TW202241935A - 具有可調適受體專一性之嵌合抗原受體系統 - Google Patents

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麥克爾 弗朗西斯 納索
路易斯 吉拉 博爾格斯
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Abstract

本發明提供嵌合抗原受體(CAR)，特定言之具有可調適受體專一性之CAR (arCAR)。亦提供CAR之多肽及其他相關分子、聚核苷酸、載體及包含其之細胞組合物。亦提供包含本發明之該等多肽、聚核苷酸、載體或細胞之醫藥組合物及其在治療個體之疾病中的用途。

Description

具有可調適受體專一性之嵌合抗原受體系統
本申請案係關於嵌合抗原受體(CAR)，特定言之具有可調適受體專一性之CAR (arCAR)，及其在免疫療法(例如授受細胞療法)中之用途。
授受細胞療法(ACT)典型地涉及自供體分離細胞、活體外培養及/或處理細胞，且隨後將細胞轉移至患者以治療疾病。為了使得細胞能夠靶向特定抗原，細胞通常經嵌合抗原受體(CAR)工程改造。習知CAR具有固定設計；因此，一種類型之CAR T細胞通常可僅靶向一種抗原抗原決定基。此剛性設計限制臨床應用且產生格外高的製造成本。儘管存在各種交換CAR平台方法，但此等抗原專一性CAR通常在訂製基礎上產生。
因此，仍需要經改良之具有用於調節CAR之內置式及方便機制之通用CAR平台以容易地調適CAR之專一性以改良使用授受細胞療法治療疾病之療法及方法。
在一個態樣中，本文提供一種具有可調適受體專一性組分之通用嵌合抗原受體系統(arCAR)，其包含： (i)        具有嵌合抗原受體的免疫效應細胞，該嵌合抗原受體包含第一多肽，該第一多肽包含(a)胞外標記結合域、(b)跨膜域及(c)至少一個胞內信號傳導域；及 (ii)      第二多肽，其包含(a)結合至目標細胞上之至少一種抗原之抗原結合域，及(b)由該嵌合抗原受體之第一多肽的標記結合域識別之標記； 其中：(i) 該標記包含抗體或其抗原結合片段，或替代骨架且該標記結合域包含結合至該標記之抗個體基因型分子，或 (ii)   該標記包含結合至標記結合域之抗個體基因型分子，且該標記結合域包含抗體或其抗原結合片段或替代骨架。
在一些實施例中，抗個體基因型分子結合至抗體、其抗原結合片段或替代骨架之至少一個抗原結合區。在一些實施例中，抗個體基因型分子結合至抗體或其抗原結合片段之至少一個互補決定區(CDR)。
在一些實施例中，第二多肽之抗原結合域包含抗體或其抗原結合片段或替代骨架。在一些實施例中，抗個體基因型分子為抗個體基因型抗體或其抗原結合片段，或抗個體基因型替代骨架。
在一些實施例中，抗原結合片段為Fab片段、Fab'片段、F(ab')2片段、scFv片段、Fv片段、dsFv雙功能抗體、VHH、VNAR、單域抗體(sdAb)或奈米抗體、dAb片段、Fd'片段、Fd片段、重鏈可變區、經分離之互補決定區(CDR)、雙功能抗體、三功能抗體或十功能抗體。
在一些實施例中，胞外標記結合域、抗原結合域或標記中之至少一者包含單域抗體或奈米抗體。在一些實施例中，胞外標記結合域、抗原結合域或標記中之至少一者包含VHH。在一些實施例中，胞外標記結合域及標記各自包含VHH。在一些實施例中，胞外標記結合域、標記及抗原結合域各自包含VHH。
在一些實施例中，抗原結合片段、胞外標記結合域、抗原結合域及標記中之一或多者至少部分包含與選自由以下組成之群的序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的多肽序列：SEQ ID NO.: 84、86、88、90、92、94、96、98、100、102、104、106、108及110-133。
在一些實施例中，胞外標記結合域、抗原結合域或標記中之至少一者包含scFv。
在一些實施例中，替代骨架為阿非林(Affilin)或生替林(Centyrin)。
在一些實施例中，標記包含抗體或其抗原結合片段或替代骨架。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段或替代骨架結合至來自非人類來源之多肽。在一些實施例中，衍生自非人類來源之該多肽為呼吸道融合性病毒(RSV) F蛋白、李氏菌內化蛋白(Listeria internalin)、眼鏡蛇磷脂酶A2、伊波拉核蛋白(Ebola nucleoprotein)、疱疹單純型病毒(herpes simplex virus；HSV)糖蛋白D、乳球菌噬菌體受體結合蛋白(RBP)、嗜熱脂肪地芽孢桿菌( Geobacillus stearothermophilus)、蓖麻毒素或雞卵白溶菌酶。
在一些實施例中，抗原結合域結合至至少一種腫瘤抗原或自體免疫抗原。在一些實施例中，至少一種抗原與相同腫瘤或自體免疫疾病相關。在一些實施例中，腫瘤抗原與神經膠母細胞瘤、卵巢癌、子宮頸癌、頭頸癌、肝癌、前列腺癌、胰臟癌、腎細胞癌、膀胱癌或血液惡性病相關。在一些實施例中，與神經膠母細胞瘤相關之腫瘤抗原為HER2、EGFRvIII、EGFR、CD133、PDGFRA、FGFR1、FGFR3、MET或IL13Rα2。在一些實施例中，與卵巢癌相關之腫瘤抗原為FOLR1、FSHR、MUC16、MUC1、間皮素、CA125、EpCAM、EGFR、PDGFRα或B7H4。在一些實施例中，與子宮頸癌或頭頸癌相關之腫瘤抗原為GD2、MUC1、間皮素、HER2或EGFR。在一些實施例中，與肝癌相關之腫瘤抗原為緊密連接蛋白18.2、GPC-3、EpCAM、cMET或AFP。
在一些實施例中，跨膜域進一步包含鉸鏈域。在一些實施例中，跨膜域及/或鉸鏈域源於CD8或CD28。
在一些實施例中，至少一個胞內信號傳導域包含CD3ζ信號傳導域。
在一些實施例中，至少一個胞內信號傳導域包含一或多個共刺激信號傳導域。在一些實施例中，一或多個共刺激信號傳導域源於CD28、41BB、IL2Rb、CD40、OX40、CD80、CD86、CD27、ICOS、NKG2D、DAP10、DAP12或2B4 (CD244)。
在各種實施例中，第二多肽包含N端處之抗原結合域及C端處之標記。在一些實施例中，第二多肽包含C端處之抗原結合域及N端處之標記。
在各種實施例中，第二多肽為可溶性多肽。
在本文所描述之arCAR之各種實施例中，免疫效應細胞為T細胞、自然殺手(NK)細胞、細胞毒性T淋巴細胞(CTL)、調節T細胞或腫瘤浸潤性淋巴細胞(TIL)、樹突狀細胞或巨噬細胞。在一些實施例中，免疫效應細胞衍生自誘導性富潛能幹細胞(induced pluripotent stem cell；iPSC)。在一些實施例中，免疫效應細胞為衍生自誘導性富潛能幹細胞(iPSC)之T細胞或NK細胞。
在本文所描述之arCAR之各種實施例中，arCAR進一步包含一或多種多肽，其各自包含(a)結合至獨特抗原之抗原結合域及(b)由第一多肽之標記結合域識別之標記。
在另一態樣中，本文提供一種包含兩種或更多種本文所描述之arCAR的arCAR系統，其中各arCAR包含一對獨特的標記及標記結合域。
在另一態樣中，本文提供一種編碼本文所描述之arCAR系統之第一多肽的聚核苷酸。
在另一態樣中，本文提供一種編碼本文所描述之arCAR系統之第二多肽的聚核苷酸。
在另一態樣中，本文提供一種編碼本文所描述之arCAR系統之第一多肽及第二多肽的聚核苷酸。
在本文所描述之聚核苷酸之一些實施例中，抗原結合片段、胞外標記結合域、抗原結合域及標記中之一或多者至少部分由與選自由以下組成之群的序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的聚核苷酸序列編碼：SEQ ID NO.: 83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107及109。
在另一態樣中，本文提供一種包含本文所描述之聚核苷酸的重組載體。在一些實施例中，載體為質體。
在另一態樣中，本文提供一種宿主細胞，其包含表現本文所描述之arCAR系統之第一多肽的聚核苷酸。
在另一態樣中，本文提供一種宿主細胞，其包含表現本文所描述之arCAR系統之第二多肽的聚核苷酸。
在另一態樣中，本文提供一種醫藥組合物，其包含本文所描述之arCAR系統之免疫效應細胞及醫藥學上可接受之載劑及/或賦形劑。
在另一態樣中，本文提供一種醫藥組合物，其包含本文所描述之arCAR系統之第二多肽及醫藥學上可接受之載劑及/或賦形劑。
在另一態樣中，本文提供一種套組，其包含含有本文所描述之arCAR系統之免疫效應細胞的醫藥組合物及組合地包含arCAR系統之第二多肽的醫藥組合物。
在另一態樣中，本文提供一種製備包含表現第一多肽之聚核苷酸之宿主細胞的方法，其包含將編碼arCAR系統之第一多肽之聚核苷酸或包含聚核苷酸之重組載體引入細胞中。
在另一態樣中，本文提供一種製備包含表現第二多肽之聚核苷酸之宿主細胞的方法，其包含將編碼arCAR系統之第二多肽之聚核苷酸或包含聚核苷酸之重組載體引入細胞中。
在另一態樣中，本文提供一種治療有需要之個體之疾病的方法，其包含向個體投與治療有效量之 (i)        包含嵌合抗原受體之免疫效應細胞，該嵌合抗原受體包含本文所描述之arCAR的第一多肽，及 (ii)      該arCAR之第二多肽或編碼該第二多肽之聚核苷酸或包含該第二多肽之宿主細胞。
在一些實施例中，第二多肽係在免疫效應細胞之前、之後或與其一起投與。
在另一態樣中，本文提供一種治療有需要之個體之疾病的方法，其包含向該個體投與治療有效量之 (i)        包含兩種或更多種arCAR之第一多肽的免疫效應細胞，其中兩種或更多種arCAR各自包含一對獨特的標記及標記結合域，及 (ii)      該兩種或更多種arCAR之第二多肽，或編碼該等第二多肽之一或多種聚核苷酸，或包含該等第二多肽之一或多種宿主細胞。
在本文所描述之治療方法之一些實施例中，免疫效應細胞為T細胞、自然殺手(NK)細胞、細胞毒性T淋巴細胞(CTL)、調節T細胞或腫瘤浸潤性淋巴細胞(TIL)、樹突狀細胞或巨噬細胞。在一些實施例中，免疫效應細胞衍生自iPSC。在一些實施例中，免疫效應細胞組成性表現第一多肽。
在一些實施例中，疾病為癌症或自體免疫疾病。在一些實施例中，癌症為神經膠母細胞瘤、卵巢癌、子宮頸癌、頭頸癌、肝癌、前列腺癌、胰臟癌、腎細胞癌、膀胱癌或血液惡性病。
在一些實施例中，免疫效應細胞及一或多種第二多肽同時投與。在一些實施例中，免疫效應細胞及一或多種第二多肽依序投與。
在一些實施例中，免疫效應細胞為自體細胞。在一些實施例中，免疫效應細胞為同種異體細胞。
在一些實施例中，個體為哺乳動物。在一些實施例中，個體為人類。
相關申請案之交叉參考
本申請案主張2020年12月18日申請之美國臨時專利申請案第63/127,587號之權益，該申請案以全文引用之方式併入本文中。 以電子方式提交之序列表之參考
本申請案含有序列表，該序列表係以創建日期為2021年12月15日檔案名稱為「SequenceListing_ST25.txt」且大小為103,886位元組之ASCII格式序列表經由EFS-Web以電子方式提交。此經由EFS-Web提交之序列表為說明書之一部分且以全文引用之方式併入本文中。
先前技術及本說明書通篇引用或描述各種出版物、文章及專利；該等參考文獻中之每一者以全文引用之方式併入本文中。本說明書中所包括之文獻、操作、材料、器件、文章或類似者之論述係出於提供本發明之內容的目的。此類論述並非承認任何或所有此等內容形成關於所揭示或所主張之任何發明之先前技術的一部分。
本申請案尤其提供具有可調適的受體專一性組分之通用嵌合抗原受體系統(arCAR)及其在免疫療法(例如授受細胞療法)中之用途。此arCAR平台提供使用標記多肽親和力調節受體且允許多種受體存在於細胞療法上之內置式及方便機制。此類arCAR可使得能夠適合用於目的細胞療法。 定義
如本文所用之術語「嵌合抗原受體」或「CAR」通常係指包含胞外目標結合域、跨膜域及包含信號傳導域及視情況存在之至少一個共刺激信號傳導域之細胞質域的細胞表面受體，該等均以並不一起天然存在於單一蛋白質上組合。此特定言之包括受體，其中胞外域及細胞質域並不一起天然地存在於單一受體蛋白上。
如本文所用之術語「具有可調適受體專一性組分之嵌合抗原受體」或「arCAR」係指二組分CAR系統，其中受體之胞外目標結合域可與多種不同抗原結合部分偶合。除非另外指明，否則本文所用之術語「嵌合抗原受體」或「CAR」意謂涵蓋本文所描述之「具有可調適受體專一性組分之嵌合抗原受體」或「arCAR」。本發明之arCAR系統可與免疫效應細胞，諸如包括T細胞及自然殺手(NK)細胞之淋巴細胞一起使用，該等免疫效應細胞可衍生自諸如誘導性富潛能幹細胞(iPSC)之幹細胞。
如本文所用之術語「免疫效應細胞」意謂分化成能夠調節或實現專一性免疫反應之形式的細胞。此類細胞可包括適用於療法之成熟淋巴細胞，包括(但不限於)：細胞毒性T細胞、輔助T細胞、自然殺手細胞及腫瘤浸潤性淋巴細胞(TIL)，且亦可包括樹突狀細胞或巨噬細胞。
本文中之術語「抗體」係以最廣泛意義使用且包括多株及單株抗體，包括完整抗體及功能性(抗原結合)抗體片段，包括抗原結合片段(Fab)、F(ab')2片段、Fab'片段、Fv片段、scFv片段、重組IgG (rIgG)片段、單鏈抗體片段，包括單鏈可變片段(scFv)及單域抗體(例如VHH、VNAR、sdAb、sdFv)片段或奈米抗體、Fd'片段、Fd片段、重鏈可變區或經分離之互補決定區(CDR)。該術語涵蓋免疫球蛋白之經基因工程改造及/或以其他方式修飾之形式，諸如胞內抗體、肽體、嵌合抗體、完全人類抗體、人類化抗體，及異結合抗體、多專一性(例如雙專一性)抗體、雙功能抗體、三功能抗體、四功能抗體、十功能抗體、串聯二-scFv及串聯三-scFv。除非另有說明，否則術語「抗體」應理解為涵蓋其功能性抗體片段。該術語亦涵蓋完整或全長抗體，包括任何類別或子類之抗體，包括IgG及其子類(例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4)、IgM、IgY、IgE、IgA及IgD。
術語「抗個體基因型分子」係指專一性識別抗體(諸如抗原結合片段)、專一性靶向抗體及/或專一性結合至抗體之個體基因位(idiotope)之分子(例如肽、蛋白質、抗體或抗體片段、替代骨架)。抗體之個體基因位可包括(但未必限於)抗體之互補決定區(CDR)中之一或多者內之殘基、抗體之可變區及/或此類可變區及/或此類CDR之部分或全部，及/或前述之任何組合。CDR可為選自由以下組成之群的一或多者：CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3、CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3。抗體之可變區可為重鏈可變區、輕鏈可變區，或重鏈可變區與輕鏈可變區之組合。抗體之重鏈可變區及/或輕鏈可變區之部分片段或部分可為包括抗體之重鏈可變區或輕鏈可變區內之2個或更多個、5個或更多個或10個或更多個連續胺基酸，例如約2至約100個、約5至約100個、約10至約100個、約2至約50個、約5至約50個或約10至約50個連續胺基酸之片段；個體基因位可包括胺基酸之多個非連續伸長段。抗體之重鏈可變區及輕鏈可變區之部分片段可為包括可變區內之2個或更多個、5個或更多個或10個或更多個連續胺基酸，例如約2至約100個、約5至約100個、約10至約100個、約2至約50個、約5至約50個或約10至約50個連續胺基酸之片段，且在一些實施例中含有一或多個CDR或CDR片段。CDR片段可為在CDR內之連續或非連續的2個或更多個，或5個或更多個胺基酸。因此，抗體之個體基因位可為抗體之重鏈可變區或輕鏈可變區內之含有一或多個CDR或一或多個CDR片段之約2至約100個、約5至約100個、約10至約100個、約2至約50個、約5至約50個或約10至約50個連續胺基酸。在另一實施例中，個體基因位可為位於抗體可變區，例如CDR位點處之單一胺基酸。
在一些實施例中，個體基因位為抗體可變部分內之任何單一抗原決定子或抗原決定基。在一些情況下，其可與抗體之實際抗原結合位點重疊，且在一些情況下，其可包含抗體之抗原結合位點外部的可變區序列。在一些實施例中，抗體之個別個體基因位之集合稱為此類抗體之「個體基因型」。
如本文所用，術語「抗原」係指能夠由抗體或抗體片段、T細胞受體或替代骨架結合之任何藥劑(例如蛋白質、肽、多醣、糖蛋白、糖脂、核酸、其部分或其組合)分子。抗原亦能夠引起免疫反應。免疫反應之實例可涉及(但不限於)抗體產生或專一性免疫勝任細胞之活化，或兩者。熟習此項技術者應理解，抗原根本不必由「基因」編碼。易於顯而易知，抗原可合成產生或可源於生物樣本或可為除多肽以外之大分子。此類生物樣本可包括(但不限於)：組織樣本、腫瘤樣本、細胞或具有其他生物組分之流體、生物體、蛋白質/抗原之次單元、殺死或滅活之全細胞或溶解物。
術語「載體」、「表現載體」及「表現構築體」可互換地使用以指代物質之組成，其可用於將所關注之核酸遞送至細胞內部且介導其在細胞內之表現。載體之最常用實例為自主複製質體及病毒(諸如腺病毒載體、腺相關病毒載體(AAV)、慢病毒載體、辛得比斯病毒(Sindbis virus)載體等)。表現構築體可在活細胞中複製，或其可以合成方式製得。在一個實施例中，表現載體包含可操作地連接至聚核苷酸(例如，編碼本文所描述之arCAR之第一多肽及/或第二多肽的聚核苷酸)之啟動子，該啟動子控制藉由RNA聚合酶之轉錄起始及聚核苷酸之表現。哺乳動物細胞表現之典型啟動子包括例如SV40早期啟動子、CMV即刻早期啟動子(參見例如美國專利第5,168,062號及第5,385,839號，該兩者均以全文引用之方式併入本文中)、小鼠乳腺腫瘤病毒LTR啟動子、腺病毒主要晚期啟動子(Ad MLP)、疱疹單純型病毒啟動子、鼠類金屬硫蛋白基因啟動子及U6或H1 RNA pol III啟動子。適用於在本發明之方法中表現本文所描述之arCAR之第一多肽及/或第二多肽的啟動子之非限制性實例包括例如突觸蛋白啟動子(神經元專一性)、CamKIIa啟動子(針對激動性神經元具有專一性)、泛素啟動子、CAG啟動子、CMV啟動子及β-肌動蛋白啟動子。此等及其他啟動子可以使用此項技術中熟知之技術自市售質體獲得。參見例如Sambrook等人，同上。強化子元素可與啟動子結合使用以提高載體之表現量。實例包括SV40早期基因強化子，如Dijkema等人, EMBO J. (1985) 4:761, the enhancer/promoter derived from the long terminal repeat (LTR) of the Rous Sarcoma Virus中所描述，如Gorman等人, Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1982b) 79:6777中所描述，其以全文引用之方式併入本文中，及源於人類CMV之元素，如Boshart等人, Cell (1985) 41:521中所描述，其以全文引用之方式併入本文中，諸如CMV內含子A序列中所包括之元素。
轉錄終止子/聚腺苷酸化信號亦可存在於表現載體中。此類序列之實例包括(但不限於)如Sambrook等人,前述中所描述之衍生自SV40之序列，以及牛生長激素終止子序列(參見例如美國專利第5,122,458號，其以全文引用之方式併入本文中)。另外，5'-UTR序列可鄰近編碼序列置放以便增強其之表現。此類序列包括UTR，其包括例如存在於諸如腦心肌炎病毒(EMCV) UTR之小核糖核酸病毒之前導序列中之內部核糖體進入位點(Internal Ribosome Entry Site；IRES) (Jang等人 J. Virol. (1989) 63:1651-1660，其以全文引用之方式併入本文中)。其他有用的小核糖核酸病毒UTR序列包括例如脊髓灰質炎前導序列、A型肝炎病毒前導序列及C型肝炎IRES。
術語「宿主細胞」意謂含有異源核酸之任何細胞。異源核酸可為載體(例如表現載體)。舉例而言，宿主細胞可為來自任何生物體之細胞，該生物體以任何方式選擇、修飾、轉化、生長、使用或處理以用於藉由細胞產生物質，例如藉由基因之細胞、DNA或RNA序列、蛋白質或酶表現。可確定適合的宿主。舉例而言，可基於載體主鏈及所要結果選擇宿主細胞。舉例而言，可將質體或黏質體引入原核生物宿主細胞中以用於複製若干類型之載體。諸如但不限於DH5α、JM109及KCB、SURE®勝任細胞及SOLOPACK Gold細胞之細菌細胞可用作用於載體複製及/或表現之宿主細胞。另外，諸如大腸桿菌LE392之細菌細胞可用作用於噬菌體病毒之宿主細胞。可用作宿主細胞之真核細胞包括(但不限於)酵母(例如YPH499、YPH500及YPH501)、昆蟲及哺乳動物。用於載體複製及/或表現之哺乳動物真核宿主細胞之實例包括(但不限於)：HeLa、NIH3T3、Jurkat、293、COS、CHO、Saos及PC12。
本發明之宿主細胞包括T細胞及自然殺手細胞，該等細胞含有編碼CAR之DNA或RNA序列及/或在細胞表面上表現CAR。宿主細胞可用於增強T細胞活性、自然殺手細胞活性、癌症治療及自體免疫疾病治療。
術語「T細胞」及「T淋巴細胞」在本文中可互換及同義地使用。如本文所用，T細胞包括胸腺細胞、原初T淋巴細胞、不成熟T淋巴細胞、成熟T淋巴細胞、休眠T淋巴細胞或活化T淋巴細胞。T細胞可為T輔助(Th)細胞，例如T輔助1 (Thl)或T輔助2 (Th2)細胞。T細胞可為輔助T細胞(HTL；CD4+ T細胞) CD4+ T細胞、細胞毒性T細胞(CTL；CD8+ T細胞)、腫瘤浸潤性細胞毒性T細胞(TIL；CD8+ T細胞)、CD4+CD8+ T細胞或任何其他T細胞亞群。適用於特定實施例之其他說明性T細胞群包括原始T細胞及記憶T細胞。亦包括「NKT細胞」，其係指表現半恆定αβ T細胞受體之特定T細胞群體，且亦表現通常與NK細胞(諸如NK1.1)相關之多種分子標誌物。NKT細胞包括NK1.1+及NK1.1-，以及CD4+、CD4-、CD8+及CD8-細胞。NKT細胞上之TCR之獨特之處在於其識別由MHC I樣分子CD Id呈現之糖脂抗原。NKT細胞由於其產生可促進發炎或免疫耐受性之細胞介素之能力而具有保護性或有害作用。亦包括「γ-δ T細胞(γδ T細胞)」，該等γδ T細胞係指針對在表面上具有不同TCR之小亞群之T細胞的特定群體，且不同於TCR由命名為α-TCR鏈及β-TCR鏈之兩個糖蛋白鏈構成的大部分T細胞，γδ T細胞中之TCR由γ鏈及δ鏈構成。γδ T細胞可在免疫監視及免疫調節中起作用，且發現其為IL-17之重要來源且誘導穩定的CD8+細胞毒性T細胞反應。亦包括「調節T細胞」或「Treg」，其係指抑制異常或過度免疫反應且在免疫耐受中起作用的T細胞。Treg細胞通常為轉錄因子FoxP3-陽性CD4+T細胞且亦可包括作為產生IL-10之CD4+T細胞的轉錄因子FoxP3-陰性調節T細胞。
術語「自然殺傷細胞」及「NK細胞」在本文中可互換及同義地使用。如本文所用，NK細胞係指具有CD 16+ CD56+及/或CD57+ TCR-表型之分化淋巴細胞。NK之特徵在於其藉由活化專一性溶胞酶結合至未能表現「自身」MHC/HLA抗原之細胞且殺死該等細胞之能力、殺死表現NK活化受體之配位體的腫瘤細胞或其他病變細胞的能力及釋放稱為刺激或抑制免疫反應之細胞介素的蛋白質分子的能力。
在本發明之某些實施例中，含有本發明之核酸構築體之細胞可藉由在表現載體中包括標誌物來活體外或活體內識別。此類標誌物將賦予細胞可識別之變化，允許容易地識別含有表現載體之細胞。通常，包括藥物選擇標誌物有助於選殖及選擇轉化子，例如賦予新黴素、嘌呤黴素、潮黴素、DHFR、GPT、吉歐黴素(zeocin)及組胺醇抗性之基因為適用的選擇標誌物。替代地，可採用酶，諸如疱疹單純型病毒胸苷激酶(tk)或氯黴素乙醯基轉移酶(CAT)。亦可採用螢光標誌物(例如綠色螢光蛋白(GFP)、EGFP或Dronpa)或免疫標誌物。可選標誌物之其他實例為熟習此項技術者所熟知的。
如本文所用，在蛋白質或多肽(例如arCAR多肽或其域)之上下文中之術語「變體」係指：(a)與其變體多肽具有至少40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、98%或99%序列一致性之多肽；(b)由與編碼其變體多肽之核苷酸序列具有至少40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、98%或99%序列一致性之核苷酸序列編碼的多肽；(c)相對於其變體多肽含有1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、或更多個胺基酸突變(亦即，添加、缺失及/或取代)之多肽；(d)由可在較高、中等或典型嚴格度混雜條件下與編碼其變體多肽之核酸混雜之核酸編碼的多肽；(e)由在較高、中等或典型嚴格度混雜條件下與編碼其變體多肽片段之核苷酸序列混雜之核苷酸序列編碼的多肽，該多肽片段具有至少20個連續胺基酸、至少30個連續胺基酸、至少40個連續胺基酸、至少50個連續胺基酸、至少75個連續胺基酸、至少100個連續胺基酸、至少125個連續胺基酸或至少150個連續胺基酸；或(f)其變體多肽之片段。
序列一致性百分比可使用熟習此項技術者已知之任何方法確定。在一特定實施例中，一致性百分比係使用序列分析套裝軟體(版本10；Genetics Computer Group, Inc., University of Wisconsin Biotechnology Center, Madison, Wisconsin)之「Best Fit」或「Gap」程式確定。已描述關於混雜條件之資訊(例如較高、中等及典型嚴格度條件)，參見例如美國專利申請公開案第US 2005/0048549號(例如段落72-73)。
在本發明之上下文中，就其係關於本文所列舉之疾病病狀中之任一者而言，術語「治療(treat/treatment)」及其類似術語意謂預防、減輕或緩解與此類病狀相關之至少一種症狀，或減緩或逆轉此類病狀之進展，或遏制、延遲發作(亦即，在疾病之臨床表現之前的時段)及/或降低罹患或惡化疾病之風險。
如本文所用，術語應用於劑量或量之「治療有效」係指在向有需要之個體投與時足以引起所需活性(例如緩解與癌症或自體免疫疾病相關之症狀)之化合物或醫藥組合物之量。應注意，當投與活性成分之組合時，組合之有效量可或可不包括在個別地投與時會有效的各成份之量。所需精確量將隨各個體而變化，視個體之物種、年齡及一般狀況、所治療之病狀之嚴重程度、所用一或多種特定藥物、投藥模式及其類似因素而定。在任何個別情況下之適合的「有效」量可由一般熟習此項技術者使用常規實驗基於本文所提供之資訊確定。
如與本發明之組合物結合使用之片語「醫藥學上可接受」係指此類組合物之分子實體及其他成分為生理學上可耐受的且當向哺乳動物(例如人類)投與時通常不產生不良反應。較佳地，如本文所用，術語「醫藥學上可接受」意指經聯邦或州政府之監管機構批准或在美國藥典或其他公認的適用於哺乳動物(且更特定言之，適用於人類)之藥典中列出。
如本文所用，術語本發明組合物之與至少一種額外治療劑之「組合」意謂至少兩種，但任何所需藥劑組合可同時或依序進行遞送。經考慮當用於治療各種疾病時，本發明之組合物及方法可與適用於相同或類似疾病之其他治療方法/藥劑一起使用。此類其他治療方法/藥劑可共投與(同時或依序)以產生累加或協同效果。各藥劑之適合的治療有效劑量可由於累加作用或協同作用而降低。
術語「載劑」係指與化合物一起投與之稀釋劑、佐劑、賦形劑或媒劑。此類醫藥學載劑可為無菌液體，諸如水及油，包含石油、動物、植物或合成來源之彼等油，諸如花生油、大豆油、礦物油、芝麻油及其類似油。水或水溶液、鹽水溶液以及水性右旋糖及甘油溶液較佳用作載劑，特定言之用於可注射溶液。替代地，載劑可為固體劑型載劑，包括(但不限於)：黏合劑(用於壓縮丸劑)、滑動劑、包封劑、調味劑及著色劑中之一或多者。適合的醫藥學載劑描述於E.W. Martin之「Remington's Pharmaceutical Sciences」中。
如本文所用，「個體(individual/subject)」或「動物」係指疾病或病症(例如癌症或自體免疫疾病)之人類、獸醫學動物(例如貓、狗、牛、馬、綿羊、豬等)或實驗動物模型。在一較佳實施例中，個體為人類。
術語「與...相關」用以涵蓋任何相關性、同現以及任何因果關係。
術語「約」意謂在如藉由一般熟習此項技術者所確定之特定值之可接受誤差範圍內，其將部分地取決於如何量測或判定值，亦即，量測系統之限制。舉例而言，根據此項技術中之實踐，「約」可意謂在可接受標準差內。替代地，「約」可意謂在既定值或範圍之一定數量級內，較佳在50%內、更佳在20%內、再更佳在10%內、甚至更佳在5%內且最佳在1%內。替代地，尤其相對於生物系統或方法，該術語可意謂在值之一定數量級內，較佳在2倍內。若特定值描述於本申請案及申請專利範圍中，除非另外陳述，否則術語「約」為隱含的且在此上下文中意謂在特定值之可接受誤差範圍內。
必須注意的是，除非上下文明確另外指示，否則如本說明書及所附申請專利範圍中所用，單數形式「一(a/an)」及「該」包括複數個指示物。
根據本發明，可在此項技術內採用習知分子生物學、微生物學及重組DNA技術。此類技術在文獻中已充分解釋。參見例如Sambrook, Fritsch & Maniatis, Molecular Cloning:  A Laboratory Manual,第二版 Cold Spring Harbor, NY:  Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989 (本文中「Sambrook等人, 1989」)；DNA Cloning:  A Practical Approach, 第I卷及第II卷(D.N. Glover編 1985)；Oligonucleotide Synthesis (M.J. Gait編 1984)；Nucleic Acid Hybridization [B.D. Hames & S.J. Higgins編 (1985)]；Transcription And Translation [B.D. Hames & S.J. Higgins編 (1984)]；Animal Cell Culture [R.I. Freshney,編 (1986)]；Immobilized Cells And Enzymes [IRL Press, (1986)]; B. Perbal, A Practical Guide To Molecular Cloning (1984); Ausubel, F.M.等人(編). Current Protocols in Molecular Biology. John Wiley & Sons, Inc., 1994。此等技術包括如以下中所描述之定點突變誘發：Kunkel, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82: 488- 492 (1985), 美國專利第5,071,743號, Fukuoka等人, Biochem. Biophys. Res. Commun. 263: 357-360 (1999)；Kim及Maas, BioTech. 28: 196-198 (2000)；Parikh及Guengerich, BioTech. 24: 428-431 (1998)；Ray及Nickoloff, BioTech. 13: 342-346 (1992)；Wang等人, BioTech. 19: 556-559 (1995)；Wang及Malcolm, BioTech. 26: 680-682 (1999)；Xu及Gong, BioTech. 26: 639-641 (1999), 美國專利第5,789, 166號及第5,932, 419號, Hogrefe, Strategies l4.3: 74-75 (2001), 美國專利第5,702,931號、第5,780,270號及第6,242,222號, Angag及Schutz, Biotech. 30: 486-488 (2001), Wang及Wilkinson, Biotech. 29: 976-978 (2000), Kang等人, Biotech. 20: 44-46 (1996), Ogel及McPherson, Protein Engineer. 5: 467-468 (1992), Kirsch及Joly, Nucl. Acids. Res. 26: 1848-1850 (1998), Rhem及Hancock, J. Bacteriol. 178: 3346-3349 (1996), Boles及Miogsa, Curr. Genet. 28: 197-198 (1995), Barrenttino等人, Nuc. Acids. Res. 22: 541-542 (1993), Tessier及Thomas, Meths. Molec. Biol. 57: 229-237以及Pons等人, Meth. Molec. Biol. 67: 209-218。 具有可調適受體專一性組分之嵌合抗原受體 (arCAR)
在一個態樣中，本文提供一種具有可調適受體專一性組分之通用嵌合抗原受體系統(arCAR)，其包含： (i)        具有嵌合抗原受體的免疫效應細胞，該嵌合抗原受體包含第一多肽，該第一多肽包含(a)胞外標記結合域、(b)跨膜域及(c)至少一個胞內信號傳導域；及 (ii)      第二多肽，其包含(d)結合至目標細胞上之至少一種抗原的抗原結合域，及(e)由該嵌合抗原受體之第一多肽的標記結合域識別之標記； 其中：(i)該標記包含抗體或其抗原結合片段，或替代骨架且該標記結合域包含結合至該標記之抗個體基因型分子，或 (ii)該標記包含結合至標記結合域之抗個體基因型分子，且該標記結合域包含抗體或其抗原結合片段或替代骨架。
在一些實施例中，抗個體基因型分子結合至抗體、其抗原結合片段之至少一個抗原結合區或非構架區。
在一些實施例中，標記包含抗體或其抗原結合片段，或結合至源於非人類來源之多肽的替代骨架。替代地，標記結合域包含抗體或其抗原結合片段，或結合至源於非人類來源之多肽的替代骨架。
在一些實施例中，抗個體基因型分子結合至抗體或其抗原結合片段之至少一個互補決定區(CDR)。
在一些實施例中，抗個體基因型分子為抗個體基因型抗體或其抗原結合片段或替代骨架。
在一些實施例中，第二多肽之抗原結合域包含抗體或其抗原結合片段或替代骨架。
在各種實施例中，適合用於本發明之arCAR系統之抗體或抗體片段包括(但不限於)：單株抗體、雙專一性抗體、多專一性抗體、嵌合抗體、多肽-Fc融合物、單鏈Fv (scFv)、單鏈抗體、Fab片段、F(ab')片段、二硫鍵連接之Fv (sdFv)、掩飾抗體(例如Probodies®)、小模塊免疫藥物(「SMIPsTM」)、胞內抗體、微型抗體、單域抗體可變域、奈米抗體、VHH、雙功能抗體、串聯雙功能抗體(TandAb®)及以上中之任一者之抗原決定基-結合片段。抗體及/或抗體片段可源於鼠類抗體、兔抗體、人類抗體、完全人類化抗體、駱駝抗體可變域及人類化型式、鯊魚抗體可變域及人類化型式以及駱駝化抗體可變域。
在一些實施例中，抗原結合片段為Fab片段、Fab'片段、F(ab')2片段、scFv片段、Fv片段、dsFv雙功能抗體、VHH、VNAR、單域抗體(sdAb)或奈米抗體、dAb片段、Fd'片段、Fd片段、重鏈可變區、經分離之互補決定區(CDR)、雙功能抗體、三功能抗體或十功能抗體。在一些實施例中，抗原結合片段為scFv片段。在一些實施例中，抗原結合片段為VHH。
在一些實施例中，胞外標記結合域、抗原結合域或標記中之至少一者包含單域抗體或奈米抗體。
在一些實施例中，胞外標記結合域、抗原結合域或標記中之至少一者包含VHH。
在一些實施例中，胞外標記結合域及標記各自包含VHH。
在一些實施例中，胞外標記結合域、標記及抗原結合域各自包含VHH。
在一些實施例中，胞外標記結合域、抗原結合域或標記中之至少一者包含scFv。
在一些實施例中，胞外標記結合域及標記各自包含scFv。
在一些實施例中，胞外標記結合域、標記及抗原結合域各自包含scFv。
在一些實施例中，本文所用之抗體或抗原結合片段(例如VHH、scFv)為人類化的。人類化蛋白具有降低免疫原性風險之潛能。
本發明之arCAR中亦可使用展現類似功能特徵(諸如對目標生物分子的高親和力及專一性結合)之免疫球蛋白域的替代骨架。此類骨架已展示可產生具有改良之特徵(諸如較大穩定性或減小的免疫原性)的分子。可用於本發明之arCAR系統中之替代骨架之非限制性實例包括經工程改造之肌腱蛋白衍生的肌腱蛋白III型域(例如Centyrin™)；經工程改造之γ-B晶狀體球蛋白衍生的骨架或經工程改造之泛素衍生的骨架(例如阿非林)；經工程改造之纖維結合蛋白衍生的第10纖維結合蛋白III型(10Fn3)域(例如單功能抗體、AdNectins™或AdNexins™)；經工程改造之含有多肽之錨蛋白重複模體(例如DARPins™)；經工程改造之低密度-脂蛋白-受體衍生的A域(LDLR-A) (例如Avimers™)；脂質運載蛋白(例如抗運載蛋白)；經工程改造之蛋白酶抑制劑衍生的孔尼茲(Kunitz)域(例如EETI-II/AGRP、BPTI/LACI-D1/ITI-D2)；經工程改造之蛋白質-A衍生的Z域(Affibodies™)；Sac7d衍生之多肽(例如Nanoffitins®或阿非汀)；經工程改造之Fyn衍生的SH2域(例如Fynomers®)；CTLD 3(例如四連接素(Tetranectin))；硫化還原蛋白(例如肽適體)；KALBITOR®；β-夾心(例如iMab)；小型蛋白；C型凝集素樣域骨架；經工程改造之抗體模擬物；以及保持其結合官能基之前述者之任何經基因處理之對應物(Wörn A, Pluckthun A, J Mol Biol 305: 989-1010 (2001)；Xu L等人, Chem Biol 9: 933-42 (2002)；Wikman M等人, Protein Eng Des Sel 17: 455-62 (2004)；Binz H等人, Nat Biolechnol 23: 1257-68 (2005)；Hey T等人, Trends Biotechnol 23:514-522 (2005)；Holliger P, Hudson P, Nat Biotechnol 23: 1126-36 (2005)；Gill D, Damle N, Curr Opin Biotech 17: 653-8 (2006)；Koide A, Koide S, Methods Mol Biol 352: 95-109 (2007)；Skerra, Current Opin. in Biotech., 2007 18: 295-304；Byla P等人, J Biol Chem 285: 12096 (2010)；Zoller F等人, Molecules 16: 2467-85 (2011)，該等文獻中之每一者以全文引用之方式併入本文中)。
在一些實施例中，替代骨架為阿非林或生替林。
源於非人類來源之分子可源於任何非人類生物體，包括(但不限於)：病毒、細菌、酵母、真菌、植物及非人類動物。
在一些實施例中，源於非人類來源之分子為多肽。在一些實施例中，蛋白質之來源係來自不具有人類同源物之非人類多肽。
在一些實施例中，衍生自非人類來源之該多肽為呼吸道融合性病毒(RSV) F蛋白、李氏菌內化蛋白、眼鏡蛇磷脂酶A2、伊波拉核蛋白、疱疹單純型病毒(HSV)糖蛋白D、乳球菌噬菌體受體結合蛋白(RBP)、嗜熱脂肪地芽孢桿菌、蓖麻毒素或雞卵白溶菌酶。
在一些實施例中，本發明之arCAR之第一多肽包含前導序列。前導序列可位於胞外標記結合域之N端。在細胞處理CAR及CAR定域於細胞膜期間，前導序列可視情況自胞外標記結合域裂解。熟習此項技術者已知的多種前導序列中之任一者可用作前導序列。可衍生前導序列之肽的非限制性實例包括顆粒球-巨噬細胞群落刺激因子(GMCSF)、FcεR、人類免疫球蛋白(IgG)重鏈(HC)可變區、CD8α、小鼠Ig-κ信號肽或由T細胞分泌之各種其他蛋白質中之任一者。在各種實施例中，前導序列與T細胞之分泌路徑相容。在某些實施例中，前導序列源於人類免疫球蛋白重鏈(HC)。
在一些實施例中，前導序列源於GMCSF。在一個實施例中，GMCSF前導序列包含SEQ ID NO: 1中所列之胺基酸序列或與SEQ ID NO: 1具有至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列一致性之其變體。
在一些實施例中，前導序列源於小鼠Ig-κ信號肽。在一個實施例中，小鼠Ig-κ信號肽包含SEQ ID NO: 61中所列之胺基酸序列或與SEQ ID NO: 61具有至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列一致性之其變體。
在一些實施例中，本發明之arCAR之第一多肽包含胞外標記結合域與細胞質域之間同框融合之跨膜域。
跨膜域可源於促成胞外標記結合域之蛋白質、促成信號傳導域或共信號傳導域之蛋白質，或完全不同的蛋白質。在一些情況下，可藉由胺基酸取代、缺失或插入來選擇或修飾跨膜域，以最小化與arCAR複合物之其他成員的相互作用。在一些情況下，可藉由胺基酸取代、缺失或插入來選擇或修飾跨膜域以避免與跨膜域天然締合的蛋白質發生結合。在某些實施例中，跨膜域包括其他胺基酸以實現與跨膜域連接之域之間的柔性及/或最佳距離。
跨膜域可源於天然或合成來源。在來源為天然之情況下，域可源於任何膜結合蛋白或跨膜蛋白。本發明中特定使用之跨膜域之非限制性實例可源於以下(亦即至少包含以下之一或多個跨膜區)：T細胞受體(TCR)之α、β或ζ鏈、NKG2D、CD28、CD3 ε、CD45、CD4、CD5、CD8、CD8α、CD9、CD16、CD22、CD33、CD37、CD40、CD64、CD80、CD86、CD134、CD137或CD154。替代地，跨膜域可為合成的，在此情況下，其將主要包含疏水性殘基，諸如白胺酸及纈胺酸。舉例而言，可在合成跨膜域之各端發現苯丙胺酸、色胺酸及/或纈胺酸之三聯體。
在一些實施例中，需要使用ζ、η或FcεR1γ鏈之跨膜域，其含有能夠以二硫鍵鍵結之半胱胺酸殘基，使得所得嵌合蛋白能夠與自身或與ζ、η或FcεR1γ鏈或相關蛋白質之未修飾形式形成二硫鍵連接之二聚體。在一些情況下，將藉由胺基酸取代來選擇或修飾跨膜域，以避免此類結構域結合至相同或不同表面膜蛋白之跨膜域，從而最小化與受體複合物中之其他成員之相互作用。在其他情況下，為了保持與受體複合物中之其他成員之物理性締合，需要使用ζ、η或FcεR1γ及-β、MB1 (Igα.)、B29或CD3-γ、ζ或η之跨膜域。
在一些實施例中，跨膜域源於CD8或CD28。在一個實施例中，CD8跨膜域包含SEQ ID NO: 23中所列之胺基酸序列或與SEQ ID NO: 23具有至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列一致性之其變體。在一個實施例中，CD28跨膜域包含SEQ ID NO: 24中所列之胺基酸序列或與SEQ ID NO: 24具有至少50、至少55、至少60、至少65、至少70、至少75、至少80、至少85、至少90、至少95、至少96、至少97、至少98或至少99%序列一致性之其變體。
在一些實施例中，本發明之arCAR系統之第一多肽包含胞外標記結合域與跨膜域之間的間隔區，其中標記結合域、連接子及跨膜域彼此同框。
如本文所用，術語「間隔區」一般意謂用於使標記結合域與跨膜域連接之任何寡肽或多肽。間隔區可用於向標記結合域提供更大的柔性及可及性。間隔區可包含至多300個胺基酸，較佳10至100個胺基酸且最佳25至50個胺基酸。間隔區可衍生自天然存在之分子的全部或一部分，諸如CD8、CD4或CD28之胞外區之全部或一部分，或抗體恆定區之全部或一部分。替代地，間隔區可為對應於天然存在之間隔區序列之合成序列，或可為完全合成的間隔區序列。可根據本發明使用之間隔區之非限制性實例包括人類CD8α鏈之一部分、CD28之部分胞外域、FcyRllla受體、IgG、IgM、IgA、IgD、IgE、Ig鉸鏈，或其功能片段。在一些實施例中，將其他連接胺基酸添加至間隔區中以確保抗原結合域與跨膜域的距離最佳。在一些實施例中，當間隔子衍生自Ig時，間隔子可突變以防止Fc受體結合。
在一些實施例中，間隔區包含鉸鏈域。鉸鏈域可衍生自CD8α、CD28或免疫球蛋白(IgG)。舉例而言，IgG鉸鏈可來自IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgM1、IgM2、IgA1、IgA2、IgD、IgE或其嵌合體。
在某些實施例中，鉸鏈域包含免疫球蛋白IgG鉸鏈或其功能片段。在某些實施例中，IgG鉸鏈來自IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgM1、IgM2、IgA1、IgA2、IgD、IgE或其嵌合體。在某些實施例中，鉸鏈域包含免疫球蛋白之CH1、CH2、CH3及/或鉸鏈區。在某些實施例中，鉸鏈域包含免疫球蛋白之核心鉸鏈區。術語「核心鉸鏈」可與術語「短鉸鏈」(亦稱為「SH」)互換地使用。適合的鉸鏈域之非限制性實例為免疫球蛋白核心鉸鏈區，包括來自IgG1之EPKSCDKTHTCPPCP (SEQ ID NO: 57)、來自IgG2之ERKCCVECPPCP (SEQ ID NO: 58)、來自IgG3之ELKTPLGDTTHTCPRCP(EPKSCDTPPPCPRCP) 3(SEQ ID NO: 59)及來自IgG4之ESKYGPPCPSCP (SEQ ID NO: 60) (亦參見Wypych等人, JBC2008 283(23): 16194-16205，該文獻出於所有目的以全文引用之方式併入本文中)。在某些實施例中，鉸鏈域為免疫球蛋白鉸鏈之片段。
在一些實施例中，鉸鏈域源於CD8或CD28。在一個實施例中，CD8鉸鏈域包含SEQ ID NO: 21中所列之胺基酸序列或與SEQ ID NO: 21具有至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列一致性之其變體。在一個實施例中，CD28鉸鏈域包含SEQ ID NO: 22中所列之胺基酸序列或與SEQ ID NO: 22具有至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列一致性之其變體。
在一些實施例中，跨膜域及/或鉸鏈域源於CD8或CD28。在一些實施例中，跨膜域與鉸鏈域均源於CD8。在一些實施例中，跨膜域與鉸鏈域均源於CD28。
在某些態樣中，本發明之arCAR之第一多肽包含細胞質域，其包含至少一個胞內信號傳導域。在一些實施例中，細胞質域亦包含一或多個共刺激信號傳導域。
細胞質域負責其中已置放有arCAR之宿主細胞(例如，T細胞)之正常效應功能中之至少一者的活化。術語「效應功能」係指細胞之專門功能。舉例而言，T細胞之效應功能可為細胞溶解活性或輔助活性，包括細胞介素之分泌。因此，術語「信號傳導域」係指蛋白質之一部分，該部分轉導效應功能信號且引導細胞執行專門功能。儘管通常存在完整信號傳導域，但在許多情況下，無需使用整條鏈。就使用胞內信號傳導域之截短部分而言，此類截短部分可用於替代完整鏈，只要其轉導效應功能信號即可。術語胞內信號傳導域因此意欲包括足以轉導效應功能信號之信號傳導域之任何截斷部分。
本發明之arCAR中可使用之信號傳導域之非限制性實例包括例如源於DAP10、DAP12、Fcε受體I γ鏈(FCER1G)、FcR β、NKG2D、CD3δ、CD3ε、CD3γ、CD3ζ、CD5、CD22、CD226、CD66d、CD79A或CD79B之信號傳導域。
在一些實施例中，細胞質域包含CD3ζ信號傳導域。在一個實施例中，CD3ζ信號傳導域包含SEQ ID NO: 6中所列之胺基酸序列或與SEQ ID NO: 6具有至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列一致性之其變體。
在一些實施例中，細胞質域進一步包含一或多個共刺激信號傳導域。在一些實施例中，一或多個共刺激信號傳導域源於CD28、41BB、IL2Rb、CD40、OX40 (CD134)、CD80、CD86、CD27、ICOS、NKG2D、DAP10、DAP12、2B4 (CD244)、BTLA、CD30、GITR、CD226、CD79A或HVEM。
在一個實施例中，共刺激信號傳導域源於41BB。在一個實施例中，41BB共刺激信號傳導域包含SEQ ID NO: 8中所列之胺基酸序列或與SEQ ID NO: 8具有至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列一致性之其變體。
在一個實施例中，共刺激信號傳導域源於IL2Rb。在一個實施例中，IL2Rb共刺激信號傳導域包含SEQ ID NO: 9中所列之胺基酸序列或與SEQ ID NO: 9具有至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列一致性之其變體。
在一個實施例中，共刺激信號傳導域源於CD40。在一個實施例中，CD40共刺激信號傳導域包含SEQ ID NO: 10中所列之胺基酸序列或與SEQ ID NO: 10具有至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列一致性之其變體。
在一個實施例中，共刺激信號傳導域源於OX40。在一個實施例中，OX40共刺激信號傳導域包含SEQ ID NO: 11中所列之胺基酸序列或與SEQ ID NO: 11具有至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列一致性之其變體。
在一個實施例中，共刺激信號傳導域源於CD80。在一個實施例中，CD80共刺激信號傳導域包含SEQ ID NO: 12中所列之胺基酸序列或與SEQ ID NO: 12具有至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列一致性之其變體。
在一個實施例中，共刺激信號傳導域源於CD86。在一個實施例中，CD86共刺激信號傳導域包含SEQ ID NO: 13中所列之胺基酸序列或與SEQ ID NO: 13具有至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列一致性之其變體。
在一個實施例中，共刺激信號傳導域源於CD27。在一個實施例中，CD27共刺激信號傳導域包含SEQ ID NO: 14中所列之胺基酸序列或與SEQ ID NO: 14具有至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列一致性之其變體。
在一個實施例中，共刺激信號傳導域源於ICOS。在一個實施例中，ICOS共刺激信號傳導域包含SEQ ID NO: 15中所列之胺基酸序列或與SEQ ID NO: 15具有至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列一致性之其變體。
在一個實施例中，共刺激信號傳導域源於NKG2D。在一個實施例中，NKG2D共刺激信號傳導域包含SEQ ID NO: 16中所列之胺基酸序列或與SEQ ID NO: 16具有至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列一致性之其變體。
在一個實施例中，共刺激信號傳導域源於DAP10。在一個實施例中，DAP10共刺激信號傳導域包含SEQ ID NO: 17中所列之胺基酸序列或與SEQ ID NO: 17具有至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列一致性之其變體。
在一個實施例中，共刺激信號傳導域源於DAP12。在一個實施例中，DAP12共刺激信號傳導域包含SEQ ID NO: 18中所列之胺基酸序列或與SEQ ID NO: 18具有至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列一致性之其變體。
在一個實施例中，共刺激信號傳導域源於2B4 (CD244)。在一個實施例中，2B4 (CD244)共刺激信號傳導域包含SEQ ID NO: 19中所列之胺基酸序列或與SEQ ID NO: 19具有至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列一致性之其變體。
在一個實施例中，共刺激信號傳導域源於CD28。在一個實施例中，CD28共刺激信號傳導域包含SEQ ID NO: 20中所列之胺基酸序列或與SEQ ID NO: 20具有至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列一致性之其變體。
在一些實施例中，本發明之arCAR包含一個共刺激信號傳導域。在一些實施例中，本發明之arCAR包含兩個或更多個共刺激信號傳導域。在某些實施例中，本發明之arCAR包含兩個、三個、四個、五個、六個或更多個共刺激信號傳導域。
在一些實施例中，一或多個信號傳導域及一或多個共刺激信號傳導域可以任何次序置放。在一些實施例中，信號傳導域位於共刺激信號傳導域上游。在一些實施例中，信號傳導域位於共刺激信號傳導域下游。在包括兩個或更多個共刺激域之情況下，可交換共刺激信號傳導域之次序。
非限制性例示性CAR區及序列提供於 表 1中。 表1.
