TWI726879B - 抗ｃｄ７１抗體類、可活化之抗ｃｄ７１抗體類及使用彼等之方法 - Google Patents

抗ｃｄ７１抗體類、可活化之抗ｃｄ７１抗體類及使用彼等之方法 Download PDF

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喬納森 泰瑞特
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Abstract

本發明大抵關於結合CD71之抗體、專一性結合CD71之可活化之抗體及製造及使用該等抗CD71抗體及抗CD71可活化之抗體於各種治療、診斷及預防適應症之方法。

Description

抗CD71抗體類、可活化之抗CD71抗體類及使用彼等之方法 相關申請
本申請案主張下列美國臨時申請案之權益：案號62/156,838，其於2015年5月4日申請；案號62/257,321，其於2015年11月19日申請；案號62/257,484，其於2015年11月19日申請；案號62/277,775，其於2016年1月12日申請；案號62/310,553，其於2016年3月18日申請；及案號62/315,276，其於2016年3月30日申請，彼等之內容係以引用方式全部併入本文。
本發明大抵關於與CD71結合之抗體、專一地結合CD71之可活化之抗體及製造和使用該等抗CD71抗體及抗CD71可活化之抗體在各種治療、診斷及預防適應症之方法。
以抗體為基礎之療法已被證實對於數種疾病為有效的治療，但在一些案例中，由於廣泛的標的表現性之毒性亦限制其治療有效性。此外，以抗體為基礎之療法已經展現出其他限制，例如投予後從循環中快速清除。
在小分子療法的領域中，已發展出可提供活性化學實體的前藥之策略。彼等前藥係以相對無活性(或顯著較低活性)的形式投予。一旦投予，此前藥在活體內被代謝成活性化合物。該前藥策略可提供藥物對於其預定標的增加的選擇性和不良反應的降低。
因此，在以抗體為基礎之療法領域中對於模仿小分子前藥的理想特性之抗體有持續性的需求。
本發明提供專一性結合CD71之抗體或彼之抗原結合片段，其中CD71亦稱為轉鐵蛋白受體蛋白(TfR1)。
在一些實施態樣中，此抗體包含專一性結合CD71之抗體或彼之抗原結合片段。在一些實施態樣中，專一性結合CD71之抗體或彼之抗原結合片段係單株抗體、結構域抗體、單鏈、Fab片段、F(ab’)2片段、scFv、scAb、dAb、單域重鏈抗體或單域輕鏈抗體。在一些實施態樣中，結合CD71之此抗體或其抗原結合片段係小鼠、其他齧齒目、嵌合體、人化或全人單株抗體。
在一些實施態樣中，該抗體或其抗原結合片段包含選自由SEQ ID NO：1及3-5所組成之群組的重鏈變異區胺基酸序列。在一些實施態樣中，該抗體或其抗原結合片段包含選自由SEQ ID NO：3-5所組成之群組的重鏈變異區胺基酸序列。
在一些實施態樣中，該抗體或其抗原結合片段包含選自由SEQ ID NO：2和6-8所組成之群組的輕鏈變異區胺基酸序列。在一些實施態樣中，該抗體或其抗原結合片段包含選自由SEQ ID NO：6-8所組成之群組的輕鏈變異區胺基酸序列。
在一些實施態樣中，該抗體或其抗原結合片段包含選自由SEQ ID NO：1和3-5所組成之群組的重鏈變異區胺基酸序列，及選自由SEQ ID NO：2和6-8所組成之群組的輕鏈變異區胺基酸序列或其抗原結合片段。
在一些實施態樣中，該抗體或其抗原結合片段包含選自由SEQ ID NO：3-5所組成之群組的重鏈變異區胺基酸序列和由SEQ ID NO：6-8所組成之群組的輕鏈變異區胺基酸序列。
在一些實施態樣中，該抗體或其抗原結合片段包含選自由SEQ ID NO：1和3-5所組成之群組的胺基酸序列至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%相同的重鏈變異區胺基酸序列。在一些實施態樣中，該抗體或其抗原結合片段包含選自由SEQ ID NO：3-5所組成之群組的胺基酸序列至少90%、91%、 92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%相同的重鏈變異區胺基酸序列。
在一些實施態樣中，該抗體或其抗原結合片段包含選自由SEQ ID NO：2和6-8所組成之群組的胺基酸序列至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%相同的輕鏈變異區胺基酸序列。在一些實施態樣中，該抗體或其抗原結合片段包含選自由SEQ ID NO：6-8所組成之群組的胺基酸序列至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%相同的輕鏈變異區胺基酸序列。
在一些實施態樣中，該抗體或其抗原結合片段包含選自由SEQ ID NO：1和3-5所組成之群組的胺基酸序列至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%相同的重鏈變異區胺基酸序列，以及選自由SEQ ID NO：2和6-8所組成之群組的胺基酸序列至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%相同的輕鏈變異區胺基酸序列。
在一些實施態樣中，抗體或其抗原結合片段包含選自由SEQ ID NO：3-5所組成之群組的胺基酸序列至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%相同的重鏈變異區胺基酸序列以及由SEQ ID NO：6-8所組成之群組的胺基酸序列至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或9.9%相同的輕鏈變異區胺基酸序列。
在一些實施態樣中，抗體或其抗原結合片段包含變異區重鏈互補性決定區域1(VH CDR1，於此亦稱為CDRH1)序列、變異區重鏈互補性決定區域2(VH CDR2，於此亦稱為CDRH2)序列、變異區重鏈互補性決定區域3(VH CDR3，於此亦稱為CDRH3)序列、變異區輕鏈互補性決定區域1(VL CDR1，於此亦稱為CDRL1)序列、變異區輕鏈互補性決定區域2(VL CDR2，於此亦稱為CDRL2)序列、變異區輕鏈互補性決定區域3(VL CDR3，於此亦稱為CDRL3)序列之組合，其中至少一互補性決定區域(CDR)序列係選自由下列所組成之群組：包含胺基酸序列GYTFTSYWMH(SEQ ID NO：9)之VH CDR1序列、包含胺基酸序列AIYPGNSETG(SEQ ID NO：10)之VH CDR2序列、包含胺基酸序列ENWDPGFAF(SEQ ID NO：11)之VH CDR3序列、包含胺基酸序列SASSSVYYMY(SEQ ID NO：12)或CRASSSVYYMY(SEQ ID NO：13)之VL CDR1序列、包含胺基酸序列STSNLAS(SEQ ID NO：14)之VL CDR2序列、包含胺基酸序列QQRRNYPYT(SEQ ID NO：15)之VL CDR3序列。
在一些實施態樣中，抗體和其抗原結合片段係包含VH CDR1序列、VH CDR2序列、VH CDR3序列、VL CDR1序列、VL CDR2序列、VL CDR3序列之組合，其中至少一CDR序列係選自由下列所組成之群組：VH CDR1序列至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高相同的包含胺基酸序列 GYTFTSYWMH(SEQ ID NO：9)之VH CDR1序列、VH CDR2序列至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高相同的包含胺基酸序列AIYPGNSETG(SEQ ID NO：10)之VH CDR2序列、VH CDR3序列至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高相同的包含胺基酸序列ENWDPGFAF(SEQ ID NO：11)之VH CDR3序列、VL CDR1序列至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高相同的包含胺基酸序列SASSSVYYMY(SEQ ID NO：12)或CRASSSVYYMY(SEQ ID NO：13)之VL CDR1序列、VL CDR2序列至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高相同的包含胺基酸序列STSNLAS(SEQ ID NO：14)之VL CDR2序列、VL CDR3序列至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高相同的包含胺基酸序列QQRRNYPYT(SEQ ID NO：15)之VL CDR3序列。
在一些實施態樣中，抗體或其抗原結合片段包含VH CDR1序列、VH CDR2序列、VH CDR3序列、VL CDR1序列、VL CDR2序列、VL CDR3序列之組合，其中VH CDR1序列包含胺基酸序列GYTFTSYWMH(SEQ ID NO：9)；VH CDR2序列包含胺基酸序列AIYPGNSETG(SEQ ID NO：10)；VH CDR3序列包含胺基酸序列ENWDPGFAF(SEQ ID NO：11)；VL CDR1序列包含胺基 酸序列SASSSVYYMY(SEQ ID NO：12)或CRASSSVYYMY(SEQ ID NO：13)；VL CDR2序列包含胺基酸序列STSNLAS(SEQ ID NO：14)；以及VL CDR3序列包含胺基酸序列QQRRNYPYT(SEQ ID NO：15)。
在一些實施態樣中，抗體和其抗原結合片段係包含VH CDR1序列、VH CDR2序列、VH CDR3序列、VL CDR1序列、VL CDR2序列、VL CDR3序列之組合，其中VH CDR1序列包含至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高和胺基酸序列GYTFTSYWMH(SEQ ID NO：9)相同之序列、VH CDR2序列包含至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高和胺基酸序列AIYPGNSETG(SEQ ID NO：10)相同之序列、VH CDR3序列包含至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高和胺基酸序列ENWDPGFAF(SEQ ID NO：11)相同之序列、VL CDR1序列包含至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高相同的包含ASSSVYYMY(SEQ ID NO：12)或CRASSSVYYMY(SEQ ID NO：13)相同之序列、VL CDR2序列包含至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高和胺基酸序列STSNLAS(SEQ ID NO：14)相同之序列、VL CDR3序列包含至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高和胺基酸序列QQRRNYPYT(SEQ ID NO：15)相同之序列。
在一些實施態樣中，抗體或其抗原結合片段係由核苷酸編碼含有重鏈胺基酸序列，其選自SEQ ID NO：1和3-5之群組之核苷酸序列所編碼組成。在一些實施態樣中，抗體或其抗原結合片段係由核苷酸編碼含有重鏈胺基酸序列，其選自SEQ ID NO：3-5之群組之核苷酸序列所編碼組成。
在一些實施態樣中，抗體或其抗原結合片段係由核苷酸編碼含有輕鏈胺基酸序列，其選自SEQ ID NO：2和6-8之群組之核苷酸序列所編碼組成。在一些實施態樣中，抗體或其抗原結合片段係由核苷酸編碼含有輕鏈胺基酸序列，其選自SEQ ID NO：6-8之群組之核苷酸序列所編碼組成。
在一些實施態樣中，抗體或其抗原結合片段係由核苷酸編碼含有重鏈胺基酸序列，其選自SEQ ID NO：1和3-5之群組，及核苷酸編碼含有輕鏈胺基酸序列，其選自SEQ ID NO：2和6-8之群組之核苷酸序列所編碼組成。
在一些實施態樣中，抗體或其抗原結合片段係由核苷酸編碼含有重鏈胺基酸序列，其選自SEQ ID NO：3-5之群組，及核苷酸編碼含有輕鏈胺基酸序列，其選自SEQ ID NO：6-8之群組之核苷酸序列所編碼組成。
在一些實施態樣中，抗體及其抗原結合片段係由包含至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、 96%、97%、98%、99%或更高和含有選自SEQ ID NO：1和3-5群組之重鏈胺基酸序列的核苷酸編碼相同之核苷酸序列所編碼而成。在一些實施態樣中，抗體及其抗原結合片段係由包含至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高和含有選自SEQ ID NO：3-5群組之重鏈胺基酸序列的核苷酸編碼相同之核苷酸序列所編碼而成。
在一些實施態樣中，抗體及其抗原結合片段係由包含至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高和含有選自SEQ ID NO：2和6-8群組之輕鏈胺基酸序列的核苷酸編碼相同之核苷酸序列所編碼而成。在一些實施態樣中，抗體及其抗原結合片段係由包含至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高和含有選自SEQ ID NO：6-8組之輕鏈胺基酸序列的核苷酸編碼相同之核苷酸序列所編碼而成。
在一些實施態樣中，抗體及其抗原結合片段係由包含至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高和含有選自SEQ ID NO：1和3-5群組之重鏈胺基酸序列的核苷酸編碼相同之核苷酸序列、以及包含至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高和含有選自SEQ ID NO：2和6-8群組之輕鏈胺基酸序列的核苷酸編碼相同之核苷酸序列所編碼而成。
在一些實施態樣中，抗體及其抗原結合片段係由包含至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高和含有選自SEQ ID NO：3-5群組之重鏈胺基酸序列的核苷酸編碼相同之核苷酸序列、以及包含至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高和含有選自SEQ ID NO：6-8群組之輕鏈胺基酸序列的核苷酸編碼相同之核苷酸序列所編碼而成
本發明亦提供一種藉由在會導致抗體或可活化之抗體表現的條件下培養細胞以產生抗體的方法，其中細胞包含本發明中的核苷酸分子或本發明中之載體。
在一些實施態樣中，抗體及其抗原結合片段係併入多專一性抗體或其抗原結和片段，其中至少一多專一性抗體或其抗原結和片段的臂會專一性與CD71結合。在一些實施態樣中，抗體及其抗原結合片段係併入雙專一性抗體或其抗原結和片段，其中至少一雙專一性抗體或其抗原結和片段的臂會專一性與CD71結合。
在一些實施態樣中，其中至少一多專一性抗體或其抗原結和片段的臂，例如雙專一性抗體或其抗原結和片段，包含選自由SEQ ID NO：1和3-5所組成之群組的重鏈變異區胺基酸序列。在一些實施態樣中，其中至少一多專一性抗體或其抗原結和片段的臂，例如雙專一性抗體或其抗原結和片段，包含選自由SEQ ID NO：3-5所組成之群組的重鏈變異區胺基酸序列。
在一些實施態樣中，其中至少一多專一性抗體或其抗原結和片段的臂，例如雙專一性抗體或其抗原結和片段，包含選自由SEQ ID NO：2和6-8所組成之群組的輕鏈變異區胺基酸序列。在一些實施態樣中，其中至少一多專一性抗體或其抗原結和片段的臂，例如雙專一性抗體或其抗原結和片段，包含選自由SEQ ID NO：6-8所組成之群組的輕鏈變異區胺基酸序列。
在一些實施態樣中，其中至少一多專一性抗體或其抗原結和片段的臂，例如雙專一性抗體或其抗原結和片段，包含選自由SEQ ID NO：1和3-5所組成之群組的輕鏈變異區胺基酸序列，以及選自由SEQ ID NO：2和6-8所組成之群組的輕鏈變異區胺基酸序列。
在一些實施態樣中，其中至少一多專一性抗體或其抗原結和片段的臂，例如雙專一性抗體或其抗原結和片段，包含選自由SEQ ID NO：3-5所組成之群組的輕鏈變異區胺基酸序列，以及選自由SEQ ID NO：6-8所組成之群組的輕鏈變異區胺基酸序列。
在一些實施態樣中，其中至少一多專一性抗體或其抗原結和片段的臂，例如雙專一性抗體或其抗原結和片段，包含至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高和選自由SEQ ID NO：1和3-5所組成之群組的胺基酸序列相同的重鏈變異區胺基酸序列。在一些實施態樣中，其中至少一多專一性抗體或其抗原結和片段的臂，例如雙專一性抗體或其抗原結和片 段，包含至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高和選自由SEQ ID NO：3-5所組成之群組的胺基酸序列相同的重鏈變異區胺基酸序列。
在一些實施態樣中，其中至少一多專一性抗體或其抗原結和片段的臂，例如雙專一性抗體或其抗原結和片段，包含至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高和選自由SEQ ID NO：2和6-8所組成之群組的胺基酸序列相同的輕鏈變異區胺基酸序列。在一些實施態樣中，其中至少一多專一性抗體或其抗原結和片段的臂，例如雙專一性抗體或其抗原結和片段，包含至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高和選自由SEQ ID NO：6-8所組成之群組的胺基酸序列相同的輕鏈變異區胺基酸序列。
在一些實施態樣中，其中至少一多專一性抗體或其抗原結和片段的臂，例如雙專一性抗體或其抗原結和片段，包含至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高和選自由SEQ ID NO：1和3-5所組成之群組的胺基酸序列相同的重鏈變異區胺基酸序列，以及至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高和選自由SEQ ID NO：2和6-8所組成之群組的胺基酸序列相同的輕鏈變異區胺基酸序列。
在一些實施態樣中，其中至少一多專一性抗體或其抗原結和片段的臂，例如雙專一性抗體或其抗原結和片段，包含至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高和選自由SEQ ID NO：3-5所組成之群組的胺基酸序列相同的重鏈變異區胺基酸序列，以及至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高和選自由SEQ ID NO：6-8所組成之群組的胺基酸序列相同的輕鏈變異區胺基酸序列。
在一些實施態樣中，至少一多專一性抗體或其抗原結和片段的臂，例如雙專一性抗體或其抗原結和片段包含變異區重鏈互補性決定區域1(VH CDR1，於此亦稱為CDRH1)序列、變異區重鏈互補性決定區域2(VH CDR2，於此亦稱為CDRH2)序列、變異區重鏈互補性決定區域3(VH CDR3，於此亦稱為CDRH3)序列、變異區輕鏈互補性決定區域1(VL CDR1，於此亦稱為CDRL1)序列、變異區輕鏈互補性決定區域2(VL CDR2，於此亦稱為CDRL2)序列、變異區輕鏈互補性決定區域3(VL CDR3，於此亦稱為CDRL3)序列之組合，其中至少一互補性決定區域(CDR)序列係選自由下列所組成之群組：包含胺基酸序列GYTFTSYWMH(SEQ ID NO：9)之VH CDR1序列、包含胺基酸序列AIYPGNSETG(SEQ ID NO：10)之VH CDR2序列、包含胺基酸序列ENWDPGFAF(SEQ ID NO：11)之VH CDR3序列、包含胺基酸序列 SASSSVYYMY(SEQ ID NO：12)或CRASSSVYYMY(SEQ ID NO：13)之VL CDR1序列、包含胺基酸序列STSNLAS(SEQ ID NO：14)之VL CDR2序列、包含胺基酸序列QQRRNYPYT(SEQ ID NO：15)之VL CDR3序列。
在一些實施態樣中，至少一多專一性抗體或其抗原結和片段的臂，例如雙專一性抗體或其抗原結和片段包含VH CDR1序列、VH CDR2序列、VH CDR3序列、VL CDR1序列、VL CDR2序列、VL CDR3序列之組合，其中至少一互補性決定區域(CDR)序列係選自由下列所組成之群組：包含至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高和含有胺基酸序列GYTFTSYWMH(SEQ ID NO：9)的VH CDR1序列相同的VH CDR1序列、至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高和含有胺基酸序列AIYPGNSETG(SEQ ID NO：10)的VH CDR2序列相同的VH CDR2序列、至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高和含有胺基酸序列ENWDPGFAF(SEQ ID NO：11)的VH CDR3序列相同的VH CDR3序列、至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高和含有胺基酸序列SASSSVYYMY(SEQ ID NO：12)或CRASSSVYYMY(SEQ ID NO：13)的VL CDR1序列相同的VL CDR1序列、至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高和含有胺基酸序列STSNLAS(SEQ ID NO：14)的VL CDR2序列相同的VL CDR2序列、至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高和含有胺基酸序列QQRRNYPYT(SEQ ID NO：15)的VL CDR3序列相同的VL CDR3序列。
在一些實施態樣中，至少一多專一性抗體或其抗原結和片段的臂，例如雙專一性抗體或其抗原結和片段包含VH CDR1序列、VH CDR2序列、VH CDR3序列、VL CDR1序列、VL CDR2序列、VL CDR3序列之組合，其中VH CDR1包含胺基酸序列GYTFTSYWMH(SEQ ID NO：9)、VH CDR2包含胺基酸序列AIYPGNSETG(SEQ ID NO：10)、VH CDR3包含胺基酸序列ENWDPGFAF(SEQ ID NO：11)、VL CDR1包含胺基酸序列SASSSVYYMY(SEQ ID NO：12)或CRASSSVYYMY(SEQ ID NO：13)、VL CDR2包含胺基酸序列STSNLAS(SEQ ID NO：14)、VL CDR3包含胺基酸序列QQRRNYPYT(SEQ ID NO：15)。
在一些實施態樣中，至少一多專一性抗體或其抗原結和片段的臂，例如雙專一性抗體或其抗原結和片段包含VH CDR1序列、VH CDR2序列、VH CDR3序列、VL CDR1序列、VL CDR2序列、VL CDR3序列之組合，其中VH CDR1序列包含至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高和胺基酸序列GYTFTSYWMH(SEQ ID NO：9)相同的序列、VH CDR2序列包含至少90%、91%、92%、93%、94%、 95%、96%、97%、98%、99%或更高和胺基酸序列AIYPGNSETG(SEQ ID NO：10)相同的序列、VH CDR3序列包含至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高和胺基酸序列ENWDPGFAF(SEQ ID NO：11)相同的序列、VL CDR1序列包含至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高和胺基酸序列SASSSVYYMY(SEQ ID NO：12)或CRASSSVYYMY(SEQ ID NO：13)相同的序列、VL CDR2序列包含至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高和胺基酸序列STSNLAS(SEQ ID NO：14)相同的序列、VL CDR3序列包含至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高和胺基酸序列QQRRNYPYT(SEQ ID NO：15)相同的序列、 在一些實施態樣中，其中至少一多專一性抗體或其抗原結和片段的臂，例如雙專一性抗體或其抗原結和片段，包含含有或從表12中衍生而來的重鏈胺基酸序列或重鏈變異區胺基酸序列之重鏈或重鏈變異區。在一些實施態樣中，其中至少一多專一性抗體或其抗原結和片段的臂，例如雙專一性抗體或其抗原結和片段，包含含有或從表12中衍生而來的輕鏈胺基酸序列或輕鏈變異區胺基酸序列之輕鏈或輕鏈變異區。在一些實施態樣中，其中至少一多專一性抗體或其抗原結和片段的臂，例如雙專一性抗體或其抗原結和片段，包含含有或從表12中衍生而來 的重鏈胺基酸序列或重鏈變異區胺基酸序列之重鏈或重鏈變異區以及含有或從表12中衍生而來的輕鏈胺基酸序列或輕鏈變異區胺基酸序列之輕鏈或輕鏈變異區。
在一些實施態樣中，其中至少一多專一性抗體或其抗原結和片段的臂，例如雙專一性抗體或其抗原結和片段，包含至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高和選自由表12中胺基酸序列所組成之群組相同的重鏈變異區胺基酸序列。在一些實施態樣中，其中至少一多專一性抗體或其抗原結和片段的臂，例如雙專一性抗體或其抗原結和片段，包含至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高和選自由表12中胺基酸序列所組成之群組相同的輕鏈變異區胺基酸序列。在一些實施態樣中，其中至少一多專一性抗體或其抗原結和片段的臂，例如雙專一性抗體或其抗原結和片段，包含至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高和選自由表12中胺基酸序列所組成之群組相同的重鏈變異區胺基酸序列和至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高和選自由表12中胺基酸序列所組成之群組相同的重鏈變異區胺基酸序列。
在一些實施態樣中，其中至少一多專一性抗體或其抗原結和片段的臂，例如雙專一性抗體或其抗原結和片段，包含至少變異區重鏈互補性決定區域1(VH CDR1，於此亦稱為CDRH1)序列、變異區重鏈互補性決 定區域2(VH CDR2，於此亦稱為CDRH2)序列、變異區重鏈互補性決定區域3(VH CDR3，於此亦稱為CDRH3)序列、變異區輕鏈互補性決定區域1(VL CDR1，於此亦稱為CDRL1)序列、變異區輕鏈互補性決定區域2(VL CDR2，於此亦稱為CDRL2)序列、變異區輕鏈互補性決定區域3(VL CDR3，於此亦稱為CDRL3)序列之組合，其中至少一CDR序列係選自由下列所組成之群組：如表13所示之VH CDR1序列、如表13所示之VH CDR2序列、如表13所示之VH CDR3序列、如表13所示之VL CDR1序列、如表13所示之VL CDR2序列、如表13所示之VL CDR3序列。
在一些實施態樣中，其中至少一多專一性抗體或其抗原結和片段的臂，例如雙專一性抗體或其抗原結和片段，包含VH CDR1序列、VH CDR2序列、VH CDR3序列、VL CDR1序列、VL CDR2序列、VL CDR3序列之組合，其中至少一互補性決定區域(CDR)序列係選自由下列所組成之群組：包含至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高和表13所示之VH CDR1序列相同的VH CDR1序列、至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高和表13所示之VH CDR2序列相同的VH CDR2序列、至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高和表13所示之VH CDR3序列相同的VH CDR3序列、至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、 97%、98%、99%或更高和表13所示之VL CDR1序列相同的VL CDR1序列、至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高和表13所示之VL CDR2序列相同的VL CDR2序列、至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高和表13所示之VL CDR3序列相同的VL CDR3序列。
在一些實施態樣中，其中至少一多專一性抗體或其抗原結和片段的臂，例如雙專一性抗體或其抗原結和片段，包含VH CDR1序列、VH CDR2序列、VH CDR3序列、VL CDR1序列、VL CDR2序列、VL CDR3序列之組合，其中組合係為六種如表13中單一橫列所示CDR序列(VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3)之組合。
在一些實施態樣中，其中至少一多專一性抗體或其抗原結和片段的臂，例如雙專一性抗體或其抗原結和片段，包含含有VL CDR1序列、VL CDR2序列、VL CDR3序列之組合的輕鏈變異區，其中組合係為三種如表13中單一橫列所示輕鏈CDR序列(VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3)之組合。
在一些實施態樣中，其中至少一多專一性抗體或其抗原結和片段的臂，例如雙專一性抗體或其抗原結和片段，包含含有VH CDR1序列、VH CDR2序列、VH CDR3序列之組合的重鏈變異區，其中組合係為三種如表13中單一橫列所示重鏈CDR序列(VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3)之組合。
在一些實施態樣中，其中至少一多專一性抗體或其抗原結和片段的臂，例如雙專一性抗體或其抗原結和片段，包含VH CDR1序列、VH CDR2序列、VH CDR3序列、VL CDR1序列、VL CDR2序列、VL CDR3序列之組合，其中組合內單一CDR序列係包含至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高和相對應表13單一橫列所示六種CDR序列之組合(VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3)的CDR序列相同的序列。
在一些實施態樣中，其中至少一多專一性抗體或其抗原結和片段的臂，例如雙專一性抗體或其抗原結和片段，包含含有VH CDR1序列、VH CDR2序列、VH CDR3序列之組合的重鏈變異區，其中組合內單一CDR序列係包含至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高和相對應表13單一橫列所示三種重鏈CDR(VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3)序列之組合相同的序列。
在一些實施態樣中，其中至少一多專一性抗體或其抗原結和片段的臂，例如雙專一性抗體或其抗原結和片段，包含含有VL CDR1序列、VL CDR2序列、VL CDR3序列之組合的重鏈變異區，其中組合內單一CDR序列係包含至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高和相對應表13單一橫列所 示三種輕鏈CDR(VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3)序列之組合相同的序列。
本發明中合適的抗CD71抗體亦包含結合至相同抗原決定位之人類CD71和/或食蟹獼猴CD71之抗體或其抗原結合片段且抗CD71抗體包含選自由SEQ NO：1和3-5所組成之群組的重鏈變異區胺基酸序列以及選自由SEQ ID NO：2和6-8所組成之群組的輕鏈變異區胺基酸序列。
本發明中合適的抗CD71抗體亦包含結合至相同抗原決定位之人類CD71和/或食蟹獼猴CD71之抗體或其抗原結合片段且抗CD71抗體包含含有胺基酸序列GYTFTSYWMH(SEQ ID NO：9)的VH CDR1序列、含有胺基酸序列AIYPGNSETG(SEQ ID NO：10)的VH CDR2序列、含有胺基酸序列ENWDPGFAF(SEQ ID NO：11)的VH CDR3序列、含有胺基酸序列SASSSVYYMY(SEQ ID NO：12)或CRASSSVYYMY(SEQ ID NO：13)的VL CDR1序列、含有胺基酸序列STSNLAS(SEQ ID NO：14)的VL CDR2序列、含有胺基酸序列QQRRNYPYT(SEQ ID NO：15)的VL CDR3序列。
本發明中合適的抗CD71抗體亦包含交叉競爭結合至人類CD71和/或食蟹獼猴CD71與包含選自由SEQ ID NO：1和3-5所組成之群組的重鏈變異區胺基酸序列和選自由SEQ ID NO：2和6-8所組成之群組的輕鏈變異區胺基酸序列之抗CD71抗體的結合。
本發明中合適的抗CD71抗體亦包含交叉競爭結合至人類CD71和/或食蟹獼猴CD71與包含含有GYTFTSYWMH(SEQ ID NO：9)胺基酸序列的VH CDR1序列、含有AIYPGNSETG(SEQ ID NO：10)胺基酸序列的VH CDR2序列、含有ENWDPGFAF(SEQ ID NO：11)胺基酸序列的VH CDR3序列、含有STSNLAS(SEQ ID NO：14)胺基酸序列的VL CDR2序列、含有QQRRNYPYT(SEQ ID NO：15)胺基酸序列的VL CDR3序列之抗CD71抗體的結合。
在一些實施態樣中，本發明之抗CD71抗體包含專一性和哺乳類CD71結合之單離抗體或其抗原結合片段(AB)，其中AB專一性結合至人類CD71和食蟹獼猴CD71。在一些實施態樣中，抗體或其抗原結合片段包含VH CDR1序列GYTFTSYWMH(SEQ ID NO：9)、VH CDR2序列AIYPGNSETG(SEQ ID NO：10)、VH CDR3序列ENWDPGFAF(SEQ ID NO：11)、VL CDR1序列SASSSVYYMY(SEQ ID NO：12)或CRASSSVYYMY(SEQ ID NO：13)、VL CDR2序列STSNLAS(SEQ ID NO：14)以及VL CDR3序列QQRRNYPYT(SEQ ID NO：15)。在一些實施態樣中，抗體或其抗原結合片段包含選自由胺基酸序列SEQ NO：3-5所組成之群組的重鏈變異區以及選自由胺基酸序列SEQ ID NO：6-8所組成之群組的輕鏈變異區。
在一些實施態樣中，單離抗體和其抗原結和 片段會結合至人類CD71和/或食蟹獼猴CD71之抗原決定位與包含VH CDR1序列GYTFTSYWMH(SEQ ID NO：9)、VH CDR2序列AIYPGNSETG(SEQ ID NO：10)、VH CDR3序列ENWDPGFAF(SEQ ID NO：11)、VL CDR1序列SASSSVYYMY(SEQ ID NO：12)或CRASSSVYYMY(SEQ ID NO：13)、VL CDR2序列STSNLAS(SEQ ID NO：14)以及VL CDR3序列QQRRNYPYT(SEQ ID NO：15)之單離抗體相同。在一些實施態樣中，單離抗體和其抗原結和片段會結合至人類CD71和/或食蟹獼猴CD71之抗原決定位與包含含有選自由SEQ ID NO：3-5所組成之群組之胺基酸序列的重鏈變異區以及選自由SEQ ID NO：6-8所組成之群組之胺基酸序列的輕鏈變異區的單離抗體相同。在一些實施態樣中，其抗原結合片段係選自由下列所組成之群組：Fab片段、F(ab’)2片段、scFv、scAb、dAb、單域重鏈抗體和單域輕鏈抗體。在一些實施態樣中，抗體或其抗原結合片段係專一性結合至人類CD71。
在一些實施態樣中，單離抗體或其抗原結合片段會與包含VH CDR1序列GYTFTSYWMH(SEQ ID NO：9)、VH CDR2序列AIYPGNSETG(SEQ ID NO：10)、VH CDR3序列ENWDPGFAF(SEQ ID NO：11)、VL CDR1序列SASSSVYYMY(SEQ ID NO：12)or CRASSSVYYMY(SEQ ID NO：13)、VL CDR2序列STSNLAS(SEQ ID NO：14)以及L CDR3序列 QQRRNYPYT(SEQ ID NO：15)之單離抗體交叉競爭。在一些實施態樣中，單離抗體或其抗原結合片段會與包含選自由SEQ ID NO：3-5所組成之群組之胺基酸序列的重鏈變異區和選自由SEQ ID NO：6-8所組成之群組之胺基酸序列的輕鏈變異區交叉競爭。
在一些實施態樣中，抗體或其抗原結合片段係與一劑共軛。在一些實施態樣中，抗體或其抗原結合片段會與含有VH CDR1序列GYTFTSYWMH(SEQ ID NO：9)、VH CDR2序列AIYPGNSETG(SEQ ID NO：10)、VH CDR3序列ENWDPGFAF(SEQ ID NO：11)、VL CDR1序列SASSSVYYMY(SEQ ID NO：12)或CRASSSVYYMY(SEQ ID NO：I3)、VL CDR2序列STSNLAS(SEQ ID NO：14)和VL CDR3序列QQRRNYPYT(SEQ ID NO：15)之單離抗體交叉競爭。在一些實施態樣中，抗體或其抗原結合片段會與含有包含選自由SEQ ID NO：3-5所組成之群組胺基酸序列的重鏈變異區和含有選自由SEQ ID NO：6-8所組成之群組胺基酸序列的輕鏈變異區的單離抗體交叉競爭。在一些實施態樣中，劑係為毒素或彼等片段。在一些實施態樣中，劑係為微膠囊抑制劑。在一些實施態樣中，劑係為核苷酸破壞劑。在一些實施態樣中，劑係選自由下列所組成之群組：尾海兔素(dolastatin)或其衍生物、耳抑素(單甲醇)或其衍生物、類美登素(類美登素)或其衍生物、倍癌黴素(duocarmycin)或其衍生物、卡奇黴素(calicheamicin)或其 衍生物以及吡咯并苯并二吖呯及其衍生物。在一些實施態樣中，劑係為耳抑素E或其衍生物。在一些實施態樣中，劑係為單甲基耳抑素E(MMAE)、單甲基耳抑素E(MMAE)或其衍生物。在一些實施態樣中，劑係為單甲基耳抑素D(MMAD)。在一些實施態樣中，劑係為選自由DM1和DM4所組成之群組的類美登素。在一些實施態樣中，劑係為DM4。在一些實施態樣中，劑係倍癌黴素。在一些實施態樣中，劑係透過連接子與AB結合。在一些實施態樣中，在劑共軛至AB的連接子中包含SPCB部分、vc部分或PEG2-vc部分。在一些實施態樣中，共軛至AB的連接子和毒素包含SPDB-DM4部分、vc-MMAD部分、vc-MMAE部分、vc-倍癌黴素或PEG2-vc-MMAD部分。在一些實施態樣中，連接子係為可切割連接子。在一些實施態樣中，連接子係為不可切割連接子。在一些實施態樣中，劑係為可偵測部分。在一些實施態樣中，可偵測部分係為診斷劑。
In some embodiments,the conjugated antibody comprises a conjugated antibody comprising：(a)an antibody or an antigen binding fragment thereof(AB)that specifically binds to mammalian CD71,wherein the AB comprises：(i)the VH CDR1 sequence GYTFTSYWMH(SEQ ID NO：9)；the VH CDR2 sequence AIYPGNSETG(SEQ ID NO：10)；the VH CDR3 sequence ENWDPGFAF(SEQ ID NO：11)；the VL CDR1 sequence SASSSVYYMY (SEQ ID NO：12)or CRASSSVYYMY(SEQ ID NO：13)；the VL CDR2 sequence STSNLAS(SEQ ID NO：14)；and the VL CDR3 sequence QQRRNYPYT(SEQ ID NO：15),or在一些實施態樣中，共軛的抗體包含含有下列之共軛的抗體：(a)抗體或彼等專一性結合至哺乳類CD71之抗原結合片段(AB)，其中AB包含(i)VH CDR1序列GYTFTSYWMH(SEQ ID NO：9)；VH CDR2序列AIYPGNSETG(SEQ ID NO：10)；VH CDR3序列ENWDPGFAF(SEQ ID NO：11)；VL CDR1序列SASSSVYYMY(SEQ ID NO：12)或CRASSSVYYMY(SEQ ID NO：13)；VL CDR2序列STSNLAS(SEQ ID NO：14)；和VL CDR3序列QQRRNYPYT(SEQ ID NO：15)，或(b)共軛至AB的劑，其中劑係選自由下列所組成之群組：耳抑素E(單甲醇)、單甲基耳抑素F(MMAF)、單甲基耳抑素E(MMAE)、單甲基耳抑素D(MMAD)、類美登素(類美登素)DM4、類美登素(類美登素)DM1、吡咯并苯并二吖呯、吡咯并苯并二吖呯二聚物和倍癌黴素。
本發明亦提供包含抗體或其專一性結合至共軛至掩蔽部分(MM)之CD71的抗原結合片段，彼等MM之共軛減少抗體或其抗原結合片段結合至CD71的能力。在一些實施態樣中，MM係透過包含蛋白酶受質之序列，例如在患病組織和/或在個體治療位置與CD71共定位的蛋白酶。本文所提供之可活化抗CD71抗體，亦和本文中所提及抗CD71可活化之抗體或CD71可活化之抗體係為可 相互交換的，在循環系統中為穩定的，在治療和/診斷意欲位置被活化，但正常位置如健康組織或其他非治療和/或診斷目標的組織不會，且當被活化時會具有結合至至少可和相對應未修飾抗體比較之CD71，於本文中亦被稱為母體抗體。
本發明亦提供治療、預防和/或延遲其開始或進程，或減緩和畸變的表現相關的症狀和/或在個體中利用結合至CD71之可活化之抗體的CD71活性，特別是結合和中和或其他方式抑制至少一CD71生物性活性和/或CD71-調解訊息傳遞。
本發明亦提供治療、預防和/或延遲其開始或進程，或減緩和存在、生長、增殖、轉移相關之症狀和/或在個體中透過結合至CD71之可活化之抗體表現CD71或畸變的表現CD71細胞的活性，特別是結合、中和、殺死或其他方式抑制至少一表現或畸變的表現CD71細胞的生物性活性之可活化之抗體。
本發明亦提供治療、預防和/或延遲其開始或進程，或減緩和存在、生長、增殖、轉移相關之症狀和/或在個體中透過結合至CD71之可活化之抗體表現CD71細胞的活性，特別是結合、中和、殺死或其他方式抑制至少一表現CD71細胞的生物性活性之可活化之抗體。
本發明亦提供治療、預防和/或延遲其開始或進程，或減緩和存在、生長、增殖、轉移相關之症狀和/或在個體中透過結合至CD71之可活化之抗體畸變的表現 CD71細胞的活性，特別是結合、中和、殺死或其他方式抑制至少一畸變的表現CD71細胞的生物性活性之可活化之抗體。
在可活化狀態的可活化之抗體會結合CD71且包含(i)抗體或專一性結合至CD71之彼等抗原結合片段(AB)；(ii)掩蔽部分(MM)，當可活化之抗體係在未經切割狀態，抑制AB和CD71的結合；以及(c)共軛至AB的可切割部分(CM)，其中CM係為作為蛋白酶受質的多肽。
在一些實施態樣中，在未經切割狀態的可活化之抗體具有從N端到C端的結構排列如下：MM-CM-AB或AB-CM-MM。
在一些實施態樣中，可活化之抗體包含在MM和CM之間的連接胜肽。
在一些實施態樣中，可活化之抗體包含在AB和CM之間的連接胜肽。
在一些實施態樣中，可活化之抗體包含其中可活化之抗體包含第一連接胜肽(LP1)和第二連接胜肽(LP2)，且其中處於未經切割狀態的可活化之抗體包含從N端到C端之結構排列如下：MM-LP1-CM-LP2-AB或AB-LP2-CM-LP1-MM。
在一些實施態樣中，至少一LP1或LP2包含選自由下列所組成之群組的胺基酸序列：(GS)n、(GGS)n,(GSGGS)n(SEQ ID NO：339)和(GGGS)n(SEQ ID NO：340)，其中n為至少為一的整數。
在一些實施態樣中，至少一LP1或LP2包含選自由下列所組成之群組的胺基酸序列：GGSG(SEQ ID NO：341)、GGSGG(SEQ ID NO：342)、GSGSG(SEQ ID NO：343)、GSGGG(SEQ ID NO：344)、GGGSG(SEQ ID NO：345)和GSSSG(SEQ ID NO：346)。
在一些實施態樣中，LP1包含胺基酸序列GSSGGSGGSGGSG(SEQ ID NO：347)、GSSGGSGGSGG(SEQ ID NO：348)、GSSGGSGGSGGS(SEQ ID NO：349)、GSSGGSGGSGGSGGGS(SEQ ID NO：350)、GSSGGSGGSG
在一些實施態樣中，LP2包含胺基酸序列GSS、GGS、GGGS(SEQ ID NO：353)、GSSGT(SEQ ID NO：354)或GSSG(SEQ ID NO：355)。
在一些實施態樣中，AB對哺乳類CD71之結合具有約100nM或少於的解離常數。在一些實施態樣中，AB對CD71之結合具有約5mM或少於的解離常數。在一些實施態樣中，AB對CD71之結合具有約1mM或少於的解離常數。在一些實施態樣中，AB對CD71之結合具有約0.5mM或少於的解離常數。在一些實施態樣中，AB對CD71之結合具有0.01nM至100nM、0.01nM至10nM、0.01nM至5nM、0.01nM至1nM、0.01至0.5nM、0.01nm至0.1nM、0.01nm至0.05nM、0.05nM至100nM、0.05nM至10nM、0.05nM至5nM、0.05nM至1nM、0.05至0.5nM、0.05nm至0.1nM、0.1nM至100nM、0.1nM至10nM、0.1nM至5nM、0.1nM至1 nM、0.1至0.5nM、0.5nM至100nM、0.5nM至10nM、0.5nM至5nM、0.5nM至1nM、1nM至100nM、1nM至10nM、1nM至5nM、5nM至100nM、5nM至10nM或10nM至100nM的解離常數。
在一些實施態樣中，可活化之抗體包含抗體或彼等專一性結合至CD71的抗原結合片段(AB)。在一些實施態樣中，抗體或其結合至CD71的抗原結合片段係為單株抗體、區域抗體、單鏈、Fab片段、F(ab’)2片段、scFv、ScAb、dAb、單域重鏈抗體或單域輕鏈抗體。在一些實施態樣中，該抗體或彼等結合至CD71的抗原結合片段係為小鼠、其他齧齒目、嵌合體、人化或全人單株抗體。
在一些實施態樣中，在未經切割狀態的可活化之抗體專一性結合至哺乳類CD71，以解離常數少於或等於1nM、少於或等於5nM、少於或等於10nM、少於或等於15nM、少於或等於20nM、少於或等於25nM、少於或等於50nM、少於或等於100nM、少於或等於150nM、少於或等於250nM、少於或等於500nM、少於或等於750nM、少於或等於1000nM和/或少於或等於2000nM。
在一些實施態樣中，在未經切割狀態專一性結合至哺乳類CD71的可活化之抗體以解離常數從範圍1nM至2000nM、1nM至1000nM、1nM至750nM、1nM至500nM、1nM至250nM、1nM至150nM、1nM至100nM、1nM至50nM、1nM至25nM、1nM至15 nM、1nM至10nM、1nM至5nM、5nM至2000nM、5nM至1000nM、5nM至750nM、5nM至500nM、5nM至250nM、5nM至150nM、5nM至100nM、5nM至50nM、5nM至25nM、5nM至15nM、5nM至10nM、10nM至2000nM、10nM至1000nM、10nM至750nM、10nM至500nM、10nM至250nM、10nM至150nM、10nM至100uM、10nM至50nM、10nM至25nM、10nM至15nM、15nM至2000nM、15nM至1000nM、15nM至750nM、15nM至500nM、15nM至250nM、15nM至150nM、15nM至100nM、15nM至50nM、15nM至25nM、25nM至2000nM、25nM至1000nM、25nM至750nM、25nM至500nM、25nM至250nM、25nM至150nM、25nM至100nM、25nM至50nM、50nM至2000nM、50nM至1000nM、50nM至750nM、50nM至500nM、50nM至250nM、50nM至150nM、50nM至100nM、100nM至2000nM、100nM至1000nM、100nM至750nM、100nM至500nM、100nM至250nM、100nM至150nM、150nM至2000nM、150nM至1000nM、150nM至750nM、150nM至500nM、150nM至250nM、250nM至2000nM、250nM至1000nM、250nM至750nM、250nM至500nM、500nM至2000nM、500nM至1000nM、500nM至750nM、500nM至500nM、500nM至250nM、500nM至150nM、500nM至100nM、500nM至50nM、750nM至 2000nM、750nM至1000nM或1000nM至2000nM.
在一些實施態樣中，在活化狀態下的可活化之抗體專一性結合至哺乳類CD71以解離常數少於或等於0.01nM、0.05nM、0.1nM、0.5nM、1nM、5nM或10nM。
在一些實施態樣中，在活化狀態下的可活化之抗體專一性結合至哺乳類CD71以解離常數在範圍0.01nM至100nM、0.01nM至10nM、0.01nM至5nM、0.01nM至1nM、0.01至0.5nM、0.01nm至0.1nM、0.01nm至0.05nM、0.05nM至100nM、0.05nM至10nM、0.05nM至5nM、0.05nM至1nM、0.05至0.5nM、0.05nm至0.1nM、0.1nM至100nM、0.1nM至10nM、0.1nM至5nM、0.1nM至1nM、0.1至0.5nM、0.5nM至100nM、0.5nM至10nM、0.5nM至5nM、0.5nM至1nM、1nM至100nM、1nM至10nM、1nM至5nM、5nM至100nM、5nM至10nM、or 10nM至100nM
在一些實施態樣中，哺乳類CD71係選自由下列所組成之群組：人類CD71、小鼠CD71、大鼠CD71和食蟹獼猴CD71。在一些實施態樣中，AB係專一性以解離常數小於1nM結合至人類CD71、小鼠CD71、大鼠CD71和食蟹獼猴CD71。在一些實施態樣中，哺乳類CD71係為人類CD71。
在一些實施態樣中，AB具有一或多個下列特 性：(a)AB係專一性結合至人類CD71；和(b)AB係專一性結合至人類CD71和食蟹獼猴CD71。
在一些實施態樣中，AB具有一或多個下列特性：(a)AB係專一性結合至人類CD71和食蟹獼猴CD71；和(b)AB抑制運鐵蛋白結合至至人類CD71；(c)AB抑制人類運鐵蛋白結合至人類CD71；(d)AB抑制食蟹獼猴運體蛋白結合至食蟹獼猴CD71。
在一些實施態樣中，AB阻隔天然配體結合至哺乳類CD71的能力，以EC50少於或等於5nM、少於或等於10nM、少於或等於50nM、少於或等於100nM、少於或等於500nM和/或少於或等於1000nM。在一些實施態樣中，AB阻隔運體蛋白結合至哺乳類CD71的能力，以EC50少於或等於5nM、少於或等於10nM、少於或等於50nM、少於或等於100nM、少於或等於500nM和/或少於或等於1000nM。在一些實施態樣中，CD71之天然配體係為運鐵蛋白。
在一些實施態樣中，AB阻隔天然配體結合至哺乳類CD71的能力，以EC505nM至1000nM、5nM至500nM、5nM至100nM 5nM至50nM、5nM至10nM、10nM至1000nM、10nM至500nM、10nM至100nM 10nM至50nM、50nM至1000nM、50nM至500nM、50nM至100nM、100nM至1000nM、100nM至500nM、500nM至1000nM.在一些實施態樣中，AB阻隔運體蛋白結合至哺乳類CD71的能力，以EC505nM至 1000nM、5nM至500nM、5nM至100nM 5nM至50nM、5nM至10nM、10nM至1000nM、10nM至500nM、10nM至100nM 10nM至50nM、50nM至1000nM、50nM至500nM、50nM至100nM、100nM至1000nM、100nM至500nM、500nM至1000nM。在一些實施態樣中，CD71之天然配體係為運鐵蛋白。
在一些實施態樣中，本發明之AB抑制或減少生長、增殖和/或轉移表現哺乳類CD71的細胞。在沒有意圖受任何理論限制的形況下，本發明之AB會透過專一性結合至CD71抑制或減少生長、增殖和/或轉移表現哺乳類CD71的細胞且抑制、阻隔和/或防止天然配體和哺乳類CD71之結合。在一些實施態樣中，哺乳類CD71的天然配體係為運鐵蛋白。
在一些實施態樣中，可活化之抗體包含選自由SEQ ID NO：1和3-5所組成之群組的重鏈變異區胺基酸序列。在一些實施態樣中，可活化之抗體包含選自由SEQ ID NO：3-5所組成之群組的重鏈變異區胺基酸序列。
在一些實施態樣中，可活化之抗體包含選自由SEQ ID NO：2和6-8所組成之群組的輕鏈變異區胺基酸序列。在一些實施態樣中，可活化之抗體包含選自由SEQ ID NO：6-8所組成之群組的輕鏈變異區胺基酸序列。
在一些實施態樣中，可活化之抗體包含選自由SEQ ID NO：1和3-5所組成之群組的重鏈變異區胺基酸序列以及由SEQ ID NO：2和6-8所組成之群組的輕 鏈變異區胺基酸序列。
在一些實施態樣中，可活化之抗體包含選自由SEQ ID NO：3-5所組成之群組的重鏈變異區胺基酸序列以及由SEQ ID NO：6-8所組成之群組的輕鏈變異區胺基酸序列。
在一些實施態樣中，可活化之抗體包含至少和選自由SEQ ID NO：1和3-5所組成之群組的胺基酸序列90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%相同的重鏈變異區胺基酸序列。在一些實施態樣中，可活化之抗體包含至少和選自由SEQ ID NO：3-5所組成之群組的胺基酸序列90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%相同的重鏈變異區胺基酸序列。
在一些實施態樣中，可活化之抗體包含至少和選自由SEQ ID NO：2和6-8所組成之群組的胺基酸序列90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%相同的輕鏈變異區胺基酸序列。在一些實施態樣中，可活化之抗體包含至少和選自由SEQ ID NO：6-8所組成之群組的胺基酸序列90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%相同的輕鏈變異區胺基酸序列。
在一些實施態樣中，可活化之抗體包含至少和選自由SEQ ID NO：1和3-5所組成之群組的胺基酸序列90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98% 或99%相同的重鏈變異區胺基酸序列以及至少和選自由SEQ ID NO：2和6-8所組成之群組的胺基酸序列90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%相同的輕鏈變異區胺基酸序列。
在一些實施態樣中，可活化之抗體包含至少和選自由SEQ ID NO：3-5所組成之群組的胺基酸序列90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%相同的重鏈變異區胺基酸序列以及至少和選自由SEQ ID NO：6-8所組成之群組的胺基酸序列90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%相同的輕鏈變異區胺基酸序列。
在一些實施態樣中，可活化之抗體包含變異區重鏈互補性決定區域1(VH CDR1，於此亦稱為CDRH1)序列、變異區重鏈互補性決定區域2(VH CDR2，於此亦稱為CDRH2)序列、變異區重鏈互補性決定區域3(VH CDR3，於此亦稱為CDRH3)序列、變異區輕鏈互補性決定區域1(VL CDR1，於此亦稱為CDRL1)序列、變異區輕鏈互補性決定區域2(VL CDR2，於此亦稱為CDRL2)序列、變異區輕鏈互補性決定區域3(VL CDR3，於此亦稱為CDRL3)序列之組合，其中至少一CDR序列係選自由下列所組成之群組：含有胺基酸序列GYTFTSYWMH(SEQ ID NO：9)的VH CDR1序列、含有胺基酸序列AIYPGNSETG(SEQ ID NO：10)的VH CDR2、含有胺基酸序列ENWDPGFAF(SEQ ID NO：11)的VH CDR3序列、含 有胺基酸序列SASSSVYYMY(SEQ ID NO：12)或CRASSSVYYMY(SEQ ID NO：13)的VL CDR1序列、含有胺基酸序列STSNLAS(SEQ ID NO：14)的VL CDR2序列和含有胺基酸序列QQRRNYPYT(SEQ ID NO：15)的VL CDR3序列。
在一些實施態樣中，可活化之抗體包含VH CDR1序列、VH CDR2序列、VH CDR3序列、VL CDR1序列、VL CDR2序列、VL CDR3序列之組合，其中組合內至少一CDR序列係選自由下列所組成之群組：與包含GYTFTSYWMH(SEQ ID NO：9)的VH CDR1至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高相同的VH CDR1序列、與包含AIYPGNSETG(SEQ ID NO：10)的VH CDR2至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高相同的VH CDR2序列、與包含ENWDPGFAF(SEQ ID NO：11)的VH CDR3至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高相同的VH CDR3序列、與包含SASSSVYYMY(SEQ ID NO：12)或CRASSSVYYMY(SEQ ID NO：13)的VL CDR1至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高相同的VL CDR1序列、與包含STSNLAS(SEQ ID NO：14)的VL CDR2至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高相同的VL CDR2序列和與包含QQRRNYPYT(SEQ ID NO：15)的VL CDR3至少90%、 91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高相同的VL CDR3序列。
在一些實施態樣中，可活化之抗體包含VH CDR1序列、VH CDR2序列、VH CDR3序列、VL CDR1序列、VL CDR2序列、VL CDR3序列之組合，其中VH CDR1序列包含胺基酸序列GYTFTSYWMH(SEQ ID NO：9)；VH CDR2序列包含胺基酸序列AIYPGNSETG(SEQ ID NO：10)；VH CDR3序列包含胺基酸序列ENWDPGFAF(SEQ ID NO：11)；VL CDR1序列包含胺基酸序列SASSSVYYMY(SEQ ID NO：12)或CRASSSVYYMY(SEQ ID NO：13)；VL CDR2序列包含胺基酸序列STSNLAS(SEQ ID NO：14)；以及VL CDR3序列包含胺基酸序列QQRRNYPYT(SEQ ID NO：15)。
在一些實施態樣中，可活化之抗體包含VH CDR1序列、VH CDR2序列、VH CDR3序列、VL CDR1序列、VL CDR2序列、VL CDR3序列之組合，其中VH CDR1序列包含與胺基酸序列GYTFTSYWMH(SEQ ID NO：9)至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高相同的序列；VH CDR2序列包含與胺基酸序列AIYPGNSETG(SEQ ID NO：10)至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高相同的序列；VH CDR3序列包含與胺基酸序列ENWDPGFAF(SEQ ID NO：11)至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高相同的 序列；VL CDR1序列包含與胺基酸序列SASSSVYYMY(SEQ ID NO：12)或CRASSSVYYMY(SEQ ID NO：13)至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高相同的序列；VL CDR2序列包含與胺基酸序列STSNLAS(SEQ ID NO：14)至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高相同的序列以及VL CDR3序列包含與胺基酸序列QQRRNYPYT(SEQ ID NO：15)至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高相同的序列。
在一些實施態樣中，可活化抗CD-71抗體之AB包含和選自由表12中重鏈變異區胺基酸序列所組成之群組至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高相同的重鏈變異區胺基酸序列。在一些實施態樣中，可活化抗CD-71抗體之AB包含和選自由表12中輕鏈變異區胺基酸序列所組成之群組至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高相同的輕鏈變異區胺基酸序列。在一些實施態樣中，可活化抗CD-71抗體之AB包含和選自由表12中重鏈變異區胺基酸序列所組成之群組至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高相同的重鏈變異區胺基酸序列以及和選自由表12中輕鏈變異區胺基酸序列所組成之群組至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高相同的 輕鏈變異區胺基酸序列。
在一些實施態樣中，可活化抗CD-71抗體之AB包含和選自由表12中重鏈變異區序列所組成之群組至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高相同的重鏈變異區胺基酸序列。在一些實施態樣中，可活化抗CD-71抗體之AB包含和選自由表12中輕鏈變異區序列所組成之群組至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高相同的輕鏈變異區胺基酸序列。在一些實施態樣中，可活化抗CD-71抗體之AB包含和選自由表12中重鏈變異區序列所組成之群組至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高相同的重鏈變異區胺基酸序列以及和選自由表12中輕鏈變異區序列所組成之群組至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高相同的輕鏈變異區胺基酸序列。
在一些實施態樣中，可活化之抗體包含變異區重鏈互補性決定區域1(VH CDR1，於此亦稱為CDRH1)序列、變異區重鏈互補性決定區域2(VH CDR2，於此亦稱為CDRH2)序列、變異區重鏈互補性決定區域3(VH CDR3，於此亦稱為CDRH3)序列、變異區輕鏈互補性決定區域1(VL CDR1，於此亦稱為CDRL1)序列、變異區輕鏈互補性決定區域2(VL CDR2，於此亦稱為CDRL2)序列、變異區輕鏈互補性決定區域3(VL CDR3，於此亦稱為CDRL3)序列之組合，其中至少一CDR係序列係選自由下 列所組成之群組：顯示於表13之VH CDR1序列；顯示於表13之VH CDR2序列；顯示於表13之VH CDR3序列；顯示於表13之VL CDR1序列；顯示於表13之VL CDR2序列；顯示於表13之VL CDR3序列。
在一些實施態樣中，可活化之抗體包含VH CDR1序列、VH CDR1序列、VH CDR2序列、VH CDR3序列、VL CDR1序列、VL CDR2序列和VL CDR3序列的組合，其中至少一CDR序列係選自由下列所組成之群組：包含至少和顯示於表13的VH CDR1序列90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高相同之序列的VH CDR1序列；包含至少和顯示於表13的VH CDR2序列90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高相同之序列的VH CDR2序列；包含至少和顯示於表13的VH CDR3序列90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高相同之序列的VH CDR3序列；包含至少和顯示於表13的VL CDR1序列90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高相同之序列的VL CDR1序列；包含至少和顯示於表13的VL CDR2序列90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高相同之序列的VL CDR2序列和包含至少和顯示於表13的VL CDR3序列90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高相同之序列的VL CDR3序列。
在一些實施態樣中，可活化之抗體包含VH CDR1序列、VH CDR1序列、VH CDR2序列、VH CDR3序列、VL CDR1序列、VL CDR2序列和VL CDR3序列的組合，其中組合係為顯示於表13單一橫列中的六種CDR序列組合(VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3)。
在一些實施態樣中，可活化之抗體包含含有VH CDR1序列、VH CDR2序列和VH CDR3序列組合之重鏈，其中組合係為其中組合係為顯示於表13單一橫列中的三種CDR序列組合(VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3)。
在一些實施態樣中，可活化之抗體包含含有VL CDR1序列、VL CDR2序列和VL CDR3序列組合之輕鏈，其中組合係為其中組合係為顯示於表13單一橫列中的三種CDR序列組合(VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3)。
在一些實施態樣中，可活化之抗體包含VH CDR1序列、VH CDR2序列、VH CDR3序列、VL CDR1序列、VL CDR2序列和VL CDR3序列之組合，其中組合中的每一個CDR序列包含至少90%,91%,92%,93%,94%,95%,96%,97%,98%,99%或更高和顯示於表13單一橫列中的三種CDR序列組合(VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3)相對應CDR序列相同。
在一些實施態樣中，可活化之抗體包含含有 VH CDR1序列、VH CDR2序列、VH CDR3序列之重鏈變異區，其中組合中的每一個CDR序列包含至少90%,91%,92%,93%,94%,95%,96%,97%,98%,99%或更高和顯示於表13單一橫列中的三種重鏈CDR序列組合(VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3)相對應CDR序列相同。
在一些實施態樣中，可活化之抗體包含含有VL CDR1序列、VL CDR2序列、VL CDR3序列之輕鏈變異區，其中組合中的每一個CDR序列包含至少90%,91%,92%,93%,94%,95%,96%,97%,98%,99%或更高和顯示於表13單一橫列中的三種輕鏈CDR序列組合(VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3)相對應CDR序列相同。
在一些實施態樣中，MM對AB結合的解離常數係大於AB對CD71
在一些實施態樣中，MM對AB結合的解離常數係不大於AB對CD71結合的解離常數。
在一些實施態樣中，MM對AB結合的解離常數係小於AB對CD71結合的解離常數。
在一些實施態樣中，MM對AB的解離常數(Kd)係不大於2、3、4、5、10、25、50、100、250、500、1,000、2,500、5,000、10,000、50,000、100,000、500,000、1,000,000、5,000,000、10,000,000、50,000,000倍或更多，或介於1-5、5-10、10-100、10-1,000、10-10,000、10-100,000、10-1,000,000、10-10,000,000、100-1,000、100-10,000、100-100,000、100-1,000,000、100- 10,000,000、1,000-10,000、1,000-100,000、1,000-1,000,000、1000-10,000,000、10,000-100,000、10,000-1,000,000、10,000-10,000,000、100,000-1,000,000或100,000-10,000,000倍或大於AB對標的的解離常數。
在一些實施態樣中，當可活化之抗體處於切割的狀態時，MM不會干擾或與AB競爭和CD71的結合。
在一些實施態樣中，MM係為約2至40個胺基酸長度的多肽。在一些實施態樣中，MM係為達到約40胺基酸長度的多肽。
在一些實施態樣中，MM多肽序列係和CD71之多肽序列不同。在一些實施態樣中，MM多肽序列與任何AB之天然結合配偶體不大於50%相同。在一些實施態樣中，MM多肽系列係與CD71不同且與任何AB之天然結合配偶體少於40%、30%、25%、20%、15%或10%相同。
在一些實施態樣中，MM與AB之共軛減少AB結合至CD71的能力，因此當共軛至MM時對於CD71之AB的解離常數(Kd)為至少為2倍大於當未共軛至MM時對於CD71之AB的Kd。
在一些實施態樣中，MM與AB共軛減少AB結合至CD71的能力，因此當共軛至MM時對於CD71之AB的解離常數(Kd)為至少為5倍大於當未共軛至MM時對於CD71之AB的Kd。
在一些實施態樣中，MM與AB共軛減少AB結合至CD71的能力，因此當共軛至MM時對於CD71之AB的解離常數(Kd)為至少為10倍大於當未共軛至MM時對於CD71之AB的Kd。
在一些實施態樣中，MM與AB共軛減少AB結合至CD71的能力，因此當共軛至MM時對於CD71之AB的解離常數(Kd)為至少為20倍大於當未共軛至MM時對於CD71之AB的Kd。
在一些實施態樣中，MM與AB共軛減少AB結合至CD71的能力，因此當共軛至MM時對於CD71之AB的解離常數(Kd)為至少為40倍大於當未共軛至MM時對於CD71之AB的Kd。
在一些實施態樣中，MM與AB共軛減少AB結合至CD71的能力，因此當共軛至MM時對於CD71之AB的解離常數(Kd)為至少為100倍大於當未共軛至MM時對於CD71之AB的Kd。
在一些實施態樣中，MM與AB共軛減少AB結合至CD71的能力，因此當共軛至MM時對於CD71之AB的解離常數(Kd)為至少為1000倍大於當未共軛至MM時對於CD71之AB的Kd。
在一些實施態樣中，MM與AB共軛減少AB結合至CD71的能力，因此當共軛至MM時對於CD71之AB的解離常數(Kd)為至少為10,000倍大於當未共軛至MM時對於CD71之AB的Kd。
在一些實施態樣中，在CD71的存在下，在試管內以標的置換檢測法，例如，如PCT公告案號WO 2010/081173所述之檢測法，此揭示內容係併入本文以供參考，當CM為未切割時相較CM為切割的，MM會減少AB結合至CD71的能力至少90%。
在一些實施態樣中，MM包含選自由SEQ ID NO：16-295和297-314所組成之群組的胺基酸序列。
在一些實施態樣中，可切割CM之蛋白酶係在患病組織為活化的，例如，正調控或其他方式負調控的，且當抗體暴露在蛋白酶中，蛋白酶切割在可活化之抗體中的CM。
在一些實施態樣中，蛋白酶係與CD71於組織中共定位，且當抗體暴露在蛋白酶中，蛋白酶切割在可活化之抗體中的CM。
在一些實施態樣中，CM係位於可活化之抗體中，其中當可活化之抗體為未經切割狀態，可活化之抗體與CD71之結合係減少以致解離常數為至少兩倍大於未修飾AB與CD71結合的解離常數，而當在經切割狀態下(如當可活化之抗體在切割的狀態)，則AB和CD71結合。
在一些實施態樣中，CM係位於可活化之抗體中其中當可活化之抗體在為未經切割狀態，可活化之抗體與CD71之結合係減少以致解離常數為至少五倍大於未修飾AB與CD71結合的解離常數，而當在經切割狀態下(如當可活化之抗體在切割的狀態)，則AB和CD71結合。
在一些實施態樣中，CM係位於可活化之抗體中其中當可活化之抗體在為未經切割狀態，可活化之抗體與CD71之結合係減少以致解離常數為至少10倍大於未修飾AB與CD71結合的解離常數，而當在經切割狀態下(如當可活化之抗體在切割的狀態)，則AB和CD71結合。
在一些實施態樣中，CM係位於可活化之抗體中其中當可活化之抗體在為未經切割狀態，可活化之抗體與CD71之結合係減少以致解離常數為至少20倍大於未修飾AB與CD71結合的解離常數，而當在經切割狀態下(如當可活化之抗體在切割的狀態)，則AB和CD71結合。
在一些實施態樣中，CM係位於可活化之抗體中其中當可活化之抗體在為未經切割狀態，可活化之抗體與CD71之結合係減少以致解離常數為至少40倍大於未修飾AB與CD71結合的解離常數，而當在經切割狀態下(如當可活化之抗體在切割的狀態)，則AB和CD71結合。
在一些實施態樣中，CM係位於可活化之抗體中其中當可活化之抗體在為未經切割狀態，可活化之抗體與CD71之結合係減少以致解離常數為至少50倍大於未修飾AB與CD71結合的解離常數，而當在經切割狀態下(如當可活化之抗體在切割的狀態)，則AB和CD71結合。
在一些實施態樣中，CM係位於可活化之抗體中其中當可活化之抗體在為未經切割狀態，可活化之抗體與CD71之結合係減少以致解離常數為至少100倍大於未修飾AB與CD71結合的解離常數，而當在經切割狀態下(如當可活化之抗體在切割的狀態)，則AB和CD71結合。
在一些實施態樣中，CM係位於可活化之抗體中其中當可活化之抗體在為未經切割狀態，可活化之抗體與CD71之結合係減少以致解離常數為至少200倍大於未修飾AB與CD71結合的解離常數，而當在經切割狀態下(如當可活化之抗體在切割的狀態)，則AB和CD71結合。
在一些實施態樣中，CM係為高達15胺基酸長度的多肽。
在一些實施態樣中，CM係為多肽，其包含為至少一種基質金屬蛋白酶(MMP)之受質的第一可切割部分(CM1)和為至少一種絲胺酸蛋白酶(SP)之受質的第二可切割部分(CM2)。在一些實施態樣中，每個CM1-CM2受質的CM1受質序列和CM2受質序列係獨立為長達15胺基酸長度的多肽。
在一些實施態樣中，CM係為至少一種蛋白酶的受質，其係為或被認為會在癌症中被正調控活其他方式負調控。
在一些實施態樣中，CM係為至少一選自由下 列所組成之群組：基質金屬蛋白酶(MMP)、凝血酶、嗜中性細胞彈性蛋白酶、半胱胺酸蛋白酶、豆蛋白酶和絲胺酸蛋白酶，例如絲胺酸蛋白酶(MT-SP1)和尿激酶(uPA)。在沒有意圖受任何理論限制的形況下，相信彼等蛋白酶係在至少一種癌症中受到正調控或其他方式負調控。
實例性受質包含但不限於可受到一或多種列於表4酵素或蛋白酶切割之受質。
在一些實施態樣中，CM係選來用於特定的蛋白酶，例如已知和可活化之抗體之標的共定位的蛋白酶。
在一些實施態樣中，CM係為至少一MMP的受質。MMP實例包含列於表4的MMP。在一些實施態樣中，CM係為選自由MMP 9、MMP14、MMP1、MMP3、MMP13、MMP17、MMP11和MMP19所組成之群組的蛋白酶受質。在一些實施態樣中，CM係為MMP9的受質。在一些實施態樣中，CM係為MMP14的受質。
在一些實施態樣中，CM係為包含下列序列之受質：TGRGPSWV(SEQ ID NO：356)；SARGPSRW(SEQ ID NO：357)；TARGPSFK(SEQ ID NO：358)；LSGRSDNH(SEQ ID NO：359)；GGWHTGRN(SEQ ID NO：360)；HTGRSGAL(SEQ ID NO：361)；PLTGRSGG(SEQ ID NO：362)；AARGPAIH(SEQ ID NO：363)；RGPAFNPM(SEQ ID NO：364)；SSRGPAYL(SEQ ID NO：365)；RGPATPIM(SEQ ID NO：366)；RGPA(SEQ ID NO：367)；GGQPSGMWGW(SEQ ID NO：368)； FPRPLGITGL(SEQ ID NO：369)；VHMPLGFLGP(SEQ ID NO：370)；SPLTGRSG(SEQ ID NO：371)；SAGFSLPA(SEQ ID NO：372)；LAPLGLQRR(SEQ ID NO：373)；SGGPLGVR(SEQ ID NO：374)；PLGL(SEQ ID NO：375)；LSGRSGNH(SEQ ID NO：789)；SGRSANPRG(SEQ ID NO：790)；LSGRSDDH(SEQ ID NO：791)；LSGRSDIH(SEQ ID NO：792)；LSGRSDQH(SEQ ID NO：793)；LSGRSDTH(SEQ ID NO：794)；LSGRSDYH(SEQ ID NO：795)；LSGRSDNP(SEQ ID NO：796)；LSGRSANP(SEQ ID NO：797)；LSGRSANI(SEQ ID NO：798)；LSGRSDNI(SEQ ID NO：799)；MIAPVAYR(SEQ ID NO：800)；RPSPMWAY(SEQ ID NO：801)；WATPRPMR(SEQ ID NO：802)；FRLLDWQW(SEQ ID NO：803)；ISSGL(SEQ ID NO：804)；ISSGLLS(SEQ ID NO：805)；和/或ISSGLL(SEQ ID NO：806)。
在一些實施態樣中，CM包含胺基酸序列LSGRSDNH(SEQ ID NO：359)。在一些實施態樣中，CM包含胺基酸序列TGRGPSWV(SEQ ID NO：356)。在一些實施態樣中，CM包含胺基酸序列PLTGRSGG(SEQ ID NO：362)。在一些實施態樣中，CM包含胺基酸序列GGQPSGMWGW(SEQ ID NO：368)。在一些實施態樣中，CM包含胺基酸序列FPRPLGITGL(SEQ ID NO：369)。在一些實施態樣中，CM包含胺基酸序列VHMPLGFLGP(SEQ ID NO：370)。在一些實施態樣中，CM包含胺基酸 序列PLGL(SEQ ID NO：375)。在一些實施態樣中，CM包含胺基酸序列SARGPSRW(SEQ ID NO：357)。在一些實施態樣中，CM包含胺基酸序列TARGPSFK(SEQ ID NO：358)。在一些實施態樣中，CM包含胺基酸序列GGWHTGRN(SEQ ID NO：360)。在一些實施態樣中，CM包含胺基酸序列HTGRSGAL(SEQ ID NO：361)。在一些實施態樣中，CM包含胺基酸序列AARGPAIH(SEQ ID NO：363)。在一些實施態樣中，CM包含胺基酸序列RGPAFNPM(SEQ ID NO：364)。在一些實施態樣中，CM包含胺基酸序列SSRGPAYL(SEQ ID NO：365)。在一些實施態樣中，CM包含胺基酸序列RGPATPIM(SEQ ID NO：366)。在一些實施態樣中，CM包含胺基酸序列RGPA(SEQ ID NO：367)。在一些實施態樣中，CM包含胺基酸序列LSGRSGNH(SEQ ID NO：789)。在一些實施態樣中，CM包含胺基酸序列SGRSANPRG(SEQ ID NO：790)。在一些實施態樣中，CM包含胺基酸序列LSGRSDDH(SEQ ID NO：791)。在一些實施態樣中，CM包含胺基酸序列LSGRSDIH(SEQ ID NO：792)。在一些實施態樣中，CM包含胺基酸序列LSGRSDQH(SEQ ID NO：793)在一些實施態樣中，CM包含胺基酸序列LSGRSDTH(SEQ ID NO：794)。在一些實施態樣中，CM包含胺基酸序列LSGRSDYH(SEQ ID NO：795)。在一些實施態樣中，CM包含胺基酸序列LSGRSDNP(SEQ ID NO：796)。在一些實施態樣中，CM包含胺基酸序列LSGRSANP (SEQ ID NO：797)。在一些實施態樣中，CM包含胺基酸序列LSGRSANI(SEQ ID NO：798)。在一些實施態樣中，CM包含胺基酸序列LSGRSDNI(SEQ ID NO：799)。在一些實施態樣中，CM包含胺基酸序列MIAPVAYR(SEQ ID NO：800)。在一些實施態樣中，CM包含胺基酸序列RPSPMWAY(SEQ ID NO：801)。在一些實施態樣中，CM包含胺基酸序列WATPRPMR(SEQ ID NO：802)。在一些實施態樣中，CM包含胺基酸序列FRLLDWQW(SEQ ID NO：803)。在一些實施態樣中，CM包含胺基酸序列ISSGL(SEQ ID NO：804)。在一些實施態樣中，CM包含胺基酸序列ISSGLLS(SEQ ID NO：805)。在一些實施態樣中，CM包含胺基酸序列和/或ISSGLL(SEQ ID NO：806)。
在一些實施態樣中，CM係為MMP之受質且包含序列ISSGLSS(SEQ ID NO：376)；QNQALRMA(SEQ ID NO：377)；AQNLLGMV(SEQ ID NO：378)；STFPFGMF(SEQ ID NO：379)；PVGYTSSL(SEQ ID NO：380)；DWLYWPGI(SEQ ID NO：381),ISSGLLSS(SEQ ID NO：382),LKAAPRWA(SEQ ID NO：383)；GPSHLVLT(SEQ ID NO：384)；LPGGLSPW(SEQ ID NO：385)；MGLFSEAG(SEQ ID NO：386)；SPLPLRVP(SEQ ID NO：387)；RMHLRSLG(SEQ ID NO：388)；LAAPLGLL(SEQ ID NO：389)；AVGLLAPP(SEQ ID NO：390)；LLAPSHRA(SEQ ID NO：391)；和/或 PAGLWLDP(SEQ ID NO：392).
