HU229414B1 - Kinazolin-származékok mint VEGF-inhibitorok, eljárás az elõállításukra, ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények és alkalmazásuk - Google Patents

Description

A találmány (I) általános képletű ki nazolin-szá mázé kokra és azok sóira vonatkozik - a képletben m értéke 1 és 3 közötti egész szám;

R¹ halogénatomot vagy 1-3 szénatomos alkilcsoportot jelent, és

R² (1-5 szénatomos alkil)-R³, (2-5 szénatomos alkenil)-R³ vagy (2-5 szénatomos alkinil)-R³ csoportot képvisel, amelyekben R³ adott esetben egy vagy két hidroxil-, halogén-, 1-4 szénatomos alkil-, hidroxi-(1-4 szénatomos alkil)és/vagy 1-4 szénatomos alkoxi-szubsztituenst hordozó piperidin-4-il-csoportot képvisel;

és ahol bármely alkil-, alkenil- vagy alkinilcsoporthoz adott esetben egy vagy több hidroxil-, halogén- és/vagy amino-szubsztituens kapcsolódhat.

A fenti vegyületek előállítására szolgáló eljárások, a vegyűleteket tartalmazó gyógyszerkészítmények és a vegyületek alkalmazása is a találmány tárgyát képezi.

I

í » ♦ ««

Képviselő: Dr.Jalsovszky Györgyéé ügyvéd Társ-képviselő: Dr. Miskoiczi Mária ügyvéd

·<ί?\ a e § $ ; :^L a -y'raWsí

Ϊ W&

58/1200

KINAZOLIN-SZARMAZÉKOK MINT VEGF-INHÍBlTOROK, ELJÁRÁS AZ ELŐÁLLÍTÁSUKRA, EZEKET TARTALMAZÓ GYÓGYSZERKÉSZÍTMÉNYEK ÉS ALKALMAZÁSUK

AS i RAZENECA AB, S-151 85-Sodorta Ije, Svédország

Fal találók:

HENNEQ.U1N L-aarent Francois André, Z.L La Pompellé, Solté postale 1050. F-51889 Réims Cedex 2, Franciaország

STORES Elaine Sopbie Elizabefh,, M-eresid©,. Alderley Fark, Macclesfield, ^:Chesbire SK10 4TG, Nagy-Britannia

THOMAS Andrew Peter,. Meredd©, Alderley Park, Mncdesfielő, CheshireSKlO 4TG, Rsgy-Bniannía

A bejelentés napja:	2000. 1	1. 01.
Elsőbbségei:	1999. 1	1. 05. (EP,	99402759.7}
	1999. 1	1. 19, (EP,	99402877.7}

A nemzetközi bejelentés száma: PCT/GBOÖ/04181

A nemzetközi közzététel száma: WO 01/32851 A1 φφ

A találmány kinazoíin-szármaízékokra, azok előállítási eljárásaira, az azokat hatóanyagként tartalmazó gyógyászati készítményekre, továbbá azoknak melegvérűeken (köztük embereken) antí-engidgén és/vagy érpermeabíiitást csökkentő hatást kifejtő gyógyszerek gyártásában való felhasználására vonatkozik.

A normális angiogenezis számos biológiai folyamatban, így például az embriófejlődésben, a sebgyógyulasban és a nőivarú szaporítószervek működésének több komponensében fontos szerepet játszik. A namklvánf vagy kóros angiogenezis ezzel szemben számos betegség, Igy a dlabetesz-okozta retlnahánfalmak, a pikkelysömör, a rák, a reumás artritisz, a faggyúdaganat, a Kaposi-szarkőma és a vérér-daganat kísérő tünete {Fan és mtsai: Trenös PharmacoL Scl. 16. 57-86 (1995), Folkman; Natúré Medicina 1, 27-31 (1995)). Az érpermeabilifás megváltozása normális és kóros élettani folyamatokban egyaránt szerepet játszhat [Cüliínan-Bove és rnt-saí: Endocrinology 133, 329-837 (1993/, Senger és mtsai: Cancer and Mefástásis- Rev'iews 12, 303-324 (1993)). Több pokpeptídről kimutatták már, hogy in vitro körülmények között serkentik a belhámsejtek növekedését. Ezek közé tartozik a savas és a bázikus fíbroblaszt növekedési faktor (aFGF és bFGF), valamint az-érrendszeri belhám-növekedési faktor (VEGE). Minthogy a VEGE receptorai korlátozottan fejeződnek ki, a VEGE növekedési faktor aktivitása - az FGF-ekéveí ellentétben - helhámsejtekre nézve viszonylag specifikus, A jelenlegi kutatások eredményei azt Igazolták, hogy a VEGE mind a normái és a kóros angiogenezlsnek [Jakomén és mtsai: Endocrinology 133, 848-859 (1993), Ko-l-cb és rntsal: Breast Cancer Research and Treatment 36, 139-155 (1995)), mind pedig az. érpeoneabilitásnak [Connolly és mtsai: J. Bioi. Chem. 2.64, 26017-20024 (1989)] fontos stimulálom. A VEGE hatásának antagonizálása - ami a VEGE antitesttel való rnaszkirozásával érhető- el - a tumomövekedés gátlását eredményezheti {Kim és mtsai; Natúré 362, 841-844 (1993)).

A receptor tlroztn kinázok (ETK-k) fontos szerepet játszanak abban a folyamatban, ahogy a biokémiai jelzések áthatolnak a sejtek plazmamembránján. Ezek a *ί *« * * * · «. « V « « » * * * X » * ♦ ♦** X « * -* * » » » X *» *« ♦**« « «♦ íranszmembrán molekulák jellemzően egy sejten kívüli ligandum-megkotő domént tartalmaznék, amely egy, a plazmamembránban lévő szegmensen keresztül egy sejten belüli tirozin kinéz dornénhoz kapcsolódik. Ha a receptorhoz ligandum· kötődik, ez a receptor-függő tirozin kinéz aktivitás serkentését eredményezi, és ennek eredményeként beindul a receptorban és a más sejten belüli molekulákban lévő tirozin maradékok. foszfortleződése A tirozin fcszforilezettségében beálló változások jelzéssorozatot Indítanak be,. ami egy sor sejt-választ idéz elő.. Az aminosav-szekvencíák homológiája alapján jelenleg legalább 19 különböző RTK alcsoportot azonosítottak. Ezen alcsoportok egyikét az íms-szerö tirozin kinéz receptor .(Fit vagy Fid), a kinéz lőszert domént tartalmazó receptor (KOR vagy más jelölés szerint Flk-1)·, és egy mési'k fms-szerö- tirozin kinéz receptor (FIM): alkotja. A felsorolt rokon RYK-k közül kettőről, az Fit-ről és a KDR-ről kimutatták, hogy nagy aktivitással kötik meg a VEGF-t (De Vries és mlsaie. Science 255, 989-991 (1992), Termán és mtsaí: Bioehem. Biophys. Rés. Comm 18?, í 579-1588 (1992)]. A VEGF-rsek a fenti,, heterolog sejtekben kifejeződő receptorokhoz való kötődése révén megváltozik a sejtfehérjék és a kalcium-fluxus tirozin maradékainak, foszforílezeítsége.

A WC) 97/30035 és WO 98/13354 sz. nemzetközi közzétételi irat a VEGE receptor tirozin kinázzal szemben inhibitor hatással rendelkező kinazolin-származékokát ismertet. Az ott ismertetett vegyületek a VEGF receptor tirozin kinázzal szemben hatásosak, és bizonyos mértékű EGE receptor tirozin kináz-ellenes hatásuk is van.

.A találmány szerinti vegyületek a WO- 97/30035 és WO $18/13354 sz. nemzetközi közzétételi iratban általánosságban ismerteteti széles vegyületkörbe tartoznak. Azt tapasztaltuk, hogy a találmány szerinti vegyületek kitűnő gátló hatást fejtenek ki a VEGF receptor tirozin kinézzél szemben. A találmány szerinti vegyületek vizsgáit képviselői in vívó körülmények között egereken egy sor tumor-ojtvánnyal szemben hatásosaknak bizonyultak. A találmány szerinti vegyületek patkányokon 14 napon keresztül vizsgálva Igen előnyős toxikológiai profilt mutattak.

» * * * χ χ » * **♦ X ♦ *χχ ***·>♦ Χ· » ** «* <e««> » »«

A találmány szerinti vegyöletek gátolják a VEGF hatásait, ami az anglogenezlssel és/vagy fokozott érpermeabilitással járó· betegségek és rendellenességek, például rák, cukorbetegség, pikkelysömör, reumás artntisz, Kaposl-szarkómo, vérérdaganat, akut és krónikus vesebántatmak, íaggyúdaganat, artériás resztenóxis, autoimmun betegségek, akut gyulladások, hegtúiképződések és adhézlők, méhbelhártya-gyotladás, disxíunkctortoks méhvérzés és retinaér-burjáozássel kapcsolatos szembetegségek kezelésében hasznosítható tulajdonság.

A találmány szerinti vegyületek a VEGF receptor tirozin kinézzél szemben jó hatást fejtenek ki, és bizonyos mértékű EGF receptor tirozin kináz-ellenes halasuk Is van. Továbbá, a találmány szerinti vegyületek egyes képviselőinek VEGF receptor tirozin kináz-ellenes aktivitása lényegesen meghaladja azok EGF receptor tirozin kináz-ellenes vagy FGF Rí receptor tirozin kináz-ellenes halasát Noha találmányunkat nem kívánjuk elméleti megfontolásokhoz kötni, várható, hogy ezek a vegyületek értékes hatást fejthetnek ki például a VEGF-fei kapcsolatos tumorok {közölük elsősor bán a VEGF-függöen növekedő tumorok) kezelésében. Várható az is, hogy ezek a vegyületek értékes hatást fejthetnek ki VEGF-fei és EGF-íeí egyaránt kapcsolatos tumorok kezelésében, különösen ha a beteg olyan állapotban szenved, ahol a tumorok növekedése egyaránt függ a VEGF-től és az EGF-töt

Az egyik szempont szerint tehát a találmány (u általános képletű kinazo-iin-származékokra, azok sálra és azok etögyógyszer-származékalra vonatkozik - a képletben m értéke 1 és 3 közötti egész szám;

R^! halogénatomof vagy 1-3· szénatomos alklicsoportot jelent, és fV (1-5 szénatomos atkil)-RT (2-5 szénatomos aikenílj-R⁵ vagy (2-S szénato·) _ <· mos alkinil)-R ' csoportot képvisel· amelyekben R adott esetben egy vagy két hidroxil-, balogén-, 1-4 szénatomos alkth, hldroxt-(1-4 szénatomos alkil)- és/vagy 1-4 szénatomos alkoxnszubsztltuensf hordozó piperidin-4-ihcsoportot képvisel· * ♦»» * * * * * Φ * ** ♦* * «« és ahof bármely alkil-, aikenii- vagy alkinllcsoportboz adott esetben egy vagy több hidroxil·. halogén- és/vagy amino-szubsztituens kapcsolódhat.

Az (I) általános képletü vegyületekben m értéke előnyösen 2 lehet.

Az (R '),_n csoporttal szubszíiíuált fenilcsoport előnyösen 2fluor-4-metii~fenll·, 4~k lör-2,6-difluor-fenil-. 4- bróm-2,6-dífIuor~fen.il·, 4-kiór-2-fluor-feniI- vagy 4-brdm--2-íIuör-fenll-csoporf lehet

Az (RX, csoporttal szubsztftuáít fenilcsoport célszerűen 4-klór-2-11uor-fenllvagy 4bróm;-2:-:fluor~fenjl-csopod_! különösen előnyösen 4~bróm~2-fluor-fenil-esoport lehet.

Rá előnyösen (1-5 szénatomos alkiO-FP csoportot jelenthet, ahol R^J jelentése a fenti.

R' célszerűen 0 -3 szénatomos alksi}-R^J csoportot jelenthet, ahol R' jelentése a fenti.

R^z különösen előnyösen ρίροπ0ίη~4~Ιηη3θΙΝ-csoport lehet., ahol a pipebdlngyűröhöz adott esetben egy vagy két, a fentiekben meghatározott szuhsztituens. célszerűen egy vagy kei 1-4 szénatomos alkilcsoport kapcsolódhat. R' kiemelkedően előnyösen 1-η'!θί:ΙΙ-ρϊρβΓΐ0Ιη-4-ϋ-!ηοΙίΙ-σ5ορο0ο1 jelenthet.

Rgy további szempont szerint a találmány (II) általános képletü kinazdin-száb mazékokra, azok sóira és azok efögyógyszer-származékaira vonatkozik - a képletben ma értéke 1 és 3 közötti egész szám;

R^5<! helogénatomot vagy 1-3 szénatomos alkilesoportoí jeleni, es pl-5 szénatomos ellet)-R'\ (2-5 szénatomos alkeml)-R' vagy (2-5 szénatomos alkiníl)-R ' csoportot képvisel, amelyekben R”' jelentése a fenti.

A (II) általános képtető vegyületekben ma értéke előnyösen 2 lehet « « ** X « «

Az. csoporttal szubszíituált fenílcsoport előnyösen 2-tor-4~me$-fenil·, 4~kiór~2,6~difiuor-fenil-, 4~bróm-2,8^.IOmr-feníl-, 4-klár~2-fteör~fenil~ vagy 4-bróm-2~ -fluor-fenll-csoport tehet.

Az (R^1a)me csoporttal szubszli tűéit fenllcsoport célszerűen 4~klór-2~fiuör-íenll~ vagy 4-bróm>2-fluor>fenli-csoport, különösen előnyösen 4-bróm-2-floor~fenil-csoport tehet.

Ρ** előnyösen (1-5 szénatomos alkílj-R'¹ csoportot jelenthet, ahol R° jelentése a fenti.

R^<a célszerűen (1-3 szénatomos alkii}~R⁵ csoportot jelenthet, ahol R⁵Jelentése a fenti .

R^z® különösen előnyösen pipeddin-4-ll-metil-csoport lehet, ahol a plperidingyörűhöz adott esetben egy vagy két, a fentiekben meghatározott szubsztituens, célszerűen egy vagy két. 1-4 szénatomos alkiicsoport kapcsolódhat. R^z,i kiemelkedően előnyösen 1~mefil”piperiöin-4-ll-metikcsoporfot jelenthet.

A találmány szerinti vegyületek előnyös képviselői a következők: 4-(4-klór~2~fluor-anilino)-6-meiox!-7-(1~metil-pipehdln-4-il-metoxi)~kinazoiin,

4-'(2-fluor-4-metli~aniÍlno}-6-metoxl-7-(1-metii~pipeudin“4“il“metoxl)”kinazolin_! 4-(4-hrőm-2'-fluor~ahjllno)-6-metoxl-7“í1~metil-pipendln-4-ii“metoxi}-kinazolln, 4-(4-klór-2,6~difloor-anillno}-6-metoxi-7-(1-metil-piperidin“4~!l~metoxi)-kl.nazolin, 4~{4-0Γόηι~2₍8-0Ι71ηοΓ-οηίΙΙηο}-0~ηιβΙοχΙ-7~(1-ηΐδ1ίΙ-ρΙρβπ0Ιη-4~Ι1-^δΙοχΙ)-ΚΙη3ζοΙΙη, 4-(4-klór~2-floor-anllino)-6”metoxl-7-(pipendln-4-ÍI-mefoxl)~klnazolln, 4''(2-fluor“4“metH~ahliino}-6-metoxi-7“(plpeddin-4-ii-metoxi)-klnazoiin_; 4~(4-bróm~2~fluor-anilino)-6--metoxl-7-(pipeddln-4~ü-metoxí)-kinazohn, 4-(4-klőr~2,6-dÍfluor~anÍilno)-ő-metoxi-7-(piperidln-4-il~motoxi)-klnazolin, 4(4-brőm-2,8-dlfluor-anlllno)~ö-metoxi~7-(plperÍdÍn”4“ll“metöxh-klnazolin, és a felsorolt vegyületek sói, előnyösen a megfelelő hidrokiondok.

A találmány szerinti vegyületek célszerű képviselői a következők:

4-{4-klór~2-fluor-aoilino}-6~metoxl-7-(1-metll-piperidln“4~il~metoxl)-kinazolln,

4-(4-bróm-2-fluor-anilioo)-8-mafoxk7-(1-metll-plperídin-4-il-metoxi)-kinazolin,

4~(4~klór-2,6-difluor-anl1ino)-6-metoxi-7-(1~mefil-piperldin~4-il-rnetoxl}-kinazolin,

4~(4-bróm~2,6~difluor~anlfao}“6~metoxl-7-(1-metil-piperidin-4-il~metoxi)-kinazolln,

4-(4-kíór-2~fluor~aniliuo)-6-metoxi~7~(piperldln~4-il-metoxi}-kinazolin,

4~(4-ΡΓόιτ$-24ΙηοΓ~3ηΙΙίηο)-β^βΙοχ1~7-(ρ1ρ©ηόί^4ΰ^©1οχΙ)-&^ζοΙ1η,

4-(4-klör~2,ü-dlfÍnor~anllino}-S~metexi~7-(piperidin-4-il-metoxl)-kinazoiin,

4-{4-bróm-2,ő-diflüor-ⁱantl^:!no)-6metox!~7~{plperidlin~4--iimetoxl}-kinazofe, és a felsorolt vegyületek sók célszerűen a megfelelő bidrokloridok,

A találmány szerinti vegyületek különösen előnyös képviselői a következők: 4-(4-kiÓF2~fluor-anllinc)-ő-metcxi~7-{1~metil-pipertdin-4-sl-rnetoxi)-!<inazolin, ^{é-bróm^-flimr-anilinoj-ő-metoxi-T-Cí-metil^iperidín-é-il-meioxij-kinazölm, 4-(4-klór~2,S~dlfluor-anlllnö}-&~metöx 1-7-(1-Γηοΰί-ρΙρβΓΐ0Ιη-4-ί1-η·!θΙοχ1)~ΚίηαΖθΙΙη, 4-(4-'bróm-2,S-dlfiuor-'aniiinc)-6~:metoxl-7-'{1^:-meti;l-piperid:fn-4-íí-metoxl>kínazolin, és a felsorolt vegyületek sói, elsősorban a megfelelő bidrokloridok..

A találmány szerinti vegyületek kiemelkedően előnyös képviselői a következők: 4-{4-klór-2-fluor-anlllno}”b-mefoxí-7-(1-metll-piperidln~4-ll~metoxi)~kinazolin, 4~(4-feróm~2~fiuor-anll^:ino)-6~rnetoxl-7-(1-metil~píperidin~4-4l~metQxl)-kmazclin_: és a felsorolt vegyületek. sói, elsősorban a megfelelő bidrokloridok.

Rendkívül előnyősnek bizonyult a 4-.{4-bróm-2.~fíuor~anllíno)-ő-metoxi-7-.(1-meti1-pípendin-4~il~metoxi)~klnazolhn és sói, elsősorban a hldrokloríd-ső.

Félreértések elkerülése végett rögzítjük, hogy ha a leírásban egy csoport jelentésére a. fenti vagy későbbiekben közlendő” kifejezéssel utalunk, ezeken az adott csoport legtágabb jelentését és összes előnyös jelentését egyaránt értjük.

Ha a leírásban mást nem közlünk, az általános “alkilcsoport” megjelölésen az egyenes és elágazó táncé csoportokat egyaránt értjük. Az egyedi alkilcsoportok megnevezésekor azonban külön utalunk az esetleges láncelágazásra: igy például a “proΧΦ Φ φ Χ·φ ΦΧ X· Φ

X * X Φ Φ Φ * Φ » *

Φ Φ Φ »♦* X * Φ Φ Φ * * χχΦΦ φφ φφ *χ χφφφ χ«» X Φ φφ ΦΦΦ» > χ.

X Φ φ Φ χ Φ φ * Χ«* φ » «Φ.χ « » φ φ φ _w

ΦΦ «φ χχ-φ.φ φ φ>

piícsoport'' megjelölés csak az egyenesláncő csoportot jelenti. Hasonlóan értelmezzük az egyéb általános megjelöléseket is. Hs a leírásban mást nem közlünk, az alkilcsoport” megjelölés előnyösen 1-5 szénatomos, célszerűen 1-3 szénatomos csoportokra vonatkozik. Az “alkoxicsoport” megjelölésen - ha mást nem közlünk - olyan élkik-O- csoportokat értünk, amelyekben az alkilcsoport jelentését a fentiek szerint értelmezzük, Az általános ‘sdlcsoport” megjelölésen - ha mást nem közlünk - 8-10 szénatomos árucsoportokat értünk, amelyekhez adott esetben egy vagy több halogén-, alkil-, alkoxi-, nltrc-, trifluor-metil- és/vagy ciano-szubsztitoens kapcsolódhat (az alkil- és alkoxicsoport értelmezése a fenti). Az általános terli-oxi-csoporí megjelölésen - ha mást nem közlünk - olyan “arik-O- csoportokat értünk, amelyekben az árucsoport jelentését a fontiek szerint értelmezzük. A szulfonil-oxi megjelölésen alkilés aril-szulfonll-oxl-csoportokat egyaránt értünk; ezekben az alkil- és árucsoportok jelentését a fentiek szerint értelmezzük. Az “alkanollesoport megjelölésen - ha mást nem közlünk - formiicsoportot és elvan “alkik-CO- csoportokat értünk., amelyekben az alkilcsoport jelentését a fentiek szerint értelmezzük. A 2 szénatomos alkanollesoport tehát etanoilcsoportot (CH₃C=O), mig az 1 szénatomos alkanollesoport forrni leső portot (CHO) jelent. Ha a leírásban mást nem köziünk, az általános alkenllcsoport megjelölésen az egyenes és elágazó láncú csoportokat egyaránt érijük; az egyedi csoportok megnevezésekor azonban külön utalunk az esetleges láncelágazásra (igy például a ’'2-butenit-csoport megjelölés csak az egyenesláncú csoportot jelenti). He mást nem köziünk, ez alkenilcsoportok előnyösen 2-5, célszerűen 3-5 szénatomos csoportok lehetnek. Ha a leírásban mást nem köziünk, az általános alkinilcsoport” megjelölésen az egyenes és elágazó láncú csoportokat egyaránt értjük; az egyedi csoportok megnevezésekor azonban külön utalunk az esetlegét láncelágazásra (Így a 2-buiinil-csoport” megjelölés csak az egyenesláncú csoportot jelenti). Ha mást nem közlünk, az alkinílcsoportok előnyösen 2-5, célszerűen 3-5 szénatomos csoportok lehetnek.

