RU2701341C2 - Cd33-специфические химерные антигенные рецепторы для иммунотерапии рака - Google Patents
Cd33-специфические химерные антигенные рецепторы для иммунотерапии рака Download PDFInfo
- Publication number
- RU2701341C2 RU2701341C2 RU2016143155A RU2016143155A RU2701341C2 RU 2701341 C2 RU2701341 C2 RU 2701341C2 RU 2016143155 A RU2016143155 A RU 2016143155A RU 2016143155 A RU2016143155 A RU 2016143155A RU 2701341 C2 RU2701341 C2 RU 2701341C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- seq
- cells
- cell
- car
- domain
- Prior art date
Links
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 title claims abstract description 22
- 101100273728 Mus musculus Cd33 gene Proteins 0.000 title 1
- 238000002619 cancer immunotherapy Methods 0.000 title 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 333
- 101000934338 Homo sapiens Myeloid cell surface antigen CD33 Proteins 0.000 claims abstract description 260
- 102100025243 Myeloid cell surface antigen CD33 Human genes 0.000 claims abstract description 259
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 claims abstract description 102
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 78
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 50
- 108020001756 ligand binding domains Proteins 0.000 claims abstract description 46
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims abstract description 38
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 claims abstract description 36
- 101000851370 Homo sapiens Tumor necrosis factor receptor superfamily member 9 Proteins 0.000 claims abstract description 35
- 102100036856 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 9 Human genes 0.000 claims abstract description 35
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 claims abstract description 30
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 claims abstract description 22
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 claims abstract description 11
- 210000004896 polypeptide structure Anatomy 0.000 claims abstract description 7
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims abstract description 3
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 159
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 149
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 147
- 208000031261 Acute myeloid leukaemia Diseases 0.000 claims description 95
- 208000033776 Myeloid Acute Leukemia Diseases 0.000 claims description 89
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 37
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 claims description 37
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 claims description 37
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 claims description 37
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 claims description 26
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 claims description 25
- 201000005787 hematologic cancer Diseases 0.000 claims description 22
- 201000003793 Myelodysplastic syndrome Diseases 0.000 claims description 14
- 208000030289 Lymphoproliferative disease Diseases 0.000 claims description 12
- 208000024893 Acute lymphoblastic leukemia Diseases 0.000 claims description 11
- 208000014697 Acute lymphocytic leukaemia Diseases 0.000 claims description 11
- 208000006664 Precursor Cell Lymphoblastic Leukemia-Lymphoma Diseases 0.000 claims description 11
- 208000032791 BCR-ABL1 positive chronic myelogenous leukemia Diseases 0.000 claims description 9
- 208000010833 Chronic myeloid leukaemia Diseases 0.000 claims description 8
- 208000034578 Multiple myelomas Diseases 0.000 claims description 8
- 208000033761 Myelogenous Chronic BCR-ABL Positive Leukemia Diseases 0.000 claims description 8
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 claims description 8
- 239000003018 immunosuppressive agent Substances 0.000 claims description 8
- 208000011691 Burkitt lymphomas Diseases 0.000 claims description 7
- 102100029193 Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-A Human genes 0.000 claims description 7
- 208000015914 Non-Hodgkin lymphomas Diseases 0.000 claims description 7
- 208000032852 chronic lymphocytic leukemia Diseases 0.000 claims description 7
- 201000003444 follicular lymphoma Diseases 0.000 claims description 7
- 201000001268 lymphoproliferative syndrome Diseases 0.000 claims description 7
- 101710099301 Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-A Proteins 0.000 claims description 6
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 claims description 6
- 208000029499 cancer-related condition Diseases 0.000 claims description 6
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 claims description 6
- 229940124589 immunosuppressive drug Drugs 0.000 claims description 4
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 3
- 210000002443 helper t lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 3
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 claims description 3
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 claims description 3
- 210000003289 regulatory T cell Anatomy 0.000 claims description 3
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 2
- 229940044683 chemotherapy drug Drugs 0.000 claims description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 22
- 230000002489 hematologic effect Effects 0.000 abstract description 9
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 9
- 230000000139 costimulatory effect Effects 0.000 abstract description 4
- 230000006378 damage Effects 0.000 abstract description 2
- 108010019670 Chimeric Antigen Receptors Proteins 0.000 description 248
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 169
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 108
- 101000946843 Homo sapiens T-cell surface glycoprotein CD8 alpha chain Proteins 0.000 description 57
- 102100034922 T-cell surface glycoprotein CD8 alpha chain Human genes 0.000 description 57
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 55
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 44
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 39
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 38
- 102000016266 T-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 description 37
- 108091008874 T cell receptors Proteins 0.000 description 36
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 34
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 30
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 29
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 28
- 108010042407 Endonucleases Proteins 0.000 description 27
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 27
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 26
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 26
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 26
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 26
- 102000017420 CD3 protein, epsilon/gamma/delta subunit Human genes 0.000 description 25
- 101710163270 Nuclease Proteins 0.000 description 25
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 25
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 23
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 19
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 19
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 19
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 18
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 18
- 230000006870 function Effects 0.000 description 17
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 17
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 17
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 17
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 17
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 15
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 15
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 15
- 102000004533 Endonucleases Human genes 0.000 description 14
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 14
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 14
- 108091033409 CRISPR Proteins 0.000 description 13
- 108091007741 Chimeric antigen receptor T cells Proteins 0.000 description 13
- 102100031780 Endonuclease Human genes 0.000 description 13
- 101001023379 Homo sapiens Lysosome-associated membrane glycoprotein 1 Proteins 0.000 description 13
- 102100035133 Lysosome-associated membrane glycoprotein 1 Human genes 0.000 description 13
- 101000914514 Homo sapiens T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Proteins 0.000 description 12
- 102100027213 T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Human genes 0.000 description 12
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 12
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 12
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 12
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 12
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 12
- 238000003501 co-culture Methods 0.000 description 11
- 230000003112 degranulating effect Effects 0.000 description 11
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 11
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 11
- 229920002477 rna polymer Polymers 0.000 description 11
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 10
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 10
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 10
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 10
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 10
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 10
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 10
- 238000010361 transduction Methods 0.000 description 10
- 230000026683 transduction Effects 0.000 description 10
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 9
- -1 series Chemical compound 0.000 description 9
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 9
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 8
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 8
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 8
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 8
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 8
- 210000004986 primary T-cell Anatomy 0.000 description 8
- 101150044797 CD33 gene Proteins 0.000 description 7
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 7
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 7
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 7
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 7
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 7
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 7
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 7
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 7
- 230000005945 translocation Effects 0.000 description 7
- 208000036762 Acute promyelocytic leukaemia Diseases 0.000 description 6
- 102100026878 Interleukin-2 receptor subunit alpha Human genes 0.000 description 6
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 6
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 6
- 230000006037 cell lysis Effects 0.000 description 6
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 6
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 6
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 6
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 6
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 6
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 6
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 6
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 6
- 101150013553 CD40 gene Proteins 0.000 description 5
- 102100035793 CD83 antigen Human genes 0.000 description 5
- 238000010354 CRISPR gene editing Methods 0.000 description 5
- 101150090033 DRB2 gene Proteins 0.000 description 5
- 101000946856 Homo sapiens CD83 antigen Proteins 0.000 description 5
- 101001057504 Homo sapiens Interferon-stimulated gene 20 kDa protein Proteins 0.000 description 5
- 101001055144 Homo sapiens Interleukin-2 receptor subunit alpha Proteins 0.000 description 5
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 5
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 5
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 5
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 5
- 101100117568 Oryza sativa subsp. japonica DRB5 gene Proteins 0.000 description 5
- 102100040245 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 5 Human genes 0.000 description 5
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 5
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 5
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 5
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 5
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 5
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 5
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 5
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 5
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 5
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 5
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 5
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 5
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 5
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 5
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 5
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 5
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 5
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 5
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 5
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 5
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 5
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 5
- 208000024827 Alzheimer disease Diseases 0.000 description 4
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 4
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 4
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 4
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 4
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 4
- 102000018071 Immunoglobulin Fc Fragments Human genes 0.000 description 4
- 108010091135 Immunoglobulin Fc Fragments Proteins 0.000 description 4
- 108010038807 Oligopeptides Proteins 0.000 description 4
- 102000015636 Oligopeptides Human genes 0.000 description 4
- 102100040678 Programmed cell death protein 1 Human genes 0.000 description 4
- 208000033826 Promyelocytic Acute Leukemia Diseases 0.000 description 4
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 4
- 208000021841 acute erythroid leukemia Diseases 0.000 description 4
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 4
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 4
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 4
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 4
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 description 4
- 238000002784 cytotoxicity assay Methods 0.000 description 4
- 231100000263 cytotoxicity test Toxicity 0.000 description 4
- 230000036541 health Effects 0.000 description 4
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 4
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 4
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 4
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 4
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 4
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 4
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 4
- WYWHKKSPHMUBEB-UHFFFAOYSA-N tioguanine Chemical compound N1C(N)=NC(=S)C2=C1N=CN2 WYWHKKSPHMUBEB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 4
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 4
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 4
- 206010000890 Acute myelomonocytic leukaemia Diseases 0.000 description 3
- 101710145634 Antigen 1 Proteins 0.000 description 3
- 208000003950 B-cell lymphoma Diseases 0.000 description 3
- 102100027207 CD27 antigen Human genes 0.000 description 3
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 3
- PMATZTZNYRCHOR-CGLBZJNRSA-N Cyclosporin A Chemical compound CC[C@@H]1NC(=O)[C@H]([C@H](O)[C@H](C)C\C=C\C)N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C1=O PMATZTZNYRCHOR-CGLBZJNRSA-N 0.000 description 3
- 108010036949 Cyclosporine Proteins 0.000 description 3
- UHDGCWIWMRVCDJ-CCXZUQQUSA-N Cytarabine Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 UHDGCWIWMRVCDJ-CCXZUQQUSA-N 0.000 description 3
- 208000036566 Erythroleukaemia Diseases 0.000 description 3
- 101000914511 Homo sapiens CD27 antigen Proteins 0.000 description 3
- 101001002657 Homo sapiens Interleukin-2 Proteins 0.000 description 3
- 101001109503 Homo sapiens NKG2-C type II integral membrane protein Proteins 0.000 description 3
- 101000851376 Homo sapiens Tumor necrosis factor receptor superfamily member 8 Proteins 0.000 description 3
- 208000022559 Inflammatory bowel disease Diseases 0.000 description 3
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 3
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 3
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 3
- 102000004856 Lectins Human genes 0.000 description 3
- 108090001090 Lectins Proteins 0.000 description 3
- 208000031422 Lymphocytic Chronic B-Cell Leukemia Diseases 0.000 description 3
- 101100508818 Mus musculus Inpp5k gene Proteins 0.000 description 3
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 3
- 102100022683 NKG2-C type II integral membrane protein Human genes 0.000 description 3
- 101710089372 Programmed cell death protein 1 Proteins 0.000 description 3
- 101100366438 Rattus norvegicus Sphkap gene Proteins 0.000 description 3
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 3
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 3
- 108700042076 T-Cell Receptor alpha Genes Proteins 0.000 description 3
- QJJXYPPXXYFBGM-LFZNUXCKSA-N Tacrolimus Chemical compound C1C[C@@H](O)[C@H](OC)C[C@@H]1\C=C(/C)[C@@H]1[C@H](C)[C@@H](O)CC(=O)[C@H](CC=C)/C=C(C)/C[C@H](C)C[C@H](OC)[C@H]([C@H](C[C@H]2C)OC)O[C@@]2(O)C(=O)C(=O)N2CCCC[C@H]2C(=O)O1 QJJXYPPXXYFBGM-LFZNUXCKSA-N 0.000 description 3
- 108091028113 Trans-activating crRNA Proteins 0.000 description 3
- 102100022153 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 4 Human genes 0.000 description 3
- 101710165473 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 4 Proteins 0.000 description 3
- 102100036857 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 8 Human genes 0.000 description 3
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 3
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 3
- 208000011912 acute myelomonocytic leukemia M4 Diseases 0.000 description 3
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 3
- 230000007815 allergy Effects 0.000 description 3
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 description 3
- 238000011316 allogeneic transplantation Methods 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- 238000010322 bone marrow transplantation Methods 0.000 description 3
- 230000036755 cellular response Effects 0.000 description 3
- 229960001265 ciclosporin Drugs 0.000 description 3
- 229930182912 cyclosporin Natural products 0.000 description 3
- 230000002559 cytogenic effect Effects 0.000 description 3
- 230000001461 cytolytic effect Effects 0.000 description 3
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 3
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 3
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 3
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 3
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 3
- 238000012239 gene modification Methods 0.000 description 3
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 3
- 125000000404 glutamine group Chemical group N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)* 0.000 description 3
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 3
- 229960003444 immunosuppressant agent Drugs 0.000 description 3
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 3
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 description 3
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 3
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 description 3
- 239000002523 lectin Substances 0.000 description 3
- 230000001589 lymphoproliferative effect Effects 0.000 description 3
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 3
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 3
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 description 3
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 206010036807 progressive multifocal leukoencephalopathy Diseases 0.000 description 3
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 3
- 230000007420 reactivation Effects 0.000 description 3
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 3
- 230000000306 recurrent effect Effects 0.000 description 3
- 210000003705 ribosome Anatomy 0.000 description 3
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 3
- 238000013456 study Methods 0.000 description 3
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 3
- QJJXYPPXXYFBGM-SHYZHZOCSA-N tacrolimus Natural products CO[C@H]1C[C@H](CC[C@@H]1O)C=C(C)[C@H]2OC(=O)[C@H]3CCCCN3C(=O)C(=O)[C@@]4(O)O[C@@H]([C@H](C[C@H]4C)OC)[C@@H](C[C@H](C)CC(=C[C@@H](CC=C)C(=O)C[C@H](O)[C@H]2C)C)OC QJJXYPPXXYFBGM-SHYZHZOCSA-N 0.000 description 3
- 238000011426 transformation method Methods 0.000 description 3
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 3
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 3
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 3
- 102000002627 4-1BB Ligand Human genes 0.000 description 2
- 108010082808 4-1BB Ligand Proteins 0.000 description 2
- KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 7H-purine Chemical compound N1=CNC2=NC=NC2=C1 KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000035330 Acute monoblastic/monocytic leukemia Diseases 0.000 description 2
- 206010000871 Acute monocytic leukaemia Diseases 0.000 description 2
- 208000010581 Acute myeloid leukemia with minimal differentiation Diseases 0.000 description 2
- 102000006306 Antigen Receptors Human genes 0.000 description 2
- 108010083359 Antigen Receptors Proteins 0.000 description 2
- 102100029822 B- and T-lymphocyte attenuator Human genes 0.000 description 2
- 208000004736 B-Cell Leukemia Diseases 0.000 description 2
- 108010074708 B7-H1 Antigen Proteins 0.000 description 2
- 102100024217 CAMPATH-1 antigen Human genes 0.000 description 2
- 108010065524 CD52 Antigen Proteins 0.000 description 2
- 102100025221 CD70 antigen Human genes 0.000 description 2
- 108010067225 Cell Adhesion Molecules Proteins 0.000 description 2
- 102000016289 Cell Adhesion Molecules Human genes 0.000 description 2
- 206010058314 Dysplasia Diseases 0.000 description 2
- 101000889900 Enterobacteria phage T4 Intron-associated endonuclease 1 Proteins 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 108010087819 Fc receptors Proteins 0.000 description 2
- 102000009109 Fc receptors Human genes 0.000 description 2
- 229920001917 Ficoll Polymers 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100028967 HLA class I histocompatibility antigen, alpha chain G Human genes 0.000 description 2
- 108010024164 HLA-G Antigens Proteins 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 101000864344 Homo sapiens B- and T-lymphocyte attenuator Proteins 0.000 description 2
- 101000934356 Homo sapiens CD70 antigen Proteins 0.000 description 2
- 101000984189 Homo sapiens Leukocyte immunoglobulin-like receptor subfamily B member 2 Proteins 0.000 description 2
- 101000984186 Homo sapiens Leukocyte immunoglobulin-like receptor subfamily B member 4 Proteins 0.000 description 2
- 101100207070 Homo sapiens TNFSF8 gene Proteins 0.000 description 2
- 101000597785 Homo sapiens Tumor necrosis factor receptor superfamily member 6B Proteins 0.000 description 2
- 108010091358 Hypoxanthine Phosphoribosyltransferase Proteins 0.000 description 2
- 102100029098 Hypoxanthine-guanine phosphoribosyltransferase Human genes 0.000 description 2
- 102100034343 Integrase Human genes 0.000 description 2
- 102000008070 Interferon-gamma Human genes 0.000 description 2
- 108020003285 Isocitrate lyase Proteins 0.000 description 2
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 2
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 2
- 241000713666 Lentivirus Species 0.000 description 2
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100025583 Leukocyte immunoglobulin-like receptor subfamily B member 2 Human genes 0.000 description 2
- 102100025578 Leukocyte immunoglobulin-like receptor subfamily B member 4 Human genes 0.000 description 2
- 102000018170 Lymphotoxin beta Receptor Human genes 0.000 description 2
- 108010091221 Lymphotoxin beta Receptor Proteins 0.000 description 2
- 102100030301 MHC class I polypeptide-related sequence A Human genes 0.000 description 2
- 108010061593 Member 14 Tumor Necrosis Factor Receptors Proteins 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 208000035489 Monocytic Acute Leukemia Diseases 0.000 description 2
- 101100407308 Mus musculus Pdcd1lg2 gene Proteins 0.000 description 2
- 101100207071 Mus musculus Tnfsf8 gene Proteins 0.000 description 2
- 208000033835 Myelomonocytic Acute Leukemia Diseases 0.000 description 2
- 102000004473 OX40 Ligand Human genes 0.000 description 2
- 108010042215 OX40 Ligand Proteins 0.000 description 2
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 2
- 108010047620 Phytohemagglutinins Proteins 0.000 description 2
- 241000709664 Picornaviridae Species 0.000 description 2
- 108700030875 Programmed Cell Death 1 Ligand 2 Proteins 0.000 description 2
- 102100024216 Programmed cell death 1 ligand 1 Human genes 0.000 description 2
- 102100024213 Programmed cell death 1 ligand 2 Human genes 0.000 description 2
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 2
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 2
- 108010029180 Sialic Acid Binding Ig-like Lectin 3 Proteins 0.000 description 2
- 108010047827 Sialic Acid Binding Immunoglobulin-like Lectins Proteins 0.000 description 2
- 102000007073 Sialic Acid Binding Immunoglobulin-like Lectins Human genes 0.000 description 2
- 230000006044 T cell activation Effects 0.000 description 2
- 230000006052 T cell proliferation Effects 0.000 description 2
- 230000005867 T cell response Effects 0.000 description 2
- 102100036011 T-cell surface glycoprotein CD4 Human genes 0.000 description 2
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 2
- 108010073062 Transcription Activator-Like Effectors Proteins 0.000 description 2
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100032100 Tumor necrosis factor ligand superfamily member 8 Human genes 0.000 description 2
- 102100028785 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 14 Human genes 0.000 description 2
- 102100035284 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 6B Human genes 0.000 description 2
- 108010017070 Zinc Finger Nucleases Proteins 0.000 description 2
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010317 ablation therapy Methods 0.000 description 2
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 2
- 208000026784 acute myeloblastic leukemia with maturation Diseases 0.000 description 2
- 208000010816 acute myeloblastic leukemia without maturation Diseases 0.000 description 2
- 230000003044 adaptive effect Effects 0.000 description 2
- 230000002730 additional effect Effects 0.000 description 2
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 2
- SHGAZHPCJJPHSC-YCNIQYBTSA-N all-trans-retinoic acid Chemical compound OC(=O)\C=C(/C)\C=C\C=C(/C)\C=C\C1=C(C)CCCC1(C)C SHGAZHPCJJPHSC-YCNIQYBTSA-N 0.000 description 2
- 238000011230 antibody-based therapy Methods 0.000 description 2
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 description 2
- 125000000637 arginyl group Chemical group N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)* 0.000 description 2
- 208000006673 asthma Diseases 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 230000008275 binding mechanism Effects 0.000 description 2
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 2
- 229930195731 calicheamicin Natural products 0.000 description 2
- HXCHCVDVKSCDHU-LULTVBGHSA-N calicheamicin Chemical compound C1[C@H](OC)[C@@H](NCC)CO[C@H]1O[C@H]1[C@H](O[C@@H]2C\3=C(NC(=O)OC)C(=O)C[C@](C/3=C/CSSSC)(O)C#C\C=C/C#C2)O[C@H](C)[C@@H](NO[C@@H]2O[C@H](C)[C@@H](SC(=O)C=3C(=C(OC)C(O[C@H]4[C@@H]([C@H](OC)[C@@H](O)[C@H](C)O4)O)=C(I)C=3C)OC)[C@@H](O)C2)[C@@H]1O HXCHCVDVKSCDHU-LULTVBGHSA-N 0.000 description 2
- 229940112129 campath Drugs 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 2
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 2
- 239000002458 cell surface marker Substances 0.000 description 2
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 2
- 238000010835 comparative analysis Methods 0.000 description 2
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 2
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 2
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 2
- 229960000684 cytarabine Drugs 0.000 description 2
- OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N cytosine Chemical compound NC=1C=CNC(=O)N=1 OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 2
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 2
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 2
- 238000002716 delivery method Methods 0.000 description 2
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 2
- BFMYDTVEBKDAKJ-UHFFFAOYSA-L disodium;(2',7'-dibromo-3',6'-dioxido-3-oxospiro[2-benzofuran-1,9'-xanthene]-4'-yl)mercury;hydrate Chemical compound O.[Na+].[Na+].O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC(Br)=C([O-])C([Hg])=C1OC1=C2C=C(Br)C([O-])=C1 BFMYDTVEBKDAKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 230000003828 downregulation Effects 0.000 description 2
- 241001493065 dsRNA viruses Species 0.000 description 2
- 230000000925 erythroid effect Effects 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 210000004700 fetal blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000000834 fixative Substances 0.000 description 2
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 2
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 2
- 229960003297 gemtuzumab ozogamicin Drugs 0.000 description 2
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 2
- 238000007429 general method Methods 0.000 description 2
- 230000005017 genetic modification Effects 0.000 description 2
- 235000013617 genetically modified food Nutrition 0.000 description 2
- 208000024908 graft versus host disease Diseases 0.000 description 2
- UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N guanine Chemical compound O=C1NC(N)=NC2=C1N=CN2 UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 description 2
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002744 homologous recombination Methods 0.000 description 2
- 230000006801 homologous recombination Effects 0.000 description 2
- 102000056982 human CD33 Human genes 0.000 description 2
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 2
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 2
- 230000001861 immunosuppressant effect Effects 0.000 description 2
- 238000002650 immunosuppressive therapy Methods 0.000 description 2
- 230000001024 immunotherapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960003130 interferon gamma Drugs 0.000 description 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 2
- 208000002551 irritable bowel syndrome Diseases 0.000 description 2
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 2
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 2
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 2
- 206010025135 lupus erythematosus Diseases 0.000 description 2
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 2
- 239000010445 mica Substances 0.000 description 2
- 229910052618 mica group Inorganic materials 0.000 description 2
- HPNSFSBZBAHARI-UHFFFAOYSA-N micophenolic acid Natural products OC1=C(CC=C(C)CCC(O)=O)C(OC)=C(C)C2=C1C(=O)OC2 HPNSFSBZBAHARI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 2
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 2
- HPNSFSBZBAHARI-RUDMXATFSA-N mycophenolic acid Chemical compound OC1=C(C\C=C(/C)CCC(O)=O)C(OC)=C(C)C2=C1C(=O)OC2 HPNSFSBZBAHARI-RUDMXATFSA-N 0.000 description 2
- 208000025113 myeloid leukemia Diseases 0.000 description 2
- 230000032965 negative regulation of cell volume Effects 0.000 description 2
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 2
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 2
- 230000001885 phytohemagglutinin Effects 0.000 description 2
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 2
- 238000010837 poor prognosis Methods 0.000 description 2
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 2
- 108020001580 protein domains Proteins 0.000 description 2
- 150000003212 purines Chemical class 0.000 description 2
- 150000003230 pyrimidines Chemical class 0.000 description 2
- ZAHRKKWIAAJSAO-UHFFFAOYSA-N rapamycin Natural products COCC(O)C(=C/C(C)C(=O)CC(OC(=O)C1CCCCN1C(=O)C(=O)C2(O)OC(CC(OC)C(=CC=CC=CC(C)CC(C)C(=O)C)C)CCC2C)C(C)CC3CCC(O)C(C3)OC)C ZAHRKKWIAAJSAO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 2
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 2
- 230000008054 signal transmission Effects 0.000 description 2
- 230000003007 single stranded DNA break Effects 0.000 description 2
- 229960002930 sirolimus Drugs 0.000 description 2
- QFJCIRLUMZQUOT-HPLJOQBZSA-N sirolimus Chemical compound C1C[C@@H](O)[C@H](OC)C[C@@H]1C[C@@H](C)[C@H]1OC(=O)[C@@H]2CCCCN2C(=O)C(=O)[C@](O)(O2)[C@H](C)CC[C@H]2C[C@H](OC)/C(C)=C/C=C/C=C/[C@@H](C)C[C@@H](C)C(=O)[C@H](OC)[C@H](O)/C(C)=C/[C@@H](C)C(=O)C1 QFJCIRLUMZQUOT-HPLJOQBZSA-N 0.000 description 2
- DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M sodium pyruvate Chemical compound [Na+].CC(=O)C([O-])=O DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 2
- RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N thymine Chemical group CC1=CNC(=O)NC1=O RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960003087 tioguanine Drugs 0.000 description 2
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 2
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 2
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 2
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 2
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HIYAVKIYRIFSCZ-CYEMHPAKSA-N 5-(methylamino)-2-[[(2S,3R,5R,6S,8R,9R)-3,5,9-trimethyl-2-[(2S)-1-oxo-1-(1H-pyrrol-2-yl)propan-2-yl]-1,7-dioxaspiro[5.5]undecan-8-yl]methyl]-1,3-benzoxazole-4-carboxylic acid Chemical compound O=C([C@@H](C)[C@H]1O[C@@]2([C@@H](C[C@H]1C)C)O[C@@H]([C@@H](CC2)C)CC=1OC2=CC=C(C(=C2N=1)C(O)=O)NC)C1=CC=CN1 HIYAVKIYRIFSCZ-CYEMHPAKSA-N 0.000 description 1
- 108010013238 70-kDa Ribosomal Protein S6 Kinases Proteins 0.000 description 1
- 208000016557 Acute basophilic leukemia Diseases 0.000 description 1
- 206010000830 Acute leukaemia Diseases 0.000 description 1
- 229930024421 Adenine Natural products 0.000 description 1
- GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N Adenine Chemical compound NC1=NC=NC2=C1N=CN2 GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000710929 Alphavirus Species 0.000 description 1
- 241000710189 Aphthovirus Species 0.000 description 1
- 101000719121 Arabidopsis thaliana Protein MEI2-like 1 Proteins 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- 108010031480 Artificial Receptors Proteins 0.000 description 1
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010003594 Ataxia telangiectasia Diseases 0.000 description 1
- 241000271566 Aves Species 0.000 description 1
- 102100038080 B-cell receptor CD22 Human genes 0.000 description 1
- 102100022005 B-lymphocyte antigen CD20 Human genes 0.000 description 1
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 1
- 208000033775 Basophilic Acute Leukemia Diseases 0.000 description 1
- 208000005692 Bloom Syndrome Diseases 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 229940124294 CD33 monoclonal antibody Drugs 0.000 description 1
- 108091079001 CRISPR RNA Proteins 0.000 description 1
- 108010021064 CTLA-4 Antigen Proteins 0.000 description 1
- 229940045513 CTLA4 antagonist Drugs 0.000 description 1
- 102000004631 Calcineurin Human genes 0.000 description 1
- 108010042955 Calcineurin Proteins 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000178270 Canarypox virus Species 0.000 description 1
- 102100025466 Carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 3 Human genes 0.000 description 1
- 208000031404 Chromosome Aberrations Diseases 0.000 description 1
- VWFCHDSQECPREK-LURJTMIESA-N Cidofovir Chemical compound NC=1C=CN(C[C@@H](CO)OCP(O)(O)=O)C(=O)N=1 VWFCHDSQECPREK-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- 108020004638 Circular DNA Proteins 0.000 description 1
- PHEDXBVPIONUQT-UHFFFAOYSA-N Cocarcinogen A1 Natural products CCCCCCCCCCCCCC(=O)OC1C(C)C2(O)C3C=C(C)C(=O)C3(O)CC(CO)=CC2C2C1(OC(C)=O)C2(C)C PHEDXBVPIONUQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010053138 Congenital aplastic anaemia Diseases 0.000 description 1
- 241000711573 Coronaviridae Species 0.000 description 1
- CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N Cyclophosphamide Chemical compound ClCCN(CCCl)P1(=O)NCCCO1 CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930105110 Cyclosporin A Natural products 0.000 description 1
- 206010067477 Cytogenetic abnormality Diseases 0.000 description 1
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 1
- 102100039498 Cytotoxic T-lymphocyte protein 4 Human genes 0.000 description 1
- 230000007018 DNA scission Effects 0.000 description 1
- 241000450599 DNA viruses Species 0.000 description 1
- 230000004568 DNA-binding Effects 0.000 description 1
- 241000702421 Dependoparvovirus Species 0.000 description 1
- 206010061818 Disease progression Diseases 0.000 description 1
- 102100034583 Dolichyl-diphosphooligosaccharide-protein glycosyltransferase subunit 1 Human genes 0.000 description 1
- 201000010374 Down Syndrome Diseases 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 238000012286 ELISA Assay Methods 0.000 description 1
- 206010014950 Eosinophilia Diseases 0.000 description 1
- 208000031637 Erythroblastic Acute Leukemia Diseases 0.000 description 1
- 108060002716 Exonuclease Proteins 0.000 description 1
- 201000004939 Fanconi anemia Diseases 0.000 description 1