在一些實施態樣中，CM包含胺基酸序列ISSGLSS(SEQ ID NO：376)。在一些實施態樣中，CM包含胺基酸序列QNQALRMA(SEQ ID NO：377)。在一些實施態樣中，CM包含胺基酸序列AQNLLGMV(SEQ ID NO：378)。在一些實施態樣中，CM包含胺基酸序列STFPFGMF(SEQ ID NO：379)。在一些實施態樣中，CM包含胺基酸序列PVGYTSSL(SEQ ID NO：380)。在一些實施態樣中，CM包含胺基酸序列DWLYWPGI(SEQ ID NO：381)。在一些實施態樣中，CM包含胺基酸序列ISSGLLSS(SEQ ID NO：382)。在一些實施態樣中，CM包含胺基酸序列LKAAPRWA(SEQ ID NO：383)。在一些實施態樣中，CM包含胺基酸序列GPSHLVLT(SEQ ID NO：384)。在一些實施態樣中，CM包含胺基酸序列LPGGLSPW(SEQ ID NO：385)。在一些實施態樣中，CM包含胺基酸序列MGLFSEAG(SEQ ID NO：386)。在一些實施態樣中，CM包含胺基酸序列SPLPLRVP(SEQ ID NO：387)。在一些實施態樣中，CM包含胺基酸序列RMHLRSLG(SEQ ID NO：388)。在一些實施態樣中，CM包含胺基酸序列LAAPLGLL(SEQ ID NO：389)。在一些實施態樣中，CM包含胺基酸序列AVGLLAPP(SEQ ID NO：390)。在一些實施態樣中，CM包含胺基酸序列LLAPSHRA(SEQ ID NO：391)。在一些實施態樣中，CM包含胺基酸序列PAGLWLDP(SEQ ID NO：392)。
在一些實施態樣中，CM係為凝血酶之受質。在一些實施態樣中，CM係為凝血酶之受質且包含序列GPRSFGL(SEQ ID NO：393)或GPRSFG(SEQ ID NO：394)。在一些實施態樣中，CM包含胺基酸序列GPRSFGL(SEQ ID NO：393)。在一些實施態樣中，CM包含胺基酸序列GPRSFG(SEQ ID NO：394)。
在一些實施態樣中，CM包含選自由下列所組成之群組的胺基酸序列：NTLSGRSENHSG(SEQ ID NO：395)；NTLSGRSGNHGS(SEQ ID NO：396)；TSTSGRSANPRG(SEQ ID NO：397)；TSGRSANP(SEQ ID NO：398)；VAGRSMRP(SEQ ID NO：399)；VVPEGRRS(SEQ ID NO：400)；ILPRSPAF(SEQ ID NO：401)；MVLGRSLL(SEQ ID NO：402)；QGRAITFI(SEQ ID NO：403)；SPRSIMLA(SEQ ID NO：404)和SMLRSMPL(SEQ ID NO：405)。
在一些實施態樣中，CM包含胺基酸序列NTLSGRSENHSG(SEQ ID NO：395)。在一些實施態樣中，CM包含胺基酸序列NTLSGRSGNHGS(SEQ ID NO：396)。在一些實施態樣中，CM包含胺基酸序列TSTSGRSANPRG(SEQ ID NO：397)。在一些實施態樣中，CM包含胺基酸序列TSGRSANP(SEQ ID NO：398)。在一些實施態樣中，CM包含胺基酸序列VAGRSMRP(SEQ ID NO：399)。在一些實施態樣中，CM包含胺基酸序列VVPEGRRS(SEQ ID NO：400)。在一些實施態樣中， CM包含胺基酸序列ILPRSPAF(SEQ ID NO：401)。在一些實施態樣中，CM包含胺基酸序列MVLGRSLL(SEQ ID NO：402)。在一些實施態樣中，CM包含胺基酸序列QGRAITFI(SEQ ID NO：403)。在一些實施態樣中，CM包含胺基酸序列SPRSIMLA(SEQ ID NO：404)。在一些實施態樣中，CM包含胺基酸序列SMLRSMPL(SEQ ID NO：405)。
在一些實施態樣中，CM係為嗜中性細胞彈性蛋白酶之受質。在一些實施態樣中，CM係為絲胺酸蛋白酶之受質。在一些實施態樣中，CM係為uPA之受質。在一些實施態樣中，CM係為豆蛋白酶之受質。在一些實施態樣中，CM係為基質金屬蛋白酶(MMP)之受質。在一些實施態樣中，CM係為半胱胺酸蛋白酶之受質。在一些實施態樣中，CM係為半胱胺酸蛋白酶之受質，例如細胞自溶酵素。
在一些實施態樣中，CM係為CM1-CM2受質且包含序列：ISSGLLSGRSDNH(SEQ ID NO：406)；ISSGLLSSGGSGGSLSGRSDNH(SEQ ID NO：407)；AVGLLAPPGGTSTSGRSANPRG(SEQ ID NO：408)；TSTSGRSANPRGGGAVGLLAPP(SEQ ID NO：409)；VHMPLGFLGPGGTSTSGRSANPRG(SEQ ID NO：410)；TSTSGRSANPRGGGVHMPLGFLGP(SEQ ID NO：411)；AVGLLAPPGGLSGRSDNH(SEQ ID NO：412)；LSGRSDNHGGAVGLLAPP(SEQ ID NO：413)； VHMPLGFLGPGGLSGRSDNH(SEQ ID NO：414)；LSGRSDNHGGVHMPLGFLGP(SEQ ID NO：415)；LSGRSDNHGGSGGSISSGLLSS(SEQ ID NO：416)；LSGRSGNHGGSGGSISSGLLSS(SEQ ID NO：417)；ISSGLLSSGGSGGSLSGRSGNH(SEQ ID NO：418)；LSGRSDNHGGSGGSQNQALRMA(SEQ ID NO：419)；QNQALRMAGGSGGSLSGRSDNH(SEQ ID NO：420)；LSGRSGNHGGSGGSQNQALRMA(SEQ ID NO：421)；QNQALRMAGGSGGSLSGRSGNH(SEQ ID NO：422)；ISSGLLSGRSGNH(SEQ ID NO：423)；ISSGLLSGRSANPRG(SEQ ID NO：680)；AVGLLAPPTSGRSANPRG(SEQ ID NO：681)；AVGLLAPPSGRSANPRG(SEQ ID NO：682)；ISSGLLSGRSDDH(SEQ ID NO：683)；ISSGLLSGRSDIH(SEQ ID NO：684)；ISSGLLSGRSDQH(SEQ ID NO：685)；ISSGLLSGRSDTH(SEQ ID NO：686)；ISSGLLSGRSDYH(SEQ ID NO：687)；ISSGLLSGRSDNP(SEQ ID NO：688)；ISSGLLSGRSANP(SEQ ID NO：689)；ISSGLLSGRSANI(SEQ ID NO：690)；AVGLLAPPGGLSGRSDDH(SEQ ID NO：691)；AVGLLAPPGGLSGRSDIH(SEQ ID NO：692)；AVGLLAPPGGLSGRSDQH(SEQ ID NO：693)；AVGLLAPPGGLSGRSDTH(SEQ ID NO：694)；AVGLLAPPGGLSGRSDYH(SEQ ID NO：695)； AVGLLAPPGGLSGRSDNP(SEQ ID NO：696)；AVGLLAPPGGLSGRSANP(SEQ ID NO：697)；AVGLLAPPGGLSGRSANI(SEQ ID NO：698),ISSGLLSGRSDNI(SEQ ID NO：713)；AVGLLAPPGGLSGRSDNI(SEQ ID NO：714)；GLSGRSDNHGGAVGLLAPP(SEQ ID NO：807)；和/或GLSGRSDNHGGVHMPLGFLGP(SEQ ID NO：808)。
在一些實施態樣中，CM1-CM2受質包含序列ISSGLLSGRSDNH(SEQ ID NO：406)，其中亦於本文中被稱為受質2001。在一些實施態樣中，CM1-CM2受質包含序列ISSGLLSSGGSGGSLSGRSDNH(SEQ ID NO：407)，其中亦於本文中被稱為受質1001/LP'/0001，其中用於彼等CM1-CM2受質之LP'係為胺基酸序列GGSGGS(SEQ ID NO：1037)。在一些實施態樣中，CM1-CM2受質包含序列AVGLLAPPGGTSTSGRSANPRG(SEQ ID NO：408)，其中亦於本文中被稱為受質2015和/或受質1004/LP'/0003，其中用於彼等CM1-CM2受質之LP'係為胺基酸序列GG.在一些實施態樣中，CM1-CM2受質包含序列TSTSGRSANPRGGGAVGLLAPP(SEQ ID NO：409)，其中亦於本文中被稱為受質0003/LP'/1004，其中用於彼等CM1-CM2受質之LP'係為胺基酸序列GG。在一些實施態樣中，CM1-CM2受質包含序列VHMPLGFLGPGGTSTSGRSANPRG(SEQ ID NO：410)，其中亦於本文中被稱為受質1003/LP'/0003，其中用於彼等 CM1-CM2受質之LP'係為胺基酸序列GG。在一些實施態樣中，CM1-CM2受質包含序列TSTSGRSANPRGGGVHMPLGFLGP(SEQ ID NO：411)，其中亦於本文中被稱為受質0003/LP'/1003，其中用於彼等CM1-CM2受質之LP'係為胺基酸序列GG。在一些實施態樣中，CM1-CM2受質包含序列AVGLLAPPGGLSGRSDNH(SEQ ID NO：412)，其中亦於本文中被稱為受質3001和/或受質1004/LP'/0001，其中用於彼等CM1-CM2受質之LP'係為胺基酸序列GG。在一些實施態樣中，CM1-CM2受質包含序列LSGRSDNHGGAVGLLAPP(SEQ ID NO：413)，其中亦於本文中被稱為受質0001/LP'/1004，其中用於彼等CM1-CM2受質之LP'係為胺基酸序列GG.在一些實施態樣中，CM1-CM2受質包含序列VHMPLGFLGPGGLSGRSDNH(SEQ ID NO：414)，其中亦於本文中被稱為受質1003/LP’/0001，其中用於彼等CM1-CM2受質之LP'係為胺基酸序列GG。在一些實施態樣中，CM1-CM2受質包含序列LSGRSDNHGGVHMPLGFLGP(SEQ ID NO：415)，其中亦於本文中被稱為受質0001/LP'/1003，其中用於彼等CM1-CM2受質之LP'係為胺基酸序列GG。在一些實施態樣中，CM1-CM2受質包含序列LSGRSDNHGGSGGSISSGLLSS(SEQ ID NO：416)，其中亦於本文中被稱為受質0001/LP'/1001，其中用於彼等 CM1-CM2受質之LP'係為胺基酸序列GGSGGS(SEQ ID NO：1037)。在一些實施態樣中，CM1-CM2受質包含序列LSGRSGNHGGSGGSISSGLLSS(SEQ ID NO：417)，其中亦於本文中被稱為受質0002/LP'/1001，其中用於彼等CM1-CM2受質之LP'係為胺基酸序列GGSGGS(SEQ ID NO：1037)。在一些實施態樣中，CM1-CM2受質包含序列ISSGLLSSGGSGGSLSGRSGNH(SEQ ID NO：418)，其中亦於本文中被稱為受質1001/LP'/0002，其中用於彼等CM1-CM2受質之LP'係為胺基酸序列GGSGGS(SEQ ID NO：1037)。在一些實施態樣中，CM1-CM2受質包含序列LSGRSDNHGGSGGSQNQALRMA(SEQ ID NO：419)，其中亦於本文中被稱為受質0001/LP'/1002，其中用於彼等CM1-CM2受質之LP'係為胺基酸序列GGSGGS(SEQ ID NO：1037)。在一些實施態樣中，CM1-CM2受質包含序列QNQALRMAGGSGGSLSGRSDNH(SEQ ID NO：420)，其中亦於本文中被稱為受質1002/LP'/0001，其中用於彼等CM1-CM2受質之LP'係為胺基酸序列GGSGGS(SEQ ID NO：1037)。在一些實施態樣中，CM1-CM2受質包含序列LSGRSGNHGGSGGSQNQALRMA(SEQ ID NO：421)，其中亦於本文中被稱為受質0002/LP'/1002，其中用於彼等CM1-CM2受質之LP'係為胺基酸序列GGSGGS(SEQ ID NO：1037)。在一些實施態樣中，CM1-CM2受質包含序列QNQALRMAGGSGGSLSGRSGNH(SEQ ID NO：422)，其中亦於本文中被稱為受質1002/LP'/0002，其中用於彼等 CM1-CM2受質之LP'係為胺基酸序列GGSGGS(SEQ ID NO：1037)。在一些實施態樣中，CM1-CM2受質包含序列ISSGLLSGRSGNH(SEQ ID NO：423)，其中亦於本文中被稱為受質2002。在一些實施態樣中，CM1-CM2受質包含序列ISSGLLSGRSANPRG(SEQ ID NO：680)，其中亦於本文中被稱為受質2003。在一些實施態樣中，CM1-CM2受質包含序列AVGLLAPPTSGRSANPRG(SEQ ID NO：681)，其中亦於本文中被稱為受質2004。在一些實施態樣中，CM1-CM2受質包含序列AVGLLAPPSGRSANPRG(SEQ ID NO：682)，其中亦於本文中被稱為受質2005。在一些實施態樣中，CM1-CM2受質包含序列ISSGLLSGRSDDH(SEQ ID NO：683)，其中亦於本文中被稱為受質2006。在一些實施態樣中，CM1-CM2受質包含序列ISSGLLSGRSDIH(SEQ ID NO：684)，其中亦於本文中被稱為受質2007。在一些實施態樣中，CM1-CM2受質包含序列ISSGLLSGRSDQH(SEQ ID NO：685)，其中亦於本文中被稱為受質2008.在一些實施態樣中，CM1-CM2受質包含序列ISSGLLSGRSDTH(SEQ ID NO：686)，其中亦於本文中被稱為受質2009。在一些實施態樣中，CM1-CM2受質包含序列ISSGLLSGRSDYH(SEQ ID NO：687)，其中亦於本文中被稱為受質2010。在一些實施態樣中，CM1-CM2受質包含序列ISSGLLSGRSDNP(SEQ ID NO：688)，其中亦於本文中被稱為受質2011。在一些實施態樣中，CM1-CM2受質包含序列ISSGLLSGRSANP(SEQ ID NO：689)，其中亦於本文中被稱為受質2012。在一些實施態樣中，CM1-CM2受質包含序列ISSGLLSGRSANI(SEQ ID NO：690)，其中亦於本文中被稱為受質2013.在一些實施態樣中，CM1-CM2受質包含序列AVGLLAPPGGLSGRSDDH(SEQ ID NO：691)，其中亦於本文中被稱為受質3006。在一些實施態樣中，CM1-CM2受質包含序列AVGLLAPPGGLSGRSDIH(SEQ ID NO：692)，其中亦於本文中被稱為受質3007。在一些實施態樣中，CM1-CM2受質包含序列AVGLLAPPGGLSGRSDQH(SEQ ID NO：693)，其中亦於本文中被稱為受質3008。在一些實施態樣中，CM1-CM2受質包含序列AVGLLAPPGGLSGRSDTH(SEQ ID NO：694)，其中亦於本文中被稱為受質3009。在一些實施態樣中，CM1-CM2受質包含序列AVGLLAPPGGLSGRSDYH(SEQ ID NO：695)，其中亦於本文中被稱為受質3010。在一些實施態樣中，CM1-CM2受質包含序列AVGLLAPPGGLSGRSDNP(SEQ ID NO：696)，其中亦於本文中被稱為受質3011。在一些實施態樣中，CM1-CM2受質包含序列AVGLLAPPGGLSGRSANP(SEQ ID NO：697)，其中亦於本文中被稱為受質3012。在一些實施態樣中，CM1-CM2受質包含序列AVGLLAPPGGLSGRSANI(SEQ ID NO：698)，其中亦於本文中被稱為受質3013。在一些實施態樣中，CM1-CM2受質包含序列ISSGLLSGRSDNI(SEQ ID NO：713)，其中亦於本文中被稱為受質2014。在一些實施 態樣中，CM1-CM2受質包含序列AVGLLAPPGGLSGRSDNI(SEQ ID NO：714)，其中亦於本文中被稱為受質3014。在一些實施態樣中，CM1-CM2受質包含序列GLSGRSDNHGGAVGLLAPP(SEQ ID NO：807)，其中亦於本文中被稱為受質0001/LP'/1004，其中用於彼等CM1-CM2受質之LP'係為胺基酸序列GG。在一些實施態樣中，CM1-CM2受質包含序列GLSGRSDNHGGVHMPLGFLGP(SEQ ID NO：808)，其中亦於本文中被稱為受質0001/LP'/1003，其中用於彼等CM1-CM2受質之LP'係為胺基酸序列GG。
在一些實施態樣中，CM係為至少兩種蛋白酶之受質。在一些實施態樣中，每一個蛋白酶係選自由列於表4所組成之群組。在一些實施態樣中，CM係為至少兩種蛋白酶之受質，其中一個蛋白酶係選自由下列所組成之群組：MMP、凝血酶、嗜中性細胞彈性蛋白酶、半胱胺酸蛋白酶、uPA、豆蛋白酶和絲胺酸蛋白酶以及其他選自由顯示於表4蛋白酶所組成之群組。在一些實施態樣中，CM係為至少兩種選自由下列所組成之群組：MMP、凝血酶、嗜中性細胞彈性蛋白酶、半胱胺酸蛋白酶、uPA、豆蛋白酶和絲胺酸蛋白酶以及其他選自由顯示於表4蛋白酶所組成之群組的蛋白酶之受質。
在一些實施態樣中，可活化之抗體包含至少一個一級CM(first CM)和二級CM(second CM)。在一些實施態樣中，一級CM和二級CM分別為不長於15個胺基 酸的多肽。在一些實施態樣中，在未經切割狀態之可活化之抗體中的一級CM和二級CM結構排列從N-端至C-端如下：MM-CM1-CM2-AB or AB-CM2-CM1-MM。在一些實施態樣中，至少一個一級CM和二級CM係為作用為蛋白酶之受質的多肽，彼等受質係選自由下列所組成之群組：MMP、凝血酶、嗜中性細胞彈性蛋白酶、半胱胺酸蛋白酶、uPA、豆蛋白酶和絲胺酸蛋白酶。在一些實施態樣中，一級CM係經由選自由下列所組成之群組：MMP、凝血酶、嗜中性細胞彈性蛋白酶、半胱胺酸蛋白酶、uPA、豆蛋白酶和絲胺酸蛋白酶的一級切割劑在標的組織中切割且二級CM係於標的組織中經由二級切割劑切割。在一些實施態樣中，其他蛋白酶係選自由列於表4所組成之群組。在一些實施態樣中，一級切割劑和二級切割劑為相同的蛋白酶，彼等係選自由下列所組成之群組：MMP、凝血酶、嗜中性細胞彈性蛋白酶、半胱胺酸蛋白酶、uPA、豆蛋白酶和絲胺酸蛋白酶，且一級CM和二級CM為酶的不同受質。在一些實施態樣中，一級切割劑和二級切割劑為係選自由列於表4所組成之群組的相同蛋白酶。在一些實施態樣中，一級切割劑和二級切割劑為不同蛋白酶。在一些實施態樣中，一級切割劑和二級切割劑為係共定位在標的組織中。在一些實施態樣中，一級CM和二級CM係經由只少一種在標的組織的切割劑所切割。
在一些實施態樣中，可活化之抗體係暴露於蛋白酶並其受切割，因而在活化的或切割的狀態下，可活 化之抗體包含含有至少一LP2部分和/或CM經蛋白酶切割後之CM序列的輕鏈胺基酸序列。
本發明之合適的可活化抗CD71抗體包含抗體或其抗原結合片段，彼等結合至人類CD71和/或食蟹獼猴CD71的相同抗原結合位，同時抗CD71抗體包含選自由SEQ ID NO：1和3-5所組成之群組的重鏈變異區序列和選自由SEQ ID NO：2所組成之群組的輕鏈變異區序列。
本發明之合適的可活化抗CD71抗體亦包含抗體或其抗原結合片段，彼等結合至人類CD71和/或食蟹獼猴CD71的相同抗原結合位，同時抗CD71抗體包含含有胺基酸序列GYTFTSYWMH(SEQ ID NO：9)之VH CDR1、含有胺基酸序列AIYPGNSETG(SEQ ID NO：10)之VH CDR2、含有胺基酸序列ENWDPGFAF(SEQ ID NO：11)之VH CDR3、含有胺基酸序列SASSSVYYMY(SEQ ID NO：12)或CRASSSVYYMY(SEQ ID NO：13)之VL CDR1、含有胺基酸序列STSNLAS(SEQ ID NO：14)之VL CDR2以及含有胺基酸序列QQRRNYPYT(SEQ ID NO：15)之VL CDR3。
本發明之合適的可活化抗CD71抗體亦包含抗體或其抗原結合片段，彼等結合至人類CD71和/或食蟹獼猴CD71的相同抗原結合位，同時抗CD71包含選自由列於表12之重鏈變異區序列所組成之群組的重鏈變異區胺基酸序列和選自由列於表12之輕鏈變異區序列所組成之群組的輕鏈變異區胺基酸序列。
本發明之合適的可活化抗CD71抗體亦包含抗體或其抗原結合片段，彼等結合至人類CD71和/或食蟹獼猴CD71的相同抗原結合位，同時抗CD71包含VH CDR1序列、VH CDR2序列、VH CDR3序列、VL CDR1序列、VL CDR2序列和VL CDR3序列之組合，其中組合係為列於表13中單一橫列之六種CDR序列(VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3)的組合。
本發明之合適的可活化抗CD71抗體亦包含抗體或其抗原結合片段，彼等與結合至人類CD71和/或食蟹獼猴CD71的抗CD71抗體交叉競爭，彼等抗CD71抗體包含選自由SEQ ID NO：1和3-5所組成之群組的重鏈變異區序列和選自由SEQ ID NO：2所組成之群組的輕鏈變異區序列。
本發明之合適的可活化抗CD71抗體亦包含抗體或其抗原結合片段，彼等與結合至人類CD71和/或食蟹獼猴CD71的抗CD71抗體交叉競爭，彼等抗CD71抗體包含含有胺基酸序列GYTFTSYWMH(SEQ ID NO：9)的VH CDR1、含有胺基酸序列AIYPGNSETG(SEQ ID NO：10)的VH CDR2、含有胺基酸序列ENWDPGFAF(SEQ ID NO：11)的VH CDR3、含有胺基酸序列SASSSVYYMY(SEQ ID NO：12)或CRASSSVYYMY(SEQ ID NO：13)的VL CDR1、含有胺基酸序列STSNLAS(SEQ ID NO：14)的VL CDR2、含有胺基酸序列QQRRNYPYT(SEQ ID NO：15)的VL CDR3。
本發明之合適的可活化抗CD71抗體亦包含抗體或其抗原結合片段，彼等與結合至人類CD71和/或食蟹獼猴CD71的抗CD71抗體交叉競爭，彼等抗CD71抗體包含選自由列於表12之重鏈變異區序列所組成之群組的重鏈變異區胺基酸序列和選自由列於表12之輕鏈變異區序列所組成之群組的輕鏈變異區胺基酸序列。
本發明之合適的可活化抗CD71抗體亦包含抗體或其抗原結合片段，彼等與結合至人類CD71和/或食蟹獼猴CD71的抗CD71抗體交叉競爭，同時抗CD71包含VH CDR1序列、VH CDR2序列、VH CDR3序列、VL CDR1序列、VL CDR2序列和VL CDR3序列之組合，其中組合係為列於表13中單一橫列之六種CDR序列(VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3)的組合。
在一些實施態樣中，可活化抗CD71抗體為在活化的狀態下會與CD71結合的可活化之抗體，其包含：專一性結合至哺乳類CD71之抗體或其抗原結合片段(AB)，其中AB係專一性結合至人類CD71和食蟹獼猴CD71；當可活化之抗體係處於未經切割狀態下，抑制AB和CD71之結合的掩蔽部分(MM)；共軛至AB的可切割部分(CM)，其中CM係為作用為蛋白酶受質的多肽。
在一些實施態樣中，MM對AB結合的解離常數係大於AB對CD71結合的解離常數。在一些實施態樣 中，當可活化之抗體在經切割狀態時，其中MM不會干擾或與AB競爭CD71之結合。在一些實施態樣中，MM係為長度不大於40個胺基酸的多肽。在一些實施態樣中，MM多肽序列係和人類CD71不同。在一些實施態樣中，MM多肽序列與AB之任何天然結合配偶體不超過50%相同。在一些實施態樣中，MM係包含選自由SEQ ID NOs：16-295和297-314所組成之群組的胺基酸序列。在一些實施態樣中，MM包含選自由SEQ ID NOs：16、17和297-314所組成之群組的胺基酸序列。
在一些實施態樣中，在患病組織中活化的CM為蛋白酶的受質。在一些實施態樣中，CM包含胺基酸序列選自由下列所組成之群組：SEQ ID NOs：356-423、680-698、713、714和789-808。在一些實施態樣中，CM包含胺基酸序列選自由下列所組成之群組：SEQ ID NOs：406-423、680-698、713、714和807-808。
在一些實施態樣中，可活化之抗體包含選自由下列所組成之群組的抗原結合片段：Fab片段、F(ab’)2片段、scFv、scAb、dAb、單域重鏈抗體和單域輕鏈抗體。在一些實施態樣中，可活化之抗體之AB係專一性結合至人類CD71。在一些實施態樣中，AB包含VH CDR1序列GYTFTSYWMH(SEQ ID NO：9)；VH CDR2序列AIYPGNSETG(SEQ ID NO：10)；VH CDR3序列ENWDPGFAF(SEQ ID NO：11)；VL CDR1序列SASSSVYYMY(SEQ ID NO：12)或CRASSSVYYMY (SEQ ID NO：13)；VL CDR2序列STSNLAS(SEQ ID NO：14)；和VL CDR3序列QQRRNYPYT(SEQ ID NO：15)。在一些實施態樣中，AB包含含有選自由SEQ ID NOs：3-5所組成之群組的胺基酸序列之重鏈變異區和選自由SEQ ID NOs：6-8和809-908所組成之群組的胺基酸序列之輕鏈變異區。
在一些實施態樣中，AB係與CM結合。在一些實施態樣中，AB係直接連結到CM。在一些實施態樣中，AB係透過連接胜肽與CM結合。在一些實施態樣中，MM係與CM結合因此在未經切割狀態下的可活化之抗體具有結構排列從N端至C端如下：MM-CM-AB or AB-CM-MM。在一些實施態樣中，可活化之抗體包含介於MM和CM之間的連接胜肽。在一些實施態樣中，可活化之抗體包含介於CM和AB的連接胜肽。在一些實施態樣中，可活化之抗體包含第一連接胜肽(LP1)和第二連接胜肽(LP2)，其中在未經切割狀態下的可活化之抗體具有結構排列從N端至C端如下：MM-LP1-CM-LP2-AB or AB-LP2-CM-LP1-MM。在一些實施態樣中，兩連接胜肽不需要和彼此一致。在一些實施態樣中，每個LP1和LP2係為約1至20個胺基酸長的胜肽。
在一些實施態樣中，可活化之抗體包含重鏈序列SEQ ID NO：325或699以及含有選自由下列所組成之群組的輕鏈序列：SEQ ID NO：327、329、331、333、335、337、650、652、654、656、658、660、670- 673、701-712、721-788、809-836和841-908。
在一些實施態樣中，可活化之抗體包含胺基酸序列之組合，其中胺基酸序列之組合係選自由表D之單一橫列，其中對於給定之組合，(a)AB的重鏈包含相對應表D之單一橫列給予的組合的VH CDR序列之胺基酸序列(b)AB的輕鏈包含相對應表D之單一橫列給予的組合的VL CDR序列之胺基酸序列，(c)掩蔽部分(MM)包含相對應表D之單一橫列給予的組合的MM序列之胺基酸序列，(d)受質部分(CM)包含相對應表D之單一橫列給予的組合的CM序列之胺基酸序列。
在一些實施態樣中，可活化之抗體包含胺基酸序列之組合，其中對於給定之組合，(a)AB之重鏈包含VH序列之胺基酸序列或選自由下列所組成之群組的VH CDR序列：列於表E相對應直欄中的VH序列或VH CDR序列，(b)AB之輕鏈包含VH序列之胺基酸序列或選自由下列所組成之群組的VL CDR序列：列於表E相對應直欄中的VL序列或VL CDR序列，(c)含有選自由下列所組成之群組的掩蔽部分(MM)胺基酸序列的MM：列於表E相對應直欄中的MM序列，和(d)含有選自由下列所組成之群組的受質序列(CM)胺基酸序列的CM：列於表E相對應直欄中的CM序列。
在一些實施態樣中，可活化抗CD71抗體包含專一性結合至哺乳類CD71、MM和CM的抗體或其抗原結合片段(AB)，其中可活化之抗體包含：重鏈序列SEQ ID NOS：325或699；和含有選自由下列胺基酸序列所組成之群組的輕鏈：SEQ ID NOS：327、329、331、333、335、337、650、652、654、656、658、660、670-673、701-712、721-788、809-836和841-908。在一些實施態樣中，MM包含胺基酸序列選自由SEQ ID NOs：16、17、297-314所組成之群組，以及CM包含胺基酸序列選自由SEQ ID NOs：406-423、680-698、713、714和789-808所組成之群組。在一些實施態樣中，AB包含VH CDR1序列GYTFTSYWMH(SEQ ID NO：9)；VH CDR2序列AIYPGNSETG(SEQ ID NO：10)；VH CDR3序列ENWDPGFAF(SEQ ID NO：11)；VL CDR1序列SASSSVYYMY(SEQ ID NO：12)或CRASSSVYYMY(SEQ ID NO：13)；VL CDR2序列STSNLAS(SEQ ID NO：14)；和VL CDR3序列QQRRNYPYT(SEQ ID NO：15)。在一些實施態樣中，AB包含含有胺基酸序列選自由SEQ ID NOs：3-5所組成之群組的重鏈變異區和選自由SEQ ID NOs：6-8和809-908所組成之群組的輕鏈變異區。
在一些實施態樣中，可活化抗CD71抗體包含專一性結合至哺乳類CD71之抗體或其抗原結合片段(AB)，MM包含胺基酸序列選自由SEQ ID NOs：16-295和297-314所組成之群組，CM包含胺基酸序列選自由SEQ ID NOs：356-423、680-698、713、714和789-808所組成之群組。在一些實施態樣中，MM包含胺基酸序列選 自由SEQ ID NOs：16、17和297-314所組成之群組，以及CM包含胺基酸序列選自由SEQ ID NOs：406-423、680-698、713、714和807-808所組成之群組。在一些實施態樣中，AB包含VH CDR1序列GYTFTSYWMH(SEQ ID NO：9)；VH CDR2序列AIYPGNSETG(SEQ ID NO：10)；VH CDR3序列ENWDPGFAF(SEQ ID NO：11)；VL CDR1序列SASSSVYYMY(SEQ ID NO：12)或CRASSSVYYMY(SEQ ID NO：13)；VL CDR2序列STSNLAS(SEQ ID NO：14)和VL CDR3序列QQRRNYPYT(SEQ ID NO：15).在一些實施態樣中，AB包含含有胺基酸序列選自由SEQ ID NOs：3-5所組成之群組的重鏈變異區以及胺基酸序列選自由SEQ ID NOs：6-8和809-908所組成之群組的輕鏈變異區。
在一些實施態樣中，可活化抗CD71抗體包含專一性結合至哺乳類CD71之抗體或其抗原結合片段(AB)，其中如同本發明之單離抗體，AB專一性結合至相同抗原決定位之人類CD71和/或食蟹獼猴CD71、當可活化之抗體係處於未經切割狀態下，抑制AB和CD71之結合的掩蔽部分(MM)；共軛至AB的可切割部分(CM)，其中CM係為作用為蛋白酶受質的多肽。
在一些實施態樣中，可活化抗CD71抗體包含專一性結合至哺乳類CD71之抗體或其抗原結合片段(AB)，其中AB專一性結合至人類CD71和食蟹獼猴CD71。在一些實施態樣中，抗體或其抗原結合片段包含 VH CDR1序列GYTFTSYWMH(SEQ ID NO：9)；VH CDR2序列AIYPGNSETG(SEQ ID NO：10)；VH CDR3序列ENWDPGFAF(SEQ ID NO：11)；VL CDR1序列SASSSVYYMY(SEQ ID NO：12)或CRASSSVYYMY(SEQ ID NO：13)；VL CDR2序列STSNLAS(SEQ ID NO：14)和VL CDR3序列QQRRNYPYT(SEQ ID NO：15)。在一些實施態樣中，可活化之抗體或其抗原結合片段包含含有胺基酸序列選自由SEQ ID NOs：3-5所組成之群組的重鏈變異區和含有胺基酸序列選自由SEQ ID NOs：6-8所組成之群組的輕鏈變異區。
在一些實施態樣中，可活化抗CD71抗體包含專一性結合至哺乳類CD71之抗體或其抗原結合片段(AB)，其中AB專一性與本發明之單離抗體之單離抗體至相同抗原決定位之人類CD71和/或食蟹獼猴CD71；當可活化之抗體係處於未經切割狀態下，抑制AB和CD71之結合的掩蔽部分(MM)；共軛至AB的可切割部分(CM)，其中CM係為作用為蛋白酶受質的多肽。
在一些實施態樣中，本發明之可活化抗CD71抗體包含專一性結合至哺乳類CD71之單離抗體或其抗原結合片段(AB)，其中AB專一性結合至人類CD71和食蟹獼猴CD71。在一些實施態樣中，抗體或其抗原結合片段包含VH CDR1序列GYTFTSYWMH(SEQ ID NO：9)；VH CDR2序列AIYPGNSETG(SEQ ID NO：10)；VH CDR3序列ENWDPGFAF(SEQ ID NO：11)；VL CDR1序列 SASSSVYYMY(SEQ ID NO：12)或CRASSSVYYMY(SEQ ID NO：13)；VL CDR2序列STSNLAS(SEQ ID NO：14)；和VL CDR3序列QQRRNYPYT(SEQ ID NO：15)。在一些實施態樣中，可活化之抗體或其抗原結合片段包含含有胺基酸序列選自由SEQ ID NOs：3-5所組成之群組的重鏈變異區和含有胺基酸序列選自由SEQ ID NOs：6-8所組成之群組的輕鏈變異區。
在一些實施態樣中，在一些實施態樣中，可活化之抗體亦包含共軛至AB的劑。在一些實施態樣中，共軛至AB的劑或可活化之抗體之AB係為治療劑。在一些實施態樣中，該劑為抗癌劑。在一些實施態樣中，該劑為毒素或其片段。如本文所用，毒素之片段係為保有毒性活性的片段。在一些實施態樣中，該劑係透過可切割連接子與AB共軛。在一些實施態樣中，該劑係透過包含至少一種CM1-CM2受質序列之連接子與AB共軛。在一些實施態樣中，該劑係透過不可切割連接子與AB共軛。在一些實施態樣中，該劑係透過在胞內或溶酶體內環境可切割的連接子與AB共軛。在一些實施態樣中，該劑係為微小管抑制劑。在一些實施態樣中，該劑為核苷酸破壞劑，例如DNA烷化劑、DNA切割劑、DNA交聯劑、DNA插入劑或其他破壞劑。在一些實施態樣中，該劑係選自由列於表5的所組成之群組。在一些實施態樣中，該劑為尾海兔素。在一些實施態樣中，該劑為耳抑素(單甲醇)或其衍生物。在一些實施態樣中，該劑為耳抑素E或其衍生物。在 一些實施態樣中，該劑為單甲基耳抑素E(MMAE)。在一些實施態樣中，該劑為單甲基耳抑素D(MMAD)。在一些實施態樣中，該劑為類美登素或其衍生物。在一些實施態樣中，該劑為DM1或DM4。在一些實施態樣中，該劑係與其衍生物共定位。在一些實施態樣中，該劑為卡奇黴素或其衍生物。在一些實施態樣中，該劑為吡咯并苯并二吖呯。在一些實施態樣中，該劑為吡咯并苯并二吖呯二聚物。
在一些實施態樣中，可活化之抗體係共軛至劑的一或多個等價物。在一些實施態樣中，可活化之抗體係共軛至劑的一個等價物。在一些實施態樣中，可活化之抗體係共軛至劑的二、三、四、五、六、七、八、九、十或更多個等價物。在一些實施態樣中，可活化之抗體係為具有均值數目之共軛劑的等價物之可活化之抗體的混合物。在一些實施態樣中，可活化之抗體係為具有不同數目之共軛劑的等價物之可活化之抗體的混合物的部分。在一些實施態樣中，可活化之抗體之混合物之中共軛至每一個可活化之抗體之劑的平均數目係介於零至一、介於一至二、介於二至三、介於三至四、介於四至五、介於五至六、介於六至七、介於七至八、介於八至九、介於九至十和十和更多。在一些實施態樣中，可活化之抗體之混合物之中共軛至每一個可活化之抗體之劑的平均數目係為一、二、三、四、五、六、七、八、九、十或更多。
在一些實施態樣中，可活化之抗體包含一或多個專一性位置胺基酸序列修飾，彼等修飾使離胺酸和/ 或半胱胺酸殘基對原始可活化之抗體胺基酸序列來說增加或減少，因此在一些實施態樣中，可共軛至可活化之抗體之劑的數量會相對應增加或減少，或在一些實施態樣中，可活化之抗體和劑之專一性位置共軛係受到限制的。在一些實施態樣中，修飾的可活化之抗體係經一或多非天然胺基酸之專一性位置修飾，因此在一些實施態樣中劑的共軛係限制至只有在非天然胺基酸的位置。
在一些實施態樣中，此劑係為抗炎性。
在一些實施態樣中，可活化之抗體亦包含可偵測部分。在一些實施態樣中，可偵測部分係為診斷劑。
在一些實施態樣中，可活化之抗體亦包含單一胜肽。在一些實施態樣中，單一胜肽係透過間隔共軛至可活化之抗體。在一些實施態樣中，間隔係在沒有訊號胜肽的存在下共軛至可活化之抗體。在一些實施態樣中，間隔係直接連結至可活化之抗體的MM。在一些實施態樣中，間隔係直接連結至可活化之抗體的MM，且其結構排列從N端至C端為間隔-MM-CM-AB。間隔直接連結到可活化之抗體之MM的N端之實例為QGQSGQ(SEQ ID NO：424)。其他間隔直接連結到可活化之抗體之MM的N端之實例包含QGQSGQG(SEQ ID NO：645)、QGQSG(SEQ ID NO：646)、QGQS(SEQ ID NO：647)、QGQ(SEQ ID NO：648),QG(SEQ ID NO：649)和Q。其他間隔直接連結到可活化之抗體之MM的N端之實例包含GQSGQG(SEQ ID NO：666)、QSGQG(SEQ ID NO：667)、SGQG (SEQ ID NO：668)、GQG(SEQ ID NO：669)和G。在一些實施態樣中，no spacer is joined to the N-terminus of the MM。在一些實施態樣中，間隔包含至少胺基酸序列QGQSGQ(SEQ ID NO：424)。在一些實施態樣中，間隔包含至少胺基酸序列QGQSGQG(SEQ ID NO：645)。在一些實施態樣中，間隔包含至少胺基酸序列QGQSG(SEQ ID NO：646)。在一些實施態樣中，間隔包含至少胺基酸序列QGQS(SEQ ID NO：647)。在一些實施態樣中，間隔包含至少胺基酸序列QGQ(SEQ ID NO：648)。在一些實施態樣中，間隔包含至少胺基酸序列QG(SEQ ID NO：649)。在一些實施態樣中，間隔包含至少胺基酸殘基Q。在一些實施態樣中，間隔包含至少胺基酸序列GQSGQG(SEQ ID NO：666)。在一些實施態樣中，間隔包含至少胺基酸序列QSGQG(SEQ ID NO：667)。在一些實施態樣中，間隔包含至少胺基酸序列SGQG(SEQ ID NO：668)。在一些實施態樣中，間隔包含至少胺基酸序列GQG(SEQ ID NO：669)。在一些實施態樣中，間隔包含至少胺基酸序列G。在一些實施態樣中，間隔係不存在。
在一些實施態樣中，可活化之抗體天然的包含一或多個雙硫鍵。在一些實施態樣中，可活化之抗體可經工程的改造包含一或多個雙硫鍵。
在一些實施態樣中，可活化之抗體或其抗原結合片段係共軛至劑。在一些實施態樣中，可活化之抗體包含抗體或其抗原結合片段，彼等會與含有VH CDR1序 列GYTFTSYWMH(SEQ ID NO：9)；VH CDR2序列AIYPGNSETG(SEQ ID NO：10)；VH CDR3序列ENWDPGFAF(SEQ ID NO：11)；VL CDR1序列SASSSVYYMY(SEQ ID NO：12)或CRASSSVYYMY(SEQ ID NO：13)；VL CDR2序列STSNLAS(SEQ ID NO：14)；和VL CDR3序列QQRRNYPYT(SEQ ID NO：15)之單離抗體交叉競爭。在一些實施態樣中，可活化之抗體包含抗體或其抗原結合片段，彼等會與包含選自由SEQ ID NO：3-5所組成之群組胺基酸序列的重鏈變異區和含有選自由SEQ ID NO：6-8所組成之群組胺基酸序列的輕鏈變異區的單離抗體交叉競爭。在一些實施態樣中，該劑為毒素或其片段。在一些實施態樣中，該劑係為微小管抑制劑。在一些實施態樣中，該劑為核苷酸破壞劑。在一些實施態樣中，劑係選自由下列所組成之群組：尾海兔素(dolastatin)或其衍生物、耳抑素(單甲醇)或其衍生物、類美登素(類美登素)或其衍生物、倍癌黴素(duocarmycin)或其衍生物、卡奇黴素(calicheamicin)或其衍生物以及吡咯并苯并二吖呯及其衍生物。在一些實施態樣中，該劑係為耳抑素E或其衍生物。在一些實施態樣中，該劑係為單甲基耳抑素E(MMAE)。在一些實施態樣中，該劑係為單甲基耳抑素D(MMAD)。在一些實施態樣中，該劑係為選自由DM1和DM4所組成之群組的類美登素。在一些實施態樣中，該劑係為類美登素DM4。在一些實施態樣中，該劑係為倍癌黴素。在一些實施態樣中，該劑係透過 可切割連接子與AB共軛。在一些實施態樣中，在劑共軛至AB的連接子中包含SPCB部分、vc部分或PEG2-vc部分。在一些實施態樣中，共軛至AB的連接子和毒素包含SPDB-DM4部分、vc-MMAD部分、vc-MMAE部分、vc-倍癌黴素或PEG2-vc-MMAD部分。在一些實施態樣中，連接子係為可切割連接子。在一些實施態樣中，連接子係為不可切割連接子。在一些實施態樣中，劑係為可偵測部分。在一些實施態樣中，可偵測部分係為診斷劑。
在一些實施態樣中，可活化之抗體包含在活化狀態下會結合CD71的共軛的可活化之抗體，彼等包含專一性結合至哺乳類CD71之抗體或其抗原結合片段(AB)，其中AB係專一性結合至人類CD71和食蟹獼猴CD71；當可活化之抗體係處於未經切割狀態下，抑制AB和CD71之結合的掩蔽部分(MM)；共軛至AB的可切割部分(CM)，其中CM係為作用為蛋白酶受質的多肽，且劑係共軛至AB。在一些實施態樣中，劑係選自由下列所組成之群組：尾海兔素(dolastatin)或其衍生物、耳抑素(單甲醇)或其衍生物、類美登素(類美登素)或其衍生物、倍癌黴素(duocarmycin)或其衍生物、卡奇黴素(calicheamicin)或其衍生物以及吡咯并苯并二吖呯及其衍生物。在一些實施態樣中，劑係選自由下列所組成之群組：耳抑素E、單甲基耳抑素F(MMAF)、單甲基耳抑素E(MMAE)、單甲基耳抑素D(MMAD)、類美登素DM4、類美登素DM1、倍癌黴素、吡咯并苯并二吖呯以及吡咯并苯并二吖呯二聚物。 在一些實施態樣中，該劑係透過可切割連接子與AB共軛。在一些實施態樣中，在劑共軛至AB的連接子中包含SPCB部分、vc部分或PEG2-vc部分。在一些實施態樣中，共軛至AB的連接子和毒素包含SPDB-DM4部分、vc-MMAD部分、vc-MMAE部分、vc-倍癌黴素或PEG2-vc-MMAD部分。在一些實施態樣中，共軛的可活化之抗體或其抗原結合片段之AB包含VH CDR1序列GYTFTSYWMH(SEQ ID NO：9)；VH CDR2序列AIYPGNSETG(SEQ ID NO：10)；VH CDR3序列ENWDPGFAF(SEQ ID NO：11)；VL CDR1序列SASSSVYYMY(SEQ ID NO：12)或CRASSSVYYMY(SEQ ID NO：13)；VL CDR2序列STSNLAS(SEQ ID NO：14)；和VL CDR3序列QQRRNYPYT(SEQ ID NO：15)。在一些實施態樣中，共軛的可活化之抗體或其抗原結合片段之AB包含選自由SEQ ID NO：3-5所組成之群組胺基酸序列的重鏈變異區和含有選自由SEQ ID NO：6-8和809-908所組成之群組胺基酸序列的輕鏈變異區。在一些實施態樣中，MM包含胺基酸序列選自由SEQ ID NOs：16-295和297-314所組成之群組。在一些實施態樣中，MM包含胺基酸序列選自由SEQ ID NOs：16、17和297-314所組成之群組。在一些實施態樣中，CM包含胺基酸序列選自由SEQ ID NOs：356-423、680-698、713、714和89-808所組成之群組。在一些實施態樣中，CM包含胺基酸序列選自由SEQ ID NOs：406-423、680-698、713、714 和807-808所組成之群組。在一些實施態樣中，可活化之抗體包含胺基酸序列組合，其中該組合係選自由表D之單一橫列，其中給定之組合，(a)AB重鏈包含對應至表D之單一橫列給定之組合的VH CDR序列之胺基酸序列，(b)AB輕鏈包含對應至表D之單一橫列給定之組合的VL CDR序列之胺基酸序列，(c)MM包含對應至表D之單一橫列給定之組合的掩蔽序列(MM)之胺基酸序列，及(d)CM包含對應至表D之單一橫列給定之組合的受質序列(CM)之胺基酸序列。在一些實施態樣中，可活化之抗體包含胺基酸序列組合，其中給定之組合，(a)AB重鏈包含選自由對應至列於表E直欄之VL序列或VL CDR序列所組成之群組之VL序列或VL CDR序列的胺基酸序列，(b)AB輕鏈包含選自由對應至列於表E直欄之VH序列或VH CDR序列所組成之群組之VH序列或VH CDR序列的胺基酸序列，(c)MM包含選自由對應至列於表E直欄之MM序列所組成之群組掩蔽序列(MM)的胺基酸序列，以及(d)CM包含選自由對應至列於表E直欄之CM序列所組成之群組受質序列(CM)的胺基酸序列。在一些實施態樣中，可活化之抗體包含：SEQ ID NOS：325或699之胺基酸序列的重鏈；以及包含選自由下列組成之群組的胺基酸序列的輕鏈：SEQ ID NOS：327、329、331、333、335、337、650、652、654、656、658、660、670-673、701-712、721-788、809-836及841-908。
在一些實施態樣中，共軛的可活化之抗體包 含在活化狀態下會結合CD71的共軛的可活化之抗體，彼等包含專一性結合至哺乳類CD71之抗體或其抗原結合片段(AB)，其中AB係專一性結合至人類CD71和食蟹獼猴CD71；當可活化之抗體係處於未經切割狀態下，抑制AB和CD71之結合的掩蔽部分(MM)；共軛至AB的可切割部分(CM)，其中CM係為作用為蛋白酶受質的多肽，且劑係共軛至AB，其中AB包含：(i)VH CDR1序列GYTFTSYWMH(SEQ ID NO：9)；VH CDR2序列AIYPGNSETG(SEQ ID NO：10)；VH CDR3序列ENWDPGFAF(SEQ ID NO：11)；VL CDR1序列SASSSVYYMY(SEQ ID NO：12)或CRASSSVYYMY(SEQ ID NO：13)；VL CDR2序列STSNLAS(SEQ ID NO：14)；VL CDR3序列QQRRNYPYT(SEQ ID NO：15)，或(ii)選自由SEQ ID NO：3-5所組成之群組之胺基酸序列的重鏈變異區和選自由SEQ ID NO：6-8所組成之群組之胺基酸序列的輕鏈變異區，或(iii)包含胺基酸序列SEQ ID NOS：325或699之重鏈，和包含選自由下列所組成之群組胺基酸序列的輕鏈：SEQ ID NOS：327、329、331、333、335、337、650、652、654、656、658、660、670-673、701-712、721-788、809-836和841-908；以及其中劑係選自由下列所組成之群組：耳抑素E、單甲基耳抑素F(MMAF)、單甲基耳抑素E(MMAE)、單甲基耳抑素D(MMAD)、類美登素DM4、類美登素DM1、吡咯并苯并二吖呯、吡咯并苯并二吖呯二聚物以及倍癌黴素。 在一些實施態樣中，MM包含選自由SEQ ID NOs：16-295和297-314所組成之群組的胺基酸序列。在一些實施態樣中，MM包含選自由SEQ ID NOs：16、17和297-314所組成之群組的胺基酸序列。在一些實施態樣中，CM包含選自由SEQ ID NOs：356-423、680-698、713、714和789-808所組成之群組的胺基酸序列。在一些實施態樣中，CM包含選自由SEQ ID NOs：406-423、680-698、713、714和807-808所組成之群組的胺基酸序列。在一些實施態樣中，劑係透過連接子共軛至AB，且其中在劑共軛至AB的連接子中包含SPCB部分、vc部分或PEG2-vc部分。在一些實施態樣中，共軛至AB的連接子和毒素包含SPDB-DM4部分、vc-MMAD部分、vc-MMAE部分、vc-倍癌黴素或PEG2-vc-MMAD部分。
在一些實施態樣中，共軛可活化之抗體包含共軛可活化之抗體或共軛抗體包含：在活化狀態結合至CD71之抗體或其抗原結合片段(AB)；且毒素透過連接子和AB共軛結合，其中共軛可活化之抗體或共軛抗體包含選自由表F中單一橫列之胺基酸序列、連接子、毒素，其中給定之組合，(a)AB包含含有對應到列於表F之單一橫列中給定之組合的重鏈序列或重鏈變異區域序列的胺基酸序列之重鏈，(b)AB包含含有對應到列於表F之單一橫列中給定之組合的輕鏈序列或輕鏈變異區域序列的胺基酸序列之輕鏈，和(c)連接子和毒素包含對應到列於表F之單一橫列中給定之組合的連接子和毒素。
在一些實施態樣中，可活化之抗體係由包含編碼選自由SEQ ID NO：1和3-5所組成之群組的重鏈變異區胺基酸序列之核苷酸序列的核苷酸序列所編碼。在一些實施態樣中，可活化之抗體係由包含編碼選自由SEQ ID NO：3-5所組成之群組的重鏈變異區胺基酸序列之核苷酸序列的核苷酸序列所編碼。
在一些實施態樣中，可活化之抗體係由包含編碼選自由SEQ ID NO：2和6-8所組成之群組的輕鏈變異區胺基酸序列之核苷酸序列的核苷酸序列所編碼。在一些實施態樣中，可活化之抗體係由包含編碼選自由SEQ ID NO：6-8所組成之群組的輕鏈變異區胺基酸序列之核苷酸序列的核苷酸序列所編碼。
在一些實施態樣中，可活化之抗體係由包含編碼選自由SEQ ID NO：1和3-5所組成之群組的重鏈變異區胺基酸序列之核苷酸序列和包含編碼選自由SEQ ID NO：2和6-8所組成之群組的輕鏈變異區胺基酸序列之核苷酸序列的核苷酸序列所編碼。
在一些實施態樣中，可活化之抗體係由包含編碼選自由SEQ ID NO：3-5所組成之群組的重鏈變異區胺基酸序列之核苷酸序列和包含編碼選自由SEQ ID NO：6-8所組成之群組的輕鏈變異區胺基酸序列之核苷酸序列的核苷酸序列所編碼。
在一些實施態樣中，可活化之抗體係含有與編碼選自由SEQ ID NO：1和3-5所組成之群組的重鏈變異 區胺基酸序列的核苷酸序列至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%相同的核苷酸序列之核苷酸序列所編碼。在一些實施態樣中，可活化之抗體係含有與編碼選自由SEQ ID NO：3-5所組成之群組的重鏈變異區胺基酸序列的核苷酸序列至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%相同的核苷酸序列之核苷酸序列所編碼。
在一些實施態樣中，可活化之抗體係含有與編碼選自由SEQ ID NO：2和6-8所組成之群組的輕鏈變異區胺基酸序列的核苷酸序列至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%相同的核苷酸序列之核苷酸序列所編碼。在一些實施態樣中，可活化之抗體係含有與編碼選自由SEQ ID NO：6-8所組成之群組的輕鏈變異區胺基酸序列的核苷酸序列至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%相同的核苷酸序列之核苷酸序列所編碼。
在一些實施態樣中，可活化之抗體係含有與編碼選自由SEQ ID NO：1和3-5所組成之群組的重鏈變異區胺基酸序列的核苷酸序列至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%相同的核苷酸序列以及和編碼選自由SEQ ID NO：2和6-8所組成之群組的輕鏈變異區胺基酸序列的核苷酸序列至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%相同的核苷酸序列之核苷酸序列所編碼。
在一些實施態樣中，可活化之抗體係含有與編碼選自由SEQ ID NO：3-5所組成之群組的重鏈變異區胺基酸序列的核苷酸序列至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%相同的核苷酸序列以及和編碼選自由SEQ ID NO：6-8所組成之群組的輕鏈變異區胺基酸序列的核苷酸序列至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%相同的核苷酸序列之核苷酸序列所編碼。
在一些實施態樣中，可活化之抗體係由包含編碼選自由列於表12之重鏈變異區序列所組成之群組的重鏈變異區胺基酸序列之核苷酸序列的核苷酸序列所編碼。在一些實施態樣中，可活化之抗體係由包含編碼選自由列於表12之輕鏈變異區序列所組成之群組的輕鏈變異區胺基酸序列之核苷酸序列的核苷酸序列所編碼。在一些實施態樣中，可活化之抗體係由包含編碼選自由列於表12之重鏈變異區序列所組成之群組的重鏈變異區胺基酸序列之核苷酸序列以及編碼選自由列於表12之輕鏈變異區序列所組成之群組的輕鏈變異區胺基酸序列之核苷酸序列的核苷酸序列所編碼。
在一些實施態樣中，可活化之抗體係由包含編碼與選自由列於表12之重鏈變異區序列所組成之群組的重鏈變異區胺基酸序列至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%相同的重鏈變異區胺基酸序列之核苷酸序列的核苷酸序列所編碼。在一些實施 態樣中，可活化之抗體係由包含編碼與選自由列於表12之輕鏈變異區序列所組成之群組的輕鏈變異區胺基酸序列至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%相同的輕鏈變異區胺基酸序列之核苷酸序列的核苷酸序列所編碼。在一些實施態樣中，可活化之抗體係由包含編碼與選自由列於表12之重鏈變異區序列所組成之群組的重鏈變異區胺基酸序列至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%相同的重鏈變異區胺基酸序列之核苷酸序列以及編碼與選自由列於表12之輕鏈變異區序列所組成之群組的輕鏈變異區胺基酸序列至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%相同的輕鏈變異區胺基酸序列之核苷酸序列。
在一些實施態樣中，可活化之抗體係由含有編碼變異區重鏈互補性決定區域1(VH CDR1，於此亦稱為CDRH1)序列、變異區重鏈互補性決定區域2(VH CDR2，於此亦稱為CDRH2)序列、變異區重鏈互補性決定區域3(VH CDR3，於此亦稱為CDRH3)序列、變異區輕鏈互補性決定區域1(VL CDR1，於此亦稱為CDRL1)序列、變異區輕鏈互補性決定區域2(VL CDR2，於此亦稱為CDRL2)序列、變異區輕鏈互補性決定區域3(VL CDR3，於此亦稱為CDRL3)序列之核苷酸序列組合之核苷酸序列所編碼，其中至少一CDR序列係選自由下列所組成之群組：如表13所示之VH CDR1序列、如表13所示之VH CDR2序列、如表13所示之VH CDR3序列、如表13所示之VL CDR1序列、如表13所示之VL CDR2序列、如表13所示之VL CDR3序列。
在一些實施態樣中，可活化之抗體係由含有編碼VH CDR1序列、VH CDR2序列、VH CDR3序列、VL CDR1序列、VL CDR2序列和VL CDR3序列之組合，其中組合係為列於表13中單一橫列之六種CDR序列(VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3)之核苷酸序列組合之核苷酸序列所編碼，其中至少一互補性決定區域(CDR)序列係選自由下列所組成之群組：包含至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高和表13所示之VH CDR1序列相同的VH CDR1序列、至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高和表13所示之VH CDR2序列相同的VH CDR2序列、至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高和表13所示之VH CDR3序列相同的VH CDR3序列、至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高和表13所示之VL CDR1序列相同的VL CDR1序列、至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高和表13所示之VL CDR2序列相同的VL CDR2序列、至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高和表13所示之VL CDR3序列相同的VL CDR3序列。
在一些實施態樣中，可活化之抗體係由含有編碼VH CDR1序列、VH CDR2序列、VH CDR3序列、VL CDR1序列、VL CDR2序列和VL CDR3序列之組合，其中fu6j5/(VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3)之核苷酸序列組合之核苷酸序列所編碼。
在一些實施態樣中，可活化之抗體係由含有編碼VL CDR1序列、VL CDR2序列和VL CDR3序列之組合，其中組合係為列於表13中單一橫列之三種輕鏈CDR序列(VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3)之核苷酸序列組合之核苷酸序列所編碼。
在一些實施態樣中，在一些實施態樣中，可活化之抗體係由含有編碼VH CDR1序列、VH CDR2序列、VH CDR3序列之組合，其中組合係為列於表13中單一橫列之三種重鏈CDR序列(VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3)之核苷酸序列組合之核苷酸序列所編碼。
在一些實施態樣中，可活化之抗體係由含有編碼VH CDR1序列、VH CDR2序列、VH CDR3序列、VL CDR1序列、VL CDR2序列和VL CDR3序列之核苷酸序列組合之核苷酸序列所編碼，其中組合中任一CDR序列包含與列於表13中單一橫列之六種CDR序列(VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3)至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高相同的序列。
在一些實施態樣中，可活化之抗體係由含有編碼VH CDR1序列、VH CDR2序列和VH CDR3序列之核苷酸序列組合之核苷酸序列所編碼，其中組合中任一CDR序列包含與列於表13中單一橫列之三種重鏈CDR序列(VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3)至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高相同的序列。
在一些實施態樣中，可活化之抗體係由含有編碼VL CDR1序列、VL CDR2序列和VL CDR3序列之核苷酸序列組合之核苷酸序列所編碼，其中組合中任一CDR序列包含與列於表13中單一橫列之三種輕鏈CDR序列(VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3)至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高相同的序列。
本發明亦提供在會導致本文中可活化之抗體表現的條件下培養細胞的方法，其中細胞包含本發明之核苷酸分子或本發明之載體。
本發明亦提供製造於活化狀態會結合至CD71之可活化之抗體的方法，其中方法包含：(a)培養包含編碼會導致可活化之抗體表現的條件下可活化之抗體之核苷酸建構物，其中可活化之抗體包含本發明之可活化之抗體；以及(b)回復可活化之抗體。
在一些實施態樣中，可活化之抗體包含一或多種含有給予於表D橫列中序列的組合之多肽或其他任何 掩蔽部分之組合(MM)、受質序列(CM)、表E中的輕鏈變異區序列或輕鏈變異區CDR序列和重鏈變異區序列和重鏈變異區CDR序列。
Figure 105113835-A0202-12-0090-2608
Figure 105113835-A0202-12-0091-2609
Figure 105113835-A0202-12-0092-2610
Figure 105113835-A0202-12-0093-2611
Figure 105113835-A0202-12-0094-2612
Figure 105113835-A0202-12-0095-2613
Figure 105113835-A0202-12-0096-2614
Figure 105113835-A0202-12-0097-2615
Figure 105113835-A0202-12-0098-2616
Figure 105113835-A0202-12-0099-2617
Figure 105113835-A0202-12-0100-2618
在一些實施態樣中，本發明之可活化之抗體包含一或多種含有選自由表D或表E序列之組合的多 肽，其中多肽包含選自由表D或表E欄位中標題為「掩蔽序列(MM)」之序列、選自由表D或表E欄位中標題為「受質序列(CM)」之序列、選自由表D或表E欄位中標題為「VL或VL CDRs」或「VL CDRs SEQ ID NOs」之輕鏈變異區或輕鏈CDR、以及選自由表D或表E欄位中標題為「VH或VH CDRs」或「VH CDRs SEQ ID NOs」之重鏈變異區或重鏈CDR之組合舉例來說，本發明之可活化之抗體包含組合no,54之胺基酸序列，其中包含掩蔽序列SEQ ID NO：17、受質序列SEQ ID NO：412、含有SEQ ID NOS：12、14和15之VL CDR序列的輕鏈變異區和含有SEQ ID NOS：9、10和11之VH CDR序列的重鏈變異區因此，本文敘述含有至少任何表D中給予橫列之組合序列的可活化之抗體。類似的，本文敘述表E中掩蔽序列(MM)、受質序列(CM)、輕鏈變異區或輕鏈變異區CDR序列和重鏈變異區或重鏈變異區CDR序列之任何組合。含有表D或表E中掩蔽序列(MM)、受質序列(CM)、輕鏈變異區或輕鏈變異區CDR序列和重鏈變異區或重鏈變異區CDR序列之任何組合的可活化之抗體亦於本文中敘述。在一些實例性實施態樣中，至少包含表E中掩蔽序列(MM)、受質序列(CM)、輕鏈變異區或輕鏈變異區CDR序列和重鏈變異區或重鏈變異區CDR序列之組合序列的可活化之抗體可和一或多種毒素結合，該毒素包含尾海兔素(dolastatin)或其衍生物、耳抑素(單甲醇)或其衍生物、類美登素(類美登素)或其衍生物、倍癌黴素(duocarmycin) 或其衍生物、卡奇黴素(calicheamicin)或其衍生物以及吡咯并苯并二吖呯及其衍生物在一些實例性實施態樣中，至少包含表D中掩蔽序列(MM)、受質序列(CM)、輕鏈變異區或輕鏈變異區CDR序列和重鏈變異區或重鏈變異區CDR序列之任一組合序列的可活化之抗體可和一或多種毒素結合，該毒素包含耳抑素E(單甲醇)、單甲基耳抑素F(MMAF)、單甲基耳抑素E(MMAE)、單甲基耳抑素D(MMAD)、類美登素(類美登素)DM4、類美登素(類美登素)DM1、吡咯并苯并二吖呯、吡咯并苯并二吖呯二聚物和/或倍癌黴素。
任何上述表D或表E之組合可人類免疫球蛋白恆定區結合以導致包含IgG1、IgG2、IgG4的全人IgGs或的導致改變功能例如IgG1 N297A、IgG1 N297Q或IgG4 S228P的人類IgGs。描述於表D或表E的組合不受限於任何給予橫列所示的特定組合，因此可包含任何表D欄2的任何掩蔽序列(或表E欄1)，與任何表D欄3的任何受質序列(或表E欄2)結合，與任何表D欄4的任何VL序列或VL CDR序列套組(或表E欄3)結合，與任何表D欄5的任何HL序列或VH CDR序列套組(或表E欄4)結合。在本發明之表D欄3或表E欄2之受質序列外，任何本發明之CM可用於組合。在本發明之表D欄4或表E欄3之輕鏈變異區序列或輕鏈CDR序列外，任何本發明之輕鏈變異區序列或輕鏈CDR序列可用於組合。在本發明之表D欄5或表E欄4之重鏈變異區序列或重鏈 CDR序列外，任何本發明之重鏈變異區序列或重鏈CDR序列可用於組合。
在一些實施態樣中，抗體藥物共軛物(ADCs)和可活化之抗體藥物共軛物(AADCs)可包含一或多種含有表F給予橫列中輕鏈序列或輕鏈變異區序列、重鏈序列或重鏈變異區序列、連接子和毒素之組合或表F中輕鏈序列或輕鏈變異區序列、重鏈序列或重鏈變異區序列、連接子和毒素之任何組合的多肽。
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本發明之抗體藥物共軛物(ADC)或本發明之可活化之抗體藥物共軛物(AADC)可包含含有列於表F給予橫列之胺基酸序列、連接子和毒素的組合之一或多個多肽。因此，本發明之抗體藥物共軛物(ADC)或本發明之可活化之抗體藥物共軛物(AADC)包含列於給予橫列之胺基酸序列、連接子和毒素的組合或以特殊組合提供係於本文中描述。例如，本發明之抗體藥物共軛物可包含組合no.45之胺基酸序列，其包含含有胺基酸序列SEQ ID NO：325之重鏈、含有胺基酸序列SEQ ID NO：333之輕鏈以及spdb-DM4連接子-毒素。在本發明中所述之其他AADC實例中，本發明之抗體藥物共軛物可包含組合no.33之胺基酸序列，其包含含有胺基酸序列SEQ ID NO：325之重鏈、含有胺基酸序列SEQ ID NO：331之輕鏈以及vc-MMAE連接子-毒素。
任何列於表F之組合，其列出重鏈和輕鏈變異區，可與人類免疫球蛋白恆定區結合以導致包含IgG1、IgG2、IgG4的全人IgGs或的導致改變功能例如IgG1 N297A、IgG1 N297Q或IgG4 S228P的人類IgGs。表F所述之組合不限於顯示於任何給予橫列的特定組合，且因此可包含任何表F欄2之重鏈序列或重鏈變異區序列，與表F欄3之輕鏈序列或輕鏈變異區序列結合，與欄4之任一連接子結合，與欄5之任一毒素結合。除了列於欄2之重鏈序列或重鏈變異區序列之外，本發明所述之任 何重鏈序列或重鏈變異區序列可用於組合中。除了列於欄3之輕鏈序列或輕鏈變異區序列之外，本發明所述之任何輕鏈序列或輕鏈變異區序列可用於組合中。除了列於欄4的連接子之外，本發明所述之任何連接子可用於組合中。除了列於欄5的毒素之外，本發明所述之任何毒素可用於組合中。
在一些實施態樣中，可活化之抗體之血清半衰期係大於相對應抗體之血清半衰期；例如，可活化之抗體之pK係大於相對應抗體知pK。在一些實施態樣中，可活化之抗體之血清半衰期係和相對應抗體之血清半衰期類似。In some embodiments,the serum half-life of the activatable antibody is at least 15 days when administered to an organism.在一些實施態樣中，當投予生物體時，可活化之抗體之血清半衰期係為至少15天。在一些實施態樣中，當投予生物體時，可活化之抗體之血清半衰期係為至少12天。在一些實施態樣中，當投予生物體時，可活化之抗體之血清半衰期係為至少11天。在一些實施態樣中，當投予生物體時，可活化之抗體之血清半衰期係為至少10天。在一些實施態樣中，當投予生物體時，可活化之抗體之血清半衰期係為至少9天。在一些實施態樣中，當投予生物體時，可活化之抗體之血清半衰期係為至少8天。在一些實施態樣中，當投予生物體時，可活化之抗體之血清半衰期係為至少7天。在一些實施態樣中，當投予生物體時，可活化之抗體之血清半衰期係為至少6天。在 一些實施態樣中，當投予生物體時，可活化之抗體之血清半衰期係為至少5天。在一些實施態樣中，當投予生物體時，可活化之抗體之血清半衰期係為至少4天。在一些實施態樣中，當投予生物體時，可活化之抗體之血清半衰期係為至少3天。在一些實施態樣中，當投予生物體時，可活化之抗體之血清半衰期係為至少2天。在一些實施態樣中，當投予生物體時，可活化之抗體之血清半衰期係為至少24小時。在一些實施態樣中，當投予生物體時，可活化之抗體之血清半衰期係為至少20小時。在一些實施態樣中，當投予生物體時，可活化之抗體之血清半衰期係為至少18小時。在一些實施態樣中，當投予生物體時，可活化之抗體之血清半衰期係為至少16小時。在一些實施態樣中，當投予生物體時，可活化之抗體之血清半衰期係為至少14小時。在一些實施態樣中，當投予生物體時，可活化之抗體之血清半衰期係為至少12小時。在一些實施態樣中，當投予生物體時，可活化之抗體之血清半衰期係為至少10小時。在一些實施態樣中，當投予生物體時，可活化之抗體之血清半衰期係為至少8小時。在一些實施態樣中，當投予生物體時，可活化之抗體之血清半衰期係為至少6小時。在一些實施態樣中，當投予生物體時，可活化之抗體之血清半衰期係為至少4小時。在一些實施態樣中，當投予生物體時，可活化之抗體之血清半衰期係為至少3小時。
在一些實施態樣中，可活化抗CD71抗體和/ 或共軛的可活化抗CD71抗體係為單專一性的。在一些實施態樣中，可活化抗CD71抗體和/或共軛的可活化抗CD71抗體係為多專一性的，例如，以非限制性實而言，雙專一性的或三專一性的。在一些實施態樣中，可活化抗CD71抗體和/或共軛的可活化抗CD71抗體係經配方為pro-雙專一性T細胞銜接器(BITE)分子的部分。在一些實施態樣中，可活化抗CD71抗體和/或共軛的可活化抗CD71抗體係經配方為pro-嵌合抗原受體(CAR)修飾T細胞或其他改造之受體。
在一些實施態樣中，可活化之抗體或其抗原結合片段係被嵌入多專一性可活化之抗體或其抗原結合片段，其中至少一多專一性可活化之抗體的臂會專一性結合至CD71。在一些實施態樣中，可活化之抗體或其抗原結合片段係被嵌入雙專一性可活化之抗體或其抗原結合片段，其中至少一多專一性可活化之抗體的臂會專一性結合至CD71。
在一些實施態樣中，本文所述抗CD71抗體、共軛的抗CD71抗體和/或共軛的可活化抗CD71抗體係用於與一或多個額外的劑之連結或額外的劑的組合。合適額外的劑包含用於目前預期應用之藥學和/或手術治療，例如癌症。舉例來說，抗CD71抗體、共軛的抗CD71抗體和/或共軛的可活化抗CD71抗體可用於和額外的化學治療或抗癌劑連結。
在一些實施態樣中，額外的劑係為化學治療 劑，例如選自由下列所組成之群組的化學治療劑：歐洲紫杉醇、紫杉醇、紫杉醇蛋白(例如：白蛋白-共軛紫杉醇)、阿黴素、奧沙利鉑、卡鉑、順鉑、愛萊諾迪肯和吉西他濱。
在一些實施態樣中，額外的劑係為檢查哨抑制劑、激酶抑制劑、在腫瘤微環境中目標為抑制劑的劑和/或T細胞或NK促效劑。在一些實施態樣中，額外的劑係為放射線治療，單獨或和另一個額外的劑組合，例如化學治療或抗癌劑。在一些實施態樣中，額外的劑係為疫苗，致癌病毒和/或DC-活化劑，例如，以非限定實例而言，類鐸受體(TLR)促效劑和/或α-CD40。在一些實施態樣中，額外的劑係為腫瘤-標的抗體用於透握ADCC殺死腫瘤或透過直接共軛至毒素(如抗體藥物共軛物(ADC))。
在一些實施態樣中，檢查哨抑制劑係為標的為選自由下列所組成之群組的抑制劑：CTLA-4、LAG-3、PD-1、CD71、TIGIT、TIM-3、B7H4、和Vista。在一些實施態樣中，激酶抑制劑係為選自由下列所組成之群組：B-RAFi、MEKi和Btk抑制劑如依魯替尼。在一些實施態樣中，激酶抑制劑係為截剋瘤。在一些實施態樣中，腫瘤微環境抑制劑係選自由下列所組成之群組：IDO抑制劑、α-CSFIR抑制劑、α-CCR4抑制劑、TGF-beta、骨髓-衍生抑制性細胞或調節性T細胞。在一些實施態樣中，促效劑係選自由下列所組成之群組：Ox40、GITR、CD137、ICOS、CD27和HVEM。
在一些實施態樣中，抑制劑係為CTLA-4抑制劑。在一些實施態樣中，抑制劑係為LAG-3抑制劑。在一些實施態樣中，抑制劑係為PD-1抑制劑。在一些實施態樣中，抑制劑係為CD71抑制劑。在一些實施態樣中，抑制劑係為TIGIT抑制劑。在一些實施態樣中，抑制劑係為TIM-3抑制劑。在一些實施態樣中，抑制劑係為B7H4抑制劑。在一些實施態樣中，抑制劑係為Vista抑制劑。在一些實施態樣中，抑制劑係為B-RAFi抑制劑。在一些實施態樣中，抑制劑係為MEKi抑制劑。在一些實施態樣中，抑制劑係為Btk抑制劑。在一些實施態樣中，抑制劑係為依魯替尼。在一些實施態樣中，抑制劑係為截剋瘤。在一些實施態樣中，抑制劑係為IDO抑制劑。在一些實施態樣中，抑制劑係為α-CSF1R抑制劑。在一些實施態樣中，抑制劑係為α-CCR4抑制劑。在一些實施態樣中，抑制劑係為TGF-beta.在一些實施態樣中，抑制劑係為骨髓-衍生抑制性細胞。在一些實施態樣中，抑制劑係為調節性T細胞。
在一些實施態樣中，促效劑係為Ox40。在一些實施態樣中，促效劑係為在一些實施態樣中，促效劑係為在一些實施態樣中，促效劑係為GITR。在一些實施態樣中，促效劑係為CD137。在一些實施態樣中，促效劑係為ICOS。在一些實施態樣中，促效劑係為CD27。在一些實施態樣中，促效劑係為HVEM。
在一些實施態樣中，抗CD71抗體、共軛抗 體、可活化之抗體和/或共軛的可活化之抗體係在治療期間和/或治療後結合一或多種額外的劑例如化學治療劑、抗炎劑和/或免疫抑制劑一起投予。在一些實施態樣中，抗CD71抗體、共軛的抗CD71抗體、可活化之抗體和/或共軛的可活化之抗體以及額外的劑係經配方成單一治療組分，且抗CD71抗體、共軛的抗CD71抗體、可活化之抗體和/或共軛的可活化之抗體以及額外的劑係同時投予。或者，抗CD71抗體、共軛的抗CD71抗體、可活化之抗體和/或共軛的可活化之抗體以及額外的劑係和彼此為分離的，例如，每一個係經配方成分開的治療組分，且抗CD71抗體、共軛的抗CD71抗體、可活化之抗體和/或共軛的可活化抗CD-71抗體以及額外的劑係同時投予或抗CD71抗體、共軛的抗CD71抗體、可活化抗CD71抗體和/或共軛的可活化抗CD-71抗體及額外的劑係於治療療程的不同時間投予。例如，抗CD71抗體、共軛的抗CD71抗體、可活化抗CD71抗體和/或共軛的可活化抗CD-71抗體可在投予額外的劑之前投予、抗CD71抗體、共軛的抗CD71抗體、可活化抗CD71抗體和/或共軛的可活化抗CD-71抗體可接在投予額外的劑之後投予、或抗CD71抗體、共軛的抗CD71抗體、可活化抗CD71抗體和/或共軛的可活化抗CD-71抗體和額外的劑和係為輪替投予。如本文所述，抗CD71抗體、共軛的抗CD71抗體、可活化之抗體和/或共軛的可活化之抗體以及額外的劑係以單一劑量或多劑量給藥投予。
在一些實施態樣中，抗CD71抗體、共軛的抗CD71抗體、可活化抗CD71抗體和/或共軛的可活化抗CD-71抗體和額外的劑係共同投予。例如，抗CD71抗體、共軛的抗CD71抗體、可活化抗CD71抗體和/或共軛的可活化抗CD-71抗體和額外的劑可經配方成單一組分或以二或多種不同組份投予。在一些實施態樣中，抗CD71抗體、共軛的抗CD71抗體、可活化抗CD71抗體和/或共軛的可活化抗CD-71抗體和額外的劑可相繼投予，或抗CD71抗體、共軛的抗CD71抗體、可活化抗CD71抗體和/或共軛的可活化抗CD-71抗體和額外的劑係於治療療程的不同時間投予。
在一些實施態樣中，抗CD71抗體、共軛的抗CD71抗體、可活化抗CD71抗體和/或共軛的可活化抗CD-71抗體在治療期間和/或治療後結合一或多種額外的劑一起投予，例如，以非限制性實例而言，化學治療劑、抗炎劑和/或免疫抑制劑，例如烷化劑、抗代謝劑、微管蛋白聚合抑制劑(anti-microtubule agent)、拓樸異構酶抑制劑、細胞毒性抗生素和/或其他任何核苷酸破壞劑。在一些實施態樣中，額外的劑係為紫杉醇類，例如紫杉醇(如紫杉醇蛋白®)。在一些實施態樣中，額外的劑係為抗代謝劑，例如吉西他濱。在一些實施態樣中，額外的劑係為烷化劑，例如含鉑藥物的化學治療，例如卡鉑或順鉑。在一些實施態樣中，額外的劑係為靶向劑，例如激酶抑制劑，如索拉非尼或厄洛替尼。在一些實施態樣中，額外的 劑係為靶向劑(targeted agent)，例如另一個抗體，如單株抗體(如安維汀)、雙專一性抗體或多專一性抗體。在一些實施態樣中，額外的劑係為蛋白酶體抑制劑，例如萬科(bortezomib)或卡菲佐米(carfilzomib)。在一些實施態樣中，額外的劑係為免疫調節劑，例如雷利度胺(lenolidominde)或IL-2。在一些實施態樣中，額外的劑係為放射線。在一些實施態樣中，額外的劑係為熟知本領域技術人員所所認定之標準的劑。
在一些實施態樣中，額外的劑係為另一個抗體或其抗原結合片段、另一個共軛的抗體或其抗原結合片段、另一個可活化之抗體或其抗原結合片段和/或另一個共軛的可活化之抗體或其抗原結合片段。在一些實施態樣中，額外的劑係為另一個抗體或其抗原結合片段、另一個共軛的抗體或其抗原結合片段、另一個可活化之抗體或其抗原結合片段和/或另一個共軛的可活化之抗體或其抗原結合片段，對於一級抗體或其抗原結合片段、第一共軛的抗體或其抗原結合片段、可活化之抗體或其抗原結合片段和/或共軛的可活化之抗體或其抗原結合片段具有相同的標的，例如對於CD71。在一些實施態樣中，額外的劑係為另一個抗體或其抗原結合片段、另一個共軛的抗體或其抗原結合片段、另一個可活化之抗體或其抗原結合片段和/或另一個共軛的可活化之抗體或其抗原結合片段，對於一級抗體或其抗原結合片段、第一共軛的抗體或其抗原結合片段、可活化之抗體或其抗原結合片段和/或共軛的可 活化之抗體或其抗原結合片段具有不同的標的。
在非限制性實例中，抗體或其抗原結合片段和/或可活化之抗體之AB係為任一列於表1之標的的結合配偶體。
Figure 105113835-A0202-12-0122-2629
Figure 105113835-A0202-12-0123-2630
如同非限制性實例，抗體或抗原結合片段和/或可活化之抗體之AB係為或衍生自列於表2之抗體。
Figure 105113835-A0202-12-0124-2666
Figure 105113835-A0202-12-0125-2632
Figure 105113835-A0202-12-0126-2633
]在一些實施態樣中，額外的抗體或其抗原結合片段、共軛的抗體或其抗原結合片段、可活化之抗體或其抗原結合片段和/或共軛的可活化之抗體或其抗原結合片段係為單株抗體、區域抗體、單鏈、Fab片段、F(ab’)2片段、scFv、scAb、dAb、單域重鏈抗體或單域輕鏈抗體。在一些實施態樣中，額外的抗體或其抗原結合片段、共軛的抗體或其抗原結合片段、可活化之抗體或其抗原結合片段和/或共軛的可活化之抗體或其抗原結合片段係為小鼠、其他齧齒目、嵌合體、人化或全人單株抗體。
本發明亦提供透過在會導致多肽表現的條件下培養細胞以製造抗CD71抗體和/或可活化抗CD71抗體多肽的方法，其中細胞包含含有編碼本文所述之抗體和/或可活化之抗體之單離核苷酸分子、和/或包含彼等單離核苷酸序列之建構物。本發明亦提供透過在會導致抗體和/或可活化之抗體表現的條件下培養細胞以製造抗體和/或可活化之抗體的方法，其中細胞包含含有編碼本文所述之抗體和/或可活化之抗體之單離核苷酸分子、和/或包含彼等單離核苷酸序列之建構物。
本發明亦提供一種製造於活化狀態會結合至 CD71之可活化之抗體的方法，透過：(a)培養包含編碼會導致可活化之抗體表現的條件下可活化之抗體之核苷酸建構物的細胞，其中可活化之抗體包含掩蔽部分(MM)、可切割部分(CM)、專一性結合至CD71的抗體或其抗原結合片段(AB)，(i)其中CM係為作用為蛋白酶受質的多肽；且(ii)其中CM係位於可活化之抗體中，其中當可活化之抗體在為未經切割狀態，MM會干擾AB對CD71的結合且在切割的狀態下，MM不會干擾或與AB對CD71專一性的結合競爭；並且(b)回覆可活化之抗體。合適的AB、MM和/或CM包含任一於本文所揭露的AB、MM和/或CM。
在一些實施態樣中，在未經切割狀態下的可活化之抗體具有結構排列從N端至C段如下：MM-CM-AB or AB-CM-MM。在一些實施態樣中，可活化之抗體包含介於MM和CM之間的連接胜肽。在一些實施態樣中，可活化之抗體包含介於CM和AB之間的連接胜肽。在一些實施態樣中，可活化之抗體包含第一連接胜肽(LP1)和第二連接胜肽(LP2)，在未經切割狀態下的可活化之抗體具有結構排列從N端至C段如下：MM-LP1-CM-LP2-AB or AB-LP2-CM-LP1-MM。在一些實施態樣中，兩個鍵結胜肽不需要和彼此完全相同。在一些實施態樣中，在未經切割狀態下的可活化之抗體具有結構排列從N端至C段如下：間隔-MM-LP1-CM-LP2-AB or AB-LP2-CM-LP1-MM-間隔。
在一些實施態樣中，至少一個LP1或LP2包含胺基酸序列所自由下列所組成之群組：(GS)n、(GGS)n、(GSGGS)n(SEQ ID NO：339)和(GGGS)n(SEQ ID NO：340)，其中n為至少為1的整數。
在一些實施態樣中，至少一個LP1或LP2包含胺基酸序列所自由下列所組成之群組：GGSG(SEQ ID NO：341)、GGSGG(SEQ ID NO：342)、GSGSG(SEQ ID NO：343)、GSGGG(SEQ ID NO：344)、GGGSG(SEQ ID NO：345)和GSSSG(SEQ ID NO：346)。
在一些實施態樣中，LP1包含胺基酸序列GSSGGSGGSGGSG(SEQ ID NO：347)、GSSGGSGGSGG(SEQ ID NO：348)、GSSGGSGGSGGS(SEQ ID NO：349)、GSSGGSGGSGGSGGGS(SEQ ID NO：350)、GSSGGSGGSG(SEQ ID NO：351)或GSSGGSGGSGS(SEQ ID NO：352)。
在一些實施態樣中，LP2包含胺基酸序列GSS、GGS、GGGS(SEQ ID NO：353)、GSSGT(SEQ ID NO：354)or GSSG(SEQ ID NO：355)。
本發明亦提供透過對有需要的個體投予本文所述之治療有效量的抗CD71抗體、共軛的抗CD71抗體、可活化抗CD71抗體和/或共軛的可活化抗CD71抗體來預防、延緩其進程、治療、減輕症狀或其他方式改善個體中CD71調節疾病。
本發明亦提供透過對有需要的個體投予本文所述之治療有效量的抗CD71抗體、共軛的抗CD71抗 體、可活化抗CD71抗體和/或共軛的可活化抗CD71抗體來預防、延緩其進程、治療、減輕症狀或其他方式改善個體中癌症。CD71已知會在不同種類癌症中表現，例如，以非限制性實例而言，腺癌、膽管(膽道)癌、膀胱癌、乳癌，例如三重陰性乳癌和Her2-陰性乳癌、類癌、子宮頸癌、膽管癌、直腸癌、子宮內膜癌、膠質瘤、頭部頸部癌，如頭頸鳞狀細胞癌，白血病、肝癌、肺炎，如NSCLC、SCLC，淋巴瘤、黑色素瘤、口咽癌、卵巢癌、胰臟癌、攝護腺癌，例如轉移性去勢療法無效前列腺癌，腎臟癌、皮膚癌、鳞狀細胞癌、胃癌、睪丸癌、甲狀腺癌和泌尿上皮癌。
在一些實施態樣中，癌症係為和CD-71表現腫瘤相關聯。在一些實施態樣中，癌症係由於CD-71表現腫瘤。
抗CD71抗體、共軛的抗CD71抗體、可活化抗CD71抗體和/或共軛的可活化抗CD71抗體可用於彼等方法的任一實施態樣中，且可用於投予在任一疾病階段。例如，彼等抗CD71抗體、共軛的抗CD71抗體、可活化抗CD71抗體和/或共軛的可活化抗CD71抗體可透與受任一階段癌症所苦的病患，從早期到轉移階段。本文所用術語個體和病患係可交換使用。
在一些實施態樣中，個體係為哺乳類，例如人類、非人類靈長目、寵物(如貓、狗、馬)、家畜、役畜或動物園動物。在一些實施態樣中，個體係為人類。在一 些實施態樣中，個體係為寵物。在一些實施態樣中，個體係為受到獸醫照顧的動物。