** *Φ ΦΦΚφ, φ Φ*

Az (i) általános képletü vegyületekhen a ki π azok n csoport 2~es, 5-ős és 8-as helyzetéhez hidrogénatom: kapcsolódik..

Az (I) általános képletö vegyűletek és sóik egyes képviselői tauíomer módosulatok formájában létezhetnek. Az áttekinthetőség érdekében a képleteken csak az e~ gyik lehetséges tautomer formát tüntettük fel, a találmány azonban nem korlátozódik a képleteken bemutatott formákra, hanem az (!) általános képletö vegyűletek összes olyan tautomer formáját magában foglalja, amelyek gátolják a VEGF receptor tírozin kinéz aktivitását.

Az (I) általános képletü vegyűletek és sóik egyes képviselői szolvatáft (például hidratált) és szolvatálatlsn formában egyaránt létezhetnek. Oltalmi igényünk az öszszes olyan szoivatáif formára kiterjed, amelyek gátolják a VEGF receptor tírozin kinéz.

aktivitását

Félreértések elkerülése végett rögzítjük, hogy ha az (I) általános képletü vegyüietekbeo R^z például (2-5 szénatomos allkeniíFR'' képletö csoportot jelent, ez a csoport a 2-5 szénatomos aikenilcsoporttai kapcsolódik az ~O~ csoporthoz, Ugyanígy értelmezzük, az egyéb csoportok kapcsolódását is. Ha FÜ például 1~R'ép_rop-j.en-3-il-csoportot jelent, a propenücsoport az első szénatomjával az R” csoporthoz, a harmadik szénatomjával pedig az -O- csoporthoz kapcsolódik, Hasonlóan, ha FA 2~R'~penl~ ~3-en~5~ií~esoportot jelent, a peníenílcsoport a második szénatomjával az R'' csoporthoz, az ötödik szénatomjával pedig az ~O~ csoporthoz kapcsolódik. Ugyanígy értelmezzük az egyéb csoportok kapcsolódását is.

Az Rí általános képletö vegyöleteket gyógyászati célokra elŐgyógyszerek formájában is felhasználhatjuk, amelyekből az emberi vagy állati szervezetben lezajló bomlási folyamatok révén (!) általános képletü vegyűletek képződnek, ilyen elögyógyszerek például az (I) általános képletö vegyűletek in vivő körülmények között hldroiizálhato észterei.

'19 ♦ *«* v*

Szakember számára az -elögyógyszerek számos formája ismert, Ilyen elögyógyszer-formákat ismertetnek például a következő közlemények: H. Bündgaard (szerk.;) Design of Prodrugs (Elsevler, 1985); K.WIdder és mtsai (szerk,): Metbods ín Enzymology 42, 309-396 (Academíc Press, 1935); KrogsgaardxLarsen és H, Bundgaard (szerk,): A Textbook of Drog Design and öevetepment (1991) 113-191, oldal (azaz H. Bündgaard:Design and Application of Prodrugs c. 5, fejezett H . Bundgaard: Advanced Drog Dekvery Revlews 8, 1-38 (1992); H. Bündgaard és mtsai: Journal of Pharmaceutica! Sciences 77, 285 (1988); N. Kakeya és· mtsai: Chem. Pharm. Buli. 32, 692 (1984)

A Hdroxilcsoportot tartalmazó (I) általános képiéül vegyületek in vivő körülmények között hidroi-izálható észterei például szervetlen észterek, így foszfát-észterek (a gyűrűs (osztoramld-észíereket Is beleértve), továbbá a-aciloxi~aikíl~éferek és más hasonló vegyültetek lehetnek, amelyekből az. in vivő körülmények között lezajló hidrolízis hatására tehasad az észterképző csoport és ezáltal felszahadul(nak) az. alapvegyület hidroxfcsoportja(i). Az n-adloxl-alkikéterek közül példaként az acetoxi-metoxiés 2,2-dimetil-propionil-oxi-mefox.t-vegyületeket említjük meg. A hidroxllcsopotííal in vivő körülmények között hterollzáIható észtert képező egyéb csoportok közül példaként a következőket soroljuk fel: alkánoil-, benzolé, fenll-acedk szuhsztlluéit benzolé, •szubsztituálf tenil-acetll- és aikoxl-karbonlhcsoportok (alkikkarhonil-észlerek képzésére), dialkll-karbamoil- és N-tdlalkikandno-etlü-H-aikli-karbamöll-csoportok (karbamáfok képzésére), dialkli-arnlno-acetll- és karboxl-acetll-csopodok. A hanzollcsoporthoz adott esetben kapcsolódó szubszílfuensek közül példaként a moríolíno- és piperazinccsoportot említjük meg, amelyek gyürötag-nitrogénatomjuknái meíiléncsoport köz-beiktatásával kapcsolódhatnak a benzoltesoporí 3-as vagy 4-es helyzetéhez.

A találmány az (I) általános képletű vegyületek mellett azok sóira is vonatkozik. A gyógyászati készítményekben felhasználandó sók .gyógyászatilag alkalmazható sók lehetnek; a vegyületek egyéb sói az (I) általános képletű vegyületek vagy gyógyásza~.Η.

♦ * ♦ V * « flf *

* *4 β « * χ >» φφ ψ*Κ» V tílag alkalmazható sóik előállításéhoz használhatók fel. Az (II) általános· képletü vegyüietek győgyászatilag: alkalmazható sói például a kellően bázíkus alapvegyüfetek addiciós sói lehetnek, ilyenek például a győgyászatilag alkalmazható aniont szolgáltató szervetlen vagy szerves savakkal, mint hldrogén-halogenldekkel (Így sósavval- ás bídmgén-bromíddál, előnyösen sósavval),, kénsavval, feszforsavval, thHuor-ecetsavval, citromsavval és maíeínsavval képezett sók, A kellően savas (I) általános képielű vegyületek győgyászatilag alkalmazható kationt-szolgáltató szervetlen vagy szerves bázisokkal is képezhetnek győgyászatilag alkalmazható sókat. A szerves vagy szervetlen bázisokkal képezett sók közül példaként az alkálífémsökat (Igy náthám- és káliumsókat). az alkáiifő!dfem.-sőkat (igy kalcium- és magnézfumsókal), az ammóniurnsókat, továbbá a metü-aminnal, dlrneíit-amlnnaí, trimeS-aminnal, piperídínnel, mortolinnal és trlsz-tő-hlöroxi-efih-amkmal képezett sókat említjük meg.

Az (i) általános képletü vegyületeket azok sóit, továbbá a találmány tárgyál képező (később felsorolandó) más vegyületeket a rokonszerkezetü vegyületek előállítására alkalmas módszerek bármelyikével előáll ithatlük. ilyen módszereket Ismertet többek között az .520 722, 566 226, 602 851 és 635 493 számon közzétett európai szabadalmi bejelentés, továbbá a WO 97/22596, WO 97/30035, WO 97/32856 és WO 98/13354 sz. nemzetközi közzétételi Irat. Ezeknek a vegyületeknek az előállítása Is a találmány tárgyát képezi, amit a későbbiekben ismertetünk.. A szükséges kiindulási a-nyagokal ismert szerves kémiai módszerekkel állíthatjuk elő Egyes kiindulási anyagok előállítását a példákban Ismertetjük. A további kiindulási anyagokat szakember számára ismert módon,- például a megadott módszerekkel analóg -szintézisekkel állíthatjuk elő, A találmány tárgyát képezik tehát az alább részletesen Ismertetendő (a)~(d) és ü?-(iv) eljárások is.

Az ;// WAfo-bvm fcéptoto vegyü/etek szte/éz/se;

(a) Az egyik megoldás szerint az (I) általános képiem vegyületeket és azok sóit úgy állíthatjuk elő, hogy a (Hit általános képletü vegyületeket - a képletben R leien««♦ X X Λ * * * * X * X * *'Χ* * * *<# ***** * X** *» *»κ> * *χ lése a fenti, és L¹ kilépő atomot vagy csoportot jelent - (IV) általános képietű vegyületekkel - a képletben E' és m jelentése a fenti ~ reagálhatjuk.

Az L' helyén álló kilépő atom vagy csoport, például halogénatom, atomcsoport (előnyösen 1 -4 szénatomos alkoxicsoport), aril-oxl-esoport vagy szutfoniloxi-esoport így klórafom, brömatom vagy metoxi-, fenoxh, metánsztslíoniloxi- vagy totuoM-szuiíoniloxí-csöporf lehet,

A reakciót előnyösen sav vagy bázis jelenlétében hajtjuk végre. Savként például vízmentes szervetlen savat, Így hídrogén-kloridot használhatunk. A bázis például szerves aminbázis, Igy piridin, 2,6-iutldin, kollidin, 4-(dlmeflt-amlno)-pihdin., trietil-amin. moholin, N-m etil-morfé! in vagy dlaza-bicikloj5.4.Ö]undéc-7-én, vagy alkálifémvagy alkálítoldíém-karbonát vagy hldroxld. igy oátríum-karbőnát,. kálium-karbonát, kalcium-karbonát, nátrlum-hldroxld vagy kálium-hidroxld lehet, A reakcióhoz más bázisékát. például alkálifém-hídrídeket (így rmtnum-hldndet) vagy alkálifém- vagy alkáliföldfém-amidokaf (így nátrlum-amldot vagy aáfrium~blsz(trímetíl~szilii)-amldot] Is felhasználhatunk. A reakciót előnyösen inért oldószer vagy higifószer, például alkanoi vagy észter (igy metanol, etanoi, 2-propanol vagy etil-acetát), halogénezett oldószer (Igy metiién-kiohd, foklór-meíán vagy szén-tetraklodd), éter (így tetrahidrofurán vagy 1,4-dioxánk aromás szénhidrogén (így toíuol) vagy dlpoláns aprotikus oldószer (így N,N-dímeíll-íormamid, N, N-dimefil-acetamld, N~metií-pirrolidin-2-on vagy dirnetil-sxuifoxid) jelenlétében végezzük. A reakció hőmérséklete rendszerint például lö-tSöAX előnyösen 20-80¾ lehet.

Ezzel az eljárással az (!) általános képietű vegyületeket. szabad bázisok vagy a H~L^: általános képietű savakkal - ahol t? jelentése a fenti képezett sóik formájában kapjuk, A sókból szokásos módszerekkel, bázissal (például a korábban felsoroltakkal) való kezeléssel szafeodifhetj.uk fel a bázlkus (!) általános képiem vegyületeket, (b) Az (!) általános képietű vegyületeket és azok sósit úgy is előállíthatjuk, hogy az (V) akalános képietű vegyületeket - a képletben, rn és E' jelentése a fenti **-»-·· Φ * ΦΦ «χ * φ φ φ * ΦΦ* φ * ΦΦΦ

Φ * Φ Φ Φ Λ φ

ΦΦ φ φ Χ ΦΦ« φ φ 9 (VI) általános képletű vegyűfetekkei - a képletben R^z és L^; jelentése a fenti - reagaltatjuk. A reakciót előnyösen bázis jelenlétében végezzük. k kilépő .atomot vagy csoportot például halogénatomot vagy szulfonlfoxi-csoportot, így brómatomot vagy metó nszulfonl le x kese portot jelenthet. Egy előnyös megoldás szerint L' helyén CkPíYk általános képletű csoportot - ahol Y butik vagy fenti-csoportot jelent ~ tartalmazó (VI) általános képletű reagenseket használunk., amiket célszerűen magában a reakciéetegyben alak Hónk ki. A reakciót előnyösen bázis, például az (a) eljárásnál felsoroltak, jelenlétében végezzük.. A reakciót előnyösen inért oldószer vagy higlteszer [például az (a) eljárásnál felsoroltak) jelenlétében hajtjuk végre. A reakció hőmérséklete rendszerint például 10-150¾. előnyösen 50¾ körüli érték lehet.

Az d) általános képletű vegyületeket és azok sóit ügy is előállíthatjuk, hogy a (VII) általános képletű vegyületeket - a képletben Lk R^f és rn jelentése a fenti - (Vili) általános képletű vegyületekkei - a képletben R‘ jelentése a fent’ - reagáitatjuk. A reakciót rendszerint bázis [például az (a) eljárásnál felsoroltak] jelenlétében, előnyösen inért oldószerben vagy higlföszerben végezzük. Oldószerként vagy hlgiföszerként például az (a) eljárásnál felsoroltakat használhatjuk. A reakció hőmérsékleté előnyösen például 1.0¾ és 150¾ közötti, rendszerint: 100¾ körüli érték lehel.

(d) Az (!) általános képletű vegyületeket és azok sóit ügy is előállíthatjuk, hegy a (IX) általános képletű vegyületek - a képletben R^! és m jelentése a fenti, R’ pedig egy vagy főbb P'^:' védőcsoporftal védett R^: csoportot jelent - védő-csoportját vagy védőcső portjait lehasltjuk. A tehetséges P'~ védőcsoportok például: a “Protective Groups In Orgprac Syolhssls (T.W. Greene és R.CS.fvl. Wuts: 2. kiadás, Wiléy, 1991) szakkönyvből vagy más szakirodalmi forrásokból szakember számára közismertek. A P'^: védőcsoport előnyösen karbamátképző (alkoxi-karbonli) csoport, például terc-butoxi-karbonll-. terc-arnlloxl-karho-nlk. clklobutoxf-karbonii-, -propoxi-karbonií-, me-toxi-karbonlk etoxi-karbonk, izopropoxi-karbonik aliil-oxl-karbonil- és benzkoxnkarboolk

-csoport lehet. A P'^; védöcsoporf különösen előnyösen terc-butoxi-karbonll-esoport lehet. A védőcsoportot előnyösen sav jelenlétében hasítjuk le. Savként például szervetlen savakat, igy sósavat vagy hldrogén-bromidot vagy szervetlen savakat, Igy trlftuor-ecetsavat vagy trifiuor-mefánszuitonsavat használhatunk, A reakciót előnyösen inért oldószer, például metilén-kioriö vagy trikiőr-metén és nvomnyi mennyiségű víz jelenlétében végezzük, A reakció hőmérséklete például lO- I OíAC, előnyösen 2Ö-8Ö°'C lehet,

A kiindulási anyagok és közbenső termékek eíöá/lkása;

(n Az L^! helyén haiogénatomot tartalmazó (lll)_: általános képletű vegyületeket és azok sóit például a (X) általános képletű vegyűletek ~ a képletben R^s jelentése a fenti - halagénezésével állíthatjuk elő.

Hélogénezőszerként például szervetlen savhaiogenldekeh Igy tionli-kloridoí, foszfor-trikiondok íoszíor-oxl-klondöt vagy foszíompentaklohdot használhatunk. A halogénezés; reakciót rendszerint inért oldószer vagy hígítószer, például halogénezett oldószer, Így metltén-kioríd, trtkíór-metán vagy szén-tetraklorid, vagy aromás szénhidrogén. oldószer, Így benzol vagy lohol jelenlétében hajtjuk végre. A reakció hőmérséklete rendszerint például lö-1öö'³C, előnyösen 40-1 ÖÖ°C lehet.

A (X) általános képletű vegyületeket és azok sóit például úgy álllthatluk elő, hogy a (XI) általános képlete vegyületeket - a képletben L^! jelentése a fenti - a korábbiakban meghatározott iVUlj általános képletü vegyületekkel reagáltatjuk. A reakciót rendszerint bázis [például az (a) eljárásnál felsoroltak] jelenlétében, előnyösen inért oldószerben vagy 'hígítószerben végezzük. Oldószerként vagy bigiíószerként például az (a) eljárásnál felsoroltakat használhatjuk. A reakció hőmérséklete előnyösen például 1CŐC és 150°C közötti, rendszerint 10Ö°C körüli érték lehet.

A (X) általános képletü vegyületeket és azok sóit a (XII) általános képletű vegyületek - a képletben R’^; jelentése a fenti, A¹ pedig hidroxilosoportot, aikoxicsoportot (előnyösen 1-4 szénatomos aikoxicsoportot) vagy aminocsoportot jelent - olkhxálásával is eiőálllllmtjuk. Az A^! helyén hidroxíl- vagy alkoxlcsoportoí tartalmazó (XII) általános képietü vegyületeket formamidda-l vagy egy ekvivalens reagenssel', igy [3-(dime~ bi-ammo)-2~aza~pfop~2-eni:lidé-n}-dimetil^:-ammó:híum-kio-riddal reagáltatva ciklizáíhatjuk. A ciklizáclóhoz oldószerként rendszerint formarnidöt használunk, de a reakcióközeg ínért-oldószer vagy higítószer, például egy éter, igy í,4-óiöxán is lehet. A cíkiizáíá-st rendszerint megnövelt hőmérsékleten, előnyösen 8ö-2öö'^;C-on végezzük.. Az A¹ helyén arnInocsoportot tartalmazó (XI i) általános képietü vegyületeket hangyasavval vagy egy ekvivalens reagenssel [például egy tn-( 1-4 szénatomos alkoxi)-metánnal, igy thetoxi-metánnal vagy tnmetoxi-metánnal) reagáltatva cíklízáíhstiuk. A óikiízáiást rendszerint katalitikus mennyiségű vízmentes sav, például egy szulfonsav (így p-tohjobozulfensav} jelenlétében, inért oldószerben vagy hígítószerben, példáéi egy halogénezett oldószerben (Így metílén-kforidban, triklör-meiánfoan vagy széotetrakloridban), egy éterben (így dietíl-éterben vagy tetráhidrofeánhan) vagy egy aromás szénhidrogénben (igy toi-uolban) végezzük. A ciklizálás hőmérséklete- rendszerint például 10-1öö^:;C. előnyösen .20-5ü^uC lehet.

A (XI g általános- képietü vegyületeket és azok sóit például ügy állíthatjuk elő, hogy a (XIII) általános képietü vegyületek - a képletben R^z és A’ jelentése a fenti nltrocsoportját redukáljuk.. A nitrocsoportot az ilyen átalakításokra ismert módszerek bármelyike szerint redukálhatjuk. Eljárhatunk például úgy, hogy a nitrovegyületet Inért oldószerrel vagy hfgltószerrel (például a korábban felsoroltakkal) készített oldatban, a hidrogén-ezés katallzáiására alkalmas fém (így palládium vagy platina) jelenlétében hidrogénezzük. Redukáiószerként aktivált fémeket, például aktivált vasat Is felhasználhatunk; az aktivált vasat például úgy állíthatjuk elő, hogy vasport híg vizes savók dattal (így híg vizes sosavoidaíía!) mosunk.. Ebben az esetben úgy járhatunk ei_: hogy a nitrovegyüfet,. az aktivált fém és egy oldószer vagy higítószer (például egy vizes alkohol, Így vizes metanol vagy etanol) elegyét melegítjük. A reakció hőmérsékletepéldául áCXC és 151X0 közötti, rendszerint ?0°C körüli érték lehet.

φ» * * * * * * * * « « ίχ* * * ♦ » Λ * χ ** *♦ ***« « *♦

A (Xiit) általános képietű nitrovegyülefekel és azok sóit péidául úgy állíthatjuk •elő, hogy a (XIV) általános képietű vegyületeket - a képletben L.^! és A' jelentése a fenti · a korábbiakban meghatározott (Vili) általános képietű vegyületekkei reagáltatjuk. A reakciót rendszerint a (c) eljárásnál ismertetett körülmények között végezzük.

A (XIII) általános képietű rXrovegyüieteket és azok sóit úgy Is előállíthatjuk, hogy a (XV)· általános képietű vegyületeket - a képletben A^: jelentése a fenti - a korábbiakban meghatározott (VI) általános képietű vegyületekkei reagáltatjuk. A reakciói rendszerint a (b) eljárásnál megadott körülmények között végezzük,

A {Ili} általános képietű kiindulási anyagokat és azok sölt úgy is előáll áthatjuk, hogy a (XVI) általános képietű vegyületeket - a képletben Ló kicserélhető védőcsoportot jelent - a korábbiakban meghatározott (VI) általános képietű vegyületekkei reagál· tatjuk. Ekkor L^! helyén 1./ csoportot hordozó (Ili) általános képietű vegyületeket kapunk.