CAR 區 序列 UniProt Id SEQ ID NO
CD19 CAR ：
GMCSF信號肽 MLLLVTSLLLCELPHPAFLLIP    1
FMC63 VH EVKLQESGPGLVAPSQSLSVTCTVSGVSLPDYGVSWIRQPPRKGLEWLGVIWGSETTYYNSALKSRLTIIKDNSKSQVFLKMNSLQTDDTAIYYCAKHYYYGGSYAMDYWGQGTSVTVSS    2
Whitlow連接子 GSTSGSGKPGSGEGSTKG    3
FMC63 VL DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDISKYLNWYQQKPDGTVKLLIYHTSRLHSGVPSRFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPYTFGGGTKLEIT    4
CD28 (AA 114-220) IEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRS P10747-1 5
CD3-ζ同功異型物3 (AA 52-163) RVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR P20963-3 6
FMC63 scFV EVKLQESGPGLVAPSQSLSVTCTVSGVSLPDYGVSWIRQPPRKGLEWLGVIWGSETTYYNSALKSRLTIIKDNSKSQVFLKMNSLQTDDTAIYYCAKHYYYGGSYAMDYWGQGTSVTVSSGSTSGSGKPGSGEGSTKGDIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDISKYLNWYQQKPDGTVKLLIYHTSRLHSGVPSRFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPYTFGGGTKLEIT    7
信號傳導域：
41BB (AA 214-255) KRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCEL Q07011 8
IL2Rb (AA 266-551) NCRNTGPWLKKVLKCNTPDPSKFFSQLSSEHGGDVQKWLSSPFPSSSFSPGGLAPEISPLEVLERDKVTQLLPLNTDAYLSLQELQGQDPTHLV P14784 9
CD40 (AA 216-277) KKVAKKPTNKAPHPKQEPQEINFPDDLPGSNTAAPVQETLHGCQPVTQEDGKESRISVQERQ P25942 10
OX40 (AA 236-277) ALYLLRRDQRLPPDAHKPPGGGSFRTPIQEEQADAHSTLAKI P43489 11
CD80 (AA 264-288) TYCFAPRCRERRRNERLRRESVRPV P33681 12
CD86 (AA269-329) KWKKKKRPRNSYKCGTNTMEREESEQTKKREKIHIPERSDEAQRVFKSSKTSSCDKSDTCF P42081 13
CD27 (AA 213-260) QRRKYRSNKGESPVEPAEPCHYSCPREEEGSTIPIQEDYRKPEPACSP P26842 14
ICOS (AA 162-199) CWLTKKKYSSSVHDPNGEYMFMRAVNTAKKSRLTDVTL Q9Y6W8 15
NKG2D (AA 1-51) MGWIRGRRSR HSWEMSEFHN YNLDLKKSDF STRWQKQRCP VVKSKCRENAS P26718 16
DAP10 (AA 70-93) LCARPRRSPAQEDGKVYINMPGRG Q9UBK5 17
DAP12 (AA 62-113) YFLGRLVPRGRGAAEAATRKQRITETESPYQELQGQRSDVYSDLNTQRPYYK O54885 18
2B4/CD244  (AA 251-370) WRRKRKEKQSETSPKEFLTIYEDVKDLKTRRNHEQEQTFPGGGSTIYSMIQSQSSAPTSQEPAYTLYSLIQPSRKSGSRKRNHSPSFNSTIYEVIGKSQPKAQNPARLSRKELENFDVYS Q9BZW8 19
CD3-ζ同功異型物3 (AA 52-163) RVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR P20963-3 6
CD28  (AA 180-220) RSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRS P10747-1 20
間隔子 / 鉸鏈：
CD8 (AA 136-182) TTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIY P01732 21
CD28 (AA 114-151) IEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKP P10747-1 22
短鉸鏈(核苷酸序列) GAGAGCAAGTATGGGCCCCCTTGTCCTCCTTGTCCG    63
短鉸鏈(胺基酸序列) ESKYGPPCPPCP    64
中等鉸鏈(核苷酸序列) GAGAGCAAGTATGGGCCCCCTTGTCCTCCTTGTCCGGGGCAGCCCCGAGAGCCACAGGTGTACACtCTGCCaCCAAGTCAGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAGGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGGAGGGGAATGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCTGGGAAAG    65
中等鉸鏈(胺基酸序列) ESKYGPPCPPCPGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK    66
長鉸鏈(核苷酸序列) GAGTCTAAGTATGGGCCCCCTTGTCCTCCTTGTCCGGCACCTCCCGTGGCTGGACCAAGTGTATTCTTATTTCCCCCAAAACCCAAAGATACTCTCATGATTTCCCGGACCCCTGAGGTTACATGCGTGGTGGTGGATGTGAGCCAGGAAGACCCCGAAGTCCAGTTTAACTGGTACGTGGATGGAGTGGAGGTGCATAATGCAAAGACAAAGCCTCGGGAAGAACAGTTTCAGAGCACATACCGTGTGGTTAGTGTCCTCACAGTTCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTATAAGTGTAAGGTCTCCAATAAAGGCCTCCCGTCATCGATCGAAAAAACCATCAGTAAAGCCAAAGGGCAGCCAAGGGAGCCACAGGTGTATACTTTACCACCAAGTCAGGAGGAAATGACCAAGAACCAGGTATCTCTGACCTGCCTAGTCAAAGGCTTTTACCCCAGCGATATCGCTGTGGAGTGGGAGTCTAATGGGCAGCCAGAGAACAACTACAAGACCACACCTCCTGTGCTGGACTCCGATGGCTCCTTCTTTCTATACAGCAGGTTAACCGTGGATAAGAGCAGGTGGCAGGAGGGGAATGTCTTCTCATGCTCTGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCTGGGAAAG    67
長鉸鏈(胺基酸序列) ESKYGPPCPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFQSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK    68
前導序列 / 信號肽：
GMCSF信號肽 MLLLVTSLLLCELPHPAFLLIP    1
小鼠Ig-κ信號肽(核苷酸序列) ATGGCCAGGAGCCCCGCCCAGCTGCTGGGCCTGCTGCTGCTGTGGCTGAGCGGCGCCAGGTGC    61
小鼠Ig-κ信號肽(胺基酸序列) MARSPAQLLGLLLLWLSGARC    62
跨膜：
CD8 (AA 183-203) IYIWAPLAGTCGVLLLSLVIT P01732 23
CD28  (AA 153-179) FWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWV P10747-1 24
連接子：
Whitlow連接子 GSTSGSGKPGSGEGSTKG    3
(G 4S) 3 GGGGSGGGGSGGGGS    25
連接子3 GGSEGKSSGSGSESKSTGGS    26
連接子4 GGGSGGGS    27
連接子3 GGGSGGGSGGGS    28
連接子4 GGGSGGGSGGGSGGGS    29
連接子5 GGGSGGGSGGGSGGGSGGGS    30
連接子6 GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS    31
連接子7 GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGS    32
連接子8 IRPRAIGGSKPRVA    33
連接子9 GKGGSGKGGSGKGGS    34
連接子10 GGKGSGGKGSGGKGS    35
連接子11 GGGKSGGGKSGGGKS    36
連接子12 GKGKSGKGKSGKGKS    37
連接子13 GGGKSGGKGSGKGGS    38
連接子14 GKPGSGKPGSGKPGS    39
連接子15 GKPGSGKPGSGKPGSGKPGS    40
連接子16 GKGKSGKGKSGKGKSGKGKS    41
連接子17 STAGDTHLGGEDFD    42
連接子18 GEGGSGEGGSGEGGS    43
連接子19 GGEGSGGEGSGGEGS    44
連接子20 GEGESGEGESGEGES    45
連接子21 GGGESGGEGSGEGGS    46
連接子22 GEGESGEGESGEGESGEGES    47
連接子23 GSTSGSGKPGSGEGSTKG    48
連接子24 PRGASKSGSASQTGSAPGS    49
連接子25 GTAAAGAGAAGGAAAGAAG    50
連接子26 GTSGSSGSGSGGSGSGGGG    51
連接子27 GKPGSGKPGSGKPGSGKPGS    52
連接子28 GSGS    53
連接子29 APAPAPAPAP    54
連接子30 APAPAPAPAPAPAPAPAPAP    55
連接子31 AEAAAKEAAAKEAAAAKEAAAAKEAAAAKAAA    56
在一些實施例中，第二多肽之抗原結合域結合至抗原。第二多肽之抗原結合域可結合至超過一種抗原或抗原中之超過一個抗原決定基。舉例而言，第二多肽之抗原結合域可結合至兩種、三種、四種、五種、六種、七種、八種或更多種抗原。作為另一實例，第二多肽之抗原結合域可結合至相同抗原中之兩個、三個、四個、五個、六個、七個、八個或更多個抗原決定基。
抗原結合域之選擇可視界定目標細胞表面之抗原類型及數目而定。舉例而言，可選擇可識別抗原之抗原結合域，該抗原充當目標細胞上之與特定疾病病狀相關的細胞表面標誌物。在某些實施例中，本發明之arCAR可經基因修飾以借助於工程改造專一性結合至抗原(例如腫瘤細胞上)之所需抗原結合域來靶向所關注腫瘤抗原。可充當本發明之arCAR中之抗原結合域之目標的細胞表面標誌物之非限制性實例包括與腫瘤細胞或自體免疫疾病相關之細胞表面標記。
在一些實施例中，抗原結合域結合至至少一種腫瘤抗原或自體免疫抗原。
在一些實施例中，抗原結合域結合至至少一種腫瘤抗原。在一些實施例中，抗原結合域結合至兩種或更多種腫瘤抗原。在一些實施例中，兩種或更多種腫瘤抗原與相同腫瘤相關。在一些實施例中，兩種或更多種腫瘤抗原與不同腫瘤相關。
在一些實施例中，抗原結合域結合至至少一種自體免疫抗原。在一些實施例中，抗原結合域結合至兩種或更多種自體免疫抗原。在一些實施例中，兩種或更多種自體免疫抗原與相同的自體免疫疾病相關。在一些實施例中，兩種或更多種自體免疫抗原與不同的自體免疫疾病相關。
在一些實施例中，腫瘤抗原與神經膠母細胞瘤、卵巢癌、子宮頸癌、頭頸癌、肝癌、前列腺癌、胰臟癌、腎細胞癌、膀胱癌或血液惡性病相關。與神經膠母細胞瘤相關之腫瘤抗原之非限制性實例包括HER2、EGFRvIII、EGFR、CD133、PDGFRA、FGFR1、FGFR3、MET、CD70、ROBO1及IL13Rα2。與卵巢癌相關之腫瘤抗原之非限制性實例包括FOLR1、FSHR、MUC16、MUC1、間皮素、CA125、EpCAM、EGFR、PDGFRα、連接素-4及B7H4。與子宮頸癌或頭頸癌相關之腫瘤抗原之非限制性實例包括GD2、MUC1、間皮素、HER2及EGFR。與肝癌相關之腫瘤抗原之非限制性實例包括緊密連接蛋白18.2、GPC-3、EpCAM、cMET及AFP。與血液惡性病相關之腫瘤抗原之非限制性實例包括CD19、CD22、CD79、BCMA、GPRC5D、SLAM F7、CD33、CLL1、CD123及CD70。與膀胱癌相關之腫瘤抗原之非限制性實例包括連接素-4及SLITRK6。與腎癌相關之腫瘤抗原之非限制性實例包括CD70及FOLR1。
抗原結合域可靶向之其他抗原實例包括(但不限於)：α-胎蛋白、A3、對A33抗體具有專一性之抗原、Ba 733、BrE3-抗原、碳酸酐酶EX、CD1、CD1a、CD3、CD5、CD15、CD16、CD19、CD20、CD21、CD22、CD23、CD25、CD30、CD33、CD38、CD45、CD74、CD79a、CD80、CD123、CD138、大腸專一性抗原-p (CSAp)、CEA (CEACAM5)、CEACAM6、CSAp、EGFR、EGP-I、EGP-2、Ep-CAM、EphA1、EphA2、EphA3、EphA4、EphA5、EphA6、EphA7、EphA8、EphA10、EphB1、EphB2、EphB3、EphB4、EphB6、FIt-I、Flt-3、葉酸受體、HLA-DR、人絨毛膜促性腺激素(HCG)及其亞單元、低氧誘導因子(HIF-I)、Ia、IL-2、IL-6、IL-8、胰島素生長因子-1 (IGF-I)、KC4-抗原、KS-1抗原、KS1-4、Le-Y、巨噬細胞抑制因子(MIF)、MAGE、MUC2、MUC3、MUC4、NCA66、NCA95、NCA90、對PAM-4抗體具有專一性之抗原、胎盤生長因子、p53、前列腺酸磷酸酶、PSA、PSMA、RS5、S100、TAC、TAG-72、肌腱蛋白、TRAIL受體、Tn抗原、湯姆遜-弗雷登抗原(Thomson-Friedenreich antigens)、腫瘤壞死抗原、VEGF、ED-B纖維結合蛋白、17-1A-抗原、血管生成標誌物、致癌基因標誌物或致癌基因產物。
在一個實施例中，抗原結合域靶向之抗原為CD19。在一個實施例中，抗原結合域包含抗CD19 scFv。在一個實施例中，抗CD19 scFv包含重鏈可變區(VH)，該重鏈可變區包含SEQ ID NO: 2中所列之胺基酸序列或與SEQ ID NO: 2具有至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列一致性之其變體。在一個實施例中，抗CD19 scFv包含輕鏈可變區(VL)，該輕鏈可變區包含SEQ ID NO: 4中所列之胺基酸序列或與SEQ ID NO: 4具有至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列一致性之其變體。在一個實施例中，抗CD19 scFv包含SEQ ID NO: 7中所列之胺基酸序列或與SEQ ID NO: 7具有至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列一致性之其變體。
在一些實施例中，抗原與自體免疫疾病或病症相關。此類抗原可衍生自細胞受體及產生「自」引導抗體之細胞。在一些實施例中，抗原與自體免疫疾病或病症相關，諸如類風濕性關節炎(RA)、多發性硬化症(MS)、休格連氏症候群(Sjögren's syndrome)、全身性紅斑狼瘡、類肉瘤病、1型糖尿病、胰島素依賴性糖尿病(IDDM)、自體免疫甲狀腺炎、反應性關節炎、僵直性脊椎炎、硬皮病、多發性肌炎、皮肌炎、牛皮癬、脈管炎、韋格納氏肉芽腫病(Wegener's granulomatosis)、重症肌無力、橋本氏甲狀腺炎(Hashimoto's thyroiditis)、格雷夫氏病(Graves' disease)、慢性發炎性脫髓鞘多發性神經病變、格-巴二氏症候群(Guillain-Barre syndrome)、克羅恩氏病(Crohn's disease)或潰瘍性結腸炎。
在一些實施例中，本文所揭示之arCAR可靶向之自體免疫抗原包括(但不限於)：血小板抗原、髓鞘蛋白質抗原、snRNP中之Sm抗原、胰島細胞抗原、類風濕性因子及抗瓜胺酸化蛋白質。瓜胺酸化蛋白質及肽(諸如CCP-1、CCP-2 (環狀瓜胺酸化肽))、血纖維蛋白原、纖維蛋白、波形蛋白、絲聚蛋白、膠原蛋白I及II肽、α-烯醇酶、轉譯起始因子4G1、核周因子、角蛋白、Sa (細胞骨架蛋白質波形蛋白)、諸如膠原蛋白II、IX及XI之關節軟骨之組分、諸如RF (IgG、IgM)之循環血清蛋白、血纖維蛋白原、纖維蛋白溶酶原、鐵蛋白、諸如RA33/hnRNP A2之核組分、Sm、真核轉譯延伸因子1 α 1、壓力蛋白質(諸如HSP-65、-70、-90)、BiP、發炎性/免疫因子(諸如B7-H1、IL-1 α及IL-8)、酶(諸如鈣蛋白酶抑素、α-烯醇酶、醛縮酶-A、二肽基肽酶、骨橋蛋白、葡糖-6-磷酸異構酶)、受體(諸如脂皮質素1)、嗜中性白血球核蛋白(諸如乳鐵蛋白及25-35 kD核蛋白)、顆粒蛋白(諸如殺菌滲透性增強蛋白(BPI))、彈性蛋白酶、組織蛋白酶G、髓過氧化酶、蛋白酶3、血小板抗原、髓鞘蛋白質抗原、胰島細胞抗原、類風濕因子、組蛋白、核糖體P蛋白、心磷脂、波形蛋白、核酸(諸如dsDNA、ssDNA及RNA)、核糖核粒子及蛋白質(諸如Sm抗原((包括但不限於SmD's及SmB'/B)))、U1RNP、A2/B1 hnRNP、Ro (SSA)及La (SSB)抗原。
非限制性例示性抗原目標提供於 表 2-4中。 表 2：抗原結合域可包含VH序列、VL序列及/或其CDR，諸如所引用之公開案中所描述之彼等序列、VL序列及/或其CDR，各公開案之內容出於所有目的以全文引用之方式併入本文中.
抗原 目標 類型 來源之實例 類型 來源之實例
5T4 VH WO2016022939中之標識符2、4 VL WO2016022939中之標識符1、3
AGR2 VH WO2016040321中之標識符10、18 VL WO2016040321中之標識符11、19
ALK VH US20160280798Al中之標識符1、11、13、15、3、5、7、9；WO2015069922中之標識符9、1、3、5、11、13、15、7、9 VL US20160280798Al中之標識符10、12、14、16、2、4、6、8；WO2015069922中之標識符10、12、14、16、8；WO2015069922中之標識符2、4、6
AMC VH WO2016161390中之標識符17、18、19、20、21、22、23、24、25、26 VL WO2016161390中之標識符27、28、29、31、32、33、34、35、36
ANG2 VH WO2015091655中之標識符1、3 VL WO2015091655中之標識符2、4
APCDD1 VH WO2012019061中之標識符10、102、106、110、114、118、122、126、130、134、14、6、98 VL WO2012019061中之標識符136、100、104、108、112、116、12、120、124、128、132、16、8
APRIL VH US20160264674中之標識符12、14、16、18、3、32、34、36、38、40、42、44、46、48、52 VL US2016026467中之標識符20、22、24、26、28、30、4、50
AXL VH WO2016097370中之標識符21、3、45 VL WO2016097370中之標識符22、4
B2MG VH WO2016126213A1中之標識符28 VL WO2016126213A1中之標識符29
B7H1 VH US20130034559中之標識符12、32、42、52、72、2、62 VL US20130034559中之標識符17、37、47、57、7、77、27、67
B7H3 VH WO2016033225中之標識符10、11、12、13、14、15、16、9 VL WO2016033225中之標識符1、2、3、4、5、6、7、8
B7H3 (CD276) VH WO2016044383中之標識符17、26、7 VL WO2016044383中之標識符18、27、8
B7H4 VH US20160159910中之標識符100、101、102、103、107、108、109、110、11l、112、113、114、12、127、130、131、132、133、137、2、20、28、36、37、38、4、56、99、144；WO2016160620中之標識符13、15、17 VL US20160159910中之標識符104、11、126、134、138、19、27、3、35、55、93、95、97、98、145、146、147、148；WO2016160620中之標識符29、31、33
BAT1 VH WO2013014668中之標識符5、6、7、8、9 VL WO2013014668中之標識符1、2、3、4
BCMA VH WO2016168773 A3中之標識符26；WO2016168595A1中之標識符142、148、154、160、166、172、178、184、190、196、202、208、214、220、226、232、238、244、250、256、262、268、274、280、286、292、298、304、310、316、322、328、334、340、346、352；WO2016094304A3中之標識符8；WO2016014565中之標識符171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、190、255、257、258、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81；EP3057994A1中之標識符38；WO2016187349A1中之標識符55；WO2016090320中之標識符1、13、17、21、25、29、33、37、41、45、49、5、53、57、61、65、9；WO2016120216中之標識符101、743、174、758、95、759、97、760、99；WO2015158671A1中之標識符11、741、17；WO2016014789中之標識符10、11、12、13、14；WO2016168766A1中之標識符15 VL WO2016168773 A3中之標識符25；WO2016097231中之標識符42；WO2016168595 A1中之標識符143、149、155、161、167、173、179、185、191、197、203、209、215、221、227、233、239、245、251、257、263、269、275、281、287、293、299、305、311、317、323、329、335、341、347、353；WO2016014565中之標識符192、193、194、195、196、197、198、199、200、201、204、205、207、208、211、259、260、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98；WO2016187349A1中之標識符53；WO2016094304 A3中之標識符7；WO2016090320中之標識符10、14、18、2、22、26、30、34、38、42、46、50、54、58、6、62、66；WO2016120216中之標識符100、102、175、96、98；WO2015158671A1中之標識符12、14、16、18；WO2016014789中之標識符7、8、9；WO2016168766A1中之標識符14
BMPR1A VH WO2011116212中之標識符12 - -
CA19.9 VH US20160333114A1中之標識符117 VL US20160333114A1中之標識符118
Campath 1 VH US20160333114A1中之標識符34 VL US20160333114A1中之標識符31、33
CD105 VH WO2014039682中之標識符13、14、16 VL WO2014039682中之標識符1、17、20、22、23
CD123 VH WO2015140268A1中之標識符11、13、14、21；WO2016120216中之標識符113、115、57、59、63；WO2016120220中之標識符12、123、24、25、26、27、28、29、30、9；WO2016028896中之標識符216、217、218、219、274 VL WO2016120220中之標識符9、11、18、19、20、21、22、23；WO2015140268A1中之標識符12、16、18、19、22；WO2016028896中之標識符275、276、277、278、307、308、309、310；US20160333108A1中之標識符5；WO2016120216中之標識符114、116、58、60、64
CD148 VH WO2005118643中之標識符10、14、18、2、22、26、30、6 VL WO2005118643中之標識符12、16、20、24、28、32、4、8
CD16 VH WO2015158868中之標識符25 VL WO2015158868中之標識符26
CD19 VH WO2016120216中之標識符53、55 VL WO2016168773 A3中之標識符27、31；WO2016187349A1中之標識符49；WO2016134284中之標識符11；US20140134142A1中之標識符194；WO2016120216中之標識符54、56；US20160152723中之標識符13、14、15、16、17、186、187、188、189、192、196、197、198、199、200、201、202、203、204、205、64、66、67、68、69、70、71、91；US20160039942中之標識符22；WO2016097231中之3361標識符63；US20160145337A1中之標識符3；US20160333114A1中之標識符112；US20160333114A1中之標識符114；US20160319020中之標識符13、6
CD19H 803 VH WO2016168773 A3中之標識符28、29、32、33、34、35；WO2016187349A1中之標識符51；US20160039942中之標識符20；WO2014184143中之標識符1；US20160145337A1中之標識符5；US20160152723中之標識符166、167、168、172、176、177、181、183、184、185、62；US20160319020中之標識符15；EP3057994A1中之標識符17、33、34、35；WO2016097231中之標識符62；WO2016134284中之標識符12；US20160333114A1中之標識符111、113 - -
CD2 VH WO2016122701中之標識符103、117、119 VL WO2016122701中之標識符102、116
CD20 VH WO2016097231中之標識符45；WO2017004091中之標識符11、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、7、9；US20170000900中之標識符26；US20160333114A1中之標識符54；US20170000900中之標識符25；US20170000900中之標識符24；US20170000900中之標識符23 VL WO2016097231中之標識符46；WO2017004091中之標識符10、12、8；US20160333114A1中之標識符51
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CD276 VH US20160053017中之標識符17、26、7 VL US20160053017中之標識符18、27
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CD324 VH US9534058中之識符21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、51、53、55、57、59、61、63、65、67、69、71 VL US9534058中之標識符20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68、70
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CD33 VH WO2016120216中之標識符65、67、69、71、77、79、81、83、84；WO2015150526A2中之標識符11、13、15、17；WO2016014576中之標識符57、58、59、60、61、62、63、64、65 VL WO2015150526A2中之標識符12、14、16、18；WO2016120216中之標識符66、68、70、72、78、80、82；WO2016014576中之標識符66、67、68、69、70、71、72、73、74
CD37 VH US20170000900中之標識符11、12、18 VL US20170000900中之標識符14、15
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CD4BS VH US20160194375A1中之標識符15、3 VL US20160194375A1中之標識符14、2
CD4i VH US20160194375A1中之標識符5 VL US20160194375A1中之標識符4
CD52 VH WO2010132659中之標識符103、136、137 VL WO2010132659中之標識符102、138
CD64 VH WO2016122701中之標識符129 VL WO2016122701中之標識符128
CD7 VH WO2016126213A1中之標識符16、20 VL WO2016126213A1中之標識符17、21
CD70 VH WO2015121454中之標識符81、85、89 VL WO2015121454中之標識符83、87、91；WO2015121454中之標識符83；WO2015121454中之標識符87；WO2015121454中之標識符91
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CD73 VH US20160145350中之標識符100、103、107、109、112、114、116、119、121、16、32、4、52、60、68、80、88；WO2016055609A1中之標識符135、40、21、3、28、36 VL US20160145350中之八方12、20、44、72、76、8、84、92；WO2016055609A1中之標識符22、29、37、4；US20160145350中之標識符101、102、104、106、110、117、118、120、122
CD74 VH US20100284906A1中之標識符6；US20040115193A1中之標識符10、11、9；US20130171064中之標識符23、27、30、33 VL US20130171064中之標識符25、29、31、35；US20040115193A1中之標識符12、13、14、11、4
CD76b VH US20160159906中之標識符15、17、19、23、27、29、37、57、59、61 VL US20160159906中之標識符16、18、22、38、58、60、62
CD79 VH WO2016122701中之標識符131 VL WO2016122701中之標識符130
CDIM VH WO2013120012中之標識符1、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、2、20、21、22、3、4、5、6、7、8、9 VL WO2013120012中之標識符28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49
CEA  VH US8287865中之標識符8 VL US8287865中之標識符10、38、39、7、9
Claudin  VH WO2016073649A1中之標識符101、103、105、107、109、111、113、115、117、119、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、23、27、31、35、39、43、47、51、55、59、63、67、71、75、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99 VL WO2016073649A1中之標識符114、116、118、120、22、25、29、33、37、41、45、49、53、57、61、65、69、73、77
CLDN18.2 VH US20160347815A1中之標識符12、2 VL US20160347815A1中之標識符13、3
CLL1 VH WO2016120219中之標識符13、14、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35；WO2016014535中之標識符195、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77；US20160075787中之標識符31、33、34、36、38、40、42、46；WO2016179319A1中之標識符150、103、105、107、109、111、113、115、117 VL WO2016120219中之標識符16、18、20、22、24、26、28、30、32、24、36；WO2016014535中之196、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90；US20160075787中之標識符30、32、35、37、39、41；WO2016179319A1中之標識符152、104、106、108、110、112、114、116、118
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collagen VH WO2007024921中之標識符21、4、15、17、18、19、20、5、6、7、1、2、3 VL WO2007024921中之標識符11、12、14、23、25、26、27、8、9
CS1 VH WO2016168773 A3中之標識符22；WO2016120216中之103、105、107、109；WO2015166056A1中之標識符13、15、17、19；WO2015121454中之標識符38、40、42、44、46；US20160075784A1中之標識符26 VL WO2016120216中之標識符104、106、108；WO2015166056A1中之標識符14、16、18、20、22；WO2015121454中之標識符39、41、43、45、47；WO2016120216中之標識符110、112
CSF VH US20050059113A1中之標識符10、102、14、18、2、22、26、30、34、38、46、50、54、58、6、62、66、70、74、78、82、86、90、94、98 VL US20050059113A1中之標識符12、32、44、48、60
CSPG4 VH WO2016077638中之標識符10、16、18、4、6、8；WO2016164429中之標識符8 VL WO2016164429中之標識符7；WO2016077638中之標識符12、14
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DR5 VH WO2016122701中之標識符18、82、90、98、8 VL WO2016122701中之標識符13、23、25、27、3、78、86、94、29；WO2016122701中之標識符62；WO2016122701中之標識符54；WO2016122701中之標識符70
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EGFR (EGFRvIII) VH WO2018231759中之標識符2124；WO2016016341中之標識符13；WO2016168773 A3中之標識符24；US20160304615中之標識符34；US20160200819A1中之標識符2；WO2016120216中之標識符91、93 VL WO2018231759中之4640、4641、4642、4643、4644、4645、4646、4647、4648、4649、4650、4651、4652、4653、4654、4655、4656、4657、4658；WO2016016341中之標識符14；WO2016168773 A3中之標識符23；US20160304615中之標識符42；US20160200819A1中之標識符1；WO2016120216中之標識符92、94
內皮因子 VH US20160009811中之標識符41、42、43、71、73、75、88、89、90、91、92 VL WO2011041441中之標識符103、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、102、100；US20160009811中之標識符100、102、103、3、4、5、70、72、74、93、94、95、96、97
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因子D  VH US20160017052中之標識符17、20、27、29、30、31、32、33、4 VL US20160017052中之標識符16、18、19、26、3
因子XII VH WO2014089493中之標識符15 VL WO2014089493中之標識符17
FAP VH WO2015118030中之標識符1、5；WO2016120216中之標識符170、172；US20160326265 A1中之標識符8 VL WO2015118030中之標識符2、6；WO2016120216中之標識符171、173；US20160326265A1中之標識符9
Fc受體類5 (FcRL5) VH WO2016090337中之標識符12、16、20、24、28、32、36、4、40、44、48、8、915、919 VL WO2016090337中之標識符11、15、19、23、27、3、31、35、39、43、47、7、917、921
FGFR3 VH US9499623中之標識符132、134、136 VL US9499623中之標識符133、135、137、139
捲曲受體 VH WO2010037041中之標識符10 VL WO2010037041中之標識符12、14
GAH VH US20060057147A1中之標識符7 VL US20060057147A1中之標識符8
GCC1 VH US20160030595A1中之標識符1 VL US20160030595A1中之標識符4、2
GD2 VH WO2016134284中之標識符17；US20130216528中之標識符1；WO2015132604中之標識符10、9；US20130216528中之標識符3、4、6、8 VL US20130216528中之標識符10、2、5、7、9；WO2015132604中之標識符11、12；WO2016134284中之標識符18
GD3 VH WO2016185035A1中之標識符11、13、15、17 VL WO2016185035A1中之標識符12、14、16、18
糖基抗原決定基及ErbBB I專一性 VH WO2012007167A1中之標識符7 VL WO2012007167A1中之標識符10
GM2 VH US20090028877中之標識符20、22、23、26、27、28、29、30 VL US20090028877中之標識符21、24、25、31、32、33、34、35
GPC3 VH US20160208015 A1中之標識符10、14、2、3、4、5、6、7、8、9；WO2016049459中之標識符22；US9409994B2中之標識符12、16、20、37、8 VL US9409994B2中之標識符10、14、18、22、24、26；US20160208015A1中之標識符16、31；WO2016049459中之標識符23
GPDL1 VH US20160108123中之標識符20 - -
GPRC5D VH WO2016090312中之標識符13、17、21、25、29、314、326、33、338、350、362、37、374、386、41、45、49、5、53、57、61、65、69、73、77、81、85、89、93、1、9 VL WO2016090312中之標識符10、14、18、2、22、26、30、303、315、327、339、34、351、363、375、38、387、42、46、50、54、58、6、62、66、70、74、78、82、86、94
Her2 VH WO2016168773A3中之標識符141、262、264、266、268、270；US9518118中之標識符11；US20160333114A1中之標識符62；US9518118中之標識符19、24 VL WO2016054555A2中之標識符140；WO2016168773A3中之標識符261、263、265、267、269；US9518118中之標識符10、18、23；WO2016168769A1中之標識符3；US20160333114A1中之標識符59、61
Herl/her3 VH WO2016073629之標識符8 VL WO2016073629之標識符4
HLAG VH WO2016160622A2中之標識符10、8 VL WO2016160622A2中之標識符18、20
HSP70 VH WO2016120217中之標識符11、12 VL WO2016120217中之標識符16、17
人類膠原蛋白VII VH WO2016112870中之標識符31 VL WO2016112870中之標識符32
人類CD79b VH WO2016112870中之標識符27；WO2016112870中之人類CD79b VH 2304標識符29 VL WO2016112870中之標識符28、30
人類ERBB3 VH WO2013052745中之標識符19、29、38、45、55、61、9 VL WO2013052745中之標識符10、20、30、39、46、56、62
ICOS VH US20160215059中之標識符15、16、19、23、7 VL US20160215059中之標識符17、18、20、24、8
IGFI VH WO2007118214中之標識符1、3、7；WO2015073575中之標識符7 VL WO2007118214中之標識符2、4、6、8
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IL13 VH US20160168242中之標識符302 VL US20160168242中之標識符303
IL13Ra2 VH WO2016123143中之標識符7、8 - -
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IL33 VH US20160168242中之標識符134、136、138、185、187、189、216、218、220、221、236、246、282、284、286、36、38、40、84、86、88 VL US20160168242中之標識符135、137、139、184、188、217、219、237、247、283、285、287、37、39、41、87
IL3α VH WO2008127735中之標識符22 VL WO2008127735中之標識符27、37
IL4R VH WO2009121847中之標識符10、11、14、15、9 VL WO2009121847中之標識符13、7、8
ILIRAP VH WO2016020502中之標識符1、10、19、8、9；WO2016179319A1中之標識符120、122、124 VL WO2016020502中之標識符14、15、17、18、2、20；WO2016179319A1中之標識符121、123、125
整合素 VH US 20140161794中之標識符3、4、5 VL US 20140161794中之標識符10、11、8、9
KDR VH WO2003075840中之標識符20、24、26、29、31、33 VL WO2003075840中之標識符22
KIR (利瑞路單抗) VH US20150290316中之標識符3；WO2014055648中之2371標識符1 VL US20150290316中之標識符5；WO2014055648中之標識符2
KIR2DL 1 VH WO2016126213A1中之標識符36 VL WO2016126213A1中之標識符37
KIR2DL 2/3 VH WO2016126213A1中之標識符36 VL WO2016126213A1中之標識符37
Klon43 VH WO2016097231中之標識符47 VL WO2016097231中之標識符48
KMA VH WO2016172703 A2中之標識符22 VL WO2016172703A2中之標識符2、21
LAG3 VH US20150259420中之標識符102、106、110、113、122、18、30、66、70、74、78；US20150259420中之標識符100、104、108、28、64、68、72、76、8、80；WO2015042246中之標識符1 VL US20150259420中之標識符32、36、40、44、48、52、56、60、84、88、92、96、134、34、38、42、46、50、54、58、60、86、90、94、98；WO2015042246中之標識符2
白細胞原A2 VH WO2010065962 A2中之標識符25 - -
白細胞原A VH WO2010065962 A2中之標識符9 VL WO2010065962 A2中之標識符24
LGR4 VH US20160046723中之標識符12、13、5、9 VL US20160046723中之標識符10、11、6
LGR5 VH US20160102146中之標識符10、12、16、18、20、22、24、26、4 VL US20160102146中之標識符15、19、21、23、25、3
LHR VH WO2016160618A3中之標識符1、2、3、4、5、6、7、8 - -
淋巴毒素β受體 VH WO2004002431中之標識符10、12、14、16、2 VL WO2004002431中之標識符1、15、4、6、8
類離胺酸氧化酶2 VH WO2011097513中之標識符42、44 VL WO2011097513中之標識符43、45
惡性可變受體 VH WO2015133817A1中之標識符1 VL WO2015133817A1中之標識符5
MCAM VH US20150259419中之標識符115、116、117、118、119、157、158、159、160、161、178、179；US20150239980中之標識符35、45、55、65、77、89；US20150259419中之標識符101、102、103、104、105、106、107 VL US20150259419中之標識符109、110、111、112、121、122、123；US20150239980中之標識符30、40、50、60、70、71、72
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MPER VH US20160194375A1中之標識符13 VL US20160194375A1中之標識符12
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MUCIN1 VH EP3049812A2中之標識符101、106、109、115、119、123、127、141、15、23、28、33、39、42、47、5、57、66、70、75、80、83、87、92 VL EP3049812A2中之標識符148、158、162、167、170、174、184、190、193、203、208、211、220、225、229、234、242、246、250、255、261、270、275、279、283、291、297、303、308、315、319、323、333、340
MVR VH US20160257762A1中之標識符1 VL US20160257762A1中之標識符5
N聚糖 VH US20160194375A1中之標識符7、9 VL US20160194375A1 N中之標識符6、8
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OlfmB VH WO2015054441A1中之標識符1 VL WO2015054441A1中之標識符2
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癌胚纖維結合蛋白 - - VL US20070202103A1中之標識符1、2、7
黏骨素 VH WO2016112870中之標識符58 VL WO2016112870中之標識符59
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OX40 VH WO2016196228中之標識符101、103、105、107、109、111、113、115、117、119、121、123、124、125、17、28、318、37、48、50、58、66、74、85、93、95、97、99；US20150190506中之標識符31、34、36、38、40、42、44、46、48、50、53、54、55、58、59、61；US20160137740中之標識符33、35、37、39、41、43、45、47、49、51、53、55、57、59、61、63、65、67、71；US8283450中之標識符44、46、48、7、9；US9428570中之標識符9、15；US8748585中之標識符19、21、22、23、29、58、59、7、77、78、79、80 VL US8283450中之標識符10、45、47、49、8；US9428570中之標識符11、7；WO2016196228中之標識符116、120、122、30、38、49、57、65、73、84、86、94、98；US8748585中之標識符24、26、27、28、30、60、8、81、82、83、84、85、86、87、88、89；US20160137740中之標識符30、32；US20150190506中之標識符32、35、39、41、43、45、47、49、51、52、56、57、62；US20160137740中之標識符29、37
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PDK1 VH WO2016090365中之標識符2 VL WO2016090365中之標識符9
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SEMAPHORIN 4D VH US20160115240A1中之標識符10、25、9 VL US20160115240A1中之標識符17、18、29
TAG72 VH US20160333114A1中之標識符115 VL US20160333114A1中之標識符116
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TEM8 VH US20160264662A1中之標識符1、3、5、7 VL US20160264662A1中之標識符4、6、8
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TIGIT VH US20160355589中之標識符10、11、12、124、125、126、127、128、129、13、136、138、14、143、144、149、15、150、16、17、18、19、20、21、22、23、24、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、63、94、7、9 VL US20160355589中之標識符130、131、132、133、137、139、145、146、151、152、25、26、27、28、29、30、50、51、52、64、95、8
TIM3 VH US20150086574中之標識符102、112、12、2、22、32、42、52、62、72、82、91；WO2013006490中之標識符82；WO2016179319A1中之標識符13、21、29、37、45、5、53、61、69、77、85、93；WO2013006490中之標識符7；US20150086574中之標識符107、117、17、27、37、47、57、67、7、77、87、97；WO2016179319A1中之標識符17、25、33、41、49、57、65、73、81、89、9、97 - -
組織因子 VH WO2004094475中之標識符10、19、23、27、29、6；US20160333114A1中之標識符38 VL US20040229301A1中之標識符25、31；WO2004094475中之標識符12、21、25、31、8；US20160333114A1中之標識符35、37
Tn糖肽 VH WO2015120180中之標識符19、20 - -
TRBC1 VH WO2015132598中之標識符1 VL WO2015132598中之標識符2
滋胚層糖蛋白5T4 VH WO2016034666A1中之標識符17、13、15、11 VL WO2016034666A1中之標識符18、12、14、16
Upar VH US20160333114A1中之標識符72 VL US20160333114A1中之標識符71、73
V2 VH US20160194375A1中之標識符11 - -
VEGF VH WO2000034337中之標識符4、8；WO2006012688A1中之標識符12、20、4、44；US20030175276A1中之標識符7；US20160090427中之標識符152、153、154、155、156、157、158、159 VL WO2000034337中之標識符2、6；US20030175276A1中之標識符9；WO2006012688A1中之標識符11、19、27、28、3、43；US20160090427中之標識符160、161、162、163、164、165、166、167
VEGFR2 VH WO2017004254中之標識符100、101、102、103、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、95、96、97、98、99 VL WO2017004254中之標識符107、108、109、110、111、112、113、86、87、88、89、90、91、92、93、94
VISTA VH WO2015097536中之標識符37、38、39、40 VL WO2015097536中之標識符41、42、43、44、45
VMS2 VH WO2000058363中之圖1 - -
WT1/HLA雙專一性 VH WO2015070061中之標識符104、111、128、14、32、50、68、86 VL WO2015070061中之標識符106、112、130、34、52、70、88
表 3：抗原結合域可包含源於結合至抗原目標(諸如所引用之公開案中所描述之抗原目標)之抗體或抗體片段的scFv，各公開案之內容出於所有目的以全文引用之方式併入本文中.
抗原目標 來源之實例
經活化αvβ3 US20090117096A1中之標識符8、2、4
阿達利單抗 US20160208021中之標識符41；WO2016112870中之標識符41
ALK WO2015069922中之標識符17、18、19、20、21、22、23；US20160280798A1中之標識符17、18、19、20、21、22、23、24；WO23015069922中之標識符24
B7H3 WO2016033225中之標識符99、100、101、102、103、104、102、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、87、88、89、90、91、92、94、95、96、97、98
B7H4 WO2013067492中之標識符1、2、3、4；US9422351B2中之標識符1
BCMA WO2016014565中之標識符152、158、176、185、188、200、212、218、224、284、290、296、302、314、326、344、129、130、131、132、133、134、135、136、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、263、264、265、266、271、273、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、64、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、263、264、265、266、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53；US20160311907A1中之標識符214、215、216、217、218、219、220、221、222、223、224、225、226、227、228、229、230、231、232、233、234、235、236、237、238、239、240、241、242、243、244、245、246、247、248、249、251
CCR4 WO2015191997中之標識符7、9
CD123 WO2016028896中之標識符157、158、159、160、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、199、200、201、202、203、204、205、206、207、208、209、210、211、212、213、214、215、478、480、483、485；WO2015092024A2中之標識符36；WO2016115482A1中之標識符57；EP3083691A2中之標識符36；US20160311907A1中之標識符15
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CD138 WO2016130598A1中之標識符36
CD19 EP3083671A1中之標識符53、54、37；WO2015157252中之標識符1、10、11、12、2；WO2016033570中之標識符10、2、206、207、208、209、210、211、213、214、215、216、217、218、219、220、221、222、223、224、225、4、45、47、49、51、53、55、57、51、53、55、57、59、6、8、87；WO2015157252中之標識符3、4、5、59、6、7、8、9；WO2015155341A1中之5754標識符5；WO2014184143中之標識符7 WO2016139487中之標識符9；US20160152723中之標識符10、2、206、207、208、209、210、211、212、213、214、215、216、217、218、219、220、221、222、223、224、225、4、45、47、49、51、53、55、57、59、6、8、87、89；EP3083691A2中之標識符32、35、38；WO2016115482A1中之標識符174；WO2012079000中之標識符20；WO2015092024A2中之標識符32、33、35、38；WO2016109410中之標識符39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51；WO2015155341A1中之標識符5、6；US20160145337A1中之標識符7、9；US9499629B2中之標識符20；WO2016164580中之標識符73；US20160152723中之標識符10、2、206、207、209、210、212、216、218、219、220、221、222、223、224、225、4、45、47、49、51、53、55、57、59、6、8、87、89；WO2016055551中之標識符5
CD19/CD22雙專一性 WO2016164731A2中之標識符1303、1307
CD20 WO2016164731A100中之標識符691；WO2016164731A101中之標識符692；WO2016164731A102中之標識符693；WO2016164731A103中之標識符694；WO2016164731A104中之標識符695；WO2016164731A105中之標識符696；WO2016115482A1中之標識符175
CD22 WO2013059593中之標識符5、6；US20150299317中之標識符9；WO2016164731A2中之標識符131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、203、209、215、221、227、232、238、244、250、256、262、268、274、280、286、292、298、304、310、316、322、328、334、340、346、353、358、364、370、376、383、388、394、400、406、412、418、423
CD276 US20160053017中之標識符10、19、28
CD3 WO2015153912A1中之標識符46、47
CD30 WO2016116035A1中之標識符20；US20160200824A1中之標識符2
CD33 WO2016014576中之標識符262、263、264、265、266、267、268、39、40、41、42、43、44、45、46、47；WO2015092024 A2中之標識符37；EP3083691A2中之標識符37；WO2016115482A1中之標識符153、154、155、156、157、158、159、160、161、162、163
CD33/CD3雙專一性 WO2014144722A2中之標識符33、34、84
CD37 US20170000900中之標識符21、22
CD44 WO2016042461A1中之標識符17
CD46 WO2016040683中之標識符1-42
CD5 WO2016138491中之標識符16
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CEA US20160303166A1中之標識符1；US20140242701A1中之標識符22
西妥昔單抗 WO2016112870中之標識符37；US20160208021中之標識符37
緊密連接蛋白 WO2016073649A1中之標識符11、5、7、9；WO2014179759A1中之標識符17
緊密連接蛋白6 WO2016115482A1中之標識符164
緊密連接蛋白7 WO2016115482A1中之標識符165
緊密連接蛋白8 WO2016115482A1中之標識符166
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CLDN8 WO2016150400中之標識符6
CLL1 WO2016014535中之標識符39、40、41、42、43、44、45、46、48、49、50、51；US20160311907A1中之標識符200、201、202、203、204、205、206、207、208、209、210、211、212、213
CMet US20040166544中之標識符11、12、13、14、15、16、17、18、19、2、21、22、23、25、26、27、28、3、30、31、33、34、35、36、37、38、39、4、40、41、42、43、44、48、49、5、50、51、52、53、54、55、56、57、58、6、60、7、9、29；US20150299326中之標識符26、27、28、29、30、32；US20130034559中之標識符32
CS1 WO2016090369之標識符1；WO2014179759A1中之標識符17
CSPG4 WO2015080981中之標識符2；EP3074025A1中之標識符2
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E7MC WO2016182957A1中之標識符223、224、225、226、227、228、229、230、231、232
EGFR WO2014130657中之標識符11、38、41、44、47、50、53、56、59、62、65、68、71、74、77、80、83、88、91、94
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END 0180 WO2013098813中之標識符6
ERBB2 US20110059076A1中之標識符26、27；US7244826中之標識符1、2
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FcRL WO2016090337中之標識符11、15、19、23、27、31、35、39、3、43、7、594、596、598、600、602、604、606、608、610、612、614、616、618、620、622、624、626、628、630、632、634、636、638、640、642、644、646、648、652、654、656、658、660、662、664、666、668、670、672、674、676、680、682、684、686、688、690、692、694、696、700、702、704、706、708、710、712、714、716、718、720、722、724、726、728、730、732、734、736、738、740、742、744、746、748、750、752、754、756、758、760、762、764、766、768、770、772、774、776、778、780、782、784、786、788、790、792、794、796、798、800、802、804、806、808、810、812、814、816、818、820、822、824、826、828、830、832、834、836、838、840、842、844、846、848、850、852、854、856、858、860、862、864、866、868、870、874、876、878、880、882、884、886、888、890、892、894、896、650、678
葉酸受體 US20170002072A1中之標識符15
葉酸受體α WO2012099973中之標識符15、23
FOLRl/CD3雙專一性 WO2014144722A2中之標識符90
GCN4 WO2016168773 A3中之標識符165、166、167、168、169、170
GD2 WO2016134284中之標識符19、20、21；WO2015132604中之標識符8
GPC3 WO2016049459中之標識符1；US20160208015A1中之標識符12
GPC4 WO2016049459中之標識符24
GPRC5D WO2016090312中之標識符100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123,301、313、325、337、349、361、373、385
HER2/CD3 WO2014144722 A2中之標識符9
人類CD79b WO2016112870中之標識符33
人類膠原蛋白VII WO2016112870中之標識符34
IL4 WO2009121847中之標識符17、16
整合素二價 WO2009070753中之標識符2、1
伊派利單抗 US20160208021中之標識符39；WO2016112870中之標識符39
Mec/CD3雙專一性 WO2014144722A2中之標識符78
間皮素 WO2015188141中之標識符7；WO2016090034中之標識符NO 47、46、57、48、49、50、51、53、54、55、56、58、59、62、64、65、66、67、68、69、70、52、60、61、63；WO2013142034中之標識符10、11、12；WO2013063419中之標識符11
MUC1 US20160130357中之標識符15
MUC2 US20160130357中之標識符17
MUC3 US20160130357中之標識符15
MUC4 US20160130357中之標識符17
納武單抗 US20160208021中之標識符38；WO2016112870中之標識符38
NYBR1 US20160333422A1中之標識符21；WO2015112830中之標識符21、18、19
O-乙醯化GD2神經節苷脂 US20150140023中之標識符29、31
OX40 US20150190506中之標識符33
PD1 US20160311917A1中之標識符39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61
PDK1 WO2016090365中之標識符15
PDL1奈米抗體 US20110129458中之標識符22、23、24、25、26、27
PDL2奈米抗體6462 US20110129458中之標識符28、29、30、31、32、33
PRAME WO2016191246A2中之標識符63、64、65、66、67、68、69
PSMA WO2012145714中之標識符19、21、30、31、34、35
PSMA雙功能抗體 WO2011069019中之標識符12、13、14、15
放射誘導性新抗原 WO2005042780A1中之標識符22、24
雷珠單抗 US20160208021中之標識符40；WO2016112870中之標識符40
RAS WO2016154047中之標識符81
利妥昔單抗 US20160208021中之標識符36；WO2016112870中之標識符36
RORI EP3083691A2中之標識符34；US20160208018A1中之標識符249、250 251、252、253、254、255、256、257、258、259、260、261、262、263、264、265、266、267、268；EP3083671A1中之標識符57；US20160304619A1中之標識符1、2；WO2015092024A2中之標識符34 in
替利珠單抗 WO2016112870中之標識符42
替利珠單抗(經突變) US20160208021中之標識符42
TOSO EP3098237A1中之標識符2
曲妥珠單抗 US20160208021中之標識符35；WO2016112870中之標識符35
TRBC1 WO2015132598中之標識符13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、3
TRBC2 WO2015132598中之標識符23、24、25、26、27、28、29、30、31、32
TSLPR US20160311910A1中之標識符1、2；WO2015084513中之標識符1、2
VEGF US20160090427中之標識符168、169、170、171、172、173、174、175；US20110177074A1中之標識符498、500、502、504、506、508
VEGFR2 US20120213783中之標識符1、2
WT1/HLA雙專一性 WO2015070061中之標識符108、113、18、36、54、72、90
表 4：抗原結合域可包含源於結合於抗原目標之CAR的抗原結合域，諸如所引用之公開案中所描述之抗原結合域，各公開案之內容出於所有目的以全文引用之方式併入本文中.
