JP4890255B2 - 改良された薬物特性を有するキノリノン化合物の薬学的に受容可能な塩 - Google Patents

改良された薬物特性を有するキノリノン化合物の薬学的に受容可能な塩 Download PDF

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Description

本発明は、一般的に、改良された水溶解度および他の望ましい物理化学的性質（例えば、安定性、吸湿性、結晶化度、および成形性）を有する特定のタンパク質キナーゼを阻害するキノリノン化合物の薬学的に受容可能な塩の調製に関する。このキノリノン化合物は、癌を含む血管形成によって特徴付けられる疾患の処置に有用である。より特定的には、本明細書中に記載される本発明は、改良された水溶解度および望ましい薬物基質の性質を有する特定のタンパク質キナーゼを阻害するキノリノン化合物の薬学的に受容可能な塩に関する。本発明は、血管内皮増殖因子レセプターチロシンキナーゼの阻害剤であり、患者を処置する方法において使用可能であり、血管の内皮増殖因子レセプターチロシンキナーゼの阻害が示される、これらの塩を提供する。
（発明の背景）
薬物の基質形態をその遊離塩基または酸から塩形態に変化させることは、その薬物動力学または物理化学的性質、例えば、吸収度、バイオアベイラビリティ、水溶解度、安定性、吸湿性、結晶化度、および加工性を改良するために使用され得る１つの技術である（非特許文献１；非特許文献２；非特許文献３）。しかし、今日まで、塩に変化させることが物理化学的性質または薬物動力学的性質にどのような影響を実際に与えるのかを正確に予測する信頼できる方法は存在していない。さらに、どの塩を形成する薬剤または対イオンが、薬物化合物または基質に最も望ましい薬学的性質を与えるのかを予測する信頼できる方法も存在していない。必要とされる用量に依存して、０．１〜１．０ｍｇ／ｍＬの範囲の水溶解度が、経口投薬配合物について典型的である。非経口配合物は、さらに高い溶解度（例えば、１０ｍｇ／ｍＬ以上）が必要とされる場合がある（非特許文献４）。
一般的に、塩は、酸および塩基を好適な媒体（溶液または樹脂）中で混合することによって製造されてもよい。塩を誘発して媒体から結晶化させる典型的なアプローチとしては、冷却、蒸発、ｐＨシフト、および中でも不溶性溶媒の添加が挙げられる。例えば、塩基性化合物の塩は、この化合物と無機酸、有機酸、酸性アミノ酸とを反応させることによって調製されてもよい。薬物基質に無機塩基および有機塩基（例えば、アミンカチオン、アンモニウム、および四級アンモニウム化合物）を添加することによって形成される塩はさらに、「薬学的に受容可能な塩」の定義に含まれる。
選択された塩イオンは、薬物の薬物動力学、特にその吸収または膜移動プロセスに顕著に影響を与えることができる。薬物基質の塩形態は、バイオアベイラビリティに影響を与える因子に影響を与えることが知られている。これらの塩は、薬物の吸収速度およびそのバイオアベイラビリティに影響を与える溶解度プロフィールおよび溶解速度において異なっている。
薬物基質の溶解度は、遊離塩基または酸を塩形態に変換することによって向上させることができる。薬物基質の溶解度は、その薬物動力学プロフィール、化学安定性、および最終的な投薬組成物の最終的な配合に影響を与える。化合物の溶解度は、薬物基質の物理的性質および化学的性質および他の因子（例えば、温度、圧力および溶媒の性質（例えばｐＨ））に依存する。物理的性質および化学的性質は、それぞれの塩形態で変動し得る。
薬物基質の特定の塩形態は、投薬形態、製造プロセス、包装、および完成薬物製品の最終的な治療の利点の選択に顕著な影響を与え得るその安定性に影響を与えることができる。安定性に影響を与える因子としては、吸湿性および結晶化度が挙げられる。非吸湿性の塩および結晶性の非アモルファス塩が、最適な貯蔵、ハンドリング、および加工特性を有する配合物を開発するのに一般的に好ましい。
加工性（すなわち、結晶形態および成形性）は、塩形態を選択する場合に考慮される別の特徴である。一般的に、バルク粉末の流動性のため、平板形状の結晶は針状結晶よりも好ましい。成形性は、粉末化された物質が特定の引っ張り強度の錠剤へと圧縮される能力として定義され、高用量の薬物において特に重要性を有する。
薬物基質の遊離酸または塩基の塩形態を形成する能力は、その化学式を変更することなく、薬物製品の化学的特徴、物理的特徴、および／または生物学的特徴を変更するための手段を提供する。このような変更は、親薬物基質よりも溶解度、安定性、加工性、およびバイオアベイラビリティを高めた配合物の開発を可能にする。
毛管は人体のほぼ全ての組織に到達し、組織に酸素および栄養物を供給し、廃棄産物を除去する。典型的な条件下で、内皮細胞をつなぐ毛管は分割されず、それ故に、毛管は通常は成人において数またはサイズが増加しない。しかし、特定の正常な条件下では、例えば、組織が損傷した場合、または特定の月経サイクルの一部分の間には、毛管は迅速に増殖し始める。既存の血管から新しい毛管を形成するこのプロセスは、脈管形成または血管新生として知られている。非特許文献５を参照。創傷治癒中の脈管形成は、成人の一生の間の病態生理学的血管新生の一例である。創傷治癒の間、さらなる毛管は、酸素および栄養物の供給を提供し、肉芽組識を促進し、廃棄物除去を助ける。治癒プロセスの終了後、毛管は通常は退縮する。非特許文献６。
脈管形成はさらに、癌細胞の増殖において重要な役割を果たす。癌細胞の病巣が特定のサイズ（直径がほぼ１〜２ｍｍ）に到達すると、拡散が十分な酸素および栄養物を癌細胞に供給するのに十分ではないため、癌細胞は腫瘍をより大きく成長させるために血管供給を発達させなければならない。従って、脈管形成の阻害が、癌細胞の増殖を中断すると予想される。
レセプターチロシンキナーゼ（ＲＴＫ）は、成人組織の進行的な細胞増殖および分化、リモデリングおよび再生を調整する膜内外ポリペプチドである。非特許文献７；非特許文献８。増殖因子またはサイトカインとして知られるポリペプチドリガンドは、ＲＴＫを活性化することが知られている。ＲＴＫのシグナル伝達は、リガンド結合およびその二量化を生じるレセプターの外部ドメインの形状シフトを含む。非特許文献９；非特許文献１０。ＲＴＫに対するリガンドの結合により、特定のチロシン残基でレセプタートランス−ホスホリル化が生じ、細胞質基質のホスホリル化のための触媒的ドメインの後に続く活性化が生じる。同上。
ＦＬＴ−３は、大部分の患者の急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）細胞で発現する、ＰＤＧＦレセプターファミリーに属するレセプターチロシンキナーゼであり、野生型において存在し得るか、または構成的に活性なキナーゼ機能を生じる活性化変異を有する。内部縦列反復（ＩＴＤ）変異は、ＡＭＬ患者の約２５％において発現し、ＡＭＬ患者中の予後の悪さと関係がある。非特許文献１１。
ｃ−Ｋｉｔは、ＰＤＧＦレセプターファミリーに属する別のレセプターチロシンキナーゼであり、通常は、造血前駆細胞、マスト細胞、および生殖細胞中で発現する。Ｃ−ｋｉｔ発現は、マスト白血病、生殖細胞の腫瘍、小細胞肺癌腫、消化管間質腫瘍、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、神経芽細胞腫、黒色腫、卵巣癌腫、乳癌腫を含む多くの癌に関与している。非特許文献１２：非特許文献１３。
ｃ−ＡＢＬは、もともとはＡｂｅｌｓｏｎマウス白血病ウイルスのゲノム由来の癌遺伝子産物として同定されたチロシンキナーゼである。慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）の約９０％、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）の２０〜３０％および急性骨髄芽球性白血病（ＡＭＬ）の約１％が、染色体９および２２の間の相互転座を有する。転座により、「Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ」染色体を生じ、これがキメラＢＣＲ／ＡＢＬ転写物を発現する理由である。
ＦＧＦＲ３は、種々の癌に関係するチロシンキナーゼである。線維芽細胞増殖因子レセプター３（ＦＧＦＲ３）は、ＩＶ類レセプターチロシンキナーゼである。ＦＧＦＲ３は、多発性骨髄腫患者の約１５〜３０％におけるｔ（４，１４）転座に起因して制御が解除される。この転座は、例えば、骨微小環境においてＦＧＦ１に対して応答可能な機能的なＦＧＦＲ３の発現を生じる。いくつかの場合では、ＦＧＦＲ３リガンド非依存をつくりだす活性化変異が同定された。これらの活性化ＦＧＦＲ３変異は、Ｒａｓ−様の腫瘍進行を生じることがわかっており、同様のシグナル伝達経路が利用されるという証拠が存在する（非特許文献１４）。
ＣＳＦ−１（コロニー刺激因子−１およびそのレセプターマクロファージＣＳＦＲ−１（Ｆｍｓ）は、マクロファージ増殖および分化および胎盤の発達を必要とする。ＣＳＦ−１は乳腺において妊娠中および授乳中に発現する。ＣＳＦＲ１の異常発現は、乳癌患者の進行段階および予後不良と相関関係を有する。
Ｃ−Ｍｅｔは、ＨＧＦ（肝細胞増殖因子）に結合するレセプターチロシンキナーゼである。Ｃ−Ｍｅｔは、直腸癌、多発性骨髄腫、小細胞および非小細胞肺癌および腎臓細胞癌腫を含む腫瘍形成、腫瘍進行および多発性腫瘍の転移に関与する。Ｃ−Ｍｅｔは、多発性癌において突然変異し、増幅し、および過剰発現することがわかっている。
ＲＴＫの２個のサブファミリーは、血管内皮に特異的である。これらは、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）サブファミリーおよびＴｉｅレセプターサブファミリーを含む。Ｖ類ＲＴＫは、ＶＥＧＦＲ−１、ＶＥＧＦＲ−２、およびＶＥＧＦＲ−３を含む。非特許文献１５；非特許文献１６；非特許文献１７。
ＶＥＧＦサブファミリーのメンバーは、血管の透過性および内皮細胞増殖を誘発することができ、さらに、血管形成および脈管形成の主要な誘発剤として同定された。非特許文献１８。ＶＥＧＦは、ＶＥＧＦＲ−１およびＶＥＧＦＲ−２を含むＲＴＫに特異的に結合することが知られている。非特許文献１９；非特許文献２０。ＶＥＧＦは内皮細胞の移動および増殖を刺激し、インビトロおよびインビボで血管形成を誘発する。非特許文献２１；非特許文献２２；非特許文献２３；非特許文献２４；非特許文献２５。
血管形成は癌の増殖にとって重要であり、ＶＥＧＦおよびＶＥＧＦ−ＲＴＫによって制御されることが知られているため、ＶＥＧＦ−ＲＴＫのアンタゴニストである治療薬を開発し、血管形成を阻害または遅らせ、願わくば腫瘍増殖を妨害または停止させるために実質的な努力がなされた。
ＩＩＩ類ＲＴＫは、５個の免疫グロブリン様ドメインで構成される細胞外領域および分割されたチロシンキナーゼドメインによって特徴付けられる。式Ｉの化合物によって阻害されるＩＩＩ類ＲＴＫのいくつかとしては、限定されないが、ＫＩＴ、ＦＭＳ、ＦＬＴ３、ＰＤＧＦＲα、およびＰＤＧＦＲβが挙げられる。
ＩＶ類ＲＴＫは、それらの細胞外領域に３個の免疫グロブリン様ドメインを含有する。例えば、ＦＧＦＲは、式Ｉの化合物によって阻害されるＩＶ類ＲＴＫである。
式Ｉの化合物によって阻害されるＶ類ＲＴＫの例としては、限定されないが、ＶＥＧＦＲ−１、ＶＥＧＦＲ−２、およびＶＥＧＦＲ−３が挙げられる。
広範囲の化学化合物および組成物が、１つ以上のＶＥＧＦ−ＲＴＫに対して活性を有するものとして報告されている。例としては、特許文献１に記載されるようなキノリン誘導体、アミノニコチンアミド誘導体（例えば、特許文献２を参照）、アンチセンス化合物（例えば、特許文献３を参照）、ペプチド模倣物（例えば、特許文献４を参照）、キナゾリン誘導体（例えば、特許文献５を参照）、モノクローナル抗体（例えば、特許文献６を参照）、種々の５，１０，１５，２０−テトラアリール−ポルフィリンおよび５，１０，１５−トリアリール−コロール（例えば、特許文献７を参照）、ヘテロ環アルカンスルホン酸およびアルカンカルボン酸誘導体（例えば、特許文献８を参照）、オキシンドールイルキナゾリン誘導体（例えば、特許文献９を参照）、１，４−ジアザアントラシン誘導体（例えば、米国特許第特許文献１０を参照）、およびシンノリン誘導体（例えば、特許文献１０を参照）、および種々のインダゾール化合物（例えば、特許文献１１および特許文献１２を参照）が挙げられる。
種々のインドリル置換化合物は、近年、特許文献１４、特許文献１５および特許文献１６において開示され、種々のベンズイミダゾリル化合物は、近年、特許文献１７において開示されている。これらの化合物は、レセプター型および非レセプターチロシンキナーゼの両方のシグナル導入を阻害し、調整し、および／または制御することができることが報告されている。開示された化合物のいくつかは、インドリル基またはベンズイミダゾリル基に結合したキノロンフラグメントを含有する。
４−ヒドロキシキノロンおよび４−ヒドロキシキノリン誘導体の合成は、多くの参考文献に開示されている。例えば、Ｕｋｒａｉｎｅｔｓ ｅｔ ａｌ．は、３−（ベンズイミダゾール−２−イル）−４−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリンの合成を開示している。非特許文献２６；非特許文献２７。Ｕｋｒａｉｎｅｔｓはさらに、他の４−ヒドロキシキノロンおよびチオアナログ、例えば、１Ｈ−２−オキソ−３−（２−ベンズイミダゾリル）−４−ヒドロキシキノリニンの合成、痙攣防止活性および抗甲状腺活性を開示している。非特許文献２８；非特許文献２９；非特許文献３０。
種々のキノリン誘導体の合成は、特許文献１８に開示されている。これらの化合物は、核ホルモンレセプターに結合可能であり、骨芽細胞増殖および骨増殖を刺激するのに有用であるものとして開示されている。この化合物はさらに、核ホルモンレセプターファミリーと関係する疾患の処置または予防において有用であるものとして開示されている。
キノロンのベンゼン環が硫黄基によって置換されている種々のキノリン誘導体が特許文献１９に開示されている。これらの化合物は、薬学的処方物において、および医薬品として有用であるものとして開示されている。
キノロンおよびクマリン誘導体は、医学および薬学的処方物に関係しない種々の適用における用途を有するものとして開示されている。光重合可能な組成物において使用するための、またはルミネセンスのためのキノロン誘導体の調製を記載する参考文献としては以下のものが挙げられる：特許文献２０（Ｏｋａｍｏｔｏ ｅｔ ａｌ．に対して発行）；特許文献２１；特許文献２２；特許文献２３；特許文献２４；特許文献２５および特許文献２６。
キノリノン誘導体は、米国特許出願第０９／９５１，２６５号（２００２年８月８日に特許文献２７として公開）、２００２年３月２１日に特許文献２８として公開されたＰＣＴ出願に開示されており、ＶＥＧＦ−ＲＴＫの阻害剤として有用である。上述の参考文献の両方は、全ての目的のためにその全体が本明細書中に参考として組み込まれる。しかし、毛管の増殖を阻害し、腫瘍の増殖を阻害し、および／または血管内皮増殖因子レセプターチロシンキナーゼを阻害する化合物のバイオアベイラビリティ、安定性、溶解度、および吸湿性を高めるための必要性、および遊離塩基および酸をそれらの対応する塩形態に変換することによってこのような化合物を含有する薬学的処方物の必要性が継続して存在する。
種々のＲＴＫの阻害の結果として、下流シグナル伝達分子、細胞増殖および生存を含む、他のリガンドにより刺激される細胞機能がブロックされる。特定のＲＴＫの阻害剤として作用する薬剤は、播種性疾患および白血病、および固体腫瘍、薬剤の抗血管形成活性の外側の処置において有用である。すなわち、特許文献２９に記載されるような化合物は、異なるＲＴＫおよびＰＴＫで広範囲の活性を有する、血管形成薬剤および抗腫瘍薬剤である。
多発性骨髄腫（ＭＭ）、悪性腫瘍Ｂ細胞の疾患は、骨髄（ＢＭ）におけるクローナル血漿細胞の蓄積および骨溶解性骨病変によって特徴付けられる。自己幹細胞移植（ＡＳＣＴ）および対症的ケアにおける進歩は、疾患および長期間の生存において顕著な影響を有している。非特許文献３１および非特許文献３２。しかし、患者は常に再発し、ＭＭは全体的に致命的な疾患のままである。ＭＭにおける非ランダムな染色体転座の同定は、強力な予後ツールの開発および新規な分子標的の同定を生じた。ＭＭを有する患者のほぼ半分は、推定上の癌遺伝子を過剰発現し、５個の再発免疫グロブリン重鎖遺伝子（ＩｇＨ）転座のうち１個によって調節不全される：１１ｑ１３（サイクリンＤ１）、６ｐ２１（サイクリンＤ３）、４ｐ１６（ＦＧＦＲ３およびＭＭＳＥＴ）、１６ｑ２３（ｃ−ｍａｆ）および２０ｑ１１（ｍａｆＢ）。非特許文献３３および非特許文献３４。これらの転座は、ＭＭの進行において初期および可能な場合発生事象をあらわすようである。さらに最近では、これらの特定のＩｇＨ転座が予後の深刻さを分け与えることが明らかになってきた。特に、患者の約２０％に生じるｔ（４；１４）転座は、ＭＭについて特に予後不良を与えるようであり、ＡＳＣＴの明らかな治療効果がなかった。非特許文献３５；非特許文献３６；非特許文献３７および非特許文献３８。明らかに、新規な処置アプローチがこれらの患者には必要である。
ｔ（４；１４）転座が２個の潜在的な癌遺伝子ｄｅｒ（４）でのＭＭＳＥＴおよびｄｅｒ（１４）でのＦＧＦＲ３を調節不全すると考えることは不自然である。非特許文献３９および非特許文献４０。これらの遺伝子のいずれかまたは両方の調節不全がＭＭ病原論にとって重要であるか否かは知られていないが、いくつかのラインの証拠が、腫瘍開始および進行におけるＦＧＦＲ３の役割を支持する。ＷＴ ＦＧＦＲ３、ＲＴＫの活性化は、骨髄腫細胞における増殖および生存を促進し、造血マウスモデルにおいて弱く形質転換される。非特許文献４１；非特許文献４２および非特許文献４３。それに続くいくつかのＭＭにおけるＦＧＦＲ３の活性化変異の獲得は、後期段階の骨髄腫への進行と関係があり、いくつかの実験モデルにおいて強力に形質転換される。非特許文献４４および非特許文献４５。インビトロ研究は、ＦＧＦＲ３が化学耐性を与えることを示唆し、従来の化学治療に対して悪い応答を示す臨床データによって支持され、ｔ（４；１４）ＭＭ患者の生存期間が短いことが認められた。非特許文献４６；非特許文献４７；非特許文献４８および非特許文献４９。これらの発見は、ＦＧＦＲ３の異所性発現が骨髄腫の腫瘍形成に顕著ではあるが唯一ではない役割を果たし得、このＲＴＫが分子に基づく治療のための標的になり得ることを示唆する。
ｔ（４；１４）ＭＭ細胞株におけるＦＧＦＲ３の阻害は、これらの細胞が、末期段階の患者から誘導されるこれらの細胞における遺伝的改変の複雑性にもかかわらず、ＦＧＦＲ３シグナル伝達に依存したままであることを示す細胞毒性応答を誘発する。非特許文献５０；非特許文献５１および非特許文献５２。これらの観察結果は、臨床的成功が示され、これらの予後の悪い患者を処置するためのＦＧＦＲ３阻害剤の臨床的開発を助ける、ヒト悪性疾患の範囲におけるレセプターチロシン不活性化の結果と一致する。非特許文献５３；非特許文献５４；非特許文献５５および非特許文献５６。
国際公開第９８／１３３５０号パンフレット 国際公開第０１／５５１１４号パンフレット 国際公開第０１／５２９０４号パンフレット 国際公開第０１／５２８７５号パンフレット 米国特許第６，２５８，９５１号明細書 欧州特許第１０８６７０５Ａ１号明細書 国際公開第００／２７３７９号パンフレット 独国特許第１９８４１９８５号明細書 国際公開第９９／１０３４９号パンフレット 米国特許第５，７６３，４４１号明細書 国際公開第９７／３４８７６号パンフレット 国際公開第０１／０２３６９号パンフレット 国際公開第０１／５３２６８号パンフレット 国際公開第０１／２９０２５号パンフレット 国際公開第０１／６２２５１号パンフレット 国際公開第０１／６２２５２号パンフレット 国際公開第０１／２８９９３号パンフレット 国際公開第９７／４８６９４号パンフレット 国際公開第９２／１８４８３号パンフレット 米国特許第５，８０１，２１２号明細書 特開平第８−２９９７３号公報 特開平第７−４３８９６号公報 特開平第６−９９５２号公報 特開昭第６３−２５８９０３号公報 欧州特許第７９７３７６号明細書 独国特許第２３ ６３ ４５９号明細書 米国特許出願公開第２００２／０１０７３９２号明細書 国際公開第０２／２２５９８Ａ１号パンフレット 国際公開第０１／６０８１４号パンフレット Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓａｌｔｓ Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ，ａｎｄ Ｕｓｅ；Ｐ．Ｈ．Ｓｔａｈｌ，Ｃ．Ｇ．Ｗｅｒｍｕｔｈ（Ｅｄｓ．）：Ｃｈａｐｔｅｒ ５ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｔｈｅ ｄｒｕｇ ｓａｌｔ ｆｏｒｍ Ｆ．Ｐｆａｎｎｋｕｃｈ，Ｈ．Ｒｅｔｔｉｇ，Ｐ．Ｈ．Ｓｔａｈｌ．Ｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｔｏ Ｓａｌｔ Ｆｏｒｍｓ ｏｆ Ｄｒｕｇｓ ａｎｄ Ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ，Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｊ．Ｓｗａｒｂｉｃｋ，Ｊ．Ｃ．Ｂｏｙｌａｎ；Ｖｏｌ．１３，ｐ．４５３−４７６ Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓａｌｔｓ Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ，ａｎｄ Ｕｓｅ；Ｐ．Ｈ．Ｓｔａｈｌ，Ｃ．Ｇ．Ｗｅｒｍｕｔｈ（Ｅｄｓ．）：Ｃｈａｐｔｅｒ ７． Ａ Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅ ｆｏｒ Ｓａｌｔ Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ；Ｍ．Ｊ．Ｂｏｗｋｅｒ Ｆｏｌｋｍａｎ，Ｊ．Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ａｍｅｒｉｃａｎ ２７５，１５０−１５４（１９９６） Ｌｙｍｂｏｕｓｓａｋｉ，Ａ．"Ｖａｓｃｕｌａｒ Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ Ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ｉｎＥｍｂｒｙｏｓ，Ａｄｕｌｔｓ， ａｎｄ ｉｎ Ｔｕｍｏｒｓ"Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｄｉｓｓｅｒｔａｔｉｏｎ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｈｅｌｓｉｎｋｉ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ／Ｃａｎｃｅｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ａｎｄ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ，Ｈａａｒｔｍａｎ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，（１９９９） Ｍｕｓｔｏｎｅｎ，Ｔ．ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ １２９，８９５−８９８（１９９５） ｖａｎ ｄｅｒ Ｇｅｅｒ，Ｐ．ｅｔ ａｌ．Ａｎｎ Ｒｅｖ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．１０，２５１−３３７（１９９４） Ｌｙｍｂｏｕｓｓａｋｉ，Ａ．"Ｖａｓｃｕｌａｒ Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ Ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ｉｎ Ｅｍｂｒｙｏｓ，Ａｄｕｌｔｓ，ａｎｄ ｉｎ Ｔｕｍｏｒｓ" Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｄｉｓｓｅｒｔａｔｉｏｎ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｈｅｌｓｉｎｋｉ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ／Ｃａｎｃｅｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ａｎｄ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ，Ｈａａｒｔｍａｎ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，（１９９９） Ｕｌｌｒｉｃｈ，Ａ．ｅｔ ａｌ，Ｃｅｌｌ ６１，２０３−２１２（１９９０） Ｌｅｖｉｓ，Ｍ．ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ ９９，１１；２００２ Ｈｅｉｎｒｉｃｈ，Ｍ．Ｃ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｅ．２０，６ １６９２−１７０３，２００２（ｒｅｖｉｅｗ ａｒｔｉｃｌｅ） Ｓｍｏｌｉｃｈ，Ｂ．Ｄ．ｅｔ ａｌ，Ｂｌｏｏｄ，９７，５；１４１３−１４２１ Ｃｈｅｓｉ，ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ ２００１ ９７ ７２９−７３６ Ｓｈｉｂｕｙａ，Ｍ．ｅｔ ａｌ，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ ５，５１９−５２５（１９９０） Ｔｅｒｍａｎ，Ｂ．ｅｔ ａｌ，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ ６，１６７７−１６８３（１９９１） Ａｐｒｅｌｉｋｏｖａ，Ｏ．ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５２，７４６−７４８（１９９２） Ｆｅｒｒａｒａ，Ｎ．ｅｔ ａｌ．，Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．Ｒｅｖ．１８，４−２５（１９９７） ＤｅＶｒｉｅｓ，Ｃ．ｅｔ ａｌ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５５，９８９−９９１（１９９２） Ｑｕｉｎｎ，Ｔ．ｅｔ ａｌ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．９０，７５３３−７５３７（１９９３） Ｃｏｎｎｏｌｌｙ，Ｄ．ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６４，２００１７−２００２４（１９８９） Ｃｏｎｎｏｌｌｙ，Ｄ．ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．８４，１４７０−１４７８（１９８９） Ｆｅｒｒａｒａ，Ｎ．ｅｔ ａｌ，Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏ．Ｒｅｗ．１８，４−２５（１９９７） Ｌｅｕｎｇ，Ｄ．ｅｔ ａｌ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４６，１３０６−１３０９（１９８９） Ｐｌｏｕｅｔ，Ｊ．ｅｔ ａｌ，ＥＭＢＯＪ ８，３８０１−３８０６（１９８９） Ｕｋｒａｉｎｅｔｓ，Ｉ．ｅｔ ａｌ，Ｔｅｔ．Ｌｅｔｔ．４２，７７４７−７７４８（１９９５） Ｕｋｒａｉｎｅｔｓ，Ｉ．ｅｔ ａｌ．，Ｋｈｉｍｉｙａ Ｇｅｔｅｒｏｔｓｉｋｌｉｃｈｅｓｋｉｋｈ Ｓｏｅｄｉｎｉｉ，２，２３９−２４１（１９９２） Ｕｋｒａｉｎｅｔｓ，Ｉ．ｅｔ ａｌ．，Ｋｈｉｍｉｙａ Ｇｅｔｅｒｏｔｓｉｋｌｉｃｈｅｓｋｉｋｈ Ｓｏｅｄｉｎｉｉ，１，１０５−１０８（１９９３） Ｕｋｒａｉｎｅｔｓ，Ｉ．ｅｔ ａｌ，Ｋｈｉｍｉｙａ Ｇｅｔｅｒｏｔｓｉｋｌｉｃｈｅｓｋｉｋｈ Ｓｏｅｄｉｎｉｉ，８，１１０５−１１０８（１９９３） Ｕｋｒａｉｎｅｔｓ，Ｉ．ｅｔ ａｌ，Ｃｈｅｍ．Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ Ｃｏｍｐ．３３，６００−６０４，（１９９７） Ａｔｔａｌ，Ｍ．ｅｔ ａｌ，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．，１９９６；３３５：９１−９７ Ｂａｒｌｏｇｉｅ，Ｂ．ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，１９９７；８９：７８９−７９３ Ｋｕｅｈｌ，Ｗ．Ｍ．ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｃａｎｃｅｒ，２００２；２：１７５−１８７ Ａｖｅｔ−Ｌｏｉｓｅａｕ，Ｈ．ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，２００２；９９：２１８５−２１９１ Ｆｏｎｓｅｃａ，Ｒ．ｅｔ ａｌ，Ｂｌｏｏｄ，２００３；１０１：４５６９−４５７５ Ｋｅａｔｓ，Ｊ．Ｊ．ｅｔ ａｌ，Ｂｌｏｏｄ，２００３；１０１：１５２０−１５２９ Ｍｏｒｅａｕ，Ｐ． ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，２００２；１００：１５７９−１５８３ Ｃｈａｎｇ，Ｈ．ｅｔ ａｌ．，Ｂｒ．Ｊ．Ｈａｅｍａｔｏｌ，２００４；１２５：６４−６８ Ｃｈｅｓｉ，Ｍ．ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ． Ｇｅｎｅｔ．，１９９７；１６：２６０−２６５ Ｃｈｅｓｉ，Ｍ．ｅｔ ａｌ，Ｂｌｏｏｄ，１９９８；９２：３０２５−３０３４ Ｅ．Ｅ．ｅｔ ａｌ，Ｂｌｏｏｄ，２０００；９５：９９２−９９８ Ｃｈｅｓｉ，Ｍ．ｅｔ ａｌ，Ｂｌｏｏｄ，２００１；９７：７２９−７３６ Ｐｏｌｌｅｔｔ，Ｊ．Ｂ．ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，２００２；１００：３８１９−３８２１ Ｃｈｅｓｉ，Ｍ．ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，２００１；９７：７２９−７３６ Ｌｉ，Ｚ．ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，２００１；９７：２４１３−２４１９ Ｆｏｎｓｅｃａ，Ｒ．ｅｔ ａｌ，Ｂｌｏｏｄ，２００３；１０１：４５６９−４５７５ Ｋｅａｔｓ，Ｊ．Ｊ．ｅｔ ａｌ，Ｂｌｏｏｄ，２００３；１０１：１５２０−１５２９ Ｍｏｒｅａｕ，Ｐ．ｅｔ ａｌ，Ｂｌｏｏｄ，２００２；１００：１５７９−１５８３ Ｃｈａｎｇ，Ｈ．ｅｔ ａｌ，Ｂｒ．Ｊ．Ｈａｅｍａｔｏｌ，２００４； １２５：６４−６８ Ｔｒｕｄｅｌ，Ｓ．ｅｔ ａｌ，Ｂｌｏｏｄ，２００４；１０３：３５２１−３５２８ Ｐａｔｅｒｓｏｎ，Ｊ．Ｌ．ｅｔ ａｌ，Ｂｒ．Ｊ．Ｈａｅｍａｔｏｌ，２００４；１２４：５９５−６０３ Ｇｒａｎｄ，Ｅ．Ｋ．ｅｔ ａｌ，Ｌｅｕｋｅｍｉａ，２００４；１８：９６２−９６６ Ｄｒｕｋｅｒ，Ｂ．Ｊ．ｅｔ ａｌ，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．，２００１；３４４：１０３１−１０３７ Ｄｅｍｅｔｒｉ，Ｇ．Ｄ．ｅｔ ａｌ，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．，２００２；３４７：４７２−４８０ Ｓｌａｍｏｎ，Ｄ．Ｊ．ｅｔ ａｌ，Ｎ．Ｅｎｇｌ Ｊ．Ｍｅｄ．２００１；３４４：７８３−７９２ Ｓｍｉｔｈ，Ｂ．Ｄ．ｅｔ ａｌ，Ｂｌｏｏｄ，２００４；１０３：３６６９−３６７６
（発明の要旨）
本発明は、種々の化合物の薬学的に受容可能な塩、このような塩を作成するための方法、このような塩を含む薬学的処方物および医薬品、種々の状態の処置において使用するための医学および薬学的処方物の調製における上記塩の使用、および本発明の薬学的に受容可能な塩または薬学的処方物を使用する処置方法を提供する。
それゆえに、１つの局面では、本発明は、式Ｉの化合物または化合物の互変異性体の乳酸塩を提供する。上記乳酸塩は、種々のモル比で存在してもよく、その結果、いくつかの実施形態では、酸：遊離塩基のモル比は、０．５〜４．５の任意の部分比を含む。いくつかのこのような実施形態では、上記塩は、一乳酸塩または二乳酸塩を含む。式Ｉの化合物は以下の構造を有する：
Figure 0004890255
 ここで、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４は同じであるかまたは異なっていてもよく、Ｈ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｆ、Ｉ、−ＣＮ、−ＮＯ２、−ＯＨ、−ＯＲ１５基、−ＮＲ１６Ｒ１７基、置換および非置換のアミジニル基、置換および非置換のグアニジニル基、置換および非置換の一級、二級、および三級のアルキル基、置換および非置換のアリール基、置換および非置換のアルケニル基、置換および非置換のアルキニル基、置換および非置換のヘテロシクリル基、置換および非置換のアミノアルキル基、置換および非置換のアルキルアミノアルキル基、置換および非置換のジアルキルアミノアルキル基、置換および非置換のアリールアミノアルキル基、置換および非置換のジアリールアミノアルキル基、置換および非置換の（アルキル）（アリール）アミノアルキル基、置換および非置換のヘテロシクリルアルキル基、およびＣ（＝Ｏ）Ｒ１８基からなる群から独立して選択され；
Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、およびＲ８は同じであるかまたは異なっていてもよく、Ｈ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｆ、Ｉ、−ＮＯ２、−ＯＨ、−ＯＲ１９基、−ＮＲ２０Ｒ２１基、−ＳＨ、−ＳＲ２２基、−Ｓ（＝Ｏ）Ｒ２３基、−Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ２４基、−ＣＮ、置換および非置換のアミジニル基、置換および非置換のグアニジニル基、置換および非置換の一級、二級、および三級のアルキル基、置換および非置換のアリール基、置換および非置換のアルケニル基、置換および非置換のアルキニル基、置換および非置換のヘテロシクリル基、置換および非置換のアルキルアミノアルキル基、置換および非置換のジアルキルアミノアルキル基、置換および非置換のアリールアミノアルキル基、置換および非置換のジアリールアミノアルキル基、置換および非置換の（アルキル）（アリール）アミノアルキル基、置換および非置換のヘテロシクリルアルキル基、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ２５基、置換および非置換のアミノアルキル基、置換および非置換のヘテロシクリルアミノアルキル基、置換および非置換のヒドロキシアルキル基、置換および非置換のアルコキシアルキル基、置換および非置換のアリールオキシアルキル基、および置換および非置換のヘテロシクリルオキシアルキル基からなる群から独立して選択され；
Ｒ９はＨであり；
Ｒ１２は、Ｈ、置換および非置換のアルキル基、置換および非置換のアリール基、および置換および非置換のヘテロシクリル基からなる群から選択され；
Ｒ１３は、Ｈ、置換および非置換のアルキル基、置換および非置換のアリール基、置換および非置換のヘテロシクリル基、−ＯＨ、アルコキシ基、アリールオキシ基、−ＮＨ２、置換および非置換のヘテロシクリルアルキル基、置換および非置換のアミノアルキル基、置換および非置換のアルキルアミノアルキル基、置換および非置換のジアルキルアミノアルキル基、置換および非置換のアリールアミノアルキル基、置換および非置換のジアリールアミノアルキル基、置換および非置換の（アルキル）（アリール）アミノアルキル基、置換および非置換のアルキルアミノ基、置換および非置換のアリールアミノ基、置換および非置換のジアルキルアミノ基、置換および非置換のジアリールアミノ基、置換および非置換の（アルキル）（アリール）アミノ基、−Ｃ（＝Ｏ）Ｈ、−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル基、−Ｃ（＝Ｏ）−アリール基、−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−アルキル基、−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−アリール基、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（アルキル）基、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（アリール）基、Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（アルキル）２基、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（アリール）２基、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（アルキル）（アリール）基、−Ｃ（＝Ｏ）−ヘテロシクリル基、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−ヘテロシクリル基、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（ヘテロシクリル）基、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（ヘテロシクリル）２基、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（アルキル）（ヘテロシクリル）基、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（アリール）（ヘテロシクリル）基、置換および非置換のヘテロシクリルアミノアルキル基、置換および非置換のヒドロキシアルキル基、置換および非置換のアルコキシアルキル基、置換および非置換のアリールオキシアルキル基、および置換および非置換のヘテロシクリルオキシアルキル基からなる群から選択され；