- 241000710831 Flavivirus Species 0.000 description 1
- 102000052907 GIY-YIG endonucleases Human genes 0.000 description 1
- 108700035841 GIY-YIG endonucleases Proteins 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 108010017213 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 1
- 102100039620 Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Human genes 0.000 description 1
- 108050008753 HNH endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 102000000310 HNH endonucleases Human genes 0.000 description 1
- 102100031573 Hematopoietic progenitor cell antigen CD34 Human genes 0.000 description 1
- 206010058991 Hepatic vein occlusion Diseases 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- 102100039121 Histone-lysine N-methyltransferase MECOM Human genes 0.000 description 1
- 208000017604 Hodgkin disease Diseases 0.000 description 1
- 208000021519 Hodgkin lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 208000010747 Hodgkins lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 101000590272 Homo sapiens 26S proteasome non-ATPase regulatory subunit 2 Proteins 0.000 description 1
- 101000884305 Homo sapiens B-cell receptor CD22 Proteins 0.000 description 1
- 101000897405 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD20 Proteins 0.000 description 1
- 101000914337 Homo sapiens Carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 3 Proteins 0.000 description 1
- 101000848781 Homo sapiens Dolichyl-diphosphooligosaccharide-protein glycosyltransferase subunit 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000777663 Homo sapiens Hematopoietic progenitor cell antigen CD34 Proteins 0.000 description 1
- 101001033728 Homo sapiens Histone-lysine N-methyltransferase MECOM Proteins 0.000 description 1
- 101000998120 Homo sapiens Interleukin-3 receptor subunit alpha Proteins 0.000 description 1
- 101000917858 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-A Proteins 0.000 description 1
- 101000917839 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-B Proteins 0.000 description 1
- 101000591286 Homo sapiens Myocardin-related transcription factor A Proteins 0.000 description 1
- 101001000104 Homo sapiens Myosin-11 Proteins 0.000 description 1
- 101000996563 Homo sapiens Nuclear pore complex protein Nup214 Proteins 0.000 description 1
- 101000611936 Homo sapiens Programmed cell death protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000959489 Homo sapiens Protein AF-9 Proteins 0.000 description 1
- 101001062093 Homo sapiens RNA-binding protein 15 Proteins 0.000 description 1
- 101000857677 Homo sapiens Runt-related transcription factor 1 Proteins 0.000 description 1
- 241000701044 Human gammaherpesvirus 4 Species 0.000 description 1
- 108010073807 IgG Receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000009490 IgG Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 1
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 1
- 108010061833 Integrases Proteins 0.000 description 1
- 108010038453 Interleukin-2 Receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000010789 Interleukin-2 Receptors Human genes 0.000 description 1
- 102100033493 Interleukin-3 receptor subunit alpha Human genes 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- PWKSKIMOESPYIA-BYPYZUCNSA-N L-N-acetyl-Cysteine Chemical compound CC(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O PWKSKIMOESPYIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N L-methotrexate Chemical compound C=1N=C2N=C(N)N=C(N)C2=NC=1CN(C)C1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- 206010024404 Leukostasis Diseases 0.000 description 1
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 1
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- 208000025205 Mantle-Cell Lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 206010026851 Marrow hyperplasia Diseases 0.000 description 1
- 241000712079 Measles morbillivirus Species 0.000 description 1
- 108010090054 Membrane Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000012750 Membrane Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 229930191564 Monensin Natural products 0.000 description 1
- GAOZTHIDHYLHMS-UHFFFAOYSA-N Monensin A Natural products O1C(CC)(C2C(CC(O2)C2C(CC(C)C(O)(CO)O2)C)C)CCC1C(O1)(C)CCC21CC(O)C(C)C(C(C)C(OC)C(C)C(O)=O)O2 GAOZTHIDHYLHMS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000711408 Murine respirovirus Species 0.000 description 1
- 101100268066 Mus musculus Zap70 gene Proteins 0.000 description 1
- 102100034099 Myocardin-related transcription factor A Human genes 0.000 description 1
- 102100036639 Myosin-11 Human genes 0.000 description 1
- 241000714209 Norwalk virus Species 0.000 description 1
- 102100033819 Nuclear pore complex protein Nup214 Human genes 0.000 description 1
- 108091007494 Nucleic acid- binding domains Proteins 0.000 description 1
- 241000702244 Orthoreovirus Species 0.000 description 1
- 208000030852 Parasitic disease Diseases 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 108010004729 Phycoerythrin Proteins 0.000 description 1
- 241000218657 Picea Species 0.000 description 1
- 208000002151 Pleural effusion Diseases 0.000 description 1
- 208000008691 Precursor B-Cell Lymphoblastic Leukemia-Lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 208000007541 Preleukemia Diseases 0.000 description 1
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100039686 Protein AF-9 Human genes 0.000 description 1
- 102000001253 Protein Kinase Human genes 0.000 description 1
- 102000003923 Protein Kinase C Human genes 0.000 description 1
- 108090000315 Protein Kinase C Proteins 0.000 description 1
- 102000004022 Protein-Tyrosine Kinases Human genes 0.000 description 1
- 108090000412 Protein-Tyrosine Kinases Proteins 0.000 description 1
- 241000125945 Protoparvovirus Species 0.000 description 1
- 201000004681 Psoriasis Diseases 0.000 description 1
- 206010061924 Pulmonary toxicity Diseases 0.000 description 1
- CZPWVGJYEJSRLH-UHFFFAOYSA-N Pyrimidine Chemical compound C1=CN=CN=C1 CZPWVGJYEJSRLH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100029244 RNA-binding protein 15 Human genes 0.000 description 1
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 241000711798 Rabies lyssavirus Species 0.000 description 1
- 102100023606 Retinoic acid receptor alpha Human genes 0.000 description 1
- 241000712907 Retroviridae Species 0.000 description 1
- 102100025373 Runt-related transcription factor 1 Human genes 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 1
- 206010039491 Sarcoma Diseases 0.000 description 1
- 108091081021 Sense strand Proteins 0.000 description 1
- 201000004283 Shwachman-Diamond syndrome Diseases 0.000 description 1
- 102000001555 Sialic Acid Binding Ig-like Lectin 3 Human genes 0.000 description 1
- 102100029946 Sialic acid-binding Ig-like lectin 7 Human genes 0.000 description 1
- 241000700584 Simplexvirus Species 0.000 description 1
- 241000713675 Spumavirus Species 0.000 description 1
- 108010092262 T-Cell Antigen Receptors Proteins 0.000 description 1
- 108020004566 Transfer RNA Proteins 0.000 description 1
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 description 1
- 206010052779 Transplant rejections Diseases 0.000 description 1
- 208000037280 Trisomy Diseases 0.000 description 1
- 241000700618 Vaccinia virus Species 0.000 description 1
- 241000700647 Variola virus Species 0.000 description 1
- 241000711975 Vesicular stomatitis virus Species 0.000 description 1
- 108020005202 Viral DNA Proteins 0.000 description 1
- 108020000999 Viral RNA Proteins 0.000 description 1
- 101150003160 X gene Proteins 0.000 description 1
- 241000589634 Xanthomonas Species 0.000 description 1
- 101150044453 Y gene Proteins 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010016200 Zinc Finger Protein GLI1 Proteins 0.000 description 1
- DGEZNRSVGBDHLK-UHFFFAOYSA-N [1,10]phenanthroline Chemical compound C1=CN=C2C3=NC=CC=C3C=CC2=C1 DGEZNRSVGBDHLK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004308 acetylcysteine Drugs 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 208000019159 acute myeloid leukemia with t(6;9)(p23;q34) Diseases 0.000 description 1
- 208000019144 acute myeloid leukemia with t(9;11)(p22;q23) Diseases 0.000 description 1
- 230000033289 adaptive immune response Effects 0.000 description 1
- 210000005006 adaptive immune system Anatomy 0.000 description 1
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 1
- 229960000643 adenine Drugs 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 229960000548 alemtuzumab Drugs 0.000 description 1
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 229940100198 alkylating agent Drugs 0.000 description 1
- 239000002168 alkylating agent Substances 0.000 description 1
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 208000007502 anemia Diseases 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 238000011319 anticancer therapy Methods 0.000 description 1
- 238000011394 anticancer treatment Methods 0.000 description 1
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- LMEKQMALGUDUQG-UHFFFAOYSA-N azathioprine Chemical compound CN1C=NC([N+]([O-])=O)=C1SC1=NC=NC2=C1NC=N2 LMEKQMALGUDUQG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002170 azathioprine Drugs 0.000 description 1
- 125000000852 azido group Chemical group *N=[N+]=[N-] 0.000 description 1
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 description 1
- SQVRNKJHWKZAKO-UHFFFAOYSA-N beta-N-Acetyl-D-neuraminic acid Natural products CC(=O)NC1C(O)CC(O)(C(O)=O)OC1C(O)C(O)CO SQVRNKJHWKZAKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002551 biofuel Substances 0.000 description 1
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 1
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000004820 blood count Methods 0.000 description 1
- 229960005520 bryostatin Drugs 0.000 description 1
- MJQUEDHRCUIRLF-TVIXENOKSA-N bryostatin 1 Chemical compound C([C@@H]1CC(/[C@@H]([C@@](C(C)(C)/C=C/2)(O)O1)OC(=O)/C=C/C=C/CCC)=C\C(=O)OC)[C@H]([C@@H](C)O)OC(=O)C[C@H](O)C[C@@H](O1)C[C@H](OC(C)=O)C(C)(C)[C@]1(O)C[C@@H]1C\C(=C\C(=O)OC)C[C@H]\2O1 MJQUEDHRCUIRLF-TVIXENOKSA-N 0.000 description 1
- MUIWQCKLQMOUAT-AKUNNTHJSA-N bryostatin 20 Natural products COC(=O)C=C1C[C@@]2(C)C[C@]3(O)O[C@](C)(C[C@@H](O)CC(=O)O[C@](C)(C[C@@]4(C)O[C@](O)(CC5=CC(=O)O[C@]45C)C(C)(C)C=C[C@@](C)(C1)O2)[C@@H](C)O)C[C@H](OC(=O)C(C)(C)C)C3(C)C MUIWQCKLQMOUAT-AKUNNTHJSA-N 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000003710 calcium ionophore Substances 0.000 description 1
- HIYAVKIYRIFSCZ-UHFFFAOYSA-N calcium ionophore A23187 Natural products N=1C2=C(C(O)=O)C(NC)=CC=C2OC=1CC(C(CC1)C)OC1(C(CC1C)C)OC1C(C)C(=O)C1=CC=CN1 HIYAVKIYRIFSCZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000035269 cancer or benign tumor Diseases 0.000 description 1
- 125000002837 carbocyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 230000020411 cell activation Effects 0.000 description 1
- 238000002659 cell therapy Methods 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 239000013043 chemical agent Substances 0.000 description 1
- 239000003638 chemical reducing agent Substances 0.000 description 1
- 208000012191 childhood neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000002759 chromosomal effect Effects 0.000 description 1
- 229960000724 cidofovir Drugs 0.000 description 1
- 230000002301 combined effect Effects 0.000 description 1
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 229960004397 cyclophosphamide Drugs 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 229940104302 cytosine Drugs 0.000 description 1
- 239000000824 cytostatic agent Substances 0.000 description 1
- 239000002254 cytotoxic agent Substances 0.000 description 1
- 231100000599 cytotoxic agent Toxicity 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 239000000412 dendrimer Substances 0.000 description 1
- 229920000736 dendritic polymer Polymers 0.000 description 1
- 238000006471 dimerization reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005750 disease progression Effects 0.000 description 1
- 238000012137 double-staining Methods 0.000 description 1
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 description 1
- 239000003596 drug target Substances 0.000 description 1
- 239000002961 echo contrast media Substances 0.000 description 1
- 229960000284 efalizumab Drugs 0.000 description 1
- 210000001671 embryonic stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 108010050663 endodeoxyribonuclease CreI Proteins 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 238000001976 enzyme digestion Methods 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- 150000002170 ethers Chemical class 0.000 description 1
- CJAONIOAQZUHPN-KKLWWLSJSA-N ethyl 12-[[2-[(2r,3r)-3-[2-[(12-ethoxy-12-oxododecyl)-methylamino]-2-oxoethoxy]butan-2-yl]oxyacetyl]-methylamino]dodecanoate Chemical compound CCOC(=O)CCCCCCCCCCCN(C)C(=O)CO[C@H](C)[C@@H](C)OCC(=O)N(C)CCCCCCCCCCCC(=O)OCC CJAONIOAQZUHPN-KKLWWLSJSA-N 0.000 description 1
- 102000013165 exonuclease Human genes 0.000 description 1
- 238000011347 external beam therapy Methods 0.000 description 1
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 1
- 238000009093 first-line therapy Methods 0.000 description 1
- 229960000390 fludarabine Drugs 0.000 description 1
- GIUYCYHIANZCFB-FJFJXFQQSA-N fludarabine phosphate Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC(F)=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(O)=O)[C@@H](O)[C@@H]1O GIUYCYHIANZCFB-FJFJXFQQSA-N 0.000 description 1
- 230000037406 food intake Effects 0.000 description 1
- 238000002825 functional assay Methods 0.000 description 1
- 238000001476 gene delivery Methods 0.000 description 1
- 238000010363 gene targeting Methods 0.000 description 1
- 230000030414 genetic transfer Effects 0.000 description 1
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000003862 glucocorticoid Substances 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 201000009277 hairy cell leukemia Diseases 0.000 description 1
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000002367 halogens Chemical class 0.000 description 1
- 230000003862 health status Effects 0.000 description 1
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 1
- 210000003630 histaminocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 238000001794 hormone therapy Methods 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 125000001165 hydrophobic group Chemical group 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 210000001822 immobilized cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000005965 immune activity Effects 0.000 description 1
- 230000036737 immune function Effects 0.000 description 1
- 102000027596 immune receptors Human genes 0.000 description 1
- 108091008915 immune receptors Proteins 0.000 description 1
- 230000000984 immunochemical effect Effects 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 229940125721 immunosuppressive agent Drugs 0.000 description 1
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 1
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 1
- 210000004263 induced pluripotent stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000015788 innate immune response Effects 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 1
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 201000003445 large cell neuroendocrine carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 238000002647 laser therapy Methods 0.000 description 1
- 238000000506 liquid--solid chromatography Methods 0.000 description 1
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 229940126601 medicinal product Drugs 0.000 description 1
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 229960000485 methotrexate Drugs 0.000 description 1
- 238000000520 microinjection Methods 0.000 description 1
- 230000002297 mitogenic effect Effects 0.000 description 1
- 229960005358 monensin Drugs 0.000 description 1
- GAOZTHIDHYLHMS-KEOBGNEYSA-N monensin A Chemical compound C([C@@](O1)(C)[C@H]2CC[C@@](O2)(CC)[C@H]2[C@H](C[C@@H](O2)[C@@H]2[C@H](C[C@@H](C)[C@](O)(CO)O2)C)C)C[C@@]21C[C@H](O)[C@@H](C)[C@@H]([C@@H](C)[C@@H](OC)[C@H](C)C(O)=O)O2 GAOZTHIDHYLHMS-KEOBGNEYSA-N 0.000 description 1
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 1
- 201000006417 multiple sclerosis Diseases 0.000 description 1
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 1
- 229940014456 mycophenolate Drugs 0.000 description 1
- 229960000951 mycophenolic acid Drugs 0.000 description 1
- 201000006462 myelodysplastic/myeloproliferative neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 210000000066 myeloid cell Anatomy 0.000 description 1
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 1
- 229960005027 natalizumab Drugs 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 238000007899 nucleic acid hybridization Methods 0.000 description 1
- 239000002777 nucleoside Substances 0.000 description 1
- 150000003833 nucleoside derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 238000002515 oligonucleotide synthesis Methods 0.000 description 1
- 231100000590 oncogenic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002246 oncogenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 230000007030 peptide scission Effects 0.000 description 1
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 1
- 230000008823 permeabilization Effects 0.000 description 1
- 230000002085 persistent effect Effects 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PHEDXBVPIONUQT-RGYGYFBISA-N phorbol 13-acetate 12-myristate Chemical compound C([C@]1(O)C(=O)C(C)=C[C@H]1[C@@]1(O)[C@H](C)[C@H]2OC(=O)CCCCCCCCCCCCC)C(CO)=C[C@H]1[C@H]1[C@]2(OC(C)=O)C1(C)C PHEDXBVPIONUQT-RGYGYFBISA-N 0.000 description 1
- 108010058237 plasma protein fraction Proteins 0.000 description 1
- 229940002993 plasmanate Drugs 0.000 description 1
- 231100000374 pneumotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 230000001902 propagating effect Effects 0.000 description 1
- 230000007047 pulmonary toxicity Effects 0.000 description 1
- 239000002213 purine nucleotide Substances 0.000 description 1
- 239000002719 pyrimidine nucleotide Substances 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 230000003362 replicative effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 229930002330 retinoic acid Natural products 0.000 description 1
- 108091008726 retinoic acid receptors α Proteins 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 230000005070 ripening Effects 0.000 description 1
- 229960004641 rituximab Drugs 0.000 description 1
- 229960003452 romidepsin Drugs 0.000 description 1
- OHRURASPPZQGQM-GCCNXGTGSA-N romidepsin Chemical compound O1C(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)C(=C/C)/NC(=O)[C@H]2CSSCC\C=C\[C@@H]1CC(=O)N[C@H](C(C)C)C(=O)N2 OHRURASPPZQGQM-GCCNXGTGSA-N 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 201000006681 severe congenital neutropenia Diseases 0.000 description 1
- SQVRNKJHWKZAKO-OQPLDHBCSA-N sialic acid Chemical compound CC(=O)N[C@@H]1[C@@H](O)C[C@@](O)(C(O)=O)OC1[C@H](O)[C@H](O)CO SQVRNKJHWKZAKO-OQPLDHBCSA-N 0.000 description 1
- 125000005629 sialic acid group Chemical group 0.000 description 1
- 230000009131 signaling function Effects 0.000 description 1
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 229940054269 sodium pyruvate Drugs 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 238000011272 standard treatment Methods 0.000 description 1
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 229940037128 systemic glucocorticoids Drugs 0.000 description 1
- 208000016595 therapy related acute myeloid leukemia and myelodysplastic syndrome Diseases 0.000 description 1
- 229940113082 thymine Drugs 0.000 description 1
- 210000001541 thymus gland Anatomy 0.000 description 1
- 210000003014 totipotent stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- 102000035160 transmembrane proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091005703 transmembrane proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000027257 transmembrane receptors Human genes 0.000 description 1
- 108091008578 transmembrane receptors Proteins 0.000 description 1
- 229960001727 tretinoin Drugs 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- 241000701447 unidentified baculovirus Species 0.000 description 1
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 description 1
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 description 1
- 241001515965 unidentified phage Species 0.000 description 1
- 230000003827 upregulation Effects 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/14—Blood; Artificial blood
- A61K35/17—Lymphocytes; B-cells; T-cells; Natural killer cells; Interferon-activated or cytokine-activated lymphocytes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
- A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
- A61K39/39558—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against tumor tissues, cells, antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
- A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
- C07K14/7051—T-cell receptor (TcR)-CD3 complex
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
- C07K14/70517—CD8
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
- C07K16/3061—Blood cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
- C12N5/0636—T lymphocytes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
- C07K2317/53—Hinge
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
- C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
- C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
- C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
- C07K2319/03—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif containing a transmembrane segment
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Hematology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Virology (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Mycology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Изобретение относится к биотехнологии. Описан CD33-специфический химерный антигенный рецептор (CAR), имеющий полипептидную структуру, выбранную из V1, V3 и V5, которые проиллюстрированы на фигуре 2. Указанная структура содержит: (а) внеклеточный лигандсвязывающий домен, содержащий VH и VL из моноклонального антитела к CD33, (б) шарнир, выбранный из шарнира FcRIIIα, шарнира CD8α и шарнира IgG1, (в) трансмембранный домен CD8α и (г) цитоплазматический домен, включающий сигнальный домен CD3дзета и костимуляторный домен из 4-1ВВ. Представлен способ разрушения клетки гематологического рака, заключающийся в том, что приводят в контакт указанную клетку гематологического рака со сконструированной иммунной клеткой в количестве, эффективном для разрушения указанной раковой клетки. Также описана сконструированная иммунная клетка, экспрессирующая на мембране клеточной поверхности CD33-специфический CAR. Сконструированные иммунные клетки, наделенные указанными CAR, наиболее пригодны для лечения лимфом и лейкозов. 8 н. и 33 з.п. ф-лы, 8 ил., 11 табл., 3 пр.
Description
Область техники, к которой относится изобретение
Настоящее изобретение относится к химерным антигенным рецепторам (CAR), которые представляют собой рекомбинантные химерные белки, обладающие способностью перенаправлять специфичность и реактивность иммунных клеток на CD33, который представляет собой расположенный на клеточной поверхности гликопротеин, присутствующий на большинстве миелоидных клеток, и который применяют для диагностирования у пациентов острого миелоидного лейкоза (AML). CAR, предлагаемые в изобретении, наиболее пригодны для лечения злокачественных клеток, несущих CD33, при экспрессии в T-клетках или NK-клетках. Полученные сконструированные иммунные клетки отличаются высоким уровнем специфичности в отношении злокачественных клеток, обеспечивая безопасность и эффективность иммунотерапии.
Предпосылки создания изобретения
Адаптивная иммунотерапия, в которой применяют перенос аутологичных антигенспецифических T-клеток, созданных ex vivo, представляет собой перспективную стратегию для лечения вирусных инфекций и рака. T-клетки, применяемые для адаптивной иммунотерапии, можно создавать либо путем размножения антигенспецифических T-клеток, либо посредством перенаправления T-клеток с помощью методов генетической инженерии (Park, Rosenberg и др., 2011). Перенос T-клеток, специфических в отношении вирусных антигенов, является хорошо зарекомендовавшей себя процедурой, которую применяют для лечения ассоциированных с трансплантацией вирусных инфекций и редких связанных с вирусами злокачественных заболеваний. Продемонстрировано также, что выделение и перенос специфических в отношении опухоли T-клеток приводит к успеху при лечении меланомы.
В T-клетках были успешно созданы новые специфичности посредством генетического переноса трансгенных T-клеточных рецепторов или химерных антигенных рецепторов (CAR) (Jena, Dotti и др., 2010). CAR представляют собой синтетические рецепторы, состоящие из «нацеливающего» фрагмента, ассоциированного с одним или несколькими сигнальными доменами в одной слитой молекуле. В целом, связывающий фрагмент CAR состоит из антигенсвязывающего домена одноцепочечного антитела (scFv), который содержит фрагменты моноклонального антитела, представляющие собой вариабельные домены легкой и тяжелой цепи, соединенные гибким линкером. Успешно применяли также связывающие фрагменты на основе доменов рецептора или лиганда. Сигнальные домены для первого поколения CAR получали из цитоплазматической области дзета-цепей CD3 или гамма-цепей Fc-рецептора. Было продемонстрировано, что первое поколение CAR позволяло успешно перенаправлять T-клеточную цитотоксичность. Однако для них не удалось обеспечить пролонгированное размножение и противоопухолевую активность in vivo. Для получения CAR второго и третьего поколений добавляли сигнальные домены из костимуляторных молекул, а также трансмембранные и шарнирные домены, которые в некоторых успешных испытаниях на людях продемонстрировали терапевтическое действие, когда T-клетки удавалось перенаправлять на злокачественные клетки, экспрессирующие CD 19 (June и др., 2011). Однако конкретная комбинация сигнальных доменов, трансмембранных и костимуляторных доменов, которую применяли в случае ScFv, мишенью которого является CD 19, оказалась в большей степени антигенспецифической и непригодной для других антигенных маркеров
Острый миелоидный лейкоз (AML) представляет собой второй по частоте встречаемости из наиболее распространенных острых лейкозов, в США ежегодно фиксируется примерно 13300 новых случаев указанного лейкоза, от которого ежегодно умирает 8800 человек. Общепринятая терапия лейкозов включает облучение и/или химиотерапию. Кроме того, в определенных обстоятельствах в качестве дополнительного приемлемого пути рассматривается трансплантация костного мозга. Однако указанные терапии являются относительно токсичными для пациента и очень часто не приводят к полному излечению заболевания. Таким образом, хотя полная ремиссия может достигаться у 65-80% пациентов, получающих химиотерапию, у большинства из этих пациентов происходит рецидив (Cros и др., 2004), поскольку выжившие после химиотерапии клетки обогащены стволовыми клетками, которые являются лейкозными клетками-предшественниками AML (AML-LSC), и представляют собой очень опасный резервуар клеток, обладающих способностью в повторному размножению и способностью приводить к рецидиву. Лейкозные стволовые клетки наиболее хорошо охарактеризованы для острого миелоидного лейкоза. AML-LSC экспрессируют характерный набор антигенов клеточной поверхности, включая среди прочего CD33. Для пациентов старше 60 лет характерен плохой прогноз, согласно которому только 10-15% из них могут рассчитывать на 4-летнюю выживаемость без признаков прогрессирования заболевания (Gardin и др., 2007). Указанный высокий уровень рецидивов у страдающих AML пациентов и плохой прогноз для престарелых пациентов свидетельствуют о настоятельной необходимости в новых терапевтических подходах, направленных главным образом на CD33+-клетки.
CD33 (связывающий сиаловую кислоту Ig-подобный лектин 3) или SIGLEC3, обозначенный как Р20138 в базе данных белков в UniProtKB/Swiss-Prot, представляет собой трансмембранный рецептор, который экспрессируется на клетках миелоидной линии дифференцировки. Он, как правило, рассматривается как миелоидспецифический, но он часто присутствует на некоторых лимфоидных клетках. Он связывает сиаловые кислоты, и поэтому является представителем SIGLEC-семейства лектинов.
Ранее использовали различные подходы для создания неконъюгированных моноклональных антител против CD33 с противоопухолевой активностью. Однако эти попытки оказались неудачными с точки зрения специфического воздействия на злокачественные клетки.
В 2000 г. гемтузумабозогамицин (Mylotarg™, GO), представляющий собой конъюгированное с калихеамицином гуманизированное моноклональное антитело к CD33, был одобрен Управлением по контролю за качеством пищевых продуктов, медикаментов и косметических средств США (FDA) для лечения пациентов старше 60 лет с рефракторным или рецидивирующим AML. Однако это средство было отозвано с рынка 21 июня 2010 г.; средство GO состояло из гуманизированного антитела к CD33 IgG типа, химически сшитого с цитотоксическим агентом калихеамицином. Исследование, проведенное после одобрения (SWOG S0106), вызвало сомнения касательно безопасности продукта, а в других клинических исследованиях (британские исследования MRC AML-15 и HOVON-43) не удалось продемонстрировать какую-либо клиническую пользу (Maniecki и др., 2011). Обнаруженные побочные действия включали окклюзионное заболевание печеночных вен, легочную токсичность и серьезные реакции гиперчувствительности, в то время как в опытах in vitro продемонстрирована независимая от антигена цитотоксичность в отношении CD33-негативных клеточных линий (Schwemmlein и др., 2006).
Позднее предложены триспецифические полипептидные молекулы, в которых объединены иммуноглобулиновые домены из антител к CD123, CD16 и CD33 (WO 2011/070109), для того, чтобы избегать проблем со специфичностью, ранее установленных для терапевтических средств, мишенью которых является CD33.
В качестве альтернативы применяемым ранее стратегиям в настоящем изобретении предложены CD33-специфческие CAR, которые могут экспрессироваться в иммунных клетках, для «нацеливания» на злокачественные CD33+-клетки, обладающие значительным клиническим преимуществом.
Краткое изложение сущности изобретения
При создании изобретения были разработаны CD33-специфические CAR, обладающие различной структурой и содержащие различные scFV, полученные из различных специфических в отношении CD33 антител. Предпочтительные полипептиды CAR, предлагаемые в изобретении, содержат аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 19-42. Более предпочтительные полипептиды CAR, предлагаемые в изобретении, содержат аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 68, или последовательность, идентичную по меньшей мере на 80% SEQ ID NO: 68. После неспецифической активации in vitro (например, с использованием покрытых CD3/CD28 гранул и рекомбинантного IL2), T-клетки из доноров трансформировали полинуклеотидами, экспрессирующими указанные CAR, используя вирусную трансдукцию. В некоторых случаях T-клетки подвергали дополнительному конструированию для создания неаллореактивных T-клеток, более конкретно путем разрушения компонента TCR (αβ-цепи T-клеточных рецепторов) для предупреждения реакции «трансплантат-против-хозяина» и еще более конкретно путем разрушения компонента TCR (αβ-цепи T-клеточных рецепторов) и гена CD33.
Полученные сконструированные T-клетки обладали разной степенью реактивностью in vitro в отношении CD33-позитивных клеток, что свидетельствует о том, что CAR, предлагаемые в настоящем изобретении, принимают участие в антигензависимой активации, а также пролиферации T-клеток, что делает возможным их применение для иммунотерапии.
В настоящей заявке подробно описаны полипептидные и полинуклеотидные последовательности, которые кодируют CAR, предлагаемые в настоящем изобретении.
Сконструированные иммунные клетки, предлагаемые в настоящем изобретении, наиболее пригодны для таких терапевтических применений, как лечение B-клеточной лимфомы или лейкоза.
Краткое описание чертежей
На чертежах показано:
на фиг. 1 - схематическое изображение сконструированной иммунной клетки, предлагаемой в изобретении. Сконструированная иммунная клетка, представленная на этом чертеже, представляет собой T-клетку, трансдуцированную ретровирусом, кодирующим полипептид CAR. Указанную T-клетку конструировали также для обеспечения улучшенного и более безопасного приживления трансплантата пациенту, что необязательно подпадает под объем настоящего изобретения. Ген X может представлять собой, например, ген, экспрессирующий компонент TCR (TCRальфа или TCRбета), ген Y может представлять собой ген, с которым связана чувствительность T-клетки к иммуносупрессорным лекарственным средствам типа средств, мишенью которых является CD52 (таких как Campath (Кэмпас) или HPRT (таких как 6-тиогуанин);
на фиг. 2 - схематическое изображение различной архитектуры CAR (V1-V6):
на фиг. 3 - схематическое изображение различных CAR со структурой V1, V3 или V5;
на фиг. 4 - данные о дегранулирующей активности (% CD8/CD107a+-клеток и средняя интенсивность флуоресценции (MFI) CD107a в популяции CD8+-клеток) scFv M195 с тремя архитектурами (v1: шарнир FcgRIII/трансмембранный домен CD8, v3: шарнир CD8/трансмембранный домен CD8, v5: шарнир IgG1/трансмембранный домен CD8), полученные при совместном культивировании CAR+-T-клеток в течение 6 ч с экспрессирующими CD33 клетками (U937) или с клетками, которые не экспрессируют CD33 (Jeko). Данные представлены в виде процента (%) дегрануляции и средней интенсивности флуоресценции (MFI);
на фиг. 5 - данные о дегранулирующей активности (% CD8/CD107a+-клеток и средняя интенсивность флуоресценции (MFI) CD107a в популяции CD8+-клеток) scFv m2H12 и Му9.6 с тремя архитектурами (v1: шарнир FcgRIII/трансмембранный домен CD8, v3: шарнир CD8/трансмембранный домен CD8, v5: шарнир IgG1/трансмембранный домен CD8), полученные при совместном культивировании CAR+-T-клеток в течение 6 ч с экспрессирующими CD33 клетками (U937) или с клетками, которые не экспрессируют CD33 (Jeko). Данные представлены в виде процента (%) дегрануляции и средней интенсивности флуоресценции (MFI);
на фиг. 6 - данные о дегранулирующей активности (% CD8/CD107a+-клеток) 7 конструкций: M195-V1, M195-V3, M195-V5, m2H12-V1, m2H12-V3, My9.6-V1 и My9.6-V3 (v1: шарнир FcgRIII/трансмембранный домен CD8, v3: шарнир CD8/трансмембранный домен CD8, v5: шарнир IgG1/трансмембранный домен CD8), полученные при совместном культивировании CAR+-T-клеток в течение 6 ч с клетками, экспрессирующими высокие или средние уровни CD33 (U937 и K562 соответственно), или с клетками, которые не экспрессируют CD33 (Jeko-1). Данные представлены в виде процента (%) дегрануляции;
на фиг. 7 - данные о количестве IFN, высвободившегося экспрессирующими анти-CD33 CAR T-клетками при совместном культивировании в течение 24 ч с клетками, экспрессирующими различные уровни CD33 (U937 и K562), или с клетками, которые не экспрессируют CD33 (Jeko-1). Представлены также данные о высвобождении IFN-гамма из T-клеток, культивируемых в таких же условиях индивидуально. Эксперименты осуществляли с использованием образцов трех независимых доноров, и представлены результаты, полученные для одного репрезентативного донора;
на фиг. 8 - данные об удельной цитолитической активности экспрессирующих анти-CD33 CAR T-клеток. Анализы осуществляли через 48 ч после трансфекции мРНК CAR. T-клетки совместно культивировали с клетками U937+Jeko или K562+Jeko в течение 4 ч. Определяли жизнеспособность клеток для каждой клеточной линии в конце периода совместного культивирования и рассчитывали процент удельного клеточного лизиса.
Подробное описание изобретения
Если специально не указано иное, то все технические и научные понятия, использованные в настоящем описании, имеют значение, которое является общепринятым для специалистов в области генной терапии, биохимии, генетики и молекулярной биологии.
Для осуществления на практике или тестирования настоящего изобретения можно применять все методы и материалы, сходные или эквивалентные тем, которые указаны в настоящем описании, при этом в настоящей заявке описаны приемлемые методы и материалы. Все публикации, заявки на патент, патенты и другие ссылки, упомянутые в настоящем описании, полностью включены в настоящее описание в качестве ссылки. В случае разночтения следует руководствоваться настоящим описанием, включая определения. Кроме того, материалы, методы и примеры представлены только для иллюстрации и не направлены на ограничение объема изобретения, если не указано иное.
При осуществлении на практике настоящего изобретения следует применять, если не указано иное, общепринятые методы клеточной биологии, культивирования клеток, молекулярной биологии, трансгенной биологии, микробиологии, рекомбинантной ДНК и иммунологии, известные специалисту в данной области. Такие методы подробно описаны в литературе, см., например, Current Protocols in Molecular Biology (Frederick M. AUSUBEL, изд-во Wiley and son Inc, Library of Congress, USA, 2000); Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 3-е изд. (Sambrook и др., изд-во Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York, 2001); Oligonucleotide Synthesis, под ред. M.J. Gait, 1984; Mullis и др., US №4683195; Nucleic Acid Hybridization (под ред. В.D. Harries и S.J. Higgins, 1984); Transcription And Translation (под ред. В.D. Hames и S.J. Higgins, 1984); Culture Of Animal Cells (R.I. Freshney, изд-во Alan R. Liss, Inc., 1987); Immobilized Cells And Enzymes (изд-во IRL Press, 1986); B. Perbal, A Practical Guide To Molecular Cloning, 1984; серия: Methods In ENZYMOLOGY (под. ред. J. Abelson и M. Simon, изд-во Academic Press, Inc., New York), прежде всего том 154 и том 155 (под ред. Wu и др.) и том 185, «Gene Expression Technology» (под ред. D. Goeddel); Gene Transfer Vectors For Mammalian Cells (под ред. J.H. Miller и M.P. Calos, 1987, изд-во Cold Spring Harbor Laboratory); Immunochemical Methods In Cell And Molecular Biology (под ред. Mayer и Walker, изд-во Academic Press, London, 1987); Handbook Of Experimental Immunology, тома I-IV (под ред. D.M. Weir и С.С. Blackwell, 1986); и Manipulating the Mouse Embryo, (изд-во Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y., 1986).