抗原目標 來源之實例
酸/鹼白胺酸拉鏈 WO2016124930中之標識符34、35
ALK WO2015069922中之標識符43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、84、85、86、87、88、89、90
APRIL基CAR US20160296562A1中之標識符53；US20160296562A1中之標識符52
BCMA WO2016168595A1中之標識符180、162、168、174、144、150、186、192、198、204、210、156、216、222、228、234、240、246、252、258、264、270、276、330、282、300、306、336、354、288、312、294、342、324、318、348；WO2015158671A1中之標識符48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42；WO2016014565中之標識符124、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、125、126、127、128、234、235、236、237、238、239、240、241、242、243、244、245、246、247、248、249、250、251、252、253、254、267、268、269、270；WO2015052538中之標識符1、2、3、4、5、20；US20160237139A1中之標識符1、2、3、4、5、6；WO2016094304 A3中之標識符9；WO2013154760中之標識符4、5、6、8、9、10、11、12；WO2016014789中之標識符15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、71、73；WO2016120216中之標識符125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、145、146、147、148、149、150；WO2016097231中之標識符102、106、107、108、109、110、111、112、129、130、131、132、133、134、135、136、113、114、115、116、117、118、101、100、137、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、103、104、105、213
CAR及閘(CD19及CD33) CD148磷酸酶 US20160296562中之標識符2
CAR及閘(CD19及CD5) US20160296562中之標識符43
CAR及閘(CD19及EGFR VIII) US20160296562中之標識符45
CAR及閘(CD19及GD2) US20160296562中之標識符41
CAR及閘(CD19或CD33) CD45磷酸酶 US20160296562中之標識符3
CAR及閘(CD19而非CD33) US20160296562中之標識符4、5
CAR而非閘(CD19而非CD33) US20160296562A1中之標識符6
CAR而非閘1 US20160296562中之標識符48
CAR而非閘2 US20160296562中之標識符49
CAR而非閘3 US20160296562中之標識符50
CAR或閘(DC19或DC33) US20160296562中之標識符1
具有CD28 ζ胞內域之CAT19 CAR WO2016139487中之標識符12
具有OX40 ζ胞內域之CAT19 CAR WO2016139487中之標識符11
CAT19，坎帕納架構 WO2016139487中之標識符10
CD123 WO2016142532中之標識符69；WO2015140268A1中之標識符23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、44、45、46、47、48；US20140271582中之標識符9、10、11、12；WO2016097231中之標識符56、57、58、59、60、61；WO2016028896中之標識符98、99、100、101、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156；WO2016120220中之標識符31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159、160、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、193、194、195、196、197；WO2016120216中之標識符1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、142
CD19 US9499629B2中之標識符12；US20160333108A1中之標識符24；US20160333108A1中之標識符25、29；US20160333108A1中之標識符27；EP2997134A4中之標識符1；EP3071687A1中之標識符19、20；WO2016168773A3中之標識符181；WO2015157399A9中之標識符2；WO2016174409A1中之標識符56、62；WO2016179319A1中之標識符145、293、294、295、296、297、298；WO2013176915A1中之標識符73；WO2013176916A1中之標識符73；US20130315884A1中之標識符73；US20140134142A1中之標識符73；US20150017136A1中之標識符73；US20150203817A1中之標識符73；US20160120905A1中之標識符73；US20160120906A1中之標識符73；WO2015124715中之標識符8、5；WO2014184744中之標識符73；WO2014184741中之標識符73；US20160145337A1中之標識符14、15；WO2014184143中之標識符14、15；WO2015075175中之標識符15、16；US20160145337A1中之標識符16；WO2014184143中之標識符16；WO2012079000中之標識符12；WO2016164580中之標識符31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、58；US20160296563A1中之標識符14、15；WO2015157252中之標識符31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42；WO2016139487中之標識符14、15；US20160250258A1中之標識符53、54、55、56、57、58；WO2015187528中之標識符1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13；WO2015157252中之標識符31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、58；WO2014153270中之標識符31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42；WO2016134284 (無標識符)；WO2016139487中之標識符13
CD19或CD33 WO2015075468中識別CD19或CD33之標識符1
CD19/CD20雙專一性 WO2016164731A2中之標識符1308；US9447194B2中之標識符2、8、11
CD19/IL13雙專一性 US20160340649A1中之標識符10
CD2 WO2016138491中之標識符10、11
CD20 WO2015157399A9中之標識符25；WO2016097231中之標識符177、181、182、183、184、185、186、187、205、206、207、208、209、210、211、188、189、190、191、192、193、176、212、194、195、196、197、198、199、200、201、202、203、178、179、180
CD22 WO2016164731A2中之標識符380、204、260、266、272、278、284、290、296、302、308、341、213、320、326、332、338、347、350、356、362、368、374、219、386、392、398、404、410、416、421、427、225、230、1109、236、242、248、254；WO2013059593中之標識符15、16、17、18、19、20、32；US20150299317中之標識符22、23、24
CD22/CD19雙專一性 WO2016149578中之標識符29、30；WO2016164731A2中之標識符1304
CD276 US20160053017中之標識符39、40、41、42、43、44、45、46、47、122、123、124、125、126、127、128、129、130
CD3 WO2016138491中之標識符12
CD30 WO2016008973A1中之標識符20；WO2016116035A1中之標識符1；WO2016134284 (無標識符)；WO2016008973中之標識符2
CD33 WO2016014576中之標識符48、49、50、51、52、53、54、55、83；WO2015150526A2中之標識符19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71
CD38 WO2016097231中之標識符70、71、72、64、65、66、67、68、69；WO2015121454中之標識符35、36、37
CD4 WO2016138491中之標識符13、14
CD410 EP3074419A2中之標識符7
CD435 EP3074419A2中之標識符5
CD44 WO2016042461A1中之標識符21、22、23、24、25、26、27、28、31、32、33、34、35
CD4-DDY3 EP3074419A2中之標識符9
CD5 WO2016138491中之標識符15、13
CD52 WO2016138491中之標識符18
CD7 WO2016138491中之標識符17
CD70 WO2015121454中之標識符99
CD70 WO2015121454中之標識符100、93、94、96、101、95、97、98
CD8莖APRIL US20160296562A1中之標識符51
CEA WO2016008973A1中之標識符4；US20140242701A中之標識符29、30
CLDN6 WO2016150400中之標識符22、23、24
CLL1 WO2016179319A1中之標識符148；WO2016120218中之標識符35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112；WO2016014535中之標識符91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、197
COM22 US20160297884A1中之標識符358、359、360
CS1 WO2015121454中之標識符55、57、60、54、56、48、49、50、51、52、53、58、59、61、62；WO2014179759A1中之標識符28
DDD1/AD1拉鏈 WO2016124930中之標識符37
DDD1/AD1基拉鏈 WO2016124930中之標識符36
EGFR WO2014130657中之標識符3、2；US20140242701 A中之標識符36、37、38、39、35；WO2014130657中之標識符43、96、49、55、61、67、73、79、85、90、1
EGFR vIII WO2016016341中之標識符15、16、17、18、24、25、26、27；US20160311907A1中之標識符5、10、12、8、31、30、3；US20160200819A1中之標識符10；US9394368B2中之標識符43、49、55、61、67、73、79、85、90、96；US20170008963A1中之標識符49、55、61、67、73、79、85、90、2、1；US20140037628中之標識符10、11
FcRL5 US20170008963A1中之標識符11
葉酸受體 US20170008963A1中之標識符12
FR  US20170002072A1中之標識符22
FRβ US9402865B2中之標識符13、22；US9446105B2中之標識符2、4、6
FRa US20120213783中之標識符13、14
Fra WO2016090337中之標識符959；US20170002072A1中之標識符13
GCN4 US9446105B2中之標識符8、10
GD2 US9446105B2中之標識符12；WO2016168773A3中之標識符273、274；WO2015132604中之標識符26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37；WO2016134284 (無標識符)
GD3 WO2016185035A1中之標識符19；WO2016185035A1中之標識符20、21、22、23、24、25、26；WO2016134284 (無標識符)
GFRα WO2016185035A1中之標識符27
GPC3 WO2016185035A1中之標識符28、29；WO2016049459中之標識符3、27、10、29、14、30、31、18、33；US20160215261A1中之標識符22
HER2 US20160215261A1中之標識符25；WO2016073629中之標識符9、10；US20160333114A1中之標識符17、28、98、110；WO2016168773A3中之標識符271、272；WO2016168769A1中之標識符5
Herl/Her3雙專一性 US20160215261A1中之標識符23、24
HERVK WO2016168769A1中之標識符6
HIV Env WO2016168766A1中之標識符48、49；EP2997134A4中之標識符4；WO2015077789中之標識符7、9、47、49
HSP70 WO2015077789中之標識符51、53、5；WO2016120217中之標識符21、22、23、24、25、26、27、28、29
IL13 WO2016120217中之標識符30、31、32
IL13Ra2專一性 WO2016089916A1中之標識符4、5、6；WO2016123143中之標識符47、49；WO2016123143中之標識符51、53、55；US20160340649A1中之標識符1、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45
KMA US20160340649A1中之標識符46
間皮素 US20160340649A1中之標識符47、48；US20160340649A1中之標識符48；WO2016172703A2中之標識符27；WO2013142034中之標識符18、19、20、21、22、23；WO2013067492中之標識符3
MUC1 WO2013063419中之標識符5、7；US20160340406A1中之標識符51；US20160130357中之標識符30、32、34；WO2016130726中之標識符295、298、301、304、307、607、609、611、613
具有RQR82 ACD 19之NCAR WO2016130726中之標識符615
NYBR1 WO2016130726中之標識符617、619；WO2016097231中之標識符218；WO2015112830中之標識符26、29、60；US20160333422A1中之標識符1
P5A US20160333422A1中之標識符26、29、60
P5AC1 US20160297884A1中之標識符343、344、345、346
P5AC16 US20160297884A1中之標識符347、396、348
P6AP US20160297884A1中之標識符349、350、351
P6DY US20160297884A1中之標識符364、365、366
PC1C12 US20160297884A1中之標識符352、353、354
PCI US20160297884A1中之標識符361、362、363
PD1 US20160297884A1中之標識符355、356、357；WO2014153270中之標識符119 WO2014153270中之標識符121；US20160311917A1中之標識符22、24、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86；WO2016172537A1中之標識符26、39；US20160311907A1中之標識符40；WO2015157252中之標識符121、119；WO2016014565中之標識符24；WO2016014565中之標識符22
PD1 WO2016014565中之標識符23；WO2015142675中之標識符26
PSMA WO2015142675中之標識符39；US20160311907A1中之標識符28、29；WO2016097231中之標識符140、144、145、146、147、148、149、150、167、168、169、170、171、172、173、174、151、152、153、154、155、156、139、138、175、157、158、159、160、161、162、163、164、165、166、141、142、143、214
ROR1 WO2016097231中之標識符216、217、215；WO2016016344A1中之標識符79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、127、128、129、130、131,132、133,134、1335、136、137、138、97、98、99、100、101、102、121、122、123、124、125、126；WO2016187216A1中之標識符386、387、388、389、390、391、392、393、394
SNAP WO2016187216A1中之標識符395
SSEA4 WO2016187216A1中之標識符396、397
Tan US20160311907A1中之使用CD45磷酸酶識別CD19及CD33之標識符19；WO2016026742A1中之使用CD148磷酸酶識別CD19及CD33之標識符5；WO2016026742A1中之識別CD19而非CD33之標識符6且係基於含有來自LAIR1之胞內域之ITIM；WO2015075468中之基於PTPN6磷酸酶識別CD19而非CD33之標識符3；WO2015075468中之識別CD19而非CD33之標識符2且將PTPN6/CD148融合蛋白質募集至含有胞內域之ITIM
TOSO WO2015075468中之標識符5、4
滋胚層糖蛋白5T4 WO2015075468中之標識符6；US20160347854A1中之標識符4；EP3098237A1中之標識符4；WO2016034666A1中之標識符19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39
TSLPR WO2016034666A1中之標識符40、41、42；WO2015084513中之標識符39、40、41、42、43、44、45、46；US20160311910A1中之標識符39、40、41、42、43
VEGFR2 US20160311910A1中之標識符44、45、46；US20120213783中之標識符10、11、12
VNAR US20160333094A1中之標識符105、106、107、108、109、110
在各種實施例中，本發明之arCAR系統中所用之scFv片段可包括VH與VL域之間的連接子。連接子可為肽連接子且可包括任何天然存在之胺基酸。可包括於連接子中之例示性胺基酸為Gly、Ser、Pro、Thr、Glu、Lys、Arg、Ile、Leu、His及The。連接子應具有足以使VH與VL連接之長度，以使得其相對於彼此形成正確的構形，從而使其保持所需活性，諸如結合至抗原。連接子可為約5-50個胺基酸長。在一些實施例中，連接子為約10-40個胺基酸長。在一些實施例中，連接子為約10-35個胺基酸長。在一些實施例中，連接子為約10-30個胺基酸長。在一些實施例中，連接子為約10-25個胺基酸長。在一些實施例中，連接子為約10-20個胺基酸長。在一些實施例中，連接子為約15-20個胺基酸長。可使用之例示性連接子為富含Gly之連接子、含有Gly及Ser之連接子、含有Gly及Ala之連接子、含有Ala及Ser之連接子及其他柔性連接子。
在一個實施例中，連接子為Whitlow連接子。在一個實施例中，Whitlow連接子包含SEQ ID NO: 3中所列之胺基酸序列或與SEQ ID NO: 3具有至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列一致性之其變體。在另一實施例中，連接子為(G 4S) 3連接子。在一個實施例中，(G 4S) 3連接子包含SEQ ID NO: 25中所列之胺基酸序列或與SEQ ID NO: 25具有至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列一致性之其變體。
其他連接子序列可包括源於任何免疫球蛋白重鏈或輕鏈同型之免疫球蛋白鉸鏈區、CL或CH1之部分。可使用之例示性連接子包括表1中之SEQ ID NO: 26-56中之任一者。其他連接子描述於例如國際專利公開案第WO2019/060695號中，該專利以全文引用之方式併入本文中。
在一些實施例中，第二多肽包含N端處之抗原結合域及C端處之標記。在一些實施例中，第二多肽包含C端處之抗原結合域及N端處之標記。
在一些實施例中，第二多肽為可溶性多肽。
在一些實施例中，arCAR系統進一步包含一或多種額外多肽，其各自包含(a)結合至獨特抗原之抗原結合域及(b)由第一多肽之標記結合域識別之標記。
在另一態樣中，本文提供一種包含兩種或更多種本文所描述之arCAR的arCAR系統，其中各arCAR包含一對獨特的標記及標記結合域。
在其他態樣中，本文提供一種本文所描述之arCAR之多肽。在一個態樣中，本文提供一種本文所描述之arCAR之第一多肽。在一個態樣中，本文提供一種本文所描述之arCAR之第二多肽。
不希望受理論所束縛，本發明之arCAR系統可具有各種優點，包括： ●  抗ID分子/抗體片段之高度專一性使非目標相互作用降至最低，特定言之，與非人類蛋白質目標組合使抗體專一性降至最低。 ●  對標記上之結合環之專一性避免與類似構架/骨架蛋白質之非所需相互作用。亦可使用中和與目標之結合的真實ID。 ●  開發一系列親和力之固有能力以最佳化且調節「標記」多肽及CAR相互作用。 ●  該系統在可能的配對中不受限制，使得可開發多個最佳化CAR/「標記」多肽對，其各自具有獨特專一性以能夠實現目標療法，包括調節結合親和力、邏輯閘控、每個細胞多個專一性及每種治療多個可溶性藥物。 ●  該方法為「平台不可知的」，若對一個骨架產生免疫原性或其他限制，則其允許併入不同骨架(例如用VHH替換scFv)。 聚核苷酸及載體
在另一態樣中，本文提供編碼本發明之arCAR系統中之一或多種多肽的聚核苷酸。
在一些實施例中，本文提供一種編碼本發明之arCAR系統之第一多肽的聚核苷酸。在一些實施例中，本文提供一種編碼本發明之兩種或更多種arCAR系統之第一多肽的聚核苷酸。在一些實施例中，兩種或更多種arCAR系統各自包含一對獨特的標記及標記結合域。
在一些實施例中，本文提供一種編碼本發明之arCAR系統之第二多肽的聚核苷酸。在一些實施例中，本文提供一種編碼本發明之兩種或更多種arCAR系統之第二多肽的聚核苷酸。在一些實施例中，兩種或更多種arCAR系統各自包含一對獨特的標記及標記結合域。
在一些實施例中，本文提供一種編碼本發明之arCAR系統之兩種多肽的聚核苷酸。在一些實施例中，聚核苷酸編碼本發明之兩種或更多種arCAR系統之兩種多肽。在一些實施例中，兩種或更多種arCAR系統各自包含一對獨特的標記及標記結合域。
聚核苷酸可包含任何類型之核苷酸，包括(但不限於)可為單股或雙股、合成的或自天然來源中部分獲得且可含有天然、非天然或經改變之核苷酸的DNA及RNA。聚核苷酸可包含天然存在或非天然存在之核苷酸間鍵或兩種類型之鍵。
在一些實施例中，本文所描述之聚核苷酸為DNA分子。在各種實施例中，本文所描述之聚核苷酸為RNA分子。
在一個態樣中，本發明提供包含本文所描述之聚核苷酸的重組載體。
在一些實施例中，重組載體包含編碼本發明之arCAR系統之第一多肽的聚核苷酸。在一些實施例中，重組載體包含編碼本發明之兩種或更多種arCAR之第一多肽的聚核苷酸。在一些實施例中，兩種或更多種arCAR各自包含一對獨特的標記及標記結合域。
在一些實施例中，重組載體包含編碼本發明之arCAR系統之第二多肽的聚核苷酸。在一些實施例中，重組載體包含編碼本發明之兩種或更多種arCAR之第二多肽的聚核苷酸。在一些實施例中，兩種或更多種arCAR各自包含一對獨特的標記及標記結合域。
在一些實施例中，重組載體包含編碼本發明之arCAR系統之兩種多肽的聚核苷酸。在一些實施例中，重組載體包含編碼本發明之兩種或更多種arCAR之兩種多肽的聚核苷酸。在一些實施例中，兩種或更多種arCAR各自包含一對獨特的標記及標記結合域。
重組表現載體可為任何合適的重組表現載體。適合的載體包括經設計用於增殖及擴增或用於表現或用於這兩者的彼等載體，諸如質體及病毒。舉例而言，載體可選自pUC系列(Fermentas Life Sciences, Glen Burnie, Md.)、pBluescript系列(Stratagene, LaJolla, Calif.)、pET系列(Novagen, Madison, Wis.)、pGEX系列(Pharmacia Biotech, Uppsala, Sweden)及pEX系列(Clontech, Palo Alto, Calif.)。亦可使用噬菌體載體，諸如λGT10、λGT11、λZapII (Stratagene)、λEMBL4及λNM1149。適用於本發明之上下文中之植物表現載體之實例包括pBI01、pBI101.2、pBI101.3、pBI121及pBIN19 (Clontech)。適用於本發明之上下文中之動物表現載體之實例包括pcDNA、pEUK-Cl、pMAM及pMAMneo (Clontech)。在一些實施例中，雙順反子IRES載體(例如來自Clontech)可用於包括編碼本文所描述之arCAR系統之第一多肽及第二多肽的聚核苷酸。
在一些實施例中，重組載體為非病毒載體。病毒載體可為質體或轉座子(諸如PiggyBac轉座子或Sleeping Beauty轉座子)。在一個實施例中，載體為質體。
在一些實施例中，重組載體為病毒載體。適合的病毒載體包括(但不限於)：反轉錄病毒載體、慢病毒載體、α病毒載體、腺病毒載體、腺相關病毒載體(AAV)、疱疹病毒載體、疫苗載體及家禽痘病毒載體。在一些實施例中，病毒載體具有天然或經工程改造之能力以轉化宿主細胞(例如T細胞)。
可使用描述於以下之標準重組DNA技術製備重組載體：例如Sambrook等人, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 第3版, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. 2001；及Ausubel等人, Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing Associates and John Wiley & Sons, NY, 1994。環狀或線性之表現載體的構築體可經製備以含有在原核或真核宿主細胞中起作用之複製系統。複製系統可衍生自例如ColEl、2μ質體、λ、SV40、牛乳突狀瘤病毒及其類似者。
重組載體可包括一或多個標誌物基因，其允許選擇經轉化或經轉染之宿主。標誌物基因包括殺生物劑抗性(例如，對抗生素、重金屬等具有抗性)，營養缺陷型宿主中之互補以提供原營養及其類似者。用於重組表現載體之適合的標誌物基因包括例如新黴素/G418抗性基因、嘌呤黴素抗性基因、潮黴素抗性基因、組胺醇抗性基因、四環素抗性基因及安比西林(ampicillin)抗性基因。
適用於本發明之上下文中之載體可為「裸」核酸載體(亦即，具有極少或無蛋白質、糖及/或脂質囊封其之載體)，或與其他分子複合之載體。可適合地與載體組合之其他分子包括(不限於)：病毒塗層、陽離子型脂質、脂質體、多元胺、金粒子及靶向部分，諸如靶向細胞分子之配位體、受體或抗體。
載體DNA可經由習知轉化或轉染技術引入宿主細胞，例如免疫效應細胞中。如本文所用，術語「轉化」及「轉染」係指將外來核酸(例如DNA)引入細胞中之多種此項技術中公認的技術，包括磷酸鈣或氯化鈣共沈澱、DEAE-聚葡萄糖介導之轉染、脂質體轉染、基因槍或電穿孔。
在各種實施例中，編碼arCAR多肽(例如第一多肽或第二多肽)之聚核苷酸可操作地連接至至少調節元件。調節元件可能夠介導arCAR多肽(例如第一多肽或第二多肽)在宿主細胞中之表現。調節元件包括(但不限於)：啟動子、強化子、起始位點、聚腺苷酸化(polyA)尾、IRES元件、反應元件及終止信號。在某些實施例中，調節元件調節arCAR多肽表現。在某些實施例中，調節元件增加arCAR多肽(例如，第一多肽或第二多肽)之表現。在某些實施例中，調節元件在宿主細胞經活化後即增加arCAR多肽(例如，第一多肽或第二多肽)之表現。在某些實施例中，調節元件減少arCAR多肽(例如第一多肽或第二多肽)之表現。在某些實施例中，調節元件在宿主細胞經活化後即減少arCAR多肽(例如，第一多肽或第二多肽)之表現。 經修飾之宿主細胞
在一個態樣中，本文提供經修飾以表現本發明之arCAR之多肽中之一或多種的宿主細胞。
在一些實施例中，本文提供一種宿主細胞，其為包含本發明之arCAR系統之第一多肽的免疫效應細胞。在一些實施例中，本文提供一種包含本發明之兩種或更多種arCAR之第一多肽的宿主細胞在一些實施例中，兩種或更多種arCAR各自包含一對獨特的標記及標記結合域。
在一些實施例中，本文提供一種包含本發明之arCAR之第二多肽的宿主細胞。在一些實施例中，本文提供一種包含本發明之兩種或更多種arCAR之第二多肽的宿主細胞。在一些實施例中，兩種或更多種arCAR各自包含一對獨特的標記及標記結合域。
在一些實施例中，本文提供一種包含本發明之arCAR之第一及第二多肽兩者的宿主細胞。
在一些實施例中，本文提供一種包含本文所描述之聚核苷酸或重組載體的宿主細胞。
在各種實施例中，具有包含第一多肽之嵌合抗原受體的細胞為免疫效應細胞。在一些實施例中，細胞為T細胞、自然殺手(NK)細胞、細胞毒性T淋巴細胞(CTL)、調節T細胞、腫瘤浸潤性淋巴細胞(TIL)、樹突狀細胞或巨噬細胞。
在一些實施例中，免疫效應細胞衍生自幹細胞。在一些實施例中，細胞為誘導性富潛能幹細胞(iPSC)、造血幹細胞(HSC)或胚胎幹細胞(ESC)。在一些實施例中，細胞為iPSC。在一個實施例中，細胞為衍生自iPSC之T細胞。在一個實施例中，細胞為衍生自iPSC之NK細胞。
在一個態樣中，本文提供製備本文所描述之經修飾之宿主細胞的方法。
在一個實施例中，製備經修飾之宿主細胞之方法包含將編碼本發明之arCAR之第一多肽的聚核苷酸或包含聚核苷酸之重組載體引入細胞中。
在一個實施例中，製備經修飾之宿主細胞之方法包含將編碼本發明之arCAR之第二多肽的聚核苷酸或包含聚核苷酸之重組載體引入細胞中。
在一個實施例中，製備經修飾之宿主細胞之方法包含將編碼本發明之arCAR之第一多肽及第二多肽兩者的聚核苷酸或包含聚核苷酸之重組載體引入細胞中。
在各種實施例中，經修飾之細胞組成性表現本文所描述之arCAR之第一多肽。在各種實施例中，經修飾之細胞誘導性表現本文所描述之arCAR之第一多肽。
在各種實施例中，經修飾之細胞組成性表現本文所描述之arCAR之第二多肽。在各種實施例中，經修飾之細胞誘導性表現本文所描述之arCAR之第二多肽。
在各種實施例中，宿主細胞可為自體(autologous/autogenic) (「自身」)或非自體(或「非自身」，例如同種異體、同基因型或異種)。在一些實施例中，宿主細胞係自哺乳動物個體獲得。在一些實施例中，宿主細胞係自靈長類個體獲得。在一些實施例中，宿主細胞係自人類個體獲得。
在某些實施例中，使用免疫細胞，諸如淋巴細胞。淋巴細胞可自諸如(但不限於)周邊血液單核細胞、骨髓、淋巴結組織、臍帶血、胸腺組織、來自感染位點之組織、腹水、肋膜積液、脾組織及腫瘤之來源獲得。淋巴細胞亦可藉由幹細胞分化產生。在某些實施例中，淋巴細胞可使用熟習此項技術者通常已知之技術從自個體收集之血液獲得，該等技術諸如沈降，例如FICOLL™分離。
在某些實施例中，藉由血球分離術獲得來自個體之循環血液的免疫細胞。血球分離術裝置通常含有淋巴球，包括T細胞、單核球、粒細胞、B細胞、其他成核白血球、紅血球及血小板。在某些實施例中，藉由血球分離術收集之細胞可經洗滌以移除血漿部分且將細胞置於適當緩衝液或培養基中以用於後續處理。細胞可用PBS或用不具有鈣、鎂及大部分(若並非所有)二價陽離子之另一適合的溶液洗滌。洗滌步驟可藉由熟習此項技術者已知之方法實現，諸如(但不限於)使用半自動流通式離心機(例如Cobe 2991細胞處理器或Baxter CytoMate)。在洗滌之後，可將細胞再懸浮於多種生物相容性緩衝液、細胞培養介質或其他具有或不具有緩衝液之鹽水溶液中。
在某些實施例中，T淋巴細胞可藉由溶解紅血球及消耗單核球而與外周血液單核細胞(PBMC)分離。作為一實例，細胞可藉由經由PERCOLL™梯度進行之離心來分選。在某些實施例中，在分離PBMC之後，細胞毒性及輔助T淋巴細胞可在活化、擴增及/或基因修飾之前或之後分選為原始、記憶及效應T細胞亞群。
在某些實施例中，可富集T淋巴細胞。舉例而言，T淋巴細胞之特定亞群使用陽性或陰性選擇技術表現一或多種標誌物，諸如(但不限於)：CD3、CD4、CD8、CD14、CD15、CD16、CD19、CD27、CD28、CD34、CD36、CD45RA、CD45RO、CD56、CD62、CD62L、CD122、CD123、CD127、CD235a、CCR7、HLA-DR或其組合。在某些實施例中，用於本發明之組合物中之T淋巴細胞並不表現或實質上並不表現以下標誌物中之一或多者：CD57、CD244、CD160、PD-1、CTLA4、TIM3及LAG3。
在某些實施例中，可富集NK細胞。舉例而言，使用陽性或陰性選擇技術表現一或多種標誌物(諸如(但不限於)：CD2、CD16、CD56、CD57、CD94、CD122或其組合)的T淋巴細胞之特定亞群。
在某些實施例中，諸如誘導性富潛能幹細胞(iPSC)及胚胎幹細胞(ESC)之富潛能幹細胞(PSC)用於產生諸如NK細胞或T淋巴細胞之宿主細胞。人類iPSC及人類ESC可藉由此項技術中已知之各種方法產生。PSC (例如，iPSC或ESC)可藉由本發明之arCAR修飾，例如，藉由使細胞與編碼arCAR之多肽的聚核苷酸或重組載體接觸，且經工程改造之PSC可用於產生或生成包含本發明之arCAR的免疫細胞(例如，T細胞)。
iPSC可直接自成人細胞(例如體細胞)產生。iPSC可藉由將一組特定的富潛能性締合基因或「再程式化因子」引入給定細胞類型而衍生或產生。再程式化因子包括(但不限於)：OCT4 (亦稱為「POU5FL」)、SOX2、cMYC及KLF4，其亦稱為Yamanaka因子。參見Takahashi, K; Yamanaka, S (2006). Cell 126 (4): 663-76。再程式化因子中之每一者可在功能上經相關轉錄因子、miRNA、小分子或甚至非相關基因(諸如譜系說明符)替換。在引入再程式化因子時，細胞開始形成類似於PSC之群落，該等群落可基於其形態、選擇其生長之條件或經由表面標誌物或報導基因之表現而分離。在某些實施例中，用於本發明之方法中之PSC為個體專一性的。
已知用於藉由使用Yamanaka因子(OCT4、SOX2、KLF4及cMYC)再程式化自各種類型之體細胞產生PSC的技術。舉例而言，將成熟淋巴細胞再程式化成iPSC係針對鼠類B細胞(Hanna等人, (2008) Cell, 133, 第250-264頁；Wada等人, (2011) Int. Immunol., 23, 第65-74頁)、針對鼠類T細胞及成熟NK T細胞(Watarai等人, (2010) J. Clin. Invest., 120, 第2610-2618頁)及針對人類T細胞(Loh等人, (2010) Cell Stem Cell, 7, 第15-19頁；Seki等人, (2010) Cell Stem Cell, 7, 第11-14頁)實現。iPSC可藉由使用全周邊單核細胞(PBMC或CD3 +細胞作為源細胞群體自人類T細胞產生(Loh等人, (2010) Cell Stem Cell, 7, 第15-19頁；Seki等人, (2010) Cell Stem Cell, 7, 第11-14頁；Staerk等人 (2010) Cell Stem Cell, 7, 第20-24頁；Brown等人, (2010) PloS One 5, e11373)。
為了達成宿主細胞組合物之足夠治療劑量，宿主細胞通常經歷一或多輪刺激/活化。在某些實施例中，產生用於投與個體之宿主細胞的方法包含在一或多種刺激信號或藥劑(例如化合物、小分子，例如小有機分子、核酸、多肽或其片段、同功異型物、變體、類似物或衍生物)存在下刺激宿主細胞以變得活化。在某些實施例中，產生用於向個體投與之宿主細胞之方法包含刺激宿主細胞以變得活化及在一或多種刺激信號或藥劑存在下增殖。
免疫細胞(例如，T淋巴細胞及NK細胞)可藉由誘導其生物狀態之變化而活化，藉由該變化細胞表現活化標誌物、產生細胞介素、增殖及/或變得對目標細胞具有細胞毒性。所有此等改變均可由初級刺激信號產生。在初始刺激之後，協同刺激信號擴大初級信號之量值且抑制細胞死亡，產生較持久的活化狀態且因此產生較高的細胞毒性能力。
T細胞可通常使用如例如美國專利6,352,694；6,534,055；6,905,680；6,692,964；5,858,358；6,887,466；6,905,681；7,144,575；7,067,318；7,172,869；7,232,566；7,175,843；5,883,223；6,905,874；6,797,514；及6,867,041中所描述之方法活化，該等專利中之每一者以全文引用之方式併入本文中。在某些實施例中，T細胞係藉由結合至活化CD3ζ之藥劑來活化。
在一些實施例中，CD2結合劑可用於向T細胞提供初級刺激信號。舉例而言而非限制，CD2藥劑包括(但不限於)：CD2配位體及抗CD2抗體，例如Tl 1.3抗體與Tl 1.1或Tl 1.2抗體組合(Meuer, S. C.等人 (1984) Cell 36:897-906)及9.6抗體(其識別與TI 1.1相同之抗原決定基)與9-1抗體組合(Yang, S. Y.等人 (1986) J. Immunol. 137:1097-1100)。亦可使用與上文所描述之抗體中之任一者結合至相同抗原決定基之其他抗體。
在一些實施例中，免疫細胞係藉由投與佛波醇肉豆蔻酸乙酸酯(PMA)及離子黴素來活化。在某些實施例中，宿主細胞係藉由投與誘導活化且隨後擴增之適當抗原來活化。在某些實施例中，PMA、離子黴素及/或適當抗原與CD3一起投與以誘導活化及/或擴增。
一般而言，用於本發明中之活化劑包括(但不限於)：抗體、其片段及具有抗體樣功能之蛋白質結合分子。(重組)抗體片段之實例為Fab片段、Fv片段、單鏈Fv片段(scFv)、二價抗體片段，諸如(Fab)2'片段、雙功能抗體、三功能抗體(Iliades, P.,等人, FEBS Lett (1997) 409, 437-441)、十功能抗體(Stone, E.,等人, Journal of Immunological Methods (2007) 318, 88-94)及其他域抗體(Holt, L. J.,等人, Trends Biotechnol. (2003), 21, 11, 484-490)。二價抗體片段可為(Fab)2'片段或二價單鏈Fv片段，而單價抗體片段可選自由以下組成之群：Fab片段、Fv片段及單鏈Fv片段(scFv)。
在某些實施例中，CD3ζ劑之一或多個結合位點可為二價蛋白質人工結合分子，諸如二聚脂質運載蛋白突變蛋白(亦即雙運載蛋白(duocalin))。在某些實施例中，受體結合試劑可具有單一第二結合位點(亦即，單價)。單價試劑之實例包括(但不限於)：單價抗體片段、具有抗體樣結合特性之蛋白質結合分子或MHC分子。單價抗體片段之實例包括(但不限於)：Fab片段、Fv片段及單鏈Fv片段(scFv)，包括二價單鏈Fv片段。
專一性結合CD3之藥劑包括(但不限於)：抗CD3抗體、抗CD3抗體之二價抗體片段、抗CD3抗體之單價抗體片段及具有抗體樣結合特性之蛋白質CD3結合分子。具有抗體樣結合特性之蛋白質CD3結合分子可為適體、基於脂質運載蛋白家族之多肽的突變蛋白、黏抗體、基於錨蛋白骨架之蛋白質、基於結晶骨架之蛋白質、阿德奈汀及高親和性多聚體。其亦可偶合至珠粒。
在某些實施例中，活化劑(例如CD3結合劑)可以約0.1 μg/ml至約10 μg/ml之濃度存在。在某些實施例中，活化劑(例如，CD3結合劑)可以約0.2 μg/ml至約9 μg/ml、約0.3 μg/ml至約8 μg/ml、約0.4 μg/ml至約7 μg/ml、約0.5 μg/ml至約6 μg/ml、約0.6 μg/ml至約5 μg/ml、約0.7 μg/ml至約4 μg/ml、約0.8 μg/ml至約3 μg/ml或約0.9 μg/ml至約2 μg/ml之濃度存在。在某些實施例中，活化劑(例如，CD3結合劑)係以約0.1 μg/ml、約0.2 μg/ml、約0.3 μg/ml、約0.4 μg/ml、約0.5 μg/ml、約0.6 μg/ml、約0.7 μg/ml、約0.8 μM、約0.9 μg/ml、約1 μg/ml、約2 μg/ml、約3 μg/ml、約4 μM、約5 μg/ml、約6 μg/ml、約7 μg/ml、約8 μg/ml、約9 μg/ml或約10 μg/ml之濃度投與。在某些實施例中，CD3結合劑可以1 μg/ml之濃度存在。
NK細胞可通常使用如例如美國專利7,803,376、6,949,520、6,693,086、8,834,900、9,404,083、9,464,274、7,435,596、8,026,097、8,877,182；美國專利申請案US2004/0058445、US2007/0160578、US2013/0011376、US2015/0118207、US2015/0037887；以及PCT專利申請案WO2016/122147中所描述之方法來活化，該等文獻中之每一者以全文引用之方式併入本文中。
在一些實施例中，NK細胞係藉由例如(且不限於) NK細胞上抑制受體(例如KIR2DL1、KIR2DL2/3、KIR2DL4、KIR2DL5A、KIR2DL5B、KIR3DL1、KIR3DL2、KIR3DL3、LILRB1、NKG2A、NKG2C、NKG2E或LILRB5受體)之抑制來活化。
在某些實施例中，NK細胞係藉由例如(且不限於)飼養細胞(例如經基因修飾以表現4-1BBL之天然K562細胞或K562細胞及細胞介素，諸如IL15或IL21)來活化。
在其他實施例中，干擾素或巨噬細胞衍生之細胞介素可用於活化NK細胞。舉例而言，此類干擾素包括(但不限於)干擾素α及干擾素γ，且此類細胞介素包括(但不限於)：IL-15、IL-2、IL-21。
在某些實施例中，NK活化劑可以約0.1 μg/ml約10 μg/ml之濃度存在。在某些實施例中，NK活化劑可以約0.2 μg/ml至約9 μg/ml、約0.3 μg/ml至約8 μg/ml、約0.4 μg/ml至約7 μg/ml、約0.5 μg/ml至約6 μg/ml、約0.6 μg/ml至約5 μg/ml、約0.7 μg/ml至約4 μg/ml、約0.8 μg/ml至約3 μg/ml或約0.9 μg/ml至約2 μg/ml之濃度存在。在某些實施例中，NK活化劑係以約0.1 μg/ml、約0.2 μg/ml、約0.3 μg/ml、約0.4 μg/ml、約0.5 μg/ml、約0.6 μg/ml、約0.7 μg/ml、約0.8 μM、約0.9 μg/ml、約1 μg/ml、約2 μg/ml、約3 μg/ml、約4 μM、約5 μg/ml、約6 μg/ml、約7 μg/ml、約8 μg/ml、約9 μg/ml或約10 μg/ml之濃度投與。在某些實施例中，NK活化劑可以1 μg/ml之濃度存在。
在某些實施例中，活化劑附接至固體載體，諸如(但不限於)：珠粒、存在於培養盤或孔中之吸收劑聚合物或其他基質，諸如(但不限於)瓊脂糖或玻璃；可藉由熟習此項技術者已知之方式在天然或重組細胞株之細胞表面上表現(諸如以天然或重組形式)。
在某些實施例中，宿主細胞可在刺激/活化之後經基因修飾。在某些實施例中，宿主細胞在刺激/活化之12小時、16小時、24小時、36小時或48小時內經修飾。在某些實施例中，細胞在刺激/活化之後16至24小時內經修飾。在某些實施例中，宿主細胞在24小時內經修飾。在某些實施例中，宿主細胞可在刺激/活化之前經基因修飾。
為了基因修飾宿主細胞以表現本發明之arCAR，必須將arCAR聚核苷酸或重組載體轉移至宿主細胞中。聚核苷酸轉移可經由病毒或非病毒遞送方法進行。適用於與本發明方法一起使用之聚核苷酸傳遞的方法包括熟習此項技術者已知之任何方法，藉由該等方法聚核苷酸可引入細胞器、細胞、組織或生物體中。
在各種實施例中，離體進行基因修飾。各種方法可用於經由離體修飾自個體移除之轉染細胞及組織。舉例而言，活體外反轉錄病毒基因轉移可用於經基因修飾之細胞自個體移除且細胞轉移回至個體中。參見例如Wilson等人, Science, 244:1344-1346, 1989及Nabel等人, Science, 244(4910):1342-1344, 1989，該兩者均以全文引用之方式併入本文中。在某些實施例中，宿主細胞可自個體移除且使用本發明之聚核苷酸或重組載體離體轉染。在某些實施例中，自個體獲得之宿主細胞可經本發明之聚核苷酸或重組載體轉染或轉導，且隨後投與回至個體。
在一些實施例中，宿主細胞可經由反轉錄病毒轉導來轉導。描述基因之反轉錄病毒轉導之參考為Anderson等人, 美國專利第5,399,346號；Mann等人, Cell 33:153 (1983)；Temin等人, 美國專利第4,650,764號；Temin等人, 美國專利第4,980,289號；Markowitz等人, J. Virol. 62:1120 (1988)；Temin等人, 美國專利第5,124,263號；國際專利公開案第WO 95/07358號；及Kuo等人, Blood 82:845 (1993)，該等文獻中之每一者以全文引用之方式併入本文中。
另一適合的基因轉移方法包括注射。在某些實施例中，聚核苷酸或重組載體可經由一或多次注射(例如針頭注射)遞送至細胞、組織或生物體。注射之非限制性方法包含注射組合物(例如基於鹽水之組合物)。聚核苷酸或重組載體亦可藉由直接顯微注射引入。注射之非限制性位點包括皮下、皮內、肌肉內、結節內(允許抗原直接遞送至淋巴組織)、靜脈內、前列腺內、腫瘤內、淋巴管內(允許直接投與DC)及腹膜內。應理解，注射製劑之恰當位點為必需的(例如刮去注射位點以觀測恰當針頭置放)。
電穿孔為另一適合的基因轉移方法。參見例如Potter等人, (1984) Proc. Nat'l Acad. Sci. USA, 81, 7161-7165及Tur-Kaspa等人, (1986) Mol. Cell Biol., 6, 716-718，該兩者出於所有目的全文併入本文中。電穿孔涉及細胞及DNA之懸浮液暴露於高電壓放電。在某些實施例中，可採用細胞壁降解酶(諸如果膠降解酶)使宿主細胞比未經處理之細胞更易於藉由電穿孔進行基因修飾。參見例如美國專利第5,384,253號，該專利出於所有目的以全文引用之方式併入本文中。
與本發明一起使用之電穿孔方法包括例如Sardesai, N. Y.及Weiner, D. B., Current Opinion in Immunotherapy23:421-9 (2011)以及Ferraro, B.等人, Human Vaccines7:120-127 (2011)，該兩者出於所有目的特此以全文引用之方式併入本文中。
核酸疫苗可用於將arCAR聚核苷酸或載體轉移至宿主細胞中。此類疫苗包括(但不限於)：非病毒載體、「裸」DNA及RNA以及病毒載體。用此等疫苗基因修飾細胞及使包括於此等疫苗中之基因表現最佳化的方法為熟習此項技術者已知的。
基因轉移之其他方法包括經脂質體介導之轉染(例如截留於懸浮於過量水溶液中之脂質複合物中之聚核苷酸)。參見例如Ghosh及Bachhawat, (1991) In: Liver Diseases, Targeted Diagnosis and Therapy Using Specific Receptors and Ligands. 第87-104頁。亦考慮與脂染胺或Superfect複合之聚核苷酸；DEAE-聚葡萄糖(例如使用DEAE-聚葡萄糖繼之以聚乙二醇將聚核苷酸遞送至細胞中，參見例如Gopal, T. V., Mol Cell Biol. 1985年5月; 5(5):1188-90)；磷酸鈣(例如使用磷酸鈣沈澱物降聚核苷酸引入至細胞中，參見例如Graham及van der Eb, (1973) Virology, 52, 456-467；Chen及Okayama, Mol. Cell Biol., 7(8):2745-2752, 1987)，及Rippe等人, Mol. Cell Biol., 10:689-695, 1990)；音波處理負載(藉由直接音波負載引入聚核苷酸，參見例如Fechheimer等人, (1987) Proc. Nat'l Acad. Sci. USA, 84, 8463-8467)；微彈轟擊(例如可將一或多個粒子塗佈有至少一種聚核苷酸且藉由推動力遞送至細胞中，參見例如美國專利第5,550,318號；美國專利第5,538,880號；美國專利第5,610,042；及PCT申請案WO 94/09699；Klein等人, (1987) Nature, 327, 70-73, Yang等人, (1990) Proc. Nat'l Acad. Sci. USA, 87, 9568-9572)；以及受體介導之轉染(例如藉由受體介導之內飲作用選擇性吸收大分子，其將使用不同受體之細胞類型專一性分佈在目標細胞中發生，參見例如Wu及Wu, (1987) J. Biol. Chem., 262, 4429-4432；Wagner等人, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 87(9):3410-3414, 1990；Perales等人, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 91:4086-4090, 1994；Myers, EPO 0273085；Wu及Wu, Adv. Drug Delivery Rev., 12:159-167, 1993；Nicolau等人, (1987) Methods Enzymol., 149, 157-176)，此處所引用之各參考文獻出於所有目的以全文引用之方式併入。
在其他實施例中，宿主細胞係使用基因編輯經同源定向修復(HDR)來基因修飾。同源定向修復(HDR)為細胞修復雙股DNA斷裂所用的機制。在HDR中，與雙股DNA斷裂位點同源之供體聚核苷酸用作修復經裂解DNA序列之模板，使得將遺傳資訊自供體聚核苷酸轉移至DNA。因此，新核酸材料可插入或複製至目標DNA裂解位點中。宿主細胞中之雙股DNA斷裂可藉由位點專一性核酸酶誘導。如本文所用之術語「位點專一性核酸酶」係指能夠專一性識別及裂解核酸(DNA或RNA)序列之核酸酶。適用於本發明中之位點專一性核酸酶包括(但不限於)：RNA引導之核酸內切酶(例如CRISPR相關(Cas)蛋白)、鋅指核酸酶、TALEN核酸酶或兆-TALEN核酸酶。舉例而言，能夠在目標DNA序列中誘導雙股斷裂之位點專一性核酸酶(例如Cas9+嚮導RNA)以及編碼本發明之arCAR之多肽的供體聚核苷酸可引入宿主細胞中。
在活化及轉導宿主細胞之後，培養細胞以增殖。
T細胞可經1、2、3、4、5、6、7、8、9或10輪或更多輪持續至少1、2、3、4、5、6或7天，至少2週，至少1、2、3、4、5或6個月或更長時間之擴增來培養。
可用於擴增T細胞之藥劑可包括介白素，諸如IL-2、IL-7、IL-15或IL-21 (參見例如Cornish等人 2006, Blood. 108(2):600-8，Bazdar及Sieg, 2007, Journal of Virology, 2007, 81(22):12670-12674，Battalia等人, 2013, Immunology, 139(1):109-120)。可用於擴增T細胞之藥劑之其他說明性實例為結合至CD8、CD45或CD90之藥劑，諸如αCD8、αCD45或αCD90抗體。T細胞群體之說明性實例包括抗原專一性T細胞、T輔助細胞、細胞毒性T細胞、記憶T細胞(記憶T細胞之說明性實例為CD62L|CD8|專一性中樞記憶T細胞)或調節T細胞(Treg之說明性實例為CD4+CD25+CD45RA+ Treg細胞)。
可用於擴增T細胞之額外藥劑包括如例如美國專利6,352,694；6,534,055；6,905,680；6,692,964；5,858,358；6,887,466；6,905,681；7,144,575；7,067,318；7,172,869；7,232,566；7,175,843；5,883,223；6,905,874；6,797,514；及6,867,041中所描述之方法，該等專利中之每一者以全文引用之方式併入本文中。
在某些實施例中，用於擴增之一或多種藥劑(例如，IL-2)係以約20單位/ml至約200單位/ml投與。在某些實施例中，用於擴增之一或多種藥劑(例如，IL-2)係以約25單位/ml至約190單位/ml、約30單位/ml至約180單位/ml、約35單位/ml至約170單位/ml、約40單位/ml至約160單位/ml、約45單位/ml至約150單位/ml、約50單位/ml至約140單位/ml、約55單位/ml至約130單位/ml、約60單位/ml至約120單位/ml、約65單位/ml至約110單位/ml、約70單位/ml至約100單位/ml、約75單位/ml至約95單位/ml或約80單位/ml至約90單位/ml投與。在某些實施例中，用於擴增之一或多種藥劑(例如，IL-2)係以約20單位/ml、約25單位/ml、約30單位/ml、35單位/ml、40單位/ml、45單位/ml、約50單位/ml、約55單位/ml、約60單位/ml、約65單位/ml、約70單位/ml、約75單位/ml、約80單位/ml、約85單位/ml、約90單位/ml、約95單位/ml、約100單位/ml、約105單位/ml、約110單位/ml、約115單位/ml、約120單位/ml、約125單位/ml、約130單位/ml、約135單位/ml、約140單位/ml、約145單位/ml、約150單位/ml、約155單位/ml、約160單位/ml、約165單位/ml、約170單位/ml、約175單位/ml、約180單位/ml、約185單位/ml、約190單位/ml、約195單位/ml或約200單位/ml投與。在某些實施例中，用於擴增之一或多種藥劑(例如，IL-2)係以約5 mg/ml至約10 ng/ml投與。在某些實施例中，用於擴增之一或多種藥劑(例如，IL-2)係以約5.5 ng/ml至約9.5 ng/ml、約6 ng/ml至約9 ng/ml、約6.5 ng/ml至約8.5 ng/ml或約7 ng/ml至約8 ng/ml投與。在某些實施例中，用於擴增之一或多種藥劑(例如，IL-2)係以約5 ng/ml、6 ng/ml、7 ng/ml、8 ng/ml、9 ng/ml或10 ng/ml投與。
NK細胞可經1、2、3、4、5、6、7、8、9或10輪或更多輪持續至少1、2、3、4、5、6或7天，至少2週，至少1、2、3、4、5或6個月或更長時間之擴增來培養。
可用於擴增NK細胞之藥劑可包括結合至CD16或CD56之藥劑，諸如αCD16或αCD56抗體。在某些實施例中，結合劑包括抗體(參見例如Hoshino等人, Blood. 1991年12月 15; 78(12):3232-40)。可用於擴增NK細胞之其他藥劑可為IL-15 (參見例如Vitale等人 2002. The Anatomical Record. 266:87-92，其出於所有目的以全文引用之方式併入本文中)。
適合於T細胞培養之條件包括適當培養基(例如最低必需培養基(MEM)、RPMI培養基1640、Lonza RPMI 1640、Advanced RPMI、Clicks、AIM-V、DMEM、a-MEM、F-12、TexMACS、X-Vivo 15及X-Vivo 20、Optimizer，其中添加胺基酸、丙酮酸鈉及維生素，無血清或補充有適當量之血清(或血漿)或已確定集合之激素及/或足以生長及擴增之一定量之一或多種細胞介素。
其他用於宿主細胞擴增之添加劑之實例包括(但不限於)：界面活性劑、piasmanate、pH緩衝液(諸如HEPES)及還原劑(諸如N-乙醯基-半胱胺酸及2-巰基乙醇)、抗生素(例如青黴素及鏈黴素)僅包括於實驗培養物中，而不在待輸注至個體中之細胞培養物中。目標細胞保持於支持生長所必需之條件下，例如適當溫度(例如，37℃)及氛圍(例如，空氣加5% CO 2)。
在其中PSC (例如，iPSC或ESC)用作起始細胞群體之某些實施例中，該方法可進一步包含將PSC分化成免疫細胞，諸如T細胞。用於獲得源自iPSC之造血細胞譜系之適用的分化方法及組合物包括此項技術中，例如國際專利公開案第WO2017078807號及第WO2019112899號中所描述之彼等方法及組合物，該等專利公開案之揭示內容以引用之方式併入本文中。源自iPSC之造血譜系細胞可包括(但不限於)：決定性溶血內皮、造血多潛能祖細胞、造血幹細胞及祖細胞、T細胞祖細胞、NK細胞祖細胞、T細胞、NK細胞、NKT細胞、B細胞、巨噬細胞及嗜中性白血球。
在一些實施例中，本發明亦提供純化本發明之arCAR之多肽的方法。在一些實施例中，該方法涉及自經修飾以表現arCAR之第二多肽之宿主細胞純化arCAR之第二多肽。在一些實施例中，arCAR之第二多肽為可溶性蛋白質。 醫藥組合物
在一個態樣中，組合物包含本文所描述之arCAR之一或多種多肽、聚核苷酸、包含其之載體及如本文所揭示之細胞組合物。在一些實施例中，本發明之組合物包括(但不限於)醫藥組合物。
在一個態樣中，本發明提供一種醫藥組合物，其包含本文所描述之arCAR之多肽及醫藥學上可接受之載劑及/或賦形劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含本文所描述之arCAR之第二多肽及醫藥學上可接受之載劑及/或賦形劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含本文所描述之兩種或更多種arCAR之第二多肽及醫藥學上可接受之載劑及/或賦形劑。
在另一態樣中，本發明提供一種醫藥組合物，其包含本文所描述之聚核苷酸或重組載體及醫藥學上可接受之載劑及/或賦形劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含編碼本文所描述之arCAR之第二多肽的聚核苷酸及醫藥學上可接受之載劑及/或賦形劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含編碼本文所描述之兩種或更多種arCAR之第二多肽的聚核苷酸及醫藥學上可接受之載劑及/或賦形劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含兩種或更多種各自編碼本文所描述之arCAR之第二多肽的聚核苷酸及醫藥學上可接受之載劑及/或賦形劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含有包含編碼本文所描述之arCAR之第二多肽的聚核苷酸的重組載體及醫藥學上可接受之載劑及/或賦形劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含有包含編碼本文所描述之兩種或更多種arCAR之第二多肽的聚核苷酸的重組載體及醫藥學上可接受之載劑及/或賦形劑。在各種實施例中，兩種或更多種arCAR各自包含一對獨特的標記及標記結合域。
在另一態樣中，本發明提供醫藥組合物，其包含本文所描述之經修飾之宿主細胞及醫藥學上可接受之載劑及/或賦形劑。
醫藥學載劑之實例包括(但不限於)：無菌液體，諸如水及油，包括石油、動物、植物或合成來源之油，諸如花生油、大豆油、礦物油、芝麻油及其類似油。水或水溶液、鹽水溶液以及水性右旋糖及甘油溶液較佳用作載劑，特定言之用於可注射溶液。
包含本文所揭示之經修飾宿主細胞之組合物可包含緩衝液，諸如中性緩衝鹽水、磷酸鹽緩衝鹽水及其類似緩衝液；碳水化合物，諸如葡萄糖、甘露糖、蔗糖或葡聚糖、甘露糖醇；蛋白質；多肽或胺基酸，諸如甘胺酸；抗氧化劑；螯合劑，諸如EDTA或麩胱甘肽；佐劑(例如氫氧化鋁)；及防腐劑。
包含本文所揭示之經修飾宿主細胞之組合物可包含以下中之一或多者：無菌稀釋劑(諸如注射用水)、鹽水溶液(較佳生理鹽水)、林格氏溶液(Ringer's solution)、等張氯化鈉、不揮發性油(諸如可充當溶劑或懸浮介質之合成單甘油酯或二甘油酯)、聚乙二醇、丙三醇、丙二醇或其他溶劑；抗菌劑，諸如苯甲醇或對羥基苯甲酸甲酯；抗氧化劑，諸如抗壞血酸或亞硫酸氫鈉；螯合劑，諸如乙二胺四乙酸；緩衝液，諸如乙酸鹽、檸檬酸鹽或磷酸鹽及用於調節張力之試劑，諸如氯化鈉或右旋糖。
在一些實施例中，組合物經調配用於非經腸投與，例如血管內(靜脈內或動脈內)、腹膜內、瘤內、心室內、胸膜內或肌肉內投與。非經腸製劑可封裝於由玻璃或塑膠製成之安瓿、拋棄式注射器或多劑量小瓶中。可注射醫藥組合物較佳為無菌的。在一些實施例中，組合物在投與之前自凍乾製劑復原。
在一些實施例中，經修飾宿主細胞可在其投與之前與黏附或滲透之物質(例如(但不限於)奈米粒子)混合。 治療方法
在一些態樣中，本文提供使用本發明之arCAR治療疾病之方法。
在一個態樣中，本文提供一種治療有需要之個體之疾病的方法，其包含向該個體投與治療有效量之 (i)        包含嵌合抗原受體之免疫效應細胞，該嵌合抗原受體包含本文所描述之arCAR的第一多肽，及 (ii)      該arCAR之第二多肽或編碼該第二多肽之聚核苷酸或包含該第二多肽之宿主細胞。
在一些實施例中，該方法進一步包含投與一或多種額外多肽，其各自包含(a)結合至獨特抗原之抗原結合域及(b)由第一多肽之標記結合域識別之標記。
在另一態樣中，本文提供一種治療有需要之個體之疾病的方法，其包含向個體投與治療有效量之 (i)        包含嵌合抗原受體之免疫效應細胞，該等嵌合抗原受體包含兩種或更多種arCAR之第一多肽，其中該兩種或更多種arCAR係選自本文所描述之arCAR系統，及 (ii)      該兩種或更多種arCAR之第二多肽，或編碼該等第二多肽之一或多種聚核苷酸，或包含該等第二多肽之一或多種宿主細胞。
在本文所描述之治療方法之各種實施例中，細胞為免疫效應細胞。在一些實施例中，細胞為T細胞、自然殺手(NK)細胞、細胞毒性T淋巴細胞(CTL)、調節T細胞或腫瘤浸潤性淋巴細胞(TIL)。在一些實施例中，細胞為T細胞。在一些實施例中，細胞衍生自iPSC。在各種實施例中，細胞組成性表現第一多肽。
在本文所描述之治療方法之各種實施例中，宿主細胞及/或一或多種多肽以亦包含如本文所描述之醫藥學上可接受之載劑及/或賦形劑的醫藥組合物形式投與。
在本文所描述之治療方法之各種實施例中，疾病為癌症。術語「癌症」、「惡性病」、「贅瘤」、「腫瘤」及「癌瘤」在本文中可互換地用於指代展現相對異常、不可控及/或自發生長之細胞，使得其展現表徵為明顯減輕細胞增殖之控制的異常生長表型。一般而言，本申請案中用於治療之所關注細胞包括癌變前(例如，良性)、惡性、轉移前、轉移性及非轉移性細胞。本發明之教示可與任何及所有癌症相關。為得到少數非限制性實例，在一些實施例中，本發明之教示應用於一或多種癌症諸如造血癌症，包括白血病、淋巴瘤(霍奇金氏及非霍奇金氏)、骨髓瘤及骨髓增生病；肉瘤、黑素瘤、腺瘤、固體組織癌瘤、口、咽喉、喉及肺之鱗狀細胞癌、肝癌；泌尿生殖癌，諸如前列腺、宮頸、膀胱、子宮及子宮內膜癌及腎細胞癌、骨癌、胰臟癌、皮膚癌、皮膚或眼內黑素瘤、內分泌系統癌、甲狀腺癌、副甲狀腺癌、頭頸癌、乳癌、胃腸癌及神經系統癌；良性病變，諸如乳頭狀瘤及類似癌症。在一些實施例中，藉由本發明方法治療之癌症為實體腫瘤。在一些實施例中，藉由本發明方法治療之癌症為血液惡性病。
在一些實施例中，藉由本發明方法治療之癌症為神經膠母細胞瘤、卵巢癌、子宮頸癌、頭頸癌、肝癌、前列腺癌、胰臟癌、腎細胞癌、膀胱癌或血液惡性病。在一些實施例中，血液惡性病為白血病(例如，急性淋巴球性(ALL)、慢性淋巴球性(CLL)、急性骨髓(AML)、慢性骨髓(CML)、骨髓瘤或淋巴瘤(例如，霍奇金氏或非霍奇金氏(NHL))。
在本文所描述之治療方法之各種實施例中，疾病為自體免疫疾病或病症。在一些實施例中，自體免疫疾病或病症為類風濕性關節炎(RA)、多發性硬化症(MS)、休格連氏症候群、全身性紅斑狼瘡、類肉瘤病、1型糖尿病、胰島素依賴性糖尿病(IDDM)、自體免疫甲狀腺炎、反應性關節炎、僵直性脊椎炎、硬皮病、多發性肌炎、皮肌炎、牛皮癬、脈管炎、韋格納氏肉芽腫病、重症肌無力、橋本氏甲狀腺炎、格雷夫氏病、慢性發炎性脫髓鞘多發性神經病變、格-巴二氏症候群、克羅恩氏病或潰瘍性結腸炎。
當投與超過一種具有獨特抗原結合專一性之多肽時，該等方法可用於靶向相同疾病(例如腫瘤或自體免疫疾病)中之多種抗原(或相同抗原中之多種抗原決定基)或不同疾病(例如腫瘤或自體免疫疾病)中之多種抗原。
在一些實施例中，將經修飾免疫效應細胞及一或多種第二多肽或編碼該一或多種第二多肽之聚核苷酸或包含該一或多種第二多肽之一或多種宿主細胞同時投與。
在一些實施例中，將經修飾免疫效應細胞及一或多種第二多肽或編碼該一或多種第二多肽之聚核苷酸或包含該一或多種第二多肽之一或多種宿主細胞依序投與。舉例而言，一或多種第二多肽或編碼該一或多種第二多肽之一或多種聚核苷酸或包含該一或多種第二多肽之一或多種宿主細胞可在投與經修飾宿主細胞之前或之後投與。
在一些實施例中，免疫效應細胞為相對於接受治療之個體的自體細胞。在一些實施例中，免疫效應細胞為相對於接受治療之個體的同種異體細胞。當免疫效應細胞自供體分離時，該方法可進一步包括預防移植物抗宿主疾病(GVHD)及宿主細胞排斥反應之方法。
在一些實施例中，額外步驟可在向個體投與之前進行。舉例而言，免疫效應細胞可在使免疫效應細胞與本文所描述之聚核苷酸或重組載體(例如編碼arCAR之第一多肽的聚核苷酸或重組載體)接觸(例如轉導或轉染)之後，但在向個體投與之前活體外擴增。在向個體投與之前，可進行活體外擴增1天或更多天，例如2天或更多天、3天或更多天、4天或更多天、6天或更多天或8天或更多天。替代地或另外，活體外擴增可在向個體投與之前進行21天或更短，例如18天或更短、16天或更短、14天或更短、10天或更短、7天或更短或5天或更短。舉例而言，活體外擴增可在向個體投與之前進行1-7天、2-10天、3-5天或8-14天。
在一些實施例中，在活體外擴增期間，免疫效應宿主細胞可以用抗原(例如TCR抗原)刺激。抗原專一性擴增視情況可補充有在非專一性刺激淋巴細胞增殖之條件下之擴增，諸如抗CD3抗體、抗Tac抗體、抗CD28抗體或植物血球凝集素(PHA)。經擴增之宿主細胞可直接投與至個體中或可冷凍以供未來使用，亦即用於後續投與個體。
在一些實施例中，免疫效應宿主細胞在輸注至個體中之前用介白素-2 (IL-2)離體處理，及/或個體在輸注之後用IL-2治療。此外，在一些實施例中，患者可在投與經修飾宿主細胞之前經歷製備型淋巴細胞耗盡(即免疫系統之暫時切除)。IL-2處理與製備型淋巴細胞耗盡之組合可增強經修飾宿主細胞之持久性。
在一些實施例中，免疫效應宿主細胞經編碼細胞介素之核酸轉導或轉染，該核酸可經工程改造以提供細胞介素之組成型、可調節或可暫時控制之表現。適合的細胞介素包括例如在收縮階段期間起增強T淋巴細胞之存活作用的細胞介素，其可促進記憶T淋巴細胞之形成及存活。
在一些實施例中，本發明之組合物(例如，宿主細胞或多肽)係以治療有效量投與。在本發明之方法中所投與之組合物的劑量將廣泛變化，視個體之身體參數、投與頻率、投與方式、清除速率及其類似者而定。初始劑量可較大，且之後可為較小維持劑量。劑量可以不頻繁地每週或每兩週投與，或分成較小劑量且每天、每半週等投與以維持有效劑量水準。經考慮多種劑量將有效達成經修飾宿主細胞之活體內持久性。亦考慮多種劑量將有效改良經修飾宿主細胞之活體內效應功能。
在一些實施例中，包含藉由本文所描述之方法製備之經修飾宿主細胞的組合物可以10 2至10 10個細胞/kg體重、10 5至10 9個細胞/kg體重、10 5至10 8個細胞/kg體重、10 5至10 7個細胞/kg體重、10 7至10 9個細胞/kg體重或10 7至10 8個細胞/kg體重(包括彼等範圍內之所有整數值)之劑量投與。經修飾宿主細胞之數目將視組合物意欲用於之治療用途而定。
經修飾宿主細胞可以上文所列之劑量投與多次。經修飾宿主細胞對經歷療法之患者可為同種異體、同基因型、異種或自體的。
亦考慮當用於治療各種疾病/病症時，本發明之組合物及方法可與適用於相同或類似疾病/病症之其他治療方法/藥劑一起使用。此類其他治療方法/藥劑可共投與(同時或依序)以產生累加或協同效果。各藥劑之適合的治療有效劑量可由於累加作用或協同作用而降低。
在某些實施例中，本發明之組合物(例如，宿主細胞或多肽)係在投與另一治療劑(諸如癌症治療劑)之前、實質上同時或之後投與。另一癌症治療劑可為例如化學治療劑、生物劑、手術、基因療法或放射治療。在一些實施例中，未向接受組合物之個體投與足以引起免疫細胞耗盡之治療，諸如淋巴細胞耗盡化學療法或放射療法。
在以上治療方法中之任一者之一些實施例中，該方法進一步包含向個體投與一或多種選自由以下組成之群的其他化合物：免疫抑制劑、生物製劑、益生菌、益菌助生質及細胞介素(例如IFN或IL-2)。
在一些實施例中，本發明之方法及組合物可與阻斷發炎(例如經由IL1、INFα/β、IL6、TNF、IL23等之阻斷)之其他療法組合。
本發明之方法及組合物可與其他免疫調節治療組合，諸如治療性疫苗(包括(但不限於)GVAX、DC基疫苗等)、檢查點抑制劑(包括(但不限於)阻斷CTLA4、PD1、LAG3、TIM3等之藥劑)或活化劑(包括(但不限於)增強4-1BB、OX40等之藥劑)。本發明之方法亦可與具有調節NKT功能或穩定性之能力的其他治療組合，該等其他治療包括(但不限於)：CD1d、CD1d-融合蛋白、未裝載或裝載有抗原之CD1d二聚體或CD1d更大聚合物、CD1d-嵌合抗原受體(CD1d-CAR)或存在於人類中之五種已知CD1異構體(CD1a、CD1b、CD1c、CD1e)之任何其他者。本發明之方法亦可與其他治療(諸如米哚妥林(midostaurin)、艾那尼布(enasidenib)或其組合)組合。
本發明之治療方法亦可與其他免疫療法及療法組合。舉例而言，當用於治療腫瘤時，本發明之組合物可與習知療法組合使用，諸如手術、放射療法、化學療法或其組合，視腫瘤類型、患者病狀、其他健康問題及多種因素而定。在某些態樣中，適用於與本發明之抑制劑組合腫瘤療法的其他治療劑包括抗血管生成劑。已識別多種抗血管生成劑且在此項技術中為已知的，包括例如TNP-470、血小板因子4、凝血酶致敏蛋白-1、金屬蛋白酶之組織抑制劑(TIMP1及TIMP2)、促乳素(16-Kd片段)、血管生長抑素(纖維蛋白溶酶原之38-Kd片段)、內皮生長抑素、bFGF可溶性受體、轉型生長因子β、干擾素α、可溶性KDR及FLT-1受體、胎盤增殖蛋白相關蛋白質以及藉由Carmeliet及Jain (2000)所列之彼等抗血管生成劑。在一個實施例中，本發明之經修飾宿主細胞可與VEGF拮抗劑或VEGF受體拮抗劑組合使用，諸如抗VEGF抗體、VEGF變體、可溶性VEGF受體片段、能夠阻斷VEGF或VEGFR之適體、中和抗VEGFR抗體、VEGFR酪胺酸激酶抑制劑及其任何組合(例如抗hVEGF抗體A4.6.1、貝伐單抗或蘭比珠單抗)。
可用於本發明之組合治療中之化學治療性化合物之非限制性實例包含例如胺麩精、安吖啶(amsacrine)、阿那曲唑(anastrozole)、天冬醯胺酶、氮胞苷、bcg、比卡魯胺(bicalutamide)、博萊黴素(bleomycin)、布舍瑞林(buserelin)、白消安(busulfan)、喜樹鹼(campothecin)、卡培他濱(capecitabine)、卡鉑、卡莫司汀(carmustine)、苯丁酸氮芥(chlorambucil)、順鉑、克拉屈濱(cladribine)、氯屈膦酸鹽(clodronate)、秋水仙鹼(colchicine)、環磷醯胺(cyclophosphamide)、環丙孕酮(cyproterone)、阿糖胞苷(cytarabine)、達卡巴嗪(dacarbazine)、放線菌素(dactinomycin)、道諾黴素(daunorubicin)、地西他濱(decitabine)、雙烯雌酚(dienestrol)、己烯雌酚(diethylstilbestrol)、多西他賽(docetaxel)、小紅莓(doxorubicin)、表柔比星(epirubicin)、雌二醇(estradiol)、雌氮芥(estramnustine)、依託泊苷(etoposide)、依西美坦(exemestane)、非格司亭(filgrastim)、氟達拉濱(fludarabine)、氟可體松(fludrocortisone)、氟尿嘧啶(fluorouracil)、氟甲睾酮(fluoxymesterone)、氟他胺(flutamide)、吉西他濱(gemcitabine)、金雀異黃酮(genistein)、戈舍瑞林(goserelin)、羥基脲、艾達黴素(idarubicin)、異環磷醯胺(ifosfamide)、伊馬替尼(imatinib)、干擾素(interferon)、伊立替康(irinotecan)、伊洛替康(ironotecan)、來曲唑(letrozole)、甲醯四氫葉酸(leucovorin)、亮丙瑞林(leuprolide)、左旋咪唑(levamisole)、洛莫司汀(lomustine)、氮芥(mechlorethamine)、甲羥孕酮(medroxyprogesterone)、甲地孕酮(megestrol)、美法侖(melphalan)、巰基嘌呤(mercaptopurine)、美司鈉(mesna)、甲胺喋呤(methotrexate)、絲裂黴素(mitomycin)、米托坦(mitotane)、米托蒽醌(mitoxantrone)、尼魯米特(nilutamide)、諾考達唑(nocodazole)、奧曲肽(octreotide)、奧沙利鉑(oxaliplatin)、太平洋紫杉醇(paclitaxel)、帕米膦酸鹽(pamidronate)、噴司他汀(pentostatin)、普卡黴素(plicamycin)、卟吩姆(porfimer)、丙卡巴肼(procarbazine)、雷替曲塞(raltitrexed)、利妥昔單抗(rituximab)、鏈脲黴素(streptozocin)、蘇拉明(suramin)、他莫昔芬(tamoxifen)、替莫唑胺(temozolomide)、替尼泊苷(teniposide)、睾固酮(testosterone)、硫鳥嘌呤、噻替派(thiotepa)、二氯化二茂鈦、拓朴替康(topotecan)、曲妥珠單抗(trastuzumab)、維甲酸(tretinoin)、長春鹼(vinblastine)、長春新鹼(vincristine)、長春地辛(vindesine)或長春瑞濱(vinorelbine)。
此等化學治療性化合物可藉由其作用機制分類成例如以下群組：抗代謝物/抗腫瘤劑，諸如嘧啶類似物(5-氟尿嘧啶、氟尿苷、卡培他濱、吉西他濱及阿糖胞苷)及嘌呤類似物、葉酸拮抗劑及相關抑制劑(巰基嘌呤、硫鳥嘌呤、噴司他汀及2-氯去氧腺苷(克拉屈濱))；抗增生/抗有絲分裂劑，包括天然產物(諸如長春花生物鹼(長春鹼、長春新鹼及長春瑞濱))，微管干擾劑(諸如紫杉烷(太平洋紫杉醇、多西他賽)、長春新鹼、長春鹼、諾考達唑、埃博黴素及溫諾平)、表鬼臼毒素(依託泊苷、替尼泊苷)、DNA損傷劑(放射菌素、安吖啶、蒽環黴素、博萊黴素、白消安(busulfan)、喜樹鹼、卡鉑、苯丁酸氮芥、順鉑、環磷醯胺、環磷氮介、放線菌素、道諾黴素、小紅莓、表柔比星、六甲苯胺奧沙利鉑(hexamethyhnelamineoxaliplatin)、異環磷醯胺、美法侖、甲基二(氯乙基)胺、絲裂黴素、米托蒽醌、亞硝基脲、普卡黴素、丙卡巴肼、紫杉醇、克癌易(taxotere)、替尼泊苷、三伸乙基硫代磷醯胺及依託泊苷(VP16))；抗生素，諸如放線菌素(放線菌素D)、道諾黴素、小紅莓(阿德力黴素(adriamycin))、艾達黴素、蒽環黴素、米托蒽醌、博來黴素、普卡黴素(光神黴素(mithramycin))及絲裂黴素；酶類(全身性代謝L-天冬醯胺且剝奪並不具有合成其自身天冬醯胺之能力之細胞的L-天冬醯胺酶)；抗血小板藥劑；抗增生/抗有絲分裂烷基化劑，諸如氮芥(氮芥(mechlorethamine)、環磷醯胺及類似物、美法侖、苯丁酸氮芥)、伸乙亞胺及甲基三聚氰胺(六甲三聚氰胺及噻替派)、磺酸烷基酯-白消安、亞硝基脲(卡莫司汀(BCNU)及類似物、鏈脲菌素)、三氮烯-達卡巴嗪(DTIC)；抗增生/抗有絲分裂抗代謝物，諸如葉酸類似物(甲胺喋呤)；鉑配位之錯合物(順鉑、卡鉑)、丙卡巴肼、羥基脲、米托坦、胺麩精；激素、激素類似物(雌激素、他莫昔芬、戈舍瑞林、比卡魯胺、尼魯米特)及芳香酶抑制劑(來曲唑、阿那曲唑)；抗凝劑(肝素、合成性肝素鹽及凝血酶之其他抑制劑)；纖維蛋白溶解劑(諸如組織纖維蛋白溶酶原活化因子、鏈激酶及尿激酶)、阿司匹林、雙嘧達莫、噻氯匹定、克羅匹多、阿昔單抗；抗遷移藥劑；抗分泌藥劑(布瑞汀)；免疫抑制劑(環孢靈、他克莫司(FK-506)、西羅莫司(雷帕黴素)、硫唑嘌呤、黴酚酸嗎啉乙酯)；抗血管生成化合物(例如TNP-470、金雀異黃酮、貝伐單抗)及生長因子抑制劑(例如纖維母細胞生長因子(FGF)抑制劑)；血管收縮素受體阻斷劑；氧化氮供體；反義寡核苷酸；抗體(曲妥珠單抗)；細胞週期抑制劑及分化誘導劑(維甲酸)；mTOR抑制劑、拓樸異構酶抑制劑(小紅莓(阿德力黴素)、安吖啶、喜樹鹼、道諾黴素、放線菌素、艾尼西德、表柔比星、依託泊苷、艾達黴素及米托蒽醌、拓朴替康、伊立替康)、皮質類固醇(可體松、地塞米松、氫皮質酮、甲潑尼龍、普賴松及潑尼龍)；生長因子信號轉導激酶抑制劑；粒線體功能障礙誘導劑及凋亡蛋白酶活化劑；以及染色體干擾劑。
在本文所描述之方法之各種實施例中，個體為哺乳動物。在一些實施例中，個體為人類。個體可為任何年齡或性別之青少年或成人。 實例
提供以下實例以進一步描述本文所揭示之實施例中之一些。該等實例意欲說明所揭示之實施例。然而，應理解，本申請案不限於下文所說明之例示性實施例。 實例1. 開發具有新穎VHH標記之arCAR
使用噬菌體呈現技術或藉由免疫接種識別對非人類蛋白質具有專一性之新穎VHH。選擇候選VHH用於產生及品質對照分析。進一步測試候選VHH之專一性及交叉反應性。前導VHH用於產生抗VHH。
對前導標記VHH具有專一性之抗VHH係使用噬菌體呈現技術識別或藉由對駱馬或其他駱駝科動物免疫接種來產生。可採用若干市售噬菌體活動，包括鎢、VHH及SuperHuman以及scFv。選擇結合至標記VHH之CDR或其他非構架區之候選抗VHH。
可溶性經標記之VHH表現且產生於CHO細胞中。經由蛋白A層析純化可溶性經標記之VHH。抗VHH作為胞外標記結合域併入CAR構築體中。T細胞係藉由慢病毒構築體轉導以表現含有抗VHH域之CAR。亦測試抗VHH之專一性及交叉反應性。
建立活體外分析以分別藉由評定細胞介素產生及細胞毒性來評估經由可溶性經標記之VHH及抗標記CAR之T細胞活化。選擇前導CAR構築體以用於進一步分析。 實例2. 開發具有預先存在之VHH標記之arCAR