Ｒ１４はＨであり；
Ｒ１５およびＲ１９は同じであるかまたは異なっていてもよく、置換および非置換のアルキル基、置換および非置換のアリール基、置換および非置換のヘテロシクリル基、置換および非置換のヘテロシクリルアルキル基、−Ｃ（＝Ｏ）Ｈ、−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル基、−Ｃ（＝Ｏ）−アリール基、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（アルキル）基、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（アリール）基、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（アルキル）２基、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（アリール）２基、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（アルキル）（アリール）基、置換および非置換のアミノアルキル基、置換および非置換のアルキルアミノアルキル基、置換および非置換のジアルキルアミノアルキル基、置換および非置換のアリールアミノアルキル基、置換および非置換のジアリールアミノアルキル基、置換および非置換の（アルキル）（アリール）アミノアルキル基、置換および非置換のヘテロシクリルアミノアルキル、置換および非置換のジヘテロシクリルアミノアルキル、置換および非置換の（ヘテロシクリル）（アルキル）アミノアルキル、置換および非置換の（ヘテロシクリル）（アリール）アミノアルキル、置換および非置換のアルコキシアルキル基、置換および非置換のヒドロキシアルキル基、置換および非置換のアリールオキシアルキル基、および置換および非置換のヘテロシクリルオキシアルキル基からなる群から独立して選択され；
Ｒ１６およびＲ２０は同じであるかまたは異なっていてもよく、Ｈ、置換および非置換のアルキル基、置換および非置換のアリール基、および置換および非置換のヘテロシクリル基からなる群から独立して選択され；
Ｒ１７およびＲ２１は同じであるかまたは異なっていてもよく、Ｈ、置換および非置換のアルキル基、置換および非置換のアリール基、置換および非置換のヘテロシクリル基、−Ｃ（＝Ｏ）Ｈ、−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル基、−Ｃ（＝Ｏ）−アリール基、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（アルキル）基、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（アリール）基、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（アルキル）２基、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（アリール）２基、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（アルキル）（アリール）基、−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−アルキル基、−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−アリール基、置換および非置換のヘテロシクリルアルキル基、置換および非置換のアミノアルキル基、置換および非置換のアルキルアミノアルキル基、置換および非置換のジアルキルアミノアルキル基、置換および非置換のアリールアミノアルキル基、置換および非置換のジアリールアミノアルキル基、置換および非置換の（アルキル）（アリール）アミノアルキル基、−Ｃ（＝Ｏ）−ヘテロシクリル基、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−ヘテロシクリル基、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（ヘテロシクリル）基、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（ヘテロシクリル）２基、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（アルキル）（ヘテロシクリル）基、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（アリール）（ヘテロシクリル）基、置換および非置換のヘテロシクリルアミノアルキル基、置換および非置換のヒドロキシアルキル基、置換および非置換のアルコキシアルキル基、置換および非置換のアリールオキシアルキル基、および置換および非置換のヘテロシクリルオキシアルキル基からなる群から独立して選択され；
Ｒ１８、Ｒ２３、Ｒ２４、およびＲ２５は同じであるかまたは異なっていてもよく、Ｈ、−ＮＨ２、−ＮＨ（アルキル）基、−ＮＨ（アリール）基、−Ｎ（アルキル）２基、−Ｎ（アリール）２基、−Ｎ（アルキル）（アリール）基、−ＮＨ（ヘテロシクリル）基、−Ｎ（ヘテロシクリル）（アルキル）基、−Ｎ（ヘテロシクリル）（アリール）基、−Ｎ（ヘテロシクリル）２基、置換および非置換のアルキル基、置換および非置換のアリール基、−ＯＨ、置換および非置換のアルコキシ基、置換および非置換のアリールオキシ基、置換および非置換のヘテロシクリル基、−ＮＨＯＨ、−Ｎ（アルキル）ＯＨ基、−Ｎ（アリール）ＯＨ基、−Ｎ（アルキル）Ｏ−アルキル基、−Ｎ（アリール）Ｏ−アルキル基、−Ｎ（アルキル）Ｏ−アリール基、およびＮ（アリール）Ｏ−アリール基からなる群から独立して選択され；および
Ｒ２２は、置換および非置換のアルキル基、置換および非置換のアリール基、および置換および非置換のヘテロシクリル基からなる群から独立して選択される。
式Ｉの化合物またはそれらの互変異性体の乳酸塩のいくつかの実施形態では、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、またはＲ８の少なくとも１つは、置換および非置換のアミジニル基、置換および非置換のグアニジニル基、置換および非置換の飽和ヘテロシクリル基、置換および非置換のアルキルアミノアルキル基、置換および非置換のジアルキルアミノアルキル基、置換および非置換のアリールアミノアルキル基、置換および非置換のジアリールアミノアルキル基、置換および非置換の（アルキル）（アリール）アミノアルキル基、置換および非置換のヘテロシクリルアルキル基、置換および非置換のヘテロシクリルアミノアルキル基、置換および非置換のヒドロキシアルキル基、置換および非置換のアルコキシアルキル基、置換および非置換のアリールオキシアルキル基、および置換および非置換のヘテロシクリルオキシアルキル基；−ＯＲ１９基（ここで、Ｒ１９は、置換および非置換のアリール基、置換および非置換のヘテロシクリル基、置換および非置換のヘテロシクリルアルキル基、−Ｃ（＝Ｏ）Ｈ、Ｃ（＝Ｏ）−アリール基、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（アルキル）基、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（アリール）基、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（アルキル）２基、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（アリール）２基、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（アルキル）（アリール）基、置換および非置換のアミノアルキル基、置換および非置換のアルキルアミノアルキル基、置換および非置換のジアルキルアミノアルキル基、置換および非置換のアリールアミノアルキル基、置換および非置換のジアリールアミノアルキル基、置換および非置換の（アルキル）（アリール）アミノアルキル基、置換および非置換のヘテロシクリルアミノアルキル基、置換および非置換のジヘテロシクリルアミノアルキル基、置換および非置換の（ヘテロシクリル）（アルキル）アミノアルキル基、置換および非置換の（ヘテロシクリル）（アリール）アミノアルキル基、置換および非置換のヒドロキシアルキル基、置換および非置換のアルコキシアルキル基、置換および非置換のアリールオキシアルキル基、および置換および非置換のヘテロシクリルオキシアルキル基からなる群から選択される）；−ＮＲ２０Ｒ２１基（ここで、Ｒ２０は、置換および非置換のヘテロシクリル基からなる群から選択される）；−ＮＲ２０Ｒ２１基（ここで、Ｒ２１は、置換および非置換のヘテロシクリル基、−Ｃ（＝Ｏ）Ｈ、−Ｃ（＝Ｏ）−アリール基、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（アルキル）基、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（アリール）基、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（アルキル）２基、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（アリール）２基、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（アルキル）（アリール）基、−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−アルキル基、−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−アリール基、置換および非置換のアミノアルキル基、置換および非置換のアルキルアミノアルキル基、置換および非置換のジアルキルアミノアルキル基、置換および非置換のアリールアミノアルキル基、置換および非置換のジアリールアミノアルキル基、置換および非置換の（アルキル）（アリール）アミノアルキル基、置換および非置換のヘテロシクリルアミノアルキル基、置換および非置換のヒドロキシアルキル基、置換および非置換のアルコキシアルキル基、置換および非置換のアリールオキシアルキル基、置換および非置換のヘテロシクリルアルキル基、および置換および非置換のヘテロシクリルオキシアルキル基からなる群から選択される）；およびＣ（＝Ｏ）Ｒ２５基（ここで、Ｒ２５は、Ｈ、−ＮＨ２、−ＮＨ（アルキル）基、−ＮＨ（アリール）基、−Ｎ（アルキル）２基、−Ｎ（アリール）２基、−Ｎ（アルキル）（アリール）基、−ＮＨ（ヘテロシクリル）基、−Ｎ（ヘテロシクリル）（アルキル）基、−Ｎ（ヘテロシクリル）（アリール）基、−Ｎ（ヘテロシクリル）２基、置換および非置換のアリール基、置換および非置換のアリールオキシ基、および置換および非置換のヘテロシクリル基からなる群から選択される）からなる群から選択される。
１つの実施形態では、式Ｉの化合物またはそれらの互変異性体の乳酸塩は、２２℃での水中の溶解度が約５ｍｇ／ｍＬ〜約４００ｍｇ／ｍＬである。いくつかの実施形態では、式Ｉの化合物またはそれらの互変異性体の上記塩は、水中の溶解度が約１００ｍｇ／ｍＬ〜約４００ｍｇ／ｍＬである。他の実施形態では、式Ｉの化合物またはそれらの互変異性体の上記塩は、水中の溶解度が約２００ｍｇ／ｍＬ〜約４００ｍｇ／ｍＬである。いくつかの実施形態では、式Ｉの化合物またはそれらの互変異性体の上記塩は、水中の溶解度が約３０ｍｇ／ｍＬより大きい。他の実施形態では、式Ｉの化合物またはそれらの互変異性体の上記塩は、水中の溶解度が約１５０ｍｇ／ｍＬ〜約２５０ｍｇ／ｍＬである。別の実施形態では、式Ｉの化合物またはそれらの互変異性体の上記塩は、約ｐＨ７未満、例えば、ｐＨ１〜７、ｐＨ３〜７、またはｐＨ４〜７の水性媒体で解離可能である。いくつかの実施形態では、上記乳酸塩は結晶性であり、いくつかのこのような実施形態では、平板形状の結晶を含む。
いくつかの実施形態では、式Ｉの化合物またはそれらの互変異性体の乳酸塩はＤＬ−乳酸塩である。他の実施形態では、式Ｉの化合物の塩はＬ−乳酸塩である。なお他の実施形態では、式Ｉの化合物の塩はＤ−乳酸塩である。なお他の実施形態では、式Ｉの化合物の塩はＤ−乳酸塩およびＬ−乳酸塩の混合物である。上記塩は、１つより多い形態で存在することができる。本発明によれば、ラセミ体または特定のエナンチオマーを本発明の塩を調製するために使用することができる。
いくつかの実施形態では、式Ｉの化合物の乳酸塩は、４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンまたはそれらの互変異性体の塩である。いくつかのこのような実施形態では、上記塩は、４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンまたはそれらの互変異性体の一乳酸塩または二乳酸塩である。さらに好ましい実施形態では、上記塩は、４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンまたはそれらの互変異性体のＤＬ−乳酸塩である。他のこのような実施形態では、上記塩は、４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンまたはそれらの互変異性体のＬ−乳酸塩である。なお他の実施形態では、上記塩は、４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンまたはそれらの互変異性体のＤ−乳酸塩である。
式Ｉの化合物の乳酸塩のいくつかの実施形態では、Ｒ１２およびＲ１３が両方Ｈである。
式Ｉの化合物の乳酸塩のいくつかの実施形態では、Ｒ１は、Ｆ、Ｃｌ、置換および非置換のアルコキシ基、置換および非置換のヘテロシクリルアルコキシ基、置換および非置換のヘテロシクリル基、置換および非置換のアルキルアミノアルコキシ基、置換および非置換のアリールアミノアルコキシ基、置換および非置換のジアルキルアミノアルコキシ基、置換および非置換のジアリールアミノアルコキシおよび置換および非置換の（アルキル）（アリール）アミノアルコキシ基からなる群から選択される。
式Ｉの化合物の乳酸塩のいくつかの実施形態では、Ｒ１はＨおよびＦからなる群から選択される。いくつかのこのような実施形態では、Ｒ１はＦである。いくつかの実施形態では、Ｒ２はＨである。
式Ｉの化合物の乳酸塩のいくつかの実施形態では、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、およびＲ８のうち少なくとも１つは置換または非置換のヘテロシクリル基である。いくつかのこのような実施形態では、Ｒ６またはＲ７のうち少なくとも１つは置換または非置換のヘテロシクリル基である。他のこのような実施形態では、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、およびＲ８のうち少なくとも１つは、少なくとも１つのＯまたはＮ原子を含む置換または非置換のヘテロシクリル基である。いくつかのこのような実施形態では、Ｒ６またはＲ７のうち少なくとも１つは、少なくとも１つのＯまたはＮ原子を含む置換または非置換のヘテロシクリル基である。いくつかのこのような実施形態では、置換または非置換のヘテロシクリル基またはヘテロシクリル基は、モルホリン、ピペラジン、ピペリジン、ピロリジン、チオモルホリン、ホモピペラジン、テトラヒドロチオフェン、テトラヒドロフラン、およびテトラヒドロピランから選択される。他のこのような実施形態では、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、またはＲ８のうち少なくとも１つは、およびいくつかのこのような実施形態では、Ｒ６またはＲ７のうち１つは、置換および非置換のモルホリン基、および置換および非置換のピペラジン基からなる群から選択される。
式Ｉの化合物の乳酸塩のいくつかの実施形態では、Ｒ６またはＲ７のうち１つは、置換および非置換のモルホリン基、および置換および非置換のピペラジン基からなる群から選択される。いくつかのこのような実施形態では、Ｒ１はＦである。いくつかのこのような実施形態では、Ｒ２はＨである。いくつかのこのような実施形態では、Ｒ１２およびＲ１３は両方Ｈである。いくつかのこのような実施形態では、Ｒ５はＨであり、Ｒ８はＨである。他のこのような実施形態では、Ｒ３はＨであり、Ｒ４はＨである。
式Ｉの化合物の乳酸塩のいくつかの実施形態では、Ｒ５およびＲ８は両方Ｈである。
式Ｉの化合物の乳酸塩のいくつかの実施形態では、Ｒ６およびＲ７のうち少なくとも１つは、−ＮＲ２０Ｒ２１基（ここで、Ｒ２０は、置換および非置換のヘテロシクリル基からなる群から選択される）；およびＮＲ２０Ｒ２１基（ここで、Ｒ２１は、置換および非置換のヘテロシクリル基、置換および非置換のアミノアルキル基、置換および非置換のアルキルアミノアルキル基、置換および非置換のジアルキルアミノアルキル基、置換および非置換のアリールアミノアルキル基、置換および非置換のジアリールアミノアルキル基、置換および非置換の（アルキル）（アリール）アミノアルキル基、置換および非置換のヘテロシクリルアミノアルキル基、置換および非置換のヒドロキシアルキル基、置換および非置換のアルコキシアルキル基、置換および非置換のアリールオキシアルキル基、置換および非置換のヘテロシクリルアルキル基、および置換および非置換のヘテロシクリルオキシアルキル基からなる群から選択される）からなる群から選択される。いくつかのこのような実施形態では、Ｒ１はＨおよびＦから選択される。いくつかのこのような実施形態では、Ｒ２はＨである。いくつかのこのような実施形態では、Ｒ１２およびＲ１３は両方Ｈである。いくつかのこのような実施形態では、Ｒ５はＨであり、Ｒ８はＨである。いくつかのこのような実施形態では、Ｒ３はＨであり、Ｒ４はＨである。
本発明はさらに、式ＩＩを有する化合物または式ＩＩの化合物の互変異性体の乳酸塩を提供する。いくつかのこのような実施形態では、上記塩は一乳酸塩または二乳酸塩を含む。式ＩＩの化合物は下式を有する：
Figure 0004890255
 式中：
Ｌは、共有結合、−（ＣＨ２）ｍ−、−ＣＨＲ３０−、またはＮ（Ｒ３１）−であり；
ＸはＣＨまたはＮであり；
ＷはＣＨ、Ｏ、またはＮであり；
Ｒ２６は、置換または非置換のアルキル基、置換または非置換のアルキルアミノ基、置換または非置換のジアルキルアミノ、−ＯＨ、置換または非置換のアルコキシ基、置換または非置換のアルキルアミノアルキル基、置換または非置換のジアルキルアミノアルキル基、置換または非置換のヘテロシクリル基、置換または非置換のヘテロシクリルアルキル基からなる群から選択され；但し、ＷがＯである場合、Ｒ２６は存在せず、
Ｒ２７は存在しないか、またはＮＯ２、−ＯＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、−ＮＨ２、置換または非置換のアルキル基、置換または非置換のアルキルアミノ基、置換または非置換のジアルキルアミノ基、置換または非置換のアルキルアミノアルキル基、置換または非置換のジアルキルアミノアルキル基、および置換または非置換のアルコキシ基からなる群から選択され；
Ｒ２８は、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、−ＯＨ、−ＮＨ２、および置換または非置換のアルキル基からなる群から選択され；
Ｒ２９、Ｒ３０、およびＲ３１は、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、置換および非置換のアルキル基、−ＯＨ、アルコキシ基、置換および非置換のアリールオキシ基、−ＮＨ２、置換および非置換のアミノアルキル基、置換および非置換のアリール基、置換および非置換のヘテロアリール基、置換および非置換のヘテロシクリル基、置換および非置換のアルキルアミノアルキル基、置換および非置換のジアルキルアミノアルキル基、置換および非置換のアリールアミノアルキル基、置換および非置換のジアリールアミノアルキル基、置換および非置換の（アルキル）（アリール）アミノアルキル基、置換および非置換のアルキルアミノ基、置換および非置換のジアルキルアミノ基、置換および非置換のジアリールアミノ基、置換および非置換の（アルキル）（アリール）アミノ基、−Ｃ（＝Ｏ）Ｈ、−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル基、−Ｃ（＝Ｏ）−アリール基、−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−アルキル基、−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−アリール基、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（アルキル）基、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（アリール）基、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（アルキル）２基、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（アリール）２基、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（アルキル）（アリール）基、−Ｃ（＝Ｏ）−ヘテロシクリル基、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−ヘテロシクリル基、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（ヘテロシクリル）基、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（ヘテロシクリル）２基、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（アルキル）（ヘテロシクリル）基、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（アリール）（ヘテロシクリル）基、置換および非置換のヘテロシクリルアミノアルキル基、置換および非置換のヒドロキシアルキル基、置換および非置換のアルコキシアルキル基、置換および非置換のアリールオキシアルキル基、および置換および非置換のヘテロシクリルオキシアルキル基からなる群から独立して選択され；
ｎは、０、１、または２であり；および
ｍは、１、２、３、または４である。
１つの実施形態では、式ＩＩの化合物または式ＩＩの化合物の互変異性体の乳酸塩は、２２℃での水中の溶解度が約５ｍｇ／ｍＬ〜約４００ｍｇ／ｍＬである。いくつかの実施形態では、式ＩＩの化合物またはそれらの互変異性体の上記塩は、水中の溶解度が約１００ｍｇ／ｍＬ〜約４００ｍｇ／ｍＬである。他の実施形態では、式ＩＩの化合物またはそれらの互変異性体の上記塩は、水中の溶解度が約２００ｍｇ／ｍＬ〜約４００ｍｇ／ｍＬである。いくつかの実施形態では、式ＩＩの化合物またはそれらの互変異性体の上記塩は、水中の溶解度が約３０ｍｇ／ｍＬより大きい。他の実施形態では、式ＩＩの化合物またはそれらの互変異性体の上記塩は、水中の溶解度が約１５０ｍｇ／ｍＬ〜約２５０ｍｇ／ｍＬである。別の実施形態では、式ＩＩの化合物またはそれらの互変異性体の上記塩は、約ｐＨ７未満、例えば、ｐＨ１〜７、ｐＨ３〜７、またはｐＨ４〜７の水性媒体で解離可能である。
いくつかの実施形態では、式ＩＩの化合物または式ＩＩの化合物の互変異性体の乳酸塩はＤＬ−乳酸塩である。他の実施形態では、式ＩＩの化合物の乳酸塩はＬ−乳酸塩である。なお他の実施形態では、式ＩＩの化合物の乳酸塩はＤ−乳酸塩である。
式ＩＩの化合物の乳酸塩のいくかの実施形態では、Ｒ２８はＦであり、Ｒ２９はＨである。いくつかのこのような実施形態では、ｎは１である。
式ＩＩの化合物の乳酸塩のいくかの実施形態では、ｎは１である。
いくつかの実施形態では、本発明は、式Ｉまたは式ＩＩの化合物または互変異性体の化合物の乳酸塩を調製するための方法を提供する。このような方法は、典型的には、以下の工程を含む：
（ａ）式Ｉまたは式ＩＩの化合物またはそれらの互変異性体の化合物の遊離塩基を溶媒または溶媒の混合物中に懸濁する工程；
（ｂ）乳酸と式Ｉまたは式ＩＩの化合物またはそれらの互変異性体とを接触させて混合物を提供する工程；
（ｃ）上記混合物を加熱する工程；
（ｄ）上記混合物を冷却する工程；
（ｅ）上記塩を単離する工程。
式Ｉまたは式ＩＩの化合物またはそれらの互変異性体の乳酸塩を調製するためのいくつかの方法において、混合物は冷却され、塩は溶液から沈殿する。
式Ｉまたは式ＩＩの化合物の乳酸塩を調製するためのいくつかの方法において、混合物は加熱され、還流させた後に冷却される。
式Ｉまたは式ＩＩの化合物の乳酸塩を調製するためのいくつかの方法において、溶媒はプロトン性溶媒である。
式Ｉまたは式ＩＩの化合物の乳酸塩を調製するためのいくつかの方法において、溶媒は、メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、ブタノール、２−ブタノール、アセトン、ブタノン、ジオキサン、水、テトラヒドロフラン、またはそれらの組み合わせから選択される。
式Ｉまたは式ＩＩの化合物またはそれらの互変異性体の化合物の乳酸塩を調製するための方法の好ましい実施形態において、単離工程は、混合物をろ過する工程を含む。
本発明はさらに、式Ｉの化合物またはそれらの互変異性体の乳酸塩の錠剤を含む組成物、または式ＩＩの化合物またはそれらの互変異性体の乳酸塩の錠剤を含む組成物を提供する。
本発明はさらに、薬学的処方物および医薬品を提供する。このような配合物および医薬品は、式Ｉまたは式ＩＩの乳酸塩を薬学的に受容可能なキャリアと組み合わせて含む。
本発明はさらに、血管内皮増殖因子レセプターチロシンキナーゼの阻害の必要がある患者を処置する方法を提供する。このような方法は、有効量の乳酸塩またはこの乳酸塩を含む薬学的処方物または医薬品をそれらを必要とする患者に投与する工程を含む。
本発明のさらなる目的、特徴、利点は、以下の詳細な記載から明らかである。
（発明の詳細な記載）
本発明は、レセプターチロシンキナーゼのアンタゴニストとして、さらに特定的には、ＦＧＦＲ１およびＦＧＦＲ３、ＰＤＧＦＲαおよびＰＤＧＦＲβ、マクロファージＣＳＦＲ−１、ＦＬＴ−３、ｃ−ＫＩＴおよび／またはＶＥＧＦ−ＲＴＫ機能の阻害剤として作用する式Ｉおよび式ＩＩのキノリノン化合物の新規な薬学的な塩を提供する。このようなキナーゼはさらに、ＩＧＦＲ１、ＥｐｈＡ２、ＦＧＦＲ２、およびＦＧＦＲ４を含んでもよい。本発明において提供される塩は、ＶＥＧＦ−ＲＴＫの阻害剤をそれを必要とする患者に処置するのに有用な薬学的処方物に配合することができ、特に、特定の実施形態において、毛細血管増殖を減らすためおよび癌の処置における組成物および方法を提供する。
薬学的に受容可能な塩としては、無機酸との塩、有機酸との塩、塩基性アミノ酸との塩、または酸性アミノ酸との塩が挙げられる。無機酸の塩として、本発明は、例えば、塩酸、水素化ホウ酸、硝酸、硫酸、およびリン酸の塩を含む。有機酸の塩として、本発明は、例えば、乳酸、ギ酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、フマル酸、シュウ酸、酒石酸、マレイン酸、クエン酸、コハク酸、リンゴ酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、およびｐ−トルエンスルホン酸の塩を含む。酸性アミノ酸としては、例えば、グリシン、アスパラギン酸およびグルタミン酸が挙げられる。
上記の列挙の中で、特定の塩が、式（Ｉ）の化合物に付加する性質のために好ましい。それゆえに、いくつかの実施形態では、上記塩は、酒石酸塩、リンゴ酸塩、乳酸塩、二塩酸塩、クエン酸塩、酢酸塩、二メシル酸塩、二酢酸塩、およびメシル酸塩である。これらの塩に付与される改良された性質のいくつかは、溶解度、吸湿性、結晶化度、成形性、および形態を含む。
以下の省略語および定義は、本明細書全体で使用される：
「ｂＦＧＦ」は、塩基性線維芽細胞増殖因子をあらわす省略語であり；
「ｂＦＧＦＲ」（ＦＧＦＲ１とも称される）は、線維芽細胞増殖因子ＦＧＦと相互作用するレセプターチロシンキナーゼをあらわす省略語であり；
「Ｃ−ＭＥＴ」（ＨＧＦレセプターとも称される）は、ｍｅｔ遺伝子または肝細胞増殖因子レセプターの細胞産物をあらわす省略語であり；肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）と相互作用するレセプターチロシンキナーゼはさらに分散因子とも称され；
「ＣＳＦ−１」は、コロニー刺激因子−１およびそのレセプターをあらわす省略語である。マクロファージＣＳＦＲ−１（Ｆｍｓ）は、ＣＳＦ−１のレセプターであり；
「ＥＧＦＲ１」は、上皮増殖因子レセプター１をあらわす省略語であり、上皮増殖因子「ＥＧＦ」に結合し；
「ＥｐｈＡ２」は、エフリンレセプターＡ２（上皮細胞レセプタータンパク質−チロシンキナーゼまたはＥＣＫとも称される）をあらわす省略語であり；
「ＥＲＫ」は、細胞外制御されたキナーゼをあらわす省略語であり；
「ＦＡＣＳ」は、蛍光活性化細胞分類法をあらわす省略語であり；
「ＦＢＳ」は、胎児ウシ血清をあらわす省略語であり；
「Ｆｌｋ−１」は、胎児肝臓チロシンキナーゼ１（キナーゼ−インサートドメインチロシンキナーゼまたはＫＤＲ（ヒト）としても知られ、血管内皮増殖因子レセプター−２またはＶＥＧＦＲ２（ＫＤＲ（ヒト）、Ｆｌｋ−１（マウス）としても知られる）をあらわす省略語であり；
「ＦＬＴ−１」は、ｆｍｓ様チロシンキナーゼ−１（血管内皮増殖因子レセプター−１またはＶＥＧＦＲ１としても知られる）をあらわす省略語であり；
「ＦＬＴ−３」は、ｆｍｓ様チロシンキナーゼ−３（幹細胞チロシンキナーゼＩ（ＳＴＫＩ）としても知られる）をあらわす省略語であり；
「ＦＬＴ−４」は、ｆｍｓ様チロシンキナーゼ−４（ＶＥＧＦＲ３としても知られる）をあらわす省略語であり；
「ＦＧＦＲ２」および「ＦＧＦＲ４」は、線維芽細胞増殖因子レセプター２および線維芽細胞増殖因子レセプター４をそれぞれあらわす省略語である。ＦＧＦＲ２およびＦＧＦＲ４はＩＶ類レセプターチロシンキナーゼであり；
「ＦＧＦＲ３」は、複数の種類の骨髄腫の癌の１５〜２０％中で発現するチロシンキナーゼ線維芽細胞増殖因子レセプター３をあらわす省略語であり；
「Ｇ１」は、標準的な真核細胞サイクルの段階をあらわす省略語である。標準的な細胞サイクルにおいて、Ｇ１段階は、Ｓ段階の前、Ｍ段階の後のギャップであり、Ｇ２段階は、Ｓ段階の後、Ｍ段階の前のギャップであり；
「ＧＭ−ＣＳＦ」は、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子をあらわす省略語であり；
「ＩＧＦＲ１」は、インスリン様増殖因子レセプター−１をあらわす省略語である。ＩＦＧＲ１は、ＩＩ類レセプターチロシンキナーゼであり；
「ＨＥＲ２」は、ヒト上皮増殖因子レセプター２をあらわす省略語であり；
「ＩＬ６」は、インターロイキン６をあらわす省略語であり；
「ＫＤＲ」は、キナーゼ挿入ドメインを含有するレセプターをあらわす省略語であり、これはさらに血管内皮増殖因子レセプター−１すなわち「ＶＥＧＦＲ２」としても知られ；
「ＭＡＰＫ」は、マイトジェン活性化タンパク質キナーゼをあらわす省略語であり；
「Ｍ−ＣＳＦ」は、マクロファージコロニー刺激因子をあらわす省略語であり；
「ＰＤＧＦ」は、血小板由来増殖因子をあらわす省略語である。ＰＤＧＦはチロシンキナーゼＰＤＧＦＲαおよびＰＤＧＦＲβと相互作用し；
「ＲＴＫ」は、レセプターチロシンキナーゼをあらわす省略語であり；
「Ｔｉｅ−２」は、ＩｇおよびＥＧＦホモロジードメインを有するチロシンキナーゼをあらわす省略語であり；
「ＶＥＧＦ」は、血管内皮増殖因子をあらわす省略語であり；
「ＶＥＧＦ−ＲＴＫ」は、血管内皮増殖因子レセプターチロシンキナーゼをあらわす省略語である。
一般的に、特定の元素に対する参照（例えば、水素すなわちＨ）は、その元素の全ての同位体を含むことを意味する。例えば、Ｒ基が水素すなわちＨを含むことが定義される場合、重水素および三重水素も含む。
句「非置換のアルキル」は、ヘテロ原子を含有しないアルキル基を指す。従って、この句は、直鎖アルキル基、例えば、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル、ノニル、デシル、ウンデシル、ドデシル等を含む。この句はさらに、直鎖アルキル基の分枝鎖異性体を含み、限定されないが、以下の例が提供される：−ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ（ＣＨ３）（ＣＨ２ＣＨ３）、−ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ３）２、−Ｃ（ＣＨ３）３、−Ｃ（ＣＨ２ＣＨ３）３、−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）（ＣＨ２ＣＨ３）、−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ３）２、−ＣＨ２Ｃ（ＣＨ３）３、−ＣＨ２Ｃ（ＣＨ２ＣＨ３）３、−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ（ＣＨ３）（ＣＨ２ＣＨ３）、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、
−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）（ＣＨ２ＣＨ３）、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ３）２、−ＣＨ２ＣＨ２Ｃ（ＣＨ３）３、−ＣＨ２ＣＨ２Ｃ（ＣＨ２ＣＨ３）３、−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ３）ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ（ＣＨ３）（ＣＨ２ＣＨ３）およびその他。この句はさらに、環状アルキル基、例えば、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、およびシクロオクチル、および上記に定義されるような直鎖および分枝鎖のアルキル基で置換されたこれらの環を含む。この句はさらに、多環状アルキル基、例えば、限定されないが、アダマンチルノルボルニル、およびビシクロ［２．２．２］オクチル、および上記に定義されるような直鎖および分枝鎖のアルキル基で置換されたこれらの環を含む。従って、非置換のアルキル基との句は、一級アルキル基、二級アルキル基、および三級アルキル基を含む。非置換のアルキル基は、親化合物中で１つ以上の炭素原子、酸素原子、窒素原子、および／または硫黄原子に結合してもよい。好ましい非置換のアルキル基としては、１〜２０個の炭素原子を含む直鎖および分枝鎖のアルキル基および環状アルキル基が挙げられる。さらに好ましいこのような非置換のアルキル基は１〜１０個の炭素原子を有し、なおさらに好ましいこのような基は１〜５個または１〜６個の炭素原子を有する。最も好ましい非置換のアルキル基としては、１〜３個の炭素原子を有する直鎖および分枝鎖のアルキル基が挙げられ、メチル、エチル、プロピル、およびＣＨ（ＣＨ３）２が挙げられる。
句「置換アルキル」は、炭素または水素に対する１つ以上の結合が非水素原子および非炭素原子（例えば、限定されないが、ハロゲン化物中のハロゲン原子、例えば、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ；および例えば、ヒドロキシル基、アルコキシ基、アリールオキシ基、およびエステル基中の酸素原子；例えば、チオール基、アルキルスルフィド基およびアリールスルフィド基、スルホン基、スルホニル基、およびスルホキシド基中の硫黄原子；例えば、アミン、アミド、アルキルアミン、ジアルキルアミン、アリールアミン、アルキルアリールアミン、ジアリールアミン、Ｎ−オキシド、イミド、およびエナミン中の窒素原子；例えば、トリアルキルシリル基、ジアルキルアリールシリル基、アルキルジアリールシリル基、およびトリアリールシリル基中のケイ素原子；および種々の他の基中の他のヘテロ原子）に対する結合によって交換された、上記に定義されるような非置換アルキルを指す。また、置換アルキル基としては、炭素原子または水素原子に対する１つ以上の結合が、ヘテロ原子（例えば、カルボニル、カルボキシル、およびエステル基中の酸素；例えば、イミン、オキシム、ヒドラゾン、およびニトリル中の窒素）に対する結合によって交換された基が挙げられる。好ましい置換アルキル基としては、とりわけ、炭素原子または水素原子に対する１つ以上の結合がフッ素原子に対する１つ以上の結合によって交換されたアルキル基が挙げられる。置換アルキル基の一例はトリフルオロメチル基およびトリフルオロメチル基を含有する他のアルキル基である。他のアルキル基としては、炭素原子または水素原子に対する１つ以上の結合が、酸素原子に対する結合によって交換されたものが挙げられ、その結果、置換アルキル基は、ヒドロキシル、アルコキシ、アリールオキシ基、またはヘテロシクリルオキシ基を含有する。なお他のアルキル基としては、アミン、アルキルアミン、ジアルキルアミン、アリールアミン、（アルキル）（アリール）アミン、ジアリールアミン、ヘテロシクリルアミン、（アルキル）（ヘテロシクリル）アミン、（アリール）（ヘテロシクリル）アミン、またはジヘテロシクリルアミン基を有するアルキル基が挙げられる。