Előnyösen olyan (XVI) általános képietű vegyületeket használunk, amelyekben L^z adott esetben legföljebb öt (előnyösen legföljebb két) halogén-_: ultra- és/vagy ciano-szuhszötuenst hordozó fenoxlcsopodot jelent, A reakciót rendszerint a (b) eljárásnál ismertetett körülmények között hajtjuk végre

A (XVI) általános képietű vegyületeket és azok sóit péidául ügy állíthatjuk elő, hogy a (XVII) általános képietű vegyületek - ahol Lé jelentése a fente és P⁵ fenolos hidroxi lesöpört védelmére alkalmas védocsopedoí jelent - P^: védöcsoportlaf iehasitiuk, A lehetséges P^! vedöcsopodok péidául a Protective Groups in Organic Synthesis (7 W Greene és R.GM. Wuts; 2. kiadás, Wiiey, fűül) szakkönyvböl vagy más közleményekből szakember számára közismertek, A P^! csoporttal védett fenolos hídroxiicsoporiok például a következők lehetnek: éterek (így metii-, metoxi-metil-._: aliil-, henzit- és legföljebb két 1-4 szénatomos alkoxi- és/vagy nltroosoporttai szubsztituált benzll-éterek), szllli-éterek (így lerc-buttl-difen-il-sziltl· és ΙβΓΟ-όιΰίΙ-όΙϊ-ηοΙΙΙ-δζίΙΙΐ-όίβrek), észterek (Így acetátok és benzoátok) és karbonátok (így metii-., benztl- és íegtol-

jebb két 1 -4 szénatomos alkoxi- és/vagy nitrocsoportíai szubsztituált benzill-karboná-

bármely szokásos módszerrel lehasíthatjuk. így például ha P ^; benzilcsoportot jelent, ezt a csoportot hidrogenolízisselvagy trtfluor-ecefsavas. kezeléssel távolíthatjuk el·

Afenolos hidroxiicsoport P' védőcsoportját az adott csoport jellegének megfelelő bármely szokásos módszerrel (például a feni idézett kézikönyvben leírt eljárásokkal vagy azokkal analóg módon) iehasifhatjuk. A reakciókörülményeket célszerűén úgy választjuk meg, hogy a hidroxiicsoport felszabadulásán kívül a kiindulási anyag vagy a termék más részein ne menjenek végbe nemkivánt átalakulások. így például a P ^! helyén álló acetáfcsoport tebas'ítására a kinazolín-származékot bázissal kezelhetjük., Bázisként a korábbiakban felsoroltakat használhatjuk, köztük ammóniát és annak mono- és di-alkilezetf származékait, A reakciót előnyösen protonos oldószer vagy segédoídószer, így víz vagy egy alkohol (például metanol vagy etanol) jelenlétében végezzük. A reakció során más, a korábbiakban meghatározott inért oldószer vagy hígitőszer is jelen lehet. A reakció hőmérséklete általában (AC és 50°C közötti, rendszerint 20X körüli érték lehet..

A (Hl) általános képletű vegyületeket kívánt esetben L^: helyén más kilépő atomot vagy csoportot tartalmazó (111) általános képletű vegyöletekké alakíthatjuk, át. így például az L ^: helyén halogénatomtől eltérő csoportot (például adott esetben szubsztitnáít fenox.icsopo.rtot) tartalmazó (Hl) általános képletű vegyületeket t^: helyére halogénalom bevitele céljából először (X.) általános képletű vegyületekké hldroiizáljuk, majd az így kapott (X) általános képletö vegyületekbe a korábbiakban leírtak szerint beépítjük a halogénatomot.

fii) Az ·(V) általános képletű vegyűletekel és azok sóit úgy állíthatjuk elek hogy a (XVI11) általános képletö vegyületek - a képletben R^:, P^: és m jelentése a fenti - P^! védőcsoportját Iehasltjuk. A P^! védőcsoportot például az (í) eljárásnál ismertetett módón távolifbetjek el.

te Í5 -χ» *'·*♦♦' Φ4 * * * X Φ K « * » *«« x ♦ v at * ♦X ψφ «*»« X #«

A (XVIII) általános képlete vegyületeket és azok sóit úgy állíthatjuk elő, hogy a (XV.H) általános képíetű vegyületeket a (b) eljárásnál leírt körülmények között (ÍV) általános képletü vegyöletekkeí reagáltatjuk, (Ili) A (Vli} általános képletü vegyületeket: és azok sóit ügy állíthatjuk elő, hogy a (XIX) általános képíetű vegyületeket - a képletben L^! jelentése a fenti, és a 4-es és 7-es helyzethez kapcsolódó L^s csoportok azonosak vagy eltérőek lehetnek - (IV) általános képtelü vegyüíetekkoí reagáltatjok. A reakciót például az (a) eljárásnál ismertetett körülmények szerint végezhetjük.

(ív) A (IX) általános képletü vegyületeket úgy állíthatjuk elő·, hogy az (V) általános képletü vegyületeket a (b) eljárásnál ismerteteti körülmények között (XX) általános képletü vegyöletekkeí - a képletben R⁴ és l? jelentése a fenti - reagáítatjuk. A reakciót előnyösen bázis jelenlétében, célszerűen Inért oldószerben vagy bígltöszerben végezzük. Bázisként és ínért oldószerként vagy híg Ítészekként például az (a) eljárásnál felsoroltakat használhatjuk.. A reakció hőmérséklete előnyösen például W~15(VC, például 205ü^;ÍG lehet.

Az (!) általános képletü vegyületek gyógyászatliag alkalmazható sóit például ügy állíthatjuk elő, hogy az (:!) általános képletü vegyületeket szokásos körülmények között egy alkalmas, gyógyászatliag alkalmazható Iont szolgáltató savval reagál tatjuk, vagy szokásos körülmények között bázissal reagáltatok.

,4 vegyítetek farmakotegiaf hatásának vlzsgá/ete:

A találmány egyik célja olyan vegyületek azonosítása, amelyek hatásosan, gátolják a VEGE receptorokkal kapcsolatos Ilrozln klnázok (így az Fit és/vagy a KDR). aktivitását, és amelyek gátolják az anglogenezlst és/vagy a megnövekedőit érpormeabiilfást Ezeket a vegyületeket az alábbiakban felsorolt farrnakológiai vizsgálati módszere kke I azonosíthat; uk;

(ro Receptor ilrozln klnázok gátlásának vizsgálata In vitro körülmények között;

Χ« «« » * « «. * X β * **« * ♦ Φ«χ * * * » Λ # ♦

Φ» »« ΦΦΦ_Φ « _Xlf

Ez a vizsgálat azt mutatja ki, hogy a vizsgált vegyüiet képes-e a tírozin kinéz aktivitást gátolni. A VEGF vagy 'bolhám növekedési faktor (EGF) receptor cltoplazma-doménjait kódoló DNS teljes génszintézissel ÍEdwards M.: International Bioteohnotogy Láb 5(3), 19-25 (1937)1 vagy 'klónozással alakítható ki. Az így kapott DNS-t alkalmas rendszerben kifejezve tírozin kinéz aktivitással rendelkező poüpepiíd képezhető, Azt tapasztalták például, hogy a rekombináns fehérje rovarsejtekben való kifejezésével előállított VEGF és EGF receptor cítopíazma-doménok természetes tirczin kinéz aktivitást matatnak. Az Fit jelű VEGE receptor (gánhanki letéti száma; X51692) esetén cDHS-bói elkülönítették a Shíbuya és munkatársai által leírt (öncogene 5, 519-524 (1990)1, a 783-as helyzetű metioninnal kezdődő és a terminálé kodont tartalmazó, 1.7 kilobázis méretű DNS-fragmenst, amely a dtoplazma-domén legnagyobb részét kódolja, és ezt egy bacuiovirus· transzpiantáió vektorba, például pAcVMI-he [lásd; L.A. Kirsg és R.D. Possee: The Baoulovíros Expression System; A Laboratory Galde (Chaprnán és Hall, 1991)}, pAc3'6ö-ba vagy pB1ue8acHis-fee (az Invitrogen Corporation-föl beszerezhető vektorok) klónozták. Az Így kapott rekombináns szerkezetet vírus-eredetű DNS-el (például Fharmlngen BaonteCold-dai) együtt rovarsejtekbe (például Spodopfera frugiperda 21 (SÍ21) sejtekbe] :ko-transzfektálíák. és így rekombínáns bacuiovírust alakítottak ki. (A rekombináns DNS molekulák összeállítására és a rekombináns baoolovirus előállítására és felhasználására vonatkozó módszereket a szakirodalom részletesen ismerteti; lásd például Sambrook és mtsai; Moteouler Cioning - a Laboratory Manna! (2. kiadás. Coki Spríng Harbour Laboratory Press,

1989) és OTkeílly és mtsai. Baculovírus Expression Vectors - A Laboratory Manual”' (W.H. Freeman and Co,, New York, 1992).j A biológiai vizsgálatokban felhasználható egyéb tírozin kinázok előállítására a 806-os helyzetű metlonínnai kezdődő cltopíazrna-fragmensl (KOR, génbanki letéti száma L04947), valamint a 663-as helyzetű meiloninnaí kezdődő ciioplazma-fragmenst. (EGF receptor, génbanki letéti száma; XÖ05S8) a fentiekhez hasonlóan klónozhatunk és expresszáthatunk.

A cFit tlrozin kinéz aktivitás expresszáiása céljából Sf21 sejteket plakkből tisztított cFit rekombináns vírussal háromszoros multiplicitásban megfertőztünk, majd 48 óra elteltével összegyűjtöttük a sejteket Az összegyűjtött sejteket jéghideg PBS~ol~ dattal (foszfáttal pufferott sóoidat, összetétele: 10 mmól nátrium-foszfát, 138 mmól NaCl, 2,7 mmól KCI, pH 7,4) mostuk, majd 1 ml rtNTG/PMSF oldat/10 millió sejt arányhan; HMTG/PMSF oldatban [összetétele: 20 mmól Hepes (pH 7,5), 150 mmöl NaCII, 10 tért % glicerin, 1 téri. % Triton XIÖÖ, 1,5 mmöl MgCh, 1 mmól etilén-glikol· -bisz(8amino~etfi-éter)-;N,N;.N’,N^,’teíraecetsav (EGTA), 1 mmól fenh-mefíFszulfo-níF

-ftuodd (PMSF): a FMSF-t közvetlenöl a szuszpendálás elölt adjuk az eíegyhez egy frissen készített 100 mmölos metanolos oldatból) újra szuszpendáltuk. A szuszpenziöt 10 percig 4”C-on centrifugáltuk 13 ÖÖÖ íorduiat/perc sebességgel, majd a feíüiúszót (enzim törzsanyag) elkülönítettük, és allkvot részietekben -70’’G-on tároltuk, Az enzim törzsanyag minden egyes ól tételét a vizsgálatban enzimé lg ítöval [összetétele: 100 mmol Hepes (pH 7,4). 0,2 mmól Na₃VGü, 0,1 fért, % 7'ríton Xt'ÖÖ, 0.2 mmól ditio-treitj hígítva tifraltuk. Egy tipikus tételben az enzim törzsanyagot 1:2000 férfogatórányban hígítottuk az enzímhigiíövai, és a vizsgálandó lemez minden egyes mélyedésébe 50-50 pl hígított enzimet töltöttünk.

Trroztot tartalmazó randóm kopotimerbok például poii(Glu,Ala,Tyr)6:3:1-böi (a Slgma cég P38S9 katalógusszámé gyártmánya) PBS oldattal 1 mg/ml koncentrációjú szubsztrátum törzs-oldatot készítettünk, amit -20°C~on tároltunk, majd a lemezek bevonásához PBS oldattal 1:500 férfogatarányban .hígítottunk.

A vizsgálat elvégzését megelőző napon a vizsgáló lemez (95 méiyedéses Nunc maxlsorp immunlemez) minden egyes mélyedésébe 100-100 pl hígított szabsztrátum oldatot mértünk be, majd. a mélyedéseket lezártuk, és a lemezt éjszakán át 4°C-on tároltuk.

·' · ΛΦΦχ ** «φ «χφφ · ®

Φ * « $ Φ Φ « * «' Λ φφ« * * Φ » χ Φ φ

».♦. «« ««ΦΧ χ ΧΑ

A vizsgálat napján a szubsztráium oldatot kiöntöttük, és a vizsgáló lemez mélyedéseit PBST oldattal (0,05 tért. % Tween 20-af tartalmazó PBS oldat) egyszer, majd 50 mmólos- Hepes oldattal (pH 7,4) egyszer mostuk.

A vizsgálandó vegyöleteket lö %-os dímetíl-szuífoxidda! hígítottak, és a kimosott vizsgáló lemez mélyedéseibe 25-2:5 pl hígított vegyület-elegyet töltöttünk. A tiszta” kontrollként szolgáló mélyedésekbe csak 10 %-os dimetil-szaifcxldoí töltöttünk. Ezután az egyes mélyedésekbe - az üres kontrollok kivételével, ahová ATP-rnenfes MaCh oldatot adagoltunk - 8 μ mól adenozln-thfoszíáloí (ATP) Is tartalmazó 48 mrnölos MnCl_;? oldatból 25-25 ul-t töltöttünk. A reakció megindítására mindegyik mélyedésbe 50-50 pl frissen hígított enzimet mértünk be, majd a lemezeket szobahőmérsékleten 20 percig inkubáltuk, Ezután a folyadékot elöntöttük,, és a mélyedéseket PBST oldattal kétszer mostuk. Ezután mindegyik mélyedésbe 100 pg egér IgG anti-fószfotirozin antitestei (az Upstate Blotecbnology Inc. 05-321 katalógusszámá gyártmánya) mértünk be 0,5 tömeg/térfogat %: BSA-t (szarvasmarha szérum album-in) tartalmazó PB-ST oldattal 1:6000 térfogatarányban hígított formában, és a lemezeket 1 órán át szobahőmérsékleten Inkubáltuk. Ezután a folyadékot elöntöttük, ás a mélyedéseket

PBST oldattal kétszer mostuk, Ezután a mélyedésekbe 100 .pl forma-perexldázzal (HRP) kapcsolt juh antt-egér lg antitestet (az Amersham cég NX.A 931 k-atalogusszémü gyártmánya) töltöttünk 0,5 tömeg/tértogat. % BSA-t tartalmazó PBST oldattal 1:500 térfogatarányban hígított formában, és a lemezeket 1 órán át szobahőmérsékleten Inkubáltuk, Ezután a folyadékot elöntöttük, és a mélyedéseket PEST oldattal kétszer mostuk. Ezután minden mélyedésbe 100-108 ul ABTS (2₍2-azino~bisz(3-etii~ -benzotiazokn~6-szuifonsav)j oldatot töltöttünk.. Az ABTS oldatot .frissen készítettük úgy. hogy 50 mi frissen készített 50 mmólos foszfát-citrát putter (pH 5,0) ·+· 0,03 % nátrlum-perberát oldatban [amelynek előállitása során 100 ml desztillált vízhez egy PCSB kapszulát (náfrium-perhoráfot tartalmazó foszfát-cifrát pufiér, -a Sigma cég P4922 katalógusszámá gyártmánya) adtunk] egy 50 mg-os ABTS tablettát (a

B-oehringer cég 1204-521 katalógusszámé gyártmánya) oldottunk. Ezután a lemezeket addig inkubál-tuk szobahőmérsékleten., amíg a tiszta* kontroli-mélyedésekben lévő anyag, optikai sűrűsége (lemezleoívasó spektrofotométeren 405 nm huílámhoszszón mérve) 1,0 kö-rüii értéket nem ért el (ehhez mintegy 20-80 percre volt szükség). Az üres (ATP-mentes) és a tiszta” (vizsgált vegyülei-mentes) kontrolfokra mért adatok alapján meghatároztuk a vizsgált vegyület ÍCt» értékét (50 %-os enzlmgátiást biztosító meri nyiség).

(b) HUVEC sejtek burjánzására gyakorolt gátló hatás vizsgálata in vltrc körülmények, között:

Ebben a vizsgálatban azt értékeltük, hogy a vegyületek kepesek-e a humán köidökvena beihámsejtek (HÜVEC sejtek) növekedési faktorokkal -serkentett burjánzását gátolni.

HÜVEC sejteket 7.5 tért. % borjú magzatszérum-ma! (FCS) kiegészített MCD8 131 közegben (gyártja: Gíbeo BEL) izoláltunk, majd a sejteket a 2-8. pas-s-záíásna 2 tért. % FCS-mal, 3 ug/ml heparinnalés 1 pg/ml hidrokorfeonnaf kiegészített MCD8 131 kőzetben 96 mélyedésss vizsgáló lemezekre vittük fel mélyedésenként 1000 sejt koncentrációban. Legalább 4 óra elteltével a lemezeket a megfelelő növekedési faktorral (azaz 3 ng/ml VEGF-tel. 3 ng/ml EGF-fel vagy 0,3 ng/mí h-FGF-fel) es a vizsgálandó vegyülettel kezeltük, majd .a tenyészeteket 4 napig 7,5 % Cö₂-ot tartalmazólégtérben 3-T’C-on inkubálluk. A 4. napon a lemezeket 1 pCI/raélyedés- dózisban íbciu-mozott bmidlnnel (az Ametsham cég TEA 61 katalógusszáma gyártmánya) kezeltük és 4 órán át inkub-áltuk. A sejteket Tömtek típusú 96 mélyedéses sejtgyűjtö lemezzel összegyűjtöttük, és Béta lem-ezszémlélóvaí mértük a beépült trícium mennyiségét. A növekedési faktorral serken lett sejtburjánzás gátlásának mértékét a sejtbe beépült radioaktivitással (opm-ben kifejezve) jellemeztük,.

(c) Szilárd tunmrgk növekedésére gyakorolt gátló hatás vizsgálata in viyg körülmények között:

Ebben a vizsgálatban azt mértük, hogy képesek-e a vegyületek gátolni a szi-23lárd tumorok növekedését.

CaLu-S tumor ojtványok kialakítása céljából tbymushiányos Swiss nuZnu nőstény egerek csípőjébe egerenként 1 x1 Ö^G Catu-6 sejtet juttattunk be 100 μ,ί térfogatú szubkután injekció tormájában (hordozóanyag: szémmmentes táptalajjal készített 50 térfogat %-os Matrigel oldat), A sejtbeültetés után 10 nappal az egereket 8-10 állatból álló csoportokra osztottuk annak érdekében, hogy csoportonként összemérhető átlagértékeket számíthassunk. A tumorok méretét fínombeáliífós tapintókörzővel mértük, és az (Lx w) x (L x w) x (~/8) képlet segítségével - ahol L a tumor legnagyobb átmérőjét, w pedig a legnagyobb átmérőre merőleges irányban mért tumorátméröt jelenti kiszámítottuk a tumorok térfogatát. A vizsgálandó vegyüieteket naponta egyszer adtuk be az állatoknak orális úton, legalább 21 napon keresztül; a kontrollcsoportba tartozó állatoknak csak hígitószert adtunk be. A tumorok méretét hetente kétszer mértük. A növekedésgátlás mértékének meghatározására a kezeit állatcsoportokon méri átlagos tumortérfogalot egybevetettük a kontrollcsoporton mért átlagos tumortértogattal, és Student-féle t-próbával és/vagy Mann-Whltney-féle rangsorszám-osszegzéssel meghatároztuk az eltérések statisztikai szignifikanciáját. A vizsgált vegyület gátló hatását akkor tekintettük szignifikánsnak, ha p értéke 0,05-nél kisebb.

(d) Párkányokon 14 napon keresztő/ végzett foxfoífász fozsgá/afok;

Ezzel a vizsgálatsorozattal a találmány szerinti vegyületek toxikológiai profilját értékeltük, A vizsgálat során azt határoztuk meg, hogy a. vizsgáit vegyületek fokozzák-e a távolabbi combcsonfrész és a közelebbi síposontrész combcsonti izületi növekedési lemezeinek: tülnövésl zónáját a kapott eredményekből más szöveteket érintő kórszövettani változásokra is következtethetünk.

Az ángiogehezís a hosszú csontok hosszanti növekedése során lezajló porccsonfosodás egyik lényeges tényezője. A korábbi kutatások eredményei arra engednek következtéim, hogy a növekedési lemezbe való érbehatolás a iúínövekedő porcsejtek VEGF-termelésétöi függ. Több kísérletben a 7EGF~et specifikusan maszkírozó

-24szerekkei végzett kezelés hatására a tülnövekedő porcseji-zóna kiszélesedését és az angiogenezis gátlását észlelték. Ezek közöl példaként egereken egy oldható VEGF receptor kiméra fehérjével {Flt-( 1 -3)~lgGj: végzett kezelés eredményeit Ismertető közleményre [Gerber,. H-P., Vu_s T.H., Ryan, AM, Kowalskl, d., Werh, Z. és Ferrara, Nz. VEGF couptes hypertrophlc oartilage remodellsng, ossification and angíogenesls duríng endochondra! honé formádén, Natúré Med, 5, 623-628 (1999)], és kutyafejő majmokon egy rekombináns humanizált aníí-VEGF monoklónos IgGI antitesttel végzett kezelés eredményeit ismertető közleményre [Ryan, AM, Eppler, DB., Hagler, K.E., Sruner, R.H., Thomford, P J„ Hall, R.L., Shopp, GM és O'Nieíi, C.A.: Predinical safety evaluatson of rhulvlAbVEGF, an antianglogenic humsnised monoclonal antibody”', Tox, Palim 27, 78-36 (1999)) hivatkozunk.

A VEGF receptor tirozln kinéz aktivitását gátló hatású anyagoknak tehát a porcokba vető érbehatolást is gátolniuk kell, és ugyanakkor növekedésben lévő állatokon növelniük kell a távolabbi combcsontrész és a közelebbi slpcsontrész combcsonti izületi növekedési lemezeinek tülnövési zónáját.

A vizsgálandó készítmények kialakításának első lépésében a hatóanyagokat pölt(oxi-eftíén/2ö/}~szörbítán-monooieát desztillált vízzel készített: í térfogat %-os oldatéban szuszpendáituk úgy, hogy az elegyet egy éjszakán (legalább 15 órán) át 4°C-on golyós malomban őröltök. Közvetlenül a készitmény beadása előtt a hatóanyagot keveréssel újra szuszpendáituk.. A vizsgálatokat fiatat (4-8 hetes), 135-150 g testtömegű, Aiderley Park förzstanyészeibeii Wlstar patkányokon végeztük; minden egyes vizsgált állatcsoportba 5-6 állat tartozott. Az állatoknak 14 egymást követő napon keresztül naponta egyszer, orális úton hatóanyagot vagy csak hordozóanyagot adtunk, be 0,25 ml/100 g testtömeg dózisban. A 15. napon az állatokat növekvő szén-dioxid koncentrációjú légtérbe helyezve kíméletesen elöltök, majd: teíboncoituk. Az áilstokböl egy sor olyan szövetmintát különítettünk el, amelyek combcsonti-sipcsonti ízületeket tartalmaztak, és a szövetmintákból szokásos szövettani módszerekkel pa-

- 2 5 raffínvisszos metszeteket készítettünk. A szövettani metszeteket hematoxilinnet és eozínnal megfestettük, és fénymikroszkóp alatt kórszövettani vizsgálatnak vetettük alá. A távolabbi eombcsontrész és a közelebi siposontresz combcsonii ízületi növekedési lemezeinek területét morfomefrikus képelemzéssel mértük meg a combcsont és a sfpcsont metszeteiben, A tülnővekedő zóna méretének növekedését a kontrollcsoporton mért átlagos növekedési lemez-mérettel egybevetve határoztuk meg, és a statisztikai szlgn ifi kan elet egysoros Siudent-féie t-próbával értékeltük, A vizsgált vegyűlet gátló hatását akkor tekintettük szignifikánsnak, ha p értéke 0,05-nél kisebb.

