KR20230143605A - Bcl-xl 억제제 항체-약물 접합체 및 그의 사용 방법 - Google Patents

Bcl-xl 억제제 항체-약물 접합체 및 그의 사용 방법 Download PDF

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KR20230143605A
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매튜 티. 버거
주오리앙 첸
조셉 안토니 드'알레시오
에릭 멕네일
카츠마사 나카지마
리차드 본 뉴컴
마크 지. 팔레르모
빙 유
치앙 장
프레데릭 콜랑드
제임스 에드워드 파울 다비드슨
리아 델라코우어
파트리스 데소스
올리비에 제네스테
베셀라 코스토바
언드러시 코치치
애나 레티시아 마라그노
제임스 브룩 머레이
티보르 노버크
제롬 스탁
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노파르티스 아게
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Abstract

인간 종양학 표적에 결합하는 항체-약물 접합체가 개시된다. 항체-약물 접합체는 Bcl-xL 억제제 약물 모이어티를 포함한다. 본 개시내용은 추가로, 본원에 제공된 항체-약물 접합체를 투여함으로써 암의 치료에 사용하기 위한 방법 및 조성물에 관한 것이다. Bcl-xL 억제제 약물 모이어티를 포함하는 링커-약물 접합체 및 그의 제조 방법이 또한 개시된다.

Description

BCL-XL 억제제 항체-약물 접합체 및 그의 사용 방법
<관련 출원>
본 출원은 35 U.S.C. § 119(e) 하에 2020년 11월 24일에 출원된 미국 가출원 번호 63/117,763의 출원일의 이익 및 그에 대한 우선권을 주장하며, 그의 전체 내용은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
<서열 목록>
본 출원은 ASCII 포맷으로 전자 제출된 서열 목록을 함유하며, 이는 그 전문이 본원에 참조로 포함된다. 2021년 11월 19일에 생성된 상기 ASCII 카피는 132043-00420_SL.txt로 명명되고, 550,925 바이트 크기이다.
<기술분야>
본 개시내용은 Bcl-xL 억제제, 및 항원 표적, 예를 들어 종양 또는 다른 암 세포 상에 발현된 항원에 결합하는 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 포함하는 항체-약물 접합체 (ADC)에 관한 것이다. 본 개시내용은 추가로 표적 항원을 발현하고/하거나 Bcl-xL 발현 및/또는 활성을 조정함으로써 치료될 수 있는 암의 치료 및/또는 진단에 유용한 방법 및 조성물, 및 상기 조성물의 제조 방법에 관한 것이다. Bcl-xL 억제제 약물 모이어티를 포함하는 링커-약물 접합체 및 그의 제조 방법이 또한 개시된다.
아폽토시스 (프로그램화된 세포 사멸)는 조직 항상성, 손상된 세포의 발생 및 제거에 필수적인 진화적으로 보존된 경로이다. 아폽토시스의 탈조절은 악성종양, 신경변성 장애, 면역계 질환 및 자가면역 질환을 비롯한 인간 질환의 원인이 된다 (문헌 [Hanahan and Weinberg, Cell. 2011 Mar 4;144(5):646-74; Marsden and Strasser, Annu Rev Immunol. 2003;21:71-105; Vaux and Flavell, Curr Opin Immunol. 2000 Dec;12(6):719-24]). 아폽토시스의 회피는 종양의 발생 뿐만 아니라 지속적인 확장 및 항암 치료에 대한 저항성에 참여하는 암의 특징으로서 인식된다 (문헌 [Hanahan and Weinberg, Cell. 2000 Jan 7;100(1):57-70]).
Bcl-2 단백질 패밀리는 아폽토시스를 억제하거나 (예를 들어, Bcl-2, Bcl-xL, Mcl-1) 또는 촉진할 수 있는 (예를 들어, Bad, Bax) 세포 생존의 주요 조절제를 포함한다 (문헌 [Gross et al., Genes Dev. 1999 Aug 1;13(15):1899-911, Youle and Strasser, Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 2008 Jan;9(1):47-59]).
스트레스 자극에 직면하여, 세포가 생존하는지 또는 아폽토시스를 겪는지는 세포 사멸을 촉진하는 Bcl-2 패밀리 구성원과 세포 생존을 촉진하는 패밀리 구성원 사이의 쌍형성의 정도에 의존한다. 대부분의 경우에, 이들 상호작용은 아폽토시스촉진 패밀리 구성원의 Bcl-2 상동성 3 (BH3) 도메인을 생존촉진 구성원의 표면 상의 홈 내로 도킹하는 것을 수반한다. Bcl-2 상동성 (BH) 도메인의 존재는 Bcl-2 패밀리의 멤버십을 정의하며, 이는 단백질 내에 존재하는 특정한 BH 도메인에 따라 3개의 주요 군으로 나뉜다. 생존촉진 구성원, 예컨대 Bcl-2, Bcl-xL 및 Mcl-1은 BH 도메인 1-4를 함유하는 반면, 아폽토시스 동안 미토콘드리아 외막 투과화의 아폽토시스촉진 이펙터인 Bax 및 Bak는 BH 도메인 1-3을 함유한다 (문헌 [Youle and Strasser, Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 2008 Jan;9(1):47-59]).
Bcl-2 패밀리의 생존촉진 구성원의 과다발현은 암의 특징이고, 이들 단백질은 종양 발생, 유지 및 항암 요법에 대한 저항성에서 중요한 역할을 하는 것으로 밝혀졌다 (문헌 [Czabotar et al., Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 2014 Jan;15(1):49-63]). Bcl-xL (BCL2-유사 1로부터의 BCL2L1로도 명명됨)은 암에서 빈번하게 증폭되고 (Beroukhim et al., Nature 2010 Feb 18;463(7283):899-905), 그의 발현은 암 세포주 (NCI-60)의 대표적인 패널에서 120개 초과의 항암 치료 분자에 대한 감수성과 역의 상관관계가 있는 것으로 밝혀졌다 (문헌 [Amundson et al., Cancer Res. 2000 Nov 1;60(21):6101-10]).
또한, 트랜스제닉 녹아웃 마우스 모델 및 Bcl-2 패밀리 구성원의 트랜스제닉 과다발현을 사용한 여러 연구는 면역계 질환 및 자가면역 질환에서의 이들 단백질의 중요성을 강조하였다 (검토를 위해, 문헌 [Merino et al., Apoptosis 2009 Apr;14(4):570-83. doi: 10.1007/s10495-008-0308-4.PMID: 19172396] 참조). T-세포 구획 내에서의 Bcl-xL의 트랜스제닉 과다발현은 글루코코르티코이드, g-방사선 및 CD3 가교에 의해 유도된 아폽토시스에 대한 저항성을 유발하였으며, 이는 트랜스제닉 Bcl-xL 과다발현이 휴지 및 활성화된 T-세포에서 아폽토시스를 감소시킬 수 있음을 시사한다 (문헌 [Droin et al., Biochim Biophys Acta 2004 Mar 1;1644(2-3):179-88. doi: 10.1016/j.bbamcr.2003.10.011.PMID: 14996502]). 환자 샘플에서, 항아폽토시스 Bcl-2 패밀리 단백질의 지속적 또는 높은 발현이 관찰되었다 (문헌 [Pope et al., Nat Rev Immunol. 2002 Jul;2(7):527-35. doi: 10.1038/nri846.PMID: 12094227]). 특히, 류마티스 관절염 환자의 관절로부터 단리된 T-세포는 증가된 Bcl-xL 발현을 나타내었고, 자발적 아폽토시스에 저항성이었다 (문헌 [Salmon et al., J Clin Invest. 1997 Feb 1;99(3):439-46. doi: 10.1172/JCI119178.PMID: 9022077]).
상기 나타낸 발견은 BH3 모방체로 명명된 새로운 부류의 약물의 발견 및 개발에 동기를 부여하였다. 이들 분자는 Bcl-2 패밀리의 아폽토시스촉진 및 항아폽토시스 구성원 사이의 상호작용을 방해할 수 있고, 아폽토시스의 강력한 유도제이다. 이러한 새로운 부류의 약물은 Bcl-2, Bcl-xL, Bcl-w 및 Mcl-1의 억제제를 포함한다. 기재된 제1 BH3 모방체는 Bcl-2, Bcl-xL 및 Bcl-w를 표적화하는 ABT-737 및 ABT-263이었다 (문헌 [Park et al., J. Med. Chem. 2008 Nov 13;51(21):6902-15; Roberts et al., J. Clin. Oncol. 2012 Feb 10;30(5):488-96]). 그 후, Bcl-2 (ABT-199 및 S55746 - 문헌[Souers et al., Nat Med. 2013 Feb;19(2):202-8; Casara et al., Oncotarget 2018 Apr 13;9(28):20075-20088]), Bcl-xL (A-1155463 및 A-1331852 - 문헌 [Tao et al., ACS Med Chem Lett. 2014 Aug 26;5(10):1088-93; Leverson et al., Sci Transl Med. 2015 Mar 18;7(279):279ra40]) 및 Mcl-1 (A-1210477, S63845, S64315, AMG-176 및 AZD-5991 - 문헌 [Leverson et al., Cell Death Dis. 2015 Jan 15;6:e1590.; Kotschy et al., Nature 2016, 538, 477-482; Maragno et al., AACR 2019, Poster #4482; Kotschy et al., WO 2015/097123; Caenepeel et al., Cancer Discov. 2018 Dec;8(12):1582-1597; Tron et al., Nat. Commun. 2018 Dec 17;9(1):5341])의 선택적 억제제가 또한 발견되었다. 선택적 Bcl-2 억제제 ABT-199는 현재 조합 요법에서 CLL 및 AML을 갖는 환자의 치료에 대해 승인된 반면, 다른 억제제는 여전히 전임상 또는 임상 개발 하에 있다. 전임상 모델에서, ABT-263은 여러 혈액 악성종양 및 고형 종양에서 활성을 나타내었다 (문헌 [Shoemaker et al., Clin. Cancer Res. 2008 Jun 1;14(11):3268-77; Ackler et al., Cancer Chemother. Pharmacol. 2010 Oct;66(5):869-80; Chen et al., Mol. Cancer Ther. 2011 Dec;10(12):2340-9]). 임상 연구에서, ABT-263은 림프성 악성종양에서 객관적 항종양 활성을 나타내었고 (문헌 [Wilson et al., Lancet Oncol. 2010 Dec;11(12):1149-59; Roberts et al., J. Clin. Oncol. 2012 Feb 10;30(5):488-96]) 그의 활성은 고형 종양에서 여러 요법과 조합되어 조사되고 있다. 선택적 Bcl-xL 억제제인 A-1155463 또는 A-1331852는 T-ALL(T-세포 급성 림프모구성 백혈병) 및 상이한 유형의 고형 종양의 전임상 모델에서 생체내 활성을 나타내었다 (문헌 [Tao et al., ACS Med. Chem. Lett. 2014 Aug 26;5(10):1088-93; Leverson et al., Sci. Transl. Med. 2015 Mar 18;7(279):279ra40]). BH3 모방체의 사용은 또한 면역계 질환 및 자가면역 질환의 전임상 모델에서 이익을 나타내었다. ABT-737 (Bcl-2, Bcl-xL, 및 Bcl-w 억제제)로의 처리는 시험관내 림프구 증식의 강력한 억제를 발생시켰다. 중요하게는, 관절염 및 루푸스의 동물 모델에서 ABT-737로 처리된 마우스는 질환 중증도의 유의한 감소를 나타내었다 (문헌 [Bardwell et al., J Clin Invest. 1997 Feb 1;99(3):439-46. doi: 10.1172/JCI119178.PMID: 9022077]). 또한, ABT-737은 시험관내 동종 T-세포 활성화, 증식 및 세포독성을 방지하고, 피부 이식 후 동종 T- 및 B-세포 반응을 림프성 세포에 대한 높은 선택성으로 억제한 것으로 밝혀졌다 (문헌 [Cippa et al.,. Transpl Int. 2011 Jul;24(7):722-32. doi: 10.1111/j.1432-2277.2011.01272.x. Epub 2011 May 25.PMID: 21615547]). 따라서, 아폽토시스 신호전달 경로에서 Bcl-xL 또는 그의 상류 및/또는 하류 단백질을 치료적으로 표적화하는 것은 종양학에서 및 면역 및 자가면역 질환의 분야에서 신규 요법의 개발을 위한 매우 매력적인 접근법을 나타낸다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용은 부분적으로 암 세포에 대해 생물학적 활성을 갖는 신규 항체-약물 접합체 (ADC) 화합물을 제공한다. 화합물은 포유동물에서 종양 성장을 둔화시키고/거나, 억제하고/거나, 역전시킬 수 있고/거나, 인간 암 환자를 치료하는 데 유용할 수 있다. 본 개시내용은 보다 구체적으로, 일부 실시양태에서, 암 세포에 결합하여 이를 사멸시킬 수 있는 ADC 화합물에 관한 것이다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 ADC 화합물은 Bcl-xL 억제제를 전장 항체 또는 항원-결합 단편에 부착시키는 링커를 포함한다. 일부 실시양태에서, ADC 화합물은 또한 결합 후에 표적 세포 내로 내재화될 수 있다.
일부 실시양태에서, ADC 화합물은 화학식 (1)에 의해 나타내어질 수 있다:
여기서, Ab는 항체 또는 그의 항원-결합 단편이고;
D는 Bcl-xL 억제제이고;
L은 Ab를 D에 공유 부착시키는 링커이고;
p는 1 내지 16의 정수이다. 일부 실시양태에서, Ab는 암 세포를 표적화하는 항체 또는 그의 항원-결합 단편이다.
일부 실시양태에서, 화학식 (I)의 ADC 화합물에 대해, D는 링커 L에 공유 부착된 하기 화학식 (I) 또는 화학식 (II)의 Bcl-xL 억제제 화합물을 포함한다:
Figure pct00002
또는 거울상이성질체, 부분입체이성질체 및/또는 상기 중 어느 하나와 그의 제약상 허용되는 산 또는 염기와의 부가염 (즉, 제약상 허용되는 염), 여기서
◆ R1 및 R2는 서로 독립적으로 수소; 히드록실 또는 C1-C6알콕시 기에 의해 임의로 치환된 선형 또는 분지형 C1-C6알킬; C3-C6시클로알킬; 트리플루오로메틸; 선형 또는 분지형 C1-C6알킬렌-헤테로시클로알킬로부터 선택된 기를 나타내고, 여기서 헤테로시클로알킬 기는 선형 또는 분지형 C1-C6알킬 기에 의해 임의로 치환되거나;
또는 R1 및 R2는 이들을 보유하는 탄소 원자와 함께 C3-C6시클로알킬렌 기를 형성하고,
◆ R3은 수소; C3-C6시클로알킬; 선형 또는 분지형 C1-C6알킬; -X1-NRaRb; -X1-N+RaRbRc; -X1-O-Rc; -X1-COORc; -X1-PO(OH)2; -X1-SO2(OH); -X1-N3 및
Figure pct00003
로부터 선택된 기를 나타내고;
◆ Ra 및 Rb는 서로 독립적으로 수소; 헤테로시클로알킬; -SO2-페닐 (여기서, 페닐은 선형 또는 분지형 C1-C6알킬에 의해 치환될 수 있음); 1 또는 2개의 히드록실 기에 의해 임의로 치환된 선형 또는 분지형 C1-C6알킬; C1-C6알킬렌-SO2OH; C1-C6알킬렌-SO2O-; C1-C6알킬렌-COOH; C1-C6알킬렌-PO(OH)2; C1-C6알킬렌-NRdRe; C1-C6알킬렌-N+RdReRf; C1-C6알킬렌-페닐 (여기서, 페닐은 C1-C6알콕시 기에 의해 치환될 수 있음); 기
Figure pct00004
로부터 선택된 기를 나타내거나;
또는 Ra 및 Rb는 이들을 보유하는 질소 원자와 함께 사이클 B1을 형성하거나;
또는 Ra, Rb 및 Rc는 이들을 보유하는 질소 원자와 함께 가교된 C3-C8헤테로시클로알킬을 형성하고,
◆ Rc, Rd, Re, Rf는 서로 독립적으로 수소 또는 선형 또는 분지형 C1-C6알킬 기를 나타내거나,
또는 Rd 및 Re는 이들을 보유하는 질소 원자와 함께 사이클 B2를 형성하거나,
또는 Rd, Re 및 Rf는 이들을 보유하는 질소 원자와 함께 가교된 C3-C8헤테로시클로알킬을 형성하고,
◆ Het1은
Figure pct00005
로부터 선택된 기를 나타내고,
◆ Het2는
Figure pct00006
로부터 선택된 기를 나타내고,
◆ A1은 -NH-, -N(C1-C3알킬), O, S 또는 Se이고,
◆ A2는 N, CH 또는 C(R5)이고,
◆ G는
-C(O)ORG3, -C(O)NRG1RG2, -C(O)RG2, -NRG1C(O)RG2, -NRG1C(O)NRG1RG2, -OC(O)NRG1RG2, -NRG1C(O)ORG3, -C(=NORG1)NRG1RG2, -NRG1C(=NCN)NRG1RG2, -NRG1S(O)2NRG1RG2, -S(O)2RG3, -S(O)2NRG1RG2, -NRG1S(O)2RG2, -NRG1C(=NRG2)NRG1RG2, -C(=S)NRG1RG2, -C(=NRG1)NRG1RG2, 히드록실 기에 의해 임의로 치환된 C1-C6알킬, 할로겐, -NO2 및 -CN으로 이루어진 군으로부터 선택되고, 여기서
- RG1 및 RG2는 각 경우에 각각 독립적으로 수소, 1 내지 3개의 할로겐 원자에 의해 임의로 치환된 C1-C6알킬, C2-C6알케닐, C2-C6알키닐, C3-C6시클로알킬, 페닐 및 -(CH2)1-4-페닐로 이루어진 군으로부터 선택되고;
- RG3은 1 내지 3개의 할로겐 원자에 의해 임의로 치환된 C1-C6알킬, C2-C6알케닐, C2-C6알키닐, C3-C6시클로알킬, 페닐 및 -(CH2)1-4-페닐로 이루어진 군으로부터 선택되거나; 또는
RG1 및 RG2는 각각이 부착되어 있는 원자와 함께 조합되어 C3-C8헤테로시클로알킬을 형성하거나; 또는 대안적으로, G는
Figure pct00007
로 이루어진 군으로부터 선택되고 여기서 RG4는 수소, 1 내지 3개의 할로겐 원자에 의해 임의로 치환된 C1-C6알킬, C2-C6알케닐, C2-C6알키닐 및 C3-C6시클로알킬로부터 선택되고,
◆ R4는 수소, 플루오린, 염소 또는 브로민 원자, 메틸, 히드록실 또는 메톡시 기를 나타내고,
◆ R5는 1 내지 3개의 할로겐 원자에 의해 임의로 치환된 C1-C6알킬; C2-C6알케닐; C2-C6알키닐; 할로겐 또는 -CN으로부터 선택된 기를 나타내고,
◆ R6은
수소;
-C2-C6알케닐;
-X2-O-R7;
Figure pct00008
;
-X2-NSO2-R7;
-C=C(R9)-Y1-O-R7;
C3-C6시클로알킬;
히드록실 기에 의해 임의로 치환된 C3-C6헤테로시클로알킬;
C3-C6시클로알킬렌-Y2-R7;
C3-C6헤테로시클로알킬렌-Y2-R7 기,
선형 또는 분지형 C1-C6알킬 기에 의해 임의로 치환된 헤테로아릴렌-R7 기
로부터 선택된 기를 나타내고,
◆ R7은 선형 또는 분지형 C1-C6알킬 기; (C3-C6)시클로알킬렌-R8; 또는
Figure pct00009
로부터 선택된 기를 나타내고;
여기서 Cy는 C3-C8시클로알킬을 나타내고,
◆ R8은 수소; 선형 또는 분지형 C1-C6알킬, -NR'aR'b; -NR'a-CO-OR'c; -NR'a-CO-R'c; -N+R'aR'bR'c; -O-R'c; -NH-X'2-N+R'aR'bR'c; -O-X'2-NR'aR'b, -X'2-NR'aR'b, -NR'c-X'2-N3 및
Figure pct00010
로부터 선택된 기를 나타내고;
◆ R9는 선형 또는 분지형 C1-C6알킬, 트리플루오로메틸, 히드록실, 할로겐, C1-C6알콕시로부터 선택된 기를 나타내고,
◆ R10은 수소, 플루오린, 염소, 브로민, -CF3 및 메틸로부터 선택된 기를 나타내고,
◆ R11은 수소, C1-C3알킬렌-R8, -O-C1-C3알킬렌-R8, -CO-NRhRi 및 -CH=CH-C1-C4알킬렌-NRhRi, -CH=CH-CHO, C3-C8시클로알킬렌-CH2-R8, C3-C8헤테로시클로알킬렌-CH2-R8로부터 선택된 기를 나타내고,
◆ R12 및 R13은 서로 독립적으로 수소 원자 또는 메틸 기를 나타내고,
◆ R14 및 R15는 서로 독립적으로 수소 또는 메틸 기를 나타내거나, 또는 R14 및 R15는 이들을 보유하는 탄소 원자와 함께 시클로헥실을 형성하고,
◆ Rh 및 Ri는 서로 독립적으로 수소 또는 선형 또는 분지형 C1-C6알킬 기를 나타내고,
◆ X1 및 X2는 서로 독립적으로 트리플루오로메틸, 히드록실, 할로겐, C1-C6알콕시로부터 선택된 1 또는 2개의 기에 의해 임의로 치환된 선형 또는 분지형 C1-C6알킬렌 기를 나타내고,
◆ X'2는 선형 또는 분지형 C1-C6알킬렌을 나타내고,
◆ R'a 및 R'b는 서로 독립적으로 수소; 헤테로시클로알킬; -SO2-페닐 (여기서, 페닐은 선형 또는 분지형 C1-C6알킬에 의해 치환될 수 있음); 1 또는 2개의 히드록실 또는 C1-C6알콕시 기에 의해 임의로 치환된 선형 또는 분지형 C1-C6알킬; C1-C6알킬렌-SO2OH; C1-C6알킬렌-SO2O-; C1-C6알킬렌-COOH; C1-C6알킬렌-PO(OH)2; C1-C6알킬렌-NR'dR'e; C1-C6알킬렌-N+R'dR'eR'f; C1-C6알킬렌-O-C1-C6알킬렌-OH; C1-C6알킬렌-페닐 (여기서, 페닐은 히드록실 또는 C1-C6알콕시 기에 의해 치환될 수 있음); 기
Figure pct00011
로부터 선택된 기를 나타내거나;
또는 R'a 및 R'b는 이들을 보유하는 질소 원자와 함께 사이클 B3을 형성하거나,
또는 R'a, R'b 및 R'c는 이들을 보유하는 질소 원자와 함께 가교된 C3-C8헤테로시클로알킬을 형성하고,
◆ R'c, R'd, R'e, R'f는 서로 독립적으로 수소 또는 선형 또는 분지형 C1-C6알킬 기를 나타내거나,
또는 R'd 및 R'e는 이들을 보유하는 질소 원자와 함께 사이클 B4를 형성하거나,
또는 R'd, R'e 및 R'f는 이들을 보유하는 질소 원자와 함께 가교된 C3-C8헤테로시클로알킬을 형성하고,
◆ Y1은 선형 또는 분지형 C1-C4알킬렌을 나타내고,
◆ Y2는 결합, -O-, -O-CH2-, -O-CO-, -O-SO2-, -CH2-, -CH2-O, -CH2-CO-, -CH2-SO2-, -C2H5-, -CO-, -CO-O-, -CO-CH2-, -CO-NH-CH2-, -SO2-, -SO2-CH2-, -NH-CO-, -NH-SO2-를 나타내고,
◆ m=0, 1 또는 2이고,
◆ p=1, 2, 3 또는 4이고,
◆ B1, B2, B3 및 B4는 서로 독립적으로 C3-C8헤테로시클로알킬 기를 나타내고, 상기 기는 (i) 모노- 또는 비-시클릭 기일 수 있고, 여기서 비시클릭 기는 융합된, 가교된 또는 스피로 고리계를 포함하고, (ii) 질소 원자 이외에, 산소, 황 및 질소로부터 독립적으로 선택된 1 또는 2개의 헤테로 원자를 함유할 수 있고, (iii) 플루오린, 브로민, 염소, 선형 또는 분지형 C1-C6알킬, 히드록실, -NH2, 옥소 또는 피페리디닐로부터 선택된 1 또는 2개의 기에 의해 치환될 수 있고,
여기서 R3 및 R8 기 중 1개는, 존재하는 경우에, 링커에 공유 부착되고, 여기서 원자의 원자가는 그에 결합된 1개 이상의 치환기에 의해 초과되지 않음; 또는
Figure pct00012
또는 이들의 거울상이성질체, 부분입체이성질체 및/또는 부가염과 상기의 제약상 허용되는 산 또는 염기 (즉, 제약상 허용되는 염): 여기서
◆ n=0, 1 또는 2이고,
◆ ------는 단일 또는 이중 결합을 나타내고,
◆ A4 및 A5는 서로 독립적으로 탄소 또는 질소 원자를 나타내고,
◆ Z1은 결합, -N(R)- 또는 -O-를 나타내고, 여기서 R은 수소 또는 선형 또는 분지형 C1-C6알킬을 나타내고,
◆ R1은 수소; 히드록실 또는 C1-C6알콕시 기로 임의로 치환된 선형 또는 분지형 C1-C6알킬; C3-C6시클로알킬; 트리플루오로메틸; 선형 또는 분지형 C1-C6알킬렌-헤테로시클로알킬 (여기서, 헤테로시클로알킬 기는 선형 또는 분지형 C1-C6알킬 기로 임의로 치환됨)로부터 선택된 기를 나타내고;
◆ R2는 수소 또는 메틸을 나타내고;
◆ R3은 수소; 선형 또는 분지형 C1-C4알킬; -X1-NRaRb; -X1-N+RaRbRc; -X1-O-Rc; -X1-COORc; -X1-PO(OH)2; -X1-SO2(OH); -X1-N3 및
Figure pct00013
로부터 선택된 기를 나타내고;
◆ Ra 및 Rb는 서로 독립적으로 수소; 헤테로시클로알킬; -SO2-페닐 (여기서, 페닐은 선형 또는 분지형 C1-C6알킬에 의해 치환될 수 있음); 1 또는 2개의 히드록실 기에 의해 임의로 치환된 선형 또는 분지형 C1-C6알킬; C1-C6알킬렌-SO2OH; C1-C6알킬렌-SO2O-; C1-C6알킬렌-COOH; C1-C6알킬렌-PO(OH)2; C1-C6알킬렌-NRdRe; C1-C6알킬렌-N+RdReRf; C1-C6알킬렌-페닐 (여기서, 페닐은 C1-C6알콕시 기에 의해 치환될 수 있음); 기
Figure pct00014
로부터 선택된 기를 나타내거나;
또는 Ra 및 Rb는 이들을 보유하는 질소 원자와 함께 사이클 B1을 형성하거나;
또는 Ra, Rb 및 Rc는 이들을 보유하는 질소 원자와 함께 가교된 C3-C8헤테로시클로알킬을 형성하고,
◆ Rc, Rd, Re, Rf는 서로 독립적으로 수소 또는 선형 또는 분지형 C1-C6알킬 기를 나타내거나,
또는 Rd 및 Re는 이들을 보유하는 질소 원자와 함께 사이클 B2를 형성하거나,
또는 Rd, Re 및 Rf는 이들을 보유하는 질소 원자와 함께 가교된 C3-C8헤테로시클로알킬을 형성하고,
◆ Het1은
Figure pct00015
로부터 선택된 기를 나타내고,
◆ Het2는
Figure pct00016
로부터 선택된 기를 나타내고,
◆ A1은 -NH-, -N(C1-C3알킬), O, S 또는 Se이고,
◆ A2는 N, CH 또는 C(R5)이고,
◆ G는
-C(O)ORG3, -C(O)NRG1RG2, -C(O)RG2, -NRG1C(O)RG2, -NRG1C(O)NRG1RG2, -OC(O)NRG1RG2, -NRG1C(O)ORG3, -C(=NORG1)NRG1RG2, -NRG1C(=NCN)NRG1RG2, -NRG1S(O)2NRG1RG2, -S(O)2RG3, -S(O)2NRG1RG2, -NRG1S(O)2RG2, -NRG1C(=NRG2)NRG1RG2, -C(=S)NRG1RG2, -C(=NRG1)NRG1RG2, 히드록실 기에 의해 임의로 치환된 C1-C6알킬, 할로겐, -NO2 및 -CN으로 이루어진 군으로부터 선택되고, 여기서
- RG1 및 RG2는 각 경우에 각각 독립적으로, 수소, 1 내지 3개의 할로겐 원자에 의해 임의로 치환된 C1-C6알킬, C2-C6알케닐, C2-C6알키닐, C3-C6시클로알킬, 페닐 및 -(CH2)1-4-페닐로 이루어진 군으로부터 선택되고;
- RG3은 1 내지 3개의 할로겐 원자에 의해 임의로 치환된 C1-C6알킬, C2-C6알케닐, C2-C6알키닐, C3-C6시클로알킬, 페닐 및 -(CH2)1-4-페닐로 이루어진 군으로부터 선택되거나; 또는
RG1 및 RG2는 각각이 부착되어 있는 원자와 함께 조합되어 C3-C8헤테로시클로알킬을 형성하거나; 또는 대안적으로, G는
Figure pct00017
로 이루어진 군으로부터 선택되고
여기서 RG4는 수소, 1 내지 3개의 할로겐 원자에 의해 임의로 치환된 C1-C6알킬, C2-C6알케닐, C2-C6알키닐 및 C3-C6시클로알킬로부터 선택되고,
◆ R4는 수소, 플루오린, 염소 또는 브로민 원자, 메틸, 히드록실 또는 메톡시 기를 나타내고,
◆ R5는 1 내지 3개의 할로겐 원자에 의해 임의로 치환된 C1-C6알킬; C2-C6알케닐; C2-C6알키닐; 할로겐 또는 -CN으로부터 선택된 기를 나타내고,
◆ R6은
수소;
-C2-C6알케닐;
-X2-O-R7;
Figure pct00018
;
-X2-NSO2-R7;
-C=C(R9)-Y1-O-R7;
C3-C6시클로알킬;
히드록실 기에 의해 임의로 치환된 C3-C6헤테로시클로알킬;
C3-C6시클로알킬렌-Y2-R7;
C3-C6헤테로시클로알킬렌-Y2-R7 기,
선형 또는 분지형 C1-C6알킬 기에 의해 임의로 치환된 헤테로아릴렌-R7 기
로부터 선택된 기를 나타내고,
◆ R7은 선형 또는 분지형 C1-C6알킬 기; (C3-C6)시클로알킬렌-R8; 또는
Figure pct00019
로부터 선택된 기를 나타내고;
여기서 Cy는 C3-C8시클로알킬을 나타내고,
◆ R8은 수소; 선형 또는 분지형 C1-C6알킬, -NR'aR'b; -NR'a-CO-OR'c; -NR'a-CO-R'c; -N+R'aR'bR'c; -O-R'c; -NH-X'2-N+R'aR'bR'c; -O-X'2-NR'aR'b, -X'2-NR'aR'b, -NR'c-X'2-N3 및
Figure pct00020
로부터 선택된 기를 나타내고;
◆ R9는 선형 또는 분지형 C1-C6알킬, 트리플루오로메틸, 히드록실, 할로겐, C1-C6알콕시로부터 선택된 기를 나타내고,
◆ R10은 수소, 플루오린, 염소, 브로민, -CF3 및 메틸로부터 선택된 기를 나타내고,
◆ R11은 수소, 할로겐, C1-C3알킬렌-R8, -O-C1-C3알킬렌-R8, -CO-NRhRi 및 -CH=CH-C1-C4알킬렌-NRhRi, -CH=CH-CHO, C3-C8시클로알킬렌-CH2-R8, C3-C8헤테로시클로알킬렌-CH2-R8로부터 선택된 기를 나타내고,
◆ R12 및 R13은 서로 독립적으로 수소 원자 또는 메틸 기를 나타내고,
◆ R14 및 R15는 서로 독립적으로 수소 또는 메틸 기를 나타내거나, 또는 R14 및 R15는 이들을 보유하는 탄소 원자와 함께 시클로헥실을 형성하고,
◆ Rh 및 Ri는 서로 독립적으로 수소 또는 선형 또는 분지형 C1-C6알킬 기를 나타내고,
◆ X1은 트리플루오로메틸, 히드록실, 할로겐, C1-C6알콕시로부터 선택된 1 또는 2개의 기에 의해 임의로 치환된 선형 또는 분지형 C1-C4알킬렌 기를 나타내고,
◆ X2는 트리플루오로메틸, 히드록실, 할로겐, C1-C6알콕시로부터 선택된 1 또는 2개의 기에 의해 임의로 치환된 선형 또는 분지형 C1-C6알킬렌 기를 나타내고,
◆ X'2는 선형 또는 분지형 C1-C6알킬렌을 나타내고,
◆ R'a 및 R'b는 서로 독립적으로 수소; 헤테로시클로알킬; -SO2-페닐 (여기서, 페닐은 선형 또는 분지형 C1-C6알킬에 의해 치환될 수 있음); 1 또는 2개의 히드록실 또는 C1-C6알콕시 기에 의해 임의로 치환된 선형 또는 분지형 C1-C6알킬; C1-C6알킬렌-SO2OH; C1-C6알킬렌-SO2O-; C1-C6알킬렌-COOH; C1-C6알킬렌-PO(OH)2; C1-C6알킬렌-NR'dR'e; C1-C6알킬렌-N+R'dR'eR'f; C1-C6알킬렌-O-C1-C6알킬렌-OH; C1-C6알킬렌-페닐 (여기서, 페닐은 히드록실 또는 C1-C6알콕시 기에 의해 치환될 수 있음); 기
Figure pct00021
로부터 선택된 기를 나타내거나;
또는 R'a 및 R'b는 이들을 보유하는 질소 원자와 함께 사이클 B3을 형성하거나,
또는 R'a, R'b 및 R'c는 이들을 보유하는 질소 원자와 함께 가교된 C3-C8헤테로시클로알킬을 형성하고,
◆ R'c, R'd, R'e, R'f는 서로 독립적으로 수소 또는 선형 또는 분지형 C1-C6알킬 기를 나타내거나,
또는 R'd 및 R'e는 이들을 보유하는 질소 원자와 함께 사이클 B4를 형성하거나,
또는 R'd, R'e 및 R'f는 이들을 보유하는 질소 원자와 함께 가교된 C3-C8헤테로시클로알킬을 형성하고,
◆ Y1은 선형 또는 분지형 C1-C4알킬렌을 나타내고,
◆ Y2는 결합, -O-, -O-CH2-, -O-CO-, -O-SO2-, -CH2-, -CH2-O, -CH2-CO-, -CH2-SO2-, -C2H5-, -CO-, -CO-O-, -CO-CH2-, -CO-NH-CH2-, -SO2-, -SO2-CH2-, -NH-CO-, -NH-SO2-를 나타내고,
◆ m=0, 1 또는 2이고,
◆ p=1, 2, 3 또는 4이고,
◆ B1, B2, B3 및 B4는 서로 독립적으로 C3-C8헤테로시클로알킬 기를 나타내고, 상기 기는 (i) 모노- 또는 비-시클릭 기일 수 있고, 여기서 비시클릭 기는 융합된, 가교된 또는 스피로 고리계를 포함하고, (ii) 질소 원자 이외에, 산소, 황 및 질소로부터 독립적으로 선택된 1 또는 2개의 헤테로 원자를 함유할 수 있고, (iii) 플루오린, 브로민, 염소, 선형 또는 분지형 C1-C6알킬, 히드록실, -NH2, 옥소 또는 피페리디닐로부터 선택된 1 또는 2개의 기에 의해 치환될 수 있고,
◆ 여기서 R3 및 R8 기 중 1개는, 존재하는 경우에, 링커에 공유 부착되고, 여기서 원자의 원자가는 그에 결합된 1개 이상의 치환기에 의해 초과되지 않음.
일부 실시양태에서, 화학식 (I) 또는 화학식 (II)에 대해, G는
-C(O)ORG3, -C(O)NRG1RG2, -C(O)RG2, -NRG1C(O)RG2, -NRG1C(O)NRG1RG2, -OC(O)NRG1RG2, -NRG1C(O)ORG3, -C(=NORG1)NRG1RG2, -NRG1C(=NCN)NRG1RG2, -NRG1S(O)2NRG1RG2, -S(O)2RG3, -S(O)2NRG1RG2, -NRG1S(O)2RG2, -NRG1C(=NRG2)NRG1RG2, -C(=S)NRG1RG2, -C(=NRG1)NRG1RG2, 할로겐, -NO2, 및 -CN으로 이루어진 군으로부터 선택되고, 여기서
- RG1 및 RG2는 각 경우에 각각 독립적으로, 수소, 1 내지 3개의 할로겐 원자에 의해 임의로 치환된 C1-C6알킬, C2-C6알케닐, C2-C6알키닐, C3-C6시클로알킬, 페닐 및 -(CH2)1-4-페닐로 이루어진 군으로부터 선택되고;
- RG3은 1 내지 3개의 할로겐 원자에 의해 임의로 치환된 C1-C6알킬, C2-C6알케닐, C2-C6알키닐, C3-C6시클로알킬, 페닐 및 -(CH2)1-4-페닐로 이루어진 군으로부터 선택되거나; 또는
RG1 및 RG2는 각각이 부착되어 있는 원자와 함께 조합되어 C3-C8헤테로시클로알킬을 형성하거나; 또는 대안적으로, G는
Figure pct00022
로 이루어진 군으로부터 선택되고 여기서 RG4는 1 내지 3개의 할로겐 원자에 의해 임의로 치환된 C1-C6알킬, C2-C6알케닐, C2-C6알키닐 및 C3-C6시클로알킬로부터 선택된다.
일부 실시양태들에서, p는 1 내지 8의 정수이다. 일부 실시양태들에서, p는 1 내지 5의 정수이다. 일부 실시양태들에서, p는 2 내지 4의 정수이다. 일부 실시양태들에서, p는 2이다. 일부 실시양태들에서, p는 4이다. 일부 실시양태들에서, p는 액체 크로마토그래피-질량 분광측정법 (LC-MS)에 의해 측정된다.
일부 실시양태에서, 링커 (L)는 부착 기, 적어도 1개의 스페이서 기 및 적어도 1개의 절단가능한 기를 포함한다. 일부 경우, 절단가능한 기는 피로포스페이트 기 및/또는 자기-희생적 기를 포함한다. 구체적 실시양태에서, L은 부착 기; 적어도 1개의 가교 스페이서 기; 및 피로포스페이트 기 및/또는 자기-희생적 기를 포함하는 적어도 1개의 절단가능한 기를 포함한다.
일부 실시양태에서, 항체-약물 접합체는 화학식 (A)의 링커-약물 (또는 "링커-페이로드") 모이어티 -(L-D)를 포함한다:
Figure pct00023
여기서, R1은 부착 기이고, L1은 가교 스페이서 기이고, E는 절단가능한 기이다.
일부 실시양태에서, 절단가능한 기는 피로포스페이트 기를 포함한다. 일부 실시양태에서, 절단가능한 기는 하기를 포함한다:
Figure pct00024
일부 실시양태에서, 가교 스페이서 기는 폴리옥시에틸렌 (PEG) 기를 포함한다. 일부 경우, PEG 기는 PEG1, PEG2, PEG3, PEG4, PEG5, PEG6, PEG7, PEG8, PEG9, PEG10, PEG11, PEG12, PEG13, PEG14 및 PEG15로부터 선택될 수 있다. 일부 실시양태에서, 가교 스페이서 기는 -CO-CH2-CH2-PEG12-를 포함할 수 있다. 다른 실시양태에서, 가교 스페이서 기는 부타노일, 펜타노일, 헥사노일, 헵타노일 또는 옥타노일 기를 포함한다. 일부 실시양태에서, 가교 스페이서 기는 헥사노일 기를 포함한다.
일부 실시양태에서 부착 기는 말레이미드 기, 티올 기, 시클로옥틴 기 및 아지도 기로부터 선택되는 적어도 1개의 반응성 기로부터 형성된다. 예를 들어, 말레이미드 기는 다음 구조를 가질 수 있다:
Figure pct00025
아지도 기는 다음 구조를 가질 수 있다: -N=N+=N-.
시클로옥틴 기는 다음 구조를 가질 수 있다:
Figure pct00026
, 여기서
Figure pct00027
은 항체에 대한 결합이다.
일부 경우, 시클로옥틴 기는 다음 구조를 갖는다:
Figure pct00028
, 여기서
Figure pct00029
는 항체에 대한 결합이다.
일부 실시양태에서, 부착 기는
Figure pct00030
를 포함하는 화학식을 가지며, 여기서
Figure pct00031
은 항체에 대한 결합이다.
일부 실시양태에서, 항체는 다음으로부터 선택되는 부착 기에 의해 링커 (L)에 연결된다:
Figure pct00032
여기서,
Figure pct00033
은 항체에 대한 결합이고,
Figure pct00034
는 가교 스페이서 기에 대한 결합이다. 본원에 사용된 용어 "연결된"은 공유 부착되거나 또는 공유 연결된 것을 지칭한다.
일부 실시양태에서, 가교 스페이서 기는 절단가능한 기에 연결되거나 공유 연결된다.
일부 실시양태에서, 가교 스페이서 기는 -CO-CH2-CH2-PEG12-이다.
일부 실시양태에서, 절단가능한 기는 -피로포스페이트-CH2-CH2-NH2-이다.
일부 실시양태에서, 절단가능한 기는 Bcl-xL 억제제 (D)에 연결되거나 공유 연결된다.
일부 실시양태에서, 링커는 부착 기, 적어도 1개의 가교 스페이서 기, 펩티드 기, 및 적어도 1개의 절단가능한 기를 포함한다.
일부 실시양태에서, 항체-약물 접합체는 하기 화학식 (B)의 링커-약물 모이어티 -(L-D)를 포함한다:
Figure pct00035
여기서, R1은 부착 기이고, L1은 가교 스페이서이고, Lp는 1 내지 6개의 아미노산 잔기를 포함하는 펩티드 기이고, E는 절단가능한 기이고, L2는 가교 스페이서이고, m은 0 또는 1이고; D는 Bcl-xL 억제제이다. 일부 경우, m은 1이고, 가교 스페이서는 하기를 포함한다:
Figure pct00036
일부 실시양태에서, 적어도 1개의 가교 스페이서는 PEG 기를 포함한다. 일부 경우, PEG 기는 PEG1, PEG2, PEG3, PEG4, PEG5, PEG6, PEG7, PEG8, PEG9, PEG10, PEG11, PEG12, PEG13, PEG14 및 PEG15로부터 선택된다. 일부 경우, 적어도 1개의 가교 스페이서는 *-C(O)-CH2-CH2-PEG1-**, *-C(O)-CH2-PEG3-**, *-C(O)-CH2-CH2-PEG12**, *-NH-CH2-CH2-PEG1-**, 폴리히드록시알킬 기, *-C(O)-N(CH3)-CH2-CH2-N(CH3)-C(O)-**, *-C(O)-CH2-CH2-PEG12-NH-C(O)CH2-CH2-**로부터 선택되며, 여기서 **는 1개 이상의 가교 스페이서가 부착 기에 직접 또는 간접 부착되는 지점을 나타내고, *는 1개 이상의 가교 스페이서가 펩티드 기에 직접 또는 간접 부착되는 지점을 나타낸다.
일부 실시양태에서, L1은 *-C(O)-CH2-CH2-PEG1-**, *-C(O)-CH2-PEG3-**, *-C(O)-CH2-CH2-PEG12**, *-NH-CH2-CH2-PEG1-**, 및 폴리히드록시알킬 기로부터 선택되고, 여기서 **는 R1에 대한 L1의 직접 또는 간접 부착 지점을 나타내고, *는 Lp에 대한 L1의 직접 또는 간접 부착 지점을 나타낸다.
일부 실시양태에서, m은 1이고 L2는 -C(O)-N(CH3)-CH2-CH2-N(CH3)-C(O)-이다.
일부 실시양태에서, 펩티드 기는 1 내지 12개의 아미노산 잔기를 포함한다. 일부 실시양태에서, 펩티드 기 (Lp)는 1 내지 10개의 아미노산 잔기를 포함한다. 일부 실시양태에서, 펩티드 기 (Lp)는 1 내지 8개의 아미노산 잔기를 포함한다. 일부 실시양태에서, 펩티드 기 (Lp)는 1 내지 6개의 아미노산 잔기를 포함한다. 일부 실시양태에서, 펩티드 기는 1 내지 4개의 아미노산 잔기를 포함한다. 일부 실시양태에서, 펩티드 기는 1 내지 3개의 아미노산 잔기를 포함한다. 일부 실시양태에서, 펩티드 기는 1 내지 2개의 아미노산 잔기를 포함한다. 일부 경우, 아미노산 잔기는 L-글리신 (Gly), L-발린 (Val), L-시트룰린 (Cit), L-시스테산 (술포-Ala), L-리신 (Lys), L-이소류신 (Ile), L-페닐알라닌 (Phe), L-메티오닌 (Met), L-아스파라긴 (Asn), L-프롤린 (Pro), L-알라닌 (Ala), L-류신 (Leu), L-트립토판 (Trp), 및 L-티로신 (Tyr)으로부터 선택된다. 예를 들어, 펩티드 기는 Val-Cit, Val-Ala, Val-Lys 및/또는 술포-Ala-Val-Ala를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 펩티드 기 (Lp)는
Figure pct00037
기에 연결된 1개의 아미노산 잔기를 포함한다. 일부 실시양태에서, 펩티드 기 (Lp)는 기
Figure pct00038
를 포함한다.
일부 경우, 펩티드 기는 다음으로부터 선택되는 기를 포함한다:
Figure pct00039
일부 실시양태에서, 자기-희생적 기는 파라-아미노벤질-카르바메이트, 파라-아미노벤질-암모늄, 파라-아미노-(술포)벤질-암모늄, 파라-아미노-(술포)벤질-카르바메이트, 파라-아미노-(알콕시-PEG-알킬)벤질-카르바메이트, 파라-아미노-(폴리히드록시카르복시테트라히드로피라닐)알킬-벤질-카르바메이트 또는 파라-아미노-(폴리히드록시카르복시테트라히드로피라닐)알킬-벤질-암모늄을 포함한다.
일부 실시양태에서, m은 1이고, 가교 스페이서는
Figure pct00040
를 포함한다.
일부 실시양태에서, 링커-약물 모이어티 -(L-D)는 다음으로부터 선택되는 화합물로부터 형성된다:
Figure pct00041
Figure pct00042
Figure pct00043
Figure pct00044
Figure pct00045
일부 실시양태에서, 항체-약물 접합체는 다음으로부터 선택되는 화학식을 포함하는 링커-약물 기 -(L-D)를 포함한다:
Figure pct00046
Figure pct00047
Figure pct00048
Figure pct00049
Figure pct00050
Figure pct00051
Figure pct00052
여기서,
Figure pct00053
은 항체에 대한 결합이다.
일부 실시양태에서, 항체-약물 접합체는 화학식 (C)의 링커 약물 기 -(L-D)를 포함한다:
Figure pct00054
여기서, R1은 부착 기이고, L1은 가교 스페이서이고; Lp는 1 내지 6개의 아미노산을 포함하는 펩티드 기이고; D는 Bcl-xL 억제제이고; G1-L2-A는 자기-희생적 스페이서이고; L2는 결합, 메틸렌, 네오펜틸렌 또는 C2-C3알케닐렌이고; A는 결합, -OC(=O)-*,
Figure pct00055
, -OC(=O)N(CH3)CH2CH2N(CH3)C(=O)-* 또는 -OC(=O)N(CH3)C(Ra)2C(Ra)2N(CH3)C(=O)-*이고, 여기서 각각의 Ra는 독립적으로 H, C1-C6알킬 및 C3-C8시클로알킬로부터 선택되고, A의 *는 D에 대한 부착 지점을 나타내고; L3은 스페이서 모이어티이고; R2는 친수성 모이어티이다.
일부 실시양태에서, 항체-약물 접합체는 하기 화학식 (D)의 링커 약물 기 -(L-D)를 포함한다:
Figure pct00056
여기서, R1은 부착 기이고; L1은 가교 스페이서이고; Lp는 1 내지 6개의 아미노산을 포함하는 펩티드 기이고; A는 결합, -OC(=O)-*,
Figure pct00057
, -OC(=O)N(CH3)CH2CH2N(CH3)C(=O)-* 또는 -OC(=O)N(CH3)C(Ra)2C(Ra)2N(CH3)C(=O)-*이고, 여기서 각각의 Ra는 독립적으로 H, C1-C6알킬 및 C3-C8시클로알킬로부터 선택되고, A의 *는 D에 대한 부착 지점을 나타내고; L3은 스페이서 모이어티이고; R2는 친수성 모이어티이다.
일부 실시양태에서, L1은
Figure pct00058
또는 *-CH(OH)CH(OH)CH(OH)CH(OH)-**를 포함하고, 여기서 각각의 n은 1 내지 12의 정수이고, 여기서 L1의 *는 Lp에 대한 직접 또는 간접 부착 지점을 나타내고, L1의 **는 R1에 대한 직접 또는 간접 부착 지점을 나타낸다.
일부 실시양태에서, L1은
Figure pct00059
이고, n은 1 내지 12의 정수이고, 여기서 L1의 *는 Lp에 대한 직접 또는 간접 부착 지점을 나타내고, L1의 **는 R1에 대한 직접 또는 간접 부착 지점을 나타낸다.
일부 실시양태에서, L1은
Figure pct00060
이고, n은 1이고, 여기서 L1의 *는 Lp에 대한 직접 또는 간접 부착 지점을 나타내고, L1의 **는 R1에 대한 직접 또는 간접 부착 지점을 나타낸다.
일부 실시양태에서, L1은
Figure pct00061
이고, n은 12이고, 여기서 L1의 *는 Lp에 대한 직접 또는 간접 부착 지점을 나타내고, L1의 **는 R1에 대한 직접 또는 간접 부착 지점을 나타낸다.
일부 실시양태에서, L1은
Figure pct00062
이고, n은 1 내지 12의 정수이고, 여기서 L1의 *는 Lp에 대한 직접 또는 간접 부착 지점을 나타내고, L1의 **는 R1에 대한 직접 또는 간접 부착 지점을 나타낸다.
일부 실시양태에서, L1은
Figure pct00063
를 포함하고, 여기서 L1의 *는 Lp에 대한 직접 또는 간접 부착 지점을 나타내고, L1의 **는 R1에 대한 직접 또는 간접 부착 지점을 나타낸다.
일부 실시양태에서, L1은 하기를 포함하는 가교 스페이서이고:
*-C(=O)(CH2)mO(CH2)m-**; *-C(=O)((CH2)mO)t(CH2)n-**; *-C(=O)(CH2)m-**;
*-C(=O)NH((CH2)mO)t(CH2)n-**;
*-C(=O)O(CH2)mSSC(R3)2(CH2)mC(=O)NR3(CH2)mNR3C(=O)(CH2)m-**;
*-C(=O)O(CH2)mC(=O)NH(CH2)m-**; *-C(=O)(CH2)mNH(CH2)m-**;
*-C(=O)(CH2)mNH(CH2)nC(=O)-**; *-C(=O)(CH2)mX1(CH2)m-**;
*-C(=O)((CH2)mO)t(CH2)nX1(CH2)n-**; *-C(=O)(CH2)mNHC(=O)(CH2)n-**;
*-C(=O)((CH2)mO)t(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-**; *-C(=O)(CH2)mNHC(=O)(CH2)nX1(CH2)n-**;
*-C(=O)((CH2)mO)t(CH2)nNHC(=O)(CH2)nX1(CH2)n-**;
*-C(=O)((CH2)mO)t(CH2)nC(=O)NH(CH2)m-**; *-C(=O)(CH2)mC(R3)2-** 또는
*-C(=O)(CH2)mC(=O)NH(CH2)m-**, 여기서 L1의 *는 Lp에 대한 직접 또는 간접 부착 지점을 나타내고, L1의 **는 R1에 대한 직접 또는 간접 부착 지점을 나타내며, 여기서 X1은
Figure pct00064
이고,
각각의 m은 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 및 10으로부터 선택되고;
각각의 n은 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 및 10으로부터 선택되고;
각각의 t는 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 및 30으로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, R2는 폴리에틸렌 글리콜, 폴리알킬렌 글리콜, 폴리올, 폴리사르코신, 당, 올리고사카라이드, 폴리펩티드 또는 1 내지 3개의
Figure pct00065
기로 치환된 C2-C6 알킬 또는 -OC(=O)NHS(O)2NHCH2CH2OCH3, -NHC(=O)C1-4알킬렌-P(O)(OCH2CH3)2 및 -COOH 기로부터 독립적으로 선택된 1 내지 2개의 치환기로 치환된 C2-C6 알킬을 포함하는 친수성 모이어티이다. 일부 실시양태에서, R2는
Figure pct00066
(여기서, n은 1 내지 6의 정수임),
Figure pct00067
이다.
