BRPI0015203B1

BRPI0015203B1 - Derivado de quinazolina, composição farmacêutica, e, uso de um composto

Info

Publication number: BRPI0015203B1
Application number: BRPI0015203-0A
Authority: BR
Inventors: Laurent François André Hennequin; Elaine Sophie Elizabeth Stokes; Andrew Peter Thomas
Original assignee: Genzyme Corporation
Priority date: 1999-11-05
Filing date: 2000-11-01
Publication date: 2019-03-26
Also published as: NO20022139D0; BE2012C036I2; HK1049664A1; CY1106166T1; AU769222B2; EE05330B1; KR100849151B1; US9040548B2; DE60029007T2; US20160130249A1; KR100881105B1; PL203782B1; JP2003513089A; US20200262811A1; EP1244647A1; NO2012014I1; FR12C0048I2; CA2389767C; SK6122002A3; IS2556B

Abstract

"derivado de quinazolina, processo para a preparação de um derivado de quinazolina, composição farmacêutica, uso de um composto, e, processo para a produção de um efeito antiangiogênico e/ou redutor de permeabilidade vascular em um animal de sangue quente" a invenção refere-se a derivados de quinazolina de fórmula (i) em que m é um número inteiro de 1 a 3; r^ 1^ representa halogênio ou c~ 1-3~ alquila; x^ 1^ representa -o-; r^ 2^ é selecionado de um dos três grupos a seguir: 1) c~ 1-5~ alquila r^ 3^ (em que r^ 3^ é piperidin-4-ila que pode portar um ou dois substituintes selecionados dentre hidróxi, halogênio, c~ 1-4~ alquila, c~ 1-4~ hidroxialquila e c~ 1-4~ alcóxi; 2) c~ 2-5~ alquenila r^ 3^ (em que r^ 3^ é como definido previamente); 3) c~ 2-5~ alquinila r^ 3^ (em que r^ 3^ é como definido previamente); e em que qualquer grupo alquila, alquenila ou alquinila pode portar um ou mais substituintes selecionados dentre hidróxi, halogênio e amino; e sais dos mesmos; processos para sua preparação, composições farmacêuticas contendo um composto de fórmula (i) ou um seu sal farmaceuticamente aceitável como ingrediente ativo. os compostos de fórmula (i) e os seus sais farmaceuticamente aceitáveis inibem os efeitos de vegf, uma propriedade valiosa no tratamento de uma quantidade de estados de doença, incluindo câncer e artrite reumatóide.

Description

“DERIVADO DE QUINAZOLINA, COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, E, USO DE UM COMPOSTO”

A presente invenção refere-se a derivados de quinazolina, a processos para sua preparação, a composições farmacêuticas contendo os 5 mesmos como ingrediente ativo, a métodos para o tratamento de estados de doença associados com angiogênese e/ou permeabilidade vascular incrementada, a seu uso como medicamentos e a seu uso na manufatura de medicamentos para uso na produção de efeitos antiangiogênicos e/ou efeitos redutores de permeabilidade vascular em animais de sangue quente, como 10 humanos.

A angiogênese normal desempenha um papel importante em uma variedade de processos incluindo o desenvolvimento embrionário, a cura de ferimentos e diversos componentes da função reprodutiva feminina. A angiogênese indesejada ou patológica foi associada com estados de doença 15 que incluem retinopatia diabética, psoríase, câncer, artrite reumatóide, ateroma, sarcoma de Kaposi e hemangioma (Fan et al., 1995, Trends Pharmacol. Sei. 16: 57-66; Folkman, 1995, Nature Medicine 1Γ27-3 1). Considera-se que alteração de permeabilidade vascular desempenhe um papel tanto em processos fisiológicos normais e patológicos (Cullinan-Bove et al., 20 1993, Endocrinology 133: 829-837, Senger et al., 1993, Câncer and

Metastasis Reviews, 12-303-324). Identificou-se diversos polipeptídeos com uma atividade promotora do crescimento de células endoteliais in vitro incluindo, fatores de crescimento de fibroblastos ácidos e básicos (aFGF & bFGF) e fator de crescimento endotelial vascular (VEGF). Em virtude da 25 restrita expressão de seus receptores, a atividade de fator de crescimento de VEGF, em contraste com aquele do FGFS, é relativamente específica no que

se refere às células endoteliais. Evidência recente indica que o VEGF é um estimulador importante da angiogênese normal e da angiogênese patológica (Jakeman et al., 1993, Endocrinology, 133-848-859; Kolch et al., 1995, Breast Câncer Research and Treatment, 36: 139-155) e permeabilidade vascular (Connolly et al., 1989, J. Biol. Chem. 264: 20017-20024). O antagonismo da ação do VEGF por seqüestro do VEGF com anticorpo pode resultar na inibição do crescimento de tumor (Kim et al., 1993, Nature 362: 841-844).

As quinases de tirosina de receptor (RTKs: Receptor tyrosine kinases) são importantes na transmissão de sinais bioquímicos através da membrana plasmática das células. Estas moléculas de transmembrana consistem caracteristicamente de um domínio de ligação de ligando extracelular conectado através de um segmento na membrana plasmática a um domínio de tirosina quinase intracelular. A ligação de um ligando ao receptor resulta no estímulo da atividade de tirosina quinase associada com receptor que leva à fosforilação de radicais tirosina tanto no receptor quanto em outras moléculas intracelulares. Estas alterações na fosforilação de tirosina iniciam uma cascata de sinalização que leva a uma variedade de respostas celulares. Até o presente, pelo menos dezenove subfamílias de RTK distintas, definidas por homologia de seqüência de aminoácidos, foram identificadas. Uma destas subfamílias constitui-se presentemente do receptor de tirosina quinase semelhante a fins, Flt ou Fltl, o receptor contendo domínio de inserto de quinase, KDR (também referido como Flk-1), e outro receptor de tirosina quinase semelhante a fins, Flt4. Demonstrou-se que duas destas RTKs relacionadas, Flt e KDR, ligam VEGF com alta afinidade (De Vries et al., 1992, Science 255: 989-991; Terman et al., 1992, Biochem. Biophys. Res. Comm. 1992, 187: 1579-1586). A ligação de VEGF a estes receptores expressos em células heterólogas foi associada a alterações no estado de fosforilação de tirosina de proteínas celulares e fluxos de cálcio.

Derivados de quinazolina que constituem inibidores de tirosina quinase de receptor de VEGF encontram-se descritos nas Publicações de Pedidos de Patentes Internacionais nums. WO 97/30035 e WO 98/13354. Nos WO 97/30035 e WO 98/13354 descreve-se compostos que apresentam atividade contra tirosina quinase de receptor de VEGF ao mesmo tempo que apresentam alguma atividade contra tirosina quinase de receptor de EGF.

Compostos da presente invenção incluem-se na descrição geral ampla dos WO 97/30035 e WO 98/13354. A Requerente verificou que compostos da presente invenção apresentam uma atividade inibidora muito boa contra tirosina quinase de receptor de VEGF. Os compostos da presente invenção, que foram testados, apresentam atividade in vivo contra uma faixa de xeno-enxertos de tumores em camundongos. Os compostos da presente invenção apresentam um perfil toxicológico benéfico quando testado durante 14 dias em ratos. Os compostos da presente invenção apresentam uma atividade inibidora muito boa contra tirosina quinase de receptor de VEGF, mostram uma atividade in vivo contra uma faixa de xeno-enxertos de tumores em camundongos e apresentam um perfil toxicológico benéfico quando testados durante 14 dias em ratos.

Os compostos da presente invenção apresentam os efeitos do VEGF, uma propriedade valiosa no tratamento de estados de doença associados com a angiogênese e/ou a permeabilidade vascular incrementada, como câncer, diabete, psoríase, artrite reumatóide, sarcoma de Kaposi, hemangioma, neffopatias agudas e crônicas, ateroma, restenose arterial, doenças autoimunes, inflamação aguda, formação excessiva de cicatrizes e adesões, endometriose, sangramento uterino disfuncional e doenças oculares com proliferação de vasos retinais.

Os compostos da presente invenção apresentam boa atividade contra tirosina quinase de receptor de VEGF ao mesmo tempo em que apresentam alguma atividade contra tirosina quinase de receptor de EGF.

Além disso, alguns compostos da presente invenção apresentam potência subseqüentemente maior contra tirosina quinase de receptor de VEGF do que contra tirosina quinase de receptor de EGF ou tirosina quinase de receptor de FGF Rl. Embora não desejemos ater-nos a considerações teóricas, esses compostos podem ser interessantes, por exemplo, para o tratamento de tumores que são associados com VEGF, especialmente aqueles tumores que são dependentes de VEGF para seu crescimento. Acredita-se também que estes compostos podem ser interessantes para tratar estados de tumor associados tanto com VEGF como com EGF, especialmente quando um paciente está sofrendo de uma condição em que estão presentes tumores que são dependentes tanto de VEGF como de EGF para seu crescimento.

De acordo com um aspecto da presente invenção proporcionase um derivado de quinazolina de fórmula I:

em que:

m é um número inteiro de 1 a 3;

R¹ representa halogênio ou C 1.3 alquila;

X¹ representa -O-;

R² é selecionadode um dos três grupos a seguir:

^1) C1.5 alquila R³ (em que R³ é piperidin-4-jla que pode portar

um ou dois substituintes selecionados dentre hidróxi, halogênio, Cm alquila, Ci.₄hidroxialquila e Ci.₄alcóxi;

2) C2-5 alquenila R³ (em que R³ é como definido previamente);

3) C2-5 alquinila R³ (em que R³ é como definido previamente);

e em que qualquer grupo alquila, alquenila ou alquinila pode

portar um ou mais substituintes selecionados dentre hidróxi, halogênio e amino;

ou um sal do mesmo de uma pró-droga do mesmo.

De preferência, m é 2.

De preferência, o grupo fenila que porta (R¹)™ é selecionado dentre grupos 2-fluoro-4-metilfenila, 4-cloro-2,6-difluorofenila, 4-bromo-2,6difluorofenila, 4-cloro-2-fluorofenila e 4-bromo-2-fluorofenila.

Mais preferivelmente, o grupo fenila que porta (R^!)_m é selecionado dentre 4-cloro-2-fluorofenila e 4-bromo-2-fluorofenila.

O mais preferível é que o grupo fenila portando (R’)m é 4bromo-2-fluorofenila.

De preferência R² é Ci_₅ alquila R³ (em que R³ é como definido previamente).

Mais preferivelmente, R² é C].₃ alquila R³ (em que R³ é como definido previamente).

Particularmente R² é piperidin-4-ilmetila em que o anel piperidina pode portar um ou dois substituintes como definido previamente.

Mais particularmente, R² é piperidin-4-ilmetila em que o anel piperidina pode portar um ou dois substituintes selecionados dentre Cm alquila.

Especialmente R² é 1 -metilpiperidin-4-ilmetila.

De acordo com um outro aspecto da presente invenção proporciona-se um derivado de quinazolina de fórmula II:

em que:

ma é um número inteiro de 1 a 3;

R^la representa halogênio ou Cj.₃ alquila,

X^la representa-O-,

R^2a é selecionado de um dos três grupos a seguir:

1) Ci.5 alquila R³ (em que R³ é como definido previamente),

2) C₂-5 alquenila R³ (em que R³ é como definido previamente),

3) C2-5 alquinila R³ (em que R³ é como definido previamente); ou um sal ou pró-droga do mesmo.

De preferência ma é 2.

De preferência o grupo fenila que porta (R^la)_ma é selecionado dentre grupo 2-fluoro-4-metilfenila, 4-cloro-2,6-difluorofenila, 4-bromo-2,6difluorofenila, 4-cloro-2-fluorofenila e 4-bromo-2-fluorofenila.

Mais preferivelmente, 0 grupo fenila que porta (R^la)_ma é selecionado dentre 4-cloro-2-fluorofenila e 4-bromo-2-fluorofenila.

O mais preferível é que o grupo fenila que porta (R^la)_ma seja 4bromo-2-fluorofenila.

De preferência R^2a é C1.5 alquila R³ (em que R³ é como definido previamente).

Mais preferivelmente R^2a é Cj.₃ alquila R³ (em que R³ é como definido previamente).

Particularmente R^2a é piperidin-4-ilmetila em que o anel piperidina pode portar um ou dois substituintes como definido acima.

Mais particularmente, R^2a é piperidin-4-ilmetila em que o anel piperidina pode portar um ou dois substituintes selecionados de Cm alquila.

Especialmente R^2a é l-metilpiperidin-4-ilmetila.

Compostos preferidos da presente invenção incluem: 4-(4-cloro-2-fluoroanilino)-6-metóxi-7-( 1 -metilpiperidin-4ilmetóxi)quinazolina,

4-(2-fhioro-4-metilanilino)-6-metóxi-7-( 1 -metilpiperidin-47

ilmetóxi)quinazolina,

4-(4-bromo-2-fluoroanilino)-6-metóxi-7-(l-metilpiperidin-4ilmetóxi)quinazolina,

4-(4-cloro-2,6-difluoroanilino)-6-metóxi-7-( 1 -metilpiperidin4-ilmetóxi)quinazolina,

4-(4-bromo-2,6-difluoroanilino)-6-metóxi-7-(l-metilpiperidin4-ilmetóxi) quinazolina,

4-(4-cloro-2-fluoroanilino)-6-metóxi-7-(piperidin-4-ilmetóxi) quinazolina,

4-(2-fluoro-4-metilanilino)-6-metóxi-7-(piperidin-4-ilmetóxi) quinazolina,

4-(4-bromo-2-fluoroanilino)-6-metóxi-7-(piperidin-4ilmetóxi) quinazolina,

4-(4-cloro-2,6-difluoroanilino)-6-metóxi-7-(piperidin-4ilmetóxi)quinazolina, e

4-(4-bromo-2,6-difluoroanilino)-6-metóxi-7-(piperidin-4ilmetóxi)quinazolina, e seus sais, especialmente sais de hidrocloreto dos mesmos.

Compostos mais preferidos da presente invenção incluem:

4-(4-cloro-2-fluoroanilino)-6-metóxi-7-( 1 -metilpiperidin-4ilmetóxi) quinazolina,

4-(4-bromo-2-fluoroanilino)-6-metóxi-7-( 1 -metilpiperidin-4ilmetóxi)quinazolina,

4-(4-bromo-2,6-difluoroanilino)-6-metóxi-7-( 1 -metilpiperidm4-ilmetóxi)quinazolina,

4-(4-cloro-2-fluoroanilino)-6-metóxi-7-(piperidin-4-ilmetóxi) quinazolina, /8

4-(4-bromo-2-fluoroanilino)-6-metóxi-7-(piperidin-4ilmetóxi)quinazolina,

4-(4-bromo-2,6-difluoroanilino)-6-metóxi-7-(piperidin-4ilmetóxi)quinazolina, e seus sais, especialmente sais de hidrocloreto.

Compostos particularmente preferidos da presente invenção incluem:

4-(4-cloro-2-fluoroanilino)-6-metóxi-7-( 1 -metilpiperidin-4ilmetóxi)quinazolina,

4-(4-bromo-2-fluoroanilino)-6-metóxi-7-( 1 -metilpiperidm-4ilmetóxi)quinazolina,

4-(4-cloro-2,6-difhioroanilino)-6-metóxi-7-(l-metilpiperidin4-ilmetóxi)quinazolina, e

4-(4-bromo-2,6-difhioroanilino)-6-metóxi-7-( 1 -metilpiperidin4-ilmetóxi)quinazolina, e seus sais, especialmente sais de hidrocloreto dos mesmos.

Compostos mais particularmente preferidos da presente invenção incluem:

4-(4-cloro-2-fhioroanilino)-6-metóxi-7-(l-metilpiperidin-4ilmetóxi)quinazolina e

4-(4-bromo-2-fluoroanilino)-6-metóxi-7-( 1 -metilpiperidin-4ilmetóxi)quinazolina, e seus sais, especialmente sais de hidrocloreto dos mesmos.

Um composto especialmente preferido da presente invenção é 4-(4-bromo-2-fluoroanilino)-6-metóxi-7-(1 -metilpiperidin-4-ilmetóxi) quinazolina e seus sais, especialmente sais de hidrocloreto dos mesmos.

A fim de dirimir dúvidas deve-se compreender que onde, nesta

descrição, um grupo é qualificado como “definido acima” ou “previamente definido”, o referido grupo abrange a primeira definição ocorrente e a mais ampla bem como cada uma e todas as definições preferidas para aquele grupo. E uma convenção semelhante aplica-se a “definido acima” ou “previamente definido”.

