CN101472915A - 吲唑化合物和抑制cdc7的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了能作为CDC7抑制剂的新化合物。所述化合物单独或与至少一种另外的治疗剂组合可用于预防或治疗CDC7介导的疾病如癌症。所述化合物具有式(I)或(II)的结构，其中式(I)或(II)中变量的含义如本文所述。

Description

吲唑化合物和抑制CDC7的方法
相关申请的交叉参考
本申请要求了于2006年4月19日提交的序号为60/793,691的美国临时申请的优先权。
技术领域
本申请涉及CDC7抑制剂并提供了新化合物、该新化合物和药学上可接受的载体的组合物以及该新化合物单独或与至少一种另外的治疗剂组合在预防或治疗CDC7介导的疾病如癌症中的用途。
背景技术
在真核生物中，DNA复制在细胞周期过程中严格受控并且仅发生一次和仅发生于S期(Bell和Dutta的综述，“真核细胞中的DNA复制(DNAreplication in eukaryotic cells)”，Annu Rev Biochem 71：333-74(2002))。DNA复制在G1期间在复制的起点由复制前复合物(pre-RC)的形成引发。在形成复合物后，该pre-RC通过两种S-期激酶、即Cdk2/细胞周期蛋白E和CDC7/Dbf4(也被称为Hsk1或CDC7L1)的协同活性被转化成起始复合物。Hsk1是裂变酵母(S.pombe)CDC7同系物。通过在EST数据库中搜索与CDC7和Hsk2的那些序列相似的序列，Jiang和Hunter鉴定了一种部分人CDC7 cDNA(Jiang和Hunter，“与芽酵母CDC7p有关的人蛋白激酶的鉴定和表征(Identification and characterization of a human proteinkinase related to budding yeast CDC7p)”，PNAS 23；94(26)：14320-5(1997))。他们用该部分cDNA从HeLa细胞基因库中分离出一种全长cDNA。预测的574个氨基酸的人CDC7蛋白包含11个在所有蛋白丝氨酸/苏氨酸激酶中发现的保守的亚结构域以及3个位于亚结构域I和II、VII和VIII以及X和XI之间的另外的序列(激酶插入区)。人和酿酒酵母(S.cerevisiae)的激酶结构域共享44％的蛋白序列同一性。人CDC7的分子量为64kD并且主要位于细胞核中。Hess等人，“酵母CDC7基因的人同系物在一些肿瘤和转化细胞系中被过表达(A human homolog of the yeastCDC7 gene is overexpressed in some tumors and transformed cell lines)”，Gene 211(1)：133-40(1998)报道了CDC7L1在许多正常组织中被表达，但是在所试验的所有转换细胞系和某些肿瘤类型中被过表达。
CDC7(一种丝氨酸/苏氨酸激酶)在真核细胞DNA复制的开始中起重要作用(Jiang等人，EMBO J 18：5703(1999))。在复制前复合物装配成复制起点后，CDC7激酶磷酸化MCM(微小染色体维持)蛋白并使CDC45和DNA聚合酶募集，从而引发DNA复制(Kim等人，Mutation Research 532：29(2003))。对于激酶活化而言，CDC7需要与其辅因子之一、即ASK(又被称为DBF4)或ASKL1(又被称为Drf1)结合(Ogino等人，J Biol Chem276：31376(2001)；Sato等人，Genes to Cells 8：451(2003)；Montagnoli等人，EMBO J 21：3171(2002)；Yoshizawa-Sugata等人，J Biol Chem 280，13062(2005))。缺乏CDC7的小鼠在第3.5至6.5天死亡，表明CDC7是早期胚胎发育所必需的(Kim等人，EMBO J 21：2168(2002))。有条件地剔除小鼠ES细胞系的CDC7(CDC7-/-tg)显示细胞增殖立即抑制、DNA合成迅速停止和S期进展被阻止(Kim等人(2002))。已经表明CDC7参与对依托泊苷处理或DNA单链破裂的响应中的DNA损害检测点信号发送(Costanzo等人，J Mol Cell 11：203(2003))。CDC7缺失小鼠ES细胞在细胞核中蓄积RAD51灶这一观察结果为CDC7在DNA损害响应中的作用提供了支持(Kim等人(2002))。酵母CDC7缺失导致对羟基脲处理的超敏反应(Weinreich等人，EMBO J 18：5334(1999))。
丝氨酸/苏氨酸激酶CDC7在DNA复制的开始中起重要作用，最近表明其参与S期检测点信号发送(Kim，Yamada和Masai的综述，“哺乳动物CDC7激酶在DNA复制的开始/监测和发育中的功能(Functions ofmammalian CDC7 kinase in initiation/monitoring of DNA replication anddevelopment)”，Mutat Res 532(1-2)：29-40(2003))。CDC7激酶与Dbf4(其调节亚基又被称为ASK)形成一种复合物，从而产生活性Ser/Thr激酶。CDC7/Dbf4激酶活性是开始DNA复制和随后过渡到细胞周期的S期所必需的。已经在人细胞中鉴定了CDC7的第二种激活蛋白(其被称为Drf1或ASKL1)，并且表明其参与S和M期的进展(Montagnoli等人，“Drf1，一种人CDC7激酶的新调节亚基(Drf1，a novel regulatory subunit for humanCDC7 kinase)”，EMBO J 21(12)：3171-81(2002)；Yoshizawa-Sugata，“第二种人Dbf4/ASK-相关蛋白、即Drf1/ASKL1是S和M期有效进展所必需的(A second human Dbf4/ASK-related protein，Drf1/ASKL1，is required forefficient progression of S and M phases)”，Biol Chem 280(13)：13062-70(2005))。CDC7敲除小鼠在E3.5至E6.5之间是胚胎致死性的(Kim等人，“在小鼠ES细胞中CDC7激酶的灭活导致S期停止和p53-依赖性细胞死亡(Inactivation of CDC7 kinase in mouse ES cells results in S-phase arrestand p53-dependent cell death)”，EMBO J 21(9)：2168-79(2002))。但是，对有条件的CDC7以及有条件的Dbf4敲除ES细胞系的分析显示了两种蛋白在哺乳动物细胞增殖和DNA合成中的重要作用(Kim等人，“必需的细胞周期激酶中的亚效等位基因突变造成生长阻滞和精子生成受损(Hypomorphic mutation in an essential cell-cyclekinase causes growthretardation and impaired spermatogenesis)”，EMBO J 22(19)：5260-72(2003)；Yamashita等人，“用有条件的ASK敲除ES细胞进行的小鼠ASK(CDC7激酶的活化亚基)的功能分析(Functional analyses of mouseASK，an activation subunit for CDC7 kinase，using conditional ASKknockout ES cells)”，Genes Cells 10(6)：551-63(2005))。
在细胞周期的G1期期间，DNA复制通过将复制前复合物(pre-RC)装配成一种六-元起点识别复合物(ORC)标记的起点而开始。Cdc6和Cdt1的结合促进微小染色体维持(MCM)复合物负载到ORC上。认为MCM2-7杂六聚物复合物是一种作为解旋酶(其在S期中在复制分叉前解旋DNA)发挥功能的良好候选者，但是迄今为止，仅证明纯化的MCM467复合物具有体外解旋酶活性(Lei等人，“开始DNA合成：从募集到激活MCM复合物(Initiating DNA synthesis：from recruiting to activating the MCMcomplex)”，Cell Sci 114(Pt8)：1447-54(2001)；Schechter等人，“DNA解旋是一种Mcm复合物依赖性和ATP水解依赖性过程(DNA unwinding isan Mcm complex-dependent and ATP hydrolysis-dependent process)”，JBiol Chem 279(44)：45586-93(2004))。MCM蛋白是CDC7的主要生理学底物。在酿酒酵母中，已经表明MCM5 bob-1中的突变规避了对CDC7/Dbf4激酶活性的需求(Hardy等人，“MCM5/cdc46-bob1规避了对S期激活子CDC7p的需求(MCM5/cdc46-bob1 bypasses the requirement for the Sphase activator CDC7p)”，PNAS 94(7)：3151-5(1997))。在形成MCM2-7复合物的六个亚基中，已经表明MCM2、MCM4和MCM6在体外和在细胞中是CDC7的直接底物。对CDC7/Dbf4磷酸化的MCM2进行的二维胰蛋白酶放射性标记的磷酸肽基因定位分析显示有七个体外磷酸化位点(Jiang等人，“哺乳动物CDC7-Dbf4蛋白激酶复合物是DNA复制的开始所必需的(Mammalian CDC7-Dbf4 protein kinase complex is essential forinitiation of DNA replication)”，EMBO J 18(20)：5703-131999)。最近，已经定位MCM2上的CDC7磷酸化位点包括残基S40、S50和S108(Montagnoli等人，“用S-期调节激酶进行的Mcm2磷酸化位点的鉴定(Identification of Mcm2 phosphorylation sites by S-phase-regulatingkinases)”，J Biol Chem 281(15)：10281-90(2006))。另一些残基如残基S53已经被鉴定为在体外和体内被CDC7磷酸化(Cho等人，“CDC7激酶磷酸化与微小染色体维持2蛋白中的酸性氨基酸毗邻的丝氨酸残基(CDC7kinase phosphorylates serine residues adjacent to acidic amino acids in theminichromosome maintenance 2 protein)”，PNAS 103(31)：11521-6(2006)；Tsuji T等人，“CDC7/Dbf4对MCM2的磷酸化在哺乳动物细胞的DNA复制开始中的重要作用(Essential role of phosphorylation of MCM2 byCDC7/Dbf4 in the initiation of DNA replication in mammalian cells)”，MolBiol Cell 17(10)：4459-72(2006))。此外，MCM2还可以被另一种S-期激酶、即Cdk2/CycE(在DNA复制期间)磷酸化和被ATM和ATM-及Rad3-相关(ATR)检测点激酶(在对遗传毒性应激的响应中)磷酸化(Cortez等人，“微小染色体维持蛋白是ATM和ART检测点激酶的直接靶标(Minichromosomemaintenance proteins are direct targets of the ATM and ATR checkpointkinases”，PNAS 101(27)：10078-83(2004)；Yoo等人，“在DNA损害和DNA复制检测点响应期间Mcm2是ATM和ATR的直接底物(Mcm2 is a directsubstrate of ATM and ATR during DNA damage and DNA replicationcheckpoint responses)”，J Biol Chem 279(51)：53353-64(2004))。最近，已经报道了CDC7介导MCM4和MCM6的磷酸化(Sheu和Stillman，“CDC7-Dbf4通过停泊位点介导的机理磷酸化MCM蛋白从而促进S期进展(CDC7-Dbf4 phosphorylates MCM proteins via a docking site-mediatedmechanism to promote S phase progression)”，Mol Cell 24(1)：101-13(2006)；Masai H等人，“CDC7激酶对MCM4的磷酸化促进了其与染色质上Cdc45的相互作用(Phosphorylation of MCM4 by CDC7 kinasefacilitates its interaction with Cdc45 on the chromatin)”，J Biol Chem281(51)：39249-61(2006))。虽然磷酸化位点之间的功能关联性和丰余性仍然有待解释，但是CDC7对MCM蛋白的磷酸化通常促进S期进展。
最近，作为癌症治疗的有吸引力的靶标，CDC7已经浮现出来。用siRNA寡核苷酸进行的CDC7缺失在癌细胞系中诱导细胞凋亡，而正常的皮肤成纤维细胞被赦免(Montagnoli等人，Cancer Res 64，7110(2004))。此外，还已经鉴定了肿瘤细胞中MCM2、MCM4和MCM6上CDC7介导的磷酸化位点，但是这些位点的功能关联性仍然有待确定(Montagnoli等人，Jof Biol Chem 281：10281(2006)；Tsuji等人，Mol Biol Cell 17：4459-4472(2006)；Masai等人，J Biol Chem 281：39249-39261(2006)；Sheu等人，MolCell 24：101-113(2006))。有迹象表明，CDC7/Dbf4复合物是对遗传毒性应激的S检测点响应的靶标。在HU-处理的酿酒酵母中，Rad53磷酸化Dbf4，从而导致从染色质中除去该激酶复合物和抑制CDC7/Dbf4激酶活性。CDC7的缺失导致HU超敏反应(Weinreich M和Stillman B，1999)。此外，用依托泊苷(一种在临床上被用作抗癌剂的拓扑异构酶II抑制剂)处理的非洲蟾蜍(Xenopus)卵提取物导致需要ATR的DNA损害检测点的活化，从而阻断了CDC7/Dbf4激酶活性(Costanzo 2003)。这与最近的数据相反，最近的数据表明CDC7/Dbf4激酶在复制应激期间有活性并且在对HU和依托泊苷处理的响应中促进MCM2的过磷酸化(Tenca P等人，2007)。在存在这些药物的情况下用siRNA进行的CDC7的进一步缺失增加了细胞死亡。