句「非置換アリール」は、ヘテロ原子を含有しないアリール基を指す。従って、この句は、限定されないが、例えば、一例としてフェニル、ビフェニル、アントラセニル、ナフテニルのような基が挙げられる。句「非置換アリール」は、ナフタレンのような縮合環を含有する基を含むが、トリルのようなアリール基は、以下に詳細に記載されるように置換アリール基であると本明細書中でみなされるため、環原子の１つに結合するアルキルまたはハロ基のような他の基を有するアリール基は含まれない。いくつかの実施形態では、アリール基は６〜１４個の炭素原子を有する。好ましい非置換アリール基はフェニルである。しかし、非置換アリール基は、親化合物中の１つ以上の炭素原子、酸素原子、窒素原子、および／または硫黄原子に対して結合していてもよい。
非置換アリール基に対する句「置換アリール基」は、非置換アルキル基に対する置換アルキル基と同じ意味を有する。しかし、置換アリール基はさらに、１つ以上の芳香族炭素が上述の非炭素原子または非水素原子の１つに結合したアリール基を含み、さらに、アリール基の１つ以上の芳香族炭素が、上記に定義されるような置換および／または非置換のアルキル、アルケニル、またはアルキニル基に結合したアリール基を含む。このことは、アリール基の２個の炭素原子が、アルキル、アルケニル、またはアルキニル基の２個の原子に結合し、縮合環系（例えば、ジヒドロナフチルまたはテトラヒドロナフチル）を規定する結合配置を含む。従って、句「置換アリール」としては、限定されないが、とりわけ、トリル、およびヒドロキシフェニルが挙げられる。
句「非置換アルケニル」は、少なくとも１つの二重結合が２個の炭素原子間に存在すること以外は、上記に定義されるような非置換アルキル基に関して記載されるような直鎖および分枝鎖および環状の基を指す。例としては、限定されないが、とりわけ、ビニル、−ＣＨ＝Ｃ（Ｈ）（ＣＨ３）、−ＣＨ＝Ｃ（ＣＨ３）２、−Ｃ（ＣＨ３）＝Ｃ（Ｈ）２、−Ｃ（ＣＨ３）＝Ｃ（Ｈ）（ＣＨ３）、−Ｃ（ＣＨ２ＣＨ３）＝ＣＨ２、シクロヘキセニル、シクロペンテニル、シクロヘキサジエニル、ブタジエニル、ペンタジエニル、およびヘキサジエニルが挙げられる。いくつかの実施形態では、アルケニル基は２〜８個の炭素原子を有する。
句「置換アルケニル」は、置換アルキル基が非置換アルキル基に関して有する非置換アルケニル基に関するものと同じ意味を有する。置換アルケニル基としては、非炭素原子または非水素原子が別の炭素に対して二重結合した炭素に結合するアルケニル基、および非炭素原子または非水素原子の１つが別の炭素に対する二重結合に含まれない炭素に結合するアルケニル基が挙げられる。
句「非置換アルキニル」は、少なくとも１つの三重結合が２個の炭素原子間に存在する以外は、上記に定義されるような非置換アルキル基に関して記載されるような直鎖および分枝鎖を指す。例としては、限定されないが、とりわけ、−Ｃ≡Ｃ（Ｈ）、−Ｃ≡Ｃ（ＣＨ３）、−Ｃ≡Ｃ（ＣＨ２ＣＨ３）、−Ｃ（Ｈ２）Ｃ≡Ｃ（Ｈ）、−Ｃ（Ｈ）２Ｃ≡Ｃ（ＣＨ３）、およびＣ（Ｈ）２Ｃ≡Ｃ（ＣＨ２ＣＨ３）が挙げられる。いくつかの実施形態では、アルキニル基は２〜８個の炭素原子を有する。
非置換アルキニル基に対する句「置換アルキニル」は、非置換アルキル基に対する置換アルキル基と同じ意味を有する。置換アルキニル基としては、非炭素原子または非水素原子が、別の炭素に対して三重結合した炭素に対して結合するアルキニル基、および非炭素原子または非水素原子が、別の炭素に対する三重結合に含まれない炭素に対して結合するアルキニル基が挙げられる。
句「非置換アラルキル」は、非置換アルキル基の水素結合または炭素結合が上記に定義されるようなアリール基に対する結合に交換された、上記に定義されるような非置換アルキル基を指す。例えば、メチル（−ＣＨ３）は非置換アルキル基である。メチル基の水素原子がフェニル基に対する結合によって交換された場合、例えば、メチルの炭素がベンゼンの炭素に対して結合した場合、その化合物は非置換アラルキル基（すなわち、ベンジル基）である。従って、この句は、限定されないが、とりわけ、ベンジル、ジフェニルメチル、および１−フェニルエチル（−ＣＨ（Ｃ６Ｈ５）（ＣＨ３））を含む。
非置換アラルキル基に対する句「置換アラルキル」は、非置換アリール基に対する置換アリール基と同じ意味を有する。しかし、置換アラルキル基はさらに、その基のアルキル部分の炭素結合または水素結合が非炭素原子または非水素原子に対する結合によって交換された基を含む。置換アラルキル基の例としては、限定されないが、とりわけ、−ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）（Ｃ６Ｈ５）、およびＣＨ２（２−メチルフェニル）が挙げられる。
句「非置換ヘテロシクリル」は、単環式、二環式、および多環式の環化合物を含む芳香族環および非芳香族環化合物の両方を指し、例えば、限定されないが、１個以上が、限定されないが、Ｎ、Ｏ、およびＳのようなヘテロ原子である３個以上の環原子を含有するキヌクリジルが挙げられる。句「非置換ヘテロシクリル」は、ベンズイミダゾリルのような縮合ヘテロ環式環を含むが、２−メチルベンズイミダゾリルのような化合物は置換ヘテロシクリル基であるため、他の基（例えば、環原子の１個に結合したアルキル基またはハロ基）を有するヘテロシクリル基を含まない。ヘテロシクリル基の例としては、限定されないが、以下のものが挙げられる：１〜４個の窒素原子を含有する不飽和の３〜８員環、例えば、限定されないが、ピローリル、ピロリニル、イミダゾリル、ピラゾリル、ピリジル、ジヒドロピリジル、ピリミジル、ピラジニル、ピリダジニル、トリアゾリル（例えば、４Ｈ−１，２，４−トリアゾリル、１Ｈ−１，２，３−トリアゾリル、２Ｈ−１，２，３−トリアゾリル等）、テトラゾリル（例えば、１Ｈ−テトラゾリル、２Ｈ−テトラゾリル等）；１〜４個の窒素原子を含有する飽和の３〜８員環、例えば、限定されないが、ピロリジニル、イミダゾリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル；１〜４個の窒素原子を含有する縮合不飽和ヘテロ環基、例えば、限定されないが、インドリル、イソインドリル、インドリニル、インドリジニル、ベンズイミダゾリル、キノリル、イソキノリル、インダゾリル、ベンゾトリアゾリル；１〜２個の酸素原子および１〜３個の窒素原子を含有する不飽和の３〜８員環、例えば、限定されないが、オキサゾリル、イソオキサゾリル、オキサジアゾリル（例えば、１，２，４−オキサジアゾリル、１，３，４−オキサジアゾリル、１，２，５−オキサジアゾリル等）；１〜２個の酸素原子および１〜３個の窒素原子を含有する飽和の３〜８員環、例えば、限定されないが、モルホリニル；１〜２個の酸素原子および１〜３個の窒素原子を含有する不飽和の縮合ヘテロ環基、例えば、ベンゾオキサゾリル、ベンゾオキサジアゾリル、ベンゾオキサジニル（例えば、２Ｈ−１，４−ベンゾオキサジニル等）；１〜３個の硫黄原子および１〜３個の窒素原子を含有する不飽和の３〜８員環、例えば、限定されないが、チアアゾリル、イソチアゾリル、チアジアゾリル（例えば、１，２，３−チアジアゾリル、１，２，４−チアジアゾリル、１，３，４−チアジアゾリル、１，２，５−チアジアゾリル等）；１〜２個の硫黄原子および１〜３個の窒素原子を含有する飽和の３〜８員環、例えば、限定されないが、チアゾロジニル；１〜２個の硫黄原子を含有する飽和および不飽和の３〜８員環、例えば、限定されないが、チエニル、ジヒドロジチイニル、ジヒドロジチオニル、テトラヒドロチオフェン、テトラヒドロチオピラン；１〜２個の硫黄原子および１〜３個の窒素原子を含有する不飽和の縮合ヘテロ環式環、例えば、限定されないが、ベンゾチアゾリル、ベンゾチアジアゾリル、ベンゾチアジニル（例えば、２Ｈ−１，４−ベンゾチアジニル等）、ジヒドロベンゾチアジニル（例えば、２Ｈ−３，４−ジヒドロベンゾチアジニル等）、酸素原子を含有する不飽和の３〜８員環、例えば、限定されないが、フリル；１〜２個の酸素原子を含有する不飽和の縮合ヘテロ環式環、例えば、ベンゾジオキソリル（例えば、１，３−ベンゾジオキソリル等）；１個の酸素原子および１〜２個の硫黄原子を含有する不飽和の３〜８員環、例えば、限定されないが、ジヒドロオキサチイニル；１〜２個の酸素原子および１〜２個の硫黄原子を含有する飽和の３〜８員環、例えば、１，４−オキサチアン；１〜２個の硫黄原子を含有する不飽和の縮合環、例えば、ベンゾチエニル、ベンゾジチイニル；および１個の酸素原子および１〜２個の酸素原子を含有する不飽和の縮合ヘテロ環式環、例えば、ベンゾキサチイニル。ヘテロシクリル基としては、さらに、環中の１個以上のＳ原子が１個または２個の酸素原子に対して二重結合した上述のものが挙げられる（スルホキシドおよびスルホン）。例えば、ヘテロシクリル基としては、テトラヒドロチオフェン、テトラヒドロチオフェンオキシド、およびテトラヒドロチオフェン１，１−ジオキシドが挙げられる。好ましいヘテロシクリル基は、５または６個の環原子を含有する。さらに好ましいヘテロシクリル基としては、モルホリン、ピペラジン、ピペリジン、ピロリジン、イミダゾール、ピラゾール、１，２，３−トリアゾール、１，２，４−トリアゾール、テトラゾール、チオモルホリン、チオモルホリンのＳ原子が１つ以上のＯ原子に結合したチオモルホリン、ピロール、ホモピペラジン、オキサゾリジン−２−オン、ピロリジン−２−オン、オキサゾール、キヌクリジン、チアゾール、イソオキサゾール、フラン、およびテトラヒドロフランが挙げられる。
句「置換ヘテロシクリル」は、環原子の１つが置換アルキル基および置換アリール基に関して上述のような非水素原子に結合した、上記に定義されるような非置換ヘテロシクリル基を指す。例としては、限定されないが、とりわけ、２−メチルベンズイミダゾリル、５−メチルベンズイミダゾリル、５−クロロベンズチアゾリル、１−メチルピペラジニル、および２−クロロピリジルが挙げられる。
句「非置換ヘテロシクリルアルキル」は、非置換アルキル基の水素結合または炭素結合が上記に定義されるようなヘテロシクリル基に対する結合と交換された、上記に定義されるような非置換アルキル基を指す。例えば、メチル（−ＣＨ３）は非置換アルキル基である。メチル基の水素がヘテロシクリル基に対する結合によって交換される場合、例えば、メチルの炭素がピリジンの２位の炭素（ピリジンのＮに対して結合した炭素のうち１つ）に結合した場合、またはピリジンの３位または４位の炭素に結合した場合、この化合物は非置換ヘテロシクリルアルキル基である。
非置換ヘテロシクリルアルキル基に対する句「置換ヘテロシクリルアルキル」は、非置換アラルキル基に対する置換アラルキル基と同じ意味を有する。しかし、置換ヘテロシクリルアルキル基としてはさらに、非水素原子がヘテロシクリルアルキル基のヘテロシクリル基中のヘテロ原子（例えば、限定されないが、ピペリジニルアルキル基のピペリジン環中の窒素原子）に結合した基が挙げられる。
句「非置換アルキルアミノアルキル」は、炭素結合または水素結合が水素原子に結合した窒素原子に対する結合および上記に定義されるような非置換アルキル基によって交換された、上記に定義されるような非置換アルキル基を指す。例えば、メチル（−ＣＨ３）は非置換アルキル基である。メチル基の水素原子が、水素原子およびエチル基に対して結合した窒素原子に対する結合によって交換される場合、得られた化合物は−ＣＨ２−Ｎ（Ｈ）（ＣＨ２ＣＨ３）であり、非置換アルキルアミノアルキル基である。
句「置換アルキルアミノアルキル」は、アルキル基の１つまたは両方中の炭素原子または水素原子に対する１つ以上の結合が、置換アルキル基に関して上記に記載されるような非炭素原子または非水素原子に対する結合によって交換され、全てのアルキルアミノアルキル基中の窒素原子に対する結合が、全てのアルキルアミノアルキル基が置換されているものではないという以外は、上記に定義されるような非置換アルキルアミノアルキル基を指す。しかし、置換アルキルアミノアルキル基は、基の窒素原子に対して結合した水素が非炭素原子および非水素原子で交換されたものを含む。
句「非置換ジアルキルアミノアルキル」は、炭素結合または水素結合が、上記に定義されるような２個の同じまたは異なる非置換アルキル基に対して結合した窒素原子に対する結合によって交換された、上記に定義されるような非置換アルキル基を指す。
句「置換ジアルキルアミノアルキル」は、１つ以上のアルキル基中の炭素原子または水素原子に対する１つ以上の結合が、置換アルキル基に関して記載されるような非炭素原子および非水素原子に対する結合によって交換された、上記に定義されるような非置換ジアルキルアミノアルキル基を指す。全てのジアルキルアミノアルキル基中の窒素原子に対する結合は、全てのジアルキルアミノアルキル基が置換されているわけではない。
句「非置換ヘテロシクリルオキシアルキル」は、炭素結合または水素結合が、上記に定義されるような非置換ヘテロシクリル基に対して結合した酸素原子に対する結合によって交換された、上記に定義されるような非置換アルキル基を指す。
句「置換ヘテロシクリルオキシアルキル」は、ヘテロシクリルオキシアルキル基のアルキル基の炭素基または水素基が、置換アルキル基に関して上記に記載されるような非炭素原子および非水素原子に対して結合しているか、またはヘテロシクリルオキシアルキル基のヘテロシクリル基が上記に定義されるような置換ヘテロシクリル基である、上記に定義されるような非置換ヘテロシクリルオキシアルキル基を指す。
句「非置換アリールアミノアルキル」は、炭素結合または水素結合が、上記に定義されるような少なくとも１つの非置換アリール基に対して結合した窒素原子に対する結合によって交換される、上記に定義されるような非置換アルキル基を指す。
句「置換アリールアミノアルキル」は、アリールアミノアルキル基のアルキル基が上に定義される置換アルキル基であるか、またはアリールアミノアルキル基のアリール基が置換アリール基であり、全てのアルキルアミノアルキル基中の窒素原子に対する結合が、全てのアルキルアミノアルキル基が置換されているものではないという以外は、上記に定義されるような非置換アリールアミノアルキル基を指す。しかし、置換アリールアミノアルキル基は、この基の窒素原子に対して結合した水素が非炭素原子および非水素原子と交換された基を含む。
句「非置換ヘテロシクリルアミノアルキル」は、炭素結合または水素結合が、上記に定義されるような少なくとも１つの非置換ヘテロシクリル基に結合した窒素原子に対する結合によって交換された、上記に定義されるような非置換アルキル基を指す。
句「置換ヘテロシクリルアミノアルキル」は、ヘテロシクリル基が、上記に定義されるような置換ヘテロシクリル基であるか、および／またはアルキル基が上記に定義されるような置換アルキル基である、上記に定義されるような非置換ヘテロシクリルアミノアルキル基を指す。全てのヘテロシクリルアミノアルキル基中の窒素原子に対する結合は、全てのヘテロシクリルアミノアルキル基が置換されているものではない。しかし、置換ヘテロシクリルアミノアルキル基は、この基の窒素原子に結合した水素が非炭素原子および非水素原子と交換されている基を含む。
句「非置換アルキルアミノアルコキシ」は、炭素結合または水素結合が、親化合物に結合した酸素原子に対する結合によって交換され、非置換アルキル基の別の炭素結合または水素結合が、水素原子および上記に定義されるような非置換アルキル基に対して結合した窒素原子に結合する、上記に定義されるような非置換アルキル基を指す。
句「置換アルキルアミノアルコキシ」は、親化合物に結合した酸素原子に結合したアルキル基の炭素原子または水素原子に対する結合が、置換アルキル基に関して上記に記載されるような非炭素原子および非水素原子に対する１つ以上の結合によって交換され、および／またはアミノ基に結合した水素が非炭素原子および非水素原子である場合、および／またはアミンの窒素に対して結合したアルキル基が置換アルキル基に関して上記に記載されるような非炭素原子および非水素原子に結合している場合、上記に定義されるような非置換アルキルアミノアルコキシ基を指す。全てのアルキルアミノアルコキシ基中のアミンおよびアルコキシ官能基の存在は、全てのこのような基が置換アルキルアミノアルコキシ基ではない。
句「非置換ジアルキルアミノアルコキシ」は、炭素結合または水素結合が、親化合物に結合した酸素原子に対する結合によって交換され、非置換アルキル基の別の炭素結合または水素結合が、上記に定義されるような他の２個の同じまたは異なる非置換アルキル基に結合した窒素原子に対して結合する、上記に定義されるような非置換アルキル基を指す。
句「置換ジアルキルアミノアルコキシ」は、親化合物に対して結合した酸素原子に対して結合したアルキル基の炭素原子または水素原子に対する結合が、置換アルキル基に関して上記に記載されるような非炭素原子および非水素原子に対する１つ以上の結合によって交換され、および／またはアミンの窒素に対して結合したアルキル基が置換アルキル基に対して上記に記載されるような非炭素原子および非水素原子に結合している場合、上記に定義されるような非置換ジアルキルアミノアルコキシ基を指す。全てのジアルキルアミノアルコキシ基中のアミンおよびアルコキシ官能基の存在は、全てのこのような基が置換ジアルキルアミノアルコキシ基ではない。
句「非置換ヘテロシクリルオキシ」は、水素原子に対する結合が、上記に定義されるような非置換ヘテロシクリル基の環原子に対する結合によって交換される、ヒドロキシル基（−ＯＨ）を指す。
句「置換ヘテロシクリルオキシ」は、水素原子に対する結合が、上記に定義されるような置換ヘテロシクリル基の環原子に対する結合によって交換される、ヒドロキシル基（−ＯＨ）を指す。
ヒドロキシル基、アミン基、およびスルフヒドリル基に関する用語「保護」は、当業者に既知の保護された基（例えば、本明細書に記載の手順を用いて付加または除去可能なＯｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ， Ｇｒｅｅｎｅ，Ｔ．Ｗ．；Ｗｕｔｓ，Ｐ．Ｇ．Ｍ．，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ，（３ｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，１９９９）中の保護基）を用いて望ましくない反応から保護される、これらの官能基の形態を指す。保護されたヒドロキシル基の例としては、限定されないが、例えば、ヒドロキシル基と試薬との反応によって得られるシリルエーテル、例えば、限定されないが、ｔ−ブチルジメチルクロロシラン、トリメチルクロロシラン、トリイソプロピルクロロシラン、トリエチルクロロシラン；置換メチルエーテルおよびエチルエーテル、例えば、限定されないが、メトキシメチルエーテル、メチルチオメチルエーテル、ベンジルオキシメチルエーテル、ｔ−ブトキシメチルエーテル、２−メトキシエトキシメチルエーテル、テトラヒドロピラニルエーテル、１−エトキシエチルエーテル、アリルエーテル、ベンジルエーテル；エステル、例えば、限定されないが、ベンゾイルホルメート、ホルメート、アセテート、トリクロロアセテート、およびトリフルオロアセテートが挙げられる。保護されたアミン基の例としては、限定されないが、アミド、例えば、ホルムアミド、アセトアミド、トリフルオロアセトアミド、およびベンズアミド；イミド、例えば、フタルイミド、およびジチオスクシンイミド；およびその他が挙げられる。保護されたスルフヒドリル基の例としては、限定されないが、チオエーテル、例えば、Ｓ−ベンジルチオエーテル、およびＳ−４−ピコリルチオエーテル；置換Ｓ−メチル誘導体、例えば、ヘミチオアセタール、ジチオアセタールおよびアミノチオアセタール；およびその他が挙げられる。
式Ｉおよび式ＩＩと乳酸、酢酸、酒石酸、リンゴ酸、メタンスルホン酸、塩酸およびクエン酸との化合物の塩は、好適な有機溶媒または溶媒の混合物中の式Ｉまたは式ＩＩの化合物の塩基と、乳酸、酢酸、酒石酸、リンゴ酸、クエン酸、塩酸、またはメタンスルホン酸のうち１個、２個またはそれ以上の等価体とを溶解することによって調製することができる。この混合物は、加熱され、通常は還流され、次いで冷却される。形成された塩は、典型的には、ろ過または乾燥するまで蒸発させることによって元に戻る。好適な有機溶媒としては、限定されないが、低級アルコールおよびエーテルが挙げられ、好ましくは、メタノール、エタノール、ジエチルエーテル、およびこれらの組み合わせである。これらの塩は、多くの既知の用量形態に配合することができるか、または当該技術分野において既知の手段によって、例えば、経口、非経口、経皮または局所使用のための送達系の任意の１つに配合することができる。いくつかの実施形態では、この塩は結晶性であり、いくつかの実施形態では、この結晶は平板形状または針状である。これらの塩は、圧縮されて錠剤を形成してもよい。好ましくは、本発明の塩は、式Ｉまたは式ＩＩの化合物の水性配合物を調製するために使用される。本発明の塩は、式Ｉまたは式ＩＩの化合物の遊離塩基または酸よりも一般的に改良された水溶解度を有する。例えば、４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］−１Ｈ−キノリン−２−オンの乳酸塩の蒸留水中の溶解度は約３３０ｍｇ／ｍＬである。
本発明は、式Ｉを有する化合物または式Ｉの化合物の互変異性体の薬学的に受容可能な塩に関する。いくつかのこのような実施形態では、塩は、乳酸塩、リンゴ酸塩、メシル酸塩、酢酸塩、酒石酸塩、リン酸塩、硫酸塩、硝酸塩、ＨＣｌ塩、クエン酸塩、またはマレイン酸塩から選択される。いくつかのこのような実施形態では、塩は、乳酸塩、リンゴ酸塩、メシル酸塩、酢酸塩、または酒石酸塩から選択される。いくつかのこのような実施形態では、塩は、乳酸塩、二乳酸塩、リンゴ酸塩、メシル酸塩、二メシル酸塩、二酢酸塩、または酒石酸塩から選択される。他の実施形態では、塩は、乳酸塩、リンゴ酸塩、またはメシル酸塩から選択される。式Ｉの化合物は下式を有する：
Figure 0004890255
 式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４は同じであるかまたは異なっていてもよく、Ｈ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｆ、Ｉ、−ＣＮ、−ＮＯ２、−ＯＨ、−ＯＲ１５基、−ＮＲ１６Ｒ１７基、置換および非置換のアミジニル基、置換および非置換のグアニジニル基、置換および非置換の一級、二級、および三級のアルキル基、置換および非置換のアリール基、置換および非置換のアルケニル基、置換および非置換のアルキニル基、置換および非置換のヘテロシクリル基、置換および非置換のアミノアルキル基、置換および非置換のアルキルアミノアルキル基、置換および非置換のジアルキルアミノアルキル基、置換および非置換のアリールアミノアルキル基、置換および非置換のジアリールアミノアルキル基、置換および非置換の（アルキル）（アリール）アミノアルキル基、置換および非置換のヘテロシクリルアルキル基、およびＣ（＝Ｏ）Ｒ１８基からなる群から独立して選択され；
Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、およびＲ８は同じであるかまたは異なっていてもよく、Ｈ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｆ、Ｉ、−ＮＯ２、−ＯＨ、−ＯＲ１９基、−ＮＲ２０Ｒ２１基、−ＳＨ、−ＳＲ２２基、−Ｓ（＝Ｏ）Ｒ２３基、−Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ２４基、−ＣＮ、置換および非置換のアミジニル基、置換および非置換のグアニジニル基、置換および非置換の一級、二級、および三級のアルキル基、置換および非置換のアリール基、置換および非置換のアルケニル基、置換および非置換のアルキニル基、置換および非置換のヘテロシクリル基、置換および非置換のアルキルアミノアルキル基、置換および非置換のジアルキルアミノアルキル基、置換および非置換のアリールアミノアルキル基、置換および非置換のジアリールアミノアルキル基、置換および非置換の（アルキル）（アリール）アミノアルキル基、置換および非置換のヘテロシクリルアルキル基、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ２５基、置換および非置換のアミノアルキル基、置換および非置換のヘテロシクリルアミノアルキル基、置換および非置換のヒドロキシアルキル基、置換および非置換のアルコキシアルキル基、置換および非置換のアリールオキシアルキル基、および置換および非置換のヘテロシクリルオキシアルキル基からなる群から独立して選択され；
Ｒ９はＨであり；
Ｒ１２は、Ｈ、置換および非置換のアルキル基、置換および非置換のアリール基、および置換および非置換のヘテロシクリル基からなる群から選択され；
Ｒ１３は、Ｈ、置換および非置換のアルキル基、置換および非置換のアリール基、置換および非置換のヘテロシクリル基、−ＯＨ、アルコキシ基、アリールオキシ基、−ＮＨ２、置換および非置換のヘテロシクリルアルキル基、置換および非置換のアミノアルキル基、置換および非置換のアルキルアミノアルキル基、置換および非置換のジアルキルアミノアルキル基、置換および非置換のアリールアミノアルキル基、置換および非置換のジアリールアミノアルキル基、置換および非置換の（アルキル）（アリール）アミノアルキル基、置換および非置換のアルキルアミノ基、置換および非置換のアリールアミノ基、置換および非置換のジアルキルアミノ基、置換および非置換のジアリールアミノ基、置換および非置換の（アルキル）（アリール）アミノ基、−Ｃ（＝Ｏ）Ｈ、−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル基、−Ｃ（＝Ｏ）−アリール基、−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−アルキル基、−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−アリール基、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（アルキル）基、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（アリール）基、Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（アルキル）２基、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（アリール）２基、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（アルキル）（アリール）基、−Ｃ（＝Ｏ）−ヘテロシクリル基、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−ヘテロシクリル基、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（ヘテロシクリル）基、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（ヘテロシクリル）２基、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（アルキル）（ヘテロシクリル）基、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（アリール）（ヘテロシクリル）基、置換および非置換のヘテロシクリルアミノアルキル基、置換および非置換のヒドロキシアルキル基、置換および非置換のアルコキシアルキル基、置換および非置換のアリールオキシアルキル基、および置換および非置換のヘテロシクリルオキシアルキル基からなる群から選択され；
Ｒ１４はＨであり；
Ｒ１５およびＲ１９は同じであるかまたは異なっていてもよく、置換および非置換のアルキル基、置換および非置換のアリール基、置換および非置換のヘテロシクリル基、置換および非置換のヘテロシクリルアルキル基、−Ｃ（＝Ｏ）Ｈ、−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル基、−Ｃ（＝Ｏ）−アリール基、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（アルキル）基、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（アリール）基、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（アルキル）２基、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（アリール）２基、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（アルキル）（アリール）基、置換および非置換のアミノアルキル基、置換および非置換のアルキルアミノアルキル基、置換および非置換のジアルキルアミノアルキル基、置換および非置換のアリールアミノアルキル基、置換および非置換のジアリールアミノアルキル基、置換および非置換の（アルキル）（アリール）アミノアルキル基、置換および非置換のヘテロシクリルアミノアルキル、置換および非置換のジヘテロシクリルアミノアルキル、置換および非置換の（ヘテロシクリル）（アルキル）アミノアルキル、置換および非置換の（ヘテロシクリル）（アルキル）アミノアルキル、置換および非置換のアルコキシアルキル基、置換および非置換のヒドロキシアルキル基、置換および非置換のアリールオキシアルキル基、および置換および非置換のヘテロシクリルオキシアルキル基からなる群から独立して選択され；
Ｒ１６およびＲ２０は同じであるかまたは異なっていてもよく、Ｈ、置換および非置換のアルキル基、置換および非置換のアリール基、および置換および非置換のヘテロシクリル基からなる群から独立して選択され；
Ｒ１７およびＲ２１は同じであるかまたは異なっていてもよく、Ｈ、置換および非置換のアルキル基、置換および非置換のアリール基、置換および非置換のヘテロシクリル基、−Ｃ（＝Ｏ）Ｈ、−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル基、−Ｃ（＝Ｏ）−アリール基、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（アルキル）基、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（アリール）基、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（アルキル）２基、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（アリール）２基、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（アルキル）（アリール）基、−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−アルキル基、−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−アリール基、置換および非置換のヘテロシクリルアルキル基、置換および非置換のアミノアルキル基、置換および非置換のアルキルアミノアルキル基、置換および非置換のジアルキルアミノアルキル基、置換および非置換のアリールアミノアルキル基、置換および非置換のジアリールアミノアルキル基、置換および非置換の（アルキル）（アリール）アミノアルキル基、−Ｃ（＝Ｏ）−ヘテロシクリル基、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−ヘテロシクリル基、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（ヘテロシクリル）基、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（ヘテロシクリル）２基、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（アルキル）（ヘテロシクリル）基、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（アリール）（ヘテロシクリル）基、置換および非置換のヘテロシクリルアミノアルキル基、置換および非置換のヒドロキシアルキル基、置換および非置換のアルコキシアルキル基、置換および非置換のアリールオキシアルキル基、および置換および非置換のヘテロシクリルオキシアルキル基からなる群から独立して選択され；
Ｒ１８、Ｒ２３、Ｒ２４、およびＲ２５は同じであるかまたは異なっていてもよく、Ｈ、−ＮＨ２、−ＮＨ（アルキル）基、−ＮＨ（アリール）基、−Ｎ（アルキル）２基、−Ｎ（アリール）２基、−Ｎ（アルキル）（アリール）基、−ＮＨ（ヘテロシクリル）基、−Ｎ（ヘテロシクリル）（アルキル）基、−Ｎ（ヘテロシクリル）（アリール）基、−Ｎ（ヘテロシクリル）２基、置換および非置換のアルキル基、置換および非置換のアリール基、−ＯＨ、置換および非置換のアルコキシ基、置換および非置換のアリールオキシ基、置換および非置換のヘテロシクリル基、−ＮＨＯＨ、−Ｎ（アルキル）ＯＨ基、−Ｎ（アリール）ＯＨ基、−Ｎ（アルキル）Ｏ−アルキル基、−Ｎ（アリール）Ｏ−アルキル基、−Ｎ（アルキル）Ｏ−アリール基、およびＮ（アリール）Ｏ−アリール基からなる群から独立して選択され；および
Ｒ２２は、置換および非置換のアルキル基、置換および非置換のアリール基、および置換および非置換のヘテロシクリル基からなる群から独立して選択され
式Ｉの化合物または式Ｉの化合物の互変異性体の薬学的に受容可能な塩のいくつかの実施形態では、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、またはＲ８の少なくとも１つは、置換および非置換のアミジニル基、置換および非置換のグアニジニル基、置換および非置換の飽和ヘテロシクリル基、置換および非置換のアルキルアミノアルキル基、置換および非置換のジアルキルアミノアルキル基、置換および非置換のアリールアミノアルキル基、置換および非置換のジアリールアミノアルキル基、置換および非置換の（アルキル）（アリール）アミノアルキル基、置換および非置換のヘテロシクリルアルキル基、置換および非置換のヘテロシクリルアミノアルキル基、置換および非置換のヒドロキシアルキル基、置換および非置換のアルコキシアルキル基、置換および非置換のアリールオキシアルキル基、および置換および非置換のヘテロシクリルオキシアルキル基；−ＯＲ１９基（ここで、Ｒ１９は、置換および非置換のアリール基、置換および非置換のヘテロシクリル基、置換および非置換のヘテロシクリルアルキル基、−Ｃ（＝Ｏ）Ｈ、Ｃ（＝Ｏ）−アリール基、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（アルキル）基、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（アリール）基、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（アルキル）２基、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（アリール）２基、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（アルキル）（アリール）基、置換および非置換のアミノアルキル基、置換および非置換のアルキルアミノアルキル基、置換および非置換のジアルキルアミノアルキル基、置換および非置換のアリールアミノアルキル基、置換および非置換のジアリールアミノアルキル基、置換および非置換の（アルキル）（アリール）アミノアルキル基、置換および非置換のヘテロシクリルアミノアルキル基、置換および非置換のジヘテロシクリルアミノアルキル基、置換および非置換の（ヘテロシクリル）（アルキル）アミノアルキル基、置換および非置換の（ヘテロシクリル）（アリール）アミノアルキル基、置換および非置換のヒドロキシアルキル基、置換および非置換のアルコキシアルキル基、置換および非置換のアリールオキシアルキル基、および置換および非置換のヘテロシクリルオキシアルキル基からなる群から選択される）；−ＮＲ２０Ｒ２１基（ここで、Ｒ２０は、置換および非置換のヘテロシクリル基からなる群から選択される）；−ＮＲ２０Ｒ２１基（ここで、Ｒ２１は、置換および非置換のヘテロシクリル基、−Ｃ（＝Ｏ）Ｈ、−Ｃ（＝Ｏ）−アリール基、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（アルキル）基、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（アリール）基、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（アルキル）２基、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（アリール）２基、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（アルキル）（アリール）基、−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−アルキル基、−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−アリール基、置換および非置換のアミノアルキル基、置換および非置換のアルキルアミノアルキル基、置換および非置換のジアルキルアミノアルキル基、置換および非置換のアリールアミノアルキル基、置換および非置換のジアリールアミノアルキル基、置換および非置換の（アルキル）（アリール）アミノアルキル基、置換および非置換のヘテロシクリルアミノアルキル基、置換および非置換のヒドロキシアルキル基、置換および非置換のアルコキシアルキル基、置換および非置換のアリールオキシアルキル基、置換および非置換のヘテロシクリルアルキル基、および置換および非置換のヘテロシクリルオキシアルキル基からなる群から選択される）；およびＣ（＝Ｏ）Ｒ２５基（ここで、Ｒ２５は、Ｈ、−ＮＨ２、−ＮＨ（アルキル）基、−ＮＨ（アリール）基、−Ｎ（アルキル）２基、−Ｎ（アリール）２基、−Ｎ（アルキル）（アリール）基、−ＮＨ（ヘテロシクリル）基、−Ｎ（ヘテロシクリル）（アルキル）基、−Ｎ（ヘテロシクリル）（アリール）基、−Ｎ（ヘテロシクリル）２基、置換および非置換のアリール基、置換および非置換のアリールオキシ基、および置換および非置換のヘテロシクリル基からなる群から選択される）からなる群から選択される。