Nesta descrição, a não ser que indicado de outra forma, o termo “alquila” inclui tanto grupos alquila de cadeia reta como de cadeia ramificada, porém referências a grupos alquila individuais, como propila são específicos apenas para a versão de cadeia reta. Uma conversão análoga aplica-se a outros termos genéricos. A não ser que indicado de outra forma, o termo alquila refere-se vantajosamente a cadeias com 1-5 átomos de carbono, de preferência com 1-3 átomos de carbono. O termo alcóxi como usado aqui, a não ser que indicado de outra forma, inclui grupos alquila-Oem que alquila é como definido acima. O termo “arila” como usado aqui, a não ser que indicado de outra forma, inclui referência a um grupo Cô-io arila que pode, se desejado, portar um ou mais substituintes selecionados dentre halogênio, alquila, alcóxi, nitro, trifluorometila e ciano, (em que alquila e alcóxi são como definidos previamente). O termo arilóxi como usado aqui, a não ser que indicado de outra forma, inclui grupos arila-O- em que arila é como definido previamente. O termo sulfonilóxi como usado aqui, referese a grupos alquilsulfonilóxi e arilsulfonilóxi em que alquila e arila são como definidos acima. O termo “alcanoíla” como usado aqui, a não ser que indicado de outra forma, inclui grupos formila e alquila C=O em que alquila é como definido previamente, por exemplo C₂ alcanoíla é etanoíla e refere-se a CH₃C=O, Ci alcanoíla é formila e refere-se a CHO. Nesta descrição, a não ser que indicado de outra forma, o termo “alquenila” inclui tanto grupos alquenila de cadeia reta ou ramificada, porém referências a grupos alquenila individuais, como 2-butenila, são específicos apenas para a versão de cadeia reta. A não ser que indicado de outra forma o termo âO

alquenila refere-se vantajosamente a cadeias com 2-5 átomos de carbono, de preferência 3-5 átomos de carbono. Nesta descrição, a não ser que indicado de outra forma, o termo alquinila inclui tanto grupos alquinila de cadeia reta ou ramificada, porém referências a grupos alquinila individuais, como 2-butinila, são específicos apenas para a versão de cadeia reta. A não ser que indicado de outra forma, o termo alquinila refere-se vantajosamente a cadeias com 2-5 átomos de carbono, de preferência 3-5 átomos de carbono.

Na fórmula I, como definido acima, hidrogênio estará presente nas posições 2, 5 e 8 do grupo quinazolina.

Dentro da presente invenção compreende-se que um composto da fórmula I ou um sal do mesmo pode apresentar o fenômeno de tautomerismo e que os desenhos das fórmulas dentro desta descrição podem representar apenas uma das formas tautoméricas possíveis. Deve-se compreender que a invenção abrange qualquer forma tautomérica que inibe a atividade tirosina quinase de receptor de VEGF e não deve limitar-se meramente a qualquer uma das formas tautoméricas utilizadas nos desenhos de fórmulas.

Deve-se compreender também que determinados compostos da fórmula I e seus sais podem existir em formas solvatadas e também em formas não-solvatadas, como por exemplo, formas hidratadas. Deve-se compreender que a invenção abrange todas essas formas solvatadas que inibem a atividade de tirosina quinase de receptor de VEGF.

A fim de dirimir qualquer dúvida deve-se compreender que, em um composto de fórmula I, quando R² é, por exemplo, um grupo de fórmula C2-5 alquenila R³ é a porção C2-5 alquenila que se encontra ligada a X¹, e uma conversão análoga aplica-se a outros grupos. Quando R² é um grupo l-R³prop-l-en-3-ila, é o primeiro carbono ao qual o grupo W está ligado e é o terceiro carbono que está ligado a X¹, semelhantemente quando R² é um grupo 2-R³pent-3-en-5-ila é o segundo carbono ao qual o grupo R³ é

ligado e é o quinto carbono que é ligado a X¹, e uma conversão análoga aplica-se a outros grupos.

Compostos de fórmula I podem ser administrados em forma de uma pró-droga que é decomposta no corpo humano ou animal para dar um composto de Fórmula I. Exemplos de pró-drogas incluem ésteres hidrolisáveis in vivo de um composto da Fórmula I.

Diversas formas de pró-drogas são conhecidas na técnica. Como exemplos destes derivados de pró-drogas ver:

a) Design of Prodrugs, editado por H. Bundgaard, (Elsevier, 1985) e Methods in Enzymology, vol. 42, p. 309-396, editado por K. Widder, et al. (Academic Press, 1985);

b) A Textbook of Drug Design and Development, editado por Krogsgaard-Larsen e H. Bundgaard, capítulo 5 Design and Application of Prodrugs, por H. Bundgaard p. 113-191 (1991);

c) H. Bundgaard, Advanced Drug Delivery Reviews, 8, 1-38 (1992);

d) H. Bundgaard, et al., Journal of Pharmaceutical Sciences, 77,285 (1988); e

e) N. Kakeya, et al., Chem. Pharm. Bull., 32, 692 (1984).

Um éster hidrolisável in vivo de um composto de Fórmula I contendo um grupo hidróxi inclui ésteres inorgânicos, como ésteres de fosfato (incluindo ésteres cíclicos fosforamidícos) e éteres de a-aciloxialquila e compostos relacionados que, como um resultado da hidrólise in vivo da decomposição do éster, para dar o grupo(s) hidróxi parental/parentais. Exemplos de éteres de a-aciloxialquila incluem acetoximetóxi e 2,2dimetilpropionilóxi-metóxi. Uma seleção de grupos formadores de ésteres hidrolisáveis in vivo para hidróxi incluem alcanoíla, benzoíla, fenilacetila e benzoíla substituído e fenilacetila, alcoxicarbonila (dando ésteres de carbonato de alquila), dialquilacarbamoíla e N-(dialquilaminoetila)-N12

alquilcarbamoíla (dando carbamatos), dialquilaminoacetila e carboxiacetila. Exemplos de substituintes para benzoíla incluem morfolina e piperazino ligados de um átomo de nitrogênio de anel via um grupo metileno na posição 3- ou 4- do anel benzoíla.

A presente invenção refere-se a compostos de fórmula I como definido previamente e também a seus sais. Sais para uso em composições farmacêuticas serão sais farmaceuticamente aceitáveis, porém outros sais podem ser úteis na produção dos compostos de fórmula I e seus sais farmaceuticamente aceitáveis. Sais farmaceuticamente aceitáveis da invenção podem incluir, por exemplo, sais de adição de ácido dos compostos de fórmula I como definidos previamente e que são suficientemente básicos para formar esses sais. Esses sais de adição de ácido incluem, por exemplo, sais com ácidos inorgânicos ou orgânicos proporcionando ânions farmaceuticamente aceitáveis, como com halogenetos de hidrogênio (especialmente ácido clorídrico ou hidrobrômico, dentre os quais se prefere particularmente o ácido clorídrico) ou com ácido sulfurico ou fosfórico, ou com ácido trifluoroacético, cítrico ou maleico. Adicionalmente, quando os compostos de fórmula I são suficientemente ácidos, pode-se formar sais farmaceuticamente aceitáveis com uma base inorgânica ou orgânica que dá um cátion farmaceuticamente aceitável. Esses sais com bases inorgânicas ou orgânicas incluem, por exemplo, um sal de metal de álcali, como um sal de sódio ou de potássio, um sal de metal alcalino terroso, como um sal de cálcio ou de magnésio, um sal de amônio ou, por exemplo, um sal com metilamina, dimetilamina, trimetilamina, piperidina, morfolina ou tris-(2hidroxietil)amina.

Um composto da fórmula I, ou um seu sal, e outros compostos da invenção (como definido a seguir) pode ser preparado por meio de qualquer processo conhecido por ser aplicável na preparação de compostos relacionados quimicamente. Esses processos incluem, por exemplo, aqueles

ilustrados em Pedidos de Patentes Européias, Publicações nums. 0520722,

0566226, 0602851 e 0635498 e nos Pedidos Internacionais de Patentes nums WO 97/22596, WO 97/30035, WO 97/32856 e WO 98/13354. Esses processos são proporcionados como uma característica adicional da invenção e são como descritos a seguir. Materiais iniciais necessários podem ser obtidos por meio de procedimentos convencionais da química orgânica. A preparação desses materiais iniciais é descrita nos Exemplos não-limitantes acompanhantes. Materiais iniciais altemativamente necessários podem ser obtidos por meio de procedimentos análogos àqueles ilustrados e que se encontram dentro da prática ordinária de um químico orgânico.

Assim, os processos de (a) a (d) e (i) a (iv) a seguir constituem características adicionais da presente invenção.

Síntese de compostos de Fórmula I (a) Compostos da fórmula I e seus sais podem ser preparados

através da reação de um composto da fórmula III:

(em que R² e X¹ são como definidos acima e L¹ é uma porção deslocável), com um composto da fórmula IV:

(em que R¹ e m são como definidos acima) com o que se obtém compostos da fórmula I e seus sais. Uma porção deslocável 20 conveniente L¹ é, por exemplo, um grupo halogênio, alcóxi (de preferência Cm alcóxi), arilóxi ou sulfonilóxi, por exemplo um grupo cloro, bromo,

	metóxi, fenóxi, metanossulfonilóxi ou tolueno-4-sulfonilóxi. A reação é efetuada vantajosamente na presença de um ácido ou de uma base. Um ácido desse tipo é, por exemplo, um ácido inorgânico anidro, como cloreto de hidrogênio. Uma base desse tipo é, por exemplo, uma
5	base de amina orgânica, como por exemplo, piridina, 2,6-lutidina, colidina, 4dimetilaminopiridina, trietilamina, morfolina, N-metilmorfolina ou diazabiciclo[5.4.0]undec-7-eno, ou por exemplo, um hidróxido ou carbonato de metal alcalino terroso ou metal de álcali, por exemplo carbonato de sódio,
•ο	carbonato de potássio, carbonato de cálcio, hidróxido de sódio ou hidróxido de potássio. Altemativamente, uma base desse tipo é, por exemplo, um hidreto de metal de álcali, por exemplo hidreto de sódio, ou amida de metal de alcalino terroso ou metal de álcali, por exemplo amida de sódio ou bis(trimetilsilil)amida de sódio. A reação é efetuada, de preferência, na presença de um diluente ou solvente inerte, por exemplo um alcanol ou éster,
15 •	como metanol, etanol, 2-propanol ou acetato de etila, um solvente halogenado, como cloreto de metileno, triclorometano ou tetracloreto de carbono, um éter, como tetraidrofurano ou 1,4-dioxano, um solvente de hidrocarboneto aromático, como tolueno, ou um solvente aprótico dipolar, como Ν,Ν-dimetilformamida, N,N-dimetilacetamida, N-metilpirrolidin-2-ona
20	ou dimetilsulfóxido. A reação é efetuada convenientemente a uma temperatura na faixa de, por exemplo, 10 a 150°C, de preferência na faixa de 20 a 80°C. O composto da invenção pode ser obtido com este processo na forma da base livre ou, altemativamente, o mesmo pode ser obtido na forma
25	de um sal com o ácido da fórmula H-L¹ em que L¹ tem o significado definido acima. Quando se deseja obter a base livre do sal, o sal pode ser tratado com uma base como definido acima utilizando-se um procedimento convencional. (b) Compostos da fórmula I e seus sais podem ser preparados por meio da reação, convenientemente na presença de uma base como

definido previamente, de um composto da fórmula V:

(em que m, X¹ e R¹ são como definidos acima) com um composto de fórmula VI:

φ R²-L‘ (VI) (em que R² e L¹ são como definidos acima); L¹ é uma porção deslocável, por exemplo, um grupo halogênio ou sulfonilóxi, como um grupo bromo ou metanossulfonilóxi. Convenientemente, L¹ é um grupo O-⁺P(Y)3 (em que Y é butila ou fenila) e, em casos assim, o composto de fórmula VI é convenientemente formado in situ. A reação é efetuada, de preferência, na presença de uma base (como definido previamente no processo (a)) e, 10 vantajosamente na presença de um solvente ou diluente inerte como definido previamente no processo (a)), vantajosamente a uma temperatura na faixa, por exemplo, de 10 a 150°C, convenientemente a cerca de 50°C.

(c) Compostos da fórmula I e seus sais podem ser preparados por meio da reação de um composto da fórmula VII:

com um composto da fórmula VIII:

R²-X¹-H (VIII) (em que L¹, R¹, R², m e X¹ são como definidos acima). A reação pode ser efetuada convenientemente na presença de uma base (como definido acima no processo (a)) e, vantajosamente, na presença de um solvente ou diluente inerte (como definido previamente no processo (a)), vantajosamente a uma temperatura na faixa, por exemplo, de 10 a 150°C, convenientemente a cerca de 100°C.

(d) Compostos da fórmula I e seus sais podem ser preparados através da desproteção de um composto da fórmula IX:

em que R¹, m e X¹ são todos como definidos acima, e R⁴representam um grupo R² protegido em que R² é como definido previamente, 10 porém, adicionalmente, porta um ou mais grupos protetores P². A escolha do grupo protetor P² encontra-se dentro do conhecimento convencional de um

químico orgânico, por exemplo como incluídos em textos padrão, como Protective Groups in Organic Synthesis T.W. Greene e R.G.M. Wuts, 2^aedição, Wiley 1991. De preferência P² é um grupo protetor, como um carbamato (alcoxicarbonila) (como, por exemplo, ter-butoxicarbonila, teramiloxicarbonila, ciclobutoxicarbonila, propoxicarbonila, metoxicarbonila, etoxicarbonila, isopropoxicarbonila, aliloxicarbonila ou benziloxicarbonila). Mais preferivelmente, P² é ter-butoxicarbonila. A reação é efetuada, de preferência, na presença de um ácido. Um ácido desse tipo é, por exemplo, um ácido inorgânico, como cloreto de hidrogênio, brometo de hidrogênio ou um ácido orgânico, como ácido trifluoroacético, ácido trifluorometano sulfônico. A reação pode ser efetuada na presença de um solvente inerte, como o cloreto de metileno, triclorometano e na presença de um traço de água. A reação é efetuada convenientemente a uma temperatura na faixa de,

por exemplo, 10-100°C, de preferência na faixa de 20-80°C.

Síntese de intermediários (i) Os compostos de fórmula III e seus sais em que L¹ é halogênio podem ser preparados, por exemplo, halogenando-se um composto 5 da fórmula X:

(X) (em que R² e X¹ são como definidos acima).

Agentes halogenadores convenientes incluem halogenetos de ácido inorgânico, por exemplo, cloreto de tionila, cloreto de fósforo(III), oxicloreto de fósforo(V) e cloreto de fósforo(V). A reação de halogenação é 10 efetuada convenientemente na presença de um solvente ou diluente inerte, como por exemplo, um solvente halogenado, como cloreto de metileno, triclorometano ou tetracloreto de carbono, ou um solvente de hidrocarboneto

aromático, como benzeno ou tolueno. A reação é efetuada convenientemente a uma temperatura na faixa, por exemplo, de 10 a 150°C, de preferência na faixa de 40 a 100°C.

Os compostos de fórmula X e seus sais podem ser preparados, por exemplo, reagindo-se um composto da fórmula XI:

(em que L¹ é como definido previamente) com um composto da fórmula VIII como definido previamente. A reação pode ser efetuada 20 convenientemente na presença de uma base (como definido previamente no processo (a)) e vantajosamente na presença de um diluente ou solvente inerte

(como definido previamente no processo (a)), vantajosamente a uma temperatura na faixa, por exemplo, de 10 a 150°C, convenientemente a cerca de 100°C.

Os compostos de fórmula X e seus sais também podem ser preparados ciclizando-se um composto da fórmula XII:

(em que R² e X¹, são como definidos previamente, e A¹ é um grupo hidróxi, alcóxi (de preferência Cm alcóxi) ou amino) desta maneira formando um composto de fórmula X ou seu sal. A ciclização pode ser efetuada reagindo-se um composto da fórmula XII, em que A¹ é um grupo hidróxi ou alcóxi, com formamida ou um equivalente da mesma efetivo para causar ciclização, com o que se obtém um composto de fórmula X ou um sal do mesmo, como cloreto de [3-(dimetilamino)-2-azaprop-2enilidenojdimetilamônio. A ciclização é efetuada convenientemente na presença de formamida como solvente ou na presença de um diluente ou solvente inerte como um éter, por exemplo 1,4-dioxano. A ciclização é efetuada convenientemente a uma temperatura elevada, de preferência na faixa de 80 a 200°C. Os compostos de fórmula X também podem ser preparados ciclizando-se um composto da fórmula XII em que A¹ é um grupo amino, com ácido fórmico ou um equivalente do mesmo efetivo para causar ciclização, com o que se obtém um composto de fórmula X ou um sal do mesmo. Equivalentes de ácido fórmico efetivos para causar ciclização incluem, por exemplo, um tri-Ci.₄ alcoximetano, por exemplo trietoximetano e trimetoximetano. A ciclização é efetuada convenientemente na presença de uma quantidade catalítica de um ácido anidro, como um ácido sulfônico, por exemplo, ácido p-toluenossulfônico, e na presença de um diluente ou

• · · ··· · solvente inerte como, por exemplo, um solvente halogenado, como cloreto de ·· metileno, triclorometano ou tetracloreto de carbono, um éter, como dietil éter ou tetraidrofurano, ou um solvente de hidrocarboneto aromático, como tolueno. A ciclização é efetuada convenientemente a uma temperatura na 5 faixa, por exemplo, de 10 a 100°C, de preferência na faixa de 20 a 50°C.

Compostos de fórmula XIII e seus sais podem ser preparados, por exemplo, através da redução do grupo nitro em um composto de fórmula

XIII:

(ΧΠΙ)

1 1 (em que R , X e A são como definidos acima) dando um composto de fórmula XII como definido previamente. A redução do grupo nitro pode ser efetuada convenientemente por meio de qualquer um dos procedimentos conhecidos para uma tal transformação. A redução pode ser ® realizada, por exemplo, por meio de hidrogenação de uma solução do composto nitro na presença de um diluente ou solvente inerte como definido previamente na presença de um metal efetivo para catalisar reações de hidrogenação, como paládio ou platina. Um agente redutor adicional é, por exemplo, um metal ativado, como um ferro ativado (produzido por exemplo lavando-se pó de ferro com uma solução diluída de um ácido, como ácido clorídrico). Assim, por exemplo, a redução pode ser efetuada aquecendo-se o 20 composto nitro e o metal ativado na presença de um solvente ou diluente, como uma mistura de água e álcool, por exemplo, metanol ou etanol, a uma temperatura na faixa, por exemplo, de 50 a 150°C, convenientemente a cerca de 70°C.

