JP2020511130A - Ｃｄ１４７抗体、活性化可能ｃｄ１４７抗体、ならびにその作製および使用の方法 - Google Patents

Ｃｄ１４７抗体、活性化可能ｃｄ１４７抗体、ならびにその作製および使用の方法 Download PDF

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Abstract

本発明は概して、CD147に結合する抗体、CD147に結合する活性化可能抗体、ならびにこれらの抗体および活性化可能抗体を作製する、および種々の治療上、予防上および診断上の状況のなかで使用する方法に関する。いくつかの態様において、CD147抗体およびCD147活性化可能抗体は、ヒトおよびカニクイザルCD147に結合する。

Description

関連出願の相互参照
本出願は、2017年3月9日付で出願された米国特許仮出願第62/469,429号の恩典を主張するものであり、その内容は参照によりその全体が組み入れられる。
発明の分野
本発明は全体として、CD147に結合する抗体、CD147に結合する活性化可能抗体、ならびにこれらの抗体および活性化可能抗体を種々の治療上、予防上および診断上の状況のなかで作製および使用する方法に関する。
発明の背景
抗体に基づく療法は、いくつかの疾患については有効な処置だと判明しているが、場合によっては、広範な標的発現による毒性があるために、その治療有効性が制約されている。さらに、抗体に基づく治療法は、投与後、循環から急速に排出されるなど他の制約を示してきた。
低分子治療法の分野では、活性のある化学実体のプロドラッグを提供するための戦略が立案されている。このようなプロドラッグは比較的不活性な形態(または活性がかなり低い形態)で投与される。ひとたび投与されると、プロドラッグはインビボで活性化合物に代謝される。このようなプロドラッグ戦略は、意図された標的に対する薬物の選択性を高め、副作用を低減することができる。
したがって、抗体に基づく治療法の分野では、低分子プロドラッグの望ましい特徴を摸倣する抗体が引き続き必要とされている。
CD147に結合する抗体、CD147に結合する活性化可能抗体、ならびにこれらの抗体および活性化可能抗体を種々の治療上、予防上および診断上の状況のなかで作製および使用する方法が本明細書において提供される。いくつかの態様において、CD147抗体およびCD147活性化可能抗体は、ヒトおよびカニクイザルCD147に結合する。いくつかの態様において、CD147抗体およびCD147活性化可能抗体は、CD147抗原のグリコシル化形態および脱グリコシル化形態の両方に結合する。
本発明の1つの局面において、ヒトCD147およびカニクイザルCD147に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片(AB)が本明細書において提供される。本発明の別の局面において、ヒトCD147および/またはカニクイザルCD147に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片(AB)が本明細書において提供される。いくつかの態様において、CD147は脱グリコシル化CD147およびグリコシル化CD147の両方を含む。いくつかの態様において、ABはヒトCD147に特異的に結合する。いくつかの態様において、ABはヒトCD147のみに結合する。抗体またはその抗体結合断片のいずれかにおいて、ABは、Fab断片、F(ab')2断片、scFv、scAb、dAb、単一ドメイン重鎖抗体、および単一ドメイン軽鎖抗体からなる群より選択することができる。いくつかの態様において、抗体またはその抗原結合断片は、(a) VH CDR1配列
Figure 2020511130
；VH CDR2配列
Figure 2020511130
；VH CDR3配列
AGTDY (SEQ ID NO:13)
；VL CDR1配列
Figure 2020511130
；VL CDR2配列
YSSNRYT (SEQ ID NO:16)
；およびVL CDR3配列
Figure 2020511130
、(b) VH CDR1配列
Figure 2020511130
；VH CDR2配列
Figure 2020511130
；VH CDR3配列
AGTDY (SEQ ID NO:13)
；およびVL CDR1配列
Figure 2020511130
；VL CDR2配列
YSSNRYT (SEQ ID NO:16)
；およびVL CDR3配列
QQDYSSPYT (SEQ ID NO:18)
、ならびに(c) VH CDR1配列
Figure 2020511130
；VH CDR2配列
Figure 2020511130
；VH CDR3配列
AGTDY (SEQ ID NO:13)
；VL CDR1配列
Figure 2020511130
；VL CDR2配列
YSSNRYT (SEQ ID NO:16)
；およびVL CDR3配列
QQDYSSPFT (SEQ ID NO:17)
からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、抗体またはその抗原結合断片は、SEQ ID NO:1〜4からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、およびSEQ ID NO:5〜9からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
本発明の別の局面において、活性化状態では、(a) ヒトCD147およびカニクイザルCD147に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片(AB)；(b) ABにカップリングされたマスキング部分(MM)であって、活性化可能抗体が非切断状態(非活性化状態)にある場合にCD147に対するABの結合を阻害する該MM；かつ(c) ABにカップリングされた切断可能部分(CM)であって、プロテアーゼの基質として機能するポリペプチドである該CMを含むCD147に結合する、活性化可能抗体が、本明細書において提供される。いくつかの態様において、CD147は脱グリコシル化CD147およびグリコシル化CD147の両方を含む。本明細書において提供される活性化可能抗体のいずれかにおいて、ABは、Fab断片、F(ab')2断片、scFv、scAb、dAb、単一ドメイン重鎖抗体、および単一ドメイン軽鎖抗体からなる群より選択することができる。本明細書において提供される活性化可能抗体のいずれかにおいて、ABはヒトCD147に特異的に結合する。本明細書において提供される活性化可能抗体のいずれかにおいて、ABはヒトCD147のみに結合する。いくつかの態様において、活性化可能抗体のABは、(a) VH CDR1配列
Figure 2020511130
；VH CDR2配列
Figure 2020511130
；VH CDR3配列
AGTDY (SEQ ID NO:13)
；VL CDR1配列
Figure 2020511130
；VL CDR2配列
YSSNRYT (SEQ ID NO:16)
；およびVL CDR3配列
Figure 2020511130
、(b) VH CDR1配列
Figure 2020511130
；VH CDR2配列
Figure 2020511130
；VH CDR3配列
AGTDY (SEQ ID NO:13)
；VL CDR1配列
Figure 2020511130
；VL CDR2配列
YSSNRYT (SEQ ID NO:16)
；およびVL CDR3配列
QQDYSSPYT (SEQ ID NO:18)
、ならびに(c) VH CDR1配列
Figure 2020511130
；VH CDR2配列
Figure 2020511130
；VH CDR3配列
AGTDY (SEQ ID NO:13)
；VL CDR1配列
Figure 2020511130
；VL CDR2配列
YSSNRYT (SEQ ID NO:16)
；およびVL CDR3配列
QQDYSSPFT (SEQ ID NO:17)
からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、活性化可能抗体のABは、SEQ ID NO:1〜4からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、およびSEQ ID NO:5〜9からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの態様において、活性化可能抗体のABは、SEQ ID NO:1〜3からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、およびSEQ ID NO:5〜8からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの態様において、活性化可能抗体は、SEQ ID NO:1〜4および19〜22からなる群より選択される重鎖配列、ならびにSEQ ID NO:5〜9、23〜27、140〜182、185〜227、230〜272および275〜317からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。いくつかの態様において、MMは、ABに対する結合について、CD147に対するABの解離定数よりも大きい解離定数を有する。いくつかの態様において、活性化可能抗体が切断状態にある場合、MMは、CD147に対する結合についてABに干渉も競合もしない。いくつかの態様において、MMは、40アミノ酸以下の長さのポリペプチドである。いくつかの態様において、MMポリペプチド配列はヒトCD147のポリペプチド配列とは異なる。いくつかの態様において、MMポリペプチド配列の、ABのあらゆる天然の結合パートナーに対する同一性が、50%以下である。いくつかの態様において、MMは、SEQ ID NO:30〜100からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、MMは、SEQ ID NO:30、31、33、44、46、75〜80、82、83、および86〜100からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、CMは、疾患組織において活性であるプロテアーゼの基質である。いくつかの態様において、CMは、SEQ ID NO:356〜423、680〜698、713、714、および789〜808からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、CMは、SEQ ID NO:359、370、377、382、390、397、406〜423、680〜698、713、714、および807〜808からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。
本明細書において提供される別の局面において、本明細書において提供される抗体または活性化可能抗体のいずれか1つが作用物質にコンジュゲートされ、コンジュゲートされた抗体またはコンジュゲートされた活性化可能抗体を作製する。いくつかの態様において、作用物質は毒素またはその断片である。いくつかの態様において、作用物質は微小管阻害剤である。いくつかの態様において、作用物質は核酸損傷剤である。いくつかの態様において、作用物質は検出可能な部分である。いくつかの態様において、検出可能な部分は診断用作用物質である。
別の局面において、本明細書において提供される抗体、活性化可能抗体、コンジュゲートされた抗体またはコンジュゲートされた活性化可能抗体のいずれか；および担体、を含む、薬学的組成物が本明細書において提供される。いくつかの態様において、薬学的組成物はさらなる作用物質を含む。いくつかの態様において、さらなる作用物質は治療用作用物質である。
別の局面において、本明細書において記述される抗体または活性化可能抗体のいずれか1つをコードする単離された核酸分子が本明細書において提供される。関連する局面において、単離された核酸分子を含むベクターが本明細書において提供される。別の関連する局面において、本明細書において提供される核酸分子またはベクターを含む細胞を、抗体または活性化可能抗体の発現をもたらす条件下で培養することによって、抗体または活性化可能抗体を産生する方法が本明細書において提供される。
別の局面において、活性化状態ではCD147に結合する活性化可能抗体を製造する方法であって、(a) 本明細書において記述される活性化可能抗体のいずれか1つの発現をもたらす条件下で活性化可能抗体をコードする核酸構築物を含む細胞を培養する段階、および(b) 活性化可能抗体を回収する段階を含む、該方法が、本明細書において提供される。
別の局面において、本明細書において提供される抗体、コンジュゲートされた抗体、活性化可能抗体、コンジュゲートされた活性化可能抗体、またはその薬学的組成物のいずれか1つの治療的有効量を、その必要のある対象に投与する段階を含む、疾患細胞がCD147を発現する障害または疾患を処置する、その症状を緩和する、またはその進行を遅らせる方法が本明細書において提供される。別の局面において、本明細書において提供される抗体、コンジュゲートされた抗体、活性化可能抗体、コンジュゲートされた活性化可能抗体、またはその薬学的組成物のいずれか1つの治療的有効量を、その必要のある対象に投与する段階を含む、CD147を発現する細胞に関連した障害または疾患を処置する、その症状を緩和する、またはその進行を遅らせる方法が本明細書において提供される。いくつかの態様において、障害または疾患はがんである。いくつかの態様において、がんは、腺がん、胆管(胆道)がん、膀胱がん、骨がん、乳がん、トリプルネガティブ乳がん、Her2陰性乳がん、カルチノイドがん、子宮頸がん、胆管細胞癌、結腸直腸がん、結腸がん、子宮内膜がん、食道がん、神経膠腫、頭頸部がん、頭頸部扁平上皮がん、白血病、肝臓がん、肺がん、非小細胞肺がん、小細胞肺がん、リンパ腫、黒色腫、中咽頭がん、卵巣がん、膵臓がん、前立腺がん、転移性去勢抵抗性前立腺癌、腎がん、肉腫、皮膚がん、扁平上皮がん、胃がん、精巣がん、甲状腺がん、泌尿生殖器がん、または尿路上皮がんである。別の局面において、本明細書において提供される抗体、コンジュゲートされた抗体、活性化可能抗体、コンジュゲートされた活性化可能抗体、またはその薬学的組成物のいずれか1つの治療的有効量を、その必要のある対象に投与する段階を含む、CD147を発現する細胞の成長、増殖または転移を阻害または低減する方法が本明細書において提供される。いくつかの態様において、CD147の発現および/または活性は異常である。別の局面において、本明細書において提供される抗体、コンジュゲートされた抗体、活性化可能抗体、コンジュゲートされた活性化可能抗体、またはその薬学的組成物のいずれか1つの治療的有効量を、その必要のある対象に投与する段階を含む、CD147に対する天然リガンドの結合を阻害する、ブロックする、または抑止する方法が本明細書において提供される。いくつかの態様において、CD147の発現および/または活性は異常である。本明細書において提供される抗体、コンジュゲートされた抗体、活性化可能抗体、コンジュゲートされた活性化可能抗体、またはその薬学的組成物のいずれか1つの治療的有効量を、その必要のある対象に投与する段階を含む、本明細書において提供される方法のいずれかにおいて、該方法はさらなる作用物質を投与する段階を含むことができる。いくつかの態様において、さらなる作用物質は治療用作用物質である。
本開示のマウスおよびヒト化抗ヒトCD147抗体がヒトCD147に結合する能力を表すグラフである。 本開示のヒト化抗ヒトCD147抗体がヒトCD147に結合する能力を表すグラフである。 図3A〜3Hは、本開示のコンジュゲートされた抗ヒトCD147抗体のインビトロ細胞毒性を表すグラフである。 図3-1の説明を参照のこと。 本開示のマスキングペプチドのスクリーニングおよび選別の概略図である。 本開示の抗ヒトCD147抗体に対する細菌表面に提示された本開示のマスキングペプチドの親和性を表すグラフである。 図6Aおよび6Bは、本開示のマスクされていない親抗ヒトCD147抗体と比較した、本開示の活性化可能抗ヒトCD147抗体の相対結合親和性の例示的なアッセイを表すグラフである。 本開示のマスクされていない親抗ヒトCD147抗体と比較した、本開示の活性化可能抗ヒトCD147抗体の相対結合親和性を表すグラフである。 本開示のマスクされていない親抗ヒトCD147抗体と比較した、本開示の活性化可能抗ヒトCD147抗体の相対結合親和性を表すグラフである。 本開示のマスクされていない親抗ヒトCD147抗体と比較した、本開示の活性化可能抗ヒトCD147抗体の相対結合親和性を表すグラフである。 さまざまながん由来組織に対する本開示の抗ヒトCD147抗体の例示的な免疫組織化学アッセイ結果を示す。 さまざまながん由来組織に対する本開示の抗ヒトCD147抗体の例示的な免疫組織化学アッセイ結果を示す。 さまざまながん由来組織に対する本開示の抗ヒトCD147抗体の例示的な免疫組織化学アッセイ結果を示す。 さまざまながん由来組織に対する本開示の抗ヒトCD147抗体の例示的な免疫組織化学アッセイ結果を示す。 さまざまなヒト由来細胞株上のヒトCD147に結合する本開示の抗ヒトCD147抗体の能力、およびさまざまなヒト由来細胞株に対する本開示の抗ヒトCD147抗体薬物コンジュゲートの細胞毒性の例示的な研究を表すグラフである。 ヒトおよびカニクイザル細胞株に対する本開示の抗ヒトCD147抗体の例示的な結合親和性研究を表すグラフである。 図11Aは、ヒト細胞株に対する本開示の無傷なおよびプロテアーゼで活性化された抗ヒトCD147活性化可能抗体薬物コンジュゲートの例示的な結合親和性研究を表すグラフである。図11Bは、がん由来細胞株に対する本開示の無傷なおよびプロテアーゼで活性化された抗ヒトCD147活性化可能抗体薬物コンジュゲートの例示的なインビトロ細胞毒性研究を表すグラフである。 図12Aおよび12Bは、異種移植モデルにおける本開示の抗ヒトCD147活性化可能抗体薬物コンジュゲートの例示的なインビボ有効性研究を表すグラフである。 図13A〜13Dは、本開示のコンジュゲートされた活性化可能抗ヒトCD147抗体(抗huCD147 3A11-440.1-2012 DM4)を投与されたカニクイザルは、本開示の対応するコンジュゲートされた抗ヒトCD147抗体(抗huCD147 3A11 DM4)と比較して血液学的毒性(好中球、網状赤血球および単球数に基づく)または肝臓毒性(アラニントランスアミナーゼ(ALT)のレベルに基づく)の証拠がない、またはその証拠が少ないことを示した例示的な毒性研究を示す。 カニクイザルに投与された場合の、本開示のコンジュゲートされた活性化可能抗ヒトCD147抗体および本開示のコンジュゲートされた親抗ヒトCD147抗体の例示的な薬物動態研究を表すグラフである。 コンジュゲートされた抗体を投与したカニクイザルにおけるアラニントランスアミナーゼレベルおよび好中球数をモニタリングすることによる、カニクイザルにおける本開示のコンジュゲートされた活性化可能抗ヒトCD147抗体および本開示のコンジュゲートされた親抗ヒトCD147抗体の例示的な忍容性研究を表すグラフである。 コンジュゲートされた抗体を投与したカニクイザルにおけるアラニントランスアミナーゼレベルおよび好中球数をモニタリングすることによる、カニクイザルにおける本開示のコンジュゲートされた活性化可能抗ヒトCD147抗体および本開示のコンジュゲートされた親抗ヒトCD147抗体の例示的な忍容性研究を表すグラフである。 本開示のヒト化抗ヒトCD147抗体がグリコシル化および脱グリコシル化ヒトCD147融合タンパク質の両方に結合する能力を表すグラフである。
発明の詳細な説明
CD147 (バシギン(Basigin)、細胞外マトリックスメタロプロテイナーゼインデューサー(EMMPRIN)、gp42、BSG、HT7、ニューロセリン、OX-47、M6、および5A11としても公知)は、免疫グロブリンスーパーファミリーに属し、細胞間伝達において重要な役割を果たす膜貫通糖タンパク質である。(「CD147」という用語の使用は、非限定的な例として、CD-147および/またはCD 147のような、その任意の変化形を網羅することが意図されており、全ての変化形は本明細書において互換的に使用される。) CD147は受容体であるシクロフィリンAおよびB、S100A9ならびに血小板糖タンパク質VIの受容体であるが、CD147は桿体由来の錐体生存因子(rod-derived cone viability factor)の受容体として働く。CD147はモノカルボン酸輸送体と結び付き、その細胞表面移動および活性に不可欠である。CD147は、いくつかのインテグリンとも相互作用する。同じ膜面において、CD147は、GLUT1、CD44およびCD98を含む他のタンパク質とも結び付く。CD147の炭水化物部分は、ガレクチン-3およびE-セレクチンのような、レクチンによって認識される。これらの分子認識は、栄養素の輸送、炎症性白血球の遊走、およびマトリックスメタロプロテイナーゼ(MMP)の誘導におけるCD147の役割の基礎を形成する。CD147は、視覚、精子形成および他の生理学的現象に関与しており、がんを含む、多数の疾患の病因にも関与している。CD147は、マラリア原虫に存在する侵襲性タンパク質RH5の受容体でもある。
CD147は、単球、顆粒球、上皮細胞および内皮細胞のような造血細胞および非造血細胞で幅広い発現パターンを有する。CD147は、活性Tリンパ球上でアップレギュレートされる。特定のエピトープに対するいくつかのCD147抗体は、CD3 mAbによって誘導される増殖を阻害する。
CD147は、複数のがんの適応症でよく見られるため、望ましい標的である。
したがって、本開示は、哺乳動物CD147に特異的に結合する抗体、活性化可能抗体、コンジュゲートされた抗体、およびコンジュゲートされた活性化可能抗体、その作製および使用の方法を提供する。
より具体的には、本開示は、CD147を発現する細胞に関連した疾患または障害を処置する、予防する、その進行を遅らせる、その症状を改善するおよび/または緩和する方法において有用である抗哺乳動物CD147抗体およびその断片(本明細書において互換的にCD147抗体またはABといわれる)、コンジュゲートされたCD147抗体、活性化可能CD147抗体、およびコンジュゲートされた活性化可能CD147抗体を提供する。いくつかの態様において、細胞は正常なCD147発現および/または活性に関連している。いくつかの態様において、細胞は異常なCD147発現および/または活性に関連している。いくつかの態様において、細胞は疾患細胞におけるCD147発現および/または活性に関連している。例えば、本明細書において記述される抗体/活性化可能抗体のいずれかを、がんまたは他の新生物状態を処置する、予防する、その進行を遅らせる、その症状を改善するおよび/または緩和する方法において用いることができる。本明細書において記述される抗体/活性化可能抗体のいずれかを、検出/診断用途のために用いることもできる。
いくつかの態様において、抗体および活性化可能抗体は、ヒトCD147およびカニクイザルCD147に特異的に結合する。いくつかの態様において、抗体および活性化可能抗体はヒトCD147に結合する。いくつかの態様において、抗体および活性化可能抗体はカニクイザルCD147に結合する。いくつかの態様において、抗体および活性化可能抗体は、CD147含有細胞によって内在化される。いくつかの態様において、抗体および活性化可能抗体は、CD147抗原のグリコシル化形態および脱グリコシル化形態の両方に結合する。
定義
特に別の定義がなければ、本開示に関連して用いられる科学的および技術的用語は、当業者によって一般的に理解される意味を有するものとする。「1つの(a)」実体または「1つの(an)」実体という用語は、その実体の1つまたは複数をいう。例えば、1つの化合物(a compound)は、1つまたは複数の化合物(one or more compounds)をいう。したがって、「1つの(a)」、「1つの(an)」、「1つまたは複数の(one or more)」および「少なくとも1つの(at least one)」という用語は、互換的に用いることができる。さらに、文脈に別段の定めがない限り、単数形の用語は複数形を含むものとし、複数形の用語は単数形を含むものとする。一般に、本明細書において記述される細胞および組織培養、分子生物学、ならびにタンパク質およびオリゴまたはポリヌクレオチド化学およびハイブリダイゼーションに関連して利用される命名法や、それらの技法は、当技術分野において周知で、一般的に用いられるものである。組み換えDNA、オリゴヌクレオチド合成、ならびに組織培養および形質転換(例えば、エレクトロポレーション、リポフェクション)のために標準的な技法が用いられる。酵素反応および精製技法は、製造業者の仕様書にしたがって、または当技術分野において一般的に行われるように、または本明細書において記述されるように行われる。前述の技法および手順は一般に、当技術分野において周知の従来の方法にしたがって、および本明細書の全体にわたって引用され論じられている種々の一般的なおよびより具体的な参考文献に記述されているように行われる。例えば、Sambrook et al. Molecular Cloning：A Laboratory Manual (2d ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. (1989))を参照されたい。本明細書において記述される分析化学、合成有機化学、ならびに医化学および薬化学に関連して利用される命名法、ならびにそれらの実験手順および技法は、当技術分野において周知で、一般的に用いられるものである。化学合成、化学分析、薬学的調製、処方、ならびに患者への送達および患者の処置のために標準的な技法が用いられる。
本開示にしたがって利用される場合、以下の用語は、別段の指示がない限り、以下の意味を有すると理解されるものとする。
本明細書において用いられる場合、「抗体」という用語は、免疫グロブリン分子および免疫グロブリン(Ig)分子の免疫学的に活性な部分、すなわち、抗原に特異的に結合する(抗原と免疫反応する)抗原結合部位を含む分子をいう。「特異的に結合する」または「〜と免疫反応する」または「免疫特異的に結合する」とは、抗体が所望の抗原の1つもしくは複数の抗原性決定基と反応し、その他のポリペプチドとは反応しないか、またはかなり低い親和性(Kd＞10-6)で結合することを意味する。抗体には、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、キメラ抗体、ドメイン抗体、単鎖、FabおよびF(ab')2断片、scFv、ならびにFab発現ライブラリーが含まれるが、これらに限定されることはない。本明細書において提供する抗体は、IgG、IgM、IgA、IgEおよびIgDのクラス（またはこれらのサブクラス）のいずれかのものであることができる。
本明細書において用いられる「モノクローナル抗体」(mAb)または「モノクローナル抗体組成物」という用語は、固有の軽鎖遺伝子産物および固有の重鎖遺伝子産物からなる抗体分子の1つの分子種のみを含む抗体分子集団をいう。特に、モノクローナル抗体の相補性決定領域(CDR)は、その集団の全ての分子において同一である。MAbは、抗原に対する固有の結合親和性によって特徴付けられる特定の抗原エピトープと免疫反応することができる抗原結合部位を含む。
「抗原結合部位」または「結合部分」という用語は、抗原結合に関与する免疫グロブリン分子の部分をいう。抗原結合部位は、重(「H」)鎖および軽(「L」) 鎖のN末端可変(「V」)領域のアミノ酸残基によって形成される。「超可変領域」といわれる、重鎖および軽鎖のV領域内の3つの高度に多様な伸長部が、「フレームワーク領域」または「FR」として知られるいっそう保存された隣接伸長部の間に挿入される。このように、「FR」という用語は、免疫グロブリンの超可変領域の間に、および超可変領域に隣接して天然に見出されるアミノ酸配列をいう。抗体分子において、軽鎖の3つの超可変領域および重鎖の3つの超可変領域は、三次元空間で互いに関連して配置されて、抗原結合表面を形成する。抗原結合表面は、結合した抗原の三次元表面と相補的であり、重鎖および軽鎖の各々の3つの超可変領域は、「相補性決定領域」または「CDR」といわれる。各ドメインに対するアミノ酸の割付は、Kabat Sequences of Proteins of Immunological Interest (National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1987 and 1991))、またはChothia & Lesk J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987), Chothia et al. Nature 342:878-883 (1989)の定義に従う。
本明細書において用いられる場合、「エピトープ」という用語は、免疫グロブリン、scFvまたはT細胞受容体に特異的に結合することができる任意のタンパク質決定基を含む。「エピトープ」という用語は、免疫グロブリンまたはT細胞受容体に特異的に結合することができる任意のタンパク質決定基を含む。エピトープ決定基は通常、アミノ酸または糖側鎖のような分子の化学的に活性な表面官能基からなり、通常、特異的な三次元構造特徴、ならびに特異的な電荷特徴を有する。例えば、抗体は、ポリペプチドのN末端ペプチドまたはC末端ペプチドに対して作製されうる。抗体は、解離定数が1μM以下；いくつかの態様では100 nM以下およびいくつかの態様では10 nM以下である場合に抗原に特異的に結合すると言われる。
本明細書において用いられる場合、「特異的結合」、「免疫学的な結合」および「免疫学的な結合特性」という用語は、免疫グロブリン分子と、免疫グロブリン分子が特異的である抗原との間に起こるタイプの非共有結合性相互作用をいう。免疫学的な結合相互作用の強度または親和性は、相互作用の解離定数(Kd)に関して表現することができ、ここでKdが小さいほど親和性が大きくなることを表す。選択されたポリペプチドの免疫学的な結合特性は、当技術分野において周知の方法を用いて定量することができる。そのような1つの方法では、抗原結合部位/抗原複合体の形成および解離の速度を測定する段階を伴い、ここでそれらの速度は複合体パートナーの濃度、相互作用の親和性、および両方向の速度に等しく影響を及ぼす幾何学的パラメータに依存する。したがって、濃度ならびに実際の結合速度および解離速度の計算により「結合速度(on rate)定数」(Kon)および「解離速度(off rate)定数」(Koff)の両方を決定することができる(Nature 361:185-87 (1993)を参照のこと)。Koff/Konの比率は、親和性に関連しない全てのパラメータの解除を可能にし、かつ解離定数Kdに等しい(一般的には、Davies et al. (1990) Annual Rev Biochem 59:439-473を参照のこと)。本開示の抗体は、放射性リガンド結合アッセイ法または当業者に公知の類似のアッセイ法のようなアッセイにより測定された場合に、結合定数(Kd)が1 μM以下、いくつかの態様では100 nM以下、いくつかの態様では10 nM以下、およびいくつかの態様では100 pM以下〜約1 pMであれば、標的に特異的に結合すると言われる。
本明細書において用いられる「単離(された)ポリヌクレオチド」という用語は、ゲノム、cDNA、もしくは合成由来のポリヌクレオチドまたはそのいくつかの組み合わせを意味するものとし、その起源によって「単離(された)ポリヌクレオチド」は、(1) 「単離(された)ポリヌクレオチド」が天然において見出されるポリヌクレオチドの全部または一部に結び付いていない、(2) 天然において連結されていないポリヌクレオチドに機能的に連結されている、または(3) より大きい配列の一部として天然において存在しない。本開示によるポリヌクレオチドは、本明細書において示される重鎖免疫グロブリン分子をコードする核酸分子、および本明細書において示される軽鎖免疫グロブリン分子をコードする核酸分子を含む。
本明細書において言及される「単離(された)タンパク質」という用語は、cDNA、組み換えRNAもしくは合成由来のタンパク質、またはそのいくつかの組み合わせを意味し、その由来または起源によって「単離(された)タンパク質」は、(1) 天然において見出されるタンパク質に結び付いていない、(2) 同じ起源の他のタンパク質を含まない、例えば、マウスタンパク質を含まない、(3) 異なる種からの細胞によって発現される、または(4) 天然において存在しない。
「ポリペプチド」という用語は本明細書において一般的な用語として用いられ、ポリペプチド配列の本来のタンパク質、断片または類似体をいう。ゆえに、本来のタンパク質断片および類似体は、ポリペプチド属の種である。本開示によるポリペプチドは、本明細書において示される重鎖免疫グロブリン分子および本明細書において示される軽鎖免疫グロブリン分子、ならびに重鎖免疫グロブリン分子と、カッパ軽鎖免疫グロブリン分子のような軽鎖免疫グロブリン分子とを含む組み合わせ、およびその逆によって形成される抗体分子、ならびにその断片および類似体を含む。
本明細書において物体に適用される場合に用いられる「天然に存在する」という用語は、天然において物体を見出すことができるという事実をいう。例えば、天然の供給源から単離することができる生物(ウイルスを含む)に存在し、かつ研究室において人為的にまたはそれ以外の方法で意図的に修飾されていないポリペプチドまたはポリヌクレオチド配列は、天然に存在する。
本明細書において用いられる「機能的に連結された」という用語は、そのように記述された構成要素の位置がその意図される方法でそれらを機能させる関係にあることをいう。コード配列に「機能的に連結された」制御配列は、コード配列の発現が、制御配列と適合性の条件下で達成されるようにライゲーションされる。
本明細書において用いられる「制御配列」という用語は、それらがライゲーションされるコード配列の発現およびプロセッシングを達成するために必要であるポリヌクレオチド配列をいう。そのような制御配列の性質は、原核生物では宿主生物に応じて異なり、そのような制御配列は一般に、真核生物ではプロモーター、リボソーム結合部位および転写終結配列を含み、一般に、そのような制御配列はプロモーターおよび転写終結配列を含む。「制御配列」という用語は、少なくとも、発現およびプロセッシングにとって存在が不可欠な全ての構成要素を含むことが意図され、同様に存在が有利となる追加の構成要素、例えばリーダー配列および融合パートナー配列を含むことができる。本明細書において言及される「ポリヌクレオチド」という用語は、リボヌクレオチドもしくはデオキシヌクレオチドのいずれかの、長さが少なくとも10塩基のヌクレオチドまたはいずれかのタイプのヌクレオチドの修飾型を意味する。この用語は、DNAの一本鎖型および二本鎖型を含む。
本明細書において言及されるオリゴヌクレオチドという用語は、天然に存在するヌクレオチド、ならびに天然に存在するおよび天然に存在しないオリゴヌクレオチド結合によってともに連結された修飾ヌクレオチドを含む。オリゴヌクレオチドは、200塩基またはそれ未満の長さを一般的に含むポリヌクレオチドサブセットである。いくつかの態様において、オリゴヌクレオチドは、長さが10〜60塩基であり、いくつかの態様において、長さが12、13、14、15、16、17、18、19、または20〜40塩基である。オリゴヌクレオチドは通常、例えばプローブの場合、一本鎖であるが、例えば遺伝子変異体の構築に用いる場合には、オリゴヌクレオチドは二本鎖であり得る。本開示のオリゴヌクレオチドは、センスまたはアンチセンスオリゴヌクレオチドのいずれかである。
本明細書において言及される「天然に存在するヌクレオチド」という用語は、デオキシリボヌクレオチドおよびリボヌクレオチドを含む。本明細書において言及される「修飾ヌクレオチド」という用語は、修飾されたまたは置換された糖基などを有するヌクレオチドを含む。本明細書において言及される「オリゴヌクレオチド結合」という用語は、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホロセレロエート、ホスホロジセレノエート、ホスホロアニロチオエート、ホスホラニラデート、ホスホロンミデート(phosphoronmidate)などのようなオリゴヌクレオチド結合を含む。例えば、LaPlanche et al. Nucl. Acids Res. 14:9081 (1986); Stec et al. J. Am. Chem. Soc. 106:6077 (1984)、Stein et al. Nucl. Acids Res. 16:3209 (1988)、Zon et al. Anti Cancer Drug Design 6:539 (1991); Zon et al. Oligonucleotides and Analogues：A Practical Approach, pp. 87-108 (F. Eckstein, Ed., Oxford University Press, Oxford England (1991)); Stec et al. 米国特許第5,151,510号; Uhlmann and Peyman Chemical Reviews 90:543 (1990)を参照されたい。オリゴヌクレオチドは、所望なら、検出用の標識を含むことができる。
本明細書において用いられる場合、20種類の通常アミノ酸およびその略語は、慣例的用法に従う。Immunology - A Synthesis (2nd Edition, E.S. Golub and D.R. Green, Eds., Sinauer Associates, Sunderland, Mass. (1991))を参照されたい。20種類の通常アミノ酸の立体異性体(例えば、D-アミノ酸)、非天然アミノ酸、例えばα-,α-二置換アミノ酸、N-アルキルアミノ酸、乳酸、および他の非通常アミノ酸も同様に、本開示のポリペプチドに適した成分であり得る。非通常アミノ酸の例としては、4ヒドロキシプロリン、γ-カルボキシグルタメート、ε-N,N,N-トリメチルリジン、ε-N-アセチルリジン、O-ホスホセリン、N-アセチルセリン、N-ホルミルメチオニン、3-メチルヒスチジン、5-ヒドロキシリジン、σ-N-メチルアルギニン、ならびに他の類似のアミノ酸およびイミノ酸(例えば、4-ヒドロキシプロリン)が挙げられる。本明細書において用いられるポリペプチドの表記において、標準的な用法および慣例にしたがって、左手方向はアミノ末端方向であり、右手方向はカルボキシ末端方向である。
同様に、特別の定めのない限り、一本鎖ポリヌクレオチド配列の左手末端は5'末端であり、二本鎖ポリヌクレオチド配列の左手方向は、5'方向といわれる。新生RNA転写産物の5'から3'への付加の方向は転写方向といわれ、RNAと同じ配列を有し、RNA転写産物の5'末端に対して5'側にあるDNA鎖上の配列領域は「上流配列」といわれ、RNAと同じ配列を有し、RNA転写産物の3'末端に対して3'側にあるDNA鎖上の配列領域は「下流配列」といわれる。
ポリペプチドに適用される場合、「実質的な同一性」という用語は、2つのペプチド配列が、例えばプログラムGAPまたはBESTFITなどにより、デフォルトのギャップ重みを用いて最適に整列された場合に、少なくとも80%の配列同一性、いくつかの態様において、少なくとも90%の配列同一性、いくつかの態様において、少なくとも95%の配列同一性、およびいくつかの態様において、少なくとも99%の配列同一性を共有することを意味する。
いくつかの態様において、同一でない残基の位置は、保存的アミノ酸置換によって異なる。
本明細書において論じられるように、抗体または免疫グロブリン分子のアミノ酸配列の軽微な変化は、アミノ酸配列の変化が、少なくとも75%、いくつかの態様において、少なくとも80%、90%、95%、およびいくつかの態様において99%を維持する限り、本開示によって包含されると企図される。特に、保存的アミノ酸交換が企図される。保存的交換は、その側鎖が関連するアミノ酸のファミリー内で行われるものである。遺伝的にコードされるアミノ酸は一般に、以下のファミリーに分けられる：(1) 酸性アミノ酸はアスパラギン酸塩、グルタミン酸塩であり；(2) 塩基性アミノ酸はリジン、アルギニン、ヒスチジンであり；(3) 非極性アミノ酸はアラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファンであり、および(4) 非荷電極性アミノ酸はグリシン、アスパラギン、グルタミン、システイン、セリン、トレオニン、チロシンである。親水性アミノ酸には、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸塩、グルタミン、グルタミン酸塩、ヒスチジン、リジン、セリンおよびトレオニンが含まれる。疎水性アミノ酸には、アラニン、システイン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、トリプトファン、チロシンおよびバリンが含まれる。他のアミノ酸ファミリーには、(i) 脂肪族ヒドロキシファミリーであるセリンおよびトレオニン；(ii) アミド含有ファミリーであるアスパラギンおよびグルタミン；(iii) 脂肪族ファミリーであるアラニン、バリン、ロイシンおよびイソロイシン；ならびに(iv) 芳香族ファミリーであるフェニルアラニン、トリプトファンおよびチロシンが含まれる。例えば、ロイシンとイソロイシンまたはバリンとの、アスパラギン酸塩とグルタミン酸塩との、トレオニンとセリンとの単独交換、またはアミノ酸と構造的に関連するアミノ酸との同類交換は、特に交換にはフレームワーク部位内のアミノ酸が含まれない場合、結果的に得られる分子の結合または特性に大きな影響を及ぼさないと予想することは妥当である。アミノ酸の変化によって機能的ペプチドが得られるかどうかは、ポリペプチド誘導体の特異的活性をアッセイすることにより容易に判定することができる。アッセイ法は、本明細書において詳細に記述される。当業者は、抗体または免疫グロブリン分子の断片または類似体を容易に調製することができる。断片または類似体の好適なアミノ末端およびカルボキシ末端は、機能的ドメインの境界付近に存在する。構造的および機能的ドメインは、公共または専用の配列データベースとのヌクレオチドおよび/またはアミノ酸配列データの比較によって同定することができる。いくつかの態様において、コンピュータ化比較法を用いて、既知構造および/または機能の他のタンパク質に存在する配列モチーフまたは予測されるタンパク質コンフォメーションドメインを同定する。既知の三次元構造に折り畳まれるタンパク質配列を同定する方法は、公知である。Bowie et al. Science 253：164 (1991)。このように、前述の例は、本開示によって構造的および機能的ドメインを定義するために用いられうる配列モチーフおよび構造的コンフォメーションを当業者が認識できることを実証する。
好適なアミノ酸置換は、(1) タンパク質分解に対する感受性を低減させる、(2) 酸化に対する感受性を低減させる、(3) タンパク質複合体を形成するための結合親和性を変化させる、(4) 結合親和性を変化させる、および(5) そのような類似体の他の物理化学的または機能的特性を付与または改変するものである。類似体は、天然に存在するペプチド配列以外の配列の様々なムテインを含むことができる。例えば、1つまたは複数のアミノ酸置換(例えば、保存的アミノ酸置換)が、天然に存在する配列において(例えば、分子間接触を形成するドメイン外のポリペプチドの部分において行われうる。保存的アミノ酸置換は、親配列の構造的特徴を実質的に変化させてはならない(例えば、交換アミノ酸は、親配列に存在するらせんを切断させる傾向も、親配列を特徴付ける他のタイプの二次構造を崩壊させる傾向もあってはならない)。当技術分野で認識されるポリペプチドの二次および三次構造の例はProteins, Structures and Molecular Principles (Creighton, Ed., W. H. Freeman and Company, New York (1984)); Introduction to Protein Structure (C. Branden and J. Tooze, eds., Garland Publishing, New York, N.Y. (1991)); およびThornton et at. Nature 354：105 (1991)に記述されている。
本明細書において用いられる「ポリペプチド断片」という用語は、アミノ末端および/またはカルボキシ末端欠失および/または1つもしくは複数の内部欠失を有するが、しかし残りのアミノ酸配列は、例えば、完全長cDNA配列から推定される天然配列における対応する位置と同一であるポリペプチドをいう。断片は、典型的には、少なくとも5、6、8または10アミノ酸長であり、いくつかの態様において、少なくとも14アミノ酸長であり、いくつかの態様において、少なくとも20アミノ酸長であり、通常は、少なくとも50アミノ酸長であり、およびいくつかの態様において、少なくとも70アミノ酸長である。本明細書において用いられる「類似体」という用語は、推定されたアミノ酸配列の部分と実質的な同一性を有し、かつ好適な結合条件下で、標的への特異的結合を有する少なくとも25アミノ酸のセグメントで構成されるポリペプチドをいう。典型的には、ポリペプチド類似体は、天然に存在する配列に関して保存的アミノ酸置換(または付加もしくは欠失)を含む。類似体は、典型的には、少なくとも20アミノ酸長、いくつかの態様において、少なくとも50アミノ酸長またはそれ以上であり、完全長の天然ポリペプチドと同じくらい長いことも多い。
「作用物質」という用語は、本明細書において、化学化合物、化学化合物の混合物、生物学的高分子、または生物学的材料から作製された抽出物を示すために用いられる。
本明細書において用いられる場合、「標識」または「標識された」という用語は、例えば、放射性標識アミノ酸の組み入れ、またはマーキングされたアビジン(例えば、光学的方法もしくは熱量測定法によって検出できる蛍光マーカーもしくは酵素活性を含むストレプトアビジン)によって検出できるビオチニル部分のポリペプチドへの結合による、検出可能なマーカーの組み入れをいう。ある特定の状況では、標識またはマーカーは治療的であることもできる。ポリペプチドおよび糖タンパク質を標識する様々な方法が当技術分野において公知であり、用いることができる。ポリペプチドの標識の例としては、以下が挙げられるが、これらに限定されることはない：放射性同位体または放射性核種(例えば、3H、14C、15N、35S、90Y、99Tc、111In、125I、131I)、蛍光標識(例えば、FITC、ローダミン、ランタニド蛍光体)、酵素標識(例えば西洋ワサビペルオキシダーゼ、p-ガラクトシダーゼ、ルシフェラーゼ、アルカリホスファターゼ)、化学発光物質、ビオチニル基、二次レポーターによって認識される所定のポリペプチドエピトープ(例えばロイシンジッパー対配列、二次抗体の結合部位、金属結合ドメイン、エピトープタグ)。いくつかの態様において、潜在的な立体障害を低減させるために、様々な長さのスペーサーアームによって標識が結合される。本明細書において用いられる「薬学的作用物質(pharmaceutical agent)または薬物」という用語は、患者に適切に投与された場合に、所望の治療効果を誘導することができる化学化合物または組成物をいう。
本明細書における他の化学用語は、The McGraw-Hill Dictionary of Chemical Terms (Parker, S., Ed., McGraw-Hill, San Francisco (1985))によって例証されるように、当技術分野における慣例的用法にしたがって用いられる。
本明細書において用いられる場合、「実質的に純粋な」とは、目的種が、存在する優勢な種である(すなわち、モルに基づいて、組成物中の他の任意の個々の種より豊富に存在する)ことを意味し、いくつかの態様において、実質的に精製された画分は、目的種が、存在する全ての高分子種の少なくとも約50パーセント(モルに基づいて)を構成する組成物である。
一般的に、実質的に純粋な組成物は、組成物中に存在する全ての高分子種の約80%超、いくつかの態様において、約85%、90%、95%および99%超を構成するであろう。いくつかの態様において、目的種は、組成物が単一の高分子種から本質的になる、本質的な均一性となるまで精製される(通常の検出法によって組成物中に夾雑種を検出することができない)。
患者という用語には、ヒトおよび獣医学の対象が含まれる。
CD147抗体
哺乳動物CD147に特異的に結合する抗体およびその抗原結合断片(AB)が本明細書において提供される。いくつかの態様において、ABは、ヒトCD147およびカニクイザルCD147に特異的に結合する。
CD147に結合する本明細書において提供されるABは、モノクローナル抗体、ドメイン抗体、単鎖抗体、Fab断片、F(ab')2断片、scFv、scAb、dAb、単一ドメイン重鎖抗体、または単一ドメイン軽鎖抗体を含む。いくつかの態様において、CD147に結合するそのようなABは、マウス、他のげっ歯類、キメラ、ヒト化または完全ヒトモノクローナル抗体である。
MMのカップリングがCD147に結合する抗体またはその抗原結合断片の能力を低減させるような、マスキング部分(MM)にカップリングされたCD147に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片(AB)を含む活性化可能CD147抗体も本明細書において提供される。いくつかの態様において、MMは、プロテアーゼ、例えば、対象における処置部位でCD147と共局在化するプロテアーゼの基質(切断可能部分、CM)を含む配列を介してカップリングされる。(本開示の活性化可能CD147抗体は、以下の項のなかでさらに詳細に記述されている)。
本開示のCD147抗体は、例えば、ヒトCD147のような、哺乳動物CD147標的に特異的に結合する。本開示には、本開示の抗体および/または本明細書において記述される活性化された活性化可能抗体と同じCD147エピトープに結合するCD147抗体およびABも含まれる。本開示には、CD147標的、例えば、ヒトCD147への結合について本明細書において記述されるCD147抗体と競合するCD147抗体も含まれる。本開示には、CD147標的、例えばヒトCD147への結合について本明細書において記述されるCD147抗体および/または活性化されたCD147活性化可能抗体と交差競合する(その結合を阻害する) CD147抗体も含まれる。
本開示の抗体および/または活性化可能抗体は、哺乳動物CD147、例えばヒトCD147およびカニクイザルCD147に特異的に結合する。本開示には、本明細書において記述される抗体および/または活性化可能抗体のいずれかと同じエピトープに結合する抗体および/または活性化可能抗体も含まれる。本開示には、CD147、例えばヒトCD147への結合について本明細書において記述されるCD147抗体および/またはCD147活性化可能抗体と競合する(その結合を阻害する)抗体および/または活性化可能抗体も含まれる。本開示には、CD147、例えばヒトCD147への結合について本明細書において記述されるCD147抗体および/またはCD147活性化可能抗体と交差競合する(CD147への結合を阻害する)抗体および/または活性化可能抗体も含まれる。
いくつかの態様において、哺乳動物CD147は、ヒトCD147、マウスCD147、ラットCD147、およびカニクイザルCD147からなる群より選択される。いくつかの態様において、ABは、1 nM未満の解離定数でヒトCD147、マウスCD147またはカニクイザルCD147に特異的に結合する。いくつかの態様において、哺乳動物CD147はヒトCD147である。
いくつかの態様において、ABは以下の特徴の1つまたは複数を有する：(a) ABはヒトCD147に特異的に結合する；および(b) ABはヒトCD147およびカニクイザルCD147に特異的に結合する。
いくつかの態様において、ABは以下の特徴の1つまたは複数を有する：(a) ABは、ヒトCD147およびカニクイザルCD147に特異的に結合する；(b) ABは、哺乳動物CD147に対する、CD147の1つまたは複数の天然哺乳動物リガンドの結合を阻害する；(c) ABは、ヒトCD147に対する、CD147の1つまたは複数の天然ヒトリガンドの結合を阻害する；および(d) ABは、カニクイザルCD147に対する、CD147の1つまたは複数の天然カニクイザルリガンドの結合を阻害する。
いくつかの態様において、ABは、CD147のグリコシル化形態および脱グリコシル化形態の両方に結合する。
いくつかの態様において、ABは、5 nM以下、10 nM以下、50 nM以下、100 nM以下、500 nM以下、および/または1000 nM以下のEC50で哺乳動物CD147に結合する天然リガンドの能力をブロックする。いくつかの態様において、ABは、5 nM以下、10 nM以下、50 nM以下、100 nM以下、500 nM以下、および/または1000 nM以下のEC50で哺乳動物CD147に結合する天然リガンドの能力をブロックする。
いくつかの態様において、ABは、5 nM〜1000 nM、5 nM〜500 nM、5 nM〜100 nM 5 nM〜50 nM、5 nM〜10 nM、10 nM〜1000 nM、10 nM〜500 nM、10 nM〜100 nM 10 nM〜50 nM、50 nM〜1000 nM、50 nM〜500 nM、50 nM〜100 nM、100 nM〜1000 nM、100 nM〜500 nM、500 nM〜1000 nMのEC50で哺乳動物CD147に結合する天然リガンドの能力をブロックする。いくつかの態様において、ABは、5 nM〜1000 nM、5 nM〜500 nM、5 nM〜100 nM 5 nM〜50 nM、5 nM〜10 nM、10 nM〜1000 nM、10 nM〜500 nM、10 nM〜100 nM 10 nM〜50 nM、50 nM〜1000 nM、50 nM〜500 nM、50 nM〜100 nM、100 nM〜1000 nM、100 nM〜500 nM、500 nM〜1000 nMのEC50で哺乳動物CD147に結合する天然リガンドの能力をブロックする。
いくつかの態様において、本開示のABは、哺乳動物CD147を発現する細胞の成長、増殖、および/または転移を阻害または低減する。いかなる理論にも束縛されることを意図するものではないが、本開示のABは、CD147に特異的に結合し、哺乳動物CD147に対する天然リガンドの結合を阻害、ブロックおよび/または抑止することにより、哺乳動物CD147を発現する細胞の成長、増殖および/または転移を阻害または低減しうる。
いくつかの態様において、ABは、哺乳動物CD147への結合について約100 nMまたはそれ以下の解離定数を有する。いくつかの態様において、ABは、哺乳動物CD147への結合について約10 nMまたはそれ以下の解離定数を有する。いくつかの態様において、ABは、CD147への結合について約5 nMまたはそれ以下の解離定数を有する。いくつかの態様において、ABは、CD147への結合について約1 nMまたはそれ以下の解離定数を有する。いくつかの態様において、ABは、CD147への結合について約0.5 nMまたはそれ以下の解離定数を有する。いくつかの態様において、ABは、CD147への結合について約0.1 nMまたはそれ以下の解離定数を有する。いくつかの態様において、ABは、哺乳動物CD147への結合について0.01 nM〜100 nM、0.01 nM〜10 nM、0.01 nM〜5 nM、0.01 nM〜1 nM、0.01〜0.5 nM、0.01 nm〜0.1 nM、0.01 nm〜0.05 nM、0.05 nM〜100 nM、0.05 nM〜10 nM、0.05 nM〜5 nM、0.05 nM〜1 nM、0.05〜0.5 nM、0.05 nm〜0.1 nM、0.1 nM〜100 nM、0.1 nM〜10 nM、0.1 nM〜5 nM、0.1 nM〜1 nM、0.1〜0.5 nM、0.5 nM〜100 nM、0.5 nM〜10 nM、0.5 nM〜5 nM、0.5 nM〜1 nM、1 nM〜100 nM、1 nM〜10 nM、1 nM〜5 nM、5 nM〜100 nM、5 nM〜10 nM、または10 nM〜100 nMの解離定数を有する。
本発明の例示的なCD147抗体および活性化可能CD147抗体は、以下に示される重鎖可変および軽鎖可変配列である、またはそれらに由来する重鎖および軽鎖を含みうる(CDR配列は太字および下線で示されている):
Figure 2020511130
いくつかの態様において、CD147抗体/活性化可能抗体の抗体またはその抗原結合断片は、SEQ ID NO:1〜4からなる群より選択される重鎖可変領域アミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、CD147抗体/活性化可能抗体の抗体またはその抗原結合断片は、SEQ ID NO:1〜3からなる群より選択される重鎖可変領域アミノ酸配列を含む。
いくつかの態様において、CD147抗体/活性化可能抗体の抗体またはその抗原結合断片は、SEQ ID NO:5〜9からなる群より選択される軽鎖可変領域アミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、CD147抗体/活性化可能抗体の抗体またはその抗原結合断片は、SEQ ID NO:5〜8からなる群より選択される軽鎖可変領域アミノ酸配列を含む。
いくつかの態様において、CD147抗体/活性化可能抗体の抗体またはその抗原結合断片は、SEQ ID NO:1〜4からなる群より選択される重鎖可変領域アミノ酸配列、およびSEQ ID NO:5〜9からなる群より選択される軽鎖可変領域アミノ酸配列を含む。
いくつかの態様において、CD147抗体/活性化可能抗体の抗体またはその抗原結合断片は、SEQ ID NO:1〜3からなる群より選択される重鎖可変領域アミノ酸配列、およびSEQ ID NO:5〜8からなる群より選択される軽鎖可変領域アミノ酸配列を含む。
いくつかの態様において、CD147抗体/活性化可能抗体の抗体またはその抗原結合断片は、SEQ ID NO:1〜4からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である重鎖可変領域アミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、CD147抗体/活性化可能抗体の抗体またはその抗原結合断片は、SEQ ID NO:1〜3からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である重鎖可変領域アミノ酸配列を含む。
いくつかの態様において、CD147抗体/活性化可能抗体の抗体またはその抗原結合断片は、SEQ ID NO:5〜9からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である軽鎖可変領域アミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、CD147抗体/活性化可能抗体の抗体またはその抗原結合断片は、SEQ ID NO:5〜8からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である軽鎖可変領域アミノ酸配列を含む。
いくつかの態様において、CD147抗体/活性化可能抗体の抗体またはその抗原結合断片は、SEQ ID NO:1〜4からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である重鎖可変領域アミノ酸配列、およびSEQ ID NO:5〜9からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である軽鎖可変領域アミノ酸配列を含む。
いくつかの態様において、CD147抗体/活性化可能抗体の抗体またはその抗原結合断片は、SEQ ID NO:1〜3からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である重鎖可変領域アミノ酸配列、およびSEQ ID NO:5〜8からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である軽鎖可変領域アミノ酸配列を含む。
本発明の例示的なCD147抗体および活性化可能CD147抗体は、可変重鎖相補性決定領域1 (VH CDR1, 本明細書においてCDRH1ともいわれる)配列、可変重鎖相補性決定領域2 (VH CDR2, 本明細書においてCDRH2ともいわれる)配列、可変重鎖相補性決定領域3 (VH CDR3, 本明細書においてCDRH3ともいわれる)配列、可変軽鎖相補性決定領域1 (VL CDR1, 本明細書においてCDRL1ともいわれる)配列、可変軽鎖相補性決定領域2 (VL CDR2, 本明細書においてCDRL2ともいわれる)配列および可変軽鎖相補性決定領域3 (VL CDR3, 本明細書においてCDRL3ともいわれる)配列の組み合わせを含み、ここで少なくとも1つのCDR配列が、アミノ酸配列
Figure 2020511130
を含むVH CDR1配列；アミノ酸配
Figure 2020511130
を含むVH CDR2配列；アミノ酸配
AGTDY (SEQ ID NO:13)
を含むVH CDR3配列；アミノ酸配列
Figure 2020511130
を含むVL CDR1配列；アミノ酸配
YSSNRYT (SEQ ID NO:16)
を含むVL CDR2配列；およびアミノ酸配
Figure 2020511130
を含むVL CDR3配列からなる群より選択される。
いくつかの態様において、CD147抗体またはその抗原結合断片は、可変重鎖相補性決定領域1 (VH CDR1, 本明細書においてCDRH1ともいわれる)配列、可変重鎖相補性決定領域2 (VH CDR2, 本明細書においてCDRH2ともいわれる)配列、可変重鎖相補性決定領域3 (VH CDR3, 本明細書においてCDRH3ともいわれる)配列、可変軽鎖相補性決定領域1 (VL CDR1, 本明細書においてCDRL1ともいわれる)配列、可変軽鎖相補性決定領域2 (VL CDR2, 本明細書においてCDRL2ともいわれる)配列および可変軽鎖相補性決定領域3 (VL CDR3, 本明細書においてCDRL3ともいわれる)配列の組み合わせを含み、ここで少なくとも1つの相補性決定領域(CDR)配列が、アミノ酸配列
Figure 2020511130
を含むVH CDR1配列；アミノ酸配
Figure 2020511130
を含むVH CDR2配列；アミノ酸配
AGTDY (SEQ ID NO:13)
を含むVH CDR3配列；アミノ酸配列
Figure 2020511130
を含むVL CDR1配列；アミノ酸配
YSSNRYT (SEQ ID NO:16)
を含むVL CDR2配列；およびアミノ酸配
Figure 2020511130
を含むVL CDR3配列からなる群より選択される。
いくつかの態様において、CD147抗体またはその抗原結合断片は、VH CDR1配列、VH CDR2配列、VH CDR3配列、VL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせを含み、ここで少なくとも1つのCDR配列が、アミノ酸配列
Figure 2020511130
を含むVH CDR1配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含むVH CDR1配列；アミノ酸配列
Figure 2020511130
を含むVH CDR2配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含むVH CDR2配列；アミノ酸配列
AGTDY (SEQ ID NO:13)
を含むVH CDR3配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含むVH CDR3配列；アミノ酸配列
Figure 2020511130
を含むVL CDR1配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含むVL CDR1配列；アミノ酸配列
YSSNRYT (SEQ ID NO:16)
を含むVL CDR2配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含むVL CDR2配列；およびアミノ酸配列
QQDYSSPFT (SEQ ID NO:17)またはQQDYSSPYT (SEQ ID NO:18)
を含むVL CDR3配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含むVL CDR3配列からなる群より選択される。
いくつかの態様において、CD147抗体またはその抗原結合断片は、VH CDR1配列、VH CDR2配列、VH CDR3配列、VL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせを含み、ここでVH CDR1配列がアミノ酸配列
Figure 2020511130
を含み；VH CDR2配列がアミノ酸配列
Figure 2020511130
を含み；VH CDR3配列がアミノ酸配列
AGTDY (SEQ ID NO:13)
を含み；VL CDR1配列がアミノ酸配列
Figure 2020511130
を含み；VL CDR2配列がアミノ酸配列
YSSNRYT (SEQ ID NO:16)
を含み；およびVL CDR3配列がアミノ酸配列
Figure 2020511130
を含む。
いくつかの態様において、CD147抗体またはその抗原結合断片は、(a) VH CDR1配列
Figure 2020511130
；VH CDR2配列
Figure 2020511130
；VH CDR3配列
AGTDY (SEQ ID NO:13)
；VL CDR1配列
Figure 2020511130
；VL CDR2配列
YSSNRYT (SEQ ID NO:16)
；およびVL CDR3配列
Figure 2020511130
；(b) VH CDR1配列
Figure 2020511130
；VH CDR2配列
Figure 2020511130
；VH CDR3配列
AGTDY (SEQ ID NO:13)
；VL CDR1配列
Figure 2020511130
；VL CDR2配列
YSSNRYT (SEQ ID NO:16)
；およびVL CDR3配列
QQDYSSPYT (SEQ ID NO:18)
；ならびに(c) VH CDR1配列
Figure 2020511130
；VH CDR2配列
Figure 2020511130
；VH CDR3配列
AGTDY (SEQ ID NO:13)
；VL CDR1配列
Figure 2020511130
；VL CDR2配列
YSSNRYT (SEQ ID NO:16)
；およびVL CDR3配列
QQDYSSPFT (SEQ ID NO:17)
からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むアミノ酸配列を含む。
いくつかの態様において、CD147抗体またはその抗原結合断片は、VH CDR1配列、VH CDR2配列、VH CDR3配列、VL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせを含み、ここでVH CDR1配列が、アミノ酸配列
Figure 2020511130
と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含み；VH CDR2配列が、アミノ酸配列
Figure 2020511130
と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含み；VH CDR3配列が、アミノ酸配列
AGTDY (SEQ ID NO:13)
と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含み；VL CDR1配列が、アミノ酸配列
Figure 2020511130
と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含み；VL CDR2配列が、アミノ酸配列
YSSNRYT (SEQ ID NO:16)
と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含み；および
VL CDR3配列が、アミノ酸配列
Figure 2020511130
と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含む。
本開示の適当なCD147抗体はまた、ヒトCD147および/またはカニクイザルCD147上の、SEQ ID NO:1〜4からなる群より選択される重鎖可変領域アミノ酸配列、およびSEQ ID NO:5〜9からなる群より選択される軽鎖可変領域アミノ酸配列を含むCD147抗体と同じエピトープに結合する抗体またはその抗原結合断片を含む。
本開示の適当なCD147抗体はまた、ヒトCD147および/またはカニクイザルCD147上の、アミノ酸配列
Figure 2020511130
を含むVH CDR1配列；アミノ酸配列
Figure 2020511130
を含むVH CDR2配列；アミノ酸配列
AGTDY (SEQ ID NO:13)
を含むVH CDR3配列；アミノ酸配列
Figure 2020511130
を含むVL CDR1配列；アミノ酸配列
YSSNRYT (SEQ ID NO:16)
を含むVL CDR2配列；およびアミノ酸配列
Figure 2020511130
を含むVL CDR3配列を含むCD147抗体と同じエピトープに結合する抗体またはその抗原結合断片を含む。
本開示の適当なCD147抗体はまた、SEQ ID NO:1〜4からなる群より選択される重鎖可変領域アミノ酸配列、およびSEQ ID NO:5〜9からなる群より選択される軽鎖可変領域アミノ酸配列を含むCD147抗体に対して、ヒトCD147および/またはカニクイザルCD147に対する結合について交差競合する(その結合を阻害する)、抗体またはその抗原結合断片を含む。
本開示の適当なCD147抗体はまた、アミノ酸配列
Figure 2020511130
を含むVH CDR1配列；アミノ酸配列
Figure 2020511130
を含むVH CDR2配列；アミノ酸配列
AGTDY (SEQ ID NO:13)
を含むVH CDR3配列；アミノ酸配列
Figure 2020511130
を含むVL CDR1配列；アミノ酸配列
YSSNRYT (SEQ ID NO:16)
を含むVL CDR2配列；およびアミノ酸配列
Figure 2020511130
を含むVL CDR3配列を含むCD147抗体に対して、ヒトCD147および/またはカニクイザルCD147に対する結合について交差競合する(その結合を阻害する)、抗体またはその抗原結合断片を含む。
いくつかの態様において、本開示のCD147抗体は、哺乳動物CD147に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合断片(AB)を含み、ここでABは、ヒトCD147およびカニクイザルCD147に特異的に結合する。いくつかの態様において、抗体またはその抗原結合断片は、VH CDR1配列
Figure 2020511130
；VH CDR2配列
Figure 2020511130
；VH CDR3配列
AGTDY (SEQ ID NO:13)
；VL CDR1配列
Figure 2020511130
；VL CDR2配列
YSSNRYT (SEQ ID NO:16)
；およびVL CDR3配列
Figure 2020511130
を含む。いくつかの態様において、抗体またはその抗原結合断片は、SEQ ID NO:1〜4からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、およびSEQ ID NO:5〜9からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
いくつかの態様において、単離された抗体またはその抗原結合断片は、ヒトCD147および/またはカニクイザルCD147上の、VH CDR1配列
Figure 2020511130
；VH CDR2配列
Figure 2020511130
；VH CDR3配列
AGTDY (SEQ ID NO:13)
；VL CDR1配列
Figure 2020511130
；VL CDR2配列
YSSNRYT (SEQ ID NO:16)
；およびVL CDR3配列
Figure 2020511130
を含む単離された抗体と同じエピトープに結合する。いくつかの態様において、単離された抗体またはその抗原結合断片は、ヒトCD147および/またはカニクイザルCD147上の、SEQ ID NO:1〜4からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、およびSEQ ID NO:5〜9からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む単離された抗体と同じエピトープに結合する。
いくつかの態様において、単離された抗体またはその抗原結合断片は、VH CDR1配列
Figure 2020511130
；VH CDR2配列
Figure 2020511130
；VH CDR3配列
AGTDY (SEQ ID NO:13)
；VL CDR1配列
Figure 2020511130
；VL CDR2配列
YSSNRYT (SEQ ID NO:16)
；およびVL CDR3配列
Figure 2020511130
を含む単離された抗体と交差競合する(その結合を阻害する)。いくつかの態様において、単離された抗体またはその抗原結合断片は、SEQ ID NO:1〜4からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、およびSEQ ID NO:5〜9からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む単離された抗体と交差競合する(その結合を阻害する)。
いくつかの態様において、単離された抗体またはその抗原結合断片は、VH CDR1配列
Figure 2020511130
；VH CDR2配列
Figure 2020511130
；VH CDR3配列
AGTDY (SEQ ID NO:13)
；VL CDR1配列
Figure 2020511130
；VL CDR2配列
YSSNRYT (SEQ ID NO:16)
；およびVL CDR3配列
Figure 2020511130
を含む単離された抗体と交差競合する(その結合を阻害する)。いくつかの態様において、単離された抗体またはその抗原結合断片は、SEQ ID NO:1〜4からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、およびSEQ ID NO:5〜9からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む単離された抗体と交差競合する(その結合を阻害する)。
いくつかの態様において、CD147抗体/活性化可能CD147抗体は、表1に示される重鎖アミノ酸配列を含むか、またはそれに由来する重鎖を含む。いくつかの態様において、CD147抗体/活性化可能CD147抗体は、表1に示される重鎖アミノ酸配列を含むか、またはそれに由来する軽鎖を含む。いくつかの態様において、CD147抗体/活性化可能CD147抗体は、表1に示される重鎖アミノ酸配列を含むか、またはそれに由来する重鎖、および表1に示される軽鎖アミノ酸配列を含むか、またはそれに由来する軽鎖を含む。いくつかの態様において、CD147抗体/活性化可能CD147抗体は、表1のグループAに示される組み合わせ由来の重鎖可変領域配列および軽鎖可変領域配列の組み合わせを含む。いくつかの態様において、CD147抗体/活性化可能CD147抗体は、表1のグループBに示される配列由来の重鎖可変領域配列および軽鎖可変領域配列の組み合わせを含む。いくつかの態様において、CD147抗体/活性化可能CD147抗体は、表1のグループCに示される配列由来の重鎖可変領域配列および軽鎖可変領域配列の組み合わせを含む。いくつかの態様において、CD147抗体/活性化可能CD147抗体は、表1のグループDに示される配列由来の重鎖可変領域配列および軽鎖可変領域配列の組み合わせを含む。いくつかの態様において、CD147抗体/活性化可能CD147抗体は、表1のグループEに示される重鎖可変領域配列および軽鎖可変領域配列の組み合わせを含む。いくつかの態様において、CD147抗体/活性化可能CD147抗体は、表1のグループFに示される重鎖可変領域配列および軽鎖可変領域配列の組み合わせを含む。いくつかの態様において、CD147抗体/活性化可能CD147抗体は、表1のグループGに示される配列由来の重鎖可変領域配列および軽鎖可変領域配列の組み合わせを含む。いくつかの態様において、CD147抗体/活性化可能CD147抗体は、表1のグループHに示される配列由来の重鎖可変領域配列および軽鎖可変領域配列の組み合わせを含む。いくつかの態様において、CD147抗体/活性化可能CD147抗体は、表1のグループIに示される重鎖可変領域配列および軽鎖可変領域配列の組み合わせを含む。いくつかの態様において、CD147抗体/活性化可能CD147抗体は、表1のグループJに示される重鎖可変領域配列を含む。いくつかの態様において、CD147抗体/活性化可能CD147抗体は、表1のグループJに示される重鎖可変領域配列、または表1のグループKに示される重鎖可変領域配列および軽鎖可変領域配列の組み合わせを含む。いくつかの態様において、CD147抗体/活性化可能CD147抗体は、表1のグループLに示される配列由来の重鎖可変領域配列および軽鎖可変領域配列の組み合わせを含む。
いくつかの態様において、CD147抗体/活性化可能CD147抗体は、表1のグループAに示される重鎖配列由来の重鎖配列の相補性決定領域(CDR)配列の組み合わせを含む。いくつかの態様において、CD147抗体/活性化可能CD147抗体は、表1のグループAに示される軽鎖配列由来の軽鎖配列のCDRの組み合わせを含む。いくつかの態様において、CD147抗体/活性化可能CD147抗体は、表1のグループAに示される重鎖配列由来の重鎖配列のCDRおよび表1のグループAに示される重鎖配列由来の軽鎖配列のCDRの組み合わせを含む。
いくつかの態様において、CD147抗体/活性化可能CD147抗体は、表1のグループBに示される重鎖配列由来の重鎖配列のCDRの組み合わせを含む。いくつかの態様において、CD147抗体/活性化可能CD147抗体は、表1のグループBに示される軽鎖配列由来の軽鎖配列のCDRの組み合わせを含む。いくつかの態様において、CD147抗体/活性化可能CD147抗体は、表1のグループBに示される重鎖配列由来の重鎖配列のCDRおよび表1のグループBに示される重鎖配列由来の軽鎖配列のCDRの組み合わせを含む。
いくつかの態様において、CD147抗体/活性化可能CD147抗体は、表1のグループCに示される重鎖配列由来の重鎖配列のCDRの組み合わせを含む。いくつかの態様において、CD147抗体/活性化可能CD147抗体は、表1のグループCに示される軽鎖配列由来の軽鎖配列のCDRの組み合わせを含む。いくつかの態様において、CD147抗体/活性化可能CD147抗体は、表1のグループCに示される重鎖配列由来の重鎖配列のCDRおよび表1のグループCに示される重鎖配列由来の軽鎖配列のCDRの組み合わせを含む。
いくつかの態様において、CD147抗体/活性化可能CD147抗体は、表1のグループDに示される重鎖配列由来の重鎖配列のCDRの組み合わせを含む。いくつかの態様において、CD147抗体/活性化可能CD147抗体は、表1のグループDに示される軽鎖配列由来の軽鎖配列のCDRの組み合わせを含む。いくつかの態様において、CD147抗体/活性化可能CD147抗体は、表1のグループDに示される重鎖配列由来の重鎖配列のCDRおよび表1のグループDに示される重鎖配列由来の軽鎖配列のCDRの組み合わせを含む。
いくつかの態様において、CD147抗体/活性化可能CD147抗体は、表1のグループEに示される重鎖配列由来の重鎖配列のCDRの組み合わせを含む。いくつかの態様において、CD147抗体/活性化可能CD147抗体は、表1のグループEに示される軽鎖配列由来の軽鎖配列のCDRの組み合わせを含む。いくつかの態様において、CD147抗体/活性化可能CD147抗体は、表1のグループEに示される重鎖配列由来の重鎖配列のCDRおよび表1のグループEに示される重鎖配列由来の軽鎖配列のCDRの組み合わせを含む。
いくつかの態様において、CD147抗体/活性化可能CD147抗体は、表1のグループFに示される重鎖配列由来の重鎖配列のCDRの組み合わせを含む。いくつかの態様において、CD147抗体/活性化可能CD147抗体は、表1のグループFに示される軽鎖配列由来の軽鎖配列のCDRの組み合わせを含む。いくつかの態様において、CD147抗体/活性化可能CD147抗体は、表1のグループFに示される重鎖配列由来の重鎖配列のCDRおよび表1のグループFに示される重鎖配列由来の軽鎖配列のCDRの組み合わせを含む。
いくつかの態様において、CD147抗体/活性化可能CD147抗体は、表1のグループGに示される重鎖配列由来の重鎖配列のCDRの組み合わせを含む。いくつかの態様において、CD147抗体/活性化可能CD147抗体は、表1のグループGに示される軽鎖配列由来の軽鎖配列のCDRの組み合わせを含む。いくつかの態様において、CD147抗体/活性化可能CD147抗体は、表1のグループGに示される重鎖配列由来の重鎖配列のCDRおよび表1のグループGに示される重鎖配列由来の軽鎖配列のCDRの組み合わせを含む。
いくつかの態様において、CD147抗体/活性化可能CD147抗体は、表1のグループHに示される重鎖配列由来の重鎖配列のCDRの組み合わせを含む。いくつかの態様において、CD147抗体/活性化可能CD147抗体は、表1のグループHに示される軽鎖配列由来の軽鎖配列のCDRの組み合わせを含む。いくつかの態様において、CD147抗体/活性化可能CD147抗体は、表1のグループHに示される重鎖配列由来の重鎖配列のCDRおよび表1のグループHに示される重鎖配列由来の軽鎖配列のCDRの組み合わせを含む。
いくつかの態様において、CD147抗体/活性化可能CD147抗体は、表1のグループIに示される重鎖配列由来の重鎖配列のCDRの組み合わせを含む。いくつかの態様において、CD147抗体/活性化可能CD147抗体は、表1のグループIに示される軽鎖配列由来の軽鎖配列のCDRの組み合わせを含む。いくつかの態様において、CD147抗体/活性化可能CD147抗体は、表1のグループIに示される重鎖配列由来の重鎖配列のCDRおよび表1のグループIに示される重鎖配列由来の軽鎖配列のCDRの組み合わせを含む。
いくつかの態様において、CD147抗体/活性化可能CD147抗体は、表1のグループJに示される重鎖配列由来の重鎖配列のCDRの組み合わせを含む。いくつかの態様において、CD147抗体/活性化可能CD147抗体は、表1のグループJに示される軽鎖配列由来の軽鎖配列のCDRの組み合わせを含む。いくつかの態様において、CD147抗体/活性化可能CD147抗体は、表1のグループJに示される重鎖配列由来の重鎖配列のCDRおよび表1のグループJに示される重鎖配列由来の軽鎖配列のCDRの組み合わせを含む。
いくつかの態様において、CD147抗体/活性化可能CD147抗体は、表1のグループKに示される重鎖配列由来の重鎖配列のCDRの組み合わせを含む。いくつかの態様において、CD147抗体/活性化可能CD147抗体は、表1のグループKに示される軽鎖配列由来の軽鎖配列のCDRの組み合わせを含む。いくつかの態様において、CD147抗体/活性化可能CD147抗体は、表1のグループKに示される重鎖配列由来の重鎖配列のCDRおよび表1のグループKに示される重鎖配列由来の軽鎖配列のCDRの組み合わせを含む。