抗CD71抗體、共軛的抗CD71抗體、可活化抗CD71抗體和/或共軛的可活化抗CD-71抗體和其治療配方係投予至受到或易受到疾病或和畸變的CD71表現和/或活性相關之失調所苦的病患。個體受到或易受到疾病或和畸變的CD71表現和/或活性相關之失調所苦係可用本領域技術所熟知的各種方法鑑定。例如，受癌症或其他腫瘤症狀所苦的個體可用任一臨床和/或實驗室檢測，例如身體檢查和血液、尿液和/或糞便分析來評估健康狀態以判別。受炎症或發炎失調所苦的個體可用任一臨床和/或實驗室檢測，例如身體檢查和/或體液分析，例如血液、尿液和/或糞便分析來評估健康狀態以判別。
投予受疾病或和畸變的CD71表現和/或活性相關之失調所苦的病患抗CD71抗體、共軛的抗CD71抗體、可活化抗CD71抗體和/或共軛的可活化抗CD-71抗體會在實驗室或臨床目標達成後認定為成功。例如，投予受疾病或和畸變的CD71表現和/或活性相關之失調所苦的病患抗CD71抗體、共軛的抗CD71抗體、可活化抗CD71抗體和/或共軛的可活化抗CD-71抗體會在一或多種疾病或失調相關症狀減緩、減少、抑制或不再進一步進展，如惡化階段，後認定為成功。投予受疾病或和畸變的CD71表現和/或活性相關之失調所苦的病患抗CD71抗體、共軛的抗CD71抗體、可活化抗CD71抗體和/或共軛的可活化 抗CD-71抗體會在疾病或失調進入緩解期或不再進一步進展，如惡化階段，後認定為成功。
在一些實施態樣中，抗CD71抗體、共軛的抗CD71抗體、可活化抗CD71抗體和/或共軛的可活化抗CD-71抗體和其治療配方係投予受到或易受到疾病或失調所苦的個體，彼等個體受到癌症或其他腫瘤的情況所苦，其中個體的疾病細胞會表現CD71。在一些實施態樣中，疾病細胞係和畸變的CD71表現和/或活性相關。在一些實施態樣中，疾病細胞係和正常的CD71表現和/或活性相關。受到或易受到疾病或失調所苦的個體，其中個體疾病細胞表現CD71，係可利用任一種類本領域技術已知的方法鑑定。例如，受癌症或其他腫瘤症狀所苦的個體可用任一臨床和/或實驗室檢測，例如身體檢查和血液、尿液和/或糞便分析來評估健康狀態以判別。例如，受炎症或發炎失調所苦的個體可用任一臨床和/或實驗室檢測，例如身體檢查和/或體液分析，例如血液、尿液和/或糞便分析來評估健康狀態以判別。
在一些實施態樣中，抗CD71抗體、共軛的抗CD71抗體、可活化抗CD71抗體和/或共軛的可活化抗CD-71抗體和其治療配方係投予受到或易受到和細胞表現CD71相關或彼等細胞的存在、生長、增殖、轉移和/或活性相關的疾病或失調所苦之個體，彼等個體係受到癌症或其他腫瘤症狀所苦。在一些實施態樣中，疾病細胞係和畸變的CD71表現和/或活性相關。在一些實施態樣中，疾病 細胞係和正常的CD71表現和/或活性相關。受到或易受和細胞表現CD71相關的疾病或失調所苦的個體，係可利用任一種類本領域技術已知的方法鑑定。例如，受癌症或其他腫瘤症狀所苦的個體可用任一臨床和/或實驗室檢測，例如身體檢查和血液、尿液和/或糞便分析來評估健康狀態以判別。例如，受炎症和/或發炎失調所苦的個體可用任一臨床和/或實驗室檢測，例如身體檢查和/或體液分析，例如血液、尿液和/或糞便分析來評估健康狀態以判別。
投予受CD71表現相關之疾病和失調所苦的病患抗CD71抗體、共軛的抗CD71抗體、可活化抗CD71抗體和/或共軛的可活化抗CD-71抗體會在實驗室或臨床目標達成後認定為成功。例如，投予受細胞表現CD71相關之疾病和失調所苦的病患抗CD71抗體、共軛的抗CD71抗體、可活化抗CD71抗體和/或共軛的可活化抗CD-71抗體會在和疾病或失調相關之症狀減緩、減少、抑制或不再進一步進展，如惡化階段，後認定為成功。投予受細胞表現CD71相關之疾病和失調所苦的病患抗CD71抗體、共軛的抗CD71抗體、可活化抗CD71抗體和/或共軛的可活化抗CD-71抗體會在疾病或失調進入緩解期或不再進一步進展，如惡化階段，後認定為成功。
在一些實施態樣中，抗CD71抗體、共軛的抗CD71抗體、可活化抗CD71抗體和/或共軛的可活化抗CD-71抗體係在治療期間和/或治療後和一或多種額外的 劑例如，化學治療劑、抗發炎劑和/或免疫抑制劑共同投予。在一些實施態樣中，抗CD71抗體、共軛的抗CD71抗體、可活化抗CD71抗體和/或共軛的可活化抗CD-71抗體和額外的劑係同時投予。例如，抗CD71抗體、共軛的抗CD71抗體、可活化抗CD71抗體和/或共軛的可活化抗CD-71抗體和額外的劑可經配方成單一組分或以二或多種不同組份投予。在一些實施態樣中，抗CD71抗體、共軛的抗CD71抗體、可活化抗CD71抗體和/或共軛的可活化抗CD-71抗體和額外的劑係相繼投予。
本發明亦提供對於治療、減緩症狀、延緩進展疾病或失調的方法，其中疾病細胞表現CD71表現，彼等方法包含對其有需求的個體投予治療有效量之本發明的抗體或本發明之共軛的抗體或含有本發明之共軛抗體的藥學組成物。在一些實施態樣中，失調或疾病係為癌症。
本發明亦提供對於治療、減緩症狀、延緩進展和細胞表現CD71相關的疾病或失調的方法，彼等方法包含對其有需求的個體投予治療有效量之本發明的抗體或本發明之共軛的抗體或含有本發明之共軛抗體的藥學組成物。在一些實施態樣中，和細胞表現CD7相關的失調或疾病係為癌症。在一些實施態樣中，癌症係為腺癌、膽管(膽道)癌、膀胱癌、骨癌、乳癌、三陰性乳腺癌、Her2-陰性乳腺癌、類癌、頸癌、膽管癌、直腸癌、大腸癌、子宮內膜癌、膠質瘤、頭頸癌、頭頸鱗狀細胞癌、血癌、肝癌、肺癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、淋巴癌、黑色素 瘤、食道癌、卵巢癌、胰臟癌、前列腺癌、轉移性閹割抗性前列腺癌、腎癌、肉瘤、皮膚癌、鱗狀細胞癌、胃癌、睪丸癌、甲狀腺癌、泌尿道腫瘤或泌尿上皮癌。在一些實施態樣中，天然配體係為運體蛋白.在一些實施態樣中，該哺乳類CD71之表現和/或活性係畸變的在一些實施態樣中，該方法包含投予額外的劑。在一些實施態樣中，額外的劑係為治療劑。
本發明亦提供抑制或減少生長、增殖或轉移表現哺乳類CD71細胞之方法，彼等方法包含對其有需求的個體投予治療有效量之本發明的抗體或本發明之共軛的抗體或含有本發明之共軛抗體的藥學組成物。在一些實施態樣中，天然配體係為運體蛋白。在一些實施態樣中，該哺乳類CD71之表現和/或活性為畸變的在一些實施態樣中，該方法包含投予額外的劑。在一些實施態樣中，額外的劑係為治療劑。
本發明亦提供抑制、阻止或預防天然配體對哺乳類CD71結合之方法，包含對其有需求的個體投予治療有效量之本發明的抗體或本發明之共軛的抗體或含有本發明之共軛抗體的藥學組成物。在一些實施態樣中，天然配體係為運體蛋白。在一些實施態樣中，該哺乳類CD71之表現和/或活性係畸變的在一些實施態樣中，該方法包含投予額外的劑。在一些實施態樣中，額外的劑係為治療劑。
本發明亦提供對於治療、減緩症狀、延緩進 展失調或疾病的方法，其中疾病細胞表現CD71，彼等方法包含對其有需求的個體投予治療有效量之本發明的可活化之抗體或本發明之共軛的可活化之抗體或含有本發明之共軛的可活化之抗體的藥學組成物。在一些實施態樣中，該失調或疾病係為癌症。
本發明亦提供對於治療、減緩症狀、延緩進展和細胞表現CD71相關之失調或疾病的方法，彼等方法包含對其有需求的個體投予治療有效量之本發明的可活化之抗體或本發明之共軛的可活化之抗體或含有本發明之共軛的可活化之抗體的藥學組成物。在一些實施態樣中，該失調或疾病係為癌症。在一些實施態樣中，和細胞表現CD71相關之失調或疾病係為癌症。在一些實施態樣中，癌症係為腺癌、膽管(膽道)癌、膀胱癌、骨癌、乳癌、三陰性乳腺癌、Her2-陰性乳腺癌、類癌、頸癌、膽管癌、直腸癌、大腸癌、子宮內膜癌、膠質瘤、頭頸癌、頭頸鱗狀細胞癌、血癌、肝癌、肺癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、淋巴癌、黑色素瘤、食道癌、卵巢癌、胰臟癌、前列腺癌、轉移性閹割抗性前列腺癌、腎癌、肉瘤、皮膚癌、鱗狀細胞癌、胃癌、睪丸癌、甲狀腺癌、泌尿道腫瘤或泌尿上皮癌。在一些實施態樣中，天然配體係為運體蛋白.在一些實施態樣中，該哺乳類CD71之表現和/或活性係畸變的在一些實施態樣中，該方法包含投予額外的劑。在一些實施態樣中，額外的劑係為治療劑。
本發明亦提供抑制或減少生長、增殖或轉移 表現哺乳類CD71之細胞的方法，彼等方法包含對其有需求的個體投予治療有效量之本發明的可活化之抗體或本發明之共軛的可活化之抗體或含有本發明之共軛的可活化之抗體的藥學組成物。在一些實施態樣中，天然配體係為運體蛋白。在一些實施態樣中，該哺乳類CD71之表現和/或活性係畸變的在一些實施態樣中，該方法包含投予額外的劑。在一些實施態樣中，額外的劑係為治療劑。
本發明亦提供抑制、阻止或預防天然配體對哺乳類CD71結合之方法，包含對其有需求的個體投予治療有效量之本發明的可活化之抗體或本發明之共軛的可活化之抗體或含有本發明之共軛的可活化之抗體的藥學組成物。在一些實施態樣中，天然配體係為運體蛋白。在一些實施態樣中，該哺乳類CD71之表現和/或活性係畸變的在一些實施態樣中，該方法包含投予額外的劑。在一些實施態樣中，額外的劑係為治療劑。
本發明亦提供在不同種類的診斷和/或預防指示中利用可活化抗CD71抗體和/或共軛的可活化抗CD71抗體的方法和套組。例如，本發明提供偵測個體或樣本中之切割劑和有興趣之標的的存在或不存在的方法，利用(i)將個體或樣本與抗CD-71可活化之抗體接觸，其中抗CD-71可活化之抗體包含掩蔽部分(MM)、受切割劑切割的可切割部分(CM)和抗原結合部分或或專一性結合至有興趣之標的的其片段(AB)，其中當抗CD-71可活化之抗體為未切割且在非活化狀態時，包含結構排列從N端至C 端如下：MM-CM-AB或AB-CM-MM；(a)其中MM係為抑制AB對CD71結合的胜肽，且其中MM不具有AB之天然發生結合配偶體的胺基酸序列，並且不是AB之天然發生結合配偶體的修飾形式；且(b)其中，當AB為未切割且在非活化狀態時，MM會干擾AB對CD71的專一性結合，且當AB為切割的且在活化的狀態下，MM不會干擾或競爭AB對CD71的專一性結合；且(ii)在個體或樣本中測量活化的抗CD71可活化之抗體的值，其中在個體或樣本中可偵測活化的抗CD71可活化之抗體的值指示切割劑和CD71係存在於個體或樣本中且其中不可偵測活化的抗CD71可活化之抗體的值指示切割劑和CD71兩者皆不存在於個體或樣本中。
在一些實施態樣中，可活化抗CD71抗體係為與治療劑共軛結合的可活化抗CD71抗體。在一些實施態樣中，可活化抗CD71抗體係不與劑共軛結合。在一些實施態樣中，可活化抗CD71抗體包含可偵測標記。在一些實施態樣中，可偵測標記係定位於AB上。在一些實施態樣中，在個體或樣本中測量可活化抗CD71抗體的值可透過會專一性結合到活化的抗體之第二試劑來達成，其中試劑包含可偵測標記。在一些實施態樣中，第二試劑係為包含可偵測標記的抗體。
在彼等方法和套組的實施態樣中，可活化抗CD71抗體包含可偵測標記。在彼等方法和套組的實施態樣中，可偵測標記包含成像劑、對比劑、酶、螢光標記、 發色團、染料、一或多種金屬離子或基於配體的標記。在彼等方法和套組的實施態樣中，成像劑包含放射性同位素。在彼等方法和套組的實施態樣中，放射性同位素係為銦或鎝。在彼等方法和套組的實施態樣中，對比劑包含碘、釓或氧化鐵。在彼等方法和套組的實施態樣中，酶包含過氧化物酶、鹼性磷酸酶或β-半乳糖苷酶。在彼等方法和套組的實施態樣中，螢光標記包含黃色螢光蛋白質(YFP)、藍色螢光蛋白質(CFP)、綠色螢光蛋白質(GFP)、修飾的紅色螢光蛋白質(mRFP)、紅色螢光蛋白質tdimer2(RFP tdimer2)、HCRED或銪衍生物。在彼等方法和套組的實施態樣中，冷光標記包含N-甲基吖啶衍生物。在彼等方法和套組的實施態樣中，標記包含Alexa Fluor®標記，例如Alex Fluor® 680或Alexa Fluor® 750。在彼等方法和套組的實施態樣中，基於配體之標記包含生物素、抗生物素蛋白、鏈親和素或一或多種半抗原。
在彼等方法和套組的實施態樣中，個體係為哺乳類。在彼等方法和套組的實施態樣中，個體係為人類。在一些實施態樣中，個體係為非人哺乳類，例如非人靈長類、寵物(如貓、狗、馬)家畜、役畜或動物園動物。在一些實施態樣中，個體係為齧齒目。
在彼等方法和套組的實施態樣中，方法係為活體內方法。在彼等方法的一些實施態樣中，方法係為原位方法。在彼等方法的一些實施態樣中，方法係為活體外方法。在彼等方法的一些實施態樣中，方法係為試管內方 法。
在彼等方法和套組的實施態樣中，方法係用於鑑定或其他方法精選適用於本發明地抗CD71可活化之抗體治療的病患群，跟隨對有需求個體投予該可活化抗CD71抗體和/或共軛的活化抗CD71抗體的治療。例如，對兩者測試為陽性的病患(如CD71)以及切割在彼等方法中所測試之抗CD71可活化之抗體的可切割部分(CM)受質的蛋白酶係被認定為包含該CM之抗CD71可活化之抗體之合適的候選者，然後投予所述病患經測試之治療有效量的可活化之抗體和/或共軛的可活化抗CD71抗體。同樣的，對兩者測試任一或皆為陰性的病患(如CD71)以及切割在彼等方法中所測試之可活化之抗體CM之受質的蛋白酶係被認定為另一種形式療法之合適的候選者。在一些實施態樣中，彼等病患可已其他抗CD71可活化之抗體測試，直到對治療合適的抗CD71可活化之抗體被鑑定出來(例如，包含在病患的疾病位置被切割的CM之抗CD71可活化之抗體)在一些實施態樣中，病患係接著被投予治療有效量的可活化抗CD71抗體和/或病患測試為陽性的共軛。合適的AB、MM和/或CM包含本發明之任一AB、MM和/或CM。
根據本發明之藥學組成物可包含本發明之抗體和載體。彼等藥學組成物可被包含在套組中，例如，診斷套組。
在一些實施態樣中，藥學組成物包含本發明 之抗體、本發明之可活化之抗體和/或本發明之共軛的可活化之抗體和載體。在一些實施態樣中，藥學組成物包含額外的劑。在一些實施態樣中，額外的劑係為治療劑。
圖1係為描述本發明之抗CD71抗體結合至人類CD71能力的示意圖。
圖2係為描述本發明之不同抗CD71抗體結合至人類CD71能力的示意圖。
圖3A係為描述在可活化之抗體係完整的或經蛋白水解活化時，本發明之未共軛的和共軛的抗CD71抗體結合至人類CD71能力的示意圖。圖3B係為描述本發明之共軛的抗CD71抗體和活化的共軛的抗CD71抗體在試管內細胞活性的示意圖。
圖4係為描述本發明之共軛的可活化抗CD71抗體在NCI-H292異種移植腫瘤內的效力之示意圖。
圖5係為描述本發明之共軛的可活化抗CD71抗體在乳癌HCC1806異種移植腫瘤內的效力之示意圖。
圖6A係為描述本發明之抗CD71抗體結合至食蟹獼猴初代腎臟上皮細胞之示意圖，圖6B係為描述本發明之抗CD71抗體結合至食蟹獼猴CD71但不和小鼠CD71結合之示意圖，以及圖6C係為描述本發明之小鼠和人源的抗CD71抗體結合至人類BxPC3細胞株之示意圖。
圖7係為描述單一劑量的本發明之抗CD71抗 體例證相對於食蟹獼猴CD71母體抗體具延長的半衰期之示意圖。
圖8係為描述本發明之共軛的可活化抗CD71抗體在投予食蟹獼猴時的藥物動力學之示意圖。
圖9係為描述本發明之共軛的可活化抗CD71抗體在投予食蟹獼猴時的可忍受度之示意圖。
圖10係為描述在重組CD71和其配體運體蛋白的實例性檢測法之示意圖。
圖11A係為描述在本發明之抗CD71抗體和運體蛋白之間對於CD71的競爭性結合檢測法之示意圖。圖11B係為描述運體蛋白對CD71之結合的結合檢測法之示意圖，例證本發明之抗CD71抗體對結合的抑制。
圖12A、12B和12C係為描述在原發性和轉移性癌症組織種類中決定CD71表現值實例性免疫組織化學檢測法。
圖13A、13B和13C係描述以小鼠中非霍奇金氏淋巴瘤腫瘤異種移植研究本發明之可活化抗CD71共軛的抗體(ADCCs)的實例性效力。
圖14A至14G係描述食蟹獼猴中抗CD71共軛的可活化之抗體(ADCCs)的實例性忍受度。
圖15係描述在不同細胞株中利用抗CD71抗體之實例性CD71表現值，以及在相同細胞株中利用本發明之抗CD71抗體和藥物共軛二級抗體之細胞毒性研究。
圖16A至16D係描述本發明中不同抗CD71 可活化共軛的抗體在不同人類來源細胞株對CD71結合的能力之實例性研究。
圖17A至17D係描述本發明中不同抗CD71藥物共軛物在不同人細胞株的細胞毒性之實例性研究。
圖18係描述本發明之不同可活化抗CD71抗體藥物共軛物在非霍奇金氏淋巴瘤腫瘤來源Raji細胞株之細胞毒性的實例性研究。
圖19係描述本發明之不同抗CD71可活化之抗體結合至人類CD71能力的實例性研究。
圖20A和20B係描述本發明之不同抗CD71抗體藥物共軛物(ADC)和抗CD71可活化之抗體藥物共軛物(AADC)在源自病患之異種移植腫瘤模式之效力的實例性研究。
圖21A至21H係描述本發明之不同抗CD71抗體藥物共軛物在不同大腸直腸癌衍生細胞株之細胞毒性的實例性研究。
圖22A和22B係描述本發明之不同抗CD71抗體藥物共軛物和可活化藥物共軛物在HT29大腸直腸癌衍生細胞株之細胞毒性的實例性研究。
圖23A和23B係描述本發明之可活化抗CD71共軛的抗體(AADCs)在小鼠中利用非霍奇金氏淋巴瘤腫瘤異種移植的實例性效力研究。
圖24A和24B係描述本發明之可活化抗CD71共軛的抗體(AADCs)在小鼠中利用非小細胞肺癌 (NCI-H292)腫瘤異種移植的實例性效力研究。
圖25係描述本發明之可活化抗CD71共軛的抗體(AADCs)在小鼠中利用胰臟癌(BxPC3)腫瘤異種移植的實例性效力研究。
圖26A和26B係描述本發明之可活化抗CD71共軛的抗體(AADCs)在小鼠中利用源自病患腫瘤異種移植(非霍奇金氏淋巴瘤)的實例性效力研究。
圖27A和27B係描述本發明之可活化抗CD71共軛的抗體(AADCs)在小鼠中利用源自病患腫瘤異種移植的實例性效力研究。
圖28係描述本發明之不同的抗CD71抗體和可活化之抗體對CD71
圖29A至29C係描述本發明之不同的抗CD71可活化之抗體和可活化之抗體藥物共軛物在不同人源細胞株中對人類CD71結合能力的實例性研究。
圖30A至30D係描述本發明之不同的抗CD71可活化之抗體在不同人源細胞株中對人類CD71試管內結合能力的實例性研究。
圖31A至31J係描述本發明之不同的抗CD71可活化藥物共軛物在不同癌症來源細胞株中細胞毒性的實例性研究。
圖32A和32B係描述本發明之抗CD71抗體和抗體藥物共軛物在不同人源小細胞肺癌細胞株中對人類CD71結合能力的實例性研究。
圖33A和33B係描述本發明之抗CD71抗體在不同人源小細胞肺癌細胞株中對人類CD71結合能力的實例性研究。
圖34係描述在多種源自病患轉移性癌症樣本中CD71之表現值的實例性研究。
圖35係描述在胰臟癌小鼠模式中本發明之抗CD71抗體在活體內對腫瘤結合的實例性研究。
圖36係描述在轉移性乳癌小鼠模式中本發明之抗CD71抗體在活體內對腫瘤結合的實例性研究。
圖37係描述在轉移性肺癌異種移植模式中本發明之抗CD71抗體在原位結合的實例性研究。
本發明之詳細描述
本發明提供單株抗體(mAbs)和專一性結合至CD71之可活化單株抗體，亦稱為運鐵蛋白受體1(TfR1)。在一些實施態樣中，單株抗體和可活化單株抗體係被含CD71之細胞內化。術語「CD71」的使用係意欲包含彼等之任何變化，例如於非限制性例子中，CD-71和/或CD71及所有變化係於此可交換地使用。
CD71係為主要和運鐵蛋白結合的跨膜醣蛋白。CD71係對細胞恆定為必須的。CD71係持續性透過配體-調節胞吞作用再利用，畸變的表現或CD71的活性以及CD71-相關訊 息係和許多疾病和失調的病原性相關，例如癌症。CD71係在多種癌症中過度表現，包括實體和血液性癌症。CD71具有廣泛的細胞表面表現。惡性細胞內的CD71會調節細胞分裂所需之較高的鐵攝人。CD71亦和白血病不利的預後相關。
由於CD71是普遍的多種癌症指標，故為理想標的。
本發明提供對於治療、預防、延緩進展、改善和/緩和和畸變CD71表現及/或活性相關的疾病或失調症狀之方法有效用的抗CD71抗體、共軛的抗CD71抗體、可活化抗CD71抗體及/或共軛可活化抗CD71抗體。例如，可活化抗CD71抗體可用於治療、預防、延遲進展、改善和/緩和癌症和其他腫瘤情況症狀的方法。
本發明提供對於治療、預防、延緩進展、改善和/緩和和細胞表現CD71相關疾病或失調之症狀有效用的抗CD71抗體、共軛的抗CD71抗體、可活化抗CD71抗體及/或共軛可活化抗CD71抗體。在一些實施態樣中，細胞係和畸變CD71表現和/或活性相關。在一些實施態樣中，係和正常CD71表現和/或活性相關。例如，可活化抗CD71抗體係用於治療、預防、延遲進展、改善和/緩和癌症和其他腫瘤情況症狀的方法。
本發明提供對於疾病細胞中治療、預防、延緩進展、改善和/緩和疾病或失調之症狀有效用的抗CD71抗體、共軛的抗CD71抗體、可活化抗CD71抗體及/或共 軛可活化抗CD71抗體。在一些實施態樣中，疾病細胞係和正常CD71表現和/或活性相關。舉例來說，可活化抗CD71抗體可用於治療、預防、延緩進展、改善和/緩和癌症和其他腫瘤情況症狀的方法。
可活化抗CD71抗體及/或共軛可活化抗CD71抗體包含專一性結合至耦接到掩蔽部分(MM)之CD71的抗體或其抗原結合片段，其中耦接至MM會減少抗體或其抗原結合片段結合到CD71的能力。在一些實施態樣中，MM係透過包含蛋白酶受質之序列共軛，例如，在個體中治療位置和CD71共定位之蛋白酶。
本發明實例性可活化抗CD71抗體包含，例如，含有下列重鏈變異和輕鏈變異序列或從彼等衍生出來之重鏈和輕鏈的可活化之抗體。
muM21 VH：
Figure 105113835-A0202-12-0146-2634
Figure 105113835-A0202-12-0146-2635
(SEQ ID NO：1)
muM21 VL：
Figure 105113835-A0202-12-0146-2636
Figure 105113835-A0202-12-0146-2637
(SEQ ID NO：2)
hu2vHa變異重鏈
Figure 105113835-A0202-12-0147-2638
Figure 105113835-A0202-12-0147-2639
(SEQ ID NO：3)
hu2vHb變異重鏈
Figure 105113835-A0202-12-0147-2640
Figure 105113835-A0202-12-0147-2641
(SEQ ID NO：4)
hu2vHc變異重鏈
Figure 105113835-A0202-12-0147-2642
Figure 105113835-A0202-12-0147-2643
(SEQ ID NO：5)
hu21vKa變異輕鏈
Figure 105113835-A0202-12-0147-2644
Figure 105113835-A0202-12-0147-2645
(SEQ ID NO：6)
hu21vKb變異輕鏈
Figure 105113835-A0202-12-0148-2646
Figure 105113835-A0202-12-0148-2647
(SEQ ID NO：7)
hu21vKc變異輕鏈
Figure 105113835-A0202-12-0148-2648
Figure 105113835-A0202-12-0148-2649
(SEQ ID NO：8)
本發明之實例性可活化抗CD71抗體包含，例如包含變異區重鏈互補性決定區域1(VH CDR1，於此亦稱為CDRH1)序列、變異區重鏈互補性決定區域2(VH CDR2，於此亦稱為CDRH2)序列、變異區重鏈互補性決定區域3(VH CDR3，於此亦稱為CDRH3)序列、變異區輕鏈互補性決定區域1(VL CDR1，於此亦稱為CDRL1)序列、變異區輕鏈互補性決定區域2(VL CDR2，於此亦稱為CDRL2)序列、變異區輕鏈互補性決定區域3(VL CDR3，於此亦稱為CDRL3)序列之組合的可活化之抗體，其中至少一互補性決定區域(CDR)序列係選自由下列所組成之群組：包含胺基酸序列GYTFTSYWMH(SEQ ID NO：9)之VH CDR1序列、包含胺基酸序列AIYPGNSETG(SEQ ID NO：10)之VH CDR2序列、包含胺基酸序列ENWDPGFAF(SEQ ID NO：11)之VH CDR3序列、包含胺基酸序列 SASSSVYYMY(SEQ ID NO：12)或CRASSSVYYMY(SEQ ID NO：13)之VL CDR1序列、包含胺基酸序列STSNLAS(SEQ ID NO：14)之VL CDR2序列、包含胺基酸序列QQRRNYPYT(SEQ ID NO：15)之VL CDR3序列。
在一些實施態樣中，可活化抗CD71抗體包含含有或衍生自如專利合作條約公告案號WO 2014/144060、WO 2014/189973、WO 2014/020140；美國專利案號8,663,598、8,129,503、7,736,647、7,572,895、4,434,156；美國專利申請公告案號US2014114054、US20140212423、US2013177579、US2013045206、US20130216476、US20120282176及/或中國專利案號CN101245107B中之重鏈，將此揭示內容併入本文以供參考。
在一些實施態樣中，可活化抗CD71抗體包含含有或衍生自示於表12之重鏈胺基酸序列的重鏈。在一些實施態樣中，可活化抗CD71抗體包含含有或衍生自示於表12之輕鏈胺基酸序列的輕鏈。在一些實施態樣中，可活化抗CD71抗體包含含有或衍生自示於表12之重鏈胺基酸序列的重鏈和含有或衍生自示於表12之輕鏈胺基酸序列的輕鏈。在一些實施態樣中，可活化抗CD71抗體包含示於表12A組組合中之重鏈變異區域和輕鏈變異區域的組合。在一些實施態樣中，可活化抗CD71抗體包含示於表12B組組合中之重鏈變異區域和輕鏈變異區域的組合。在一些實施態樣中，可活化抗CD71抗體包含示於表 12C組組合中之重鏈變異區域和輕鏈變異區域的組合。在一些實施態樣中，可活化抗CD71抗體包含示於表12D組組合中之重鏈變異區域和輕鏈變異區域的組合。在一些實施態樣中，可活化抗CD71抗體包含示於表12E組組合中之重鏈變異區域和輕鏈變異區域的組合。在一些實施態樣中，可活化抗CD71抗體包含示於表12F組組合中之重鏈變異區域和輕鏈變異區域的組合。在一些實施態樣中，可活化抗CD71抗體包含示於表12G組組合中之重鏈變異區域和輕鏈變異區域的組合。在一些實施態樣中，可活化抗CD71抗體包含示於表12H組組合中之重鏈變異區域和輕鏈變異區域的組合。在一些實施態樣中，可活化抗CD71抗體包含示於表12I組組合中之重鏈變異區域和輕鏈變異區域的組合。在一些實施態樣中，可活化抗CD71抗體包含示於表12J組組合中之重鏈變異區域和輕鏈變異區域的組合。在一些實施態樣中，可活化抗CD71抗體包含示於表12K組組合中之重鏈變異區域和輕鏈變異區域的組合。在一些實施態樣中，可活化抗CD71抗體包含示於表12L組組合中之重鏈變異區域和輕鏈變異區域的組合。
在一些實施態樣中，可活化抗CD71抗體包含示於表12A組之重鏈序列之互補性決定區域(CDR)重鏈序列的組合。在一些實施態樣中，可活化抗CD71抗體包含示於表12A組之輕鏈序列之CDR輕鏈序列的組合。在一些實施態樣中，可活化抗CD71抗體包含示於表12A組之重鏈序列及示於表12A組之輕鏈序列之CDR輕鏈序列的 組合。
在一些實施態樣中，可活化抗CD71抗體包含示於表12B組之重鏈序列之CDR重鏈序列的組合。在一些實施態樣中，可活化抗CD71抗體包含示於表12B組之輕鏈序列之CDR輕鏈序列的組合。在一些實施態樣中，可活化抗CD71抗體包含示於表12B組之重鏈序列及示於表12B組之輕鏈序列之CDR輕鏈序列的組合。
在一些實施態樣中，可活化抗CD71抗體包含示於表12C組之重鏈序列之CDR重鏈序列的組合。在一些實施態樣中，可活化抗CD71抗體包含示於表12C組之輕鏈序列之CDR輕鏈序列的組合。在一些實施態樣中，可活化抗CD71抗體包含示於表12C組之重鏈序列及示於表12C組之輕鏈序列之CDR輕鏈序列的組合。
在一些實施態樣中，可活化抗CD71抗體包含示於表12D組之重鏈序列之CDR重鏈序列的組合。在一些實施態樣中，可活化抗CD71抗體包含示於表12D組之輕鏈序列之CDR輕鏈序列的組合。在一些實施態樣中，可活化抗CD71抗體包含示於表12D組之重鏈序列及示於表12D組之輕鏈序列之CDR輕鏈序列的組合。
在一些實施態樣中，可活化抗CD71抗體包含示於表12E組之重鏈序列之CDR重鏈序列的組合。在一些實施態樣中，可活化抗CD71抗體包含示於表12E組之輕鏈序列之CDR輕鏈序列的組合。在一些實施態樣中，可活化抗CD71抗體包含示於表12E組之重鏈序列及示於 表12E組之輕鏈序列之CDR輕鏈序列的組合。
在一些實施態樣中，可活化抗CD71抗體包含示於表12F組之重鏈序列之CDR重鏈序列的組台。在一些實施態樣中，可活化抗CD71抗體包含示於表12F組之輕鏈序列之CDR輕鏈序列的組合。在一些實施態樣中，可活化抗CD71抗體包含示於表12F組之重鏈序列及示於表12F組之輕鏈序列之CDR輕鏈序列的組合。
在一些實施態樣中，可活化抗CD71抗體包含示於表12G組之重鏈序列之CDR重鏈序列的組合。在一些實施態樣中，可活化抗CD71抗體包含示於表12G組之輕鏈序列之CDR輕鏈序列的組合。在一些實施態樣中，可活化抗CD71抗體包含示於表12G組之重鏈序列及示於表12G組之輕鏈序列之CDR輕鏈序列的組合。
在一些實施態樣中，可活化抗CD71抗體包含示於表12H組之重鏈序列之CDR重鏈序列的組合。在一些實施態樣中，可活化抗CD71抗體包含示於表12H組之輕鏈序列之CDR輕鏈序列的組合。在一些實施態樣中，可活化抗CD71抗體包含示於表12H組之重鏈序列及示於表12H組之輕鏈序列之CDR輕鏈序列的組合。
在一些實施態樣中，可活化抗CD71抗體包含示於表12 I組之重鏈序列之CDR重鏈序列的組合。在一些實施態樣中，可活化抗CD71抗體包含示於表12 I組之輕鏈序列之CDR輕鏈序列的組合。在一些實施態樣中，可活化抗CD71抗體包含示於表12 I組之重鏈序列之CDR 重鏈序列和示於表12 I組之輕鏈序列之CDR輕鏈序列的組合。
在一些實施態樣中，可活化抗CD71抗體包含示於表12 J組之重鏈序列之CDR重鏈序列的組合。在一些實施態樣中，可活化抗CD71抗體包含示於表12 J組之輕鏈序列之CDR輕鏈序列的組合。在一些實施態樣中，可活化抗CD71抗體包含示於表12 J組之重鏈序列之CDR重鏈序列和示於表12 J組之輕鏈序列之CDR輕鏈序列的組合。
在一些實施態樣中，可活化抗CD71抗體包含示於表12 K組之重鏈序列之CDR重鏈序列的組合。在一些實施態樣中，可活化抗CD71抗體包含示於表12 K組之輕鏈序列之CDR輕鏈序列的組合。在一些實施態樣中，可活化抗CD71抗體包含示於表12 K組之重鏈序列之CDR重鏈序列和示於表12 K組之輕鏈序列之CDR輕鏈序列的組合。
在一些實施態樣中，可活化抗CD71抗體包含示於表12 L組之重鏈序列之CDR重鏈序列的組合。在一些實施態樣中，可活化抗CD71抗體包含示於表12 L組之輕鏈序列之CDR輕鏈序列的組合。在一些實施態樣中，可活化抗CD71抗體包含示於表12 L組之重鏈序列之CDR重鏈序列和示於表12 L組之輕鏈序列之CDR輕鏈序列的組合。
Figure 105113835-A0202-12-0154-2650
Figure 105113835-A0202-12-0155-2651
Figure 105113835-A0202-12-0156-2652
Figure 105113835-A0202-12-0157-2667
Figure 105113835-A0202-12-0158-2654
Figure 105113835-A0202-12-0159-2655
Figure 105113835-A0202-12-0160-2656
Figure 105113835-A0202-12-0161-2657
在一些實施態樣中，可活化抗CD71抗體包含示於表13之CDR重鏈序列、選自由列於表13單一橫列之組合所組成的VL CDR序列(VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3)組合、選自由列於表13單一橫列之組合所組成的VH CDR序列(VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3)組合或選 自由列於表13之組合所組成的VL CDR和VH CDR序列(VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3、VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3)組合。
Figure 105113835-A0202-12-0162-2658
Figure 105113835-A0202-12-0163-2659
Figure 105113835-A0202-12-0164-2660
Figure 105113835-A0305-02-0167-1
Figure 105113835-A0305-02-0168-2
Figure 105113835-A0305-02-0169-3
在一些實施態樣中，可活化抗CD71係包含或衍生自由融合瘤所製造、分泌或以其他方式產生的抗體，其中舉例來說，稱為BA120之融合瘤係如同美國專利案號7,736,647所揭露並於2005年6月14日存放於Collection Nationale de Cultures de Microorganismes(CNCM)(Institut Pasteur,Paris,France,25,Rue du Docteur Roux,F-75724,Paris,Cedex 15)，序號為CNCM I-3449；美國專利案號7,572,895揭露之融合瘤係在PTA-6055下存放於ATCC中；專利合作條約公告案號WO 2014/020140及WO 2005/111082所揭露之融合瘤係於2001年5月10日存放在CNCM，序號為1-2665；美國專利案號4,434,156所揭露之融合瘤係在HB-8094存放於ATCC；美國專利案號5,648,469所揭露之融合瘤係在HB-11011和HB-11010下存放於ATCC。
本發明之抗CD-71抗體和可活化之抗體中AB專一性結合至CD71標的，舉例而言，哺乳類CD71、和/或人類CD71。本發明亦包含會結合至與本發明和/或此處所述活化的可活化之抗體之CD71抗原決定位相同的抗CD71抗體和AB。本發明亦包含與抗CD71抗體和/或此處所述活化的可活化抗CD71抗體競爭與CD71標的結合的抗CD71抗體和AB。本發明亦包含與抗CD71抗體和/或此處所述活化的抗CD71可活化之抗體交叉競爭與CD71標的，例如人類CD71，結合的抗CD71抗體和AB。
本發明提供的活化的可活化抗CD71抗體包含掩蔽部分。在一些實施態樣中，掩蔽部分係為與抗CD71抗體共軛或以其他方式附著且位於可活化的抗CD71抗體建構物的胺基酸序列，其中掩蔽部分減少抗CD71抗體和CD71專一性之結合的能力。合適的掩蔽部分係以任何種類已知的技術鑑定。舉例來說，胜肽掩蔽序列係以Daugherty等人之專利合作條約公告案號WO 2009/025846所述之方法來鑑定，將此揭示內容併入本文以供參考。
本發明提供的可活化抗CD71抗體包含可切割部分。在一切實施態樣中，可切割部分包含為蛋白酶受質的胺基酸序列，通常為胞外蛋白酶。合適的受質係以任何種類已知的技術鑑定。舉例來說，胜肽受質係以Daugherty等人之美國專利案號7,666,817以及La Porte等人之專利合作條約公告案號WO 2014/026136中所述的方法鑑定；將此揭示內容併入本文以供參考(亦見Boulware等人之“Evolutionary optimization of peptide substrates for proteases that exhibit rapid hydrolysis kinetics.”Biotechnol Bioeng.106.3(2010)：339-46)。
實例性受質包含但不限於被下列列於表4中一或多種酵素或蛋白酶切割的受質。
Figure 105113835-A0202-12-0170-2664
Figure 105113835-A0202-12-0171-2665
本發明所述可活化抗CD71抗體克服抗體療法的限制，特別是於活體內抗體療法至少某種程度的毒性。目標介導毒性造成抗體療法發展的主要限制。本發明提供之可活化抗CD71抗體係用來對付和透過傳統療法抗體中標的抑制相關的毒性。彼等可活化抗CD71抗體維持掩蔽，直到疾病位置為蛋白水解地活化。以抗CD71抗體為親代治療抗體作為起始，本發明之可活化抗CD71抗體係透過嵌入蛋白酶受體之連接子將抗體共軛至抑制性掩蔽來改造。
當AB係以MM修飾且標的存在時，比起AB未經MM修飾之專一性結合或親代AB對標的的結合， AB對其標的之專一性結合係減少或受抑制。
經MM修飾AB相對標的的Kd係至少為5、10、25、50、100、250、500、1,000、2,500、5,000、10,000、50,000、100,000、500,000、1,000,000、5,000,000、10,000,000、50,000,000或更高，或介於5-10、10-100、10-1,000、10-10,000、10-100,000、10-1,000,000、10-10,000,000、100-1,000、100-10,000、100-100,000、100-1,000,000、100-10,000,000、1,000-10,000、1,000-100,000、1,000-1,000,000、1000-10,000,000、10,000-100,000、10,000-1,000,000、10,000-10,000,000、100,000-1,000,000、或100,000-10,000,000倍高於未經MM修飾AB相對標的或親代AB相對標的的Kd。相反的，經MM修飾AB對於標的的結合親和力係至少為2、3、4、5、10、25、50、100、250、500、1,000、2,500、5,000、10,000、50,000、100,000、500,000、1,000,000、5,000,000、10,000,000、50,000,000或更高，或介於5-10、10-100、10-1,000、10-10,000、10-100,000、10-1,000,000、10-10,000,000、100-1,000、100-10,000、100-100,000、100-1,000,000、100-10,000,000、1,000-10,000、1,000-100,000、1,000-1,000,000、1000-10,000,000、10,000-100,000、10,000-1,000,000、10,000-10,000,000、100,000-1,000,000或100,000-10,000,000倍低於未經MM修飾AB相對標的或親代AB相對標的的結合親和力。
MM對於AB之解離常數(Kd)通常大於AB對於標的的Kd。MM對於AB之Kd係至少為5、10、25、50、100、250、500、1,000、2,500、5,000、10,000、100,000、1,000,000或甚至10,000,000倍大於AB對於標的的Kd。相反的，MM對於AB的結合親和力係通常低於AB相對標的的結合親和力。MM對於AB的結合親和力可以至少為5、10、25、50、100、250、500、1,000、2,500、5,000、10,000、100,000、1,000,000 or even 10,000,000倍低於AB相對標的的結合親和力。
在一些實施態樣中，MM對於AB的解離常數(Kd)大致和AB對於標的的Kd相同。在一些實施態樣中，MM對於AB的解離常數(Kd)不會多於AB對於標的的解離常數。
在一些實施態樣中，MM對於AB的解離常數(Kd)係少於AB對於標的的解離常數。
在一些實施態樣中，MM對於AB的解離常數(Kd)係大於AB對於標的的解離常數。
在一些實施態樣中，MM對於AB結合的Kd係不大於AB對於標的結合的的Kd。
在一些實施態樣中，MM對於AB結合的Kd係不少於AB對於標的結合的的Kd。
在一些實施態樣中，MM對於AB結合的Kd約等於AB對於標的結合的的Kd。
在一些實施態樣中，MM對於AB結合的Kd 不少於AB對於標的結合的的Kd。
在一些實施態樣中，MM對於AB結合的Kd大於AB對於標的結合的的Kd。
在一些實施態樣中，MM對於AB結合的Kd係不多於2、3、4、5、10、25、50、100、250、500或1,000倍高於AB對於標的結合的的Kd。在一些實施態樣中，MM對於AB結合的Kd其介於1-5、2-5、2-10、5-10、5-20、5-50、5-100、10-100、10-1,000、20-100、20-1000或100-1,000倍高於AB對於標的結合的的Kd。
在一些實施態樣中，MM結合至AB的親和力少於AB結合至標的的親和力。
在一些實施態樣中，MM結合至AB的親和力不大於AB結合至標的的親和力。
在一些實施態樣中，MM結合至AB的親和力大約等於AB結合至標的的親和力。
在一些實施態樣中，MM結合至AB的親和力不小於AB結合至標的的親和力。
在一些實施態樣中，MM結合至AB的親和力大於AB結合至標的的親和力。
在一些實施態樣中，MM結合至AB的親和力係為2、3、4、5、10、25、50、100、250、500或1,000少於AB結合至標的的親和力。在一些實施態樣中，MM結合至AB的親和力係介於1-5、2-5、2-10、5-10、5-20、5-50、5-100、10-100、10-1,000、20-100、20-1000 或100-1,000倍少於AB結合至標的的親和力。在一些實施態樣中，MM結合至AB的親和力係為2至20倍少於AB對於標的的親和力。在一些實施態樣中，非共價結合至AB且與AB為等量分子濃度的MM不會抑制AB對於標的的結合。
相較於未經MM修飾的AB之結合或親代AB和標的專一性之結合，當AB經由MM修飾且當AB標的專一性結合至其標的之存在下係減少或抑制。比較未經MM修飾之AB的結合或親代AB與標的之結合，當AB經MM修飾後與標的結合之能力以活體內或試管內檢定測量至少1、2、4、6、8、12、28、24、30、36、48、60、72、84或96小時、或5、10、15、30、45、60、90、120、150或180天或1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12月或更長可減少至少50%、60%、70%、80%、90%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%及甚至100%。
MM會抑制AB對於標的的結合。MM會結合至AB的抗原結合區域並抑制AB對於標的的結合。MM於空間上抑制AB和標的的結合。MM可異位的抑制AB對其標的的結合。在這些實施態樣中，當AB係被修飾或與MM結合並且在標的存在下，其中AB和標的沒有結合或實質上沒有結合，或不超過0.001%,0.01%,0.1%,1%,2%,3%,4%,5%,6%,7%,8%,9%,10%,15%,20%,25%,30%,35%,40%,or 50%AB和標的的結合，相較於未經 MM修飾的AB之結合、親代AB或未和MM結合至標的之AB，以活體內或試管內檢定測量至少2、4、6、8、12、28、24、30、36、48、60、72、84或96小時、或5、10、15、30、45、60、90、120、150或180天或1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12月或更長。
當AB與MM結合或經MM修飾，MM「掩蔽」或減少或以其他方式抑制AB對於標的專一性之結合。當AB係與MM結合或經MM修飾，該等結合或修飾可造成減少或抑制AB對其標的專一性之結合的結構上改變。
結合至或經MM修飾的AB可以下列公式(依序從胺(N)端區域到羧基(C)端區域)表示：(MM)-(AB)
(AB)-(MM)
(MM)-L-(AB)
(AB)-L-(MM)
其中MM係為掩蔽部分，AB為抗體或彼等抗體片段，且L為連接子。在許多實施態樣中，在組合物中插入一或多個連接子以提供彈性，如彈性連接子，係為理想的。
在特定實施態樣中，MM非AB的天然結合配偶體。在一些實施態樣中，MM不包含或不實質上包含和AB同源的任何天然結合配偶體。在一些實施態樣中，MM與任何AB的天然結合配偶體不多於5%、10%、15%、 20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%或80%相似。在一些實施態樣中，MM與任何AB之天然結合配偶體不多於25%的相同。在一些實施態樣中，MM與任何AB之天然結合配偶體不多於20%的相同。在一些實施態樣中，MM與任何AB之天然結合配偶體不多於10%的相同。
在一些實施態樣中，可活化之抗體包含一或多個可切割部分(CM)。彼等可活化之抗體顯示可活化/可切換的結合，與AB的標的。可活化之抗體大體上包含抗體或抗體片段(AB)，經掩蔽部分(MM)修飾或與之結合和可修飾或可切割部分(CM)。在一些實施態樣中，CM包含可作為至少一蛋白酶受質的胺基酸序列。
可活化之抗體的元素係經安排因此MM和CM被放置例如在標的存在之下於切割的(或相對活化的)狀態，在標的存在之下當可活化之抗體係處於不可切割(或相對不活化的)狀態時AB與標的的結合，AB與其標的之專一性結合會被減少或抑制。AB與彼等之標的專一性結合可由於抑制或掩蔽AB透過MM對其標的之結合的能力被減少。
經MM和CM修飾之AB對於標的的Kd為至少5、10、25、50、100、250、500、1,000、2,500、5,000、10,000、50,000、100,000、500,000、1,000,000、5,000,000、10,000,000、50,000,000或更高，或介於5-10、10-100、10-1,000、10-10,000、10-100,000、10- 1,000,000、10-10,000,000、100-1,000、100-10,000、100-100,000、100-1,000,000、100-10,000,000、1,000-10,000、1,000-100,000、1,000-1,000,000、1000-10,000,000、10,000-100,000、10,000-1,000,000、10,000-10,000,000、100,000-1,000,000或100,000-10,000,000倍高於未經MM和CM修飾AB或親代AB對於標的的Kd。相反的，經MM和CM修飾之AB對於標的的結合親和力為至少5、10、25、50、100、250、500、1,000、2,500、5,000、10,000、50,000、100,000、500,000、1,000,000、5,000,000、10,000,000、50,000,000或更高，或介於5-10、10-100、10-1,000、10-10,000、10-100,000、10-1,000,000、10-10,000,000、100-1,000、100-10,000、100-100,000、100-1,000,000、100-10,000,000、1,000-10,000、1,000-100,000、1,000-1,000,000、1000-10,000,000、10,000-100,000、10,000-1,000,000、10,000-10,000,000、100,000-1,000,000或100,000-10,000,000倍低於未經MM和CM修飾之AB對於標的的結合親和力。
當AB係經MM和CM修飾且在標的存在之下而非修飾劑(例如至少一蛋白酶)存在之下，相較於未經MM和CM修飾之AB或親代AB對彼等標的之專一性結合，AB對其標的之專一性結合係被減少或抑制。當與和親代AB結合或未經MM和CM修飾之AB與其標的結合比較，AB經MM和CM修飾時與彼等標的結合之能力以活體內或試管內檢定測量至少1、2、4、6、8、12、28、 24、30、36、48、60、72、84或96小時、或5、10、15、30、45、60、90、120、150或180天或1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12月或更長係被減少50%,60%,70%,80%,90%,92%,93%,94%,95%,96%,97%,98%,99%和甚至100%。
如同本文所述，術語切割的狀態意指可活化之抗體在CM經至少一蛋白酶修飾之下的狀態。如同本文所述，術語不可切割的狀態意指可活化之抗體在沒有經蛋白酶切割之CM之下的狀態。如上述，本文使用術語「可活化之抗體」係指在不可切割狀態(天然的)以及可切割狀態的可活化之抗體。對一般熟習本領域技術者在一些實施態樣中，切割的可活化之抗體由於CM經蛋白酶切割而缺乏MM，導致至少MM的釋放(如，其中MM為透過共價鍵(例如，半胱胺酸殘基之間的雙硫鍵)和可活化之抗體結合)。
可活化或可交換係意指當可活化之抗體處於抑制、掩蔽或不可切割狀態(例如第一級構體)具有結合至標的第一級程度的可活化之抗體，和與未抑制、未掩蔽和/或切割的狀態之標的第二級程度的結合，其中第二級程度標的結合係大於第一級程度結合。整體而言，可活化之抗體之AB在有能夠切割CM的切割劑(例如蛋白酶)存在下比起沒有切割劑存在更能接近標的。因此，當可活化之抗體在未經切割狀態，AB之標的結合係被抑制的且可被標的結合所掩蔽(例如，第一級構體為AB無法結合標 的)，且在切割的狀態AB對標的結合是不被抑制或不受掩蔽的。
可活化之抗體之CM和AB係受選擇的故而AB代表給予標的之結合部分，且CM代表蛋白酶之受質。在一些實施態樣中，蛋白酶係與標的共存於個體中之治療位置或診斷位置。如本文所使用，共存係指同時在相同位置或相對的靠近。在一些實施態樣中，蛋白酶切割CM產生結合到位於切割位置附近之活化的抗體。本文所揭露的可活化之抗體有特定的用途，舉例來說，其中能夠切割CM位置的蛋白酶(如蛋白酶)係以相對非治療位置組織(例如健康組織)較高程度存在於治療位置或診斷位置中含有標的之組織。在一些實施態樣中，本發明之CM係經一或多種其他蛋白酶所切割。在一些實施態樣中，彼等一或多種其他蛋白酶係與標的共存且在活體內造成CM之切割。
在一些實施態樣中，可活化之抗體提供從當AB未經掩蔽或另外抑制和標的之結合時位於非治療位置AB之結合減少的毒性和/或惡性副作用。
大抵來說，可活化之抗體意圖選擇有興趣知AB並建構可活化之抗體之剩餘物，使得當構型受限時，MM提供AB掩蔽或減少AB對其標的的結合。彼等功能性特徵可將結構設計準則納入考量。
本文提供在受抑制相對未受抑制構型下具有期望動力學範圍的標的結合之可交換表現型的可活化之抗 體。動力學範圍一般意指(a)第一組條件下所測得最大程度係數相對(b)第二組條件下所測得最小係數的比例。例如，在可活化之抗體文中，動力學範圍意指(a)在至少一種可切割可活化之抗體CM的蛋白酶存在下，所測得標的蛋白質與可活化之抗體結合的最大程度相對(b)在沒有蛋白酶存在下，所測得標的蛋白質與可活化之抗體結合的最小程度的比例。可活化之抗體的動力學範圍可以可活化之抗體切割劑(如酵素)處理的解離常數相對可活化之抗體抗體切割劑處理的解離常數之比例來計算。可活化之抗體的動力學範圍越大，可活化之抗體之可交換表現型越好。具有相對較高動力學範圍值(如大於1)的可活化之抗體顯示較多期望的可交換表現型，使得受可活化之抗體結合的標的蛋白質在可切割可活化之抗體之CM的切割劑(如酵素)存在下比起沒有切割劑之下達到較高程度(如顯著的發生)。
可活化之抗體可以多種結構形式存在。可活化之抗體之實例性公式係如下方所列。在可活化之抗體中，AB、MM和CM從N至C端順序經明確思量後是可以反轉的。同樣經明確思量得知CM和MM可於胺基酸序列重疊，例如CM係被包含於MM之中。
舉例而言，可活化之抗體可以下列公式表示：(依序從胺(N)端區域到羧基(C)端區域)
(MM)-(CM)-(AB)
(AB)-(CM)-(MM)
其中MM係為掩蔽部分，CM為可切割部分，AB為 抗體或彼等片段。需注意的是儘管MM和CM在上列公式顯示為不同組分，在本文揭露所有實例性實施態樣中(包含公式)，MM和CM的胺基酸序列係被預期為可重疊的，例如，CM為完全或部分包含在MM之中。此外，上述公式提供額外的能放置其N端或C端至可活化之抗體元素的胺基酸序列。
在特定實施態樣中，MM並非AB的天然結合配偶體。在一些實施態樣中，MM係與任何AB的天然結合配偶體不大於5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%或80%相同。在一些實施態樣中，MM與任何AB之天然結合配偶體係不大於50%相同。在一些實施態樣中，MM與任何AB之天然結合配偶體係不大於25%相同。在一些實施態樣中，MM與任何AB之天然結合配偶體係不大於10%相同。
在許多實施態樣中，可期望在可活化之抗體建構物插入一或多個連接子，例如彈性連接子，如同在一或多個MM-CM接合處、CM-AB接合處或兩者提供彈性。舉例而言，AB、MM和/或CM可能不包含足夠數量的殘基(例如，Gly、Ser、Asp、Asn，特別是Gly和Ser，尤其是Gly)來提供期望的彈性。於此，彼等可活化之抗體建構物的可交換表現型可透過導入一或多個胺基酸供給彈性連接子而得益。此外，如下述，其中可活化之抗體係以構型受限建構體存在，彈性連接子被可操作地插入 以協助未切割可活化之抗體的環狀構造之形成和維持。
舉例而言，在特定實施態樣中，可活化之抗體包含下列公式之一：(其中下述公式係以N端到C端方向或C端到N端方向表示)
(MM)-L1-(CM)-(AB)
(MM)-(CM)-L2-(AB)
(MM)-L1-(CM)-L2-(AB)
其中MM、CM和AB係如上述定義；其中L1和L2係各自獨立且選擇性存在或不存在，為相同或不同包含至少一彈性胺基酸(如Gly)的彈性連接子。除此之外，上述公式提供額外的能放置其N端或C端至可活化之抗體元素的胺基酸序列。實例包含，但不限於目標部分(如存在標的組織細胞的受體之配體)以及血清半衰期延長部分(如與血清蛋白，如免疫球蛋白(如IgG)和血清白蛋白(如人類白蛋白(HAS))結合的多肽)。
CM係在速率約為0.001-1500 x 104M-1S-1或至少0.001、0.005、0.01、0.05、0.1、0.5、1、2.5、5、7.5、10、15、20、25、50、75、100、125、150、200、250、500、750、1000、1250、或1500 x 104M-1S-1下專一性經至少一蛋白酶切割。在一些實施態樣中，CM係在速率約為1x10E2至約1x10E6 M-1S-1下專一性被切割。
經酵素特殊的切割，酵素和CM之間的聯繫被製造。當包含AB的可活化之抗體與MM共軛且CM於標的中存在且有足夠的酵素活性，CM可被切割。足夠酵 素活性意指酵素之活性可與CM接觸且影響切割。鄰近CM的酵素卻因為其他酵素的細胞因素或蛋白質修飾而無法切割係可輕易預見的。
適合本文所述組合物的連接子一般可提供修飾的AB或可活化之抗體彈性以協助AB和標的結合的抑制。彼等連接子一般意指彈性連接子。合適的連接子可輕易挑選且可為任何合適的不同長度，例如從1個胺基酸(如Gly)至20個胺基酸，從2個胺基酸至15個胺基酸，從3個胺基酸至12個胺基酸，從4個胺基酸至10個胺基酸，從5個胺基酸至9個胺基酸，從6個胺基酸至8個胺基酸或從7個胺基酸至8個胺基酸，且可為長度1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個胺基酸。
實例性彈性連接子包含甘氨酸聚合物(G)n、甘氨酸-絲胺酸聚合物(包括例如(GS)n、(GSGGS)n(SEQ ID NO：339)及(GGGS)n(SEQ ID NO：340)，其中n為至少1的整數)，甘氨酸-丙胺酸聚合物，丙胺酸-絲胺酸聚合物和其他此領域技術中已知的彈性連接子。甘氨酸及甘氨酸-絲胺酸聚合物係相對未組織的，且因此可用於成分之間的中性繫鏈。甘氨酸比起丙胺酸有顯著較多phi-psi空間，且比起有較長支鏈的殘基受到較少限制(見Scheraga,Rev.Computational Chem.11173-142(1992))。實例性彈性連接子包含但不限於Gly-Gly-Ser-Gly(SEQ ID NO：341)、Gly-Gly-Ser-Gly-Gly(SEQ ID NO：342)、Gly- Ser-Gly-Ser-Gly(SEQ ID NO：343)、Gly-Ser-Gly-Gly-Gly(SEQ ID NO：344)、Gly-Gly-Gly-Ser-Gly(SEQ ID NO：345)、Gly-Ser-Ser-Ser-Gly(SEQ ID NO：346)以及相似的。一般熟知本技術者可辨識包含完全彈性或部分彈性連接子的可活化之抗體，其中連接子可包含能給予期望之可活化之抗體結構較少彈性結構的一或多個部分。
本發明亦提供包含含有專一性結合至CD71的抗體或抗體片段(AB)之可活化抗CD71抗體的組合物和方法，其中AB係與掩蔽部分(MM)共軛而減少AB與其標的結合的能力。在一些實施態樣中，可活化抗CD71抗體進一步包含為蛋白酶受質的可切割部分(CM)。本文提供的組合物和方法可在不折衷可活化抗CD71抗體活性(例如掩蔽、活化或結合的活性)之下使一或多種劑與AB之間一或多個半胱胺酸殘基能附著。在一些實施態樣中，本文提供的組合物和方法在不減少或不以其他方式干擾MM中一或多雙硫鍵之下，使一或多種劑與AB之間一或多個半胱胺酸殘基能附著。在一些實施態樣中，本文提供的組合物和方法產生可與一或多種劑結合的可活化抗CD71抗體，例如，任何種類的治療、診斷和/或預防劑，舉例來說，在一些實施態樣中沒有任一共軛到可活化抗CD71抗體之MM的劑。本文提供的組合物和方法產生共軛的可活化抗CD71抗體，其中MM保留能有效用且有效率掩蔽處於未經切割狀態的可活化之抗體之AB的能力。本文提供的組合物和方法產生共軛的可活化抗CD71抗體，其中可活化 之抗體仍為活化的，如在能切割CM的蛋白酶存在之下為切割的。
可活化抗CD71抗體具有至少一個給劑的共軛點，但在本文提供的組合物和方法中，可用於共軛至劑的點少於所有可能的共軛結合點。在一些實施態樣中，一或多個共軛點係為和雙硫鍵相關之硫原子。在一些實施態樣中，一或多個共軛點係與鍵間雙硫鍵的硫原子相關。在一些實施態樣中，一或多個共軛點係為半胱胺酸的硫原子或其他含有硫原子的胺基酸殘基。彼等殘基可自然發生於抗體結構中或可經由定位突變、化學轉化或錯誤插入非天然胺基酸插入抗體中。
本文亦提供製備具有AB間一或多個鍵間雙硫鍵或MM間多個鍵間雙硫鍵以及含有對自由硫醇反應之藥物的可活化抗CD71抗體共軛物的方法。彼等方法通常包含以還原劑(例如TCEP)部分還原可活化之抗體中的鍵間雙硫鍵，和將對自由硫醇反應之藥物共軛至部分還原的可活化之抗體。如此處所述，術語部分檢署意指當可活化抗CD71抗體與還原劑接觸，少於所有雙硫鍵，例如少於所有可能共軛位置被還原的情形。在一些實施態樣中，少於99%、98%、97%、96%、95%、90%、85%、80%、75%、70%、65%、60%、55%、50%、45%、40%、35%、30%、25%、20%、15%、10%或少於5%的所有可能共軛位置被還原。
仍在其他實施態樣中，一種還原或共軛劑與 可活化抗CD71抗體而導致劑之定位選擇性的方法係在此提供。本方法大致包含部分還原帶有還原劑的可活化抗CD71抗體，因而任何在掩蔽部分的共軛位置或其他可活化之抗體的非AB部份並未還原，並將AB中鍵間硫醇與劑共軛。共軛位置係為選擇的使期望之劑的定位可使共軛發生在期望的位置。舉例而言，還原劑相對可活化之抗體的比例、培養長度、培養期間的溫度、還原反應溶液的pH值等皆受鑑定可在MM保持能夠有效用的並有效率的掩蔽在未經切割狀態下可活化之抗體之AB產生共軛的可活化之抗體所決定。還原劑相對於可活化抗CD71抗體的比例會根據可活化之抗體而改變。在一些實施態樣中，還原劑相對於可活化抗CD71抗體的比例係於範圍從約20：1至1：1、從約10：1至1：1、從約9：1至1：1、從約8：1至1：1、從約7：1至1：1、從約6：1至1：1、從約5：1至1：1、從約4：1至1：1、從約3：1至1：1、從約2：1至1：1、從約20：1至1：1.5、從約10：1至1：1.5、從約9：1至1：1.5、從約8：1至1：1.5、從約7：1至1：1.5、從約6：1至1：1.5、從約5：1至1：1.5、從約4：1至1：1.5、從約3：1至1：1.5、從約2：1至1：1.5、從約1.5：1至1：1.5或從約1：1至1.5。在一些實施態樣中，該比例係為範圍從約5：1至1：1。在一些實施態樣中，該比例係為範圍從約4：1至1.5：1。在一些實施態樣中，該比例係為範圍從約8：1至1：1。在一些實施態樣中，該比例係為範圍從約2.5： 1至1：1。
在一些實施態樣中，本輪提供還原可活化抗CD71抗體中AB的鍵間雙硫鍵，且將劑，例如含有硫醇的劑(如：藥)與所得到鍵間硫醇鍵結以選擇性的將AB定位的方法。本方法大致包含部分還原含有還原劑的AB在可活化之抗體中不形成所有可能鍵間硫醇下形成至少兩個鍵間硫醇，並將劑共軛至部份還原AB的鍵間硫醇。舉例來說，可活化之抗體之AAB在37℃和期望的還原劑：可活化之抗體比例係部分還原約1小時。在一些實施態樣中，還原劑相對可活化之抗體之比例可為在範圍約從約20：1至1：1、從約10：1至1：1、從約9：1至1：1、從約8：1至1：1、從約7：1至1：1、從約6：1至1：1、從約5：1至1：1、從約4：1至1：1、從約3：1至1：1、從約2：1至1：1、從約20：1至1：1.5、從約10：1至1：1.5、從約9：1至1：1.5、從約8：1至1：1.5、從約7：1至1：1.5、從約6：1至1：1.5、從約5：1至1：1.5、從約4：1至1：1.5、從約3：1至1：1.5、從約2：1至1：1.5、從約1.5：1至1：1.5或從約1：1至1.5。在一些實施態樣中，該比例係為範圍從約5：1至1：1。在一些實施態樣中，該比例係為範圍從約4：1至1.5：1。在一些實施態樣中，該比例係為範圍從約8：1至1：1。在一些實施態樣中，該比例係為範圍從約2.5：1至1：1。
含有硫醇的劑可為，例如，半胱胺酸或N-乙 醯基半胱氨酸。還原劑可為，例如，TCEP。在一些實施態樣中，還原的可活化之抗體可藉由例如管柱層析法、透析或滲濾法在共軛前被純化。又或者，還原的抗體在部分還原和共額前係未被純化的。
本發明亦提供部分還原的可活化抗CD71抗體在至少一可活化之抗體的鍵間雙硫鍵在沒有任何可活化之抗體中的鍵間雙硫鍵受到干擾下被還原劑還原，其中可活化之抗體包含抗體或專一性與CD71結合的其抗原結合片段(AB)、會抑制可活化之抗體之AB在未經切割狀態下雨CD71標的結合的掩蔽部分(MM)、以及共軛至AB的可切割部分(CM)，其中CM係做為蛋白質受質的多肽。在一些實施態樣中，MM係透過CM與AB共軛。在一些實施態樣中，可活化之抗體的一或多個鍵間雙硫鍵不受到還原劑的干擾。在一些實施態樣中，可活化之抗體中MM的一或多個鍵間雙硫鍵不受到還原劑的干擾。在一些實施態樣中，在未經切割狀態下的可活化之抗體具有結構排列從N-端到C-端如下：MM-CM-AB or AB-CM-MM。在一些實施態樣中，還原劑為TCEP。
在一些實施態樣中，修飾的可活化之抗體係經一或多非天然胺基酸之專一性位置修飾，因此在一些實施態樣中劑的共軛係限制至只有在非天然胺基酸的位置。在一些實施態樣中，具有特定數目和位置之離胺酸和/或半胱胺酸的抗CD-71抗體或可活化抗CD71抗體可被本文討論的還原劑部分還原，以致於任何掩蔽部分的共軛位置 或其他可活化之抗體的非AB部分沒有被還原，且將劑共軛至AB中的鍵間硫醇。
本發明亦提供部分還原的可活化之抗體其中至少一可活化之抗體中的鍵間雙硫鍵係在不干擾任何可活化之抗體中的鍵間雙硫鍵之下經還原劑還原，其中可活化之抗體包含專一性與標的結合的抗體或其抗原結合片段(AB)，例如CD71、抑制在未經切割狀態下可活化之抗體之AB與標的結合的掩蔽部分(MM)和共軛至AB的可切割部分(CM)，其中CM係為作用為至少一蛋白酶受質的多肽。在一些實施態樣中，MM係透過CM與AB共軛。在一些實施態樣中，可活化之抗體的一或多個鍵間雙硫鍵可活化之抗體中MM的一或多個鍵間雙硫鍵不受到還原劑的干擾。在一些實施態樣中，在未經切割狀態下的可活化之抗體具有結構排列從N-端到C-端如下：MM-CM-AB or AB-CM-MM。在一些實施態樣中，還原劑為TCEP。
在一些實施態樣中，本文所述可活化之抗體亦包含共軛至可活化之抗體的劑。在一些實施態樣中，共軛的劑係為治療劑，例如抗發炎和/或抗癌劑。在一些實施態樣中，共軛的劑係為可活化之抗體的碳水化合物部分，例如，在一些實施態樣中碳水化合物部分係位於抗體的抗原結合部分外側或可活化之抗體的抗原結合部分。在一些實施態樣中，劑係和抗體之硫醇基或可活化之抗體之抗原結合部分共軛。
在一些實施態樣中，劑係為細胞毒性劑如毒 素(例如，細菌、黴菌、植物或動物來源或其片段的酵素性活化毒素)。
在一些實施態樣中劑係為可偵測部分像例如一種標記或其他標記物。例如，劑係為或包含放射性標記胺基酸，一或多個可由被標記的親和素所偵測到的生物素部分(例如可由視覺或熱量方法偵測之包含螢光標記或酵素活性的鏈親和素)、一或多種放射性同位素或放射性核種、一或多種螢光標記、一或多種酵素標記及/或一或多種化學發光劑。在一些實施態樣中，可偵測部分係被間隔分子附著。
本發明亦與包含共軛至細胞毒素劑例如毒素(如：細菌、黴菌、植物或動物來源或其片段的酵素性活化毒素)之免疫軛合物或放射性同位素(例如放射性共軛物)相關。合適的細胞毒性劑包含，例如尾海兔素(dolastatin)或其衍生物(例如耳抑素E、AFP、MMAF、MMAE、MMAD、DMAF、DMAE)。舉例來說，此劑係為單甲基耳抑素E(MMAE)或單甲基耳抑素D(MMAD)。在一些實施態樣中，此劑係為選自由表5所列出群組所組成之群組。在一些實施態樣中，此劑係為尾海兔素。在一些實施態樣中，此劑係為單甲醇E或其衍生物。在一些實施態樣中，此劑係為單甲基單甲醇E(MMAE)。在一些實施態樣中，此劑係為單甲基單甲醇D(MMAD)。在一些實施態樣中，此劑係為類美登素(類美登素)或類美登素衍生物。在一些實施態樣中，此劑係為DM1或DM4。在一些實施態樣 中，此劑係為卡奇黴素(calicheamicin)或其衍生物。在一些實施態樣中，此劑係為吡咯并苯并二吖呯。在一些實施態樣中，此劑係為吡咯并苯并二吖呯diemr。
在一些實施態樣中，此劑係透過順丁烯二醯亞胺己醯基-纈胺酸-瓜氨酸連接子連結至AB。在一些實施態樣中，此係係透過順丁烯二醯亞胺PCG-纈胺酸-瓜氨酸連接子連結至AB。在一些實施態樣中，此劑係為透過順丁烯二醯亞胺PCG-纈胺酸-瓜氨酸-對-胺基下氧基碳酰苯連接子連接至AB的單甲基單甲醇D(MMAD)，且彼等連接子酬載建構體係為本文中所指「vc-MMAD」。在一些實施態樣中，此劑係為透過順丁烯二醯亞胺PCG-纈胺酸-瓜氨酸-胺基下氧基碳酰苯連接子連接至AB的單甲基單甲醇E(MMAE)，且彼等連接子酬載建構體係為本文中所指「vc-MMAE」。在一些實施態樣中，此劑係為透過順丁烯二醯亞胺PCG-纈胺酸-瓜氨酸連接子連接至AB。在一些實施態樣中，此劑係為透過順丁烯二醯亞胺雙-PCG-纈胺酸-瓜氨酸-胺基下氧基碳酰苯連接子連接至AB的單甲基單甲醇D(MMAD)，且彼等連接子酬載建構體係為本文中所指「PEG-vc-MMAD」。vc-MMAD、vc-MMAE和PEG2-vc-MMAD之結構如下所示： vc-MMAD：
Figure 105113835-A0202-12-0193-2524
vc-MMAE：
Figure 105113835-A0202-12-0193-2525
PEG2-vc-MMAD：
Figure 105113835-A0202-12-0193-2526
本發明亦提供包含連接至單甲基單甲醇D(MMAD)酬載之可活化之抗體的共軛可活化之抗體，其中可活化之抗體包含專一性結合至標的的可活化之抗體抗體或其抗原結合片段、抑制可活化之抗體之AB在未經切割狀態下與標的之結合的掩蔽部分和共軛至AB的可切割部分(CM)，且CM係作用為至少一MMP蛋白酶受質的多肽。
在一些實施態樣中，MMAD-共軛可活化之抗體可透過任何連接劑與AB的方法共軛：(a)附著到AB 的碳水化合物部分，或(b)附著到AB的羧酸酯基。
在一些實施態樣中，MMAD酬載係透過連接子共軛至AB。在一些實施態樣中，MMAD酬載係透過連接子共軛至AB中的半胱胺酸。在一些實施態樣中，MMAD酬載係透過連接子共軛至AB中的離胺酸。在一些實施態樣中，MMAD酬載係透過連接子共軛至AB中的其他殘基，例如其他本發明中的殘基。在一些實施態樣中，此連接子係為含有硫醇連接子。在一些實施態樣中，此連接子係為可切割連接子。在一些實施態樣中，此連接子係為不可切割連接子。在一些實施態樣中，此連接子係選自由示於表6和表7中之連接子組成之群組的連接子。在一些實施態樣中，可活化之抗體和MMAD酬載係透過順丁烯二醯亞胺己醯基-纈胺酸-瓜氨酸連接子相連在一些實施態樣中，可活化之抗體和MMAD酬載係透過順丁烯二醯亞胺PEG-纈胺酸-瓜氨酸連接子相連。在一些實施態樣中，可活化之抗體和MMAD酬載係透過順丁烯二醯亞胺己醯基-纈胺酸-瓜氨酸-對-胺基下氧基碳酰苯連接子相連接。在一些實施態樣中，可活化之抗體和MMAD酬載係透過順丁烯二醯亞胺PEG-纈胺酸-瓜氨酸-對-胺基下氧基碳酰苯連接子相連接。在一些實施態樣中，MMAD酬載係透過部份還原和本文所述共軛技術共軛至AB。
在一些實施態樣中，本文所述連接子之聚乙二醇(PEG)元素係由2個乙二醇單體、3個乙二醇單體、4 個乙二醇單體、5個乙二醇單體、6個乙二醇單體、7個乙二醇單體、8個乙二醇單體、9個乙二醇單體或至少10個乙二醇單體所組成。在本發明之一些實施態樣中，PCG元素係為分支聚合物。在本發明之一些實施態樣中，PCG元素係為未分支聚合物。在一些實施態樣中，PEG聚合物元素係為帶有官能基的，此官能基為胺基或其衍生物、羧基或其衍生物或胺基或其衍生物及羧基或其衍生物兩者。
在一些實施態樣中，本發明之連接子的PEG元素係為胺-四甘醇-羧基或其衍生物。在一些實施態樣中，本發明之連接子的PEG元素係為胺-三甘醇-羧基或其衍生物。在一些實施態樣中，本發明之連接子的PEG元素係為胺-二甘醇-羧基或其衍生物。在一些實施態樣中，胺衍生物係為與彼等共軛之羧基和胺基之間產生的醯胺鍵。在一些實施態樣中，羧基衍生物係為與彼等共軛之羧基和羥基之間產生的酯鍵。
可使用的酵素活性毒素和彼等之片段包含白喉A鏈，白喉毒素的非結合活化片段、外毒素A鏈(源自綠膿桿菌)、蓖麻毒蛋白A鏈、雞母珠毒素A鏈、莫迪素A鏈、alpha-核醣毒素、油桐蛋白質、香石竹毒蛋白質、美洲商陸蛋白質(PAPI、PAPII和PAP-S)、苦瓜抑制劑、麻瘋樹毒蛋白、巴豆毒蛋白、肥皂草抑制劑、截短型细胞毒素、絲林黴素、restrictocin、酚黴素、新黴素和單端孢霉烯族毒素。許多放射性核苷酸可用來產生放射性共軛抗體。例子包含212Bi、131I、131In、90Y和186Re。
抗體和細胞毒性劑共軛物係以許多雙功能性蛋白質-共軛劑例如3-(2-吡啶二硫基)丙酸N-琥珀酰亞胺基(SPDP)、亞胺基硫烷鹽(IT)、亞胺酸酯的雙功能性衍生物(例如二亞胺代己二酸二甲酯二鹽酸鹽)、活化的酯類(例如辛二酸二琥珀酰亞胺)、醛類(例如戊二醛)、雙-疊氮基化合物(例如雙(對疊氮基苯 甲酯基)己二胺)、雙重氮鹽衍生物(例如雙-(對重氮基苯甲酯基)-乙二胺)、二異氯酸醋類(例如甲苯2,6-二異氯酸醋)和雙活性氯化合物(例如1,5-二氯-2,4-二硝基苯)。舉例來說，菌麻毒蛋白免疫毒素可如Vitetta等人於Science 238：1098(1987)中所述來製備。碳-14-標記之1-異硫氰苄基-3-甲基二甘醇三胺五乙酸(MX-DTPA)是將放射性核甘酸和抗體共軛的實例性螯合劑(見W094/11026)。
表5列出一些可被用在本發明所述之實例性藥劑但彼等決對不是意欲為一詳盡的列表。
Figure 105113835-A0202-12-0196-2527
Figure 105113835-A0202-12-0197-2528
Figure 105113835-A0202-12-0198-2529
Figure 105113835-A0202-12-0199-2530
熟知本領域技術之人員將意識到許多可能部分可與本發明所得之抗體產生共軛。(見例如J.M.Cruse和R.E.Lewis、Jr(eds)之「Conjugate Vaccines」，Contributions to Microbiology and Immunology,Carger Press,New York,(1989)，將此全部內容併入本文以供參考)。
共軛可透過兩個分子的任何化學反應進行，只要抗體和另一部分保持原來各自的活性。該連結可包含許多化學機制，例如共價結合、親和力結合、嵌入、配位結合和錯合。在一些實施態樣中，彼等結合係為共價結合。共價結合可透過直接縮合已存在的側鏈或插入外部橋接分子來達成。許多二價的或多價的連接劑可用於蛋白質分子之共軛，例如本發明之抗體與其他分子之共軛。舉例來說，代表性的共軛劑包含有機分子如：硫酯、碳二亞胺、琥珀酰亞胺酯、異氰酸酯、戊二醛、偶氮苯和己二胺。本列表不意欲窮盡本領域已知各種類別的共軛劑，而是較常見共軛劑的示例。(見Killen及Lindstrom之Jour.Immun.133：1335-2549(1984)；Jansen et al., Immunological Reviews 62：185-216(1982)；and Vitetta et al.,Science 238：1098(1987)。
在一些實施態樣中，除了本文提供的組合物和方法，共軛的可活化之抗體亦可經由將修飾的胺基酸序列插入或以其他方式包含於可活化之抗體序列中以修飾專一性位置共軛。彼等修飾的胺基酸序列係經設計可讓可活化之抗體內共軛的劑受控制的放置和/或量。舉例而言，可活化之抗體可透過工程改造在輕鏈和重鏈的位置上包含半胱胺酸的置換，其提供反應性硫基且不會對蛋白質摺疊和組裝造成負面影響。在一些實施態樣中，可活化之抗體可經工程改造在可活化之抗體中包含或以其他方式導入一或多個非天然胺基酸殘基以提供共軛合適的位置。在一些實施態樣中，可活化之抗體可經工程改造在可活化之抗體中包含或以其他方式導入酵素性可活化胜肽序列。
合適的連接子係如文獻中所述(見例如，Ramakrishnan,S.等人之Cancer Res.44：201-208(1984)describing use of MBS(M-maleimidobenzoyl-N-hydroxysuccinimide ester)。亦可參見美國專利案號5,030,719，描述使用通過寡肽連接子將鹵化的乙酰基醯肼衍生物和抗體共軛。在一些實施態樣中，合適的連接子包括：(i)EDC(1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳醯二亞胺)(ii)SMPT(4-琥珀酰亞胺基氧羰基-α-甲基-α-(2吡啶二硫代)-甲苯(Pierce Chem.Co.,Cat.(21558G)；(iii)SPDP(琥珀酰亞胺基-6[3-(2-吡啶二硫代)丙醯胺基]己酸(Pierce Chem.Co.,Cat #21651G)；(iv)磺酸基-LC-SPDP(磺酸基琥珀酰亞胺基6[3-(2-吡啶二硫代)-丙醯胺]己酸(Pierce Chem.Co.Cat.#2165G)和(v)與EDC共軛的磺酸基-NHS(N-羥基磺酸基-琥珀醯亞胺：Pierce Chem.Co.,Cat.#24510)。另外的連接子包括但不限於SMCC((琥珀酰亞胺基4-(N-馬來醯亞胺基甲基)環己烷-1-羧酸鹽)、磺酸基-SMCC(磺酸基琥珀酰亞胺基4-(N-馬來醯亞胺基甲基)環己烷-1-羧酸鹽)、SPDB(N-琥珀酰亞胺基-4-(2-吡啶二硫代)丁酸)或磺酸基-SPDB(N-琥珀酰亞胺基-4-(2-吡啶二硫代)-2-磺酸基丁酸)。
上述連接子包含具有不同屬性的組分，因此產生具有不同物理-化學性質的共軛物。例如，烷基羧酸之磺酸基-NHS酯相較芳香烴羧酸之磺酸基-NHS酯更穩定。具有連接子的NHS酯比起磺酸基-NHS酯較不可溶。進一步，連接子SMPT包含空間阻礙的雙硫鍵，且可形成具有增加穩定性的共軛物。雙硫鍵結比起其他鍵結通常較不穩定，因為雙硫鍵係在細胞外被切割，導致獲得較少的共軛物。特別是磺酸基-NHS可以增加碳二亞胺共軛的穩定性。當用於和磺酸基-NHS共軛的時，碳二亞胺共軛(例如EDC)會形成比起碳二亞胺共軛反應本身對水解更具抵抗力的酯。
在一些實施態樣中，連接子係為可切割的。在一些實施態樣中，連接子係為不可切割的。在一些實施態樣中，存在二或更多連接子。彼等二或多個連接子係完 全相同，如可切割或不可切割，或二或多個連接子係不同的，如至少一個為可切割且至少一個為不可切割。
本發明利用不同方式將劑附著至AB上：(a)附著至AB的碳水化合物部分，或(b)附著至AB的硫基，或(c)附著至AB的胺基部分，或(d)附著至AB的羧酸基。根據本發明，AB可透過具有至少兩個反應基的中間連接子共價的附著到劑上，一個和AB反應而另一個和劑反應。可包含任何相容的有機化合物之連接子可經選擇後使和AB(或劑)的反應不會不利影響AB的反應性和選擇性。此外，連接子和劑的附著可能不破壞劑的活性。對於和氧化的抗體或氧化的抗體片段反應，適合的連接子包含那些含有選自由下列所組成之群組的胺：一級胺、二級胺、聯氨、醯肼、羥胺、苯肼、氨基脲和氨基脲基團。彼等反應官能基可作為連接子的部分結構存在，或者可以透過不包含彼等基團的連接子之合適的化學修飾而導入。
根據本發明，用於附著以減少AB之合適的連接子包含含有能與還原的抗體或片段之氫硫基反應的反應基。彼等反應基包含但不限於：反應性鹵代烷基(包含例如鹵代乙酰基)、對-汞基苯甲酸鹽基和能夠Michael型加成反應的基團(包含例如端粒酶和Mitra and Lawton於1979,J.Amer.Chem.Soc.101：3097-3110所述類型之基團)。
根據本發明，用於連接至非氧化亦非還原的AB之合適連接子包含那些具有能夠與存在於AB中未修 飾離胺酸的一級胺基反應的特定官能基。彼等反應性官能基包含但不限於NHS羧酸或碳酸酯、磺酸基-NHS羧酸或碳酸酯、4-硝基苯酯羧酸或碳酸酯、五氟苯基羧酸或碳酸酯、咪唑醯基、異氰酸酯和異硫氰酸酯。
根據本發明，用於連接至非氧化亦非還原的AB之合適連接子包含那些具有能夠與存在於AB中天門冬胺酸或穀胺酸殘基的羧酸基團反應的特定官能基，彼等連接子係被合適的劑活化。合適的活化劑包含EDC、具有或不具有加入NHS或磺酸基-NHS以及其他用於羧酰胺形成的脫水劑。在這些例子中，存在於合適連接子的官能基可包含一級和二級胺、聯氨、羥胺和醯肼。
劑可在連接子與AB連接之前或之後附著到連接子上。在某些應用中，首先產生AB-連接子中間物係為需要的，其中連接子係不包含相關的劑。根據具體的應用，特定的劑可共價附著到連接子上。在一些實施態樣中，AB首先附著到MM、CM及相關的連接子，之後再附著到用於共軛目的的連接子。
分支連接子：在特定實施態樣中，使用具有多個劑連接位置的分支連接子。對於多位置連接子，與AB的單一共價連接可產生能夠在多個位置上與劑結合的AB-連接子中間體。所述位置可為醛基或硫氫基或任何劑可附著的化學位置。
在一些實施態樣中，可透過在AB的多個位置附著單一連接位置連接子已獲得教高的專一活性(或較高 劑之於AB的比例)。透過兩種方式的任一種，彼等多個位置可導入AB之中。第一，可在同一AB上產生多個醛基和/或硫氫基。第二，可連接AB的醛基或硫氫基與具有多個功能位置的分支連接子。分支連接子的功能位置或多位置連接子可為醛基或硫氫基，或可為任何連接子可附著的化學位置。仍更高專一性活性可透過結合兩種方法獲得，亦即在AB的數個位置上附著多位置連接子。
可切割連接子：在本發明的的一個實施態樣中，可使用易於被補體系統的酶(例如但不限於尿激酶型纖維蛋白酶原激活劑、組織型血纖維溶解酶原激活劑、胰蛋白酶、纖維蛋白溶酶或其他具有蛋白酶活性的酵素)切割的胜肽連接子。根據本發明的一種方法，劑係經由易被補體切割的連接子附著。抗體係選自可活化補體的類別。因此抗體-劑共軛物活化補體級聯並在標的位置釋放劑。根據本發明之另一個方法，劑係經由易被具有蛋白酶活性之酵素(例如激酶型纖維蛋白酶原激活劑、組織型血纖維溶解酶原激活劑、胰蛋白酶)切割的連接子附著。彼等可切割連接子在共軛的可活化之抗體，其包括胞外毒素，如作為非限制性實例的表5中所示的任何胞外毒素，係為有用的。
可切割連接子序列之非限制性實例係示於表6中。
Figure 105113835-A0202-12-0205-2531
此外，劑可經由雙硫鍵(例如半胱胺酸分子上的雙硫鍵)附著到AB上。因此許多腫瘤天然是釋放高水平的穀胱甘肽(還原劑)，其隨後在傳送定位釋放劑可還原雙硫鍵。在一些實施態樣中，可修飾CM的還原劑亦可修飾共軛的可活化之抗體之連接子。
間隔和可切割元素：在一些實施態樣中，以優化劑和可活化之抗體之AB間的間隔之方式建構連接子係為必須的。可透過使用一般結構之連接子來完成：W-(CH2)n-Q
其中W係為-NH-CH2-或-CH2-
Q係為胺基酸、胜肽；和n係為從0到20的整數。
在一些實施態樣中，連接子可包含間隔元素和可切割元素。間隔元素用於定位可切割元素遠離AB的核心使得可切割元素更容易接近負責切割的酶。上述的特定分支連接子可作為間隔元素。
在整個論述中，應理解連接子與劑的附著(或間隔元素和可切割元素，或可切割元素和劑)不需要是特定的附著或反應。提供具有合適穩定度和生物相容性的產物的任何反應都是可接受的。
血清補體和連接子的選擇：根據本發明的一種方法，當期望釋放劑時，使用可活化補體之類型的抗體之AB。得到的共軛物同時保留結合抗原和活化補體級聯 的能力。因此，根據本發明的該實施態樣，劑連接可切割連接子的一個末端或可切割元素和另一端連接子基團係與AB上的特定位置連接。例如，若劑具有羥基或胺基，則可分別透過酯或醯胺鍵與胜肽的羧基端、胺基酸或其他經適當選擇的連接子連接。如果劑包含會干擾連接子的官能基，彼等干擾的官能基可在連接前被阻隔且在產物共軛物或中間物生成後解除阻隔。連接子的相對或氨基端係接著直接或進一步修飾後用於結合可活化補體的AB。
連接子(或連接子的間隔元素)可具有任何需要的長度，其一末端可和可活化之抗體之AB上特定位置共價連接。連接子之另一末端或間隔元素可和胺基酸或胜肽連接子連接。
因此，當這些共軛物在補體存在的情形下和抗原結合時，連接劑和連接子的酯和醯胺鍵會被切割，造成劑重新被釋放呈其活化狀態。當於個體中投予彼等共軛物時，將在標的位置完成劑的傳送和釋放，且對於活體內藥劑、抗生素、抗代謝物質、抗增殖劑和如表5中所列(但不限於)的傳遞特別有效。
用於無補體活化下釋放的連接子：仍在另一標的傳遞的應用中，無補體活化的劑釋放係為需要的，因為補體級聯的活化最終會將標的細胞溶解。因此，當劑的傳遞和示範應該在不殺死標的細胞的情況下完成時該方法係為有用的。此為當傳遞細胞調節劑如激素、酶、皮質類固醇、神經傳導物質、基因或酵素至標的細胞係為期望 的。彼等共軛物可透過將劑與不可活化補體之AB經由連接子連接來製備，所述連接子係輕微的容易被血清蛋白酶鎖切割。當彼等共軛物投予個體時，抗原-抗體複合物可快速形成，其中劑的切割將緩慢發生，因此導致化合物在標的位置的釋放。