В настоящем изобретении предложен CD33-специфический химерный антигенный рецептор (CAR), идентичный по меньшей мере на 80% одной из полипептидных структур, выбранных из V1, V3 и V5, которые проиллюстрированы на фиг. 2, где указанная структура содержит:
(а) внеклеточный лигандсвязывающий домен, содержащий VH и VL из моноклонального антитела к CD33,
(б) шарнир, выбранный из шарнира FcRIIIα, шарнира CD8α и шарнира IgG1,
(в) трансмембранный домен CD8α и
(г) цитоплазматический домен, включающий сигнальный домен CD3дзета и костимуляторный домен из 4-1ВВ.
Предпочтительным вариантом осуществления настоящего изобретения является CD33-специфический CAR, указанный выше, в котором указанная структура V3 содержит шарнир CD8α и трансмембранный домен CD8α.
В настоящем изобретении предложен CD33-специфический CAR, указанный выше, в котором указанный шарнир CD8α идентичен по меньшей мере на 80% SEQ ID NO: 4.
В настоящем изобретении предложен CD33-специфический CAR, указанный выше, который содержит полипептидную последовательность, идентичную по меньшей мере на 80% SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 29 и SEQ ID NO: 30.
Вариантом осуществления настоящего изобретения является CD33-специфический CAR, указанный выше, в котором указанная структура V1 содержит шарнир FcγRIIIα и трансмембранный домен CD8α.
В настоящем изобретении предложен CD33-специфический CAR, указанный выше, в котором указанный шарнир FcγRIIIα идентичен по меньшей мере на 80% SEQ ID NO: 3.
В настоящем изобретении предложен CD33-специфический CAR, указанный выше, который содержит полипептидную последовательность, идентичную по меньшей мере на 80% SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 21 и SEQ ID NO: 22.
Вариантом осуществления настоящего изобретения является CD33-специфический CAR, указанный выше, в котором указанная структура V5 содержит шарнир IgG1 и трансмембранный домен CD8α.
В настоящем изобретении предложен CD33-специфический CAR, указанный выше, в котором указанный шарнир IgG1 идентичен по меньшей мере на 80% SEQ ID NO: 5.
В настоящем изобретении предложен CD33-специфический CAR, указанный выше, который содержит полипептидную последовательность, идентичную по меньшей мере на 80% SEQ ID NO: 35, SEQ ID NO: 36, SEQ ID NO: 37 и SEQ ID NO: 38.
В настоящем изобретении предложен CD33-специфический CAR, указанный выше, в котором указанная VH идентична по меньшей мере на 80% полипептидной последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 15 и SEQ ID NO: 17, и указанная VL идентична по меньшей мере на 80% полипептидной последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 16 и SEQ ID NO: 18.
В настоящем изобретении предложен CD33-специфический CAR, указанный выше, в котором костимуляторный домен из 4-1ВВ идентичен по меньшей мере на 80% SEQ ID NO: 8.
В настоящем изобретении предложен CD33-специфический CAR, указанный выше, в котором указанный сигнальный домен CD3дзета идентичен по меньшей мере на 80% SEQ ID NO: 9.
В настоящем изобретении предложен CD33-специфический CAR, указанный выше, в котором указанный трансмембранный домен CD8α идентичен по меньшей мере на 80% SEQ ID NO: 6.
В настоящем изобретении предложен CD33-специфический CAR, указанный выше, который дополнительно содержит сигнальный пептид.
В настоящем изобретении предложен CD33-специфический CAR, указанный выше, в котором указанный сигнальный пептид идентичен по меньшей мере на 80% SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 2.
Одним из вариантом осуществления настоящего изобретения является CD33-специфический CAR, указанный выше, который содержит полипептидную последовательность, идентичную по меньшей мере на 80% SEQ ID NO: 48-71, предпочтительно идентичную по меньшей мере на 80% SEQ ID NO: 48, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 54, SEQ ID NO: 56, SEQ ID NO: 58, SEQ ID NO: 66, SEQ ID NO: 68, SEQ ID NO: 70, более предпочтительно идентичную по меньшей мере на 80% SEQ ID NO: 66, SEQ ID NO: 68, SEQ ID NO: 70.
В настоящем изобретении предложен CD33-специфический CAR, указанный выше, который дополнительно содержит другой внеклеточный лигандсвязывающий домен, который не является специфическим в отношении CD33.
Другим объектом настоящего изобретения является полинуклеотид, кодирующий CAR по одному из указанных выше вариантов осуществления изобретения.
Одним из объектов изобретения является экспрессионный вектор, содержащий указанный выше полинуклеотид.
Одним из объектов настоящего изобретения является сконструированная иммунная клетка, экспрессирующая на поверхности клеточной мембраны CD33-специфический CAR по одному из указанных выше вариантов осуществления изобретения.
Настоящее изобретение относится к сконструированной иммунной клетке, указанной выше, полученной из воспалительных T-лимфоцитов, цитотоксических T-лимфоцитов, регуляторных T-лимфоцитов или хелперных T-лимфоцитов.
Настоящее изобретение относится к сконструированной иммунной клетке, указанной выше, в которой подавляется экспрессия TCR.
Настоящее изобретение относится к сконструированной иммунной клетке, указанной выше, в которой подавляется экспрессия CD33.
Настоящее изобретение относится к сконструированной иммунной клетке, указанной выше, где указанная сконструированная иммунная клетка модифицирована для приобретения устойчивости по меньшей мере к одному иммуносупрессорному или химиотерапевтическому лекарственному средству.
Настоящее изобретение относится к сконструированной иммунной клетке, указанной выше, которая предназначена для применения в терапии.
Настоящее изобретение относится к сконструированной иммунной клетке, указанной выше, которая предназначена для применения в терапии, где пациент представляет собой человека.
Настоящее изобретение относится к сконструированной иммунной клетке, указанной выше, которая предназначена для применения в терапии, где состояние представляет собой предзлокачественное или злокачественное связанное с раком состояние, отличающееся наличием экспрессирующих CD33 клеток.
Настоящее изобретение относится к сконструированной иммунной клетке, указанной выше, которая предназначена для применения в терапии, где состояние представляет собой состояние, отличающееся избыточным количеством экспрессирующих CD33 клеток.
Настоящее изобретение относится к сконструированной иммунной клетке, указанной выше, которая предназначена для применения в терапии, где состояние представляет собой состояние, связанное с гематологическим раком.
Настоящее изобретение относится к сконструированной иммунной клетке, указанной выше, которая предназначена для применения в терапии, где состояние, связанное с гематологическим раком, представляет собой лейкоз.
Настоящее изобретение относится к сконструированной иммунной клетке, указанной выше, которая предназначена для применения в терапии, где указанный лейкоз выбран из группы, состоящей из острого миелогенного лейкоза (AML), хронического миелогенного лейкоза, мелодиспластического синдрома, острого лимфоидного лейкоза, хронического лимфоидного лейкоза и миелодиспластического синдрома.
Настоящее изобретение относится к сконструированной иммунной клетке, указанной выше, которая предназначена для применения в терапии, где указанный лейкоз представляет собой острый миелогенный лейкоз (AML).
Настоящее изобретение относится к сконструированной иммунной клетке, указанной выше, которая предназначена для применения в терапии, где указанный гематологический рак представляет собой злокачественное лимфопролиферативное нарушение.
Настоящее изобретение относится к сконструированной иммунной клетке, указанной выше, которая предназначена для применения в терапии, где указанное лимфопролиферативное нарушение представляет собой лимфому.
Настоящее изобретение относится к сконструированной иммунной клетке, указанной выше, которая предназначена для применения в терапии, где указанная лимфома выбрана из группы, состоящей из множественной миеломы, неходжкинской лимфомы, лимфомы Беркитта и фолликулярной лимфомы (мелкоклеточной и крупноклеточной).
Одним из объектов настоящего изобретения является способ нарушения клетки гематологического рака, заключающийся в том, что приводят в контакт указанную клетку гематологического рака со сконструированной иммунной клеткой, указанной выше, в количестве, эффективном для нарушения указанной раковой клетки.
Одним из объектов настоящего изобретения является способ создания иммунной клетки, заключающийся в том, что:
(а) получают иммунную клетку,
(б) осуществляют экспрессию на поверхности указанной клетки по меньшей мере одного CD33-специфического химерного антигенного рецептора, указанного выше.
В настоящем изобретении предложен способ создания описанной выше иммунной клетки, заключающийся в том, что:
(а) получают иммунную клетку,
(б) интродуцируют в указанную клетку по меньшей мере один полинуклеотид, который кодирует указанный CD33-специфический химерный антигенный рецептор, указанный выше,
(в) осуществляют экспрессию указанного полинуклеотида в клетке, необязательно экспрессирующей указанный CD33-специфический химерный антигенный рецептор.
В настоящем изобретении предложен способ создания описанной выше иммунной клетки, дополнительно заключающийся в том, что:
(г) ингибируют экспрессию TRC и/или экспрессию CD33.
В одном из вариантов осуществления изобретения иммунная клетка, полученная на стадии (а) описанного выше способа, представляет собой иммунную клетку, в которой ингибируют экспрессию TRC и/или CD33 на клеточной поверхности, и которая необязательно обладает устойчивостью по меньшей мере к одному лекарственному средству, применяемому для лечения рака, прежде всего AML.
В настоящем изобретении предложен способ создания описанной выше иммунной клетки, дополнительно заключающийся в том, что:
(а) интродуцируют по меньшей мере один другой химерный антигенный рецептор, который не является специфическим в отношении CD33.
В настоящем изобретении предложен также способ лечения индивидуума, который нуждается в этом, заключающийся в том, что:
(а) получают иммунную клетку, экспрессирующую на поверхности CD33-специфический химерный антигенный рецептор по одному из указанных выше пунктов;
(б) вводят указанные иммунные клетки указанному пациенту.
Одним из объектов настоящего изобретения является указанный выше способ, в котором указанную иммунную клетку получают из донора.
В настоящем изобретении предложен способ лечения указанного выше индивидуума, нуждающегося в этом, заключающийся в том, что получают указанную иммунную клетку (подлежащую конструированию согласно изобретению) из организма самого пациента.
CD33-специфические химерные антигенные рецепторы
Настоящее изобретение относится к новым конструкциям анти-CD33 химерного антигенного рецептора (CAR или CD33 CAR или CD33-специфический CAR или анти-CD33 CAR), которые содержат внеклеточный лигандсвязывающий домен, трансмембранный домен и домен трансдукции сигнала.
Более конкретно, настоящее изобретение относится к новому CD33-специфическому CAR, который содержит внеклеточный лигандсвязывающий домен, содержащий VH и VL из моноклонального антитела к CD33, шарнирную область, выбранную из шарнира FcRIIIα, шарнира CD8α и шарнира IgG1, трансмембранный домен CD8α и цитоплазматический домен, включающий сигнальный домен CD3дзета и костимуляторный домен из 4-1ВВ.
Понятие «внеклеточный лигандсвязывающий домен» в контексте настоящего описания обозначает олиго- или полипептид, обладающий способностью связываться с лигандом. Предпочтительно домен должен обладать способностью взаимодействовать с молекулой клеточной поверхности. Например, можно выбирать внеклеточный лигандсвязывающий домен, позволяющий распознавать лиганд, который функционирует в качестве маркера клеточной поверхности на клетках-мишенях, ассоциированных с конкретным болезненным состоянием. В предпочтительном варианте осуществления изобретения указанный внеклеточный лигандсвязывающий домен содержит одноцепочечный фрагмент антитела (scFv), содержащий вариабельный фрагмент легкой (V L ) и тяжелой (V H ) цепи специфического в отношении антигена-мишени моноклонального антитела к CD33, соединенные гибким линкером. Указанные VL и VH выбирают из антител, обозначенных как М195, m2H12, DRB2 и Му9-6 в таблице 2.
В еще более предпочтительном варианте осуществления изобретения указанные VL и VH содержат SEQ ID NO: 17 и 18, необязательно гуманизированные.
Они предпочтительно соединены друг с другом с помощью гибкого линкера, содержащего, например, последовательность SEQ ID NO: 10. Другими словами, указанные CAR предпочтительно содержат внеклеточный лигандсвязывающий домен, который содержит полипептидную последовательность, идентичную по меньшей мере на 90%, 95%, 97% или 99% аминокислотной последовательности, выбранной из группы, которая состоит из SEQ ID NO: 11 - SEQ ID NO: 18.
В одном из вариантов осуществления изобретения указанный CAR, предлагаемый в изобретении, предпочтительно содержит внеклеточный лигандсвязывающий домен, который содержит полипептид, имеющий SEQ ID NO: 11 и SEQ ID NO: 12.
В одном из вариантов осуществления изобретения указанный CAR, предлагаемый в изобретении, предпочтительно содержит внеклеточный лигандсвязывающий домен, который содержит полипептид, имеющий SEQ ID NO: 13 и SEQ ID NO: 14.
В одном из вариантов осуществления изобретения указанный CAR, предлагаемый в изобретении, предпочтительно содержит внеклеточный лигандсвязывающий домен, который содержит полипептид, имеющий SEQ ID NO: 15 и SEQ ID NO: 16.
В одном из вариантов осуществления изобретения указанный CAR, предлагаемый в изобретении, предпочтительно содержит внеклеточный лигандсвязывающий домен, который содержит полипептид, имеющий SEQ ID NO: 17 и SEQ ID NO: 18.
В контексте настоящего описания понятие «рекомбинантное антитело» означает антитело или фрагмент антитела, созданное/созданный с помощью технологии рекомбинантной ДНК, такое, например, как антитело или фрагмент антитела, экспрессируемое/экспрессируемый бактериофагом, системой экспрессии дрожжей или системой экспрессии клеток млекопитающих. Подразумевается также, что понятие относится к антителу или фрагменту антитела, созданному с помощью синтеза молекулы ДНК, которая кодирует антитело или фрагмент антитела, и эта молекула ДНК экспрессирует белок антитела или фрагмента антитела или аминокислотную последовательность, специфическую для антитела или фрагмента антитела, при этом ДНК или аминокислотную последовательность получали с использованием технологии получения рекомбинантной или синтетической ДНК, или аминокислотной последовательности, которая доступна и хорошо известна в данной области.
В контексте настоящего описания подразумевается, что понятие «консервативные модификации последовательности» или «гуманизация» относится к модификациям аминокислот, которые существенно не влияют или не изменяют характеристики связывания CAR (по сравнению с характеристиками CAR, сконструированного с использованием исходного антитела к CD33) и/или которые не оказывают существенного влияния на активность CAR, содержащего модифицированную аминокислотную последовательность, и снижают или аннулируют ответ в виде человеческого антимышиного антитела (НАМА). Указанные консервативные модификации включают аминокислотные замены, добавления и делеции в указанном фрагменте антитела в указанном CAR и/или в любых других частях указанной молекулы CAR. Модификации можно интродуцировать в антитело, во фрагмент антитела или в любую из других частей молекулы CAR, предлагаемой в изобретении, с помощью стандартных технологий, известных в данной области, таких как сайтнаправленный мутагенез, опосредуемый ПЦР мутагенез, или путем применения оптимизированных последовательностей зародышевых линий. Таким образом, в настоящем изобретении предложен (гуманизированный) CD33 CAR, в котором последовательность VH идентична по меньшей мере на 80% SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 15 или SEQ ID NO: 17, а последовательность VL идентична по меньшей мере на 80% SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 16 или SEQ ID NO: 18.
В одном из вариантов осуществления изобретения указанный CAR, предлагаемый в изобретении, предпочтительно содержит внеклеточный лигандсвязывающий домен, который содержит полипептидную последовательность, идентичную по меньшей мере на 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 11 и SEQ ID NO: 12.
В одном из вариантов осуществления изобретения указанный CAR, предлагаемый в изобретении, предпочтительно содержит внеклеточный лигандсвязывающий домен, который содержит полипептидную последовательность, идентичную по меньшей мере на 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 13 и SEQ ID NO: 14.
В одном из вариантов осуществления изобретения указанный CAR, предлагаемый в изобретении, предпочтительно содержит внеклеточный лигандсвязывающий домен, который содержит полипептидную последовательность, идентичную по меньшей мере на 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 15 и SEQ ID NO: 16.
В одном из вариантов осуществления изобретения указанный CAR, предлагаемый в изобретении, предпочтительно содержит внеклеточный лигандсвязывающий домен, который содержит полипептидную последовательность, идентичную по меньшей мере на 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 17 и SEQ ID NO: 18.
Консервативные аминокислотные замены представляют собой замены, при которых аминокислотный остаток заменяют на аминокислотный остаток, который имеет сходную боковую цепь. Семейства аминокислотных остатков, имеющих сходные боковые цепи, известны в данной области. Эти семейства включают аминокислоты с боковыми цепями (например, лизин, аргинин, гистидин), кислотными боковыми цепями (например, аспарагиновая кислота, глутаминовая кислота), незаряженными полярными боковыми цепями (например, глицин, аспарагин, глутамин, серии, треонин, тирозин, цистеин, триптофан), неполярными боковыми цепями (например, аланин, валин, лейцин, изолейцин, пролин, фениланин, метионин), бета-разветвленными боковыми цепями (например, треонин, валин, изолейцин) и ароматическими боковыми цепями (например, тирозин, фенилаланин, триптофан, гистидин). Таким образом, один или несколько аминокислотных остатков в CAR, предлагаемом в изобретении, можно заменять на другие аминокислотные остатки из того же семейства боковых цепей и измененный CAR можно тестировать в отношении способности связывать CD33, используя функциональные анализы, представленные в настоящем описании.
Домен трансдукции сигнала или внутриклеточный сигнальный домен CAR, предлагаемого в настоящем изобретении, ответствен за внутриклеточную передачу сигнала после связывания внеклеточного лигандсвязывающего домена с мишенью, приводя к активации иммунной клетки и иммунному ответу. Другими словами, домен трансдукции сигнала ответствен за активацию по меньшей мере одной из обычных эффекторных функций иммунной клетки, в которой экспрессируется CAR. Например, эффекторная функция T-клетки может представлять собой цитолитическую активность или хелперную активность, включая секрецию цитокинов. Таким образом, понятие «домен трансдукции сигнала» относится к участку белка, который трансдуцирует сигнал эффекторной сигнальной функции и побуждает клетку осуществлять специализированную функцию.
Предпочтительными примерами домена трансдукции сигнала, которые можно применять в CAR, могут являться цитоплазматические последовательности T-клеточного рецептора и корецепторов, совместное действие которых состоит в инициации трансдукции сигнала после контакта с рецептором антигена, а также любое производное или любой вариант указанных последовательностей и любой синтетической последовательности, которая имеет такую же функциональную способность. Домен трансдукции сигнала содержит два различных класса цитоплазматических сигнальных последовательностей, те, которые инициируют антигензависимую первичную активацию, и те, которые действуют независимым от антигена образом, обеспечивая вторичный или костимуляторный сигнал. Первичная цитоплазматическая сигнальная последовательность может содержать сигнальные мотивы, известные как мотивы активации иммунных рецепторов на основе тирозина, ITAM. ITAM представляют собой хорошо известные сигнальные мотивы, присутствующие во внутрицитоплазматическом «хвосте» различных рецепторов, которые служат в качестве сайтов связывания для класса syk/zap70 тирозинкиназ. Примерами ITAM, применяемых согласно изобретению, могут служить (но, не ограничиваясь только ими) ITAM, происходящие из TCRдзета, FcRгамма, FcRбета, FcRэпсилон, CD3гамма, CD3дельта, CD3эпсилон, CD5, CD22, CD79a, CD79b и CD66d. В предпочтительном варианте осуществления изобретения домен трансдукции сигнала CAR может содержать происходящий из CD3дзета сигнальный домен, который имеет аминокислотную последовательность, идентичную по меньшей мере на 70%, предпочтительно по меньшей мере на 80%, более предпочтительно по меньшей мере на 90%, 95%, 97%-99% или 100% аминокислотной последовательности, выбранной из группы, включающей SEQ ID NO: 9.
В конкретном варианте осуществления изобретения домен трансдукции сигнала CAR, предлагаемого в настоящем изобретении, содержит костимуляторную сигнальную молекулу. Костимуляторная молекула представляет собой молекулу клеточной поверхности, отличную от антигенного рецептора или его лигандов, которая требуется для эффективного иммунного ответа. Понятие «костимуляторный лиганд» относится к молекуле на антигенпрезентирующей клетке, которая специфически связывается с когнатной костимуляторной молекулой на T-клетке, создавая тем самым сигнал, который, в дополнение к первичному сигналу, создаваемому, например, при связывании комплекса TCR/CD3 с молекулой ГКГС, загруженной пептидом, опосредует T-клеточный ответ, включая (но, не ограничиваясь только ими) активацию пролиферации, дифференцировку и т.п. Костимуляторный лиганд может включать (но, не ограничиваясь только ими) CD7, В7-1 (CD80), В7-2 (CD86), PD-L1, PD-L2, 4-1BBL, OX40L, индуцибельный костимуляторный лиганд (ICOS-L), молекулу межклеточной адгезии (ICAM, CD30L, CD40, CD70, CD83, HLA-G, MICA, М1СВ, HVEM, рецептор лимфотоксина бета, 3/TR6, ILT3, ILT4, агонист или антитело, который/которое связывается с лигандом Толл-рецептора, и лиганд, который специфически связывается с В7-Н3. Под понятие «костимуляторный лиганд» подпадает, среди прочего, антитело, которое специфически связывается с костимуляторной молекулой, присутствующей на T-клетке, такой как (но, не ограничиваясь только ими) CD27, CD28, 4-1ВВ, ОХ40, CD30, CD40, PD-1, ICOS, антиген-1, ассоциированный с функцией лимфоцитов (LFA-1), CD2, CD7, LTGHT, NKG2C, В7-Н3, лиганд, специфически связывающийся с CD83. Понятие «костимуляторная молекула» относится к когнатному связывающему партнеру, присутствующему на T-клетке, который специфически связывается с костимуляторным лигандом, опосредуя тем самым костимуляторный ответ клетки, такой как (но, не ограничиваясь только им) пролиферация. Костимуляторные молекулы включают (но, не ограничиваясь только ими) молекулу ГКГС класса I, BTLA и лиганд Толл-рецептора. Примерами костимуляторных молекул являются CD27, CD28, CD8, 4-1ВВ (CD137), ОХ40, CD30, CD40, PD-1, ICOS, антиген-1, ассоциированный с функцией лимфоцитов (LFA-1), CD2, CD7, LIGHT, NKG2C, В7-Н3 и лиганд, специфически связывающийся с CD83, и т.п.
В предпочтительном варианте осуществления изобретения домен трансдукции сигнала CAR, предлагаемого в настоящем изобретении, содержит часть костимуляторной сигнальной молекулы, выбранной из группы, состоящей из фрагмента 4-1ВВ (GenBank: ААА53133.) и CD28 (NP_006130.1). В частности, домен трансдукции сигнала CAR, предлагаемого в настоящем изобретении, содержит аминокислотную последовательность, идентичную по меньшей мере на 70%, предпочтительно по меньшей мере на 80%, более предпочтительно по меньшей мере на 90%, 95%, 97%, 99% или 100% аминокислотной последовательности, выбранной из группы, включающей SEQ ID NO: 8.
CAR, предлагаемый в настоящем изобретении, экспрессируется на поверхности клеточной мембраны. Таким образом, CAR содержит также трансмембранный домен. Отличительными особенностями соответствующих трансмембранных доменов являются способность экспрессироваться на поверхности клетки, согласно настоящему изобретению предпочтительно на поверхности иммунной клетки, прежде всего лимфоцитов или естественных клеток-киллеров (NK), и взаимодействовать друг с другом, направляя клеточный ответ иммунной клетки на заранее определенную клетку-мишень. Трансмембранный домен можно получать как из встречающегося в естественных условиях, так и синтетического источника. Трансмембранный домен можно получать из любого связанного с мембраной или трансмембранного белка. Примерами трансмембранных полипептидов могут служить (но, не ограничиваясь только ими) субъединица T-клеточного рецептора, такая как α-, β-, γ- или δ-субъединица, полипептид, образующий комплекс с CD3, р55 (α-цепь), р75 (β-цепь) или γ-цепь рецептора IL2, цепь субъединицы Fc-рецепторов, в частности, Fcγ-рецептора III, или CD-белки. Альтернативно этому, трансмембранный домен может быть синтетическим, и он может содержать преимущественно гидрофобные остатки, такие как лейцин и валин. В предпочтительном варианте осуществления изобретения указанный трансмембранный домен получают из альфа-цепи человеческого CD8 (например, NP_001139345.1). Трансмембранный домен может содержать также шарнирную область между указанным внеклеточным лигандсвязывающим доменом и указанным трансмембранным доменом. В контексте настоящего описания понятие «шарнирная область», как правило, обозначает любой олиго- или полипептид, функция которого заключается в сцеплении трансмембранного домена с внеклеточным лигандсвязывающим доменом. В частности, шарнирную область используют для обеспечения большей гибкости и доступности внеклеточного лигандсвязывающего домена. Шарнирная область может содержать вплоть до 300 аминокислот, предпочтительно от 10 до 100 аминокислот, и наиболее предпочтительно от 25 до 50 аминокислот. Шарнирную область можно получать из полных встречающихся в естественных условиях молекул, или их частей, таких как полная внеклеточная область CD8, CD4 или CD28, или ее часть, или полная константная область антитела или ее часть. Альтернативно этому, шарнирная область может представлять собой синтетическую последовательность, которая соответствует встречающейся в естественных условиях шарнирной последовательности, или может представлять собой полностью синтетическую шарнирную последовательность. В предпочтительном варианте осуществления изобретения указанная шарнирная область представляет собой часть альфа-цепи человеческого CD8, FcγRIIIα-рецептора или IgG1 соответственно, которые обозначены в настоящем описании как SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4 и SEQ ID NO: 5, или шарнирные полипептиды, последовательности которых идентичны предпочтительно по меньшей мере на 80%, более предпочтительно по меньшей мере на 90%, 95%, 97%, 99% или 100% последовательностям указанных полипептидов.
CAR, предлагаемый в изобретении, как правило, дополнительно содержит трансмембранный домен (ТМ), более конкретно выбранный из CD8α и 4-1ВВ, который идентичен полипептидам, имеющим SEQ ID NO: 6 или 7.
CAR, предлагаемый в изобретении, как правило, содержит трансмембранный домен (ТМ) из CD8α, идентичный на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% полипептиду, имеющему SEQ ID NO: 6. В предпочтительном варианте осуществления изобретения CAR, предлагаемый в изобретении, как правило, содержит трансмембранный домен (ТМ) из CD8α, идентичный на 100% полипептиду, имеющему SEQ ID NO: 6.
В раковых клетках часто имеет место понижающая регуляция или мутация антигенов-мишеней, что приводит к появлению так называемых вариантов «потерянных антигенов» (антигенов, ускользающих от иммунологического надзора). Таким образом, для того, чтобы противостоять ускользанию опухоли от иммунологического надзора и придавать иммунной клетке большую специфичность в отношении мишени, CD33-специфический CAR, предлагаемый в изобретении, может содержать другие внеклеточные лигандсвязывающие домены, предназначенные для одновременного связывания с другими элементами на мишени и усиления тем самым активации и функции иммунной клетки. В одном из вариантов осуществления изобретения внеклеточные лигандсвязывающие домены можно размещать тандемно на одном и том же трансмембранном полипептиде и их необязательно можно отделять друг от друга с помощью линкера. В другом варианте осуществления изобретения указанные другие внеклеточные лигандсвязывающие домены можно размещать на различных трансмембранных полипептидах, из которых состоит CAR. Другой вариант осуществления настоящего изобретения относится к популяции CAR, каждый из которых содержит различные внеклеточные лигандсвязывающие домены. В частности, настоящее изобретение относится к способу создания иммунных клеток, заключающемуся в том, что получают иммунную клетку и экспрессируют на поверхности указанной клетки популяцию CAR, каждый из которых содержит различные внеклеточные лигандсвязывающие домены. Другой конкретный вариант осуществления настоящего изобретения относится к способу создания иммунной клетки, заключающемуся в том, что получают иммунную клетку и интродуцируют в указанную клетку полинуклеотиды, кодирующие полипептиды, из которых состоит популяция CAR, каждый из которых содержит различные внеклеточные лигандсвязывающие домены. Под популяцией CAR подразумевают по меньшей мере два, три, четыре, пять, шесть или большее количество CAR, каждый из которых содержит различные внеклеточные лигандсвязывающие домены. Согласно настоящему изобретению различные внеклеточные лигандсвязывающие домены, предлагаемые в настоящем изобретении, предпочтительно могут связываться одновременно с различными элементами на мишени, усиливая тем самым активацию и функцию иммунной клетки. Настоящее изобретение относится также к выделенной иммунной клетке, которая содержит популяцию CAR, каждый из которых содержит различные внеклеточные лигандсвязывающие домены.
В настоящем изобретении предложен CD33-специфический CAR, который имеет одну из полипептидных структур, выбранную из V1-V6, которые проиллюстрированы на фиг. 2, где структура содержит внеклеточный лигандсвязывающий домен, который содержит VH и VL из моноклонального антитела к CD33, шарнирную область, выбранную из шарнира FcRIIIα, шарнира CD8α и шарнира IgG1, трансмембранный домен CD8α и цитоплазматический домен, включающий сигнальный домен CD3дзета и костимуляторный домен из 4-1ВВ.
В настоящем изобретении предложен CD33-специфический CAR, который имеет одну из полипептидных структур, выбранную из V1, V3 и V5, которые проиллюстрированы на фиг. 2, где структура содержит внеклеточный лигандсвязывающий домен, который содержит VH и VL из моноклонального антитела к CD33, шарнирную область, выбранную из шарнира FcRIIIα и шарнира CD8альфа (α), трансмембранный домен CD8α и цитоплазматический домен, включающий сигнальный домен CD3дзета и костимуляторный домен из 4-1ВВ.
В настоящем изобретении предложен CD33 CAR, который содержит полипептидную последовательность, выбранную из группы, которая состоит из SEQ ID NO: 48, SEQ ID NO: 49, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 51, SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 53, SEQ ID NO: 54, SEQ ID NO: 55, SEQ ID NO: 56, SEQ ID NO: 57, SEQ ID NO: 58, SEQ ID NO: 59; SEQ ID NO: 60, SEQ ID NO: 61, SEQ ID NO: 62, SEQ ID NO: 63, SEQ ID NO: 64, SEQ ID NO: 65? SEQ ID NO: 66, SEQ ID NO: 67, SEQ ID NO: 68, SEQ ID NO: 69, SEQ ID NO: 70, SEQ ID NO: 71, предпочтительно указанный CAR содержит полипептидную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 48, SEQ ID NO: 49, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 51, SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 53, SEQ ID NO: 54, SEQ ID NO: 55, SEQ ID NO: 56, SEQ ID NO: 57, SEQ ID NO: 58, SEQ ID NO: 59; SEQ ID NO: 66, SEQ ID NO: 67, SEQ ID NO: 68, SEQ ID NO: 69, SEQ ID NO: 70, SEQ ID NO: 71, и наиболее предпочтительно указанный CAR предпочтительно содержит полипептидную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 66, SEQ ID NO: 67, SEQ ID NO: 68, SEQ ID NO: 69, SEQ ID NO: 70, SEQ ID NO: 71, и еще более предпочтительно указанный CAR предпочтительно содержит полипептид, имеющий SEQ ID NO: 68.
В настоящем изобретении предложен также:
- CD33-специфический химерный антигенный рецептор (CAR), который содержит полипептидную последовательность, идентичную по меньшей мере на 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 48, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 54, SEQ ID NO: 56, SEQ ID NO: 58, SEQ ID NO: 60, SEQ ID NO: 62, SEQ ID NO: 64, SEQ ID NO: 66, SEQ ID NO: 68, SEQ ID NO: 70,
более предпочтительно CAR, который содержит полипептидную последовательность, идентичную по меньшей мере на 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 48, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 54, SEQ ID NO: 56, SEQ ID NO: 58, SEQ ID NO: 66, SEQ ID NO: 68, SEQ ID NO: 70,
еще более предпочтительно CAR, которые содержат полипептидную последовательность, идентичную по меньшей мере на 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 66, SEQ ID NO: 68, SEQ ID NO: 70.
Предпочтительно в настоящем изобретении предложен CD33-специфический CAR, который имеет структуру V1, которая проиллюстрирована на фиг. 2, где указанная структура содержит внеклеточный лигандсвязывающий домен, который содержит VH и VL из моноклонального антитела к CD33, шарнирную область FcRIIIα, трансмембранный домен CD8α и цитоплазматический домен, включающий сигнальный домен CD3дзета и костимуляторный домен из 4-1ВВ.