いくつかの態様において、CD147抗体/活性化可能CD147抗体は、表1のグループLに示される重鎖配列由来の重鎖配列のCDRの組み合わせを含む。いくつかの態様において、CD147抗体/活性化可能CD147抗体は、表1のグループLに示される軽鎖配列由来の軽鎖配列のCDRの組み合わせを含む。いくつかの態様において、CD147抗体/活性化可能CD147抗体は、表1のグループLに示される重鎖配列由来の重鎖配列のCDRおよび表1のグループLに示される重鎖配列由来の軽鎖配列のCDRの組み合わせを含む。
（表１）CD147に結合する抗体および活性化可能抗体の可変重鎖領域(VH)および可変軽鎖領域(VL)配列
Figure 2020511130
Figure 2020511130
Figure 2020511130
Figure 2020511130
Figure 2020511130
Figure 2020511130
Figure 2020511130
Figure 2020511130
Figure 2020511130
Figure 2020511130
Figure 2020511130
＊「HC」と指定されたグループGにおいて提供されている表示配列は重鎖アミノ酸配列であり、「LC」と指定されたグループLにおいて提供されている表示配列は軽鎖アミノ酸配列である；表1に提示されている他の全ての配列は、可変重鎖および可変軽鎖の配列である。
いくつかの態様において、CD147抗体/活性化可能CD147抗体は、表2に示されるCDR配列、表2の単列内に示される組み合わせからなる群より選択されるVL CDR配列(VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3)の組み合わせ、表2に示される組み合わせからなる群より選択されるVH CDR配列(VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3)の組み合わせ、または表2に示される組み合わせからなる群より選択されるVL CDRおよびVH CDR配列(VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3、VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3)の組み合わせを含む。
いくつかの態様において、CD147抗体/活性化可能CD147抗体は、表2のグループAに示される組み合わせからなる群より選択される重鎖CDR配列の組み合わせを含む。いくつかの態様において、CD147抗体/活性化可能CD147抗体は、表2のグループAに示される組み合わせからなる群より選択される軽鎖CDR配列の組み合わせを含む。いくつかの態様において、CD147抗体/活性化可能CD147抗体は、表2のグループAに示される組み合わせからなる群より選択される重鎖CDR配列の組み合わせ、および表2のグループAに示される組み合わせからなる群より選択される軽鎖CDR配列の組み合わせを含む。
いくつかの態様において、CD147抗体/活性化可能CD147抗体は、表2のグループBに示される組み合わせからなる群より選択される重鎖CDR配列の組み合わせを含む。いくつかの態様において、CD147抗体/活性化可能CD147抗体は、表2のグループBに示される組み合わせからなる群より選択される軽鎖CDR配列の組み合わせを含む。いくつかの態様において、CD147抗体/活性化可能CD147抗体は、表2のグループBに示される組み合わせからなる群より選択される重鎖CDR配列の組み合わせ、および表2のグループBに示される組み合わせからなる群より選択される軽鎖CDR配列の組み合わせを含む。
いくつかの態様において、CD147抗体/活性化可能CD147抗体は、表2のグループCに示される組み合わせからなる群より選択される重鎖CDR配列の組み合わせを含む。いくつかの態様において、CD147抗体/活性化可能CD147抗体は、表2のグループCに示される組み合わせからなる群より選択される軽鎖CDR配列の組み合わせを含む。いくつかの態様において、CD147抗体/活性化可能CD147抗体は、表2のグループCに示される組み合わせからなる群より選択される重鎖CDR配列の組み合わせ、および表2のグループCに示される組み合わせからなる群より選択される軽鎖CDR配列の組み合わせを含む。
いくつかの態様において、CD147抗体/活性化可能CD147抗体は、表2のグループEに示される組み合わせからなるグループEより選択される重鎖CDR配列の組み合わせを含む。いくつかの態様において、CD147抗体/活性化可能CD147抗体は、表2のグループEに示される組み合わせからなるグループEより選択される軽鎖CDR配列の組み合わせを含む。いくつかの態様において、CD147抗体/活性化可能CD147抗体は、表2のグループEに示される組み合わせからなるグループEより選択される重鎖CDR配列の組み合わせ、および表2のグループEに示される組み合わせからなるグループEより選択される軽鎖CDR配列の組み合わせを含む。
（表２）CD147に結合する抗体および活性化可能抗体のCDR配列
Figure 2020511130
いくつかの態様において、CD147抗体/活性化可能CD147抗体は、例えば、米国特許第5,330,896号において開示され、かつ寄託番号HB 8214の下でATCCに寄託されているハイブリドーマのような、ハイブリドーマによって製造され、分泌されまたはそれ以外の方法で産生される抗体を含むか、またはそれに由来する。
いくつかの態様において、CD147抗体/活性化可能CD147抗体は、例えば、米国特許第7,736,647号において開示され、かつ番号CNCM I-3449の下、2005年6月14日付でCollection Nationale de Cultures de Microorganismes (CNCM) (Institut Pasteur, Paris, France, 25, Rue du Docteur Roux, F-75724, Paris, Cedex 15)に寄託されたBA120と称されるハイブリドーマ；米国特許第7,572,895号において開示され、かつPTA-6055の下でATCCに寄託されたハイブリドーマ；PCT公開公報第WO 2014/020140号および同第WO 2005/111082号において開示され、かつ番号1-2665の下、2001年5月10日付でCNCMに寄託されたハイブリドーマ；米国特許第4,434,156号において開示され、かつHB-8094の下でATCCに寄託されたハイブリドーマ；米国特許第5,648,469号において開示され、かつHB-11011およびHB-11010の下でATCCに寄託されたハイブリドーマのような、ハイブリドーマによって製造され、分泌されまたはそれ以外の方法で産生される抗体を含むか、またはそれに由来する。
いくつかの態様において、CD147抗体/活性化可能CD147抗体は、PCT公開公報第WO 2014/144060号、同第WO 2014/189973号、同第WO 2014/020140号に、米国特許第8,663,598号；同第8,129,503号；同第7,736,647号；同第7,572,895号；同第4,434,156号に；米国特許出願公開第US2014114054号、同第US20140212423号、同第US2013177579号、同第US2013045206号、同第US20130216476号、同第US20120282176号に、および/または中国特許第CN101245107B号に示される重鎖アミノ酸配列を含むか、またはそれに由来する重鎖を含み、それらの各々の内容は参照によりその全体が本明細書に組み入れられる。
本開示はまた、本開示の核酸分子または本開示のベクターを含む細胞を、抗体またはその断片の発現をもたらす条件下で培養することにより本開示のCD147 ABを産生するための方法を提供する。
いくつかの態様において、CD147抗体またはその抗原結合断片は、SEQ ID NO:1〜4からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む重鎖アミノ酸配列をコードする核酸配列を含む核酸配列によってコードされる。いくつかの態様において、抗体またはその抗原結合断片は、SEQ ID NO:1〜3からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む重鎖アミノ酸配列をコードする核酸配列を含む核酸配列によってコードされる。
いくつかの態様において、CD147抗体またはその抗原結合断片は、SEQ ID NO:5〜9からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖アミノ酸配列をコードする核酸配列を含む核酸配列によってコードされる。いくつかの態様において、抗体またはその抗原結合断片は、SEQ ID NO:5〜8からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖アミノ酸配列をコードする核酸配列を含む核酸配列によってコードされる。
いくつかの態様において、CD147抗体またはその抗原結合断片は、SEQ ID NO:1〜4からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む重鎖アミノ酸配列をコードする核酸配列、およびSEQ ID NO:5〜9からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖アミノ酸配列をコードする核酸配列を含む核酸配列によってコードされる。
いくつかの態様において、CD147抗体またはその抗原結合断片は、SEQ ID NO:1〜3からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む重鎖アミノ酸配列をコードする核酸配列、およびSEQ ID NO:5〜8からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖アミノ酸配列をコードする核酸配列を含む核酸配列によってコードされる。
いくつかの態様において、CD147抗体またはその抗原結合断片は、SEQ ID NO:1〜4からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む重鎖アミノ酸配列をコードする核酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である核酸配列を含む核酸配列によってコードされる。いくつかの態様において、抗体またはその抗原結合断片は、SEQ ID NO:1〜3からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む重鎖アミノ酸配列をコードする核酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である核酸配列を含む核酸配列によってコードされる。
いくつかの態様において、CD147抗体またはその抗原結合断片は、SEQ ID NO:5〜9からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖アミノ酸配列をコードする核酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である核酸配列を含む核酸配列によってコードされる。いくつかの態様において、抗体またはその抗原結合断片は、SEQ ID NO:5〜8からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖アミノ酸配列をコードする核酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である核酸配列を含む核酸配列によってコードされる。
いくつかの態様において、CD147抗体またはその抗原結合断片は、SEQ ID NO:1〜4からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む重鎖アミノ酸配列をコードする核酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である核酸配列、およびSEQ ID NO:5〜9からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖アミノ酸配列をコードする核酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である核酸配列を含む核酸配列によってコードされる。
いくつかの態様において、CD147抗体またはその抗原結合断片は、SEQ ID NO:1〜3からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む重鎖アミノ酸配列をコードする核酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である核酸配列、およびSEQ ID NO:5〜8からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖アミノ酸配列をコードする核酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である核酸配列を含む核酸配列によってコードされる。
活性化可能CD147抗体
上記のように、本開示はまた、MMのカップリングがCD147に結合する抗体またはその抗原結合断片の能力を低減させるような、マスキング部分(MM)にカップリングされたCD147に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片を含む活性化可能抗体を提供する。いくつかの態様において、MMは、プロテアーゼの基質(CM、切断可能部分)、例えば、疾患組織において活性であるプロテアーゼおよび/または対象における処置部位でCD147と共局在化するプロテアーゼを含む配列を介してカップリングされる。本明細書において提供される活性化可能CD147抗体は、循環血中で安定であり、意図された治療部位および/または診断部位で活性化されるが、しかし正常な、例えば健常な組織または処置および/もしくは診断の標的とされない他の組織では活性化されず、活性化されると、対応する非修飾抗体に少なくとも匹敵するCD147への結合を示す。
本明細書において記述される活性化可能CD147抗体は、抗体治療法、特にインビボで少なくともある程度まで毒性があることが知られている抗体治療法の制限を克服する。標的を介した毒性は、治療用抗体の開発にとって大きな制限となる。本明細書において提供される活性化可能CD147抗体は、従来の治療用抗体による正常組織における標的の阻害に関連する毒性に対処するように設計されている。これらの活性化可能CD147抗体は、疾患部位でタンパク質分解的に活性化されるまでマスクされたままである。親治療用抗体としてのCD147抗体から始めて、本発明の活性化可能CD147抗体は、プロテアーゼ基質を組み入れたリンカーを通じて阻害性マスクに抗体をカップリングすることにより操作された。
本明細書において用いられる場合、活性化可能抗体の切断状態という用語は、少なくとも1つのプロテアーゼによるCMの修飾後の活性化可能抗体の様子をいう。非切断状態という用語は、本明細書において用いられる場合、プロテアーゼによるCMの切断のない活性化可能抗体の様子をいう。上記で論じられるように、「活性化可能抗体」という用語は、その切断されていない(天然の)状態、およびその切断状態の両方の活性化可能抗体をいうように、本明細書において用いられる。いくつかの態様において、切断された活性化可能抗体は、(例えば、MMが共有結合(例えば、システイン残基間のジスルフィド結合)によって活性化可能抗体に接合されていない場合は)少なくともMMの放出を結果としてもたらす、プロテアーゼによるCMの切断のためにMMを欠如しうることが、当業者に明らかであろう。
活性化可能または切り替え可能とは、活性化可能抗体が阻害された状態、マスクされた状態、または非切断状態(すなわち、第1のコンフォメーション)にある場合、活性化可能抗体が標的に対する結合の第1のレベルを示し、阻害されていない状態、マスクされていない状態、および/または切断状態(すなわち、第2のコンフォメーション)にある場合は、標的に対する結合の第2のレベルを示し、ここで標的結合の第2のレベルが結合の第1のレベルよりも大きいことを意味する。一般に、活性化可能抗体のABに対する標的のアクセスは、CMを切断することができる切断作用物質、すなわちプロテアーゼの存在下では、そのような切断作用物質の非存在下よりも大きい。したがって、活性化可能抗体が非切断状態にある場合、ABは、標的結合から阻害され、標的結合からマスクされることができ(すなわち、第1のコンフォメーションは、ABが標的に結合できないようなものである)、切断状態にある場合は、ABは、標的結合について阻害されないか、またはマスクされない。
活性化可能抗体のCMおよびABは、ABが所定の標的に対する結合部分に相当し、CMがプロテアーゼに対する基質に相当するように選択される。いくつかの態様において、プロテアーゼは、対象における処置部位または診断部位で標的と共局在化する。本明細書において用いられる場合、共局在化とは、同じ部位または相対的にすぐ近くにあることをいう。いくつかの態様において、プロテアーゼはCMを切断し、切断部位の近くに位置する標的に結合する活性化抗体を生じる。本明細書において開示される活性化可能抗体は、例えば、CM中の部位を切断することができるプロテアーゼ、すなわちプロテアーゼが処置部位または診断部位の標的含有組織において、非処置部位の組織において(例えば、健常組織において)よりも相対的に高いレベルで存在する場合、特定の用途を見いだす。いくつかの態様において、本開示のCMはまた、1つまたは複数の他のプロテアーゼによっても切断される。いくつかの態様において、それは、標的と共局在化し、インビボでCMの切断を担う1つまたは複数の他のプロテアーゼである。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、ABが標的に対する結合からマスクされていないかまたはさもなくば阻害されていない場合に、非処置部位でのABの結合にさもなくば起因しうる毒性および/または有害副作用の低減を提供する。
一般に、活性化可能抗体は、関心対象のAB (本明細書において記述されるいずれかのCD147抗体またはその断片のような)を選択すること、および、コンフォメーション的に束縛された時に、MMがABのマスキングまたはABのその標的に対する結合の低減を提供するように、活性化可能抗体の残りの部分を構築することによって設計することができる。構造設計基準は、この機能的特色を提供するように考慮に入れることができる。
阻害されたコンフォメーション対阻害されていないコンフォメーションにおいて、標的結合について望ましいダイナミックレンジの切り替え可能な表現型を呈する活性化可能抗体が、提供される。ダイナミックレンジとは、一般に、(a) 第1のセットの条件下でのパラメータの最大検出レベルの、(b) 第2のセットの条件下でのそのパラメータの最小検出値に対する比をいう。例えば、活性化可能抗体の文脈において、ダイナミックレンジとは、(a) 活性化可能抗体のCMを切断することができる少なくとも1つのプロテアーゼの存在下での活性化可能抗体に対する標的タンパク質結合の最大検出レベルの、(b) プロテアーゼの非存在下での活性化可能抗体に対する標的タンパク質結合の最小検出レベルに対する比をいう。活性化可能抗体のダイナミックレンジは、活性化可能抗体切断作用物質(例えば、酵素)処置の解離定数の、活性化可能抗体切断作用物質処置の解離定数に対する比として算出することができる。活性化可能抗体のダイナミックレンジが大きければ大きいほど、活性化可能抗体の切り替え可能な表現型は良好である。相対的に高い(例えば、1よりも大きい)ダイナミックレンジ値を有する活性化可能抗体は、活性化可能抗体による標的タンパク質結合が、活性化可能抗体のCMを切断することができる切断作用物質(例えば、酵素)の存在下で、切断作用物質の非存在下よりも大きい程度まで起こる(例えば、優勢に起こる)ように、より望ましい切り替え表現型を呈する。
上記のように、本明細書において提供される活性化可能CD147抗体は、マスキング部分(MM)を含む。いくつかの態様において、マスキング部分は、CD147 抗体にカップリングされるかまたは別の方法で付加されるアミノ酸配列であり、マスキング部分が、CD147 抗体のCD147 に特異的に結合する能力を低減させるように、活性化可能CD147 抗体構築物内に位置付けられる。適当なマスキング部分は、種々の公知の技法のいずれかを用いて特定される。例えば、ペプチドマスキング部分は、DaughertyらによるPCT公開公報第WO 2009/025846号に記述されている方法を用いて特定され、それらの内容は、参照によりその全体が本明細書に組み入れられる。
上記のように、本明細書において提供される活性化可能CD147抗体は、切断可能部分(CM)を含む。いくつかの態様において、切断可能部分は、プロテアーゼ、通常は細胞外プロテアーゼに対する基質であるアミノ酸配列を含む。適当な基質は、種々の公知の技法のいずれかを用いて特定される。例えば、ペプチド基質は、Daughertyらによる米国特許第7,666,817号；Staglianoらによる米国特許第8,563,269号；およびLa PorteらによるPCT公開公報第WO 2014/026136号に記述されている方法を用いて特定され、それらの各々の内容は、参照によりその全体が本明細書に組み入れられる。(Boulware et al. 「Evolutionary optimization of peptide substrates for proteases that exhibit rapid hydrolysis kinetics.」 Biotechnol Bioeng. 106.3 (2010)：339-46も参照されたい。)
例示的な基質としては、表3に列挙される以下の酵素またはプロテアーゼのうちの1つまたは複数によって切断可能な基質が挙げられるが、それらに限定されることはない。
（表３）例示的なプロテアーゼおよび／または酵素
Figure 2020511130
活性化可能抗体は、活性化状態ではCD147に結合し、(i) CD147に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片(AB)と、(ii) 活性化可能抗体が非切断状態にある場合にABとCD147との結合を阻害するマスキング部分(MM)と、(c)ABにカップリングされた切断可能部分(CM)とを含み、該CMは、プロテアーゼの基質として機能するポリペプチドである。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、非切断状態では、N末端からC末端に向かって、MM-CM-ABまたはAB-CM-MMのような構造的配置を有する。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、MMとCMとの間に連結ペプチドを含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、CMとABとの間に連結ペプチドを含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、第1の連結ペプチド(LP1)および第2の連結ペプチド(LP2)を含み、非切断状態では、N末端からC末端に向かって、MM-LP1-CM-LP2-ABまたはAB-LP2-CM-LP1-MMのような構造的配置を有する。いくつかの態様において、2つの連結ペプチドは互いに同一である必要はない。
いくつかの態様において、LP1またはLP2の少なくとも1つは、(GS)n、(GGS)n、(GSGGS)n(SEQ ID NO:339)、および(GGGS)n(SEQ ID NO:340)からなる群より選択されるアミノ酸配列を含み、nは、少なくとも1の整数である。
いくつかの態様において、LP1またはLP2の少なくとも1つは、
Figure 2020511130
からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの態様において、LP1は、アミノ酸配列
Figure 2020511130
を含む。
いくつかの態様において、LP2は、アミノ酸配列GSS、GGS、GGGS(SEQ ID NO:353)、GSSGT(SEQ ID NO:354)、またはGSSG(SEQ ID NO:355)を含む。
いくつかの態様において、CD147に結合する抗体またはその抗原結合断片は、モノクローナル抗体、ドメイン抗体、単鎖、Fab断片、F(ab')2断片、scFv、scAb、dAb、シングルドメイン重鎖抗体、またはシングルドメイン軽鎖抗体である。いくつかの態様において、このような、CD147に結合する抗体またはその抗原結合断片は、マウス抗体、他のげっ歯類抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、または完全ヒトモノクローナル抗体である。
いくつかの態様において、非切断状態にある活性化可能抗体は、1 nM以下、5 nM以下、10 nM以下、15 nM以下、20 nM以下、25 nM以下、50 nM以下、100 nM以下、150 nM以下、250 nM以下、500 nM以下、750 nM以下、1000 nM以下、および/または2000 nM以下の解離定数で哺乳動物CD147に特異的に結合する。
いくつかの態様において、非切断状態にある活性化可能抗体は、1 nM〜2000 nM、1 nM〜1000 nM、1 nM〜750 nM、1 nM〜500 nM、1 nM〜250 nM、1 nM〜150 nM、1 nM〜100 nM、1 nM〜50 nM、1 nM〜25 nM、1 nM〜15 nM、1 nM〜10 nM、1 nM〜5 nM、5 nM〜2000 nM、5 nM〜1000 nM、5 nM〜750 nM、5 nM〜500 nM、5 nM〜250 nM、5 nM〜150 nM、5 nM〜100 nM、5 nM〜50 nM、5 nM〜25 nM、5 nM〜15 nM、5 nM〜10 nM、10 nM〜2000 nM、10 nM〜1000 nM、10 nM〜750 nM、10 nM〜500 nM、10 nM〜250 nM、10 nM〜150 nM、10 nM〜100 nM、10 nM〜50 nM、10 nM〜25 nM、10 nM〜15 nM、15 nM〜2000 nM、15 nM〜1000 nM、15 nM〜750 nM、15 nM〜500 nM、15 nM〜250 nM、15 nM〜150 nM、15 nM〜100 nM、15 nM〜50 nM、15 nM〜25 nM、25 nM〜2000 nM、25 nM〜1000 nM、25 nM〜750 nM、25 nM〜500 nM、25 nM〜250 nM、25 nM〜150 nM、25 nM〜100 nM、25 nM〜50 nM、50 nM〜2000 nM、50 nM〜1000 nM、50 nM〜750 nM、50 nM〜500 nM、50 nM〜250 nM、50 nM〜150 nM、50 nM〜100 nM、100 nM〜2000 nM、100 nM〜1000 nM、100 nM〜750 nM、100 nM〜500 nM、100 nM〜250 nM、100 nM〜150 nM、150 nM〜2000 nM、150 nM〜1000 nM、150 nM〜750 nM、150 nM〜500 nM、150 nM〜250 nM、250 nM〜2000 nM、250 nM〜1000 nM、250 nM〜750 nM、250 nM〜500 nM、500 nM〜2000 nM、500 nM〜1000 nM、500 nM〜750 nM、500 nM〜500 nM、500 nM〜250 nM、500 nM〜150 nM、500 nM〜100 nM、500 nM〜50 nM、750 nM〜2000 nM、750 nM〜1000 nM、または1000 nM〜2000 nMの範囲の解離定数で哺乳動物CD147に特異的に結合する。
いくつかの態様において、活性化状態の活性化可能抗体は、0.01 nM、0.05 nM、0.1 nM、0.5 nM、1 nM、5 nM、または10 nM以下である解離定数で哺乳動物CD147に特異的に結合する。
いくつかの態様において、活性化状態の活性化可能抗体は、0.01 nM〜100 nM、0.01 nM〜10 nM、0.01 nM〜5 nM、0.01 nM〜1 nM、0.01〜0.5 nM、0.01 nm〜0.1 nM、0.01 nm〜0.05 nM、0.05 nM〜100 nM、0.05 nM〜10 nM、0.05 nM〜5 nM、0.05 nM〜1 nM、0.05〜0.5 nM、0.05 nm〜0.1 nM、0.1 nM〜100 nM、0.1 nM〜10 nM、0.1 nM〜5 nM、0.1 nM〜1 nM、0.1〜0.5 nM、0.5 nM〜100 nM、0.5 nM〜10 nM、0.5 nM〜5 nM、0.5 nM〜1 nM、1 nM〜100 nM、1 nM〜10 nM、1 nM〜5 nM、5 nM〜100 nM、5 nM〜10 nM、または10 nM〜100 nMの範囲の解離定数で哺乳動物CD147に特異的に結合する。
ABがMMで修飾され、かつ標的の存在下にある場合、ABのその標的に対する特異的結合は、標的に対する、MMで修飾されていないABの特異的結合または親ABの特異的結合と比較して、低減または阻害される。
CD147標的に対する、MMで修飾されたABのKdは、CD147標的に対する、MMで修飾されていないABまたは親ABのKdよりも、少なくとも5、10、25、50、100、250、500、1,000、2,500、5,000、10,000、50,000、100,000、500,000、1,000,000、5,000,000、10,000,000、50,000,000倍もしくはそれよりも大きい、または5〜10、10〜100、10〜1,000、10〜10,000、10〜100,000、10〜1,000,000、10〜10,000,000、100〜1,000、100〜10,000、100〜100,000、100〜1,000,000、100〜10,000,000、1,000〜10,000、1,000〜100,000、1,000〜1,000,000、1000〜10,000,000、10,000〜100,000、10,000〜1,000,000、10,000〜10,000,000、100,000〜1,000,000もしくは100,000〜10,000,000倍大きい。逆に、CD147標的に対する、MMで修飾されたABの結合親和性は、CD147標的に対する、MMで修飾されていないABまたは親ABの結合親和性よりも、少なくとも2、3、4、5、10、25、50、100、250、500、1,000、2,500、5,000、10,000、50,000、100,000、500,000、1,000,000、5,000,000、10,000,000、50,000,000倍もしくはそれよりも大きい、または5〜10、10〜100、10〜1,000、10〜10,000、10〜100,000、10〜1,000,000、10〜10,000,000、100〜1,000、100〜10,000、100〜100,000、100〜1,000,000、100〜10,000,000、1,000〜10,000、1,000〜100,000、1,000〜1,000,000、1000〜10,000,000、10,000〜100,000、10,000〜1,000,000、10,000〜10,000,000、100,000〜1,000,000もしくは100,000〜10,000,000倍低い。
ABに対するMMの解離定数(Kd)は、一般に、CD147標的に対するABのKdよりも大きい。ABに対するMMのKdは、CD147標的に対するABのKdよりも少なくとも5、10、25、50、100、250、500、1,000、2,500、5,000、10,000、100,000、1,000,000倍、または10,000,000倍大きいことすらある。逆に、ABに対するMMの結合親和性は、一般に、CD147標的に対するABの結合親和性よりも低い。ABに対するMMの結合親和性は、CD147標的に対するABの結合親和性よりも少なくとも5、10、25、50、100、250、500、1,000、2,500、5,000、10,000、100,000、1,000,000倍、または10,000,000倍低いことすらある。
いくつかの態様において、ABに対するMMの解離定数(Kd)は、CD147標的に対するABのKdとほぼ同等である。いくつかの態様において、ABに対するMMの解離定数(Kd)は、CD147標的に対するABの解離定数以下である。いくつかの態様において、ABに対するMMの解離定数(Kd)は、CD147標的に対するABの解離定数に等しい。
いくつかの態様において、ABに対するMMの解離定数(Kd)は、CD147標的に対するABの解離定数よりも小さい。
いくつかの態様において、ABに対するMMの解離定数(Kd)は、CD147標的に対するABの解離定数よりも大きい。
いくつかの態様において、MMは、ABに対する結合について、標的に対するABの結合についてのKd以下であるKdを有する。
いくつかの態様において、MMは、ABに対する結合について、標的に対するABの結合についてのKd以上であるKdを有する。
いくつかの態様において、MMは、ABに対する結合について、標的に対するABの結合についてのKdとほぼ同等であるKdを有する。
いくつかの態様において、MMは、ABに対する結合について、標的に対するABの結合についてのKdよりも小さいKdを有する。
いくつかの態様において、MMは、ABに対する結合について、標的に対するABの結合についてのKdよりも大きいKdを有する。
いくつかの態様において、MMは、ABに対する結合について、標的に対するABの結合についてのKdの2、3、4、5、10、25、50、100、250、500、または1,000倍以下だけ大きいKdを有する。いくつかの態様において、MMは、ABに対する結合について、標的に対するABの結合のKdの1〜5、2〜5、2〜10、5〜10、5〜20、5〜50、5〜100、10〜100、10〜1,000、20〜100、20〜1000、または100〜1,000倍大きいKdを有する。
いくつかの態様において、MMは、ABに対する結合について、標的に対するABの結合親和性よりも低い親和性を有する。
いくつかの態様において、MMは、ABに対する結合について、標的に対するABの結合親和性以下である親和性を有する。
いくつかの態様において、MMは、ABに対する結合について、標的に対するABの結合親和性とほぼ同等である親和性を有する。
いくつかの態様において、MMは、ABに対する結合について、標的に対するABの結合親和性以上である親和性を有する。
いくつかの態様において、MMは、ABに対する結合について、標的に対するABの結合親和性よりも高い親和性を有する。
いくつかの態様において、MMは、ABに対する結合について、標的に対するABの結合親和性よりも2、3、4、5、10、25、50、100、250、500、または1,000倍低い親和性を有する。いくつかの態様において、MMは、ABに対する結合について、標的に対するABの結合親和性よりも1〜5、2〜5、2〜10、5〜10、5〜20、5〜50、5〜100、10〜100、10〜1,000、20〜100、20〜1000、または100〜1,000倍低い親和性を有する。いくつかの態様において、MMは、ABに対する結合について、標的に対するABの結合親和性よりも2〜20倍低い親和性を有する。いくつかの態様において、ABに共有結合で連結されておらず、かつABと等モル濃度のMMは、標的に対するABの結合を阻害しない。
ABがMMで修飾され、かつ標的の存在下にある場合、ABのその標的に対する特異的結合は、標的に対する、MMで修飾されていないABの特異的結合または親ABの特異的結合と比較して、低減または阻害される。標的に対する、MMで修飾されていないABの結合または親ABの結合と比較した場合、MMで修飾した場合の、標的に結合するABの能力は、インビボでまたはインビトロアッセイにおいて測定した際、少なくとも2、4、6、8、12、28、24、30、36、48、60、72、84、もしくは96時間、または5、10、15、30、45、60、90、120、150、もしくは180日、または1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、もしくは12か月またはそれより長くに渡って、少なくとも50%、60%、70%、80%、90%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、およびさらに100%低減されうる。
MMは、標的に対するABの結合を阻害する。MMは、ABの抗原結合ドメインに結合し、標的に対するABの結合を阻害する。MMは、標的に対するABの結合を立体的に阻害することができる。MMは、ABのその標的に対する結合をアロステリックに阻害することができる。これらの態様において、ABが修飾されるかまたはMMにカップリングされ、かつ標的の存在下にある場合、インビボでまたはインビトロアッセイにおいて測定した際、少なくとも2、4、6、8、12、28、24、30、36、48、60、72、84、もしくは96時間、または5、10、15、30、45、60、90、120、150、もしくは180日、または1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、もしくは12か月またはそれより長くに渡って、標的に対するABの結合は存在しないかもしくは実質的に結合が存在せず、または、標的に対する、MMで修飾されていないAB、親AB、もしくはMMにカップリングされていないABの結合と比較して、標的に対するABの結合は、0.001%、0.01%、0.1%、1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、または50%以下である。
ABがMMにカップリングされるかまたはMMにより修飾されている場合、MMは、標的に対するABの特異的結合を「マスクする」か、または低減させるか、またはさもなくば阻害する。ABがMMにカップリングされるかまたはMMにより修飾されている場合、そのようなカップリングまたは修飾は、構造変化をもたらすことができ、それが、ABのその標的に特異的に結合する能力を低減または阻害する。
MMにカップリングされるかまたはMMで修飾されているABは、以下の式によって表すことができる(アミノ(N)末端領域からカルボキシル(C)末端領域への順序):
(MM)-(AB)
(AB)-(MM)
(MM)-L-(AB)
(AB)-L-(MM)
式中、MMはマスキング部分であり、ABは抗体またはその抗体断片であり、かつLはリンカーである。多くの態様において、可動性を提供するために1つまたは複数のリンカー、例えばフレキシブルリンカーを、組成物中に挿入することが望ましい可能性がある。
ある特定の態様において、MMは、ABの天然の結合パートナーではない。いくつかの態様において、MMは、ABのいずれの天然の結合パートナーに対しても相同性を有しないか、または実質的に相同性を有しない。いくつかの態様において、MMの、ABのあらゆる天然の結合パートナーに対する類似性は、5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、または80%以下である。いくつかの態様において、MMの、ABのあらゆる天然の結合パートナーに対する同一性は、5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、または80%以下である。いくつかの態様において、MMの、ABのあらゆる天然の結合パートナーに対する同一性は、25%以下である。いくつかの態様において、MMの、ABのあらゆる天然の結合パートナーに対する同一性は、50%以下である。いくつかの態様において、MMの、ABのあらゆる天然の結合パートナーに対する同一性は、20%以下である。いくつかの態様において、MMの、ABのあらゆる天然の結合パートナーに対する同一性は、10%以下である。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、MMにより修飾され、かつ1つまたは複数の切断可能部分(CM)も含むABを含む。そのような活性化可能抗体は、ABの標的に対して、活性化可能/切り替え可能な結合を呈する。活性化可能抗体は、一般に、マスキング部分(MM)および修飾可能または切断可能部分(CM)により修飾されるかまたはそれにカップリングされた、抗体または抗体断片(AB)を含む。いくつかの態様において、CMは、少なくとも1つのプロテアーゼに対する基質として働くアミノ酸配列を含有する。
活性化可能抗体の要素は、切断された(または相対的に活性の)状態および標的の存在下で、ABが標的に結合し、活性化可能抗体が切断されていない(または相対的に不活性の)状態で標的の存在下にある間は、ABのその標的に対する特異的結合が低減または阻害されるように、MMおよびCMが位置付けられて配置される。ABのその標的に対する特異的結合は、ABのその標的に特異的に結合する能力のMMによる阻害またはマスキングに起因して低減されうる。
CD147標的に対するMMおよびCMで修飾されたABのKdは、CD147標的に対するMMおよびCMで修飾されていないABまたは親ABのKdよりも、少なくとも5、10、25、50、100、250、500、1,000、2,500、5,000、10,000、50,000、100,000、500,000、1,000,000、5,000,000、10,000,000、50,000,000倍もしくはそれより大きい、または、5〜10、10〜100、10〜1,000、10〜10,000、10〜100,000、10〜1,000,000、10〜10,000,000、100〜1,000、100〜10,000、100〜100,000、100〜1,000,000、100〜10,000,000、1,000〜10,000、1,000〜100,000、1,000〜1,000,000、1000〜10,000,000、10,000〜100,000、10,000〜1,000,000、10,000〜10,000,000、100,000〜1,000,000、もしくは100,000〜10,000,000倍大きい。逆に、CD147標的に対するMMおよびCMで修飾されたABの結合親和性は、CD147標的に対するMMおよびCMで修飾されていないABまたは親ABの結合親和性よりも、少なくとも5、10、25、50、100、250、500、1,000、2,500、5,000、10,000、50,000、100,000、500,000、1,000,000、5,000,000、10,000,000、50,000,000倍もしくはそれより大きい、または、5〜10、10〜100、10〜1,000、10〜10,000、10〜100,000、10〜1,000,000、10〜10,000,000、100〜1,000、100〜10,000、100〜100,000、100〜1,000,000、100〜10,000,000、1,000〜10,000、1,000〜100,000、1,000〜1,000,000、1000〜10,000,000、10,000〜100,000、10,000〜1,000,000、10,000〜10,000,000、100,000〜1,000,000、もしくは100,000〜10,000,000倍低い。
ABがMMおよびCMで修飾され、標的の存在下にあるが修飾作用物質(例えば、少なくとも1つのプロテアーゼ)の存在下にはない時、ABのその標的に対する特異的結合は、標的に対するMMおよびCMで修飾されていないABまたは親ABの特異的結合と比較して、低減または阻害される。その標的に対する、親ABの結合またはMMおよびCMで修飾されていないABの結合と比較した場合、MMおよびCMで修飾された際の標的に結合するABの能力は、インビボでまたはインビトロアッセイにおいて測定した際、少なくとも2、4、6、8、12、28、24、30、36、48、60、72、84、もしくは96時間、または5、10、15、30、45、60、90、120、150、もしくは180日、または1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、もしくは12か月またはそれより長くに渡って、少なくとも50%、60%、70%、80%、90%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、およびさらに100%低減されうる。
活性化可能抗体は、種々の構造的配置で提供することができる。活性化可能抗体の例示的な式は、下記で提供される。AB、MM、およびCMのN末端からC末端への順序は、活性化可能抗体内で逆でありうることが、特に企図される。CMおよびMMは、例えば、CMがMM内に含有されるように、アミノ酸配列において重複しうることもまた、特に企図される。
例えば、活性化可能抗体は、以下の式によって表すことができる(アミノ(N)末端領域からカルボキシル(C)末端領域への順序):
(MM)-(CM)-(AB)
(AB)-(CM)-(MM)
式中、MMはマスキング部分であり、CMは切断可能部分であり、かつABは抗体またはその断片である。MMおよびCMは、上記の式において別個の構成要素として示されているが、本明細書において開示されるすべての例示的な態様(式を含む)において、MMおよびCMのアミノ酸配列は、例えば、CMがMM内に完全にまたは部分的に含有されるように重複しうると企図されることに、注目されるべきである。加えて、上記の式は、活性化可能抗体要素のN末端またはC末端に位置付けられうる追加的なアミノ酸配列を提供する。
ある特定の態様において、MMは、ABの天然の結合パートナーではない。いくつかの態様において、MMは、ABのいずれの天然の結合パートナーに対しても相同性を有さないか、または実質的に相同性を有さない。いくつかの態様において、MMの、ABのあらゆる天然の結合パートナーに対する類似性は、5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、または80%以下である。いくつかの態様において、MMの、ABのあらゆる天然の結合パートナーに対する同一性は、5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、または80%以下である。いくつかの態様において、MMの、ABのあらゆる天然の結合パートナーに対する同一性は、50%以下である。いくつかの態様において、MMの、ABのあらゆる天然の結合パートナーに対する同一性は、25%以下である。いくつかの態様において、MMの、ABのあらゆる天然の結合パートナーに対する同一性は、20%以下である。いくつかの態様において、MMの、ABのあらゆる天然の結合パートナーに対する同一性は、10%以下である。
多くの態様において、MM-CM接合部、CM-AB接合部、またはその両方のうちの1つまたは複数で可動性を提供するために、1つまたは複数のリンカー、例えばフレキシブルリンカーを、活性化可能抗体構築物中に挿入することが望ましい可能性がある。例えば、AB、MM、および/またはCMは、望ましい可動性を提供するのに十分な数の残基(例えば、Gly、Ser、Asp、Asn、特にGlyおよびSer、とりわけGly)を含有しない場合がある。そのような際、そのような活性化可能抗体構築物の切り替え可能な表現型は、フレキシブルリンカーを提供するための1つまたは複数のアミノ酸の導入から恩恵を受ける可能性がある。加えて、下記のように、活性化可能抗体がコンフォメーション的に束縛された構築物として提供される場合には、フレキシブルリンカーを、切断されていない活性化可能抗体における環状構造の形成および維持を促進するために機能的に挿入することができる。
例えば、ある特定の態様において、活性化可能抗体は、以下の式(下記の式は、N末端からC末端の方向、またはC末端からN末端の方向のいずれかでのアミノ酸配列を表す)のうちの1つを含むことができる:
(MM)-L1-(CM)-(AB)
(MM)-(CM)-L2-(AB)
(MM)-L1-(CM)-L2-(AB)
式中、MM、CM、およびABは上記で定義されたようであり；L1およびL2は、各々独立しており、任意で存在するかまたは欠如しており、少なくとも1つの可動性アミノ酸(例えば、Gly)を含む、同じかまたは異なるフレキシブルリンカーである。加えて、上記の式は、活性化可能抗体要素のN末端またはC末端に位置付けられうる追加的なアミノ酸配列を提供する。例には、標的部分(例えば、標的組織中に存在する細胞の受容体に対するリガンド)および血清半減期延長部分(例えば、免疫グロブリン(例えば、IgG)または血清アルブミン(例えば、ヒト血清アルブミン(HAS))などの血清タンパク質に結合するポリペプチド)が含まれるが、それらに限定されることはない。
CMは、約0.001〜1500×104 M-1S-1または少なくとも0.001、0.005、0.01、0.05、0.1、0.5、1、2.5、5、7.5、10、15、20、25、50、75、100、125、150、200、250、500、750、1000、1250、もしくは1500×104 M-1S-1の速度で少なくとも1つのプロテアーゼによって特異的に切断される。いくつかの態様において、CMは、約100,000 M-1S-1の速度で特異的に切断される。いくつかの態様において、CMは、約1×10E2〜約1×10E6 M-1S-1 (すなわち、約1×102〜約1×106 M-1S-1)の速度で特異的に切断される。
酵素による特異的切断のために、酵素とCMとの間の接触がなされる。MMおよびCMにカップリングされたABを含む活性化可能抗体が、標的および十分な酵素活性の存在下にある場合に、CMは切断されうる。十分な酵素活性とは、CMと接触して切断をもたらす酵素の能力をいうことができる。酵素は、CMの付近にありうるが、他の細胞因子または酵素のタンパク質修飾のために切断できないことを、容易に想定することができる。
本明細書において記述される組成物で用いるのに適したリンカーは一般に、修飾されたABまたは活性化可能抗体の可動性を提供して、標的に対するABの結合の阻害を促進するものである。そのようなリンカーは、一般に、フレキシブルリンカーといわれる。適当なリンカーは、容易に選択することができ、さまざまな長さ、例えば、4アミノ酸〜10アミノ酸、5アミノ酸〜9アミノ酸、6アミノ酸〜8アミノ酸、または7アミノ酸〜8アミノ酸を含む、1アミノ酸(例えば、Gly)〜20アミノ酸、2アミノ酸〜15アミノ酸、3アミノ酸〜12アミノ酸の適しているいずれかであることができ、長さが1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20アミノ酸であることができる。
例示的なフレキシブルリンカーとしては、グリシンポリマー(G)n、グリシン-セリンポリマー(例えば、(GS)n、(GSGGS)n (SEQ ID NO:339)および(GGGS)n (SEQ ID NO:340) (式中、nは少なくとも1の整数である)を含む)、グリシン-アラニンポリマー、アラニン-セリンポリマー、および当技術分野において公知である他のフレキシブルリンカーが挙げられる。グリシンポリマーおよびグリシン-セリンポリマーは、相対的に構造化されておらず、そのため、構成要素間の中性のつなぎとして働くことができる。グリシンは、互角のアラニンよりも有意に大きいphi-psi空間にアクセスし、より長い側鎖を有する残基よりもずっと制限されない(Scheraga, Rev. Computational Chem. 11173-142 (1992)を参照のこと)。例示的なフレキシブルリンカーとしては、Gly-Gly-Ser-Gly (SEQ ID NO:341)、Gly-Gly-Ser-Gly-Gly (SEQ ID NO:342)、Gly-Ser-Gly-Ser-Gly (SEQ ID NO:343)、Gly-Ser-Gly-Gly-Gly (SEQ ID NO:344)、Gly-Gly-Gly-Ser-Gly (SEQ ID NO:345)、Gly-Ser-Ser-Ser-Gly (SEQ ID NO:346)などが挙げられるが、それらに限定されることはない。当業者は、リンカーが、フレキシブルリンカー、およびより可動性が低い構造を付与して望ましい活性化可能抗体構造を提供する1つまたは複数の部分を含むことができるように、活性化可能抗体の設計が、全てまたは部分的に可動性であるリンカーを含みうることを認識しているであろう。
本開示はまた、CD147に特異的に結合する抗体または抗体断片(AB)を含み、該ABが、該ABのその標的に結合する能力を減少させるマスキング部分(MM)にカップリングされている、活性化可能CD147抗体を含む組成物および方法も提供する。いくつかの態様において、活性化可能CD147抗体は、プロテアーゼに対する基質である切断可能部分(CM)をさらに含む。本明細書において提供される組成物および方法は、活性化可能CD147抗体の活性(例えば、マスキング活性、活性化活性、または結合活性)を損なうことなく、AB中の1つまたは複数のシステイン残基に対する1つまたは複数の作用物質の付加を可能にする。いくつかの態様において、本明細書において提供される組成物および方法は、MM内の1つまたは複数のジスルフィド結合を低減させるかまたはさもなくば妨害することなく、AB中の1つまたは複数のシステイン残基に対する1つまたは複数の作用物質の付加を可能にする。本明細書において提供される組成物および方法は、1つまたは複数の作用物質、例えば、種々の治療用、診断用、および/または予防用作用物質のいずれかにコンジュゲートされている活性化可能CD147抗体を生じ、例えば、いくつかの態様においては、作用物質のいずれも活性化可能CD147抗体のMMにコンジュゲートされていない。本明細書において提供される組成物および方法は、MMが、非切断状態において活性化可能抗体のABを効果的かつ効率的にマスクする能力を保持する、コンジュゲートされた活性化可能CD147抗体を生じる。本明細書において提供される組成物および方法は、活性化可能抗体がさらに活性化されている、すなわち、CMを切断することができるプロテアーゼの存在下で切断されている、コンジュゲートされた活性化可能CD147抗体を生じる。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、SEQ ID NO:1〜4からなる群より選択される重鎖可変領域アミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、活性化可能抗体は、SEQ ID NO:1〜3からなる群より選択される重鎖可変領域アミノ酸配列を含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、SEQ ID NO:5〜9からなる群より選択される軽鎖可変領域アミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、活性化可能抗体は、SEQ ID NO:5〜8からなる群より選択される軽鎖可変領域アミノ酸配列を含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、SEQ ID NO:1〜4からなる群より選択される重鎖可変領域アミノ酸配列、およびSEQ ID NO:5〜9からなる群より選択される軽鎖可変領域アミノ酸配列を含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、SEQ ID NO:1〜3からなる群より選択される重鎖可変領域アミノ酸配列、およびSEQ ID NO:5〜8からなる群より選択される軽鎖可変領域アミノ酸配列を含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、SEQ ID NO:1〜4からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である重鎖可変領域アミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、活性化可能抗体は、SEQ ID NO:1〜3からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である重鎖可変領域アミノ酸配列を含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、SEQ ID NO:5〜9からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である軽鎖可変領域アミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、活性化可能抗体は、SEQ ID NO:5〜8からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である軽鎖可変領域アミノ酸配列を含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、SEQ ID NO:1〜4からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である重鎖可変領域アミノ酸配列、およびSEQ ID NO:5〜9からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である軽鎖可変領域アミノ酸配列を含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、SEQ ID NO:1〜3からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である重鎖可変領域アミノ酸配列、およびSEQ ID NO:5〜8からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である軽鎖可変領域アミノ酸配列を含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、可変重鎖相補性決定領域1 (VH CDR1, 本明細書においてCDRH1ともいわれる)配列、可変重鎖相補性決定領域2 (VH CDR2, 本明細書においてCDRH2ともいわれる)配列、可変重鎖相補性決定領域3 (VH CDR3, 本明細書においてCDRH3ともいわれる)配列、可変軽鎖相補性決定領域1 (VL CDR1, 本明細書においてCDRL1ともいわれる)配列、可変軽鎖相補性決定領域2 (VL CDR2, 本明細書においてCDRL2ともいわれる)配列および可変軽鎖相補性決定領域3 (VL CDR3, 本明細書においてCDRL3ともいわれる)配列の組み合わせを含み、ここで少なくとも1つのCDR配列が、アミノ酸配列
Figure 2020511130
を含むVH CDR1配列；アミノ酸配
Figure 2020511130
を含むVH CDR2配列；アミノ酸配
AGTDY (SEQ ID NO:13)
を含むVH CDR3配列；アミノ酸配列
Figure 2020511130
を含むVL CDR1配列；アミノ酸配
YSSNRYT (SEQ ID NO:16)
を含むVL CDR2配列；およびアミノ酸配
Figure 2020511130
を含むVL CDR3配列からなる群より選択される。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、VH CDR1配列、VH CDR2配列、VH CDR3配列、VL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせを含み、ここで少なくとも1つのCDR配列が、アミノ酸配列
Figure 2020511130
を含むVH CDR1配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含むVH CDR1配列；アミノ酸配列
Figure 2020511130
を含むVH CDR2配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含むVH CDR2配列；アミノ酸配列
AGTDY (SEQ ID NO:13)
を含むVH CDR3配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含むVH CDR3配列；アミノ酸配列
Figure 2020511130
を含むVL CDR1配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含むVL CDR1配列；アミノ酸配列
YSSNRYT (SEQ ID NO:16)
を含むVL CDR2配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含むVL CDR2配列；およびアミノ酸配列
Figure 2020511130
を含むVL CDR3配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含むVL CDR3配列からなる群より選択される。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、VH CDR1配列、VH CDR2配列、VH CDR3配列、VL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせを含み、ここでVH CDR1配列がアミノ酸配列
Figure 2020511130
を含み；VH CDR2配列がアミノ酸配列
Figure 2020511130
を含み；VH CDR3配列がアミノ酸配列
AGTDY (SEQ ID NO:13)
を含み；VL CDR1配列がアミノ酸配列
Figure 2020511130
を含み；VL CDR2配列がアミノ酸配列
YSSNRYT (SEQ ID NO:16)
を含み；およびVL CDR3配列がアミノ酸配列
Figure 2020511130
を含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、VH CDR1配列、VH CDR2配列、VH CDR3配列、VL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせを含み、ここでVH CDR1配列が、アミノ酸配列
Figure 2020511130
と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含み；VH CDR2配列が、アミノ酸配列
Figure 2020511130
と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含み；VH CDR3配列が、アミノ酸配列
AGTDY (SEQ ID NO:13)
と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含み；VL CDR1配列が、アミノ酸配列
Figure 2020511130
と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含み；VL CDR2配列が、アミノ酸配列
YSSNRYT (SEQ ID NO:16)
と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含み；および
VL CDR3配列が、アミノ酸配列
Figure 2020511130
と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含む。
いくつかの態様において、活性化可能CD147抗体のABは、表1に示される重鎖可変領域配列からなる群より選択される重鎖可変領域アミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、活性化可能CD147抗体のABは、表1に示される軽鎖可変領域配列からなる群より選択される軽鎖可変領域アミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、活性化可能CD147抗体のABは、表1に示される重鎖可変領域配列からなる群より選択される重鎖可変領域アミノ酸配列および表1に示される軽鎖可変領域配列からなる群より選択される軽鎖可変領域アミノ酸配列を含む。
いくつかの態様において、活性化可能CD147抗体のABは、表1に示される重鎖可変領域配列からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である重鎖可変領域アミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、活性化可能CD147抗体のABは、表1に示される軽鎖可変領域配列からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である軽鎖可変領域アミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、活性化可能CD147抗体のABは、表1に示される重鎖可変領域配列からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である重鎖可変領域アミノ酸配列および表1に示される軽鎖可変領域配列からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である軽鎖可変領域アミノ酸配列を含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、可変重鎖相補性決定領域1 (VH CDR1, 本明細書においてCDRH1ともいわれる)配列、可変重鎖相補性決定領域2 (VH CDR2, 本明細書においてCDRH2ともいわれる)配列、可変重鎖相補性決定領域3 (VH CDR3, 本明細書においてCDRH3ともいわれる)配列、可変軽鎖相補性決定領域1 (VL CDR1, 本明細書においてCDRL1ともいわれる)配列、可変軽鎖相補性決定領域2 (VL CDR2, 本明細書においてCDRL2ともいわれる)配列および可変軽鎖相補性決定領域3 (VL CDR3, 本明細書においてCDRL3ともいわれる)配列の組み合わせを含み、ここで少なくとも1つのCDR配列が、表2に示されるVH CDR1配列；表2に示されるVH CDR2配列；表2に示されるVH CDR3配列；表2に示されるVL CDR1配列；表2に示されるVL CDR2配列；および表2に示されるVL CDR3配列からなる群より選択される。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、VH CDR1配列、VH CDR2配列、VH CDR3配列、VL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせを含み、ここで少なくとも1つのCDR配列が、表2に示されるVH CDR1配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含むVH CDR1配列；表2に示されるVH CDR2配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含むVH CDR2配列；表2に示されるVH CDR3配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含むVH CDR3配列；表2に示されるVL CDR1配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含むVL CDR1配列；表2に示されるVL CDR2配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含むVL CDR2配列；および表2に示されるVL CDR3配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含むVL CDR3配列からなる群より選択される。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、VH CDR1配列、VH CDR2配列、VH CDR3配列、VL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせを含み、ここで該組み合わせが、表2の単列内に示される6つのCDR配列(VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2およびVL CDR3)の組み合わせである。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、VH CDR1配列、VH CDR2配列、およびVH CDR3配列の組み合わせを含む重鎖を含み、ここで該組み合わせが、表2の単列内に示される3つの重鎖CDR配列(VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3)の組み合わせである。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、VL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせを含む軽鎖を含み、ここで該組み合わせが、表2の単列内に示される3つの軽鎖CDR配列(VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3)の組み合わせである。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、VH CDR1配列、VH CDR2配列、VH CDR3配列、VL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせを含み、ここで組み合わせにおける各CDR配列が、表2の単列内に示される6つのCDR配列(VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2およびVL CDR3)の組み合わせにおける対応するCDR配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、VH CDR1配列、VH CDR2配列、およびVH CDR3配列の組み合わせを含む重鎖可変領域を含み、ここで組み合わせにおける各CDR配列が、表2の単列内に示される3つの重鎖CDR配列(VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3)の組み合わせにおける対応するCDR配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、VL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせを含む軽鎖可変領域を含み、ここで組み合わせにおける各CDR配列が、表2の単列内に示される3つの軽鎖CDR配列(VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3)の組み合わせにおける対応するCDR配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含む。
いくつかの態様において、MMは、ABに対する結合について、CD147に対するABの解離定数よりも大きい解離定数を有する。
いくつかの態様において、MMは、ABに対する結合について、CD147に対するABの解離定数以下である解離定数を有する。
いくつかの態様において、MMは、ABに対する結合について、CD147に対するABの解離定数に等しい解離定数を有する。
いくつかの態様において、MMは、ABに対する結合について、CD147標的に対するABの解離定数よりも小さい解離定数を有する。
いくつかの態様において、ABに対するMMの解離定数(Kd)は、CD147標的に対するABの解離定数のわずか2、3、4、5、10、25、50、100、250、500、1,000、2,500、5,000、10,000、50,000、100,000、500,000、1,000,000、5,000,000、10,000,000、50,000,000倍もしくはそれ以上であるか、または1〜5、5〜10、10〜100、10〜1,000、10〜10,000、10〜100,000、10〜1,000,000、10〜10,000,000、100〜1,000、100〜10,000、100〜100,000、100〜1,000,000、100〜10,000,000、1,000〜10,000、1,000〜100,000、1,000〜1,000,000、1000〜10,000,000、10,000〜100,000、10,000〜1,000,000、10,000〜10,000,000、100,000〜1,000,000もしくは100,000〜10,000,000倍もしくはそれ以上である。
いくつかの態様において、活性化可能抗体が切断状態にある場合、MMは、CD147に対する結合についてABに干渉も競合もしない。
いくつかの態様において、MMは、約2〜40アミノ酸の長さのポリペプチドである。いくつかの態様において、MMは、約40アミノ酸までの長さのポリペプチドである。
いくつかの態様において、MMポリペプチド配列はCD147のポリペプチド配列とは異なる。いくつかの態様において、MMポリペプチド配列は、ABのあらゆる天然の結合パートナーに対する同一性が50%以下である。いくつかの態様において、MMポリペプチド配列は、CD147のポリペプチド配列とは異なり、かつ、ABのあらゆる天然の結合パートナーに対する同一性が40%、30%、25%、20%、15%、または10%以下である。
いくつかの態様において、ABに対するMMのカップリングは、MMにカップリングされている場合のABのCD147に対する解離定数(Kd)が、MMにカップリングされていない場合のABのCD147に対するKdよりも少なくとも2倍大きいように、CD147に結合するABの能力を低減させる。
いくつかの態様において、ABに対するMMのカップリングは、MMにカップリングされている場合のABのCD147に対する解離定数(Kd)が、MMにカップリングされていない場合のABのCD147に対するKdよりも少なくとも5倍大きいように、CD147に結合するABの能力を低減させる。
いくつかの態様において、ABに対するMMのカップリングは、MMにカップリングされている場合のABのCD147に対する解離定数(Kd)が、MMにカップリングされていない場合のABのCD147に対するKdよりも少なくとも10倍大きいように、CD147に結合するABの能力を低減させる。
いくつかの態様において、ABに対するMMのカップリングは、MMにカップリングされている場合のABのCD147に対する解離定数(Kd)が、MMにカップリングされていない場合のABのCD147に対するKdよりも少なくとも20倍大きいように、CD147に結合するABの能力を低減させる。
いくつかの態様において、ABに対するMMのカップリングは、MMにカップリングされている場合のABのCD147に対する解離定数(Kd)が、MMにカップリングされていない場合のABのCD147に対するKdよりも少なくとも40倍大きいように、CD147に結合するABの能力を低減させる。
いくつかの態様において、ABに対するMMのカップリングは、MMにカップリングされている場合のABのCD147に対する解離定数(Kd)が、MMにカップリングされていない場合のABのCD147に対するKdよりも少なくとも100倍大きいように、CD147に結合するABの能力を低減させる。
いくつかの態様において、ABに対するMMのカップリングは、MMにカップリングされている場合のABのCD147に対する解離定数(Kd)が、MMにカップリングされていない場合のABのCD147に対するKdよりも少なくとも1000倍大きいように、CD147に結合するABの能力を低減させる。
いくつかの態様において、ABに対するMMのカップリングは、MMにカップリングされている場合のABのCD147に対する解離定数(Kd)が、MMにカップリングされていない場合のABのCD147に対するKdよりも少なくとも10,000倍大きいように、CD147に結合するABの能力を低減させる。
いくつかの態様において、例えば、内容の全体が参照により本明細書に組み入れられるPCT公開公報第WO2010/081173号において記述されるアッセイのような、標的置換(target displacement)アッセイを用いてインビトロでアッセイした時、CMが切断されている場合と比較して、CMが切断されていない場合、CD147の存在下で、MMはABのCD147に結合する能力を少なくとも90%だけ低減する。
いくつかの態様において、MMは、SEQ ID NO:30〜100からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、MMは、SEQ ID NO:30、31、33、44、46、75〜80、82、83、86〜89、および90〜100からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、MMは、SEQ ID NO:30、31、33、44、46、75、76、77、78、79、80、82、83、86、87、88、89、90、91、92、93、94、96、97、98、99、および100からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの態様において、CMを切断するプロテアーゼは疾患組織において、活性であり、例えばアップレギュレートされているかまたは別の方法でアンレギュレートされており、活性化可能抗体がプロテアーゼに曝露されると、プロテアーゼは活性化可能抗体におけるCMを切断する。
いくつかの態様において、プロテアーゼは組織中でCD147と共局在化し、活性化可能抗体がプロテアーゼに曝露されると、プロテアーゼは活性化可能抗体におけるCMを切断する。
いくつかの態様において、活性化可能抗体が非切断状態にある場合は、活性化可能抗体とCD147との結合が、改変されていないABとCD147との結合の解離定数の少なくとも2倍の解離定数で起こるように低下するが、切断状態にある場合(すなわち、活性化可能抗体が切断状態にある場合)は、ABがCD147に結合するように、CMは、活性化可能抗体に配置される。
いくつかの態様において、活性化可能抗体が非切断状態にある場合は、活性化可能抗体とCD147との結合が、改変されていないABとCD147との結合の解離定数の少なくとも5倍の解離定数で起こるように低下するが、切断状態にある場合(すなわち、活性化可能抗体が切断状態にある場合)は、ABがCD147に結合するように、CMは、活性化可能抗体に配置される。
いくつかの態様において、活性化可能抗体が非切断状態にある場合は、活性化可能抗体とCD147との結合が、改変されていないABとCD147との結合の解離定数の少なくとも10倍の解離定数で起こるように低下するが、切断状態にある場合(すなわち、活性化可能抗体が切断状態にある場合)は、ABがCD147に結合するように、CMは、活性化可能抗体に配置される。
いくつかの態様において、活性化可能抗体が非切断状態にある場合は、活性化可能抗体とCD147との結合が、改変されていないABとCD147との結合の解離定数の少なくとも20倍の解離定数で起こるように低下するが、切断状態にある場合(すなわち、活性化可能抗体が切断状態にある場合)は、ABがCD147に結合するように、CMは、活性化可能抗体に配置される。
いくつかの態様において、活性化可能抗体が非切断状態にある場合は、活性化可能抗体とCD147との結合が、改変されていないABとCD147との結合の解離定数の少なくとも40倍の解離定数で起こるように低下するが、切断状態にある場合は、ABがCD147に結合するように、CMは、活性化可能抗体に配置される。
いくつかの態様において、活性化可能抗体が非切断状態にある場合は、活性化可能抗体とCD147との結合が、改変されていないABとCD147との結合の解離定数の少なくとも50倍の解離定数で起こるように低下するが、切断状態にある場合は、ABがCD147に結合するように、CMは、活性化可能抗体に配置される。
いくつかの態様において、活性化可能抗体が非切断状態にある場合は、活性化可能抗体とCD147との結合が、改変されていないABとCD147との結合の解離定数の少なくとも100倍の解離定数で起こるように低下するが、切断状態にある場合は、ABがCD147に結合するように、CMは、活性化可能抗体に配置される。
いくつかの態様において、活性化可能抗体が非切断状態にある場合は、活性化可能抗体とCD147との結合が、改変されていないABとCD147との結合の解離定数の少なくとも200倍の解離定数で起こるように低下するが、切断状態にある場合は、ABがCD147に結合するように、CMは、活性化可能抗体に配置される。
いくつかの態様において、CMは、15アミノ酸までの長さのポリペプチドである。
いくつかの態様において、CMは、少なくとも1つのマトリックスメタロプロテアーゼ(MMP)の基質である第1の切断可能部分(CM1)と、少なくとも1種類のセリンプロテアーゼ(SP)の基質である第2の切断可能部分(CM2)を含むポリペプチドである。いくつかの態様において、CM1-CM2基質のCM1基質配列およびCM2基質配列はそれぞれ、独立して、15アミノ酸までの長さのポリペプチドである。
いくつかの態様において、CMは、がんにおいてアップレギュレートされているもしくはそうでなければ制御されていない、またはがんにおいてアップレギュレートされているもしくはそうでなければ制御されていないと考えられている、少なくとも1種類のプロテアーゼの基質である。
いくつかの態様において、CMは、マトリックスメタロプロテアーゼ(MMP)、トロンビン、好中球エラスターゼ、システインプロテアーゼ、レグマイン(legumain)、およびセリンプロテアーゼ、例えば、マトリプターゼ(MT-SP1)、ならびにウロキナーゼ(uPA)からなる群より選択される少なくとも1種類のプロテアーゼの基質である。理論に拘束されるものではないが、これらのプロテアーゼは、がんの少なくとも1つにおいてアップレギュレートされているまたはそうでなければ制御されていないと考えられている。
例示的な基質には、表3に列挙した以下の酵素またはプロテアーゼの1つまたは複数によって切断可能な基質が含まれるが、これに限定されない。
いくつかの態様において、CMは、特定のプロテアーゼ、例えば、活性化可能抗体の標的と共存することが知られているプロテアーゼと共に使用するために選択される。
いくつかの態様において、CMは、少なくとも1種類のMMPの基質である。MMPの例には、表3に列挙したMMPが含まれる。いくつかの態様において、CMは、MMP9、MMP14、MMP1、MMP3、MMP13、MMP17、MMP11、およびMMP19からなる群より選択されるプロテアーゼの基質である。いくつかの態様において、CMはMMP9の基質である。いくつかの態様において、CMはMMP14の基質である。
いくつかの態様において、CMは、配列
Figure 2020511130
を含む基質である。
いくつかの態様において、CMは、アミノ酸配列
LSGRSDNH (SEQ ID NO：359)
を含む。いくつかの態様において、CMは、アミノ酸配列
TGRGPSWV (SEQ ID NO：356)
を含む。いくつかの態様において、CMは、アミノ酸配列
PLTGRSGG (SEQ ID NO：362)
を含む。いくつかの態様において、CMは、アミノ酸配列
Figure 2020511130
を含む。いくつかの態様において、CMは、アミノ酸配列
Figure 2020511130
を含む。いくつかの態様において、CMは、アミノ酸配列
Figure 2020511130
を含む。いくつかの態様において、CMは、アミノ酸配列