生物化學交叉連接子：在一些實施態樣中，可活化之抗體可透過特定生物化學交叉連接子與一種或多種腫瘤治療劑共軛結合。交叉連接劑可形成分子橋將兩個不同分子的官能基綁在一起。為了逐步將兩個不同蛋白質結合在一起，可以異雙官能基交叉連接子來排除不需要的同元聚合物之形成。
可以溶解體蛋白酶切割的肽基連接子亦為有用的，例如，Val-Cit、Val-Ala或其他二肽。除此之外可使用溶小體在低-pH環境下可切割酸性不穩定連接子，例如：雙-矽醚。其他合適的連接子包含組織蛋白酶不穩定受質，尤其是那些在酸性pH下可表現出最佳功能的。
實例性異雙官能基交叉連接子在表7中提及。
Figure 105113835-A0202-12-0209-2532
非可切割連接子或直接附著：在本發明的一些實施態樣中，共軛物可經設計使劑係被傳遞至標的而不被釋放。可透過將劑與AB直接或經由不可切割連接子附著而達成。
不可切割連接子可包含胺基酸、胜肽、D-胺基酸或可被本文所述方法修飾以包含具有可以隨後用於與AB附著之官能基的有機化合物。彼等有機連接子的一般公式可為：W-(CH2)n-Q
其中W係為酯-NH-CH2-或-CH2-
Q係為胺基酸、胜肽；和n係為從0到20的整數。
不可切割共軛物：在一些實施態樣中，化合物可結合到不可活化補體的AB。當使用不可活化補體之AB，該連結可透過容易被活化的補體切割之連接子或用不容易被活化的補體切割之連接子達成。
本發明所述之抗體可被配製成免疫脂質體。脂質體包含透過本領域已知的方法製備的抗體，如Epstein等人於Proc.Natl.Acad.Sci.USA,82：3688(1985)；Hwang等人於Proc.Natl Acad.Sci.USA,77：4030(1980)；美國專利案號4,485,045和4,544,545所述。具有提高循環時間的脂質體係於美國專利案號5,013,556中所揭露。
特別有用的脂質體可用包含磷脂醯膽鹼、膽固醇和PEG-衍生磷脂醯乙醇胺(PEG-PE)的脂質組合物透過反相蒸發法來產生。脂質體透過特定孔徑濾器擠出。本發明中抗體之Fab’片段可依照Martin等人J.Biol.Chem.,257：286-288(1982)所述之方法透過雙硫互換反應與脂質體共軛。
定義：
除非另有其他定義，否則在本文所使用之所有技術及科學術語具有與熟習本發明所屬領域技術者共同瞭解的相同意義。術語「一個(a)」實體或「一個(an)」實體意欲指一或多個該實體。例如，一化合物意指一或多個化合物。因此，術語「一個(a)」、「一個(an)」、「一或多個」、「至少一個」可交換使用。此外，除非上下文另外要求，否則單數術語應包括複數和複數術語應包含單數。通常，與本文描述的细胞和組織培養、分子生物學和蛋白質和寡核苷酸或多核苷酸之化學和雜交所使用的命名法及其技術係為本領域技術所熟知的。標準技術係用於重组DNA、寡核苷酸合成和組織培養和轉形(例如電穿孔法、脂轉染法)。酵素反應和純化技術係按照製造商的說明書或本領域技術一般執行方式或本文所述來進行。前述技術和程序通常按照本領域所熟知的常規方法和如本文引用和論述的各種通用方法以及較特定的參考文獻中所述來進行。參見例如，Sambrook等人於Molecular Cloning：A Laboratory Manual(第2版，Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring化rbor,N.Y.(1989))。於本文描述的分析化學、合成有機化學和醫用和藥用化學結合使用的命名法及其實驗室程序和技術係本領域技術一般所熟知和使用的。標準技術用於化學合成、化學分析、藥物製備、配製和傳遞，和治療病患。
如根據本發明內容所使用，除非另外說明，否則下列術語應理解具有下列含義： 術語「抗體」是指免疫球蛋白分子和免疫球蛋白(Ig)分子的免疫活性部分，例如，含有可專一性結合抗原(與其免疫反應)的抗原結合位置的分子。「專一性的結合」或「與其免疫反應」意指抗體與所期望抗原的一個或多個抗原決定位反應且不與其他多肽反應或在親和力低許多(Kd>10-6)時結合。抗體包含但不限於多株抗體、單株抗體、嵌合抗體、區域抗體、單鏈、Fab和F(ab’)2片段、scFvs和Fab表現庫。
基本抗體結構單位已知包含四聚體。各個四聚體係由兩個相同的多肽鏈對所組成，每對具有一個「輕」鏈(大約25kDa)和一個「重」鏈(大約50-75kDa)。各鏈的氨基端部分包含大約100至110或更多個胺基酸之變異區，其主要負責抗原辨識。各鏈的羧基端部分限定了不變異區，其主要負責效應子的功能。通常，源自人類的抗體分子係和IgG、IgM、IgA、IgE和IgD之中任一類別相關，彼等之間和彼此不同之處在於分子中存在的重鏈之 性質。某些類別亦具有子類別，如IgG1,IgG2和其他。更進一步，在人類中，輕鏈可為kappa鏈或lambda鏈。
本文所使用之術語「單株抗體(mAb)」或「單株抗體組合物」，係指僅包含一個分子種類之抗體分子的抗體分子群體，所述抗體分子係由獨特輕鏈基因產物和獨特重鏈基因產物所組成。具體而言，單株抗體的互補性決定區域(CDR)在所有群體中之所有分子中係為相同的。Mab包含能夠和特定抗原決定位抗原結合位置，其特徵在於對抗原有獨特的結合親和力。
術語「抗原結合位置」或「結合部分」係指免疫球蛋白分子的一部份，其參與抗原之結合。抗原結合位置由「重」鏈和「輕」鏈之N端變異區域(V)之胺基酸殘基所組成。在重鏈和輕鏈的V區內三個高度不同的區段稱為「超變區」，彼等係穿插在稱為「架構區」或「FR」的較保守側區段。因此，術語「FR」係指天然存在於免疫球蛋白的超變區或其鄰近位置。在抗體分子中，輕鏈的三個超變區重鏈的三個超變區係在三維空間中彼此相對排列以形成抗原結合表面。抗原結合表面係與結合之抗原係於三維空間互補的，且重鏈和輕鏈各自的三個超變區被稱為「互補性決定區域」或「CDR」。將胺基酸指定到各個區域係按照Kabat Sequences of Proteins of Immunological Interest(National Institutes of Health,Bethesda,Md.(1987 and 1991))之定義或Chothia & Lesk J.Mol.Biol.196：901-917(1987)，Chothia等人之Nature 342：878-883 (1989)。
如本文所述，術語「抗原決定位」包含任何能夠專一性結合免疫球蛋白、scFV或T-細胞受體的抗原決定子。術語「抗原決定位」包含任何能夠專一性結合免疫球蛋白或T-細胞受體的抗原決定子。抗原決定位決定子包含通常由如胺基酸或糖類側鏈之化學性可活化表面決定群組分子所組成，且通常具有特殊三維結構特徵和特殊的電荷特徵。舉例來說，抗體可針對多肽的N-端或C-端胜肽而產生。當解離常數
Figure 105113835-A0202-12-0214-181
1μM抗體會專一性結合至抗原，在一些實施態樣中為
Figure 105113835-A0202-12-0214-182
100nM且在一些實施態樣中係
Figure 105113835-A0202-12-0214-183
10nM。
如本文所述，術語「專一性結合」、「免疫性結合」和「免疫性結合性質」係指免疫球蛋白分子和對其具有專一性的抗原之間形成非共價交互作用。免疫結合性質交互作用的強度和親和力可以交互作用的解離常數(Kd)來表示，其中較小的Kd代表較高親和力。被選擇之多肽的免疫結合性質可以本領域技術熟知的方法來定量測量。該等方法要求測定抗原結合位置/抗體複合物形成和解離的速率，其中彼等速率係取決於複合物配偶之濃度，和在兩個方向上同等影響速率的幾何參數。因此，「結合速率常數」和「解離速率常數」可透過計算濃度和結合及解離的實際速率來測定(參見Nature 361：186-87(1993))。Koff/Kon之比例使得和親和力不相關的所有常數可以消除，且和解離常數Kd相等。(一般參見Davies等人之 (1990)Annual Rev Biochem 59：439-473)。透過測定法如放射性配體結合測定法活其他本領域技術人員已熟知之方法所量當結合常數(Kd)
Figure 105113835-A0202-12-0215-184
1μM、在一些實施態樣中
Figure 105113835-A0202-12-0215-185
100nM、在一些實施態樣中
Figure 105113835-A0202-12-0215-186
10nM且在一些實施態樣中
Figure 105113835-A0202-12-0215-187
100pM至約為1pM時，本發明之抗體係被認定會專一性結合至標的。
本文所使用術語「分離的多核苷酸」係指基因組DNA的多核苷酸、cDNA或合成來源的多核苷酸或一些彼等之組合。根據其來源，「分離的多核苷酸」(1)存在於天然之「分離的多核苷酸」不和全部或部分的多核苷酸結合，(2)可和與天然不連接之多核苷酸操作性相連，(3)不作為較大序列的一部份天然存在。根據本發明之多核苷酸包含編碼本文所示重鏈免疫球蛋白分子的核酸分子和編碼本文所示之輕鏈免疫球蛋白分子之核酸分子。
本文提及術語「分離的蛋白」係指cDNA、重組DNA或合成來源的蛋白或一些彼等之組合，其中根據其來源或衍生源，「分離的蛋白」(1)不結合天然存在的蛋白，(2)不含其他相同來源的蛋白，例如不含鼠蛋白，(3)透過不同物種的細胞表現，或(4)不天然存在。
本文所使用術語「多肽」係指據多肽序列的天然蛋白、片段或類似物。因此，天然蛋白片段和類似物係多肽種類下之種類。根據本發明所述之多肽包含本文所示的重鏈免疫球蛋白分子和本文所示輕鏈免疫球蛋白分子，以及由包含重鏈免疫球蛋白與輕鏈免疫球蛋白例如 kappa輕鏈免疫球蛋白分子(和反之亦然)所形成的抗體分子和其片段及類似物。
本文所使用術語「天然存在的」應用於物體係指物體可在天然中找到的事實。舉例而言，存在於可被從天然來源分離出且未在實驗室經過人為刻意修飾或其他方式修飾的生物體中(包含病毒)之多肽或多核苷酸序列係天然存在的。
本文所使用術語「可操作連接的」係指所述組分之位置處於允許它們以預期方式起作用的關係中。與編碼序列「可操作連接的」控制序列使編碼序列的表現在與控制序列相容的條件下達成的方式連接。
本文所使用術語「控制序列」係指對彼等所連接之編碼序列的表現和加工的影響為必須的多核苷酸序列。彼等控制序列的性質取決於宿主生物體，在原核生物中彼等控制序列通常包含啟動子、核糖體結合位置和轉錄終止序列；在真核生物中通常彼等控制序列包含啟動子和轉錄終止序列。術語「控制序列」係意欲最少包含其存在係對表現和加工為必要的所有組分，以及亦可包含存在係為有利的額外組分，例如前導序列和融合伴侶序列。本文所提及術語「多核苷酸」係指至少10個鹼基長度的核苷酸，可為核糖核苷酸或去氧核糖核苷酸或彼等任一修飾的形式的核苷酸。該術語包含單股或雙股形式DNA。
本文所提及術語寡核苷酸包含聽然存在的和透過天然存在和非天然存在寡核苷酸連結連接在一起修飾 的核苷酸。寡核苷酸通常為包含長度200個或更少鹼基的多核苷酸子集。在一些實施態樣中，寡核苷酸係為10至60個鹼基長，且在一些實施態樣中為12、13、14、15、16、17、18、19或20至40個鹼基長。寡核苷酸通常為單股的，例如用於探針，但亦可為雙股，例如用於建構基因突變。本發明之寡核苷酸可為義股或反義股。
本文提及之術語「天然存在的核苷酸」包含去氧核醣核酸和核糖核酸。本文所提及之術語「修飾的核苷酸」包含具有修飾的或取代的糖基團等之核苷酸。本文提及之術語「寡核苷酸鍵結」包含例如硫逐磷酸酯、二硫代磷酸酯、硒代磷酸酯、二硒代磷酸酯、氨苯基硫代磷酸酯、縮苯胺磷酸酯、氨基磷酸酯等。參見例如LaPlanche等人之Nucl.Acids Res.14：9081(1986)；Zon等人之Oligonucleotides and Analogues：A Practical Approach,pp.87-108(F.Eckstein,Ed.,Oxford University Press,Oxford England(1991))；Stec等人之美國專利案號5,151,510；Uhlmann和Peyman Chemical Reviews 90：543(1990)。如果需要，寡核苷酸可包含用於檢測的標記。
如本文所使用，20種常規胺基酸和其縮寫係按照常規使用。詳見Immunology-A Synthesis(2nd Edition,E.S.Golub and D.R.Green,Eds.,Sinauer Associates,Sunderland,Mass.(1991))。20種常規胺基酸的立體異構物(例如，D-胺基酸)、非天然胺基酸例如4羥脯胺酸、γ-羧基谷胺酸、ε-N,N,N-三甲基離胺酸、ε-N-乙 酰基離胺酸、O-磷酸絲胺酸、N-乙酰基絲胺酸、N-甲酰甲硫胺酸、3-甲基組胺酸、5-羥離胺酸、σ-N-甲基精胺酸和其他類似胺基酸以及亞胺基酸(例如4-羥脯胺酸)。在本文所使用的多肽記號中，按照標準用法和慣例，左手方向係為氨基末端方向且又右手方向係為羧基末端方向。
類似的，除非另外說明，否則單股多核苷酸序列的左手末端係為5’端，雙股多核苷酸序列的左手方向係為5’方向。新生的RNA轉錄物之5’至3’方向被稱為轉錄方向，具有與RNA相同序列且為5’至RNA轉錄物5’末端的DNA鏈上之序列區域被稱為「上游序列」；具有與RNA相同序列且為3’至RNA轉錄物3’末端的DNA鏈上之序列區域被稱為「下游序列」。
應用於多肽時，術語「本質上相同」意指兩個胜肽序列再利用程式GAP或BESTFIT使用預設缺口權重做最佳比對時，共同具有至少80%序列相同，在一些實施態樣中，至少90%序列相同，在一些實施態樣中，至少95%序列相同，在一些實施態樣中，至少99%序列相同。
在一些實施態樣中，不相同的殘基位置會因為保守胺基酸取代而不同。
如本文所述，抗體或免疫球蛋白分子的胺基酸序列之較少變化係預期包含在本發明之內容中，使得胺基酸序列中的變化維持至少75%。在一些實施態樣中，至少80%、90%、95%且在一些實施態樣中，至少99%。具體而言，保守胺基酸置換係為預期的。保守置換係發生在 和側鏈上相關之胺基酸家族。遺傳編碼胺基酸通常分成下面家族：(1)酸性胺基酸為天門冬醯胺(Asparagine)和谷胺酸(2)鹼性胺基酸為離胺酸、精胺酸、組胺酸(3)非極性胺基酸為丙胺酸、纈胺酸、白胺酸、異白胺酸、脯胺酸、苯丙胺酸、甲硫胺酸、色胺酸和(4)不帶電荷之極性胺基酸為甘胺酸、天門冬醯胺、谷氨醯胺、半胱胺酸、絲胺酸、蘇胺酸、酪胺酸。親水性胺基酸包含精胺酸、天門冬醯胺、天門冬胺酸、谷氨醯胺、谷胺酸、組胺酸、離胺酸、絲胺酸和蘇胺酸。疏水性胺基酸包含丙胺酸、半胱胺酸、甲硫胺酸、苯丙胺酸、脯胺酸、色胺酸、酪胺酸和纈胺酸。胺基酸其他家族包含(i)絲胺酸和蘇胺酸，其為脂肪族羥基家族；(ii)天門冬醯胺和谷氨醯胺，其為含有醯胺家族；(iii)丙胺酸、纈胺酸、白胺酸、異白胺酸，其為脂肪族家族；(iv)苯丙胺酸、色胺酸和酪胺酸，其為芳香族家族。舉例來說，可合理預期單獨置換白胺酸為異白胺酸或纈胺酸，天門冬胺酸為谷胺酸、蘇胺酸為絲胺酸，或以結構相關之胺基酸做類似的置換不會對結果分子造成結合或性質上的主要影響，特別當置換不會牽扯到框架位置內的胺基酸。胺基酸變化是否會產生功能性胜肽可透過測定多肽衍生物的特定活性而輕易確定。本文詳細描述測定法。抗體或免疫球蛋白分子之片段或類似物可透過熟知本領域技術之人員輕易配製。片段或類似物的氨基末端和羧基末端出現在功能結構區域的邊界附近。結構和功能區域可透過將核苷酸和/或胺基酸序列與公開或專有 之序列數據庫做比對來鑑定。在一些實施態樣中，電腦化比較方法係用於鑑定出現在具有已經結構和/或功能的其他蛋白中的序列模組和預期的蛋白質構型區域。鑑定折疊成已知3維結構之蛋白質序列的方法係為已知的。Bowie等人之Science 253：164(1991)。因此，前述實例證明本領域技術人員可根據本發明所述來鑑別序列模組和構型區域。
合適的氨基酸置換為(1)減少對蛋白質水解的易感性，(2)減少對氧化的易感性，(3)改變對形成蛋白質複合物的結合親和力，(4)改變結合親和力，和(5)賦予或修飾彼等之其他物理化學性或功能性性質。類似物可包含具有並非天然存在胜肽序列的各種不同突變。例如，可在天然存在的序列(例如在形成分子間接觸的區域外的多肽部分)形成分子間接觸之間產生單一或多個胺基酸置換(例如保守胺基酸置換)。保守胺基酸置換不應本質上改變母體序列的結構特徵(例如置換胺基酸不應傾向於中斷母體序列中出現的螺旋，或破壞母體序列之特有的其他類型的二級結構)。本領域供認知多肽二級和三級結構之實例細描述於Proteins,Structures and Molecular Principles(Creighton,Ed.,W.H.Freeman and Company,New York(1984))；Introduction to Protein Structure(C.Branden and J.Tooze,eds.,Garland Publishing,New York,N.Y.(1991))；和Thornton等人之Nature 354：105(1991)。
本文所使用術語「多肽片段」係指具有胺基 末段或羧基末端的缺失和/或一個或多個內部缺失的多肽，但其中剩餘的胺基酸序列與從例如全長cDNA序列中推論的天然存在的序列相對應之位置相同。片段通常為至少5、6、8或10個胺基酸長，在一些實施態樣中，至少20個胺基酸長。通常至少50個胺基酸長，和在一些實施態樣中至少70個胺基酸長。本文所使用術語「類似物」意指由至少25個胺基酸的區段所構成的多肽，其與推論之胺基酸序列的一部份係為本質上相同且在適當條件下與EGFR專一性的結合。一般來說，多肽類似物包含相對於天然存在之序列的保守胺基酸置換(或添加或缺失)。類似物通常為至少20個胺基酸長，例如在一些實施態樣中至少50個胺基酸長或更長且通常可和天然存在的多肽的全長一樣長。
本文所使用之術語「劑」係用於表示化合物，化合物的混合物、生物大分子或自生物材料製備的萃取物。
如本文所用，術語「標記」或「標記的」係指嵌入可檢測標記物，例如透過嵌入放射性標記的胺基酸或透過可被標記的抗生物素蛋白(例如，包含可通過光學或熱量方式檢測的螢光標記或酵素活性之鏈霉抗生物素)偵測的生物素部分之多肽的連結。在某些情況下，標記或標記物也可為治療性的。標記多肽和糖蛋白的各種方式係為本領域技術已知和可被使用的。用於標記多肽的實例包含但不限於下列：放射性同位素或放射性核素(例如， 3H、14C、15N、35S、90Y、99Tc、111In、125I、131I)、螢光標記(例如，FITC、羅丹明、鑭系元素、磷光質)、酵素標記(例如，辣根過氧化物酶、p-半乳糖苷酶、螢光素酶、鹼性磷酸酶)、化學發光、生物素基團、被二級報告子辨識之預定的多肽抗原決定位(例如白胺酸拉鍊對序列、二級抗體結合位置、金屬結合區域、抗原決定位標籤)。在一些實施態樣中，標記透過與各種長度的間隔臂連接來降低潛在的空間位阻。本文所使用術語「藥劑或藥物」係指當適當投予病患時能夠對起產生所需的治療效果的化合物或組合物。
本文所使用的其他化學術語係根據本領域技術之常規使用，如The McGraw-Hill Dictionary of Chemical Terms(Parker,S.,Ed.,McGraw-Hill,San Francisco(1985))所示例。
如本文所用，「本質上純的」意指對象種類係為主要種類(如在組成成分的莫耳基礎上其量為相較任何其他對象種類更多的)，且在一些實施態樣中，純化的部分係為一組合物其中個體種類至少佔全部存在的高分子之50%(在莫耳基礎上)。
通常本質上純的組合物會包含組合物中存在超過80%的高分子。在一些實施態樣中，會超過85%、90%、95%和99%。在一些實施態樣中，個體種類經純化到本質上均質(透過常規檢測方法無法檢測出組合物中的污染物種類)，其中組合物基本上由單一高分子種類所組 成。
術語病患包含人和獸醫個體。
本發明之抗體和/或可活化之抗體專一性結合至給予之標的，例如人類標的蛋白如人類CD71。本發明亦包含和本文所述之抗體和/或可活化之抗體結合至相同抗原決定位的抗體和/或可活化之抗體。本發明亦包含和本文所述抗CD71抗體和/或抗CD71可活化之抗體競爭與CD71，如人類CD71，之結合的抗體和/或可活化之抗體。本發明亦包含和本文所述抗CD71抗體和/或抗CD71可活化之抗體交叉競爭與CD71，如人類CD71，之結合的抗體和/或可活化之抗體。
熟知本領域技術之人員將意識到，可能透過確認前者是否阻止後者與標的的結合而無需過度實驗的情況下確定單株抗體(如鼠體單源或人源抗體)具有與單株抗體相同的專一性。如所測試的單株抗體與本發明之單株抗體競爭，如透過本發明之單株抗體的結合降低所示，則兩單株抗體結合到相同或相近的抗原決定位。另一種測定單株抗體是否和本發明之單株抗體具有相同專一性的方法係為將本發明之單株抗體和標的預培養後再加入待測試之單株抗體，以決定待測試之單株抗體和標的的結合是否受到抑制。假設待測試單株抗體受到抑制，則很有可能和本發明之單株抗體具有相同，或功能性相當之抗原決定位專一性。
多專一性可活化之抗體
本發明亦提供多專一性抗CD71可活化之抗體。本文所提供之多專一性可活化之抗體可辨識CD71和至少一或多個抗原或抗原結合位之多專一性抗體，且其中包含至少一個連結到多專一性抗體上至少一抗原-或抗原結合位-結合區域的掩蔽部分(MM)，且和MM共軛減少抗原-或抗原結合位-結合區域和其標的結合之能力。在一些實施態樣中，MM係透過作用為至少一蛋白酶受質的可切割部分(CM)和抗原-或抗原結合位-結合區域共軛。本文所提供可活化多專一性抗體係在循環中穩定的，在治療和/診斷意欲位置被活化，但正常位置如健康組織不會，且當被活化時會具有結合至至少可和相對應未修飾多專一性抗體比較之標的。
在一些實施態樣中，多專一性可活化之抗體係被用於吸引免疫效應子細胞，亦於本文中被稱為受免疫效應子細胞吸引之多專一性可活化之抗體。在一些實施態樣中，多專一性可活化之抗體係用於吸引白血球，亦於本文中被稱為受白血球吸引之多專一性可活化之抗體。在一些實施態樣中，多專一性可活化之抗體係用於吸引T細胞，亦於本文中被稱為受T細胞吸引之多專一性可活化之抗體。在一些實施態樣中，多專一性可活化之抗體係用於吸引白血球上的表面抗原，例如在T細胞、在自然殺手(NK)細胞、在骨髓單核細胞、在巨噬細胞和/或在其他免疫效應子細胞。在一些實施態樣中，免疫效應子係為白血 球。在一些實施態樣中，免疫效應子係為T細胞。在一些實施態樣中，免疫效應子係為NK細胞。在一些實施態樣中，免疫效應子係為巨噬細胞，例如骨髓巨噬細胞。在一些實施態樣中，多專一性可活化之抗體係用於結合或和多於一種標的和/或多於一種抗原決定位產生其他交互作用，於本文中亦意指為多-抗原標的可活化之抗體。如本文所用，術語「標的」和「抗原」可互相交換使用。
在一些實施態樣中，本發明之免疫效應子吸引之多專一性可活化之抗體包含結合至CD71和免疫效應子吸引之抗體或其抗原結合部分的目標抗體或其抗原結合片段，其中至少一目標抗體或其抗原結合片段和/或免疫效應子吸引之抗體或其抗原結合部分係為掩蔽的。在一些實施態樣中，免疫效應子吸引之多專一性可活化之抗體包含結合至一級、免疫效應子吸引之標的的一級抗體或其抗原結合片段(AB1)，其中AB1係與掩蔽部分(MM1)結合而彼等MM1之共軛減少AB1結合到第一標的的能力。在一些實施態樣中，目標抗體或其抗原結合片段包含而及抗體或其片段，彼等包含會結合到CD71之二級抗體或其抗原結合片段(AB2)，其中AB2係與掩蔽部分(MM2)結合而該MM2之共軛減少AB2結合到CD71的能力。在一些實施態樣中，非免疫效應子抗體係為IgG。在一些實施態樣中，非免疫效應子細胞吸引之抗體係為scFv。在一些實施態樣中，CD71-目標抗體(如非免疫效應子抗體)係為IgG且免疫效應子細胞吸引之抗體係為scFv。在一些實施態樣 中，免疫效應子細胞係為白血球。在一些實施態樣中，免疫效應子細胞係為T細胞。在一些實施態樣中，免疫效應子細胞係為NK細胞。在一些實施態樣中，免疫效應子細胞係為骨髓巨噬細胞。
在一些實施態樣中，本發明之T細胞吸引之多專一性可活化之抗體包含CD71-目標抗體或其抗原結合片段以及T細胞吸引之抗體或期抗原結合部分，其中至少一CD71-目標抗體或其抗原結合片段和/或T細胞吸引之抗體或其抗原結合部分係為掩蔽的。在一些實施態樣中，T細胞吸引之抗體或其抗原結合片段包含結合至一級、T細胞吸引之標的的一級抗體或其抗原結合片段(AB1)，其中AB1係與掩蔽部分(MM1)結合而彼等MM1之共軛減少AB1結合到第一標的的能力。在一些實施態樣中，目標抗體或其抗原結合片段包含結合至CD71之二級抗體或其抗原結合片段(AB2)，其中AB2係與掩蔽部分(MM2)結合而彼等MM2之共軛減少AB2結合到CD71的能力。在一些實施態樣中，T細胞吸引之多專一性可活化之抗體包含結合至一級、T細胞吸引之標的的一級抗體或其抗原結合片段(AB1)，其中AB1係與掩蔽部分(MM1)結合而彼等MM1之共軛減少AB1結合到第一標的的能力，且目標抗體和其抗原結合片段包含與CD71結合之二級抗體或其抗原結合片段，其中AB2係與掩蔽部分(MM2)結合而彼等MM2之共軛減少AB2結合到CD71的能力， 在一些免疫效應子吸引之多專一性可活化之 抗體的實施態樣中，一個抗原為CD71，另一個抗原典型為存在T細胞、天然殺手細胞(NK)、骨髓單核細胞、巨噬細胞和/或其他免疫效應子表面之刺激性或抑制性受體，例如，但不限於，B7-H4、BTLA、CD3、CD4、CD8、CD16a、CD25、CD27、CD28、CD32、CD56、CD137、CTLA-4、GITR、HVEM、ICOS、LAG3、NKG2D、OX40、PD-1、TIGIT、TIM3或VISTA。在一些實施態樣中，抗原係為存在於T細胞或NK細胞表面的刺激性受體，彼等刺激性受體實例包含但不限於CD3、CD27、CD28、CD137(亦被稱為4-1BB)、GITR、HVEM、ICOS、NKG2D和OX40。在一些實施態樣中，抗原係為存在於T細胞表面的刺激性受體，彼等刺激性受體實例包含但不限於BTLA、CTLA-4、LAG3、PD-1、TIGIT、TIM3和NK-表現KIRs。賦予T細胞表面抗原專一性的抗體區域可同時配體或配體區域取代，該配體區域會與T細胞受體、天然殺手細胞受體、巨噬細胞受體和/或其他免疫效應子受體，例如但不限於B7-1、B7-2、B7H3、PDL1、PDL2或TNFSF9結合。
在一些實施態樣中，T細胞吸引之多專一性可活化之抗體包含抗-CD3 epsilon(CD3ε，於此亦稱為CD3e和CD3)scFv和目標抗體或其抗原結合片段，其中至少一抗CD3ε scFv和目標抗體或其抗原結合片段係為被掩蔽的。在一些實施態樣中，CD3ε scFv包含會與CD3ε結合的一級抗體或其抗原結合片段(AB1)，其中AB1係與掩蔽 部分(MM1)結合，彼等MM1之共軛會減少AB1結合到CD3ε的能力。在一些實施態樣中，目標抗體或其抗原結合片段包含會與CD71結合之二級抗體或其抗原結合片段(AB2)，其中AB2係與掩蔽部分(MM2)結合，彼等MM2之共軛會減少AB2結合到CD71的能力。在一些實施態樣中，CD3ε scFv包含會與CD3ε結合之一級抗體或其抗原結合片段(AB1)，其中AB1係與掩蔽部分(MM1)結合，彼等MM1之共軛會減少AB1結合到CD3ε的能力，且目標抗體或其含有會與CD71結合的二級抗體或其抗原結合片段(AB2)之片段，其中AB2係與掩蔽部分(MM2)結合，彼等MM2之共軛會減少AB2結合到CD71的能力。
在一些實施態樣中，多抗原目標抗體和多抗原目標可活化之抗體包含至少一個會與第一目標和/或第一抗原決定位結合的一級抗體或其抗原結合片段和或與第二目標和/或第二抗原決定位結合的二級抗體和其抗原結合片段。在一些實施態樣中，多抗原目標抗體和多抗原目標可活化之抗體會與相同目標上二或多種不同之抗原決定位結合。在一些實施態樣中，多抗原目標抗體和多抗原目標可活化之抗體會與相同目標上二或多種不同目標和二或多種不同的抗原決定位之組合結合。
在一些實施態樣中，多專一性可活化之抗體包含具有掩蔽的IgG變異區之IgG。在一些實施態樣中，多專一性可活化之抗體包含具有掩蔽的scFv變異區之scFv。在一些實施態樣中，多專一性可活化之抗體同時包 含IgG變異區和scFv區域，其中至少一scFv區域係共軛至掩蔽部分。在一些實施態樣中，多專一性可活化之抗體同時包含IgG變異區和scFv區域，其中至少一IgG變異區係共軛至掩蔽部分。在一些實施態樣中，多專一性可活化之抗體同時包含IgG變異區和scFv區域，其中至少一IgG變異區係共軛至掩蔽部分且至少一scFv區域係共軛至掩蔽部分。在一些實施態樣中，多專一性可活化之抗體同時包含IgG變異區和scFv區域，其中每個IgG變異區和scFv區域係與各自的掩蔽部分共軛。在一些實施態樣中，多專一性可活化之抗體的一個抗體區域具有對於目標抗原的專一性且其他抗體區域具有對T細胞表面抗原的專一性。在一些實施態樣中，多專一性可活化之抗體具有對目標抗原的專一性且其他抗體區域具有對其他目標抗原的專一性。在一些實施態樣中，多專一性可活化之抗體具有對目標抗原之抗原決定位的專一性且其他抗體區域具有對其他抗原之抗原決定位的專一性。
在多專一性可活化之抗體中，scFv可和可活化之抗體IgG重鏈的羧基端接合、和可活化之抗體IgG輕鏈的羧基端接合或和同時和可活化之抗體IgG重鏈和輕鏈的羧基端接合。在多專一性可活化之抗體中，scFv可和可活化之抗體IgG重鏈的氨基端接合、和可活化之抗體IgG輕鏈的氨基端接合或和同時和可活化之抗體IgG重鏈和輕鏈的氨基端接合。在多專一性可活化之抗體中，scFv可和可活化之抗體IgG中一或多個羧基端和一或多個氨基端的 任一組合接合。在一些實施態樣中，連接到可切割部分(CM)的掩蔽部分(MM)係附著到並掩蔽IgG的抗原結合區域。在一些實施態樣中，連接到可切割部分(CM)的掩蔽部分(MM)係附著到並掩蔽至少一scFv的抗原結合區域。在一些實施態樣中，連接到可切割部分(CM)的掩蔽部分(MM)係附著到並掩蔽IgG的抗原結合區域且連接到可切割部分(CM)的掩蔽部分(MM)係附著到並掩蔽至少一scFv的抗原結合區域。
本發明提供之多專一性可活化之抗體結構實例包含但不限於下列：(VL-CL)2：(VH-CH1-CH2-CH3-L4-VH*-L3-VL*-L2-CM-L1-MM)2；(VL-CL)2：(VH-CH1-CH2-CH3-L4-VL*-L3-VH*-L2-CM-L1-MM)2；(MM-L1-CM-L2-VL-CL)2：(VH-CH1-CH2-CH3-L4-VH*-L3-VL*)2；(MM-L1-CM-L2-VL-CL)2：(VH-CH1-CH2-CH3-L4-VL*-L3-VH*)2；(VL-CL)2：(MM-L1-CM-L2-VL*-L3-VH*-L4-VH-CH1-CH2-CH3)2；(VL-CL)2：(MM-L1-CM-L2-VH*-L3-VL*-L4-VH-CH1-CH2-CH3)2；(MM-L1-CM-L2-VL-CL)2：(VL*-L3-VH*-L4-VH-CH1-CH2-CH3)2；(MM-L1-CM-L2-VL-CL)2：(VH*-L3-VL*-L4-VH-CH1-CH2-CH3)2；(VL-CL-L4-VH*-L3-VL*-L2-CM-L1-MM)2：(VH-CH1-CH2-CH3)2；(VL-CL-L4-VL*-L3-VH*-L2-CM-L1-MM)2：(VH-CH1-CH2-CH3)2；(MM-L1-CM-L2-VL*-L3-VH*-L4-VL-CL)2：(VH-CH1-CH2-CH3)2；(MM-L1-CM-L2-VH*-L3-VL*-L4-VL-CL)2：(VH-CH1-CH2-CH3)2；(VL-CL-L4- VH*-L3-VL*-L2-CM-L1-MM)2：(MM-L1-CM-L2-VL*-L3-VH*-L4-VH-CH1-CH2-CH3)2；(VL-CL-L4-VH*-L3-VL*-L2-CM-L1-MM)2：(MM-L1-CM-L2-VH*-L3-VL*-L4-VH-CH1-CH2-CH3)2；(VL-CL-L4-VL*-L3-VH*-L2-CM-L1-MM)2：(MM-L1-CM-L2-VL*-L3-VH*-L4-VH-CH1-CH2-CH3)2；(VL-CL-L4-VL*-L3-VH*-L2-CM-L1-MM)2：(MM-L1-CM-L2-VH*-L3-VL*-L4-VH-CH1-CH2-CH3)2；(VL-CL-L4-VH*-L3-VL*)2：(MM-L1-CM-L2-VL*-L3-VH*-L4-VH-CH1-CH2-CH3)2；(VL-CL-L4-VH*-L3-VL*)2：(MM-L1-CM-L2-VH*-L3-VL*-L4-VH-CH1-CH2-CH3)2；(VL-CL-L4-VL*-L3-VH*)2：(MM-L1-CM-L2-VL*-L3-VH*-L4-VH-CH1-CH2-CH3)2；(VL-CL-L4-VL*-L3-VH*)2：(MM-L1-CM-L2-VH*-L3-VL*-L4-VH-CH1-CH2-CH3)2；(VL-CL-L4-VH*-L3-VL*-L2-CM-L1-MM)2：(VL*-L3-VH*-L4-VH-CH1-CH2-CH3)2；(VL-CL-L4-VH*-L3-VL*-L2-CM-L1-MM)2：(VH*-L3-VL*-L4-VH-CH1-CH2-CH3)2；(VL-CL-L4-VL*-L3-VH*-L2-CM-L1-MM)2：(VL*-L3-VH*-L4-VH-CH1-CH2-CH3)2；or(VL-CL-L4-VL*-L3-VH*-L2-CM-L1-MM)2：(VH*-L3-VL*-L4-VH-CH1-CH2-CH3)2，其中：包含在IgG內VL和VH代表第一專一性的輕鏈和重鏈變異區；包含在scFv內VL*和VH*代表第二專一性的變異區；L1為連接掩蔽部分(MM)和可切割部分(CM)的連接子胜肽，L2為連接可切割部分(CM)的連接子胜肽，和抗體；L3為連接scFv之變異區的連接子胜肽，L4為連 接第一專一性之抗體和第二專一性之抗體的連接子胜肽，CL為輕鏈不變異區，且CH1、CH2、CH3為重鏈不變異區。第一和第二專一性可針對任何抗原或抗原決定位。
在一些T細胞吸引之多專一性可活化之抗體的實施態樣中，一抗原為CD71，且其他抗原典型上為T細胞、自然殺手(NK)細胞、骨髓單核細胞、巨噬細胞和/或其他免疫效應子表面的刺激性(於本文中亦指為活化的)或抑制性受體，例如但不限於：B7-H4、BTLA、CD3、CD4、CD8、CD16a、CD25、CD27、CD28、CD32、CD56、CD137(亦稱為TNFRSF9)、CTLA-4、GITR、HVEM、ICOS、LAG3、NKG2D、OX40、PD-1、TIGIT、TIM3和VISTA。
在一些實施態樣中，目標抗體係為本發明中之抗CD71抗體。在一些實施態樣中，目標抗體可為可活化之抗體之形式。在一些實施態樣中，scFv(s)可為Pro-scFv之形式(見例如WO 2009/025846、WO 2010/081173)。
在一些實施態樣中，scFv係對CD3ε之結合有專一性，且包含或衍生於會與CD3ε結合之抗體或其片段，例如CH2527、FN18、H2C、OKT3、2C11、UCHT1或V9。
在一些實施態樣中，抗-CTLA-4 scFv包含胺基酸序列：
Figure 105113835-A0202-12-0232-2533
Figure 105113835-A0202-12-0233-2534
Figure 105113835-A0202-12-0233-2535
(SEQ ID NO：643)
在一些實施態樣中，抗-CTLA-4 scFv包含胺基酸序列與SEQ ID NO：643至少為90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高相同。
在一些實施態樣中，抗-CD3ε scFv包含胺基酸序列：
Figure 105113835-A0202-12-0233-2536
Figure 105113835-A0202-12-0233-2537
(SEQ ID NO：644)
在一些實施態樣中，抗-CD3ε scFv包含胺基酸序列與SEQ ID NO：644至少為90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高相同。
在一些實施態樣中，scFv係對一或多個T細胞、一或多個NK細胞和/或一或多個巨噬細胞之結合有專 一性。在一些實施態樣中，scFv係對選自下列所組成之群組的標的結合有專一性：B7-H4、BTLA、CD3、CD4、CD8、CD16a、CD25、CD27、CD28、CD32、CD56、CD137、CTLA-4、GITR、HVEM、ICOS、LAG3、NKG2D、OX40、PD-1、TIGIT、TIM3或VISTA。
在一些實施態樣中，多專一性可活化之抗體亦包含共軛至AB的劑。在一些實施態樣中，該劑為治療劑。在一些實施態樣中，該劑為抗癌劑。在一些實施態樣中，該劑為毒素或其片段。在一些實施態樣中，該劑係與多專一性可活化之抗體透過連接子共軛。在一些實施態樣中，該劑係透過可切割連接子與AB共軛。在一些實施態樣中，連接子係為不可切割連接子。在一些實施態樣中，該劑係為微小管抑制劑。在一些實施態樣中，該劑為核苷酸破壞劑，例如DNA烷化劑或DNA插入劑或其他破壞劑在一些實施態樣中，連接子維可切割連接子。在一些實施態樣中，該劑係選自由列於表5之群組。在一些實施態樣中，該劑為尾海兔素(尾海兔素)。在一些實施態樣中，該劑為單甲醇或其衍生物。在一些實施態樣中，該劑為單甲醇E或其衍生物。在一些實施態樣中，該劑為單甲基單甲醇E(MMAE)或其衍生物。在一些實施態樣中，該劑為單甲基單甲醇D(MMAD)或其衍生物。在一些實施態樣中，此劑係為類美登素(類美登素)或類美登素衍生物。在一些實施態樣中，此劑係為DM1或DM4。在一些實施態樣中，此劑係為倍癌黴素(duocarmycin)或其衍生物。在一些 實施態樣中，此劑係為卡奇黴素(calicheamicin)或其衍生物。在一些實施態樣中，此劑係為吡咯并苯并二吖呯。在一些實施態樣中，此劑係為吡咯并苯并二吖呯二聚物。
在一些實施態樣中，多專一性可活化之抗體亦包含可偵測部分。在一些實施態樣中，可偵測部分係為診斷劑。
在一些實施態樣中，多專一性可活化之抗體天然的包含一或多個雙硫鍵。在一些實施態樣中，多專一性可活化之抗體可經工程的改造包含一或多個雙硫鍵。
本發明亦提供編碼本文中多專一性可活化之抗體分離的核苷酸分子，以及包含分離的核苷酸序列之載體。本發明提供利用在會導致抗體或可活化之抗體表現的條件下培養細胞的方法，其中細胞包含該核苷酸分子。在一些實施態樣中，細胞包含該載體。
本發明亦提供生產本發明之多專一性可活化之抗體的方法，其係為透過(a)在會導致多專一性可活化之抗體的條件下培養包含編碼多專一性可活化之抗體之核苷酸建構物，和(b)回復多專一性可活化之抗體。合適的AB、MM和/或CM包含任一本發明所述之AB、MM和/或CM。
本發明亦提供多專一性可活化之抗體和/或多專一性可活化之抗體組合物。該組合物包含至少一個一級抗體或專一性結合至一級抗體或一級抗原決定位之彼等抗原結合片段(AB1)和二級抗體或專一性結合至二級抗體或 二級抗原決定位之彼等抗原結合片段(AB2)，其中AB1係共軛或以其他方式附著至掩蔽部分(MM1)，該MM1之共軛會減少AB1與其標的結合的能力。在一些實施態樣中，MM1係透過第一可切割部分(CM1)序列共軛至AB1，該可切割部分係包含蛋白酶的受質，例如於個體中在治療位置或診斷位置與AB1之標的共存的蛋白酶。本文所提供知多專一性可活化之抗體在循環系統係為穩定的，在治療和/診斷意欲位置被活化，但正常位置如健康組織不會，且當被活化時會具有結合至AB1其至少可和相對應未修飾多專一性抗體比較之標的。合適的AB、MM和/或CM包含任一本發明所述之AB、MM和/或CM。
本發明亦提供組合物和包含含有至少一個一級抗體或專一性結合至標的的抗體片段(AB1)或抗體片段(AB2)，其中至少多專一性可活化之抗體中的AB會共軛至掩蔽部分(MM)而減少AB和標的的結合。在一些實施態樣中，每個AB係共軛至MM而減少其彼等和相對應之AB的結合能力。舉例來說，在雙專一性可活化之抗體實施態樣中，AB1係共軛至會減少AB1結合其標的能力的第一掩蔽部分(MM1)，同時AB2會共軛至會減少AB2結合其標的能力的第二掩蔽部分(MM2)，AB2會共軛至會減少AB3結合其標的能力的第三掩蔽部分(MM3)，對每個多專一性可活化之抗體之AB皆可以此類推。合適的AB、MM和/或CM包含任一本發明所述之AB、MM和/或CM。
在一些實施態樣中，多專一性可活化之抗體進一步包含至少一個為蛋白酶受質的可切割部分(CM)，其中CM將MM連結到AB。例如，在一些實施態樣中，多專一性可活化之抗體包含至少一個一級抗體或專一性結合至標的的抗體片段(AB1)和二級抗體或抗體片段(AB2)，其中至少多專一性可活化之抗體中的一級AB會透過第一可切割部分(CM1)共軛至掩蔽部分(MM1)而減少AB1和其標的的結合能力。在雙專一性可活化之抗體實施態樣中，AB1係透過CM1共軛至MM1且AB2係透過第二可切割部分(CM2)共軛至第二掩蔽部分(MM2)而減少AB2和標的的結合能力。在一些實施態樣中，多專一性可活化之抗體包含多於兩個AB區域，在這些實施態樣中，AB1係透過CM1共軛至MM1，AB2係透過CM2共軛至MM2且AB3係透過第三可切割部分(CM3)共軛至會減少AB3和其標的的結合能力的第三掩蔽部分(MM3)。對每個多專一性可活化之抗體之AB皆可以此類推。合適的AB、MM和/或CM包含任一本發明所述之AB、MM和/或CM。
具有非結合立體部分或非結合立體部分之結合配偶體的可活化之抗體
本發明亦提供包含非結合立體部分(NB)或非結合立體部分之結合配偶體(BP)的可活化之抗體，其中BP吸收或以其他方式吸引NB至可活化之抗體。本文所述可活化之抗體包含，例如，含有非結合立體部分(NB)、 可切割連接子(CL)和抗體或結合至標的的抗體部分(AB)之可活化之抗體；含有非結合立體部分之結合配偶體(BP)、CL和AB的可活化之抗體；以及含有吸收NB的BP、CL和結合標的的AB之可活化之抗體。可活化之抗體其中NB係共軛連結至CL和可活化之抗體之AB或透過和共軛連結至CL和可活化之抗體之BP的交互作用連接，於本文中稱為「含有NB之可活化之抗體」。透過可活化或可交換表示可活化之抗體在當可活化之抗體被抑制、掩蔽或未經切割狀態(如一級構型)時表現一級結合至標的，可活化之抗體在當可活化之抗體未被抑制、被掩蔽和/或切割狀態(如二級構型，如活化的抗體)時表現二級結合至標的，其中二級結合至標的大於一級結合至標的。可活化之抗體組合物比起常規抗體治療可表現增加的生物可利用率和更多有利的生物分佈。
在一些實施態樣中，可活化之抗體提供減少當AB未受掩蔽或其他方式抑制其在非治療位置和/或非診斷位置結合而來的毒性和/或有害的副作用。
抗CD71可活化之抗體包含可透過利用PCT公告案號WO 2013/192546中所陳述之方法來製造的非結合立體部分，此揭示內容係併入本文以供參考。
抗體、共軛的抗體、可活化之抗體和共軛的可活化之抗體之使用
本發明之治療實體的投予係將以嵌入配方中 以提供改進的轉移、傳遞、耐受性和其他等之合適的載體、賦形劑和其他劑一起給予。大多數合適的配方可在所有製藥化學家熟知的藥典中找到：Remington’s Pharmaceutical Sciences(15th ed,Mack Publishing Company,Easton,PA(1975))，尤其是其中的Blaug,Seymour的第87章。這些配方包含，例如粉末、糊劑、軟膏、凝膠、蠟、油、脂質、包含脂質(陽離子或陰離子)的囊泡(例如LipofectinTM)、DNA共軛物、無水吸收糊劑、水包油和油包水乳劑、聚乙二醇乳劑(各種分子量的聚乙二醇)、半固體凝膠和包含聚乙二醇的半固體混合物。任何前述可適用於本發明的治療和療法的混合物，條件為試劑中的活性成分未被配方失活且配方係與投予途徑為生理學上可相容和耐受的。亦可參見Baldrick P.之“Pharmaceutical excipient development：the need for preclinical guidance.”Regul.Toxicol Pharmacol.32(2)：210-8(2000)、Wang W.之“Lyophilization and development of solid protein pharmaceuticals.”Int.J.Pharm.203(1-2)：1-60(2000)、Charman WN之“Lipids,lipophilic drugs,and oral drug delivery-some emerging concepts.”J Pharm Sci.89(8)：967-78(2000)、Powell等人之“Compendium of excipients for parenteral formulations”PDA J Pharm Sci Technol.52：238-311(1998)和其中的引用已得到更多為藥學化學家所熟知和配方、賦形劑以及載體相關之資訊。
本發明的治療配方，其包含抗CD71抗體和/或可活化抗CD71抗體，例如非限制性實例來說，抗體、共軛的抗體、可活化之抗體和/或共軛的可活化之抗體係用於防止、治療或其他方式改善疾病或和畸變標的之表現和/或活性的失調。舉例來說，本發明之治療配方，包含抗體、共軛的抗體、可活化之抗體和/或共軛的可活化之抗體，係用於治療或其他方式改善癌症或其他腫瘤情況、發炎、發炎失調和/或自體免疫疾病。在一些實施態樣中，癌症係為實體腫瘤或惡性血液病，其中標的被表現。在一些實施態樣中，癌症係為實體腫瘤其中標的被表現。在一些實施態樣中，癌症係為惡性血液病，其中標的被表現。在一些實施態樣中，標的係被表現在薄壁組織上(例如，在癌症，在器官或組織中常負責其功能的器官或組織的部分)。在一些實施態樣中，標的係被表現在細胞、組織或器官中。在一些實施態樣中，標的係被表現在基質上(如在細胞、組織或器官的結締支撐骨架)。在一些實施態樣中，標的係被表現在成骨細胞上。在一些實施態樣中，標的係被表現在癌症幹細胞上。在一些實施態樣中，和抗體和/或可活化之抗體共軛的劑係為微小管抑制劑。在一些實施態樣中，和抗體和/或可活化之抗體共軛的劑係為核苷酸破壞劑。
有效之預防、改善或治療係以和任何已知診斷、治療疾病或失調相關標的表現和/或活性之方法決定，例如，畸變的標的表現和/或活性。延長個體之存活 或其他方式延遲疾病或和與標的表現和/或活性相關之失調的進展，例如，畸變的標的表現和/或活性，在個體中暗示抗體、共軛抗體、可活化之抗體和/或共軛的可活化之抗體提供臨床上益處。
抗體、共軛抗體、可活化之抗體和/或共軛的可活化之抗體可以藥學組合物形式來投予。準備彼等組合物之原則和考量，以及選擇組分的指導係於下列例子提供：in Remington：The Science And Practice Of Pharmacy 19th ed.(Alfonso R.Gennaro,et al.,editors)Mack Pub.Co.,Easton,Pa.：1995；Drug Absorption Enhancement：Concepts,Possibilities,Limitations,And Trends,Harwood Academic Publishers,Langhorne,Pa.,1994；和Peptide And Protein Drug Delivery(Advances In Parenteral Sciences,Vol.4),1991,M.Dekker,New York。
在使用抗體片段的實施態樣中，選擇專一性結合標的蛋白之結合區域的最小片段。例如，根據抗體之變異區序列，胜肽分子可被設計以保留對標的蛋白結合的能力。彼等胜肽係經化學合成和/或以重組DNA技術製造。(見例如Marasco等人之Proc.Natl.Acad.Sci.USA,90：7889-7893(1993))。配方亦可包含超過一種對於所治療的特定適應症的活性化合物，例如，在一些實施態樣中，彼等具有補體活性且彼此沒有不良影響的。在一些實施態樣中，或在此之外，化合物可包含增加其功能的劑，諸如，例如細胞毒性劑、細胞激素、化學治療劑、或生長 抑制劑。彼等分子係以對預期目的有效的量合適的存在於組合之中。
活性成分可被包覆在準備的微膠囊中，例如，利用凝聚(coacervation)技術或界面具合作用，例如羥丙甲纖維素或明膠微膠囊和聚(甲基丙烯酸甲酯)微膠囊，分別在膠體藥物投遞系統(例如，脂質體、白蛋白微球、微乳液、奈米粒子以及奈米膠囊)或在粗乳液(macroemulsions)中。
用於活體內投予之配方必須是無菌的。這可利用使用無菌濾膜過濾而輕易達成。
緩釋製備係可達成。緩釋製備的合適實例包含含有固體疏水性聚合物的半穿透性基質，其中基質係為成形製品的形式，例如，薄膜或微膠囊。緩釋基質實例包含聚酯、水凝膠(例如，聚(2-羥乙基-甲基丙烯酸酯)或聚(乙烯醇)、聚乳酸(美國專利案號3,773,919)、L-穀胺酸和γ乙基-L-麩胺酸共聚合物、不可降解的乙烯-乙酸乙烯酯、可降解的乳酸-乙醇酸共聚物例如LUPRON DEPOTTM(由乳酸-乙醇酸共聚物和醋酸和柳菩林組成的可注射的微球)、以及聚-D-(-)-3-羥基丁酸。雖然聚合物如乙烯-乙酸乙烯酯和乳酸-乙醇酸能使分子的釋放超過100天，但是某些水凝膠釋放蛋白質的時間為較短的期間。
在一些實施態樣中，抗體、共軛的抗體、可活化之抗體和/或共軛的可活化之抗體包含可偵測標記。使用完整抗體、或其片段(如Fab、scFv或F(ab)2)。關於 探針或抗體的術語「標記的」係意欲包括透過共軛(如物理性)可偵測物質至探針或抗體的直接標記，以及透過與直接標記的另一種試劑反應的探針或抗體的間接標記。間接標記實例包含使用螢光標記的二級抗體偵測一級抗體和以生物素末端標記的DNA，使其可利用螢光標記的鏈親和素來偵測。術語「生物性樣本」意欲包含分離自個體的組織、細胞和生物性流體以及個體內的組織、細胞和生物性流體。因此，包含在術語「生物性樣本」的使用是血液和血液的部分或組分，其包含血清、血漿或淋巴。亦即，本發明之偵測方法可用來偵測活體內以及試管內生物性樣本的被分析物mRNA、蛋白質或基因組DNA。例如，用來偵測被分析物mRNA的技術包含北方雜交法和原位雜交法。用來偵測被分析物蛋白質的試管內技術包含酵素連結免疫吸附分析法(ELISAs)、西方墨點法、免疫沈澱法、免疫化學染色和免疫螢光法。用來偵測被分析物基因組DNA的試管內技術包含南方雜交法。進行免疫檢測的步驟係描述於，例如，ELISA：Theory and Practice：Methods in Molecular Biology,Vol.42,J.R.Crowther(Ed.)Human Press,Totowa,NJ,1995；Immunoassay,E.Diamandis and T.Christopoulus,Academic Press,Inc.,San Diego,CA,1996；以及Practice and Theory of Enzyme Immunoassays,P.Tijssen,Elsevier Science Publishers,Amsterdam,1985。此外，用來偵測被分析物蛋白質的活體內技術包含將標記的抗-被分析物蛋白質抗體導入個體中。例如，可 以用放射性標記抗體，其在個體的存在和定位可透過標準成像技術來檢測。
本發明之抗體、共軛的抗體、可活化之抗體和/或共軛的可活化之抗體係對不同的診斷性以及預防性配方為有用的。在一個實施態樣中，抗體、共軛的抗體、可活化之抗體和/或共軛的可活化之抗體係在具有發展出一或多種前述失調的風險下投予病患。病患或器官對一或多個前述失調的傾向可利用遺傳型、血清學或生物化學標記來決定。
在本發明的一些實施態樣中，抗體、共軛的抗體、可活化之抗體和/或共軛的可活化之抗體係投予被診斷具有和前述失調相關一個或多個臨床上適應症的人類個體。根據診斷，抗體、共軛的抗體、可活化之抗體和/或共軛的可活化之抗體係被投予以減輕或逆轉臨床上適應症的效果。
本發明之抗體、共軛的抗體、可活化之抗體和/或共軛的可活化之抗體亦對偵測病患樣本中標的為有用的且相對應地對診斷為有用的。例如，本發明之抗體和/或可活化之抗體以及其共軛的版本係用於試管內檢測法，如ELISA來偵測在病患樣本中標的的值。
在一些實施態樣中，本發明之抗體、共軛的抗體、可活化之抗體和/或共軛的可活化之抗體係固定在固體支撐物上(例如微量滴定板的孔)。固定的抗體、共軛的抗體，可活化之抗體和/或共軛的可活化之抗體係做為 任何可存在測試樣本中標的之捕獲抗體。將固定的抗體和/或可活化之抗體、和/或其共軛的版本與病患樣本接觸之前，固體支撐物係經沖洗以及用阻斷劑如牛奶蛋白或白蛋白處理來防止被分析物非專一性的吸收。
隨後將孔以懷疑帶有抗原的測試樣本或以包含標準量之抗原的溶液處理。該樣本係，如，來自懷疑具有被認為是病理診斷性循環抗原水平之對象的血清樣本。測試樣本或標準品經過沖洗後，將固體支撐物以可偵測地標記之二級抗體處理。標記的二級抗體係做為偵測抗體。測量可偵測標記的值，並且測量樣本中標的抗原的濃度，透過與來自標準品的標準曲線進行比較來確定。
應該理解的是，在試管內診斷性檢測中基於利用本發明之抗體和可活化之抗體得到的結果，以及其共軛的版本，可能基於標的抗原在個體中表現的值來對疾病分級。對給予的疾病，從診斷為在疾病進展之不同階段和/或在疾病治療性處理不同點的個體採取血液樣本。使用對進展或治療的每個階段提供統計學顯著結果的樣本群，可指定考量每個階段特徵的一定範圍的抗原濃度。
本發明之抗體、共軛的抗體、可活化之抗體和/或共軛的可活化之抗體可用於診斷和/或成像方法。在一些實施態樣中，彼等方法係為活體內方法。在一些實施態樣中，彼等方法係為原位方法。在一些實施態樣中，彼等方法係為活體外方法。例如，可使用酵素性可切割CM的可活化之抗體來偵測是否存在能夠切割CM的酶。透過 在給予宿主生物體的給予細胞或組織中活化的抗體(如從可活化之抗體切割得到的抗體)測量的累積，彼等可活化之抗體可用於診斷，其可包含活體內偵測(如定性或定量)酵素活性(或，在一些實施態樣中，還原電勢增加的環境，譬如可提供雙硫鍵還原的環境)。彼等活化的抗體之累積指示不僅組織表現酵素活性(或根據CM之性質，增加還原電勢)，同時指示組織表現活化的抗體結合的標的。
例如，可以選擇CM為在腫瘤部位、在生物學限制的位置之細菌或病毒感染部位(例如，諸如在膿瘡、在器官中等)等發現的蛋白酶之受質。AB可為結合標的抗原的AB。使用本發明所述之方法，或使用本領域技術人員所熟悉方法，可將可偵測標記(例如，螢光標記或放射性標記或放射性追蹤劑)共軛至AB或至抗體和/或可活化之抗體的其他區域。在上述篩選方法的前提下討論合適的可偵測標記，並且在下文中提供額外的具體實例。使用對疾病狀態的蛋白質或胜肽專一性的AB，以及至少一活性在有興趣之患病組織中活性天升高的蛋白酶，可活化之抗體將顯示相對其中其中不存在可偵測之值的CM專一性酶或以比患病組織更低的值存在或無活性(例如，以酶原型式或和抑制劑複合)的組織對患病組織增加的結合率。因此小蛋白質和胜肽係快速透過腎臟過濾系統從血液中迅速被清除，並且由於對CM酶專一性不存在可偵測的值(或在非患病組織以更低的值存在，或以無活性構型存 在)，在患病組織中活化的抗體之累績相對於非患病組織係被增強。
在其他例子，可活化之抗體可用來偵測樣本中切割劑的存在或不存在。例如，當可活化之抗體包含易被酶切割之CM時，可活化之抗體可用來偵測樣本中酶的存在(定性或定量)。在其他例子中，當可活化之抗體包含易被還原劑切割之CM時，可活化之抗體可用來偵測樣本中還原劑的存在(定性或定量)。為了利於分析彼等方法，可活化之抗體可被偵測性標記，且可被結合至支撐物上(如固體支撐物，如玻片或珠子)。可偵測標記可被定位在不會被下列所切割的可活化之抗體部分，例如，可偵測標記可為消光螢光標記或其他需等切割發生才可被偵測的標記。該檢測法可透過例如在對切割具足夠時間將發生下，將固定的、可偵測標記的可活化之抗體與懷疑含有酶和/或還原劑接觸來進行，之後清洗以移除多餘的樣本和污染物。在樣本中切割劑(如酶或還原劑)的存在或不存在係隨後以可活化之抗體內可偵測訊號在與樣本接觸之前的改變來判定，例如在樣本中因為可活化之抗體被切割劑切割造成之可偵測訊號的存在和/或增加。
彼等偵測方法可改變以同時提供偵測能夠結合當受切割時可活化之抗體之AB的標的。因此，檢測法亦能改變以評估切割劑的存在或不存在以及有興趣之標的的存在或不存在。切割劑的存在與否可利用前述之可活化之抗體的存在和/或可偵測之值的增加來偵測，且標的的 存在或不存在可透過偵測標的-AB複合物來偵測，如，利用可偵測標記的抗-標的抗體。
可活化之抗體亦對用於確認可活化之抗體之活化的原位成像法為有用的，如透過蛋白酶切割，和與特定標的結合。原位成像法係為能夠定位蛋白水解活性和生物性樣本中的標的諸如細胞培養或組織部分的技術。利用此技術，與給予標的之結合和根據可偵測標記存在的蛋白水解活性事可能被確認的(如螢光標記)。
彼等技術係對從疾病位置衍生之冷凍細胞或組織(如癌症組織)或其他健康組織為有用的。彼等技術亦對新鮮細胞或組織樣本為有用的。
In these techniques,an activatable antibody is labeled with a detectable label.The detectable label can be a fluorescent dye,(e.g.a fluorophore,Fluorescein Isothiocyanate(FITC),Rhodamine Isothiocyanate(TRITC),an Alexa Fluor® label),a near infrared(NIR)dye(e.g.,Qdot® nanocrystals),a colloidal metal,a hapten,a radioactive marker,biotin and an amplification reagent such as streptavidin,or an enzyme(e.g.horseradish peroxidase or alkaline phosphatase).在彼等技術中，可活化之抗體係以可偵測標記來標記。可偵測標記本含螢光染料(如螢光基團、螢光異硫氰酸鹽(FITC)、異硫氰酸羅丹明(TRITC)、Alexa Fluor®標記)、近紅外線(NIR)染料(如Qdot®奈米晶體)、膠體金屬、半抗原、放射性標記、生物 素和擴增劑例如鏈親和素或酶(例如，辣根過氧化物酶或鹼性磷酸酶)。
偵測與標記的可活化之抗體共同培養之樣品的標記指示樣本中含標記且包含對可活化之抗體之CM具專一性的蛋白酶。在一些實施態樣中，蛋白酶的存在可使用廣效性蛋白酶抑制劑例如本文所描述那些和/或透過對蛋白酶具有專一性的劑(例如抗體如A11，其係對絲胺酸蛋白酶具專一性且抑制絲胺酸蛋白酶的蛋白質水解活性，參見如International Publication Number WO 2010/129609,published 11 November 2010)來確認。利用廣效性蛋白酶抑制劑如本文所述者和/或利用更具選擇性的抑制劑可用來鑑定對CM具專一性的可活化之抗體。在一些實施態樣中，標的的存在可使用對標的具有專一性的劑來證實，如其他抗體，或者可偵測標記可與未標記標的競爭。在一些實施態樣中，未標記的可活化之抗體可用在透過標記的二級抗體或更複雜的檢測系統進行的檢測。
類似的技術對活體內成像亦為有用的，其中在個體中(如哺乳類，包含人類)偵測螢光訊號，指示疾病位置包含標的且包含對可活化之抗體之CM具專一性的蛋白酶。
彼等技術還可用於套組和/或基於可活化之抗體中蛋白酶-專一性CM用作偵測、鑑定或表徵在不同細胞、組織或器官中蛋白酶活性的試劑。
本發明提供利用抗體和/或可活化之抗體在不 同種類的診斷和/或預防指示中的方法。例如，本發明提供偵測個體或樣本中之切割劑和有興趣之標的的存在或不存在的方法，利用(i)將個體或樣本與可活化之抗體接觸，其中可活化之抗體包含掩蔽部分(MM)、受切割劑切割的可切割部分(CM)如蛋白酶和抗原結合部分或或專一性結合至有興趣之標的的其片段(AB)，其中當可活化之抗體為未切割且在非活化狀態時，包含結構排列從N端至C端如下：MM-CM-AB或AB-CM-MM；(a)其中MM係為抑制AB對CD71結合的胜肽，且其中MM不具有AB之天然發生結合配偶體的胺基酸序列，並且不是AB之天然發生結合配偶體的修飾形式；且(b)其中，當AB為未切割且在非活化狀態時，MM會干擾AB對標的的專一性結合，且當AB為切割的且在活化的狀態下，MM不會干擾或競爭AB對標的的專一性結合；且(ii)在個體或樣本中測量活化的可活化之抗體的值，其中在個體或樣本中可偵測活化的可活化之抗體的值指示切割劑和標的係存在於個體或樣本中且其中不可偵測活化的可活化之抗體的值指示切割劑和標的兩者皆不存在於個體或樣本中。在一些實施態樣中，可活化之抗體係為與劑共軛的可活化之抗體。在一些實施態樣中，可活化之抗體不會與劑共軛。在一些實施態樣中，可活化之抗體包含可偵測標記。在一些實施態樣中，可偵測標記係定位於AB。在一些實施態樣中，在個體或樣本中測量可活化之抗體之值係可透過專一性結合至活化的抗體之第二試劑來達成，其中劑包含可偵 測標記。在一些實施態樣中，第二試劑係為包含可偵測標記的抗體。
本發明亦提供在個體或樣本中偵測切割劑存在或不存在的方法，利用(i)在有興趣之標的的存在下，將個體或樣本與可活化之抗體接觸，如標的，其中可活化之抗體包含掩蔽部分(MM)、受切割劑切割的可切割部分(CM)如蛋白酶和抗原結合部分或或專一性結合至有興趣之標的的其片段(AB)，其中當可活化之抗體為未切割且在非活化狀態時，包含結構排列從N端至C端如下：MM-CM-AB或AB-CM-MM；(a)其中MM係為抑制AB對標的結合的胜肽，且其中MM不具有AB之天然發生結合配偶體的胺基酸序列，並且不是AB之天然發生結合配偶體的修飾形式；且(b)其中，在處於未切割且在非活化狀態時，MM會干擾AB對標的的專一性結合，且為切割的且在活化的狀態下，MM不會干擾或競爭AB對標的的專一性結合；且(ii)在個體或樣本中測量活化的可活化之抗體的值，其中在個體或樣本中可偵測活化的可活化之抗體的值指示切割劑和標的係存在於個體或樣本中且其中不可偵測活化的可活化之抗體的值指示切割劑和標的兩者皆不存在於個體或樣本中。在一些實施態樣中，可活化之抗體係為與治療劑共軛的可活化之抗體。在一些實施態樣中，可活化之抗體不會與劑共軛。在一些實施態樣中，可活化之抗體包含可偵測標記。在一些實施態樣中，可偵測標記係定位於AB。在一些實施態樣中，在個體或樣本 中測量可活化之抗體之值係可透過專一性結合至活化的抗體之第二試劑來達成，其中劑包含可偵測標記。在一些實施態樣中，第二試劑係為包含可偵測標記的抗體。
本發明亦提供在個體或樣本中偵測切割劑和標的存在或不存在的套組，其中套組包含至少含有掩蔽部分(MM)、受切割劑切割的可切割部分(CM)如蛋白酶和抗原結合部分或或專一性結合至有興趣之標的的其片段(AB)的套組，其中當可活化之抗體為未切割且在非活化狀態時，包含結構排列從N端至C端如下：MM-CM-AB或AB-CM-MM；(a)其中MM係為抑制AB對標的結合的胜肽且其中MM不具有AB之天然發生結合配偶體的胺基酸序列，並且不是AB之天然發生結合配偶體的修飾形式；且(b)其中，在處於未切割且在非活化狀態時，MM會干擾AB對標的的專一性結合，且為切割的且在活化的狀態下，MM不會干擾或競爭AB對標的的專一性結合；且(ii)在個體或樣本中測量活化的可活化之抗體的值，其中在個體或樣本中可偵測活化的可活化之抗體的值指示切割劑係存在於個體或樣本中且其中不可偵測活化的可活化之抗體的值指示切割劑不存在和/或沒有足夠的存在於個體或樣本中。在一些實施態樣中，可活化之抗體係為與治療劑共軛的可活化之抗體。在一些實施態樣中，可活化之抗體不會與劑共軛。在一些實施態樣中，可活化之抗體包含可偵測標記。在一些實施態樣中，可偵測標記係定位於AB。在一些實施態樣中，在個體或樣本中測量可活化之 抗體之值係可透過專一性結合至活化的抗體之第二試劑來達成，其中劑包含可偵測標記。在一些實施態樣中，第二試劑係為包含可偵測標記的抗體。
本發明亦提供在個體或樣本中偵測切割劑存在或不存在的方法，利用(i)將個體或樣本與可活化之抗體接觸，其中可活化之抗體包含掩蔽部分(MM)、受切割劑切割的可切割部分(CM)如蛋白酶和抗原結合部分或或專一性結合至有興趣之標的的其片段(AB)、和可偵測標記，其中當可活化之抗體為未切割且在非活化狀態時，包含結構排列從N端至C端如下：MM-CM-AB或AB-CM-MM；其中MM係為抑制AB對標的結合的胜肽且其中MM不具有AB之天然發生結合配偶體的胺基酸序列，並且不是AB之天然發生結合配偶體的修飾形式；其中，在處於未切割且在非活化狀態時，MM會干擾AB對標的的專一性結合，且為切割的且在活化的狀態下，MM不會干擾或競爭AB對標的的專一性結合；且其中可偵測標記係定位於可活化之抗體受到CM切割後釋放的可活化之抗體部分；且(ii)在個體或樣本中測量可偵測標記的值，其中在個體或樣本中可偵測標記的值指示切割劑係不存在和/或不足夠存在於個體或樣本中且其中無可偵測的可偵測標記的值指示切割劑存在存在於個體或樣本中。在一些實施態樣中，可活化之抗體係為與治療劑共軛的可活化之抗體。在一些實施態樣中，可活化之抗體不會與劑共軛。在一些實施態樣中，可活化之抗體包含可偵測標記。在一些 實施態樣中，可偵測標記係定位於AB。在一些實施態樣中，在個體或樣本中測量可活化之抗體之值係可透過專一性結合至活化的抗體之第二試劑來達成，其中劑包含可偵測標記。在一些實施態樣中，第二試劑係為包含可偵測標記的抗體。
本發明亦提供在個體或樣本中偵測切割劑和標的存在或不存在的套組，其中套組包含至少本文所述之可活化之抗體和/或共軛的可活化之抗體(如和治療劑共軛的可活化之抗體)用於接觸個體或生物性樣本以及在個體或生物性樣本中偵測活化的可活化之抗體和/或共軛的可活化之抗體的方法，其中在個體或生物性樣本中可偵測之活化的可活化之抗體的值指示切割劑和標的係存在於個體或生物性樣本中且其中在個體或生物性樣本中沒有可偵測之活化的可活化之抗體的值指示切割劑、標的或兩者為不存在於和/或不足夠的存在於個體或生物性樣本中，因此可活化之抗體的標的結合和/或蛋白酶切割在個體或生物性樣本中不可被偵測。
本發明亦提供在個體或樣本中偵測切割劑存在或不存在的方法，利用(i)在標的的存在下，將個體或樣本與可活化之抗體接觸，和(ii)在個體或樣本中測量活化的可活化之抗體的值，其中其中在個體或生物性樣本中可偵測之活化的可活化之抗體的值指示切割劑係存在於個體或生物性樣本中且其中在個體或生物性樣本中沒有可偵測之活化的可活化之抗體的值指示切割劑不存在於和/ 或不足夠的以可偵測之值存在於個體或生物性樣本中，因此可活化之抗體的蛋白酶切割在個體或生物性樣本中不可被偵測。該可活化之抗體包含掩蔽部分(MM)、受切割劑切割的可切割部分(CM)如蛋白酶和抗原結合部分或或專一性結合至有興趣之標的的其片段(AB)，其中當可活化之抗體為未切割且在非活化狀態時，包含結構排列從N端至C端如下：MM-CM-AB或AB-CM-MM；(a)其中MM係為抑制AB對標的結合的胜肽且其中MM不具有AB之天然發生結合配偶體的胺基酸序列，並且不是AB之天然發生結合配偶體的修飾形式；且(b)其中，在處於未切割之可活化之抗體的MM會干擾AB對標的的專一性結合，且其中可活化之抗體的MM在切割的(如活化的)狀態下不會干擾或競爭AB對標的的專一性結合。在一些實施態樣中，可活化之抗體係為與治療劑共軛的可活化之抗體。在一些實施態樣中，可偵測標記係附著到掩蔽部份。在一些實施態樣中，可偵測標記係附著到可切割部分N端至蛋白酶切割位置。在一些實施態樣中，AB的單一抗原結合位係被掩蔽。在一些實施態樣(其中本發明之抗體具有至少兩個抗原結合位)中，至少一個抗原結合位係被掩蔽而至少一個抗原結合位係不被掩蔽。在一些實施態樣中，所有抗原結合位皆被掩蔽。在一些實施態樣中，測量步驟包含利用含有可偵測標記的第二試劑。
本發明亦提供用於在個體或樣本中偵測切割劑和標的存在或不存在之方法的套組，其中套組包含至少 本文所述之可活化之抗體和/或共軛的可活化之抗體用於在標的存在下將個體或生物性樣本和可活化之抗體接觸的方法，並且測量活化的可活化之抗體在個體或生物性樣本中的值，其中在個體或生物性樣本中可偵測之活化的可活化之抗體的值指示切割劑係存在於個體或生物性樣本中且其中在個體或生物性樣本中沒有可偵測之活化的可活化之抗體的值指示切割劑係不存在於和/或不足夠的存在於個體或生物性樣本中，因此可活化之抗體的標的結合和/或蛋白酶切割在個體或生物性樣本中不可被偵測。彼等可活化之抗體包含掩蔽部分(MM)、受切割劑切割的可切割部分(CM)如蛋白酶和抗原結合部分或或專一性結合至有興趣之標的的其片段(AB)，其中當可活化之抗體為未切割(如非活化)狀態時，包含結構排列從N端至C端如下：MM-CM-AB或AB-CM-MM；(a)其中MM係為抑制AB對標的結合的胜肽且其中MM不具有AB之天然發生結合配偶體的胺基酸序列；且(b)其中，在處於未切割之可活化之抗體的MM會干擾AB對標的的專一性結合，且其中可活化之抗體的MM在切割的(如活化的)狀態下不會干擾或競爭AB對標的的專一性結合。在一些實施態樣中，可活化之抗體係為與治療劑共軛的可活化之抗體。在一些實施態樣中，可活化之抗體不會與劑共軛。在一些實施態樣中，可偵測標記係附著到掩蔽部份。在一些實施態樣中，可偵測標記係附著到可切割部分N端至蛋白酶切割位置。在一些實施態樣中，AB的單一抗原結合位係被掩蔽。在 一些實施態樣(其中本發明之抗體具有至少兩個抗原結合位)中，至少一個抗原結合位係被掩蔽而至少一個抗原結合位係不被掩蔽。在一些實施態樣中，所有抗原結合位皆被掩蔽。在一些實施態樣中，測量步驟包含利用含有可偵測標記的第二試劑。
本發明亦提供用於在個體或樣本中偵測切割劑和標的存在或不存在之方法的套組，其中套組包含至少本文所述之可活化之抗體和/或共軛的可活化之抗體用於接觸個體或生物性樣本以及在個體或生物性樣本中測量活化的可活化之抗體和/或共軛的可活化之抗體的值之方法，其中可活化之抗體包含可偵測標記，其係定位在從CM之切割釋放出來的可活化之抗體部分上，其中在個體或生物性樣本中可偵測之活化的可活化之抗體的值指示切割劑係不存在於和/或不足夠的存在於個體或生物性樣本中，因此可活化之抗體的標的結合和/或蛋白酶切割在個體或生物性樣本中不可被偵測，且其中在個體或生物性樣本中沒有可偵測之活化的可活化之抗體的值指示切割劑係以可偵測的值存在於個體或生物性樣本中。
本發明亦提供在個體或樣本中偵測切割劑和標的存在或不存在的方法，利用(i)將個體或生物性樣本與可活化之抗體接觸，其中可活化之抗體包含可偵測標記其係定位在從CM之切割釋放出來的可活化之抗體部分上，和(ii)在個體或樣本中測量活化的可活化之抗體的值，其中其中在個體或生物性樣本中可偵測之活化的可活 化之抗體的值指示切割劑、標的或切割劑和標的兩者係不存在於和/或不足夠的存在於個體或生物性樣本中，因此可活化之抗體的標的結合和/或蛋白酶切割在個體或生物性樣本中不可被偵測，且其中在個體或生物性樣本中減少的可偵測之活化的可活化之抗體的值指示切割劑和標的係存在於個體或生物性樣本中。減少的可偵測標記之值，例如，約5%、約10%、約15%、約20%、約25%、約30%、約35%、約40%、約45%、約50%、約55%、約60%、約65%、約70%、約75%、約80%、約85%、約90%、約95%和/或約100%的減少。彼等可活化之抗體包含掩蔽部分(MM)、受切割劑切割的可切割部分(CM)如蛋白酶和抗原結合部分或或專一性結合至有興趣之標的的其片段(AB)，其中當可活化之抗體為未切割且在非活化狀態時，包含結構排列從N端至C端如下：MM-CM-AB或AB-CM-MM；(a)其中MM係為抑制AB對標的結合的胜肽且其中MM不具有AB之天然發生結合配偶體的胺基酸序列；且(b)其中，在處於未切割之可活化之抗體的MM會干擾AB對標的的專一性結合，且其中可活化之抗體的MM在切割的(如活化的)狀態下不會干擾或競爭AB對標的的專一性結合。在一些實施態樣中，可活化之抗體係為與治療劑共軛的可活化之抗體。在一些實施態樣中，可活化之抗體不會與劑共軛。在一些實施態樣中，可活化之抗體包含可偵測標記。在一些實施態樣中，可偵測標記係定位在AB上。在一些實施態樣中，在個體或樣本中測 量可活化之抗體之值係可透過專一性結合至活化的抗體之第二試劑來達成，其中劑包含可偵測標記。在一些實施態樣中，第二試劑係為包含可偵測標記的抗體。
本發明亦提供用於在個體或樣本中偵測切割劑和標的存在或不存在之方法的套組，其中套組包含至少本文所述之可活化之抗體和/或共軛的可活化之抗體用於接觸個體或生物性樣本以及在個體或生物性樣本中測量活化的可活化之抗體和/或共軛的可活化之抗體的值之方法，其中在個體或生物性樣本中可偵測之活化的可活化之抗體的值指示切割劑、標的或切割劑和標的兩者係不存在於和/或不足夠的存在於個體或生物性樣本中，因此可活化之抗體的標的結合和/或蛋白酶切割在個體或生物性樣本中不可被偵測，且其中在個體或生物性樣本中減少的可偵測之活化的可活化之抗體的值指示切割劑和標的係存在於個體或生物性樣本中。減少的可偵測標記之值，例如，約5%、約10%、約15%、約20%、約25%、約30%、約35%、約40%、約45%、約50%、約55%、約60%、約65%、約70%、約75%、約80%、約85%、約90%、約95%和/或約100%的減少。
本發明亦提供在個體或樣本中偵測切割劑存在或不存在的方法，利用(i)將個體或樣本與可活化之抗體接觸，其中可活化之抗體包含可偵測標記其係定位在從CM之切割釋放出來的可活化之抗體部分上，和(ii)在個體或樣本中測量活化的可活化之抗體的值，其中其中在 個體或生物性樣本中可偵測之活化的可活化之抗體的值指示切割劑係存在於個體或生物性樣本中且其中在個體或生物性樣本中沒有可偵測之活化的可活化之抗體的值指示切割劑不存在於和/或不足夠的以可偵測之值存在於個體或生物性樣本中，因此可活化之抗體的蛋白酶切割在個體或生物性樣本中不可被偵測，且其中在個體或生物性樣本中減少的可偵測之活化的可活化之抗體的值指示切割劑係存在於個體或生物性樣本中。減少的可偵測標記之值，例如，減少的可偵測標記之值，例如，約5%、約10%、約15%、約20%、約25%、約30%、約35%、約40%、約45%、約50%、約55%、約60%、約65%、約70%、約75%、約80%、約85%、約90%、約95%和/或約100%的減少。彼等可活化之抗體包含掩蔽部分(MM)、受切割劑切割的可切割部分(CM)如蛋白酶和抗原結合部分或或專一性結合至有興趣之標的的其片段(AB)，其中當可活化之抗體為未切割且在非活化狀態時，包含結構排列從N端至C端如下：MM-CM-AB或AB-CM-MM；(a)其中MM係為抑制AB對標的結合的胜肽且其中MM不具有AB之天然發生結合配偶體的胺基酸序列；且(b)其中，在處於未切割之可活化之抗體的MM會干擾AB對標的的專一性結合，且其中可活化之抗體的MM在切割的(如活化的)狀態下不會干擾或競爭AB對標的的專一性結合。在一些實施態樣中，可活化之抗體係為與治療劑共軛的可活化之抗體。在一些實施態樣中，可活化之抗體不會與劑共軛。在 一些實施態樣中，可活化之抗體包含可偵測標記。在一些實施態樣中，可偵測標記係定位在AB上。在一些實施態樣中，在個體或樣本中測量可活化之抗體之值係可透過專一性結合至活化的抗體之第二試劑來達成，其中劑包含可偵測標記。在一些實施態樣中，第二試劑係為包含可偵測標記的抗體。
本發明亦提供用於在個體或樣本中偵測有興趣的切割劑存在或不存在之方法的套組，其中套組包含至少本文所述之可活化之抗體和/或共軛的可活化之抗體用於接觸個體或生物性樣本以及在個體或生物性樣本中測量活化的可活化之抗體和/或共軛的可活化之抗體的值之方法，其中可活化之抗體包含定位在從CM切割下來的可活化之抗體部分的可偵測標記，其中在個體或生物性樣本中可偵測之活化的可活化之抗體的值指示切割劑、標的或切割劑和標的兩者係不存在於和/或不足夠的存在於個體或生物性樣本中，因此可活化之抗體的標的結合和/或蛋白酶切割在個體或生物性樣本中不可被偵測，且其中在個體或生物性樣本中減少的可偵測之活化的可活化之抗體的值指示切割劑和標的係存在於個體或生物性樣本中。減少的可偵測標記之值，例如，減少的可偵測標記之值，例如，約5%、約10%、約15%、約20%、約25%、約30%、約35%、約40%、約45%、約50%、約55%、約60%、約65%、約70%、約75%、約80%、約85%、約90%、約95%和/或約100%的減少。
在彼等方法和套組的實施態樣中，可活化之抗體包含可偵測標記。在彼等方法和套組的實施態樣中，可偵測標記包含成像劑，對比劑、酶、螢光標記、發色團、染料、一或多種金屬離子或基於配體。在彼等方法和套組的實施態樣中，成像劑包含放射性同位素。在彼等方法和套組的實施態樣中，放射性同位素係為銦或鎝。在彼等方法和套組的實施態樣中，對比劑包含碘、釓或氧化鐵。在彼等方法和套組的實施態樣中，酶包含過氧化物酶、鹼性磷酸酶或β-半乳糖苷酶。在彼等方法和套組的實施態樣中，在彼等方法和套組的實施態樣中，螢光標記包含黃色螢光蛋白質(YFP)、藍色螢光蛋白質(CFP)、綠色螢光蛋白質(GFP)、修飾的紅色螢光蛋白質(mRFP)、紅色螢光蛋白質tdimer2(RFP tdimer2)、HCRED或銪衍生物。在彼等方法和套組的實施態樣中，冷光標記包含N-甲基吖啶衍生物。在彼等方法之實施態樣中，標記包含Alexa Fluor®標記，例如Alex Fluor® 680或Alexa Fluor® 750。在彼等方法和套組的實施態樣中，基於配體之標記包含生物素、抗生物素蛋白、鏈親和素或一或多種半抗原。
在彼等方法和套組的實施態樣中，個體係為哺乳類。在彼等方法和套組的實施態樣中，個體係為人類。在一些實施態樣中，個體係為非人哺乳類，例如非人靈長類、寵物(如貓、狗、馬)家畜、役畜或動物園動物。在一些實施態樣中，個體係為齧齒目。
在彼等方法和套組的實施態樣中，方法係為 活體內方法。在彼等方法的一些實施態樣中，方法係為原位方法。在彼等方法的一些實施態樣中，方法係為活體外方法。在彼等方法的一些實施態樣中，方法係為試管內方法。
在一些實施態樣中，原位成像和/或活體內成像係對鑑定治療哪一個病患的方法係為有用的。例如，原位成像中，可活化之抗體係用於篩選病患樣本來鑑定具有合適的蛋白酶和標的在合適的定位之病患，如在腫瘤位置。
在一些實施態樣中，原位成像係用於鑑別或其他方式重新定義適合以本發明之可活化之抗體治療的病患群。例如，檢測後同時對標的(如標的)和切割受測試之可活化之抗體之可切割部分(CM)的蛋白酶(如在疾病位置堆積活化的抗體)皆為陽性係被認定為用彼等含有該CM的可活化之抗體來治療的合適的候選者。同樣的，以彼等方法對標的(如標的)和切割在受測試之可活化之抗體中CM受質的蛋白酶其中之一或兩者皆為陰性的病患係被認定為對於其他形式治療的合適的候選人。在一些實施態樣中，關於一級可活化之抗體測試為陰性的病患可以其他包含不同CM的可活化之抗體測試，直到鑑定出適合治療的可活化之抗體(例如，包含在病患的疾病位置被切割之CM的可活化之抗體)。在一些實施態樣中，對測試為陽性的病患，病患係接著被投予治療有效量的可活化之抗體。
在一些實施態樣中，活體內成像係用於鑑別 或其他方式重新定義適合以本發明之可活化之抗體治療的病患群。例如，檢測後同時對標的(如標的)和切割受測試之可活化之抗體之可切割部分(CM)的蛋白酶(如在疾病位置堆積活化的抗體)皆為陽性係被認定為用彼等含有該CM的可活化之抗體來治療的合適的候選者。同樣的，以彼等方法對標的(如標的)和切割在受測試之可活化之抗體中CM受質的蛋白酶其中之一或兩者皆為陰性的病患係被認定為對於其他形式治療的合適的候選人。在一些實施態樣中，關於一級可活化之抗體測試為陰性的病患可以其他包含不同CM的可活化之抗體測試，直到鑑定出適合治療的可活化之抗體(例如，包含在病患的疾病位置被切割之CM的可活化之抗體)。在一些實施態樣中，對測試為陽性的病患，病患係接著被投予治療有效量的可活化之抗體。
在一些方法和套組的實施態樣中，方法或套組係用於鑑別或其他方式重新定義適合以本發明之可活化之抗體治療的病患群。例如，檢測後同時對標的(如標的)和切割受測試之可活化之抗體之可切割部分(CM)的蛋白酶(如在疾病位置堆積活化的抗體)皆為陽性係被認定為用彼等含有該CM的可活化之抗體來治療的合適的候選者。同樣的，以彼等方法對標的(如標的)和切割在受測試之可活化之抗體中CM受質的蛋白酶其中之一或兩者皆為陰性的病患係被認定為對於其他形式治療的合適的候選人。在一些實施態樣中，彼等病患可以其他可活化之抗體測試，直到鑑定出適合治療的可活化之抗體(例如，包含在病患的 疾病位置被切割之CM的可活化之抗體)。在一些實施態樣中，對測試為陽性的病患，病患係接著被投予治療有效量的可活化之抗體。在一些實施態樣中，病患對任一標的(如標的)測試為陰性的係可被認定為以彼等包含CM之可活化之抗體治療的合適候選者。在一些實施態樣中，彼等病患可以其他可活化之抗體測試直到鑑定出合適用於治療的可活化之抗體(例如包含在病患疾病位置被切割之CM的可活化之抗體)。在一些實施態樣中，可活化之抗體係為與治療劑共軛的可活化之抗體。在一些實施態樣中，可活化之抗體不會與劑共軛。在一些實施態樣中，可活化之抗體包含可偵測標記。在一些實施態樣中，可偵測標記係定位在AB上。在一些實施態樣中，在個體或樣本中測量可活化之抗體之值係可透過專一性結合至活化的抗體之第二試劑來達成，其中劑包含可偵測標記。在一些實施態樣中，第二試劑係為包含可偵測標記的抗體。
在一些實施態樣中，方法或套組係用於鑑別或其他方式重新定義適合以本發明之抗-標的可活化之抗體和/或共軛的可活化之抗體(如與治療劑共軛的可活化之抗體)治療的病患群，接著將可活化之抗體和/或共軛的可活化之抗體投予對其有需求的個體。例如，以彼等方法檢測後同時對標的(如標的)和切割受測試之可活化之抗體和/或共軛的可活化之抗體之可切割部分(CM)的蛋白酶(如在疾病位置堆積活化的抗體)皆為陽性係被認定為用彼等含有該CM的可活化之抗體和/或共軛的可活化之抗體來治 療的合適的候選者，且病患係接著被投予所測試之治療有效量的可活化之抗體和/或共軛的可活化之抗體。同樣的，以彼等方法對標的(如標的)和切割在受測試之可活化之抗體中CM受質的蛋白酶其中之一或兩者皆為陰性的病患係被認定為對於其他形式治療的合適的候選人。在一些實施態樣中，彼等病患可以其他可活化之抗體和/或共軛的可活化之抗體測試，直到鑑定出適合治療的可活化之抗體和/或共軛的可活化之抗體(例如，包含在病患的疾病位置被切割之CM的可活化之抗體和/或共軛的可活化之抗體)。在一些實施態樣中，對測試為陽性的病患，病患係接著被投予治療有效量的可活化之抗體和/或共軛的可活化之抗體。
在彼等方法和套組的實施態樣中，MM係為具有4至40胺基酸長度的胜肽。在彼等方法和套組的實施態樣中，可活化之抗體包含連接子胜肽，其中連接子胜肽係定位於MM和CM之間。在彼等方法和套組的實施態樣中，可活化之抗體包含連接子胜肽，其中連接子胜肽係定位於AB和CM之間。在彼等方法和套組的實施態樣中，可活化之抗體包含第一連接子胜肽(L1)和第二連接子胜肽(L2)，其中第一連接子胜肽係定位於MM和CM之間且第二連接子胜肽係定位於AB和CM之間。在彼等方法和套組的實施態樣中，每一個L1和L2係為約1至20個氨基酸長度的胜肽，且其中每一個L1和L2不需要同樣的連接子。在彼等方法和套組的實施態樣中，一個或 同時L1和L2包含甘胺酸-絲胺酸聚合物。在彼等方法和套組的實施態樣中，至少L1和L2之一包含選自由下列群組所組成的胺基酸序列：(GS)n、(GSGGS)n(SEQ ID NO：339)和(GGGS)n(SEQ ID NO：340)，其中n為至少為1的整數。在彼等方法和套組的實施態樣中，至少L1和L2之一包含胺基酸序列帶有配方(GGS)n，其中n為至少為1的整數。在彼等方法和套組的實施態樣中，至少L1和L2之一包含選自由下列群組所組成的胺基酸序列：Gly-Gly-Ser-Gly(SEQ ID NO：341,Gly-Gly-Ser-Gly-Gly(SEQ ID NO：342)、Gly-Ser-Gly-Ser-Gly(SEQ ID NO：343,Gly-Ser-Gly-Gly-Gly(SEQ ID NO：344)、Gly-Gly-Gly-Ser-Gly(SEQ ID NO：345)和Gly-Ser-Ser-Ser-Gly(SEQ ID NO：346)。