일부 실시양태에서, 친수성 모이어티는 화학식
Figure pct00068
의 폴리에틸렌 글리콜을 포함하며, 여기서 R은 H, -CH3, CH2CH2NHC(=O)ORa, -CH2CH2NHC(=O)Ra, 또는 -CH2CH2C(=O)ORa이고, R'는 OH, -OCH3, CH2CH2NHC(=O)ORa, -CH2CH2NHC(=O)Ra, 또는 -OCH2CH2C(=O)ORa이고, m 및 n은 각각 2 내지 25 (예를 들어 3 내지 25)의 정수이다.
일부 실시양태에서, 친수성 모이어티는
Figure pct00069
를 포함한다.
일부 실시양태에서, 친수성 모이어티는, 예를 들어 하기 모이어티:
Figure pct00070
를 갖는 폴리사르코신이고, 여기서 n은 3 내지 25의 정수이고; R은 H, -CH3 또는 -CH2CH2C(=O)OH이다.
일부 실시양태에서, L3은 구조
Figure pct00071
를 갖는 스페이서 모이어티이고,
여기서:
W는 -CH2-, -CH2O-, -CH2N(Rb)C(=O)O-, -NHC(=O)C(Rb)2NHC(=O)O-, -NHC(=O)C(Rb)2NH-, -NHC(=O)C(Rb)2NHC(=O)-, -CH2N(X-R2)C(=O)O-, -C(=O)N(X-R2)-, -CH2N(X-R2)C(=O)-, -C(=O)NRb-, -C(=O)NH-, -CH2NRbC(=O)-, -CH2NRbC(=O)NH-, -CH2NRbC(=O)NRb-, -NHC(=O)-, -NHC(=O)O-, -NHC(=O)NH-, -OC(=O)NH-, -S(O)2NH-, -NHS(O)2-, -C(=O)-, -C(=O)O- 또는 -NH-이고, 여기서 각각의 Rb는 독립적으로 H, C1-C6알킬, 및 C3-C8시클로알킬로부터 선택되고;
X는 결합, 트리아졸릴, 또는 -CH2-트리아졸릴-이고, 여기서 X는 R2에 연결된다.
일부 실시양태에서, L3은 구조
Figure pct00072
를 갖는 스페이서 모이어티이고,
여기서:
W는 -CH2-, -CH2O-, -CH2N(Rb)C(=O)O-, -NHC(=O)C(Rb)2NHC(=O)O-, -NHC(=O)C(Rb)2NH-, -NHC(=O)C(Rb)2NHC(=O)-, -CH2N(X-R2)C(=O)O-, -C(=O)N(X-R2)-, -CH2N(X-R2)C(=O)-, -C(=O)NRb-, -C(=O)NH-, -CH2NRbC(=O)-, -CH2NRbC(=O)NH-, -CH2NRbC(=O)NRb-, -NHC(=O)-, -NHC(=O)O-, -NHC(=O)NH-, -OC(=O)NH-, -S(O)2NH-, -NHS(O)2-, -C(=O)-, -C(=O)O- 또는 -NH-이고, 여기서 각각의 Rb는 독립적으로 H, C1-C6알킬, 및 C3-C8시클로알킬로부터 선택되고;
X는 -CH2-트리아졸릴-C1-4 알킬렌-OC(O)NHS(O)2NH-, -C4-6 시클로알킬렌-OC(O)NHS(O)2NH-, -(CH2CH2O)n-C(O)NHS(O)2NH-, -(CH2CH2O)n-C(O)NHS(O)2NH-(CH2CH2O)n-, -CH2-트리아졸릴-C1-4 알킬렌-OC(O)NHS(O)2NH-(CH2CH2O)n-, 또는 -C4-6 시클로알킬렌-OC(O)NHS(O)2NH-(CH2CH2O)n-이고, 여기서 각각의 n은 독립적으로 1, 2, 또는 3이고, 여기서 X는 R2에 연결된다.
일부 실시양태에서, 부착 기는 적어도 1개의 반응성 기를 포함하는 반응에 의해 형성된다. 일부 경우, 부착 기는 링커에 부착된 제1 반응성 기 및 항체에 부착되거나 항체의 아미노산 잔기인 제2 반응성 기를 반응시킴으로써 형성된다.
일부 실시양태에서, 반응성 기 중 적어도 1개는 하기를 포함한다:
티올,
말레이미드,
할로아세트아미드,
아지드,
알킨,
시클로옥텐,
트리아릴 포스핀,
옥사노보르나디엔,
시클로옥틴,
디아릴 테트라진,
모노아릴 테트라진,
노르보르넨,
알데히드,
히드록실아민,
히드라진,
NH2-NH-C(=O)-,
케톤,
비닐 술폰,
아지리딘,
아미노산 잔기,
Figure pct00073
Figure pct00074
여기서:
각각의 R3은 독립적으로 H 및 C1-C6알킬로부터 선택되고;
각각의 R4는 2-피리딜 또는 4-피리딜이고;
각각의 R5는 독립적으로 H, C1-C6알킬, F, Cl, 및 -OH로부터 선택되고;
각각의 R6은 독립적으로 H, C1-C6알킬, F, Cl, -NH2, -OCH3, -OCH2CH3, -N(CH3)2, -CN, -NO2 및 -OH로부터 선택되고;
각각의 R7은 독립적으로 H, C1-6알킬, 플루오로, -C(=O)OH로 치환된 벤질옥시, -C(=O)OH로 치환된 벤질, -C(=O)OH로 치환된 C1-4알콕시, 및 -C(=O)OH로 치환된 C1-4알킬로부터 선택되는 것인 항체-약물 접합체.
일부 실시양태에서, 제1 반응성 기 및 제2 반응성 기는 하기를 포함한다:
티올 및 말레이미드,
티올 및 할로아세트아미드,
티올 및 비닐 술폰,
티올 및 아지리딘,
아지드 및 알킨,
아지드 및 시클로옥틴,
아지드 및 시클로옥텐,
아지드 및 트리아릴 포스핀,
아지드 및 옥사노보르나디엔,
디아릴 테트라진 및 시클로옥텐,
모노아릴 테트라진 및 비보르넨,
알데히드 및 히드록실아민,
알데히드 및 히드라진,
알데히드 및 NH2-NH-C(=O)-,
케톤 및 히드록실아민,
케톤 및 히드라진,
케톤 및 NH2-NH-C(=O)-,
히드록실아민 및
Figure pct00075
,
아민 및
Figure pct00076
, 또는
CoA 또는 CoA 유사체 및 세린 잔기.
일부 실시양태에서, 부착 기는 다음으로부터 선택되는 기를 포함한다:
Figure pct00077
Figure pct00078
Figure pct00079
Figure pct00080
여기서:
R32는 H, C1-4 알킬, 페닐, 피리미딘 또는 피리딘이고;
R35는 H, C1-6 알킬, 페닐, 또는 1 내지 3개의 -OH 기로 치환된 C1-4 알킬이고;
각각의 R7은 독립적으로 H, C1-6 알킬, 플루오로, -C(=O)OH로 치환된 벤질옥시, -C(=O)OH로 치환된 벤질, -C(=O)OH로 치환된 C1-4 알콕시, 및 -C(=O)OH로 치환된 C1-4 알킬로부터 선택되고;
R37은 독립적으로 H, 페닐 및 피리딘으로부터 선택되고;
q는 0, 1, 2 또는 3이고;
R8은 H 또는 메틸이고;
R9는 H, -CH3 또는 페닐이다.
일부 실시양태에서, 펩티드 기 (Lp)는 1 내지 6개의 아미노산 잔기를 포함한다. 일부 실시양태에서, 펩티드 기 (Lp)는 1 내지 4개의 아미노산 잔기를 포함한다. 일부 실시양태에서, 펩티드 기는 1 내지 3개의 아미노산 잔기를 포함한다. 일부 실시양태에서, 펩티드 기는 1 내지 2개의 아미노산 잔기를 포함한다. 일부 실시양태에서, 아미노산 잔기는 L-글리신 (Gly), L-발린 (Val), L-시트룰린 (Cit), L-시스테산 (술포-Ala), L-리신 (Lys), L-이소류신 (Ile), L-페닐알라닌 (Phe), L-메티오닌 (Met), L-아스파라긴 (Asn), L-프롤린 (Pro), L-알라닌 (Ala), L-류신 (Leu), L-트립토판 (Trp), 및 L-티로신 (Tyr)으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 펩티드 기는 Val-Cit, Phe-Lys, Val-Ala, Val-Lys, Leu-Cit, 술포-Ala-Val 및/또는 술포-Ala-Val-Ala를 포함한다. 일부 실시양태에서, Lp는 다음으로부터 선택된다:
Figure pct00081
일부 실시양태에서, 링커-약물 기 -(L-D)는 하기 화학식의 화합물을 포함하거나 또는 그로부터 형성된다:
Figure pct00082
여기서:
R은 H, -CH3 또는 -CH2CH2C(=O)OH이고;
A는 결합, -OC(=O)-*,
Figure pct00083
, -OC(=O)N(CH3)CH2CH2N(CH3)C(=O)-* 또는 -OC(=O)N(CH3)C(Ra)2C(Ra)2N(CH3)C(=O)-*이고, 여기서 각각의 Ra는 독립적으로 H, C1-C6 알킬, 및 C3-C8 시클로알킬로부터 선택되고, A의 *는 D에 대한 부착 지점을 나타내고;
D는 Bcl-xL 억제제이다. 일부 실시양태에서, 링커-약물 기 -(L-D)는 하기 화학식의 화합물을 포함한다:
Figure pct00084
여기서:
Figure pct00085
는 항체에 결합되고; A, D 및 R은 상기 정의된 바와 같다. 일부 실시양태에서, A는 결합 또는 -OC(=O)-*이고; R은 -CH3 또는 -CH2CH2C(=O)OH이다.
일부 실시양태에서, 링커-약물 기 -(L-D)는 하기 화학식의 화합물을 포함하거나 또는 그로부터 형성된다:
Figure pct00086
여기서:
R은 H, -CH3 또는 -CH2CH2C(=O)OH이고;
A는 결합, -OC(=O)-*,
Figure pct00087
, -OC(=O)N(CH3)CH2CH2N(CH3)C(=O)-* 또는 -OC(=O)N(CH3)C(Ra)2C(Ra)2N(CH3)C(=O)-*이고, 여기서 각각의 Ra는 독립적으로 H, C1-C6 알킬, 및 C3-C8 시클로알킬로부터 선택되고, A의 *는 D에 대한 부착 지점을 나타내고;
D는 Bcl-xL 억제제이다. 일부 실시양태에서, 링커-약물 기 -(L-D)는 하기 화학식의 화합물을 포함한다:
Figure pct00088
여기서
Figure pct00089
는 항체에 결합되고; A, D 및 R은 상기 정의된 바와 같다. 일부 실시양태에서, A는 결합 또는 -OC(=O)-*이고; R은 -CH3 또는 -CH2CH2C(=O)OH이다.
일부 실시양태에서, 링커-약물 기 -(L-D)는 하기 화학식의 화합물을 포함하거나 또는 그로부터 형성된다:
Figure pct00090
여기서:
R은 H, -CH3 또는 -CH2CH2C(=O)OH이고;
A는 결합, -OC(=O)-*,
Figure pct00091
, -OC(=O)N(CH3)CH2CH2N(CH3)C(=O)-* 또는 -OC(=O)N(CH3)C(Ra)2C(Ra)2N(CH3)C(=O)-*이고, 여기서 각각의 Ra는 독립적으로 H, C1-C6 알킬, 및 C3-C8 시클로알킬로부터 선택되고, A의 *는 D에 대한 부착 지점을 나타내고;
D는 Bcl-xL 억제제이다. 일부 실시양태에서, 링커-약물 기 -(L-D)는 하기 화학식의 화합물을 포함한다:
Figure pct00092
여기서
Figure pct00093
는 항체에 결합되고; A, D 및 R은 상기 정의된 바와 같다. 일부 실시양태에서, A는 결합 또는 -OC(=O)-*이고; R은 -CH3 또는 -CH2CH2C(=O)OH이다.
일부 실시양태에서, 링커-약물 기 -(L-D)는 하기 화학식의 화합물을 포함하거나 또는 그로부터 형성된다:
Figure pct00094
여기서:
각각의 R은 독립적으로 H, -CH3, 및 -CH2CH2C(=O)OH로부터 선택되고;
A는 결합, -OC(=O)-*,
Figure pct00095
, -OC(=O)N(CH3)CH2CH2N(CH3)C(=O)-* 또는 -OC(=O)N(CH3)C(Ra)2C(Ra)2N(CH3)C(=O)-*이고, 여기서 각각의 Ra는 독립적으로 H, C1-C6 알킬, 및 C3-C8 시클로알킬로부터 선택되고, A의 *는 D에 대한 부착 지점을 나타내고;
D는 Bcl-xL 억제제이다. 일부 실시양태에서, 링커-약물 기 -(L-D)는 하기 화학식의 화합물을 포함한다:
Figure pct00096
여기서:
Figure pct00097
는 항체에 결합되고; A, D 및 R은 상기 정의된 바와 같다. 일부 실시양태에서, A는 결합 또는 -OC(=O)-*이고; R은 -CH3 또는 -CH2CH2C(=O)OH이다.
일부 실시양태에서, 링커-약물 기 -(L-D)는 하기 화학식의 화합물을 포함하거나 또는 그로부터 형성된다:
Figure pct00098
여기서:
각각의 R은 독립적으로 H, -CH3, 및 -CH2CH2C(=O)OH로부터 선택되고;
A는 결합, -OC(=O)-*,
Figure pct00099
, -OC(=O)N(CH3)CH2CH2N(CH3)C(=O)-* 또는 -OC(=O)N(CH3)C(Ra)2C(Ra)2N(CH3)C(=O)-*이고, 여기서 각각의 Ra는 독립적으로 H, C1-C6 알킬, 및 C3-C8 시클로알킬로부터 선택되고, A의 *는 D에 대한 부착 지점을 나타내고;
D는 Bcl-xL 억제제이다. 일부 실시양태에서, 링커-약물 기 -(L-D)는 하기 화학식의 화합물을 포함한다:
Figure pct00100
여기서:
Figure pct00101
는 항체에 결합되고; A, D 및 R은 상기 정의된 바와 같다. 일부 실시양태에서, A는 결합 또는 -OC(=O)-*이고; R은 -CH3 또는 -CH2CH2C(=O)OH이다.
일부 실시양태에서, 링커-약물 기 -(L-D)는 하기 화학식의 화합물을 포함하거나 또는 그로부터 형성된다:
Figure pct00102
여기서:
Xa는 -CH2-, -OCH2-, -NHCH2- 또는 -NRCH2-이고, 각각의 R은 독립적으로 H, -CH3 또는 -CH2CH2C(=O)OH이고;
A는 결합, -OC(=O)-*,
Figure pct00103
, -OC(=O)N(CH3)CH2CH2N(CH3)C(=O)-* 또는 -OC(=O)N(CH3)C(Ra)2C(Ra)2N(CH3)C(=O)-*이고, 여기서 각각의 Ra는 독립적으로 H, C1-C6 알킬, 및 C3-C8 시클로알킬로부터 선택되고, A의 *는 D에 대한 부착 지점을 나타내고;
D는 Bcl-xL 억제제이다. 일부 실시양태에서, 링커-약물 기 -(L-D)는 하기 화학식의 화합물을 포함한다:
Figure pct00104
여기서:
Figure pct00105
는 항체에 결합되고; Xa, A, D 및 R은 상기 정의된 바와 같다. 일부 실시양태에서, Xa는 -CH2- 또는 -NHCH2-이고; A는 결합 또는 -OC(=O)-*이고; R은 -CH3 또는 -CH2CH2C(=O)OH이다.
일부 실시양태에서, 링커-약물 기 -(L-D)는 하기 화학식의 화합물을 포함하거나 또는 그로부터 형성된다:
Figure pct00106
여기서:
R은 H, -CH3 또는 -CH2CH2C(=O)OH이고;
A는 결합, -OC(=O)-*,
Figure pct00107
, -OC(=O)N(CH3)CH2CH2N(CH3)C(=O)-* 또는 -OC(=O)N(CH3)C(Ra)2C(Ra)2N(CH3)C(=O)-*이고, 여기서 각각의 Ra는 독립적으로 H, C1-C6 알킬, 및 C3-C8 시클로알킬로부터 선택되고, A의 *는 D에 대한 부착 지점을 나타내고;
D는 Bcl-xL 억제제이다. 일부 실시양태에서, 링커-약물 기 -(L-D)는 하기 화학식의 화합물을 포함한다:
Figure pct00108
여기서:
Figure pct00109
는 항체에 결합되고; A, D 및 R은 상기 정의된 바와 같다. 일부 실시양태에서, A는 결합 또는 -OC(=O)-*이고; R은 -CH3 또는 -CH2CH2C(=O)OH이다.
일부 실시양태에서, 링커-약물 기 -(L-D)는 하기 화학식의 화합물을 포함하거나 또는 그로부터 형성된다:
Figure pct00110
여기서:
Xb는 -CH2-, -OCH2-, -NHCH2- 또는 -NRCH2-이고, 각각의 R은 독립적으로 H, -CH3 또는 -CH2CH2C(=O)OH이고;
A는 결합, -OC(=O)-*,
Figure pct00111
, -OC(=O)N(CH3)CH2CH2N(CH3)C(=O)-* 또는 -OC(=O)N(CH3)C(Ra)2C(Ra)2N(CH3)C(=O)-*이고, 여기서 각각의 Ra는 독립적으로 H, C1-C6 알킬, 및 C3-C8 시클로알킬로부터 선택되고, A의 *는 D에 대한 부착 지점을 나타내고;
D는 Bcl-xL 억제제이다. 일부 실시양태에서, 링커-약물 기 -(L-D)는 하기 화학식의 화합물을 포함한다:
Figure pct00112
여기서:
Figure pct00113
는 항체에 결합되고; Xb, A, D 및 R은 상기 정의된 바와 같다. 일부 실시양태에서, A는 결합 또는 -OC(=O)-*이고; R은 -CH3 또는 -CH2CH2C(=O)OH이다.
일부 실시양태에서, 링커-약물 기 -(L-D)는 하기 화학식의 화합물을 포함하거나 또는 그로부터 형성된다:
Figure pct00114
여기서:
A는 결합, -OC(=O)-*,
Figure pct00115
, -OC(=O)N(CH3)CH2CH2N(CH3)C(=O)-* 또는 -OC(=O)N(CH3)C(Ra)2C(Ra)2N(CH3)C(=O)-*이고, 여기서 각각의 Ra는 독립적으로 H, C1-C6 알킬, 및 C3-C8 시클로알킬로부터 선택되고, A의 *는 D에 대한 부착 지점을 나타내고;
D는 Bcl-xL 억제제이다. 일부 실시양태에서, 링커-약물 기 -(L-D)는 하기 화학식의 화합물을 포함한다:
Figure pct00116
여기서:
Figure pct00117
는 항체에 결합되고; A는 상기 정의된 바와 같다. 일부 실시양태에서, A는 결합 또는 -OC(=O)-*이다.
일부 실시양태에서, 링커-약물 기 -(L-D)는 하기 화학식의 화합물을 포함하거나 또는 그로부터 형성된다:
Figure pct00118
여기서:
A는 결합, -OC(=O)-*,
Figure pct00119
, -OC(=O)N(CH3)CH2CH2N(CH3)C(=O)-* 또는 -OC(=O)N(CH3)C(Ra)2C(Ra)2N(CH3)C(=O)-*이고, 여기서 각각의 Ra는 독립적으로 H, C1-C6 알킬, 및 C3-C8 시클로알킬로부터 선택되고, A의 *는 D에 대한 부착 지점을 나타내고;
D는 Bcl-xL 억제제이다. 일부 실시양태에서, 링커-약물 기 -(L-D)는 하기 화학식의 화합물을 포함한다:
Figure pct00120
여기서:
Figure pct00121
는 항체에 결합되고; A 및 D는 상기 정의된 바와 같다. 일부 실시양태에서, A는 결합 또는 -OC(=O)-*이다.
일부 실시양태에서, 링커-약물 기 -(L-D)는 하기 화학식의 화합물을 포함하거나 또는 그로부터 형성된다:
Figure pct00122
여기서:
A는 결합, -OC(=O)-*,
Figure pct00123
, -OC(=O)N(CH3)CH2CH2N(CH3)C(=O)-* 또는 -OC(=O)N(CH3)C(Ra)2C(Ra)2N(CH3)C(=O)-*이고, 여기서 각각의 Ra는 독립적으로 H, C1-C6 알킬, 및 C3-C8 시클로알킬로부터 선택되고, A의 *는 D에 대한 부착 지점을 나타내고;
D는 Bcl-xL 억제제이다. 일부 실시양태에서, 링커-약물 기 -(L-D)는 하기 화학식의 화합물을 포함한다:
Figure pct00124
여기서:
Figure pct00125
는 항체에 결합되고; A 및 D는 상기 정의된 바와 같다. 일부 실시양태에서, A는 결합 또는 -OC(=O)-*이다.
일부 실시양태에서, 링커-약물 기 -(L-D)는 하기 화학식의 화합물을 포함하거나 또는 그로부터 형성된다:
Figure pct00126
여기서:
A는 결합, -OC(=O)-*,
Figure pct00127
, -OC(=O)N(CH3)CH2CH2N(CH3)C(=O)-* 또는 -OC(=O)N(CH3)C(Ra)2C(Ra)2N(CH3)C(=O)-*이고, 여기서 각각의 Ra는 독립적으로 H, C1-C6 알킬, 및 C3-C8 시클로알킬로부터 선택되고, A의 *는 D에 대한 부착 지점을 나타내고;
D는 Bcl-xL 억제제이다. 일부 실시양태에서, 링커-약물 기 -(L-D)는 하기 화학식의 화합물을 포함한다:
Figure pct00128
여기서:
Figure pct00129
는 항체에 결합되고; A 및 D는 상기 정의된 바와 같다. 일부 실시양태에서, A는 결합 또는 -OC(=O)-*이다.
일부 실시양태에서, 링커-약물 기 -(L-D)는 하기 화학식의 화합물을 포함하거나 또는 그로부터 형성된다:
Figure pct00130
여기서:
A는 결합, -OC(=O)-*,
Figure pct00131
, -OC(=O)N(CH3)CH2CH2N(CH3)C(=O)-* 또는 -OC(=O)N(CH3)C(Ra)2C(Ra)2N(CH3)C(=O)-*이고, 여기서 각각의 Ra는 독립적으로 H, C1-C6 알킬, 및 C3-C8 시클로알킬로부터 선택되고, A의 *는 D에 대한 부착 지점을 나타내고;
D는 Bcl-xL 억제제이다. 일부 실시양태에서, 링커-약물 기 -(L-D)는 하기 화학식의 화합물을 포함한다:
Figure pct00132
여기서:
Figure pct00133
는 항체에 결합되고; A 및 D는 상기 정의된 바와 같다. 일부 실시양태에서, A는 결합 또는 -OC(=O)-*이다.
일부 실시양태에서, 링커-약물 기 -(L-D)는 하기 화학식의 화합물을 포함하거나 또는 그로부터 형성된다:
Figure pct00134
여기서:
A는 결합, -OC(=O)-*,
Figure pct00135
, -OC(=O)N(CH3)CH2CH2N(CH3)C(=O)-* 또는 -OC(=O)N(CH3)C(Ra)2C(Ra)2N(CH3)C(=O)-*이고, 여기서 각각의 Ra는 독립적으로 H, C1-C6 알킬, 및 C3-C8 시클로알킬로부터 선택되고, A의 *는 D에 대한 부착 지점을 나타내고;
D는 Bcl-xL 억제제이다. 일부 실시양태에서, 링커-약물 기 -(L-D)는 하기 화학식의 화합물을 포함한다:
Figure pct00136
여기서:
Figure pct00137
는 항체에 결합되고; A 및 D는 상기 정의된 바와 같다. 일부 실시양태에서, A는 결합 또는 -OC(=O)-*이다.
일부 실시양태에서, 링커-약물 기 -(L-D)는 하기 화학식의 화합물을 포함하거나 또는 그로부터 형성된다:
Figure pct00138
여기서:
A는 결합, -OC(=O)-*,
Figure pct00139
, -OC(=O)N(CH3)CH2CH2N(CH3)C(=O)-* 또는 -OC(=O)N(CH3)C(Ra)2C(Ra)2N(CH3)C(=O)-*이고, 여기서 각각의 Ra는 독립적으로 H, C1-C6 알킬, 및 C3-C8 시클로알킬로부터 선택되고, A의 *는 D에 대한 부착 지점을 나타내고;
D는 Bcl-xL 억제제이다. 일부 실시양태에서, 링커-약물 기 -(L-D)는 하기 화학식의 화합물을 포함한다:
Figure pct00140
여기서:
Figure pct00141
는 항체에 결합되고; A 및 D는 상기 정의된 바와 같다. 일부 실시양태에서, A는 결합 또는 -OC(=O)-*이다.
일부 실시양태에서, 링커-약물 기 -(L-D)는 하기 화학식의 화합물을 포함하거나 또는 그로부터 형성된다:
Figure pct00142
여기서:
각각의 R은 독립적으로 H, -CH3 또는 -CH2CH2C(=O)OH이고;
A는 결합, -OC(=O)-*,
Figure pct00143
, -OC(=O)N(CH3)CH2CH2N(CH3)C(=O)-* 또는 -OC(=O)N(CH3)C(Ra)2C(Ra)2N(CH3)C(=O)-*이고,
여기서 각각의 Ra는 독립적으로 H, C1-C6 알킬, 및 C3-C8 시클로알킬로부터 선택되고, A의 *는 D에 대한 부착 지점을 나타내고;
D는 Bcl-xL 억제제이다. 일부 실시양태에서, 링커-약물 기 -(L-D)는 하기 화학식의 화합물을 포함한다:
Figure pct00144
여기서:
Figure pct00145
는 항체에 결합되고; A, D 및 R은 상기 정의된 바와 같다. 일부 실시양태에서, A는 결합 또는 -OC(=O)-*이고; R은 -CH3 또는 -CH2CH2C(=O)OH이다.
일부 실시양태에서, 링커-약물 기 -(L-D)는 하기 화학식의 화합물을 포함하거나 또는 그로부터 형성된다:
Figure pct00146
여기서:
각각의 R은 독립적으로 H, -CH3 또는 -CH2CH2C(=O)OH이고;
A는 결합, -OC(=O)-*,
Figure pct00147
, -OC(=O)N(CH3)CH2CH2N(CH3)C(=O)-* 또는 -OC(=O)N(CH3)C(Ra)2C(Ra)2N(CH3)C(=O)-*이고,
여기서 각각의 Ra는 독립적으로 H, C1-C6 알킬, 및 C3-C8 시클로알킬로부터 선택되고, A의 *는 D에 대한 부착 지점을 나타내고;
D는 Bcl-xL 억제제이다. 일부 실시양태에서, 링커-약물 기 -(L-D)는 하기 화학식의 화합물을 포함한다:
Figure pct00148
여기서:
Figure pct00149
는 항체에 결합되고; A, D 및 R은 상기 정의된 바와 같다. 일부 실시양태에서, A는 결합 또는 -OC(=O)-*이고; R은 -CH3 또는 -CH2CH2C(=O)OH이다.
일부 실시양태에서, 링커-약물 기 -(L-D)는 하기 화학식의 화합물을 포함하거나 또는 그로부터 형성된다:
Figure pct00150
여기서:
A는 결합, -OC(=O)-*,
Figure pct00151
, -OC(=O)N(CH3)CH2CH2N(CH3)C(=O)-* 또는 -OC(=O)N(CH3)C(Ra)2C(Ra)2N(CH3)C(=O)-*이고,
여기서 각각의 Ra는 독립적으로 H, C1-C6 알킬, 및 C3-C8 시클로알킬로부터 선택되고, A의 *는 D에 대한 부착 지점을 나타내고;
D는 Bcl-xL 억제제이다.
일부 실시양태에서, A는 결합이다.
일부 실시양태에서, A는 -OC(=O)-*이다.
일부 실시양태에서, R은 -CH3이다.
일부 실시양태에서, R은 -CH2CH2COOH이다.
일부 실시양태에서, 항체-약물 접합체는 링커-약물 기 -(L-D)을 포함하고, 이는 하기로부터 선택된 화학식을 포함한다:
Figure pct00152
Figure pct00153
Figure pct00154
Figure pct00155
Figure pct00156
Figure pct00157
Figure pct00158
Figure pct00159
Figure pct00160
Figure pct00161
Figure pct00162
Figure pct00163
Figure pct00164
Figure pct00165
Figure pct00166
일부 실시양태에서, 항체-약물 접합체는 링커-약물 기 -(L-D)을 포함하고, 이는 하기로부터 선택된 화학식을 포함한다:
Figure pct00167
Figure pct00168
Figure pct00169
Figure pct00170
Figure pct00171
Figure pct00172
Figure pct00173
Figure pct00174
Figure pct00175
Figure pct00176
Figure pct00177
Figure pct00178
Figure pct00179
Figure pct00180
여기서
Figure pct00181
는 항체에 결합된다.
일부 실시양태에서, Bcl-xL 억제제 (D)는 하기 화학식 (I)의 화합물 또는 거울상이성질체, 부분입체이성질체 및/또는 상기 중 어느 하나의 제약상 허용되는 염을 포함한다:
Figure pct00182
여기서 가변기는 화학식 (I)에 대해 상기 기재된다. 일부 실시양태에서, R1은 선형 또는 분지형 C1-6알킬이고 R2는 H이다.
일부 실시양태에서, Bcl-xL 억제제 (D)는 하기 화학식 (II)의 화합물 또는 거울상이성질체, 부분입체이성질체 및/또는 상기 중 어느 하나의 제약상 허용되는 염을 포함한다:
Figure pct00183
여기서 가변기는 화학식 (II)에 대해 상기 기재된다. A1 및 A5는 둘 다 질소 원자를 나타내고, R1은 선형 또는 분지형 C1-6알킬이고; R2는 H이고; n은 1이고; ------는 단일 결합을 나타낸다.
일부 실시양태에서, Bcl-xL 억제제 (D)는 화학식 (IA) 또는 (IIA)의 화합물 또는 거울상이성질체, 부분입체이성질체 및/또는 상기 중 어느 하나의 제약상 허용되는 염을 포함한다:
Figure pct00184
여기서
◆ Z1은 결합 또는 -O-를 나타내고,
◆ R3은 수소; C3-C6시클로알킬; 선형 또는 분지형 C1-C6알킬; -X1-NRaRb; -X1-N+RaRbRc; 및 -X1-O-Rc로부터 선택된 기를 나타내고,
◆ Ra 및 Rb는 서로 독립적으로 수소; 1 또는 2개의 히드록실 기에 의해 임의로 치환된 선형 또는 분지형 C1-C6알킬; 및 C1-C6알킬렌-SO2O-로부터 선택된 기를 나타내고,
◆ Rc는 수소 또는 선형 또는 분지형 C1-C6알킬 기를 나타내고,
◆ Het2는
Figure pct00185
로부터 선택된 기를 나타내고,
◆ A1은 -NH-, -N(C1-C3알킬), O, S 또는 Se이고,
◆ A2는 N, CH 또는 C(R5)이고,
◆ G는
-C(O)OH, -C(O)ORG3, -C(O)NRG1RG2, -C(O)RG2, -NRG1C(O)RG2, -NRG1C(O)NRG1RG2, -OC(O)NRG1RG2, -NRG1C(O)ORG3, -C(=NORG1)NRG1RG2, -NRG1C(=NCN)NRG1RG2, -NRG1S(O)2NRG1RG2, -S(O)2RG3, -S(O)2NRG1RG2, -NRG1S(O)2RG2, -NRG1C(=NRG2)NRG1RG2, -C(=S)NRG1RG2, -C(=NRG1)NRG1RG2, 히드록실 기에 의해 임의로 치환된 C1-C6알킬, 할로겐, -NO2 및 -CN으로 이루어진 군으로부터 선택되고, 여기서
- RG1 및 RG2는 각 경우에 각각 독립적으로 수소, 및 1 내지 3개의 할로겐 원자에 의해 임의로 치환된 C1-C6알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고;
- RG3은 1 내지 3개의 할로겐 원자에 의해 임의로 치환된 C1-C6알킬이거나; 또는
RG1 및 RG2는 각각이 부착되어 있는 원자와 함께 조합되어 C3-C8헤테로시클로알킬을 형성하고;
◆ R4는 수소, 플루오린, 염소 또는 브로민 원자, 메틸, 히드록실 또는 메톡시 기를 나타내고,
◆ R5는 1 내지 3개의 할로겐 원자에 의해 임의로 치환된 C1-C6알킬; 할로겐 또는 -CN으로부터 선택된 기를 나타내고,
◆ R6은
-X2-O-R7; 및
선형 또는 분지형 C1-C6알킬 기에 의해 임의로 치환된 헤테로아릴렌-R7 기
로부터 선택된 기를 나타내고,
◆ R7은 선형 또는 분지형 C1-C6알킬 기; (C3-C6)시클로알킬렌-R8; 또는
Figure pct00186
로부터 선택된 기를 나타내고;
여기서 Cy는 C3-C8시클로알킬을 나타내고,
◆ R8은 수소; 선형 또는 분지형 C1-C6알킬, -NR'aR'b; -NR'a-CO-OR'c; -NR'a-CO-R'c; -N+R'aR'bR'c; -O-R'c; -NH-X'2-N+R'aR'bR'c; -O-X'2-NR'aR'b; -X'2-NR'aR'b: -NR'c-X'2-N3 및
Figure pct00187
로부터 선택된 기를 나타내고;
◆ R10은 수소, 플루오린, 염소, 브로민, -CF3 및 메틸로부터 선택된 기를 나타내고,
◆ R11은 수소, C1-C3알킬렌-R8, -O-C1-C3알킬렌-R8, -CO-NRhRi 및 -CH=CH-C1-C4알킬렌-NRhRi, -CH=CH-CHO, C3-C8시클로알킬렌-CH2-R8, C3-C8헤테로시클로알킬렌-CH2-R8로부터 선택된 기를 나타내고,
◆ R12 및 R13은 서로 독립적으로 수소 원자 또는 메틸 기를 나타내고,
◆ R14 및 R15는 서로 독립적으로 수소 또는 메틸 기를 나타내거나, 또는 R14 및 R15는 이들을 보유하는 탄소 원자와 함께 시클로헥실을 형성하고,
◆ Rh 및 Ri는 서로 독립적으로 수소 또는 선형 또는 분지형 C1-C6알킬 기를 나타내고,
◆ X1 및 X2는 서로 독립적으로 트리플루오로메틸, 히드록실, 할로겐, C1-C6알콕시로부터 선택된 1 또는 2개의 기에 의해 임의로 치환된 선형 또는 분지형 C1-C6알킬렌 기를 나타내고,
◆ X'2는 선형 또는 분지형 C1-C6알킬렌을 나타내고,
◆ R'a 및 R'b는 서로 독립적으로 수소; 헤테로시클로알킬; -SO2-페닐 (여기서, 페닐은 선형 또는 분지형 C1-C6알킬에 의해 치환될 수 있음); 1 또는 2개의 히드록실 또는 C1-C6알콕시 기에 의해 임의로 치환된 선형 또는 분지형 C1-C6알킬; C1-C6알킬렌-SO2OH; C1-C6알킬렌-SO2O-; C1-C6알킬렌-COOH; C1-C6알킬렌-PO(OH)2; C1-C6알킬렌-NR'dR'e; C1-C6알킬렌-N+R'dR'eR'f; C1-C6알킬렌-O-C1-C6알킬렌-OH; C1-C6알킬렌-페닐 (여기서, 페닐은 히드록실 또는 C1-C6알콕시 기에 의해 치환될 수 있음); 기
Figure pct00188
로부터 선택된 기를 나타내거나;
또는 R'a 및 R'b는 이들을 보유하는 질소 원자와 함께 사이클 B3을 형성하거나,
또는 R'a, R'b 및 R'c는 이들을 보유하는 질소 원자와 함께 가교된 C3-C8헤테로시클로알킬을 형성하고,
◆ R'c, R'd, R'e, R'f는 서로 독립적으로 수소 또는 선형 또는 분지형 C1-C6알킬 기를 나타내거나,
또는 R'd 및 R'e는 이들을 보유하는 질소 원자와 함께 사이클 B4를 형성하거나,
또는 R'd, R'e 및 R'f는 이들을 보유하는 질소 원자와 함께 가교된 C3-C8헤테로시클로알킬을 형성하고,
◆ m=0, 1 또는 2이고,
◆ p=1, 2, 3 또는 4이고,
◆ B3 및 B4는 서로 독립적으로 C3-C8헤테로시클로알킬 기를 나타내고, 상기 기는 (i) 모노- 또는 비-시클릭 기일 수 있고, 여기서 비시클릭 기는 융합된, 가교된 또는 스피로 고리계를 포함하고, (ii) 질소 원자 이외에, 산소, 황 및 질소로부터 독립적으로 선택된 1 또는 2개의 헤테로 원자를 함유할 수 있고, (iii) 플루오린, 브로민, 염소, 선형 또는 분지형 C1-C6알킬, 히드록실, -NH2, 옥소 또는 피페리디닐로부터 선택된 1 또는 2개의 기에 의해 치환될 수 있다.
일부 실시양태에서, 화학식 (IA) 또는 (IIA)에 대해, G는 -C(O)OH, -C(O)ORG3, -C(O)NRG1RG2, -C(O)RG2, -NRG1C(O)RG2, -NRG1C(O)NRG1RG2, -OC(O)NRG1RG2, -NRG1C(O)ORG3, -C(=NORG1)NRG1RG2, -NRG1C(=NCN)NRG1RG2, -NRG1S(O)2NRG1RG2, -S(O)2RG3, -S(O)2NRG1RG2, -NRG1S(O)2RG2, -NRG1C(=NRG2)NRG1RG2, -C(=S)NRG1RG2, -C(=NRG1)NRG1RG2, 할로겐, -NO2 및 -CN으로 이루어진 군으로부터 선택되고, 여기서
- RG1 및 RG2는 각 경우에 각각 독립적으로 수소, 및 1 내지 3개의 할로겐 원자에 의해 임의로 치환된 C1-C6알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고;
- RG3은 1 내지 3개의 할로겐 원자에 의해 임의로 치환된 C1-C6알킬이거나; 또는
- RG1 및 RG2는 각각이 부착되어 있는 원자와 함께 조합되어 C3-C8헤테로시클로알킬을 형성한다.
일부 실시양태에서, 화학식 (I), (II), (IA) 또는 (IIA)에 대해, R7은 선형 또는 분지형 C1-C6알킬 기; (C3-C6)시클로알킬렌-R8; 또는
Figure pct00189
로부터 선택된 기를 나타내고
여기서 Cy는 C3-C8시클로알킬을 나타낸다.
일부 실시양태에서, 화학식 (I), (II), (IA) 또는 (IIA)에 대해, R7은 하기로부터 선택된 기를 나타낸다.
Figure pct00190
일부 실시양태에서, Bcl-xL 억제제 (D)는 하기 화학식 (IB), (IC), (IIB) 또는 (IIC)의 화합물 또는 거울상이성질체, 부분입체이성질체 및/또는 상기 중 어느 하나의 제약상 허용되는 염을 포함한다.
Figure pct00191
Figure pct00192
여기서
◆ 화학식 (IB) 또는 (IC)에서, R3은 수소; 선형 또는 분지형 C1-C6알킬; -X1-NRaRb; -X1-N+RaRbRc; 및 -X1-O-Rc로부터 선택된 기를 나타내고;
화학식 (IIB) 또는 (IIC)에서, Z1은 결합을 나타내고, R3은 수소를 나타내거나; 또는 Z1은 -O-를 나타내고, R3은 -X1-NRaRb를 나타내고,
◆ Ra 및 Rb는 서로 독립적으로 수소; 1 또는 2개의 히드록실 기에 의해 임의로 치환된 선형 또는 분지형 C1-C6알킬; 및 C1-C6알킬렌-SO2O-로부터 선택된 기를 나타내고,
◆ Rc는 수소 또는 선형 또는 분지형 C1-C6알킬 기를 나타내고,
◆ R6은 -X2-O-R7 또는 선형 또는 분지형 C1-C6알킬 기에 의해 임의로 치환된 헤테로아릴렌-R7 기를 나타내고,
◆ R7은
Figure pct00193
로부터 선택된 기를 나타내고
◆ R8은 -NR'aR'b; -O-X'2-NR'aR'b; 및 -X'2-NR'aR'b로부터 선택된 기를 나타내고,
◆ R10은 플루오린을 나타내고,
◆ R12 및 R13은 서로 독립적으로 수소 원자 또는 메틸 기를 나타내고,
◆ R14 및 R15는 서로 독립적으로 수소 또는 메틸 기를 나타내고,
◆ X1 및 X2는 서로 독립적으로 트리플루오로메틸, 히드록실, 할로겐, C1-C6알콕시로부터 선택된 1 또는 2개의 기에 의해 임의로 치환된 선형 또는 분지형 C1-C6알킬렌 기를 나타내고,
◆ X'2는 선형 또는 분지형 C1-C6알킬렌을 나타내고,
◆ R'a 및 R'b는 서로 독립적으로 수소; 1 또는 2개의 히드록실 또는 C1-C6알콕시 기에 의해 임의로 치환된 선형 또는 분지형 C1-C6알킬; C1-C6알킬렌-NR'dR'e로부터 선택된 기를 나타내고;
또는 R'a 및 R'b는 이들을 보유하는 질소 원자와 함께 사이클 B3을 형성하거나,
◆ R'd, R'e는 서로 독립적으로 수소 또는 선형 또는 분지형 C1-C6알킬 기를 나타내고,
◆ B3은 C3-C8헤테로시클로알킬 기를 나타내고, 상기 기는 (i) 모노- 또는 비-시클릭 기일 수 있고, 여기서 비시클릭 기는 융합된, 가교된 또는 스피로 고리계를 포함하고, (ii) 질소 원자 이외에, 산소 및 질소로부터 독립적으로 선택된 1 또는 2개의 헤테로 원자를 함유할 수 있고, (iii) 플루오린, 브로민, 염소, 선형 또는 분지형 C1-C6알킬, 히드록실, 및 옥소로부터 선택된 1 또는 2개의 기에 의해 치환될 수 있다.
일부 실시양태에서, R7은 하기 기를 나타낸다:
Figure pct00194
일부 실시양태에서, R7은 하기로부터 선택된 기를 나타낸다:
Figure pct00195
.
일부 실시양태에서, 화학식 (I), (IA), (IB), (IC), (II), (IIA), (IIB) 또는 (IIC)에 대해, R8은 하기로부터 선택된 기를 나타낸다.
Figure pct00196
여기서
Figure pct00197
은 링커에 대한 결합을 나타낸다.
일부 실시양태에서, B3은 피롤리디닐 기, 피페리디닐 기, 피페라지닐 기, 모르폴리닐 기, 아제파닐 기, 및 2,8-디아자스피로[4,5]데카닐 기로부터 선택된 C3-C8헤테로시클로알킬 기를 나타낸다.
일부 실시양태에서, D는 공유 결합에 의해 링커 L에 부착된 Bcl-xL 억제제를 나타내고, 여기서 Bcl-xL 억제제는 표 A1의 화합물 또는 거울상이성질체, 부분입체이성질체 및/또는 상기 중 어느 하나의 제약상 허용되는 염으로부터 선택된다:
표 A1
Figure pct00198
Figure pct00199
Figure pct00200
Figure pct00201
Figure pct00202
Figure pct00203
Figure pct00204
Figure pct00205
Figure pct00206
Figure pct00207
Figure pct00208
일부 실시양태에서, D는 표 A2에서의 화학식 중 어느 하나로부터 선택된 화학식, 또는 거울상이성질체, 부분입체이성질체 및/또는 상기 중 어느 하나의 제약상 허용되는 염을 포함한다.
표 A2
Figure pct00209
Figure pct00210
Figure pct00211
Figure pct00212
Figure pct00213
Figure pct00214
Figure pct00215
Figure pct00216
Figure pct00217
Figure pct00218
Figure pct00219
Figure pct00220
여기서
Figure pct00221
은 링커에 대한 결합을 나타낸다.
일부 실시양태에서, -(L-D)는 표 B로부터 선택된 화합물 또는 그의 거울상이성질체, 부분입체이성질체 및/또는 제약상 허용되는 염으로부터 형성된다. 일부 실시양태에서, 표 B의 화합물 내의 말레이미드 기
Figure pct00222
은 항체 또는 그의 항원-결합 단편 (Ab)과 공유 결합을 형성하여
Figure pct00223
모이어티를 포함하는 화학식 (1)의 ADC 화합물을 형성하며, 여기서 *는 Ab에 대한 연결 지점을 나타낸다. 표 A1, 표 A2, 표 B 및 표 1의 화합물에 대해, 그의 전자 전하에 따라, 이들 화합물은 1종의 제약상 허용되는 1가 음이온성 반대이온 M1 -을 함유할 수 있다. 일부 실시양태에서, 1가 음이온성 반대이온 M1 -은 브로마이드, 클로라이드, 아이오다이드, 아세테이트, 트리플루오로아세테이트, 벤조에이트, 메실레이트, 토실레이트, 트리플레이트, 포르메이트 등으로부터 선택될 수 있다. 일부 실시양태에서, 1가 음이온성 반대이온 M1 -은 트리플루오로아세테이트 또는 포르메이트이다.
표 B. 예시적인 링커 약물 기
Figure pct00224
Figure pct00225
Figure pct00226
Figure pct00227
Figure pct00228
Figure pct00229
Figure pct00230
Figure pct00231
Figure pct00232
Figure pct00233
Figure pct00234
Figure pct00235
Figure pct00236
Figure pct00237
Figure pct00238
Figure pct00239
Figure pct00240
Figure pct00241
Figure pct00242
Figure pct00243
Figure pct00244
Figure pct00245
Figure pct00246
Figure pct00247
Figure pct00248
Figure pct00249
Figure pct00250
Figure pct00251
Figure pct00252
Figure pct00253
Figure pct00254
Figure pct00255
Figure pct00256
Figure pct00257
Figure pct00258
Figure pct00259
Figure pct00260
Figure pct00261
Figure pct00262
Figure pct00263
Figure pct00264
Figure pct00265
Figure pct00266
Figure pct00267
Figure pct00268
Figure pct00269
Figure pct00270
Figure pct00271
Figure pct00272
Figure pct00273
Figure pct00274
Figure pct00275
Figure pct00276
Figure pct00277
Figure pct00278
일부 실시양태에서, 항체-약물 접합체는 표 1에 제시된 구조 중 어느 하나에 따른 화학식을 갖는다.
표 1. ADC 구조
Figure pct00279
Figure pct00280
Figure pct00281
Figure pct00282
Figure pct00283
Figure pct00284
Figure pct00285
Figure pct00286
Figure pct00287
Figure pct00288
Figure pct00289
Figure pct00290
Figure pct00291
Figure pct00292
Figure pct00293
Figure pct00294
Figure pct00295
Figure pct00296
Figure pct00297
Figure pct00298
Figure pct00299
Figure pct00300
Figure pct00301
Figure pct00302
Figure pct00303
Figure pct00304
Figure pct00305
Figure pct00306
Figure pct00307
Figure pct00308
Figure pct00309
Figure pct00310
Figure pct00311
Figure pct00312
Figure pct00313
Figure pct00314
Figure pct00315
Figure pct00316
Figure pct00317
Figure pct00318
Figure pct00319
Figure pct00320
Figure pct00321
Figure pct00322
Figure pct00323
Figure pct00324
Figure pct00325
Figure pct00326
Figure pct00327
Figure pct00328
Figure pct00329
Figure pct00330
Figure pct00331
Figure pct00332
Figure pct00333
Figure pct00334
Figure pct00335
Figure pct00336
Figure pct00337
Figure pct00338
Figure pct00339
Figure pct00340
Figure pct00341
Figure pct00342
상기 도시된 ADC는 또한 하기 화학식에 의해 나타내어질 수 있다:
Ab-(L-D)p (1),
여기서
Figure pct00343
은 상기 도시된 링커-페이로드 (L/P)에 공유 연결된 항체 또는 그의 항원 단편을 나타내고; p는 1 내지 16의 정수이다. 일부 실시양태에서, p는 1 내지 8의 정수이다. 일부 실시양태에서, p는 1 내지 5의 정수이다. 일부 실시양태에서, p는 2 내지 4의 정수이다. 일부 실시양태에서, p는 2이다. 일부 실시양태에서, p는 4이다. 일부 실시양태에서, p는 액체 크로마토그래피-질량 분광측정법 (LC-MS)에 의해 결정된다.
일부 실시양태에서, 표 1에 도시된 ADC에 대해, 항체는 본원에 기재된 항체 또는 그의 항원 단편이다. 일부 실시양태에서, 표 1에 도시된 ADC에 대해, 항체는 항-EGFR 항체 (예를 들어, 세툭시맙 또는 Ab C)이다. 일부 실시양태에서, 항체는 항-HER2 항체 (예를 들어, 트라스투주맙 또는 Ab T)이다. 다른 실시양태에서, 항체는 항-CD7 항체 (예를 들어, Ab D 또는 Ab E)이다. 다른 실시양태에서, 항체는 항-닭 리소자임 항체 (예를 들어, Ab F)이다. 일부 실시양태에서, 항체는 항-CD74 항체 (예를 들어, Ab G)이다. 일부 실시양태에서, 항체는 항-CD38 항체 (예를 들어, Ab H)이다. 일부 실시양태에서, 항체는 항-CD48 항체 (예를 들어, Ab I)이다.
본원에 사용된 "L/P"는 본원에 개시된 링커-페이로드, 링커-약물 또는 링커-화합물을 지칭하고, 용어 "L#-P#" 및 "L#-C#"은 본원에 개시된 특정 링커-약물을 지칭하기 위해 상호교환가능하게 사용되는 한편, 코드 "P#" 및 "C#"은 달리 명시되지 않는 한 특정 화합물을 지칭하기 위해 상호교환가능하게 사용된다. 예를 들어, "L1-C1" 및 "L1-P1"은 둘 다 본원에 개시된 동일한 링커-페이로드 구조를 지칭하는 한편, "C1" 및 "P1"은 둘 다 거울상이성질체, 부분입체이성질체, 회전장애이성질체, 중수소화 유도체를 포함한 본원에 개시된 동일한 화합물 및/또는 상기 중 임의의 것의 제약상 허용되는 염을 나타낸다.
일부 실시양태에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 암 세포 상의 표적 항원에 결합한다. 일부 실시양태에서, 표적 항원은 BCMA, CD33, HER2, CD38, CD48, CD79b, PCAD, CD74, CD138, SLAMF7, CD123, CLL1, FLT3, CD7, CKIT, CD56, DLL3, DLK1, B7-H3, EGFR, CD71, EPCAM, FOLR1, ENPP3, MET, AXL, SLC34A2, Nectin4, TROP2, LIV1, CD46, MSLN, F3, MUC16, SLC39A6, TFRC, TACSTD2, 또는 GPNMB이다. 일부 실시양태에서, 표적 항원은 EphA2, CD56, SEZ6, CD25, CCR8,CEACAM5, CEACAM6, 4-1BB, 5AC, 5T4, 알파-태아단백질, 안지오포이에틴 2, ASLG659, TCLI, BMPRIB, 브레비칸 BCAN, BEHAB, C242 항원, C5, CA-125, CA-125 (모방), CA-IX (탄산 안히드라제 9), CCR4, CD140a, CD152, CD19, CD20, CD200, CD21 (C3DR) I), CD22 (B-세포 수용체 CD22-B 이소형), CD221, CD23 (gE 수용체), CD28, CD30 (TNFRSF8), CD37, CD4, CD40, CD44 v6, CD51, CD52, CD70, CD72 (Lyb-2, B-세포 분화 항원 CD72), CD79a, CD80, CEA, CEA-관련 항원, ch4D5, CLDN18.2, CRIPTO (CR, CRI, CRGF, TDGF1), CTLA-4, CXCR5, DLL4, DR5, E16 (LATI, SLC7A5), EGFL7, EphB2R (DRT, ERK, Hek5, EPHT3, Tyro5), 에피시알린, ERBB3, ETBR (엔도텔린 유형 B 수용체), FCRHI (Fc 수용체-유사 단백질 I), FcRH2 (IFGP4, IRTA4, SPAPI, SPAP IB, SPAP IC), 피브로넥틴 엑스트라 도메인-B, 프리즐드 수용체, GD2, GD3 강글리오시드, GEDA, HER1, HER2/neu, HER3, HGF, HLA-DOB, HLA-DR, 인간 산란 인자 수용체 키나제, IGF-I 수용체, IL-13, IL20R (ZCYTOR7), IL-6, ILGF2, ILFRIR, 인테그린 u, IRTA2 (이뮤노글로불린 슈퍼패밀리 수용체 전위 연관 2), 루이스-Y 항원, LY64 (RP105), MCP-I, MDP (DPEPI), (MPF), MSLN, SMR, 메소텔린, 거핵구, PD-I, PDCDI, PDGF-R u, 전립선 특이적 막 항원, PSCA (전립선 줄기 세포 항원 전구체), PSCA hlg, RANKL, RON, SDCI, Sema Sb, STEAP I, STEAP2, PCANAP I, STAMP I, STEAP2, STMP, 전립선암 연관 유전자 I, TAG-72, TEMI, 테나신 C, TENB2, (TMEFF2, 토모레귤린, TPEF, HPPI, TR), TGF-IJ, TRAIL-E2, TRAIL-Rl, TRAIL-R2, T17M4 (BR22450, FLJ20041, TRPM4, TRPM4B, 일시적 수용체 전위 양이온 채널 서브패밀리 M, 구성원 4), TWEAK-R, TYRP I (당단백질 75), VEGF, VEGF-A, EGFR-I, VEGFR-2, 또는 비멘틴이다. 일부 실시양태에서, 표적 항원은 EGFR, CD7, HER2, EPCAM, FOLR1, ENPP3, MET, AXL, SLC34A2, Nectin4, MSLN, F3, MUC16, SLC39A6, TFRC, TACSTD2, 또는 GPNMB이다. 일부 실시양태에서, 표적 항원은 EGFR, CD7, 또는 HER2이다.