Noha az (I) általános képletü vegyületek farmakológia! sajátságai a vegyületek kémiai szerkezetétől függően változnak, az (1) általános képletü vegyületek a fenti (e)~(d) vizsgálatokban általában a következő koncentrációkban vagy dózisokban bizony uItak hatásosa kna k;

(a) vizsgálat: IC_S0 például <5 pmól;

(b) vizsgálat: IC₆₀ például 0,001-5 emói:

(c) vizsgálat; a hatásos dózis például 0,1-108 mg/kg;

(d) vizsgálat; a hatásos dózis például 0,1-100 mg/kg.

A találmány szerinti vegyületek a patkányokon végzett 14 napos toxieitási vizsgálatok alapján a WO 98/13354 és WO 97/30Ö35 sz. nemzetközi közzétételi iratban ismertetett egyéb vegyületekéaéi kedvezőbb toxikológiai profillal rendelkeznek.

Noha az (I) általános képletö vegyületek íarmahoSőglai tulajdonságai a vegyűletek szerkezetétől és a vizsgálatba bevont állatfajtáktól függően változnak, patkányokon az (I) általános képletü vegyületek előnyösen 150 mg/kg-os vagy annál kisebb, célszerűen 100 mg/kg-os vagy annál kisebb, különösen előnyösen 50 mg/kg-os vagy annál kisebb dózisban növelik statisztikusan szignifikáns mértékben a távolabbi eombcsontrész és/vagy a közelebbi sípcsontrész combcsonti ízületi növekedési lemezének területét, és ugyanakkor a (d) vizsgálat körülményei között más szövetekben nem idéznek elő elfogadhatatlan kórszövettani változásokat.

Példaként az alábbiakba	m közöljük a 2, példa szerint előállított 4-(4-brőm^2:-
-fluor-aníllno)-6-meto-xí-7 ~(1 -ms	stíl-piperídín-4-ií-metoxi)-kínazolinnek az (a)-(d) vizsga
latban meghatározott aktivitási	adatait;
(a) vizsgálat: Fit:	ÍCS0 1,6 omol,
KDR:	IC.;0 0.04 urnái;
EGFR:	ICK 0,5 úrnői:
(bt vizsgálat: VEGF:	IG-δο 0,06 úrnői
EGF:	ÍCse 0,17 úrnői
alap:	IC5Ö >3 úrnői;
(c) vizsgálat: 50 mg/kg-r	>s dózisban adagolva 78 %-ban gátolja a tumor növe-
kedését (p<0,001 a Mann-Whr	ney-féle rangsorszám-összegzés szeriát);
(dl vizsgálat: nőstény p£	ttkányokon 10ö mg/kg-os napi dózisban adagolva 75
%-kal növeli az ízületi növeked	ésl lemez méretét <p<0,.GÖ1 az egysoros StudenWéle
t-próba szerint).
A találmány tárgy a tova	űbá gyógyászati készítmény, amely (h általános képle

Mag alkalmazható hígító-, hordozó- és/vagy egyéb segédanyaggal vagy segéda:

gokkal együtt.
A gyógyászati készitrné	nyék orálisan adagolható gyógyszerformák (például
tabletták., rágótabletták, kémén	y vagy lágy kapszulák, vizes vagy olajos szuszpenzí-

<atő po-rkészítmények vagy granulátumok, szirupok vagy éli

xírek), belégzéssel adagolható	gyógyszerformák (például finom eloszlású porok vág;
folyadék-aeroszolok),, beszipp?	intéssel adagolható gyógy szerformák (például finom
eloszlású porok), parenterálb 1	niekciók (például intravénás, szubkután, intramuszkü-
Iáris, iníravaszkuláris vagy ínfű	ziós adagolásra alkalmas steril oldatok, szuszpenziók
vagy emulziók), helyileg adago lek vagy vizes vagy olajos olds	Iható gyógyszerformák (például krémek, kenőcsök, gr tok. vagy szuszpenziók) vagy rektálisan adagolható

«**φ ♦*

Φ φ « V φ ♦ · * *·

X Α ♦ Φ ♦ « « χ « φ* *ΦΦ« * *♦ gyógyszerfonnák (például kúpok} lehetnek. Ezeket a készítményeket rendszerint Ismert módszerekkel állítjuk elő. szokásos excipiensek felhasználásával

A találmány szerinti gyógyszerkészítményeket előnyösen dózisegységek formájában készítjük ki A dózisegységekként kikészített hatóanyagot rendszerint 5-5000 mg/rrl testfelület, azaz körülbelül 0,1-100 mg/testfömeg kg mennyiségben adjuk he a kezelendő melegvérűeknek. Ezért célszerűen olyan dózisegységeket alakítunk ki. amelyek például 1-100 (előnyösen 1-50) mg/kg hatóanyag bejuttatásának fejelnek meg; ez a mennyiség általában terápiásán htásos. A dózisegységek (például tabletták vagy kapszulák) rendszerint például 1-250 mg hatóanyagot tartalmazhatnak.

A találmány tárgyát képezik továbbá az (I) általános képletö vegyületek és gyógyászatiig alkalmazható sóik emberi vagy állati test terápiás célú kezelésében való felhasználásra.

Azt tapasztaltuk, hogy a találmány szerinti vegyületek gátolják a VE'GF receptor tírozin kinéz aktivitását, és ennek megfelelően aníí-angiogén hatást fejtenek ki és/vagy csökkentik az érpermeabilltást.

A találmány tárgyát képezik tehát továbbá az (I) általános képletö vegyületek és gyógyászatíiag alkalmazható sóik gyógyszerként - elsősorban melegvéröeken (köztük embereken) anti-anglíogén és/vagy érpermeabíhíást csökkentő hatást kifejtő gyógyszerként - vak» felhasználásra,

A találmány tárgyát képezi továbbá az (t) általános képletö vegyületek és gyógyászatilag alkalmazható -sóik felhasználása melegvéröe'ken (köztük embereken) arstí-angiogén és/vagy érpermeahliifásf csökkentő hatást kifejtő gyógyszerkészítmények gyárfásában.

Miként már közöltük, az adott betegség terápiás vagy profilaktlkus célú kezeléséhez szükséges dózis pontos értéke a kezelendő gazdaszervezettől az adagolás módjától és a kezelendő'betegség súlyosságától függően változik. A napi dózis előnyösen 1-5Ü mg/kg lehet, pontos értékét azonban a kezelendő gazdaszervezetnek, ♦ * * ««« φφ az adagolás módjának ás a kezelendő: betegség súlyosságának megfelelően kell megválasztani.. Az adott esetben szükséges optimális dózis megválasztása a gyakorló orvos ismeretei közé tartozik.

A fent ismertetett antil-anglogén és/vagy érpermeabiíifást. csökkentő kezelés egyedüli terápiaként Is alkalmazható, szükség esetén azonban a találmány szerinti vegyöletekkeí végzett kezelés mellett egy vagy több más anyagot is beadhatunk a betegnek és/vagy más kezeléseket is végezhetőnk. Az Ilyen kombinált kezelések egyedi elemeit egyszerre., váltakozva vagy külön-külön alkalmazhatlak. A rákos betegek kombinált kezelése a klinikai onkológiában bevett gyakorlatnak számit; Az antl-angíogén és/vagy érpermeafeiiitást csökkentő kezelés a klinikai onkológiában sebészeti beavatkozással, sugárterápiával és/vagy kemoterápiával kombinálható. A kemoterápiában felhasználható egyéb anyagok a következő öt fő csoportban sorolhatók:

ü) a találmány szerinti vegyüietekétöi elférő mechanizmus szerint ható más anti-angiogén anyagok, például linó mid, az integrin ονβ3 funkcióját gátló anyagok, angiosztatin. razoxio és talidomid: a vaszkuláris célra!rányltó szereket (például kombresztatin-foszíátot és a WO 99/(12166 sz. nemzetközi közzétételi Iratban ismertetett érkárosító anyagokat, köztük az N-acetit-kolchinol-O-foszfátot) is beleértve;

(ii) cifosztatlknmok, például antlösztrogén hatóanyagok (Igy tamoxifen, toremifen, raloxlfen, droioxifery jodoxlfen), progeszfogén anyagok (igy megösztrohacetát), arornafáz inhibitorok (így anaszfrozol, letrazoi, vorazol, exemesztán), antiprogeszíogén anyagok, anfladrogén anyagok (igy flutarnid, nilotamid. bikalptamld, ciprotemn-acetát), LHRH agenisták és antagonisfák (igy goszerelin-aeetát, luprolid, abareíix), tesztösztemn-btt'-dlhldro-reduktáz inhibitorok (igy fínaszterid), Inváziogátío anyagok (igy metelioprotelnáz inhibitorok, köztük mariroasztaf, és az nrokináz plazminogén ak~ tivátor receptor működését gátló anyagok), továbbá a növekedési faktorok működését gátló anyagok (a növekedési faktorok közül példaként a vérlemezke-eredetü növekedési faktort es a hepatocits növekedési faktort, az Inhibitorok közül pedig példaként a

X * * » » * ♦ **** * φ «φ» « * φφ* * ♦ * X * * *

-»« *κ **φφ φ χ* növekedési faktor .antitesteket, a növekedési faktor receptor antitesteket, a tirozin kinéz .inhibitorokat és a szerin/ireomn kinéz inhibitorokat említjük meg};.

(ii) a biológiai választ módosító anyagok (például interferon):

(ív) antitestek (például edrekoíomah): és (v) anilproíiferativ/antineopíasztikus hatóanyagok és a klinikai onkológiában használt'kombinációik, például antímetabolítok (így aotifolátok, köztük metotrexáf, fluorpirimidinek, köztük o-fiuor-uracil, parin és adenozín analógok, oitozin arabínozid), tumoreHenes antibiotikumok (így antrselkíinek, köztük doxoruhicin, daunomicln, eplrubloin és idarubicin, mltomlcin-C. daktinomicín,. rnítramíein), platina-származékok (például císzplatin, karbopiatin), aíkllezöszerek (például nitrogénmustár, melfaían. klórombucik buszukén, cikíofeszíamld, ífcszfamid, niírözó-karharnídok, tíofepo), mltózlsgátlő szerek (például vinka-alkaioidok, így vinkriszíín, és taxotdok, így taxol, taxatoré), enzimek (például aszparagináz), íimidilát-szintáz inhibitorok (például raltírexed), topoizomeráz Inhibitorok (például epípodofíííotoxinok, köztük etopozíd és tenipoz.id, amszekrin, topoíekan. ídnofekan).

A kombinált kezelést például úgy végezhetjük, hogy a betegnek egyszerre, váltakozva vagy külön-külön egy (I) általános képletü vegyületet, például 4-(4~brdm-2~ fluor-aniiino)-ö~metoxi~7-( 1 -met.ii~piperidín~4-íl-metoxi)-k.inazolint vagy sójál (célszerűen hidrokíoddját) és egy, a WO 99/02168 sz, nemzetközi közzétételi iratban ismertetett vaszkuíárls céiroirányító anyagot, például az idézett közzétételi írat 1. példásában leld N-acetíi~kotohinoi~O~fo.szfáföt adunk be.

Miként már közöltük, a találmány szerinti vegyűletek anti-angíogén és/vagy érpermeahillfást csökkentő hatást fejtenek ki. Várhatóan ezek a vegyöletek számos betegség ss rendellenes állapot, köztük rák, cukorbetegség, plkkeíysörnög reumás adrltisz, Kaposászarkbma, vérér-daganat, akut és krónikus vesebániaimsk, faggyúdaganat, artériás resztenőzls, autoimmun betegségek, akut gyulladások, hegtüiképzödések és adhéziók, méhbethárfya-gyuiiadások, diszrunkciós méhvérzések és a retinaφ φ « φ * »«* * * χ * :_ν. Φ

X»' »* ΧΦφφ »·»* * * * ίχ

XX* «

ΦΦ **φ erek burjánzására visszavezethető- szembetegségek kezelésére alkalmasak. Várhatóan a tolál-mány szerinti vegyületek igen előnyösen lassítják például a bélrendszer, a mell, a prosztata, a tüdő és a bőr primer és visszatérő szilárd tumorainak növekedését. Közelebbről, ezek a vegyületek várhatóan olyan primer és visszatérő szilárd tumorok növekedését gátolják, amelyek kialakulása kapcsolatban áll a VEGF funkcióival· különösen olyan tumorok (például egyes vastagbél-, mell-, hü-veiy-, tüdő- és óőrtumomk) esetén., amelyek növekedése és szétterjedése szignifikánsan függ a

VEGF funkció Ítél,

Egy másik szempont szerint az 0} általános képletű vegyületek várhatóan olyan primer és visszatérő szilárd tumorok növekedését gátolják, amelyek kialakulása kapcsolatban áll az EGF funkcióival, különösen olyan tumorok esetén, amelyek növekedése és szétterjedése szignifikánsan függ az EGF funkcióitól.

Egy további szempont szerint az 0) általános képletű vegyületek várhatóan olyan primer és visszatérd szilárd tumorok növekedését gátolják, amelyek kialakulása mind a VEGF. mind az EGF funkcióival kapcsolatban áll, különösen olyan tumorok esetén, amelyek növekedése és szétterjedése szignifikánsan függ a VEGE és az

EGF funkcióitól.

Gyógyászati felhasználásuk mellett az ü) általános képletű vegyületek és győgyászatfe-g alkalmazható- sóik a farmakológiában Is hasznosíthatok a VEGF receptor tirozin kinéz inhibitorok laboratóriumi állatokon (igy macskákon,, kutyákon, nyulakon, majmokon, patkányokon és egereken) kifejlett hatásának értékelésére szolgáló vizsgálati rendszerek fejlesztésére és standardizáiására., ami az új gyógyhatású anyagok felismerésére Irányuló kutatások részét képezi.

* Φ Φ X * Φ φ φ * Φ Φ X Φ Φ 4 φ » φ Λ Φ 4 ΦΦ-Α Χφ» χ

Φ Φ ♦ X φ φ **** ΦΦ XX φφ ΧΦφφ

Megjegyezzük, hogy a leírásban; használt éter” megjelölésen dietll-étert értünk,

A találmányt az oltalmi kör korlátozása nélkül a kővetkező példákban részletesebben ismertetjük. Ha a példákban mást nem közlünk, (I) a bepárfást forgó bepárló készülékben, csökkentett nyomáson végeztük, és a feldolgozási műveletsor megkezdése előtt az esetleges szilárd maradékokat (példa ui szárítószert) szűréssel eltávolítottak;

(II) a műveleteket szobahőmérsékleten (azaz 18-25^cC-on), Inért gáz (például argon) atmoszférában végeztük;

(Ili) az oszlöpkromatografáláshoz (gyorskromatografáláshoz) és a közepes nyomású foiyadékkromatografeláshoz 9385 kstaiögusszámú Merck Kieselge! szíllkagéit vagy 9303 katalögesszámű Merck Llcnrcprep RP-18 reverz fázisú szilíkagélt használtunk (mindketíőtgyártjá azE. Merck cég, Darmstadt, Német Szövetségi Köztársaság);

(Ív) a közölt hozam-adatok csak tájékoztatásra szolgálnak, és nem jelentik szükségképpen az elérhető maximumot;

(v) a megadott olvadáspontok korrigálásán értékek; az olvadáspontokat Mattiét· SP62 típusú automata olvadáspont-mérővel, olajfördos készülékkel vagy Koffer típusú forrólemezes készülékkel mértük;

(vi) az fi) általános képietü végtermékek szerkezetét mag-mágneses (rendszerint proton-mágneses) spektrum (NMR) és tömegspektrum (MS) felvételével igazoltuk; az ^H-NMR spektrumokat 24°€~οπ, 400 MHz frekvencián vettük fel, a kémiai eltolódásokat ó skálán adtuk meg ppm egységekben;

(vli) a közbenső termékeket esetenként nem azonosítottuk, és tisztaságukat vékonyrétegkromafegrafálással (TLC), nagyteljesítményű folyadékkromatografáfássa (HPLC), infravörös spektrum (ÍR) vagy MMR spektrum alapján értékeltük.

φφ φφ

X* Φφ φ« * Φ Φ Φ φ « ν, Φ Φ X ΦΦΦ ΦΦΦ φ * Φ X φ φ φ «»♦· φφ «* Φ4 χφφφ

4-(4-Brórn-2-fluor-aniiino}-6~metoxk7-(pöÍpendln~4dl-metoxí)~kinazolín előállítása

673 mg (1,2 mmól) 4-(4~öróm-2-fluor-anilino}~7-(1~(terc~butoxi-karbonll}~plperidin-4-ií-metoxij-8-metoxí-kinazoíln 1 ö ml metilén-kiohddal készített szuszpenziójához 3 mi tdfluor-eeetsavat adtunk. A reakcióelegyet 1 órán át szobahőmérsékleten kevertük, majd az Illékony anyagokat csökkentett nyomáson lepároltok. A maradékot víz és éter keverékével eldőrzsöitök. A szerves fázist elválasztottuk, és a vizes fázist éterrel mostuk. A vizes fázist 2 mólos vizes nátnum-hldroxld oldattal pH 10-re lűgosítottuk, és meiilén-klohddai extraháltuk. A szerves oldatot vízmentes magnézium-szulfát fölött szárítottuk, majd az oldószert csökkentett nyomáson lepároltuk. A szilárd maradékot éter és petroléter 1:í térfogatarányú elegyével eldörzsöltük, ezután a terméket kiszűrtök, éterrel mostuk, és csökkentett nyomáson szárítottuk. 390 mg (70,.5 %) cím szerinti vegyületet kaptunk. MS (ESI): 461-463 (MH}7 ^?H NMR spektrum adatai (DMlSO-d_e): 1,13-1,3 (m,2H), 1,75 (d,2Hk 1,87-2,0 (m,1H), 2,5 (d,2H), 3,0 (d,2H), 3,96 (s,3H), 3,98 (d,2H), 7,2 (s,1 H), 7,5 (dd,1Hj, 7,56 (f,1H}, 7,68 (dd,1H), 7,80 (s_:1H), 8,36 (s,1H), 9,55 (szs,1M).

Elemi analízis a C^H^N^QjSrF képlet alapján; számított; C: 54,7 %, H; 4,8 %, N; 12,1 %:

talált; C:54,5%, H: 4,9 %, N: 12,1 %.

A kiindulási anyagot a következőképpen állítottuk elő;

8,35 g (27,8 mmöl} 7-(benzil-oxi>4-lktór-6-metoxi-kínazolin-hídroktoríd (ez a vegyület például a WO 97/22596 sz. nemzetközi közzétételi Irat 1. példájában megadottak szerint állítható elő) és- 5,65 g (29,7 mmól) 4~brom~2-ííuör-anlíin 2ő0 ml 2-propanollal készített oldatát 4 órán át vlsszafolyatás közben forraltuk, A képződött csapadékot kiszűrtük, 2-propanoilal, majd éterrel mostuk, és csökkentett nyomáson szári-

jutottuk, 9,46 g (78 %) 7-(benzÜ-oxy*4--(4-bróm-2-fiuo'r-anBno)-8-metoxi-.k!nazo^:lin:-hídrokloridot kaptunk. MS (ESI); 486 (MH}\ ’H NMR spektrum adatai (OMSO~d_e, CD₃COOO): 4,0 (s,3H), 5,37 (s,2H)_f 7,35-7,.5 (m,4H), 7,52-7,62 (m,4H), 7,8 (d,1.H), 8,14 (s,1H), 8,78 (s,1H).

Elemi analízis a C2₃H_!7N₃O₃BrF.Ö,9 HCi képlet alapján: számított: 0: 54.2 %, H:3,7%, N: 8,6 %;

talált: C: 54,0 %, H: 3,7 %, N: 8,7 %.

9.4 g (19,1 mmól) 7-(benz1koxí)-4-(4-bróm-2-fíuor~ani0no)-8-metoxi-kinazoífn-hldrokiorid 90 ml trifluor-ecetsavval készített oldatát 50 percig vlsszafolyatás közben forraltuk. .Az. elegyet lehűlni hagytuk, majd jégre öntöttük. A kivált csapadékot kiszűrtük, és 70 ml metanolban oldottuk. Az oldat pH-iát tömény vizes ammónia oldattal 9 és 10 közötti értékre állítottuk, és az így kapott elegyet térfogatának felére bepároltuk. A kivált csapadékot kiszűrtük, vízzel, majd éterrel mostok, és csökkentett nyomáson szárítottuk. 5,80 g (82 %) 4-(4-brőm-2-fluor-anillno)-7-bldroxi-6~metoxí-kínazolint kaptunk. MS (ESI); 368 (MKf.

Ή NMR spektrum adatai (DMSÖ-d_fí, CO₃COOD>: 3,95 (s,3H), 7,09 (s,IH),

7,48 7,54 (t, IH), 7,64 (d,1H), 7,79 (s,1H), 8,31 (s,1H).