在彼等方法和套組的實施態樣中，AB包含抗體或抗體片段序列選自由本文所述之交叉-反應抗體序列。在彼等方法和套組的實施態樣中，AB包含Fab片段、scFV或單鏈抗體(scAb)。
在彼等方法和套組的實施態樣中，切割劑係為在個體或樣本中與標的共定位蛋白酶且CM係為作用為蛋白酶受質的多肽，其中當可活化之抗體暴露在蛋白酶中時，蛋白酶在可活化之抗體中切割。在彼等方法和套組的實施態樣中，CM係為長度達15個胺基酸的多肽。在彼等方法和套組的實施態樣中，CM係共軛至AB的N端。在彼等方法和套組的實施態樣中，CM係共軛至AB的C 端。在彼等方法和套組的實施態樣中，CM係共軛至AB之VL鏈的N端。
本發明之抗體、共軛的抗體、可活化之抗體和/或共軛的可活化之抗體係用於診斷性和預防性配方。在一個實施態樣中，可活化之抗體係在具有發展出一或多種前述發炎、發炎性失調、癌症或其他失調的風險下投予病患。
病患或器官對一或多個前述失調的傾向可利用遺傳型、血清學或生物化學標記來決定。
在本發明的一些實施態樣中，抗體、共軛的抗體、可活化之抗體和/或共軛的可活化之抗體係投予被診斷具有和前述失調相關一個或多個臨床上適應症的人類個體。根據診斷，抗體、共軛的抗體、可活化之抗體和/或共軛的可活化之抗體係被投予以減輕或逆轉臨床上適應症的效果。
本發明之抗體、共軛的抗體、可活化之抗體和/或共軛的可活化之抗體係對偵測病患樣本中標的為有用的且相對應的對診斷為有用的。例如，本發明之抗體、共軛的抗體、可活化之抗體和/或共軛的可活化之抗體係用於試管內檢測法，如ELISA來偵測病患樣本中標的的值。
在一些實施態樣中，本發明之抗體和/或可活化之抗體係固定在固體支撐物上(例如微量滴定板的孔)。固定的抗體和/或可活化之抗體係做為任何可存在測試樣 本中標的之捕獲抗體。將固定的抗體和/或可活化之抗體與病患樣本接觸之前，固體支撐物係經沖洗以及用阻斷劑如牛奶蛋白或白蛋白處理來防止被分析物非專一性的吸收。
隨後將孔以懷疑帶有抗原的測試樣本或以包含標準量之抗原的溶液處理。該樣本係，如，來自懷疑具有被認為是病理診斷性循環抗原水平之對象的血清樣本。測試樣本或標準品經過沖洗後，將固體支撐物以可偵測地標記之二級抗體處理。標記的二級抗體係做為偵測抗體。測量可偵測標記的值，並且測量樣本中標的抗原的濃度，透過與來自標準品的標準曲線進行比較來確定。
應該理解的是，在試管內診斷性檢測中基於利用本發明之抗體和/或可活化之抗體得到的結果，可能基於標的抗原在個體中表現的值來對疾病分級。對給予的疾病，從診斷為在疾病進展之不同階段和/或在疾病治療性處理不同點的個體採取血液樣本。使用對進展或治療的每個階段提供統計學顯著結果的樣本群，可指定考量每個階段特徵的一定範圍的抗原濃度。
抗體、共軛的抗體、可活化之抗體和/或共軛的可活化之抗體可用於診斷和/或成像方法。在一些實施態樣中，彼等方法係為試管內方法。在一些實施態樣中，彼等方法係為活體內方法。在一些實施態樣中，彼等方法係為原位方法。在一些實施態樣中，彼等方法係為活體外方法。例如，可使用酵素性可切割CM的可活化之抗體來 偵測是否存在能夠切割CM的酶。透過在給予宿主生物體的給予細胞或組織中活化的抗體(如從可活化之抗體切割得到的抗體)測量的累積，彼等可活化之抗體可用於診斷，其可包含活體內偵測(如定性或定量)酵素活性(或，在一些實施態樣中，還原電勢增加的環境，譬如可提供雙硫鍵還原的環境)。彼等活化的抗體之累積指示不僅組織表現酵素活性(或根據CM之性質，增加還原電勢)，同時指示組織表現活化的抗體結合的標的。
例如，可以選擇CM為在腫瘤部位、在生物學限制的位置之細菌或病毒感染部位(例如，諸如在膿瘡、在器官中等)等發現的蛋白酶之受質。AB可為結合標的抗原的AB。使用本發明所述之方法，或使用本領域技術人員所熟悉方法，可將可偵測標記(例如，螢光標記或放射性標記或放射性追蹤劑)共軛至AB或至抗體和/或可活化之抗體的其他區域。在上述篩選方法的前提下討論合適的可偵測標記，並且在下文中提供額外的具體實例。使用對疾病狀態的蛋白質或胜肽專一性的AB，以及至少一活性在有興趣之患病組織中活性天升高的蛋白酶，可活化之抗體將顯示相對其中其中不存在可偵測之值的CM專一性酶或以比患病組織更低的值存在或無活性(例如，以酶原型式或和抑制劑複合)的組織對患病組織增加的結合率。因此小蛋白質和胜肽係快速透過腎臟過濾系統從血液中迅速被清除，並且由於對CM酶專一性不存在可偵測的值(或在非患病組織以更低的值存在，或以無活性構型存 在)，在患病組織中活化的抗體之累績相對於非患病組織係被增強。
在另一個實施態樣中，可活化之抗體可用來偵測樣本中切割劑的存在或不存在。例如，當可活化之抗體包含易受到酶切割的CM，可活化之抗體被使用來偵測(定性或定量)樣本中酶的存在。在另一個實例中，當可活化之抗體包含易受到還原劑切割的CM，可活化之抗體被使用來偵測(定性或定量)樣本中還原條件的存在。為了利於彼等方法中的分析，可活化之抗體可被偵測性標記，且可被結合至支撐物上(如固體支撐物，如玻片或珠子)。可偵測標記可被定位在不會被下列所切割的可活化之抗體部分，例如，可偵測標記可為消光螢光標記或其他需等切割發生才可被偵測的標記。該檢測法可透過例如在對切割具足夠時間將發生下，將固定的、可偵測標記的可活化之抗體與懷疑含有酶和/或還原劑接觸來進行，之後清洗以移除多餘的樣本和污染物。在樣本中切割劑(如酶或還原劑)的存在或不存在係隨後以可活化之抗體內可偵測訊號在與樣本接觸之前的改變來判定，例如在樣本中因為可活化之抗體被切割劑切割造成之可偵測訊號的存在和/或增加。
彼等偵測方法可改變以同時提供偵測能夠結合當受切割時可活化之抗體之AB的標的的存在或不存在。因此，檢測法亦能改變以評估切割劑的存在或不存在以及有興趣之標的的存在或不存在。切割劑的存在與否可利用前述之可活化之抗體的存在和/或可偵測之值的增加 來偵測，且標的的存在或不存在可透過偵測標的-AB複合物來偵測，如，利用可偵測標記的抗-標的抗體。
可活化之抗體亦對原位成像用於確認可活化之抗體之活化為有用的，例如蛋白酶切割、和結合至特定標的。試管內成像為一種能夠在生物性樣本中如細胞培養或組織切片中定位蛋白水解活性和標的的技術。使用該技術，可能可以同時確認結合至給予之標的和根據可偵測標記存在的蛋白水解活性(例如螢光標記)。
彼等技術係對任何冷凍細胞或源自疾病位置(如腫瘤組織)或健康組織的組織為有用的。彼等技術亦對新鮮細胞或組織樣本為有用的。
在彼等技術中，可活化之抗體係以可偵測標記來標記。可偵測標記可為螢光染料(如螢光異硫氰酸鹽(FITC)、異硫氰酸羅丹明(TRITC))、近紅外線(NIR)染料(如Qdot®奈米晶體)、膠體金屬、半抗原、放射性標記、生物素和擴增劑例如鏈親和素或酶(例如，辣根過氧化物酶或鹼性磷酸酶)。
偵測與標記的可活化之抗體共同培養之樣品的標記指示樣本中含標記且包含對可活化之抗體之CM具專一性的蛋白酶。在一些實施態樣中，蛋白酶的存在可使用廣效性蛋白酶抑制劑例如本文所描述那些和/或透過對蛋白酶具有專一性的劑(例如抗體如A11，其係對絲胺酸蛋白酶具專一性且抑制絲胺酸蛋白酶的蛋白質水解活性，參見如International Publication Number WO 2010/129609, published 11 November 2010)來確認。同樣方式利用廣效性蛋白酶抑制劑如本文所述者和/或利用更具選擇性的抑制劑可用來鑑定對CM具專一性的可活化之抗體。在一些實施態樣中，標的的存在可使用對標的具有專一性的劑來證實，如其他抗體，或者可偵測標記可與未標記標的競爭。在一些實施態樣中，未標記的可活化之抗體可用在透過標記的二級抗體或更複雜的檢測系統進行的檢測。
類似技術係對活體內成像亦為有用的，其中在個體內偵測螢光訊號，如哺乳類，包含人類，指示在疾病位置具有標的且包含對可活化之抗體CM有專一性的蛋白酶。
根據在可活化之抗體中的蛋白酶-專一性CM，彼等技術亦對套組和/或用於偵測、鑒定和特徵化在不同細胞、組織和器官內蛋白酶活性為有用的。
在一些實施態樣中，原位成像和/或活體內成像係對鑑定治療哪一個病患係為有用的。例如，原位成像中，可活化之抗體係用來篩選病患樣本以鑑別哪些病患在合適的位置具有合適的蛋白酶和標的，如在腫瘤位置。
在一些實施態樣中，原位成像係用於鑑別或其他方式重新定義適合以本發明之可活化之抗體治療的病患群。例如，檢測後同時對標的(如標的)和切割受測試之可活化之抗體之可切割部分(CM)的蛋白酶(如在疾病位置堆積活化的抗體)皆為陽性係被認定為用彼等含有該CM的可活化之抗體來治療的合適的候選者。同樣的，以彼等 方法對標的(如標的)和切割在受測試之可活化之抗體中CM受質的蛋白酶其中之一或兩者皆為陰性的病患係被認定為對於其他形式治療的合適的候選人(如，不適合以測試的可活化之抗體做治療)。在一些實施態樣中，關於一級可活化之抗體測試為陰性的病患可以其他包含不同CM的可活化之抗體測試，直到鑑定出適合治療的可活化之抗體(例如，包含在病患的疾病位置被切割之CM的可活化之抗體)。
在一些實施態樣中，活體內成像係用於鑑別或其他方式重新定義適合以本發明之可活化之抗體治療的病患群。例如，檢測後同時對標的(如標的)和切割受測試之可活化之抗體之可切割部分(CM)的蛋白酶(如在疾病位置堆積活化的抗體)皆為陽性係被認定為用彼等含有該CM的可活化之抗體來治療的合適的候選者。同樣的，測試為陰性的病患係被認定為對於其他形式治療的合適的候選人(例如，不適合以測試的可活化之抗體做治療)。在一些實施態樣中，關於一級可活化之抗體測試為陰性的病患可以其他包含不同CM的可活化之抗體測試，直到鑑定出適合治療的可活化之抗體(例如，包含在病患的疾病位置被切割之CM的可活化之抗體)。
藥學組成物
本發明之抗體、共軛的抗體、可活化之抗體和/或共軛的可活化之抗體(亦即本文所述之「活性化合 物」)及其衍生物、片段、類似物和其同源物，可插入適合於投予的藥學組合物。彼等組合物典型上包含抗體、共軛的抗體、可活化之抗體和/或共軛的可活化之抗體以及藥學上可接受之載體。如本文所述，術語「藥學上可接受之載體」意欲包含任何和所有與藥學投予相容的溶劑、分散介質、包覆、抗細菌和抗真菌劑、等滲劑和延緩吸收劑及等。合適的載體係描述於本領域標準參考文獻之最新版本的雷明頓氏藥物科學(Remington’s Pharmaceutical Sciences)，且併入本文以供參考。彼等載體或稀釋劑的合適實例包含但不限於水、鹽水、林格氏溶液、葡萄糖溶液及5%人血清白蛋白。亦可使用脂質體和非水性賦形藥例如固定油。彼等對於藥學活性物質的介質和試劑的用途係為本技術領域所熟知的。除非任何常規介質或試劑與活性化合物不相容，否則其在組合中的使用係可預期的。補充的活性化合物可被摻入組合物中。
本發明之要學組合物係被配製成與預期投予途徑相容。投予途徑之實例包含腸胃外的，例如靜脈內、皮膚內、皮下的、口服(如吸入)、皮膚滲透(如局部的)、黏膜和直腸投予。用於腸胃外的皮膚內或皮下應用溶液或懸浮液可以包含以下組分：無菌稀釋劑例如注射用水、鹽水溶液、固定油、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其他合成溶劑；抗菌劑例如苯醇或羥基苯甲酸甲酯；抗氧化劑如抗壞血酸或亞硫酸氫鈉；螫合劑如乙二胺四乙酸(EDTA)；緩衝劑如乙酸鹽、檸檬酸鹽或磷酸鹽和用於調 節張力的劑例如氯化鈉或右旋糖。pH可用酸或鹼，例如鹽酸或氫氧化鈉。腸胃外的製備可封裝在安瓶、一次性注射器或玻璃或塑膠製成的多劑量小瓶中。
適合於注射使用的藥學組合物包含無菌水溶液(其中水為可溶的)或分散體和用於無菌注射溶液或分散體臨時製備的無菌粉末。對於靜脈內投予，合適的載體包括生理食鹽水、抑菌性用水、Cremophor ELTM(BASF,Parsippany,N.J.)或磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)。在所有情況下，組合物必須是無菌的，並且應該達到存在易於注射之程度的流體。在製造和儲存的條件下，彼等需要是穩定的，並且保存在免於諸如細菌和真菌的微生物污染作用。載體可為溶劑或分散介質，例如水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇和液體乙二醇等)，以及其合適的混合物。可以透過例如包覆如卵磷脂的使用、透過在分散體的情況下維持所要求的粒子尺寸和透過表面活性劑的使用來維持適當的流動性。防止微生物的作用可透過各種抗菌劑和抗真菌劑來達成，例如對羥基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、抗壞血酸、硫柳汞等。在一些實施態樣中，組合物中係期望包含等滲劑，例如糖、多元醇(如甘露醇、山梨醇)、氯化鈉。注射組合物的延長吸收可透過在組合物中包含延遲吸收的試劑，例如單硬脂酸鋁和明膠來達成。
可以利用將所需量的活性化合物在適當的劑中摻入以上列舉之一種成分或多種成分的組合，如需要，可隨後過濾滅菌來製備無菌注射液。一般來說，透過將活 性化合物摻入包含基本分散介質和來自上述列舉所需之其他成分的無菌媒介來製備分散體。在用於無菌注射液之製備的無菌粉末的情況下，製備方法係為真空乾燥和冷凍乾燥，以獲得來自其先前無菌過濾的溶液的活性成分加上任何另外所需成分的粉末。
口服組成物通常包含惰性稀釋劑或可食用的載體。他們可被封入明膠膠囊或壓成片劑。對於口服治療的投予目的，活性化合物可以和賦形劑混合並以片劑、錠劑或膠囊形式使用。口服組合物亦可使用流體載體製備，做為漱口水，其中流體載體中的化合物係口服使用，並涮洗和吐出或吞下。藥學上相容的結合劑和/或佐劑材料可被包含作為組合物的一部份。所述片劑、丸劑、膠囊、錠劑等可包含下列成分或類似性質的化合物：黏合劑如微晶纖維素、黄蓍膠或明膠；賦形劑例如澱粉或乳糖；崩解劑例如藻酸、Primogel或玉米澱粉；潤滑劑如硬脂酸鎂或Sterotes；助流劑例如膠體二氧化硅；甜味劑如蔗糖或糖精；或調味劑如薄荷、水楊酸甲酯或橙調味劑。
對於吸入投予，化合物係以氣溶膠噴射形式從包含合適推進器，如氣體，諸如二氧化碳的加壓容器或分配器、或噴霧器中傳遞。
全身性投予可透過黏膜或經皮膚方法。對於黏膜或經皮膚投予，適用於待滲透屏障的滲透劑係用於組分中。彼等滲透劑係為本技術領域所熟知者，且包括，例如，對於經黏膜投予，去垢劑、膽鹽和夫西地酸衍生物。 經黏膜投予可透過使用鼻噴霧劑或栓劑來達成。用於經皮膚投予，活性化合物係為配製成軟膏劑、油膏劑、凝膠劑或本技術領域通常以熟知的。
所述化合物亦可以栓劑(例如以常規栓劑基質諸如可可脂和其他甘油酯)或用於直腸傳遞的保留灌腸形式製備。
在一個實施態樣中，活性化合物係與載體一起製備，所述載體可保護化合物免於從身體內快速被清除，例如控釋制劑，包含植入物和為囊化傳遞系統。可使用可生物降解的、生物相容性聚合物，如乙烯乙酸乙烯酯、聚酐、聚乙醇酸、膠原蛋白、聚原酸酯和聚乳酸。用於製備彼等配方之方法係對本領域技術人員為顯而易見的。材料亦可從Alza Corporation and Nova Pharmaceuticals,Inc.購得。脂質體的懸浮液(包含用單株抗體對病毒抗原標靶受感染細胞的脂質體)亦可做為藥學可接受載體。這些可根據本領域技術人員已知的方法製備，例如美國專利案號4,522,811中所述。
特別有利的係以計量單位形式配製口服或腸胃外組合物以利於投予和劑量均勻。本文所使用劑量單位形式係指適合在待治療對象中作用為單一劑量的物理上離散單位；每個單位含有經計算產生所需的藥物載體組合物所需要達到預期治療效果的活性化合物的預定量。對於本發明的劑量單位形式說明是由活性化合物的獨特性質和要達成的特定治療效果，以及在配製彼等活性化合物用於個 體治療的領域中固有的限制所決定且直接根據於此的。
藥學組合物可包還在容器、包裝或分配器中，連同投予說明書。
本發明將在下列實施例中進一步描述，所述實施例不限制請求相中所描述本發明之範圍。
實施例1.抗CD71抗體之特性分析
在此處所提供之研究係經設計以評估本發明之抗CD71抗體之結合。
本發明之抗CD71的M21單株抗體係使用根據本技術領域中已知的小鼠融合瘤技術而獲得。小鼠以人CD71的胞外結構域(ECD)免疫化，且之後的融合瘤係使用細胞毒性背馱分析(cytotoxicity piggyback assay)來篩選，並將來自此分析之細胞毒性陽性株藉由ELISA來確認結合人CD71 ECD多肽，及藉由FACS來確認結合至細胞表面。本發明之抗CD71的M21單株抗體包括SEQ ID NO：1之重鏈變異區(VH)及SEQ ID NO：2的輕鏈變異區(VL)，且若在本文中敘述，係使用作為陽性對照。
測試下列基於抗CD71小鼠單株抗體M21之人化抗CD71抗體：Ab21.10 LcB：HcA(SEQ ID NO：3之VH及SEQ ID NO：7之VL)、Ab21.11 LcB：HcB(SEQ ID NO：4之VH及SEQ ID NO：7之VL)、Ab21.12 LcB：HcC(SEQ ID NO：5之VH及SEQ ID NO：7之VL)及M21(SEQ ID NO：1之VH及SEQ ID NO：2之VL)。本發明之 各種抗CD71抗體之結合係藉由FACS確認(圖1)。
如圖1所示，所有人化抗CD71抗體均顯示結合至人CD71，其與CD71 M21小鼠抗體所示之結合相當。該人化抗CD71抗體之結合係藉由FACS在BxPC3細胞株上確認。簡言之，BxPC3細胞於所指示之濃度下經標示以小鼠單株Mab21或huCD71(Ab21.10、Ab21.11及Ab21.12)抗體，且後續分別以經lexa Fluor 647標示之山羊抗小鼠或抗人IgG Alexa Fluor 647偵測。
實施例2.掩蔽(mask)之開發
在此處所提供之研究係經設計以鑑定及特性分析用於本發明之可活化之抗CD71抗體的掩蔽部分。
抗CD71 21.12抗體，其包含SEQ ID NO：5之VH及SEQ ID NO：7之VL，係用於篩選總歧異度(total diversity)為6x1010之隨機X15胜肽庫，其中X係任何胺基酸，使用的是類似於2010年7月15日公開的PCT國際專利第WO 2010/081173號中所述之方法。該篩選由一輪MACS及五輪FACS分選組成。初始MACS分選係以蛋白質A Dynabeads(Invitrogen)及抗CD71 21.12抗體在200nM的濃度下而完成。針對MACS，約1x1012細胞經篩選結合與否，並收集1x107細胞。將抗CD71 21.12與DyLight-488(ThermoFisher)共軛，確認CD71結合活性，且於所有FACS輪次，均使用抗CD71 21.12-488作為螢光探針。將細菌細胞染色，且陽性株係收集如下：在FACS 第1輪，20nM的抗CD71 21.12-488，收集1x106細胞；在FACS第2輪，5nM的抗CD71 21.12-488，收集6.2x104細胞；及在FACS第3輪，5nM的抗CD71 21.12-488，收集5x103細胞，且1nM的抗CD71 21.12-488，收集5x102細胞；在FACS第4及5輪，1nM的抗CD71 21.12-488，收集>2x102細胞。來自第二輪FACS的陽性族群確認抑制抗CD71 21.12-488抗體對重組CD71蛋白質的結合。個別胜肽株藉由序列分析來自FACS第3輪的5nM結合者及FACS第3、4及5輪的1nM結合者而鑑定出。
抗CD71掩蔽部分的序列係列於表A中。
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TF01及TF02的掩蔽係經截斷(truncate)及經丙胺酸掃描(alanine scan)，以產生具有不同掩蔽效率之可活化之抗體的家族：
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這些掩蔽胜肽係用於產生本發明之抗CD71可活化之抗體。這些抗CD71可活化之抗體的部分者之序列係示於下列表C中。在一些實施態樣中，如所示，這些抗CD71可活化之抗體包括可切割之部分2001(ISSGLLSGRSDNH；SEQ ID NO：406)、可切割之部分3001(AVGLLAPPGGLSGRSDNH；SEQ ID NO：412)、可切割之部分2007(ISSGLLSGRSDIH；SEQ ID NO：684)、可切割之部分2008(ISSGLLSGRSDQH；SEQ ID NO：685)、可切割之部分2011(ISSGLLSGRSDNP；SEQ ID NO： 688)、可切割之部分2012(ISSGLLSGRSANP；SEQ ID NO：689)、可切割之部分2013(ISSGLLSGRSANI；SEQ ID NO：690)、可切割之部分3007(AVGLLAPPGGLSGRSDIH；SEQ ID NO：692)、可切割之部分3008(AVGLLAPPGGLSGRSDQH；SEQ ID NO：693)、可切割之部分3011(AVGLLAPPGGLSGRSDNP；SEQ ID NO：696)、可切割之部分3012(AVGLLAPPGGLSGRSANP；SEQ ID NO：697)或可切割之部分3013(AVGLLAPPGGLSGRSANI；SEQ ID NO：698)。
雖然下文所示的某些序列包括SEQ ID NO：645之間隔子(spacer)序列，但此所屬技術領域中具有通常知識者可理解本發明之可活化之抗CD71抗體可包括任何適合之間隔子序列，例如像是選自由下列所組成的群組之間隔子序列：QGQSGQG(SEQ ID NO：645)、QGQSGQ(SEQ ID NO：424)、QGQSG(SEQ ID NO：646)、QGQS(SEQ ID NO：647)、QGQ(SEQ ID NO：648)、QG(SEQ ID NO：649)、GQSGQG(SEQ ID NO：666)、QSGQG(SEQ ID NO：667)、SGQG(SEQ ID NO：668)、GQG(SEQ ID NO：669)、G或Q。在一些實施態樣中，本發明之可活化之抗CD71抗體可不具有接至彼之N端的間隔子序列。
表C. 抗CD71可活化之抗體序列HuCD71_HcC-des胺基酸序列
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實施例3.可活化之抗CD71抗體的產生及特性分析
在此處所提供之研究係經設計以產生本發明之可活化之抗CD71抗體之結合。
所產生之抗CD71可活化之抗體具有不同掩蔽 效率(即，該可活化之抗體之MM阻斷該可活化之抗體的AB對其標的結合的能力之量測值)。胜肽TF01及TF02係如實施例2中所述的，以截斷(truncation)及丙胺酸掃描(alanine scannig)來突變，且這些掩蔽胜肽變體係用以產生本發明之具有不同程度掩蔽效率的抗CD71可活化之抗體家族。
本發明之抗CD71可活化之抗體對NCI H292(在本文中亦稱之為H292)細胞株的結合係使用來評估。簡言之，將細胞以所指示之濃度下的huCD71抗體或可活化之抗體來標定，且之後以經Alexa Fluor 647標定之山羊抗人IgG二級抗體來偵測。如圖2中所示，本發明之抗CD71可活化之抗體顯示相較於親代抗CD71抗體(huCD71 21.12 Ab)的不同程度掩蔽效率。
如圖3A中所示，本發明之huCD71可活化之抗體藥物共軛體表現類似於未經共軛之可活化之抗體，且於蛋白質分解活化(proteolytic activation)時回復huCD71抗體結合活性。此研究係使用下列來完成：可活化之抗CD71抗體，在此稱為huCD71 TF01-2001，其經由val-cit連接子而共軛至MMAD(該連接子-毒素在此稱為vc-MMAD)，且此可活化之抗體構築體包括SEQ ID NO：5之VH、SEQ ID NO：7之VL、SEQ ID NO：16之MM及包含序列ISSGLLSGRSDNH(SEQ ID NO：406)之CM。經uPA處理或完整(intact)之huCD71 TF01-2001可活化之抗體-經MMAD共軛對H292細胞之結合係使用標準FACS標定實 驗程序(protocol)藉由FACS來評估。抗CD71可活化之抗體藥物共軛體，在本文中亦稱為“AADC”，係藉由與uPA溫育整夜而活化。圖3B顯示經由val-cit連接子共軛至MMAD的經活化之抗CD71可活化之抗體huCD71 TF01-2001體外殺除細胞之能力(該連接子-毒素在此稱為v-MMAD或vc-MMAD)，係類似於抗CD71抗體21.12-MMAD。當在此等細胞殺除分析中測試經共軛至核酸損壞劑(nucleic acid damaging agent)的本實施態樣之可活化之抗體時，觀察到類似結果。
H292異種移植腫瘤以下列者來處理：同型DM4對照、huCD71-DM4 ADC及經共軛之抗CD71可活化之抗體huCD71 TF02.13_2001-DM4 AADC，其具有SEQ ID NO：5之VH、SEQ ID NO：7之VL、SEQ ID NO：309(NLCTEHSAALDCRSY)之MM及包含序列ISSGLLSGRSDNH(SEQ ID NO：406)之CM。腫瘤生長至平均為150mm3；接著將小鼠隨機分配成八組，並於第0日及第7日給劑所指示之測試物。此研究之結果顯示於圖4中。將各組的平均腫瘤體積±SEM作圖。ADC及AADC兩者均誘發腫瘤退化(tumor regression)。所有本文中所揭示之經DM4共軛之可活化之抗體係由TCRS(The Chemistry Research Solution)所製造。
圖5係描繪下列結果之圖：乳癌HCC1806異種移植腫瘤，以下列者來處理：PBS，作為對照；及二個不同劑量(1mg/kg及3mg/kg)的經共軛之可活化之抗 CD71抗體huCD71 TF02.13-2001-DM4 AADC，其具有SEQ ID NO：5之VH、SEQ ID NO：7之VL、SEQ ID NO：309(NLCTEHSAALDCRSY)之MM及包含序列ISSGLLSGRSDNH(SEQ ID NO：406)之CM1。將各組的平均腫瘤體積±SEM作圖。圖5闡明本發明之經共軛之可活化之抗CD71抗體於乳房HCC1806異種移植腫瘤中在低於臨床相關劑量下誘發完全的腫瘤退化。
圖6A係描繪本發明之抗CD71抗體(SEQ ID NO：5之VH及SEQ ID NO：7之VL)結合食蟹獮猴初代腎上皮細胞之能力的圖，在此例示性研究中，具有觀察到約3nM之Kd。在此研究中，本發明之抗體對細胞的結合係使用標準FACS標定方法來進行。簡言之，將細胞以所指示之濃度下的本發明之抗CD71抗體或同型(帕利珠單抗(palivizumab))對照來標定，且之後以經Alexa Fluor 647標定之山羊抗人IgG二級抗體來偵測。
圖6B闡示抗CD71抗體huCD71(SEQ ID NO：5之VH及SEQ ID NO：7之VL)結合至人及食蟹獮猴CD71，但不結合至小鼠CD71。在此分析中，所示類型之重組CD71(1μg/mL)吸附至ELISA盤且之後與所示濃度之抗人CD71 21.12抗體溫育，接以及之後使用分析及根據熟習本技術領域者已知的方法，以山羊抗人IgG-HRP二級抗體及Ultra TMB(Thermo Fisher Scientific)偵測來偵測。
圖6C係描繪本發明之鼠抗CD71抗體 muM21(“CD71 ms Ab”)(SEQ ID NO：1之VH及SEQ ID NO：2之VL)及本發明之人化抗CD71抗體Ab21.12(“CD71 Hu Ab”)(SEQ ID NO：5之VH及SEQ ID NO：7之VL)結合源自人胰癌之BxPC3細胞株的能力之圖，在例示性研究中，兩者均具有觀察到約3nM之Kd。在此研究中，本發明之抗體對細胞的結合係使用標準FACS標定方法來進行。簡言之，將細胞以所指示之濃度下的本發明之抗CD71抗體或人IgG1同型對照抗體(帕利珠單抗(palivizumab)，“同型”)對照來標定，且之後以經Alexa Fluor 647標定之山羊抗人或山羊抗小鼠IgG二級抗體來偵測。
圖7係描繪當投予食蟹獮猴時，相較於CD71親代抗體，單劑之本發明之抗CD71可活化之抗體展現增長的半生期之圖。在此研究中，獼猴在第0日注射單劑5mg/kg的指示之抗體，其中“CD71抗體”係本發明之抗人CD71 21.12抗體，且“CD71可活化之抗體”係本發明之抗人CD71 TF01.2001可活化之抗體。各獮猴的血清中總人IgG量係於指示之日使用抗人IgG以夾層式ELISA(sandwich ELISA)來分析。
在二隻食蟹獮猴中的huCD71 TF02.13-2001 DM4藥物共軛之藥物動力學及耐受性係於單一5mg/kg劑量之後評估(圖8)。總血清人IgG量係使用抗人IgG夾層式ELISA來測量。
圖7、8及9中所描繪之研究執行係3週耐受 性研究之一部分(非最終型(non-terminal))；單劑n=2。所觀察到的完整可活化之抗體之增長的PK係與正常組織結合的下降一致。所偵測到的是低的經活化之經共軛之可活化之抗體的循環量。經共軛之可活化之抗體在5mg/mg係耐受性良好。未觀察到在靶(on-target)或脫靶(off-target)毒性之證據。未有臨床徵象、體重減少、臨床化學或血液學發現。
圖9顯示二隻接受本發明之經共軛之可活化之抗CD71抗體(anti-huCD71 TF02.13-2001 DM4)的食蟹獮猴未顯示嗜中性白血球減少(基於嗜中性球計數)或肝毒性(基於丙胺酸轉胺酶(ALT)或天冬胺酸轉胺酶(AST)量)之證據。
實施例4：CD71抗體的結合及抑制活性之特性分析
此實施例顯示本發明之抗CD71抗體抑制重組CD71結合至其配體轉鐵蛋白之能力。
圖10顯示，使用固相ELISA結合分析，重組人轉鐵蛋白(Tf)配體對重組人CD71在未存在抗CD71抗體之結合。在此研究中，在此實施例中，轉鐵蛋白對人CD71經判定約1.6nM之解離常數(Kd)。在此分析中，重組人CD71(1μg/ml)經吸附至ELISA盤，且之後與所指示之濃度的經生物素化之轉鐵蛋白配體溫育，接以使用抗生物素蛋白鏈黴菌素(streptavidin)-辣根過氧化酶(HRP)及使用分析及根據熟悉本技術領域者已知之方法的Ultra TMB 偵測(Thermo Fisher Scientific)來偵測已結合之經生物素化之轉鐵蛋白。
圖11A顯示使用固相ELISA結合分析，在各種條件下，對重組人轉鐵蛋白(Tf)配體及重組人CD71之間結合之效果，包括存有本發明之抗CD71抗體時之結合。特別地，如圖11A中所示，此研究顯示，相較於同型對照，本發明之人化抗CD71抗體(“CD71 Ab21.12”)抑制轉鐵蛋白配體及彼之CD71受體之間的結合。結果亦顯示此抑制類似於藉由不同、市售小鼠抗人CD71單株抗體(“OKT9”)所展示之結合抑制。結果亦顯示市售兔子抗人CD71多株抗體(LS-C334364,LS Bio)或同型對照均未顯著抑制轉鐵蛋白結合至CD71，且結合活性藉由加入過量冷轉鐵蛋白而消除。在此分析中，重組人CD71蛋白質(1μg/ml)係經吸附至ELISA盤，且之後在存有所指示濃度之抗體或轉鐵蛋白之下與0.6nM的經生物素化之轉鐵蛋白溫育(其中本發明之抗CD71 21.12具有SEQ ID NO：5之VH及SEQ ID NO：7之VL)，作為滴定分析(titration assay)之一部分。經結合之轉鐵蛋白係以經抗生物素蛋白鏈黴菌素共軛之HRP及使用分析及根據熟悉本技術領域者已知之方法的Ultra TMB偵測來偵測。
圖11B顯示藉由已知之抗CD71單株抗體(OKT9)抑制轉鐵蛋白結合至CD71程度係顯著小於本發明之抗CD71 21.12抗體的抑制程度。在此分析中，重組人CD71蛋白質(1μg/ml)係經吸附至ELISA盤，且之後在存 有所指示濃度之OKT9抗CD71抗體或本發明之抗CD71 21.12抗體(抗CD71 21.12，其具有SEQ ID NO：5之VH及SEQ ID NO：7之VL)之下，與0.6nM的經生物素化之轉鐵蛋白溫育，作為滴定分析之一部分。經結合之轉鐵蛋白係以經抗生物素蛋白鏈黴菌素共軛之HRP及使用分析及根據熟悉本技術領域者已知之方法的Ultra TMB偵測來偵測。
實施例5：在多種原發腫瘤及轉移性腫瘤中之CD71表現
此實施例使用抗CD71抗體，藉由免疫組織化學(IHC)染色，顯示CD71會在各種不同原發腫瘤及轉移性腫瘤類型中表現。
圖12A、12B及12C顯示，以市售抗CD71抗體於多種原發腫瘤及轉移性組織微陣列(TMA)上使用IHC染色，CD71在許多原發腫瘤及轉移性腫瘤樣本中會高度表現。圖12A顯示子宮頸癌(1)、頭頸癌(2)、H292異種移植(3)、淋巴結中的非何杰金氏淋巴瘤(non-Hodgkin’s lymphoma)(NHL)(4)、結腸中的NHL(5)及胃中的NHL(6)中的CD71的IHC染色。圖12B顯示，在由來自轉移性腫瘤的核心組成的TMA中之CD71的IHC染色，於大部分的核心中，展現中量至高量的CD71表現。圖12C顯示在一個例示性TMA的CD71的IHC染色量總結，其呈現許多源自多種組織來源的轉移性核心顯示強CD71訊號。
實施例6：在Raji異種移植模式中的可活化之抗CD71-AADC體內療效
此實施例顯示本發明之具有經共軛之毒素(AADC類)抗人CD71可活化之抗體在非何杰金氏淋巴瘤(NHL)小鼠異種移植模式中具療效。這些療效特定於抗人CD71抗體且相當於或等效於親代抗人CD71藥物共軛體所展示之療效。
圖13A顯示各種抗CD71可活化之抗體藥物共軛體在小鼠NHL異種移植模式中之療效，其中本發明之可活化之抗體藥物共軛體(CD71 TF02.18-2001-spdb-DM4、CD71 TF02.13-2001-spdb-DM4及CD71 TF02.13.3001-spdb-DM4)顯示顯著高於同型對照(帕利珠單抗-spdb-DM4)之療效。該圖亦顯示本發明之可活化之抗體藥物共軛體展示相當於未經掩蔽之抗CD71抗體藥物共軛體(CD71 21.12-spdb-DM4)之療效。在此研究中，在小鼠中的非何杰金氏淋巴瘤(NHL)Raji異種移植腫瘤生長至150mm3之平均體積。接著將小鼠隨機分配成八組，並於第1日及第8日給劑5mg/kg的各個指示之測試物。針對各時間點作圖平均腫瘤體積±SEM。
圖13B顯示各種抗CD71可活化之抗體藥物共軛體在小鼠NHL異種移植模式中之療效，其中本發明之可活化之抗體藥物共軛體(CD71 TF02.18-2001-vc-MMAE及CD71 TF02.13-3001-vc-MMAE)顯示顯著高於同型對照(帕利珠單抗-vc-MMAE)之療效。該圖亦顯示本發 明之可活化之抗體藥物共軛體展示相當於未經掩蔽之抗CD71抗體藥物共軛體(CD71 21.12-vc-MMAE)之療效。在此研究中，在小鼠中的非何杰金氏淋巴瘤(NHL)Raji異種移植腫瘤生長至150mm3之平均體積。接著將小鼠隨機分配成八組，並於第1日及第8日給劑3mg/kg的各個指示之測試物。針對各時間點作圖平均腫瘤體積±SEM。
圖13C顯示各種抗CD71可活化之抗體藥物共軛體在小鼠NHL異種移植模式中之療效，其中本發明之可活化之抗體藥物共軛體(CD71 TF02.18-2001-vc-MMAD及CD71 TF02.13-3001-vc-MMAD)顯示顯著高於同型對照(帕利珠單抗-vc-MMAD)之療效。該圖亦顯示本發明之可活化之抗體藥物共軛體展示相當於未經掩蔽之抗CD71抗體藥物共軛體(CD71 21.12-vc-MMAD)之療效。在此研究中，在小鼠中的非何杰金氏淋巴瘤(NHL)Raji異種移植腫瘤生長至150mm3之平均體積。接著將小鼠隨機分配成八組，並於第1日及第8日給劑0.5或1mg/kg的各個指示之測試物。針對各時間點作圖平均腫瘤體積±SEM。
實施例7：食蟹獮猴抗CD71-ADC及可活化之抗CD71-AADC的耐受性
此實施例顯示，基於一或多種血液學讀值，相較於對應之親代抗CD71ADC類，本發明之具有經共軛之毒素(AADC類)的可活化之抗人CD71抗體在食蟹獮猴 中具良好耐受性。
圖14A-14G顯示，本發明之抗CD71可活化之抗體藥物共軛體類(AADC類)，相較於經高或低劑量的對應之親代抗CD71之ADC處理之獮猴，基於各個血液學讀值中未有明顯改變，在食蟹獮猴中展示較高耐受性。以5mg/kg的親代抗CD71的ADC處理獮猴時，觀察到下列血液學結果：以高劑量ADC處理，總白血球(WBC)明顯減少(圖14A)；以高及低劑量ADC處理，第8日及第11日嚴重嗜中性白血球減少(圖14B)；以高劑量ADC處理，淋巴球明顯減少(圖14C)；高及低劑量ADC處理均使單核球減少，在低劑量處理動物中，於第11日單核球回復(圖14D)；高及低劑量ADC處理均使紅血球(RBC)計數減少(圖14E)；高及低劑量ADC處理，血紅素(HGB)計數明顯減少(圖14F)；及高及低劑量ADC處理，網狀紅血球明顯減少(圖14G)。經抗CD71的ADC處理之獮猴顯示正常血小板計數(數據未示出)。相反地，經本發明之可活化之抗CD71 AADC類處理之動物在所有這些血液學讀值未顯示明顯改變(圖14A至14F)。在此研究中，單劑的本發明之可活化之抗CD71 TF02.13-2001-spdb-DM4(“AADC”)，其具有藥物-抗體比(DAR)約3.4，以5mg/kg給劑食蟹獮猴，且本發明之抗CD71 21.12-spdb-DM4(“ADC”)以5mg/kg(低劑量)及7.5mg/kg(高劑量)給劑。於研究的指示之日，使用本技術領域中已知之技術及方法，自各獮猴獲得血液學結果。
實施例8：在多種細胞株中的CD71表現及對經抗CD71調介之細胞毒性之敏感性
此實施例顯示CD71在許多源自腫瘤之細胞株中高量表現，且這些細胞株中有許多展示對抗CD71標靶性細胞毒性之敏感性。
圖15藉由FACS分析顯示在所指示之細胞株中的CD71最大結合或相對表現。FACS染色係使用市售抗CD71小鼠單株抗體OKT9、接以經Alexa Fluor 647共軛之山羊抗小鼠二級抗體來進行，給定細胞株的長條高度對應該細胞株的源自CD71訊號之相對量。給定細胞株之長條顏色顯示對應之細胞株在體外細胞毒性分析中的相對敏感性，其中在存有經共軛至MMAE毒素之抗人二級抗體下，以本發明之抗CD71 21.12抗體處理細胞株。若觀察到小於1nM EC50的細胞毒性，則將細胞株分類為“敏感性”。若最大殺除係小於50%且EC50大於1nM，則將細胞株分類為“中度敏感性”。若觀察到無或極小細胞毒性，則將細胞株分類為“抗性”。
實施例9：CD71在HT29、BxPc3、Fadu及MDA MB 231細胞株上之表現
此實施例顯示本發明之可活化之抗人CD71抗體在多種細胞株上結合CD71，具有高於本發明之未經掩蔽之抗人CD7抗體解離常數，由此顯示在活化前掩蔽減 少結合之效果。
圖16A至16D顯示本發明之抗CD71可活化之抗體及親代抗體對細胞株HT29(圖16A)、BxPc3(圖16B)、FaDu(圖16C)及MDA MB 231(圖16D)結合的量。在此研究中，本發明之抗體對所指示之細胞株的結合係使用標準FACS標定方法來進行。簡言之，將細胞以所示之濃度下之所示之本發明之抗體標定：抗人CD71抗體(抗人CD71 Ab21.12抗體，“CD71-Ab”)或二種抗人CD71可活化之抗體(抗人CD71 TF02.13-3001，“CD71-ActAb 1”；或抗人CD71 TF02.18-2001，“CD71-ActAb 2”)中之一者，且之後以經Alexa Fluor 647標定之山羊抗人IgG二級抗體來偵測。下列表14顯示基於圖14A至14D中所繪示之結合曲線平衡解離常數。這些結果顯示抗人CD71 21.12抗體(CD71-Ab)結合所有細胞株，Kd類似(0.39 to 0.81nM)，而抗人CD71 TF02.13-3001(CD71-ActAb 1)及抗人CD71 TF02.18-2001(CD71-ActAb 2)對細胞株之結合顯著向右偏移(38至46倍)，這係掩蔽部分之掩蔽效率之表示。
Figure 105113835-A0202-12-0361-2606
實施例10：在HT29、BxPc3、FaDu及MDA MB 231細 胞株上之抗CD71 ADC細胞毒性
此實施例顯示，相較於同型對照ADC，本發明之抗人CD71抗體藥物共軛體類展示較高的抗多種細胞株之細胞毒性。
圖17A至17D顯示，相較於同型對照ADC，經共軛至各種毒素之本發明之抗人CD71抗體展示較高的抗各種表現CD71細胞株之體外細胞毒性。在此研究中，本發明之抗人CD71 21.12-ADC(經共軛至spdb-DM4、vc-MMAE或vc-MMAD)或同型對照(帕利珠單抗-ADC，經共軛至spdb-DM4、vc-MMAE或vc-MMAD)，依所指示之濃度施加至HT29(圖17A)、BxPc3(圖17B)、FaDu(圖17C)及MDA MB 231(圖17D)。細胞毒性以作為對照未經處理之細胞族群之百分比判定。
實施例11：在NHL Raji細胞上之可活化之抗CD71細胞毒性
此實施例顯示，相較於本發明之抗人CD71可活化之抗體藥物共軛體類(AADC類)，本發明之抗人CD71抗體藥物共軛體類(ADC類)展示較高的抗Raji(非何杰金氏淋巴瘤)細胞株的細胞毒性。
圖18顯示本發明之抗人CD71 21.12-ADC藥物共軛體類(ADC類)(經共軛至spdb-DM4、vc-MMAE或vc-MMAD)顯示抗Raji非何杰金氏淋巴瘤衍生之細胞的細胞毒性高於它們的對應抗人CD71 TF02.18-2001-AADC 可活化之抗體藥物共軛體類(經共軛至spdb-DM4、vc-MMAE或vc-MMAD)或抗人CD71 TF02.13-3001-AADC可活化之抗體藥物共軛體類(經共軛至spdb-DM4、vc-MMAE或vc-MMAD)。該等抗人CD71 ADC類展示類似彼此之抗Raji細胞株的細胞毒性療效(基於與對照樣本之比較，顯示IC50係~0.1nM)。比較起來，抗人CD71可活化之抗體藥物共軛體(AADC)顯示細胞毒性效果類似於或相當於同型ADC對照者。在此研究中，本發明之各種抗人CD71抗體藥物共軛體類及可活化之抗體藥物共軛體類以所指示之濃度施加在Raji細胞上。細胞毒性以作為對照未經處理之細胞族群之百分比判定。
實施例12：CD71結合分析
此實施例顯示，相較於本發明之親代抗CD71抗體，本發明之抗人CD71可活化之抗體展示對重組CD71蛋白質的偏移之結合親和力。
如圖19中所描繪之實施例所示，使用固相結合分析來展示本發明之抗人CD71抗體之結合。在此實施例中，重組人CD71蛋白質(R&D Systems)以1μg/mL的濃度塗覆於經鎳電鍍之ELISA盤，且接著與所示濃度之抗CD71抗體(“CD71 21.12”)或可活化之抗CD71抗體(“CD71.TF02.13-2001”或“CD71.TF02.18-2001”)溫育，其中可活化之抗體係在它們未蛋白酶分解活化之形式來分析。結合抗體量的偵測，係藉由以經共軛至辣根過氧化酶 的山羊抗人抗體及Ultra TMB(Thermo Fisher Scientific)偵測來溫育及偵測。
如圖19中所描繪，該例示性分析展示抗人CD71 21.12抗體結合具有~0.3nM之Kd。抗人CD71 TF02.18-2001及人CD71 Tf02.13-2001可活化之抗體之結合常數向右偏移，此乃它們個別的掩蔽效率所致(分別為9及42倍)。
Figure 105113835-A0202-12-0364-2607
實施例13：在非何杰金氏淋巴瘤之源於病患異種移植模式中的可活化之抗CD71-AADC體內療效
此實施例顯示本發明之具有經共軛之毒素之抗人CD71可活化之抗體(AADC)在源自非何杰金氏淋巴瘤(NHL)病患異種移植模式具療效，且此療效相當於或優於親代抗人CD71抗體藥物共軛體(ADC)所觀察到的。
圖20A及20B顯示使用非何杰金氏淋巴瘤(NHL)原發腫瘤之源自病患異種移植小鼠模式，以本發明之可活化之抗huCD71-AADC處理之小鼠，顯示隨時間之 療效，類似於或高於它們個別的本發明之抗huCD71-ADC。在此研究中，二個源自病患之NHL異種移植(標示為LY2214及LY0257，Crown Bioscience)各以下列處理：同型ADC對照(帕利珠單抗，經共軛至spdb-DM4，“Isotype-ADC”)；本發明之可活化之抗huCD71 21.12-ADC，經共軛至spdb-DM4(“CD71-ADC”)；或本發明之可活化之抗huCD71 TF02.13.3001，經共軛至spdb-DM4(“CD71-AADC”)。在各實施例中，腫瘤異種移植生長至平均體積為150mm3；接著將小鼠隨機分配成4組，並於第1日及第7日給劑5mg/kg所指示之測試物。針對各時間點作圖平均腫瘤體積±SEM。
實施例14：在多種源自結腸直腸癌細胞株上的抗CD71-ADC細胞毒性
此實施例顯示，相較於同型ADC對照，本發明之抗人CD71抗體藥物共軛體類(ADC類)展示較高的抗多種源自結腸直腸癌(CRC)細胞株之細胞毒性。
圖21A至21H顯示，本發明之經共軛至spdb-DM4或vc-MMAE的抗人CD71 21.12抗體藥物共軛體類(ADC類)顯示高於經共軛至spdb-DM4或vc-MMAE的同型抗體(chKTI，嵌合人IgG1抗大豆胰蛋白酶抑制劑抗體)之抗各種源自CRC細胞株之細胞毒性。以ADC類處理的源自CRC細胞株係SW1417、SW48、Ls411N、Lovo、HCT116、DLD1、Ls174T及SW480。該等抗人 CD71 ADC類展示彼此類似抗細胞株的細胞毒性療效。在此研究中，本發明之各種抗人CD71抗體藥物共軛體類及同型藥物共軛體類以所指示之濃度施加在細胞。細胞毒性以作為對照未經處理之細胞族群之百分比判定。
圖22A及22B顯示，本發明之經共軛至vc-MMAE或vc-MMAD的抗人CD71 21.12-ADC藥物共軛體類(ADC類)(CD71 21.12-vc-MMAE、CD71 21.12-vc-MMAD)顯示較高抗HT29源自CRC細胞之細胞毒性，此係相較於它們的對應之經共軛至vc-MMAE或vc-MMAD的抗人CD71 TF02.18-2001-AADC可活化之抗體藥物共軛體(CD71 TF02.18-2001-vc-MMAE、CD71 TF02.18-2001-vc-MMAD)、經共軛至vc-MMAE或vc-MMAD的抗人CD71 TF02.13-3001-AADC可活化之抗體藥物共軛體(CD71 TF02.13-3001-vc-MMAE、CD71 TF02.13-3001-vc-MMAD)或經共軛至vc-MMAE或vc-MMAD的同型對照(帕利珠單抗-ADC)(同型-vc-MMAE、同型-vc-MMAD)。在此研究中，本發明之各種抗人CD71抗體藥物共軛體類及可活化之抗體藥物共軛體類還有同型ADC以所指示之濃度施加在HT29細胞。細胞毒性以作為對照未經處理之細胞族群之百分比判定。
實施例15：在非何杰金氏淋巴瘤之異種移植模式中的可活化之抗CD71-AADC體內療效
此實施例顯示本發明之具有經共軛之毒素 (AADC類)抗人CD71可活化之抗體在非何杰金氏淋巴瘤(NHL)小鼠異種移植模式中具療效。這些療效特定於抗人CD71抗體且相當於或等效於親代抗人CD71藥物共軛體類所展示之療效。
圖23A顯示各種抗CD71可活化之抗體藥物共軛體在小鼠NHL(Raji)異種移植模式中之療效，其中本發明之可活化之抗體藥物共軛體(CD71 TF02.18-2001-spdb-DM4、CD71 TF02.13-2001-spdb-DM4及CD71 TF02.13.3001-spdb-DM4)顯示顯著高於同型對照(帕利珠單抗-spdb-DM4)之療效。該圖亦顯示本發明之可活化之抗體藥物共軛體展示相當於未經掩蔽之抗CD71抗體藥物共軛體(CD71 21.12-spdb-DM4)之療效。在此研究中，在小鼠中的非何杰金氏淋巴瘤(NHL)Raji異種移植腫瘤生長至150mm3之平均體積。接著將小鼠隨機分配成八組，並於第1日及第8日給劑5mg/kg的各個指示之測試物。針對各時間點作圖平均腫瘤體積±SEM。
圖23B顯示各種抗CD71可活化之抗體藥物共軛體在小鼠NHL(Raji)異種移植模式中之療效，其中本發明之可活化之抗體藥物共軛體(CD71 TF02.18-2001-vc-MMAE及CD71 TF02.13-3001-vc-MMAE)顯示顯著高於同型對照(帕利珠單抗-vc-MMAE)之療效。該圖亦顯示本發明之可活化之抗體藥物共軛體展示相當於未經掩蔽之抗CD71抗體藥物共軛體(CD71 21.12-vc-MMAE)之療效。在此研究中，在小鼠中的非何杰金氏淋巴瘤(NHL)Raji異種 移植腫瘤生長至150mm3之平均體積。接著將小鼠隨機分配成八組，並於第1日及第8日給劑3mg/kg的各個指示之測試物。針對各時間點作圖平均腫瘤體積±SEM。
實施例16：在非小細胞肺癌之異種移植模式中的可活化之抗CD71-AADC體內療效
此實施例顯示本發明之具有經共軛之毒素(AADC類)抗人CD71可活化之抗體在非小細胞肺癌(NSCLC)小鼠異種移植模式中隨劑量範圍具療效。這些療效特定於抗人CD71抗體且相當於或等效於親代抗人CD71藥物共軛體所展示之療效。
圖24A及24B顯示抗CD71可活化之抗體藥物共軛體類在小鼠NSCLC異種移植模式中之療效，其中本發明之可活化之抗體藥物共軛體類(CD71 TF02.13-3001-spdb-DM4、CD71 TF02.13-2001-spdb-DM4、CD71 TF01-2001-PEG2-vc-MMAD)在所指示之劑量(5mg/kg、3mg/kg及1mg/kg)顯示顯著高於同型對照(帕利珠單抗-spdb-DM4或帕利珠單抗-PEG2-vc-MMAD)於投予5mg/kg劑量之療效。該圖亦顯示本發明之可活化之抗體藥物共軛體展示相當於未經掩蔽之抗CD71抗體藥物共軛體(CD71 21.12-spdb-DM4或CD71 21.12-PEG2-vc-MMAD)於5mg/kg劑量之療效。在此研究中，在小鼠中的NSCLC H292異種移植腫瘤生長至150mm3之平均體積。接著將小鼠隨機分配成八組，並於第1日及第8日依所指示之量的各個指示之 測試物來給劑。針對各時間點作圖平均腫瘤體積±SEM。
實施例17：在胰腺癌之異種移植模式中的可活化之抗CD71-AADC體內療效
此實施例顯示本發明之具有經共軛之毒素(AADC類)抗人CD71可活化之抗體在BxPC3胰腺癌小鼠異種移植模式中隨劑量範圍具療效。這些療效特定於抗人CD71抗體且相當於或等效於親代抗人CD71藥物共軛體所展示之療效及/或高於同型對照ADC療效。
圖25顯示各種抗CD71可活化之抗體藥物共軛體類在BxPC3小鼠異種移植模式中之療效，其中本發明之可活化之抗體藥物共軛體類(CD71 TF02.13-2001-spdb-DM4、CD71 TF02.13-3001-spdb-DM4及CD71 TF02.13-3001-vc-MMAE)各於所指示劑量顯示顯著高於同型對照(5mg/kg的帕利珠單抗-spdb-DM4及3mg/kg的帕利珠單抗-vc-MMAE)之療效。該圖亦顯示本發明之可活化之抗體藥物共軛體類展示相當於未經掩蔽之抗CD71抗體藥物共軛體(5mg/kg的CD71 21.12-spdb-DM4或3mg/kg的CD71 21.12-vc-MMAE)之療效。在此研究中，在小鼠中的BxPC3異種移植腫瘤生長至150mm3之平均體積。接著將小鼠隨機分配成八組，並於第1日依所指示之量的各個指示之測試物來給劑。針對各時間點作圖平均腫瘤體積±SEM。
實施例18：在非何杰金氏淋巴瘤之源於病患異種移植模式中的可活化之抗CD71-AADC體內療效
此實施例顯示本發明之具有經共軛之毒素之抗人CD71可活化之抗體(AADC)在源自非何杰金氏淋巴瘤(NHL)病患異種移植模式具療效，且此療效相當於或優於親代抗人CD71抗體藥物共軛體(ADC)所觀察到的。
圖26A及26B顯示使用非何杰金氏淋巴瘤(NHL)原發腫瘤之源自病患異種移植小鼠模式，以本發明之可活化之抗hu CD71-AADC(CD71 TF02.13-3001-spdb-DM4及CD71 TF02.13-3001-vc-MMAD)處理之小鼠，顯示隨時間之療效，類似於或高於它們個別的本發明之抗huCD71-ADC。在此研究中，二個源自病患之NHL異種移植(標示為LY2214及LY0257，Crown Bioscience)各以下列處理：同型ADC對照，經共軛至spdb-DM4(“Isotype-spdb-DM4”)或vc-MMAD(“Isotype-vc-MMAD”)；本發明之抗體藥物共軛體類抗huCD71 21.12-spdb-DM4或抗huCD71 21.12-vc-MMAD；或本發明之可活化之抗體抗hu CD71 TF02.13-3001-spdb-DM4及抗huCD71 TF02.13-3001-vc-MMAD。在各實施例中，腫瘤異種移植生長至平均體積為150mm3；接著將小鼠隨機分配成4組，並於第1日及第7日依所指示之劑量之所指示之測試物來給劑。針對各時間點作圖平均腫瘤體積±SEM。
實施例19：在源於病患異種移植模式中的可活化之抗CD71-AADC體內療效
此實施例顯示本發明之具有經共軛之毒素之抗人CD71可活化之抗體(AADC)在各種源自病患異種移植模式中具療效，且此療效高於同型對照ADC者。
圖27A顯示使用肺腫瘤(CTG-0166)之源自病患異種移植小鼠模式，小鼠以本發明之可活化之抗hu CD71-AADC(CD71 TF02.13-3001-spdb-DM4)處理，顯示隨時間之療效高於它們個別同型ADC對照(chKTI，嵌合人IgG1抗大豆胰蛋白酶抑制劑抗體，經共軛至spdb-DM4，“同型-spdb-DM4”)。圖27B顯示使用子宮內膜腫瘤(CTG-0774)之源自病患異種移植小鼠模式，小鼠以本發明之可活化之抗hu CD71-AADC(CD71 TF02.13-3001-spdb-DM4)處理，顯示隨時間之療效高於它們個別同型ADC對照(chKTI，經共軛至spdb-DM4，“同型-spdb-DM4”)。在另一研究中，使用膽管癌腫瘤(膽管癌)(CTG-1941)之源自病患異種移植小鼠模式，小鼠以本發明之可活化之抗hu CD71-AADC(CD71 TF02.13-3001-vc-MMAE)處理，顯示隨時間之療效高於同型ADC對照(chKTI，嵌合人IgG1抗大豆胰蛋白酶抑制劑抗體，經共軛至spdb-DM4)。在各實施例中，腫瘤異種移植生長至平均體積為150mm3；接著將小鼠隨機分配成4組，並於第1日針對依所指示之量的各測試物給劑來給劑。針對各時間點作圖平均腫瘤體積±SEM。
實施例20：CD71結合分析
此實施例顯示，相較於本發明之親代抗CD71抗體，本發明之抗人CD71可活化之抗體展示對重組CD71蛋白質的偏移之結合親和力。
如圖28中所描繪之實施例所示，使用固相結合分析來展示本發明之抗人CD71抗體之結合。在此實施例中，重組人CD71蛋白質(R&D Systems)以1μg/mL的濃度塗覆於經銅或鎳電鍍之ELISA盤，且接著與所示濃度之抗CD71抗體(“CD71 21.12”)或可活化之抗CD71抗體(“CD71.TF01-2001”、“CD71.TF02-2001”、“CD71.TF02.13-2001”或“CD71.TF02.18-2001”)溫育，其中可活化之抗體係在它們未經切割之形式來分析。結合抗體量的偵測，係藉由以經共軛至辣根過氧化酶的山羊抗人抗體及Ultra TMB(Thermo Fisher Scientific)偵測來溫育及偵測。
如圖28中所描繪，該例示性分析展示抗人CD71 21.12抗體結合具有~0.14nM之Kd。可活化之抗CD71抗體之結合常數向右偏移，此乃它們個別的掩蔽效率所致。
Figure 105113835-A0202-12-0373-1994
實施例21：正常人及食蟹獮猴組織中的CD71表現
此實施例使用抗CD71抗體，藉由免疫組織化學(IHC)染色，顯示CD71會在各種不同正常人及食蟹獮猴組織中表現。
表17顯示，使用IHC染色，以市售抗CD71抗體(兔抗CD71 mAb IgG；D7G9X，Cell Signaling Tech.)，CD71於某些正常人及食蟹獮猴組織樣本中表現。表17顯示各種經福馬林固定、石蠟包埋之正常人及食蟹獮猴組織的CD71的IHC染色之相對量總結，其中每個加號(“+”)對應較高量染色，且每個減號(“-”)。
Figure 105113835-A0202-12-0374-1995
實施例22：在多種原發腫瘤及轉移性腫瘤中之CD71表現
此實施例使用抗CD71抗體，藉由免疫組織化學(IHC)染色，顯示CD71會在許多及各種不同源自病患之腫瘤中表現。
表18顯示，以市售抗CD71抗體於多種源自病患腫瘤組織微陣列(TMA)上使用IHC染色，CD71在許多及各種源自病患腫瘤樣本中會中度或高度表現。表18顯示在TMA的CD71的IHC染色量總結，其呈現許多源自多種源自病患樣本之核心顯示強CD71訊號。下列各癌類型後所接的括弧中數字表示個體源自病患樣本數。
Figure 105113835-A0202-12-0375-1996
實施例23：CD71 Fab結合分析
此實施例顯示本發明之抗人CD71抗原結合片段(Fab)(其係源自本發明之抗人CD71抗體)展示對重組人及食蟹獮猴CD71蛋白質的結合親和力。
Fab抗原結合片段係依據已知的實驗程序藉由以木瓜酵素消化本發明之抗CD71 21.12抗體以產生抗CD71 Fab片段而產生。藉由測量1：3稀釋系列的Fab片段對基材固定之(substrate-immobilized)重組CD71蛋白質的動力結合及分離之速率(Octet system,ForteBio)，分析本發明之抗CD71 Fab片段結合至重組人或食蟹獮猴CD71 蛋白質。重組CD71蛋白質包括六組胺酸(His6)胜肽標籤(tag)，蛋白質藉此固定至含Ni-NTA(氮基三醋酸)基材。結果顯示於表19中。
Figure 105113835-A0202-12-0376-1997
實施例24：食蟹獮猴於ADC處理後之組織病理學
此實施例描述經本發明之抗人CD71抗體藥物共軛體(ADC)處理之食蟹獮猴展示由ADC毒性所致之組織病理學異常之研究。
二隻雄性食蟹獮猴各給予單一劑(靜脈內)的本發明之ADC(CD71 21.12-spdb-DM4)，劑量為5mg/kg或7.5mg/kg。給予7.5mg/kg劑量之標本之後由於垂死而於研究的第11日安樂死，且檢驗其組織。光學顯微鏡檢查限定選擇組織顯示顯著、具關聯性之腸病灶(例如結腸、十二指腸及空腸中潰瘍、發炎、出血、細菌過度生長及/或纖維壞死性滲出物(fibrino-necrotic exudate))。標本亦呈現肺出血、壞死、發炎及細菌，暗示二次性菌血症(secondary bacteremia)。亦有觀察到舌中潰瘍及細菌。亦有注意到明顯脾淋巴增生。
標本的垂死可能歸因於例如猛爆性及大量腸病灶，還有二次全身性病灶(例如肺中)。腸及全身性病灶 的產生可能歸因於例如所觀察之明顯股骨骨髓的骨髓缺乏及/或臨床觀察的嗜中性白血球減少。
實施例25：CD71在HT29、HCC1806及MDA MB 231細胞株上之表現
此實施例顯示本發明之抗人CD71可活化之抗體及本發明之抗人CD71可活化之抗體藥物共軛體類在多種細胞株上結合CD71，具有高於本發明之未經掩蔽之抗人CD7抗體解離常數，由此顯示在活化前掩蔽減少結合之效果。
圖29A、29B及29C顯示本發明之抗CD71可活化之抗體、可活化之抗體藥物共軛體類及親代抗體對細胞株MDA MB 231(圖29A)、H292(圖29B)及HCC1806(圖29C)之結合量。在此研究中，本發明之抗體對所指示之細胞株的結合係使用標準FACS標定方法來進行。簡言之，細胞以所指示之本發明之抗體或可活化之抗體標定：同型對照(帕利珠單抗)、人CD71抗體(抗人CD71 Ab 21.12抗體)、抗人CD71可活化之抗體(抗人CD71 TF02.13-2001或抗人CD71 TF02.13-3001)。此外，細胞亦以指定之濃度的下列者標定：同型ADC對照(帕利珠單抗-vc-MMAE)、本發明之抗人CD71抗體藥物共軛體(ADC)(CD71 Ab21.12-PEG2-vc-MMAD、CD71 Ab 21.12-vc-MMAE或CD71 Ab 21.12-spdb-DM4)、或本發明之可活化之抗體藥物共軛體(AADC)：CD71 TF02.13-3001-PEG2- vc-MMAD、CD71 TF02.13-3001-vc-MMAE、CD71 TF02.13-2001-spdb-DM4或CD71 TF02.13-3001-spdb-DM4)，且之後以經Alexa Fluor 647標定之山羊抗人IgG二級抗體來偵測。
下列表20顯示基於圖29A至29C中所繪示之結合曲線之平衡解離常數及Bmax值。這些結果顯示抗人CD71 Ab 21.12抗體以類似Kd結合所有細胞株，而本發明之抗人CD71可活化之抗體及可活化之抗體藥物共軛體類對細胞株之結合展示顯著較高Kd，其係本發明之可活化之抗體中的掩蔽部分的掩蔽效率之表示。
Figure 105113835-A0202-12-0379-1998
實施例26：抗CD71可活化之抗體與經修飾之基質的結合
此實施例顯示本發明之抗人CD71可活化之抗體在細胞株上及體外結合CD71，具有高於本發明之未經掩蔽之抗人CD71抗體解離常數，由此顯示在活化前掩蔽 減少結合之效果。
圖30A及30B顯示本發明之抗CD71可活化之抗體及親代抗體對H292細胞株之結合量。在此研究中，本發明之抗體對所指示之細胞株的結合係使用標準FACS標定方法來進行。簡言之，細胞以所示之本發明之抗體或可活化之抗體標定：同型對照(帕利珠單抗)、人CD71抗體(抗人CD71 Ab 21.12)、抗人CD71可活化之抗體(抗人CD71 TF02.13-3001、TF02.13-3007、TF02.13-3008、TF02.13-3011、TF02.13-3012、TF02.13-3013、TF02.13-2001、TF02.13-2007、TF02.13-2008、TF02.13-2011、TF02.13-2012、TF02.13-2013)，其中該可活化之抗體係以它們未經切割形式分析。這些可活化之抗體包括上列表C中所列之對應名稱序列之輕鏈。將細胞以所指示之濃度下的測試物來標定，且之後以經Alexa Fluor 647標定之山羊抗人IgG二級抗體來偵測。
圖30C及30D顯示，在固相ELISA結合分析中，本發明之抗CD71可活化之抗體及親代抗體對人CD71之結合量。在此實施例中，重組人CD71蛋白質(R&D Systems)以1μg/mL的濃度塗覆於經銅或鎳電鍍之ELISA盤，且接著與所示濃度之抗CD71抗體(抗人CD71 Ab 21.12)或可活化之抗CD71抗體(抗人CD71 TF02.13-3001、TF02.13-3007、TF02.13-3008、TF02.13-3011、TF02.13-3013、TF02.13-2001、TF02.13-2007、TF02.13-2008、TF02.13-2011、TF02.13-2012、TF02.13-2013)溫 育，其中可活化之抗體係在它們未經切割之形式來分析。結合抗體量的偵測，係藉由以經共軛至辣根過氧化酶的山羊抗人抗體及Ultra TMB(Thermo Fisher Scientific)偵測來溫育及偵測。
下列表21顯示基於圖30A至30D中所繪示之結合曲線平衡解離常數。這些結果顯示抗人CD71可活化之抗體及可活化之抗體藥物共軛體類結合至細胞株及結合至固相結合CD71以顯著低於親代抗CD71抗體之親和力，其係掩蔽部分之掩蔽效率之表示。
Figure 105113835-A0202-12-0381-1999
實施例27：在源自皮膚癌及肺癌細胞株上的抗CD71-AADC及ADC細胞毒性
此實施例顯示，相較於同型ADC對照，本發明之抗人CD71抗體藥物共軛體類(ADC類)及可活化之抗體藥物共軛體類(AADC類)展示較高的抗源自肺腺癌及皮膚鱗狀細胞癌之細胞株之細胞毒性。
圖31A至31J顯示，本發明之經共軛至PEG2-vc-MMAD或vc-MMAE之可活化之抗體藥物共軛體類(AADC類)，展現低於對應之經共軛的親代抗CD71抗體藥物共軛體的抗各種源自癌的細胞株之細胞毒性。以ADC類或AADC類處理之源自癌之細胞株，係源自皮膚鱗狀細胞癌(A431，圖31A及31B)、肺腺癌(A549，圖31C及31D)、咽下癌(hypopharyngeal carcinoma)(FaDu，圖31E及31F)、非小細胞肺癌(NCI-H292，圖31G及31H)及胰腺癌(BxPC3，圖31I及31J)。
該等抗人CD71 ADC類展示彼此類似抗細胞株的細胞毒性療效。該等抗人CD71 AADC類展示低於親代抗CD71 ADC之療效，其可能歸因於掩蔽部分之掩蔽效果。在此研究中，本發明之各種抗人CD71 ADC類或AADC類(TF02.13-3001或TF02.18-2001，經共軛至所指示之藥物)及同型藥物共軛體類以所指示之濃度施加在細胞。細胞毒性以作為對照未經處理之細胞族群之百分比判定。
實施例28：在各種源自癌的細胞株上之抗CD71 ADC細胞毒性
此實施例顯示，本發明之抗人CD71抗體藥物共軛體類(ADC類)展示顯著的抗各種源自癌細胞株之細胞毒性。
表23顯示所觀察的本發明之經共軛至vc-MMAE的抗CD71抗體藥物共軛體(ADC類)之EC50。在此研究中，本發明之抗人CD71 Ab 21-12-vc-MMAE係以一系列不同濃度施加至所指示之細胞。細胞毒性以作為對照未經處理之細胞族群之百分比判定，且EC50係以所觀察之細胞毒性曲線為基礎而計算。
Figure 105113835-A0202-12-0384-2000
實施例29：在小細胞肺癌細胞株上之CD71表現
此實施例顯示本發明之CD71抗體藥物共軛體類於多種小細胞肺癌細胞株(SCLC)上基本上等效及專一結 合CD71，同型對照或同型對照ADC缺少結合。
圖32A及32B及表24顯示本發明之抗CD71抗體及ADC類對5CLC細胞株DMS 79及DMS 153之結合量。在此研究中，本發明之抗體及ADC類對所指示之細胞株的結合係使用標準FACS標定方法來進行。簡言之，細胞係以所指示之濃度的所指示之本發明之抗體標定：抗人CD71抗體(抗人CD71 Ab21.12)或經共軛至倍癌黴素之抗人CD71抗體(抗人CD71 Ab21.12-Duoc)或對應同型對照(帕利珠單抗(pavilizumab))，且之後以經Alexa Fluor 647標定之山羊抗人IgG二級抗體來偵測。下列表24顯示基於所觀察之結合曲線之平衡解離常數。這些結果顯示抗人CD71 21.12抗體(CD71-Ab)及其對應之ADC結合具有基本上等同之親和力。
Figure 105113835-A0202-12-0385-2001
實施例30：抗CD71抗體之抗增生效果
此實施例顯示，相較於同型對照，在癌細胞株上結合CD71的本發明之抗人CD71抗體展示抗增生效果。
圖33A及33B顯示，相較於同型對照，藉由施加本發明之抗CD71 Ab 21.12抗體至H292及HCC1806 細胞株，抑制細胞增生。在此研究中，在96孔盤中，所指示之細胞以每孔1000個細胞之密度種植(plating)，且留置貼附整夜。加入所指示濃度兩倍的等體積測試物，並使孔盤溫育5日。之後，使用Cell Titer Glo試劑(Promega)測量存活率，且增生的抑制係以用以作為對照的未經處理細胞族群之百分比來判定。結果指出，本發明之抗CD71抗體顯示顯著增生抑制(在H292細胞，EC50為~4nM，且在HCC1806細胞為~10nM)。
實施例31：在多種轉移性癌樣本中的CD71表現
此實施例使用抗CD71抗體，藉由免疫組織化學(IHC)染色，顯示CD71會在許多及各種不同源自病患之轉移性腫瘤中表現。
圖34顯示，以市售抗CD71抗體於多種源自病患腫瘤組織微陣列(TMA)上使用IHC染色，CD71在許多及各種源自病患轉移性腫瘤樣本中會中度或高度表現。圖34顯示在TMA的CD71的IHC染色量總結，其呈現許多源自多種源自病患轉移性樣本之核心顯示強CD71訊號。
實施例32：在小鼠胰癌異種移植模式中的可活化之抗CD71抗體之體內影像
此實施例藉由體內螢光影像，顯示本發明之可活化之抗CD71抗體展示腫瘤相關蛋白酶依賴性體內活 化，且結合至表現於胰癌小鼠異種移植模式中的CD71。
圖35顯示具有胰腫瘤異種移植(BxPC3細胞)活小鼠之體內影像，其係使用經螢光共軛之本發明之抗CD71及可活化之抗CD71抗體。在此研究中，將7-8週大nu/nu雌鼠於右後側腹皮下植入5 x 106 BxPC3細胞(源自人胰癌細胞株)。在腫瘤長至300至380mm3後，本發明之抗CD71抗體Ab 21.12(“抗CD71”)、本發明之可活化之抗CD71抗體(“CD71 TF02.13-2012”)或本發明之經掩蔽之抗CD71抗體本發明之(缺少CM結構域)(“CD71 TF02.13-NSUB”)係以1mg/kg之劑量投予至各小鼠。所投予之抗體藉由共軛至螢光標定物AlexFluor 750來標定。在投予抗體96小時後，將小鼠予以體內螢光成影，使用745nm激發訊號，並偵測800nm發光訊號。尺標顯示所偵測之螢光訊號之相對強度。
此例示性研究之結果顯示來自經標定的本發明之未經掩蔽之抗CD71抗體及經標定的本發明之可活化之抗CD71抗體螢光訊號累積在異種移植中。相反地，對應之經掩蔽之抗CD71抗體且缺少蛋白酶切割位(CM)，在其腫瘤異種移植位中，並未偵測到累積。未受限於任何特定理論，此例示性研究展示本發明之可活化之抗CD71抗體可於體內經由腫瘤相關之蛋白酶切割而活化，因此允許經活化之可活化之抗CD71抗體在異種移植腫瘤結合CD71達相當於本發明之未經掩蔽之抗CD71抗體的程度。本發明之缺少蛋白酶切割結構域(CM)的經掩蔽之抗 CD71抗體，並非以相同方式而可活化，且因此並未明顯結合至腫瘤異種移植。
實施例33：在乳癌轉移之小鼠模式中的可活化之抗CD71抗體之體內影像
此實施例藉由體內影像，顯示本發明之可活化之抗CD71抗體展示腫瘤相關蛋白酶依賴性體內活化，且結合至表現於乳癌轉移小鼠模式中的CD71。
圖36顯示具有源自人乳癌轉移性癌模式的活小鼠之體內影像，其係使用本發明之經螢光共軛之抗CD71及可活化抗CD71抗體，且其中該癌細胞亦表現生物發光訊號。在此研究中，將7至8週大的nu/nu雌鼠左心室注射以5 x 105 MDA-MB-231-luc2-D3LN細胞，此為源自人乳癌之細胞株，其表現生物發光酵素螢光素酶。具有可偵測之癌細胞之小鼠(藉由偵測生物發光訊號，經由體內成像來判定)接受5mg/kg靜脈注射同型對照抗體帕利珠單抗(“同型”)、本發明之抗CD71抗體Ab21.12(“抗CD71”)或本發明之可活化之抗體(“CD71 TF02.13-3001”)。所投予之抗體藉由共軛至螢光標定物AlexFluor 750來標定。在投予抗體48小時後，將小鼠予以體內螢光成影，使用745nm激發訊號，並偵測800nm發光訊號。抗體螢光成影後，小鼠腹膜內注射3mg螢光素，且接著藉由阻斷激發及開始發射，於注射後10分鐘予以體內生物發光成影。
此例示性研究之結果顯示，如重疊生物發光及螢光訊號所判定，來自經標定的本發明之未經掩蔽之抗CD71抗體及經標定的本發明之可活化之抗CD71抗體螢光訊號累積在與腫瘤位置相同的位置。相反地，對應之經標定之同型對照抗體，在任何腫瘤位置處或接近處並無可偵測之累積。未受限於任何特定理論，此例示性研究展示本發明之可活化之抗CD71抗體可於體內經由腫瘤相關之蛋白酶切割而活化，因此允許經活化之可活化之抗CD71抗體在轉移性腫瘤模式中結合CD71達相當於本發明之未經掩蔽之抗CD71抗體的程度。
實施例34：可活化之抗CD71抗體的原位影像
此實施例藉由免疫組織化學(IHC)染色，顯示本發明之可活化之抗CD71抗體展示腫瘤依賴性原位活化，且結合至表現於非小細胞肺癌(NSCLC)小鼠異種移植模式中的CD71。
圖37顯示H292 NSCLC異種移植腫瘤之組織切片的IHC染色分析，其使用本發明之抗CD71及可活化之抗CD71抗體。在此研究中，來自H292異種移植腫瘤的組織切片係在存有(+BSPI)或未有(-BSPI)廣譜性蛋白酶抑制劑混合液(broad-spectrum protease inhibitor cocktail)(Protease Inhibitor Cocktail Set III,EDTA-Free(Cat.No.539134,EMD Millipore)，於1：15稀釋且20mM EDTA於Tris緩衝液)預溫育。該組織切片接著在室溫下與本發明 之抗CD71抗體Ab 21.12(“抗CD71”)或本發明之可活化之抗CD71抗體(“CD71 TF02.13-3001”、“CD71 TF02.13-2001”或“CD71 TF02.13-2012”)溫育2小時。在大量洗滌以移除未結合之材料後，本發明之結合之抗CD71抗體或經活化之抗CD71抗體的存在係以經標定AlexaFluor 647之驢抗人IgG二級抗體(Cat.No.709-605-149,Jackson ImmunoResearch)偵測。未受限於任何特定理論，此例示性研究顯示本發明之可活化之抗CD71抗體在異種移植組織切片中展示原位活化及結合至CD71，其係受以廣譜性蛋白酶抑制劑預溫育之組織抑制。本發明之未經掩蔽抗CD71抗體在異種移植組織切片中，不論存有或未有蛋白酶抑制劑預溫育，均展示原位結合至CD71。
其他實施態樣
雖然本發明已結合該發明之詳細說明來描述，但前述說明係意欲為描繪且並非限制本發明之範圍，本發明之範圍係由後附之申請專利範圍所界定。其他態樣、優點、及修飾係在後列之申請專利範圍內。
<110> CYTOMX生物製藥公司(CYTOMX THERAPEUTICS,INC.)
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<210> 1
<211> 118
<212> PPT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 1
Figure 105113835-A0305-02-0393-6
Figure 105113835-A0305-02-0394-7
<210> 2
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 2
Figure 105113835-A0305-02-0394-8
Figure 105113835-A0202-12-0393-2005
<210> 3
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 3
Figure 105113835-A0202-12-0393-2006
<210> 4
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 4
Figure 105113835-A0202-12-0394-2007
<210> 5
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 5
Figure 105113835-A0202-12-0394-2008
Figure 105113835-A0202-12-0395-2009
<210> 6
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 6
Figure 105113835-A0202-12-0395-2010
Figure 105113835-A0202-12-0396-2011
<210> 7
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 7
Figure 105113835-A0202-12-0396-2012
<210> 8
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 8
Figure 105113835-A0202-12-0396-2013
Figure 105113835-A0202-12-0397-2014
<210> 9
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 9
Figure 105113835-A0202-12-0397-2015
<210> 10
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 10
Figure 105113835-A0202-12-0397-2016
<210> 11
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 11
Figure 105113835-A0202-12-0398-2017
<210> 12
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 12
Figure 105113835-A0202-12-0398-2018
<210> 13
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 13
Figure 105113835-A0202-12-0398-2019
<210> 14
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 14
Figure 105113835-A0202-12-0398-2020
<210> 15
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 15
Figure 105113835-A0202-12-0399-2021
<210> 16
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 16
Figure 105113835-A0202-12-0399-2022
<210> 17
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 17
Figure 105113835-A0202-12-0399-2023
<210> 18
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 18
Figure 105113835-A0202-12-0399-2024
<210> 19
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 19
Figure 105113835-A0202-12-0400-2025
<210> 20
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 20
Figure 105113835-A0202-12-0400-2026
<210> 21
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 21
Figure 105113835-A0202-12-0400-2027
<210> 22
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 22
Figure 105113835-A0202-12-0400-2028
<210> 23
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 23
Figure 105113835-A0202-12-0401-2029
<210> 24
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 24
Figure 105113835-A0202-12-0401-2030
<210> 25
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 25
Figure 105113835-A0202-12-0401-2031
<210> 26
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 26
Figure 105113835-A0202-12-0401-2032
<210> 27
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 27
Figure 105113835-A0202-12-0402-2033
<210> 28
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 28
Figure 105113835-A0202-12-0402-2034
<210> 29
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 29
Figure 105113835-A0202-12-0402-2035
<210> 30
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 30
Figure 105113835-A0202-12-0402-2036
<210> 31
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 31
Figure 105113835-A0202-12-0403-2037
<210> 32
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 32
Figure 105113835-A0202-12-0403-2038
<210> 33
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 33
Figure 105113835-A0202-12-0403-2039
<210> 34
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 34
Figure 105113835-A0202-12-0403-2040
Figure 105113835-A0202-12-0404-2041
<210> 35
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 35
Figure 105113835-A0202-12-0404-2042
<210> 36
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 36
Figure 105113835-A0202-12-0404-2043
<210> 37
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 37
Figure 105113835-A0202-12-0404-2044
<210> 38