일부 실시양태에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 인터넷 go.drugbank.com/drugs/DB00002, 국제 출원 공개 WO2018/098306, WO2016/179257, WO2011/097627, WO2017/214282, WO2017/214301, WO2017/214233, WO2013/126810, WO2008/056833, WO2020/236817, WO2017/214335, 및 WO2012147713, 및 미국 특허 번호 US6870034B2 (그 전문이 참조로 포함됨)에 개시된 항체 또는 항원-결합 단편이다.
일부 실시양태에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 항-BCMA 항체 또는 항원-결합 단편이다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 서열식별번호: 15 (HCDR1), 서열식별번호: 16 (HCDR2) 및 서열식별번호: 17 (HCDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 3개의 중쇄 상보성 결정 영역 (HCDR); 및 서열식별번호: 18 (LCDR1), 서열식별번호: 19 (LCDR2) 및 서열식별번호: 20 (LCDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 3개의 경쇄 상보성 결정 영역 (LCDR)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 서열식별번호: 1의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 2의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 IgG1 중쇄 불변 도메인 또는 변형된 IgG1 중쇄 불변 도메인을 포함한다. 일부 실시양태에서, IgG1 중쇄 불변 도메인은 위치 152 및 위치 375에 시스테인 잔기 (C)를 포함한다. 일부 실시양태에서, IgG1 중쇄 불변 도메인은 위치 156 및 위치 379에 시스테인 잔기 (C)를 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 Ig 카파 경쇄 불변 도메인을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 항-CD33 항체 또는 항원-결합 단편이다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 서열식별번호: 21 (HCDR1), 서열식별번호: 22 (HCDR2) 및 서열식별번호: 23 (HCDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 3개의 중쇄 상보성 결정 영역 (HCDR); 및 서열식별번호: 24 (LCDR1), 서열식별번호: 25 (LCDR2) 및 서열식별번호: 26 (LCDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 3개의 경쇄 상보성 결정 영역 (LCDR)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 서열식별번호: 3의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 4의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 IgG1 중쇄 불변 도메인 또는 변형된 IgG1 중쇄 불변 도메인을 포함한다. 일부 실시양태에서, IgG1 중쇄 불변 도메인은 위치 297에 글루타민 잔기 (Q)를 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 Ig 카파 경쇄 불변 도메인을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 항-PCAD 항체 또는 항원-결합 단편이다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 서열식별번호: 33 (HCDR1), 서열식별번호: 34 (HCDR2) 및 서열식별번호: 35 (HCDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 3개의 중쇄 상보성 결정 영역 (HCDR); 및 서열식별번호: 36 (LCDR1), 서열식별번호: 37 (LCDR2) 및 서열식별번호: 38 (LCDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 3개의 경쇄 상보성 결정 영역 (LCDR)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 서열식별번호: 7의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 8의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 항-HER2 항체 또는 항원-결합 단편이다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 서열식별번호: 39 (HCDR1), 서열식별번호: 40 (HCDR2) 및 서열식별번호: 41 (HCDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 3개의 중쇄 상보성 결정 영역 (HCDR); 및 서열식별번호: 42 (LCDR1), 서열식별번호: 43 (LCDR2) 및 서열식별번호: 44 (LCDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 3개의 경쇄 상보성 결정 영역 (LCDR)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 서열식별번호: 9의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열식별번호: 10의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 IgG1 중쇄 불변 도메인 또는 변형된 IgG1 중쇄 불변 도메인을 포함한다. 일부 실시양태에서, IgG1 중쇄 불변 도메인은 위치 297에 글루타민 잔기 (Q)를 포함한다. 일부 실시양태에서, IgG1 중쇄 불변 도메인은 위치 297에 세린 잔기 (S)를 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 Ig 카파 경쇄 불변 도메인을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 항-CD38 항체 또는 항원-결합 단편이다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 항-CD46 항체 또는 항원-결합 단편이다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 항-CD48 항체 또는 항원-결합 단편이다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 항-CD79b 항체 또는 항원-결합 단편이다.
또한, 일부 실시양태에서, 항체-약물 접합체 (예를 들어, 본원에 기재된 임의의 예시적인 항체-약물 접합체)의 다중 카피를 포함하는 조성물이 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 조성물 중 항체-약물 접합체의 평균 p는 약 2 내지 약 4이다.
또한, 일부 실시양태에서, 항체-약물 접합체 (예를 들어, 본원에 기재된 임의의 예시적인 항체-약물 접합체) 또는 조성물 (예를 들어, 본원에 기재된 임의의 예시적인 조성물) 및 제약상 허용되는 담체를 포함하는 제약 조성물이 본원에 제공된다.
일부 실시양태에서, 예를 들어 암을 치료하는 데 있어서 기재된 ADC 화합물 및 조성물에 대한 치료 용도가 본원에 추가로 제공된다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용은 암 (예를 들어, ADC의 항체 또는 항원-결합 단편에 의해 표적화된 항원, 예컨대 EGFR, CD7 또는 HER2를 발현하는 암)을 치료하는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용은 대상체에서 암 세포 집단의 확장을 감소 또는 둔화시키는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용은 암을 갖거나 갖는 것으로 의심되는 대상체가 본원에 개시된 ADC 화합물 또는 조성물을 사용한 치료에 반응성일지 여부를 결정하는 방법을 제공한다.
예시적인 실시양태는 암을 갖거나 갖는 것으로 의심되는 대상체에게 치료 유효량의 항체-약물 접합체, 조성물 또는 제약 조성물 (예를 들어, 본원에 개시된 임의의 예시적인 항체-약물 접합체, 조성물 또는 제약 조성물)을 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체를 치료하는 방법이다. 일부 실시양태에서, 암은 표적 항원을 발현한다. 일부 실시양태에서, 표적 항원은 BCMA, CD33, HER2, CD38, CD48, CD79b, PCAD, CD74, CD138, SLAMF7, CD123, CLL1, FLT3, CD7, CKIT, CD56, DLL3, DLK1, B7-H3, EGFR, CD71, EPCAM, FOLR1, ENPP3, MET, AXL, SLC34A2, Nectin4, TROP2, LIV1, CD46, MSLN, F3, MUC16, SLC39A6, TFRC, TACSTD2, 또는 GPNMB이다. 일부 실시양태에서, 표적 항원은 EphA2, CD56, SEZ6, CD25, CCR8,CEACAM5, CEACAM6, 4-1BB, 5AC, 5T4, 알파-태아단백질, 안지오포이에틴 2, ASLG659, TCLI, BMPRIB, 브레비칸 BCAN, BEHAB, C242 항원, C5, CA-125, CA-125 (모방), CA-IX (탄산 안히드라제 9), CCR4, CD140a, CD152, CD19, CD20, CD200, CD21 (C3DR) I), CD22 (B-세포 수용체 CD22-B 이소형), CD221, CD23 (gE 수용체), CD28, CD30 (TNFRSF8), CD37, CD4, CD40, CD44 v6, CD51, CD52, CD70, CD72 (Lyb-2, B-세포 분화 항원 CD72), CD79a, CD80, CEA, CEA-관련 항원, ch4D5, CLDN18.2, CRIPTO (CR, CRI, CRGF, TDGF1), CTLA-4, CXCR5, DLL4, DR5, E16 (LATI, SLC7A5), EGFL7, EphB2R (DRT, ERK, Hek5, EPHT3, Tyro5), 에피시알린, ERBB3, ETBR (엔도텔린 유형 B 수용체), FCRHI (Fc 수용체-유사 단백질 I), FcRH2 (IFGP4, IRTA4, SPAPI, SPAP IB, SPAP IC), 피브로넥틴 엑스트라 도메인-B, 프리즐드 수용체, GD2, GD3 강글리오시드, GEDA, HER1, HER2/neu, HER3, HGF, HLA-DOB, HLA-DR, 인간 산란 인자 수용체 키나제, IGF-I 수용체, IL-13, IL20R (ZCYTOR7), IL-6, ILGF2, ILFRIR, 인테그린 u, IRTA2 (이뮤노글로불린 슈퍼패밀리 수용체 전위 연관 2), 루이스-Y 항원, LY64 (RP105), MCP-I, MDP (DPEPI), (MPF), MSLN, SMR, 메소텔린, 거핵구, PD-I, PDCDI, PDGF-R u, 전립선 특이적 막 항원, PSCA (전립선 줄기 세포 항원 전구체), PSCA hlg, RANKL, RON, SDCI, Sema Sb, STEAP I, STEAP2, PCANAP I, STAMP I, STEAP2, STMP, 전립선암 연관 유전자 I, TAG-72, TEMI, 테나신 C, TENB2, (TMEFF2, 토모레귤린, TPEF, HPPI, TR), TGF-IJ, TRAIL-E2, TRAIL-Rl, TRAIL-R2, T17M4 (BR22450, FLJ20041, TRPM4, TRPM4B, 일시적 수용체 전위 양이온 채널 서브패밀리 M, 구성원 4), TWEAK-R, TYRP I (당단백질 75), VEGF, VEGF-A, EGFR-I, VEGFR-2, 또는 비멘틴이다. 일부 실시양태에서, 표적 항원은 EGFR, CD7, HER2, EPCAM, FOLR1, ENPP3, MET, AXL, SLC34A2, Nectin4, MSLN, F3, MUC16, SLC39A6, TFRC, TACSTD2, 또는 GPNMB이다. 일부 실시양태에서, 표적 항원은 EGFR, CD7, 또는 HER2이다. 일부 실시양태에서, 암은 종양 또는 혈액암이다. 일부 실시양태에서, 암은 유방암, 다발성 골수종, 형질 세포 골수종, 백혈병, 림프종, 육종, 위암, 급성 골수성 백혈병, 방광암, 뇌암, 골수암, 자궁경부암, 만성 림프구성 백혈병, 결장직장암, 식도암, 간세포성암, 급성 림프모구성 백혈병을 포함한 림프모구성 백혈병, 여포성 림프종, T-세포 또는 B-세포 기원의 림프성 악성종양, 흑색종, 골수 백혈병, 골수종, 구강암, 난소암, 비소세포 폐암, 전립선암, 소세포 폐암, 비장암 또는 두경부암이다. 일부 실시양태에서, 암은 림프종 또는 위암이다.
또 다른 예시적인 실시양태는 대상체에게 치료 유효량의 항체-약물 접합체, 조성물 또는 제약 조성물 (예를 들어, 본원에 개시된 임의의 예시적인 항체-약물 접합체, 조성물 또는 제약 조성물)을 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 종양의 성장을 감소시키거나 또는 억제하는 방법이다. 일부 실시양태에서, 종양은 표적 항원을 발현한다. 일부 실시양태에서, 표적 항원은 BCMA, CD33, HER2, CD38, CD48, CD79b, PCAD, CD74, CD138, SLAMF7, CD123, CLL1, FLT3, CD7, CKIT, CD56, DLL3, DLK1, B7-H3, EGFR, CD71, EPCAM, FOLR1, ENPP3, MET, AXL, SLC34A2, Nectin4, TROP2, LIV1, CD46, MSLN, F3, MUC16, SLC39A6, TFRC, TACSTD2, 또는 GPNMB이다. 일부 실시양태에서, 표적 항원은 EphA2, CD56, SEZ6, CD25, CCR8,CEACAM5, CEACAM6, 4-1BB, 5AC, 5T4, 알파-태아단백질, 안지오포이에틴 2, ASLG659, TCLI, BMPRIB, 브레비칸 BCAN, BEHAB, C242 항원, C5, CA-125, CA-125 (모방), CA-IX (탄산 안히드라제 9), CCR4, CD140a, CD152, CD19, CD20, CD200, CD21 (C3DR) I), CD22 (B-세포 수용체 CD22-B 이소형), CD221, CD23 (gE 수용체), CD28, CD30 (TNFRSF8), CD37, CD4, CD40, CD44 v6, CD51, CD52, CD70, CD72 (Lyb-2, B-세포 분화 항원 CD72), CD79a, CD80, CEA, CEA-관련 항원, ch4D5, CLDN18.2, CRIPTO (CR, CRI, CRGF, TDGF1), CTLA-4, CXCR5, DLL4, DR5, E16 (LATI, SLC7A5), EGFL7, EphB2R (DRT, ERK, Hek5, EPHT3, Tyro5), 에피시알린, ERBB3, ETBR (엔도텔린 유형 B 수용체), FCRHI (Fc 수용체-유사 단백질 I), FcRH2 (IFGP4, IRTA4, SPAPI, SPAP IB, SPAP IC), 피브로넥틴 엑스트라 도메인-B, 프리즐드 수용체, GD2, GD3 강글리오시드, GEDA, HER1, HER2/neu, HER3, HGF, HLA-DOB, HLA-DR, 인간 산란 인자 수용체 키나제, IGF-I 수용체, IL-13, IL20R (ZCYTOR7), IL-6, ILGF2, ILFRIR, 인테그린 u, IRTA2 (이뮤노글로불린 슈퍼패밀리 수용체 전위 연관 2), 루이스-Y 항원, LY64 (RP105), MCP-I, MDP (DPEPI), (MPF), MSLN, SMR, 메소텔린, 거핵구, PD-I, PDCDI, PDGF-R u, 전립선 특이적 막 항원, PSCA (전립선 줄기 세포 항원 전구체), PSCA hlg, RANKL, RON, SDCI, Sema Sb, STEAP I, STEAP2, PCANAP I, STAMP I, STEAP2, STMP, 전립선암 연관 유전자 I, TAG-72, TEMI, 테나신 C, TENB2, (TMEFF2, 토모레귤린, TPEF, HPPI, TR), TGF-IJ, TRAIL-E2, TRAIL-Rl, TRAIL-R2, T17M4 (BR22450, FLJ20041, TRPM4, TRPM4B, 일시적 수용체 전위 양이온 채널 서브패밀리 M, 구성원 4), TWEAK-R, TYRP I (당단백질 75), VEGF, VEGF-A, EGFR-I, VEGFR-2, 또는 비멘틴이다. 일부 실시양태에서, 표적 항원은 EGFR, CD7, HER2, EPCAM, FOLR1, ENPP3, MET, AXL, SLC34A2, Nectin4, MSLN, F3, MUC16, SLC39A6, TFRC, TACSTD2, 또는 GPNMB이다. 일부 실시양태에서, 표적 항원은 EGFR, CD7, 또는 HER2이다. 일부 실시양태에서, 종양은 유방암, 위암, 방광암, 뇌암, 자궁경부암, 결장직장암, 식도암, 간세포성암, 흑색종, 구강암, 난소암, 비소세포 폐암, 전립선암, 소세포 폐암 또는 비장암이다. 일부 실시양태에서, 종양은 위암이다. 일부 실시양태에서, 항체-약물 접합체, 조성물 또는 제약 조성물의 투여는 종양의 성장을 적어도 약 10%, 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95% 또는 적어도 약 99%만큼 감소시키거나 또는 억제한다.
또 다른 예시적인 실시양태는 대상체에게 치료 유효량의 항체-약물 접합체, 조성물 또는 제약 조성물 (예를 들어, 본원에 개시된 임의의 예시적인 항체-약물 접합체, 조성물 또는 제약 조성물)을 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 암 세포 집단의 확장을 감소시키거나 또는 둔화시키는 방법이다. 일부 실시양태에서, 암 세포 집단은 표적 항원을 발현한다. 일부 실시양태에서, 표적 항원은 BCMA, CD33, HER2, CD38, CD48, CD79b, PCAD, CD74, CD138, SLAMF7, CD123, CLL1, FLT3, CD7, CKIT, CD56, DLL3, DLK1, B7-H3, EGFR, CD71, EPCAM, FOLR1, ENPP3, MET, AXL, SLC34A2, Nectin4, TROP2, LIV1, CD46, MSLN, F3, MUC16, SLC39A6, TFRC, TACSTD2, 또는 GPNMB이다. 일부 실시양태에서, 표적 항원은 EphA2, CD56, SEZ6, CD25, CCR8,CEACAM5, CEACAM6, 4-1BB, 5AC, 5T4, 알파-태아단백질, 안지오포이에틴 2, ASLG659, TCLI, BMPRIB, 브레비칸 BCAN, BEHAB, C242 항원, C5, CA-125, CA-125 (모방), CA-IX (탄산 안히드라제 9), CCR4, CD140a, CD152, CD19, CD20, CD200, CD21 (C3DR) I), CD22 (B-세포 수용체 CD22-B 이소형), CD221, CD23 (gE 수용체), CD28, CD30 (TNFRSF8), CD37, CD4, CD40, CD44 v6, CD51, CD52, CD70, CD72 (Lyb-2, B-세포 분화 항원 CD72), CD79a, CD80, CEA, CEA-관련 항원, ch4D5, CLDN18.2, CRIPTO (CR, CRI, CRGF, TDGF1), CTLA-4, CXCR5, DLL4, DR5, E16 (LATI, SLC7A5), EGFL7, EphB2R (DRT, ERK, Hek5, EPHT3, Tyro5), 에피시알린, ERBB3, ETBR (엔도텔린 유형 B 수용체), FCRHI (Fc 수용체-유사 단백질 I), FcRH2 (IFGP4, IRTA4, SPAPI, SPAP IB, SPAP IC), 피브로넥틴 엑스트라 도메인-B, 프리즐드 수용체, GD2, GD3 강글리오시드, GEDA, HER1, HER2/neu, HER3, HGF, HLA-DOB, HLA-DR, 인간 산란 인자 수용체 키나제, IGF-I 수용체, IL-13, IL20R (ZCYTOR7), IL-6, ILGF2, ILFRIR, 인테그린 u, IRTA2 (이뮤노글로불린 슈퍼패밀리 수용체 전위 연관 2), 루이스-Y 항원, LY64 (RP105), MCP-I, MDP (DPEPI), (MPF), MSLN, SMR, 메소텔린, 거핵구, PD-I, PDCDI, PDGF-R u, 전립선 특이적 막 항원, PSCA (전립선 줄기 세포 항원 전구체), PSCA hlg, RANKL, RON, SDCI, Sema Sb, STEAP I, STEAP2, PCANAP I, STAMP I, STEAP2, STMP, 전립선암 연관 유전자 I, TAG-72, TEMI, 테나신 C, TENB2, (TMEFF2, 토모레귤린, TPEF, HPPI, TR), TGF-IJ, TRAIL-E2, TRAIL-Rl, TRAIL-R2, T17M4 (BR22450, FLJ20041, TRPM4, TRPM4B, 일시적 수용체 전위 양이온 채널 서브패밀리 M, 구성원 4), TWEAK-R, TYRP I (당단백질 75), VEGF, VEGF-A, EGFR-I, VEGFR-2, 또는 비멘틴이다. 일부 실시양태에서, 표적 항원은 EGFR, CD7, HER2, EPCAM, FOLR1, ENPP3, MET, AXL, SLC34A2, Nectin4, MSLN, F3, MUC16, SLC39A6, TFRC, TACSTD2, 또는 GPNMB이다. 일부 실시양태에서, 표적 항원은 EGFR, CD7, 또는 HER2이다. 일부 실시양태에서, 암 세포 집단은 종양 또는 혈액암으로부터의 것이다. 일부 실시양태에서, 암 세포 집단은 유방암, 다발성 골수종, 형질 세포 골수종, 백혈병, 림프종, 육종, 위암, 급성 골수성 백혈병, 방광암, 뇌암, 골수암, 자궁경부암, 만성 림프구성 백혈병, 결장직장암, 식도암, 간세포성암, 급성 림프모구성 백혈병을 포함한 림프모구성 백혈병, 여포성 림프종, T-세포 또는 B-세포 기원의 림프성 악성종양, 흑색종, 골수 백혈병, 골수종, 구강암, 난소암, 비소세포 폐암, 전립선암, 소세포 폐암, 비장암 또는 두경부암으로부터의 것이다. 일부 실시양태에서, 암 세포 집단은 림프종 또는 위암으로부터의 것이다. 일부 실시양태에서, 항체-약물 접합체, 조성물 또는 제약 조성물의 투여는 암 세포 집단을 적어도 약 10%, 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95% 또는 적어도 약 99%만큼 감소시킨다. 일부 실시양태에서, 항체-약물 접합체, 조성물 또는 제약 조성물의 투여는 암 세포 집단의 확장을 적어도 약 10%, 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95% 또는 적어도 약 99%만큼 둔화시킨다.
또 다른 예시적인 실시양태는 암을 갖거나 갖는 것으로 의심되는 의심되는 대상체를 치료하는 데 사용하기 위한 항체-약물 접합체, 조성물 또는 제약 조성물 (예를 들어, 본원에 개시된 임의의 예시적인 항체-약물 접합체, 조성물 또는 제약 조성물)이다. 일부 실시양태에서, 암은 표적 항원을 발현한다. 일부 실시양태에서, 표적 항원은 BCMA, CD33, HER2, CD38, CD48, CD79b, PCAD, CD74, CD138, SLAMF7, CD123, CLL1, FLT3, CD7, CKIT, CD56, DLL3, DLK1, B7-H3, EGFR, CD71, EPCAM, FOLR1, ENPP3, MET, AXL, SLC34A2, Nectin4, TROP2, LIV1, CD46, MSLN, F3, MUC16, SLC39A6, TFRC, TACSTD2, 또는 GPNMB이다. 일부 실시양태에서, 표적 항원은 EphA2, CD56, SEZ6, CD25, CCR8,CEACAM5, CEACAM6, 4-1BB, 5AC, 5T4, 알파-태아단백질, 안지오포이에틴 2, ASLG659, TCLI, BMPRIB, 브레비칸 BCAN, BEHAB, C242 항원, C5, CA-125, CA-125 (모방), CA-IX (탄산 안히드라제 9), CCR4, CD140a, CD152, CD19, CD20, CD200, CD21 (C3DR) I), CD22 (B-세포 수용체 CD22-B 이소형), CD221, CD23 (gE 수용체), CD28, CD30 (TNFRSF8), CD37, CD4, CD40, CD44 v6, CD51, CD52, CD70, CD72 (Lyb-2, B-세포 분화 항원 CD72), CD79a, CD80, CEA, CEA-관련 항원, ch4D5, CLDN18.2, CRIPTO (CR, CRI, CRGF, TDGF1), CTLA-4, CXCR5, DLL4, DR5, E16 (LATI, SLC7A5), EGFL7, EphB2R (DRT, ERK, Hek5, EPHT3, Tyro5), 에피시알린, ERBB3, ETBR (엔도텔린 유형 B 수용체), FCRHI (Fc 수용체-유사 단백질 I), FcRH2 (IFGP4, IRTA4, SPAPI, SPAP IB, SPAP IC), 피브로넥틴 엑스트라 도메인-B, 프리즐드 수용체, GD2, GD3 강글리오시드, GEDA, HER1, HER2/neu, HER3, HGF, HLA-DOB, HLA-DR, 인간 산란 인자 수용체 키나제, IGF-I 수용체, IL-13, IL20R (ZCYTOR7), IL-6, ILGF2, ILFRIR, 인테그린 u, IRTA2 (이뮤노글로불린 슈퍼패밀리 수용체 전위 연관 2), 루이스-Y 항원, LY64 (RP105), MCP-I, MDP (DPEPI), (MPF), MSLN, SMR, 메소텔린, 거핵구, PD-I, PDCDI, PDGF-R u, 전립선 특이적 막 항원, PSCA (전립선 줄기 세포 항원 전구체), PSCA hlg, RANKL, RON, SDCI, Sema Sb, STEAP I, STEAP2, PCANAP I, STAMP I, STEAP2, STMP, 전립선암 연관 유전자 I, TAG-72, TEMI, 테나신 C, TENB2, (TMEFF2, 토모레귤린, TPEF, HPPI, TR), TGF-IJ, TRAIL-E2, TRAIL-Rl, TRAIL-R2, T17M4 (BR22450, FLJ20041, TRPM4, TRPM4B, 일시적 수용체 전위 양이온 채널 서브패밀리 M, 구성원 4), TWEAK-R, TYRP I (당단백질 75), VEGF, VEGF-A, EGFR-I, VEGFR-2, 또는 비멘틴이다. 일부 실시양태에서, 표적 항원은 EGFR, CD7, HER2, EPCAM, FOLR1, ENPP3, MET, AXL, SLC34A2, Nectin4, MSLN, F3, MUC16, SLC39A6, TFRC, TACSTD2, 또는 GPNMB이다. 일부 실시양태에서, 표적 항원은 EGFR, CD7, 또는 HER2이다. 일부 실시양태에서, 암은 종양 또는 혈액암이다. 일부 실시양태에서, 암은 유방암, 다발성 골수종, 형질 세포 골수종, 백혈병, 림프종, 육종, 위암, 급성 골수성 백혈병, 방광암, 뇌암, 골수암, 자궁경부암, 만성 림프구성 백혈병, 결장직장암, 식도암, 간세포성암, 급성 림프모구성 백혈병을 포함한 림프모구성 백혈병, 여포성 림프종, T-세포 또는 B-세포 기원의 림프성 악성종양, 흑색종, 골수 백혈병, 골수종, 구강암, 난소암, 비소세포 폐암, 전립선암, 소세포 폐암, 비장암 또는 두경부암이다. 일부 실시양태에서, 암은 림프종 또는 위암이다.
또 다른 예시적인 실시양태는 암을 갖거나 갖는 것으로 의심되는 대상체를 치료하는 데 있어서 항체-약물 접합체, 조성물 또는 제약 조성물 (예를 들어, 본원에 개시된 임의의 예시적인 항체-약물 접합체, 조성물 또는 제약 조성물)의 용도이다. 일부 실시양태에서, 암은 표적 항원을 발현한다. 일부 실시양태에서, 표적 항원은 BCMA, CD33, HER2, CD38, CD48, CD79b, PCAD, CD74, CD138, SLAMF7, CD123, CLL1, FLT3, CD7, CKIT, CD56, DLL3, DLK1, B7-H3, EGFR, CD71, EPCAM, FOLR1, ENPP3, MET, AXL, SLC34A2, Nectin4, TROP2, LIV1, CD46, MSLN, F3, MUC16, SLC39A6, TFRC, TACSTD2, 또는 GPNMB이다. 일부 실시양태에서, 표적 항원은 EphA2, CD56, SEZ6, CD25, CCR8,CEACAM5, CEACAM6, 4-1BB, 5AC, 5T4, 알파-태아단백질, 안지오포이에틴 2, ASLG659, TCLI, BMPRIB, 브레비칸 BCAN, BEHAB, C242 항원, C5, CA-125, CA-125 (모방), CA-IX (탄산 안히드라제 9), CCR4, CD140a, CD152, CD19, CD20, CD200, CD21 (C3DR) I), CD22 (B-세포 수용체 CD22-B 이소형), CD221, CD23 (gE 수용체), CD28, CD30 (TNFRSF8), CD37, CD4, CD40, CD44 v6, CD51, CD52, CD70, CD72 (Lyb-2, B-세포 분화 항원 CD72), CD79a, CD80, CEA, CEA-관련 항원, ch4D5, CLDN18.2, CRIPTO (CR, CRI, CRGF, TDGF1), CTLA-4, CXCR5, DLL4, DR5, E16 (LATI, SLC7A5), EGFL7, EphB2R (DRT, ERK, Hek5, EPHT3, Tyro5), 에피시알린, ERBB3, ETBR (엔도텔린 유형 B 수용체), FCRHI (Fc 수용체-유사 단백질 I), FcRH2 (IFGP4, IRTA4, SPAPI, SPAP IB, SPAP IC), 피브로넥틴 엑스트라 도메인-B, 프리즐드 수용체, GD2, GD3 강글리오시드, GEDA, HER1, HER2/neu, HER3, HGF, HLA-DOB, HLA-DR, 인간 산란 인자 수용체 키나제, IGF-I 수용체, IL-13, IL20R (ZCYTOR7), IL-6, ILGF2, ILFRIR, 인테그린 u, IRTA2 (이뮤노글로불린 슈퍼패밀리 수용체 전위 연관 2), 루이스-Y 항원, LY64 (RP105), MCP-I, MDP (DPEPI), (MPF), MSLN, SMR, 메소텔린, 거핵구, PD-I, PDCDI, PDGF-R u, 전립선 특이적 막 항원, PSCA (전립선 줄기 세포 항원 전구체), PSCA hlg, RANKL, RON, SDCI, Sema Sb, STEAP I, STEAP2, PCANAP I, STAMP I, STEAP2, STMP, 전립선암 연관 유전자 I, TAG-72, TEMI, 테나신 C, TENB2, (TMEFF2, 토모레귤린, TPEF, HPPI, TR), TGF-IJ, TRAIL-E2, TRAIL-Rl, TRAIL-R2, T17M4 (BR22450, FLJ20041, TRPM4, TRPM4B, 일시적 수용체 전위 양이온 채널 서브패밀리 M, 구성원 4), TWEAK-R, TYRP I (당단백질 75), VEGF, VEGF-A, EGFR-I, VEGFR-2, 또는 비멘틴이다. 일부 실시양태에서, 표적 항원은 EGFR, CD7, HER2, EPCAM, FOLR1, ENPP3, MET, AXL, SLC34A2, Nectin4, MSLN, F3, MUC16, SLC39A6, TFRC, TACSTD2, 또는 GPNMB이다. 일부 실시양태에서, 표적 항원은 EGFR, CD7, 또는 HER2이다. 일부 실시양태에서, 암은 종양 또는 혈액암이다. 일부 실시양태에서, 암은 유방암, 다발성 골수종, 형질 세포 골수종, 백혈병, 림프종, 육종, 위암, 급성 골수성 백혈병, 방광암, 뇌암, 골수암, 자궁경부암, 만성 림프구성 백혈병, 결장직장암, 식도암, 간세포성암, 급성 림프모구성 백혈병을 포함한 림프모구성 백혈병, 여포성 림프종, T-세포 또는 B-세포 기원의 림프성 악성종양, 흑색종, 골수 백혈병, 골수종, 구강암, 난소암, 비소세포 폐암, 전립선암, 소세포 폐암, 비장암 또는 두경부암이다. 일부 실시양태에서, 암은 림프종 또는 위암이다.
또 다른 예시적인 실시양태는 암을 갖거나 갖는 것으로 의심되는 대상체를 치료하기 위한 의약을 제조하는 방법에서 항체-약물 접합체, 조성물 또는 제약 조성물 (예를 들어, 본원에 개시된 임의의 예시적인 항체-약물 접합체, 조성물 또는 제약 조성물)의 용도이다. 일부 실시양태에서, 암은 표적 항원을 발현한다. 일부 실시양태에서, 표적 항원은 BCMA, CD33, HER2, CD38, CD48, CD79b, PCAD, CD74, CD138, SLAMF7, CD123, CLL1, FLT3, CD7, CKIT, CD56, DLL3, DLK1, B7-H3, EGFR, CD71, EPCAM, FOLR1, ENPP3, MET, AXL, SLC34A2, Nectin4, TROP2, LIV1, CD46, MSLN, F3, MUC16, SLC39A6, TFRC, TACSTD2, 또는 GPNMB이다. 일부 실시양태에서, 표적 항원은 EphA2, CD56, SEZ6, CD25, CCR8,CEACAM5, CEACAM6, 4-1BB, 5AC, 5T4, 알파-태아단백질, 안지오포이에틴 2, ASLG659, TCLI, BMPRIB, 브레비칸 BCAN, BEHAB, C242 항원, C5, CA-125, CA-125 (모방), CA-IX (탄산 안히드라제 9), CCR4, CD140a, CD152, CD19, CD20, CD200, CD21 (C3DR) I), CD22 (B-세포 수용체 CD22-B 이소형), CD221, CD23 (gE 수용체), CD28, CD30 (TNFRSF8), CD37, CD4, CD40, CD44 v6, CD51, CD52, CD70, CD72 (Lyb-2, B-세포 분화 항원 CD72), CD79a, CD80, CEA, CEA-관련 항원, ch4D5, CLDN18.2, CRIPTO (CR, CRI, CRGF, TDGF1), CTLA-4, CXCR5, DLL4, DR5, E16 (LATI, SLC7A5), EGFL7, EphB2R (DRT, ERK, Hek5, EPHT3, Tyro5), 에피시알린, ERBB3, ETBR (엔도텔린 유형 B 수용체), FCRHI (Fc 수용체-유사 단백질 I), FcRH2 (IFGP4, IRTA4, SPAPI, SPAP IB, SPAP IC), 피브로넥틴 엑스트라 도메인-B, 프리즐드 수용체, GD2, GD3 강글리오시드, GEDA, HER1, HER2/neu, HER3, HGF, HLA-DOB, HLA-DR, 인간 산란 인자 수용체 키나제, IGF-I 수용체, IL-13, IL20R (ZCYTOR7), IL-6, ILGF2, ILFRIR, 인테그린 u, IRTA2 (이뮤노글로불린 슈퍼패밀리 수용체 전위 연관 2), 루이스-Y 항원, LY64 (RP105), MCP-I, MDP (DPEPI), (MPF), MSLN, SMR, 메소텔린, 거핵구, PD-I, PDCDI, PDGF-R u, 전립선 특이적 막 항원, PSCA (전립선 줄기 세포 항원 전구체), PSCA hlg, RANKL, RON, SDCI, Sema Sb, STEAP I, STEAP2, PCANAP I, STAMP I, STEAP2, STMP, 전립선암 연관 유전자 I, TAG-72, TEMI, 테나신 C, TENB2, (TMEFF2, 토모레귤린, TPEF, HPPI, TR), TGF-IJ, TRAIL-E2, TRAIL-Rl, TRAIL-R2, T17M4 (BR22450, FLJ20041, TRPM4, TRPM4B, 일시적 수용체 전위 양이온 채널 서브패밀리 M, 구성원 4), TWEAK-R, TYRP I (당단백질 75), VEGF, VEGF-A, EGFR-I, VEGFR-2, 또는 비멘틴이다. 일부 실시양태에서, 표적 항원은 EGFR, CD7, HER2, EPCAM, FOLR1, ENPP3, MET, AXL, SLC34A2, Nectin4, MSLN, F3, MUC16, SLC39A6, TFRC, TACSTD2, 또는 GPNMB이다. 일부 실시양태에서, 표적 항원은 EGFR, CD7, 또는 HER2이다. 일부 실시양태에서, 암은 종양 또는 혈액암이다. 일부 실시양태에서, 암은 유방암, 다발성 골수종, 형질 세포 골수종, 백혈병, 림프종, 육종, 위암, 급성 골수성 백혈병, 방광암, 뇌암, 골수암, 자궁경부암, 만성 림프구성 백혈병, 결장직장암, 식도암, 간세포성암, 급성 림프모구성 백혈병을 포함한 림프모구성 백혈병, 여포성 림프종, T-세포 또는 B-세포 기원의 림프성 악성종양, 흑색종, 골수 백혈병, 골수종, 구강암, 난소암, 비소세포 폐암, 전립선암, 소세포 폐암, 비장암 또는 두경부암이다. 일부 실시양태에서, 암은 림프종 또는 위암이다.
또 다른 예시적인 실시양태는 암을 갖거나 갖는 것으로 의심되는 대상체로부터의 생물학적 샘플을 제공하고; 샘플을 항체-약물 접합체와 접촉시키고; 샘플 내 암 세포에 대한 항체-약물 접합체의 결합을 검출함으로써, 암을 갖거나 갖는 것으로 의심되는 대상체가 항체-약물 접합체, 조성물 또는 제약 조성물 (예를 들어, 본원에 개시된 임의의 예시적인 항체-약물 접합체, 조성물 또는 제약 조성물)로의 치료에 반응성일지 여부를 결정하는 방법이다. 일부 실시양태에서, 샘플 내 암 세포는 표적 항원을 발현한다. 일부 실시양태에서, 암은 표적 항원을 발현한다. 일부 실시양태에서, 표적 항원은 BCMA, CD33, HER2, CD38, CD48, CD79b, PCAD, CD74, CD138, SLAMF7, CD123, CLL1, FLT3, CD7, CKIT, CD56, DLL3, DLK1, B7-H3, EGFR, CD71, EPCAM, FOLR1, ENPP3, MET, AXL, SLC34A2, Nectin4, TROP2, LIV1, CD46, MSLN, F3, MUC16, SLC39A6, TFRC, TACSTD2, 또는 GPNMB이다. 일부 실시양태에서, 표적 항원은 EphA2, CD56, SEZ6, CD25, CCR8,CEACAM5, CEACAM6, 4-1BB, 5AC, 5T4, 알파-태아단백질, 안지오포이에틴 2, ASLG659, TCLI, BMPRIB, 브레비칸 BCAN, BEHAB, C242 항원, C5, CA-125, CA-125 (모방), CA-IX (탄산 안히드라제 9), CCR4, CD140a, CD152, CD19, CD20, CD200, CD21 (C3DR) I), CD22 (B-세포 수용체 CD22-B 이소형), CD221, CD23 (gE 수용체), CD28, CD30 (TNFRSF8), CD37, CD4, CD40, CD44 v6, CD51, CD52, CD70, CD72 (Lyb-2, B-세포 분화 항원 CD72), CD79a, CD80, CEA, CEA-관련 항원, ch4D5, CLDN18.2, CRIPTO (CR, CRI, CRGF, TDGF1), CTLA-4, CXCR5, DLL4, DR5, E16 (LATI, SLC7A5), EGFL7, EphB2R (DRT, ERK, Hek5, EPHT3, Tyro5), 에피시알린, ERBB3, ETBR (엔도텔린 유형 B 수용체), FCRHI (Fc 수용체-유사 단백질 I), FcRH2 (IFGP4, IRTA4, SPAPI, SPAP IB, SPAP IC), 피브로넥틴 엑스트라 도메인-B, 프리즐드 수용체, GD2, GD3 강글리오시드, GEDA, HER1, HER2/neu, HER3, HGF, HLA-DOB, HLA-DR, 인간 산란 인자 수용체 키나제, IGF-I 수용체, IL-13, IL20R (ZCYTOR7), IL-6, ILGF2, ILFRIR, 인테그린 u, IRTA2 (이뮤노글로불린 슈퍼패밀리 수용체 전위 연관 2), 루이스-Y 항원, LY64 (RP105), MCP-I, MDP (DPEPI), (MPF), MSLN, SMR, 메소텔린, 거핵구, PD-I, PDCDI, PDGF-R u, 전립선 특이적 막 항원, PSCA (전립선 줄기 세포 항원 전구체), PSCA hlg, RANKL, RON, SDCI, Sema Sb, STEAP I, STEAP2, PCANAP I, STAMP I, STEAP2, STMP, 전립선암 연관 유전자 I, TAG-72, TEMI, 테나신 C, TENB2, (TMEFF2, 토모레귤린, TPEF, HPPI, TR), TGF-IJ, TRAIL-E2, TRAIL-Rl, TRAIL-R2, T17M4 (BR22450, FLJ20041, TRPM4, TRPM4B, 일시적 수용체 전위 양이온 채널 서브패밀리 M, 구성원 4), TWEAK-R, TYRP I (당단백질 75), VEGF, VEGF-A, EGFR-I, VEGFR-2, 또는 비멘틴이다. 일부 실시양태에서, 표적 항원은 EGFR, CD7, HER2, EPCAM, FOLR1, ENPP3, MET, AXL, SLC34A2, Nectin4, MSLN, F3, MUC16, SLC39A6, TFRC, TACSTD2, 또는 GPNMB이다. 일부 실시양태에서, 표적 항원은 EGFR, CD7, 또는 HER2이다. 일부 실시양태에서, 암은 종양 또는 혈액암이다. 일부 실시양태에서, 암은 유방암, 다발성 골수종, 형질 세포 골수종, 백혈병, 림프종, 육종, 위암, 급성 골수성 백혈병, 방광암, 뇌암, 골수암, 자궁경부암, 만성 림프구성 백혈병, 결장직장암, 식도암, 간세포성암, 급성 림프모구성 백혈병을 포함한 림프모구성 백혈병, 여포성 림프종, T-세포 또는 B-세포 기원의 림프성 악성종양, 흑색종, 골수 백혈병, 골수종, 구강암, 난소암, 비소세포 폐암, 전립선암, 소세포 폐암, 비장암 또는 두경부암이다. 일부 실시양태에서, 암은 림프종 또는 위암이다. 일부 실시양태에서, 샘플은 조직 생검 샘플, 혈액 샘플 또는 골수 샘플이다.
상기 기재된 ADC 화합물 및 조성물을 생성하는 방법이 또한 개시된다. 예시적인 실시양태는 접합을 허용하는 조건 하에 항체 또는 항원-결합 단편을 Bcl-xL 억제제에 연결되거나 공유 부착된 절단가능한 링커와 반응시킴으로써 항체-약물 접합체를 생성하는 방법이다.
도 1은 예시적인 부위-특이적 시스테인 접합을 나타낸다.
도 2는 박테리아 트랜스글루타미나제 (BTG)를 사용하는 예시적인 부위-특이적 항체 접합을 나타낸다.
도 3은 ALL-SIL 세포주 (CTG 72h)에서의 항-CD7-Bcl-xL ADC 및 페이로드의 시험관내 활성을 나타낸다.
도 4는 DND-41 세포주 (CTG 72h)에서의 항-CD7-BclxL ADC 및 페이로드의 시험관내 활성을 나타낸다.
도 5a 및 도 5b는 H1650 세포주 (3D, CTG 120h)에서의 항-EGFR-BclxL ADC 및 페이로드의 시험관내 활성을 나타낸다.
도 6은 CTG 검정을 사용한 HCC1569 세포 생존율에서 단일 작용제로서 및 파클리탁셀과 조합된 항-HER2-Bcl-xL ADC의 효과를 나타낸다.
도 7a, 7b, 7c 및 7d는 HPB-ALL 세포주에서 단일 작용제에서 또는 빈크리스틴 또는 BCL2 억제제와 조합된 Bcl-xLi 페이로드 및 항-CD7-, 항-CD38-, 항-CD48- 및 항-chLys- Bcl-xLi ADC의 시험관내 활성을 나타낸다.
도 8a 및 도 8b는 다양한 암 세포주에서 EGFR-AbA-L109A-P1과 MAP 키나제 경로의 억제제의 시험관내 조합 활성을 나타낸다.
도 9는 마우스에서 H1650 인간 비소세포 폐 암종 (NSCLC) 모델에 대한 도세탁셀과 조합된 EGFR2 CysMab DANAPA-L109A-P1 ADC의 종양 성장 억제를 나타낸다.
도 10은 마우스에서 H1650 인간 비소세포 폐 암종 (NSCLC) 모델에 대한 도세탁셀과 조합된 EGFR2 CysMab DANAPA-L109A-P1 ADC의 체중 변화를 나타낸다.
도 11은 도세탁셀과 조합된 상이한 링커 페이로드를 갖는 EGFR-Bcl-xLi-ADC의 항종양 효과를 나타낸다. 값은 평균 ± SEM; 샘플 크기이다 (군당 n=7마리 마우스). 제21일 (vs 비히클 대조군) 및 제21일 및 제46일 (vs EGFR-L109A-P1)의 통계적 분석을 일원 ANOVA 사후 터키 다중 비교 검정; 팁코 스팟파이어에서의 인디고 인라이프 결과 분석을 사용하여 수행하였다. #: p<0.05.
도 12는 도세탁셀과 조합된 상이한 링커 페이로드를 갖는 EGFR-Bcl-xLi-ADC로 처리한 후의 체중 변화를 나타낸다. 체중 변화 (%)는 각각의 개별 동물에 대한 백분율로 표현된 평가일에서의 체중과 제0일에서의 체중 사이의 비를 나타낸다. 값은 평균 ± SEM; 샘플 크기이다 (군당 n=7마리 마우스). 제21일 (vs 비히클 대조군) 및 제21일 및 제46일 (vs EGFR-L109A-P1)의 통계적 분석을 일원 ANOVA 사후 터키 다중 비교 검정; 팁코 스팟파이어에서의 인디고 인라이프 결과 분석을 사용하여 수행하였다. #: p<0.05.
도 13은 파클리탁셀과 조합된, EpCAM-DANAPA-L11C-P25 ADC, 3207-DANAPA-L11C-P25 이소형 대조군 ADC, 및 EpCAM-DANAPA CysMab 대조군 항체의 EBC-1 성장 동역학을 나타낸다.
도 14는 EpCAM-DANAPA-L11C-P25 ADC, 3207-DANAPA-L11C-P25 이소형 대조군 ADC, 및 EpCAM-DANAPA CysMab 대조군 항체를 파클리탁셀과 조합하여 사용한 치료 후의 체중 변화를 나타낸다.
도 15는 IgG1 DANAPA-L9A-P21, Ab D DANAPA_L9A-P1, Ab D DANAPA_L9A-P21, Ab D DANAPA_L9C-P25, Ab D DANAPA_L9A-P33 및 Ab D DANAPA_L9C-P40 (2.5 및/또는 7.5 mg/kg, IV 1회 투여, n=6)으로의 처리 시 ALL-SIL-이식된 암컷 NSG 마우스의 종양 부피 (mm3)를 나타낸다.
도 16은 IgG1 DANAPA-L9A-P21, Ab D DANAPA_L9A-P1, Ab D DANAPA_L9A-P21, Ab D DANAPA_L9C-P25, Ab D DANAPA_L9A-P33 및 Ab D DANAPA_L9C-P40 (2.5 및/또는 7.5 mg/kg, IV 1회 투여, n=6)으로 처리 시 ALL-SIL-이식된 암컷 NSG 마우스의 체중을 나타낸다.
개시된 조성물 및 방법은 본 개시내용의 일부를 형성하는 첨부 도면과 연계헤서 취해진 하기 상세한 설명을 참조함으로써 보다 쉽게 이해될 수 있다.
본 명세서 전반에 걸쳐, 설명은 조성물 및 조성물의 사용 방법에 관한 것이다. 본 개시내용이 조성물과 연관된 특색 또는 실시양태를 기재하거나 청구하는 경우, 아러한 특색 또는 실시양태는 조성물을 사용하는 방법에도 동일하게 적용가능하다. 마찬가지로, 본 개시내용이 조성물을 사용하는 방법과 연관된 특색 또는 실시양태를 기재하거나 청구하는 경우, 이러한 특색 또는 실시양태는 조성물에도 동일하게 적용가능하다.
값의 범위가 표현되는 경우, 이는 범위 내의 임의의 특정한 값을 사용하는 실시양태를 포함한다. 또한, 범위로 언급된 값들은 그 범위 내 각각의 그리고 모든 값을 포함한다. 모든 범위는 그의 종점을 포함하고 조합가능하다. 값이 선행사 "약"의 사용에 의해 근사치로 표현되는 경우, 특정한 값은 또 다른 실시양태를 형성하는 것으로 이해될 것이다. 특정한 수치에 대한 언급은 문맥상 달리 명백하게 지시되지 않는 한 적어도 그 특정한 값을 포함한다. "또는"의 사용은 그의 사용에 대해 구체적으로 문맥상 달리 지시되지 않는 한 "및/또는"을 의미할 것이다. 본원에 인용된 모든 참고문헌은 임의의 목적을 위해 참조로 포함된다. 참고문헌 및 명세서가 상충되는 경우, 명세서가 우선할 것이다.
설명에서 문맥상 달리 나타내지 않는 한, 예를 들어 연결부의 구체적인 지점(들)을 나타내는 기호의 부재 하에 구조 또는 구조의 단편이 그려질 때, 이는 그 자체로 사용되거나 또는 ADC의 다른 성분에 부착될 수 있고, 이는 임의의 배향으로, 예를 들어 항체가 임의의 적합한 부착 지점에서 화학적 모이어티, 예컨대 링커-약물에 부착되도록 부착되어질 수 있다. 그러나, 나타내어진 경우, ADC의 성분은 주어진 화학식에 제시된 배향으로 부착된다. 예를 들어, 화학식 (1)이 Ab-(L-D)p로서 기재되고 기 "-(L-D)"가
Figure pct00344
로서 기재되는 경우, 화학식 (1)의 정교화된 구조는
Figure pct00345
이다. 이는
Figure pct00346
이 아니다.
명확성을 위해, 별도의 실시양태의 맥락에서 본원에 기재되는 개시된 조성물 및 방법의 특정 특색이 또한 단일 실시양태에서 조합하여 제공될 수 있음을 인지해야 한다. 반대로, 간결성을 위해, 단일 실시양태의 맥락에서 기재되는 개시된 조성물 및 방법의 다양한 특색이 또한 별도로 또는 임의의 하위-조합으로 제공될 수 있다.
본 출원 전반에 걸쳐 사용된 항체 약물 접합체는 "표적 항원/항체-링커-페이로드"의 일반 포맷의 명명 규정을 사용하여 식별될 수 있다. 단지 예를 들어, 항체 약물 접합체가 "표적 X-L0-P0"으로 지칭되는 경우, 이러한 접합체는 표적 X에 결합하는 항체, L0으로 지정된 링커 및 P0으로 지정된 페이로드를 포함할 것이다. 대안적으로, 항체 약물 접합체가 "항-표적 X-L0-P0"으로 지칭되는 경우, 이러한 접합체는 표적 X에 결합하는 항체, L0으로 지정된 링커 및 P0으로 지정된 페이로드를 포함할 것이다. 또 다른 대안에서, 항체 약물 접합체가 "AbX-L0-P0"으로 지칭되는 경우, 이러한 접합체는 AbX로 지정된 항체, L0으로 지정된 링커 및 P0으로 지정된 페이로드를 포함할 것이다. 비-특이적 이소형 대조군 항체를 포함하는 대조군 항체 약물 접합체는 "이소형 대조군 IgG1-L0-P0" 또는 "IgG1-L0-P0"으로 지칭될 수 있다.
본원에 제시된 임의의 화학식은 또한 화합물의 비표지된 형태 뿐만 아니라 동위원소 표지된 형태를 나타내는 것으로 의도된다. 동위원소 표지된 화합물은 본원에 제시된 화학식으로 도시된 구조를 갖지만, 단 1개 이상의 원자가 선택되는 원자 질량 또는 질량수를 갖는 원자에 의해 대체된다. 본 발명의 화합물에 혼입될 수 있는 동위원소는, 예를 들어 수소, 탄소, 질소, 산소, 플루오린 및 염소의 동위원소, 예컨대 3H, 11C, 13C, 14C, 15N, 18F 및 36Cl을 포함한다. 따라서, 본 개시내용은, 예를 들어 방사성 동위원소, 예컨대 3H 및 14C, 또는 비-방사성 동위원소, 예컨대 2H 및 13C가 존재하는 것들을 포함한, 상기 언급된 동위원소 중 임의의 것 중 1종 이상을 포함하는 화합물을 포함하는 것으로 이해되어야 한다. 이러한 동위원소 표지된 화합물은 대사 연구 (14C), 반응 동역학 연구 (예를 들어, 2H 또는 3H), 검출 또는 영상화 기술, 예컨대 약물 또는 기질 조직 분포 검정을 포함한 양전자 방출 단층촬영 (PET) 또는 단일-광자 방출 컴퓨터 단층촬영 (SPECT), 또는 환자의 방사성 치료에 유용하다. 특히, 18F 또는 표지된 화합물이 PET 또는 SPECT 연구에 특히 바람직할 수 있다. 동위원소-표지된 화합물은 일반적으로, 예를 들어 이전에 사용된 비-표지된 시약 대신에 적절한 동위원소-표지된 시약을 사용하여 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 통상적인 기술에 의해 제조될 수 있다.
정의
설명의 측면과 관련된 다양한 용어가 명세서 및 청구범위 전반에 걸쳐 사용된다. 이러한 용어는 달리 나타내지 않는 한 관련 기술분야에서 그의 통상의 의미로 주어져야 한다. 다른 구체적으로 정의된 용어는 본원에 제공된 정의와 일치하는 방식으로 해석되어야 한다.
본원에 사용된 단수 형태 ("a", "an", 및 "the")는 문맥상 달리 명백하게 지시하지 않는 한 복수 형태를 포함한다. "화학식의 것인", "포함하는" 및 "함유하는"에서와 같이, 용어 "포함하는", "갖는", "의 것인"은 달리 나타내지 않는 한 개방형 용어 (즉, "포함하나 이에 제한되지는 않는"을 의미함)로서 해석되어야 한다. 추가로, 한 실시양태에서 "포함하는" 또는 또 다른 개방형 용어가 사용될 때마다, 동일한 실시양태는 중간 용어 "본질적으로 이루어진" 또는 폐쇄형 용어 "이루어진"을 사용하여 보다 좁게 청구될 수 있는 것으로 이해되어야 한다.