已经确定了肿瘤抑制基因Men1中与疾病有关的突变阻断menin与Dbf4(一种CDC7激酶活性所需的辅因子)的相互作用，从而促发疾病“I型多发性内分泌腺瘤形成(MEN1))(Schnepp RW等人，2004)。已经根据内部(in-house)微矩阵分析探测到CDC7在乳腺癌组织样品(特别是ER和PR阴性样品)中的表达水平进一步增加。可以用该信息来确定对CDC7抑制敏感的患者群。
虽然仍然没有完全了解CDC7在S-期检测点调节中的作用，但是有迹象表明CDC7抑制剂单独使用和与影响DNA复制的化疗剂组合治疗时在癌症患者中有效。但是，迄今为止一直没有特效的CDC7抑制剂被批准用于治疗癌症。
因此，需要有效的和特效的低分子量小分子CDC7抑制剂以及筛选该类化合物的方法。还特别需要治疗CDC7介导的疾病如癌症的方法。
概述
本发明提供了有效的和特效的CDC7抑制剂，其是低分子量小分子。因此，本发明一方面提供了式(I)的化合物或其立体异构体、互变异构体或药学上可接受的盐：
其中
X是N或CR7；
Y是N或CR8；
Z是N或CR4；
R1选自H、卤素、烷基、被取代的烷基、羟基、烷氧基、被取代的烷氧基、氨基和被取代的氨基；
R2选自烷基、被取代的烷基、烷氧基、被取代的烷氧基、氨基、被取代的氨基、芳基氧基、被取代的芳基氧基、杂芳基氧基、被取代的杂芳基氧基、环烷基氧基、被取代的环烷基氧基、杂环基氧基、被取代的杂环基氧基、芳基、被取代的芳基、杂芳基、被取代的杂芳基、环烷基、被取代的环烷基、杂环基和被取代的杂环基；
R3是H、烷基、被取代的烷基、芳基或被取代的芳基；
R4、R6、R7和R8独立地选自H、卤素、烷基、被取代的烷基、羟基、烷氧基、被取代的烷氧基、氨基和被取代的氨基；
R5选自H、烷基、被取代的烷基、烷氧基、被取代的烷氧基、酰基、酰基氨基、酰基氧基、氨基、被取代的氨基、氨基羰基、氨基硫代羰基、氨基羰基氨基、氨基硫代羰基氨基、氨基羰氧基、氨基磺酰基、氨基磺酰基氧基、氨基磺酰基氨基、脒基、羧基、羧酸酯(carboxyl ester)、(羧酸酯)氨基、(羧酸酯)氧基、氰基、卤素、羟基、硝基、SO3H、磺酰基、被取代的磺酰基、磺酰基氧基、硫代酰基、硫羟基、烷硫基、被取代的烷硫基、芳基、被取代的芳基、杂芳基、被取代的杂芳基、环烷基、被取代的环烷基、杂环基和被取代的杂环基。
在另一些实施方案中，提供了式(II)的新化合物或其立体异构体、互变异构体或药学上可接受的盐：
Figure A200780022548D00121
其中
R4、R6和R7独立地选自H、卤素、烷基、被取代的烷基、羟基、烷氧基、被取代的烷氧基、氨基和被取代的氨基；
R5选自H、烷基、被取代的烷基、烷氧基、被取代的烷氧基、酰基、酰基氨基、酰基氧基、氨基、被取代的氨基、氨基羰基、氨基硫代羰基、氨基羰基氨基、氨基硫代羰基氨基、氨基羰氧基、氨基磺酰基、氨基磺酰基氧基、氨基磺酰基氨基、脒基、羧基、羧酸酯、(羧酸酯)氨基、(羧酸酯)氧基、氰基、卤素、羟基、硝基、SO3H、磺酰基、被取代的磺酰基、磺酰基氧基、硫代酰基、硫羟基、烷硫基、被取代的烷硫基、芳基、被取代的芳基、杂芳基、被取代的杂芳基、环烷基、被取代的环烷基、杂环基和被取代的杂环基；
R9、R10、R11、R12和R13独立地选自H、烷基、被取代的烷基、烷氧基、被取代的烷氧基、酰基、酰基氨基、酰基氧基、氨基、被取代的氨基、氨基羰基、氨基硫代羰基、氨基羰基氨基、氨基硫代羰基氨基、氨基羰氧基、氨基磺酰基、氨基磺酰基氧基、氨基磺酰基氨基、脒基、羧基、羧酸酯、(羧酸酯)氨基、(羧酸酯)氧基、氰基、卤素、羟基、硝基、SO3H、磺酰基、被取代的磺酰基、磺酰基氧基、硫代酰基、硫羟基、烷硫基、被取代的烷硫基、芳基、被取代的芳基、杂芳基、被取代的杂芳基、环烷基、被取代的环烷基、杂环基、被取代的杂环基、芳基氧基、被取代的芳基氧基、杂芳基氧基、被取代的杂芳基氧基、环烷基氧基、被取代的环烷基氧基、杂环基氧基和被取代的杂环基氧基。
另一方面，本发明提供了治疗需要该类治疗的人或动物个体的与CDC7有关的障碍的方法，其包括给所述个体施用抑制个体的CDC7活性有效量的式(I)或(II)的化合物。
在另一些方面，与CDC7有关的障碍是癌症，本发明提供了治疗需要该类治疗的人或动物个体的癌症的方法，其包括给所述个体施用减轻或预防个体的肿瘤生长有效量的式(I)或(II)的化合物。按照本发明可治疗的代表性癌症包括但不限于癌如膀胱癌、乳腺癌、结肠癌、肾癌、肝癌、肺癌(包括小细胞肺癌)、食道癌、胆囊癌、卵巢癌、胰腺癌、胃癌、宫颈癌、甲状腺癌、前列腺癌和皮肤癌(包括鳞状细胞癌)；淋巴系的造血系统肿瘤，包括白血病、急性淋巴细胞白血病(acute lymphocitic leukemia)、急性原始淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia)、B细胞淋巴瘤、T细胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、多毛细胞淋巴瘤(hairy cell lymphoma)和伯基特淋巴瘤(Burkett′s lymphoma)；髓系的造血系统肿瘤，包括急性和慢性髓性白血病、骨髓增生异常综合征和早幼粒细胞白血病；间质源(mesenchymal origin)的肿瘤，包括纤维肉瘤和横纹肌肉瘤；中枢和外周神经系统的肿瘤，包括星形细胞瘤、神经母细胞瘤、神经胶质瘤和神经鞘瘤；和其它肿瘤，包括黑素瘤、精原细胞瘤、畸胎瘤、骨肉瘤、着色性干皮病、角化棘皮瘤(keratoxanthoma)、甲状腺滤泡癌和卡波西肉瘤。
在另一些其它方面，本发明提供了治疗需要该类治疗的人或动物个体的与CDC7有关的障碍的方法，其包括给所述个体施用减少或预防个体的肿瘤生长有效量的式(I)或(II)的化合物以及与之组合的至少一种用于治疗癌症的另外的物质。
在另一些其它方面，本发明提供了包含至少一种式(I)或(II)的化合物以及与之组合的一种或多种用于治疗癌症的在癌症治疗中常用的另外的活性剂的治疗组合物。
在另一些其它方面，本发明提供了用作药物的式(I)或(II)的化合物。本发明进一步提供了式(I)或(II)的化合物在制备用于治疗癌症的药物中的用途。
另一个实施方案提供了一种筛选化合物对CDC7活性的抑制作用的方法，其包括使MCM2、CDC7和ATP与化合物接触，和监测MCM2的磷酸化。在一个更特定的实施方案中，如实施例80中所述，该方法包括监测MCM2上Ser108的磷酸化。
本发明的其它目的、特征和优点将因下面的详述而变得显而易见。但是，应当理解的是，尽管详述和具体实施例给出了本发明优选的实施方案，但仅仅是作为举例说明，因为对于本领域技术人员而言，在本发明的主旨和范围内的各种变化和变型将因该详述而变得显而易见。
详述
本发明涉及一类新的小分子CDC7调节剂。这些化合物可以被配制为药物组合物并且可用于抑制人或动物个体的CDC7和治疗CDC7介导的疾病，如癌症。
本发明的一个实施方案提供了一种包含被取代的4-(1H-吲唑-5-基)嘧啶-2(1H)-酮的新化合物。在一个更特定的实施方案中，所述4-(1H-吲唑-5-基)嘧啶-2(1H)-酮是被取代的或未被取代的4-(1H-吲唑-5-基)-6-苯基嘧啶-2(1H)-酮。在另一个实施方案中，该化合物具有式(I)或(II)。在一个更特定的实施方案中，该化合物是CDC7抑制剂。在其另一个实施方案中，该化合物是CDC7抑制剂并被施用于患者，更特定地被施用于患有癌症的患者，还更特定地是患有包含表达CDC7的细胞的癌症的患者。
本发明的另一个实施方案提供了式(I)的新化合物或其立体异构体、互变异构体或药学上可接受的盐：
Figure A200780022548D00151
其中
X是N或CR7；
Y是N或CR8；
Z是N或CR4；
R1选自H、卤素、烷基、被取代的烷基、羟基、烷氧基、被取代的烷氧基、氨基和被取代的氨基；
R2选自烷基、被取代的烷基、烷氧基、被取代的烷氧基、氨基、被取代的氨基、芳基氧基、被取代的芳基氧基、杂芳基氧基、被取代的杂芳基氧基、环烷基氧基、被取代的环烷基氧基、杂环基氧基、被取代的杂环基氧基、芳基、被取代的芳基、杂芳基、被取代的杂芳基、环烷基、被取代的环烷基、杂环基和被取代的杂环基；
R3是H、烷基、被取代的烷基、芳基或被取代的芳基；
R4、R6、R7和R8独立地选自H、卤素、烷基、被取代的烷基、羟基、烷氧基、被取代的烷氧基、氨基和被取代的氨基；
R5选自H、烷基、被取代的烷基、烷氧基、被取代的烷氧基、酰基、酰基氨基、酰基氧基、氨基、被取代的氨基、氨基羰基、氨基硫代羰基、氨基羰基氨基、氨基硫代羰基氨基、氨基羰氧基、氨基磺酰基、氨基磺酰基氧基、氨基磺酰基氨基、脒基、羧基、羧酸酯、(羧酸酯)氨基、(羧酸酯)氧基、氰基、卤素、羟基、硝基、SO3H、磺酰基、被取代的磺酰基、磺酰基氧基、硫代酰基、硫羟基、烷硫基、被取代的烷硫基、芳基、被取代的芳基、杂芳基、被取代的杂芳基、环烷基、被取代的环烷基、杂环基和被取代的杂环基。
在一个更特定的实施方案中，X是CR7且Z是CR4。还更特定地，R4、R6和R7是H或卤素。更特定地，R4、R6和R7是H。
在另一个更特定的实施方案中，R1是H、卤素或烷基。更特定地，R1是H。
在另一个更特定的实施方案中，R2是芳基或被取代的芳基。在另一个更特定的实施方案中，R2是杂芳基或被取代的杂芳基。在另一个更特定的实施方案中，R2是环烷基或被取代的环烷基。在另一个更特定的实施方案中，R2是杂环基或被取代的杂环基。在另一个更特定的实施方案中，R2是苯基或被取代的苯基。
在另一个更特定的实施方案中，R3是H或烷基。更特定地，R3是甲基。更特定地，R3是H。
在另一个更特定的实施方案中，R5选自H、卤素、羟基、烷基、被取代的烷基、氨基、被取代的氨基、烷氧基和被取代的烷氧基。在另一个更特定的实施方案中，R5是H。
在另一个更特定的实施方案中，Y是N。在另一个更特定的实施方案中，Z是N。在另一个更特定的实施方案中，Y是CR8且X和Z中仅一个是N。
本发明的另一个实施方案提供了式(II)的新化合物或其立体异构体、互变异构体或药学上可接受的盐：
Figure A200780022548D00171
其中
R4、R6和R7独立地选自H、卤素、烷基、被取代的烷基、羟基、烷氧基、被取代的烷氧基、氨基和被取代的氨基；
R5选自H、烷基、被取代的烷基、烷氧基、被取代的烷氧基、酰基、酰基氨基、酰基氧基、氨基、被取代的氨基、氨基羰基、氨基硫代羰基、氨基羰基氨基、氨基硫代羰基氨基、氨基羰氧基、氨基磺酰基、氨基磺酰基氧基、氨基磺酰基氨基、脒基、羧基、羧酸酯、(羧酸酯)氨基、(羧酸酯)氧基、氰基、卤素、羟基、硝基、SO3H、磺酰基、被取代的磺酰基、磺酰基氧基、硫代酰基、硫羟基、烷硫基、被取代的烷硫基、芳基、被取代的芳基、杂芳基、被取代的杂芳基、环烷基、被取代的环烷基、杂环基和被取代的杂环基；
R9、R10、R11、R12和R13独立地选自H、烷基、被取代的烷基、烷氧基、被取代的烷氧基、酰基、酰基氨基、酰基氧基、氨基、被取代的氨基、氨基羰基、氨基硫代羰基、氨基羰基氨基、氨基硫代羰基氨基、氨基羰氧基、氨基磺酰基、氨基磺酰基氧基、氨基磺酰基氨基、脒基、羧基、羧酸酯、(羧酸酯)氨基、(羧酸酯)氧基、氰基、卤素、羟基、硝基、SO3H、磺酰基、被取代的磺酰基、磺酰基氧基、硫代酰基、硫羟基、烷硫基、被取代的烷硫基、芳基、被取代的芳基、杂芳基、被取代的杂芳基、环烷基、被取代的环烷基、杂环基、被取代的杂环基、芳基氧基、被取代的芳基氧基、杂芳基氧基、被取代的杂芳基氧基、环烷基氧基、被取代的环烷基氧基、杂环基氧基和被取代的杂环基氧基。
在另一个更特定的实施方案中，R9、R10、R11、R12和R13中至少一个是烷氧基。在另一个实施方案中，R9、R10、R11、R12和R13中至少一个是卤素、烷基或被取代的烷基。
在另一个更特定的实施方案中，R11选自卤素、烷基、被取代的烷基、烷氧基、被取代的烷氧基、芳基、被取代的芳基、杂芳基、被取代的杂芳基、环烷基、被取代的环烷基、杂环基、被取代的杂环基、芳基氧基、被取代的芳基氧基、杂芳基氧基、被取代的杂芳基氧基、环烷基氧基、被取代的环烷基氧基、杂环基氧基和被取代的杂环基氧基。
在另一个更特定的实施方案中，R4、R6和R7是H或卤素。还更特定地，R4、R6和R7是H。
在另一个更特定的实施方案中，R5选自H、卤素、羟基、烷基、被取代的烷基、氨基、被取代的氨基、烷氧基和被取代的烷氧基。还更特定地，R5是H。
在另一个更特定的实施方案中，所述化合物选自6-(3-氟苯基)-4-(1H-吲唑-5-基)嘧啶-2(1H)-酮、6-(2-氟-4-甲氧基苯基)-4-(1H-吲唑-5-基)嘧啶-2(1H)-酮、6-(2，5-二甲氧基苯基)-4-(1H-吲唑-5-基)嘧啶-2(1H)-酮、6-(3-氟-4-甲氧基苯基)-4-(1H-吲唑-5-基)嘧啶-2(1H)-酮、6-(4-乙基苯基)-4-(1H-吲唑-5-基)嘧啶-2(1H)-酮、6-(3，4-二甲氧基苯基)-4-(1H-吲唑-5-基)嘧啶-2(1H)-酮、4-(1H-吲唑-5-基)-6-[3-(三氟甲基)苯基]嘧啶-2(1H)-酮、6-(2-氟苯基)-4-(1H-吲唑-5-基)嘧啶-2(1H)-酮、6-(3-氯苯基)-4-(1H-吲唑-5-基)嘧啶-2(1H)-酮、4-(1H-吲唑-5-基)-6-苯基嘧啶-2(1H)-酮、6-[3-(苄氧基)苯基]-4-(1H-吲唑-5-基)嘧啶-2(1H)-酮、4-(1H-吲唑-5-基)-6-(4-吗啉-4-基苯基)-嘧啶-2(1H)-酮、4-(1H-吲唑-5-基)-6-(4-苯氧基苯基)嘧啶-2(1H)-酮、6-[4-(苄氧基)苯基]-4-(1H-吲唑-5-基)嘧啶-2(1H)-酮、4-(1H-吲唑-5-基)-6-(4-哌嗪-1-基苯基)嘧啶-2(1H)-酮或其立体异构体、互变异构体或药学上可接受的盐。