選擇結合非人類蛋白質之預先存在之VHH。可用於構築本發明之arCAR之VHH的非限制性實例包括靶向RSV F-蛋白、李氏菌內化蛋白、眼鏡蛇磷脂酶A2、伊波拉、核蛋白、HSV糖蛋白D、乳球菌噬菌體RBP、嗜熱脂肪地芽孢桿菌、蓖麻毒素(例如V5E4)及雞卵白溶菌酶之VHH。VHH亦可經工程改造以消除擾亂CDR之結合。選擇候選VHH用於產生及品質對照分析。所選VHH用於產生抗VHH。
對前導標記VHH具有專一性之VHH係使用噬菌體呈現技術或藉由免疫接種在駱馬中來識別。可採用若干市售噬菌體活動，包括鎢、VHH及SuperHuman以及scFv。選擇結合至標記VHH之CDR或其他非構架區之候選抗VHH。
可溶性經標記之VHH表現且產生於CHO細胞中。經由蛋白A層析純化可溶性經標記之VHH。抗VHH作為胞外標記結合域併入慢病毒CAR構築體中。T細胞係藉由慢病毒構築體轉導以表現含有抗VHH域之CAR。亦測試抗VHH之專一性及交叉反應性。
建立活體外分析以分別藉由評定細胞介素產生及細胞毒性來評估經由可溶性經標記之VHH及抗標記CAR之T細胞活化。選擇前導CAR構築體以用於進一步分析。 實例3. 具有BCMA/抗BCMA VHH之arCAR
為測試arCAR概念，使用如下文所列之若干方法。
為測試蛋白質:蛋白質在arCAR平台中之相互作用之最初概念，將抗BCMA抗體與靶向腫瘤之域抗體融合。BCMA與CAR之跨膜域融合。併入BCMA/抗BCMA抗體之例示性arCAR展示於 圖 3A中。
在另一組實驗中，開發衍生自赫賽汀mAb序列之scFv。將針對抗赫賽汀個體基因型mAb識別之序列轉化為scFv型式。此等已知序列經工程改造至arCAR平台中以展現該概念。將赫賽汀scFv與CAR融合且將赫賽汀抗ID scFv與靶向腫瘤之可溶性域抗體(例如抗CD19 scFv或VHH)融合。併入赫賽汀/赫賽汀scFv之例示性arCAR展示於 圖 3B中。測試此arCAR在活體外之細胞毒性潛能。
對非人類蛋白質具有專一性之若干抗體已在文獻中識別。此類實例包括H6dyx、hP3-3、hAnti-Z、hHSV GD、hLP RBP、hVHH4、hSbsB及hV5E4。此等抗體以用於表徵之scFv或VHH型式構築。基於生物物理學特性選擇候選物。隨後針對此等結合物進行抗ID活動以開發多樣化親和力小組，該小組使得能夠圍繞調節arCAR親和力之優點進行概念驗證。 實例4. 具有赫賽汀/抗赫賽汀scFv之arCAR
在概念驗證研究中，開發衍生自赫賽汀(曲妥珠單抗) mAb之scFv。由抗赫賽汀個體基因型mAb開發另一scFv (scFv69)。將此等序列組裝至不同CAR表現構築體中( 表 5)，其中之每一者隨後封裝至慢病毒載體中且經由Jurkat細胞或初級T細胞中之病毒轉導來表現。藉由流式細胞測量術偵測CAR表現且結合至EGFR可溶性蛋白質。將CAR表現細胞與過度表現EGFR之CHO細胞或具有EGFR之天然細胞表面表現之細胞株組合使用以展現EGFR專一性細胞毒性。 圖 4A展示例示性arCAR，其中赫賽汀scFV與CAR融合且赫賽汀抗ID scFv與定向EGFR之VHH (9G8)融合。 圖 4B展示表現赫賽汀scFv CAR與9G8-scFv69融合蛋白偶合之T細胞能夠靶向EGFR+細胞。
表 5呈現包含赫賽汀scFv或抗赫賽汀個體基因型scFv69作為胞外標記結合域之所產生之CAR表現構築體。 圖 5展示用於遞送CAR構築體之慢病毒載體之載體圖譜。 表 6呈現赫賽汀scFv及scFv69 (赫賽汀抗ID)。
藉由攜帶 表 5中所描述之CAR構築體之慢病毒載體轉導Jurkat細胞以評估CAR表現及CD69活化。為量測CD69調節作為活化讀數，將表現Jurkat細胞之CAR與EGFR陽性細胞共培養24及48小時。在共培養之後，使用抗人類CD69-BV421抗體將細胞染色CD69水準且在Intellicyte流式細胞儀上量測。CAR構築體亦在T細胞中表現以評估細胞毒性。為進行此分析，根據製造商之說明使用Pan T細胞分離套組(Miltenyi目錄號130-096-535)分離T細胞。將細胞再懸浮於含30單位/ml IL2之RPMI、10% FBS中且用Dynabeads™人類T-活化劑CD3/CD28 (ThermoFisher，目錄號11132D)活化隔夜。次日，使用TransDux™ MAX慢病毒轉導劑(SBI，目錄號LV860A-1)，藉由含有CAR表現卡匣之慢病毒質體轉導T細胞( 圖 12A-12K)。將T細胞擴增七天且在第七天，設定細胞毒性分析。將藉由Recon細胞跟蹤紫色加標籤之目標細胞與CAR陽性T細胞以各種比率共培養24或48小時。48小時之後，在Intellicyte流式細胞儀上檢查細胞存活率。 表 5. CAR 表現構築體
CAR 形式 抗體 PLASMID
長鉸鏈，CD28 tm 4-1BB，CD3z 赫賽汀 p518
長鉸鏈，CD28 tm 4-1BB，CD3z scFv69 p517
中等鉸鏈，CD28 tm 4-1BB，CD3z 赫賽汀 p511
中等鉸鏈，CD28 tm 4-1BB，CD3z scFv69 p516
長鉸鏈，CD28 tm 4-1BB，CD3z 赫賽汀 p514
長鉸鏈，CD28 tm 4-1BB，CD3z scFv69 p515
短鉸鏈，CD28 tm 4-1BB，CD3z scFv69 p510
9G8
表 6. 赫賽汀、 scFv69 及 9G8 CAR 相關序列
CAR 區 序列 SEQ ID NO
赫賽汀scFv (核苷酸序列) GACATCCAGATGACTCAGTCACCATCAAGCCTGAGTGCATCCGTGGGCGATCGAGTGACAATAACATGTAGAGCGAGCCAGGATGTAAATACGGCAGTAGCGTGGTACCAACAGAAACCCGGCAAGGCTCCTAAGCTGTTAATCTACAGCGCCAGCTTCCTTTATAGTGGAGTGCCTTCAAGGTTCTCAGGATCTAGGTCCGGTACTGACTTCACGCTGACAATCTCGAGCCTACAACCCGAGGACTTCGCCACTTATTACTGCCAGCAGCATTACACTACTCCTCCCACATTCGGACAGGGAACCAAAGTCGAGATCAAAGGATCAACCTCTGGATCTGGCAAGCCCGGGAGCGGGGAAGGCTCTACTAAGGGTGAGGTGCAACTAGTGGAGAGTGGCGGAGGGCTCGTCCAGCCAGGAGGTTCCCTGAGGCTGAGTTGCGCTGCAAGCGGATTCAATATCAAGGACACGTACATACACTGGGTGCGCCAGGCCCCCGGAAAGGGACTGGAGTGGGTCGCCCGAATCTATCCTACTAATGGCTACACCAGGTATGCTGATTCAGTGAAAGGAAGGTTTACAATCTCTGCCGATACTTCAAAGAATACAGCTTATCTACAGATGAATTCACTTAGAGCCGAGGATACAGCCGTGTATTATTGCTCCCGATGGGGAGGAGATGGGTTCTACGCTATGGACTACTGGGGTCAAGGAACCCTGGTGACCGTTAGTTCA 69
赫賽汀scFv (胺基酸序列) DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVNTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQHYTTPPTFGQGTKVEIKGSTSGSGKPGSGEGSTKGEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVARIYPTNGYTRYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRWGGDGFYAMDYWGQGTLVTVSS 70
赫賽汀scFv VL DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVNTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQHYTTPPTFGQGTKVEIK 71
赫賽汀scFv VH EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVARIYPTNGYTRYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRWGGDGFYAMDYWGQGTLVTVSS 72
赫賽汀scFv連接子 GSTSGSGKPGSGEGSTKG 3
scFv69 (赫賽汀抗ID) (核酸) TCTTCTGAGCTGACTCAGGACCCTGCTGTGTCTGTGGCCTTGGGACAGACAGTCAGGATCACATGCCAAGGAGACAGCCTCAGAAGCTATTATGCAAGCTGGTACCAGCAGAAGCCAGGACAGGCCCCTGTACTTGTCATCTATGGTAAAAACAACCGGCCCTCAGGGATCCCAGACCGATTCTCTGGCTCCAGCTCAGGAAACACAGCTTCCTTGACCATCACTGGGGCTCAGGCGGAAGATGAGGCTGACTATTACTGTAACAGCAGTGAACCAACCCCACCAAGAGTGGTCTTCGGCGGCGGAACAAAACTGACAGTGCTGGGCTCTACAAGCGGCAGCGGCAAACCTGGATCTGGCGAGGGATCTACCAAGGGCGAGGTGCAACTATTGGAAAGTGGTGGCGGGCTGGTCCAACCGGGCGGGTCCTTGAGGCTGTCCTGTGCAGCCAGCGGGTTTACTTTTTCTTCCTACGCCATGTCTTGGGTACGACAGGCTCCCGGAAAAGGGCTCGAGTGGGTGAGTGCAATCTCCGGGAGTGGGGGCTCTACCTACTACGCCGATTCTGTCAAGGGTAGGTTCACTATCTCCAGGGATAATTCAAAGAATACTTTATACCTGCAGATGAATTCACTGCGAGCGGAAGATACAGCAGTGTACTATTGTGCCAAGAACGTGCACATCCAGCCCTTTGATTACTGGGGCCAGGGCACCAGCGTGACCGTGTCTAGC 73
scFv69 (赫賽汀抗ID) (胺基酸序列) SSELTQDPAVSVALGQTVRITCQGDSLRSYYASWYQQKPGQAPVLVIYGKNNRPSGIPDRFSGSSSGNTASLTITGAQAEDEADYYCNSSEPTPPRVVFGGGTKLTVLGSTSGSGKPGSGEGSTKGEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKNVHIQPFDYWGQGTSVTVSS 74
scFv69 VL SSELTQDPAVSVALGQTVRITCQGDSLRSYYASWYQQKPGQAPVLVIYGKNNRPSGIPDRFSGSSSGNTASLTITGAQAEDEADYYCNSSEPTPPRVVFGGGTKLTVL 75
scFv69 VH EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKNVHIQPFDYWGQGTSVTVSS 76
scFv69連接子 GSTSGSGKPGSGEGSTKG 3
9G8 VHH (抗EGFR) (核苷酸序列) GAAGTGCAGCTTGTGGAGAGTGGCGGTGGTTTAGTTCAACCAGGGGGCAGCCTGCGCTTGAGTTGTGCCGCATCGGGTCGTACCTTTTCTAGCTACGCAATGGGGTGGTTTCGTCAAGCTCCTGGGAAGGAACGTGAGTTTGTGGTCGCCATTAATTGGTCATCAGGGAGTACATACTACGCTGATTCCGTCAAAGGGCGCTTTACAATCTCACGCGATAACAGCAAGAATACCCTTTATTTACAAATGAATAGTCTGCGTGCAGAAGATACGGCTGTGTATTACTGCGCTGCGGGGTACCAAATCAACTCTGGGAATTACAACTTTAAGGACTACGAGTATGATTATTGGGGCCAGGGCACTCAGGTTACAGTCTCGAGC 77
9G8 VHH (抗EGFR) (胺基酸序列) EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAASGRTFSSYAMGWFRQAPGKEREFVVAINWSSGSTYYADSVKGRFTISRDNAKNTMYLQMNSLKPEDTAVYYCAAGYQINSGNYNFKDYEYDYWGQGTQVTVSS 78
T2A序列(核苷酸序列) GGATCCGGCGCCACAAACTTCAGCCTGCTGAAACAGGCCGGCGACGTGGAGGAAAACCCAGGCCCA 79
T2A序列(胺基酸序列) GSGATNFSLLKQAGDVEENPGP 80
GFP (用於表現偵測) (核苷酸序列) GTGTCCAAGGGCGAAGAACTGTTCACCGGCGTGGTGCCCATTCTGGTGGAACTGGACGGGGATGTGAACGGCCACAAGTTCAGCGTTAGAGGCGAAGGCGAAGGGGATGCCACAAACGGCAAGCTGACCCTGAAGTTCATCTGCACCACCGGAAAGCTGCCCGTGCCTTGGCCTACACTGGTCACCACACTGACATACGGCGTGCAGTGCTTCAGCAGATACCCCGACCATATGAAGCAGCACGACTTCTTCAAGAGCGCCATGCCTGAGGGCTACGTGCAAGAGAGAACCATCACCTTCAAGGACGACGGCACCTACAAGACCAGAGCCGAAGTGAAGTTCGAGGGCGACACCCTGGTCAACCGGATCGAGCTGAAGGGCATCGACTTCAAAGAGGACGGCAACATCCTGGGCCACAAACTTGAGTACAACTTCAACAGCCACAACGTGTAtATCACCGCCGACAAGCAGAAGAACGGCATCAAGGCCAACTTCAAGATCCGGCACAACGTGGAAGATGGCAGCGTGCAGCTGGCCGATCACTACCAGCAGAACACACCCATCGGAGATGGCCCTGTGCTGCTGCCCGATAACCACTACCTGAGCACCCAGAGCAAGCTGAGCAAGGACCCCAACGAGAAGCGGGACCACATGGTGCTGCTGGAATTTGTGACAGCCGCCGGAATCACCCACGGCATGGATGAGCTGTACAAG 81
8GFP (用於表現偵測) (胺基酸序列) VSKGEELFTGVVPILVELDGDVNGHKFSVRGEGEGDATNGKLTLKFICTTGKLPVPWPTLVTTLTYGVQCFSRYPDHMKQHDFFKSAMPEGYVQERTITFKDDGTYKTRAEVKFEGDTLVNRIELKGIDFKEDGNILGHKLEYNFNSHNVYITADKQKNGIKANFKIRHNVEDGSVQLADHYQQNTPIGDGPVLLPDNHYLSTQSKLSKDPNEKRDHMVLLEFVTAAGITHGMDELYK 82
組裝四種融合蛋白(或橋蛋白)構築體( 表 7)，其包含經由(G 4S) 3連接子(SEQ ID NO: 25)與赫賽汀scFv或抗赫賽汀個體基因型scFv69融合之9G8 VHH ( 表 6)。 圖 6A展示用於選殖描述於 表 7中之橋構築體之質體的載體圖譜。
EXPi-293細胞根據製造商之說明使用Expifectamine經質體轉染用於蛋白質表現，該質體攜帶 表 6中所描述之橋構築體。純化可溶性橋蛋白質。以1 ml/min將澄清上清液裝載於1 ml HiTrap MabSelect SuRe管柱上。用20個管柱體積之PBS洗滌管柱以移除未結合之蛋白質。管柱用10 cV之0.1 M乙酸納pH 3.5溶離且樣本用2.5 M Tris pH 6.5中和。藉由SEC拋光蛋白質樣本以移除高分子量物質。 圖 6B展示凝膠電泳影像，其展現自各構築體純化之橋蛋白質之純度。 表 7. 橋蛋白質構築體
橋形式 PLASMID
9G8-赫賽汀 p522
赫賽汀-9G8 p521
9G8-scFv69 p519
scFv69-9G8 p520
進行與經CAR轉導之Jurkat細胞結合之橋蛋白質的結合分析以偵測經scFv69-CAR轉導之Jurkat細胞與橋蛋白質之兩種變體：9G8_赫賽汀scFv及赫賽汀scFv 9G8之間的結合，如 圖 7A中所示。經由培育之後如下進行細胞染色分析，在Intellicyte上偵測橋蛋白質結合。經CAR轉導之Jurkat細胞與橋蛋白質一起培育30分鐘。在培育之後，洗滌細胞且隨後與生物素標記之EGFR一起培育30分鐘。在洗滌步驟之後，將經PE加標籤之鏈黴抗生物素蛋白與細胞一起培育。橋蛋白質結合、CAR轉導之Jurkat細胞係藉由流式細胞測量術測定為對9G8_赫賽汀scFv呈65%陽性及對赫賽汀scFv 9G8呈45%陽性( 圖 7B)。亦在相反方向上偵測橋蛋白質結合：具有scFv69_9G8橋之赫賽汀CAR及具有9G8_scFv69橋之赫賽汀CAR(資料未展示)。
評估目標細胞與表現CAR之T細胞之間的細胞毒性活性。如藉由流式細胞量測術所評定，在EGFR轉導之CHO細胞中偵測EGFR之表現( 圖 8A)。亦在T細胞中評估CAR表現。在具有長Ig-鉸鏈形式之CAR中觀測HER-CAR (p514)及scFv69-CAR (p515)兩者之最高表現( 圖 8B)。
為設定細胞毒性活性分析，以10,000個細胞/孔接種目標細胞(經EGFR轉導之CHO及親本CHO)，用CellTrace™紫(CTV)加標籤。CAR T細胞以100,000個細胞/孔接種，估算CAR效應細胞與目標細胞比率(E:T)為約5:1。將CAR-T細胞與CHO-EGFR+細胞一起共培養48小時。分析中所使用之對照展示於 表 8中。使用10、1、0.1及0 nM橋蛋白9G8-赫賽汀(p522)及9G8- scFv69(p519)。 表 8. 細胞毒性活性分析對照
對照 測試
9G8-CAR T 陽性對照，靶向專一性CAR介導之殺死
未經轉染之T細胞 陰性對照，非專一性T細胞介導之殺死
無T細胞 陰性對照，基線細胞死亡
赫賽汀CAR及赫賽汀橋 陰性對照，CAR-橋-殺死機制之專一性
scFv69 CAR及scFv69橋 陰性對照，CAR-橋-殺死機制之專一性
通用CAR-T細胞在與適當橋蛋白質配對時展現CD25活化但在與橋蛋白質錯配時並不如此( 圖 9A、 9B)。此外，通用CAR-T細胞在與適當橋蛋白質配對時展現細胞毒活性但在與橋蛋白質錯配時並不如此( 圖 10A 、 10B)。 實例5. 通用CAR平台之VHH之識別
VHH結合物經選擇作為潛在目標用於發現抗個體基因型以形成可互換充當「標記」及「抗標記」之專一性及獨特結合對。識別已知結合至非人類蛋白質之VHH清單。亦獲得結合至雞卵溶菌酶(HEL)之額外VHH。此等VHH及產生之質體提供於 表 9中且序列提供於 表 10中(帶下劃線之序列表示CDR位置)。 表 9. 候選 VHH
非人類蛋白質目標 質體 對應候選 VVH 多肽
RSV F蛋白 p243 SEQ ID NO.: 94
李氏菌內化蛋白 p279 SEQ ID NO.: 84
眼鏡蛇磷脂酶A2 p247 SEQ ID NO.: 86
伊波拉核蛋白 p246 SEQ ID NO.: 88
HSV糖蛋白D p249 SEQ ID NO.: 90
乳球菌噬菌體RBP p251 SEQ ID NO.: 92
嗜熱脂肪地芽孢桿菌 p250 SEQ ID NO.: 96
蓖麻毒素(V5E4) p252 SEQ ID NO.: 98
LYSO_CW_P01_B10 p245 SEQ ID NO.: 100
LYSO_CW_P01_B11 p242 SEQ ID NO.: 102
LYSO_CW_P01_D04 p244 SEQ ID NO.: 104
LYSO_CW_P01_F11 p248 SEQ ID NO.: 106
LYSO_CW_P01_F09 p278 SEQ ID NO.: 108
LYSO_CW_P01_C04 p253 SEQ ID NO.: 110
表 10. 候選 VHH 序列
CAR 區 序列 SEQ ID NO
李氏菌：內化蛋白6dyx (核苷酸序列) CAGGTGAAGTTGGAAGAGTCTGGTGGTGGCCTCGTCCAGGCTGGGGGGAGTCTTCGCCTTAGTTGCGCAGCTTCAGGTCGGACATACAGCACTTACGCGATGGGGTGGTTTCGCCAGACTCCGGGGAAGGAGAGAGAATTGGTGGCAGCAATAAATTGGTCAGGGGGCAACACGCACTATGCAGACTCTGTAAAAGGCCGGTTCACGATCAGTAGAGATAACGCCAAGAGCACCGTCTACCTCCAGATGAATTCCCTGAAACCTGAGGACACAGCAGTTTATTACTGTGCCGCTCCGAAAGGCCACACAGGGGATCATTACTGGGGACCCGGCACCCAAGTGACTGTGAGCTCG 83
李氏菌：內化蛋白6dyx (胺基酸序列) QVKLEESGGGLVQAGGSLRLSCAAS GRTYSTYAMGWFRQTPGKERELV AAINWSGGNTHYADSVKGRFTISRDNAKSTVYLQMNSLKPEDTAVYYC AAPKGHTGDHYWGPGTQVTVSS 84
單眼紋眼鏡蛇(眼鏡蛇)：磷脂酶A2 P3-3 (核苷酸序列) CAGGTGCAACTCGTTGAAAGTGGAGGCGGTAGCGTTCAGGCAGGTGGAAGCCTCAGGCTGTCCTGTGCGGCCAGTAGAGACACGTATGATTCACACTGTATGGGGTGGTTCCGGCAAGCGCCCGGAAAAGAGAGGGAACAGGTGGCGGCACATAACGGTGGCCGAAACACATATTACGCAGATAGCGTTAAAGGACGATTTACAATATCTCAGGACAATGCTAAGAATACGATGTATCTCCAAATGAATAGCCTTAAACCTGAAGATACAGCCATTTACTACTGCGCCGCGGACATGTCCGCGAGAAGGGTCGCAAACACAGGATGCAGATACAATTATTGGGGCCAAGGCACTTTGGTAACTGTGAGCTCG 85
單眼紋眼鏡蛇(眼鏡蛇)：磷脂酶A2 P3-3 (胺基酸序列) QVQLVESGGGSVQAGGSLRLSCAAS RDTYDSHCMGWFRQAPGKEREQV AAHNGGRNTYYADSVKGRFTISQDNAKNTMYLQMNSLKPEDTAIYYC AADMSARR VANTGCRYNYWGQGTLVTVSS 86
伊波拉：核蛋白 抗Z C (核苷酸序列) CAGGTGCAACTTCAACAAAGCGGCGGGGGATCCGTAACGCCAGGTGGATCACTGCGGCTTTCTTGTGCTGCTTCCGGATCCATTTCAGACTTTGCTGCTATGGCATGGTATCGGCAGGCCCCTGGCAAAGAAAGGGATTGGGTTTTTGGAACCATATTCTCAGCAGGTGCTTTGTTGTACGCAGAACCAGTTAAAGGTCGGTTTACCATATCAAGGGATAACGCTAAGAATACTGTATATCTTCAAATGAACAGTTTGAAACCAGAGGATACTGCCGTATACTATTGTCGCCTCTATGCTAAGGCAATTTATTGGGGTCAGGGCACACAGGTAACGGTGAGCTCG 87
伊波拉：核蛋白 抗Z C (胺基酸序列) KVQLQQSGGGSVTPGGSLRLSCAAS GSISDFAAMAWYRQAPGKERDWV FGTIFSAGALLYAEPVKGRFTISRDNAKNTVYLQMNSLKPEDTAVYYC RLYAKAIYWGQGTQVTVSS 88
疱疹單純型病毒：糖蛋白D (核苷酸序列) CAGGTGCAACTTCAGGCTAGTGGAGGGGGACTGGTGCAAGCTGGCGGGTCTTTGCGACTGTCCTGTGCAGCCTCAGGCCGAGCTACAGGCAATTATCCCATGGGATGGTTCCGCCAGGCCCCTGGAAAAGAACGCGAGTTCGTTGCAGCCATCAGTCGGGACGGCGACAGTACATACTACCGGGATAGTGTTAAAGGCCGATTTACCATATCCCGAGACAATACGAAAAATACGGCATATCTTCAGATGAACAGTCTTAAGCCGGAGGACACAGCCGTCTACTATTGTGCAGCTGACCGGCTGACAGCATATCGATACAATCCAGGGCAGATTGACTATTGGGGACAGGGTACACAAGTTACGGTGAGCTCG 89
疱疹單純型病毒：糖蛋白D (胺基酸序列) EVQLQASGGGLVQAGGSLRLSCAAS GRATGNYPMGWFRQAPGKEREFV AAISRDGDSTYYRDSVKGRFTISRDNTKNTAYLQMNSLKPEDTAVYYC AADRLTAY RYNPGQIDYWGQGTQVTVSS 90
乳球菌噬菌體：RBP (核苷酸序列) CAGGTGCAACTGGTCGAAAGTGGTGGGGGGCTCGTTCAAGCCGGTGGCAGTTTGCGCTTGTCATGCGCCGCTAGTGAAAGTACCTTCTCTAACTACGCGATGGGATGGTTCAGGCAAGCACCAGGCCCTGAAAGGGAATTTGTGGCTACGATTTCTCAAACAGGGTCCCACACCTACTACCGCAATTCTGTGAAGGGACGCTTCACGATTAGTCGGGATAACGCCAAGAACACAGTGTACCTTCAAATGAACAATATGAAGCCTGAAGACACGGCCGTGTATTATTGTGCAGCCGGAGACAACTATTACTATACCAGAACTTATGAGTACGACTACTGGGGCCAGGGTACTCAGGTCACTGTGAGCTCG 91
乳球菌噬菌體：RBP (胺基酸序列) QVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAASESTFSNYAMGWFRQAPGPEREFVATISQTGSHTYYRNSVKGRFTISRDNAKNTVYLQMNNMKPEDTAVYYCAAGDNYYYTRTYEYDYWGQGTQVTVSS 92
RSV：F-蛋白 (核苷酸序列) CAGGTGCAGTTGGTCGAGTCAGGTGGAGGGTCAGTGCAGCCAGGGGGGTCCCTTCGACTTAGTTGTGCAGCCAGTGGTTTTACACTGGATTACTATTACATTGGGTGGTTTCGACAGGCCCCCGGGAAGGAACGCGAGGGTGTTTCTTGTATTTCCAGCTCACATGGCTCAACCTATTATGCTGACTCAGTAAAAGGTCGGTTTACGATAAGCCGGGATAATGCAAAGAATACCGTGTATCTTCAAATGAATAGCCTTAAACCAGAAGATACCGCTGTGTACTATTGTGCCACTATACGCTCTAGCTCATGGGGGGGCTGTGTCCACTACGGGATGGATTATTGGGGGAAGGGCACGCAAGTCACGGTGAGCTCG 93
RSV：F-蛋白 (胺基酸序列) QVQLVESGGGSVQPGGSLRLSCAAS GFTLDYYYIGWFRQAPGKEREGVS CISSSHGSTYYADSVKGRFTISRDNAKNTVYLQMNSLKPEDTAVYYC ATIRSSSWG GCVHYGMDYWGKGTQVTVSS 94
嗜熱脂肪地芽孢桿菌：SbsB (核苷酸序列) CAGGTGCAGTTGCAAGAAAGTGGAGGGGGATTGGTGCAGGCAGGTGGATCTTTGAGGCTGTCCTGTGCAGCCTCTGGTCGCACTAGCTCTGCGTACGCTATGGGTTGGTTTCGACAGGCCCCTGGGAAAGAACGCGAGTTCGTTGCCGGCATTTCAAGCAAAGGCGGTAGCACGTATTATGGTGCCAGCATGAAAGGACGCTTTACGATATCACGGGATAACGCGAAAAATACGGTCTACTTGCAGATGAACGGTCTGGCCCCAGAAGACACGGCAGTGTACTACTGCGCTGCGAGCGACAAGTATAATTTCGACACCAGCCATGCGGGATACGGCTATTGGGGCCAAGGGACCCAGGTTACAGTGAGCTCG 95
嗜熱脂肪地芽孢桿菌：SbsB (胺基酸序列) QVQLQESGGGLVQAGGSLRLSCAAS GRTSSAYAM GWFRQAPGKEREFV AGISSKGGSTYYGASMKGRFTISRDNAKNTVYLQMNGLAPEDTAVYYCAAS DKYNFDTSHAGYGYWGQGTQVTVSS 96
蓖麻毒素(V5E4) (核苷酸序列) CAGGTGCAACTCGTGGAGACGGGTGGAGGACTTGTGCAAGCGGGCGGAAGCCTTAGGTTGAGCTGTGCTGCGTCTGGATTTACATTTAGTAGCTATGCAATGGGCTGGTTTCGCCAGGCGCCGGGGAAGGAACGCGACTTCGTTGCGGGTATCTCACTTAGCGGCGCCGGGACGTACTATGTAAAAGGAAGGTTCACCATTTCACGCGATAACGCTAAAAACACTGTCTATTTGCAGATGAACAGCCTCAAACCAGAGGATACTGCAGTATATTACTGTAAGGCCACAGGAGAAAGGGGGTATGGAGATCAGGGATATCTTGAAGTCTGGGGGAGAGGGACGCTGGTTACCGTGAGCTCG 97
蓖麻毒素(V5E4) (胺基酸序列) QVQLVETGGGLVQAGGSLRLSCAAS GFTFSSYAMGWFRQAPGKERDFV AGISLSGAGTYYVKGRFTISRDNAKNTVYLQMNSLKPEDTAVYYCKAT GERGYGDQGYLEVWGRGTLVTVSS 98
Lyso CW P01 B10 (核苷酸序列) CAGGTGCAACTTGTGGAGAGCGGGGGTGGTCTCGTCCAGGCTGGTGGCTCACTTCGCCTCTCCTGCGCGGCTAGCGGCGGGATATTCTCAGGTGGAAGAATGGGCTGGTTCAGACAAGCTCCAGGTAAAGAGAGAGAGTTCGTAGCGGCGGTAATCACTCGCGGGGGGTCTACTTATTATGCGGACTCTGTGAAGGGTAGATTTACAATTTCACGGGACAACGCAAAGAATACTGTGTACCTTCAAATGAACTCACTTAAACCTGAGGACACGGCGGTTTATTACTGCGCTGCAAGCGAGGTAACCTATGACGAGGGACATTACATCGGAACCAAATCCACTTACGACACTTGGGGACAGGGCACGCAGGTAACTGTGAGCTCG 99
Lyso CW P01 B10 (胺基酸序列) QVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAASGGIFSGGRMGWFRQAPGKEREFVAAVITRGGSTYYADSVKGRFTISRDNAKNTVYLQMNSLKPEDTAVYYCAASEVTYDEGHYIGTKSTYDTWGQGTQVTVSS 100
Lyso CW P01 B11 (核苷酸序列) CAGGTGCAGCTCGTAGAGTCCGGGGGAGGTCTGGTGCAAGCTGGAGGTTCCTTGCGATTGTCATGTGCGGCAAGCGGAGGAATTTTTTCTGGAGGACGAATGGGGTGGTTCCGACAGGCACCGGGAAAAGAGAGGGAGTTCGTAGCTGCCGTGATTACAAGGGGTGGTAGCACATACTATGCAGATAGCGTAAAGGGTAGGTTTACGATATCCAGGGATAACGCAAAGAACACGGTCTACCTGCAGATGAACTCCCTTAAACCAGAAGATACTGCCGTTTATTATTGCGCCGCATCAGAGGTAACTTACGATGAAGGTCGATACATTGGGACGAAGAGCACCTATGACACATGGGGGCAGGGTACTCAAGTGACCGTGAGCTCG 101
Lyso CW P01 B11 (胺基酸序列) QVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAASGGIFSGGRMGWFRQAPGKEREFVAAVITRGGSTYYADSVKGRFTISRDNAKNTVYLQMNSLKPEDTAVYYCAASEVTYDEGRYIGTKSTYDTWGQGTQVTVSS 102
Lyso CW P01 D04 (核苷酸序列) CAGGTGCAACTGGTGGAATCCGGGGGTGGACTGGTACAAGCCGGAGGGAGTTTGAGACTCTCTTGCGCTGCCTCCGGTAGAATTTTTTCAATATACGACACCATAGGATGGTTTCGACAAGCGCCTGGAAAGGAAAGAGAGTTTGTAGCGGCCACTATCACAACGGCGGGTATTACGACATATGATGATAGCGTTAAAGGACGGTTCACGATAAGCCGCGACAATGCCAAGAACACAGTGTACCTCCAAATGAATAGCCTTAAGCCCGAGGATACAGCCGTTTACTATTGTTACGTCCGAGTTGGTCGCGGTGACTACTGGGGTCAAGGTACTCAGGTGACTGTAAGCTCG 103
Lyso CW P01 D04 (胺基酸序列) QVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAASGRIFSIYDTIGWFRQAPGKEREFVAATITTAGITTYDDSVKGRFTISRDNAKNTVYLQMNSLKPEDTAVYYCYVRVGRGDYWGQGTQVTVSS 104
Lyso CW P01 F11 (核苷酸序列) CAGGTGCAACTGGTTGAATCTGGTGGTGGGCTGGTCCAAGCGGGAGGCAGTCTTCGACTTTCCTGCGCAGCCTCAGGGAGTATATTCAGCTTTTACGACGTAGGTTGGTTCCGCCAAGCGCCCGGTAAAGAACGAGAGTTCGTCGCTGCCAGTATAACGAAGGGAGGCGGGACGTACTACGTAGATTCAGTAAAAGGGAGATTTACCATAAGTAGGGACAATGCAAAGAACACGGTCTACCTCCAGATGAATAGCCTTAAACCAGAAGATACGGCAGTCTATTACTGCGCCCTGGCAACCCCCCACGGATATGACTTTTGGGGCCAAGGTACGCAAGTCACGGTGAGCTCG 105
Lyso CW P01 F11 (胺基酸序列) QVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAASGSIFSFYDVGWFRQAPGKEREFVAASITKGGGTYYVDSVKGRFTISRDNAKNTVYLQMNSLKPEDTAVYYCALATPHGYDFWGQGTQVTVSS 106
Lyso CW P01 F09 (核苷酸序列) CAGGTGCAGCTCGTTGAAAGCGGGGGTGGCTTGGTCCAAGCGGGAGGTTCCCTGAGACTGTCCTGCGCTGCGTCAGGATCAATAATCACGATTTATGTAGTCGGATGGTTCCGACAAGCCCCAGGTAAAGAGCGGGAATTTGTGGCCTCCGACATAGGCTCTGGTGGGTCAACTTATTACAGTGACTCCGTAAAAGGTCGGTTCACAATCTCAAGGGATAACGCAAAGAATACAGTCTACTTGCAAATGAATTCATTGAAGCCTGAGGATACAGCAGTGTACTACTGCGTTACTGGAGATCCCTCTACTCCGTATTCATACTGGGGTCAAGGCACACAGGTTACAGTGAGCTCG 107
Lyso CW P01 F09 (胺基酸序列) QVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAASGSIITIYVVGWFRQAPGKEREFVASDIGSGGSTYYSDSVKGRFTISRDNAKNTVYLQMNSLKPEDTAVYYCVTGDPSTPYSYWGQGTQVTVSS 108
Lyso CW P01 C04 (核苷酸序列) CAGGTGCAACTGGTCGAGAGTGGTGGTGGACTGGTTCAAGCTGGGGGCAGCCTGAGATTGTCCTGCGCCGCATCTGGCTCCTCCTTCTCAATTTACGACGTGGGCTGGTTCCGCCAAGCACCTGGAAAGGAAAGAGAGTTTGTTGCTGCGACAATTGAGACTGGGGGACACACGTCTTACGCCGACTCAGTGAAAGGTAGATTTACAATCTCAAGGGATAACGCTAAAAACACCGTTTATCTGCAAATGAACTCCCTGAAACCGGAGGATACAGCTGTGTACTATTGTTATGCGAAGATTGTCTACGACCAGGGCCCGAGCTACTACTATTGGGGCCAGGGGACACAGGTTACCGTGAGCTCG 109
Lyso CW P01 C04 (胺基酸序列) QVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAASGSSFSIYDVGWFRQAPGKEREFVAATIETGGHTSYADSVKGRFTISRDNAKNTVYLQMNSLKPEDTAVYYCYAKIVYDQGPSYYYWGQGTQVTVSS 110
組裝包含 表 9中所描述之VHH的慢病毒CAR表現構築體。 圖 11A展示用於遞送VHH CAR之慢病毒載體之載體圖譜。慢病毒載體隨後用於轉導Jurkat細胞。觀測到Jurkat細胞上10/14個VHH CAR之穩固CAR表現( 圖 11B)。Jurkat細胞中所有候選VHH以極高水準表現為CAR。為確定當存在於CAR上時此等VHH之任何強直性信號傳導或非專一性性活化存在，將經轉導Jurkat細胞與人類胎腎細胞(HEK)一起培育隔夜且次日評定T細胞活化標誌物CD69。所有VHH CAR構築體觀測到Jurkat細胞上低或無非專一性活化( 圖 11C 、 11D)指示經由無靶向驅動活化之CAR之信號傳導極少或無信號傳導。將三個抗溶菌酶VHH CAR結合至雞溶菌酶且對人類無交叉反應性( 圖 11E)，展現對雞蛋白質之專一性。
基於此等資料，選擇LYSO_CW_P01_B11 (B11)及LYSO_CW_P01_D04 (D04) VHH用於進一步考量，因為其高表現為CAR、低至無強直性信號傳導及非專一性活性及理想生物物理學特徵(藉由其強表現為可溶性蛋白質指示)。此等VHH在CAR中或在橋蛋白質中具有良好表現。 表 11. B11 及 D04 之純化資料
DNA ID 蛋白質ID VHH 構築體形式 濃度(mg/mL) 體積(μL) 產量(μg) 單體%
P1184 PROT951 LYSO_CW_P01_B11 VHH_IgG1.Fc 1.53 200 306.7 98.50
P1186 PROT949 LYSO_CW_P01_D04 VHH_IgG1.Fc 1.94 200 387.1 ＞99
圖 11F展示靶向嗜熱脂肪地芽孢桿菌、LYSO_CW_P01_B11及LYSO_CW_P01_D04之VHH之胺基酸序列的比對。基於比對序列產生共同序列。
作為此等VHH之專一性之最終特徵，測試經B11及D04 VHH轉導之CAR Jurkat細胞以及一組候選物之另一抗HEL VHH，以結合至經生物素標記之雞及人類溶菌酶，以確保不結合至人類溶菌酶蛋白質。B11(p242)及D04 (p244) VHH兩者均展示結合至雞溶菌酶，而對人類溶菌酶蛋白質無交叉反應性( 圖 11E)。 實例6. B11及D04 VHH之人類化
B11及D04蛋白質源於Distributed Bio (San Francisco, CA)之駱駝VHH噬菌體顯示庫。為限制此等VHH之免疫原性之可能性，將其在VHH之構架區中人類化。自此實例向前，對B11及D04之提及為人類化VHH。 表 12. 最初駱駝 VHH B11 及 D04 之人類化版本
VHH CAR 載體編號 胺基酸序列 SEQ ID NO
huLYSO_CW_P01_B11 P1649 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGGIFSGGRMGWFRQAPGKEREFVAAVITRGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAASEVTYDEGRYIGTKSTYDTWGQGTQVTVSS 111
huLYSO_CW_P01_D04 P1650 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRIFSIYDTIGWFRQAPGKEREFVAATITTAGITTYDDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCYVRVGRGDYWGQGTQVTVSS 112
人類化B11及D04作為駱駝科版本經歷類似表徵步驟以確保構架區之人類化不會損害其生物物理學特徵、表現為CAR之能力或當存在於CAR上時其特性。 表 13. 人類化 B11 及 D04 之純化資料
DNA ID PROT ID VHH 濃度 (mg/mL) 體積 (mL) 產量 (mg) 單體% 內毒素單位/mL
P1376 PROT1045 huLysoB11 4.21 2.85 12.0 ＞99 ＜1
P1377 PROT1046 huLysoD04 3.17 4.20 13.3 ＞99 ＜1
如前所述，將各VHH CAR轉導至Jurkat細胞中。另外，將各VHH CAR轉導至Nurkat細胞(Jurkat細胞之Nur77報導細胞株(Nurkat))中。此細胞株含有對Nur77有反應之GFP報導體，該GFP報導體為藉由CD3z刺激活化且充當CAR活化之報告子的轉錄因子。因此，經由CAR在Nurkat細胞中活化使細胞表現GFP。圖13展示經含有人類化B11 (p1649)及D04 (p1648) CAR之慢病毒轉導的Nurkat細胞之CAR及GFP表現。UTD細胞為未經轉導之Nurkat細胞。使用多株抗駱駝VHH混合物(Genscript)量測CAR表現。此等結果指示B11及D04 VHH作為CAR之表現不受其序列人類化影響。另外，在此等CAR Nurkat中缺乏GFP表現展示由CAR之人類化版本介導之極少強直性信號傳導。
為確保作為人類化之結果各VHH之結合特徵無變化，吾等測試此等人類化VHH CAR是否仍可結合HEL。圖14展示分析之結果，其中B11 (p1649)及D04 (p1648) CAR Nurkat經生物素標記之HEL染色且經由流式細胞測量術用鏈黴抗生物素蛋白-APC偵測。UTD為作為陰性對照之未經轉導之Nurkat。B11及D04均保持其在人類化之後結合HEL之能力。 實例7. 針對B11及D04之抗個體基因型VHH之噬菌體呈現淘選
在噬菌體庫淘選中使用人類化B11及D04 VHH來識別針對各專一性具有專一性之抗ID VHH。合成VHH噬菌體庫係由主要藉由其CDR3序列之長度區分之四個子庫組成，其中庫1 (CNTY1)具有最短CDR長度，且庫3及4 (CNTY3及CNTY4)具有最長CDR長度。
所用之一個淘選方案展示於圖15中。在此方法中，藉由首先耗盡針對B11-Fc蛋白之庫針對D04發現抗個體基因型VHH。進行此以移除結合VHH之構架區及蛋白質之Fc部分的任何噬菌體。此耗盡的噬菌體輸出隨後在經生物素標記之D04-Fc蛋白上淘選。具有任何噬菌體結合物之經生物素標記之D04可經由鏈黴抗生物素蛋白分離。輸出噬菌體在細菌中擴增且在伴隨愈來愈嚴格的淘選條件下用於其他輪淘選。替代地，藉由噬菌體顯示之VHH可藉由ELISA測試與D04或B11蛋白質之結合、定序及選殖至表現載體中以用於更嚴格測試。此噬菌體庫淘選方法用於識別D04及B11兩者之VHH結合物。
此淘選方案隨著目標抗原濃度逐漸降低而重複4次以選擇高親和力結合物(對於第一輪及第二輪為200 nM，對於第三輪為50 nM，且對於第四輪為10 nM)。最後一輪淘選之輸出噬菌體用於將細菌轉型成單一群落，在ELISA中篩選作為周質提取物(PPE)針對目標VHH及非目標VHH (圖16)。
選擇對其目標蛋白展示專一性反應且對非目標蛋白具有極少反應之PPE樣本用於額外表徵。識別出6種獨特B11結合物及18種獨特D04結合物。將此等獨特序列選殖至Fc融合表現載體中用於進一步測試。此等蛋白質及標識符之序列展示於表14中。 表 14. 表現為 IgG1-Fc 融合物之抗個體基因型
Fc 融合物 Prot ID 抗 Id VHH 抗個體基因型 VHH 之 胺基酸序列 SEQ ID NO
源於靶向 D04 之淘選的抗個體基因型
AMD67 huD04_CNTY2_F09 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRTFSSGAMGWYRQAPGKERELVSAISNRGSTVYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAADRNPSSAGAGVAAYRLIARFNYWGQGTQVTVSS 113
AMD68 huD04_CNTY2_F08 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTLSSYAMGWYRQAPGKEREGVSSISYAGVTNYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAAALTGYYAYRRLWSYRIGSQAYDYWGQGTQVTVSS 114
AMD69 huD04_CNTY2_E03 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGLTYTGYAMGWYRQAPGKERELVSAISSRSSIYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAAGRPVALGSWRRTATWSAGLGAEYAYWGQGTQVTVSS 115
AMD70 huD04_CNTY2_F04 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRTFSSYGMGWYRQAPGKERELVSAISNRGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAASPARVGVSGHSSSRRSYYGYSYDYWGQGTQVTVSS 116
AMD72 huD04_CNTY2_H12 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGSIFSSDVMGWYRQAPGKERELVSAISSGGSTRYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAATMGKSKTNRRNYGTWRYGAYAYWGQGTQVTVSS 117
AMD74 huD04_CNTY2_F12 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSNAMGWYRQAPGKEREFVSSISSGRSTTYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAAHGTKYKWTRARLRSARQKQLETYRYWGQGTQVTVSS 118
AMD77 huD04_CNTY1_A11 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTSSNYVMGWYRQAPGKEREFVSAIGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTYLQMNSLRAEDTAVYYCAAEIYTSGARDYWGQGTQVTVSS 119
AMD78 huD04_CNTY2_C03 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGLTFSRYAMGWYRQAPGKERELVSAISSRRSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAADYRLTSLERARYASASITYDYWGQGTQVTVSS 120
AMD79 huD04_CNTY2_B06 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFNRYSMGWYRQAPGKERELVSAISSGGSGYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAIQDYSRIWEYIALDRRRSYYGMDYWGQGTQVTVSS 121
AMD80 huD04_CNTY2_D02 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFRSYAMGWYRQAPGKEREGVSVISSGGTPSYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCDAIMGLVEADYVSTGTYEYTAYAYWGQGTQVTVSS 122
AMD81 huD04_CNTY2_D04 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGLTFSGVCMGWFRQAPGKEREGVSAIYSSGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAADRIPDLGEPCIGTTNLARTYNYWGQGTQVTVSS 123
AMD82 huD04_CNTY1_B12 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRTSSNYVMGWYRQAPGKEREGVSAITSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAANLYSRTGAYDYWGQGTQVTVSS 124
AMD84 huD04_CNTY2_D05 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYIYSSYSMGWYRQAPAKNASLSAITSSGETYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAADALDAPIAGDRYYRGSGAGYAYWGQGTQVTVSS 125
AMD85 huD04_CNTY2_D12 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGSAFSSNAMGWYRQAPGKERELVSAISSGGSTNYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAARNPLTYTALVSNAPSGDYYLFEYRLWGQGTQVTVSS 126
AMD86 huD04_CNTY1_D12 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTSSNYVMGWYRQAPGKEREGVSAISSSGRTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAAAYYSGYGETDYWGQGTQVTVSS 127
AMD87 huD04_CNTY1_D11 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGSTFSYYYMGWYRQAPGKERELVSAISSGGSIYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARRTYYGDEADYWGQGTQVTVSS 128
AMD88 huD04_CNTY1_D10 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRTSSNYVIGWYRQAPGKEREFVSAISGGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCATRIYTARGAGDYWGQGTQVTVSS 129
源於靶向 B11 之淘選的抗個體基因型
AMD71 huB11_CNTY3+4_A02 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRTYTGSAMGWYRQAPGKERELVSAISTGGETYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAAGYVGLPYTYRPATSRRGYTYWGQGTQVTVSS 130
AMD73 huB11_CNTY3+4_A01 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYSIGWYRQAPGKERELVSVISSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAASDWSYSWITYTGTWRLYEYWGQGTQVTVSS 131
AMD75 huB11_CNTY1_E11 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFAFSDYVMGWYRQAPGKEREFVSAIRSTTSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAADVWSGYEYDYWGQGTQVTVSS 132
AMD76 huB11_CNTY1_B11 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGLAFSSYAMGWYRQAPGKEREFVSVISGTGETLYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAADVWSGYEYDYWGQGTQVTVSS 133
實例8. 抗個體基因型VHH之專一性及親和力測試
為確定抗個體基因型之專一性及結合，經由FACS針對表現B11或D04 VHH CAR之Nurkat細胞測試Fc融合蛋白。
如圖17A-17B中所示，若干抗個體基因型在可忽略地與非目標CAR (例如AMD 71 (至B11)及AMD 69、AMD 77、AMD 82、AMD 84、AMD 87及AMD 88 (至D04))結合的濃度範圍內展示對CAR上之VHH的穩固且專一性結合。亦注意展示非專一性結合之少數結合物，其藉由結合至兩種細胞株(AMD 72及AMD 74)來指示。其中，選擇AMD 71、AMD 77、AMD 82、AMD 84、AMD 87及AMD 88用於進一步專一性測試。將經生物素標記之抗個體基因型VHH-Fc融合蛋白針對多種其他VHH CAR-Nurkat排列，且隨後偵測到經由FACS與彼等細胞株之任何結合。
圖 18展示經由FACS用鏈黴抗生物素蛋白-APC偵測之前導抗個體基因型經生物素標記之VHH-Fc與目標及非目標CAR Nurkat細胞之結合。所測試之細胞株包括B11、D04、P711、P712、P713、P716及親本細胞。B11及D04細胞分別為表現B11及D04 VHH CAR之CAR Nurkat細胞。P711、712、713、716細胞為非目標CAR Nurkat細胞。親本細胞為未經轉導之非CAR表現之Nurkat細胞。對照包括經生物素標記之蛋白A (其不專一性結合大多數VHH)、PROT786 (不相關的經生物素標記之VHH-Fc蛋白)及未添加之經生物素標記之蛋白質。前導VHH展現與非目標VHH CAR及親本Nurkat之結合可忽略，同時仍具有與目標VHH之穩固結合。
在一些情況下，形成通用CAR之「標記」及「抗標記」相互作用之基礎的專一性結合事件為平台安全概況之重要態樣。另外，溶菌酶VHH及單獨的抗個體基因型之結合事件不應足以引起CAR誘導之活化。為確定B11或D04與一或多種其可溶性抗個體基因型之結合在腫瘤抗原靶向VHH與可溶性蛋白質融合之情況下是否引起CAR誘導之活化，進行隔夜刺激分析，其中前導可溶性抗個體基因型Fc融合蛋白與其目標及非目標CAR Nurkat以及親本Nurkat一起培育。 圖 19A-19B展示使用經由FACS與10 nM抗個體基因型VHH Fc-融合物一起培育之Nurkat細胞之隔夜刺激分析的結果。 圖 19A展示在與抗個體基因型Fc-融合蛋白共培養隔夜之後B11及D04 CAR Nurkat細胞以及親本Nurkat細胞之GFP表現。 圖 19B展示在隔夜培育之後經由鏈黴抗生物素蛋白-APC偵測經生物素標記之蛋白質。對照包括PMA/離子黴素(引起穩固Nurkat細胞活化之TCR交聯劑)、經生物素標記之蛋白A及未添加蛋白質之樣本。與PMA/離子黴素誘導相比，抗個體基因型中無一者引起如藉由GFP表現所量測之Nurkat之可觀測活化。在隔夜培育之後，抗個體基因型亦可仍偵測到，指示若抗個體基因型觸發CAR活化，則分析中所用之抗原濃度足以在實驗過程中引起將可觀測到之活化。
對於經B11-his標記之VHH及經D04-his標記之VHH兩者之抗ID結合物，藉由Octet獲得親和力量測結果。 表 15. 針對經 B11 his 標記之蛋白質測試之抗個體基因型 VHH Fc- 融合蛋白之 Octet 結果
樣本ID KD (M) kon(1/Ms) kdis(1/s) 反應
AMD71 ＜1.0E-12 2.16E+03 ＜1.0E-07 0.0062
AMD77 2.08E-09 6.96E+05 1.45E-03 0.497
AMD82 1.25E-07 6.97E+05 8.68E-02 0.1718
AMD87 3.69E-06 1.76E+04 6.49E-02 0.1306
AMD88 7.23E-08 5.88E+05 4.25E-02 0.2893
AMD84 1.85E-07 7.90E+05 1.47E-01 0.0991
PROT253 NA NA NA -0.05
展示親和力值(KD)、結合速率(kon)、解離速率(kdis)及對於針對B11-his蛋白質之抗個體基因型VHH fc-融合蛋白之反應 表 16. 針對經 D04 his 標記之蛋白質測試之抗個體基因型 VHH Fc- 融合蛋白之 Octet 結果
樣本ID KD (M) kon(1/Ms) kdis(1/s) 反應
AMD71 5.15E-07 2.73E+05 1.40E-01 0.0566
AMD77 7.96E-08 3.54E+03* 2.82E-04 0.1785
AMD82 NA NA NA -0.0225
AMD87 NA NA NA -0.0301
AMD88 NA NA NA -0.0183
AMD84 NA NA NA -0.0341
PROT253 NA NA NA -0.0648
展示親和力值(KD)、結合速率(kon)、解離速率(kdis)及對於針對B11-his蛋白質之抗個體基因型VHH fc-融合蛋白之反應。
抗個體基因型蛋白質展現2 nM (UNK D77至D04)至3.7 μM (AMD87至D04)之親和力範圍。為了經由Octet驗證兩種最高親和力結合物AMD77 (2 nM)及AMD88 (72 nM)之專一性，吾等測試各蛋白質針對其本身、其目標VHH、非目標VHH、來自血清之總人類IgG及Fc-y片段之結合。 表 17. 抗個體基因型 AMD77 及 AMD88 之 Octet 專一性分析
樣本ID 分析物 反應
AMD77 LysoD04.His 0.3374
AMD77 AMD77 0.0493
AMD77 AMD88 0.2773
AMD77 IgG -0.0155
AMD77 Fc -0.009
AMD77 PROT939 -0.0053
AMD77 LysoD04.Fc 2.6741
AMD88 LysoD04.His 0.0923
AMD88 AMD77 0.0229
AMD88 AMD88 0.1492
AMD88 IgG -0.0338
AMD88 Fc -0.0261
AMD88 PROT939 -0.024
AMD88 LysoD04.Fc 2.1784
針對分析物D04-his、AMD77、AMD88、來自血清之IgG、Fc-y片段、PROT939 (非目標VHH-fc可溶性)及D04-fc測試各樣本(AMD77或AMD88)。反應值展示於表17中。AMD77及AMD88均展示對人類IgG、Fc及非目標VHH-fc PROT939之最低反應，同時維持對D04-his及D04-Fc之強反應。AMD88展示對自身及AMD77之反應。AMD77不與自身締合。 實例9. 橋蛋白設計
橋蛋白含有VHH arCAR結合物及靶向腫瘤之VHH，在此實例中尤其含有抗CD70及抗EGFR。在Fc域存在及不存在下構築此等橋蛋白，該Fc域將在活體內充當半衰期延長劑。為達成通用CAR之專一性，設計橋蛋白，將所選抗個體基因型併入與D04 CAR搭配之D04或搭配有抗ID至D04之可溶性橋蛋白上之D04作為CAR。 表 18. 無 Fc 之橋蛋白： VHH1 - 連接子 -VHH2
蛋白質ID VHH1 VHH2 連接子 腫瘤目標
AMD1 CD70W_DB02_D08 huLysoB11 (G4S)3 CD70
AMD2 CD70W_DB02_D08 huLysoB11 WHITLOW CD70
AMD3 CD70W_DB02_G07 huLysoB11 (G4S)3 CD70
AMD4 CD70W_DB02_G07 huLysoB11 WHITLOW CD70
AMD5 CD70W_DB02_G08 huLysoB11 (G4S)3 CD70
AMD6 CD70W_DB02_G08 huLysoB11 WHITLOW CD70
AMD7 CD70W_DB02_G09 huLysoB11 (G4S)3 CD70
AMD8 CD70W_DB02_G09 huLysoB11 WHITLOW CD70
AMD9 CD70W_DB02_E01 huLysoB11 (G4S)3 CD70
AMD10 CD70W_DB02_E01 huLysoB11 WHITLOW CD70
AMD11 CD70W_DB02_E06 huLysoB11 (G4S)3 CD70
AMD12 CD70W_DB02_E06 huLysoB11 WHITLOW CD70
AMD13 CD70W_DB02_D08 huLysoB11 (G4S)3 CD70
AMD14 CD70W_DB02_D08 huLysoB11 WHITLOW CD70
AMD15 CD70W_DB02_G07 huLysoB11 (G4S)3 CD70
AMD16 CD70W_DB02_G07 huLysoB11 WHITLOW CD70
AMD17 CD70W_DB02_G08 huLysoB11 (G4S)3 CD70
AMD18 CD70W_DB02_G08 huLysoB11 WHITLOW CD70
AMD19 CD70W_DB02_G09 huLysoB11 (G4S)3 CD70
AMD20 CD70W_DB02_G09 huLysoB11 WHITLOW CD70
AMD21 CD70W_DB02_E01 huLysoB11 (G4S)3 CD70
AMD22 CD70W_DB02_E01 huLysoB11 WHITLOW CD70
AMD23 CD70W_DB02_E06 huLysoB11 (G4S)3 CD70
AMD24 CD70W_DB02_E06 huLysoB11 WHITLOW CD70
AMD25 CD70W_DB02_D08 huLysoD04 (G4S)3 CD70
AMD26 CD70W_DB02_D08 huLysoD04 WHITLOW CD70
AMD27 CD70W_DB02_G07 huLysoD04 (G4S)3 CD70
AMD28 CD70W_DB02_G07 huLysoD04 WHITLOW CD70
AMD29 CD70W_DB02_G08 huLysoD04 (G4S)3 CD70
AMD30 CD70W_DB02_G08 huLysoD04 WHITLOW CD70
AMD31 CD70W_DB02_G09 huLysoD04 (G4S)3 CD70
AMD32 CD70W_DB02_G09 huLysoD04 WHITLOW CD70
AMD33 CD70W_DB02_E01 huLysoD04 (G4S)3 CD70
AMD34 CD70W_DB02_E01 huLysoD04 WHITLOW CD70
AMD35 CD70W_DB02_E06 huLysoD04 (G4S)3 CD70
AMD36 CD70W_DB02_E06 huLysoD04 WHITLOW CD70
AMD37 CD70W_DB02_D08 huLysoD04 (G4S)3 CD70
AMD38 CD70W_DB02_D08 huLysoD04 WHITLOW CD70
AMD39 CD70W_DB02_G07 huLysoD04 (G4S)3 CD70
AMD40 CD70W_DB02_G07 huLysoD04 WHITLOW CD70
AMD41 CD70W_DB02_G08 huLysoD04 (G4S)3 CD70
AMD42 CD70W_DB02_G08 huLysoD04 WHITLOW CD70
AMD43 CD70W_DB02_G09 huLysoD04 (G4S)3 CD70
AMD44 CD70W_DB02_G09 huLysoD04 WHITLOW CD70
AMD45 CD70W_DB02_E01 huLysoD04 (G4S)3 CD70
AMD46 CD70W_DB02_E01 huLysoD04 WHITLOW CD70
AMD47 CD70W_DB02_E06 huLysoD04 (G4S)3 CD70
AMD48 CD70W_DB02_E06 huLysoD04 WHITLOW CD70
表 19. 具有 VHH1- whitlow - VHH2- IgG1 Fc 構築體之橋蛋白
蛋白質ID VHH1 VHH2 腫瘤目標
AMD99 huD04_CNTY1_A11 CD70W_DB02_G08 CD70
AMD100 huD04_CNTY1_B12 CD70W_DB02_G08 CD70
AMD101 huD04_CNTY1_D10 CD70W_DB02_G08 CD70
AMD102 CD70W_DB02_G08 huD04_CNTY1_A11 CD70
AMD103 CD70W_DB02_G08 huD04_CNTY1_B12 CD70
AMD104 CD70W_DB02_G08 huD04_CNTY1_D10 CD70
AMD105 huLysoD04 CD70W_DB02_G08 CD70
AMD106 CD70W_DB02_G08 huLysoD04 CD70
AMD107 huD04_CNTY1_A11 9G8 EGFR
AMD108 huD04_CNTY1_B12 9G8 EGFR
AMD109 huD04_CNTY1_D10 9G8 EGFR
AMD110 9G8 huD04_CNTY1_A11 EGFR
AMD111 9G8 huD04_CNTY1_B12 EGFR
AMD112 9G8 huD04_CNTY1_D10 EGFR
AMD113 huLysoD04 9G8 EGFR
AMD114 9G8 huLysoD04 EGFR
表 20. 具有 VHH-IgG1 Fc-(G4S)1-VHH 構築體之橋蛋白
樣本ID VHH1 VHH2 腫瘤目標
AMD115 huD04_CNTY1_A11 CD70W_DB02_G08 CD70
AMD116 huD04_CNTY1_B12 CD70W_DB02_G08 CD70
AMD117 huD04_CNTY1_D10 CD70W_DB02_G08 CD70
AMD118 CD70W_DB02_G08 huD04_CNTY1_A11 CD70
AMD119 CD70W_DB02_G08 huD04_CNTY1_B12 CD70
AMD120 CD70W_DB02_G08 huD04_CNTY1_D10 CD70
AMD121 huLysoD04 CD70W_DB02_G08 CD70
AMD122 CD70W_DB02_G08 huLysoD04 CD70
AMD123 huD04_CNTY1_A11 9G8 EGFR
AMD124 huD04_CNTY1_B12 9G8 EGFR
AMD125 huD04_CNTY1_D10 9G8 EGFR
AMD126 9G8 huD04_CNTY1_A11 EGFR
AMD127 9G8 huD04_CNTY1_B12 EGFR
AMD128 9G8 huD04_CNTY1_D10 EGFR
AMD129 huLysoD04 9G8 EGFR
AMD130 9G8 huLysoD04 EGFR
實例 10. D04 CAR 及 huD04_CNTY1_D10 橋之 T 細胞 細胞毒性
為確定通用平台是否可藉由T細胞介導細胞毒性，吾人創建由來自AMD88蛋白質之VHH組成之橋蛋白，(huD04_CNTY1_D10)藉由Whitlow連接子以串聯方式連接至靶向EGFR之VHH 9G8，融合至IgG1 Fc片段(表19)。在T細胞細胞毒性分析中，藉由表現D04 CAR之初級T細胞測試各橋蛋白。 表 21. AMD109 及 AMD112 橋蛋白之蛋白質濃度及單體百分比
DNA ID 濃度(mg/mL) 單體%
AMD109 0.35 97.40
AMD112 0.46 97.34
藉由共培養CAR T細胞進行殺死分析，其中經CellTrace紫以效應子:目標為1:2加標籤之EGFR陽性細胞，針對T細胞之CAR陽性百分比進行調節48小時。5 nM橋樑，AMD109 (圖20A)或AMD112 (圖20B)。
如圖20A-20B中所示，當橋及CAR『匹配』時(例如抗個體基因型VHH存在於橋蛋白上，而其目標VHH存在於CAR上)，觀測到EGFR陽性細胞之穩固細胞毒性，如在表現P1650 CAR之T細胞的情況下，其在CAR上具有D04 (huD04_CNTY1_D10，可溶性橋蛋白上之抗個體基因型至D04)。此細胞毒活性與9G8 CAR相當。當CAR與橋不匹配時，與CAR AMD94或NONS F12 CAR一樣，未觀測到細胞毒性。 *          *          *
本發明之範疇不受本文所描述之特定實施例限制。實際上，根據前述描述，除本文所描述之修改之外，本發明之各種修改對熟習此項技術者而言亦會變得顯而易見。此等修改意欲屬於隨附申請專利範圍之範疇內。
本文所引用之所有專利、申請案、公開案、測試方法、文獻及其他材料均以全文引用之方式併入本文中，如同在本說明書中物理上存在一般。
圖 1描繪具有本發明之可調適受體專一性(arCAR)之例示性CAR的示意性圖示。CAR結合至可溶性藥物上之「標記」。可溶性藥物可為抗體或抗體片段(例如VHH、scFv、Fab、mAb)或替代骨架。腫瘤專一性及CAR活化由可溶性藥物驅動。
圖 2A描繪本發明之另一例示性arCAR之示意性圖示。VHH用於可溶性藥物中之抗原結合域及標記兩者以及arCAR之標記結合域(α-標記)。
圖 2B說明抗個體基因型mAb之結構特徵。
圖 2C說明例示性VHH結構之結構特徵。
圖 2D描繪本發明之另一例示性arCAR之示意性圖示。非人類靈長類動物(NHP) VHH及抗個體基因型NHP VHH用於可溶性藥物以及arCAR之標記結合域。
圖 3A描繪本發明之另一例示性arCAR之示意性圖示。
圖 3B描繪本發明之另一例示性arCAR之示意性圖示。
圖 4A描繪本發明之另一例示性arCAR之示意性圖示。赫賽汀(Herceptin) scFv與CAR融合且赫賽汀抗ID scFv與靶向EGFR之VHH (9G8)融合。
圖 4B展示表現赫賽汀scFv CAR與9G8-scFv69融合蛋白偶合之T細胞能夠靶向EGFR+細胞。
圖 5描繪用於遞送本發明之CAR構築體之慢病毒載體的載體圖譜。
圖 6A描繪用於表現本發明之橋構築體之質體的載體圖譜。
圖 6B展示凝膠電泳影像，其展現橋蛋白質之純度。
圖 7A描繪scFv69-CAR及橋蛋白質之兩種變體之示意性圖示：9G8_赫賽汀scFv及赫賽汀scFv 9G8。
圖 7B表明scFv69-CAR與橋蛋白質之結合。該圖中之樣本按以下次序呈現：9G8_赫賽汀、赫賽汀_9G8。
圖 8A表明EGFR在經EGFR轉導之CHO細胞上之表現。
圖 8B表明T細胞中之CAR表現。
圖 9A-9B展示通用CAR-T細胞在與適當橋蛋白質配對時展現CD25活化( 圖 9A)但在與橋蛋白質錯配時並不如此( 圖 9B)。圖中之樣本按如圖例中所指定之次序呈現。
圖 10A 、 10B展示通用CAR-T細胞在與適當橋蛋白質配對時展現細胞毒活性( 圖 10A)但在與橋蛋白質錯配時並不如此( 圖 10B)。圖中之樣本按如圖例中所指定之次序呈現。
圖 11A描繪用於遞送本發明之VHH CAR之慢病毒載體的載體圖譜。
圖 11B展示Jurkat細胞上VHH CAR之表現。
圖 11C展示經Jurkat細胞轉導之VHH CAR之表面上缺乏強直性信號傳導。
圖 11D展示用於圖11C中之CD69偵測的FAC閘控策略。
圖 11E展示抗雞卵溶菌酶-VHH CAR與來自雞或人類之溶菌酶之結合。
圖 11F展示靶向嗜熱脂肪地芽孢桿菌之VHH之胺基酸序列(SEQ ID NO: 96)、LYSO_CW_P01_B11 (SEQ ID NO: 102)及LYSO_CW_P01_D04 (SEQ ID NO: 104)之比對。共同序列展示於比對序列(SEQ ID NO: 134)上方。
圖 12A-12K展示用於arCAR概念驗證研究之質體映射p510、p511、p514、p515、p516、p517、p518、p519、p520、p521及p522。
圖 13展示經含有人類化B11 (p1649)及D04 (p1648) CAR之慢病毒(LV)轉導的Nurkat細胞(Jurkat細胞之Nur77報導株)之CAR及GFP表現。亦展示未經轉導(UTD)之Nurkat之結果。CAR表現係藉由來自Genscript之多株抗駱駝VHH混合物量測(例如，用於穩健偵測之VHH之人類化版本與駱駝科版本之間足夠的同源性)。
圖 14展示經生物素標記之HEL染色之B11 (p1649)及D04 (p1648) CAR Nurkat細胞，該等細胞經由流式細胞測量術用鏈黴抗生物素蛋白-APC偵測。UTD為用作陰性對照之未經轉導之Nurkat細胞。
圖 15展示噬菌體呈現淘選方案之概述。針對D04之抗個體基因型發現之方案展示為一實例。同樣，對於針對B11之抗個體基因型發現，兩個VHH將在圖式中調換位置。
圖 16A-16D展示對各CNTY庫群落達成之周質提取物(PPE) ELISA輸出(450 nm處之吸收率)。黑色條表示針對B11蛋白質之ELISA反應，而灰色條表示針對D04蛋白質之反應。
圖 17A-17B展示抗個體基因型VHH-Fc融合構築體與( 圖 17A) B11及( 圖 17B)無基於IgG之連接子的D04表現CAR之Nurkat細胞之FACS結合。虛線概述識別來自表15的在ELISA中觀測到結合D04之所選蛋白質。點線輪廓識別來自表16的在ELISA中觀測到結合B11之所選蛋白質。以50 nM降至0.02 pM之3倍稀釋數列對兩種細胞株測試各蛋白質(如圖例中所示)。經由抗Fc APC偵測Fc融合蛋白，且展示對此偵測方法呈陽性之細胞之百分比。展示向下稀釋數列與其目標細胞株專一性結合之蛋白質低於蛋白質ID。對照包括(i)無VHH-Fc添加及(ii)抗VHH混合物偵測試劑(遠右端)。各蛋白質之曲線圖中所示之樣本以圖例中指定之次序呈現。
圖 18展示經由FACS用鏈黴抗生物素蛋白-APC偵測之前導抗個體基因型經生物素標記之VHH-Fc與目標及非目標CAR Nurkat細胞之結合。所測試之細胞株包括B11、D04、P711、P712、P713、P716及親本細胞。B11及D04細胞分別為表現B11及D04 VHH CAR之CAR Nurkat。P711、P712、P713、P716細胞為非目標CAR Nurkat。親本細胞為未經轉導之非CAR表現之Nurkat。對照包括經生物素標記之蛋白A (其不專一性結合大多數VHH)、PROT786 (不相關的經生物素標記之VHH-Fc蛋白)及未添加之經生物素標記之蛋白質。各蛋白質之曲線圖中所示之樣本以圖例中指定之次序呈現。
圖 19A-19B展示使用經由FACS與10 nM抗個體基因型VHH Fc-融合物一起培育之Nurkat細胞之隔夜刺激分析的結果。( 圖 19A)在與抗個體基因型Fc-融合蛋白共培養隔夜之後B11及D04 CAR Nurkat細胞以及親本Nurkat細胞之GFP表現。( 圖 19B)在隔夜培育之後經由鏈黴抗生物素蛋白-APC偵測經生物素標記之蛋白質。對照包括PMA/離子黴素(引起穩固Nurkat細胞活化之TCR交聯劑)、經生物素標記之蛋白A及未添加蛋白質之樣本。各蛋白質之曲線圖中所示之樣本以圖例中指定之次序呈現。
圖 20A-20B展示相同T細胞殺死分析之結果，其中任一橋蛋白質( 圖 20A) AMD109或( 圖 20B) AMD112以5 nM添加。對於U87目標細胞或K562目標細胞展示死亡目標百分比。 

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          Ser Leu Ser Val Thr Cys Thr Val Ser Gly Val Ser Leu Pro Asp Tyr 
                      20                  25                  30          
          Gly Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Arg Lys Gly Leu Glu Trp Leu 
                  35                  40                  45              
          Gly Val Ile Trp Gly Ser Glu Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Leu Lys 
              50                  55                  60                  
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          Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Gln 
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          Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro Ser Pro Leu 
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                  35                  40                  45              
          Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe 
              50                  55                  60                  
          Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn 