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 38
Figure 105113835-A0202-12-0405-2045
<210> 39
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 39
Figure 105113835-A0202-12-0405-2046
<210> 40
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 40
Figure 105113835-A0202-12-0405-2047
<210> 41
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 41
Figure 105113835-A0202-12-0405-2048
<210> 42
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 42
Figure 105113835-A0202-12-0406-2049
<210> 43
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 43
Figure 105113835-A0202-12-0406-2050
<210> 44
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 44
Figure 105113835-A0202-12-0406-2051
<210> 45
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 45
Figure 105113835-A0202-12-0406-2052
<210> 46
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 46
Figure 105113835-A0202-12-0407-2053
<210> 47
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 47
Figure 105113835-A0202-12-0407-2054
<210> 48
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 48
Figure 105113835-A0202-12-0407-2055
<210> 49
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 49
Figure 105113835-A0202-12-0407-2056
<210> 50
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 50
Figure 105113835-A0202-12-0408-2057
<210> 51
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 51
Figure 105113835-A0202-12-0408-2058
<210> 52
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<40(0> 52
Figure 105113835-A0202-12-0408-2059
<210> 53
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 53
Figure 105113835-A0202-12-0408-2060
<210> 54
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 54
Figure 105113835-A0202-12-0409-2061
<210> 55
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 55
Figure 105113835-A0202-12-0409-2062
<210> 56
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 56
Figure 105113835-A0202-12-0409-2063
<210> 57
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 57
Figure 105113835-A0202-12-0409-2064
<210> 58
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 58
Figure 105113835-A0202-12-0410-2065
<210> 59
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 59
Figure 105113835-A0202-12-0410-2066
<210> 60
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 60
Figure 105113835-A0202-12-0410-2067
<210> 61
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 61
Figure 105113835-A0202-12-0410-2068
<210> 62
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 62
Figure 105113835-A0202-12-0411-2069
<210> 63
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 63
Figure 105113835-A0202-12-0411-2070
<210> 64
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 64
Figure 105113835-A0202-12-0411-2071
<210> 65
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 65
Figure 105113835-A0202-12-0411-2072
<210> 66
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 66
Figure 105113835-A0202-12-0412-2073
<210> 67
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 67
Figure 105113835-A0202-12-0412-2074
<210> 68
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 68
Figure 105113835-A0202-12-0412-2075
<210> 69
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 69
Figure 105113835-A0202-12-0412-2076
<210> 70
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 70
Figure 105113835-A0202-12-0413-2077
<210> 71
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 71
Figure 105113835-A0202-12-0413-2078
<210> 72
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 72
Figure 105113835-A0202-12-0413-2079
<210> 73
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 73
Figure 105113835-A0202-12-0413-2080
<210> 74
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 74
Figure 105113835-A0202-12-0414-2081
<210> 75
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 75
Figure 105113835-A0202-12-0414-2082
<210> 76
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 76
Figure 105113835-A0202-12-0414-2083
<210> 77
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 77
Figure 105113835-A0202-12-0414-2084
<210> 78
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 78
Figure 105113835-A0202-12-0415-2085
<210> 79
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 79
Figure 105113835-A0202-12-0415-2086
<210> 80
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 80
Figure 105113835-A0202-12-0415-2087
<210> 81
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 81
Figure 105113835-A0202-12-0415-2088
<210> 82
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 82
Figure 105113835-A0202-12-0416-2089
<210> 83
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 83
Figure 105113835-A0202-12-0416-2090
<210> 84
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 84
Figure 105113835-A0202-12-0416-2091
<210> 85
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 85
Figure 105113835-A0202-12-0416-2092
<210> 86
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 86
Figure 105113835-A0202-12-0417-2093
<210> 87
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 87
Figure 105113835-A0202-12-0417-2094
<210> 88
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 88
Figure 105113835-A0202-12-0417-2095
<210> 89
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 89
Figure 105113835-A0202-12-0417-2096
Figure 105113835-A0202-12-0418-2097
<210> 90
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 90
Figure 105113835-A0202-12-0418-2098
<210> 91
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 91
Figure 105113835-A0202-12-0418-2099
<210> 92
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 92
Figure 105113835-A0202-12-0418-2100
<210> 93
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 93
Figure 105113835-A0202-12-0419-2101
<210> 94
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400<94
Figure 105113835-A0202-12-0419-2102
<210> 95
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 95
Figure 105113835-A0202-12-0419-2103
<210> 96
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 96
Figure 105113835-A0202-12-0419-2104
<210> 97
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 97
Figure 105113835-A0202-12-0420-2105
<210> 98
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 98
Figure 105113835-A0202-12-0420-2106
<210> 99
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 99
Figure 105113835-A0202-12-0420-2107
<210> 100
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 100
Figure 105113835-A0202-12-0420-2108
<210> 101
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 101
Figure 105113835-A0202-12-0421-2109
<210> 102
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 102
Figure 105113835-A0202-12-0421-2110
<210> 103
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 103
Figure 105113835-A0202-12-0421-2111
<210> 104
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 104
Figure 105113835-A0202-12-0421-2112
<210> 105
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 105
Figure 105113835-A0202-12-0422-2113
<210> 106
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 106
Figure 105113835-A0202-12-0422-2114
<210> 107
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 107
Figure 105113835-A0202-12-0422-2115
<210> 108
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 108
Figure 105113835-A0202-12-0422-2116
<210> 109
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 109
Figure 105113835-A0202-12-0423-2117
<210> 110
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 110
Figure 105113835-A0202-12-0423-2118
<210> 111
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 111
Figure 105113835-A0202-12-0423-2119
<210> 112
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 112
Figure 105113835-A0202-12-0423-2120
<210> 113
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 113
Figure 105113835-A0202-12-0424-2121
<210> 114
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 114
Figure 105113835-A0202-12-0424-2122
<210> 115
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 115
Figure 105113835-A0202-12-0424-2123
<210> 116
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 116
Figure 105113835-A0202-12-0424-2124
<210> 117
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 117
Figure 105113835-A0202-12-0425-2125
<210> 118
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 118
Figure 105113835-A0202-12-0425-2126
<210> 119
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 119
Figure 105113835-A0202-12-0425-2127
<210> 120
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 120
Figure 105113835-A0202-12-0425-2128
<210> 121
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 121
Figure 105113835-A0202-12-0426-2129
<210> 122
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 122
Figure 105113835-A0202-12-0426-2130
<210> 123
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 123
Figure 105113835-A0202-12-0426-2131
<210> 124
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 124
Figure 105113835-A0202-12-0426-2132
<210> 125
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 125
Figure 105113835-A0202-12-0427-2133
<210> 126
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 126
Figure 105113835-A0202-12-0427-2134
<210> 127
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 127
Figure 105113835-A0202-12-0427-2135
<210> 128
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 128
Figure 105113835-A0202-12-0427-2136
<210> 129
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 129
Figure 105113835-A0202-12-0428-2137
<210> 130
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 130
Figure 105113835-A0202-12-0428-2138
<210> 131
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 131
Figure 105113835-A0202-12-0428-2139
<210> 132
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 132
Figure 105113835-A0202-12-0428-2140
<210> 133
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 133
Figure 105113835-A0202-12-0429-2141
<210> 134
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 134
Figure 105113835-A0202-12-0429-2142
<210> 135
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 135
Figure 105113835-A0202-12-0429-2143
<210> 136
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 136
Figure 105113835-A0202-12-0429-2144
<210> 137
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 137
Figure 105113835-A0202-12-0430-2145
<210> 138
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 138
Figure 105113835-A0202-12-0430-2146
<210> 139
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 139
Figure 105113835-A0202-12-0430-2147
<210> 140
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 140
Figure 105113835-A0202-12-0430-2148
<210> 141
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 141
Figure 105113835-A0202-12-0431-2149
<210> 142
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 142
Figure 105113835-A0202-12-0431-2150
<210> 143
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 143
Figure 105113835-A0202-12-0431-2151
<210> 144
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 144
Figure 105113835-A0202-12-0431-2152
Figure 105113835-A0202-12-0432-2153
<210> 145
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 145
Figure 105113835-A0202-12-0432-2154
<210> 146
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 146
Figure 105113835-A0202-12-0432-2155
<210> 147
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 147
Figure 105113835-A0202-12-0432-2156
<210> 148
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 148
Figure 105113835-A0202-12-0433-2157
<210> 149
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 149
Figure 105113835-A0202-12-0433-2158
<210> 150
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 150
Figure 105113835-A0202-12-0433-2159
<210> 151
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 151
Figure 105113835-A0202-12-0433-2160
<210> 152
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 152
Figure 105113835-A0202-12-0434-2161
<210> 153
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 153
Figure 105113835-A0202-12-0434-2162
<210> 154
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 154
Figure 105113835-A0202-12-0434-2163
<210> 155
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 155
Figure 105113835-A0202-12-0434-2164
<210> 156
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 156
Figure 105113835-A0202-12-0435-2165
<210> 157
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 157
Figure 105113835-A0202-12-0435-2166
<210> 158
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 158
Figure 105113835-A0202-12-0435-2167
<210> 159
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 159
Figure 105113835-A0202-12-0435-2168
<210> 160
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 160
Figure 105113835-A0202-12-0436-2169
<210> 161
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 161
Figure 105113835-A0202-12-0436-2170
<210> 162
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 162
Figure 105113835-A0202-12-0436-2171
<210> 163
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 163
Figure 105113835-A0202-12-0436-2172
<210> 164
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 164
Figure 105113835-A0202-12-0437-2173
<210> 165
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 165
Figure 105113835-A0202-12-0437-2174
<210> 166
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 166
Figure 105113835-A0202-12-0437-2175
<210> 167
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 167
Figure 105113835-A0202-12-0437-2176
<210> 168
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 168
Figure 105113835-A0202-12-0438-2177
<210> 169
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 169
Figure 105113835-A0202-12-0438-2178
<210> 170
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 170
Figure 105113835-A0202-12-0438-2179
<210> 171
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 171
Figure 105113835-A0202-12-0438-2180
<210> 172
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 172
Figure 105113835-A0202-12-0439-2181
<210> 173
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 173
Figure 105113835-A0202-12-0439-2182
<210> 174
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 174
Figure 105113835-A0202-12-0439-2183
<210> 175
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 175
Figure 105113835-A0202-12-0439-2184
<210> 176
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 176
Figure 105113835-A0202-12-0440-2185
<210> 177
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 177
Figure 105113835-A0202-12-0440-2186
<210> 178
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 178
Figure 105113835-A0202-12-0440-2187
<210> 179
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 179
Figure 105113835-A0202-12-0440-2188
<210> 180
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 180
Figure 105113835-A0202-12-0441-2189
<210> 181
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 181
Figure 105113835-A0202-12-0441-2190
<210> 182
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 182
Figure 105113835-A0202-12-0441-2191
<210> 183
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 183
Figure 105113835-A0202-12-0441-2192
<210> 184
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 184
Figure 105113835-A0202-12-0442-2193
<210> 185
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 185
Figure 105113835-A0202-12-0442-2194
<210> 186
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 186
Figure 105113835-A0202-12-0442-2195
<210> 187
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 187
Figure 105113835-A0202-12-0442-2196
<210> 188
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 188
Figure 105113835-A0202-12-0443-2197
<210> 189
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 189
Figure 105113835-A0202-12-0443-2198
<210> 190
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 190
Figure 105113835-A0202-12-0443-2199
<210> 191
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 191
Figure 105113835-A0202-12-0443-2200
<210> 192
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 192
Figure 105113835-A0202-12-0444-2201
<210> 193
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 193
Figure 105113835-A0202-12-0444-2202
<210> 194
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 194
Figure 105113835-A0202-12-0444-2203
<210> 195
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 195
Figure 105113835-A0202-12-0444-2204
<210> 196
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 196
Figure 105113835-A0202-12-0445-2205
<210> 197
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 197
Figure 105113835-A0202-12-0445-2206
<210> 198
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 198
Figure 105113835-A0202-12-0445-2207
<210> 199
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 199
Figure 105113835-A0202-12-0445-2208
Figure 105113835-A0202-12-0446-2209
<210> 200
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 200
Figure 105113835-A0202-12-0446-2210
<210> 201
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 201
Figure 105113835-A0202-12-0446-2211
<210> 202
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 202
Figure 105113835-A0202-12-0446-2212
<210> 203
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 203
Figure 105113835-A0202-12-0447-2213
<210> 204
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 204
Figure 105113835-A0202-12-0447-2214
<210> 205
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 205
Figure 105113835-A0202-12-0447-2215
<210> 206
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 206
Figure 105113835-A0202-12-0447-2216
<210> 207
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 207
Figure 105113835-A0202-12-0448-2217
<210> 208
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 208
Figure 105113835-A0202-12-0448-2218
<210> 209
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 209
Figure 105113835-A0202-12-0448-2219
<210> 210
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 210
Figure 105113835-A0202-12-0448-2220
<210> 211
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 211
Figure 105113835-A0202-12-0449-2221
<210> 212
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 212
Figure 105113835-A0202-12-0449-2222
<210> 213
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 213
Figure 105113835-A0202-12-0449-2223
<210> 214
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 214
Figure 105113835-A0202-12-0449-2224
<210> 215
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 215
Figure 105113835-A0202-12-0450-2225
<210> 216
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 216
Figure 105113835-A0202-12-0450-2226
<210> 217
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 217
Figure 105113835-A0202-12-0450-2227
<210> 218
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 218
Figure 105113835-A0202-12-0450-2228
<210> 219
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 219
Figure 105113835-A0202-12-0451-2229
<210> 220
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 220
Figure 105113835-A0202-12-0451-2230
<210> 221
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 221
Figure 105113835-A0202-12-0451-2231
<210> 222
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 222
Figure 105113835-A0202-12-0451-2232
<210> 223
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 223
Figure 105113835-A0202-12-0452-2233
<210> 224
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 224
Figure 105113835-A0202-12-0452-2234
<210> 225
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 225
Figure 105113835-A0202-12-0452-2235
<210> 226
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 226
Figure 105113835-A0202-12-0452-2236
<210> 227
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 227
Figure 105113835-A0202-12-0453-2237
<210> 228
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 228
Figure 105113835-A0202-12-0453-2238
<210> 229
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 229
Figure 105113835-A0202-12-0453-2239
<210> 230
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 230
Figure 105113835-A0202-12-0453-2240
<210> 231
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 231
Figure 105113835-A0202-12-0454-2241
<210> 232
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 232
Figure 105113835-A0202-12-0454-2242
<210> 233
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 233
Figure 105113835-A0202-12-0454-2243
<210> 234
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 234
Figure 105113835-A0202-12-0454-2244
<210> 235
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 235
Figure 105113835-A0202-12-0455-2245
<210> 236
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 236
Figure 105113835-A0202-12-0455-2246
<210> 237
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 237
Figure 105113835-A0202-12-0455-2247
<210> 238
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 238
Figure 105113835-A0202-12-0455-2248
<210> 229
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 239
Figure 105113835-A0202-12-0456-2249
<210> 240
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 240
Figure 105113835-A0202-12-0456-2250
<210> 241
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 241
Figure 105113835-A0202-12-0456-2251
<210> 242
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 242
Figure 105113835-A0202-12-0456-2252
<210> 243
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 243
Figure 105113835-A0202-12-0457-2253
<210> 244
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 244
Figure 105113835-A0202-12-0457-2254
<210> 245
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 245
Figure 105113835-A0202-12-0457-2255
<210> 246
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 246
Figure 105113835-A0202-12-0457-2256
<210> 247
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 247
Figure 105113835-A0202-12-0458-2257
<210> 248
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 248
Figure 105113835-A0202-12-0458-2258
<210> 249
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 249
Figure 105113835-A0202-12-0458-2259
<210> 250
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 250
Figure 105113835-A0202-12-0458-2260
<210> 251
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 251
Figure 105113835-A0202-12-0459-2261
<210> 252
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 252
Figure 105113835-A0202-12-0459-2262
<210> 253
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 253
Figure 105113835-A0202-12-0459-2263
<210> 254
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 254
Figure 105113835-A0202-12-0459-2264
Figure 105113835-A0202-12-0460-2265
<210> 255
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 255
Figure 105113835-A0202-12-0460-2266
<210> 256
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 256
Figure 105113835-A0202-12-0460-2267
<210> 257
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 257
Figure 105113835-A0202-12-0460-2268
<210> 258
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 258
Figure 105113835-A0202-12-0461-2269
<210> 259
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 259
Figure 105113835-A0202-12-0461-2270
<210> 260
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 260
Figure 105113835-A0202-12-0461-2271
<210> 261
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 261
Figure 105113835-A0202-12-0461-2272
<210> 262
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 262
Figure 105113835-A0202-12-0462-2273
<210> 263
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 263
Figure 105113835-A0202-12-0462-2274
<210> 264
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 264
Figure 105113835-A0202-12-0462-2275
<210> 265
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 265
Figure 105113835-A0202-12-0462-2276
<210> 266
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 266
Figure 105113835-A0202-12-0463-2277
<210> 267
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 267
Figure 105113835-A0202-12-0463-2278
<210> 268
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 268
Figure 105113835-A0202-12-0463-2279
<210> 269
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 269
Figure 105113835-A0202-12-0463-2280
<210> 270
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 270
Figure 105113835-A0202-12-0464-2281
<210> 271
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 271
Figure 105113835-A0202-12-0464-2282
<210> 272
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 272
Figure 105113835-A0202-12-0464-2283
<210> 273
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 273
Figure 105113835-A0202-12-0464-2284
<210> 274
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 274
Figure 105113835-A0202-12-0465-2285
<210> 275
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 275
Figure 105113835-A0202-12-0465-2286
<210> 276
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 276
Figure 105113835-A0202-12-0465-2287
<210> 277
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 277
Figure 105113835-A0202-12-0465-2288
<210> 278
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 278
Figure 105113835-A0202-12-0466-2289
<210> 279
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 279
Figure 105113835-A0202-12-0466-2290
<210> 280
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 280
Figure 105113835-A0202-12-0466-2291
<210> 281
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 281
Figure 105113835-A0202-12-0466-2292
<210> 282
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 282
Figure 105113835-A0202-12-0467-2293
<210> 283
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 283
Figure 105113835-A0202-12-0467-2294
<210> 284
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 284
Figure 105113835-A0202-12-0467-2295
<210> 285
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 285
Figure 105113835-A0202-12-0467-2296
<210> 286
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 286
Figure 105113835-A0202-12-0468-2297
<210> 287
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 287
Figure 105113835-A0202-12-0468-2298
<210> 288
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 288
Figure 105113835-A0202-12-0468-2299
<210> 289
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 289
Figure 105113835-A0202-12-0468-2300
<210> 290
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 290
Figure 105113835-A0202-12-0469-2301
<210> 291
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 291
Figure 105113835-A0202-12-0469-2302
<210> 292
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 292
Figure 105113835-A0202-12-0469-2303
<210> 293
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 293
Figure 105113835-A0202-12-0469-2304
<210> 294
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 294
Figure 105113835-A0202-12-0470-2305
<210> 295
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 295
Figure 105113835-A0202-12-0470-2306
<210> 296
<400> 296 000
<210> 297
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 297
Figure 105113835-A0202-12-0470-2307
<210> 298
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 298
Figure 105113835-A0202-12-0471-2308
<210> 299
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 299
Figure 105113835-A0202-12-0471-2309
<210> 300
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 300
Figure 105113835-A0202-12-0471-2310
<210> 301
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 301
Figure 105113835-A0202-12-0471-2311
<210> 302
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 302
Figure 105113835-A0202-12-0472-2312
<210> 303
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 303
Figure 105113835-A0202-12-0472-2313
<210> 304
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 304
Figure 105113835-A0202-12-0472-2314
<210> 305
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 305
Figure 105113835-A0202-12-0472-2315
<210> 306
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 306
Figure 105113835-A0202-12-0473-2316
<210> 307
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 307
Figure 105113835-A0202-12-0473-2317
<210> 308
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 308
Figure 105113835-A0202-12-0473-2318
<210> 309
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 309
Figure 105113835-A0202-12-0473-2319
<210> 310
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 310
Figure 105113835-A0202-12-0474-2320
<210> 311
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 311
Figure 105113835-A0202-12-0474-2321
<210> 312
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 312
Figure 105113835-A0202-12-0474-2322
<210> 313
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 313
Figure 105113835-A0202-12-0474-2323
<210> 314
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 314
Figure 105113835-A0202-12-0475-2324
<210> 315
<211> 255
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 315
Figure 105113835-A0202-12-0475-2325
Figure 105113835-A0202-12-0476-2326
<210> 316
<400> 316 000
<210> 317
<400> 317 000
<210> 318
<400> 318 000
<210> 319
<400> 319 000
<210> 320
<400> 320 000
<210> 321
<400> 321 000
<210> 322
<400> 322 000
<210> 323
<211> 213
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 323
Figure 105113835-A0202-12-0477-2327
Figure 105113835-A0202-12-0478-2328
<210> 324
<211> 639
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 324
Figure 105113835-A0202-12-0478-2329
<210> 325
<211> 448
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 325
Figure 105113835-A0202-12-0479-2330
Figure 105113835-A0202-12-0480-2331
Figure 105113835-A0202-12-0481-2332
<210> 326
<211> 1344
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 326
Figure 105113835-A0202-12-0481-2333
Figure 105113835-A0202-12-0482-2334
<210> 327
<211> 260
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 327
Figure 105113835-A0202-12-0482-2335
Figure 105113835-A0202-12-0483-2336
<210> 328
<211> 780
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 328
Figure 105113835-A0202-12-0483-2337
Figure 105113835-A0202-12-0484-2338
<210> 329
<211> 264
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 329
Figure 105113835-A0202-12-0484-2339
Figure 105113835-A0202-12-0485-2340
<210> 330
<211> 792
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 330
Figure 105113835-A0202-12-0485-2341
Figure 105113835-A0202-12-0486-2342
<210> 331
<211> 260
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 331
Figure 105113835-A0202-12-0486-2343
Figure 105113835-A0202-12-0487-2344
<210> 332
<211> 780
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 332
Figure 105113835-A0202-12-0487-2345
Figure 105113835-A0202-12-0488-2346
<210> 333
<211> 264
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 333
Figure 105113835-A0202-12-0488-2347
Figure 105113835-A0202-12-0489-2348
<210> 334
<211> 792
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 334
Figure 105113835-A0202-12-0490-2349
<210> 335
<211> 255
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 335
Figure 105113835-A0202-12-0490-2350
Figure 105113835-A0202-12-0491-2351
<210> 336
<211> 765
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 336
Figure 105113835-A0202-12-0492-2352
<210> 337
<211> 259
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 337
Figure 105113835-A0202-12-0492-2353
Figure 105113835-A0202-12-0493-2354
<210> 338
<211> 777
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 338
Figure 105113835-A0202-12-0494-2355
<210> 339
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 339
Figure 105113835-A0202-12-0494-2356
<210> 340
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 340
Figure 105113835-A0202-12-0495-2357
<210> 341
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 341
Figure 105113835-A0202-12-0495-2358
<210> 342
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 342
Figure 105113835-A0202-12-0495-2359
<210> 343
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 343
Figure 105113835-A0202-12-0495-2360
<210> 344
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 344
Figure 105113835-A0202-12-0496-2361
<210> 345
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 345
Figure 105113835-A0202-12-0496-2362
<210> 346
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 346
Figure 105113835-A0202-12-0496-2363
<210> 347
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 347
Figure 105113835-A0202-12-0496-2364
<210> 348
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 348
Figure 105113835-A0202-12-0497-2365
<210> 349
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 349
Figure 105113835-A0202-12-0497-2366
<210> 350
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 350
Figure 105113835-A0202-12-0497-2367
<210> 351
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 351
Figure 105113835-A0202-12-0497-2368
<210> 352
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 352
Figure 105113835-A0202-12-0498-2369
<210> 353
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 353
Figure 105113835-A0202-12-0498-2370
<210> 354
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 354
Figure 105113835-A0202-12-0498-2371
<210> 355
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 355
Figure 105113835-A0202-12-0498-2372
<210> 356
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 356
Figure 105113835-A0202-12-0499-2373
<210> 357
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 357
Figure 105113835-A0202-12-0499-2374
<210> 358
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 358
Figure 105113835-A0202-12-0499-2375
<210> 359
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 359
Figure 105113835-A0202-12-0499-2376
<210> 360
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 360
Figure 105113835-A0202-12-0500-2377
<210> 361
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 361
Figure 105113835-A0202-12-0500-2378
<210> 362
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 362
Figure 105113835-A0202-12-0500-2379
<210> 363
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 363
Figure 105113835-A0202-12-0500-2380
<210> 364
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 364
Figure 105113835-A0202-12-0501-2381
<210> 365
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 365
Figure 105113835-A0202-12-0501-2382
<210> 366
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 366
Figure 105113835-A0202-12-0501-2383
<210> 367
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 367
Figure 105113835-A0202-12-0501-2384
<210> 368
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 368
Figure 105113835-A0202-12-0502-2385
<210> 369
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 369
Figure 105113835-A0202-12-0502-2386
<210> 370
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 370
Figure 105113835-A0202-12-0502-2387
<210> 371
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 371
Figure 105113835-A0202-12-0502-2388
<210> 372
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 372
Figure 105113835-A0202-12-0503-2389
<210> 373
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 373
Figure 105113835-A0202-12-0503-2390
<210> 374
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 374
Figure 105113835-A0202-12-0503-2391
<210> 375
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 375
Figure 105113835-A0202-12-0503-2392
<210> 376
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 376
Figure 105113835-A0202-12-0504-2393
<210> 377
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 377
Figure 105113835-A0202-12-0504-2394
<210> 378
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 378
Figure 105113835-A0202-12-0504-2395
<210> 379
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 379
Figure 105113835-A0202-12-0504-2396
<210> 380
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 380
Figure 105113835-A0202-12-0505-2397
<210> 381
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 381
Figure 105113835-A0202-12-0505-2398
<210> 382