PLGL (SEQ ID NO：375)
を含む。いくつかの態様において、CMは、アミノ酸配列
SARGPSRW (SEQ ID NO：357)
を含む。いくつかの態様において、CMは、アミノ酸配列
TARGPSFK (SEQ ID NO：358)
を含む。いくつかの態様において、CMは、アミノ酸配列
GGWHTGRN (SEQ ID NO：360)
を含む。いくつかの態様において、CMは、アミノ酸配列
HTGRSGAL (SEQ ID NO：361)
を含む。いくつかの態様において、CMは、アミノ酸配列
AARGPAIH (SEQ ID NO：363)
を含む。いくつかの態様において、CMは、アミノ酸配列
RGPAFNPM (SEQ ID NO：364)
を含む。いくつかの態様において、CMは、アミノ酸配列
SSRGPAYL (SEQ ID NO：365)
を含む。いくつかの態様において、CMは、アミノ酸配列
RGPATPIM (SEQ ID NO：366)
を含む。いくつかの態様において、CMは、アミノ酸配列
RGPA (SEQ ID NO：367)
を含む。いくつかの態様において、CMはアミノ酸配列
LSGRSGNH (SEQ ID NO：789)
を含む。いくつかの態様において、CMはアミノ酸配列
SGRSANPRG (SEQ ID NO：790)
を含む。いくつかの態様において、CMはアミノ酸配列
LSGRSDDH (SEQ ID NO：791)
を含む。いくつかの態様において、CMはアミノ酸配列
LSGRSDIH (SEQ ID NO：792)
を含む。いくつかの態様において、CMはアミノ酸配列
LSGRSDQH (SEQ ID NO：793)
を含む。いくつかの態様において、CMはアミノ酸配列
LSGRSDTH (SEQ ID NO：794)
を含む。いくつかの態様において、CMはアミノ酸配列
LSGRSDYH (SEQ ID NO：795)
を含む。いくつかの態様において、CMはアミノ酸配列
LSGRSDNP (SEQ ID NO：796)
を含む。いくつかの態様において、CMはアミノ酸配列
LSGRSANP (SEQ ID NO：797)
を含む。いくつかの態様において、CMはアミノ酸配列
LSGRSANI (SEQ ID NO：798)
を含む。いくつかの態様において、CMはアミノ酸配列
LSGRSDNI (SEQ ID NO：799)
を含む。いくつかの態様において、CMはアミノ酸配列
MIAPVAYR (SEQ ID NO：800)
を含む。いくつかの態様において、CMはアミノ酸配列
RPSPMWAY (SEQ ID NO：801)
を含む。いくつかの態様において、CMはアミノ酸配列
WATPRPMR (SEQ ID NO：802)
を含む。いくつかの態様において、CMはアミノ酸配列
FRLLDWQW (SEQ ID NO：803)
を含む。いくつかの態様において、CMはアミノ酸配列
ISSGL (SEQ ID NO：804)
を含む。いくつかの態様において、CMはアミノ酸配列
ISSGLLS (SEQ ID NO：805)
を含む。いくつかの態様において、CMはアミノ酸配列および/または
ISSGLL (SEQ ID NO：806)
を含む。
いくつかの態様において、CMはMMPの基質であり、配列
Figure 2020511130
を含む。
いくつかの態様において、CMは、アミノ酸配列
ISSGLSS (SEQ ID NO：376)
を含む。いくつかの態様において、CMは、アミノ酸配列
QNQALRMA (SEQ ID NO：377)
を含む。いくつかの態様において、CMは、アミノ酸配列
AQNLLGMV (SEQ ID NO：378)
を含む。いくつかの態様において、CMは、アミノ酸配列
STFPFGMF (SEQ ID NO：379)
を含む。いくつかの態様において、CMは、アミノ酸配列
PVGYTSSL (SEQ ID NO：380)
を含む。いくつかの態様において、CMは、アミノ酸配列
DWLYWPGI (SEQ ID NO：381)
を含む。いくつかの態様において、CMは、アミノ酸配列
ISSGLLSS (SEQ ID NO：382)
を含む。いくつかの態様において、CMは、アミノ酸配列
LKAAPRWA (SEQ ID NO：383)
を含む。いくつかの態様において、CMは、アミノ酸配列
GPSHLVLT (SEQ ID NO：384)
を含む。いくつかの態様において、CMは、アミノ酸配列
LPGGLSPW (SEQ ID NO：385)
を含む。いくつかの態様において、CMは、アミノ酸配列
MGLFSEAG (SEQ ID NO：386)
を含む。いくつかの態様において、CMは、アミノ酸配列
SPLPLRVP (SEQ ID NO：387)
を含む。いくつかの態様において、CMは、アミノ酸配列
RMHLRSLG (SEQ ID NO：388)
を含む。いくつかの態様において、CMは、アミノ酸配列
LAAPLGLL (SEQ ID NO：389)
を含む。いくつかの態様において、CMは、アミノ酸配列
AVGLLAPP (SEQ ID NO：390)
を含む。いくつかの態様において、CMは、アミノ酸配列
LLAPSHRA (SEQ ID NO：391)
を含む。いくつかの態様において、CMは、アミノ酸配列
PAGLWLDP (SEQ ID NO：392)
を含む。
いくつかの態様において、CMはトロンビンの基質である。いくつかの態様において、CMはトロンビンの基質であり、配列
GPRSFGL (SEQ ID NO：393)またはGPRSFG (SEQ ID NO：394)
を含む。いくつかの態様において、CMは、アミノ酸配列
GPRSFGL (SEQ ID NO：393)
を含む。いくつかの態様において、CMは、アミノ酸配列
GPRSFG (SEQ ID NO：394)
を含む。
いくつかの態様において、CMは、
Figure 2020511130
からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの態様において、CMは、アミノ酸配列
Figure 2020511130
を含む。いくつかの態様において、CMは、アミノ酸配列
Figure 2020511130
を含む。いくつかの態様において、CMは、アミノ酸配列
Figure 2020511130
を含む。いくつかの態様において、CMは、アミノ酸配列
TSGRSANP (SEQ ID NO：398)
を含む。いくつかの態様において、CMは、アミノ酸配列
VAGRSMRP (SEQ ID NO：399)
を含む。いくつかの態様において、CMは、アミノ酸配列
VVPEGRRS (SEQ ID NO：400)
を含む。いくつかの態様において、CMは、アミノ酸配列
ILPRSPAF (SEQ ID NO：401)
を含む。いくつかの態様において、CMは、アミノ酸配列
MVLGRSLL (SEQ ID NO：402)
を含む。いくつかの態様において、CMは、アミノ酸配列
QGRAITFI (SEQ ID NO：403)
を含む。いくつかの態様において、CMは、アミノ酸配列
SPRSIMLA (SEQ ID NO：404)
を含む。いくつかの態様において、CMは、アミノ酸配列
SMLRSMPL (SEQ ID NO：405)
を含む。
いくつかの態様において、CMは好中球エラスターゼの基質である。いくつかの態様において、CMはセリンプロテアーゼの基質である。いくつかの態様において、CMはuPAの基質である。いくつかの態様において、CMはレグマインの基質である。いくつかの態様において、CMはマトリプターゼの基質である。いくつかの態様において、CMはシステインプロテアーゼの基質である。いくつかの態様において、CMは、カテプシンなどのシステインプロテアーゼの基質である。
いくつかの態様において、CMはCM1〜CM2基質であり、以下の配列を含む。
Figure 2020511130
いくつかの態様において、CM1-CM2基質は配列
Figure 2020511130
を含み、これは本明細書において基質2001ともいわれる。いくつかの態様において、CM1-CM2基質は配列
Figure 2020511130
を含み、これは本明細書において基質1001/LP'/0001ともいわれ、ここでこのCM1-CM2基質で使用されるLP'は、アミノ酸配列
GGSGGS (SEQ ID NO：1037)
である。いくつかの態様において、CM1-CM2基質は配列
Figure 2020511130
を含み、これは本明細書において基質2015および/または基質1004/LP'/0003ともいわれ、ここでこのCM1-CM2基質で使用されるLP'は、アミノ酸配列
GG
である。いくつかの態様において、CM1-CM2基質は配列
Figure 2020511130
を含み、これは本明細書において基質0003/LP'/1004ともいわれ、ここでこのCM1-CM2基質で使用されるLP'は、アミノ酸配列
GG
である。いくつかの態様において、CM1-CM2基質は配列
Figure 2020511130
を含み、これは本明細書において基質1003/LP'/0003ともいわれ、ここでこのCM1-CM2基質で使用されるLP'は、アミノ酸配列
GG
である。いくつかの態様において、CM1-CM2基質は配列
Figure 2020511130
を含み、これは本明細書において基質0003/LP'/1003ともいわれ、ここでこのCM1-CM2基質で使用されるLP'は、アミノ酸配列
GG
である。いくつかの態様において、CM1-CM2基質は配列
Figure 2020511130
を含み、これは本明細書において基質3001および/または基質1004/LP'/0001ともいわれ、ここでこのCM1-CM2基質で使用されるLP'は、アミノ酸配列
GG
である。いくつかの態様において、CM1-CM2基質は配列
Figure 2020511130
を含み、これは本明細書において基質0001/LP'/1004ともいわれ、ここでこのCM1-CM2基質で使用されるLP'は、アミノ酸配列
GG
である。いくつかの態様において、CM1-CM2基質は配列
Figure 2020511130
を含み、これは本明細書において基質1003/LP'/0001ともいわれ、ここでこのCM1-CM2基質で使用されるLP'は、アミノ酸配列
GG
である。いくつかの態様において、CM1-CM2基質は配列
Figure 2020511130
を含み、これは本明細書において基質0001/LP'/1003ともいわれ、ここでこのCM1-CM2基質で使用されるLP'は、アミノ酸配列
GG
である。いくつかの態様において、CM1-CM2基質は配列
Figure 2020511130
を含み、これは本明細書において基質0001/LP'/1001ともいわれ、ここでこのCM1-CM2基質で使用されるLP'は、アミノ酸配列
GGSGGS (SEQ ID NO：1037)
である。いくつかの態様において、CM1-CM2基質は配列
Figure 2020511130
を含み、これは本明細書において基質0002/LP'/1001ともいわれ、ここでこのCM1-CM2基質で使用されるLP'は、アミノ酸配列
GGSGGS (SEQ ID NO：1037)
である。いくつかの態様において、CM1-CM2基質は配列
Figure 2020511130
を含み、これは本明細書において基質1001/LP'/0002ともいわれ、ここでこのCM1-CM2基質で使用されるLP'は、アミノ酸配列
GGSGGS (SEQ ID NO：1037)
である。いくつかの態様において、CM1-CM2基質は配列
Figure 2020511130
を含み、これは本明細書において基質0001/LP'/1002ともいわれ、ここでこのCM1-CM2基質で使用されるLP'は、アミノ酸配列
GGSGGS (SEQ ID NO：1037)
である。いくつかの態様において、CM1-CM2基質は配列
Figure 2020511130
を含み、これは本明細書において基質1002/LP'/0001ともいわれ、ここでこのCM1-CM2基質で使用されるLP'は、アミノ酸配列
GGSGGS (SEQ ID NO：1037)
である。いくつかの態様において、CM1-CM2基質は配列
Figure 2020511130
を含み、これは本明細書において基質0002/LP'/1002ともいわれ、ここでこのCM1-CM2基質で使用されるLP'は、アミノ酸配列
GGSGGS (SEQ ID NO：1037)
である。いくつかの態様において、CM1-CM2基質は配列
Figure 2020511130
を含み、これは本明細書において基質1002/LP'/0002ともいわれ、ここでこのCM1-CM2基質で使用されるLP'は、アミノ酸配列
GGSGGS (SEQ ID NO：1037)
である。いくつかの態様において、CM1-CM2基質は配列
Figure 2020511130
を含み、これは本明細書において基質2002ともいわれる。いくつかの態様において、CM1-CM2基質は配列
Figure 2020511130
を含み、これは本明細書において基質2003ともいわれる。いくつかの態様において、CM1-CM2基質は配列
Figure 2020511130
を含み、これは本明細書において基質2004ともいわれる。いくつかの態様において、CM1-CM2基質は配列
Figure 2020511130
を含み、これは本明細書において基質2005ともいわれる。いくつかの態様において、CM1-CM2基質は配列
Figure 2020511130
を含み、これは本明細書において基質2006ともいわれる。いくつかの態様において、CM1-CM2基質は配列
Figure 2020511130
を含み、これは本明細書において基質2007ともいわれる。いくつかの態様において、CM1-CM2基質は配列
Figure 2020511130
を含み、これは本明細書において基質2008ともいわれる。いくつかの態様において、CM1-CM2基質は配列
Figure 2020511130
を含み、これは本明細書において基質2009ともいわれる。いくつかの態様において、CM1-CM2基質は配列
Figure 2020511130
を含み、これは本明細書において基質2010ともいわれる。いくつかの態様において、CM1-CM2基質は配列
Figure 2020511130
を含み、これは本明細書において基質2011ともいわれる。いくつかの態様において、CM1-CM2基質は配列
Figure 2020511130
を含み、これは本明細書において基質2012ともいわれる。いくつかの態様において、CM1-CM2基質は配列
Figure 2020511130
を含み、これは本明細書において基質2013ともいわれる。いくつかの態様において、CM1-CM2基質は配列
Figure 2020511130
を含み、これは本明細書において基質3006ともいわれる。いくつかの態様において、CM1-CM2基質は配列
Figure 2020511130
を含み、これは本明細書において基質3007ともいわれる。いくつかの態様において、CM1-CM2基質は配列
Figure 2020511130
を含み、これは本明細書において基質3008ともいわれる。いくつかの態様において、CM1-CM2基質は配列
Figure 2020511130
を含み、これは本明細書において基質3009ともいわれる。いくつかの態様において、CM1-CM2基質は配列
Figure 2020511130
を含み、これは本明細書において基質3010ともいわれる。いくつかの態様において、CM1-CM2基質は配列
Figure 2020511130
を含み、これは本明細書において基質3011ともいわれる。いくつかの態様において、CM1-CM2基質は配列
Figure 2020511130
を含み、これは本明細書において基質3012ともいわれる。いくつかの態様において、CM1-CM2基質は配列
Figure 2020511130
を含み、これは本明細書において基質3013ともいわれる。いくつかの態様において、CM1-CM2基質は配列
ISSGLLSGRSDNI (SEQ ID NO：713)
を含み、これは本明細書において基質2014ともいわれる。いくつかの態様において、CM1-CM2基質は配列および/または
Figure 2020511130
を含み、これは本明細書において基質3014ともいわれる。いくつかの態様において、CM1-CM2基質は配列
Figure 2020511130
を含み、これは本明細書において基質0001/LP'/1004ともいわれ、ここでこのCM1-CM2基質で使用されるLP'は、アミノ酸配列
GG
である。いくつかの態様において、CM1-CM2基質は配列
Figure 2020511130
を含み、これは本明細書において基質0001/LP'/1003ともいわれ、ここでこのCM1-CM2基質で使用されるLP'は、アミノ酸配列
GG
である。
いくつかの態様において、CMは、少なくとも2種類のプロテアーゼの基質である。いくつかの態様において、それぞれのプロテアーゼは、表3に示したプロテアーゼからなる群より選択される。いくつかの態様において、CMは、少なくとも2種類のプロテアーゼの基質であり、プロテアーゼの一方は、MMP、トロンビン、好中球エラスターゼ、システインプロテアーゼ、uPA、レグマイン、およびマトリプターゼからなる群より選択され、他方のプロテアーゼは、表3に示したプロテアーゼからなる群より選択される。いくつかの態様において、CMは、MMP、トロンビン、好中球エラスターゼ、システインプロテアーゼ、uPA、レグマイン、およびマトリプターゼからなる群より選択される少なくとも2種類のプロテアーゼの基質である。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は少なくとも第1のCMおよび第2のCMを含む。いくつかの態様において、第1のCMおよび第2のCMはそれぞれ、15アミノ酸以下の長さのポリペプチドである。いくつかの態様において、非切断状態の活性化可能抗体にある第1のCMおよび第2のCMは、N末端からC末端に向かって、MM-CM1-CM2-ABまたはAB-CM2-CM1-MMのような構造的配置を有する。いくつかの態様において、第1のCMおよび第2のCMの少なくとも1つは、MMP、トロンビン、好中球エラスターゼ、システインプロテアーゼ、uPA、レグマイン、およびマトリプターゼからなる群より選択されるプロテアーゼの基質として機能するポリペプチドである。いくつかの態様において、第1のCMは、標的組織にある、MMP、トロンビン、好中球エラスターゼ、システインプロテアーゼ、uPA、レグマイン、およびマトリプターゼからなる群より選択される第1の切断作用物質によって切断され、第2のCMは、標的組織にある第2の切断作用物質によって切断される。いくつかの態様において、他のプロテアーゼは、表3に示したプロテアーゼからなる群より選択される。いくつかの態様において、第1の切断作用物質および第2の切断作用物質は、MMP、トロンビン、好中球エラスターゼ、システインプロテアーゼ、uPA、レグマイン、およびマトリプターゼからなる群より選択される同じプロテアーゼであり、第1のCMおよび第2のCMは、この酵素の異なる基質である。いくつかの態様において、第1の切断作用物質および第2の切断作用物質は、表3に示したプロテアーゼからなる群より選択される同じプロテアーゼである。いくつかの態様において、第1の切断作用物質および第2の切断作用物質は異なるプロテアーゼである。いくつかの態様において、第1の切断作用物質および第2の切断作用物質は標的組織において共存している。いくつかの態様において、第1のCMおよび第2のCMは、標的組織にある少なくとも1種類の切断作用物質によって切断される。
いくつかの態様において、プロテアーゼがCMを切断した後に、活性化された抗体が、活性化状態または切断状態では、LP2および/またはCM配列の少なくとも一部を含む軽鎖アミノ酸配列を含むように、活性化可能抗体はプロテアーゼに曝露され、プロテアーゼによって切断される。
本開示の適当な活性化可能CD147抗体はまた、ヒトCD147および/またはカニクイザルCD147上の、SEQ ID NO:1〜4からなる群より選択される重鎖可変領域アミノ酸配列、およびSEQ ID NO:5〜9からなる群より選択される軽鎖可変領域アミノ酸配列を含むCD147抗体と同じエピトープに結合する抗体またはその抗原結合断片を含む。
本開示の適当な活性化可能CD147抗体はまた、ヒトCD147および/またはカニクイザルCD147上の、アミノ酸配列
Figure 2020511130
を含むVH CDR1配列；アミノ酸配列
Figure 2020511130
を含むVH CDR2配列；アミノ酸配列
AGTDY (SEQ ID NO:13)
を含むVH CDR3配列；アミノ酸配列
Figure 2020511130
を含むVL CDR1配列；アミノ酸配列
YSSNRYT (SEQ ID NO:16)
を含むVL CDR2配列；およびアミノ酸配列
Figure 2020511130
を含むVL CDR3配列を含むCD147抗体と同じエピトープに結合する抗体またはその抗原結合断片を含む。
本開示の適当な活性化可能CD147抗体はまた、ヒトCD147および/またはカニクイザルCD147上の、表1に示される重鎖可変領域配列からなる群より選択される重鎖可変領域アミノ酸配列および表1に示される軽鎖可変領域配列からなる群より選択される軽鎖可変領域アミノ酸配列を含むCD147抗体と同じエピトープに結合する抗体またはその抗原結合断片を含む。
本開示の適当な活性化可能CD147抗体はまた、ヒトCD147および/またはカニクイザルCD147上の、VH CDR1配列、VH CDR2配列、VH CDR3配列、VL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせを含み、ここで該組み合わせが、表2の単列内に示される6つのCDR配列(VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2およびVL CDR3)の組み合わせであるCD147抗体と同じエピトープに結合する抗体またはその抗原結合断片を含む。
本開示の適当な活性化可能CD147抗体はまた、SEQ ID NO:1〜4からなる群より選択される重鎖可変領域アミノ酸配列、およびSEQ ID NO:5〜9からなる群より選択される軽鎖可変領域アミノ酸配列を含むCD147抗体に対して、ヒトCD147および/またはカニクイザルCD147に対する結合について交差競合する(その結合を阻害する)、抗体またはその抗原結合断片を含む。
本開示の適当な活性化可能CD147抗体はまた、アミノ酸配列
Figure 2020511130
を含むVH CDR1配列；アミノ酸配列
Figure 2020511130
を含むVH CDR2配列；アミノ酸配列
AGTDY (SEQ ID NO:13)
を含むVH CDR3配列；アミノ酸配列
Figure 2020511130
を含むVL CDR1配列；アミノ酸配列
YSSNRYT (SEQ ID NO:16)
を含むVL CDR2配列；およびアミノ酸配列
Figure 2020511130
を含むVL CDR3配列を含むCD147抗体に対して、ヒトCD147および/またはカニクイザルCD147に対する結合について交差競合する(その結合を阻害する)、抗体またはその抗原結合断片を含む。
本開示の適当な活性化可能CD147抗体はまた、表1に示される重鎖可変領域配列からなる群より選択される重鎖可変領域アミノ酸配列および表1に示される軽鎖可変領域配列からなる群より選択される軽鎖可変領域アミノ酸配列を含むCD147抗体と同様の、ヒトCD147および/またはカニクイザルCD147に対する結合について交差競合する(その結合を阻害する)、抗体またはその抗原結合断片を含む。
本開示の適当な活性化可能CD147抗体はまた、VH CDR1配列、VH CDR2配列、VH CDR3配列、VL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせを含み、ここで該組み合わせが、表2の単列内に示される6つのCDR配列(VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2およびVL CDR3)の組み合わせであるCD147抗体と同様の、ヒトCD147および/またはカニクイザルCD147に対する結合について交差競合する(その結合を阻害する)、抗体またはその抗原結合断片を含む。
いくつかの態様において、活性化可能CD147抗体は、活性化状態では、哺乳動物CD147に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片(AB)であって、ヒトCD147およびカニクイザルCD147に特異的に結合する該AB；活性化可能抗体が非切断状態にある場合にCD147に対するABの結合を阻害するマスキング部分(MM)；ならびにABにカップリングされた切断可能部分(CM)であって、プロテアーゼの基質として機能するポリペプチドである該CMを含むCD147に結合する、活性化可能抗体である。
いくつかの態様において、MMは、ABに対する結合について、CD147に対するABの解離定数よりも大きい解離定数を有する。いくつかの態様において、活性化可能抗体が切断状態にある場合、MMは、CD147に対する結合についてABに干渉も競合もしない。いくつかの態様において、MMは、40アミノ酸以下の長さのポリペプチドである。いくつかの態様において、MMポリペプチド配列はヒトCD147のポリペプチド配列とは異なる。いくつかの態様において、MMポリペプチド配列の、ABのあらゆる天然の結合パートナーに対する同一性が、50%以下である。いくつかの態様において、MMは、SEQ ID NO:30〜100からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、MMは、SEQ ID NO:30、31、33、44、46、75〜80、82、83、86〜89、および90〜100からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの態様において、CMは、疾患組織において活性であるプロテアーゼの基質である。いくつかの態様において、CMは、SEQ ID NO:356〜423、680〜698、713、714、および789〜808からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、CMは、SEQ ID NO:359、370、377、382、390、397、406〜423、680〜698、713、714、および807〜808からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、Fab断片、F(ab')2断片、scFv、scAb、dAb、単一ドメイン重鎖抗体、および単一ドメイン軽鎖抗体からなる群より選択されるその抗原結合断片を含む。いくつかの態様において、活性化可能抗体のABはヒトCD147に特異的に結合する。いくつかの態様において、ABは、VH CDR1配列
Figure 2020511130
；VH CDR2配列
Figure 2020511130
；VH CDR3配列
AGTDY (SEQ ID NO:13)
；VL CDR1配列
Figure 2020511130
；VL CDR2配列
YSSNRYT (SEQ ID NO:16)
；およびVL CDR3配列
Figure 2020511130
を含む。いくつかの態様において、ABは、SEQ ID NO:1〜4からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、およびSEQ ID NO:5〜9からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
いくつかの態様において、ABはCMに連結されている。いくつかの態様において、ABはCMに直接連結されている。いくつかの態様において、ABは連結ペプチドを介してCMに連結されている。いくつかの態様において、活性化可能抗体が非切断状態では、N末端からC末端に向かって、以下の構造的配置：
MM-CM-ABまたはAB-CM-MM
を含むように、MMはCMに連結されている。いくつかの態様において、活性化可能抗体は、MMとCMとの間に連結ペプチドを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗体は、CMとABとの間に連結ペプチドを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗体は、第1の連結ペプチド(LP1)および第2の連結ペプチド(LP2)を含み、非切断状態では、N末端からC末端に向かって、以下の構造的配置：
MM-LP1-CM-LP2-ABまたはAB-LP2-CM-LP1-MM
を有する。いくつかの態様において、2つの連結ペプチドは互いに同一である必要はない。いくつかの態様において、LP1およびLP2の各々は、約1〜20アミノ酸の長さのペプチドである。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、SEQ ID NO:1〜4および19〜22からなる群より選択される重鎖配列、ならびにSEQ ID NO:5〜9、23〜27、140〜182、185〜227、230〜272、および275〜317からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗体はアミノ酸配列の組み合わせを含み、アミノ酸配列の組み合わせは表4の単列から選択され、所与の組み合わせについて、(a) ABの重鎖は、表4に列挙された単列内の所与の組み合わせに対応するVH CDR配列のアミノ酸配列を含み、(b) ABの軽鎖は、表4に列挙された単列内の所与の組み合わせに対応するVL CDR配列のアミノ酸配列を含み、(c) MMは、表4に列挙された単列内の所与の組み合わせに対応するマスク配列(MM)のアミノ酸配列を含み、かつ(d) CMは、表4に列挙された単列内の所与の組み合わせに対応する基質配列(CM)のアミノ酸配列を含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗体はアミノ酸配列の組み合わせを含み、アミノ酸配列の所与の組み合わせについて、(a) ABの重鎖は、表5の対応する縦列に列挙されたVH配列またはVH CDR配列からなる群より選択されるVH配列またはVH CDR配列のアミノ酸配列を含み、(b) ABの軽鎖は、表5の対応する縦列に列挙されたVL配列またはVL CDR配列からなる群より選択されるVL配列またはVL CDR配列のアミノ酸配列を含み、(c) MMは、表5の対応する縦列に列挙されたMM配列からなる群より選択されるマスク配列(MM)のアミノ酸配列を含み、かつ(d) CMは、表5の対応する縦列に列挙されたCM配列からなる群より選択される基質配列(CM)のアミノ酸配列を含む。
いくつかの態様において、活性化可能CD147抗体は、哺乳動物CD147に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片(AB)、MM、およびCMを含み、該活性化可能抗体は、SEQ ID NO:19〜22の重鎖配列；ならびにSEQ ID NO:5〜9および23〜27からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。いくつかの態様において、MMは、SEQ ID NO:30〜100からなる群より選択されるアミノ酸配列を含み、CMは、SEQ ID NO:359、370、377、382、390、397、406〜423、680〜698、713、714、および789〜808からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ABは、VH CDR1配列
Figure 2020511130
；VH CDR2配列
Figure 2020511130
；VH CDR3配列
AGTDY (SEQ ID NO:13)
；VL CDR1配列
Figure 2020511130
；VL CDR2配列
YSSNRYT (SEQ ID NO:16)
；およびVL CDR3配列
Figure 2020511130
を含む。いくつかの態様において、ABは、SEQ ID NO:1〜3からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、およびSEQ ID NO:5〜9からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
いくつかの態様において、活性化可能CD147抗体は、哺乳動物CD147に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片(AB)、SEQ ID NO:30〜100からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むMM、ならびにSEQ ID NO:356〜423、680〜698、713、714、および789〜808からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むCMを含む。いくつかの態様において、MMは、SEQ ID NO:30〜100からなる群より選択されるアミノ酸配列を含み、CMは、SEQ ID NO:359、370、377、382、390、397、406〜423、680〜698、713、714、および807〜808からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ABは、VH CDR1配列
Figure 2020511130
；VH CDR2配列
Figure 2020511130
；VH CDR3配列
AGTDY (SEQ ID NO:13)
；VL CDR1配列
Figure 2020511130
；VL CDR2配列
YSSNRYT (SEQ ID NO:16)
；およびVL CDR3配列
Figure 2020511130
を含む。いくつかの態様において、ABは、SEQ ID NO:1〜3からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、およびSEQ ID NO:5〜9からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
いくつかの態様において、活性化可能CD147抗体は、哺乳動物CD147に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片(AB)であって、ヒトCD147および/またはカニクイザルCD147上の、本開示の単離された抗体と同じエピトープに特異的に結合する該AB；活性化可能抗体が非切断状態にある場合にCD147に対するABの結合を阻害するマスキング部分(MM)；ならびにABにカップリングされた切断可能部分(CM)であって、プロテアーゼの基質として機能するポリペプチドである該CMを含む。
いくつかの態様において、本開示のCD147活性化可能抗体は、哺乳動物CD147に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合断片(AB)であって、ヒトCD147およびカニクイザルCD147に特異的に結合する該ABを含む。いくつかの態様において、抗体またはその抗原結合断片は、VH CDR1配列
Figure 2020511130
；VH CDR2配列
Figure 2020511130
；VH CDR3配列
AGTDY (SEQ ID NO:13)
；VL CDR1配列
Figure 2020511130
；VL CDR2配列
YSSNRYT (SEQ ID NO:16)
；およびVL CDR3配列
Figure 2020511130
を含む。いくつかの態様において、活性化可能抗体またはその抗原結合断片は、SEQ ID NO:1〜4からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、およびSEQ ID NO:5〜9からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
いくつかの態様において、活性化可能CD147抗体は、哺乳動物CD147に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片(AB)であって、ヒトCD147および/またはカニクイザルCD147への結合について本開示の単離された抗体と特異的に交差競合する(その結合を阻害する)該AB；活性化可能抗体が非切断状態にある場合にCD147に対するABの結合を阻害するマスキング部分(MM)；ならびにABにカップリングされた切断可能部分(CM)であって、プロテアーゼの基質として機能するポリペプチドである該CMを含む。
いくつかの態様において、本開示のCD147活性化可能抗体は、哺乳動物CD147に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合断片(AB)であって、ヒトCD147およびカニクイザルCD147に特異的に結合する該ABを含む。いくつかの態様において、抗体またはその抗原結合断片は、VH CDR1配列
Figure 2020511130
；VH CDR2配列
Figure 2020511130
；VH CDR3配列
AGTDY (SEQ ID NO:13)
；VL CDR1配列
Figure 2020511130
；VL CDR2配列
YSSNRYT (SEQ ID NO:16)
；およびVL CDR3配列
Figure 2020511130
を含む。いくつかの態様において、活性化可能抗体またはその抗原結合断片は、SEQ ID NO:1〜4からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、およびSEQ ID NO:5〜9からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗体はまた、ABにコンジュゲートされた作用物質を含む。いくつかの態様において、ABまたは活性化可能抗体のABにコンジュゲートされた作用物質は治療用作用物質である。いくつかの態様において、作用物質は抗腫瘍剤である。いくつかの態様において、作用物質は毒素またはその断片である。本明細書において用いられる場合、毒素の断片は、毒性活性を保持する断片である。いくつかの態様において、作用物質は、切断可能なリンカーを介してABにコンジュゲートされている。いくつかの態様において、作用物質は、少なくとも1つのCM1-CM2基質配列を含むリンカーを介してABにコンジュゲートされている。いくつかの態様において、作用物質は、非切断可能リンカーを介してABにコンジュゲートされている。いくつかの態様において、作用物質は、細胞内環境またはリソソーム環境において切断可能なリンカーを介してABにコンジュゲートされている。いくつかの態様において、作用物質は微小管阻害剤である。いくつかの態様において、作用物質は、DNAアルキル化剤、DNA切断剤、DNA架橋剤、DNAインターカレーター、または他のDNA損傷剤のような、核酸損傷剤である。いくつかの態様において、作用物質は表5に列挙された群から選択される作用物質である。いくつかの態様において、作用物質はドラスタチンである。いくつかの態様において、作用物質はアウリスタチンまたはその誘導体である。いくつかの態様において、作用物質はアウリスタチンEまたはその誘導体である。いくつかの態様において、作用物質はモノメチルアウリスタチンE (MMAE)である。いくつかの態様において、作用物質はモノメチルアウリスタチンD (MMAD)である。いくつかの態様において、作用物質はメイタンシノイドまたはメイタンシノイド誘導体である。いくつかの態様において、作用物質はDM1またはDM4である。いくつかの態様において、作用物質はデュオカルマイシンまたはその誘導体である。いくつかの態様において、作用物質はカリケアマイシンまたはその誘導体である。いくつかの態様において、作用物質はピロロベンゾジアゼピンである。いくつかの態様において、作用物質はピロロベンゾジアゼピン二量体である。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、1当量または複数当量の作用物質にコンジュゲートされている。いくつかの態様において、活性化可能抗体は、1当量の作用物質にコンジュゲートされている。いくつかの態様において、活性化可能抗体は、2、3、4、5、6、7、8、9、10当量、または10を超える当量の作用物質にコンジュゲートされている。いくつかの態様において、活性化可能抗体は、均一な当量数のコンジュゲートされた作用物質を有する活性化可能抗体の混合物の一部である。いくつかの態様において、活性化可能抗体は、不均一な当量数のコンジュゲートされた作用物質を有する活性化可能抗体の混合物の一部である。いくつかの態様において、活性化可能抗体の混合物は、各活性化可能抗体にコンジュゲートされた作用物質の平均数が0〜1、1〜2、2〜3、3〜4、4〜5、5〜6、6〜7、7〜8、8〜9、9〜10、ならびに10およびそれ以上であるようなものである。いくつかの態様において、活性化可能抗体の混合物は、各活性化可能抗体にコンジュゲートされた作用物質の平均数が1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、またはそれ以上であるようなものである。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、リジンおよび/またはシステイン残基の数が活性化可能抗体の元のアミノ酸配列に対して増加または減少するように、1つまたは複数の部位特異的アミノ酸配列修飾を含み、したがっていくつかの態様において活性化可能抗体にコンジュゲートされうる作用物質の数を相応に増加または減少させ、またはいくつかの態様において、部位特異的様式で活性化可能抗体に対する作用物質のコンジュゲーションを制限する。いくつかの態様において、修飾された活性化可能抗体は部位特異的様式で1つまたは複数の非天然アミノ酸により修飾され、したがっていくつかの態様において、作用物質のコンジュゲーションを非天然アミノ酸の部位のみに制限する。
いくつかの態様において、作用物質は抗炎症剤である。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は検出可能な部分も含む。いくつかの態様において、検出可能な部分は診断用作用物質である。
いくつかの態様において、活性化可能抗体はシグナルペプチドも含む。いくつかの態様において、シグナルペプチドは、スペーサーを介して活性化可能抗体にコンジュゲートされている。いくつかの態様において、スペーサーは、シグナルペプチドの非存在下で活性化可能抗体にコンジュゲートされている。いくつかの態様において、スペーサーは、活性化可能抗体のMMに直接結び付けられる。いくつかの態様において、スペーサーは、スペーサー-MM-CM-ABであるN末端からC末端への構造的配置で、活性化可能抗体のMMに直接結び付けられる。活性化可能抗体のMMのN末端に直接結び付けられるスペーサーの例は、QGQSGQ (SEQ ID NO:424)である。活性化可能抗体のMMのN末端に直接結び付けられるスペーサーの他の例としては、QGQSGQG (SEQ ID NO:645)、QGQSG (SEQ ID NO:646)、QGQS (SEQ ID NO:647)、QGQ (SEQ ID NO:648)、QG (SEQ ID NO:649)、およびQが挙げられる。活性化可能抗体のMMのN末端に直接結び付けられるスペーサーの他の例としては、GQSGQG (SEQ ID NO:666)、QSGQG (SEQ ID NO:667)、SGQG (SEQ ID NO:668)、GQG (SEQ ID NO:669)、およびGが挙げられる。いくつかの態様において、MMのN末端にスペーサーは結び付けられていない。いくつかの態様において、スペーサーは少なくともアミノ酸配列QGQSGQ (SEQ ID NO:424)を含む。いくつかの態様において、スペーサーは少なくともアミノ酸配列QGQSGQG (SEQ ID NO:645)を含む。いくつかの態様において、スペーサーは少なくともアミノ酸配列QGQSG (SEQ ID NO:646)を含む。いくつかの態様において、スペーサーは少なくともアミノ酸配列QGQS (SEQ ID NO:647)を含む。いくつかの態様において、スペーサーは少なくともアミノ酸配列QGQ (SEQ ID NO:648)を含む。いくつかの態様において、スペーサーは少なくともアミノ酸配列QG (SEQ ID NO:649)を含む。いくつかの態様において、スペーサーは少なくともアミノ酸残基Qを含む。いくつかの態様において、スペーサーは少なくともアミノ酸配列GQSGQG (SEQ ID NO:666)を含む。いくつかの態様において、スペーサーは少なくともアミノ酸配列QSGQG (SEQ ID NO:667)を含む。いくつかの態様において、スペーサーは少なくともアミノ酸配列SGQG (SEQ ID NO:668)を含む。いくつかの態様において、スペーサーは少なくともアミノ酸配列GQG (SEQ ID NO:669)を含む。いくつかの態様において、スペーサーは少なくともアミノ酸配列Gを含む。いくつかの態様において、スペーサーは存在しない。
いくつかの態様において、活性化可能抗体のABは、天然には1つまたは複数のジスルフィド結合を含む。いくつかの態様において、ABは、1つまたは複数のジスルフィド結合を含むように操作することができる。
いくつかの態様において、活性化可能抗体またはその抗原結合断片は作用物質にコンジュゲートされている。いくつかの態様において、活性化可能抗体は、VH CDR1配列
Figure 2020511130
；VH CDR2配列
Figure 2020511130
；VH CDR3配列
AGTDY (SEQ ID NO:13)
；VL CDR1配列
Figure 2020511130
；VL CDR2配列
YSSNRYT (SEQ ID NO:16)
；およびVL CDR3配列
Figure 2020511130
を含む単離された抗体と交差競合する(その結合を阻害する)抗体またはその抗原結合断片を含む。いくつかの態様において、活性化可能抗体は、SEQ ID NO:1〜3からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、およびSEQ ID NO:5〜9からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む単離された抗体と交差競合する(その結合を阻害する)抗体またはその抗原結合断片を含む。いくつかの態様において、作用物質は毒素またはその断片である。いくつかの態様において、作用物質は微小管阻害剤である。いくつかの態様において、作用物質は核酸損傷剤である。いくつかの態様において、作用物質は、ドラスタチンまたはその誘導体、アウリスタチンまたはその誘導体、メイタンシノイドまたはその誘導体、デュオカルマイシンまたはその誘導体、カリケアマイシンまたはその誘導体、およびピロロベンゾジアゼピンまたはその誘導体からなる群より選択される。いくつかの態様において、作用物質はアウリスタチンEまたはその誘導体である。いくつかの態様において、作用物質はモノメチルアウリスタチンE (MMAE)である。いくつかの態様において、作用物質はモノメチルアウリスタチンD (MMAD)である。いくつかの態様において、作用物質は、DM1およびDM4からなる群より選択されるメイタンシノイドである。いくつかの態様において、作用物質はメイタンシノイドDM4である。いくつかの態様において、作用物質はデュオカルマイシンである。いくつかの態様において、作用物質は、リンカーを介してABにコンジュゲートされている。いくつかの態様において、作用物質がABにコンジュゲートされるのに用いられるリンカーは、SPDB部分、vc部分、またはPEG2-vc部分を含む。いくつかの態様において、ABにコンジュゲートされているリンカーおよび毒素は、SPDB-DM4部分、vc-MMAD部分、vc-MMAE部分、vc-デュオカルマイシン、またはPEG2-vc-MMAD部分を含む。いくつかの態様において、リンカーは切断可能なリンカーである。いくつかの態様において、リンカーは非切断可能リンカーである。いくつかの態様において、作用物質は検出可能な部分である。いくつかの態様において、検出可能な部分は診断用作用物質である。
いくつかの態様において、コンジュゲートされた活性化可能抗体は、活性化状態ではCD147に結合する、以下を含むコンジュゲートされた活性化可能抗体を含む：哺乳動物CD147に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片(AB)であって、ヒトCD147およびカニクイザルCD147に特異的に結合する該AB；活性化可能抗体が非切断状態にある場合にCD147に対するABの結合を阻害するマスキング部分(MM)；ABにカップリングされた切断可能部分(CM)であって、プロテアーゼの基質として機能するポリペプチドである該CM；ならびにABにコンジュゲートされた作用物質。いくつかの態様において、作用物質は、ドラスタチンまたはその誘導体、アウリスタチンまたはその誘導体、メイタンシノイドまたはその誘導体、デュオカルマイシンまたはその誘導体、カリケアマイシンまたはその誘導体、およびピロロベンゾジアゼピンまたはその誘導体からなる群より選択される。いくつかの態様において、作用物質は、アウリスタチンE、モノメチルアウリスタチンF (MMAF)、モノメチルアウリスタチンE (MMAE)、モノメチルアウリスタチンD (MMAD)、メイタンシノイドDM4、メイタンシノイドDM1、デュオカルマイシン、ピロロベンゾジアゼピン、およびピロロベンゾジアゼピン二量体からなる群より選択される。いくつかの態様において、作用物質は、リンカーを介してABにコンジュゲートされている。いくつかの態様において、作用物質がABにコンジュゲートされるのに用いられるリンカーは、SPDB部分、vc部分、またはPEG2-vc部分を含む。いくつかの態様において、ABにコンジュゲートされているリンカーおよび毒素は、SPDB-DM4部分、vc-MMAD部分、vc-MMAE部分、vc-デュオカルマイシン、またはPEG2-vc-MMAD部分を含む。いくつかの態様において、コンジュゲートされた活性化可能抗体またはその抗原結合断片のABは、VH CDR1配列
Figure 2020511130
；VH CDR2配列
Figure 2020511130
；VH CDR3配列
AGTDY (SEQ ID NO:13)
；VL CDR1配列
Figure 2020511130
；VL CDR2配列
YSSNRYT (SEQ ID NO:16)
；およびVL CDR3配列
Figure 2020511130
を含む。いくつかの態様において、コンジュゲートされた活性化可能抗体またはその抗原結合断片のABは、SEQ ID NO:1〜3からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、およびSEQ ID NO:5〜9からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの態様において、MMは、SEQ ID NO:30〜100からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、MMは、SEQ ID NO:30〜100からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、CMは、SEQ ID NO:356〜423、680〜698、713、714、および789〜808からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、CMは、SEQ ID NO:359、370、377、382、390、397、406〜423、680〜698、713、714、および807〜808からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、活性化可能抗体はアミノ酸配列の組み合わせを含み、アミノ酸配列の組み合わせは表4の単列から選択され、所与の組み合わせについて、(a) ABの重鎖は、表4に列挙された単列内の所与の組み合わせに対応するVH CDR配列のアミノ酸配列を含み、(b) ABの軽鎖は、表4に列挙された単列内の所与の組み合わせに対応するVL CDR配列のアミノ酸配列を含み、(c) MMは、表4に列挙された単列内の所与の組み合わせに対応するマスク配列(MM)のアミノ酸配列を含み、かつ(d) CMは、表4に列挙された単列内の所与の組み合わせに対応する基質配列(CM)のアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、活性化可能抗体はアミノ酸配列の組み合わせを含み、アミノ酸配列の所与の組み合わせについて、(a) ABの重鎖は、表5の対応する縦列に列挙されたVH配列またはVH CDR配列からなる群より選択されるVH配列またはVH CDR配列のアミノ酸配列を含み、(b) ABの軽鎖は、表5の対応する縦列に列挙されたVL配列またはVL CDR配列からなる群より選択されるVL配列またはVL CDR配列のアミノ酸配列を含み、(c) MMは、表5の対応する縦列に列挙されたMM配列からなる群より選択されるマスク配列(MM)のアミノ酸配列を含み、かつ(d) CMは、表5の対応する縦列に列挙されたCM配列からなる群より選択される基質配列(CM)のアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、活性化可能抗体は、SEQ ID NO:1〜4または19〜22からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む重鎖；ならびにSEQ ID NO:5〜9、23〜27、140〜182、185〜227、230〜272、および275〜317からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
いくつかの態様において、コンジュゲートされた活性化可能抗体は、活性化状態ではCD147に結合する、以下を含むコンジュゲートされた活性化可能抗体を含む：哺乳動物CD147に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片(AB)であって、ヒトCD147およびカニクイザルCD147に特異的に結合する該AB；活性化可能抗体が非切断状態にある場合にCD147に対するABの結合を阻害するマスキング部分(MM)；ABにカップリングされた切断可能部分(CM)であって、プロテアーゼの基質として機能するポリペプチドである該CM；ならびにABにコンジュゲートされた作用物質、
ここで、ABは、(i) VH CDR1配列
Figure 2020511130
；VH CDR2配列
Figure 2020511130
；VH CDR3配列
AGTDY (SEQ ID NO:13)
；VL CDR1配列
Figure 2020511130
；VL CDR2配列
YSSNRYT (SEQ ID NO:16)
；およびVL CDR3配列
Figure 2020511130
、または(ii) SEQ ID NO:1〜3からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、およびSEQ ID NO:5〜9からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または(iii) SEQ ID NO:1〜4もしくは19〜22からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む重鎖、ならびにSEQ ID NO:5〜9、23〜27、140〜182、185〜227、230〜272、および275〜317からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、かつ作用物質は、アウリスタチンE、モノメチルアウリスタチンF (MMAF)、モノメチルアウリスタチンE (MMAE)、モノメチルアウリスタチンD (MMAD)、メイタンシノイドDM4、メイタンシノイドDM1、ピロロベンゾジアゼピン、ピロロベンゾジアゼピン二量体、およびデュオカルマイシンからなる群より選択される。いくつかの態様において、MMは、SEQ ID NO:30〜100からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、MMは、SEQ ID NO:30、31、33、44、46、75〜80、82、83、および86〜100からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、CMは、SEQ ID NO:356〜423、680〜698、713、714、および789〜808からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、CMは、SEQ ID NO:359、370、377、382、390、397、406〜423、680〜698、713、714、および807〜808からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、作用物質はリンカーを介してABにコンジュゲートされ、かつここで作用物質がコンジュゲートされてABにコンジュゲートされるリンカーは、SPDB部分、vc部分、またはPEG2-vc部分を含む。いくつかの態様において、ABにコンジュゲートされているリンカーおよび毒素は、SPDB-DM4部分、vc-MMAD部分、vc-MMAE部分、vc-デュオカルマイシン、またはPEG2-vc-MMAD部分を含む。
いくつかの態様において、コンジュゲートされた活性化可能抗体は、以下を含むコンジュゲートされた活性化可能抗体またはコンジュゲートされた抗体を含む：活性化状態ではCD147に結合する、抗体またはその抗原結合断片(AB)；およびリンカーを介してABにコンジュゲートされた毒素、ここで、該コンジュゲートされた活性化可能抗体またはコンジュゲートされた抗体は、表9の単列から選択されるアミノ酸配列、リンカー、および毒素を含み、所与の組み合わせについて、(a) ABは、表9に列挙された単列内の所与の組み合わせに対応する重鎖配列または重鎖可変ドメイン配列のアミノ酸配列を含む重鎖を含み、(b) ABは、表9に列挙された単列内の所与の組み合わせに対応する軽鎖配列または軽鎖可変ドメイン配列のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、かつ(c) リンカーおよび毒素は、表9に列挙された単列内の所与の組み合わせに対応するリンカーおよび毒素を含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、SEQ ID NO:1〜4からなる群より選択される重鎖可変領域アミノ酸配列をコードする核酸配列を含む核酸配列によってコードされる。いくつかの態様において、活性化可能抗体は、SEQ ID NO:1〜3からなる群より選択される重鎖可変領域アミノ酸配列をコードする核酸配列を含む核酸配列によってコードされる。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、SEQ ID NO:5〜9からなる群より選択される軽鎖可変領域アミノ酸配列をコードする核酸配列を含む核酸配列によってコードされる。いくつかの態様において、活性化可能抗体は、SEQ ID NO:5〜8からなる群より選択される軽鎖可変領域アミノ酸配列をコードする核酸配列を含む核酸配列によってコードされる。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、SEQ ID NO:1〜4からなる群より選択される重鎖可変領域アミノ酸配列をコードする核酸配列、およびSEQ ID NO:5〜9からなる群より選択される軽鎖可変領域アミノ酸配列をコードする核酸配列を含む核酸配列によってコードされる。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、SEQ ID NO:1〜3からなる群より選択される重鎖可変領域アミノ酸配列をコードする核酸配列、およびSEQ ID NO:5〜8からなる群より選択される軽鎖可変領域アミノ酸配列をコードする核酸配列を含む核酸配列によってコードされる。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、SEQ ID NO:1〜4からなる群より選択される重鎖可変領域アミノ酸配列をコードする核酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である核酸配列を含む核酸配列によってコードされる。いくつかの態様において、活性化可能抗体は、SEQ ID NO:1〜3からなる群より選択される重鎖可変領域アミノ酸配列をコードする核酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である核酸配列を含む核酸配列によってコードされる。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、SEQ ID NO:5〜9からなる群より選択される軽鎖可変領域アミノ酸配列をコードする核酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である核酸配列を含む核酸配列によってコードされる。いくつかの態様において、活性化可能抗体は、SEQ ID NO:5〜8からなる群より選択される軽鎖可変領域アミノ酸配列をコードする核酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である核酸配列を含む核酸配列によってコードされる。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、SEQ ID NO:1〜4からなる群より選択される重鎖可変領域アミノ酸配列をコードする核酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である核酸配列、およびSEQ ID NO:5〜9からなる群より選択される軽鎖可変領域アミノ酸配列をコードする核酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である核酸配列を含む核酸配列によってコードされる。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、SEQ ID NO:1〜3からなる群より選択される重鎖可変領域アミノ酸配列をコードする核酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である核酸配列、およびSEQ ID NO:5〜8からなる群より選択される軽鎖可変領域アミノ酸配列をコードする核酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である核酸配列を含む核酸配列によってコードされる。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、表1に示される重鎖可変領域配列からなる群より選択される重鎖可変領域アミノ酸配列をコードする核酸配列を含む核酸配列によってコードされる。いくつかの態様において、活性化可能抗体は、表1に示される軽鎖可変領域配列からなる群より選択される軽鎖可変領域アミノ酸配列をコードする核酸配列を含む核酸配列によってコードされる。いくつかの態様において、活性化可能抗体は、表1に示される重鎖可変領域配列からなる群より選択される重鎖可変領域アミノ酸配列をコードする核酸配列および表1に示される軽鎖可変領域配列からなる群より選択される軽鎖可変領域アミノ酸配列をコードする核酸配列を含む核酸配列によってコードされる。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、表1に示される重鎖可変領域配列からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である重鎖可変領域アミノ酸配列をコードする核酸配列を含む核酸配列によってコードされる。いくつかの態様において、活性化可能抗体は、表1に示される軽鎖可変領域配列からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である軽鎖可変領域アミノ酸配列をコードする核酸配列を含む核酸配列によってコードされる。いくつかの態様において、活性化可能抗体は、表1に示される重鎖可変領域配列からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である重鎖可変領域アミノ酸配列をコードする核酸配列を含む核酸配列および表1に示される軽鎖可変領域配列からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である軽鎖可変領域アミノ酸配列をコードする核酸配列を含む核酸配列によってコードされる。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、可変重鎖相補性決定領域1 (VH CDR1, 本明細書においてCDRH1ともいわれる)配列、可変重鎖相補性決定領域2 (VH CDR2, 本明細書においてCDRH2ともいわれる)配列、可変重鎖相補性決定領域3 (VH CDR3, 本明細書においてCDRH3ともいわれる)配列、可変軽鎖相補性決定領域1 (VL CDR1, 本明細書においてCDRL1ともいわれる)配列、可変軽鎖相補性決定領域2 (VL CDR2, 本明細書においてCDRL2ともいわれる)配列および可変軽鎖相補性決定領域3 (VL CDR3, 本明細書においてCDRL3ともいわれる)配列の組み合わせをコードする核酸配列を含む核酸配列によってコードされ、ここで少なくとも1つのCDR配列が、表2に示されるVH CDR1配列；表2に示されるVH CDR2配列；表2に示されるVH CDR3配列；表2に示されるVL CDR1配列；表2に示されるVL CDR2配列；表2に示されるVL CDR3配列からなる群より選択される。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、VH CDR1配列、VH CDR2 配列、VH CDR3 配列、VL CDR1 配列、VL CDR2 配列、およびVL CDR3 配列の組み合わせをコードする核酸配列を含む核酸配列によってコードされ、ここで少なくとも1つのCDR配列が、表2に示されるVH CDR1配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含むVH CDR1配列；表2に示されるVH CDR2配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含むVH CDR2配列；表2に示されるVH CDR3配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含むVH CDR3配列；表2に示されるVL CDR1配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含むVL CDR1配列；表2に示されるVL CDR2配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含むVL CDR2配列；および表2に示されるVL CDR3配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含むVL CDR3配列からなる群より選択される。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、VH CDR1配列、VH CDR2配列、VH CDR3配列、VL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせをコードする核酸配列を含む核酸配列によってコードされ、ここで該組み合わせが、表2の単列内に示される6つのCDR配列(VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2およびVL CDR3)の組み合わせである。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、VL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせを含む軽鎖可変領域をコードする核酸配列を含む核酸配列によってコードされ、ここで該組み合わせが、表2の単列内に示される3つの軽鎖CDR配列(VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3)の組み合わせである。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、VH CDR1配列、VH CDR2配列、およびVH CDR3配列の組み合わせを含む重鎖可変領域をコードする核酸配列を含む核酸配列によってコードされ、ここで該組み合わせが、表2の単列内に示される3つの重鎖CDR配列(VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3)の組み合わせである。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、VH CDR1配列、VH CDR2配列、VH CDR3配列、VL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせをコードする核酸配列を含む核酸配列によってコードされ、ここで組み合わせにおける各CDR配列が、表2の単列内に示される6つのCDR配列(VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2およびVL CDR3)の組み合わせにおける対応するCDR配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、VH CDR1配列、VH CDR2配列、およびVH CDR3配列の組み合わせを含む重鎖可変領域をコードする核酸配列を含む核酸配列によってコードされ、ここで組み合わせにおける各CDR配列が、表2の単列内に示される3つの重鎖CDR配列(VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3)の組み合わせにおける対応するCDR配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、VL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせを含む軽鎖可変領域をコードする核酸配列を含む核酸配列によってコードされ、ここで組み合わせにおける各CDR配列が、表2の単列内に示される3つの軽鎖CDR配列(VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3)の組み合わせにおける対応するCDR配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含む。
本開示はまた、本開示の核酸分子または本開示のベクターを含む細胞を、活性化可能抗体の発現をもたらす条件下で培養することにより本開示の活性化可能抗体を産生するための方法を提供する。
本開示はまた、活性化状態ではCD147に結合する活性化可能抗体を製造する方法であって、(a) 本開示の活性化可能抗体を含む、活性化可能抗体の発現をもたらす条件下で活性化可能抗体をコードする核酸構築物を含む細胞を培養する段階；および(b) 活性化可能抗体を回収する段階を含む、該方法を提供する。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、表4の所与の列における配列の組み合わせまたは表5のマスク配列(MM)、基質配列(CM)、軽鎖可変ドメイン配列もしくは軽鎖可変ドメインCDR配列および重鎖可変ドメイン配列もしくは重鎖可変ドメインCDR配列の任意の組み合わせを含む1つまたは複数のポリペプチドを含む。
（表４）CD147活性化可能抗体の組み合わせ
Figure 2020511130
Figure 2020511130
Figure 2020511130
Figure 2020511130
Figure 2020511130
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Figure 2020511130
Figure 2020511130
（表５）CD147活性化可能抗体の構成要素
Figure 2020511130
Figure 2020511130
Figure 2020511130
いくつかの態様において、本開示の活性化可能抗体は、表4または表5から選択される配列の組み合わせを含む1つまたは複数のポリペプチドを含み、ここでポリペプチドが表4または表5の「マスク配列(MM)」というタイトルの縦列から選択されるマスキング配列、表4または表5の「基質配列(CM)」というタイトルの縦列からの基質配列、表4または表5の「VLもしくはVL CDRs」または「VL CDRs SEQ ID NOs」というタイトルの縦列からの軽鎖可変ドメインまたは軽鎖CDR、および表4または表5の「VHもしくはVH CDRs」または「VH CDRs SEQ ID Nos」というタイトルの縦列からの重鎖可変ドメインまたは重鎖CDRの組み合わせを含む。例えば、本開示の活性化可能抗体は、組み合わせ番号147のアミノ酸配列を含んでもよく、これはSEQ ID NO:17のマスキング配列、SEQ ID NO:412の基質配列、SEQ ID NO:15、16、および18のVL CDR配列を含む軽鎖可変ドメイン、ならびに11、12、および13のVH CDR配列を含む重鎖可変ドメインを含む。それゆえ、表4の任意の所与の列における配列の少なくとも組み合わせを含む活性化可能抗体が本明細書において記述される。同様に、表5のマスク配列(MM)、基質配列(CM)、軽鎖可変ドメイン配列または軽鎖可変ドメインCDR配列、および重鎖可変ドメイン配列または重鎖可変ドメインCDR配列の任意の組み合わせが本明細書において記述される。表4または表5の対応する縦列から選択されるマスキング配列、基質配列、可変重鎖または可変重鎖CDR、および可変軽鎖または可変軽鎖CDRの少なくとも任意の組み合わせを含む活性化可能抗体も本明細書において記述される。いくつかの例示的な態様において、少なくとも、表4の任意の所与の列における配列の組み合わせ、または表5のマスク配列(MM)、基質配列(CM)、軽鎖可変ドメイン配列もしくは軽鎖可変ドメインCDR配列、および重鎖可変ドメイン配列もしくは重鎖可変ドメインCDR配列の任意の組み合わせを含む活性化可能抗体を、ドラスタチンもしくはその誘導体、アウリスタチンもしくはその誘導体、メイタンシノイドもしくはその誘導体、デュオカルマイシンもしくはその誘導体、カリケアマイシンもしくはその誘導体、またはピロロベンゾジアゼピンもしくはその誘導体を含む、1つまたは複数の毒素と組み合わせることができる。いくつかの例示的な態様において、少なくとも、表4の任意の所与の列における配列の組み合わせ、または表5のマスク配列(MM)、基質配列(CM)、軽鎖可変ドメイン配列もしくは軽鎖可変ドメインCDR配列、および重鎖可変ドメイン配列もしくは重鎖可変ドメインCDR配列の任意の組み合わせを含む活性化可能抗体を、アウリスタチンE、モノメチルアウリスタチンF (MMAF)、モノメチルアウリスタチンE (MMAE)、モノメチルアウリスタチンD (MMAD)、メイタンシノイドDM4、メイタンシノイドDM1、ピロロベンゾジアゼピン、ピロロベンゾジアゼピン二量体、および/またはデュオカルマイシンを含む、1つまたは複数の毒素と組み合わせることができる。
上記の表4または表5における組み合わせのいずれかをヒト免疫グロブリン定常領域と組み合わせて、IgG1、IgG2、IgG4を含む完全ヒトIgGをもたらすこともでき、または変異型定常領域と組み合わせて、IgG1 N297A、IgG1 N297Q、もしくはIgG4 S228Pのような改変された機能を有するヒトIgGをもたらすこともできる。表4または表5に記述されている組み合わせは、任意の所与の列に示される特定の組み合わせに制限されず、したがって表4の縦列2 (または表5の縦列1)からの任意のマスク配列を、表4の縦列3 (または表5の縦列2)からの任意の基質配列と組み合わせて、表4の縦列4 (または表5の縦列3)からの任意のVL配列またはVL CDR配列セットと組み合わせて、表4の縦列5 (または表5の縦列4)からの任意のVH配列またはVH CDR配列セットと組み合わせて含みうる。表4の縦列2または表5の縦列1に開示されているマスク配列に加えて、本明細書において開示される任意のマスク配列を組み合わせて用いることができる。表4の縦列3または表5の縦列2に開示されている基質配列に加えて、本明細書において開示される任意のCMを組み合わせて用いることができる。表4の縦列4または表5の縦列3に開示されている軽鎖可変領域配列または軽鎖CDR配列に加えて、本明細書において開示される任意の軽鎖可変領域配列または軽鎖CDR配列を組み合わせて用いることができる。表4の縦列5または表5の縦列4に開示されている重鎖可変領域配列または重鎖CDR配列に加えて、本明細書において開示される任意の重鎖可変領域配列または重鎖CDR配列を組み合わせて用いることができる。
いくつかの態様において、活性化可能抗体の血清半減期は、対応する抗体の血清半減期より長い。例えば、活性化可能抗体のpKは、対応する抗体のpKより長い。いくつかの態様において、活性化可能抗体の血清半減期は、対応する抗体の血清半減期と同様である。いくつかの態様において、活性化可能抗体の血清半減期は、生物に投与された場合に少なくとも15日である。いくつかの態様において、活性化可能抗体の血清半減期は、生物に投与された場合に少なくとも12日である。いくつかの態様において、活性化可能抗体の血清半減期は、生物に投与された場合に少なくとも11日である。いくつかの態様において、活性化可能抗体の血清半減期は、生物に投与された場合に少なくとも10日である。いくつかの態様において、活性化可能抗体の血清半減期は、生物に投与された場合に少なくとも9日である。いくつかの態様において、活性化可能抗体の血清半減期は、生物に投与された場合に少なくとも8日である。いくつかの態様において、活性化可能抗体の血清半減期は、生物に投与された場合に少なくとも7日である。いくつかの態様において、活性化可能抗体の血清半減期は、生物に投与された場合に少なくとも6日である。いくつかの態様において、活性化可能抗体の血清半減期は、生物に投与された場合に少なくとも5日である。いくつかの態様において、活性化可能抗体の血清半減期は、生物に投与された場合に少なくとも4日である。いくつかの態様において、活性化可能抗体の血清半減期は、生物に投与された場合に少なくとも3日である。いくつかの態様において、活性化可能抗体の血清半減期は、生物に投与された場合に少なくとも2日である。いくつかの態様において、活性化可能抗体の血清半減期は、生物に投与された場合に少なくとも24時間である。いくつかの態様において、活性化可能抗体の血清半減期は、生物に投与された場合に少なくとも20時間である。いくつかの態様において、活性化可能抗体の血清半減期は、生物に投与された場合に少なくとも18時間である。いくつかの態様において、活性化可能抗体の血清半減期は、生物に投与された場合に少なくとも16時間である。いくつかの態様において、活性化可能抗体の血清半減期は、生物に投与された場合に少なくとも14時間である。いくつかの態様において、活性化可能抗体の血清半減期は、生物に投与された場合に少なくとも12時間である。いくつかの態様において、活性化可能抗体の血清半減期は、生物に投与された場合に少なくとも10時間である。いくつかの態様において、活性化可能抗体の血清半減期は、生物に投与された場合に少なくとも8時間である。いくつかの態様において、活性化可能抗体の血清半減期は、生物に投与された場合に少なくとも6時間である。いくつかの態様において、活性化可能抗体の血清半減期は、生物に投与された場合に少なくとも4時間である。いくつかの態様において、活性化可能抗体の血清半減期は、生物に投与された場合に少なくとも3時間である。
本開示はまた、活性化可能CD147抗体ポリペプチドの発現をもたらす条件下で細胞を培養することによって該ポリペプチドを産生する方法であって、前記細胞が、本明細書に記載の抗体および/もしくは活性化可能抗体をコードする単離された核酸分子、ならびに/またはこれらの単離された核酸配列を含むベクターを含む、前記方法も提供する。本開示は、抗体および/または活性化可能抗体の発現をもたらす条件下で細胞を培養することによって抗体および/または活性化可能抗体を産生する方法であって、前記細胞が、本明細書に記載の抗体および/もしくは活性化可能抗体をコードする単離された核酸分子、ならびに/またはこれらの単離された核酸配列を含むベクターを含む、前記方法を提供する。
本発明はまた、以下の工程によって、活性化状態ではCD147に結合する活性化可能抗体を製造する方法も提供する：(a)活性化可能抗体の発現をもたらす条件下で、活性化可能抗体をコードする核酸構築物を含む細胞を培養する工程であって、活性化可能抗体が、マスキング部分(MM)と、切断可能部分(CM)と、CD147に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片(AB)とを含み、(i)CMが、プロテアーゼの基質として機能するポリペプチドであり、(ii)活性化可能抗体が非切断状態にある場合にMMがCD147に対するABの特異的結合に干渉するように、および活性化可能抗体が切断状態にある場合はMMがCD147に対するABの特異的結合に干渉も競合もしないように、CMが活性化可能抗体に配置される、前記工程、および(b)活性化可能抗体を回収する工程。適切なAB、MM、および/またはCMは、本明細書において開示された任意のAB、MM、および/またはCMを含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は非切断状態では、N末端からC末端に向かって、以下の構造的配置：
MM-CM-ABまたはAB-CM-MM
を有する。いくつかの態様において、活性化可能抗体はMMとCMとの間に連結ペプチドを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗体はCMとABとの間に連結ペプチドを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗体は第1の連結ペプチド(LP1)および第2の連結ペプチド(LP2)を含み、非切断状態では、N末端からC末端に向かって、以下の構造的配置：
MM-LP1-CM-LP2-ABまたはAB-LP2-CM-LP1-MM
を有する。いくつかの態様において、2つの連結ペプチドは互いに同一である必要はない。いくつかの態様において、活性化可能抗体は非切断状態では、N末端からC末端に向かって、以下の構造的配置：
スペーサー-MM-LP1-CM-LP2-ABまたはAB-LP2-CM-LP1-MM-スペーサー
を有する。
いくつかの態様において、LP1またはLP2の少なくとも1つは、(GS)n、(GGS)n、(GSGGS)n (SEQ ID NO:339)および(GGGS)n (SEQ ID NO:340)からなる群より選択されるアミノ酸配列を含み、ここでnは少なくとも1の整数である。
いくつかの態様において、LP1またはLP2の少なくとも1つは、GGSG (SEQ ID NO:341)、GGSGG (SEQ ID NO:342)、GSGSG (SEQ ID NO:343)、GSGGG (SEQ ID NO:344)、GGGSG (SEQ ID NO:345)、およびGSSSG (SEQ ID NO:346)からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの態様において、LP1はアミノ酸配列