          65                  70                  75                  80  
          Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr 
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          Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr 
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          Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys 
                  35                  40                  45              
          Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys 
              50                  55                  60                  
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                  35                  40                  45              
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          Ser Arg Leu Thr Ile Ile Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu 
          65                  70                  75                  80  
          Lys Met Asn Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala 
                          85                  90                  95      
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          Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Gly Ser Thr Ser Gly Ser Gly Lys 
                  115                 120                 125             
          Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr Lys Gly Asp Ile Gln Met Thr Gln 
              130                 135                 140                 
          Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly Asp Arg Val Thr Ile Ser 
          145                 150                 155                 160 
          Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Lys Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln 
                          165                 170                 175     
          Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile Tyr His Thr Ser Arg Leu 
                      180                 185                 190         
          His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp 
                  195                 200                 205             
          Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Gln Glu Asp Ile Ala Thr Tyr 
              210                 215                 220                 
          Phe Cys Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr 
          225                 230                 235                 240 
          Lys Leu Glu Ile Thr 
                          245 
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          Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe 
                      20                  25                  30          
          Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu 
                  35                  40          
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          Asn Cys Arg Asn Thr Gly Pro Trp Leu Lys Lys Val Leu Lys Cys Asn 
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          Thr Pro Asp Pro Ser Lys Phe Phe Ser Gln Leu Ser Ser Glu His Gly 
                      20                  25                  30          
          Gly Asp Val Gln Lys Trp Leu Ser Ser Pro Phe Pro Ser Ser Ser Phe 
                  35                  40                  45              
          Ser Pro Gly Gly Leu Ala Pro Glu Ile Ser Pro Leu Glu Val Leu Glu 
              50                  55                  60                  
          Arg Asp Lys Val Thr Gln Leu Leu Pro Leu Asn Thr Asp Ala Tyr Leu 
          65                  70                  75                  80  
          Ser Leu Gln Glu Leu Gln Gly Gln Asp Pro Thr His Leu Val 
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          <![CDATA[<400>  10]]>
          Lys Lys Val Ala Lys Lys Pro Thr Asn Lys Ala Pro His Pro Lys Gln 
          1               5                   10                  15      
          Glu Pro Gln Glu Ile Asn Phe Pro Asp Asp Leu Pro Gly Ser Asn Thr 
                      20                  25                  30          
          Ala Ala Pro Val Gln Glu Thr Leu His Gly Cys Gln Pro Val Thr Gln 
                  35                  40                  45              
          Glu Asp Gly Lys Glu Ser Arg Ile Ser Val Gln Glu Arg Gln 
              50                  55                  60          
          <![CDATA[<210>  11]]>
          <![CDATA[<211>  42]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  智人]]>
          <![CDATA[<400>  11]]>
          Ala Leu Tyr Leu Leu Arg Arg Asp Gln Arg Leu Pro Pro Asp Ala His 
          1               5                   10                  15      
          Lys Pro Pro Gly Gly Gly Ser Phe Arg Thr Pro Ile Gln Glu Glu Gln 
                      20                  25                  30          
          Ala Asp Ala His Ser Thr Leu Ala Lys Ile 
                  35                  40          
          <![CDATA[<210>  12]]>
          <![CDATA[<211>  25]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  智人]]>
          <![CDATA[<400>  12]]>
          Thr Tyr Cys Phe Ala Pro Arg Cys Arg Glu Arg Arg Arg Asn Glu Arg 
          1               5                   10                  15      
          Leu Arg Arg Glu Ser Val Arg Pro Val 
                      20                  25  
          <![CDATA[<210>  13]]>
          <![CDATA[<211>  61]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  智人]]>
          <![CDATA[<400>  13]]>
          Lys Trp Lys Lys Lys Lys Arg Pro Arg Asn Ser Tyr Lys Cys Gly Thr 
          1               5                   10                  15      
          Asn Thr Met Glu Arg Glu Glu Ser Glu Gln Thr Lys Lys Arg Glu Lys 
                      20                  25                  30          
          Ile His Ile Pro Glu Arg Ser Asp Glu Ala Gln Arg Val Phe Lys Ser 
                  35                  40                  45              
          Ser Lys Thr Ser Ser Cys Asp Lys Ser Asp Thr Cys Phe 
              50                  55                  60      
          <![CDATA[<210>  14]]>
          <![CDATA[<211>  48]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  智人]]>
          <![CDATA[<400>  14]]>
          Gln Arg Arg Lys Tyr Arg Ser Asn Lys Gly Glu Ser Pro Val Glu Pro 
          1               5                   10                  15      
          Ala Glu Pro Cys His Tyr Ser Cys Pro Arg Glu Glu Glu Gly Ser Thr 
                      20                  25                  30          
          Ile Pro Ile Gln Glu Asp Tyr Arg Lys Pro Glu Pro Ala Cys Ser Pro 
                  35                  40                  45              
          <![CDATA[<210>  15]]>
          <![CDATA[<211>  38]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  智人]]>
          <![CDATA[<400>  15]]>
          Cys Trp Leu Thr Lys Lys Lys Tyr Ser Ser Ser Val His Asp Pro Asn 
          1               5                   10                  15      
          Gly Glu Tyr Met Phe Met Arg Ala Val Asn Thr Ala Lys Lys Ser Arg 
                      20                  25                  30          
          Leu Thr Asp Val Thr Leu 
                  35              
          <![CDATA[<210>  16]]>
          <![CDATA[<211>  51]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  智人]]>
          <![CDATA[<400>  16]]>
          Met Gly Trp Ile Arg Gly Arg Arg Ser Arg His Ser Trp Glu Met Ser 
          1               5                   10                  15      
          Glu Phe His Asn Tyr Asn Leu Asp Leu Lys Lys Ser Asp Phe Ser Thr 
                      20                  25                  30          
          Arg Trp Gln Lys Gln Arg Cys Pro Val Val Lys Ser Lys Cys Arg Glu 
                  35                  40                  45              
          Asn Ala Ser 
              50      
          <![CDATA[<210>  17]]>
          <![CDATA[<211>  24]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  智人]]>
          <![CDATA[<400>  17]]>
          Leu Cys Ala Arg Pro Arg Arg Ser Pro Ala Gln Glu Asp Gly Lys Val 
          1               5                   10                  15      
          Tyr Ile Asn Met Pro Gly Arg Gly 
                      20                  
          <![CDATA[<210>  18]]>
          <![CDATA[<211>  52]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  智人]]>
          <![CDATA[<400>  18]]>
          Tyr Phe Leu Gly Arg Leu Val Pro Arg Gly Arg Gly Ala Ala Glu Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ala Thr Arg Lys Gln Arg Ile Thr Glu Thr Glu Ser Pro Tyr Gln Glu 
                      20                  25                  30          
          Leu Gln Gly Gln Arg Ser Asp Val Tyr Ser Asp Leu Asn Thr Gln Arg 
                  35                  40                  45              
          Pro Tyr Tyr Lys 
              50          
          <![CDATA[<210>  19]]>
          <![CDATA[<211>  120]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  智人]]>
          <![CDATA[<400>  19]]>
          Trp Arg Arg Lys Arg Lys Glu Lys Gln Ser Glu Thr Ser Pro Lys Glu 
          1               5                   10                  15      
          Phe Leu Thr Ile Tyr Glu Asp Val Lys Asp Leu Lys Thr Arg Arg Asn 
                      20                  25                  30          
          His Glu Gln Glu Gln Thr Phe Pro Gly Gly Gly Ser Thr Ile Tyr Ser 
                  35                  40                  45              
          Met Ile Gln Ser Gln Ser Ser Ala Pro Thr Ser Gln Glu Pro Ala Tyr 
              50                  55                  60                  
          Thr Leu Tyr Ser Leu Ile Gln Pro Ser Arg Lys Ser Gly Ser Arg Lys 
          65                  70                  75                  80  
          Arg Asn His Ser Pro Ser Phe Asn Ser Thr Ile Tyr Glu Val Ile Gly 
                          85                  90                  95      
          Lys Ser Gln Pro Lys Ala Gln Asn Pro Ala Arg Leu Ser Arg Lys Glu 
                      100                 105                 110         
          Leu Glu Asn Phe Asp Val Tyr Ser 
                  115                 120 
          <![CDATA[<210>  20]]>
          <![CDATA[<211>  41]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  智人]]>
          <![CDATA[<400>  20]]>
          Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr 
          1               5                   10                  15      
          Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro 
                      20                  25                  30          
          Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser 
                  35                  40      
          <![CDATA[<210>  21]]>
          <![CDATA[<211>  47]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  智人]]>
          <![CDATA[<400>  21]]>
          Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly 
                      20                  25                  30          
          Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr 
                  35                  40                  45          
          <![CDATA[<210>  22]]>
          <![CDATA[<211>  39]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  智人]]>
          <![CDATA[<400>  22]]>
          Ile Glu Val Met Tyr Pro Pro Pro Tyr Leu Asp Asn Glu Lys Ser Asn 
          1               5                   10                  15      
          Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro Ser Pro Leu 
                      20                  25                  30          
          Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro 
                  35                  
          <![CDATA[<210>  23]]>
          <![CDATA[<211>  21]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  智人]]>
          <![CDATA[<400>  23]]>
          Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Val Ile Thr 
                      20      
          <![CDATA[<210>  24]]>
          <![CDATA[<211>  27]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  智人]]>
          <![CDATA[<400>  24]]>
          Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu 
          1               5                   10                  15      
          Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val 
                      20                  25          
          <![CDATA[<210>  25]]>
          <![CDATA[<211>  15]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  (GGGGS)3]]>
          <![CDATA[<400>  25]]>
          Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 
          1               5                   10                  15  
          <![CDATA[<210>  26]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  連接子3]]>
          <![CDATA[<400>  26]]>
          Gly Gly Ser Glu Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Glu Ser Lys Ser 
          1               5                   10                  15      
          Thr Gly Gly Ser 
                      20  
          <![CDATA[<210>  27]]>
          <![CDATA[<211>  8]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  連接子4]]>
          <![CDATA[<400>  27]]>
          Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser 
          1               5               
          <![CDATA[<210>  28]]>
          <![CDATA[<211>  12]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  連接子5]]>
          <![CDATA[<400>  28]]>
          Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser 
          1               5                   10          
          <![CDATA[<210>  29]]>
          <![CDATA[<211>  16]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  連接子6]]>
          <![CDATA[<400>  29]]>
          Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser 
          1               5                   10                  15      
          <![CDATA[<210>  30]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  連接子7]]>
          <![CDATA[<400>  30]]>
          Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser 
          1               5                   10                  15      
          Gly Gly Gly Ser 
                      20  
          <![CDATA[<210>  31]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  連接子8]]>
          <![CDATA[<400>  31]]>
          Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly 
          1               5                   10                  15      
          Gly Gly Gly Ser 
                      20  
          <![CDATA[<210>  32]]>
          <![CDATA[<211>  25]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  連接子9]]>
          <![CDATA[<400>  32]]>
          Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly 
          1               5                   10                  15      
          Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 
                      20                  25  
          <![CDATA[<210>  33]]>
          <![CDATA[<211>  14]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  連接子10]]>
          <![CDATA[<400>  33]]>
          Ile Arg Pro Arg Ala Ile Gly Gly Ser Lys Pro Arg Val Ala 
          1               5                   10                  
          <![CDATA[<210>  34]]>
          <![CDATA[<211>  15]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  連接子11]]>
          <![CDATA[<400>  34]]>
          Gly Lys Gly Gly Ser Gly Lys Gly Gly Ser Gly Lys Gly Gly Ser 
          1               5                   10                  15  
          <![CDATA[<210>  35]]>
          <![CDATA[<211>  15]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  連接子12]]>
          <![CDATA[<400>  35]]>
          Gly Gly Lys Gly Ser Gly Gly Lys Gly Ser Gly Gly Lys Gly Ser 
          1               5                   10                  15  
          <![CDATA[<210>  36]]>
          <![CDATA[<211>  15]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  連接子13]]>
          <![CDATA[<400>  36]]>
          Gly Gly Gly Lys Ser Gly Gly Gly Lys Ser Gly Gly Gly Lys Ser 
          1               5                   10                  15  
          <![CDATA[<210>  37]]>
          <![CDATA[<211>  15]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  連接子14]]>
          <![CDATA[<400>  37]]>
          Gly Lys Gly Lys Ser Gly Lys Gly Lys Ser Gly Lys Gly Lys Ser 
          1               5                   10                  15  
          <![CDATA[<210>  38]]>
          <![CDATA[<211>  15]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  連接子15]]>
          <![CDATA[<400>  38]]>
          Gly Gly Gly Lys Ser Gly Gly Lys Gly Ser Gly Lys Gly Gly Ser 
          1               5                   10                  15  
          <![CDATA[<210>  39]]>
          <![CDATA[<211>  15]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  連接子16]]>
          <![CDATA[<400>  39]]>
          Gly Lys Pro Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser 
          1               5                   10                  15  
          <![CDATA[<210>  40]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  連接子17]]>
          <![CDATA[<400>  40]]>
          Gly Lys Pro Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly 
          1               5                   10                  15      
          Lys Pro Gly Ser 
                      20  
          <![CDATA[<210>  41]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  連接子18]]>
          <![CDATA[<400>  41]]>
          Gly Lys Gly Lys Ser Gly Lys Gly Lys Ser Gly Lys Gly Lys Ser Gly 
          1               5                   10                  15      
          Lys Gly Lys Ser 
                      20  
          <![CDATA[<210>  42]]>
          <![CDATA[<211>  14]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  連接子19]]>
          <![CDATA[<400>  42]]>
          Ser Thr Ala Gly Asp Thr His Leu Gly Gly Glu Asp Phe Asp 
          1               5                   10                  
          <![CDATA[<210>  43]]>
          <![CDATA[<211>  15]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  連接子20]]>
          <![CDATA[<400>  43]]>
          Gly Glu Gly Gly Ser Gly Glu Gly Gly Ser Gly Glu Gly Gly Ser 
          1               5                   10                  15  
          <![CDATA[<210>  44]]>
          <![CDATA[<211>  15]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  連接子21]]>
          <![CDATA[<400>  44]]>
          Gly Gly Glu Gly Ser Gly Gly Glu Gly Ser Gly Gly Glu Gly Ser 
          1               5                   10                  15  
          <![CDATA[<210>  45]]>
          <![CDATA[<211>  15]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  連接子22]]>
          <![CDATA[<400>  45]]>
          Gly Glu Gly Glu Ser Gly Glu Gly Glu Ser Gly Glu Gly Glu Ser 
          1               5                   10                  15  
          <![CDATA[<210>  46]]>
          <![CDATA[<211>  15]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  連接子23]]>
          <![CDATA[<400>  46]]>
          Gly Gly Gly Glu Ser Gly Gly Glu Gly Ser Gly Glu Gly Gly Ser 
          1               5                   10                  15  
          <![CDATA[<210>  47]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  連接子24]]>
          <![CDATA[<400>  47]]>
          Gly Glu Gly Glu Ser Gly Glu Gly Glu Ser Gly Glu Gly Glu Ser Gly 
          1               5                   10                  15      
          Glu Gly Glu Ser 
                      20  
          <![CDATA[<210>  48]]>
          <![CDATA[<211>  18]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  連接子25]]>
          <![CDATA[<400>  48]]>
          Gly Ser Thr Ser Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr 
          1               5                   10                  15      
          Lys Gly 
          <![CDATA[<210>  49]]>
          <![CDATA[<211>  19]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  連接子26]]>
          <![CDATA[<400>  49]]>
          Pro Arg Gly Ala Ser Lys Ser Gly Ser Ala Ser Gln Thr Gly Ser Ala 
          1               5                   10                  15      
          Pro Gly Ser 
          <![CDATA[<210>  50]]>
          <![CDATA[<211>  19]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  連接子27]]>
          <![CDATA[<400>  50]]>
          Gly Thr Ala Ala Ala Gly Ala Gly Ala Ala Gly Gly Ala Ala Ala Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ala Ala Gly 
          <![CDATA[<210>  51]]>
          <![CDATA[<211>  19]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  連接子28]]>
          <![CDATA[<400>  51]]>
          Gly Thr Ser Gly Ser Ser Gly Ser Gly Ser Gly Gly Ser Gly Ser Gly 
          1               5                   10                  15      
          Gly Gly Gly 
          <![CDATA[<210>  52]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  連接子29]]>
          <![CDATA[<400>  52]]>
          Gly Lys Pro Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly 
          1               5                   10                  15      
          Lys Pro Gly Ser 
                      20  
          <![CDATA[<210>  53]]>
          <![CDATA[<211>  4]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  連接子30]]>
          <![CDATA[<400>  53]]>
          Gly Ser Gly Ser 
          1               
          <![CDATA[<210>  54]]>
          <![CDATA[<211>  10]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  連接子31]]>
          <![CDATA[<400>  54]]>
          Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro 
          1               5                   10  
          <![CDATA[<210>  55]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  連接子32]]>
          <![CDATA[<400>  55]]>
          Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro 
          1               5                   10                  15      
          Ala Pro Ala Pro 
                      20  
          <![CDATA[<210>  56]]>
          <![CDATA[<211>  32]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  連接子33]]>
          <![CDATA[<400>  56]]>
          Ala Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Ala 
          1               5                   10                  15      
          Lys Glu Ala Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Ala Lys Ala Ala Ala 
                      20                  25                  30          
          <![CDATA[<210>  57]]>
          <![CDATA[<211>  15]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  智人]]>
          <![CDATA[<400>  57]]>
          Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro 
          1               5                   10                  15  
          <![CDATA[<210>  58]]>
          <![CDATA[<211>  12]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  智人]]>
          <![CDATA[<400>  58]]>
          Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro 
          1               5                   10          
          <![CDATA[<210>  59]]>
          <![CDATA[<211>  62]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  智人]]>
          <![CDATA[<400>  59]]>
          Glu Leu Lys Thr Pro Leu Gly Asp Thr Thr His Thr Cys Pro Arg Cys 
          1               5                   10                  15      
          Pro Glu Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg Cys Pro 
                      20                  25                  30          
          Glu Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg Cys Pro Glu 
                  35                  40                  45              
          Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg Cys Pro 
              50                  55                  60          
          <![CDATA[<210>  60]]>
          <![CDATA[<211>  12]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  智人]]>
          <![CDATA[<400>  60]]>
          Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro 
          1               5                   10          
          <![CDATA[<210>  61]]>
          <![CDATA[<211>  63]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  小家鼠]]>
          <![CDATA[<400>  61]]>
          atggccagga gccccgccca gctgctgggc ctgctgctgc tgtggctgag cggcgccagg       60
          tgc                                                                     63
          <![CDATA[<210>  62]]>
          <![CDATA[<211>  21]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小家鼠]]>
          <![CDATA[<400>  62]]>
          Met Ala Arg Ser Pro Ala Gln Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp Leu 
          1               5                   10                  15      
          Ser Gly Ala Arg Cys 
                      20      
          <![CDATA[<210>  63]]>
          <![CDATA[<211>  36]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  短鉸鏈]]>
          <![CDATA[<400>  63]]>
          gagagcaagt atgggccccc ttgtcctcct tgtccg                                 36
          <![CDATA[<210>  64]]>
          <![CDATA[<211>  12]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  短鉸鏈]]>
          <![CDATA[<400>  64]]>
          Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro 
          1               5                   10          
          <![CDATA[<210>  65]]>
          <![CDATA[<211>  357]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  中等鉸鏈]]>
          <![CDATA[<400>  65]]>
          gagagcaagt atgggccccc ttgtcctcct tgtccggggc agccccgaga gccacaggtg       60
          tacactctgc caccaagtca ggaggagatg accaagaacc aggtcagcct gacctgcctg      120
          gtcaaaggct tctaccccag cgacatcgcc gtggagtggg agagcaatgg gcagccggag      180
          aacaactaca agaccacgcc tcccgtgctg gactccgacg gctccttctt cctctacagc      240
          aggctcaccg tggacaagag caggtggcag gaggggaatg tcttctcatg ctccgtgatg      300
          catgaggctc tgcacaacca ctacacacag aagagcctct ccctgtctct gggaaag         357
          <![CDATA[<210>  66]]>
          <![CDATA[<211>  119]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  中等鉸鏈]]>
          <![CDATA[<400>  66]]>
          Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Gly Gln Pro Arg 
          1               5                   10                  15      
          Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys 
                      20                  25                  30          
          Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 
                  35                  40                  45              
          Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 
              50                  55                  60                  
          Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser 
          65                  70                  75                  80  
          Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser 
                          85                  90                  95      
          Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser 
                      100                 105                 110         
          Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 
                  115                 
          <![CDATA[<210>  67]]>
          <![CDATA[<211>  684]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  長鉸鏈]]>
          <![CDATA[<400>  67]]>
          gagtctaagt atgggccccc ttgtcctcct tgtccggcac ctcccgtggc tggaccaagt       60
          gtattcttat ttcccccaaa acccaaagat actctcatga tttcccggac ccctgaggtt      120
          acatgcgtgg tggtggatgt gagccaggaa gaccccgaag tccagtttaa ctggtacgtg      180
          gatggagtgg aggtgcataa tgcaaagaca aagcctcggg aagaacagtt tcagagcaca      240
          taccgtgtgg ttagtgtcct cacagttctg caccaggact ggctgaacgg caaggagtat      300
          aagtgtaagg tctccaataa aggcctcccg tcatcgatcg aaaaaaccat cagtaaagcc      360
          aaagggcagc caagggagcc acaggtgtat actttaccac caagtcagga ggaaatgacc      420
          aagaaccagg tatctctgac ctgcctagtc aaaggctttt accccagcga tatcgctgtg      480
          gagtgggagt ctaatgggca gccagagaac aactacaaga ccacacctcc tgtgctggac      540
          tccgatggct ccttctttct atacagcagg ttaaccgtgg ataagagcag gtggcaggag      600
          gggaatgtct tctcatgctc tgtgatgcat gaggctctgc acaaccacta cacacagaag      660
          agcctctccc tgtctctggg aaag                                             684
          <![CDATA[<210>  68]]>
          <![CDATA[<211>  228]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  長鉸鏈]]>
          <![CDATA[<400>  68]]>
          Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val 
          1               5                   10                  15      
          Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu 
                      20                  25                  30          
          Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser 
                  35                  40                  45              
          Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu 
              50                  55                  60                  
          Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Gln Ser Thr 
          65                  70                  75                  80  
          Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn 
                          85                  90                  95      
          Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser 
                      100                 105                 110         
          Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln 
                  115                 120                 125             
          Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val 
              130                 135                 140                 
          Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val 
          145                 150                 155                 160 
          Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro 
                          165                 170                 175     
          Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr 
                      180                 185                 190         
          Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val 
                  195                 200                 205             
          Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu 
              210                 215                 220                 
          Ser Leu Gly Lys 
          225             
          <![CDATA[<210>  69]]>
          <![CDATA[<211>  735]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  赫賽汀scFv]]>
          <![CDATA[<400>  69]]>
          gacatccaga tgactcagtc accatcaagc ctgagtgcat ccgtgggcga tcgagtgaca       60
          ataacatgta gagcgagcca ggatgtaaat acggcagtag cgtggtacca acagaaaccc      120
          ggcaaggctc ctaagctgtt aatctacagc gccagcttcc tttatagtgg agtgccttca      180
          aggttctcag gatctaggtc cggtactgac ttcacgctga caatctcgag cctacaaccc      240
          gaggacttcg ccacttatta ctgccagcag cattacacta ctcctcccac attcggacag      300
          ggaaccaaag tcgagatcaa aggatcaacc tctggatctg gcaagcccgg gagcggggaa      360
          ggctctacta agggtgaggt gcaactagtg gagagtggcg gagggctcgt ccagccagga      420
          ggttccctga ggctgagttg cgctgcaagc ggattcaata tcaaggacac gtacatacac      480
          tgggtgcgcc aggcccccgg aaagggactg gagtgggtcg cccgaatcta tcctactaat      540
          ggctacacca ggtatgctga ttcagtgaaa ggaaggttta caatctctgc cgatacttca      600
          aagaatacag cttatctaca gatgaattca cttagagccg aggatacagc cgtgtattat      660
          tgctcccgat ggggaggaga tgggttctac gctatggact actggggtca aggaaccctg      720
          gtgaccgtta gttca                                                       735
          <![CDATA[<210>  70]]>
          <![CDATA[<211>  245]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  赫賽汀scFv]]>
          <![CDATA[<400>  70]]>
          Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala 
                      20                  25                  30          
          Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 
                  35                  40                  45              
          Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 
              50                  55                  60                  
          Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro 
                          85                  90                  95      
          Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Gly Ser Thr Ser Gly 
                      100                 105                 110         
          Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr Lys Gly Glu Val Gln 
                  115                 120                 125             
          Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg 
              130                 135                 140                 
          Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr Tyr Ile His 
          145                 150                 155                 160 
          Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Arg Ile 
                          165                 170                 175     
          Tyr Pro Thr Asn Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg 
                      180                 185                 190         
          Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr Leu Gln Met 
                  195                 200                 205             
          Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ser Arg Trp 
              210                 215                 220                 
          Gly Gly Asp Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 
          225                 230                 235                 240 
          Val Thr Val Ser Ser 
                          245 
          <![CDATA[<210>  71]]>
          <![CDATA[<211>  107]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<400>  71]]>
          Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala 
                      20                  25                  30          
          Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 
                  35                  40                  45              
          Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 
              50                  55                  60                  
          Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro 
                          85                  90                  95      
          Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 
                      100                 105         
          <![CDATA[<210>  72]]>
          <![CDATA[<211>  120]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<400>  72]]>
          Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr 
                      20                  25                  30          
          Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ala Arg Ile Tyr Pro Thr Asn Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ser Arg Trp Gly Gly Asp Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln 
                      100                 105                 110         
          Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 
                  115                 120 
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          <![CDATA[<211>  732]]>
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          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  scFv69 (赫賽汀抗ID)]]>
          <![CDATA[<400>  73]]>
          tcttctgagc tgactcagga ccctgctgtg tctgtggcct tgggacagac agtcaggatc       60
          acatgccaag gagacagcct cagaagctat tatgcaagct ggtaccagca gaagccagga      120
          caggcccctg tacttgtcat ctatggtaaa aacaaccggc cctcagggat cccagaccga      180
          ttctctggct ccagctcagg aaacacagct tccttgacca tcactggggc tcaggcggaa      240
          gatgaggctg actattactg taacagcagt gaaccaaccc caccaagagt ggtcttcggc      300
          ggcggaacaa aactgacagt gctgggctct acaagcggca gcggcaaacc tggatctggc      360
          gagggatcta ccaagggcga ggtgcaacta ttggaaagtg gtggcgggct ggtccaaccg      420
          ggcgggtcct tgaggctgtc ctgtgcagcc agcgggttta ctttttcttc ctacgccatg      480
          tcttgggtac gacaggctcc cggaaaaggg ctcgagtggg tgagtgcaat ctccgggagt      540
          gggggctcta cctactacgc cgattctgtc aagggtaggt tcactatctc cagggataat      600
          tcaaagaata ctttatacct gcagatgaat tcactgcgag cggaagatac agcagtgtac      660
          tattgtgcca agaacgtgca catccagccc tttgattact ggggccaggg caccagcgtg      720
          accgtgtcta gc                                                          732
          <![CDATA[<210>  74]]>
          <![CDATA[<211>  244]]>
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          <![CDATA[<400>  74]]>
          Ser Ser Glu Leu Thr Gln Asp Pro Ala Val Ser Val Ala Leu Gly Gln 
          1               5                   10                  15      
          Thr Val Arg Ile Thr Cys Gln Gly Asp Ser Leu Arg Ser Tyr Tyr Ala 
                      20                  25                  30          
          Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Ile Tyr 
                  35                  40                  45              
          Gly Lys Asn Asn Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser 
              50                  55                  60                  
          Ser Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu 
          65                  70                  75                  80  
          Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Asn Ser Ser Glu Pro Thr Pro Pro Arg 
                          85                  90                  95      
          Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Ser Thr Ser 
                      100                 105                 110         
          Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr Lys Gly Glu Val 
                  115                 120                 125             
          Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu 
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          Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met 
          145                 150                 155                 160 
          Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Ala 
                          165                 170                 175     
          Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly 
                      180                 185                 190         
          Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln 
                  195                 200                 205             
          Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys 
              210                 215                 220                 
          Asn Val His Ile Gln Pro Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val 
          225                 230                 235                 240 
          Thr Val Ser Ser 
          <![CDATA[<210>  75]]>
          <![CDATA[<211>  108]]>
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          <![CDATA[<223>  scFv69 VL]]>
          <![CDATA[<400>  75]]>
          Ser Ser Glu Leu Thr Gln Asp Pro Ala Val Ser Val Ala Leu Gly Gln 
          1               5                   10                  15      
          Thr Val Arg Ile Thr Cys Gln Gly Asp Ser Leu Arg Ser Tyr Tyr Ala 
                      20                  25                  30          
          Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Ile Tyr 
                  35                  40                  45              
          Gly Lys Asn Asn Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser 
              50                  55                  60                  
          Ser Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu 
          65                  70                  75                  80  
          Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Asn Ser Ser Glu Pro Thr Pro Pro Arg 
                          85                  90                  95      
          Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 
                      100                 105             
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          <![CDATA[<212>  PRT]]>
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          <![CDATA[<223>  scFv69 VH]]>
          <![CDATA[<400>  76]]>
          Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 
                      20                  25                  30          
          Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Lys Asn Val His Ile Gln Pro Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 
                      100                 105                 110         
          Ser Val Thr Val Ser Ser 
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          gaagtgcagc ttgtggagag tggcggtggt ttagttcaac cagggggcag cctgcgcttg       60
          agttgtgccg catcgggtcg taccttttct agctacgcaa tggggtggtt tcgtcaagct      120
          cctgggaagg aacgtgagtt tgtggtcgcc attaattggt catcagggag tacatactac      180
          gctgattccg tcaaagggcg ctttacaatc tcacgcgata acagcaagaa taccctttat      240
          ttacaaatga atagtctgcg tgcagaagat acggctgtgt attactgcgc tgcggggtac      300
          caaatcaact ctgggaatta caactttaag gactacgagt atgattattg gggccagggc      360
          actcaggtta cagtctcgag c                                                381
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          <![CDATA[<211>  127]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  9G8 VHH (抗EGFR)]]>
          <![CDATA[<400>  78]]>
          Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Phe Ser Ser Tyr 
                      20                  25                  30          
          Ala Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val 
                  35                  40                  45              
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              50                  55                  60                  
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          Ala Ala Gly Tyr Gln Ile Asn Ser Gly Asn Tyr Asn Phe Lys Asp Tyr 
                      100                 105                 110         
          Glu Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser 
                  115                 120                 125         
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          <![CDATA[<223>  T2A序列]]>
          <![CDATA[<400>  79]]>
          ggatccggcg ccacaaactt cagcctgctg aaacaggccg gcgacgtgga ggaaaaccca       60
          ggccca                                                                  66
          <![CDATA[<210>  80]]>
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          <![CDATA[<223>  T2A序列]]>
          <![CDATA[<400>  80]]>
          Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val 
          1               5                   10                  15      
          Glu Glu Asn Pro Gly Pro 
                      20          
          <![CDATA[<210>  81]]>
          <![CDATA[<211>  714]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  GFP]]>
          <![CDATA[<400>  81]]>
          gtgtccaagg gcgaagaact gttcaccggc gtggtgccca ttctggtgga actggacggg       60
          gatgtgaacg gccacaagtt cagcgttaga ggcgaaggcg aaggggatgc cacaaacggc      120
          aagctgaccc tgaagttcat ctgcaccacc ggaaagctgc ccgtgccttg gcctacactg      180
          gtcaccacac tgacatacgg cgtgcagtgc ttcagcagat accccgacca tatgaagcag      240
          cacgacttct tcaagagcgc catgcctgag ggctacgtgc aagagagaac catcaccttc      300
          aaggacgacg gcacctacaa gaccagagcc gaagtgaagt tcgagggcga caccctggtc      360
          aaccggatcg agctgaaggg catcgacttc aaagaggacg gcaacatcct gggccacaaa      420
          cttgagtaca acttcaacag ccacaacgtg tatatcaccg ccgacaagca gaagaacggc      480
          atcaaggcca acttcaagat ccggcacaac gtggaagatg gcagcgtgca gctggccgat      540
          cactaccagc agaacacacc catcggagat ggccctgtgc tgctgcccga taaccactac      600
          ctgagcaccc agagcaagct gagcaaggac cccaacgaga agcgggacca catggtgctg      660
          ctggaatttg tgacagccgc cggaatcacc cacggcatgg atgagctgta caag            714
          <![CDATA[<210>  82]]>
          <![CDATA[<211>  238]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  GFP]]>
          <![CDATA[<400>  82]]>
          Val Ser Lys Gly Glu Glu Leu Phe Thr Gly Val Val Pro Ile Leu Val 
          1               5                   10                  15      
          Glu Leu Asp Gly Asp Val Asn Gly His Lys Phe Ser Val Arg Gly Glu 
                      20                  25                  30          
          Gly Glu Gly Asp Ala Thr Asn Gly Lys Leu Thr Leu Lys Phe Ile Cys 
                  35                  40                  45              
          Thr Thr Gly Lys Leu Pro Val Pro Trp Pro Thr Leu Val Thr Thr Leu 
              50                  55                  60                  
          Thr Tyr Gly Val Gln Cys Phe Ser Arg Tyr Pro Asp His Met Lys Gln 
          65                  70                  75                  80  
          His Asp Phe Phe Lys Ser Ala Met Pro Glu Gly Tyr Val Gln Glu Arg 
                          85                  90                  95      
          Thr Ile Thr Phe Lys Asp Asp Gly Thr Tyr Lys Thr Arg Ala Glu Val 
                      100                 105                 110         
          Lys Phe Glu Gly Asp Thr Leu Val Asn Arg Ile Glu Leu Lys Gly Ile 
                  115                 120                 125             
          Asp Phe Lys Glu Asp Gly Asn Ile Leu Gly His Lys Leu Glu Tyr Asn 
              130                 135                 140                 
          Phe Asn Ser His Asn Val Tyr Ile Thr Ala Asp Lys Gln Lys Asn Gly 
          145                 150                 155                 160 
          Ile Lys Ala Asn Phe Lys Ile Arg His Asn Val Glu Asp Gly Ser Val 
                          165                 170                 175     
          Gln Leu Ala Asp His Tyr Gln Gln Asn Thr Pro Ile Gly Asp Gly Pro 
                      180                 185                 190         
          Val Leu Leu Pro Asp Asn His Tyr Leu Ser Thr Gln Ser Lys Leu Ser 
                  195                 200                 205             
          Lys Asp Pro Asn Glu Lys Arg Asp His Met Val Leu Leu Glu Phe Val 
              210                 215                 220                 
          Thr Ala Ala Gly Ile Thr His Gly Met Asp Glu Leu Tyr Lys 
          225                 230                 235             
          <![CDATA[<210>  83]]>
          <![CDATA[<211>  354]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  李氏菌內化蛋白6dyx]]>
          <![CDATA[<400>  83]]>
          caggtgaagt tggaagagtc tggtggtggc ctcgtccagg ctggggggag tcttcgcctt       60
          agttgcgcag cttcaggtcg gacatacagc acttacgcga tggggtggtt tcgccagact      120
          ccggggaagg agagagaatt ggtggcagca ataaattggt cagggggcaa cacgcactat      180
          gcagactctg taaaaggccg gttcacgatc agtagagata acgccaagag caccgtctac      240
          ctccagatga attccctgaa acctgaggac acagcagttt attactgtgc cgctccgaaa      300
          ggccacacag gggatcatta ctggggaccc ggcacccaag tgactgtgag ctcg            354
          <![CDATA[<210>  84]]>
          <![CDATA[<211>  118]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  李氏菌內化蛋白6dyx]]>
          <![CDATA[<400>  84]]>
          Gln Val Lys Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Tyr Ser Thr Tyr 
                      20                  25                  30          
          Ala Met Gly Trp Phe Arg Gln Thr Pro Gly Lys Glu Arg Glu Leu Val 
                  35                  40                  45              
          Ala Ala Ile Asn Trp Ser Gly Gly Asn Thr His Tyr Ala Asp Ser Val 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Ser Thr Val Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Ala Pro Lys Gly His Thr Gly Asp His Tyr Trp Gly Pro Gly Thr 
                      100                 105                 110         
          Gln Val Thr Val Ser Ser 
                  115             
          <![CDATA[<210>  85]]>
          <![CDATA[<211>  372]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  單眼紋眼鏡蛇磷脂酶A2 P3-3]]>
          <![CDATA[<400>  85]]>
          caggtgcaac tcgttgaaag tggaggcggt agcgttcagg caggtggaag cctcaggctg       60
          tcctgtgcgg ccagtagaga cacgtatgat tcacactgta tggggtggtt ccggcaagcg      120
          cccggaaaag agagggaaca ggtggcggca cataacggtg gccgaaacac atattacgca      180
          gatagcgtta aaggacgatt tacaatatct caggacaatg ctaagaatac gatgtatctc      240
          caaatgaata gccttaaacc tgaagataca gccatttact actgcgccgc ggacatgtcc      300
          gcgagaaggg tcgcaaacac aggatgcaga tacaattatt ggggccaagg cactttggta      360
          actgtgagct cg                                                          372
          <![CDATA[<210>  86]]>
          <![CDATA[<211>  124]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  單眼紋眼鏡蛇磷脂酶A2 P3-3]]>
          <![CDATA[<400>  86]]>
          Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Ser Val Gln Ala Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Arg Asp Thr Tyr Asp Ser His 
                      20                  25                  30          
          Cys Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Gln Val 
                  35                  40                  45              
          Ala Ala His Asn Gly Gly Arg Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 
              50                  55                  60                  
          Gly Arg Phe Thr Ile Ser Gln Asp Asn Ala Lys Asn Thr Met Tyr Leu 
          65                  70                  75                  80  
          Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala 
                          85                  90                  95      
          Ala Asp Met Ser Ala Arg Arg Val Ala Asn Thr Gly Cys Arg Tyr Asn 
                      100                 105                 110         
          Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 
                  115                 120                 
          <![CDATA[<210>  87]]>
          <![CDATA[<211>  345]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  伊波拉核蛋白抗Z C]]>
          <![CDATA[<400>  87]]>
          caggtgcaac ttcaacaaag cggcggggga tccgtaacgc caggtggatc actgcggctt       60
          tcttgtgctg cttccggatc catttcagac tttgctgcta tggcatggta tcggcaggcc      120
          cctggcaaag aaagggattg ggtttttgga accatattct cagcaggtgc tttgttgtac      180
          gcagaaccag ttaaaggtcg gtttaccata tcaagggata acgctaagaa tactgtatat      240
          cttcaaatga acagtttgaa accagaggat actgccgtat actattgtcg cctctatgct      300
          aaggcaattt attggggtca gggcacacag gtaacggtga gctcg                      345
          <![CDATA[<210>  88]]>
          <![CDATA[<211>  115]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  伊波拉核蛋白抗Z C]]>
          <![CDATA[<400>  88]]>
          Lys Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Gly Gly Ser Val Thr Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Ile Ser Asp Phe Ala 
                      20                  25                  30          
          Ala Met Ala Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Asp Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Phe Gly Thr Ile Phe Ser Ala Gly Ala Leu Leu Tyr Ala Glu Pro Val 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Arg Leu Tyr Ala Lys Ala Ile Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr 
                      100                 105                 110         
          Val Ser Ser 
                  115 
          <![CDATA[<210>  89]]>
          <![CDATA[<211>  372]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  疱疹單純型病毒：糖蛋白D]]>
          <![CDATA[<400>  89]]>
          caggtgcaac ttcaggctag tggaggggga ctggtgcaag ctggcgggtc tttgcgactg       60
          tcctgtgcag cctcaggccg agctacaggc aattatccca tgggatggtt ccgccaggcc      120
          cctggaaaag aacgcgagtt cgttgcagcc atcagtcggg acggcgacag tacatactac      180
          cgggatagtg ttaaaggccg atttaccata tcccgagaca atacgaaaaa tacggcatat      240
          cttcagatga acagtcttaa gccggaggac acagccgtct actattgtgc agctgaccgg      300
          ctgacagcat atcgatacaa tccagggcag attgactatt ggggacaggg tacacaagtt      360
          acggtgagct cg                                                          372
          <![CDATA[<210>  90]]>
          <![CDATA[<211>  124]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  疱疹單純型病毒：糖蛋白D]]>
          <![CDATA[<400>  90]]>
          Glu Val Gln Leu Gln Ala Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Ala Thr Gly Asn Tyr 
                      20                  25                  30          
          Pro Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val 
                  35                  40                  45              
          Ala Ala Ile Ser Arg Asp Gly Asp Ser Thr Tyr Tyr Arg Asp Ser Val 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Thr Lys Asn Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Ala Asp Arg Leu Thr Ala Tyr Arg Tyr Asn Pro Gly Gln Ile Asp 
                      100                 105                 110         
          Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser 
                  115                 120                 
          <![CDATA[<210>  91]]>
          <![CDATA[<211>  369]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  乳球菌噬菌體：RBP]]>
          <![CDATA[<400>  91]]>
          caggtgcaac tggtcgaaag tggtgggggg ctcgttcaag ccggtggcag tttgcgcttg       60
          tcatgcgccg ctagtgaaag taccttctct aactacgcga tgggatggtt caggcaagca      120
          ccaggccctg aaagggaatt tgtggctacg atttctcaaa cagggtccca cacctactac      180
          cgcaattctg tgaagggacg cttcacgatt agtcgggata acgccaagaa cacagtgtac      240
          cttcaaatga acaatatgaa gcctgaagac acggccgtgt attattgtgc agccggagac      300
          aactattact ataccagaac ttatgagtac gactactggg gccagggtac tcaggtcact      360
          gtgagctcg                                                              369
          <![CDATA[<210>  92]]>
          <![CDATA[<211>  123]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  乳球菌噬菌體：RBP]]>
          <![CDATA[<400>  92]]>
          Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Glu Ser Thr Phe Ser Asn Tyr 
                      20                  25                  30          
          Ala Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Pro Glu Arg Glu Phe Val 
                  35                  40                  45              
          Ala Thr Ile Ser Gln Thr Gly Ser His Thr Tyr Tyr Arg Asn Ser Val 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Gln Met Asn Asn Met Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Ala Gly Asp Asn Tyr Tyr Tyr Thr Arg Thr Tyr Glu Tyr Asp Tyr 
                      100                 105                 110         
          Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser 
                  115                 120             
          <![CDATA[<210>  93]]>
          <![CDATA[<211>  375]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  RSV：F蛋白]]>
          <![CDATA[<400>  93]]>
          caggtgcagt tggtcgagtc aggtggaggg tcagtgcagc caggggggtc ccttcgactt       60
          agttgtgcag ccagtggttt tacactggat tactattaca ttgggtggtt tcgacaggcc      120
          cccgggaagg aacgcgaggg tgtttcttgt atttccagct cacatggctc aacctattat      180
          gctgactcag taaaaggtcg gtttacgata agccgggata atgcaaagaa taccgtgtat      240
          cttcaaatga atagccttaa accagaagat accgctgtgt actattgtgc cactatacgc      300
          tctagctcat gggggggctg tgtccactac gggatggatt attgggggaa gggcacgcaa      360
          gtcacggtga gctcg                                                       375
          <![CDATA[<210>  94]]>
          <![CDATA[<211>  125]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  RSV：F蛋白]]>
          <![CDATA[<400>  94]]>
          Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Ser Val Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Leu Asp Tyr Tyr 
                      20                  25                  30          
          Tyr Ile Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Gly Val 
                  35                  40                  45              
          Ser Cys Ile Ser Ser Ser His Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Thr Ile Arg Ser Ser Ser Trp Gly Gly Cys Val His Tyr Gly Met 
                      100                 105                 110         
          Asp Tyr Trp Gly Lys Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser 
                  115                 120                 125 
          <![CDATA[<210>  95]]>
          <![CDATA[<211>  372]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  嗜熱脂肪地芽孢桿菌：SbsB]]>
          <![CDATA[<400>  95]]>
          caggtgcagt tgcaagaaag tggaggggga ttggtgcagg caggtggatc tttgaggctg       60
          tcctgtgcag cctctggtcg cactagctct gcgtacgcta tgggttggtt tcgacaggcc      120
          cctgggaaag aacgcgagtt cgttgccggc atttcaagca aaggcggtag cacgtattat      180
          ggtgccagca tgaaaggacg ctttacgata tcacgggata acgcgaaaaa tacggtctac      240
          ttgcagatga acggtctggc cccagaagac acggcagtgt actactgcgc tgcgagcgac      300
          aagtataatt tcgacaccag ccatgcggga tacggctatt ggggccaagg gacccaggtt      360
          acagtgagct cg                                                          372
          <![CDATA[<210>  96]]>
          <![CDATA[<211>  124]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  嗜熱脂肪地芽孢桿菌：SbsB]]>
          <![CDATA[<400>  96]]>
          Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Ser Ser Ala Tyr 
                      20                  25                  30          
          Ala Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val 
                  35                  40                  45              
          Ala Gly Ile Ser Ser Lys Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Gly Ala Ser Met 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Gln Met Asn Gly Leu Ala Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Ala Ser Asp Lys Tyr Asn Phe Asp Thr Ser His Ala Gly Tyr Gly 
                      100                 105                 110         
          Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser 
                  115                 120                 
          <![CDATA[<210>  97]]>
          <![CDATA[<211>  360]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  蓖麻毒素(V5E4)]]>
          <![CDATA[<400>  97]]>
          caggtgcaac tcgtggagac gggtggagga cttgtgcaag cgggcggaag ccttaggttg       60
          agctgtgctg cgtctggatt tacatttagt agctatgcaa tgggctggtt tcgccaggcg      120
          ccggggaagg aacgcgactt cgttgcgggt atctcactta gcggcgccgg gacgtactat      180
          gtaaaaggaa ggttcaccat ttcacgcgat aacgctaaaa acactgtcta tttgcagatg      240
          aacagcctca aaccagagga tactgcagta tattactgta aggccacagg agaaaggggg      300
          tatggagatc agggatatct tgaagtctgg gggagaggga cgctggttac cgtgagctcg      360
          <![CDATA[<210>  98]]>
          <![CDATA[<211>  120]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  蓖麻毒素(V5E4)]]>
          <![CDATA[<400>  98]]>
          Gln Val Gln Leu Val Glu Thr Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 
                      20                  25                  30          
          Ala Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Asp Phe Val 
                  35                  40                  45              
          Ala Gly Ile Ser Leu Ser Gly Ala Gly Thr Tyr Tyr Val Lys Gly Arg 
              50                  55                  60                  
          Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met 
          65                  70                  75                  80  
          Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Lys Ala Thr 
                          85                  90                  95      
          Gly Glu Arg Gly Tyr Gly Asp Gln Gly Tyr Leu Glu Val Trp Gly Arg 
                      100                 105                 110         
          Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 
                  115                 120 
          <![CDATA[<210>  99]]>
          <![CDATA[<211>  384]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  Lyso CW P01 B10]]>
          <![CDATA[<400>  99]]>
          caggtgcaac ttgtggagag cgggggtggt ctcgtccagg ctggtggctc acttcgcctc       60
          tcctgcgcgg ctagcggcgg gatattctca ggtggaagaa tgggctggtt cagacaagct      120
          ccaggtaaag agagagagtt cgtagcggcg gtaatcactc gcggggggtc tacttattat      180
          gcggactctg tgaagggtag atttacaatt tcacgggaca acgcaaagaa tactgtgtac      240
          cttcaaatga actcacttaa acctgaggac acggcggttt attactgcgc tgcaagcgag      300
          gtaacctatg acgagggaca ttacatcgga accaaatcca cttacgacac ttggggacag      360
          ggcacgcagg taactgtgag ctcg                                             384
          <![CDATA[<210>  100]]>
          <![CDATA[<211>  128]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  Lyso CW P01 B10]]>
          <![CDATA[<400>  100]]>
          Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Gly Ile Phe Ser Gly Gly 
                      20                  25                  30          
          Arg Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val 
                  35                  40                  45              
          Ala Ala Val Ile Thr Arg Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Ala Ser Glu Val Thr Tyr Asp Glu Gly His Tyr Ile Gly Thr Lys 
                      100                 105                 110         
          Ser Thr Tyr Asp Thr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser 
                  115                 120                 125             
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          caggtgcagc tcgtagagtc cgggggaggt ctggtgcaag ctggaggttc cttgcgattg       60
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          ccgggaaaag agagggagtt cgtagctgcc gtgattacaa ggggtggtag cacatactat      180
          gcagatagcg taaagggtag gtttacgata tccagggata acgcaaagaa cacggtctac      240
          ctgcagatga actcccttaa accagaagat actgccgttt attattgcgc cgcatcagag      300
          gtaacttacg atgaaggtcg atacattggg acgaagagca cctatgacac atgggggcag      360
          ggtactcaag tgaccgtgag ctcg                                             384
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          Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Gly Ile Phe Ser Gly Gly 
                      20                  25                  30          
          Arg Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val 
                  35                  40                  45              
          Ala Ala Val Ile Thr Arg Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Ala Ser Glu Val Thr Tyr Asp Glu Gly Arg Tyr Ile Gly Thr Lys 
                      100                 105                 110         
          Ser Thr Tyr Asp Thr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser 
                  115                 120                 125             
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          Cys Ala Gly Gly Thr Gly Cys Ala Ala Cys Thr Gly Gly Thr Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ala Ala Thr Cys Cys Gly Gly Gly Gly Gly Thr Gly Gly Ala Cys Thr 
                      20                  25                  30          
          Gly Gly Thr Ala Cys Ala Ala Gly Cys Cys Gly Gly Ala Gly Gly Gly 
                  35                  40                  45              
          Ala Gly Thr Thr Thr Gly Ala Gly Ala Cys Thr Cys Thr Cys Thr Thr 
              50                  55                  60                  
          Gly Cys Gly Cys Thr Gly Cys Cys Thr Cys Cys Gly Gly Thr Ala Gly 
          65                  70                  75                  80  
          Ala Ala Thr Thr Thr Thr Thr Thr Cys Ala Ala Thr Ala Thr Ala Cys 
                          85                  90                  95      
          Gly Ala Cys Ala Cys Cys Ala Thr Ala Gly Gly Ala Thr Gly Gly Thr 
                      100                 105                 110         
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          Ala Ala Ala Gly Gly Ala Ala Ala Gly Ala Gly Ala Gly Thr Thr Thr 
              130                 135                 140                 
          Gly Thr Ala Gly Cys Gly Gly Cys Cys Ala Cys Thr Ala Thr Cys Ala 
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          Cys Ala Ala Cys Gly Gly Cys Gly Gly Gly Thr Ala Thr Thr Ala Cys 
                          165                 170                 175     
          Gly Ala Cys Ala Thr Ala Thr Gly Ala Thr Gly Ala Thr Ala Gly Cys 
                      180                 185                 190         
          Gly Thr Thr Ala Ala Ala Gly Gly Ala Cys Gly Gly Thr Thr Cys Ala 
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          Thr Gly Cys Cys Ala Ala Gly Ala Ala Cys Ala Cys Ala Gly Thr Gly 
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          Thr Ala Cys Cys Thr Cys Cys Ala Ala Ala Thr Gly Ala Ala Thr Ala 
                          245                 250                 255     
          Gly Cys Cys Thr Thr Ala Ala Gly Cys Cys Cys Gly Ala Gly Gly Ala 
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          Thr Ala Cys Ala Gly Cys Cys Gly Thr Thr Thr Ala Cys Thr Ala Thr 
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          Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly 
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          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Ile Phe Ser Ile Tyr 
                      20                  25                  30          
          Asp Thr Ile Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe 
                  35                  40                  45              
          Val Ala Ala Thr Ile Thr Thr Ala Gly Ile Thr Thr Tyr Asp Asp Ser 
              50                  55                  60                  
          Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val 
          65                  70                  75                  80  
          Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr 
                          85                  90                  95      
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                      100                 105                 110         
          Val Thr Val Ser Ser 
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          caggtgcaac tggttgaatc tggtggtggg ctggtccaag cgggaggcag tcttcgactt       60
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          ctccagatga atagccttaa accagaagat acggcagtct attactgcgc cctggcaacc      300
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          Asp Val Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val 
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          Ala Ala Ser Ile Thr Lys Gly Gly Gly Thr Tyr Tyr Val Asp Ser Val 
              50                  55                  60                  
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          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Ile Ile Thr Ile Tyr 
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          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Ser Phe Ser Ile Tyr 
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          Ala Ala Thr Ile Glu Thr Gly Gly His Thr Ser Tyr Ala Asp Ser Val 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr 
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          Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Tyr Ala Lys Ile Val Tyr Asp Gln Gly Pro Ser Tyr Tyr Tyr Trp Gly 
                      100                 105                 110         
          Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser 
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          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Gly Ile Phe Ser Gly Gly 
                      20                  25                  30          
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          Ala Ala Val Ile Thr Arg Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 
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          Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Ala Ser Glu Val Thr Tyr Asp Glu Gly Arg Tyr Ile Gly Thr Lys 
                      100                 105                 110         
          Ser Thr Tyr Asp Thr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser 
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          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Ile Phe Ser Ile Tyr 
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          Val Ala Ala Thr Ile Thr Thr Ala Gly Ile Thr Thr Tyr Asp Asp Ser 
              50                  55                  60                  
          Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu 
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          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Phe Ser Ser Gly 
                      20                  25                  30          
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          Ser Ala Ile Ser Asn Arg Gly Ser Thr Val Tyr Ala Asp Ser Val Lys 
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                      100                 105                 110         
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          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Leu Ser Ser Tyr 