♦· ···· * · • · ·· • * ·· • · ·t • · ·· ·♦ ·· ·· • · ♦ · «·

Compostos da fórmula XIII e seus sais podem ser preparados, por exemplo, por meio da reação de um composto da fórmula XIV:

(xiv) (em que L¹ e A¹ são como definidos acima) com um composto

da fórmula VIII como definido previamente para dar um composto da fórmula XIII. A reação dos compostos das fórmulas XIV e VIII é efetuada convenientemente em condições como descritas para o processo (c) acima.

Compostos de fórmula XIII e seus sais podem ser preparados, por exemplo, por meio da reação de um composto da fórmula XV:

(XV) (em que X¹ e A¹ são como definidos acima) com um composto da fórmula VI como definido previamente para dar um composto da fórmula

XIII como definido acima. A reação dos compostos de fórmulas XV e VI é efetuada convenientemente em condições como descrito para o processo (b) acima.

Os compostos de fórmula III e seus sais também podem ser preparados, por exemplo, reagindo-se um composto da fórmula XVI:

(xvi)

7 (em que X é como definido previamente e L representa uma porção protetora deslocável) com um composto da fórmula VI como definido previamente, com o que se obtém um composto de fórmula III em que L¹ é representado por L².

Um composto de fórmula XVI é utilizado convenientemente de tal forma que L² represente um grupo fenóxi que, se desejado, pode portar até 5 substituintes, de preferência até 2 substituintes, selecionados dentre halogênio, nitro e ciano. A reação pode ser efetuada convenientemente em condições como descritas para o processo (b) acima.

Os compostos de fórmula XVI e seus sais como definidos acima podem ser preparados, por exemplo, desprotegendo-se um composto da fórmula XVII:

(XVII)

(em que X¹ e L¹ são como definidos acima e P¹ representa um grupo protetor hidróxi fenólico). A escolha do grupo protetor hidróxi fenólico P¹ encontra-se dentro do conhecimento convencional de um químico orgânico, por exemplo aqueles incluídos em textos padrão, como Protective

Groups in Organic Synthesis T.W. Greene e R.G.M. Wuts, 2^a edição, Wiley 1991, incluindo éteres (por exemplo, metila metoximetila, alila e benzila e benzila substituído com até dois substituintes selecionados dentre alcóxi e nitro), éteres de silila (por exemplo, t-butildifenilsilila e t-butildimetilsilila), ésteres (por exemplo, acetato e benzoato) e carbonatos (por exemplo, metila e benzila e benzila substituído com até dois substituintes selecionados dentre

Cm alcóxi e nitro). A desproteção pode ser efetuada por meio de técnicas bem conhecidas na literatura, por exemplo em que P¹ representa um grupo benzila, a desproteção pode ser efetuada por meio de hidrogenólise ou por meio de tratamento com ácido trifluoroacético.

A remoção de um tal grupo protetor hidróxi fenólico pode ser efetuada por meio de qualquer dos procedimentos conhecidos na técnica para uma tal transformação, incluindo aquelas condições de reação indicadas em textos padrão como indicado acima, ou por meio de um procedimento relacionado. As condições de reação são, de preferência, tais que o derivado hidróxi seja produzido sem reações indesejadas em outros sítios dentro dos compostos de iniciais ou produtos. Por exemplo, onde o grupo protetor P¹ e acetato, a transformação pode ser efetuada convenientemente por meio de tratamento do derivado quinazolina com uma base como definido previamente e incluindo amônia, e seus derivados mono- e di-alquilados, de preferência na presença de um co-solvente ou solvente prótico, como água ou um álcool, por exemplo metanol ou etanol. É possível realizar uma reação desse tipo na presença de um diluente ou solvente inerte adicional, como definido previamente e a uma temperatura na faixa de 0 a 50°C, convenientemente a cerca de 20°C.

Se desejado, um composto de fórmula III pode ser convertido a outro composto de fórmula III em que a porção L¹ é diferente. Assim, por exemplo, um composto de fórmula III em que L¹ é diferente de halogênio, por exemplo fenóxi opcionalmente substituído, pode ser convertido a um composto de fórmula III em que L¹ é um halogênio por meio de hidrólise de um composto de fórmula III (em que L¹ é diferente de halogênio) dando um composto de fórmula X como definido previamente, seguido da introdução de halogeneto ao composto de fórmula X, assim obtido como definido previamente, dando um composto de fórmula III em que L¹ representa halogênio.

(ii) Compostos da fórmula V como definida acima e seus sais podem ser preparados por meio de desproteção do composto de fórmula XVIII:

(Rbm

(XVIII)

(em que R¹, P¹, X¹ e m são como definidos acima) por meio de um processo, por exemplo, como descrito em (i) acima.

Compostos da fórmula XVIII e seus sais, como definidos acima, podem ser preparados reagindo-se compostos das fórmulas XVII e IV como definidos acima, sob as condições descritas em (a) acima, dando um composto da fórmula XVIII ou seu sal.

(iii) Compostos da fórmula VII e seus sais como definidos acima podem ser preparados reagindo-se um composto da fórmula XIX:

(XIX) (em que L¹ é como definido previamente, e L¹, nas posições 4 e 7, podem ser iguais ou diferentes) com um composto de fórmula IV como definido acima, sendo que a reação é efetuada, por exemplo, por meio de um processo como descrito em (a) acima.

(iv) Um composto da fórmula IX pode ser preparado por meio da reação de um composto da fórmula V como definido acima com um composto da fórmula XX:

R⁴-L’ (XX) em que R⁴ e L¹ são como definidos acima sob as condições descritas em (b) acima para dar um composto da fórmula IX ou seu sal. A reação é efetuada, de preferência, na presença de uma base (como definido acima no processo (a)) e, vantajosamente, na presença de um solvente ou diluente inerte (como definido acima no processo (a)), vantajosamente a uma 5 temperatura na faixa, por exemplo, de 10 a 150°C, convenientemente na faixa de 20-50°C.

Quando se requer um sal farmaceuticamente aceitável de um composto da fórmula I, o mesmo pode ser obtido, por exemplo, por meio de

reação do referido composto com, por exemplo, um ácido utilizando-se um procedimento convencional, sendo que o ácido apresenta um ânion farmaceuticamente aceitável, ou o mesmo pode ser obtido por meio de reação do referido composto com uma base por meio de um procedimento convencional.

A identificação de compostos que inibem potencialmente a atividade tirosina quinase associada com os receptores VEGF, como Flt e/ou KDR e que inibem angiogênese e/ou permeabilidade vascular incrementada é desejável e é o objeto da presente invenção. Estas propriedades podem ser _ avaliadas, por exemplo, utilizando-se um ou mais processos indicados abaixo:

(a) Teste da inibição de tirosina quinase de receptor in vitro

Esta análise determina a capacidade de um composto de teste em inibir atividade de tirosina quinase. É possível obter DNA que codifica domínios citoplásmicos de receptor de VEGF ou fator de crescimento epidérmico (EGF) por meio de síntese de gene total (Edwards M, 25 International Biotechnology Lab 5 (3), 19-25, 1987) ou por meio de clonagem. Estes podem ser expressos em um sistema de expressão adequado para se obter polipeptídeo com atividade de tirosina quinase. Por exemplo, verificou-se que domínios citoplásmicos de receptor de VEGF e EGF, que são obtidos por meio de expressão de proteína recombinante em células de

insetos, apresentam atividade de tirosina quinase intrínseca. No caso do receptor de VEGF Flt (número de registro no Genbank X51602), um fragmento de DNA com 1,7 kb codificando a maior parte do domínio citoplásmico, iniciando com metionina 783 e incluindo o códon de 5 terminação, descrito por Shibuya et al. (Oncogene, 1990, 5: 519-524), foi isolado de cDNA e clonado em um vetor de transposição de baculorívus (por exemplo, pAcYMl (ver The Baculovirus Expression System: A Laboratory

Guide, L.A. King e R, D. Possee, Chapman and Hall, 1992) ou pAc360 ou

pBlueBacHis (disponível junto à Invitrogen Corporation)). Esta construção recombinante foi co-transfectada em células de insetos (por exemplo,

Spodoptera frugiperda 21 (Sf21)) com DNA viral (por exemplo Pharmingen

BaculoGold) para preparar baculovirus recombinante. (Detalhes acerca dos métodos para o conjunto de moléculas de DNA recombinante e a preparação e uso de baculovirus recombinante podem ser encontrados em textos padrão, por exemplo, Sambrook et al., 1989, Molecular cloning - A Laboratory

Manual, 2^a edição, Cold Spring Harbour Laboratory Press e O'Reilly et al.,

1992, Baculovirus Expression Vectors - A Laboratory Manual, W. H.

Freeman and Co, New York). Para outras tirosina quinases destinadas a análises, fragmentos citoplásmicos iniciando de metionina 806 (KDR, número de registro no Genbank L04947) e metionina 668 (receptor de EGF, número de registro no Genbank X00588) podem ser clonados e expressos de uma maneira semelhante.

Para a expressão de atividade de tirosina quinase de cFlt, células Sf21 foram infectadas com vírus recombinante de cFlt com uma 25 pureza adequada para placa a uma multiplicidade de infecção de 3 e colhidos horas mais tarde. Células colhidas foram lavadas com solução salina tamponada com fosfato (PBS) gelada (10 mM de fosfato de sódio pH 7,4,138 mM de cloreto de sódio, 2,7 mM de cloreto de potássio), depois ressuspensas em HNTG/PMSF gelado (20 mM de Hepes pH 7,5, 150 mM de cloreto de sódio, 10 % vol/vol de glicerol, 1 % vol/vol de Triton XI00, 1,5 mM de cloreto de magnésio, 1 mM de etileno glicol - ácido bis(3aminoetil éter) Ν,Ν,Ν',Ν'-tetraacético (EGTA), adiciona-se 1 mM de PMSF (fluoreto de fenilmetilsulfonila); o PMSF é adicionado imediatamente antes do uso a partir de uma solução 100 mM recentemente preparada em metanol) utilizando-se 1 ml de HNTG/PMSF por 10 milhões de células. A suspensão foi centrifugada durante 10 minutos a 13.000 rpm a 4°C, o sobrenadante (solução-mãe de enzima) foi removido e armazenado em frações a -70°C. Cada nova batelada de solução-mãe de enzima foi titulada no ensaio por meio de diluição com diluente de enzima (100 mM de Hepes pH 7,4, 0,2 mM de ortovanadato de sódio, 0,1 % vol/vol de Triton XI00, 0,2 mM de ditiotreitol). Para uma batelada típica, o estoque de enzima é diluído a 1 em 2000 com diluente de enzima e utiliza-se 50 μΐ de enzima diluída para cada poço de ensaio.

Preparou-se uma solução-mãe de substrato a partir de copolímero randômico contendo tirosina, por exemplo, Poly (Glu, Ala, Tyr) 6:3:1 (Sigma P3899), armazenado como 1 mg/ml de solução-mãe em PBS a 20°C e diluído a 1 em 500 com PBS para revestimento da placa.

No dia anterior ao ensaio colocou-se 100 μΐ de solução de substrato diluída em todos os poços das placas de ensaio (imuno-placas Nunc maxisorp de 96-poços) que foram selados e deixados de um dia para o outro a 4°C.

No dia do ensaio, a solução de substrato foi descartada e os poços das placas de ensaio foram lavados uma vez com PBST (PBS contendo 0,05 % vol/vol de Tween 20) e uma vez com 50 mM de Hepes pH 7,4.

Os compostos de ensaio foram diluídos com dimetilsulfóxido (DMSO) a 10 % e 25 μΐ de composto diluído foram transferidos para poços nas placas de análise lavadas. Poços de controle “total” continham DMSO a 10 % em lugar de composto. Vinte e cinco microlitros de 40 mM de cloreto de manganês(II) contendo 8 μΜ de adenosina-5'-trifosfato (ATP) foram adicionados em todos os poços de teste exceto poços de controle “nulos” que continham cloreto de manganês(II) sem ATP. Para iniciar as reações, adicionou-se 50 μΐ de enzima recentemente diluída a cada poço e as placas foram incubadas à temperatura ambiente durante 20 minutos. O líquido foi então descartado e os poços foram lavados duas vezes com PBST. Adicionou-se em cada poço uma centena de microlitros de anticorpo antifosfotirosina IgG de camundongo (produto Upstate Biotechnology Inc. 05321), diluídos a 1 em 6000 com PBST contendo 0,5 % peso/volume de albumina de soro bovino (BSA), e as placas foram incubadas durante 1 hora à temperatura ambiente antes de se descartar o líquido e lavar os poços duas vezes com PBST. Adicionou-se cem microlitros anticorpo de Ig anticamundongo de ovelha ligado com peroxidase de raiz forte (BRP: horse radish peroxidase) (produto Amersham NXA 931), diluído a 1 em 500 com PBST contendo 0,5 % peso/volume de BSA, e as placas foram incubadas durante 1 hora à temperatura ambiente antes de se descartar o líquido e lavar os poços duas vezes com PBST. Adicionou-se em cada poço cem microlitros de solução de 2,2'-azino-bis(ácido 3-etilbenzotiazolino-6-sulfônico) (ABTS), recentemente preparado utilizando-se um tablete de 50 mg de ABTS (Boehringer 1204 521) em tamponador de citrato-fosfato 50 mM recentemente preparado com pH 5,0 + 0,03 % de perborato de sódio (preparado com tamponador de citrato fosfato com cápsula de perborato de sódio (PCSB: phosphate citrate buffer with sodium perboraté) (Sigma P4922) por 100 ml de água destilada). Em seguida as placas foram incubadas durante 20-60 minutos à temperatura ambiente até que o valor de densidade óptica das células de controle “total”, medido a 405 nm utilizando-se um espectrofotômetro de leitura de placas, foi de aproximadamente 1,0. Os valores de controle nulos (nenhum ATP) e total (nenhum composto) foram usados para se determinar a faixa de diluição do composto de teste que proporcionou 50 % de inibição de atividade de enzima.

(b) Ensaio de proliferação de HUVEC in vitro

Este ensaio determina a capacidade de um composto de teste em inibir a proliferação de células endoteliais de veia umbilical humana 5 (HUVEC: human umbilical vein endothelial cells) estimuladas com fator de crescimento.

Células HUVEC foram isoladas em MCDB 131 (Gibco BRL) + 7,5 % vol/vol de soro de bezerro fetal (FCS: foetal calf serum) e foram

plaqueadas (na passagem de 2 a 8), em MCDB 131 + 2 % vol/vol de FCS + 3 pg/ml de heparina + 1 pg/ml de hidrocortisona, a uma concentração de 1000 células/poço em placas com 96 poços. Após um mínimo de 4 horas elas foram dosadas com o fator de crescimento apropriado (i.e. VEGF 3 ng/ml,

EGF 3 ng/ml ou B-FGF 0,3 ng/ml) e composto. As culturas foram então incubadas durante 4 dias a 37°C com dióxido de carbono a 7,5 %. No dia 4 as culturas foram pulsadas com timidina tritiada a 1 pCi/poço (produto Amersham TRA 61) e incubadas durante 4 horas. As células foram colhidas utilizando-se um coletor de placas com 96 poços (Tomtek) e, depois, analisadas quanto à incorporação de trítio com um contador de placas Beta. A ^w incorporação de radioatividade em células, expressa como cpm, foi utilizada para se medir a inibição da proliferação de células estimuladas com fator de crescimento, por parte dos compostos.

(c) Modelo de doença de tumor sólido in vivo

Este teste mede a capacidade de compostos para inibir o crescimento de tumor sólido.

Xeno-enxertos de tumor CaLu-6 foram estabelecidos no flanco de camundongos Swiss fêmeas atímicos nu/nu, por meio de injeção subcutânea de 1 x 10⁶ células CaLu-6/camundongo em 100 μΐ de uma solução de Matrigel a 50 % (vol/vol) em meio de cultura livre de soro. Dez dias após o implante celular, camundongos foram alocados em grupos de 829

• · ·*

10, de modo a se conseguir volumes médios comparáveis por grupo. Mediuse os tumores utilizando-se calibradores vemier e os volumes foram calculados como: (1 x w) x n' (1 x w)x (π/6), em que 1 é o diâmetro maior e w é o diâmetro perpendicular ao diâmetro maior. Os compostos de teste 5 foram administrados oralmente uma vez ao dia durante um mínimo de 21

dias, e animais de controle receberam diluente de composto. Os tumores foram medidos duas vezes por semana. O nível de inibição de crescimento foi calculado em comparação com o volume médio do tumor do grupo de controle versus o grupo de tratamento, e a significância estatística foi determinada utilizando-se o teste t de Student e/ou um teste Mann-Whitney Rank Sum Test. O efeito inibitório do tratamento com o composto foi considerado significativo quando p < 0,05.

O perfil toxicológico dos compostos da presente invenção pode ser analisado, por exemplo, utilizando-se um estudo de 14 dias em ratos, como descrito a seguir.

(d) Teste de toxicidade de 14 dias em rato

Este teste mede a atividade de compostos no incremento da zona de hipertrofia nas placas de crescimento epifisiário femural do fêmur distai e da tíbia proximal, e permite a análise de alterações histopatológicas em outros tecidos.