Предпочтительно в настоящем изобретении предложен CD33-специфический CAR, имеющий структуру V1, которая проиллюстрирована на фиг. 2, где указанная структура содержит внеклеточный лигандсвязывающий домен, который содержит VH и VL из моноклонального антитела к CD33, которое выбрано из М195, m2h12 и Му9.6, необязательно гуманизированного, шарнирную область FcRIIIα, трансмембранный домен CD8α и цитоплазматический домен, включающий сигнальный домен CD3дзета и костимуляторный домен из 4-1ВВ.
Более предпочтительно, в настоящем изобретении предложен CD33-специфический химерный антигенный рецептор (CAR), имеющий структуру V1, которая проиллюстрирована на фиг. 2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 48, SEQ ID NO: 54, SEQ ID NO: 60 и SEQ ID NO: 66, более предпочтительно указанный CAR предпочтительно содержит полипептидную последовательность, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 48, SEQ ID NO: 54 и SEQ ID NO: 66.
Предпочтительно в настоящем изобретении предложен CD33-специфический химерный антигенный рецептор (CAR), имеющий структуру V3, которая проиллюстрирована на фиг. 2, где указанная структура содержит внеклеточный лигандсвязывающий домен, который содержит VH и VL из моноклонального антитела к CD33, шарнир CD8α, трансмембранный домен CD8α и цитоплазматический домен, включающий сигнальный домен CD3дзета и костимуляторный домен из 4-1ВВ.
Предпочтительно в настоящем изобретении предложен CD33-специфический CAR, имеющий структуру V3, которая проиллюстрирована на фиг. 2, где указанная структура содержит внеклеточный лигандсвязывающий домен, который содержит VH и VL из моноклонального антитела к CD33, которое выбрано из М195, m2h12, DRB2 и Му9.6, необязательно гуманизированного, шарнир FcRIIIα, трансмембранный домен CD8α и цитоплазматический домен, включающий сигнальный домен CD3дзета и костимуляторный домен из 4-1ВВ.
Более предпочтительно, в настоящем изобретении предложен CD33-специфический CAR, имеющий структуру V3, которая проиллюстрирована на фиг. 2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 56, SEQ ID NO: 62 и SEQ ID NO: 68, более предпочтительно указанный CAR предпочтительно содержит полипептидную последовательность, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 56 и SEQ ID NO: 68.
Предпочтительно в настоящем изобретении предложен CD33-специфический CAR, имеющий структуру V5, которая проиллюстрирована на фиг. 2, где указанная структура содержит внеклеточный лигандсвязывающий домен, который содержит VH и VL из моноклонального антитела к CD33, шарнир IgG1, трансмембранный домен CD8α и цитоплазматический домен, включающий сигнальный домен CD3дзета и костимуляторный домен из 4-1ВВ.
Предпочтительно в настоящем изобретении предложен CD33-специфический CAR, имеющий структуру V5, которая проиллюстрирована на фиг. 2, где указанная структура содержит внеклеточный лигандсвязывающий домен, который содержит VH и VL из моноклонального антитела к CD33, которое выбрано из M195, m2h12, DRB2 и Му9.6, необязательно гуманизированного, шарнир FcRIIIα, трансмембранный домен CD8α и цитоплазматический домен, включающий сигнальный домен CD3дзета и костимуляторный домен из 4-1ВВ.
Более предпочтительно, в настоящем изобретении предложен CD33-специфический CAR, имеющий структуру V5, которая проиллюстрирована на фиг. 2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 58, SEQ ID NO: 64 и SEQ ID NO: 70, более предпочтительно указанный CAR предпочтительно содержит полипептидную последовательность, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 58 и SEQ ID NO: 70.
Одним из вариантов осуществления настоящего изобретения является CD33-специфический химерный антигенсвязывающий рецептор, который содержит:
- необязательный сигнальный пептид, имеющий аминокислотную последовательность, последовательность которой по меньшей мере на 80%, более предпочтительно по меньшей мере на 90%, 95%, 97% или 99% идентична полипептиду, имеющему SEQ ID NO: 1 или 2. Предпочтительно необязательный сигнальный пептид имеет аминокислотную последовательность, последовательность которой по меньшей мере на 80%, более предпочтительно по меньшей мере на 90%, 95%, 97% или 99% идентична полипептиду, имеющему SEQ ID NO: 1. Предпочтительно сигнальный пептид присутствует;
- VH-домен, отделенный от VL-домена линкером, указанные VH и VL принимают участие в связывании с CD33;
- шарнир, происходящий из Fcгамма (γ) RIIIальфа (α), имеющий аминокислотную последовательность, последовательность которой по меньшей мере на 80%, более предпочтительно по меньшей мере на 90%, 95%, 97% или 99% идентична полипептиду, имеющему SEQ ID NO: 3;
- трансмембранный домен, происходящий из CD8альфа (α), имеющий аминокислотную последовательность, последовательность которой по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична полипептиду, имеющему SEQ ID NO: 6;
- костимуляторную сигнальную молекулу, происходящую из 4-1ВВ, имеющую аминокислотную последовательность, последовательность которой по меньшей мере на 70%, предпочтительно по меньшей мере на 80%, более предпочтительно по меньшей мере на 90%, 95%, 97%, 99% или 100% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, включающей SEQ ID NO: 8;
- внутриклеточный сигнальный домен, содержащий сигнальный домен CD3дзета, имеющий аминокислотную последовательность, последовательность которой по меньшей мере на 70%, предпочтительно по меньшей мере на 80%, более предпочтительно по меньшей мере на 90%, 95%, 97%, 99% или 100% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, включающей SEQ ID NO: 9.
Одним из вариантов осуществления настоящего изобретения является CD33-специфический химерный антигенсвязывающий рецептор, который содержит:
- необязательный сигнальный пептид, имеющий аминокислотную последовательность, последовательность которой по меньшей мере на 80%, более предпочтительно по меньшей мере на 90%, 95%, 97% или 99% идентична полипептиду, имеющему SEQ ID NO: 1 или 2. Предпочтительно необязательный сигнальный пептид имеет аминокислотную последовательность, последовательность которой по меньшей мере на 80%, более предпочтительно по меньшей мере на 90%, 95%, 97% или 99% идентична полипептиду, имеющему SEQ ID NO: 1. Предпочтительно сигнальный пептид присутствует;
- VH-домен, отделенный от VL-домена линкером, указанные VH и VL принимают участие в связывании с CD33;
- шарнир, происходящий из Fсгамма (γ) RIIIальфа (α), имеющий аминокислотную последовательность, последовательность которой по меньшей мере на 80%, более предпочтительно по меньшей мере на 90%, 95%, 97% или 99% идентична полипептиду, имеющему SEQ ID NO: 3;
- трансмембранный домен (ТМ), происходящий из 4-1ВВ, имеющий аминокислотную последовательность, последовательность которой по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична полипептиду, имеющему SEQ ID NO: 7;
- костимуляторную сигнальную молекулу, происходящую из 4-1ВВ, имеющую аминокислотную последовательность, последовательность которой по меньшей мере на 70%, предпочтительно по меньшей мере на 80%, более предпочтительно по меньшей мере на 90%, 95%, 97%, 99% или 100% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, включающей SEQ ID NO: 8;
- внутриклеточный сигнальный домен, содержащий сигнальный домен CD3дзета, имеющий аминокислотную последовательность, последовательность которой по меньшей мере на 70%, предпочтительно по меньшей мере на 80%, более предпочтительно по меньшей мере на 90%, 95%, 97%, 99% или 100% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, включающей SEQ ID NO: 9.
Одним из вариантов осуществления настоящего изобретения является CD33-специфический химерный антигенсвязывающий рецептор, который содержит:
- необязательный сигнальный пептид, имеющий аминокислотную последовательность, последовательность которой по меньшей мере на 80%, более предпочтительно по меньшей мере на 90%, 95%, 97% или 99% идентична полипептиду, имеющему SEQ ID NO: 1 или 2. Предпочтительно необязательный сигнальный пептид имеет аминокислотную последовательность, последовательность которой по меньшей мере на 80%, более предпочтительно по меньшей мере на 90%, 95%, 97% или 99% идентична полипептиду, имеющему SEQ ID NO: 1. Предпочтительно сигнальный пептид присутствует;
- VH-домен, отделенный от VL-домена линкером, указанные VH и VL принимают участие в связывании с CD33;
- шарнир, происходящий из альфа-цепи CD8, имеющий аминокислотную последовательность, последовательность которой по меньшей мере на 80%, более предпочтительно по меньшей мере на 90%, 95%, 97% или 99% идентична полипептиду, имеющему SEQ ID NO: 4;
- трансмембранный домен, происходящий из CD8альфа (α), имеющий аминокислотную последовательность, последовательность которой по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична полипептиду, имеющему SEQ ID NO: 6;
- костимуляторную сигнальную молекулу, происходящую из 4-1ВВ, имеющую аминокислотную последовательность, последовательность которой по меньшей мере на 70%, предпочтительно по меньшей мере на 80%, более предпочтительно по меньшей мере на 90%, 95%, 97%, 99% или 100% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, включающей SEQ ID NO: 8;
- внутриклеточный сигнальный домен, содержащий сигнальный домен CD3дзета, имеющий аминокислотную последовательность, последовательность которой по меньшей мере на 70%, предпочтительно по меньшей мере на 80%, более предпочтительно по меньшей мере на 90%, 95%, 97%, 99% или 100% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, включающей SEQ ID NO: 9.
Одним из вариантов осуществления настоящего изобретения является CD33-специфический химерный антигенсвязывающий рецептор, который содержит:
- необязательный сигнальный пептид, имеющий аминокислотную последовательность, последовательность которой по меньшей мере на 80%, более предпочтительно по меньшей мере на 90%, 95%, 97% или 99% идентична полипептиду, имеющему SEQ ID NO: 1 или 2. Предпочтительно необязательный сигнальный пептид имеет аминокислотную последовательность, последовательность которой по меньшей мере на 80%, более предпочтительно по меньшей мере на 90%, 95%, 97% или 99% идентична полипептиду, имеющему SEQ ID NO: 1. Предпочтительно сигнальный пептид присутствует;
- VH-домен, отделенный от VL-домена линкером, указанные VH и VL принимают участие в связывании с CD33;
- шарнир, происходящий из альфа-цепи CD8, имеющий аминокислотную последовательность, последовательность которой по меньшей мере на 80%, более предпочтительно по меньшей мере на 90%, 95%, 97% или 99% идентична полипептиду, имеющему SEQ ID NO: 4;
- трансмембранный домен (ТМ), происходящий из 4-1ВВ, имеющий аминокислотную последовательность, последовательность которой по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична полипептиду, имеющему SEQ ID NO: 7;
- костимуляторную сигнальную молекулу, происходящую из 4-1ВВ, имеющую аминокислотную последовательность, последовательность которой по меньшей мере на 70%, предпочтительно по меньшей мере на 80%, более предпочтительно по меньшей мере на 90%, 95%, 97%, 99% или 100% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, включающей SEQ ID NO: 8;
- внутриклеточный сигнальный домен, содержащий сигнальный домен CD3дзета, имеющий аминокислотную последовательность, последовательность которой по меньшей мере на 70%, предпочтительно по меньшей мере на 80%, более предпочтительно по меньшей мере на 90%, 95%, 97%, 99% или 100% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, включающей SEQ ID NO: 9.
Одним из вариантов осуществления настоящего изобретения является CD33-специфический химерный антигенсвязывающий рецептор, который содержит:
- необязательный сигнальный пептид, имеющий аминокислотную последовательность, последовательность которой по меньшей мере на 80%, более предпочтительно по меньшей мере на 90%, 95%, 97% или 99% идентична полипептиду, имеющему SEQ ID NO: 1 или 2. Предпочтительно необязательный сигнальный пептид имеет аминокислотную последовательность, последовательность которой по меньшей мере на 80%, более предпочтительно по меньшей мере на 90%, 95%, 97% или 99% идентична полипептиду, имеющему SEQ ID NO: 1. Предпочтительно сигнальный пептид присутствует;
- VH-домен, отделенный от VL-домена линкером, указанные VH и VL принимают участие в связывании с CD33;
- шарнир, происходящий из IgG1, имеющий аминокислотную последовательность, последовательность которой по меньшей мере на 80%, более предпочтительно по меньшей мере на 90%, 95%, 97% или 99% идентична полипептиду, имеющему SEQ ID NO: 5;
- трансмембранный домен, происходящий из CD8альфа (α), имеющий аминокислотную последовательность, последовательность которой по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична полипептиду, имеющему SEQ ID NO: 6;
- костимуляторную сигнальную молекулу, происходящую из 4-1ВВ, имеющую аминокислотную последовательность, последовательность которой по меньшей мере на 70%, предпочтительно по меньшей мере на 80%, более предпочтительно по меньшей мере на 90%, 95%, 97%, 99% или 100% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, включающей SEQ ID NO: 8;
- внутриклеточный сигнальный домен, содержащий сигнальный домен CD3дзета, имеющий аминокислотную последовательность, последовательность которой по меньшей мере на 70%, предпочтительно по меньшей мере на 80%, более предпочтительно по меньшей мере на 90%, 95%, 97%, 99% или 100% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, включающей SEQ ID NO: 9.
Одним из вариантов осуществления настоящего изобретения является CD33-специфический химерный антигенсвязывающий рецептор, который содержит:
- необязательный сигнальный пептид, имеющий аминокислотную последовательность, последовательность которой по меньшей мере на 80%, более предпочтительно по меньшей мере на 90%, 95%, 97% или 99% идентична полипептиду, имеющему SEQ ID NO: 1 или 2. Предпочтительно необязательный сигнальный пептид имеет аминокислотную последовательность, последовательность которой по меньшей мере на 80%, более предпочтительно по меньшей мере на 90%, 95%, 97% или 99% идентична полипептиду, имеющему SEQ ID NO: 1. Предпочтительно сигнальный пептид присутствует;
- VH-домен, отделенный от VL-домена линкером, указанные VH и VL принимают участие в связывании с CD33;
- шарнир, происходящий из IgG1, имеющий аминокислотную последовательность, последовательность которой по меньшей мере на 80%, более предпочтительно по меньшей мере на 90%, 95%, 97% или 99% идентична полипептиду, имеющему SEQ ID NO: 5;
- трансмембранный домен (ТМ), происходящий из 4-1ВВ, имеющий аминокислотную последовательность, последовательность которой по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична полипептиду, имеющему SEQ ID NO: 7;
- костимуляторную сигнальную молекулу, происходящую из 4-1ВВ, имеющую аминокислотную последовательность, последовательность которой по меньшей мере на 70%, предпочтительно по меньшей мере на 80%, более предпочтительно по меньшей мере на 90%, 95%, 97%, 99% или 100% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, включающей SEQ ID NO: 8;
- внутриклеточный сигнальный домен, содержащий сигнальный домен CD3дзета, имеющий аминокислотную последовательность, последовательность которой по меньшей мере на 70%, предпочтительно по меньшей мере на 80%, более предпочтительно по меньшей мере на 90%, 95%, 97%, 99% или 100% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, включающей SEQ ID NO: 9.
Одним из вариантов осуществления настоящего изобретения является по меньшей мере один из следующих CD33-специфических CAR, который имеет указанные ниже последовательности - или 80% указанных ниже последовательностей:
М195-1
М195-2
М195-3
М195-4
М195-5
М195-6
m2H12-l
m2H12-2
m2H12-3
m2H12-4
m2H12-5
m2H12-6
DRB2-1
DRB2-2
DRB2-3
DRB2-4
DRB2-5
DRB2-6
My9.6-1
My9.6-2
My9.6-3
My9.6-4
My9.6-5
My9.6-6
Одним из вариантов осуществления настоящего изобретения являются первичные T-клетки, наделенные (снабженные) по меньшей мере одним из указанных CD33-специфических CAR.
Предпочтительным вариантом осуществления настоящего изобретения является CD33-специфический химерный антигенный рецептор (CAR), последовательность которого по меньшей мере на 80% соответствует последовательности, выбранной из: SEQ ID NO: 48-71, более предпочтительно по меньшей мере на 80% соответствует SEQ ID NO: 68,
и еще более предпочтительно указанные CAR предпочтительно содержат полипептидную последовательность, которая по меньшей мере на 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентична аминокислотным последовательностям, включающим SEQ ID NO: 68.
Согласно этому варианту осуществления изобретения указанный CAR предпочтительно содержит полипептидную последовательность, которая на 81% идентична аминокислотным последовательностям, включающим SEQ ID NO: 68,
указанный CAR предпочтительно содержит полипептидную последовательность, которая на 82% идентична аминокислотным последовательностям, включающим SEQ ID NO: 68,
указанный CAR предпочтительно содержит полипептидную последовательность, которая на 83% идентична аминокислотным последовательностям, включающим SEQ ID NO: 68,
указанный CAR предпочтительно содержит полипептидную последовательность, которая на 84% идентична аминокислотным последовательностям, включающим SEQ ID NO: 68,
указанный CAR предпочтительно содержит полипептидную последовательность, которая на 85% идентична аминокислотным последовательностям, включающим SEQ ID NO: 68,
указанный CAR предпочтительно содержит полипептидную последовательность, которая на 86% идентична аминокислотным последовательностям, включающим SEQ ID NO: 68,
указанный CAR предпочтительно содержит полипептидную последовательность, которая на 87% идентична аминокислотным последовательностям, включающим SEQ ID NO: 68,
указанный CAR предпочтительно содержит полипептидную последовательность, которая на 88% идентична аминокислотным последовательностям, включающим SEQ ID NO: 68,
указанный CAR предпочтительно содержит полипептидную последовательность, которая на 89% идентична аминокислотным последовательностям, включающим SEQ ID NO: 68,
указанный CAR предпочтительно содержит полипептидную последовательность, которая на 90% идентична аминокислотным последовательностям, включающим SEQ ID NO: 68,
указанный CAR предпочтительно содержит полипептидную последовательность, которая на 91% идентична аминокислотным последовательностям, включающим SEQ ID NO: 68,
указанный CAR предпочтительно содержит полипептидную последовательность, которая на 92% идентична аминокислотным последовательностям, включающим SEQ ID NO: 68,
указанный CAR предпочтительно содержит полипептидную последовательность, которая на 93% идентична аминокислотным последовательностям, включающим SEQ ID NO: 68,
указанный CAR предпочтительно содержит полипептидную последовательность, которая на 94% идентична аминокислотным последовательностям, включающим SEQ ID NO: 68,
указанный CAR предпочтительно содержит полипептидную последовательность, которая на 95% идентична аминокислотным последовательностям, включающим SEQ ID NO: 68,
указанный CAR предпочтительно содержит полипептидную последовательность, которая на 96% идентична аминокислотным последовательностям, включающим SEQ ID NO: 68,
указанный CAR предпочтительно содержит полипептидную последовательность, которая на 97% идентична аминокислотным последовательностям, включающим SEQ ID NO: 68,
указанный CAR предпочтительно содержит полипептидную последовательность, которая на 98% идентична аминокислотным последовательностям, включающим SEQ ID NO: 68,
указанный CAR предпочтительно содержит полипептидную последовательность, которая на 99% идентична аминокислотным последовательностям, включающим SEQ ID NO: 68.
Согласно одному из вариантов осуществления изобретения указанный CAR идентичен на 100% аминокислотным последовательностям, включающим SEQ ID NO: 68.
Настоящее изобретение относится к CAR, которые обладают указанным в настоящем описании процентом идентичности (от 80% до 99%) с любой из последовательностей от SEQ ID NO: 48 до SEQ ID NO: 71.
В настоящем изобретении предложен CD33-специфический CAR, который содержит
(а) внеклеточный лигандсвязывающий домен, содержащий VH и VL из моноклонального антитела к CD33, необязательно гуманизированного,
(б) шарнир CD8α,
(в) трансмембранный домен CD8α и
(г) цитоплазматический домен, включающий сигнальный домен CD3дзета и костимуляторный домен из 4-1ВВ.
В настоящем изобретении предложен CD33-специфический CAR, который содержит
(а) внеклеточный лигандсвязывающий домен, содержащий VH и VL из моноклонального антитела к CD33, необязательно гуманизированного,
(б) шарнир FcγRIIIα,
(в) трансмембранный домен CD8α и
(г) цитоплазматический домен, включающий сигнальный домен CD3дзета и костимуляторный домен из 4-1ВВ.
Полинуклеотиды, векторы:
Настоящее изобретение относится также к полинуклеотидам, векторам, кодирующим любой из описанных выше CAR, предлагаемых в изобретении.
Настоящее изобретение относится также к полинуклеотиду, который кодирует анти-CD33 CAR, предлагаемый в изобретении, вектору, предпочтительно лентивирусному вектору, который содержит по меньшей мере один из указанных полинуклеотидов, кодирующих анти-CD33 CAR, предлагаемый в изобретении.
Полинуклеотид может содержаться в кассете экспрессии или экспрессионном векторе (например, в плазмиде, предназначенной для интродукции в бактериальную клетку-хозяина, или вирусном векторе, таком как бакуловирусный вектор, предназначенный для трансфекции клетки насекомого-хозяина, или плазмидном или вирусном векторе, таком как лентивирус, предназначенном для трансфекции клетки млекопитающего-хозяина).
В конкретном варианте осуществления изобретения можно включать различные нуклеотидные последовательности в один полинуклеотид или вектор, который содержит нуклеотидную последовательность, кодирующую рибосомальную skip-последовательность, такую как последовательность, кодирующую пептид 2А. Пептиды 2А, которые были идентифицированы в подгруппе афтовирусов группы пикорнавирусов, приводят к рибосомальному «перескоку» (skip) от одного кодона к следующему без образования пептидной связи между двумя аминокислотами, кодируемыми кодонами (см. Donnelly и Elliott, 2001; Atkins, Wills и др., 2007; Doronina, Wu и др., 2008). Под «кодоном» понимают три нуклеотида на мРНК (или на смысловой цепи молекулы ДНК), которые транслируются рибосомой в один аминокислотный остаток. Таким образом, можно синтезировать два полипептида из одной непрерывной рамки считывания в мРНК, если полипептиды разделены последовательностью олигопептида 2А, присутствующей в рамке считывания. Такие рибосомальные skip-механизмы хорошо известны в данной области и известно их применение в нескольких векторах для экспрессии нескольких белков, кодируемых одной матричной РНК.
Для направления трансмембранного полипептида в секреторный путь клетки-хозяина, в последовательность полинуклеотида или в последовательность вектора помещают секреторную сигнальную последовательность (известную также как лидерная последовательность, пре-про-последовательность или пре-последовательность). Секреторную сигнальную последовательность функционально связывают с трансмембранной нуклеотидной последовательностью, т.е. две последовательности соединяют в правильной рамке считывания и размещают так, чтобы направлять новый синтезированный полипептид в секреторный путь клетки-хозяина. Секреторные сигнальные последовательности, как правило, размещают в 5'-направлении относительно нуклеотидной последовательности, кодирующей представляющий интерес полипептид, хотя некоторые секреторные сигнальные последовательности можно размещать и в другом месте представляющей интерес нуклеотидной последовательности (см., например, Welch и др., US №5037743; Holland и др., US №5143830). В предпочтительном варианте осуществления изобретения сигнальный пептид содержит аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 1 и 2.
Специалистам в данной области должно быть очевидно, что с учетом вырожденности генетического кода могут иметь место значительные вариации последовательности указанных полинуклеотидных молекул. Предпочтительно нуклеотидные последовательности, предлагаемые в настоящем изобретении, имеют оптимизированные кодоны для экспрессии в клетках млекопитающих, предпочтительно для экспрессии в человеческих клетках. Оптимизация кодонов относится к замене в представляющей интерес последовательности кодонов, встречающихся относительно редко в генах с высоким уровнем экспрессии, на кодоны, которые, как правило, часто встречаются в генах с высоким уровнем экспрессии в указанных видах, такие кодоны кодируют те же аминокислоты, что и подлежащие замене кодоны.
Методы конструирования иммунных клеток, наделенных CAR:
В настоящем изобретении предложен способ получения иммунных клеток для иммунотерапии, заключающийся в том, что интродуцируют ex vivo в указанные иммунные клетки полинуклеотиды или векторы, кодирующие один из описанных ранее CD33-специфических CAR.
В предпочтительном варианте осуществления изобретения указанные полинуклеотиды включают в лентивирусные векторы, принимая во внимание, что они стабильно экспрессируются в клетках.
В других вариантах осуществления изобретения указанный способ дополнительно включает стадию, на которой генетически модифицируют указанную клетку, делая ее пригодной для аллогенной трансплантации.
Согласно первому объекту изобретения иммунную клетку можно делать менее аллогенной, например, путем инактивации по меньшей мере одного гена, экспрессирующего один или несколько компонентов T-клеточного рецептора (TCR), согласно методу, описанному в WO 2013/176915, что можно объединять с инактивацией гена, кодирующего или регулирующего экспрессию белка HLA или β2m. Таким образом, существенно снижают риск возникновения реакции «трансплантат-против-хозяина» и отторжение трансплантата.
Согласно другому объекту изобретения инактивируют по меньшей мере один ген, обеспечивающий экспрессию одного или нескольких компонентов CD33, в содержащих CD33-специфический CAR иммунных клетках, предлагаемых в изобретении. Ингибирование экспрессии CD33 на поверхности клеток, экспрессирующих анти-CD33 CAR, является частью способа получения экспрессирующих анти-CD33 CAR иммунных клеток, предлагаемых в изобретении.
Общий метод описан в WO 2013/176915. Инактивацию гена CD33 можно объединять с активацией /или инактивацией гена, кодирующего или регулирующего экспрессию CD33, такого как связывающие сиаловую кислоту Ig-подобные лектины (Cao Н., Crocker P.R. Evolution of CD33-related siglecs: regulating host immune functions and escaping pathogen exploitation? Immunology, 132(1), январь 2011 г., cc. 18-26), в результате чего экспрессия CD33 на поверхности иммунных клеток, экспрессирующих анти-CD33 CAR, ингибируется и, как следствие, не изменяет выживаемость или не ингибирует активность экспрессирующих анти-CD33 CAR соседних клеток.
Согласно другому объекту изобретения иммунные клетки можно дополнительно подвергать генетической инженерии для повышения их устойчивости к обработкам иммуносупрессорными лекарственными средствами или химиотерапевтическими средствами, которые применяют в качества стандартной медицинской помощи в случае CD33-позитивных злокачественных клеток. Например, CD52 и глюкортикоидные рецепторы (GR), которые являются мишенями лекарственных средств при лечении алемтузумабом и глюкокортикоидами, можно инактивировать, придавая клеткам устойчивость к указанным обработкам и давая конкурентное преимущество по сравнению с собственными T-клетками пациента, не наделенными CD33-специфическими CAR. Можно также подавлять или снижать экспрессию гена CD3, придавая устойчивость к теплизумабу, который представляет собой другое иммуносупрессорное средство. Согласно изобретению можно также подавлять или снижать экспрессию HPRT, придавая устойчивость к 6-тиогуанину, цитостатическому агенту, обычно применяемому для химиотерапии, прежде всего для лечения острого лимфобластного лейкоза. Можно снижать экспрессию гена «GLI1».
Согласно другому объекту изобретения на иммунные клетки можно дополнительно оказывать воздействие, делая их более активными или ограничивая их истощение, путем инактивации генов, кодирующих белки, которые действуют в качестве «иммунных контрольных точек (чекпойнтов)», такие как регуляторы T-клеточной активации PDCD1 или CTLA-4. Примеры генов, экспрессию которых можно снижать или подавлять, представлены в таблице 9.
В предпочтительном варианте осуществления изобретения указанный способ дополнительного конструирования иммунных клеток включает интродукцию в указанные T-клетки полинуклеотидов, прежде всего мРНК, кодирующих специфическую редко расщепляющую эндонуклеазу, обладающую способностью осуществлять избирательную инактивацию указанных выше генов путем расщепления ДНК. В более предпочтительном варианте осуществления изобретения указанные редко расщепляющие эндонуклеазы представляют собой TALE-нуклеазы или эндонуклеазу Cas9. К настоящему времени доказано, что TAL-нуклеазы обладают более высокой специфичностью и эффективностью расщепления по сравнению с другими типами редко расщепляющих эндонуклеаз, поэтому их выбирают в качестве эндонуклеаз для получения сконструированных иммунных клеток при крупномасштабном производстве с постоянным циклом.
Методы доставки
Различные методы, описанные выше, предполагают интродукцию CAR в клетку. Например (но, не ограничиваясь только этим), указанный CAR можно интродуцировать в виде трансгенов, кодируемых одним плазмидным вектором. Указанный плазмидный вектор может содержать также селектируемый маркер, обеспечивающий идентификацию и/или отбор клеток, в которые встроен указанный вектор.
Полипептиды можно синтезировать in situ в клетке в результате интродукции в клетку полинуклеотидов, кодирующих указанные полипептиды. Альтернативно этому, указанные полипептиды можно получать вне клетки и затем интродуцировать в нее. Методы интродукции полинуклеотидных конструкций в клетки известны в данной области и их примерами являются (но, не ограничиваясь только ими) методы стабильной трансформации, в которых полинуклеотидную конструкцию интегрируют в геном клетки, методы кратковременной трансформации, в которых полинуклеотидную конструкцию не интегрируют в геном клетки, и методы, основанные на использовании вирусов. Указанные полинуклеотиды можно интродуцировать в клетку, например, с использованием рекомбинантных вирусных векторов (например, ретровирусов, аденовирусов), липосом и т.п. Например, методы кратковременной трансформации включают микроинъекцию, электропорацию или бомбардировку частицами. Указанные полинуклеотиды можно включать в векторы, более конкретно, в плазмиды или вирусы, с целью экспрессии в клетках.
Сконструированные иммунные клетки
Настоящее изобретение относится также к выделенным клеткам или клеточным линиям, которые можно получать указанным способом создания клеток. В частности, указанная выделенная клетка содержит по меньшей мере один описанный выше CAR. В другом варианте осуществления изобретения указанная выделенная клетка содержит популяцию CAR, каждый из которых содержит различные внеклеточные лигандсвязывающие домены. В частности, указанная выделенная клетка содержит экзогенную полинуклеотидную последовательность, кодирующую CAR. Активация и пролиферация генетически модифицированных иммунных клеток, предлагаемых в настоящем изобретении, происходит независимо от механизмов связывания с антигеном.
Под объем настоящего изобретения подпадает также выделенная иммунная клетка, предпочтительно T-клетка, полученная с помощью одного из описанных ранее методов. Указанная иммунная клетка представляет собой клетку, происходящую из гематопоэтической клетки, функционально участвующую в инициации и/или реализации врожденного или адаптивного иммунного ответа. Указанную иммунную клетку, предлагаемую в настоящем изобретении, можно получать из стволовой клетки. Стволовые клетки могут представлять собой зрелые стволовые клетки, нечеловеческие эмбриональные стволовые клетки, более предпочтительно нечеловеческие стволовые клетки, стволовые клетки из пуповинной крови, клетки-предшественники, стволовые клетки костного мозга, индуцированные плюрипотентные стволовые клетки, тотипотентные стволовые клетки или гематопоэтические стволовые клетки. Репрезентативными человеческими клетками являются CD34+-клетки. Указанная выделенная клетка может представлять собой также дендритную клетку, дендритную киллерную клетку, тучную клетку, NK-клетку, B-клетку или T-клетку, выбранную из группы, состоящей из воспалительных T-лимфоцитов, цитотоксических T-лимфоцитов, регуляторных T-лимфоцитов или хелперных T-лимфоцитов. В другом варианте осуществления изобретения указанная клетка может иметь происхождение из группы, состоящей из CD4+-T-лимфоцитов и CD8+-T-лимфоцитов. Перед осуществлением размножения и генетической модификации клеток, предлагаемых в изобретении, из организма индивидуума можно получать источник клеток с помощью различных методов, не ограничивающих объем изобретения. Клетки можно получать из многочисленных источников, включая (но, не ограничиваясь только ими) мононуклеарные клетки периферической крови, костный мозг, ткань лимфатических узлов, пуповинную кровь, ткань тимуса, ткань из инфицированной области, асциты, плевральный выпот, ткань селезенки и опухоли. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения можно применять любое количество T-клеточных линий, доступных и известных специалистам в данной области. В другом варианте осуществления изобретения указанную клетку можно получать из организма здорового донора, пациента, у которого диагностирован рак, или пациента, у которого диагностирована инфекция. В другом варианте осуществления изобретения указанная клетка представляет собой часть смешанной популяции клеток, обладающих различными фенотипическими характеристиками. Под объем настоящего изобретения подпадает также клеточная линия, полученная из T-клетки, трансформированной согласно ранее описанному методу. Под объем настоящего изобретения подпадают модифицированные клетки, полученные с помощью ранее описанного метода, которые являются устойчивыми или чувствительными к иммуносупрессорной обработке.
Предпочтительными вариантами осуществления настоящего изобретения являются T-клетки или популяция T-клеток, наделенных CD33 CAR, описанные выше, которые не экспрессируют функциональный TCR и которые обладают реактивностью в отношении CD33-позитивных клеток, предназначенные для их аллогенной трансплантации пациентам.
