl-2H-pyrazol-3-karboxylovej kyseliny. Rt 4,16 minút (100% oblasť). XH NMR (DMSO-d6) Ô 10,44 (s, 1H) , 8,73 (d, 1H, J = 3,0 Hz), 8,78 (d, 1H, 8,7 Hz), 8,30 (s, 1H), 8,23 (d, 1H, J = 6,9 Hz), 8,14-8,03 (m, 2H) , 7,93 (t, 1H, 6,9 Hz), 7,82-7,63 (m, 6H), 7,40 (t, 1H, J = 6,3 Hz), 7,01 (s, 1H) , 4,12 (s, 1H) ,
2,68 (q, 2H, 7,8 Hz), 1,30 (t, 3H, J = 7,5 Hz). HRMS (MALDI) 02θΗ24Νβ02 [M+H]+/z: vypočítané 477,2034, namerané 477,2054.
Príklad 41(w)
6-(3-((2-chlórpyridín-4-yl)karboxamido)benzoyl]-3-E-[2(pyridín-2-yl)etenyl]-lH-indazol
Zlúčenina z príkladu 41(w) bola pripravená podobným spôsobom, ako v príklade 41(a) okrem toho, že 2-chlórizonikotinová kyselina bola použitá namiesto 2-etyl-5-metyl2H-pyrazol-3-karboxylovej kyseliny. HPLC: Rt = 3,99 minút (100% oblasť). XH NMR (DMSO-d6) δ 10,88 (s, 1H) , 7,33 (d, 2H, J = 4,8 Hz), 8,49 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 8,33 (s, 1H) , 8,26 (td,
280
1Η, J = 6,9, 3,0 Hz), 8,12-7,91 (m, 5H) , 7,82-7, 63 (m, 5H) ,
7,40 (t, 1H, J = 4,8 Hz) .
Príklad 41(x)
6-[3-((l-izopropyl-3-metyl-lH-pyrazol-5-yl)karboxamido)benzoyl]-3-E-[2-(pyridín-2-yl)etenyl]-lH-indazol
Zlúčenina z príkladu 41(x) bola pripravená podobným spôsobom, ako v príklade 41(a) okrem toho, že 2-izopropyl-5metyl-2H-pyrazol-3-karboxylová kyselina bola použitá namiesto 2-etyl-5-metyl-2H-pyrazol-3-karboxylovej kyseliny. HPLC: Rt
4,19 minút (100% oblasť). XH NMR (DMSO) δ 10,46 (s, 1H),8,72 (t, 1H, J = 4,80 Hz), 8,48 (d, 1H, J = 9,0 Hz), 8,31 (s,1H) ,
8,21 (td, 1H, J = 9,6, 2,1 Hz), 8,15-7,98 (m, 2H) , 7,96-7,84 (m, 1H), 7, 82-7, 65 (m, 5H) , 7, 42-7,38 (m, 1H) , 6,88 (s,1H) ,
5, 64-5,38 (m, 1H) , 2,32 (s, 3H) , 1,48 (d, 1H, J = 6, 6 Hz) .
HRMS (MALDI) C29H26N6O2 [M+H]+/z, vypočítané 491,2190, namerané
491,2194.
Príklad 41(y)
6- [3-(izopropoxykarbonylamino)benzoyl]-3-E-[2-(pyridín-2-yl)etenyl]-lH-indazol
281
Zlúčenina z príkladu 41(y) bola pripravená podobným spôsobom, ako v príklade 41(a) okrem toho, že izopropylchloroformiát bol použitý namiesto 2-etyl-5-metyl-2Hpyrazol-3-karboxylovej kyseliny. 1H NMR (DMSO-d6) δ 9,97 (s,
1H) , 8,72 (t, . 2H, J = 4,8 Hz), 8,47 (d, 1H, J = 8,7 Hz), 8,347,96 (m, 3H), 8,01-7,87 (m, 2H) , 7,82-7, 69 (m, 2H) , 7,52 (dt, 1H, J = 7,5, 1,2 Hz), 7, 42-7,36 (m, 2H) , 3,68 (d, 2H, J = 6,6 Hz), 2,02 (m, 1H) , 1,02 (d, 6H, J = 6,6 Hz). HRMS (MALDI)
C26H24N4O3 [M+H]+/z: vypočítané 441,1921, namerané 441,1937.
Príklad 41(z)
6-[3-((4-chlórpyridín-2-yl)karboxamido)benzoyl)-3-E-[2(pyridín 2-yl)etenyl]-lH-indazol
Zlúčenina z príkladu 41 (z) bola pripravená podobným spôsobom, ako v príklade 41(a) okrem toho, že 4-chlórpyridín2-karboxylová kyselina bola použitá namiesto 2-etyl-5-metyl2H-pyrazol-3-karboxylovej kyseliny. HPLC: Rt = 4,40 minút (100% oblasť). λΗ NMR (DMSO-d6) δ 10,99 (s, 1H), 8,72 (d, 1H, J = 5,4 Hz), 8,63 (d, 1H, J = 3,9 Hz), 8,44 (s, 1H) , 8,38 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 8,25 (dt, 1H, J = 6,6, 2,4 Hz), 8,16 (d, 1H, J = 1,8 Hz), 8,02 (d, 1H, J = 16,2 Hz), 7,94 (s, 1H) , 7,867,80 (m, 2H), 7, 72-7,58 (m, 5H) , 7,29 (dd, 1H, J = 6, 9, 6,0 Hz) .
Príklad 41(aa)
282
6-[3-(pyridín-2-ylkarboxamido)benzoyl]-3-E-[2-(pyridín-2-yl)etenyl]-lH-indazol
Zlúčenina z príkladu 41(aa) bola pripravená podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 41(a) okrem toho, že pyridín-2-karboxylová kyselina bola použitá namiesto 2-etyl-5metyl-2H-pyrazol-3-karboxylovej kyseliny. 1H NMR (300 MHz, DMFd6) δ 10,9 (s, 1H) , 8,74 (m, 1H) , 8,63 (dd, 1H, J = 4,78 Hz, 0,94 Hz), 8,46 (s, 1H), 8,38 (d, 1H, J = 8,48 Hz), 8,25 (dt, 1H, J = 7,17 Hz, J = 2,05 Hz), 8,16 (dt, 1H, J = 7,73 Hz, J = 1,04 Hz), 8,07 (td, 1H, J = 7,56 Hz, J = 1,67 Hz), 8,02 (d,
1H, J = 16,28 Hz), 7,95 (s, 1H) , 7,83 (td, 1H, J = 7,65 Hz, J = 1,81 Hz), 7,22-7, 66 (m, ,4H), 7,30 (qd, 1H, J = 7,40 Hz, J = 1,02 Hz). MS (ESI+) [M+H]/z vypočítané 446, namerané 446.
Príklad 41(bb)
6-[3-(3-metoxybenzamido)benzoyl]-3-E-[2-(pyridín-2-yl)etenyl]lH-indazol
Zlúčenina z príkladu 41(bb) bola pripravená podobným spôsobom, ako v príklade 41(a) okrem toho, že 3-metoxybenzoová kyselina bola použitá namiesto 2-etyl-5-metyl-2H-pyrazol-3 karboxylovej kyseliny. ΧΗ NMR (DMSO-de) δ 10,50 (s, 1H) , 8,67 (d, 1H, J = 3,9 Hz), 8,46 (d, 1H, J = 8,7 Hz), 8,33 (s, 1H) ,
8,22 (dt, 1H, J = 7,8, 1, 8) ,
8,08 (d, 1H, J = 15,0 Hz) ,
8, 00
283 (s, 1H, ) , 7, 78-7, 54 (m, 8H) , 7,51 (t, 1H, 7,8 Hz), 7,38-7,33 (m, 1H) , 7,23 (dd, 1H, J = 7,5, 1,5 Hz), 3,90 (s, 3H) . HRMS (MALDI) C29H22N4O3. [M+H]+/z: vypočítané 475, 1765, namerané
475,1763.
Príklad 41(cc)
6-[3-(fenoxyamido)benzoyl]-3-E-[2-(pyridín-2-yl)etenyl]-1Hindazol
Zlúčenina z príkladu 41(cc) bola pripravená podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 41(a) okrem toho, že fénylchloroformiát bol použitý namiesto 2-etyl-5-metyl-2Hpyrazol-3-karboxylovej kyseliny. Tt 212-217 °C, NMR (300
MHz, DMSO-de) δ 13,63 (s, 1H) , 10,51 (s, 1H) , 8,62 (d, 1H, J =
4,3 Hz), 8,36 (d, 1H, J = 8,6 Hz), 8,04-7,81 (m, 5H) , 7,71-
7,40 (m, 7H) , 7,31-7,22 (m, 4H) . ESIMS m/z 461 [M+H] + . Anál, vypočítané pre C28H20N4O3 · 0,3 H2O 465, 9 g mol-1): C, 72,18, H, 4,46, N, 11,33. Namerané: C, 72,41, H, 4,63, N, 1157.
Príklad 41(ďd)
6-[3-(3,3-dimetylakrylamido)benzoyl]-3-E-[2-(pyridín-2-yl)etenyl]-lH-indazol
284
Zlúčenina z príkladu 41(dd) bola pripravená podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 41(a) okrem toho, že
3,3-dimetylakrylová kyselina bola použitá namiesto 2-etyl-5metyl-2H-pyrazol-3-karboxylovej kyseliny. XH NMR (300 MHz, DMSO-de) δ 13,6 (s, 1H) , 10,2 (s, 1H) , 8,63 (d, 1H, J = 3,81 Hz), 8,37 (d, 1H, J = 8,49 Hz), 8,12 (s, 1H), 8,02 (d, 1H, J = 16,34 Hz), 7,99 (d, 1H, J = 7,88 Hz), 7,83 (td, 1H, J = 7,67 Hz, J = 1,78 Hz), 7,70 (d, 1H, J = 7,85 Hz), 7,63 (dd, 1H, J =
8,43 Hz, J = 1,23 Hz), 7,47-7, 56 (m, 2H) , 7,29 (qd, 1H,J =
7,39 Hz, J = 0,99 Hz), 6,82 (m, 1H, J = 6,9 Hz), 5,85 (s,1H) ,
2,12 (s, 3H) , 1,85 (s, 3H) . MS (ESI+) [M+H]/z vypočítané409, namerané 409. Anál, vypočítané pre C26H22N4O2 · 0,33 TBME: C,
73, 54, H, 5,80, N, 12,41. Namerané: C, 73,26, H, 5,76, N, 12,36.
Príklad 41(ee)
6-(3-((l-etyl-3-metyl-lH-pyrazol-5-yl)karboxamido)-4metylbenzoyl]-3-E-[2-(pyridín-2-yl)etenyl]-lH-indazol
príkladu z
Zlúčenina (ee) bola pripravená podobným spôsobom, ako príklade (a) okrem toho, že zlúčenina bola z príkladu 40 (b) (a). *H NMR (DMSO-de) použitá namiesto zlúčeniny príkladu δ 13,6 (S, 1H),
9,94 (s, 1H)
8,62 (d,
1H, J = 3,8 Hz) , 8,36 (d, 1H,
J = 8,51
Hz), 8,01 (d,
1H, J
16, 36 Hz) ,
7,91 (s, 1H)
7,84 (dd, 1H,
J = 7,66 Hz,
J = 1,74
Hz), 7,81 (s, 1H), 7,70 (d, 1H, J = 7,9
Hz), 7,64 (d,
1H, J
16, 45 Hz) ,
7,62 (m, 2H)
7,29 (m,
1H) , 6,82 (s, 1H), 4,42 (q, 2H, J = 7,06 Hz), 2,36 (s, 3H),
285
2,21 (s, 3H) , 1,30 (t, 3H, J = 7,09 Hz). MS (ESI+) [M+H]/z vypočítané 491, namerané 491. Anál, výpočet: C, 71,00, H, 5,34, N, 17,13. Namerané : C, 70,80, H, 5,38, N, 17,00.
Príklad 41(ff)
6-[3-((l-allyl-3-metyl-lH-pyrazol-5-yl)karboxamido)-4metylbenzoyl]-3-E-[2-(pyridín-2-yl)etenyl]-lH-indazol
Zlúčenina z príkladu 41(ff) bola pripravená podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 41(ee) okrem toho, že
2-allyl-5-metyl-2H-pyrazol-3-karboxylová kyselina bola použitá namiesto 2-etyl-5-metyl-2H-pyrazol-3-karboxylovej kyseliny. XH
NMR (DMSO-de) δ 13,6 (s, IH), 9,9 8 (s , IH), 8,62 (d,
4, 60 Hz), 8,36 (d, IH, J = 8,46 Hz) , 8,01 (d, IH,
Hz) , 7,91 (s, IH), 7,83 (td, IH, J = 7,69 Hz, J =
7,78 (d, IH, J = 1,73), 7,70 (d, IH, J = 7,78 Hz),
(m, 3H) , 7,50 (d, IH, J = 8,01 Hz) , 7, 29 (qd, IH, J =
J = 1,02 Hz), 6,86 (s, IH) , 5,95 (m, IH), 4,93-5,10
7,59-7,70
7,46 Hz,
3H),
J = 16,37
3H) . LCMS (ESI+) , IH, J
2,22 (s, (m, 4H), [M+H]/z vypočítané
503, namerané 503. Anál.
výpočet: C, 71,70,
H, 5,21, N, 16,72.
Namerané: C, 70,98, H, 5,42, N, 15,94.
Príklad 41(gg)
6-(3-acetamido-4-metylbenzoyl)-3-E-[2-(pyridín-2-yl)etenyl]lH-indazol
286
Zlúčenina z príkladu 41(gg) bola pripravená podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 41 (ee) okrem toho, že acetylchlorid bol použitý namiesto 2-etyl-5-metyl-2H-pyrazol3-karboxylovej kyseliny. 1H NMR (CD3OD) δ 8,57 (d, 1H, J = 4,90 Hz), 8,13 (d, 1H, J = 8,49 Hz), 7,99 (s, 1H) , 7,95 (d, 1H, J = 16,53 Hz), 7,89 (d, 1H, J = 1,46 Hz), 7,86 (td, 1H, J = 7,64
Hz, J = 1,73 Hz), 7,73 (d, 1H, J = 7,05 Hz), 7, 62-7, 69 (m, 2H) , 7,65 (d, 1H, J = 16,48 Hz), 7,44. (d, 1H, J = 7,97 Hz),
7,32 (qd, 1H, J = 7,44 Hz, J = 1,03 Hz), 2,38 (s, 3H) , 2,18 (s, 3H) . LCMS (ESI+) [M+H]/z vypočítané 397, namerané 397. Anál, výpočet: C, 72,71, H, 5,08, N, 14,13. Namerané: C, 72,29, H, 5,09, N, 13,98.
Príklad 41(hh)
6-[3-((1,3-dimetyl-lH-pyrazol-5-yl)karboxamido)-4-metylbenzoyl]-3-E-[2-(pyridín-2-yl)etenyl]-lH-indazol
Zlúčenina z príkladu 41(hh) bola pripravená podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 41(ee) okrem toho, že
2,5-dimetyl-2H-pyrazol-3-karboxylová kyselina bola použitá namiesto 2-etyl-5-metyl-2H-pyrazol-3-karboxylovej kyseliny. HPLC: Rt = 3,92 minút (100% oblasť). XH NMR (DMSO) δ 10,02 (s, 1H) , 8,74 (d, 1H, J = 3,6 Hz), 8,49 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 8,13
287 (d, IH, J = 16,3 Hz), 8,03 (s, IH) , 7, 96-7,93 (m, 2H) , 7,84-
7,72 (m, 4H), 7,63 (d, IH, 8,1 Hz), 7,42 (dd, IH, J = 6,8, 1,5 Hz), 6,95 (s, IH), 4,11 (s, IH) , 2,48 (s, IH) , 2,32 (s, IH) .
Príklad 41 (ii)
6-[3-((l-n-propyl-3-metyl-lH-pyrazol-5-yl)karboxamido)-4metylbenzoyl]-3-E-[2-(pyridín-2-yl)etenyl]-lH-indazol
Zlúčenina z príkladu 41 (ii) bola pripravená podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 41(ee) okrem toho, že
5-metyl-2-propyl-2H-pyrazol-3-karboxylová kyselina bola použitá namiesto 2-etyl-5-metyl-2H-pyrazol-3-karboxylovej kyseliny. HPLC: Rt 4,16 minút (100% oblasť). XH NMR (DMSO-de) δ
10,29 (s, IH) , 8,58 (d, IH, 3, 9 Hz), 8,33 (d, IH, J = 8,4 HZ) ,
8,13 (s, IH) , 8,10 (dt, IH, J = 5,4, 2,1 Hz), 7,96 (d, IH, J =
16, 5 Hz) , 7,87 (s, IH), 7,78 (td, IH, J = 7, 5, 1,5 Hz) , 7 ,61-
7,49 (m, 6H), 7,24 (dd, IH, J = 6, 9, 1, 8 Hz) , 4,32 (t, 2H, J =
6, 90 Hz) , 2,58 (s, 3H) , 2,22 (s, 3H) , 1,69 (q, 2H, J = 7,2
Hz) , 0,77 (t, 3H, 7,5 Hz) . HRMS (MALDI) C 0θΗ26Νβθ2 . [M+HJ +/z:
vypočítané 505,2347, namerané 505,2343.
Príklad 41(jj)
6-[3-((3-etyl-l-metyl-lH-pyrazol-5-yl)karboxamido)-4-metyl- benzoyl]-3-E-[2-(pyridín-2-yl)etenyl]-lH-indazol
288
Zlúčenina z príkladu 41 (jj) bola pripravená podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 41(ee) okrem toho, že
5-etyl-2-metyl-2H-pyrazol-3-karboxylová kyselina bola použitá namiesto 2-etyl-5-metyl-2H-pyrazol-3-karboxylovej kyseliny. 1H NMR (DMSO-de) δ 10,78 (s, 1H) , 9,43 (d, 1H, J = 3,0 Hz), 9,15 (t, 1H, J = 9,6 Hz), 8,82 (dd, 1H, J = 16,4, 1,5 Hz), 8,72-
8,61 (m, 2H), 8, 52-8,30 (m, 4H) , 8,10 (dd, 1H, J = 6,9, 5,7), 7,93-7,89 (m, 1H) , 7,72-7, 69 (m, 1H) , 4,85 (s, 3H) , 3,39 (q, 2H, J = 7,8 Hz), 3,17 (s, 3H) , 2,10 (t, 3H, J = 7,5 Hz). HRMS (MALDI) C29H26N6O2 (M+H+) m/z: vypočítané 491,2190, namerané
491,2211.
Príklad 41 (kk)
6- [3- ( (l-izopropyl-3-metyl-lH-pyrazol-5-yl)karboxamido)-4- metylbenzoyl]-3-E-[2-(pyridín-2-yl)etenyl]-lH-indazol
Zlúčenina z príkladu 41(kk) bola pripravená podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 41(ee) okrem toho, že 2-izopropyl-5-metyl-2H-pyrazol-3-karboxylová kyselina bola použitá namiesto 2-etyl-5-metyl-2H-pyrazol-3-karboxylovej kyseliny. HPLC: Rt 4,11 minút (100% oblasť). XH NMR (DMSO-d6) δ
289
9,99 (s, 1H) , 8,68 (d, 1H, J = 3,6 Hz), 8,42 (d, 1H, J = 8,7
Hz), 8,07 (d, 1H, J = 16,4 Hz), 7,98 (s, 1H) , 7, 67-7,86 (m,
2H), 7,77-7, 65 (m, 4H) , 7,56 (d, 1H, J = 7,8 Hz), 7,37-7,33 (m, 1H), 6,82 (s, 2H) , 5, 44-5, 36 (m, 1H) , 2,42 (s, 3H) , 2,28 (s, 3H) , 1,42 (d, 6H, J = 6,6 Hz). Anál. (C3oH28N602 ’ 0,2H2O) vypočítané: C, 5,63, N, 16,54, namerané C, 70,57, H, 5,70, N, 16,35.
Príklad 41(11)
6-[2,4-dimetyl-5-((l-etyl-3-metyl-lH-pyrazol-5-yl)karboxamido) benzoyl] -3-E-[2-(pyridín-2-yl)etenyl]-lH-indazol
príklade použitá bola
41(a) okrem
príkladu spôsobom, ako z príkladu 40 (c) (a). 7H NMR (DMSO-dg) pripravená toho, že podobným zlúčenina δ 13,6 (d, 1H, namiesto zlúčeniny príkladu (s, 1H), 9,82 (s, 1H)
8,63 (d,
J = 8,54 Hz) , 8,00 (d,
1H, J
16,37 Hz), 7,83 (s, 1H) , 7,83 (td, 1H, J = 7,65 Hz, J = 1,82
Hz) , 7, 69 (d, ll H, J = 7,89 Hz), 7, 65 (dd, 1H, J = 8,52 Hz, J =
1,36 Hz) , 7,62 (d, 1H, J = 16,34 Hz), 7,35 (s, 1H), 7,32 (s,
1H>, 7-, 2 9 (qd, 1H, J = 7,42 Hz,· J = 1, 09 Hz) , 6,78- (s, 1H)-,
4,39 (q, 2H, J = 7 ,15 Hz), 2,30 (S, 3H), 2,25 (s, 3H), 2,19
(s, 3H) , 1,27 (t, 3H, J = 7,1 5 Hz). LCMS (ESI+) [M+H]/z
vypočítané 505, namerané 505.
Príklad 41(mm)
6-[2,4-dimetyl-5-((1,3-dimetyl-lH-pyrazol-5-yl)karboxamido)benzoyl]-3-E-[2-(pyridín-2-yl)etenyl]-lH-indazol
290
Zlúčenina z príkladu 41(mm) bola pripravená podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 41(11) krém toho, že
2,5-dimetyl-2H-pyrazol-3-karboxylová kyselina bola použitá namiesto 2-etyl-5-metyl-2H-pyrazol-3-karboxylovej kyseliny. 1H NMR (DMSO-de) δ 13,6 (s, 1H) , 9,81 (s, 1H) , 8,62 (d, 1H, J =
3,81 Hz), 8,35 (d, 1H, J = 8,6 Hz), 8,00 (d, 1H, J = 16,36 Hz), 7,83 (dt, 1H, J = 7,65 Hz, J = 1,8 Hz), 7,8 (s, 1H) , 7,69 (d, 1H, J = 7,88 Hz), 7,65 (dd, 1H, J = 8,53 Hz, J = 1,36 Hz),
7,62 (d, 1H, J = 16,35 Hz), 7,36 (s, 1H) , 7,32 (s, 1H) , 7,29 (qd, 1H, J = 7,41 Hz, J = 1,03 Hz), 6,79 (s, 1H) , 3,96 (s, 3H) , 2,30 (s, 3H) , 2,25 (s, 3H) , 2,18 (s, 3H) . LCMS (ESI+) [M+H]/z vypočítané 491, namerané 491. Anál, výpočet: C, 71,00, H, 5,34, N, 17,13. Namerané : C, 70,69, H, 5,57, N, 16,26.
Príklad 41(nn)
6-(5-acetamido-2,4-dimetylbenzoyl)-3-E-[2-(pyridín-2-yl)etenyl]-lH-indazol
Zlúčenina z príkladu 41(nn) bola pripravená podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 41(11) okrem toho, že acetylchlorid bol použitý namiesto 2-etyl-5-metyl-2H-pyrazol3-karboxylovej kyseliny. 1H NMR (DMSO-d6) δ 13,6 (š s, 1H) ,
291
9,34 (s, 1H) , 8,62 (d, 1H, J = 4,15 Hz), 8,33 (d, 1H, Hz), 7,86 (d, 1H, J = 16,36 Hz), 7,83 (td, 1H, J = 7, = 1,82 Hz), 7,81 (s, 1H) , 7,69 (d, 1H, J = 7,84 Hz), ' 1H, J = 1,38 Hz), 7,62 (d, 1H, J = 16,46 Hz), 7,48 (s, (qd, 1H, J = 7,44 Hz, J = 1,02 Hz), 7,24 (s, 1H) , 3H) , 2,23 (s, 3H) , 2,02 (s, 3H) . LCMS (ESI+) vypočítané 411, namerané 411.
Príklady 41(oo)-41(111) môžu byť pripravené
J = 8, 6 71 Hz, J ',64 (dd, H), 7,29 2,27 (s, [M+H]/z podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 41(a).
Príklad 41(oo)
Príklad 41(pp)
Príklad 41(qq)
292
Príklad 41(rr)
Príklad 41(ss)
Príklad 41(tt)
Príklad 41(uu)
293
Príklad 41 (w)
Príklad 41(ww)
Príklad 41(xx)
Príklad 41(yy)
294
Príklad 41 (zz)
Príklad 41(aaa}
Príklad 41(bbb)
Príklad 41(ccc)
Príklad 41(ddd)
295
Príklad 41(eee)
Príklad 41(fff)
Príklad 41(ggg)
Príklad 41(hhh)
Príklad 41(iii)
Príklad 41 (jj j)
Príklad 41(kkk)
296
Príklad 41(111)
297
Príklad 42(a)
6-(3-benzamidobenzoyl)-3-E-[2-(pyridín-2-yl)etenyl]-lH-indazol
0,58 g (80,6%) zlúčeniny z príkladu 42(a) bolo pripravené z 6-(3-benzamidobenzoyl)-3-E-[2-(pyridín-2-yl)etenyl]-1-(2trimetylsilanyletoxymetyl)-lH-indazolu podobným spôsobom, ako v príklade 12. HPLC 4,13 minút (98% oblasť). ΧΗ NMR(CDC13) δ
8,66 (d, 1H, J = 4,1 Hz), 8,24 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 8,11-8,10 (m, 3H), 8,01-7,98 (m, 4H) , 7,83 (t, 2H, J = 7,1 Hz), 7,72-
7,53 (m, 7H) , 7,30 (qd, 1H, J = 52, 1,1 Hz). HRMS (MALDI) C28H20N4O2. [M+H+]/z: vypočítané 445, 1664, namerané 445, 1659.
Anál. (C26H19N5O2 · 0,2EtOAc): C, 75, 87, H, 4,78, N, 12,39.
Východzia látka bola pripravená takto:
(i)
K miešanému roztoku 4,00 g (8,40 mmol) 6-jód-3 ( (E)styryl)-1-(2-trimetylsilanyletoxymetyl)-lH-indazolu
298 z príkladu 14, krok (i), v 48 ml anisolu v argónovej atmosfére bolo 176 mg (0,25 mmol)pridané bis(trifenylfosfín)paládiumdichloridu, 288 mg (1,0 mmol) TBACI, 1,54 ml (16,8 mmol) 2-butanolu a 3,48 g (25,2 mmol) uhličitanu draselného. Výsledná zmes bola miešaná v atmosfére oxidu uhoľnatého v 80 °C po dobu 100 hodín. Po odstránení rozpúšťadla koncentráciou vo vákuu bol získaný zvyšok nariedený 400 ml EtOAc a extrahovaný 2 x 150 ml saturovaného NaCl, 2 x 50 ml saturovaného NaHCO3 a 2 x 50 ml vody, potom bola organická vrstva filtrovaná cez 20 ml silikagélu. Organický filtrát potom bol koncentrovaný vo vákuu za vzniku jantárového oleja. Purifikácia velmi rýchlou chromatografiiou zo zmesí hexánu a EtOAc (7:3) poskytla po koncentrácii 2,38 g (61 % výťažok) 6(3-aminobenzoyl)-3-((E)styryl)-1-(2-trimetylsilanyletoxymetyl) -lH-indazolu ako jantárového oleja. XH NMR (CDC13) δ 8,84 (dd, 1H, J = 8,70, 0, 90 Hz), 8,02 (s, 1H) , 7,77 (dd, 1H, J =
8,40, 1, 50 Hz), 7,62-7,59 (m, 2H), 7,40 (t, 2H, J = 7,20 Hz), 7, 38-7,24 (m, 4H) , 7,22-7,19 (m, 3H) , 6,98 (dq, 1H, J = 8,30,
0,90 Hz), 3,83 (š s, 2H, ) , 3,61 (t, 2H, J = 8,10 Hz), 0,91 (t, 2H, J =7,20 Hz), -0,17 (s, 9H).
(ii)
K miešanému roztoku 3,22 g (6,87 mmol) 6-(3-aminobenzoyl)3-( (E)styryl)-1-(2-trimetylsilanyletoxymetyl)-ΙΗ-indazolu v 10 ml metylénchloridu v argónovej atmosfére bolo pridané 0,95 ml (8,37 mmol) benzoylchloridu a 0,67 ml (3,22 mmol) pyridinu. Po 2 hodinách bol roztok nariedený 100 ml EtOAc a premytý 1 x 50 ml saturovaného NaCl, 2 x 50 ml kyseliny citrónovej (IM, pH
299
2,5) a 2 x 50 ml zmesi NaHCCh a vody (50:50) . Organická vrstva bola usušená nad Na2SO4 a filtrovaná cez 20 ml silikagélu. Organická vrstva bola koncentrovaná vo vákuu, za vzniku produktu ako žltej pevnej látky. Purifikácia s použitím velmi rýchlej chromatografie na silikagéle za elúcie zmesí hexánu a EtOAc (7:3) poskytla 3,22 g (85,1% výťažok) 6—(3— benzamidobenzoyl)-3- ( (E)styryl)-1-(2-trimetylsilanyletoxymetyl) -ΙΗ-indazolu ako žltej peny. 1H NMR (CDC13) δ 8,19 (d, 1H, J = 8,7 Hz), 8,16 (s, 1H, ) , 8,11-8,10 (m, 2H) , 8,03-7,93 (m, 3H), 7,82 (dd, 1H, J = 8,4, 1,2 Hz), 7,70-7, 67 (m, 3H) ,
7, 64-7,54 (m, 5H) , 7,48 (t, 2H, J = 14,1 Hz) 7,39 (1H, d, J =
7,2 Hz) .
(iii)
Miešaný roztok 2,35 g (4,07 mmol) 6-(3-benzamidobenzoyl)-
3-((E)styryl)-1-(2-trimetylsilanyletoxymetyl)-lH-indazolu v 45, 6 ml metylénchloridu bol ochladený na -45 °C s použitím kúpeľa so zmesouacetonitrilu a pevného oxidu uhličitého. Roztokom potom bol prebublávaný ozón rýchlosťou 1,5 1/m, 60 A po dobu 15 minút. Reakčná zmes bola zastavená pridaním 2,5 ml sírovodíka a zohrietá na 25 °C. Odstránenie metylénchloridu bolo uskutočnené pomocou koncentrácie vo vákuu. Zvyšok bol purifikovaný na silikagéle za elúcie zmesí hexánu a EtOAc (7:3) za vzniku 1,74 g (85% výťažok) 6-(3-benzamidobenzoyl)-1(2-trimetylsilanyletoxymetyl)-lH-indazol-3-karboxaldehydu ako špinavo bielej peny. HPLC 3,78 minút (100% oblasť), 1H NMR (DMSO-de) δ 10,77 (s, 1H) , 10,42 (s, 1H) , 8, 46-8, 39 (m, 2H) , 8,31 (dt, 1H, J = 6,0, 1,8 Hz), 8,19 (s, 1H, ) , 8,11-8,07 (m,
300
2Η, ) , 7,91 (dd, 1H, J = 6,0, 1,2 Hz), 7,70-7, 64 (m, 5H) , 5,81 (s, 2H) 3,68 (t, 2H, J = 6,9 Hz),
0,98 (t,
2H, J = 6,7 Hz) ,
0, 02 (s, 9H) .
(iv)
K miešanému roztoku 2,23 g (4,91 mmol)
2-pikolytrifenylfosfóniumchloridu/hydridu sodného ochladenému na -78 °C bolo pridané 1,26 g (2,46 mmol) 6-(3-benzamidobenzoyl)-(2-trimetylsilanyletoxymetyl) -lH-indazol-3-karboxaldehydu v 5 ml bezvodného THF v argónovej atmosfére a roztok bol miešaný po dobu 1 hodiny pri teplote 0 °C a zastavený zmesou CH3COOH a
MeOH (1:1,1 ml). Reakčná zmes bola nariedená 100 ml EtOAc a rozdelená medzi 1 x 50 ml saturovaného NaCI a 2 x 50 ml saturovaného NaHCO3, potom bola organická vrstva usušená nad Na2SO4 a filtrovaná cez krátky stĺpec 20 ml silikagélu (zmes trans/cis 3:1). Purifikácia na kruhovej doske so 4 mm silikagélu za elúcie zmesí hexánu a EtOAc (1:1) poskytla po koncentrácii 1,05 g (62 %) 6-(3-benzamidobenzoyl)-3-E-[2(pyridín-2-yl)etenyl]-1-(2-trimetylsilanyletoxymetyl)-lH-inda-
zolu ako žltej pevnej látky. XH NMR (CDCI3) δ 8,62 (d, 1H, J =
4,1 Hz), 8,22 (d, 1H, J = 8 ,5 Hz), 8,’11-8,10 (m, 3H ), θ ,01-
7, 98 (m, 4H) , 7,83 (t, 2H, J = 7,1 Hz), 7,72-7, 53 (m, 7H),
7,30 (qd, 1H, J = 5,2, 1,1 Hz ), 5,81 (s, 2H), 3,68 (t, 2H, J =
6, 9 : Hz), 0, 98 (t, 2H, J = 6,7 Hz ), 0,02 (s, 9H) .
Príklad 42(b)
6- (3-benzamidobenzoyl)-3-(lH-benzimidazol-2-yl)-lH-indazol
301
Zlúčenina z príkladu 42 (b) bola pripravená podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 42(a) okrem toho, že krok (iv) bol nahradený nasledujúcim: k aldehydu pripravenému v príklade 42 (a), krok (iii), bolo pridané 0,011 g (0,11 mmol)
1,2-diaminobenzénu, 0,4 g (0,1201 mmol) elementárnej síry, (čistota dle liekopisu USA), 2 ml bezvodného DMF a zmes bola zohriatá na 90 °C po dobu 18 hodín a ochladená na 25 ’C. Reakčná zmes bola nariedená 10 ml etylacetátu a bola premytá 1 x 10 ml saturovaného NaCl, 1 x 10 ml NaHCO3 a 10 ml vody, usušená nad NaSO4 a filtrovaná cez teflónový filter 0,22 μΜ a koncentrovaná za vzniku jantárového oleja. Purifikácia chromatografiou s kruhovou doskou nasledovaná precipitáciou zo 2 ml metylénchloridu a 2 ml hexánu poskytla medziprodukt ako biely precipitát. 1H NMR (acetón-de) δ 8,81 (d, 1H, J = 8,6),
8,30-8, 25 (m, 2H) , 8,11 (s, 1H), 8, 02-7,99(m, 2H), 7,79 (td, 2H, J = 12,2, 1,2 Hz), 7, 63-7, 47 (m, 7H) , 7,28-7, 40 (m, 2H) . HRMS (MALDI) m/z C2eHi9N5O2 vypočítané (M+H+) : 458, 1617, namerané 458,1632.
Príklad 42(c)
6-(3-benzamidobenzoyl)-3-E-[2-(2-metyltiazol-4-yl)etenyl]- 1Hindazol
302
Zlúčenina z príkladu 42(c) bola pripravená podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 42 (a) okrem toho, že
4-(2-metyltiazyl)metyltrifenylfosfóniumchlorid bol použitý namiesto 2-pikolytrifenyfosfóniumchloridu v kroku (iv). 1H NMR (DMSO) δ 8,11-8,01 (m, 4H) , 7,92 (d, 2H, J= 6,9 Hz), 7,76-7,71 (m, 2H), 7, 65-7, 62 (m, 1H) , 7, 56-7,48 (m, 5H, ) , 7,15 (s, 1H, ) ,
2,81 (s, 3H) . HRMS (MALDI) C27H20N4O2S [M+H+]/z: vypočítané (M+H+) 465, 1380, namerané 465, 1373.
Príklad 42(d)
6-(3-benzamidobenzoyl)-3-(3H-imidazo[4,5-b]pyridín-2-yl)-1Hindazol
Zlúčenina z príkladu 42(d) bola pripravená podobným spôsobom, ako v príklade 42(b) okrem toho, že 1,2-diamín-2pyridín bol použitý namiesto 1,2-diaminbenzénu. HPLC: 3,88 minút (95% oblasť), 2H NMR (DMSO-de) δ 10,62 (s, 1H), 8,83 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 8,53 (s, 1H) , 8,43 (s, 1H) , 8,32 (dt, 1H, J =
6,9, 1,8 Hz), 8,15 (d, 1H, J = 12,9 Hz), 8,11-8,10 (m, 2H) ,
7,91 (d, 1H, J = 9,0 Hz), 7,72-7,65 (m, 6H) , 7,43 (dd, 1H, J = 6,3, 4,5 Hz). HRMS (MALDI) m/z C27H18N6O2 vypočítané (M+H+) :
459, 1564, namerané 459, 1558. Anál. (C27Hi8N6O2 · 0,4 CH2C12) :
vypočítané C, 66,83, H, 3,85, N, 17,07. Namerané: C, 66,93, H, 4,04, N, 16,68.
303
Príklad 42(e)
6-(3-benzamidobenzoyl)-3-E-[N-(4H-1,2, 4-triazol-4-yl)iminometyl]-lH-indazol
Zlúčenina z príkladu 42 (e) bola pripravená podobným spôsobom, ako v príklade 42(a) okrem toho, že 4-amino-l,2,4triazol a PPTS boli použité v 80 °C namiesto 2-pikolytrifenyfosfóniumchloridu/hydridu draselného v 23 °C. HPLC: Rt = 4,05 minút (96% oblasť), 3H NMR (DMSO-de) δ 10,58 (s, 1H) ,
9,53 (s, 1H) , 9,40 (s, 2H) , 8,56 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 8,38 (s, 1H), 8,26 (dt, 1H, J = 7,2, 2,1 Hz), 8,13 (s, 1H) , 8,08-8,05 (m, 2H), 7,73-7, 67 (m, 5H) . HRMS (MALDI) C24Hi7N7O2 [M+H+]/z.
Vypočítané 436, 1516, namerané 436, 1510. Anál. (C24H17N7O2 · 0,4 hexán) vypočítané C, 66,18, H, 4,67, N, 20,47. Namerané: C, 65, 78, H, 4,87, N, 20, 47.
Príklad 43
6- (3-benzamidobenzoyl)-3-E-[2-(2-formamidofenyl)etenyl]-1Hindazol mg (36 %) zlúčeniny z príkladu 43 bolo pripravené z 6(3-benzamidobenzoyl)-3-E-(2-formamidofenyl)etenyl-1- (2trimetylsilanyletoxymetyl)-ΙΗ-indazolu podobným spôsobom, ako
304 bolo popísané v príklade 11. HPLC: Rt = 4,19 minút 1H NMR (CDC13) δ 8,43-7, 92 (m, 6H) , 7, 68-7,49 (m, 4H) 7, 39-7, 36 (m,
3H) , 7,32-7,21 (m, 2H) , 7,09-7, 00 (m, 2H) , 6,91-6,84 (m, 1H) .
HRMS (MALDI) C30H22N4O3 [M+Na]/z: vypočítané 509, 1590, namerané 509, 1580. Anál. (C30H22N4O3 · 0,3H20) vypočítané: C, 73,25, H,
4,63, N, 11,39. Namerané: C, 73,10, H, 4,58, N, 11,28.
Východzia látka bola pripravená takto:
(i)
6-(3-benzamidobenzoyl)-1-(2-trimetylsilanyletoxymetyl)-1Hindazol-3-karboxaldehyd (pripravený v príklade 42(a), krok (iii)) bol konvertovaný na 6-(3-benzamidobenzoyl)-3-E-(2nitrofenyl)etenyl-1-(2-trimetylsilanyletoxymetyl)lH-indazol podobným spôsobom, ako v príklade 42(a), krok (iv), okrem toho, že monohydrát (2-nitrobenzyl)trifenylfosfóniumbromidu bol použitý namiesto 2-pikolytrifenyfosfóniumchloridu (0,19 g, 79 %) . 3H NMR (CDCI3) δ 8,15-7,93 (m, 5H), 7,89-7, 86 (m, 3H), 7,54-7,41 (m, 6H) , 7,36-7,35 (m,
2H), 7,21-7,18 (m, 2H) , 7,03-6,91 (m, 1H) , 3, 64-3,46 (m, 2H) ,
0, 96-0, 79 (m, 2H), -0,06 (s, 9H) .
(ii)
305
0,19 (0,32 mmol) 6-(3-benzamidobenzoyl)-3-E-(2-nitrofenyl)etenyl-1-(2-trimetylsilanyletoxymetyl)-ΙΗ-indazolu bolo rozpustené v 3 ml DMF, podrobené pôsobeniu 0,26 g (1,40 mmol) SnCl2 a 0, 037 ml (1,87 mmol) vody a bolo miešané po dobu 3 hodín v 50 °C. Reakcia bola zastavená v 25 °C s 0,5 ml 3N NaOH a precipitát bol odstránený filtráciou cez celit. Roztok potom bol rozdelený medzi 2 x 30 ml zmesi saturovaného NaHCO3 a vody (50/50) a organická vrstva bola filtrovaná cez krátky stĺpec silikagélu za vzniku 0,17 g (92 %) 6-(3-benzamidobenzoyl)-3-E(2-aminofenyl)etenyl-1-(2-trimetylsilanyletoxymetyl)-lH-indazolu, ako jantárového oleja. Produkt bol použitý bez ďalšej purifikácie.
0,17 (0,28 mmol) 6-(3-benzamidobenzoyl)-3-E-(2-aminofenyl)etenyl-1-(2-trimetylsilanyletoxymetyl)-ΙΗ-indazolu bolo rozpustené v 3 ml metylénchloridu. K tomuto roztoku bolo po kvapkách pridané 0,12 g (0,56 mmol) pentafluórfenylesteru kyseliny mravčej. Po 3 hodinách bola reakčná zmes nariedená 40 ml EtOAc a bola premytá 2 x 30 ml 50/50 NaHCO3 a organická vrstva bola filtrovaná cez krátky stĺpec silikagélu. Zvyšok bol purifikovaný chromatografiou s kruhovou doskou na silikagélu za elúcie zmesi hexánu a EtOAc a CH2C12 (1:1:1), ktorá poskytla 63 mg (40 %)6-(3-benzamidobenzoyl)-3-E-(2formamidofenyl)etenyl-1-(2-trimetylsilanyletoxymetyl)-lH-indazolu ako číreho oleja. 1H NMR (CDCI3) δ 8, 48-8,36 (m, 1H) ,
8,20-7, 84 (m, 4H) , 7,61-7,52 (m, 5H) , 7,41-7,32 (m, 4H) , 7,26306
7,01 (m, 4H) , 6,82 (t, 1H, J = 14,2 Hz), 3, 48-3,23 (m, 2H) ,
0, 95-0,87 (m, 2H) , -0,05 (s, 9H) .
Príklad 44
6-(3-aminobenzoyl)-3-E-[N-(pyrol-l-yl)iminometyl]-lH-indazol
Zlúčenina z príkladu 44 bola pripravená z východzej látky popísanej nižšie podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 12. Rf sm 0,6, p 0,5 (etylacetát) : 1H NMR (300 MHz, CDC13) δ 8,8 (s, 1H), 8,5 (d, 1H) , 7,95 (s, 1H) , 7,75 (d, 1H) , 7,45-7,3 (m, 7H) , 7,2 (m, 1H) , 6,40 (s, 2H) .
Východzia látka bola pripravená takto: (i)
204 mg (0,507 mmol) aldehydu pripraveného v príklade 33 (a), krok (i), a 67 μΐ (0,66 mmol, 1,3 ekv.) 1-aminopyrolu bolo miešané spoločne vo 2 ml toluénu. K tejto zmesi bol pridaný 1 mg PPTS a roztok bol zohrievaný na 80 °C po dobu 1 hodiny. Zmes bola ochladená a bola rozdelená medzi 2:8 zmes etylacetátu a hexánu a vodu. Organická látka bola usušená nad sulfátom sodným, dekantovaná a koncentrovaná pri zníženom tlaku. 215,7 mg (91 %) produktu bolo kryštalizované z 0,5 ml dichlórmetánu a 2 ml metanolu: 1H NMR (300 MHz, C6D6) δ 8,71 (s,
307
1Η) , 8,25 (d, l.H, J = 8,5 Hz), 8,08 (s, 1H) , 7,75 (d, 1H, J =
8,5 Hz), 6,35 (s, 2H), 5,85 (s, 2H) .
(ii)
V
Zmes 535 mg (1,15 mmol, 1 ekv.) vyššie uvedeného jodidu,
236 mg (1,72 mmol, 1,5 ekv.) 3-aminofenylborónovej kyseliny,
24 mg (0, 034 mmol, 0,03 ekv.) PdCl2(PPh3)2 a uhličitanu
draselného bola nabraná do 6,7 ml anisolu v atmosfére oxidu uhoľnatého, 101.325 kPa (1 atm) . Zmes bola zohrievaná na 80 °C po dobu 14 hodin. Zmes bola ochladená, rozdelená medzi etylacetát a vodu. Organické vrstvy boli premyté saturovaným vodným hydrouhličitanem sodným, vodou a soľankou a organická vrstva bola oddelená. Organická látka bola usušená nad sulfátom sodným, dekantovaná a koncentrovaná pri zníženom tlaku. Purifikácia chromatografiiou na silikagéle (50 ml silikagélu, 2:8 až 3:7 zmes etylacetátu a hexánu) poskytla 331 mg (63 %) anilínu ako pevnej látky: Rf sm 0,60, p 0,21 (zmes etylacetátu a hexánu 3:7), XH NMR (300 MHz, CDCI3) δ 8,75 (s, 1H), 8,51 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 8,06 (s, 1H) , 7,76 (dd, 1H, J = 1,3, 8,4 Hz), 7,26 (m, 3H) , 7,17 (m, 2H) , 6,92 (m, 1H) , 6,31 (t, 1H, J = 2,3 Hz), 5,79 (s, 2H) , 3,84 (š s, 2H) , 3,60 (t, 2H, J = 8,2 H2), 0,91 (t, 2H, J = 8,2 Hz), -0,08 (s, 9H) . LCMS
4,98 minút (poz) [M+H]/z vypočítané 460, namerané 460.
Príklad 45(a)
308