Elemi analízis a Ο^Η, ,Ν^Ο^ΒγΕ képlet alapján; számított: C: 49,5 %, H: 3,0 %, N: 11,5 %;

talált: C; 49,5 %, H: 3,1 %, N111,3%.

g (0,19 mól) 4-plperidin-karbonsav-efil~észter 150 ml etil-acetáttal készített,

5^yC-ra hűtött oldatához részletekben, a hőmérsékletet ö-5^i;C-on tartva 41,7 g (ö,19 mól) di-térc-butii-dikarbonát 75 ml etil-acetáttal készített oldatát adtuk. A reakdőelegyet 48 órán át szobahőmérsékleten kevertük, majd 300 ml vízbe öntöttük. A szerves fázist elválasztottuk, egymás után 200 ml vízzel, 200 ml 0,1 mólos vizes sósavaidattál, 200 ml telített vizes nátríum-hldrogén-karbonát oldattal, végül 20G mi vizes nátrb um-klortd oldattal mostuk, vízmentes magnézium-szulfát fölött szárítottuk, majd bepá-34roltük. 48 g (98 %) 4~{1-(terc-butoxi~karbonil)~piperidlnj~karbonsav~etll-észtert kaptunk.

*H NMR.spektrum adatai <CDC!₃): 1,25 (t,3Hh 1,45 (s,9H>, 1,55-1 ,70 (m₍2H), 1,8-2,9 (d,2H), 2,35-2,5 (m,1H), 2,7-2,95 (t2H), 3,9-4,1 (szs,2H), 4,15 (q,2H).

g (0,19 mól) 4-(1-(terc~butoxi-karbonil)-piperídín)-karbonsay-efil~észfer 189 mí vízmentes tetrahidrotoránnaí készített, O°C~ra hűtött oldatához részletekben 133 ml '1 mólos· tetrahidrofurános. iítium-atomínium-hídnd oldatot (-0,133 mól iítium-alumíniurn-hídríd) adtunk. Az elegyet 2 érán át ö“C-on kevertük, majd 39 ml vizet, ezután 19 ml 2 mólos vizes nátnum-hidroxíd oldatot adtunk hozzá. A kivált csapadékot diatómaföldön kiszűrtük, és etil-acetáttal mostuk. A szüdetet vízzel és vizes nátnum-klodd oldattal mostuk, vízmentes magnézium-szulfát fölött szárítottuk, majd bepároltuk.

36,3 g (39 %) 1-(terc-butoxi-karbonll)-4-(bldroxi-metil)-pipehdlnt kaptunk. MS (El):

215 (M^:).

M NMR spektrum adatai (CDCI_S): 1,05-1,2 (m,2R). 1,35-1,55 (m,10H), 1,6-1,8 (m,2H), 2,6-2,8 (t,2H), 3,4-3,6 (t,2K), 4,9-4,2 (szs,2H).

52, 5 g (0,244 mól) 1“'(terc-buioxí-karboníl)-4-(hidrox.!-metií)-píperldin 525 mi terc-butil-meíii-éterrei készített oldatához 42,4 g (0,378 mól) 1,4-diaza-bíoiklol2,2,2]oktánt adtunk.. Az elegyet 15 percig szobahőmérsékleten kevertük, majd 5^:í3C-ra hűtőttűk, és 2. óra alatt, részletekben, a hőmérsékletet ö^cC~on tartva 82,8 g (0,33 mól) toluöl-szultoníl-klorld 525 ml terc-butihmetíl-éterrel készített oldatát adtuk hozzá. Az elegyet 1 órán át szobahőmérsékleten kevertük, majd 1 liter petroiétert adtunk hozzá. A kivált csapadékot kiszűrtük, és a szüdetet bepároltuk, A kapott szilárd maradékot éterben oldottuk, és az oldatot: kétszer 500 ml 0,5 mólos vizes sósavoldattal, vízzel, telített vizes nátdum-hidrogén-karbonát oldattal, végül vizes nátdum-kiorid oldattal mostak. A szerves fázist vízmentes magnézium-szulfát fölött szárítottuk, majd bepámltuk,

76,7 g (85 '%) l:-(terc-butoxí~karbonlí)~4-(4-metíl~fenilszulfonii~oxi-metll)-pipendinl kaptunk. MS (ESI): 392 (MNa)’.

-35'M NMR spektrum adatai (CDCh): 1,0-1,2 (m,2H), 1,45 (s,9H), 1,65 (d,2H), 175-1,9 2,45 (s,3H), 2,55-275 (m,2H), 3,85 (d,1H), 4,0-4,2 (szs,2H), 7,35 (d,

2H), 7,8 (d,2H).

546 mg (1,5 mmol) 4~(4-bróm-2-áuor~anllíno)-7-hidroxi-6~metoxl~kinazolín 5 ml dlmetíl-formamiddal készített szuszpenzíójához 414 mg (3 mmól) kálium-karbonátot adtunk. Az. elegyet 10 percig szobahőmérsékleten kevertük, majd 638 mg (1,72 mmól) 1-(fero~butoxl-karbonll)-4-(4-mefil-fenliszulfoníl-oxi-mafi!)-p!peddlnt adtunk hozzá, és a kapott elegyet 2 órán át S5^cC-on tartottuk. Lehűlés után az elegyet 20 ml hideg vízbe öntöttük. A kivált csapadékot kiszűrtük, vízzel mostuk, és csökkentett nyomáson szárítottuk. 665 mg (79 %) 4-(4-bróm-2-fluQr~anílíno)-7-j1-(terc-buíoxí-karbonil)-pi:pehdin-4-il-metQXi|-8-metoxi-kínazoiint kaptunk. MS (ESI): 581-583 (MH) 3 ⁵H NMR spektrum adatai (DMSO~d₆); 1,15-1,3 (m,2H), 1,46 (s,9H), 1,8 (ö,2H), 2,0-2,1 (m,1H), 2,65-2,9 (m,2H), 3,95 (s,3H), 4,02 (szs,2H), 4,05 (d,2H), 7,2 (s,1K),

7,48 (d,1H). 7,55 (f,1 H), 7,85 (d,1H), 7,8 (s,1H), 8,35 (s,1H), 9.55 (szs,1H).

2«U>éida

4-(4-Sróm-2“fluor-anlÍlno)-6-metoxl~7-{1-metil-pipendin-4-ii-metQxh-kínazoiin-hidroklorld előállítása

139 mg (0,3 mmól) 4-(4-bróm-2-^uor-anllíno)-8-metoxi-7-(plper:ídln~4-íl-meíoxf)-kinazolin (az 1. példa szerint előállított vegyület) 1,4 ml tetrahidrofurán és 1,4 ml metanol elegyével készített oldatához 50 pl 37 %-os vizes formaldehid oldatot (0,6 mmol formaldehid), majd 23 mg (0,36 mrnöl) nátnum-ciano-bórhidrtdet adtunk. Az elegyet 1 órán át szobahőmérsékleten kevertük, ezután vizet adtunk hozzá, és az Illékony anyagökaí csökkentett nyomáson lepároltuk, A maradékot vízzel eldörzsöltük, a szilárd anyagot kiszűrtük, vízzel mostuk, és csökkentett nyomáson szárítottuk. A szilárd anyagot semleges alumínlum-oxldon krometografálva tisztítottuk: eluálószerként kezdetben metilén-kierldot, azután 1:1 térfogatarányü mefílen-klorib/elll-acetát elegyet, végül 50:45:5 térfogatarányü mefllén-klorid/etil-acetát/metanol elegyet használtunk. A * 9 9 φ « χ χ φ e * * X A φ X V χ « Φ fc * * X Φ « ♦ ♦ * * X » ♦ ♦- Φ φ φ«Χ;φ várt. terméket tartalmazó frakciókat csökkentett nyomáson bepámltuk, A kapott fehér szilárd anyagot 3 ml metiién-klond és 3 ml metanol et egyében oldottuk, és az oldathoz 0,5 mi 3 mólos éteres bidrogén-kiond oldatot adtunk. Az. illékony anyagokat csók kenteit nyomáson leporoltuk. A kapott szilárd anyagot éterrel eldörzsöltök, kiszűrtük, éterrel mostuk, és csökkentett nyomáson szárítottuk. 120 mg (69 %) cím szerinti vegyöletet kaptunk. MS (ESI); 476-47? (MHf.

A 4-(4-bróm-2-fluor-anfoo>6-metoxÍ-?-(1-met}l-píperidln~4-it-metoxi)-kinazo0n· -hldroklorld protonált formájának NMR spektruma azt mutatta, hogy a termék két különböző forma f A” és B” forma) ”A^!i;'^!B kb, 9:1 arányú keveréke.

^!H HMR spektrum adatai (DMSö-d₆, CF₃CÖOD); 1.55-1,7 (m, A forma, 2H), 1,85-2,0 (m, 8 forma, 4H), 2,03 (d. ”A” forrna, 2H), 2,08-2,14 (szs, “A” forma. 1H), 2,31-2,38 (szs, 8” forma, 1H), 2,79 (s, A forma, 3H), 2,32 (s, B” forma, 3H), 3,03 (t, ”A” forma, 2H), 3,21 (szs, ”8” forrna, 2H), 3,30 (szs, 8 forma, 2H), 3,52 <d, A forma, 2H), 4,02 (s,3H), 4,12 (d, ”A” forma, 2H>, 4,30 (d, Ί-Γ forma, 2h), 7,41 (s.1H),

7,5-7,65 <m,2H), 7,81 (d,1H), 8,20 (s,1H), 8,88 (s,1H).,

Elemi analízis a C^N^BrF.Ö.S H₂O.2,65 MCI képlet alapján; számított; C: 45,8 %, H; 4,8 %, N: 9,7 %;

talált-. C: 46,0 %, H;5,2%, N; 9,8 %.

2b. példa

4-(4-Bróm-2-fiuor-anilino)-B-mefoxi-7-(1-rnetii-plperidim4-ij-metoxj)-kinazolin lít

3,49 g (8,22 mmól) 4-(4-bróm-2-fluor~anillno)-7“(1 -(terc-hutoxl-karbonll)-plperidln-4-ll-mefoxi)-6-metoxi-kinazolin (az 1. példában a kiindulási anyag előállításánál le írtak szerint kapott vegyület) 35 ml hangyasávval készített oldatához 3,5 ml 37 %-os vizes formaldehid oldatot (42 mmői formaldehid) adtunk. A reakcióelegyet 4 érán át 95°C~on tartottuk, majd az Illékony anyagokat csökkentett nyomáson lepároltuk. A maradékot vízben szuszpendáltuk, és a szuszpenziö pH-ját lassan adagolt 2 mólos

X 4 4 X- A 4 Λ χ χ y 4 4 4 44 X A AV V * * * 4 K X »XX4 44 K« 44 4>Ay vizes nátnum-hidroxid oldattal 10,5-re állítottuk.. Ezután a szuszpenzlót etil·acetáttal extraháltuk. A szerves fázist vizes náfrlum-kíorid oldattal mostuk, vízmentes magnézium-szulfát fölött szárítottuk, majd bepámítuk. 2,81 g (88 %) cím szerinti vegyületet kaptunk. MS(ESI)·. 475-477 <MH)\ ’H NMR spektrum adatai (DMSO-d₈): 1,3-1,45 (m,2H), 1,8 (d,2H), 1,7-1,9 (m, 1R), 1,95 (t,2H), 2,2 (s,3H), 2,85 td,2H), 3,96 (s,3H), 4,05 (d,2H). 7,19 (s,1H), 7,5 (d, 1H), 7,55 (1,1 Hj, 7,67 (d,1H), 7,81 (&JH), 8,37 (s,1H), 9,54 (sJH),

Elemi analízis a C₂₂H₂₄N,₄O₂BrF képlet alapján:

számított: €:55,374, H: 5,1 14, N: 11,8 14;

talált: €:55,474, H: 5,1 14, N: 11.8 14.

fluor-aníilno)-5-metoxl-7-(1-metiI-píperidin~4“il-metoxb-kinazeHn

-hidrokiond előállítása

208 mg (0,6 mmól) 4-kl:ór~6-melox!-7-(1-metil-pipendtU:-4-íl-mstoxi)'-k!nazoíin és 142 mg (0,74 mmól) 4-hrQm~2-fiuor~amíín 3 ml ízopropanollsl és 118 pl 5 mólos ízopropanoíos sósavoldattal készített 'szuszpenzióját 1,5 órán át visszafolyatás közben forraltuk. Lehűlés után a csapadékot kiszűrtük, izöpropanolial, ezután éterrel mostuk, és csökkentett nyomáson szárítottuk. 304 mg (80 14) cím szerinti vegyületet kaptunk.

Elemi analízis a €₂₂Η₂₄Ν₄Ό₂ΒγΕ.0,5 H₂O,1 ,8 HCI.Ö,8 izopropanoí képlet alapján számított: C: 48,2 %, H: 5,0 14, M; 18,1 %:

talált: 0:47,9%,. H: 4,9 %, N: 10,0 14.

A 4-(4-bróm-2-fluor-anllfoo)-8~u?etoxi~7~(1-metil-píperldin-4-il-mefoxl)-kinazolln-hldroklorid protonéit formájának RMR spektruma azt mutatta, hogy a termék két különböző forma (A és “B” forma) Á’fB' kb. 9:1 arányú keveréke.

¹H NMR spektrum adatai (OMSO-dg): 1,8-1,78 (m·, A forma, 2H), 1,81-1,93 (szs, Έ” forma, 4H), 1,94-2,87 <d, A forma, 2H), 2,08-2,23 (szs, ^KA^K forma, IH), 2,29-2,37 {szs, B“ forma, 1H), 2,73 (d, *A” forma, 3R), 2,77 (d, Έ” forrna, 3H), 2,93-3,10 (q, A” forma, 2Η), 3,21 (szs, 8 forma, 2Η), 3,27 (szs, 8 forma,. 2H), 3,42-3,48 (d, A” forma, 2H), 4,04 (s,3H>, 4,10 (d, A^!! forma, 2H), 4,29 (d, 8“ forma, 2H),

7,49 (s,1H), 7,53-7,61 (m,2H), 7,78 (d,1H>, 8,47 8,81 10,48 (szs, A forma, 1Η1, 10,79 (szs, Έ forma, 1H), 11,90 (szs, 1K).

Egy újabb NMR spektrumfelvétel előtt a 4“(4-bróm-2-fluor-anliino)-6-metöxi~7-(1-metil~píperidín-4~ii-metöxl)-kinazolin-hidrokloríd hexadeutero-dimetil-szulfoxídos oldatához kevés szilárd kálium-karbonátot adva a küvettában felszabadítottuk a bázist. Az ezután felvett NMR spektrum már csak egyetlen forma jelenlétét mutatta, ’H NMR spektrum adatai (DMSÖ-dg + szilárd K₂CO₃); 1,3-1,45 (m,2R), 1,75 (d, 2H>, 1,7-1,9 (m,1H), 1,89 (t,2.H),: 2,18 (s,3H), 2,8 (d,2H), 3,98 (s,3H), 4,0 (d,2H), 7,2 is,ÍH), 7,48 (d,1H), 7,55 (UH), 7,58 (dJH), 7,8 (s,1H), 8,35 (s,1H), 9,75

A fentiek szerint előállított 4-(4-bróm-2-'nuor-anílino)-8~metoxi-7~(1~mstll~píperidln-4-ií-metoxí)-kÍnazolin~hldroklorld mintáiéból a következőképpen szabadítottuk fel a

4-(4-bröm-2~fiuor~anllino)-5-mstoxi-7-(1-metik~pipeddin-4~íl-metoxl)-kínazolin bázist: 50 mg 4-(4-bróm-2-9uQr-an!Uno)-6-metox.i-7-(1~mefií^piperidfn-4-il-metox.í)-ki'nazolln-hídrokloritíöt 2 ml metllen-klorídban .szuszpendáltunk, és a szuszpenziót telített vizes nátnum-bidrogén-karbonát oldattal mostuk. A metílén-klondos oldatot vízmentes magnézium-szulfát fölött szárítottuk, és az illékony anyagokat lepároltuk. 4-(4-Bröm~2-fluor~antlmo)-8-'metoxi-7-(1-metll-piperídín~4-íkmetoxl)~kinazoiint (szabad bázis) kaptunk.

Az így kapott szabad bázis Ή NMR spektrumának adatai .(ÖMSO-d§): 1,3-1,45 (m,2K), 1,75 (d,2Hl 1,7-1,9 (mJH). 1,9 (t_t2H), 2,19 (s,3H), 2,8 (d,2H), 3,95 (s,3H), 4,02 (d,2H),_; 7,2 (s,1H), 7,48 (d,1H), 7,55 (UH), 7,88 (dd,1.R), 7,8 (s,1H), 8,38 (s,1 H),

9,55 (szs,1H).

Egy újabb RMR spektrum felvétele előtt a fent ismertetett 4-(4-bróm-2-fluor-anllinö)“8-metoxí-7-(1 -metll-píperidtn-4-it-metoxl)-kinazolln (szabad bázis) hexadeuíero-dimetil-szulfoxidos oldatához kevés deutero-trltluor-ecetsavat adtunk. Az iqy klalab « ** kitolt .4-<4-fo-FÓm-2-ttuo-r-anii-ino)~6-matoxl-7-(1-m-etii-pipend.in-44l-metoxi>-kinazöíb> rtríffoor-aeelát só proíonáit formájának NMR spektruma ismét két forma CA és 8* forma) jelenlétét mutatta ”A“:8^!'' körülbelül 9:1 arányban.

Ή NMR spektrum- adatai (ÜMSO-dg, CF₃COOO): 1,5-1,7 (rn, A” forma, 2R), 1,93 (szs, ”8 forma, 4R), 2,0-2,1 (d, ”A forma, 2Ή), 2,.17 (szs, ^WA forma, IH), 2,35 (szs. B” forma, ÍR), 2,71 (s, ^SSAforma, 3H), 2,73 (s, *8” forma, 3H), 2,97-3.09 (I, A forma, 2R), 3.23 (szs, 8“ forma, 2R), 3,34 (szs, 8” forma, 2H), 3,47-3.57 (d, ”A forma, 2H), 4,02 (s,3H), 4,15 (d, A* forma, 2H), 4,30 (d;, ”8 forma, 2H), 7,2 (s,1H), 7,3-7,5 (m,2H), 7,6 (d,1H), 7,9 (s,1R), 8,7 (s,IH).

A kiindulási anyagot a következőképpen állítottuk elő:

19,0 g (0,1 mól) 4-bióroxC3-rnefoxi-benzoesev-etií-észter és 28 g (0,2 mól) kálium-karbonát 200 ml vízmentes dlmetil-formamlddal készített szuszpenziójához 40 g (0,11 mól) 1-(terc-butoxi~karbonli)~4~(4~metii-fenilszuífonii-oxi-metll)-píperidint (az 1, példában a kiindulási anyag előáll hasánál leírtak szerint előállított vegyület) adtunk. Az elegyet 2,5 órán át 95°C-on kevertük, maid szobahőmérsékletre Kötöttük, és víz és etlí-aceláí/éfer elegy között megoszlattuk. A szerves fázist vízzel és vizes nátrlum-klorid oldattal mostuk, vízmentes magnézium-szulfát fölött szárítottuk, majd depóróltűk. A kapott olajos maradékot pefroiéterből kristályosítottuk; a szuszpenziőt éjszakán át. 5^fíC~on tartottuk. A szilárd anyagot kiszűrtük, petroíéterrel mostuk, és csökkentett nyomáson szántottuk. 35 g (89 %) 4-.(1 -(terc-büfoxí~karbonÍi)-piperidln-4-ii-mefoxij-3-m-etoxf-benzossav-etil-észtert kaptunk; op..: 81-83°C. MS (FSl); 415 (MHa)7

Ή NMR spektrum adatai (CDCI₃): 1,2-1,35 (m,2R), 1,4 (í,3H), 1,48 (s,9R), 1,8-1,9 (d,2H), 2,0-2,15 (m,2H). 2.75 (f,2R), 3,9 (d,.2H), 3,95 (s,3H), 4,05-4,25 (szs,2H),

4,35 (g,2H), 6,85 7,55 (s,1H), 7.85 (4,1 H).

Elemi analízis a C₂(K₃₁NO_&.0,3 H₂O képlet alapján: számított: 0:63,2%, H: 8,0 %, R: 3,5 %;

talált; C; 63,4 %, H: 8,0 N: 3,5 %.

* φ #» g (89 mmól) 4-{1-(terc-bufoxi-karboni1)-pipendm~4-i.!-meíoxíj-3-metoxi-bonzoesav-efli-észter 35 mi bangyasavval készített oldatához 35 ml 37 %-os vizes formaldehid oldatot (420 mmoi formaldehid) adtunk. Az elegyet 3 órán át 05°C-on kevertük. majd az illékony anyagokat lepáaroltuk. A maradékot metiién-kfoodban oldottuk, és 40 ml 3 mólos éíeres'hidrogén-kloríd oldatot (120 mmól HCI) adtunk hozzá. Az ele gyet éterrel hígítottuk. és szilárd anyag kiválásáig dörzsöltük. A kivált szilárd anyagot kiszűrtök, éterrel mostuk·,, és éjszakán át csökkentett nyomáson 5Ö°C-on száritottuk.

30,8 g (mennyiségi hozam) 3-metoxi-4-(1-metikpipehdin-4-íkmetoxí)“benzoesav-etil-észtert kaptunk. MS (ESI): 358 (ΜΗΓ.

’H NMR spektrum adatai (DMSO-d^): 1,29 (t,.3H), 1,5-1,7 (m,2H), 1,95 (d,2H), 2,0-2,45 <szs,1M), 2,72 (s,.3H), 2,9-3,1 .(m,2H), 3,35-3,5 (szs,2H), 3,85 (s,3H). 3,9-4,05 (szs.,2H), 4,3 (g,2H), 7,1 (d,1H), 7,48 (s, 1H), 7,5 (d,1H).