Более предпочтительным вариантом осуществления настоящего изобретения являются сконструированные иммунные клетки, предлагаемые в изобретении, включающие T-клетки или популяцию T-клеток, наделенных CD33 CAR, описанные выше, которые не экспрессируют ни функциональный TCR, ни CD33 и которые обладают реактивностью в отношении CD33-позитивных клеток, предназначенные для их аллогенной трансплантации пациентам.
Еще более предпочтительным вариантом осуществления настоящего изобретения являются сконструированные иммунные клетки, предлагаемые в изобретении, включающие T-клетки или популяцию T-клеток, наделенных CD33 CAR, где указанный CD33 CAR содержит полипептидную структуру, выбранную из V1, V3 и V5, где указанная полипептидная структура содержит внеклеточный лигандсвязывающий домен, который содержит VH и VL из моноклонального антитела к CD33, шарнир, выбранный из шарнира FcRIIIα, шарнира CD8α и шарнира IgG1, трансмембранный домен CD8α и цитоплазматический домен, включающий сигнальный домен CD3дзета и костимуляторный домен из 4-1ВВ. В одном из вариантов осуществления изобретения иммунные клетки, предлагаемые в изобретении, содержат CD33-специфический CAR, который содержит моноклональное антитело к CD33, выбранное из М195, m2h12, DRB2 и Му9.6 или из M195, m2h12 и Му9.6, и необязательно гуманизированное.
В более предпочтительном варианте осуществления изобретения указанный CD33 CAR содержит полипептид, выбранный из группы, состоящей из SEQ ID NO: 48, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 54, SEQ ID NO: 56, SEQ ID NO: 58, SEQ ID NO: 60, SEQ ID NO: 62, SEQ ID NO: 64, SEQ ID NO: 66, SEQ ID NO: 68, SEQ ID NO: 70, или содержит полипептид, выбранный из группы, состоящей из SEQ ID NO: 48, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 54, SEQ ID NO: 56, SEQ ID NO: 58, SEQ ID NO: 66, SEQ ID NO: 68, SEQ ID NO: 70.
В еще более предпочтительном варианте осуществления изобретения T-клетки, наделенные CD33 CAR, не экспрессируют функциональный TCR и CD33, и указанный CD33 CAR содержит полипептид, имеющий SEQ ID NO: 68, и необязательно является гуманизированным.
В еще более предпочтительном варианте осуществления изобретения T-клетки или популяция T-клеток, наделенных CD33 CAR, в частности экспрессирующие анти-CD33 CAR T-клетки, которые не экспрессируют ни функциональный TCR, ни CD33, содержат полипептидную последовательность, идентичную по меньшей мере на 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% любой из аминокислотных последовательностей, которые выбраны из группы, состоящей из SEQ ID NO: 48, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 54, SEQ ID NO: 56, SEQ ID NO: 58, SEQ ID NO: 66, SEQ ID NO: 68, SEQ ID NO: 70, или идентичную по меньшей мере на 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% любой из аминокислотных последовательностей, которые выбраны из группы, состоящей из SEQ ID NO: 48, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 54, SEQ ID NO: 56, SEQ ID NO: 58, SEQ ID NO: 66, SEQ ID NO: 68, SEQ ID NO: 70, или идентичную по меньшей мере на 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% SEQ ID NO: 68.
В еще более предпочтительном указанном варианте осуществления изобретения T-клетки, наделенные CD33 CAR, не экспрессируют функциональный TCR и CD33 и содержат полипептидную последовательность, идентичную по меньшей мере на 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% любой из аминокислотных последовательностей, которые выбраны из группы, состоящей из SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 56, SEQ ID NO: 58, SEQ ID NO: 68, SEQ ID NO: 70, или полипептидную последовательность, идентичную по меньшей мере на 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% любой из аминокислотных последовательностей, которые выбраны из группы, состоящей из SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 56, SEQ ID NO: 68, или полипептидную последовательность, идентичную по меньшей мере на 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% SEQ ID NO: 68.
Предпочтительно указанная экспрессирующая анти-CD33 CAR T-клетка представляет собой TCRальфа KO (т.е. с «выключенным» TCRальфа) и CD33 KO (т.е. с «выключенным» CD33) T-клетку и обладает устойчивостью по меньшей мере к одному из лекарственных средств, применяемых для лечения AML.
Экспрессирующая анти-CD33 CAR T-клетка, предлагаемая в изобретении, представляет собой выделенные иммунные T-клетки, наделенные анти-CD33 CAR, предпочтительно иммунные T-клетки TCR-альфа KO и/или CD33 KO, наделенные анти-CD33 CAR клетки, и более предпочтительно иммунные T-клетки TCRальфа KO и/или CD33 KO, наделенные анти-CD33 CAR клетки, которые обладают устойчивостью по меньшей мере к одному из лекарственных средств, применяемых для лечения AML. Предпочтительно экспрессирующая анти-CD33 CAR T-клетка, относящаяся к предлагаемым в изобретении T-клеткам, содержит анти-CD33 CAR, который имеет любую из последовательностей, выбранных из SEQ ID NO: 48-SEQ ID NO: 71, более предпочтительно анти-CD33 CAR, который идентичен по меньшей мере на 80% SEQ ID NO: 48-SEQ ID NO: 71, и еще более предпочтительно идентичен по меньшей мере на 80% SEQ ID NO: 68. Сконструированная иммунная клетка (или экспрессирующие анти-CD33 CAR T-клетки) согласно изобретению означает любую из сконструированных иммунных клеток, предлагаемых в изобретении, которые описаны выше.
Активация и размножение T-клеток
Как до, так и после осуществления генетической модификации T-клеток, даже в том случае, если активация и пролиферация генетически модифицированных иммунных клеток, предлагаемых в настоящем изобретении, не зависит от механизмов связывания с антигеном, иммунные клетки, прежде всего T-клетки, предлагаемые в настоящем изобретении, можно подвергать дополнительной активации и размножать с помощью методов, описанных, например, в US №№6352694; 6534055; 6905680; 6692964; 5858358; 6887466; 6905681; 7144575; 7067318; 7172869; 7232566; 7175843; 5883223; 6905874; 6797514; 6867041 и публикации заявки на патент США №2006/0121005. T-клетки можно размножать in vitro или in vivo.
Как правило, T-клетки, предлагаемые в изобретении, размножают путем приведения в контакт с агентом, который стимулирует комплекс CD3 TCR, и костимуляторной молекулой на поверхности T-клеток с целью создания сигнала активации для T-клетки.
Например, для создания сигнала активации для T-клетки можно применять химические соединения, такие как ионофор кальция А23187, форбол-12-миристат-13-ацетат (ФМА), или митогенные лектины, такие как фитогемагглютинин (ФГА).
Например (но, не ограничиваясь только этим), популяции T-клеток можно стимулировать in vitro путем приведения в контакт с антителом к CD3 или его антигенсвязывающим фрагментом, или антителом к CD2, иммобилизованным на поверхности, или путем приведения в контакт с активатором протеинкиназы С (например, бриостатином) в сочетании с ионофором кальция. Для костимуляции вспомогательной молекулы на поверхности T-клеток используют лиганд, который связывается с вспомогательной молекулой. Например, популяцию T-клеток можно приводить в контакт с антителом к CD3 и антителом к CD28 в условиях, обеспечивающих стимуляцию пролиферации T-клеток. Условия, пригодные для культивирования T-клеток, включают соответствующие среды (например, минимальную поддерживающую среду или среду RPMI 1640, или X-vivo 5, (фирма Lonza)), которые могут содержать факторы, необходимые для обеспечения пролиферации и жизнеспособности, включая сыворотку (например, фетальную бычью сыворотку или человеческую сыворотку), интерлейкин-2 (IL-2), инсулин, IFN-g, 1L-4, 1L-7, GM-CSF, -10, -2, 1L-15, TGFp и TNF, или любые другие добавки для роста клеток, известные специалисту в данной области. Другие добавки для роста клеток включают (но, не ограничиваясь только ими) сурфактант, плазманат и восстановители, такие как N-ацетилцистеин и 2-меркаптоэтанол. Среды могут представлять собой RPMI 1640, A1M-V, DMEM, MEM, а-МЕМ, F-12, Х-Vivo 1 и Х-Vivo 20, Optimizer, содержащие в качестве добавок аминокислоты, пируват натрия и витамины, они могут быть бессывороточными или могут содержать в качестве добавок в определенном количестве сыворотку (или плазму) или определенный набор гормонов, и/или цитокин(ы) в количестве, достаточном для роста и размножения T-клеток. Антибиотики, например, пенициллин и стрептомицин, включают только в экспериментальные культуры, но не в культуры клеток, которые предназначены для введения путем инфузии индивидууму. Клетки-мишени поддерживают в условиях, необходимых для поддержания роста, например, при соответствующей температуре (например, при 37°C) и атмосфере (например, в воздухе плюс 5% СО2). Клетки, которые подвергали стимуляции в течение различных промежутков времени, могут обладать различными характеристиками.
В другом конкретном варианте осуществления изобретения указанные клетки можно размножать путем совместного культивирования с тканью или клетками. Указанные клетки можно размножать также in vivo, например, в крови индивидуума после введения указанной клетки индивидууму.
Терапевтические применения
В другом варианте осуществления изобретения выделенные клетки, полученные различными методами, или клеточную линию, полученную из указанной выделенной клетки, согласно описанному ранее методу, можно применять в качестве лекарственного средства. В другом варианте осуществления изобретения указанное лекарственное средство можно применять для лечения рака, прежде всего для лечения B-клеточных лимфом и лейкозов у пациента, нуждающегося в этом. В другом варианте осуществления изобретения указанную выделенную клетку, предлагаемую в изобретении, или клеточную линию, полученную из указанной выделенной клетки, можно применять для изготовления лекарственного средства, предназначенного для лечения рака у пациента, нуждающегося в этом.
Другой объект настоящего изобретения относится к способам лечения пациентов, нуждающихся в этом, где указанный способ заключается в том, что осуществляют по меньшей мере одну из следующих стадий, на которых:
(а) получают иммунную клетку, которую можно создавать с помощью одного из ранее описанных способов;
(б) вводят указанные трансформированные иммунные клетки указанному пациенту.
В одном из вариантов осуществления изобретения указанные T-клетки, предлагаемые в изобретении, можно подвергать интенсивному T-клеточному размножению in vivo и их можно сохранять в течение продолжительного периода времени.
Другим объектом настоящего изобретения являются способы лечения пациентов, которые нуждаются в этом, заключающиеся в том, что осуществляют по меньшей мере одну из следующих стадий:
(а) получают иммунную клетку, которую можно создавать с помощью одного из ранее описанных способов, предлагаемых в изобретении, которые предназначены для получения экспрессирующей анти-CD33 CAR иммунной клетки (или любой сконструированной иммунной клетки, предлагаемой в изобретении),
(б) вводят указанные экспрессирующие анти-CD33 CAR иммунные клетки указанному пациенту; необязательно указанную CD33 CAR T-клетку, предлагаемую в изобретении, можно подвергать интенсивному T-клеточному размножению in vivo и их можно сохранять в течение продолжительного периода времени, в частности, они могут связываться с CD33 в течение продолжительного периода времени.
Указанное лечение может быть облегчающим, терапевтическим или профилактическим. Оно может представлять собой либо составную часть аутологичного иммунотерапевтического лечения, либо составную часть аллогенного иммунотерапевтического лечения. Понятие «аутологичный» означает, что клетки, клеточная линия или популяция клеток, применяемые для лечения пациентов, получают из организма указанного пациента или из организма совместимого по человеческому лейкоцитарному антигену (HLA) донора. Понятие «аллогенный» означает, что клетки или популяция клеток, применяемые для лечения пациентов, не получают из организма указанного пациента, но получают из организма донора.
Одним из вариантов осуществления изобретения является экспрессирующая анти-CD33 CAR T-клетка, предлагаемая в изобретении, которая предназначена для применения в качестве лекарственного средства.
Конкретным вариантом осуществления изобретения является экспрессирующая анти-CD33 CAR T-клетка, предлагаемая в изобретении, которая предназначена для применения в качестве лекарственного средства, содержащая полипептид, выбранный из SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 35, SEQ ID NO: 36, SEQ ID NO: 37, SEQ ID NO: 38, и более предпочтительно полипептид, идентичный по меньшей мере на 80% полипептиду, выбранному из SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 35, SEQ ID NO: 36, SEQ ID NO: 37, SEQ ID NO: 38.
Еще более предпочтительно указанная экспрессирующая указанный анти-CD33 CAR T-клетка, которая предназначена для применения в качестве лекарственного средства, содержит полипептид, выбранный из группы, состоящей из SEQ ID NO: 48, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 54, SEQ ID NO: 56, SEQ ID NO: 58, SEQ ID NO: 60, SEQ ID NO: 62, SEQ ID NO: 64, SEQ ID NO: 66, SEQ ID NO: 68, SEQ ID NO: 70, или содержит полипептид, выбранный из группы, состоящей из SEQ ID NO: 48, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 54, SEQ ID NO: 56, SEQ ID NO: 58, SEQ ID NO: 66, SEQ ID NO: 68, SEQ ID NO: 70; где указанные CAR могут быть гуманизированными.
В одном из вариантов осуществления изобретения экспрессирующая анти-CD33 CAR T-клетка, предлагаемая в изобретении, которая предназначена для применения в качестве лекарственного средства, содержит полипептид, имеющий SEQ ID NO: 68, или полипептид, идентичный по меньшей мере на 80% полипептиду, имеющему SEQ ID NO: 68, необязательно гуманизированному.
Другими словами, изобретение относится к экспрессирующей анти-CD33 CAR T-клетке, предлагаемой в изобретении, которая содержит полипептид, идентичный по меньшей мере на 80% любому из полипептидов, выбранных из SEQ ID NO: 48, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 54, SEQ ID NO: 56, SEQ ID NO: 58, SEQ ID NO: 66, SEQ ID NO: 68 и SEQ ID NO: 70, необязательно гуманизированному, который предназначен для применения в качестве лекарственного средства.
В предыдущих разделах описаны сконструированные иммунные клетки, которые можно применять в качестве лекарственного средства или в сочетании с описанными способами. Предпочтительно сконструированные иммунные клетки могут содержать первичные T-клетки, в которых изменена экспрессия CD33, изменена экспрессия TCR, необязательно устойчивые по меньшей мере к одному из лекарственных средств, применяемых для лечения гематологического рака.
В целом, указанное лекарственное средство можно применять для лечения обусловленного экспрессирующей CD33 клеткой патологического состояния или состояния, характеризующегося прямой или косвенной активностью экспрессирующей CD33 клетки, т.е. состояния, связанного с активностью экспрессирующих CD33 клеток.
Указанное лекарственное средство можно применять для лечения пациентов, у которых диагностировано предзлокачественное или злокачественное связанное с раком состояние, отличающееся наличием экспрессирующих CD33 T-клеток, прежде всего избыточным количеством экспрессирующих CD33 T-клеток. Указанные состояния имеют место при гематологических видах рака, таких как лейкоз или злокачественные лимфопролиферативные нарушения, такие как B-клеточные лимфопролиферативные нарушения.
Другим примером обусловленного экспрессирующей CD33 клеткой патологического состояния или состояния, характеризующегося прямой или косвенной активностью экспрессирующей CD33 клетки, т.е. состояния, связанного с активностью экспрессирующей CD33 клетки, которое можно лечить с помощью экспрессирующей анти-CD33 CAR T-клетки, предлагаемой в изобретении, является болезнь Альцгеймера.
Лимфопролиферативное нарушение может представлять собой лимфому, в частности, множественную миелому, неходжскинскую лимфому, лимфому Беркитта и фолликулярную лимфому (мелкоклеточную и крупноклеточную).
Любое обусловленное CD33 заболевание и заболевание, в котором принимает участие CD33, в частности злокачественное лимфопролиферативное нарушение или лейкоз, можно лечить и состояние здоровья пациента, страдающего указанным патологическим состоянием можно улучшать с помощью экспрессирующих анти-CD33 CAR T-клеток, предлагаемых в настоящем изобретении.
В предпочтительном варианте осуществления изобретения рак, который можно лечить с помощью экспрессирующих анти-CD33 CAR T-клеток, предлагаемых в настоящем изобретении, представляет собой лейкоз, заболевание, ассоциированное с лейкозом, или являющееся его осложнением, в частности AML, подтип AML, связанное с AML осложнение и связанные с AML состояния.
Лейкоз, который можно также предупреждать или лечить с помощью экспрессирующих анти-CD33 CAR T-клеток, предлагаемых в настоящем изобретении, может представлять собой острый миелогенный лейкоз (AML), хронический миелогенный лейкоз, мелодиспластический синдром, острый лимфоидный лейкоз, острый лимфобластный лейкоз, хронический лимфоидный лейкоз и миелодиспластический синдром.
AML или подтипы AML, которые можно лечить с помощью экспрессирующих анти-CD33 CAR T-клеток, предлагаемых в настоящем изобретении, могут представлять собой, в частности, острый миелобластный лейкоз, минимально-дифференцированный острый миелобластный лейкоз, острый миелобластный лейкоз без созревания (клеток), острый миелобластный лейкоз с созреванием гранулоцитов, промиелоцитарный или острый промиелоцитарный лейкоз (APL), острый миеломоноцитарный лейкоз, миеломоноцитарный лейкоз в сочетании с эозинофилией костного мозга, острый монобластный лейкоз (М5а) или острый моноцитарный лейкоз (M5b), острый эритроидный лейкоз, включая эритролейкоз (М6а) и очень редкий чистый эритроидный лейкоз (M6b), острый мегакариобластный лейкоз (М7), острый базофильный лейкоз, острый панмиелоз с миелофиброзом, в которых участвуют CD33-позитивные клетки.
Подтипы AML, которые можно лечить с помощью экспрессирующих анти-CD33 CAR T-клеток, предлагаемых в настоящем изобретении, включают также AML с t (8;21) (q22;q22), (AML1/ETO), AML с inv (16) (p13;q22) или t (16;16) (p13;q22), (CBFβ/MYH11), AML с t (15;17) (q22;q12), (PML/RARα) и их варианты, AML с t(9;11)(p22;q23), (MLLT3/MLL), AML с t(6;9)(p23;q34) (DEK/NUP214), AML с inv(3)(q21q26) или t(3;3)(q21;q26), (RPN1/EVI1), AML с t(1;22)(p13;q13) (RBM15/MKL1) (мегакариоцитарный), AML с ассоциированными с миелодисплазией изменениями, включая AML, возникающий из предшествующего MDS или MDS/MPN, AML с ассоциированной с MDS цитогенетической аномалией, и AML с мультилинейной дисплазией, ассоциированный с алкилирующим агентом /облучением AML, минимально-дифференцированный AML (известный также как AML-M0), AML без созревания (известный также как AML-M1), AML с созреванием (известный также как AML-M2), острый миеломоноцитарный лейкоз (известный также как AML-M4), острый монобластный/моноцитарный лейкоз (известный также как AML-M5), острый эритроидный лейкоз (известный также как AML-M6) и чистый эритроидный лейкоз.
Таким образом, AML, классифицированные как AML со специфическим генетическими аномалиями, представляют собой состояния, которые можно лечить с помощью экспрессирующих анти-CD33 CAR T-клеток, предлагаемых в настоящем изобретении. Классификация основывается на возможности прогнозировать на основе кариотипа ответ на индукционную терапию, риск рецидива, продолжительность жизни.
Таким образом, AML, которые можно лечить с помощью экспрессирующих анти-CD33 CAR T-клеток, предлагаемых в настоящем изобретении, могут представлять собой AML с транслокацией между хромосомами 8 и 21, AML с транслокацией или инверсией в хромосоме 16, AML с транслокацией между хромосомами 9 и 11, APL (М3) с транслокацией между хромосомами 15 и 17, AML с транслокацией между хромосомами 6 и 9, AML с транслокацией или инверсией в хромосоме 3, AML (мегакариобластный) с транслокацией между хромосомами 1 и 22.
Настоящее изобретение является наиболее ценным для лечения AML, ассоциированного с указанными конкретными цитогенетическими маркерами.
В настоящем изобретении предложена также экспрессирующая анти-CD33 CAR T-клетка для лечения пациентов со специфическими цитогенетическими субпопуляциями AML, например, пациентов с t(15;17)(q22;q21), идентифицированных с помощью полностью транс-ретиноевой кислоты (ATRA), и для лечения пациентов с t(8;21)(q22;q22) или inv(16)(p13q22)/t(16;16)(pl3;q22), идентифицированных с помощью повторяющихся высоких доз цитарабина.
Предпочтительно в настоящем изобретении предложена экспрессирующая анти-CD33 CAR T-клетка для лечения пациентов с аберрациям, такими как -5/del(5q), -7, аномалиями 3q или комплексным кариотипом, у которых обнаружены плохие уровни полной ремиссии и выживаемости.
Группа пациентов
Предпочтительным вариантом осуществления изобретения является медикаментозное лечение лейкоза, в частности, у страдающих AML пациентов, возрастом старше 60 лет, пациентов возрастом моложе 20 лет, в частности у детей.
Более предпочтительным вариантом осуществления настоящего изобретения является педиатрическое лечение, в частности педиатрическое лечение AML или ассоциированных с AML заболеваний или осложнений.
Еще более предпочтительным вариантом осуществления изобретения является применение для лечения страдающих AML пациентов с низким, плохим или неблагоприятным статусом, основой для определения которого является прогнозируемая выживаемость, составляющая менее 5 лет. В этой группе пациенты, страдающие AML со следующими цитогенетическими характеристиками: -5; 5q; -7; 7q-; 11q23; non t(9;11); inv(3); t(3;3); t(6;9); t(9;22), имеют статус, ассоциированный с риском неблагоприятного исхода (Byrd J.С. и др., Blood, 100 (13), 15 декабря 2002 г.; и для них прежде всего пригодно лечение, предлагаемое в настоящем изобретении, или лечение на основе объекта настоящего изобретения.
В одном из вариантов осуществления изобретения экспрессирующую анти-CD33 CAR T-клетку, предлагаемую в настоящем изобретении, можно применять в случае рецидива AML или в случае рефрактерного или устойчивого AML. Предпочтительно T-клетки, содержащие по меньшей мере один гуманизированный анти-CD33 CAR, предлагаемый в изобретении, который содержит или состоит из SEQ ID NO: 1 и полипептида, выбранного из полипептида, который по меньшей мере на 80%-100% идентичен SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 35, SEQ ID NO: 36, SEQ ID NO: 37, SEQ ID NO: 38, или их комбинации, применяют для пациентов с рецидивом AML или рефрактерным или устойчивым AML, более предпочтительно в сочетании по меньшей мере с одним другим противораковым лекарственным средством.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения указанную по меньшей мере одну экспрессирующую анти-CD33 CAR T-клетку, предлагаемую в изобретении, применяют для предупреждения развития раковых клеток, что имеет место, в частности, после противоракового лечения, в процессе деплеции (очистки) костного мозга или перед трансплантацией костного мозга, после разрушения костного мозга.
Связанные с AML осложнения
Одним из предпочтительных вариантов осуществления изобретения является лекарственное средство, которое улучшает состояние здоровья пациента, в частности, пациента с осложнениями, связанными с AML. Более предпочтительно указанная сконструированная экспрессирующая анти-CD33 CAR T-клетка, предлагаемая в изобретении, экспрессирует по меньшей мере один анти-CD33 CAR, содержащий SEQ ID NO: 1 и полипептид, который по меньшей мере на 80% идентичен SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 35, SEQ ID NO: 36, SEQ ID NO: 37, SEQ ID NO: 38, или их комбинацию, и ее применяют в качестве лекарственного средства для лечения осложнения, связанного с AML.
Одним из конкретных вариантов осуществления изобретения является лекарственное средство, которое улучшает состояние здоровья пациента, страдающего AML, в частности, пациента с осложнениями, связанными с AML, где указанное лекарственное средство содержит экспрессирующую анти-CD33 CAR T-клетку, предлагаемую в изобретении, содержащую полипептид, который по меньшей мере на 80% идентичен полипептиду, выбранному из SEQ ID NO: 48, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 54, SEQ ID NO: 56, SEQ ID NO: 58, SEQ ID NO: 66, SEQ ID NO: 68 и SEQ ID NO: 70.
Осложнение или заболевание, связанное с AML, может включать предшествующую миелодисплазии фазу, вторичный лейкоз, в частности, вторичный AML, высокое содержание лейкоцитов и отсутствие палочек Ауэра. Среди прочего, в качестве осложнения или заболевания, связанного с AML, рассматриваются лейкостаз и затрагивающий центральную нервную систему (ЦНС) гиперлейкоцитоз, остаточные явления болезни.
Ассоциированные с AML заболевания
Одним из вариантов осуществления настоящего изобретения является также экспрессирующая анти-CD33 CAR T-клетка, предназначенная для лечения патологического состояния, связанного с AML. Предпочтительно в настоящем изобретении предложна клетка, экспрессирующая по меньшей мере один анти-CD33 CAR, который содержит полипептид, идентичный по меньшей мере на 80% полипептиду, выбранному из SEQ ID NO: 48, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 54, SEQ ID NO: 56, SEQ ID NO: 58, SEQ ID NO: 66, SEQ ID NO: 68, и SEQ ID NO: 70, для лечения патологического состояния, связанного с AML.
Настоящее изобретение относится к лекарственному средству для связанных с AML миелоидных неоплазм, острого миелоидного лейкоза и миелодиспластического синдрома, лечения рецидивирующего или рефракторного миелоидного лейкоза, лечения рецидивирующего или рефракторного острого промиелоцитарного лейкоза у взрослых, лечения острого промиелоидного лейкоза, лечения острого миелоидного лейкоза у взрослых возрастом старше 60 лет.
Другим объектом настоящего изобретения является композиция, предназначенная для лечения ассоциированных с AML заболеваний, в частности, гематологических злокачественных связанных с AML заболеваний.
Гематологические злокачественные связанные с AML состояния включают миелодиспластический синдром (MDS, ранее известный как «предлейкоз»), который представляет собой широкий спектр гематологических состояний, объединенных неэффективным производством (или дисплазией) миелоидных клеток крови и риск трансформации в AML.
Другим вариантом осуществления изобретения является лекарственное средство, предлагаемое в изобретении, которое улучшает состояние здоровья пациента, страдающего множественной миеломой.
Другие патологические состояния или генетические синдромы, ассоциированные с риском AML, можно улучшать посредством соответствующего применения настоящего изобретения, указанные генетические синдромы включают синдром Дауна, трисомию, анемию Фанкони, синдром Блума, атаксию-телеангиэктазию, анемию Даймонда-Блекфена, синдром Швахмана-Даймонда, синдром Ли-Фраумени, нейтрофиброматоз типа 1, серьезную врожденную нейтропению (которую называют также синдромом Костмана).
Одним из вариантов осуществления настоящего изобретения является экспрессирующая анти-CD33 CAR T-клетка, предназначенная для лечения болезни Альцгеймера. В настоящем изобретении предложены клетки, которые можно применять в сочетании со способами, описанными в предыдущем разделе, предпочтительно клетки, которые представляют собой экспрессирующие анти-CD33 CAR T-клетки и более предпочтительно экспрессирующие TCR и CD33 KO анти-CD33 CAR T-клетки. Указанное лечение можно применять для лечения пациентов с диагностированным предзлокачественным или злокачественным связанным с раком состоянием, характеризующимся присутствием экспрессирующих CD33 клеток, прежде всего избыточным количеством экспрессирующих CD33 клеток. Указанные состояния имеют место при гематологических формах рака, таких как лейкоз или злокачественные лимфопролиферативные нарушения.
Лейкоз может представлять собой острый миелогенный лейкоз, хронический миелогенный лейкоз, мелодиспластический синдром, острый лимфоидный лейкоз, хронический лимфоидный лейкоз и миелодиспластический синдром.
Лимфопролиферативное нарушение может представлять собой лимфому, в частности, множественную миелому, неходжскинскую лимфому, лимфому Беркитта и фолликулярную лимфому (мелкоклеточную и крупноклеточную).
Типы рака, которые можно лечить, включают несолидные опухоли (такие как гематологические опухоли, включая (но, не ограничиваясь только ими) пре-В ALL (при педиатрических показаниях), ALL взрослых, лимфому из клеток мантии, диффузную крупноклеточную B-клеточную лимфому и т.п. Типы рака, которые можно лечить с помощью CAR, предлагаемых в изобретении, включают (но, не ограничиваясь только ими) некоторые типы лейкозов или лимфоидных злокачественных заболеваний. Они включают также опухоли/типы рака взрослых и детские опухоли/типы рака.
Лечение с помощью сконструированных иммунных клеток, предлагаемых в изобретении, можно осуществлять в сочетании с применением одного или нескольких типов противораковой терапии, выбранных из группы, включающей терапию на основе антител, химиотерапию, цитокиновую терапию, терапию с использованием дендритных клеток, генную терапию, гормональную терапию, свето-лазерную терапию и лучевую терапию.
Согласно предпочтительному варианту осуществления изобретения указанное лечение можно применять для пациентов, подвергающихся иммуносупрессорной терапии. Фактически, настоящее изобретение основано предпочтительно на применении клеток или популяции клеток, которые приобрели устойчивость по меньшей мере к одному иммунодепрессанту в результате инактивации гена, кодирующего рецептор для такого иммунодепрессанта. С этой точки зрения, иммуносупрессорная терапия должна способствовать отбору и размножению T-клеток, предлагаемых в изобретении, в организме пациента.
Композиции
В настоящем изобретении предложна композиция, содержащая экспрессирующие анти-CD33 T-клетки, предлагаемые в изобретении, и фармацевтически приемлемый наполнитель.
Одним из вариантов осуществления изобретения является указанная композиция, предназначенная для применения в качестве лекарственного средства.
В другом варианте осуществления изобретения указанная композиция предназначена для применения в качестве лекарственного средства для лечении состояний, характеризующихся наличием экспрессирующих CD33 клеток, в частности, избыточным количеством экспрессирующих CD33 клеток. Такие состояния имеют место при гематологических формах рака, таких как лейкоз или злокачественные лимфопролиферативные нарушения, такие как B-клеточные лимфопролиферативные нарушения.
Одним из объектов настоящего изобретения является композиция, которая содержит экспрессирующие анти-CD33 T-клетки, предлагаемые в изобретении, и фармацевтически приемлемый наполнитель, предназначенная для лечения опосредуемых CD33+-клеток заболеваний. Указанные опосредуемые CD33+-клетками заболевания включают предзлокачественное или злокачественное связанное с раком состояние, воспаление, аутоиммунные заболевания, болезнь Альцгеймера.
Согласно одному из объектов изобретения экспрессирующая CD33 клетка гематологического рака, который можно лечить с помощью композиции, предлагаемой в изобретении, может представлять собой экспрессирующую CD33 стволовую клетку гематологического рака, включая (но, не ограничиваясь только ими) экспрессирующую CD33 раковую клетку при лейкозе (таком как острый миелогенный лейкоз (AML), хронический миелогенный лейкоз, острый лимфоидный лейкоз, хронический лимфоидный лейкоз и миелодиспластический синдром) и злокачественные лимфопролиферативные состояния, включая лимфому (такую как множественная миелома, неходжскинская лимфома, лимфома Беркитта и мелкоклеточная и крупноклеточная фолликулярная лимфома), или связанные с ними осложнения.
Композицию, содержащую экспрессирующие анти-CD33 T-клетки, предлагаемые в изобретении, и фармацевтически приемлемый наполнитель, можно применять в способе снижения количества, ингибирования пролиферации и/или активности экспрессирующих CD33 клеток гематологического рака у пациента. Приведенный в качестве примера способ заключается в том, что приводят в контакт популяцию клеток, содержащую экспрессирующую CD33 клетку, с экспрессирующей CD33 CAR T-клеткой, предлагаемой в изобретении, которая связывается с экспрессирующей CD33 клеткой.
Более конкретным объектом настоящего изобретения является композиция, содержащая экспрессирующие анти-CD33 T-клетки, предлагаемые в изобретении, и фармацевтически приемлемый наполнитель, предназначенная для применения, в частности, в способе ингибирования пролиферации или снижения численности популяции раковых клеток, которые экспрессируют CD33, у пациента, где способы заключаются в том, что приводят в контакт популяцию клеток, содержащую экспрессирующую CD33 клетку, с экспрессирующей CD33 CAR T-клеткой, предлагаемой в изобретении, которая связывается с экспрессирующей CD33 клеткой, связывание экспрессирующей CD33 CAR T-клетки, предлагаемой в изобретении, с экспрессирующей CD33 клеткой приводит к разрушению экспрессирующих CD33 раковых клеток.