A angiogênese é um evento essencial na ossificação endocondral durante o alongamento de ossos longos, e sugeriu-se que a invasão vascular da placa de crescimento depende da produção de VEGF por condrócitos hipertróficos. A expansão da zona de condrócitos hipertróficos e 25 a inibição da angiogênese foi demonstrada após tratamento com agentes que seqüestram especificamente VEGF, como por exemplo, (i) uma proteína quimérica solúvel de receptor de VEGF (Flt-(l-3)-IgG) em camundongos (Gerber, Η-P., Vu, T.H., Ryan, A.M., Kowalski, J., Werb, Z. e Ferrara, N. VEGF acopla a remodelação da cartilagem hipertrófica, ossificação e

-·» ·ΑΑ ·<-. *4 9 ·»*· ·· *····

-· ·'-'····-> ·· r · ···-·»·<- · ··« · · · r>·· 9 « e · · · · · * ·· * · · · <·»«··· • « ·· ··· · »*»*! -· ·· angiogênese durante a formação de ossos endocondrais, Nature Med., 5: 623628, 1999) e (ii) um anticorpo IgGl monoclonal anti-VEGF humanizado recombinante no macaco cinomólogo (Ryan, A.M., Eppler, D.B., Hagler, K.E., Bruner, R.H., Thomford, P.J., Hall, R.L., Shopp, G.M. e O’Niell, C.A.

Preclinical Safety Evaluation of rhuMAbVEGF, an antiangiogenic humanised monoclonal antibody, Tox. Path., 27: 78-86, 1999).

Portanto, um inibidor da atividade de tirosina quinase de

receptor de VEGF também deveria inibir a invasão vascular da cartilagem, e aumentar a zona de hipertrofia nas placas de crescimento epifisiário femural do fêmur distai e da tíbia proximal em animais em crescimento.

Os compostos foram formulados inicialmente por meio de suspensão em uma solução a 1 % (vol/vol) de polioxietileno (20) monooleato de sorbitano em água deionizada, por meio de moagem com esferas a 4°C de um dia para o outro (durante pelo menos 15 horas). Os compostos 15 foram ressuspensos por meio de agitação imediatamente antes da dosagem.

Ratos Alderley Park jovens (derivados de Wistar, com peso de 135-150 g, com de 4 a 8 semanas de idade, 5-6 por grupo) receberam dosagens diárias

únicas por meio de lavagem oral durante 14 dias consecutivos com o composto (a 0,25 ml/100 g de peso corporal) ou veículo. No dia 15 os animais foram sacrificados humanamente utilizando-se uma concentração crescente de dióxido de carbono, e realizou-se um post-mortem. Uma gama de tecidos, que incluía juntas fêmuro-tibiais, foi coletada e processada por meio de técnicas histológicas convencionais para produzir seções de cera de parafina. Seções histológicas foram manchadas com hematoxilina e eosina e examinadas com microscopia luminosa quanto à histopatologia. As áreas de placas de crescimento epifisiário femural do fêmur distai e da tíbia proximal foram medidas em seções de fêmur e da tíbia utilizando-se análise de imagem morfométrica. O aumento na zona de hipertrofia foi determinado por comparação da área média de placa de crescimento epifisiário do grupo de controle versus o grupo de tratamento, e determinou-se a significância estatística utilizando-se um teste t de Student de um único segmento. O efeito inibidor do tratamento com o composto foi considerado significativo quando p < 0,05.

Embora as propriedades farmacológicas dos compostos de Fórmula I variem com a alteração estrutural, em geral, a atividade apresentada pelos compostos da Fórmula I pode ser demonstrada com as doses ou concentrações a seguir em um ou mais dos testes (a), (b), (c) e (d) acima:

Teste (a): IC₅₀ na faixa, por exemplo, < 5μΜ;

Teste (b): IC₅₀ na faixa, por exemplo, de 0,001-5 μΜ;

Teste (c): atividade na faixa, por exemplo, de 0,1-100 mg/kg;

Teste (d): atividade na faixa, por exemplo, de 0,1-100 mg/kg.

De acordo com um aspecto da presente invenção, os compostos de Fórmula I, avaliados no dia 14 do teste de toxicidade no rato, apresentam um perfil toxicológico benéfico relativamente a outros compostos dentro da abrangência da Publicação de Pedido de Patente Internacional n° WO 98/13354.

De acordo com outro aspecto da presente invenção os compostos de Fórmula I, analisados no dia 14 do teste de toxicidade no rato, apresentam um perfil toxicológico benéfico relativamente a outros compostos dentro da abrangência da Publicação de Pedido de Patente Internacional n° WO 97/30035.

Embora os perfis farmacológicos dos compostos de Fórmula I variem com a alteração estrutural e entre as espécies, a doses no rato, de preferência a doses menores que ou iguais a 150 mg/kg, mais preferivelmente a doses menores que ou iguais a 100 mg/kg, especialmente a doses menores ou iguais a 50 mg/kg, os compostos de Fórmula I que produzem um aumento estatisticamente significativo aumentam na área de placa de crescimento epifisiário do fêmur distai e/ou da tíbia proximal não produzem alterações histopatológicas inaceitáveis em outros tecidos nos testes (d) realizados pela Requerente.

Assim, a título de exemplo, o composto 4-(4-bromo-2fluoroanilino)-6-metóxi-7-(l-metilpiperidin-4-ilmetóxi)quinazolina, (Exemplo 2), testado de acordo com (a), (b), (c) e (d) acima deram os resultados a seguir:

(a) Flt-IC₅₀, de 1,6 μΜ

KDR-IC₅₀de0,04 μΜ

EGFR-IC50 de 0,5 μΜ (b) VEGF - IC₅₀ de 0,06 μΜ

EGF - IC₅₀ de 0,17 μΜ

Basal - IC₅₀ >3 μΜ (c) 78% de inibição do crescimento tumoral a 50 mg/kg; p < 0,001 (Mann-Whitney Rank Sum Test);

(d) 75% de incremento da hipertrofia da placa de crescimento epifisiário a 100 mg/kg/dia em ratos fêmeas; p < 0,001 (teste t de Student de um único segmento).

De acordo com um outro aspecto da invenção proporciona-se uma composição farmacêutica que compreende um composto da fórmula I como definido previamente ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, em associação com um veículo ou excipiente farmaceuticamente aceitável.

A composição pode encontrar-se em uma forma adequada para administração oral (por exemplo, como tabletes, losangos, cápsulas duras ou moles, suspensões aquosas ou oleosas, emulsões, grânulos ou pós dispersáveis, xaropes ou elixires), para administração por inalação (por exemplo, como um pó finamente dividido ou um aerossol líquido), para administração por insuflação (por exemplo, como um pó finamente dividido), para injeção parenteral (por exemplo, como uma solução, suspensão ou

emulsão estéril para dosagem intravenosa, subcutânea, intramuscular, intravascular ou por infusão), para administração tópica (por exemplo, como cremes, ungüentos, géis, ou suspensões ou soluções aquosas ou oleosas), ou para administração retal (por exemplo, como um supositório). Em geral, as 5 composições acima podem ser preparadas de maneira convencional utilizando-se excipientes convencionais.

As composições da presente invenção são apresentadas

vantajosamente em forma de dosagem unitária. O composto será administrado normalmente a um animal de sangue quente a uma dose unitária dentro da faixa de 5-5000 mg por metro quadrado de área corporal do animal,

i.e. de aproximadamente 0,1-100 mg/kg. Considera-se uma dose unitária na faixa, por exemplo, de 1-100 mg/kg, de preferência de 1-50 mg/kg, e isto proporciona normalmente uma dose terapeuticamente efetiva. Uma forma de dosagem unitária, como um tablete ou uma cápsula conterá usualmente, por exemplo, 1-250 mg de ingrediente ativo.

De acordo com um outro aspecto da presente invenção

proporciona-se um composto de fórmula I ou um seu sal farmaceuticamente aceitável como definido acima para uso em um método de tratamento do corpo humano ou animal por meio de terapia. A Requerente verificou que compostos da presente invenção inibem a atividade de tirosina quinase de receptor de VEGF e são, portanto, interessantes devido a seus efeitos antiangiogênicos e/ou devido a sua capacidade de causar uma redução da permeabilidade vascular.

Uma característica adicional da presente invenção é um composto de fórmula I, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, para uso como um medicamento, convenientemente um composto de Fórmula I, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, para uso como um medicamento para produzir um efeito antiangiogênico e/ou redutor de permeabilidade vascular em um animal de sangue quente, como um ser humano.

Assim, de acordo com um aspecto adicional da invenção proporciona-se o uso de um composto de Fórmula I, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável na manufatura de um medicamento para uso na produção de um efeito antiangiogênico e/ou redutor de permeabilidade vascular em um animal de sangue quente, como um ser humano.

De acordo com uma outra característica da invenção proporciona-se um método para produzir um efeito antiangiogênico e/ou redutor de permeabilidade vascular em um animal de sangue quente, como um ser humano, que necessite de um tal tratamento que compreende administrar ao referido animal uma quantidade efetiva de um composto de fórmula I ou um seu sal farmaceuticamente aceitável como definido acima.

Como indicado acima, o tamanho da dose requerida para o tratamento terapêutico ou profilático de um estado de doença particular será necessariamente variado dependendo do hospedeiro tratado, da via de administração e da gravidade da doença que está sendo tratada. De preferência, emprega-se uma dose diária na faixa de 1-50 mg/kg. No entanto, a dose diária será variada necessariamente dependendo do hospedeiro tratado, da via particular de administração, e da gravidade da doença que está sendo tratada. Assim, a dosagem ótima pode ser determinada pelo praticante que está tratando qualquer paciente particular.

O tratamento antiangiogênico e/ou de redução da permeabilidade vascular pode ser aplicado como uma terapia única ou pode envolver, adicionalmente a um composto da invenção, uma ou mais substâncias e/ou tratamentos. Um tal tratamento conjunto pode ser conseguido por meio da administração simultânea, seqüencial ou separada dos componentes individuais do tratamento. No campo da oncologia médica constitui prática normal usar uma combinação de diferentes formas de tratamento para tratar cada paciente com câncer. Na oncologia médica o(s) outro(s) componente(s) de um tal tratamento conjunto, adicionalmente ao tratamento antiangiogênico e/ou ao tratamento de redução da permeabilidade vascular definido acima, pode(m) ser: cirurgia, radioterapia ou quimioterapia. Essa quimioterapia pode cobrir cinco categorias principais de agente terapêutico:

(i) outros agentes antiangiogênicos que atuam por meio de mecanismos diferentes daqueles definidos acima (por exemplo, linomida, inibidores da função de integrina ανβ3, angiostatina, endostatina, razoxina, talidomida) e incluindo agentes de objetivação vascular (por exemplo, fosfato de combretastatina e os agentes de danos vasculares descritos na Publicação de Pedido de Patente Internacional n° WO 99/02166, sendo que a revelação integral do referido documento é incorporada aqui integralmente por referência, (por exemplo, N-acetilcolquinol-O-fosfato));

(ii) agentes citostáticos, como antiestrógenos (por exemplo, tamoxifeno, toremifeno, raloxifeno, droloxifeno, iodoxifeno), progestógenos (por exemplo, acetato de megestrol), inibidores de aromatase (por exemplo, anastrozol, letrazol, vorazol, exemestano), antiprogestógenos, antiandrógenos (por exemplo, flutamida, nilutamida, bicalutamida, acetato de ciproterona), agonistas e antagonistas de LHRH (por exemplo, acetato de goserelina, luprolida, abarelix), inibidores de testosterona 5a-diidrorredutase (por exemplo, finasterida), agentes anti-invasão (por exemplo, inibidores de metaloproteinase, como marimastato e inibidores da função de receptor de ativador de plasminógeno de uroquinase) e inibidores da função de fator de crescimento, (tais fatores de crescimento incluem, por exemplo, fator de crescimento derivado de plaquetas e fator de crescimento de hepatócitos, como inibidores, incluem anticorpos de fator de crescimento, anticorpos de receptor de fator de crescimento, inibidores de tirosina quinase e inibidores de serina/tirosina quinase);

(iii) modificadores de resposta biológica (por exemplo, interferon), (iv) anticorpos (por exemplo, edrecolomab); e (v) drogas antiproliferativas/antineoplásicas e combinações das mesmas, como usadas na oncologia médica, como antimetabólitos (por exemplo, antifolatos, como metotrexato, fluoropirimidinas, como 55 fluorouracila, purina e análogos de adenosina, arabinosídeo de citosina);

antibióticos anti-tumor (por exemplo, antraciclinas, como doxorubicina, daunomicina, epirubicina e idarubicina, mitomicina-C, dactinomicina, mitramicina); derivados de platina (por exemplo, cisplatina, carboplatina);

agentes alquiladores (por exemplo, mostarda de nitrogênio, melfalan, clorambucil, busulfano, ciclofosfamida, ifosfamida, nitrosouréias, tiotepa);

agentes antimitóticos (por exemplo, alcalóides vinca, como vincristina e taxóides, como taxol, taxotere); enzimas (por exemplo, asparaginase); inibidores de timidilato sintase (por exemplo, raltitrexed); inibidores de topoisomerase (por exemplo, epipodofilotoxinas, como etoposídeo e 15 teniposídeo, amsacarina, topotecano, irinotecano).

Por exemplo, um tal tratamento conjunto pode ser obtido através da administração simultânea, seqüencial ou separada de um composto

de fórmula I como definido previamente, como 4-(4-bromo-2-fluoroanilino)6-metóxi-7-(l-metilpiperidin-4-ilmetóxi)quinazolina ou um seu sal, especialmente um sal de hidrocloreto do mesmo, e um agente de marcação vascular descrito no WO 99/02166, como N-acetilcolquinol-O-fosfato (Exemplo 1 do WO 99/02166).

Como indicado acima, os compostos definidos na presente invenção são interessantes devido a seus efeitos antiangiogênicos e/ou 25 redutores de permeabilidade vascular. Espera-se que esses compostos da invenção sejam úteis numa ampla faixa de estados de doença incluindo o câncer, diabetes, psoríase, artrite reumatóide, sarcoma de Kaposi, hemangioma, nefropatias agudas e crônicas, ateroma, restenose arterial, doenças autoimunes, inflamação aguda, formação excessiva de cicatrizes, e adesões, endometriose, sangramento uterino disfuncional e doenças oculares com proliferação de vasos retinais. Em particular, espera-se que esses compostos da invenção reduzam vantajosamente o crescimento de tumores sólidos primários e recorrentes, por exemplo, do cólon, mama, próstata, 5 pulmões e pele. Mais particularmente, espera-se que esses compostos da invenção inibam o crescimento daqueles tumores sólidos primários e

recorrentes que são associados com VEGF especialmente aqueles tumores que são significativamente dependentes de VEGF quanto a seu crescimento e que se disseminam, incluindo, por exemplo, determinados tumores do cólon, da mama, da próstata, do pulmão, da vulva, e da pele.

Em outro aspecto da presente invenção espera-se que os compostos de Fórmula I inibam o crescimento daqueles tumores sólidos primários e recorrentes que são associados com EGF especialmente aqueles tumores que são significativamente dependentes de EGF para seu crescimento e disseminação.

Em outro aspecto da presente invenção, espera-se que os compostos da Fórmula I inibam o crescimento daqueles tumores sólidos

primários e recorrentes que são associados com VEGF e EGF especialmente aqueles tumores que são significativamente dependentes de VEGF e EGF para seu crescimento e disseminação.

Adicionalmente a seu uso na medicina terapêutica, os compostos de fórmula I e seus sais farmaceuticamente aceitáveis temperatura são úteis como ferramentas farmacológicas no desenvolvimento e na padronização de sistemas de teste in vitro e in vivo para a avaliação dos efeitos de inibidores da atividade de tirosina quinase de receptor de VEGF em animais de laboratório, como gatos, cães, coelhos, macacos, ratos e camundongos, como parte da pesquisa por novos agentes terapêuticos.

Deve-se compreender que onde o termo “éter” for utilizado em qualquer lugar nesta descrição, ele refere-se a éter de dietila.

•ο

A invenção será ilustrada agora, embora sem limitação, pelos Exemplos a seguir em que, a não ser que indicado de outra forma:

(i) as evaporações foram realizadas por meio de evaporação rotativa em vácuo e realizou-se procedimentos de tratamento após remoção dos sólidos residuais, como agentes secantes, por filtração, (ii) as operações foram realizadas à temperatura ambiente, ou seja, na faixa de 8-25°C e sob uma atmosfera de um gás inerte, como o argônio;

(iii) a cromatografia de coluna (pelo processo de vaporização instantânea) e cromatografia líquida de média pressão (MPLC) foram realizadas sobre sílica Merck Kieselgel (Art. 9385) ou sílica de fase reversa Merck Lichroprep RP-18 (Art. 9303) obtida junto à E. Merck, Darmstadt, Alemanha;

(iv) os rendimentos são dados apenas para fins de ilustração e não são necessariamente o máximo atingível;

(v) os pontos de fusão são não-corrigidos e foram determinados utilizando-se um aparelho automático de ponto de fusão Mettler SP62, um aparelho de banho de óleo ou um aparelho de placa quente Koffler.

(vi) as estruturas dos produtos finais da fórmula I foram confirmadas por meio de técnicas de ressonância magnética nuclear (RMN) (geralmente de próton) e de massa espectral; os valores de desvio químico de ressonância magnética de próton foram medidos na escala delta e as multiplicidades de picos são mostradas como a seguir: s, singleto; d, dubleto; t, tripleto; m, multipleto; br, largo; q, quarteto; os espectros de RMN foram operados em um aparelho a 400 MHz a 24°C.