30,8 g (89 mmól) 3-meioxl-4~(1 -metli-plpendln-4-lkmetoxl)-benzoesav-etll-észter 75 mi metilén-klonddal készített oldatát ö-5°C~ra hűtöttük. Az oldathoz 37,5 ml trifiaor-ecetsavat adtunk, majd 15 perc alatt 7,42 ml füstölgő (24 mólos) salétromsav (178 mmól salétromsav) 15 ml metilén-kloriddal készíteti oldatát csepegtettük be. A beadagolás után az oldatot szobahőmérsékletre hagytuk melegedni, és 2 órán át szó bahömérsékleten kevertük. Az illékony anyagokat csökkentett nyomáson lepároltuk, és a maradékot 50 ml metilén-kloridban oldottuk. Az oldatot 0-5'C-ra hűtöttük, és étert adtunk hozzá. A kivált csapadékot kiszűrtük, és csökkentett nyomáson 5ö°C-on szárítottuk, A szilárd anyagot Söü ml metilén-kloridban oldottuk, és az oldathoz 30 ml 3 mólos éteres hídrogén-klorid oldatot, majd 500' ml éteri adtunk. A kivált szilárd anyagot kiszűrtük, és csökkentett nyomáson 5Ö°C~on szárítottuk. 28,4 g (82 %) 3-mefoxi-4-.(1 -metii-piperidlm4-il-n^etoxi)-8~nitro-benzoesaV”etil-észtért kaptunk. MS (ESI):

(MHf.

*♦ AX *A A A AX * * X # A * * Á 9

A X A AAX XX-A A

A A A A X A

4AAA AA <í AA A A x »

Ή NMR spektrum adatai (OMSO-d_s): 1,3 (t_s3H), 1,45-1,65 (m,2H), 1,75-2,1 (m,3H), 2,75 (s,8H), 2,9-3,05 (m,2H). 3,4-3,5 (d_t2H), 3,95 (s,3H), 4,05 <d,2H), 4,3 (q.2H), 7,32 (s,1H), 7,66 (s,íH).

3,39 g (10 mmóí) 3-metoxM-('1-metil-.pipendín-4-ll^:-metoxl>8-nítro-benzoesav-etil-észter és 339 mg 50 % nedvességtartalmú 10 %-os platina/csontszén katalizátor 30 mi metanollal' készített oldatét a hidrogénfelvétel megszűnéséig 1,3 atmoszféra nyomáson hidrogéneztük. Az elegyet. szűrtük, és a szűrletet bepároltuk. A maradékot 30 ml vízben oldottuk, és az oldatot telített vizes nátrium-hídrogén-karbonát oldattal pH 1ö~re lűgosífottuk. Az elegyet 1:1 térfogatarányú eíil-acetát/éter eleggyei hígítottuk, és a szerves fázist, elválasztottuk. A vizes fázist etil-acetát és éter elegyével tovább extraháltuk. A szerves fázisokat egyesítettük, vízzel és vizes nátnum-klorid oldattal mostuk, vízmentes magnézium-szulfát fölött szárítottuk, szűrtük, és a szürieíet bepároltuk. A kapott szilárd maradékot éter és petroléter elegyével eldörzsölfük. A szilárd anyagot kiszűrtük, petroléterrel mostuk, és csökkentett nyomáson 8Ö''C-on szárítottuk. 2,58 g (30 %) 6-amlno-3~metoxÍ~4“(1metil-pipebdin-4-il-metoxí)-benzoe~' sav-etil-észtert kaptunk; op.: 111-112°C. MS (ESI): 323 (MHf.

^!'H NMR spektrum adatai (CDCI₃)·: 1,35 (t.3H), 1,4-1,5 (m,2H), 1,35 (m,3H),

1,95 (f,2H), 2,29 (s,3H), 2,9 (d,2H), 3,3 (s,3H), 3,35 (d,2H), 4,3 (q,2H), 5,55 (szs,2H),

8,13 (s,1H), 7,33 (s,1H),.

Elemi analízis a H₂O képlet alapján:

számított: 0:82,8%, H: 8,2 %, N: 8,6 %:

talált: C: 32,8%, H:8,5%, N:8,3%,

18,1 g (50 mmói) 8-amlno~3-metoxí-4~(1~metli-piperidin-4-li-mefoxl)-benzoe~ sav-efil-észter és 5,2 o (50 mmől) formarnidin-acetát 130 ml 2-meíöxl-eíanoÍlal készttett oldatát 2 órán át 115^öC-on tartottuk. Az elegyhez 4 óra alatt, 33 percenkénti részletekben 10,4 g (100 mmöl) formamldin-acetátot adtunk. Az utolsó aoyagrészíet beadása után a melegítést még 30 percig folytattuk, majd az elegyet lehűlni hagytuk, és φφ az illékony anyagokat csökkentett nyomáson lepárolfak. A kapott szilárd anyagot 100 rnl etanol és 50 ml metilén-kiohd ©legyében oldottuk. A csapadékot kiszűrtük, és a szörletet 1ÖÖ ml végtérfogaíra bepároltuk. A kapott szuszpenziót 5^:;C-ra hütöttnk. A szilárd anyagot kiszűrtük, hideg, etanolial, majd éterrel mostuk, és éjszakán át csökkentett nyomáson 80 Α3-οη szárítottuk. 12,7 g (7Ö %) 6-metoxi-7~(1-meiil-plperídin-4~íl~metoxi)~3,4-díhídrQ-kínazofin-4~-oof kaptunk. MS (ESI); 304 (FvlH) \

Ή HMR spektrum adatai (DMSO-d₆); 1,25-1,4 (m,2H), 1,75 (d,2H), 1,9 (t,1H), 1,9 (s,3H), 2,16 (s,2H>, 2,8 (d,2H), 3,9 (s,3H), 4,0 (d,2H). 7,11 (s,1H), 7,44 (s,1H), 7,97 (sJH).

2,8 g (9,24 mmól) :6-metox.i-7-(1-mefíl-piper)din-4-tl-rnetoxi)-^:3₎4~dibidro-kinazolin-4-on 2S0 μΙ dimetil-formamidot tartalmazó 28 mi tíonll-kionddal készített oldatát 1 órán át 85^f,C-on visszafoíyatés közben forraltuk. Lehűlés után az illékony anyagokat leporoltuk. A kapott csapadékot éterrel eldörzsöltük, kiszűrtük, éterrel mostuk, és csökkentett nyomáson szárítottuk. A szilárd anyagot metilén-klohdhan oldottuk, és az oldathoz telített vizes nátrium-hidrogén-karbonát oldatot adtunk. A szerves fázist elvé iasztottuk, vízzel és vizes náthum-kiorid oldattal mostuk, vízmentes magnézíum-szuifátfölött szárítottuk, majd hepároltuk. 2,9 g (98 %) 4-k!Ör-6-metoxl~7-(1-metll-pípen~ din-4-íl~meioxí}~kínazo!ini kaptunk. MS (ESI); 322 (MHf.

Ή NMR spektrum adatai (DMSö~d§): 1,3-1,5 (m,2H), 1,75-1,9 (m.,3H), 2,0 (t, 1H), 2,25 (s,3H), 2,85 (d,2H), 4,02 (s,3H), 4,12 (d_;2H), 7,41 (s,1H), 7,48 (s,1H), 8,9 (s,1H).

-A 6-metöxi~7~(1-mefll·piperídin-4~Π~rneiöxíj~3,4~dihldro-kinazoiin-4~or·t a következő eljárással is előállítottuk:

8,48 g (30 mmol) 7~(benzil~oxí)“6-metoxí-3,4-dítildro-kínazoliR-4-on (a WO 97/22596 sz., nemzetközi közzétételi írat 1. példájában leírtak szerint előállított vegyölet) 70 ml dímefil-tdrmamiddai készített oldatához részletekben, 20 perc alatt 1,44 g 60 %-os ásványolajos náthum-hídhd diszperziót (36 mmól nátrium-hidrid) adtunk, és * ♦ * V

ζ.; χ az -elegyet 1.5 órán át kevertük. Ezután az elegyhez részletekben 5,65 g (37,5 mmól) klórmefif-pivalátot adtunk, és a kapott elegyet 2 órán át szobahőmérsékleten: kevertük, A reakcíöüeiegyet 100 mi etil-acetáttal hígítottuk, és 400 ml jeges víz és 4 mi 2 mólos vizes sósavoldat elegyébe öntöttük. A szerves fázist elválasztottuk, és a vizes fázist eíö-acefátfsí extraháltak, A szerves oldatokat egyesítettük, vizes nátrlum-klorld oldattal mostuk, vízmentes magnézium-szulfát fölött szárítottuk, végül az oldószert lepároltuk. A maradékot éter és pefroléter elegyével eldörzsöltük. A szilárd anyagot kiszűrtük, és csökkentett nyomáson szárítottuk. 10 g (84 %) 7-(benzil-oxí)-€-metoxi-3-(pivaloli~oxi-metiU-3,4-dlhidro-kinazoiin~4~ont kaptunk.

Ή NMR spektrum adatai (DMSO-dg): 1,11 (s,9H), 3,89 (s,3H), 5,3 (s,2H), 5,9 (s,2H), 7,27 (s, 1H), 7,35 (mJH), 7,47 (t,2H), 7,43 (d,2H), 7,51 (s, 1H), 3,34 (s,1H).

g (17,7 romét) 7-(benzlí~oxl)~8-metoxi-3-(pivaloll-oxi-metll)-3,4-dlhidro-kioazolin-4~on, 700 mg 10 %-os paitádlum/csontszán katalizátor, 250 mi etii-acetát, 50 ml dimetll-forroarold, 50 ml metanol és 9,7 ml ecetsav elegyét 40 percig hidrogén atmoszférában kevertük, atmoszferikus nyomáson. A katalizátort kiszűrtük, és a szőriéiből tepároltuk az oldószert. A maradékot éterrel eldörzsölfük.. A szilárd anyagot kiszűrtük, és csökkentett nyomáson szárítottuk. 4,36 g (80 %) 7~hidroxi~6-metoxl-3-(pivaloil-oxl-metil)-3,4-dihidro-kinazolln-4-ont kaptunk.

•H NMR spektrum adatai (DMSO-d₆): 1,1 (s.9H), 3,39 (s,3H), 5,89 (s,2:H), 7,0 (s,1H), 7,48 (s,1H), 8,5 (s,1H).

1,53 g (5 mmól) 7-hidroxi-6-metoxl-3-(plvaloil-oxí~roetll)-3,4-dlbídro~klnazolln-4~ -on 20 ml metllén-klortddal készített szuszpenziójához nitrogén atmoszférában 1,7 g (6,5 mmöl) trtfenil-foszfint, majd 1,29 g (8 mmél) 1-(terc-butoxí-karbonil)-4-(bldroxi-metlh-pipeddlní (az 1. példában a kiindulási anyag előállításánál leírtak szerint kapott vegyüiet), végül 1,12 g (6,5 mmól) azodlkarbonsav-dietll-észter 5 mi metlíén-kionddal készített oldatát adtuk. A reakcióüelogyet 3ö percig szobahőmérsékleten kevertük, majd szilikagél oszlopra öntöttük, és 1:1,6:5, 6:4, végül 7:3 térfogatarányü etii-aceΦ * ΑΧ * Φ X * * A χ X φ ΦΦ X » X Φ »ΧΦ ΦΦΦ

X « Φ X Φ *φ X * XX ΦΦ *Χ táVpetroiéter eleggyel eluálfok, A várt terméket tartalmazó frakciók bepáriásával olajos anyagot kaptunk, ami pentános eldórzsölés hatására kristályosodott. A szilárd anyagot kiszűrtük, és csökkentett nyomáson szárítottuk. 232 g (92 %) 7-[1-(terc-bufoxi-karboníí)-píperidín-4-iFmetcxij-6-metoxi-3-(pivaloil-oxí-metil)-3,4-dÍhídro-kiriazoln-4-ont kaptunk. MS (ESI): 528 (MNal.

’H NM.R spektrum adatai (COC1₃): 1,20(s,9H), 1,2-1.25 (m,2H), 1,43 (s,9H),

1,87 (d,2:H), 2,05-2,2 (m,1H), 2,75 (t,2H), 3,98 (d,2H), 3,97 <s,3H), 4,1-4,25 (szs,2H).

5.95 (s,2H), 7,07 (s.lHk 7,63 (s,ÍH), 8,17 (s,1H).

Elemi analízis a képlet alapján;

számított; C: 62,0 %, H; 7,4 %, N; 8,3 talált; C: 81,8 %, H: 7,5 %, N: 8,3 %.

2,32 g (4,6 mmóí) 7~í1~(terc-butoxi-kerbonil)-plpehdín-4~il~metoxij-6-metoxi-3-(pívaloii-oxi-metil)-3₍4-dihidro-kinazolin~4-on 23 mi: meírlén-kloriddal és 5 ml trifluo-r-ecetsavval készített oldatát 1 órán át szobahőmérsékleten kevertük. Az illékony a~ nyagokat csökkentett nyomáson lepároltuk, és a maradékot etlhaceíát és vizes nátrium-hldrogén-karbonát oldatközött megoszlattuk. A szerves oldószert csökkentett nyomáson lepároltuk, és a maradékot szűrtük. A szilárd anyagot vízzel mostuk, csökkentett nyomáson szárítottuk, majd azeotrop desztílíáoíóva! toíuolt pároltunk le róla, végül ismét csökkentett nyomáson szárítottuk. 1,7 g <92 %)· 6-metoxi-7-{piperidin-4-|Kmetoxi)-3-(pÍvaíoÍI-oxí-metí!)-3,4-dihidro-kinazo1in-4-ont kaptunk. MS (ESI); 404 (MH)⁺.

’H NMR spektrum adatai (DMSO~d_s, CF₃.COQ); 1,15 (s,9H), 1,45-1,6 (m,2H),

1.95 (d,2H), 2,1-2,25 (m,lH), 2,95 (t2H), 3,35 (ά,2Η), 3,95 (s,3H), 4,1 (tí,2H), 5,95 (s, 2R), 7,23 (s,1H), 7,54 (s,1H), 8,45 (s.lH).

1,21 g (3 mmól) 5~metoxl~7~(piperídtm4-ll-metoxi)~3-(pivalok-oxl~mel:il)-3,4-dlhldro-kinaz.olin-4-on 10 ml teírahidrofurán és 10 ml metanol elegyéveí készített oldatához 501 al 37 %-os vizes formaldehid oldatot (6 mmóí formaldehid), majd részletekben 228 mg (3,8 mmóí) nátnum-ciano-borbídridet adtunk. Ας elegyet 30 percig szobaΦ X φφ * « φ * φ* X* ΦΦ t Φ Φ β 9 *

Λφφ φφ* X φ φ φ φ* «» ΦΦΦ*

-4 5hőmérsékleten kevertük, majd a .szerves oldószereket: csökkentett nyomáson íepároltuk, és a maradékot metílén-kloríö és víz között megosztattuk, A szerves fázist elválasztottuk, vízzel és vizes nátrium-klónd oldattál mostuk, vízmentes magnézium-szulfát fölött szántottuk, és az illékony anyagokat íepárolfuk. A maradékot éterrel eldörzsőífük. A kivált szilárd anyagot kiszűrtük, éterrel mostuk, és csökkentett nyomáson szárítottuk, 1,02 g (82 %) 6-rnetox!-7-(1~metil-píperídin~4-il-metoxi)-3-(pivaloikoxi~me~ tllj-3,4“dlhidrO“kínazolin~4-ont kaptunk. MS (ESI): 418 <MH)⁺,

Ή NMR spektrum adatai (C0CI₃): 1,19 (s,OH), 1,4-1,55 (m,2H), 1,9 (d,2H), 2,0 (t,2H). 1,85-2,1 (m,1H), 2,3 (s,3H>, 2,92 (d,2H), 3,96 (s,3H), 3,99 (d,2H), 5,94 (s,2K), 7,08 (s,1H), 7,63 (sJH), 8,17 (s,lH).

1,38 g (3,3. mmól) 6-mefoxí-7-(1-metil-pipen’dfn-4-ii-metoxí)-3-(píva:|oll-oxl-m:etlÍ)-3,4-dlhidro-:kínazolín-4-on 5 ml metanollal készített oldatához. 14 ml telített metanolos ammónia oldatot adtunk. .A reakciőeiegyet 20 órán át szobahőmérsékleten kevertük, majd a képződött szuszpenzíőt 10 ml metiién-kíoriddal hígítottuk., és a kapott oldatot szűrtük. A szúrletet csökkentett nyomáson hepároltuk, és a maradékot éterrel eldörzsöltük., A kivált szilárd anyagot kiszűrtük, éterrel mostuk, és csökkentett nyomáson szárítottuk, 910 mg (83 %) 6«metoxi-7-(1-meW^piperídín-4-ít~metoxí)~3,4“dihídro>· -kínazolin-4-ont kaptunk. MS (ESI): 304 (MHf.

Ή NMR spektrum adatai (OMSO-dg): 1,3-1,45 (m,2H), 1,75 (d,2H),. 1,7-1,85 (mJH), 1,9 (t,2H), 2,2 (s,3H), 2,8 (ö,2H), 3,9 (s,3H), 4,0 (d,2H), 7,13 (sJH). 7,45 (s,

1H), 7,99 ís.lH).

4-|4-Kiör-2-feor-aniiino)~6-mefoxi-7-(1~metil.-piperidjn-4-il-metöx;ükinazojin-hidroklorid előállítása mg -(0-,25 mmol) 4-kíör-8-inetoxl-7-(1-metií-pípendin-4-il-mstoxi)-kinazofin (a 2c. példában a kiindulási anyag előállításánál leírtak szerint kapott vegyület) 3 rní izopropanollal készített szuszpenzióiához 75 pl 3 mólos etanotos hídrogén-kíoríd oldatot φφ φ -X φ 9 χφ * Φ * X Φ Φ> Φ X * Φ χ χ Φ «τχ* Φφφ Φ

Φ λ Φ Φ Φ Φ

ΦΦΦ* ΦΧ ΦΦ Φφ (0,26 mmól HC1) adtunk. Az elegyet 5G°c~ra melegítettük, és 44 mg (0,3 mmöl) 4-klér-2-fluor~aniilnt adtunk, hozzá.. Az elegyet 30 percig visszafolystás közben forraltuk, majd lehűtötték, és 3 ml éterrel hígítottuk. A kivált csapadékot kiszűrtük, éterrel mostuk, és csökkentett nyomáson szárítottuk. 105 mg (82 %} cím szerinti vegyületet kaptunk. MS (ESI): 431-433 (MH)\

A 4-(4-któr-2-fluor-aniiino)-ö-mafoxí~7-(1-metíl-plperídin~4~ií~metoxí)~kinazolín-hldrokbnd protonéit formájának HMR spektruma azt mutatta, hogy a termék két különböző forma f A és ”B forma)· *A”:”8” kb. 9:1 arányú keveréke.

'H NMR.spektrum adatai (DMSO-d_s, CF₃COOD): 1,55-1,7 (m, ”A” forma. 2H), 1,85-2,0 (m, δ forma, 4H), 2,05 (d, A forma, 2H), 2,1-2,2 (m, A” forma, 1H), 2,35 (s,3H), 2,79 (s, “A” forma, 3h), 2,82 (s, “B^!I forma, 3H), 3,03 (t, ^!!A^M forma, 2H), 3.2-3,3 (m, Έ* forma, 2H), 3,3-3,4 (m, ^forrna, 2H), 3,52 (d, A forrna, 2H). 4.02 (s,3H),

4,13 (d, ”A forma, 2H), 4,3 (d, 8” forma, 2H), 7,41 (s,1H), 7,47 (dd, 1H), 7,83 (t, 1H), 7,69 (dd,1H), 8,19 is,IH), 8,88 (s, 1H).

Elemi analízis a C^H^Ö-jCíRCM H_SO.2 HCI képiét alapján: számított: C: 51,7 %, H: 5,3 %, N: 11,0 %;

talált: C: 51,8%, H:.5,6%, H: 10,9%.

3o, petoe

4-(4-Klőr-2-fiüor-anilino)-8-metoxÍÍ-7-( 1 -n

-hidrokfohd előállítása más.módszerrel

151 mg (1,1 mmól) 4~(hidro'xi-meti1)-1-metll-plperkib [J. Med. Chem. 16, 156 (1973)} és 250 mg (0,76 mmól) 4-(4-klór^2-fluor-anilíno)-?-hidroxi-8-metoxhkinazolín (a 7. példában a kiindulási anyag előállításánál leírtak szerint kapott vegyület) 5 mi metilén-klonddal készíteti oldatához 615 mg (2,3 mmól.) thíenil-foszííni, majd; 369 ni (2,3 mmól) azodikarbonsav-dietil-észtert adtunk. Az elegyel 30 percig szobahőmérsékleten kevertük, és ezután 51 mg (0,39 mmól) 4-(hidröxi-mefil)-1-metii-piperídint, 102 mg (0,39 mmöl) thfeníi-foszfint és 61 pí (0.39 mmól) azodikarhonsav-dsetil-észtert φφ * * χ φ X Φ Φ * φ Φ X ΦΦ* Φ*β *

Φ Φ φ * Κ Φ φφφφ φφ ΦΧ ΦΦ ΦΦΦΦ adtunk hozzá. Az elegyetmég 15 percig kevertük, majd az illékony anyagokat csökkenteti nyomáson lepároltuk. A maradékot oszlopkrcmatografálással tisztítottuk, eluálöszerként 70:1-0:20, majd 75:5:20, végül 50:0:20 térfogatarányű metíién-kíöríd/acetonitrit/meta-nol elegyet használtunk. A várt terméket tartalmazó- frakciókat egyesítettük, és az illékony anyagokat iepároítuk. A maradékot meülén-kiorid és metanol elegyében oldottuk, és az oldathoz 5 mólos izopropandlos hidrogén-klorid oldatot adtunk. A kapott szuszpenziót betöményítettük, a szilárd anyagot kiszűrtük,, éterrel mos tűk, és csökkentett, nyomáson szárítottuk. 15 mg (4 %) cím szerinti vegyületet kaptunk.