Figure 2020511130
を含む。
いくつかの態様において、LP2はアミノ酸配列GSS、GGS、GGGS (SEQ ID NO:353)、GSSGT (SEQ ID NO:354)またはGSSG (SEQ ID NO:356)を含む。
コンジュゲートされたCD147抗体および活性化可能抗体
いくつかの態様において、本明細書において記述されるCD147抗体および活性化可能抗体はまた、抗体/活性化可能抗体にコンジュゲートされた作用物質も含む。いくつかの態様において、コンジュゲートされた作用物質は、抗炎症剤および/または抗腫瘍剤のような、治療用作用物質である。そのような態様において、例えば、炭水化物部分が活性化可能抗体中の抗体または抗原結合断片の抗原結合領域の外側に位置するいくつかの態様において、作用物質は、抗体/活性化可能抗体の炭水化物部分にコンジュゲートされている。いくつかの態様において、作用物質は、抗体/活性化可能抗体中の抗体または抗原結合断片のスルフヒドリル基にコンジュゲートされている。
いくつかの態様において、作用物質は、毒素(例えば、細菌、真菌、植物もしくは動物由来の酵素的に活性な毒素、またはその断片)、あるいは放射性同位体(すなわち、放射性コンジュゲート)のような細胞毒性剤である。
いくつかの態様において、作用物質は、例えば、標識または他のマーカーなどの検出可能部分である。例えば、作用物質は、放射標識されたアミノ酸、マークされたアビジン(例えば、光学的方法または熱量測定法によって検出することができる蛍光マーカーまたは酵素活性を含有するストレプトアビジン)によって検出することができる1つもしくは複数のビオチン化部分、1つもしくは複数の放射性同位体もしくは放射性核種、1つもしくは複数の蛍光標識、1つもしくは複数の酵素標識、および/または1つもしくは複数の化学発光作用物質であるか、またはそれらを含む。いくつかの態様において、検出可能部分は、スペーサー分子によって付加される。
本開示はまた、毒素(例えば、細菌、真菌、植物もしくは動物由来の酵素的に活性な毒素、またはその断片)、あるいは放射性同位体(すなわち、放射性コンジュゲート)のような細胞毒性剤にコンジュゲートされた抗体を含む免疫コンジュゲートに関する。適当な細胞毒性剤は、例えば、ドラスタチンおよびその誘導体(例えば、アウリスタチンE、AFP、MMAF、MMAE、MMAD、DMAF、DMAE)を含む。例えば、作用物質はモノメチルアウリスタチンE (MMAE)またはモノメチルアウリスタチンD (MMAD)である。いくつかの態様において、作用物質は表5に列挙された群から選択される作用物質である。いくつかの態様において、作用物質はドラスタチンである。いくつかの態様において、作用物質はアウリスタチンまたはその誘導体である。いくつかの態様において、作用物質はアウリスタチンEまたはその誘導体である。いくつかの態様において、作用物質はモノメチルアウリスタチンE (MMAE)である。いくつかの態様において、作用物質はモノメチルアウリスタチンD (MMAD)である。いくつかの態様において、作用物質はメイタンシノイドまたはメイタンシノイド誘導体である。いくつかの態様において、作用物質はDM1またはDM4である。いくつかの態様において、作用物質はデュオカルマイシンまたはその誘導体である。いくつかの態様において、作用物質はカリケアマイシンまたはその誘導体である。いくつかの態様において、作用物質はピロロベンゾジアゼピンである。いくつかの態様において、作用物質はピロロベンゾジアゼピン二量体である。
使用できる酵素的に活性な毒素およびその断片は、ジフテリアA鎖、ジフテリア毒素の非結合活性断片、外毒素A鎖(緑膿菌(Pseudomonas aeruginosa)由来)、リシンA鎖、アブリンA鎖、モデシンA鎖、アルファ-サルシン、シナアブラギリ(Aleurites fordii)タンパク質、ジアンチンタンパク質、ヨウシュヤマゴボウ(Phytolaca americana)タンパク質(PAPI、PAPIIおよびPAP-S)、ツルレイシ(momordica charantia)阻害剤、クルシン、クロチン、サボンソウ(sapaonaria officinalis)阻害剤、ゲロニン、ミトゲリン、レストリクトシン、フェノマイシン、エノマイシン、ならびにトリコテセンを含む。放射性コンジュゲートされた抗体の産生には、種々の放射性核種が利用可能である。例としては、212Bi、131I、131In、90Y、および186Reが挙げられる。
いくつかの態様において、作用物質は毒素またはその断片である。いくつかの態様において、作用物質は微小管阻害剤である。いくつかの態様において、作用物質は核酸損傷剤である。いくつかの態様において、作用物質は、ドラスタチンまたはその誘導体、アウリスタチンまたはその誘導体、メイタンシノイドまたはその誘導体、デュオカルマイシンまたはその誘導体、カリケアマイシンまたはその誘導体、およびピロロベンゾジアゼピンまたはその誘導体からなる群より選択される。いくつかの態様において、作用物質はアウリスタチンEまたはその誘導体である。いくつかの態様において、作用物質はモノメチルアウリスタチンE (MMAE)である。いくつかの態様において、作用物質はモノメチルアウリスタチンD (MMAD)である。いくつかの態様において、作用物質は、DM1およびDM4からなる群より選択されるメイタンシノイドである。いくつかの態様において、作用物質はメイタンシノイドDM4である。いくつかの態様において、作用物質はデュオカルマイシンである。いくつかの態様において、作用物質は、リンカーを介してABにコンジュゲートされている。いくつかの態様において、作用物質がABにコンジュゲートされるのに用いられるリンカーは、SPDB部分、vc部分、またはPEG2-vc部分を含む。いくつかの態様において、ABにコンジュゲートされているリンカーおよび毒素は、SPDB-DM4部分、vc-MMAD部分、vc-MMAE部分、vc-デュオカルマイシン、またはPEG2-vc-MMAD部分を含む。いくつかの態様において、リンカーは切断可能なリンカーである。いくつかの態様において、リンカーは非切断可能リンカーである。いくつかの態様において、作用物質は検出可能な部分である。いくつかの態様において、検出可能な部分は診断用作用物質である。
いくつかの態様において、コンジュゲートされた抗体は、(a) 哺乳動物CD147に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片(AB)であって、(i) VH CDR1配列
Figure 2020511130
；VH CDR2配列
Figure 2020511130
；VH CDR3配列
AGTDY (SEQ ID NO:13)
；VL CDR1配列
Figure 2020511130
；VL CDR2配列
YSSNRYT (SEQ ID NO:16)
；およびVL CDR3配列
Figure 2020511130
、または(ii) SEQ ID NO:1〜4からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、およびSEQ ID NO:5〜9からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む該AB；(b) ABにコンジュゲートされた作用物質であって、アウリスタチンE、モノメチルアウリスタチンF (MMAF)、モノメチルアウリスタチンE (MMAE)、モノメチルアウリスタチンD (MMAD)、メイタンシノイドDM4、メイタンシノイドDM1、ピロロベンゾジアゼピン、ピロロベンゾジアゼピン二量体、およびデュオカルマイシンからなる群より選択される該作用物質を含むコンジュゲートされた抗体を含む。
本開示のCD147抗体および活性化可能抗体は、作用物質に対するコンジュゲーションの少なくとも1つの点を有するが、本明細書で提供される方法および組成物においては、すべてよりは少ない可能なコンジュゲーションの点が、作用物質に対するコンジュゲーションのために利用可能である。いくつかの態様において、1つまたは複数のコンジュゲーションの点は、ジスルフィド結合に関与する硫黄原子である。いくつかの態様において、1つまたは複数のコンジュゲーションの点は、鎖間ジスルフィド結合に関与する硫黄原子である。いくつかの態様において、1つまたは複数のコンジュゲーションの点は、鎖間スルフィド結合に関与する硫黄原子であるが、鎖内ジスルフィド結合に関与する硫黄原子ではない。いくつかの態様において、1つまたは複数のコンジュゲーションの点は、システインまたは硫黄原子を含有する他のアミノ酸残基の硫黄原子である。そのような残基は、抗体構造中に天然に存在し得、または、部位特異的変異誘発、化学変換、または非天然アミノ酸の誤取り込みによって抗体中に組み込むことができる。
AB中の1つまたは複数の鎖間ジスルフィド結合、およびMM中の1つまたは複数の鎖内ジスルフィド結合を有するCD147抗体/CD147活性化可能抗体と、遊離チオールと反応する薬物とのコンジュゲートを調製する方法もまた提供される。方法は、一般に、活性化可能抗体中の鎖間ジスルフィド結合を、例えばTCEPなどの還元剤で部分的に還元する工程；および、遊離チオールと反応する薬物を、部分的に還元された抗体/活性化可能抗体にコンジュゲートする工程を含む。本明細書において使用される際、部分的還元という用語は、act抗体/活性化可能抗体を還元剤と接触させ、すべてよりは少ないジスルフィド結合、例えば、すべてよりは少ない可能なコンジュゲーションの部位が還元される状況を指す。いくつかの態様において、すべての可能なコンジュゲーションの部位の99％、98％、97％、96％、95％、90％、85％、80％、75％、70％、65％、60％、55％、50％、45％、40％、35％、30％、25％、20％、15％、10％未満、または5％未満が還元される。
さらに他の態様において、作用物質、例えば薬物を還元してCD147抗体/CD147活性化可能抗体にコンジュゲートして、作用物質の配置において選択性を結果としてもたらす方法が提供される。方法は、一般に、CD147抗体/CD147活性化可能抗体のマスキング部分または他の非AB部分中のいずれのコンジュゲーション部位も還元されないように、CD147抗体/CD147活性化可能抗体を還元剤で部分的に還元する工程、および、作用物質をAB中の鎖間チオールにコンジュゲートする工程を含む。コンジュゲーション部位は、作用物質の望ましい配置を可能にして、コンジュゲーションを望ましい部位で起こさせるように選択される。還元剤は、例えばTCEPである。例えば、還元剤の抗体/活性化可能抗体に対する比、インキュベーションの長さ、インキュベーション中の温度、還元反応溶液のpHなどのような還元反応条件は、例えば、MMが、非切断状態において活性化可能抗体のABを効果的かつ効率的にマスクする能力を保持する、コンジュゲートされた抗体/活性化可能抗体を生じる条件下でコンジュゲートされた抗体/活性化可能抗体を生じる条件を特定することによって決定される。還元剤の抗体/活性化可能抗体に対する比は、抗体/活性化可能抗体に応じて変動することになる。いくつかの態様において、還元剤の抗体/活性化可能抗体に対する比は、約20：1〜1：1、約10：1〜1：1、約9：1〜1：1、約8：1〜1：1、約7：1〜1：1、約6：1〜1：1、約5：1〜1：1、約4：1〜1：1、約3：1〜1：1、約2：1〜1：1、約20：1〜1：1.5、約10：1〜1：1.5、約9：1〜1：1.5、約8：1〜1：1.5、約7：1〜1：1.5、約6：1〜1：1.5、約5：1〜1：1.5、約4：1〜1：1.5、約3：1〜1：1.5、約2：1〜1：1.5、約1.5：1〜1：1.5、または約1：1〜1：1.5の範囲であろう。いくつかの態様において、比は約5：1〜1：1の範囲である。いくつかの態様において、比は約5：1〜1.5：1の範囲である。いくつかの態様において、比は約4：1〜1：1の範囲である。いくつかの態様において、比は約4：1〜1.5：1の範囲である。いくつかの態様において、比は約8：1〜約1：1の範囲である。いくつかの態様において、比は約2.5：1〜1：1の範囲である。
いくつかの態様において、CD147は、最初にコンジュゲーションを受け、その後、CMおよびMMを含むようにさらに改変される（活性化可能抗体をもたらす）。いくつかの態様において、CD147活性化可能抗体は、コンジュゲートされている。
いくつかの態様において、活性化可能CD147抗体のAB中の鎖間ジスルフィド結合を還元し、作用物質、例えば薬物などのチオール含有作用物質を、結果として生じた鎖間チオールにコンジュゲートして作用物質をAB上に選択的に置く方法が提供される。方法は、一般に、ABを還元剤で部分的に還元して、活性化可能抗体中のすべての可能な鎖間チオールを形成させることなく、少なくとも2つの鎖間チオールを形成させる工程；および、部分的に還元されたABの鎖間チオールに作用物質をコンジュゲートする工程を含む。例えば、活性化可能抗体のABは、約37℃で約1時間、還元剤：活性化可能抗体の望ましい比で部分的に還元される。いくつかの態様において、還元剤の活性化可能抗体に対する比は、約20：1〜1：1、約10：1〜1：1、約9：1〜1：1、約8：1〜1：1、約7：1〜1：1、約6：1〜1：1、約5：1〜1：1、約4：1〜1：1、約3：1〜1：1、約2：1〜1：1、約20：1〜1：1.5、約10：1〜1：1.5、約9：1〜1：1.5、約8：1〜1：1.5、約7：1〜1：1.5、約6：1〜1：1.5、約5：1〜1：1.5、約4：1〜1：1.5、約3：1〜1：1.5、約2：1〜1：1.5、約1.5：1〜1：1.5、または約1：1〜1：1.5の範囲であろう。いくつかの態様において、比は約5：1〜1：1の範囲である。いくつかの態様において、比は約5：1〜1.5：1の範囲である。いくつかの態様において、比は約4：1〜1：1の範囲である。いくつかの態様において、比は約4：1〜1.5：1の範囲である。いくつかの態様において、比は約8：1〜約1：1の範囲である。いくつかの態様において、比は約2.5：1〜1：1の範囲である。
チオール含有試薬は、例えば、システインまたはN-アセチルシステインであることができる。還元剤は、例えばTCEPであることができる。いくつかの態様において、還元された活性化可能抗体は、コンジュゲーションの前に、例えば、カラムクロマトグラフィー、透析、または透析濾過を用いて精製することができる。あるいは、還元された抗体は、部分的還元の後、およびコンジュゲーションの前に精製されない。
本発明はまた、抗体/活性化可能抗体中の少なくとも1つの鎖間ジスルフィド結合が、抗体/活性化可能抗体中のいずれの鎖内ジスルフィド結合も妨害することなく還元剤で還元されている、部分的に還元された抗体/活性化可能抗体も提供し、該活性化可能抗体は、CD147に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片（AB）と、非切断状態においてCD147標的に対する活性化可能抗体のABの結合を阻害するマスキング部分（MM）と、ABにカップリングされた切断可能部分（CM）とを含み、該CMは、プロテアーゼに対する基質として機能するポリペプチドである。いくつかの態様において、MMは、CMを介してABにカップリングされている。いくつかの態様において、抗体/活性化可能抗体の1つまたは複数の鎖内ジスルフィド結合は、還元剤によって妨害されない。いくつかの態様において、抗体/活性化可能抗体内のMMの1つまたは複数の鎖内ジスルフィド結合は、還元剤によって妨害されない。いくつかの態様において、非切断状態では、活性化可能抗体は、N末端からC末端に向かって、以下の構造的配置：
MM-CM-ABまたはAB-CM-MM
を有する。いくつかの態様において、還元剤はTCEPである。
さらに他の態様において、定義された数および位置のリジンおよび/またはシステイン残基を有する活性化可能CD147抗体を提供することにより、作用物質、例えば薬物をCD147抗体/CD147活性化可能抗体へ還元かつコンジュゲートし、作用物質の配置の選択性をもたらす方法。いくつかの態様において、リジンおよび/またはシステイン残基の定義された数は、親抗体または活性化可能抗体のアミノ酸配列における対応する残基の数より多いかまたは少ない。いくつかの態様において、定義された数のリジンおよび/またはシステイン残基は、CD147抗体または活性化可能CD147抗体にコンジュゲートできる定義された数の作用物質同等物をもたらしうる。いくつかの態様において、定義された数のリジンおよび/またはシステイン残基は、部位特異的様式でCD147抗体または活性化可能CD147にコンジュゲートできる定義された数の作用物質同等物をもたらしうる。いくつかの態様において、修飾された活性化可能抗体は部位特異的様式で1つまたは複数の非天然アミノ酸により修飾され、したがっていくつかの態様において、作用物質のコンジュゲーションを非天然アミノ酸の部位のみに制限する。いくつかの態様において、定義された数および位置のリジンおよび/またはシステイン残基を有するCD147抗体または活性化可能CD147抗体は、活性化可能抗体のマスキング部分または他の非AB部分における任意のコンジュゲーション部位が還元されず、ABにおける鎖間チオールに作用物質をコンジュゲートするような本明細書において論じられる還元剤で部分的に還元することができる。
本開示はまた、活性化可能抗体中の少なくとも1つの鎖間ジスルフィド結合が、活性化可能抗体中のいずれの鎖内ジスルフィド結合も妨害することなく還元剤で還元されている、部分的に還元された活性化可能抗体も提供し、該活性化可能抗体は、標的、例えばCD147に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片（AB）と、非切断状態において標的に対する活性化可能抗体のABの結合を阻害するマスキング部分（MM）と、ABにカップリングされた切断可能部分（CM）とを含み、該CMは、少なくとも1つのプロテアーゼに対する基質として機能するポリペプチドである。いくつかの態様において、MMは、CMを介してABにカップリングされている。いくつかの態様において、活性化可能抗体の1つまたは複数の鎖内ジスルフィド結合は、還元剤によって妨害されない。いくつかの態様において、活性化可能抗体内のMMの1つまたは複数の鎖内ジスルフィド結合は、還元剤によって妨害されない。いくつかの態様において、非切断状態における活性化可能抗体は、N末端からC末端に向かって、以下の構造的配置：
MM-CM-ABまたはAB-CM-MM
を有する。いくつかの態様において、還元剤はTCEPである。
いくつかの態様において、作用物質は、マレイミドカプロイル-バリン-シトルリンリンカーまたはマレイミドPEG-バリン-シトルリンリンカーを用いてABに連結されている。いくつかの態様において、作用物質は、マレイミドカプロイル-バリン-シトルリンリンカーを用いてABに連結されている。いくつかの態様において、作用物質は、マレイミドPEG-バリン-シトルリンリンカーを用いてABに連結されている。いくつかの態様において、作用物質は、マレイミドPEG-バリン-シトルリン-パラ-アミノベンジルオキシカルボニルリンカーを用いてABに連結されたモノメチルアウリスタチンD (MMAD)であり、このリンカーペイロード構築物は本明細書において「vc-MMAD」といわれる。いくつかの態様において、作用物質は、マレイミドPEG-バリン-シトルリン-パラ-アミノベンジルオキシカルボニルリンカーを用いてABに連結されたモノメチルアウリスタチンE (MMAE)であり、このリンカーペイロード構築物は本明細書において「vc-MMAE」といわれる。いくつかの態様において、作用物質は、マレイミドPEG-バリン-シトルリンリンカーを用いてABに連結されている。いくつかの態様において、作用物質は、マレイミドビス-PEG-バリン-シトルリン-パラ-アミノベンジルオキシカルボニルリンカーを用いてABに連結されたモノメチルアウリスタチンD (MMAD)であり、このリンカーペイロード構築物は本明細書において「PEG2-vc-MMAD」といわれる。vc-MMAD、vc-MMAE、およびPEG2-vc-MMADの構造を以下に示す。
Figure 2020511130
本開示はまた、モノメチルアウリスタチンD (MMAD)ペイロードに連結された活性化可能抗体を含むコンジュゲートされた活性化可能抗体を提供し、ここで該活性化可能抗体は、標的に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片(AB)、非切断状態の活性化可能抗体のABの、標的に対する結合を阻害するマスキング部分(MM)、およびABにカップリングされた切断可能部分(CM)を含み、CMは少なくとも1つのMMPプロテアーゼの基質として機能するポリペプチドである。
いくつかの態様において、MMADがコンジュゲートされた活性化可能抗体は、ABに作用物質を付着させるためのいくつかの方法：(a) ABの炭水化物部分への付着、または(b) ABのスルフヒドリル基への付着、または(c) ABのアミノ基への付着、または(d) ABのカルボキシレート基への付着のいずれかを用いてコンジュゲートすることができる。
いくつかの態様において、MMADペイロードは、リンカーを介してABにコンジュゲートされている。いくつかの態様において、MMADペイロードは、リンカーを介してAB中のシステインにコンジュゲートされている。いくつかの態様において、MMADペイロードは、リンカーを介してAB中のリジンにコンジュゲートされている。いくつかの態様において、MMADペイロードは、本明細書において開示される残基のような、リンカーを介してABの別の残基にコンジュゲートされている。いくつかの態様において、リンカーはチオール含有リンカーである。いくつかの態様において、リンカーは切断可能リンカーである。いくつかの態様において、リンカーは非切断可能リンカーである。いくつかの態様において、リンカーは、表7および8に示されるリンカーからなる群より選択される。いくつかの態様において、活性化可能抗体およびMMADペイロードは、マレイミドカプロイル-バリン-シトルリンリンカーを介して連結されている。いくつかの態様において、活性化可能抗体およびMMADペイロードは、マレイミドPEG-バリン-シトルリンリンカーを介して連結されている。いくつかの態様において、活性化可能抗体およびMMADペイロードは、マレイミドカプロイル-バリン-シトルリン-パラ-アミノベンジルオキシカルボニルリンカーを介して連結されている。いくつかの態様において、活性化可能抗体およびMMADペイロードは、マレイミドPEG-バリン-シトルリン-パラ-アミノベンジルオキシカルボニルリンカーを介して連結されている。いくつかの態様において、MMADペイロードは、本明細書において開示される部分的還元およびコンジュゲーション技術を用いてABにコンジュゲートされている。
いくつかの態様において、本開示のリンカーのポリエチレングリコール(PEG)構成要素は、2個のエチレングリコール単量体、3個のエチレングリコール単量体、4個のエチレングリコール単量体、5個のエチレングリコール単量体、6個のエチレングリコール単量体、7個のエチレングリコール単量体、8個のエチレングリコール単量体、9個のエチレングリコール単量体、または少なくとも10個のエチレングリコール単量体から形成される。本開示のいくつかの態様において、PEG構成要素は分枝ポリマーである。本開示のいくつかの態様において、PEG構成要素は非分枝ポリマーである。いくつかの態様において、PEGポリマー構成要素は、アミノ基もしくはその誘導体、カルボキシル基もしくはその誘導体、またはアミノ基もしくはその誘導体とカルボキシル基もしくはその誘導体の両方で官能化される。
いくつかの態様において、本開示のリンカーのPEG構成要素は、アミノ-テトラ-エチレングリコール-カルボキシル基またはその誘導体である。いくつかの態様において、本開示のリンカーのPEG構成要素は、アミノ-トリ-エチレングリコール-カルボキシル基またはその誘導体である。いくつかの態様において、本開示のリンカーのPEG構成要素は、アミノ-ジ-エチレングリコール-カルボキシル基またはその誘導体である。いくつかの態様において、アミノ誘導体は、アミノ基と、それがコンジュゲートされるカルボキシル基との間のアミド結合の形成である。いくつかの態様において、カルボキシル誘導体は、カルボキシル基と、それがコンジュゲートされるアミノ基との間のアミド結合の形成である。いくつかの態様において、カルボキシル誘導体は、カルボキシル基と、それがコンジュゲートされるヒドロキシル基との間のエステル結合の形成である。
抗体および細胞毒性剤のコンジュゲートは、N-スクシンイミジル-3-(2-ピリジルジチオール)プロピオネート(SPDP)、イミノチオラン(IT)、イミドエステルの二官能性誘導体(ジメチルアジピミデートHCLのような)、活性エステル(スベリン酸ジスクシンイミジルのような)、アルデヒド(グルタルアルデヒドのような)、ビス-アジド化合物(ビス(p-アジドベンゾイル)ヘキサンジアミンのような)、ビス-ジアゾニウム誘導体(ビス-(p-ジアゾニウムベンゾイル)- エチレンジアミンのような)、ジイソシアネート(トリエン2,6-ジイソシアネートのような)、およびビス-活性フッ素化合物(1,5-ジフルオロ-2,4-ジニトロベンゼンのような)のような種々の二官能性タンパク質カップリング剤を用いて作製される。例えば、リシン免疫毒素は、Vitetta et al., Science 238：1098 (1987)に記述されているように調製することができる。炭素-14標識1-イソチオシアナトベンジル-3-メチルジエチレントリアミン五酢酸(MX-DTPA)は、抗体に対する放射性ヌクレオチドのコンジュゲーションのための例示的なキレート剤である。(WO94/11026参照)。
表6は、本明細書において記述される開示において利用できる例示的な医薬剤(pharmaceutical agent)のいくつかを列挙しているが、決して網羅的なリストであることを意味するものではない。
（表６）コンジュゲーションのための例示的な薬学的作用物質
Figure 2020511130
Figure 2020511130
Figure 2020511130
当業者は、多種多様の可能な部分を、本開示の結果として生じた抗体にカップリングできることを認識しているであろう。（例えば、その全内容が参照により本明細書に組み入れられる"Conjugate Vaccines", Contributions to Microbiology and Immunology, J.M. Cruse and R. E. Lewis, Jr (eds), Carger Press, New York, (1989)を参照されたい。）
カップリングは、抗体および他の部分がそのそれぞれの活性を保持する限り、2つの分子を結合することになる任意の化学反応によって達成することができる。この連結は、多くの化学的機構、例として、共有結合、親和性結合、インターカレーション、配位結合、および複合体化を含むことができる。しかし、いくつかの態様において、結合は共有結合である。共有結合は、既存の側鎖の直接縮合、または外部架橋分子の組み込みのいずれかによって成し遂げることができる。多くの二価または多価の連結剤が、本開示の抗体などのタンパク質分子を他の分子にカップリングするのに有用である。例えば、代表的なカップリング剤には、チオエステル類、カルボジイミド類、スクシンイミドエステル類、ジイソシアナート類、グルタルアルデヒド、ジアゾベンゼン類、およびヘキサメチレンジアミン類などの有機化合物が含まれることができる。この一覧は、当技術分野において公知である種々のクラスのカップリング剤を網羅するようには意図されないが、むしろ、より一般的なカップリング剤を例示する。（Killen and Lindstrom, Jour. Immun. 133:1335-2549 (1984)；Jansen et al., Immunological Reviews 62:185-216 (1982)）；およびVitetta et al., Science 238:1098 (1987)を参照されたい。）
いくつかの態様において、本明細書で提供される組成物および方法に加えて、活性化可能抗体はまた、活性化可能抗体配列に挿入されるかまたは別の方法で含まれる修飾アミノ酸配列を通して、部位特異的コンジュゲーションのために修飾することもできる。これらの修飾アミノ酸配列は、コンジュゲートされた活性化可能抗体内で、コンジュゲートされた作用物質の配置および／または投与量の制御を可能にするように設計される。例えば、活性化可能抗体は、反応性チオール基を提供して、タンパク質のフォールディングおよびアセンブリに負の影響も及ぼさず、抗原結合も変更しない軽鎖および重鎖上の位置で、システイン置換を含むように作製することができる。いくつかの態様において、活性化可能抗体は、コンジュゲーションに適している部位を提供するために、活性化可能抗体内に1つまたは複数の非天然アミノ酸残基を含むか、または別の方法で導入するように作製することができる。いくつかの態様において、活性化可能抗体は、活性化可能抗体配列内に酵素学的に活性化可能なペプチド配列を含むか、または別の方法で導入するように作製することができる。
好適なリンカーは、文献に記載されている。（例えば、MBS（M-マレイミドベンゾイル-N-ヒドロキシスクシンイミドエステルの使用を記載している、Ramakrishnan, S. et al., Cancer Res. 44:201-208 (1984）を参照されたい。）また、オリゴペプチドリンカーとして抗体にカップリングされるハロゲン化アセチルヒドラジド誘導体の使用を記載している、米国特許第5,030,719号も参照されたい。いくつかの態様において、好適なリンカーには、（i）EDC（1-エチル-3-(3-ジメチルアミノ-プロピル)カルボジイミドヒドロクロリド）；（ii）SMPT（4-スクシンイミジルオキシカルボニル-α-メチル-α-(2-ピリジル-ジチオ)-トルエン）（Pierce Chem. Co., カタログ21558G）；（iii）SPDP（スクシンイミジル-6[3-(2-ピリジルジチオ)プロピオンアミド]ヘキサノアート）（Pierce Chem. Co., カタログ番号21651G）；（iv）スルホ-LC-SPDP（スルホスクシンイミジル6[3-(2-ピリジルジチオ)-プロピアンアミド]ヘキサノアート）（Pierce Chem. Co. カタログ番号2165-G）；および（v）EDCにコンジュゲートされたスルホ-NHS（N-ヒドロキシスルホ-スクシンイミド：Pierce Chem. Co., カタログ番号24510）が含まれる。追加的なリンカーには、SMCC((スクシンイミジル 4-(N-マレイミドメチル)シクロヘキサン-1-カルボキシレート)、スルホ-SMCC(スクシンイミジル 4-(N-マレイミドメチル)シクロヘキサン-1-カルボキシレート)、SPDB(N-スクシンイミジル-4-(2-ピリジルジチオ)ブタノエート)、またはスルホ-SPDB(N-スクシンイミジル-4-(2-ピリジルジチオ)-2-スルホ ブタノエート)が含まれるが、それらに限定されない。
上記のリンカーは、様々な属性を有する構成要素を含有し、したがって、異なる物理化学的特性を有するコンジュゲートをもたらす。例えば、アルキルカルボキシラートのスルホ-NHSエステルは、芳香族カルボキシラートのスルホ-NHSエステルよりも安定である。NHS-エステルを含有するリンカーは、スルホ-NHSエステルよりも溶解度が低い。さらに、リンカーSMPTは、立体的に妨げられたジスルフィド結合を含有し、安定性が増大したコンジュゲートを形成することができる。ジスルフィド連結は、一般に、インビトロで切断されるために他の連結よりも安定性が低く、利用可能なコンジュゲートがより少ない状態を結果としてもたらす。スルホ-NHSは、とりわけ、カルボジイミドカップリングの安定性を増強することができる。カルボジイミドカップリング（EDCなど）は、スルホ-NHSと共に使用される時、加水分解に対してカルボジイミドカップリング反応単独よりも耐性であるエステルを形成する。
いくつかの態様において、リンカーは切断可能である。いくつかの態様において、リンカーは切断不可能である。いくつかの態様において、2つ以上のリンカーが存在する。2つ以上のリンカーはすべて同じであり、すなわち、切断可能もしくは切断不可能であるか、または、2つ以上のリンカーは異なり、すなわち、少なくとも1つは切断可能および少なくとも1つは切断不可能である。
本開示は、作用物質をABに付加するためのいくつかの方法：（a）ABの炭水化物部分への付加、または（b）ABのスルフヒドリル基への付加、または（c）ABのアミノ基への付加、または（d）ABのカルボキシラート基への付加を利用する。本開示によると、ABは、少なくとも2つの反応基、ABと反応する1つおよび作用物質と反応する1つを有する中間体リンカーを通して、作用物質に共有結合で付加することができる。任意の適合性有機化合物を含み得るリンカーは、AB（または作用物質）との反応がABの反応性および選択性に有害な影響を及ぼさないように選択することができる。さらに、リンカーの作用物質への付加は、作用物質の活性を破壊しえない。酸化された抗体または酸化された抗体断片との反応に適しているリンカーには、一級アミン、二級アミン、ヒドラジン、ヒドラジド、ヒドロキシルアミン、フェニルヒドラジン、セミカルバジド、およびチオセミカルバジド基からなる群より選択されるアミンを含有するものが含まれる。そのような反応性官能基は、リンカーの構造の一部として存在し得、または、そのような基を含有しないリンカーの好適な化学修飾によって導入することができる。
本開示によると、還元されたABへの付加に適しているリンカーには、還元された抗体または断片のスルフヒドリル基と反応することができる、ある特定の反応基を有するものが含まれる。そのような反応基には、反応性ハロアルキル基（例えば、ハロアセチル基を含む）、p-水銀安息香酸基、およびマイケル型付加反応が可能である基（例えば、マレイミド類およびMitra and Lawton, 1979, J. Amer, Chem. Soc. 101：3097-3110により記載されているタイプの基を含む）が含まれるが、それらに限定されない。
本開示によると、酸化も還元もされていないAbへの付加に適しているリンカーには、Ab中の修飾されていないリジン残基に存在する一級アミノ基と反応することができる、ある特定の官能基を有するものが含まれる。そのような反応基には、NHSカルボン酸または炭酸エステル類、スルホ-NHSカルボン酸または炭酸エステル類、4-ニトロフェニルカルボン酸または炭酸エステル類、ペンタフルオロフェニルカルボン酸または炭酸エステル類、アシルイミダゾール類、イソシアナート類、およびイソチオシアナート類を含まれるが、それらに限定されない。
本開示によると、酸化も還元もされていないAbへの付加に適しているリンカーには、好適な試薬で活性化されている、Ab中のアスパラギン酸残基またはグルタミン酸残基に存在するカルボン酸基と反応することができる、ある特定の官能基を有するものが含まれる。好適な活性化試薬には、NHSまたはスルホ-NHSが加えられているかまたは加えられていないEDC、および、カルボキサミド形成に利用される他の脱水剤が含まれる。これらの例において、好適なリンカー中に存在する官能基には、一級および二級アミン類、ヒドラジン類、ヒドロキシルアミン類、ならびにヒドラジド類が含まれることになる。
作用物質は、リンカーがABに付加される前または後に、リンカーに付加することができる。ある特定の適用において、リンカーが会合した作用物質から遊離しているAB-リンカー中間体を最初に生じることが望ましい場合がある。特定の適用に応じて、特異的な作用物質を、次いで、リンカーに共有結合で付加してもよい。いくつかの態様において、ABは、MM、CM、および会合したリンカーに最初に付加され、次いで、コンジュゲーションの目的でリンカーに付加される。
分岐型リンカー：具体的な態様において、作用物質の付加のための複数部位を有する分岐型リンカーが利用される。複数部位リンカーについては、ABへの単一の共有結合性付加が、数多くの部位で作用物質に結合することができるAB-リンカー中間体を結果としてもたらすことになる。部位は、アルデヒド基もしくはスルフヒドリル基、または作用物質が付加することができる任意の化学的部位であることができる。
いくつかの態様において、より高い比活性（または作用物質のABに対するより高い比）は、AB上の複数の部位での単一部位リンカーの付加によって成し遂げることができる。この複数の部位は、2つの方法のいずれかによってAB中に導入することができる。第1に、同じAB中に複数のアルデヒド基および／またはスルフヒドリル基を生成してもよい。第2に、ABのアルデヒドまたはスルフヒドリルに、その後のリンカーへの付加のために複数の官能部位を有する「分岐型リンカー」を付加してもよい。分岐型リンカーまたは複数部位リンカーの官能部位は、アルデヒド基もしくはスルフヒドリル基であることができるか、または、リンカーを付加することができる任意の化学的部位であることができる。さらにより高い比活性は、これらの2つのアプローチを組み合わせること、すなわち、AB上のいくつかの部位で複数部位リンカーを付加することによって得ることができる。
切断可能なリンカー：u-プラスミノーゲンアクチベーター、組織プラスミノーゲンアクチベーター、トリプシン、プラスミン、またはタンパク質分解活性を有する別の酵素などであるがそれらに限定されない、補体系の酵素による切断を受けやすいペプチドリンカーを、本開示の1つの態様において使用することができる。本開示の1つの方法によると、作用物質は、補体による切断を受けやすいリンカーを介して付加される。抗体は、補体を活性化することができるクラスから選択される。したがって、抗体-作用物質コンジュゲートは、補体カスケードを活性化し、標的部位で作用物質を放出する。本開示の別の方法によると、作用物質は、u-プラスミノーゲンアクチベーター、組織プラスミノーゲンアクチベーター、プラスミン、またはトリプシンなどのタンパク質分解活性を有する酵素による切断を受けやすいリンカーを介して付加される。これらの切断可能なリンカーは、細胞外毒素、例えば非限定的な例として表6に示される細胞外毒素のいずれかを含むコンジュゲートされた活性化可能抗体において有用である。
切断可能なリンカー配列の非限定的な例を、表7において提供する。
（表７）コンジュゲーションのための例示的なリンカー配列
Figure 2020511130
加えて、作用物質を、ジスルフィド結合（例えば、システイン分子上のジスルフィド結合）を介してABに付加することができる。多くの腫瘍は、高レベルのグルタチオン（還元剤）を天然に放出するため、これは、ジスルフィド結合を還元して、送達の部位での作用物質のその後の放出を伴うことができる。いくつかの態様において、CMを修飾するであろう還元剤はまた、コンジュゲートされた活性化可能抗体のリンカーも修飾するであろう。
スペーサーおよび切断可能要素：いくつかの態様において、活性化可能抗体の作用物質とABとの間の間隔を最適化するような方式で、リンカーを構築することが必要であり得る。これは、以下の一般構造のリンカーの使用によって達成することができる：
W-(CH2)n-Q
式中、
Wは--NH--CH2--または--CH2--のいずれかであり；
Qはアミノ酸、ペプチドであり；かつ
nは0〜20の整数である。
いくつかの態様において、リンカーは、スペーサー要素および切断可能要素を含みうる。スペーサー要素は、切断可能要素が切断を担う酵素によりアクセス可能であるように、切断可能要素をABのコアから離れて位置づけるために働く。上記の分岐型リンカーのある特定のものは、スペーサー要素として働きうる。
この議論を通して、リンカーの作用物質への（またはスペーサー要素の切断可能要素への、または切断可能要素の作用物質への）付加は、特定の様式の付加または反応である必要はないことが理解されるべきである。好適な安定性および生物学的適合性の産物を提供する任意の反応が、受け入れられる。
血清補体およびリンカーの選択：本開示の1つの方法によると、作用物質の放出が望ましい時、補体を活性化することができるクラスの抗体であるABが使用される。結果として生じたコンジュゲートは、抗原を結合する能力、および補体カスケードを活性化する能力の両方を保持する。したがって、本開示のこの態様によると、作用物質は、切断可能なリンカーまたは切断可能要素の1つの末端に接合され、リンカー基のもう1つの末端は、AB上の特定の部位に付加される。例えば、作用物質がヒドロキシ基またはアミノ基を有する場合は、ペプチド、アミノ酸、または他の適するように選択されたリンカーのカルボキシ末端に、それぞれ、エステル結合またはアミド結合を介して付加されうる。例えば、そのような作用物質は、カルボジイミド反応を介してリンカーペプチドに付加されうる。作用物質が、リンカーへの付加に干渉するであろう官能基を含有する場合は、これらの干渉する官能基を、付加の前に遮断し、ひとたび産物コンジュゲートまたは中間体が作製されたら脱遮断することができる。リンカーの反対の末端またはアミノ末端を、次いで、直接、または、補体を活性化することができるABに対する結合のためのさらなる修飾後のいずれかに使用する。
リンカー（またはリンカーのスペーサー要素）は、任意の望ましい長さであることができ、その1つの末端は、活性化可能抗体のAB上の特定の部位に共有結合で付加させることができる。リンカーまたはスペーサー要素のもう1つの末端は、アミノ酸またはペプチドリンカーに付加されうる。
したがって、これらのコンジュゲートが補体の存在下で抗原に結合する時、作用物質をリンカーに付加するアミド結合またはエステル結合が切断され、作用物質のその活性型での放出を結果としてもたらすことになる。これらのコンジュゲートは、対象に投与される時、標的部位での作用物質の送達および放出を達成することになり、表6に提示されるがそれらに限定されない、薬学的作用物質、抗生物質、代謝拮抗物質、抗増殖作用物質などのインビボ送達に特に有効である。
補体活性化を伴わない放出のためのリンカー：ターゲティングされた送達のさらに別の適用において、補体カスケードの活性化は最終的に標的細胞を溶解することになるため、補体活性化を伴わない作用物質の送達が望ましい。そのため、このアプローチは、標的細胞を殺傷することなく作用物質の送達および放出が達成されるべきである場合に有用である。ホルモン、酵素、コルチコステロイド、神経伝達物質、遺伝子または酵素などの細胞媒介物質の標的細胞への送達が望ましい時、そのようなことが目標である。これらのコンジュゲートは、血清プロテアーゼによる切断を少々受けやすいリンカーを介して、補体を活性化することができないABに作用物質を付加することによって調製されうる。このコンジュゲートが個体に投与される時、作用物質の切断はゆっくり起こることになるが、抗原-抗体複合体は急速に形成し、したがって標的部位での化合物の放出を結果としてもたらすことになる。
生化学的クロスリンカー：いくつかの態様において、活性化可能抗体は、ある特定の生化学的クロスリンカーを用いて1つまたは複数の治療用作用物質にコンジュゲートされうる。架橋試薬は、2つの異なる分子の官能基を結びつける分子架橋を形成する。2つの異なるタンパク質を段階的様式で連結するために、望ましくないホモポリマー形成を排除するヘテロ二官能性クロスリンカーを使用することができる。
リソソームプロテアーゼによって切断可能であるペプチジルリンカー、例えば、Val-Cit、Val-Ala、または他のジペプチドもまた有用である。加えて、リソソームの低pH環境で切断可能である酸に不安定なリンカー、例えば、ビスシアリルエーテルが使用されうる。他の好適なリンカーには、カテプシンに不安定な基質、特に酸性pHで最適な機能を示すものが含まれる。
例示的なヘテロ二官能性クロスリンカーを、表8に参照として載せる。
（表８）例示的なヘテロ二官能性クロスリンカー
Figure 2020511130
切断不可能なリンカーまたは直接付加：本開示のいくつかの態様において、コンジュゲートは、作用物質が標的に送達されるが放出されないように設計されうる。これは、直接または切断不可能なリンカーを介してのいずれかで、作用物質をABに付加することによって達成することができる。
これらの切断不可能なリンカーには、アミノ酸、ペプチド、D-アミノ酸、または、本明細書に記載される方法によるABへの付加においてその後利用することができる官能基を含むように改変されうる他の有機化合物が含まれうる。そのような有機リンカーについての一般式は、
W-(CH2)n-Q
であることができ、
式中、
Wは--NH--CH2--または--CH2--のいずれかであり；
Qはアミノ酸、ペプチドであり；かつ
nは0〜20の整数である。
切断不可能なコンジュゲート：いくつかの態様において、化合物は、補体を活性化しないABに付加されうる。補体活性化ができないABを使用する時、この付加は、活性化された補体による切断を受けやすいリンカーを用いて、または、活性化された補体による切断を受けやすくないリンカーを用いて達成することができる。
本明細書において開示される抗体はまた、イムノリポソームとして製剤化することもできる。抗体を含有するリポソームは、Epstein et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 82：3688 (1985)；Hwang et al., Proc. Natl Acad. Sci. USA, 77：4030 (1980)；ならびに米国特許第4,485,045号および第4,544,545号に記載されているものなどの、当技術分野において公知である方法によって調製される。増強された循環時間を有するリポソームは、米国特許第5,013,556号において開示されている。
特に有用なリポソームは、ホスファチジルコリン、コレステロール、およびPEG誘導体化ホスファチジルエタノールアミン（PEG-PE）を含む脂質組成で、逆相蒸発法によって生成することができる。リポソームは、望ましい直径を有するリポソームを生じるように規定された孔サイズのフィルターを通して押し出し成形される。本開示の抗体のFab'断片は、ジスルフィド相互交換反応を介して、Martin et al., J. Biol. Chem., 257：286-288 (1982)に記載されているように、リポソームにコンジュゲートすることができる。
CD147抗体薬物コンジュゲートおよびCD147活性化可能抗体薬物コンジュゲート
いくつかの態様において、抗体薬物コンジュゲート(ADC)および活性化可能抗体薬物コンジュゲート(AADC)は、表9の所与の列における軽鎖配列もしくは軽鎖可変ドメイン配列、および重鎖配列もしくは重鎖可変ドメイン配列、リンカー、ならびに毒素の組み合わせ、または表9の軽鎖配列もしくは軽鎖可変ドメイン配列、および重鎖配列もしくは重鎖可変ドメイン配列、リンカー、ならびに毒素の任意の組み合わせを含む1つまたは複数のポリペプチドを含むことができる。例えば、組み合わせ番号1は、SEQ ID NO:1の重鎖、SEQ ID NO:5の軽鎖、MMAD毒素にコンジュゲートされたvcリンカーを含む。
（表９）CD147 ADCおよびCD147活性化可能ADCの組み合わせ
Figure 2020511130
Figure 2020511130
Figure 2020511130
Figure 2020511130
Figure 2020511130
本開示の抗体薬物コンジュゲート(ADC)または本開示の活性化可能抗体薬物コンジュゲート(AADC)は、表9の所与の列に列挙されたアミノ酸配列、リンカー、および毒素の組み合わせを含む1つまたは複数のポリペプチドを含みうる。それゆえ、所与の列に列挙されたまたは特定の組み合わせとして提供されたアミノ酸配列、リンカー、および毒素の組み合わせを含む、本開示の活性化可能抗体薬物コンジュゲート(ADC)または本開示の活性化可能抗体薬物コンジュゲート(AADC)が本明細書において記述される。例えば、本開示の活性化可能抗体薬物コンジュゲートは組み合わせ番号20のアミノ酸配列を含んでもよく、これにはSEQ ID NO:19のアミノ酸配列を含む重鎖、SEQ ID NO:262のアミノ酸配列を含む軽鎖、およびspdb-DM4リンカー-毒素が含まれる。本明細書において開示および記述されるAADCの別の例では、本開示の活性化可能抗体薬物コンジュゲートは組み合わせ番号70のアミノ酸配列を含んでもよく、これにはSEQ ID NO:19のアミノ酸配列を含む重鎖、SEQ ID NO:261のアミノ酸配列を含む軽鎖、およびspdb-DM4リンカー-毒素が含まれる。
重鎖および軽鎖可変領域を列挙した表9における組み合わせのいずれかをヒト免疫グロブリン定常領域と組み合わせて、IgG1、IgG2、IgG4を含む完全ヒトIgGをもたらすこともでき、または変異型定常領域と組み合わせて、IgG1 N297A、IgG1 N297Q、もしくはIgG4 S228Pのような改変された機能を有するヒトIgGをもたらすこともできる。表9に記述されている組み合わせは、任意の所与の列に示される特定の組み合わせに制限されず、したがって表9の縦列2からの任意の重鎖配列または重鎖可変領域配列を、表9の縦列3からの任意の軽鎖配列または軽鎖可変領域配列と組み合わせて、縦列4からの任意のリンカーと組み合わせて、縦列5からの任意の毒素と組み合わせて含むことができる。縦列2に列挙された重鎖配列または重鎖可変領域配列に加えて、本明細書において開示される任意の重鎖配列または重鎖可変領域配列を組み合わせて用いることができる。縦列3に列挙された軽鎖配列または軽鎖可変領域配列に加えて、本明細書において開示される任意の軽鎖配列または軽鎖可変領域配列を組み合わせて用いることができる。縦列4に列挙されたリンカーに加えて、本明細書において開示される任意のリンカーを組み合わせて用いることができる。縦列5に列挙された毒素に加えて、本明細書において開示される任意の毒素を組み合わせて用いることができる。
多重特異性抗体および活性化可能抗体
いくつかの態様において、活性化可能CD147抗体および/またはコンジュゲートされた活性化可能なCD147抗体は単一特異性である。いくつかの態様において、活性化可能CD147抗体および/またはコンジュゲートされた活性化可能CD147抗体は多重特異性であり、例えば非限定的な例として、二重特異性または三機能性である。
いくつかの態様において、活性化可能CD147抗体および/またはコンジュゲートされた活性化可能CD147抗体は、プロ二重特異性T細胞エンゲージャー(pro-Bispecific T Cell Engager：BITE)分子の一部として処方される。いくつかの態様において、活性化可能CD147抗体および/またはコンジュゲートされた活性化可能CD147抗体は、プロキメラ抗原受容体(CAR)によって改変されたT細胞または他の操作された受容体の一部として処方される。
したがって、本開示はまた、多重特異性CD147抗体も提供する。本明細書において提供される多重特異性抗体は、CD147および少なくとも1つまたは複数の異なる抗原またはエピトープを認識する多重特異性抗体である。
本開示はまた、多重特異性CD147活性化可能抗体を提供する。本明細書において提供される多重特異性活性化可能抗体は、CD147および少なくとも1つまたは複数の異なる抗原またはエピトープを認識し、かつ多重特異性抗体の少なくとも1つの抗原結合ドメインまたはエピトープ結合ドメインに連結された少なくとも1つのマスキング部分(MM)を含む多重特異性抗体であり、MMのカップリングによって、抗原結合ドメインまたはエピトープ結合ドメインのその標的に結合する能力が低減される。いくつかの態様において、MMは、少なくとも1つのプロテアーゼの基質として機能する切断可能部分(CM)を介して、多重特異性抗体の抗原結合ドメインまたはエピトープ結合ドメインにカップリングされている。本明細書において提供される活性化可能な多重特異性抗体は、循環血中で安定であり、意図された治療部位および/または診断部位で活性化されるが、しかし正常な、すなわち健常な組織では活性化されず、活性化されると、対応する非修飾多重特異性抗体に少なくとも匹敵する標的への結合を示す。
いくつかの態様において、活性化可能抗体またはその抗原結合断片は多重特異性活性化可能抗体またはその抗原結合断片に組み入れられ、多重特異性活性化可能抗体の少なくとも1つのアームはCD147に特異的に結合する。いくつかの態様において、活性化可能抗体またはその抗原結合断片は二重特異性抗体またはその抗原結合断片に組み入れられ、二重特異性抗体またはその抗原結合断片の少なくとも1つのアームはCD147に特異的に結合する。
いくつかの態様において、抗体またはその抗原結合断片は多重特異性抗体またはその抗原結合断片に組み入れられ、多重特異性抗体またはその抗原結合断片の少なくとも1つのアームはCD147に特異的に結合する。いくつかの態様において、抗体またはその抗原結合断片は二重特異性抗体またはその抗原結合断片に組み入れられ、二重特異性活性化可能抗体の少なくとも1つのアームはCD147に特異的に結合する。
いくつかの態様において、多重特異性抗体またはその抗原結合断片、例えば、二重特異性抗体またはその抗原結合断片の少なくとも1つのアームは、SEQ ID NO:1〜4からなる群より選択される重鎖可変領域アミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、多重特異性抗体またはその抗原結合断片、例えば、二重特異性抗体またはその抗原結合断片の少なくとも1つのアームは、SEQ ID NO:1〜3からなる群より選択される重鎖可変領域アミノ酸配列を含む。
いくつかの態様において、多重特異性抗体またはその抗原結合断片、例えば、二重特異性抗体またはその抗原結合断片の少なくとも1つのアームは、SEQ ID NO:5〜9からなる群より選択される軽鎖可変領域アミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、多重特異性抗体またはその抗原結合断片、例えば、二重特異性抗体またはその抗原結合断片の少なくとも1つのアームは、SEQ ID NO:5〜8からなる群より選択される軽鎖可変領域アミノ酸配列を含む。
いくつかの態様において、多重特異性抗体またはその抗原結合断片、例えば、二重特異性抗体またはその抗原結合断片の少なくとも1つのアームは、SEQ ID NO:1〜4からなる群より選択される重鎖可変領域アミノ酸配列、およびSEQ ID NO:5〜9からなる群より選択される軽鎖可変領域アミノ酸配列を含む。
いくつかの態様において、多重特異性抗体またはその抗原結合断片、例えば、二重特異性抗体またはその抗原結合断片の少なくとも1つのアームは、SEQ ID NO:1〜3からなる群より選択される重鎖可変領域アミノ酸配列、およびSEQ ID NO:5〜8からなる群より選択される軽鎖可変領域アミノ酸配列を含む。
いくつかの態様において、多重特異性抗体またはその抗原結合断片、例えば、二重特異性抗体またはその抗原結合断片の少なくとも1つのアームは、SEQ ID NO:1〜4からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である重鎖可変領域アミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、多重特異性抗体またはその抗原結合断片、例えば、二重特異性抗体またはその抗原結合断片の少なくとも1つのアームは、SEQ ID NO:1〜3からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である重鎖可変領域アミノ酸配列を含む。
いくつかの態様において、多重特異性抗体またはその抗原結合断片、例えば、二重特異性抗体またはその抗原結合断片の少なくとも1つのアームは、SEQ ID NO:5〜9からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である軽鎖可変領域アミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、多重特異性抗体またはその抗原結合断片、例えば、二重特異性抗体またはその抗原結合断片の少なくとも1つのアームは、SEQ ID NO:5〜8からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である軽鎖可変領域アミノ酸配列を含む。
いくつかの態様において、多重特異性抗体またはその抗原結合断片、例えば、二重特異性抗体またはその抗原結合断片の少なくとも1つのアームは、SEQ ID NO:1〜4からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である重鎖可変領域アミノ酸配列、およびSEQ ID NO:5〜9からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である軽鎖可変領域アミノ酸配列を含む。
いくつかの態様において、多重特異性抗体またはその抗原結合断片、例えば、二重特異性抗体またはその抗原結合断片の少なくとも1つのアームは、SEQ ID NO:1〜3からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である重鎖可変領域アミノ酸配列、およびSEQ ID NO:5〜8からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である軽鎖可変領域アミノ酸配列を含む。
いくつかの態様において、多重特異性抗体またはその抗原結合断片、例えば、二重特異性抗体またはその抗原結合断片の少なくとも1つのアームは、可変重鎖相補性決定領域1 (VH CDR1, 本明細書においてCDRH1ともいわれる)配列、可変重鎖相補性決定領域2 (VH CDR2, 本明細書においてCDRH2ともいわれる)配列、可変重鎖相補性決定領域3 (VH CDR3, 本明細書においてCDRH3ともいわれる)配列、可変軽鎖相補性決定領域1 (VL CDR1, 本明細書においてCDRL1ともいわれる)配列、可変軽鎖相補性決定領域2 (VL CDR2, 本明細書においてCDRL2ともいわれる)配列および可変軽鎖相補性決定領域3 (VL CDR3, 本明細書においてCDRL3ともいわれる)配列の組み合わせを含み、ここで少なくとも1つの相補性決定領域(CDR)配列が、アミノ酸配列
Figure 2020511130
を含むVH CDR1配列；アミノ酸配
Figure 2020511130
を含むVH CDR2配列；アミノ酸配
AGTDY (SEQ ID NO:13)
を含むVH CDR3配列；アミノ酸配列
Figure 2020511130
を含むVL CDR1配列；アミノ酸配
YSSNRYT (SEQ ID NO:16)
を含むVL CDR2配列；およびアミノ酸配
Figure 2020511130
を含むVL CDR3配列からなる群より選択される。
いくつかの態様において、多重特異性抗体またはその抗原結合断片、例えば、二重特異性抗体またはその抗原結合断片の少なくとも1つのアームは、VH CDR1配列、VH CDR2配列、VH CDR3配列、VL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせを含み、ここで少なくとも1つのCDR配列が、アミノ酸配列
Figure 2020511130
を含むVH CDR1配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含むVH CDR1配列；アミノ酸配列
Figure 2020511130
を含むVH CDR2配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含むVH CDR2配列；アミノ酸配列
AGTDY (SEQ ID NO:13)
を含むVH CDR3配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含むVH CDR3配列；アミノ酸配列
Figure 2020511130
を含むVL CDR1配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含むVL CDR1配列；アミノ酸配列
YSSNRYT (SEQ ID NO:16)
を含むVL CDR2配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含むVL CDR2配列；およびアミノ酸配列
Figure 2020511130
を含むVL CDR3配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含むVL CDR3配列からなる群より選択される。
いくつかの態様において、多重特異性抗体またはその抗原結合断片、例えば、二重特異性抗体またはその抗原結合断片の少なくとも1つのアームは、VH CDR1配列、VH CDR2配列、VH CDR3配列、VL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせを含み、ここでVH CDR1配列がアミノ酸配列
Figure 2020511130
を含み；VH CDR2配列がアミノ酸配列
Figure 2020511130
を含み；VH CDR3配列がアミノ酸配列
AGTDY (SEQ ID NO:13)
を含み；VL CDR1配列がアミノ酸配列
Figure 2020511130
を含み；VL CDR2配列がアミノ酸配列
YSSNRYT (SEQ ID NO:16)
を含み；およびVL CDR3配列がアミノ酸配列
Figure 2020511130
を含む。
いくつかの態様において、多重特異性抗体またはその抗原結合断片、例えば、二重特異性抗体またはその抗原結合断片の少なくとも1つのアームは、VH CDR1配列、VH CDR2配列、VH CDR3配列、VL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせを含み、ここでVH CDR1配列が、アミノ酸配列
Figure 2020511130
と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含み；VH CDR2配列が、アミノ酸配列
Figure 2020511130
と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含み；VH CDR3配列が、アミノ酸配列
AGTDY (SEQ ID NO:13)
と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含み；VL CDR1配列が、アミノ酸配列
Figure 2020511130
と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含み；VL CDR2配列が、アミノ酸配列
YSSNRYT (SEQ ID NO:16)
と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含み；および
VL CDR3配列が、アミノ酸配列
Figure 2020511130
と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含む。
いくつかの態様において、多重特異性抗体またはその抗原結合断片、例えば、二重特異性抗体またはその抗原結合断片の少なくとも1つのアームは、表1に示される重鎖アミノ酸配列または重鎖可変領域アミノ酸配列を含むか、またはそれに由来する重鎖または重鎖可変領域を含む。いくつかの態様において、多重特異性抗体またはその抗原結合断片、例えば、二重特異性抗体またはその抗原結合断片の少なくとも1つのアームは、表1に示される軽鎖アミノ酸配列または軽鎖可変領域アミノ酸配列を含むか、またはそれに由来する軽鎖または軽鎖可変領域を含む。いくつかの態様において、多重特異性抗体またはその抗原結合断片、例えば、二重特異性抗体またはその抗原結合断片の少なくとも1つのアームは、表1に示される重鎖アミノ酸配列または重鎖可変領域アミノ酸配列を含むか、またはそれに由来する重鎖または重鎖可変領域アミノ酸配列および表1に示される軽鎖アミノ酸配列または軽鎖可変領域アミノ酸配列を含むか、またはそれに由来する軽鎖または軽鎖可変領域アミノ酸配列を含む。
いくつかの態様において、多重特異性抗体またはその抗原結合断片、例えば、二重特異性抗体またはその抗原結合断片の少なくとも1つのアームは、表1に示される重鎖可変領域配列からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である重鎖可変領域アミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、多重特異性抗体またはその抗原結合断片、例えば、二重特異性抗体またはその抗原結合断片の少なくとも1つのアームは、表1に示される軽鎖可変領域配列からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、多重特異性抗体またはその抗原結合断片、例えば、二重特異性抗体またはその抗原結合断片の少なくとも1つのアームは、表1に示される重鎖可変領域配列からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一であるアミノ酸配列および表1に示される軽鎖可変領域配列からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である軽鎖可変領域アミノ酸配列を含む。
いくつかの態様において、多重特異性抗体またはその抗原結合断片、例えば、二重特異性抗体またはその抗原結合断片の少なくとも1つのアームは、可変重鎖相補性決定領域1 (VH CDR1, 本明細書においてCDRH1ともいわれる)配列、可変重鎖相補性決定領域2 (VH CDR2, 本明細書においてCDRH2ともいわれる)配列、可変重鎖相補性決定領域3 (VH CDR3, 本明細書においてCDRH3ともいわれる)配列、可変軽鎖相補性決定領域1 (VL CDR1, 本明細書においてCDRL1ともいわれる)配列、可変軽鎖相補性決定領域2 (VL CDR2, 本明細書においてCDRL2ともいわれる)配列および可変軽鎖相補性決定領域3 (VL CDR3, 本明細書においてCDRL3ともいわれる)配列の組み合わせを含み、ここで少なくとも1つのCDR配列が、表2に示されるVH CDR1配列；表2に示されるVH CDR2配列；表2に示されるVH CDR3配列；表2に示されるVL CDR1配列；表2に示されるVL CDR2配列；および表2に示されるVL CDR3配列からなる群より選択される。
いくつかの態様において、多重特異性抗体またはその抗原結合断片、例えば、二重特異性抗体またはその抗原結合断片の少なくとも1つのアームは、VH CDR1配列、VH CDR2配列、VH CDR3配列、VL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせを含み、ここで少なくとも1つのCDR配列が、表2に示されるVH CDR1配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含むVH CDR1配列；表2に示されるVH CDR2配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含むVH CD2配列；表2に示されるVH CDR3配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含むVH CDR3配列；表2に示されるVL CDR1配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含むVL CDR1配列；表2に示されるVL CDR2配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含むVL CDR2配列；および表2に示されるVL CDR3配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含むVL CDR3配列からなる群より選択される。
いくつかの態様において、多重特異性抗体またはその抗原結合断片、例えば、二重特異性抗体またはその抗原結合断片の少なくとも1つのアームは、VH CDR1配列、VH CDR2配列、VH CDR3配列、VL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせを含み、ここで該組み合わせが、表2の単列内に示される6つのCDR配列(VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2およびVL CDR3)の組み合わせである。
いくつかの態様において、多重特異性抗体またはその抗原結合断片、例えば、二重特異性抗体またはその抗原結合断片の少なくとも1つのアームは、VL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせを含む軽鎖可変領域を含み、ここで該組み合わせが、表2の単列内に示される3つの軽鎖CDR配列(VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3)の組み合わせである。
いくつかの態様において、多重特異性抗体またはその抗原結合断片、例えば、二重特異性抗体またはその抗原結合断片の少なくとも1つのアームは、VH CDR1配列、VH CDR2配列、およびVH CDR3配列の組み合わせを含む重鎖可変領域を含み、ここで該組み合わせが、表2の単列内に示される3つの重鎖CDR配列(VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3)の組み合わせである。
いくつかの態様において、多重特異性抗体またはその抗原結合断片、例えば、二重特異性抗体またはその抗原結合断片の少なくとも1つのアームは、VH CDR1配列、VH CDR2配列、VH CDR3配列、VL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせを含み、ここで組み合わせにおける各CDR配列が、表2の単列内に示される6つのCDR配列(VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2およびVL CDR3)の組み合わせにおける対応するCDR配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含む。
いくつかの態様において、多重特異性抗体またはその抗原結合断片、例えば、二重特異性抗体またはその抗原結合断片の少なくとも1つのアームは、VH CDR1配列、VH CDR2配列、およびVH CDR3配列の組み合わせを含む重鎖可変領域を含み、ここで組み合わせにおける各CDR配列が、表2の単列内に示される3つの重鎖CDR配列(VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3)の組み合わせにおける対応するCDR配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含む。
いくつかの態様において、多重特異性抗体またはその抗原結合断片、例えば、二重特異性抗体またはその抗原結合断片の少なくとも1つのアームは、VL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせを含む軽鎖可変領域を含み、ここで組み合わせにおける各CDR配列が、表2の単列内に示される3つの軽鎖CDR配列(VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3)の組み合わせにおける対応するCDR配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含む。
いくつかの態様において、多重特異性抗体/活性化可能抗体は、免疫エフェクター細胞に係合するようにデザインされ、本明細書において免疫エフェクター細胞係合性の多重特異性活性化可能抗体ともいわれる。いくつかの態様において、多重特異性抗体/活性化可能抗体は、白血球に係合するようにデザインされ、本明細書において白血球係合性の多重特異性活性化可能抗体ともいわれる。いくつかの態様において、多重特異性抗体/活性化可能抗体は、T細胞に係合するようにデザインされ、本明細書においてT細胞係合性の多重特異性抗体/活性化可能抗体ともいわれる。いくつかの態様において、多重特異性抗体/活性化可能抗体は、白血球上、例えばT細胞上、ナチュラルキラー(NK)細胞上、骨髄単核細胞上、マクロファージ上、および/または別の免疫エフェクター細胞上の表面抗原に係合する。いくつかの態様において、免疫エフェクター細胞は白血球である。いくつかの態様において、免疫エフェクター細胞はT細胞である。いくつかの態様において、免疫エフェクター細胞はNK細胞である。いくつかの態様において、免疫エフェクター細胞は骨髄単核細胞のような、単核細胞である。いくつかの態様において、多重特異性活性化可能抗体は、2つ以上の標的および/または2つ以上のエピトープと結合するかまたはそうでなければ相互作用するようにデザインされ、本明細書において多抗原標的性の活性化可能抗体ともいわれる。本明細書において用いられる場合、「標的」および「抗原」という用語は互換的に用いられる。
いくつかの態様において、本開示の免疫エフェクター細胞係合性の多重特異性活性化可能抗体は、CD147に結合するターゲティング抗体またはその抗原結合断片、および免疫エフェクター細胞係合性の抗体またはその抗原結合部分を含み、ここで該ターゲティング抗体もしくはその抗原結合断片および/または免疫エフェクター細胞係合性の抗体もしくはその抗原結合部分の少なくとも1つがマスクされている。いくつかの態様において、免疫エフェクター細胞係合性の抗体またはその抗原結合断片は、第1の免疫エフェクター細胞係合性の標的に結合する第1の抗体またはその抗原結合断片(AB1)を含み、ここでAB1はマスキング部分(MM1)に、MM1のカップリングが第1の標的に結合するAB1の能力を低減させるように結合されている。いくつかの態様において、ターゲティング抗体またはその抗原結合断片は、CD147に結合する第2の抗体またはその抗原結合断片(AB2)を含む第2の抗体またはその断片を含み、ここでAB2はマスキング部分(MM2)に、MM2のカップリングがCD147に結合するAB2の能力を低減させるように結合されている。いくつかの態様において、免疫エフェクター細胞係合性の抗体またはその抗原結合断片は、第1の免疫エフェクター細胞係合性の標的に結合する第1の抗体またはその抗原結合断片(AB1)を含み、ここでAB1はマスキング部分(MM1)に、MM1のカップリングが第1の標的に結合するAB1の能力を低減させるように結合され、かつターゲティング抗体またはその抗原結合断片は、CD147に結合する第2の抗体またはその抗原結合断片(AB2)を含む第2の抗体またはその断片を含み、ここでAB2はマスキング部分(MM2)に、MM2のカップリングがCD147に結合するAB2の能力を低減させるように結合されている。いくつかの態様において、非免疫エフェクター細胞係合性の抗体は、がんターゲティング抗体である。いくつかの態様において、非免疫細胞エフェクター抗体はIgGである。いくつかの態様において、免疫エフェクター細胞係合性の抗体はscFvである。いくつかの態様において、CD147ターゲティング抗体(例えば、非免疫細胞エフェクター抗体)はIgGであり、かつ免疫エフェクター細胞係合性の抗体はscFvである。いくつかの態様において、免疫エフェクター細胞は白血球である。いくつかの態様において、免疫エフェクター細胞はT細胞である。いくつかの態様において、免疫エフェクター細胞はNK細胞である。いくつかの態様において、免疫エフェクター細胞は骨髄単核細胞である。
いくつかの態様において、本開示のT細胞係合性の多重特異性活性化可能抗体は、CD147ターゲティング抗体またはその抗原結合断片およびT細胞係合性の抗体またはその抗原結合部分を含み、ここでCD147ターゲティング抗体もしくはその抗原結合断片および/またはT細胞係合性の抗体もしくはその抗原結合部分の少なくとも1つがマスクされている。いくつかの態様において、T細胞係合性の抗体またはその抗原結合断片は、第1のT細胞係合性の標的に結合する第1の抗体またはその抗原結合断片(AB1)を含み、ここでAB1はマスキング部分(MM1)に、MM1のカップリングが第1の標的に結合するAB1の能力を低減させるように結合されている。いくつかの態様において、ターゲティング抗体またはその抗原結合断片は、CD147に結合する第2の抗体またはその抗原結合断片(AB2)を含む第2の抗体またはその断片を含み、ここでAB2はマスキング部分(MM2)に、MM2のカップリングがCD147に結合するAB2の能力を低減させるように結合されている。いくつかの態様において、T細胞係合性の抗体またはその抗原結合断片は、第1のT細胞係合性の標的に結合する第1の抗体またはその抗原結合断片(AB1)を含み、ここでAB1はマスキング部分(MM1)に、MM1のカップリングが第1の標的に結合するAB1の能力を低減させるように結合され、かつターゲティング抗体またはその抗原結合断片は、CD147に結合する第2の抗体またはその抗原結合断片(AB2)を含む第2の抗体またはその断片を含み、ここでAB2はマスキング部分(MM2)に、MM2のカップリングがCD147に結合するAB2の能力を低減させるように結合されている。
免疫エフェクター細胞係合性の多重特異性抗体/活性化可能抗体のいくつかの態様において、1つの抗原はCD147であり、別の抗原は、典型的には、T細胞、ナチュラルキラー(NK)細胞、骨髄単核細胞、マクロファージ、および/または限定されるものではないが、B7-H4、BTLA、CD3、CD4、CD8、CD16a、CD25、CD27、CD28、CD32、CD56、CD137、CTLA-4、GITR、HVEM、ICOS、LAG3、NKG2D、OX40、PD-1、TIGIT、TIM3もしくはVISTAのような、他の免疫エフェクター細胞の表面上に存在する刺激性または阻害性の受容体である。いくつかの態様において、抗原は、T細胞またはNK細胞の表面上に存在する刺激性受容体であり；そのような刺激性受容体の例としては、CD3、CD27、CD28、CD137 (4-1BBともいわれる)、GITR、HVEM、ICOS、NKG2DおよびOX40が挙げられるが、これらに限定されることはない。いくつかの態様において、抗原は、T細胞の表面上に存在する阻害性受容体であり；そのような阻害性受容体の例としては、BTLA、CTLA-4、LAG3、PD-1、TIGIT、TIM3およびNK発現KIRが挙げられるが、これらに限定されることはない。T細胞表面抗原に特異性を付与する抗体ドメインはまた、限定されるものではないが、B7-1、B7-2、B7H3、PDL1、PDL2またはTNFSF9のような、T細胞受容体、NK細胞受容体、マクロファージ受容体、および/または他の免疫エフェクター細胞受容体に結合するリガンドまたはリガンドドメインによって置換されうる。
いくつかの態様において、T細胞係合性の多重特異性活性化可能抗体は、抗CD3イプシロン(CD3ε、本明細書においてCD3eおよびCD3ともいわれる) scFvならびにターゲティング抗体またはその抗原結合断片を含み、ここで抗CD3ε scFvおよび/またはターゲティング抗体もしくはその抗原結合部分の少なくとも1つがマスクされている。いくつかの態様において、CD3ε scFvは、CD3εに結合する第1の抗体またはその抗原結合断片(AB1)を含み、ここでAB1はマスキング部分(MM1)に、MM1のカップリングがCD3εに結合するAB1の能力を低減させるように結合されている。いくつかの態様において、ターゲティング抗体またはその抗原結合断片は、CD147に結合する第2の抗体またはその抗原結合断片(AB2)を含む第2の抗体またはその断片を含み、ここでAB2はマスキング部分(MM2)に、MM2のカップリングがCD147に結合するAB2の能力を低減させるように結合されている。いくつかの態様において、CD3ε scFvは、CD3εに結合する第1の抗体またはその抗原結合断片(AB1)を含み、ここでAB1はマスキング部分(MM1)に、MM1のカップリングがCD3εに結合するAB1の能力を低減させるように結合され、かつターゲティング抗体またはその抗原結合断片は、CD147に結合する第2の抗体またはその抗原結合断片(AB2)を含む第2の抗体またはその断片を含み、ここでAB2はマスキング部分(MM2)に、MM2のカップリングがCD147に結合するAB2の能力を低減させるように結合されている。
いくつかの態様において、多抗原ターゲティング抗体および/または多抗原ターゲティング活性化可能抗体は、少なくとも、第1の標的および/または第1のエピトープに結合する第1の抗体またはその抗原結合断片、ならびに第2の標的および/または第2のエピトープに結合する第2の抗体またはその抗原結合断片を含む。いくつかの態様において、多抗原ターゲティング抗体および/または多抗原ターゲティング活性化可能抗体は、2つまたはそれ以上の異なる標的に結合する。いくつかの態様において、多抗原ターゲティング抗体および/または多抗原ターゲティング活性化可能抗体は、同じ標的上の2つまたはそれ以上の異なるエピトープに結合する。いくつかの態様において、多抗原ターゲティング抗体および/または多抗原ターゲティング活性化可能抗体は、2つまたはそれ以上の異なる標的および同じ標的上の2つまたはそれ以上の異なるエピトープの組み合わせに結合する。
いくつかの態様において、IgGを含む多重特異性活性化可能抗体は、IgG可変ドメインがマスクされている。いくつかの態様において、scFvを含む多重特異性活性化可能抗体は、scFvドメインがマスクされている。いくつかの態様において、多重特異性活性化可能抗体は、複数のIgG可変ドメインおよび複数のscFvドメインの両方を有し、ここでIgG可変ドメインの少なくとも1つがマスキング部分にカップリングされている。いくつかの態様において、多重特異性活性化可能抗体は、複数のIgG可変ドメインおよび複数のscFvドメインの両方を有し、ここでscFvドメインの少なくとも1つがマスキング部分にカップリングされている。いくつかの態様において、多重特異性活性化可能抗体は、複数のIgG可変ドメインおよび複数のscFvドメインの両方を有し、ここでIgG可変ドメインの少なくとも1つがマスキング部分にカップリングされ、かつscFvドメインの少なくとも1つがマスキング部分にカップリングされている。いくつかの態様において、多重特異性活性化可能抗体は、複数のIgG可変ドメインおよび複数のscFvドメインの両方を有し、ここでIgG可変ドメインおよびscFvドメインの各々が、それ自体のマスキング部分にカップリングされている。いくつかの態様において、多重特異性活性化可能抗体の1つの抗体ドメインは標的抗原に対する特異性を有し、別の抗体ドメインはT細胞表面抗原に対する特異性を有する。いくつかの態様において、多重特異性活性化可能抗体の1つの抗体ドメインは標的抗原に対する特異性を有し、別の抗体ドメインは別の標的抗原に対する特異性を有する。いくつかの態様において、多重特異性活性化可能抗体の1つの抗体ドメインは標的抗原のエピトープに対する特異性を有し、別の抗体ドメインは該標的抗原の別のエピトープに対する特異性を有する。
多重特異性活性化可能抗体において、scFvは、IgG活性化可能抗体の重鎖のカルボキシル末端に、IgG活性化可能抗体の軽鎖のカルボキシル末端に、またはIgG活性化可能抗体の重鎖および軽鎖の両方のカルボキシル末端に融合することができる。多重特異性活性化可能抗体において、scFvは、IgG活性化可能抗体の重鎖のアミノ末端に、IgG活性化可能抗体の軽鎖のアミノ末端に、またはIgG活性化可能抗体の重鎖および軽鎖の両方のアミノ末端に融合することができる。多重特異性活性化可能抗体において、scFvは、IgG活性化可能抗体の1つまたは複数のカルボキシル末端および1つまたは複数のアミノ末端の任意の組み合わせに融合することができる。いくつかの態様において、切断可能部分(CM)に連結されたマスキング部分(MM)は、IgGの抗原結合ドメインに結合され、それをマスクする。いくつかの態様において、切断可能部分(CM)に連結されたマスキング部分(MM)は、少なくとも1つのscFvの抗原結合ドメインに結合され、それをマスクする。いくつかの態様において、切断可能部分(CM)に連結されたマスキング部分(MM)は、IgGの抗原結合ドメインに結合され、それをマスクし、かつ切断可能部分(CM)に連結されたマスキング部分(MM)は、少なくとも1つのscFvの抗原結合ドメインに結合され、それをマスクする。