(vii) os intermediários geralmente não foram totalmente caracterizados e a pureza foi avaliada por meio de cromatografia de camada fina (TLC), cromatografia líquido de alto desempenho (HPLC),

infravermelho (IR) ou análise de RMN;

(viii) utilizou-se as seguintes abreviaturas:

DMF	N,N-dimetilformamida
DMSO	dimetilsulfóxido
THF	tetraidrofurano
TFA	ácido trifluoroacético
NMP	1 -metil-2-pirrolidinona.]

Exemplo 1 •b

Adicionou-se TFA (3 ml) a uma suspensão de 4-(4-bromo-2fluoroanilino)-7-(l-(ter-butoxicarbonila)piperidin-4-ilmetóxi)-6-metoxi quinazolina (673 mg, 1,2 mmol) em cloreto de metileno (10 ml). Após agitar durante 1 hora à temperatura ambiente, os voláteis foram removidos sob vácuo. O resíduo foi triturado com uma mistura de água/éter. A camada orgânica foi separada. A camada aquosa foi novamente lavada com éter. A camada aquosa foi ajustada a pH 10 com hidróxido de sódio aquoso 2N. A camada aquosa foi extraída com cloreto de metileno. A camada orgânica foi secada (MgSO₄) e o solvente foi removido sob vácuo. O sólido foi triturado com uma mistura de éter/éter de petróleo (1/1), filtrado, lavado com éter e secado sob vácuo dando 4-(4-bromo-2-fluoroanilino)-6-metóxi-7-(piperidin

4-ilmetóxi)quinazolina (390 mg, 70,5 %).

MS-ESI: 461-463 [MH]⁺

Espectro de RMN Ή: (DMSOd₆) 1,13-1,3 (m, 2H), 1-75 (d,

2H), 1,87-2,0 (m, 1H), 2,5 (d, 2H), 3,0 (d, 2H), 3,96 (s, 3H), 3,98 (d, 2H), 7,2 (s, 1H), 7,5 (dd, 1H), 7,55 (t, 1H), 7,68 (dd, 1H), 7,80 (s, 1H), 8,36 (s, 1H), 25 9,55 (br s, 1H)

Análise elementar: Encontrado C 54,5 H4,9 N 12,1

C₂iH₂₂N₄O₂BrF Requer C 54,7 H4,8 N 12,1 %

O material inicial foi preparado como a seguir:

Uma solução de hidrocloreto de 7-benzilóxi-4-cloro-640 metoxiquinazolina (8,35 g, 27,8 mmol), (preparado, por exemplo, como descrito em WO 97/22596, Exemplo 1), e 4-bromo-2-fluoroanilina (5,65 g, 29,7 mmol) em 2-propanol (200 ml) foi aquecida ao refluxo durante 4 horas. O precipitado resultante foi recolhido por meio de filtração, lavado com 2propanol e, depois, com éter, e secado sob vácuo dando hidrocloreto de 7benzilóxi-4-(4-bromo-2-fluoroanilino)-6-metoxiquinazolina (9,46 g, 78 %).

Espectro de RMN ’H: (DMSOd₆; CD₃ÕOD) 4,0 (s, 3H); 5,37 (s, 2H); 7,35-7,5 (m, 4H); 7,52-7,62 (m, 4H); 7,8 (d, ÍH); 8,14 (9s, 1H); 8,79 (s, 1H)

MS - ESI: 456 [MH]⁺

Análise elementar: Encontrado C 54,0 H 3,7 N 8,7

C₂₂H₁₇N₃O₂BrF O,9HC1 Requer C 54,2 H 3,7 N 8,6 %

Uma solução de hidrocloreto de 7-benzilóxi-4-(4-bromo-2fhioroanilino)-6-metoxiquinazolina (9,4 g, 19,1 mmol) em TFA (90 ml) foi aquecida ao refluxo durante 50 minutes. A mistura foi deixada resfriar e foi despejada sobre gelo. O precipitado resultante foi recolhido por meio de filtração e dissolvido em metanol (70 ml). A solução foi ajustada a pH 9-10 com solução de amônia aquosa concentrada. A mistura foi concentrada à metade do volume inicial por evaporação. O precipitado resultante foi recolhido por meio de filtração, lavado com água e depois com éter, e secado sob vácuo dando 4-(4-bromo-2-fluoroanilino)-7-hidróxi-6-metoxiquinazolina (5,66 g, 82 %).

Espectro de RMN ’H: (DMSOd₆; CD₃COOD) 3,95 (s, 3H); 7,09 (s, 1H); 7,48 (s, 1H); 7,54 (t, 1H); 7,64 (d, 1H); 7,79 (s, 1H); 8,31 (s, 1H)

MS - ESI: 366 [MH]⁺

Análise elementar: Encontrado C49,5 5H3,1 Nll,3

CjsHuN^BrF Requer C 49,5 H 3,0 NI 1,5%

Enquanto se mantinha a temperatura na faixa de 0-5°C, uma solução de dicarbonato de di-ter-butila (41,7 g, 0,19 mol) em acetato de etila (75 ml) foi adicionada em porções a uma solução de 4-piperidinecarboxilato de etila (30 g 0,19 mol) em acetato de etila (150 ml) resfriada a 5°C. Após agitar durante 48 horas à temperatura ambiente, a mistura foi despejada sobre ♦

água (300 ml). A camada orgânica foi separada, lavada sucessivamente com água (200 ml), ácido clorídrico aquoso 0,1 N (200 ml), hidrogeno carbonato de sódio saturado (200 ml) e salmoura (200 ml), secado (MgSO₄) e evaporada dando 4-(l-(ter-butoxicarbonila)piperidina)carboxilato de etila (48 g, 98 %).

Espectro de RMN ’H: (CDC1₃) 1,25 (t, 3H); 1,45 (s, 9H); 1,55Wo 1,70 (m, 2H); 1,8-2,0 (d, 2H); 2,35-2,5 (m, 1H); 2,7-2,95 (t, 2H); 3,9-4,1 (br s, 2H); 4,15 (q, 2H)

Uma solução de hidreto de lí tio alumínio 1M em THF (133 ml, 0,133 mol) foi adicionada em porções a uma solução de 4-(l-(terbutoxicarbonila)piperidina)carboxilato de etila (48 g, 0,19 mol) em THF seco (180 ml) resfriada a 0°C. Após agitar a 0°C durante 2 horas adicionou-se água (30 ml) seguido de hidróxido de sódio 2N (10 ml). O precipitado foi removido por filtração através de terra de diatomáceas e lavado com acetato de etila. O filtrado foi lavado com água, salmoura, secado (MgSO₄) e evaporado dando l-(ter-butoxicarbonila)-4-hidroximetilpiperidina (36,3 g, 20 89%).

MS (EI): 215 [M.]+

Espectro de RMN ’H: (CDC1₃) 1,05-1,2 (m, 2M); 1,35-1,55 (m, 10H); 1,6-1,8 (m, 2H); 2,6-2,8 (t, 2H); 3,4-3,6 (t, 2H); 4,04-2 (br s, 2H)

1,4-Diazabiciclo[2.2.2]octano (42,4 g, 0,378 mol) foi adicionado a uma solução de l-(ter-butoxicarbonila)-4-hidroximetilpiperidina (52,5 g, 0,244 mol) em ter-butil metil éter (525 ml). Após agitar durante 15 minutos à temperatura ambiente, a mistura foi resfriada a 5°C e uma solução de cloreto de toluenossulfonila (62,8 g, 0,33 mmol) em ter-butil metil éter (525 ml) foi adicionada em porções ao longo de 2 horas enquanto se mantinha a temperatura a 0°C. Após agitar durante 1 hora à temperatura ambiente, adicionou-se éter de petróleo (1 1). O precipitado foi removido por filtração. O filtrado foi evaporado dando um sólido. O sólido foi dissolvida em éter e lavado sucessivamente com ácido clorídrico aquoso 0,5 N (2 x 500 5 ml), água, hidrogeno carbonato de sódio saturado e salmoura, secado (MgSO₄) e evaporado dando l-(ter-butoxicarbonila)-4-(4-metilfenil sulfonilóximetil)piperidina (76,7 g, 85 %).

MS (ESI): 392 [MNa]⁺

Espectro de RMN 'H: (CDC1₃) 1,0-1,2 (m, 2H); 1,45 (s, 9H); ®0 1,65 (d, 2H); 1,75-1,9 (m, 2H); 2,45 (s, 3H); 2,55-2,75 (m, 2H); 3,85 (d, 1H);

4,0-4,2 (br s, 2H); 7,35 (d, 2H); 7,8 (d, 2H)

Adicionou-se carbonato de potássio (414m g, 3 mmol) a uma suspensão de 4-(4-bromo-2-fluoroanilino)-7-hidróxi-6-metoxiquinazolina (546 mg, 1,5 mmol) em DMF (5 ml). Após agitar durante 10 minutos à 15 temperatura ambiente, adicionou-se l-(ter-butoxicarbonila)4-(4metilfenilsulfonilóximetil)piperidina (636 mg, 1,72 mmol) e a mistura foi aquecida a 95°C durante 2 horas. Após resfriar, a mistura foi despejada sobre água resfriada (20 ml). O precipitado foi recolhido por filtração, lavado com água, e secado sob vácuo dando 4-(4-bromo-2-fluoroanilino)-7-(l-(ter20 butoxicarbonila)piperidin-4-ilmetóxi)-6-metoxiquinazolina (665 mg, 79 %).

MS ESI: 561-563 [MH]⁺

Espectro de RMN ’H: (DMSOd₆) 1,15-1,3 (m, 2H), 1,46 (s, 9M), 1,8 (d, 2H), 2,0-2,1 (m, 1H), 2,65-2,9 (m, 2H), 3,95 (s, 3H), 4,02 (br s, 2H), 4,05 (d, 2H),-7,2 (s, 1H), 7,48 (d, 1H), 7,55 (t, 1H), 7,65 (d, 1H), 7,8 (s, 25 1H), 8,35 (s, 1H), 9,55 (br s, 1H)

Exemplo 2a

Uma solução de formaldeído aquoso a 37 % (50 μΐ, 0,6 mmol) seguido de cianoboroidreto de sódio (23 mg, 0,36 mmol) foram adicionados a uma solução de 4-(4-bromo-2-fluoroanilino)-6-metóxi-7-(piperidin-443

ilmetóxi)quinazolina (139 mg, 0,3 mmol), (preparada como descrito no

Exemplo 1), em uma mistura de THF/metanol (1,4 ml/1,4 ml). Após agitar durante 1 hora à temperatura ambiente adicionou-se água e os voláteis foram removidos sob vácuo. O resíduo foi triturado com água, filtrado, lavado com 5 água, e secado sob vácuo. O sólido foi purificado por meio de cromatografia sobre alumina neutra, eluindo-se com cloreto de metileno seguido de cloreto de metileno/acetato de etila (1/1) seguido de cloreto de metileno/acetato de etila/metanol (50/45/5). As frações contendo o produto desejado foram

evaporadas sob vácuo. O sólido branco resultante foi dissolvido em cloreto de metileno/metanol (3 ml/3 ml) e adicionou-se cloreto de hidrogênio 3 N em éter (0,5 ml). Os voláteis foram removidos sob vácuo. O sólido foi triturado com éter, filtrado, lavado com éter e secado sob vácuo dando hidrocloreto de

4-(4-bromo-2-fluoroanilino)-6-metóxi-7-(l-metilpiperidin-4ilmetóxi)quinazolina (120 mg, 69 %).

MS - ESI: 475-477 [MH]⁺

O espectro de RMN da forma protonada de hidrocloreto de 4(4-bromo-2-fluoroanilino)-6-metóxi-7-( 1 -metilpiperidin-4ilmetóxi)quinazolina mostra a presença de 2 formas A e B numa proporção A:B de aproximadamente 9:1.

Espectro de RMN ^!H: (DMSOd₆; CF₃COOD) 1,55-1,7 (m, forma A 2H); 1,85-2,0 (m, forma B 4H); 2,03 (d, forma A 2H); 2,08-2,14 (br s, forma A 1H); 2,31-2,38 (br s, forma B 1H); 2,79 (s, forma A 3H); 2,82 (s, forma B 3H); 3,03 (t, forma A 2H); 3,21 (br s, forma B 2H); 3,30 (br s, forma B 2H); 3,52 (d, forma A 2H); 4,02 (s, 3H); 4,12 (d, forma A 2H); 4,30 (d, forma B 2H); 7,41 (s, 1H); 7,5-7,65 (m, 2M; 7,81 (d, 1H); 8,20 (s, 1H); 8,88 (s, 1M)

Análise elementar: Encontrado C 46,0 H 5,2 N 9,6

C22H₂₄N₄O₂BrF 0,3H₂O 2,65HC1 Requer C 45,8 H4,8 N 9,7 %

Exemplo 2b

Adicionou-se formaldeído aquoso a 37 % (3,5 ml, 42 mmol) a uma solução de 4 (4-bromo-2-fluoroanilino)-7-(l-(ter-butoxicarbonila) piperidin-4-ilmetóxi)-6-metoxiquinazolina (3,49 g, 6,22 mmol), (preparado 5 como descrito para o material inicial no Exemplo 1), em ácido fórmico (35 ml). Após aquecimento a 95°C durante 4 horas os voláteis foram removidos sob vácuo. O resíduo foi suspenso em água e a mistura foi ajustada a pH 10,5 através da lenta adição de uma solução de hidróxido de sódio 2 N. A

suspensão foi extraída com acetato de etila. A camada orgânica foi lavada com salmoura, secado sobre MgSO₄ e evaporada dando 4-(4-bromo-2fluoroanilino)-6-metóxi-7-( 1 -metilpiperidin-4-ilmetóxi)quinazolina (2,61 g,

%). MS - ESI: 475-477 [MH]⁺

Espectro de RMN ^!H: (DMSOd₆) 1,3-1,45 (m, 2H), 1,8 (d,

(s, 1H), 9,54 (s, 1H)

Análise elementar:

C₂₂H₂₄N₄O₂BrF

Exemplo 2c

Encontrado C 55,4 H5,l N 11,6

Requer C 55,6 H5,l NI 1,8%

Uma suspensão de 4-cloro-6-metóxi-7-(l-metilpiperidin-4ilmetóxi)quinazolina (200 mg, 0,62 mmol) e 4,bromo-2-fluoroanilina (142 mg, 0,74 mmol) em isopropanol (3 ml) contendo cloreto de hidrogênio 6 N em isopropanol (110 μΐ, 0,68 ml) foi aquecida ao refluxo durante 1,5 hora.

Após resfriamento o precipitado foi recolhido por meio de filtração, lavado com isopropanol seguido de éter e secado sob vácuo dando hidrocloreto de 4(4-bromo-2-fluoroanilino)-6-metóxi-7-(1 -metilpiperidin-4-ilmetóxi) quinazolina (304 mg, 90 %).

Análise elementar: Encontrado C47,9 H4,9 N 10,0

C₂₂H₂₄N₄O₂BrF 0,5H₂O 1,8HC1 Requer C 48,2 H 5,0 N 10,1 %

0,08 isopropanol

O espectro de RMN da forma protonada de hidrocloreto de 4(4-bromo-2-fluoroanilino)-6-metóxi-7-( 1 -metilpipefidin-4ilmetóxi)quinazolina mostra a presença de duas formas A e B numa 5 proporção A:B de aproximadamente 9:1.

Espectro de RMN ’H: (DMSOdg) 1,6-1,78 (m, forma A 2H);

1,81-1,93 (br s, forma B 4H); 1,94-2,07 (d, forma A 2H); 2,08-2,23 (br s, forma A 1H); 2,29-2,37 (br s, forma B 1H); 2,73 (d, forma A 3H); 2,77 (d, forma B 3H); 2,93-3,10 (q, forma A 2H); 3,21 (br s, forma B 2H); 3,27 (br s, ®0 forma B 2H); 3,42-3,48 (d, forma A 2H); 4,04 (s, 3H); 4,10 (d, forma A 2H);

4,29 (d, forma B 2H); 7,49 (s, 1H); 7,53-7,61 (m, 2H); 7,78 (d, 1H); 8,47 (s, 1H); 8,81 (s, 1H); 10,48 (br s, forma A 1H); 10,79 (br s, forma B 1H); 10,79 (br s, forma B 1H); 11,90 (br s, 1H)

Para outra leitura de RMN, adicionou-se algum carbonato de potássio sólido na solução de DMSO do hidrocloreto de 4 (4-bromo-2fluoroanilino)-6-metóxi-7-( 1 -metilpipefidin-4-ilmetóxi)quinazolina descrito acima, de modo a liberar a base livre no tubo de RMN. O espectro de RMN foi então novamente registrado e mostrou apenas uma forma como descrito abaixo:

Espectro de RMN *H: (DMSOdôJ carbonato de potássio sólido) 1,3-1,45 (m, 2H); 1,75 (d, 2H); 1,7-1,9 (m, 1H); 1,89 (t, 2H); 2,18 (s, 3H); 2,8 (d, 2H); 3,98 (s, 3H); 4,0 (d, 2H); 7,2 (s, 1H); 7,48 (d, 1H); 7,55 (t, 1H); 7,68 (d, 1H); 7,8 (s, 1H); 8,35 (s, 1H); 9,75 (s, 1H)

Uma amostra de 4-(4-bromo-2-fluoroanilino)-6-metóxi-7-(l25 metilpiperidin-4-ilmetóxi)quinazolina (base livre) foi gerada a partir do hidrocloreto de 4-(4-bromo-2-fluoroanilino)-6-metóxi-7-(l -metilpiperidin-4ilmetóxi)quinazolina, (preparada como descrito acima), como a seguir:

Hidrocloreto de 4-(4-bromo-2-fluoroanilino)-6-etóxi-7-(lmetilpiperidin-4-ilmetoxiquinazolina (50 mg) foi suspenso em cloreto de •ο metileno (2 ml) e foi lavado com hidrogeno carbonato de sódio saturado. A solução de cloreto de metileno foi secada (MgSO₄) e os voláteis foram removidos por evaporação dando 4-(4-bromo-2-fluoroanilino)-6-metóxi-7-(lmetilpiperidin-4-ilmetóxi)quinazolina (base livre). A RMN da base livre assim gerada mostrar apenas uma forma como descrito abaixo:

Espectro de RMN ’H: (DMSOd₆) 1,3-1,45 (m, 2H); 1,76 (d, 2H); 1,7-1,9 (m, 1H); 1,9 (t, 2H); 2,19 (s, 3H); 2,8 (d, 2H); 3,95 (s, 3H); 4,02 (d, 2H); 7,2 (s, 1H); 7,48 (d, 1H); 7,55 (t, 1H); 7,68 (dd, 1H); 7,8 (s, 1H); 8,38 (s, 1H); 9,55 (br s, 1H)

Para outra leitura de RMN, adicionou-se algum CF₃COOD na solução de DMSO de RMN da 4-(4-bromo-2-fluoroanilino)-6-metóxi-7-(lmetilpiperidin-4-ilmetóxi)quinazolina (base livre) descrita acima e 0 espectro de RMN foi novamente registrado. O espectro da forma protonada do sal de trifluoroacetato de 4-(4-bromo-2-fluoroanilino)-6-metóxi-7-( 1 -metilpiperidin-4ilmetóxi) quinazolina assim obtido mostra a presença de duas formas A e B numa proporção A:B de aproximadamente 9:1.