용어 "약" 또는 "대략"은 수치 값 및 범위와 관련하여 사용되는 경우, 본원에 함유된 교시로부터 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 명백한 바와 같이, 실시양태가 의도된 바와 같이 수행할 수 있도록 언급된 값 또는 범위에 근접하거나 그에 근접한 값 또는 범위를 지칭한다. 일부 실시양태에서, 약은 수치 양의 ± 20%, 15%, 10%, 5%, 1%, 0.5% 또는 0.1%를 의미한다. 한 실시양태에서, 용어 "약"은 명시된 값보다 10% 많거나 적은 값의 범위를 지칭한다. 또 다른 실시양태에서, 용어 "약"은 명시된 값보다 5% 많거나 적은 값의 범위를 지칭한다. 또 다른 실시양태에서, 용어 "약"은 명시된 값보다 1% 많거나 적은 값의 범위를 지칭한다.
용어 "항체-약물 접합체", "항체 접합체", "접합체", "면역접합체" 및 "ADC"는 상호교환가능하게 사용되고, 하나 이상의 항체 또는 항원-결합 단편에 연결된 하나 이상의 치료 화합물 (예를 들어, Bcl-xL 억제제)을 지칭한다. 일부 실시양태에서, ADC는 다음 일반식에 의해 정의된다: Ab-(L-D)p (화학식 (1)), 여기서 Ab = 항체 또는 항원-결합 단편, L = 링커 모이어티, D = 약물 모이어티 (예를 들어, Bcl-xL 억제제 약물 모이어티), 및 p = 항체 또는 항원-결합 단편당 약물 모이어티의 수. Bcl-xL 억제제 약물 모이어티를 포함하는 ADC에서, "p"는 항체 또는 항원-결합 단편에 연결된 Bcl-xL 억제제 화합물의 수를 지칭한다.
용어 "항체"는 가장 넓은 의미로 이뮤노글로불린 분자의 가변 영역 내의 하나 이상의 항원 인식 부위를 통해 표적, 예컨대 단백질, 폴리펩티드, 탄수화물, 폴리뉴클레오티드, 지질 또는 그의 조합을 인식하고 특이적으로 결합하는 이뮤노글로불린 분자를 지칭하도록 사용된다. 항체는 폴리클로날 또는 모노클로날, 다중 또는 단일 쇄, 또는 무손상 이뮤노글로불린일 수 있고, 천연 공급원으로부터 또는 재조합 공급원으로부터 유래될 수 있다. "무손상" 항체는 전형적으로 디술피드 결합에 의해 상호연결된 적어도 2개의 중쇄 (H) 및 2개의 경쇄 (L)를 포함하는 당단백질이다. 각각의 중쇄는 중쇄 가변 영역 (본원에서 VH로 약칭됨) 및 중쇄 불변 영역으로 구성된다. 중쇄 불변 영역은 3개의 도메인, CH1, CH2 및 CH3을 포함한다. 각각의 경쇄는 경쇄 가변 영역 (본원에서 VL로 약칭됨) 및 경쇄 불변 영역으로 구성된다. 경쇄 불변 영역은 1개의 도메인, CL로 구성된다. VH 및 VL 영역은 프레임워크 영역 (FR)으로 명명된 보다 보존된 영역에 산재되어 있는, 상보성 결정 영역 (CDR)으로 명명된 초가변 영역으로 추가로 세분될 수 있다. 각각의 VH 및 VL은 아미노-말단으로부터 카르복실-말단으로 다음 순서로 배열된 3개의 CDR 및 4개의 FR로 구성된다: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. 중쇄 및 경쇄의 가변 영역은 항원과 상호작용하는 결합 도메인을 함유한다. 항체의 불변 영역은 면역계의 다양한 세포 (예를 들어, 이펙터 세포) 및 전형적 보체계의 제1 성분 (C1q)을 포함하는 숙주 조직 또는 인자에 대한 이뮤노글로불린의 결합을 매개할 수 있다. 항체는 모노클로날 항체, 인간 항체, 인간화 항체, 낙타화 항체 또는 키메라 항체일 수 있다. 항체는 임의의 이소형 (예를 들어, IgG, IgE, IgM, IgD, IgA 및 IgY), 부류 (예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 및 IgA2), 또는 하위부류의 것일 수 있다. 항체는 무손상 항체 또는 그의 항원-결합 단편일 수 있다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 항체 또는 항체 단편은 약물 모이어티에의 접합을 위한 부위로서 변형된 또는 조작된 아미노산 잔기, 예를 들어 1개 이상의 시스테인 잔기를 포함한다 (문헌 [Junutula JR, et al., Nat Biotechnol 2008, 26:925-932]). 한 실시양태에서, 본 개시내용은 본원에 기재된 위치에서 1개 이상의 아미노산의 시스테인으로의 치환을 포함하는 변형된 항체 또는 항체 단편을 제공한다. 시스테인 치환을 위한 부위는 항체 또는 항체 단편의 불변 영역 내에 있고, 따라서 다양한 항체 또는 항체 단편에 적용가능하고, 부위는 안정하고 균질한 접합체를 제공하도록 선택된다. 변형된 항체 또는 단편은 1, 2개 또는 그 초과의 시스테인 치환을 가질 수 있고, 이들 치환은 본원에 기재된 바와 같은 다른 변형 및 접합 방법과 조합되어 사용될 수 있다. 항체의 특정 위치에 시스테인을 삽입하는 방법은 관련 기술분야에 공지되어 있으며, 예를 들어 문헌 [Lyons et al., (1990) Protein Eng., 3:703-708], WO 2011/005481, WO2014/124316, WO 2015/138615를 참조한다. 특정 실시양태에서, 변형된 항체는 항체의 중쇄의 위치 117, 119, 121, 124, 139, 152, 153, 155, 157, 164, 169, 171, 174, 189, 191, 195, 197, 205, 207, 246, 258, 269, 274, 286, 288, 290, 292, 293, 320, 322, 326, 333, 334, 335, 337, 344, 355, 360, 375, 382, 390, 392, 398, 400 및 422로부터 선택되는 그의 불변 영역 상에 1개 이상의 아미노산의 시스테인으로의 치환을 포함하며, 여기서 위치는 EU 시스템에 따라 넘버링된다. 일부 실시양태에서, 변형된 항체 또는 항체 단편은 항체 또는 항체 단편의 경쇄의 위치 107, 108, 109, 114, 129, 142, 143, 145, 152, 154, 156, 159, 161, 165, 168, 169, 170, 182, 183, 197, 199 및 203으로부터 선택되는 그의 불변 영역 상에 1개 이상의 아미노산의 시스테인으로의 치환을 포함하며, 여기서 위치는 EU 시스템에 따라 넘버링되고, 경쇄는 인간 카파 경쇄이다. 특정 실시양태에서, 변형된 항체 또는 그의 항체 단편은 그의 불변 영역 상에 2개 이상의 아미노산의 시스테인으로의 치환의 조합을 포함하며, 여기서 조합은 항체 중쇄의 위치 375, 항체 중쇄의 위치 152, 항체 중쇄의 위치 360 또는 항체 경쇄의 위치 107에서의 치환을 포함하고, 위치는 EU 시스템에 따라 넘버링된다. 특정 실시양태에서, 변형된 항체 또는 그의 항체 단편은 그의 불변 영역 상에서 1개의 아미노산의 시스테인으로의 치환을 포함하며, 여기서 치환은 항체 중쇄의 위치 375, 항체 중쇄의 위치 152, 항체 중쇄의 위치 360, 항체 경쇄의 위치 107, 항체 경쇄의 위치 165 또는 항체 경쇄의 위치 159이고, 위치는 EU 시스템에 따라 넘버링 되고, 경쇄는 카파 쇄이다. 특정한 실시양태에서, 변형된 항체 또는 그의 항체 단편은 그의 불변 영역 상에 2개의 아미노산의 시스테인으로의 치환의 조합을 포함하며, 여기서 조합은 항체 중쇄의 위치 375 및 항체 중쇄의 위치 152에서의 치환을 포함하고, 위치는 EU 시스템에 따라 넘버링된다. 특정한 실시양태에서, 변형된 항체 또는 그의 항체 단편은 항체 중쇄의 위치 360에서 1개의 아미노산의 시스테인으로의 치환을 포함하며, 여기서 위치는 EU 시스템에 따라 넘버링된다. 다른 특정한 실시양태에서, 변형된 항체 또는 그의 항체 단편은 항체 경쇄의 위치 107에서 1개의 아미노산의 시스테인으로의 치환을 포함하며, 여기서 위치는 EU 시스템에 따라 넘버링되고, 경쇄는 카파 쇄이다.
본원에 사용된 용어 "항체 단편" 또는 "항원-결합 단편" 또는 "기능적 항체 단편"은 항원 (예를 들어, EGFR, CD7, 또는 HER2)의 에피토프와 (예를 들어, 결합, 입체 장애, 안정화/탈안정화, 공간 분포에 의해) 특이적으로 상호작용하는 능력을 보유하는 항체의 적어도 한 부분을 지칭한다. 항원-결합 단편은 또한 항원-발현 세포 내로 내재화하는 능력을 보유할 수 있다. 일부 실시양태에서, 항원-결합 단편은 또한 면역 이펙터 활성을 보유한다. 용어 항체, 항체 단편, 항원-결합 단편 등은 보다 큰 거대분자, 예컨대 ADC와 관련하여 항체로부터의 결합 도메인의 사용을 포괄하는 것으로 의도된다. 전장 항체의 단편이 전장 항체의 항원 결합 기능을 수행할 수 있는 것으로 나타났다. 항체 단편의 예는 Fab, Fab', F(ab')2, Fv 단편, scFv 항체 단편, 디술피드-연결된 Fv (sdFv), VH 및 CH1 도메인으로 이루어진 Fd 단편, 선형 항체, 단일 도메인 항체, 예컨대 sdAb (VL 또는 VH), 낙타류 VHH 도메인, 항체 단편, 예컨대 힌지 영역에서 디술피드 가교에 의해 연결된 2개의 Fab 단편을 포함하는 2가 단편으로부터 형성된 다중-특이적 항체 및 단리된 CDR 또는 항체의 다른 에피토프 결합 단편을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 항원-결합 단편은 또한 단일 도메인 항체, 맥시바디, 미니바디, 나노바디, 인트라바디, 디아바디, 트리아바디, 테트라바디, 이중특이적 또는 다중특이적 항체 구축물, ADC, v-NAR 및 비스-scFv 내로 혼입될 수 있다 (예를 들어, 문헌 [Holliger and Hudson (2005) Nat Biotechnol. 23 (9):1126-36] 참조). 항원-결합 단편은 또한 폴리펩티드에 기초한 스캐폴드, 예컨대 피브로넥틴 유형 III (Fn3) 내로 이식될 수 있다 (피브로넥틴 폴리펩티드 미니바디를 기재하고 있는 미국 특허 번호 6,703,199 참조). 용어 "scFv"는 경쇄의 가변 영역을 포함하는 적어도 1개의 항원-결합 단편 및 중쇄의 가변 영역을 포함하는 적어도 1개의 항원-결합 단편을 포함하는 융합 단백질을 지칭하며, 여기서 경쇄 및 중쇄 가변 영역은, 예를 들어 합성 링커, 예를 들어 짧은 가요성 폴리펩티드 링커를 통해 인접하여 연결되고, 단일 쇄 폴리펩티드로서 발현될 수 있고, 여기서 scFv는 그가 유래된 무손상 항체의 특이성을 보유한다. 명시되지 않는 한, scFv는 VL 및 VH 가변 영역을 임의의 순서로 가질 수 있고, 예를 들어 폴리펩티드의 N-말단부 및 C-말단부와 관련하여, scFv는 VL-링커-VH를 포함할 수 있거나 또는 VH-링커-VL을 포함할 수 있다. 항원-결합 단편은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 통상적인 기술을 사용하여 수득되고, 결합 단편은 무손상 항체와 동일한 방식으로 유용성 (예를 들어, 결합 친화도, 내재화)에 대해 스크리닝된다. 항원-결합 단편은, 예를 들어 무손상 단백질의 절단, 예를 들어 프로테아제 또는 화학적 절단에 의해 제조될 수 있다.
본원에 사용된 용어 "상보성 결정 영역" 또는 "CDR"은 항원 특이성 및 결합 친화도를 부여하는 항체 가변 영역 내의 아미노산의 서열을 지칭한다. 예를 들어, 일반적으로, 각각의 중쇄 가변 영역 내에 3개의 CDR (예를 들어, HCDR1, HCDR2 및 HCDR3) 및 각각의 경쇄 가변 영역 내에 3개의 CDR (LCDR1, LCDR2 및 LCDR3)이 존재한다. 주어진 CDR의 정확한 아미노산 서열 경계는 문헌 [Kabat et al. (1991) "Sequences of Proteins of Immunological Interest," 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD] ("카바트" 넘버링 스킴); [Al-Lazikani et al. (1997) J Mol Biol. 273(4):927-48] ("코티아" 넘버링 스킴); [ImMunoGenTics (IMGT) numbering (Lefranc (2001) Nucleic Acids Res. 29(1):207-9]; [Lefranc et al. (2003) Dev Comp Immunol. 27(1):55-77)] ("IMGT" 넘버링 스킴)에 기재된 것들 또는 그의 조합을 비롯한 다수의 널리 공지된 스킴 중 임의의 것을 사용하여 결정될 수 있다. 주어진 CDR 영역 (예를 들어, HC CDR1, HC CDR2, HC CDR3, LC CDR1, LC CDR2 또는 LC CDR3)에 대한 조합된 카바트 및 코티아 넘버링 스킴에서, 일부 실시양태에서, CDR은 코티아 CDR의 일부로서 정의된 아미노산 잔기와 함께, 카바트 CDR의 일부로서 정의된 아미노산 잔기에 상응한다. 본원에 사용된 "코티아" 넘버링 스킴에 따라 정의된 CDR은 또한 때때로 "초가변 루프"로 지칭된다.
일부 실시양태에서, 카바트 하에, 중쇄 가변 도메인 (VH) 내의 CDR 아미노산 잔기는 31-35 (HCDR1) (예를 들어, 위치 35 후의 삽입(들)), 50-65 (HCDR2), 및 95-102 (HCDR3)로 넘버링되고; 경쇄 가변 도메인 (VL) 내의 CDR 아미노산 잔기는 24-34 (LCDR1) (예를 들어, 위치 27 후의 삽입(들)), 50-56 (LCDR2), 및 89-97 (LCDR3)로 넘버링된다. 일부 실시양태에서, 코티아 하에, VH 내의 CDR 아미노산은 26-32 (HCDR1) (예를 들어, 위치 31 후의 삽입(들)), 52-56 (HCDR2), 및 95-102 (HCDR3)로 넘버링되고; VL 내의 아미노산 잔기는 26-32 (LCDR1) (예를 들어, 위치 30 후의 삽입(들)), 50-52 (LCDR2), 및 91-96 (LCDR3)으로 넘버링된다. 카바트 및 코티아 둘 다의 CDR 정의를 조합함으로써, 일부 실시양태에서, CDR은, 예를 들어 인간 VH 내의 아미노산 잔기 26-35 (HCDR1), 50-65 (HCDR2), 및 95-102 (HCDR3) 및 인간 VL 내의 아미노산 잔기 24-34 (LCDR1), 50-56 (LCDR2), 및 89-97 (LCDR3)을 포함하거나 또는 이로 이루어진다. 일부 실시양태에서, IMGT 하에, VH 내의 CDR 아미노산 잔기는 대략 26-35 (CDR1), 51-57 (CDR2) 및 93-102 (CDR3)로 넘버링되고, VL 내의 CDR 아미노산 잔기는 대략 27-32 (CDR1), 50-52 (CDR2), 및 89-97 (CDR3)로 넘버링된다. 일부 실시양태에서, IMGT 하에, 항체의 CDR 영역은 프로그램 IMGT/도메인갭 얼라인(IMGT/DomainGap Align)을 사용하여 결정될 수 있다.
본원에 사용된 용어 "모노클로날 항체"는 실질적으로 동종인 항체의 집단으로부터 수득된 항체를 지칭하며, 즉 집단을 구성하는 개별 항체는 미량으로 존재할 수도 있는 가능한 자연 발생 돌연변이를 제외하고는 동일하다. 모노클로날 항체는 단일 항원 에피토프에 대해 작용하며, 특이성이 높다. 대조적으로 종래 (다중클론) 항체 제제는 전형적으로 상이한 에피토프에 대한 (또는 그에 특이적인) 다수의 항체를 포함한다. 수식어 "모노클로날"은 실질적으로 동종인 항체 집단으로부터 수득되는 바와 같은 항체의 특징을 나타내고, 임의의 특정한 방법에 의한 항체의 생성을 요구하는 것으로 해석되어서는 안된다. 예를 들어, 본 개시내용에 따라 사용될 모노클로날 항체는 문헌 [Kohler et al. (1975) Nature 256:495]에 최초로 기재된 하이브리도마 방법에 의해 제조될 수 있거나, 또는 재조합 DNA 방법에 의해 제조될 수 있다 (예를 들어, 미국 특허 번호 4,816,567 참조). 모노클로날 항체는 또한 예를 들어 문헌 [Clackson et al. (1991) Nature 352:624-8] 및 [Marks et al. (1991) J Mol Biol. 222:581-97]에 기재된 기술을 사용하여 파지 항체 라이브러리로부터 단리될 수 있다. 상기 용어는 또한 단일 분자 조성의 항체 분자의 제제를 포함한다. 모노클로날 항체 조성물은 특정한 에피토프에 대해 단일 결합 특이성 및 친화도를 나타낸다.
본원에 기재된 모노클로날 항체는 비-인간, 인간 또는 인간화 항체일 수 있다. 용어는 구체적으로 표적 항원에 특이적으로 결합하고/거나 목적하는 생물학적 활성을 나타내는 한, 중쇄 및/또는 경쇄의 일부가 특정 종으로부터 유래되거나 특정 항체 부류 또는 하위부류에 속하는 항체의 상응하는 서열과 동일하거나 상동이고, 쇄(들)의 나머지는 또 다른 종으로부터 유래되거나 또 다른 항체 부류 또는 하위부류에 속하는 항체의 상응하는 서열과 동일하거나 상동인 "키메라" 항체 뿐만 아니라 이러한 항체의 단편을 포함한다.
본원에 사용된 용어 "인간 항체"는 인간에 의해 생산된 항체, 또는 인간에 의해 생산된 항체의 아미노산 서열을 갖는 항체를 지칭한다. 상기 용어는 프레임워크 및 CDR 영역 둘 다가 인간 기원의 서열로부터 유래된 가변 영역을 갖는 항체를 포함한다. 또한, 항체가 불변 영역을 함유하는 경우, 불변 영역은 또한 이러한 인간 서열, 예를 들어 인간 배선 서열 또는 인간 배선 서열의 돌연변이된 버전, 또는 예를 들어 문헌 [Knappik et al. ((2000) J Mol Biol. 296(1):57-86)]에 기재된 바와 같은 인간 프레임워크 서열 분석으로부터 유래된 컨센서스 프레임워크 서열을 함유하는 항체로부터 유래된다. 이뮤노글로불린 가변 도메인, 예를 들어 CDR의 구조 및 위치는 널리 공지된 넘버링 스킴, 예를 들어 카바트 넘버링 스킴, 코티아 넘버링 스킴 또는 카바트 및 코티아의 조합 및/또는 이뮤노젠틱스 (IMGT) 넘버링을 사용하여 정의될 수 있다. 본 발명의 인간 항체는 인간 서열에 의해 코딩되지 않는 아미노산 잔기 (예를 들어, 시험관내 무작위 또는 부위-특이적 돌연변이유발 또는 생체내 체세포 돌연변이에 의해 도입된 돌연변이, 또는 안정성 또는 제조를 촉진하기 위한 보존적 치환)를 포함할 수 있다. 그러나, 본원에 사용된 용어 "인간 항체"는 또 다른 포유동물 종, 예컨대 마우스의 배선으로부터 유래된 CDR 서열이 인간 프레임워크 서열 상에 그라프팅된 항체를 포함하는 것으로 의도되지 않는다.
본원에 사용된 용어 "재조합 인간 항체"는 재조합 수단에 의해 제조, 발현, 생성 또는 단리된 인간 항체, 예컨대 인간 이뮤노글로불린 유전자에 대해 트랜스제닉 또는 트랜스크로모소말인 동물 (예를 들어, 마우스) 또는 그로부터 제조된 하이브리도마로부터 단리된 항체, 인간 항체를 발현하도록 형질전환된 숙주 세포, 예를 들어 트랜스펙토마로부터 단리된 항체, 재조합 조합 인간 항체 라이브러리로부터 단리된 항체 및 인간 이뮤노글로불린 유전자 서열의 전부 또는 일부를 다른 DNA 서열로 스플라이싱하는 것을 수반하는 임의의 다른 수단에 의해 제조, 발현, 생성 또는 단리된 항체를 지칭한다. 이러한 재조합 인간 항체는 프레임워크 및 CDR 영역이 인간 배선 이뮤노글로불린 서열로부터 유래된 가변 영역을 갖는다. 그러나, 일부 실시양태에서, 이러한 재조합 인간 항체에 대해 시험관내 돌연변이유발 (또는, 인간 Ig 서열에 대해 트랜스제닉인 동물이 사용되는 경우, 생체내 체세포 돌연변이유발) 시킬 수 있으므로, 재조합 항체의 VH 및 VL 영역의 아미노산 서열은, 인간 배선 VH 및 VL 서열로부터 유래되고 이와 관련되지만, 생체내 인간 항체 배선 레퍼토리 내에 자연적으로 존재하지 않을 수 있는 서열이다.
본원에 사용된 용어 "키메라 항체"는 이뮤노글로불린 분자의 아미노산 서열이 2종 이상의 종으로부터 유래된 항체를 지칭한다. 일부 경우, 중쇄 및 경쇄 둘 다의 가변 영역은 목적하는 특이성, 친화도 및 활성을 갖는 한 종으로부터 유래된 항체의 가변 영역에 상응하는 반면, 불변 영역은 또 다른 종 (예를 들어, 인간)으로부터 유래된 항체와 상동이어서 후자 종에서의 면역 반응을 최소화한다.
본원에 사용된 용어 "인간화 항체"는 비-인간 (예를 들어, 뮤린) 항체 뿐만 아니라 인간 항체로부터의 서열을 함유하는 항체의 형태를 지칭한다. 이러한 항체는 비-인간 이뮤노글로불린으로부터 유래된 최소 서열을 함유하는 키메라 항체의 유형이다. 일반적으로, 인간화 항체는 적어도 1개, 전형적으로 2개의 가변 도메인을 실질적으로 모두 포함할 것이며, 여기서 모든 또는 실질적으로 모든 초가변 루프는 비-인간 이뮤노글로불린의 것에 상응하고, 모든 또는 실질적으로 모든 프레임워크 (FR) 영역은 인간 이뮤노글로불린 서열의 것이다. 또한, 인간화 항체는 이뮤노글로불린 불변 영역 (Fc)의 적어도 일부, 전형적으로 인간 이뮤노글로불린의 것을 포함할 것이다. 인간화 항체는 Fv 프레임워크 영역에서 및/또는 상기 대체된 비-인간 잔기 내에서 잔기를 치환시킴으로써 추가로 변형되어 항체 특이성, 친화도 및/또는 활성을 정밀화 및 최적화할 수 있다.
본원에 사용된 용어 "Fc 영역"은 CH3, CH2, 및 항체의 불변 도메인의 힌지 영역의 적어도 일부를 포함하는 폴리펩티드를 지칭한다. 임의로, Fc 영역은 일부 항체 부류에 존재하는 CH4 도메인을 포함할 수 있다. Fc 영역은 항체의 불변 도메인의 전체 힌지 영역을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 항체의 Fc 영역 및 CH1 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 항체의 Fc 영역 CH3 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 항체의 불변 도메인으로부터의 Fc 영역, CH1 영역 및 카파/람다 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 불변 영역, 예를 들어 중쇄 불변 영역 및/또는 경쇄 불변 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 이러한 불변 영역은 야생형 불변 영역에 비해 변형된다. 즉, 폴리펩티드는 3개의 중쇄 불변 도메인 (CH1, CH2 또는 CH3) 중 하나 이상 및/또는 경쇄 불변 영역 도메인 (CL)에 대한 변경 또는 변형을 포함할 수 있다. 예시적인 변형은 하나 이상의 도메인에서의 1개 이상의 아미노산의 부가, 결실 또는 치환을 포함한다. 이러한 변화는 이펙터 기능, 반감기 등을 최적화하기 위해 포함될 수 있다.
항체 또는 항원-결합 단편과 관련하여 본원에 사용된 "내재화"는 세포에 결합시 세포의 지질 이중층 막을 통해 내부 구획으로 (즉, "내재화"), 바람직하게는 세포 내 분해 구획으로 취해질 수 있는 항체 또는 항원-결합 단편을 지칭한다. 예를 들어, 내재화 항-HER2 항체는 세포 막 상의 HER2에 결합한 후에 세포 내로 취해질 수 있는 것이다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 ADC에 사용된 항체 또는 항원-결합 단편은 세포 표면 항원 (예를 들어, EGFR, CD7, 또는 HER2)을 표적화하고, 내재화 항체 또는 내재화 항원-결합 단편이다 (즉, ADC는 항원 결합 후에 세포 막을 통해 전달됨). 일부 실시양태에서, 내재화 항체 또는 항원-결합 단편은 세포 표면 상의 수용체에 결합한다. 세포막 상의 수용체를 표적화하는 내재화 항체 또는 내재화 항원-결합 단편은 수용체-매개 세포내이입을 유도할 수 있다. 일부 실시양태에서, 내재화 항체 또는 내재화 항원-결합 단편은 수용체-매개 세포내이입을 통해 세포 내로 취해진다.
항체 또는 항원-결합 단편과 관련하여 본원에 사용된 "비-내재화"는 세포에 결합시 세포 표면에 남아있는 항체 또는 항원-결합 단편을 지칭한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 ADC에 사용된 항체 또는 항원-결합 단편은 세포 표면 항원을 표적화하고, 비-내재화 항체 또는 비-내재화 항원-결합 단편이다 (즉, ADC는 세포 표면에 남아있고, 항원 결합 후에 세포 막을 통해 전달되지 않음). 일부 실시양태에서, 비-내재화 항체 또는 항원-결합 단편은 비-내재화 수용체 또는 다른 세포 표면 항원에 결합한다. 예시적인 비-내재화 세포 표면 항원은 CA125 및 CEA를 포함하나 이에 제한되지는 않고, 비-내재화 항원 표적에 결합하는 항체가 또한 관련 기술분야에 공지되어 있다 (예를 들어, 문헌 [Bast et al. (1981) J Clin Invest. 68(5):1331-7]; [Scholler and Urban (2007) Biomark Med. 1(4):513-23]; 및 [Boudousq et al. (2013) PLoS One 8(7):e69613] 참조).
본원에 사용된 용어 "B-세포 성숙 항원" 또는 "BCMA"는 인간 BCMA의 임의의 천연 형태 (종양 괴사 인자 수용체 슈퍼패밀리 구성원 17 (TNFRSF17)로도 공지됨)를 지칭한다. 상기 용어는 전장 인간 BCMA (예를 들어, 유니프롯 참조 서열: Q02223; 서열식별번호: 72), 뿐만 아니라 세포 프로세싱으로부터 생성될 수 있는 임의의 형태의 인간 BCMA를 포괄한다. 상기 용어는 또한 인간 BCMA의 1종 이상의 생물학적 기능을 보유하는 스플라이스 변이체, 대립유전자 변이체 및 이소형을 포함하나 이에 제한되지는 않는 인간 BCMA의 기능적 변이체 또는 단편을 포괄한다 (즉, 변이체 및 단편은 문맥이 용어가 단지 야생형 단백질만을 지칭하는 데 사용된다는 것을 나타내지 않는 한 포괄됨). BCMA는 인간으로부터 단리될 수 있거나, 또는 재조합적으로 또는 합성 방법에 의해 생산될 수 있다.
본원에 사용된 용어 "항-BCMA 항체" 또는 "BCMA에 결합하는 항체"는 BCMA에 결합하는, 예를 들어 특이적으로 결합하는 항체 또는 그의 항원-결합 단편의 임의의 형태를 지칭한다. 상기 용어는 BCMA에 결합, 예를 들어 특이적으로 결합하는 한 모노클로날 항체 (전장 모노클로날 항체 포함), 폴리클로날 항체, 및 생물학적으로 기능적 항원-결합 단편을 포함한다. WO 2012/163805는 예시적인 항-BCMA 항체 서열을 포함한 예시적인 BCMA-결합 서열을 제공하고, 그에 대해 본원에 참조로 포함된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 ADC에 사용된 항-BCMA 항체는 내재화 항체 또는 내재화 항원-결합 단편이다. J6M0 (WO 2012/163805)은 예시적인 항-BCMA 항체이다.
본원에 사용된 용어 "골수 세포 표면 항원 CD33" 또는 "CD33"은 인간 CD33의 임의의 천연 형태 (시알산 결합 Ig-유사 렉틴 3 (SIGLEC3)으로도 공지됨)를 지칭한다. 상기 용어는 전장 인간 CD33 (예를 들어, 유니프롯 참조 서열: P20138; 서열식별번호: 73), 뿐만 아니라 세포 프로세싱으로부터 생성될 수 있는 임의의 형태의 인간 CD33을 포괄한다. 상기 용어는 또한 인간 CD33의 하나 이상의 생물학적 기능을 보유하는 스플라이스 변이체, 대립유전자 변이체 및 이소형을 포함하나 이에 제한되지는 않는 인간 CD33의 기능적 변이체 또는 단편을 포괄한다 (즉, 변이체 및 단편은 문맥이 상기 용어가 야생형 단백질만을 지칭하는 데 사용된다는 것을 나타내지 않는 한 포괄됨). CD33은 인간으로부터 단리될 수 있거나, 또는 재조합적으로 또는 합성 방법에 의해 생산될 수 있다.
본원에 사용된 용어 "항-CD33 항체" 또는 "CD33에 결합하는 항체"는 CD33에 결합하는, 예를 들어 특이적으로 결합하는 임의의 형태의 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 지칭한다. 상기 용어는 CD33에 결합하는, 예를 들어 특이적으로 결합하는 한 모노클로날 항체 (전장 모노클로날 항체 포함), 폴리클로날 항체, 및 생물학적으로 기능성인 항원-결합 단편을 포함한다. US 2013/0078241은 예시적인 항-CD33 항체 서열을 포함한 예시적인 CD33-결합 서열을 제공하고 이에 대해 본원에 참조로 포함된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 ADC에 사용된 항-CD33 항체는 내재화 항체 또는 내재화 항원-결합 단편이다. MuMy9-6ch (US 2013/0078241)는 예시적인 항-CD33 항체이다.
본원에 사용된 용어 "P-카드헤린" 또는 "PCAD"는 인간 PCAD의 임의의 천연 형태 (카드헤린 3, 유형 1 또는 CDH3으로도 공지됨)를 지칭한다. 상기 용어는 전장 인간 PCAD (예를 들어, 유니프롯 참조 서열: P22223; 서열식별번호: 74), 뿐만 아니라 세포 프로세싱으로부터 생성될 수 있는 임의의 형태의 인간 PCAD를 포괄한다. 상기 용어는 또한 인간 PCAD의 하나 이상의 생물학적 기능을 보유하는 스플라이스 변이체, 대립유전자 변이체 및 이소형을 포함하나 이에 제한되지는 않는, 인간 PCAD의 기능적 변이체 또는 단편을 포괄한다 (즉, 변이체 및 단편은 문맥이 상기 용어가 야생형 단백질만을 지칭하는 데 사용된다는 것을 나타내지 않는 한 포괄됨). PCAD는 인간으로부터 단리될 수 있거나, 또는 재조합적으로 또는 합성 방법에 의해 생산될 수 있다.
본원에 사용된 용어 "항-PCAD 항체" 또는 "PCAD에 결합하는 항체"는 PCAD에 결합하는, 예를 들어 특이적으로 결합하는 임의의 형태의 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 지칭한다. 상기 용어는 PCAD에 결합하는, 예를 들어 특이적으로 결합하는 한 모노클로날 항체 (전장 모노클로날 항체 포함), 폴리클로날 항체, 및 생물학적으로 기능성인 항원-결합 단편을 포함한다. WO 2016/203432는 예시적인 항-PCAD 항체 서열을 포함한 예시적인 PCAD-결합 서열을 제공하고, 그에 대해 본원에 참조로 포함된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 ADC에 사용된 항-PCAD 항체는 내재화 항체 또는 내재화 항원-결합 단편이다. NOV169N31Q (WO 2016/203432)는 예시적인 항-PCAD 항체이다.
본원에 사용된 용어 "인간 표피 성장 인자 수용체 2", "HER2" 또는 "HER2/NEU"는 인간 HER2의 임의의 천연 형태를 지칭한다. 상기 용어는 전장 인간 HER2 (예를 들어, 유니프롯 참조 서열: P04626; 서열식별번호: 75) 뿐만 아니라 세포 프로세싱으로부터 생성될 수 있는 임의의 형태의 인간 HER2를 포괄한다. 상기 용어는 또한 인간 HER2의 하나 이상의 생물학적 기능을 보유하는 스플라이스 변이체, 대립유전자 변이체 및 이소형을 포함하나 이에 제한되지는 않는 인간 HER2의 기능적 변이체 또는 단편을 포괄한다 (즉, 변이체 및 단편은 문맥이 상기 용어가 야생형 단백질만을 지칭하는 데 사용된다는 것을 나타내지 않는 한 포괄됨). HER2는 인간으로부터 단리될 수 있거나, 또는 재조합적으로 또는 합성 방법에 의해 생산될 수 있다.
본원에 사용된 용어 "항-HER2 항체" 또는 "HER2에 결합하는 항체"는 HER2에 결합하는, 예를 들어 특이적으로 결합하는 임의의 형태의 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 지칭한다. 상기 용어는 HER2에 결합하는, 예를 들어 특이적으로 결합하는 한 모노클로날 항체 (전장 모노클로날 항체 포함), 폴리클로날 항체, 및 생물학적으로 기능성인 항원-결합 단편을 포함한다. 미국 특허 번호 5,821,337 및 6,870,034는 예시적인 항-HER2 항체 서열을 포함한 예시적인 HER2-결합 서열에 대해 본원에 참조로 포함되고 제공한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 ADC에 사용된 항-HER2 항체는 내재화 항체 또는 내재화 항원-결합 단편이다. 트라스투주맙 (미국 특허 번호 5,821,337 및 6,870,034; 또한 문헌 [Molina et al. (2001) Cancer Res. 61(12):4744-9] 참조)은 예시적인 항-HER2 항체이다.
본원에 사용된 용어 "분화 클러스터 38" 또는 "CD38"은 인간 CD38의 임의의 천연 형태 (ADP-리보실 시클라제/시클릭 ADP-리보스 히드롤라제로도 공지됨)를 지칭한다. 상기 용어는 전장 인간 CD38 (예를 들어, 유니프롯 참조 서열: P28907; 서열식별번호: 76) 뿐만 아니라 세포 프로세싱으로부터 생성될 수 있는 임의의 형태의 인간 CD38을 포괄한다. 상기 용어는 또한 인간 CD38의 하나 이상의 생물학적 기능을 보유하는 스플라이스 변이체, 대립유전자 변이체 및 이소형을 포함하나 이에 제한되지는 않는 인간 CD38의 기능적 변이체 또는 단편을 포괄한다 (즉, 변이체 및 단편은 문맥이 상기 용어가 야생형 단백질만을 지칭하는 데 사용된다는 것을 나타내지 않는 한 포괄됨). CD38은 인간으로부터 단리될 수 있거나, 또는 재조합적으로 또는 합성 방법에 의해 생산될 수 있다.
본원에 사용된 용어 "분화 클러스터 48" 또는 "CD48"은 인간 CD48의 임의의 천연 형태 (B-림프구 활성화 마커 (BLAST-1) 또는 신호전달 림프구성 활성화 분자 2 (SLAMF2)로도 공지됨)를 지칭한다. 상기 용어는 전장 인간 CD48 (예를 들어, 유니프롯 참조 서열: P09326; 서열식별번호: 77) 뿐만 아니라 세포 프로세싱으로부터 생성될 수 있는 임의의 형태의 인간 CD48을 포괄한다. 상기 용어는 또한 인간 CD48의 하나 이상의 생물학적 기능을 보유하는 스플라이스 변이체, 대립유전자 변이체 및 이소형을 포함하나 이에 제한되지는 않는 인간 CD48의 기능적 변이체 또는 단편을 포괄한다 (즉, 변이체 및 단편은 문맥이 상기 용어가 야생형 단백질만을 지칭하는 데 사용된다는 것을 나타내지 않는 한 포괄됨). CD48은 인간으로부터 단리될 수 있거나, 또는 재조합적으로 또는 합성 방법에 의해 생산될 수 있다.
본원에 사용된 용어 "분화 클러스터 79b" 또는 "CD79b"는 임의의 천연 형태의 인간 CD79b (B-세포 항원 수용체 복합체-연관 단백질 베타 사슬로도 알려짐)를 의미한다. 상기 용어는 전장 인간 CD79b (예를 들어, 유니프롯 참조 서열: P40259; 서열식별번호: 78) 및 세포 처리로부터 생성될 수 있는 임의의 형태의 인간 CD79b를 포함한다. 상기 용어는 또한 인간 CD79b의 하나 이상의 생물학적 기능을 보유하는 스플라이스 변이체, 대립유전자 변이체, 및 이소형을 포함하고 이로 제한되지 않는 인간 CD79b의 기능적 변이체 또는 단편을 포함한다 (즉, 변이체 및 단편은 용어가 야생형 단백질만을 의미하기 위해 사용됨을 문맥이 나타내지 않으면 포함된다). CD79b는 인간으로부터 단리될 수 있거나, 또는 재조합 방식으로 또는 합성 방법에 의해 생성될 수 있다.
본원에 사용된 용어 "결합 특이성"은 상이한 항원 결정기에 비해 하나의 항원 결정기와 우선적으로 반응하는 개별 항체 또는 항원 결합 단편의 능력을 지칭한다. 특이성의 정도는 항체 또는 단편이 상이한 항원 결정기에 비해 하나의 항원 결정기에 우선적으로 결합하는 정도를 나타낸다. 또한, 본원에 사용된 용어 "특이적", "특이적으로 결합한다" 및 "특이적으로 결합하는"은 단백질 및 다른 생물제제의 불균질 집단에서 항체 또는 항원-결합 단편 (예를 들어, 항-HER2 항체)과 표적 항원 (예를 들어, HER2) 사이의 결합 반응을 지칭한다. 항체는 주어진 세트의 조건 하에 적절한 항원에 대한 결합을 비관련 항원 또는 항원 혼합물에 대한 결합과 비교함으로써 결합의 특이성에 대해 시험될 수 있다. 항체가 비관련 항원 또는 항원 혼합물보다 적어도 2, 5, 7, 10배 또는 그 초과로 더 큰 친화도로 적절한 항원에 결합하는 경우, 이는 특이적인 것으로 간주된다. "특이적 항체" 또는 "표적-특이적 항체"는 표적 항원 (예를 들어, EGFR, CD7, 또는 HER2)에만 결합하지만, 다른 항원에는 결합하지 않는 (또는 최소 결합을 나타내는) 것이다. 일부 실시양태에서, 표적 항원 (예를 들어, EGFR, CD7, 또는 HER2)에 특이적으로 결합하는 항체 또는 항원-결합 단편은 1x10-6 M 미만, 1x10-7 M 미만, 1x10-8 M 미만, 1x10-9 M 미만, 1x10-10 M 미만, 1x10-11 M, 1x10-12 M 미만 또는 1x10-13 M 미만의 KD를 갖는다. 일부 실시양태에서, KD는 1 pM 내지 500 pM이다. 일부 실시양태에서, KD는 500 pM 내지 1 μM, 1 μM 내지 100 nM 또는 100 mM 내지 10 nM이다.
본원에 사용된 용어 "친화도"는 단일 항원 부위에서 항체와 항원 사이의 상호작용의 강도를 지칭한다. 이론에 얽매이지는 않지만, 각각의 항원 결합 부위 내에서, 항체 "아암"의 가변 영역은 다수의 부위에서 약한 비-공유 힘을 통해 항원과 상호작용하고; 상호작용이 많을수록, 전형적으로 친화도가 더 강하다. 항체의 결합 친화도는 항원 결정기와 항체의 결합 부위 사이에서 작동하는 인력 및 척력의 합이다.
용어 "kon" 또는 "ka"는 항체/항원 복합체를 형성하기 위한 항원에 대한 항체의 회합에 대한 온-레이트(on-rate) 상수를 지칭한다. 레이트는 표준 검정, 예컨대 표면 플라즈몬 공명, 생물층 간섭법 또는 ELISA 검정을 사용하여 측정될 수 있다.
용어 "koff" 또는 "kd"는 항체/항원 복합체로부터의 항체의 해리에 대한 오프-레이트(off-rate) 상수를 지칭한다. 레이트는 표준 검정, 예컨대 표면 플라즈몬 공명, 생물층 간섭법 또는 ELISA 검정을 사용하여 측정될 수 있다.
용어 "KD"는 특정한 항체-항원 상호작용의 평형 해리 상수를 지칭한다. KD는 ka/kd에 의해 계산된다. 레이트는 표준 검정, 예컨대 표면 플라즈몬 공명, 생물층 간섭법 또는 ELISA 검정을 사용하여 측정될 수 있다.
용어 "에피토프"는 항체 (또는 항원-결합 단편)에 의해 인식되고 특이적으로 결합될 수 있는 항원의 부분을 지칭한다. 에피토프 결정기는 일반적으로 분자의 화학적 활성 표면 기, 예컨대 아미노산 또는 탄수화물 또는 당 측쇄로 이루어지고, 특이적 3차원 구조적 특징 뿐만 아니라 특이적 전하 특징을 가질 수 있다. 항원이 폴리펩티드인 경우, 에피토프는 인접 아미노산, 또는 폴리펩티드의 3차 폴딩에 의해 병치된 비인접 아미노산으로부터 형성될 수 있다. 에피토프는 "선형" 또는 "입체형태적"일 수 있다. 입체형태적 및 선형 에피토프는, 전자에 대한 결합은 변성 용매의 존재 하에 상실되지만 후자에 대한 결합은 그렇지 않다는 점에서 구별된다. 항체 (또는 항원-결합 단편)에 의해 결합된 에피토프는 관련 기술분야에 공지된 임의의 에피토프 맵핑 기술, 예컨대 항원-항체 복합체의 직접 가시화에 의한 에피토프 확인을 위한 X선 결정학, 뿐만 아니라 항원의 단편 또는 돌연변이된 변이에 대한 항체의 결합의 모니터링, 또는 항체 및 항원의 상이한 부분의 용매 접근성의 모니터링을 이용하여 확인될 수 있다. 항체 에피토프를 맵핑하는데 사용되는 예시적인 전략은 어레이-기반 올리고-펩티드 스캐닝, 제한된 단백질분해, 부위-지정 돌연변이유발, 고처리량 돌연변이유발 맵핑, 수소-중수소 교환 및 질량 분광측정법을 포함하나 이에 제한되지는 않는다 (예를 들어, 문헌 [Gershoni et al. (2007) BioDrugs 21:145-56]; 및 [Hager-Braun and Tomer (2005) Expert Rev Proteomics 2:745-56] 참조).
경쟁적 결합 및 에피토프 비닝을 또한 이용하여, 동일하거나 중복되는 에피토프를 공유하는 항체를 결정할 수 있다. 경쟁적 결합은 교차-차단 검정, 예컨대 문헌 ["Antibodies, A Laboratory Manual," Cold Spring Harbor Laboratory, Harlow and Lane (1st edition 1988, 2nd edition 2014)}에 기재된 검정을 사용하여 평가될 수 있다. 일부 실시양태에서, 경쟁적 결합은 시험 항체 또는 결합 단백질이 표적 항원, 예컨대 EGFR, CD7, 또는 HER2 (예를 들어, 표 3-5에서 확인된 것으로부터 선택되는 CDR 및/또는 가변 도메인을 포함하는 결합 단백질)에 대한 참조 항체 또는 결합 단백질의 결합을 교차-차단 검정에서 적어도 약 50% (예를 들어, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 99%, 99.5% 또는 그 초과, 또는 그 사이의 임의의 백분율) 감소시키는 경우에 확인되고/거나, 그 반대의 경우도 마찬가지이다. 일부 실시양태에서, 경쟁적 결합은 공유되거나 유사한 (예를 들어, 부분적으로 중첩되는) 에피토프에 기인할 수 있거나, 또는 항체 또는 결합 단백질이 인근의 에피토프에 결합하는 입체 장애에 기인할 수 있다 (예를 들어, 문헌 [Tzartos, Methods in Molecular Biology (Morris, ed. (1998) vol. 66, pp. 55-66)] 참조). 일부 실시양태에서, 경쟁적 결합은 유사한 에피토프를 공유하는 결합 단백질의 기를 분류하는데 사용될 수 있다. 예를 들어, 결합에 대해 경쟁하는 결합 단백질은 중복 또는 인근 에피토프를 갖는 결합 단백질의 군으로서 "비닝"될 수 있는 반면, 경쟁하지 않는 것은 중복 또는 인근 에피토프를 갖지 않는 결합 단백질의 별개의 군에 위치한다.
본원에 사용된 용어 "펩티드", "폴리펩티드" 및 "단백질"은 아미노산 잔기의 중합체를 지칭하기 위해 상호교환가능하게 사용된다. 상기 용어는 펩티드 결합에 의해 서로 연결된 2개 이상의 아미노산을 포함하는 아미노산 중합체, 1개 이상의 아미노산 잔기가 상응하는 자연 발생 아미노산의 인공 화학적 모방체인 아미노산 중합체, 뿐만 아니라 자연 발생 아미노산 중합체 및 비-자연 발생 아미노산 중합체를 포괄한다. 상기 용어는, 예를 들어 생물학적 활성 단편, 실질적으로 상동인 폴리펩티드, 올리고펩티드, 동종이량체, 이종이량체, 폴리펩티드의 변이체, 변형된 폴리펩티드, 유도체, 유사체, 융합 단백질을 특히 포함한다. 상기 용어는 또한 천연 펩티드, 재조합 펩티드, 합성 펩티드 또는 그의 조합을 포함한다. 달리 나타내지 않는 한, 특정한 폴리펩티드 서열은 또한 그의 보존적으로 변형된 변이체를 암시적으로 포괄한다.
"재조합" 단백질은 재조합 기술을 사용하여, 예를 들어 재조합 핵산의 발현을 통해 제조된 단백질 (예를 들어, 항체)을 지칭한다.
"단리된" 단백질은 그의 천연 상태에서 정상적으로 회합되는 물질의 적어도 일부가 동반되지 않은 단백질을 지칭한다. 예를 들어, 살아있는 유기체에 존재하는 자연 발생 폴리뉴클레오티드 또는 폴리펩티드는 단리되지 않지만, 살아있는 유기체에서 공존하는 물질의 일부 또는 전부로부터 분리된 동일한 폴리뉴클레오티드 또는 폴리펩티드는 단리된다. 정의는 관련 기술분야에 공지된 매우 다양한 유기체 및/또는 숙주 세포에서의 항체의 생산을 포함한다.
본원에 사용된 "단리된 항체"는 그의 공급원 환경의 성분 (중량 기준) 중 1종 이상 (예를 들어, 대다수)으로부터, 예를 들어 그의 생산에 사용된 하이브리도마 세포 배양물 또는 상이한 세포 배양물의 구성분으로부터 확인되고 분리된 항체이다. 일부 실시양태에서, 분리는 달리 목적하는 적용 (예를 들어, 치료 용도)을 위한 항체의 적합성을 방해할 수 있는 성분을 충분히 제거하도록 수행된다. 단리된 항체를 제조하는 방법은 관련 기술분야에 공지되어 있고, 단백질 A 크로마토그래피, 음이온 교환 크로마토그래피, 양이온 교환 크로마토그래피, 바이러스 보유 여과 및 한외여과를 비제한적으로 포함한다.
본원에 사용된 용어 "변이체"는 각각 참조 핵산 서열 또는 아미노산 서열과 상이하지만 참조 서열의 하나 이상의 생물학적 특성을 보유하는 핵산 서열 또는 아미노산 서열을 지칭한다. 변이체는 참조 서열과 관련하여 1개 이상의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입 (또는 코돈의 상응하는 치환, 결실 및/또는 삽입)을 함유할 수 있다. 핵산 변이체에서의 변화는 참조 핵산 서열에 의해 코딩되는 펩티드의 아미노산 서열을 변경시키지 않을 수 있거나, 또는 아미노산 치환, 부가, 결실, 융합 및/또는 말단절단을 유발할 수 있다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 핵산 변이체는 비변형된 핵산에 의해 코딩되는 것과 동일한 아미노산 서열을 코딩하거나 또는 비변형된 아미노산 서열의 하나 이상의 기능적 특성을 보유하는 변형된 아미노산 서열을 코딩한다. 펩티드 변이체의 서열에서의 변화가 전형적으로 제한되거나 또는 보존적이어서, 비변형된 펩티드 및 변이체의 서열이 전체적으로 밀접하게 유사하고, 많은 영역에서 동일하다. 일부 실시양태에서, 펩티드 변이체는 비변형된 펩티드 서열의 하나 이상의 기능적 특성을 보유한다. 변이체 및 비변형된 펩티드는 임의의 조합으로 하나 이상의 치환, 부가, 결실에 의해 아미노산 서열이 상이할 수 있다.
핵산 또는 펩티드의 변이체는 자연 발생 변이체 또는 자연 발생하는 것으로 공지되지 않은 변이체일 수 있다. 핵산 및 펩티드의 변이체는 돌연변이유발 기술에 의해, 직접 합성에 의해, 또는 관련 기술분야에 공지된 다른 기술에 의해 제조될 수 있다. 변이체는 참조 서열의 물리적 조작을 반드시 필요로 하지는 않는다. 서열이 참조 서열과 비교하여 상이한 핵산 또는 아미노산을 함유하는 한, 이는 그가 합성된 방법과는 상관없이 "변이체"로 간주된다. 일부 실시양태에서, 변이체는 참조 서열에 비해 높은 서열 동일성 (즉, 60% 핵산 또는 아미노산 서열 동일성 또는 그 초과)을 갖는다. 일부 실시양태에서, 펩티드 변이체는, 폴리펩티드가 참조 서열과 또는 참조 서열의 상응하는 절편 (예를 들어, 기능적 단편)에 대해 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 아미노산 서열 동일성을 갖는 한, 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖는 폴리펩티드, 예를 들어 참조 서열의 하나 이상의 기능을 또한 보유하는 변이체를 포괄한다. 일부 실시양태에서, 핵산 변이체는, 폴리뉴클레오티드가 참조 서열과 또는 참조 서열의 상응하는 절편 (예를 들어, 기능적 단편)에 대해 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 핵산 서열 동일성을 갖는 한, 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖는 폴리뉴클레오티드를 포괄한다.
용어 "보존적으로 변형된 변이체"는 아미노산 및 핵산 서열 둘 다에 적용된다. 핵산 서열의 경우, 보존적으로 변형된 변이체는 동일하거나 본질적으로 동일한 아미노산 서열을 코딩하는 핵산을 지칭한다. 유전자 코드의 축중성으로 인해 다수의 기능적으로 동일한 핵산이 임의의 주어진 단백질을 코딩한다. 예를 들어, 코돈 GCA, GCC, GCG 및 GCU는 모두 알라닌 아미노산을 코딩한다. 따라서, 알라닌이 코돈에 의해 특정되는 모든 위치에서, 코돈은 코딩되는 폴리펩티드를 변경하지 않으면서 기재된 임의의 상응하는 코돈으로 변경될 수 있다. 이러한 핵산 변이는 보존적으로 변형된 변이의 일종인 "침묵 변이"이다. 또한, 본원에서 폴리펩티드를 코딩하는 모든 핵산 서열은 핵산의 모든 가능한 침묵 변이를 기재한다. 관련 기술분야의 통상의 기술자는 핵산 내의 각각의 코돈 (통상적으로 메티오닌에 대한 유일한 코돈인 AUG 및 통상적으로 트립토판에 대한 유일한 코돈인 TGG 제외)이 기능적으로 동일한 분자를 생성하도록 변형될 수 있음을 인식할 것이다. 따라서, 폴리펩티드를 코딩하는 핵산의 각각의 침묵 변이는 각각의 기재된 서열에 내포된다. 폴리펩티드 서열의 경우, 보존적으로 변형된 변이체는 아미노산을 화학적으로 유사한 아미노산으로 치환시키는, 폴리펩티드 서열에 대한 개별 치환, 결실 또는 부가를 포함한다. 기능적으로 유사한 아미노산을 제공하는 보존적 치환은 관련 기술분야에 널리 공지되어 있다.