Согласно некоторым объектам изобретения композиция, содержащая экспрессирующую CD33 CAR T-клетку, предлагаемую в изобретении, снижает уровень, число, количество или процент клеток и/или раковых клеток по меньшей мере на 25%, по меньшей мере на 30%, по меньшей мере на 40%, по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 65%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 95% или по меньшей мере на 99% (до неподдающегося обнаружению уровня) у индивидуума или на животной модели миелоидного лейкоза или другого вида рака, ассоциированного с экспрессирующими CD33 клетками, относительно отрицательного контроля.
В настоящем изобретении предложен также способ предупреждения, лечения и/или контроля нарушения или состояния, ассоциированного с экспрессирующими CD33 клетками (например, ассоциированного с гематологическим раком, AML), способы заключаются в том, что вводят индивидууму, который нуждается в этом, композицию, которая содержит экспрессирующую CD33 CAR T-клетку, предлагаемую в изобретении, которая связывается с экспрессирующей CD33 клеткой, в частности, композицию, которая содержит экспрессирующие анти-CD33 T-клетки, предлагаемые в изобретении, и фармацевтически приемлемый наполнитель. Согласно одному из объектов изобретения индивидуум представляет собой человека. Примеры нарушений, ассоциированных с экспрессирующими CD33 клетками, включают (но, не ограничиваясь только ими) воспалительные нарушения (такие как аллергии, воспалительные заболевания кишечника BD, болезнь Альцгеймера) и различные вида рака (например, виды гематологического рака, в частности, AML или связанные с AML осложнения).
В настоящем изобретении предложена также композиция, предназначенная для применения, или способ лечения заболевания, включающий ее применение, которая содержит T-клетку, экспрессирующую анти-CD33 CAR, предлагаемый в изобретении, и фармацевтически приемлемый носитель, предпочтительно указанный анти-CD33 CAR содержит SEQ ID NO: 1 и полипептид, идентичный по меньшей мере на 80%-100% полипептиду, выбранному из SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 35, SEQ ID NO: 36, SEQ ID NO: 37, SEQ ID NO: 38, и их комбинацию, и фармацевтически приемлемый носитель или наполнитель. Согласно одному из объекту изобретения заболевание выбирают из указанных в настоящем описании заболеваний, в частности, оно представляет собой гематологический рак, более конкретно, рак из стволовых клеток, включая (но, не ограничиваясь только ими) лейкоз (такой как острый миелогенный лейкоз (AML), хронический миелогенный лейкоз, острый лимфоидный лейкоз, хронический лимфоидный лейкоз и миелодиспластический синдром) и злокачественные лимфопролиферативные состояния, включая лимфому (такую как множественная миелома, неходжскинская лимфома, лимфома Беркитта и мелкоклеточная и крупноклеточная фолликулярная лимфома), или связанные с ними осложнения.
В настоящем изобретении предложена также композиция, которая содержит T-клетку, экспрессирующую анти-CD33 CAR, предлагаемый в изобретении, и фармацевтически приемлемый носитель, предназначенная для применения в способе ингибирования пролиферации или снижения численности популяции экспрессирующих CD33 клеток или их активности в пациента. Приведенный в качестве примера способ заключается в том, что приводят в контакт популяцию клеток, содержащую экспрессирующую CD33 клетку, с экспрессирующей CD33 CAR T-клеткой, предлагаемой в изобретении, которая связывается с экспрессирующей CD33 клеткой, предпочтительно указанный анти-CD33 CAR содержит SEQ ID NO: 1 и полипептид, который идентичен по меньшей мере на 80%-100% полипептиду, выбранному из SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 35, SEQ ID NO: 36, SEQ ID NO: 37, SEQ ID NO: 38, и их комбинацию.
В настоящем изобретении предложена также композиция, которая содержит экспрессирующие анти-CD33 T-клетки, предлагаемые в изобретении, и фармацевтически приемлемый наполнитель, предназначенная для применения в способе предупреждения, лечения и/или контроля нарушения или состояния, ассоциированного с экспрессирующими CD33 клетками (например, ассоциированного с гематологическим раком), способы заключаются в том, что вводят индивидууму, который нуждается в этом, композицию, предлагаемую в изобретении, в которой указанный анти-CD33 CAR содержит SEQ ID NO: 1 и полипептид, идентичный по меньшей мере на 80%-100% полипептиду, выбранному из SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO; 22, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 35, SEQ ID NO: 36, SEQ ID NO: 37, SEQ ID NO: 38, и их комбинацию, который связывается с экспрессирующей CD33 клеткой. Согласно одному из объектов изобретения индивидуум представляет собой человека. Примеры нарушений, ассоциированных с экспрессирующими CD33 клетками, включают (но, не ограничиваясь только ими) аутоиммунные нарушения (такие как волчанка), воспалительные нарушения (такие как аллергии, IBD и астма) и различные виды рака (например, виды гематологического рака, в частности, AML или связанные с AML осложнения).
В настоящем изобретении предложена также композиция, содержащая экспрессирующую анти-CD33 CAR T-клетку, предлагаемую в изобретении, и фармацевтически приемлемый наполнитель, предназначенная для применения, или способ ее применения для лечения заболевания, в которой предпочтительно указанный анти-CD33 CAR содержит полипептид, идентичный по меньшей мере на 80%-100% полипептиду, выбранному из SEQ ID NO: 48, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 54, SEQ ID NO: 56, SEQ ID NO: 58, SEQ ID NO: 66, SEQ ID NO: 68 и SEQ ID NO: 70. Согласно одному из объектов изобретения заболевание представляет собой заболевание, указанное в настоящем описании, предпочтительно гематологический рак, более предпочтительно рак из стволовых клеток, включая (но, не ограничиваясь только ими) лейкоз (такой как острый миелогенный лейкоз (AML), хронический миелогенный лейкоз, острый лимфоидный лейкоз, хронический лимфоидный лейкоз и миелодиспластический синдром) и злокачественные лимфопролиферативные состояния, включая лимфому (такую как множественная миелома, неходжскинская лимфома, лимфома Беркитта и мелкоклеточная и крупноклеточная фолликулярная лимфома), или связанные с ними осложнения.
В настоящем изобретении предложена также композиция, которая содержит экспрессирующие анти-CD33 T-клетки, предлагаемые в изобретении, и фармацевтически приемлемый наполнитель, предназначенная для применения в способе ингибирования пролиферации или снижения численности популяции экспрессирующих CD33 клеток или их активности у пациента. Приведенный в качестве примера способ заключается в том, что приводят в контакт популяцию экспрессирующих CD33 клеток с экспрессирующими CD33 CAR T-клетками, предлагаемыми в изобретении, которые связываются с экспрессирующей CD33 клеткой, предпочтительно указанный анти-CD33 CAR содержит полипептид, который идентичен по меньшей мере на 80% последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 48, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 54, SEQ ID NO: 56, SEQ ID NO: 58, SEQ ID NO: 66, SEQ ID NO: 68 и SEQ ID NO: 70.
В настоящем изобретении предложена также композиция, которая содержит экспрессирующие анти-CD33 T-клетки, предлагаемые в изобретении, и фармацевтически приемлемый наполнитель, предназначенная для применения в способе предупреждения, лечения и/или контроля нарушения или состояния, ассоциированного с экспрессирующими CD33 клетками (например, ассоциированного с гематологическим раком), способы заключаются в том, что вводят индивидууму, который нуждается в этом, композицию, предлагаемую в изобретении, в которой указанный анти-CD33 CAR содержит полипептид, идентичный по меньшей мере на 80%-100% полипептиду, выбранному из SEQ ID NO: 48, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 54, SEQ ID NO: 56, SEQ ID NO: 58, SEQ ID NO: 66, SEQ ID NO: 68 и SEQ ID NO: 70.
Согласно одному из объектов изобретения индивидуум представляет собой человека. Примеры нарушений, ассоциированных с экспрессирующими CD33 клетками, включают (но, не ограничиваясь только ими) аутоиммунные нарушения (такие как волчанка), воспалительные нарушения (такие как аллергии, IBD и астма) и различные вида рака (например, виды гематологического рака, в частности, AML или связанные с AML осложнения).
В настоящем изобретении предложена также композиция, которая содержит экспрессирующие анти-CD33 T-клетки, предлагаемые в изобретении, и фармацевтически приемлемый наполнитель, предназначенная для применения в способе предупреждения, лечения и/или контроля нарушения или состояния, ассоциированного с экспрессирующими CD33 клетками, где способ заключается в том, что вводят индивидууму, который нуждается в этом, композицию, предлагаемую в изобретении, которая связывается с экспрессирующей CD33 клеткой. В указанном варианте осуществления изобретения указанный анти-CD33 CAR содержит полипептид, идентичный по меньшей мере на 80%-100% полипептиду, выбранному из SEQ ID NO: 48, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 54, SEQ ID NO: 56, SEQ ID NO: 58, SEQ ID NO: 66, SEQ ID NO: 68, и SEQ ID NO: 70. Согласно одному из объектов изобретения индивидуум представляет собой человека. Примеры нарушений, ассоциированных с экспрессирующими CD33 клетками, включают (но, не ограничиваясь только ими) острый миелоидный лейкоз (AML), миелодисплазию, B-клеточный острый лимфоидный лейкоз, T-клеточный острый лимфоидный лейкоз, волосатоклеточный лейкоз, неоплазм из бластных плазмоцитоидных дендритных клеток, хронический миелоидный лейкоз, лимфому Ходжкина.
В настоящем изобретении предложена также композиция, которая содержит экспрессирующие анти-CD33 T-клетки, предлагаемые в изобретении, и фармацевтически приемлемый наполнитель, предназначенная для применения в способе лечения или предупреждения рецидива рака, ассоциированного с экспрессирующими CD33 клетками, где способ заключается в том, что вводят индивидууму, который нуждается в этом, композицию, предлагаемую в изобретении, в которой указанный анти-CD33 CAR содержит полипептид, идентичный по меньшей мере на 80%-100% полипептиду, выбранному из SEQ ID NO: 48, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 54, SEQ ID NO: 56, SEQ ID NO: 58, SEQ ID NO: 66, SEQ ID NO: 68 и SEQ ID NO: 70, который связывается с экспрессирующей CD33 клеткой. Согласно другому объекту изобретения способы заключаются в том, что вводят индивидууму, который нуждается в этом, в эффективном количестве композицию, предлагаемую в изобретении, в сочетании с применяемой в эффективном количестве другой терапией.
Одним из объектов изобретения являются композиции и способы, предназначенные для лечения индивидуумов, которых подвергают лечению по поводу заболевания или нарушения, ассоциированного с повышенными уровнями экспрессии CD 19, и которые имеют заболевание или нарушение, ассоциированное с повышенными уровнями CD33.
Введение клеток или популяции клеток, предлагаемых в настоящем изобретении, можно осуществлять любым пригодным методом, включая ингаляцию аэрозоля, инъекцию, прием внутрь, трансфузию, имплантацию или трансплантацию. Композиции, представленные в настоящем описании, можно вводить пациенту подкожно, внутрикожно, внутрь опухоли, интранодально, интрамедуллярно, внутримышечно, путем внутривенной или внутрилимфатической инъекции, или внутрибрюшинно. В одном из вариантов осуществления изобретения клеточные композиции, предлагаемые в настоящем изобретении, предпочтительно вводят путем внутривенной инъекции.
Введение клеток или популяции клеток может заключаться во введении 104-109 клеток/кг веса тела, предпочтительно от 105 до 106 клеток/кг веса тела, включая все целочисленные количества клеток в указанных диапазонах. Клетки или популяцию клеток можно вводить в виде одной или нескольких доз. В другом варианте осуществления изобретения указанное эффективное количество клеток вводят в виде однократной дозы. В другом варианте осуществления изобретения указанное эффективное количество клеток вводят в виде более чем одной дозы в течение некоторого периода времени. График введения находится в компетенции лечащего врача и зависит от клинического состояния пациента. Клетки или популяцию клеток можно получать из любого источника, такого как банк крови или донор. Поскольку индивидуальные потребности варьируются, определение оптимальных диапазонов эффективных количеств рассматриваемого типа клеток для конкретного заболевания или состояний, находится в компетенции специалиста в данной области. Эффективное количество представляет собой количество, которое обеспечивает терапевтическое или профилактическое полезное действие. Вводимая доза должна зависеть от возраста, состояния здоровья и веса реципиента, вида одновременно применяемого лечения, если это имеет место, частоты обработки и природы требуемого действия.
В другом варианте осуществления изобретения клетки или композицию, содержащую эти клетки, вводят в указанном эффективном количестве парентерально. Указанное введение может представлять собой внутривенное введение. Указанное введение можно осуществлять непосредственно путем инъекции в опухоль.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения клетки вводят пациенту в сочетании с осуществлением (например, до, одновременно или после) любого количества соответствующих форм лечения, включая (но, не ограничиваясь только ими) лечение с помощью средств противовирусной терапии, таких как цидофовир и интерлейкин-2, цитарабин (известный также под названием ARA-C), или лечение натализумабом пациентов с MS (рассеянный склероз), или лечение эфализумабом пациентов с псориазом, или другие виды лечения пациентов с PML (прогрессирующая многоочаговая лейкоэнцефалопатия). В других вариантах осуществления изобретения T-клетки, предлагаемые в изобретении, можно применять в сочетании с химиотерапией, лучевой терапией, иммунодепрессантами, такими как циклоспорин, азатиоприн, метотрексат, микофенолат и FK506, антителами или другими иммунодеструктивными агентами, такими как САМРАТН, антитела к CD3, или с другими видами терапии на основе антител, цитоксином, флударибином, циклоспорином, FK506, рапамицином, микофеноловой кислотой, стероидами, FR901228, цитокинами и облучением. Эти лекарственные средства ингибируют или кальций-зависимую фосфатазу, кальцинеурин (циклоспорин и FK506), или ингибируют киназу p70S6, которая важна для индуцируемой фактором роста передачи сигнала (рапамицин) (Henderson, Naya и др., 1991; Liu, Albers и др., 1992; Bierer, Hollander и др., 1993). В другом варианте осуществления изобретения клеточные композиции, предлагаемые в настоящем изобретении, вводят пациенту в сочетании с (например, до, одновременно или после) трансплантацией костного мозга, T-клеточной абляционной терапией с использованием либо химиотерапевтических средств, таких как флударабин, либо внешней лучевой терапии (XRT), циклофосфамида, либо антител, таких как ОКТ3 или САМРАТН. В другом варианте осуществления изобретения клеточные композиции, предлагаемые в настоящем изобретении, вводят после осуществления B-клеточной абляционной терапии с использованием агентов, которые взаимодействуют с CD20, таких, например, как ритуксан. Например, в одном из вариантов осуществления изобретения индивидуумов можно подвергать стандартной обработке химиотерапевтическими средствами в высокой дозе с последующей трансплантацией стволовых клеток периферической крови. В некоторых вариантах осуществления изобретения после трансплантации индивидуумам вводят путем инфузии размноженные иммунные клетки, предлагаемые в настоящем изобретении. В еще одном варианте осуществления изобретения размноженные клетки вводят до или после хирургического вмешательства.
Другие определения
- Если специально не указано иное, то множественное число и единственное число и понятие «по меньшей мере один» используются взаимозаменяемо и означают «один» или «более чем один».
- Аминокислотные остатки в полипептидной последовательности обозначают в настоящем описании с помощью однобуквенного кода, согласно которому, например, Q обозначает Gln или остаток глутамина, R обозначает Arg или остаток аргинина и D обозначает Asp или остаток аспарагиновой кислоты.
- Аминокислотная замена обозначает замену одного аминокислотного остатка на другой, например, замена остатка аргинина на остаток глутамина в пептидной последовательности представляет собой аминокислотную замену.
- Нуклеотиды обозначают следующим образом: однобуквенный код используют для обозначения основания нуклеозида: а обозначает аденин, t обозначает тимин, с обозначает цитозин и g обозначает гуанин. Для вырожденных нуклеотидов r обозначает g или а (пуриновые нуклеотиды), k обозначает g или t, s обозначает g или с, w обозначает а или t, m обозначает а или с, у обозначает t или с (пиримидиновые нуклеотиды), d обозначает g, а или t, v обозначает g, а или с, b обозначает g, t или с, h обозначает a, t или с и n обозначает g, a, t или с.
- В контексте настоящего описания понятия «нуклеиновая кислота» или «полинуклеотиды» относятся к нуклеотидам и/или полинуклеотидам, таким как дезоксирибонуклеиновая кислота (ДНК) или рибонуклеиновая кислота (РНК), олигонуклеотидам, фрагментам, созданным с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР), и фрагментам, созданным путем лигирования, расщепления, обработки эндонуклеазами и обработки экзонуклеазами. Молекулы нуклеиновой кислоты могут состоять из мономеров, которые являются встречающимися в естественных условиях нуклеотидами (такими как ДНК или РНК) или аналогами встречающихся в естественных условиях нуклеотидов (например, энантиомерными формами встречающихся в естественных условиях нуклеотидов), или представляют собой их комбинацию. Модифицированные нуклеотиды могут иметь изменения в сахарных фрагментах и/или во фрагментах, содержащих пиримидиновые или пуриновые основания. Модификации сахаров включают, например, замену одной или нескольких гидроксильных групп на галогены, алкильные группы, амины и азидогруппы, или сахара могут быть функционализированы до простых или сложных эфиров. Кроме того, весь сахарный фрагмент может быть заменен стерически и электронно сходными структурами, такими как аза-сахара и карбоциклические аналоги Сахаров. Примерами модификаций во фрагменте, представляющем собой основание, могут служить алкилированные пурины и пиримидины, ацилированные пурины или пиримидины или другие хорошо известные гетероциклические заместители. Мономеры нуклеиновой кислоты могут быть сшиты фосфодиэфирными связями или аналогами таких связей. Нуклеиновые кислоты могут быть одноцепочечными или двухцепочечными.
- Под химерным антигенным рецептором (CAR) подразумевают молекулы, в которых объединен связывающий домен, направленный против компонента, присутствующего на клетке-мишени, например, присущую антителу специфичность в отношении требуемого антигена (например, опухолевого антигена), с активирующим T-клеточный рецептор внутриклеточным доменом, в результате чего образуется химерный белок, обладающий специфической клеточной иммунной активностью в отношении мишени. Как правило, CAR состоит из внеклеточного одноцепочечного антитела (scFvFc), слитого с внутриклеточным сигнальным доменом дзета-цепи комплекса T-клеточный антиген-рецептор (scFvFc:ζ), и при экспрессии в T-клетках он обладает способностью перенаправлять распознавание антигена благодаря специфичности моноклонального антитела. Одним из примеров CAR, применяемого в настоящем изобретении, является CAR, направленный против антигена CD33, и он может, например, содержать (но, не ограничиваясь только ими) аминокислотные последовательности: SEQ ID NO: 19-42 и предпочтительно аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 48-71.
- Под V1-структурой подразумевают молекулы, в которых объединены
- сигнальный пептид CD8альфа,
- VH-домен, отделенный от VL-домена линкером, указанные VH и VL принимают участие в связывании с CD33,
- шарнир из Fcгамма (γ) RIIIальфа (α),
- трансмембранный домен, происходящий из CD8альфа(α),
- цитоплазматический домен, происходящий из 4-1ВВ и CD3дзета (ζ).
- Под V2-структурой подразумевают молекулы, имеющие V1-структуру и в которых трансмембранный домен происходит из 4-1ВВ.
- Под V3-структурой подразумевают молекулы, в которых объединены
- сигнальный пептид CD8альфа,
- VH-домен, отделенный от VL-домена линкером, указанные VH и VL принимают участие в связывании с CD33,
- шарнир из CD8альфа(α),
- трансмембранный домен, происходящий из CD8альфа(α),
- цитоплазматический домен, происходящий из 4-1ВВ и CD3дзета (ζ).
- Под V4-структурой подразумевают молекулы, имеющие V3-структуру и в которых трансмембранный домен происходит из 4-1ВВ.
- Под VS-структурой подразумевают молекулы, в которых объединены
- сигнальный пептид CD8альфа,
- VH-домен, отделенный от VL-домена линкером, указанные VH и VL принимают участие в связывании с CD33,
- шарнир из IgG1,
- трансмембранный домен, происходящий из CD8альфа(α),
- цитоплазматический домен, происходящий из 4-1ВВ и CD3дзета (ζ).
- Под V6-структурой подразумевают молекулы, имеющие V5-структуру и в которых трансмембранный домен происходит из 4-1ВВ.
Структуры CAR, предлагаемые в изобретении, проиллюстрированы на фиг. 2, предпочтительно на фиг. 3.
- Понятие «химиотерапия» относится к любой терапии, в которой используют химические агенты, прежде всего те, которые применяют против рака.
- Понятие «эндонуклеаза» относится к ферменту дикого типа или его варианту, обладающему способностью катализировать гидролиз (расщепление) связей между нуклеиновыми кислотами в молекуле ДНК или РНК, предпочтительно в молекуле ДНК. Эндонуклеазы не расщепляют молекулу ДНК или РНК независимо от ее последовательности, но они распознают и расщепляют молекулу ДНК или РНК в специфических полинуклеотидных последовательностях, в дальнейшем обозначенных как «последовательности-мишени» или «сайты-мишени». Эндонуклеазы можно классифицировать как редко расщепляющие эндонуклеазы, для которых, как правило, полинуклеотидный сайт распознавания имеет длину более 12 пар оснований (bp), более предпочтительно 14-55 пар оснований. Редко расщепляющие эндонуклеазы значительно повышают гомологичную рекомбинацию (HR), индуцируя двухцепочечные разрывы ДНК (DSB) в определенном локусе (Perrin, Buckle и др., 1993; Rouet, Smih и др., 1994; Choulika, Perrin и др., 1995; Pingoud и Silva, 2007). Редко расщепляющие эндонуклеазы могут представлять собой, например, хоминг-эндонуклеазу (Paques и Duchateau, 2007), химерную нуклеазу с «цинковыми пальцами» (ZFN), образованную слиянием сконструированных доменов «цинковых пальцев» с каталитическим доменом рестриктазы, такой как FokI (Porteus и Carroll, 2005), эндонуклеазу Cas9 из системы CRISPR (Gasiunas, Barrangou и др., 2012; Jinek, Chylinski и др., 2012; Cong, Ran и др., 2013; Mali, Yang и др., 2013) или химическую эндонуклеазу (Eisenschmidt, Lanio и др., 2005; Arimondo, Thomas и др., 2006). В химических эндонуклеазах химический или пептидный расщепляющий компонент конъюгируют либо с полимером нуклеиновой кислоты, либо с другой ДНК, распознающей специфическую последовательность-мишень, тем самым обеспечивая направление расщепляющей активности на специфическую последовательность. Химические эндонуклеазы включают также синтетические нуклеазы типа конъюгатов ортофенантролина, ДНК-расщепляющей молекулы и триплекс-образующих олигонуклеотидов (TFO), которые, как известно, связываются со специфическими последовательностями ДНК (Kalish и Glazer, 2005). Такие химические эндонуклеазы подпадают под понятие «эндонуклеазы» в контексте настоящего изобретения.
- Под «TALE-нуклеазой» (TALEN) понимают слитый белок, который состоит из связывающего нуклеиновую кислоту домена, как правило, происходящего из подобного активатору транскрипции эффектора (TALE), и одного нуклеазного каталитического домена для расщепления последовательности нуклеиновой кислоты-мишени. Каталитический домен предпочтительно представляет собой нуклеазный домен и более предпочтительно домен, обладающий эндонуклеазной активностью, например, типа I-TevI, ColE7, NucA и Fok-I. В конкретном варианте осуществления изобретения домен TALE может быть слит с мегануклеазой, например, типа I-CreI и I-OnuI, или ее функциональным вариантом. В более предпочтительном варианте осуществления изобретения указанная нуклеаза представляет собой мономерную TALE-нуклеазу. Мономерная TALE-нуклеаза представляет собой TALE-нуклеазу, которая не требует димеризации для специфического распознавания и расщепления, например, в виде слияний сконструированных повторов TAL с каталитическим доменом I-TevI, описанным в WO 2012/138927. Подобные активатору транскрипции эффекторы (TALE) представляют собой белки из видов бактерий рода Xanthomonas, содержащие несколько повторяющихся последовательностей, где каждый повтор содержит di-остатки (двойные остатки) в положениях 12 и 13 (RVD), обладающие специфичностью в отношении каждого нуклеотидного основания последовательности нуклеиновой кислоты-мишени. Связывающие домены, обладающие сходными модульными свойствами связывания нуклеиновых кислот по типу основание-с основанием («base-per-base») (MBBBD) могут быть получены также из новых модульных белков, недавно обнаруженных заявителями в различных видах бактерий. Преимущество новых модульных белков заключается в том, что они характеризуются большей вариабельностью последовательности, чем TAL-повторы. Предпочтительно RVD, ассоциированные с распознаванием различных нуклеотидов, представляют собой HD для распознавания С, NG для распознавания Т, NI для распознавания А, NN для распознавания G или A, NS для распознавания А, С, G или Т, HG для распознавания Т, IG для распознавания Т, NK для распознавания G, НА для распознавания С, ND для распознавания С, HI для распознавания С, HN для распознавания G, NA для распознавания G, SN для распознавания G или А и YG для распознавания Т, TL для распознавания А, VT для распознавания А или G и SW для распознавания А. В другом варианте осуществления изобретения имеющие решающее значение аминокислоты 12 и 13 можно изменять путем мутации на другие аминокислотные остатки для модуляции их специфичности в отношении нуклеотидов А, Т, С и G и, прежде всего, для повышения их специфичности. Ранее уже была описана TALE-нуклеаза, и ее применяют для стимуляции генного нацеливания и генных модификаций (Boch, Scholze и др., 2009; Moscou и Bogdanove, 2009; Christian, Cermak и др., 2010; Li, Huang и др., 2011). Сконструированные TAL-нуклеазы поступают в продажу под товарным знаком TALEN™ (фирма Cellectis, 8 rue de la Croix Jarry, 75013, Париж, Франция).
Редко расщепляющая эндонуклеаза, предлагаемая в настоящем изобретении, может представлять собой также эндонуклеазу Cas9. В последние годы был разработан новый инструмент для генетической инженерии на основе РНК-направляемой нуклеазы Cas9 (Gasiunas, Barrangou и др., 2012; Jinek, Chylinski и др., 2012; Cong, Ran и др., 2013; Mali, Yang и др., 2013) из адаптивной иммунной системы CRISPR (короткие палиндромные повторы, регулярно расположенные группами (Clustered Regularly Interspaced Short palindromic Repeats)) типа II прокариот (см. обзор Sorek, Lawrence и др., 2013). CRISPR-ассоциированная (Cas) система впервые была обнаружена в бактериях, и ее функция состоит в защите от чужой вирусной или плазмидной ДНК. При осуществлении опосредуемой CRISPR генетической инженерии сначала проводят отбор последовательности-мишени, часто фланкированной короткой последовательностью мотива, который обозначают как примыкающий к протоспейсеру мотив (РАМ). После отбора последовательности-мишени конструируют специфическую crРНК (CRISPR-РНК), комплементарную указанной последовательности-мишени. Для систем CRISPR типа II требуется трансактивирующая crРНК (tracrРНК), спаренная с crRNA и связанная с внесенным белком Cas9. Cas9 функционирует в качестве молекулярного якоря, облегчающего спаривание оснований tracРНК с сРНК (Deltcheva, Chylinski и др., 2011). В этом тройном комплексе двойная структура tracrРНК : crРНК функционирует в качестве направляющей РНК, которая направляет эндонуклеазу Cas9 к когнатной последовательности-мишени. Распознавание мишени комплексом Cas9-tracrРНК : crРНК инициируется путем сканирования последовательности-мишени для обнаружения гомологии между последовательностью-мишенью и crРНК. Помимо комплементарности последовательности-мишени и crРНК, нацеливание ДНК требует присутствия короткого мотива, примыкающего к протоспейсеру (примыкающий к протоспейсеру мотив - РАМ). После спаривания двойной РНК и последовательности-мишени Cas9 интродуцирует «тупой» двухцепочечный разрыв на расстоянии 3 пар оснований в обратном направлении относительно мотива РАМ (Garneau, Dupuis и др., 2010).
Редко расщепляющая эндонуклеаза может представлять собой хоминг-эндонуклеазу, также известную под названием мегануклеаза. Такие хоминг-эндонуклеазы хорошо известны в данной области (Stoddard, 2005). Хоминг-эндонуклеазы распознают последовательность ДНК-мишени и создают одноцепочечный или двухцепочечный разрыв. Хоминг-эндонуклеазы обладают высокой специфичностью, распознавая сайты ДНК-мишени длиной от 12 до 45 пар оснований (bp), как правило, длиной от 14 до 40 пар оснований. Хоминг-эндонуклеаза, предлагаемая в изобретении, может соответствовать, например, эндонуклеазе LAGLIDADG, эндонуклеазе HNH или эндонуклеазе GIY-YIG. Предпочтительно хоминг-эндонуклеаза, предлагаемая в настоящем изобретении, может представлять собой вариант I-CreI.
- Под «вектором для доставки» или «векторами для доставки» понимают любой доставляющий вектор, который можно применять согласно настоящему изобретению для приведения в контакт с клеткой (т.е. для «контактирования») или доставки внутрь клетки или в субклеточные компартменты (т.е. для «интродукции») агентов/химических веществ и молекул (белков или нуклеиновых кислот), требующихся для осуществления настоящего изобретения. К ним относятся (но, не ограничиваясь только ими) липосомальные векторы для доставки, вирусные векторы для доставки, векторы для доставки лекарственного средства, химические носители, полимерные носители, липоплексы, полиплексы, дендримеры, микропузырьки (ультразвуковые контрастные агенты), наночастицы, эмульсии или другие пригодные векторы для переноса. Такие векторы для доставки позволяют доставлять молекулы, химические вещества, макромолекулы (гены, белки) или другие векторы, такие как плазмиды, пептиды, разработанные фирмой Diatos. В этих случаях векторы для доставки представляют собой молекулы-носители. Под «вектором для доставки» или «векторами для доставки» понимают также методы доставки, предназначенные для осуществления трансфекции.
- Понятия «вектор» или «векторы» относятся к молекуле нуклеиновой кислоты, обладающей способностью транспортировать другую нуклеиновую кислоту, с которой она сцеплена. К «векторам», применяемым согласно настоящему изобретению, относятся (но, не ограничиваясь только ими) вирусный вектор, плазмида, РНКовый вектор или молекула линейной или кольцевой ДНК или РНК, которые могут состоять из хромосомальных, нехромосомальных, полусинтетических или синтетических нуклеиновых кислот. Предпочтительными векторами являются векторы, которые способны автономно реплицировать (эписомальный вектор) и/или экспрессировать нуклеиновые кислоты, с которыми они сцеплены (экспрессионные векторы). Специалистам в данной области известно большое количество пригодных векторов, которые поступают в продажу.
К вирусным векторам относятся ретровирус, аденовирус, парвовирус (например, аденоассоциированный вирусы), коронавирус, РНК-вирусы с негативной цепью, такие как ортомиксовирус (например, вирус гриппа), рабдовирус (например, вирус бешенства и вирус везикулярного стоматита), парамиксовирус (например, вирус кори и вирус Сендай), РНК-вирусы с позитивной цепью, такие как пикорнавирус и альфавирус, и вирусы с двухцепочечной ДНК, включая аденовирус, вирус герпеса (например, вирус герпеса простого типов 1 и 2, вирус Эпштейна-Барра, цитомегаловирус) и вирус оспы (например, вирус коровьей оспы, вирус оспы птиц и вирус оспы канарейки). Другие вирусы включают, например, вирус Норвалк, тогавирус, флавивирус, реовирусы, паповирус, гепаднавирус и вирус гепатита. Примерами ретровирусов являются: вирус птичьего лейкоза-саркомы, вирусы млекопитающих С-типа, B-типа, вирусы D-типа, группа HTLV-BLV, лентивирус, спумавирус (Coffin J.М., Retroviridae: The viruses and their replication, в: Fundamental Virology, 3-е изд., под ред. В.N. Fields и др., изд-во Lippincott-Raven Publishers, Philadelphia, 1996).
- Под «лентивирусным вектором» подразумевают лентивирусные векторы на основе ВИЧ, которые являются очень перспективными с точки зрения доставки гена благодаря их относительно большой способности к упаковке, пониженной иммуногенности и их способности стабильно трансдуцировать с высокой эффективностью большой спектр различных типов клеток. Лентивирусные векторы, как правило, создают посредством кратковременной трансфекции клеток-продуцентов тремя (упаковывающая плазмида, оболочечная плазмида и плазмида переноса) или большим количеством плазмид. Подобно ВИЧ, лентивирусные векторы проникают в клетку-мишень посредством взаимодействия гликопротеинов вирусной поверхности с рецепторами на клеточной поверхности. После проникновения вирусная РНК подвергается обратной транскрипции, опосредуемой комплексом вирусной обратной транскриптазы. Продуктом обратной транскрипции является двухцепочечная линейная вирусная ДНК, которая служит субстратом для вирусной интеграции в ДНК инфицированных клеток. Понятие «интегрирующие лентивирусные векторы (или LV)» обозначает, например (но, не ограничиваясь только ими), такие векторы, которые способны интегрироваться в геном клетки-мишени. В противоположность этому, понятие «неинтегрирующие лентивирусные векторы (или NILV)» обозначает эффективные векторы для доставки генов, которые не интегрируются в геном клетки-мишени под действием вирусной интегразы.