Espectro de RMN ’Η: (DMSOd₆; CF3COOD) 1,5-1,7 (m, forma A 2H); 1,93 (br s, forma B 4H); 2,0-2,1 (d, forma A 2H); 2,17 (br s, forma A 1H); 2,35 (br s, forma B1H); 2,71 (s, forma A 3H); 2,73 (s, forma B 3M; 2,97-3,09 (t, forma A 2H); 3,23 (br s, forma B 2H); 3,34 (br s, forma B 2H); 3,47-3,57 (d, forma A 2H); 4,02 (s, 3M; 4,15 (d, forma A 2H); 4,30 (d, forma B 2H); 7,2 (s, 1H); 7,3-7,5 (m, 2H); 7,6 (d, 1H); 7,9 (s, 1H); 8,7 (s, 1H)

O material inicial foi preparado como a seguir: l-(ter-Butoxicarbonila)-4-(4-metilfenilsulfoniloximetil)piperidina (40 g, 0,11 mol) (preparada como descrito para o material inicial no Exemplo 1) foi adicionado a uma suspensão de 4-hidróxi-3-metoxibenzoato de etila (19,6 g, 0,1 mol) e carbonato de potássio (28 g, 0,2 mol) em DMF seco (200 ml). Após agitar a 95°C durante 2,5 horas, a mistura foi resfriada à temperatura ambiente e é repartida entre água e acetato de etila/éter. A

..'5 3 ·: :Ζ’ ·”: ··· ····· · · ·· camada orgânica foi lavada com água, salmoura, secada (MgSO₄) e evaporada. O óleo resultante foi cristalizado a partir de éter de petróleo e a suspensão foi armazenada de um dia para o outro a 5°C. O sólido foi recolhido por meio de filtração, lavado com éter de petróleo e secado sob 5 vácuo dando 4-(l-(ter-butoxicarbonila)piperidin-4-ilmetóxi)-3-metoxibenzoato de etila (35 g, 89 %)

p.f. 81-83°C

MS (ESI): 416 [MNa]⁺

Espectro de RMN ’Η: (CDC1₃) 1,2-1,35 (m, 2H); 1,4 (t, 3H); ®0 1,48 (s, 9H); 1,8-1,9 (d, 2H); 2,0-2,15 (m, 2M; 2,75 (t, 2H); 3,9 (d, 2H); 3,95 (s, 3H); 4,05-4,25 (br s, 2H); 4,35 (q, 2H); 6,85 (d, 1H); 7,55 (s, 1H); 7,65 (d, 1H)

Análise elementar: Encontrado C 63,4 H 8,0 N 3,5

C₂iH₃iNO₆ 0,3H₂O Requer C 63,2 H 8,0 N 3,5 %

Adicionou-se formaldeído (12M 37 % em água, 35 ml, 420 mmol) a uma solução de 4-(l-(ter-butoxicarbonila)piperidin-4-ilmetóxi)-3metoxibenzoato de etila (35 g, 89 mmol) em ácido fórmico (35 ml). Após agitar a 95°C durante 3 horas, os voláteis foram removidos por evaporação. O resíduo foi dissolvido em cloreto de metileno e adicionou-se cloreto de hidrogênio 3 M em éter (40 ml, 120 mmol). Após diluição com éter, a mistura foi triturada até formar-se um sólido. O sólido foi recolhido por meio de filtração, lavado com éter e secado sob vácuo de um dia para o outro a 50°C dando 3-metóxi-4-(l-metilpiperidin-4-ilmetóxi)benzoato de etila (30,6 g, quant.).

MS (ESI): 308 [MH]⁺

Espectro de RMN *H: (DMSOd₆) 1,29 (t, 3H); 1,5-1,7 (m,

2H); 1,95 (d, 2H); 2,0-2,15 (br s, 1H); 2,72 (s, 3H); 2,9-3,1 (m, 2H); 3,35-3,5 (br s, 2H); 3,85 (s, 3H); 3,94,05 (br s, 2H); 4,3 (q, 2H); 7,1 (d, 1H); 7,48 (s, 1H); 7,6 (d, 1H)

Uma solução de 3-metóxi-4-(l-metilpiperidin-4-ilmetóxi) benzoato de etila (30,6 g, 89 mmol) em cloreto de metileno (75 ml) foi resfriada a 0-5°C. Adicionou-se TFA (37,5 ml), seguido de adição por gotejamento, ao longo de 15 minutos, da uma solução de ácido nítrico 5 fumegante 24N (7,42 ml, 178 mmol) em cloreto de metileno (15 ml). Após término da adição, a solução foi deixada aquecer e agitada à temperatura ambiente durante 2 horas. Os voláteis foram removidos sob vácuo e o resíduo foi dissolvido em cloreto de metileno (50 ml). A solução foi resfriada a 0-5°C

e adicionou-se éter. O precipitado foi recolhido por filtração, e secado sob vácuo a 50°C. O sólido foi dissolvido em cloreto de metileno (500 ml) e adicionou-se cloreto de hidrogênio 3 M em éter (30 ml) seguido de éter (500 ml). O sólido foi recolhido por meio de filtração e secado sob vácuo a 50°C dando 3-metóxi-4-(l-metilpiperidin-4-ilmetóxi)-6-nitrobenzoato de etila (28,4 g, 82 %).

MS (ESI): 353 [MH]⁺

Espectro de RMN ’H: (DMSOd₆) 1,3 (t, 3H); 1,45-1,65 (m, 2H); 1,75-2,1 (m, 3H); 2,75 (s, 3H); 2,9-3,05 (m, 2H); 3,4-3,5 (d, 2H); 3,95 (s, 3H); 4,05 (d, 2H); 4,3 (q, 2H); 7,32 (s, 1H); 7,66 (s, 1H)

Uma suspensão de 3-metóxi-4-(l-metilpiperidin-4-ilmetóxi)20 6-nitrobenzoato de etila (3,89 g, 10 mmol) em metanol (80 ml) contendo 10 % de platina sobre carvão ativado (50 % a úmido) (389 mg) foi hidrogenada a uma pressão de 1,8 atmosfera até cessar a absorção de hidrogênio. A mistura foi filtrada e o filtrado foi evaporado. O resíduo foi dissolvido em água (30 ml) e ajustado a pH 10 com uma solução saturada de hidrogeno carbonato de sódio. A mistura foi diluída com acetato de etila/éter (1/1) e a camada orgânica foi separada. A camada aquosa foi ainda mais extraída com acetato de etila/éter e as camadas orgânicas foram combinadas. As camadas orgânicas foram lavadas com água, salmoura, secadas (MgSO₄), filtradas e evaporadas. O sólido resultante foi triturado em uma mistura de éter/éter de

petróleo, filtrado, lavado com éter de petróleo e secado sob vácuo a 60°C dando 6-amino-3-metóxi-4-(l-metilpiperidin-4-ilmetóxi)benzoato de etila (2,58 g, 800 %).

p.f. 111-112°C ' 5 MS (ESI): 323 [MH]⁺

Espectro de RMN ’H: (CDC1₃) 1,35 (t, 3H); 1,4-1,5 (m, 2H); 1,85 (m, 3H); 1,95 (t, 2H); 2,29 (s, 3H); 2,9 (d, 2H); 3,8 (s, 3H); 3,85 (d, 2H); 4,3 (q, 2H); 5,55 (br s, 2H); 6,13 (s, 1H); 7,33 (s, 1H) Análise elementar: Encontrado C 62,8 H 8,5 N 8,3 ®0 Ci₇H₂₆N₂O₄ 0,2H₂O Requer C 62,6 H 8,2 N8,6%

Uma solução de 6-amino-3-metóxi-4-(l-metilpiperidin-4ilmetóxi)benzoato de etila (16, 1 g, 50 mmol) em 2-metoxietanol (160 ml) contendo acetato de formamidina (5,2 g, 50 mmol) foi aquecida a 115°C durante 2 horas. Adicionou-se acetato de formamidina (10,4 g, 100 mmol) 15 em porções a cada 30 minutos ao longo de 4 horas. O aquecimento foi prolongado durante 30 minutos após a última adição. Após resfriamento os voláteis foram removidos sob vácuo. O sólido foi dissolvido em etanol (100 ml) e cloreto de metileno (50 ml). O precipitado foi removido por filtração e ~ o filtrado foi concentrado a um volume final de 100 ml. A suspensão foi resfriada a 5°C e o sólido foi recolhido por meio de filtração, lavado com etanol frio seguido de éter e secado sob vácuo de um dia para o outro a 60°C dando 6-metóxi-7-(l -metilpiperidin-4-ilmetóxi)-3,4-diidroquinazolin-4-ona (12,7 g, 70 %).

MS (ESI): 304 [MH]⁺

Espectro de RMN ’Η: (DMSOd₆) 1,25-1,4 (m, 2H); 1,75 (d,

2H); 1,9 (t, 1H); 1,9 (s, 3H), 2,16 (s, 2H); 2,8 (d, 2H); 3,9 (s, 3H); 4,0 (d, 2H);

7,11 (s, 1H); 7,44 (s, 1H); 7,97 (s, 1H)

Uma solução de 6-metóxi-7-(l-metilpiperidin-4-ilmetóxi)-3,4diidroquinazolin-4-ona (2,8 g, 9,24 mmol) em cloreto de tionila (28 ml)

contendo DMF (280 μΐ) foi aquecida ao refluxo a 85°C durante 1 hora. Após resfriamento, os voláteis foram removidos por evaporação. O precipitado foi triturado com éter, filtrado, lavado com éter e secado sob vácuo. O sólido foi dissolvido em cloreto de metileno e adicionou-se hidrogeno carbonato de 5 sódio aquoso saturado. A camada orgânica foi separada, lavada com água, salmoura, secada (MgSO₄) e evaporada dando 4-cloro-6-metóxi-7-(lmetilpiperidin-4-ilmetóxi)quinazolina (2,9 g, 98 %).

MS (ESI): 322 [MH]⁺

Espectro de RMN ’H: (DMSOd₆) 1,3-1,5 (m, 2H); 1,75-1,9 ®0 (m, 3H); 2,0 (t, 1H); 2,25 (s, 3H); 2,85 (d, 2H); 4,02 (s, 3H); 4,12 (d, 2H);

7,41 (s, 1H); 7,46 (s, 1H); 8,9 (s, 1H)

Altemativamente, a 6-metóxi-7-(l-metilpiperidin-4-ilmetóxi)3,4-diidroquinazolin-4-ona pode ser preparada como a seguir:

Adicionou-se hidreto de sódio (1,44 g de uma suspensão a 60 15 % em óleo mineral, 36 mmol) em porções, ao longo de 20 minutos, a uma solução de 7-benzilóxi-6-metóxi-3,4-diidroquinazolin-4-ona (8,46 g, 30 mmol), (preparada, por exemplo, como descrito no WO 97/22596, Exemplo 1), em DMF (70 ml) e a mistura foi endurecida durante 1,5 horas. Adicionouse pivalato de clorometila (5,65 g, 37,5 mmol) em porções e a mistura foi 20 agitada durante 2 horas à temperatura ambiente. A mistura foi diluída com acetato de etila (100 ml) e despejada sobre gelo/água (400 ml) e ácido clorídrico 2 N (4 ml). A camada orgânica foi separada e a camada aquosa extraída com acetato de etila, os extratos combinados foram lavados com salmoura, secada (MgSO₄) e o solvente foi removido por evaporação. O 25 resíduo foi triturado com uma mistura de éter e éter de petróleo, o sólido foi recolhido por meio de filtração e secado sob vácuo dando 7-benzilóxi-6metóxi-3-((pivaloilóxi)metil)-3,4-diidroquinazolin-4-ona (10 g, 84 %).

Espectro de RMN 'H: (DMSOd₆) 1,11 (s, 9H); 3,89 (s, 3H); 5,3 (s, 2H); 5,9 (s, 2H); 7,27 (s, 1H); 7,35 (m, 1H); 7,47 (t, 2H); 7,49 (d, 2H);

7,51 (s, 1H); 8,34 (s, 1H)

Uma mistura de 7-benzilóxi-6-metóxi-3-((pivaloilóxi)metil)3,4-diidroquinazolin-4-ona (7 g, 17,7 mmol) e catalisador de paládio sobre carvão a 10 % (700 mg) em acetato de etila (250 ml), DMF (50 ml), metanol 5 (50 ml) e ácido acético (0,7 ml) foi agitada sob hidrogênio a pressão atmosférica durante 40 minutos. O catalisador foi removido por filtração e o solvente foi removido do filtrado por evaporação. O resíduo foi triturado com éter, recolhido por filtração e secado sob vácuo dando 7-hidróxi-6-metóxi-3-

((pivaloilóxi)metil)-3,4-diidroquinazolin-4-ona (4,36 g, 80 %).

Espectro de RMN ^JH: (DMSOde) 1,1 (s, 9H); 3,89 (s, 3H);

5,89 (s, 2H); 7,0 (s, 1H); 7,48 (s, 1H); 8,5 (s, 1H)

Adicionou-se trifenilfosfino (1,7 g, 6,5 mmol) sob nitrogênio a uma suspensão de 7-hidróxi-6-metóxi-3-((pivaloilóxi)metil)-3,4diidroquinazolin-4-ona (1,53 g, 5 mmol) em cloreto de metileno (20 ml), 15 seguido da adição de l-(ter-butoxicarbonila)-4-(hidroximetil)piperidina (1,29 g, 6 mmol), (preparado como descrito para o material inicial no Exemplo 1), e com uma solução de azodicalboxilato de dietila (1,13 g, 6,5 mmol) em cloreto de metileno (5 ml). Após agitar durante 30 minutos à temperatura ambiente, a mistura de reação foi despejada sobre uma coluna de sílica e foi eluída com acetato de etila/éter de petróleo (1/1 seguido de 6/5, 6/4 e 7/3). A evaporação das frações contendo o produto desejado levou a um óleo que cristalizou após trituração com pentano. O sólido foi recolhido por meio de filtração e secado sob vácuo dando 7-(l-(ter-butoxicarbonila)piperidin-4-ilmetóxi)-6-metóxi-3((pivaloilóxi)metil)-3,4-diidroquinazolin-4-ona (232 g, 92 %).

MS - ESI: 526 [MNa]⁺

Espectro de RMN *Η: (CDC1₃) 1,20 (s, 9H), 1,2-1,35 (m, 2H),

1,43 (s, 9H), 1,87 (d, 2H), 2,05-2,2 (m, 1H), 2,75 (t, 2H), 3,96 (d, 2H), 3,97 (s, 3H), 4,1-4,25 (br s, 2H), 5,95 (s, 2H), 7,07 (s, 1H), 7,63 (s, 1H), 8,17 (s,

1H)

Análise elementar:

Encontrado

C₂₆H₃₇N₃O₇

Requer

Uma solução de

C61,8 H 7,5 N 8,3

C 62,0 H 7,4 N 8,3 %

7-( 1 -(ter-butoxicarbonila)piperidin-4ilmetóxi)-6-metóxi-3-( (pivaloilóxi)metil)-3,4-diidroquinazolin-4-ona (2,32

g, 4,6 mmol) em cloreto de metileno (23 ml) contendo TFA (5 ml) foi agitada à temperatura ambiente durante 1 hora. Os voláteis foram removidos sob vácuo. O resíduo foi repartido entre acetato de etila e hidrogeno carbonato de sódio. O solvente orgânico foi removido sob vácuo e o resíduo foi filtrado. O precipitado foi lavado com água, e secado sob vácuo. O sólido foi azeotropizado com tolueno e secado sob vácuo dando 6-metóxi-7-(piperidin4-ilmetóxi)-3-( (pivaloilóxi)metil)-3,4-diidroquinazolin-4-ona (1,7 g, 92 %).