１つの実施形態では、本発明は、４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンの薬学的に受容可能な塩に関する。いくつかのこのような実施形態では、塩は、酒石酸塩、リンゴ酸塩、乳酸塩、酢酸塩、二酢酸塩、クエン酸塩、メシル酸塩、二メシル酸塩および二塩酸塩から選択される。いくつかのこのような実施形態では、塩は、酒石酸塩、リンゴ酸塩、乳酸塩、二乳酸塩、二酢酸塩、クエン酸塩、メシル酸塩、二メシル酸塩および二塩酸塩からなる群から選択される。
いくつかの特定的な実施形態では、構造Ｉの化合物は、４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンまたはそれらの互変異性体の乳酸塩である。
式Ｉの化合物または式Ｉの化合物の互変異性体のいくつかの実施形態では、Ｒ１は、Ｆ、Ｃｌ、置換および非置換のアルコキシ基、置換および非置換のヘテロシクリルアルコキシ基、置換および非置換のヘテロシクリル基、置換および非置換のアルキルアミノアルコキシ基、置換および非置換のアリールアミノアルコキシ基、置換および非置換のジアルキルアミノアルコキシ基、置換および非置換のジアリールアミノアルコキシおよび置換および非置換の（アルキル）（アリール）アミノアルコキシ基からなる群から選択される。
式Ｉの化合物または式Ｉの化合物の互変異性体のいくつかの他の実施形態では、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、およびＲ８のうち少なくとも１つは置換または非置換のヘテロシクリル基である。
式Ｉの化合物または式Ｉの化合物の互変異性体のなお他の実施形態では、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、およびＲ８のうち少なくとも１つは、少なくとも１つのＯ原子またはＮ原子を含む置換または非置換のヘテロシクリル基である。
式Ｉの化合物または式Ｉの化合物の互変異性体のなお他の実施形態では、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、およびＲ８のうち少なくとも１つは、置換または非置換のヘテロシクリル基であり、ヘテロシクリル基が、モルホリン、ピペラジン、ピペリジン、ピロリジン、チオモルホリン、ホモピペラジン、テトラヒドロチオフェン、テトラヒドロフラン、およびテトラヒドロピランからなる群から選択される。
式Ｉの化合物または式Ｉの化合物の互変異性体のなお他の実施形態では、Ｒ６またはＲ７のうち１つは、置換および非置換のヘテロシクリル基である。
式Ｉの化合物または式Ｉの化合物の互変異性体のなお他の実施形態では、Ｒ６またはＲ７のうち１つは、少なくとも１つのＯ原子またはＮ原子を含む置換および非置換のヘテロシクリル基である。
式Ｉの化合物または式Ｉの化合物の互変異性体のなお他の実施形態では、Ｒ６またはＲ７のうち１つは、置換および非置換のヘテロシクリル基であり、ヘテロシクリル基が、モルホリン、ピペラジン、ピペリジン、ピロリジン、チオモルホリン、ホモピペラジン、テトラヒドロチオフェン、テトラヒドロフラン、およびテトラヒドロピランからなる群から選択される。
式Ｉの化合物または式Ｉの化合物の互変異性体のなお他の特定の実施形態では、Ｒ６またはＲ７のうち１つは、置換および非置換のモルホリン基、および置換および非置換のピペラジン基からなる群から選択される。
式Ｉの化合物または式Ｉの化合物の互変異性体のなお他の実施形態では、Ｒ６およびＲ７のうち少なくとも１つ、およびいくつかの実施形態では、−ＮＲ２０Ｒ２１基（ここで、Ｒ２０は、置換および非置換のヘテロシクリル基からなる群から選択される）；および−ＮＲ２０Ｒ２１基（ここで、Ｒ２１は、置換および非置換のヘテロシクリル基、置換および非置換のアミノアルキル基、置換および非置換のアルキルアミノアルキル基、置換および非置換のジアルキルアミノアルキル基、置換および非置換のアリールアミノアルキル基、置換および非置換のジアリールアミノアルキル基、置換および非置換の（アルキル）（アリール）アミノアルキル基、置換および非置換のヘテロシクリルアミノアルキル基、置換および非置換のヒドロキシアルキル基、置換および非置換のアルコキシアルキル基、置換および非置換のアリールオキシアルキル基、置換および非置換のヘテロシクリルアルキル基、および置換および非置換のヘテロシクリルオキシアルキル基からなる群から選択される）からなる群から選択される。
式Ｉの化合物または式Ｉの化合物の互変異性体のなお他の実施形態では、Ｒ１はＨおよびＦからなる群から選択される。いくつかのこのような実施形態では、Ｒ１はＦである。いくつかのこのような実施形態では、Ｒ２はＨである。
１つの実施形態では、式Ｉの化合物またはそれらの互変異性体の薬学的に受容可能な塩は、２２℃での水中の溶解度が約５ｍｇ／ｍＬ〜約４００ｍｇ／ｍＬである。いくつかの実施形態では、上記塩は、水中の溶解度が約１００ｍｇ／ｍＬ〜約４００ｍｇ／ｍＬである。他の実施形態では、上記塩は、水中の溶解度が約２００ｍｇ／ｍＬ〜約４００ｍｇ／ｍＬである。いくつかの実施形態では、式Ｉの化合物またはそれらの互変異性体の上記塩は、水中の溶解度が約３０ｍｇ／ｍＬより大きい。他の実施形態では、式Ｉの化合物またはそれらの互変異性体の上記塩は、水中の溶解度が約１５０ｍｇ／ｍＬ〜約２５０ｍｇ／ｍＬである。別の実施形態では、式Ｉの化合物またはそれらの互変異性体の薬学的に受容可能な塩は、約ｐＨ７未満、例えば、ｐＨ１〜７、ｐＨ３〜７、またはｐＨ４〜７の水性媒体で解離可能である。
本発明はさらに、式ＩＩを有する化合物またはそれらの互変異性体の薬学的に受容可能な塩を提供する。いくつかのこのような実施形態では、塩は、乳酸塩、リンゴ酸塩、メシル酸塩、酢酸塩、酒石酸塩、リン酸塩、硫酸塩、硝酸塩、ＨＣｌ塩、クエン酸塩、またはマレイン酸塩から選択される。いくつかのこのような実施形態では、塩は、乳酸塩、リンゴ酸塩、メシル酸塩、酢酸塩、または酒石酸塩から選択される。他の実施形態では、塩は、乳酸塩、リンゴ酸塩、またはメシル酸塩から選択される。式ＩＩの化合物は下式を有する：
Figure 0004890255
 式中：
Ｌは、共有結合、−（ＣＨ２）ｍ−、−ＣＨＲ３０−、またはＮ（Ｒ３１）−であり；
ＸはＣＨまたはＮであり；
ＷはＣＨ、Ｏ、またはＮであり；
Ｒ２６は、置換または非置換のアルキル基、置換または非置換のアルキルアミノ基、置換または非置換のジアルキルアミノ、−ＯＨ、置換または非置換のアルコキシ基、置換または非置換のアルキルアミノアルキル基、置換または非置換のジアルキルアミノアルキル基、置換または非置換のヘテロシクリル基、置換または非置換のヘテロシクリルアルキル基からなる群から選択され；但し、ＷがＯである場合、Ｒ２６は存在せず、
Ｒ２７は存在しないか、またはＮＯ２、−ＯＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、−ＮＨ２、置換または非置換のアルキル基、置換または非置換のアルキルアミノ基、置換または非置換のジアルキルアミノ基、置換または非置換のアルキルアミノアルキル基、置換または非置換のジアルキルアミノアルキル基、および置換または非置換のアルコキシ基からなる群から選択され；
Ｒ２８は、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、−ＯＨ、−ＮＨ２、および置換または非置換のアルキル基からなる群から選択され；
Ｒ２９、Ｒ３０、およびＲ３１は、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、置換および非置換のアルキル基、−ＯＨ、アルコキシ基、置換および非置換のアリールオキシ基、−ＮＨ２、置換および非置換のアミノアルキル基、置換および非置換のアリール基、置換および非置換のヘテロアリール基、置換および非置換のヘテロシクリル基、置換および非置換のアルキルアミノアルキル基、置換および非置換のジアルキルアミノアルキル基、置換および非置換のアリールアミノアルキル基、置換および非置換のジアリールアミノアルキル基、置換および非置換の（アルキル）（アリール）アミノアルキル基、置換および非置換のアルキルアミノ基、置換および非置換のジアルキルアミノ基、置換および非置換のジアリールアミノ基、置換および非置換の（アルキル）（アリール）アミノ基、−Ｃ（＝Ｏ）Ｈ、−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル基、−Ｃ（＝Ｏ）−アリール基、−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−アルキル基、−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−アリール基、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（アルキル）基、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（アリール）基、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（アルキル）２基、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（アリール）２基、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（アルキル）（アリール）基、−Ｃ（＝Ｏ）−ヘテロシクリル基、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−ヘテロシクリル基、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（ヘテロシクリル）基、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（ヘテロシクリル）２基、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（アルキル）（ヘテロシクリル）基、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（アリール）（ヘテロシクリル）基、置換および非置換のヘテロシクリルアミノアルキル基、置換および非置換のヒドロキシアルキル基、置換および非置換のアルコキシアルキル基、置換および非置換のアリールオキシアルキル基、および置換および非置換のヘテロシクリルオキシアルキル基からなる群から独立して選択され；
ｎは、０、１、または２であり；および
ｍは、１、２、３、または４である。
式ＩＩの化合物の薬学的に受容可能な塩のいくつかの実施形態では、塩は、乳酸塩、リンゴ酸塩、メシル酸塩、酢酸塩、酒石酸塩、リン酸塩、硫酸塩、硝酸塩、ＨＣｌ塩、クエン酸塩、またはマレイン酸塩から選択される。いくつかのこのような実施形態では、塩は、乳酸塩、リンゴ酸塩、メシル酸塩、酢酸塩、または酒石酸塩から選択される。いくつかのこのような実施形態では、塩は、乳酸塩、リンゴ酸塩、メシル酸塩、二酢酸塩、または酒石酸塩から選択される。式ＩＩの化合物の薬学的に受容可能な塩のいくつかの実施形態では、塩は乳酸塩として提供される。他の実施形態では、塩は酒石酸塩として提供される。他の実施形態では、塩はリンゴ酸として提供される。他の実施形態では、塩は二酢酸塩として提供される。他の実施形態では、塩は、酒石酸塩、メシル酸塩、二塩酸塩、クエン酸塩、または二メシル酸塩として提供される。
式ＩＩの化合物の薬学的に受容可能な塩のいくつかの実施形態では、Ｒ２８はＦであり、Ｒ２９はＨである。いくつかのこのような実施形態では、ｎは１である。
式ＩＩの化合物の薬学的に受容可能な塩のいくつかの実施形態では、ｎは１である。
１つの実施形態では、式ＩＩの化合物またはそれらの互変異性体の薬学的に受容可能な塩は、水中の溶解度が約２０ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬである。いくつかの実施形態では、式ＩＩの化合物またはそれらの互変異性体の塩は、水中の溶解度が約３０ｍｇ／ｍＬより大きい。他の実施形態では、式Ｉの化合物またはそれらの互変異性体の塩は、水中の溶解度が約１５０ｍｇ／ｍＬ〜約２５０ｍｇ／ｍＬである。さらに好ましい実施形態では、式ＩＩの化合物またはそれらの互変異性体の薬学的に受容可能な塩は、約ｐＨ７未満の水性媒体中で解離可能である。
本発明はさらに、薬学的処方物および医薬品を提供する。このような配合物および医薬品は、薬学的に受容可能なキャリアと組み合わせて式Ｉまたは式ＩＩの薬学的に受容可能な塩を含む。
本発明はさらに、血管内皮増殖因子レセプターチロシンキナーゼの阻害剤を必要とする患者を処置する方法を提供する。このような方法は、有効量のこの薬学的に受容可能な塩を含む薬学的処方物または医薬品をそれらを必要とする患者に投与する工程を含む。
本発明はさらに、式Ｉまたは式ＩＩの化合物の薬学的に受容可能な塩を調製する方法に関する。この方法は、以下の工程を含む：
（ａ）式Ｉまたは式ＩＩの化合物またはそれらの互変異性体の遊離塩基を溶媒または溶媒の混合物中に懸濁する工程；
（ｂ）酒石酸塩、リンゴ酸、乳酸、酢酸、クエン酸、塩酸、またはメタンスルホン酸から選択される酸と式Ｉまたは式ＩＩの化合物またはそれらの互変異性体とを接触させて混合物を提供する工程；
（ｃ）上記混合物を加熱する工程；
（ｄ）上記混合物を冷却する工程；
（ｅ）上記塩を単離する工程。
式Ｉまたは式ＩＩの化合物の薬学的に受容可能な塩を調製するためのいくつかの方法において、混合物は冷却され、塩は溶液から析出する。
式Ｉまたは式ＩＩの化合物の薬学的に受容可能な塩を調製するためのいくつかの方法において、混合物は加熱され、還流された後に冷却される。
式Ｉまたは式ＩＩの化合物の薬学的に受容可能な塩を調製するためのいくつかの実施形態において、単離工程は混合物をろ過する工程を含む。
いくつかの実施形態では、酸は乳酸であり、乳酸のＤ体およびＬ体の混合物であってもよいか、またはＤ−乳酸であってもよいか、またはＬ−乳酸であってもよい。
いくつかの実施形態では、塩を調製する方法において使用される溶媒はプロトン性溶媒である。
本発明の他の実施形態では、塩を調製する方法において使用される溶媒は、メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、ブタノール、２−ブタノール、アセトン、ブタノン、ジオキサン、水、テトラヒドロフラン、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される。
式Ｉおよび式ＩＩの化合物は、以下の実施例において示されるような単純な出発分子から容易に合成される。式Ｉおよび式ＩＩの化合物は、一般的に、他の任意の基に加えて、ニトリル基またはカルボン酸基で置換されたベンゼンを用いて調製されてもよい。
式Ｉおよび式ＩＩの化合物およびこのような化合物のアナログは、スキーム１〜４において示され、実施例において例示されるような単純な出発分子から合成されてもよい。スキーム１に示されるように、式Ｉおよび式ＩＩの化合物の１，４−ヒドロキシアナログは、アミン基およびカルボン酸基で置換された芳香族化合物を用いて一般的に調製されてもよい。
Figure 0004890255
 スキーム１に示されるように、置換芳香族化合物（例えば、置換または非置換の２−アミノ安息香酸）は、ハロゲン化アシル（例えば、メチル２−（クロロカルボニル）アセテート）と反応し、置換または非置換の１，２−ジアミノベンゼンと反応するアミドを生成してもよい。得られた生成物は、式Ｉまたは式ＩＩの４−ヒドロキシ置換アナログである。当業者は、スキーム１に記載の手順が種々の化合物を作成するために改変されてもよいことを理解する。
式Ｉおよび式ＩＩの４−アミノ置換化合物を調製するための方法がスキーム２に示される。スキーム２に示されるように、アミン基およびニトリル基で置換された芳香族化合物は、式Ｉまたは式ＩＩの４−アミノ置換化合物を合成するために使用されてもよい。エチル２−シアノアセテートのような化合物は、エタノールと反応してエチル３−エトキシ−３−イミノプロパノエート塩酸塩を生成してもよい。置換または非置換の１，２−フェニレンジアミンとの後に続く反応により、置換または非置換のエチル２−ベンズイミダゾール−２−イルアセテートが得られる。置換または非置換のエチル２−ベンズイミダゾール−２−イルアセテートと、アミン基およびニトリル基を有する芳香族化合物との反応、例えば、置換または非置換の２−アミノベンゾニトリルと塩基（例えば、リチウムビス（トリメチルシリル）アミド）またはＬｅｗｉｓ酸（例えば四塩化スズ）との反応により、式Ｉおよび式ＩＩの置換または非置換の４−アミノ置換化合物が得られる。
Figure 0004890255
 スキーム３は、式Ｉおよび式ＩＩの４−ジアルキルアミノ化合物および４−アルキルアミノ化合物を合成する一般的な合成経路を示す。スキーム３の検討は、式Ｉまたは式ＩＩの化合物の４−ヒドロキシ置換アナロが、オキシ塩化リンまたは塩化チオニルとの反応によって４−クロロ誘導体に変換され得ることを示す。次いで、４−クロロ誘導体をアルキルアミンまたはジアルキルアミンと反応させて対応する４−アルキルアミノ誘導体または４−ジアルキルアミノ誘導体を生成してもよい。脱プロトン化により、式Ｉまたは式ＩＩの最終的な４−アルキルアミノ化合物または４−ジアルキルアミノ化合物が得られる。この様式で４−クロロ誘導体と反応し得る他の基としては、限定されないが、ＲＯＨ、ＲＳＨ、およびＣｕＣＮが挙げられる。
Figure 0004890255
 スキーム４に示されるように、４−位にＨ、アルキル基、アリール基、またはヘテロシクリル基を有する式Ｉまたは式ＩＩの化合物のアナログの合成は、スキーム２および３において示されるように調製された置換または非置換の２−ベンズイミダゾール−２−イルアセテートを用いて達成されてもよい。
Figure 0004890255
 ヘテロ芳香族ジアミンは、式Ｉおよび式ＩＩのヘテロ環アナログ化合物を生成するための前駆体として使用されてもよい。式Ｉおよび式ＩＩのこのようなアナログ化合物（ＮＲ１２Ｒ１３＝ＮＨ２）の合成はスキーム５に示される。
Figure 0004890255
 エチルシアノアセテートのような化合物は、２個のオルトアミノ基を含有する置換または非置換のヘテロ環（例えば、置換または非置換の１，２−ジアミノピリジン）と縮合して、置換または非置換の２−イミダゾロ［５，４−ｂ］ピリジン−２−イルエタンニトリルを得て、これを酸性媒体中で加水分解して、置換または非置換のエチル２−イミダゾロ［５，４−ｂ］ピリジン−２−イルアセテートを得てもよい。代替経路として、置換または非置換のエチル２−イミダゾロ［５，４−ｂ］ピリジン−２−イルアセテートは、３−エトキシ−３−イミノプロパノエートの塩酸塩および置換または非置換の１，２−ジアミノピリジンのような化合物から得てもよい。置換または非置換のエチル２−イミダゾロ［５，４−ｂ］ピリジン−２−イルアセテートとアミン基およびニトリル基を有する芳香族化合物との反応（例えば、置換または非置換の２−アミノベンゾニトリルと塩基（例えば、リチウムビス（トリメチルシリル）アミド））との反応により、式Ｉおよび式ＩＩの化合物の置換または非置換のアナログが得られる。
本発明はさらに、ＶＥＧＦ−ＲＴＫの活性に関連する種々の障害、さらに特定的には、血管形成に関連する癌を処置または改善するための、式Ｉまたは式ＩＩの化合物の１つ以上の塩と薬学的に受容可能なキャリア、賦形剤、バインダー、希釈剤等とを混合することによって調製されてもよい組成物を提供する。
賦形剤、希釈剤、バインダー、キャリア等としては、限定されないが、微結晶性セルロース、ラクトース、二塩基性リン酸カルシウム、三塩基性リン酸カルシウム、ナトリウムデンプングリコール酸ナトリウム（ＮａＳＧ）、クロスポビドン、クロスカルメロース（ＣＣ）、ラウリル硫酸ナトリウム（ＳＬＳ）、ツイーン、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポビドン、ヒドロキシプロピルセルロース（ＨＰＭＣ）、ステアリン酸Ｍｇ、ステアリン酸Ｃａ、ステアリン酸、ナトリウムステアレートフマレート、および二酸化ケイ素が挙げられる。
治療的に有効な用量は、さらに、障害の症状を改善するのに十分な式Ｉおよび／または式ＩＩの化合物の１つ以上の塩の量を指す。本発明の薬学的組成物は、当該技術分野で既知の方法、とりわけ、例えば、従来の顆粒化、混合、溶解、カプセル化、凍結乾燥、乳化または湿式粉砕プロセスによって製造することができる。上記組成物は、例えば、顆粒、粉末、錠剤、カプセル、シロップ、坐剤、注射液、エマルション、エリクシル、懸濁液または溶液の形態であることができる。本組成物は、種々の投与経路（例えば、経口投与によって、経粘膜投与によって、直腸投与または皮下投与によって、および髄腔内、静脈内、筋肉内、腹腔内、鼻腔内、眼球内または心室内注射によって）のために配合することができる。式Ｉおよび式ＩＩの化合物の塩または化合物はさらに、例えば、持続性放出配合物として注射液により、全身態様よりもむしろ局所的に投与することができる。以下の用量形態は、一例として与えられ、本発明を限定することとみなされるべきではない。
患者に投与する際の化合物の量を決定するために、特定の操作工程をなすことができる。このような方法は、米国仮出願番号第６０／５１７，９１５号、名称「Ｍｅｔｈｏｄｓ ｏｆ Ｔｒｅａｔｉｎｇ Ｃａｎｃｅｒ ａｎｄ Ｒｅｌａｔｅｄ Ｍｅｔｈｏｄｓ」、２００３年１１月７日出願、ボラ（Ｖｏｒａ）らに記載される（本明細書中にその全体が参考として組み込まれる）。
経口投与、口腔投与、および舌下投与、粉末、懸濁液、顆粒、錠剤、丸薬、カプセル、ジェルキャップ、およびカプレットは、固体用量形態として受容可能である。これらは、式Ｉおよび／または式ＩＩの化合物の１つ以上の塩と、少なくとも１つの添加物または賦形剤（例えば、デンプンまたは他の添加物）を混合することによって調製することができる。好適な添加物または賦形剤は、ショ糖、ラクトース、セルロース糖、マンニトール、マルチトール、デキストラン、ソルビトール、デンプン、寒天、アルギネート、キチン、キトサン、ペクチン、トラガカントガム、アラビアゴム、ゼラチン、コラーゲン、カゼイン、アルブミン、合成または半合成のポリマーまたはグリセリド、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、および／またはポリビニルピロリドンである。場合により、経口投薬形態は、投与を補助するための他の成分、例えば、不活性希釈剤、滑沢剤、例えば、ステアリン酸マグネシウム、または防腐剤、例えば、パラベンまたはソルビン酸、または酸化防止剤、例えば、アスコルビン酸、トコフェロールまたはシステイン、崩壊剤、またはキレート化剤、例えば、ＥＤＴＡ、バインダー、増粘剤、バッファー、甘味剤、香味剤または香料薬剤を含有することができる。さらに、染料または顔料は、同定のために添加されてもよい。錠剤および丸薬は、当該技術分野で公知の好適なコーティング物質、例えば、水分保護コーティング、腸溶コーティング、または持続性放出コーティングでさらに処理されてもよい。
経口投与のための液体投薬形態は、不活性希釈剤（例えば水）を含有してもよい、薬学的に受容可能なエマルション、シロップ、エリクシル、懸濁液、スラリーおよび溶液の形態であってもよい。薬学的処方物は、滅菌液体（例えば、限定されないが、油、水、アルコール、およびこれらの組み合わせ）を用いた液体懸濁液または溶液として調製されてもよい。
薬学的に好適な界面活性剤、懸濁剤、乳化剤、甘味剤、香味剤、キレート化剤、防腐剤、酸化防止剤、可溶化剤、例えば、プロピレングリコールおよびグリセリンおよびソルビトールは、経口投与または非経口投与のために添加されてもよい。
上述のように、懸濁液は油を含んでもよい。このような油としては、限定されないが、ピーナッツ油、ゴマ油、綿実油、トウモロコシ油、オリーブ油が挙げられる。懸濁調製物はさらに、脂肪酸のエステル、例えば、オレイン酸エチル、ミリスチン酸イソプロピル、脂肪酸グリセリドおよびアセチル化脂肪酸グリセリドを含有してもよい。懸濁配合物は、アルコール、例えば、限定されないが、エタノール、イソプロピルアルコール、ヘキサデシルアルコール、グリセロールおよびプロピレングリコールを含んでもよい。エーテル、例えば、限定されないが、ポリ（エチレングリコール）、石油炭化水素、例えば、鉱物油およびペトロラタム；および水はさらに、懸濁配合物中で使用されてもよい。さらに、懸濁配合物は、安定化剤、防腐剤、酸化防止剤、界面活性剤、染料、甘味剤、香味剤、可溶化剤、増粘剤、および乳化剤を含んでもよい。
鼻投与のために、薬学的処方物は、適切な溶媒および場合により他の化合物、例えば、限定されないが、安定化剤、抗微生物剤、酸化防止剤、ｐＨ調整剤、界面活性剤、バイオアベイラビリティ調整剤およびこれらの組み合わせを含有するスプレーまたはエアロゾルであってもよい。エアロゾル配合物のための発泡剤は、圧縮空気、窒素、二酸化炭素、または炭化水素系の低沸点溶媒を含んでもよい。式Ｉおよび／または式ＩＩの化合物の塩または化合物は、従来は、噴霧器からのエアロゾルスプレーの形態で送達されている。
注射可能な投薬形態は、一般的に、好適な分散剤または湿潤剤および懸濁剤を用いて調製され得る水性懸濁液または油懸濁液を含む。注射可能な形態は、溶媒または希釈剤を用いて調製される、溶液相であってもよいか、または懸濁液の形態であってもよい。受容可能な溶媒またはヒビクルとしては、滅菌水、Ｒｉｎｇｅｒ液、または等張性食塩水溶液が挙げられる。あるいは、溶媒または懸濁剤として滅菌油が使用されてもよい。好ましくは、油または脂肪酸は、天然または合成の油、脂肪酸、モノ−、-ジ−またはトリ−グリセリドを含み、非揮発性である。
注射のために、薬学的処方物は、上述のような適切な溶液を用いて再構築するために好適な粉末であってもよい。これらの例としては、限定されないが、凍結乾燥された粉末、回転乾燥された粉末または噴霧乾燥された粉末、アモルファス粉末、顆粒、沈殿物、または粒子が挙げられる。注射のために、配合物は、安定化剤、ｐＨ調整剤、界面活性剤、バイオアベイラビリティ調整剤およびこれらの組み合わせを場合により含有してもよい。式Ｉおよび式ＩＩの化合物の塩は、ボラス注射または連続吸入によるような注射によって非経口投与のために配合されてもよい。注射のための単位投薬形態は、アンプルまたは複数用量の容器であってもよい。
直腸投与のために、薬学的処方物は、腸、Ｓ状結腸、および／または直腸における化合物放出のための、坐剤、軟膏、浣腸、錠剤またはクリームの形態であってもよい。直腸坐剤は、式Ｉまたは式ＩＩの化合物の１つ以上の塩と、受容可能なビヒクル、例えば、通常の貯蔵温度では固体相で存在し、体内（例えば直腸）で薬物を放出するのに好適な温度では液体相で存在する、ココアバターまたはポリエチレングリコールとを混合することによって調製される。油はさらに、軟質ゼラチン型および坐剤の配合物の調製において使用されてもよい。水、食塩水、水性デキストロースおよび関連する糖溶液、およびグリセロールは、懸濁剤（例えば、ペクチン、カルボマー、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロースまたはカルボキシメチルセルロース）、およびバッファーおよび防腐剤も含有してもよい懸濁配合物の調製において使用されてもよい。
いくつかの実施形態では、塩は、貯蔵容器（例えばバイアル）中で粉末形態で供給される。いくつかの実施形態では、バイアルは密閉されており、他の実施形態では、バイアルは不活性ガスで排気され、栓がされている。
上記に記載されるこれらの代表的な投薬形態に加えて、薬学的に受容可能な賦形剤およびキャリアは、一般的に当業者に既知であり、本発明に含まれる。このような賦形剤およびキャリアは、例えば、「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」 Ｍａｃｋ Ｐｕｂ．Ｃｏ．，Ｎｅｗ Ｊｅｒｓｅｙ（１９９１）（本明細書中に参考として組み込まれる）に記載される。
本発明の配合物は、以下に記載されるように、短時間の作用、迅速な放出、長時間の作用、および持続性放出のために設計されてもよい。従って、薬学的処方物はさらに、制御された放出または遅延性放出のために配合されてもよい。
本組成物はさらに、例えば、ミセルまたはリポソーム、またはいくつかのカプセル化形態を含んでもよいか、または、長期間の貯蔵および／または送達効果を提供するために遅延放出形態で投与されてもよい。それ故に、薬学的処方物は、ペレットまたは円柱形に圧縮されてもよく、蓄積注射としてまたはインプラント（例えばステント）として筋肉内または皮下に移植されてもよい。このようなインプラントは、既知の不活性物質（例えば、シリコンおよび生分解性ポリマー）を使用してもよい。
特定の投薬は、被検体の疾患、年齢、体重、全体的な健康状態、性別、および食事の状態、投薬間隔、投与経路、排泄速度、および薬物の組み合わせに依存して調整されてもよい。有効量を含有する上述の投薬形態のいずれかは、通常の実験の範囲内で十分であり、それ故に、本発明の範囲内である。
治療的に有効な用量は、投与経路および投薬形態に依存して変動してもよい。式Ｉまたは式ＩＩの化合物の好ましい塩または化合物は、高い治療指数を示す配合物中に存在する。治療指数は、ＬＤ５０およびＥＤ５０の比として表現可能な毒性効果と治療効果との間の用量比である。ＬＤ５０は、集合の５０％が死に至る用量であり、ＥＤ５０は、集合の５０％に治療効果がある用量である。ＬＤ５０およびＥＤ５０は、動物細胞培養物または実験動物における標準的な薬学的手順によって決定される。
本発明の内容での「処置」は、障害または疾患に関連する症状の軽減、またはこれらの症状のさらなる進行または悪化の停止、または疾患または障害の防止または予防を意味する。例えば、ＶＥＧＦ−ＲＴＫの阻害剤を必要とする患者を処置する中で、首尾よい処置は、腫瘍または疾患組織を供給する毛細血管増殖の減少、癌性増殖または腫瘍、毛細血管の増殖、または疾患組織に関連する症状の緩和、毛細血管増殖の停止、または疾患（例えば癌）の進行または癌性細胞の増殖の停止である。処置はさらに、他の治療と組み合わせた、本発明の薬学的処方物の投与を含んでもよい。例えば、本発明の化合物および薬学的処方物は、外科的手順および／または放射線治療の前、途中、または後に投与されてもよい。本発明の化合物はさらに、アンチセンスおよび遺伝子治療において使用されるものを含む他の抗癌剤と組み合わせて投与することもできる。
本発明の１つの実施形態では、本発明に従う有効量の薬学的処方物をそれらを必要とする患者に投与する工程を含む、血管内皮増殖因子レセプターチロシンキナーゼの阻害剤を必要とする患者を処置する方法がある。
本発明の１つの実施形態では、有効量の式Ｉまたは式ＩＩの化合物の塩を腫瘍を有する患者に投与する工程を含む、患者において腫瘍増殖を阻害するための方法がある。
本発明の１つの実施形態では、有効量の式Ｉまたは式ＩＩの化合物の塩をそれを必要とする患者に投与する工程を含む、患者において毛細血管の増殖を阻害するための方法がある。
本発明の１つの実施形態では、式Ｉまたは式ＩＩの化合物の上述の塩のいずれかと薬学的に受容可能なキャリアおよび水または水溶液とを混合する工程を含む、薬学的処方物を調製する方法がある。
本発明は、このように一般的に記載され、以下の実施例を参照することによって容易に理解されるが、これらは一例として提供され、本発明を限定することを意図するものではない。
以下の省略語が実施例中で使用される：
ＡＴＰ： アデノシン三リン酸
ＢＳＡ： ウシ血清アルブミン
ＤＭＡ： Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド
ＤＭＦ： Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
ｄｐｐｆ： １，１’（ジフェニルホスフィノ）フェロセン
ＤＴＴ： ＤＬ−ジチオスレイトール
ＥＤＴＡ： エチレンジアミン四酢酸
ＥｔＯＡｃ： 酢酸エチル
ＥｔＯＨ： エタノール
ＨＢＴＵ： Ｏ−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート
ＩＣ５０値： 測定された活性を５０％減少させる阻害剤の濃度
ＬｉＨＭＤＳ： リチウムビス（トリメチルシリル）アミド
ＭｅＯＨ： メタノール
ＮＭＰ： Ｎ−メチルピロリドン
ＴＨＦ： テトラヒドロフラン
化合物は、Ｃｍｅｍｌｎｏｖａｔｉｏｎ Ｓｏｆｔｗａｒｅ，Ｉｎｃ．およびＡＣＤ／Ｎａｍｅ ｖ．４．５３からの命名法（ｖ．３．０＆ｖ．５．０）を用いて命名された。
（合成方法論）
ベンズイミダゾールアセテートを合成するために使用される種々のアリールジアミン出発物質は、商業的な供給源から得てもよく、当業者に既知の方法によって調製してもよく、または以下の一般的な方法１〜１５によって調製してもよい。
（方法１）
Figure 0004890255
 ２，４−ジフルオロニトロベンゼン（１．０当量）を、アセトンおよびドライアイスを入れたドライアイスコンデンサーを取り付けた乾燥丸底フラスコに入れた。アンモニアをフラスコ内で濃縮させ、得られた溶液を還流で７時間攪拌した。黄色の沈殿が１時間以内に形成した。７時間後、コンデンサーを取り外し、液体アンモニアを数時間かけて蒸発させた。粗生成物をシリカゲル上のフラッシュクロマトグラフィーによって精製した。（８５：１５ヘキサン：酢酸、生成物のＲｆ＝０．３２、汚染物のＲｆ＝０．５１）；ＧＣ／ＭＳ ｍ／ｚ １５６．１（Ｍ＋）、Ｒｔ １１．１６分。
得られた５−フルオロ−２−ニトロフェニルアミン（１．０当量）およびアミン（１．１当量）（例えばＮ−メチルピペラジン）をＮＭＰに溶解し、トリエチルアミン（２．０当量）を添加した。反応混合物を１００℃で３時間加熱した。次いで、溶液を室温まで冷却し、水で希釈した。得られた沈殿をろ過し、減圧下で乾燥し、２−ニトロ−ジアミノ生成物を得た。あるいは、１３０℃で１〜２日間加熱する以外は同じ条件下で、市販の５−クロロ−２−ニトロフェニルアミンから同じ生成物を得てもよい。いくつかの実施例では、５−フルオロ−２−ニトロフェニルアミンまたは５−クロロ−２−ニトロフェニルアミンのいずれかへの置き換えは、ニートなアミン（５当量）中でそれぞれ１００℃または１３０℃で行うことができる。生成物を同一の様式で単離する。ＬＣ／ＭＳ ｍ／ｚ ２３７．１（ＭＨ＋）、Ｒｔ １．３０４分。
ニトロアミン（１．０当量）および１０％Ｐｄ／Ｃ（０．１当量）を室温で無水エタノール中に懸濁させた。反応フラスコを排気し、ついでＨ２で満たした。次いで、得られた混合物を水素雰囲気下で一晩攪拌した。得られた溶液をセライトでろ過し、減圧下で濃縮して、粗生成物を得て、これをさらなる精製なしに使用した。
（方法２）
Figure 0004890255
 丸底フラスコに、２，３−ジフルオロ−６−ニトロフェニルアミン（１当量）および十分なＮＭＰを入れ、粘稠なスラリーを作成した。アミン（５当量）（例えばＮ−メチルピペラジン）を添加し、溶液を１００℃に加熱した。２時間後、溶液を冷却し、水に注いだ。形成した明黄色固体をろ過し、乾燥した。ニトロアミンを方法１におけるように還元して、粗生成物を得て、これをさらなる精製なしに使用した。ＬＣ／ＭＳ ｍ／ｚ ２２５．１（ＭＨ＋）、Ｒｔ ０．３３５分。
（方法３）
Figure 0004890255
 １，３−ジフルオロ−２−ニトロベンゼンの０．１Ｍ ＤＭＦ溶液に、Ｅｔ３Ｎ（２当量）を添加し、次いでアミン（１当量）（例えばモルホリン）を添加した。混合物を１８時間攪拌し、次いで水で希釈し、酢酸エチルで抽出した。ＬＣ／ＭＳ ｍ／ｚ ２２７．２（ＭＨ＋）、Ｒｔ ２．５２２分。合わせた有機層をＭｇＳＯ４で乾燥し、ろ過し、濃縮した。アンモニアを粗生成物を含有するボンベ内に濃縮した。ボンベを密閉し、１００℃に加熱した（４００ｐｓｉを超える）。７２時間後、ボンベを冷却し、アンモニアを蒸発させて、赤色がかった固体を得た。ニトロアミンを方法１におけるように還元して、粗生成物を得て、これをさらなる精製なしに使用した。ＬＣ／ＭＳ ｍ／ｚ １９４．１（ＭＨ＋）， Ｒｔ １．１９９分。
（方法４）
Figure 0004890255
 ＮａＨ（１．３当量）を含有する攪拌したＮＭＰ溶液に、アルコール（１．０当量）、例えば、２−メチルオキシエタノールを添加した。次いで、得られた混合物を３０分攪拌した。次いで、ＮＭＰ中の５−フルオロ−２−ニトロフェニルアミンのスラリーをゆっくりと添加した。次いで、混合物を１００℃まで加熱した。２時間後、反応混合物を冷却し、水を添加した。次いで、混合物をろ過し、捕捉した固体を水で洗浄し、シリカゲルクロマトグラフィー（１：１酢酸エチル：ヘキサン）で精製した。ＬＣ／ＭＳ ｍ／ｚ ２１３．２（ＭＨ＋）、Ｒｔ ２．２４分。ニトロアミンを方法１におけるように還元して、粗生成物を得て、これをさらなる精製なしに使用した。ＬＣ／ＭＳ ｍ／ｚ １８３．１（ＭＨ＋），Ｒｔ ０．９８４分。
（方法５）
Figure 0004890255
 ジイソプロピルアゾジカルボキシレート（１．１当量）を、４−アミノ−３−ニトロフェノール（１．０当量）、トリフェニルホスフィン（１．１当量）、およびアルコール、例えばＮ−（２−ヒドロキシエチル）モルホリン（１．０当量）のテトラヒドロフランの攪拌溶液に０℃で滴下した。混合物を室温まで加温し、１８時間攪拌した。溶媒を蒸発させ、生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（９８：２ＣＨ２Ｃｌ２：メタノール）によって精製し、４−（２−モルホリン−４−イルエトキシ）−２−ニトロフェニルアミンを暗赤色がかった褐色油状物として得た。ＬＣ／ＭＳ ｍ／ｚ ２６８．０（ＭＨ＋）、Ｒｔ １．０１分。ニトロアミンを方法１におけるように還元して、粗生成物を得て、これをさらなる精製なしに使用した。ＬＣ／ＭＳ ｍ／ｚ ２３８．３（ＭＨ＋）、Ｒｔ ０．２９５分。