- Векторы для доставки и векторы можно объединять или комбинировать с любыми методами клеточной пермеабилизации, такими как сонопорация или электропорация, или вариантами этих методов.
- Под клеткой или клетками подразумевают любые эукариотические живые клетки, первичные клетки и клеточные линии, выведенные из указанных организмов для получения культур in vitro.
- Под «первичной клеткой» или «первичными клетками» подразумевают клетки, взятые непосредственно из живой ткани (т.е. материал, полученный путем биопсии) и подготовленные для выращивания in vitro, в популяции которых имело место лишь небольшое количество удвоений, и следовательно они являются более репрезентативными с точки зрения основных функциональных компонентов и характеристик тканей, из которых они происходят, по сравнению с непрерывно поддерживаемыми или искусственно иммортализованными онкогенными клеточными линиями.
Примерами таких клеточных линий могут являться (но, не ограничиваясь только ими) клеточные линии, выбранные из группы, состоящей из клеток линии СНО-K1; клеток линии HEK293; клеток линии Сасо2; клеток линии U2-OS; клеток линии NIH 3Т3; клеток линии NSO; клеток линии SP2; клеток линии CHO-S; клеток линии DG44; клеток линии K-562, клеток линии U-937; клеток линии MRC5; клеток линии IMR90; клеток линии Jurkat; клеток линии HepG2; клеток линии HeLa; клеток линии HT-1080; клеток линии HCT-116; клеток линии Hu-h7; клеток линии Huvec; клеток линии Molt 4.
Все эти клеточные линии можно модифицировать с помощью способа, предлагаемого в настоящем изобретении, создавая модели клеточных линий для получения, экспрессии, количественной оценки, обнаружения, изучения представляющего интерес гена или белка; эти модели можно применять также для скрининга представляющих интерес биологически активных молекул для исследовательских и промышленных целей в различных областях, например, таких как (но, не ограничиваясь только ими) химия, биотопливо, терапевтические средства и агрономия.
- Под «мутацией» подразумевают замену, делецию или инсерцию одного/одной, двух, трех, четырех, пяти, шести, семи, восьми, девяти, десяти, одиннадцати, двенадцати, тринадцати, четырнадцати, пятнадцати, двадцати, двадцати пяти, тридцати, сорока, пятидесяти или большего количества нуклеотидов/аминокислот в полинуклеотидной (кДНК, ген) или полипептидной последовательности. Мутация может влиять на кодирующую последовательность гена или его регуляторную последовательность. Она может влиять также на структуру геномной последовательности или структуру/стабильность кодируемой мРНК.
- Под «вариантом(ами)» подразумевают вариант повтора, вариант, ДНК-связывающий вариант, вариант TALE-нуклеазы, вариант полипептида, полученный в результате мутации или замены по меньшей мере одного остатка в аминокислотной последовательности родительской молекулы.
- Под «функциональным вариантом» подразумевают обладающий каталитической активностью мутант белка или домена белка; такой мутант может обладать такой же активностью, что и родительский белок или домен белка, или дополнительными свойствами, или более высокой или более низкой активностью.
- Понятие «идентичность» относится к идентичности последовательностей двух молекул нуклеиновых кислот или полипептидов. Идентичность можно оценивать путем сравнения положений в каждой из последовательностей, которые можно выравнивать для целей сравнения. Если положение в сравниваемой последовательности занято тем же самым основанием, то молекулы являются идентичными в этом положении. Степень сходства или идентичности между двумя нуклеотидными или аминокислотными последовательностями является функцией количества идентичных или совпадающих нуклеотидов в положениях нуклеотидных последовательностей. Для расчета идентичности двух последовательностей можно использовать различные алгоритмы и/или программы сравнительного анализа первичной структуры последовательностей, включая FASTA или BLAST, которые доступны в виде компонента пакета программ анализа последовательностей GCG (Университет Висконсина, Мэдисон, шт. Висконсин), и их можно применять, например, с использованием задаваемых по умолчанию параметров. Например, можно рассматривать полипептиды, обладающие идентичностью, составляющей по меньшей мере 70%, 85%, 90%, 95%, 98% или 99%, с конкретными полипептидами, представленными в настоящем описании, и предпочтительно обладающие практически такими же функциями, а также полинуклеотиды, кодирующие такие полипептиды. Если не указано иное, определение степени сходства базируется на применении матрицы BLOSUM62. При использовании BLASTP процент сходства основан на рассчитанном программой BLASTP балле положительных оценок, а процент идентичности последовательностей основан на рассчитанном BLASTP балле идентичности. Рассчитанные с помощью BLASTP «идентичности» представляют собой количество и пропорцию идентичных остатков относительно общего количества остатков в парах последовательностей с высокими баллами; а рассчитанные с помощью BLASTP «положительные оценки» представляют собой количество и пропорцию остатков, для которых полученные при сравнительном анализе первичной структуры последовательностей баллы являются положительными, и которые сходны друг с другом. В настоящей заявке предложены и подпадают под объем изобретения аминокислотные последовательности, имеющие указанные степени идентичности или сходства, или любую промежуточную степень идентичности или сходства с представленными в настоящем описании аминокислотными последовательностями. Полинуклеотидные последовательности сходных полипептидов выводят с использованием генетического кода и их можно получать с помощью общепринятых методов, в частности, путем обратной трансляции их аминокислотных последовательностей с использованием генетического кода.
- Понятия «домен трансдукции сигнала» или «костимуляторный лиганд» относятся к молекуле на антигенпрезентирующей клетке, которая специфически связывается с когнатной костимуляторной молекулой на T-клетке, обеспечивая тем самым сигнал, который в дополнение к первичному сигналу, обеспечиваемому, например, связыванием комплекса TCR/CD3 с молекулой ГКГС, загруженной пептидом, опосредует T-клеточный ответ, включая (но, не ограничиваясь только ими) активацию пролиферации, дифференцировку и т.п. Костимуляторным лигандом могут служить (но, не ограничиваясь только ими) CD7, В7-1 (CD80), В7-2 (CD86), PD-L1, PD-L2, 4-1BBL, OX40L, индуцибельный костимуляторный лиганд (ICOS-L), молекула межклеточной адгезии (ICAM, CD30L, CD40, CD70, CD83, HLA-G, MICA, М1СВ, HVEM, рецептор лимфотоксина бета, 3/TR6, ILT3, ILT4, агонист или антитело, который/которое связывается с лигандом Толл-рецептора, и лиганд, который специфически связывается с В7-Н3. Костимуляторный лиганд включает также, среди прочего, антитело, которое специфически связывается с костимуляторной молекулой, присутствующей на T-клетке, такой как (но, не ограничиваясь только ими) CD27, CD28, 4-1ВВ, ОХ40, CD30, CD40, PD-1, ICOS, ассоциированный с функцией лимфоцитов антиген-1 (LFA-1), CD2, CD7, LTGHT, NKG2C, В7-Н3, лиганд, который специфически связывается с CD83.
Понятие «костимуляторная молекула» относится к когнатному связывающему партнеру на T-клетке, который специфически связывается с костимуляторным лигандом, опосредуя тем самым костимуляторный ответ клетки, такой как (но, не ограничиваясь только им) пролиферация. Костимуляторные молекулы включают (но, не ограничиваясь только ими) молекулу ГКГС класса I, BTLA и лиганд Толл-рецептора.
В контексте настоящего описания понятие «костимуляторный сигнал» относится к сигналу, который в сочетании с первичным сигналом, таким как сигнал, обусловленный сцеплением TCR/CD3, приводит к пролиферации T-клеток и/или повышающей или понижающей регуляции имеющих решающее значение молекул.
- В контексте настоящего описания понятие «внеклеточный лигандсвязывающий домен» обозначает олиго- или полипептид, который обладает способностью связываться с лигандом. Предпочтительно домен должен обладать способностью взаимодействовать с молекулой клеточной поверхности. Например, можно выбирать внеклеточный лигандсвязывающий домен для распознавания лиганда, который функционирует в качестве маркера клеточной поверхности на клетках-мишенях, ассоциированных с конкретным болезненным состоянием. Так, примерами маркеров клеточной поверхности, которые могут функционировать в качестве лигандов, являются маркеры, ассоциированные с вирусными, бактериальными и паразитарными инфекциями, аутоиммунным заболеванием и раковыми клетками.
В контексте настоящего описания понятие «индивидуум» или «пациент» включает всех представителей царства животных, в том числе приматов кроме человека и человека.
Понятие «лекарство, применяемое для лечения рака, прежде всего AML» относится к лекарственным средствам, применяемым для лечения рака, прежде всего AML, и они описаны, например, в РСТ/ЕР2015/055848.
В представленном выше описании изобретения изложены подход и способ его осуществления и применения, так что любой специалист в данной области способен осуществлять и применять его, эта возможность относится, прежде всего, к сущности изобретения, изложенной в прилагаемой формуле изобретения, которая представляет собой составную часть исходного описания.
Если в настоящем описании указаны численные пределы или численный диапазон, то они включают их границы. Кроме того, считается, что включены все значения и поддиапазоны, находящиеся в указанных пределах или указанном численном диапазоне, как если бы они были специально указаны.
Приведенное выше описание представлено для того, чтобы дать возможность специалисту в данной области осуществлять и применять изобретение, и оно изложено в контексте конкретного применения и требуемых для этого условий. Специалистам в данной области должны быть очевидны различные модификации предпочтительных вариантов осуществления изобретения, и общие принципы, указанные в нем могут быть применены для других вариантов осуществления изобретения и применений без отклонения от сущности и объема изобретения. Таким образом, не следует считать, что настоящее изобретение ограничено представленными вариантами осуществления изобретения, напротив, оно соответствует наиболее широкому объему, согласующемуся с принципами и отличительными признаками, указанными в настоящем описании.
Общие методы
Инактивация специфического(их) гена(ов) в первичных T-клетках
Инактивацию специфического(их) гена(ов) в первичных T-клетках можно осуществлять до или после интродукции CAR в T-клетки.
По меньшей мере один ген, т.е. один ген или два гена, можно инактивировать на одной стадии или на последовательных стадиях. В предпочтительном варианте осуществления изобретения можно одновременно инактивировать два гена, предпочтительно ген TCRальфа и ген CD33.
В целом, конструируют и получают гетеродимерную TALE-нуклеазу, нацеленную на две длинные последовательности (которые обозначают как полумишени), разделенные спейсером в гене-мишени.
Каждую конструкцию TALE-нуклеазы можно клонировать в приемлемом экспрессионном векторе млекопитающих. мРНК, кодирующую TALE-нуклеазу, которая расщепляет геномную последовательность-мишень, можно синтезировать с использованием плазмиды, несущей кодирующую последовательность, которая расположена в прямом направлении относительно промотора.
Клетки представляют собой очищенные T-клетки, предварительно активированные покрытыми антителом к CD3/CD28 гранулами. Клетки трансфектируют каждой из двух мРНК, кодирующих обе половины TALE-нуклеаз, в частности обе половины TALE-нуклеаз и спейсера. Клетки можно реактивировать растворимым антителом к CD28 для измерения клеточной пролиферации, и определять маркер активации CD25 для оценки статуса активации клеток.
Химерные антигенные рецепторы
Нуклеиновые кислоты-векторы
Нуклеиновую кислоту (мРНК или лентивирусный вектор), кодирующую анти-CD33 CAR, предлагаемый в изобретении, конструируют с получением архитектуры, представленной на фиг. 2 или фиг. 3.
Несущие анти-CD33 CAR лентивирусные векторы можно получать, например, с помощью метода, описанного ранее в WO 2013/176915, WO 2013/176916 или WO 2014/130635, которые включены в настоящее описание в качестве ссылки. Лентивирусные векторы получают на фирме Vectalys SA (Тулуза, Франция).
мРНК CAR можно получать с помощью мРНК-полимеразы Т7 и трансфекции осуществлять с использованием технологии Cytopulse.
Скрининг и селекция анти-CD33 CAR
Культуры первичных T-клеток
T-клетки очищают из образцов лейкоцитарных пленок, полученных на фирме EFS (Etablissement Francais du Sang, Париж, Франция), используя среду с градиентом плотности фиколла. Выделяют слой РВМС и T-клетки очищают, используя поступающий в продажу набор для обогащения T-клеток. Очищенные T-клетки активируют в среде X-Vivo™-15 (фирма Lonza), используя человеческий IL-2 и гранулы Dynabeads® с активатором человеческих T-клеток CD3/CD28.
Трансфекция мРНК CAR
Трансфекции с использованием мРНК CAR, которая кодирует различные конструкции CAR, осуществляют в день 4 или день 11 после очистки и активации T-клеток.
Трансдукция T-клеток рекомбинантными лентивирусными векторами, обеспечивающими экспрессию CAR
Трансдукцию T-клеток рекомбинантными лентивирусными векторами осуществляют через 3 дня после очистки/активации T-клеток. Лентивирусные векторы получают на фирме Vectalys SA (Тулуза, Франция) путем трансфекции геномными и хелперными плазмидами клеток линии HEK-293. Трансдукции можно осуществлять, используя различную множественность заражения (MOI), в частности, MOI, составляющую 5. Обнаружение CAR на поверхности T-клеток осуществляют, используя рекомбинантный белок, который состоит из внеклеточного домена человеческого белка CD33, слитого с Fc-фрагментом мышиного IgG1 (который получают на фирме LakePharma).
Связывание указанного белка с молекулой CAR определяют с помощью конъюгированного с РЕ (фикоэритрин) вторичного антитела (фирма Jackson Immunoresearch), мишенью которого является белок мышиного Fc-фрагмента.
Анализ дегрануляции (мобилизация CD107a)
T-клетки инкубируют с равным количеством клеток, экспрессирующих различные уровни белка CD33. Совместные культуры поддерживают в течение по меньшей 6 ч. Окрашивание CD107a осуществляют в процессе стимуляции клеток, добавляя флуоресцентное антитело к CD107a в начале совместного культивирования. После периода инкубации, составляющего 6 ч, клетки окрашивают фиксирующим витальным красителем и конъюгированным с флуорохромом антителом к CD8 и анализируют с помощью проточной цитометрии. Дегранулирующую активность определяют в виде % CD8+/CD107a+-клеток и на основе определения средней интенсивности сигнала флуоресцении (MFI) для окрашивания CD107a в популяции CD8+-клеток.
Анализы дегрануляции осуществляют через 24 ч после трансфекции мРНК.
Анализ высвобождения IFN гамма
Через 24 ч после трансфекции мРНК T-клетки, экспрессирующие анти-CD33 CAR, инкубируют вместе с клеточными линиями, экспрессирующими различные уровни белка CD33, в течение 24 ч при 37°C. Супернатанты выделяют и определение IFN гамма в супернатанта клеточных культур осуществляют с помощью ELISA-анализа.
Анализ цитотоксичности
Экспрессирующие CD33 CAR T-клетки инкубируют вместе с клетками-мишенями (экспрессирующими различные уровни CD33) или (CD33neg)-клетками в одной и той же лунке. CD33+-клетки-мишени и контрольные CD33--клетки-мишени метят флуоресцентными внутриклеточными красителями (например, CFSE или Cell Trace Violet) перед совместным культивированием в течение 4 ч при 37°C. После указанного периода инкубации клетки метят фиксирующим витальный красителем и анализируют с помощью проточной цитометрии. Определяют жизнеспособность каждой клеточной популяции (клетки мишени или контрольные CD33neg-клетки) и рассчитывают % удельного клеточного лизиса. Анализы токсичности осуществляют через 48 ч после трансфекции мРНК
Мышиная модель для оценки противоопухолевого действия
Мышам с иммунодефицитом линии NOG инъецируют внутривенно (iv) клетки, экспрессирующие CD33-люциферазу. Необязательно мышей подвергают противоопухолевой обработке перед инъекцией анти-CD33 CAR+-T-клеток. Затем мышам инъецируют iv (например, через 2 или 7 дней после инъекции линии опухолевых клеток) анти-CD33 CAR+-T-клетки в тестируемых различных дозах или T-клетки, не трансдуцированные несущим CAR лентивирусным вектором. Биолюминесцентые сигналы определяют в день инъекции T-клеток (D0), в D7, 14, 21, 28 и 40 после инъекции T-клеток, для отслеживания развития опухолей у различных животных.
Имея общее описание настоящего изобретения, можно достигать более полного понимания после ознакомления с некоторыми конкретными примерами, которые представлены в настоящем описании только для целей иллюстрации и не направлены на ограничение объема изобретения, если специально не указано иное.
Примеры
Конструирование CD33 CAR с использованием фрагментов различных антител к CD33
Создавали различные архитектуры CAR (фиг. 3), а именно, V1-V6. В качестве первой стадии создавали 4 различных scFv из антител M195, DRB2, m2H12 и Му9.6 для получения химерных антигенных рецепторов (CAR) (SEQ ID NO: 48-SEQ ID NO: 71) в T-клетках.
Пример 1: Пролиферация клеток с инактивированным TCRальфа, экспрессирующих CD33-CAR
Культуры первичных T-клеток
T-клетки очищали из образцов лейкоцитарных пленок, полученных на фирме EFS (Etablissement du Sang, Париж, Франция), используя среду с градиентом плотности фиколла. Выделяли слой РВМС и T-клетки очищали, используя поступающий в продажу набор для обогащения T-клеток (фирма Stem Cell Technologies). Очищенные T-клетки активировали в среде X-Vivo™-15 (фирма Lonza), дополненной человеческим IL-2 в концентрации 20 нг/мл, человеческой сывороткой в концентрации 5% и гранулами Dynabeads® с активатором человеческих T-клеток CD3/CD28 при соотношении гранулы : клетки 1:1 (фирма Life Technologies). После активации клетки выращивали и поддерживали в среде X-Vivo™-15 (фирма Lonza), дополненной человеческим IL-2 в концентрации 20 нг/мл и человеческой сывороткой в концентрации 5%.
Трансфекция мРНК CAR
Трансфекции с использованием каждого CD33 CAR, созданного с использованием фрагментов различных антител к CD33, осуществляли в день 4 или день 11 после очистки и активации T-клеток. 5 миллионов клеток трансфектировали 15 мкг мРНК, кодирующих различные конструкции CAR. мРНК CAR получали, применяя набор mMESSAGE mMACHINE Т7 (фирма Life Technologies) и очищали, используя вращающиеся колонки RNeasy Mini (фирма Qiagen). Трансфекции осуществляли, используя технологию Cytopulse, применяя два импульса по 0,1 мс при 3000 В/см с последующими 4 импульсами по 0,2 мс при 325 В/см в кюветах с расстоянием между электродами 0,4 см в конечном объеме 200 мкл буфера Т для цитопорации («Cytoporation buffer Т») (устройство ВТХ Harvard). Клетки немедленно разводили в среде X-Vivo™-15 (фирма Lonza) и инкубировали при 37°C в атмосфере с 5% СО2. IL-2 добавляли через 2 ч после электропорации в концентрации 20 нг/мл.
Трансдукция первичных T-клеток
T-клеточная трансдукция
Трансдукцию T-клеток рекомбинантными лентивирусными векторами, экспрессирующими анти-CD33 CAR, осуществляли через 3 дня после очистки/активации T-клеток. Применяли лентивирусные векторы, полученные на фирме Vectalys SA (Тулуза, Франция). Обнаружение анти-CD33 CAR на поверхности T-клеток осуществляли, используя рекомбинантный белок, который состоит из внеклеточного домена человеческого белка CD33, слитого с Fc-фрагментом мышиного IgG1 (полученного на фирме LakePharma). Связывание указанного белка с молекулой анти-CD33 CAR определяли с помощью конъюгированного с РЕ вторичного антитела (фирма Jackson Immunoresearch), мишенью которого является белок мышиного Fc-фрагмента, и анализировали с помощью проточной цитометрии.
Конструировали и получали гетеродимерную TALE-нуклеазу, нацеленную на две последовательности длиной 17 пар оснований (которые обозначали как полумишени), разделенные состоящим из 15 пар оснований спейсером в гене константной области альфа-цепи T-клеточного рецептора (TRAC). Каждая из полумишеней распознавалась повторами половин TALE-нуклеаз, представленными в таблице 10.
Каждую конструкцию TALE-нуклеазы субклонировали с использованием расщепления рестриктазами в экспрессионном векторе млекопитающих под контролем промотора Т7. мРНК, кодирующую TALE-нуклеазу, которая расщепляла геномную последовательность TRAC, синтезировали с использованием плазмиды, несущей кодирующую последовательность, расположенную в прямом направлении относительно промотора Т7.
Очищенные T-клетки, предварительно активированные в течение 72 ч покрытыми антителом к CD3/CD28 гранулами, трансфектировали каждой из 2 мРНК, кодирующих обе половины TRAC_T01 TALE-нуклеаз. Через 48 ч после трансфекции различные группы T-клеток из одного и того же донора соответственно трансдуцировали лентивирусным вектором, кодирующим один из ранее описанных CD33 CAR (SEQ ID NO: 19-42). Через 2 для после трансдукции CD3NEG-клетки очищали с использованием покрытых антителом к CD3 магнитных гранул и через 5 дней после трансдукции клетки реактивировали растворимым антителом к CD28 (5 мкг/мл).
Мониторинг клеточной пролиферации осуществляли в течение периода времени вплоть до 30 дней после реактивации, подсчитывая количество клеток 2 раза в неделю. Обнаружено увеличение пролиферации клеток с инактивированным TCR альфа, экспрессирующих CD33 CAR, прежде всего в том случае, когда их реактивировали антителом к CD28, по сравнению с нетрансдуцированными клетками.
Для изучения вопроса о том, находятся ли человеческие T-клетки, экспрессирующие CD33 CAR, в активированном состоянии, анализировали экспрессию маркера активации CD25 с помощью FACS через 7 дней после трансдукции. Очищенные клетки, трансдуцированные лентивирусным вектором, кодирующим CD33 CAR, экспрессировали значительно в большем количестве CD25 на своей поверхности, чем нетрансдуцированные клетки. Повышенный уровень экспрессии CD25 обнаружен как в условиях после реактивации антителом к CD28, так и в условиях без реактивации.
В настоящем изобретении предложна экспрессирующая CD33-специфический CAR T-клетка, у которой количество TCR на клеточной поверхности находится на уровне ниже предела обнаружения.
Пример 2
Инактивация гена CD33
Для инактивации гена CD33 конструировали и получали гетеродимерную TALE-нуклеазу, нацеленную на две последовательности (обозначенные как последовательность, связывающаяся левой TALEN, и последовательность, связывающаяся правой TALEN, см. таблицу), разделенные состоящим из 10 или 15 пар оснований спейсером, в гене CD33, согласно описанному ниже методу. Каждая из полумишеней распознавалась повторами TALE-нуклеаз, представленными в таблице 11. Затем конструкции одновременно интродуцировали в T-клетки и вместе с конструкциями, созданными для инактивации гена TCR альфа.
В образовавшихся клетках внеклеточный домен CD33 укорочен. Двойное окрашивание образовавшихся клеток и анализ методом проточной цитометрии продемонстрировали снижение уровня экспрессии на клеточной поверхности CD33 и TCR по сравнению с контрольными (трансфектированными имитатором) клетки.
Альтернативно этому, для инактивации CD33 можно применять очищенные TCR KO T-клетки, предварительно активированные в течение 72 ч покрытыми антителом к CD3/CD28 гранулами. Для определения активированного состояния человеческих TCR KO T-клеток и CD33 KO T-клеток, экспрессирующих CD33 CAR, экспрессию маркера активации CD25 анализировали с помощью FACS через 7 дней после трансфекции.
Можно получать экспрессирующие анти-CD33 CAR T-клетки и анти-CD33 CAR T-клетки, в которых инактивирован ген TCR альфа и/или CD33 и в которых CAR соответствует архитектурами V1, V3 и V5.
Для удобства клетки обозначали как «T-клетки» или «CD33 CAR».
Пример 3
Дегранулирующая активность CD33 CAR, созданных с использованием фрагментов различных антител к CD33
Активность описанных выше конструкций V1, V3 и V5 M195, m2H12 и Му9.6 сначала определяли после кратковременной экспрессии в человеческих первичных T-клетках.
Анализ дегрануляции (мобилизация CD 107а)
Затем T-клетки инкубировали в 96-луночных планшетах (40000 клеток/лунку) вместе с равным количеством клеток, экспрессирующих различные уровни белка CD33. Совместные культуры поддерживали в конечном объеме 100 мкл среды X-Vivo™-15 (фирма Lonza) в течение 6 ч при 37°C в атмосфере с 5% СО2. Окрашивание CD 107а осуществляли в процессе стимуляции клеток, добавляя флуоресцентное антитело к CD 107а в начале совместного культивирования, вместе с антителом к CD49d в концентрации 1 мкг/мл, антителом к CD28 в концентрации 1 мкг/мл, и 1-кратным раствором монензина. После периода инкубации, составляющего 6 ч, клетки окрашивали фиксирующим витальным красителем и конъюгированным с флуорохромом антителом к CD8 и анализировали с помощью проточной цитометрии. Дегранулирующую активность определяли в виде % CD8+/CD107a+-клеток и на основе определения средней интенсивности сигнала флуоресцении (MFI) для окрашивания CD 107а в популяции CD8+-клеток. Анализы дегрануляции осуществляли через 24 ч после трансфекции мРНК.
Из сконструированных молекул CAR, проиллюстрированных на фиг. 3, девять тестировали в отношении их дегранулирующей активности (фиг. 4 - фиг. 6) и семь из них подвергали дополнительным тестам оценки активности: высвобождение интерферона гамма и клеточный лизис (фиг. 7 и фиг. 8).
Измеряли дегранулирующую активность каждого из CAR, содержащего scFv М195, m2H12 или Му9.6 в одной из трех архитектур (v1: шарнир FcgRIII/трансмембранный домен CD8, v3: шарнир CD8/трансмембранный домен CD8 или v5: шарнир IgG1/трансмембранный домен CD8), при совместном культивировании CAR+-T-клеток в течение 6 ч с экспрессирующими CD33 клетками (U937) или клетками с неподдающимся обнаружению уровнем CD33 (Jeko или Jeko-1). Результаты проиллюстрированы на фиг 4-фиг. 6.
На фиг. 4 представлены данные о дегранулирующей активности (% CD8/CD107a+-клеток и MFI CD 107а в CD8+-клетках) scFv M195 с тремя архитектурами (v1: шарнир FcgRIII/трансмембранный домен CD8, v3: шарнир CD8/трансмембранный домен CD8, v5: шарнир IgG1/трансмембранный домен CD8), полученные при совместном культивировании CAR+-T-клеток в течение 6 ч с экспрессирующими CD33 клетками (U937) или с клетками, которые не экспрессируют CD33 (Jeko). Данные представлены в виде процента (%) дегрануляции и средней интенсивности флуоресценции (MFI).
На фиг. 5 представлены данные о дегранулирующей активности (% CD8/CD107a+-клеток и MFI CD 107а в CD8+-клетках) scFv m2H12 и Му9.6 с тремя архитектурами (v1: шарнир FcgRIII/трансмембранный домен CD8, v3: шарнир CD8/трансмембранный домен CD8, v5: шарнир IgG1/трансмембранный домен CD8), полученные при совместном культивировании CAR+-T-клеток в течение 6 ч с экспрессирующими CD33 клетками (U937) или с клетками, которые не экспрессируют CD33 (Jeko). Данные представлены в виде процента (%) дегрануляции и средней интенсивности флуоресценции (MFI).
На фиг. 6 представлены данные о дегранулирующей активности (% CD8/CD107a+-клеток) 7 конструкций: M195-V1, M195-V3, M195-V5, m2H12-V1, m2H12-V3, My9.6-V1 и My9.6-V3 (v1: шарнир FcgRIII/трансмембранный домен CD8, v3: шарнир CDS/трансмембранный домен CD8, v5: шарнир IgG1/трансмембранный домен CD8), полученные при совместном культивировании CAR+-T-клеток в течение 6 ч с клетками, экспрессирующими высокие или средние уровни CD33 (U937 и K562 соответственно), или с клетками, которые не экспрессируют CD33 (Jeko-1). Данные представлены в виде процента (%) дегрануляции и среднего уровня флуоресценции.
Высвобождение интерферона гамма и лизис клеток, индуцированный T-клетками, которые экспрессируют CD33 CAR, созданный с использованием scFv-фрагментов антител к CD33, полученных из М195, М2Н12 и Му9.6
Для указанной цели выделяли T-клетки из различных доноров, используя образцы лейкоцитарных пленок, и активировали, применяя CD3/CD28-гранулы. Клетки кратковременно трансфектировали мРНК, которые кодируют различные кандидаты, в D11 после активации.
Активность CAR оценивали, измеряя высвобождение IFN-гамма и цитотоксическую активность при совместном культивировании с клетками, экспрессирующими различные уровни CD33, следующим образом.
Анализ высвобождения IFN гамма
T-клетки, экспрессирующие анти-CD33 CAR, инкубировали в 96-луночных планшетах (40000 клеток/лунку) вместе с клеточными линиями, экспрессирующими различные уровни белка CD33. Совместные культуры поддерживали в конечном объеме 100 мкл среды X-Vivo™-15 (фирма Lonza) в течение 24 ч при 37°C в атмосфере с 5% СО2. После указанного периода инкубации планшеты центрифугировали при 1500 об/мин в течение 5 мин и супернатанты переносили в новый планшет. Обнаружение IFN гамма в супернатантах клеточных культур осуществляли с помощью ELISA-анализа. Анализы высвобождения IFN гамма осуществляли в начале совместного культивирования клеток через 24 ч после трансфекции мРНК.
На фиг. 7 представлены данные о количестве IFN, высвободившегося экспрессирующими анти-CD33 CAR T-клетками при совместном культивировании в течение 24 ч с клетками, экспрессирующими различные уровни CD33 (U937 и K562), или с клетками, которые не экспрессируют CD33 (Jeko-1). Представлены также данные о высвобождении IFN-гамма из популяции T-клеток, культивируемых в таких же условиях индивидуально. Эксперименты осуществляли с использованием образцов трех независимых доноров, и представлены результаты, полученные для одного репрезентативного донора.
Затем тестировали T-клетки, экспрессирующие CD33 CAR, для создания которых использовали scFv фрагменты антител к CD33, полученные из M195, М2Н12 и Му9.6, в отношении их способности вызывать лизис экспрессирующих CD33 (CD33+) раковых клеток-мишеней (U937: клетка человеческой лейкемической моноцитарной лимфомы и K562: клетка человеческого лейкоза, полученная из пациента с хроническим миелогенным лейкозом (CML)) следующим образом.
Анализ цитотоксичности
T-клетки, экспрессирующие анти-CD33 CAR, инкубировали в 96-луночных планшетах (100000 клеток/лунку) вместе с 10000 клеток-мишеней (экспрессирующих CD33) и 10000 контрольных (CD33neg) клеток в одной и той же лунке. Клетки-мишени и контрольные клетки метили флуоресцентными внутриклеточными красителями (CFSE или Cell Trace Violet) перед их совместным культивированием с CAR+-T-клетками. Совместные культуры инкубировали в течение 4 ч при 37°C в атмосфере с 5% СО2. После указанного периода инкубации клетки метили фиксирующим витальным красителем и анализировали с помощью проточной цитометрии. Определяли жизнеспособность каждой клеточной популяции (клетки-мишени или контрольные CD33neg-клетки) и рассчитывали % удельного клеточного лизиса. Анализы цитотоксичности осуществляли через 48 ч после трансфекции мРНК.
На фиг. 8 представлены данные об удельной цитолитической активности экспрессирующих CD33 CAR T-клеток. Анализы осуществляли через 48 ч после трансфекции мРНК CAR. T-клетки совместно культивировали с клетками U937+Jeko или K562+Jeko в течение 4 ч. Определяли жизнеспособность клеток для каждой клеточной линии в конце периода совместного культивирования и рассчитывали процент удельного клеточного лизиса.
Установлено, что все конструкции обладали активностью, при этом для Му9.6 V3 (Му9.6-3, SEQ ID NO: 68) CAR обнаружена более высокая общая активность относительно контроля, чем в случае других CAR.
В вышеприведенных примерах продемонстрировано, что приведенные в качестве примера структуры CAR (V1, V3 и V5), которые содержат последовательность VH-линкер-VL, связывающуюся с CD33, обладали активностью во всех анализах.
Установлено, что CAR, имеющие структуры V1 и V3, оказались наиболее активными при оценке с помощью анализа дегранруляции, анализа высвобождения INFγ и анализа цитотоксичности (см. фиг. 4-8).