本開示は、以下を含むがそれらに限定されない、多重特異性活性化可能抗体の構造の例を提供する:
Figure 2020511130
上記構造中：VLおよびVHは、IgGに含まれる、第1の特異性の軽鎖および重鎖可変ドメインを表し；VL＊およびVH＊は、scFvに含まれる、第2の特異性の可変ドメインを表し；L1は、マスキング部分(MM)と切断可能部分(CM)とをつなぐリンカーペプチドであり；L2は、切断可能部分(CM)と抗体とをつなぐリンカーペプチドであり；L3は、scFvの可変ドメイン間をつなぐリンカーペプチドであり；L4は、第1の特異性の抗体を第2の特異性の抗体につなぐリンカーペプチドであり；CLは軽鎖定常ドメインであり；ならびにCH1、CH2、CH3は重鎖定常ドメインである。第1および第2の特異性は、任意の抗原またはエピトープに対するものであり得る。
T細胞係合性の多重特異性抗体/活性化可能抗体のいくつかの態様において、1つの抗原はCD147であり、別の抗原は、典型的には、T細胞、ナチュラルキラー(NK)細胞、骨髄単核細胞、マクロファージ、および/または限定されるものではないが、B7-H4、BTLA、CD3、CD4、CD8、CD16a、CD25、CD27、CD28、CD32、CD56、CD137 (TNFRSF9ともいわれる)、CTLA-4、GITR、HVEM、ICOS、LAG3、NKG2D、OX40、PD-1、TIGIT、TIM3もしくはVISTAのような、他の免疫エフェクター細胞の表面上に存在する刺激性(本明細書において活性化ともいわれる)または阻害性の受容体である。T細胞表面抗原に特異性を付与する抗体ドメインはまた、T細胞受容体、NK細胞受容体、マクロファージ受容体、および/または他の免疫エフェクター細胞受容体に結合するリガンドまたはリガンドドメインによって置換されうる。
いくつかの態様において、ターゲティング抗体は、本明細書において開示されるCD147抗体である。いくつかの態様において、ターゲティング抗体は、活性化可能抗体の形態であることができる。いくつかの態様において、scFvはPro-scFvの形態であることができる(例えば、WO 2009/025846、WO 2010/081173を参照のこと)。
いくつかの態様において、scFvは、CD3εの結合に特異的であり、CD3εに結合する抗体またはその断片、例えばCH2527、FN18、H2C、OKT3、2C11、UCHT1またはV9を含むか、またはそれらに由来する。いくつかの態様において、scFvは、CTLA-4 (本明細書においてCTLAおよびCTLA4ともいわれる)の結合に特異的である。
いくつかの態様において、抗CTLA-4 scFvは、アミノ酸配列:
Figure 2020511130
を含む。
いくつかの態様において、抗CTLA-4 scFvは、SEQ ID NO:643のアミノ酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一であるアミノ酸配列を含む。
いくつかの態様において、抗CD3ε scFvは、アミノ酸配列:
Figure 2020511130
を含む。
いくつかの態様において、抗CD3ε scFvは、SEQ ID NO:644のアミノ酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一であるアミノ酸配列を含む。
いくつかの態様において、scFvは、1つもしくは複数のT細胞、1つもしくは複数のNK細胞および/または1つもしくは複数のマクロファージの結合に特異的である。いくつかの態様において、scFvは、B7-H4、BTLA、CD3、CD4、CD8、CD16a、CD25、CD27、CD28、CD32、CD56、CD137、CTLA-4、GITR、HVEM、ICOS、LAG3、NKG2D、OX40、PD-1、TIGIT、TIM3またはVISTAからなる群より選択される標的の結合に特異的である。
いくつかの態様において、多重特異性抗体/活性化可能抗体はまた、ABにコンジュゲートされた作用物質を含む。いくつかの態様において、作用物質は治療用作用物質である。いくつかの態様において、作用物質は抗腫瘍剤である。いくつかの態様において、作用物質は毒素またはその断片である。いくつかの態様において、作用物質はリンカーを介して多重特異性抗体/活性化可能抗体にコンジュゲートされている。いくつかの態様において、作用物質は、切断可能なリンカーを介してABにコンジュゲートされている。いくつかの態様において、リンカーは非切断可能リンカーである。いくつかの態様において、作用物質は微小管阻害剤である。いくつかの態様において、作用物質は、DNAアルキル化剤もしくはDNAインターカレーター、または他のDNA損傷剤のような、核酸損傷剤である。いくつかの態様において、リンカーは切断可能リンカーである。いくつかの態様において、作用物質は表6に列挙された群から選択される作用物質である。いくつかの態様において、作用物質はドラスタチンである。いくつかの態様において、作用物質はアウリスタチンまたはその誘導体である。いくつかの態様において、作用物質はアウリスタチンEまたはその誘導体である。いくつかの態様において、作用物質はモノメチルアウリスタチンE (MMAE)である。いくつかの態様において、作用物質はモノメチルアウリスタチンD (MMAD)である。いくつかの態様において、作用物質はメイタンシノイドまたはメイタンシノイド誘導体である。いくつかの態様において、作用物質はDM1またはDM4である。いくつかの態様において、作用物質はデュオカルマイシンまたはその誘導体である。いくつかの態様において、作用物質はカリケアマイシンまたはその誘導体である。いくつかの態様において、作用物質はピロロベンゾジアゼピンである。いくつかの態様において、作用物質はピロロベンゾジアゼピン二量体である。
いくつかの態様において、多重特異性抗体/活性化可能抗体はまた、検出可能な部分を含む。いくつかの態様において、検出可能な部分は診断用作用物質である。
いくつかの態様において、多重特異性抗体/活性化可能抗体は、天然には、1つまたは複数のジスルフィド結合を含む。いくつかの態様において、多重特異性活性化可能抗体は、1つまたは複数のジスルフィド結合を含むように操作することができる。
本開示はまた、本明細書において記述される多重特異性抗体/活性化可能抗体をコードする単離された核酸分子、およびこれらの単離された核酸配列を含むベクターを提供する。本開示は、抗体/活性化可能抗体の発現をもたらす条件下で、そのような核酸分子を含む細胞を培養することによって、多重特異性抗体/活性化可能抗体を産生する方法を提供する。いくつかの態様において、細胞はそのようなベクターを含む。
本開示はまた、(a) 多重特異性抗体の発現をもたらす条件下で、多重特異性抗体をコードする核酸構築物を含む細胞を培養することによって、本開示の多重特異性CD147抗体を製造する方法を提供する。
本開示はまた、(a) 多重特異性活性化可能抗体の発現をもたらす条件下で、多重特異性活性化可能抗体をコードする核酸構築物を含む細胞を培養すること、および(b) 多重特異性活性化可能抗体を回収することによって、本開示の多重特異性活性化可能CD147抗体を製造する方法を提供する。好適なAB、MMおよび/またはCMは、本明細書において開示されるAB、MMおよび/またはCMのいずれかを含む。
本開示はまた、少なくとも、第1の標的または第1のエピトープに特異的に結合する第1の抗体またはその抗原結合断片(AB1)および第2の標的または第2のエピトープに特異的に結合する第2の抗体またはその抗原結合断片(AB2)を含む多重特異性活性化可能抗体および/または多重特異性活性化可能抗体組成物を提供し、ここで少なくともAB1はマスキング部分(MM1)に、MM1のカップリングがAB1のその標的に結合する能力を低減させるようにカップリングされているか、またはそれ以外の方法で結合されている。いくつかの態様において、MM1は、プロテアーゼ、例えば対象における処置部位または診断部位でAB1の標的と共局在化されているプロテアーゼの基質を含む第1の切断可能部分(CM1)配列を介してAB1にカップリングされている。本明細書において提供される多重特異性活性化可能抗体は、循環血中で安定であり、意図された治療部位および/または診断部位で活性化されるが、しかし正常な、すなわち健常な組織では活性化されず、活性化されると、対応する非修飾多重特異性抗体に少なくとも匹敵するAB1の標的への結合を示す。好適なAB、MMおよび/またはCMは、本明細書において開示されるAB、MMおよび/またはCMのいずれかを含む。
本開示はまた、少なくとも、標的に特異的に結合する第1の抗体または抗体断片(AB1)および第2の抗体または抗体断片(AB2)を含む多重特異性活性化可能抗体を含む組成物および方法を提供し、ここで少なくとも多重特異性活性化可能抗体における第1のABは、AB1のその標的に結合する能力を低下させるマスキング部分(MM1)にカップリングされている。いくつかの態様において、各ABは、各標的に対するその対応するABの能力を低下させるMMにカップリングされている。例えば、二重特異性の活性化可能抗体の態様において、AB1は、AB1のその標的に結合する能力を低下させる第1のマスキング部分(MM1)にカップリングされており、AB2は、AB2のその標的に結合する能力を低下させる第2のマスキング部分(MM2)にカップリングされている。いくつかの態様において、多重特異性活性化可能抗体は2つを超えるAB領域を含み；そのような態様において、多重特異性活性化可能抗体における各ABについて、AB1は、AB1のその標的に結合する能力を低下させる第1のマスキング部分(MM1)にカップリングされており、AB2は、AB2のその標的に結合する能力を低下させる第2のマスキング部分(MM2)にカップリングされており、AB3は、AB3のその標的に結合する能力を低下させる第3のマスキング部分(MM3)にカップリングされている、などである。好適なAB、MMおよび/またはCMは、本明細書において開示されるAB、MMおよび/またはCMのいずれかを含む。
いくつかの態様において、多重特異性活性化可能抗体は、プロテアーゼの基質である少なくとも1つの切断可能部分(CM)をさらに含み、ここでCMがMMをABに連結している。例えば、いくつかの態様において、多重特異性活性化可能抗体は、少なくとも、標的に特異的に結合する第1の抗体または抗体断片(AB1)および第2の抗体または抗体断片(AB2)を含み、ここで少なくとも多重特異性活性化可能抗体における第1のABは、AB1のその標的に結合する能力を低下させるマスキング部分(MM1)に第1の切断可能部分(CM1)を介してカップリングされている。いくつかの二重特異性の活性化可能抗体の態様において、AB1はMM1にCM1を介してカップリングされており、AB2は、AB2のその標的に結合する能力を低下させる第2のマスキング部分(MM2)に第2の切断可能部分(CM2)を介してカップリングされている。いくつかの態様において、多重特異性活性化可能抗体は2つを超えるAB領域を含み；これらの態様のいくつかにおいて、多重特異性活性化可能抗体における各ABについて、AB1はMM1にCM1を介してカップリングされており、AB2はMM2にCM2を介してカップリングされており、AB3は、AB3のその標的に結合する能力を低下させる第3のマスキング部分(MM3)に第3の切断可能部分(CM3)を介してカップリングされている、などである。好適なAB、MMおよび/またはCMは、本明細書において開示されるAB、MMおよび/またはCMのいずれかを含む。
非結合性立体部分または非結合性立体部分の結合パートナーを有する活性化可能抗体
本開示はまた、非結合性立体部分(NB)または非結合性立体部分の結合パートナー(BP)を含む活性化可能抗体を提供し、ここでBPが、活性化可能抗体にNBを動員するか、またはそれ以外の方法で誘引する。本明細書において提供される活性化可能抗体には、例えば、非結合性立体部分(NB)、切断可能なリンカー(CL)および標的に結合する抗体または抗体断片(AB)を含む活性化可能抗体；非結合性立体部分の結合パートナー(BP)、CLおよびABを含む活性化可能抗体；ならびにNBが動員されたBP、CLおよび標的に結合するABを含む活性化可能抗体が含まれる。NBが活性化可能抗体のCLおよびABに共有結合しているか、または活性化可能抗体のCLおよびABに共有結合しているBPとの相互作用により結び付いている活性化可能抗体は、本明細書において「NBを含有する活性化可能抗体」といわれる。活性化可能または切り替え可能とは、活性化可能抗体が阻害された状態、マスクされた状態、または非切断状態(なわち、第1のコンフォメーション)にある場合、活性化可能抗体が標的に対する結合の第1レベルを示し、活性化可能抗体が阻害されていない状態、マスクされていない状態、および/または切断状態(すなわち、第2のコンフォメーション、すなわち、活性化抗体)にある場合は、標的に対する結合の第2レベルを示し、ここで標的結合の第2レベルが標的結合の第1レベルよりも大きいことを意味する。活性化可能抗体組成物は、従来の抗体治療法と比べて、増大された生物学的利用能およびさらに好ましい生体内分布を示すことができる。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、ABが非処置部位および/または非診断部位への結合からマスクされていないかまたはそれ以外の方法で阻害されていない場合に、そのような部位への結合によって活性化可能抗体でない場合に生じうる毒性および/または有害な副作用の低減をもたらす。
非結合性立体部分(NB)を含むCD147活性化可能抗体は、PCT公開番号WO 2013/192546に記載された方法を用いて作製することができ、その内容は参照によりその全体が本明細書に組み入れられる。
抗体、および活性化可能抗体の治療的使用
本発明は、本明細書において記述されるCD147抗体、コンジュゲートされたCD147抗体、活性化可能CD147抗体および/またはコンジュゲートされた活性化可能CD147抗体の治療的有効量を、その必要のある対象に投与する段階により、対象においてCD147媒介疾患を予防する、該疾患の進行を遅らせる、該疾患を処置する、該疾患の症状を緩和する、またはそれ以外の方法で該疾患を改善する方法を提供する。
CD147媒介疾患を予防する、該疾患の進行を遅らせる、該疾患を処置する、該疾患の症状を緩和する、またはそれ以外の方法で該疾患を改善することにおいて用いるためのCD147抗体、コンジュゲートされたCD147抗体、活性化可能CD147抗体および/またはコンジュゲートされた活性化可能CD147抗体が提供される。
本発明はまた、本明細書において記述されるCD147抗体、コンジュゲートされたCD147抗体、活性化可能CD147抗体および/またはコンジュゲートされた活性化可能CD147抗体の治療的有効量を、その必要のある対象に投与する段階により、対象においてがんを予防する、がんの進行を遅らせる、がんを処置する、がんの症状を緩和する、またはそれ以外の方法でがんを改善する方法を提供する。
がんを予防する、がんの進行を遅らせる、がんを処置する、がんの症状を緩和する、またはそれ以外の方法でがんを改善することにおいて用いるためのCD147抗体、コンジュゲートされたCD147抗体、活性化可能CD147抗体および/またはコンジュゲートされた活性化可能CD147抗体が提供される。
本発明はまた、CD147に結合する抗体/活性化可能抗体、特に結合して、少なくとも1つのCD147生物学的活性および/またはCD147媒介シグナル伝達を中和するまたはそれ以外の方法で阻害する活性化可能抗体を用いて対象においてCD147の異常な発現および/もしくは活性に関連した症状を処置する、予防する、および/または該症状の発症もしくは進行を遅らせる、あるいは該症状を緩和する方法を提供する。
したがって、CD147の異常な発現および/または活性に関連した症状を処置する、予防する、および/または該症状の発症もしくは進行を遅らせる、該症状を改善する、または該症状を緩和することにおいて用いるためのCD147に結合する抗体/活性化可能抗体が提供される。
本発明はまた、CD147に結合する抗体/活性化可能抗体、特にCD147を発現しているまたはCD147を異常に発現している細胞の少なくとも1つの生物学的活性に結び付く、それを標的化する、中和する、死滅化する、またはそれ以外の方法で阻害する活性化可能抗体を用いて対象においてCD147を発現しているまたはCD147を異常に発現している細胞の存在、成長、増殖、転移、および/または活性に関連した症状を処置する、予防する、および/または該症状の発症もしくは進行を遅らせる、あるいは該症状を緩和する方法を提供する。
本発明はまた、CD147に結合する抗体/活性化可能抗体、特にCD147を発現している細胞の少なくとも1つの生物学的活性に結び付く、それを標的化する、中和する、死滅化する、またはそれ以外の方法で阻害する抗体/活性化可能抗体を用いて対象においてCD147を発現している細胞の存在、成長、増殖、転移、および/または活性に関連した症状を処置する、予防する、および/または該症状の発症もしくは進行を遅らせる、あるいは該症状を緩和する方法を提供する。
本発明はまた、CD147に結合する抗体/活性化可能抗体、特にCD147を異常に発現している細胞の少なくとも1つの生物学的活性に結び付く、それを標的化する、中和する、死滅化する、またはそれ以外の方法で阻害する抗体/活性化可能抗体を用いて対象においてCD147を異常に発現している細胞の存在、成長、増殖、転移、および/または活性に関連した症状を処置する、予防する、および/または該症状の発症もしくは進行を遅らせる、あるいは該症状を緩和する方法を提供する。
CD147は、非限定的な例として、腺がん、胆管(胆道)がん、膀胱がん、乳がん、例えば、トリプルネガティブ乳がんおよびHer2陰性乳がんのような、種々のがん；カルチノイドがん；子宮頸がん；胆管細胞癌；結腸直腸がん；子宮内膜がん；食道がん；神経膠腫；頭頸部がん、例えば、頭頸部扁平上皮がん；白血病；肝臓がん；肺がん、例えば、NSCLC、SCLC；リンパ腫；黒色腫；中咽頭がん；卵巣がん；膵臓がん；前立腺がん、例えば、転移性去勢抵抗性前立腺癌；腎がん；皮膚がん；扁平上皮がん、胃がん；精巣がん；甲状腺がん；および尿路上皮がんにおいて発現されることが知られている。
いくつかの態様において、がんはCD147発現腫瘍に関連している。いくつかの態様において、がんはCD147発現腫瘍に起因する。
これらの方法および使用の態様のいずれかにおいて用いられるCD147抗体、コンジュゲートされたCD147抗体、活性化可能CD147抗体および/またはコンジュゲートされた活性化可能CD147抗体は、疾患の任意の段階で投与することができる。例えば、そのようなCD147抗体、コンジュゲートされたCD147抗体、活性化可能CD147抗体および/またはコンジュゲートされた活性化可能CD147抗体は、早期から転移までの、任意の段階のがんに罹患している患者に投与することができる。対象および患者という用語は、本明細書において互換的に用いられる。
いくつかの態様において、対象は、哺乳動物、例えばヒト、非ヒト霊長類、伴侶動物(例えば、ネコ、イヌ、ウマ)、家畜、ワークアニマル(work animal)、または動物園の動物である。いくつかの態様において、対象はヒトである。いくつかの態様において、対象は伴侶動物である。いくつかの態様において、対象は、獣医師のケアを受けている動物である。
CD147抗体、コンジュゲートされたCD147抗体、活性化可能CD147抗体および/またはコンジュゲートされた活性化可能CD147抗体ならびにその治療用製剤は、異常なCD147発現および/または活性に関連する疾患または障害に罹患しているまたは感受性が高い対象に投与される。異常なCD147発現および/または活性に関連する疾患または障害に罹患しているまたは感受性が高い対象は、当技術分野において公知の種々の方法のいずれかを用いて同定される。例えば、健康状態を評価するための身体検査ならびに血液、尿および/または便分析のような種々の臨床検査および/または検査室検査のいずれかを用いて、がんまたは他の新生物状態に罹患している対象が同定される。例えば、炎症および/または炎症性障害に罹患している対象は、健康状態を評価するための身体検査および/または体液分析、例えば血液、尿および/または便分析のような種々の臨床検査および/または検査室検査のいずれかを用いて同定される。
異常なCD147発現および/または活性に関連する疾患または障害に罹患している患者に対するCD147抗体、コンジュゲートされたCD147抗体、活性化可能CD147抗体および/またはコンジュゲートされた活性化可能CD147抗体の投与は、種々の検査室または臨床の目的のいずれかが達成されるなら成功と見なされる。例えば、異常なCD147発現および/または活性に関連する疾患または障害に罹患している患者に対するCD147抗体、コンジュゲートされたCD147抗体、活性化可能CD147抗体および/またはコンジュゲートされた活性化可能CD147抗体の投与は、疾患または障害に関連する症状の1つまたは複数が軽減すれば、低減すれば、阻害されれば、またはさらなる、すなわちさらに悪い状態に進行しなければ成功と見なされる。異常なCD147発現および/または活性に関連する疾患または障害に罹患している患者に対するCD147抗体、コンジュゲートされたCD147抗体、活性化可能CD147抗体および/またはコンジュゲートされた活性化可能CD147抗体の投与は、疾患または障害が寛解期に入れば、またはさらなる、すなわちさらに悪い状態に進行しなければ成功と見なされる。
いくつかの態様において、CD147抗体、コンジュゲートされたCD147抗体、活性化可能CD147抗体および/またはコンジュゲートされた活性化可能CD147抗体ならびにその治療用製剤は、がんまたは他の新生物に罹患している対象のような、疾患または障害に罹患しているまたは感受性が高い対象に投与され、ここで対象の疾患細胞はCD147を発現している。いくつかの態様において、疾患細胞は異常なCD147発現および/または活性に関連する。いくつかの態様において、疾患細胞は正常なCD147発現および/または活性に関連する。対象の疾患細胞がCD147を発現する疾患または障害に罹患しているまたは感受性が高い対象は、当技術分野において公知の種々の方法のいずれかを用いて同定される。例えば、健康状態を評価するための身体検査ならびに血液、尿および/または便分析のような種々の臨床検査および/または検査室検査のいずれかを用いて、がんまたは他の新生物状態に罹患している対象が同定される。例えば、炎症および/または炎症性障害に罹患している対象は、健康状態を評価するための身体検査および/または体液分析、例えば血液、尿および/または便分析のような種々の臨床検査および/または検査室検査のいずれかを用いて同定される。
いくつかの態様において、CD147抗体、コンジュゲートされたCD147抗体、活性化可能CD147抗体および/またはコンジュゲートされた活性化可能CD147抗体ならびにその治療用製剤は、がんまたは他の新生物に罹患している対象のような、CD147を発現する細胞またはそのような細胞の存在、成長、増殖、転移および/もしくは活性に関連する疾患または障害に罹患しているまたは感受性が高い対象に投与される。いくつかの態様において、細胞は異常なCD147発現および/または活性に関連する。いくつかの態様において、細胞は正常なCD147発現および/または活性に関連する。CD147を発現する細胞に関連する疾患または障害に罹患しているまたは感受性が高い対象は、当技術分野において公知の種々の方法のいずれかを用いて同定される。例えば、健康状態を評価するための身体検査ならびに血液、尿および/または便分析のような種々の臨床検査および/または検査室検査のいずれかを用いて、がんまたは他の新生物状態に罹患している対象が同定される。例えば、炎症および/または炎症性障害に罹患している対象は、健康状態を評価するための身体検査および/または体液分析、例えば血液、尿および/または便分析のような種々の臨床検査および/または検査室検査のいずれかを用いて同定される。
CD147を発現する細胞に関連する疾患または障害に罹患している患者に対するCD147抗体、コンジュゲートされたCD147抗体、活性化可能CD147抗体および/またはコンジュゲートされた活性化可能CD147抗体の投与は、種々の検査室または臨床の目的のいずれかが達成されるなら成功と見なされる。例えば、CD147を発現する細胞に関連する疾患または障害に罹患している患者に対するCD147抗体、コンジュゲートされたCD147抗体、活性化可能CD147抗体および/またはコンジュゲートされた活性化可能CD147抗体の投与は、疾患または障害に関連する症状の1つまたは複数が軽減すれば、低減すれば、阻害されれば、またはさらなる、すなわちさらに悪い状態に進行しなければ成功と見なされる。CD147を発現する細胞に関連する疾患または障害に罹患している患者に対するCD147抗体、コンジュゲートされたCD147抗体、活性化可能CD147抗体および/またはコンジュゲートされた活性化可能CD147抗体の投与は、疾患または障害が寛解期に入れば、またはさらなる、すなわちさらに悪い状態に進行しなければ成功と見なされる。
いくつかの態様において、CD147抗体、コンジュゲートされたCD147抗体、活性化可能CD147抗体および/またはコンジュゲートされた活性化可能CD147抗体は、例えば、化学療法剤、抗炎症剤、および/または免疫抑制剤のような1種または複数種のさらなる作用物質と組み合わせて処置中および/または処置後に投与される。いくつかの態様において、CD147抗体、コンジュゲートされたCD147抗体、活性化可能CD147抗体および/またはコンジュゲートされた活性化可能CD147抗体と、さらなる作用物質は、同時に投与される。例えば、CD147抗体、コンジュゲートされたCD147抗体、活性化可能CD147抗体および/またはコンジュゲートされた活性化可能CD147抗体と、さらなる作用物質は、単一の組成物に処方されてもよく、または2種もしくはそれ以上の別々の組成物として投与されてもよい。いくつかの態様において、CD147抗体、コンジュゲートされたCD147抗体、活性化可能CD147抗体および/またはコンジュゲートされた活性化可能CD147抗体と、さらなる作用物質は連続して投与される。
本開示はまた、治療的有効量の本開示の抗体/コンジュゲートされた抗体/活性化可能抗体/コンジュゲートされた活性化可能抗体または本開示の抗体/コンジュゲートされた抗体/活性化可能抗体/コンジュゲートされた活性化可能抗体を含む薬学的組成物を、その必要のある対象に投与する段階を含む、疾患細胞がCD147を発現する障害または疾患を処置する、その症状を緩和する、またはその進行を遅らせる方法を提供する。いくつかの態様において、障害または疾患はがんである。
本開示はまた、治療的有効量の本開示の抗体/コンジュゲートされた抗体/活性化可能抗体/コンジュゲートされた活性化可能抗体または本開示の抗体/コンジュゲートされた抗体/活性化可能抗体/コンジュゲートされた活性化可能抗体を含む薬学的組成物を、その必要のある対象に投与する段階を含む、CD147を発現する細胞に関連する障害または疾患を処置する、その症状を緩和する、またはその進行を遅らせる方法を提供する。いくつかの態様において、CD147を発現する細胞に関連する障害または疾患は、がんである。いくつかの態様において、がんは、腺がん、胆管(胆道)がん、膀胱がん、骨がん、乳がん、トリプルネガティブ乳がん、Her2陰性乳がん、カルチノイドがん、子宮頸がん、胆管細胞癌、結腸直腸がん、結腸がん、子宮内膜がん、食道がん、神経膠腫、頭頸部がん、頭頸部扁平上皮がん、白血病、肝臓がん、肺がん、非小細胞肺がん、小細胞肺がん、リンパ腫、黒色腫、中咽頭がん、卵巣がん、膵臓がん、前立腺がん、転移性去勢抵抗性前立腺癌、腎がん、肉腫、皮膚がん、扁平上皮がん、胃がん、精巣がん、甲状腺がん、泌尿生殖器がん、または尿路上皮がんである。いくつかの態様において、哺乳動物CD147の発現および/または活性は異常である。いくつかの態様において、本方法はさらなる作用物質を投与する段階を含む。いくつかの態様において、さらなる作用物質は治療用作用物質である。
本開示はまた、治療的有効量の本開示の抗体/コンジュゲートされた抗体/活性化可能抗体/コンジュゲートされた活性化可能抗体または本開示の抗体/コンジュゲートされた抗体/活性化可能抗体/コンジュゲートされた活性化可能抗体を含む薬学的組成物を、その必要のある対象に投与する段階を含む、哺乳動物CD147を発現する細胞の成長、増殖または転移を阻害するまたは低減する方法を提供する。いくつかの態様において、哺乳動物CD147の発現および/または活性は異常である。いくつかの態様において、本方法はさらなる作用物質を投与する段階を含む。いくつかの態様において、さらなる作用物質は治療用作用物質である。
本開示はまた、治療的有効量の本開示の抗体/コンジュゲートされた抗体/活性化可能抗体/コンジュゲートされた活性化可能抗体または本開示の抗体/コンジュゲートされた抗体/活性化可能抗体/コンジュゲートされた活性化可能抗体を含む薬学的組成物を、その必要のある対象に投与する段階を含む、哺乳動物CD147に対する天然リガンドの結合を阻害する、ブロックする、または抑止する方法を提供する。いくつかの態様において、哺乳動物CD147の発現および/または活性は異常である。いくつかの態様において、本方法はさらなる作用物質を投与する段階を含む。いくつかの態様において、さらなる作用物質は治療用作用物質である。
本開示はまた、治療的有効量の本開示の抗体/コンジュゲートされた抗体/活性化可能抗体/コンジュゲートされた活性化可能抗体または本開示の抗体/コンジュゲートされた抗体/活性化可能抗体/コンジュゲートされた活性化可能抗体を含む薬学的組成物を、その必要のある対象に投与する段階を含む、疾患細胞がCD147を発現する障害または疾患を処置する、その症状を緩和する、またはその進行を遅らせる方法を提供する。いくつかの態様において、障害または疾患はがんである。
本開示はまた、治療的有効量の本開示の抗体/コンジュゲートされた抗体/活性化可能抗体/コンジュゲートされた活性化可能抗体または本開示の抗体/コンジュゲートされた抗体/活性化可能抗体/コンジュゲートされた活性化可能抗体を含む薬学的組成物を、その必要のある対象に投与する段階を含む、CD147を発現する細胞に関連する障害または疾患を処置する、その症状を緩和する、またはその進行を遅らせる方法を提供する。いくつかの態様において、CD147を発現する細胞に関連する障害または疾患は、がんである。いくつかの態様において、がんは、腺がん、胆管(胆道)がん、膀胱がん、骨がん、乳がん、トリプルネガティブ乳がん、Her2陰性乳がん、カルチノイドがん、子宮頸がん、胆管細胞癌、結腸直腸がん、結腸がん、子宮内膜がん、食道がん、神経膠腫、頭頸部がん、頭頸部扁平上皮がん、白血病、肝臓がん、肺がん、非小細胞肺がん、小細胞肺がん、リンパ腫、黒色腫、中咽頭がん、卵巣がん、膵臓がん、前立腺がん、転移性去勢抵抗性前立腺癌、腎がん、肉腫、皮膚がん、扁平上皮がん、胃がん、精巣がん、甲状腺がん、泌尿生殖器がん、または尿路上皮がんである。いくつかの態様において、哺乳動物CD147の発現および/または活性は異常である。いくつかの態様において、本方法はさらなる作用物質を投与する段階を含む。いくつかの態様において、さらなる作用物質は治療用作用物質である。
本開示はまた、治療的有効量の本開示の抗体/コンジュゲートされた抗体/活性化可能抗体/コンジュゲートされた活性化可能抗体または本開示の抗体/コンジュゲートされた抗体/活性化可能抗体/コンジュゲートされた活性化可能抗体を含む薬学的組成物を、その必要のある対象に投与する段階を含む、哺乳動物CD147を発現する細胞の成長、増殖または転移を阻害するまたは低減する方法を提供する。いくつかの態様において、哺乳動物CD147の発現および/または活性は異常である。いくつかの態様において、本方法はさらなる作用物質を投与する段階を含む。いくつかの態様において、さらなる作用物質は治療用作用物質である。
本開示はまた、治療的有効量の本開示の抗体/コンジュゲートされた抗体/活性化可能抗体/コンジュゲートされた活性化可能抗体または本開示の抗体/コンジュゲートされた抗体/活性化可能抗体/コンジュゲートされた活性化可能抗体を含む薬学的組成物を、その必要のある対象に投与する段階を含む、哺乳動物CD147に対する天然リガンドの結合を阻害する、ブロックする、または抑止する方法を提供する。いくつかの態様において、哺乳動物CD147の発現および/または活性は異常である。いくつかの態様において、本方法はさらなる作用物質を投与する段階を含む。いくつかの態様において、さらなる作用物質は治療用作用物質である。
製剤
本開示による治療実体の投与は、改善された移入、送達、寛容などを提供するよう製剤に組み入れられる、適当な担体、賦形剤および他の作用物質とともに投与されることが理解されよう。全薬剤師に公知の処方集：Remington's Pharmaceutical Sciences (15th ed, Mack Publishing Company, Easton, PA (1975))、特にその中の、Blaug, Seymourによる第87章において多数の適切な製剤を見出すことができる。これらの製剤には、例えば、粉末、ペースト、軟膏、ゼリー、ワックス、油、脂質、脂質(陽イオンまたは陰イオン性)含有小胞(リポフェクチン(商標)のような)、DNAコンジュゲート、無水吸収ペースト、水中油型および油中水型乳剤、乳剤カーボワックス(様々な分子量のポリエチレングリコール)、半固体ゲル、およびカーボワックスを含有する半固体混合物が含まれる。前述の混合物のいずれも、製剤中の活性成分が製剤によって不活性化されず、製剤が投与経路と生理学的に適合性かつ認容性である限り、本開示による処置および治療において適切でありうる。薬剤師には周知の製剤、賦形剤および担体に関するさらなる情報については、Baldrick P. 「Pharmaceutical excipient development: the need for preclinical guidance.」 Regul. Toxicol Pharmacol. 32(2):210-8 (2000), Wang W. 「Lyophilization and development of solid protein pharmaceuticals.」 Int. J. Pharm. 203(1-2): 1-60 (2000), Charman WN 「Lipids, lipophilic drugs, and oral drug delivery-some emerging concepts.」 J Pharm Sci.89(8):967-78 (2000), Powell et al. 「Compendium of excipients for parenteral formulations」 PDA J Pharm Sci Technol. 52:238-311 (1998)およびその中の引用文献も参照されたい。
非限定的な例として、抗体、コンジュゲートされた抗体、活性化可能抗体および/またはコンジュゲートされた活性化可能抗体のような、CD147抗体および/または活性化可能CD147抗体を含む、本開示の治療用製剤は、異常な標的発現および/または活性に関連する疾患または障害を予防、処置またはそれ以外の方法で改善するために用いられる。例えば、抗体、コンジュゲートされた抗体、活性化可能抗体および/またはコンジュゲートされた活性化可能抗体を含む、本開示の治療用製剤は、がんまたは他の新生物状態、炎症、炎症性障害、および/または自己免疫疾患を処置またはそれ以外の方法で改善するために用いられる。いくつかの態様において、がんは、標的が発現される固形腫瘍または血液悪性腫瘍である。いくつかの態様において、がんは、標的が発現される固形腫瘍である。いくつかの態様において、がんは、標的が発現される血液悪性腫瘍である。いくつかの態様において、標的は実質上(例えば、がん、臓器または組織の機能を行うことが多い臓器または組織の部分中)に発現される。いくつかの態様において、標的は細胞、組織または臓器上に発現される。いくつかの態様において、標的は間質(すなわち、細胞、組織または臓器の結合支持骨格)上に発現される。いくつかの態様において、標的は骨芽細胞上に発現される。いくつかの態様において、標的は内皮(血管系)上に発現される。いくつかの態様において、標的はがん幹細胞上に発現される。いくつかの態様において、抗体および/または活性化可能抗体がコンジュゲートされる作用物質は、微小管阻害剤である。いくつかの態様において、抗体および/または活性化可能抗体がコンジュゲートされる作用物質は、核酸損傷剤である。
予防、改善または処置の有効性は、例えば、異常な標的発現および/または活性のような、標的発現および/または活性に関連する疾患または障害を診断または処置するための任意の公知の方法に関連して判定される。対象の生存時間を延長させるか、またはそうでなければ対象における標的発現および/もしくは活性、例えば異常な標的発現および/もしくは活性に関連する疾患または障害の進行を遅らせることにより、抗体、コンジュゲートされた抗体、活性化可能抗体、および/またはコンジュゲートされた活性化可能抗体が臨床的利益をもたらすことが示唆される。
抗体、コンジュゲートされた抗体、活性化可能抗体、および/またはコンジュゲートされた活性化可能抗体は、薬学的組成物の形態で投与することができる。そのような組成物の調製に関与する原理および考察、ならびに成分の選択における指針は、例えば、Remington ：The Science And Practice Of Pharmacy 19th ed. (Alfonso R. Gennaro, et al., editors) Mack Pub. Co., Easton, Pa. ：1995; Drug Absorption Enhancement：Concepts, Possibilities, Limitations, And Trends, Harwood Academic Publishers, Langhorne, Pa., 1994; およびPeptide And Protein Drug Delivery (Advances In Parenteral Sciences, Vol. 4), 1991, M. Dekker, New Yorkにおいて提供されている。
抗体断片が用いられるいくつかの態様において、標的タンパク質の結合ドメインに特異的に結合する最小の断片が選択される。例えば、抗体の可変領域配列に基づいて、標的タンパク質配列に結合する能力を保持するペプチド分子をデザインすることができる。そのようなペプチドは、化学的に合成することができ、および/または組み換えDNA技術によって産生することができる。(例えば、Marasco et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90：7889-7893 (1993)を参照されたい)。製剤は、処置される特定の適応症に対し必要に応じて2つ以上の活性化合物、例えば、いくつかの態様において、互いに悪影響を及ぼさない相補的活性を有するものを含有することもできる。いくつかの態様において、またはさらに、組成物は、例えば、細胞傷害剤、サイトカイン、化学療法剤または成長阻害剤のような、その機能を増強する作用物質を含むことができる。そのような分子は、意図された目的に有効な量で組み合わせて適切に存在する。
活性成分はまた、例えば、コアセルベーション技術によってまたは界面重合化によって調製されたマイクロカプセル、例えば、コロイド薬物送達系(例えば、リポソーム、アルブミンミクロスフェア、マイクロエマルジョン、ナノ粒子、およびナノカプセル)において、またはマクロエマルジョンにおいて、それぞれヒドロキシメチルセルロースまたはゼラチンマイクロカプセルおよびポリ(メチルメタクリレート)マイクロカプセルに閉じ込めることができる。
インビボ投与のために用いられる製剤は無菌でなければならない。これは、滅菌ろ過膜によるろ過によって容易に達成される。
徐放性調製物を調製することができる。徐放性調製物の好適な例としては、マトリックスが、成型された物品、例えばフィルムまたはマイクロカプセルの形状である、抗体を含有する固体疎水性重合体の半透過性マトリックスが挙げられる。徐放性マトリックスの例としては、ポリエステル、ヒドロゲル(例えば、ポリ(2-ヒドロキシエチル-メタクリレート)、またはポリ(ビニルアルコール))、ポリラクチド(米国特許第3,773,919号)、L-グルタミン酸とγエチル-L-グルタメートの共重合体、非分解性エチレン酢酸ビニル、LUPRON DEPOT(商標)のような分解性の乳酸-グリコール酸共重合体(乳酸-グリコール酸共重合体および酢酸ロイプロリドで構成される注射可能なミクロスフェア)、ならびにポリ-D-(-)-3-ヒドロキシ酪酸が挙げられる。エチレン酢酸ビニルおよび乳酸-グリコール酸のような重合体は、100日を超える分子の放出を可能にするが、ある特定のヒドロゲルは、タンパク質をより短い期間放出する。
併用処置
いくつかの態様において、本明細書において記述されるCD147抗体、コンジュゲートされたCD147抗体、活性化可能CD147抗体および/またはコンジュゲートされた活性化可能CD147抗体は、1つもしくは複数のさらなる作用物質またはさらなる作用物質の組み合わせと併せて用いられる。適当なさらなる作用物質は、例えば、がんのような、意図した用途のための現行の薬学的および/または外科的療法を含む。例えば、CD147抗体、コンジュゲートされたCD147抗体、活性化可能CD147抗体および/またはコンジュゲートされた活性化可能CD147抗体は、さらなる化学療法剤、抗新生物剤、抗炎症剤、免疫抑制剤、アルキル化剤、代謝拮抗剤、抗微小管剤、トポイソメラーゼ阻害剤、細胞傷害性抗生物質、および/または他の任意の核酸損傷剤と併せて用いることができる。
いくつかの態様において、さらなる作用物質は、化学療法剤、例えば、ドセタキセル、パクリタキセル、アブラキサン(すなわち、アルブミンにコンジュゲートしたパクリタキセル)、ドキソルビシン、オキサリプラチン、カルボプラチン、シスプラチン、イリノテカン、およびゲムシタビンからなる群より選択される化学療法剤である。
いくつかの態様において、さらなる作用物質は、チェックポイント阻害剤、キナーゼ阻害剤、腫瘍微小環境にある阻害因子を標的とする作用物質、および/またはT細胞アゴニストもしくはNKアゴニストである。いくつかの態様において、さらなる作用物質は、単独の、または例えば化学療法剤または抗新生物剤などの別のさらなる作用物質と組み合わせた、放射線療法である。いくつかの態様において、さらなる作用物質は、ワクチン、オンコウイルス、および/またはDC活性化剤、例えば、非限定的な例として、toll様受容体(TLR)アゴニストおよび/またはα-CD40である。いくつかの態様において、さらなる作用物質は、ADCCを介して、または毒素への直接的なコンジュゲート(例えば、抗体薬物コンジュゲート(ADC))を介して腫瘍を死滅するようにデザインされた、腫瘍を標的とする抗体である。
いくつかの態様において、チェックポイント阻害剤は、CTLA-4、LAG-3、PD-1、CD147、TIGIT、TIM-3、B7H4、およびVistaからなる群より選択される標的の阻害剤である。いくつかの態様において、キナーゼ阻害剤は、B-RAFi、MEKi、およびBtk阻害剤、例えば、イブルチニブからなる群より選択される。いくつかの態様において、キナーゼ阻害剤はクリゾチニブである。いくつかの態様において、腫瘍微小環境阻害剤は、IDO阻害剤、α-CSF1R阻害剤、α-CCR4阻害剤、TGF-β、骨髄系由来サプレッサー細胞、または制御性T細胞からなる群より選択される。いくつかの態様において、アゴニストは、Ox40、GITR、CD137、ICOS、CD27、およびHVEMからなる群より選択される。
いくつかの態様において、前記阻害剤はCTLA-4阻害剤である。いくつかの態様において、阻害剤はLAG-3阻害剤である。いくつかの態様において、前記阻害剤はPD-1阻害剤である。いくつかの態様において、前記阻害剤はCD147阻害剤である。いくつかの態様において、前記阻害剤はTIGIT阻害剤である。いくつかの態様において、前記阻害剤はTIM-3阻害剤である。いくつかの態様において、前記阻害剤はB7H4阻害剤である。いくつかの態様において、前記阻害剤はVista阻害剤である。いくつかの態様において、前記阻害剤はB-RAFi阻害剤である。いくつかの態様において、前記阻害剤はMEKi阻害剤である。いくつかの態様において、前記阻害剤はBtk阻害剤である。いくつかの態様において、前記阻害剤はイブルチニブである。いくつかの態様において、前記阻害剤はクリゾチニブである。いくつかの態様において、前記阻害剤はIDO阻害剤である。いくつかの態様において、前記阻害剤はα-CSF1R阻害剤である。いくつかの態様において、前記阻害剤はα-CCR4阻害剤である。いくつかの態様において、前記阻害剤はTGF-βである。いくつかの態様において、前記阻害剤は骨髄系由来サプレッサー細胞である。いくつかの態様において、前記阻害剤は制御性T細胞である。
いくつかの態様において、前記アゴニストはOx40である。いくつかの態様において、アゴニストはGITRである。いくつかの態様において、アゴニストはCD137である。いくつかの態様において、アゴニストはICOSである。いくつかの態様において、アゴニストはCD27である。いくつかの態様において、アゴニストはHVEMである。
いくつかの態様において、CD147抗体、コンジュゲートされた抗体、活性化可能抗体および/またはコンジュゲートされた活性化可能抗体は、1種または複数種のさらなる作用物質、例えば、化学療法剤、抗炎症剤、および/または免疫抑制剤と組み合わせて処置中および/または処置後に投与される。いくつかの態様において、CD147抗体、コンジュゲートされたCD147抗体、活性化可能CD147抗体および/またはコンジュゲートされた活性化可能CD147抗体と、さらなる作用物質は単一の治療用組成物に処方され、CD147抗体、コンジュゲートされたCD147抗体、活性化可能CD147抗体および/またはコンジュゲートされた活性化可能CD147抗体と、さらなる作用物質は同時に投与される。あるいは、CD147抗体、コンジュゲートされたCD147抗体、活性化可能CD147抗体および/もしくはコンジュゲートされた活性化可能CD147抗体と、さらなる作用物質は互いに分かれており、例えば、それぞれは、別々の治療用組成物に処方され、CD147抗体、コンジュゲートされたCD147抗体、活性化可能CD147抗体および/もしくはコンジュゲートされた活性化可能CD147抗体と、さらなる作用物質は、同時に投与されるか、またはCD147抗体、コンジュゲートされたCD147抗体、活性化可能CD147抗体および/もしくはコンジュゲートされた活性化可能CD147抗体と、さらなる作用物質は、処置レジメン中に異なる時間に投与される。例えば、CD147抗体、コンジュゲートされたCD147抗体、活性化可能CD147抗体および/もしくはコンジュゲートされた活性化可能CD147抗体は、さらなる作用物質の投与の前に投与されるか、CD147抗体、コンジュゲートされたCD147抗体、活性化可能CD147抗体および/もしくはコンジュゲートされた活性化可能CD147抗体は、さらなる作用物質の投与の後に投与されるか、またはCD147抗体、コンジュゲートされたCD147抗体、活性化可能CD147抗体および/もしくはコンジュゲートされた活性化可能CD147抗体と、さらなる作用物質は、交互に投与される。本明細書において記述されるように、CD147抗体、コンジュゲートされたCD147抗体、活性化可能CD147抗体および/もしくはコンジュゲートされた活性化可能CD147抗体と、さらなる作用物質は、単一の用量で、または複数の用量で投与される。
いくつかの態様において、CD147抗体、コンジュゲートされたCD147抗体、活性化可能CD147抗体および/またはコンジュゲートされた活性化可能CD147抗体と、さらなる作用物質は同時に投与される。例えば、CD147抗体、コンジュゲートされたCD147抗体、活性化可能CD147抗体および/またはコンジュゲートされた活性化可能CD147抗体と、さらなる作用物質は、単一の組成物に処方されてもよく、または2種もしくはそれ以上の別々の組成物として投与されてもよい。いくつかの態様において、CD147抗体、コンジュゲートされたCD147抗体、活性化可能CD147抗体および/もしくはコンジュゲートされた活性化可能CD147抗体と、さらなる作用物質は、連続して投与されるか、またはCD147抗体、コンジュゲートされたCD147抗体、活性化可能CD147抗体および/もしくはコンジュゲートされた活性化可能CD147抗体と、さらなる作用物質は、処置レジメン中に異なる時間に投与される。
いくつかの態様において、処置の間および/または処置の後に、CD147抗体、コンジュゲートされたCD147抗体、活性化可能CD147抗体および/またはコンジュゲートされた活性化可能CD147抗体は、1種または複数種のさらなる作用物質、例えば、非限定的な例として、化学療法剤、抗炎症剤、および/または免疫抑制剤、例えば、アルキル化剤、代謝拮抗剤、抗微小管剤、トポイソメラーゼ阻害剤、細胞傷害性抗生物質、および/または他の任意の核酸損傷剤と組み合わせて投与される。いくつかの態様において、さらなる作用物質は、タキサン、例えば、パクリタキセル(例えば、アブラキサン(登録商標))である。いくつかの態様において、さらなる作用物質は、代謝拮抗剤、例えば、ゲムシタビンである。いくつかの態様において、さらなる作用物質は、アルキル化剤、例えば、カルボプラチンまたはシスプラチンなどの白金に基づく化学療法である。いくつかの態様において、さらなる作用物質は、標的化された作用物質、例えば、キナーゼ阻害剤、例えば、ソラフェニブまたはエルロチニブである。いくつかの態様において、さらなる作用物質は、標的化された作用物質、例えば、別の抗体、例えば、モノクローナル抗体(例えば、ベバシズマブ)、二重特異性抗体、または多重特異性抗体である。いくつかの態様において、さらなる作用物質は、プロテオソーム阻害剤、例えば、ボルテゾミブまたはカーフィルゾミブである。いくつかの態様において、さらなる作用物質は、免疫調節剤、例えば、レノリドミンドまたはIL-2である。いくつかの態様において、さらなる作用物質は放射線である。いくつかの態様において、さらなる作用物質は、当業者によって治療の標準だとみなされている作用物質である。いくつかの態様において、さらなる作用物質は、当業者に周知の化学療法である。
いくつかの態様において、さらなる作用物質は、別の抗体もしくはその抗原結合断片、別のコンジュゲートされた抗体もしくはその抗原結合断片、別の活性化可能抗体もしくはその抗原結合断片および/または別のコンジュゲートされた活性化可能抗体もしくはその抗原結合断片である。いくつかの態様において、さらなる作用物質は、第1の抗体もしくはその抗原結合断片、第1のコンジュゲートされた抗体もしくはその抗原結合断片、活性化可能抗体もしくはその抗原結合断片および/またはコンジュゲートされた活性化可能抗体もしくはその抗原結合断片と同じ標的に対する、例えば、CD147に対する、別の抗体もしくはその抗原結合断片、別のコンジュゲートされた抗体もしくはその抗原結合断片、別の活性化可能抗体もしくはその抗原結合断片および/または別のコンジュゲートされた活性化可能抗体もしくはその抗原結合断片である。いくつかの態様において、さらなる作用物質は、第1の抗体もしくはその抗原結合断片、第1のコンジュゲートされた抗体もしくはその抗原結合断片、活性化可能抗体もしくはその抗原結合断片および/またはコンジュゲートされた活性化可能抗体もしくはその抗原結合断片の標的とは異なる標的に対する、別の抗体もしくはその抗原結合断片、別のコンジュゲートされた抗体もしくはその抗原結合断片、別の活性化可能抗体もしくはその抗原結合断片および/または別のコンジュゲートされた活性化可能抗体もしくはその抗原結合断片である。
非限定的な例として、前記抗体、抗原結合断片および/または活性化可能抗体の(さらなる作用物質の) ABは、表10に列挙した任意の標的の結合パートナーである。
（表１０）例示的な標的
Figure 2020511130
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非限定的な例として、前記抗体もしくは抗原結合断片および/または活性化可能抗体のAB（追加的な作用物質のもの）は、表11に列挙した抗体であるか、または該抗体に由来する。
（表１１）Abの例示的な供給源
Figure 2020511130
Figure 2020511130
Figure 2020511130
いくつかの態様において、さらなる抗体もしくはその抗原結合断片、コンジュゲートされた抗体もしくはその抗原結合断片、活性化可能抗体もしくはその抗原結合断片、および/またはコンジュゲートされた活性化可能抗体もしくはその抗原結合断片は、モノクローナル抗体、ドメイン抗体、単鎖、Fab断片、F(ab')2断片、scFv、scAb、dAb、シングルドメイン重鎖抗体、またはシングルドメイン軽鎖抗体である。いくつかの態様において、さらなる抗体もしくはその抗原結合断片、コンジュゲートされた抗体もしくはその抗原結合断片、活性化可能抗体もしくはその抗原結合断片、および/またはコンジュゲートされた活性化可能抗体もしくはその抗原結合断片は、マウス抗体、他のげっ歯類抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、または完全ヒトモノクローナル抗体である。
検出、診断、画像化、患者選択
本発明はまた、様々な診断上および/または予防上の適用において、本明細書において提供される抗体/コンジュゲートされた抗体/活性化可能抗体/コンジュゲートされた活性化可能抗体を使用するための方法およびキットも提供する。例えば、本発明は、以下の段階によって、対象または試料における切断作用物質および関心対象の標的の有無を検出するための方法およびキットを提供する：(i) 対象または試料をCD147活性化可能抗体と接触させる段階であって、CD147活性化可能抗体が、マスキング部分(MM)と、切断作用物質によって切断される切断可能部分(CM)と、関心対象の標的に特異的に結合する抗原結合ドメインまたはその断片(AB)とを含み、切断されておらず活性化されていない状態にあるCD147活性化可能抗体がN末端からC末端に向かって以下の構造的配置：
MM-CM-ABまたはAB-CM-MM
を含み、(a) MMがABとCD147との結合を阻害するペプチドであり、かつMMがABの天然結合パートナーのアミノ酸配列を有さず、かつABの天然結合パートナーの改変型ではなく、(b) ABが切断されておらず活性化されていない状態にある場合に、MMがCD147に対するABの特異的結合に干渉し、ABが切断され活性化状態にある場合は、MMがCD147に対するABの特異的結合に干渉も競合もしない、前記段階と、(ii) 対象または試料における、活性化されたCD147活性化可能抗体のレベルを測定する段階であって、対象または試料に、活性化されたCD147活性化可能抗体の検出可能なレベルがあることは、切断作用物質およびCD147が対象または試料に存在することを示し、対象または試料に、活性化されたCD147活性化可能抗体の検出可能なレベルが無いことは、対象または試料に切断作用物質が存在しないか、CD147が存在しないか、または切断作用物質とCD147が両方とも存在しないことを示す、前記段階。本明細書において提供されるように、CD147活性化可能抗体は、ヒトおよびカニクイザルCD147の両方に結合することができる。
いくつかの態様において、活性化可能CD147抗体は、治療用作用物質がコンジュゲートした活性化可能CD147抗体である。いくつかの態様において、活性化可能抗体は、作用物質にコンジュゲートされていない。いくつかの態様において、活性化可能CD147抗体は、検出可能な標識を含む。いくつかの態様において、検出可能な標識はAB上に配置される。いくつかの態様において、対象または試料における活性化可能抗体のレベルの測定は、活性化された抗体に特異的に結合する二次試薬を用いて成し遂げられ、試薬は、検出可能な標識を含む。いくつかの態様において、二次試薬は、検出可能な標識を含む抗体である。
これらの方法およびキットのいくつかの態様において、活性化可能CD147抗体は、検出可能な標識を含む。これらの方法およびキットのいくつかの態様において、検出可能な標識は、イメージング剤、造影剤(contrasting agent)、酵素、蛍光標識、発色団、色素、1つもしくは複数の金属イオン、またはリガンドをベースとする標識を含む。これらの方法およびキットのいくつかの態様において、イメージング剤は放射性同位体を含む。これらの方法およびキットのいくつかの態様において、放射性同位体はインジウムまたはテクネチウムである。これらの方法およびキットのいくつかの態様において、造影剤は、ヨウ素、ガドリニウム、または酸化鉄を含む。これらの方法およびキットのいくつかの態様において、酵素は、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、またはβ-ガラクトシダーゼを含む。これらの方法およびキットのいくつかの態様において、蛍光標識は、黄色蛍光タンパク質(YFP)、シアン蛍光タンパク質(CFP)、緑色蛍光タンパク質(GFP)、改変赤色蛍光タンパク質(mRFP)、赤色蛍光タンパク質tdimer2(RFP tdimer2)、HCRED、またはユーロピウム誘導体を含む。これらの方法およびキットのいくつかの態様において、ルミネセンス標識はN-メチルアクリジウム(methylacrydium)誘導体を含む。これらの方法のいくつかの態様において、標識は、Alexa Fluor(登録商標)標識、例えば、Alex Fluor(登録商標)680またはAlexa Fluor(登録商標)750を含む。これらの方法およびキットのいくつかの態様において、リガンドをベースとする標識は、ビオチン、アビジン、ストレプトアビジン、または1つもしくは複数のハプテンを含む。
これらの方法およびキットのいくつかの態様において、対象は哺乳動物である。これらの方法のいくつかの態様において、対象はヒトである。いくつかの態様において、対象は非ヒト哺乳動物、例えば、非ヒト霊長類、コンパニオンアニマル(例えば、ネコ、イヌ、ウマ)、家畜、ワークアニマル、または動物園の動物である。いくつかの態様において、対象は、げっ歯類である。
これらの方法およびキットのいくつかの態様において、前記方法はインビボ方法である。これらの方法のいくつかの態様において、前記方法はインサイチュー方法である。これらの方法のいくつかの態様において、前記方法はエクスビボ方法である。これらの方法のいくつかの態様において、前記方法はインビトロ方法である。
前記方法およびキットのいくつかの態様において、前記方法は、本開示のCD147活性化可能抗体を用いた処置に適した患者集団を特定するか、または別の方法で正確にし、それに続いて、処置を必要とする対象に、活性化可能CD147抗体および/またはコンジュゲートされた活性化可能CD147抗体を投与することによって処置するのに用いられる。例えば、標的(例えば、CD147)と、これらの方法において試験されているCD147活性化可能抗体の切断可能部分(CM)にある基質を切断するプロテアーゼの両方が陽性と試験結果がでた患者は、このようなCMを含む、このようなCD147活性化可能抗体を用いた処置に適した候補であると特定され、次いで、この患者には、治療的有効量の、試験された活性化可能CD147抗体および/またはコンジュゲートされた活性化可能CD147抗体が投与される。同様に、標的(例えば、CD147)と、これらの方法を用いて試験されている活性化可能抗体のCMにある基質を切断するプロテアーゼのいずれか、または両方が陰性と試験結果がでた患者は、別の形の療法に適した候補であると特定される可能性がある。いくつかの態様において、処置に適したCD147活性化可能抗体(例えば、疾患部位で患者によって切断されるCMを含むCD147活性化可能抗体)が特定されるまで、このような患者は他のCD147活性化可能抗体を用いて試験することができる。いくつかの態様において、次いで、患者には、患者において陽性と試験結果がでた治療的有効量の活性化可能CD147抗体および/またはコンジュゲートされた活性化可能CD147抗体が投与される。適当なAB、MM、および/またはCMには、本明細書において開示された任意のAB、MM、および/またはCMが含まれる。
いくつかの態様において、抗体、コンジュゲートされた抗体、活性化可能抗体および/またはコンジュゲートされた活性化可能抗体は、検出可能な標識を含む。無傷の抗体またはその断片(例えば、Fab、scFvまたはF(ab)2)が用いられる。プローブまたは抗体に関して「標識された」という用語は、検出可能な物質をプローブまたは抗体にカップリングさせる(すなわち、物理的に連結させる)ことによるプローブまたは抗体の直接的標識、および直接的に標識されている別の試薬との反応性によるプローブまたは抗体の間接的標識を包含することが意図される。間接的標識の例としては、蛍光的に標識された二次抗体を用いる一次抗体の検出、および蛍光的に標識されたストレプトアビジンによって検出できるようにビオチンを用いたDNAプローブの末端標識が挙げられる。「生体試料」という用語は、対象から単離された組織、細胞および生体液、ならびに対象内に存在する組織、細胞および液体を含むことが意図される。それゆえ、血液、および血清、血漿、またはリンパ液を含む血液の画分または成分は「生体試料」という用語の用法内に含まれる。すなわち、本開示の検出法を用いて、インビトロおよびインビボで生体試料中の被分析物mRNA、タンパク質またはゲノムDNAを検出することができる。例えば、被分析物mRNAの検出のためのインビトロ技法には、ノザンハイブリダイゼーションおよびインサイチューハイブリダイゼーションが含まれる。被分析物タンパク質の検出のためのインビトロ技法には、酵素免疫測定法(ELISA)、ウエスタンブロット、免疫沈降、免疫化学的染色、および免疫蛍光が含まれる。被分析物ゲノムDNAの検出のためのインビトロ技法には、サザンハイブリダイゼーションが含まれる。免疫アッセイ法を行うための手順は、例えば、「ELISA: Theory and Practice: Methods in Molecular Biology」, Vol. 42, J. R. Crowther (Ed.) Human Press, Totowa, NJ, 1995; 「Immunoassay」, E. Diamandis and T. Christopoulus, Academic Press, Inc., San Diego, CA, 1996; および「Practice and Theory of Enzyme Immunoassays」, P. Tijssen, Elsevier Science Publishers, Amsterdam, 1985に記述されている。さらに、被分析物タンパク質の検出のためのインビボ技法は、標識された抗被分析物タンパク質抗体を対象に導入する段階を含む。例えば、標準的な撮像技法によって対象における存在および位置を検出できる放射性マーカーで、抗体を標識することができる。
本開示の抗体、コンジュゲートされた抗体、活性化可能抗体および/またはコンジュゲートされた活性化可能抗体は、種々の診断および予防用製剤においても有用である。1つの態様において、抗体、コンジュゲートされた抗体、活性化可能抗体および/またはコンジュゲートされた活性化可能抗体は、上記の障害の1つまたは複数を発症する危険性のある患者に投与される。上記の障害の1つまたは複数に対する患者または臓器の素因は、遺伝子型マーカー、血清学的マーカーまたは生化学的マーカーを用いて判定することができる。
本開示のいくつかの態様において、抗体、コンジュゲートされた抗体、活性化可能抗体および/またはコンジュゲートされた活性化可能抗体は、上記の障害の1つまたは複数に関連する臨床的適応症と診断されたヒト個体に投与される。診断時に、抗体、コンジュゲートされた抗体、活性化可能抗体および/またはコンジュゲートされた活性化可能抗体は、臨床的適応症の影響を緩和するか、または反転させるために投与される。
本開示の抗体、コンジュゲートされた抗体、活性化可能抗体、および/またはコンジュゲートされた活性化可能抗体はまた、患者サンプル中の標的の検出において有用であり、したがって診断薬として有用である。例えば、本開示の、抗体および/または活性化可能抗体、ならびにそれらのコンジュゲートバージョンは、患者サンプルにおける標的レベルを検出するためにインビトロアッセイ法、例えばELISAにおいて用いられる。
1つの態様において、本開示の抗体、コンジュゲートされた抗体、活性化可能抗体および/またはコンジュゲートされた活性化可能抗体は、固体支持体(例えば、マイクロタイタープレートのウェル)上に固定化される。固定化された抗体、コンジュゲートされた抗体、活性化可能抗体および/またはコンジュゲートされた活性化可能抗体は、試験サンプル中に存在しうる任意の標的の捕捉抗体として働く。固定化された抗体および/もしくは活性化可能抗体、ならびに/またはそれらのコンジュゲートバージョンを患者サンプルと接触させる前に、固体支持体をすすぎ、乳タンパク質またはアルブミンのようなブロッキング剤で処理して被分析物の非特異的吸着を防ぐ。
引き続いて、抗原を含有するのではないかと疑われる試験サンプルを用いて、または標準の抗原量を含有する溶液を用いてウェルを処理する。そのようなサンプルは、例えば、病態の診断になると考えられる循環血中抗原レベルを有するのではないかと疑われる対象由来の血清サンプルである。試験サンプルまたは標準物質をすすいだ後、固体支持体を、検出可能に標識されている二次抗体で処理する。標識された二次抗体は、検出用抗体として働く。検出可能な標識のレベルを測定し、標準サンプルから作成した標準曲線との比較によって試験サンプル中の標的抗原の濃度を判定する。
インビトロ診断アッセイ法において、本開示の抗体および活性化可能抗体、ならびにそれらのコンジュゲートバージョンを用いて得られた結果に基づき、標的抗原の発現レベルに基づいて対象において疾患を病期分類することが可能であるものと理解されよう。所与の疾患について、血液のサンプルは、疾患進行の様々な段階にあると診断された対象から、および/または疾患の治療的処置における様々な時点で採取される。進行または治療の各段階について統計的に有意な結果を提供するサンプルの集団を用いて、各段階に特徴的であるとみなされうる抗原の濃度の範囲が指定される。
抗体、コンジュゲートされた抗体、活性化可能抗体および/またはコンジュゲートされた活性化可能抗体はまた、診断方法および/または撮像方法において用いることもできる。いくつかの態様において、そのような方法はインビトロの方法である。いくつかの態様において、そのような方法はインビボの方法である。いくつかの態様において、そのような方法はインサイチューの方法である。いくつかの態様において、そのような方法はエクスビボの方法である。例えば、酵素的に切断可能なCMを有する活性化可能抗体を用いて、CMを切断することができる酵素の有無を検出することができる。そのような活性化可能抗体は、診断法において用いることができ、これには、所与の宿主生物の所与の細胞または組織において活性化された抗体(すなわち、活性化可能抗体の切断から生じる抗体)の、測定された蓄積による酵素活性(または、いくつかの態様において、ジスルフィド結合の還元をもたらすことができるものなどの増大した還元電位の環境)のインビボでの検出(例えば、定性的または定量的)が含まれうる。活性化された抗体のそのような蓄積からは、組織が酵素活性(またはCMの性質に依って増大した還元電位)を発現することだけでなく、活性化された抗体が結合する標的を組織が発現することも示唆される。
例えば、CMは、腫瘍の部位、生物学的に限定された部位(例えば、膿瘍中、臓器中などのような)におけるウイルス感染または細菌感染の部位などで見出される少なくとも1つのプロテアーゼの基質であるように選択することができる。ABは、標的抗原に結合するものであることができる。本明細書において開示される方法、または適切な場合には、当業者によく知られている方法を用いて、検出可能な標識(例えば、蛍光標識または放射性標識または放射性追跡子)をABまたは抗体および/もしくは活性化可能抗体の他の領域にコンジュゲートさせることができる。好適な検出可能な標識は、上記のスクリーニング方法の文脈において論じられており、さらなる具体的な例が以下に提供されている。関心対象の疾患組織において活性が上昇する少なくとも1つのプロテアーゼとともに、疾患状態のタンパク質またはペプチドに特異的なABを用いることにより、活性化可能抗体は、CM特異的な酵素が検出可能なレベルで存在しない、もしくは疾患組織におけるよりも低いレベルで存在するか、または不活性である(例えば、酵素前駆体の形態にあるもしくは阻害物質との複合体の状態にある)組織と比べて、疾患組織への結合速度の増大を示すであろう。小さなタンパク質およびペプチドが腎臓ろ過システムによって血液から迅速に除去されるため、およびCMに特異的な酵素が検出可能なレベルで存在しない(または、非疾患組織ではより低いレベルで存在するか、もしくは不活性なコンフォメーションで存在する)ため、疾患組織における活性化された抗体の蓄積は、非疾患組織と比べて増大する。
別の例では、活性化可能抗体を用いて、サンプル中の切断作用物質の有無を検出することができる。例えば、活性化可能抗体が酵素による切断を受けやすいCMを含む場合、活性化可能抗体を用いて、サンプル中の酵素の存在を(定性的または定量的に)検出することができる。別の例では、活性化可能抗体が還元剤による切断を受けやすいCMを含む場合、活性化可能抗体を用いて、サンプルにおける還元条件の存在を(定性的または定量的に)検出することができる。これらの方法における分析を容易にするために、活性化可能抗体を検出可能に標識することができ、支持体(例えば、スライドまたはビーズのような固体支持体)に結合させることができる。検出可能な標識は、活性化可能抗体の、切断後に放出されない部分に配置することができ、例えば、検出可能な標識は、切断が行われるまで検出できない消光された蛍光標識または他の標識であることができる。アッセイ法は、例えば、固定化された検出可能に標識された活性化可能抗体を、切断が行われるのに十分な時間、酵素および/または還元剤を含有するのではないかと疑われるサンプルと接触させ、次に洗浄して過剰なサンプルおよび夾雑物を除去することによって行うことができる。次に、サンプル中の切断作用物質(例えば、酵素または還元剤)の有無を、サンプルと接触させる前の活性化可能抗体の検出可能なシグナルの変化、例えば、サンプル中の切断作用物質による活性化可能抗体の切断に起因する検出可能なシグナルの存在および/または増加によって評価する。
そのような検出方法は、切断時に活性化可能抗体のABに結合できる標的の有無の検出を同様に提供するように適合させることができる。したがって、アッセイ法は、切断作用物質の有無および関心対象の標的の有無を評価するように適合させることができる。切断作用物質の有無は、上記のように活性化可能抗体の、検出可能な標識の存在および/または増加によって検出することができ、標的の有無は、例えば検出可能に標識された抗標的抗体の使用による、標的-AB複合体の検出によって検出することができる。
活性化可能抗体はまた、例えばプロテアーゼ切断、および特定の標的への結合による、活性化可能抗体活性化の検証のためのインサイチュー撮像において有用である。インサイチュー撮像は、細胞培養または組織切片のような生体サンプルにおけるタンパク質分解活性および標的の局在確認を可能にする技法である。この技法を用いて、検出可能な標識(例えば、蛍光標識)の存在に基づき、所与の標的への結合およびタンパク質分解活性の両方を確認することが可能である。
これらの技法は、疾患部位(例えば腫瘍組織)または健常組織に由来するどんな凍結細胞または組織でも有用である。これらの技法はまた、新鮮な細胞または組織サンプルでも有用である。
これらの技法においては、活性化可能抗体は検出可能な標識で標識される。検出可能な標識は、蛍光色素(例えばフルオロフォア、フルオレセインイソチオシアネート(FITC)、ローダミンイソチオシアネート(TRITC)、Alexa Fluor (登録商標)標識)、近赤外(NIR)色素(例えば、Qdot(登録商標)ナノクリスタル)、コロイド金属、ハプテン、放射性マーカー、ビオチンおよびストレプトアビジンのような増幅試薬、または酵素(例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼまたはアルカリホスファターゼ)であり得る。
標識された活性化可能抗体とともにインキュベートされたサンプル中の標識の検出は、サンプルが標的を含み、活性化可能抗体のCMに特異的なプロテアーゼを含有することを示す。いくつかの態様において、本明細書において記述されるものなどの広域プロテアーゼ阻害剤を用いることにより、および/またはプロテアーゼに特異的な作用物質、例えば、プロテアーゼのマトリプターゼに特異的であり、マトリプターゼのタンパク質分解活性を阻害する、A11のような抗体を用いることにより、プロテアーゼの存在を確認することができる；例えば、2010年11月11日付で刊行された国際公開番号WO 2010/129609を参照されたい。活性化可能抗体のCMに特異的なプロテアーゼを同定するために、本明細書において記述されるものなどの広域プロテアーゼ阻害剤を用いる、および/またはより選択的な阻害剤を用いることによる同じ手法を用いることができる。いくつかの態様において、標的の存在は標的に特異的な作用物質、例えば、別の抗体を用いて確認することができ、または検出可能な標識は非標識の標的と競合させることができる。いくつかの態様において、標識された二次抗体またはより複雑な検出系による検出とともに、標識されていない活性化可能抗体を用いることができる。
同様の技法はまた、対象、例えば、ヒトを含む哺乳動物における蛍光シグナルの検出から、疾患部位が標的を含み、かつ活性化可能抗体のCMに特異的なプロテアーゼを含むことが示唆される、インビボ撮像にも有用である。
これらの技法はまた、活性化可能抗体におけるプロテアーゼ特異的CMに基づく、種々の細胞、組織および生物におけるプロテアーゼ活性を検出、同定、または特性を明らかにするためのキットにおいておよび/または試薬として有用である。
本開示は、種々の診断上および/または予防上の適用において抗体および/または活性化可能抗体を用いる方法を提供する。例えば、本開示は、以下によって対象またはサンプルにおける切断作用物質および関心対象の標的の有無を検出する方法を提供する：(i) 活性化可能抗体と対象またはサンプルを接触させる段階であって、活性化可能抗体が、マスキング部分(MM)と、切断作用物質、例えばプロテアーゼにより切断される切断可能部分(CM)と、関心対象の標的に特異的に結合する抗原結合ドメインまたはその断片(AB)とを含み、ここで、切断されていない非活性化状態にある活性化可能抗体が、N末端からC末端に向かって、MM-CM-ABまたはAB-CM-MMのような構造的配置を含み；(a) MMは、標的に対するABの結合を阻害するペプチドであり、かつMMは、天然に存在するABの結合パートナーのアミノ酸配列を持たずかつ天然のABの結合パートナーの修飾型ではなく；および(b) 切断されていない非活性化状態において、MMは、標的に対するABの特異的結合に干渉し、かつ、切断された活性化状態では、MMは、標的に対するABの特異的結合に干渉も競合もしない、前記段階；ならびに(ii) 対象またはサンプルにおける活性化された活性化可能抗体のレベルを測定する段階であって、対象またはサンプルにおける活性化された活性化可能抗体の検出可能なレベルから、切断作用物質および標的が対象またはサンプル中に存在することが示唆され、かつ、対象またはサンプルにおける活性化された活性化可能抗体の検出不能なレベルから、切断作用物質、標的、もしくは切断作用物質と標的の両方が対象もしくはサンプル中に存在しないおよび/または十分に存在しないことが示唆される、前記段階。いくつかの態様において、活性化可能抗体は、治療用作用物質がコンジュゲートされている活性化可能抗体である。いくつかの態様において、活性化可能抗体は作用物質にコンジュゲートされていない。いくつかの態様において、活性化可能抗体は、検出可能な標識を含む。いくつかの態様において、検出可能な標識はABに配置される。いくつかの態様において、対象またはサンプルにおける活性化可能抗体のレベルを測定する段階は、活性化された抗体に特異的に結合する二次試薬であって、検出可能な標識を含む該試薬を用いて達成される。いくつかの態様において、二次試薬は、検出可能な標識を含む抗体である。
本開示はまた、以下によって対象またはサンプルにおける切断作用物質の有無を検出する方法を提供する：(i) 関心対象の標的、例えば、標的の存在下において活性化可能抗体と対象またはサンプルを接触させる段階であって、活性化可能抗体が、マスキング部分(MM)と、切断作用物質、例えばプロテアーゼにより切断される切断可能部分(CM)と、関心対象の標的に特異的に結合する抗原結合ドメインまたはその断片(AB)とを含み、ここで、切断されていない非活性化状態にある活性化可能抗体が、N末端からC末端に向かって、MM-CM-ABまたはAB-CM-MMのような構造的配置を含み；(a) MMは、標的に対するABの結合を阻害するペプチドであり、かつMMは、天然に存在するAB結合パートナーのアミノ酸配列を持たずかつ天然のAB結合パートナーの修飾型ではなく；および(b) 切断されていない非活性化状態において、MMは、標的に対するABの特異的結合に干渉し、かつ、切断された活性化状態では、MMは、標的に対するABの特異的結合に干渉も競合もしない、前記段階；ならびに(ii) 対象またはサンプルにおける活性化された活性化可能抗体のレベルを測定する段階であって、対象またはサンプルにおける活性化された活性化可能抗体の検出可能なレベルから、切断作用物質が対象またはサンプル中に存在することが示唆され、かつ、対象またはサンプルにおける活性化された活性化可能抗体の検出不能なレベルから、切断作用物質が対象もしくはサンプル中に存在しないおよび/または十分に存在しないことが示唆される、前記段階。いくつかの態様において、活性化可能抗体は、治療用作用物質がコンジュゲートされている活性化可能抗体である。いくつかの態様において、活性化可能抗体は作用物質にコンジュゲートされていない。いくつかの態様において、活性化可能抗体は、検出可能な標識を含む。いくつかの態様において、検出可能な標識はABに配置される。いくつかの態様において、対象またはサンプルにおける活性化可能抗体のレベルを測定する段階は、活性化された抗体に特異的に結合する二次試薬であって、検出可能な標識を含む該試薬を用いて達成される。いくつかの態様において、二次試薬は、検出可能な標識を含む抗体である。
本開示はまた、対象またはサンプルにおける切断作用物質および標的の有無を検出する方法で用いるためのキットであって、少なくとも、マスキング部分(MM)と、切断作用物質、例えばプロテアーゼにより切断される切断可能部分(CM)と、関心対象の標的に特異的に結合する抗原結合ドメインまたはその断片(AB)とを含む活性化可能抗体を含むキットを提供し、ここで、切断されていない非活性化状態にある活性化可能抗体は、N末端からC末端に向かって、MM-CM-ABまたはAB-CM-MMのような構造的配置を含み；(a) MMは、標的に対するABの結合を阻害するペプチドであり、かつ、MMは、天然に存在するAB結合パートナーのアミノ酸配列を持たずかつ天然のAB結合パートナーの修飾型ではなく；および(b) 切断されていない非活性化状態において、MMは、標的に対するABの特異的結合に干渉し、かつ、切断された活性化状態では、MMは、標的に対するABの特異的結合に干渉も競合もしない；ならびに(ii) 対象またはサンプルにおける活性化された活性化可能抗体のレベルを測定する段階であって、対象またはサンプルにおける活性化された活性化可能抗体の検出可能なレベルから、切断作用物質が対象またはサンプル中に存在することが示唆され、かつ、対象またはサンプルにおける活性化された活性化可能抗体の検出不能なレベルから、切断作用物質が対象もしくはサンプル中に存在しないおよび/または十分に存在しないことが示唆される、前記段階。いくつかの態様において、活性化可能抗体は、治療用作用物質がコンジュゲートされている活性化可能抗体である。いくつかの態様において、活性化可能抗体は作用物質にコンジュゲートされていない。いくつかの態様において、活性化可能抗体は、検出可能な標識を含む。いくつかの態様において、検出可能な標識はABに配置される。いくつかの態様において、対象またはサンプルにおける活性化可能抗体のレベルを測定する段階は、活性化された抗体に特異的に結合する二次試薬であって、検出可能な標識を含む該試薬を用いて達成される。いくつかの態様において、二次試薬は、検出可能な標識を含む抗体である。
本開示はまた、以下によって対象またはサンプルにおける切断作用物質の有無を検出する方法を提供する：(i) 活性化可能抗体と対象またはサンプルを接触させる段階であって、活性化可能抗体が、マスキング部分(MM)と、切断作用物質、例えばプロテアーゼにより切断される切断可能部分(CM)と、標的に特異的に結合する抗原結合ドメイン(AB)と、検出可能な標識とを含み、ここで、切断されていない非活性化状態にある活性化可能抗体が、N末端からC末端に向かって、MM-CM-ABまたはAB-CM-MMのような構造的配置を含み；MMが、標的に対するABの結合を阻害するペプチドであり、かつMMが、天然に存在するAB結合パートナーのアミノ酸配列を持たずかつ天然のAB結合パートナーの修飾型ではなく；切断されていない非活性化状態において、MMが、標的に対するABの特異的結合に干渉し、かつ、切断された活性化状態では、MMが、標的に対するABの特異的結合に干渉も競合もしない；かつ、検出可能な標識が、活性化可能抗体の、CMの切断後に放出される部分に配置される、前記段階；ならびに(ii) 対象またはサンプルにおける検出可能な標識のレベルを測定する段階であって、対象またはサンプルにおける検出可能な標識の検出可能なレベルから、切断作用物質が対象もしくはサンプル中に存在しないおよび/または十分に存在しないことが示唆され、かつ、対象またはサンプルにおける検出可能な標識の検出不能なレベルから、切断作用物質が対象またはサンプル中に存在することが示唆される、前記段階。いくつかの態様において、活性化可能抗体は、治療用作用物質がコンジュゲートされている活性化可能抗体である。いくつかの態様において、活性化可能抗体は作用物質にコンジュゲートされていない。いくつかの態様において、活性化可能抗体は、検出可能な標識を含む。いくつかの態様において、検出可能な標識はABに配置される。いくつかの態様において、対象またはサンプルにおける活性化可能抗体のレベルを測定する段階は、活性化された抗体に特異的に結合する二次試薬であって、検出可能な標識を含む該試薬を用いて達成される。いくつかの態様において、二次試薬は、検出可能な標識を含む抗体である。
本開示はまた、対象またはサンプルにおける切断作用物質および標的の有無を検出する方法で用いるためのキットであって、少なくとも、対象または生体サンプルと接触させるのに用いるための本明細書において記述される活性化可能抗体および/またはコンジュゲートされた活性化可能抗体(例えば、治療用作用物質がコンジュゲートされている活性化可能抗体)ならびに対象または生体サンプルにおける活性化された活性化可能抗体および/またはコンジュゲートされた活性化可能抗体のレベルを検出するための手段を含む該キットを提供し、ここで、対象または生体サンプルにおける活性化された活性化可能抗体の検出可能なレベルから、切断作用物質および標的が対象または生体サンプル中に存在することが示唆され、かつ、対象または生体サンプルにおける活性化された活性化可能抗体の検出不能なレベルから、切断作用物質、標的、もしくは切断作用物質と標的の両方が対象もしくは生体サンプル中に存在しないおよび/または十分に存在せず、したがって活性化可能抗体の標的結合および/またはプロテアーゼ切断を、対象または生体サンプルにおいて検出することができないことが示唆される。