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 382
Figure 105113835-A0202-12-0505-2399
<210> 383
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 383
Figure 105113835-A0202-12-0505-2400
Figure 105113835-A0202-12-0506-2401
<210> 384
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 384
Figure 105113835-A0202-12-0506-2402
<210> 385
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 385
Figure 105113835-A0202-12-0506-2403
<210> 386
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 386
Figure 105113835-A0202-12-0506-2404
<210> 387
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 387
Figure 105113835-A0202-12-0507-2405
<210> 388
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 388
Figure 105113835-A0202-12-0507-2406
<210> 389
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 389
Figure 105113835-A0202-12-0507-2407
<210> 390
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 390
Figure 105113835-A0202-12-0507-2408
<210> 391
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 391
Figure 105113835-A0202-12-0508-2409
<210> 392
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 392
Figure 105113835-A0202-12-0508-2410
<210> 393
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 393
Figure 105113835-A0202-12-0508-2411
<210> 394
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 394
Figure 105113835-A0202-12-0508-2412
<210> 395
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 395
Figure 105113835-A0202-12-0509-2413
<210> 396
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 396
Figure 105113835-A0202-12-0509-2414
<210> 397
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 397
Figure 105113835-A0202-12-0509-2415
<210> 398
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 398
Figure 105113835-A0202-12-0509-2416
<210> 399
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 399
Figure 105113835-A0202-12-0510-2417
<210> 400
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 400
Figure 105113835-A0202-12-0510-2418
<210> 401
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 401
Figure 105113835-A0202-12-0510-2419
<210> 402
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 402
Figure 105113835-A0202-12-0510-2420
<210> 403
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 403
Figure 105113835-A0202-12-0511-2421
<210> 404
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 404
Figure 105113835-A0202-12-0511-2422
<210> 405
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 405
Figure 105113835-A0202-12-0511-2423
<210> 406
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 406
Figure 105113835-A0202-12-0511-2424
<210> 407
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 407
Figure 105113835-A0202-12-0512-2425
<210> 408
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 408
Figure 105113835-A0202-12-0512-2426
<210> 409
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 409
Figure 105113835-A0202-12-0512-2427
<210> 410
<211> 24
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 410
Figure 105113835-A0202-12-0513-2428
<210> 411
<211> 24
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 411
Figure 105113835-A0202-12-0513-2429
<210> 412
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 412
Figure 105113835-A0202-12-0513-2430
<210> 413
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 413
Figure 105113835-A0202-12-0514-2431
<210> 414
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 414
Figure 105113835-A0202-12-0514-2432
<210> 415
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 415
Figure 105113835-A0202-12-0514-2433
<210> 416
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 416
Figure 105113835-A0202-12-0515-2434
<210> 417
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 417
Figure 105113835-A0202-12-0515-2435
<210> 418
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 418
Figure 105113835-A0202-12-0515-2436
<210> 419
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 419
Figure 105113835-A0202-12-0516-2437
<210> 420
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 420
Figure 105113835-A0202-12-0516-2438
<210> 421
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 421
Figure 105113835-A0202-12-0516-2439
<210> 422
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 422
Figure 105113835-A0202-12-0517-2440
<210> 423
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 423
Figure 105113835-A0202-12-0517-2441
<210> 424
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 424
Figure 105113835-A0202-12-0517-2442
<210> 425
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 425
Figure 105113835-A0202-12-0517-2443
Figure 105113835-A0202-12-0518-2444
<210> 426
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 426
Figure 105113835-A0202-12-0518-2445
Figure 105113835-A0202-12-0519-2446
<210> 427
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 427
Figure 105113835-A0202-12-0519-2447
<210> 428
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 428
Figure 105113835-A0202-12-0520-2448
<210> 429
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 429
Figure 105113835-A0202-12-0520-2449
Figure 105113835-A0202-12-0521-2450
<210> 430
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 430
Figure 105113835-A0202-12-0521-2451
Figure 105113835-A0202-12-0522-2452
<210> 431
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 431
Figure 105113835-A0202-12-0522-2453
<210> 432
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 432
Figure 105113835-A0202-12-0523-2454
<210> 433
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 433
Figure 105113835-A0202-12-0523-2455
Figure 105113835-A0202-12-0524-2456
<210> 434
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 434
Figure 105113835-A0202-12-0524-2457
Figure 105113835-A0202-12-0525-2458
<210> 435
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 435
Figure 105113835-A0202-12-0525-2459
<210> 436
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 436
Figure 105113835-A0202-12-0525-2460
Figure 105113835-A0202-12-0526-2461
<210> 437
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 437
Figure 105113835-A0202-12-0526-2462
Figure 105113835-A0202-12-0527-2463
<210> 438
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 438
Figure 105113835-A0202-12-0527-2464
<210> 439
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 439
Figure 105113835-A0202-12-0528-2465
<210> 440
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 440
Figure 105113835-A0202-12-0528-2466
<210> 441
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 441
Figure 105113835-A0202-12-0529-2467
<210> 442
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 442
Figure 105113835-A0202-12-0529-2468
<210> 443
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 443
Figure 105113835-A0202-12-0530-2469
<210> 444
<211> 138
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 444
Figure 105113835-A0202-12-0530-2470
Figure 105113835-A0202-12-0531-2471
<210> 445
<211> 138
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 445
Figure 105113835-A0202-12-0531-2472
Figure 105113835-A0202-12-0532-2473
<210> 446
<211> 136
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 446
Figure 105113835-A0202-12-0532-2474
Figure 105113835-A0202-12-0533-2475
<210> 447
<211> 138
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 447
Figure 105113835-A0202-12-0533-2476
Figure 105113835-A0202-12-0534-2477
<210> 448
<211> 449
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 448
Figure 105113835-A0202-12-0534-2478
Figure 105113835-A0202-12-0535-2479
Figure 105113835-A0202-12-0536-2480
<210> 449
<211> 132
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 449
Figure 105113835-A0202-12-0536-2481
Figure 105113835-A0202-12-0537-2482
<210> 450
<211> 128
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 450
Figure 105113835-A0202-12-0537-2483
<210> 451
<211> 134
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 451
Figure 105113835-A0202-12-0538-2484
<210> 452
<211> 130
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 452
Figure 105113835-A0202-12-0538-2485
Figure 105113835-A0202-12-0539-2486
<210> 453
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 453
Figure 105113835-A0202-12-0539-2487
Figure 105113835-A0202-12-0540-2488
<210> 454
<211> 137
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 454
Figure 105113835-A0202-12-0541-2489
<210> 455
<211> 128
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 455
Figure 105113835-A0202-12-0541-2490
Figure 105113835-A0202-12-0542-2491
<210> 456
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 456
Figure 105113835-A0202-12-0542-2492
Figure 105113835-A0202-12-0543-2493
<210> 457
<211> 127
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 457
Figure 105113835-A0202-12-0543-2494
<210> 458
<211> 138
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 458
Figure 105113835-A0202-12-0544-2495
<210> 459
<211> 129
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 459
Figure 105113835-A0202-12-0544-2496
Figure 105113835-A0202-12-0545-2497
<210> 460
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 460
Figure 105113835-A0202-12-0545-2498
Figure 105113835-A0202-12-0546-2499
<210> 461
<211> 130
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 461
Figure 105113835-A0202-12-0546-2500
Figure 105113835-A0202-12-0547-2501
<210> 462
<211> 129
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 462
Figure 105113835-A0202-12-0547-2502
<210> 463
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 463
Figure 105113835-A0202-12-0548-2503
<210> 464
<211> 130
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 464
Figure 105113835-A0202-12-0548-2504
Figure 105113835-A0202-12-0549-2505
<210> 465
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 465
Figure 105113835-A0202-12-0549-2506
Figure 105113835-A0202-12-0550-2507
<210> 466
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 466
Figure 105113835-A0202-12-0550-2508
<210> 467
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 467
Figure 105113835-A0202-12-0551-2509
<210> 468
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 468
Figure 105113835-A0202-12-0551-2510
Figure 105113835-A0202-12-0552-2511
<210> 469
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 469
Figure 105113835-A0202-12-0552-2512
Figure 105113835-A0202-12-0553-2513
<210> 470
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 470
Figure 105113835-A0202-12-0553-2514
Figure 105113835-A0202-12-0554-2515
<210> 471
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 471
Figure 105113835-A0202-12-0554-2516
<210> 472
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 472
Figure 105113835-A0202-12-0554-2517
Figure 105113835-A0202-12-0555-2518
<210> 473
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 473
Figure 105113835-A0202-12-0555-2519
Figure 105113835-A0202-12-0556-2520
<210> 474
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 474
Figure 105113835-A0202-12-0556-2521
<210> 475
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 475
Figure 105113835-A0202-12-0557-2522
<210> 476
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 476
Figure 105113835-A0202-12-0557-2523
Figure 105113835-A0202-12-0558-1596
<210> 477
<211> 245
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 477
Figure 105113835-A0202-12-0558-1597
Figure 105113835-A0202-12-0559-1598
<210> 478
<211> 243
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 478
Figure 105113835-A0202-12-0559-1599
Figure 105113835-A0202-12-0560-1600
<210> 479
<211> 242
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 479
Figure 105113835-A0202-12-0561-1601
Figure 105113835-A0202-12-0562-1602
<210> 480
<211> 243
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 480
Figure 105113835-A0202-12-0562-1603
Figure 105113835-A0202-12-0563-1604
<210> 481
<211> 241
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 481
Figure 105113835-A0202-12-0563-1605
Figure 105113835-A0202-12-0564-1606
<210> 482
<211> 243
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 482
Figure 105113835-A0202-12-0565-1607
Figure 105113835-A0202-12-0566-1608
<210> 483
<211> 138
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 483
Figure 105113835-A0202-12-0566-1609
Figure 105113835-A0202-12-0567-1610
<210> 484
<211> 130
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 484
Figure 105113835-A0202-12-0567-1611
<210> 485
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 485
Figure 105113835-A0202-12-0568-1612
<210> 486
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 486
Figure 105113835-A0202-12-0568-1613
<210> 487
<211> 249
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 487
Figure 105113835-A0202-12-0569-1614
Figure 105113835-A0202-12-0570-1615
<210> 488
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 488
Figure 105113835-A0202-12-0570-1616
<210> 489
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 489
Figure 105113835-A0202-12-0570-1617
<210> 490
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 490
Figure 105113835-A0202-12-0571-1618
<210> 491
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 491
Figure 105113835-A0202-12-0571-1619
<210> 492
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 492
Figure 105113835-A0202-12-0571-1620
<210> 493
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 493
Figure 105113835-A0202-12-0571-1621
<210> 494
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 494
Figure 105113835-A0202-12-0572-1622
<210> 495
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 495
Figure 105113835-A0202-12-0572-1623
<210> 496
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 496
Figure 105113835-A0202-12-0572-1624
<210> 497
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 497
Figure 105113835-A0202-12-0572-1625
<210> 498
<400> 498 000
<210> 499
<400> 499 000
<210> 500
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 500
Figure 105113835-A0202-12-0573-1626
<210> 501
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (4)..(4)
<223> X係F或P
<400> 501
Figure 105113835-A0202-12-0573-1627
<210> 502
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 502
Figure 105113835-A0202-12-0574-1628
<210> 503
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 503
Figure 105113835-A0202-12-0574-1629
<210> 504
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 504
Figure 105113835-A0202-12-0574-1630
<210> 505
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (6)..(6)
<223> X係G或D
<400> 505
Figure 105113835-A0202-12-0574-1631
<210> 506
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 506
Figure 105113835-A0305-02-0577-9
<210> 507
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 507
Figure 105113835-A0305-02-0577-10
<210> 508
<211> 11
<212> PRT
<213> A工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 508
Figure 105113835-A0305-02-0577-11
<210> 509
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 509
Figure 105113835-A0305-02-0577-12
Figure 105113835-A0305-02-0578-13
<210> 510
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 510
Figure 105113835-A0305-02-0578-14
<210> 511
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (5)..(5)
<223> X係I或S
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (12)..(12)
<223> X係N或S
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (14)..(14)
<223> X係N或T
<400> 511
Figure 105113835-A0305-02-0578-15
Figure 105113835-A0202-12-0577-1639
<210> 512
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 512
Figure 105113835-A0202-12-0577-1640
<210> 513
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 513
Figure 105113835-A0202-12-0577-1641
<210> 514
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 514
Figure 105113835-A0202-12-0577-1642
<210> 515
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 515
Figure 105113835-A0202-12-0578-1643
<210> 516
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 516
Figure 105113835-A0202-12-0578-1644
<210> 517
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 517
Figure 105113835-A0202-12-0578-1645
<210> 518
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 518
Figure 105113835-A0202-12-0578-1646
<210> 519
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (4)..(4)
<223> X係N或R
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (6)..(6)
<223> X係A或H
<400> 519
Figure 105113835-A0202-12-0579-1647
<210> 520
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> X係Q或R
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (3)..(3)
<223> X係A或G
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (4)..(4)
<223> X係L或Y
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (5)..(5)
<223> X係Y或G
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (6)..(6)
<223> X係D或Y
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (7)..(7)
<223> X係G或D
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (8)..(9)
<223> X係Y或G
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (10)..(10)
<223> X係F或缺無
<400> 520
Figure 105113835-A0202-12-0580-1648
<210> 521
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> X係S或G
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (3)..(3)
<223> X係S或L
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (12)..(12)
<223> X係P或N
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (14)..(14)
<223> X係K或T
<400> 521
Figure 105113835-A0202-12-0580-1649
Figure 105113835-A0202-12-0581-1650
<210> 522
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 522
Figure 105113835-A0202-12-0581-1651
<210> 523
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (3)..(3)
<223> X係S或G
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (5)..(5)
<223> X係V或D
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (6)..(6)
<223> X係P或I
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (7)..(7)
<223> X係S或T
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (10)..(10)
<223> X係F或L
<400> 523
Figure 105113835-A0202-12-0582-1652
<210> 524
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 524
Figure 105113835-A0202-12-0582-1653
<210> 525
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 525
Figure 105113835-A0202-12-0582-1654
<210> 526
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 526
Figure 105113835-A0202-12-0582-1655
<210> 527
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 527
Figure 105113835-A0202-12-0583-1656
<210> 528
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 528
Figure 105113835-A0202-12-0583-1657
<210> 529
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 529
Figure 105113835-A0202-12-0583-1658
<210> 530
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 530
Figure 105113835-A0202-12-0583-1659
<210> 531
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 531
Figure 105113835-A0202-12-0584-1660
<210> 532
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 532
Figure 105113835-A0202-12-0584-1661
<210> 533
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 533
Figure 105113835-A0202-12-0584-1662
<210> 534
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 534
Figure 105113835-A0202-12-0585-1663
<210> 535
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 535
Figure 105113835-A0202-12-0585-1664
<210> 536
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 536
Figure 105113835-A0202-12-0585-1665
<210> 537
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 537
Figure 105113835-A0202-12-0585-1666
<210> 538
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 538
Figure 105113835-A0202-12-0586-1667
<210> 539
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 539
Figure 105113835-A0202-12-0586-1668
<210> 540
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 540
Figure 105113835-A0202-12-0586-1669
<210> 541
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 541
Figure 105113835-A0202-12-0587-1670
<210> 542
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 542
Figure 105113835-A0202-12-0587-1671
<210> 543
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 543
Figure 105113835-A0202-12-0587-1672
<210> 544
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 544
Figure 105113835-A0202-12-0587-1673
<210> 545
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 545
Figure 105113835-A0202-12-0588-1674
<210> 546
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 546
Figure 105113835-A0202-12-0588-1675
<210> 547
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 547
Figure 105113835-A0202-12-0588-1676
<210> 548
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 548
Figure 105113835-A0202-12-0588-1677
<210> 549
<400> 549 000
<210> 550
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 550
Figure 105113835-A0202-12-0589-1678
<210> 551
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 551
Figure 105113835-A0202-12-0589-1679
<210> 552
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 552
Figure 105113835-A0202-12-0589-1680
<210> 553
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 553
Figure 105113835-A0202-12-0590-1681
<210> 554
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (3)..(3)
<223> X係Y或A
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (4)..(4)
<223> X係H或N
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (5)..(5)
<223> X係R或T
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (6)..(6)
<223> X係S或L
<400> 554
Figure 105113835-A0202-12-0590-1682
<210> 555
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 555
Figure 105113835-A0202-12-0590-1683
Figure 105113835-A0202-12-0591-1684
<210> 556
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 556
Figure 105113835-A0202-12-0591-1685
<210> 557
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 557
Figure 105113835-A0202-12-0591-1686
<210> 558
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 558
Figure 105113835-A0202-12-0591-1687
<210> 559
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 559
Figure 105113835-A0202-12-0592-1688
<210> 560
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 560
Figure 105113835-A0202-12-0592-1689
<210> 561
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 561
Figure 105113835-A0202-12-0592-1690
<210> 562
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 562
Figure 105113835-A0202-12-0592-1691
<210> 563
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 563
Figure 105113835-A0305-02-0595-16
<210> 564
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 564
Figure 105113835-A0305-02-0595-17
<210> 565
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 565
Figure 105113835-A0305-02-0595-18
<210> 566
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 566
Figure 105113835-A0305-02-0595-19
<210> 567
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 567
Figure 105113835-A0305-02-0596-20
<210> 568
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 568
Figure 105113835-A0305-02-0596-21
<210> 569
<400> 569 000
<210> 570
<400> 570 000
<210> 571
<400> 571 000
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<400> 572 000
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<400> 573 000
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<400> 574 000
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<400> 575 000
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<400> 576 000
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<400> 577 000
<210> 578
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 578
Figure 105113835-A0202-12-0595-1697
<210> 579
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 579
Figure 105113835-A0202-12-0595-1698
<210> 580
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 580
Figure 105113835-A0202-12-0595-1699
Figure 105113835-A0202-12-0596-1700
<210> 581
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 581
Figure 105113835-A0202-12-0596-1701
<210> 582
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 582
Figure 105113835-A0202-12-0596-1702
<210> 583
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 583
Figure 105113835-A0202-12-0596-1703
<210> 584
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 584
Figure 105113835-A0202-12-0597-1704
<210> 585
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 585
Figure 105113835-A0202-12-0597-1705
<210> 586
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 586
Figure 105113835-A0202-12-0597-1706
<210> 587
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 587
Figure 105113835-A0202-12-0597-1707
<210> 588
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 588
Figure 105113835-A0202-12-0598-1708
<210> 589
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 589
Figure 105113835-A0202-12-0598-1709
<210> 590
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 590
Figure 105113835-A0202-12-0598-1710
<210> 591
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 591
Figure 105113835-A0202-12-0598-1711
<210> 592
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 592
Figure 105113835-A0202-12-0599-1712
<210> 593
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 593
Figure 105113835-A0202-12-0599-1713
<210> 594
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 594
Figure 105113835-A0202-12-0599-1714
<210> 595
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 595
Figure 105113835-A0202-12-0599-1715
<210> 596
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 596
Figure 105113835-A0202-12-0600-1716
<210> 597
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 597
Figure 105113835-A0202-12-0600-1717
<210> 598
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 598
Figure 105113835-A0202-12-0600-1718
<210> 599
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 599
Figure 105113835-A0202-12-0601-1719
<210> 600
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 600
Figure 105113835-A0202-12-0601-1720
<210> 601
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 601
Figure 105113835-A0202-12-0601-1721
<210> 602
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 602
Figure 105113835-A0202-12-0601-1722
<210> 603
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 603
Figure 105113835-A0202-12-0602-1723
<210> 604
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 604
Figure 105113835-A0202-12-0602-1724
<210> 605
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 605
Figure 105113835-A0202-12-0602-1725
<210> 606
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 606
Figure 105113835-A0202-12-0602-1726
<210> 607
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 607
Figure 105113835-A0202-12-0603-1727
<210> 608
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 608
Figure 105113835-A0202-12-0603-1728
<210> 609
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 609
Figure 105113835-A0202-12-0603-1729
<210> 610
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 610
Figure 105113835-A0202-12-0604-1730
<210> 611
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 611
Figure 105113835-A0202-12-0604-1731
<210> 612
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 612
Figure 105113835-A0202-12-0604-1732
<210> 613
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 613
Figure 105113835-A0202-12-0604-1733
<210> 614
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 614
Figure 105113835-A0202-12-0605-1734
<210> 615
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 615
Figure 105113835-A0202-12-0605-1735
<210> 616
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 616
Figure 105113835-A0202-12-0605-1736
<210> 617
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 617
Figure 105113835-A0202-12-0605-1737
<210> 618
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 618
Figure 105113835-A0202-12-0606-1738
<210> 619
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 619
Figure 105113835-A0202-12-0606-1739
<210> 620
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 620
Figure 105113835-A0202-12-0606-1740
<210> 621
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 621
Figure 105113835-A0202-12-0606-1741
<210> 622
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 622
Figure 105113835-A0202-12-0607-1742
<210> 623
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 623
Figure 105113835-A0202-12-0607-1743
<210> 624
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 624
Figure 105113835-A0202-12-0607-1744
<210> 625
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 625
Figure 105113835-A0202-12-0607-1745
<210> 626
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 626
Figure 105113835-A0202-12-0608-1746
<210> 627
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 627
Figure 105113835-A0202-12-0608-1747
<210> 628
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 628
Figure 105113835-A0202-12-0608-1748
<210> 629
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 629
Figure 105113835-A0202-12-0608-1749
Figure 105113835-A0202-12-0609-1750
<210> 630
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 630
Figure 105113835-A0202-12-0609-1751
<210> 631
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 631
Figure 105113835-A0202-12-0609-1752
<210> 632
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 632
Figure 105113835-A0202-12-0609-1753
<210> 633
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 633
Figure 105113835-A0202-12-0610-1754
<210> 634
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 634
Figure 105113835-A0202-12-0610-1755
<210> 635
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 635
Figure 105113835-A0202-12-0610-1756
<210> 636
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 636
Figure 105113835-A0202-12-0610-1757
<210> 637
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 637
Figure 105113835-A0202-12-0611-1758
<210> 638
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 638
Figure 105113835-A0202-12-0611-1759
<210> 639
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 639
Figure 105113835-A0202-12-0611-1760
<210> 640
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 640
Figure 105113835-A0202-12-0611-1761
<210> 641
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 641
Figure 105113835-A0202-12-0612-1762
<210> 642
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 642
Figure 105113835-A0202-12-0612-1763
<210> 643
<211> 273
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 643
Figure 105113835-A0202-12-0612-1764
Figure 105113835-A0202-12-0613-1765
<210> 644
<211> 264
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 644
Figure 105113835-A0202-12-0614-1766
Figure 105113835-A0202-12-0615-1767
<210> 645
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 645
Figure 105113835-A0202-12-0615-1768
<210> 646
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 646
Figure 105113835-A0202-12-0615-1769
<210> 647
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 647
Figure 105113835-A0202-12-0615-1770
<210> 648
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 648
Figure 105113835-A0202-12-0616-1771
<210> 649
<211> 2
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 649
Figure 105113835-A0202-12-0616-1772
<210> 650
<211> 253
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 650
Figure 105113835-A0202-12-0616-1773
Figure 105113835-A0202-12-0617-1774
<210> 651
<211> 759
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 651
Figure 105113835-A0202-12-0618-1775
<210> 652
<211> 257
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 652
Figure 105113835-A0202-12-0618-1776
Figure 105113835-A0202-12-0619-1777
<210> 653
<211> 771
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 653
Figure 105113835-A0202-12-0620-1778
<210> 654
<211> 253
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 654
Figure 105113835-A0202-12-0620-1779
Figure 105113835-A0202-12-0621-1780
<210> 655
<211> 759
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 655
Figure 105113835-A0202-12-0622-1781
<210> 656
<211> 257
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 656
Figure 105113835-A0202-12-0622-1782
Figure 105113835-A0202-12-0623-1783
<210> 657
<211> 771
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 657
Figure 105113835-A0202-12-0624-1784
<210> 658
<211> 248
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 658
Figure 105113835-A0202-12-0624-1785
Figure 105113835-A0202-12-0625-1786
<210> 659
<211> 744
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 659
Figure 105113835-A0202-12-0626-1787
<210> 660
<211> 252
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 660
Figure 105113835-A0202-12-0626-1788
Figure 105113835-A0202-12-0627-1789
<210> 661
<211> 756
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 661
Figure 105113835-A0202-12-0628-1790
<210> 662
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 662
Figure 105113835-A0202-12-0628-1791
<210> 663
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 663
Figure 105113835-A0202-12-0629-1792
<210> 664
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 664
Figure 105113835-A0202-12-0629-1793
<210> 665
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 665
Figure 105113835-A0202-12-0629-1794
<210> 666
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 666
Figure 105113835-A0202-12-0629-1795
<210> 667
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 667
Figure 105113835-A0202-12-0630-1796
<210> 668
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 668
Figure 105113835-A0202-12-0630-1797
<210> 669
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 669
Figure 105113835-A0202-12-0630-1798
<210> 670
<211> 253
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 670
Figure 105113835-A0202-12-0630-1799
Figure 105113835-A0202-12-0631-1800
<210> 671
<211> 260
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 671
Figure 105113835-A0202-12-0632-1801
Figure 105113835-A0202-12-0633-1802
<210> 672
<211> 257
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 672
Figure 105113835-A0202-12-0633-1803
Figure 105113835-A0202-12-0634-1804
<210> 673
<211> 264
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 673
Figure 105113835-A0202-12-0634-1805
Figure 105113835-A0202-12-0635-1806
Figure 105113835-A0202-12-0636-1807
<210> 674
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 674
Figure 105113835-A0202-12-0636-1808
<210> 675
<211> 759
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 675
Figure 105113835-A0202-12-0636-1809
Figure 105113835-A0202-12-0637-1810
<210> 676
<211> 780
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 676
Figure 105113835-A0202-12-0637-1811
<210> 677
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 677
Figure 105113835-A0202-12-0637-1812
<210> 678
<211> 771
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 678
Figure 105113835-A0202-12-0638-1813
<210> 679
<211> 792
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 679
Figure 105113835-A0202-12-0638-1814
Figure 105113835-A0202-12-0639-1815
<210> 680
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 680
Figure 105113835-A0202-12-0639-1816
<210> 681
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 681
Figure 105113835-A0202-12-0639-1817
<210> 682
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 682
Figure 105113835-A0202-12-0640-1818
<210> 683
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 683
Figure 105113835-A0202-12-0640-1819
<210> 684
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 684
Figure 105113835-A0202-12-0640-1820
<210> 685
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 685
Figure 105113835-A0202-12-0640-1821
<210> 686
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 686
Figure 105113835-A0202-12-0641-1822
<210> 687
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 687
Figure 105113835-A0202-12-0641-1823
<210> 688
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 688
Figure 105113835-A0202-12-0641-1824
<210> 689
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 689
Figure 105113835-A0202-12-0641-1825
<210> 690
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 690
Figure 105113835-A0202-12-0642-1826
<210> 691
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220> .