Таким образом, в настоящем изобретении предложны экспрессирующие анти-CD33 CAR T-клетки, обладающие активностью в отношении раколвых клеток.
Примеры полипептидных последовательностей CAR:
Ссылки
Arimondo Р.В., С.J. Thomas и др., "Exploring the cellular activity of camptothecin-triple-helix-forming oligonucleotide conjugates", Mol Cell Biol 26(1), 2006, cc. 324-333.
Atkins J.F., N.M. Wills и др., "A case for "StopGo": reprogramming translation to augment codon meaning of GGN by promoting unconventional termination (Stop) after addition of glycine and then allowing continued translation (Go)", Rna 13(6), 2007, cc. 803-810.
Bierer В.E., G. Hollander и др., "Cyclosporin A and FK506: molecular mechanisms of immunosuppression and probes for transplantation biology", Curr Qpin Immunol 5(5), 1993, cc. 763-773.
Boch J., H. Scholze и др., "Breaking the code of DNA binding specificity of TAL-type III effectors", Science 326(5959), 2009, cc. 1509-1512.
Choulika A., A. Perrin и др., "Induction of homologous recombination in mammalian chromosomes by using the I-SceI system of Saccharomyces cerevisiae", Mol Cell Biol 15(4), 1995, cc. 1968-1973.
Christian M., T. Cermak и др., "Targeting DNA double-strand breaks with TAL effector nucleases", Genetics 186(2), 2010, cc. 757-761.
Cong L., F.A. Ran и др., "Multiplex genome engineering using CRISPR/Cas systems", Science 339(6121), 2013, cc. 819-823.
Cros E. и др., "Problems related to resistance to cytarabine in acute myeloid leukemia", Leukemia & Lymphoma. 45(6), 2004, cc. 1123-1132.
Deltcheva E., K. Chylinski и др., "CRISPR RNA maturation by trans-encoded small RNA and host factor RNase III". Nature 471(7340). 2011, cc. 602-607.
Donnelly M. и G. Elliott, "Nuclear localization and shuttling of herpes simplex virus tegument protein VP13/14", J Virol 75(6), 2001, cc. 2566-2574.
Doronina V.A., C. Wu и др., "Site-specific release of nascent chains from ribosomes at a sense codon", Mol Cell Biol 28(13), 2008, cc. 4227-4239.
Eisenschmidt K., T. Lanio и др., "Developing a programmed restriction endonuclease for highly specific DNA cleavage", Nucleic Acids Res 33(22), 2005, cc. 7039-7047.
Gardin С. и др., "Postremission treatment of elderly patients with acute myeloid leukemia in first complete remission after intensive induction chemotherapy : results of the multicenter randomized Acute Leukemia French Association (ALFA) 9803 trial", Blood. 109(12), 2007, cc. 5129-5135.
Garneau J.E., M.E. Dupuis и др., "The CRISPR/Cas bacterial immune system cleaves bacteriophage and plasmid DNA", Nature 468(7320), 2010, cc. 67-71.
Gasiunas G., R. Barrangou и др., "Cas9-crRNA ribonucleoprotein complex mediates specific DNA cleavage for adaptive immunity in bacteria", Proc Natl Acad Sci USA 109(39), 2012, cc. E2579-2586.
Henderson D.J., I. Naya и др., "Comparison of the effects of FK-506, cyclosporin A and rapamycin on IL-2 production", Immunology 73(3), 1991, cc. 316-321.
Jena В., G. Dotti и др., "Redirecting T-cell specificity by introducing a tumor-specific chimeric antigen receptor", Blood 116(7), 2010, cc. 1035-1044.
Jinek M., K. Chylinski и др., "A programmable dual-RNA-guided DNA endonuclease in adaptive bacterial immunity", Science 337(6096), 2012, cc. 816-821.
June С.H. и др., "T Cells with Chimeric Antigen Receptors Have Potent Antitumor Effects and Can Establish Memory in Patients with Advanced Leukemia", Sci. Transl. Med. 3(95):ra73, 2011.
Kalish J.M. и P.M. Glazer, "Targeted genome modification via triple helix formation", Ann N Y Acad Sci 1058, 2005, cc. 151-161.
Li Т., S. Huang и др., "TAL nucleases (TALNs): hybrid proteins composed of TAL effectors and FokI DNA-cleavage domain", Nucleic Acids Res 39(1), 2011, cc. 359-372.
Liu J., M.W. Albers и др., "Inhibition of T cell signaling by immunophilin-ligand complexes correlates with loss of calcineurin phosphatase activity", Biochemistry 31(16). 1992, cc. 3896-38901.
Mali P., L. Yang и др., "RNA-guided human genome engineering via Cas9", Science 339(6121), 2013, cc. 823-826.
Maniecki M.B. и др., "Is hepatotoxicity in patients treated with gemtuzumabozogamicin due to specific targeting of hepatocytes?", Leukemia Research. 2011, cc. e84-e86.
Moscou M.J. и A.J. Bogdanove, "A simple cipher governs DNA recognition by TAL effectors", Science 326(5959), 2009, c. 1501.
Paques F. и P. Duchateau, "Meganucleases and DNA double-strand break-induced recombination: perspectives for gene therapy", Curr Gene Ther 7(1), 2007, cc. 49-66.
Park T.S., S.A. Rosenberg т др., "Treating cancer with genetically engineered T cells", Trends Biotechnol 29(11), 2011, cc. 550-557.
Peipp M., D. Saul и др., "Efficient eukaryotic expression of fluorescent scFv fusion proteins directed against CD antigens for FACS applications", J Immunol Methods 285(2), 2004, cc. 265-280.
Perrin A., M. Buckle и др., "Asymmetrical recognition and activity of the I-Scel endonuclease on its site and on intron-exon junctions", Embo J 12(7), 1993, cc. 2939-2947.
Pingoud А. и G.H. Silva, "Precision genome surgery", Nat Biotechnol 25(7), 2007), cc. 743-744.
Porteus M.H. и D. Carroll, "Gene targeting using zinc finger nucleases", Nat Biotechnol 23(8), 2005, cc. 967-973.
Rouet P., F. Smih и др, "Introduction of double-strand breaks into the genome of mouse cells by expression of a rare-cutting endonuclease", Mol Cell Biol 14(12), 1994, cc. 8096-8106.
Schwemmlein M. и др., "A CD33-specific single-chain immunotoxin mediates potent apoptosis of cultured human myeloid leukaemia cells", British Journal of Haematology. 133(2), 2006, cc. 141-151
Sorek R., С.M. Lawrence и др., "CRISPR-mediated Adaptive Immune Systems in Bacteria and Archaea", Annu Rev Biochem., 2013.
Stoddard B.L., "Homing endonuclease structure and function", Q Rev Biophys 38(1), 2005, cc. 49-95.
Vitale С. и др., «Surface expression and function of p75/AIRM-1 or CD33 in acute myeloid leukemias: engagement of CD33 induces apoptosis of leukemic cells», PNAS 98. 2001, cc. 5764-5769.
Claims (51)
1. CD33-специфический химерный антигенный рецептор (CAR), имеющий полипептидную структуру, выбранную из V1, V3 и V5, которые проиллюстрированы на фигуре 2, где структура содержит: (а) внеклеточный лигандсвязывающий домен, содержащий VH и VL из моноклонального антитела к CD33, (б) шарнир, выбранный из шарнира FcRIIIα, шарнира CD8α и шарнира IgG1, (в) трансмембранный домен CD8a и (г) цитоплазматический домен, включающий сигнальный домен CD3дзета и костимуляторный домен из 4-1ВВ.
2. CD33-специфический CAR по п. 1, в котором указанная структура V3 содержит шарнир CD8a и трансмембранный домен CD8α.
3. CD33-специфический CAR по п. 2, в котором указанный шарнир CD8α идентичен по меньше мере на 80% SEQ ID NO: 4.
4. CD33-специфический CAR, имеющий структуру V3 по п. 2 или 3, который содержит полипептидную последовательность, идентичную по меньшей мере на 80% SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 29 и SEQ ID NO: 30.
5. CD33-специфический CAR по п. 1, в котором указанная структура VI содержит шарнир FcγRIIIα и трансмембранный домен CD8α.
6. CD33-специфический CAR по п. 5, в котором указанный шарнир FcγRIIIα идентичен по меньше мере на 80% SEQ ID NO: 3.
7. CD33-специфический CAR, имеющий структуру VI по п. 5 или 6, который содержит полипептидную последовательность, идентичную по меньшей мере на 80% SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 21 и SEQ ID NO: 22.
8. CD33-специфический CAR по п. 1, в котором указанная структура V5 содержит шарнир IgG1 и трансмембранный домен CD8α.
9. CD33-специфический CAR по п. 8, в котором указанный шарнир IgG1 идентичен по меньше мере на 80% SEQ ID NO: 5.
10. CD33-специфический CAR, имеющий структуру V5, по п. 8 или 9, который содержит полипептидную последовательность, идентичную по меньшей мере на 80% SEQ ID NO: 35, SEQ ID NO: 36, SEQ ID NO: 37 и SEQ ID NO: 38.
11. CD33-специфический CAR по одному из пп. 1-3, 5, 6, 8 или 9, в котором указанная VH идентична по меньшей мере на 80% полипептидной последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 15 и SEQ ID NO: 17, и указанная VL идентична по меньшей мере на 80% полипептидной последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 16 и SEQ ID NO: 18.
12. CD33-специфический CAR по п. 1, в котором костимуляторный домен из 4-1ВВ идентичен по меньшей мере на 80% SEQ ID NO: 8.
13. CD33-специфический CAR по п. 1, в котором указанный сигнальный домен CD3дзета идентичен по меньшей мере на 80% SEQ ID NO: 9.
14. CD33-специфический CAR по п. 1, в котором указанный трансмембранный домен CD8α идентичен по меньшей мере на 80% SEQ ID NO: 6.
15. CD33-специфический CAR по п. 1, дополнительно содержащий сигнальный пептид.
16. CD33-специфический CAR по п. 15, в котором последовательность указанного сигнального пептида идентична по меньшей мере на 80% SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 2.
17. CD33-специфический CAR по п. 1 или 15, дополнительно содержащий другой внеклеточный лигандсвязывающий домен, не специфический в отношении CD33.
18. Полинуклеотид, кодирующий CAR по одному из пп. 1-17.
19. Экспрессионный вектор, содержащий полинуклеотид по п. 18.
20. Сконструированная иммунная клетка, экспрессирующая на мембране клеточной поверхности CD33-специфический CAR по одному из пп. 1-17.
21. Сконструированная иммунная клетка по п. 20, полученная из воспалительных Т-лимфоцитов, цитотоксических Т-лимфоцитов, регуляторных Т-лимфоцитов или хелперных Т-лимфоцитов.
22. Сконструированная иммунная клетка по п. 21, в которой экспрессия TCR подавлена.
23. Сконструированная иммунная клетка по п. 20, в которой экспрессия CD33 подавлена.
24. Сконструированная иммунная клетка по одному из пп. 20-23, где указанная сконструированная иммунная клетка модифицирована для приобретения устойчивости по меньшей мере к одному иммуносупрессорному или химиотерапевтическому лекарственному средству.
25. Применение сконструированной иммунной клетки по одному из пп. 20-24 для лечения у пациента предзлокачественного или злокачественного, связанного с раком состояния, отличающегося присутствием экспрессирующих CD33 клеток.
26. Применение по п. 25, где пациент представляет собой человека.
27. Применение по п. 25 или 26, где состояние представляет собой состояние, отличающееся избыточным количеством экспрессирующих CD33 клеток.
28. Применение по п. 27, где состояние представляет собой связанное с гематологическим раком состояние.
29. Применение по п. 28, где связанное с гематологическим раком состояние представляет собой лейкоз.
30. Применение по п. 29, где указанный лейкоз выбран из группы, состоящей из острого миелогенного лейкоза (AML), хронического миелогенного лейкоза, миелодиспластического синдрома, острого лимфоидного лейкоза, хронического лимфоидного лейкоза и миелодиспластического синдрома.
31. Применение по п. 30, где указанный лейкоз представляет собой острый миелогенный лейкоз (AML).
32. Применение по п. 28, где гематологический рак представляет собой злокачественное лимфопролиферативное нарушение.
33. Применение по п. 32, где указанное злокачественное лимфопролиферативное нарушение представляет собой лимфому.
34. Применение по п. 33, где указанная лимфома выбрана из группы, состоящей из множественной миеломы, неходжскинской лимфомы, лимфомы Беркитта и фолликулярной лимфомы (мелкоклеточной и крупноклеточной).
35. Способ разрушения клетки гематологического рака, заключающийся в том, что приводят в контакт указанную клетку гематологического рака со сконструированной иммунной клеткой по одному из пп. 20-24 в количестве, эффективном для разрушения указанной раковой клетки.
36. Способ создания иммунной клетки, включающий:
(в) получение иммунной клетки,
(г) осуществление экспрессии на поверхности указанной клетки по меньшей мере одного CD33-специфического химерного антигенного рецептора по одному из пп. 1-17.
37. Способ создания иммунной клетки по п. 36, включающий:
(д) получение иммунной клетки,
(е) интродукцию в указанную клетку по меньшей мере одного полинуклеотида, кодирующего указанный CD33-специфический химерный антигенный рецептор,
(ж) осуществление экспрессии указанного полинуклеотида в указанной клетке, необязательно экспрессирующей указанный CD33-специфический химерный антигенный рецептор.
38. Способ создания иммунной клетки по п. 36 или 37, включающий:
(б) получение иммунной клетки,
(в) интродукцию в указанную клетку по меньшей мере одного полинуклеотида, кодирующего указанный CD33-специфический химерный антигенный рецептор,
(г) интродукцию по меньшей мере одного другого химерного антигенного рецептора, который не является специфическим в отношении CD33.
39. Способ лечения предзлокачественного или злокачественного, связанного с раком состояния, отличающегося присутствием экспрессирующих CD33 клеток, у индивидуума, который нуждается в этом, включающий:
(в) получение иммунной клетки, которая экспрессирует на поверхности CD33-специфический химерный антигенный рецептор по одному из пп. 1-17;
(г) введение указанных иммунных клеток указанному пациенту.
40. Способ по п. 39, в котором указанную иммунную клетку получают из донора.
41. Способ по п. 39, в котором указанную иммунную клетку получают из организма самого пациента.
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
DKPA201470171 | 2014-04-03 | ||
DKPA201470171 | 2014-04-03 | ||
PCT/EP2015/057331 WO2015150526A2 (en) | 2014-04-03 | 2015-04-02 | Cd33 specific chimeric antigen receptors for cancer immunotherapy |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2016143155A RU2016143155A (ru) | 2018-05-04 |
RU2016143155A3 RU2016143155A3 (ru) | 2018-10-23 |
RU2701341C2 true RU2701341C2 (ru) | 2019-09-25 |
Family
ID=50486692
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2016143155A RU2701341C2 (ru) | 2014-04-03 | 2015-04-02 | Cd33-специфические химерные антигенные рецепторы для иммунотерапии рака |
Country Status (13)
Country | Link |
---|---|
US (3) | US9944702B2 (ru) |
EP (1) | EP3126390B1 (ru) |
JP (1) | JP6673848B2 (ru) |
KR (1) | KR102170533B1 (ru) |
CN (1) | CN106795221B (ru) |
AU (1) | AU2015239069B2 (ru) |
CA (1) | CA2944528C (ru) |
DK (1) | DK3126390T3 (ru) |
ES (1) | ES2765710T3 (ru) |
IL (1) | IL247917B (ru) |
MX (1) | MX370788B (ru) |
RU (1) | RU2701341C2 (ru) |
WO (1) | WO2015150526A2 (ru) |
Families Citing this family (63)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US10689609B2 (en) | 2012-03-15 | 2020-06-23 | Flodesign Sonics, Inc. | Acoustic bioreactor processes |
US9458450B2 (en) | 2012-03-15 | 2016-10-04 | Flodesign Sonics, Inc. | Acoustophoretic separation technology using multi-dimensional standing waves |
US9752113B2 (en) | 2012-03-15 | 2017-09-05 | Flodesign Sonics, Inc. | Acoustic perfusion devices |
US10704021B2 (en) | 2012-03-15 | 2020-07-07 | Flodesign Sonics, Inc. | Acoustic perfusion devices |
US9950282B2 (en) | 2012-03-15 | 2018-04-24 | Flodesign Sonics, Inc. | Electronic configuration and control for acoustic standing wave generation |
US10967298B2 (en) | 2012-03-15 | 2021-04-06 | Flodesign Sonics, Inc. | Driver and control for variable impedence load |
US10322949B2 (en) | 2012-03-15 | 2019-06-18 | Flodesign Sonics, Inc. | Transducer and reflector configurations for an acoustophoretic device |
US9745548B2 (en) | 2012-03-15 | 2017-08-29 | Flodesign Sonics, Inc. | Acoustic perfusion devices |
US10737953B2 (en) | 2012-04-20 | 2020-08-11 | Flodesign Sonics, Inc. | Acoustophoretic method for use in bioreactors |
US9745569B2 (en) | 2013-09-13 | 2017-08-29 | Flodesign Sonics, Inc. | System for generating high concentration factors for low cell density suspensions |
WO2015105955A1 (en) | 2014-01-08 | 2015-07-16 | Flodesign Sonics, Inc. | Acoustophoresis device with dual acoustophoretic chamber |
CA2945620C (en) | 2014-04-14 | 2022-12-06 | Cellectis | Bcma (cd269) specific chimeric antigen receptors for cancer immunotherapy |
US9744483B2 (en) | 2014-07-02 | 2017-08-29 | Flodesign Sonics, Inc. | Large scale acoustic separation device |
BR112017001242A2 (pt) * | 2014-07-21 | 2017-12-05 | Novartis Ag | tratamento de câncer usando um receptor antigênico quimérico a cd33 |
US11377651B2 (en) | 2016-10-19 | 2022-07-05 | Flodesign Sonics, Inc. | Cell therapy processes utilizing acoustophoresis |
US11708572B2 (en) | 2015-04-29 | 2023-07-25 | Flodesign Sonics, Inc. | Acoustic cell separation techniques and processes |
US11021699B2 (en) | 2015-04-29 | 2021-06-01 | FioDesign Sonics, Inc. | Separation using angled acoustic waves |
US11459540B2 (en) | 2015-07-28 | 2022-10-04 | Flodesign Sonics, Inc. | Expanded bed affinity selection |
US11474085B2 (en) | 2015-07-28 | 2022-10-18 | Flodesign Sonics, Inc. | Expanded bed affinity selection |
CA3001859A1 (en) | 2015-10-16 | 2017-04-20 | The Trustees Of Columbia University In The City Of New York | Compositions and methods for inhibition of lineage specific antigens |
AU2017244108B2 (en) * | 2016-03-29 | 2021-03-18 | University Of Southern California | Chimeric antigen receptors targeting cancer |
US11085035B2 (en) | 2016-05-03 | 2021-08-10 | Flodesign Sonics, Inc. | Therapeutic cell washing, concentration, and separation utilizing acoustophoresis |
US11214789B2 (en) | 2016-05-03 | 2022-01-04 | Flodesign Sonics, Inc. | Concentration and washing of particles with acoustics |
AU2017279548B2 (en) * | 2016-06-08 | 2024-08-08 | Precigen, Inc. | CD33 specific chimeric antigen receptors |
CN110494543A (zh) | 2016-10-19 | 2019-11-22 | 弗洛设计声能学公司 | 通过声学的亲和细胞提取 |
TW201829463A (zh) | 2016-11-18 | 2018-08-16 | 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 | 抗hla-g抗體及其用途 |
EP3589291A4 (en) | 2017-02-28 | 2020-11-25 | Vor Biopharma, Inc. | COMPOSITIONS AND METHODS OF INHIBITION OF LINE-SPECIFIC PROTEINS |
WO2018175988A1 (en) * | 2017-03-24 | 2018-09-27 | Lentigen Technology, Inc. | Compositions and methods for treating cancer with anti-cd33 immunotherapy |
JP2020517259A (ja) | 2017-04-19 | 2020-06-18 | ボード・オブ・リージエンツ,ザ・ユニバーシテイ・オブ・テキサス・システム | 操作された抗原受容体を発現する免疫細胞 |
WO2018200562A1 (en) * | 2017-04-24 | 2018-11-01 | Memorial Sloan Kettering Cancer Center | Anti-cd33 antibody agents |
AU2018269370A1 (en) | 2017-05-16 | 2019-12-05 | The Johns Hopkins University | Manabodies and methods of using |
EP3655440A4 (en) | 2017-07-20 | 2021-10-13 | H. Lee Moffitt Cancer Center And Research Institute, Inc. | COMPOSITIONS AND PROCEDURES FOR CD33 EXPRESSING CARCINOMA |
EP3687569A1 (en) | 2017-09-29 | 2020-08-05 | Cell Design Labs, Inc. | Methods of making bispecific anti-cd307e and anti-bcma chimeric antigen receptors and uses of the same |
WO2019084234A1 (en) * | 2017-10-26 | 2019-05-02 | St. Jude Childen's Research Hospital, Inc. | METHODS AND COMPOSITIONS FOR TREATING CD33 + CANCERS AND IMPROVING IN VIVO PERSISTENCE OF CHIMERIC ANTIGEN RECEPTOR T CELLS |
GB201719646D0 (en) * | 2017-11-27 | 2018-01-10 | Bivictrix Therapeutics Ltd | Therapy |
EP3720559A4 (en) * | 2017-12-04 | 2021-10-06 | Actinium Pharmaceuticals, Inc. | METHOD OF TREATMENT OF PATIENTS WITH MYELODYLOPLASTIC SYNDROMS |
WO2019118921A1 (en) | 2017-12-14 | 2019-06-20 | Flodesign Sonics, Inc. | Acoustic transducer drive and controller |
CN108047333B (zh) * | 2018-01-15 | 2021-05-25 | 浙江阿思科力生物科技有限公司 | 以cd33为靶点的特异性抗体、car-nk细胞及其制备和应用 |
US20210017277A1 (en) * | 2018-03-14 | 2021-01-21 | The United States Of America,As Represented By The Secretary,Department Of Health And Human Services | Anti-cd33 chimeric antigen receptors and their uses |
EP3768700A1 (en) | 2018-03-23 | 2021-01-27 | Kite Pharma, Inc. | Chimeric transmembrane proteins and uses thereof |
AR115052A1 (es) * | 2018-04-18 | 2020-11-25 | Hoffmann La Roche | Anticuerpos multiespecíficos y utilización de los mismos |
CN110551741A (zh) * | 2018-06-01 | 2019-12-10 | 上海恒润达生生物科技有限公司 | 靶向cd33的嵌合抗原受体及其用途 |
AU2019282620A1 (en) * | 2018-06-04 | 2020-12-17 | Precigen, Inc. | MUC16 specific chimeric antigen receptors and uses thereof |
EP3806888B1 (en) | 2018-06-12 | 2024-01-31 | Obsidian Therapeutics, Inc. | Pde5 derived regulatory constructs and methods of use in immunotherapy |
SG11202011751WA (en) | 2018-06-22 | 2021-01-28 | Kite Pharma Inc | Chimeric transmembrane proteins and uses thereof |
CN110856724B (zh) * | 2018-08-24 | 2022-05-27 | 杭州康万达医药科技有限公司 | 包含核酸及car修饰的免疫细胞的治疗剂及其应用 |
EP3844187A1 (en) | 2018-08-28 | 2021-07-07 | Vor Biopharma, Inc. | Genetically engineered hematopoietic stem cells and uses thereof |
US20220348682A1 (en) | 2018-08-30 | 2022-11-03 | Innovative Cellular Therapeutics Holdings, Ltd. | Chimeric antigen receptor cells for treating solid tumor |
EP3849565A4 (en) * | 2018-09-12 | 2022-12-28 | Fred Hutchinson Cancer Research Center | REDUCING CD33 EXPRESSION FOR SELECTIVE PROTECTION OF THERAPEUTIC CELLS |
EP3870600A1 (en) | 2018-10-24 | 2021-09-01 | Obsidian Therapeutics, Inc. | Er tunable protein regulation |
WO2020095107A1 (en) * | 2018-11-07 | 2020-05-14 | Crispr Therapeutics Ag | Anti-cd33 immune cell cancer therapy |
CA3126677A1 (en) * | 2019-01-16 | 2020-07-23 | The Trustees Of Columbia University In The City Of New York | Compositions and methods for inhibition of lineage specific antigens |
WO2020219425A1 (en) * | 2019-04-25 | 2020-10-29 | Seattle Children's Hospital (dba Seattle Children's Research Institute) | Combinatorial car t cell and hematopoeitic stem cell genetic engineering for specific immunotherapy of myeloid leukemias |
CN114007642A (zh) | 2019-04-30 | 2022-02-01 | 森迪生物科学公司 | 嵌合受体及其使用方法 |
CA3142159A1 (en) * | 2019-05-31 | 2020-12-03 | City Of Hope | Cd33 targeted chimeric antigen receptor modified t cells for treatment of cd33 positive malignancies |
WO2021046451A1 (en) | 2019-09-06 | 2021-03-11 | Obsidian Therapeutics, Inc. | Compositions and methods for dhfr tunable protein regulation |
US12076343B2 (en) | 2020-02-19 | 2024-09-03 | Innovative Cellular Therapeutics Holdings, Ltd. | Engineered safety in cell therapy |
EP4126959A4 (en) * | 2020-03-31 | 2024-05-08 | Fred Hutchinson Cancer Center | CHIMERIC ANTIGEN RECEPTORS TARGETING CD33 |
US12043654B2 (en) | 2020-06-02 | 2024-07-23 | Innovative Cellular Therapeutics Holdings, Ltd. | Anti-GCC antibody and CAR thereof for treating digestive system cancer |
JP2024500847A (ja) | 2020-12-18 | 2024-01-10 | センチュリー セラピューティクス,インコーポレイテッド | 適合可能な受容体特異性を有するキメラ抗原受容体システム |
WO2022266075A1 (en) | 2021-06-14 | 2022-12-22 | Caribou Biosciences, Inc. | Methods and materials for treating cancer using car constructs with an intracellular domain comprising a stap domain and a kinase domain or a stap domain and a phosphatase domain |
CN113527435B (zh) * | 2021-07-14 | 2022-06-07 | 呈诺再生医学科技(珠海横琴新区)有限公司 | 对前列腺癌细胞特异性识别的新型多肽及其衍生物与应用 |
GB202204386D0 (en) * | 2022-03-28 | 2022-05-11 | Cambridge Entpr Ltd | Engineered immune cell platform |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2129018C1 (ru) * | 1993-12-24 | 1999-04-20 | Мерк Патент Гмбх | Иммуноконьюгат, способ получения иммуноконьюгата и фармацевтическая композиция |
WO2012079000A1 (en) * | 2010-12-09 | 2012-06-14 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Use of chimeric antigen receptor-modified t cells to treat cancer |
Family Cites Families (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20030229208A1 (en) | 1988-12-28 | 2003-12-11 | Protein Design Labs, Inc. | Humanized immunoglobulins |
EA010570B1 (ru) * | 2002-11-07 | 2008-10-30 | Иммьюноджен, Инк. | Антитело к cd33 и способы его применения |
DE102009045006A1 (de) | 2009-09-25 | 2011-04-14 | Technische Universität Dresden | Anti-CD33 Antikörper und ihre Anwendung zum Immunotargeting bei der Behandlung von CD33-assoziierten Erkrankungen |
PT2496698T (pt) * | 2009-11-03 | 2019-04-18 | Hope City | Recetor de fator de crescimento epidermal truncado (egfrt) para seleção de células t transduzidas |
AU2013221672B2 (en) * | 2012-02-13 | 2017-11-09 | Seattle Children's Hospital D/B/A Seattle Children's Research Institute | Bispecific chimeric antigen receptors and therapeutic uses thereof |
US20130309223A1 (en) | 2012-05-18 | 2013-11-21 | Seattle Genetics, Inc. | CD33 Antibodies And Use Of Same To Treat Cancer |
MX370265B (es) | 2012-05-25 | 2019-12-09 | Cellectis | Métodos para manipular por ingeniería genética célula t alogénica y resistente a inmunosupresores para inmunoterapia. |
-
2015
- 2015-04-02 JP JP2016560555A patent/JP6673848B2/ja active Active
- 2015-04-02 CN CN201580027233.3A patent/CN106795221B/zh active Active
- 2015-04-02 ES ES15713513T patent/ES2765710T3/es active Active
- 2015-04-02 KR KR1020167030892A patent/KR102170533B1/ko active IP Right Grant
- 2015-04-02 CA CA2944528A patent/CA2944528C/en active Active
- 2015-04-02 MX MX2016012855A patent/MX370788B/es active IP Right Grant
- 2015-04-02 AU AU2015239069A patent/AU2015239069B2/en active Active
- 2015-04-02 EP EP15713513.8A patent/EP3126390B1/en active Active
- 2015-04-02 RU RU2016143155A patent/RU2701341C2/ru active
- 2015-04-02 WO PCT/EP2015/057331 patent/WO2015150526A2/en active Application Filing
- 2015-04-02 US US15/301,686 patent/US9944702B2/en active Active
- 2015-04-02 DK DK15713513.8T patent/DK3126390T3/da active
-
2016
- 2016-09-19 IL IL247917A patent/IL247917B/en active IP Right Grant
-
2018
- 2018-03-20 US US15/926,755 patent/US20190002561A1/en not_active Abandoned
-
2023
- 2023-10-26 US US18/495,109 patent/US20240182565A1/en active Pending
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2129018C1 (ru) * | 1993-12-24 | 1999-04-20 | Мерк Патент Гмбх | Иммуноконьюгат, способ получения иммуноконьюгата и фармацевтическая композиция |
WO2012079000A1 (en) * | 2010-12-09 | 2012-06-14 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Use of chimeric antigen receptor-modified t cells to treat cancer |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
WO 2012079000 A1, 14.06.2012, формула, стр.30-33, 51. Helene M. Finney, Activation of Resting Human Primary T Cells with Chimeric Receptors: Costimulation from CD28, Inducible Costimulator, CD134, and CD137 in Series with Signals from the TCRζ Chain, J Immunol January 1, 2004, 172 (1) 104-113, p.105, 106, фиг.3. * |
формула, стр.30-33, 51. Helene M. Finney, Activation of Resting Human Primary T Cells with Chimeric Receptors: Costimulation from CD28, Inducible Costimulator, CD134, and CD137 in Series with Signals from the TCRζ Chain, J Immunol January 1, 2004, 172 (1) 104-113, p.105, 106, фиг.3. * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN106795221B (zh) | 2022-06-07 |
ES2765710T3 (es) | 2020-06-10 |
EP3126390B1 (en) | 2019-10-16 |
CN106795221A (zh) | 2017-05-31 |
BR112016022369A2 (pt) | 2017-10-10 |
US9944702B2 (en) | 2018-04-17 |
AU2015239069B2 (en) | 2020-02-20 |
KR102170533B1 (ko) | 2020-10-27 |
JP2017515460A (ja) | 2017-06-15 |
IL247917B (en) | 2020-11-30 |
US20190002561A1 (en) | 2019-01-03 |
DK3126390T3 (da) | 2020-01-20 |
EP3126390A2 (en) | 2017-02-08 |
RU2016143155A (ru) | 2018-05-04 |
JP6673848B2 (ja) | 2020-03-25 |
CA2944528C (en) | 2021-08-10 |
MX370788B (es) | 2020-01-06 |
WO2015150526A3 (en) | 2015-11-26 |
CA2944528A1 (en) | 2015-10-08 |
WO2015150526A2 (en) | 2015-10-08 |
MX2016012855A (es) | 2016-12-12 |
RU2016143155A3 (ru) | 2018-10-23 |
IL247917A0 (en) | 2016-11-30 |
US20170145094A1 (en) | 2017-05-25 |
US20240182565A1 (en) | 2024-06-06 |
AU2015239069A1 (en) | 2016-10-06 |
KR20170002412A (ko) | 2017-01-06 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
RU2701341C2 (ru) | Cd33-специфические химерные антигенные рецепторы для иммунотерапии рака | |
US11007224B2 (en) | CD19 specific chimeric antigen receptor and uses thereof | |
JP7222954B2 (ja) | 癌免疫療法のための栄養膜糖タンパク質(5t4、tpbg)特異的キメラ抗原受容体 | |
US20240269178A1 (en) | Cd19 specific chimeric antigen receptor and uses thereof | |
KR20170036087A (ko) | 암 면역요법을 위한 EGFRvIII 특이적 키메라 항원 수용체 | |
RU2775453C2 (ru) | Сконструированные универсальные иммунные клетки с анти-cd22 химерным антигенным рецептором | |
BR112016022369B1 (pt) | Receptor quimérico de antígeno específico para cd33, usos de células imune engenheiradas e método ex vivo de elaboração das mesmas | |
NZ714044B2 (en) | Cd19 specific chimeric antigen receptor and uses thereof |