本開示はまた、(i) 標的の存在下において活性化可能抗体と対象または生体サンプルを接触させること、および(ii) 対象または生体サンプルにおける活性化された活性化可能抗体のレベルを測定することによって、対象またはサンプルにおける切断作用物質の有無を検出する方法を提供し、ここで、対象または生体サンプルにおける活性化された活性化可能抗体の検出可能なレベルから、切断作用物質が対象または生体サンプル中に存在することが示唆され、かつ、対象または生体サンプルにおける活性化された活性化可能抗体の検出不能なレベルから、切断作用物質が対象もしくは生体サンプル中に検出可能なレベルで存在しないおよび/または十分に存在せず、したがって活性化可能抗体のプロテアーゼ切断を、対象または生体サンプルにおいて検出することができないことが示唆される。そのような活性化可能抗体は、マスキング部分(MM)と、切断作用物質、例えばプロテアーゼにより切断される切断可能部分(CM)と、標的に特異的に結合する抗原結合ドメインまたはその断片(AB)とを含み、ここで、切断されていない(すなわち非活性化)状態にある活性化可能抗体は、N末端からC末端に向かって、MM-CM-ABまたはAB-CM-MMのような構造的配置を含み；(a) MMは、標的に対するABの結合を阻害するペプチドであり、かつMMは、天然に存在するAB結合パートナーのアミノ酸配列を持たず；および(b) 非切断状態において、活性化可能抗体のMMは、標的に対するABの特異的結合に干渉し、かつ、切断された(すなわち、活性化)状態では、活性化可能抗体のMMは、標的に対するABの特異的結合に干渉も競合もしない。いくつかの態様において、活性化可能抗体は、治療用作用物質がコンジュゲートされている活性化可能抗体である。いくつかの態様において、活性化可能抗体は作用物質にコンジュゲートされていない。いくつかの態様において、検出可能な標識は、マスキング部分に結合される。いくつかの態様において、検出可能な標識は、プロテアーゼ切断部位に対してN末端側の切断可能部分に結合される。いくつかの態様において、ABの単一の抗原結合部位がマスクされる。本開示の抗体が少なくとも2つの抗原結合部位を有するいくつかの態様において、少なくとも1つの抗原結合部位がマスクされ、かつ少なくとも1つの抗原結合部位がマスクされない。いくつかの態様において、全ての抗原結合部位がマスクされる。いくつかの態様において、測定する段階は、検出可能な標識を含む二次試薬の使用を含む。
本開示はまた、対象またはサンプルにおける切断作用物質および標的の有無を検出する方法で用いるためのキットであって、少なくとも、標的の存在下において活性化可能抗体と対象または生体サンプルを接触させかつ対象または生体サンプルにおける活性化された活性化可能抗体のレベルを測定するのに用いるための、本明細書において記述される活性化可能抗体および/またはコンジュゲートされた活性化可能抗体を含む該キットを提供し、ここで、対象または生体サンプルにおける活性化された活性化可能抗体の検出可能なレベルから、切断作用物質が対象または生体サンプル中に存在することが示唆され、かつ、対象または生体サンプルにおける活性化された活性化可能抗体の検出不能なレベルから、切断作用物質が対象もしくは生体サンプル中に検出可能なレベルで存在しないおよび/または十分に存在せず、したがって活性化可能抗体のプロテアーゼ切断を、対象または生体サンプルにおいて検出することができないことが示唆される。そのような活性化可能抗体は、マスキング部分(MM)と、切断作用物質、例えばプロテアーゼにより切断される切断可能部分(CM)と、標的に特異的に結合する抗原結合ドメインまたはその断片(AB)とを含み、ここで、切断されていない(すなわち非活性化)状態にある活性化可能抗体は、N末端からC末端に向かって、MM-CM-ABまたはAB-CM-MMのような構造的配置を含み；(a) MMは、標的に対するABの結合を阻害するペプチドであり、かつMMは、天然に存在するAB結合パートナーのアミノ酸配列を持たず；および(b) 非切断状態において、活性化可能抗体のMMは、標的に対するABの特異的結合に干渉し、かつ、切断された(すなわち、活性化)状態では、活性化可能抗体のMMは、標的に対するABの特異的結合に干渉も競合もしない。いくつかの態様において、活性化可能抗体は、治療用作用物質がコンジュゲートされている活性化可能抗体である。いくつかの態様において、活性化可能抗体は作用物質にコンジュゲートされていない。いくつかの態様において、検出可能な標識は、マスキング部分に結合される。いくつかの態様において、検出可能な標識は、プロテアーゼ切断部位に対してN末端側の切断可能部分に結合される。いくつかの態様において、ABの単一の抗原結合部位がマスクされる。本開示の抗体が少なくとも2つの抗原結合部位を有するいくつかの態様において、少なくとも1つの抗原結合部位がマスクされ、かつ少なくとも1つの抗原結合部位がマスクされない。いくつかの態様において、全ての抗原結合部位がマスクされる。いくつかの態様において、測定する段階は、検出可能な標識を含む二次試薬の使用を含む。
本開示はまた、対象またはサンプルにおける切断作用物質の有無を検出する方法で用いるためのキットであって、少なくとも、対象または生体サンプルと接触させるのに用いるための本明細書において記述される活性化可能抗体および/またはコンジュゲートされた活性化可能抗体ならびに対象または生体サンプルにおける活性化された活性化可能抗体および/またはコンジュゲートされた活性化可能抗体のレベルを検出するための手段を含む該キットを提供し、ここで、活性化可能抗体は、活性化可能抗体の、CMの切断後に放出される部分に配置される検出可能な標識を含み、ここで、対象または生体サンプルにおける活性化された活性化可能抗体の検出可能なレベルから、切断作用物質が対象もしくは生体サンプル中に存在せずおよび/または十分に存在せず、したがって活性化可能抗体の標的結合および/またはプロテアーゼ切断を、対象または生体サンプルにおいて検出できないことが示唆され、かつ、対象または生体サンプルにおける活性化された活性化可能抗体の検出不能なレベルから、切断作用物質が対象または生体サンプル中に検出可能なレベルで存在することが示唆される。
本開示は、(i) 活性化可能抗体と対象または生体サンプルを接触させることであって、活性化可能抗体が、活性化可能抗体の、CMの切断後に放出される部分に配置される検出可能な標識を含む、前記接触、および(ii) 対象または生体サンプルにおける活性化された活性化可能抗体のレベルを測定することによって、対象またはサンプルにおける切断作用物質および標的の有無を検出する方法を提供し、ここで、対象または生体サンプルにおける活性化された活性化可能抗体の検出可能なレベルから、切断作用物質、標的、もしくは切断作用物質と標的の両方が対象または生体サンプル中に存在せずおよび/または十分に存在せず、したがって活性化可能抗体の標的結合および/またはプロテアーゼ切断を、対象または生体サンプルにおいて検出できないことが示唆され、かつ、対象または生体サンプルにおける活性化された活性化可能抗体の検出可能なレベルの低減から、切断作用物質および標的が対象または生体サンプル中に存在することが示唆される。検出可能な標識のレベルの低減は、例えば、約5%、約10%、約15%、約20%、約25%、約30%、約35%、約40%、約45%、約50%、約55%、約60%、約65%、約70%、約75%、約80%、約85%、約90%、約95%および/または約100%の低減である。そのような活性化可能抗体は、マスキング部分(MM)と、切断作用物質により切断される切断可能部分(CM)と、標的に特異的に結合する抗原結合ドメインまたはその断片(AB)とを含み、ここで、切断されていない(すなわち非活性化)状態にある活性化可能抗体は、N末端からC末端に向かって、MM-CM-ABまたはAB-CM-MMのような構造的配置を含み；(a) MMは、標的に対するABの結合を阻害するペプチドであり、かつMMは、天然に存在するAB結合パートナーのアミノ酸配列を持たず；および(b) 非切断状態において、活性化可能抗体のMMは、標的に対するABの特異的結合に干渉し、かつ切断された(すなわち、活性化)状態では、活性化可能抗体のMMは、標的に対するABの特異的結合に干渉も競合もしない。いくつかの態様において、活性化可能抗体は、治療用作用物質がコンジュゲートされている活性化可能抗体である。いくつかの態様において、活性化可能抗体は作用物質にコンジュゲートされていない。いくつかの態様において、活性化可能抗体は、検出可能な標識を含む。いくつかの態様において、検出可能な標識はABに配置される。いくつかの態様において、対象またはサンプルにおける活性化可能抗体のレベルを測定する段階は、活性化された抗体に特異的に結合する二次試薬であって、検出可能な標識を含む該試薬を用いて達成される。いくつかの態様において、二次試薬は、検出可能な標識を含む抗体である。
本開示はまた、対象またはサンプルにおける切断作用物質および標的の有無を検出する方法で用いるためのキットであって、少なくとも、対象または生体サンプルと接触させるのに用いるための本明細書において記述される活性化可能抗体および/またはコンジュゲートされた活性化可能抗体ならびに対象または生体サンプルにおける活性化された活性化可能抗体および/またはコンジュゲートされた活性化可能抗体のレベルを検出するための手段を含む該キットを提供し、ここで、対象または生体サンプルにおける活性化された活性化可能抗体の検出可能なレベルから、切断作用物質、標的、もしくは切断作用物質と標的の両方が対象もしくは生体サンプル中に存在せずおよび/または十分に存在せず、したがって活性化可能抗体の標的結合および/またはプロテアーゼ切断を、対象または生体サンプルにおいて検出できないことが示唆され、かつ、対象または生体サンプルにおける活性化された活性化可能抗体の検出可能なレベルの低減から、切断作用物質および標的が対象または生体サンプル中に存在することが示唆される。検出可能な標識のレベルの低減は、例えば、約5%、約10%、約15%、約20%、約25%、約30%、約35%、約40%、約45%、約50%、約55%、約60%、約65%、約70%、約75%、約80%、約85%、約90%、約95%および/または約100%の低減である。
本開示はまた、(i) 活性化可能抗体と対象または生体サンプルを接触させることであって、活性化可能抗体が、活性化可能抗体の、CMの切断後に放出される部分に配置される検出可能な標識を含む、前記接触；および(ii) 対象または生体サンプルにおける検出可能な標識のレベルを測定することによって、対象またはサンプルにおける切断作用物質の有無を検出する方法を提供し、ここで、対象または生体サンプルにおける検出可能な標識の検出可能なレベルから、切断作用物質が対象または生体サンプル中に検出可能なレベルで存在せずおよび/または十分に存在せず、したがって活性化可能抗体のプロテアーゼ切断を、対象または生体サンプルにおいて検出できないことが示唆され、かつ、対象または生体サンプルにおける検出可能な標識の検出可能なレベルの低減から、切断作用物質が対象または生体サンプル中に存在することが示唆される。検出可能な標識のレベルの低減は、例えば、約5%、約10%、約15%、約20%、約25%、約30%、約35%、約40%、約45%、約50%、約55%、約60%、約65%、約70%、約75%、約80%、約85%、約90%、約95%および/または約100%の低減である。そのような活性化可能抗体は、マスキング部分(MM)と、切断作用物質により切断される切断可能部分(CM)と、標的に特異的に結合する抗原結合ドメインまたはその断片(AB)とを含み、ここで、切断されていない(すなわち非活性化)状態にある活性化可能抗体は、N末端からC末端に向かって、MM-CM-ABまたはAB-CM-MMのような構造的配置を含み；(a) MMは、標的に対するABの結合を阻害するペプチドであり、かつMMは、天然に存在するAB結合パートナーのアミノ酸配列を持たず；および(b) 非切断状態において、活性化可能抗体のMMは、標的に対するABの特異的結合に干渉し、かつ切断された(すなわち、活性化)状態では、活性化可能抗体のMMは、標的に対するABの特異的結合に干渉も競合もしない。いくつかの態様において、活性化可能抗体は、治療用作用物質がコンジュゲートされている活性化可能抗体である。いくつかの態様において、活性化可能抗体は作用物質にコンジュゲートされていない。いくつかの態様において、活性化可能抗体は、検出可能な標識を含む。いくつかの態様において、検出可能な標識はABに配置される。いくつかの態様において、対象またはサンプルにおける活性化可能抗体のレベルを測定する段階は、活性化された抗体に特異的に結合する二次試薬であって、検出可能な標識を含む該試薬を用いて達成される。いくつかの態様において、二次試薬は、検出可能な標識を含む抗体である。
本開示はまた、対象またはサンプルにおける関心対象の切断作用物質の有無を検出する方法で用いるためのキットであって、少なくとも、対象または生体サンプルと接触させるのに用いるための本明細書において記述される活性化可能抗体および/またはコンジュゲートされた活性化可能抗体ならびに対象または生体サンプルにおける活性化された活性化可能抗体および/またはコンジュゲートされた活性化可能抗体のレベルを検出するための手段を含む該キットを提供し、ここで、活性化可能抗体が、活性化可能抗体の、CMの切断後に放出される部分に配置される検出可能な標識を含み、ここで対象または生体サンプルにおける検出可能な標識の検出可能なレベルから、切断作用物質、標的、もしくは切断作用物質と標的の両方が対象もしくは生体サンプル中に存在せずおよび/または十分に存在せず、したがって活性化可能抗体の標的結合および/またはプロテアーゼ切断を、対象または生体サンプルにおいて検出できないことが示唆され、かつ、対象または生体サンプルにおける検出可能な標識の検出可能なレベルの低減から、切断作用物質および標的が対象または生体サンプル中に存在することが示唆される。検出可能な標識のレベルの低減は、例えば、約5%、約10%、約15%、約20%、約25%、約30%、約35%、約40%、約45%、約50%、約55%、約60%、約65%、約70%、約75%、約80%、約85%、約90%、約95%および/または約100%の低減である。
これらの方法およびキットのいくつかの態様において、活性化可能抗体は検出可能な標識を含む。これらの方法およびキットのいくつかの態様において、検出可能な標識は、造影剤、コントラスト剤、酵素、蛍光標識、発色団、色素、1つもしくは複数の金属イオン、またはリガンドに基づく標識を含む。これらの方法およびキットのいくつかの態様において、造影剤は放射性同位体を含む。これらの方法およびキットのいくつかの態様において、放射性同位体はインジウムまたはテクネチウムである。これらの方法およびキットのいくつかの態様において、コントラスト剤は、ヨウ素、ガドリニウムまたは酸化鉄を含む。これらの方法およびキットのいくつかの態様において、酵素は、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、またはβ-ガラクトシダーゼを含む。これらの方法およびキットのいくつかの態様において、蛍光標識は黄色蛍光タンパク質(YFP)、シアン蛍光タンパク質(CFP)、緑色蛍光タンパク質(GFP)、修飾赤色蛍光タンパク質(mRFP)、赤色蛍光タンパク質tdimer2 (RFP tdimer2)、HCREDまたはユーロピウム誘導体を含む。これらの方法およびキットのいくつかの態様において、発光標識はN-メチルアクリジウム誘導体を含む。これらの方法のいくつかの態様において、標識は、Alex Fluor(登録商標)680またはAlexa Fluor(登録商標)750のような、Alexa Fluor(登録商標)標識を含む。これらの方法およびキットのいくつかの態様において、リガンドに基づく標識は、ビオチン、アビジン、ストレプトアビジンまたは1つもしくは複数のハプテンを含む。
これらの方法のいくつかの態様において、本方法はインビボの方法である。これらの方法のいくつかの態様において、本方法はインサイチューの方法である。これらの方法のいくつかの態様において、本方法はエクスビボの方法である。これらの方法のいくつかの態様において、本方法はインビトロの方法である。
いくつかの態様において、インサイチュー撮像および/またはインビボ撮像は、どの患者を処置するかを同定する方法において有用である。例えば、インサイチュー撮像では、活性化可能抗体を用いて患者サンプルをスクリーニングし、適切なプロテアーゼおよび標的を適切な位置、例えば腫瘍部位に有する患者を同定する。
いくつかの態様において、本開示の活性化可能抗体での処置に適した患者集団を同定するかまたはそうでなければ精緻化するためにインサイチュー撮像が用いられる。例えば、試験されている活性化可能抗体の切断可能部分(CM)における基質を切断するプロテアーゼおよび標的(例えば、標的)の両方の検査で陽性となる(例えば、疾患部位に活性化された抗体を蓄積させる)患者は、そのようなCMを含むそのような活性化可能抗体による処置に適した候補として同定される。同様に、これらの方法を用いて試験されている活性化可能抗体中のCMにおける基質を切断するプロテアーゼおよび標的(例えば、標的)の一方または両方の検査で陰性となる患者は、別の治療形態に適した候補として同定されうる。いくつかの態様において、第1の活性化可能抗体に関する検査で陰性となるそのような患者は、処置に適した活性化可能抗体(例えば、疾患の部位で患者により切断されるCMを含む活性化可能抗体)が同定されるまで、異なるCMを含む他の活性化可能抗体で試験することができる。いくつかの態様において、患者にその後、患者が試験で陽性となった活性化可能抗体の治療的有効量が投与される。
いくつかの態様において、本開示の活性化可能抗体での処置に適した患者集団を同定するかまたはそうでなければ精緻化するためにインビボ撮像が用いられる。例えば、試験されている活性化可能抗体の切断可能部分(CM)における基質を切断するプロテアーゼおよび標的(例えば、標的)の両方の検査で陽性となる(例えば、疾患部位に活性化された抗体を蓄積させる)患者は、そのようなCMを含むそのような活性化可能抗体による処置に適した候補として同定される。同様に、検査で陰性となる患者は、別の治療形態に適した候補として同定されうる。いくつかの態様において、第1の活性化可能抗体に関する検査で陰性となるそのような患者は、処置に適した活性化可能抗体(例えば、疾患の部位で患者により切断されるCMを含む活性化可能抗体)が同定されるまで、異なるCMを含む他の活性化可能抗体で試験することができる。いくつかの態様において、患者にその後、患者が試験で陽性となった活性化可能抗体の治療的有効量が投与される。
本方法およびキットのいくつかの態様において、本開示の活性化可能抗体での処置に適した患者集団を同定するかまたはそうでなければ精緻化するために本方法またはキットが用いられる。例えば、これらの方法において試験されている活性化可能抗体の切断可能部分(CM)における基質を切断するプロテアーゼおよび標的(例えば、標的)の両方の検査で陽性となる患者は、そのようなCMを含むそのような活性化可能抗体による処置に適した候補として同定される。同様に、これらの方法を用いて試験されている活性化可能抗体中のCMにおける基質を切断するプロテアーゼおよび標的(例えば、標的)の両方の検査で陰性となる患者は、別の治療形態に適した候補として同定されうる。いくつかの態様において、そのような患者は、処置に適した活性化可能抗体(例えば、疾患の部位で患者により切断されるCMを含む活性化可能抗体)が同定されるまで他の活性化可能抗体で試験することができる。いくつかの態様において、標的(例えば、標的)の一方の検査で陰性となる患者は、そのようなCMを含むそのような活性化可能抗体による処置に適した候補として同定される。いくつかの態様において、標的(例えば、標的)の一方の検査で陰性となる患者は、そのようなCMを含むそのような活性化可能抗体による処置に適した候補ではないとして同定される。いくつかの態様において、そのような患者は、処置に適した活性化可能抗体(例えば、疾患の部位で患者により切断されるCMを含む活性化可能抗体)が同定されるまで他の活性化可能抗体で試験することができる。いくつかの態様において、活性化可能抗体は、治療用作用物質がコンジュゲートされている活性化可能抗体である。いくつかの態様において、活性化可能抗体は作用物質にコンジュゲートされていない。いくつかの態様において、活性化可能抗体は、検出可能な標識を含む。いくつかの態様において、検出可能な標識はABに配置される。いくつかの態様において、対象またはサンプルにおける活性化可能抗体のレベルを測定する段階は、活性化された抗体に特異的に結合する二次試薬であって、検出可能な標識を含む該試薬を用いて達成される。いくつかの態様において、二次試薬は、検出可能な標識を含む抗体である。
いくつかの態様において、本開示の抗標的活性化可能抗体および/またはコンジュゲートされた活性化可能抗体(例えば、治療用作用物質がコンジュゲートされている活性化可能抗体)での処置に適した患者集団を同定しまたはそうでなければ精緻化し、引き続いてその活性化可能抗体および/またはコンジュゲートされた活性化可能抗体を、その必要のある対象に投与することによる処置を行うために方法またはキットが用いられる。例えば、これらの方法において試験されている活性化可能抗体および/またはコンジュゲートされた活性化可能抗体の切断可能部分(CM)における基質を切断するプロテアーゼおよび標的(例えば、標的)の両方の検査で陽性となる患者は、そのようなCMを含むそのような抗体および/またはそのようなコンジュゲートされた活性化可能抗体による処置に適した候補として同定され、患者にその後、試験された活性化可能抗体および/またはコンジュゲートされた活性化可能抗体の治療的有効量が投与される。同様に、これらの方法を用いて試験されている活性化可能抗体中のCMにおける基質を切断するプロテアーゼおよび標的(例えば、標的)の一方または両方の検査で陰性となる患者は、別の治療形態に適した候補として同定されうる。いくつかの態様において、そのような患者は、処置に適した抗体および/またはコンジュゲートされた活性化可能抗体(例えば、疾患の部位で患者により切断されるCMを含む活性化可能抗体および/またはコンジュゲートされた活性化可能抗体)が同定されるまで他の抗体および/またはコンジュゲートされた活性化可能抗体で試験することができる。いくつかの態様において、患者にその後、患者が試験で陽性となった活性化可能抗体および/またはコンジュゲートされた活性化可能抗体の治療的有効量が投与される。
これらの方法およびキットのいくつかの態様において、MMは、約4〜40アミノ酸の長さを有するペプチドである。これらの方法およびキットのいくつかの態様において、活性化可能抗体は、MMとCMとの間に位置しているリンカーペプチドを含む。これらの方法およびキットのいくつかの態様において、活性化可能抗体は、ABとCMとの間に位置しているリンカーペプチドを含む。これらの方法およびキットのいくつかの態様において、活性化可能抗体は、第1のリンカーペプチド(L1)および第2のリンカーペプチド(L2)を含み、第1のリンカーペプチドはMMとCMとの間に位置し、かつ第2のリンカーペプチドはABとCMとの間に位置している。これらの方法およびキットのいくつかの態様において、L1およびL2の各々は、約1〜20アミノ酸の長さのペプチドであり、L1およびL2の各々は同じリンカーである必要はない。これらの方法およびキットのいくつかの態様において、L1およびL2の一方または両方は、グリシン-セリン重合体を含む。これらの方法およびキットのいくつかの態様において、L1およびL2の少なくとも一方は、(GS)n、(GSGGS)n (SEQ ID NO:339)および(GGGS)n (SEQ ID NO:340)からなる群より選択されるアミノ酸配列を含み、ここでnは少なくとも1の整数である。これらの方法およびキットのいくつかの態様において、L1およびL2の少なくとも一方は、式(GGS)nを有するアミノ酸配列を含み、ここでnは少なくとも1の整数である。これらの方法およびキットのいくつかの態様において、L1およびL2の少なくとも一方は、
Figure 2020511130
からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。
これらの方法およびキットのいくつかの態様において、ABは、本明細書において提示される交差反応性抗体配列から選択される抗体または抗体断片配列を含む。これらの方法およびキットのいくつかの態様において、ABはFab断片、scFvまたは単鎖抗体(scAb)を含む。
これらの方法およびキットのいくつかの態様において、切断作用物質は、対象またはサンプル中に標的とともに共局在化されるプロテアーゼであり、CMは、プロテアーゼの基質として機能するポリペプチドであり、ここでプロテアーゼは、活性化可能抗体がプロテアーゼに曝露される場合に活性化可能抗体中のCMを切断する。これらの方法およびキットのいくつかの態様において、CMは、15アミノ酸までの長さのポリペプチドである。これらの方法およびキットのいくつかの態様において、CMはABのN末端にカップリングされる。これらの方法およびキットのいくつかの態様において、CMはABのC末端にカップリングされる。これらの方法およびキットのいくつかの態様において、CMは、ABのVL鎖のN末端にカップリングされる。
本開示の抗体、コンジュゲートされた抗体、活性化可能抗体、および/またはコンジュゲートされた活性化可能抗体は、診断および予防用製剤において用いられる。1つの態様において、活性化可能抗体は、前述の炎症、炎症性障害、がんまたは他の障害の1つまたは複数を発症する危険性のある患者に投与される。
前述の障害の1つまたは複数に対する患者または臓器の素因は、遺伝子型マーカー、血清学的マーカーまたは生化学的マーカーを用いて判定することができる。
本開示のいくつかの態様において、抗体、コンジュゲートされた抗体、活性化可能抗体、および/またはコンジュゲートされた活性化可能抗体は、前述の障害の1つまたは複数に関連する臨床的適応症と診断されたヒト個体に投与される。診断時に、抗体、コンジュゲートされた抗体、活性化可能抗体、および/またはコンジュゲートされた活性化可能抗体が、臨床的適応症の影響を緩和するか、または反転させるために投与される。
本開示の抗体、コンジュゲートされた抗体、活性化可能抗体、および/またはコンジュゲートされた活性化可能抗体はまた、患者サンプル中の標的の検出においても有用であり、したがって診断薬として有用である。例えば、本開示の抗体、コンジュゲートされた抗体、活性化可能抗体、および/またはコンジュゲートされた活性化可能抗体は、患者サンプルにおける標的レベルを検出するためにインビトロアッセイ法、例えばELISAにおいて用いられる。
1つの態様において、本開示の抗体および/または活性化可能抗体は、固体支持体(例えば、マイクロタイタープレートのウェル)上に固定化される。固定化された抗体および/または活性化可能抗体は、試験サンプル中に存在しうる任意の標的の捕捉抗体として働く。固定化された抗体および/または活性化可能抗体を患者サンプルと接触させる前に、固体支持体をすすぎ、乳タンパク質またはアルブミンのようなブロッキング剤で処理して被分析物の非特異的吸着を防ぐ。
引き続いて、抗原を含有するのではないかと疑われる試験サンプルを用いて、または標準の抗原量を含有する溶液を用いてウェルを処理する。そのようなサンプルは、例えば、病態の診断になると考えられる循環血中抗原のレベルを有するのではないかと疑われる対象由来の血清サンプルである。試験サンプルまたは標準物質をすすいだ後、固体支持体を、検出可能に標識されている二次抗体で処理する。標識された二次抗体は、検出用抗体として働く。検出可能な標識のレベルを測定し、標準サンプルから作成した標準曲線との比較によって試験サンプル中の標的抗原の濃度を判定する。
インビトロ診断アッセイ法において、本開示の抗体および/または活性化可能抗体を用いて得られた結果に基づき、標的抗原の発現レベルに基づいて対象において疾患を病期分類することが可能であるものと理解されよう。所与の疾患について、血液のサンプルは、疾患進行の様々な段階にあると診断された対象から、および/または疾患の治療的処置における様々な時点で採取される。進行または治療の各段階について統計的に有意な結果を提供するサンプルの集団を用いて、各段階に特徴的であるとみなされうる抗原の濃度の範囲が指定される。
抗体、コンジュゲートされた抗体、活性化可能抗体および/またはコンジュゲートされた活性化可能抗体はまた、診断方法および/または撮像方法において用いることもできる。いくつかの態様において、そのような方法はインビトロの方法である。いくつかの態様において、そのような方法はインビボの方法である。いくつかの態様において、そのような方法はインサイチューの方法である。いくつかの態様において、そのような方法はエクスビボの方法である。例えば、酵素的に切断可能なCMを有する活性化可能抗体を用いて、CMを切断することができる酵素の有無を検出することができる。そのような活性化可能抗体は、診断法において用いることができ、これには、所与の宿主生物の所与の細胞または組織において活性化された抗体(すなわち、活性化可能抗体の切断から生じる抗体)の、測定された蓄積による酵素活性(または、いくつかの態様において、ジスルフィド結合の還元をもたらすことができるものなどの増大した還元電位の環境)のインビボでの検出(例えば、定性的または定量的)が含まれうる。活性化された抗体のそのような蓄積からは、組織が酵素活性(またはCMの性質に依って増大した還元電位)を発現することだけでなく、活性化された抗体が結合する標的を組織が発現することも示唆される。
例えば、CMは、腫瘍の部位、生物学的に限定された部位(例えば、膿瘍中、臓器中などのような)におけるウイルス感染または細菌感染の部位などで見出されるプロテアーゼのプロテアーゼ基質であるように選択することができる。ABは、標的抗原に結合するものであることができる。当業者によく知られている方法を用いて、検出可能な標識(例えば、蛍光標識または放射性標識または放射性追跡子)をABまたは活性化可能抗体の他の領域にコンジュゲートさせることができる。好適な検出可能な標識は、上記のスクリーニング方法の文脈において論じられており、さらなる具体的な例が以下に提供されている。関心対象の疾患組織において活性が上昇するプロテアーゼとともに、疾患状態のタンパク質またはペプチドに特異的なABを用いることにより、活性化可能抗体は、CM特異的な酵素が検出可能なレベルで存在しない、もしくは疾患組織におけるよりも低いレベルで存在するか、または不活性である(例えば、酵素前駆体の形態にあるもしくは阻害物質との複合体の状態にある)組織と比べて、疾患組織への結合速度の増大を示すであろう。小さなタンパク質およびペプチドが腎臓ろ過システムによって血液から迅速に除去されるため、およびCMに特異的な酵素が検出可能なレベルで存在しない(または非疾患組織ではより低いレベルで存在するか、もしくは不活性なコンフォメーションで存在する)ので、疾患組織における活性化された抗体の蓄積は、非疾患組織と比べて増大する。
別の例では、活性化可能抗体を用いて、サンプル中の切断作用物質の有無を検出することができる。例えば、活性化可能抗体が酵素による切断を受けやすいCMを含む場合、活性化可能抗体を用いて、サンプル中の酵素の存在を(定性的または定量的に)検出することができる。別の例では、活性化可能抗体が還元剤による切断を受けやすいCMを含む場合、活性化可能抗体を用いて、サンプルにおける還元条件の存在を(定性的または定量的に)検出することができる。これらの方法における分析を容易にするために、活性化可能抗体を検出可能に標識することができ、支持体(例えば、スライドまたはビーズのような固体支持体)に結合させることができる。検出可能な標識は、活性化可能抗体の、切断後に放出されない部分に配置することができ、例えば、検出可能な標識は、切断が行われるまで検出できない消光された蛍光標識または他の標識であることができる。アッセイ法は、例えば、固定化された検出可能に標識された活性化可能抗体を、切断が行われるのに十分な時間、酵素および/または還元剤を含有するのではないかと疑われるサンプルと接触させ、次に洗浄して過剰なサンプルおよび夾雑物を除去することによって行うことができる。次に、サンプル中の切断作用物質(例えば、酵素または還元剤)の有無を、サンプルと接触させる前の活性化可能抗体の検出可能なシグナルの変化、例えば、サンプル中の切断作用物質による活性化可能抗体の切断に起因する検出可能なシグナルの存在および/または増加によって評価する。
そのような検出方法は、切断時に活性化可能抗体のABに結合できる標的の有無の検出を同様に提供するように適合させることができる。したがって、アッセイ法は、切断作用物質の有無および関心対象の標的の有無を評価するように適合させることができる。切断作用物質の有無は、上記のように活性化可能抗体の、検出可能な標識の存在および/または増加によって検出することができ、標的の有無は、例えば検出可能に標識された抗標的抗体の使用による、標的-AB複合体の検出によって検出することができる。
活性化可能抗体はまた、例えばプロテアーゼ切断、および特定の標的への結合による、活性化可能抗体活性化の検証のためのインサイチュー撮像においても有用である。インサイチュー撮像は、細胞培養または組織切片のような生体サンプルにおけるタンパク質分解活性および標的の局在確認を可能にする技法である。この技法を用いて、検出可能な標識(例えば、蛍光標識)の存在に基づき、所与の標的への結合およびタンパク質分解活性の両方を確認することが可能である。
これらの技法は、疾患部位(例えば腫瘍組織)または健常組織に由来するどんな凍結細胞または組織でも有用である。これらの技法はまた、新鮮な細胞または組織サンプルでも有用である。
これらの技法においては、活性化可能抗体は検出可能な標識で標識される。検出可能な標識は、蛍光色素(例えばフルオレセインイソチオシアネート(FITC)、ローダミンイソチオシアネート(TRITC)、近赤外(NIR)色素(例えば、Qdot(登録商標)ナノクリスタル)、コロイド金属、ハプテン、放射性マーカー、ビオチンおよびストレプトアビジンのような増幅試薬、または酵素(例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼまたはアルカリホスファターゼ)であり得る。
標識された活性化可能抗体とともにインキュベートされたサンプル中の標識の検出は、サンプルが標的を含み、活性化可能抗体のCMに特異的なプロテアーゼを含有することを示す。いくつかの態様において、本明細書において記述されるものなどの広域プロテアーゼ阻害剤を用いることにより、および/またはプロテアーゼに特異的な作用物質、例えば、プロテアーゼのマトリプターゼに特異的であり、マトリプターゼのタンパク質分解活性を阻害する、A11のような抗体を用いることにより、プロテアーゼの存在を確認することができる；例えば、2010年11月11日付で刊行された国際公開番号WO 2010/129609を参照されたい。活性化可能抗体のCMに特異的なプロテアーゼまたはプロテアーゼのクラスを同定するために、本明細書において記述されるものなどの広域プロテアーゼ阻害剤を用いる、および/またはより選択的な阻害剤を用いることによる同じ手法を用いることができる。いくつかの態様において、標的の存在は標的に特異的な作用物質、例えば、別の抗体を用いて確認することができ、または検出可能な標識は非標識の標的と競合させることができる。いくつかの態様において、標識された二次抗体またはより複雑な検出系による検出とともに、標識されていない活性化可能抗体を用いることができる。
同様の技法はまた、対象、例えば、ヒトを含む哺乳動物における蛍光シグナルの検出から、疾患部位が標的を含み、かつ活性化可能抗体のCMに特異的なプロテアーゼを含むことが示唆される、インビボ撮像にも有用である。
これらの技法はまた、活性化可能抗体におけるプロテアーゼ特異的CMに基づく種々の細胞、組織および生物におけるプロテアーゼ活性を検出、同定、または特性を明らかにするためのキットにおいておよび/または試薬として有用である。
いくつかの態様において、インサイチュー撮像および/またはインビボ撮像は、どの患者を処置するかを同定する方法において有用である。例えば、インサイチュー撮像では、活性化可能抗体を用いて患者サンプルをスクリーニングし、適切なプロテアーゼおよび標的を適切な位置、例えば腫瘍部位に有する患者を同定する。
いくつかの態様において、本開示の活性化可能抗体での処置に適した患者集団を同定するかまたはそうでなければ精緻化するためにインサイチュー撮像が用いられる。例えば、試験されている活性化可能抗体の切断可能部分(CM)における基質を切断するプロテアーゼおよび標的の両方の検査で陽性となる(例えば、疾患部位に活性化された抗体を蓄積させる)患者は、そのようなCMを含むそのような活性化可能抗体による処置に適した候補として同定される。同様に、これらの方法を用いて試験されている活性化可能抗体中のCMにおける基質を切断するプロテアーゼおよび標的の一方または両方の検査で陰性となる患者は、別の治療形態に適した(すなわち、試験されている活性化可能抗体での処置に適していない)候補として同定される。いくつかの態様において、第1の活性化可能抗体に関する検査で陰性となるそのような患者は、処置に適した活性化可能抗体(例えば、疾患の部位で患者により切断されるCMを含む活性化可能抗体)が同定されるまで、異なるCMを含む他の活性化可能抗体で試験することができる。
いくつかの態様において、本開示の活性化可能抗体での処置に適した患者集団を同定するかまたはそうでなければ精緻化するためにインビボ撮像が用いられる。例えば、試験されている活性化可能抗体の切断可能部分(CM)における基質を切断するプロテアーゼおよび標的の両方の検査で陽性となる(例えば、疾患部位に活性化された抗体を蓄積させる)患者は、そのようなCMを含むそのような活性化可能抗体による処置に適した候補として同定される。同様に、検査で陰性となる患者は、別の治療形態に適した(すなわち、試験されている活性化可能抗体での処置に適していない)候補として同定される。いくつかの態様において、第1の活性化可能抗体に関する検査で陰性となるそのような患者は、処置に適した活性化可能抗体(例えば、疾患の部位で患者により切断されるCMを含む活性化可能抗体)が同定されるまで、異なるCMを含む他の活性化可能抗体で試験することができる。
薬学的組成物
本開示の抗体、コンジュゲートされた抗体、活性化可能抗体、および/またはコンジュゲートされた活性化可能抗体(本明細書において「活性化合物」ともいわれる)、ならびにその誘導体、断片、類似体および相同体は、投与に適した薬学的組成物に組み入れることができる。そのような組成物は、典型的には、抗体、コンジュゲートされた抗体、活性化可能抗体、および/またはコンジュゲートされた活性化可能抗体ならびに薬学的に許容される担体を含む。本明細書において用いられる場合、「薬学的に許容される担体」という用語は、薬学的投与に適合する任意のおよび全ての溶媒、分散媒、コーティング、抗菌剤および抗真菌剤、等張剤および吸収遅延剤などを含むことが意図される。好適な担体は、参照により本明細書に組み入れられる、この分野における標準的な参考テキストであるRemington's Pharmaceutical Sciencesの最新版に記述されている。そのような担体または希釈剤の好適な例としては、水、生理食塩水、リンゲル溶液、デキストロース溶液、および5%ヒト血清アルブミンが挙げられるが、これらに限定されることはない。リポソームおよび固定油のような非水性媒体も用いられうる。薬学的に活性な物質のためのそのような媒質および剤の使用は、当技術分野において周知である。任意の従来の媒質または剤が活性化合物と不適合である場合を除いて、組成物におけるその使用が企図される。補充性の活性化合物を組成物に組み入れることもできる。
本発明による薬学的組成物は本発明の抗体/活性化可能抗体と担体を含んでもよい。これらの薬学的組成物は、例えば、診断キットのような、キットに含まれてもよい。
いくつかの態様において、薬学的組成物は、本開示の抗体、本開示の活性化可能抗体、本開示のコンジュゲートされた抗体、および/または本開示のコンジュゲートされた活性化可能抗体、および担体を含む。いくつかの態様において、薬学的組成物はさらなる作用物質を含む。いくつかの態様において、さらなる作用物質は治療用作用物質である。
本開示の薬学的組成物は、その意図される投与経路に適合するように処方される。投与経路の例としては非経口、例えば、静脈内、皮内、皮下、経口(例えば、吸入)、経皮(すなわち、局所)、経粘膜および直腸投与が挙げられる。非経口、皮内、または皮下適用に用いられる溶液または懸濁液は、以下の成分：注射用水、生理食塩水溶液、固定油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコールまたは他の合成溶媒のような滅菌希釈剤；ベンジルアルコールまたはメチルパラベンのような抗菌剤；アスコルビン酸または重亜硫酸ナトリウムのような抗酸化剤；エチレンジアミン四酢酸(EDTA)のようなキレート剤；酢酸塩、クエン酸塩またはリン酸塩のような緩衝液、および塩化ナトリウムまたはデキストロースのような張度調整剤を含むことができる。pHは、塩酸または水酸化ナトリウムのような、酸または塩基で調節することができる。非経口調製物は、ガラスまたはプラスチック製のアンプル、使い捨て注射器または複数回投与バイアルに封入することができる。
注射可能な用途に適した薬学的組成物は、滅菌水溶液(水溶性の場合)または滅菌分散液および注射可能な滅菌溶液または滅菌分散液の即時調製用の滅菌粉末を含む。静脈内投与の場合、好適な担体としては、生理食塩水、静菌水、Cremophor EL (商標) (BASF, Parsippany, N.J.)またはリン酸緩衝生理食塩水(PBS)が挙げられる。いかなる場合でも、この組成物は無菌でなければならず、容易に注射できる程度に流動性とするべきである。これは製造および保存の条件下で安定でなければならず、これは細菌および真菌などの微生物の汚染作用に対して保護されなければならない。この担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール(例えば、グリセロール、プロピレングリコール、および液体ポリエチレングリコールなど)、およびその好適な混合物を含む溶媒または分散媒とすることができる。その適切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティングの使用により、分散液の場合には必要とされる粒径の維持によりおよび界面活性剤の使用により維持することができる。微生物の作用からの保護はさまざまな抗菌剤および抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸、チメロサールなどにより達成することができる。いくつかの態様において、等張剤、例えば、糖類、マンニトール、ソルビトールなどの多価アルコール、塩化ナトリウムを組成物の中に含めることが望ましいであろう。注射可能な組成物の持続的吸収は、吸収を遅延させる作用物質、例えば、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンを組成物の中に含めることにより実現することができる。
注射可能な滅菌溶液は、必要とされる量の活性化合物を適切な溶媒中に、必要に応じて、上記に列挙した成分の一つまたは組み合わせとともに組み入れ、続けてろ過滅菌を行うことによって調製することができる。一般に、分散液は活性化合物を、基本的な分散媒および上記に列挙したものから必要とされるその他の成分を含む滅菌媒体の中に組み入れることによって調製される。注射可能な滅菌溶液の調製用の滅菌粉末の場合、調製の方法は、活性成分に加えて所望とされる付加的な任意の成分の粉末を予め滅菌ろ過したその溶液からもたらす真空乾燥法および凍結乾燥法である。
経口用組成物は一般に、不活性希釈剤または食用担体を含む。それらはゼラチンカプセルの中に封入され、または錠剤に圧縮されることができる。治療的な経口投与を目的に、活性化合物を賦形剤とともに組み入れて、錠剤、トローチ、またはカプセルの形態で使用することができる。経口用組成物はうがい薬として用いるために液体担体を使用して調製することもでき、この場合、液体担体中の化合物は経口的に適用され、かつこれで口をすすぎ(swished)、かつ喀出されまたは嚥下される。薬学的に適合する結合剤および/または補助物質を、組成物の一部として含めることができる。この錠剤、丸剤、カプセル、トローチなどは、以下の成分のいずれかまたは似通った性質の化合物を含むことができる：微結晶性セルロース、トラガカントゴムもしくはゼラチンのような結合剤；でんぷんもしくはラクトースのような賦形剤、アルギン酸、Primogel、もしくはとうもろこしでんぷんのような崩壊剤；ステアリン酸マグネシウムもしくはSterotesのような滑沢剤；コロイド状二酸化ケイ素のような流動促進剤；スクロースもしくはサッカリンのような甘味剤；またはペパーミント、サリチル酸メチル、もしくはオレンジ風味のような香料添加剤。
吸入による投与の場合、化合物は、適した噴射剤、例えば、二酸化炭素のようなガスを含有する加圧容器もしくは分注機、または噴霧器からエアロゾルスプレイの形態で送達される。
全身投与を経粘膜的なまたは経皮的な手段によるものとすることもできる。経粘膜投与または経皮投与の場合、浸透される障壁に適した浸透剤が処方物の中に用いられる。そのような浸透剤は一般に当技術分野において公知であり、例えば、経粘膜投与の場合、界面活性剤、胆汁塩、およびフシジン酸誘導体を含む。経粘膜投与は鼻腔用スプレイまたは坐剤の使用により達成することができる。経皮投与の場合、活性化合物は当技術分野において一般に公知であるように軟膏剤、膏薬、ゲル、またはクリームの中に処方される。
化合物はまた、直腸送達のために坐剤(例えば、ココアバターおよび他のグリセリドのような従来の坐剤基剤を用いて)または停留浣腸の形態で調製することもできる。
1つの態様において、活性化合物はインプラントおよびマイクロカプセル化した送達系を含めて、制御放出処方物のような、体内からの迅速除去から化合物を防御する担体とともに調製される。エチレン酢酸ビニル、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、およびポリ乳酸のような、生体分解性の生体適合性高分子を用いることができる。そのような処方物の調製方法は当業者には明らかであろう。その材料はAlza社およびNova Pharmaceuticals社から商業的に入手することもできる。リポソーム懸濁液(ウイルス抗原に対するモノクローナル抗体によって感染細胞を標的とするリポソームを含めて)を薬学的に許容される担体として用いることもできる。これらは当業者に公知の方法により、例えば、米国特許第4,522,811号に記述されているように、調製することができる。
投与の容易さおよび投与量の均一性のために、経口用組成物または非経口用組成物を投与量単位形態で処方することが特に有利である。投与量単位形態とは、本明細書において用いられる場合、処置される対象のために単一投与量として適した、物理的に不連続な単位をいい、各単位は、所望の治療効果を生じると計算された所定量の活性化合物を、必要とされる薬学的担体に関連して含有する。本開示の投与量単位形態の仕様は、活性化合物の独特の特徴および達成されたい特定の治療効果、ならびにそのような活性化合物を個体の処置のために配合する技術に固有の制限により決定され、それらに直接依存する。
薬学的組成物は、投与のための使用説明書とともに容器、パックまたは分注機に含めることができる。
本発明は、特許請求の範囲に記述された本発明の範囲を限定するものではない以下の実施例においてさらに記述されよう。
実施例1. 抗ヒトCD147抗体の特徴付け
本明細書において提供される研究は、本開示の抗ヒトCD147抗体の結合を評価するためにデザインされた。
本開示の抗ヒトCD147モノクローナル抗体は、当技術分野において公知の技法にしたがってマウスハイブリドーマ技術を用いて得られた。マウスをヒトCD147細胞外ドメイン(ECD)で免疫し、その後のハイブリドーマをELISAによりヒトCD147 ECDへの結合についてスクリーニングし、その後、piggybackアッセイ法において細胞毒性であることを確認し、FACSにより細胞表面に結合することを確認した。本開示のマウスCD147 3A11モノクローナル抗体は、SEQ ID NO:4の重鎖可変領域(VH)、およびSEQ ID NO:9の軽鎖可変領域(VL)を含み、本明細書において記述される場合に陽性対照として用いられた。
マウス抗ヒトCD147モノクローナル抗体3A11をヒト化して、ヒト化抗ヒトCD147重鎖hu 3A11 Hc1 (SEQ ID NO:1のVH)、hu 3A11 Hc2 (SEQ ID NO:2のVH)、およびhu 3A11 Hc3 (SEQ ID NO:3のVH)、ならびにヒト化抗3A11軽鎖hu 3A11 Lc1 (SEQ ID NO:5のVL)、hu 3A11 Lc2 (SEQ ID NO:6のVL)、hu 3A11 Lc3 (SEQ ID NO:7のVL)、およびhu 3A11 Lc4 (SEQ ID NO:8のVL)を形成させた。
図1に示されるように、本開示のヒト化抗ヒトCD147モノクローナル抗体のヒトCD147ポリペプチドに対する結合親和性を、ELISAを用いてアッセイした。この例示的な研究においてアッセイされた本開示の抗体は、hu 3A11 Lc1 / Hc1 (SEQ ID NO:5のVLおよびSEQ ID NO:1のVH)であった。マウス抗ヒトCD147モノクローナル抗体3A11 (SEQ ID NO:8のVLおよびSEQ ID NO:4のVH)を参照としてアッセイした。標準的なELISAプロトコルを用いて、ヒトCD147タンパク質をELISAプレートに吸収させ、その後、表示された濃度の本開示の抗体とともにインキュベートした。結合された本開示のヒト化抗体を抗ヒトFab-ペルオキシダーゼ二次抗体で検出し、マウス3A11モノクローナル抗体を抗マウスFc-ペルオキシダーゼ二次抗体、およびUltra TMB検出(Thermo Fisher Scientific)で検出した。この例示的な結合研究の見かけの平衡解離定数(KD)を表12に示す。
（表１２）ヒトCD147に対するマウス抗ヒトCD147抗体の平衡解離定数
Figure 2020511130
図2に示されるように、本開示のヒト化抗ヒトCD147モノクローナル抗体のヒトCD147ポリペプチドに対する結合親和性を、ELISAを用いてアッセイした。この例示的な研究においてアッセイされた本開示の抗体は、hu 3A11 Lc1 / hu 3A11 Hc1 (SEQ ID NO:5のVLおよびSEQ ID NO:1のVH)、hu 3A11 Lc2 / hu 3A11 Hc2 (SEQ ID NO:6のVLおよびSEQ ID NO:2のVH)、hu 3A11 Lc4 / hu 3A11 Hc2 (SEQ ID NO:8のVLおよびSEQ ID NO:2のVH)であった。標準的なELISAプロトコルを用いて、ヒトCD147タンパク質をELISAプレートに吸収させ、その後、表示された濃度の本開示の抗体とともにインキュベートした。結合された本開示のヒト化抗体を抗ヒトFab-ペルオキシダーゼ二次抗体、およびUltra TMB検出(Thermo Fisher Scientific)で検出した。この例示的な結合研究の見かけの平衡解離定数(KD)を表13に示す。
（表１３）ヒトCD147に対するヒト化抗ヒトCD147抗体の平衡解離定数
Figure 2020511130
実施例2. 抗ヒトCD147媒介性の細胞株細胞毒性
本実施例は、例示的なヒト細胞株が抗ヒトCD147標的細胞毒性に対する感受性を実証したことを示す。
図3A〜3Hは、ある特定の細胞株において細胞毒性を誘導する本開示のヒト化抗ヒトCD147 hu 3A11 Lc1 / Hc1抗体の能力を示す。この例示的なアッセイ法において試験された細胞株は、さまざまな癌(Detroit 562、KYSE150、A253、SCC25、SCC9、BHY、KYSE70、およびSCC1)に由来した。この例示的なアッセイ法では、表示された細胞株を、標準的な細胞培養技法を用いて培養し、1ウェルあたり細胞500〜1000個の密度でプレーティングした。本開示のヒト化抗ヒトCD147 3A11 Lc1 / Hc1モノクローナル抗体(SEQ ID NO:1のVH；SEQ ID NO:5のVL)および抗ヒトマウスIgG1-MMAE対照を表示された濃度で細胞株に適用し、vc-MMAEコンジュゲート二次抗体(vc-MMAEにコンジュゲートされたマウス抗ヒト二次抗体)を抗ヒトCD147抗体と等しい濃度で添加した。プレートを細胞死について視覚的にモニタリングし、Celltiter Glo (Promega)を用いて3〜7日後に細胞毒性について評価した。vc-MMAEのみにコンジュゲートされた二次抗体を対照として用いた。図3A〜3Hに示されるように、未処理細胞と比べて抗ヒトCD147抗体およびvc-MMAEコンジュゲート二次抗体により処理された細胞の生存性を示す例示的なグラフが描かれている。本開示の抗ヒトCD147抗体によって処理された複数の例示的な細胞株のEC50を表14に示す。
（表１４）抗ヒトCD147媒介性の細胞毒性
Figure 2020511130
Figure 2020511130
実施例3. マスクの発見
本明細書において提供される研究は、本開示の活性化可能抗ヒトCD147抗体で用いるためのマスキング部分を同定および特徴付けるためにデザインされた。
本開示のヒト化抗ヒトCD147 3A11マウスモノクローナル抗体huHc1 / huLc1 (SEQ ID NO:1のVHおよびSEQ ID NO:5のVL)を用いて、2010年7月15日付で公開されたPCT国際公開番号WO 2010/081173に記述されている方法と同様の方法を使い、4×1010の総多様性を有し、Xが任意のアミノ酸であるランダムX15ペプチドライブラリーをスクリーニングした。スクリーニングには、1ラウンドの磁気活性化細胞選別(MACS)および3ラウンドの蛍光活性化細胞選別(FACS)が含まれた。MACSおよびFACS選別スキームは、図4に概略的に描かれている。MACS選別をプロテイン-A Dynabeads(登録商標) (Invitrogen)で行い、抗ヒトCD147 3A11抗体を200 nMの濃度で用いた。MACSラウンドの場合、細胞およそ1×1012個を結合についてスクリーニングし、細胞1×107個を収集した。
本開示の抗ヒトCD147 3A11を、標準的なプロトコルを用いてAlexaFluor-488 (Invitrogen)とコンジュゲートさせた。CD147結合活性を確認し、AlexaFluor-488 (Ab-488)とコンジュゲートさせた抗ヒトCD147 3A11を全FACSラウンドの蛍光プローブとして用いた。その後、FACSラウンドから収集された細菌細胞を染色し、陽性クローンを以下のように(および米国特許出願公開第US 2009/0062142号にさらに詳細に記述されているように)標識および選別した: FACSラウンド1での10 nM 3A11-488で最も明るい2%の細胞(M1F1)を収集し、FACSラウンド2.1での1 nM 3A11-488では最も明るい上位0.2%の細胞(M1F2.1)または最も明るい12%の細胞(M1F2.2)を収集し、室温でPBS中8分のオフ速度スクリーニングを用いたFACSラウンド3.1での100 pM 3A11-488では上位0.1%の細胞を収集した。M1F2.1、M1F2.2、およびM1F3.1集団の個々のクローンを配列決定し、表15に示した。
（表１５）抗ヒトCD147マスキング部分(MM)
Figure 2020511130
Figure 2020511130
Figure 2020511130
図5に示されるように、本開示のヒト化抗ヒトCD147 3A11モノクローナル抗体の結合親和性を、ある特定の抗ヒトCD147マスキング部分クローンを呈する個々の細菌クローンに対して試験した。この例示的なアッセイ法において、各細菌クローンは、10 nM、1 nM、または0.1 nMの本開示のAlexaFluor-488標識ヒト化3A11抗体(SEQ ID NO:1のVHおよびSEQ ID NO:5のVL)と結合した。細胞をyPet (100 nM)で標識し、各クローンの表面発現を測定した。試験されたマスキング部分は、上記のようにクローン番号で示されている。
これらのマスキングペプチドを用いて、本開示の抗ヒトCD147活性化可能抗体を作製した。これらのある特定の抗ヒトCD147活性化可能抗体の配列を以下の表17に示す。いくつかの態様において、これらの抗ヒトCD147活性化可能抗体には、表示のように、切断可能部分2001
Figure 2020511130
、切断可能部分3001
Figure 2020511130
、切断可能部分2007
Figure 2020511130
、切断可能部分2008
Figure 2020511130
、切断可能部分2011
Figure 2020511130
、切断可能部分2012
Figure 2020511130
、切断可能部分2013
Figure 2020511130
、切断可能部分3007
Figure 2020511130
、切断可能部分3008
Figure 2020511130
、切断可能部分3011
Figure 2020511130
、切断可能部分3012
Figure 2020511130
、または切断可能部分3013
Figure 2020511130
が含まれる。
以下に示されるある特定の配列はSEQ ID NO:645のスペーサー配列を含むが、当業者は、本開示の活性化可能抗ヒトCD147抗体が、例えば、QGQSGQG (SEQ ID NO:645)、QGQSGQ (SEQ ID NO:424)、QGQSG (SEQ ID NO:646)、QGQS (SEQ ID NO:647)、QGQ (SEQ ID NO:648)、QG (SEQ ID NO:649)、GQSGQG (SEQ ID NO:666)、QSGQG (SEQ ID NO:667)、SGQG (SEQ ID NO:668)、GQG (SEQ ID NO:669)、G、またはQからなる群より選択されるスペーサーのような、任意の適当なスペーサー配列を含みうることを理解する。いくつかの態様において、本開示の活性化可能抗ヒトCD147抗体は、そのN末端に連結されたスペーサー配列を有しない場合がある。
（表１６）抗ヒトCD147抗体配列
Figure 2020511130
Figure 2020511130
Figure 2020511130
Figure 2020511130
（表１７）抗ヒトCD147活性化可能抗体配列
Figure 2020511130
Figure 2020511130
Figure 2020511130
Figure 2020511130
Figure 2020511130
図6Aおよび6Bに示されるように、本開示の抗ヒトCD147活性化可能抗体のヒトCD147ポリペプチドに対する結合親和性を、ELISAを用いてアッセイした。この例示的研究においてアッセイされた本開示の活性化可能抗体は、(a) hu 3A11 Hc1 / Lc1-215-3001 (SEQ ID NO:140のVLおよびSEQ ID NO:1のVH)、(b) hu 3A11 Hc1 / Lc1-216-3001 (SEQ ID NO:141のVLおよびSEQ ID NO:1のVH)、(c) hu 3A11 Hc1 / Lc1-217-3001 (SEQ ID NO:142のVLおよびSEQ ID NO:1のVH)、(d) hu 3A11 Hc1 / Lc1-221-3001 (SEQ ID NO:143のVLおよびSEQ ID NO:1のVH)、(e) hu 3A11 Hc1 / Lc1-253-3001 (SEQ ID NO:144のVLおよびSEQ ID NO:1のVH)、(f) hu 3A11 Hc1 / Lc1-414-3001 (SEQ ID NO:145のVLおよびSEQ ID NO:1のVH)、(g) hu 3A11 Hc1 / Lc1-415-3001 (SEQ ID NO:146のVLおよびSEQ ID NO:1のVH)、(h) hu 3A11 Hc1 / Lc1-416-3001 (SEQ ID NO:147のVLおよびSEQ ID NO:1のVH)、(i) hu 3A11 Hc1 / Lc1-419-3001 (SEQ ID NO:148のVLおよびSEQ ID NO:1のVH)、(j) hu 3A11 Hc1 / Lc1-422-3001 (SEQ ID NO:149のVLおよびSEQ ID NO:1のVH)、(k) hu 3A11 Hc1 / Lc1-428-3001 (SEQ ID NO:152のVLおよびSEQ ID NO:1のVH)、(l) hu 3A11 Hc1 / Lc1-445-3001 (SEQ ID NO:156のVLおよびSEQ ID NO:1のVH)、(m) hu 3A11 Hc1 / Lc1-443-3001 (SEQ ID NO:154のVLおよびSEQ ID NO:1のVH)、ならびに(n) hu 3A11 Hc1 / Lc1-440-3001 (SEQ ID NO:153のVLおよびSEQ ID NO:1のVH)であった。本開示のヒト化抗ヒトCD147抗体hu 3A11 Hc1 / Lc1 (SEQ ID NO:5のVLおよびSEQ ID NO:1のVH)を対照として用いた。
標準的なELISAプロトコルを用いて、ヒトCD147タンパク質をELISAプレートに吸収させ、その後、表示された濃度の本開示の抗体とともにインキュベートした。結合された本開示のヒト化活性化可能抗体を抗ヒトFab-ペルオキシダーゼ二次抗体およびUltra TMB検出(Thermo Fisher Scientific)で検出した。この例示的な結合研究の見かけの解離定数を表18に示す。
（表１８）抗ヒトCD147活性化可能抗体のヒトCD147に対する平衡解離定数
Figure 2020511130
実施例4. マスクグリコシル化変異体および切断の評価
本明細書において提供される研究は、本開示の活性化可能抗ヒトCD147抗体で用いるためのグリコシル化変異体を有するマスキング部分および切断型マスキング部分を同定および特徴付けるためにデザインされた。
表19に示されるように、潜在的なグリコシル化部位を除去するためのアミノ酸置換、または単離されたマスキング部分の切断型であるバリアントのいずれかを含むJS10414およびJS10419マスキング変異体のバリアントが構築された。
（表１９）抗ヒトCD147切断型マスキング部分(MM)
Figure 2020511130
表20に示されるように、本発明の活性化可能抗体は、本発明のある特定のマスキング部分バリアントを含むように構築された。
（表２０）抗ヒトCD147活性化可能抗体配列
Figure 2020511130
Figure 2020511130
Figure 2020511130
Figure 2020511130
Figure 2020511130
Figure 2020511130
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Figure 2020511130
Figure 2020511130
Figure 2020511130
Figure 2020511130
Figure 2020511130
Figure 2020511130
Figure 2020511130
Figure 2020511130
Figure 2020511130
Figure 2020511130
図7A、7B、および7Cに示されるように、本開示の抗ヒトCD147活性化可能抗体のヒトCD147ポリペプチドに対する結合親和性を、ELISAを用いてアッセイした。図7Aに描かれた例示的研究においてヒトCD147ポリペプチドへの結合についてELISAによりアッセイされた本開示の活性化可能抗体は、(a) hu 3A11 Hc1 / Lc1-414-3001 (SEQ ID NO:145のVLおよびSEQ ID NO:1のVH)、(b) hu 3A11 Hc1 / Lc1-414.1-3001 (SEQ ID NO:157のVLおよびSEQ ID NO:1のVH)、(c) hu 3A11 Hc1 / Lc1-414.2-3001 (SEQ ID NO:158のVLおよびSEQ ID NO:1のVH)、(d) hu 3A11 Hc1 / Lc1-414.3-3001 (SEQ ID NO:159のVLおよびSEQ ID NO:1のVH)、(e) hu 3A11 Hc1 / Lc1-419.1-3001 (SEQ ID NO:160のVLおよびSEQ ID NO:1のVH)、(f) hu 3A11 Hc1 / Lc1-419.2-3001 (SEQ ID NO:161のVLおよびSEQ ID NO:1のVH)、(g) hu 3A11 Hc1 / Lc1-419.3-3001 (SEQ ID NO:162のVLおよび SEQ ID NO:1のVH)であり、本開示のヒト化抗ヒトCD147 3A11抗体(SEQ ID NO:5のVLおよびSEQ ID NO:1のVH)もアッセイされた。
図7Bに描かれた例示的研究においてヒトCD147ポリペプチドへの結合についてELISAによりアッセイされた本開示の活性化可能抗体は、(a) hu 3A11 Hc1 / Lc1-414.3-2012 (SEQ ID NO:163のVLおよびSEQ ID NO:1のVH)、(b) hu 3A11 Hc1 / Lc1-414.4-2012 (SEQ ID NO:164のVLおよびSEQ ID NO:1のVH)、(c) hu 3A11 Hc1 / Lc1-415-2012 (SEQ ID NO:165のVLおよびSEQ ID NO:1のVH)、(d) hu 3A11 Hc1 / Lc1-415.1-2012 (SEQ ID NO:166のVLおよびSEQ ID NO:1のVH)、ならびに(e) hu 3A11 Hc1 / Lc1-419.3-2012 (SEQ ID NO:167のVLおよびSEQ ID NO:1のVH)であり、本開示のヒト化抗ヒトCD147 3A11抗体(SEQ ID NO:5のVLおよびSEQ ID NO:1のVH)もアッセイされた。
図7Cに描かれた例示的研究においてヒトCD147ポリペプチドへの結合についてELISAによりアッセイされた本開示の活性化可能抗体は、(a) hu 3A11 Hc1 / Lc1-419.4-2012 (SEQ ID NO:168のVLおよびSEQ ID NO:1のVH)、(b) hu 3A11 Hc1 / Lc1-419.5-2012 (SEQ ID NO:169のVLおよびSEQ ID NO:1のVH)、(c) hu 3A11 Hc1 / Lc1-440-2012 (SEQ ID NO:170のVLおよびSEQ ID NO:1のVH)、ならびに(d) hu 3A11 Hc1 / Lc1-440.1-2012 (SEQ ID NO:171のVLおよびSEQ ID NO:1のVH)であり、本開示のヒト化抗ヒトCD147 3A11抗体(SEQ ID NO:5のVLおよびSEQ ID NO:1のVH)もアッセイされた。
図7A〜7Cに描かれた例示的なアッセイ法の場合、標準的なELISAプロトコルを用い、そのなかではヒトCD147タンパク質をELISAプレートに吸収させ、その後、表示された濃度の本開示の抗体とともにインキュベートした。結合された本開示のヒト化活性化可能抗体を抗ヒトFab-ペルオキシダーゼ二次抗体およびUltra TMB検出(Thermo Fisher Scientific)で検出した。この例示的な結合研究の見かけの解離定数を表21に示す。
（表２１）抗ヒトCD147活性化可能抗体のヒトCD147に対する平衡解離定数
Figure 2020511130
実施例5. 複数の原発性および転移性腫瘍におけるCD147発現
本実施例は、抗ヒトCD147抗体を用いた免疫組織化学(IHC)染色により、CD147が多種多様の原発性および転移性腫瘍型において発現されることを示す。
表22は、複数の原発腫瘍および転移組織マイクロアレイ(TMA)上で、抗ヒトCD147抗体を用いたIHC染色を使用した際に、多種多様の原発性および転移性腫瘍試料においてCD147が高度に発現されることを示す。この例示的な研究では、クエン酸ナトリウム緩衝液(10 mMクエン酸ナトリウム, 0.05% Tween-20, pH 6.0)中での標準的な熱誘導エピトープ回復法の後、10 ug/mlのマウスモノクローナル抗ヒトCD147抗体(クローンMEM-M6/1, Abcamコードab78106)を用いてヒトCD147を検出した。
（表２２）免疫組織化学(IHC)によるCD147発現レベル
Figure 2020511130
実施例6. 複数の原発性および転移性腫瘍におけるCD147発現
本実施例は、抗ヒトCD147抗体を用いた免疫組織化学(IHC)染色により、CD147が種々の患者由来の原発性腫瘍型において発現されることを示す。
図8A、8B、8C、および8Dは、複数の原発腫瘍および転移組織マイクロアレイ(TMA)上で、商業的に購入された抗ヒトCD147抗体を用いたIHC染色を使用した際に、多種多様の原発性および転移性腫瘍試料においてCD147が高度に発現されることを示す。図8Aは、複数の患者由来の腫瘍組織マイクロアレイ(TMA)上で、商業的に購入された抗ヒトCD147マウスモノクローナル抗体(クローンMEM-M6/1、Abcamコードab78106)を用いたIHC染色を使用した際に、多数かつ多種多様の患者由来の転移性腫瘍試料においてCD147が中程度または高度に発現されることを示す。図8AはTMAのCD147のIHC染色レベルの要約を示し、複数の患者由来の転移試料に由来する多数のコアが強いCD147シグナルを示したことを示す。
図8B、8C、および8Dは、頭頸部扁平上皮癌(図8B)、食道がん(図8C)、および非小細胞肺がん(図8D)における商業的に購入された抗ヒトCD147マウスモノクローナル抗体(クローンMEM-M6/1, Abcamコードab78106)を用いたIHC染色を示す。図8B、8C、および8Dは、これらの例示的ながん種が高レベルのCD147シグナルを実証することを示す。
実施例7: 複数の細胞株におけるCD147発現および抗ヒトCD147媒介細胞毒性に対する感受性
本実施例は、CD147が多くの腫瘍由来細胞株において高レベルで発現されること、およびこれらの細胞株の多くが抗ヒトCD147標的細胞毒性に対する感受性を実証したことを示す。
図9は、FACS分析による表示された細胞株におけるCD147の最大結合または相対発現を示す。本開示の3A11抗ヒトCD147抗体(SEQ ID NO:1のVH、SEQ ID NO:5のVL)、引き続きAlexa Fluor 647コンジュゲートヤギ抗マウス二次抗体を用いてFACS染色を実施した。所与の細胞株のバーの高さは、CD147由来のシグナルの相対量と、その細胞株の抗ヒトCD147の細胞表面受容体の数に対応している。所定の細胞株に対するバーの色は、細胞株がvc-MMAE毒素にコンジュゲートされた抗ヒト二次抗体の存在下において本開示の抗ヒトCD147抗体(SEQ ID NO:1のVH、SEQ ID NO:5のVL)で処理されたインビトロ細胞毒性アッセイ法での対応する細胞株の相対感度を示す。細胞株は、組み合わせた抗体薬物コンジュゲートでの処理時に1 nM未満のEC50が観察されたなら、組み合わせた抗ヒトCD147抗体と二次抗体薬物コンジュゲートでの処理時に「強力な」細胞毒性を示すと分類された。細胞株は、組み合わせた抗体薬物コンジュゲートでの処理時に5 nM〜1 nMのEC50が観察されたなら、組み合わせた抗ヒトCD147抗体と二次抗体薬物コンジュゲートでの処理時に「中程度の」細胞毒性を示すと分類された。図9は、本発明の抗ヒトCD147薬物コンジュゲートが、複数のがん由来細胞株に対して強力なまたは中程度の細胞毒性を実証したことを示す。ある特定の態様において、本発明の抗ヒトCD147抗体薬物コンジュゲートは、試験された五十九(59)種のうち四十四(44)種のがん由来細胞株に対して強力なまたは中程度の細胞毒性を実証した。ある特定の態様において、本発明の抗ヒトCD147抗体薬物コンジュゲートは、乳がん、結腸直腸がん、食道がん、胃がん、頭頸部扁平上皮癌、非小細胞肺がん、中皮腫、食道がん、卵巣がん、膵臓がん、および前立腺がんに由来するがん細胞株に対して強力なまたは中程度の細胞毒性を実証した。試験された細胞株、その由来組織、および観察されたEC50のリストを以下の表23に示す。
（表２３）さまざまな細胞株に対する抗ヒトCD147抗体薬物コンジュゲートのインビトロ細胞毒性
Figure 2020511130
Figure 2020511130
Figure 2020511130
TNBC = トリプルネガティブ乳がん；NSCLC = 非小細胞肺がん；SCLC = 小細胞肺がん；HNSCC = 頭頸部扁平上皮癌；CRC = 結腸直腸がん
実施例8: 抗ヒトCD147のヒトおよびカニクイザルCD147への結合
本実施例は、本開示の抗ヒトCD147抗体が、ヒトおよびカニクイザル細胞株上のCD147に同様の相対的親和性で結合することを示す。
図10は、本開示のhu3A11抗ヒトCD147抗体(SEQ ID NO:1のVH、SEQ ID NO:5のVL)のヒトKYSE-70食道上皮細胞株およびカニクイザル初代腎臓上皮細胞株に対する結合親和性を示す。本研究において、表示された細胞株への本開示のヒト化抗ヒトCD147抗体の結合は、標準的なFACS標識化の方法を用いて実施された。簡潔には、細胞を、表示された本開示の抗体: 抗ヒトCD147抗体(ヒト化抗ヒトCD147 hu3A11抗体；SEQ ID NO:1のVH、SEQ ID NO:5のVL)により表示された濃度で標識し、その後、Alexa Fluor 647標識ヤギ抗ヒトIgG二次抗体で検出した。これらの結果は、抗ヒトCD147 hu3A11抗体が、カニクイザル細胞株に対する抗体の親和性(1.297 nMのKD)と類似した、1.654 nMのKDでヒト細胞株に結合することを示す。
実施例9: 抗ヒトCD147活性化可能抗体薬物コンジュゲート結合活性および細胞毒性
本開示の抗ヒトCD147活性化可能抗体薬物コンジュゲートのNCI H292 (本明細書においてH292ともいわれる)細胞株への結合を、FACSを用いて評価した。簡潔には、細胞を、表示された濃度のhuCD147活性化可能抗体薬物コンジュゲート(または活性化可能抗体とともにインキュベートし、その後、Alexa Fluor 647標識ヤギ抗ヒトIgG二次抗体で検出した。図11Aに示されるように、本開示の無傷の抗ヒトCD147活性化可能抗体薬物コンジュゲート(抗ヒトCD147 hu3A11-440.1-2012-spdb-DM4, SEQ ID NO:1のVH, SEQ ID NO:171のVL)は、H292細胞に対して100 nMを上回るKdであるの親和性を示す(図11A)。本開示の抗ヒトCD147 AADCをプロテアーゼ(マトリプターゼ)で処理すると、タンパク質分解的に活性化された抗ヒトCD147 AADCの結合親和性は著しく増加する。
図11Bは、DM4にコンジュゲートされた活性化抗ヒトCD147活性化抗体(抗ヒトCD147 hu3A11-440.1-2012-spdb-DM4, SEQ ID NO:1のVH, SEQ ID NO:171のVL)がDM4にコンジュゲートされた無傷の抗ヒトCD147活性化可能抗体のEC50よりも高いEC50でインビトロにおいて細胞を死滅化させる能力を示す。DM4にコンジュゲートされた無傷抗ヒトCD147活性化可能抗体の細胞毒性は、DM4にコンジュゲートされたアイソタイプ抗体の細胞毒性と類似していた。EC50は以下の表24にまとめられている。
（表２４）ヒトH292細胞に対する抗ヒトCD147活性化可能抗体のインビトロ細胞毒性
Figure 2020511130
実施例10: HT29およびH292異種移植モデルでの活性化可能抗ヒトCD147-AADCのインビボ効力
本実施例は、本開示のコンジュゲートされた毒素を有する抗ヒトCD147活性化可能抗体(AADC)が、媒体対照と比較してマウス異種移植モデルにおいて有効であることを示す。
図12Aおよび12Bは、マウスH292 (NSCLC)異種移植モデル(図12A)およびマウスHT29 (CRC)異種移植モデル(図12B)における抗ヒトCD147活性化可能抗体薬物コンジュゲート(抗ヒトCD147 hu3A11-440.1-2012-DM4, SEQ ID NO:1のVH, SEQ ID NO:171のVL)の効力を示す。腫瘍を平均150 mm3まで成長させた；その後、マウスを異なる群に無作為化し、0日目に表示された試験品を投薬した。各群の平均腫瘍体積±SEMがプロットされている。2.5 mg/kgまたは5 mg/kgで投与された本開示の活性化可能抗体薬物コンジュゲート(抗ヒトCD147 hu3A11-440.1-2012-DM4, SEQ ID NO:1のVH, SEQ ID NO:171のVL)は、媒体対照よりも著しく高い効力を示した。各群の平均腫瘍体積±SEMがプロットされている。ADCおよびAADCの両方が腫瘍退縮を誘導する。
実施例11: カニクイザルでの抗ヒトCD147-AADCのインビボ毒性
カニクイザルにおけるDM4にコンジュゲートされた無傷抗ヒトCD147活性化可能抗体(AADC)およびDM4にコンジュゲートされた抗ヒトCD147抗体(ADC)の耐容性を、5 mg/kgの単回投薬後に評価した(図13A〜13D)。
図13A〜13Dに描かれた研究は、3週間の耐容性研究(非終端)の一環として実施された；単回投薬n=2。本研究において、約4.1の薬物抗体比(DAR)を有する本開示の無傷活性化可能抗ヒトCD147 hu3A11-440.1-2012-spdb-DM4 (「AADC」) (抗ヒトCD147 hu3A11-440.1-2012-spdb-DM4, SEQ ID NO:1のVH, SEQ ID NO:171のVL)の単回用量を、カニクイザルにおいて4.4 mg/kgで投薬し、約3.6のDARを有する本開示の抗ヒトCD147 hu3A11-spdb-DM4 (「ADC」) (抗ヒトCD147 hu3A11-spdb-DM4, SEQ ID NO:1のVH, SEQ ID NO:5のVL)を5 mg/kgで投薬した。コンジュゲートされた活性化可能抗体は、5 mg/mgで十分に耐容された。オンまたはオフターゲット毒性の証拠は観察されなかった。臨床兆候、体重減少、臨床化学または血液学的所見はなかった。
図13A〜13Dは、本開示の抗ヒトCD147活性化可能抗体薬物コンジュゲート(AADC) (抗ヒトCD147 hu3A11-440.1-2012-spdb-DM4, SEQ ID NO:1のVH, SEQ ID NO:171のVL)が、対応する親抗ヒトCD147 ADC (抗ヒトCD147 hu3A11-spdb-DM4, SEQ ID NO:1のVH, SEQ ID NO:5のVL)で処置されたサルと比較した場合に、各血液学の読み取り値と肝臓毒性の著しい変化がないことに基づいてカニクイザルでのさらに高い耐容性を実証することを示す。特に、下記の血液学的読み取り値の全てで顕著な変化を示さなかった(図13A〜13D)、本開示の活性化可能抗ヒトCD147 AADCで処置されたサルと比較して、5 mg/kgの親抗ヒトCD147 ADCで処置されたサルは、アラニントランスアミナーゼ(ALT)のレベルに基づく、より高いレベルの肝臓毒性(図13A)、好中球数に基づく重度の好中球減少症(図13B)、ならびに網状赤血球および単球の減少(図13Cおよび13D)を示した。
実施例12: カニクイザルにおける抗ヒトCD147-AADCおよび抗ヒトCD147 ADCのインビボ薬物動態および耐容性
本開示のDM4にコンジュゲートされた無傷抗ヒトCD147活性化可能抗体(AADC)および本開示のDM4にコンジュゲートされた抗ヒトCD147抗体(ADC)のカニクイザルにおける薬物動態および耐容性を、各5 mg/kgの単回用量を雄性および雌性のサルに投与した後に評価した。標準的なプロトコルを用いた抗ヒトIgGサンドイッチELISAを使って、ヒトIgGの総血清レベルを測定した。
図14は、カニクイザルにおける本開示のhu3A11-440.1-2012-DM4 (SEQ ID NO:1のVH, SEQ ID NO:171のVL)活性化可能抗体薬物コンジュゲート(AADC)およびhu3A11-DM4 (SEQ ID NO:1のVH, SEQ ID NO:5のVL)抗体薬物コンジュゲート(ADC)の薬物動態を示し、AADCが、ADCと比べて研究された雄性および雌性の動物の両方において有意に長い半減期を有することを実証した。標準的なプロトコルを用いた抗ヒトIgGサンドイッチELISAを使って、ヒトIgGの総血清レベルを測定した。図15Aおよび15Bは、試験した本開示のコンジュゲートされた活性化可能抗ヒトCD147抗体(AADC)が、試験したコンジュゲートされた抗ヒトCD147抗体(ADC)と比較して肝機能のマーカーの増加(アラニントランスアミナーゼ(ALT)のレベルに基づく)または好中球減少症(好中球数に基づく)を引き起こさないという点で十分に耐容されたことを示す。
実施例13: 抗CD147抗体のグリコシル化および脱グリコシル化CD147に対するインビトロ結合親和性
本開示の抗ヒトCD147抗体のCD147抗原に対するインビトロ結合親和性の例示的な研究を本明細書において提示する。天然のヒトCD147には3つのアルギニン(N-)グリコシル化部位が含まれる。これらの部位のグリコシル化が、高グリコシル化CD147アイソフォーム(複雑な炭水化物を有しおよそ40〜60 kDa)および低グリコシル化フォーム(マンノースを有しおよそ32 kDa)をもたらしうる。
本実施例では、Protein Deglycosylation Mix II (37℃でおよそ16時間のインキュベーション；New England Biolabs, カタログ番号P6044S)またはEnzymatic Protein Deglycosylation Kit (37℃でおよそ1.5日 +インキュベーション；Sigma-Aldrich, カタログ番号EDEGLY)を用いその各プロトコルにしたがって組み換えヒトCD147-Fcキメラタンパク質(R&D Systems, カタログ番号927-EMN-050)のN結合および単純O結合炭水化物を脱グリコシル化した。グリコシル化CD147-Fc融合タンパク質はおよそ62 kDaの位置に移動することが観察されたが、いずれかの脱グリコシル化キットで処理されたCD147-Fc融合タンパク質は52および48 kDaの位置に移動することが観察された。N結合炭水化物とO結合炭水化物の両方を含むウシフェチュインを、脱グリコシル化の程度の対照として用いた。
PBSでの緩衝液交換の後、脱グリコシル化またはグリコシル化タンパク質を1 μg/mLでELISAプレートに吸着させた。図16に示されるように、本開示のヒト化抗CD147モノクローナル抗体(SEQ ID NO:5のVLおよびSEQ ID NO:1のVHを有する3A11 Lc1 / Hc1)のインビトロ結合親和性を、表示された濃度の本開示の抗CD147ヒト化抗体とともに吸着されたタンパク質をインキュベートすることにより標準的なELISAプロトコルを用いて決定した。結合された本開示のヒト化抗体を抗ヒトFab-ペルオキシダーゼ二次抗体で検出し、マウス3A11モノクローナル抗体を抗マウスFc-ペルオキシダーゼ二次抗体、およびUltra TMB検出(Thermo Fisher Scientific)で検出した。この例示的な結合研究の見かけの平衡解離定数(KD)を表25に示す。
（表２５）グリコシル化および脱グリコシル化ヒトCD147に対する抗ヒトCD147抗体のインビトロ結合親和性
Figure 2020511130
これらの例示的なデータは、本開示の抗CD147ヒト化抗体が、同等の親和性でグリコシル化および脱グリコシル化CD147抗原に結合したことを実証する。
例示的な態様
本発明は、以下の例示的な条項を参照することによって定義されうる:

1. 哺乳動物CD147に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合断片(AB)。ヒトCD147およびカニクイザルCD147に特異的に結合する、哺乳動物CD147に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合断片(AB)。ヒトCD147に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合断片(AB)。カニクイザルCD147に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合断片(AB)。ヒトCD147およびカニクイザルCD147に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合断片(AB)。グリコシル化および脱グリコシル化されたヒトおよび/またはカニクイザルCD147に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合断片(AB)。

2. 以下である、条項1記載の単離された抗体またはその抗原結合断片：
(a) 抗体もしくはその抗原結合断片が、VH CDR1配列
Figure 2020511130
；VH CDR2配列
Figure 2020511130
；VH CDR3配列
AGTDY (SEQ ID NO: 13)
；VL CDR1配列
Figure 2020511130
；VL CDR2配列
YSSNRYT (SEQ ID NO: 16)
；およびVL CDR3配列
Figure 2020511130
からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むアミノ酸配列を含む、または
(b) 抗体もしくはその抗原結合断片が、VH CDR1配列
Figure 2020511130
；VH CDR2配列
Figure 2020511130
；VH CDR3配列
AGTDY (SEQ ID NO: 13)
；VL CDR1配列
Figure 2020511130
；VL CDR2配列
YSSNRYT (SEQ ID NO: 16)
；およびVL CDR3配列
QQDYSSPYT (SEQ ID NO: 18)
からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むアミノ酸配列を含む、または
(c) 抗体もしくはその抗原結合断片が、VH CDR1配列
Figure 2020511130
；VH CDR2配列
Figure 2020511130
；VH CDR3配列
AGTDY (SEQ ID NO: 13)
；VL CDR1配列
Figure 2020511130
；VL CDR2配列
YSSNRYT (SEQ ID NO: 16)
；およびVL CDR3配列
QQDYSSPFT (SEQ ID NO: 17)
からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むアミノ酸配列を含む；ならびに/または
(d) 抗体もしくはその抗原結合断片が、SEQ ID NO: 1〜4からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、ならびにSEQ ID NO: 5〜9、140〜182、および185〜227からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、好ましくはSEQ ID NO: 5〜9からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む；ならびに/または
(e) その抗原結合断片が、Fab断片、F(ab')2断片、scFv、scAb、dAb、単一ドメイン重鎖抗体、および単一ドメイン軽鎖抗体からなる群より選択される。