6-[3-(indol-4-ylkarboxamido)benzoyl]-3-E-[N-(pyrol-1yl)iminometyl]-lH-indazol
Zlúčenina z príkladu 45(a) bola pripravená podlá príkladu 44 podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 12(d) okrem toho, že indol-4-karboxylová kyselina bola použitá namiesto
5-metyltiazol-2-karboxylovej kyseliny: Rf sm 0,0, p 0,2 (zmes etylacetátu a benzénu 1:3), ľH NMR (300 MHz, DMSO-dg) δ 9,84 (s, 1H) , 8,92 (s, 1H) , 8,66 (s, 1H) , 8,39 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 8,02 (s, 1H) , 7,86 (m, 2H) , 7,66 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 7,52-
7,40 (m, 4H), 7,27-7, 07 (m, 5H), 6,83 (s, 1H), 6,21 (s, 2H) .
Príklad 45(b)
6- (3-benzamidobenzoyl)-3-E-[N-(pyrol-l-yl)iminometyl]-lH-inda zol
Zlúčenina z príkladu 45(b) bola pripravená podlá príkladu 44 podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 12(d) okrem toho, že benzoylchlorid bol použitý namiesto 5-metyltiazol-2karboxylovej kyseliny a HATU: XH NMR (300 MHz, CDCI3, ) 8 11,9 (š s, 1H), 8,70 (s, 1H) , 8,43 (s, 1H) , 8,39 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 7,99 (s, 1H) , 7,9-7,8 (m, 4H) , 7,65 (d, 1H, J = 8,4 Hz),
309
7,48 (t, 2H, J = 7,8 Hz), 7,42-735 (m, 3H) , 7,20 (t, 2H, 2,2
Hz) , 6,28 (t, 2H, J = 2,2 Hz) .
Príklad 46
6-[N-(3-aminofenyl)amino]-3-E-styryl-lH-indazol
Zlúčenina z príkladu 46 bola pripravená z východzej látky podobným 2H NMR (300 popísanej nižšie v príklade 13 (i) .
8, 07 (s, 1H),
7, 97 (d, 1H, J
6, 44
7,88 (i)
7,40 (m, (t, 1H, spôsobom, ako
MHz, DMSO-d6)
8, 73 Hz) , 7,69 bolo
7,28 (m, 1H), 7,06 (d, 1H, J
J = 1,98 Hz) (š s, 2H).
Zlúčenina pripravená v príklade 11, popísané δ 12,6 (d, 1H,
(S, 1H) ,
J = 8, 49
1,49 Hz) ,
1H, J =
krok (v) , bola konvertovaná na 6-[N-(3-nitrofenyl)amino]-3-E-styryl-lH-indazol podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 12. XH NMR (300 MHz, CDC13) δ 8,0 (m, 2H) , 7,77 (m, 1H) , 7,64 (d, 2H, J = 7,86 Hz), 7,41-7,56 (m, 6H) , 7,33 (m, 2H) , 7,08 (d, 1H, J =
8,67 Hz). MS (ESI+) [M+H]/z vypočítané 357, namerané 357. Vypočítané: C, 70,77, H, 4,53, N, 15,72. Namerané: C, 69,18, H, 4,51, N, 15,30.
310
Príklad 47
6- [N-(3-benzamido-4-fluórfenyl)amino]-3-E-styryl-lH-indazol
6-[N-(3-benzamido-4-fluórfenyl)amino]-1-(2-trimetylsilanyletoxymetyl-3-E-styryl-lH-indazol bol konvertovaný na zlúčeninu z príkladu 47 podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 11. XH NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 12,6 (s, 1H) , 10,0
(S, 1H), 8,38 (š s, 1H) , 8,02 (d, 1H, J = 8,78), 7, 98 (d, 2H,
J = 6,87 Hz), 7,69 (d, 2H, J = 7,27 Hz), 7,48-7,61 (m, 4H) ,
7,45 (s, 2H), 7,40 (t, 2H, J = 7,28 Hz), 7,53-7,30 ( t, 2H, J =
7,28 Hz), 7,53-7,30 m, 2H), 7,07 (d, 1H, J = 1,55 Hz) , 7,03
(m, 1H) , 6,95 (dd, 1H, J = 8,79 Hz, J = 1,85 Hz) . MS (ESI+)
[M+H]/z vypočítané 449, namerané 449. Anál, výpočet: C, 74 ,98.
H, 4,72. N, 12,49. Namerané: C, 74,29. H, 4,76. N, 12,12.
Východzia látka bola pripravená takto:
(i)
K roztoku 3,12 g (20 mmol) 2-fluór-5-nitrofenylamínu v 20 ml dichlórmetánu v 23 °C v argónovej atmosfére bolo pridané
1,94 ml (24 mmol) pyridínu a 2,8 ml (24 mmol) benzoylchloridu. Po 45 minútach bol vytvorený biely precipitát. Reakčná zmes bola koncentrovaná vo vákuu, potom bola nariedená vodou a filtrovaná za vzniku bielaj pevnej látky, ktorá bola resuspendovaná v MeOH a opäť filtrovaná za vzniku 4,86 g (93 %) N-(2-fluór-5-nitrofenyl)benzamidu. 1H NMR (300 MHz,
311
CDC13) δ 9,48 (dd, 1H, J = 6, 8 Hz, J = 2,81 Hz), 8,17 (š s, 1H), 8,03 (m, 1H), 7,92 (m, 2H) , 7,52-7, 65 (m, 3H) , 7,31 (d, 1H, J = 9,2 Hz).
(ii)
Zmes 4,86 g (18,7 mmol) N-(2-fluór-5-nitrofenyl)benzamidu a 486 mg 10% Pd/C v 80 ml zmesi 1:1 THF a MeOH bola sýtená vodíkom v 23 °C. Po 2,5 hodinách bola reakčná zmes filtrovaná cez celit a koncentrovaná za vzniku 3,92 g (91 %) N-(5-amino2-fluórfenyl)benzamidu. MS (ESI+) [M+H]/z vypočítané 231, namerané 231.
(iii)
6-[N-(3-benzamido-4-fluórfenyl)amino]-1-(2-trimetylsilanyletoxymetyl-3-E-styryl-lH-indazol bol pripravený podobným spôsobom, ako v príklade 48(a), krok (iii), okrem toho, že N-(5-amino-2-fluórfenyl)benzamid a zlúčenina pripravená v príklade 14, krok (i), boli použité ako východzie látky. 1H NMR (300 MHz, CDC13) δ 8,38 (dd, 1H, J = 6,84 Hz, J =
2,73 Hz), 8,09 (d, 1H, J = 3,08 Hz), 7,86-7,91 (m, 3H) , 7,48-
7,61 (m, 5H) , 7,28-7,45 (m, 4H) , 7,19 (d, 1H, J = 1,7 Hz), 7,08 (dd, 1H, J = 10,48 Hz), 6, 90-6, 96 (m, 2H) , 6,03 (š s, 1H) , 5,66 (s, 2H) , 3,62 (t, 2H, J = 8,14 Hz), 0,91 (t, 2H, J =
8,32 Hz), 0,0 (s, 9H) . MS (ESI+) [M+H]/z vypočítané 579,
312 namerané 579. Anál. výpočet: C, 70, 56. H, 6,10, N, 9,68.
Namerané: C, 20,26. H, 6,08. N, 9,16.
Príklad 48(a)
6-[N- (5- ( (l-etyl-3-metyl-lH-pyrazol-5-yl)karboxamido)-2-fluór4-metylfenyl)amino]-3-E-[2-(pyridín-2-yl)etenyl]-lH-indazol
Zlúčenina z príkladu 48 (a) bola pripravená podobným spôsobom, ako v príklade 41(a), z východzej látky popísanej nižšie. 2H NMR (300 MHz, CD3OD) δ 8,54 (d, 1H, J = 4,8 Hz),
7,95 (d, 1H, J = 9,49 Hz), 7,84 (td, 1H, J = 7,71 Hz, J =1,78
Hz), 7,70 (d, 1H, J = 7,95 Hz), 7,53 (d, 1H, J = 16,59Hz),
7,40 (d, 1H, J = 7,92 Hz), 7,29 (qd, 1H, J = 7,45 Hz, J =1,07
Hz), 7,11 (d, 1H, J = 11, 8), 7, 03-7, 06 (m, 2H) , 6,71 (s,1H) ,
4,50 (Qr 2H, J = 7,16 Hz) , 2,27 (s, 3H) , 2,26 (s, 3H), 1,38
(t, 3H, J = 7,11 Hz). MS (ESI+) [M+H]/z vypočítané 496,
namerané 496. Anál, výpočet: C, 67, 86, H, 5,29, N, 19,79.
Namerané : C, 66,24, H, 5,50, N, 18,61
Východzia látka bola pripravená takto:
(i)
Zmes 1,0 g (5 mmol) 1-fluór-5-metyl-2,4-dinitrobenzénu a 200 mg 10% Pd/C v 20 ml MeOH bola sýtená vodíkom v 23 °C po dobu 24 hodín. Reakčná zmes bola filtrovaná cez celit a
313 koncentrovaná. Purifikácia chromatografiou na silikagéle (1:1 zmes etylacetátu a hexánu) poskytla 613 mg (87 %) 4-fluór-6metylbenzén-1,3-diamínu.
(ii)
K roztoku 566 mg (2 mmol) 4-nitrofenylester-2-trimetylsilanyletylesteru uhličitej kyseliny v 4 ml DMF v 23 °C v argónovej atmosfére bolo pridané 12 mg (0,1 mmol) DMAP, 0,35 ml (2 mmol) DIEA a 4-fluór-6-metylbenzén-l, 3-diamin. Výsledný roztok bol zohrievaný na 50 °C po dobu 48 hodín. Reakčná zmes bola zastavená saturovaným vodným NaHCOa, a extrahovaná 3 x 20 ml EtOAc. EtOAc bol odstránený vo vákuu a zvyšok bol opäť rozpustený v Et2O, potom premytý 3N vodným NaOH, vodou, solankou, usušený nad Na2SO4, filtrovaný a koncentrovaný. Purifikácia chromatografiou na silikagélu (2:8 až 7:3 zmes etylacetátu a hexánu) poskytla 160 mg (28 %) 2-trimetylsilanyletylesteru (5-amino-4-fluór-2-metylfenyl)karbámovej kyseliny. MS (ESI+) [M+H]/z vypočítané 634, namerané 634.
(iii)
K zmesi 224 mg (0,47 mmol) 6-jód-3-((E)-2-pyridin-2ylvinyl)-1-(2-trimetylsilanyletoxymetyl)-lH-indazolu, 160 mg (0,56 mmol) 2-trimetylsilanyletylesteru 5-amino-4-fluór-2metylfenyl) karbámovej kyseliny, 214 mg (0,66 mmol) Cs2CO3, 5,4
314 mg, (0, 0059 mmol) PdC12(PPh3)2 a 10 mg (0,0176 mmol) BINAP v argónovej atmosfére v 23 °C bolo pridané 0,5 ml toluénu^ Výsledná zmes bola zohrievaná na 80 ’C po dobu 16 hodín. Reakčná zmes bola ochladená na 23 ’C, a potom nariedená 20 ml vody a extrahovaná 3 x 50 ml EtOAc. Organické vrstvy boli premyté 30 ml vody, 30 ml solanky, usušené nad Na2SO4, filtrované a koncentrované na penu. Chromatografia na kolóne so silikagélom (3:7 zmes etylacetátu a hexánu) poskytla 98 mg (33 %) 2-trimetylsilanyletylesteru {4-fluór-2-metyl-5-[3-((E)2-pyridín-2-ylvinyl)-1-(2-trimetylsilanyletoxymetyl)-lH-indazol-6-ylamino]fenyl}karbámovej kyseliny. TLC (7:3 zmes hexánu
a etylacetátu) Rf sm 0,42, Rf p 0,23. 3H NMR (CDCI3) δ 8,64 (dd,
1H, J = 4,79 Hz, J = 0, 86 Hz) , 7,94 (d, 1H, J = 8,71 Hz) , 7, 91
(š s, 1H) , 7,86 (d, 1H, J = 16 ,41 Hz) , 7,69 (td, 1H, J = 7,72
Hz, J = 1,8 Hz), 7,55 (d, 1H, J = 16,44 Hz), 7,49 (d, 1H, J =
7,91 Hz), 7,17 (qd, 1H, J = 7,44 Hz, J = 0,98 Hz), 6,99 (dd,
1H, J = 8,67 Hz, J = 1,89 Hz), 6,93 (d, 1H, J = 11,2 Hz), 6,25
(š s, 1H) , 5,95 (d, 1H, J = 1,97 Hz), 5,70 (s, 2H) , 4,25 (t,
2H, J = 8,53 Hz; ), 3,60 (t, 2H, J = 8,24 Hz), 2,22 (s, 3H) ,
1,04 (t, 2H, J = 8,54 Hz) , 0,9 (t, 2H, J = 8,25 Hz) , 0,05 (s,
9H), 0,0 (s, 9H) . 13C NMR (CDC13, 75 MHz) δ 156, 0, 154,4, 149, 8,
142,9, 142, 8, 142,5, 136, 6, 132, 1, 130, 1, 130, 5, 128,7, 128, 5,
124,3, 122,2, 122,0, 121,8, 118,2, 117,3, 117,0, 115,1, 95,2,
77, 6, 77, 4, 66,5, 63,7, 17, 9, 17,2, -1,3. FTIR cm-1: 3326,
2947, 1716, 1617, 1534, 1514, 1244, 1057. MS (ESI+) [M+H]/z vypočítané 634, namerané 634.
(iv)
.315
Vyššie uvedený anilín bol pripravený podobným spôsobom, ako v príklade 11. NMR (300 MHz, CD3OD) δ 8,54 (m, 1H) , 7,91 (dd, 1H, J = 8,74 Hz, J = 0,58 Hz), 7,83 (td, 1H, J = 7,72 Hz, J = 1,79 Hz), 7,80 (d, 1H, J = 16,52 Hz), 7,69 (d, 1H, J =
7,98 Hz), 7,52 (d, 1H, J = 16,58 Hz), 7,29 (qd, 1H, J = 7,43
Hz, J = 1,07 Hz), 6,94-6,99 (m, 2H) , 6,83 (d, 1H, J = 11,98
Hz), 6,82 (d, 1H, J = 7,49 Hz), 2,15 (s, 3H) . MS (ESI+) [M+H]/z vypočítané 360, namerané 360.
Príklad 48(b)
6-[N-(5-((1,3-dimetyl-lH-pyrazol-5-yl)karboxamido)-2-fluór-4metylfenyl)amino]-3-E-[2-(pyridín-2-yl)etenyl]-lH-indazol
Zlúčenina z príkladu 48 (b) bola pripravená podobným spôsobom, ako v príklade 48(a) okrem toho, že 2,5-dimetyl-2Hpyrazol-3-karboxylová kyselina bola použitá namiesto 2-etyl-5metyl-2H-pyrazol-3-karboxylovej kyseliny. 1H NMR (300 MHz,
DMSO· -d6) δ 12, 8 (s, 1H) , 9,71 (S, 1H), 8,59 (m, 1H) , 8,11 (s,
1H) , 8,00 (d, 1H, J = 8,75 Hz), 7,87 (d, 1H, J = 16,37 Hz) ,
7, 80 (td, 1H, J = 7,66 Hz, J = = 1,81 Hz) , 7, 64 (d, 1H, J = 7, 88
Hz) , 7,49 (d, 1H, J = 16, 38 Hz), 7,34 (d, 1H, J = 8,16 Hz) ,
7,26 (m, LH), 7,21 (d, 1H, J = 12,14 Hz), 6,97 (dd, 1H, J =
8,76 Hz) , 6,88 (s, 1H) , 6,79 (5, 1H), 3,98 (s, 3H) , 2,20 (s,
3H) , 2,19 (s, 3H) . MS (ESI+) [M+H]/z vypočítané 482, namerané
482. Anál. výpočet: C, 67,35, H, 5,02, N, 20,36. Namerané : C,
66,83, H, 5,25, N, 19,68.
Príklad 49(a)
316
6- [N- (3- ( (1, 3-dimetyl-lH-pyrazol-5-yl) karboxamido) -4fluórfenyl)amino]-3-E-[2-(pyridin-2-yl)etenyl]-lH-indazol
Zlúčenina z príkladu 49 (a) bola pripravená podobným spôsobom, ako v príklade 48 (a) dimetyl-2H-pyrazol-3-karboxylová okrem nasledujúceho: 2,5kyselina bola použitá namiesto 2-etyl-5-metyl-2H-pyrazol-3-karboxylovej kyseliny, v kroku (íii), 2-trimetylsilanyletylester (5-amino-2fluórfenyl)karbámovej kyseliny, pripravený ako popísané nižšie, bol použitý namiesto 2-trimetylsilanyletylesteru (5 amino-4-fluór-2-metylfenyl)karbámovej kyseliny, rozpúšťadlo bolo DME a ako ligand bol použitý bifenyl-2-
yldicyklohexylfosfán. TH NMR (300 MHz, CD3OD) δ 12,7 (s, 1H),
9,94 (s, 1H), 8,48 (m, 1H) , 8,40 (s, 1H), 8,02 (d, 1H, J =
6,77 Hz), 7,87 (d, 1H, J = 16,37 Hz), 7,80 (d, 1H, J = 7, 63
Hz, J = 1, 81 Hz) , 7, 64 (d, 1H, J = = 7,88 Hz), 7,49 (d, 1H, J =
16,39 Hz), 7,42 (dd, 1H, J = 6,65 Hz, J = 2,68 Hz), 7,24 (m,
2H) , 7,06 (m, 2H) , 6,96 (dd, 1H, J = 8,81 Hz, J = 1,82 Hz),
6,85 (s, 1H), 4,0 (s, 3H) , 2,20 (s, 3H) . MS (ESI+) [M+H]/z vypočítané 468, namerané 468. Anál, výpočet: C, 66,80, H,
4,74, N, 20,97. Namerané: C, 66,01, H, 4,72, N, 20,81.
(i)
317
K roztoku 9,82 g (54 mmol) 1-fluór-2-izokyanato-4-nitrobenzénu v 40 ml THF v 23 °C v argónovej atmosfére bolo pridané 7,72 ml (54 mmol) 2-trimetylsilanyletanolu. Výsledná zmes bola miešaná po dobu 11 hodín, a potom zohrievaná na 50 °C po dobu 2 hodín. Reakčná zmes bola ponechaná vychladnúť na 23 ’C, zastavená saturovaným vodným NaHCCb a extrahovaná 3 x 100 ml EtOAc. Zlúčené etylacetátové vrstvy boli premyté 2 x 90 ml IN vodné HCI, 90 ml vody a 90 ml solanky, usušené nad Na2SO4, filtrované a koncentrované na žltú pevnú látku. Chromatografia na silikagéle (2:8 zmes etylacetátu a hexánu) poskytla 12,3 g (77 %) 2-trimetylsilanyletylesteru (2-fluór-5nitrofenyl) karbámovej kyseliny. 1H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 9,06 (dd, 1H, J = 6,89 Hz, J = 2,63 Hz), 7,89 (m, 1H) , 7,20 (m, 1H), 6,91 (š s, 1H), 4,31 (t, 2H, J = 8,67 Hz), 1,06 (t, 2H, J = 8,67 Hz), 0,05 (s, 9H). LCMS (ESI-) [M+H]/z vypočítané 299, namerané 299.
(ii)
NH,
Zmes 3,00 g (10 mmol) 2-trimetylsilanyletylesteru (2-fluór-5-nitrofenyl)karbámovej kyseliny a 300 mg 10% Pd/C v 30 ml metanolu bola sýtená vodíkom v 23 °C. Výsledná zmes bola miešané po dobu 24 hodín. Reakčná zmes bola filtrovaná cez celit a koncentrovaná za vzniku 2,62 g (97 %) 2-trimetylsilanyletylesteru (5-amino-2-fluórfenyl)karbámovej kyseliny. 1H NMR (300 MHz, CDC13) 8 7,52 (m, 1H) , 6,85 (dd, 1H, J = 10,8,
Hz, 1 = 8,69 Hz), 6,73 (š s, 1H) , 6,28 (m, 1H) , 4,27 (t, 2H, J = 8,57 Hz), 3,0-4,4 (š s, 2H) , 1,06 (t, 2H, J = 8,58 Hz), 0,07 (s, 9H).
318
Príklad 49(b)
6-[N-(3-((1,3-dimetyl-lH-pyrazol-5-yl)karboxamido)-4-metylfenyl)amino]-3-E-[2-(pyridin-2-yl)etenyl]-lH-indazol
CC -Vr a CO-
Zlúčenina z príkladu 49(b) bola pripravená podobným
spôsobom ako v príklade 49(a) okrem toho, že 1-metyl-2-
izokyanato-4-nitrobenzén bol použitý namiesto l-fluór-2-
izokyanato-4-nitrobenzénu v kroku (i) . 1H NMR (300 MHz, CDCI3)
δ 8,59 (m, 1H) , 8,35 (s, 1H) , 8,00 (d, 1H, J = 8,73 Hz) , 7,87
(d, 1H, J = 16,38 Hz) , 7,80 (td, 1H, J = 7,66 Hz, J = 1, 85
Hz) , 7,64 (d, 1H, J = 7,85 Hz), 7 ,49 (d, 1H, J = 16, 35 Hz ) ,
7,26 (m, 1H), 7,19 (m, 2H), 7,09 (d, 1H, J = 1,48 HZ) , 7, 02
(dd, 1H, J = 8,17 Hz, J = 2,24 Hz), 6,97 (dd, 1H, J = 8,79 Hz, J = 1,80 Hz), 6,81 (š s, 1H) , 4,00 (s, 3H) , 2,20 (s, 3H) , 2,18 (s, 3H). LCMS (ESI+) [M+H]/z vypočítané 464, namerané 464.
Príklad 49(c)
6-[N-(3-acetamido-4-fluórfenyl)amino]-3-E-[2-(pyridín-2-yl)etenyl]-lH-indazol
Zlúčenina z príkladu 49(c) bola pripravená podobným spôsobom ako v príklade 49(a) okrem toho, že acetanhydrid bol použitý namiesto 2,5-dimetyl-2H-pyrazol-3-karboxylovej kyseliny: XH NMR (300 MHz, CD3OD) δ 8,44 (m, 1H), 7,82 (d, 1H) ,
319
7,70 (m, 3H) , 7,55 (d, 1H) , 7,41 (d, 1H, J = 16,4 Hz), 7,19 (m, 1H) , 7,03 (s, 1H) , 6,94 (m, 1H) , 6,87 (m, 2H) , 2,11 (s, 3H) . LCMS (100% oblasť) Rt = 4,53 minúty (poz) [M+H]/z vypočítané 388,4, namerané 388,4.
Príklady 49(d)-49(x) môžu byť pripravené podobným spôsobom, jako bolo popísané v príklade 49(a).
Príklad 49(d)
Príklad 49(e)
Príklad 49(f)
320
Príklad 49(g)
Príklad 49(h)
Príklad 49(i)
Príklad 49(j)
321
Príklad 49(k)
Príklad 49(1)
Príklad 49(m)
Príklad 49(n)
Príklad 49(o)
322
Príklad 49(p)
Príklad 49(q)
Príklad 49(r)
Príklad 49(s)
323
Príklad 49(t)
Príklad 49(u)
Príklad 49(v)
Príklad 49(w)
324
Príklad 49(x)
Príklad 50
6- [3- (5-amino-2-fluórfenyl) karbamoyl-5-metyl-2-etyl-2Hpyrazol-4-yl]-3-E-[2-(pyridin-2-yl)etenyl]-lH-indazol
Zlúčenina z príkladu 50 bola pripravená z východzej látky popísané nižšie podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 11. MS (ESI+) [M+H]/z vypočítané 482, namerané 482. Vypočítané: C, 67,35, H, 5,02, N, 20,36. Namerané: C, 66,70, H, 5,09, N, 19,95.
(i)
325
(2-fluór-5-nitrofenyl)amid 2-etyl-5-metyl-2H-pyrazol-3karboxylovej kyseliny bol pripravený podobným spôsobom, ako v príklade 47, krok (i), okrem toho, že 2-etyl-5-metyl-2Hpyrazol-3-karboxylová kyselina a HATU boli použité namiesto benzoylchloridu. MS (ESI+) [M+H]/z vypočítané 293, namerané 293.
(ii)
(2-fluór-5-nitrofenyl)amid 2-etyl~5-metyl-2H-pyrazol-3karboxylovej kyseliny bol pripravený podobným spôsobom, ako v príklade 40(b), krok (i). MS (ESI+) [M+H]/z vypočítané 263, namerané 263.
(iii)
6-[3-(5-amino-2-fluórfenyl)karbamoyl-5-metyl-2-etyl-2Hpyrazol-4-yl]-3-E-[2-(pyridín-2-yl)etenyl)-1-(2-trimetyl326 silanyletoxymetyl)-lH-indazol bol pripravený podobným spôsobom, ako v príklade 48(a), krok (iii), okrem toho, že (5amino-2-fluórfenyl)amid 2-etyl-5-metyl-2H-pyrazol-3karboxylovej kyseliny bol použitý ako východzia látka. MS (ESI+) [M+H]/z vypočítané 612, namerané 612.
Príklad 51
6-pyrid-4-yl-3-E-(N-(pyrol-l-yl)iminometyl)-lH-indazol
6-pyrid-4-yl-3-E-(N-(pyrol-l-yl)iminomethyl)-1-(2-trimetylsilanyletoxymetyl-lH-indazol bol konvertovaný na 6-pyrid4-yl-3-E- (N-(pyrol-l-yl)iminometyl)-lH-indazol podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 29(3)/11 NMR (300 MHz, CDCla) δ 8,76 (s, 1H), 8,67 (d, 2H, J = 6,1 Hz), 8,53 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 7,74 (s, 1H), 7,61 (d, 2H, J = 6,2 Hz), 7,54 (d,
1H, J = 8,5 Hz), 7,27-7,25 (m, 2H) , 6,31-6,29 (m, 2H) . MS (ES) [M+H]/z vypočítané 288, namerané 288. Anál. výpočet: C (71,07), H (456), N (24,37). Namerané: C (70,81), H (4,57), N (24,14) .
Východzia látka bola pripravená takto:
Roztok 208 mg (0,59 mmol) 6-pyridin-4-yl-l-(2-trimetyl silanyletoxymetyl) -lH-indazol-3-karbaldehydu, 145 mg (1,76
327 mmol) N-aminopyrolu a 5,8 μΐ octovej kyseliny v 1 ml etanolu bol udržovaný v 95 °C po dobu 16 hodín. Roztok potom bol evaporovaný pri zníženom tlaku a purifikovaný chromatografiou na silikagéle za vzniku 140 mg (57 %) 6-pyrid-4-yl-3-E(N-(pyrol-l-yl)iminometyl)-1-(2-trimetylsilanyletoxymetyl)-1Hindazolu ako oleja. XH NMR (300 MHz, CDC13) δ 9,08 (s, IH) ,
8,71 (d, 2H, J = 6,1 Hz), 8,46 (d, IH, J = 8,5 Hz), 8,34 (s, IH), 7,85 (d, 2H, J = 6,2 Hz), 7,80 (d, IH, J = 8,5 Hz), 7,56 (t, 2H, J = 2,3 Hz), 6,25 (t, 2H, J = 2,3 Hz), 5,93 (s, IH) ,
5,74 (s, 2H), 3,64 (t, 2H, J = 7,9 Hz), 0,86 (t, 2H, J = 7,9
Hz), 0,00 (s, 9H) .
Príklad 52(a)
6-(7-azaindazol-4-yl)-3-E-styryl-lH-indazol
SEM-zlúčenina z príkladu 52(a) bola konvertovaná na zlúčeninu z príkladu 52 (a) podobným spôsobom, jako bolo popísané v príklade 27 (a) . XH NMR (300 MHz, DMSO-de) δ 8, 63 (d, IH, J = 4,8 Hz), 8,41 (d, IH, J = 85 Hz), 8,37 (s, IH) , 7,99 (s, IH), 7,76 (d, 2H, J = 7,3 Hz), 7,70 (d, IH, J = 8,5 Hz), 7, 60-7, 85 (m, 6H) . HRMS (FAB) [M+H]/z vypočítané 338,1400, namerané 338,1389. Analyzované s 1,1 trifluóroctovou kyselinou, vypočítané: C (60,21), H (3,51), N (15,13). Namerané: C (59,93), H (3,59), N (14,86).
Východzia látka bola pripravená takto:
(i)
328
Roztok 1,0 g (1,90 mmol) 3-styryl-l-(2-trimetylsilanyletoxymetyl)-6-trimetylstannyl-lH-indazolu, 0,56 g (1,90 mmol)
1-(4-jódpyrazolo[3,4-b]pyridín-l-yl)etanónu, 116 mg (0,38 mmol) AsPh3 a 87 mg (0,09 mmol) Pd2dba3 v 10 ml odplyneného dioxánu bol zohrievaný v 110 °C po dobu 3 hodín. Roztok potom bol nariedený 50 ml etylacetátu, premytý 2 nad MgSO^ a koncentrovaný pri na silikagéle usušený
Purifikácia chromatografiou (46 %) zlúčeniny z príkladu x 10 ml solanky, zníženom tlaku.
poskytla 412 mg pevnej látky. 1H
NMR (300 MHz, CDC13) δ 8,82 (d, 1H, J = 5,8 Hz) , 8,52 (s, 1H),
8,29 (d, 1H, J = 8,2 Hz) , 8,05 (s, 1H) , 7,73-7,32 (m, 10H) ,
5,86 (s, 2H), 3,69 (t, 2H, J = 8,2 Hz) , 0,97 (t, 2H, J = 8,2
Hz) , -o, 03 (s, 9H) .
(ii)
Roztok 2,90 g (6,10 mmol) 6-jód-3-styryl-l-(2-trimetylsilanyletoxymetyl)-lH-indazolu, 2,00 g (6,12 mmol) hexametyldicínu a 282 mg (0,24 mmol) Pd(PPh3)4 v 10 ml odplyneného dioxánu bol zohrievaný ve 110 °C po dobu 3 hodín. Roztok potom bol nariedený 200 ml etylacetátu, premytý 2 x 20 ml soťanky, usušený nad MgSO< a evaporovaný pri zníženom tlaku. Purifikácia chromatografiou na silikagéle poskytla 3 g (96 %) 3-styryl-l329 (2-trimetylsilanyletoxymetyl)-6-trimetylstannyl-lH-indazolu ako žltého oleja. XH NMR (300 MHz, CDC13) δ 8,02 (d, 1H, J =
7,4 Hz), 7,71 (s, 1H), 7,71-7,29 (m, 8H) , 5,77 (s, 2H) , 3,65 (t, 2H, J = 16,3 Hz), 0,95 (t, 2H, J = 16,4 Hz), 0,38 (s, 9H) , -0,03 (s, 9H).
(iii)
Ó
Zmes 820 mg (5,30 mmol) 4-chlór-lH-pyrazolo[3,4-
bjpyridínu, 2,4 mg (16,0 mmol) jodidu sodného a 0,8 ml
acetylchloridu v 6 ml acetonitrilu bola zohrievaná k varu pod
spätným chladičom 8 hodín. Zmes potom bola podrobená pôsobeniu 10 ml 10% vodného roztoku NaCC>3 a 10 ml 10% vodného roztoku NaHSC>3 a udržovaná 10 minút. Zmes bola extrahovaná 50 ml etylacetátu a organické vrstvy boli premyté 10 ml solanky, usušené nad MgSO4 a evaporované pri zníženom tlaku. Purifikácia chromatografiou na silikagéle poskytla 650 mg (42 %) l-(4-jódpyrazolo[3,4-b]pyridín-l-yl)etanónu ako hnedej pevnej látky. 1H NMR (300 MHz, CDC13) δ 8,39 (d, 1H, J = 5,0 Hz), 8,04 (s, 1H) ,
7,76 (d, 1H, J = 5,0 Hz), 2,88 (s, 3H) .
(iv)
330
1,2 g (8,8 mmol) 1,7-dihydropyrazolo[3,4-b]pyridín-4-ónu, (Dorn, H. Et al., Prakt. Chem., 324, 557-62, 1982) v 15 ml
POCI3 pri teplote 0 °C bolo podrobené pôsobeniu 2,5 mg (0,01 mmol) PCI5. Roztok bol ponechaný ohriať sa na izbovú teplotu po dobu 1 hodiny, potom bol zohrievaný na 90°C a udržovaný 3 hodiny. Roztok bol koncentrovaný pri zníženom tlaku, potom podrobený pôsobeniu 50 ml ladu a vody. Výsledná zmes bola extrahovaná 100 ml etylacetátu a organická vrstva bola premytá 30 ml saturovaného vodného roztoku hydrouhličitanu sodného. Organická vrstva bola usušená nad MgSO4, potom evaporovaná pri zníženom tlaku za vzniku 820 mg (60 %) 4-chlór-lHpyrazolo[3,4-b]pyridínu ako žltej pevnej látky. NMR (300 MHz, CDCI3) δ 8,57 (d, 1H, J = 5,2 Hz), 8,25 (s, 1H) , 7,28 (d, 1H, J = 5,2 Hz) .
Príklad 52 (b)
6-(7-azaindol-4-yl)-3-E-styryl-lH-indazol
SEM-jódindazol bol konvertovaný na zlúčeninu z príkladu 52 (b) podobným spôsobom, jako bolo popísané v príklade 27(a). XH NMR (300 MHz, MeOH-dJ δ 8,40 (d, 1H, J = 5,3 Hz), 8,53 (d, 1H, J = 6 Hz), 7,74-7,35 (m, 10H) , 6,90 (s, 1H) . HRMS (FAB) [M+H]/z vypočítané 337,1448, namerané 337,1457. Analyzované s 0,3 H2O, vypočítané: C (77,31), H (4,90), N (16,39). Namerané: C (77,51), H (4,88), N (16,27).
Východzia látka bola pripravená takto:
(i)
331
OD
4-chlór-lH-pyrolo[2,3-b]pyridín
Chem. Soc. PI, 2270-74, 1974) pyrolo[2,3-b]pyridín podobným v príklade 52 (a). rH NMR (300
7,89 (d, 1H, J = 5,0 Hz) , 7,58 Hz) , 6,26 (š s, 1H) .
(Clark, B. A. Et al., J. bol konvertovaný na 4-jód-lHspôsobom, jako bolo popísané MHz, MeOH-dJ δ 8,10 (m, 1H) , (m, 1H) , 7,50 (d, 1H, J = 5,0
Príklad 53(a)
3-(lH-benzimidazol-2-yl)-N-(4-hydroxyfenyl)-lH-indazol-6karboxamid
K roztoku 208 mg (0,7 mmol) indazol-6-karboxylovej kyseliny formamidu bolo pridané 82 mg
3-(lH-benzimidazol-2-yl)-1H(0,7 ml suchého dimetyl4-aminofenolu, mmol) nasledované 312 mg (0,8 mmol) HATU, a potom bolo pridané 20 kvapiek trietylamínu. Reakcia bola miešaná cez miestnosti. LC/MS preukázala požadovaný produkt zložku. Rozpúšťadlo bolo odstránené vo vákuu. Zvyšný noc
Pri ako teplote hlavnú zvyšok bol nabraný do vody a etylacetátu. Vrstvy boli oddelené a organická vrstva bola koncentrovaná vo rozpustený v 10 ml metanolu a polovina vákuu. Zvyšok bol tohto roztoku bola purifikovaná HPLC s použitím gradientu
55% acetonitril/voda po dobu 60 minút
5% acetonitril/voda až
0,1% trifluóroctovou kyselinou vo vode. Zlúčenina uvedená v názve bola izolovaná
332 ako 20 mg pevnej látky. XH NMR (metanol-d4) δ 6,87 (2H, d, 8,8 Hz), 7,55 (2H, d, 8,7 Hz), 7,61 (2H, m), 7,87 (2H, br s), 8,00 (1H, d, 8,4 Hz), 8,35 (1H, s), 8,52 (1H, d, 8,6 Hz). MS (APCI poz) 370,1.
Východzia látka bola pripravená takto:
(i)
K 2,0 g (12,42 mmol) lH-indol-6-karboxylovej kyseliny v 100 ml vody bolo pridané 8,56 g (124,2 mmol) NaNO2. K tejto suspenzii potom bolo pomaly po kvapkách pridávané adičným lievikom 16 ml 6N HCI. Výsledná suspenzie bola ponechána za miešania pri izbovej teplote cez noc. Pevný precipitát bol filtrovaný a premytý 50 ml vody za vzniku 2,35 g (100 %) 3formyl-lH-indazol-6-karboxylovej kyseliny. 1H NMR (DMSO-de) δ 14,46 (1H, s), 10,21 (1H, s), 8,26 (1H, s), 8,20 (1H, d, J =
8,5 Hz), 7,90 (1H, d, J = 8,3 Hz). MS (APCI pozitívny) 205 (metylester) .
(ii)
K 2,35 g (12,42 mmol) 3-formyl-lH-indazol-6-karboxylovej kyseliny v 60 ml DMF bolo pridané 1,34 g (12,42 mmol) 1,2f enyléndiamínu a 13,66 mmol (1,1 ekv.) práškovej síry. Táto zmes potom bola zohrievaná k varu pod spätným chladičom po
333 dobu 6 hodín. Reakcia bola sledovaná TLC a LC-MS. Po ochladení bolo pridané 50 ml vody do reakcie a hnedý precipitát, ktorý bol vytvorený, bol filtrovaný a zbieraný za vzniku 3,1 g (90 %) 3-(lH-benzimidazol-2-yl)-lH-indazol-6-karboxylovej kyseliny. TH NMR (DMSO-d6) δ 14,01 (1H, s), 8,58 (1H, d, J =
8,5 Hz), 8,24 (1H, s), 7,87 (1H, d, J = 8,7 Hz), 7,64 (2H, m), 7,25 (2H, m). MS (APCI pozitívny) 279.
Príklad 53(b)
3-(lH-benzimidazol-2-yl)-N-cyklopropyl-lH-indazol-6-karboxamid
K 200 mg (0,719 mmol) 3-(lH-benzimidazol-2-yl)-lH-indazol6-karboxylovej kyseliny v 30 ml DMF bolo pridané 98 mg (0,719 mmol) cyklopropylamínu, 273 mg (0,719 mmol) HATU a 0,1 ml (0,726 mmol) trietylaminu. Tento roztok bol ponechaný za miešania pri izbovej teplote cez noc. Reakcia bola spracovaná premytím vodou a extrakciou 3 x 50 ml etylacetátu. Organická vrstva potom bola usušená nad MgSOa, filtrovaná a koncentrovaná za vzniku tmavého oleja. Velmi rýchla chromatografia na kolóne (30-70% etylacetát/petroléter) poskytla 0,130 g (57 %) 3-(lHbenzimidazol-2-yl)-N-cyklopropyl-lH-indazol-6-karboxamidu ako žltej pevnej látky. NMR (DMSO-d6) δ 13,88 (1H, s), 8,63 (1H, m), 8,51 (1H, d, J = 8,5 Hz), 8,09 (1H, s), 7,75 (1H, d, J =
8,7 Hz), 7,63 (2H, br s), 7,21 (2H, m), 2,89 (1H, m), 0,72 (2H, m), 0,63 (2H, m). MS (APCI pozitívny) 318,1.
334
Príklad 53(c)
3-(lH-benzimidazol-2-yl)-N-(4-hydroxy-3-metylfenyl)-lH-indazol-6-karboxamid
Zlúčenina z príkladu 53(c) bola pripravená podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 53(a), okrem toho, že 3-metyl-4-aminofenol bol použitý namiesto 4-aminofenolu. 1H
NMR, (DMSO-de) δ 8,59 (1H, d, J = 8,3 Hz) , 8,25 (1H, s), 7,89
(1H, dd, J = 1,3, 8,5 Hz) , 7,68 (2H, br s), 7,28 (2H, m), 7,14
(1H, d, J = 8,5 Hz) , 6, 74 (1H, s), 6,68 (2H, dd, J = 3,0, 8,3
Hz). MS (APCI pozitívny) 384,1.
Príklad 53(d)
3-(lH-benzimidazol-2-yl)-N-(4-hydroxy-2, 3-dimetylfenyl)-1Hindazol-6-karboxamid
Zlúčenina z príkladu 53(d) bola pripravená podobným spôsobom, jako bolo popísané v príklade 53(a) okrem toho, že
2,3-dimetyl-4-aminofenol bol použitý namiesto 4-aminofenolu. 1H
NMR (DMSO-de) 8 9,93 (1H, s }, 9, 22 (1H, s) 9 8,56 (1H, d, J =
5,5 Hz), 8,25 (1H, s) , 7,90 (1H, d, J = θ, 5 Hz) , 7,73 (1H, br
s) , 7,53 (1H, br s) , 7,23 (2H, br s) , 6r 92 (1H, d, J = 8,3
335
Hz), 6,68 (1H, d, J = 8,5 Hz), 2,09 (6H, br s). MS (APCI pozitívny) 398,4.
Príklad 53(e)
3-(lH-benzimidazol-2-yl)-lH-indazol-6-karboxamid
Zlúčenina z príkladu 53 (e) bola pripravená podobným spôsobom, jako bolo popísané v príklade 53(a) okrem toho, že
1,1,1,3,3,3-hexametyldisilazán bol použitý namiesto 4-amino-
fenolu. ΧΗ NMR (DMSO-de) δ 13,91 (1H, s) , 13, 04 (1H, s), 8,52
(1H, d, J = 8,3 Hz), 8,20 (1H, br s), 8,15 (1H, s), 7,81 (1H,
d, J =· 7,7 Hz), 7,75 (1H, d, J = 6,6 Hz) , 7,51 (2H, m), 7,21
(2H, m). MS (APCI pozitívny) 278,1.
Príklad 53(f)
3-(lH-benzimidazol-2-yl)-N-benzyloxy-lH-indazol-6-karboxamid
Zlúčenina z príkladu 53 (f) bola pripravená podobným spôsobom, jako bolo popísané v príklade 53(a) okrem toho, že O-benzylhydroxylamín bol použitý namiesto 4-aminofenolu. 1H NMR (DMSO-de) δ 13,94 (1H, s), 13,06 (1H, s), 11,97 (1H, s), 8,55 (1H, d, J = 8,8 Hz), 8,02 (1H, s), 7,78 (1H, d, J = 8,3 Hz),
336
7,52 (1Η, d, J = 8,3 Hz), 7,50 (3H, m), 7,40 (3H, m), 7,22 (2H, m), 4,97 (2H, s). MS (APCI pozitívny) 384,2.
Príklad 53 (g)
3-(lH-benzimidazol-2-yl)-N-(3-fluór-4-hydroxyfenyl)-lH-indazol-6-karboxamid
Zlúčenina z príkladu 53(g) bola pripravená podobným spôsobom, jako bolo popísané v príklade 53(a) okrem toho, že 3-fluór-4-aminofenol bol použitý namiesto 4-aminofenolu. 1H NMR (CH3OD) δ 8,58 (1H, d, J = 8,5 Hz), 8,20 (1H, s), 7,84 (1H, d, J = 8,7 Hz), 7,68 (2H, br s), 7,63 (1H, dd, J = 2,4, 13 Hz),
7,29 (3H, m), 6,92 (1H, t, J = 9,2 Hz). MS (APCI pozitívny)
388,3.
Príklad 54(a)
3- (5,6-difluór-lH-benzimidazol-2-yl)-N-(4-hydroxyfenyl)-1Hindazol-6-karboxamid
S použitím rovnakého postupu ako pre syntézu 3-(lHbenzimidazol-2-yl)-lH-indazol-6-karboxylovej kyseliny v príklade 53(a), krok (ii), N-(4-hydroxyfenyl)-3-formyl-lH337 indazol-6-karboxamid a 4,5-difluór-l,2-fenyléndiamín poskytli 3-(5, 6-difluór-lH-benzimidazol-2-yl)-N-(4-hydroxyfenyl)-1Hindazol-6-karboxamid ako žltohnedou pevnou látku, 1H NMR (DMSO-d6) δ 13,99 (1H, s), 13,27 (1H, s), 10,21 (1H, s), 9,25 (1H, s), 8,52 (1H, d, J = 8,7 Hz), 8,21 (1H, s), 7,85 (1H, d, J = 9,0 Hz), 7,80 (1H, t, J = 9,8 Hz), 7,55 (2H, d, J = 8,7 Hz), 7,47 (1H, t, J - 9,8 Hz), 6,75 (2H, d, J = 8,7 Hz). MS (APCI pozitívny) 406.
Východzia látka bola pripravená takto:
.OH
K roztoku 1,6 g (8,4 mmol) 3-formyl-lH-indazol-6karboxylovej kyseliny a 1,8 g (16,8 mmol) 4-aminofenolu v 35 ml suchého dimetylformamidu bolo pridané 3,8 g (16,8 mmol) HATU nasledované 1,4 ml (10,1 mmol) trietylamínu. Reakcia bola miešaná pri izbovej teplote a monitorovaná TLC a LC/MS. Po dvoch hodinách bola reakcia kompletná. Rozpúšťadlo bolo odstránené vo vákuu a produkt bol purifikovaný velmi rýchlou chromatografiou na kolóne s použitím zmesi etylacetátu a petroléteru 1:1 až čistého etylacetátu. N-(4-hydroxyfenyl)-3formyl-lH-indazol-6-karboxamid bol izolovaný ako žltohnedo sfarbená pevná látka. 1H NMR (DMSO-d6) δ 6,79 (2H, d, 8,9 Hz), 7,59 (2H, d, 8,9 Hz), 7,94 (1H, d, 9,8 Hz), 8,24 (1H, d, 8,2 Hz), 8,31 (1H, s), 9,31 (2H, br s), 10,27 (2H, s). MS (APCI poz) 282,1.