MS - ESI: 404 [MH]⁺

Espectro de RMN ^!H: (DMSOd₆; CF₃COOD) 1,15 (s, 9H), 1,45-1,6 (m, 2H), 1,95 (d, 2H), 2,1-2,25 (m, 1H), 2,95 (t, 2H), 3,35 (d, 2H), 3,95 (s, 3H), 4,1 (d, 2H), 5,95 (s, 2H), 7,23 (s, 1H), 7,54 (s, 1M, 8,45 (s, 1H)

Uma solução aquosa a 37 % da formaldeído (501 μΐ, 6 mmol) seguida de cianoboroidreto de sódio (228 mg, 3,6 mmol) foram adicionadas de maneira parcelada a uma solução de 6-metóxi-7-(piperidin-4-ilmetóxi)-3((pivaloilóxi)metil)-3,4-diidroquinazolin-4-ona (1,21 g, 3 mmol) em uma mistura de THF/metanol (10 ml/10 ml). Após agitar durante 30 minutos à temperatura ambiente, os solventes orgânicos foram removidos sob vácuo e o resíduo foi repartida entre cloreto de metileno e água. A camada orgânica foi separada, lavada com água e salmoura, secado (MgSO₄) e os voláteis foram removidos por evaporação. O resíduo foi triturado com éter e o sólido resultante foi recolhido por meio de filtração, lavado com éter e secado sob vácuo dando 6-metóxi-7-(l -metilpiperidin-4-ilmetóxi)-3-((pivaloilóxi) metil)-3,4-diidroquinazolin-4-ona (1,02 g, 82 %).

MS - ESI: 418 [MH]⁺

Espectro de RMN ^!H: (CDC1₃) 1,19 (s, 9H), 1,4-1,55 (m, 2H),

Go

1,9 (d, 2H), 2,0 (t, 2H), 1,85-2,1 (m, 1H), 2,3 (s, 3H), 2,92 (d, 2H), 3,96 (s, 3H), 3,99 (d, 2H), 5,94 (s, 2H), 7,08 (s, 1H), 7,63 (s, 1H), 8,17 (s, 1H)

Adicionou-se uma solução saturada de amônia em metanol (14 ml) a uma solução de 6-metóxi-7-(l-metilpiperidin-4-ilmetóxi)-35 ((pivaloilóxi)metil)-3,4-diidroquinazolin-4-ona (1,38 g, 3,3 mmol) em metanol (5 ml). Após agitar durante 20 horas à temperatura ambiente a suspensão foi diluída com cloreto de metileno (10 ml). A solução foi filtrada. O filtrado foi evaporado sob vácuo e o resíduo foi triturado com éter, recolhido por filtração, lavada com éter e secado sob vácuo dando 6-metóxi0 7-(l-metilpiperidin-4-ilmetóxi)-3,4-diidroquinazolin-4-ona (910 mg, 83 %).

MS - ESI: 304 [MH]⁺

Espectro de RMN ^lH: (DMSOd₆) 1,3-1,45 (m, 2H), 1,75 (d, 2H), 1,7-1,85 (m, 1H), 1,9 (t, 2H), 2,2 (s, 3H), 2,8 (d, 2H), 3,9 (s, 3H), 4,0 (d, 2H), 7,13 (s, 1H), 7,45 (s, 1H), 7,99 (s, 1H)

Exemplo 3 a

Adicionou-se cloreto de hidrogênio 3,5 M em etanol (75 μΐ,

0,26 mmol) a uma suspensão de 4-cloro-6-metóxi-7-(l-metilpiperidin-4ilmetóxi)quinazolina (80 mg, 0,25 mmol), (preparada como descrito para o material inicial no Exemplo 2c), em isopropanol (3 ml), a mistura foi aquecida a 50°C e adicionou-se 4-cloro-2-fluoroanilina (44 mg, 0,3 mmol). A mistura foi aquecida ao refluxo durante 30 minutos. Após resfriamento, a mistura foi diluída com éter (3 ml). O precipitado foi recolhido por meio de filtração, lavado com éter e secado sob vácuo dando hidrocloreto de 4-(4cloro-2-fluoroanilino)-6-metóxi-7-(1 -metilpiperidin-4-ilmetóxi)quinazolina (105 mg, 82 %).

MS - ESI: 431-433 [MH]⁺

O espectro de RMN da forma protonada de hidrocloreto de 4(4-cloro-2-fhioroanilino)-6-metóxi-7-(l-metilpiperidin-4-ilmetóxi) quinazolina mostra a presença de duas formas A e B numa proporção A:B de ·· ι··· <

aproximadamente 9:1.

Espectro de RMN ^JH: (DMSOd₆; CF₃COOD) 1,55-1,7 (m, forma A 2H), 1,85-2,0 (m, forma B 4H), 2,05 (d, forma A 2H), 2,1-2,2 (m, *

forma A 1H), 2,35 (s, 3H); 2,79 (s, forma A 3H), 2,82 (s, forma B 3H), 3,03 (t, forma A 2H), 3,2-3,3 (m, forma B 2M; 3,3-3,4 (m, forma B 2H), 3,52 (d, forma A 2H), 4,02 (s, 3M, 4,13 (d, forma A 2H), 4,3 (d, forma B 2H), 7,41 (s, 1H), 7,47 (dd, 1H), 7,63 (t, 1H), 7,69 (dd, 1H), 8,19 (s, 1M, 8,88 (s, 1H) Análise elementar: Encontrado C51,8 H5,6 N 10,9

C22H₂₄N4O₂CIF 0,4H₂O 2HC1 Requer C 51,7 H 5,3

NI 1,0%

Exemplo 3b

Um método alternativo de preparação é como a seguir:

Adicionou-se trifenilfosfino (615 mg, 2,3 mmol) seguido de azodicarboxilato de dietila (369 μΐ, 2,3 mmol) a uma solução de 4hidroximetil-l-metilpiperidina (151 mg, 1,1 mmol), (J. Med. Chem. 1973, 16,

156), e 4-(4-cloro-2-fluoroanilino)-7-hidróxi-6-metoxiquinazolina (250 mg,

0,78 mmol), (preparado como descrito para o material inicial no Exemplo 7), em cloreto de metileno (5 ml). Após agitar durante 30 minutos à temperatura ambiente, adicionou-se 4-hidroximetil-l-metilpiperidina (51 mg, 0,39 mmol), trifenilfosfino (102 mg, 0,39 mmol) e azodicarboxilato de dietila (61 μΐ, 0,39 20 mmol). Após agitação durante 15 minutos, os voláteis foram removidos sob vácuo e o resíduo foi purificado por meio de cromatografia de coluna eluindo-se com cloreto de metileno/acetonitrila/metanol (70/10/20 seguido de

75/5/20 e 80/0/20). As frações contendo o produto esperado foram combinadas e os voláteis foram removidos por meio de evaporação. O resíduo foi dissolvido em uma mistura de cloreto de metileno e metanol e adicionou-se cloreto de hidrogênio 5 M em isopropanol. A suspensão foi concentrada e o sólido foi recolhido por meio de filtração, lavado com éter e secado sob vácuo dando hidrocloreto de 4-(4-cloro-2-fluoroanilino)-6metóxi-7-(l-metilpiperidin-4-ilmetóxi)quinazolina (16 mg, 4 %).

Exemplo 4

Sob argônio, adicionou-se hidreto de sódio (60 %, 372 mg, 9,3 mmol) a uma solução de 4-bromo-2,6-difluoroanilina (1,67 g, 8,08 mmol) em

DMF. Após agitar durante 30 minutos à temperatura ambiente adicionou-se

4-cloro-6-metóxi-7-(l-metilpiperidin-4-ilmetóxi)quinazolina (1,3 g, 4,04 mmol) e manteve-se a agitação durante mais 20 horas. A mistura foi despejada sobre água (130 ml) e extraída com acetato de etila. As camadas orgânicas foram lavadas com água, salmoura, secadas (MgSO₄) e os voláteis

foram removidos por evaporação. O resíduo foi purificada por meio de cromatografia de coluna sobre silica, eluindo-se com cloreto de metileno/metanol (95/5) seguido de cloreto de metileno/metanol contendo amônia (1 %) (90/10). As frações contendo o produto esperado foram combinadas e evaporadas. O resíduo foi triturado com éter, recolhido por filtração, lavado com éter e secado sob vácuo a 50°C dando 4-(4-bromo-2,615 difluoroanilino)-6-metóxi-7-(1 -metilpiperidin-4-ilmetóxi)quinazolina (1,4 g,

%).

MS - ESI: 493495 [MH]⁺

Espectro de RMN ^!H: (DMSOd₆) 1,3-1,45 (m, 2H), 1,8 (d,

2H), 1,7-1,9 (m, 1H), 1,9 (t, 2H), 2,17 (s, 3H), 2,8 (d, 2H), 3,95 (s, 3H), 4,02 (d, 2H), 7,2 (s, 1H), 7,63 (s, 1H), 7,6 (s, 1H), 7,82 (s, 1H), 8,35 (s, 1H)

Análise elementar: Encontrado C 53,8 H4,8 NI 1,3

C₂₂H₂₃N₄O₂BrF₂ Requer C 53,6 H4,7 NI 1,4%

Exemplo 5

Utilizando-se um procedimento análogo àquele descrito no 25 Exemplo 4, 4-cloro-6-metóxi-7-(l-metilpiperidin-4-ilmetóxi)quinazolina (246 mg, 0,764 mmol), (preparada como descrito para o material inicial no Exemplo 2c), foi reagida com 4-cloro-2,6-difluoroanilina (250 mg, 1,53 mmol), (ver WO 97/30035 Exemplo 15), em DMF (9 ml) e na presença de hidreto de sódio (60 %, 76,5 mg, 1,9 mmol) dando 4-(4-cloro-2,656 difluoroanilino)-6-metóxi-7-( 1 -metilpiperidin-4-ilmetóxi)quinazolina (210 mg, 61 %).

MS-ESI: 449451 [MH]⁺

Espectro de RMN ’Η: (DMSOd₆) 1,3-1,45 (m, 2H), 1,8 (d, 2H), 1,7-1,9 (m, 1H), 1,9 (t, 2H), 2,2 (s, 3H), 2,8 (d, 2H), 3,96 (s, 3H), 4,02 (d, 2H), 7,21 (s, 1H), 7,52 (s, 1H), 7,54 (s, 1H), 7,82 (s, 1H), 8,35 (s, 1H) Análise elementar: Encontrado C 59,0 H 5,3 N 12,5

C22H23N4O2CIF2 Requer C 58,9 H 5,2 N 12,5 %

O material inicial foi preparado como a seguir:

Hidrocloreto de 4-cloro-2,6-difluoroanilina (ver WO 97/30035 Exemplo 15) foi repartido entre cloreto de metileno e água, e adicionou-se hidrogeno carbonato de sódio aquoso até que 0 pH da camada aquosa fosse de aproximadamente 9. A camada orgânica foi separada, lavada com salmoura, secada (MgSO₄) e evaporada dando 4-cloro-2,6-difluoroanilina base livre.

Exemplo 6

Uma suspensão de 4-cloro-6-metóxi-7-(l-metilpiperidin-4ilmetóxi)quinazolina (200 mg, 0,622 mmol), (preparada como descrito para o material inicial no Exemplo 2c) e 2-fluoro-4-metilanilina (94 mg, 0,764 mmol) em isopropanol (5 ml) contendo cloreto de hidrogênio 6,2 M em isopropanol (110 μΐ) foi endurecida a 80°C durante 1,5 hora. Após resfriamento, 0 precipitado foi recolhido por meio de filtração, lavado com isopropanol seguido de éter e secado sob vácuo. O sólido foi purificado por meio de cromatografia de coluna, eluindo-se com cloreto de metileno/metanol (90/10) seguido de 5 % amônia em metanol/cloreto de metileno (10/90). Evaporação das frações contendo o produto esperado deu 4-(2-fluoro-4-metilanilino)-metóxi-7-( 1 -metilpiperidin-4ilmetóxi)quinazolina (170 mg, 61 %).

MS - ESI: 411 [MH]⁺

Espectro de RMN *Η: (DMSOde) 1,3-1,45 (m, 2H), 1,8 (d,

2H), 1,7-1,9 (m, lH), 1,9 (t, 2H), 2,2 (s, 3H), 2,35 (s, 3H), 2,8 (d, 2H), 3,95 (s, 3H), 4,01 (d, 2H), 7,1 (d, 1H), 7,13 (d, 1H), 7,16 (s, 1H), 7,4 (t, 1H), 7,81 (s, 1H), 8,32 (s, 1H), 9,4 (s, 1H)

Análise elementar: Encontrado C 66,5 H 6,7 N 13,7

C₂₃H27N₄O₂F 0,3H₂O Requer C 66,4 H6,7 N 13,5 %

Exemplo 7 l-ter-Butoxicarbonila-4-hidroximetilpiperidina (590 mg, 2,75

mmol), (preparado como descrito para o material inicial no Exemplo 1), seguido de trifenilfosfino (1,2 g, 4,58 mmol) e azodicarboxilato de dietila (0,72 ml, 4,58 mmol) foram adicionados a uma solução de 4-(4-cloro-2fluoroanilino)-7-hidróxi-6-metoxiquinazolina (585 mg, 1,83 mmol) em cloreto de metileno (20 ml). Após agitar durante 1 hora à temperatura ambiente, adicionou-se mais trifenilfosfino (239 mg, 0,91 mmol) e azodicarboxilato de dietila (0,14 ml, 0,91 mmol). Após agitar durante 1,5 hora, os voláteis foram removidos sob vácuo e o resíduo foi purificado por meio de cromatografia de coluna eluindo-se com acetato de etila/cloreto de

metileno (1/1). O produto bruto foi usado diretamente na etapa seguinte.

Uma solução do produto bruto em cloreto de metileno (15 ml) contendo TFA (4,5 ml) foi agitada à temperatura ambiente durante 1,5 hora.

Os voláteis foram removidos sob vácuo. O resíduo foi repartido entre água e acetato de etila. A camada aquosa foi ajustada a pH 9,5 com hidróxido de sódio 2 N. A camada orgânica foi separada, lavada com água, seguido de salmoura, secada (MgSO₄) e evaporada dando 4-(4-cloro-2-fluoroanilino)-625 metóxi-7-(piperidin-4-ilmetóxi)quinazolina.

MS-ESI: 417-419 [MH]⁺

Espectro de RMN ’H: (DMSOd₆) 1, 1-1,3 (m, 2H), 1,75 (d,

2H), 1,85-2,0 (br s, 1H), 2,55 (d, 2H)) 2,95 (d, 2H), 3,95 (s, 3H), 4,0 (d, 2H),

7,2 (s, 1H), 7,35 (dd, 1H), 7,55 (dd, 1H), 7,6 (t, 1H, 7,8 (s, 1H), 8,35 (s, 1H),

9,55 (s„lH)

O sal de hidrocloreto foi preparado como a seguir:

4-(4-Cloro-2-fluoroanilino)-6-metóxi-7-(piperidin-4ilmetóxi)quinazolina foi dissolvida em uma mistura de metanol/cloreto de 5 metileno e adicionou-se cloreto de hidrogênio 6 M em éter. Os voláteis foram removidos sob vácuo, o resíduo foi triturado com éter, recolhido por filtração, lavado com éter e secado sob vácuo dando hidrocloreto de 4-(4-cloro-2fluoro)-6-metóxi-7-(piperidin-4-ilmetóxi)quinazolina (390 mg, 47 % em 2

etapas).

Análise elementar:

Encontrado C 50,4 H 5,2 NI 1,0

C21H22O2N4CIF 2,25HC1 Requer

C 50,6 H 4,9 NI 1,2%

O material inicial foi preparado como a seguir:

Uma solução de hidrocloreto de 7-benzilóxi-4-cloro-6metoxiquinazolina (1,2 g, 4 mmol), (preparada como descrito no WO 15 97/22596, Exemplo 1), e 4-cloro-2-fluoroanilina (444 μΐ, 4 mmol) em 2propanol (40 ml) foi aquecida ao refluxo durante 1,5 hora. Após resfriamento, o precipitado foi recolhido por meio de filtração, lavado com 2propanol, depois com éter e secado sob vácuo dando hidrocloreto de 7* benzilóxi-4-(4-cloro-2-fluoroanilino)-6-metoxiquinazolina (1,13 g, 64 %).

p.f. 239-242°C

Espectro de RMN *Η: (DMSOd₆) 4,0 (s, 3M); 5,36 (s, 2H); 7,39-7,52 (m, 9H); 8,1 (s, 1H); 8,75 (s, 1H)

MS - ESI: 410 [MH]⁺

Análise elementar: Encontrado C 59,2 H 4,3 N 9,4

C₂2H₁₇N₃O₂C1F 1HC1 Requer C 59,2 H4,l N9,4%

Uma solução de hidrocloreto de 7-benzilóxi-4-(4-cloro-2fluoroanilino)-6-metoxiquinazolina (892 mg, 2 mmol) em TFA (10 ml) foi aquecida ao refluxo durante 50 minutos. Após resfriamento, a mistura foi despejada sobre gelo. O precipitado foi recolhido por meio de filtração,

dissolvido em metanol (Ί0 ml) e basificado a pH 11 com amônia aquosa. Após concentração por evaporação, o produto sólido foi recolhido por meio de filtração, lavado com água, depois com éter e secado sob vácuo dando 4(4-cloro-2-fluoroanilino)-7-hidróxi-6-metoxiquinazolina como um sólido 5 amarelo (460 mg, 72 %). p.f. 141-143°C

MS - ESI: 320-322 [MH]⁺

Espectro de RMN ’H: (DMSOd₆) 3,95 (s, 3H); 7,05 (s, 1H);

7,35 (d, 1H); 7,54-7,59 (m, 2H); 7,78 (s, 1H); 8,29 (s, 1H)

Exemplo 8

Uma suspensão de 7-(l-(ter-butoxicarbonila)piperidin-4ilmetóxi)-4-(2-fluoro-4-metilanilino)-6-metoxiquinazolina (318 mg, 0,64 mmol) em cloreto de metileno (5 ml) contendo TFA (2,5 ml) foi agitada à temperatura ambiente durante 2 horas. Os voláteis foram removidos sob vácuo e o resíduo foi repartido entre cloreto de metileno e água. A camada 15 aquosa foi ajustada a pH 10-11. A camada orgânica foi separada, lavada com água, salmoura, secada (MgSO₄) e os voláteis foram removidos por evaporação dando 4-(2-[fluoro-4-metilanilino)-6-metóxi-7-(piperidin-4ilmetóxi)quinazolina (220 mg, 87 %).