3. (i) ABがヒトCD147に特異的に結合する；または
(ii) 単離された抗体もしくはその抗原結合断片が脱グリコシル化哺乳動物CD147および哺乳動物グリコシル化CD147に特異的に結合し、任意で哺乳動物CD147がヒトのものである、
条項1または2記載のいずれか一項記載の単離された抗体またはその抗原結合断片。

4. ヒトCD147および/もしくはカニクイザルCD147上の、条項1〜3のいずれか一項記載の単離された抗体と同じエピトープに結合するか、またはヒトCD147および/もしくはカニクイザルCD147への結合について条項1〜3のいずれか一項記載の単離された抗体と交差競合する(条項1〜3のいずれか一項記載の単離された抗体の結合を阻害する)、単離された抗体またはその抗原結合断片。

5. 以下を含む、活性化状態ではCD147に結合する活性化可能抗体：
条項1〜4のいずれか記載の抗体またはその抗原結合断片(AB);
ABにカップリングされたマスキング部分(MM)であって、該活性化可能抗体が非切断(非活性化)状態にある場合にCD147へのABの結合を阻害する、該MM；かつ
ABにカップリングされた切断可能部分(CM)であって、プロテアーゼの基質として機能するポリペプチドである、該CM。

6. (a) MMが、
(i) ABに対する結合について、CD147に対するABの解離定数よりも大きい解離定数を有する；および/もしくは
(ii) 前記活性化可能抗体が切断状態にある場合、CD147に対する結合についてABに干渉も競合もしない；および/もしくは
(iii) 40アミノ酸以下の長さのポリペプチドである；および/もしくは
(iv) ポリペプチド配列がヒトCD147のポリペプチド配列とは異なる；および/もしくは
(v) ポリペプチド配列の、ABのあらゆる天然の結合パートナーに対する同一性が、50%以下である；および/もしくは
(vi) SEQ ID NO: 30〜100からなる群より選択される；好ましくはSEQ ID NO: 30、31、33、44、46、75〜80、82、83、および86〜100からなる群より選択される、アミノ酸配列を含む；ならびに/または
(b) CMが、
(i) 疾患組織において活性であるプロテアーゼの基質である；および/もしくは
(ii) SEQ ID NO: 356〜423、680〜698、713、714、および789〜808からなる群より選択される；好ましくはSEQ ID NO: 359、370、377、382、390、397、406〜423、680〜698、713、714、および807〜808からなる群より選択される、アミノ酸配列を含む、
条項5記載の活性化可能抗体。

7. (i) ABが、SEQ ID NO:1〜3からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、およびSEQ ID NO:5〜8からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む；ならびに/あるいは
(ii) ABがCMに連結される；好ましくはABがCMに直接連結される、またはABが連結ペプチドを介してCMに連結される；ならびに/あるいは
(iii) 前記活性化可能抗体が、非切断状態では、N末端からC末端に向かって、以下の構造的配置:
MM-CM-ABもしくはAB-CM-MM
を含むように、MMがCMに連結される；ならびに/あるいは
(iv) 前記活性化可能抗体がMMとCMとの間に連結ペプチドを含む、またはCMとABとの間に連結ペプチドを含む；ならびに/あるいは
(v) 前記活性化可能抗体が第1の連結ペプチド(LP1)および第2の連結ペプチド(LP2)を含み、非切断状態では、N末端からC末端に向かって、以下の構造的配置:
MM-LP1-CM-LP2-ABもしくはAB-LP2-CM-LP1-MM
を有し、任意で2つの連結ペプチドが互いに同一である必要はなく、かつ/または任意でLP1およびLP2の各々が、約1〜20アミノ酸の長さのペプチドである、
条項5〜6のいずれか一項記載の活性化可能抗体。

8. (i) SEQ ID NO:1〜4および19〜22からなる群より選択される重鎖配列、ならびにSEQ ID NO:5〜9、23〜27、140〜182、185〜227、230〜272、および275〜317からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖；または
(ii) アミノ酸配列の組み合わせであって、表4の単列から選択され、
所与の組み合わせについて、
(a) ABの重鎖が、表4に列挙された単列内の所与の組み合わせに対応するVH CDR配列のアミノ酸配列を含み、
(b) ABの軽鎖が、表4に列挙された単列内の所与の組み合わせに対応するVL CDR配列のアミノ酸配列を含み、
(c) MMが、表4に列挙された単列内の所与の組み合わせに対応するマスク配列(MM)のアミノ酸配列を含み、かつ
(d) CMが、表4に列挙された単列内の所与の組み合わせに対応する基質配列(CM)のアミノ酸配列を含む、
該アミノ酸配列の組み合わせ；または
(iii) アミノ酸配列の所与の組み合わせについて、
(a) ABの重鎖が、表5の対応する縦列に列挙されたVH配列もしくはVH CDR配列からなる群より選択されるVH配列もしくはVH CDR配列のアミノ酸配列を含み、
(b) ABの軽鎖が、表5の対応する縦列に列挙されたVL配列もしくはVL CDR配列からなる群より選択されるVL配列もしくはVL CDR配列のアミノ酸配列を含み、
(c) MMが、表5の対応する縦列に列挙されたMM配列からなる群より選択されるマスク配列(MM)のアミノ酸配列を含み、かつ
(d) CMが、表5の対応する縦列に列挙されたCM配列からなる群より選択される基質配列(CM)のアミノ酸配列を含む、
アミノ酸配列の組み合わせ
を含む、条項5〜7のいずれか一項記載の活性化可能抗体。

9. SEQ ID NO:30〜100からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むMM、ならびにSEQ ID NO:356〜423、680〜698、713、714、および789〜808からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むCMを含む；好ましくは
MMが、SEQ ID NO:30、31、33、44、46、75〜80、82、83、および86〜100からなる群より選択されるアミノ酸配列を含み、CMが、SEQ ID NO:359、370、377、382、390、397、406〜423、680〜698、713、714、および807〜808からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む；ならびに/または任意で
ABが、SEQ ID NO:1〜3からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、ならびにSEQ ID NO:5〜8、140〜182、および185〜227からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、
条項5〜8のいずれか一項記載の活性化可能抗体。

10. 作用物質にコンジュゲートされた条項1〜4のいずれか一項記載の抗体、または作用物質にコンジュゲートされた条項5〜9のいずれか一項記載の活性化可能抗体を含む、コンジュゲートされた抗体またはコンジュゲートされた活性化可能抗体であって、任意で
(i) 該作用物質が毒素もしくはその断片および/または微小管阻害剤であり、かつ任意で
(a) 該作用物質が核酸損傷剤である；または
(b) 該作用物質が、ドラスタチンもしくはその誘導体、アウリスタチンもしくはその誘導体、メイタンシノイドもしくはその誘導体、デュオカルマイシンもしくはその誘導体、カリケアマイシンもしくはその誘導、ピロロベンゾジアゼピンもしくはその誘導体、アウリスタチンEもしくはその誘導体、モノメチルアウリスタチンE (MMAE)、モノメチルアウリスタチンD (MMAD)、メイタンシノイドDM1、メイタンシノイドDM4、モノメチルアウリスタチンF (MMAF)、またはピロロベンゾジアゼピン二量体からなる群より選択される；ならびに/または
(c) 該作用物質がリンカーを介してABにコンジュゲートされ、任意で該作用物質がABにコンジュゲートされるのに用いられるリンカーが、SPDB部分、vc部分、またはPEG2-vc部分を含み、かつ任意でABにコンジュゲートされているリンカーおよび毒素が、SPDB-DM4部分、vc-MMAD部分、vc-MMAE部分、vc-デュオカルマイシン部分、またはPEG2-vc-MMAD部分を含む；または
(d) 該作用物質がリンカーを介してABにコンジュゲートされ、リンカーが切断可能リンカーまたは非切断可能リンカーである；または
(ii) 該作用物質が検出可能部分であり、任意で検出可能部分が診断用作用物質である、
該コンジュゲートされた抗体またはコンジュゲートされた活性化可能抗体。

11. (a)
(i) VH CDR1配列
Figure 2020511130
；VH CDR2配列
Figure 2020511130
；VH CDR3配列
AGTDY (SEQ ID NO:13)
；VL CDR1配列
Figure 2020511130
；VL CDR2配列
YSSNRYT (SEQ ID NO:16)
；およびVL CDR3配列
Figure 2020511130
、
または
(ii) SEQ ID NO:1〜4からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、ならびにSEQ ID NO:5〜9、140〜182、および185〜227からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域
を含む、哺乳動物CD147に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片(AB)、
(b) 作用物質が、アウリスタチンE、モノメチルアウリスタチンF (MMAF)、モノメチルアウリスタチンE (MMAE)、モノメチルアウリスタチンD (MMAD)、メイタンシノイドDM4、メイタンシノイドDM1、ピロロベンゾジアゼピン、ピロロベンゾジアゼピン二量体、デュオカルマイシン、およびカリケアマイシンからなる群より選択される、ABにコンジュゲートされた作用物質
を含む、コンジュゲートされた抗体。

12. 活性化状態ではCD147に結合する、以下を含むコンジュゲートされた活性化可能抗体:
条項1記載の抗体もしくはその抗原結合断片(AB);
該活性化可能抗体が非切断状態にある場合にCD147へのABの結合を阻害するマスキング部分(MM)であって、好ましくはSEQ ID NO:30〜100からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、該MM、より好ましくはSEQ ID NO:30、31、33、44、46、75〜80、82、83、および86〜100からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、該MM;
ABにカップリングされた切断可能部分(CM)であって、プロテアーゼの基質として機能するポリペプチドである該CM、好ましくはSEQ ID NO:356〜423、680〜698、713、714、および789〜808からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む該CM、より好ましくはSEQ ID NO:359、370、377、382、390、397、406〜423、680〜698、713、714、および807〜808からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、該CM；ならびに
ABにコンジュゲートされた作用物質；
ここでABは、
(i) VH CDR1配列
Figure 2020511130
；VH CDR2配列
Figure 2020511130
；VH CDR3配列
AGTDY (SEQ ID NO:13)
；VL CDR1配列
Figure 2020511130
；VL CDR2配列
YSSNRYT (SEQ ID NO:16)
；およびVL CDR3配列
Figure 2020511130
、
または
(ii) SEQ ID NO:1〜4からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、ならびにSEQ ID NO:5〜9、140〜182、および185〜227からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
(iii) SEQ ID NO:19〜22からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む重鎖、ならびにSEQ ID NO:23〜27、230〜272、および275〜317からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖
を含み；かつ
該作用物質は、アウリスタチンE、モノメチルアウリスタチンF (MMAF)、モノメチルアウリスタチンE (MMAE)、モノメチルアウリスタチンD (MMAD)、メイタンシノイドDM4、メイタンシノイドDM1、ピロロベンゾジアゼピン、ピロロベンゾジアゼピン二量体、デュオカルマイシン、およびカリケアマイシンからなる群より選択され、任意で作用物質がリンカーを介してABにコンジュゲートされ、好ましくは作用物質がコンジュゲートされてABにコンジュゲートされるリンカーが、SPDB部分、vc部分、またはPEG2-vc部分を含み、より好ましくはABにコンジュゲートされているリンカーおよび毒素が、SPDB-DM4部分、vc-MMAD部分、vc-MMAE部分、vc-デュオカルマイシン部分、またはPEG2-vc-MMAD部分を含む。

13. 活性化状態ではCD147に結合する抗体またはその抗原結合断片(AB)と、
リンカーを介してABにコンジュゲートされた毒素と
を含む、コンジュゲートされた活性化可能抗体またはコンジュゲートされた抗体であって、
表9の単列から選択されるアミノ酸配列、リンカー、および毒素を含み、所与の組み合わせについて、
(a) ABが、表9に列挙された単列内の所与の組み合わせに対応する重鎖配列または重鎖可変ドメイン配列のアミノ酸配列を含む重鎖を含み、
(b) ABが、表9に列挙された単列内の所与の組み合わせに対応する軽鎖配列または軽鎖可変ドメイン配列のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、かつ
(c) リンカーおよび毒素が、表9に列挙された単列内の所与の組み合わせに対応するリンカーおよび毒素を含む、
該コンジュゲートされた活性化可能抗体またはコンジュゲートされた抗体。

14. 条項1〜4のいずれか一項記載の抗体、条項5〜9のいずれか一項記載の活性化可能抗体、または条項10〜13のいずれか一項記載のコンジュゲートされた抗体もしくはコンジュゲートされた活性化可能抗体；および担体
を含む、薬学的組成物。

15. さらなる作用物質を含む、任意で作用物質が治療用作用物質である、条項14記載の薬学的組成物。

16. 条項1〜4のいずれか一項記載の単離された抗体または条項5〜9のいずれか一項記載の活性化可能抗体をコードする、単離された核酸分子。

17. 条項16記載の単離された核酸分子を含むベクター。

18. 条項16記載の核酸分子または条項17記載のベクターを含む細胞を、抗体または活性化可能抗体の発現をもたらす条件下で培養することによって、抗体または活性化可能抗体を産生する方法。

19. 活性化状態ではCD147に結合する活性化可能抗体を製造する方法であって、
(a) 条項5〜9のいずれか一項記載の活性化可能抗体を含む活性化可能抗体の発現をもたらす条件下で、活性化可能抗体をコードする核酸構築物を含む細胞を培養する段階、および
(b) 活性化可能抗体を回収する段階
を含む、該方法。

20. CD147を発現する細胞に関連したまたは疾患細胞がCD147を発現する障害または疾患を処置する、その症状を緩和する、またはその進行を遅らせる方法で用いるための、条項1〜4のいずれか一項記載の抗体、条項5〜9のいずれか一項記載の活性化可能抗体、条項10〜13のいずれか一項記載のコンジュゲートされた抗体もしくはコンジュゲートされた活性化可能抗体、または条項14もしくは15のいずれか一項記載の薬学的組成物。

21. (i) 障害または疾患が、がんであり；任意で該がんが、腺がん、胆管(胆道)がん、膀胱がん、骨がん、乳がん、トリプルネガティブ乳がん、Her2陰性乳がん、カルチノイドがん、子宮頸がん、胆管細胞癌、結腸直腸がん、結腸がん、子宮内膜がん、食道がん、神経膠腫、頭頸部がん、頭頸部扁平上皮がん、白血病、肝臓がん、肺がん、非小細胞肺がん、小細胞肺がん、リンパ腫、黒色腫、中咽頭がん、卵巣がん、膵臓がん、前立腺がん、転移性去勢抵抗性前立腺癌、腎がん、肉腫、皮膚がん、扁平上皮がん、胃がん、精巣がん、甲状腺がん、泌尿生殖器がん、もしくは尿路上皮がんである；または
(ii) 前記方法が、哺乳動物CD147を発現する細胞の成長、増殖、もしくは転移を阻害もしくは低減するためであり、任意で哺乳動物CD147の発現および/もしくは活性が異常である、または
(iii) 前記方法が、哺乳動物CD147への天然リガンドの結合を阻害する、ブロックする、もしくは抑止するためであり、任意で哺乳動物CD147の発現および/もしくは活性が異常である；ならびに/または
(iv) 前記方法が、さらなる作用物質を投与する段階を含み、任意でさらなる作用物質が治療用作用物質である、
条項20記載の使用のための抗体、活性化可能抗体、コンジュゲートされた抗体、コンジュゲートされた活性化可能抗体、または薬学的組成物。
本発明をその詳細な説明とともに説明してきたが、前述の説明は例示することを意図するものであり、添付の特許請求の範囲によって定義される本発明の範囲を限定するものではないことが意図される。他の局面、利点および修正は、以下の範囲内にある。

Claims (102)

  1. ヒトCD147およびカニクイザルCD147に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合断片(AB)。
  2. 前記抗体またはその抗原結合断片が、
    (a) VH CDR1配列
    Figure 2020511130
    ；VH CDR2配列
    Figure 2020511130
    ；VH CDR3配列
    AGTDY (SEQ ID NO:13)
    ；VL CDR1配列
    Figure 2020511130
    ；VL CDR2配列
    YSSNRYT (SEQ ID NO:16)
    ；およびVL CDR3配列
    Figure 2020511130
    、
    (b) VH CDR1配列
    Figure 2020511130
    ；VH CDR2配列
    Figure 2020511130
    ；VH CDR3配列
    AGTDY (SEQ ID NO:13)
    ；VL CDR1配列
    Figure 2020511130
    ；VL CDR2配列
    YSSNRYT (SEQ ID NO:16)
    ；およびVL CDR3配列
    QQDYSSPYT (SEQ ID NO:18)
    、ならびに
    (c) VH CDR1配列
    Figure 2020511130
    ；VH CDR2配列
    Figure 2020511130
    ；VH CDR3配列
    AGTDY (SEQ ID NO:13)
    ；VL CDR1配列
    Figure 2020511130
    ；VL CDR2配列
    YSSNRYT (SEQ ID NO:16)
    ；およびVL CDR3配列
    QQDYSSPFT (SEQ ID NO:17)
    からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むアミノ酸配列を含む、請求項1記載の単離された抗体。
  3. 前記抗体またはその抗原結合断片が、SEQ ID NO:1〜4からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、およびSEQ ID NO:5〜9からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項1または請求項2記載の単離された抗体。
  4. ヒトCD147および/またはカニクイザルCD147上の、請求項1〜4のいずれか一項記載の単離された抗体と同じエピトープに結合する、単離された抗体またはその抗原結合断片。
  5. ヒトCD147および/またはカニクイザルCD147に対する請求項1〜3のいずれか一項記載の単離された抗体の結合を阻害する、単離された抗体またはその抗原結合断片。
  6. 活性化状態ではCD147に結合する、以下を含む活性化可能抗体：
    ヒトCD147およびカニクイザルCD147に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片(AB);
    ABにカップリングされたマスキング部分(MM)であって、該活性化可能抗体が非切断状態にある場合にCD147に対するABの結合を阻害する、該MM；かつ
    ABにカップリングされた切断可能部分(CM)であって、プロテアーゼの基質として機能するポリペプチドである、該CM。
  7. MMが、ABに対する結合について、CD147に対するABの解離定数よりも大きい解離定数を有する、請求項6記載の活性化可能抗体。
  8. 前記活性化可能抗体が切断状態にある場合、MMが、CD147に対する結合についてABに干渉も競合もしない、請求項6または請求項7記載の活性化可能抗体。
  9. MMが、40アミノ酸以下の長さのポリペプチドである、請求項6〜8のいずれか一項記載の活性化可能抗体。
  10. MMポリペプチド配列がヒトCD147のポリペプチド配列とは異なる、請求項6〜9のいずれか一項記載の活性化可能抗体。
  11. MMポリペプチド配列の、ABのあらゆる天然の結合パートナーに対する同一性が、50%以下である、請求項6〜10のいずれか一項記載の活性化可能抗体。
  12. MMが、SEQ ID NO:30〜100からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、請求項6〜11のいずれか一項記載の活性化可能抗体。
  13. MMが、SEQ ID NO:30、31、33、44、46、75〜80、82、83、および86〜100からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、請求項6〜12のいずれか一項記載の活性化可能抗体。
  14. CMが、疾患組織において活性であるプロテアーゼの基質である、請求項6〜13のいずれか一項記載の活性化可能抗体。
  15. CMが、SEQ ID NO:356〜423、680〜698、713、714、および789〜808からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、請求項6〜14のいずれか一項記載の活性化可能抗体。
  16. CMが、SEQ ID NO:359、370、377、382、390、397、406〜423、680〜698、713、714、および807〜808からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、請求項6〜15のいずれか一項記載の活性化可能抗体。
  17. その抗原結合断片が、Fab断片、F(ab')2断片、scFv、scAb、dAb、単一ドメイン重鎖抗体、および単一ドメイン軽鎖抗体からなる群より選択される、請求項1〜5、99、および100のいずれか一項記載の抗体または請求項6〜16のいずれか一項記載の活性化可能抗体。
  18. ABがヒトCD147に特異的に結合する、請求項1〜5、99、および100のいずれか一項記載の抗体または請求項6〜17のいずれか一項記載の活性化可能抗体。
  19. ABが、VH CDR1配列
    Figure 2020511130
    ；VH CDR2配列
    Figure 2020511130
    ；VH CDR3配列
    AGTDY (SEQ ID NO:13)
    ；VL CDR1配列
    Figure 2020511130
    ；VL CDR2配列
    YSSNRYT (SEQ ID NO:16)
    ；およびVL CDR3配列
    Figure 2020511130
    を含む、請求項6〜18のいずれか一項記載の活性化可能抗体。
  20. ABが、SEQ ID NO:1〜3からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、およびSEQ ID NO:5〜8からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項6〜19のいずれか一項記載の活性化可能抗体。
  21. ABがCMに連結されている、請求項6〜20のいずれか一項記載の活性化可能抗体。
  22. ABがCMに直接連結されている、請求項6〜21のいずれか一項記載の活性化可能抗体。
  23. ABが連結ペプチドを介してCMに連結されている、請求項6〜21のいずれか一項記載の活性化可能抗体。
  24. 非切断状態では、N末端からC末端に向かって、以下の構造的配置：
    MM-CM-ABまたはAB-CM-MM
    を含むように、MMがCMに連結されている、請求項6〜23のいずれか一項記載の活性化可能抗体。
  25. MMとCMとの間に連結ペプチドを含む、請求項6〜24のいずれか一項記載の活性化可能抗体。
  26. CMとABとの間に連結ペプチドを含む、請求項6〜24のいずれか一項記載の活性化可能抗体。
  27. 第1の連結ペプチド(LP1)および第2の連結ペプチド(LP2)を含み、非切断状態では、N末端からC末端に向かって、以下の構造的配置：
    MM-LP1-CM-LP2-ABまたはAB-LP2-CM-LP1-MM
    を有する、請求項6〜26のいずれか一項記載の活性化可能抗体。
  28. 2つの連結ペプチドが互いに同一である必要はない、請求項27記載の活性化可能抗体。
  29. LP1およびLP2の各々が、約1〜20アミノ酸の長さのペプチドである、請求項27または請求項28記載の活性化可能抗体。
  30. SEQ ID NO:1〜4および19〜22からなる群より選択される重鎖配列、ならびにSEQ ID NO:5〜9、23〜27、140〜182、185〜227、230〜272、および275〜317からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、請求項6〜29のいずれか一項記載の活性化可能抗体。
  31. 前記活性化可能抗体がアミノ酸配列の組み合わせを含み、アミノ酸配列の該組み合わせが表4の単列から選択され、
    所与の組み合わせについて、
    (a) ABの重鎖が、表4に列挙された単列内の所与の組み合わせに対応するVH CDR配列のアミノ酸配列を含み、
    (b) ABの軽鎖が、表4に列挙された単列内の所与の組み合わせに対応するVL CDR配列のアミノ酸配列を含み、
    (c) MMが、表4に列挙された単列内の所与の組み合わせに対応するマスク配列(MM)のアミノ酸配列を含み、かつ
    (d) CMが、表4に列挙された単列内の所与の組み合わせに対応する基質配列(CM)のアミノ酸配列を含む、
    請求項6〜29のいずれか一項記載の活性化可能抗体。
  32. 前記活性化可能抗体がアミノ酸配列の組み合わせを含み、アミノ酸配列の所与の組み合わせについて、
    (a) ABの重鎖が、表5の対応する縦列に列挙されたVH配列またはVH CDR配列からなる群より選択されるVH配列またはVH CDR配列のアミノ酸配列を含み、
    (b) ABの軽鎖が、表5の対応する縦列に列挙されたVL配列またはVL CDR配列からなる群より選択されるVL配列またはVL CDR配列のアミノ酸配列を含み、
    (c) MMが、表5の対応する縦列に列挙されたMM配列からなる群より選択されるマスク配列(MM)のアミノ酸配列を含み、かつ
    (d) CMが、表5の対応する縦列に列挙されたCM配列からなる群より選択される基質配列(CM)のアミノ酸配列を含む、
    請求項6〜29のいずれか一項記載の活性化可能抗体。
  33. 哺乳動物CD147に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片(AB)、MM、およびCMを含む活性化可能抗体であって、
    SEQ ID NO:1〜4および19〜22からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む重鎖配列；ならびに
    SEQ ID NO:5〜9、23〜27、140〜182、185〜227、230〜272、および275〜317からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖
    を含む、該活性化可能抗体。
  34. 哺乳動物CD147に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片(AB)、SEQ ID NO:30〜100からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むMM、ならびにSEQ ID NO:356〜423、680〜698、713、714、および789〜808からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むCMを含む、活性化可能抗体。
  35. MMが、SEQ ID NO:30、31、33、44、46、75〜80、82、83、および86〜100からなる群より選択されるアミノ酸配列を含み、CMが、SEQ ID NO:359、370、377、382、390、397、406〜423、680〜698、713、714、および807〜808からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、請求項34記載の活性化可能抗体。
  36. ABが、VH CDR1配列
    Figure 2020511130
    ；VH CDR2配列
    Figure 2020511130
    ；VH CDR3配列
    AGTDY (SEQ ID NO:13)
    ；VL CDR1配列
    Figure 2020511130
    ；VL CDR2配列
    YSSNRYT (SEQ ID NO:16)
    ；およびVL CDR3配列
    Figure 2020511130
    を含む、請求項34または35記載の活性化可能抗体。
  37. ABが、SEQ ID NO:1〜3からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、ならびにSEQ ID NO:5〜8、140〜182、および185〜227からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項34〜36のいずれか一項記載の活性化可能抗体。
  38. 以下を含む、活性化可能抗ヒトCD147抗体：
    哺乳動物CD147に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片(AB)であって、ヒトCD147および/またはカニクイザルCD147上の、請求項1〜5、99、および100のいずれか一項記載の単離された抗体と同じエピトープに特異的に結合する、該AB;
    該活性化可能抗体が非切断状態にある場合にCD147に対するABの結合を阻害するマスキング部分(MM)；かつ
    ABにカップリングされた切断可能部分(CM)であって、プロテアーゼの基質として機能するポリペプチドである、該CM。
  39. 以下を含む、活性化可能抗ヒトCD147抗体：
    哺乳動物CD147に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片(AB)であって、ヒトCD147および/またはカニクイザルCD147に対する結合について請求項1〜5、99、および100のいずれか一項記載の単離された抗体と特異的に交差競合する、該AB;
    該活性化可能抗体が非切断状態にある場合にCD147に対するABの結合を阻害するマスキング部分(MM)；かつ
    ABにカップリングされた切断可能部分(CM)であって、プロテアーゼの基質として機能するポリペプチドである、該CM。
  40. 作用物質にコンジュゲートされた請求項1〜5、99、および100のいずれか一項記載の抗体、または作用物質にコンジュゲートされた請求項6〜39のいずれか一項記載の活性化可能抗体を含む、コンジュゲートされた抗体またはコンジュゲートされた活性化可能抗体。
  41. 作用物質が毒素またはその断片である、請求項40記載のコンジュゲートされた抗体またはコンジュゲートされた活性化可能抗体。
  42. 作用物質が微小管阻害剤である、請求項40または請求項41記載のコンジュゲートされた抗体またはコンジュゲートされた活性化可能抗体。
  43. 作用物質が核酸損傷剤である、請求項40または請求項41記載のコンジュゲートされた抗体またはコンジュゲートされた活性化可能抗体。
  44. 作用物質が、ドラスタチンまたはその誘導体、アウリスタチンまたはその誘導体、メイタンシノイドまたはその誘導体、デュオカルマイシンまたはその誘導体、カリケアマイシンまたはその誘導体、およびピロロベンゾジアゼピンまたはその誘導体からなる群より選択される、請求項40または請求項41記載のコンジュゲートされた抗体またはコンジュゲートされた活性化可能抗体。
  45. 作用物質がアウリスタチンEまたはその誘導体である、請求項40〜42および44のいずれか一項記載のコンジュゲートされた抗体またはコンジュゲートされた活性化可能抗体。
  46. 作用物質がモノメチルアウリスタチンE (MMAE)である、請求項40〜42および44のいずれか一項記載のコンジュゲートされた抗体またはコンジュゲートされた活性化可能抗体。
  47. 作用物質がモノメチルアウリスタチンD (MMAD)である、請求項40〜42および44のいずれか一項記載のコンジュゲートされた抗体またはコンジュゲートされた活性化可能抗体。
  48. 作用物質が、DM1およびDM4からなる群より選択されるメイタンシノイドである、請求項40〜42および44のいずれか一項記載のコンジュゲートされた抗体またはコンジュゲートされた活性化可能抗体。
  49. 作用物質がメイタンシノイドDM4である、請求項40〜42および44のいずれか一項記載のコンジュゲートされた抗体またはコンジュゲートされた活性化可能抗体。
  50. 作用物質がデュオカルマイシンである、請求項40、41、43、および44のいずれか一項記載のコンジュゲートされた抗体またはコンジュゲートされた活性化可能抗体。
  51. 作用物質が、リンカーを介してABにコンジュゲートされている、請求項40〜50のいずれか一項記載のコンジュゲートされた抗体またはコンジュゲートされた活性化可能抗体。
  52. 作用物質がABにコンジュゲートされるのに用いられるリンカーが、SPDB部分、vc部分、またはPEG2-vc部分を含む、請求項40〜51のいずれか一項記載のコンジュゲートされた抗体またはコンジュゲートされた活性化可能抗体。
  53. ABにコンジュゲートされているリンカーおよび毒素が、SPDB-DM4部分、vc-MMAD部分、vc-MMAE部分、vc-デュオカルマイシン部分、またはPEG2-vc-MMAD部分を含む、請求項40〜52のいずれか一項記載のコンジュゲートされた抗体またはコンジュゲートされた活性化可能抗体。
  54. リンカーが切断可能なリンカーである、請求項51記載のコンジュゲートされた抗体またはコンジュゲートされた活性化可能抗体。
  55. リンカーが非切断可能リンカーである、請求項51記載のコンジュゲートされた抗体またはコンジュゲートされた活性化可能抗体。
  56. 作用物質が検出可能な部分である、請求項40および51〜55のいずれか一項記載のコンジュゲートされた抗体またはコンジュゲートされた活性化可能抗体。
  57. 検出可能な部分が診断用作用物質である、請求項56記載のコンジュゲートされた抗体またはコンジュゲートされた活性化可能抗体。
  58. 活性化状態ではCD147に結合する、以下を含むコンジュゲートされた活性化可能抗体：
    ヒトCD147およびカニクイザルCD147に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片(AB);
    該活性化可能抗体が非切断状態にある場合にCD147に対するABの結合を阻害するマスキング部分(MM);
    ABにカップリングされた切断可能部分(CM)であって、プロテアーゼの基質として機能するポリペプチドである、該CM；ならびに
    ABにコンジュゲートされた作用物質。
  59. 作用物質が、ドラスタチンまたはその誘導体、アウリスタチンまたはその誘導体、メイタンシノイドまたはその誘導体、デュオカルマイシンまたはその誘導体、カリケアマイシンまたはその誘導体、およびピロロベンゾジアゼピンまたはその誘導体からなる群より選択される、請求項58記載のコンジュゲートされた活性化可能抗体。
  60. 作用物質が、アウリスタチンE、モノメチルアウリスタチンF (MMAF)、モノメチルアウリスタチンE (MMAE)、モノメチルアウリスタチンD (MMAD)、メイタンシノイドDM4、メイタンシノイドDM1、カリケアマイシン、デュオカルマイシン、ピロロベンゾジアゼピン、およびピロロベンゾジアゼピン二量体からなる群より選択される、請求項58または59記載のコンジュゲートされた活性化可能抗体。
  61. 作用物質が、リンカーを介してABにコンジュゲートされている、請求項58〜60のいずれか一項記載のコンジュゲートされた活性化可能抗体。
  62. 作用物質がABにコンジュゲートされるのに用いられるリンカーが、SPDB部分、vc部分、またはPEG2-vc部分を含む、請求項58〜61のいずれか一項記載のコンジュゲートされた活性化可能抗体。
  63. ABにコンジュゲートされているリンカーおよび毒素が、SPDB-DM4部分、vc-MMAD部分、vc-MMAE部分、vc-デュオカルマイシン部分、またはPEG2-vc-MMAD部分を含む、請求項58〜62のいずれか一項記載のコンジュゲートされた活性化可能抗体。
  64. 前記抗体またはその抗原結合断片が、VH CDR1配列
    Figure 2020511130
    ；VH CDR2配列
    Figure 2020511130
    ；VH CDR3配列
    AGTDY (SEQ ID NO:13)
    ；VL CDR1配列
    Figure 2020511130
    ；VL CDR2配列
    YSSNRYT (SEQ ID NO:16)
    ；およびVL CDR3配列
    Figure 2020511130
    を含む、請求項58〜63のいずれか一項記載のコンジュゲートされた活性化可能抗体。
  65. 前記抗体またはその抗原結合断片が、SEQ ID NO:1〜4からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、ならびにSEQ ID NO:5〜9、140〜182、および185〜227からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項58〜64のいずれか一項記載のコンジュゲートされた活性化可能抗体。
  66. MMが、SEQ ID NO:30〜100からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、請求項58〜65のいずれか一項記載のコンジュゲートされた活性化可能抗体。
  67. MMが、SEQ ID NO:30、31、33、44、46、75〜80、82、83、および86〜100からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、請求項58〜66のいずれか一項記載のコンジュゲートされた活性化可能抗体。
  68. CMが、SEQ ID NO:356〜423、680〜698、713、714、および789〜808からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、請求項58〜67のいずれか一項記載のコンジュゲートされた活性化可能抗体。
  69. CMが、SEQ ID NO:359、370、377、382、390、397、406〜423、680〜698、713、714、および807〜808からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、請求項58〜68のいずれか一項記載のコンジュゲートされた活性化可能抗体。
  70. 前記活性化可能抗体がアミノ酸配列の組み合わせを含み、アミノ酸配列の該組み合わせが表4の単列から選択され、
    所与の組み合わせについて、
    (a) ABの重鎖が、表4に列挙された単列内の所与の組み合わせに対応するVH CDR配列のアミノ酸配列を含み、
    (b) ABの軽鎖が、表4に列挙された単列内の所与の組み合わせに対応するVL CDR配列のアミノ酸配列を含み、
    (c) MMが、表4に列挙された単列内の所与の組み合わせに対応するマスク配列(MM)のアミノ酸配列を含み、かつ
    (d) CMが、表4に列挙された単列内の所与の組み合わせに対応する基質配列(CM)のアミノ酸配列を含む、
    請求項58〜69のいずれか一項記載のコンジュゲートされた活性化可能抗体。
  71. 前記活性化可能抗体がアミノ酸配列の組み合わせを含み、アミノ酸配列の所与の組み合わせについて、
    (a) ABの重鎖が、表5の対応する縦列に列挙されたVH配列またはVH CDR配列からなる群より選択されるVH配列またはVH CDR配列のアミノ酸配列を含み、
    (b) ABの軽鎖が、表5の対応する縦列に列挙されたVL配列またはVL CDR配列からなる群より選択されるVL配列またはVL CDR配列のアミノ酸配列を含み、
    (c) MMが、表5の対応する縦列に列挙されたMM配列からなる群より選択されるマスク配列(MM)のアミノ酸配列を含み、かつ
    (d) CMが、表5の対応する縦列に列挙されたCM配列からなる群より選択される基質配列(CM)のアミノ酸配列を含む、
    請求項58〜70のいずれか一項記載のコンジュゲートされた活性化可能抗体。
  72. SEQ ID NO:1〜4および19〜22からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む重鎖；ならびに
    SEQ ID NO:5〜9、23〜27、140〜182、185〜227、230〜272、および275〜317からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖
    を含む、請求項58〜71のいずれか一項記載のコンジュゲートされた活性化可能抗体。
  73. (a) 哺乳動物CD147に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片(AB)であって、
    (i) VH CDR1配列
    Figure 2020511130
    ；VH CDR2配列
    Figure 2020511130
    ；VH CDR3配列
    AGTDY (SEQ ID NO:13)
    ；VL CDR1配列
    Figure 2020511130
    ；VL CDR2配列
    YSSNRYT (SEQ ID NO:16)
    ；およびVL CDR3配列
    Figure 2020511130
    、または
    (ii) SEQ ID NO:1〜4からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、およびSEQ ID NO:5〜9、140〜182、および185〜227からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域
    を含む、該AB;
    (b) ABにコンジュゲートされた作用物質であって、アウリスタチンE、モノメチルアウリスタチンF (MMAF)、モノメチルアウリスタチンE (MMAE)、モノメチルアウリスタチンD (MMAD)、メイタンシノイドDM4、メイタンシノイドDM1、ピロロベンゾジアゼピン、ピロロベンゾジアゼピン二量体、デュオカルマイシン、およびカリケアマイシンからなる群より選択される、該作用物質
    を含む、コンジュゲートされた抗体。
  74. 活性化状態ではCD147に結合する、以下を含むコンジュゲートされた活性化可能抗体：
    ヒトCD147およびカニクイザルCD147に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片(AB);
    該活性化可能抗体が非切断状態にある場合にCD147に対するABの結合を阻害するマスキング部分(MM);
    ABにカップリングされた切断可能部分(CM)であって、プロテアーゼの基質として機能するポリペプチドである、該CM；ならびに
    ABにコンジュゲートされた作用物質；
    ここでABは、
    (i) VH CDR1配列
    Figure 2020511130
    ；VH CDR2配列
    Figure 2020511130
    ；VH CDR3配列
    AGTDY (SEQ ID NO:13)
    ；VL CDR1配列
    Figure 2020511130
    ；VL CDR2配列
    YSSNRYT (SEQ ID NO:16)
    ；およびVL CDR3配列
    Figure 2020511130
    、または
    (ii) SEQ ID NO:1〜4からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、およびSEQ ID NO:5〜9、140〜182、および185〜227からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
    (iii) SEQ ID NO:19〜22からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む重鎖、およびSEQ ID NO:23〜27、230〜272、および275〜317からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖
    を含み；かつ
    該作用物質は、アウリスタチンE、モノメチルアウリスタチンF (MMAF)、モノメチルアウリスタチンE (MMAE)、モノメチルアウリスタチンD (MMAD)、メイタンシノイドDM4、メイタンシノイドDM1、ピロロベンゾジアゼピン、ピロロベンゾジアゼピン二量体、デュオカルマイシン、およびカリケアマイシンからなる群より選択される。
  75. MMが、SEQ ID NO:30〜100からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、請求項74記載のコンジュゲートされた活性化可能抗体。
  76. MMが、SEQ ID NO:30、31、33、44、46、75〜80、82、83、および86〜100からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、請求項74または請求項75記載のコンジュゲートされた活性化可能抗体。
  77. CMが、SEQ ID NO:356〜423、680〜698、713、714、および789〜808からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、請求項74〜76のいずれか一項記載のコンジュゲートされた活性化可能抗体。
  78. CMが、SEQ ID NO:359、370、377、382、390、397、406〜423、680〜698、713、714、および807〜808からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、請求項74〜77のいずれか一項記載のコンジュゲートされた活性化可能抗体。
  79. 前記作用物質がリンカーを介してABにコンジュゲートされ、作用物質がコンジュゲートされてABにコンジュゲートされるリンカーが、SPDB部分、vc部分、またはPEG2-vc部分を含む、請求項74〜78のいずれか一項記載のコンジュゲートされた活性化可能抗体。
  80. ABにコンジュゲートされているリンカーおよび毒素が、SPDB-DM4部分、vc-MMAD部分、vc-MMAE部分、vc-デュオカルマイシン部分、またはPEG2-vc-MMAD部分を含む、請求項74〜79のいずれか一項記載のコンジュゲートされた活性化可能抗体。
  81. 活性化状態ではCD147に結合する抗体またはその抗原結合断片(AB)と、
    リンカーを介してABにコンジュゲートされた毒素と
    を含むコンジュゲートされた活性化可能抗体またはコンジュゲートされた抗体であって、
    表9の単列から選択されるアミノ酸配列、リンカー、および毒素を含み、所与の組み合わせについて、
    (a) ABが、表9に列挙された単列内の所与の組み合わせに対応する重鎖配列または重鎖可変ドメイン配列のアミノ酸配列を含む重鎖を含み、
    (b) ABが、表9に列挙された単列内の所与の組み合わせに対応する軽鎖配列または軽鎖可変ドメイン配列のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、かつ
    (c) リンカーおよび毒素が、表9に列挙された単列内の所与の組み合わせに対応するリンカーおよび毒素を含む、
    該コンジュゲートされた活性化可能抗体またはコンジュゲートされた抗体。
  82. 請求項1〜5、99、および100のいずれか一項記載の抗体、請求項6〜39のいずれか一項記載の活性化可能抗体、または請求項40〜81のいずれか一項記載のコンジュゲートされた抗体もしくはコンジュゲートされた活性化可能抗体；ならびに担体
    を含む、薬学的組成物。
  83. さらなる作用物質を含む、請求項82記載の薬学的組成物。
  84. さらなる作用物質が治療用作用物質である、請求項83記載の薬学的組成物。
  85. 請求項1〜5、99、および100のいずれか一項記載の単離された抗体または請求項6〜39のいずれか一項記載の活性化可能抗体をコードする、単離された核酸分子。
  86. 請求項85記載の単離された核酸分子を含むベクター。
  87. 請求項85記載の核酸分子または請求項86記載のベクターを含む細胞を、抗体または活性化可能抗体の発現をもたらす条件下で培養することによって、抗体または活性化可能抗体を産生する方法。
  88. 活性化状態ではCD147に結合する活性化可能抗体を製造する方法であって、
    (a) 請求項6〜39のいずれか一項記載の活性化可能抗体を含む活性化可能抗体の発現をもたらす条件下で、活性化可能抗体をコードする核酸構築物を含む細胞を培養する段階、および
    (b) 活性化可能抗体を回収する段階
    を含む、該方法。
  89. 請求項1〜5、99、および100のいずれか一項記載の抗体、請求項6〜39のいずれか一項記載の活性化可能抗体、請求項40〜81のいずれか一項記載のコンジュゲートされた抗体もしくはコンジュゲートされた活性化可能抗体、または請求項82〜84のいずれか一項記載の薬学的組成物の治療的有効量を、その必要のある対象に投与する段階を含む、疾患細胞がCD147を発現する障害または疾患を処置する、その症状を緩和する、またはその進行を遅らせる方法。
  90. 障害または疾患が、がんである、請求項89記載の方法。
  91. 請求項1〜5、99、および100のいずれか一項記載の抗体、請求項6〜39のいずれか一項記載の活性化可能抗体、請求項40〜81のいずれか一項記載のコンジュゲートされた抗体もしくはコンジュゲートされた活性化可能抗体、または請求項82〜84のいずれか一項記載の薬学的組成物の治療的有効量を、その必要のある対象に投与する段階を含む、CD147を発現する細胞に関連した障害または疾患を処置する、その症状を緩和する、またはその進行を遅らせる方法。
  92. CD147を発現する細胞に関連した障害または疾患が、がんである、請求項91記載の方法。
  93. がんが、腺がん、胆管(胆道)がん、膀胱がん、骨がん、乳がん、トリプルネガティブ乳がん、Her2陰性乳がん、カルチノイドがん、子宮頸がん、胆管細胞癌、結腸直腸がん、結腸がん、子宮内膜がん、食道がん、神経膠腫、頭頸部がん、頭頸部扁平上皮がん、白血病、肝臓がん、肺がん、非小細胞肺がん、小細胞肺がん、リンパ腫、黒色腫、中咽頭がん、卵巣がん、膵臓がん、前立腺がん、転移性去勢抵抗性前立腺癌、腎がん、肉腫、皮膚がん、扁平上皮がん、胃がん、精巣がん、甲状腺がん、泌尿生殖器がん、または尿路上皮がんである、請求項90または請求項92記載の方法。
  94. 請求項1〜5のいずれか一項記載の抗体、請求項6〜39のいずれか一項記載の活性化可能抗体、請求項40〜81のいずれか一項記載のコンジュゲートされた抗体もしくはコンジュゲートされた活性化可能抗体、または請求項82〜84のいずれか一項記載の薬学的組成物の治療的有効量を、その必要のある対象に投与する段階を含む、哺乳動物CD147を発現する細胞の成長、増殖または転移を阻害または低減する方法。
  95. 請求項1〜5、99、および100のいずれか一項記載の抗体、請求項6〜39のいずれか一項記載の活性化可能抗体、請求項40〜81のいずれか一項記載のコンジュゲートされた抗体もしくはコンジュゲートされた活性化可能抗体、または請求項82〜84のいずれか一項記載の薬学的組成物の治療的有効量を、その必要のある対象に投与する段階を含む、哺乳動物CD147に対する天然リガンドの結合を阻害する、ブロックする、または抑止する方法。
  96. 哺乳動物CD147の発現および/または活性が異常である、請求項94または95のいずれか一項記載の方法。
  97. さらなる作用物質を投与する段階を含む、請求項89〜96のいずれか一項記載の方法。
  98. さらなる作用物質が治療用作用物質である、請求項97記載の方法。
  99. 前記単離された抗体またはその抗原結合断片が、脱グリコシル化CD147およびグリコシル化CD147に特異的に結合する、請求項1〜5のいずれか一項記載の単離された抗体。
  100. CD147がヒトCD147である、請求項99記載の単離された抗体。
  101. ABが脱グリコシル化CD147およびグリコシル化CD147に特異的に結合する、請求項6〜39のいずれか一項記載の活性化可能抗体、または請求項40〜57、73、および81のいずれか一項記載のコンジュゲートされた抗体、または請求項40〜72および74〜81のいずれか一項記載のコンジュゲートされた活性化可能抗体。
  102. CD147がヒトCD147である、請求項101記載の活性化可能抗体。
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