Príklad 54(b)
338
3- (5, 6-dichlór-lH-benzimidazol-2-yl) -N- (4-hydroxyfenyl) -1Hindazol-6-karboxamid .OH
Zlúčenina z príkladu 54(b) bola pripravená podobným spôsobom, jako bolo popísané v príklade 54(a) okrem toho, že
4,5-dichlór-l,2-fenylendiamín bol použitý namiesto 4,5difluór-1,2-fenyléndiamínu. XH NMR (DMSO-de) δ 14,08 (IH, s), 13,38 (IH, s), 10,22 (IH, s), 9,27 (IH, s), 8,52 (IH, d, J =
8,7 Hz), 8,23 (IH, s), 8,02 (IH, s), 7,86 (IH, d, J = 8,7 Hz), 7,70 (IH, s), 7,55 (2H, d, J = 8,7 Hz), 6,75 (2H, d, J = 8,7 Hz). MS (APCI pozitívny) 438.
Príklad 54(c)
3-(5-metoxy-lH-benzimidazol-2-yl)-N-(4-hydroxyfenyl)-lH-indazol-6-karboxamid .OH
Zlúčenina z príkladu 54 (c) bola pripravená podobným spôsobom, jako bolo popísané v príklade 54(a) okrem toho, že 4-metoxy-l,2-fenyléndiamín bol použitý namiesto 4,5-difluór-
1,2 fenyléndiamínu. XH NMR (DMSO-de) δ 13,76 (IH, s), 12,77 (IH, s), 10,13 (IH, s), 9,17 (IH, s), 8,45 (IH, d, J = 8,3 Hz), 8,11 (IH, s), 7,75 (IH, d, J = 8,6 Hz), 7,46 (2H, d, J =
8,7 Hz), 7,32 (IH, d, J = 8,3 Hz), 6,91. (IH, s), 6,77 (IH,
339
m), 6,67 (2H, d, J = 8,7 Hz), 3,72 (3H, s). MS (APCI pozitívny) 400.
Príklad 54 (d)
3-[lH-nafto(2,3-d)imidazol-2-yl]-N-(4-hydroxyfenyl)-lH-indazol-6-karboxamid .OH
Zlúčenina z príkladu 54(d) bola pripravená podobným spôsobom, jako bolo popísané v príklade 54(a) okrem toho, že
2,3-naftaléndiamín bol použitý namiesto 4,5-difluór-1,2- fenyléndiaminu. NMR (DMSO-d6) δ 14,11 (1H, s), 13,10 (1H,
s), 10,24 (1H, s), 9,27 (1H, s), 8,64 (1H, d, J = 8,7 Hz),
8,28 (1H, s), 8,25 (1H, s), 7,97 (2H, m), 7,73 (1H, br s),
7,89 (1H, d, J = 8,6 Hz), 7,56 (2H, d, J = 8,7 Hz), 7,38 (2H,
b), 6,76 (2H, d, J = 8,7 Hz). MS (APCI pozitívny) 420.
Príklad 54(e)
3-[lH-nafto(1,2-d)imidazol-2-yl]-N-(4-hydroxyfenyl)-lH-indazol-6-karboxamid .OH
340
Zlúčenina z príkladu 54(e) bola pripravená podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 54 (a) okrem toho, že
1,2-naftaléndiamín bol použitý namiesto 4,5-difluór-1,2fenyléndiaminu. ľH NMR (DMSO-de) δ 13,93 (1H, s), 13,38 (1H,
S), 10,23 (1H, s), 9,27 (1H, s), 8,70 (2H, m), 8,22 (1H, s),
8,00 (1H, d, J = 8,0 Hz), 7,87 (1H, m), 7,72 (3H, m), 7,57 (2H, d, J = 8,7 Hz), 6,76 (2H, d, J = 8,6 Hz): MS (APCI pozitívny) 420.
Príklad 54(f)
3- (4,5-dimetyl-lH-benzimidazol-2-yl)-N-(4-hydroxyfenyl)-1Hindazol-6-karboxamid
OH
Zlúčenina z príkladu 54(f) bola pripravená podobným, ako bolo popísané v príklade 54(a) okrem toho, že 3, 4-dimetyl-l,2-. fenyléndiamín bol použitý namiesto 4,5-difluór-l,2fenyléndiamínu. TH NMR (DMSO-de) δ 13,77 (1H, d, tautoméry) ,
12,70 (1H, d, tautoméry), 10,11 (1H, s), 9,16 (1H, s), 8,48 (1H, d, J = 8,3 Hz), 8,09 (1H, s), 7,73 (1H, d, J = 8,6 Hz), 7,47 (2H, d, J = 8,7 Hz), 7,10 (1H, d, J = 8,3 Hz), 6,93 (1H, d, J = 8,3 Hz), 6,65 (2H, d, J = 8,7 Hz), 2,49 (3H, s), 2,24 (3H, s). MS (APQ pozitívny) 398,4.
Príklad 54(g)
3- (5-terc-butyl-lH-benzimidazol-2-yl)-N-(4-hydroxyfenyl)-1Hindazol-6-karboxamid
341
Zlúčenina z príkladu 54(g) bola pripravená podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 54(a) okrem toho, že 4-terc-butyl-l,2 fenyléndiamín bol použitý namiesto 4,5difluór-1,2-fenyléndiamínu. XH NMR (acetón-dô) δ 12,88 (IH, s), 9,47 (IH, s), 8,63 (1H, d, J = 8,7 Hz), 8,18 (IH, s), 7,82 (IH, d, J = 8,3 Hz), 7,57 (4H, m), 7,26 (IH, d, J = 8,4 Hz),
6,74 (IH, d, J = 8,3 Hz), 1,31 (9H, s). MS (APCI pozitívny) 426.
Príklad 54(h)
3-(5-trifluórmetyl-lH-benzimidazol-2-yl)-N-(4-hydroxyfenyl)lH-indazol-6-karboxamid
Zlúčenina z príkladu 54(h) bola pripravená podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 54(a) okrem toho, že 4-trifluôrmetyl-l,2-fenyléndiamín bol použitý namiesto 4,5difluór-1,2-fenyléndiamínu. 1H NMR (metanol-d4) δ 6,86 (2H, d,
8,9 Hz), 7,54 (2H, d, 8,9 Hz), 7,6 (IH, dd, 8,5 Hz), 7,83 (IH, d, 83 Hz), 7,89 (IH, dd, 8,6 Hz), 8,04 (1H, br s), 8,25 (IH, s), 8,61 (IH, d, 8,6 Hz). MS (APCI poz) 438,1.
342
Príklad 54(i)
3-(5-fluór-lH-benzimidazol-2-yl)-N-(4-hydroxyfenyl)-lH-indazol-6-karboxamid .OH
Zlúčenina z príkladu 54 (i) bola pripravená podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 54(a) okrem toho, že 4-fluór-l,2-fenyléndiamín bol použitý namiesto 4,5-difluór-
1,2-fenyléndiaminu. 1H NMR (acetón-de) δ 13,40 (1H, b), 12,47 (1H, b), 9,74 (1H, s), 8,67 (1H, d, J = 8,6 Hz), 8,66 (1H, s),
8,29 (1H, s), 7,94 (1H, d, J = 8,5 Hz), 7,67 (2H, J = 8,4 Hz),
7,64 (1H, m), 7,40 (1H, m), 7,05 (1H, t, J = 8,5 Hz), 6,83 (2H, d, J = 8,4 Hz). MS (APCI poz) 388.
Príklad 54(j)
3-(5H-[1,3]dioxolo[4,5-f]benzimidazol-6-yl)-N-(4-hydroxyfenyl) -lH-indazol-6-karboxamid .OH
Zlúčenina z príkladu 54 (j) bola pripravená podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 54 (a) okrem toho, že
4,5-metyléndioxy-l, 2-fenyléndiamín bol použitý namiesto 4,5difluór-1,2-fenyléndiaminu. 1H NMR (metanol-d4) δ 6,85 (2H, d,
343
8,9 Hz), 7,15 (2H, s), 7,54 (2H, d, 8,9 Hz), 7,86 (1H, dd, 8,6 Hz), 8,23 (1H, s), 8,55 (1H, dd, 8,5 Hz). MS (APCI poz) 414,1.
Príklad 54(k)
3-(5,6-dimetoxy-lH-benzimidazol-2-yl)-N-(4-hydroxyfenyl)-1Hindazol-6-karboxamid
Zlúčenina z príkladu 54(k) bola pripravená podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 54(a) okrem toho, že
4,5-dimetoxy-l,2-fenyléndiamín bol použitý namiesto 4,5difluór-1,2-fenyléndiamínu. 1H NMR (metanol-d4) δ 3,98 (6H, s),
6.85 (2H, d, 8,78 Hz), 7,29 (2H, br s), 7,54 (2H, d, 8,73 Hz),
7.86 (1H, d, 8,57 Hz), 8,24 (1H, s), 8,57 (1H, d, 8,58 Hz). MS (APCI poz) 430,1.
Príklad 54(1)
3- (5-chlór-lH-benzimidazol-2-y.l) -N- (4-hydroxyfenyl) -ΙΉ-indazol-6-karboxamid
Zlúčenina z príkladu 54 (1) bola pripravená podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 54(a) okrem toho, že
4-chlór-l,2-fenyléndiamín bol použitý namiesto 4,5-difluór-
1,2-fenyléndiaminu. 1H NMR (metanol-d4) δ 8,62 (1H, d, J = 8, 6
344
Hz), 8,30 (1H, s), 7,90 (1H, dd, JI = 8,6 Hz, J2 = 1,3 Hz),
7,69 (b, 2H) , 7,56 (2H, d, J = 6,89 Hz), 7,33 (1H, dd, JI = 8,59, J2 = 1,97 Hz), 6,88 (2H, d, J = 6,89 Hz). MS (APCI poz)
404,1.
Príklad 55
3-lH-benzimidazol-2-yl-6-pyridin-4-yl-lH-indazol
SEM-zlúčenina z príkladu 55 bola konvertovaná na zlúčeninu z príkladu 55 bola podobným spôsobom, ako bolo popísané v príklade 27 (a). 2H NMR (300 MHz, CDC13 + MeOH-d4 + DMSO-de) δ 8,71-8,64 (m, 3H) , 8,03 (s, 1H) , 7,86 (dd, 2H, J = 4,7, 1,6 Hz), 7, 77-7,72 (m, 3H) , 7,32 (dd, 2H, J = 6,0, 3,1 Hz). HRMS (FAB) [M+H]/z vypočítané 312,1244, namerané 312,1253. Analyzované s 1,40 H2O, vypočítané: C (67, 80), H (4,73), N (20,81). Namerané: C (68, 06), H (4,45), N (20, 68).
Východzia látka bola pripravená takto:
Roztok 0,70 g (2,0 mmol) 6-pyridín-4-yl-l-(2-trimetylsilanyletoxymetyl) -lH-indazol-3-karbaldehydu, 0,26 g (2,4 mmol) benzén-1,2-diamínu a 77 mg (2,4 mmol) síry v 10 ml DMF bol zohrievaný v olejovom kúpeli v 90 °C cez noc. Výsledná zmes bola naliata do 200 ml solanky, a potom extrahovaná 3 x
345 ml EtOAc. Spojené organické vrstvy boli usušené nad MgSO4 a koncentrované pri zníženom tlaku. Výsledný olej bol purifikovaný chromatografiou na silikagéle za vzniku 0,75 g (65 %) 6-pyridín-4-yl-l-(2-trimetylsilanyletoxymetyl)-3-[1-(2trimetylsilanyletoxymetyl)-lH-benzimidazol-2-yl]-lH-indazolu ako svetlo hnedého oleja. 1H NMR(CDC13) δ 8,82 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 8,73 (d, 1H, J = 5,8 Hz), 7,94-7,89 (m, 2H) , 7,87 (s, 1H), 7,69-7, 62 (m, 4H) , 7,40-7,34 (m, 2H), 3,70-3, 49 (m, 4H) , 0,94 (t, 2H, J = 8,3 Hz), 0,67 (t, 2H, J = 8,2 Hz), -0,03 (s, 9H), -0,13 (s, 9H) .
Príklad 56
6-[3-(propyn-3-ylkarbamoyl)benzoyl]-3-E-[2-(pyridín-2-yl)etenyl]-lH-indazol
Roztok 55,4 mg (0,15 mmol, syntéza popísaná nižšie) 2—{1— [3-((E)-2-pyridín-2-ylvinyl)-lH-indazol-6yl]metanoyl]benzoovej kyseliny, 15,4 μΐ (0,225 mmol) propargylamínu a 41,8 μΐ (0,30 mmol) trietylamínu, rozpustený v 1,5 ml DMF, bol podrobený pôsobeniu 62,7 mg (0,165 mmol) 0-(7-azabenzotriazol-l-yl)-N,N,N',N'tetrametyluróniumh.exafluórfosfátu. Po miešaní po dobu jednej hodiny bola zmes koncentrovaná za vysokého vákua a purifikované preparatívnou chromatografiou s prevráteným pomerom fáz na kolóne C18. Výsledných 40 mg produktu bolo ďalej purifikované chromatografiou na chromatotróne s kruhovou doskou za elúcie zmesí 25% CH3CN a CH2C12z za vzniku 16,5 mg produktu ako bielej pevnej látky (27% výtažok). 1H NMR
346 (DMSO-de) δ 13,30 (s, ΙΗ) , 8,58 (d, J = 5,00 Hz, 1H) , 8,05 (d, J = 8,29 Hz, 1H) , 7,92 (d, J = 16,2 Hz, 1H) , 7,79 (m, 3H) ,
7,63 (d, J = 8,25 Hz, 1H) , 7,53 (m, 3H) , 7,32 (s, 1H) , 7,27 (m, 2H) , 6,89 (d, J = 8,48 Hz, 1H) . Anál, výpočet, pre
C25H18N4O2 · 0,5 H2O: C, 72,27, H, 4,61, N, 13,49. Namerané: C,
72,39, H, 4,62, N, 13,69.
(i)
Syntéza 2-{1-[3-((E)-2-pyridín-2-ylvinyl)-lH-indazol-6yl]metanoyl}benzoovej kyseliny. Roztok 402 mg (0,805 mmol, syntéza popísaná nižšie) 2-{1-[3-( (E)-2-pyridín-2-ylvinyl)-1(2-trimetylsilanyletoxymetyl)-lH-indazol-6-yl]metanoyl}benzoovej kyseliny, 215 μΐ (3,22 mmol) etyléndiaminu a 6,44 ml (6,44 mmol) IM TBAF v THF bol miešaný v 90 °C v olejovom kúpeli po dobu 4 hodín. Surová reakčná zmes bola zastavená 386 μΐ (6,44 mmol) octovej kyseliny, nariedená 100 ml etylacetátu, extrahovaná 2 x 20 ml IM roztoku hydrouhličitanu sodného, 5 x 20 ml solanky, usušená nad sulfátom horečnatým, filtrovaná a koncentrovaná na objem 3 ml. Výsledná surová látka bola purifikovaná preparativnou chrómatografiou s prevráteným pomerom fáz na kolóne C18 za vzniku 211 mg zlúčeniny uvedenej v názve ako žltej pevnej látky (71 % výťažok). 1H NMR (DMSO-de) δ 13,50 (š s, 1H) , 8,68 (d, J = 5,27 Hz, 1H) , 8,29 (d, J = 8,86 Hz, 1H) , 8,13-7,90 (m, 4H), 7,81-7,43 (m, 7H) .
(ii)
347
Syntéza 2-{1- [3-((E)-2-pyridin-2-ylvinyl) -1-(2-trimetylsilanyletoxymetyl)-lH-indazol-6-yl]metanoyl}benzoovej kyseliny. Roztok 477 mg (1,0 mmol) 6-jódindazolu, rozpustený v 10 ml THF, v -100 °C bol po kvapkách podrobený pôsobeniu 440 μΐ (1,10 mmol) 2,5M n-butyllitia v hexáne, miešané po dobu 5 minút v tejto teplote, a potom bol podrobený pôsobeniu roztoku 222 mg (1,5 mmol) anhydridu kyseliny ftalovej v 1,0 ml THF. Výsledná zmes bola ponechaná ohriať sa pomaly na iozbovú teplotu, kde bola zbavená THF, nariedená etylacetátom, extrahovaná IN kyselinou citrónovou, extrahovaná solankou, usušená nad sulfátom horečnatým a koncentrovaná na olej. Olej bol triturovaný metylénchloridom a dietyléterom za vzniku 484 mg (81% výťažok) zlúčeniny uvedenej v názve ako bielej pevnej látky. NMR (DMSO-de) δ 8,67 (d, J = 5,09 Hz, 1H) , 8,31 (d, J = 8,85 Hz, 1H) , 8, 08-7,55 (m, 4H) , 7,50-7,37 (m, 2H) , 5,81 (s, 2H) , 3,53 (t, J = 8,10 Hz, 2H) , 0,78 (t, J = 8,15 Hz, 2H) , 0, 12 (S, 9H) .
Príklad 57
6-[3-((1,3-dimetyl-lH-pyrazol-5-yl)karboxamido)fenoxy]-3-E-[2(pyridin-2-yl)etenyl]-lH-indazol
348
Zlúčenina z príkladu 57 bola pripravená podobným spôsobom ako v príklade 58. ΧΗ NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,15 (s, 1H), 10,17 (s, 1H), 8,60 (d, 1H, J = 4,2 Hz), 8,22 (d, 1H, J = 8,7 Hz), 7,94 (d, 1H, J = 16,4 Hz), 7,84-7,79 (m, 1H) , 7,68-7,50 (m, 4H) , 7,40 (t, 1H, J= 8,1 Hz), 7,30-7,26 (m, 1H) , 7,06 (s, 1H), 7,00 (dd, 1H, J = 8,8, 1,9 Hz), 6,87 (dd, 1H, J = 8,0,
1,9 Hz), 6,79 (S, 1H) , 3,96 (s, 3H) , 2,17 (s, 3H) , ESIMS m/z 451 [M+H] + . Anál, vypočítané pre C26H22N6O2 x 0,5 H2O x 0,4 hexán (494,0 g/mol): C, 69,05, H, 5,84, N, 17,01. Namerané: C, 68, 78, H, 5,55, N, 17,05.
Príklad 58
6-[3-((l-etyl-3-metyl-lH-pyrazol-5-yl)karboxamido)fenoxy]-3-E[2-(lH-imidazol-2-yl)etenyl]-lH-indazol
Roztok 7,5 ml (7,5 mmol, 15,0 ekv.) 1,OM tetrabutylamóniumfluoridu v THF a 0,33 ml (5,0 mmol, 10 ekv.) 1,2diaminoetánu bolo pridané k 360 mg (0,5 mmol, 1,0 ekv.) [2-metyl-5-(1-(2-trimetylsilanyletoxymetyl)-3-{(E)-2-[1-(2trimetylsilanyletoxymetyl)-lH-imidazol-2-yl]vinyl}-lH-indazol6-yloxy)fenyl]amidu 2-etyl-5-metyl-2H-pyrazol-3-karboxylovej kyseliny v 5 ml 1,4-dioxánu a reakčná zmes bola zohrievaná na 90 °C po dobu 18 hodín. Na konci tejto doby bola reakcia koncentrovaná pri zníženom tlaku a výsledný oranžový olej bol nariedený 50 ml etylacetátu. Organická vrstva bola dôkladne premytá 5 x 50 ml saturovaného hydrouhličitanu sodného, solankou, usušená nad sulfátom horečnatým a koncentrovaná pri zníženom tlaku za vzniku 287 mg žltej pevnej látky. Surový
349 produkt bol purifikovaný chromatografiou s kruhovou doskou na silikagéle s použitím zmesi 5% metanolu a chloroformu s 0,1% hydroxidom amónnym (Rf 0,1) ako eluenta za vzniku 140 mg (61 %) (5-{3-[(E)-2-(lH-imidazol-2-yl)vinyl]-lH-indazol-6-yloxy}2metylfenyl)amidu 2-etyl-5-metyl-2H-pyrazol-3-karboxylovej kyseliny ako svetlo žltej pevnej látky: HPLC Rt = 11,8 minút, TLC Rf = 0,8 (10% zmes metanolu a chloroformu s 0,1% hydroxidom amónnym), XH NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,03 (s, 1H) , 12,30 (š s, 1H) , 9,78 (s, 1H) , 8,00 (d, 1H, J = 8,6 Hz), 7,54 (d, 1H, J = 16,8 Hz), 7,32 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 7,27 (d, 1H, J = 16,9
Hz), 7,13-7,12 (m, 3H) , 7, 00-6, 94 (m, 3H) , 6,78 (s, 1H) , 4,39 (q, 2H, J = 7,1 Hz), 2,23 (s, 3H) , 2,19 (s, 3H) , 1,28 (t, 3H, J = 7,1 Hz). Túial. vypočítané pre C26H25N7O2 · 0,5 H2O · 0,4 hexán (511,0 g/mol): C, 66,75, H, 6,23, N, 19,19. Namerané: C, 66, 95, H, 6,25, N, 18,83.
Východzie látky boli pripravené takto:
(i) Príprava 1-(2-trimetylsilanyletoxymetyl)-lH-imidazolu
2,0 g (29,4 mmol, 1,0 ekv.) ΙΗ-imidazolu v 70 ml THF boli pridané pri teplote 0 °C k suspenzii 1,5 g (38,2 mmol, 1,3 ekv.) hydridu sodného (60% v minerálnom oleji) vo 30 ml THF. Potom, čo ustal vývoj plynu, bola zmes zohriatá na izbovú teplotu po dobu 45 minút, a potom opäť ochladená na 0 °C. Bolo pridané 5,4 ml (30,2 mmol, 1,0 ekv.) [2-(trimetylsilyl)etoxy]metylc.hloridu a zmes bola zohriatá cez noc na izbovú teplotu. Reakcia bola zastavená saturovaným hydrouhličitanom sodným, THF bolo odstránené pri zníženom tlaku a výsledná béžová suspenzia bola extrahovaná etylacetátom. Extrakty boli spojené, premyté solankou, usušené nad sulfátom horečnatým, filtrované a koncentrované za vzniku 6,9 g jantárového oleja.
350
Olej bol purifikovaný veľmi rýchlou chromatografiou na silikagéle s použitím 2% zmesi metanolu a chloroformu ako eluenta za vzniku 4,7 g (81 %) 1-(2-trimetylsilanyletoxymetyl) -lH-imidazolu ako svetlo jantárového oleja: TLC Rf = 0,3 (5% zmes metanolu a chloroformu), 1H NMR (300 MHz, DMSO-dg) δ
7,77 (s, 1H), 7,26 (d, 1H, J = 1,2 Hz), 6,93 (s, 1H), 5,32 (s, 2H) , 3,45 (t, 2H, J = 8,0 Hz), 0,83 (t, 2H, J = 8,0 Hz), -0,05 (s, 9H) , 13C NMR (75 MHz, DMSO-de) δ 137, 9, 128, 8, 119, 6, 74, 8,
65,1, 17,1, -1,4.
(ii) Príprava (1-(2-trimetylsilanyletoxymetyl)-lH-imidazol-2yl]metanolu
3,0 g (15,4 mmol, 1,0 ekv.) 1-(2-trimetylsilanyletoxymetyl)-ΙΗ-imidazolu bolo rozpustené v 150 ml THF a ochladené na -78 °C. Bolo pridané 10,6 ml (16,9 mmol, 1,1 ekv.) n-BuLi, 1,6M v hexáne, a teplota bola ponechaná zvýšiť sa na -40 °C po dobu 15 minút. Svetlo žltý roztok bol miešaný ďalších 30 minút v -40 °C, potom bol anión zastavený 1,3 ml (16,9 mmol, 1,1 ekv.) DMF. Reakčná zmes bola cez noc zohriatá na izbovú teplotu, a potom zastavená vodou. Rozpúšťadlo bolo odstránené a zmes bola extrahovaná dichlórmetánom. Organická vrstva bola premytá vodou, usušená nad soľankou a sulfátom horečnatým, filtrovaná a koncentrovaná za vzniku 3,5 g surového produktu, TLC Rf = 0,5 (5% zmes metanolu a chloroformu). Podľa protónového NMR spektra je aldehydový protón prítomný v 9,73 ppm (300 MHz, DMSO-d6) . Surový produkt bol rozpustený v 15 ml metanolu, ochladený na 0 °C a podrobený pôsobeniu 1,2 g (30,8 mmol, 2,0 ekv.) borohydridu sodného. Reakčná zmes bola cez noc zohriatá na izbovú teplotu. Rozpúšťadlo bolo odstránené a
Μ
351 surový produkt bol nariedený chloroformom, premytý vodou, usušený nad solankou a sulfátom horečnatým, filtrovaný a koncentrovaný za vzniku 3,6 g číreho oleja. Olej bol purifikovaný velmi rýchlou chromatografiou na silikagéle s použitím 3-6% zmesi metanolu a chloroformu s 0,1% hydroxidom amónnym ako eluenta za vzniku 1,4 g (41 %, 2 kroky) [l—(2— trimetylsilanyletoxymetyl)-lH-imidazol-2-yl]metanolu ako bielej pevnej látky: TLC = 0,4 (8% zmes metanolu a chloroformu), XH NMR (300 MHz, DMSO-de) δ 7,22 (d, 1H, J = 1,1 Hz), 6,81 (d, 1H, J = 1,0 Hz), 5,36 (s, 2H) , 5,31 (br t, 1H, J = 5,2 Hz), 4,50 (d, 2H, J = 4,8 Hz), 3,48 (t, 2H, J = 8,0 Hz), 0,83 (t, 2H, J = 8,0 Hz), -0,05 (s, 9H) , 13C NMR (75 MHz, DMSO-de) δ 148, 9, 127, 8, 122,5, 75,5, 66, 5, 56, 9, 18, 5, 0, 0.
(iii) Príprava hydrochloridu 2-chlórmetyl-l-(2-trimetylsilanyletoxymetyl) -lH-imidazolu
HCI
Roztok 0,87 ml (12,0 mmol, 3,0 ekv.) tionylchloridu v 8 ml chloroformu bol ochladený na 0 °C a podrobený pôsobeniu roztoku 0,92 g (4,0 mmol, 1,0 ekv.) [1-(2-trimetylsilanyletoxymetyl) -lH-imidazol-2-yl] metanolu v 2 ml chloroformu. Číry roztok bol miešaný pri teplote 0 °C po dobu 30 minút, a potom pri izbovej teplote po dobu 2 hodín. Rozpúšťadlo bolo odstránené a produkt bol postupne suspendovaný a koncentrovaný s použitím chloroformu, toluénu a cyklohexánu za vzniku 1,1 g (97 %) hydrochloridu 2-chlórmetyl-l-(2-trimetylsilanyletoxymetyl) -lH-imidazolu ako béžovej pevnej látky: XH NMR (300 MHz, DMSO-de) δ 7,85 (d, 1H, J = 1,9 Hz), 7,70 (d, 1H, J = 1,9 Hz),
5,62 (s, 2H) , 5,14 (s, 2H) , 3,57 (t, 2H, J = 8,3 Hz), 0,90 (t,
352
2Η, J = 8,3 Hz), -0,02 (s, 9H) , 13C NMR (75 MHz, DMSO-de) δ 142, 1, 123, 2, 120, 2, 76, 5, 66, 8, 31, 7, 17,3, -1, 4.
(iv) Príprava 3-amino-4-metylfenolu v
nh2
Čierna pevná látka (95 %), HPLC Rt = 4,4 minút, ľH NMR (300 MHz, DMSO-de) δ 8,61 (s, 1H) , 6,64 (d, 1H, J = 8,1 Hz),
6,05 (d, 1H, J = 2,4 Hz), 5,8 8 (dd, 1H, J = 8,0, 2,4 Hz),
4,64 (š s, 2H) , 1,92 (s, 3H) , 13C NMR (75 MHz, DMSO-d6) δ 156,1, 147,2, 130,2, 111,7, 103,3, 101,1, 16,6.
(v) Príprava 3-(benzhydrylidénamino)-4-metylfenolu
Žltá , pevná látka (49 %), tt 106-108 °C, HPLC Rt = 15,3 minút, TLC Rf = 0,2 (10% zmes etylacetátu a cyklohexánu) , 1H NMR (300 MHz, DMSO-de) δ 8,91 (s, 1H) , 7, 67-7,56 (m, 2H), 7,53-
7,43 (m, 3H) , 7,35-7,31 (m, 3H) , 7,13-7,10 (m, 2H) , 6,82 (d, 1H, J = 8,3 Hz), 6,22 (dd, 1H, J = 8,1, 2,5 Hz), 5,88 (d, 1H, J = 2,5 Hz), 1,97 (s, 3H) , 13C NMR (75 MHz, DMSO-de) δ 165,4,
155, 2, 150, 6, 138, 9, 136, 0, 130, 8, 130, 2, 128,7, 128, 4, 128,2, 128,0, 1173, 109, 9, 106, 2, 17,0.
(vi) Príprava benzhydrylidén-(2-metyl-5-[3-((E)styryl)-1-(2 trimetylsilanyletoxymetyl) -lH-indazol-6-yloxy] fenyljaminu
353
Do banky s guľatým dnom bolo vložené 5,5 g (26,0 mmol, 2,0 ekv.) fosfátu draselného, 3,9 g (13,6 mmol, 1,1 ekv.) 3-(benzhydrylidenamino)-4-metylfenolu, 6,2 g (13,0 mmol, 1,0 ekv.) 6-jód-3-((E)styryl)-1-(2-trimetylsilanyletoxymetyl)-lH-indazolu a 130 ml o-xylénu. Výsledná suspenzia bola odplynená, prebublávaná argónom a podrobená pôsobeniu 916 mg (1,1 mmol, 8 mol%) zmesi tris(dibenzylidénacetón)dipaládia(0) a 656 mg (2,2 mmol, 16 mol%) bifenyl-2-yl-di-terc-butylfosfánu. Banka bola ponorená do olejového kúpeľa miešaná v 100 °C po dobu 18 hodín. Čierna suspenzia bola ochladená na izbovú teplotu, filtrovaná cez celit a koncentrovaná. Čierny olej bol rozpustený v chloroformu, premytý vodou, soľankou, usušený nad sulfátom horečnatým, filtrovaný a koncentrovaný za vzniku 12,1 g čierneho oleja. Surový produkt bol purifikovaný veľmi rýchlou chromatografiou na silikagéle s použitím 10-15% zmesi éteru a cyklohexánu ako eluenta za vzniku 1,4 g (16 %) benzhydrylidén-{2-metyl-5-[3-((E)styryl)-1-(2-trimetylsilanyletoxymetyl)-lH-indazol-6-yloxy]fenyl}aminu ako žltej peny z éteru: HPLC Rt = 24,3 minút, TLC Rf = 0,5 (20% zmes éteru a cyklohexánu), 1H NMR (300 MHz, DMSO-de) δ 8,10 (d, 1H, J = 8,8 Hz), 7,75-7, 66 (m, 4H) , 7, 53-7, 31(m, 11H) , 7,14-7,08 (m, 4H) ,
6,62 (dd, 1H, J = 8,8, 2,0 Hz), 6,55 (dd, 1H, J = 8,2, 2,5 Hz), 6,20 (d, 1H, J = 2,4 Hz), 5,64 (s, 2H) , 3,51 (t, 2H, J =
7,8 Hz), 2,12 (s, 3H) , 0,78 (t, 2H, J = 7,7 Hz), -0,14 (s, 9H) .
354 (vii) Príprava 2-metyl-5-[3-((E)styryl)-l-(2-trimetylsilanyletoxymetyl-lH-indazol-6-yloxy]fenylamínu
Jantárový olej (80 %), HPLC Rt = 21,0 minút, TLC Rf = 0,4 (20% zmes etylacetátu a cyklohexánu), 1H NMR (300 MHz, DMSO-de) δ 8,18 (d, 1H, J = 8,8 Hz), 7,74-7,71 (m, 2H), 7,52 (s, 2H), 7,43-7,38 (m, 2H) , 7,33-7,28 (m, 1H) , 7,20 (d, 1H, J = 2,0 Hz), 6, 97-6, 90 (m, 2H) , 6,33 (d, 1H, J = 2,4 Hz), 6,16 (dd,
1H, J = 8,0, 2,5 Hz), 5,66 (s, 2H) , 5,01 (š s, 2H) , 3,52 (t, 2H, J = 8,0 Hz), 2,03 (s, 3H) , 0,80 (t, 2H, J = 8,0 Hz), -0,11 (s, 9H) .
(viii) Príprava {2-metyl-5-[3-((E)styryl)-1-(2-trimetylsilanyletoxymetyl)-lH-indazol-6-yloxy]fenyl}amidu 2-etyl-5metyl-2H-pyrazol-3-karboxylovej kyseliny
Biela pena (85 %) , HPLC Rt = 21,5 minút, TLC Rf = 0,2 (20% zmes etylacetátu a cyklohexánu) , 1H NMR (300 MHz, DMSO-de) δ
9,75 (s, 1H), 8,24 (d, 1H, J = 8,8 Hz), 7,74-7,72 (m, 2H) ,
7,53 (s, 2H) , 7,43-7,38 (m, 2H) , 7,34-7,28 (m, 3H) , 7,12 (d, 1H, J = 2,6 Hz), 7,00 (dd, 1H, J = 8,8, 2,0 Hz), 6,92 (dd, 1H,
355
J = 8,3, 25 Hz), 6,78 (s, 1H) , 5,69 (s, 2H) , 4,40 (q, 2H, J =
7,1 Hz), 3,53 (t, 2H, J = 7,9 Hz), 2,22 (s, 3H) , 2,19 (s, 3H),
1,27 (t, 3H, J = 7,1 Hz), 0,78 (t, 2H, J
7, 9 Hz) , -0,15 (S, (ix) Príprava {5-[3-formyl-l-(2-trimetylsilanyletoxymetyl)-1Hindazol-6-yloxy]-2-metylfenyl}amidu 2-etyl-5-metyl-2H-pyrazol3-karboxylovej kyseliny
Roztok 774 mg (1,28 mmol, 1,0 ekv.) {2-metyl-5-[3((E)styryl)-(2-trimetylsilanyletoxymetyl)-lH-indazol-6yloxy] fenyl}amidu 2-etyl-5-metyl-2H-pyrazol-3-karboxylovej kyseliny v 8 ml 1,4-dioxánu a 2 ml vody bol podrobený pôsobeniu 7 mg (0,03 mmol, 0,02 ekv.) oxidu osmičelého. Roztok bol miešaný po dobu 5 minút, a potom bol podrobený pôsobeniu 822 mg (3,84 mmol, 3,0 ekv.) jodistanu sodného. Výsledná hustá žltohnedá suspenzia bola miešaná cez noc pri izbovej teplote, naliata do 100 ml 15% Na2S2O3 a extrahovaná etylacetátom. Organická vrstva bola premytá saturovaným hydrouhličitanom sodným, solankou, usušená nad sulfátom horečnatým, filtrovaná a koncentrovaná za vzniku 902 mg jantárového oleja. Surový produkt bol purifikovaný chromatografiou s kruhovou doskou na silikagéle s použitím 10-50% zmesi etylacetátu a cyklohexánu ako eluenta za vzniku 590 mg (86 %) [5-[3-formyl-l-(2trimetylsilanyletoxymetyl)-lH-indazol-6-yloxy]-2metylf enyl} amidu 2-etyl-5-metyl-2H-pyrazol-3-karboxylove j kyseliny ako béžovej pevnej látky z éteru: HPLC Rt = 18,9 minút, TLC Rf = 0,2 (40% zmes etylacetátu a cyklohexánu), 1H
356
NMR (300 MHz, DMSO-de) δ 10,16 (s , 1H, 9,75 (s, 1H) , 8,14 (d
1H, J = 8,8 Hz), 7,48 (d, 1H, J = 1,8 Hz), 7,32 (d, 1H, J =
8, 5 Hz) , 7,16-7,13 (m, 2H) , 6,93 (dd, 1H, J = 8,3, 2,6 HZ)
6,78 (s, 1H), 5,84 (s, 2H), 4,39 (q, 2H, J = 7,1 Hz), 3 55 (t
2H, J = 7,8 Hz), 2,23 (s, 3H), 2, 19 (s, 3H), 1,27 (t, 3H, J
7,2 Hz) , 0,79 (t, 2H, J = 7,8 Hz) , -0,15 (S, 9H) .
(x) Príprava 2-metyl-5-(1-(2-trimetylsilanyletoxymetyl)-3((E)-2-[1-(2-trimetylsilanyletoxymetyl)-lH-imidazol-2yl]vinyl}-lH-indazol-6-yloxy)fenyl]amidu 2-etyl-5-metyl-2Hpyrazol-3-karboxylovej kyseliny
Roztok 344 mg (1,22 mmol, 2,0 ekv.) hydrochloridu
2-chlórmetyl-l-(2-trimetylsilanyletoxymetyl)-lH-imidazolu v 20 ml chloroformu bol prevedený na formu volnej bázy saturovaným hydrouhličitanom sodným. Organická vrstva bola usušená nad solankou a sulfátom horečnatým, filtrovaná a koncentrovaná za vzniku 301 mg (100 %) jantárového oleja. Výsledný olej bol rozpustený v 12 ml acetonitrilu, bol podrobený pôsobeniu 304 mg (1,16 mmol, 1,9 ekv.) trifenylfosfínu a zohrievaný na 70 °C po dobu 18 hodín. Rozpúšťadlo bolo odstránené a surový 1— (2— trimetylsilanyletoxymetyl)-2-[(trifenyl-X5-fosfanyl)metyl]-1Himidazolchlorid bol rozpustený v 12 ml THF, ochladeného na 78 °C a podrobený pôsobeniu 1,2 ml (1,22 mmol, 2,0 ekv.) tercbutoxidu draselného, l,0M v THF. Po 15 minútach bolo pridané 325 mg (0,61 mmol, 1,0 ekv.) {5-[3-formyl-l-(2-trimetylsilanyletoxymetyl) -lH-indazol-6-yloxy]-2-metylfenyl}amidu 2-
357 etyl-5-metyl-2H-pyrazol-3-karboxylovej kyseliny v 1 ml THF k ylidu v -78 °C. Číry žltý roztok bol cez noc zohriaty na izbovú teplotu, zastavený vodou a extrahovaný etylacetátom. Organická vrstva bola premytá solankou, usušená nad sulfátom horečnatým, filtrovaná a koncentrovaná za vzniku 1,0 g surového produktu ako jantárového oleja. Surový produkt bol purifikovaný ďalšou chromatografiou s kruhovou doskou na silikagéle s použitím 0-5% zmesi metanolu a chloroformu ako eluenta za vzniku 390 mg (88 %) [2-metyl-5-(1-(2-trimetylsilanyletoxymetyl) -3-{(E)-2-[1-(2-trimetylsilanyletoxymetyl)lH-imidazol-2-yl]vinyl}-lH-indazol-6-yloxy)fenyl]amidu 2-etyl-
5-metyl-2H-pyrazol-3-karboxylovej kyseliny ako žltohnedej pevnej látky po staní cez noc: HPLC Rt = 20,6 minút, TLC Rf =
0,4 (4% zmes metá nolu a dichlórmetánu), 2h : NMR (300 MHz,
DMSO· -d6) δ 9,75 (s, 1H) , 8,14 (d, 1H, J = 8, 8 Hz) , 7,64 (d, 1H,
J = 16,2 Hz), 7,42 (d, 1H, J = 16,3 Hz), 7,39 -7,35 (m, 3H) ,
7, 30 (d, 1H, J = 8, -5 Hz) , 7,12 (d, 1H, J = = 2,5 Hz) , 7, 03 (s,
1H) , 6,99 (dd, 1H, J = 8,8, 1,9 Hz), 6, 78 (s, 1H) , 5,70 (s,
2H) , 5,55 (s, 2H), 4,40 (q, 2H, J = 7,1 Hz), 3, 55 -3, 48 (m,
4H) , 2,22 (s, 3H) , 2,19 (s, 3H) , 1,27 (t, 3H, J = 7,1 Hz) ,
0, 84 (t, 2H, J = 7, 9 Hz) , 0,77 (t, 2H, J = 7,9 Hz) , -0, 11 (s,
9H) , -0,15 (s, 9H) .
Príklad 59(a)
Hydrochlorid 6-(3-((l-etyl-3-metyl-lH-pyrazol~5-yl)karboxamido)benzoyl]-3-E-[2-(pyridín-2-yl)etenyl]-lH-indazolu
358
4,57 g (9,59 mmol, 1 ekv.) zlúčeniny z príkladu 41(a) bolo nabrané do 96 ml metanolu a chránené pred svetlom alumíniovou foliou. Druhá banka s 20 ml metanolu bola podrobená pôsobeniu
684 μΐ (1,00 ekv.) acetylchloridu po dobu 5 minút. Roztok kyseliny potom bol pridaný k prvej zmesi a zmes bola niekoľkokrát premytá ~20 ml metanolu.
Tekavá látka bola odstránená pri zníženom tlaku a zvyšok bol triturovaný
1:1 zmesou etylacetátu a hexánu za vzniku 4,82 g (98 %) žltého prášku po filtrácii a usušení: analyzované s 1,0 H2O, vypočítané: C (61,85), H (5,07), N (15,46).Namerané: C (61,15), H (5,15), N (15,38).
Príklad 59(b)
Hydrochlorid 6-[3-((1,3-dimetyl-lH-pyrazol-5-yl)karboxamido)benzoyl]-3-E-[2-(pyridín-2-yl)etenyl]-lH-indazolu
Zlúčenina z príkladu 59 (b) bola pripravená podobným spôsobom, ako v príklade 59(a) okrem toho, že zlúčenina z príkladu 41 (p) bola použitá namiesto zlúčeniny z príkladu (a). HPLC: 3,92 minút (100% oblasť), XH NMR (DMSO) δ 10,45 (s, IH) , 8,85 (d, IH, J = 4,8 Hz), 8,49 (d, IH, J = 8,7 Hz), 8,38-8, 30 (m, 4H) , 8,21 (dt, IH, J = 7,5, 2,1 Hz), 8,01 (s, IH) , 7, 90-7, 79 (m, 2H) , 7, 72-7, 64 (m, 3H) , 6,70 (s, IH) , 4,30 (s, 3H) , 2,33 (s, 3H) . Anál. (C27H2oN402S · 1,3 H2O · 0,2 EtOAc):
vypočítané C, 62,15, H, 5,18, N, 15,64, namerané C, 61,81, H,
5,01, N, 15,64.
359
Príklad 59(c)
Hydrochlorid 6-[N-(5-((l-etyl-3-metyl-lH-pyrazol-5-yl)karboxamido) -2-fluór-4-metylfenyl)amino]-3-E-[2-(pyridín-2-yl)etenyl]-lH-indazolu
bola príkladu z
Zlúčenina pripravená podobným spôsobom, ako z príkladu 48(a)
41(a). Anál, výpočet:
príklade okrem toho, že zlúčenina bola použitá namiesto
C, 63,21, H, 5,12, zlúčeniny
N, 38, 43, z príkladu
Cl, 6,66.
Namerané: C, 60,86, H,
5,38, N, 17,28, Cl,
6,52.
Príklad 59(d)
Hydrochlorid 6-[N-(3-( (1,3-dimetyl-lH-pyrazol-5-yl)karboxamido) -4-fluórfenyl)amino]-3-E-[2-(pyridín-2-yl)etenyl]-1Hindazolu
I-VXX/P . .HCI
Zlúčenina z príkladu 59 (d) bola pripravená podobným
spôsobom, ako v príklade 59(a) okrem toho, že zlúčenina
z príkladu 49(a) bola použitá namiesto zlúčeniny z príkladu
(a). XH NMR (300 MHz, DMSO-dg) Ô 13,2 (b, 1H) , 9,97 (s, 1H) ,
8,75 (d, 1H, J = 5,44 Hz), 8,51 (š s, 1H) , 8,35 (m, 2H) , 8,20 (d, 1H, J = 16,59 Hz), 8,06 (d, 1H, J = 8,81 Hz), 7,71 (d, 1H,
360
J = 16, 59 Hz) , 7,70 (m, 1H) , 7,44 (dd, 1H, J = 6,65 Hz, J =
2, 67 Hz) , 7,24 (t, 1H, J = 9,54 Hz) , 7,12 (d, 1H, J = 1,46
HZ) , 7,05 (m, 2H), 6,86 (s, 1H), 4,0 (s, 3H), 3,84 (š s, 1H,
2,20 (s, 3H) .
Príklad 59(e)
Hydrochlorid 6— [3—((l-etyl-3-metyl-lH-pyrazol-5-yl)karboxamido)fenoxy]-3-E-[2-(pyridín-2-yl)etenyl]-lH-indazolu
Zlúčenina z spôsobom, ako v z príkladu 31 (d)
bola príkladu príklade bola použitá namiesto
59(a) okrem pripravená toho, že podobným zlúčenina zlúčeniny z príkladu
41 (a ) . XH NMR (DM SO-d6) δ 13,53 (s, 1H) , 10,23 (s, 1H), 8,78
(d, 1H, J = 5,5 H z), 8,30 (m, 4H), 7,80 (m, 2H) , 7,59 (d, 1H,