본원에 사용된 용어 "보존적 서열 변형"은, 예를 들어 아미노산 서열을 함유하는 항체 또는 항원-결합 단편의 결합 특징에 유의하게 영향을 미치거나 이를 변경시키지 않는 아미노산 변형을 지칭한다. 이러한 보존적 변형은 아미노산 치환, 부가 및 결실을 포함한다. 변형은 관련 기술분야에 공지된 표준 기술, 예컨대 예를 들어 부위-지정 돌연변이유발 및 PCR-매개 돌연변이유발에 의해 항체 또는 항원-결합 단편 내로 도입될 수 있다. 보존적 아미노산 치환은 아미노산 잔기가 유사한 측쇄를 갖는 아미노산 잔기로 대체된다. 유사한 측쇄를 갖는 아미노산 잔기의 패밀리는 관련 기술분야에 정의되어 있다. 이들 패밀리는 염기성 측쇄 (예를 들어, 리신, 아르기닌, 히스티딘), 산성 측쇄 (예를 들어, 아스파르트산, 글루탐산), 비하전 극성 측쇄 (예를 들어, 글리신, 아스파라긴, 글루타민, 세린, 트레오닌, 티로신, 시스테인, 트립토판), 비극성 측쇄 (예를 들어, 알라닌, 발린, 류신, 이소류신, 프롤린, 페닐알라닌, 메티오닌), 베타-분지형 측쇄 (예를 들어, 트레오닌, 발린, 이소류신) 및 방향족 측쇄 (예를 들어, 티로신, 페닐알라닌, 트립토판, 히스티딘)를 갖는 아미노산을 포함한다. 따라서, 일부 실시양태에서, 항체 내의 1개 이상의 아미노산 잔기는 동일한 측쇄 패밀리로부터의 다른 아미노산 잔기로 대체될 수 있고, 변경된 항체는 본원에 기재된 기능적 검정을 사용하여 시험될 수 있다.
본원에 사용된 용어 "상동" 또는 "동일성"은 2개의 중합체 분자, 예를 들어 2개의 핵산 분자, 예컨대 2개의 DNA 분자 또는 2개의 RNA 분자 또는 2개의 폴리펩티드 분자 사이의 서브유닛 서열 동일성을 지칭한다. 2개의 분자 둘 다 내에서의 서브유닛 위치가 동일한 단량체 서브유닛에 의해 점유되는 경우; 예를 들어, 각각 2개의 DNA 분자 내에서의 위치가 아데닌에 의해 점유되는 경우, 이들은 그 위치에서 상동이거나 동일하다. 2개의 서열 사이의 상동성은 매칭 또는 상동 위치의 수의 직접 함수이다. 예를 들어, 2개의 서열 내 위치의 절반 (예를 들어, 10개 서브유닛 길이의 중합체 내 5개의 위치)이 매칭되거나 상동이면, 2개의 서열은 50% 상동이고; 위치의 90% (예를 들어, 10개 중 9개)가 매칭되거나 상동이면, 2개의 서열은 90% 상동이다.
"서열 동일성"의 백분율은 2개의 최적으로 정렬된 서열을 비교 윈도우 상에서 비교함으로써 결정될 수 있으며, 여기서 비교 윈도우 내의 아미노산 서열의 단편은 2개의 서열의 최적 정렬을 위해 참조 서열 (이는 부가 또는 결실을 포함하지 않음)과 비교하여 부가 또는 결실 (예를 들어, 갭 또는 오버행)을 포함할 수 있다. 백분율은 동일한 아미노산 잔기가 서열 둘 다에서 발생하는 위치의 수를 결정하여 매칭되는 위치의 수를 산출하고, 매칭되는 위치의 수를 비교 윈도우 내의 위치의 총 수로 나누고, 결과에 100을 곱하여 서열 동일성의 백분율을 산출함으로써 계산될 수 있다. 산출값은 질의 서열에 대한 대상 서열의 퍼센트 동일성이다. 2개의 서열 간의 퍼센트 동일성은 두 서열의 최적의 정렬을 위해 도입될 필요가 있는 갭의 수 및 각각의 갭의 길이를 고려하여 서열들에 의해 공유되는 동일한 위치의 수의 함수이다. 일반적으로, 표적 항원 (예컨대, EGFR, CD7, 또는 HER2)의 변이체 및 항체 가변 도메인의 변이체 (개별 변이체 CDR 포함)를 포함한 본원에 개시된 단백질과 그의 변이체 사이의 아미노산 동일성 또는 상동성은 본원에 도시된 서열에 대해 적어도 80%, 예를 들어 적어도 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 거의 100% 또는 100%의 동일성 또는 상동성이다.
서열의 비교 및 두 서열 사이의 퍼센트 동일성의 측정은 수학적 알고리즘을 사용하여 달성될 수 있다. 일부 실시양태에서, 2개의 아미노산 서열 사이의 퍼센트 동일성은 블로섬(Blossum) 62 매트릭스 또는 PAM250 매트릭스 및 갭 가중치 16, 14, 12, 10, 8, 6 또는 4 및 길이 가중치 1, 2, 3, 4, 5 또는 6을 사용하여, GCG 소프트웨어 패키지 중의 GAP 프로그램 내로 혼입된 니들만(Needleman) 및 분쉬(Wunsch) ((1970) J Mol Biol. 48:444-53) 알고리즘을 사용하여 결정된다. 일부 실시양태에서, 2개의 뉴클레오티드 서열 사이의 퍼센트 동일성은 NWSgapdna.CMP 매트릭스 및 갭 가중치 40, 50, 60, 70 또는 80의 및 길이 가중치 1, 2, 3, 4, 5 또는 6을 사용하는 GCG 소프트웨어 패키지 중의 GAP 프로그램을 사용하여 결정된다. 예시적인 파라미터 세트는 갭 페널티 12, 갭 연장 페널티 4 및 프레임시프트 갭 페널티 5를 갖는 블로섬 62 스코어링 매트릭스이다. 2개의 아미노산 또는 뉴클레오티드 서열 사이의 퍼센트 동일성은 또한 PAM120 가중치 잔기 표, 갭 길이 페널티 12 및 갭 페널티 4를 사용하여, ALIGN 프로그램 (버전 2.0) 내로 혼입된 마이어스(Meyers) 및 밀러(Miller) ((1989) CABIOS 4:11-17)의 알고리즘을 사용하여 결정될 수 있다.
용어 "작용제"는 화학적 화합물, 화학적 화합물의 혼합물, 생물학적 거대분자, 생물학적 물질로부터 생성된 추출물 또는 그의 2종 이상의 조합을 지칭하기 위해 본원에 사용된다. 용어 "치료제" 또는 "약물"은 생물학적 과정을 조정할 수 있고/거나 생물학적 활성을 갖는 작용제를 지칭한다. 본원에 기재된 바와 같은 Bcl-xL 억제제 및 그를 포함하는 ADC는 예시적인 치료제이다.
용어 "화학요법제" 또는 "항암제"는 (작용 메카니즘에 상관없이) 암을 치료하는 데 효과적인 모든 작용제를 지칭하기 위해 본원에 사용된다. 전이 또는 혈관신생의 억제는 빈번하게 화학요법제의 특성이다. 화학요법제는 항체, 생물학적 분자 및 소분자를 포함하고, 본원에 기재된 바와 같은 Bcl-xL 억제제 및 그를 포함하는 ADC를 포괄한다. 화학요법제는 세포독성제 또는 세포증식억제제일 수 있다. 용어 "세포증식억제제"는 세포 성장 및/또는 세포의 증식을 억제하거나 저해하는 작용제를 지칭한다. 용어 "세포독성제"는 주로 세포의 발현 활성 및/또는 기능을 방해함으로써 세포 사멸을 유발하는 물질을 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "B-세포 림프종-특대형" 또는 "Bcl-xL"은 Bcl-2 단백질 패밀리의 항아폽토시스 구성원인 인간 Bcl-xL의 임의의 천연 형태를 지칭한다. 상기 용어는 전장 인간 Bcl-xL (예를 들어, 유니프롯(UniProt) 참조 서열: Q07817-1; 서열식별번호: 71), 뿐만 아니라 세포 프로세싱으로부터 생성될 수 있는 임의의 형태의 인간 Bcl-xL을 포괄한다. 상기 용어는 또한 인간 Bcl-xL의 하나 이상의 생물학적 기능을 보유하는 스플라이스 변이체, 대립유전자 변이체 및 이소형을 포함하나 이로 제한되지는 않는 인간 Bcl-xL의 기능적 변이체 또는 단편을 포괄한다 (즉, 변이체 및 단편은 상기 용어가 야생형 단백질만을 지칭하기 위해 사용된다는 것을 문맥상 달리 나타내지 않는 한 포함된다). Bcl-xL은 인간으로부터 단리될 수 있거나, 또는 재조합적으로 또는 합성 방법에 의해 생성될 수 있다.
본원에 사용된 용어 "억제하다" 또는 "억제" 또는 "억제하는"은 생물학적 활성 또는 과정을 측정가능한 양만큼 감소시키는 것을 의미하고, 완전한 방지 또는 억제를 포함할 수 있으나 이를 요구하지는 하지 않는다. 일부 실시양태에서, "억제"는 Bcl-xL 및/또는 1종 이상의 상류 조정제 또는 그의 하류 표적의 발현 및/또는 활성을 감소시키는 것을 의미한다.
본원에 사용된 용어 "Bcl-xL 억제제"는 Bcl-xL 및/또는 그의 1종 이상의 상류 조정제 또는 하류 표적의 발현 및/또는 활성을 감소시킬 수 있는 작용제를 지칭한다. 예시적인 Bcl-xL 조정제 (예시적인 Bcl-xL의 억제제 포함)는 WO2010/080503, WO2010/080478, WO2013/055897, WO2013/055895, WO2016/094509, WO2016/094517, WO2016/094505, 문헌 [Tao et al., ACS Medicinal Chemistry Letters (2014), 5(10), 1088-109] 및 [Wang et al., ACS Medicinal Chemistry Letters (2020), 11(10), 1829-1836]에 기재되어 있으며, 이들 각각은 개시된 ADC에 약물 모이어티로서 포함될 수 있는 예시적인 Bcl-xL 억제제를 포함한 예시적인 Bcl-xL 조정제로서 본원에 참조로 포함된다.
본원에 사용된 "Bcl-xL 억제제 약물 모이어티", "Bcl-xL 억제제" 등은 본래의 화합물과 비교하여 본질적으로 동일하거나, 유사하거나 또는 증진된 생물학적 기능 또는 활성을 보유하는 Bcl-xL 억제제 화합물 또는 ADC로의 부착을 위해 변형된 화합물의 구조를 제공하는 ADC 또는 조성물의 성분을 지칭한다. 일부 실시양태에서, Bcl-xL 억제제 약물 모이어티는 화학식 (1)의 ADC 내의 성분 (D)이다.
본원에 사용된 용어 "암"은 암-유발 세포의 전형적인 특징, 예컨대 비제어된 증식, 불멸성, 전이 잠재력, 빠른 성장 및 증식 속도 및/또는 특정 형태학적 특색을 보유하는 세포의 존재를 지칭한다. 종종, 암 세포는 종양 또는 덩어리의 형태일 수 있지만, 이러한 세포는 대상체 내에 단독으로 존재할 수 있거나, 또는 독립적 세포, 예컨대 백혈병 또는 림프종 세포로서 혈류에서 순환할 수 있다. 용어 "암"은 혈액암, 고형 종양, 육종, 암종, 및 다른 고형 및 비-고형 종양 암을 포함한 모든 유형의 암 및 암 전이를 포함한다. 혈액암은 B-세포 악성종양, 혈액의 암 (백혈병), 형질 세포의 암 (골수종, 예를 들어 다발성 골수종), 또는 림프절의 암 (림프종)을 포함할 수 있다. 예시적인 B-세포 악성종양은 만성 림프구성 백혈병 (CLL), 여포성 림프종, 외투 세포 림프종 및 미만성 대 B-세포 림프종을 포함한다. 백혈병은 급성 림프모구성 백혈병 (ALL), 급성 골수성 백혈병 (AML), 만성 림프구성 백혈병 (CLL), 만성 골수 백혈병 (CML), 만성 골수단핵구성 백혈병 (CMML), 급성 단핵구성 백혈병 (AMoL) 등을 포함할 수 있다. 용어 "급성 림프모구성 백혈병" 및 "급성 림프구성 백혈병"은 ALL을 기재하기 위해 상호교환가능하게 사용될 수 있다. 림프종은 호지킨 림프종, 비-호지킨 림프종 등을 포함할 수 있다. 다른 혈액암은 골수이형성증 증후군 (MDS)을 포함할 수 있다. 고형 종양은 암종, 예컨대 선암종, 예를 들어 유방암, 췌장암, 전립선암, 결장 또는 결장직장암, 폐암, 위암, 자궁경부암, 자궁내막암, 난소암, 담관암종, 신경교종, 흑색종 등을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 암은 유방암, 다발성 골수종, 형질 세포 골수종, 백혈병, 림프종, 육종, 위암, 급성 골수성 백혈병, 방광암, 뇌암, 골수암, 자궁경부암, 만성 림프구성 백혈병, 결장직장암, 식도암, 간세포성암, 급성 림프모구성 백혈병을 포함한 림프모구성 백혈병, 여포성 림프종, T-세포 또는 B-세포 기원의 림프성 악성종양, 흑색종, 골수 백혈병, 골수종, 구강암, 난소암, 비소세포 폐암, 전립선암, 소세포 폐암, 비장암 또는 두경부암이다. 일부 실시양태에서, 암은 림프종 또는 위암이다.
본원에 사용된 용어 "종양"은 전암성 병변을 포함한, 양성 또는 악성의 과도한 세포 성장 또는 증식으로부터 발생하는 임의의 조직 덩어리를 지칭한다. 일부 실시양태에서, 종양은 유방암, 위암, 방광암, 뇌암, 자궁경부암, 결장직장암, 식도암, 간세포성암, 흑색종, 구강암, 난소암, 비소세포 폐암, 전립선암, 소세포 폐암 또는 비장암이다. 일부 실시양태에서, 종양은 위암이다.
용어 "종양 세포" 및 "암 세포"는 본원에서 상호교환가능하게 사용될 수 있고, 비-종양발생 세포 및 암 줄기 세포 둘 다를 포함한, 종양 또는 암으로부터 유래된 개별 세포 또는 전체 세포 집단을 지칭한다. 용어 "종양 세포" 및 "암 세포"는 재생 및 분화 능력이 결여되어 이들 세포를 암 줄기 세포와 구별하는 세포만을 지칭하는 경우에 용어 "비-종양발생"에 의해 변형될 것이다.
본원에 사용된 용어 "표적-음성", "표적 항원-음성" 또는 "항원-음성"은 세포 또는 조직에 의한 표적 항원 발현의 부재를 지칭한다. 용어 "표적-양성", "표적 항원-양성" 또는 "항원-양성"은 표적 항원 발현의 존재를 지칭한다. 예를 들어, 표적 항원을 발현하지 않는 세포 또는 세포주는 표적-음성으로서 기재될 수 있는 반면, 표적 항원을 발현하는 세포 또는 세포주는 표적-양성으로서 기재될 수 있다.
용어 "대상체" 및 "환자"는 치료를 필요로 하는 임의의 인간 또는 비-인간 동물을 지칭하기 위해 본원에서 상호교환가능하게 사용된다. 비-인간 동물은 모든 척추동물 (예를 들어, 포유동물 및 비-포유동물), 예컨대 임의의 포유동물을 포함한다. 포유동물의 비제한적 예는 인간, 침팬지, 유인원, 원숭이, 소, 말, 양, 염소, 돼지, 토끼, 개, 고양이, 래트, 마우스 및 기니 피그를 포함한다. 비-포유동물의 비제한적 예는 조류 및 어류를 포함한다. 일부 실시양태에서, 대상체는 인간이다.
본원에 사용된 용어 "치료를 필요로 하는 대상체"는 치료 (예를 들어, 본원에 기재된 예시적인 ADC 화합물 중 임의의 1종 이상을 사용한 치료)로부터 생물학적으로, 의학적으로 또는 삶의 질에 있어서 이익을 얻을 대상체를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "치료하다", "치료하는" 또는 "치료"는 질환, 장애 또는 상태의 임의의 결과의 임의의 개선, 예컨대 연장된 생존, 보다 적은 이환율 및/또는 대안적 치료 양식으로 인한 부작용의 감소를 지칭한다. 일부 실시양태에서, 치료는 질환, 장애 또는 상태를 지연 또는 개선시키는 것 (즉, 질환 또는 그의 임상 증상 중 적어도 1종의 발생을 둔화 또는 정지 또는 감소시키는 것)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 치료는 환자에 의해 식별가능하지 않을 수 있는 것들을 포함한 질환, 장애 또는 상태의 적어도 1종의 물리적 파라미터를 지연, 완화 또는 개선시키는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 치료는 질환, 장애 또는 상태를 물리적으로 (예를 들어, 식별가능한 증상의 안정화), 생리학적으로 (예를 들어, 물리적 파라미터의 안정화), 또는 둘 다로 조정하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 치료는 본원에 열거된 치료 이익을 얻기 위해 대상체, 예를 들어 환자에게 기재된 ADC 화합물 또는 조성물을 투여하는 것을 포함한다. 치료는 질환, 장애 또는 상태 (예를 들어, 암), 질환, 장애 또는 상태 (예를 들어, 암)의 증상, 또는 질환, 장애 또는 상태 (예를 들어, 암)에 대한 소인을 치유, 치료, 완화(alleviate), 지연, 경감, 변경, 해소, 호전, 완화(palliate), 개선시키거나 또는 그에 영향을 미치는 것일 수 있다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 조성물은 질환, 장애 또는 상태를 갖는 대상체를 치료하는 것 이외에도 또한 질환, 장애 또는 상태가 발생할 가능성을 예방하거나 감소시키기 위해 예방적으로 제공될 수 있다.
본원에 사용된 용어 질환, 장애 또는 상태의 "예방하다", "예방하는" 또는 "예방"은 질환, 장애 또는 상태의 예방적 치료; 또는 질환, 장애 또는 상태의 발병 또는 진행의 지연을 지칭한다.
본원에 사용된 "제약 조성물"은, 대상체에게 투여하기에 적합한 적어도 1종의 다른 (및 임의로 1종 초과의 다른) 성분, 예컨대 제약상 허용되는 담체, 안정화제, 희석제, 분산제, 현탁화제, 증점제 및/또는 부형제에 추가로, 조성물, 예를 들어 ADC 화합물 또는 조성물의 제제를 지칭한다. 본원에 제공된 제약 조성물은 투여를 허용하고 후속적으로 활성 성분(들)의 의도된 생물학적 활성을 제공하고/거나 치료 효과를 달성하도록 하는 형태이다. 본원에 제공된 제약 조성물은 바람직하게는 제제가 투여될 대상체에게 허용되지 않는 독성인 추가의 성분을 함유하지 않는다.
본원에 사용된 용어 "제약상 허용되는 담체" 및 "생리학상 허용되는 담체"는 상호교환가능하게 사용될 수 있으며, 대상체에게 유의한 자극을 유발하지 않고 투여된 ADC 화합물 또는 조성물 및/또는 조성물 중 임의의 추가의 치료제의 생물학적 활성 및 특성을 제거하지 않는 담체 또는 희석제를 지칭한다. 제약상 허용되는 담체는 조성물을 증진 또는 안정화시킬 수 있거나 또는 조성물의 제조를 용이하게 하는데 사용될 수 있다. 제약상 허용되는 담체는 통상의 기술자에게 공지된 바와 같은 용매, 분산 매질, 코팅, 계면활성제, 항산화제, 보존제 (예를 들어, 항박테리아제, 항진균제), 등장화제, 흡수 지연제, 염, 보존제, 약물 안정화제, 결합제, 부형제, 붕해제, 윤활제, 감미제, 향미제, 염료 등 및 그의 조합을 포함할 수 있다 (예를 들어, 문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Ed. Mack Printing Company, 1990, pp. 1289- 1329] 참조). 통상적인 어떠한 담체도 활성 성분과 비상용성인 경우를 제외하고는, 치료 또는 제약 조성물에서의 그의 사용이 고려된다. 담체는 대상체에서 유해 부작용을 최소화하고/거나 활성 성분(들)의 분해를 최소화하도록 선택될 수 있다. 아주반트는 또한 임의의 이들 제제에 포함될 수 있다.
본원에 사용된 용어 "부형제"는 활성 성분의 투여를 추가로 용이하게 하기 위해 제약 조성물에 첨가되는 불활성 물질을 지칭한다. 비경구 투여를 위한 제제는, 예를 들어 부형제, 예컨대 멸균수 또는 염수, 폴리알킬렌 글리콜, 예컨대 폴리에틸렌 글리콜, 식물성 오일 또는 수소화 나프탈렌을 함유할 수 있다. 다른 예시적인 부형제는 중탄산칼슘, 인산칼슘, 다양한 당 및 전분 유형, 셀룰로스 유도체, 젤라틴, 에틸렌-비닐 아세테이트 공중합체 입자, 및 예를 들어 폴리소르베이트 20을 비롯한 계면활성제를 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
본원에 사용된 용어 "제약상 허용되는 염"은 본 발명의 화합물의 생물학적 활성 및 특성을 제거하지 않고, 그가 투여되는 대상체에게 유의한 자극을 유발하지 않는 염을 지칭한다. 이러한 염의 예는 (a) 무기 산, 예를 들어 염산, 브로민화수소산, 황산, 인산, 질산 등으로 형성된 산 부가염; 및 유기 산, 예를 들어 아세트산, 옥살산, 타르타르산, 숙신산, 말레산, 푸마르산, 글루콘산, 시트르산, 말산, 아스코르브산, 벤조산, 탄닌산, 팔미트산, 알긴산, 폴리글루탐산, 나프탈렌술폰산, 메탄술폰산, p-톨루엔술폰산, 나프탈렌디술폰산, 폴리갈락투론산 등으로 형성된 염; 및 (b) 원소 음이온, 예컨대 염소, 브로민 및 아이오딘으로부터 형성된 염을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 예를 들어, 문헌 [Haynes et al., "Commentary: Occurrence of Pharmaceutically Acceptable Anions and Cations in the Cambridge Structural Database," J. Pharmaceutical Sciences, vol. 94, no. 10 (2005)], 및 [Berge et al., "Pharmaceutical Salts," J. Pharmaceutical Sciences, vol. 66, no. 1 (1977)]을 참조하며, 이들은 본원에 참조로 포함된다.
일부 실시양태에서, 그의 전자 전하에 따라, 본원에 기재된 항체-약물 접합체 (ADC), 링커, 페이로드 및 링커-페이로드는 1가 음이온성 반대이온 M1 -을 함유할 수 있다. 임의의 적합한 음이온성 반대이온이 사용될 수 있다. 특정 실시양태에서, 1가 음이온성 반대이온은 제약상 허용되는 1가 음이온성 반대이온이다. 특정 실시양태에서, 1가 음이온성 반대이온 M1 -은 브로마이드, 클로라이드, 아이오다이드, 아세테이트, 트리플루오로아세테이트, 벤조에이트, 메실레이트, 토실레이트, 트리플레이트, 포르메이트 등으로부터 선택될 수 있다. 일부 실시양태에서, 1가 음이온성 반대이온 M1 -은 트리플루오로아세테이트 또는 포르메이트이다.
본원에 사용된 용어 "치료 유효량" 또는 "치료 유효 용량"은 목적하는 치료 결과 (즉, 효소 또는 단백질 활성의 감소 또는 억제, 증상의 개선, 증상 또는 상태의 완화, 질환 진행의 지연, 종양 크기의 감소, 종양 성장의 억제, 전이의 예방)를 가져오는 본원에 기재된 화합물, 예를 들어 본원에 기재된 ADC 화합물 또는 조성물의 양을 지칭한다. 일부 실시양태에서, 치료 유효량은 바람직하지 않은 부작용을 유도하거나 야기하지 않는다. 일부 실시양태에서, 치료 유효량은 부작용을 유도하거나 야기하지만, 단지 환자의 상태의 관점에서 치료 임상의에 의해 허용되는 부작용만을 유도하거나 야기한다. 일부 실시양태에서, 치료 유효량은 암 세포의 성장 또는 확산, 종양의 크기 또는 수, 및/또는 암의 수준, 병기, 진행 및/또는 중증도의 다른 척도의 검출가능한 사멸, 감소 및/또는 억제에 효과적이다. 상기 용어는 또한 표적 세포에서 특정한 반응, 예를 들어 세포 성장의 감소, 둔화 또는 억제를 유도할 용량에 적용된다. 치료 유효량은 먼저 저용량을 투여한 다음, 목적하는 효과가 달성될 때까지 그 용량을 점증적으로 증가시킴으로써 결정될 수 있다. 치료 유효량은 또한 의도된 적용 (시험관내 또는 생체내), 또는 치료될 대상체 및 질환 상태, 예를 들어 대상체의 체중 및 연령, 질환 상태의 중증도, 투여 방식 등에 따라 달라질 수 있으며, 이는 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 용이하게 결정될 수 있다. 구체적 양은, 예를 들어 특정한 제약 조성물, 대상체 및 그의 연령 및 기존 건강 상태 또는 건강 상태에 대한 위험, 후속될 투여 요법, 질환의 중증도, 다른 작용제와 조합되어 투여되는지 여부, 투여 시기, 투여되는 조직, 및 그가 운반되는 물리적 전달 시스템에 따라 달라질 수 있다. 암의 경우, ADC의 치료 유효량은 암 세포의 수를 감소시키고/거나, 종양 크기를 감소시키고/거나, 종양 전이를 억제 (예를 들어, 둔화 또는 정지)하고/거나, 종양 성장을 억제 (예를 들어, 둔화 또는 정지)하고/거나, 1종 이상의 증상을 완화시킬 수 있다.
본원에 사용된 용어 "예방 유효량" 또는 "예방 유효 용량"은 목적하는 예방 결과를 달성하는데 필요한 투여량 및 기간 동안 효과적인 본원에 개시된 화합물, 예를 들어 본원에 기재된 ADC 화합물 또는 조성물의 양을 지칭한다. 전형적으로, 예방 용량은 질환 전에 또는 질환의 초기 단계에서 대상체에서 사용되기 때문에, 예방 유효량은 치료 유효량 미만일 것이다. 일부 실시양태에서, 예방 유효량은 암과 연관된 증상을 포함한 질환 증상의 발병을 예방할 수 있다.
용어 "p" 또는 "약물 로딩" 또는 "약물:항체 비" 또는 "약물-대-항체 비" 또는 "DAR"은 화학식 (1)의 ADC에서 항체 또는 항원-결합 단편당 약물 모이어티의 수, 즉 약물 로딩, 또는 항체 또는 항원-결합 단편 (Ab)당 -L-D 모이어티의 수를 지칭한다. Bcl-xL 억제제 약물 모이어티를 포함하는 ADC에서, "p"는 항체 또는 항원-결합 단편에 연결된 Bcl-xL 억제제 화합물의 수를 지칭한다. 예를 들어, 2개의 Bcl-xL 억제제 화합물이 항체 또는 항원-결합 단편에 연결되면, p = 2이다. 화학식 (1)의 ADC의 다중 카피를 포함하는 조성물에서, "평균 p"는 항체 또는 항원-결합 단편당 -L-D 모이어티의 평균 수를 지칭하며, 또한 "평균 약물 로딩"으로 지칭된다.
항체-약물 접합체
본 개시내용의 항체-약물 접합체 (ADC) 화합물은 항암 활성을 갖는 것을 포함한다. 특히, ADC 화합물은 약물 모이어티 (예를 들어, Bcl-xL 억제제)에 접합된 (즉, 링커에 의해 공유 부착된) 항체 또는 항원-결합 단편을 포함하고, 여기서 약물 모이어티는 항체 또는 항원-결합 단편에 접합되지 않은 경우에 세포독성 또는 세포증식억제 효과를 갖는다. 일부 실시양태에서, 약물 모이어티는 항체 또는 항원-결합 단편에 접합되지 않은 경우에 Bcl-xL 및/또는 1종 이상의 상류 조정제 또는 그의 하류 표적의 발현 및/또는 활성을 감소시킬 수 있다. 이론에 얽매이지는 않지만, Bcl-xL 발현 및/또는 활성을 표적화함으로써, 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 ADC는 강력한 항암제를 제공할 수 있다. 또한, 이론에 얽매이지는 않지만, 종양 세포 또는 암에서의 발현과 연관된 항원에 결합하는 항체에 약물 모이어티를 접합시킴으로써, ADC는 단독으로 투여되는 경우에 약물 모이어티와 비교하여 개선된 활성, 보다 양호한 세포독성 특이성 및/또는 감소된 오프-타겟 사멸을 제공할 수 있다.
따라서, 일부 실시양태에서, ADC의 성분은 (i) 단리된 항체 및 약물 모이어티에 의해 나타나는 1종 이상의 치료 특성을 보유하고/거나, (ii) 항체 또는 항원-결합 단편의 특이적 결합 특성을 유지하고/거나; (iii) 약물 로딩 및 약물-대-항체 비를 최적화하고/거나; (iv) 항체 또는 항원-결합 단편에의 안정한 부착을 통한 약물 모이어티의 전달, 예를 들어 세포내 전달을 가능하게 하고/거나; (v) 표적 부위로의 수송 또는 전달까지 무손상 접합체로서의 ADC 안정성을 보유하고/거나; (vi) 투여 전 또는 후에 ADC의 응집을 최소화하고/거나; (vii) 절단 또는 세포 환경에서의 다른 방출 메카니즘 후에 약물 모이어티의 치료 효과, 예를 들어 세포독성 효과를 가능하게 하고/거나; (viii) 단리된 항체 및 약물 모이어티의 것에 필적하거나 그보다 우수한 생체내 항암 치료 효능을 나타내고/거나; (ix) 약물 모이어티에 의한 오프-타겟 사멸을 최소화하고/거나; (x) 바람직한 약동학적 및 약역학적 특성, 제제화가능성 및 독성학적/면역학적 프로파일을 나타내도록 선택된다. 각각의 이들 특성은 치료 용도를 위한 개선된 ADC를 제공할 수 있다 (문헌 [Ab et al. (2015) Mol Cancer Ther. 14:1605-13]).
본 개시내용의 ADC 화합물은 유효 용량의 세포독성제 또는 세포증식억제제를 암 세포 또는 종양 조직에 선택적으로 전달할 수 있다. 일부 실시양태에서, ADC의 세포독성 및/또는 세포증식억제 활성은 세포에서의 표적 항원 발현에 의존한다. 일부 실시양태에서, 개시된 ADC는 오프-타겟 사멸을 최소화하면서 표적 항원을 발현하는 암 세포를 사멸시키는데 특히 효과적이다. 일부 실시양태에서, 개시된 ADC는 표적 항원을 발현하지 않는 암 세포에 대해 세포독성 및/또는 세포증식억제 효과를 나타내지 않는다.
예시적인 BCMA-발현 암은 다발성 골수종을 포함하나 이에 제한되지는 않는다 (문헌 [Cho et al. (2018) Front Immunol. 9:1821]).
예시적인 CD33-발현 암은 결장직장암, 췌장암, 림프종 및 백혈병 (예를 들어, 급성 골수성 백혈병)을 포함하나 이에 제한되지는 않는다 (문헌 [Human Protein Atlas; Walter (2014) Expert Opin Ther Targets 18(7):715-8]).
예시적인 PCAD-발현 암은 유방암, 위암, 자궁내막암, 난소암, 췌장암, 방광암, 전립선암 및 흑색종을 포함하나 이에 제한되지는 않는다 (문헌 [Vieira and Paredes (2015) Mol Cancer 14:178]).
예시적인 HER2-발현 암은 유방암, 위암, 방광암, 요로상피 세포 암종, 식도암, 폐암 (예를 들어, 폐 선암종), 자궁암 (예를 들어, 자궁 장액성 자궁내막 암종), 타액관 암종, 자궁경부암, 자궁내막암 및 난소암을 포함하나 이에 제한되지는 않는다 (문헌 [English et al. (2013) Mol Diagn Ther. 17:85-99]).
특정 측면에서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편 (Ab), Bcl-xL 억제제 약물 모이어티 (D), 및 Ab를 D에 공유 부착시키는 링커 모이어티 (L)를 포함하는 ADC 화합물이 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 암 세포를 표적화하는 항체 또는 그의 항원-결합 단편 (Ab), Bcl-xL 억제제 약물 모이어티 (D), 및 Ab를 D에 공유 부착시키는 링커 모이어티 (L)를 포함하는 ADC 화합물이 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 예를 들어 높은 특이성 및 높은 친화도로 종양-연관 항원 (예를 들어, EGFR, CD7 또는 HER2)에 결합할 수 있다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 결합시 표적 세포 내로, 예를 들어 세포 내의 분해 구획 내로 내재화된다. 일부 실시양태에서, ADC는 표적 세포에 결합시 내재화되고, 분해되고, Bcl-xL 억제제 약물 모이어티를 방출하여 암 세포를 사멸시킨다. Bcl-xL 억제제 약물 모이어티는 효소 작용, 가수분해, 산화 또는 임의의 다른 메카니즘에 의해 ADC의 항체 및/또는 링커 모이어티로부터 방출될 수 있다.
예시적인 ADC는 하기 화학식 (1)을 갖는다:
Ab-(L-D) p (1)
여기서, Ab = 항체 또는 항원-결합 단편, L = 링커 모이어티, D = Bcl-xL 억제제 약물 모이어티 및 p = 항체 또는 항원-결합 단편당 Bcl-xL 억제제 약물 모이어티의 수이다.
항체
화학식 (1)의 항체 또는 항원-결합 단편 (Ab)은 그의 범주 내에 세포 상의 표적 항원에 특이적으로 결합하는 임의의 항체 또는 항원-결합 단편을 포함한다. 일부 실시양태에서, 화학식 (1)의 항체 또는 항원-결합 단편 (Ab)은 그의 범주 내에 암 세포 상의 표적 항원에 특이적으로 결합하는 임의의 항체 또는 항원-결합 단편을 포함한다. 항체 또는 항원-결합 단편은, 예를 들어 비아코어(BIAcore)® 분석에 의해 측정 시, ≤1 mM, ≤100 nM 또는 ≤10 nM 또는 이들 사이의 임의의 양의 해리 상수 (KD)로 표적 항원에 결합할 수 있다. 일부 실시양태에서, KD는 1 pM 내지 500 pM이다. 일부 실시양태에서, KD는 500 pM 내지 1 μM, 1 μM 내지 100 nM 또는 100 mM 내지 10 nM이다.
일부 실시양태에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 2개의 중쇄 및 2개의 경쇄를 포함하는 4-쇄 항체 (이뮤노글로불린 또는 전장 또는 무손상 항체로도 지칭됨)이다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 이뮤노글로불린의 항원-결합 단편이다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 표적 암 항원에 결합하고/거나 이뮤노글로불린의 적어도 하나의 기능을 제공하는 능력을 보유하는 이뮤노글로불린의 항원-결합 단편이다.
일부 실시양태에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 내재화 항체 또는 그의 내재화 항원-결합 단편이다. 일부 실시양태에서, 내재화 항체 또는 그의 내재화 항원-결합 단편은 세포의 표면 상에 발현된 표적 암 항원에 결합하고, 결합시 세포에 진입한다. 일부 실시양태에서, ADC의 Bcl-xL 억제제 약물 모이어티는, ADC가 표적 암 항원을 발현하는 세포에 진입하여 존재한 후 (즉, ADC가 내재화된 후), 예를 들어 절단에 의해, 항체 또는 항원-결합 단편의 분해에 의해 또는 임의의 다른 적합한 방출 메카니즘에 의해 ADC의 항체 또는 항원-결합 단편으로부터 방출된다.
일부 실시양태에서, 항체는 항체-의존성 세포성 세포독성 (ADCC) 또는 보체-의존성 세포독성 (CDC)의 감소 또는 부재를 매개하는 돌연변이를 포함한다. 일부 실시양태에서, 이들 돌연변이는 Fc 침묵, Fc 침묵 또는 Fc 침묵 돌연변이로 공지되어 있다. 일부 실시양태에서, IgG1 불변 영역의 아미노산 잔기 L234 및 L235는 A234 및 A235 ("LALA"로도 공지됨)로 치환된다. 일부 실시양태에서, IgG1 불변 영역의 아미노산 잔기 N297은 A297 ("N297A"로도 공지됨)로 치환된다. 일부 실시양태에서, IgG1 불변 영역의 아미노산 잔기 D265 및 P329는 A265 및 A329 ("DAPA"로도 공지됨)로 치환된다. 다른 항체 Fc 침묵 돌연변이가 또한 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, Fc 침묵 돌연변이, 예를 들어 D265A, N297A 및 P329A ("DANAPA"로도 공지됨)가 조합되어 사용된다.
예시적인 항원 표적에 추가로, 본 개시내용의 예시적인 항체의 아미노산 서열이 표 2-6에 제시된다.
표 2. 예시된 항체
Figure pct00347
Figure pct00348
표 3. mAb 가변 영역의 아미노산 서열
Figure pct00349
Figure pct00350
Figure pct00351
표 4. mAb CDR의 아미노산 서열 (조합됨)
Figure pct00352
Figure pct00353
Figure pct00354
Figure pct00355
표 5. 전장 mAb Ig 쇄의 아미노산 서열
Figure pct00356
Figure pct00357
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Figure pct00359
Figure pct00360
Figure pct00361
Figure pct00362
Figure pct00363
표 6. 예시적인 Bcl-xLand 표적 항원 아미노산 서열
Figure pct00364
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Figure pct00368
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Figure pct00375
Figure pct00376
Figure pct00377
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 ADC의 항체 또는 항원-결합 단편은 상기 표에 열거된 중쇄 및 경쇄 가변 도메인의 임의의 세트 또는 상기 표에 열거된 중쇄 및 경쇄 가변 도메인의 임의의 세트로부터의 6개의 CDR의 세트를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 ADC의 항체 또는 항원-결합 단편은, ADC가 그의 표적 암 항원에 결합하는 능력 (예를 들어, 1x10-8 M 미만의 KD)을 보유하고 본원에 개시된 ADC의 하나 이상의 기능적 특성 (예를 들어, 항원 표적, 예를 들어 종양 또는 다른 암 세포 상에 발현된 항원에 내재화하거나 결합하는 능력 등)을 보유하는 한, 상기 표에 열거된 서열에 대해 보존적으로 변형되고/거나 상동인 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 ADC의 항체 또는 항원-결합 단편은 인간 중쇄 및 경쇄 불변 도메인 또는 그의 단편을 추가로 포함한다. 예를 들어, 기재된 ADC의 항체 또는 항원-결합 단편은 인간 IgG 중쇄 불변 도메인 (예컨대 IgG1) 및 인간 카파 또는 람다 경쇄 불변 도메인을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 기재된 ADC의 항체 또는 항원-결합 단편은 인간 Ig 카파 경쇄 불변 도메인을 갖는 인간 이뮤노글로불린 G 하위유형 1 (IgG1) 중쇄 불변 도메인을 포함한다.
일부 실시양태에서, ADC에 대한 표적 암 항원은 BCMA이다.
일부 실시양태에서, 항-BCMA 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 다음과 같은 3개의 중쇄 CDR 및 3개의 경쇄 CDR을 포함한다: 서열식별번호: 15로 이루어진 중쇄 CDR1 (HCDR1), 서열식별번호: 16으로 이루어진 중쇄 CDR2 (HCDR2), 서열식별번호: 17로 이루어진 중쇄 CDR3 (HCDR3); 서열식별번호: 18로 이루어진 경쇄 CDR1 (LCDR1), 서열식별번호: 19로 이루어진 경쇄 CDR2 (LCDR2), 및 서열식별번호: 20으로 이루어진 경쇄 CDR3 (LCDR3).
일부 실시양태에서, 항-BCMA 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 서열식별번호: 1의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 2의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-BCMA 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 서열식별번호: 1의 중쇄 가변 영역 아미노산 서열 및 서열식별번호: 2의 경쇄 가변 영역 아미노산 서열, 또는 개시된 서열에 대해 적어도 95% 동일한 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-BCMA 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 서열식별번호: 1에 대해 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 중쇄 가변 영역 아미노산 서열 및/또는 서열식별번호: 2에 대해 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 경쇄 가변 영역 아미노산 서열을 갖는다.
일부 실시양태에서, 항-BCMA 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 내재화 항체 또는 내재화 항원-결합 단편이다. 일부 실시양태에서, 항-BCMA 항체는 인간 IgG1 중쇄 불변 도메인 또는 변형된 IgG1 중쇄 불변 도메인을 포함한다. 일부 실시양태에서, IgG1 중쇄 불변 도메인은 EU 넘버링 시스템에 따라 넘버링된 야생형 (비변형된) IgG1 중쇄 불변 도메인 내의 152 및 375에 상응하는 아미노산 위치에 시스테인 잔기 (C)를 포함한다. 일부 실시양태에서, IgG1 중쇄 불변 도메인은 야생형 (비변형된) IgG1 중쇄 불변 도메인 내의 156 및 379에 상응하는 아미노산 위치에 시스테인 잔기 (C)를 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-BCMA 항체는 인간 Ig 카파 경쇄 불변 도메인 또는 변형된 Ig 카파 경쇄 불변 도메인을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항-BCMA 항체는 서열식별번호: 57의 중쇄 아미노산 서열 또는 서열식별번호: 57과 적어도 95% 동일한 서열, 및 서열식별번호: 58의 경쇄 아미노산 서열 또는 서열식별번호: 58과 적어도 95% 동일한 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-BCMA 항체는 서열식별번호: 57의 중쇄 아미노산 서열 및 서열식별번호: 58의 경쇄 아미노산 서열, 또는 개시된 서열과 적어도 95% 동일한 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-BCMA 항체는 서열식별번호: 57과 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 중쇄 아미노산 서열 및 서열식별번호: 58과 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 경쇄 아미노산 서열을 갖는다. 일부 실시양태에서, 항-BCMA 항체는 J6M0 (WO 2012/163805) 또는 그의 항원-결합 단편이다.
일부 실시양태에서, 항-BCMA 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 J6M0의 3개의 중쇄 CDR 및 3개의 경쇄 CDR을 포함하거나, 또는 여기서 CDR은 HCDR1 (서열식별번호: 15), HCDR2 (서열식별번호: 16), HCDR3 (서열식별번호: 17); LCDR1 (서열식별번호: 18), LCDR2 (서열식별번호: 19), 및 LCDR3 (서열식별번호: 20)의 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개 이하의 아미노산 부가, 결실 또는 치환을 포함한다.
일부 실시양태에서, ADC에 대한 표적 암 항원은 CD33이다.
일부 실시양태에서, 항-CD33 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 하기와 같은 3개의 중쇄 CDR 및 3개의 경쇄 CDR을 포함한다: 서열식별번호: 21로 이루어진 중쇄 CDR1 (HCDR1), 서열식별번호: 22로 이루어진 중쇄 CDR2 (HCDR2), 서열식별번호: 23으로 이루어진 중쇄 CDR3 (HCDR3); 서열식별번호: 24로 이루어진 경쇄 CDR1 (LCDR1), 서열식별번호: 25로 이루어진 경쇄 CDR2 (LCDR2), 및 서열식별번호: 26으로 이루어진 경쇄 CDR3 (LCDR3).
일부 실시양태에서, 항-CD33 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 서열식별번호: 3의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 4의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-CD33 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 서열식별번호: 3의 중쇄 가변 영역 아미노산 서열 및 서열식별번호: 4의 경쇄 가변 영역 아미노산 서열, 또는 개시된 서열과 적어도 95% 동일한 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-CD33 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 서열식별번호: 3과 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 중쇄 가변 영역 아미노산 서열 및/또는 서열식별번호: 4와 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 경쇄 가변 영역 아미노산 서열을 갖는다.
일부 실시양태에서, 항-CD33 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 내재화 항체 또는 내재화 항원-결합 단편이다. 일부 실시양태에서, 항-CD33 항체는 인간 IgG1 중쇄 불변 도메인 또는 변형된 IgG1 중쇄 불변 도메인을 포함한다. 일부 실시양태에서, IgG1 중쇄 불변 도메인은 야생형 (비변형된) IgG1 중쇄 불변 도메인 내의 297에 상응하는 아미노산 위치에 글루타민 잔기 (Q)를 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-CD33 항체는 인간 Ig 카파 경쇄 불변 도메인 또는 변형된 Ig 카파 경쇄 불변 도메인을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항-CD33 항체는 서열식별번호: 59의 중쇄 아미노산 서열 또는 서열식별번호: 59와 적어도 95% 동일한 서열, 및 서열식별번호: 60의 경쇄 아미노산 서열 또는 서열식별번호: 60과 적어도 95% 동일한 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-CD33 항체는 서열식별번호: 59의 중쇄 아미노산 서열 및 서열식별번호: 60의 경쇄 아미노산 서열, 또는 개시된 서열과 적어도 95% 동일한 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-CD33 항체는 서열식별번호: 59와 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 중쇄 아미노산 서열 및 서열식별번호: 60과 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 경쇄 아미노산 서열을 갖는다. 일부 실시양태에서, 항-CD33 항체는 MuMy9-6ch (US 2013/0078241) 또는 그의 항원-결합 단편이다.
일부 실시양태에서, 항-CD33 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 MuMy9-6ch의 3개의 중쇄 CDR 및 3개의 경쇄 CDR을 포함하거나, 또는 여기서 CDR은 HCDR1 (서열식별번호: 21), HCDR2 (서열식별번호: 22), HCDR3 (서열식별번호: 23); LCDR1 (서열식별번호: 24), LCDR2 (서열식별번호: 25), 및 LCDR3 (서열식별번호: 26)의 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개 이하의 아미노산 부가, 결실 또는 치환을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항-CD33 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 하기와 같은 3개의 중쇄 CDR 및 3개의 경쇄 CDR을 포함한다: 서열식별번호: 27로 이루어진 중쇄 CDR1 (HCDR1), 서열식별번호: 28로 이루어진 중쇄 CDR2 (HCDR2), 서열식별번호: 29로 이루어진 중쇄 CDR3 (HCDR3); 서열식별번호: 30으로 이루어진 경쇄 CDR1 (LCDR1), 서열식별번호: 31로 이루어진 경쇄 CDR2 (LCDR2), 및 서열식별번호: 32로 이루어진 경쇄 CDR3 (LCDR3).
일부 실시양태에서, 항-CD33 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 서열식별번호: 5의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 6의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-CD33 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 서열식별번호: 5의 중쇄 가변 영역 아미노산 서열 및 서열식별번호: 6의 경쇄 가변 영역 아미노산 서열, 또는 개시된 서열과 적어도 95% 동일한 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-CD33 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 서열식별번호: 5와 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 중쇄 가변 영역 아미노산 서열 및/또는 서열식별번호: 6과 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 경쇄 가변 영역 아미노산 서열을 갖는다.
일부 실시양태에서, 항-CD33 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 내재화 항체 또는 내재화 항원-결합 단편이다. 일부 실시양태에서, 항-CD33 항체는 인간 IgG1 중쇄 불변 도메인 또는 변형된 IgG1 중쇄 불변 도메인을 포함한다. 일부 실시양태에서, IgG1 중쇄 불변 도메인은 EU 넘버링 시스템에 따라 넘버링된 야생형 (비변형된) IgG1 중쇄 불변 도메인 내의 152 및 375에 상응하는 아미노산 위치에 시스테인 잔기 (C)를 포함한다.
일부 실시양태에서, 항-CD33 항체는 서열식별번호: 61의 중쇄 아미노산 서열 또는 서열식별번호: 61과 적어도 95% 동일한 서열, 및 서열식별번호: 62의 경쇄 아미노산 서열 또는 서열식별번호: 62와 적어도 95% 동일한 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-CD33 항체는 서열식별번호: 61의 중쇄 아미노산 서열 및 서열식별번호: 62의 경쇄 아미노산 서열, 또는 개시된 서열과 적어도 95% 동일한 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-CD33 항체는 서열식별번호: 61과 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 중쇄 아미노산 서열 및 서열식별번호: 62와 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 경쇄 아미노산 서열을 갖는다. 일부 실시양태에서, 항-CD33 항체는 겜투주맙 또는 그의 항원-결합 단편이다.
일부 실시양태에서, 항-CD33 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 겜투주맙의 3개의 중쇄 CDR 및 3개의 경쇄 CDR을 포함하거나, 또는 여기서 CDR은 HCDR1 (서열식별번호: 27), HCDR2 (서열식별번호: 28), HCDR3 (서열식별번호: 29); LCDR1 (서열식별번호: 30), LCDR2 (서열식별번호: 31) 및 LCDR3 (서열식별번호: 32)의 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개 이하의 아미노산 부가, 결실 또는 치환을 포함한다.
일부 실시양태에서, ADC에 대한 표적 암 항원은 PCAD이다.
일부 실시양태에서, 항-PCAD 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 하기와 같은 3개의 중쇄 CDR 및 3개의 경쇄 CDR을 포함한다: 서열식별번호: 33으로 이루어진 중쇄 CDR1 (HCDR1), 서열식별번호: 34로 이루어진 중쇄 CDR2 (HCDR2), 서열식별번호: 35로 이루어진 중쇄 CDR3 (HCDR3); 서열식별번호: 36으로 이루어진 경쇄 CDR1 (LCDR1), 서열식별번호: 37로 이루어진 경쇄 CDR2 (LCDR2), 및 서열식별번호: 38로 이루어진 경쇄 CDR3 (LCDR3).
일부 실시양태에서, 항-PCAD 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 서열식별번호: 7의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 8의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-PCAD 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 서열식별번호: 7의 중쇄 가변 영역 아미노산 서열 및 서열식별번호: 8의 경쇄 가변 영역 아미노산 서열, 또는 개시된 서열과 적어도 95% 동일한 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-PCAD 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 서열식별번호: 7과 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 중쇄 가변 영역 아미노산 서열 및/또는 서열식별번호: 8과 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 경쇄 가변 영역 아미노산 서열을 갖는다.
일부 실시양태에서, 항-PCAD 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 내재화 항체 또는 내재화 항원-결합 단편이다. 일부 실시양태에서, 항-PCAD 항체는 인간 IgG1 중쇄 불변 도메인 또는 변형된 IgG1 중쇄 불변 도메인을 포함한다. 일부 실시양태에서, IgG1 중쇄 불변 도메인은 EU 넘버링 시스템에 따라 넘버링된 야생형 (비변형된) IgG1 중쇄 불변 도메인 내의 152 및 375에 상응하는 아미노산 위치에 시스테인 잔기 (C)를 포함한다.
일부 실시양태에서, 항-PCAD 항체는 서열식별번호: 63의 중쇄 아미노산 서열 또는 서열식별번호: 63과 적어도 95% 동일한 서열, 및 서열식별번호: 64의 경쇄 아미노산 서열 또는 서열식별번호: 64와 적어도 95% 동일한 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-PCAD 항체는 서열식별번호: 63의 중쇄 아미노산 서열 및 서열식별번호: 64의 경쇄 아미노산 서열, 또는 개시된 서열과 적어도 95% 동일한 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-PCAD 항체는 서열식별번호: 63과 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 중쇄 아미노산 서열 및 서열식별번호: 64와 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 경쇄 아미노산 서열을 갖는다. 일부 실시양태에서, 항-PCAD 항체는 NOV169N31Q (WO 2016/203432) 또는 그의 항원-결합 단편이다.
일부 실시양태에서, 항-PCAD 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 NOV169N31Q의 3개의 중쇄 CDR 및 3개의 경쇄 CDR을 포함하거나, 또는 여기서 CDR은 HCDR1 (서열식별번호: 33), HCDR2 (서열식별번호: 34), HCDR3 (서열식별번호: 35); LCDR1 (서열식별번호: 36), LCDR2 (서열식별번호: 37), 및 LCDR3 (서열식별번호: 38)의 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개 이하의 아미노산 부가, 결실 또는 치환을 포함한다.
일부 실시양태에서, ADC에 대한 표적 암 항원은 HER2이다.
일부 실시양태에서, 항-HER2 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 하기와 같은 3개의 중쇄 CDR 및 3개의 경쇄 CDR을 포함한다: 서열식별번호: 39로 이루어진 중쇄 CDR1 (HCDR1), 서열식별번호: 40으로 이루어진 중쇄 CDR2 (HCDR2), 서열식별번호: 41로 이루어진 중쇄 CDR3 (HCDR3); 서열식별번호: 42로 이루어진 경쇄 CDR1 (LCDR1), 서열식별번호: 43으로 이루어진 경쇄 CDR2 (LCDR2), 및 서열식별번호: 44로 이루어진 경쇄 CDR3 (LCDR3).
일부 실시양태에서, 항-HER2 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 서열식별번호: 9의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 10의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-HER2 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 서열식별번호: 9의 중쇄 가변 영역 아미노산 서열 및 서열식별번호: 10의 경쇄 가변 영역 아미노산 서열, 또는 개시된 서열과 적어도 95% 동일한 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-HER2 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 서열식별번호: 9와 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 중쇄 가변 영역 아미노산 서열 및/또는 서열식별번호: 10과 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 경쇄 가변 영역 아미노산 서열을 갖는다.