本发明的另一个实施方案提供了一种包含式(I)或(II)的化合物和药学上可接受的赋形剂或载体的药物组合物。
本发明的另一个实施方案提供了对患有与CDC7有关的障碍的人或动物个体进行治疗的方法，其包括给该个体施用抑制个体的CDC7活性有效量的本发明的化合物。在其一个更特定的实施方案中，与CDC7有关的障碍是癌症障碍，并且本发明提供了对需要该类治疗的人或动物个体进行治疗的方法，其包括给该个体单独或与其它抗癌剂组合施用治疗有效量的式(I)或(II)的化合物。另一方面，本发明提供了治疗需要该类治疗的人或动物个体的与CDC7有关的障碍的方法，其包括给所述个体施用减少或预防个体的肿瘤生长有效量的式(I)或(II)的化合物。在另一些其它方面，本发明提供了治疗需要该类治疗的人或动物个体的与CDC7有关的障碍的方法，其包括给所述个体施用减少或预防个体的肿瘤生长有效量的式(I)或(II)的化合物以及与之组合的至少一种用于治疗癌症的另外的物质。如下文所详细描述的那样，许多适合用作组合治疗剂的抗癌剂被考虑用于本发明的方法中。还更特定地，所述癌症包含表达CDC7的细胞。
本发明的另一个实施方案提供了一种抑制MCM(更特定地为MCM2)磷酸化的方法，其包括使MCM或MCM2、CDC7和ATP与前面任何一个实施方案的化合物接触。在一个更特定的实施方案中，MCM2上Ser40和/或Ser108的磷酸化被抑制。
本发明的另一个实施方案提供了式(I)或(II)的化合物作为药物、特别是治疗癌症的药物的用途。在另一些实施方案中，本发明提供了式(I)或(II)的化合物在制备用于治疗癌症的药物中的用途。
本发明的另一个实施方案提供了一种筛选化合物对CDC7活性的抑制作用的方法，其包括使MCM2、CDC7和ATP与化合物接触和监测MCM2上Ser108的磷酸化。
另一个实施方案提供了一种鉴定CDC7的激酶活性的方法，其包括监测MCM2上Ser108的磷酸化，其中Ser108的磷酸化指示了CDC7活性。一个更特定的实施方案进一步提供了对MCM2上Ser40的磷酸化的监测。在一个更特定的实施方案中，所述鉴定CDC7活性的方法被用于鉴定CDC7的抑制剂。在一个更特定的实施方案中，所述鉴定CDC7活性的方法用于鉴定需要CDC7抑制剂的患者。还更特定地，所述患者患有癌症。
另一个实施方案提供了一种筛选CDC7抑制剂的方法，其包括：使可能的抑制剂与CDC7和MCM2接触和监测MCM2上Ser108的磷酸化，其中通过MCM2上Ser108磷酸化的减少来鉴定所述CDC7抑制剂。一个更特定的实施方案包括使可能的抑制剂与CDC7、MCM2和ATP接触。在一个更特定的实施方案中，通过ATP缺失的减少来鉴定所述MCM2上Ser108磷酸化的减少。
本发明提供了药物组合物，其包含至少一种CDC7抑制剂化合物(例如，式(I)或(II)的化合物)以及适合施用于人或动物个体的药学上可接受的载体，或者其还包含其它抗癌剂。
在一个实施方案中，本发明提供了治疗患有细胞增殖性疾病如癌症的人或动物个体的方法。本发明可治疗的代表性的癌症包括但不限于癌如膀胱癌、乳腺癌、结肠癌、肾癌、肝癌、肺癌(包括小细胞肺癌)、食道癌、胆囊癌、卵巢癌、胰腺癌、胃癌、宫颈癌、甲状腺癌、前列腺癌和皮肤癌(包括鳞状细胞癌)；淋巴系的造血系统肿瘤，包括白血病、急性淋巴细胞白血病、急性原始淋巴细胞白血病、B细胞淋巴瘤、T细胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、多毛细胞淋巴瘤和伯基特淋巴瘤；髓系的造血系统肿瘤，包括急性和慢性髓性白血病、骨髓增生异常综合征和早幼粒细胞白血病；间质源的肿瘤，包括纤维肉瘤和横纹肌肉瘤；中枢和外周神经系统的肿瘤，包括星形细胞瘤、神经母细胞瘤、神经胶质瘤和神经鞘瘤；和其它肿瘤，包括黑素瘤、精原细胞瘤、畸胎瘤、骨肉瘤、着色性干皮病、角化棘皮瘤、甲状腺滤泡癌和卡波西肉瘤。本发明提供了对需要该类治疗的人或动物个体进行治疗的方法，其包括给该个体单独或与其它抗癌剂组合施用治疗有效量的式(I)或(II)的CDC7抑制剂。
组合物特别是将被配制成组合治疗或分别施用的形式。用于本发明的抗癌剂包括但不限于一种或多种下面所述的物质：
A.激酶抑制剂
用作与本发明的组合物联合使用的抗癌剂的激酶抑制剂包括表皮生长因子受体(EGFR)激酶的抑制剂如小分子喹唑啉类，例如吉非替尼(US5457105、US 5616582和US 5770599)、ZD-6474(WO 01/32651)、厄洛替尼
Figure A200780022548D00211
US 5,747,498和WO 96/30347)和拉帕替尼(lapatinib)(US6,727,256和WO 02/02552)；血管内皮生长因子受体(VEGFR)激酶抑制剂，包括SU-11248
Figure A200780022548D00212
WO 01/60814)、SU 5416(US 5,883,113和WO99/61422)、SU 6668(US 5,883,113和WO 99/61422)、CHIR-258(US6,605,617和US 6,774,237)、瓦他拉尼(vatalanib)或PTK-787(US 6,258,812)、VEGF-Trap(WO 02/57423)、B43-Genistein(WO 09606116)、芬维A胺(视黄酸对-羟基苯基胺)(US 4,323,581)、IM-862(WO 02/62826)、贝伐单抗或
Figure A200780022548D00213
(WO 94/10202)、KRN-951、3-[5-(甲基磺酰基哌啶甲基)-吲哚基]-喹诺酮、AG-13736和AG-13925、吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪类、ZK-304709、
Figure A200780022548D00214
VMDA-3601、EG-004、CEP-701(US 5,621,100)、Cand5(WO04/09769)；Erb2酪氨酸激酶抑制剂如帕妥珠单抗(pertuzumab)(WO01/00245)、曲妥单抗和利妥昔单抗；Akt蛋白激酶抑制剂，如RX-0201；蛋白激酶C(PKC)抑制剂，如LY-317615(WO 95/17182)和哌立福辛(US2003171303)；Raf/Map/MEK/Ras激酶抑制剂，包括索拉非尼(sorafenib)(BAY 43-9006)、ARQ-350RP、LErafAON、BMS-354825 AMG-548和WO03/82272中公开的其它物质；成纤维细胞生长因子受体(FGFR)激酶抑制剂；细胞依赖性激酶(CDK)抑制剂，包括CYC-202或roscovitine(WO97/20842和WO 99/02162)；血小板衍生生长因子受体(PGFR)激酶抑制剂如CHIR-258、3G3 mAb、AG-13736、SU-11248和SU6668；和Bcr-Abl激酶抑制剂以及融合蛋白如STI-571或
Figure A200780022548D00215
(伊马替尼)。
B.抗雌激素药
用于与本发明的组合物联合使用的抗癌治疗的以雌激素为靶标的药物包括选择性雌激素受体调节剂(SERM)，包括他莫昔芬、托瑞米芬、雷洛昔芬；芳香酶抑制剂，包括
Figure A200780022548D00216
或阿那曲唑；雌激素受体负调节物(ERD)，包括或氟维司群。
C.抗雄激素药
用于与本发明的组合物联合使用的抗癌治疗的以雄激素为靶标的药物包括氟他胺、比卡鲁胺、非那雄胺、氨鲁米特(glutethamide)、酮康唑和皮质类固醇。
D.其它抑制剂
用作与本发明的组合物联合使用的抗癌药的其它抑制剂包括蛋白法尼基转移酶抑制剂，包括tipifarnib或R-115777(US 2003134846和WO97/21701)、BMS-214662、AZD-3409和FTI-277；拓扑异构酶抑制剂，包括美巴龙(merbarone)和diflomotecan(BN-80915)；有丝分裂驱动蛋白纺锤体蛋白(KSP)抑制剂，包括SB-743921和MKI-833；蛋白酶调节剂如硼替佐米(bortezomib)或(US 5,780,454)、XL-784；和环加氧酶2(COX-2)抑制剂，包括非甾体抗炎药I(NSAID)。
E.癌症化疗药
用作与本发明的组合物联合的抗癌药的特定癌症化疗药包括阿那曲唑
Figure A200780022548D00222
比卡鲁胺
Figure A200780022548D00223
硫酸博来霉素
Figure A200780022548D00224
白消安
Figure A200780022548D00225
白消安注射剂
Figure A200780022548D00226
卡培他滨
Figure A200780022548D00227
N4-戊氧基羰基-5-脱氧-5-氟胞嘧啶、卡铂
Figure A200780022548D00228
卡莫司汀苯丁酸氮芥
Figure A200780022548D002210
顺铂
Figure A200780022548D002211
克拉屈滨
Figure A200780022548D002212
环磷酰胺
Figure A200780022548D002213
或
Figure A200780022548D002214
阿糖胞苷、胞嘧啶阿拉伯糖苷
Figure A200780022548D002215
阿糖胞苷脂质体注射剂
Figure A200780022548D002216
达卡巴嗪
Figure A200780022548D002217
更生霉素(Actinomycin D，Cosmegan)、盐酸柔红霉素
Figure A200780022548D002218
柠檬酸柔红霉素脂质体注射剂地塞米松、多西他赛US2004073044)、盐酸阿霉素
Figure A200780022548D002221
依托泊苷
Figure A200780022548D002222
磷酸氟达拉滨
Figure A200780022548D002223
5-氟尿嘧啶
Figure A200780022548D002224
氟他胺
Figure A200780022548D0022105808QIETU
替扎他滨(tezacitibine)、吉西他滨(二氟脱氧胞苷)、羟基脲伊达比星
Figure A200780022548D002227
异环磷酰胺
Figure A200780022548D002228
伊立替康
Figure A200780022548D002229
L-天冬酰胺酶
Figure A200780022548D002230
亚叶酸钙、美法仑
Figure A200780022548D002231
6-巯基嘌呤
Figure A200780022548D002232
甲氨蝶呤
Figure A200780022548D002233
米托蒽醌
Figure A200780022548D002234
mylotarg、紫杉醇phoenix(Yttrium90/MX-DTPA)、喷司他丁、具有卡莫司汀的聚苯丙生20植入物
Figure A200780022548D00232
柠檬酸他莫昔芬
Figure A200780022548D00233
替尼泊苷6-硫鸟嘌呤、噻替哌、替拉扎明
Figure A200780022548D00235
用于注射的盐酸托泊替康长春碱
Figure A200780022548D00237
长春新碱
Figure A200780022548D00238
和长春瑞滨
Figure A200780022548D00239
F.烷化剂
与本发明的化合物联合使用来进行抗癌治疗的烷化剂包括VNP-40101M或cloretizine、奥沙利铂(US 4,169,846、WO 03/24978和WO03/04505)、葡磷酰胺、马磷酰胺、凡毕复(etopophos)(US 5,041,424)、泼尼莫司汀；曲奥舒凡；白消安；伊罗夫文(酰基富烯)；本可麦定(penclomedine)；吡唑并吖啶(PD-115934)；O6-苄基鸟嘌呤；地西他滨(5-氮杂-2-脱氧胞苷)；brostallicin；丝裂霉素C(MitoExtra)；TLK-286
Figure A200780022548D002310
替莫唑胺；trabectedin(US 5,478,932)；AP-5280(顺铂的铂酸盐制剂)；泊非霉素；和clearazide(mecloreth amine)。
G.螯合剂
与本发明的化合物联合使用来进行抗癌治疗的螯合剂包括四硫钼酸盐(WO 01/60814)；RP-697；Chimeric T84.66(cT84.66)；钆膦维司
Figure A200780022548D002311
去铁胺；和任选地与电穿孔法(EPT)组合使用的博来霉素。
H.生物反应修饰剂
与本发明的化合物组合使用来进行抗癌治疗的生物反应修饰剂如免疫调节剂包括星孢素及其大环类似物，包括UCN-01、CEP-701和米哚妥林(见WO 02/30941、WO 97/07081、WO 89/07105、US 5,621,100、WO 93/07153、WO 01/04125、WO 02/30941、WO 93/08809、WO 94/06799、WO 00/27422、WO 96/13506和WO 88/07045)；角鲨胺(WO 01/79255)；DA-9601(WO98/04541和US 6,025,387)；阿仑单抗；干扰素类(例如IFN-a、IFN-b等)；白介素类，特别是IL-2或阿地白介素以及IL-1、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-10、IL-11、IL-12及其具有天然人序列70％以上的氨基酸序列的活性生物学变型；六甲蜜胺
Figure A200780022548D002312
SU 101或来氟米特(WO 04/06834和US 6,331,555)；咪唑并喹啉类如瑞喹莫德和咪喹莫特(US4,689,338、5,389,640、5,268,376、4,929,624、5,266,575、5,352,784、5,494,916、5,482,936、5,346,905、5,395,937、5,238,944和5,525,612)；和SMIP，包括苯并吡咯类、蒽醌类、缩氨基硫脲类和色胺酮类(WO 04/87153、WO04/64759和WO 04/60308)。