MS - ESI: 397 [MH]⁺

Espectro de RMN Ή: (DMSOd₆) 1,15-1,3 (m, 2H); 1,75 (d,

2H); 1,85-2,0 (m, 1H); 2,4 (s, 3H); 3,0 (d, 2H); 3,3-3,4 (d, 2H); 3,95 (s, 3H); 4,0 (d, 2H); 7,04 (d, 1H); 7,15 (d, 1H); 7,17 (s, 1H); 7,4 (t, 1H); 7,8 (s, 1H);

8,3 (s, 1H); 9,4 (s, 1H)

O material inicial foi preparado como a seguir:

Utilizando-se um procedimento análogo àquele descrito no

Exemplo, hidrocloreto de 6,7-benzilóxi-4-cloro-5-metoxiquinazolina (1,55 g, 5,15 mmol), (preparado, por exemplo, como descrito no WO 97/22596, Exemplo 1), foi reagido com 2-fluoro-4-metilanilina (700 mg, 5,67 mmol) em isopropanol (90 ml) contendo cloreto de hidrogênio 6,2 M em isopropanol

(80 μΐ, 0,51 mmol) dando hidrocloreto de 7-benzilóxi-4-(2-fluoro-4metilanilino)-6-metoxiquinazolina (2 g, 91 %).

MS - ESI: 390 [MH]⁺

Espectro de RMN ^!H: (DMSOdó) 2,4 (s, 3H), 4,01 (s, 3H), * 5 7,15 (d, 1H), 7,25 (d, 1H), 7,35-7,6, (m, 7H), 8,3 (s, 1H), 8,78 (s, 1H)

Uma solução de hidrocloreto de 7-benzilóxi-4-(2-fluoro-4metilanilino)-6-metoxiquinazolina (2 g, 4,7 mmol) em TFA (20 ml) foi

aquecida a 80°C durante 5 horas e agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro. Os voláteis foram removidos sob vácuo e o resíduo foi suspenso em água (50 ml). Adicionou-se hidrogeno carbonato de sódio sólido até que o pH fosse de aproximadamente 7. O precipitado foi depois recolhido por filtração, lavado com água e secado sob vácuo. O sólido foi purificado por meio de cromatografia de coluna eluindo-se com metanol/cloreto de metileno (5/95). Após remoção do solvente por evaporação, o sólido foi triturado com éter, recolhido por filtração, lavado com éter e secado sob vácuo dando 4-(2fluoro-4-metilanilino)-7-hidróxi-6-metoxiquinazolina (1,04 g, 74 %).

MS - ESI: 300 [MH]⁺

Espectro de RMN ’Η: (DMSOd₆) 2,4 (s, 3H), 4,0 (s, 3H), 7,15 (d, 1H), 7,22 (s, 1H), 7,25 (d, 1H), 7,41 (t, 1H), 8,05 (s, 1H), 8,7 (s, 1H), 11,0 (s, 1H), 11,5-11,8 (br s, 1H)

Adicionou-se trifenilfosfino (2,19 g, 8,36- mmol) a uma suspensão de 4-(2-fluoro-4-metilanilino)-7-hidróxi-6-metoxiquinazolina (1 g, 3,34 mmol) em cloreto de metileno (10 ml) resfriado a 0°C, seguido de l-(ter-butoxicarbonila)-4-hidroximetilpiperidina (1,08 g, 5,01 mmol), 25 (preparado como descrito para o material inicial no Exemplo 1), e azodicarboxilato de dietila (1,3 ml, 8,36 mmol). Após agitar durante 2 horas à temperatura ambiente, os voláteis foram removidos sob vácuo. O resíduo foi purificada por meio de cromatografia de coluna eluindo-se com cloreto de metileno/metanol (2/98). Após remoção do solvente por

evaporação, ο resíduo foi triturado com éter, recolhido por filtração, lavado com éter e secado sob vácuo dando 7-(l-(terbutoxicarbonila)piperidin-4-ilmetóxi)4-(2-fluoro-4-metilanilino)-6metoxiquinazolina (327 mg, 20 %).

’ 5 MS - ESI: 497 [MH]⁺

Espectro de RMN ’H: (DMSOd₆) 1,15-1,3 (m, 2H); 1,45 (s, 9H); 1,8 (d, 2H); 2,0-2,1 (m, 1H); 2,4 (s, 3H); 2,75-2,9 (br s, 2H); 3,95 (s, 3H); 4,0 (br s, 21-1); 4,05 (d, 2H); 7,1 (d, 1H); 7,15 (d, 1H); 7,2 (s, 1H); 7,4 (t, 1H); 7,85 (t, 1H); 8,32 (s, 1H); 9,45 (s, 1H) ^0 Exemplo 9

Uma solução de 4-(4-bromo-2,6-difluoroanilino)-7-(l-(terbutoxicarbonila)piperidin-4-ilmetóxi)-6-metoxiquinazolina (578 mg, 1 mmol) em cloreto de metileno (10 ml) contendo TFA (4 ml) foi agitada à temperatura ambiente durante 2 horas. Os voláteis foram removidos sob vácuo e o resíduo foi suspenso em água. A camada aquosa foi ajustada a aproximadamente pH 10 e foi extraída com cloreto de metileno. A camada orgânica foi lavada com água, salmoura, secada (MgSO4) e os voláteis foram removidos por evaporação. O resíduo foi triturado com éter e secado sob vácuo dando 4-(4-bromo-2,6-difluoroanilino)-6-metóxi-7-(piperidin-420 ilmetóxi)quinazolina (110 mg, 23 %).

MS - ESI: 479-481 [MH]⁺

Espectro de RMN ’H: (DMSOd₆) 1,15-1,3 (m, 2H); 1,75 (d, 2H); 1,85-2,0 (br s, 1H); 2,5 (d, 2H); 3,0 (d, 2H); 3,97 (s, 3H); 4,0 (d, 2H); 7,2 (s, 1H); 7,62 (d, 2H); 7,82 (s, 1H); 8,35 (s, 1H)

Espectro de RMN ^]H: (DMSOd₆, CF₃COOD) 1,5-1,65 (m,2H); 2,0 (d,2H); 2,15-2,3 (brs, 1H); 3,0 (t, 2H); 3,4 (d, 2H); 4,02 (s, 3H); 4,15 (d, 2H); 7,4 (s, 1H); 7,75 (d, 2H); 8,1 (s, 1H); 8,92 (s, 1H)

O material inicial foi preparado como a seguir:

Adicionou-se hidreto de sódio (60 %, 612 mg, 15,3 mmol) a

Ο

-tcsó uma solução de 4-bromo-2,6-difluoroanilina (2,77g 6,65 mmol) em DMF (80 ml). Após agitar durante 30 minutos à temperatura ambiente, adicionou-se 7benzilóxi-4-cloro-6-metoxiquinazolina (2 g, 6,65 mmol), (preparado, por exemplo, como descrito no WO 97/22596, Exemplo 1, porém a base livre foi 5 gerada antes do uso), e manteve-se a agitação durante 4 horas. A mistura foi repartida entre acetato de etila e água (200 ml). A camada orgânica foi separada, lavada com água, salmoura, secado (MgSO₄) e os voláteis foram removidos por evaporação. O resíduo foi triturado com isopropanol, recolhido por meio de filtração, lavado com éter e secado sob vácuo dando 7*0 benzilóxi-4-(4-bromo-2,6-difluoroanilino)-6-metoxiquinazolina (1,95 g, 62%).

MS - ESI: 472-474 [MH]⁺

Espectro de RMN ’H: (DMSOd₆) 3,94 (s, 3H), 5,3 (s, 2H), 7,3

(s, 1H), 8,35 (s, 1H), 9,4-9,6 (br s, 1H)

Utilizando-se um procedimento análogo àquele descrito para a síntese do material inicial no Exemplo 8, 7-benzilóxi-4-(4-bromo-2,6-

difluoroanilino)-6-metoxiquinazolina (1,9 g, 4,02 mmol) foi reagido com

TFA (20 ml) dando 4-(4-bromo-2,6-difluoroanilino)-7-hidróxi-6 metoxiquinazolina (1,5 g, 98 %).

Espectro de RMN ’H: (DMSOd₆) 3,95 (s, 3H), 7,1 (s, 1H), 7,6 (s, 1H), 7,65 (s, 1H), 7,8 (s, 1H), 8,3 (s, 1H), 9,45 (br s, 1H), 10,5 (br s, 1H)

Utilizando-se um procedimento análogo àquele descrito na preparação do material inicial no Exemplo 8, 4-(4-bromo-2,625 difhioroanilino)-7-hidróxi-6-metoxiquinazolina (1 g, 2,62 mmol) foi reagido com l-(ter-butoxicarbonila)-4-hidroximetilpiperidina (845 mg 3,93 mmol), (preparada como descrito para o material inicial no Exemplo 1), dando 4-(4bromo-2,6-difluoroanilino)-7-(l-(ter-butoxicarbonila)piperidin-4-ilmetóxi)-6metoxiquinazolina (620 mg, 41 %).

Ο · *··· 9t ·· ···· ♦W· · · ♦ · • · · · · •ο

MS - ESI: 579-581 [MH]⁺

Espectro de RMN Ή: (DMSOde) 1,15-1,3 (m, 2H); 1,45 (s, 9H); 1,8 (d, 2H); 2,0-2,1 (m, 1H); 2,7-2,9 (m, 2H);3,95 (s, 3H) 4,0 (br s, 2H); 4,05 (d, 2H); 7,22 (s, 1H) 7,65 (d, 2H); 7,85 (s, 1H); 8,35 (s, 1H); 9,4-9,6 (br s, 1H)

Exemplo 10

Utilizando-se um procedimento análogo àquele descrito no Exemplo 9, 7-(l -(ter-butoxicarbonila)piperidin-4-ilmetóxi)-4-(4-cloro-2,6difluoroanilino)-6-metoxiquinazolina (95 mg, 0,2 mmol) em cloreto de metileno (2 ml) foi tratado com TFA (800 μΐ) dando 4-(4-cloro-2,6difluoroamilino)-6-metóxi-7-(piperidin-4-ilmetóxi)quinazolina (20 mg, 26%).

MS - ESI: 435-437 [MH]⁺

Espectro de RMN ’H: (DMSOd_ó) 1,2-1,3 (m, 2H); 1,75 (d, 2H); 1,85-2,0 (br s, 1H); 2,5 (d, 2H); 3,0 (d, 2H); 3,97 (s, 3H); 4,0 (d, 2H); 7,2 (s, 1H); 752 (d, 2H); 7,85 (s, 1H); 8,35 (s, 1H)

O material inicial foi preparado como a seguir:

Utilizando-se um procedimento análogo àquele descrito para a preparação do material inicial no Exemplo 9, 7-benzilóxi-4-cloro-6metoxiquinazolina (184 mg, 0,61 mmol) (preparado, por exemplo, como descrito no WO 97/22596, Exemplo 1, porém a base livre foi gerada antes do uso) foi reagida com 4-cloro-2,6-difluoroanilina (200 mg, 1,22 mmol) na presença de hidreto de sódio (60 %, 87 mg, 1,4 mmol) em DMF (8 ml) dando 7-benzilóxi-4-(4-cloro-2,6-difluoroanilino)-6-metoxiquinazolina (212 mg, 74%).

MS - ESI: 428 [MH]⁺

Espectro de RMN ^!Η: (DMSOd₆) 3,96 (s, 3H); 5,31 (s, 2H);

7,32 (s, 1H); 7,4 (d, 1H); 7,45 (t, 2H); 7,5-7,6 (in, 4H); 7,85 (s, 1H); 8,35 (br s, 1H); 9,55 (br s, 1H) ·· ·· ···* «9 •·

9·· ·· ··

Uma solução de 7-benzilóxi-4-(4-cloro-2,6-difluoroanilino)-6metoxiquinazolina (200 mg, 0,47 mmol) em TFA (3 ml) foi agitada a 80°C durante 3 horas. Após resfriamento, os voláteis foram removidos sob vácuo e o resíduo foi dissolvido em água contendo 5 % de metanol. O pH foi ajustado a 8 com hidrogeno carbonato de sódio e o sólido foi recolhido por meio de filtração e lavado com água. O sólido foi solubilizado em uma mistura de acetato de etila/metanol/cloreto de metileno (47/6/47). Os voláteis foram removidos sob vácuo dando 4-(4-cloro-2,6-difluoroanilino)-7-hidróxi-6metoxiquinazolina (126 mg, 80 %).

® 0 MS - ESI: 338 [MH]⁺

Espectro de RMN ’Η: (DMSOd₆) 3,95 (s, 3H); 7,1 (s, 1H);

7,55 (d, 2H); 7,8 (s, 1H); 8,3 (s, 1H); 9,42 (br s, 1H)

Utilizando-se um procedimento análogo àquele descrita para a preparação do material inicial no Exemplo 9, 4-(4-cloro-2,6-difluoroanilino)15 7-hidróxi-6-metoxiquinazolina (150 mg, 0,44 mmol) foi reagida com l-(terbutoxicarbonila)4-hidroximetilpiperidina (150 mg, 0,88 mmol), (preparada como descrito para o material inicial no Exemplo 1), dando 7-(l-(terbutoxicarbonila)piperidin-4-ilmetóxi)-4-(4-cloro-2,6-difluoroanilino)-6• metoxiquinazolina (113 mg, 59 %).

MS - ESI: 535 [MH]⁺

Espectro de RMN ^!H: (DMSOd₆) 1,15-1,3 (m, 2H); 1,45 (s,

9H); 1,8 (d, 2H); 2,0-2,1 (m, 1H); 2,7-2,9 (m, 2H); 3,95 (s, 3H); 4,0 (br s, 2H); 4,05 (d, 2H); 7,2 (s, 1H); 7,6 (m, 2H); 7,8 (s, 1H); 8,35 (s, 1H); 9,4-9,6 (br s, 1H)

Exemplo 11

A seguir ilustra-se as formas de dosagens farmacêuticas representativas contendo o composto de fórmula I, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável (a seguir, composto X), para uso terapêutico ou profilático em humanos:

-	(a)	Tablete I composto X lactose Ph.Eur croscarmelose sódica	mg/tablete 100 182,75 12,0
‘ 5		pasta de amido de milho (5 % peso/volume de pasta) 2,25
		estearato de magnésio	3,0
	(b)	Tablete II	mg/tablete
		composto X	50
		lactose Ph.Eur	223,75
®0		croscarmelose sódica	6,0
		amido de milho	15,0
		polivinilpirrolidona (5 % peso/volume de pasta) 2,25
		estearato de magnésio	3,0
	(c)	Tablete III	mg/tablete
15		composto X	1,0
		lactose Ph.Eur	93,25
		croscarmelose sódica	4,0
A		pasta de amido de milho (5 % peso/volume de pasta) 0,75
V		estearato de magnésio	1,0
20	(d)	Cápsula	mg/cánsula
		composto X	10
		lactose Ph.Eur	488,5
		estearato de magnésio	1,5
	(e)	Injeção I	(50 mg/ml)
25		composto X	5,0 % peso/volume
		solução de hidróxido de sódio 1 M	15,0 % vol/vol

ácido clorídrico 0,1 M (para ajustar o pH em 7,6) polietileno glicol 400

4,5 % peso/volume

água para injetáveis até 100 % (f) Injeção II composto X fosfato de sódio BP solução de hidróxido de sódio 0,1 M água para injetáveis até 100 % (g) Injeção III

composto X fosfato de sódio BP ácido cítrico polietileno glicol 400 água para injetáveis até 100 % mg/ml)

1,0 % peso/volume

3,6 % peso/volume 15,0%vol/vol (1 mg/ml, tamponado a pH 6)

0,1 % peso/volume

2,26 % peso/volume

0,38 % peso/volume

3,5 % peso/volume

Nota

As formulações acima podem ser obtidas por meio de procedimentos convencionais bem conhecidos na técnica farmacêutica. Os tabletes (a)-(c) podem ser revestidos entericamente por meios convencionais, por exemplo para proporcionar um revestimento de ftalato de acetato de celulose.

Claims

1. Derivado de quinazolina, caracterizado pelo fato ser o composto 4-(4-bromo-

2-fluoroanilino)-6-metóxi-7-( 1 -metilpiperidin-4ilmetóxi)quinazolina e sais do mesmo.

5 2. Derivado de quinazolina de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de ser na forma de um sal farmaceuticamente aceitável.

3. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de que compreende como ingrediente ativo um composto como definido na

10 reivindicação 1 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em associação com um veículo ou excipiente farmaceuticamente aceitável.

4. Uso de um composto como definido na reivindicação 1 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de ser para a manufatura de um medicamento para uso na produção de um efeito

15 antiangiogênico e/ou redutor de permeabilidade vascular em um animal de sangue quente, como um ser humano.