<223> 化學合成
<400> 691
Figure 105113835-A0202-12-0642-1827
<210> 692
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 692
Figure 105113835-A0202-12-0642-1828
<210> 693
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 693
Figure 105113835-A0202-12-0643-1829
<210> 694
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 694
Figure 105113835-A0202-12-0643-1830
<210> 695
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 695
Figure 105113835-A0202-12-0643-1831
<210> 696
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 696
Figure 105113835-A0202-12-0644-1832
<210> 697
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 697
Figure 105113835-A0202-12-0644-1833
<210> 698
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 698
Figure 105113835-A0202-12-0644-1834
<210> 699
<211> 447
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 699
Figure 105113835-A0202-12-0645-1835
Figure 105113835-A0202-12-0646-1836
Figure 105113835-A0202-12-0647-1837
<210> 700
<211> 1341
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 700
Figure 105113835-A0202-12-0647-1838
Figure 105113835-A0202-12-0648-1839
<210> 701
<211> 253
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 701
Figure 105113835-A0202-12-0648-1840
Figure 105113835-A0202-12-0649-1841
<210> 702
<211> 260
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 702
Figure 105113835-A0202-12-0649-1842
Figure 105113835-A0202-12-0650-1843
<210> 703
<211> 257
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 703
Figure 105113835-A0202-12-0651-1844
Figure 105113835-A0202-12-0652-1845
<210> 704
<211> 264
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 704
Figure 105113835-A0202-12-0652-1846
Figure 105113835-A0202-12-0653-1847
<210> 705
<211> 248
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 705
Figure 105113835-A0202-12-0653-1848
Figure 105113835-A0202-12-0654-1849
<210> 706
<211> 255
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 706
Figure 105113835-A0202-12-0655-1850
Figure 105113835-A0202-12-0656-1851
<210> 707
<211> 252
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 707
Figure 105113835-A0202-12-0656-1852
Figure 105113835-A0202-12-0657-1853
<210> 708
<211> 259
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 708
Figure 105113835-A0202-12-0657-1854
Figure 105113835-A0202-12-0658-1855
Figure 105113835-A0202-12-0659-1856
<210> 709
<211> 248
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 709
Figure 105113835-A0202-12-0659-1857
Figure 105113835-A0202-12-0660-1858
<210> 710
<211> 255
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 710
Figure 105113835-A0202-12-0660-1859
Figure 105113835-A0202-12-0661-1860
<210> 711
<211> 252
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 711
Figure 105113835-A0202-12-0662-1861
Figure 105113835-A0202-12-0663-1862
<210> 712
<211> 259
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 712
Figure 105113835-A0202-12-0663-1863
Figure 105113835-A0202-12-0664-1864
<210> 713
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 713
Figure 105113835-A0202-12-0664-1865
<210> 714
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 714
Figure 105113835-A0202-12-0665-1866
<210> 715
<211> 253
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 715
Figure 105113835-A0202-12-0665-1867
Figure 105113835-A0202-12-0666-1868
<210> 716
<211> 260
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 716
Figure 105113835-A0202-12-0666-1869
Figure 105113835-A0202-12-0667-1870
<210> 717
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 717
Figure 105113835-A0202-12-0668-1871
<210> 718
<211> 759
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 718
Figure 105113835-A0202-12-0668-1872
<210> 719
<211> 780
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 719
Figure 105113835-A0202-12-0668-1873
Figure 105113835-A0202-12-0669-1874
<210> 720
<211> 248
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 720
Figure 105113835-A0202-12-0669-1875
Figure 105113835-A0202-12-0670-1876
<210> 721
<211> 253
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 721
Figure 105113835-A0202-12-0670-1877
Figure 105113835-A0202-12-0671-1878
Figure 105113835-A0202-12-0672-1879
<210> 722
<211> 260
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 722
Figure 105113835-A0202-12-0672-1880
Figure 105113835-A0202-12-0673-1881
<210> 723
<211> 253
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 723
Figure 105113835-A0202-12-0673-1882
Figure 105113835-A0202-12-0674-1883
<210> 724
<211> 260
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 724
Figure 105113835-A0202-12-0675-1884
Figure 105113835-A0202-12-0676-1885
<210> 725
<211> 253
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 725
Figure 105113835-A0202-12-0676-1886
Figure 105113835-A0202-12-0677-1887
<210> 726
<211> 260
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 726
Figure 105113835-A0202-12-0677-1888
Figure 105113835-A0202-12-0678-1889
Figure 105113835-A0202-12-0679-1890
<210> 727
<211> 257
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 727
Figure 105113835-A0202-12-0679-1891
Figure 105113835-A0202-12-0680-1892
<210> 728
<211> 264
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 728
Figure 105113835-A0202-12-0680-1893
Figure 105113835-A0202-12-0681-1894
<210> 729
<211> 257
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 729
Figure 105113835-A0202-12-0682-1895
Figure 105113835-A0202-12-0683-1896
<210> 730
<211> 264
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 730
Figure 105113835-A0202-12-0683-1897
Figure 105113835-A0202-12-0684-1898
<210> 731
<211> 257
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 731
Figure 105113835-A0202-12-0684-1899
Figure 105113835-A0202-12-0685-1900
Figure 105113835-A0202-12-0686-1901
<210> 732
<211> 264
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 732
Figure 105113835-A0202-12-0686-1902
Figure 105113835-A0202-12-0687-1903
<210> 733
<211> 248
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 733
Figure 105113835-A0202-12-0687-1904
Figure 105113835-A0202-12-0688-1905
<210> 734
<211> 255
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 734
Figure 105113835-A0202-12-0689-1906
Figure 105113835-A0202-12-0690-1907
<210> 735
<211> 248
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 735
Figure 105113835-A0202-12-0690-1908
Figure 105113835-A0202-12-0691-1909
<210> 736
<211> 255
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 736
Figure 105113835-A0202-12-0691-1910
Figure 105113835-A0202-12-0692-1911
<210> 737
<211> 248
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 737
Figure 105113835-A0202-12-0693-1912
Figure 105113835-A0202-12-0694-1913
<210> 738
<211> 255
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 738
Figure 105113835-A0202-12-0694-1914
Figure 105113835-A0202-12-0695-1915
<210> 739
<211> 252
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 739
Figure 105113835-A0202-12-0695-1916
Figure 105113835-A0202-12-0696-1917
<210> 740
<211> 259
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 740
Figure 105113835-A0202-12-0697-1918
Figure 105113835-A0202-12-0698-1919
<210> 741
<211> 252
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 741
Figure 105113835-A0202-12-0698-1920
Figure 105113835-A0202-12-0699-1921
<210> 742
<211> 259
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 742
Figure 105113835-A0202-12-0699-1922
Figure 105113835-A0202-12-0700-1923
Figure 105113835-A0202-12-0701-1924
<210> 743
<211> 252
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 743
Figure 105113835-A0202-12-0701-1925
Figure 105113835-A0202-12-0702-1926
<210> 744
<211> 259
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 744
Figure 105113835-A0202-12-0702-1927
Figure 105113835-A0202-12-0703-1928
<210> 745
<211> 253
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 745
Figure 105113835-A0202-12-0704-1929
Figure 105113835-A0202-12-0705-1930
<210> 746
<211> 260
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 746
Figure 105113835-A0202-12-0705-1931
Figure 105113835-A0202-12-0706-1932
<210> 747
<211> 257
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 747
Figure 105113835-A0202-12-0706-1933
Figure 105113835-A0202-12-0707-1934
Figure 105113835-A0202-12-0708-1935
<210> 748
<211> 264
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 748
Figure 105113835-A0202-12-0708-1936
Figure 105113835-A0202-12-0709-1937
<210> 749
<211> 253
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 749
Figure 105113835-A0202-12-0709-1938
Figure 105113835-A0202-12-0710-1939
<210> 750
<211> 260
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 750
Figure 105113835-A0202-12-0711-1940
Figure 105113835-A0202-12-0712-1941
<210> 751
<211> 257
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 751
Figure 105113835-A0202-12-0712-1942
Figure 105113835-A0202-12-0713-1943
<210> 752
<211> 264
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 752
Figure 105113835-A0202-12-0713-1944
Figure 105113835-A0202-12-0714-1945
Figure 105113835-A0202-12-0715-1946
<210> 753
<211> 253
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 753
Figure 105113835-A0202-12-0715-1947
Figure 105113835-A0202-12-0716-1948
<210> 754
<211> 260
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 754
Figure 105113835-A0202-12-0716-1949
Figure 105113835-A0202-12-0717-1950
<210> 755
<211> 257
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 755
Figure 105113835-A0202-12-0718-1951
Figure 105113835-A0202-12-0719-1952
<210> 756
<211> 264
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 756
Figure 105113835-A0202-12-0719-1953
Figure 105113835-A0202-12-0720-1954
<210> 757
<211> 253
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 757
Figure 105113835-A0202-12-0720-1955
Figure 105113835-A0202-12-0721-1956
Figure 105113835-A0202-12-0722-1957
<210> 758
<211> 260
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 758
Figure 105113835-A0202-12-0722-1958
Figure 105113835-A0202-12-0723-1959
<210> 759
<211> 257
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 759
Figure 105113835-A0202-12-0723-1960
Figure 105113835-A0202-12-0724-1961
<210> 760
<211> 264
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 760
Figure 105113835-A0202-12-0725-1962
Figure 105113835-A0202-12-0726-1963
<210> 761
<211> 253
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 761
Figure 105113835-A0202-12-0726-1964
Figure 105113835-A0202-12-0727-1965
<210> 762
<211> 260
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 762
Figure 105113835-A0202-12-0727-1966
Figure 105113835-A0202-12-0728-1967
Figure 105113835-A0202-12-0729-1968
<210> 763
<211> 257
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 763
Figure 105113835-A0202-12-0729-1969
Figure 105113835-A0202-12-0730-1970
<210> 764
<211> 264
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 764
Figure 105113835-A0202-12-0730-1971
Figure 105113835-A0202-12-0731-1972
<210> 765
<211> 253
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 765
Figure 105113835-A0202-12-0732-1973
Figure 105113835-A0202-12-0733-1974
<210> 766
<211> 260
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 766
Figure 105113835-A0202-12-0733-1975
Figure 105113835-A0202-12-0734-1976
<210> 767
<211> 257
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 767
Figure 105113835-A0202-12-0734-1977
Figure 105113835-A0202-12-0735-1978
Figure 105113835-A0202-12-0736-1979
<210> 768
<211> 264
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 768
Figure 105113835-A0202-12-0736-1980
Figure 105113835-A0202-12-0737-1981
<210> 769
<211> 253
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 769
Figure 105113835-A0202-12-0737-1982
Figure 105113835-A0202-12-0738-1983
<210> 770
<211> 260
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 770
Figure 105113835-A0202-12-0739-1984
Figure 105113835-A0202-12-0740-1985
<210> 771
<211> 257
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 771
Figure 105113835-A0202-12-0740-1986
Figure 105113835-A0202-12-0741-1987
<210> 772
<211> 264
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 772
Figure 105113835-A0202-12-0741-1988
Figure 105113835-A0202-12-0742-1989
Figure 105113835-A0202-12-0743-1990
<210> 773
<211> 253
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 773
Figure 105113835-A0202-12-0743-1991
Figure 105113835-A0202-12-0744-1992
<210> 774
<211> 260
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 774
Figure 105113835-A0202-12-0744-1993
Figure 105113835-A0202-12-0745-1126
<210> 775
<211> 257
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 775
Figure 105113835-A0202-12-0746-1127
Figure 105113835-A0202-12-0747-1128
<210> 776
<211> 264
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 776
Figure 105113835-A0202-12-0747-1129
Figure 105113835-A0202-12-0748-1130
<210> 777
<211> 253
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 777
Figure 105113835-A0202-12-0748-1131
Figure 105113835-A0202-12-0749-1132
Figure 105113835-A0202-12-0750-1133
<210> 778
<211> 260
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 778
Figure 105113835-A0202-12-0750-1134
Figure 105113835-A0202-12-0751-1135
<210> 779
<211> 257
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 779
Figure 105113835-A0202-12-0751-1136
Figure 105113835-A0202-12-0752-1137
<210> 780
<211> 264
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 780
Figure 105113835-A0202-12-0753-1138
Figure 105113835-A0202-12-0754-1139
<210> 781
<211> 253
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 781
Figure 105113835-A0202-12-0754-1140
Figure 105113835-A0202-12-0755-1141
<210> 782
<211> 260
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 782
Figure 105113835-A0202-12-0755-1142
Figure 105113835-A0202-12-0756-1143
Figure 105113835-A0202-12-0757-1144
<210> 783
<211> 257
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 783
Figure 105113835-A0202-12-0757-1145
Figure 105113835-A0202-12-0758-1146
<210> 784
<211> 264
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 784
Figure 105113835-A0202-12-0758-1147
Figure 105113835-A0202-12-0759-1148
<210> 785
<211> 253
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 785
Figure 105113835-A0202-12-0760-1149
Figure 105113835-A0202-12-0761-1150
<210> 786
<211> 260
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 786
Figure 105113835-A0202-12-0761-1151
Figure 105113835-A0202-12-0762-1152
<210> 787
<211> 257
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 787
Figure 105113835-A0202-12-0762-1153
Figure 105113835-A0202-12-0763-1154
Figure 105113835-A0202-12-0764-1155
<210> 788
<211> 264
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 788
Figure 105113835-A0202-12-0764-1156
Figure 105113835-A0202-12-0765-1157
<210> 789
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 789
Figure 105113835-A0202-12-0765-1158
<210> 790
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 790
Figure 105113835-A0202-12-0766-1159
<210> 791
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 791
Figure 105113835-A0202-12-0766-1160
<210> 792
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 792
Figure 105113835-A0202-12-0766-1161
<210> 793
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 793
Figure 105113835-A0202-12-0766-1162
<210> 794
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 794
Figure 105113835-A0202-12-0767-1163
<210> 795
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 795
Figure 105113835-A0202-12-0767-1164
<210> 796
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 796
Figure 105113835-A0202-12-0767-1165
<210> 797
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 797
Figure 105113835-A0202-12-0767-1166
<210> 798
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 798
Figure 105113835-A0202-12-0768-1167
<210> 799
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 799
Figure 105113835-A0202-12-0768-1168
<210> 800
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 800
Figure 105113835-A0202-12-0768-1169
<210> 801
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 801
Figure 105113835-A0202-12-0768-1170
<210> 802
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 802
Figure 105113835-A0202-12-0769-1171
<210> 803
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 803
Figure 105113835-A0202-12-0769-1172
<210> 804
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 804
Figure 105113835-A0202-12-0769-1173
<210> 805
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 805
Figure 105113835-A0202-12-0769-1174
<210> 806
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 806
Figure 105113835-A0202-12-0770-1175
<210> 807
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 807
Figure 105113835-A0202-12-0770-1176
<210> 808
<211> 21
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 808
Figure 105113835-A0202-12-0770-1177
<210> 809
<211> 146
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 809
Figure 105113835-A0202-12-0770-1178
Figure 105113835-A0202-12-0771-1179
<210> 810
<211> 153
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 810
Figure 105113835-A0202-12-0771-1180
Figure 105113835-A0202-12-0772-1181
<210> 811
<211> 150
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 811
Figure 105113835-A0202-12-0772-1182
Figure 105113835-A0202-12-0773-1183
<210> 812
<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 812
Figure 105113835-A0202-12-0773-1184
Figure 105113835-A0202-12-0774-1185
<210> 813
<211> 146
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 813
Figure 105113835-A0202-12-0774-1186
Figure 105113835-A0202-12-0775-1187
<210> 814
<211> 153
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 814
Figure 105113835-A0202-12-0775-1188
Figure 105113835-A0202-12-0776-1189
<210> 815
<211> 150
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 815
Figure 105113835-A0202-12-0776-1190
Figure 105113835-A0202-12-0777-1191
<210> 816
<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 816
Figure 105113835-A0202-12-0777-1192
Figure 105113835-A0202-12-0778-1193
<210> 817
<211> 141
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 817
Figure 105113835-A0202-12-0778-1194
<210> 818
<211> 148
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 818
Figure 105113835-A0202-12-0779-1195
<210> 819
<211> 145
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 819
Figure 105113835-A0202-12-0780-1196
<210> 820
<211> 152
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 820
Figure 105113835-A0202-12-0780-1197
Figure 105113835-A0202-12-0781-1198
<210> 821
<211> 146
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 821
Figure 105113835-A0202-12-0781-1199
Figure 105113835-A0202-12-0782-1200
<210> 822
<211> 153
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 822
Figure 105113835-A0202-12-0782-1201
Figure 105113835-A0202-12-0783-1202
<210> 823
<211> 150
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 823
Figure 105113835-A0202-12-0783-1203
Figure 105113835-A0202-12-0784-1204
<210> 824
<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 824
Figure 105113835-A0202-12-0784-1205
Figure 105113835-A0202-12-0785-1206
<210> 825
<211> 146
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 825
Figure 105113835-A0202-12-0785-1207
Figure 105113835-A0202-12-0786-1208
<210> 826
<211> 153
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 826
Figure 105113835-A0202-12-0786-1209
Figure 105113835-A0202-12-0787-1210
<210> 827
<211> 150
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 827
Figure 105113835-A0202-12-0787-1211
<210> 828
<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 828
Figure 105113835-A0202-12-0788-1212
<210> 829
<211> 141
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 829
Figure 105113835-A0202-12-0789-1213
<210> 830
<211> 148
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 830
Figure 105113835-A0202-12-0789-1214
Figure 105113835-A0202-12-0790-1215
<210> 831
<211> 145
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 831
Figure 105113835-A0202-12-0790-1216
Figure 105113835-A0202-12-0791-1217
<210> 832
<211> 152
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 832
Figure 105113835-A0202-12-0791-1218
Figure 105113835-A0202-12-0792-1219
<210> 833
<211> 141
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 833
Figure 105113835-A0202-12-0792-1220
Figure 105113835-A0202-12-0793-1221
<210> 834
<211> 148
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 834
Figure 105113835-A0202-12-0793-1222
Figure 105113835-A0202-12-0794-1223
<210> 835
<211> 145
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 835
Figure 105113835-A0202-12-0794-1224
Figure 105113835-A0202-12-0795-1225
<210> 836
<211> 152
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 836
Figure 105113835-A0202-12-0795-1226
<210> 837
<211> 146
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 837
Figure 105113835-A0202-12-0796-1227
<210> 838
<211> 153
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 838
Figure 105113835-A0202-12-0797-1228
<210> 839
<211> 141
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 839
Figure 105113835-A0202-12-0798-1229
<210> 840
<211> 148
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 840
Figure 105113835-A0202-12-0798-1230
Figure 105113835-A0202-12-0799-1231
<210> 841
<211> 146
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 841
Figure 105113835-A0202-12-0799-1232
Figure 105113835-A0202-12-0800-1233
<210> 842
<211> 153
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 842
Figure 105113835-A0202-12-0800-1234
Figure 105113835-A0202-12-0801-1235
<210> 843
<211> 146
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 843
Figure 105113835-A0202-12-0801-1236
Figure 105113835-A0202-12-0802-1237
<210> 844
<211> 153
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 844
Figure 105113835-A0202-12-0802-1238
Figure 105113835-A0202-12-0803-1239
<210> 845
<211> 146
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 845
Figure 105113835-A0202-12-0803-1240
Figure 105113835-A0202-12-0804-1241
<210> 846
<211> 153
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 846
Figure 105113835-A0202-12-0804-1242
Figure 105113835-A0202-12-0805-1243
<210> 847
<211> 150
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 847
Figure 105113835-A0202-12-0805-1244
<210> 848
<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 848
Figure 105113835-A0202-12-0806-1245
<210> 849
<211> 150
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 849
Figure 105113835-A0202-12-0807-1246
<210> 850
<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 850
Figure 105113835-A0202-12-0807-1247
Figure 105113835-A0202-12-0808-1248
<210> 851
<211> 150
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 851
Figure 105113835-A0202-12-0808-1249
Figure 105113835-A0202-12-0809-1250
<210> 852
<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 852
Figure 105113835-A0202-12-0809-1251
Figure 105113835-A0202-12-0810-1252
<210> 853
<211> 141
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 853
Figure 105113835-A0202-12-0810-1253
Figure 105113835-A0202-12-0811-1254
<210> 854
<211> 148
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 854
Figure 105113835-A0202-12-0811-1255
Figure 105113835-A0202-12-0812-1256
<210> 855
<211> 141
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 855
Figure 105113835-A0202-12-0812-1257
Figure 105113835-A0202-12-0813-1258
<210> 856
<211> 148
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 856
Figure 105113835-A0202-12-0813-1259
<210> 857
<211> 141
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 857
Figure 105113835-A0202-12-0814-1260
<210> 858
<211> 148
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 858
Figure 105113835-A0202-12-0815-1261
<210> 859
<211> 145
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 859
Figure 105113835-A0202-12-0815-1262
Figure 105113835-A0202-12-0816-1263
<210> 860
<211> 152
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 860
Figure 105113835-A0202-12-0816-1264
Figure 105113835-A0202-12-0817-1265
<210> 861
<211> 145
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 861
Figure 105113835-A0202-12-0817-1266
Figure 105113835-A0202-12-0818-1268
<210> 862
<211> 152
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 862
Figure 105113835-A0202-12-0818-1269
Figure 105113835-A0202-12-0819-1270
<210> 863
<211> 145
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 863
Figure 105113835-A0202-12-0819-1271
Figure 105113835-A0202-12-0820-1272
<210> 864
<211> 152
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 864
Figure 105113835-A0202-12-0820-1273
Figure 105113835-A0202-12-0821-1274
<210> 865
<211> 146
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 865
Figure 105113835-A0202-12-0821-1275
Figure 105113835-A0202-12-0822-1276
<210> 866
<211> 153
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 866
Figure 105113835-A0202-12-0822-1277
<210> 867
<211> 150
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 867
Figure 105113835-A0202-12-0823-1278
<210> 868
<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 868
Figure 105113835-A0202-12-0824-1279
<210> 869
<211> 146
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 869
Figure 105113835-A0202-12-0825-1280
<210> 870
<211> 153
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 870
Figure 105113835-A0202-12-0825-1281
Figure 105113835-A0202-12-0826-1282
<210> 871
<211> 150
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 871
Figure 105113835-A0202-12-0826-1283
Figure 105113835-A0202-12-0827-1284
<210> 872
<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 872
Figure 105113835-A0202-12-0827-1285
Figure 105113835-A0202-12-0828-1286
<210> 873
<211> 146
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 873
Figure 105113835-A0202-12-0828-1287
Figure 105113835-A0202-12-0829-1288
<210> 874
<211> 153
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 874
Figure 105113835-A0202-12-0829-1289
Figure 105113835-A0202-12-0830-1290
<210> 875
<211> 150
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 875
Figure 105113835-A0202-12-0830-1291
Figure 105113835-A0202-12-0831-1292
<210> 876
<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 876
Figure 105113835-A0202-12-0831-1293
Figure 105113835-A0202-12-0832-1294
<210> 877
<211> 146
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 877
Figure 105113835-A0202-12-0832-1295
<210> 878
<211> 153
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 878
Figure 105113835-A0202-12-0833-1296
<210> 879
<211> 150
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 879
Figure 105113835-A0202-12-0834-1297
<210> 880
<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 880
Figure 105113835-A0202-12-0835-1298
<210> 881
<211> 146
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 881
Figure 105113835-A0202-12-0835-1299
Figure 105113835-A0202-12-0836-1300
<210> 882
<211> 153
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 882
Figure 105113835-A0202-12-0836-1301
Figure 105113835-A0202-12-0837-1302
<210> 883
<211> 150
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 883
Figure 105113835-A0202-12-0837-1303
Figure 105113835-A0202-12-0838-1304
<210> 884
<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 884
Figure 105113835-A0202-12-0838-1305
Figure 105113835-A0202-12-0839-1306
<210> 885
<211> 146
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 885
Figure 105113835-A0202-12-0839-1307
Figure 105113835-A0202-12-0840-1308
<210> 886
<211> 153
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 886
Figure 105113835-A0202-12-0840-1309
Figure 105113835-A0202-12-0841-1310
<210> 887
<211> 150
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 887
Figure 105113835-A0202-12-0841-1311
Figure 105113835-A0202-12-0842-1312
<210> 888
<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 888
Figure 105113835-A0202-12-0842-1313
<210> 889
<211> 146
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 889
Figure 105113835-A0202-12-0843-1314
<210> 890
<211> 153
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 890
Figure 105113835-A0202-12-0844-1315
<210> 891
<211> 150
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 891
Figure 105113835-A0202-12-0845-1316
<210> 892
<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 892
Figure 105113835-A0202-12-0845-1317
Figure 105113835-A0202-12-0846-1318
<210> 893
<211> 146
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 893
Figure 105113835-A0202-12-0846-1319
Figure 105113835-A0202-12-0847-1320
<210> 894
<211> 153
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 894
Figure 105113835-A0202-12-0847-1321
Figure 105113835-A0202-12-0848-1322
<210> 895
<211> 150
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 895
Figure 105113835-A0202-12-0848-1323
Figure 105113835-A0202-12-0849-1324
<210> 896
<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 896
Figure 105113835-A0202-12-0849-1325
Figure 105113835-A0202-12-0850-1326
<210> 897
<211> 146
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 897
Figure 105113835-A0202-12-0850-1327
Figure 105113835-A0202-12-0851-1328
<210> 898
<211> 153
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 898
Figure 105113835-A0202-12-0851-1329
Figure 105113835-A0202-12-0852-1330
<210> 899
<211> 150
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 899
Figure 105113835-A0202-12-0852-1331
<210> 900
<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 900
Figure 105113835-A0202-12-0853-1332
<210> 901
<211> 146
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 901
Figure 105113835-A0202-12-0854-1333
<210> 902
<211> 153
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 902
Figure 105113835-A0202-12-0855-1334
<210> 903
<211> 150
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 903
Figure 105113835-A0202-12-0855-1335
Figure 105113835-A0202-12-0856-1336
<210> 904
<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 904
Figure 105113835-A0202-12-0856-1337
Figure 105113835-A0202-12-0857-1338
<210> 905
<211> 146
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 905
Figure 105113835-A0202-12-0857-1339
Figure 105113835-A0202-12-0858-1340
<210> 906
<211> 153
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 906
Figure 105113835-A0202-12-0858-1341
Figure 105113835-A0202-12-0859-1342
<210> 907
<211> 150
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 907
Figure 105113835-A0202-12-0859-1343
Figure 105113835-A0202-12-0860-1344
<210> 908
<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 908
Figure 105113835-A0202-12-0860-1345
Figure 105113835-A0202-12-0861-1346
<210> 909
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 909
Figure 105113835-A0202-12-0861-1347
<210> 910
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 910
Figure 105113835-A0202-12-0861-1348
<210> 911
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 911
Figure 105113835-A0202-12-0861-1349
<210> 912
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 912
Figure 105113835-A0202-12-0862-1350
<210> 913
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 913
Figure 105113835-A0202-12-0862-1351
<210> 914
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 914
Figure 105113835-A0202-12-0862-1352
<210> 915
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 915
Figure 105113835-A0202-12-0862-1353
Figure 105113835-A0202-12-0863-1354
<210> 916
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 916
Figure 105113835-A0202-12-0863-1355
<210> 917
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 917
Figure 105113835-A0202-12-0863-1356
<210> 918
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 918
Figure 105113835-A0202-12-0863-1357
<210> 919
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 919
Figure 105113835-A0202-12-0864-1358
<210> 920
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 920
Figure 105113835-A0202-12-0864-1359
<210> 921
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 921
Figure 105113835-A0202-12-0864-1360
<210> 922
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 922
Figure 105113835-A0202-12-0864-1361
<210> 923
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 923
Figure 105113835-A0202-12-0865-1362
<210> 924
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 924
Figure 105113835-A0202-12-0865-1363
<210> 925
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 925
Figure 105113835-A0202-12-0865-1364
<210> 926
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 926
Figure 105113835-A0202-12-0865-1365
<210> 927
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 927
Figure 105113835-A0202-12-0866-1366
<210> 928
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 928
Figure 105113835-A0202-12-0866-1367
<210> 929
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 929
Figure 105113835-A0202-12-0866-1368
<210> 930
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 930
Figure 105113835-A0202-12-0866-1370
<210> 931
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 931
Figure 105113835-A0202-12-0867-1371
<210> 932
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 932
Figure 105113835-A0202-12-0867-1372
<210> 933
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 933
Figure 105113835-A0202-12-0867-1373
<210> 934
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 934
Figure 105113835-A0202-12-0868-1374
<210> 935
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 935
Figure 105113835-A0202-12-0868-1375
<210> 936
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 936
Figure 105113835-A0202-12-0868-1376
<210> 937
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 937
Figure 105113835-A0202-12-0868-1377
<210> 938
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 938
Figure 105113835-A0202-12-0869-1378
<210> 939
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 939
Figure 105113835-A0202-12-0869-1379
<210> 940
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 940
Figure 105113835-A0202-12-0869-1380
<210> 941
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 941
Figure 105113835-A0202-12-0869-1381
<210> 942
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 942
Figure 105113835-A0202-12-0870-1382
<210> 943
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 943
Figure 105113835-A0202-12-0870-1383
<210> 944
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 944
Figure 105113835-A0202-12-0870-1384
<210> 945
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 945
Figure 105113835-A0202-12-0870-1385
<210> 946
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 946
Figure 105113835-A0202-12-0871-1386
<210> 947
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 947
Figure 105113835-A0202-12-0871-1387
<210> 948
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 948
Figure 105113835-A0202-12-0871-1388
<210> 949
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 949
Figure 105113835-A0202-12-0871-1389
Figure 105113835-A0202-12-0872-1390
<210> 950
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 950
Figure 105113835-A0202-12-0872-1391
<210> 951
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 951
Figure 105113835-A0202-12-0872-1392
<210> 952
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 952
Figure 105113835-A0202-12-0872-1393
<210> 953
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 953
Figure 105113835-A0202-12-0873-1394
<210> 954
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 954
Figure 105113835-A0202-12-0873-1395
<210> 955
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 955
Figure 105113835-A0202-12-0873-1396
<210> 956
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 956
Figure 105113835-A0202-12-0873-1397
<210> 957
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 957
Figure 105113835-A0202-12-0874-1398
<210> 958
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 958
Figure 105113835-A0202-12-0874-1399
<210> 959
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 959
Figure 105113835-A0202-12-0874-1400
<210> 960
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 960
Figure 105113835-A0202-12-0874-1401
<210> 961
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 961
Figure 105113835-A0202-12-0875-1402
<210> 962
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 962
Figure 105113835-A0202-12-0875-1403
<210> 963
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 963
Figure 105113835-A0202-12-0875-1404
<210> 964
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 964
Figure 105113835-A0202-12-0875-1405
<210> 965
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 965
Figure 105113835-A0202-12-0876-1406
<210> 966
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 966
Figure 105113835-A0202-12-0876-1407
<210> 967
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 967
Figure 105113835-A0202-12-0876-1408
<210> 968
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 968
Figure 105113835-A0202-12-0876-1409
Figure 105113835-A0202-12-0877-1410
<210> 969
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 969
Figure 105113835-A0202-12-0877-1411
<210> 970
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 970
Figure 105113835-A0202-12-0877-1412
<210> 971
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 971
Figure 105113835-A0202-12-0877-1413
<210> 972
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 972
Figure 105113835-A0202-12-0878-1414
<210> 973
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 973
Figure 105113835-A0202-12-0878-1415
<210> 974
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 974
Figure 105113835-A0202-12-0878-1416
<210> 975
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 975
Figure 105113835-A0202-12-0878-1417
<210> 976
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 976
Figure 105113835-A0202-12-0879-1418
<210> 977
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 977
Figure 105113835-A0202-12-0879-1419
<210> 978
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 978
Figure 105113835-A0202-12-0879-1420
<210> 979
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 979
Figure 105113835-A0202-12-0880-1421
<210> 980
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 980
Figure 105113835-A0202-12-0880-1422
<210> 981
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 981
Figure 105113835-A0202-12-0880-1423
<210> 982
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 982
Figure 105113835-A0202-12-0880-1424
<210> 983
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 983
Figure 105113835-A0202-12-0881-1425
<210> 984
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 984
Figure 105113835-A0202-12-0881-1426
<210> 985
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 985
Figure 105113835-A0202-12-0881-1427
Figure 105113835-A0202-12-0882-1428
<210> 986
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 986
Figure 105113835-A0202-12-0882-1429
<210> 987
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 987
Figure 105113835-A0202-12-0882-1430
Figure 105113835-A0202-12-0883-1431
<210> 988
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 988
Figure 105113835-A0202-12-0883-1432
Figure 105113835-A0202-12-0884-1433
<210> 989
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 989
Figure 105113835-A0202-12-0884-1434
<210> 990
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 990
Figure 105113835-A0202-12-0885-1435
<210> 991
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 991
Figure 105113835-A0202-12-0885-1436
<210> 992
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 992
Figure 105113835-A0202-12-0886-1437
<210> 993
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 993
Figure 105113835-A0202-12-0886-1438
<210> 994
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 994
Figure 105113835-A0202-12-0886-1439
<210> 995
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 995
Figure 105113835-A0202-12-0886-1440
<210> 996
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 996
Figure 105113835-A0202-12-0887-1441
<210> 997
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 997
Figure 105113835-A0202-12-0887-1442
<210> 998
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 998
Figure 105113835-A0202-12-0887-1443
<210> 999
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 999
Figure 105113835-A0202-12-0887-1444
Figure 105113835-A0202-12-0888-1445
<210> 1000
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 1000
Figure 105113835-A0202-12-0888-1446
Figure 105113835-A0202-12-0889-1447
<210> 1001
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 1001
Figure 105113835-A0202-12-0889-1448
<210> 1002
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 1002
Figure 105113835-A0202-12-0890-1449
<210> 1003
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 1003
Figure 105113835-A0202-12-0890-1450
Figure 105113835-A0202-12-0891-1451
<210> 1004
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 1004
Figure 105113835-A0202-12-0891-1452
Figure 105113835-A0202-12-0892-1453
<210> 1005
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 1005
Figure 105113835-A0202-12-0892-1454
Figure 105113835-A0202-12-0893-1455
<210> 1006
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 1006
Figure 105113835-A0202-12-0893-1456
<210> 1007
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 1007
Figure 105113835-A0202-12-0894-1457
<210> 1008
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 1008
Figure 105113835-A0202-12-0894-1458
Figure 105113835-A0202-12-0895-1459
<210> 1009
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 1009
Figure 105113835-A0202-12-0895-1460
<210> 1010
<211> 101
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (3)..(3)
<223> X係任何胺基酸
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (32)..(32)
<223> X係任何胺基酸
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (41)..(41)
<223> X係任何胺基酸
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (69)..(70)
<223> X係any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (101)..(101)
<223> X係任何胺基酸
<400> 1010
Figure 105113835-A0202-12-0896-1462
Figure 105113835-A0202-12-0897-1463
<210> 1011
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 1011
Figure 105113835-A0202-12-0897-1464
<210> 1012
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 1012
Figure 105113835-A0202-12-0898-1465
<210> 1013
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 1013
Figure 105113835-A0202-12-0898-1466
Figure 105113835-A0202-12-0899-1467
<210> 1014
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 1014
Figure 105113835-A0202-12-0899-1468
<210> 1015
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 1015
Figure 105113835-A0202-12-0900-1469
<210> 1016
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 1016
Figure 105113835-A0202-12-0900-1470
Figure 105113835-A0202-12-0901-1471
<210> 1017
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 1017
Figure 105113835-A0202-12-0901-1472
<210> 1018
<211> 95
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 1018
Figure 105113835-A0202-12-0902-1473
<210> 1019
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 1019
Figure 105113835-A0202-12-0902-1474
Figure 105113835-A0202-12-0903-1475
<210> 1020
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 1020
Figure 105113835-A0202-12-0903-1476
<210> 1021
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 1021
Figure 105113835-A0202-12-0904-1477
<210> 1022
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 1022
Figure 105113835-A0202-12-0904-1478
Figure 105113835-A0202-12-0905-1479
<210> 1023
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 1023
Figure 105113835-A0202-12-0905-1480
Figure 105113835-A0202-12-0906-1481
<210> 1024
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 1024
Figure 105113835-A0202-12-0906-1482
<210> 1025
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 1025
Figure 105113835-A0202-12-0906-1483
Figure 105113835-A0202-12-0907-1484
<210> 1026
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 1026
Figure 105113835-A0202-12-0907-1485
<210> 1027
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 1027
Figure 105113835-A0202-12-0907-1486
<210> 1028
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 1028
Figure 105113835-A0202-12-0908-1487
<210> 1029
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 1029
Figure 105113835-A0202-12-0908-1488
<210> 1030
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 1030
Figure 105113835-A0202-12-0908-1489
<210> 1031
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 1031
Figure 105113835-A0202-12-0908-1490
Figure 105113835-A0305-02-0911-22
<210> 1032
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 1032
Figure 105113835-A0305-02-0911-23
<210> 1033
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 1033
Figure 105113835-A0305-02-0911-24
<210> 1034
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 1034
Figure 105113835-A0305-02-0911-25
<210> 1035
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 1035
Figure 105113835-A0305-02-0912-26
<210> 1036
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 1036
Figure 105113835-A0305-02-0912-27
<210> 1037
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 1037
Figure 105113835-A0305-02-0912-28
<210> 1038
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成
<400> 1038
Figure 105113835-A0305-02-0912-29

Claims (24)

  1. 一種可活化之抗體，其在經活化狀態結合CD71，該可活化之抗體包含：一種專一性結合哺乳類CD71之單離抗體或彼之抗原結合片段(AB)，其中該AB專一性結合人CD71及食蟹獼猴CD71，其中該AB包含VH CDR1序列GYTFTSYWMH(SEQ ID NO：9)；VH CDR2序列AIYPGNSETG(SEQ ID NO：10)；VH CDR3序列ENWDPGFAF(SEQ ID NO：11)；VL CDR1序列SASSSVYYMY(SEQ ID NO：12)或CRASSSVYYMY(SEQ ID NO：13)；VL CDR2序列STSNLAS(SEQ ID NO：14)；及VL CDR3序列QQRRNYPYT(SEQ ID NO：15)；掩蔽部分(masking moiety)(MM)，當該可活化之抗體係在未經切割狀態時，該掩蔽部分抑制該AB與CD71結合；及與該AB偶聯的可切割之部分(cleavable moiety)(CM)，其中該CM係作為蛋白酶受質之多肽。
  2. 如請求項1之可活化之抗體，其中該AB包含：重鏈變異區和輕鏈變異區，該重鏈變異區包含選自由SEQ ID NO：3至5所組成的群組之胺基酸序列，且該輕鏈變異區包含選自由SEQ ID NO：6至8所組成的群組之胺基酸序列。
  3. 如請求項1之可活化之抗體，其中：(i)該MM與該AB結合之解離常數大於該AB與 CD71結合之解離常數；和/或(ii)當該可活化之抗體係在經切割狀態時，該MM不會干擾AB與CD71結合或與AB競爭與CD71結合；和/或(iii)該MM係長度不大於40個胺基酸的多肽；和/或(iv)該MM之多肽序列係不同於人CD71之序列；和/或(v)該MM之多肽序列係與該AB之任何天然結合配偶體(binding partner)僅達50%同一性。
  4. 如請求項1之可活化之抗體，其中：(i)該CM係於患病組織中呈活化的蛋白酶之受質；和/或(ii)該彼之抗原結合片段係選自由下列所組成之群組：Fab片段、F(ab’)2片段、scFv、scAb、dAb、單域重鏈抗體及單域輕鏈抗體；和/或(iii)該AB專一性結合人CD71；和/或(iv)該AB連接該CM、直接連接該CM、或經由連接胜肽(linking peptide)連接該CM；和/或(v)該MM連接該CM，使得在未經切割狀態的該可活化之抗體包含從N端到C端之如下結構排列：MM-CM-AB或AB-CM-MM；和/或(vi)該可活化之抗體包含介於該MM與該CM之間的連接胜肽；和/或 (vii)該可活化之抗體包含介於該CM與該AB之間的連接胜肽；和/或(viii)該可活化之抗體包含第一連接胜肽(LP1)及第二連接胜肽(LP2)，且其中在未經切割狀態的該可活化之抗體具有從N端到C端之如下結構排列：MM-LP1-CM-LP2-AB或AB-LP2-CM-LP1-MM；其中該二個連接胜肽不須彼此相同；和/或其中LP1及LP2每一者係約1至20個胺基酸長的胜肽。
  5. 如請求項1之可活化之抗體，其中該可活化之抗體包含：重鏈序列SEQ ID NO：325或699；及輕鏈，該輕鏈包含選自由下列所組成的群組之胺基酸序列：SEQ ID NO：327、329、331、333、335、337、650、652、654、656、658、660、670至673、701至712、721至788、809至836及841至908。
  6. 如請求項1之可活化之抗體，其中：該MM包含選自由SEQ ID NO：16至295及297至314所組成的群組之胺基酸序列；和/或該CM包含選自由SEQ ID NO：356至423、680至698、713、714及789至808所組成的群組之胺基酸序列。
  7. 如請求項1之可活化之抗體，其中：該MM包含選自由SEQ ID NO：16、17及297至314所組成的群組之胺基酸序列；和/或 該CM包含選自由SEQ ID NO：406至423、680至698、713、714及807至808所組成的群組之胺基酸序列。
  8. 如請求項1之可活化之抗體，其中該可活化之抗體包含胺基酸序列之組合，其中：(a)該AB之重鏈包含SEQ ID NO：9、10及11之VH CDR胺基酸序列；(b)該AB之輕鏈包含SEQ ID NO：12、14及15之VL CDR胺基酸序列；(c)該MM包含選自由SEQ ID NO：16、17、309及314所組成的群組之胺基酸序列；且(d)該CM包含選自由SEQ ID NO：359、382、789、390、370、397、377、406、423、680至690、713、412、691至698、714及407所組成的群組之胺基酸序列。
  9. 如請求項1之可活化之抗體，其中該可活化之抗體包含胺基酸序列之組合，其中：(a)該AB之重鏈包含SEQ ID NO：3、4或5之VH胺基酸序列或SEQ ID NO：9、10及11之VH CDR胺基酸序列；(b)該AB之輕鏈包含SEQ ID NO：6、7或8之VL胺基酸序列或SEQ ID NO：12、14及15或SEQ ID NO：13、14及15之VL CDR胺基酸序列；(c)該MM包含選自由SEQ ID NO：16、17及297至 314所組成的群組之胺基酸序列；且(d)該CM包含選自由SEQ ID NO：356、358、359、362、370、377至379、382、389、390、392、395至407、412、680至698、713、714及789至808所組成的群組之胺基酸序列。
  10. 一種經共軛之可活化之抗體，其在經活化狀態結合CD71，該經共軛之可活化之抗體包含：如請求項1至9中任一項之可活化之抗體；及與該AB共軛之劑。
  11. 如請求項10之經共軛之可活化之抗體，其中該劑係毒素或彼之片段，其中：(i)該毒素係微管抑制劑；或(ii)該毒素係核酸損壞劑，該核酸損壞劑係選自由DNA烷化劑、DNA切割劑、DNA交聯劑及DNA插入劑所組成之群組；或(iii)該毒素係選自由下列所組成之群組：尾海兔素(dolastatin)、耳抑素(auristatin)、類美登素(maytansinoid)、倍癌黴素(duocarmycin)、卡奇黴素(calicheamicin)及吡咯并苯并二吖呯(pyrrolobenzodiazepine)；或(iv)該毒素係耳抑素E(auristatin E)、單甲基耳抑素E(monomethyl auristatin E)(MMAE)、單甲基耳抑素F(monomethyl auristatin F)(MMAF)、單甲基耳抑素D(monomethyl auristatin D)(MMAD)、選自由DM1及DM4 所組成的群組之類美登素、類美登素DM4、類美登素DM1、倍癌黴素、吡咯并苯并二吖呯、或吡咯并苯并二吖呯二聚物；或(v)該毒素係可偵測之部分，該可偵測之部分係選自由放射性標記胺基酸、一或多個可由被標記的親和素所偵測到的生物素部分、一或多種放射性同位素或放射性核種、一或多種螢光標記、一或多種酵素標記及一或多種化學發光劑所組成之群組。
  12. 如請求項10之經共軛之可活化之抗體，其中該劑係經由連接子與該AB共軛，且其中使該劑與該AB共軛之該連接子包含SPDB部分、vc部分或PEG2-vc部分；和/或其中與該AB共軛的該連接子及毒素包含SPDB-DM4部分、vc-MMAD部分、vc-MMAE部分、vc-倍癌黴素部分或PEG2-vc-MMAD部分；和/或其中該連接子係可切割之連接子或非可切割之連接子。
  13. 如請求項10之經共軛之可活化之抗體，其中：(a)該AB包含重鏈，該重鏈包含SEQ ID NO：5或325之胺基酸序列；(b)該AB包含輕鏈，該輕鏈包含選自由下列所組成的群組之胺基酸序列：SEQ ID NO：7、323、327、329、331、333、335、337、650、652、654、656、658、660、670至673、701至712及809至836；且 (c)該連接子及該毒素係選自由下列所組成的群組：SPDB-DM4、vc-MMAD、PEG2-vc-MMAD、vc-MMAE及vc-倍癌黴素。
  14. 一種藥學組成物，其包含：如請求項1至9中任一項之可活化之抗體或如請求項10至13中任一項之經共軛之可活化之抗體；及載劑。
  15. 如請求項14之藥學組成物，其另包含另外的治療劑。
  16. 一種單離核酸分子，其編碼如請求項1至9中任一項之可活化之抗體。
  17. 一種載體，其包含如請求項16之單離核酸分子。
  18. 一種藉由將細胞培養在導致表現可活化之抗體之條件下製造該可活化之抗體之方法，其中該細胞包含如請求項16之核酸分子或如請求項17之載體。
  19. 一種製造在經活化狀態結合CD71的可活化之抗體之方法，該方法包含：(a)培養包含編碼如請求項1至9中任一項之可活化之抗體的核酸構築體之細胞於導致該可活化之抗體表現的條件下；及(b)回收該可活化之抗體。
  20. 如請求項10至13中任一項之經共軛之可活化之抗體，其係作為藥物。
  21. 一種如請求項1至9中任一項之可活化之抗體、如請求項10至13中任一項之經共軛之可活化之抗體或如請求項14或15之藥學組成物於製備藥物之用途，該藥物係用於治療失調或疾病、緩解失調或疾病之症狀或延遲失調或疾病之進展，其中該失調或疾病的患病細胞表現CD71或該失調或疾病係與表現CD71之細胞有關。
  22. 如請求項21之用途，其中該失調或疾病係癌，該癌係選自由下列所組成的群組：腺癌、膽管(膽道)癌、膀胱癌、骨癌、乳癌、三重陰性乳癌、Her2陰性乳癌、類癌(carcinoid cancer)、子宮頸癌、膽管癌、結腸直腸癌(colorectal cancer)、結腸癌、子宮內膜癌、神經膠質瘤(glioma)、頭頸癌、頭頸鱗狀細胞癌、白血病、肝癌、肺癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、淋巴癌、黑色素瘤、口咽癌、卵巢癌、胰癌、前列腺癌、轉移性閹割抗性前列腺癌(metastatic castration-resistant prostate carcinoma)、腎癌、肉瘤、皮膚癌、鱗狀細胞癌、胃癌、睪丸癌、甲狀腺癌、泌尿生殖癌及泌尿上皮癌。
  23. 一種如請求項1至9中任一項之可活化之抗體、如請求項10至13中任一項之經共軛之可活化之抗體或如請求項14或15之藥學組成物於製備藥物之用途，該藥物係用於抑制或減少表現哺乳類CD71之細胞的生長、增生或轉移、或抑制、阻斷或預防天然配體與哺乳類CD71結合，其中該天然配體係轉鐵蛋白； 其中該哺乳類CD71之表現和/或活性係畸變的。
  24. 如請求項21至23中任一項之用途，其中該藥物另包含另外的治療劑。
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