（方法６）
Figure 0004890255
 ４−アミノ−３−ニトロフェノール（１当量）、Ｋ２ＣＯ３（２当量）、および２−ブタノンを入れたフラスコに、アルキルジブロミド、例えば、１，３−ジブロモプロパン（１．５当量）を添加した。次いで、得られた混合物を８０℃で１８時間加熱した。冷却した後、混合物をろ過し、濃縮し、水で希釈した。次いで、溶液をＣＨ２Ｃｌ２（３回）で抽出し、合わせた有機層を濃縮して、固体を得て、この固体をペンタンで洗浄した。ＬＣＭＳ ｍ／ｚ ２７５．１（ＭＨ＋）、Ｒｔ ２．７４分。
上記で調製したブロミドのアセトニトリル溶液、アミン、例えば、ピロリジン（５当量）、Ｃｓ２ＣＯ３（２当量）およびＢｕ４ＮＩ（０．１当量）を７０℃で４８時間加熱した。反応混合物を冷却し、ろ過し、濃縮した。残渣をＣＨ２Ｃｌ２に溶解し、水で洗浄し、濃縮して、所望のニトロアミン、２−ニトロ−４−（３−ピロリジン−１−イルプロポキシ）フェニルアミンを得た。ＬＣＭＳ ｍ／ｚ ２６６．２（ＭＨ＋）、Ｒｔ １．５１分。ニトロアミンを方法１におけるように還元し、粗生成物を得て、これをさらなる精製なしに使用した。
（方法７）
Figure 0004890255
 ６−クロロ−３−ニトロピリジン−２−アミン（１当量）のアセトニトリル中の懸濁液に、アミン、例えばモルホリン（４当量）を添加した。得られた反応混合物を７０℃で５時間攪拌した。溶媒を減圧下で蒸発させ、残渣をエーテルで磨砕し、所望の化合物を明黄色粉末として得た。ＬＣ／ＭＳ ｍ／ｚ ２２５．０（ＭＨ＋）、Ｒｔ １．７９分。ニトロアミンを方法１におけるように還元し、粗生成物を得て、これをさらなる精製なしに使用した。
（方法８）
Figure 0004890255
 フェノール（１当量）および５−クロロ−２−ニトロアニリン（１当量）をＤＭＦに溶解し、固体Ｋ２ＣＯ３（２当量）を一度に添加した。反応混合物を１２０℃で一晩加熱した。反応混合物を室温まで冷却し、ほとんどのＤＭＦを蒸発させ、水を残渣に添加して沈殿を得た。固体を乾燥し、シリカゲル上のクロマトグラフィー（２〜１０％ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２）によって精製し、所望の生成物を得た。ニトロアミンを方法１におけるように還元し、粗生成物を得て、これをさらなる精製なしに使用した。
（方法９）
Figure 0004890255
 ベンズイミダゾール環への置換基の導入は、合成の初期段階に限定される必要はなく、キノリノン環の形成後に生じてもよい。例えば、上の図に示される粗メチルエステルを、ＥｔＯＨおよび３０％ＫＯＨ水溶液の１：１混合物に溶解し、７０℃で一晩攪拌した。次いで、反応混合物を冷却し、１Ｎ ＨＣｌで酸性化し、沈殿を得た。固体をろ過し、水で洗浄し、乾燥して、２−（４−アミノ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−３−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−６−カルボン酸２−（４−アミノ−２−オキソ−３−ヒドロキノリル）ベンズイミダゾール−６−カルボン酸を褐色固体として得た。ＬＣ／ＭＳ ｍ／ｚ：３２１．１（ＭＨ＋）、Ｒｔ ２．２６分。
２−（４−アミノ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−３−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−６−カルボン酸（１当量）、アミン（１当量）、ＥＤＣ（１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩、１．２当量）、ＨＯＡＴ（１−ヒドロキシ−７−アザベンゾトリアゾール、１．２当量）およびトリエチルアミン（２．５当量）のＤＭＦ中の混合物を、２３℃で２０時間攪拌した。反応混合物を水と酢酸エチルとの間で分配した。合わせた有機層を乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、濃縮した。水を添加し、このようにして形成した沈殿をろ別し、乾燥して、所望の生成物を得た。
無水イサト酸を合成するために使用される種々の２−アミノ安息香酸出発物質は、商業的な供給源から得てもよく、当業者に既知の方法によって調製されてもよく、または以下の一般的な方法１０〜１１によって調製されてもよい。一般的な無水イサト酸の合成方法は、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１９８１，２４（６），７３５ ａｎｄ Ｊ．Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌ．Ｃｈｅｍ．１９７５，１２（３），５６５に記載される。
（方法１０）
Figure 0004890255
 化合物１〜３を、米国特許第４，２８７，３４１号中に見いだされるのと同様の手順を用いて作成した。化合物３をＮＨ４ＯＨ中の１０％Ｐｄ／Ｃ、５０℃で４８時間以上の標準的な水素化条件を用いて還元した。生成物を氷酢酸を用いて中性化することにより沈殿させ、ろ過し、水およびエーテルで洗浄した。収率は約５０％であった。化合物５を、米国特許第５，７１６，９９３号に開示されるのと同様の様式で調製した。
（方法１１）
Figure 0004890255
 アニリン含有化合物のヨウ素化は、種々の手順を用いて達成された。ヨウ素化は、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２００１，４４，６，９１７−９２２に記載されるのと同様の手順を用いて達成された。ＥｔＯＨ中のアントラニル酸エステルを、硫酸銀（１当量）およびＩ２（１当量）の混合物に添加した。この反応は、典型的には、室温で３時間後に終了した。反応物をセライトを通してろ過し、濃縮した。残渣をＥｔＯＡｃにとり、ＮａＨＣＯ３水溶液（３回）、水（３回）、ブライン（１回）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、ろ過し、濃縮した。粗生成物（約５ｇ）をＭｅＯＨ（６０〜１００ｍＬ）、６Ｎ ＮａＯＨ（２５ｍＬ）、および水（２５０ｍＬ）に溶解した。反応は、典型的には７０〜８０℃で４時間加熱した後に終了した。反応混合物をＥｔＯＡｃ（２回）で抽出し、ＨＣｌ水溶液で中性化し、ろ過して固体を集め、この固体生成物を水で洗浄した。生成物を減圧下で乾燥した。
種々の例では、キノリノン環への置換はさらに、一般的な方法１２〜１５に示されるようにカップリングされた後に導入されてもよい。
（方法１２）
Figure 0004890255
 Ｃ−６またはＣ−７のハロゲン化物の酸基への変換は、以下の参考文献中の手順を用いて達成された：Ｋｏｇａ，Ｈ．ｅｔ ａｌ，Ｔｅｔ．Ｌｅｔ．，１９９５，３６，１，８７−９０；ａｎｄ Ｆｕｋｕｙａｍａ，Ｔ．ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１９９４，１１６，３１２５−３１２６。
（方法１３）
Figure 0004890255
 Ｃ−６またはＣ−７のハロゲン化物のシアノ基への変換は、以下の参考文献中の手順を用いて達成された。Ａｎｄｅｒｓｏｎ，Ｂ．Ａ．ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，１９９８，６３，８２２４−８２８。
（方法１４）
Figure 0004890255
 Ｃ−６またはＣ−７のハロゲン化物のアリール基への変換は、以下に記載されるような標準的なＳｕｚｕｋｉ手順またはＳｔｉｌｌｅ手順を用いて達成された。
Ｓｕｚｕｋｉ方法：１ドラム（４ｍＬ）バイアルに、キノロン（１当量）、ホウ酸（１．２〜１．５当量）、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２・Ｃｌ２ＣＨ２（０．２当量）、ＤＭＦ（０．５〜１ｍＬ）およびＴＥＡ（４当量）を続けて添加した。反応物にアルゴンを流し、ふたをして８５℃で１２時間加熱した。終了後、反応物を室温まで冷却し、シリンジフィルターディスクでろ過した。次いで、透明溶液をＴＦＡ（２〜３滴）で中性化し、分取ＨＰＬＣに直接注入した。生成物を乾燥するまで凍結乾燥した。
Ｓｔｉｌｌｅ方法：１ドラム（４ｍＬ）バイアルに、キノロン（１当量）、スズ試薬（１．８当量）、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２・Ｃｌ２ＣＨ２（０．２当量）、およびＤＭＦ（０．５〜１ｍＬ）を連続して添加した。反応物にアルゴンを流し、ふたをして６０〜８５℃で４時間加熱した。終了後、反応物を室温まで冷却し、シリンジフィルターディスクでろ過した。次いで、透明溶液をＴＦＡ（２〜３滴）で中性化し、分取ＨＰＬＣに直接注入した。生成物を乾燥するまで凍結乾燥した。
（方法１５）
Figure 0004890255
 ジハロキノロン、例えば、ジフルオロキノロン（１２〜１５ｍｇ）を、１ドラム（２ｍＬ）バイアルに入れた。ＮＭＰ（乾燥し、アルゴンで５分間あらかじめパージした）（０．５ｍＬ）をバイアルに添加した。アミン試薬（４０〜５０ｍｇ）を次に添加した。アミンがＨＣｌ塩であった場合、反応物をＴＥＡ（約１．２〜１．５当量）で中性化した。反応物をアルゴンで約５秒間再びパージし、すぐにふたをした。反応物を典型的には加熱ブロック中で９０〜９５℃で１８時間加熱した。反応物をＨＰＬＣまたはＬＣＭＳにかけた。サンプルをＨＰＬＣにかけた後、バイアルをアルゴンで再びパージし、ふたをした。いくつかのカップリングパートナーは終了に到達するのに２４または４８時間かかった。ピロールのような求核性の低いアミンは、反応を完結させるのに強塩基の添加を必要とした。これらの場合では、炭酸セシウム（使用されるアミンに基づいて２当量）を反応物に添加した。終了後、反応物を室温まで冷却し、シリンジフィルターディスクでろ過した。次いで、透明溶液をＴＦＡ（２〜３滴）で中性化し、分取ＨＰＬＣに直接注入した。生成物を乾燥するまで凍結乾燥した。
（方法１６）
式Ｉおよび式ＩＩの化合物、例えば、４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペリジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］−１Ｈ−キノリン−２−オンの一般的な合成
Figure 0004890255
 （Ａ．５−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−２−ニトロアニリンの合成）
（手順Ａ）
Figure 0004890255
 ５−クロロ−２−ニトロアニリン（５００ｇ，２．８９８ｍｏｌ）および１−メチルピペラジン（８７１ｇ，８．６９３ｍｏｌ）を、コンデンサーをとりつけた２０００ｍＬフラスコに入れ、Ｎ２をパージした。フラスコを１００℃の油浴に入れ、ＨＰＬＣで決定して５−クロロ−２−ニトロアニリンが完全に反応するまで（典型的には一晩）加熱した。ＨＰＬＣで５−クロロ−２−ニトロアニリンが消失したことを確認した後、反応混合物を機械的に攪拌しながら室温の水２５００ｍＬに直接（暖かいままで）注いだ。得られた混合物を室温に達するまで攪拌し、次いでろ過した。このようにして得られた黄色固体を水１０００ｍＬに添加し、３０分攪拌した。得られた混合物をろ過し、得られた固体をＴＢＭＥ（５００ｍＬ、２回）で洗浄し、次いで、ラバーダムを用いて減圧下で１時間攪拌した。得られた固体を乾燥トレイに移し、減圧下５０℃で一定重量になるまで乾燥し、標題化合物６７０ｇ（９７．８％）を黄色粉末として得た。
（手順Ｂ）
５−クロロ−２−ニトロアニリン（３０８．２ｇ，１．７９ｍｏｌ）を、オーバーヘッドスターラー、コンデンサー、ガス注入口、滴下漏斗、およびサーモメータープローブを取り付けた４ッ口５０００ｍＬ丸底フラスコに添加した。次いで、フラスコにＮ２をパージした。１−メチルピペラジン（７５８．１ｇ，８４０ｍＬ，７．５７ｍｏｌ）および２００プルーフのエタノール（５０８ｍＬ）を攪拌しながら反応フラスコに添加した。フラスコを再びＮ２パージし、反応物をＮ２下に維持した。フラスコを加熱マントル中で内部温度９７℃（±５℃）になるまで加熱し、ＨＰＬＣで決定して反応が終了するまでこの温度に維持した（典型的には約４０時間）。反応が終了した後、加熱をやめ、反応物を攪拌しながら内部温度が約２０℃〜約２５℃になるまで冷却し、反応物を２〜３時間攪拌した。沈殿が生じていなければ、５−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−２−ニトロアニリンの種結晶（０．２０ｇ，０．８５ｍｍｏｌ）を反応混合物に添加した。内部温度を約２０℃〜３０℃の範囲の温度に維持しながら、水（２，４５０ｍＬ）を攪拌した反応混合物に約１時間かけて添加した。水の添加が終了した後、得られた混合物を２０℃〜３０℃の温度で約１時間攪拌した。次いで、得られた混合物をろ過し、フラスコおよびろ過ケーキを水（３×２．５６Ｌ）で洗浄した。黄金色固体生成物を、減圧オーブン中約５０℃減圧下で４１６ｇ（収率９８．６ｇ）の一定重量になるまで乾燥した。
（手順Ｃ）
５−クロロ−２−ニトロアニリン（４０１ｇ，２．３２ｍｏｌ）を、オーバーヘッドスターラー、コンデンサー、ガス注入口、滴下漏斗、およびサーモメータープローブを取り付けた４ッ口１２Ｌ丸底フラスコに添加した。次いで、フラスコにＮ２をパージした。１−メチルピペラジン（９７７ｇ，１．０８Ｌ，９．７５ｍｏｌ）および１００％エタノール（６５０ｍＬ）を攪拌しながら反応フラスコに添加した。フラスコを再びＮ２パージし、反応物をＮ２下に維持した。フラスコを加熱マントル中で内部温度９７℃（±５℃）になるまで加熱し、ＨＰＬＣで決定して反応が終了するまでこの温度に維持した（典型的には約４０時間）。反応が終了した後、加熱をやめ、反応物を内部温度が約８０℃になるまで攪拌しながら冷却し、内部温度を８２℃（±３℃）に維持しながら、水（３．１５Ｌ）を１時間かけて滴下漏斗を介して混合物に添加した。水添加が終了した後、加熱をやめ、反応混合物を４時間以上かけて内部温度が２０〜２５℃になるまで冷却した。次いで、反応混合物をさらに１時間、内部温度２０〜３０℃で攪拌した。次いで、得られた混合物をろ過し、フラスコおよびろ過ケーキを水（１×１Ｌ）、５０％エタノール（１×１Ｌ）、および９５％エタノール（１×１Ｌ）で洗浄した。黄金色固体生成物を乾燥パンに置き、減圧オーブン中で、減圧下約５０℃で５４６ｇの一定重量になるまで乾燥した（収率９９％）。
（Ｂ．［６−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］−酢酸エチルエステルの合成）
（手順Ａ）
Figure 0004890255
 ５０００ｍＬの４ッ口フラスコに、スターラー、サーモメーター、コンデンサー、およびガス注入口／排気口を取り付けた。取り付けたフラスコに、５−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−２−ニトロアニリン２６５．７ｇ（１．１２ｍｏｌ，１．０当量）および２００プルーフのＥｔＯＨ ２１２５ｍＬを入れた。得られた溶液をＮ２で１５分間パージした。次いで、５％Ｐｄ／Ｃ（５０％Ｈ２Ｏｗ／ｗ）２０．０ｇを添加した。Ｈ２を混合物を通して泡立たせながら、反応物を４０〜５０℃（内部温度）で激しく攪拌した。ＨＰＬＣによって５−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−２−ニトロアニリンの消失について反応物を時間ごとにモニタリングした。典型的な反応時間は６時間であった。
全ての５−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−２−ニトロアニリンが反応物から消えた後、溶液をＮ２で１５分間パージした。次いで、エチル３−エトキシ−３−イミノプロパノエート塩酸塩４４０．０ｇ（２．２５ｍｏｌ）を固体として添加した。反応物を反応が終了するまで４０〜５０℃（内部温度）で攪拌した。ＨＰＬＣによってジアミノ化合物の消失を調べることによって反応をモニタリングした。典型的な反応時間は１〜２時間であった。反応が終了した後、室温まで冷却し、セライトろ過物質のパッドを介してろ過した。セライトろ過物質を無水ＥｔＯＨ（２×２５０ｍＬ）で洗浄し、ろ液を減圧下で濃縮し、濃い褐色／橙色油状物を得た。得られた油状物を０．３７％ＨＣｌ溶液８５０ｍＬに取った。次いで、固体ＮａＯＨ（２５ｇ）を一度に添加し、沈殿が形成した。得られた混合物を１時間攪拌し、次いでろ過した。固体をＨ２Ｏ（２×４００ｍＬ）で洗浄し、減圧オーブン中５０℃で乾燥し、［６−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル］−酢酸エチルエステル２５１．７ｇ（７４．１％）を黄色粉末として得た。
（手順Ｂ）
５０００ｍＬの４ッ口のジャケット付フラスコにメカニカルスターラー、コンデンサー、温度プローブ、ガス注入口、およびオイルバブラーを取り付けた。取り付けたフラスコに、５−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−２−ニトロアニリン３００ｇ（１．２７ｍｏｌ）および２００プルーフＥｔＯＨ ２４００ｍＬを入れた（反応は、９５％エタノールとともに行われてもよく、実際に行われ、この反応では２００プルーフエタノールを使用する必要はない）。得られた溶液を攪拌し、Ｎ２を１５分間パージした。次いで、５％Ｐｄ／Ｃ（５０％Ｈ２Ｏｗ／ｗ）２２．７ｇを反応フラスコに添加した。反応容器をＮ２で１５分間パージした。Ｎ２をパージした後、フラスコに流すＨ２の流速をゆっくりだが一定に維持することによって、反応容器をＨ２でパージした。ＨＰＬＣによって決定される場合に５−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−２−ニトロアニリンが完全に消費されるまで混合物を通してＨ２を泡立たせながら、反応物を４５〜５５℃（内部温度）で攪拌した。典型的な反応時間は６時間であった。
全ての５−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−２−ニトロアニリンが反応物から消失した後、溶液をＮ２で１５分間パージした。ジアミン中間体は空気に感受性であるので、空気に触れないように注意して取り扱った。エチル３−エトキシ−３−イミノプロパノエート塩酸塩５００ｇ（２．５６ｍｏｌ）を約３０分かけて反応混合物に添加した。ＨＰＬＣによって決定される場合にジアミンが完全に消費されるまで、反応物をＮ２下で４５〜５５℃（内部温度）で攪拌した。典型的な反応温度は約２時間であった。反応が終了した後、セライトのパッドを通して温かいままで反応物をろ過した。反応フラスコおよびセライトを２００プルーフＥｔＯＨ（３×２８５ｍＬ）で洗浄した。ろ液を５０００ｍＬフラスコに合わせ、エタノール約３３００ｍＬを減圧下で除去し、橙色油状物を得た。水（５３０ｍＬ）、次いで１Ｍ ＨＣｌ（３５０ｍＬ）を得られた油状物に添加し、得られた混合物を攪拌した。内部温度を約２５〜３０℃に維持しつつ、ｐＨを９〜１０にしながら、３０％ＮａＯＨ（２００ｍＬ）を約２０分かけて添加しながら、得られた溶液を激しく攪拌した。内部温度を約２５〜３０℃に維持しながら、得られた懸濁液を約４時間攪拌した。得られた混合物をろ過し、ろ過ケーキをＨ２Ｏ（３×３００ｍＬ）で洗浄した。集めた固体を減圧オーブン中で減圧下５０℃で一定重量になるまで乾燥し、［６−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル］−酢酸エチルエステル３４５．９ｇ（９０．１％）を淡黄色粉末として得た。代わりの操作手順において、ろ液を合わせ、少なくとも約９０％が除去されるまでエタノールを減圧下で除去した。次いで、中性ｐＨで水を得られた油状物に添加し、溶液を約０℃に冷却した。次いで、素早く攪拌しながら２０％ＮａＯＨ水溶液をゆっくりと添加し、ｐＨを９．２（ｐＨメーターの読み）まで上げた。次いで、得られた混合物をろ過し、上述のように乾燥した。代替の作業手順により、淡黄褐色〜淡黄色生成物を９７％の高収率で得た。
（［６−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］−酢酸エチルエステルの含水量を減らすための方法）
あらかじめ作成しておき、約８〜９％Ｈ２Ｏの含水量に乾燥した［６−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］−酢酸エチルエステル（１２０．７グラム）を、２０００ｍＬ丸底フラスコに入れ、無水エタノール（５００ｍＬ）に溶解した。すべての溶媒が除去されるまで、琥珀色溶液をロータリーエバポレーターを用いて加熱しながら濃い油状物に濃縮した。この手順を２回以上繰り返した。このようにして得られた濃い油状物をフラスコに残し、５０℃に加熱した減圧オーブンに一晩置いた。カールフィッシャー分析により、含水量が５．２５％であることが示された。この方法によって含水量を下げることにより、以下の実施例の手順における収率が増加した。他の溶媒（例えばトルエンおよびＴＨＦ）を、この乾燥プロセスのためにエタノールの代わりに使用してもよい。
（Ｃ．４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］−１Ｈ−キノリン−２−オンの合成）
（手順Ａ）
Figure 0004890255
 ［６−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］−酢酸エチルエステル（２５０ｇ，８２０ｍｍｏｌ）（上述のようにエタノールで乾燥した）を、コンデンサー、メカニカルスターラー、温度プローブを取り付けた５０００ｍＬフラスコ中でＴＨＦ（３８００ｍＬ）に溶解し、アルゴンをパージした。２−アミノ−６−フルオロ−ベンゾニトリル（９５．３ｇ，７００ｍｍｏｌ）を溶液に添加し、内部温度を４０℃に上げた。全ての固体が溶解し、溶液温度が４０℃に到達した後、固体ＫＨＭＤＳ（３７６．２ｇ，１８９０ｍｍｏｌ）を５分かけて添加した。カリウム塩基の添加が終了すると、不均質黄色溶液が得られ、内部温度は６２℃まで上がった。６０分後、内部温度は４０℃まで下がり、ＨＰＬＣによって反応が完了していることを決定した（出発物質も環化していない中間体も存在していなかった）。次いで、濃い反応混合物をＨ２Ｏ（６０００ｍＬ）を注ぐことによってクエンチし、室温に達するまで得られた混合物を攪拌した。次いで、混合物をろ過し、ろ過パッドを水（１０００ｍＬ×２）で洗浄した。明黄色固体を乾燥トレイに置き、減圧オーブン中５０℃で一晩乾燥し、所望の４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］−１Ｈ−キノリン−２−オン１５５．３ｇ（４７．９％）を得た。
（手順Ｂ）
５０００ｍＬの４ッ口ジャケット付フラスコに、蒸留装置、温度プローブ、Ｎ２ガス注入口、滴下漏斗、およびメカニカルスターラーを取り付けた。［６−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］−酢酸エチルエステル（１７３．０ｇ，５７０ｍｍｏｌ）を反応器に入れ、反応器をＮ２で１５分パージした。次いで、乾燥ＴＨＦ（２６００ｍＬ）を攪拌しながらフラスコに入れた。全ての固体が溶解した後、必要な場合には熱を使用して、溶媒を蒸留によって除去した（減圧または常圧（より高い温度は水を除去するのに役立つ））。溶媒１０００ｍＬを除去した後、蒸留をやめ、反応物をＮ２でパージした。次いで、乾燥ＴＨＦ１０００ｍＬを反応容器に添加し、全ての固体が溶解したら、溶媒をさらに１０００ｍＬ除去するまで蒸留（減圧または常圧）を再び行った。この乾燥ＴＨＦ添加プロセスおよび溶媒除去プロセスを少なくとも４回繰り返し（最初の３回の蒸留においてたった４０％除去されるのに対し、４回目の蒸留の際に溶媒６０％が除去される）、１ｍＬサンプルをカールフィッシャー分析のために除去し、含水量を決定した。分析によりサンプルが０．２０％未満の水を含有していることが示された場合、次のパラグラフに記載されるように反応を続けた。しかし、分析により０．２０％を超える水を含有していることが示された場合、含水量が０．２０％未満になるまで上述の乾燥プロセスを続けた。
上述のパラグラフにおいて記載される手順を用いて約２０％未満の含水量が達成された後、蒸留装置を還流コンデンサーと交換し、反応物に２−アミノ−６−フルオロ−ベンゾニトリル（６６．２ｇ，４７０ｍｍｏｌ）を入れた（いくつかの手順において、０．９５当量が使用される）。次いで、反応物を内部温度３８〜４２℃に加熱した。内部温度が３８〜４２℃に達したら、添加中の内部温度を３８〜５０℃に維持しつつ、ＫＨＭＤＳ溶液（１３１３ｇ，１．３２ｍｏｌ，ＴＨＦ中２０％ＫＨＭＤＳ）を滴下漏斗を介して５分間かけて反応物に添加した。カリウム塩基の添加が終了したら、内部温度を３８〜４２℃に維持しつつ、反応物を３．５〜４．５時間攪拌した（いくつかの例において、３０〜６０分攪拌し、反応はこの時間内に終了してもよい）。次いで、反応サンプルを取り除き、ＨＰＬＣで分析した。反応が終了していない場合、さらなるＫＨＭＤＳ溶液を５分間かけてフラスコに添加し、反応物を３８〜４２℃で４５〜６０分攪拌した（添加されるＫＨＭＤＳ溶液の量は以下のように決定された：ＩＰＣ比が＜３．５０である場合、１２５ｍＬを添加した；１０．０≧ＰＣ比≧３．５０である場合、５６ｍＬを添加した；２０．０≧ＩＰＣ比≧１０である場合、３０ｍＬを添加した）。ＩＰＣ比は、４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］−１Ｈ−キノリン−２−オン）に対応する面積を環化されていない中間対に対応する面積によって割ったものと等しい。反応が終了したら（ＩＰＣ比＞２０）、反応器を内部温度が２５〜３０℃になるまで冷却し、内部温度を２５〜３５℃に維持しながら、水（３５０ｍＬ）を反応器に１５分かけて入れた（１つの代替法では、反応は４０℃で行い、水を５分以内に添加する。クエンチを素早くすればするほど、時間ごとに形成する不純物の量が減る）。次いで、還流コンデンサーを蒸留装置に入れ替え、必要な場合には熱を用いて溶媒を蒸留（減圧または常圧）によって除去した。溶媒１５００ｍＬが除去された後、蒸留をやめ、反応物にＮ２をパージした。次いで、内部温度を２０〜３０℃に維持しながら、水（１６６０ｍＬ）を反応フラスコに添加した。次いで、反応混合物を２０〜３０℃で３０分攪拌した後、内部温度を５〜１０℃に冷却し、１時間攪拌した。得られた懸濁液をろ過し、フラスコおよびろ過ケーキを水（３×６５０ｍＬ）で洗浄した。このようにして得られた固体を、減圧オーブン中、減圧下５０℃で一定重量になるまで乾燥し、４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］−１Ｈ−キノリン−２−オン１０３．９ｇ（４２．６％収率）を黄色粉末として得た。
（手順Ｃ）
Figure 0004890255
 ［６−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］−酢酸エチルエステル（６０８ｇ，２．０１ｍｏｌ）（乾燥）および２−アミノ−６−フルオロ−ベンゾニトリル（２７４ｇ，２．０１ｍｏｌ）を、加熱マントル上に置いた、コンデンサー、メカニカルスターラー、ガス注入口、および温度プローブを取り付けた４ッ口１２Ｌフラスコに入れた。反応容器にＮ２をパージし、攪拌しながらトルエン（７．７Ｌ）を反応混合物に入れた。反応容器を再びＮ２でパージし、Ｎ２下に維持した。混合物の内部温度を６３℃（±３℃）の温度に達するまで上げた。混合物の内部温度を６３℃（±３℃）に維持しつつ、減圧下（３８０±１０ｔｏｒｒ、蒸留ヘッドｔ＝４０℃（±１０℃））トルエン約２．６Ｌをフラスコから蒸留した（カールフィッシャー分析を使用して混合物の含水量を調べた。含水量が０．０３％よりも多い場合、さらなるトルエン２．６Ｌを添加し、蒸留を繰り返した。このプロセスを含水量０．０３％未満が達成されるまで繰り返した）。０．０３％未満の含水量が達成された後、加熱をやめ、反応物をＮ２下で内部温度１７〜１９℃になるまで冷却した。次いで、ＴＨＦ中のカリウムｔ−ブトキシド（ＴＨＦ中２０％；３．３９ｋｇ，カリウムｔ−ブトキシド６．０４ｍｏｌｅ）を、反応物の内部温度が２０℃未満に維持されるような速度で、Ｎ２下で反応物に添加した。カリウムｔ−ブトキシドの添加が終了した後、反応物を内部温度２０℃未満で３０分攪拌した。次いで、温度を２５℃に上げ、反応物を少なくとも１時間攪拌した。次いで、温度を３０℃に上げ、反応物を少なくとも３０分攪拌した。次いで、出発物質の消費について調べるためにＨＰＬＣを用いて終了について反応をモニタリングした（典型的には２〜３時間に、両出発物質は消費された（ＨＰＬＣの領域％で０．５％未満））。反応が２時間後に終了しない場合、さらなる０．０５当量のカリウムｔ−ブトキシドを同時に添加し、ＨＰＬＣによって反応が終了したことが示されるまで、プロセスを完了させた。反応が終了した後、水６５０ｍＬを攪拌した反応混合物に添加した。次いで、反応物を内部温度５０℃まで加温し、減圧下で反応混合物からＴＨＦを留去した（体積で約３Ｌ）。次いで、水（２．６Ｌ）を滴下漏斗を用いて反応混合物に滴下した。次いで、混合物を室温まで冷却し、少なくとも１時間攪拌した。次いで、混合物をろ過し、ろ過ケーキを水（１．２Ｌ）、７０％エタノール（１．２Ｌ）、および９５％エタノール（１．２Ｌ）で洗浄した。明黄色固体を乾燥トレイに置き、減圧オーブン中５０℃で一定重量が得られるまで乾燥させて、所望の４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］−１Ｈ−キノリン−２−オン６７４ｇ（８５．４％）を得た。
４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］−１Ｈ−キノリン−２−オンの精製
コンデンサー、温度プローブ、Ｎ２ガス注入口、およびメカニカルスターラーを取り付けた３０００ｍＬの４ッ口フラスコを加熱マントルに入れた。次いで、フラスコに４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］−１Ｈ−キノリン−２−オン（１０１．０ｇ，０．２６ｍｏｌ）を入れ、黄色固体を９５％エタノール（１０００ｍＬ）に懸濁し、攪拌した。いくつかの場合において、８：１溶媒比を使用する。次いで、約１時間攪拌しながら、懸濁液を穏やかに還流するまで加熱した（約７６℃の温度）。次いで、還流させながら反応物を４５〜７５分間攪拌した。この時点で、フラスコから熱源をはずし、懸濁液を２５〜３０℃の温度まで冷却した。懸濁液をろ過し、ろ過パッドを水（２×５００ｍＬ）で洗浄した。次いで、黄色固体を乾燥トレイに置き、一定重量が得られるまで減圧オーブン中５０℃で乾燥し（典型的には１６時間）、精製生成物９７．２ｇ（９６．２％）を黄色粉末として得た。
（Ｄ．４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］−１Ｈ−キノリン−２−オンの乳酸塩の調整）
Figure 0004890255
 ３０００ｍＬの４ッ口ジャケット付フラスコにコンデンサー、温度プローブ、Ｎ２ガス注入口、およびメカニカルスターラーを取り付けた。反応容器に少なくとも１５分間Ｎ２をパージし、４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］−１Ｈ−キノリン−２−オン（４８４ｇ，１．２３ｍｏｌ）を入れた。Ｄ，Ｌ−乳酸（２４３．３ｇ，モノマー１．７２ｍｏｌ−以下のパラグラフを参照）、水（３３９ｍＬ）、およびエタノール（１２１１ｍＬ）の溶液を調製し、反応フラスコに入れた。攪拌を中速で開始し、反応物を内部温度が６８〜７２℃になるまで加熱した。反応物の内部温度を６８〜７２℃に１５〜４５分間維持し、加熱をやめた。得られた混合物を１０〜２０ミクロンのフリットを通してろ過し、ろ液を１２Ｌフラスコに集めた。１２Ｌフラスコに内部温度プローブ、還流コンデンサー、滴下漏斗、ガス注入口および排気口、およびオーバーヘッドスターラーを取り付けた。次いで、ろ液を中速で攪拌し、還流するまで加熱した（内部温度約７８℃）。穏やかな還流を維持しながら、エタノール（３，５９６ｍＬ）を約２０分かけてフラスコに入れた。次いで、１５〜２５分以内に反応フラスコを内部温度が約６４〜７０℃の範囲になるまで冷却し、この温度を約３０分間維持した。反応器を結晶について観察した。結晶があらわれない場合、４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］−１Ｈ−キノリン−２−オンの乳酸塩の結晶（４８４ｍｇ，０．１ｍｏｌｅ％）をフラスコに添加し、反応物を６４〜７０℃で３０分攪拌した後、再びフラスコを結晶について観察した。結晶があらわれたら、攪拌を低速に下げ、反応物を６４〜７０℃でさらに９０分間攪拌した。次いで、反応物を約２時間かけて約０℃に冷却し、得られた混合物を２５〜５０ミクロンフリット状フィルターを通してろ過した。反応器をエタノール（４８４ｍＬ）で洗浄し、内部温度が約０℃になるまで攪拌した。冷エタノールを使用してろ過ケーキを洗浄し、この手順を２回以上繰り返した。集めた固体を減圧オーブン中減圧下５０℃で一定重量になるまで乾燥し、４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］−１Ｈ−キノリン−２−オンの結晶性の黄色乳酸塩５１０．７ｇ（８５．７％）を得た。ろ過プロセス中は、ラバーダムまたは不活性条件を典型的に使用した。乾燥固体がそれほど吸湿性ではない場合には、濡れたろ過ケーキは水を捕捉し、粘着性になる傾向がある。濡れたろ過ケーキが大気に長時間さらされるのを避けるために、予防策がとられた。
市販の乳酸は、一般的に、約８〜１２％ｗ／ｗの水を含有し、モノマー乳酸に加えてダイマーおよびトリマーを含有する。乳酸ダイマー：モノマーのモル比は、一般的に約１．０：４．７である。商業グレードの乳酸は、一乳酸塩が反応混合物から優先的に析出するため、先のパラグラフにおいて記載されるプロセスにおいて使用されてもよい。
（塩選択のためのスクリーニング手順）
式Ｉの化合物の塩の特性の向上を決定するために、特定のベースラインとなる基準が設定され、観察された。これらは、以下のものを含む：
１．水溶解度＞１０ｍｇ／ｍＬ
２．Ｘ−線粉末回折（ＸＲＰＤ）によって決定される場合に、高度に結晶性の物質、すなわち、より化学的に安定で、吸湿性が低く、ＮＭＲまたはイオンクロマトグラフィーによって決定される場合に二塩に対して一塩が優位であり、高い化学収率であること。
（スクリーニング技術）
平衡溶解度、ＸＲＰＤ、吸湿性、適合性、形態、および固体状態の安定性を含む物理化学特性スクリーニング技術を使用して、遊離塩基および塩を評価した。
（溶解度）
式Ｉおよび式ＩＩの化合物およびそれらの塩の水溶解度は、過剰の固体と水１ｍＬとを２２℃で２４時間平衡にすることによって決定された。２００ｕＬアリコートを１５，０００ｒｐｍで１５分間遠心分離した。上清をＨＰＬＣによって分析し、溶解度をその遊離塩基当量としてあらわす（ｍｇ ＦＢ／ｍＬ）。例えば、４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］−１Ｈ−キノリン−２−オンの塩を調製し、その溶解度および溶液ｐＨを測定した。種々の塩について水溶解度および飽和時のｐＨを比較した表を以下に示す。
（表１．４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］−１Ｈ−キノリン−２−オン遊離塩基および塩の溶解度）
Figure 0004890255
Figure 0004890255
 （結晶化度）
Ｓｈｉｍａｄｚｕ ＸＲＤ−６０００ Ｘ−線粉末回折計でＣｕ Ｋα照射を用いてＸＲＰＤ分析をおこなった。この装置には、精密な集中Ｘ線管が取り付けられている。この管の電圧およびアンペア数をそれぞれ４０ｋＶおよび４０ｍＡに設定した。発散スリットおよび分散スリットは１°に設定され、受光スリットは０．１５ｍｍに設定された。回折照射をＮａＩシンチレーション検出器によって検出した。２．５〜４０℃での３°／分でのθ−２θ連続スキャン（０．４秒／０．０２０°ステップ）を使用した。例えば、４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］−１Ｈ−キノリン−２−オンの塩を調製し、結晶化度を観察した。上記表におけるこれらの塩形態のいくつかは、高い結晶化度を示し、別個の粉末Ｘ−線回折パターンを有することがわかった。
（吸湿性）
水分吸収／脱離データをＶＴＩ ＳＧＡ−１００水分バランスシステムまたはその等価物で集めた。吸収等温線について、２５℃で１０％ＲＨ増分における５〜９５％の相対湿度（ＲＨ）の吸収範囲および５〜９５％ＲＨの相対湿度の脱離範囲を各分析のために使用した。例えば、４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］−１Ｈ−キノリン−２−オンの塩を調製し、水分に誘発される重量変化を測定した。
（表２．４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］−１Ｈ−キノリン−２−オンの塩における水分に誘発される重量変化）
Figure 0004890255
 （化学安定性）
遊離塩基および塩の乾燥粉末サンプルを３０℃／６０％相対湿度および４０℃／７０％相対湿度でのストレス条件下で開放フラスコ中に維持した。遊離塩基および塩の溶液サンプルを周囲温度で密閉バイアル中に保存した。サンプルをあらかじめ決定した時間点で引き出し、化学安定性について分析した。サンプルをあらかじめ決定した時間点で引き出し、ＵＶ−可視光複数波長検出器を用いてＨＰＬＣによってアッセイした。種々の塩の固体状態および溶液状態の化学安定性を比較する２つの表を以下に与える。
（表３．４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］−１Ｈ−キノリン−２−オン遊離塩基および塩の固体状態安定性／ＨＰＬＣ分析）