I.癌症疫苗：
与本发明的组合物联合使用的抗癌疫苗包括
Figure A200780022548D00241
(TetrahedronLetters 26，1974 2269-70)；oregovomab
Figure A200780022548D00242
Figure A200780022548D00243
(STn-KLH)；黑素瘤疫苗；GI-4000系列(GI-4014、GI-4015和GI-4016)，其涉及Ras蛋白中的五个突变；GlioVax-1；MelaVax；
Figure A200780022548D00244
或INGN-201(WO 95/12660)；Sig/E7/LAMP-1，编码HPV-16E7；MAGE-3疫苗或M3TK(WO 94/05304)；HER-2VAX；ACTIVE，其刺激对肿瘤有特异性的T-细胞；GM-CSF癌症疫苗；和以李斯特氏菌属产单核细胞(monocytogene)为基础的疫苗。
J.反义疗法：
与本发明的组合物联合使用的抗癌药还包括反义组合物，如AEG-35156(GEM-640)；AP-12009和AP-11014(TGF-β2-特异性反义寡核苷酸)；AVI-4126；AVI-4557；AVI-4472；oblimersenJFS2；aprinocarsen(WO 97/29780)；GTI-2040(R2核糖核苷酸还原酶mRNA反义寡聚物)(WO 98/05769)；GTI-2501(WO 98/05769)；脂质体包封的c-Raf反义寡聚脱氧核苷酸(LErafAON)(WO 98/43095)；和Sirna-027(以RNAi为基础的靶向于VEGFR-1mRNA的治疗剂)。
本发明的化合物还可以与支气管扩张药(bronchiodilatory)或抗组胺药一起组合在药物组合物中。该类支气管扩张药包括抗胆碱能药或抗毒蕈碱药，特别是异丙托溴铵、氧托溴铵和噻托溴铵、和β-2-肾上腺受体激动剂如沙丁胺醇、特布他林、沙美特罗和尤其是福莫特罗。共治疗的抗组胺药包括盐酸西替利嗪、富马酸氯马斯汀、异丙嗪、氯雷他定、地氯雷他定、苯海拉明和盐酸非索非那定。
本发明的化合物还可与用于治疗血栓溶解疾病、心脏病、中风等的化合物(例如，阿司匹林、链激酶、组织纤溶酶原活化因子、尿激酶、抗凝血药、抗血小板药(例如，PLAVIX；氯吡格雷硫酸氢盐)、他汀类(例如，LIPITOR或阿托伐他汀钙)、ZOCOR(辛伐他汀)、CRESTOR(罗苏伐他汀)等)、β阻滞剂(例如，阿替洛尔)、NORVASC(苯磺酸氨氯地平)和ACE抑制剂(例如，赖诺普利)一起组合在药物组合物中。
本发明的化合物还可以与用于抗高血压药治疗的化合物一起组合在药物组合物中，所述化合物如ACE抑制剂、降低脂类的药物如他汀类、LIPITOR(阿托伐他汀钙)、钙通道阻滞剂如NORVASC(苯磺酸氨氯地平)。本发明的化合物还可以与贝特类、β-阻滞剂、NEPI抑制剂、血管紧张素-2受体拮抗剂和血小板聚集抑制剂组合使用。
对于炎性疾病(包括类风湿性关节炎)的治疗而言，本发明的化合物可以与诸如以下物质组合使用：TNF-α抑制剂如抗-TNF-α单克隆抗体(如REMICADE、CDP-870)和D2E7(HUMIRA)和TNF受体免疫球蛋白融合分子(如ENBREL)、IL-1抑制剂、受体拮抗剂或可溶性IL-1Rα(例如KINERET或ICE抑制剂)、非甾体抗炎药(NSAIDS)、吡罗昔康、双氯芬酸、萘普生、氟比洛芬、非诺洛芬、酮洛芬、布洛芬、芬那酸酯/盐类(fenamates)、甲芬那酸、吲哚美辛、舒林酸、阿扎丙宗、吡唑啉酮类(pyrazolones)、保泰松、阿司匹林、COX-2抑制剂(如CELEBREX(塞来考昔)、PREXIGE(芦米考昔))、金属蛋白酶抑制剂(优选MMP-13选择性抑制剂)、p2x7抑制剂、α2δ抑制剂、NEUROTIN、普加巴林、低剂量甲氨喋呤、来氟米特、羟氯喹、d-青霉胺、金诺芬或胃肠外或口服的金。
本发明的化合物还可以与用于治疗骨关节炎的现有治疗剂组合使用。用于组合使用的适宜的物质包括标准的非甾体抗炎药(在下文被称为NSAID)如吡罗昔康、双氯芬酸、丙酸类如萘普生、氟比洛芬、非诺洛芬、酮洛芬和布洛芬、芬那酸酯/盐类如甲芬那酸、吲哚美辛、舒林酸、阿扎丙宗、吡唑啉酮类如保泰松、水杨酸酯/盐类如阿司匹林、COX-2抑制剂如塞来考昔、伐地考昔、芦米考昔和艾托考昔、镇痛药和关节内疗法如皮质类固醇和透明质酸类如hyalgan和synvisc。
本发明的化合物还可以与抗病毒药如Viracept、AZT、阿昔洛韦和泛昔洛韦以及防腐化合物如Valant组合使用。
本发明的化合物还可以与CNS活性剂如抗抑郁药(舍曲林)、抗帕金森病药(如丙炔苯丙胺、L-多巴、Requip、Mirapex、MAOB抑制剂如selegine和雷沙吉兰、comP抑制剂如Tasmar、A-2抑制剂、多巴胺再摄取抑制剂、NMDA拮抗剂、烟碱激动剂、多巴胺激动剂和神经元(neuronal)一氧化氮合酶的抑制剂)和抗阿尔茨海默病药如多奈哌齐、他克林、α2δ抑制剂、NEUROTIN、普加巴林、COX-2抑制剂、丙戊茶碱或metryfonate组合使用。
本发明的化合物还可以与骨质疏松药如EVISTA(盐酸雷洛昔芬)、屈洛昔芬、拉索昔芬或fosomax和免疫抑制剂如FK-506和雷帕霉素组合使用。
在本发明的另一个方面，提供了包括一种或多种本发明的化合物的药盒。代表性的药盒包括本发明的CDC7抑制剂(例如，式(I)-(II)的化合物)和包括关于通过施用CDC7抑制量的所述化合物来治疗细胞增殖性疾病的说明的包装插页或其它标签。
本发明的另一方面提供了MCM2上功能重要的CDC7磷酸化位点。一般而言，提供了CDC7-介导的MCM复合物的磷酸化促进起点活化的机理。为了实现该目的，使用肽分离和串连质谱光谱进行被CDC7/Dbf4复合物磷酸化的MCM2上的特定部位的详细分析。进行体外分析以便于有足够的肽来产生假定特异性磷酸化位点的第一遍“定位”。随后，用RNAi介导的A549肺癌细胞中的Dbf4敲除进行的验证表明这些位点在体内同样被磷酸化。该体外至体内的工作流程和分析方法具有足够的通用性，使得可对感兴趣的其它激酶底物进行定位和验证。
由于磷酸肽的丰度相对较低，所以用蛋白组学和质谱进行的磷酸化位点定位一直存在挑战。因此，许多研究均着眼于用金属螯合色谱如IMAC-Fe或IMAC-Ga进行磷酸肽富集。(Posewitz，Anal.Chem71：2883-2892(1999)。但是，这些方法由于酸性肽的非特异性结合而容量差。通常仅捕获最丰富的磷酸肽，甚至在“模型”蛋白如酪蛋白或卵清蛋白的情况下也是如此。
最近，Beausoleil等人，“海拉细胞核磷酸蛋白的大规模表征(Large-scalecharacterization of HeLa cell nuclear phosphoproteins)”，PNAS101(33)：12130-12135(2004)描述了一种富集磷酸肽的新方法，该方法依赖于磷酸化的和未修饰的胰蛋白酶肽之间的电荷差异。在低pH下用强阳离子交换色谱可对磷酸肽进行分离。然后在反相LCMS上进一步分离所得的级分。用这种方法对海拉细胞中的核磷酸蛋白进行表征，并且发现在967种蛋白中有2,002个磷酸化位点。这种大规模方法使得可自动鉴别海拉细胞中MCM2上的五个磷酸化位点。
本发明的一个更特定的方面提供了用质谱、然后对所发现的位点进行蛋白印迹法确认来进行的单个蛋白上的磷酸化位点的详细和完全表征。因此，使用一种低通量法，该方法使用离线(offline)反相HPLC，然后对各HPLC级分使用MALDI-qTOF串联质谱法(Krokhin等人，“MALDIQqTOF MS与离线HPLC组合用于表征蛋白初级结构和翻译后修饰(MALDI QqTOF MS combined with off-line HPLC for characterization ofprotein primary structure and post-translational modifications)”，J BiomolTech 16(4)429-440(2005))。不需要对磷酸肽进行富集，因此，不必特定地将一些肽从分析中排除出去。用这种方法，描述了CDC7/Dbf4激酶复合物特定介导的MCM2上磷酸化位点的体外和体内鉴定。获得了体内全长免疫纯化的MCM2几乎75％的序列覆盖。除了以前其它研究发现的位点外，还鉴定了一个由CDC7/Dbf4介导的新位点(S108)。以前发现这一位点在对DNA损害的应答中被ATR磷酸化。但是，我们的研究结果证明，在不存在外源性DNA损害的情况下，MCM2上的S108被CDC7/Dbf4杂二聚体磷酸化。
在本说明书和权利要求书中使用的术语具有下面的定义。
“烷基”是指具有1至10个碳原子、优选1至6个碳原子的单价饱和脂族烃基。这一术语包括例如直链和支链烃基如甲基(CH3-)、乙基(CH3CH2-)、正-丙基(CH3CH2CH2-)、异丙基((CH3)2CH-)、正-丁基(CH3CH2CH2CH2-)、异丁基((CH3)2CHCH2-)、仲-丁基((CH3)(CH3CH2)CH-)、叔-丁基((CH3)3C-)、正-戊基(CH3CH2CH2CH2CH2-)和新戊基((CH3)3CCH2-)。
“被取代的烷基”是指具有1至5个、优选1至3个或更优选1至2个取代基的烷基，其取代基选自烷氧基、被取代的烷氧基、酰基、酰基氨基、酰基氧基、氨基、被取代的氨基、氨基羰基、氨基硫代羰基、氨基羰基氨基、氨基硫代羰基氨基、氨基羰氧基、氨基磺酰基、氨基磺酰基氧基、氨基磺酰基氨基、脒基、芳基、被取代的芳基、芳基氧基、被取代的芳基氧基、芳硫基、被取代的芳硫基、羧基、羧酸酯、(羧酸酯)氨基、(羧酸酯)氧基、氰基、环烷基、被取代的环烷基、环烷基氧基、被取代的环烷基氧基、环烷基硫基、被取代的环烷基硫基、环烯基、被取代的环烯基、环烯基氧基、被取代的环烯基氧基、环烯基硫基、被取代的环烯基硫基、胍基、被取代的胍基、卤素、羟基、杂芳基、被取代的杂芳基、杂芳基氧基、被取代的杂芳基氧基、杂芳基硫基、被取代的杂芳基硫基、杂环基、被取代的杂环基、杂环基氧基、被取代的杂环基氧基、杂环基硫基、被取代的杂环基硫基、硝基、SO3H、被取代的磺酰基、磺酰基氧基、硫代酰基、硫羟基、烷硫基和被取代的烷硫基，其中所述取代基如本文所定义。
“烷氧基”是指基团-O-烷基，其中烷基如本文所定义。烷氧基包括例如甲氧基、乙氧基、正-丙氧基、异丙氧基、正-丁氧基、叔-丁氧基、仲-丁氧基和正-戊氧基。
“被取代的烷氧基”是指基团-O-(被取代的烷基)，其中被取代的烷基如本文所定义。
“酰基”是指基团H-C(O)-、烷基-C(O)-、被取代的烷基-C(O)-、链烯基-C(O)-、被取代的链烯基-C(O)-、炔基-C(O)-、被取代的炔基-C(O)-、环烷基-C(O)-、被取代的环烷基-C(O)-、环烯基-C(O)-、被取代的环烯基-C(O)-、芳基-C(O)-、被取代的芳基-C(O)-、杂芳基-C(O)-、被取代的杂芳基-C(O)-、杂环基-C(O)-和被取代的杂环基-C(O)-，其中烷基、被取代的烷基、链烯基、被取代的链烯基、炔基、被取代的炔基、环烷基、被取代的环烷基、环烯基、被取代的环烯基、芳基、被取代的芳基、杂芳基、被取代的杂芳基、杂环基和被取代的杂环基如本文所定义。酰基包括“乙酰基”CH3C(O)-。
“酰基氨基”是指基团-NRC(O)烷基、-NRC(O)被取代的烷基、-NRC(O)环烷基、-NRC(O)取代的环烷基、-NRC(O)环烯基、-NRC(O)被取代的环烯基、-NRC(O)链烯基、-NRC(O)被取代的链烯基、-NRC(O)炔基、-NRC(O)被取代的炔基、-NRC(O)芳基、-NRC(O)被取代的芳基、-NRC(O)杂芳基、-NRC(O)被取代的杂芳基、-NRC(O)杂环基和-NRC(O)被取代的杂环基，其中R是氢或烷基，并且其中烷基、被取代的烷基、链烯基、被取代的链烯基、炔基、被取代的炔基、环烷基、被取代的环烷基、环烯基、被取代的环烯基、芳基、被取代的芳基、杂芳基、被取代的杂芳基、杂环基和被取代的杂环基如本文所定义。
“酰基氧基”是指基团烷基-C(O)O-、被取代的烷基-C(O)O-、链烯基-C(O)O-、被取代的链烯基-C(O)O-、炔基-C(O)O-、被取代的炔基-C(O)O-、芳基-C(O)O-、被取代的芳基-C(O)O-、环烷基-C(O)O-、被取代的环烷基-C(O)O-、环烯基-C(O)O-、被取代的环烯基-C(O)O-、杂芳基-C(O)O-、被取代的杂芳基-C(O)O-、杂环基-C(O)O-和被取代的杂环基-C(O)O-，其中烷基、被取代的烷基、链烯基、被取代的链烯基、炔基、被取代的炔基、环烷基、被取代的环烷基、环烯基、被取代的环烯基、芳基、被取代的芳基、杂芳基、被取代的杂芳基、杂环基和被取代的杂环基如本文所定义。
“氨基”是指基团-NH2。
“被取代的氨基”是指基团-NR′R＂，其中R′和R＂独立地选自氢、烷基、被取代的烷基、链烯基、被取代的链烯基、炔基、被取代的炔基、芳基、被取代的芳基、环烷基、被取代的环烷基、环烯基、被取代的环烯基、杂芳基、被取代的杂芳基、杂环基、被取代的杂环基、-SO2-烷基、-SO2-被取代的烷基、-SO2-链烯基、-SO2-被取代的链烯基、-SO2-环烷基、-SO2-被取代的环烷基、-SO2-环烯基、-SO2-被取代的环烯基、-SO2-芳基、-SO2-被取代的芳基、-SO2-杂芳基、-SO2-被取代的杂芳基、-SO2-杂环基和-SO2-被取代的杂环基，并且其中R′和R＂任选地于它们所键合的氮一起联合形成杂环基或被取代的杂环基，前提是R′和R＂不均是氢，并且其中烷基、被取代的烷基、链烯基、被取代的链烯基、炔基、被取代的炔基、环烷基、被取代的环烷基、环烯基、被取代的环烯基、芳基、被取代的芳基、杂芳基、被取代的杂芳基、杂环基和被取代的杂环基如本文所定义。当R′是氢且R＂是烷基时，被取代的氨基在本文中有时被称为烷基氨基。当R′和R＂是烷基时，被取代的氨基在本文中有时被称为二烷基氨基。当涉及单取代的氨基时，其是指R′或R＂是氢，但不均是氢。当涉及被二取代的氨基时，其是指R′或R＂均不是氢。
“氨基羰基”是指基团-C(O)NR10R11，其中R10和R11独立地选自氢、烷基、被取代的烷基、链烯基、被取代的链烯基、炔基、被取代的炔基、芳基、被取代的芳基、环烷基、被取代的环烷基、环烯基、被取代的环烯基、杂芳基、被取代的杂芳基、杂环基和被取代的杂环基，并且其中R10和R11任选地与它们所键合的氮一起联合形成杂环基或被取代的杂环基，并且其中烷基、被取代的烷基、链烯基、被取代的链烯基、炔基、被取代的炔基、环烷基、被取代的环烷基、环烯基、被取代的环烯基、芳基、被取代的芳基、杂芳基、被取代的杂芳基、杂环基和被取代的杂环基如本文所定义。