4. cékla lin előállítása

1,67 -g (8,08 mmól) 4-brárn~2 ,6~dlíluor-aníHn dime-til-fo-rmamiddál készített oldatához argon atmoszférában 372 mg 80 %-os ásványolajos nátbum-hiddd diszperziót (9,3 mmól nátriurn-hidrid) adtunk. Az elegyet 30 percig szobahőmérsékleten kevertük, majd 1,3 g (4,04 mmól) 4-klór-5-metoxi-7-(1-m-eüi-pípendin-4-ií-metGXi)-kín-azolín.t adtunk hozzá, és -a keverést még 20 órán át.folytattuk. Az elegyet 130 ml vízbe öntöttük, és a vizes elegyet etíl-acetáttal extraháltuk,. A szerves oldatokat vízzel és vizes nátrlum-klorid oldattal mostuk, vízmentes magnézium-szulfát fölött szárítottuk, és az illékony anyagokat lepéroítuk, A maradékot szilikagél oszlopon kromatogra-fálva tisztítottuk, eluálószerként kezdetben 95:5 térfogatarányú m-etöén-kfönd/metanol elegyet, majd- 90:10 térfögsfarányá metílén-klorid/1 %-os metanolo-s ammónia oldat elegyet használtunk. A várt terméket tartalmazó frakciókat egyesítettük -és bepároltuk. A maradékot éterrel eídörzsöitOk. A szilárd anyagot kiszűrtük., éterrel mostuk, és csökkentett nyomáson 50°C-on szárítottuk. 1,4 g (70 %) cím szerinti vegyületet kaptunk. MS (ESI): 493-495 (MHf

S* X« «X )lí ♦ < » « A X « « * β * « X ·* « » # » X « «««« <·« «χ «♦ «*χ<

¹H NMR spektrum adatai (OMSO-dg): 1,3-1,45 (m,2H), 1,8 (d,2H), 1.7-1,9 (m, 1H), 19 (t,2H), 2,17 (s,8H), 2,8 (d,2HK 3,95 (s,3H), 4,02 (d,2H), 7,2 (s,1 H), 7,63 <s,

1H), 7,8 (sJH), 7,82 8,35 (s,ÍH).

Elemi analízis a képiét alapján:, számítod: C: 53,8 %, H: 4,7 %, Ni 114 %;

0:53,8%, H; 4,8%, N:113%.

5, példa

4-(4-Kiór-2,6-dlfiuor-anllino)-6-metoxl-7-(1~metlkplperldln-4-il-mefoi<i)-l<lna20itn előállítása:

245 mg (0,784 mól) 4-klő.r-6-metoxi-7-(1-metil-píperidin-4-il-m-etoxi)-kína2oíínt (a 2c. példában a kiindulási anyag előállításánál leírtak szerint kapott vegyület) a 4. példában közösekkel analóg módon, 9 ml dimetil-formamidban, 78,5 mg 80 %~os ásványolajos nátnum-bidrid diszperzió (1,9 mmól nátrium-hidrid) jelenlétében 250 mg (1,53 mmól) 4~klőr-2.,6-di0uor~anilinnel: (lásd aa WO 97/30035 sz. nemzetközi közzétételi irat 15, példáját) reagáltattunk. 210 mg (61 %) dm szerinti vegyületet kaptunk. MS (ESI): 449-451 (MH)'.

Ή NMR spektrum adatai (DMSO-d_e): 13-1,45 (m,2H), 17-19 (m,1K), 1,3 (d,2H), 1,9 (1,2H), 2,2 (s,3H), 2,8 (ő,2H), 3,96 (s,3H), 4,02 (d,2H), 7,21 (s,1H), 7,52 (s,1H), 7,54 (s,1H), 7,82 (s,1H), 8,35 (s,1H).

Elemi analízis a O^jH-sN^O^CIF^ képlet alapján: számítod: C: 58,9 %, H: 5,2 %, N: 12,5 %;

C: 59,0 %, H: 5,3 %, N::12,5%.

A kiindulási anyagot a következőképpen állitottuk elő:

A WO 97/30035 sz. nemzetközi közzétételi Irat 15. példájában ismertetett 4-kióm2,8~di8uor-aniiln-hidrukfebdot mefiién-klodd és viz között megúsztattak, és az eíegyhez addig adtunk vizes nátdum-hídrogén-karbonát oldatot, amíg. a vizes fázis pH-ja 9 körüli értéket nem ért el, A szerves fázist elválasztottuk, vizes nátrium-klorid ♦ X

X »

X * Κ X X * X * X * *XX* χχ *

X X » *

X X »χ

XX

XX * ΧΦΦ X

X X

XX Χ**Χ oldattal mostuk, vízmentes magnézium-szulfát fölött szárítottuk, majd bepároítuk. A szabad 4-kló-r-2,6-dífluor-aniin bázist kaptuk.

47(2-Ruor-4-metil-aniilno)-6-m.etoxr-7-(1-metil-pípendí.n-4-?l-metoxi)-;kinazolÍn előállítása

200 mg (0,622 mmol) 4-klór-6-mstoxi-7-(1-meti!-píperidln-4-fl-meío-xi>kinazoiín (a 2c. példában a kiindulási anyag előállításánál leírtak szerint kapott vegyüiet) és 94 mg (0,764 mmöl) 2~ttuor-4~mefíl-anilin 5 mii izopropanol és 110 μί 8,2 mólos izopropanolos bídrogén-klohd oldat eíegyévelkészifettszuszpenziőját 1,5 órán át 80°C-on kevertük. Lehűlés után a csapadékot kiszűrtük, ízopropanoilat, majd éterrel mostuk, és csökkentett nyomáson szárítottuk. A szilárd anyagot oszlopkromatografáíással tisztítottuk, eluálószerkéní kezdetben 90:10 térfogatarányú metllén-klond/metanoí elegyet, majd δ %-os roetanolos ammónia oldat és metílén-klorld 19-:.90 térfogatarányú elegyét használtuk. A várt terméket tartalmazó frakciók bepárlásával 170 mg (81 %) cím szerinti vegyületetkaptunk. MS (ESI): 400 (MRf.

Έ NMR spektrum adatai (DMSO-d₀); 1,3-1,46 (m,2H), 16 (d,2H), 1,7-1:,9 (m, IH), 1,9 (t,2H), 2,2 (s,3H), 2,36 (s,3H), 2,6 (d,2H), 3,95 (s,3H), 4,01 (d,2H), 7,1 (d, IH), 7,13 (d,1H), 7,16 (s,1H), 7,4 (í,1H), 7,81 (s,1H), 3,32 (s,1H), 9,4 (sJH).

Elemi analízis a H_aO képlet alapján:

számított: C: 66,4 %, H: 8,7 %, N: 13,5%;

talált; C; 66,5 %, H: 8,7 %, N: 13,7 %.

4-(4-Klór-2-fiuor~ani0no)-6-mefoxl-7-(píperidin-4-ii-mefozü-kinazolín előállítása 585 rng (1,83 mmol) 4-(4-klőr~2-fiuor-snilino)-7~hídroxí-8“metoxí-klnazoiín 20 mi metilén-Woriddal készített oldatához a megadott sorrendben 590 mg: (2,75 mmót)

1-(tere-butoxí-karbonli)-4~(hldrcxí-matil)-piperidint (az 1. példában a kiindulási anyag előállításánál leírtak szerint kapott vegyüiet), 1,2 g (4,58 romol) trifeníl-foszílnt és 0,72 φφ χχ Φφ ΦΦ

Φ Φ Φ Φ X * Φ * * Φ χ χ * ΛΦΦ ΦΦΦ -«

X β> φ φ φ φ

ΦΦΦΦ X# φφ ΦΦ ΦΦΦΦ ml {4,-58 mmól) azodtkarbonsav-dietil-észtert adtunk, A reakcióelegyet 1 órán át szobahőmérsékleten kevertük, majd újabb 239 mg (0,91 mmól) trifenil-foszfínt és- 9,14 ml (0,91 mmól) azoálkarbonsav-dletll-észíert adtunk hozzá, 1,5 órás keverés után az Illékony anyagokat csökkentett nyomáson tepároltuk, és a maradékot osziopkromatografáláesal tisztítottuk, Eiuálöszerkén? 1:1 férfogatarányú etil-acetáVmetilén-klorid elegyet.'használtunk, Az így kapott nyers terméket közvetlenül felhasználtuk a következő lépésben,

A fentiek szerint kapott nyers termék 15- ml metilén-kloriddal és 4,5 ml tnfluor-ecetsavval készített oldatát 1,5 órán át szobahőmérsékleten kevertük. Az illékony anyagokat csökkentett nyomáson lepároltuk, és a maradékot víz és etil-scetát között megoszlattuk, A vizes fázist 2 mólos vizes náthum-hídroxíd oldattal pH 9,5-re lúgositottuk. A szerves fázist elválasztottuk, vízzel és vizes náírium-kterid oldattal mostuk, vízmentes magnézium-szulfát fölött szárítottuk, majd bepároltuk, A cim szerinti vegyületet kaptuk. fdS (ESI); 417-419 (MHf.

Ή NMR spektrum adatai (DMSO--d«);. 1,1-1,3 (m,2H), 1,75 <d,.2.H). 1,85-2.0 (szs,1HI, 2,55 (d,2H), 2,95 (-d,2H), 3,95 (s,3H), 4,9 (d,2H)_:, 7,2 (s,1H), 7,35 (dd,1R),

7,55 (dd.lH), 7,6 (UH), 7,8 (s,1H), 8,35 (s.íH), 9,55 (s, 1H).

A vegyület hídrokfarid-sóját a kövtkezőképpen állítottuk elő:

4-{4-k3ó-r-2-Huor-anH^:ino-)-6-m:eto-x!-7-{plpeddln”4-il-metoxl)-ki:nazol:int' metanol és metilén-klond eíegyében oldottunk, és az oldathoz 6 mólos éteres bldrogén-klorid oldatot adtunk.. Az illékony anyagokat csökkentett nyomáson tepároltuk, és a maradékot éterrel etdörzsöltök. A szilárd anyagot kiszűrtök, éterrel mostuk, és csökkentett nyomáson szárítottuk, 390 mg (a két lépésre vonatkoztatva 47 %} 4-(4-klör-2-fiuor>8-metoxl~7-(piperldin-4-il-meloxi}-klnazolln-hidrokloridot kaptunk.

Elemi analízis a C;;ÍH_2íö_sM<CiF.2,25 HC1 képlet alapján: számított: C: 50,6 %, H; 4,9 N: 11,2 tarait: Cz 50,4 %, H: 5,z %»

N: 11.0 %.

• X ** *♦ * * X é χ * V » « * * χ « «ΧΧ *«Φ *.

««»«» XX X«r »« «»««>

A kiindulási anyagot a következőképpen állitcftuk elő:

1,2 g (4 mmól) 7-(benzil-oxí)-4-klór~6-meioxí-klnazolin-bldrokfodd (a WO

722596 sz, nemzetközi közzétételi irat 1, példájában leírtak szerint előállított vegyü let) és 444 ul (4 mmól) 4-któr-2-fiuor-anflm 40 ml 2~pröpanoüal készített oldatát 1,5 ö~ rán át vlsszafolyatás közben forraltuk- Lehűlés után a csapadékot kiszűrtök, 2-propanollal és éterrel mostuk, és csökkentett nyomáson szárítottuk. 1,13 g (84 %) 7-(benzii-oxi)-4-(4-kiór-2“fluor-anillno)~8-mefoxí-klnazoiin-hidroklorídot kaptunk; op.: 239-242^:C. MS (ESI): 410 (MHf.

^?H NMR spektrum adatai (DMSO-d_s): 4,0 (s,3H), 5,36 (s,2R), 7,39-7,52 (m, 9H), 8,1 (s,1H), 8,75 (sJH).

Elemi analízis a CvjH^N^öjCIF.I HCi képlet alapján: számított: C: 59,2 %. H:4,1%, M; 9,4 %;

talált; C: 59,2 %, H: 4,3 %, H: 9,4 %,

892 mg (2 mmól) 7-(benzll-oxi)-4-(4-klór-2-fiuor~anllino)-8-matoxl-kinazoíln-hld roklorid 10 ml trííluor-ecetsavvsl készített oldatát 50 percig vlsszafolyatás közben forraltuk, Lehűtés után az elegyet jégre öntöttük. A kivált csapadékot kiszűrtök, 10 ml metanolban oldottuk, és az oldatot vizes ammónia oldattal pH 11 -re lúgos itattuk. Az oldatot befőményitattuk, a kivált szilárd terméket kiszűrtük, vízzel, majd éterrel mostuk, és csökkentett nyomáson szántottuk. Sárga szilárd anyag formájában 480 mg (72 %) 4-(4-klór-2~fiuor-aníllno)-7-hldroxl~8-mefoxí-klnazollnf kaptunk; op: 141-143°C. MS (ESI): 320-322 (MH)⁺.

Ή HMR spektrum adatai (DMSO-d₃): 3,95 ís,3H), 7,05 (s,1H), 7,35 (d,1 H)_; 7,54-7,59 (m,2H), 7,78 (s,1H), 8,29 (s, 1H).

K.brÁ

4-(2-Fluor-4-mefii-aniiino)-0-i metoxű-kinazolin előálii318 mg (0,84 mmól) 7-[1-(terc~bufoxi~karbónH>ptp®'^fn-4>í:kmetoxij~4-(2-fíuor

-^-mettl-anillnoj-ő-metoxí-kinazolln 5 ml metilén-klonddál és 2,5 ml tríttuor-eeetsavvai készített szuszpenzióját 2 órán át szobahőmérsékleten kevertük. Az illékony anyagokat csökkentett nyomáson íepároltuk, és a maradékot metiíén-klortd és víz között megoszlattuk.. A vizes fázis pH-ját 10 és 11 közötti értékre állítottuk. A szerves fázist •elválasztottuk, vízzel és vizes náínum-kíorid oldattal mostuk, vízmentes magnézium-szulfát fölött szárítottuk, és az illékony anyagokat. lepároltuk. 220 mg (87 %) cím szerinti vegyületet kaptunk. M.S (ESI): 307 (MK)7 ⁵H NMR spektrum adatai (DMSÖ~d₆); 1,15-1,3 (m,2H), 1,75 (d,2H>, 1,85-2,0 (m,1H), 2,4 (s,3H), 3,0 (d,2H), 3,3-3,4 (d,2H), 3,95 (s,3H), 4,0 (d,2H), 7,04 (d,1H). 7,15 (d,1H), 7,17 (s,lH), 7,4 (t,1H), 7,8 <s,1H), 8,3 (s,1H), 9,4 (s/lH).

A kiindulási anyagot a következőképpen állítottuk elő:

1,55 g (5,15 mmói) 7-(benzíí-oxl)-4-kiór-6-metoxi~klnazoíín~bidrokbddol (a WO 97/22598 sz. nemzetközi közzétételi irat 1. példájában leírtak szerint kapott vegyület) a 8. példában kőzöltekke! analóg módon 90 ml izopropanolban, 80 μ| ·Β,2 mólos ízopropanolos hidrogén-klorid oldat (0,51 mmói RCI). jelenlétében 700 mg (5,87 mmói) .2-fIuor-4-metII-.amiinnei reagsitattunk. 2 g (91 %) 7~(benzíl~oxi)-4~(2~fiuor-4-metii-anilíno)-0-metöx:kkiuazolin~bídmklondöt kaptunk. MS (ESI): 390 (MH)\ ’H NMR spektrum adatai (DMSO-d_s): 2,4 (s,3H), 4,01 (s,3H), 7,15 (d,1H), 7,25 (d,1H), 7,35-7,6 (m.,7H), 8,3 (s,i:H), 3,78 (s,1H).

g (4,7 mmói) 7-(benzH-oxi)~4-(2-fluor~4-metíl~anilÍno}~8-metoxi-kinezolin~hidrokiorid 20 ml trtüüor-ecetsawsl készített oldatát 5 órán át 8ö''C-on tartottuk, majd éjszakán át szobahőmérsékleten kevertük. Az illékony anyagokat csökkentett nyomáson leporoltuk, és a maradékot 50 ml vízben szuszpendáltuk. A szuszpenziö pH-ját szilárd nátdum-hidrogén-karbonát beadagolásával 7 köröli értékre állítottuk. Ezután a csapadékot kiszűrtük, vízzel mostuk, és csökkentett nyomáson szántottuk. A kapott szilárd anyagot osziopkromatografálássai tisztítottuk, eluálószerként 5:95 térfogatarányú metanol/metílén-kiond elegyet használtunk. Az oldószer lepárlása után kapott szí« * ·« * * * *

~58lárd anyagot éterrel eldörzsöltök, kiszűrtük, éterrel mostuk, és csökkentett nyomáson szárítottuk. 1,04 g (74 %) 4-(2-Ouor-4-metil-anlítno)-7-hidroxH6-metox^:ii-kinazollnt kaptunk. MS (ESI); 300 (MHf.

¹H NMR spektrum adatai {DMSO-df: 2,4 {s,3H)₍. 4,0 (s,3H), 7,15 (d,1H), 7,22 (s,1H), 7,25 (d,1H), 7,41 (t,1H), 3,05 (s,1H), 3,7 (s,1M), 11,0 (s,ÍH), 11,5-11,3 (szs,1H), g (3,34 mmól) 4-(2-Huo-r~4-metil-anílino)-?-bidroxi~6~metoxi-ki:nazoHn 10-ml metílén-klonddal készített, 0^öC~ra hűtött szuszpenziójához a megadott sorrendben 2,19 g (3,36 mmól) trífenlt-foszfint, 1,08 g (5,01 mmól) 1-(terc-buíoxi-karbonil)-4-(hldroxi-metíl)-pipendinf (az 1. példában a kiindulási anyag előállításánál leírtak szerint kapott vegyöíetö és 1,31 ml (8,36 mmöl) azodikarbonsav-dietil-észtert adtunk. A reakcióelegyet 2 órán át szobahőmérsékleten kevertük, majd az illékony anyagokat csökkentett nyomáson lepároltuk, A maradékot oszlopkromatografálással tisztítottuk, elu~ álöszerként 2:98 térfagatarányú metilén-klohdZmetanol elegyet használtunk. Az oldószer lepárlása után kapott maradékot éterrel eldörzsöltük, a szilárd anyagot kiszűrtük, éterrel mostuk, és csökkentett nyomáson szántottuk. 327 mg (20 %) 7-[1-(terc-butoxl~karbonil)-piperidin~4-il-metoxi]-4“(2-fluor-4-metit-anillno)-6~metoxi~klnaz;o!int kaptunk, MS (ESI); 497 (MHf.

’H NMR spektrum adatai (DMSO-df: 1,15-1,3 (m,2H), 1,45 (s,SH), 1,3 (d,2H), 2,0-2,1 (m,1H), 2,4 (s,3H), 2,75-2,9 (szs,2M>, 3,95 (s,3h), 4,0 (szs,2H), 4,05 (d,2H),

7,1 (d,1H), 7,15 (d,1H), 7,2 (s,1H), 7,4 (t,1 H), 7,85 (UH), 8,32 (s,1H), 9,45 (s,1H).

9. példa

4(4-ΒΓόηι-2,6-0ΙίΙυοΓ-8η)ΙΙηο)-6-Γηβ1οχΙ-7-(ρΙροΓΐΰΙπ-4~Π^θ1οχ1)-Κίη«ζο1Ιη előállítása

578n mg (1 mmól) 4-(4-bróm-2,6-dífiuor-anilíno)-7“(1-(ierc-butoxl-karbonll)“pipeddin-4-ll-metoxij-6-metoxi-kinazolin 10 ml metiién-klortddal és 4 ml ihfsuonecetsavvai készített oldatát 2 órán át szobahőmérsékleten kevertük. Az Illékony anyagokat

Claims (19)

1. csökkentett nyomáson lepárokuk, és· a maradékot vízben szuszpendáltuk. A vizes fázis pH~lát 10 körüli értékre állítottuk, és metilén-kloriddaí extraháltuk. A szerves fázist vízzel és vizes nátrium-klórid oldattal mostuk, vízmentes magnézium-szulfát fölött szárítottuk, és az illékony anyagokat lepárolfuk, A maradékot éterrel eldörzsöítük, A kapott terméket csökkentett nyomáson szárítottuk. 110 mg (23 %) cím szerinti vegyületet kaptunk. MS (ESI): 479-481 (MH)\ 'H NWR epektram adatai (DMSÖ-d_s): 1,15-1,3 (m,2H), 1,75 (d,2H), 1,85-2,0 (szs.lH), 2,5 (d,2H), 3,0 (d,2H), 3,97 (s,3H), 4,0 (d,2H), 7,2 (s,1H), 7,82 (d,2H), 7,82 (s,1H), 8,33 (s, IH).