Figure 0004890255
 （表４．４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］−１Ｈ−キノリン−２−オン塩の溶液状態安定度／ＨＰＬＣ分析）
Figure 0004890255
 （圧縮試験）
粉末化４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］−１Ｈ−キノリン−２−オン塩２００ｍｇをあらかじめ秤量し、０．８ｃｍ直径のダイに満たし、Ｃａｒｖｅｒ Ｐｒｅｓｓを用いて５０００ｐｓｉで圧縮した（１分間保持）。得られた圧縮物の引っ張り強さおよび厚みをＶＫ ２００ Ｔａｂｌｅｔ Ｈａｒｄｎｅｓｓ ＴｅｓｔｅｒおよびＭｉｔｕｔｏｙｏ製厚みゲージを用いて測定した。例えば、４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］−１Ｈ−キノリン−２−オンの乳酸塩およびメシル酸塩を調製し、圧縮試験を行った。同じ適応圧力で圧縮された場合、乳酸塩、リンゴ酸塩およびメシル酸塩形態が圧縮され；乳酸塩は一般的に、キャップまたはチップに対する傾向なくより強く圧縮される。
（表５．４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］−１Ｈ−キノリン−２−オン塩の圧縮）
Figure 0004890255
 （形態）
４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］−１Ｈ−キノリン−２−オン塩の結晶形態をＮｉｋｏｎ Ｅｃｌｉｐｓｅ ６６００ ＰＯＬ偏光顕微鏡を用いて倍率１０倍および４０倍で決定した。
（表６．４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］−１Ｈ−キノリン−２−オン塩の形態）
Figure 0004890255
 溶解度、ＸＲＰＤ、吸湿性、成形性、形態、および固体状態安定性を含む上述の種々の物理化学的性質のスクリーニング技術を使用して、４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンの塩形態を評価した。
４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンの場合には、一般的に約２０ｍｇ／ｍＬ〜３３０ｍｇ／ｍＬの水中での溶解度を示し、ゲル化せずに最終的な水ｐＨがｐＨ３〜６を有するこの化合物の塩形態は、酢酸塩、酒石酸塩、リンゴ酸塩、乳酸塩、二酢酸塩、メシル酸、クエン酸塩、および二メシル酸塩であった。このように、４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］−１Ｈ−キノリン−２−オン遊離塩基（水溶解度約０．０１ｍｇ／ｍＬ）を塩形態に変更することにより、その溶解度および溶解速度を顕著に増大させることができる。
４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］−１Ｈ−キノリン−２−オンのＬ−酒石酸塩、クエン酸塩、Ｌ−リンゴ酸塩、ＤＬ−乳酸塩、メシル酸、および二メシル酸塩（ロットＡ〜Ｕ）のＸＲＰＤパターンは、反射光の分解能を示し、サンプルが現実に結晶性であることを示す。酢酸塩のＸＲＰＤパターンは、このサンプルが現実にアモルファスであることを示す。
４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］−１Ｈ−キノリン−２−オンの以下の塩をＸＲＰＤによって分析した：一メシル酸、硫酸塩、リン酸塩、一−ＤＬ−乳酸塩、二メシル酸塩、二乳酸塩、Ｌ−酒石酸塩、二酢酸塩、二酢酸塩、およびＬ−リンゴ酸塩（ロットＢＢ〜ＰＰ）。全てのサンプルのＸＲＰＤパターン（二メシル酸塩を除く）は、オフセットベースラインにいくつかの幅広い反射を示し、このことはこのサンプルが結晶性物質およびアモルファス物質の混合物で構成され、低い整列度（低い結晶度）を有することを示す。二メシル酸塩のＸＲＰＤパターンは、反射光の解像度を示し、このサンプルが現実に結晶性であることを示す。
結晶性の塩の中で、リンゴ酸塩、乳酸塩、メシル酸、および二メシル酸塩は、一般的に約５０ｍｇ／ｍＬ〜３３０ｍｇ／ｍＬの水中での溶解度を示し、最終的な水のｐＨが約ｐＨ４〜６である。遊離塩基または塩形態の結晶化度は、溶解度および溶解速度に顕著に影響を与え得る。４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］−１Ｈ−キノリン−２−オンの以下の結晶性塩について吸湿性を分析した。８５％ＲＨでの水吸収のアフィニティーは、一般的にメシル酸＞乳酸塩＝リンゴ酸塩であった。乳酸塩およびリンゴ酸塩は、非吸湿性であるとみなされる。安定性データは、４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］−１Ｈ−キノリン−２−オン遊離塩基および選択された塩が十分な化学安定性を示すことを示した。
乳酸塩は、平板形状の結晶形態を有し、一方、メシル酸塩は平板〜針状に変動し、リンゴ酸は針状の結晶形態を示す。その良好な流動性のために、平板形状は針状結晶よりも好ましく、この性質は、配合物の有効なブレンド、充填、および錠剤化に重要である。
同じ適用圧力下で圧縮した場合、乳酸塩、リンゴ酸塩、およびメシル酸形態が圧縮され；乳酸塩は、一般的にキャップまたはチップに対する傾向なくより強く圧縮される。この実施例から作成されるデータは、乳酸塩、酢酸塩、リンゴ酸塩、酒石酸塩、メシル酸塩、およびクエン酸塩は対応する遊離塩基形態よりも改良された水溶解度を有することを示す。乳酸塩、リンゴ酸塩、酒石酸塩、メシル酸塩、およびクエン酸塩、二メシル酸塩は現実の結晶性である。
リンゴ酸塩および乳酸塩は非吸水性であるとみなすことができ、化学的不安定性のリスクを最小限にすることができる。乳酸塩は、良好な加工性を示し、錠剤の開発のために好適である。
（アッセイ手順）
（レセプターチロシンキナーゼのためのインビトロキナーゼアッセイ）
種々のタンパク質チロシンキナーゼのキナーゼ活性は、ＡＴＰおよび好適なペプチドまたはタンパク質チロシン含有基質を提供し、チロシン残基のリン酸部分の移動をアッセイすることによって測定することができる。ｆｌｔ−１の細胞質ドメインに対応する組換えタンパク質（ＶＥＧＦＲ１）、ＫＤＲ（ＶＥＧＦＲ２）、ＰＤＧＦ、およびｂＦＧＦレセプターは、バキュロウイルス発現系（ＩｎＶｉｔｒｏｇｅｎ）を用いてＳｆ９昆虫細胞中に発現し、Ｇｌｕ抗体相互作用を介して精製するか（Ｇｌｕ−エピトープタグ化構築物について）、または金属イオンクロマトグラフィーによって精製した（Ｈｉｓ６（配列番号１）タグ化構築物について）。各アッセイについて、試験化合物をＤＭＳＯで順次希釈し、次いで、適切なキナーゼ反応バッファーおよびＡＴＰと混合した。キナーゼタンパク質および適切なビオチン化ペプチド基質を添加し、最終体積を１００μＬにし、反応物を室温で１〜２時間インキュベートし、４５ｍＭ ＥＤＴＡ５０μＬ、５０ｍＭのＨｅｐｅｓ（ｐＨ７．５）を添加することによって反応を停止させた。停止した反応混合物（７５μＬ）をストレプトアビジンでコーティングされたマイクロタイタープレート（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ）に移し、１時間インキュベートした。ホスホリル化ペプチド産物を、Ｅｕ標識された抗−ホスホチロシン抗体ＰＴ６６を用いて、ＤＥＬＦＩＡアッセイバッファーに抗体希釈のために１ｍＭ ＭｇＣｌ２を添加した改変を伴い、ＤＥＬＦＩＡ時間分解蛍光システム（Ｗａｌｌａｃ）を用いて測定した。時間分解蛍光を、Ｗａｌｌａｃ １２３２ ＤＥＬＦＩＡ蛍光測定器で読み取った。５０％阻害するための各化合物の濃度（ＩＣ５０）を、ＸＬ Ｆｉｔデータ分析ソフトウェアを用いて非線形回帰によって計算した。
Ｆｌｔ−１、ＫＤＲ、ＰＤＧＦ、ｃ−ＫＩＴ、ＦＬＴ−３およびｂＦＧＦＲキナーゼを、５０ｍＭ Ｈｅｐｅｓ（ｐＨ７．０）、２ｍＭ ＭｇＣｌ２、１０ｍＭ ＭｎＣｌ２、１ｍＭ ＮａＦ、１ｍＭ ＤＴＴ、１ｍｇ／ｍＬ ＢＳＡ、２μＭ ＡＴＰ、および０．４２μＭ ビオチン−ＧＧＧＧＱＤＧＫＤＹＩＶＬＰＩ−ＮＨ２（配列番号２）中でアッセイした。Ｆｌｔ−１、ＫＤＲ、およびｂＦＧＦＲキナーゼを、それぞれ０．１μｇ--／ｍＬ、０．０５μｇ--／ｍＬ、または０．１μｇ--／ｍＬ添加した。
（実施例１−４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］−１Ｈ−キノリン−２−オンによる、ＣＳＦ−１により媒介される増殖の阻害）
４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］−１Ｈ−キノリン−２−オンの抗増殖活性は、Ｍ−ＮＦ Ｓ−６０細胞（マウス骨髄芽細胞細胞株）のＣＳＦ−１（コロニー刺激因子−１）により媒介される増殖を、３００ｎＭのＥＣ５０で阻害することが示された。このアッセイは、９６ウェルプレート中で、５０ｕＬアッセイ培地（６７．１ｎｇ／ｍｌ ＧＭ−ＣＳＦ：ＲＰＭＩ−１６４０＋１０％ＦＢＳ＋０．０４４ｍＭ β−メルカプトエタノール＋２ｍＭ Ｌ−Ｇｌｕｔ＋Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐを含まない増殖培地）中で５０００細胞／ウェルを接種することによって操作された。ＤＭＳＯ中で順次希釈した４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］−１Ｈ−キノリン−２−オンストック溶液（２０μＭから開始）を、ＣＳＦ−１を含有する５０μＬアッセイ培地中のプレートに添加し、最終濃度を１０ｎｇ／ｍｌにし、次いで３７℃および５％ＣＯ２で７２時間インキュベートした。最終的なＤＭＳＯ濃度は０．２％であった。インキュベーション７２時間後、Ｃｅｌｌ Ｔｉｔｅｒ Ｇｌｏ（Ｐｒｏｍｅｇａ ＃Ｇ７５５Ｂ）１００μＬをプレートに添加し、１０分間のインキュベーション時間の間振り混ぜながら、ルミネセンスを測定した。ＥＣ５０を非線形回帰を用いて計算した。
ＣＳＦＲ１の自動ホスホリル化は、濃度＜１μＭで４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］−１Ｈ−キノリン−２−オンによって阻害される。インキュベーション時間の最終５分間の４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］−１Ｈ−キノリン−２−オンを用いたＭ−ＮＦＳ―６０の処理およびＣＳＦ−１を用いた細胞の処理により、ＣＳＦＲ１の免疫沈降および抗−ホスホチロシン抗体を用いたウェスタンブロットによって検出される、レセプターチロシンホスホリル化が阻害される。
（実施例２−４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］−１Ｈ−キノリン−２−オンによるＦＧＦＲ３の阻害）
多発性骨髄腫（ＭＭ）患者のサブセット（１５〜２０％）において固有に生じるｔ（４；１４）転座は、レセプターチロシンキナーゼ（ＲＴＫ）ＦＧＦＲ３の異所性発現を生じる。いくつかのＭＭにおけるＦＧＦＲ３により活性化する突然変異の後に続く獲得は、疾患の進行に関係があり、実験モデルにおいて強力に変化する。
４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］−１Ｈ−キノリン−２−オンは、１００ｎＭのＥＣ５０でＫ６５０Ｅ突然変異に起因する構築的に活性化されたＦＧＦＲ３を発現するＯＰＭ−２細胞の増殖を阻害した。このアッセイは、９６ウェルプレート中で、５０μＬアッセイ培地（ＲＰＭＩ−１６４０＋１０％ＦＢＳ＋Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐ）中に８０００細胞／ウェルを接種することによって操作された。ＤＭＳＯ中で順次希釈した４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］−１Ｈ−キノリン−２−オンストック溶液（２０μＭから開始）を、５０μＬアッセイ培地中のプレートに添加し、次いで３７℃および５％ＣＯ２で７２時間インキュベートした。最終的なＤＭＳＯ濃度は０．２％であった。インキュベーション７２時間後、Ｃｅｌｌ Ｔｉｔｅｒ Ｇｌｏ（Ｐｒｏｍｅｇａ ＃Ｇ７５５Ｂ）１００μＬをプレートに添加し、１０分間のインキュベーション時間の間振り混ぜながら、ルミネセンスを測定した。ＥＣ５０を非線形回帰を用いて計算した。ＷＴ ＦＧＦＲ３レセプターを発現するＨ９２９細胞株（ＩＭＤＭ＋１０％ＦＢＳ＋Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐ）中の４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］−１Ｈ−キノリン−２−オンについてのＥＣ５０は、０．６３μＭであった。ＥＣ５０は、５０ｎｇ／ｍｌ ａＦＧＦ、１０μｇ／ｍｌ Ｈｅｐａｒｉｎおよび１％ＦＢＳを含有するアッセイ培地を用いて上述のように決定された。ＥＣ５０は、ＭＴＳテトラゾリウム試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ）を添加した４時間後に決定される４９０ｎｍのＯＤから非線形回帰を用いて計算された。
４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］−１Ｈ−キノリン−２−オンを用いたＯＰＭ−２の処置の６日後に、有意なアポトーシスが見られた（アネキシンＶ陽性細胞の検出のためのＧｕａｖａ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓからのプロトコルおよび装置を用いて、細胞の＞６０％が、アネキシンＶ陽性であった）。
下流シグナル成分ＥＲＫのホスホリル化は、０．１μＭの４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］−１ Ｈ−キノリン−２−オンを用いてＯＰＭ−２細胞をインキュベートした後に、完全に阻害された。ウェスタンブロットを使用して、ＥＲＫホスホリル化の阻害を示した。
（実施例３−４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］−１Ｈ−キノリン−２−オンによるＣ−Ｍｅｔの阻害）
４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］−１Ｈ−キノリン−２−オンは、ＩＣ５０＞３μＭでｃ−ＭＥＴを阻害した。最終濃度２５μＭでＡＴＰを提供し、１μＭビオチン化基質（ＫＫＫＳＰＧＥＹＶＮＩＥＦＧ（配列番号３））の存在下、１０ｎＭのｃ−ＭＥＴ酵素（Ｕｐｓｔａｔｅ＃１４−５２６）を提供することによってｃ−ＭＥＴのキナーゼ活性を測定した。ストレプトアビジンプレートに結合した基質を、ユーロピウム標識された抗ホスホチロシン抗体ＰＴ６６を用いて検出した。ホスホリル化ペプチド基質をＤＥＬＰＨＩＡ時間分解蛍光システムを用いて測定し、ＩＣ５０を、ＸＬ Ｆｉｔデータ分析ソフトウェアを用いた非線形回帰を使用して計算した。Ｃ−ＭＥＴは、４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］−１Ｈ−キノリン−２−オン（ＥＣ５０が２０ｎＭ）による増殖阻害に関して最も感受性細胞の１つであるＫＭ１２Ｌ４Ａ細胞中で構成的に活性であった。このことは、４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］−１Ｈ−キノリン−２−オンが、ｃ―ＭＥＴの下流シグナル経路において変異ｃ−ＭＥＴまたはキナーゼのいずれかを阻害することを示唆する。
以下の化合物のそれぞれが、上述の手順または米国特許第６，６０５，６１７号（その全体が本明細書中に完全に記載されているかのように本明細書に参考として組み込まれる）に記載される手順を用いて合成され、アッセイされた。
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 上記実施例（１〜１１５６）の多くは、Ｆｌｔ−１、ＫＤＲ、ＰＤＧＦ、ｃ−ＫＩＴ、ＦＬＴ−３、ＶＥＧＦＲ１、ＶＥＧＦＲ２、ｃ−Ｍｅｔ、ＣＳＦ−１、ＦＧＦＲ３および／またはｂＦＧＦＲに関して１０μＭ未満のＩＣ５０値を示した。さらに、上記実施例の多くは、ＰＤＧＦＲに関して１０μＭ未満のＩＣ５０値を示した。
（種々のＲＴＫに対する４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンのインビトロ活性）
４−アミノ置換キノリノンベンズイミダゾリル化合物、例えば、４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンおよびそれらの互変異性体およびそれらの塩は、１０〜２７ｎＭの範囲のＩＣ５０を有する、種々のキナーゼ、例えば、ＶＥＧＦＲ２（ＫＤＲ、Ｆｌｋ−１）、ＦＧＦＲ１およびＰＤＧＦＲβの強力な阻害剤である。４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンが活性を示す種々のチロシンおよびセリン／スレオニンキナーゼのリストについて、およびアッセイ手順について、米国特許第６，６０５，６１７号、米国特許出願第１０／６４４，０５５号、および米国特許出願第１０／７０６，３２８号（これらのそれぞれは、全ての目的のために本明細書中に完全に記載されるように、その全体が参考として組み込まれる）を参照。これらのＲＴＫは、新血管増殖の開始および維持および腫瘍増殖のために重要である。他の種類からのＩＩＩ−ＩＶ類のＲＴＫおよびＲＴＫのサブセットに対する系統的なプロファイリングは、ＣＳＦ−Ｒｌ／ｃ−ｆｍｓ、ｃ−ｋｉｔ、ｆｌｔ３およびＦＧＦＲ３の強力な阻害を示す。ＦＧＦＲ３は異常に発現し、いくつかの場合には、ｔ（４；１４）転座（約１５〜２０％）の結果として、多発性骨髄腫患者のサブセットにおいて構成的に活性である。
ｔ（４；１４）転座を有する多発性骨髄腫細胞株に対する４−アミノ置換キノリノンベンズイミダゾリル化合物、例えば、４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンの効果を、増殖、細胞サイクル、アポトーシス、およびＦＧＦＲ３およびＥＲＫ（細胞外制御されたキナーゼ）ホスホリル化に関して観察した。多発性骨髄腫は、ＩＬ６産生の大量増加および骨吸収に関係のある破骨細胞の随伴性活性化によって主に媒介される有害な骨欠損を伴って存在する。Ｍ−ＣＳＦは、破骨細胞前駆体の漸増において役割を有し、それらの生存を促進する場合がある。ＣＳＦ−１Ｒを介したブロッキングシグナルは、多発性骨髄腫患者に対してさらなる利点を提供する場合がある。マウス骨髄性細胞株Ｍ−ＮＦＳ−６０のＭ−ＣＳＦにより媒介される増殖の阻害は、ｃ−ｆｍｓ／ＣＳＦ−ｌＲに対するインビトロキナーゼ活性の阻害と相関関係にある。
４−アミノ置換キノリノンベンズイミダゾリル化合物、例えば、４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンおよびそれらの互変異性体およびそれらの塩は、ＩＩＩ−Ｖ類ＲＴＫの強力な阻害剤として作用する。４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンのＩＣ５０値は、以下の表に存在する。
（表９．種々のＲＴＫに対する４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンの活性）
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 上の表を作成するために使用されるインビトロＲＴＫアッセイは、使用される酵素のＫｍの３倍または等倍以内の濃度のＡＴＰ存在下でなされた（Ｋｍが入手可能な酵素について）。 ホスホリル化ペプチド基質は、ユーロピウム標識された抗−ホスホ−チロシン抗体（ＰＴ６６）を用いて検出した。ユーロピウムを時間分解蛍光を用いて検出した。いくつかのアッセイについて、γ−Ｐ３３ＡＴＰを酵素と共にインキュベートし、ホスホリル化ペプチド基質の放射能活性を種々の濃度の４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンの存在下で定量し、ＩＣ５０を計算するために使用した。
図１は、４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンが多発性骨髄腫細胞株の増殖を阻害することを示す。ＫＭＳ１１、ＯＰＭ−２、およびＨ９２９は、４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンを順次希釈したものと共にインキュベートした多発性骨髄腫細胞株である。７２時間後、残った生存可能な細胞の数をＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−ＧｌｏＴＭアッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を用いて決定した。ＫＭＳ１１およびＯＰＭ−２はＦＧＦＲ３レセプター中に活性化した変異を有し、Ｈ９２９はＷＴ ＦＧＦＲ３を発現する。４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンはＦＧＦＲ３レセプターキナーゼを阻害し（ＩＣ５０＝９ｎＭ、表９）、活性化したＦＧＦＲ３変異を有する２つの細胞株の増殖をブロックした：ＫＭＳ１１（Ｙ３７３Ｃ）およびＯＰＭ−２（Ｋ６５０Ｅ）細胞はそれぞれ６０ｎＭおよび８７ｎＭのＥＣ５０を有する（図１を参照）。Ｈ９２９細胞はＷＴ ＦＧＦＲ３および突然変異Ｎ−ｒａｓ（１３Ｇ＞Ｄ）を発現し、増殖は阻害されるが、この細胞株においては、４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンによる阻害はそれほど大きくなかった（ＥＣ５０＝２．６μＭ、血清を減らした増殖培地中のＥＣ５０＝０．６μＭ）。
ＦＧＦＲ３チロシンのホスホリル化は、ＫＭＳ１１細胞中で０．５μＭの４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンによって阻害された（図２を参照）。ＫＭＳ１１細胞を、１％ＦＢＳを含有する増殖培地中で２時間飢餓状態にした。次いで、細胞を異なる濃度の４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンと共にＦＢＳを含まない増殖培地中で２時間インキュベートし、洗浄し、ＦＧＦＲ３ Ａｂ （ｓｃ１２３ Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈ）を用いて免疫沈降のために溶解した。溶解産物をウェスタンブロットによって分析し、抗−ホスホチロシン抗体４Ｇ１０（Ｕｐｓｔａｔｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ）でプローブ化した。下側のパネルには、ストリッピングおよびウェスタンブロットおよびＦＧＦＲ３ Ａｂを用いた再プローブ化の後の全ＦＧＦＲ３を示した（図２を参照）。
４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンは、ＫＭＳ１１細胞中０．５μＭでＥＲＫホスホリル化を阻害することがわかった。ＫＭＳ１１細胞を、１％ＦＢＳを含有する増殖培地中で２時間飢餓状態にした。次いで、細胞を異なる濃度の４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンと共にＦＢＳを含まない増殖培地中で２時間インキュベートし、洗浄し、溶解し、ウェスタンブロットによって分析し、抗ホスホ−ＥＲＫ抗体（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ）を用いてプローブ化した。図３Ａの下側のパネルは、ローディングコントロールとしてのシクロフィリンタンパク質（Ｕｐｓｔａｔｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ）を示す。４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンはさらに、ＯＰＭ−２細胞中０．１μＭでＥＲＫホスホリル化を阻害した。ＯＰＭ−２細胞を異なる濃度の４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンと共に１％ＦＢＳを含む増殖培地中で１時間インキュベートし、洗浄し、溶解し、ウェスタンブロットによって分析し、抗ホスホ−ＥＲＫ抗体（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ）を用いてプローブ化した。図３Ｂの下側のパネルは、ローディングコントロールとしての１４−３−３タンパク質（Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈ）を示す。ＭＡＰＫ経路中のＥＲＫは、下流ＦＧＦＲ３シグナル成分であり、ＥＲＫのホスホリル化は、０．５μＭの４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンでＯＰＭ−２およびＫＭＳ１１細胞の両方中で阻害された（図３Ａおよび３Ｂを参照）。対照的に、この化合物は、Ｈ９２９細胞中のホスホ−ＥＲＫレベルについて５μＭまででなんら効果がなかった。Ｈ９２９細胞をＦＢＳを含有しない増殖培地中で２日間飢餓状態にさせた。次いで、細胞を異なる濃度の４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンと共にＦＢＳを含まない増殖培地中で１時間インキュベートし、洗浄し、５０ｎｇ／ｍＬａＦＧＦおよび１０μｇ／ｍＬ Ｈｅｐａｒｉｎで５分間刺激し、溶解し、ウェスタンブロットによって分析し、抗ホスホ−ＥＲＫ抗体（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ）を用いてプローブ化した。血清飢餓状態の２日後のａＦＧＦを用いた刺激に応答するホスホ−ＥＲＫの変化がほんの少しであることは、この経路がＲａｓ変異に起因して構成的に活性化されることを示していた（図３Ｃを参照）。
ＫＭＳ１１細胞を、種々の濃度の４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンと共に９６時間インキュベートした。インキュベートしたＫＭＳ１１細胞を洗浄し、Ｎｅｘｉｎアッセイプロトコルに従ってアネキシンＶＰＥおよび７ＡＡＤで染色した（Ｇｕａｖａ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）。サンプルをＧｕａｖａ ＰＣＡＴＭ装置で操作し、各カテゴリーにおける細胞の割合をＧｕａｖａ ＮｅｘｉｎＴＭソフトウェアを用いて分析した。ＯＰＭ−２細胞を、種々の濃度の４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンと共に７２時間インキュベートした。インキュベートしたＯＰＭ−２細胞を洗浄し、Ｎｅｘｉｎアッセイプロトコルに従ってアネキシンＶＰＥおよび７ＡＡＤで染色した（Ｇｕａｖａ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）。サンプルをＧｕａｖａ ＰＣＡＴＭ装置で操作し、各カテゴリーにおける細胞の割合をＧｕａｖａ ＮｅｘｉｎＴＭソフトウェアを用いて分析した。上記実験の結果は、４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンが、ＫＭＳ１１細胞およびＯＰＭ−２細胞においてそれぞれ０．１μＭおよび０．５μＭの濃度で開始するアネキシンＶＰＥ染色によって測定されるように、アポトーシスを誘発することを示す（図４および図６）。
ＫＭＳ１１細胞およびＯＰＭ−２細胞において４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンによるアポトーシスの誘発に関する実験データは、０．１μＭ以上の濃度の４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンで観察された細胞サイクル分析における細胞のｓｕｂ Ｇ１集合の顕著な増加によって確認された（図５）。ＫＭＳ１１細胞を、０．００１μＭ、０．０１μＭ、０．１μＭ、および１μＭの濃度の４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンと共に７２時間インキュベートした。次いで、細胞を固定し、ヨウ化プロピジウムを用いて染色した後、ＦＡＣＳによってサンプルを分析した（図５を参照）。これらの結果は、この化合物が細胞サイクルには最小限の影響しか有さないが、ＫＭＳ１１細胞中で０．１μＭでアポトーシスを誘発することを示した。ＯＰＭ−２細胞をさらに、０．００１μＭ、０．０１μＭ、０．１μＭ、および１μＭの濃度の４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンと共に７２時間インキュベートした。細胞を同様に固定し、ヨウ化プロピジウムを用いて染色した後、ＦＡＣＳによってサンプルを分析した（図７を参照）。これらの結果は、この化合物が細胞サイクルには最小限の影響しか有さないが、ＯＰＭ−２細胞中で０．５μＭでアポトーシスを誘発することを示した。細胞サイクルについてのこの化合物による他の影響は最小限であり、例えば、Ｇ１停止に有意性は存在しなかった。ｓｕｂ Ｇ１集合における増加は、ＫＭＳ１１細胞と比較してＯＰＭ−２細胞株においてそれほど有意ではなく、０．５μＭで開始された（図７）。
Ｈ９２９細胞を、０．０１μＭ、０．１μＭ、０．５μＭ、および１μＭの濃度の４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンと共に７２時間インキュベートした。次いで、細胞を固定し、ヨウ化プロピジウムを用いて染色した後、ＦＡＣＳによってサンプルを分析した（図８を参照）。４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンは１μＭまでの濃度でＨ９２９細胞中で細胞サイクルになんら影響を有さず、このことにより、ＦＧＦＲ３を発現するＮ−ｒａｓ突然変異細胞株は４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンに対して、ＫＭＳ１１およびＯＰＭ−２細胞よりも感受性が低いことが確認された（図８）。
骨溶解性骨欠損は、多発性骨髄腫疾患の主な合併症の１つである。骨再吸収に関与する主なサイトカインは、ＩＬ１βおよびＩＬ６である。それに加えて、Ｍ−ＣＳＦの血清濃度の増加が患者において検出された。４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンはＣＳＦ−１Ｒ活性を阻害し、ＩＣ５０が３６ｎＭであるＭ−ＣＳＦについて唯一の既知のレセプターであった（表９参照）。マウス骨髄芽球性細胞株Ｍ−ＮＦＳ−６０のＭ−ＣＳＦにより媒介される増殖は、２２０ｎＭのＥＣ５０で阻害された（図９）。マウスＭ−ＮＦＳ−６０細胞を、１０ｎｇ／ｍＬのＭ−ＣＳＦを含むまたはＧＭ−ＣＳＦを含まないアッセイ培地中で順次希釈した４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンと共に、インキュベートした。コントロールウェル中の細胞をアッセイ培地のみと共にインキュベートした。インキュベーション時間が７２時間たった後、生存可能な残った細胞の数をＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−ＧｌｏＴＭアッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を用いて決定した。ＥＣ５０値を非線形回帰を用いて決定した（図９）。
４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンは、顕著な増殖防止活性を有し、活性化したＦＧＦＲ３変異を有する多発性骨髄腫細胞株においてＦＧＦＲ３レセプターホスホリル化およびＥＲＫホスホリル化を阻害する。それ故に、本発明は、有効量の４−アミノ置換キノリノンベンズイミダゾリル化合物、それらの互変異性体、４−アミノ置換キノリノンベンズイミダゾリル化合物の塩、互変異性体の塩、それらの組み合わせ、または４−アミノ置換キノリノンベンズイミダゾリル化合物、それらの互変異性体、４−アミノ置換キノリノンベンズイミダゾリル化合物の塩、互変異性体の塩、またはそれらの組み合わせを含む薬学的処方物を活性化したＦＧＦＲ３変異を有する多発性骨髄腫を有する被検体に投与する工程を含み、上記化合物または薬学的処方物を投与した後にＦＧＦＲ３レセプターホスホリル化およびＥＲＫホスホリル化の阻害が阻害される、活性化したＦＧＦＲ３変異を有する多発性骨髄腫細胞株においてＦＧＦＲ３レセプターホスホリル化およびＥＲＫホスホリル化を阻害する方法を提供する。いくつかの実施形態では、４−アミノ置換キノリノンベンズイミダゾリル化合物は、４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンである。いくつかの実施形態では、被検体は、哺乳動物、例えば、げっ歯類または霊長類である。いくつかのこのような実施形態では、被検体はマウスであり、一方他の実施形態では、被検体はヒトである。本発明はさらに、ＦＧＦＲ３レセプターホスホリル化および／またはＥＲＫホスホリル化を阻害するための医薬品の調製における、４−アミノ置換キノリノンベンズイミダゾリル化合物、それらの互変異性体、４−アミノ置換キノリノンベンズイミダゾリル化合物の塩、互変異性体の塩、それらの組み合わせの使用を提供する。いくつかのこのような実施形態では、４−アミノ置換キノリノンベンズイミダゾリル化合物は、４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンである。
４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンはアポトーシスを生じるが、＜０．５μＭの濃度ではＦＧＦＲ３変異細胞株における細胞サイクルには最小限の影響しか有さない。それ故に、本発明は、ＦＧＦＲ３変異細胞株におけるアポトーシスを誘発する方法を提供し、いくつかの実施形態では、細胞サイクルについて大きな影響を伴わない。この方法は、有効量の４−アミノ置換キノリノンベンズイミダゾリル化合物、それらの互変異性体、４−アミノ置換キノリノンベンズイミダゾリル化合物の塩、互変異性体の塩、それらの組み合わせ、または４−アミノ置換キノリノンベンズイミダゾリル化合物、それらの互変異性体、４−アミノ置換キノリノンベンズイミダゾリル化合物の塩、互変異性体の塩、またはそれらの組み合わせを含む薬学的処方物を、ＦＧＦＲ３変異を活性化する多発性骨髄腫を有する被検体に投与する工程を含み、ＦＧＦＲ３変異細胞株におけるアポトーシスが投与後に誘発される。いくつかの実施形態では、４−アミノ置換キノリノンベンズイミダゾリル化合物は、４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンである。いくつかの実施形態では、被検体は、哺乳動物、例えば、げっ歯類または霊長類である。いくつかのこのような実施形態では、被検体はマウスであり、一方他の実施形態では、被検体はヒトである。本発明はさらに、ＦＧＦＲ３変異細胞株におけるアポトーシスを誘発するための医薬品の調製における、４−アミノ置換キノリノンベンズイミダゾリル化合物、それらの互変異性体、４−アミノ置換キノリノンベンズイミダゾリル化合物の塩、互変異性体の塩、それらの組み合わせの使用を提供し、いくつかの実施形態では、所定の時間でインキュベートされた場合に細胞サイクルに大きな影響を伴わない。いくつかの実施形態では、４−アミノ置換キノリノンベンズイミダゾリル化合物は、４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンである。
マウス骨髄性細胞株Ｍ−ＮＦＳ−６０のＭ−ＣＳＦにより媒介される増殖の阻害は、４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンによるＣＳＦ−１Ｒのインビトロキナーゼ活性の阻害と相関関係にあった。ｔ（４：１４）多発性骨髄腫細胞株（特に活性化ＦＧＦＲ３を有するもの）に対する４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンの強力な活性が観察された。さらに、この化合物およびそれらの塩および互変異性体は、多発性骨髄腫を有する患者を骨溶解性骨欠損および病変から保護するために使用されてもよい。それ故に、いくつかの実施形態では、本発明は、骨髄性細胞株のＭ−ＣＳＦにより媒介される増殖を阻害し、ＣＳＦ−１Ｒ活性を阻害する方法を提供する。この方法は、有効量の４−アミノ置換キノリノンベンズイミダゾリル化合物、それらの互変異性体、４−アミノ置換キノリノンベンズイミダゾリル化合物の塩、互変異性体の塩、それらの組み合わせ、または４−アミノ置換キノリノンベンズイミダゾリル化合物、それらの互変異性体、４−アミノ置換キノリノンベンズイミダゾリル化合物の塩、互変異性体の塩、またはそれらの組み合わせを含む薬学的処方物を、骨髄性細胞株を有する被検体に投与する工程を含み、骨髄性細胞株のＭ−ＣＳＦにより媒介される増殖および／またはＣＳＦ−１Ｒ活性が阻害される。いくつかの実施形態では、４−アミノ置換キノリノンベンズイミダゾリル化合物は、４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンである。本発明はさらに、骨髄性細胞株のＭ−ＣＳＦにより媒介される増殖および／またはＣＳＦ−１Ｒ活性を阻害するための医薬品の調製における、４−アミノ置換キノリノンベンズイミダゾリル化合物、それらの互変異性体、４−アミノ置換キノリノンベンズイミダゾリル化合物の塩、互変異性体の塩、それらの組み合わせの使用を提供する。いくつかのこのような実施形態では、４−アミノ置換キノリノンベンズイミダゾリル化合物は、４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンである。本発明はさらに、多発性骨髄腫を有する患者における骨溶解性骨欠損および病変を減らす方法を提供し、この方法は、有効量の４−アミノ置換キノリノンベンズイミダゾリル化合物、それらの互変異性体、４−アミノ置換キノリノンベンズイミダゾリル化合物の塩、互変異性体の塩、それらの組み合わせ、または４−アミノ置換キノリノンベンズイミダゾリル化合物、それらの互変異性体、４−アミノ置換キノリノンベンズイミダゾリル化合物の塩、互変異性体の塩、またはそれらの組み合わせを含む薬学的処方物を、骨髄性細胞株を有する被検体に投与する工程を含み、投与後に、被検体において骨溶解性骨欠損および病変の減少が観察される。いくつかの実施形態では、４−アミノ置換キノリノンベンズイミダゾリル化合物は、４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンである。いくつかの実施形態では、被検体は、哺乳動物、例えば、げっ歯類または霊長類である。いくつかのこのような実施形態では、被検体はマウスであり、一方他の実施形態では、被検体はヒトである。本発明はさらに、多発性骨髄腫を有する患者における骨溶解性骨欠損および病変を減らすための医薬品の調製における、４−アミノ置換キノリノンベンズイミダゾリル化合物、それらの互変異性体、４−アミノ置換キノリノンベンズイミダゾリル化合物の塩、互変異性体の塩、それらの組み合わせの使用を提供する。いくつかのこのような実施形態では、４−アミノ置換キノリノンベンズイミダゾリル化合物は、４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンである。