“氨基硫代羰基”是指基团-C(S)NR10R11，其中R10和R11独立地选自氢、烷基、被取代的烷基、链烯基、被取代的链烯基、炔基、被取代的炔基、芳基、被取代的芳基、环烷基、被取代的环烷基、环烯基、被取代的环烯基、杂芳基、被取代的杂芳基、杂环基和被取代的杂环基，其中R10和R11任选地与它们所键合的氮一起联合形成杂环基或被取代的杂环基，并且其中烷基、被取代的烷基、链烯基、被取代的链烯基、炔基、被取代的炔基、环烷基、被取代的环烷基、环烯基、被取代的环烯基、芳基、被取代的芳基、杂芳基、被取代的杂芳基、杂环基和被取代的杂环基如本文所定义。
“氨基羰基氨基”是指基团-NRC(O)NR10R11，其中R是氢或烷基，R10和R11独立地选自氢、烷基、被取代的烷基、链烯基、被取代的链烯基、炔基、被取代的炔基、芳基、被取代的芳基、环烷基、被取代的环烷基、环烯基、被取代的环烯基、杂芳基、被取代的杂芳基、杂环基和被取代的杂环基，并且其中R10和R11任选地与它们所键合的氮一起联合形成杂环基或被取代的杂环基，并且其中烷基、被取代的烷基、链烯基、被取代的链烯基、炔基、被取代的炔基、环烷基、被取代的环烷基、环烯基、被取代的环烯基、芳基、被取代的芳基、杂芳基、被取代的杂芳基、杂环基和被取代的杂环基如本文所定义。
“氨基硫代羰基氨基”是指基团-NRC(S)NR10R11，其中R是氢或烷基，R10和R11独立地选自氢、烷基、被取代的烷基、链烯基、被取代的链烯基、炔基、被取代的炔基、芳基、被取代的芳基、环烷基、被取代的环烷基、环烯基、被取代的环烯基、杂芳基、被取代的杂芳基、杂环基和被取代的杂环基，并且其中R10和R11任选地与它们所键合的氮一起联合形成杂环基或被取代的杂环基，并且其中烷基、被取代的烷基、链烯基、被取代的链烯基、炔基、被取代的炔基、环烷基、被取代的环烷基、环烯基、被取代的环烯基、芳基、被取代的芳基、杂芳基、被取代的杂芳基、杂环基和被取代的杂环基如本文所定义。
“氨基羰氧基”是指基团-O-C(O)NR10R11，其中R10和R11独立地选自氢、烷基、被取代的烷基、链烯基、被取代的链烯基、炔基、被取代的炔基、芳基、被取代的芳基、环烷基、被取代的环烷基、环烯基、被取代的环烯基、杂芳基、被取代的杂芳基、杂环基和被取代的杂环基，并且其中R10和R11任选地与它们所键合的氮一起联合形成杂环基或被取代的杂环基，并且其中烷基、被取代的烷基、链烯基、被取代的链烯基、炔基、被取代的炔基、环烷基、被取代的环烷基、环烯基、被取代的环烯基、芳基、被取代的芳基、杂芳基、被取代的杂芳基、杂环基和被取代的杂环基如本文所定义。
“氨基磺酰基”是指基团-SO2NR10R11，其中R10和R11独立地选自氢、烷基、被取代的烷基、链烯基、被取代的链烯基、炔基、被取代的炔基、芳基、被取代的芳基、环烷基、被取代的环烷基、环烯基、被取代的环烯基、杂芳基、被取代的杂芳基、杂环基和被取代的杂环基，并且其中R10和R11任选地与它们所键合的氮一起联合形成杂环基或被取代的杂环基，并且其中烷基、被取代的烷基、链烯基、被取代的链烯基、炔基、被取代的炔基、环烷基、被取代的环烷基、环烯基、被取代的环烯基、芳基、被取代的芳基、杂芳基、被取代的杂芳基、杂环基和被取代的杂环基如本文所定义。
“氨基磺酰基氧基”是指基团-O-SO2NR10R11，其中R10和R11独立地选自氢、烷基、被取代的烷基、链烯基、被取代的链烯基、炔基、被取代的炔基、芳基、被取代的芳基、环烷基、被取代的环烷基、环烯基、被取代的环烯基、杂芳基、被取代的杂芳基、杂环基和被取代的杂环基，并且其中R10和R11任选地与它们所键合的氮一起联合形成杂环基或被取代的杂环基，并且其中烷基、被取代的烷基、链烯基、被取代的链烯基、炔基、被取代的炔基、环烷基、被取代的环烷基、环烯基、被取代的环烯基、芳基、被取代的芳基、杂芳基、被取代的杂芳基、杂环基和被取代的杂环基如本文所定义。
“氨基磺酰基氨基”是指基团-NR-SO2NR10R11，其中R是氢或烷基，R10和R11独立地选自氢、烷基、被取代的烷基、链烯基、被取代的链烯基、炔基、被取代的炔基、芳基、被取代的芳基、环烷基、被取代的环烷基、环烯基、被取代的环烯基、杂芳基、被取代的杂芳基、杂环基和被取代的杂环基，并且其中R10和R11任选地与它们所键合的氮一起联合形成杂环基或被取代的杂环基，并且其中烷基、被取代的烷基、链烯基、被取代的链烯基、炔基、被取代的炔基、环烷基、被取代的环烷基、环烯基、被取代的环烯基、芳基、被取代的芳基、杂芳基、被取代的杂芳基、杂环基和被取代的杂环基如本文所定义。
“脒基”是指基团-C(＝NR12)R10R11，其中R10、R11和R12独立地选自氢、烷基、被取代的烷基、链烯基、被取代的链烯基、炔基、被取代的炔基、芳基、被取代的芳基、环烷基、被取代的环烷基、环烯基、被取代的环烯基、杂芳基、被取代的杂芳基、杂环基和被取代的杂环基，并且其中R10和R11任选地与它们所键合的氮一起联合形成杂环基或被取代的杂环基，并且其中烷基、被取代的烷基、链烯基、被取代的链烯基、炔基、被取代的炔基、环烷基、被取代的环烷基、环烯基、被取代的环烯基、芳基、被取代的芳基、杂芳基、被取代的杂芳基、杂环基和被取代的杂环基如本文所定义。
“芳基”或“Ar”是指具有单环(例如苯基)或多个稠合环(例如萘基或蒽基)的6至14个碳原子的单价芳族碳环基团，所述稠合环可以是芳族的或非芳族的(例如，2-苯并噁唑啉酮、2H-1，4-苯并噁嗪-3(4H)-酮-7-基等)，前提是其连接点位于芳族碳原子上。优选的芳基包括苯基和萘基。
“被取代的芳基”是指被1至5个、优选1至3个或更优选1至2个取代基取代的芳基，其取代基选自烷基、被取代的烷基、链烯基、被取代的链烯基、炔基、被取代的炔基、烷氧基、被取代的烷氧基、酰基、酰基氨基、酰基氧基、氨基、被取代的氨基、氨基羰基、氨基硫代羰基、氨基羰基氨基、氨基硫代羰基氨基、氨基羰氧基、氨基磺酰基、氨基磺酰基氧基、氨基磺酰基氨基、脒基、芳基、被取代的芳基、芳基氧基、被取代的芳基氧基、芳硫基、被取代的芳硫基、羧基、羧酸酯、(羧酸酯)氨基、(羧酸酯)氧基、氰基、环烷基、被取代的环烷基、环烷基氧基、被取代的环烷基氧基、环烷基硫基、被取代的环烷基硫基、环烯基、被取代的环烯基、环烯基氧基、被取代的环烯基氧基、环烯基硫基、被取代的环烯基硫基、胍基、被取代的胍基、卤素、羟基、杂芳基、被取代的杂芳基、杂芳基氧基、被取代的杂芳基氧基、杂芳基硫基、被取代的杂芳基硫基、杂环基、被取代的杂环基、杂环基氧基、被取代的杂环基氧基、杂环基硫基、被取代的杂环基硫基、硝基、SO3H、被取代的磺酰基、磺酰基氧基、硫代酰基、硫羟基、烷硫基和被取代的烷硫基，其中所述取代基如本文所定义。
“芳基氧基”是指基团-O-芳基，其中芳基如本文所定义，其包括例如苯氧基和萘氧基。
“被取代的芳基氧基”是指基团-O-(被取代的芳基)，其中被取代的芳基如本文所定义。
“芳硫基”是指基团-S-芳基，其中芳基如本文所定义。
“被取代的芳硫基”是指基团-S-(被取代的芳基)，其中被取代的芳基如本文所定义。
“链烯基”是指具有2至6个碳原子、优选2至4个碳原子并具有至少1个、优选1至2个烯基不饱和部位的链烯基。该类基团例如有乙烯基、烯丙基和丁-3-烯-1-基。
“被取代的链烯基”是指具有1至3个、优选1至2个取代基的链烯基，其取代基选自烷氧基、被取代的烷氧基、酰基、酰基氨基、酰基氧基、氨基、被取代的氨基、氨基羰基、氨基硫代羰基、氨基羰基氨基、氨基硫代羰基氨基、氨基羰氧基、氨基磺酰基、氨基磺酰基氧基、氨基磺酰基氨基、脒基、芳基、被取代的芳基、芳基氧基、被取代的芳基氧基、芳硫基、被取代的芳硫基、羧基、羧酸酯、(羧酸酯)氨基、(羧酸酯)氧基、氰基、环烷基、被取代的环烷基、环烷基氧基、被取代的环烷基氧基、环烷基硫基、被取代的环烷基硫基、环烯基、被取代的环烯基、环烯基氧基、被取代的环烯基氧基、环烯基硫基、被取代的环烯基硫基、胍基、被取代的胍基、卤素、羟基、杂芳基、被取代的杂芳基、杂芳基氧基、被取代的杂芳基氧基、杂芳基硫基、被取代的杂芳基硫基、杂环基、被取代的杂环基、杂环基氧基、被取代的杂环基氧基、杂环基硫基、被取代的杂环基硫基、硝基、SO3H、被取代的磺酰基、磺酰基氧基、硫代酰基、硫羟基、烷硫基和被取代的烷硫基，其中所述取代基如本文所定义并且前提是任何羟基取代都不与乙烯基(不饱和)碳原子相连。
“炔基”是指具有2至6个碳原子、优选2至3个碳原子并具有至少1个、优选1至2个炔基不饱和部位的炔基。
“被取代的炔基”是指具有1至3个、优选1至2个取代基的炔基，其取代基选自烷氧基、被取代的烷氧基、酰基、酰基氨基、酰基氧基、氨基、被取代的氨基、氨基羰基、氨基硫代羰基、氨基羰基氨基、氨基硫代羰基氨基、氨基羰氧基、氨基磺酰基、氨基磺酰基氧基、氨基磺酰基氨基、脒基、芳基、被取代的芳基、芳基氧基、被取代的芳基氧基、芳硫基、被取代的芳硫基、羧基、羧酸酯、(羧酸酯)氨基、(羧酸酯)氧基、氰基、环烷基、被取代的环烷基、环烷基氧基、被取代的环烷基氧基、环烷基硫基、被取代的环烷基硫基、环烯基、被取代的环烯基、环烯基氧基、被取代的环烯基氧基、环烯基硫基、被取代的环烯基硫基、胍基、被取代的胍基、卤素、羟基、杂芳基、被取代的杂芳基、杂芳基氧基、被取代的杂芳基氧基、杂芳基硫基、被取代的杂芳基硫基、杂环基、被取代的杂环基、杂环基氧基、被取代的杂环基氧基、杂环基硫基、被取代的杂环基硫基、硝基、SO3H、被取代的磺酰基、磺酰基氧基、硫代酰基、硫羟基、烷硫基和被取代的烷硫基，其中所述取代基如本文所定义并且前提是任何羟基取代均不与炔碳原子相连。
“羰基”是指二价基团-C(O)-，其与-C(＝O)-相当。
“羧基”是指-COOH或其盐。
“羧酸酯”是指基团-C(O)O-烷基、-C(O)O-被取代的烷基、-C(O)O-链烯基、-C(O)O-被取代的链烯基、-C(O)O-炔基、-C(O)O-被取代的炔基、-C(O)O-芳基、-C(O)O-被取代的芳基、-C(O)O-环烷基、-C(O)O-被取代的环烷基、-C(O)O-环烯基、-C(O)O-被取代的环烯基、-C(O)O-杂芳基、-C(O)O-被取代的杂芳基、-C(O)O-杂环基和-C(O)O-被取代的杂环基，其中烷基、被取代的烷基、链烯基、被取代的链烯基、炔基、被取代的炔基、环烷基、被取代的环烷基、环烯基、被取代的环烯基、芳基、被取代的芳基、杂芳基、被取代的杂芳基、杂环基和被取代的杂环基如本文所定义。
“(羧酸酯)氨基”是指基团-NR-C(O)O-烷基、被取代的-NR-C(O)O-烷基、-NR-C(O)O-链烯基、-NR-C(O)O-被取代的链烯基、-NR-C(O)O-炔基、-NR-C(O)O-被取代的炔基、-NR-C(O)O-芳基、-NR-C(O)O-被取代的芳基、-NR-C(O)O-环烷基、-NR-C(O)O-被取代的环烷基、-NR-C(O)O-环烯基、-NR-C(O)O-被取代的环烯基、-NR-C(O)O-杂芳基、-NR-C(O)O-被取代的杂芳基、-NR-C(O)O-杂环基和-NR-C(O)O-被取代的杂环基，其中R是烷基或氢，并且其中烷基、被取代的烷基、链烯基、被取代的链烯基、炔基、被取代的炔基、环烷基、被取代的环烷基、环烯基、被取代的环烯基、芳基、被取代的芳基、杂芳基、被取代的杂芳基、杂环基和被取代的杂环基如本文所定义。
本文所用的“CDC7抑制剂”是指在下文实施例79中所述的体外CDC7/DBF4抑制试验中进行测量时对CDC7活性表现出不高于约100μM并且更通常不高于约50μM的IC50的化合物。“IC50”是将酶(例如Raf激酶)活性降低至最大水平一半的抑制剂浓度。发现本发明的代表性化合物对CDC7表现出抑制活性。在本文所述的CDC7试验中进行测量时，本发明的化合物优选对CDC7表现出不高于约10μM、更优选不高于约5μM、甚至更优选不高于约1μM、最优选不高于约200nM的IC50。
“(羧酸酯)氧基”是指基团-O-C(O)O-烷基、被取代的-O-C(O)O-烷基、-O-C(O)O-链烯基、-O-C(O)O-被取代的链烯基、-O-C(O)O-炔基、-O-C(O)O-被取代的炔基、-O-C(O)O-芳基、-O-C(O)O-被取代的芳基、-O-C(O)O-环烷基、-O-C(O)O-被取代的环烷基、-O-C(O)O-环烯基、-O-C(O)O-被取代的环烯基、-O-C(O)O-杂芳基、-O-C(O)O-被取代的杂芳基、-O-C(O)O-杂环基和-O-C(O)O-被取代的杂环基，其中烷基、被取代的烷基、链烯基、被取代的链烯基、炔基、被取代的炔基、环烷基、被取代的环烷基、环烯基、被取代的环烯基、芳基、被取代的芳基、杂芳基、被取代的杂芳基、杂环基和被取代的杂环基如本文所定义。
“氰基”是指基团-CN。
“环烷基”是指具有单个或多个环(包括稠合、桥连和螺环环系)的3至10个碳原子的环状烷基。适宜的环烷基的实例包括例如金刚烷基、环丙基、环丁基、环戊基和环辛基。
“环烯基”是指具有单个或多个环并具有至少一个>C＝C<环不饱和度、优选1至2两个>C＝C<环不饱和度的3至10个碳原子的非芳族环烷基。
“被取代的环烷基”和“被取代的环烯基”是指具有1至5个或优选1至3个取代基的环烷基或环烯基，其取代基选自氧代、硫酮(thione)、烷基、被取代的烷基、链烯基、被取代的链烯基、炔基、被取代的炔基、烷氧基、被取代的烷氧基、酰基、酰基氨基、酰基氧基、氨基、被取代的氨基、氨基羰基、氨基硫代羰基、氨基羰基氨基、氨基硫代羰基氨基、氨基羰氧基、氨基磺酰基、氨基磺酰基氧基、氨基磺酰基氨基、脒基、芳基、被取代的芳基、芳基氧基、被取代的芳基氧基、芳硫基、被取代的芳硫基、羧基、羧酸酯、(羧酸酯)氨基、(羧酸酯)氧基、氰基、环烷基、被取代的环烷基、环烷基氧基、被取代的环烷基氧基、环烷基硫基、被取代的环烷基硫基、环烯基、被取代的环烯基、环烯基氧基、被取代的环烯基氧基、环烯基硫基、被取代的环烯基硫基、胍基、被取代的胍基、卤素、羟基、杂芳基、被取代的杂芳基、杂芳基氧基、被取代的杂芳基氧基、杂芳基硫基、被取代的杂芳基硫基、杂环基、被取代的杂环基、杂环基氧基、被取代的杂环基氧基、杂环基硫基、被取代的杂环基硫基、硝基、SO3H、被取代的磺酰基、磺酰基氧基、硫代酰基、硫羟基、烷硫基和被取代的烷硫基，其中所述取代基如本文所定义。
“环烷基氧基”是指-O-环烷基。