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          Ser Ser Ile Ser Tyr Ala Gly Val Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val Lys 
              50                  55                  60                  
          Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu 
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          Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 
                          85                  90                  95      
          Ala Ala Leu Thr Gly Tyr Tyr Ala Tyr Arg Arg Leu Trp Ser Tyr Arg 
                      100                 105                 110         
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          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Leu Thr Tyr Thr Gly Tyr 
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          Ala Met Gly Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Leu Val 
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          Ser Ala Ile Ser Ser Arg Ser Ser Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 
              50                  55                  60                  
          Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu 
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          Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 
                          85                  90                  95      
          Ala Gly Arg Pro Val Ala Leu Gly Ser Trp Arg Arg Thr Ala Thr Trp 
                      100                 105                 110         
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          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Phe Ser Ser Tyr 
                      20                  25                  30          
          Gly Met Gly Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Leu Val 
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          Ser Ala Ile Ser Asn Arg Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 
              50                  55                  60                  
          Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu 
          65                  70                  75                  80  
          Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 
                          85                  90                  95      
          Ala Ser Pro Ala Arg Val Gly Val Ser Gly His Ser Ser Ser Arg Arg 
                      100                 105                 110         
          Ser Tyr Tyr Gly Tyr Ser Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val 
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          Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 
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          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Ile Phe Ser Ser Asp 
                      20                  25                  30          
          Val Met Gly Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Leu Val 
                  35                  40                  45              
          Ser Ala Ile Ser Ser Gly Gly Ser Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val Lys 
              50                  55                  60                  
          Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu 
          65                  70                  75                  80  
          Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 
                          85                  90                  95      
          Ala Thr Met Gly Lys Ser Lys Thr Asn Arg Arg Asn Tyr Gly Thr Trp 
                      100                 105                 110         
          Arg Tyr Gly Ala Tyr Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val 
                  115                 120                 125             
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          Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Asn 
                      20                  25                  30          
          Ala Met Gly Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val 
                  35                  40                  45              
          Ser Ser Ile Ser Ser Gly Arg Ser Thr Thr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 
              50                  55                  60                  
          Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu 
          65                  70                  75                  80  
          Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 
                          85                  90                  95      
          Ala His Gly Thr Lys Tyr Lys Trp Thr Arg Ala Arg Leu Arg Ser Ala 
                      100                 105                 110         
          Arg Gln Lys Gln Leu Glu Thr Tyr Arg Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln 
                  115                 120                 125             
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          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Ser Ser Asn Tyr 
                      20                  25                  30          
          Val Met Gly Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val 
                  35                  40                  45              
          Ser Ala Ile Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 
              50                  55                  60                  
          Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Tyr Leu Gln 
          65                  70                  75                  80  
          Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ala 
                          85                  90                  95      
          Glu Ile Tyr Thr Ser Gly Ala Arg Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln 
                      100                 105                 110         
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          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Leu Thr Phe Ser Arg Tyr 
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          Ser Ala Ile Ser Ser Arg Arg Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 
              50                  55                  60                  
          Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu 
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          Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 
                          85                  90                  95      
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                      100                 105                 110         
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          Ser 
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          Ser Met Gly Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Leu Val 
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          Ser Ala Ile Ser Ser Gly Gly Ser Gly Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 
              50                  55                  60                  
          Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu 
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          Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 
                          85                  90                  95      
          Ile Gln Asp Tyr Ser Arg Ile Trp Glu Tyr Ile Ala Leu Asp Arg Arg 
                      100                 105                 110         
          Arg Ser Tyr Tyr Gly Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr 
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          Ala Met Gly Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Gly Val 
                  35                  40                  45              
          Ser Val Ile Ser Ser Gly Gly Thr Pro Ser Tyr Ala Asp Ser Val Lys 
              50                  55                  60                  
          Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu 
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          Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Asp 
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              50                  55                  60                  
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              50                  55                  60                  
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          Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 
                          85                  90                  95      
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                      100                 105                 110         
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          Ala Ile Thr Ser Ser Gly Glu Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly 
              50                  55                  60                  
          Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln 
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          Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ala 
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              50                  55                  60                  
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          Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 
                          85                  90                  95      
          Ala Asp Val Trp Ser Gly Tyr Glu Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 
                      100                 105                 110         
          Gln Val Thr Val Ser Ser 
                  115             
          <![CDATA[<210>  134]]>
          <![CDATA[<211>  125]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  共同序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  misc_feature]]>
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          <![CDATA[<223>  Xaa可為任何天然存在之胺基酸]]>
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          <![CDATA[<222>  (33)..(33)]]>
          <![CDATA[<223>  Xaa可為任何天然存在之胺基酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  misc_feature]]>
          <![CDATA[<222>  (51)..(51)]]>
          <![CDATA[<223>  Xaa可為任何天然存在之胺基酸]]>
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          <![CDATA[<222>  (54)..(54)]]>
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          <![CDATA[<400>  134]]>
          Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Ile Phe Ser Xaa Tyr 
                      20                  25                  30          
          Xaa Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val 
                  35                  40                  45              
          Ala Ala Xaa Ile Thr Xaa Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Xaa Asp Ser Val 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Val Xaa Xaa Asp Xaa Gly Xaa Tyr Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr 
                      100                 105                 110         
          Xaa Xaa Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser 
                  115                 120                 125
Figure 12_A0101_SEQ_0001
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Claims (63)

  1. 一種具有可調適受體專一性組分之通用嵌合抗原受體系統(arCAR)，其包含 (i)    具有嵌合抗原受體的免疫效應細胞，該嵌合抗原受體包含第一多肽，該第一多肽包含： (a) 胞外標記結合域， (b) 跨膜域，及 (c) 至少一個胞內信號傳導域；以及 (ii)   第二多肽，其包含： (a) 結合至目標細胞上之至少一種抗原之抗原結合域，及 (b) 由該標記結合域識別之標記； 其中： (i)    該標記包含抗體、其抗原結合片段或替代骨架，且 該標記結合域包含結合至該標記之抗個體基因型分子；或 (ii)   該標記包含結合至該標記結合域之抗個體基因型分子，且 該標記結合域包含抗體或其抗原結合片段或替代骨架。
  2. 如請求項1之arCAR系統，其中該抗個體基因型分子結合至該抗體、其抗原結合片段或替代骨架之至少一個抗原結合區。
  3. 如請求項1或2之arCAR系統，其中該抗個體基因型分子結合至該抗體或其抗原結合片段之至少一個互補決定區(CDR)。
  4. 如請求項1至3中任一項之arCAR系統，其中該第二多肽之該抗原結合域包含抗體或其抗原結合片段或替代骨架。
  5. 如請求項1至4中任一項之arCAR系統，其中該抗個體基因型分子為抗個體基因型抗體或其抗原結合片段或抗個體基因型替代骨架。
  6. 如請求項1至5中任一項之arCAR系統，其中該抗原結合片段為Fab片段、Fab'片段、F(ab')2片段、scFv片段、Fv片段、dsFv雙功能抗體、VHH、VNAR、單域抗體(sdAb)或奈米抗體、dAb片段、Fd'片段、Fd片段、重鏈可變區、經分離之互補決定區(CDR)、雙功能抗體、三功能抗體或十功能抗體。
  7. 如請求項1至6中任一項之arCAR系統，其中該胞外標記結合域、該抗原結合域及該標記中之至少一者包含單域抗體或奈米抗體。
  8. 如請求項1至7中任一項之arCAR系統，其中該胞外標記結合域、該抗原結合域及該標記中之至少一者包含VHH。
  9. 如請求項1至8中任一項之arCAR系統，其中該胞外標記結合域及該標記各自包含VHH。
  10. 如請求項1至9中任一項之arCAR系統，其中該胞外標記結合域、該標記及該抗原結合域各自包含VHH。
  11. 如請求項6至10中任一項之arCAR系統，其中該抗原結合片段、該胞外標記結合域、該抗原結合域及該標記中之一或多者包含與選自由以下組成之群的序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之多肽序列：SEQ ID NO.: 84、86、88、90、92、94、96、98、100、102、104、106、108及110-133。
  12. 如請求項1至6中任一項之arCAR系統，其中該胞外標記結合域、該抗原結合域及該標記中之至少一者包含scFv。
  13. 如請求項1至12中任一項之arCAR系統，其中該替代骨架為阿非林(Affilin)或生替林(Centyrin)。
  14. 如請求項1至13中任一項之arCAR系統，其中該標記包含抗體或其抗原結合片段或替代骨架。
  15. 如請求項14之arCAR系統，其中該抗體或其抗原結合片段或替代骨架結合至來自非人類來源之多肽。
  16. 如請求項15之arCAR系統，其中源於非人類來源之該多肽為呼吸道融合性病毒(RSV) F蛋白、李氏菌內化蛋白(Listeria internalin)、眼鏡蛇磷脂酶A2、伊波拉核蛋白(Ebola nucleoprotein)、疱疹單純型病毒(herpes simplex virus；HSV)糖蛋白D、乳球菌噬菌體受體結合蛋白(RBP)、嗜熱脂肪地芽孢桿菌( Geobacillus stearothermophilus)、蓖麻毒素或雞卵白溶菌酶。
  17. 如請求項1至16中任一項之arCAR系統，其中該抗原結合域結合至至少一種腫瘤抗原或自體免疫抗原。
  18. 如請求項17之arCAR系統，其中該至少一種抗原與相同腫瘤或自體免疫疾病相關。
  19. 如請求項17或18之arCAR系統，其中該腫瘤抗原與神經膠母細胞瘤、卵巢癌、子宮頸癌、頭頸癌、肝癌、前列腺癌、胰臟癌、腎細胞癌、膀胱癌或血液惡性病相關。
  20. 如請求項19之arCAR系統，其中與神經膠母細胞瘤相關之該腫瘤抗原為HER2、EGFRvIII、EGFR、CD133、PDGFRA、FGFR1、FGFR3、MET或IL13Rα2。
  21. 如請求項19之arCAR系統，其中與卵巢癌相關之該腫瘤抗原為FOLR1、FSHR、MUC16、MUC1、間皮素、CA125、EpCAM、EGFR、PDGFRα或B7H4。
  22. 如請求項19之arCAR系統，其中與子宮頸癌或頭頸癌相關之該腫瘤抗原為GD2、MUC1、間皮素、HER2或EGFR。
  23. 如請求項19之arCAR系統，其中與肝癌相關之該腫瘤抗原為緊密連接蛋白18.2、GPC-3、EpCAM、cMET或AFP。
  24. 如請求項1至23中任一項之arCAR系統，其中該抗個體基因型分子、抗體及/或抗體片段為人類化的。
  25. 如請求項1至24中任一項之arCAR系統，其中該跨膜域進一步包含鉸鏈域。
  26. 如請求項25之arCAR系統，其中該跨膜域及/或鉸鏈域源於CD8或CD28。
  27. 如請求項1至26中任一項之arCAR系統，其中該至少一個胞內信號傳導域包含CD3ζ信號傳導域。
  28. 如請求項1至27中任一項之arCAR系統，其中該至少一個胞內信號傳導域包含一或多個共刺激信號傳導域。
  29. 如請求項28之arCAR系統，其中該一或多個共刺激信號傳導域源於CD28、41BB、IL2Rb、CD40、OX40、CD80、CD86、CD27、ICOS、NKG2D、DAP10、DAP12或2B4 (CD244)。
  30. 如請求項1至29中任一項之arCAR系統，其中該第二多肽包含N端處之該抗原結合域及C端處之該標記。
  31. 如請求項1至29中任一項之arCAR系統，其中該第二多肽包含C端處之該抗原結合域及N端處之該標記。
  32. 如請求項1至31中任一項之arCAR系統，其中該第二多肽為可溶性多肽。
  33. 如請求項1至32中任一項之arCAR系統，其中該免疫效應細胞為T細胞、自然殺手(NK)細胞、細胞毒性T淋巴細胞(CTL)、調節T細胞或腫瘤浸潤性淋巴細胞(TIL)、樹突狀細胞或巨噬細胞。
  34. 如請求項33之arCAR系統，其中該免疫效應細胞衍生自誘導性富潛能幹細胞(induced pluripotent stem cell；iPSC)。
  35. 如請求項34之arCAR系統，其中該免疫效應細胞為衍生自誘導性富潛能幹細胞(iPSC)之T細胞或NK細胞。
  36. 如請求項1至35中任一項之arCAR系統，其中該arCAR進一步包含一或多種多肽，其各自包含(a)結合至獨特抗原之抗原結合域及(b)由該第一多肽之該標記結合域識別之標記。
  37. 一種arCAR系統，其包含兩種或更多種如請求項1至36中任一項之arCAR，其中各arCAR包含一對獨特的標記及標記結合域。
  38. 一種聚核苷酸，其編碼如請求項1至36中任一項之arCAR系統之該第一多肽。
  39. 一種聚核苷酸，其編碼如請求項1至36中任一項之arCAR系統之該第二多肽。
  40. 一種聚核苷酸，其編碼如請求項1至36中任一項之arCAR之該第一多肽及該第二多肽。
  41. 如請求項38至40中任一項之聚核苷酸，其中該抗原結合片段、該胞外標記結合域、該抗原結合域及該標記中之一或多者至少部分由與選自由以下組成之群的序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之聚核苷酸序列編碼：SEQ ID NO.: 83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107及109。
  42. 一種重組載體，其包含如請求項38至41中任一項之聚核苷酸。
  43. 如請求項42之重組載體，其中該載體為質體。
  44. 一種宿主細胞，其包含表現如請求項1至37中任一項之第一多肽的聚核苷酸。
  45. 一種宿主細胞，其包含表現如請求項1至37中任一項之第二多肽的聚核苷酸。
  46. 一種醫藥組合物，其包含如請求項1至37中任一項之免疫效應細胞及醫藥學上可接受之載劑及/或賦形劑。
  47. 一種醫藥組合物，其包含如請求項1至37中任一項之第二多肽及醫藥學上可接受之載劑及/或賦形劑。
  48. 一種套組，其包含組合的如請求項46之醫藥組合物及如請求項47之醫藥組合物。
  49. 一種製備如請求項44之宿主細胞的方法，其包含將如請求項38之聚核苷酸或包含該聚核苷酸之重組載體引入該細胞中。
  50. 一種製備如請求項45之宿主細胞的方法，其包含將如請求項39之聚核苷酸或包含該聚核苷酸之重組載體引入該細胞中。
  51. 一種治療有需要之個體之疾病的方法，其包含向該個體投與治療有效量之： (i)    包含嵌合抗原受體之免疫效應細胞，該嵌合抗原受體包含如請求項1至36中任一項之arCAR的該第一多肽，及 (ii)   該arCAR之該第二多肽、編碼該第二多肽之聚核苷酸或包含該第二多肽之宿主細胞。
  52. 如請求項51之方法，其中該第二多肽係在該免疫效應細胞之前、之後或與其一起投與。
  53. 一種治療有需要之個體之疾病的方法，其包含向該個體投與治療有效量之： (i)    免疫效應細胞，其包含兩種或更多種arCAR之第一多肽，其中該兩種或更多種arCAR係選自如請求項37之arCAR系統，及 (ii)   該兩種或更多種arCAR之第二多肽，或編碼該等第二多肽之一或多種聚核苷酸，或包含該等第二多肽之一或多種宿主細胞。
  54. 如請求項51至53中任一項之方法，其中該免疫效應細胞為T細胞、自然殺手(NK)細胞、細胞毒性T淋巴細胞(CTL)、調節T細胞或腫瘤浸潤性淋巴細胞(TIL)、樹突狀細胞或巨噬細胞。
  55. 如請求項51至53中任一項之方法，其中該免疫效應細胞衍生自iPSC。
  56. 如請求項51至55中任一項之方法，其中該免疫效應細胞組成性表現該第一多肽。
  57. 如請求項51至56中任一項之方法，其中該疾病為癌症或自體免疫疾病。
  58. 如請求項57之方法，其中該癌症為神經膠母細胞瘤、卵巢癌、子宮頸癌、頭頸癌、肝癌、前列腺癌、胰臟癌、腎細胞癌、膀胱癌或血液惡性病。
  59. 如請求項51至58中任一項之方法，其中該免疫效應細胞與該一或多種第二多肽同時投與。
  60. 如請求項51至58中任一項之方法，其中該免疫效應細胞與該一或多種第二多肽依序投與。
  61. 如請求項51至60中任一項之方法，其中該免疫效應細胞為自體細胞。
  62. 如請求項51至60中任一項之方法，其中該免疫效應細胞為同種異體細胞。
  63. 如請求項51至62中任一項之方法，其中該個體為人類。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2023129937A1 (en) * 2021-12-29 2023-07-06 Century Therapeutics, Inc. Genetically engineered cells having anti-cd19 / anti-cd22 chimeric antigen receptors, and uses thereof
WO2024103017A2 (en) 2022-11-10 2024-05-16 Century Therapeutics, Inc. Genetically engineered cells having anti-nectin4 chimeric antigen receptors, and uses thereof

Family Cites Families (504)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3026097A (en) 1958-04-15 1962-03-20 Ball Charles Field Mining machine having laterally adjustable head
US4650764A (en) 1983-04-12 1987-03-17 Wisconsin Alumni Research Foundation Helper cell
EP0173552B1 (en) 1984-08-24 1991-10-09 The Upjohn Company Recombinant dna compounds and the expression of polypeptides such as tpa
US5168062A (en) 1985-01-30 1992-12-01 University Of Iowa Research Foundation Transfer vectors and microorganisms containing human cytomegalovirus immediate-early promoter-regulatory DNA sequence
EP0273085A1 (en) 1986-12-29 1988-07-06 IntraCel Corporation A method for internalizing nucleic acids into eukaryotic cells
US4980289A (en) 1987-04-27 1990-12-25 Wisconsin Alumni Research Foundation Promoter deficient retroviral vector
US5858358A (en) 1992-04-07 1999-01-12 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Navy Methods for selectively stimulating proliferation of T cells
US6352694B1 (en) 1994-06-03 2002-03-05 Genetics Institute, Inc. Methods for inducing a population of T cells to proliferate using agents which recognize TCR/CD3 and ligands which stimulate an accessory molecule on the surface of the T cells
US6534055B1 (en) 1988-11-23 2003-03-18 Genetics Institute, Inc. Methods for selectively stimulating proliferation of T cells
US6905680B2 (en) 1988-11-23 2005-06-14 Genetics Institute, Inc. Methods of treating HIV infected subjects
US5124263A (en) 1989-01-12 1992-06-23 Wisconsin Alumni Research Foundation Recombination resistant retroviral helper cell and products produced thereby
US5399346A (en) 1989-06-14 1995-03-21 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Gene therapy
US5550318A (en) 1990-04-17 1996-08-27 Dekalb Genetics Corporation Methods and compositions for the production of stably transformed, fertile monocot plants and cells thereof
US5071743A (en) 1989-10-27 1991-12-10 Her Majesty The Queen In Right Of Canada, As Represented By The National Research Council Of Canada Process for conducting site-directed mutagenesis
US5484956A (en) 1990-01-22 1996-01-16 Dekalb Genetics Corporation Fertile transgenic Zea mays plant comprising heterologous DNA encoding Bacillus thuringiensis endotoxin
US5384253A (en) 1990-12-28 1995-01-24 Dekalb Genetics Corporation Genetic transformation of maize cells by electroporation of cells pretreated with pectin degrading enzymes
EP0592597B1 (en) 1991-07-01 2001-09-26 Berlex Laboratories, Inc. Novel mutagenesis methods and compositions
US5610042A (en) 1991-10-07 1997-03-11 Ciba-Geigy Corporation Methods for stable transformation of wheat
GB9222888D0 (en) 1992-10-30 1992-12-16 British Tech Group Tomography
CA2168202A1 (en) 1993-07-30 1995-03-16 Joseph Dougherty Efficient gene transfer into primary lymphocytes
US7175843B2 (en) 1994-06-03 2007-02-13 Genetics Institute, Llc Methods for selectively stimulating proliferation of T cells
US6692964B1 (en) 1995-05-04 2004-02-17 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Navy Methods for transfecting T cells
US7067318B2 (en) 1995-06-07 2006-06-27 The Regents Of The University Of Michigan Methods for transfecting T cells
US5789166A (en) 1995-12-08 1998-08-04 Stratagene Circular site-directed mutagenesis
WO1997046670A1 (en) 1996-06-07 1997-12-11 Massachusetts Institute Of Technology Programmed sequential mutagenesis
US5780270A (en) 1996-07-17 1998-07-14 Promega Corporation Site-specific mutagenesis and mutant selection utilizing antibiotic-resistant markers encoding gene products having altered substrate specificity
US7244826B1 (en) 1998-04-24 2007-07-17 The Regents Of The University Of California Internalizing ERB2 antibodies
US6693086B1 (en) 1998-06-25 2004-02-17 National Jewish Medical And Research Center Systemic immune activation method using nucleic acid-lipid complexes
JP2002530066A (ja) 1998-11-19 2002-09-17 スミスクライン・ビーチャム・コーポレイション Ｒｈａｍｍアンタゴニスト抗体
WO2000034337A1 (en) 1998-12-10 2000-06-15 Tsukuba Research Laboratory, Toagosei Co., Ltd. Humanized monoclonal antibodies against vascular endothelial cell growth factor
IL129299A0 (en) 1999-03-31 2000-02-17 Mor Research Applic Ltd Monoclonal antibodies antigens and diagnosis of malignant diseases
JP4926320B2 (ja) 1999-04-28 2012-05-09 ボード・オブ・リージエンツ，ザ・ユニバーシテイ・オブ・テキサス・システム Ｖｅｇｆの選択的阻害による癌処置のための組成物および方法
US8383081B2 (en) 1999-05-10 2013-02-26 Immunomedics, Inc. Anti-CD74 immunoconjugates and methods of use
US6949245B1 (en) 1999-06-25 2005-09-27 Genentech, Inc. Humanized anti-ErbB2 antibodies and treatment with anti-ErbB2 antibodies
US6949520B1 (en) 1999-09-27 2005-09-27 Coley Pharmaceutical Group, Inc. Methods related to immunostimulatory nucleic acid-induced interferon
JP2004500095A (ja) 2000-02-24 2004-01-08 エクサイト　セラピーズ，　インコーポレイテッド 細胞の同時の刺激および濃縮
US6797514B2 (en) 2000-02-24 2004-09-28 Xcyte Therapies, Inc. Simultaneous stimulation and concentration of cells
US6867041B2 (en) 2000-02-24 2005-03-15 Xcyte Therapies, Inc. Simultaneous stimulation and concentration of cells
US20040058445A1 (en) 2001-04-26 2004-03-25 Ledbetter Jeffrey Alan Activation of tumor-reactive lymphocytes via antibodies or genes recognizing CD3 or 4-1BB
IL160157A0 (en) 2001-08-17 2004-07-25 Coley Pharm Group Inc Combination motif immune stimulation oligonucleotides with improved activity
US7306925B2 (en) 2001-11-09 2007-12-11 Vanderbilt University Phage antibodies to radiation-inducible neoantigens
CN1649902B (zh) 2002-03-01 2011-04-13 免疫医疗公司 内在化抗-cd74抗体和使用方法
PT1916001E (pt) 2002-03-04 2011-07-18 Imclone Llc Anticorpos humanos específicos para kdr e suas utilizações
US7446190B2 (en) 2002-05-28 2008-11-04 Sloan-Kettering Institute For Cancer Research Nucleic acids encoding chimeric T cell receptors
AU2003248782A1 (en) 2002-07-01 2004-01-19 Biogen Idec Ma Inc. Humanized anti-lymphotoxin beta receptor antibodies
CA2501222A1 (en) 2002-10-04 2004-10-21 Mitsubishi Pharma Corporation Antibody recognizing antigen
US9068234B2 (en) 2003-01-21 2015-06-30 Ptc Therapeutics, Inc. Methods and agents for screening for compounds capable of modulating gene expression
BRPI0407446A (pt) 2003-02-13 2006-01-31 Pharmacia Corp Anticorpos para c-met para o tratamento de cânceres
US7425328B2 (en) 2003-04-22 2008-09-16 Purdue Pharma L.P. Tissue factor antibodies and uses thereof
HUE033129T2 (en) 2003-07-24 2017-11-28 Innate Pharma Sa Methods and compositions for increasing the efficacy of therapeutic antibodies using compounds that potentiate NK cells
US7902338B2 (en) 2003-07-31 2011-03-08 Immunomedics, Inc. Anti-CD19 antibodies
US7485297B2 (en) 2003-08-12 2009-02-03 Dyax Corp. Method of inhibition of vascular development using an antibody
AR045563A1 (es) 2003-09-10 2005-11-02 Warner Lambert Co Anticuerpos dirigidos a m-csf
AU2004279736A1 (en) 2003-10-09 2005-04-21 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Antibody composition specifically binding to ganglioside GM2
US7435596B2 (en) 2004-11-04 2008-10-14 St. Jude Children's Research Hospital, Inc. Modified cell line and method for expansion of NK cell
US8420087B2 (en) 2004-01-05 2013-04-16 Antisoma Research Limited Interleukin-12 targeted to oncofoetal fibronectin
US7271245B2 (en) 2004-02-13 2007-09-18 The Scripps Research Institute Methods and compositions for inhibition of metastasis
AU2005250341A1 (en) 2004-04-23 2005-12-15 Amgen Inc. Antibodies to angiogenesis inhibiting domains of CD148
ATE443084T1 (de) 2004-07-10 2009-10-15 Fox Chase Cancer Ct Genetisch modifizierte, menschliche, natürliche killerzellenlinien:
DK1781321T3 (da) 2004-08-02 2014-04-14 Zenyth Operations Pty Ltd Fremgangsmåde til behandling af cancer, der omfatter en vegf-b-antagonist
US20060046294A1 (en) 2004-08-26 2006-03-02 The United States Of America, As Represented By The Secretary Of Agriculture Site-specific recombination systems for use in eukaryotic cells
US9034650B2 (en) 2005-02-02 2015-05-19 Intrexon Corporation Site-specific serine recombinases and methods of their use
US9493569B2 (en) 2005-03-31 2016-11-15 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Structural isomers of sc(Fv)2
US9284375B2 (en) 2005-04-15 2016-03-15 Macrogenics, Inc. Covalent diabodies and uses thereof
CA2619654A1 (en) 2005-08-24 2007-03-01 Cell Matrix Combination therapies for inhibiting integrin-extracellular matrix interactions
TWI461436B (zh) 2005-11-25 2014-11-21 Kyowa Hakko Kirin Co Ltd 人類ｃｄ１３４（ｏｘ４０）之人類單株抗體及其製造及使用方法
DOP2006000277A (es) 2005-12-12 2007-08-31 Bayer Pharmaceuticals Corp Anticuerpos anti mn y métodos para su utilización
US20070160578A1 (en) 2005-12-14 2007-07-12 The Gov. Of The Usa As Represented By The Secretary Of The Dep. Of Health And Human Services Expansion of natural killer and CD8 T-cells with IL-15R/ligand activator complexes
AU2006325236B2 (en) 2005-12-16 2011-11-10 Ribovax Biotechnologies Sa Methods for obtaining immortalized antibody secreting cells
KR20090029184A (ko) 2006-04-07 2009-03-20 더 가브먼트 오브 더 유나이티드 스테이츠 오브 아메리카, 리프리젠티드 바이 더 세크러테리, 디파트먼트 오브 헬쓰 앤드 휴먼 서비씨즈 항체 조성물 및 신생물성 질병의 치료 방법
NZ574215A (en) 2006-07-18 2012-07-27 Sanofi Aventis Antagonist antibody against epha2 for the treatment of cancer
PT2511301T (pt) 2006-08-04 2018-03-08 Medimmune Ltd Anticorpos humanos para erbb2
US9334330B2 (en) 2006-10-10 2016-05-10 Universite De Nantes Use of monoclonal antibodies specific to the O-acetylated form of GD2 ganglioside for the treatment of certain cancers
JP5299902B2 (ja) 2007-01-30 2013-09-25 中外製薬株式会社 キメラＦｃγレセプター及び該レセプターを用いたＡＤＣＣ活性測定方法
WO2008127735A1 (en) 2007-04-13 2008-10-23 Stemline Therapeutics, Inc. Il3ralpha antibody conjugates and uses thereof
AU2007358569B2 (en) 2007-09-07 2014-09-04 Ablynx N.V. Binding molecules with multiple binding sites, compositions comprising the same and uses thereof
WO2009070753A2 (en) 2007-11-28 2009-06-04 The Scripps Research Institute Bivalent single chain fv antibody compositions that specifically bind to integrin receptor on a metastatic cell in a mammalian subject
PT2242772E (pt) 2007-12-26 2015-02-09 Biotest Ag Imunoconjugados dirigidos contra cd138 e as suas utilizações
WO2009120922A2 (en) 2008-03-27 2009-10-01 Zymogenetics, Inc. Compositions and methods for inhibiting pdgfrbeta and vegf-a
US20110008326A1 (en) 2008-04-02 2011-01-13 Oliver Hill Binding agents directed against il-4 receptor for the treatment of tumors, inflammatory and immunological disorders
US8530636B2 (en) 2008-05-07 2013-09-10 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Method for regulating protein function in cells in vivo using synthetic small molecules
US20100008978A1 (en) 2008-05-09 2010-01-14 The Regents Of The University Of California Nanoparticles effective for internalization into cells
AU2009296392B2 (en) 2008-09-26 2016-06-02 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Human anti-PD-1, PD-L1, and PD-L2 antibodies and uses therefor
WO2010037041A2 (en) 2008-09-26 2010-04-01 Oncomed Pharmaceuticals, Inc. Frizzled-binding agents and uses thereof
EP2172485A1 (en) 2008-10-01 2010-04-07 Pierre Fabre Medicament Novel anti CXCR4 antibodies and their use for the treatment of cancer
BRPI0921586A2 (pt) 2008-11-18 2019-09-24 Merrimack Pharmaceuticals Inc articuladores de albumina de soro humana e conjugados destes
US20110293620A1 (en) 2008-12-05 2011-12-01 Molldrem Jeffrey J Monoclonal Antibodies For Use In Diagnosis and Therapy of Cancers and Autoimmune Disease
CN102741287B (zh) 2009-02-17 2015-02-18 Ucb制药公司 对人ox40具有特异性的抗体分子
GB0903325D0 (en) 2009-02-26 2009-04-08 Univ Aberdeen Antibody molecules
CA2755686A1 (en) 2009-03-16 2010-09-23 Daniel A. Vallera Methods and compositions for bi-specific targeting of cd19/cd22
BRPI1006448B1 (pt) 2009-03-25 2021-08-17 Genentech, Inc Anticorpo antagonista anti-fgfr3, anticorpo monoclonal, polinucleotídeo, vetor, micro­organismo transgênico, método para produção de um anticorpo anti-fgfr3, formulação farmacêutica e usos do anticorpo antagonista anti-fgfr3
CN102428173B (zh) 2009-03-26 2014-07-30 细胞维护北欧制药公司 Nk细胞的扩增
MY160126A (en) 2009-05-13 2017-02-28 Genzyme Corp Anti-human cd52 immunoglobulins
US8221753B2 (en) 2009-09-30 2012-07-17 Tracon Pharmaceuticals, Inc. Endoglin antibodies
CA2774260C (en) 2009-09-16 2018-10-09 Immunomedics, Inc. Class i anti-cea antibodies and uses thereof
WO2011041093A1 (en) 2009-10-01 2011-04-07 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Anti-vascular endothelial growth factor receptor-2 chimeric antigen receptors and use of same for the treatment of cancer
BR122021025338B1 (pt) 2009-11-24 2023-03-14 Medimmune Limited Anticorpo isolado ou fragmento de ligação do mesmo contra b7-h1, composição farmacêutica e seus usos
MX354143B (es) 2009-12-02 2018-02-14 Imaginab Inc Minicuerpos j591 y diacuerpos-cys para apuntar con especificidad de objetivo a un antígeno de membrana específico para próstata de humano (psma) y métodos para su uso.
WO2011071871A1 (en) 2009-12-07 2011-06-16 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Methods for enhancing anti-tumor antibody therapy
EP3184109B1 (en) 2009-12-29 2020-11-18 Gamida-Cell Ltd. Methods for enhancing natural killer cell proliferation and activity
SG183174A1 (en) 2010-02-04 2012-09-27 Gilead Biologics Inc Antibodies that bind to lysyl oxidase-like 2 (loxl2) and methods of use therefor
WO2011116212A2 (en) 2010-03-17 2011-09-22 Oncomed Pharmaceuticals, Inc. Bone morphogenetic protein receptor binding agents and methods of their use
CA3002192C (en) 2010-03-26 2023-03-07 Memorial Sloan-Kettering Cancer Center Antibodies to muc16 and methods of use thereof
PL3202789T3 (pl) 2010-04-16 2020-09-21 Biogen Ma Inc. Przeciwciała anty-vla-4
US9242014B2 (en) 2010-06-15 2016-01-26 The Regents Of The University Of California Receptor tyrosine kinase-like orphan receptor 1 (ROR1) single chain Fv antibody fragment conjugates and methods of use thereof
ES2961381T3 (es) 2010-06-19 2024-03-11 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Anticuerpos anti-GD2
KR20230096132A (ko) 2010-07-13 2023-06-29 셀룰래리티 인코포레이티드 천연 킬러 세포의 생성 방법
EP2407487A1 (en) 2010-07-14 2012-01-18 F-Star Biotechnologische Forschungs - und Entwicklungsges. M.B.H. Multispecific modular antibody
WO2012019061A2 (en) 2010-08-05 2012-02-09 Stem Centrx, Inc. Novel effectors and methods of use
AU2011293127B2 (en) 2010-08-27 2016-05-12 Abbvie Stemcentrx Llc Notum protein modulators and methods of use
AU2011295715B9 (en) 2010-09-03 2017-02-23 Abbvie Stemcentrx Llc Novel modulators and methods of use
DK3327040T3 (da) 2010-09-21 2021-09-20 Altor Bioscience Corp Multimeriske opløselige il-15-fusionsmolekyler og fremgangsmåder til at fremstille og anvende samme
US9845362B2 (en) 2010-10-08 2017-12-19 The University Of North Carolina At Charlotte Compositions comprising chimeric antigen receptors, T cells comprising the same, and methods of using the same
WO2012075581A1 (en) 2010-12-06 2012-06-14 Ym Biosciences Inc. Antibodies selective for cells presenting erbb2 at high density
BR112013014119A8 (pt) 2010-12-08 2017-07-11 Stem Centrx Inc Novos moduladores e métodos de uso
EP3305798A1 (en) 2010-12-09 2018-04-11 The Trustees of The University of Pennsylvania Use of chimeric antigen receptor-modified t cells to treat cancer
ES2791716T3 (es) * 2010-12-14 2020-11-05 Univ Maryland Células T que expresan al receptor de antígeno quimérico antietiqueta universal y métodos para el tratamiento del cáncer
CA2824997C (en) 2011-01-18 2023-01-17 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Compositions and methods for treating cancer
US20130295671A1 (en) 2011-01-21 2013-11-07 Biotherapy Institute Of Japan Method for producing nk cell-enriched blood preparation
SA112330278B1 (ar) 2011-02-18 2015-10-09 ستيم سينتركس، انك. مواد ضابطة جديدة وطرق للاستخدام
GB201103955D0 (en) 2011-03-09 2011-04-20 Antitope Ltd Antibodies
ES2872077T3 (es) 2011-04-08 2021-11-02 Us Health Receptor de antígenos quiméricos anti-variante III del receptor de factor de crecimiento epidérmico y uso de los mismos para el tratamiento de cáncer
WO2012145469A1 (en) 2011-04-19 2012-10-26 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health & Human Services Human monoclonal antibodies specific for glypican-3 and use thereof
CA3205636A1 (en) 2011-04-20 2012-10-26 University Of Washington Through Its Center For Commercialization Beta-2 microglobulin-deficient cells
AU2012245260B2 (en) 2011-04-22 2016-09-08 Aptevo Research And Development Llc Prostate-specific membrane antigen binding proteins and related compositions and methods
JP5572863B2 (ja) 2011-06-24 2014-08-20 国立大学法人九州大学 Ｎｋ細胞の増幅方法
WO2013006490A2 (en) 2011-07-01 2013-01-10 Cellerant Therapeutics, Inc. Antibodies that specifically bind to tim3
CA2840460C (en) 2011-07-11 2022-08-16 Glenmark Pharmaceuticals S.A. Antibodies that bind to ox40 and their uses
BR112013032552A2 (pt) 2011-07-24 2017-12-12 Curetech Ltd variantes de anticorpos monoclonais humanizados imunomoduladores
WO2013023162A2 (en) 2011-08-10 2013-02-14 Genus Oncology, Llc Anti-muc1 antibodies for cancer diagnostics
WO2013033626A2 (en) 2011-08-31 2013-03-07 Trustees Of Dartmouth College Nkp30 receptor targeted therapeutics
CN108753942A (zh) 2011-10-06 2018-11-06 Aveo制药公司 预测肿瘤对抗erbb3抗体的应答
WO2013051718A1 (ja) 2011-10-07 2013-04-11 国立大学法人三重大学 キメラ抗原受容体
WO2013059593A1 (en) 2011-10-20 2013-04-25 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Anti-cd22 chimeric antigen receptors
US9272002B2 (en) 2011-10-28 2016-03-01 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Fully human, anti-mesothelin specific chimeric immune receptor for redirected mesothelin-expressing cell targeting
WO2013067492A1 (en) 2011-11-03 2013-05-10 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Isolated b7-h4 specific compositions and methods of use thereof
AU2012339681A1 (en) 2011-11-16 2014-06-19 Oncomed Pharmaceuticals, Inc. Human NOTCH receptor mutations and their use
US10391126B2 (en) 2011-11-18 2019-08-27 Board Of Regents, The University Of Texas System CAR+ T cells genetically modified to eliminate expression of T-cell receptor and/or HLA
US9757458B2 (en) 2011-12-05 2017-09-12 Immunomedics, Inc. Crosslinking of CD22 by epratuzumab triggers BCR signaling and caspase-dependent apoptosis in hematopoietic cancer cells
CA2853138A1 (en) 2011-12-05 2013-06-13 Immunomedics, Inc. Therapeutic use of anti-cd22 antibodies for inducing trogocytosis
CN104204194B (zh) 2011-12-22 2018-08-03 财团法人牧岩生命工学研究所 生产自然杀伤细胞的方法、由该方法生产的自然杀伤细胞以及包含该自然杀伤细胞的用于治疗癌症和感染性疾病的组合物
US20150216998A1 (en) 2012-01-01 2015-08-06 Ramot At Tel-Aviv University Ltd. Endo180-targeted particles for selective delivery of therapeutic and diagnostic agents
MX363819B (es) 2012-02-08 2019-04-03 Igm Biosciences Inc Uniones a cdim y sus usos.