J = 7,7 Hz), 7,55 (s, 1H), 7,41 (t, 1H, J = 8,1 Hz), 7,11 (s,
2H) , 6,88 (d, 1H, J = 6,7 Hz), 6,81 (s, 1H), 4,38 (q, 2H, J =
7,0 Hz) , 3,75 (š s, 1H), 2,19 (s, 3H) , 1,29 (t, 3H, J = 7,0
H20
C, • 0,1 EtOAc:
Hz). Anál, výpočet pre C27H25CIN6O2 · 1,7
60,89, H, 5,45, N, 15,55. Namerané: C,
60,88,
H,
5,51,
N,
15,27.
Príklad 59(f)
Hydrochlorid 6-[2-(metylkarbamoyl)fenylsulfanyl]-3-E-[2(pyridin-2-yl)etenyl]indazolu
361
(f)
Zlúčenina z príkladu bola pripravená podobným spôsobom, ako v príklade (a) okrem toho, že zlúčenina z príkladu 33(a) bola použitá namiesto zlúčeniny z príkladu
41(a). Analyzované s 2,0 H2O, vypočítané C, 57,58, H, 5,05, N,
12,21, Cl, 6,99. Namerané: C, 57,24, H, 5, 048, N, 11,91: Cl,
6, 63.
Príklady zlúčenín popísaných vyššie môžu byť testované na aktivitu s použitím testov popísaných nižšie.
Biologické testovanie: enzýmové testy
Stimulácia bunečnej proliferácie rastovými faktormi, ako je napríklad VFFG, FGF a ďalší, závisí na ich indukcii autofosforylácie každého z ich príslušných receptorov tyrožinkináz. Teda schopnosť inhibitoru proteinkinázy blokovať autofosforyláciu môže byť meraná inhibíciou peptidových substrátov. Pre meranie proteinkinázovej inhibičnej aktivity zlúčenín boli navrhnuté nasledujúce konštrukty.
Konštrukt VEGF-R2 pre test:
Tento konštrukt zisťuje schopnosť testovanej zlúčeniny inhibovať aktivitu tyrozinkinázy. Konštrukt (VEGF-R2A50) cytosolovej domény receptora 2 humánneho vaskulárneho endotelového rastového faktoru (VEGF-R2) s chýbajúcimi 50 centrálnymi zvyškami zo 68 zvyšok inzerčnej kinázovej domény bol exprimovaný v systéme bakulovírus/hmyzí bunky. Zo 1356
362 zvyškov kompletného VEGF-R2 obsahuje VEGF-R2A50 zvyšky 806 až 939 a 990 až 1171, a tiež jednu bodovú mutáciu (E990V) v inzerčnej kinázovej doméne relatívne k VEGF-R2 divokého typu. Autofosforylácia purifikovaného konštruktu bola prevádzaná inkubáciou enzýmu v koncentrácii 4 μΜ v prítomnosti 3 mM ATP a 40mM MgC12 vo lOOmM HEPES, pH 7,5, obsahujúcim 5% glycerol a 5mM DTT, v 4 °C po dobu 2 hodín. Po autofosforylácii bolo ukázané, že tento konštrukt má katalytickú aktivitu v podstate totožnú s konštruktom obsahujúcim autofosforylovanú kinázovú doménu divého typu, (viď Parast et al., Biochemistry, 37, 16788-16801, 1998) .
Konštrukt FGF-R1 pre test:
Intracelulárna kinázová doména humánneho FGF-R1 bola exprimovaná s použitím bakulovírusového vektorového expresného systému počínajúc endogénnym metioninovým zvyškom 456 ku glutamátu 766, podía systému číslovania zvyškov podía autorov Mohammadi et al. (Mol. Celí. Biol., 16, 977-989, 1996). Okrem toho konštrukt tiež má nasledujúce substitúcie3 aminokyselín: L457V, C488A a C584S.
Konštrukt LCK pre test:
LCK tyrozinkináza bola exprimovaná v hmyzích bunkách ako N-koncová delécia počínajúc aminokyselinovým zvyškom 223 ku konci proteínu vo zvyšku 509, s nasledujúcimi substitúciami dvoch aminokyselín v N-koncovej časti: P233M a C224D.
Konštrukt CHK1 pre test:
363
Kompletný humánny CHK1 (FL-CHK1) so značkou His na C-koncovej časti bol exprimovaný s použitím systému bakulovírus/hmyzí bunky. Obsahuje 6 histidínových zvyškov (6 x značka His) v C-koncovej časti 476 aminokyselín humánneho CHK1. Proteín bol purifikovaný zvyčajnými chromatografickými technikami.
Konštrukt CDK2/cyklín A pre test:
CDK2 bol purifikovaný s použitím publikovanej metódy (Rosenblatt et al., J. Mol. Biol., 230, 1317-1319, 1993) z hmyzích buniek, ktoré boli infikované bakulovírusovým expresným vektorom. Cyklín A bol purifikovaný z buniek E. Coli exprimujúcich kompletný rekombinantný cyklín A a skrátený konštrukt s cyklinom A bol vytvorený limitovanou proteolýzou a purifikovaný, ako bolo popísané skoršie (Jeffrey et al., Náture, 376, 313-320, 1995).
Konštrukt CDK4/cyklín D pre test:
Komplex humánneho CDK4 a cyklínu D3 alebo komplex cyklínu Dl a fúzneho proteínu humánneho CDK4 a glutatión-S-transferázy (GST-CDK4), bol purifikovaný s použitím tradičných biochemických chromatografických techník z hmyzích buniek, ktoré boli súčasne infikované (koinfikované) odpovedajúcimi bakulovírusovými expresnými vektormi.
Konštrukt FAK pre test:
Katalytická doména humánneho FAK (FAKcd409) bola exprimovaná s použitím bakulovírusové vektorového expresného systému. Exprimovaná doména s 280 aminokyselinami obsahuje zvyšky metionín 409 až glutamát 689. Existuje jedna aminokyselinová substitúcia (P410T) relatívne k prístupovému
364 číslu sekvencie L13616, publikované autormi Whithey, G.S. Et al. (DNA Celí Biol, 9, 823-30, 1993). Proteín bol purifikovaný s použitím techniky klasickej chromatografie.
Konštrukt TIE-2 (TEK) pre test:
Doména tyrozinkinázy TIE-2 bola exprimovaná v hmyzích bunkách ako N-koncová delécia počínajúc aminokyselinovým zvyškom 774 ku konci proteínu vo zvyšku 1124. Tento konštrukt tiež nesie mutáciu R774M, ktorá slúži ako iniciačný metioninovým zvyšok pri translácii.
Test VEGF-R2
Spriahnutý spektrofotometrický (FLVK-P) test
Produkcia ADP z ATP, ktorá sprevádza transfer fosfátu bola spriahnutá s oxidáciou NADH využitím fosfoenolpyruvátu (PEP) a systému s pyruvátkinázou (PK) a laktátdehydrogenázou (LDH). Oxidácia NADH bola monitorovaná poklesom absorbancie pri 340 nm (β34ο = 6,22 cm-1 mM-1) s použitím spektrofotometra Beckman DU 650. Podmienky testu pre fosforylovaný VEGF-R2Á50 (označený ako FLVK-P v tabuľkách uvedených nižšie) boli nasledujúce: lmM PEP, 250μΜ NADH, 50 jednotiek LDH/ml, 20 jednotiek PK/ml, 5mM DTT, 5, lmM poly(E4Yi), lmM ATP a 25 mM MgCl2 v 200 mM HEPES, pH 7,5. Podmienky testu pre nefosforylovaný VEGF-R2Ä50 (označený ako FLVK v tabuľkách) boli nasledujúce: lmM PEP, 250μΜ NADH, 50 jednotiek LDH/ml, 20 jednotiek PK/ml, 5mM DTT, 20mM poly(E4Yi), 3mM ATP a 60mM MgCl2 a 2mM MnCl2 vo 200mM HEPES, pH 7,5. Testy boli iniciované s 5 až 40 nM enzýmu. Hodnoty Kí boli zisťované meraním enzýmovej aktivity v prítomnosti meniacej sa koncentrácie testovanej zlúčeniny. Dáta bola analyzovaná s použitím software Enzýme Kinetic a Kaleidagraph.
365
Test ELISA
Tvorba fosfogastrínu bola monitorovaná s použitím biotinylovaného peptidu gastrínu (1-17) ako substrátu. Biotinylovaný fosfogastrín bol imobilizovaný s použitím streptavidínom potiahnutých 96 jamkových mikrotitračných doštičiek, potom nasledovala detekcia s použitím protilátky anti-fosfotyrozin konjugovanej s chrenovou peroxidázou. Aktivita chrenovej peroxidázy bola monitorovaná s použitím diamónne soli 2,2'-azinodi[3-etylbenzatiazolínsulfonátu(6)] (ABTS). Typické roztoky testu obsahovali: 2μΜ biotinylovaný peptid gastrín, 5mM DTT, 20μΜ ATP, 26mM MgC12 a 2mM MnC12 v 200mM HEPES, pH 7,5. Test bol iniciovaný s 0,8 nM fosforylovaného VEGF-R2Á50. Aktivita chrenovej peroxidázy bola testovaná s použitím lOmM ABTS. Reakcia chrenovej peroxidázy bola zastavená pridaním kyseliny (H2SO4), potom nasledovalo odpočítanie absorbancie v 405 nm. Hodnoty Ki boli zisťované meraním enzýmovej aktivity v prítomnosti meniacej sa koncentrácie testovanej zlúčeniny. Dáta bola analyzovaná s použitím software Enzýme Kinetic a Kaleidagraph.
Test FGF-R
Spektrofotometrický test bol prevádzaný, ako bolo popísané vyššie pre VEGF-R2, okrem nasledujúcich zmien koncentrácie: FGF-R = 50 nM, ATP = 2 mM a poly(E4Yl) = 15 mM.
Test LCK
Spektrofotometrický test bol prevádzaný, ako bolo popísané vyššie pre VEGF-R2, okrem nasledujúcich zmien koncentrácie: LCK = 60 nM, MgCl2 = 0 mM, poly(E4Yl) = 20 mM.
366
Test CHK1
Produkcia ADP z ATP, ktorá sprevádza prenos fosfátu na syntetický substrátový peptid Syntide-2 (PLARTLSVAGLPGKK) bola spriahnutá s oxidáciou NADH s použitím fosfoenolpyruvátu (PEP) prostredníctvom pôsobenia pyruvátkinázy (PK) a laktátdehydrogenázy (LDH). Oxidácia NADH bola monitorovaná poklesom absorbancie v 340 nm (e340 = 6,22 cm-1 mM-1) s použitím spektrofotometra HP8452. Typické roztoky testu obsahovali: 4mN PEP, 0,15mM NADH, 28 jednotiek LDH/ml, 16 jednotiek PK/ml, 3mM DTT, 0,125 mM Syntide-2, 0,15mM ATP, 25mM MgCl2 v 50mM TRIS, pH
7,5 a 400mM NaCl. Testy boli iniciované s lOnM FL-CHK1. Hodnoty Kí boli zisťované meraním počiatočnej enzýmovej aktivity v prítomnosti meniacich sa koncentrácií testovaných zlúčenín. Dáta bola analyzovaná s použitím software Enzýme Kinetic a Kaleidagraph.
Testy CDK2/cyklínu A a CDK4/cyklínu D
Kinázová aktivita závislá na cyklínu bola meraná kvantifikáciou enzýmom katalyzovanej, na čase závislej inkorporácia rádioaktívneho fosfátu z [32P]ATP do rekombinantného fragmentu retinoblastómového proteínu. Ak nie je uvedené inak, boli testy prevádzané na 96 jamkových doštičkách v celkovom objeme 50 μΐ, v prítomnosti 10 mM HEPES (N- [2-hydroxyethyl]piperazín-N'-[2-etánsulfónová kyselina]) (pH 7,4), lOmM MgCl2, 25μΜ adenozíntrifosfátu (ATP), 1 mg/ml ovalbumínu, 5 μς/πιΐ leupeptínu, lmM ditiotreitolu, lOmM rekombinantného β-glycerofosfátu, 0,lmM vanadičnanu sodného, lmM fluoridu sodného, 2,5mM etylénglykol-bis(β-aminoetyléter)-N,N,N',N'tetraoctovej kyseliny (EGTA), 2% (objem/objem) dimetylsulfoxidu a 0,03 až 0,2μϋί [32P]ATP. Substrát (0,3-0,5 μg) bol purifikovaný fragment
367 retinoblastómového proteínu (Rb) (zvyšky 386-928 natívneho retinoblastómového proteínu, 62,3 kD, obsahujúci väčšinu fosforylačných miest zistených v natívnom proteínu o veľkosti 106 kD, a tie značku šiestich histidínových zvyškov pre ľahkú purifikáciu). Reakcie bolo iniciované s CDK2 (150 nM komplexu CDK2/cyklín A) alebo CDK4 (50 nM komplexu CDK4/cyklín D3), inkubované v 30 °C a ukončené po 20 minútach pridaním etyléndiamíntetraoctovej kyseliny (EDTA) do koncentrácie 250 mM. Fosforylovaný substrát potom bol zachytený na nitrocelulózovej membráne s použitím filtračného zariadenia pre 96jamkovéj doštičky a neinkorporovaná rádioaktivita bola odstránená opakovaným premytím 0,85% kyselinou fosforečnou. Rádioaktivita bola kvantifikovaná expozíciou suchej nitrocelulózovej membrány pomocou zobrazovacieho zariadenia Phosphoimager. Zjavné hodnoty Kí boli merané testovaním enzýmovej aktivity v prítomnosti rôznych koncentrácií zlúčeniny a odpočítaním rádioaktivity pozadia meranej bez enzýmu. Kinetické parametre (kcat, Km pre ATP) boli merané pre každý enzým v obvyklých testovacích podmienkach určením závislosti počiatočných rýchlostí od koncentrácie ATP. Dáta boli preložené závislosťou od kompetitívnej inhibície s použitím software Kaleidagraph (Synergy Software) alebo bola preložená závislosťou od kompetitívnej inhibície s tesnou väzbou použitím software KineTic (BioKin, Ltd.). Namerané hodnoty Ki pre známe inhibítory CDK4 a CDK2 súhlasili s publikovanými hodnotami IC50. Špecifická aktivita CDK4 bola rovnaká, buď v komplexu s konštruktom kompletného cyklínu D3 alebo skráteného cyklínu D3, oba komplexy tiež poskytli veľmi podobné hodnoty Kí pre vybrané inhibítory.
Test FAK
Pre FAK HTS bol použitý test fluorescenčnej polarizácie poskytnutý firmou LJL Biosystems. Kinázová reakcia obsahovala:
368 lOOmM Hepes pH 7,5, lOmM MgCl2, lmM DTT, lmM ATP a 1 mg/ml poly Glu-Tyr (4:1). Reakcia bola iniciovaná pridaním 5nM FAKcd409. Reakcia bola ukončená pridaním EDTA, potom nasledovalo pridanie peptidu označeného fluórom a anti-fosfotyrozínové protilátky, poskytnuté firmou LJL Biosystémy. Výsledky inhibície boli odpočítané na detektoru Analyst (LJL).
Spektrofotometrický test TIE-2
Kinázou katalyzovaná produkcia ADP z ATP, ktorá sprevádza prenos fosfátu na náhodný kopolymér poly(Glu4Tyr) bola spriahnutá s oxidáciou NADH s použitím aktivity pyruvátkinázy (PK) a laktátdehydrogenázy (LDH) . NADH konverzia na NAD+ bola monitorovaná poklesom v absorbancii v 340 nm (ε - 6,22 cm mM-1) s použitím spektrofotometra Beckman DU650. Typické reakčné roztoky obsahovali lmM fosfoenolpyruvát, 0,24mM NADH, 40mM MgCl2, 5mM DTT, 2,9 mg/ml poly (Glu4Tyr), 0,5mM ATP, 15 jednotiek/ml PK, 15 jednotiek/ml LDH v lOOmM HEPES, pH 7,5. Testy boli iniciované pridaním 4 až 12 nM fosforylovanej Tie-2 (aa 775 až 1122) . Percento inhibície bolo zisťované v troch opakovaní pri ΙμΜ hladine inhibítora.
Test TIE-2 DELFIA
Tvorba, -fosfotyrozínu -bola monitorovaná- - - s- použitím biotinylovaného p34cdc2 (aa 6 až 20 = KVEKIGEGTYGWYK) peptidu ako substrátu. Biotinylovaný peptid bol imobilizovaný s použitím NeutrAvidinom™ potiahnutých 96 jamkových mikrotitračných doštičiek, potom nasledovala detekcia s použitím protilátky anti-fosfotyrozín (PY20) konjugovanej s európium N1 chelátom. Typické roztoky pre test obsahovali: ΙμΜ biotinylovaný peptid p34cdc2, 150μΜ ATP, 5mM MgCl2, lmM DTT, 0,01% BSA, 5% glycerol, 2% DMSO, 25mM HEPES, pH 7,5. Test bol
369 iniciovaný na doštičke NeutrAvidin s 50nM intracelulárnej domény TIE2. Kinázová reakcia bola ukončená 50mM EDTA. Doštičky potom boli premyté a bola pridaná protilátka s európiom. Po inkubácii boli doštičky opäť premyté a bol pridaný zosilňovací roztok DELFIA™. Doštičky boli odpočítané v štandardnom nastavení pre detekciu európia (ex 340 nm, em 615 nm, zmeškanie 400 μεεο, okno 400 μεεε). Percento inhibície bolo vyrátané s použitím referenčných jamiek na doštičke, do ktorých bolo pridané DMSO a ne zlúčenina v DMSO, a pozadie bolo odpočítané od experimentálnych i kontrolných jamiek so vzťahom k referenčným jamkám na doštičke, do ktorých bola pridaná EDTA pred pridaním enzýmu.
Test proliferácie buniek HUVEC
Tento test určoval schopnosť testované zlúčeniny inhibovať rastovými faktormi stimulovanú proliferáciu endotelových buniek ludskej umbilikálnej žily („HUVEC). HUVEC bunky (pasáž
3-4, Clonetics, Corp.) boli rozmrazené do kultivačného média EGM2 (Clonetics Corp) vo fľašiach T75. O 24 hodín neskoršie bolo do fliaš pridané čerstvé médium EGM2. Štyri alebo päť dní neskoršie boli bunky vystavené ďalšiemu kultivačnému médiu (médium F12K doplnené 10% fetálnym bovinným sérom (FBS), 60 μς/πιΐ rastovým doplnkom pre endotelové bunky (ECGS) a 0,1 mg/ml heparínu). Exponenciálne narastajúce bunky HUVEC potom boli použité v experimentoch. Desať až dvanásť tisíc buniek HUVEC bolo nanesené na 96 jamkové doštičky v 100 μΐ bohatého kultivačného média (popísaného vyššie). Bunky boli ponechané prichytiť sa po dobu 24 hodín v tomto médiu. Médium potom bolo odstránené odsatím a do každej jamky bolo pridané 105 μΐ deficitného („hladovanie) média (F12K+1% FBS). Po 24 hodinách bolo pridané 15 μΐ testovaného činidla rozpusteného v 1% DMSO v deficitnom médiu alebo v tomto vehikule samotnom ku každej
370 ošetrenej jamke, konečná
DMSO koncentrácia bola 0,1 %. Jednu hodinu neskoršie bolo pridané 30 μΐ
VEGF (30 ng/ml) v deficitnom médiu do všetkých jamiek, okrem tých, čo obsahovali neošetrené kontroly, konečná VEGF koncentrácia bola ng/ml.
Bunečná proliferácia bola kvantifikovaná 72 hodín neskoršie redukcoU farbiva MTT, v tomto okamžiku boli bunky exponované po dobu 4 hodín MTT (Promega Corp.)
Redukcia farbiva bola zastavená pridaním zastavovacieho roztoku (Promega Corp.) a bola zisťovaná absorbancia v
595 λ na spektrofotometrickom čítacom zariadení pre 96 jamkové doštičky.
Hodnoty IC50 boli vypočítané prekladaním krivky reakcie A595 na rôzne koncentrácie testovaného činidla, typicky bolo použité sedem koncentrácii odstupňovaných po 0,5 log, s tromi opakovaniami jamiek v každej koncentrácii. Pre screening doštičiek s knižnicou zlúčenín bola použitá jedna alebo dve koncentrácie (jedna jamka na koncentrácii) a % inhibicie bolo vypočítané z nasledujúceho vzorca:
% inhibicie = (kontrola - test) = (kontrola - hladovanie) kde
Kontrola = A595, keď je VEGF prítomný bez testovaného činidla
Test = A595, keď je VEGF prítomný s testovaným činidlom
Hladovanie = A595, keď chýba VEGF i testované činidlo.
Test proliferácie buniek karcinómu (MV522)
Protokol pre stanovenie bunečnej proliferácie v karcinómových bunkách je podobný testu použitému pre hodnotenie HUVEC buniek. Dva tisíce buniek plúcneho karcinómu (línia MV522, získaná od Američan Tissue Cultural Collection) bolo nasadené do rastového média (médium RPMI1640 doplnené 2mM glutamínom a 10% FBS). Bunky boli ponechané prichytiť sa po
371 dobu 1 dňa pred pridaním testovaných činidiel a/alebo vehikúl. Bunky boli ošetrené súčasne rovnakými testovanými činidlami použitými v HUVEC teste. Bunečná proliferácia bola kvantifikovaná redukčným testom farbiva MTT 72 hodín po expozícii testovaným činidlom. Celková dĺžka testu je 4 dni proti 5 dňom pre bunky HUVEC, pretože MV522 bunky neboli vystavené deficitnému médiu (hladovaniu).
Test PK na myšiach
Farmakokinetiká (napr. absorpcia a eliminácia) liekov v myšiach bola analyzovaná s použitím nasledujúceho experimentu. Testované zlúčeniny boli formulované ako roztok alebo suspenzia v 30:70 (PEG 400: acidifikovaný H2O) vehikulu alebo ako suspenzia v 0,5% CMC. Toto bolo podávané perorálne (p.o.) a intraperitoneálne (i.p.) vo variabilných dávkach dvom rôznym skupinám (n = 4) samíc myší B6. Krvné vzorky boli odoberané z orbitálnej vény v časových bodoch: 0 hodín (pred dávkou), 0,5 hodiny, 1,0 hodina, 2,0 hodiny a 4,0 hodiny a 7,0 hodín po dávke. Plazma bola získaná z každej vzorky centrifugáciou v 2500 rpm po dobu 5 minút. Testovaná zlúčenina bola extrahovaná z plazmy metódou organickej precipitácie proteínu. Pre každý časový odber bolo 50 μΐ plazmy zmiešané s 1,0 ml acetonitrilu, vortexované (prudko pretriasanej na mikrotrepačke) po dobu 2 minút, a potom stočené vo 4000 rpm po dobu -1-5- minút, aby sa proteín precipitoval a extrahoval od testovanej zlúčeniny. Potom bol acetonitrilový supernatant (extrakt obsahujúci testovanú zlúčeninu) naliaty do nových testovacích skúmaviek a evaporovaný na horúcej doštičke (25 °C) vo výparoch plynu N2. Do každej skúmavky obsahujúcej usušený extrakt testovanej zlúčeniny bolo pridané 125 μΐ mobilnej fázy (60:40, 0,025M NH4H2PO4 + 2,5 ml/1 TEA : acetonitril). Testovaná zlúčenina bola resuspendovaná v mobilnej fáze vortexovaním a ďalší
372 proteín bol odstránený centrifugáciou vo 4000 rpm po dobu 5 minút. Každá vzorka bol naliata do HPLC fľaštičky pre analýzu testovanej zlúčeniny na prístroji „Hewlett Packard 1100 šerieš HPLC s UV detekciou. Z každej vzorky bolo 95 μΐ injikované na kolónu Fenomenex-Prodigy s reverznou fázou C-18, 150 x 3,2 mm, a bolo eluované gradientom 45-50% acetonitrilu po dobu 10 minút. Plazmatické koncentrácie testovanej zlúčeniny (pg/ml) boli zisťované v zrovnaní so štandardnou krivkou (oblasť vrcholu proti koncentrácii v pg/ml) s použitím známych koncentrácií testovanej zlúčeniny extrahovanej z plazmatických vzoriek spôsobom popísaným vyššie. Spolu so štandardy a neznámymi boli testované tri skupiny (n = 4) kontroly kvality (0,25 pg/ml, 1,5 pg/ml, a 7,5 pg/ml), aby sa zaistila konzistentnosť analýz. štandardná krivka mala R2>0,99 a kontroly kvality boli všetky v 10 % očakávaných hodnôt.
Kvántifikované testované vzorky boli vynesené do grafu pre vizuálne zobrazenie s použitím software Kalidagraph a ich farmakokinetické parametre boli zisťované s použitím software WIN NONLIN. Príklad l(a) poskytol nasledujúce výsledky: 0,69 (myší pK, AUC, ip, pg-h/ml), 0,33 (myší pK, AUC, po, pg-h/ ml.
Test mikrozómov ľudskej pečene (HLM)
Metabolizmus zlúčenín v mikrozómoch ľudskej pečene bol meraný postupmi analytického testu LC-MS nasledovne. Najskôr mikrozómy ľudskej pečene(HLM) boli rozmrazené a nariedené na 5 mg/ml chladným pufrom, lOOmM fosfátom draselným (KPO«) . Vhodná množstvá KPO4 pufra, NADPH regeneračného roztoku (obsahujúceho B-NADP, glukózo-6-fosfát, glukózo-6-fosfátdehydrogenázu a MgCl2) a HLM bola preinkubovaná vo sklenených skúmavkách 13 x 100 mm v 37 °C po dobu 10 minút (3 skúmavky na testovanú zlúčeninu - troje opakovanie). Testovaná zlúčenina (konečná koncentrácia 5 pM) bola pridaná do každej skúmavky, aby sa
373 zahájila reakcia a bola miešaná miernym vortexovaním, ‘tik·, nasledovala inkubácia v 37 °C. V časových bodoch' t = 0, 2 hodiny, bol z každej inkubačnej skúmavky odstránená vzorka 250 μΐ do samostatnej sklenenej skúmavky 12 x 75 mm obsahujúcej 1 ml ľadovo chladného acetonitrilu s 0,05μΜ reserpínom. Vzorky boli stočené v 4000 rpm po dobu 20 minút, aby sa precipitovali proteíny a soľ (Beckman Allegra 6KR, S/N ALK98D06, #634). Supernatant bol prenesený do nových sklenených mm a evaporovaný na centrifugačnej vákuovej skúmaviek 12 x odparke SpeedVac. Vzorky boli rekonstituované v
200 μΐ zmesi
0,1% mravenčej acetonitrilu (90/10) a vortexované kyseliny a rozpustení. polypropylenových mikrocentrifugačných skúmaviek 14000 x g po dobu
Vzorky boli potom prenesené do dôkladne do samostatných a stočené v minút (Fisher Micro 14, S/N M0017580) .
(č. 1 až 3) v každom časovom bodu (0 a 2
Pre každý replikát hodiny) bol alikvot do jednej HPLC viálky (6 celkových vzoriek) pre analýzu LC-MS, ktorá je popísané nižšie.
vzorky každej testovanej zlúčeniny spojený
Vzorky spojených zlúčenín boli injikované do systému LCMS, zloženého z HPLC Hewlett-Packard HP1100 s diódovým čidlom a hmotnostného spektrometra Micromass Quattro II triple quadruple pracujúceho v módu pozitívneho elektrospreja SIR (programovaného tak, aby skenoval špecificky molekulárny ión každej testovanej zlúčeniny). Vrchol krivky pre každú testovanú zlúčeninu bol integrovaný v každom časovom bode. Pre každú zlúčeninu bola oblasť vrcholu v každom časovom bode (n = 3) spriemerňovaná a táto priemerná hodnota plochy vrcholu v 2 hodinách bola delená priemernou plochou vrcholu v čase 0 hodín, aby sa získalo percento testovanej zlúčeniny zostávajúcej v 2 hodinách.
Výsledky testovania zlúčenín s použitím rôznych testov sú zhrnuté v tabuľke nižšie, kde označení „% ukazuje percento
374 inhibicie v uvedenej koncentrácii, hodnoty predstavujú Ki (nM) alebo % inhibicie pri koncentrácii zlúčeniny 1 μΜ pre * alebo 50 nM pre **, ak nie je uvedené inak. „NI označuje nevýznamnú inhibíciu.
Tabuľka 1
Pŕ.Č. FLVK r· FLVK -P** Lck- P* CHK -1* FGFp· CDK2 ♦ CDK4 • HUVEC IC50 (nM) HUVEC + album! nICSO (nM) MV522 1C50 (μΜ) % sbytku HLM 2 hod)
2(b) 300 425 549 228 μΜ .2 200 8000
2(c) 2600 50 μΜ 26 μΜ
1(ä) 0r3 2 68 5,2 27 19 13 54 0,35 98
3 6(6 65 37% 4,8 112 16 23 930 2,2
8(a) 3,2 23 43% 530 42 >100 μΜ >100 μΜ >1000 >10
8(b) 72 12% O 50 UM
2(d) 3,7 43% 91 68 53 53 450 0.18
1(c) M V 46% 78 560 670 >1000 >10
2(a) 40 61% ©20 μΜ 610 1600 >1000 0,58
1(b) 2,2 1400 4000 1300 >1000 >10
8(c) 2,6 16 34% >10 000 >100 μΜ >100 μΜ 280 >10
-9(a)— —1-6—
lv£ 11 uu O/U
9(b) 24 448
2(0 40 5% β 20 UM
10 9 9100 >700 >10
20(a) 29 12,7 200 9,4 52
20(b) 1,6 8 23% 28% 8,2 Ca.10
14 15 - - - 12% d 25 UM - _ . .
7 18 1300
17 11 532
8(d) 11 82 000
4(a) 0,65 68% NI 15.4 NI 19% 3 30 6,3 35
23 V 2,1 12% NI 14% NI 17% 9,5 106 5,7 74
21 4,6 >700
11 12 34,000
22(b) 0,63 1,2 21.5 4,8 8.5
22(a) 0,22 0.2 12 >10
22(0 0,64 38
4{b) 2,7 1,9 13% & 1 μΜ 4.9 25 205 3,2 63
12(a) L8 6,9 17% 19 6 87 2,1 59
375
12(b) 0,48 1,8 32% 31 4,8 44 >10 29
18 12r5
19(b) 0,49 6,6 58% Nl 60% Nl 11% 2z9 27 4,3 137
19(a) OO 6,8 16% © 1 μΜ 92% 44
19(C) 5,9 50% 68% 17
12(c) 1,6
19(6) 0,72 33% 39% 6,8 34 >10 36
5(a) 0,03 28% 10,4 12 9,6
12(d) 0,39 31% 61% θ,1 >10 51
13 1,3 61% 74% 3,9 28 >10 69
15 15
I6(a) -0,08 28% Nl 65% Nl Nl 4,5 112 8 T
6(a) 0,74 33% 67% 8,5 50 3,5 69*
5(b) 0,9 78% 14 3,7 33 8,5
16(b) 0,34 22% 73% 4,7 140 >10 50
16(c) 1,1 1001000 >10
16(6) 0,43 33% 90% 11 >10
16(e) 1,3 8% 59% 4,9 106 >10 40
6(b) 0,15 81% 95% 8 60 4 128
16(f) 2,8 >30 >10
19(e) 20 >300
30(a) 1,7 45% 94% 1.6 22 5,7 64
19(1) 0,18 52% 58% 2,3 16 3,9 98
46 3,5
30(b) 2,2 90
19(q) 0,86 19% 59% 18 1920 90
30(c) 0,83 44% 82% 2,5 21 54
19(hL 600 7.9
44 9,6 >700
38(a) 0,22 77% 74% 4,5- 20 10,7 72
45(b) 99% 86% 79% 1,9 11,5 4,4 97
45(a) 0,062J - - 3,1 ca; 15 3,5 97
i9í!L >300
daa. 0,046 79% 53 65 0,8 8 5,5 92
38(b) 72% 79
19Í1L 0,33 23% 44% 2,2 50 >10 66
42(b) 0,35 75% 27% 2,1 29 2,1 81
19[£ 100% 37% 41% 2,6 28 4 58
33[b}. 0,66 76% 63% 77% 0,8 11.5 15 45
26 ĽL θιθ 3,2
19Í!L 0,72 36% 88% 6£ 100
376
19(m) 0.68 35% 23% 94 >10 61
33{a) 3r8 42% 9% 0 56 2% 7% 0£ 2Z. >10 29
19(n) 0,54 26% 48% 3,4 23 2.9
33(c) 0,28 26% 76% 6,6 >10 16
33(d) 0,14 55% 24 >300 8 22
40(a) 17,9
41 (aa) 0,11 49% 37% 1 5,2 >10 100
41(b) 0,26 24% 31% 2 9,8 >10 80 m
42(e) 1,1 95
42(d) 1,7 44 >10
43 2,6 56% 24 2
19(0) 89% 20
41(c) 0,22 83% 36% 77% 0^ 5,3 68
41(d) 0,093 O,9
41(a) 0,03 94% 50% 0 20 0 6% 0,48 4,4 >10 96
19(p) 1,5
41(e) 0,22 21% 31% 0,15 5,6, 6,1 22
41(f) 0,11 84% 65% 92% 0,45 20 59
41(g) θ,1 36% 95% 0,9 >10 52
30(d) 0,37 3,8
30(e) 0,37 62% 92% 29
33(e) 1,7 70% 2% 68% 0,46 5 >10 54
W — —tr— -31-
41(h) 90% 30% 2 25 8
47 0,25 50% 88%
31(a) 0,29 77%* 95% 0,7 10 58
41(1) 0,04 38%* 76% 0,25 3,3 48
35(u) 79% 2,6 27
32(a) <0,1 86%* 96% 0,16 4,5 2
41(k) 2,95 20% 49% 48
41(1) 0,24 63%* 66% 386
41 (m) 0,75 40% 67% 23 0
41(n) .0,2. 66%· 87% _ _ - - 28- 70
31(b) <0,1 66% 97% 5,6 2
41(0) 0,05 77% 74% 10 94
31(C) <0,1 81% 98% Hf4 87
35(gg) 23% >100
33(g) 15%
34 97% 78% 95% 15 28
50
35(v) 72% 11% 59% 22 26
377
35(w) 59% 35
35(x) 75% 2 37
35(a) 76% 12% 59% 2,1 33
35(b) 49% 12% 59% 35
35(C) 76% 11% 42% 6,3 - 17
41(p) 0,06 49% 0 90 6% 3% 0,27 2,6 >10 62
42(C) 95% 1 to 3
41 (d d) 98% 50% 69% 5,8 7
41(bb) 99% 7é% 88% 1to3 110
35(y) 99% 29% 82% 1 to 3 7
35(d) 76% >100
31(d) 96% 52% 0 14 5% 9% ca. 13 110
41(q) 100% 53% 91% 2,7
35(e) 99% 56% 69% 4,8 >10 34
35(f) 100% 8 15
35(g) 100% ca. 15 53
35(h) 100% 3,6 9
35(1) 100% 4,7
35(j) 99% 1,5 5
35(k) 85% 6% 0 34% 8% 7% 2,2 >10 14
41 (ee) 0;13 13% 0 94% 0 2% 0,24 4,3. 2,7 M- 47
3b(z) 95% —2—
35(aa) 99% 5 15
41(r) 100 % 55% 0 92% 0 5% 11 83
41 (CC) 97% 41% 95% >100
35(l) 90% 12
35(cc) 89% 15% 0 74% 5% 6% 0,05 1,6 31
35(ee) 82% 3 13
35(ff) 0 11 25% 75% 5,8 31
35(dd) 0,6 17% 0 75 .7% 8% 0,18 -2,9- >10 26
35(bb) 87% 4,1 8
32(b) 0,08 70% 95% 21 >10
35(hh) 100% 34% 73% 7
35(m) 0,04 61% 82% 35
-«(a) 0,37 13% 0 14 0 0 8,8 55
39(a) 53% 1,4 ca. 50 70
35(n) 0,83 58% 23% 92 4% 10% 0,11 11 5,1 47
41(s) 0,23 53% 86%
378
35(0) 39% 17% 44% >100
41(1) 0,06 51% 0 85% 1% 2% 3,8 87
32(c) 0,27 52% 96% >30
36(b) 85% 22% 43% >30
37(d) 26% 10% 38% >100
37(c) 83% 12% 39% • 12 21
37(b) 48% 8% 36% 30- 100
59(a)
41 (u) 0,08 54% 74% 7?9
41(hh) 98% 13% 74% 3,9 72
36(c) 89% • 28% 60% >30
36(a) 87% 19% 38% 19 58
35(p) 62% 5% 11% >30
35(q) 92% 42% 51% 18
40(b) 89% 32% 92%
41(ff) 98% 15% 12 5,6 68
37(a) 57% 6% 35% 15 21
41(v) 68% -* 52% 68% 12
41(11) 57% 18% 11 13 85
35(r) 0,11 16% 20 0,36 2,3 >10 51
35(s) 60% ♦ 18% 64% 4,6 16
35(t) 59% • 12% 63% 4 7
41(») 95% 14% 91% 23
41 (w) 97% 49% 67% ca. 10
41(X) 98% 66% 3,4 4,6 100
41 (mm) 93% 6% 46% 1,3 14,4 94
41(JJ) 87% 19% 81% 21
4i(y) 98% 61% 86% 30' 100
0,02 43% . - .. ~ 62% - - 6,2 8,6 49
40(c) 24% 28% 59%
41(99) 84% 27% 3,5 9,5 50
41 (nn) 57% 7% 91% >100
41«) 98% 16% 41% 7,7
48(b) 97% 6% 77% ca. 8
41(2) 100% 54% 74% 7,5
41(kk) 100% 26% 97% 16 63
39(b) 2,8 10% 50% >10 67
31(f) 97% 62% 99% >10
379
59(b)
49(a) 0.04 11% 79 ca. 4 8f4
59(c)
49(b) 98% 9% 80% ca. 10
56 5%
35(11) 44%
59(d)
57 100% 30% 89%
59(e)
58 98% 19% 98%
Tabulka 2
PtíW. č. CDK2* CDK4* CH Kí* FĽVK-P* Lcie FGF* HCT-116 IC50 (UM)
24(a) 0,017 0,0051 0,028 0,0983 67% 72% 0,23
24(b) 0,021 0,0032 0,02 0,0331 96% 88% 0,37
24(c) 0,0034 0,0015 0,044 0,0142 93% 89% 0,44
24(m) 17% 16% Nl © 20 μΜ
24(1) 0,086 0,071 62% © 20 μΜ 3,8
-24(dy —0^83~ 0,017— 0,056 0ýl25 —66%·’ 0,O23 -
24(e) 0,03 0,0044 75% 52% 0,15
24(f) 0,0072 0,0074 97% 89% 1,5
24(g) 0,13 0,029 1,67 0,194 >5
24(0) 0,029 0,2 2,2
24(h) 0,054 0,053 3,6
24(1) 0,055 0,013 1,7
240) .·. 2,1 . .. 0,32 . .... _ _ • .... -
24(k) 0,056 0,0072 81% 89% 0,16 0,2
25{a) 0,08 0,02í 49% 44% 62% 0,051
24(n) 0,035 0,019 1,5
25(b) 0,112 0,048 B3% 87% 87% 2,1
25(C) 0,233 0,0155 90% 96% 0,25
25(d) 0,16 0,098 87% 60% 80%
25(e) 0,477 0,181 16% 13% 26%
25(f) 0,39 1 Nl 58% 56% 0,098
25(g) 0,08 0,021 21% 76% 82% 2
25(h) 0,17 0,024 86% 87 91 0,32
pri
NI
380
25(1) 0,021 0,02 >5
24(p) 0,089 0,092 0,44
25(j) 0,079 0,016 70 0,0083
* hodnoty predstavujú Ki (μΜ) alebo % inhibície koncentrácii zlúčeniny 1 μΜ, ak nie je uvedené inak, označuje nevýznamnú inhibíciu
Tabulka 3
Príklad č. CHK-ľ CDK1* CDK2* CDK4* FLVK*
28(d) 0,018 93% 66% 87%
27(j) 15% © 50uM
27(a) co CO •x o NI © 1 μΜ NI © 100 μΜ 28% © 5 μΜ 71%
27(b) 28% ©50 μΜ
28(a) 0,108 77% 75% 79% 84%
27(c) 11%©5 μΜ
28(b) 0,0143 97% 98% 96%
27(d) .14% © 10 μΜ
-27(e). . . 0,757. - -- 34%
27(l) 0,227 85% 73% 92%
27(f) 0,35 0,223 3,3 0,78 49%
27(h) 0,311 84%
27(k) 24
28(c) 1,14 34%
27(g) 0,85
52(b) 0,08 0,041 0,241 0,117 94%
381
55 10
52(a) 0,263 39% 60%
53(a) 0,301 24 13% © 5 μΜ 28% © 5 μΜ
29(b) 0,138 0,9 3 3,9
29(a) Nl © 25μΜ