“被取代的环烷基氧基”是指-O-(被取代的环烷基)。
“环烷基硫基”是指-S-环烷基。
“被取代的环烷基硫基”是指-S-(被取代的环烷基)。
“环烯基氧基”是指-O-环烯基。
“被取代的环烯基氧基”是指-O-(被取代的环烯基)。
“环烯基硫基”是指-S-环烯基。
“被取代的环烯基硫基”是指-S-(被取代的环烯基)。
“胍基”是指-NHC(＝NH)NH2。
“被取代的胍基”是指-NR13C(＝NR13)N(R13)2，其中各R13独立地是选自氢、烷基、被取代的烷基、芳基、被取代的芳基、杂芳基、被取代的杂芳基、杂环基和被取代的杂环基，并且连接在同一个胍基氮原子上的两个R13基团任选地与它们所键合的氮一起联合形成杂环基或被取代的杂环基，前提是至少一个R13不是氢，并且其中所述取代基如本文所定义。
“卤代”或“卤素”是指氟、氯、溴和碘。
“羟基”是指基团-OH。
“杂芳基”是指在环中具有1至10个碳原子和1至4个选自氧、氮和硫的杂原子的芳族基团。该类杂芳基可以具有单个环(例如，吡啶基或呋喃基)或多个稠合的环(例如，吲嗪基或苯并噻吩基)，其中稠合的环可以是或不是芳族的和/或包含或不包含杂原子，前提是其连接点是芳族杂芳基的原子。在一个实施方案中，杂芳基的氮和/或硫环原子任选地被氧化从而提供N-氧化物(N→O)、亚磺酰基或磺酰基部分。优选的杂芳基包括吡啶基、吡咯基、吲哚基、噻吩基和呋喃基。
“被取代的杂芳基”是指被1至5个、优选1至3个或更优选1至2个选自针对被取代的芳基所定义的取代基的取代基取代的杂芳基。
“杂芳基氧基”是指-O-杂芳基。
“被取代的杂芳基氧基”是指基团-O-(被取代的杂芳基)。
“杂芳基硫基”是指基团-S-杂芳基。
“被取代的杂芳基硫基”是指基团-S-(被取代的杂芳基)。
“杂环”或“杂环的”或“杂环烷基”或“杂环基”是指具有单个环或多个稠合环(包括稠合、桥连和螺环环系)、在环中具有1至10个碳原子和1至4个选自氮、硫或氧的杂原子的饱和或不饱和基团，其中，在稠合环系中，一个或多个环可以是环烷基、芳基或杂芳基，前提是连接点是非芳族环。在一个实施方案中，杂环基的氮和/或硫原子任选地被氧化从而提供N-氧化物、亚磺酰基、磺酰基部分。
“被取代的杂环”或“被取代的杂环烷基”或“被取代的杂环基”是指具有1至5个或优选1至3个与被取代的环烷基所定义的取代基相同的取代基取代的杂环基。
“杂环基氧基”是指基团-O-杂环基。
“被取代的杂环基氧基”是指基团-O-(被取代的杂环基)。
“杂环基硫基”是指基团-S-杂环基。
“被取代的杂环基硫基”是指基团-S-(被取代的杂环基)。
杂环和杂芳基的实例包括但不限于氮杂环丁烷、吡咯、咪唑、吡唑、吡啶、吡嗪、嘧啶、哒嗪、吲嗪、异吲哚、吲哚、二氢吲哚、吲唑、嘌呤、喹嗪、异喹啉、喹啉、酞嗪、萘啶、喹喔啉、喹唑啉、噌啉、蝶啶、咔唑、咔啉、菲啶、吖啶、菲咯啉、异噻唑、吩嗪、异噁唑、吩噁嗪、吩噻嗪、咪唑烷、咪唑啉、哌啶、哌嗪、二氢吲哚、苯邻二甲酰亚胺、1，2，3，4-四氢异喹啉、4，5，6，7-四氢苯并[b]噻吩、噻唑、噻唑烷、噻吩、苯并[b]噻吩、吗啉基、硫代吗啉基(也被称为硫吗啉基)、1，1-二氧代硫代吗啉基、哌啶基、吡咯烷和四氢呋喃基。
“硝基”是指基团-NO2。
“氧代”是指原子(＝O)或(-O-)。
“螺环基”是指具有带有螺环连接(该连接是由为环的唯一共有成员的单个原子形成的)的环烷基或杂环基环的3至10个碳原子的二价饱和环状基团，其实例是下面的结构：
Figure A200780022548D00391
“磺酰基”是指二价基团-S(O)2-。
“被取代的磺酰基”是指基团-SO2-烷基、-SO2-被取代的烷基、-SO2-链烯基、-SO2-被取代的链烯基、-SO2-环烷基、-SO2-被取代的环烷基、-SO2-环烯基、-SO2-被取代的环烯基、-SO2-芳基、-SO2-被取代的芳基、-SO2-杂芳基、-SO2-被取代的杂芳基、-SO2-杂环基、-SO2-被取代的杂环基，其中烷基、被取代的烷基、链烯基、被取代的链烯基、炔基、被取代的炔基、环烷基、被取代的环烷基、环烯基、被取代的环烯基、芳基、被取代的芳基、杂芳基、被取代的杂芳基、杂环基和被取代的杂环基如本文所定义。被取代的磺酰基包括例如甲基-SO2-、苯基-SO2-和4-甲基苯基-SO2-等基团。
“磺酰基氧基”是指基团-OSO2-烷基、-OSO2-被取代的烷基、-OSO2-链烯基、-OSO2-被取代的链烯基、-OSO2-环烷基、-OSO2-被取代的环烷基、-OSO2-环烯基、-OSO2-被取代的环烯基、-OSO2-芳基、-OSO2-被取代的芳基、-OSO2-杂芳基、-OSO2-被取代的杂芳基、-OSO2-杂环基、-OSO2-被取代的杂环基，其中烷基、被取代的烷基、链烯基、被取代的链烯基、炔基、被取代的炔基、环烷基、被取代的环烷基、环烯基、被取代的环烯基、芳基、被取代的芳基、杂芳基、被取代的杂芳基、杂环基和被取代的杂环基如本文所定义。
“硫代酰基”是指基团H-C(S)-、烷基-C(S)-、被取代的烷基-C(S)-、链烯基-C(S)-、被取代的链烯基-C(S)-、炔基-C(S)-、被取代的炔基-C(S)-、环烷基-C(S)-、被取代的环烷基-C(S)-、环烯基-C(S)-、被取代的环烯基-C(S)-、芳基-C(S)-、被取代的芳基-C(S)-、杂芳基-C(S)-、被取代的杂芳基-C(S)-、杂环基-C(S)-和被取代的杂环基-C(S)-，其中烷基、被取代的烷基、链烯基、被取代的链烯基、炔基、被取代的炔基、环烷基、被取代的环烷基、环烯基、被取代的环烯基、芳基、被取代的芳基、杂芳基、被取代的杂芳基、杂环基和被取代的杂环基如本文所定义。
“硫羟基”是指基团-SH。
“硫代羰基”是指二价基团-C(S)-，其与-C(＝S)-相当。
“硫酮”是指原子(＝S)。
“烷硫基”是指基团-S-烷基，其中烷基如本文所定义。
“被取代的烷硫基”是指基团-S-(被取代的烷基)，其中被取代的烷基如本文所定义。
“立体异构体”是指在一个或多个立体中心的手性方面不同的化合物。立体异构体包括对映异构体和非对映异构体。
“互变异构体”是指在质子位置方面不同的化合物的交变形式，如烯醇-酮和亚胺-烯胺互变异构体，或者包含与环-NH-部分和环＝N-部分均相连的环原子的杂芳基如吡唑类、咪唑类、苯并咪唑类、三唑类和四唑类的互变异构形式。
“同系物”是指与所提及的序列具有至少50％同源性、或至少60％同源性、或至少70％同源性、或至少80％同源性、或至少85％同源性、或至少90％同源性、或至少95％同源性、或至少96％同源性、或至少97％同源性、或至少98％同源性、或至少99％同源性的序列。
“患者”是指哺乳动物，包括人和非人哺乳动物。
“药学上可接受的盐”是指化合物的药学上可接受的盐，该盐衍生自本领域中众所周知的许多有机和无机反荷离子，包括例如钠、钾、钙、镁、铵和四烷基铵；当分子包含碱性官能团时，是有机酸或无机酸的盐，如盐酸盐、氢溴酸盐、酒石酸盐、甲磺酸盐、乙酸盐、马来酸盐和草酸盐。
患者疾病的“治疗”或“处理”是指1)防止有出现疾病症状的倾向或还没有表现出疾病症状的患者发生疾病；2)抑制疾病或阻止其发展；或3)改善疾病或使疾病消退。
除非另有说明，否则本文没有明确定义的取代基的命名是通过命名官能团的末端部分、然后朝向连接点方向命名毗邻的官能团来获得的。例如，被取代的“芳基烷氧基羰基”是指基团(芳基)-(烷基)-O-C(O)-。
应当理解的是，在上面所定义的所有被取代的基团中，通过用其进一步的取代基定义取代基获得的聚合物(例如，具有被取代的芳基作为取代基的被取代的芳基，该取代基本身被被取代的芳基取代，该被取代的芳基进一步被被取代的芳基取代等)不被包括在本文中。在该类情况中，该类取代基的最大数目是三个。例如，具有两个其它被取代的芳基的被取代的芳基的系列取代仅限于-被取代的芳基-(被取代的芳基)-被取代的芳基。
本发明的化合物可在体外或体内用于抑制癌细胞的生长。这些化合物可以单独使用或者可以与药学上可接受的载体或赋形剂一起位于组合物中。本发明的药物组合物包含与一种或多种药学上可接受的载体一起配制的治疗有效量的本文所述的CDC7抑制剂化合物。本文所用的术语“药学上可接受的载体”是指任何类型的无毒的惰性的固体、半固体或液体填充剂、稀释剂、包封材料或制剂助剂。可作为药学上可接受载体的材料的一些实例有糖类如乳糖、葡萄糖和蔗糖；淀粉类如玉米淀粉和马铃薯淀粉；纤维素及其衍生物如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和醋酸纤维素；粉状西黄蓍胶；麦芽糖；明胶；滑石粉；赋形剂如可可豆脂和栓剂蜡类；油类如花生油、棉子油；红花油；芝麻油；橄榄油；玉米油和豆油；二醇类；如丙二醇；酯类如油酸乙酯和月桂酸乙酯；琼脂；缓冲剂如氢氧化镁和氢氧化铝；海藻酸；无热原的水；等张的生理盐水；林格氏溶液；乙醇和磷酸盐缓冲液以及其它无毒的可相容的润滑剂如十二烷基硫酸钠和硬脂酸镁，以及根据制剂人员的判断，在组合物中也可以存在着色剂、释放剂、包衣剂、甜味剂、矫味剂和芳香剂、防腐剂和抗氧化剂。在“Remington′sPharmaceutical Sciences”，Mack Pub.Co.，New Jersey，1991中描述了其它适宜的药学上可接受的赋形剂，将其引入本文作为参考。
本发明的化合物可以以剂量单位制剂的形式口服、胃肠外、舌下、通过雾化或吸入喷雾、直肠、脑池内、阴道内、腹膜内、口腔或局部施用于人和其它动物，所述制剂根据需要包含常规的无毒的药学上可接受的载体、助剂和基质。局部施用还可以涉及使用透皮施用如透皮贴剂或电泳装置。本文所用的术语胃肠外包括皮下注射、静脉内注射、肌内注射、胸骨内注射或输注技术。
制剂方法在本领域中是众所周知的并且在例如Remington：TheScience and Practice of Pharmacy，Mack Publishing Company，Easton，Pa.，第19版(1995)中被公开。用于本发明的药物组合物可以是无菌、无热原的液体溶液或混悬液、包衣胶囊、栓剂、冷冻干燥粉末、透皮贴剂的形式或本领域中已知的其它形式。
可注射的制剂例如可注射的无菌水性或油性混悬剂可以根据现有技术用适宜的分散剂或润湿剂和助悬剂来配制。可注射的无菌制剂也可以是在无毒的胃肠外可接受的稀释剂或溶剂中的可注射的无菌溶液、混悬剂或乳剂，例如在1，3-丙二醇或1，3-丁二醇中的溶液。可使用的可接受的基质和溶剂尤其是水、林格氏溶液、U.S.P.和等张的氯化钠溶液。此外，还常用无菌的不挥发性油作为溶剂或混悬介质。为此，可以使用任何温和的不挥发性油，包括合成的单-或二-甘油酯。此外，在制备可注射制剂时还可以使用脂肪酸如油酸。可以例如通过用截留细菌的滤器过滤或者通过在使用前掺入可溶解或分散于无菌水或其它可注射无菌介质中的无菌固体组合物形式的杀菌剂来对可注射制剂进行灭菌。
为了延长药物的作用，常常希望减缓药物从皮下或肌内注射的吸收。可以通过使用水溶性差的结晶或无定形物质的液体混悬剂来实现这一点。然后药物的吸收速率取决于其溶出速率，其溶出速率又可能取决于晶体粒度和晶形。或者，通过将药物溶解或混悬于油性基质中来实现胃肠外施用的药物形式的延迟吸收。可注射的储库形式可以通过在可生物降解的聚合物如聚丙交酯-聚乙交酯中形成药物的微囊基质来制备。根据药物与聚合物的比例以及所用的具体化合物的性质，可以控制药物释放速率。其它可生物降解的聚合物的实例包括聚(原酸酯)和聚(酸酐)。可注射的储库制剂也可以通过将药物包埋到可与机体组织相容的脂质体或微乳中来制备。
用于直肠或阴道施用的组合物优选地为栓剂，其可以通过将本发明的化合物与适宜的无刺激的在环境温度下是固体、但是在体温下是液体并因此在直肠或阴道腔中熔化并释放活性化合物的赋形剂或载体(如可可脂、聚乙二醇或栓剂蜡)混合来制备。
用于口服施用的固体剂型包括胶囊剂、片剂、丸剂、散剂和颗粒剂。在该类固体剂型中，将活性化合物与至少一种药学上可接受的惰性赋形剂或载体如柠檬酸钠或磷酸二钙和/或a)填充剂或增量剂如淀粉类、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅酸，b)粘合剂如羧甲基纤维素、藻酸盐类、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯胶，c)湿润剂如甘油，d)崩解剂如琼脂、碳酸钙、马铃薯或木薯淀粉、海藻酸、某些硅酸盐类和碳酸钠，e)溶液阻滞剂如石蜡，f)吸收促进剂如季铵化合物，g)润湿剂如乙酰基醇和甘油单硬脂酸酯，h)吸收剂，如高岭土和皂土，和i)润滑剂如滑石粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、十二烷基硫酸钠，以及其混合物混合在一起。在胶囊剂、片剂和丸剂的情况中，该剂型还可包含缓冲剂。
还可以用类似类型的固体组合物作为使用这类赋形剂如乳糖以及高分子量聚乙二醇等的软和硬填充明胶胶囊的填充物。
可以用包衣和壳如肠溶衣和药物制剂领域众所周知的其它包衣来制备片剂、糖衣丸、胶囊剂、丸剂和颗粒剂固体剂型。它们可任选地包含遮光剂并且可以是仅在或优先在胃肠道的某个部分中释放活性成分、任选以延迟方式释放活性成分的组合物。可使用的包埋组合物的实例包括聚合物物质和蜡类。
活性化合物还可以是使用一种或多种上述赋形剂的微囊包封形式。可以用包衣和壳如肠溶衣、控释包衣和药物制剂领域众所周知的其它包衣来制备片剂、糖衣丸、胶囊剂、丸剂和颗粒剂固体剂型。在该类固体剂型中，可以将活性化合物与至少一种惰性稀释剂如蔗糖、乳糖或淀粉混合。按照常规惯例，该类剂型还可包含除惰性稀释剂外的其它物质，例如压片润滑剂和其它压片助剂如硬脂酸镁和微晶纤维素。在胶囊剂、片剂和丸剂的情况中，该剂型还可包含缓冲剂。它们可任选地包含遮光剂并且可以是仅在或优先在胃肠道的某个部分中释放活性成分、任选以延迟方式释放活性成分的组合物。可使用的包埋组合物的实例包括聚合物物质和蜡类。
用于口服施用的液体剂型包括药学上可接受的乳剂、微乳、溶液、混悬液、糖浆剂和酏剂。除活性化合物以外，液体剂型还可含有本领域中常用的惰性稀释剂例如水或其它溶剂、增溶剂和乳化剂如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、EtOAc、苄醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1，3-丁二醇、二甲基甲酰胺、油类(特别是棉子油、花生油、玉米油、胚芽油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油)、甘油、四氢糠醇、聚乙二醇和失水山梨醇的脂肪酸酯以及其混合物。除惰性稀释剂以外，口服组合物还可包含助剂如润湿剂、乳化剂和助悬剂、甜味剂、矫味剂和芳香剂。