（多発性骨髄腫の処置）
多発性骨髄腫（ＭＭ）患者のサブセット（２０％）に固有に生じるｔ（４：１４）転座により、レセプターチロシンキナーゼ（ＲＴＫ）、線維芽細胞増殖因子レセプター３（ＦＧＦＲ３）の異所性発現を生じる。ＭＭ細胞中の活性化されたＦＧＦＲ３の阻害はアポトーシスを誘発し、ｔ（４；１４）ＭＭにおいて治療標的としてＦＧＦＲ３を確認し、これらの予後の悪い患者を処置するためのＦＧＦＲ３阻害剤の臨床的開発を助ける。４−アミノ置換キノリノンベンズイミダゾリル化合物、例えば、４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンは、ＦＧＦＲ３の阻害剤として作用する。４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンは、インビトロキナーゼアッセイにおいて５ｎＭのＩＣ５０を有し、ＦＧＦＲ３を強力に阻害し、野生型（ＷＴ）または活性化された突然変異ＦＧＦＲ３を発現するＢ９細胞およびヒト骨髄腫細胞株の増殖を選択的に阻害した。応答性細胞株では、４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンは、細胞増殖抑制効果および細胞毒性効果を誘発した。重要なことに、間質でのインターロイキン−６（ＩＬ−６）、インスリン増殖因子１（ＩＧＦ−１）または共培養物の添加は、４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンに対する耐性を与えなかった。ｔ（４；１４）患者由来の原発性骨髄腫細胞において、４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンは、関連する細胞毒性応答と共に下流のＥＲＫ１／２ホスホリル化を阻害した。最後に、４−アミノ置換キノリノンベンズイミダゾリル化合物、例えば、４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンの治療効力は、ＦＧＦＲ３ ＭＭの異種移植マウスモデルにおいて示された。４−アミノ置換キノリノンベンズイミダゾリル化合物、例えば、４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンは、ＷＴまたは突然変異ＦＧＦＲ３のいずれかを発現するＦＧＦＲ３−形質転換された造血細胞株およびヒト多発性骨髄腫細胞株の強力な阻害剤である。それに加えて、これらの化合物は、ＦＧＦＲ３により媒介されるＭＭのマウスモデルにおいて強力な阻害剤であり、ｔ（４；１４）患者由来の原発性骨髄腫細胞に対して細胞毒性である。ひとまとめにして考えると、これらのデータは、４−アミノ置換キノリノンベンズイミダゾリル化合物、例えば、４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンが、ＦＧＦＲ３発現に関連するＭＭの処置において顕著な潜在性を有することを示す。
（方法）
（化学化合物および生物学的試薬）
４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンを２０ｍＭのストック濃度でＤＭＳＯに溶解した。動物実験のために、４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンを５ｍＭクエン酸バッファー中に配合した。酸性ＦＧＦ（αＦＧＦ）およびヘパリンはそれぞれＲ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ（Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）およびＳｉｇｍａ（Ｏｎｔａｒｉｏ，Ｃａｎａｄａ）から購入した。ＦＧＦＲ３抗体（Ｃ１５，Ｈ１００およびＢ９）をＳａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ，ＣＡ）から得て、４Ｇ１０はＵｐｓｔａｔｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（Ｌａｋｅ Ｐｌａｃｉｄ，ＮＹ）から得た。
（インビトロキナーゼアッセイ）
４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンによるＲＴＫの阻害についてのＩＣ５０値は、時間分解蛍光（ＴＲＦ）または放射能活性フォーマットにおいて決定され、それぞれの酵素による４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンの基質へのリン酸の移動の阻害を測定する。簡単にいうと、それぞれのＲＴＫドメインは、組換えタンパク質として発現されるか、または購入され、基質および酵素のＫｍの２〜３倍濃度のＡＴＰの存在下で４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンの順次希釈物とともにインキュベートされた。ＩＣ５０値は非線形回帰を用いて計算され、少なくとも２回の実験の平均をあらわす。
（ＦＧＦＲ３発現ベクターおよびＢ９細胞形質転換体）
ＷＴ ＦＧＦＲ３を発現するＢ９細胞（Ｂ９−ＷＴ）、ＦＧＦＲ３−Ｋ６５０Ｅを発現するＢ９細胞（Ｂ９−Ｋ６５０Ｅ）および空のレトロウイルスを発現するＢ９細胞（Ｂ９−ＭＩＮＶ）は以前に記載されている。Ｐｌｏｗｒｉｇｈｔ，Ｅ．Ｅ．ｅｔ ａｌ，Ｂｌｏｏｄ，２０００；９５：９９２−９９８。全長ＦＧＦＲ３ ｃＤＮＡ（Ｆ３８４Ｌ、Ｙ３７３Ｃ、またはＪ８０７Ｃを含有する（Ｍａｒｔａ Ｃｈｅｓｉ，Ｗｅｉｌｌ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｃｏｒｎｅｌｌ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹの寄贈））を緑色蛍光たんぱく質（ＧＦＰ）カセットを含有するＭＳＣＶベースのレトロウイルスベクターへとクローン化した。アミノ酸２９０〜４１３の間のＰｍｌＩ−ＢｇｌＩＩフラグメントと、以前に記載されるようなＫＭＳ１８から得られた同じフラグメントとを交換することによって、Ｇ３８４Ｄ変異を有する構築物をＦＧＦＲ３−ＷＴから作成した。Ｒｏｎｃｈｅｔｔｉ，Ｄ．ｅｔ ａｌ，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，２００１；２０：３５５３−３５６２。構築されたレトロウイルスベクターを、ＧＰ−Ｅエコトロピックパッケージ細胞へとトランスフェクトした。得られたレトロウイルスを使用して、ＩＬ−６依存性マウス骨髄腫細胞株Ｂ９にＦＧＦＲ３を導入した。限定的な細胞希釈をさらに行って、単一の細胞クローンを作成した。各構築物について高度に発現するクローン（Ｂ９−Ｆ３８４Ｌ、Ｂ９−Ｙ３７３Ｃ、Ｂ９−Ｇ３８４ＤおよびＢ９−Ｊ８０７Ｃ）を凍結保存した。
（細胞株および組織培養物）
全てのヒトＭＭ細胞株およびＢ９細胞を、５％ＦＣＳ、１００μｇ／ｍｌペニシリンおよび１００μｇ／ｍｌストレプトマイシン（Ｇｉｂｃｏ，Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｃａｎａｄａ，Ｏｎｔａｒｉｏ）および１％ＩＬ−６馴化培地（Ｂ９細胞のみ）を追加したＩｓｃｏｖｅ’ｓ Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ Ｍｅｄｉｕｍ（ＩＭＤＭ）中に維持した。ＢＭ間質細胞（ＢＭＳＣ）をＭＭ患者から得られたＢＭ標本から誘導した。Ｆｉｃｏｌｌ−Ｈｉｐａｑｕｅ密度沈殿法によって分離した単核細胞を使用して、以前に記載されるように長期間培養を確立した。Ｈｉｄｅｓｈｉｍａ，Ｔ．ｅｔ ａｌ，Ｂｌｏｏｄ，２０００；９６：２９４３−２９５０。生存能力アッセイの目的のために、ＢＭＳＣを９６ウェルプレートに接種した後に、ＢＭＳＣに２０Ｇγを照射した。
（生存能力アッセイ）
細胞生存能力を、３−（４，５−ジメチルチアゾール）−２，５−ジフェニルテトラゾリウム（ＭＴＴ）染料の吸収によって評価した。５％ＦＣＳを有するＩＭＤＭ中に細胞を１ウェルあたり５，０００（Ｂ９細胞）または２０，０００（ＭＭ細胞株）細胞の密度で９６−ウェルプレートに接種した。４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンの所定の増加する濃度で、３０ｎｇ／ｍｌのａＦＧＦおよび１００μｇ／ｍｌヘパリンまたは１％のＩＬ−６と共に細胞をインキュベートした。４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンの各濃度について、培地中に希釈した薬物またはＤＭＳＯの１０μｌのアリコートを添加した。薬物組み合わせ試験について、０．５μＭのデキサメタゾン、１００ｎＭの４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンまたはその両方と共に細胞をインキュベートした。ＢＭＳＣに接着性のＭＭ細胞の増殖について４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンの効果を評価するために、４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンの存在下または非存在下で、１０，０００ＫＭＳ１１細胞をＢＭＳＣコーティングされた９６−ウェルプレート上で培養した。プレートを３７℃、５％ＣＯ２で４８〜９６時間インキュベートした。製造業者の指示に従ってＭＴＴアッセイを行った（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ，Ｍａｎｎｈｅｉｍ，Ｇｅｒｍａｎｙ）。マクロファージ−コロニー刺激因子（Ｍ−ＣＳＦ）により媒介される増殖の評価のために、１０ｎｇ／ｍｌのＭ−ＣＳＦを有し、顆粒球マクロファージ−コロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）を有さない培地中で、４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンの順次希釈物と共に１ウェルあたり５０００のＭ−ＮＦＳ−６０細胞をインキュベートした。７２時間後、Ｃｅｌｌ Ｔｉｔｅｒ−ＧｌｏＴＭアッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ， Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）を用いて細胞生存能力を決定した。非線形回帰を用いてＥＣ５０値を決定した。各実験条件を３ッ組で行った。
（細胞内リンタンパク質染色）
フローサイトメトリーによるＥＲＫ１／２ホスホリル化の決定は、以前に記載されている。Ｃｈｏｗ，Ｓ．ｅｔ ａｌ，Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ，２００１；４６：７２−７８；およびＩｒｉｓｈ，Ｊ．Ｍ．ｅｔ ａｌ，Ｃｅｌｌ，２００４；１１８：２１７−２２８。簡単に言うと、細胞を一晩血清飢餓状態にして、次いで３０ｎｇ／ｍｌ ａＦＧＦおよび１０μｇ／ｍｌヘパリンで３７℃で１０分間刺激した。培地に１０％ホルムアルデヒドを直接添加することによって細胞を迅速に固定し、最終濃度２％を得た。細胞を３７℃で１０分間固着剤中でインキュベートし、さらに氷上で２分間インキュベートした。氷冷メタノールを添加することによって細胞を浸透させ（最終濃度９０％）、氷上で３０分間インキュベートした。細胞を抗−ＥＲＫｌ／２（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｂｅｖｅｒｌｙ，ＭＡ）で１５分間染色し、指摘されるＦＩＴＣ−接合ヤギ抗−ウサギおよび抗−ＣＤ１３８−ＰＥ（ＰｈａｒＭｉｎｏｇｅｎ， Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）で標識した。悪性腫瘍細胞を、高レベルのＣＤ１３８を発現する細胞として同定した。フローサイトメトリーを、ＦＡＣＳ Ｃａｌｉｂｅｒフローサイトメーター（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓａｎ Ｊｏｓｅ，ＣＡ）で行い、Ｃｅｌｌｑｕｅｓｔソフトウェア（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）を用いて分析した。
（アポトーシス分析）
アポトーシスの試験のために、細胞を初期濃度２×１０５／ｍｌ培地（ＤＭＳＯ、１００ｎＭまたは５００ｎＭの４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンを追加）で接種し、６日間培養した。培地および薬物を３日ごとに補充し、細胞濃度を２×１０５／ｍｌに調整した。アネキシンＶ染色（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ，Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ）によってアポトーシスを決定し、フローサイトメトリーによって分析した。
（原発性患者サンプル）
この試験のために同定された患者は、ｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）における蛍光によってｔ（４；１４）転座を有することが決定された。ＦＧＦＲ３の発現を以前に記載されるようにフローサイトメトリーによって確認した。Ｃｈｅｓｉ，Ｍ．ｅｔ ａｌ，Ｂｌｏｏｄ，２００１；９７：７２９−７３６。簡単に言うと、赤血球を溶解し、ＢＭ単核細胞をウサギ抗−ＦＧＦＲ３（Ｈ１００）またはウサギ免疫前血清と共に氷上で３０分間インキュベートした。細胞をＦＩＴＣ接合ヤギ抗-−ウサギＩｇＧおよびマウス抗−ＣＤ１３８−ＰＥで染色し、ＭＭ細胞を同定した。次いで、サンプルをフローサイトメトリーで分析した。
全てのｔ（４；１４）陽性サンプルを、ＦＧＦＲ３またはＲａｓ突然変異の存在についてさらに分析した。活性化変異の既知のホットスポットである、細胞外（ＥＣ）ドメインのＦＧＦＲＳ含有コドン、膜貫通（ＴＭ）ドメインチロシンキナーゼ（ＴＫ）ドメインおよび停止コドン（ＳＣ）の領域を増幅するために、４対のプライマーを設計した。Ｎ−ｒａｓおよびＫ−ｒａｓのコドン１２、１３、および６１の領域を増幅するために２対のプライマーを設計した。Ｃｈｅｓｉ，Ｍ．ｅｔ ａｌ，Ｂｌｏｏｄ，２００１；９７：７２９−７３６。第１のＰＣＲ反応をＣＤ１３８精製骨髄腫細胞から抽出したゲノムＤＮＡ上で行ない、単位複製配列をＤＨＰＬＣ分析のために使用した。結果をＰＣＲ産物の配列分析によって確認した。
細胞死の分析のために、単核細胞をＦｉｃｏｌｌ−Ｈｉｐａｑｕｅ勾配沈降によって分離し、２０％ＦＣＳおよび３０ｎｇ／ｍｌのａＦＧＦおよび１０μｇ／ｍｌヘパリンを追加したＩＭＤＭ中に５×１０５細胞／ｍｌの細胞濃度で接種した。細胞をＤＭＳＯまたは５００ｎＭの４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オン存在下で１２日まで培養した。培地、ａＦＧＦ／ヘパリンおよび薬物を３日ごとに補充した。３、７、および１２日後に、細胞を以前に記載されるように抗−ＣＤ３８−ＰＥ、抗−ＣＤ４５−ＣｙＣｈｒｏｍｅ（ＰｈａｒＭｉｎｏｇｅｎ）およびＦＩＴＣ接合アネキシンＶを用いて三重に染色した。ＬｅＢｌａｎｃ，Ｒ．ｅｔ ａｌ，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，２００２；６２：４９９６−５０００。コントロールは、染色されていない細胞、アイソタイプコントロール染色された細胞、および単一染色された細胞を含む。悪性腫瘍細胞血漿細胞は、高レベルのＣＤ３８を発現し、ＣＤ４５を発現しないかまたは低レベルで発現する細胞として同定された（ＣＤ３８＋＋／ＣＤ４５−）。Ｃｅｌｌｑｕｅｓｔソフトウェアを用いてサンプルをＦＡＣＳｃａｎ分析によって分析した。ＢＭ吸引液をＩＲＢに承認されたプロトコルのもとでの同意によって得た。
（異種移植マウスモデル）
異種移植マウスモデルを以前に記載されるように調製した。Ｍｏｈａｍｍａｄｉ，Ｍ．ｅｔ ａｌ．，Ｅｍｂｏ．Ｊ．，１９９８；１７：５８９６−５９０４。簡単に言うと、Ｆｒｅｄｅｒｉｃｋ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ Ｃｅｎｔｒｅ（Ｆｒｅｄｅｒｉｃｋ，ＭＤ）から得た６〜８週齢の雌ＢＮＸマウスに、１５０μｌのＩＭＤＭ中の３×１０７ＫＭＳ１１細胞を、マトリゲル基底膜マトリックス（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，Ｂｅｄｆｏｒｄ，ＭＡ）１５０μｌと共に右腹部に皮下注射することによって接種した。腫瘍が約２００ｍｍ３に達したとき、処置を開始し、この時点で、マウスは、ランダム化され、１０、３０または６０ｍｇ／ｋｇの４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンまたは５ｍＭのクエン酸バッファーを受けた。胃管栄養法によって毎日投薬を行ない、２１日間続けた。８〜１０匹のマウスが各処置グループに含まれていた。キャリパー測定を週に２回行い、以下の式を用いて腫瘍体積を概算した：４π／３×（幅／２）２×（長さ／２）。一元配置分散分析を用いて、ビヒクルで処理されたグループと４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンで処理されたグループとの間の違いを比較した。
（免疫沈降およびイムノブロッティング）
免疫沈降およびイムノブロッティングを以前に記載されるように行なった。ＬｅＢｌａｎｃ，Ｒ．ｅｔ ａｌ，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，２００２；６２：４９９６−５０００。簡単に言うと、と殺されたマウス由来の腫瘍を氷上で迅速に均質化し、洗剤バッファー中に溶解した。分類された細胞抽出物（１ｍｇ／サンプル）をＣ１５ ＦＧＦＲ３抗体と共に６時間インキュベートし、次いでタンパク質Ａ／Ｇ寒天（Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ）をさらに２時間添加した。抗−ホスホチロシン抗体、４Ｇ１０と共にイムノブロッティングを行ない、ホスホリル化ＦＧＦＲ３を評価し、または抗−ＦＧＦＲ３（Ｂ９）と共にイムノブロッティングを行ない全ＦＧＦＲ３を測定した。
（組織病理学および免疫組織化学分析）
組織サンプルを１０％ホルマリン中で固定し、パラフィン中に包埋し、ここから５μｍの組織学的断片を切断し、ヘマトキシリンおよびエオシンで染色した。以前に記載されるようなＴｅｃｈＭａｔｅ５００ＴＭ ＢｉｏＴｅｋ自動化免疫染色機（Ｖｅｎｔａｎａ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ．，Ｔｕｃｓｏｎ，ＡＺ）、抗体認識するＦＧＦＲ３（ＣＩＳ）、Ｋｉ−６７（Ｚｙｍｅｄ，Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ＣＡ），、および切断カスパーゼ３（Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）を用いてパラフィン組織断片の間接的なイムノペルオキシダーゼ染色によって免疫組織化学（ＩＨＣ）試験を行なった。
（多発性骨髄腫試験の結果）
（４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンの選択的キナーゼ阻害）
４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンが外因性基質ホスホリル化を阻害する能力を、広範囲のキナーゼに対して試験した。レセプターチロシンキナーゼの活性を５０％減少させる４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンの濃度（ＩＣ５０）を表９に報告している。４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンは、インビトロキナーゼアッセイによって評価される場合に０．００１〜０．２１ｍＭのＩＣ５０値でＦＬＴ３、ｃ−Ｋｉｔ、ＣＳＦ−Ｒ１およびＰＤＧＦＲα／βを含むＩＩＩ類ＲＴＫのメンバーを阻害した。それに加えて、４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンは、０．００８〜０．０１３ｍＭのＩＣ５０値でＩＶ類（ＦＧＦＲ１および３）およびＶ類Ｖ（ＶＥＧＦＲ１−４）ＲＴＫを強力に阻害した。ＩｎｓＲ、ＥＧＦＲ、ｃ−ＭＥＴ、ＥｐｈＡ２、ＴＩＥ２、ＩＧＦＲ１およびＨＥＲ２のための同様のキナーゼアッセイが行われる場合、＞１０倍より高い濃度でのみ有意な阻害が観察された。これらの試験は、４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンが選択的であるが、ＦＧＦＲに対して高い能力を有するＩＩＩ類、ＩＶ類およびＶ類のＲＴＫの複数標的阻害剤であることを示した。
（４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンは、ＷＴおよび突然変異ＦＧＦＲ３で形質転換された細胞の増殖を阻害する）
４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンがＭＭ患者中で同定される構成的に活性化されたＦＧＦＲ３突然変異（Ｙ３７３Ｃ、Ｇ３８４Ｄ、Ｋ６５０Ｅ、Ｊ８０７Ｃ）を阻害する能力も試験した。Ｃｈｅｓｉ，Ｍ．ｅｔ ａｌ，Ｂｌｏｏｄ，２００１；９７：７２９−７３６；ａｎｄ Ｅｌｙ，Ｓ．Ａ．ｅｔ ａｌ，Ｃａｎｃｅｒ，２０００；８９：４４５−４５２。これらのｃＤＮＡの安定な発現は、Ｂ９細胞に対してＩＬ−６非依存性増殖を与え、このことは、これらの変異が生物学的活性を保持し、種々の種類のＦＧＦＲ３変異に対する潜在的なＦＧＦＲ３阻害剤を試験するためのプラットフォームを与えることを示す。ＦＧＦＲＳにより媒介される細胞増殖に対する４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンの効果を決定するために、ＦＧＦＲ３−ＷＴ、ＦＧＦＲ３−Ｆ３８４Ｌ（形質転換されていない多形）およびＦＧＦＲ３活性化された突然変異を発現するＢ９細胞を増加させた濃度の阻害剤中で４８時間増殖させた後、生存能力をＭＴＴアッセイによって決定した（図１０）。予想されるように、４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンは、ＷＴおよびＦ３８４Ｌ−ＦＧＦＲ３を発現するＢ９細胞のＦＧＦにより刺激される増殖を２５ｎＭのＩＣ５０で強力に阻害した。それに加えて、４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンは、ＦＧＦＲ３の種々の活性化された突然変異のそれぞれを発現するＢ９細胞の増殖を阻害した。興味深いことに、４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンに対する異なるＦＧＦＲ３突然変異の感受性における違いは、それぞれの突然変異で７０〜９０ｎＭの範囲のＩＣ５０で、ほんのわずかの違いしか観察されなかった。ベクターのみを含有するＩＬ−６依存性Ｂ９細胞１１（Ｂ９−ＭＩＮＶ）を使用して、非特異的な毒性を検出した。Ｂ９−ＭＩＮＶ細胞は、４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンの阻害活性に対して１μＭまでの濃度で耐性であった。これらのデータはさらに、４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンによるＦＧＦＲ３の阻害を示すインビトロキナーゼ活性を確認し、非特異的な細胞毒性効果が有効範囲の薬物濃度では観察されないことを示す。これらの結果はさらに、４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンがＭＭ中に記載される種々のＦＧＦＲ３の活性化された突然変異に対して強力な活性を有することを示す。
（４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンがＦＧＦＲ３を発現する骨髄腫細胞に対して細胞毒性である）
ＭＭ中の治療薬剤として４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンの能力を評価するために、ヒト骨髄腫細胞株の増殖および生存に対する４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンの効果もさらに観察した。ＦＧＦＲ３陽性細胞株（ＫＭＳ１１、ＫＭＳ１８、ＯＰＭ２、Ｈ９２９）およびＦＧＦＲ３陰性細胞株、Ｕ２６６および８２２６を、増加する濃度の４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンと共にインキュベートし、細胞の生存能力をモニタリングした（図１０）。４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンは、それぞれ、９０ｎＭ（ＫＭＳ１１およびＯＰＭ２）および５５０ｎＭのＩＣ５０で、ＫＭＳ１１（ＦＧＦＲ３−Ｙ３７３Ｃ）およびＯＰＭ２（ＦＧＦＲ３−Ｋ６５０Ｅ）、およびＫＭＳ１８（ＦＧＦＲ３−Ｇ３８４Ｄ）細胞の細胞増殖を阻害した。ＦＧＦＲ３陰性細胞株およびＨ９２９（ＦＧＦＲ３−ＷＴ）、Ｎ−Ｒａｓの下流活性化変異を有する細胞株（Ｃｈｅｓｉ，Ｍ．ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，２００１；９７：７２９−７３６）は耐性であり、細胞増殖を阻害するために５倍より高い濃度を必要とした。細胞増殖の阻害は、フローサイトメトリーによって決定される場合に下流ＥＲＫ１／２ホスホリル化しないことと関連があった。４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンに感受性の細胞株（ＫＭＳ１１、ＫＭＳ１８、ＯＰＭ２）はすべて、有効用量の４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オン存在下でＥＲＫ１／２ホスホリル化しなかったことを示した。対照的に、Ｈ９２９細胞は、４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンに対する細胞増殖抑制応答が最小限であることが示されているが、構成的なＲａｓ活性化の結果として高い基底レベルのＭＡＰキナーゼ活性を示し、ＥＲＫ１／２ホスホリル化は変化させず、このことは、４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンがＲａｓの上流に作用することを示す。
（表１０．ヒト骨髄腫細胞株に対する４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンのＩＣ５０値（ｎＭ））
Figure 0004890255
 （ＭＭ細胞株およびｔ（４；１４）転座の存在（＋）または非存在（−）およびＦＧＦＲ３突然変異が列挙される。ＷＴは野生型の遺伝子型を示し、Ｎ／Ｄは決定されていないことを意味する。４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンと共に７２時間インキュベーションした後の、ＤＭＳＯコントロールと比較した場合の、生存能力の５０％を阻害する４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンの濃度（ＩＣ５０）を決定した（ＭＴＴアッセイまたはＣｅｌｌ Ｔｉｔｅｒ Ｇｌｏ））。
４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンはさらに、応答性のＦＧＦＲ３を発現する細胞株においてアポトーシスを誘発した。５００ｎＭの４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンを用いてＫＭＳ１１、ＯＰＭ２、およびＫＭＳ１８細胞を９６時間処理すると、ＤＭＳＯコントロールと比較した場合に、アネキシンＶに結合する細胞の割合が顕著に増加した（図１１）。骨髄腫細胞株中で観察されたアポトーシスの遅延誘発は、さらに選択的なＦＧＦＲ３阻害剤であるＰＤ１７３０７４を用いて以前に報告されたものと類似している。Ｔｒｕｄｅｌ，Ｓ．ｅｔ ａｌ，Ｂｌｏｏｄ，２００４；１０３：３５２１−３５２８。ＦＧＦＲ３陰性の細胞（Ｕ２６６は示されない）の処置は、アネキシンＶ結合になんら効果を有さず、このことは、４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンによって潜在的に阻害可能なＩＩＩ類およびＶ類のＲＴＫが発現されないか、またはこれらの骨髄腫細胞の生存に必須ではないことを示唆する。
４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンの細胞毒性能力を原発性ヒト骨髄腫細胞に対して評価した。新しく単離したＢＭ単核細胞をＦＩＳＨによってｔ（４；１４）陽性または陰性としてあらかじめ同定した患者から得た。Ｃｈａｎｇ，Ｈ．ｅｔ ａｌ．，Ｂｒ．Ｊ．Ｈａｅｍａｔｏｌ，２００４；１２５：６４−６８。ＦＧＦＲ３発現の存在または非存在は、フローサイトメトリーによって確認された（図１２Ａ）。５個のｔ（４；１４）陽性サンプルの中で、１個以外の全てが、ＣＤ１３８陽性骨髄腫細胞上で高レベルのＦＧＦＲ３発現を示した（表１０）。それに加えて、これらのサンプルを、ＮおよびＫ−ＲａｓのＦＧＦＲ３突然変異および下流突然変異についてＤＨＰＬＣによってスクリーニングした。その結果を配列分析によって確認した。突然変異は同定されなかった。培養物中の原発性細胞のＦＧＦ刺激は、ＣＤ１３８陽性骨髄腫細胞中でＦＧＦＲ３の生物学的活性を示すＥＲＫ１／２ホスホリル化をこれらの細胞中で上方制御した（図１２Ｂ）。４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンは５００ｎＭですべてのサンプル中のＥＲＫ１／２ホスホリル化を完全に阻害した。それに加えて、単核細胞を、５００ｎＭの４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンまたはＤＭＳＯビヒクルと共に培養し、アポトーシスをアネキシンＶ染色によって決定した。５個のｔ（４；１４）骨髄腫サンプルのうち４個は、ビヒクルコントロールと比較した場合、４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンに対する細胞毒性応答を示したが、一方、他の骨髄腫サンプルはなんら影響を受けなかった（図１２Ｃおよび１２Ｄおよび表１１）。興味深いことに、低レベルのＦＧＦＲ３発現を示したｔ（４；１４）陽性サンプルは、高レベルのＷＴ ＦＧＦＲ３発現のみが依存性を与え得ることを暗示する４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オン耐性であった。この仮説のための支持は、消化管の腫瘍におけるｃ−ＫＩＴ（Ｒｕｂｉｎ，Ｂ．Ｐ．ｅｔ ａｌ，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，２００１；６１：８１１８−８１２１）の研究およびＡＭＬにおけるＦＬＴ３（Ａｒｍｓｔｒｏｎｇ，Ｓ．Ａ．ｅｔ ａｌ，Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ，２００３；３：１７３−１８３）の研究によって与えられ、高レベルのＷＴレセプターおよびレセプター変異の発現が構成的活性および阻害剤感受性を導く。さらに、乳癌におけるＨｅｒｃｅｐｔｉｎに対する感度は、ＨＥＲ２／ｎｅｕ発現のレベルと相関関係にある。Ｖｏｇｅｌ，Ｃ．Ｌ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ，２００２；２０：７１９−７２６。あるいは、この患者由来のＭＭ細胞は、ＦＧＦＲ３シグナル伝達に対する依存を回避するさらなる経路の活性を有する場合がある。
（表１１．４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オン（化合物）に対する感度と関係する、原発性ＭＭ細胞上でのＦＧＦＲ３の発現の概要）
Figure 0004890255
 （ＣＤ１３８原発性ＭＭ細胞上でのＦＧＦＲ３発現をフローサイトメトリーによって分析し、蛍光を以下のように表現した：＋ 弱い；＋＋ 中間；＋＋＋ 強い；− なし。Ｄ１３８選択された細胞をＦＧＦＲ３およびＮおよびＫ−Ｒａｓ突然変異についてスクリーニングした。ＷＴは野生型状態を示し、Ｎ／Ｄは決定されていないことを示す）。
（４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンに対するＭＭ細胞の応答についてのＩＬ−６、ＩＧＦ−１および間質の効果）
腫瘍細胞増殖、ＭＭにおける生存および薬物耐性における、ＩＬ−６（Ｋｌｅｉｎ，Ｂ．ｅｔ ａｌ，Ｂｌｏｏｄ，１９９５；８５：８６３−８７２；およびＡｎｄｅｒｓｏｎ，Ｋ．Ｃ．ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｍｉｎ．Ｈｅｍａｔｏｌ，１９９９；３６：１４−２０）およびさらに最近では、ＩＧＦ−１（Ｏｇａｗａ，Ｍ．ｅｔ ａｌ，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，２０００；６０：４２６２−４２６９；ａｎｄ Ｍｉｔｓｉａｄｅｓ，Ｃ．Ｓ．ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ，２００４；５：２２１−２３０）の既知の役割が与えられ、外因性ＩＬ−６およびＩＧＦ−１が４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンによってつくりだされる増殖阻害効果を超えるか否かを決定するために、実験が行なわれた。ＫＭＳ１１細胞が５０ｎｇ／ｍｌのＩＬ−６または５０ｎｇ／ｍｌのＩＧＦ−１の存在下で増殖し、４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンを用いた阻害が観察され、これはａＦＧＦの存在下で培養される細胞に匹敵した（図１３Ａ）。これらの試験は、これらの細胞における増殖因子レセプターのヒエラルキーにおけるＦＧＦＲ３機能の重要な役割を強調する。
ＢＭ微小環境がＭＭ細胞において薬物耐性を与えることが示されているため（Ｄａｌｔｏｎ，Ｗ．Ｓ．ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｍｉｎ Ｈｅｍａｔｏｌ．，２００４；４１：１−５；ａｎｄ Ｈｉｄｅｓｈｉｍａ，Ｔ．ｅｔ ａｌ，Ｓｅｍｉｎ．Ｏｎｃｏｌ，２００１；２８：６０７−６１２）、ＭＭ細胞増殖に対する４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンの効果をＢＭ環境において観察した。ＢＭＳＣに対する４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンの直接的な毒性をＭＴＴアッセイを用いて決定し、ＤＭＳＯコントロールと比較して、処理された細胞で、４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンの細胞生存能力においてなんら有意な差異はなかった（図１３Ｂ）ことが観察された。次いで、４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンの存在下または非存在下で、ＢＭＳＣ存在下または非存在下でＫＭＳ１１細胞を培養した。ＢＭＳＣは、ＢＭＳＣなしで増殖させた細胞について７１．６％の増殖阻害を有するのと比較して、５００ｎＭの４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンで処理され、間質で培養された細胞の増殖を４４．６％阻害しつつ、中程度の耐性を与えた。しかし、細胞増殖は、間質が存在しなくても、４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンによって有意に阻害された。