29(c) n 0,174 56% 2,2 2
29(d) 10
29(e) 0,074 0,593 1,4 2 33%
29(f) 0,418
51 0,087 0,146 84% 79%
29(r) 9,072 0,066 1,3 1,1
29(g) 0,068 0,39 1,4 1,1.
29(h) 0,14 1,3 3 2,2
54(d) 0,68 Ni Q 1μΜ
54(b) 3,1
29(1) 0,104 . 26% 3,1 5
--53(d)__ Nl Q 100
μΜ
54(e) 0,342 Ni Q 1μΜ
54(a) 0,896 1%
53(c) 1,1
290) 0,533 31%
29(q) 11 11%
29(p) 0,232 6%
. 53(b) . 4,4- ....... — - - -
29(k) 1,3
54(f) 2,9
54(c) 0,125 Nl
54{g) 0,195 3%
29(0) 46
53(e) 0,886 13%
29(1) 1,4 7%
29(n)· 16
382
29(m) 1 54%
53(f) 7,3
54(h) 1
29(s) 11
54«) 0,424
54(1) 0,461
29(t) 0,072
29(u) 0,151 .
53(g) 1,5
54(1) 0,99
54(k)
* hodnoty predstavujú Ki (μΜ) alebo % inhibície pri koncentrácii zlúčeniny 1 μΜ, ak nie je uvedené inak. NI označuje nevýznamnú inhibíciu
Príklad knižnice I
X, v tabulce I
Tri stavebné bloky knižnice („amínové templáty) 6—(3— aminofenoxy)-3-E-styryl-lH-indazol (Y=0), 6-(3-aminobenzoyl)3-E-styryl-lH-indazol (Y = CO) a 6-(3-aminofenyl)amino-3-Εstyryl-lH-indazol (Y = NH) boli pripravené, ako bolo popísané v príklade 7, príklade 18 a príklade 46, v danom poradí. 0, IM roztoky kyselín, amínového templátu, o-(7-azabenzotriazol-lyl)-N, N, N', N'-tetra-metyluróniumhexafluórfosfátu a trietylaminu boli pripravené oddelene v bezvodnom DMF. Do každej skúmavky v zoskupení 8x11 kultivačných skúmaviek (10x75 mm) bolo pridané 105 μύ (0,0105 mmol) odlišnej kyseliny. K tomu bolo pridané 100 μΐ (0,01 mmol) roztoku amínu, 105 μΐ (0,0105
383 mmol) roztoku trietylaminu, nasledované 105 μΐ (0,0105 mmol) roztoku o-(7-azabenzotriazol-l-yl)-N,N,Nr,N'-tetra-metyluróniumhexafluórfosfátu. Reakcie boli miešané vo vyhrievanom bloku v 50 °C po dobu 3 hodín. Reakčné zmesi boli prenesené na 1 ml 96 jamkové doštičky s použitím multipipety. Rozpúšťadla bola odstránená s použitím prístroja SpeedVac™ a hrubé reakčné zmesi boli opäť rozpustené v DMSO za vzniku konečnej teoretickej koncentrácie 10 mM.
Zlúčeniny v tabuľke boli testované na inhibícii proliferácie HUVEC v nominálnej koncentrácii 10 nM a výsledky sú uvedené v tabuľke I nižšie, vypočítané zo vzorca:
% inhibícia = (kontrola - ošetrené)/(kontrola - hladovanie) x
100
V týchto testovacích podmienkach je >50% inhibícia považovaná za významnú.
Tabuľka knižnice I
R* y= Y=o y =
CO NH
CH, 134 127 135 •
Η,φ y 124 145 118
H,C^ H,C 128 94 115
R* Y = Y = O Y =
CO NH
134 138 112
υγ. 3 56 111
HjC^y 30’ 91 109
o 101 157 105
384
h.c/y’'’ n-n H 113 150 86
CH, H,C^cAX’ 72 . θ7 85
Os^Xi 128 92 81
CC. Η,Ο'θ 113 30 ' 80
HjC^CH, (T 51 35 79
HA .y*. 125 122 78
urCr^
F pXjLx*? 87 80 77
ΗΊ HhOxXl H,C 26 52 76
CH, CH, 99 52 75
385
ζ. ď 54 85 71
c F 80 91 64
71 52 60
nQL^x, 21 76 43
ςύ, F 81 93 40
H^jQ^X, S7 86 34
fH, h,c'nYSv^x’ S 25 70 32
CX^*1 2 52 30
<?H3 I_| Q'Ň^^XX^X, 24 96 30
35 64 30
37 48 30
„XT-' 57 70 29
CH, CT'' 52 42 27
Η,θγ-γΧ, CH, OH 47 69 25
H3C X H,C^CH, 51 71 25
35 57 24
CH,
a 18 51 23
ΟγΧ, 0 45 57 23
rv H,C 19 22 20
H v 32 32 20
386
r HjC 10 24 20 νσ' CH, 33 42 13
HS y*? H,C 24 45 19 0 3 36 13
Y 0 14 90 12
-13 18 17
OY' -37 25 11
H ΟγΝγΧ, HY 0 -36 -6 17
CH, 0 81 64 11
-T? 1 -2 25 17 «3% 47 17 10
H,C^— —---
?H’ X «.c-V^ hy 3 24 16 H,C OH 27 30 10
H3C H.cJy'· H,C 5 23 7
r 5 25 16
H v ΐΉ H 21 40 7
& H -1 30 15
H.c-fr’'’ O-N 50 112 6
387
96 134 6
42 13 6
HO\^ OH -20 25 6
44 82 5
ÓH 33 32 3
HX^x 0 4 2
n^hOr''*1 20 43 0
ψΗ, cT 8 23 0
ÍH’ Η1<Γ56Ν'°'γ'Χ’ CH, 28 80 -1
_ 0^0¾ - -σχ· 10 19 -2
<r 12 40 -3
9y' chACHj 3 46 -3
39 -4
O^CH3 37 20 -5
-11 52 -7
xr -HO- -59- —7— -
0 27 48 -8
_____ .. -CH^ 64 83 -8
yä CHjC 35 42 -9
o x 27 52 -9
388
31 20 -17
56 17 -17
V'0 -20 18 -18
OH 64 38 -20
Príklad knižnice II (a) keď Y = S vo vzorci I
6- [2-(pentafluórfenoxykarbonyl)fenylsulfanyl]-3-E-[2(pyridín-2-yl) etenyl]-lH-indazol (Y = S) bol pripravený, ako bolo popísané v príklade 35 (a). l,5pmol roztoky 261 amínov a 0, 1393 μΐ (1,0 μπιοί) EtaN, rozpustené v 15 μΐ DMF, boli rozdelené do jamiek 96 jamkovej doštičky. V prípadoch, kde bol amin použitý ako hydrochlorid, bolo pridané ďalších 0,4179 μΐ
389 (3,0 μπιοί) Et3N k uvoľneniu voľnej bázy. Každá jamka bola podrobená pôsobeniu roztoku 0,5395 mg (1,0 pmol) pentafluórfenylesteru (rozpusteného v 30 μΐ DMF, a potom bola doštička pretriasaná po dobu 24 hodín pri izbovej teplote. Surové reakčné zmesi boli koncentrované s použitím prístroja GeneVac™, a potom neriedené DMSO na konečnú koncentráciu 10 mM.
(b) keď Y = NH vo vzorci I
R-Nhfc
DMF.EfcN. HATU, 24h
2,0 μπιοί roztokov 263 aminov a 0,4181 μΐ (3,0 μπιοί) Et3N bolo rozpustené v 20 μΐ DMF a rozdelené do jamiek 96 jamkovej doštičky. V prípadoch, kde bol amín použitý ako hydrochlorid, bolo pridané ďalších 0,5575 μΐ (4,0 μπιοί) Et3N k uvoľneniu volnej bázy. Každá jamka bola podrobená pôsobeniu roztoku 0, 447 mg (0,75 μπιοί) 6- [2-karboxyfenylamino]-3-E- [2- (pyridin-2yl)etenyl]-lH-indazolu rozpusteného v 20 μΐ DMF, nasledované 0, 570 mg (1,5 μπιοί) roztoku HATU rozpusteného v 10 μΐ DMF, a potom bola doštička pretriasaná po dobu 72 hodín pri izbovej teplote.. Hrubé reakčné . zmesi, boli . koncentrované, .s použitím prístroja GeneVac™, a potom nariedené DMSO na konečnú koncentráciu 10 mM.
Zlúčeniny v tabuľke boli testované na inhibiciu proliferácie HUVEC v nominálnej koncentrácii 0,5 a 2 nM pre Y = S a výsledky sú uvedené nižšie, ako boli vyrátané zo vzorca: % inhibicie = (kontrola - ošetrené)/(kontrola - hladovanie) x 100
390
V týchto testovacích podmienkach je >50% inhibície považované za významnú.
Tabuľka knižnice II
R’ 0.5 nM 2nM
19 89
38 2
& 37 16
/ 39 15
35 10
P”1
ý x,' 32 31
5 14
x? 14 55
23 44
Z5 XÍ 25 35
H»C~»Q x/ 30 23
5 19
70 105
Λ x,' 25 15
q P 44 19
£N'ch, H-ch> X,' CH, 38 5
OH P 23 6
391
%-ΟΗ 4 20
O-CHj 21 60
u. 34 61
rO Xí 23 23
r*o 26 37
.. .. x(
A 2 6
32 24
9« rP=° χ/ OH 32 6
no-y^ χΛ OH 48 β
y-’ 45 88
p xf NH* 17 4
392
η X Ο v 18 32
6 43
30 78
34 58
Λ“ χ/ 0« 22 20
Η C P” y 19 28
_ . PH. <Ν· Λ CH, χ{ 6 1
JrCH, χ,' 20 10
CH, r+^a X{ CH, 31 3
V H,C 32 10
/-CH, r-N r-' '-CH, 31 -1
Λ 6 4
Λ 4 29
Λ 23 61
OH 18 24
b 21 15
-
H-ch, b -1 26
/^N ^C-N I x( -6 0
_x Az^o: VJ Λ 1 - í& 5
„o·-· ť 23 17
393
394
Z A 18 22
H-X1 9 30
H°l X, 7 25
Η,σ^χ, 16 17
ϊξσ^χ, 13 31
95 106
59 97
30 86
22 43
Λ
33 64
28 29
x Η,σ'^χ, 31 20
O^x, 42 80
<r* 25 53
CH. 65 110
395
29 58
52 107
CH. 31 36
°yS CH, 4 10
8 23
“-X, 13 20
33 18
cx 20 25
Η,(/°> 62 99
/Sl 6 16
Ck * 17 13
/=^ 19 22
/Ί 39 18
44 5
43 96
396
28 14
v, -6 41
α 12 76
R 33 94
α 27 17
44 28
r- r 55 50
21 90
a, 12 53
•U, 21 64
cr* 35 63
«.OyCH, *<A<, 21 -5
r 1 65
28 103
«» 51 105
44 97
Λ 44 40
»,<<,04, HO^X 47 -4
Η,ίΤθγ^χ, ^CH, 47 89
IO pq
- ch, s rís--- —uv
44 100
o^x, 35 69
16 2
rrs 32 92
92 103
397
9 1
K 56 96
CH. ď 26 2
A^0’· 39 13
•^ys 0 19 5
HC<^X'-X'XX1 24 31
35 106
k 15 36
Ä- 69 59
Ύ\ -11 42
16 42
15 95
20 92
19 -1
X 31 30
-1 14
9 34
’Ύ'^ 6 44
1 52
h^ch, *A. CH, 18 -2
X 9 -9
O 40 94
398
cu, 38 68
25 40
34 99
ď' 30 94
¢5^ 24 99
19 101
20 92
Ou, 15 99
a% 16 37
Os 17 - 23
CU, 70 111
0 60 99
6~' 75 114
81 95
OO'x, 24 86
CH, -3 64
Oys 26 71
14 60
- v yk,
51 108
h 8 37
rys VhS CH, 15 23
.Λ-Λ 20 32
--- 35 63
399
28 47
26 16
Os 18 11
y./-s 13 7
28 69
18 43
ΗΓχχ'Ο^γΖ'Χ™ Xľ 11 47
19 86
- - -. -
y 26 83
cr~·‘ 50 111
400
α Η,νΑ0 21 39
10 29
h ’v’-VS 16 2
22 36
σ' 18 29
25 25
ií^V0'^ 27 80
Λ H,c,z'xcrx'-Z'x^ 30 70
10 23
0-Λ 50 40
51 67
23 51
401
402
Ο,ΙΜ roztoky amínov, trietylaminu a 4-dimetylaminopyridínu boli pripravené oddelene v bezvodnom DMF a prenesené do bezpečnostného boxu. O,1M roztok 6-[2-(karboxy)fenylsulfanyl]3-E-[2-(pyridin-2-yl)etenyl]-ΙΗ-indazolu, príklad 33(g), tetrabutylamónna sol a o-(7-azabenzotriazol-l-yl)-Ν,Ν,Ν',N'tetra-metyluróniumhexafluórfosfát boli pripravené v bezpečnostnom boxu. Do každej skúmavky v zoskupení 8x11 kultivačných skúmaviek (10x75 mm) v bezpečnostnom boxu bolo pridané 100 μΐ (0,01 mmol) odlišných roztokov aminu, nasledované pridaním roztoku 100 μΐ (0,01 mmol) tetrabutylamónium-2-{3—[(E)-2-(2-pyridinyl)etylyl]-lH-indazol6-yl}sulfanyl)benzoátu, roztoku 100 μΐ (0,01 mmol) trietylaminu, roztoku 100 μΐ (0,01 mmol) 4-dimetylaminopyridínu a roztoku 100 μΐ (0,01 mmol) o-(7-azabenzotriazol-l-yl)N, N, N',N'-tetra-metyluróniumhexafluórfosfátu. Reakcie boli miešané vo vyhrievanom bloku v 50 °C po dobu 1 hodiny. Reakcie reakčnej zmesi boli prenesené na 1 ml 96 jamkovej doštičky s použitím multipipety. Rozpúšťadlá boli odstránené s použitím prístroja SpeedVac™ a hrubé reakčné zmesi boli opäť rozpustené v DMSO za vzniku konečnej teoretickej koncentrácie 10 mM.
403
Zlúčeniny v tabulke boli testované na inhibicii proliferácie HUVEC v nominálnej koncentrácii 0,5 nM a výsledky sú uvedené v tabulke III nižšie, ako boli vypočítané zo vzorca:
% inhibícia = (kontrola - ošetrené)/(kontrola - hladovanie) x 100
V týchto testovacích podmienkach je >30% inhibícia považovaná za významnú.
Tabuľka knižnice III
R % inhibícia
1----------------- 1 -1
ή· -17
HO H
ay 4
’ύ 17
o x 6
R % inhibícia
22
... ___X, -19
°'CHa
J F 9
Ϊ’ ό CH, 2
5
404
405
406
407
408
409
410
7
Η·°Λσυ -4
X ΟΗ 4
fi γ ΟΗ 7
- 0—-- ο^'Χ» 7 .
<νΛ 18
f Δ, 11
Ο$ 0 -31
411
“ó CH, -22
“Ä -5
-1
x, H,C--CH, .....£T............. -7
4 -22
-A X^CH, -3
Μα^0Η· 11
x, 4
“φ OH 20
15
°'ô'° -45
-37
f1 HsC.UyCH3 -20
h-0'^ch· -4
f. H,C—4—CH, Hv H3C<CH, 0
412
H,C—τ—CH, Η3σ -29 [
f. ClxJx^CH, V CH, -26
3
'‘ô'1' 8
-- Ty - 12
f. h,c-4-ch, οΛο HjC-j-rCH, CH, 6
H,C'Os|^JxO‘CH, -57
f’ H,C-(-CH, -25
-41
í· hjc'N^N 6 -21
Ä Η,βγ-Ν h,c -28
L w H,C -20
L z -20
ď 3
°ΰ . 11
413
Λ CH, -28
4 OH -10
* Λ -13
13
-7
-13
> OH T CH, -45
414
415
, ľ. HO J OH HO 14
y. / HO J CH. HO ’ 61
£ HO^X .'CH, ηο'ν χη. 9
joo 1
ΟηΛ 1
u
4
CQ X, 1
Cl 8
CX) -15
Cl -12
OH 52
O^CH, 19
-------- 0
o x 13
°-ô -7
fYV*1 OH -26
416
A F—F F 5
x 1
í ΐί*Ί F—τ—F -3
x -13
ó
x «3° CH, -1
417
Ť ó CH, -1
í 16
X. 4
Φ -23
CH, -20
é -15
418
ď- -3
Ah ď -11
n-nh 22
c/ 9 ,
-5
x, Η’Ύ^ CH, OH -19
-6
-12
X, ΗΟγΊ Ó -1
N-NH -7
f' HO, J γΊι 2
£ HO^J -34
UáO -13
h5o.0XX> CH, 13
419
Cl 48
36
T -8
>í^ υ i i -11
H,C.0X^. °*CHa 1
-4
Ť Y Η,Ο*0 10
420
421
CH, -6
CH, 13
Ť φ CH, -1
-----------------------------------------------------------------1----------------------------------------------------------- I i ________ -11
Y 11
I U. 7 15
-8
XAjjOO CH, 1
J, Y F 3
J' X 9
n X O ý I -i-------------------------- 2
Y 6
d> 15
422
ó N 6
0 J» 2
CH, -1
í f· HAoAJ} 3
18
oó.
-17
P -8
p 3
423
0
H3C'N'CHj 18
7
J -6
í (Γί -------------O^NH,-- 2
srS 3
OH 14
424
Μ -7
Η,%ΧΡ °'CH, -3
4
Ť -......... CH, 8
H,C-° «H· 10
Ť 7
ďj XH, -9
46
xí 2
23
5»Ha *1 CC, 11
CH, -10
H,C NH 1Γ O -4
425
/ HO -2
A 5
í -13
Λ O κ,σ -9
°=< θΗ, CH, -2
Λ Ô H.C CH, -6
S^N H S ) H,C 17
426
ά HaC 19
x, Φ OH 18
ô O^O HjCr -24
''-O- 0
a
“ô -6
Ä 3
Λ N^N η,ο^^Ύ’1 CH, -20
* V r° CH, -16
b C CH, -19
1
«M· O 3
r/ h3cA^n · 6
Ť 18
có
427
JS H-CKs HO k. ^OH -18
•X' H,c'° -9
fl 04 2
y 14
-10
Ť Ô HSC'Š -7
X 4
CH, 11
á H,C H 11
Λ CH, 8
H,C-£-CH, CH, 23
ktzXjU* Η,Ο^'Χ, V
x<Sh, -20
J 0
428
7 57
Cl 24
x, (ý· 1
f. h,cxjCHs ......... CH,---- -10
-8
-2
5
429
Tabuľka 4
0 N\ x
R jf v
R CHK-1 ©20μΜ
Cŕ 30,6
28,3
Ηθχ^\>ς 22?5
QT 21,7
d 40
ΟγΌ NH, 27,8
20,2 .
57,7
35,5
430
>cŕ 24,2
31,1
13,7
y 23,9
48,6
19,5
32,3
0¼ 24,9
ΝΗ. °Χι 25,8
ΧΓ 94,9
<xr 38,7
ν .72
431
α 21,1
αΤ 31,4
πο-Ο. 28,3
CH, 28,δ
Ο 28,1
25,7
ηο'Ί'Ο· 23,9
α 36,3
α 45,4
32,7
24,7
432
52,7
’9γς Ν^Ν 38,6
23,6
39,8
28,1
33
γ 52,4
38,6
32,3
42,9
24,1
Π^η ότ 31,6
433
Tabulka 5
% inhibície @ 1 μΜ
Príkladč. Tie2-P FAK
41(a) 50 5
41(ee) 41 7
41(p) 49 9
41(r) 56 5
41(t) 51 9
48(a) 52 11
31(d) 46 6
33(a) 35 12
35(k) 55 7
35(dd) 48 4
35(n) 82 1
35(cc) 47 7
434
l(a) 95* 69*
3 NI* 26*
8(a) 55* 3*
2(d) 90* NI*
8(c) 31* 15*
9(b) 88* NI*
10 20* NI*
17 50
— . - — ’ -
4(a) 69
11 40
4(b) 29
2(c) - NI
22(a) 8
23 5
435
22(b) NI
21 27
12(a) NI
19(a) 18
19(c) NI
12(c) 17
19(d) 15
5(a) 44
—i€(a)--- 1Ό-----
16(b) 52
24(a) 91*
24(10 92*
24(c) 94
30(a) 19
436
8(d) 10
* zlúčenina testovaná v koncentrácii 10 μΜ
Hodnoty uvedené tučným písmom sa týkajú výsledkov spektrofotometrických testov, hodnoty uvedené netučným písmom boli získané v testu DELFIA
Stanovenie koncentrácie inhibítoru v myšacej plazme po intraperitoneálnom a perorálnom podávaní dávky
Dávkovací roztok sa skladal z inhibítora rozpusteného v jednom z nasledujúcich vehikúl: buď 30% alebo 60% vodný roztok polypropylénglykolu s molárnym ekvivalentom HC1 vo vode alebo 0,5% karboxymetylcelulóza vo vode. Konečná koncentrácia bola normálne 5 mg/ml s dávkovacím objemom 5 nebo 10 ml/kg. Samiciam myší od firmy Taconic (Germantown, NY) bola podávaná dávka ako funkcie hmotnosti zlúčeniny k telesnej hmotnosti, obvykle 50 nebo 25 mg/kg. Krvné odbery boli prevádzané z očnej žily v 0,5, 1, 4 hodinách s konečným časovým bodom 7 hodín, kedy bola krv odoberaná intrakardiálnou punkciou. Krv bola stočená, aby sa zobrala plazma, ktorá potom bola uložená v 80 °C do prevádzania analýzy. ' Vzorky boli pripravené pre analýžu s použitím vnútorného štandardu a hydroxidu sodného. Po vortexovaní bol pridaný etylacetát a miešaný po dobu 15-20 minút pri izbovej teplote. Po centrifugácii bola výsledná organická vrstva evaporovaná a potom rekonštituovaná v acetonitrilu a pufru. Vzorky potom boli analyzované prostredníctvom HPLC nebo LC-MS.
Hladiny zlúčeniny boli kvantifikované pomocou štandardnej krivky známej koncentrácie zlúčeniny v myšacej plazme. Hladiny
437 zlúčeniny boli vynesené do grafu ako funkcie času a analyzované určením plochy pod krivkou koncentrácie (AUC ng*hr/ml), maximálna koncentrácia (Cmax ng/ml), minimálna koncentrácia (Cmin alebo za 7 hodín ng/ml) a konečný biologický polčas (Tl/2 hodín). Výsledky sú ukázané v tabuľke
6.
Tabuľka 6
Príklad č. Spôsob Dávka mg/kg ADCposledni (ng*hr/ml) Cmax (ng/ml) Cmin (7 h kone.) (ng/ml) Tva 8 (h) Vehikulum PEG400:H20. pH 2,3
1 (a) IP 50 691 283 2,4 30:70
19 (b) PO 50 NA 30 • 60:40
19Q) IP 25 23205 5764 456 1,6 60:40
19 0) PO 50 5889 1937 63 1.2 60:40
19 (k) IP 25 426 149 15 2,2 60:40
19 (k). PO 50 19 8 4 2,2 60:40
31 (aL IP 25 47538 13018 1906 2,4 30:70
31 (a) PO 50 40863 14499 834 1,6 30:70
31 (b) IP 25 >7037 >2000 177 í 7 30:70
31 (b). PO 50 2071 1100 15 1,0 30:70
31 (d) IP 25 237784 64184 15073 5,3 30:70
31 (d) PO 10 49120 9740 2022 3,1 30:70
31 (d) PO 25. 203860 50810 3801 1,9 30:70
31 (d) PO 50 430683 76915 42478 38,3 30:70
31 (e) PO 25 >30339 >5000 2952 13,1 30:70
PO 25 >244545 >50000 9521 2,6 30:70
32 (a) IP 25 >20554 >4000 1273 3,7 30:70
32 (a) PO 50 4190 1746 40 1,1 30:70
32 (b) PO 25 .490 179— -48— -íM- —3017G--
32 (C) PO 25 388 161 10 2,4 30:70
33 (a) IP 25 13813 13794 54 1,1 3Q:70 .
33 (a) PO 100 3556 90 0.5% CMC
33 (a) PO 25 721 66 0.5% CMC
33 (a) PO 50 19067 23562 25 0,8 30:70
33 (b) IP 25 11245 1990 902 3,0 60:40
33 (b) PO 50 3925 1496 76 3,0 60:40
33(0, IP 25 697 505 7 1,2 30:70
33 (c) PO 50 183 94 5 3,0 30:70
33(dl IP 25 5080 1738 113 1,6 60:40
33 (d) PO 50 4744 1614 8 0,9 60:40
33 (e) ÍP 25 14323 9938 94 1,0 30:70
33(e) PO 50 13290 9967 12 0,7 30:70
33 (t) | IP 25 1887 1699 6 2,4 30:70
438
33 (f) PO 50 1436 1186 3 AL. 30:70
35 (a) IP 25 2032 2138 24 1A. 30:70
35 (a) PO 50 2445 1780 • 10 0,9 30:70
35 (aa) PO 25 · 4036 4168 106 2,1 30:70
35 (b) IP 25 2840 1509 12 0,8 30:70
35 (b) PO 50 4048 5595 13 o 00 30:70
35 (c) IP 25 9408 1976 465 AA 30:70
35 (c) . PO 50 4744 909 321 AA 30:70
35 (cc) IP 25 2223 3183 6 AL 30:70
35 (cc) PO 50 1718 1439 5 0,9 30:70
35 (dd) IP 25 >23046 >4000 1364 AL 30:70
35 (dd) PÓ 25 1360 444 58 AA 0,5% CMC
35 (dd) PO 25 >6521 >4000 114 M 30:70
35 (e) IP 25 2409 1272 65 1,8 30:70
35 (e) PO 50 1503 1043 6 0,9 30:70
35 (ee) IP 25 546 579 2 1,5 30:70
35 (ee) PO 25 157 77 9 14,6 30:70
35 (f) IP 25 397 131 25 3,8 30:70
35(f) PO 50 358 93 27 3,6 30:70
35 (ff) IP 25 >6301 >4000 72 AL 30:70
35 (ff) PO 25 Blq blq . blq 30:70
35 (g) PO 25 231 61 28 16,1 30:70
35 (h) IP 25 59 46 1 1,5 30:70
35 (h) PO 50 26 7 2 w 30:70
35{hhl PO 9*; 9Q9 991 c -1-7- —--
---£íM--
35 0) PO 25 30:70
35 (j) IP 25 9531 8606 52 1,3 30:70
35 G). PO 50 1328 2176 5 4,5 30:70
35 (k) IP 25 2640 2189 35 1f4 30:70
35 (k) PÓ 50 5529 4524 33 1,4 30:70
35 (m) IP 25 226 58 17 4,0 30:70
35 (m) PO 25 10 7 0 « 30:70
35 (n) PO 25 4818 3545 55 1,4 30:70
-354o) PO 25 683 486 3 ‘ ’ 1,0 30:70
35(p) PO 25 1435 1958 5 1,3 30:70
35 (r) PO 25 4261 2601 67 1,3 30:70
35 (s) PO 25 7425 3371 86 2,2 30:70
35(t) PO 25 3199 2801 41 1,1 30:70
35 (u) PO 25 30:70
35(v) IP 25 4865 2215 16 0,9 30:70
35 (v) PO 50 >2946 >2000 26 1,0 30:70
35 (x) IP 25 951 781 48 3,2 30:70
35 (x) PO 50 3516 2313 16 0,9 30:70
• 35 (y) IP 25 159 135 2 1,2 30:70
35 (y) PO 50 58 45 1 .AA 30:70
439
35 (z) IP 25 837 556 22 1A. 30:70
35 (z) PO 50 100Ϊ 806 14 ±6. 30:70
36 (a) PO 25 605 445 17 30:70
37 (a) PO 25 30:70
37(0 PO 25 2419 2338 9 ϋ 30:70
39 (a) PO 25 >14848 >4000 219 1,4 30:70
39 (b) PO 25 >30972 >5000 3148 11,8 30:70
4 (a) PO 50 NA 50 NA 60:40
41 (a) IP 25 92823 32202 3856 2.9 30:70
41 (a) PO 50 48998 18433 2462 30:70
41 (aa) IP 25 6659 2427 124 2,1 60:40
41 (aa) PO 50 289 259 5 0,9 60:40
41 (b) IP 25 >5868 >1000 412 4.7 60:40
41 (bL PO 50 759 532 6 1.1 60:40
41(bb) PO 50 2178 596 75 2,0 30:70
41(0 ’P 25 3397 2068 57 1.7 60:40
41(0 PO 50 3182 1296 104 -2Λ 60:40
41 (d) IP 25 10324 2787 573 2jB 60:40
41(0 PO 50 7072 2954 150 1.5 60:40
41 (dd) PO 25 654 542 1 0,8 30:70
41 (eĹ IP 25 4900 1154 301 1,6 60:40
41 CeL PO 50 302' 113 7 1.6 60:40
41 (ee) IP 25 >28434 >5000 1670 4,0 30:70
41 (ee) PO 50 >25294 >5000 1214 3,4 30:70
41 (ff) PO 25 9176 - -2784— —410— ——30^0--
41 (gl IP 25 1925 1583 0 0.3 60:40
41 (gl PO 50 508 842 1 0,7 60:40
41 (gg) PO 25 2692 2079 29 1.1 30:70
41 (hl IP 25 26911 16005 300 1,2 30:70
41 (h) PO 50 4677 4080 7 0.7 30:70
41 (hh) PO 25 5601 1526 405 7,9 30:70
41 «) IP 25 1854 623 102 3.1 30:70
41 (1) PO 50 212 104 0 0,5 30:70
41 0i) PO 25 7094 1826 346 2,3 .30:70. . .
41 (Ô PO 25 1476 1'008 17. 1.3 30:70
41 (kk) PO 25 11612 3709 415 2,0 30:70
41 (m) f IP 25 1864 501. 54 2,3 30:70
41 (m) PO 50 9 5 0 blq 30:70
41 (mm) PO 25 2261 852 127 2,5 30:70
41 (n) IP 25 9408 1976 465 3.2 30:70
41 (n)- PO 50 9066 2245 253 1.9 30:70
.4,1(21, IP 25 >33750 >5000 >5000 • 30:70
41 (Q), PO 50 14717 4776 427 1.7 30:70
41 (p) IP 25 4150 866 380 5,5 30:70
41 (q). IP 25 >27000 >4000 >4000 * 30:70
440
41 (q) PO 25 8572 1901 457 5,2 30:70
41 (r) IP 25 > 23752 >5000 >5000 • 30:70
41 (r) i PQ 50 >17789 >5000 >5000 • 30:70
41 (t) PO 25 >22498 >4000 1350 4,0 30:70
41 (u) PO 25 875 224 , 51 5,6 30:70
41 M- PO 25 10949 2338 749 4r4 30:70
41 (X) PO 25 24174 4587 1268 V 30:70
41 (yl PO 25 Blq Blq Wq. blq 30:70
42(8}. IP 25 19899 4027 1639 5,0 60:40
42 (al PO 50 8384 3264 341 2,0 60:40
42 (b) IP 25 3207 953 211 3,0 60:40
42 (b) PO 50 4747 2589 46 3,0 60:40
42 (dL IP 25 1774 886 31 í4 Γ 60:40
42 (d) PO 50 46 28 18 BLQ 60:40
45 (b) IP 25 11361 2636 1123 2,0 60:40
45 (b) PO 50 1636 427 102 3,0 60:40
47 IP 25 236 39 29 19,9 30:70
47 PO 50 327 84 25 3,4 30:70
59(a) PO 25 50780 15878 1205 1,6 0,5% CMC
48 (a) IP 25 27000 4000 4000 • 30:70
48 (a) PO 25 26636 4000 3857 * 30:70
48 (b) PO 25 2191 476 136 4 30:70
49 (a) PO 25 712 342 15 30:70
49(bli PO -25 33750 5000 5000 30:70
5 (b) PO 10 61 . 12 3,1 60:40
_- ltO 0?5%OMCT
50 (3) r . 8— 7707 . c4o9 1ZZ
59 (a) PO 40 57240 13798 1879 2,4 0,5% CMC
59 (a) PO 200 156153 29975 12117 9,4 0,5% CMC
59 (b) PO 50 276467 50000 26880 CMC
59 (c) PO 25 327135 50000 43090 CMC
59 (d) PO 8 > 24696 >5000 1902 0,5% CMC
59 (d) PO 40 >32297 >5000 4135 0,5% CMC
59 (d) PO 200 >123206 >20000 12743 0,5% CMC
59 (e) PO 25 12510 28834 2135 21 0,5% CMC
In vivo test rozvoja retinálnej vaskularizácie u neonatálnych laboratórnych potkanov
Rozvoj retinálnej vaskularizácie neonatálnych laboratórnych potkanov sa deje od 1.
Postnatálneho dňa do 14.
Postnatálneho
Tento proces je závislý na aktivite VEGF (J. Stone, et al.,
J. Neurosci.,
15, 4738, práce preukázali, že VEGF tiež pôsobí ako faktor prežitie pre cievy retiny počas časného rozvoje vaskularizácie (Alon, et. al, Nat. Med., 1,
1024, 1995). Pre
441 stanovenie schopnosti špecifických zlúčenín inhibovať aktivitu VEGF in vivo boli zlúčeniny formulované vo vhodnom vehikule, obvykle 50% polyetylénglykolu, priemernej molekulovej hmotnosti 400 daltónov, a 50% roztoku 300 mM sacharózy v deionizovanej vode. Typicky boli injikované dva mikrolitre (2 μΐ) roztoku liečiva na stredu sklovca oka mláďat laboratorného potkana 8. alebo 9. Postnatálny deň. Šesť dní po injekcii do sklovca bola zvieratá utratená a retiny boli rezom uvolnené od ostatného očného tkaniva. Izolované retiny potom boli podrobené protokolu histochemického značenia, ktoré farbia špecificky endotelové bunky (Lutty a McLeod, Árch. Ophthalmol., 110, 267, 1992), a tak odhaľuje vaskularizáciu vo vzorke tkaniva. Jednotlivé retiny potom boli fixované na podložných sklíčkach a vyšetrené, aby sa určil rozsah vaskularizácie. Účinné zlúčeniny inhibovali ďalší rozvoj retinálnej vaskularizácie a indukovali regresiu všetkých ciev, okrem tých najväčších, v retine. Stupeň cievnej regresie bol použitý k stanoveniu relatívnej .účinnosti zlúčenín po in vivo podávaní. Cievna regresia je odstupňovaná podľa subjektívnej stupnice jedným až tromi krížikmi, pričom jeden krížik znamená detekovateľnú regresiu usudzovanú na približne 25 percent alebo menej, dva krížiky sú prisúdené približne 25-75 % regresii a tri krížiky sú dávané retinám s takmer celkovou regresiou (približne 75% alebo väčší).
Pre presnejšiu kvantitatívnu analýzu regresie boli obrazy ADPázou označených fixovaných retín, ktoré boli nasnímkované digitálnou kamerou pripojenou k mikroskopu. Obrazy retiny potom boli importované do softwaru pre analýzu obrazu (Image Pro Plus 4,0, Média Cybernetics, Silver Spring, MD) . Software bol použitý k určeniu percenta oblasti retiny, ktorá obsahovala ofarbené cievy. Táto hodnota pre experimentálne oko bola zrovnávaná s hodnotou nameranou pre injikované vehikulum kontralaterálneho oka toho istého zvieraťa. Redukcia
442 vaskulárnej oblasti pozorovaná v oku, ktoré dostalo zlúčeninu v zrovnaní s okom injikovaným vehikulom, potom bola exprimovaná ako „percento regresie pre danú vzorku. Hodnoty percent regresie boli dané do priemeru pre skupiny 5 až 8 zvierat.
Vo vzorkách, v ktorých pozorovanie mikroskopom ukázalo takmer úplnú regresiu, bola rutinne meraná hodnota percenta regresie 65-70 %. To bolo spôsobené farbením depozit v záhyboch retiny, záhyby boli indukované vehikulom použitým pre injekcie liečiva. Software pre analýzu obrazu interpretovalo tieto záhyby obsahujúce farbivo ako cievy. Nebol učinený žiadny pokus korekcie týchto záhybov, pretože sa menili od oka k oku. Je teda nutné poznamenať, že hodnoty percenta regresie sa týkajú výsledku konzervatívneho merania, ktoré síce presne určuje poradie zlúčenín, ale podceňuje ich absolútnu účinnosť.
In vivo test rozvoja retinálnej vaskularizácie v modelu retinopatie nedonosených neonatálnych laboratórnych potkanov
Druhý model na VEGF závislej retinálnej neovaskularizácie bol použitý k vyhodnoteniu aktivít tohto radu zlúčenín. V tomto modelu (Penn et. al, Invest. Ophthalmol. Vis. Sci., 36, 2063, 1995) sú mláďatá laboratórneho potkana (n = 16) so svojimi matkami vložená do počítačom riadenej komory, ktorá reguluje koncentráciu kyslíka. Zvieratá sú exponovaná po dobu 24 hodín koncentrácii 50% kyslík, potom nasleduje 24 hodín v koncentrácii 10% kyslíka. Tento striedavý cyklus hyperoxie nasledované hypoxiou je opakovaný 7 krát, a potom sú zvieratá prenesená do vzduchu miestnosti (P14) . Zlúčeniny sú podávané injekciou do sklovca po prenesení do vzduchu miestnosti a zvieratá boli usmrtené 6 dní neskoršie(P20) . Izolované retiny potom boli izolované, ofarbené na sklíčku a analyzované, ako
443 uvedené v detailu vyššie v modelu rozvoja. Účinnosť bola také hodnotená tak, ako je popísané pre model rozvoja.
Tabuľka 7
Príklad č. Model | Počiatočné j hodnotenie ; inhibicia Kone. (mg/ml) Vehikulum PEG/voda
16(e) ROP ++ 36% 5 70:30
16(8) ROP +++ 54% 10 70:30
W ROP ··· ++....... 37% 5 70:30
16(6) ROP 4/- 16% 1 70:30
19(b) ROP ++ 10 70:30
19<f) PB +/++ 5 50:50
19φ ROP V- 10 70:30
19(0 ROP — 1 70:30
19(k) ROP 10 70:30
19(k) ROP - 1 70:30
30(a) ROP ++ 10 70:30
30(a) ROP ++ 48% 10 70:30
31(8) P8 46% 5 70:30
31(b) P8 32% 5 50:50
444
31 (C) P8 +/++ var, 5 50:50
31(d) P8 12% 5 50:50
31 (e) P8 - 24% 5 50:50
32(a) P9 20% 5 50:50
33(b) ROP -hr 55% 10 70:30
33(b) ROP 14% 1 70:30
33(b) P6-P10 37% IP’ 70:30 .
33(e) P8 22% 5 70:30
33(f) P8 20% 5 50:50
35(a) P8 4% 5 50:50
35(aa) P8 5 50:50
35(c) P8 0% 5 50:50
35(cc) P8 +/++. 5 50:50
35(dd) ... ____P8_ . 5 50:50
35(ee) pa +/++ 5 50:50
35(h) P8 +/- 5 50:50
35® PS +/++ 5 50:50
35(j) P8 7% 5 50:50
35(k) pa - - - 5 ' 50:50
35(k) Ρ8 ++ 5 50:50
35(v) P8 20% 5 50:50
38(a) ROP 55% 10 70:30
38(a) ROP 16% 1 70:30
39(b) P8 9% 5 50:50
445
4(a) ROP ++ 10 70:30
41(a) ROP +++ 64% 10 70:30
41 (a) P8 0%. 0.5 50:50
41 (a) P8 ’ 4% 1 50:50
41 (a) P8 ++/+++ 5 50:50
41(C) ROP +++ 54% 10 70:30
41(c) ROP +/- 16% 1 70:30
41 (c) P8 ++ — 5 50:50
41 (d) ROP +++ 59% 10 70:30
41(0) ROP 0% 1 70:30
41(e) P8 8% 5 50:50
41 (ee) P8 +/++ var. 5 50:50
41(g) P8 37% 5 50:50
W Pä —0%— --5~— —70:30—
410) P8 +/++ 5 50:50
41 (k) P8 1% 5 50:50
41(1) P8 28% 2.5 70:30
41 (m) P8 10% 5 .50:50
41 (mm) - - P8- + ------- - - 5 - - 50:50-
41(n) P8 2% 5 50:50
41(0) P8 2% 5 50:50
41(p) P8 35% 5 50:50
41(r) ΡΘ +/++ var. 5 50:50
ROP -H-+ 23% 10 70:30
446
42(a) ROP + 1% 1 70:30
42(a) ROP + 10 70:30
42(a) P9 55% 10 70:30
42(a) P6-P10 61% ip* 70:30
42(a) Ρ8 +/++ 5 50:50
42(b) P9 40% 10 70:30
42(C) P8 36% 5 50:50
45(b) ' ROP ++ 60% 10 70:30
45(b) ROP -h/- 25% 1 70:30
49(a) P8 54% 5 50:50
49(b) P8 5% 5 50:50
5(b) ROP ++ 45% 5 70:30
59(a) ROP 41% 10 0.5%CMC
59(a) ROP 19% 1 0.5%CMC
6(a) ROP ++ 5 65:35
6(b) ROP ++ 10 70:30
Kináza fosforylázy
Konštrukt kinázy fosforylázy pre test
Skrátená katalytická podjednotka (podjednotka gama) kinázy fosforylázy (aminokyseliny 1 až 298) bola exprimovaná v E. Coli a izolovaná z inklúznych teliesok. Kináza fosforyláza potom bola znovu zložená a uložená v glycerolu v -20 C.
447
Test kinázy fosforylázy.
V testu bola použitá purifikovaná katalytická podjednotka k fosforylácii fosforylázy b s použitím rádioaktívne označeného ATP. Stručne, 1,5 mg/ ml fosforylázy b bolo inkubované s lOnM kinázy fosforylázy v lOmM MgCl2z 50mM Hepes, pH 7,4, v 37 ’C. Reakcia bola spustená pridaním ATP do 100 μΜ a inkubovaná po dobu 15 minút v 25 °C alebo 37 ’C. Reakcia bola ukončená a proteíny boli precipitované pridaním TCA do 10% konečnej koncentrácie. Precipitované proteíny boli izolované na 96 jamkových filtračných doštičkách Millipore MADP NOB. Filtračné doštičky potom boli dôkladne premyté 20% TCA a usušené. Potom bola na doštičky pridaná scintilačná tekutina a inkorporovaná rádioaktívna značka bola počítaná na Wallacove mikropočítači beta impulzov. % inhibicie transferu fosfátu z ATP na fosforylázu b v prítomnosti. 10 μΜ zlúčeniny je.ukázané v tabulke 8 nižšie.
Tabulka 8
Príklad č. % inhibícia @ 10 μΜ
52 (b) 92
27 (f) 90
27 (a) 37
Príklady zlúčeniny popísaných vyššie môžu byť formulované do farmaceutických prípravkov podía nasledujúcich obecných príkladov.
448
Príklad 1
Parenterálny prípravok
Aby sa pripravil parenterálny farmaceutický prípravok vhodný pre podávanie injekcií, bolo rozpustené 100 mg vo vode rozpustnej soli zlúčeniny vzorca I v DMSO, a potom zmiešané s 10 ml 0,9% sterilného fyziologického roztoku. Zmes je formulovaná do jednotkovej dávkovej formy vhodnej pre podávanie injekcii.
Príklad 2
Perorálny prípravok
Aby sa pripravil farmaceutický prípravok pre perorálne podávanie, bolo zmiešané 100 mg zlúčeniny vzorca I so 750 mg laktózy. Zmes bola formulovaná do perorálnej dávkovej jednotky, ako je napríklad tvrdá želatínová tobolka, ktorá je vhodná pre perorálne podávanie.
Príklad 3
Intraočný prípravok
Aby sa pripravil farmaceutický prípravok s predĺženým uvoľňovaním pre intraočné podávanie, bola zlúčenina vzorca I suspendovaná v neutrálnom, izotonickom roztoku hyalurónovej kyseliny (1,5% kone.) vo fosfátovom pufri (pH 7,4) za vzniku 1% suspenzie.
449
Je treba rozumieť, že predchádzajúci popis je uvedený ako príklad a vysvetlenie výhodných prevedení vysvetlujúcich povahy a je zamýšľaný pre ilustráciu vynálezov a jeho výhodných prevedení. Na základe rutinných experimentov odborník ľahko nájde modifikácie a variácie, ktoré môžu byť vytvorené bez odchýlenia sa od vynálezcovskej myšlienky. Predpokladá sa teda, že rozsah vynálezu nie je definovaný vyššie uvedeným popisom, ale pripojenými patentovými nárokmi a ich ekvivalentmi.