US9534058B2 (en) 2012-02-08 2017-01-03 Abbvie Stemcentrx Llc Anti-CD324 monoclonal antibodies and uses thereof
EP3594245A1 (en) 2012-02-13 2020-01-15 Seattle Children's Hospital d/b/a Seattle Children's Research Institute Bispecific chimeric antigen receptors and therapeutic uses thereof
EP3093294A1 (en) 2012-02-24 2016-11-16 Stemcentrx, Inc. Dll3 modulators and methods of use
GB201203442D0 (en) 2012-02-28 2012-04-11 Univ Birmingham Immunotherapeutic molecules and uses
CA3116051C (en) 2012-03-23 2023-09-26 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Anti-mesothelin chimeric antigen receptors
AR090549A1 (es) 2012-03-30 2014-11-19 Genentech Inc Anticuerpos anti-lgr5 e inmunoconjugados
US9283287B2 (en) 2012-04-02 2016-03-15 Moderna Therapeutics, Inc. Modified polynucleotides for the production of nuclear proteins
SG11201406414WA (en) 2012-04-11 2014-11-27 Us Health Chimeric antigen receptors targeting b-cell maturation antigen
PL2838548T3 (pl) 2012-04-17 2024-02-05 University Of Washington Through Its Center For Commercialization Komórki z niedoborem hla klasy ii, komórki z niedoborem hla klasy i, zdolne do ekspresji białek hla klasy ii i ich zastosowania
US9156915B2 (en) 2012-04-26 2015-10-13 Thomas Jefferson University Anti-GCC antibody molecules
KR101505157B1 (ko) 2012-05-08 2015-03-24 주식회사 종근당 항―ＥｒｂＢ２ 항체 변이체
US20150017136A1 (en) 2013-07-15 2015-01-15 Cellectis Methods for engineering allogeneic and highly active t cell for immunotherapy
ES2962571T3 (es) 2012-05-25 2024-03-19 Cellectis Métodos para modificar células T alogénicas y resistentes a la inmunosupresión para inmunoterapia
SG11201407972RA (en) 2012-06-01 2015-01-29 Us Health High-affinity monoclonal antibodies to glypican-3 and use thereof
LT4019041T (lt) 2012-07-13 2023-04-11 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Toksiškumo, atsirandančio dėl car receptorių priešnavikinio aktyvumo, suvaldymas
CN105026429B (zh) 2012-08-21 2018-09-25 美国政府(由卫生和人类服务部的部长所代表) 间皮素结构域-特异性单克隆抗体及其用途
UA115789C2 (uk) 2012-09-05 2017-12-26 Трейкон Фармасутікалз, Інк. Композиція антитіла до cd105 та її застосування
TWI595007B (zh) 2012-09-10 2017-08-11 Neotope Biosciences Ltd 抗ｍｃａｍ抗體及相關使用方法
JP6307085B2 (ja) 2012-09-27 2018-04-04 ザ・ユナイテッド・ステイツ・オブ・アメリカ・アズ・リプリゼンテッド・バイ・ザ・セクレタリー・デパートメント・オブ・ヘルス・アンド・ヒューマン・サービシーズＴｈｅ Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ ｏｆ Ａｍｅｒｉｃａ，ａｓ ｒｅｐｒｅｓｅｎｔｅｄ ｂｙ ｔｈｅ Ｓｅｃｒｅｔａｒｙ，Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ メソテリン抗体および強力な抗腫瘍活性を惹起するための方法
US9365641B2 (en) 2012-10-01 2016-06-14 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Compositions and methods for targeting stromal cells for the treatment of cancer
CN112430580A (zh) 2012-10-02 2021-03-02 纪念斯隆-凯特琳癌症中心 用于免疫疗法的组合物和方法
HUE035503T2 (en) 2012-10-02 2018-05-02 Bristol Myers Squibb Co Combination of anti-anti-antibodies and anti-PD-1 antibodies to treat cancer
EP2912063A1 (en) 2012-10-23 2015-09-02 Bristol-Myers Squibb Company Combination of anti-kir and anti-ctla-4 antibodies to treat cancer
RU2658485C2 (ru) 2012-10-24 2018-06-21 Дзе Юнайтед Стейтс Оф Америка, Эз Репрезентед Бай Дзе Секретари, Департмент Оф Хелс Энд Хьюман Сёрвисез Химерные антигенные рецепторы м971
WO2014085821A2 (en) 2012-11-30 2014-06-05 The Regents Of The University Of California Fully human antibodies and fragments recognizing human c-met
US9574013B2 (en) 2012-12-07 2017-02-21 Vanderbilt University Antibodies against factor XII and uses thereof
US9511092B2 (en) 2013-01-28 2016-12-06 St. Jude Children's Research Hospital, Inc. Chimeric receptor with NKG2D specificity for use in cell therapy against cancer and infectious disease
DK2958943T3 (da) 2013-02-20 2019-12-09 Univ Pennsylvania Behandling af cancer ved anvendelse af humaniseret anti-EGFRvIII kimær antigenreceptor
US20140302037A1 (en) 2013-03-15 2014-10-09 Amgen Inc. BISPECIFIC-Fc MOLECULES
US9446105B2 (en) 2013-03-15 2016-09-20 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Chimeric antigen receptor specific for folate receptor β
KR20150128997A (ko) 2013-03-15 2015-11-18 메모리얼 슬로안-케터링 캔서 센터 면역치료용 조성물 및 방법
US9657105B2 (en) 2013-03-15 2017-05-23 City Of Hope CD123-specific chimeric antigen receptor redirected T cells and methods of their use
RU2015144287A (ru) 2013-03-15 2017-04-24 Эббви Дойчланд Гмбх Унд Ко. Кг Составы конъюгата антитело против egfr-лекарственное средство
UY35468A (es) 2013-03-16 2014-10-31 Novartis Ag Tratamiento de cáncer utilizando un receptor quimérico de antígeno anti-cd19
US9790282B2 (en) 2013-03-25 2017-10-17 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Anti-CD276 polypeptides, proteins, and chimeric antigen receptors
ES2831315T3 (es) 2013-04-03 2021-06-08 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Generación efectiva de células T dirigidas al tumor derivadas de células madre pluripotentes
EA034575B1 (ru) 2013-04-18 2020-02-21 Фондацьоне Телетон Эффективная доставка больших генов посредством двойных aav векторов
KR102098985B1 (ko) 2013-05-03 2020-04-09 오하이오 스테이트 이노베이션 파운데이션 Cs1-특이적 키메라 항원 수용체 가공된 면역 작동체 세포
CN107460201A (zh) 2013-05-08 2017-12-12 科济生物医药（上海）有限公司 编码gpc‑3嵌合抗原受体蛋白的核酸及表达gpc‑3嵌合抗原受体蛋白的t淋巴细胞
AU2014264951A1 (en) 2013-05-10 2015-11-12 Numab Therapeutics AG Bispecific constructs and their use in the treatment of various diseases
EP2997141B1 (en) 2013-05-13 2022-10-12 Cellectis Cd19 specific chimeric antigen receptor and uses thereof
EP2997133B1 (en) 2013-05-13 2023-08-23 Cellectis Methods for engineering highly active t cell for immunotherapy
US11311575B2 (en) 2013-05-13 2022-04-26 Cellectis Methods for engineering highly active T cell for immunotherapy
EP3783098A1 (en) 2013-05-14 2021-02-24 Board Of Regents, The University Of Texas System Human application of engineered chimeric antigen receptor (car) t-cells
ES2883131T3 (es) 2013-05-29 2021-12-07 Cellectis Métodos para la modificación de células T para inmunoterapia utilizando el sistema de nucleasa CAS guiado por ARN
EP3569253A1 (en) 2013-06-05 2019-11-20 Bellicum Pharmaceuticals, Inc. Methods for inducing partial apoptosis using caspase polypeptides
EA036591B1 (ru) 2013-06-25 2020-11-26 Вэксинекс, Инк. Способ ингибирования, замедления или уменьшения роста раковой опухоли у субъекта
US10077301B2 (en) 2013-06-27 2018-09-18 Monash University IL-21 binding proteins
US10208125B2 (en) 2013-07-15 2019-02-19 University of Pittsburgh—of the Commonwealth System of Higher Education Anti-mucin 1 binding agents and uses thereof
AU2014296059B2 (en) 2013-08-02 2020-12-10 The Regents Of The University Of California Engineering antiviral T cell immunity through stem cells and chimeric antigen receptors
EP3995512A1 (en) 2013-08-26 2022-05-11 Hinrich Abken Anti cd30 chimeric antigen receptor and its use
DE102013109611A1 (de) 2013-09-03 2015-03-05 Maschinenfabrik Reinhausen Gmbh Vorrichtung und Verfahren zur Steuerung der Stabilität eines Ortsnetzes mit einem regelbaren Ortsnetztransformator
EP3048112B1 (en) 2013-09-18 2020-03-11 Tosoh Corporation Fc-BINDING PROTEIN, METHOD FOR PRODUCING SAID PROTEIN, AND ANTIBODY ADSORBENT USING SAID PROTEIN, AND METHODS FOR PURIFYING AND IDENTIFYING ANTIBODY USING SAID ADSORBENT
RS64268B1 (sr) 2013-09-20 2023-07-31 Bristol Myers Squibb Co Kombinacija anti-lag-3 antitela i anti-pd-1 antitela za lečenje tumora
PE20160541A1 (es) 2013-09-27 2016-06-03 Genentech Inc Formulaciones de anticuerpos anti-pdl1
US10808026B2 (en) 2013-10-09 2020-10-20 Research Development Foundation Monoclonal Olfml-3 antibodies and uses thereof
GB201317929D0 (en) 2013-10-10 2013-11-27 Ucl Business Plc Chimeric antigen receptor
JP6502931B2 (ja) 2013-10-11 2019-04-17 アメリカ合衆国 Ｔｅｍ８抗体およびその使用
EP3057994B1 (en) 2013-10-15 2020-09-23 The Scripps Research Institute Peptidic chimeric antigen receptor t cell switches and uses thereof
ES2741308T3 (es) 2013-10-15 2020-02-10 Scripps Research Inst Interruptores de células T con receptores de antígenos quiméricos y usos de los mismos
US10144770B2 (en) 2013-10-17 2018-12-04 National University Of Singapore Chimeric receptors and uses thereof in immune therapy
CN105873952A (zh) 2013-10-31 2016-08-17 弗莱德哈钦森癌症研究中心 经修饰的造血干细胞/祖细胞和非t效应细胞及其用途
TW201605480A (zh) 2013-11-04 2016-02-16 輝瑞大藥廠 抗ｅｆｎａ４抗體－藥物結合物
EP3066118B1 (en) 2013-11-06 2020-01-08 The U.S.A. as represented by the Secretary, Department of Health and Human Services Alk antibodies, conjugates, and chimeric antigen receptors, and their use
EP3066130B1 (en) 2013-11-07 2019-05-15 Memorial Sloan-Kettering Cancer Center Anti-wt1/hla bi-specific antibody
WO2015073575A2 (en) 2013-11-12 2015-05-21 Centre For Probe Development And Commercialization Residualizing linkers and uses thereof
US9932607B2 (en) 2013-11-15 2018-04-03 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Site-specific integration of transgenes into human cells
PT3071222T (pt) 2013-11-21 2020-11-20 Ucl Business Plc Célula
WO2015075195A1 (en) 2013-11-22 2015-05-28 Cellectis Method of engineering chemotherapy drug resistant t-cells for immunotherapy
WO2015075175A1 (en) 2013-11-22 2015-05-28 Cellectis Method for generating batches of allogeneic t-cells with averaged potency
CA2930587A1 (en) 2013-11-25 2015-05-28 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Chimeric antigen receptors to control hiv infection
EP3074025A1 (en) 2013-11-27 2016-10-05 Baylor College Of Medicine Csgp4-specific chimeric antigen receptor for cancer
SG11201604565WA (en) 2013-12-06 2016-07-28 Us Health Thymic stromal lymphopoietin receptor-specific chimeric antigen receptors and methods using same
BR112016013963A2 (pt) 2013-12-17 2017-10-10 Genentech Inc terapia de combinação compreendendo agonistas de ligação de ox40 e antagonistas de ligação do eixo de pd-1
ES2918501T3 (es) 2013-12-19 2022-07-18 Novartis Ag Receptores de antígenos quiméricos de mesotelina humana y usos de los mismos
EP3808410A1 (en) 2013-12-20 2021-04-21 Cellectis Method of engineering multi-input signal sensitive t cell for immunotherapy
BR112016014156A8 (pt) 2013-12-20 2023-04-11 Hutchinson Fred Cancer Res Moléculas efetoras quiméricas etiquetadas e receptores das mesmas
WO2015091655A1 (en) 2013-12-20 2015-06-25 F. Hoffmann-La Roche Ag Combination therapy with an anti-ang2 antibody and a cd40 agonist
WO2015090229A1 (en) 2013-12-20 2015-06-25 Novartis Ag Regulatable chimeric antigen receptor
JP6590810B2 (ja) 2013-12-24 2019-10-16 ヤンセン ファーマシューティカ エヌブイ 抗ｖｉｓｔａ抗体および断片
WO2015103479A1 (en) * 2014-01-02 2015-07-09 The Johns Hopkins University Antimicrobial compositions comprising single domain antibodies and pseudomonas exotoxin
EP3094653B1 (en) 2014-01-13 2019-10-23 Stephen J. Forman Chimeric antigen receptors (cars) having mutations in the fc spacer region and methods for their use
US10526406B2 (en) 2014-01-14 2020-01-07 Cellectis Chimeric antigen receptor using antigen recognition domains derived from cartilaginous fish
EP4303229A3 (en) 2014-01-21 2024-04-17 Novartis AG Enhanced antigen presenting ability of car t cells by co-introduction of costimulatory molecules
JOP20200094A1 (ar) 2014-01-24 2017-06-16 Dana Farber Cancer Inst Inc جزيئات جسم مضاد لـ pd-1 واستخداماتها
AU2015209263A1 (en) 2014-01-24 2016-07-28 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Anti-NY-BR-1 polypeptides, proteins, and chimeric antigen receptors
KR102448454B1 (ko) 2014-01-29 2022-09-28 다나-파버 캔서 인스티튜트 인크. Muc1-c/세포외 도메인 (muc1-c/ecd)에 대한 항체
ES2699753T3 (es) 2014-01-29 2019-02-12 Biontech Ag Mimótopos peptídicos de claudina 18.2 y sus usos
EP3102236A4 (en) 2014-02-05 2017-08-30 The University of Chicago Chimeric antigen receptors recognizing cancer-specific tn glycopeptide variants
GB201402006D0 (en) 2014-02-06 2014-03-26 Oncomatryx Biopharma S L Antibody-drug conjugates and immunotoxins
AU2015216875B2 (en) 2014-02-14 2021-02-25 Cellectis Cells for immunotherapy engineered for targeting antigen present both on immune cells and pathological cells
EP3107552B1 (en) 2014-02-21 2018-03-28 Cellectis Method for in situ inhibition of regulatory t cells
US9139649B2 (en) 2014-02-25 2015-09-22 Immunomedics, Inc. Humanized anti-CD22 antibody
KR101605421B1 (ko) 2014-03-05 2016-03-23 국립암센터 B 세포 림프종 세포를 특이적으로 인지하는 단일클론항체 및 이의 용도
GB201403972D0 (en) 2014-03-06 2014-04-23 Ucl Business Plc Chimeric antigen receptor
EP3126388B1 (en) 2014-03-11 2019-05-08 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Anti-egfrviii antibodies and uses thereof
EP4368705A2 (en) 2014-03-11 2024-05-15 Cellectis Method for generating t-cells compatible for allogenic transplantation
TW201623331A (zh) 2014-03-12 2016-07-01 普羅帝納生物科學公司 抗黑色素瘤細胞黏著分子（ｍｃａｍ）抗體類及使用彼等之相關方法
CR20160425A (es) 2014-03-14 2017-05-26 Novartis Ag Moléculas de anticuerpos que se unen a lag-3 y usos de las mismas
WO2015142675A2 (en) 2014-03-15 2015-09-24 Novartis Ag Treatment of cancer using chimeric antigen receptor
PL3119807T3 (pl) 2014-03-19 2019-09-30 Cellectis Specyficzne wobec cd123 chimeryczne receptory antygenowe do immunoterapii nowotworów
CN110841074B (zh) 2014-03-21 2023-07-18 艾伯维公司 抗-egfr抗体及抗体药物偶联物
CA2944199C (en) 2014-03-28 2023-08-15 Regents Of The University Of Minnesota Polypeptides, cells, and methods involving engineered cd16
SG11201608194VA (en) 2014-04-03 2016-10-28 Igm Biosciences Inc Modified j-chain
RU2701341C2 (ru) 2014-04-03 2019-09-25 Селлектис Cd33-специфические химерные антигенные рецепторы для иммунотерапии рака
DK3129470T3 (da) 2014-04-07 2021-07-05 Novartis Ag Behandling af cancer ved anvendelse af anti-CD19-kimær antigenreceptor
RU2752275C2 (ru) 2014-04-10 2021-07-26 Сиэтл Чилдрен'С Хоспитал (Дба Сиэтл Чилдрен'С Ресёрч Инститьют) Способ и композиции для клеточной иммунотерапии
WO2015155341A1 (en) 2014-04-11 2015-10-15 Cellectis Method for generating immune cells resistant to arginine and/or tryptophan depleted microenvironment
JP6698546B2 (ja) 2014-04-14 2020-05-27 セレクティスＣｅｌｌｅｃｔｉｓ 癌免疫療法のためのｂｃｍａ（ｃｄ２６９）特異的キメラ抗原受容体
MY184699A (en) 2014-04-16 2021-04-18 Juno Therapeutics Gmbh Methods, kits and apparatus for expanding a population of cells
SG10201809628SA (en) 2014-04-30 2018-11-29 Pfizer Anti-ptk7 antibody-drug conjugates
CR20160561A (es) 2014-05-01 2017-05-03 Genentech Inc Variantes del anticuerpo anti-factor d y sus usos
WO2015166056A1 (en) 2014-05-02 2015-11-05 Cellectis Cs1 specific multi-chain chimeric antigen receptor
SG11201609118RA (en) 2014-05-15 2016-11-29 Univ Singapore Modified natural killer cells and uses thereof
US11041021B2 (en) 2014-05-23 2021-06-22 University Of Florida Research Foundation, Incorporated Car based immunotherapy
AU2015270912B9 (en) 2014-06-02 2021-01-21 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Chimeric antigen receptors targeting CD-19
ES2928000T3 (es) 2014-06-06 2022-11-14 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Receptores de antígeno quimérico dirigidos a mesotelina y usos de los mismos
WO2015191997A1 (en) 2014-06-12 2015-12-17 The General Hospital Corporation Anti-human chemokine (c-c motif) receptor 4 immunotoxins
WO2015200073A1 (en) 2014-06-23 2015-12-30 Bionomics, Inc. Antibodies that bind lgr4
US10865243B2 (en) 2014-07-16 2020-12-15 Hinrich Abken Chimeric antigen receptor and its use
KR102594343B1 (ko) 2014-07-21 2023-10-26 노파르티스 아게 Cd33 키메라 항원 수용체를 사용한 암의 치료
RU2741120C2 (ru) 2014-07-21 2021-01-22 Новартис Аг Лечение рака с использованием химерного антигенного рецептора cll-1
KR102612313B1 (ko) 2014-07-21 2023-12-12 노파르티스 아게 인간화 항-bcma 키메라 항원 수용체를 사용한 암의 치료
KR102523934B1 (ko) 2014-07-24 2023-04-20 2세븐티 바이오, 인코포레이티드 Bcma 키메릭 항원 수용체
KR102638104B1 (ko) 2014-07-25 2024-02-20 메모리얼 슬로안 케터링 캔서 센터 이특이적 her2 및 cd3 결합 분자
AU2015295349B2 (en) 2014-07-29 2020-09-24 Cellectis ROR1(NTRKR1)specific chimeric antigen receptors for cancer immunotherapy
BR112017001818A2 (pt) 2014-07-29 2017-11-21 Pfizer receptores antigênicos quiméricos específicos para egfrviii para imunoterapia de câncer
TWI542139B (zh) 2014-07-31 2016-07-11 瑞昱半導體股份有限公司 數位預失真電路與方法以及數位預失真訓練電路
EP3194432B1 (en) 2014-07-31 2019-04-10 Cellectis Ror1 specific multi-chain chimeric antigen receptor
GB201413913D0 (en) 2014-08-06 2014-09-17 Cantargia Ab Novel antibodies and uses thereof
WO2016022939A1 (en) 2014-08-08 2016-02-11 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health & Human Services Human monoclonal antibodies specific for 5t4 and methods of their use
MX2017002229A (es) 2014-08-19 2017-05-09 Merck Sharp & Dohme Anticuerpos anti tigit.
SG11201700770PA (en) 2014-08-19 2017-03-30 Novartis Ag Anti-cd123 chimeric antigen receptor (car) for use in cancer treatment
CA2958757C (en) 2014-08-19 2021-04-27 Miltenyi Biotec Gmbh Chimeric antigen receptor specific for ssea4 antigen
BR112017003582B1 (pt) 2014-08-27 2024-01-09 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Agente de anticorpo, uso do mesmo, composição farmacêutica e receptor de antígeno quimérico
TWI751102B (zh) 2014-08-28 2022-01-01 美商奇諾治療有限公司 對ｃｄ１９具專一性之抗體及嵌合抗原受體
ES2688035T3 (es) 2014-08-29 2018-10-30 Gemoab Monoclonals Gmbh Receptor de antígeno universal que expresa células inmunes para direccionamiento de antígenos múltiples diversos, procedimiento para fabricación del mismo y utilización del mismo para tratamiento de cáncer, infecciones y enfermedades autoinmunes
AU2015310897B2 (en) 2014-09-04 2020-03-19 Cellectis Trophoblast glycoprotein (5T4, tpbg) specific chimeric antigen receptors for cancer immunotherapy
JP2017534251A (ja) 2014-09-09 2017-11-24 ボード・オブ・リージエンツ，ザ・ユニバーシテイ・オブ・テキサス・システム Ａｇｒ２およびその受容体ｃ４．４ａに対する遮断モノクローナル抗体
MX2017003126A (es) 2014-09-12 2017-08-28 Genentech Inc Anticuerpos anti-her2 e inmunoconjugados.
MX2017003022A (es) 2014-09-12 2017-05-12 Genentech Inc Anticuerpos anti-cll-1 e inmunoconjugados.
TW201625689A (zh) 2014-09-12 2016-07-16 建南德克公司 抗－ｂ７－ｈ４抗體及免疫結合物
CN107135654B (zh) 2014-09-12 2021-10-29 加利福尼亚大学董事会 巨胞饮人类抗cd46抗体和靶向癌症疗法
CN107206071A (zh) 2014-09-13 2017-09-26 诺华股份有限公司 Alk抑制剂的联合疗法
RU2745705C2 (ru) 2014-09-15 2021-03-30 МОЛМЕД СпА Химерные рецепторы антигенов
JP2017538660A (ja) 2014-09-16 2017-12-28 イナート・ファルマ・ソシエテ・アノニムＩｎｎａｔｅ Ｐｈａｒｍａ Ｐｈａｒｍａ Ｓ．Ａ． 抗ｎｋｇ２ａ抗体を使用した治療計画
EP3193933B1 (en) 2014-09-17 2021-04-28 The U.S.A. as represented by the Secretary, Department of Health and Human Services Anti-cd276 antibodies (b7h3)
CN107002084B (zh) 2014-09-19 2021-09-10 希望之城公司 靶向IL13Rα2的共刺激嵌合抗原受体T细胞
US20170281683A1 (en) 2014-09-26 2017-10-05 Baylor College Of Medicine Glypican-3 specific chimeric antigen receptors for adoptive immunotherapy
KR102390359B1 (ko) 2014-09-29 2022-04-22 삼성전자주식회사 폴리펩타이드, 이를 포함하는 항 VEGF 항체 및 항 c-Met/항 VEGF 이중 특이 항체
US20170209574A1 (en) 2014-10-03 2017-07-27 Novartis Ag Combination therapies
CA2963327A1 (en) 2014-10-07 2016-04-14 Cellectis Method for modulating car-induced immune cells activity
CN106852149B (zh) 2014-10-10 2021-08-27 依奈特制药公司 Cd73阻断
TW201619200A (zh) 2014-10-10 2016-06-01 麥迪紐有限責任公司 人類化抗－ｏｘ４０抗體及其用途
ES2952717T3 (es) 2014-10-14 2023-11-03 Novartis Ag Moléculas de anticuerpos contra PD-L1 y usos de las mismas
PL3212230T3 (pl) 2014-10-29 2021-07-26 Seagen Inc. Dawkowanie i podawanie niefukozylowanych przeciwciał anty-CD40
EP3215534B1 (en) 2014-11-05 2020-04-15 Board of Regents, The University of Texas System Chimeric antigen receptors (car) to selectively target protein complexes
MA40921A (fr) 2014-11-05 2017-09-12 Abbvie Stemcentrx Llc Récepteurs antigéniques chimériques anti-cldn et procédés d'utilisation
TWI705976B (zh) 2014-11-10 2020-10-01 美商建南德克公司 抗介白素-33抗體及其用途
CA2967350C (en) 2014-11-12 2021-11-23 The General Hospital Corporation Anti-chondroitin sulfate proteoglycan 4 antibodies and uses thereof
WO2016077734A2 (en) 2014-11-14 2016-05-19 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Nk cells with an increased antibody-dependent cellular toxicity (adcc) against tumors
TWI758928B (zh) 2014-11-21 2022-03-21 美商必治妥美雅史谷比公司 抗cd73抗體及其用途
EP3227317A4 (en) 2014-12-02 2018-04-25 Roger Williams Hospital Methods and compositons for treating cancer
WO2016090034A2 (en) 2014-12-03 2016-06-09 Novartis Ag Methods for b cell preconditioning in car therapy
JP6802158B2 (ja) 2014-12-05 2020-12-16 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ＣＤ７９ｂ抗体及び使用方法
EP4310097A3 (en) 2014-12-05 2024-04-03 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Chimeric antigen receptors targeting b-cell maturation antigen and uses thereof
WO2016090365A1 (en) 2014-12-05 2016-06-09 Dessain Scott Kendall Pdk1 binding molecules and uses thereof
KR20170108946A (ko) 2014-12-05 2017-09-27 메모리얼 슬로안-케터링 캔서 센터 Fc 수용체-유사 5를 표적화하는 키메라 항원 수용체 및 그의 용도
MY192065A (en) 2014-12-05 2022-07-25 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Chimeric antigen receptors targeting g-protein coupled receptor and uses thereof
CA2969704C (en) 2014-12-05 2023-05-02 City Of Hope Cs1 targeted chimeric antigen receptor-modified t cells
CN107208079B (zh) 2014-12-05 2021-06-29 应用干细胞有限公司 整合转基因的位点定向crispr/重组酶组合物和方法
TWI595006B (zh) 2014-12-09 2017-08-11 禮納特神經系統科學公司 抗ｐｄ－１抗體類和使用彼等之方法
EP3230321B1 (en) 2014-12-12 2019-08-28 Bluebird Bio, Inc. Bcma chimeric antigen receptors
JP6821568B2 (ja) 2014-12-15 2021-01-27 ベリカム ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド 治療用細胞のコントロールされた排除方法
AU2015367317A1 (en) 2014-12-17 2017-06-01 Cellectis Inhibitory chimeric antigen receptor (iCAR or N-CAR) expressing non-T cell transduction domain
EP3233119A2 (en) 2014-12-18 2017-10-25 Bergen Teknologioverforing AS Anti-axl antagonistic antibodies
PL3237442T3 (pl) 2014-12-24 2020-02-28 Ucl Business Plc Komórka
EP3240803B1 (en) 2014-12-29 2021-11-24 Novartis AG Methods of making chimeric antigen receptor-expressing cells
US9765330B1 (en) 2015-01-09 2017-09-19 Nant Holdings Ip, Llc Compositions and methods for reduction of allograft recognition and rejection
NL2014108B1 (en) 2015-01-09 2016-09-30 Aduro Biotech Holdings Europe B V Altered april binding antibodies.
KR20170128234A (ko) 2015-01-16 2017-11-22 주노 쎄러퓨티크스 인코퍼레이티드 Ror1에 특이적인 항체 및 키메라 항원 수용체
US11459390B2 (en) 2015-01-16 2022-10-04 Novartis Ag Phosphoglycerate kinase 1 (PGK) promoters and methods of use for expressing chimeric antigen receptor
TWI632160B (zh) 2015-01-16 2018-08-11 中央研究院 具有標的部分及效應部分的分子構建體
CN105859890A (zh) 2015-01-19 2016-08-17 西比曼生物科技（上海）有限公司 嵌合抗原受体及其基因和重组表达载体、工程化cd30靶向性的nkt细胞及其应用
TW201627322A (zh) 2015-01-26 2016-08-01 宏觀基因股份有限公司 抗-ｄｒ５抗體和包括其ｄｒ５-結合結構域的分子
AU2016212162A1 (en) 2015-01-26 2017-07-13 Cellectis T cell receptor knock out engineered immune cells, endowed with chimeric antigen receptors binding to CD123 for the treatment of relapsed/refractory acute myeloid lymphoma or blastic plasmacytoid dendritic cell neoplasm
CN107835820B (zh) 2015-01-26 2021-10-15 芝加哥大学 识别癌症特异性IL13Rα2的CAR T细胞
WO2016122014A1 (ko) 2015-01-27 2016-08-04 한국생명공학연구원 자연살해세포의 대량생산 방법 및 상기 방법으로 수득된 자연살해세포의 항암제로서의 용도
MA41414A (fr) 2015-01-28 2017-12-05 Centre Nat Rech Scient Protéines de liaison agonistes d' icos
GB201501936D0 (en) 2015-02-05 2015-03-25 Ucl Business Plc Signalling system
US10765699B2 (en) 2015-02-06 2020-09-08 National University Of Singapore Methods for enhancing efficacy of therapeutic immune cells
WO2016130598A1 (en) 2015-02-09 2016-08-18 University Of Florida Research Foundation, Inc. Bi-specific chimeric antigen receptor and uses thereof
JP6895890B2 (ja) 2015-02-10 2021-06-30 ミネルバ バイオテクノロジーズ コーポレーション ヒト化抗ｍｕｃ１＊ 抗体
WO2016134284A1 (en) 2015-02-19 2016-08-25 University Of Florida Research Foundation, Inc. Chimeric antigen receptors and uses thereof
US10273280B2 (en) 2015-02-27 2019-04-30 Icell Gene Therapeutics Llc Chimeric antigen receptors (CARs), targeting hematologic malignancies, compositions and methods of use thereof
GB201503742D0 (en) 2015-03-05 2015-04-22 Ucl Business Plc Chimeric antigen receptor
DK3268480T3 (da) 2015-03-09 2021-07-26 Sinai Health Sys Værktøjer og fremgangsmåder til anvendelse af celledelingsloci til at styre celleproliferation
WO2016142532A1 (en) 2015-03-11 2016-09-15 Cellectis Methods for engineering allogeneic t cell to increase their persistence and/or engraftment into patients
SG11201707538XA (en) 2015-03-17 2017-10-30 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Anti-muc16 antibodies and uses thereof
WO2016149578A1 (en) 2015-03-19 2016-09-22 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Dual specific anti-cd22-anti-cd19 chimeric antigen receptors
WO2016154047A2 (en) 2015-03-20 2016-09-29 Memorial Sloan-Kettering Cancer Center Monoclonal antigen-binding proteins to intracellular oncogene products
US10800828B2 (en) 2015-03-26 2020-10-13 The Scripps Research Institute Switchable non-scFv chimeric receptors, switches, and methods of use thereof to treat cancer
CN106146666B (zh) 2015-03-26 2019-09-06 科济生物医药（上海）有限公司 靶向cldn6的免疫效应细胞及其制备方法和应用
WO2016160620A2 (en) 2015-03-27 2016-10-06 University Of Southern California Car t-cells for the treatment of b7-h4 expressing solid tumors
CN114533867A (zh) 2015-03-27 2022-05-27 免疫生物公司 用于治疗癌症的被遗传修饰的nk-92细胞和单克隆抗体
ES2904573T3 (es) 2015-03-27 2022-04-05 Univ Southern California Terapia con células T dirigida a LHR para el tratamiento de tumores sólidos
EP3274715A4 (en) 2015-03-27 2018-10-10 University of Southern California Hla-g as a novel target for car t-cell immunotherapy
SG10201913158PA (en) 2015-04-03 2020-02-27 Eureka Therapeutics Inc Constructs targeting afp peptide/mhc complexes and uses thereof
WO2016164408A1 (en) 2015-04-06 2016-10-13 The General Hospital Corporation Anti-cspg4 reagents and methods of treating cancer
ES2876974T3 (es) 2015-04-07 2021-11-15 Novartis Ag Combinación de terapia con receptor de antígeno quimérico y derivados de amino pirimidina
KR20170134642A (ko) 2015-04-08 2017-12-06 노파르티스 아게 Cd20 요법, cd22 요법, 및 cd19 키메라 항원 수용체 (car) - 발현 세포와의 조합 요법
CN107980046B (zh) 2015-04-13 2021-12-24 辉瑞公司 靶向b细胞成熟抗原的嵌合抗原受体
WO2016168766A1 (en) 2015-04-15 2016-10-20 The California Institute For Biomedical Research Optimized chimeric receptor t cell switches and uses thereof
JP2018513216A (ja) 2015-04-15 2018-05-24 プロスペクト チャーターケア アールダブリュエムシー，エルエルシー ディ／ビー／エイ ロジャー ウィリアムズ メディカル センターＰｒｏｓｐｅｃｔ Ｃｈａｒｔｅｒｃａｒｅ Ｒｗｍｃ，Ｌｌｃ Ｄ／Ｂ／Ａ Ｒｏｇｅｒ Ｗｉｌｌｉａｍｓ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｅｎｔｅｒ Ｃａｒ−ｔ細胞の肝動脈注入
US11091546B2 (en) 2015-04-15 2021-08-17 The Scripps Research Institute Optimized PNE-based chimeric receptor T cell switches and uses thereof
CN108473957A (zh) 2015-04-17 2018-08-31 诺华股份有限公司 改善嵌合抗原受体表达细胞的功效和扩增的方法
IL255207B2 (en) 2015-04-23 2023-09-01 Haemalogix Pty Ltd Myeloma antigen chimeric antigen receptors and their uses
US20180092968A1 (en) 2015-04-23 2018-04-05 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Compositions to disrupt protein kinase a anchoring and uses thereof
GB201507108D0 (en) 2015-04-27 2015-06-10 Ucl Business Plc Nucleic acid construct
WO2016179319A1 (en) 2015-05-04 2016-11-10 Cellerant Therapeutics, Inc. Chimeric antigen receptors with ctla4 signal transduction domains
TWI726879B (zh) 2015-05-04 2021-05-11 美商Ｃｙｔｏｍｘ生物製藥公司 抗ｃｄ７１抗體類、可活化之抗ｃｄ７１抗體類及使用彼等之方法
EP3294328A1 (en) 2015-05-08 2018-03-21 Eureka Therapeutics, Inc. Constructs targeting hpv16-e7 peptide/mhc complexes and uses thereof
CA2986030A1 (en) 2015-05-15 2016-11-24 City Of Hope Chimeric antigen receptor compositions
FI3298033T4 (fi) 2015-05-18 2023-09-22 Tcr2 Therapeutics Inc Koostumuksia ja lääkinnällisiä käyttöjä fuusioproteiineja käyttävälle tcr:n uudelleenohjelmoinnille
US20180147271A1 (en) 2015-05-18 2018-05-31 Bluebird Bio, Inc. Anti-ror1 chimeric antigen receptors
WO2016185035A1 (en) 2015-05-20 2016-11-24 Cellectis Anti-gd3 specific chimeric antigen receptors for cancer immunotherapy
WO2016191246A2 (en) 2015-05-22 2016-12-01 Memorial Sloan-Kettering Cancer Center T cell receptor-like antibodies specific for a prame peptide
ES2690420T3 (es) 2015-05-28 2018-11-20 Universität Zu Köln Receptor de antígeno quimérico anti-toso y su uso
WO2016196228A1 (en) 2015-05-29 2016-12-08 Bristol-Myers Squibb Company Antibodies against ox40 and uses thereof
US20170000900A1 (en) 2015-06-08 2017-01-05 Immunogen, Inc. Anti-cd37 immunoconjugate and anti-cd20 antibody combinations
US10639329B2 (en) 2015-06-12 2020-05-05 Lentigen Technology, Inc. Method to treat cancer with engineered T-cells
CA2989936A1 (en) 2015-06-29 2017-01-05 Genentech, Inc. Type ii anti-cd20 antibody for use in organ transplantation
JP6403277B2 (ja) 2015-06-30 2018-10-10 オートモーティブエナジーサプライ株式会社 リチウムイオン二次電池の製造方法
WO2017004254A1 (en) 2015-06-30 2017-01-05 Wei-Dong Jiang Anti-vascular endothelial growth factor receptor 2 (vegfr2) antibodies
ES2890859T3 (es) 2015-07-29 2022-01-24 Onk Therapeutics Ltd Células asesinas naturales modificadas y líneas de células asesinas naturales que tienen citotoxicidad aumentada
CA2993431A1 (en) 2015-07-31 2017-02-09 Regents Of The University Of Minnesota Nuclease based knockouts of immunological checkpoint genes in immune cells
CN108495641A (zh) 2015-08-11 2018-09-04 塞勒克提斯公司 用于靶向cd38抗原和用于cd38基因失活的工程化的用于免疫疗法的细胞
WO2017040945A1 (en) 2015-09-04 2017-03-09 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Immune cell compositions and methods of use
AU2016334401A1 (en) 2015-10-10 2018-04-26 Intrexon Corporation Improved therapeutic control of proteolytically sensitive, destabilized forms of interleukin-12
AU2016337525B2 (en) 2015-10-16 2022-01-20 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Compositions and methods for inhibition of lineage specific antigens
WO2017075478A2 (en) 2015-10-28 2017-05-04 The Broad Institute Inc. Compositions and methods for evaluating and modulating immune responses by use of immune cell gene signatures
CN108368520B (zh) 2015-11-04 2023-01-17 菲特治疗公司 多能细胞的基因组工程改造
US10858628B2 (en) 2015-11-04 2020-12-08 Fate Therapeutics, Inc. Methods and compositions for inducing hematopoietic cell differentiation
US10941381B2 (en) 2015-11-19 2021-03-09 Versiti Blood Research Institute Foundation, Inc. Method of manufacturing dual-specific T-cells for use in cancer immunotherapy
US11052111B2 (en) 2015-12-08 2021-07-06 Chimera Bioengineering, Inc. Smart CAR devices and DE CAR polypeptides for treating disease and methods for enhancing immune responses
EP3827838B1 (en) 2015-12-16 2023-06-07 The Walter and Eliza Hall Institute of Medical Research Inhibition of cytokine-induced sh2 protein in nk cells
US11377481B2 (en) 2015-12-22 2022-07-05 The Trustees Of The University Of Pennsylvania SpyCatcher and SpyTag: universal immune receptors for T cells
IL304088A (en) 2016-01-11 2023-08-01 Univ Leland Stanford Junior Systems containing chimeric proteins and their uses for controlling gene expression
KR102587132B1 (ko) 2016-03-04 2023-10-11 에디타스 메디신, 인코포레이티드 암 면역요법을 위한 crispr-cpf1-관련 방법, 조성물 및 구성성분
CN108780565B (zh) 2016-03-24 2022-08-02 富士胶片株式会社 图像处理装置、图像处理方法及存储介质
AU2017240667C1 (en) 2016-04-01 2022-11-24 Kite Pharma, Inc. Chimeric antigen and T cell receptors and methods of use
AU2017248259A1 (en) 2016-04-07 2018-10-25 Bluebird Bio, Inc. Chimeric antigen receptor T cell compositions
CN110088133B (zh) 2016-07-29 2023-12-08 朱诺治疗学股份有限公司 抗独特型抗体及相关方法
AU2017307610B2 (en) 2016-08-04 2023-10-05 Memorial Sloan-Kettering Cancer Center Cancer antigen targets and uses thereof
EP3504245A4 (en) 2016-08-23 2020-04-22 The Regents of The University of California PROTEOLYTICALLY CLAVABLE CHIMERIC POLYPEPTIDES AND METHODS OF USE
CA3034873A1 (en) 2016-08-26 2018-03-01 Baylor College Of Medicine Constitutively active cytokine receptors for cell therapy
EP3529359B1 (en) 2016-10-18 2023-12-13 Regents of the University of Minnesota Tumor infiltrating lymphocytes for use in therapy
JP7231158B2 (ja) 2016-10-19 2023-03-01 ザ ガバニング カウンシル オブ ザ ユニバーシティ オブ トロント Ｃｄ１３３結合剤およびその使用
US11873511B2 (en) 2016-10-19 2024-01-16 Cellectis Targeted gene insertion for improved immune cells therapy
GB201619876D0 (en) 2016-11-24 2017-01-11 Cambridge Entpr Ltd Controllable transcription
EP3562492A4 (en) 2016-12-30 2020-12-09 Celularity, Inc. GENETICALLY MODIFIED NATURAL KILLER CELLS
MA47613A (fr) 2017-02-22 2020-01-01 Aleta Biotherapeutics Inc Compositions et procédés de traitement du cancer
WO2018156791A1 (en) 2017-02-22 2018-08-30 Aleta Biotherapeutics Inc. Compositions and methods for tumor transduction
US11629340B2 (en) 2017-03-03 2023-04-18 Obsidian Therapeutics, Inc. DHFR tunable protein regulation
WO2018161038A1 (en) 2017-03-03 2018-09-07 Obsidian Therapeutics, Inc. Il12 compositions and methods for immunotherapy
WO2018165913A1 (zh) 2017-03-15 2018-09-20 南京凯地生物科技有限公司 靶向nkg2dl的特异性嵌合抗原受体及其car-t细胞以及它们的应用
EP3601528A4 (en) 2017-03-20 2021-05-05 Washington University CELLS AND METHODS OF USE AND PRODUCTION OF THEM
AU2018246377A1 (en) 2017-03-31 2019-10-17 Cellectis Sa Universal anti-CD22 chimeric antigen receptor engineered immune cells
US10934336B2 (en) 2017-04-13 2021-03-02 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Use of gene editing to generate universal TCR re-directed T cells for adoptive immunotherapy
CN110650975B (zh) 2017-05-15 2024-04-05 美国卫生和人力服务部 双顺反子嵌合抗原受体及其用途
JP7285220B2 (ja) 2017-05-18 2023-06-01 モデルナティエックス インコーポレイテッド 連結したインターロイキン－１２（ｉｌ１２）ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む脂質ナノ粒子
CN110799640A (zh) 2017-06-07 2020-02-14 综合医院公司 表达嵌合抗原受体的t细胞
WO2018231759A1 (en) 2017-06-12 2018-12-20 Obsidian Therapeutics, Inc. Pde5 compositions and methods for immunotherapy
WO2019024979A1 (en) 2017-07-31 2019-02-07 Institute For Research In Biomedicine FUNCTIONAL DOMAIN ANTIBODIES IN THE ELBOW REGION
AU2018338192B2 (en) 2017-09-22 2022-03-03 Kite Pharma, Inc. Chimeric polypeptides and uses thereof
US20190091310A1 (en) 2017-09-26 2019-03-28 Stephen E. Wright Nonreleased il-12 for therapy of cancer
US20230140802A1 (en) 2017-09-27 2023-05-04 University Of Southern California Novel platforms for co-stimulation, novel car designs and other enhancements for adoptive cellular therapy
WO2019099707A1 (en) 2017-11-16 2019-05-23 Kite Pharma, Inc Modified chimeric antigen receptors and methods of use
JP2021505207A (ja) 2017-12-05 2021-02-18 セリアド エス．アー．Ｃｅｌｙａｄ Ｓ．Ａ． Ｎｋｇ２ｄベースの受容体を発現する免疫細胞のフラトリサイドの減少
EP3720946A4 (en) 2017-12-08 2021-08-18 Fate Therapeutics, Inc. IMMUNOTHERAPIES USING IMPROVED CSPI-DERIVED EFFECTIVE CELLS
MA51428A (fr) 2017-12-22 2020-11-04 Bluebird Bio Inc Récepteur d'antigène chimérique multivalent
EP3728563A4 (en) 2017-12-22 2021-11-10 Fate Therapeutics, Inc. ENHANCED IMMUNE EFFECTIVE CELLS AND THEIR USE
AU2019216269A1 (en) 2018-01-30 2020-05-28 Cellectis Combination comprising allogeneic immune cells deficient for an antigen present on both t-cells and pathological cells and therapeutic antibody against said antigen
EP3749687A4 (en) 2018-02-11 2021-12-29 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Non-hla restricted t cell receptors and uses thereof
EP3752531A1 (en) 2018-02-14 2020-12-23 Kite Pharma, Inc. Anti-idiotypic antibodies directed to the antigen-binding portion of an bcma-binding molecule
CN112534044A (zh) 2018-02-16 2021-03-19 凯德药业股份有限公司 经修饰的多能干细胞及制备和使用方法
US20210024959A1 (en) 2018-03-29 2021-01-28 Fate Therapeutics, Inc. Engineered immune effector cells and use thereof
CN110343712B (zh) 2018-04-04 2023-12-26 达仁生物科技有限公司 嵌合抗原受体和其治疗肺癌的方法
EP3781193A4 (en) 2018-04-18 2022-01-26 Altius Institute For Biomedical Sciences POLYPEPTIDES DERIVED FROM ANIMAL PATHOGEN AND USES THEREOF FOR GENETIC MANIPULATION
WO2019204661A1 (en) 2018-04-18 2019-10-24 Altius Institute For Biomedical Sciences Methods for assessing specificity of cell engineering tools
CN108531458A (zh) 2018-04-27 2018-09-14 赛诺（深圳）生物医药研究有限公司 治疗肿瘤的基因工程自然杀伤细胞产品
US20210230548A1 (en) 2018-05-03 2021-07-29 Board Of Regents, The University Of Texas System Natural killer cells engineered to express chimeric antigen receptors with immune checkpoint blockade
MX2020012028A (es) 2018-05-11 2021-03-29 Crispr Therapeutics Ag Metodos y composiciones para tratar el cancer.
BR112020023167A2 (pt) 2018-05-14 2021-02-09 Werewolf Therapeutics, Inc. polipeptídeos de citocina ativáveis e métodos de uso destes
WO2019222293A1 (en) 2018-05-14 2019-11-21 Indapta Therapeutics, Inc. Subsets of human natural killer cells with enhanced antibody-directed immune responses
GB201807870D0 (en) 2018-05-15 2018-06-27 Autolus Ltd A CD79-specific chimeric antigen receptor
CN112119096B (zh) 2018-05-15 2024-04-30 奥托路斯有限公司 嵌合抗原受体
AU2019272608B2 (en) 2018-05-22 2023-04-20 Immunitybio, Inc. Fc-epsilon CAR
US20200054675A1 (en) 2018-06-01 2020-02-20 Washington University Suppression of cytokine release syndrome in chimeric antigen receptor cell therapy
CN112566643A (zh) 2018-06-12 2021-03-26 加利福尼亚大学董事会 用于治疗癌症的单链双特异性嵌合抗原受体
EP3581200A1 (en) 2018-06-13 2019-12-18 GEMoaB Monoclonals GmbH Reversed universal chimeric antigen receptor expressing immune cells for targeting of diverse multiple antigens and method of manufacturing the same and use of the same for treatment of cancer, infections and autoimmune disorders
US20220226374A1 (en) 2018-06-14 2022-07-21 2seventy bio, Inc Cd79b chimeric antigen receptors
AU2019288733C1 (en) 2018-06-22 2023-08-03 Kite Pharma, Inc. Chimeric transmembrane proteins and uses thereof
WO2020000035A1 (en) 2018-06-25 2020-01-02 Peter Maccallum Cancer Institute Modified t cells and uses thereof
EP3814493A4 (en) 2018-06-27 2022-03-30 Altius Institute For Biomedical Sciences NUCLEIC ACID BINDING DOMAINS AND METHODS OF USE THEREOF
US20210205362A1 (en) 2018-07-05 2021-07-08 H. Lee Moffitt Cancer Center and Research Inc. Car t cells that target b-cell antigens
WO2020010235A1 (en) 2018-07-05 2020-01-09 H. Lee Moffitt Cancer Center And Research Institute Inc. Car t cells that target b-cell antigens
JP7072715B2 (ja) 2018-07-20 2022-05-20 サーフィス オンコロジー インコーポレイテッド 抗ｃｄ１１２ｒ組成物及び方法
US20210381008A1 (en) 2018-07-26 2021-12-09 Kyoto University Method for producing foreign antigen receptor gene-introduced cell
IL296050A (en) 2018-08-01 2022-10-01 Immunitybio Inc A quadricistronic system containing a receptor or cytokine and a chimeric antigen receptor for genetic modification of immunotherapies
US20220054544A1 (en) 2018-09-21 2022-02-24 Harpoon Therapeutics, Inc. Conditionally active receptors
US20210317209A1 (en) 2018-10-30 2021-10-14 Board Of Regents, The University Of Texas System Anti-cd79b antibodies and chimeric antigen receptors and methods of use thereof
KR20230070075A (ko) 2018-10-31 2023-05-19 난트퀘스트, 인크. Pd-l1 키메라 항원 수용체-발현 nk 세포에 의한 pd-l1-양성 악성종양의 제거
TW202031894A (zh) 2018-11-01 2020-09-01 中國大陸商亘喜生物科技（上海）有限公司 用於t細胞工程之組合物及方法
US11547727B2 (en) 2018-11-06 2023-01-10 Immunitybio, Inc. Chimeric antigen receptor-modified NK-92 cells
WO2020097395A1 (en) 2018-11-08 2020-05-14 The Regents Of The University Of California Systems and methods for targeting cancer cells
AU2019388876A1 (en) 2018-11-26 2021-05-20 Immunitybio, Inc. IL-2 Dependent NK-92 cells with stable Fc receptor expression
US20220047634A1 (en) 2018-11-30 2022-02-17 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Chimeric antigen receptor factories and methods of use thereof
EP3891177A4 (en) 2018-12-02 2023-03-08 Fate Therapeutics, Inc. IMMUNOTHERAPIES USING ENHANCED IPSC-DERIVED EFFECTIVE CELLS
WO2020123716A1 (en) 2018-12-11 2020-06-18 Obsidian Therapeutics, Inc. Membrane bound il12 compositions and methods for tunable regulation
WO2020124021A1 (en) 2018-12-13 2020-06-18 The General Hospital Corporation Chimeric antigen receptors targeting cd79b and cd19
CN111355871A (zh) 2018-12-21 2020-06-30 三赢科技（深圳）有限公司 镜头模组及其组装方法
US20220135678A1 (en) 2019-01-18 2022-05-05 University Of Southern California Methods and compositions to improve the safety and efficacy of cellular therapies
AU2020221409A1 (en) 2019-02-15 2021-09-02 Editas Medicine, Inc. Modified natural killer (NK) cells for immunotherapy
CA3130489A1 (en) 2019-02-18 2020-08-27 Memorial Sloan-Kettering Cancer Center Combinations of multiple chimeric antigen receptors for immunotherapy
CN113766930A (zh) * 2019-02-26 2021-12-07 特韦斯特生物科学公司 Glp1受体的变异核酸文库
US20220184142A1 (en) 2019-04-11 2022-06-16 Fate Therapeutics, Inc. CD3 RECONSTITUTION IN ENGINEERED iPSC AND IMMUNE EFFECTOR CELLS
SG11202109051PA (en) 2019-04-12 2021-10-28 Phanes Therapeutics Inc Humanized anti-folate receptor 1 chimeric antigen receptors and uses thereof
US20210069242A1 (en) 2019-04-18 2021-03-11 Dmitry Dmitrievich Genkin Reprogramming of polymorphonuclear leukocytes
CN114007642A (zh) 2019-04-30 2022-02-01 森迪生物科学公司 嵌合受体及其使用方法
CA3140393A1 (en) 2019-06-04 2020-12-10 Nkarta, Inc. Combinations of engineered natural killer cells and engineered t cells for immunotherapy
CN114269372A (zh) 2019-06-27 2022-04-01 克里斯珀医疗股份公司 嵌合抗原受体t细胞和nk细胞抑制剂用于治疗癌症的用途
US20220267802A1 (en) 2019-07-15 2022-08-25 President And Fellows Of Harvard College Methods and compositions for gene delivery
MX2022000922A (es) 2019-07-23 2022-05-03 Mnemo Therapeutics Celulas inmunes defectuosas para suv39h1.
WO2021041316A1 (en) 2019-08-23 2021-03-04 Sana Biotechnology, Inc. Cd24 expressing cells and uses thereof
EP4025689A1 (en) 2019-09-06 2022-07-13 CRISPR Therapeutics AG Genetically engineered t cells having improved persistence in culture
EP4041765A1 (en) 2019-10-07 2022-08-17 Université d'Aix-Marseille Antibodies having specificity for nectin-4 and uses thereof
CA3154076A1 (en) 2019-10-15 2021-04-22 Tobias Deuse Transplanted cell protection via fc sequestration
US20240131156A1 (en) 2019-10-17 2024-04-25 Fate Therapeutics, Inc. Enhanced chimeric antigen receptor for immune effector cell engineering and use thereof
US20220362299A1 (en) 2019-10-21 2022-11-17 Purdue Research Foundation Engineered natural killer cells and methods for using the same in immunotherapy and autophagy inhibiton techniques
CN114867485A (zh) 2019-10-31 2022-08-05 全国儿童医院研究所 Cd38敲除的原代和扩增的人nk细胞的生成
EP4054598A1 (en) 2019-11-05 2022-09-14 City of Hope Generation of chimeric antigen receptor modified t cells from stem cells and therapeutic uses thereof
MX2022005815A (es) 2019-11-13 2022-08-10 Crispr Therapeutics Ag Terapia para neoplasias malignas de celulas hematopoyeticas utilizando linfocitos t modificados geneticamente que se dirigen a cd70.
IL292351A (en) 2019-11-13 2022-06-01 Crispr Therapeutics Ag Methods for producing chimeric antigen receptor t cells
PE20221273A1 (es) 2019-11-18 2022-09-01 Janssen Biotech Inc Receptores del antigeno quimerico anti-cd79, celulas car-t, y usos de estos
US20230053028A1 (en) 2019-12-18 2023-02-16 Editas Medicine, Inc. Engineered cells for therapy
MX2022008783A (es) 2020-01-17 2022-12-13 Sana Biotechnology Inc Cambios de seguridad para la regulación de la expresión génica.
CN115335508A (zh) 2020-01-23 2022-11-11 康干细胞生物科技有限公司 成品干细胞及免疫细胞、包含其的药物组合物
WO2021154218A1 (en) 2020-01-28 2021-08-05 Nantkwest, Inc. Chimeric antigen receptor-modified nk-92 cells targeting egfr super-family receptors
US11230699B2 (en) 2020-01-28 2022-01-25 Immunitybio, Inc. Chimeric antigen receptor-modified NK-92 cells targeting EGFR super-family receptors
WO2021226151A2 (en) 2020-05-04 2021-11-11 Editas Medicine, Inc. Selection by essential-gene knock-in
US20210363212A1 (en) 2020-05-21 2021-11-25 Crispr Therapeutics Ag Genetically engineered car t cells that secret interleukin-12 and therapeutic uses thereof
US20220002424A1 (en) 2020-06-12 2022-01-06 Nkarta, Inc. Genetically modified natural killer cells for cd70-directed cancer immunotherapy
US20230235287A1 (en) * 2020-06-19 2023-07-27 Fate Therapeutics, Inc. Combining ipsc derived effector cell types for immunotherapy use
KR20230084470A (ko) 2020-08-14 2023-06-13 카이트 파마 인코포레이티드 면역 세포 기능의 향상
KR20230074721A (ko) 2020-08-17 2023-05-31 바이사이클티엑스 리미티드 Nectin-4에 특이적인 이환 콘쥬게이트 및 이의 용도
WO2022077006A1 (en) 2020-10-07 2022-04-14 Dren Bio, Inc. Anti-dectin-1 antibodies and methods of use thereof
KR20230084533A (ko) 2020-10-09 2023-06-13 페이트 세러퓨틱스, 인코포레이티드 조작된 iPSC 및 보강된 면역 효과기 세포
US20230398216A1 (en) 2020-10-22 2023-12-14 Lyell Immunopharma, Inc. Chimeric activation receptors
CA3199621A1 (en) 2020-10-26 2022-05-05 Memorial Sloan-Kettering Cancer Center Cells with cd70 knockout and uses for immunotherapy
IL302481A (en) 2020-11-04 2023-06-01 Fate Therapeutics Inc Multiplication of Induced Pluripotent Stem Cells and Effector Immune Cells Targeting Solid Tumors

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