（４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンは、多発性骨髄腫におけるデキサメタゾン細胞毒性を増強する）
ＦＧＦＲ３発現により、ＳＴＡＴ３ホスホリル化を増加させ、ＩＬ−６を引き出した後の親Ｂ９細胞において観察されるよりもＢｅｌ−ＸＬ発現のレベルをより高くする。Ｐｌｏｗｒｉｇｈｔ，Ｅ．Ｅ．ｅｔ ａｌ，Ｂｌｏｏｄ，２０００；９５：９９２−９９８；ａｎｄ Ｐｏｌｌｅｔｔ，Ｊ．Ｂ．ｅｔ ａｌ，Ｂｌｏｏｄ，２００２；１００：３８１９−３８２１。これらの発見は、デキサメタゾンにより誘発されるアポトーシスの阻害、Ｂｅｌ−ＸＬアンチセンスオリゴヌクレオチドによって逆転される状況と関係していた。ＦＧＦＲ３を発現するＭＭ細胞の処置は、デキサメタゾンに対する耐性を超える場合がある。表１２に示されるように、ＫＭＳ１１細胞はデキサメタゾンに対して比較的耐性である；しかし、４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンと合わされる場合、
相乗的な阻害効果が観察される場合がある。これらのデータは、デキサメタゾンと４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンとを治療法として組み合わせる有用性を示す。
（表１２．ＫＳＭ１１生存度に対する４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オン（化合物）および／またはデキサメタゾンの効果）
Figure 0004890255
 （４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンはＭ−ＣＳＦにより媒介される細胞増殖を阻害する）
骨溶解性骨欠損は、ＭＭの主要な合併症の１つである。骨再吸収に関与する主な破骨細胞活性化因子は、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＲＡＮＫ−ＬおよびＭ−ＣＳＦである。Ｃｒｏｕｃｈｅｒ，Ｐ．Ｉ．ｅｔ ａｌ，Ｂｒ．Ｊ．Ｈａｅｍａａｔｏｌ，１９９８；１０３：９０２−９１０。ＢＭにおけるＭＭ細胞、骨芽細胞および間質細胞は、破骨細胞形成に重要であるＲＡＮＫ−Ｌと共にＭ−ＣＳＦを発現する。Ｑｕｉｎｎ，Ｊ．Ｍ．ｅｔ ａｌ．，Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ，１９９８；１３９：４４２４−４４２７。ＭＣＳＦの血清濃度の増加がＭＭ患者において検出された。Ｊａｎｏｗｓｋａ−Ｗｉｅｃｚｏｒｅｋ，Ａ．ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，１９９１；７７：１７９６−１８０３。インビトロキナーゼアッセイは、ＣＳＦ−１Ｒに対する４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンの強力な活性を示し、これは３６ｎＭのＩ５０を有する唯一の既知のレセプターである（表９）。４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンは、Ｍ−ＮＦＳ−６０の増殖、マウス骨髄芽球性細胞を促進するＭ−ＣＳＦ増殖を２２０ｎＭのＥＣ５０で阻害した（図１４）。それ故に、ＭＭ細胞増殖の阻害に加えて、４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンが腫瘍に関連する骨溶解を強力に阻害する利点を有することが明らかである。
（異種移植マウスモデルにおける４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンのインビボでの評価）
ＫＭＳ１１細胞をＢＮＸマウスに皮下注射したマウスモデルにおいて、４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンの効力を試験した。Ｇｒａｄ，Ｊ．Ｍ．ｅｔ ａｌ，Ｂｌｏｏｄ，２００１；８０５−８１３；ａｎｄ Ｌｅｎｔｚｓｃｈ，Ｓ．ｅｔ ａｌ．，Ｌｅｕｋｅｍｉａ，２００３；１７：４１−４４。同様の形質細胞腫異種移植マウスモデルをＭＭにおいてＢｏｒｔｅｚｏｍｉｂおよびＩＭｉＤの臨床前研究において使用した。３６匹のＢＮＸマウスにそれぞれ、マトリゲルと共に３×１０７ＫＭＳ１１細胞とを皮下注射によって腹部に注射した。腫瘍が約２００ｍｍ３に達したら、マウスをランダム化して（ｎ＝８〜１０）、ビヒクルまたは４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンを１０ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇおよび６０ｍｇ／ｋｇで与え、２１日間１日に１度、経口胃管栄養法によって投与した。ビヒクルコントロールと比較した場合、全ての３つの４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オン投与グループにおいて、最少の有効用量１０ｍｇ／ｋｇ／日で有意な（ｐ＜０．００１）抗−腫瘍効果が観察された（図１５）。特に、４８％、７８．５％および９４％の増殖阻害を、それぞれ、プラセボ処置したマウスと比較して、１０ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇおよび６０ｍｇ／ｋｇ処置した腕において計算した。投薬の最終日に、最も高用量の処置グループにおける１０匹のうち７匹のマウスが、薬物投与１日目と比較して腫瘍体積の＞５０％減少と共に部分的な減少を達成し、維持した。顕著な毒性のマーカーとしての体重減少は、いかなる処置グループにおいても観察されなかった。
観察された応答がＦＧＦＲ３阻害と相関関係にあることを示すために、マウスを４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンを最後に投薬した４時間後に殺し、腫瘍をＦＧＦＲ３ホスホリル化のインビボ阻害の分析のために収集した。ＦＧＦＲ３を腫瘍細胞溶解物から免疫沈降させ、発現レベルおよびホスホリル化レベルを免疫ブロット法で決定した。ＦＧＦＲ３のインビボ阻害を観察し、ＦＧＦＲ３の完全な阻害は６０ｍｇ／ｋｇ用量で起こった。ＦＧＦＲ３ホスホリル化の阻害は用量依存であり、抗−腫瘍応答と相関関係にあった。
それぞれの動物由来の腫瘍の組織病理学試験は、プラセボコントロールと比較して、薬物処置されたマウスにおいて腫瘍が減少するという観察結果を支持した。薬物処置されたマウス由来の腫瘍は、大きな面積の腫瘍壊死を示した。増殖抗原Ｋｉ−６７の発現および切断カスパーゼ３についての免疫組織化学は、４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンが細胞増殖および誘発されるアポトーシスを阻害することを示した。これらの発見は、インビボで４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンが細胞増殖抑制性応答および細胞毒性応答の両方をインビボで誘発し、ＦＧＦＲ３を発現する腫瘍を退縮させることを示唆する。
（考察）
ＭＭにおける再発性細胞遺伝学的異常の同定および転座パートナーの特性決定は、新規な分子標的を同定し、この全体的に致命的な疾患のための分子標的治療についての潜在能力をあらわす。Ｋｕｅｈｌ，Ｗ．Ｍ．ｅｔ ａｌ，Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｃａｎｃｅｒ，２００２；２：１７５−１８７；ａｎｄ Ｃｈｅｓｉ，Ｍ．ｅｔ ａｌ，Ｎａｔ．Ｇｅｎｅｔ．，１９９７；１６：２６０−２６５。ＭＭ保有者の新規に診断された症例のほぼ２０％で、ＩｇＨ−ＭＭＳＥＴハイブリッド転写の存在によって検出されるようなｔ（４；１４）転座（Ｓａｎｔｒａ，Ｍ．ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，２００３；１０１：２３７４−２３７６）、その存在が、一般的に予後不良と関連することが報告されている。Ｆｏｎｓｅｃａ，Ｒ．ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，２００３；１０１：４５６９−４５７５；Ｋｅａｔｓ，Ｊ．Ｊ．ｅｔ ａｌ，Ｂｌｏｏｄ，２００３；１０１：１５２０−１５２９；Ｍｏｒｅａｕ，Ｐ．ｅｔ ａｌ，Ｂｌｏｏｄ，２００２；１００：１５７９−１５８３；ａｎｄ Ｃｈａｎｇ，Ｈ．ｅｔ ａｌ，Ｂｒ．Ｊ．Ｈａｅｍａｔｏｌ，２００４；１２５：６４−６８。ＦＧＦＲ３はこれらの症例の約７０％で発現し（Ｋｅａｔｓ，Ｊ．Ｊ．ｅｔ ａｌ，Ｂｌｏｏｄ，２００３；１０１：１５２０−１５２９；ａｎｄ Ｑｕｉｎｎ，Ｊ．Ｍ．ｅｔ ａｌ，Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ，１９９８；１３９：４４２４−４４２７）、患者の１０％（Ｉｎｔｉｎｉ，Ｄ．ｅｔ ａｌ，Ｂｒ．Ｊ．Ｈａｅｍａｔｏｌ，２００１；１１４：３６２−３６４）は、疾患進行を伴うＦＧＦＲ３の活性化変異を得る。
腫瘍形成に関係していると思われる遺伝的欠損の理解は、多くの癌の処置のための標的治療によって導かれる。Ｄｒｕｋｅｒ，Ｂ．Ｊ．ｅｔ ａｌ，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．， ２００１；３４４：１０３１−１０３７；Ｄｅｍｅｔｒｉ，Ｇ．Ｄ．ｅｔ ａｌ，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．，２００２；３４７：４７２−４８０；Ｓｌａｍｏｎ，Ｄ．Ｊ．ｅｔ ａｌ，Ｎ．Ｅｎｇｌ Ｊ．Ｍｅｄ．２００１；３４４：７８３−７９２；ａｎｄ Ｓｍｉｔｈ，Ｂ．Ｄ．ｅｔ ａｌ，Ｂｌｏｏｄ，２００４；１０３：３６６９−３６７６。最も顕著に、ＳＴＩ５７１によるＢＣＲ−ＡＢＬキナーゼ活性の阻害は、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）における主要な細胞遺伝学的な緩解を生じさせた。Ｄｒｕｋｅｒ，Ｂ．Ｊ．ｅｔ ａｌ，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．，２００１；３４４：１０３１−１０３７。ＳＴＩ５７１による消化管間質腫瘍における活性化されたｃ−Ｋｉｔの阻害はさらに、この化学耐性をもつ腫瘍に対して有効である。Ｄｅｍｅｔｒｉ，Ｇ．Ｄ．ｅｔ ａｌ，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．，２００２；３４７：４７２−４８０。それに加えて、Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（ＨＥＲ２／ｎｅｕを標的化するモノクローナル抗体）は、改良された化学治療応答を生じ、乳癌患者の生存度を高めた。Ｓｌａｍｏｎ，Ｄ．Ｊ．ｅｔ ａｌ．，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．２００１；３４４：７８３−７９２。急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）におけるＦＬＴ３を標的化する同様のキナーゼ阻害ストラテジーはさらに、フェーズＩＩ臨床トライアルの期待できる結果を示す。Ｓｍｉｔｈ，Ｂ．Ｄ．ｅｔ ａｌ，Ｂｌｏｏｄ，２００４；１０３：３６６９−３６７６。ｔ（４；１４）骨髄腫におけるＦＧＦＲ３阻害の前臨床研究は、同様に、標的治療のためのもっともらしい候補としてこのＲＴＫを同定した。ＦＧＦＲ３、ＰＤ１７３０７４およびＳＵ５４０２の２個のアンタゴニストは、突然変異ＦＧＦＲ３を発現するＭＭ細胞の増殖を阻害し、アポトーシスを誘発した。Ｔｒｕｄｅｌ，Ｓ．ｅｔ ａｌ，Ｂｌｏｏｄ，２００４；１０３：３５２１−３５２８；Ｐａｔｅｒｓｏｎ，Ｊ．Ｌ．ｅｔ ａｌ，Ｂｒ．Ｊ．Ｈａｅｍａｔｏｌ，２００４；１２４：５９５−６０３；ａｎｄ Ｇｒａｎｄ，Ｅ．Ｋ．ｅｔ ａｌ，Ｌｅｕｋｅｍｉａ，２００４；１８：９６２−９６６。それとともに、これらの研究がこれらの患者のためのＦＧＦＲ３阻害剤の臨床開発を支持する。残念なことに、ＰＤ１７３０７４は、臨床のための候補化合物ではなく、ＦＧＦＲ３を阻害することが必要とされるＳＵ５４０２のＩＣ５０は、インビボでは達成されないようである。
４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンは、ＦＧＦＲ３およびＩＩＩ類、ＩＶ類およびＶ類のＲＴＫ（ＦＬＴ３、ｃ−Ｋｉｔ、ｃ−Ｆｍｓ、ＰＤＧＦＲおよびＶＥＧＦＲを含む）の強力な阻害剤である。この研究において、４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンは、ＷＴおよび突然変異ＦＧＦＲ３１７チロシンキナーゼの両方の非常に活性な阻害剤であることが示された。広いスペクトルのＲＴＫに対するこの阻害剤の活性は、４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンがキナーゼドメインに対して結合するために必要なそれほどストリンジェントでない構造を必要とし、多くのＦＧＦＲ３突然変異に対する４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンの保持された活性と一致することを暗示する。４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オン処置は、ＦＧＦＲ３を保有するＭＭ細胞株および原発性患者サンプルのアポトーシス性細胞死を選択的に誘発した。ＭＭを処置するための４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンの潜在的な臨床適用はさらに、異種移植マウスモデルを用いて確認され、４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オン処置は、インビボでＦＧＦＲ３活性を阻害し、腫瘍退縮を生じ、疾患進行を有意に減少させた。
このデータは、ＦＧＦＲ３が、ＭＭ細胞において４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンの一次標的であることを示唆するけれども、ＯＰＭ２細胞がより選択的なＦＧＦＲ３阻害剤ＰＤ１７３０７４に対して応答しない場合に、ＯＰＭ２細胞がこの広く活性なＲＴＫ阻害剤に対して応答することを注記することが重要である。Ｔｒｕｄｅｌ，Ｓ．ｅｔ ａｌ，Ｂｌｏｏｄ，２００４；１０３：３５２１−３５２８；ａｎｄ Ｐａｔｅｒｓｏｎ，Ｊ．Ｌ．ｅｔ ａｌ．，Ｂｒ．Ｊ．Ｈａｅｍａｔｏｌ，２００４；１２４：５９５−６０３。この細胞株は、高い基本レベルのＡＫＴホスホリル化（データは示されない）および２対立遺伝子のＰＴＥＮ欠失によって特徴付けられる。本願発明者らの結果と一致して、Ｇｒａｎｄ ｅｔ ａｌ．は、ＯＰＭ２細胞において複数標的ＲＴＫ阻害剤、ＳＵ５４０２が細胞毒性応答を誘発する一方、ＰＤ１７３０７４はアポトーシスを誘発できないことを示した。Ｇｒａｎｄ，Ｅ．Ｋ．ｅｔ ａｌ．，Ｌｅｕｋｅｍｉａ，２００４；１８：９６２−９６６。これらの発見はさらに、４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンが、すでに定義されているように、骨髄腫細胞の生存能力に重要な他の標的を標的化する可能性を高め、疾患進行中にいくらか失われることの証明を与えるさらなる適合性を有する事実を挙げ、それ故に、他の下流シグナルメディエーターによって置き換えられてもよい事実を挙げる。
後者の点を考慮に入れて、ｔ（４；１４）骨髄腫におけるＦＧＦＲ３の臨床的証拠が、ｄｅｒ（１４）染色体がいくつかの骨髄腫患者において失われる観察によって疑問視されることを注記すること、ＦＧＦＲ３が重要ではなく、ＭＭＳＥＴがＭＭにおけるｔ（４；１４）の真の随時標的であることを注記することが重要である。Ｋｅａｔｓ，Ｊ．Ｊ．ｅｔ ａｌ，Ｂｌｏｏｄ，２００３；１０１：１５２０−１５２９；ａｎｄ Ｉｎｔｉｎｉ，Ｄ．ｅｔ ａｌ，Ｂｒ．Ｊ．Ｈａｅｍａｔｏｌ，２００１；１１４：３６２−３６４。さらに、モデル系における研究は、ＷＴ ＦＧＦＲ３が優性的に移されず、形質転換を相補するさらなる協力的な発癌事象が必要であることを示す。Ｃｈｅｓｉ，Ｍ．ｅｔ ａｌ，Ｂｌｏｏｄ，２００１；９７：７２９−７３６；ａｎｄ Ｌｉ，Ｚ．ｅｔ ａｌ，Ｂｌｏｏｄ，２００１；９７：２４１３−２４１９。しかし、上述に示されるデータは、ＦＧＦＲ３を断定的に発現する原発性ＭＭ細胞がさらなる遺伝的事象の存在にもかかわらず、生存のためのこの経路に依存したままであることを示す。それ故に、ＦＧＦＲ３がＴＡＣＣ３およびＭＭＳＥＴと協力して作用し、ＢＭ微小環境において発現するＦＧＦリガンドによる刺激を介する生存シグナルを与えるようである。これらの線に沿って、ＦＬＴ３変異およびＦＬＴ３の高レベル発現は、ＭＬＬ（ＭＭＳＥＴと類似の遺伝子）も発現される急性リンパ球性白血病において記載される。Ａｒｍｓｔｒｏｎｇ，Ｓ．Ａ．ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ，２００３；３：１７３−１８３。これらの観察は、チロシンキナーゼとトリスロラックス遺伝子との間の相補性の可能な機構を示唆する。
ＭＭ細胞株におけるＦＧＦＲ３阻害の研究は、構成的に活性なレセプターを発現する細胞株のみがＦＧＦＲ３阻害に応答することを示した。Ｔｒｕｄｅｌ，Ｓ．ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，２００４；１０３：３５２１−３５２８；ａｎｄ Ｐａｔｅｒｓｏｎ，Ｊ．Ｌ．ｅｔ ａｌ，Ｂｒ．Ｊ．Ｈａｅｍａｔｏｌ，２００４；１２４：５９５−６０３。このことは、ＢＭ微小環境で独立して増殖するＭＭ細胞株を用いることの制限を強調し、増殖および生存のための間質によって産生されるＦＧＦにもはや依存しない。それ故に、原発性患者の物質を用いる研究は重要である。４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンにさらされた原発性ＭＭ細胞によって示される細胞毒性効果は、この薬物がＷＴまたは突然変異ＦＧＦＲ３のいずれかを発現する患者において有効な治療であることを示す。それにもかかわらず、原発性ＭＭ細胞において観察される４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンに対する中程度および遅延性の細胞毒性応答は、ＷＴ ＦＧＦＲ３の阻害がアポトーシス促進シグナルを誘発しないが、強力な抗−アポトーシスシグナルを引き出すことを暗示し得る。それ故に、最も効果的な４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンの使用は、化学治療薬剤、例えば、ＫＭＳ１１細胞において示されるようなデキサメタゾンと組み合わせた使用であると予想される。
腫瘍増殖を支持するＢＭ微小環境の重要性は、徐々に明らかにされてきている。Ｍｉｔｓｉａｄｅｓ，Ｃ．Ｓ．ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ，２００４；５：２２１−２３０；ａｎｄ Ｄａｌｔｏｎ，Ｗ．Ｓ．ｅｔ ａｌ，Ｓｅｍｉｎ Ｈｅｍａｔｏｌ．，２００４；４１：１−５。特に、サイトカイン、例えば、ＩＬ−６およびＩＧＦ−１、およびＢＭＳＣとの直接的な相互作用は、薬物耐性を与えるために示された。インビトロ実験は、これらのパラクリン因子が４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンの抗−腫瘍効果を超えることができないことを示す。その標的プロフィールが与えられ、４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンはさらに、腫瘍増殖を支持する関係を有するＢＭ内の宿主から誘導される腫瘍に関連する細胞に影響を与える場合がある。４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンは、内皮細胞マイグレーションおよびフィブリンゲル上の管形成を含むいくつかの脈管形成アッセイにおいて、および生体外ラット大動脈輪アッセイにおいて強力な抗−脈管形成活性を示した。Ｗｉｅｓｍａｎｎ，Ｍ．ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ ＡＡＣＲ，２００３；４４：９３４ａ。これに一致して、４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンで処置されたマウス由来の腫瘍は、コントロールと比較される場合、血管が少なかった（データは示されない）。４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンがさらにＣＳＦ−１Ｒ活性、Ｍ−ＣＳＦについてのレセプター、ＭＭにおける骨疾患の病原論に関与し得る破骨細胞活性化因子を阻害することを示した。それと共に、このデータは、４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンがＢＭ環境およびＢＭ微小環境内のＭＭ細胞を直接的に強力に標的化し得ることを示唆する。
まとめると、４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンは、ｔ（４；１４）骨髄腫を処置するためのＦＧＦＲ３の新規および強力な低分子阻害剤をあらわす。ＭＭ細胞株および原発性患者サンプルについての４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンの細胞毒性効果、およびＢＭ環境を好適に調整するための能力を示唆する標的プロフィールは、この不良診断グループにおいて、特に併用療法において有効な治療法であるという予測を導く。この治療ストラテジーの最終的な成功は、ｔ（４；１４）ＭＭの処置の４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンの効力を評価するために進行中である臨床試験の結果を待つ。
多くの４−アミノ置換キノリノンベンズイミダゾリル化合物、それらの薬学的処方物の調製、およびそれらの塩およびそれらの互変異性体の記載は、以下の米国特許、米国特許出願、米国仮出願（これらのそれぞれは、本明細書中にその全体が記載されているかのように全ての目的のために、本明細書中にその全体が参考として組み込まれる）に記載される：米国特許第６，６０５，６１７号；米国特許出願第１０／６４４，０５５号；米国特許出願第１０／７０６，３２８号；米国仮出願第６０／５２６，４２６号；米国仮出願第６０／５１７，９１５号、および米国仮出願第６０／５４６，０１７号。
本発明に従う有機化合物が、互変異性の現象を示し得ることが理解されるべきである。本明細書内の化学構造は、同時に可能な互変異性形態の１つを表すことができているのみであるため、本発明が記載された構造の任意の互変異性形態を包含することが理解されるべきである。例えば、式ＩＩＩＢの化合物は、以下の１つの互変異性体、互変異性体ＩＩＩＢａを用いて示される：
Figure 0004890255
 式ＩＩＩＢの化合物の他の互変異性体、互変異性体ＩＩＩＩＢｂおよび互変異性体ＩＩＩＩＢｃは以下に示される：
Figure 0004890255
 本明細書中に引用される全ての文献または参考文献は、本明細書中に完全に記載されているかのように全ての目的のために、その全体が参考として本明細書に組み込まれる。
本発明は、本明細書中に記載される説明のための実施形態に限定されないが、特許請求の範囲内にあるようなすべてのこのような形態を包含することが理解される。
図１は、４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンが、ＫＭＳ１１、ＯＰＭ−２、およびＨ９２９を含む複数の骨髄腫細胞株の増殖を阻害することを示すグラフである。 図２は、４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンが、ＫＭＳ１１細胞中０．５μＭでＦＧＦＲ３ホスホリル化を阻害することを示すウェスタンブロットである。 図３Ａ，３Ｂ、および３Ｃは、４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンが、ＫＭＳ１１細胞中０．５μＭで（図３Ａ）、ＯＰＭ−２細胞中０．１μＭで（図３Ｂ）ＥＲＫホスホリル化を阻害することを示し、Ｈ９２９細胞中５μＭまででＥＲＫホスホリル化に全く効果がないことを示す（図３Ｃ）ウェスタンブロットである。 図３Ａ，３Ｂ、および３Ｃは、４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンが、ＫＭＳ１１細胞中０．５μＭで（図３Ａ）、ＯＰＭ−２細胞中０．１μＭで（図３Ｂ）ＥＲＫホスホリル化を阻害することを示し、Ｈ９２９細胞中５μＭまででＥＲＫホスホリル化に全く効果がないことを示す（図３Ｃ）ウェスタンブロットである。 図３Ａ，３Ｂ、および３Ｃは、４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンが、ＫＭＳ１１細胞中０．５μＭで（図３Ａ）、ＯＰＭ−２細胞中０．１μＭで（図３Ｂ）ＥＲＫホスホリル化を阻害することを示し、Ｈ９２９細胞中５μＭまででＥＲＫホスホリル化に全く効果がないことを示す（図３Ｃ）ウェスタンブロットである。 図４は、ＫＭＳ１１細胞が種々の濃度で４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンと共にインキュベートされた場合の、アネキシンＶＰＥ染色によって測定される場合のＫＭＳ１１細胞のアポトーシスを示すグラフである。 図５は、４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンが、細胞と共に７２時間インキュベートされた場合、種々の濃度でＫＭＳ１１細胞の細胞サイクルに軽度の影響を与えるが、アポトーシスは誘発しないことを示すグラフである。 図６は、ＯＰＭ−２細胞が種々の濃度で４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンと共にインキュベートされた場合の、アネキシンＶＰＥ染色によって測定される場合のＯＰＭ−２細胞のアポトーシスを示すグラフである。 図７は、４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンが、細胞と共に７２時間インキュベートされた場合、種々の濃度でＯＰＭ−２細胞の細胞サイクルに軽度の影響を与えるが、アポトーシスは誘発しないことを示すグラフである。 図８は、４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンが、細胞と共にインキュベートされた場合、種々の濃度でＨ９２９細胞の細胞サイクルに軽度の影響を与える〜全く影響を与えないことを示すグラフである。 図９は、マウス骨髄芽球性細胞株Ｍ−ＮＦＳ−６０のＭ−ＣＳＦにより媒介される増殖が、細胞が４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンと共にインキュベートされた場合に阻害されることを示すグラフである（ＥＣ５０は２２０ｎＭ）。 図１０は、４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンがＦＧＦＲを発現するＢ９細胞の生存能力を阻害するが、その親のインターロイキン−６−（ＩＬ−６）刺激された細胞の生存能力を阻害しないことを示すグラフである。値は、４個の独立した実験の平均標準偏差をあらわす。 図１１は、アネキシンＶ結合およびヨウ化プロピジウム排除のフローサイトメトリーアッセイと関連する、種々のヒト骨髄腫細胞株におけるアポトーシスを示すグラフである。ＫＭＳ１１、ＫＭＳ１８、ＯＰＭ２、Ｈ９２９、および８２２６細胞は、ビヒクル（網掛けなしの棒）；１００ｎＭの４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オン（影付きの棒）；および５００ｎＭの４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オン（斜線の棒）と共にインキュベートされた。値は、４個の独立した実験の平均＋／−標準偏差をあらわす。 図１２Ａ〜１２Ｄは、４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンがＦＧＦにより媒介されるＥＲＫ１／２ホスホリル化を阻害し、ＦＧＦＲ３を発現する原発性の複数の骨髄腫細胞における細胞毒性を誘発することを示すグラフである。図１２Ａは、ＦＧＦＲ３抗体で染色された細胞（白色）またはウサギの免疫前血清（黒色）（次いでヤギ抗−ウサギＦＩＴＣを用いて染色）のフローサイトメトリーを用いて得られたグラフを示す。骨髄腫細胞は、ＣＤ１３８ラベリングによって同定された。図１２Ｂは、ＦＧＦの非存在下（黒色）または存在下（−−）または４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オン５００ｎＭと共に２時間前インキュベートし、次いでａＦＧＦで刺激された原発性骨髄腫細胞のフローサイトメトリーを用いて得られたグラフを示す。ＥＲＫ１／２ホスホリル化は、フローサイトメトリーを用いて評価された。図１２Ｃおよび１２Ｄは、ＤＭＳＯの存在下（図１２Ｃ）または４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オン５００ｎＭの存在下（図１２Ｄ）、増殖培地中で培養された原発性骨髄腫細胞のフローサイトメトリーを用いて得られたグラフである。細胞は７日間後に集められ、アネキシンＶ−ＦＩＴＣを用いて染色され、フローサイトメトリーを用いて分析された。骨髄腫細胞は、ＣＤ３８＋＋／ＣＤ４５−ラベリングによって同定された。ＣＤ３８＋＋／ＣＤ４５−／アネキシンＶ＋細胞の全割合は、右上の四分区間に示される。 図１２Ａ〜１２Ｄは、４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンがＦＧＦにより媒介されるＥＲＫ１／２ホスホリル化を阻害し、ＦＧＦＲ３を発現する原発性の複数の骨髄腫細胞における細胞毒性を誘発することを示すグラフである。図１２Ａは、ＦＧＦＲ３抗体で染色された細胞（白色）またはウサギの免疫前血清（黒色）（次いでヤギ抗−ウサギＦＩＴＣを用いて染色）のフローサイトメトリーを用いて得られたグラフを示す。骨髄腫細胞は、ＣＤ１３８ラベリングによって同定された。図１２Ｂは、ＦＧＦの非存在下（黒色）または存在下（−−）または４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オン５００ｎＭと共に２時間前インキュベートし、次いでａＦＧＦで刺激された原発性骨髄腫細胞のフローサイトメトリーを用いて得られたグラフを示す。ＥＲＫ１／２ホスホリル化は、フローサイトメトリーを用いて評価された。図１２Ｃおよび１２Ｄは、ＤＭＳＯの存在下（図１２Ｃ）または４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オン５００ｎＭの存在下（図１２Ｄ）、増殖培地中で培養された原発性骨髄腫細胞のフローサイトメトリーを用いて得られたグラフである。細胞は７日間後に集められ、アネキシンＶ−ＦＩＴＣを用いて染色され、フローサイトメトリーを用いて分析された。骨髄腫細胞は、ＣＤ３８＋＋／ＣＤ４５−ラベリングによって同定された。ＣＤ３８＋＋／ＣＤ４５−／アネキシンＶ＋細胞の全割合は、右上の四分区間に示される。 図１３Ａおよび１３Ｂは、４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンが、インターロイキン−６（ＩＬ−６）、インスリン増殖因子（ＩＧＦ−１）、および骨髄間質細胞（ＢＭＳＣ）の存在下で、ＫＭＳ１１細胞の生存能力を阻害することを示すグラフである。図１３Ａは、ＫＭＳ１１細胞が、５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ６または５０ｎｇ／ｍＬのＩＧＦ−１の存在下または非存在下で、ＤＭＳＯと共に（網掛けなしの棒）；１００ｎＭの４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンと共に（影付きの棒）；および５００ｎＭの４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンと共に（斜線の棒）と共に培養された、グラフである。細胞の生存能力は、４８時間後にＭＴＴアッセイによって評価された。図１３Ｂは、ＢＭＳＣ単独またはＫＭＳ１１と共に、ＤＭＳＯと共に（網掛けなしの棒）；１００ｎＭの４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンと共に（影付きの棒）；および５００ｎＭの４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンと共に（斜線の棒）と共に培養された、グラフである。生存能力は、９６時間後にＭＴＴアッセイによって評価された。データは、４回の培養物の＋／−標準偏差の平均をあらわす。 図１３Ａおよび１３Ｂは、４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンが、インターロイキン−６（ＩＬ−６）、インスリン増殖因子（ＩＧＦ−１）、および骨髄間質細胞（ＢＭＳＣ）の存在下で、ＫＭＳ１１細胞の生存能力を阻害することを示すグラフである。図１３Ａは、ＫＭＳ１１細胞が、５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ６または５０ｎｇ／ｍＬのＩＧＦ−１の存在下または非存在下で、ＤＭＳＯと共に（網掛けなしの棒）；１００ｎＭの４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンと共に（影付きの棒）；および５００ｎＭの４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンと共に（斜線の棒）と共に培養された、グラフである。細胞の生存能力は、４８時間後にＭＴＴアッセイによって評価された。図１３Ｂは、ＢＭＳＣ単独またはＫＭＳ１１と共に、ＤＭＳＯと共に（網掛けなしの棒）；１００ｎＭの４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンと共に（影付きの棒）；および５００ｎＭの４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンと共に（斜線の棒）と共に培養された、グラフである。生存能力は、９６時間後にＭＴＴアッセイによって評価された。データは、４回の培養物の＋／−標準偏差の平均をあらわす。 図１４は、４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンが、Ｍ−ＮＦＳ−６０の増殖、２２０ｎＭのＥＣ５０を有するマウス骨髄芽球性細胞により誘導されるＭ−ＣＳＦ増殖を阻害することを示すグラフである。Ｍ−ＮＳＦ−６０細胞は、Ｍ−ＣＳＦの存在下またはＧＭ−ＣＳＦの非存在下で、４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンを段階的に希釈して、それと共にインキュベートされた。生存能力のある細胞の数は、Ｃｅｌｌ Ｔｉｔｅｒ−ＧｌｏＴＭアッセイを用いて７２時間後に評価された。 図１５は、４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンが、ＦＧＦＲ３ホスホリル化を阻害し、インビボで抗腫瘍効果を示すことを示すグラフである。腫瘍サイズが２００ｍｍ３に到達した場合、マウスはランダムに割り当てられ（８〜１０匹／グループ）、マウスは、ビヒクル単独または種々の用量の４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンを２１日間経口胃管栄養法によって受けた。このグラフは、処置日数に対する関数とした腫瘍体積（平均＋／−標準偏差）を示す。

Claims (10)

  1. ４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンの乳酸塩またはその互変異性体。
  2. 前記塩が一乳酸塩または二乳酸塩を含む、請求項１の乳酸塩またはその互変異性体。
  3. 前記塩の２２℃での水中の溶解度が３０ｍｇ／ｍＬより大きい、請求項１の乳酸塩またはその互変異性体。
  4. 前記塩が、Ｄ乳酸塩、Ｌ乳酸塩、またはそれらの混合物を含む、請求項１の乳酸塩またはその互変異性体。
  5. 前記塩が結晶性であり、平板形状の結晶を含む、請求項１の乳酸塩またはその互変異性体。
  6. 請求項１の乳酸塩またはその互変異性体の錠剤を含む組成物。
  7. 請求項１の乳酸塩またはその互変異性体を調製する方法であって、該方法は、以下：
    （ａ）４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンまたはその互変異性体を溶媒または溶媒の混合物中に懸濁する工程；
    （ｂ）乳酸と該４−アミノ−５−フルオロ−３−［６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オンまたは該その互変異性体とを接触させて混合物を提供する工程；
    （ｃ）該混合物を加熱する工程；
    （ｄ）該混合物を冷却する工程；および
    （ｅ）該塩を単離する工程
    を包含する、方法。
  8. 請求項１の乳酸塩またはその互変異性体および薬学的に受容可能なキャリアを含む、薬学的処方物。
  9. 血管内皮増殖因子レセプターチロシンキナーゼの阻害剤を必要とする患者を処置するための組成物であって、該組成物は、有効量の請求項１の乳酸塩またはその互変異性体を含む、組成物。
  10. 請求項１に記載の乳酸塩またはその互変異性体の有効量を含む、それを必要とする患者における腫瘍増殖を阻害するため、またはがん患者を処置するための組成物。
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