Claims (17)

  1. PATENTOVÉ NÁROKY
    450
    1. Zlúčenina vzorca I:
    kde:
    R1 je nesubstituovaná arylová skupina alebo substituovaná alebo nesubstituovaná heteroarylové skupina alebo skupina
    CH=CH-R3 alebo
    CH=N-R3, kde R3 je substituovaná vzorca alebo nesubstituovaná alkylová skupina, alkenylová skupina, cykloalkylová skupina, heterocykloalkylová skupina, arylová skupina alebo heteroarylové skupina a
    R2 je substituovaná alebo nesubstituovaná arylová skupina, heteroarylové skupina alebo skupina Y-X, kde Y je atóm O, S, skupina C=CH2, skupina C=O, S=O, SO2, alkylidén, skupina NH alebo N-alkylová skupina obsahujúca 1 až 8 atómov uhlíka a X je substituovaná alebo nesubstituovaná Ar, heteroarylové skupina, NH-alkylová skupina, NH-cykloalkylová skupina, NHheterocykloalkylová skupina, NH-arylová skupina, NHheteroarylová skupina, NH-alkoxyskupina alebo NHdialkylamidoskupina, kde Ar je arylová skupina, alebo jej farmaceutický prijateľný prekurzor, farmaceutický aktívni metabolit lebo farmaceutický prijateľná soľ.
    451
  2. 2. Zlúčenina vzorce I(a) :
    kde:
    R1 je substituovaná alebo nesubstituovaná arylová skupina alebo heteroarylová skupina alebo skupina vzorce CH=CH-R3 alebo CH=N-R3, kde R3 je substituovaná alebo nesubstituovaná alkylová skupina, alkenylová skupina, cykloalkylová skupina, heterocykloalkylová skupina, arylová skupina alebo heteroarylová skupina a
    R2 je substituovaná alebo nesubstituovaná arylová skupina alebo skupina Y-Ar, kde Y je atóm O, S, skupina C=CH2, skupina C=0, skupina S=0, skupina S02, skupina CH2, skupina CHCH3, skupina NH alebo N-alkylová skupina obsahujúca 1 až 8 atómov uhlíka a Ar je substituovaná alebo nesubstituovaná arylová skupina, alebo jej farmaceutický prijateľný prekurzor, farmaceutický aktívny metabolit alebo farmaceutický prijateľná soľ.
  3. 3. .'TAučenina vzorce II:
    452 kde:
    R1 je substituovaná alebo nesubstituovaná arylová skupina alebo heteroarylová skupina .alebo skupina vzorca CH=CH-R3 alebo CH=N-R3, kde R3 je substituovaná alebo nesubstituovaná alkylová skupina, cykloalkylová skupina, heterocykloalkylová skupina, arylová skupina alebo heteroarylová skupina,
    R4 a R7 sú každý nezávisle atóm vodíka, skupina OH, atóm halogénu, alkylová skupina obsahujúca 1 až 8 atómov uhlíka, alkoxyskupina obsahujúca 1 až 8 atómov uhlíka, alkenylová skupina obsahujúca 1 až 8 atómov uhlíka, aryloxyskupina, tioarylová skupina, skupina CH2-OH, CH2-0-alkylová skupina obsahujúca 1 až 8 atómov uhlíka, CH2-0-arylová skupina, CH2-Salkylová skupina obsahujúca 1 až 8 atómov uhlíka alebo CH2-Sarylová skupina,
    R5 a R6 sú každý nezávisle atóm vodíka, skupina OH, atóm halogénu, Z-alkylová skupina, Z-arylová skupina alebo skupina Z-CH2CH=CH2, kde Z je atóm 0, S, skupina NH alebo skupina CH2 a alkylová skupina a arylová skupina zo Z-alkylovej skupiny a Zarylovej skupiny je každá volitelne substituovaná, alebo jej farmaceutický prijateľný prekurzor, farmaceutický aktívny metabolit alebo farmaceutický prijatelná soľ.
  4. 4. Zlúčenina, jej farmaceutický prijateľný prekurzor, farmaceutický aktívny metabolit alebo farmaceutický prijatelná soľ podľa nároku 3, kde:
    R1 je substituovaná alebo nesubstituovaná bicyklická heteroarylová skupina alebo skupina vzorce CH=CH-R , kde R je substituovaná alebo nesubstituovaná arylová skupina alebo heteroarylová skupina,
    453
    R4 a R7 súkaždý nezávisle atóm vodíka alebo alkylová skupina obsahujúca 1 až 8 atómov uhlíka a
    R5 a R6 sú každý nezávisle atóm halogénu, Z-alkylová skupina alebo skupina Z-CH2CH=CH2, kde Z je atóm 0 alebo S a alkylová skupina je voliteľne substituovaná.
  5. 5. $učenina vzorce III:
    H H kde:
    R1 je substituovaná alebo nesubstituovaná arylová skupina alebo heteroarylová skupina alebo skupina vzorce CH=CH-R3 alebo CH=N-R3, kde R3 je substituovaná alebo nesubstituovaná alkylová skupina, cykloalkylová skupina, heterocykloalkylová skupina, arylová skupina alebo heteroarylová skupina,
    Y je atóm 0, S, skupina C=CH2, skupina C=0, skupina S=0, skupina S02, skupina CH2, skupina CHCH3, skupina NH alebo N-alkylová skupina obsahujúca 1 až 8 atómov uhlíka,
    R8 je substituovaná alebo nesubstituovaná alkylová skupina, alkenylová skupina, cykloalkylová skupina, heterocykloalkylová skupina, arylová skupina, heteroarylová skupina, alkoxyskupina alebo aryloxyskupina,
    R10 je nezávisle vybratý zo skupiny, ktorou tvorí atóm vodíka, atóm halogénu a nižšia alkylová skupina
    454 alebo jej farmaceutický prijateľný prekurzor, farmaceutický aktívny metabolit a farmaceutický prijateľná soľ.
  6. 6. Zlúčenina, jej farmaceutický prijateľný prekurzor, farmaceutický aktívny metabolit alebo farmaceutický prijateľná soľ podľa nároku 5, kde:
    R1 je substituovaná alebo nesubstituovaná bicyklická heteroarylová skupina alebo skupina vzorca CH=CH-R3, kde R3 je substituovaná alebo nesubstituovaná arylová skupina alebo heteroarylová skupina,
    Y je atóm 0, S, skupina C=CH2, skupina C=0, skupina NH alebo N-alkylová skupina obsahujúca 1 až 8 atómov uhlíka,
    R® je substituovaná alebo nesubstituovaná arylová skupina, heteroarylová skupina, alkylová skupina a alkenylová skupina a R10 je atóm vodíka alebo atóm halogénu.
  7. 7. Zlúčenina vzorca III(a):
    kde:
    R1 je substituovaná alebo nesubstituovaná arylová skupina alebo heteroarylová skupina alebo skupina vzorca CH=CH-R3 alebo CH=N-R3, kde R3 je substituovaná alebo nesubstituovaná alkylová skupina, cykloalkylová skupina, heterocykloalkylová skupina, arylová skupina alebo heteroarylová skupina,
    455
    Y je atóm O, S, skupina C=CH2, skupina C=O, skupina S=O, skupina SO2, skupina CH2, skupina CHCH3, skupina NH alebo N-alkylová skupina obsahujúcal až 8 atómov uhlíka,
    R8 je substituovaná alebo nesubstituovaná alkylová skupina, alkenylová skupina, cykloalkylová skupina, heterocykloalkylová skupina, arylová skupina, heteroarylová skupina, alkoxyskupina alebo aryloxyskupina, alebo jej farmaceutický prijateľný prekurzor, farmaceutický aktívny metabolit alebo farmaceutický prijateľná soľ.
  8. 8. Zlúčenina, jej farmaceutický prijateľný prekurzor, farmaceutický aktívny metabolit alebo farmaceutický prijateľná sol podľa nároku 7, kde:
    R1 je substituovaná alebo nesubstituovaná bicyklická heteroarylová skupina alebo skupina vzorca CH=CH-R3, kde R3 je substituovaná alebo nesubstituovaná arylová skupina alebo heteroarylová skupina,
    Y je atóm O, S, skupina C=CH2, skupina C=0, skupina NH alebo N-alkylová skupina obsahujúca 1 až 8 atómov uhlíka a
    R8 je substituovaná alebo nesubstituovaná arylová skupina, heteroarylová skupina, alkylová skupina alebo alkenylová skupina.
  9. 9. Zlúčenina, jej farmaceutický prijateľný prekurzor, farmaceutický aktívny metabolit alebo farmaceutický prijateľná soľ podľa nároku 7, kde:
    R1 je CH=CH-R3, kde R3 je substituovaná alebo nesubstituovaná arylová skupina,
    Y je atóm O alebo S a
    456
    R8 je substituovaná alebo nesubstituovaná arylová skupina alebo heteroarylová skupina.
  10. 10. Zlúčenina vzorca IV.
    R1 je substituovaná alebo nesubstituovaná arylová skupina alebo heteroarylová skupina alebo skupina vzorca CH=CH-R3 alebo CH=N-R3, kde R3 je substituovaná alebo nesubstituovaná alkylová skupina, cykloalkylová skupina, heterocykloalkylová skupina, arylová skupina alebo heteroarylová skupina,
    Y je atóm O, S, skupina C=CH2, skupina C=O, skupina S=O, skupina SO2, skupina CH2, skupina CHCH3, skupina NH alebo N-alkylová skupina obsahujúca 1 až 8 atómov uhlika,
    R9 je substituovaná alebo nesubstituovaná alkylová skupina, cykloalkylová skupina, heterocykloalkylová skupina, arylová skupina, heteroarylová skupina, alkoxyskupina, aryloxyskupina, cykloalkoxyskupina, NH-alkylová skupina obsahujúca 1 až 8 atómov uhlíka, NH-arylová skupina, NH-heteroarylová skupina, N=CH-alkylová skupina, skupina NH(C=O)RU alebo skupina NH2, kde R11 je nezávisle vybratý zo skupiny, ktorú tvorí atóm vodíka, substituovaná alebo nesubstituovaná alkylová skupina, cykloalkylová skupina, heterocykloalkylová skupina, arylová skupina a heteroarylová skupina a
    R10 je nezávisle vybratý zo skupiny, ktorú tvorí atóm vodíka, atóm halogénu a nižšia alkylová skupina
    457 alebo jej farmaceutický prijatelný prekurzor, farmaceutický aktívny metabolit a farmaceutický prijateľná soľ.
  11. 11. Zlúčenina, jej farmaceutický prijateľný prekurzor, farmaceutický aktívny metabolit alebo farmaceutický prijateľná soľ podľa nároku 10, kde:
    R1 je skupina vzorce CH=CH-R3, kde R3 je substituovaná alebo nesubstituovaná arylová skupina alebo heteroarylová skupina,
    Y je atóm S alebo skupina NH a
    R9 je substituovaná alebo nesubstituovaná alkylová skupina, alkoxyskupina alebo NH-heteroarylová skupina.
  12. 12. Zlúčenina, jej farmaceutický prijateľný prekurzor, farmaceutický aktívny metabolit alebo farmaceutický prijateľná soľ, vybrané zo skupiny, ktorú tvoria:
    458
    459
    460
    461
  13. 13. Farmaceutický prípravok vyznačujúci sa tým že obsahuje:
    (a) terapeuticky účinné množstvo zlúčeniny, jej farmaceutický prijateľného prekurzora, farmaceutický aktívneho metabolita alebo farmaceutický prijateľné soli podľa nároku 1 a (b) farmaceutický prijateľný nosič, riedidlo alebo vehikulum .
  14. 14. Spôsob liečenia chorobného stavu cicavca sprostredkovaného proteinkinázovou aktivitou vyznačujúci sa tým, že zahrnuje podávanie cicavcovi, ktorý to potrebuje, terapeuticky účinné množstvo zlúčeniny, farmaceutický prijateľného prekurzora, farmaceutický aktívneho metabolita alebo farmaceutický prijateľné soli, ako je definované v nároku 13.
  15. 15. Spôsob podľa nároku 14 vyznačujúci sa tým, že chorobný stav cicavca je združený s rastom nádoru, bunečnou proliferáciou alebo angiogenézou.
  16. 16.
    Spôsob modulácie aktivity proteinkinázového receptora vyznačuj úci tým, že zahrnuje kontakt kinázového receptora s účinným množstvom zlúčeniny, farmaceutický prijateľného prekurzora, farmaceutický aktívneho metabolita alebo farmaceutický prijateľné soli, ako sú definované v nároku 13.
  17. 17. Spôsob podľa nároku 16 vyznačujúci sa tým, že proteinkinázový receptor je receptor VEGF.
SK1925-2001A 1999-07-02 2000-06-30 Derivát indazolu, jeho použitie na liečenie chorobného stavu cicavca a farmaceutický prípravok s jeho obsahom SK286936B6 (sk)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US14213099P 1999-07-02 1999-07-02
PCT/US2000/018263 WO2001002369A2 (en) 1999-07-02 2000-06-30 Indazole compounds and pharmaceutical compositions for inhibiting protein kinases, and methods for their use