일부 실시양태에서, 항-HER2 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 내재화 항체 또는 내재화 항원-결합 단편이다. 일부 실시양태에서, 항-HER2 항체는 인간 IgG1 중쇄 불변 도메인 또는 변형된 IgG1 중쇄 불변 도메인을 포함한다. 일부 실시양태에서, IgG1 중쇄 불변 도메인은 야생형 (비변형된) IgG1 중쇄 불변 도메인 내의 297에 상응하는 아미노산 위치에 글루타민 잔기 (Q)를 포함한다. 일부 실시양태에서, IgG1 중쇄 불변 도메인은 야생형 (비변형된) IgG1 중쇄 불변 도메인 내의 297에 상응하는 아미노산 위치에 세린 잔기 (S)를 포함한다. 일부 실시양태에서, IgG1 중쇄 불변 도메인은 EU 넘버링 시스템에 따라 넘버링된 야생형 (비변형된) IgG1 중쇄 불변 도메인 내의 152 및 375에 상응하는 아미노산 위치에 시스테인 잔기 (C)를 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-HER2 항체는 인간 Ig 카파 경쇄 불변 도메인 또는 변형된 Ig 카파 경쇄 불변 도메인을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항-HER2 항체는 서열식별번호: 65의 중쇄 아미노산 서열 또는 서열식별번호: 65와 적어도 95% 동일한 서열, 및 서열식별번호: 66의 경쇄 아미노산 서열 또는 서열식별번호: 66과 적어도 95% 동일한 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-HER2 항체는 서열식별번호: 65의 중쇄 아미노산 서열 및 서열식별번호: 66의 경쇄 아미노산 서열, 또는 개시된 서열에 대해 적어도 95% 동일한 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-HER2 항체는 서열식별번호: 65와 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 중쇄 아미노산 서열 및 서열식별번호: 66과 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 경쇄 아미노산 서열을 갖는다. 일부 실시양태에서, 항-HER2 항체는 트라스투주맙 (미국 특허 번호 5,821,337 및 6,870,034; 또한 문헌 [Molina et al. (2001) Cancer Res. 61(12):4744-9] 참조), 또는 그의 항원-결합 단편이다.
일부 실시양태에서, 항-HER2 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 트라스투주맙의 3개의 중쇄 CDR 및 3개의 경쇄 CDR을 포함하거나, 또는 여기서 CDR은 HCDR1 (서열식별번호: 39), HCDR2 (서열식별번호: 40), HCDR3 (서열식별번호: 41); LCDR1 (서열식별번호: 42), LCDR2 (서열식별번호: 43) 및 LCDR3 (서열식별번호: 44)의 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개 이하의 아미노산 부가, 결실 또는 치환을 포함한다.
일부 실시양태에서, ADC에 대한 표적 암 항원은 CD38이다.
일부 실시양태에서, 항-CD38 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 하기와 같은 3개의 중쇄 CDR 및 3개의 경쇄 CDR을 포함한다: 서열식별번호: 45로 이루어진 중쇄 CDR1 (HCDR1), 서열식별번호: 46으로 이루어진 중쇄 CDR2 (HCDR2), 서열식별번호: 47로 이루어진 중쇄 CDR3 (HCDR3); 서열식별번호: 48로 이루어진 경쇄 CDR1 (LCDR1), 서열식별번호: 49로 이루어진 경쇄 CDR2 (LCDR2), 및 서열식별번호: 50으로 이루어진 경쇄 CDR3 (LCDR3).
일부 실시양태에서, 항-CD38 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 서열식별번호: 11의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 12의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-CD38 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 서열식별번호: 11의 중쇄 가변 영역 아미노산 서열 및 서열식별번호: 12의 경쇄 가변 영역 아미노산 서열, 또는 개시된 서열과 적어도 95% 동일한 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-CD38 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 서열식별번호: 11과 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 중쇄 가변 영역 아미노산 서열 및/또는 서열식별번호: 12와 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 경쇄 가변 영역 아미노산 서열을 갖는다.
일부 실시양태에서, 항-CD38 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 내재화 항체 또는 내재화 항원-결합 단편이다. 일부 실시양태에서, 항-CD38 항체는 인간 IgG1 중쇄 불변 도메인 또는 변형된 IgG1 중쇄 불변 도메인을 포함한다. 일부 실시양태에서, IgG1 중쇄 불변 도메인은 EU 넘버링 시스템에 따라 넘버링된 야생형 (비변형된) IgG1 중쇄 불변 도메인 내의 152 및 375에 상응하는 아미노산 위치에 시스테인 잔기 (C)를 포함한다.
일부 실시양태에서, 항-CD38 항체는 서열식별번호: 67의 중쇄 아미노산 서열 또는 서열식별번호: 67과 적어도 95% 동일한 서열, 및 서열식별번호: 68의 경쇄 아미노산 서열 또는 서열식별번호: 68과 적어도 95% 동일한 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-CD33 항체는 서열식별번호: 67의 중쇄 아미노산 서열 및 서열식별번호: 68의 경쇄 아미노산 서열, 또는 개시된 서열과 적어도 95% 동일한 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-CD38 항체는 서열식별번호: 67과 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 중쇄 아미노산 서열 및 서열식별번호: 68과 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 경쇄 아미노산 서열을 갖는다. 일부 실시양태에서, 항-CD38 항체는 다라투무맙 또는 그의 항원-결합 단편이다.
일부 실시양태에서, 항-CD38 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 겜투주맙의 3개의 중쇄 CDR 및 3개의 경쇄 CDR을 포함하거나, 또는 여기서 CDR은 HCDR1 (서열식별번호: 45), HCDR2 (서열식별번호: 46), HCDR3 (서열식별번호: 47); LCDR1 (서열식별번호: 48), LCDR2 (서열식별번호: 49), 및 LCDR3 (서열식별번호: 50)의 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개 이하의 아미노산 부가, 결실 또는 치환을 포함한다.
일부 실시양태에서, ADC에 대한 표적 암 항원은 CD46이다.
일부 실시양태에서, 항-CD46 항체 또는 항원-결합 단편은 본원에 참조로 포함된 WO2018/089807에 기재된 것이다. 일부 실시양태에서, 항-CD46 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 서열식별번호: 90의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 91의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-CD46 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 서열식별번호: 90의 중쇄 가변 영역 아미노산 서열 및 서열식별번호: 91의 경쇄 가변 영역 아미노산 서열, 또는 개시된 서열과 적어도 95% 동일한 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-CD46 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 서열식별번호: 90과 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 중쇄 가변 영역 아미노산 서열 및/또는 서열식별번호: 91과 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 경쇄 가변 영역 아미노산 서열을 갖는다.
일부 실시양태에서, ADC에 대한 표적 암 항원은 CD48이다.
일부 실시양태에서, 항-CD48 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 하기와 같은 3개의 중쇄 CDR 및 3개의 경쇄 CDR을 포함한다: 서열식별번호: 51로 이루어진 중쇄 CDR1 (HCDR1), 서열식별번호: 52로 이루어진 중쇄 CDR2 (HCDR2), 서열식별번호: 53으로 이루어진 중쇄 CDR3 (HCDR3); 서열식별번호: 54로 이루어진 경쇄 CDR1 (LCDR1), 서열식별번호: 55로 이루어진 경쇄 CDR2 (LCDR2), 및 서열식별번호: 56으로 이루어진 경쇄 CDR3 (LCDR3).
일부 실시양태에서, 항-CD48 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 서열식별번호: 13의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 14의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-CD48 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 서열식별번호: 13의 중쇄 가변 영역 아미노산 서열 및 서열식별번호: 14의 경쇄 가변 영역 아미노산 서열, 또는 개시된 서열과 적어도 95% 동일한 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-CD48 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 서열식별번호: 13과 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 중쇄 가변 영역 아미노산 서열 및/또는 서열식별번호: 14와 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 경쇄 가변 영역 아미노산 서열을 갖는다.
일부 실시양태에서, 항-CD48 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 내재화 항체 또는 내재화 항원-결합 단편이다. 일부 실시양태에서, 항-CD48 항체는 인간 IgG1 중쇄 불변 도메인 또는 변형된 IgG1 중쇄 불변 도메인을 포함한다. 일부 실시양태에서, IgG1 중쇄 불변 도메인은 EU 넘버링 시스템에 따라 넘버링된 야생형 (비변형된) IgG1 중쇄 불변 도메인 내의 152 및 375에 상응하는 아미노산 위치에 시스테인 잔기 (C)를 포함한다.
일부 실시양태에서, 항-CD48 항체는 서열식별번호: 69의 중쇄 아미노산 서열 또는 서열식별번호: 69와 적어도 95% 동일한 서열, 및 서열식별번호: 70의 경쇄 아미노산 서열 또는 서열식별번호: 70과 적어도 95% 동일한 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-CD48 항체는 서열식별번호: 69의 중쇄 아미노산 서열 및 서열식별번호: 70의 경쇄 아미노산 서열, 또는 개시된 서열과 적어도 95% 동일한 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-CD48 항체는 서열식별번호: 69와 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 중쇄 아미노산 서열 및 서열식별번호: 70과 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 경쇄 아미노산 서열을 갖는다. 일부 실시양태에서, 항-CD48 항체는 SGN-48A 또는 그의 항원-결합 단편이다.
일부 실시양태에서, 항-CD48 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 겜투주맙의 3개의 중쇄 CDR 및 3개의 경쇄 CDR을 포함하거나, 또는 여기서 CDR은 HCDR1 (서열식별번호: 51), HCDR2 (서열식별번호: 52), HCDR3 (서열식별번호: 53); LCDR1 (서열식별번호: 54), LCDR2 (서열식별번호: 55), 및 LCDR3 (서열식별번호: 56)의 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개 이하의 아미노산 부가, 결실 또는 치환을 포함한다.
일부 실시양태에서, ADC에 대한 표적 암 항원은 CD79B이다.
일부 실시양태에서, 항-CD48 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 하기와 같은 3개의 중쇄 CDR 및 3개의 경쇄 CDR을 포함한다: 서열식별번호: 82로 이루어진 중쇄 CDR1 (HCDR1), 서열식별번호: 83으로 이루어진 중쇄 CDR2 (HCDR2), 서열식별번호: 84로 이루어진 중쇄 CDR3 (HCDR3); 서열식별번호: 85로 이루어진 경쇄 CDR1 (LCDR1), 서열식별번호: 86으로 이루어진 경쇄 CDR2 (LCDR2), 및 서열식별번호: 87로 이루어진 경쇄 CDR3 (LCDR3).
일부 실시양태에서, 항-CD79B 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 서열식별번호: 80의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 81의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-CD79B 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 서열식별번호: 80의 중쇄 가변 영역 아미노산 서열 및 서열식별번호: 81의 경쇄 가변 영역 아미노산 서열, 또는 개시된 서열에 대해 적어도 95% 동일한 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-CD79B 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 서열식별번호: 80과 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일한 중쇄 가변 영역 아미노산 서열 및/또는 서열식별번호: 81과 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일한 경쇄 가변 영역 아미노산 서열을 갖는다.
일부 실시양태에서, 항-CD79B 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 내재화 항체 또는 내재화 항원-결합 단편이다. 일부 실시양태에서, 항-CD79B 항체는 인간 IgG1 중쇄 불변 도메인 또는 변형된 IgG1 중쇄 불변 도메인을 포함한다. 일부 실시양태에서, IgG1 중쇄 불변 도메인은 EU 넘버링 시스템에 따라 넘버링된 야생형 (비변형된) IgG1 중쇄 불변 도메인 내의 152 및 375에 상응하는 아미노산 위치에 시스테인 잔기 (C)를 포함한다.
일부 실시양태에서, 항-CD79B 항체는 서열식별번호: 88의 중쇄 아미노산 서열 또는 서열식별번호: 88과 적어도 95% 동일한 서열, 및 서열식별번호: 89의 경쇄 아미노산 서열 또는 서열식별번호: 89와 적어도 95% 동일한 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-CD79B 항체는 서열식별번호: 88의 중쇄 아미노산 서열 및 서열식별번호: 89의 경쇄 아미노산 서열, 또는 개시된 서열에 대해 적어도 95% 동일한 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-CD79B 항체는 서열식별번호: 88에 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일한 중쇄 아미노산 서열 및 서열식별번호: 89에 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일한 경쇄 아미노산 서열을 갖는다. 일부 실시양태에서, 항-CD79B 항체는 폴라티주맙 또는 그의 항원-결합 단편이다.
일부 실시양태에서, 항-CD79B 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 겜투주맙의 3개의 중쇄 CDR 및 3개의 경쇄 CDR을 포함하거나, 또는 여기서 CDR은 HCDR1 (서열식별번호: 82), HCDR2 (서열식별번호: 83), HCDR3 (서열식별번호: 84); LCDR1 (서열식별번호: 85), LCDR2 (서열식별번호: 86) 및 LCDR3 (서열식별번호: 87)의 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개 이하의 아미노산 부가, 결실 또는 치환을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항-EGFR 항체는 서열식별번호: 92의 중쇄 아미노산 서열 또는 서열식별번호: 92와 적어도 95% 동일한 서열, 및 서열식별번호: 93의 경쇄 아미노산 서열 또는 서열식별번호: 93과 적어도 95% 동일한 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-EGFR 항체는 서열식별번호: 92의 중쇄 아미노산 서열 및 서열식별번호: 93의 경쇄 아미노산 서열, 또는 개시된 서열과 적어도 95% 동일한 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-EGFR 항체는 서열식별번호: 92와 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일한 중쇄 아미노산 서열, 및 서열식별번호: 93과 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일한 경쇄 아미노산 서열을 갖는다. 일부 실시양태에서, 항-EGFR 항체는 세툭시맙 또는 그의 항원-결합 단편이다.
일부 실시양태에서, 항-EGFR 항체는 서열식별번호: 124의 중쇄 아미노산 서열 또는 서열식별번호: 124와 적어도 95% 동일한 서열, 및 서열식별번호: 125의 경쇄 아미노산 서열 또는 서열식별번호: 125와 적어도 95% 동일한 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-EGFR 항체는 서열식별번호: 124의 중쇄 아미노산 서열 및 서열식별번호: 125의 경쇄 아미노산 서열, 또는 개시된 서열과 적어도 95% 동일한 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-EGFR 항체는 서열식별번호: 124와 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일한 중쇄 아미노산 서열, 및 서열식별번호: 125와 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일한 경쇄 아미노산 서열을 갖는다.
일부 실시양태에서, 항-TFRC 항체는 서열식별번호: 94의 중쇄 아미노산 서열 또는 서열식별번호: 94와 적어도 95% 동일한 서열, 및 서열식별번호: 95의 경쇄 아미노산 서열 또는 서열식별번호: 95와 적어도 95% 동일한 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-TFRC 항체는 서열식별번호: 94의 중쇄 아미노산 서열 및 서열식별번호: 95의 경쇄 아미노산 서열, 또는 개시된 서열에 대해 적어도 95% 동일한 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-TFRC 항체는 서열식별번호: 94와 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 중쇄 아미노산 서열 및 서열식별번호: 95와 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 경쇄 아미노산 서열을 갖는다.
일부 실시양태에서, 항-EPCAM 항체는 서열식별번호: 96의 중쇄 아미노산 서열 또는 서열식별번호: 96과 적어도 95% 동일한 서열, 및 서열식별번호: 97의 경쇄 아미노산 서열 또는 서열식별번호: 97과 적어도 95% 동일한 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-EPCAM 항체는 서열식별번호: 96의 중쇄 아미노산 서열 및 서열식별번호: 97의 경쇄 아미노산 서열, 또는 개시된 서열에 대해 적어도 95% 동일한 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-TFRC 항체는 서열식별번호: 96과 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 중쇄 아미노산 서열 및 서열식별번호: 97과 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 경쇄 아미노산 서열을 갖는다. 일부 실시양태에서, 항-EPCAM 항체는 오포르투주맙 또는 그의 항원-결합 단편이다.
일부 실시양태에서, 항-FOLR1 항체는 서열식별번호: 98의 중쇄 아미노산 서열 또는 서열식별번호: 98과 적어도 95% 동일한 서열, 및 서열식별번호: 99의 경쇄 아미노산 서열 또는 서열식별번호: 99와 적어도 95% 동일한 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-FOLR1 항체는 서열식별번호: 98의 중쇄 아미노산 서열 및 서열식별번호: 99의 경쇄 아미노산 서열, 또는 개시된 서열과 적어도 95% 동일한 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-FOLR1 항체는 서열식별번호: 98과 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일한 중쇄 아미노산 서열 및 서열식별번호: 99와 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일한 경쇄 아미노산 서열을 갖는다. 일부 실시양태에서, 항-FOLR1 항체는 미르베툭시맙 또는 그의 항원-결합 단편이다.
일부 실시양태에서, 항-ENPP3 항체는 서열식별번호: 100의 중쇄 아미노산 서열 또는 서열식별번호: 100과 적어도 95% 동일한 서열, 및 서열식별번호: 101의 경쇄 아미노산 서열 또는 서열식별번호: 101과 적어도 95% 동일한 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-ENPP3 항체는 서열식별번호: 100의 중쇄 아미노산 서열 및 서열식별번호: 101의 경쇄 아미노산 서열, 또는 개시된 서열과 적어도 95% 동일한 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-ENPP3 항체는 서열식별번호: 100과 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일한 중쇄 아미노산 서열 및 서열식별번호: 101과 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일한 경쇄 아미노산 서열을 갖는다.
일부 실시양태에서, 항-MET 항체는 서열식별번호: 102의 중쇄 아미노산 서열 또는 서열식별번호: 102와 적어도 95% 동일한 서열, 및 서열식별번호: 103의 경쇄 아미노산 서열 또는 서열식별번호: 103과 적어도 95% 동일한 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-MET 항체는 서열식별번호: 102의 중쇄 아미노산 서열 및 서열식별번호: 103의 경쇄 아미노산 서열, 또는 개시된 서열에 대해 적어도 95% 동일한 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-MET 항체는 서열식별번호: 102와 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 중쇄 아미노산 서열 및 서열식별번호: 103과 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 경쇄 아미노산 서열을 갖는다. 일부 실시양태에서, 항-MET 항체는 텔리소투주맙 또는 그의 항원-결합 단편이다.
일부 실시양태에서, 항-AXL 항체는 서열식별번호: 104의 중쇄 아미노산 서열 또는 서열식별번호: 104와 적어도 95% 동일한 서열, 및 서열식별번호: 105의 경쇄 아미노산 서열 또는 서열식별번호: 105와 적어도 95% 동일한 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-AXL 항체는 서열식별번호: 104의 중쇄 아미노산 서열 및 서열식별번호: 105의 경쇄 아미노산 서열, 또는 개시된 서열에 대해 적어도 95% 동일한 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-AXL 항체는 서열식별번호: 104와 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일한 중쇄 아미노산 서열 및 서열식별번호: 105와 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일한 경쇄 아미노산 서열을 갖는다. 일부 실시양태에서, 항-AXL 항체는 에나포타맙, 또는 그의 항원-결합 단편이다.
일부 실시양태에서, 항-SLC34A2 항체는 서열식별번호: 106의 중쇄 아미노산 서열 또는 서열식별번호: 106과 적어도 95% 동일한 서열, 및 서열식별번호: 107의 경쇄 아미노산 서열 또는 서열식별번호: 107과 적어도 95% 동일한 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-SLC34A2 항체는 서열식별번호: 106의 중쇄 아미노산 서열 및 서열식별번호: 107의 경쇄 아미노산 서열, 또는 개시된 서열과 적어도 95% 동일한 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-SLC34A2 항체는 서열식별번호: 106과 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 중쇄 아미노산 서열 및 서열식별번호: 107과 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 경쇄 아미노산 서열을 갖는다. 일부 실시양태에서, 항-SLC34A2 항체는 리파스투주맙 또는 그의 항원-결합 단편이다.
일부 실시양태에서, 항-NECTIN4 항체는 서열식별번호: 108의 중쇄 아미노산 서열 또는 서열식별번호: 108과 적어도 95% 동일한 서열, 및 서열식별번호: 109의 경쇄 아미노산 서열 또는 서열식별번호: 109와 적어도 95% 동일한 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-NECTIN4 항체는 서열식별번호: 108의 중쇄 아미노산 서열 및 서열식별번호: 109의 경쇄 아미노산 서열, 또는 개시된 서열에 적어도 95% 동일한 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-NECTIN4 항체는 서열식별번호: 108과 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일한 중쇄 아미노산 서열 및 서열식별번호: 109와 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일한 경쇄 아미노산 서열을 갖는다. 일부 실시양태에서, 항-넥틴4 항체는 엔포르투맙 또는 그의 항원-결합 단편이다.
일부 실시양태에서, 항-TACSTD2 항체는 서열식별번호: 110의 중쇄 아미노산 서열 또는 서열식별번호: 110과 적어도 95% 동일한 서열, 및 서열식별번호: 111의 경쇄 아미노산 서열 또는 서열식별번호: 111과 적어도 95% 동일한 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-TACSTD2 항체는 서열식별번호: 110의 중쇄 아미노산 서열 및 서열식별번호: 111의 경쇄 아미노산 서열, 또는 개시된 서열과 적어도 95% 동일한 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-TACSTD2 항체는 서열식별번호: 110과 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 중쇄 아미노산 서열 및 서열식별번호: 111과 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 경쇄 아미노산 서열을 갖는다. 일부 실시양태에서, 항-TACSTD2 항체는 사시투주맙 또는 그의 항원-결합 단편이다.
일부 실시양태에서, 항-SLC39A6 항체는 서열식별번호: 112의 중쇄 아미노산 서열 또는 서열식별번호: 112와 적어도 95% 동일한 서열, 및 서열식별번호: 113의 경쇄 아미노산 서열 또는 서열식별번호: 113과 적어도 95% 동일한 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-SLC39A6 항체는 서열식별번호: 112의 중쇄 아미노산 서열 및 서열식별번호: 113의 경쇄 아미노산 서열, 또는 개시된 서열과 적어도 95% 동일한 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-SLC39A6 항체는 서열식별번호: 112와 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 중쇄 아미노산 서열 및 서열식별번호: 113과 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 경쇄 아미노산 서열을 갖는다. 일부 실시양태에서, 항-SLC39A6 항체는 라디라투주맙 또는 그의 항원-결합 단편이다.
일부 실시양태에서, 항-GPNMB 항체는 서열식별번호: 114의 중쇄 아미노산 서열 또는 서열식별번호: 114와 적어도 95% 동일한 서열, 및 서열식별번호: 115의 경쇄 아미노산 서열 또는 서열식별번호: 115와 적어도 95% 동일한 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-GPNMB 항체는 서열식별번호: 114의 중쇄 아미노산 서열 및 서열식별번호: 115의 경쇄 아미노산 서열, 또는 개시된 서열과 적어도 95% 동일한 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-GPNMB 항체는 서열식별번호: 114와 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 중쇄 아미노산 서열 및 서열식별번호: 115와 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 경쇄 아미노산 서열을 갖는다. 일부 실시양태에서, 항-GPNMB 항체는 글렘바투무맙 또는 그의 항원-결합 단편이다.
일부 실시양태에서, 항-MSLN 항체는 서열식별번호: 116의 중쇄 아미노산 서열 또는 서열식별번호: 116과 적어도 95% 동일한 서열, 및 서열식별번호: 117의 경쇄 아미노산 서열 또는 서열식별번호: 117과 적어도 95% 동일한 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-MSLN 항체는 서열식별번호: 116의 중쇄 아미노산 서열 및 서열식별번호: 117의 경쇄 아미노산 서열, 또는 개시된 서열과 적어도 95% 동일한 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-MSLN 항체는 서열식별번호: 116과 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 중쇄 아미노산 서열 및 서열식별번호: 117과 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 경쇄 아미노산 서열을 갖는다. 일부 실시양태에서, 항-MSLN 항체는 아네투맙 또는 그의 항원-결합 단편이다.
일부 실시양태에서, 항-CD74 항체는 서열식별번호: 118의 중쇄 아미노산 서열 또는 서열식별번호: 118에 대해 적어도 95% 동일한 서열, 및 서열식별번호: 119의 경쇄 아미노산 서열 또는 서열식별번호: 119에 대해 적어도 95% 동일한 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-CD74 항체는 서열식별번호: 118의 중쇄 아미노산 서열 및 서열식별번호: 119의 경쇄 아미노산 서열, 또는 개시된 서열과 적어도 95% 동일한 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-CD74 항체는 서열식별번호: 118과 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 중쇄 아미노산 서열 및 서열식별번호: 119와 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 경쇄 아미노산 서열을 갖는다. 일부 실시양태에서, 항-CD74 항체는 밀라투주맙 또는 그의 항원-결합 단편이다.
일부 실시양태에서, 항-F3 항체는 서열식별번호: 120의 중쇄 아미노산 서열 또는 서열식별번호: 120과 적어도 95% 동일한 서열, 및 서열식별번호: 121의 경쇄 아미노산 서열 또는 서열식별번호: 121과 적어도 95% 동일한 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-F3 항체는 서열식별번호: 120의 중쇄 아미노산 서열 및 서열식별번호: 121의 경쇄 아미노산 서열, 또는 개시된 서열과 적어도 95% 동일한 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-F3 항체는 서열식별번호: 120과 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 중쇄 아미노산 서열 및 서열식별번호: 121과 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 경쇄 아미노산 서열을 갖는다. 일부 실시양태에서, 항-F3 항체는 티소투맙 또는 그의 항원-결합 단편이다.
일부 실시양태에서, 항-MUC16 항체는 서열식별번호: 122의 중쇄 아미노산 서열 또는 서열식별번호: 122와 적어도 95% 동일한 서열, 및 서열식별번호: 123의 경쇄 아미노산 서열 또는 서열식별번호: 123과 적어도 95% 동일한 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-MUC16 항체는 서열식별번호: 122의 중쇄 아미노산 서열 및 서열식별번호: 123의 경쇄 아미노산 서열, 또는 개시된 서열과 적어도 95% 동일한 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-MUC16 항체는 서열식별번호: 122와 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일한 중쇄 아미노산 서열 및 서열식별번호: 123과 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일한 경쇄 아미노산 서열을 갖는다. 일부 실시양태에서, 항-MUC16 항체는 티소투맙 또는 그의 항원-결합 단편이다.
일부 실시양태에서, 항-CD7 항체는 서열식별번호: 143의 중쇄 아미노산 서열 또는 서열식별번호: 143과 적어도 95% 동일한 서열, 및 서열식별번호: 144의 경쇄 아미노산 서열 또는 서열식별번호: 144와 적어도 95% 동일한 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-CD7 항체는 서열식별번호: 143의 중쇄 아미노산 서열 및 서열식별번호: 144의 경쇄 아미노산 서열, 또는 개시된 서열과 적어도 95% 동일한 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-CD7 항체는 서열식별번호: 143과 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 중쇄 아미노산 서열 및 서열식별번호: 144와 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 경쇄 아미노산 서열을 갖는다.
2개 이상의 폴리펩티드 내의 잔기는 잔기가 폴리펩티드 구조에서 유사한 위치를 점유하는 경우에 "상응하는" 것으로 언급된다. 2개 이상의 폴리펩티드 내의 유사한 위치는 아미노산 서열 또는 구조적 유사성에 기초하여 폴리펩티드 서열을 정렬함으로써 결정될 수 있다. 관련 기술분야의 통상의 기술자는 만족스러운 정렬을 생성하기 위해 각각의 서열에 갭을 도입하는 것이 필요할 수 있음을 이해한다.
일부 실시양태에서, 아미노산 치환은 단일 잔기의 치환이다. 삽입은 통상적으로 대략 약 1 내지 약 20개 아미노산 잔기일 것이지만, 생물학적 기능이 유지되는 한 (예를 들어, 표적 항원에 대한 결합) 상당히 더 큰 삽입이 허용될 수 있다. 결실은 일반적으로 약 1 내지 약 20개 아미노산 잔기의 범위이지만, 일부 경우에는 결실이 훨씬 더 클 수 있다. 치환, 결실, 삽입 또는 그의 임의의 조합이 최종 유도체 또는 변이체에 도달하기 위해 사용될 수 있다. 일반적으로, 이들 변화는 분자의 변경, 특히 항원 결합 단백질의 면역원성 및 특이성을 최소화하기 위해 몇몇 아미노산에 대해 수행된다. 그러나, 특정 상황에서는 보다 큰 변화가 허용될 수 있다. 보존적 치환은 하기 표 7에 도시된 차트에 따라 이루어질 수 있다.
표 7
Figure pct00378
변이체 항체 서열이 ADC에 사용되는 일부 실시양태에서, 변이체는 전형적으로 동일한 정성적 생물학적 활성을 나타내고, 동일한 면역 반응을 도출할 것이지만, 변이체는 또한 필요에 따라 항원 결합 단백질의 특징을 변형시키기 위해 선택될 수 있다. 대안적으로, 변이체는 항원 결합 단백질의 생물학적 활성이 변경되도록 설계될 수 있다. 예를 들어, 글리코실화 부위는 변경 또는 제거될 수 있다.
다양한 항체가 암 세포를 표적화하기 위해 본원에 사용된 ADC와 함께 사용될 수 있다. 하기 제시된 바와 같이, 본원에 개시된 ADC에서의 링커-페이로드는 놀랍게도 상이한 종양 항원-표적화 항체에 효과적이다. 암 세포 상에서 발현되지만 건강한 세포 상에서는 발현되지 않거나, 또는 건강한 세포 상에서보다 더 높은 수준으로 암 세포 상에서 발현되는 적합한 항원이 관련 기술분야에 공지되어 있고, 이에 대해 지시된 항체도 그러하다. 이들 항원 표적에 대한 추가의 항체는 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 제조될 수 있다. 이들 항체는 본원에 개시된 링커 및 Bcl-xL 억제제 페이로드와 함께 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 BCMA를 표적화하고, BCMA-표적화 항체 또는 항원-결합 단편은 J6M0이다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 CD33을 표적화하고, 일부 실시양태에서 CD33-표적화 항체 또는 항원-결합 단편은 MuMy9-6ch이다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 PCAD를 표적화하고, 일부 실시양태에서 PCAD-표적화 항체 또는 항원-결합 단편은 NOV169N31Q이다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 HER2를 표적화하고, 일부 실시양태에서 HER2-표적화 항체 또는 항원-결합 단편은 트라스투주맙이다. 일부 실시양태에서, 개시된 링커 및 Bcl-xL 억제제 페이로드는 놀랍게도 여러 상이한 종양-표적화 항체, BCMA-표적화 항체, 예컨대 J6M0, CD33-표적화 항체, 예컨대 MuMy9-6ch, PCAD-표적화 항체, 예컨대 NOV169N31Q, 및 HER2-표적화 항체, 예컨대 트라스투주맙에 효과적이지만, 특히 개선된 약물:항체 비, 응집 수준, 안정성 (즉, 시험관내 및 생체내 안정성), 종양 표적화 (즉, 세포독성, 효력), 최소화된 오프-타겟 사멸, 및/또는 치료 효능을 제공하였다. 개선된 치료 효능은 시험관내 또는 생체내에서 측정될 수 있고, 감소된 종양 성장 속도 및/또는 감소된 종양 부피를 포함할 수 있다.
일부 실시양태에서, 동일한 표적에 대한 대안적 항체 또는 상이한 항원 표적에 대한 항체가 사용되고, 상기 기재된 유리한 기능적 특성 (예를 들어, 개선된 안정성, 개선된 종양 표적화, 개선된 치료 효능 등) 중 적어도 일부를 제공한다. 일부 실시양태에서, 이들 유리한 기능적 특성 중 일부 또는 모두는 개시된 링커 및 Bcl-xL 억제제 페이로드가 대안적 EGFR, CD7, 또는 HER2-표적화 항체 또는 항원-결합 단편에 접합된 경우에 관찰된다. 일부 다른 실시양태에서, 이들 유리한 기능적 특성 중 일부 또는 모두는 개시된 링커 및 Bcl-xL 억제제 페이로드가 EGFR-표적화 항체 또는 항원-결합 단편에 접합된 경우에 관찰된다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 EGFR을 표적화한다. 일부 실시양태에서, EGFR-표적화 항체 또는 항원-결합 단편은 J6M0이다. 다른 실시양태에서, 이들 유리한 기능적 특성 중 일부 또는 모두는 개시된 링커 및 Bcl-xL 억제제 페이로드가 CD7-표적화 항체 또는 항원-결합 단편에 접합된 경우에 관찰된다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 CD7을 표적화한다. 일부 실시양태에서, CD7-표적화 항체 또는 항원-결합 단편은 MuMy9-6ch이다. 다른 실시양태에서, 이들 유리한 기능적 특성 중 일부 또는 모두는 개시된 링커 및 Bcl-xL 억제제 페이로드가 HER2-표적화 항체 또는 항원-결합 단편에 접합된 경우에 관찰된다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 HER2를 표적화한다. 일부 실시양태에서, HER2-표적화 항체 또는 항원-결합 단편은 트라스투주맙이다.
링커
일부 실시양태에서, ADC 내의 링커는 치료상 유효하기에 충분한 방식으로 세포외에서 안정하다. 일부 실시양태에서, 링커는 세포 외부에서 안정하여, ADC가 세포외 조건에 존재할 때 (예를 들어, 세포 내로의 수송 또는 전달 전에) 무손상으로 유지된다. ADC와 관련하여 사용된 용어 "무손상"은 항체 또는 항원-결합 단편이 약물 모이어티 (예를 들어, Bcl-xL 억제제)에 부착되어 유지되는 것을 의미한다.
링커, 또는 링커를 포함하는 ADC와 관련하여 본원에 사용된 "안정한"은 ADC가 세포외 조건에 존재하는 경우에 ADC의 샘플에서 20%이하, 약 15%이하, 약 10%이하, 약 5%이하, 약 3%이하 또는 약 1%이하 (또는 그 사이의 임의의 백분율)의 링커가 절단되는 것 (또는 전체 ADC의 경우에는 달리 무손상이 아님)을 의미한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 링커 및/또는 ADC는 대안적 링커, 및/또는 대안적 링커 및/또는 Bcl-xL 억제제 페이로드를 갖는 ADC와 비교하여 안정하다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 ADC는 약 48시간 초과, 60시간 초과, 약 72시간 초과, 약 84시간 초과 또는 약 96시간 초과 동안 무손상으로 유지될 수 있다.
링커가 세포외에서 안정한지 여부는, 예를 들어 ADC를 혈장에 미리 결정된 기간 (예를 들어, 2, 4, 6, 8, 16, 24, 48 또는 72시간) 동안 포함시킨 다음, 혈장에 존재하는 유리 약물 모이어티의 양을 정량화함으로써 결정될 수 있다. 안정성은 ADC 시간이 표적 암 세포에 국재화되게 하고 약물 모이어티의 조기 방출 (이는 정상 및 암 조직 둘 다를 무차별적으로 손상시킴으로써 ADC의 치료 지수를 낮출 수 있음)을 방지할 수 있다. 일부 실시양태에서, 링커는 표적 세포 외부에서 안정하고, 세포 내부에서 ADC로부터 약물 모이어티를 한번에 방출하여, 약물이 그의 표적에 결합할 수 있도록 한다. 따라서, 효과적인 링커는 (i) 항체 또는 항원-결합 단편의 특이적 결합 특성을 유지하고; (ii) 항체 또는 항원-결합 단편에 대한 안정한 부착을 통해 약물 모이어티의 전달, 예를 들어 세포내 전달을 가능하게 하고; (iii) ADC가 그의 표적 부위로 수송 또는 전달될 때까지 안정하고 무손상으로 유지되고; (iv) 절단 또는 대안적 방출 메카니즘 후에 약물 모이어티의 치료 효과, 예를 들어 세포독성 효과를 허용할 것이다.
링커는 ADC의 물리-화학적 특성에 영향을 미칠 수 있다. 많은 세포독성제가 사실상 소수성이기 때문에, 이들을 추가의 소수성 모이어티를 갖는 항체에 연결시키는 것은 응집을 일으킬 수 있다. ADC 응집체는 불용성이고, 종종 항체 상으로의 달성가능한 약물 로딩을 제한하며, 이는 ADC의 효력에 부정적인 영향을 미칠 수 있다. 일반적으로, 생물제제의 단백질 응집체는 또한 증가된 면역원성과 연관되어 있다. 하기 나타낸 바와 같이, 본원에 개시된 링커는 낮은 응집 수준 및 바람직한 약물 로딩 수준을 갖는 ADC를 생성한다.
링커는 "절단가능한" 또는 "비-절단가능한" 것일 수 있다 (문헌 [Ducry and Stump (2010) Bioconjugate Chem. 21:5-13]). 절단가능한 링커는 특정 환경 인자에 적용될 때, 예를 들어 표적 세포 내로 내재화될 때 약물 모이어티 (예를 들어, Bcl-xL 억제제)를 방출하도록 설계되는 반면, 비-절단가능한 링커는 일반적으로 항체 또는 항원-결합 단편 자체의 분해에 의존한다.
본원에 사용된 용어 "알킬"은 불포화를 함유하지 않는, 탄소 및 수소 원자만으로 이루어진 직쇄형 또는 분지형 탄화수소 쇄 라디칼을 지칭한다. 본원에 사용된 용어 "C1-C6알킬"은 탄소 및 수소 원자만으로 이루어지고, 불포화를 함유하지 않고, 1 내지 6개의 탄소 원자를 갖고, 단일 결합에 의해 분자의 나머지에 부착되는 직쇄형 또는 분지형 탄화수소 쇄 라디칼을 지칭한다. "C1-C6알킬" 기의 비제한적 예는 메틸 (C1알킬), 에틸 (C2알킬), 1-메틸에틸 (C3알킬), n-프로필 (C3알킬), 이소프로필 (C3알킬), n-부틸 (C4알킬), 이소부틸 (C4알킬), sec-부틸 (C4알킬), tert-부틸 (C4알킬), n-펜틸 (C5알킬), 이소펜틸 (C5알킬), 네오펜틸 (C5알킬) 및 헥실 (C6알킬)을 포함한다
본원에 사용된 용어 "알케닐"은 적어도 1개의 이중 결합을 함유하는, 탄소 및 수소 원자만으로 이루어진 직쇄형 또는 분지형 탄화수소 쇄 라디칼 기를 지칭한다. 본원에 사용된 용어 "C2-C6알케닐"은 탄소 및 수소 원자만으로 이루어지고, 1개 이상의 이중 결합을 함유하고, 2 내지 6개의 탄소 원자를 갖고, 단일 결합에 의해 분자의 나머지에 부착되는 직쇄형 또는 분지형 탄화수소 쇄 라디칼 기를 지칭한다. "C2-C6알케닐" 기의 비제한적 예는 에테닐 (C2알케닐), 프로프-1-에닐 (C3알케닐), 부트-1-에닐 (C4알케닐), 펜트-1-에닐 (C5알케닐), 펜트-4-에닐 (C5알케닐), 펜타-1,4-디에닐 (C5알케닐), 헥사-1-에닐 (C6알케닐), 헥사-2-에닐 (C6알케닐), 헥사-3-에닐 (C6알케닐), 헥사-1,4-디에닐 (C6알케닐), 헥사-1,5-디에닐 (C6알케닐) 및 헥사-2,4-디에닐 (C6알케닐)을 포함한다. 본원에 사용된 용어 "C2-C3알케닐"은 탄소 및 수소 원자만으로 이루어지고, 1개 이상의 이중 결합을 함유하고, 2 내지 3개의 탄소 원자를 갖고, 단일 결합에 의해 분자의 나머지에 부착된 직쇄형 또는 분지형 탄화수소 쇄 라디칼 기를 지칭한다. "C2-C3알케닐" 기의 비제한적 예는 에테닐 (C2알케닐) 및 프로프-1-에닐 (C3알케닐)을 포함한다.
본원에 사용된 용어 "알킬렌"은 탄소 및 수소 원자만으로 이루어지고, 불포화를 함유하지 않는 2가 직쇄형 또는 분지형 탄화수소 쇄 라디칼을 지칭한다. 본원에 사용된 용어 "C1-C6알킬렌"은 탄소 및 수소 원자만으로 이루어지고, 불포화를 함유하지 않으며, 1 내지 6개의 탄소 원자를 갖는 2가 직쇄형 또는 분지형 탄화수소 쇄 라디칼을 지칭한다. "C1-C6알킬렌" 기의 비제한적 예는 메틸렌 (C1알킬렌), 에틸렌 (C2알킬렌), 1-메틸에틸렌 (C3알킬렌), n-프로필렌 (C3알킬렌), 이소프로필렌 (C3알킬렌), n-부틸렌 (C4알킬렌), 이소부틸렌 (C4알킬렌), sec-부틸렌 (C4알킬렌), tert-부틸렌 (C4알킬렌), n-펜틸렌 (C5알킬렌), 이소펜틸렌 (C5알킬렌), 네오펜틸렌 (C5알킬렌), 및 헥실렌 (C6알킬렌)을 포함한다.
본원에 사용된 용어 "알케닐렌"은 탄소 및 수소 원자만으로 이루어지고, 적어도 1개의 이중 결합을 함유하는 2가 직쇄형 또는 분지형 탄화수소 쇄 라디칼을 지칭한다. 본원에 사용된 용어 "C2-C6알케닐렌"은 탄소 및 수소 원자만으로 이루어지고, 1개 이상의 이중 결합을 함유하고, 2 내지 6개의 탄소 원자를 갖는 2가 직쇄형 또는 분지형 탄화수소 쇄 라디칼 기를 지칭한다. "C2-C6알케닐렌" 기의 비제한적 예는 에테닐렌 (C2알케닐렌), 프로프-1-에닐렌 (C3알케닐렌), 부트-1-에닐렌 (C4알케닐렌), 펜트-1-에닐렌 (C5알케닐렌), 펜트-4-에닐렌 (C5알케닐렌), 펜타-1,4-디에닐렌 (C5알케닐렌), 헥사-1-에닐렌 (C6알케닐렌), 헥사-2-에닐렌 (C6알케닐렌), 헥사-3-에닐렌 (C6알케닐렌), 헥사-1,4-디에닐렌 (C6알케닐렌), 헥사-1,5-디에닐렌 (C6알케닐렌) 및 헥사-2,4-디에닐렌 (C6알케닐렌)을 포함한다. 본원에 사용된 용어 "C2-C6알케닐렌"은 탄소 및 수소 원자만으로 이루어지고, 1개 이상의 이중 결합을 함유하고, 2 내지 탄소 원자를 갖는 2가 직쇄형 또는 분지형 탄화수소 쇄 라디칼 기를 지칭한다. "C2-C3알케닐렌" 기의 비제한적 예는 에테닐렌 (C2알케닐렌) 및 프로프-1-에닐렌 (C3알케닐렌)을 포함한다.
본원에 사용된 용어 "시클로알킬" 또는 "C3-C8시클로알킬"은 포화, 모노시클릭, 융합된 비시클릭, 융합된 트리시클릭 또는 가교된 폴리시클릭 고리계를 지칭한다. 융합된 비시클릭 또는 가교된 폴리시클릭 고리계의 비제한적 예는 비시클로[1.1.1]펜탄, 비시클로[2.1.1]헥산, 비시클로[2.2.1]헵탄, 비시클로[3.1.1]헵탄, 비시클로[3.2.1]옥탄, 비시클로[2.2.2]옥탄 및 아다만타닐을 포함한다. 모노시클릭 C3-C8시클로알킬 기의 비제한적 예는 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸, 시클로헥실, 시클로헵틸 및 시클로옥틸 기를 포함한다.
본원에 사용된 용어 "아릴"은 페닐, 나프틸, 비페닐 또는 인데닐 기를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "헤테로아릴"은 적어도 1개의 방향족 모이어티를 갖고 산소, 황 및 질소 (4급 질소 포함)로부터 선택된 1 내지 4개의 헤테로 원자를 함유하는, 5 내지 10개의 고리원으로 구성된 임의의 모노- 또는 비-시클릭 기를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "시클로알킬"은 융합, 가교 또는 스피로 고리계를 포함할 수 있는, 3 내지 10개의 고리원을 함유하는 임의의 모노- 또는 비-시클릭 비-방향족 카르보시클릭 기를 지칭한다. 융합된 비시클릭 또는 가교된 고리계의 비제한적 예는 비시클로[1.1.1]펜탄, 비시클로[2.1.1]헥산, 비시클로[2.2.1]헵탄, 비시클로[3.1.1]헵탄, 비시클로[3.2.1]옥탄 및 비시클로[2.2.2]옥탄을 포함한다. 모노시클릭 C3-C8시클로알킬 기의 비제한적 예는 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸, 시클로헥실, 시클로헵틸 및 시클로옥틸 기를 포함한다.
용어 "헤테로시클로알킬"은 3 내지 10개의 고리원으로 구성되고 산소, 황, SO, SO2 및 질소로부터 선택된 1 내지 3개의 헤테로원자를 함유하는 임의의 모노- 또는 비-시클릭 비-방향족 카르보시클릭 기를 의미하며, 비시클릭 기는 융합 또는 스피로 유형일 수 있는 것으로 이해된다. C3-C8헤테로시클로알킬은 3 내지 8개의 고리 탄소 원자를 갖는 헤테로시클로알킬을 지칭한다. 헤테로시클로알킬은 4 내지 10개의 고리원을 가질 수 있다.
용어 헤테로아릴렌, 시클로알킬렌, 헤테로시클로알킬렌은 2가 헤테로아릴, 시클로알킬 및 헤테로시클로알킬을 의미한다.
본원에 사용된 용어 "할로알킬"은 탄화수소 쇄를 따라 수소 대신 1개 이상의 할로겐 기로 치환된 선형 또는 분지형 알킬 쇄를 지칭한다. 할로알킬 기에서의 치환에 적합한 할로겐 기의 예는 플루오린, 브로민, 염소 및 아이오딘을 포함한다. 할로알킬 기는 알킬 쇄 내의 수소 대신 다수의 할로겐 기로의 치환을 포함할 수 있으며, 여기서 상기 할로겐 기는 알킬 쇄 내의 동일한 탄소에 또는 또 다른 탄소에 부착될 수 있다.
본원에 사용된 알킬, 알케닐, 알키닐, 알콕시, 아미노, 아릴, 헤테로아릴, 시클로알킬 및 헤테로시클로알킬 기는 임의로 치환된 선형 또는 분지형 (C1-C6)알킬, 임의로 치환된 선형 또는 분지형 (C2-C6)알케닐 기, 임의로 치환된 선형 또는 분지형 (C2-C6)알키닐 기, 임의로 치환된 선형 또는 분지형 (C1-C6)알콕시, 임의로 치환된 (C1-C6)알킬-S-, 히드록시, 옥소 (또는 적절한 경우에 N-옥시드), 니트로, 시아노, -C(O)-OR0', -O-C(O)-R0', -C(O)-NR0'R0", -NR0'R0", -(C=NR0')-OR0", 선형 또는 분지형 (C1-C6)할로알킬, 트리플루오로메톡시 또는 할로겐으로부터 선택되는 1 내지 4개의 기에 의해 임의로 치환될 수 있고, 여기서 R0' 및 R0"은 각각 독립적으로 수소 원자 또는 임의로 치환된 선형 또는 분지형 (C1-C6)알킬 기이고, 여기서 선형 또는 분지형 (C1-C6)알킬 기의 탄소 원자 중 1개 이상은 임의로 중수소화된다.
본원에 사용된 용어 "폴리옥시에틸렌", "폴리에틸렌 글리콜" 또는 "PEG"는 (OCH2CH2) 기로 구성된 선형 쇄, 분지형 쇄 또는 성상 배위를 지칭한다. 특정 실시양태에서 폴리에틸렌 또는 PEG 기는 -(OCH2CH2)t*-이고, 여기서 t는 1-40 또는 4-40이고, 여기서 "-"는 자기-희생적 스페이서를 향해 있는 말단을 나타내고, "*-"는 말단 기 R'에 대한 부착 지점을 나타내고, 여기서 R'는 OH, OCH3 또는 OCH2CH2C(=O)OH이다. 다른 실시양태에서, 폴리에틸렌 또는 PEG 기는 -(CH2CH2O)t*-이고, 여기서 t는 1-40 또는 4-40이고, 여기서 "-"는 자기-희생적 스페이서를 향해 있는 말단을 나타내고, "*-"는 말단 기 R"에 대한 부착 지점을 나타내고, 여기서 R"는 H, CH3 또는 CH2CH2C(=O)OH이다. 예를 들어, 본원에 사용된 용어 "PEG12"는 t가 12임을 의미한다.
본원에 사용된 용어 "폴리알킬렌 글리콜"은 (O(CH2)m)n 기로 구성된 선형 쇄, 분지형 쇄 또는 성상 배위를 지칭한다. 특정 실시양태에서 폴리에틸렌 또는 PEG 기는 -(O(CH2)m)t*-이고, 여기서 m은 1-10이고, t는 1-40 또는 4-40이고, 여기서 "-"는 자기-희생적 스페이서를 향해 있는 말단을 나타내고, "*-"는 말단 기 R'에 대한 부착 지점을 나타내고, 여기서 R'는 OH, OCH3 또는 OCH2CH2C(=O)OH이다. 다른 실시양태에서, 폴리에틸렌 또는 PEG 기는 -((CH2)mO)t*-이고, 여기서 m은 1-10이고, t는 1-40 또는 4-40이고, 여기서 "-"는 자기-희생적 스페이서를 향해 있는 말단을 나타내고, "*-"는 말단 기 R"에 대한 부착 지점을 나타내고, 여기서 R"는 H, CH3 또는 CH2CH2C(=O)OH이다.
본원에 사용된 용어 "반응성 기"는 항체, 항체 단편, 또는 항체 또는 항체 단편에 부착된 또 다른 반응성 기의 관능기와 공유 결합을 형성할 수 있는 관능기이다. 이러한 관능기의 비제한적 예는 본원에 제공된 표 8의 반응성 기를 포함한다.
본원에 사용된 용어 "부착 기" 또는 "커플링 기"는 가교 스페이서를 항체 또는 그의 단편에 연결하는 2가 모이어티를 지칭한다. 부착 또는 커플링 기는 반응 기와 항체 또는 그의 단편 상의 관능기 사이의 반응에 의해 형성된 2가 모이어티이다. 이러한 2가 모이어티의 비제한적 예는 본원에 제공된 표 8 및 표 9에 주어진 2가 화학적 모이어티를 포함한다.
본원에 사용된 용어 "가교 스페이서"는 2가 펩티드 스페이서를 반응성 기에 연결하거나, 2가 펩티드 공간을 커플링 기에 연결하거나 또는 부착 기를 적어도 1개의 절단가능한 기에 연결하는 2가 모이어티를 형성하도록 함께 공유 부착된 1개 이상의 링커 성분을 지칭한다. 특정 실시양태에서, "가교 스페이서"는 아미드 결합을 통해 2가 펩티드 스페이서의 N-말단에 부착된 카르복실 기를 포함한다.
본원에 사용된 용어 "스페이서 모이어티"는 자기 희생적 스페이서를 친수성 모이어티에 연결하는 모이어티를 형성하도록 함께 공유 부착된 1개 이상의 링커 성분을 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "2가 펩티드 스페이서"는 가교 스페이서를 자기 희생적 스페이서에 연결하는 모이어티를 형성하도록 함께 공유 부착된 1개 이상의 아미노산 잔기를 포함하는 2가 링커를 지칭한다. 1개 이상의 아미노산 잔기는 알라닌 (Ala), 시스테인 (Cys), 아스파르트산 (Asp), 글루탐산 (Glu), 페닐알라닌 (Phe), 글리신 (Gly), 히스티딘 (His), 이소류신 (Ile), 리신 (Lys), 류신 (Leu), 메티오닌 (Met), 아스파라긴 (Asn), 프롤린 (Pro), 글루타민 (Gln), 아르기닌 (Arg), 세린 (Ser), 트레오닌 (Thr), 발린 (Val), 트립토판 (Trp), 티로신 (Tyr), 시트룰린 (Cit), 노르발린 (Nva), 노르류쿤 (Nle), 셀레노시스테인 (Sec), 피롤리신 (Pyl), 호모세린, 호모시스테인 및 데스메틸 피롤리신으로부터 선택되는 아미노산의 잔기일 수 있다.
특정 실시양태에서, "2가 펩티드 스페이서"는 각각의 잔기가 알라닌 (Ala), 시스테인 (Cys), 아스파르트산 (Asp), 글루탐산 (Glu), 페닐알라닌 (Phe), 글리신 (Gly), 히스티딘 (His), 이소류신 (Ile), 리신 (Lys), 류신 (Leu), 메티오닌 (Met), 아스파라긴 (Asn), 프롤린 (Pro), 글루타민 (Gln), 아르기닌 (Arg), 세린 (Ser), 트레오닌 (Thr), 발린 (Val), 트립토판 (Trp), 티로신 (Tyr), 시트룰린 (Cit), 노르발린 (Nva), 노르류쿤 (Nle), 셀레노시스테인 (Sec), 피롤리신 (Pyl), 호모세린, 호모시스테인 및 데스메틸 피롤리신, 예를 들어 -ValCit*; -CitVal*; -AlaAla*; -AlaCit*; -CitAla*; -AsnCit*; -CitAsn*; -CitCit*; -ValGlu*; -GluVal*; -SerCit*; -CitSer*; -LysCit*; -CitLys*; -AspCit*; -CitAsp*; -AlaVal*; -ValAla*; -PheAla*; -AlaPhe*; -PheLys*; -LysPhe*; -ValLys*; -LysVal*; -AlaLys*; -LysAla*; -PheCit*; -CitPhe*; -LeuCit*; -CitLeu*; -IleCit*; -CitIle*; -PheArg*; -ArgPhe*; -CitTrp*; -TrpCit*; -PhePheLys*; -LysPhePhe*; -DPhePheLys*; -DLysPhePhe*; -GlyPheLys*; -LysPheGly*; -GlyPheLeuGly- [서열식별번호: 145]; -GlyLeuPheGly- [서열식별번호: 146]; -AlaLeuAlaLeu- [서열식별번호: 147], -GlyGlyGly*; -GlyGlyGlyGly- [서열식별번호: 148]; -GlyPheValGly- [서열식별번호: 149]; 및 -GlyValPheGly- [서열식별번호: 150]로부터 선택되는 아미노산의 잔기로부터 독립적으로 선택되는 2 내지 4개의 아미노산 잔기의 조합이며, 여기서 "-"는 가교 스페이서에 대한 부착 지점을 나타내고, "*"는 자기-희생적 스페이서에 대한 부착 지점을 나타낸다.