本发明的化合物的用于局部或透皮施用的剂型包括软膏剂、糊剂、乳膏剂、洗剂、凝胶剂、散剂、溶液、喷雾剂、吸入剂或贴剂。可以将活性成分在无菌条件下与药学上可接受的载体和可能需要的任何防腐剂或缓冲剂混合。在本发明的范围内还包括眼用制剂、滴耳剂等。
除本发明的活性化合物以外，软膏剂、糊剂、乳膏剂和凝胶剂还可包含赋形剂，如动物和植物脂肪、油类、蜡类、石蜡类、淀粉、西黄蓍胶、纤维素衍生物、聚乙二醇类、硅氧烷类、皂土类、硅酸、滑石粉和氧化锌、或其混合物。
本发明的组合物还可以被配制为以液体气雾剂或可吸入干粉的形式进行递送。液体气雾剂制剂可以被主要雾化成可以被递送到末端和呼吸性细支气管中的粒度。
本发明的雾化制剂可以用形成气雾剂的装置如喷射器(jet)、振动多孔板或超声喷雾器来进行递送，所选择的装置优选使得能形成质量空气动力学中位数直径(mass median aerodynamic diameter)为1至5μm的气雾剂颗粒。此外，该制剂还优选地具有平衡的渗透压离子强度和氯化物浓度和能将本发明的化合物的有效剂量递送到感染部位的最小可雾化体积。此外，该雾化制剂优选对呼吸道功能没有消极损害，并且不会造成不希望的副作用。
本发明的化合物还可以被配制为以局部用散剂和喷雾剂的形式使用，所述散剂和喷雾剂除本发明的化合物以外还可包含赋形剂如乳糖、滑石粉、硅酸、氢氧化铝、硅酸钙和聚酰胺粉末或这些物质的混合物。喷雾剂还可包含常规抛射剂如氯氟烃类。
透皮贴剂具有为机体提供控制递送化合物的另外的优点。该类剂型可以通过将化合物溶解或分散于适宜的介质中来制备。还可以使用吸收促进剂来增加通过皮肤的化合物通量。可以通过提供控速膜或将化合物分散于聚合物基质或凝胶中来控制速度。本发明的化合物也可以以脂质体的形式被施用。如本领域中已知的那样，脂质体一般衍生自磷脂或其它脂类物质。脂质体是由分散于水性介质中的单-或多-层水合液晶形成的。可以使用能形成脂质体的任何无毒的生理学可接受和可代谢的脂类。脂质体形式的本发明的组合物除本发明的化合物外还可包含稳定剂、防腐剂、赋形剂等。优选的脂类是磷脂类和磷脂酰胆碱类(卵磷脂类)，其既可以是天然的，又可以是合成的。形成脂质体的方法在本领域中是已知的。见例如Prescott(编辑)，“Methods in Cell Biology”，第XIV卷，Academic Press，纽约，1976，第33页以及之后的内容。
本发明的化合物的有效量一般包括用本文所述的任何试验、用本领域普通技术人员已知的其它CDC7活性试验或通过检测癌症症状的抑制或减轻足以可察觉地抑制CDC7活性的任何量。可以与载体材料组合以制得单个剂型的活性成分的量将根据所治疗的主体和特定的施用方式而变化。但是，应当理解的是，用于任何特定患者的特定剂量水平都将取决于许多因素，包括所用的具体化合物的活性、年龄、体重、一般健康状况、性别、饮食、施用时间、施用途径、排泄速率、药物组合以及所治疗的具体疾病的严重程度。对于给定的情况而言，可以用常规实验容易地确定治疗有效量，其在普通临床医师的技能和判断范围内。
根据本发明的治疗方法，通过以获得所需结果所必需的该类量和该类时间给患者施用治疗有效量的本发明的化合物而减轻或防止患者如人或低级哺乳动物的肿瘤生长。本发明的化合物的“治疗有效量”是指足以治疗肿瘤生长、具有适用于任何医学治疗的合理的效益/风险比的化合物的量。但是，应当理解的是，本发明的化合物和组合物的总日用量将由主治医师根据合理医学判断来确定。对于任何特定的患者而言，具体的治疗有效剂量水平将取决于许多因素，包括所治疗的障碍和障碍的严重程度；所用的具体化合物的活性；所用的具体组合物；患者的年龄、体重、一般健康状况、性别和饮食；施用时间、施用途径和所用的具体化合物的排泄速率；治疗的持续时间；与所用的具体化合物组合或并行使用的药物；以及医学领域中众所周知的类似因素。
对于本发明的目的而言，治疗有效剂量一般将是例如以单剂量或多个剂量施用于主体的总日剂量，可包括例如0.001至1000mg/kg体重/天、更优选1.0至30mg/kg体重/天的量。剂量单位组合物可包含组成日剂量的其约数量。一般而言，本发明的治疗方案包括每天以单剂量或多剂量给需要该类治疗的患者施用约10mg至约2000mg本发明的化合物。
在本发明的另一个方面，提供了包含一种或多种本发明的化合物的药盒。代表性的药盒包括式(I)或(II)的CDC7抑制剂化合物和包含关于通过施用CDC7抑制量的化合物来治疗细胞增殖性疾病的说明的包装插页或其它标签。
本文所用的术语“药盒”包含用于盛放药物组合物的容器并且还可以包括分开的容器如分开的小瓶或分开的箔包装。所述容器可以是本领域中已知的任何常规形状或形式，其由药学上可接受的材料制成，例如纸或纸板盒、玻璃或塑料瓶或罐、可重新密封的袋(例如，用于盛放放入不同容器中的片剂“再填充物(refill)”)或具有用于根据治疗时间表将各剂量压出包装的泡罩包装。所用容器可能取决于所涉及的确切剂型，例如，一般不会用常规纸板盒来盛放液体混悬剂。在用于销售单一剂型的单个包装中可以一起使用一个以上的容器。例如，片剂可以被盛装在瓶中，而该瓶又被盛装在盒中。
该类药盒的一个实例是所谓的泡罩包装。泡罩包装在包装工业中是众所周知的，被广泛用于包装药物单位剂型(片剂、胶囊剂等)。泡罩包装一般由一薄片被箔(优选透明的塑料材料)覆盖的较硬的材料组成。在包装过程中，在塑料箔上形成凹穴。该凹穴具有待包装的各片剂或胶囊剂的大小和形状或者具有容纳待包装的多个片剂和/或胶囊剂的大小和形状。接下来，将片剂或胶囊剂相应地放到凹穴中并将较硬的材料片在该箔形成凹穴的方向相反的箔面上密封到塑料箔上。结果，片剂和胶囊剂根据需要被单独密封或集合密封到塑料箔与薄片之间的凹穴中。所述薄片的强度优选使得通过在凹穴上手动施加压力从而于凹穴位置在薄片上形成开口而将片剂或胶囊剂从泡罩包装中取出。然后可通过所述开口取出片剂或胶囊剂。
除CDC7抑制剂以外，本发明的药盒还可包含一种或多种另外的药学活性化合物。所述另外的化合物优选地是上面A-J组之一所述的其它抗癌剂。所述另外的化合物可以与CDC7抑制剂以相同的剂型或以不同的剂型施用。同样，所述另外的化合物可以与CDC7抑制剂同时或在不同的时间施用。
通过参考下面的实施例可以容易地理解本发明，这些实施例仅用于举例说明，并非旨在限制本发明。
实施例
参考下面的实施例，可以用本文所述的方法或本领域中已知的其它方法来合成本发明的化合物。
在两种LCMS仪器之一上进行质谱分析：Waters系统(Alliance HTHPLC和Micromass ZQ质谱仪；柱：Eclipse XDB-C18，2.1×50mm；溶剂系统：5-95％(或35-95％，或65-95％或95-95％)乙腈的水(含0.05％TFA)溶液；流速为0.8mL/min；分子量范围200-1500；锥体电压20V；柱温40℃)或Hewlett Packard系统(Series 1100 HPLC；柱：Eclipse XDB-C18，2.1×50mm；溶剂系统：1-95％乙腈的水(含0.05％ TFA)溶液；流速0.8mL/min；分子量范围150-850；锥体电压50V；柱温30℃)。所有质量均以质子化母离子的质量进行报告。
GCMS分析是在Hewlett Packard仪器上进行的(使用质量选择性检测器5973的HP6890系列气相色谱；进样体积：1μL；初始柱温：50℃；最终柱温：250℃；升温时间(ramp time)：20分钟；气体流速：1mL/min；柱：5％苯基甲基硅氧烷，型号HP 190915-443，尺寸：30.0m×25m×0.25m)。
核磁共振(NMR)分析是用Varian 300MHz NMR(Palo Alto，CA，USA)用所述化合物进行的。光参比物是TMS或已知的化学位移溶剂。为了增加样品的溶解度，一些化合物样品在升高的温度(例如75℃)下运行。
本发明的一些化合物的纯度是用元素分析(Desert Analytics，Tucson，AZ，USA)进行评估的。
熔点是在Laboratory Devices Mel-Temp仪器(Holliston，MA，USA)上测定的。
制备分离是用Flash 40色谱系统和KP-Sil，60A(Biotage，Charlottesville，VA，USA)或用使用硅胶(230-400目)填料的快速柱色谱或用使用Waters 2767 Sample Manager，C-18反相柱，30 X 50mm，流速75mL/min的HPLC来进行的。Flash 40 Biotage系统和快速柱色谱所用的典型溶剂是二氯甲烷、甲醇、乙酸乙酯、己烷、丙酮、氨水(或氢氧化铵)和三乙胺。用于反相HPLC的典型溶剂是不同浓度的乙腈和含有0.1％三氟乙酸的水。
应当理解的是，本发明的有机化合物可表现出互变异构现象。因为本说明书中的化学结构仅能表示可能的互变异构形式中的一种，所以应当理解的是，本发明包括所画出的结构的任何互变异构形式。
应当理解的是，本发明并不限于本文用来进行举例说明的实施方案，而是包括来自以上公开范围内的其所有该类形式。
如下面流程图1中所示(Dora等人，Journal of Heterocyclic Chemistry20：691-696(1983))，可以经由二溴查耳酮来进行查耳酮合成的修改。
流程图1.
Figure A200780022548D00491
除了利用查耳酮或Biginelli型反应来合成嘧啶酮的方法外，还可以如流程图2中所示的那样(Sasakura等人，Synthetic Communications18：259-264(1988)，Lee等人，Tetrahedron 61：8705-8710(2005)；Dora等人，Journal of Heterocyclic Chemistry 20：691-696(1983)和Baddar等人，Journalof Heterocyclic Chemistry 13：257-268(1976))，由乙炔和脲来合成嘧啶酮。
流程图2.
Figure A200780022548D00492
4-芳基-6-烷基嘧啶酮可以用与合成4，6-二芳基嘧啶酮所用方法类似的方法由二酮来合成(流程图3，Walker等人WO 2003037896(2003)第116页；Carter等人US 6,780,870(2004)第14页；Cai等人WO 05121106(2005)第71页；和Abdel-Rahman等人，Egyptian Journal of Chemistry30：231-238(1989))。
流程图3.
Figure A200780022548D00501
通过用标准酸条件将杂芳族甲基酮和吲唑醛结合来引入芳族杂环(脲，HCl，i-PrOH，流程图4(a)，Bhendkar等人，W.Oriental Journal ofChemistry 19：731-732(2003))。也可以用其它方法来引入五元杂环(流程图4(b)和4(c)，Babu等人，Indian Journal of Pharmaceutical Sciences66：647-652(2004))。
流程图4.
Figure A200780022548D00511
如流程图5(George等人，New Journal of Chemistry 27：568-576(2003))中所示，N-芳基4，6-二烷基嘧啶酮、N-烷基4-烷基-6-芳基嘧啶酮和N-烷基6-烷基-4-芳基嘧啶酮也可以由N-芳基或N-烷基脲和相应的二酮来合成。
流程图5.
Figure A200780022548D00521
嘧啶酮的C-5上的小烷基可以通过将二酮去质子化和烷基化(流程图6，Cai WO05121106(2005)，第71页)或通过Wittig反应(流程图7，Marzinzik等人，Journal of Organic Chemistry 63：723-727(1998))而被引入，从而得到相应的查耳酮，其可进一步被官能化，从而形成所需的嘧啶酮。
流程图6.
Figure A200780022548D00522
流程图7.
Figure A200780022548D00523
已经建立了多种方法来引入吡啶酮的C-4和C-6上的芳基、烷基和杂芳基取代基以及C-3上的甲基。流程图8对这些方法进行了举例说明(8(a)Katritzky等人，Journal of Organic Chemistry 62：6210-6214(1997)；8(b)Wang等人，Synthesis 487-490(2003))。
流程图8.
此外，N-烷基化的吡啶酮和在C3或C5上被取代的吡啶酮也可以通过流程图9所示的氨基氮杂丁二烯化学过程来获得(Hoberg等人，SynthesisNo.3，142-144(1970)，Wittig等人，Justus Liebigs Annalen der Chemie1075-1081(1973)，Barluenga等人，Tetrahedron Letters 29：4855-4858(1988))。
流程图9.
Figure A200780022548D00532
氮杂吲唑(或1H-吡唑并吡啶)类似物可通过由溴甲基硝基吡啶合成必需的5-溴氮杂吲唑来制备(流程图10，Xie等人WO 05092890(2005)第300页)。合成了溴氮杂吲唑后，合成方法与4-吲唑-6-芳基嘧啶酮系列的合成方法相同。
流程图10.
Figure A200780022548D00541
如流程图11中所示(Li等人US 2003/0199511(2003)，第120页)，吲唑的C-3位可以被烷基取代。除甲基外，也可以用其它格氏试剂在吲唑的C-3上引入其它烷基和芳基如乙基、丙基、异-丙基、苯基和被取代的烷基和芳基。
流程图11.
Figure A200780022548D00542
C-3上也可以引入其它取代基如甲氧基、脂族杂环如哌啶和亚甲基连接的杂环如吗啉(流程图12，Allen等人WO 9749698(1997)第84页)。
流程图12.
Figure A200780022548D00551
如流程图13中着重表示的那样，也可以在吲唑的C-3上引入较长链的脂族基团(Sasakura等人，Synthetic Communications 18：259-264(1988))。
流程图13.