Publications (2)

Publication Number Publication Date
SK19252001A3 true SK19252001A3 (sk) 2002-11-06
SK286936B6 SK286936B6 (sk) 2009-07-06

Family

ID=22498654

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SK1925-2001A SK286936B6 (sk) 1999-07-02 2000-06-30 Derivát indazolu, jeho použitie na liečenie chorobného stavu cicavca a farmaceutický prípravok s jeho obsahom

Country Status (52)

Country Link
EP (2) EP1218348B1 (sk)
JP (2) JP3878849B2 (sk)
KR (1) KR100529639B1 (sk)
CN (2) CN1137884C (sk)
AP (1) AP1486A (sk)
AR (2) AR035554A1 (sk)
AT (1) ATE376543T1 (sk)
AU (1) AU777701B2 (sk)
BE (1) BE2013C015I2 (sk)
BG (1) BG66070B1 (sk)
BR (1) BRPI0012352B8 (sk)
CA (1) CA2383630C (sk)
CO (1) CO5190686A1 (sk)
CR (2) CR6517A (sk)
CY (3) CY1107147T1 (sk)
CZ (1) CZ301667B6 (sk)
DE (2) DE60036879T2 (sk)
DK (2) DK1218348T3 (sk)
DZ (1) DZ3191A1 (sk)
EA (1) EA004460B1 (sk)
EE (1) EE05585B1 (sk)
ES (2) ES2293906T3 (sk)
FR (1) FR13C0010I2 (sk)
GE (1) GEP20063885B (sk)
GT (1) GT200000107A (sk)
HK (3) HK1065037A1 (sk)
HR (1) HRP20020109B1 (sk)
HU (1) HU228502B1 (sk)
IL (1) IL146710A0 (sk)
IS (1) IS2791B (sk)
JO (1) JO2319B1 (sk)
LU (1) LU92154I2 (sk)
MA (1) MA26803A1 (sk)
ME (1) ME00385B (sk)
MX (1) MXPA01012795A (sk)
MY (2) MY139999A (sk)
NO (3) NO322507B1 (sk)
NZ (1) NZ516676A (sk)
OA (1) OA11980A (sk)
PA (1) PA8498001A1 (sk)
PE (1) PE20010306A1 (sk)
PL (1) PL212108B1 (sk)
PT (2) PT1218348E (sk)
RS (1) RS50339B (sk)
SI (2) SI1614683T1 (sk)
SK (1) SK286936B6 (sk)
SV (1) SV2002000121A (sk)
TN (1) TNSN00146A1 (sk)
UA (1) UA66933C2 (sk)
UY (1) UY26231A1 (sk)
WO (1) WO2001002369A2 (sk)
ZA (1) ZA200110061B (sk)