본원에 사용된 용어 "링커 성분"은 링커의 일부인 화학적 모이어티를 지칭한다. 링커 성분의 예는 알킬렌 기: -(CH2)n- (이는 선형 또는 분지형일 수 있음) (이 경우에 n은 1-18임); 알케닐렌 기; 알키닐렌 기; 알케닐 기; 알키닐 기; 에틸렌 글리콜 단위: -OCH2CH2- 또는 -CH2CH2O-; 폴리에틸렌 글리콜 단위: (-CH2CH2O-)x (이 경우에 x는 2-20임); -O-; -S-; 카르보닐:-C(=O); 에스테르: C(=O)-O 또는 O-C(=O); 카르보네이트: -OC(=O)O-; 아민: -NH-; 3급 아민; 아미드: -C(=O)-NH-, -NH-C(=O)- 또는 -C(=O)N(C1-6알킬); 카르바메이트: -OC(=O)NH- 또는 -NHC(=O)O; 우레아: -NHC(=O)NH; 술폰아미드: -S(O)2NH- 또는 -NHS(O)2; 에테르: -CH2O- 또는 -OCH2-; 카르복시, 술포네이트, 히드록실, 아민, 아미노산, 사카라이드, 포스페이트 및 포스포네이트로부터 독립적으로 선택되는 1개 이상의 기로 치환된 알킬렌; 카르복시, 술포네이트, 히드록실, 아민, 아미노산, 사카라이드, 포스페이트 및 포스포네이트로부터 독립적으로 선택되는 1개 이상의 기로 치환된 알케닐렌; 카르복시, 술포네이트, 히드록실, 아민, 아미노산, 사카라이드, 포스페이트 및 포스포네이트로부터 독립적으로 선택되는 1개 이상의 기로 치환된 알키닐렌; 1개 이상의 메틸렌 기가 1개 이상의 -S-, -NH- 또는 -O- 모이어티에 의해 대체된 C1-C10알킬렌; 2개의 이용가능한 부착 지점을 갖는 고리계, 예컨대 페닐 (1,2-, 1,3- 및 1,4-이치환된 페닐 포함), C5-C6 헤테로아릴, C3-C8 시클로알킬 (1,1-이치환된 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸 또는 시클로헥실 및 1,4-이치환된 시클로헥실 포함), 및 C4-C8 헤테로시클로알킬; 알라닌 (Ala), 시스테인 (Cys), 아스파르트산 (Asp), 글루탐산 (Glu), 페닐알라닌 (Phe), 글리신 (Gly), 히스티딘 (His), 이소류신 (Ile), 리신 (Lys), 류신 (Leu),메티오닌 (Met), 아스파라긴 (Asn), 프롤린 (Pro), 글루타민 (Gln), 아르기닌 (Arg), 세린 (Ser), 트레오닌 (Thr), 발린 (Val), 트립토판 (Trp), 티로신 (Tyr), 시트룰린 (Cit), 노르발린 (Nva), 노르류쿤 (Nle), 셀레노시스테인 (Sec), 피롤리신 (Pyl), 호모세린, 호모시스테인 및 데스메틸 피롤리신으로부터 선택되는 아미노산의 잔기; 각각의 잔기가 알라닌 (Ala), 시스테인 (Cys), 아스파르트산 (Asp), 글루탐산 (Glu), 페닐알라닌 (Phe), 글리신 (Gly), 히스티딘 (His), 이소류신 (Ile), 리신 (Lys), 류신 (Leu),메티오닌 (Met), 아스파라긴 (Asn), 프롤린 (Pro), 글루타민 (Gln), 아르기닌 (Arg), 세린 (Ser), 트레오닌 (Thr), 발린 (Val), 트립토판 (Trp), 티로신 (Tyr), 시트룰린 (Cit), 노르발린 (Nva), 노르류쿤 (Nle), 셀레노시스테인 (Sec), 피롤리신 (Pyl), 호모세린, 호모시스테인 및 데스메틸 피롤리신으로부터 선택되는 아미노산의 잔기로부터 독립적으로 선택되는 2개 이상의 아미노산 잔기의 조합, 예를 들어 Val-Cit; Cit-Val; Ala-Ala; Ala-Cit; Cit-Ala; Asn-Cit; Cit-Asn; Cit-Cit; Val-Glu; Glu-Val; Ser-Cit; Cit-Ser; Lys-Cit; Cit-Lys; Asp-Cit; Cit-Asp; Ala-Val; Val-Ala; Phe-Lys; Lys-Phe; Val-Lys; Lys-Val; Ala-Lys; Lys-Ala; Phe-Cit; Cit-Phe; Leu-Cit; Cit-Leu; Ile-Cit; Cit-Ile; Phe-Arg; Arg-Phe; Cit-Trp; 및 Trp-Cit; 및 산-유도된 절단, 펩티다제-유도된 절단, 에스테라제-유도된 절단, 글리코시다제 유도된 절단, 포스포디에스테라제 유도된 절단, 포스파타제 유도된 절단, 프로테아제 유도된 절단, 리파제 유도된 절단 또는 디술피드 결합 절단에 감수성인 1개 이상의 보호 (촉발) 기를 포함하는 자기-희생적 스페이서를 포함한다.
이러한 자기-희생적 스페이서의 비제한적 예는 하기를 포함한다:
Figure pct00379
여기서, PG는 보호 (촉발) 기이고;
Xa는 O, NH 또는 S이고;
Xb는 O, NH, NCH3 또는 S이고;
Xc는 O 또는 NH이고;
Ya는 CH2, CH2O 또는 CH2NH이고;
Yb는 CH2, O 또는 NH이고;
Yc는 결합, CH2, O 또는 NH이고,
LG는 이탈기, 예컨대 본 발명의 링커-약물 기의 약물 모이어티 (D)이다.
이러한 자기 희생적 스페이서의 추가의 비제한적 예는 문헌 [Angew. Chem. Int. Ed. 2015, 54, 7492 - 7509]에 기재되어 있다.
또한, 링커 성분은 2개의 반응성 기 사이의 반응에 의해 용이하게 형성되는 화학적 모이어티일 수 있다. 이러한 화학적 모이어티의 비제한적 예는 표 8에 주어진다.
표 8
Figure pct00380
Figure pct00381
Figure pct00382
Figure pct00383
Figure pct00384
여기서, 표 8에서 R32는 H, C1-4알킬, 페닐, 피리미딘 또는 피리딘이고; 표 8에서 R35는 H, C1-6알킬, 페닐, 또는 1 내지 3개의 -OH 기로 치환된 C1-4알킬이고; 표 8에서 각각의 R7은 독립적으로 H, C1-6알킬, 플루오로, -C(=O)OH로 치환된 벤질옥시, -C(=O)OH로 치환된 벤질, -C(=O)OH로 치환된 C1-4알콕시, 및 -C(=O)OH로 치환된 C1-4알킬로부터 선택되고; 표 8에서 R37은 H, 페닐 및 피리딘으로부터 독립적으로 선택되고; 표 8에서 q는 0, 1, 2 또는 3이고; 표 8에서 R8 및 R13은 H 또는 메틸이고; 표 8에서 R9 및 R14는 H, -CH3 또는 페닐이고; 표 8에서 R은 H 또는 임의의 적합한 치환기이고; 표 8에서 R50은 H이다.
또한, 링커 성분은 하기 표 9에 열거된 기일 수 있다.
표 9.
Figure pct00385
Figure pct00386
Figure pct00387
본원에 사용된 바와 같이, 화합물의 부분 구조가 예시되는 경우, 파상선 ()은 분자의 나머지 부분에 대한 부분 구조의 부착 지점을 나타낸다.
본원에 사용된 용어 "자기-희생적 스페이서" 및 "자기-희생적 기"는 산-유도된 절단, 펩티다제-유도된 절단, 에스테라제-유도된 절단, 글리코시다제 유도된 절단, 포스포디에스테라제 유도된 절단, 포스파타제 유도된 절단, 프로테아제 유도된 절단, 리파제 유도된 절단 또는 디술피드 결합 절단에 의해 활성화되고, 활성화 후에 보호기가 제거되어, 이탈기의 일시적인 순차적 방출을 유도하는 분해 반응의 캐스케이드를 생성하는 1개 이상의 촉발 기 (TG)를 포함하는 모이어티를 지칭한다. 이러한 반응 캐스케이드는 1,4-, 1,6- 또는 1,8-제거 반응일 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다.
자기-희생적 스페이서 또는 기의 비제한적 예는 하기를 포함한다:
Figure pct00389
(여기서, 이러한 기는 임의로 치환될 수 있음)
여기서:
TG는 촉발 기이고;
Xa는 O, NH 또는 S이고;
Xb는 O, NH, NCH3 또는 S이고;
Xc는 O 또는 NH이고;
Ya는 CH2, CH2O 또는 CH2NH이고;
Yb는 CH2, O 또는 NH이고;
Yc는 결합, CH2, O 또는 NH이고,
LG는 이탈기, 예컨대 본 발명의 링커-약물 기의 약물 모이어티 (D)이다.
자기 희생적 스페이서의 부가의 비-제한적 예는 문헌 [Angew. Chem. Int. Ed. 2015, 54, 7492 - 7509]에 기재되어 있다.
특정 실시양태에서, 자기-희생적 스페이서는 구조
Figure pct00390
를 갖는 모이어티이고, 여기서 Lp는 효소적으로 절단가능한 2가 펩티드 스페이서이고, A, D, L3 및 R2는 본원에 정의된 바와 같다.
바람직한 실시양태에서, 자기-희생적 스페이서는 구조
Figure pct00391
를 갖는 모이어티이고, 여기서 Lp는 효소적으로 절단가능한 2가 펩티드 스페이서이고, D, L3 및 R2는 본원에 정의된 바와 같다. 일부 실시양태에서, D는 4급화된 3급 아민-함유 Bcl-xL 억제제이다.
다른 바람직한 실시양태에서, 자기-희생적 스페이서는 구조
Figure pct00392
를 갖는 모이어티이고, 여기서 Lp는 효소적으로 절단가능한 2가 펩티드 스페이서이고, D, L3 및 R2는 본원에 정의된 바와 같다.
본원에 사용된 용어 "친수성 모이어티"는 약물 모이어티 (D)가 본 발명의 링커 기에 부착되는 경우에 약물 모이어티 (D)의 수용해도를 증가시키는 친수성 특성을 갖는 모이어티를 지칭한다. 이러한 친수성 기의 예는 폴리에틸렌 글리콜, 폴리알킬렌 글리콜, 당, 올리고사카라이드, 1 내지 3개의
Figure pct00393
기로 치환된 C2-C6알킬인 폴리펩티드를 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
약물 모이어티
일부 실시양태에서, 링커 모이어티의 전구체인 중간체는 적절한 조건 하에 약물 모이어티 (예를 들어, Bcl-xL 억제제)와 반응한다. 일부 실시양태에서, 반응성 기가 약물 및/또는 중간체 또는 링커 상에 사용된다. 약물 및 중간체 사이의 반응 생성물 또는 유도체화된 약물 (약물 플러스 링커)은 후속적으로 약물 및 중간체 또는 유도체화된 약물 및 항체 또는 항원-결합 단편의 접합을 용이하게 하는 조건 하에 항체 또는 항원-결합 단편과 반응한다. 대안적으로, 중간체 또는 링커는 먼저 항체 또는 항원-결합 단편 또는 유도체화된 항체 또는 항원-결합 단편과 반응한 다음, 약물 또는 유도체화된 약물과 반응할 수 있다.
항체 또는 항원-결합 단편에 대한 약물 모이어티 및/또는 링커 모이어티의 공유 부착을 위해 다수의 상이한 반응이 이용가능하다. 이는 종종 리신의 아민 기, 글루탐산 및 아스파르트산의 유리 카르복실산 기, 시스테인의 술프히드릴 기 및 방향족 아미노산의 다양한 모이어티를 포함한, 항체 또는 항원-결합 단편의 1개 이상의 아미노산 잔기의 반응에 의해 달성된다. 예를 들어, 비-특이적 공유 부착은 약물 모이어티 상의 카르복시 (또는 아미노) 기를 항체 또는 항원-결합 단편 상의 아미노 (또는 카르복시) 기에 연결하는 카르보디이미드 반응을 사용하여 수행될 수 있다. 추가로, 이관능성 작용제, 예컨대 디알데히드 또는 이미도에스테르가 또한 약물 모이어티 상의 아미노 기를 항체 또는 항원-결합 단편 상의 아미노 기에 연결하는데 사용될 수 있다. 또한, 결합제에 대한 약물 (예를 들어, Bcl-xL 억제제)의 부착을 위해 쉬프 염기 반응이 이용가능하다. 이 방법은 알데히드를 형성한 후 결합제와 반응하는, 글리콜 또는 히드록시 기를 함유하는 약물의 퍼아이오데이트 산화를 수반한다. 부착은 결합제의 아미노 기와 쉬프 염기의 형성을 통해 발생한다. 이소티오시아네이트는 또한 약물을 결합제에 공유 부착하기 위한 커플링제로서 사용될 수 있다. 다른 기술이 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지되어 있고, 본 개시내용의 범주 내에 있다. 관련 기술분야에 공지된 다양한 화학을 사용하여 생성되고 항체 또는 항원-결합 단편에 연결될 수 있는 약물 모이어티의 예는 Bcl-xL 억제제, 예를 들어 본원에 기재되고 예시된 Bcl-xL 억제제를 포함한다.
적합한 약물 모이어티는 화학식 (I), (IA), (IB), (IC), (II), (IIA), (IIB) 또는 (IIC)의 화합물, 또는 그의 거울상이성질체, 부분입체이성질체, 및/또는 제약상 허용되는 산 또는 염기와의 부가염을 포함할 수 있다. 추가로, 약물 모이어티는 본원에 기재된 Bcl-xL 억제제 (D)의 임의의 화합물을 포함할 수 있다.
일부 실시양태에서, 약물 모이어티 (D)는 표 A2로부터 선택된 화학식을 포함한다.
일부 실시양태에서, 약물 모이어티 (D)는 관련 기술분야에 공지된 Bcl-xL 억제제, 예를 들어 ABT-737 및 ABT-263을 포함한다.
일부 실시양태에서, 약물 모이어티 (D)는 하기로부터 선택된 Bcl-xL 억제제를 포함한다:
Figure pct00394
일부 실시양태에서, 링커-약물 (또는 "링커-페이로드") 모이어티 -(L-D)는 표 B의 화합물 또는 상기 중 임의의 것의 거울상이성질체, 부분입체이성질체, 중수소화 유도체 및/또는 제약상 허용되는 염을 포함할 수 있다.
약물 로딩
약물 로딩은 p로 표시되고, 본원에서 약물-대-항체 비 (DAR)로도 지칭된다. 약물 로딩은 항체 또는 항원-결합 단편당 1 내지 16개의 약물 모이어티의 범위일 수 있다. 일부 실시양태에서, p는 1 내지 16의 정수이다. 일부 실시양태에서, p는 1 내지 16, 1 내지 15, 1 내지 14, 1 내지 13, 1 내지 12, 1 내지 11, 1 내지 10, 1 내지 9, 1 내지 8, 1 내지 7, 1 내지 6, 1 내지 5, 1 내지 4, 1 내지 3 또는 1 내지 2의 정수이다. 일부 실시양태에서, p는 2 내지 10, 2 내지 9, 2 내지 8, 2 내지 7, 2 내지 6, 2 내지 5, 2 내지 4 또는 2 내지 3의 정수이다. 일부 실시양태에서, p는 1 내지 16의 정수이다. 일부 실시양태들에서, p는 1 내지 8의 정수이다. 일부 실시양태들에서, p는 1 내지 5의 정수이다. 일부 실시양태들에서, p는 2 내지 4의 정수이다. 일부 실시양태에서, p는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 또는 8이다. 일부 실시양태들에서, p는 2이다. 일부 실시양태들에서, p는 4이다.
약물 로딩은 항체 또는 항원-결합 단편 상의 부착 부위의 수에 의해 제한될 수 있다. 일부 실시양태에서, ADC의 링커 모이어티 (L)는 항체 또는 항원-결합 단편 상의 1개 이상의 아미노산 잔기 상의 화학적 활성 기를 통해 항체 또는 항원-결합 단편에 부착된다. 예를 들어, 링커는 유리 아미노, 이미노, 히드록실, 티올 또는 카르복실 기를 통해 (예를 들어, N- 또는 C-말단에, 하나 이상의 리신 잔기의 엡실론 아미노 기에, 하나 이상의 글루탐산 또는 아스파르트산 잔기의 유리 카르복실산 기에 또는 하나 이상의 시스테인 잔기의 술프히드릴 기에) 항체 또는 항원-결합 단편에 부착될 수 있다. 링커가 부착되는 부위는 항체 또는 항원-결합 단편의 아미노산 서열 내의 천연 잔기일 수 있거나, 또는 예를 들어 DNA 재조합 기술에 의해 (예를 들어, 시스테인 잔기를 아미노산 서열 내로 도입함으로써) 또는 단백질 생화학에 의해 (예를 들어, 환원, pH 조정 또는 가수분해에 의해) 항체 또는 항원-결합 단편 내로 도입될 수 있다.
일부 실시양태에서, 항체 또는 항원-결합 단편에 접합될 수 있는 약물 모이어티의 수는 유리 시스테인 잔기의 수에 의해 제한된다. 예를 들어, 부착이 시스테인 티올 기인 경우, 항체는 단지 1개 또는 소수 개의 시스테인 티올 기를 가질 수 있거나, 또는 그를 통해 링커가 부착될 수 있는 충분히 반응성인 티올 기를 단지 1개 또는 소수 개 가질 수 있다. 일반적으로, 항체는 약물 모이어티에 연결될 수 있는 많은 유리 및 반응성 시스테인 티올 기를 함유하지 않는다. 실제로, 항체 내의 대부분의 시스테인 티올 잔기는 쇄간 또는 쇄내 디술피드 결합에 포함된다. 따라서, 시스테인에 대한 접합은 일부 실시양태에서 항체의 적어도 부분적인 환원을 필요로 할 수 있다. 항체에 대한 링커-독소의 과다-부착은 디술피드 결합을 형성하는데 이용가능한 시스테인 잔기를 환원시킴으로써 항체를 탈안정화시킬 수 있다. 따라서, 최적의 약물:항체 비는 항체 또는 항원-결합 단편을 탈안정화시키지 않으면서 (항체당 부착된 약물 모이어티의 수를 증가시킴으로써) ADC의 효력을 증가시켜야 한다. 일부 실시양태에서, 최적 비는 2, 4, 6 또는 8일 수 있다. 일부 실시양태에서, 최적 비는 2 또는 4일 수 있다.
일부 실시양태에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 1개 이상의 유리 시스테인 잔기를 생성하기 위해 접합 전에 환원 조건에 노출된다. 일부 실시양태에서, 항체를 부분 또는 전체 환원 조건 하에 환원제, 예컨대 디티오트레이톨 (DTT) 또는 트리스(2-카르복시에틸)포스핀 (TCEP)으로 환원시켜 반응성 시스테인 티올 기를 생성할 수 있다. 쌍형성되지 않은 시스테인은 제한된 몰 당량의 TCEP로의 부분 환원을 통해 생성될 수 있으며, 이는 경쇄 및 중쇄 (H-L 쌍형성당 1개의 쌍) 및 힌지 영역 내의 2개의 중쇄 (인간 IgG1의 경우에 H-H 쌍형성당 2개의 쌍)를 연결하는 쇄간 디술피드 결합을 환원시키면서 쇄내 디술피드 결합을 무손상 상태로 남길 수 있다 (문헌 [Stefano et al. (2013) Methods Mol Biol. 1045:145-71]). 실시양태에서, 항체 내의 디술피드 결합은, 예를 들어 교대 환원 및 산화 전압을 적용하는 작업 전극을 사용함으로써 전기화학적으로 환원된다. 이러한 접근법은 분석 장치 (예를 들어, 전기화학적 검출 장치, NMR 분광계 또는 질량 분광계) 또는 화학적 분리 장치 (예를 들어, 액체 크로마토그래프 (예를 들어, HPLC) 또는 전기영동 장치 (예를 들어, US 2014/0069822 참조))에 대한 디술피드 결합 환원의 온-라인 커플링을 가능하게 할 수 있다. 일부 실시양태에서, 항체는 변성 조건에 적용되어 아미노산 잔기, 예컨대 시스테인 상의 반응성 친핵성 기를 드러낸다.
ADC의 약물 로딩은 다양한 방식으로, 예를 들어 (i) 항체 대비 몰 과량의 약물-링커 중간체 또는 링커 시약을 제한하고/거나; (ii) 접합 반응 시간 또는 온도를 제한하고/거나; (iii) 시스테인 티올 변형을 위한 부분적 또는 제한적 환원 조건을 제한하고/거나; (iv) 링커-약물 부착의 수 및/또는 위치의 제어를 위해 시스테인 잔기의 수 및 위치가 변형되도록 재조합 기술에 의해 항체의 아미노산 서열을 조작함으로써 제어될 수 있다.
일부 실시양태에서, 유리 시스테인 잔기가 항체 또는 항원-결합 단편의 아미노산 서열 내로 도입된다. 예를 들어, 모 항체의 1개 이상의 아미노산이 시스테인 아미노산으로 대체된 시스테인 조작된 항체가 제조될 수 있다. 임의의 형태의 항체가 그렇게 조작될 수 있고, 즉 돌연변이될 수 있다. 예를 들어, 모 Fab 항체 단편은 "티오Fab"로 지칭되는 시스테인 조작된 Fab를 형성하도록 조작될 수 있다. 유사하게, 모 모노클로날 항체는 "티오Mab"를 형성하도록 조작될 수 있다. 단일 부위 돌연변이는 티오Fab에서 단일 조작된 시스테인 잔기를 생성하는 반면, 단일 부위 돌연변이는 IgG 항체의 이량체 성질로 인해 티오Mab에서 2개의 조작된 시스테인 잔기를 생성한다. 모 폴리펩티드의 아미노산 서열 변이체를 코딩하는 DNA는 관련 기술분야에 공지된 다양한 방법에 의해 제조될 수 있다 (예를 들어, WO 2006/034488에 기재된 방법 참조). 이들 방법은 폴리펩티드를 코딩하는 앞서 제조된 DNA의 부위-지정 (또는 올리고뉴클레오티드-매개) 돌연변이유발, PCR 돌연변이유발 및 카세트 돌연변이유발에 의한 제조를 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 재조합 항체의 변이체는 또한 제한 단편 조작에 의해 또는 합성 올리고뉴클레오티드를 사용한 중첩 연장 PCR에 의해 구축될 수 있다. 화학식 (1)의 ADC는 1, 2, 3 또는 4개의 조작된 시스테인 아미노산을 갖는 항체를 포함하나 이에 제한되지는 않는다 (문헌 [Lyon et al. (2012) Methods Enzymol. 502:123-38]). 일부 실시양태에서, 1개 이상의 유리 시스테인 잔기는 조작의 사용 없이 항체 또는 항원-결합 단편에 이미 존재하고, 이 경우 존재하는 유리 시스테인 잔기는 항체 또는 항원-결합 단편을 약물 모이어티에 접합시키는데 사용될 수 있다.
항체 또는 항원-결합 단편 및 링커 모이어티의 다중 카피를 포함하는 반응 혼합물에서 1개 초과의 친핵성 기가 약물-링커 중간체 또는 링커 모이어티 시약, 및 이어서 약물 모이어티 시약과 반응하는 경우, 수득된 생성물은 혼합물에서 항체 또는 항원-결합 단편의 각각의 카피에 부착된 1개 이상의 약물 모이어티의 분포를 갖는 ADC 화합물의 혼합물일 수 있다. 일부 실시양태에서, 접합 반응으로부터 생성된 ADC의 혼합물 내의 약물 로딩은 항체 또는 항원-결합 단편당 부착된 1 내지 16개의 약물 모이어티 범위이다. 항체 또는 항원-결합 단편당 약물 모이어티의 평균 수 (즉, 평균 약물 로딩 또는 평균 p)는 관련 기술분야에 공지된 임의의 통상적인 방법에 의해, 예를 들어 질량 분광측정법 (예를 들어, 액체 크로마토그래피-질량 분광측정법 (LC-MS)) 및/또는 고성능 액체 크로마토그래피 (예를 들어, HIC-HPLC)에 의해 계산될 수 있다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 항원-결합 단편당 약물 모이어티의 평균 수는 액체 크로마토그래피-질량 분광측정법 (LC-MS)에 의해 측정된다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 항원-결합 단편당 약물 모이어티의 평균 수는 약 1.5 내지 약 3.5, 약 2.5 내지 약 4.5, 약 3.5 내지 약 5.5, 약 4.5 내지 약 6.5, 약 5.5 내지 약 7.5, 약 6.5 내지 약 8.5 또는 약 7.5 내지 약 9.5이다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 항원-결합 단편당 약물 모이어티의 평균 수는 약 2 내지 약 4, 약 3 내지 약 5, 약 4 내지 약 6, 약 5 내지 약 7, 약 6 내지 약 8, 약 7 내지 약 9, 약 2 내지 약 8 또는 약 4 내지 약 8이다.
일부 실시양태에서, 항체 또는 항원-결합 단편당 약물 모이어티의 평균 수는 약 2이다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 항원-결합 단편당 약물 모이어티의 평균 수는 약 1.5, 약 1.6, 약 1.7, 약 1.8, 약 1.9, 약 2, 약 2.1, 약 2.2, 약 2.3, 약 2.4 또는 약 2.5이다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 항원-결합 단편당 약물 모이어티의 평균 수는 2이다.
일부 실시양태에서, 항체 또는 항원-결합 단편당 약물 모이어티의 평균 수는 약 4이다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 항원-결합 단편당 약물 모이어티의 평균 수는 약 3.5, 약 3.6, 약 3.7, 약 3.8, 약 3.9, 약 4, 약 4.1, 약 4.2, 약 4.3, 약 4.4 또는 약 4.5이다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 항원-결합 단편당 약물 모이어티의 평균 수는 4이다.
일부 실시양태에서, 항체 또는 항원-결합 단편당 약물 모이어티의 평균 수와 관련하여 사용된 용어 "약"은 ± 20%, 15%, 10%, 5% 또는 1%를 의미한다. 한 실시양태에서, 용어 "약"은 명시된 값보다 10% 많거나 적은 값의 범위를 지칭한다. 또 다른 실시양태에서, 용어 "약"은 명시된 값보다 5% 많거나 적은 값의 범위를 지칭한다. 또 다른 실시양태에서, 용어 "약"은 명시된 값보다 1% 많거나 적은 값의 범위를 지칭한다.
개별 ADC 화합물 또는 "종"은 질량 분광분석법에 의해 혼합물에서 확인되고, 예를 들어 UPLC 또는 HPLC, 예를 들어 소수성 상호작용 크로마토그래피 (HIC-HPLC)에 의해 분리될 수 있다. 일부 실시양태에서, 단일 로딩 값을 갖는 균질 또는 거의 균질 ADC 생성물은, 예를 들어 전기영동 또는 크로마토그래피에 의해 접합 혼합물로부터 단리될 수 있다.
일부 실시양태에서, 보다 높은 약물 로딩 (예를 들어, p > 16)은 특정 항체-약물 접합체의 응집, 불용성, 독성 또는 세포 투과성의 상실을 유발할 수 있다. 보다 높은 약물 로딩은 또한 특정 ADC의 약동학 (예를 들어, 클리어런스)에 부정적인 영향을 미칠 수 있다. 일부 실시양태에서, 보다 낮은 약물 로딩 (예를 들어, p < 2)은 표적-발현 세포에 대한 특정 ADC의 효력을 감소시킬 수 있다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 ADC에 대한 약물 로딩은 약 2 내지 약 16, 약 2 내지 약 10, 약 2 내지 약 8; 약 2 내지 약 6; 약 2 내지 약 5; 약 3 내지 약 5; 약 2 내지 약 4; 또는 약 4 내지 약 8의 범위이다.
일부 실시양태에서, 약 2의 약물 로딩 및/또는 평균 약물 로딩은, 예를 들어 항체 또는 항원-결합 단편 상의 쇄내 디술피드의 부분적 환원을 사용하여 달성되고, 유익한 특성을 제공한다. 일부 실시양태에서, 약 4 또는 약 6 또는 약 8의 약물 로딩 및/또는 평균 약물 로딩은, 예를 들어 항체 또는 항원-결합 단편 상의 쇄내 디술피드의 부분적 환원을 사용하여 달성되고, 유익한 특성을 제공한다. 일부 실시양태에서, 약 2 미만의 약물 로딩 및/또는 평균 약물 로딩은 표적 항원에의 결합에 대해 ADC와 경쟁하고/거나 감소된 치료 효능을 제공할 수 있는 허용되지 않는 높은 수준의 비접합된 항체 종을 초래할 수 있다. 일부 실시양태에서, 약 16 초과의 약물 로딩 및/또는 평균 약물 로딩은 허용되지 않는 높은 수준의 생성물 불균질성 및/또는 ADC 응집을 유발할 수 있다. 약 16 초과의 약물 로딩 및/또는 평균 약물 로딩은 또한 항체 또는 항원-결합 단편을 안정화시키는데 요구되는 1개 이상의 화학 결합의 상실로 인해 ADC의 안정성에 영향을 미칠 수 있다.
본 개시내용은 기재된 ADC를 생성하는 방법을 포함한다. 간략하게, ADC는 항체 또는 항원-결합 단편으로서의 항체 또는 항원-결합 단편, 약물 모이어티 (예를 들어, Bcl-xL 억제제), 및 약물 모이어티와 항체 또는 항원-결합 단편을 연결하는 링커를 포함한다. 일부 실시양태에서, ADC는 약물 모이어티 및 항체 또는 항원-결합 단편에 공유 부착하기 위한 반응성 관능기를 갖는 링커를 사용하여 제조될 수 있다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 링커 또는 약물-링커 중간체와 반응성인 관능기를 제조하도록 관능화된다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 항체 또는 항원-결합 단편의 시스테인 티올은 링커 또는 약물-링커 중간체의 반응성 관능기와 결합을 형성하여 ADC를 제조할 수 있다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 박테리아 트랜스글루타미나제 (BTG) - 아민 함유 시클로옥틴 BCN (N-[(1R,8S,9s)-비시클로[6.1.0]논-4-인-9-일메틸옥시카르보닐]-1,8-디아미노-3,6-디옥사옥탄) 모이어티로 특이적으로 관능화된 반응성 글루타민을 사용하여 제조된다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 항원-결합 단편의 BCN 모이어티에 대한 링커 또는 약물-링커 중간체의 부위-특이적 접합은, 예를 들어 본원에 기재되고 예시된 바와 같이 수행된다. ADC의 생성은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 기술에 의해 달성될 수 있다.
일부 실시양태에서, ADC는, 항체 또는 항원-결합 단편이 먼저 링커에 공유 연결된 후, 미리 형성된 항체-링커 중간체가 약물 모이어티와 반응하도록 항체 또는 항원-결합 단편을 링커 및 약물 모이어티 (예를 들어, Bcl-xL 억제제)와 순차적 방식으로 접촉시켜 생성된다. 항체-링커 중간체는 약물 모이어티와 접촉하기 전에 정제 단계에 적용될 수 있거나 또는 적용되지 않을 수 있다. 다른 실시양태에서, ADC는 링커를 약물 모이어티와 반응시킴으로써 미리 형성된 링커-약물 화합물과 항체 또는 항원-결합 단편을 접촉시켜 생성된다. 미리 형성된 링커-약물 화합물은 항체 또는 항원-결합 단편과 접촉하기 전에 정제 단계에 적용될 수 있거나 또는 적용되지 않을 수 있다. 다른 실시양태에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 하나의 반응 혼합물에서 링커 및 약물 모이어티와 접촉하여, 항체 또는 항원-결합 단편과 링커 사이 및 링커와 약물 모이어티 사이의 공유 결합의 동시 형성을 허용한다. ADC를 생성하는 이러한 방법은 항체 또는 항원-결합 단편이 반응 혼합물에 링커를 첨가하기 전에 항체 또는 항원-결합 단편과 접촉하는 반응 및 그 반대의 반응을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, ADC는 항체 또는 항원-결합 단편을 약물 모이어티, 예컨대 Bcl-xL 억제제에 연결된 링커와 접합을 허용하는 조건 하에 반응시킴으로써 생성된다.
상기 기재된 방법에 따라 제조된 ADC는 정제 단계에 적용될 수 있다. 정제 단계는 단백질을 정제하기 위한 관련 기술분야에 공지된 임의의 생화학적 방법 또는 그의 방법들의 임의의 조합을 포함할 수 있다. 이들은 접선 유동 여과 (TFF), 친화성 크로마토그래피, 이온 교환 크로마토그래피, 임의의 전하 또는 등전점-기반 크로마토그래피, 혼합 모드 크로마토그래피, 예를 들어 CHT (세라믹 히드록시아파타이트), 소수성 상호작용 크로마토그래피, 크기 배제 크로마토그래피, 투석, 여과, 선택적 침전 또는 그의 임의의 조합을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
치료 용도 및 조성물
장애, 예를 들어 암에 대해 대상체를 치료하는 데 있어서 본원에 기재된 조성물, 예를 들어 개시된 ADC 화합물 및 조성물을 사용하는 방법이 본원에 개시된다. 조성물, 예를 들어 ADC는 단독으로 또는 적어도 1종의 추가의 불활성 및/또는 활성제, 예를 들어 적어도 1종의 추가의 치료제와 조합하여 투여될 수 있고, 임의의 제약상 허용되는 제제, 투여량 및 투여 요법으로 투여될 수 있다. 치료 효능은 독성 뿐만 아니라 효능의 지표에 대해 평가되고, 그에 따라 조정될 수 있다. 효능 척도는 시험관내 또는 생체내에서 관찰되는 세포증식억제 및/또는 세포독성 효과, 감소된 종양 부피, 종양 성장 억제 및/또는 연장된 생존을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
ADC가 세포에 대해 세포증식억제 및/또는 세포독성 효과를 발휘하는지 여부를 결정하는 방법은 공지되어 있다. 예를 들어, ADC의 세포독성 또는 세포증식억제 활성은, 예를 들어 ADC의 표적 항원을 발현하는 포유동물 세포를 세포 배양 배지에 노출시키고; 세포를 약 6시간 내지 약 6일의 기간 동안 배양하고; 세포 생존율을 측정함으로써 (예를 들어, 셀타이터-글로(CellTiter-Glo)® (CTG) 또는 MTT 세포 생존율 검정을 사용함) 측정될 수 있다. 세포-기반 시험관내 검정이 또한 ADC의 생존율 (증식), 세포독성 및 아폽토시스의 유도 (카스파제 활성화)를 측정하는데 사용될 수 있다.
세포독성을 결정하기 위해, 괴사 또는 아폽토시스 (프로그램화된 세포 사멸)를 측정할 수 있다. 괴사는 전형적으로 형질막의 증가된 투과성, 세포 팽윤 및 형질막의 파열을 동반한다. 아폽토시스는 예를 들어 DNA 단편화를 측정함으로써 정량화될 수 있다. DNA 단편화의 정량적 시험관내 측정을 위한 상업적 광도측정 방법이 이용가능하다. TUNEL (단편화된 DNA 내의 표지된 뉴클레오티드 혼입 검출) 및 ELISA-기반 검정을 비롯한 이러한 검정의 예는 문헌 [Biochemica (1999) 2:34-7 (Roche Molecular Biochemicals)]에 기재되어 있다.
아폽토시스는 또한 세포에서 형태학적 변화를 측정함으로써 결정될 수 있다. 예를 들어, 괴사에서와 같이, 형질막 완전성의 상실은 특정 염료 (예를 들어, 형광 염료, 예컨대 예를 들어 아크리딘 오렌지 또는 에티듐 브로마이드)의 흡수를 측정함으로써 결정될 수 있다. 아폽토시스 세포 수를 측정하는 방법은 문헌 [Duke and Cohen, Current Protocols in Immunology (Coligan et al., eds. (1992) pp. 3.17.1-3.17.16)]에 기재되어 있다. 세포는 또한 DNA 염료 (예를 들어, 아크리딘 오렌지, 브로민화에티듐 또는 아이오딘화프로피듐)로 표지될 수 있고, 세포는 내부 핵막을 따라 염색질 응축 및 주변화에 대해 관찰될 수 있다. 일부 실시양태에서, 아폽토시스는 또한 카스파제 활성에 대해 스크리닝함으로써 결정될 수 있다. 일부 실시양태에서, 카스파제-글로(Caspase-Glo)® 검정은 카스파제-3 및 카스파제-7의 활성을 측정하는데 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, 검정은 카스파제 활성, 루시페라제 활성 및 세포 용해에 최적화된 시약 중 발광 카스파제-3/7 기질을 제공한다. 일부 실시양태에서, "첨가-혼합-측정" 포맷으로 카스파제-글로® 3/7시약을 첨가하는 것은 세포 용해, 이어서 기질의 카스파제 절단, 및 루시페라제에 의해 생성된 "글로우-유형" 발광 신호의 생성을 유발할 수 있다. 일부 실시양태에서, 발광은 존재하는 카스파제 활성의 양에 비례할 수 있고, 아폽토시스의 지표로서 작용할 수 있다. 아폽토시스를 결정하기 위해 측정될 수 있는 다른 형태학적 변화는, 예를 들어 세포질 응축, 증가된 막 수포화 및 세포 수축을 포함한다. 암 세포에 대한 임의의 이들 효과의 결정은 ADC가 암의 치료에 유용하다는 것을 나타낸다.
세포 생존율은, 예를 들어 세포에서 염료, 예컨대 뉴트랄 레드, 트리판 블루, 크리스탈 바이올렛 또는 ALAMAR™ 블루의 흡수를 결정함으로써 측정될 수 있다 (예를 들어, 문헌 [Page et al. (1993) Intl J Oncology 3:473-6] 참조). 이러한 검정에서, 세포를 염료를 함유하는 배지에서 인큐베이션하고, 세포를 세척하고, 염료의 세포 흡수를 반영하는 나머지 염료를 분광광도계로 측정한다.
세포 생존율은 또한, 예를 들어 대사적 활성 세포의 지표인 ATP를 정량화함으로써 측정될 수 있다. 일부 실시양태에서, 제조된 ADC 또는 Bcl-xL 억제제 화합물의 시험관내 효력 및/또는 세포 생존율은 본원에 제공된 실시예에 기재된 바와 같이 셀타이터-글로® (CTG) 세포 생존율 검정을 사용하여 평가될 수 있다. 본 검정에서, 일부 실시양태에서, 단일 시약 (셀타이터-글로® 시약)은 혈청-보충 배지에서 배양된 세포에 직접 첨가된다. 시약의 첨가는 세포 용해 및 존재하는 ATP의 양에 비례하는 발광 신호의 생성을 유발한다. ATP의 양은 배양물에 존재하는 세포의 수에 정비례한다.
세포 생존율은 또한, 예를 들어 테트라졸륨 염의 환원을 측정함으로써 측정될 수 있다. 일부 실시양태에서, 제조된 ADC 또는 Bcl-xL 억제제 화합물의 시험관내 효력 및/또는 세포 생존율은 본원에 제공된 실시예에 기재된 바와 같이 MTT 세포 생존율 검정을 사용하여 평가될 수 있다. 본 검정에서, 일부 실시양태에서, 황색 테트라졸륨 MTT (3-(4,5-디메틸티아졸릴-2)-2,5-디페닐테트라졸륨 브로마이드)는 대사적 활성 세포에 의해, 부분적으로 데히드로게나제 효소의 작용에 의해 환원되어 NADH 및 NADPH와 같은 환원 등가물을 생성한다. 이어서, 생성된 세포내 자주색 포르마잔을 가용화시키고, 분광광도측정 수단에 의해 정량화할 수 있다.
특정 측면에서, 본 개시내용은 Bcl-xL 및/또는 1종 이상의 상류 조절제 또는 그의 하류 표적의 발현 및/또는 활성을 파괴함으로써 암 세포 또는 조직의 성장을 사멸, 억제 또는 조정하는 방법을 특징으로 한다. 방법은 Bcl-xL 발현 및/또는 활성의 파괴가 치료 이익을 제공하는 임의의 대상체에 사용될 수 있다. Bcl-xL 발현 및/또는 활성을 파괴하는 것으로부터 이익을 얻을 수 있는 대상체는 암, 예컨대 종양 또는 혈액암을 갖거나 가질 위험이 있는 대상체를 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 일부 실시양태에서, 암은 유방암, 다발성 골수종, 형질 세포 골수종, 백혈병, 림프종, 육종, 위암, 방광암, 뇌암, 골수암, 자궁경부암, 만성 림프구성 백혈병, 결장직장암, 식도암, 간세포성암, 급성 림프모구성 백혈병을 포함한 림프모구성 백혈병, 여포성 림프종, T-세포 또는 B-세포 기원의 림프성 악성종양, 흑색종, 골수 백혈병, 골수종, 구강암, 난소암, 비소세포 폐암, 전립선암, 소세포 폐암, 비장암 또는 두경부암이다. 일부 실시양태에서, 암은 림프종 또는 위암이다.
일부 실시양태에서, 개시된 ADC는 BCMA를 발현하는 임의의 세포 또는 조직, 예컨대 BCMA-발현 암 세포 또는 조직에 투여될 수 있다. 예시적인 실시양태는 BCMA-발현 암 세포 또는 조직을 사멸시키는 방법을 포함한다. 방법은 BCMA를 발현하는 임의의 세포 또는 조직, 예컨대 암성 세포 또는 전이성 병변에 대하여 사용될 수 있다. BCMA-발현 암의 비제한적 예는 다발성 골수종을 포함한다 (문헌 [Cho et al. (2018) Front Immunol. 9:1821]). BCMA-발현 세포의 비제한적 예는 NCI-H929 다발성 골수종 세포, 및 BCMA 또는 그의 부분을 코딩하는 재조합 핵산을 포함하는 세포를 포함한다.
일부 실시양태에서, 개시된 ADC는 CD33을 발현하는 임의의 세포 또는 조직, 예컨대 CD33-발현 암 세포 또는 조직에 투여될 수 있다. 예시적인 실시양태는 CD33-발현 암 세포 또는 조직을 사멸시키는 방법을 포함한다. 방법은 CD33을 발현하는 임의의 세포 또는 조직, 예컨대 암성 세포 또는 전이성 병변에 대하여 사용될 수 있다. CD33-발현 암의 비제한적 예는 결장직장암, 췌장암, 림프종 및 백혈병 (예를 들어, 급성 골수성 백혈병)을 포함한다 (문헌 [Human Protein Atlas; Walter (2014) Expert Opin Ther Targets 18(7):715-8]). CD33-발현 세포의 비제한적 예는 MOLM-13 백혈병 세포, 및 CD33 또는 그의 부분을 코딩하는 재조합 핵산을 포함하는 세포를 포함한다.
일부 실시양태에서, 개시된 ADC는 PCAD를 발현하는 임의의 세포 또는 조직, 예컨대 PCAD-발현 암 세포 또는 조직에 투여될 수 있다. 예시적인 실시양태는 PCAD-발현 암 세포 또는 조직을 사멸시키는 방법을 포함한다. 방법은 PCAD를 발현하는 임의의 세포 또는 조직, 예컨대 암성 세포 또는 전이성 병변에 대하여 사용될 수 있다. PCAD-발현 암의 비제한적 예는 유방암, 위암, 자궁내막암, 난소암, 췌장암, 방광암, 전립선암 및 흑색종을 포함한다 (문헌 [Vieira and Paredes (2015) Mol Cancer 14:178]).
일부 실시양태에서, 개시된 ADC는 HER2를 발현하는 임의의 세포 또는 조직, 예컨대 HER2-발현 암 세포 또는 조직에 투여될 수 있다. 예시적인 실시양태는 HER2-발현 암 세포 또는 조직을 사멸시키는 방법을 포함한다. 방법은 HER2를 발현하는 임의의 세포 또는 조직, 예컨대 암성 세포 또는 전이성 병변에 대하여 사용될 수 있다. HER2-발현 암의 비제한적 예는 유방암, 위암, 방광암, 요로상피 세포 암종, 식도암, 폐암 (예를 들어, 폐 선암종), 자궁암 (예를 들어, 자궁 장액성 자궁내막 암종), 타액관 암종, 자궁경부암, 자궁내막암 및 난소암을 포함한다 (문헌 [English et al. (2013) Mol Diagn Ther. 17:85-99]). HER2-발현 세포의 비제한적 예는 HCC1954 및 HCC2218 유방암 세포, 및 HER2 또는 그의 부분을 코딩하는 재조합 핵산을 포함하는 세포를 포함한다.
예시적인 방법은 세포를 유효량, 즉 세포를 사멸시키기에 충분한 양의 본원에 기재된 ADC와 접촉시키는 단계를 포함한다. 상기 방법은 예를 들어 시험관내, 생체내, 생체외 또는 계내에서 배양물 중 세포에 사용될 수 있다. 예를 들어, HER2를 발현하는 세포 (예를 들어, 종양 또는 전이성 병변의 생검에 의해 수집된 세포; 확립된 암 세포주로부터의 세포; 또는 재조합 세포)는 배양 배지에서 시험관내 배양될 수 있고, 접촉 단계는 ADC를 배양 배지에 첨가함으로써 영향을 받을 수 있다. 방법은 특히 HER2를 발현하는 암 세포를 포함한, HER2를 발현하는 세포의 사멸을 유발할 것이다. 대안적으로, ADC는 생체내에서 효과를 갖도록 임의의 적합한 투여 경로 (예를 들어, 정맥내, 피하 또는 종양 조직과의 직접 접촉)에 의해 대상체에게 투여될 수 있다. 이러한 접근법은 다른 세포 표면 항원 (예를 들어, EGFR, CD7, HER2)을 표적화하는 항체에 사용될 수 있다.
개시된 ADC 치료 조성물의 생체내 효과는 적합한 동물 모델에서 평가될 수 있다. 예를 들어, 이종 암 모델이 사용될 수 있으며, 여기서 암 외식편 또는 계대된 이종이식편 조직은 면역 손상된 동물, 예컨대 누드 또는 SCID 마우스 내로 도입된다 (문헌 [Klein et al. (1997) Nature Med. 3:402-8]). 효능은 종양 형성, 종양 퇴행 또는 전이 등의 억제를 측정하는 검정을 사용하여 예측될 수 있다.
아폽토시스와 같은 메카니즘에 의한 종양 사멸의 촉진을 평가하는 생체내 검정이 또한 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, 치료 조성물로 치료된 종양 보유 마우스로부터의 이종이식편을 아폽토시스 병소의 존재에 대해 검사하고, 비치료 대조군 이종이식편-보유 마우스와 비교할 수 있다. 처리된 마우스의 종양에서 아폽토시스 병소가 발견되는 정도가 조성물의 치료 효능의 지표를 제공한다.
추가로, 장애, 예를 들어 암을 치료하는 방법이 본원에 제공된다. 본원에 기재된 조성물, 예를 들어 본원에 개시된 ADC는 치료 목적을 위해 비-인간 포유동물 또는 인간 대상체에게 투여될 수 있다. 치료 방법은 암을 갖거나 갖는 것으로 의심되는 대상체에게 Bcl-xL 억제제, 예를 들어 ADC를 포함하는 조성물의 치료 유효량을 투여하는 것을 포함하며, 여기서 억제제는 (1) 암 세포 상에 발현되고/거나 (2) 결합에 접근가능하고/거나 (3) 비-암 세포에 비해 암 세포 표면 상에 국재화되거나 우세하게 발현된 항원에 결합하는 표적화 항체에 연결된다.
예시적인 실시양태는 암을 갖거나 갖는 것으로 의심되는 대상체에게 치료 유효량의 본원에 개시된 조성물, 예를 들어 ADC, 조성물 또는 제약 조성물 (예를 들어, 본원에 개시된 임의의 예시적인 ADC, 조성물 또는 제약 조성물)을 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체를 치료하는 방법이다. 일부 실시양태에서, 암은 표적 항원을 발현한다. 일부 실시양태에서, 표적 항원은 BCMA, CD33, HER2, CD38, CD48, CD79b, PCAD, CD74, CD138, SLAMF7, CD123, CLL1, FLT3, CD7, CKIT, CD56, DLL3, DLK1, B7-H3, EGFR, CD71, EPCAM, FOLR1, ENPP3, MET, AXL, SLC34A2, Nectin4, TROP2, LIV1, CD46, MSLN, F3, MUC16, SLC39A6, TFRC, TACSTD2, 또는 GPNMB이다. 일부 실시양태에서, 표적 항원은 EphA2, CD56, SEZ6, CD25, CCR8,CEACAM5, CEACAM6, 4-1BB, 5AC, 5T4, 알파-태아단백질, 안지오포이에틴 2, ASLG659, TCLI, BMPRIB, 브레비칸 BCAN, BEHAB, C242 항원, C5, CA-125, CA-125 (모방), CA-IX (탄산 안히드라제 9), CCR4, CD140a, CD152, CD19, CD20, CD200, CD21 (C3DR) I), CD22 (B-세포 수용체 CD22-B 이소형), CD221, CD23 (gE 수용체), CD28, CD30 (TNFRSF8), CD37, CD4, CD40, CD44 v6, CD51, CD52, CD70, CD72 (Lyb-2, B-세포 분화 항원 CD72), CD79a, CD80, CEA, CEA-관련 항원, ch4D5, CLDN18.2, CRIPTO (CR, CRI, CRGF, TDGF1), CTLA-4, CXCR5, DLL4, DR5, E16 (LATI, SLC7A5), EGFL7, EphB2R (DRT, ERK, Hek5, EPHT3, Tyro5), 에피시알린, ERBB3, ETBR (엔도텔린 유형 B 수용체), FCRHI (Fc 수용체-유사 단백질 I), FcRH2 (IFGP4, IRTA4, SPAPI, SPAP IB, SPAP IC), 피브로넥틴 엑스트라 도메인-B, 프리즐드 수용체, GD2, GD3 강글리오시드, GEDA, HER1, HER2/neu, HER3, HGF, HLA-DOB, HLA-DR, 인간 산란 인자 수용체 키나제, IGF-I 수용체, IL-13, IL20R (ZCYTOR7), IL-6, ILGF2, ILFRIR, 인테그린 u, IRTA2 (이뮤노글로불린 슈퍼패밀리 수용체 전위 연관 2), 루이스-Y 항원, LY64 (RP105), MCP-I, MDP (DPEPI), (MPF), MSLN, SMR, 메소텔린, 거핵구, PD-I, PDCDI, PDGF-R u, 전립선 특이적 막 항원, PSCA (전립선 줄기 세포 항원 전구체), PSCA hlg, RANKL, RON, SDCI, Sema Sb, STEAP I, STEAP2, PCANAP I, STAMP I, STEAP2, STMP, 전립선암 연관 유전자 I, TAG-72, TEMI, 테나신 C, TENB2, (TMEFF2, 토모레귤린, TPEF, HPPI, TR), TGF-IJ, TRAIL-E2, TRAIL-Rl, TRAIL-R2, T17M4 (BR22450, FLJ20041, TRPM4, TRPM4B, 일시적 수용체 전위 양이온 채널 서브패밀리 M, 구성원 4), TWEAK-R, TYRP I (당단백질 75), VEGF, VEGF-A, EGFR-I, VEGFR-2, 또는 비멘틴이다. 일부 실시양태에서, 표적 항원은 EGFR, CD7, HER2, EPCAM, FOLR1, ENPP3, MET, AXL, SLC34A2, Nectin4, MSLN, F3, MUC16, SLC39A6, TFRC, TACSTD2, 또는 GPNMB이다. 일부 실시양태에서, 표적 항원은 EGFR, CD7, 또는 HER2이다. 일부 실시양태에서, 암은 종양 또는 혈액암이다. 일부 실시양태에서, 암은 유방암, 다발성 골수종, 형질 세포 골수종, 백혈병, 림프종, 육종, 위암, 급성 골수성 백혈병, 방광암, 뇌암, 골수암, 자궁경부암, 만성 림프구성 백혈병, 결장직장암, 식도암, 간세포성암, 급성 림프모구성 백혈병을 포함한 림프모구성 백혈병, 여포성 림프종, T-세포 또는 B-세포 기원의 림프성 악성종양, 흑색종, 골수 백혈병, 골수종, 구강암, 난소암, 비소세포 폐암, 전립선암, 소세포 폐암, 비장암 또는 두경부암이다. 일부 실시양태에서, 암은 림프종 또는 위암이다.