   ^SH NMR spektrum adatai (DMSO-d_g, CF₃COOO): 1,5-1,65 (m,2H), :2,G (d,2H). 2,15-2,3 (szs,1H), 3,0 (t,2H), 3,4 (d,2H), 4,02 fs,3H), 4,15 (d,2R), 7,4 (s.lHk 7.75 (d, 2H), 8,1 (s,1H), 8,82 (s,1H),

   A kiindulási anyagot a kővetkezőképpen állítottuk elő:
2. 2,77 g (6,85 mmól) 4-öróm-2,S~difluor~aniíín 80 ml dlmetll-formamiddal készített oldatához 812 mg 80 %-os ásványolajáé nátrium-hidrid diszperziót (15,3 mmöl nátnurn-hidrid) adtunk. Az elegyet 30 percig szobahőmérsékleten kevertük, maid 2 g (6,65 mmöl) 7-(benzlí-oxí)-4-klór-6-metoxi~kir^azolint (a WO 97/22598 sz. nemzetközi közzétételi irat 1. példájában közöltek szerint előállított sóból felszabadított bázis) adtunk hozzá, és az elegyet még 4 órán át kevertük. Az elegyet etil-acetát és 200 ml víz kőzett megoszlattuk. A szerves fázist elválasztottuk, vízzel és vizes nátríum-klorid oldattal mostuk, vízmentes magnézium-szulfát fölött szárítottuk, és az illékony anyagokat tepároltuk, A maradékot izopropanollai eldörzsöítük. A szilárd anyagot kiszűrtük, éterrel mostuk, és csökkentett nyomáson szárítottuk. 1,95 g (62 %) 7-(benzil-oxi)~4-(4-brófn-2,6-dlfiuör-sniilno)-8-mefoxi-kina2clínt kaptunk.. MS (ESI): 472-474 (MHf.

   ¹H NMR spektrum adatai (DMSO-d_e)· 3,94 (s,3H), 5,3 (s_:2H), 7,3 (s,1H), 7,4 (d,1H), 7,45 (t,2H), 7,5 (s,1H), 7,55 (d,1H), 7,65 (d,2H), 7,85 (sJH), 8,35 (s.lH), 9,49,8 (szs,1H).

   1,9 g (4,02 mmol) 7(όβπζϋ-οχΐ)-4-(4-Οπ5ίη-2,8-ΟΙίΙυοΓ-^ηΙΙΙηο)~8-ΓηοΙοχΙ~ΚΙη3ζοOnt a 8. példában a kiindulási anyag előállításánál leírtak szerint 20 rol'tniuor-ecel· savval reagálhattunk. 1,5 g (98 %) 4-(4-bróm-2,^:8-diőuor~anilino)-7-bidroxi-6-roetoxi-kinazolínt kaptunk, ’H HMR spektrum adatai (DMSO-d₆); 3,95 (s, 3H), 7,1 (s,1H), 7,6 7,85 (s.íH). 7,8 (sJH), 8,3 (s,1H), 9,45 (szs,1H), 10,5 (szs,1H).

   1 g (2,62 mmol) 4~(4-bróm-2,8-dHuor-anilino)-7~hidrQXÍ-8-3'netoxl-kinazotint a 8. példában, a kiindulási anyag előállításánál leírlak szerint 845 mg (3,93 roméi) 1-(terc-buíoxi-ka.rbonii)-4-'(hidroxl-'metil)“piperidinnel (az 1, példában a kiindulási anyag előállításánál leírtak szerint kapott vegyület) reagálhattunk. 620 mg (41 %) 4-(4-bröm-2,6-dífiuor-anílíno)-7-[1-<terc-butöxi-karbö.nir)-pipendín-4-ibmetoxi]-6-metoxbkinazotini kaptunk... MS (ESI); 579-581 (MHf.

   ^?H HMR spektrum adatai (DMSO-d^: 1,15-1,3 (ro,2H), 1,45 (s_:9H), 1,8 (d,2H), 2,0-2,1 (ro,1H), 2,7-2,,9 (m,2H), 3,95 (s,3H), 4,0 (szs,2R), 4,05 (d,2H), 7,22 (s,1H), 7,85 (d,2H), 7,85 (s,1H), 8,35 (sJR), 9,4-9,8 (szs,1H).

   10 . példa

   4-(4-Któr-2,6-diftyor-anil;no)-8-metoxi~7-(piperidín-4-il-metoxi)-kinazolín előállítása

   95 mg (0,2 roméi) 7-|1-(i.erobut<3.xi-karbonÍi)-píperidin-4-ii-roetoxi)-4-(4-klór-2_!8'dl5uor-anllino}-8-mefoxí~kinazolint a 9. példában leírtakkal analóg módon 2 ml roetilén-klondban 800 μΙ tritor-ecetsawal reagáltattunk, 20 mg (26 %} cím szerinti vegyületet kaptunk. MS (ESI); 435-437 (MHf.

   ¹H HMR spektrum adatai (OMSO-d_í3): 1,2-1,3 (m,2H), 1,75 (d,2H), 1,85-2,0 {szs,.1H}, 2,5 (d,2H), 3,0 (d,2H), 3,57 (s,3H), 4,0 (d,2K), 7,2 (s,1H), 7,52 (d,2K), 7,85 (s,1H), 8,35 (s,1H).

   A kiindulási anyagot a kővetkezőképpen állítottuk elő;

   * '♦ * ♦ X 4 « X 4 4

   4 4 X *«4 4XX X

   4 4 X χ 4 * **♦* «χ «> ·χ χ ·Χ * «χ

   184 mg (0,81 mmól) 7-{benzil-exl)-4~klór-8-me-toxí-kinazollnt (a WO 87/22588 sz, nemzetközi közzétételi Irat 1, példájában Ismertetett sóból felszabadított bázis) a

   9. példában a kiindulási anyag előállításánál leírtakkal analóg módón, δ ml dimetil-íormamidban, 87 mg 80 %-os ásványolajos nátríum-hídrid diszperzió (1,4 mmól nátrium-bidríd) jelenlétében 280 mg (1,22 mmól) 4-klór-2,5~difiuer-anilinnei reagáltattunk. 212 mg (74 %) 7~(benzíl-oxl>-4-(4-klór-2,6-di8uor-anií^:ino)-8-metoxi~kínazolínt kaptunk, MS (ESI); 428 (MHf.

   ‘H NMR spektrum adatai (DMSO-d_e): 3,98 (s,3H), 5,31 (s,2H), 7,32 7,4 (dJH), 7,45 (t,2H), 7.5-7.8 (m,4R), 7,85 (s.1H), 8,35 (szs,1H), 8,55 (szsJHj.

   .200 mg (0,47 mmól) 7-(ben2il-o.xi)-4-{4-kföf-2_!6-dfeor~aníllno)-6-m«toxi-kínazolín 3 ml trifíuor-ecetsavval készített oldatát 3 órán át 80°C-on kevertük. Lehűlés lilán az illékony anyagokat csökkentett nyomáson lepároltuk, és a maradékot 5 % metanolt tartalmazó vízben oldottuk. Az oldat pH-ját nátnum-hidrogén-karbonáttal 8-ra állitottuk. A kapott szilárd anyagot kiszűrtük, vízzel mostuk, majd etil-ácetát. metanol és metílén-kíoríd 47:6:47 térfogetarányú elegyében szolubilízáltuk. Az illékony anyagokat csökkentett nyomáson lepároltuk. 128 mg (80 %) 4-(4-kíór-2,6-difluor-aniiino)-7“hidroxi-8-metoxi-kinazolint kaptunk. MS (ESI): 338 (MH)'L ⁵H RMR spektrum adatai (DMSO-dg): 3.95 (s,3h), 7,1 (s,1H)_t 7,55 (d,2H), 7.8 (s,ÍR), 8,3 (s,1H), 9,42 (szsJR).

   150 mg (0,44 mmól) 4~(4-kíó^2:,6-difluor-anilino)-7~hidroxi-6~mefoxi-klnazolint a 9. példában a kiindulási anyag előállításánál leírtakkal analóg módón 150 mg (0,88 mmól) 1-<terc-b^:utoxi“karbonilH~(htdroxi-metil)-piperldínnel (ez 1. példában a kiindulási anyag előállításánál leírtak szerint kapott vegyület) reagáltsttank. 113 mg (59 %) 7“{1”(l:erC“butoxí-karboníl)”pipendsn-4-ii-metoxi]-4(4-kiór-2_:,8-dlfluör-anilino)-6-metoxl· -klnazoiint kaptunk. MS (ESI): 535 (MH)L * * Φ X φ # Φ Φ Φ * Φ Φ ΦΦΦ ΦΦΧ » . * . * * * Φ Φ »♦·* XX φ.χ φφ ΦΦΦ

   Ή MMR'spektrum adatai (öMSO~d₆): 1,15-1,3 (m„2H), 1,45 <s,9H)_:, 1,8 (d,2H),

   2,.0-2,1 (m,1H), 2,7-2,9 (m,2H), 3,35 (s,3H), 4,0 (szs,2H), 4,05 (d,2H), 7,2 (s,1R), 7,8 (m.2H), 7,8 (s.lH), 8,35 9,4-9,6 (szs,1H).

   11, oélda

   Szokásos győgyszertechnológiái műveletekkel állítottuk elő a következő öszslö, hatóanyagként valamely (1) általános képletü vegyületet vagy gyógyászati

   lag alkalmazható sóját tartalmazó, a humán gyógyászatban terápiás vagy profíla kus kezelésre felhasználható ke íszitményeket Hatóanyag 100 mg/tabletta Laktóz (Ph. Eur. minőségül 182,75 Kroszkarmellóz-nátríum 12,0 íí Kukoricakeményítő (5 íömeg/té íogat %-os pép) 2,25 ÍJ Magnézium-sztearát 3,0 Hatóanyag 50 mg/tsbletfa Laktóz (Ph, Eur. minőségű) 223,75 n Kfoszkarmelíóz-náihum 6,0 Kukorieakeményííő 15,0 << Poli(ylnií-pirrökdon) (5 tőmegZté lógat %-os pép) 2,25 S íi λ* Α 'Φ'ί'ίΛΛΧΛ-Φ q n » ív? ; ciViC'ítej, Hatóanyag 1,0 mg/tabletta Laktóz (Ph, Eur. minőségű) 93,25 ·'·· Kroszka rm e 1 lóz-n át rl u m 4,0 ,, Kukoncakeroényítő· (5 tőmeg/ié íogat %-os pép) 0,75 «

   * * ** * * χ* ♦«

   X Φ X Φ Φ χ φ φ α φ * X Φ Φ«Φ ΦΦΦ χ φ * « φ Φ φ νφφφ ΦΦ ΧΑ ΦΦ φφφφ

   Magnézium-sztearát (d) Kapszu/a;

   Lakíóz (Pb. Eur. minőségű)

   Magnéziurn-sztearát (e) 50 mg/m/ hafőanyagtaria/mű ín/ekcM;

   Hatóanyag

   1 mólos vizes nátrium-hidröxsd oldat

   0,1 mólos vizes sósavoldat

   Propllén-gfikoí 400

   Injekciós célokra alkalmas víz (0 10 mg/mt ha'táany&gt&rtatmú injekció:

   Hatóanyag

   Nátrium-foszfát (8P minőségű)

   0,1 mólos vizes nátrium-hldroxíd oldat Injekciós célokra alkalmas víz (g) 1 mg/mi /?a/öaaysg(arfa/má< pH 6-ra puffero/f injekció:

   1.0

   10 mg/kapszük

   488,5

   5,0 tömeg/térfogat % 15,0 férfogat/térfogat % pH 7,8 eléréséhez

   4,5 tömeg/térfogat % ad 100 %

   1,0 tömeg/íérfogat %
3. 3,8 tömeg/térfogat %

   15,0 férfogaVtérfogat % ad 100 %

   Nátrium-foszfát (BP minőségű)

   8,1 tó m e g/térióg at % 2,28 tömeg/térfogat % 0,38 tömeg/térfogat % 3,5 tömeg/térfogat %

   Poli(afilén~glíkol) 400

   Injekciós célokra alkalmas víz ad

   Á tablettákra kívánt esetben Ismert módon bélben oldódó bevonatot, például cellülóz-acetáWíalát bevonatot vihetünk fel

   1. (I) általános képletö klnezelin-szérmazékok és sóik - a képletben m értéke 1 és 3 közötti egész szám;

   R* halogénatomot vagy 1-3 szénatomos alkilcsoportot jelent, és

   R* {1-5 szénatomos aikiil-FC (2-5 szénatomos alkenilbR' vagy (2-5 szénatomos alkinih-R' csoportot képvisel, amelyekben R^s adott esetben egy vagy két hídroxil-, halogén-, 1-4 szénatomos alkil·, hldroxI-fM szénatomos alkil)- és/vagy 1-4 szénatomos elkcxl-ezubsztltoenst hordozó piperidin-éálmsoportot képvisel;

   és ahol bármely alkik, alkenil- vagy alktoifosopodhoz adott esetben egy vagy tobh hidroxil·, halogén- és/vagy amlno-szuhsztltoens kapcsolódhat,

   2. Az 1, Igénypont szerinti (I) általános képlete klnezelin-szérmazékok és sóik, amelyekben az csoporttal szabsziitoéli fenilcsoport 2-&οη4οηοί1Μοη%, 4-klon -2,5-difiuor-íenll·, 4-Ptom-2to-difleor-fenll·, 4-kfór-2-fluor-fenrl- vagy 4~brőm~2-tinor-fenO-csoportot jelent,

   3. Az 1, vagy 2. igénypont szerinti (I) általános képletö kinazolln-szánnazékok és sóik, amelyekben R² (1 -5 szénatomos tokiij-E'⁵ képletö csoportot jelent és ebben R^á jelentése ez 1, Igénypontban magadott
4. 4. Az előző igénypontok bármelyike szerinti (t) általános képletö kinazotlmszármazékok és sóik, amelyekben tV a piperidingyőrön adott esetben egy vagy két 1-4 szénatomos alkihazobsztltoenst hordozó ρ1ροηό1η-4-1Ι-η^5Ι-ηοοροηοί jelent,
5. 5. Az 1, Igénypont szerinti (II) általános képletű kinazolln-szármezekok és sóik - a képletben ma értéka 1, 2 vagy 3;

   R-^iS halogénetomot vagy 1-3 szénatomos alkifosoportot jelent, és

   R^ (1-5 szénatomon alkil)-R'\ (2-5 szénatomos elkenll)-R'^! vagy (2-5 szénatomos alklnllj-R^ csoportot képvisel, amelyekben R^s jelentése az 1, igénypontban magadott,
6. 6. A következő kinazolin-származékok és azok sók 4(4-κί0ί'-2-ίΙοοηηηΙΙ1ηο)-6'·η'ΐοΙοχ1-7-(1-Γηο9Ι~ρΙρδπ0Ιη-4-Η-?ηηΙοχ1)~ΗΙποζοΙΙη_: 4~(2-fiuoM~melil-.ani!ino)~6-metoxi-?-{Í~mefii~pipehdin~44i-metoxí}-kinazölin_> 4“(4”brőn>2~8uor~enilino)-ő'-metoxi~7>(.1-metil-pipendin«4-ii”metoxl)-kinazolin_> 4«{4*klór~2>6~dit1uor~anilÍnö}~6»metGxi“7-<1-ínefii~piperidin~4«il~metGXi)~kinaz0lin. 4-(4“bróm-2_íő“dí^uor-anilino)~6-'metox>7“(1«m©tO-pipendln-4-»H-metoxi)-khazolin_> 4-<4~kiór~2“flio'«anilinö>-6~roetüxi~7~(piperidim44i~meio.xi)~kibazolin_! 4(2fluoo4.-metii~arHhno)-6-metoxi-7-(plpendin-4-ll'-metoxl)-kinazoiin, 4(4-bróm~2-tluor-ani|ino)-0-'?eetoxí-7-(piperldin“4~il-metoxl)-kinazolin_! 4~(4-klór-2_í6-dtnuor”aniHno)~8-metoxk7-(pipendin“4-0-metoxi)~kinazoh'n_> és 4~{4-hróm«2,6-dil!.uör“anilinö}-6~metöXÍ~7~{piperidin~47d-meíoxi}-kinaz0lin,
7. 7. A következő kínazolin-származékok és ezek sói: 4-(4·Α10Γ-2·41αοΓ-'θηΗηορ6~ίηβίοχ77.<·(ΐ~ΓηβΙΗ-ρίρβπόύΐ''4-|ρ?·ηδΙοχΙ)-Α1η3ΖθΗη, 4«(4~bröm-2-üuor-anilino)-6-metoxk7“(1«metil»pipendin”4-iknetoxi>kinazolin_t 4-(4»klór-2,.6»difiuor-anilino)~ő-metoxb7-(1~metlkpiperidin“4->il-meio.xi)-kinazoiin. és 4-(4-0ΓόΓη-2,δ-<ϋΟυο?'-8ηΐΟηο)~6~ηΐ0ίοχΗ7-( 1-metH-piperídin-4-ikmetoxi)-'kinezoyn.
8. 8. A következő kinazolin-származék: 4-(4-bróm-2~fiuor-anilino)-6-metoxi»7^(1»· -meW~pipeddfn-44Pmefoxi}~kinazokn és sói,
9. 9. Az előző Igénypontok bármelyike szerinti klnazolin-szármezékok gyógyászatilag alkalmazható sók formájában.
10. 10. Eljárás az 1. igénypont szerinti (.1) általános képletü klnazolin-származékok és sóik előáliitására. azzal /elemezve, hogy (a) egy (HO általános képletü vegyületet ~ a képletben R^zjelehtése az 1. Igénypont szerinti és I? kicserélhető atomot vagy -csoportot jelent ~ egy (IV) általános képletü vegyülettel - a képletben E’ és m jelentése az 1» Igénypont szerinti -' reagáltatunk:

    vagy

    *.#ΦΦ (b) egy (V) általános képletü vegyületet - a képletben m‘X^! éá R'>leÓtése a tárgyi kör szerinti ·· egy (VI) általános képletü vegyülette! - a képletben R‘ jelentése a tárgyi kör szerinti és L’ kicserélhető atomot vagy csoportot jelent - reagáltatunk; vagy (c) egy (VII) általános képletö vegyületet - a képletben R ’ és m jelentése a tárgyi kör szerinti és L? kicserélhető atomot vagy csoportot jelent · egy (Vili) általános képletö vegyülette! - a képletben R^z és X‘ jelentése a tárgyi kör szerinti ~ reagáltatünk; vagy (d) egy (IX) általános képletü vegyület - a képletben R\ m és X⁵ jelentése a tárgyi kör szerinti, R* pedig egy vagy több védöosoportot hordozó, egyébként a tárgyi körben megadott jelentésű R* csoportot jelent - védőcsoportját vagy védőcsőportjait lehasítjuk;

    és kívánt esetben egy (I) általános képletö vegyületet bázissal vagy savval képezett sójává, célszerűen gyógyászatílag alkalmazható sójává alakítunk, vagy egy só formájában kapott vegyöletből felszabadítjuk az (I) általános képletö vegyületet.
11. 11. Gyógyászati készítmény, amely hatóanyagként egy (I) általános képletü vegyületet - a képletben R’\ Ró X¹ és m jelentése az 1. igénypontban megadott - tartalmaz, győgyászatllag alkalmazható hordozó-, hígító- és/vagy egyéb segédanyagokkal együtt.
12. 12. Az 1. igénypont szerinti (I) általános képletö vegyűletek és győgyászatllag alkalmazható sóik felhasználása melegvérűeken, köztük embereken anti-angíogén és/vagy érpermeabilltást csökkentő hatás előidézésére alkalmas gyógyszerkészítmények gyártására.
13. 13. Az 1, igénypont szerinti (I) általános képletö vegyűletek vagy gyógyászatilég alkalmazható sóik és egy érrendszeri céiralnánykö szer felhasználása melegvérüeken, köztük embereken anti-angíogén és/vagy érpermeabilltást csökkentő hatás előidézésére alkalmas gyógyszerkészítmények gyártására.

    * ΦΦ Φ«ί«Φ «ÍX« « * * * * φ φ ί * φ * * * φ φ φ φ φ * φ φ φ « «
14. 14. 4-(4-Bróm-2-fiuor-aniiino)-6-mefoxi-7-(1~me‘t1F-prpán*din-4-it-máfoxí7-klnazolln vagy gyógyászatilag alkalmazható sója és N-acetil-kolchinol-O-foszfát 13. igénypont szerinti falhasználása meiegvérueken, köztük embereken anti-angiogén es/vagy érpermeabilítást csökkentő hatás előidézésére alkalmas gyógyszerkészítmények gyártására.
15. 15. Az 1. igénypont szerinti (I) általános képletű vegyületek vagy gyógyászatiig alkalmazható sóik felhasználása melegvérüeken, köztük embereken rákellenes hatás előidézésére alkalmas gyógyszerkészítmények gyártására.
16. 16. Az 1. igénypont szerinti (I) általános képletű vegyületek vagy gyógyászatilég alkalmazható sóik felhasználása melegvérüeken, köztük embereken a VEGF hatásaiénak gátlására alkalmas gyógyszerkészítmények gyártására.
17. 17. 4-(4~Bróm~2-fluör~aniiino)-8~metöxí~?-(1~meífl-pípendin~4~ii»metöxi}-kinazö~ lín vagy gyógyászatilag alkalmazható sója és N-acetil-koichinol-O-foszfát 15. Igénypont szerinti felhasználása melegvérüeken, köztük embereken rákellenes hatás előidézésére alkalmas gyógyszerkészítmények gyártására.
18. 18. A 12. vagy 15. igénypont szerinti alkalmazás, ahol egy (I) általános képiétó vegyületet vagy gyógyászatilag alkalmazható sóját az (í) linomíd, az integrin ανβ3 funkcióját gátló anyagok, angiosztaíín, endosztatin, razoxin, taíidornld és vaszkuláris célrairányító szerek ·· a kombresztatln-foszfátot és N-acetil-kolchínol-O-foszfátot is beleértve - köréből kiválasztott anti-angíogén szerek, (ii) oitosztafikumok, (üi) biológia; választ módosító anyagok, (ív) antitestek, és/vagy (v) antíproliferativ/antíneoplasztíkus hatóanyagok kőiéből kiválasztott kemoterápiás szerrel együtt alkalmazzuk.

    *φφφ φ φφ
19. 19. A 18. Igénypont szerinti alkalmazás, ahol a rak*vaslágbei* méti~, ^mazta ta-_s tüdő- vagy bőrrák.

    A maghalaímazott