Families Citing this family (332)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
PL205557B1 (pl) 1999-02-10 2010-05-31 Astrazeneca Ab Pochodne indolu
PE20010306A1 (es) * 1999-07-02 2001-03-29 Agouron Pharma Compuestos de indazol y composiciones farmaceuticas que los contienen utiles para la inhibicion de proteina kinasa
CA2699568C (en) 1999-12-24 2013-03-12 Aventis Pharma Limited Azaindoles
ATE279410T1 (de) 2000-02-07 2004-10-15 Bristol Myers Squibb Co 3-aminopyrazole als inhibitoren von cyclinabhängigen kinasen
EP1264820A4 (en) * 2000-03-14 2004-09-15 Fujisawa Pharmaceutical Co amide compounds
ES2236217T3 (es) 2000-04-25 2005-07-16 Bristol-Myers Squibb Company Uso de 5.tio.,sulfinil- y sulfonilpirazolo 3,4-b)-piridinas como inhibidores de la quinasa dependiente de la ciclina.
WO2002012226A1 (en) 2000-08-09 2002-02-14 Astrazeneca Ab Quinoline derivatives having vegf inhibiting activity
KR100834823B1 (ko) 2000-08-09 2008-06-09 아스트라제네카 아베 신놀린 화합물
EP1313734B1 (en) 2000-09-01 2009-11-11 Novartis Vaccines and Diagnostics, Inc. Aza heterocyclic derivatives and their therapeutic use
US6605617B2 (en) 2000-09-11 2003-08-12 Chiron Corporation Quinolinone derivatives
DE60126997T2 (de) 2000-10-20 2007-10-25 Eisai R&D Management Co., Ltd. Stickstoff-enthaltende aromatische ringverbindungen zur behandlung von tumorerkrankungen
TWI243164B (en) 2001-02-13 2005-11-11 Aventis Pharma Gmbh Acylated indanyl amines and their use as pharmaceuticals
GB0115109D0 (en) 2001-06-21 2001-08-15 Aventis Pharma Ltd Chemical compounds
US7064215B2 (en) 2001-07-03 2006-06-20 Chiron Corporation Indazole benzimidazole compounds
US7642278B2 (en) 2001-07-03 2010-01-05 Novartis Vaccines And Diagnostics, Inc. Indazole benzimidazole compounds
WO2003024969A1 (en) 2001-09-14 2003-03-27 Merck & Co., Inc. Tyrosine kinase inhibitors
US6897208B2 (en) * 2001-10-26 2005-05-24 Aventis Pharmaceuticals Inc. Benzimidazoles
IL161576A0 (en) * 2001-10-26 2004-09-27 Aventis Pharma Inc Benzimidazoles and analogues and their use as protein kinases inhibitors
FR2831536A1 (fr) * 2001-10-26 2003-05-02 Aventis Pharma Sa Nouveaux derives de benzimidazoles, leur procede de preparation, leur application a titre de medicament, compositions pharmaceutiques et nouvelle utilisation notamment comme inhibiteurs de kdr
FR2831537B1 (fr) * 2001-10-26 2008-02-29 Aventis Pharma Sa Nouveaux derives de benzimidazoles, leur procede de preparation, leur application a titre de medicament, compositions pharmaceutiques et nouvelle utilisation
KR101093345B1 (ko) 2002-02-01 2011-12-14 아스트라제네카 아베 퀴나졸린 화합물
US7166293B2 (en) * 2002-03-29 2007-01-23 Carlsbad Technology, Inc. Angiogenesis inhibitors
US20050119278A1 (en) * 2002-05-16 2005-06-02 Che-Ming Teng Anti-angiogenesis methods
EP1545515A1 (en) 2002-08-12 2005-06-29 Sugen, Inc. 3-pyrrolyl-pyridopyrazoles and 3-pyrrolyl-indazoles as novel kinase inhibitors
US7470709B2 (en) 2002-08-23 2008-12-30 Novartis Vaccines And Diagnostics, Inc. Benzimidazole quinolinones and uses thereof
AU2003289287A1 (en) * 2002-12-03 2004-06-23 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Jnk inhibitor
RS20050430A (en) * 2002-12-19 2007-08-03 Pfizer Inc., 2-(1h-indazol-6-ylamino)-benzamide compounds as protein kinases inhibitors useful for the treatment of ophtalmic diseases
US7192976B2 (en) 2002-12-21 2007-03-20 Angion Biomedica Corporation Small molecule modulators of hepatocyte growth factor (scatter factor) activity
JP4617299B2 (ja) 2003-03-03 2011-01-19 アレイ バイオファーマ、インコーポレイテッド ｐ３８阻害剤及びその使用法
US7135575B2 (en) 2003-03-03 2006-11-14 Array Biopharma, Inc. P38 inhibitors and methods of use thereof
AU2004226586B2 (en) * 2003-04-03 2008-12-11 Pfizer Inc. Dosage forms comprising AG013736
EP1618133A1 (en) * 2003-04-17 2006-01-25 Pfizer Inc. Crystal structure of vegfrkd: ligand complexes and methods of use thereof
FR2854159B1 (fr) * 2003-04-25 2008-01-11 Aventis Pharma Sa Nouveaux derives de l'indole, leur preparation a titre de medicaments, compositions pharmaceutiques et notamment comme inhibiteurs de kdr
TWI372050B (en) 2003-07-03 2012-09-11 Astex Therapeutics Ltd (morpholin-4-ylmethyl-1h-benzimidazol-2-yl)-1h-pyrazoles
PL1651612T3 (pl) 2003-07-22 2012-09-28 Astex Therapeutics Ltd Związki 3,4-pochodne 1h-pirazolu i ich zastosowanie jako kinazy zależne od cyklin (cdk) i modulatory kinazy syntazy glikogenu-3 (gsk-3)
JP4836788B2 (ja) * 2003-07-23 2011-12-14 エグゼリクシス， インコーポレイテッド 未分化リンパ腫キナーゼ変調因子及びその使用法
US20060281789A1 (en) * 2003-07-30 2006-12-14 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd Protein kinase inhibitors
ES2384568T3 (es) * 2003-07-30 2012-07-09 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Derivados de indazol
AU2004271978B2 (en) * 2003-09-04 2009-02-05 Merck & Co., Inc. Ophthalmic compositions for treating ocular hypertension
US20050164300A1 (en) * 2003-09-15 2005-07-28 Plexxikon, Inc. Molecular scaffolds for kinase ligand development
WO2005039564A1 (en) * 2003-10-02 2005-05-06 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Phthalimide compounds useful as protein kinase inhibitors
JP4890255B2 (ja) 2003-11-07 2012-03-07 ノバルティス バクシンズ アンド ダイアグノスティックス，インコーポレーテッド 改良された薬物特性を有するキノリノン化合物の薬学的に受容可能な塩
WO2005044788A1 (ja) 2003-11-11 2005-05-19 Eisai Co., Ltd. ウレア誘導体およびその製造方法
NZ547689A (en) * 2003-11-19 2009-05-31 Signal Pharm Llc Indazole compounds and methods of use thereof as protein kinase inhibitors
GB0330002D0 (en) 2003-12-24 2004-01-28 Astrazeneca Ab Quinazoline derivatives
KR20060114022A (ko) * 2004-02-27 2006-11-03 에프. 호프만-라 로슈 아게 인다졸 유도체 및 그들을 함유하는 약학 조성물
US20070185152A1 (en) * 2004-03-02 2007-08-09 Smithkline Beecham Corporation Inhibitors of akt activity
WO2005094823A1 (ja) * 2004-03-30 2005-10-13 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Ｆｌｔ－３阻害剤
JPWO2005108370A1 (ja) * 2004-04-16 2008-03-21 味の素株式会社 ベンゼン化合物
JP2008503446A (ja) 2004-05-06 2008-02-07 プレキシコン，インコーポレーテッド Ｐｄｅ４ｂ阻害剤及びその使用
BRPI0512261A (pt) 2004-06-17 2008-02-26 Wyeth Corp antagonistas de receptor de hormÈnio liberador de gonadotropina
AU2005264998A1 (en) * 2004-06-17 2006-01-26 Wyeth The present invention relates to methods of making Gonadotropin Releasing Hormone ('GnRH') (also known as Leutinizing Hormone Releasing Hormone) receptor antagonists
JP2008510792A (ja) * 2004-08-26 2008-04-10 ファイザー・インク タンパク質チロシンキナーゼ阻害剤としてのアミノヘテロアリール化合物
CA2583428A1 (en) 2004-09-03 2006-03-09 Plexxikon, Inc. Bicyclic heteroaryl pde4b inhibitors
KR20070053205A (ko) 2004-09-17 2007-05-23 에자이 알앤드디 매니지먼트 가부시키가이샤 의약 조성물
EP1647549A1 (en) * 2004-10-14 2006-04-19 Laboratoire Theramex Indazoles, benzisoxazoles and benzisothiazoles as estrogenic agents
AU2005300317A1 (en) * 2004-11-02 2006-05-11 Pfizer Inc. Polymorphic forms of 6-[2-(methylcarbamoyl)phenylsulfanyl]-3-E-[2-(pyridin-2-yl)ethenyl]indazole
WO2006048745A1 (en) * 2004-11-02 2006-05-11 Pfizer Inc. Methods for preparing indazole compounds
MX2007006554A (es) * 2004-11-02 2007-06-19 Pfizer Procedimientos para preparar compuestos de indazol.
WO2006068760A2 (en) 2004-11-19 2006-06-29 The Regents Of The University Of California Anti-inflammatory pyrazolopyrimidines
FR2878442B1 (fr) * 2004-11-29 2008-10-24 Aventis Pharma Sa THIENO(2,3-c)PYRAZOLES SUBSTITUES, PROCEDE DE PREPARATION, COMPOSITIONS LES CONTENANT ET UTILISATION
US20060142247A1 (en) * 2004-12-17 2006-06-29 Guy Georges Tricyclic heterocycles
AU2005321091B2 (en) 2004-12-30 2012-04-12 Astex Therapeutics Limited Pyrazole compounds that modulate the activity of CDK, GSK and Aurora kinases
US7622583B2 (en) 2005-01-14 2009-11-24 Chemocentryx, Inc. Heteroaryl sulfonamides and CCR2
US8404718B2 (en) 2005-01-21 2013-03-26 Astex Therapeutics Limited Combinations of pyrazole kinase inhibitors
AR054425A1 (es) 2005-01-21 2007-06-27 Astex Therapeutics Ltd Sales de adicion de piperidin 4-il- amida de acido 4-(2,6-dicloro-benzoilamino) 1h-pirazol-3-carboxilico.
AU2006207321B2 (en) 2005-01-21 2012-09-06 Astex Therapeutics Limited Pharmaceutical compounds
EP1845973B1 (en) 2005-01-21 2015-08-12 Astex Therapeutics Limited Pharmaceutical compounds
ES2336243T3 (es) * 2005-01-26 2010-04-09 Schering Corporation Derivados de 3-(indazol-5-il)-(1,2,4)triazina y composiciones similares como inhibidores de proteina quinasa para el tratamiento del cancer.
KR20070108881A (ko) * 2005-01-27 2007-11-13 교와 핫꼬 고교 가부시끼가이샤 Ｉｇｆ－１ｒ 저해제
US7538113B2 (en) 2005-02-18 2009-05-26 Wyeth 4-substituted imidazo[4,5-c]pyridine antagonists of gonadotropin releasing hormone receptor
US7534796B2 (en) 2005-02-18 2009-05-19 Wyeth Imidazo[4,5-b]pyridine antagonists of gonadotropin releasing hormone receptor
US7582634B2 (en) 2005-02-18 2009-09-01 Wyeth 7-substituted imidazo[4,5-c]pyridine antagonists of gonadotropin releasing hormone receptor
PT1888556E (pt) 2005-05-17 2012-02-03 Novartis Ag Métodos para sintetizar compostos heterocíclicos
US7531542B2 (en) 2005-05-18 2009-05-12 Wyeth Benzooxazole and benzothiazole antagonists of gonadotropin releasing hormone receptor
WO2006123223A1 (en) * 2005-05-19 2006-11-23 Pfizer Inc. Pharmaceutical compostions comprising an amorphous form of a vegf-r inhibitor
CA2609126A1 (en) 2005-05-20 2006-11-30 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Pyrrolopyridines useful as inhibitors of protein kinase
US7582636B2 (en) 2005-05-26 2009-09-01 Wyeth Piperazinylimidazopyridine and piperazinyltriazolopyridine antagonists of Gonadotropin Releasing Hormone receptor
WO2006130673A1 (en) 2005-05-31 2006-12-07 Janssen Pharmaceutica, N.V. 3-benzoimidazolyl-pyrazolopyridines useful in treating kinase disorders
US7888381B2 (en) 2005-06-14 2011-02-15 Bristol-Myers Squibb Company Modulators of glucocorticoid receptor, AP-1, and/or NF-κB activity, and use thereof
WO2007015578A1 (ja) 2005-08-02 2007-02-08 Eisai R & D Management Co., Ltd. 血管新生阻害物質の効果を検定する方法
PL1957074T3 (pl) 2005-11-29 2014-08-29 Novartis Ag Preparaty chinolinonów
TW200732305A (en) * 2005-12-23 2007-09-01 Yung Shin Pharmaceutical Ind Cancer chemotherapy
WO2007089646A1 (en) 2006-01-31 2007-08-09 Array Biopharma Inc. Kinase inhibitors and methods of use thereof
US20090291968A1 (en) * 2006-03-23 2009-11-26 Guy Georges Substituted indazole derivatives, their manufacture and use as pharmaceutical agents
KR20090017498A (ko) 2006-04-04 2009-02-18 더 리젠트스 오브 더 유니이버시티 오브 캘리포니아 Ｐｉ３ 키나제 길항물질
RU2448708C3 (ru) 2006-05-18 2017-09-28 Эйсай Ар Энд Ди Менеджмент Ко., Лтд. Противоопухолевое средство против рака щитовидной железы
JPWO2008001885A1 (ja) 2006-06-30 2009-11-26 協和発酵キリン株式会社 Ａｂｌキナーゼ阻害剤
WO2008001886A1 (fr) 2006-06-30 2008-01-03 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Inhibiteur d'aurora
US8519135B2 (en) 2006-07-14 2013-08-27 Chemocentryx, Inc. Heteroaryl sulfonamides and CCR2/CCR9
WO2008020606A1 (fr) * 2006-08-16 2008-02-21 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Agent anti-angiogénique
WO2008026748A1 (fr) 2006-08-28 2008-03-06 Eisai R & D Management Co., Ltd. Agent antitumoral pour cancer gastrique non différencié
CL2007002617A1 (es) 2006-09-11 2008-05-16 Sanofi Aventis Compuestos derivados de pirrolo[2,3-b]pirazin-6-ilo; composicion farmaceutica que comprende a dichos compuestos; y su uso para tratar inflamacion de las articulaciones, artritis reumatoide, tumores, linfoma de las celulas del manto.
CN101600694A (zh) 2007-01-29 2009-12-09 卫材R&D管理有限公司 未分化型胃癌治疗用组合物
JPWO2008111441A1 (ja) 2007-03-05 2010-06-24 協和発酵キリン株式会社 医薬組成物
WO2008113255A1 (fr) * 2007-03-16 2008-09-25 The Institute Of Radiation Medicine, Academy Of Military Medical Sciences, Pla Dérivés de benzamide avec activité antiproliférative, leurs préparations pharmaceutiques
EP4074702A1 (en) * 2007-04-05 2022-10-19 Pfizer Products Inc. Crystalline forms of 6-[2-(methylcarbamoyl)phenylsulfanyl]-3-e-[2-(pyridin-2-yl)ethenyl]indazole suitable for the treatment of abnormal cell growth in mammals
EP2002836B1 (en) 2007-05-31 2010-10-20 Nerviano Medical Sciences S.r.l. Cyclocondensed azaindoles active as kinase inhibitors
PT2175859E (pt) 2007-07-12 2012-06-06 Chemocentryx Inc Heteroarilpiridil- e fenil-benzenossulfonamidas condensadas como moduladores de ccr2 para o tratamento de inflamação
GB2467670B (en) 2007-10-04 2012-08-01 Intellikine Inc Chemical entities and therapeutic uses thereof
WO2009049183A1 (en) * 2007-10-11 2009-04-16 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Aryl amides useful as inhibitors of voltage-gated sodium channels
US8173635B2 (en) 2007-11-02 2012-05-08 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Kinase inhibitors
JP5638244B2 (ja) 2007-11-09 2014-12-10 エーザイ・アール・アンド・ディー・マネジメント株式会社 血管新生阻害物質と抗腫瘍性白金錯体との併用
US8193182B2 (en) 2008-01-04 2012-06-05 Intellikine, Inc. Substituted isoquinolin-1(2H)-ones, and methods of use thereof
SG10201605472WA (en) 2008-01-04 2016-09-29 Intellikine Llc Certain Chemical Entities, Compositions And Methods
WO2009114874A2 (en) 2008-03-14 2009-09-17 Intellikine, Inc. Benzothiazole kinase inhibitors and methods of use
US8637542B2 (en) 2008-03-14 2014-01-28 Intellikine, Inc. Kinase inhibitors and methods of use
KR101269393B1 (ko) 2008-04-28 2013-05-29 아사히 가세이 파마 가부시키가이샤 페닐프로피온산 유도체 및 이의 용도
US20110224223A1 (en) 2008-07-08 2011-09-15 The Regents Of The University Of California, A California Corporation MTOR Modulators and Uses Thereof
KR20110039326A (ko) 2008-07-08 2011-04-15 인텔리카인, 인크. 키나제 억제제 및 사용 방법
CA2767331A1 (en) 2008-07-10 2010-01-14 Angion Biomedica Corp. Methods and compositions of small molecule modulators of hepatocyte growth factor (scatter factor) activity
EP2346508B1 (en) 2008-09-26 2016-08-24 Intellikine, LLC Heterocyclic kinase inhibitors
WO2010045542A2 (en) 2008-10-16 2010-04-22 The Regents Of The University Of California Fused ring heteroaryl kinase inhibitors
US8476431B2 (en) 2008-11-03 2013-07-02 Itellikine LLC Benzoxazole kinase inhibitors and methods of use
MY159575A (en) 2009-04-02 2017-01-13 Merck Serono Sa Dihydroorotate dehydrogenase inhibitors
EP2427195B1 (en) 2009-05-07 2019-05-01 Intellikine, LLC Heterocyclic compounds and uses thereof
HUE028259T2 (en) 2009-08-10 2016-12-28 Samumed Llc Inhibitors of Wnt signaling signal indazole and their therapeutic use
WO2011047384A2 (en) 2009-10-16 2011-04-21 The Regents Of The University Of California Methods of inhibiting ire1
WO2011073521A1 (en) 2009-12-15 2011-06-23 Petri Salven Methods for enriching adult-derived endothelial progenitor cells and uses thereof
EP3305073B1 (en) 2009-12-21 2019-05-15 Samumed, LLC 1h-pyrazolo[3,4-b]pyridines and therapeutic uses thereof
EP2937345B1 (en) 2009-12-29 2018-03-21 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Type ii raf kinase inhibitors
UY33236A (es) 2010-02-25 2011-09-30 Novartis Ag Inhibidores dimericos de las iap
WO2011115725A2 (en) * 2010-03-16 2011-09-22 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Indazole compounds and their uses
WO2011146882A1 (en) 2010-05-21 2011-11-24 Intellikine, Inc. Chemical compounds, compositions and methods for kinase modulation
CA2802644C (en) 2010-06-25 2017-02-21 Eisai R & D Management Co., Ltd. Antitumor agent using compounds having kinase inhibitory effect in combination
SG187592A1 (en) 2010-07-23 2013-03-28 Univ Boston Anti-despr inhibitors as therapeutics for inhibition of pathological angiogenesis and tumor cell invasiveness and for molecular imaging and targeted delivery
CN103298474B (zh) 2010-11-10 2016-06-29 无限药品股份有限公司 杂环化合物及其用途
CN103261186A (zh) 2010-12-13 2013-08-21 诺瓦提斯公司 二聚化iap抑制剂
UY33794A (es) 2010-12-13 2012-07-31 Novartis Ag Inhibidores diméricos de las iap
WO2012088266A2 (en) 2010-12-22 2012-06-28 Incyte Corporation Substituted imidazopyridazines and benzimidazoles as inhibitors of fgfr3
AR084824A1 (es) 2011-01-10 2013-06-26 Intellikine Inc Procesos para preparar isoquinolinonas y formas solidas de isoquinolinonas
CN103491962B (zh) 2011-02-23 2016-10-12 因特利凯有限责任公司 激酶抑制剂的组合及其用途
WO2012135799A1 (en) 2011-04-01 2012-10-04 University Of Utah Research Foundation Substituted 3-(1h-benzo{d}imidazol-2-yl)-1h-indazole-analogs as inhibitors of the pdk1 kinase
CA2828946C (en) 2011-04-18 2016-06-21 Eisai R&D Management Co., Ltd. Therapeutic agent for tumor
WO2012166899A2 (en) 2011-06-03 2012-12-06 Eisai R&D Management Co., Ltd. Biomarkers for predicting and assessing responsiveness of thyroid and kidney cancer subjects to lenvatinib compounds
CA2842190A1 (en) 2011-07-19 2013-01-24 Infinity Pharmaceuticals Inc. Heterocyclic compounds and uses thereof
US8969363B2 (en) 2011-07-19 2015-03-03 Infinity Pharmaceuticals, Inc. Heterocyclic compounds and uses thereof
US8575336B2 (en) 2011-07-27 2013-11-05 Pfizer Limited Indazoles
RU2014111823A (ru) 2011-08-29 2015-10-10 Инфинити Фармасьютикалз, Инк. Гетероциклические соединения и их применения
CA2846496C (en) 2011-09-02 2020-07-14 The Regents Of The University Of California Substituted pyrazolo[3,4-d]pyrimidines and uses thereof
SG11201400666PA (en) 2011-09-14 2014-09-26 Samumed Llc Indazole-3-carboxamides and their use as wnt/b-catenin signaling pathway inhibitors
CN102432595B (zh) * 2011-09-14 2013-09-25 湖南有色凯铂生物药业有限公司 N-吲哚-1-酰胺类化合物及作为抗癌药物的应用
CA2849995A1 (en) 2011-09-27 2013-04-04 Novartis Ag 3-pyrimidin-4-yl-oxazolidin-2-ones as inhibitors of mutant idh
WO2013074986A1 (en) 2011-11-17 2013-05-23 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Inhibitors of c-jun-n-terminal kinase (jnk)
MX2014006736A (es) 2011-12-05 2014-08-29 Novartis Ag Derivados de urea ciclicos como antagonistas de los receptores de androgeno.
FR2985257B1 (fr) * 2011-12-28 2014-02-14 Sanofi Sa Composes dimeres agonistes des recepteurs des fgfs (fgfrs), leur procede de preparation et leur application en therapeutique
WO2013105022A2 (en) 2012-01-09 2013-07-18 Novartis Ag Organic compositions to treat beta-catenin-related diseases
US8815926B2 (en) 2012-01-26 2014-08-26 Novartis Ag Substituted pyrrolo[3,4-D]imidazoles for the treatment of MDM2/4 mediated diseases
PH12017500997A1 (en) 2012-04-04 2018-02-19 Samumed Llc Indazole inhibitors of the wnt signal pathway and therapeutic uses thereof
US8940742B2 (en) 2012-04-10 2015-01-27 Infinity Pharmaceuticals, Inc. Heterocyclic compounds and uses thereof
HUE046216T2 (hu) 2012-05-04 2020-02-28 Samumed Llc 1H-pirazolo [3,4-b]piridin-származékok és terápiás alkalmazásuk
BR112014030812B1 (pt) 2012-06-13 2022-11-08 Incyte Holdings Corporation Compostos tricíclicos substituídos como inibidores de fgfr, seus usos, composição farmacêutica e método para inibir uma enzima fgfr
JP6231262B2 (ja) * 2012-06-20 2017-11-15 大日本印刷株式会社 ピタバスタチンカルシウムの前駆体の製造法
US8828998B2 (en) 2012-06-25 2014-09-09 Infinity Pharmaceuticals, Inc. Treatment of lupus, fibrotic conditions, and inflammatory myopathies and other disorders using PI3 kinase inhibitors
US9388185B2 (en) 2012-08-10 2016-07-12 Incyte Holdings Corporation Substituted pyrrolo[2,3-b]pyrazines as FGFR inhibitors
KR20150061651A (ko) 2012-09-26 2015-06-04 더 리젠츠 오브 더 유니버시티 오브 캘리포니아 Ire1의 조절
WO2014063068A1 (en) 2012-10-18 2014-04-24 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Inhibitors of cyclin-dependent kinase 7 (cdk7)
US9758522B2 (en) 2012-10-19 2017-09-12 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Hydrophobically tagged small molecules as inducers of protein degradation
US10000483B2 (en) 2012-10-19 2018-06-19 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Bone marrow on X chromosome kinase (BMX) inhibitors and uses thereof
CN103804349A (zh) * 2012-11-01 2014-05-21 杨子娇 一类治疗青光眼的化合物及其用途
US9266892B2 (en) 2012-12-19 2016-02-23 Incyte Holdings Corporation Fused pyrazoles as FGFR inhibitors
BR112015009004A8 (pt) 2012-12-21 2021-07-20 Eisai R&D Man Co Ltd forma amorfa de derivado de quinolina e método de produção da mesma
CN105120862A (zh) 2013-01-08 2015-12-02 萨穆梅德有限公司 Wnt信号途径的3-(苯并咪唑-2-基)-吲唑抑制剂及其治疗应用
CN104370889A (zh) * 2013-01-24 2015-02-25 韩冰 一类降低眼压的化合物及其制备方法和用途
ES2716617T3 (es) * 2013-02-02 2019-06-13 Chia Tai Tianqing Pharmaceutical Group Co Ltd Inhibidor de proteína quinasa de 2-aminopiridina sustituida
DK2958907T3 (en) 2013-02-19 2018-06-06 Novartis Ag Thus, benzothiophene derivatives and compositions as selective estrogen receptor degraders
MX2015012822A (es) 2013-03-14 2016-05-31 Novartis Ag 3-pirimidin-4-il-oxazolidin-2-onas- como inhibidores del idh mutante.
CN105263929B (zh) 2013-03-14 2018-08-28 诺华股份有限公司 作为突变idh抑制剂的3-嘧啶-4-基-噁唑烷-2-酮化合物
US9481667B2 (en) 2013-03-15 2016-11-01 Infinity Pharmaceuticals, Inc. Salts and solid forms of isoquinolinones and composition comprising and methods of using the same
WO2014147586A1 (en) 2013-03-22 2014-09-25 Novartis Ag 1-(2-(ethylamino)pyrimidin-4-yl)pyrrolidin-2-ones as inhibitors of mutant idh
SG10201708520YA (en) 2013-04-19 2017-12-28 Incyte Corp Bicyclic heterocycles as fgfr inhibitors
CA2912219C (en) 2013-05-14 2021-11-16 Eisai R&D Management Co., Ltd. Biomarkers for predicting and assessing responsiveness of endometrial cancer subjects to lenvatinib compounds
US20150018376A1 (en) 2013-05-17 2015-01-15 Novartis Ag Pyrimidin-4-yl)oxy)-1h-indole-1-carboxamide derivatives and use thereof
CN103387565B (zh) * 2013-07-29 2014-10-29 苏州明锐医药科技有限公司 阿西替尼的制备方法
WO2015051241A1 (en) 2013-10-04 2015-04-09 Infinity Pharmaceuticals, Inc. Heterocyclic compounds and uses thereof
MY175778A (en) 2013-10-04 2020-07-08 Infinity Pharmaceuticals Inc Heterocyclic compounds and uses thereof
CA2927917C (en) 2013-10-18 2022-08-09 Syros Pharmaceuticals, Inc. Heteroaromatic compounds useful for the treatment of proliferative diseases
AU2014337044A1 (en) 2013-10-18 2016-05-05 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Polycyclic inhibitors of cyclin-dependent kinase 7 (CDK7)
CN103570696B (zh) * 2013-11-06 2016-02-24 湖南欧亚生物有限公司 一种阿西替尼中间体的制备方法以及在制备阿西替尼中的应用
WO2015067224A1 (en) 2013-11-08 2015-05-14 Zentiva, K.S. Salts of 6-[2-(methylcarbamoyl)phenylsulfanyl]-3-e-[2-(pyridin-2-yl)ethanyl] indazole
WO2015092634A1 (en) 2013-12-16 2015-06-25 Novartis Ag 1,2,3,4-tetrahydroisoquinoline compounds and compositions as selective estrogen receptor antagonists and degraders
WO2015107494A1 (en) 2014-01-17 2015-07-23 Novartis Ag 1 -(triazin-3-yi_/pyridazin-3-yl)-piper(-azine)idine derivatives and compositions thereof for inhibiting the activity of shp2
JP6523303B2 (ja) 2014-01-17 2019-05-29 ノバルティス アーゲー Ｓｈｐ２の活性を阻害するための１−ピリダジン／トリアジン−３−イル−ピペラジン／ピペリジン／ピロリジン誘導体およびその組成物
JO3517B1 (ar) 2014-01-17 2020-07-05 Novartis Ag ان-ازاسبيرو الكان حلقي كبديل مركبات اريل-ان مغايرة وتركيبات لتثبيط نشاط shp2
SG11201607705XA (en) 2014-03-19 2016-10-28 Infinity Pharmaceuticals Inc Heterocyclic compounds for use in the treatment of pi3k-gamma mediated disorders
EP3127900B1 (en) * 2014-03-31 2017-10-18 Senju Pharmaceutical Co., Ltd. Alkynyl indazole derivative and use thereof
WO2015160975A2 (en) 2014-04-16 2015-10-22 Infinity Pharmaceuticals, Inc. Combination therapies
WO2015164614A1 (en) 2014-04-23 2015-10-29 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Janus kinase inhibitors and uses thereof
US9862688B2 (en) 2014-04-23 2018-01-09 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Hydrophobically tagged janus kinase inhibitors and uses thereof
JP2017516779A (ja) 2014-05-28 2017-06-22 アイデニクス・ファーマシューティカルズ・エルエルシー 癌治療のためのヌクレオシド誘導体
CN104072484B (zh) * 2014-07-07 2016-07-06 渤海大学 氮-(4-(芳巯基)-1氢-吲唑-3-基)-1-(芳杂环取代)甲基亚胺类化合物及其药学上可接受的盐及其制备方法和应用
AR101196A1 (es) 2014-07-16 2016-11-30 Gruenenthal Gmbh Compuestos de pirimidina sustituidos
AR101198A1 (es) 2014-07-16 2016-11-30 Gruenenthal Gmbh Pirimidinas 2,5-sustituidas como inhibidores de pde4b
KR20230043234A (ko) 2014-08-28 2023-03-30 에자이 알앤드디 매니지먼트 가부시키가이샤 고순도의 퀴놀린 유도체 및 이를 제조하는 방법
WO2016040190A1 (en) 2014-09-08 2016-03-17 Samumed, Llc 3-(3h-imidazo[4,5-b]pyridin-2-yl)-1h-pyrazolo[3,4-b]pyridine and therapeutic uses thereof
WO2016040185A1 (en) 2014-09-08 2016-03-17 Samumed, Llc 2-(1h-indazol-3-yl)-3h-imidazo[4,5-b]pyridine and therapeutic uses thereof
WO2016040182A1 (en) 2014-09-08 2016-03-17 Samumed, Llc 2-(1h-indazol-3-yl)-1h-imidazo[4,5-c]pyridine and therapeutic uses thereof
WO2016040180A1 (en) 2014-09-08 2016-03-17 Samumed, Llc 3-(1h-benzo[d]imidazol-2-yl)-1h-pyrazolo[3,4-c]pyridine and therapeutic uses thereof
WO2016040188A1 (en) 2014-09-08 2016-03-17 Samumed, Llc 3-(3h-imidazo[4,5-c]pyridin-2-yl)-1h-pyrazolo[3,4-c]pyridine and therapeutic uses thereof
WO2016040181A1 (en) 2014-09-08 2016-03-17 Samumed, Llc 3-(1h-imidazo[4,5-c]pyridin-2-yl)-1h-pyrazolo[3,4-c]pyridine and therapeutic uses thereof
WO2016040184A1 (en) 2014-09-08 2016-03-17 Samumed, Llc 3-(3h-imidazo[4,5-b]pyridin-2-yl)-1h-pyrazolo[3,4-c]pyridine and therapeutic uses thereof
WO2016040193A1 (en) 2014-09-08 2016-03-17 Samumed, Llc 3-(1h-imidazo[4,5-c]pyridin-2-yl)-1h-pyrazolo[3,4-b]pyridine and therapeutic uses thereof
JP6723663B2 (ja) 2014-09-17 2020-07-15 セルジーン クオンティセル リサーチ，インク． ヒストンデメチラーゼ阻害剤
WO2016054491A1 (en) 2014-10-03 2016-04-07 Infinity Pharmaceuticals, Inc. Heterocyclic compounds and uses thereof
US10851105B2 (en) 2014-10-22 2020-12-01 Incyte Corporation Bicyclic heterocycles as FGFR4 inhibitors
US10508108B2 (en) 2014-12-05 2019-12-17 Merck Sharp & Dohme Corp. Tricyclic compounds as inhibitors of mutant IDH enzymes
US10086000B2 (en) 2014-12-05 2018-10-02 Merck Sharp & Dohme Corp. Tricyclic compounds as inhibitors of mutant IDH enzymes
US10442819B2 (en) 2014-12-05 2019-10-15 Merck Sharp & Dohme Corp. Tricyclic compounds as inhibitors of mutant IDH enzymes
MA41140A (fr) 2014-12-12 2017-10-17 Cancer Research Tech Ltd Dérivés de 2,4-dioxo-quinazoline-6-sulfonamide en tant qu'inhibiteurs de la parg
MA41179A (fr) * 2014-12-19 2017-10-24 Cancer Research Tech Ltd Composés inhibiteurs de parg
WO2016105528A2 (en) 2014-12-23 2016-06-30 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Inhibitors of cyclin-dependent kinase 7 (cdk7)
EP3246046A4 (en) 2015-01-13 2018-12-05 Kyoto University Agent for preventing and/or treating amyotrophic lateral sclerosis
MA41551A (fr) 2015-02-20 2017-12-26 Incyte Corp Hétérocycles bicycliques utilisés en tant qu'inhibiteurs de fgfr4
WO2016134294A1 (en) 2015-02-20 2016-08-25 Incyte Corporation Bicyclic heterocycles as fgfr4 inhibitors
AU2016219822B2 (en) 2015-02-20 2020-07-09 Incyte Holdings Corporation Bicyclic heterocycles as FGFR inhibitors
AU2016224583B2 (en) 2015-02-25 2021-06-03 Eisai R&D Management Co., Ltd. Method for suppressing bitterness of quinoline derivative
KR20170122809A (ko) 2015-03-04 2017-11-06 머크 샤프 앤드 돔 코포레이션 암을 치료하기 위한 pd-1 길항제 및 vegfr/fgfr/ret 티로신 키나제 억제제의 조합
AU2016243529B2 (en) 2015-03-27 2021-03-25 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Inhibitors of cyclin-dependent kinases
US9580406B2 (en) 2015-04-28 2017-02-28 Signa S.A. De C.V. Processes for the preparation of axitinib
WO2016189055A1 (en) 2015-05-27 2016-12-01 Idenix Pharmaceuticals Llc Nucleotides for the treatment of cancer
US10702527B2 (en) 2015-06-12 2020-07-07 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Combination therapy of transcription inhibitors and kinase inhibitors
CA2988707C (en) 2015-06-16 2023-10-10 Eisai R&D Management Co., Ltd. Combination of cbp/catenin inhibitor and immune checkpoint inhibitor for treating cancer
US10975080B2 (en) 2015-06-19 2021-04-13 Novartis Ag Compounds and compositions for inhibiting the activity of SHP2
US10308660B2 (en) 2015-06-19 2019-06-04 Novartis Ag Compounds and compositions for inhibiting the activity of SHP2
ES2805232T3 (es) 2015-06-19 2021-02-11 Novartis Ag Compuestos y composiciones para inhibir la actividad de SHP2
GB201511382D0 (en) 2015-06-29 2015-08-12 Imp Innovations Ltd Novel compounds and their use in therapy
GB201511790D0 (en) 2015-07-06 2015-08-19 Iomet Pharma Ltd Pharmaceutical compound
US10231956B2 (en) 2015-08-03 2019-03-19 Samumed, Llc 3-(1H-pyrrolo[3,2-C]pyridin-2-YL)-1 H-pyrazolo[4,3-B]pyridines and therapeutic uses thereof
US10206908B2 (en) 2015-08-03 2019-02-19 Samumed, Llc 3-(1H-pyrrolo[3,2-C]pyridin-2-YL)-1H-pyrazolo[3,4-C]pyridines and therapeutic uses thereof
US10463651B2 (en) 2015-08-03 2019-11-05 Samumed, Llc 3-(1H-pyrrolo[3,2-C]pyridin-2-YL)-1H-indazoles and therapeutic uses thereof
WO2017024015A1 (en) 2015-08-03 2017-02-09 Samumed, Llc. 3-(3h-imidazo[4,5-b]pyridin-2-yl)-1h-pyrazolo[4,3-b]pyridines and therapeutic uses thereof
US10206909B2 (en) 2015-08-03 2019-02-19 Samumed, Llc 3-(1H-pyrrolo[2,3-B]pyridin-2-yl)-1H-pyrazolo[4,3-B]pyridines and therapeutic uses thereof
WO2017024021A1 (en) 2015-08-03 2017-02-09 Samumed, Llc 3-(1h-pyrrolo[2,3-b]pyridin-2-yl)-1h-indazoles and therapeutic uses thereof
US10604512B2 (en) 2015-08-03 2020-03-31 Samumed, Llc 3-(1H-indol-2-yl)-1H-indazoles and therapeutic uses thereof
US10519169B2 (en) 2015-08-03 2019-12-31 Samumed, Llc 3-(1H-pyrrolo[2,3-C]pyridin-2-yl)-1 H-pyrazolo[4,3-B]pyridines and therapeutic uses thereof
US10226448B2 (en) 2015-08-03 2019-03-12 Samumed, Llc 3-(1H-pyrrolo[3,2-C]pyridin-2-yl)-1H-pyrazolo[3,4-B]pyridines and therapeutic uses thereof
US10226453B2 (en) 2015-08-03 2019-03-12 Samumed, Llc 3-(1H-indol-2-yl)-1H-pyrazolo[4,3-B]pyridines and therapeutic uses thereof
WO2017023972A1 (en) 2015-08-03 2017-02-09 Samumed, Llc. 3-(1h-imidazo[4,5-c]pyridin-2-yl)-1h-pyrazolo[4,3-b]pyridines and therapeutic uses thereof
WO2017023975A1 (en) 2015-08-03 2017-02-09 Samumed, Llc. 3-(1h-pyrrolo[2,3-c]pyridin-2-yl)-1h-pyrazolo[3,4-c]pyridines and therapeutic uses thereof
WO2017023980A1 (en) 2015-08-03 2017-02-09 Samumed, Llc. 3-(1h-pyrrolo[2,3-b]pyridin-2-yl)-1h-pyrazolo[3,4-c]pyridines and therapeutic uses thereof
US10188634B2 (en) 2015-08-03 2019-01-29 Samumed, Llc 3-(3H-imidazo[4,5-C]pyridin-2-yl)-1 H-pyrazolo[4,3-B]pyridines and therapeutic uses thereof
US10285983B2 (en) 2015-08-03 2019-05-14 Samumed, Llc 3-(1H-pyrrolo[2,3-B]pyridin-2-yl)-1H-pyrazolo[3,4-B] pyridines and therapeutic uses thereof
US10166218B2 (en) 2015-08-03 2019-01-01 Samumed, Llc 3-(1H-indol-2-yl)-1H-pyrazolo[3,4-C]pyridines and therapeutic uses thereof
WO2017023989A1 (en) 2015-08-03 2017-02-09 Samumed, Llc. 3-(1h-benzo[d]imidazol-2-yl)-1h-pyrazolo[4,3-b]pyridines and therapeutic uses thereof
US11453697B1 (en) 2015-08-13 2022-09-27 Merck Sharp & Dohme Llc Cyclic di-nucleotide compounds as sting agonists
UA123701C2 (uk) 2015-08-13 2021-05-19 Мерк Шарп І Доум Корп. Циклічні динуклеотидні сполуки як агоністи sting
AU2016319125B2 (en) 2015-09-09 2021-04-08 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Inhibitors of cyclin-dependent kinases
JP6980649B2 (ja) 2015-09-14 2021-12-15 インフィニティー ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド イソキノリノン誘導体の固体形態、それを製造する方法、それを含む組成物、及びそれを使用する方法
CA3001489C (en) * 2015-10-07 2024-01-16 Diane Tang-Liu Compositions and methods of treating skin fibrotic disorders
CN108349956A (zh) * 2015-10-22 2018-07-31 赛尔维他股份公司 吡啶酮衍生物及其作为激酶抑制剂的用途
MX2018005694A (es) 2015-11-06 2018-11-09 Samumed Llc 2- (1h-indazol-3-il) -3h-imidazo[4,5-c] piridinas y usos antiinflamatorios de las mismas.
WO2017106062A1 (en) 2015-12-15 2017-06-22 Merck Sharp & Dohme Corp. Novel compounds as indoleamine 2,3-dioxygenase inhibitors
US10759806B2 (en) 2016-03-17 2020-09-01 Infinity Pharmaceuticals, Inc. Isotopologues of isoquinolinone and quinazolinone compounds and uses thereof as PI3K kinase inhibitors
DK3452465T3 (da) 2016-05-04 2021-02-08 Genoscience Pharma Substituerede 2,4-diaminoquinolinderivater til anvendelse til behandling af proliferative sygdomme
CN109476660B (zh) 2016-06-01 2023-04-04 拜斯丽治疗有限公司 N-(5-(3-(7-(3-氟苯基)-3h-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-基)-1h-吲唑-5-基)吡啶-3-基)-3-甲基丁酰胺的制备方法
WO2017214269A1 (en) 2016-06-08 2017-12-14 Infinity Pharmaceuticals, Inc. Heterocyclic compounds and uses thereof
RU2021106500A (ru) 2016-06-14 2021-04-16 Новартис Аг Соединения и композиции для подавления активности shp2
EP3474856B1 (en) 2016-06-24 2022-09-14 Infinity Pharmaceuticals, Inc. Combination therapies
ES2893532T3 (es) 2016-10-04 2022-02-09 Merck Sharp & Dohme Compuestos de benzo[b]tiofeno como agonistas de STING
KR102593742B1 (ko) 2016-10-21 2023-10-24 사뮤메드, 엘엘씨 인다졸-3-카복사마이드를 사용하는 방법 및 wnt/b-카테닌 신호전달 경로 억제제로서의 그들의 용도
US10758523B2 (en) 2016-11-07 2020-09-01 Samumed, Llc Single-dose, ready-to-use injectable formulations
WO2018091542A1 (en) 2016-11-21 2018-05-24 Idenix Pharmaceuticals Llc Cyclic phosphate substituted nucleoside derivatives for the treatment of liver diseases
RU2765737C2 (ru) 2016-11-23 2022-02-02 Хемоцентрикс, Инк. Способ лечения фокально-сегментарного гломерулосклероза
AU2018212787B2 (en) 2017-01-27 2023-10-26 Janssen Biotech, Inc. Cyclic dinucleotides as sting agonists
AU2018212788A1 (en) 2017-01-27 2019-07-25 Janssen Biotech, Inc. Cyclic dinucleotides as STING agonists
WO2018151126A1 (ja) * 2017-02-14 2018-08-23 富士フイルム株式会社 インダゾール化合物の製造方法およびインダゾール化合物
EP3621624B1 (en) 2017-05-12 2023-08-30 Merck Sharp & Dohme LLC Cyclic di-nucleotide compounds as sting agonists
CN108947970B (zh) * 2017-05-18 2022-04-05 四川大学 吲唑类衍生物及其制备方法和用途
AR111960A1 (es) 2017-05-26 2019-09-04 Incyte Corp Formas cristalinas de un inhibidor de fgfr y procesos para su preparación
AU2018311966A1 (en) 2017-08-04 2020-02-13 Merck Sharp & Dohme Llc Benzo[b]thiophene sting agonists for cancer treatment
WO2019027857A1 (en) 2017-08-04 2019-02-07 Merck Sharp & Dohme Corp. COMBINATIONS OF PD-1 ANTAGONISTS AND STING BENZO [B] THIOPHENIC AGONISTS FOR THE TREATMENT OF CANCER
KR20200044016A (ko) 2017-08-24 2020-04-28 노보 노르디스크 에이/에스 Glp-1 조성물 및 그 용도
WO2019051469A1 (en) 2017-09-11 2019-03-14 Krouzon Pharmaceuticals, Inc. SHP2 OCTAHYDROCYCLOPENTA [C] PYRROLE ALLOSTERIC INHIBITORS
US11052065B2 (en) 2017-09-27 2021-07-06 Merck Sharp & Dohme Corp. Compositions and methods for treating cancer with a combination of programmed death receptor (PD-1) antibodies and a CXCR2 antagonist
MX2020003502A (es) 2017-10-11 2021-09-30 Chemocentryx Inc Tratamiento de glomerulosclerosis segmentaria focal con antagonistas ccr2.
EP3703692A4 (en) 2017-11-01 2021-04-28 Merck Sharp & Dohme Corp. NEW SUBSTITUTED TETRAHYDROQUINOLINE COMPOUNDS USED AS INDOLEAMINE 2,3-DIOXYGENASE (IDO) INHIBITORS
MX2020004930A (es) 2017-11-14 2020-08-27 Merck Sharp & Dohme Compuestos de biarilo sustituido novedosos como inhibidores de indolamina 2,3-dioxigenasa (ido).
WO2019099294A1 (en) 2017-11-14 2019-05-23 Merck Sharp & Dohme Corp. Novel substituted biaryl compounds as indoleamine 2,3-dioxygenase (ido) inhibitors
US11685761B2 (en) 2017-12-20 2023-06-27 Merck Sharp & Dohme Llc Cyclic di-nucleotide compounds as sting agonists
EP3774765A4 (en) 2018-04-03 2021-12-29 Merck Sharp & Dohme Corp. Aza-benzothiophene compounds as sting agonists
KR20200139203A (ko) 2018-04-03 2020-12-11 머크 샤프 앤드 돔 코포레이션 Sting 효능제로서의 벤조티오펜 및 관련 화합물
SG11202010882XA (en) 2018-05-04 2020-11-27 Incyte Corp Salts of an fgfr inhibitor
KR20210018265A (ko) 2018-05-04 2021-02-17 인사이트 코포레이션 Fgfr 억제제의 고체 형태 및 이의 제조 방법
CN110452176A (zh) * 2018-05-07 2019-11-15 四川大学 吲唑类衍生物及其制备方法和用途
US11352320B2 (en) 2018-05-31 2022-06-07 Merck Sharp & Dohme Corp. Substituted [1.1.1] bicyclo compounds as indoleamine 2,3-dioxygenase inhibitors
MX2021003158A (es) 2018-09-18 2021-07-16 Nikang Therapeutics Inc Derivados de anillo tricíclico condensado como inhibidores de la fosfatasa de homología a src 2.
EP3856349A1 (en) 2018-09-25 2021-08-04 Black Diamond Therapeutics, Inc. Tyrosine kinase inhibitor compositions, methods of making and methods of use
BR112021005513A2 (pt) 2018-09-25 2021-06-22 Black Diamond Therapeutics, Inc. derivados de quinazolina como inibidor de tirosina quinase, composições, métodos de fabricação e uso dos mesmos
IL305106A (en) 2018-09-29 2023-10-01 Novartis Ag A process for producing a compound to inhibit the activity of SHP2
EP3873464A4 (en) 2018-11-01 2022-06-08 Merck Sharp & Dohme Corp. NOVEL SUBSTITUTED PYRAZOLE COMPOUNDS AS INDOLAMINE-2,3-DIOXYGENASE INHIBITORS
US20210403469A1 (en) 2018-11-06 2021-12-30 Merck Sharp & Dohme Corp. Novel substituted tricyclic compounds as indoleamine 2,3-dioxygenase inhibitors
CN111205227A (zh) * 2018-11-22 2020-05-29 四川大学 3-乙烯基吲唑类衍生物及其制备方法和用途
US20230008022A1 (en) 2018-11-28 2023-01-12 Merck Sharp & Dohme Corp. Novel substituted piperazine amide compounds as indoleamine 2,3-dioxygenase (ido) inhibitors
EP3917911A1 (en) * 2019-01-31 2021-12-08 Kyorin Pharmaceutical Co., Ltd. 15-pgdh inhibitors
US11628162B2 (en) 2019-03-08 2023-04-18 Incyte Corporation Methods of treating cancer with an FGFR inhibitor
WO2020205688A1 (en) 2019-04-04 2020-10-08 Merck Sharp & Dohme Corp. Inhibitors of histone deacetylase-3 useful for the treatment of cancer, inflammation, neurodegeneration diseases and diabetes
JP2022526827A (ja) 2019-04-11 2022-05-26 アンジオン バイオメディカ コーポレーション （ｅ）－３－［２－（２－チエニル）ビニル］－１ｈ－ピラゾールの固体形態
WO2020212253A1 (en) 2019-04-18 2020-10-22 Synthon B.V. Process for preparing axitinib, process for purifying the intermediate 2-((3-iodo-1h-indazol-6-yl)thio)-n-methylbenzamide, process for purifying axitinib via the axitinib hcl salt, solid form of the axitinib hcl salt
EP3965743A1 (en) 2019-05-09 2022-03-16 Synthon B.V. Pharmaceutical composition comprising axitinib
WO2020260547A1 (en) 2019-06-27 2020-12-30 Rigontec Gmbh Design method for optimized rig-i ligands
US11591329B2 (en) 2019-07-09 2023-02-28 Incyte Corporation Bicyclic heterocycles as FGFR inhibitors
WO2021026009A1 (en) 2019-08-02 2021-02-11 Mersana Therapeutics, Inc. Bis-[n-((5-carbamoyl)-1h-benzo[d]imidazol-2-yl)-pyrazol-5-carboxamide] derivatives and related compounds as sting (stimulator of interferon genes) agonists for the treatment of cancer
US20220298120A1 (en) 2019-08-15 2022-09-22 Black Diamond Therapeutics, Inc. Alkynyl quinazoline compounds
CN112442011B (zh) * 2019-08-30 2023-11-14 润佳（苏州）医药科技有限公司 一种前药化合物及其在治疗癌症方面的应用
AU2020338490A1 (en) * 2019-08-30 2022-03-17 Risen (Suzhou) Pharma Tech Co., Ltd. Prodrugs of the tyrosine kinase inhibitor for treating cancer
CN112442010B (zh) * 2019-08-30 2023-10-03 润佳（苏州）医药科技有限公司 一类前药化合物及其在治疗癌症方面的应用
JP2022552324A (ja) 2019-10-14 2022-12-15 インサイト・コーポレイション Ｆｇｆｒ阻害剤としての二環式複素環
WO2021076728A1 (en) 2019-10-16 2021-04-22 Incyte Corporation Bicyclic heterocycles as fgfr inhibitors
CN112694474B (zh) * 2019-10-23 2022-03-18 四川大学 吲唑类衍生物及其制备方法和用途
CA3163875A1 (en) 2019-12-04 2021-06-10 Incyte Corporation Tricyclic heterocycles as fgfr inhibitors
EP4069695A1 (en) 2019-12-04 2022-10-12 Incyte Corporation Derivatives of an fgfr inhibitor
EP4069683A1 (en) 2019-12-06 2022-10-12 Mersana Therapeutics, Inc. Dimeric compounds as sting agonists
CN111829859B (zh) * 2020-01-20 2024-01-05 北京林业大学 一种高效杨树种子透明染色及其三维成像的方法
BR112022013795A2 (pt) 2020-02-18 2022-09-13 Novo Nordisk As Composição farmacêutica líquida, e, kit
WO2021184097A1 (pt) * 2020-03-18 2021-09-23 Faculdades Católicas Compostos n-acil-hidrazônicos, uso no tratamento de agregopatias degenerativas amiloides e não-amiloides, e composição farmacêutica
WO2021195206A1 (en) 2020-03-24 2021-09-30 Black Diamond Therapeutics, Inc. Polymorphic forms and related uses
US20230183214A1 (en) 2020-05-06 2023-06-15 Merck Sharp & Dohme Llc Il4i1 inhibitors and methods of use
WO2021232367A1 (zh) * 2020-05-21 2021-11-25 四川大学 3-乙烯基吲唑类衍生物及其制备方法和用途
CN113943271B (zh) * 2020-07-15 2023-11-14 鲁南制药集团股份有限公司 一种阿昔替尼晶型及其制备方法
CN112028831A (zh) * 2020-09-24 2020-12-04 山东大学 一种苯并吡唑类化合物、其制备方法及作为抗肿瘤药物的应用
EP4267575A1 (en) 2020-12-22 2023-11-01 Nikang Therapeutics, Inc. Compounds for degrading cyclin-dependent kinase 2 via ubiquitin proteosome pathway
WO2022152821A1 (en) 2021-01-13 2022-07-21 Monte Rosa Therapeutics Ag Isoindolinone compounds
WO2022170052A1 (en) 2021-02-05 2022-08-11 Black Diamond Therapeutics, Inc. Quinazoline derivatives, pyridopyrimidine derivatives, pyrimidopyrimidine derivatives, and uses thereof
WO2022219407A1 (en) 2021-04-14 2022-10-20 Monte Rosa Therapeutics Ag Isoindolinone compounds
EP4323349A1 (en) 2021-04-14 2024-02-21 Monte Rosa Therapeutics AG Isoindolinone amide compounds useful to treat diseases associated with gspt1
WO2022227015A1 (en) 2021-04-30 2022-11-03 Merck Sharp & Dohme Corp. Il4i1 inhibitors and methods of use
AR126102A1 (es) 2021-06-09 2023-09-13 Incyte Corp Heterociclos tricíclicos como inhibidores de fgfr
WO2023284730A1 (en) 2021-07-14 2023-01-19 Nikang Therapeutics, Inc. Alkylidene derivatives as kras inhibitors
TW202346292A (zh) 2022-03-28 2023-12-01 美商尼坎醫療公司 作為週期蛋白依賴性激酶２抑制劑的磺醯胺基衍生物
EP4282415A1 (en) 2022-05-26 2023-11-29 Genepharm S.A. A stable tablet composition of axitinib
WO2023240024A1 (en) 2022-06-08 2023-12-14 Nikang Therapeutics, Inc. Sulfamide derivatives as cyclin-dependent kinase 2 inhibitors
WO2024032584A1 (zh) * 2022-08-08 2024-02-15 苏州必扬医药科技有限公司 一种蛋白酪氨酸激酶抑制剂及其医疗用途

Family Cites Families (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5625031A (en) * 1994-02-08 1997-04-29 Bristol-Myers Squibb Company Peptide inhibitors of the p33cdk2 and p34cdc2 cell cycle regulatory kinases and human papillomavirus E7 oncoprotein
US5631156A (en) * 1994-06-21 1997-05-20 The University Of Michigan DNA encoding and 18 KD CDK6 inhibiting protein
AU700964B2 (en) * 1994-11-10 1999-01-14 Cor Therapeutics, Inc. Pharmaceutical pyrazole compositions useful as inhibitors of protein kinases
ZA951822B (en) * 1994-12-23 1996-09-26 Glaxo Group Ltd Chemical compounds
US5710173A (en) * 1995-06-07 1998-01-20 Sugen, Inc. Thienyl compounds for inhibition of cell proliferative disorders
US5733920A (en) * 1995-10-31 1998-03-31 Mitotix, Inc. Inhibitors of cyclin dependent kinases
US5760028A (en) * 1995-12-22 1998-06-02 The Dupont Merck Pharmaceutical Company Integrin receptor antagonists
DE69734149T2 (de) * 1996-03-15 2006-07-06 Astrazeneca Ab Cinoline derivate und verwendung als heilmittel
EP0934307B1 (en) * 1996-06-19 2011-04-27 Aventis Pharma Limited Substituted azabicylic compounds and their use as inhibitors of the production of tnf and cyclic amp phosphodiesterase
TR199900481T2 (xx) * 1996-09-04 1999-06-21 Pfizer Inc. �ndazol t�revleri; fosfodiesteraz tip IV inhibit�rleri olarak kullan�mlar�.
ID24372A (id) * 1997-10-27 2000-07-13 Agouron Pharma SENYAWA-SENYAWA 4-AMINO-TIAZOL-2-IL SEBAGAI PENGHAMBAT-PENGHAMBAT CDKs
TR200001256T2 (tr) * 1997-11-04 2000-11-21 Pfizer Products Inc. Terapötik olarak aktif bileşimler.
US6391872B1 (en) * 1997-11-04 2002-05-21 Pfizer Inc Indazole bioisostere replacement of catechol in therapeutically active compounds
PE20010306A1 (es) * 1999-07-02 2001-03-29 Agouron Pharma Compuestos de indazol y composiciones farmaceuticas que los contienen utiles para la inhibicion de proteina kinasa

Also Published As

Publication number Publication date
PA8498001A1 (es) 2002-08-26
CZ301667B6 (cs) 2010-05-19
IS6207A (is) 2001-12-19
NO2013004I1 (no) 2013-03-18
AU777701B2 (en) 2004-10-28
CN1137884C (zh) 2004-02-11
EP1614683B1 (en) 2007-11-21
CY2013009I1 (el) 2016-04-13
PT1218348E (pt) 2007-12-14
OA11980A (en) 2006-04-18
NO20060596L (no) 2002-03-01
HK1065037A1 (en) 2005-02-08
DK1614683T3 (da) 2008-03-25
EA200200120A1 (ru) 2002-08-29
CY2013009I2 (el) 2016-04-13
DE60036879D1 (de) 2007-12-06
AP1486A (en) 2005-11-01
JO2319B1 (en) 2005-09-12
ATE376543T1 (de) 2007-11-15
FR13C0010I2 (fr) 2013-08-16
PT1614683E (pt) 2008-01-24
DE60037211T2 (de) 2008-12-11
IS2791B (is) 2012-06-15
AR065937A2 (es) 2009-07-15
BRPI0012352B8 (pt) 2021-05-25
JP3969669B2 (ja) 2007-09-05
CN1495171A (zh) 2004-05-12
MY139999A (en) 2009-11-30
YU92901A (sh) 2004-09-03
HU228502B1 (en) 2013-03-28
CA2383630C (en) 2008-11-18
CY1107148T1 (el) 2012-01-25
AR035554A1 (es) 2004-06-16
NZ516676A (en) 2003-09-26
DE60037211D1 (de) 2008-01-03
HUP0202490A3 (en) 2003-01-28
LU92154I2 (fr) 2013-04-22
CR10194A (es) 2008-09-30
NO2013004I2 (no) 2014-06-02
MY137622A (en) 2009-02-27
DK1218348T3 (da) 2008-02-25
ES2293906T3 (es) 2008-04-01
KR100529639B1 (ko) 2006-01-16
EP1614683A1 (en) 2006-01-11
CR6517A (es) 2006-09-21
GT200000107A (es) 2001-12-21
BE2013C015I2 (sk) 2019-05-21
BG66070B1 (bg) 2011-01-31
BG106380A (bg) 2002-09-30
ZA200110061B (en) 2003-02-06
SI1614683T1 (sl) 2008-02-29
GEP20063885B (en) 2006-08-10
MA26803A1 (fr) 2004-12-20
MEP45108A (en) 2011-05-10
NO20015797L (no) 2002-03-01
ME00385B (me) 2011-05-10
ES2296014T3 (es) 2008-04-16
DZ3191A1 (fr) 2001-01-11
EE05585B1 (et) 2012-10-15
WO2001002369A2 (en) 2001-01-11
HK1085470A1 (en) 2006-08-25
CZ20014634A3 (cs) 2002-09-11
NO322507B1 (no) 2006-10-16
EP1218348A2 (en) 2002-07-03
HK1048813A1 (en) 2003-04-17
JP2006348043A (ja) 2006-12-28
CO5190686A1 (es) 2002-08-29
RS50339B (sr) 2009-11-10
KR20020027379A (ko) 2002-04-13
UA66933C2 (uk) 2004-06-15
IL146710A0 (en) 2002-07-25
HRP20020109A2 (en) 2003-12-31
CN1234693C (zh) 2006-01-04
EP1218348B1 (en) 2007-10-24
AU5785200A (en) 2001-01-22
HUP0202490A2 (hu) 2002-11-28
TNSN00146A1 (fr) 2005-11-10
PL212108B1 (pl) 2012-08-31
EE200100717A (et) 2003-02-17
BR0012352A (pt) 2002-05-14
MXPA01012795A (es) 2002-09-02
WO2001002369A3 (en) 2002-04-25
PE20010306A1 (es) 2001-03-29
DE60036879T2 (de) 2008-02-14
SK286936B6 (sk) 2009-07-06
NO20015797D0 (no) 2001-11-28
SV2002000121A (es) 2002-12-02
JP3878849B2 (ja) 2007-02-07
UY26231A1 (es) 2001-01-31
SI1218348T1 (sl) 2008-02-29
HRP20020109B1 (en) 2008-07-31
AP2002002392A0 (en) 2002-03-31
FR13C0010I1 (sk) 2013-03-22
CY1107147T1 (el) 2012-10-24
EA004460B1 (ru) 2004-04-29
CN1374950A (zh) 2002-10-16
JP2003503481A (ja) 2003-01-28
CA2383630A1 (en) 2001-01-11
PL355757A1 (en) 2004-05-17
BRPI0012352B1 (pt) 2016-08-16

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP1218348B1 (en) Indazole compounds and pharmaceutical compositions for inhibiting protein kinases, and methods for their use
US6531491B1 (en) Indazole compounds and pharmaceutical compositions for inhibiting protein kinases, and methods for their use
TWI394749B (zh) 具有激酶抑制劑活性之雜戊環
JP6050241B2 (ja) 神経変性疾患の治療のための新規化合物
HRP20050559A2 (en) 2-(1h-indazole-6-ylamino)-benzamide compounds as protein kinases inhibitors useful for the treatment of ophthalmic diseases

Legal Events

Date Code Title Description
TE4A Change of owner's address

Owner name: AGOURON PHARMACEUTICALS, INC., SAN DIEGO, CA, US

Effective date: 20130225

SPCF Filing of an spc

Free format text: PRODUCT NAME: AXINTINIB; REGISTRATION NO/DATE: EU/1/12/277/001-006 20120903

Spc suppl protection certif: 5003-2013

SPCG Grant of an spc

Free format text: PRODUCT NAME: AXITINIB; REGISTRATION NO/DATE: EU/1/12/777/001 - EU/1/12/777/006 20120903

Spc suppl protection certif: 133 5003-2013

Filing date: 20130218

Extension date: 20250701

SPCC Change of address or name of an owner of an spc

Free format text: AGOURON PHARMACEUTICALS, LLC, SAN DIEGO, CA, US; DATUM ZAPISU DO REGISTRA: 25.9.

Spc suppl protection certif: 133 5003-2013

TC4A Change of owner's name

Owner name: AGOURON PHARMACEUTICALS, LLC, SAN DIEGO, CA, US

Effective date: 20180925

MK4A Patent expired

Expiry date: 20200630