实施例1
4-(1H-吲唑-5-基)-6-(4-苯氧基苯基)嘧啶-2(1H)-酮的合成
步骤1：
Figure A200780022548D00561
1H-吲唑-5-甲醛(2)在-78℃下，将正-丁基锂(35.0mL，87.5mmol)缓慢加入到5-溴吲唑(1，4.98g，25.3mmol)在THF(60mL)中的溶液中。30分钟后，将该溶液历经30分钟温热至-40℃，然后冷却至-78℃。加入DMF(3.1mL，77.5mmol)。15分钟后，将反应烧瓶从干冰/丙酮浴上取下并在室温下搅拌2.5小时。用H2O将溶液淬灭。用EtOAc萃取水层。将有机层用H2O和盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤，浓缩，得到金色的油状物。将该粗品物质用柱色谱进行纯化(0-100％ EtOAc/己烷)，得到浅黄色固体形式的2(1.91g，收率为52％)。LCMS m/z 147.0(MH+)，Rt 1.53min。
合成1H-吲唑-5-甲醛的参考资料：E.Piatnitski，WO 2005/000813，第37页。
步骤2：
Figure A200780022548D00562
4-(1H-吲唑-5-基)-6-(4-苯氧基苯基)嘧啶-2(1H)-酮(3)将1H-吲唑-5-甲醛(2，0.27g，1.85mmol)和脲(0.33g，5.45mmol)在室温下在i-PrOH(18mL)和HCl(浓，1.8mL)中搅拌过夜。届时，将粘稠的溶液分成九等份。向一份中加入4′-苯氧基苯乙酮(0.0531g，0.25mmol)和另外的脲。将该反应在80℃下在密封的小瓶中加热过夜。然后将反应混合物冷却，浓缩，用反相HPLC进行纯化，得到TFA盐形式的3(9.6mg，纯度为99％)。LCMS m/z381.1(MH+)，Rt 2.39min。
酸催化的Biginelli的参考资料：Sedova等人，Chem.HeterocyclicCompounds 40(2)：194-202(2004)。
实施例2-16
下面表1中的化合物是用上述方法和操作合成的，并且是用得自高级化学研发公司(Advanced Chemistry Development，Inc.)，110 Yonge Street14th Floor，Toronto，Ontario，加拿大的ACD Name for ChemSketch 10.00版软件(2006年8月31日)命名的。
表1
Figure A200780022548D00571
Figure A200780022548D00591
表1中的化合物是根据上面提供的实施例合成的。根据生物学方法1测定了这些化合物的CDC7抑制(IC50)值。
如实施例83(CDC7/DBF4抑制的体外试验)所述，表1中的各化合物在CDC7/DBF4抑制方面表现出低于1μM的IC50值。表1的许多实施例在CDC7的抑制方面表现出低于0.1μM并且甚至低于0.01μM的IC50值。为此，这些化合物各自均是优选的并且作为组成员是优选的。
实施例17-80
下面表2中的化合物可以用上述方法和操作合成，并且是用得自高级化学研发公司，110 Yonge Street 14th Floor，Toronto，Ontario，加拿大的ACD Name for ChemSketch 10.00版软件(2006年8月31日)命名的。
表2
Figure A200780022548D00592
Figure A200780022548D00601
Figure A200780022548D00621
Figure A200780022548D00631
Figure A200780022548D00651
Figure A200780022548D00661
Figure A200780022548D00671
实施例79
CDC7/DBF4抑制的体外试验
通过顺序加入0.5μL位于DMSO中的本发明的化合物、10μL 0.5μM位于反应缓冲液中的ATP、10μL 2.2nM cdc7/dbf4(杆状病毒衍生的)、4.4nM位于反应缓冲液中的MCM-2如下在OptiPlate-384板(PerkinElmer，6007290)上进行20.5μL激酶反应。使该反应在定轨振荡器上在室温下进行1小时。通过加入10μL包含链霉抗生物素-涂布的供体小珠和蛋白A轭合的受体小珠的检测缓冲液(54μg/ml)以及1:4000稀释的针对磷酸丝氨酸108-MCM-2的兔抗体(Bethyl Labs)终止反应。将混合物在室温下在黑暗中孵育4小时。然后在PerkinElmer Fusion仪上对板进行读数。反应缓冲液包含50mM Hepes(pH 7.2-7.5)、10mM MgCl2、1mM二硫苏糖醇(DTT)、亮抑蛋白酶肽(10μg/ml)和牛血清白蛋白(BSA)(0.2mg/ml)。检测缓冲液包含25mM Tris(pH 7.5)、400mM NaCl、100mM EDTA、0.3％ BSA和0.05％吐温20。
选择在上面的cdc7/db4试验中对激酶反应的抑制>70％的本发明的代表性化合物来进行进一步分析和确认。将供试化合物用DMSO稀释至0.93μM或1.39μM的浓度，向使用上述试验条件和方法的试验孔中加入0.5μL各供试溶液。测得的实施例2-16的供试化合物的抑制百分比如表3中所示：
表3
 
实施例 化合物名称 试验浓度(μM) 抑制作用(％)
2 6-(3-氟苯基)-4-(1H-吲唑-5-基)嘧啶-2(1H)-酮 0.93 82
3 6-(2-氟-4-甲氧基苯基)-4-(1H-吲唑-5-基)嘧啶-2(1H)-酮 0.93 81
4 6-(2，5-二甲氧基苯基)-4-(1H-吲唑-5-基)嘧啶-2(1H)-酮 0.93 94
 
实施例 化合物名称 试验浓度(μM) 抑制作用(％)
5 6-(3-氟-4-甲氧基苯基)-4-(1H-吲唑-5-基)嘧啶-2(1H)-酮 0.93 75
6 6-(4-乙基苯基)-4-(1H-吲唑-5-基)嘧啶-2(1H)-酮 0.93 83
7 6-(3，4-二甲氧基苯基)-4-(1H-吲唑-5-基)嘧啶-2(1H)-酮 0.93 62
8 4-(1H-吲唑-5-基)-6-[3-(三氟甲基)苯基]嘧啶-2(1H)-酮 0.93 55
9 6-(2-氟苯基)-4-(1H-吲唑-5-基)嘧啶-2(1H)-酮 0.93 87
10 6-(3-氯苯基)-4-(1H-吲唑-5-基)嘧啶-2(1H)-酮 0.93 98
11 4-(1H-吲唑-5-基)-6-苯基嘧啶-2(1H)-酮 1.39 98
12 6-[3-(苄氧基)苯基]-4-(1H-吲唑-5-基)嘧啶-2(1H)-酮 1.39 98
13 4-(1H-吲唑-5-基)-6-(4-吗啉-4-基苯基)嘧啶-2(1H)-酮 1.39 92
14 4-(1H-吲唑-5-基)-6-(4-苯氧基苯基)嘧啶-2(1H)-酮 1.39 84
15 6-[4-(苄氧基)苯基]-4-(1H-吲唑-5-基)嘧啶-2(1H)-酮 0.93 58
16 4-(1H-吲唑-5-基)-6-(4-哌嗪-1-基苯基)嘧啶-2(1H)-酮 0.93 94
实施例80
CDC7 pS108 MCM2靶标调节试验
将细胞接种到96孔组织培养板中的100ul细胞生长培养基中并在37℃、5％ CO2下孵育过夜。第二天，加入各种浓度的化合物，产生的DMSO终浓度为0.5％。将细胞与化合物一起在37℃、5％ CO2下孵育4小时。然后将细胞用PBS缓冲液洗涤，在100μL细胞裂解缓冲液中进行裂解并向分开的高结合、单斑点、MSD 96-孔板(Meso Scale Discovery，MSD，Gaithersburg，Maryland，USA)中加入25μL细胞裂解物并在4℃下孵育1小时。用一块板使用Bethyl兔抗-MCM2(BL248)抗体来检测总MCM2，用另一块板使用Bethyl兔抗-pSer108 MCM2(BL1539)抗体来检测磷酸化的MCM2。
洗涤各孔并将其用第一抗体孵育过夜。在洗涤步骤后，加入第二抗体(用钌标记的MSD Sulfo-Tag IgG抗体)并在4℃下孵育1小时。将板用1xMSD Tris洗涤缓冲液洗涤4次并向各孔中加入MSD读数缓冲液(具有表面活性剂的MSD读数缓冲液T(4x)，用水稀释至1.5x)。在MSD(Meso ScaleDiscovery)ElectroChemiLuminescent(ECL)读板器上对板进行读数。该读数使得可以测定在存在或不存在影响细胞中CDC7激酶活性的物质的情况下MCM2 Ser108的磷酸化水平。
虽然已经对例证性的实施方案进行了说明和描述，但是应当意识到的是，可以在不脱离本发明的主旨和范围的情况下进行各种变化。

Claims (30)

  1. 其中要求了排他性权利或特权的本发明的实施方案如下所定义：
    1.式(I)的化合物或其立体异构体、互变异构体或药学上可接受的盐：
    Figure A200780022548C00021
    其中
    X是N或CR7；
    Y是N或CR8；
    Z是N或CR4；
    R1选自H、卤素、烷基、被取代的烷基、羟基、烷氧基、被取代的烷氧基、氨基和被取代的氨基；
    R2选自烷基、被取代的烷基、烷氧基、被取代的烷氧基、氨基、被取代的氨基、芳基氧基、被取代的芳基氧基、杂芳基氧基、被取代的杂芳基氧基、环烷基氧基、被取代的环烷基氧基、杂环基氧基、被取代的杂环基氧基、芳基、被取代的芳基、杂芳基、被取代的杂芳基、环烷基、被取代的环烷基、杂环基和被取代的杂环基；
    R3是H、烷基、被取代的烷基、芳基或被取代的芳基；
    R4、R6、R7和R8独立地选自H、卤素、烷基、被取代的烷基、羟基、烷氧基、被取代的烷氧基、氨基和被取代的氨基；
    R5选自H、烷基、被取代的烷基、烷氧基、被取代的烷氧基、酰基、酰基氨基、酰基氧基、氨基、被取代的氨基、氨基羰基、氨基硫代羰基、氨基羰基氨基、氨基硫代羰基氨基、氨基羰氧基、氨基磺酰基、氨基磺酰基氧基、氨基磺酰基氨基、脒基、羧基、羧酸酯、(羧酸酯)氨基、(羧酸酯)氧基、氰基、卤素、羟基、硝基、SO3H、磺酰基、被取代的磺酰基、磺酰基氧基、硫代酰基、硫羟基、烷硫基、被取代的烷硫基、芳基、被取代的芳基、杂芳基、被取代的杂芳基、环烷基、被取代的环烷基、杂环基和被取代的杂环基。
  2. 2.权利要求1的化合物，其中X是CR7且Z是CR4。
  3. 3.权利要求1的化合物，其中R1是H。
  4. 4.权利要求1的化合物，其中R2是芳基或被取代的芳基。
  5. 5.权利要求1的化合物，其中R3是H。
  6. 6.权利要求2的化合物，其中R4、R6和R7是H或卤素。
  7. 7.权利要求2的化合物，其中R4、R6和R7是H。
  8. 8.权利要求1的化合物，其中R5选自H、卤素、羟基、烷基、被取代的烷基、氨基、被取代的氨基、烷氧基和被取代的烷氧基。
  9. 9.权利要求1的化合物，其中R5是H。
  10. 10.权利要求1的化合物，其中R2是苯基或被取代的苯基。
  11. 11.权利要求1的化合物，其中Y是N。
  12. 12.权利要求1的化合物，其中Y是CR8且X和Z中仅有一个是N。
  13. 13.式(II)的化合物或其立体异构体、互变异构体或药学上可接受的盐：
    Figure A200780022548C00031
    其中
    R4、R6和R7独立地选自H、卤素、烷基、被取代的烷基、羟基、烷氧基、被取代的烷氧基、氨基和被取代的氨基；
    R5选自H、烷基、被取代的烷基、烷氧基、被取代的烷氧基、酰基、酰基氨基、酰基氧基、氨基、被取代的氨基、氨基羰基、氨基硫代羰基、氨基羰基氨基、氨基硫代羰基氨基、氨基羰氧基、氨基磺酰基、氨基磺酰基氧基、氨基磺酰基氨基、脒基、羧基、羧酸酯、(羧酸酯)氨基、(羧酸酯)氧基、氰基、卤素、羟基、硝基、SO3H、磺酰基、被取代的磺酰基、磺酰基氧基、硫代酰基、硫羟基、烷硫基、被取代的烷硫基、芳基、被取代的芳基、杂芳基、被取代的杂芳基、环烷基、被取代的环烷基、杂环基和被取代的杂环基；
    R9、R10、R11、R12和R13独立地选自H、烷基、被取代的烷基、烷氧基、被取代的烷氧基、酰基、酰基氨基、酰基氧基、氨基、被取代的氨基、氨基羰基、氨基硫代羰基、氨基羰基氨基、氨基硫代羰基氨基、氨基羰氧基、氨基磺酰基、氨基磺酰基氧基、氨基磺酰基氨基、脒基、羧基、羧酸酯、(羧酸酯)氨基、(羧酸酯)氧基、氰基、卤素、羟基、硝基、SO3H、磺酰基、被取代的磺酰基、磺酰基氧基、硫代酰基、硫羟基、烷硫基、被取代的烷硫基、芳基、被取代的芳基、杂芳基、被取代的杂芳基、环烷基、被取代的环烷基、杂环基、被取代的杂环基、芳基氧基、被取代的芳基氧基、杂芳基氧基、被取代的杂芳基氧基、环烷基氧基、被取代的环烷基氧基、杂环基氧基和被取代的杂环基氧基。
  14. 14.权利要求13的化合物，其中R9、R10、R11、R12和R13中至少一个是烷氧基。
  15. 15.权利要求13的化合物，其中R9、R10、R11、R12和R13中至少一个是卤素、烷基或被取代的烷基。
  16. 16.权利要求13的化合物，其中R10选自卤素、烷基、被取代的烷基、烷氧基、被取代的烷氧基、芳基、被取代的芳基、杂芳基、被取代的杂芳基、环烷基、被取代的环烷基、杂环基、被取代的杂环基、芳基氧基、被取代的芳基氧基、杂芳基氧基、被取代的杂芳基氧基、环烷基氧基、被取代的环烷基氧基、杂环基氧基和被取代的杂环基氧基。
  17. 17.权利要求13的化合物，其中R4、R6和R7是H或卤素。
  18. 18.权利要求13的化合物，其中R4、R6和R7是H。
  19. 19.权利要求13的化合物，其中R5选自H、卤素、羟基、烷基、被取代的烷基、氨基、被取代的氨基、烷氧基和被取代的烷氧基。
  20. 20.权利要求13的化合物，其中R5是H。
  21. 21.权利要求1的化合物，其选自6-(3-氟苯基)-4-(1H-吲唑-5-基)嘧啶-2(1H)-酮、6-(2-氟-4-甲氧基苯基)-4-(1H-吲唑-5-基)嘧啶-2(1H)-酮、6-(2，5-二甲氧基苯基)-4-(1H-吲唑-5-基)嘧啶-2(1H)-酮、6-(3-氟-4-甲氧基苯基)-4-(1H-吲唑-5-基)嘧啶-2(1H)-酮、6-(4-乙基苯基)-4-(1H-吲唑-5-基)嘧啶-2(1H)-酮、6-(3，4-二甲氧基苯基)-4-(1H-吲唑-5-基)嘧啶-2(1H)-酮、4-(1H-吲唑-5-基)-6-[3-(三氟甲基)苯基]嘧啶-2(1H)-酮、6-(2-氟苯基)-4-(1H-吲唑-5-基)嘧啶-2(1H)-酮、6-(3-氯苯基)-4-(1H-吲唑-5-基)嘧啶-2(1H)-酮、4-(1H-吲唑-5-基)-6-苯基嘧啶-2(1H)-酮、6-[3-(苄氧基)苯基]-4-(1H-吲唑-5-基)嘧啶-2(1H)-酮、4-(1H-吲唑-5-基)-6-(4-吗啉-4-基苯基)嘧啶-2(1H)-酮、4-(1H-吲唑-5-基)-6-(4-苯氧基苯基)嘧啶-2(1H)-酮、6-[4-(苄氧基)苯基]-4-(1H-吲唑-5-基)嘧啶-2(1H)-酮和4-(1H-吲唑-5-基)-6-(4-哌嗪-1-基苯基)嘧啶-2(1H)-酮或其立体异构体、互变异构体或药学上可接受的盐。
  22. 22.权利要求1的化合物，其中X和Z中仅有一个是N。
  23. 23.药物组合物，其包含权利要求1-22中任意一项的化合物和药学上可接受的赋形剂。
  24. 24.通过抑制CDC7活性来治疗病症的方法，其包括给需要该类治疗的患者施用有效量的权利要求1-22中任意一项的化合物。
  25. 25.权利要求24的方法，其中所述病症是癌症。
  26. 26.权利要求25的方法，其中所述癌症包含表达CDC7的细胞。
  27. 27.抑制MCM2的磷酸化的方法，其包括使MCM2、CDC7和ATP与权利要求1-22中任意一项的化合物接触。
  28. 28.权利要求1-22中任意一项的化合物作为药物的用途。
  29. 28.权利要求1-22中任意一项的化合物用于治疗癌症的用途。
  30. 29.权利要求1-22中任意一项的化合物在制备用于治疗癌症的药物中的用途。
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