또 다른 예시적인 실시양태는 Bcl-xL 억제제를 BCMA 에피토프에 면역특이적으로 결합하는 항체에 접합시키고, 세포를 ADC에 노출시키는 것을 포함하는, Bcl-xL 억제제를 BCMA를 발현하는 세포에 전달하는 방법이다. 본 개시내용의 ADC가 지시되는 BCMA를 발현하는 예시적인 암 세포는 다발성 골수종 세포를 포함한다.
또 다른 예시적인 실시양태는 Bcl-xL 억제제를 CD33 에피토프에 면역특이적으로 결합하는 항체에 접합시키는 것 및 세포를 ADC에 노출시키는 것을 포함하는, Bcl-xL 억제제를 CD33을 발현하는 세포에 전달하는 방법이다. 본 개시내용의 ADC가 지시되는 CD33을 발현하는 예시적인 암 세포는 백혈병 세포를 포함한다.
또 다른 예시적인 실시양태는 Bcl-xL 억제제를 PCAD 에피토프에 면역특이적으로 결합하는 항체에 접합시키고, 세포를 ADC에 노출시키는 것을 포함하는, Bcl-xL 억제제를 PCAD를 발현하는 세포에 전달하는 방법이다. 본 개시내용의 ADC가 지시되는 PCAD를 발현하는 예시적인 암 세포는 유방암 및 위암 세포를 포함한다.
또 다른 예시적인 실시양태는 Bcl-xL 억제제를 HER2 에피토프에 면역특이적으로 결합하는 항체에 접합시키고, 세포를 ADC에 노출시키는 것을 포함하는, Bcl-xL 억제제를 HER2를 발현하는 세포에 전달하는 방법이다. 본 개시내용의 ADC가 지시되는 HER2를 발현하는 예시적인 암 세포는 유방암 세포를 포함한다.
특정 측면에서, 본 개시내용은 치료 유효량의 ADC 또는 ADC를 포함하는 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 종양 (예를 들어, BCMA-발현 종양, CD33-발현 종양, PCAD-발현 종양, HER2-발현 종양)의 성장을 감소시키거나 또는 억제하는 방법을 추가로 제공한다. 일부 실시양태에서, 치료는 환자의 종양의 성장을 감소 또는 억제하고/거나, 전이성 병변의 수 또는 크기를 감소시키고/거나, 종양 부하를 감소시키고/거나, 원발성 종양 부하를 감소시키고/거나, 침습성을 감소시키고/거나, 생존 시간을 연장시키고/거나, 삶의 질을 유지 또는 개선시키기에 충분하다. 일부 실시양태에서, 종양은 단독 투여시 ADC의 항체 또는 항원-결합 단편 (예를 들어, 항-BCMA 항체, 항-CD33 항체, 항-PCAD 항체, 항-HER2 항체)을 사용한 치료에 대해 저항성 또는 불응성이고/거나, 종양은 단독 투여시 Bcl-xL 억제제 약물 모이어티를 사용한 치료에 대해 저항성 또는 불응성이다.
예시적인 실시양태는 대상체에게 치료 유효량의 ADC, 조성물 또는 제약 조성물 (예를 들어, 본원에 개시된 임의의 예시적인 ADC, 조성물 또는 제약 조성물)을 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 종양의 성장을 감소시키거나 또는 억제하는 방법이다. 일부 실시양태에서, 종양은 표적 항원을 발현한다. 일부 실시양태에서, 표적 항원은 BCMA, CD33, HER2, CD38, CD48, CD79b, PCAD, CD74, CD138, SLAMF7, CD123, CLL1, FLT3, CD7, CKIT, CD56, DLL3, DLK1, B7-H3, EGFR, CD71, EPCAM, FOLR1, ENPP3, MET, AXL, SLC34A2, Nectin4, TROP2, LIV1, CD46, MSLN, F3, MUC16, SLC39A6, TFRC, TACSTD2, 또는 GPNMB이다. 일부 실시양태에서, 표적 항원은 EphA2, CD56, SEZ6, CD25, CCR8,CEACAM5, CEACAM6, 4-1BB, 5AC, 5T4, 알파-태아단백질, 안지오포이에틴 2, ASLG659, TCLI, BMPRIB, 브레비칸 BCAN, BEHAB, C242 항원, C5, CA-125, CA-125 (모방), CA-IX (탄산 안히드라제 9), CCR4, CD140a, CD152, CD19, CD20, CD200, CD21 (C3DR) I), CD22 (B-세포 수용체 CD22-B 이소형), CD221, CD23 (gE 수용체), CD28, CD30 (TNFRSF8), CD37, CD4, CD40, CD44 v6, CD51, CD52, CD70, CD72 (Lyb-2, B-세포 분화 항원 CD72), CD79a, CD80, CEA, CEA-관련 항원, ch4D5, CLDN18.2, CRIPTO (CR, CRI, CRGF, TDGF1), CTLA-4, CXCR5, DLL4, DR5, E16 (LATI, SLC7A5), EGFL7, EphB2R (DRT, ERK, Hek5, EPHT3, Tyro5), 에피시알린, ERBB3, ETBR (엔도텔린 유형 B 수용체), FCRHI (Fc 수용체-유사 단백질 I), FcRH2 (IFGP4, IRTA4, SPAPI, SPAP IB, SPAP IC), 피브로넥틴 엑스트라 도메인-B, 프리즐드 수용체, GD2, GD3 강글리오시드, GEDA, HER1, HER2/neu, HER3, HGF, HLA-DOB, HLA-DR, 인간 산란 인자 수용체 키나제, IGF-I 수용체, IL-13, IL20R (ZCYTOR7), IL-6, ILGF2, ILFRIR, 인테그린 u, IRTA2 (이뮤노글로불린 슈퍼패밀리 수용체 전위 연관 2), 루이스-Y 항원, LY64 (RP105), MCP-I, MDP (DPEPI), (MPF), MSLN, SMR, 메소텔린, 거핵구, PD-I, PDCDI, PDGF-R u, 전립선 특이적 막 항원, PSCA (전립선 줄기 세포 항원 전구체), PSCA hlg, RANKL, RON, SDCI, Sema Sb, STEAP I, STEAP2, PCANAP I, STAMP I, STEAP2, STMP, 전립선암 연관 유전자 I, TAG-72, TEMI, 테나신 C, TENB2, (TMEFF2, 토모레귤린, TPEF, HPPI, TR), TGF-IJ, TRAIL-E2, TRAIL-Rl, TRAIL-R2, T17M4 (BR22450, FLJ20041, TRPM4, TRPM4B, 일시적 수용체 전위 양이온 채널 서브패밀리 M, 구성원 4), TWEAK-R, TYRP I (당단백질 75), VEGF, VEGF-A, EGFR-I, VEGFR-2, 또는 비멘틴이다. 일부 실시양태에서, 표적 항원은 EGFR, CD7, HER2, EPCAM, FOLR1, ENPP3, MET, AXL, SLC34A2, Nectin4, MSLN, F3, MUC16, SLC39A6, TFRC, TACSTD2, 또는 GPNMB이다. 일부 실시양태에서, 표적 항원은 EGFR. CD7, 또는 HER2이다. 일부 실시양태에서, 종양은 유방암, 위암, 방광암, 뇌암, 자궁경부암, 결장직장암, 식도암, 간세포성암, 흑색종, 구강암, 난소암, 비소세포 폐암, 전립선암, 소세포 폐암 또는 비장암이다. 일부 실시양태에서, 종양은 위암이다. 일부 실시양태에서, ADC, 조성물 또는 제약 조성물의 투여는 치료 부재 하의 성장과 비교하여 적어도 약 10%, 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95% 또는 적어도 약 99%만큼 종양의 성장을 감소시키거나 또는 억제한다.
또 다른 예시적인 실시양태는 대상체에게 치료 유효량의 ADC, 조성물 또는 제약 조성물 (예를 들어, 본원에 개시된 임의의 예시적인 ADC, 조성물 또는 제약 조성물)을 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 종양의 성장을 지연시키거나 늦추는 방법이다. 일부 실시양태에서, 종양은 표적 항원을 발현한다. 일부 실시양태에서, 표적 항원은 BCMA, CD33, HER2, CD38, CD48, CD79b, PCAD, CD74, CD138, SLAMF7, CD123, CLL1, FLT3, CD7, CKIT, CD56, DLL3, DLK1, B7-H3, EGFR, CD71, EPCAM, FOLR1, ENPP3, MET, AXL, SLC34A2, Nectin4, TROP2, LIV1, CD46, MSLN, F3, MUC16, SLC39A6, TFRC, TACSTD2, 또는 GPNMB이다. 일부 실시양태에서, 표적 항원은 EphA2, CD56, SEZ6, CD25, CCR8,CEACAM5, CEACAM6, 4-1BB, 5AC, 5T4, 알파-태아단백질, 안지오포이에틴 2, ASLG659, TCLI, BMPRIB, 브레비칸 BCAN, BEHAB, C242 항원, C5, CA-125, CA-125 (모방), CA-IX (탄산 안히드라제 9), CCR4, CD140a, CD152, CD19, CD20, CD200, CD21 (C3DR) I), CD22 (B-세포 수용체 CD22-B 이소형), CD221, CD23 (gE 수용체), CD28, CD30 (TNFRSF8), CD37, CD4, CD40, CD44 v6, CD51, CD52, CD70, CD72 (Lyb-2, B-세포 분화 항원 CD72), CD79a, CD80, CEA, CEA-관련 항원, ch4D5, CLDN18.2, CRIPTO (CR, CRI, CRGF, TDGF1), CTLA-4, CXCR5, DLL4, DR5, E16 (LATI, SLC7A5), EGFL7, EphB2R (DRT, ERK, Hek5, EPHT3, Tyro5), 에피시알린, ERBB3, ETBR (엔도텔린 유형 B 수용체), FCRHI (Fc 수용체-유사 단백질 I), FcRH2 (IFGP4, IRTA4, SPAPI, SPAP IB, SPAP IC), 피브로넥틴 엑스트라 도메인-B, 프리즐드 수용체, GD2, GD3 강글리오시드, GEDA, HER1, HER2/neu, HER3, HGF, HLA-DOB, HLA-DR, 인간 산란 인자 수용체 키나제, IGF-I 수용체, IL-13, IL20R (ZCYTOR7), IL-6, ILGF2, ILFRIR, 인테그린 u, IRTA2 (이뮤노글로불린 슈퍼패밀리 수용체 전위 연관 2), 루이스-Y 항원, LY64 (RP105), MCP-I, MDP (DPEPI), (MPF), MSLN, SMR, 메소텔린, 거핵구, PD-I, PDCDI, PDGF-R u, 전립선 특이적 막 항원, PSCA (전립선 줄기 세포 항원 전구체), PSCA hlg, RANKL, RON, SDCI, Sema Sb, STEAP I, STEAP2, PCANAP I, STAMP I, STEAP2, STMP, 전립선암 연관 유전자 I, TAG-72, TEMI, 테나신 C, TENB2, (TMEFF2, 토모레귤린, TPEF, HPPI, TR), TGF-IJ, TRAIL-E2, TRAIL-Rl, TRAIL-R2, T17M4 (BR22450, FLJ20041, TRPM4, TRPM4B, 일시적 수용체 전위 양이온 채널 서브패밀리 M, 구성원 4), TWEAK-R, TYRP I (당단백질 75), VEGF, VEGF-A, EGFR-I, VEGFR-2, 또는 비멘틴이다. 일부 실시양태에서, 표적 항원은 EGFR, CD7, HER2, EPCAM, FOLR1, ENPP3, MET, AXL, SLC34A2, Nectin4, MSLN, F3, MUC16, SLC39A6, TFRC, TACSTD2, 또는 GPNMB이다. 일부 실시양태에서, 표적 항원은 EGFR, CD7, 또는 HER2이다. 일부 실시양태에서, 종양은 유방암, 위암, 방광암, 뇌암, 자궁경부암, 결장직장암, 식도암, 간세포성암, 흑색종, 구강암, 난소암, 비소세포 폐암, 전립선암, 소세포 폐암 또는 비장암이다. 일부 실시양태에서, 종양은 위암이다. 일부 실시양태에서, ADC, 조성물 또는 제약 조성물의 투여는 치료 부재 하의 성장과 비교하여 종양의 성장을 적어도 약 10%, 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95% 또는 적어도 약 99% 지연시키거나 둔화시킨다.
특정 측면에서, 본 개시내용은 치료 유효량의 ADC 또는 ADC를 포함하는 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 암 세포 집단 (예를 들어, BCMA-발현 암 세포 집단, CD33-발현 암 세포 집단, PCAD-발현 암 세포 집단, HER2-발현 암 세포 집단)의 확장을 감소시키거나 또는 둔화시키는 방법을 추가로 제공한다.
예시적인 실시양태는 대상체에게 치료 유효량의 ADC, 조성물 또는 제약 조성물 (예를 들어, 본원에 개시된 임의의 예시적인 ADC, 조성물 또는 제약 조성물)을 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 암 세포 집단의 확장을 감소시키거나 또는 둔화시키는 방법이다. 일부 실시양태에서, 암 세포 집단은 표적 항원을 발현한다. 일부 실시양태에서, 표적 항원은 BCMA, CD33, HER2, CD38, CD48, CD79b, PCAD, CD74, CD138, SLAMF7, CD123, CLL1, FLT3, CD7, CKIT, CD56, DLL3, DLK1, B7-H3, EGFR, CD71, EPCAM, FOLR1, ENPP3, MET, AXL, SLC34A2, Nectin4, TROP2, LIV1, CD46, MSLN, F3, MUC16, SLC39A6, TFRC, TACSTD2, 또는 GPNMB이다. 일부 실시양태에서, 표적 항원은 EphA2, CD56, SEZ6, CD25, CCR8,CEACAM5, CEACAM6, 4-1BB, 5AC, 5T4, 알파-태아단백질, 안지오포이에틴 2, ASLG659, TCLI, BMPRIB, 브레비칸 BCAN, BEHAB, C242 항원, C5, CA-125, CA-125 (모방), CA-IX (탄산 안히드라제 9), CCR4, CD140a, CD152, CD19, CD20, CD200, CD21 (C3DR) I), CD22 (B-세포 수용체 CD22-B 이소형), CD221, CD23 (gE 수용체), CD28, CD30 (TNFRSF8), CD37, CD4, CD40, CD44 v6, CD51, CD52, CD70, CD72 (Lyb-2, B-세포 분화 항원 CD72), CD79a, CD80, CEA, CEA-관련 항원, ch4D5, CLDN18.2, CRIPTO (CR, CRI, CRGF, TDGF1), CTLA-4, CXCR5, DLL4, DR5, E16 (LATI, SLC7A5), EGFL7, EphB2R (DRT, ERK, Hek5, EPHT3, Tyro5), 에피시알린, ERBB3, ETBR (엔도텔린 유형 B 수용체), FCRHI (Fc 수용체-유사 단백질 I), FcRH2 (IFGP4, IRTA4, SPAPI, SPAP IB, SPAP IC), 피브로넥틴 엑스트라 도메인-B, 프리즐드 수용체, GD2, GD3 강글리오시드, GEDA, HER1, HER2/neu, HER3, HGF, HLA-DOB, HLA-DR, 인간 산란 인자 수용체 키나제, IGF-I 수용체, IL-13, IL20R (ZCYTOR7), IL-6, ILGF2, ILFRIR, 인테그린 u, IRTA2 (이뮤노글로불린 슈퍼패밀리 수용체 전위 연관 2), 루이스-Y 항원, LY64 (RP105), MCP-I, MDP (DPEPI), (MPF), MSLN, SMR, 메소텔린, 거핵구, PD-I, PDCDI, PDGF-R u, 전립선 특이적 막 항원, PSCA (전립선 줄기 세포 항원 전구체), PSCA hlg, RANKL, RON, SDCI, Sema Sb, STEAP I, STEAP2, PCANAP I, STAMP I, STEAP2, STMP, 전립선암 연관 유전자 I, TAG-72, TEMI, 테나신 C, TENB2, (TMEFF2, 토모레귤린, TPEF, HPPI, TR), TGF-IJ, TRAIL-E2, TRAIL-Rl, TRAIL-R2, T17M4 (BR22450, FLJ20041, TRPM4, TRPM4B, 일시적 수용체 전위 양이온 채널 서브패밀리 M, 구성원 4), TWEAK-R, TYRP I (당단백질 75), VEGF, VEGF-A, EGFR-I, VEGFR-2, 또는 비멘틴이다. 일부 실시양태에서, 표적 항원은 EGFR, CD7, HER2, EPCAM, FOLR1, ENPP3, MET, AXL, SLC34A2, Nectin4, MSLN, F3, MUC16, SLC39A6, TFRC, TACSTD2, 또는 GPNMB이다. 일부 실시양태에서, 표적 항원은 EGFR, CD7, 또는 HER2이다. 일부 실시양태에서, 암 세포 집단은 종양 또는 혈액암으로부터의 것이다. 일부 실시양태에서, 암 세포 집단은 유방암, 다발성 골수종, 형질 세포 골수종, 백혈병, 림프종, 육종, 위암, 급성 골수성 백혈병, 방광암, 뇌암, 골수암, 자궁경부암, 만성 림프구성 백혈병, 결장직장암, 식도암, 간세포성암, 급성 림프모구성 백혈병을 포함한 림프모구성 백혈병, 여포성 림프종, T-세포 또는 B-세포 기원의 림프성 악성종양, 흑색종, 골수 백혈병, 골수종, 구강암, 난소암, 비소세포 폐암, 전립선암, 소세포 폐암, 비장암 또는 두경부암으로부터의 것이다. 일부 실시양태에서, 암 세포 집단은 림프종 또는 위암으로부터의 것이다. 일부 실시양태에서, ADC, 조성물 또는 제약 조성물의 투여는 암 세포 집단을 치료 부재 하의 집단과 비교하여 적어도 약 10%, 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95% 또는 적어도 약 99%만큼 감소시킨다. 일부 실시양태에서, ADC, 조성물 또는 제약 조성물의 투여는 암 세포 집단의 확장을 치료 부재 하의 확장과 비교하여 적어도 약 10%, 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95% 또는 적어도 약 99%만큼 둔화시킨다.
또한, 암을 갖거나 갖는 것으로 의심되는 대상체가 개시된 ADC 및 조성물을 사용한 치료에 반응성일지 여부를 결정하는 방법이 본원에 제공된다. 예시적인 실시양태는 암을 갖거나 갖는 것으로 의심되는 대상체로부터의 생물학적 샘플을 제공하고; 샘플을 ADC와 접촉시키고; 샘플에서 암 세포에 대한 ADC의 결합을 검출함으로써, 암을 갖거나 갖는 것으로 의심되는 대상체가 ADC, 조성물 또는 제약 조성물 (예를 들어, 본원에 개시된 임의의 예시적인 ADC, 조성물 또는 제약 조성물)을 사용한 치료에 반응성일지 여부를 결정하는 방법이다. 일부 실시양태에서, 샘플은 조직 생검 샘플, 혈액 샘플 또는 골수 샘플이다. 일부 실시양태에서, 방법은 대상체로부터의 생물학적 샘플을 제공하고; 샘플을 ADC와 접촉시키고; 샘플에서 암 세포 사멸의 1종 이상의 마커 (예를 들어, 1종 이상의 아폽토시스 마커의 증가된 발현, 배양물 중 암 세포 집단의 감소된 확장 등)를 검출하는 것을 포함한다.
개시된 ADC 및 조성물의 치료 용도가 본원에 추가로 제공된다. 예시적인 실시양태는 암 (예를 들어, BCMA-발현 암, CD33-발현 암, PCAD-발현 암, HER2-발현 암)을 갖거나 갖는 것으로 의심되는 대상체를 치료하는 데 사용하기 위한 ADC, 조성물 또는 제약 조성물 (예를 들어, 본원에 개시된 임의의 예시적인 ADC, 조성물 또는 제약 조성물)이다. 또 다른 예시적인 실시양태는 암 (예를 들어, BCMA-발현 암, CD33-발현 암, PCAD-발현 암, HER2-발현 암)을 갖거나 갖는 것으로 의심되는 대상체를 치료하는 데 있어서 ADC, 조성물 또는 제약 조성물 (예를 들어, 본원에 개시된 임의의 예시적인 ADC, 조성물 또는 제약 조성물)의 용도이다. 또 다른 예시적인 실시양태는 암 (예를 들어, BCMA-발현 암, CD33-발현 암, PCAD-발현 암, HER2-발현 암)을 갖거나 갖는 것으로 의심되는 대상체를 치료하기 위한 의약을 제조하는 방법에서의 ADC, 조성물 또는 제약 조성물 (예를 들어, 본원에 개시된 임의의 예시적인 ADC, 조성물 또는 제약 조성물)의 용도이다. 표적 항원 (예를 들어, EGFR, CD7, 또는 HER2)를 발현하는 암을 갖는 대상체를 확인하는 방법은 관련 기술분야에 공지되어 있고, 개시된 ADC 화합물 또는 조성물을 사용한 치료에 적합한 환자를 확인하는데 사용될 수 있다.
또한, 본 개시내용의 ADC는 ADC가 수의학적 목적을 위해 또는 인간 질환의 동물 모델로서 결합할 수 있는 항원을 발현하는 비-인간 포유동물에게 투여될 수 있다. 후자와 관련하여, 이러한 동물 모델은 개시된 ADC의 치료 효능을 평가하는데 (예를 들어, 투여량 및 투여의 시간 경과를 시험하는데) 유용할 수 있다.
상기 방법의 실시에 사용되는 치료 조성물은 목적하는 전달 방법에 적합한 제약상 허용되는 담체를 포함하는 제약 조성물로 제제화될 수 있다. 예시적인 실시양태는 본 개시내용의 ADC, 및 제약상 허용되는 담체, 예를 들어 선택되는 투여 수단, 예를 들어 정맥내 투여에 적합한 것을 포함하는 제약 조성물이다. 제약 조성물은 또한, 예를 들어 암을 치료 또는 예방하는데 적합한 1종 이상의 추가의 불활성제 및/또는 치료제 (예를 들어, 표준 관리 작용제 등)를 포함할 수 있다. 제약 조성물은 또한 1종 이상의 담체, 부형제 및/또는 안정화제 성분 등을 포함할 수 있다. 이러한 제약 조성물을 제제화하는 방법 및 적합한 제제는 관련 기술분야에 공지되어 있다 (예를 들어, 문헌 ["Remington's Pharmaceutical Sciences," Mack Publishing Co., Easton, PA] 참조).
적합한 담체는 치료 조성물과 조합시 치료 조성물의 항종양 기능을 보유하고 일반적으로 환자의 면역계와 비반응성인 임의의 물질을 포함한다. 제약상 허용되는 담체는 생리학상 상용성인 임의의 및 모든 용매, 분산 매질, 코팅, 항박테리아제 및 항진균제, 등장화제 및 흡수 지연제 등을 포함한다. 제약상 허용되는 담체의 예는 물, 염수, 포스페이트 완충 염수, 덱스트로스, 글리세롤, 에탄올, 메실레이트 염 등 뿐만 아니라 그의 조합 중 하나 이상을 포함한다. 많은 경우, 등장화제, 예를 들어 당, 폴리알콜, 예컨대 만니톨, 소르비톨 또는 염화나트륨이 조성물에 포함된다. 제약상 허용되는 담체는 ADC의 보관 수명 또는 유효성을 증진시키는 소량의 보조 물질, 예컨대 습윤제 또는 유화제, 보존제 또는 완충제를 추가로 포함할 수 있다.
본 개시내용의 제약 조성물은 관련 기술분야에 공지된 다양한 방법에 의해 투여될 수 있다. 투여 경로 및/또는 방식은 목적하는 결과에 따라 달라질 수 있다. 일부 실시양태에서, 치료 제제는 가용화되어 치료 조성물을 암 부위에 전달할 수 있는 임의의 경로를 통해 투여된다. 잠재적으로 유효한 투여 경로는 비경구 (예를 들어, 정맥내, 피하), 복강내, 근육내, 종양내, 피내, 기관내, 동소 등을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 일부 실시양태에서, 투여는 정맥내, 피하, 복강내 또는 근육내이다. 제약상 허용되는 담체는 투여 경로, 예를 들어 정맥내 또는 피하 투여 (예를 들어, 주사 또는 주입에 의함)에 적합해야 한다. 투여 경로에 따라, 활성 화합물(들), 즉 ADC 및/또는 임의의 추가의 치료제는 화합물(들)을 불활성화시킬 수 있는 산 및 다른 천연 조건의 작용으로부터 화합물(들)을 보호하는 물질로 코팅될 수 있다. 투여는 전신 또는 국소일 수 있다.
본원에 개시된 치료 조성물은 제조 및 저장 조건 하에 멸균되고 안정할 수 있으며, 다양한 형태일 수 있다. 이는 예를 들어 액체, 반고체 및 고체 투여 형태, 예컨대 액체 용액 (예를 들어, 주사가능한 및 주입가능한 용액), 분산액 또는 현탁액, 정제, 환제, 분말, 리포솜 및 좌제를 포함한다. 형태는 의도된 투여 방식 및 치료 용도에 따라 달라진다. 일부 실시양태에서, 개시된 ADC는 비경구 투여에 적합한 제약 조성물 내로 혼입될 수 있다. 주사가능한 용액은 플린트 또는 앰버 바이알, 앰플 또는 사전-충전된 시린지 또는 다른 공지된 전달 또는 저장 장치 내의 액체 또는 동결건조된 투여 형태로 구성될 수 있다. 일부 실시양태에서, ADC 또는 제약 조성물 중 1종 이상은 기밀 밀봉된 용기 내의 건조 멸균 동결건조 분말 또는 무수 농축물로서 공급되고, 대상체에게 투여하기에 적절한 농도로 (예를 들어, 물 또는 염수로) 재구성될 수 있다.
전형적으로, 개시된 조성물, 예를 들어 개시된 ADC의 치료 유효량 또는 효능량이 본 개시내용의 제약 조성물에 사용된다. 조성물, 예를 들어 ADC를 포함하는 조성물은 관련 기술분야에 공지된 통상적인 방법에 의해 제약상 허용되는 투여 형태로 제제화될 수 있다. 상기 방법을 사용한 암의 치료를 위한 투여량 및 투여 프로토콜은 방법 및 표적 암에 따라 달라질 것이며, 일반적으로 관련 기술분야에서 인지되는 다수의 다른 요인에 의존할 것이다.
본원에 개시된 조성물, 예를 들어 ADC를 단독으로 또는 적어도 1종의 추가의 불활성 및/또는 활성 치료제와 조합하여 포함하는 조성물에 대한 투여 요법은 최적의 목적하는 반응 (예를 들어, 치료 반응)을 제공하도록 조정될 수 있다. 예를 들어, 하나 또는 둘 다의 작용제의 단일 볼루스가 한번에 투여될 수 있거나, 여러 분할 용량이 미리 결정된 기간에 걸쳐 투여될 수 있거나, 또는 하나 또는 둘 다의 작용제의 용량이 치료 상황의 위급성에 의해 지시되는 바와 같이 비례적으로 증가 또는 감소될 수 있다. 일부 실시양태에서, 치료는 허용되는 투여 경로를 통한 ADC 제제의 단일 볼루스 또는 반복 투여를 포함한다. 일부 실시양태에서, ADC는 환자에게 매일, 매주, 매월 또는 그 사이의 임의의 기간에 투여된다. 임의의 특정한 대상체에 대해, 구체적인 투여 요법은 개체의 필요 및 치료 임상의의 전문적 판단에 따라 시간 경과에 따라 조정될 수 있다. 비경구 조성물은 투여의 용이성 및 투여량의 균일성을 위해 투여 단위 형태로 제제화될 수 있다. 본원에 사용된 투여 단위 형태는 치료될 대상체에 대한 단일 투여량으로서 적합화된 물리적 이산 단위를 지칭하고; 각각의 단위는 요구되는 제약 담체와 함께 목적하는 치료 효과를 생성하도록 계산된 미리 결정된 양의 활성 화합물을 함유한다.
ADC 및/또는 임의의 추가의 치료제(들)를 포함하는 조성물에 대한 투여량 값은 활성 화합물(들)의 고유한 특징 및 달성될 특정한 치료 효과에 기초하여 선택될 수 있다. 의사 또는 수의사는 제약 조성물에 사용되는 ADC의 용량을 목적하는 치료 효과를 달성하는 데 요구되는 것보다 더 낮은 수준에서 시작하고, 목적하는 효과가 달성될 때까지 투여량을 점진적으로 증가시킬 수 있다. 일반적으로, 암의 치료를 위한 본 개시내용의 조성물의 유효 용량은 투여 수단, 표적 부위, 환자의 생리학적 상태, 환자가 인간인지 동물인지의 여부, 투여되는 다른 의약, 및 치료가 예방적인지 또는 치료적인지의 여부를 비롯한 많은 다양한 요인에 따라 달라질 수 있다. 선택되는 투여량 수준은 또한 사용되는 본 개시내용의 특정 조성물 또는 그의 에스테르, 염 또는 아미드의 활성, 투여 경로, 투여 시간, 사용되는 특정 화합물의 배출 속도, 치료 지속기간, 사용되는 특정 조성물과 조합되어 사용되는 다른 약물, 화합물 및/또는 물질, 치료되는 환자의 연령, 성별, 체중, 상태, 전반적 건강 및 과거 병력 등을 포함한 다양한 약동학적 요인에 따라 달라질 수 있다. 치료 투여량은 안전성 및 효능을 최적화하기 위해 적정될 수 있다.
본원에 제공된 화합물의 독성 및 치료 효능은 세포 배양물 또는 동물 모델에서 표준 제약 절차에 의해 결정될 수 있다. 예를 들어, LD50, ED50, EC50 및 IC50이 측정될 수 있고, 독성 및 치료 효과 사이의 용량 비 (LD50/ED50)가 치료 지수로서 계산될 수 있다. 시험관내 및 생체내 검정으로부터 수득된 데이터는 인간에서 사용하기 위한 투여량 범위를 추정 또는 공식화하는데 사용될 수 있다. 예를 들어, 본원에 개시된 조성물 및 방법은 초기에 이종 암 모델 (예를 들어, NCI-H929 다발성 골수종 마우스 모델)에서 평가될 수 있다.
일부 실시양태에서, ADC 또는 ADC를 포함하는 조성물은 단회 투여된다. 다른 실시양태에서, ADC 또는 ADC를 포함하는 조성물은 다수회 투여된다. 단일 투여량 사이의 간격은 예를 들어 매일, 매주, 매월 또는 매년일 수 있다. 간격은 또한 작용제의 비교적 일관된 혈장 농도를 유지하기 위해 환자에서의 투여된 작용제 (예를 들어, ADC)의 혈액 수준의 측정에 기초하여 불규칙적일 수 있다. ADC 또는 ADC를 포함하는 조성물의 투여량 및 투여 빈도는 또한 치료가 예방적인지 또는 치료적인지에 따라 달라질 수 있다. 예방 용도에서, 비교적 낮은 투여량은 장기간에 걸쳐 비교적 드문 간격으로 투여될 수 있다. 일부 환자는 그의 여생 동안 계속 치료를 받는다. 치료 용도에서, 질환의 진행이 감소되거나 종결될 때까지, 바람직하게는 환자가 1종 이상의 질환 증상의 부분적 또는 완전한 개선을 나타낼 때까지, 상대적으로 더 짧은 간격의 상대적으로 더 높은 투여량이 때때로 요구된다. 그 후, 환자에게 보다 낮은, 예를 들어 예방적 요법을 투여할 수 있다.
상기 치료 접근법은 매우 다양한 추가의 수술, 화학요법 또는 방사선 요법 중 어느 하나와 조합될 수 있다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 ADC 또는 조성물은 치료할 특정한 상태에 대해 1종 이상의 추가의 치료제, 예를 들어 1종 이상의 화학요법제, 1종 이상의 표준 관리 작용제와 공동-제제화되고/거나 공동-투여된다.
본원에 기재된 치료 및/또는 진단 용도에 사용하기 위한 키트가 또한 제공된다. 이러한 키트는 1종 이상의 용기, 예컨대 바이알, 튜브 등을 수용하도록 구획화된 캐리어, 패키지 또는 용기를 포함할 수 있으며, 각각의 용기(들)는 본원에 개시된 방법에 사용될 개별 요소 중 하나를 포함한다. 키트 내의 ADC 또는 조성물이 특정 요법 또는 비-치료 용도, 예컨대 예후, 예방, 진단 또는 실험실 용도에 사용된다는 것을 나타내는 표지가 용기(들) 상에 또는 용기(들)와 함께 존재할 수 있다. 표지는 또한 본원에 기재된 것과 같은 생체내 또는 시험관내 사용을 위한 지시를 나타낼 수 있다. 지시 및/또는 다른 정보가 또한 삽입물(들) 또는 표지(들) 상에 포함될 수 있으며, 이는 키트와 함께 또는 키트 상에 포함된다. 표지는 용기 상에 있거나 용기와 결합될 수 있다. 표지는 표지를 형성하는 문자, 숫자 또는 기타 문자가 용기 자체로 성형 또는 에칭될 때 용기 상에 있을 수 있다. 표지는 예를 들어 포장 삽입물로서 용기를 또한 보유하는 리셉터클 또는 캐리어 내에 존재하는 경우에 용기와 결합될 수 있다. 표지는 키트 내의 ADC 또는 조성물이 상태, 예컨대 본원에 기재된 암을 진단 또는 치료하는 데 사용된다는 것을 나타낼 수 있다.
일부 실시양태에서, 키트는 ADC 또는 ADC를 포함하는 조성물을 포함한다. 일부 실시양태에서, 키트는 사용 지침서; 다른 시약, 예를 들어 치료제 (예를 들어, 표준 관리 작용제); 투여용 ADC를 제조하기 위한 장치, 용기 또는 다른 물질; 제약상 허용되는 담체; 및 대상체에게 ADC를 투여하기 위한 장치, 용기 또는 다른 물질을 포함하나 이에 제한되지는 않는 1종 이상의 추가의 구성요소를 추가로 포함한다. 사용 지침서는, 예를 들어 암을 갖거나 갖는 것으로 의심되는 환자에서의 제안된 투여량 및/또는 투여 방식을 포함한 치료 용도에 대한 지침을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 키트는 ADC 및 암을 치료, 예방 및/또는 진단하는데 있어서 ADC의 사용에 대한 지침서를 포함한다.
상승된 Bcl-xL 발현은 방사선 요법 및 화학요법에 대한 저항성과 상관관계가 있는 것으로 공지되어 있다. 암을 치료하기 위한 단독요법으로서 충분히 효과적이지 않을 수 있는 항체-약물 접합체 (ADC)는 치료 이익을 제공하기 위해 다른 치료제 (비-표적화 및 표적화 치료제 포함) 또는 방사선 요법 (방사성리간드 요법 포함)과 조합되어 투여될 수 있다. 이론에 얽매이는 것을 원하지는 않지만, 본원에 기재된 ADC는 다른 치료제 (종양 세포가 저항성이 발생할 수 있는 표준 관리 화학요법제 포함) 및/또는 방사선 요법을 사용한 치료에 대해 종양 세포를 감작화시키는 것으로 여겨진다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 항체 약물 접합체는 종양 세포를 감작화시키는 데 효과적인 양으로 암을 갖는 대상체에게 투여된다. 본원에 사용된 용어 "감작하다"는 ADC로의 치료가 종양 세포에 대한 다른 치료제 및/또는 방사선 요법으로의 치료의 효력 또는 효능을 증가시키는 것을 의미한다.
조합 요법
일부 실시양태에서, 본 개시내용은 본원에 개시된 항체-약물 접합체가 1종 이상 (예를 들어, 1 또는 2종)의 추가의 치료제와 조합하여 투여되는 치료 방법을 제공한다. 예시적인 조합 파트너가 본원에 개시된다.
특정 실시양태에서, 본원에 기재된 조합물은 PD-1 억제제를 포함한다. 일부 실시양태에서, PD-1 억제제는 PDR001 (노파르티스(Novartis)), 니볼루맙 (브리스톨-마이어스 스큅(Bristol-Myers Squibb)), 펨브롤리주맙 (머크 & 캄파니(Merck & Co)), 피딜리주맙 (큐어테크(CureTech)), MEDI0680 (메드이뮨(Medimmune)), REGN2810 (레게네론(Regeneron)), TSR-042 (테사로(Tesaro)), PF-06801591 (화이자(Pfizer)), BGB-A317 (베이진(Beigene)), BGB-108 (베이진), INCSHR1210 (인사이트(Incyte)), 또는 AMP-224 (암플리뮨(Amplimmune))로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, PD-1 억제제는 PDR001이다. PDR001은 또한 스파르탈리주맙으로도 공지되어 있다.
특정 실시양태에서, 본원에 기재된 조합물은 LAG-3 억제제를 포함한다. 일부 실시양태에서, LAG-3 억제제는 LAG525 (노파르티스), BMS-986016 (브리스톨-마이어스 스큅) 또는 TSR-033 (테사로)으로부터 선택된다.
특정 실시양태에서, 본원에 기재된 조합물은 TIM-3 억제제를 포함한다. 일부 실시양태에서, TIM-3 억제제는 MBG453 (노파르티스), TSR-022 (테사로), LY-3321367 (일라이 릴리(Eli Lily)), Sym23 (심포겐(Symphogen)), BGB-A425 (베이진), INCAGN-2390 (아제누스(Agenus)), BMS-986258 (BMS), RO-7121661 (로슈(Roche)) 또는 LY-3415244 (일라이 릴리)이다.
특정 실시양태에서, 본원에 기재된 조합물은 PDL1 억제제를 포함한다. 한 실시양태에서, PDL1 억제제는 FAZ053 (노파르티스), 아테졸리주맙 (제넨테크(Genentech)), 두르발루맙 (아스트라 제네카(Astra Zeneca)) 또는 아벨루맙 (화이자)으로부터 선택된다.
특정 실시양태에서, 본원에 기재된 조합물은 GITR 효능제를 포함한다. 일부 실시양태에서, GITR 효능제는 GWN323 (NVS), BMS-986156, MK-4166 또는 MK-1248 (머크), TRX518 (립 테라퓨틱스(Leap Therapeutics)), INCAGN1876 (인사이트/아제누스), AMG 228 (암젠(Amgen)) 또는 INBRX-110 (인히브륵스(Inhibrx))으로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 조합물은 IAP 억제제를 포함한다. 일부 실시양태에서, IAP 억제제는 LCL161 또는 국제 출원 공개 번호 WO 2008/016893에 개시된 화합물을 포함한다.
한 실시양태에서, 조합물은 mTOR 억제제, 예를 들어 RAD001 (또한 에베롤리무스로 공지됨)을 포함한다.
한 실시양태에서, 조합물은 HDAC 억제제, 예를 들어 LBH589를 포함한다. LBH589는 또한 파노비노스타트로 공지되어 있다.
한 실시양태에서, 조합물은 IL-17 억제제, 예를 들어 CJM112를 포함한다.
특정 실시양태에서, 본원에 기재된 조합물은 에스트로겐 수용체 (ER) 길항제를 포함한다. 일부 실시양태에서, 에스트로겐 수용체 길항제는 PD-1 억제제, CDK4/6 억제제 또는 둘 다와 조합하여 사용된다. 일부 실시양태에서, 조합물은 ER 양성 (ER+) 암 또는 유방암 (예를 들어, ER+ 유방암)을 치료하는 데 사용된다.
일부 실시양태에서, 에스트로겐 수용체 길항제는 선택적 에스트로겐 수용체 분해제 (SERD)이다. SERD는 수용체에 결합하고, 예를 들어 수용체의 분해 또는 하향-조절을 유발하는 에스트로겐 수용체 길항제이다 (문헌 [Boer K. et al., (2017) Therapeutic Advances in Medical Oncology 9(7): 465-479]). ER은 예를 들어 인간 생식계의 성장, 발생 및 생리학에 중요한 호르몬-활성화 전사 인자이다. ER은 예를 들어 호르몬 에스트로겐 (17베타 에스트라디올)에 의해 활성화된다. ER 발현 및 신호전달은 암 (예를 들어, 유방암), 예를 들어 ER 양성 (ER+) 유방암에 연루된다. 일부 실시양태에서, SERD는 LSZ102, 풀베스트란트, 브릴라네스트란트 또는 엘라세스트란트로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, SERD는 국제 출원 공개 번호 WO 2014/130310 (이는 그 전문이 본원에 참조로 포함됨)에 개시된 화합물을 포함한다.
일부 실시양태에서, SERD는 LSZ102를 포함한다. LSZ102는 화학 명칭 (E)-3-(4-((2-(2-(1,1-디플루오로에틸)-4-플루오로페닐)-6-히드록시벤조[b]티오펜-3-일)옥시)페닐)아크릴산을 갖는다. 일부 실시양태에서, SERD는 풀베스트란트 (CAS 등록 번호: 129453-61-8), 또는 국제 출원 공개 번호 WO 2001/051056 (이는 그 전문이 본원에 참조로 포함됨)에 개시된 화합물을 포함한다. 일부 실시양태에서, SERD는 엘라세스트란트 (CAS 등록 번호: 722533-56-4), 또는 미국 특허 번호 7,612,114 (이는 그 전문이 참조로 포함됨)에 개시된 화합물을 포함한다. 엘라세스트란트는 또한 RAD1901, ER-306323 또는 (6R)-6-{2-[에틸({4-[2-(에틸아미노)에틸]페닐}메틸)아미노]-4-메톡시페닐}-5,6,7,8-테트라히드로나프탈렌-2-올로도 공지되어 있다. 엘라세스트란트는 경구로 생체이용가능한 비-스테로이드성 조합된 선택적 에스트로겐 수용체 조절제 (SERM) 및 SERD이다. 엘라세스트란트는 또한 예를 들어 문헌 [Garner F et al., (2015) Anticancer Drugs 26(9):948-56]에 개시되어 있다. 일부 실시양태에서, SERD는 브릴라네스트란트 (CAS 등록 번호: 1365888-06-7), 또는 국제 출원 공개 번호 WO 2015/136017 (이는 그 전문이 참조로 포함됨)에 개시된 화합물이다.
일부 실시양태에서, SERD는 예를 들어 문헌 [McDonell et al. (2015) Journal of Medicinal Chemistry 58(12) 4883-4887]에 개시된 바와 같은 RU 58668, GW7604, AZD9496, 바제독시펜, 피펜독시펜, 아르족시펜, OP-1074 또는 아콜비펜으로부터 선택된다.
다른 예시적인 에스트로겐 수용체 길항제는, 예를 들어 WO 2011/156518, WO 2011/159769, WO 2012/037410, WO 2012/037411 및 US 2012/0071535 (이들 모두는 그 전문이 본원에 참조로 포함됨)에 개시되어 있다.
특정 실시양태에서, 본원에 기재된 조합물은 시클린-의존성 키나제 4 또는 6 (CDK4/6)의 억제제를 포함한다. 일부 실시양태에서, CDK4/6 억제제는 PD-1 억제제, 에스트로겐 수용체 (ER) 길항제 또는 둘 다와 조합하여 사용된다. 일부 실시양태에서, 조합물은 ER 양성 (ER+) 암 또는 유방암 (예를 들어, ER+ 유방암)을 치료하는 데 사용된다. 일부 실시양태에서, CDK4/6 억제제는 리보시클립, 아베마시클립 (일라이 릴리) 또는 팔보시클립으로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, CDK4/6 억제제는 리보시클립 (CAS 등록 번호: 1211441-98-3), 또는 미국 특허 번호 8,415,355 및 8,685,980 (이들은 그 전문이 참조로 포함됨)에 개시된 화합물을 포함한다.
일부 실시양태에서, CDK4/6 억제제는 국제 출원 공개 번호 WO 2010/020675 및 미국 특허 번호 8,415,355 및 8,685,980 (이들은 그 전문이 참조로 포함됨)에 개시된 화합물을 포함한다.
일부 실시양태에서, CDK4/6 억제제는 리보시클립 (CAS 등록 번호: 1211441-98-3)을 포함한다. 리보시클립은 또한 LEE011, 키스칼리(KISQALI)® 또는 7-시클로펜틸-N,N-디메틸-2-((5-(피페라진-1-일)피리딘-2-일)아미노)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-6-카르복스아미드로 공지되어 있다.
일부 실시양태에서, CDK4/6 억제제는 아베마시클립 (CAS 등록 번호: 1231929-97-7)을 포함한다. 아베마시클립은 또한 LY835219 또는 N-[5-[(4-에틸-1-피페라지닐)메틸]-2-피리디닐]-5-플루오로-4-[4-플루오로-2-메틸-1-(1-메틸에틸)-1H-벤즈이미다졸-6-일]-2-피리미딘아민으로도 공지되어 있다. 아베마시클립은 CDK4 및 CDK6에 대해 선택적인 CDK 억제제이고, 예를 들어 문헌 [Torres-Guzman R et al. (2017) Oncotarget 10.18632/oncotarget.17778]에 개시되어 있다.
일부 실시양태에서, CDK4/6 억제제는 팔보시클립 (CAS 등록 번호: 571190-30-2)을 포함한다. 팔보시클립은 또한 PD-0332991, 이브런스(IBRANCE)® 또는 6-아세틸-8-시클로펜틸-5-메틸-2-{[5-(1-피페라지닐)-2-피리디닐]아미노}피리도[2,3-d]피리미딘-7 (8H)-온으로도 공지되어 있다. 팔보시클립은 CDK4를 11 nM의 IC50으로 억제하고, CDK6을 16 nM의 IC50으로 억제하며, 예를 들어 문헌 [Finn et al. (2009) Breast Cancer Research 11(5):R77]에 개시되어 있다.
특정 실시양태에서, 본원에 기재된 조합물은 케모카인 (C-X-C 모티프) 수용체 2 (CXCR2)의 억제제를 포함한다. 일부 실시양태에서, CXCR2 억제제는 6-클로로-3-((3,4-디옥소-2-(펜탄-3-일아미노)시클로부트-1-엔-1-일)아미노)-2-히드록시-N-메톡시-N-메틸벤젠술폰아미드, 다니릭신, 레파릭신 또는 나바릭신으로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, CSF-1/1R 결합제는 대식세포 콜로니-자극 인자 (M-CSF)의 억제제, 예를 들어 M-CSF에 대한 모노클로날 항체 또는 Fab (예를 들어, MCS110), CSF-1R 티로신 키나제 억제제 (예를 들어, 4-((2-(((1R,2R)-2-히드록시시클로헥실)아미노)벤조[d]티아졸-6-일)옥시)-N-메틸피콜린아미드 또는 BLZ945), 수용체 티로신 키나제 억제제 (RTK) (예를 들어, 펙시다르티닙), 또는 CSF-1R을 표적화하는 항체 (예를 들어, 에막투주맙 또는 FPA008)로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, CSF-1/1R 억제제는 BLZ945이다. 일부 실시양태에서, CSF-1/1R 결합제는 MCS110이다. 다른 실시양태에서, CSF-1/1R 결합제는 펙시다르티닙이다.
특정 실시양태에서, 본원에 기재된 조합물은 c-MET 억제제를 포함한다. 많은 종양 세포 유형에서 과다발현 또는 돌연변이된 수용체 티로신 키나제인 c-MET는 종양 세포 증식, 생존, 침습, 전이 및 종양 혈관신생에서 주요 역할을 한다. c-MET의 억제는 c-MET 단백질을 과다발현하거나 또는 구성적으로 활성화된 c-MET 단백질을 발현하는 종양 세포에서 세포 사멸을 유도할 수 있다. 일부 실시양태에서, c-MET 억제제는 캅마티닙 (INC280), JNJ-3887605, AMG 337, LY2801653, MSC2156119J, 크리조티닙, 티반티닙 또는 골바티닙으로부터 선택된다.
특정 실시양태에서, 본원에 기재된 조합물은 형질전환 성장 인자 베타 (또한 본원에서 상호교환가능하게 사용되는 TGF-β TGFβ, TGFb 또는 TGF-베타로 공지됨) 억제제를 포함한다. 일부 실시양태에서, TGF-β 억제제는 프레솔리무맙 또는 XOMA 089로부터 선택된다.
특정 실시양태에서, 본원에 기재된 조합물은 아데노신 A2a 수용체 (A2aR) 길항제 (예를 들어, A2aR 경로의 억제제, 예를 들어 아데노신 억제제, 예를 들어 A2aR 또는 CD-73의 억제제)를 포함한다. 일부 실시양태에서, A2aR 길항제는 PD-1 억제제 및 CXCR2 억제제, CSF-1/1R 결합제, LAG-3 억제제, GITR 효능제, c-MET 억제제 또는 IDO 억제제 중 1종 이상 (예를 들어, 2, 3, 4, 5종 또는 모두)과 조합하여 사용된다. 일부 실시양태에서, 조합물은 췌장암, 결장직장암, 위암 또는 흑색종 (예를 들어, 불응성 흑색종)을 치료하는 데 사용된다. 일부 실시양태에서, A2aR 길항제는 PBF509 (NIR178) (팔로비오파마(Palobiofarma)/노파르티스), CPI444/V81444 (코르부스(Corvus)/제넨테크), AZD4635/HTL-1071 (아스트라제네카/헵타레스(Heptares)), 비파데난트 (레독스(Redox)/주노(Juno)), GBV-2034 (글로바비르(Globavir)), AB928 (아쿠스 바이오사이언시스(Arcus Biosciences)), 테오필린, 이스트라데필린 (교와 하꼬 고교(Kyowa Hakko Kogyo)), 토자데난트/SYN-115 (아코다(Acorda)), KW-6356 (교와 하꼬 고교), ST-4206 (레디안트 바이오사이언시스(Leadiant Biosciences)) 또는 프렐라데난트/SCH 420814 (머크/쉐링(Schering))로부터 선택된다. 이론에 얽매이는 것을 원하지는 않지만, 일부 실시양태에서, A2aR의 억제는 IL-1b의 상향조절로 이어지는 것으로 여겨진다.
특정 실시양태에서, 본원에 기재된 조합물은 인돌아민 2,3-디옥시게나제 (IDO) 및/또는 트립토판 2,3-디옥시게나제 (TDO)의 억제제를 포함한다. 일부 실시양태에서, IDO 억제제는 PD-1 억제제 및 TGF-β 억제제, A2aR 길항제, CSF-1/1R 결합제, c-MET 억제제 또는 GITR 효능제 중 1종 이상 (예를 들어, 2, 3, 4종 또는 모두)과 조합하여 사용된다. 일부 실시양태에서, 조합물은 췌장암, 결장직장암, 위암 또는 흑색종 (예를 들어, 불응성 흑색종)을 치료하는 데 사용된다. 일부 실시양태에서, IDO 억제제는 (4E)-4-[(3-클로로-4-플루오로아닐리노)-니트로소메틸리덴]-1,2,5-옥사디아졸-3-아민 (또한 에파카도스타트 또는 INCB24360으로도 공지됨), 인독시모드 (NLG8189), (1-메틸-D-트립토판), α-시클로헥실-5H-이미다조[5,1-a]이소인돌-5-에탄올 (또한 NLG919로도 공지됨), 인독시모드, BMS-986205 (이전에 F001287)로부터 선택된다.
특정 실시양태에서, 본원에 기재된 조합물은 갈렉틴, 예를 들어 갈렉틴-1 또는 갈렉틴-3 억제제를 포함한다. 일부 실시양태에서, 조합물은 갈렉틴-1 억제제 및 갈렉틴-3 억제제를 포함한다. 일부 실시양태에서, 조합물은 갈렉틴-1 및 갈렉틴-3 둘 다를 표적화하는 이중특이적 억제제 (예를 들어, 이중특이적 항체 분자)를 포함한다. 일부 실시양태에서, 갈렉틴 억제제는 본원에 기재된 하나 이상의 치료제와 조합하여 사용된다. 일부 실시양태에서, 갈렉틴 억제제는 항-갈렉틴 항체 분자, GR-MD-02 (갈렉틴 테라퓨틱스(Galectin Therapeutics)), 갈렉틴-3C (만달 메드(Mandal Med)), 안지넥스 또는 OTX-008 (온코에틱스(OncoEthix), 머크)로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 조합물은 ERK 억제제, MEK 억제제 및 RAF 억제제를 포함한 MAP 키나제 경로의 억제제를 포함한다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 조합물은 MEK 억제제를 포함한다. 일부 실시양태에서, MEK 억제제는 트라메티닙, 셀루메티닙, AS703026, BIX 02189, BIX 02188, CI-1040, PD0325901, PD98059, U0126, XL-518, G-38963 또는 G02443714로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, MEK 억제제는 트라메티닙이다. 트라메티닙은 또한 JTP-74057, TMT212, N-(3-{3-시클로프로필-5-[(2-플루오로-4-아이오도페닐)아미노]-6,8-디메틸-2,4,7-트리옥소-3,4,6,7-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-1(2H)-일}페닐)아세트아미드, 또는 메키니스트 (CAS 번호 871700-17-3)로도 공지되어 있다.
일부 실시양태에서, MEK 억제제는 화학 명칭: (5-[(4-브로모-2-클로로페닐)아미노]-4-플루오로-N-(2-히드록시에톡시)-1-메틸-1H-벤즈이미다졸-6-카르복스아미드를 갖는 셀루메티닙을 포함한다. 셀루메티닙은, 예를 들어 PCT 공개 번호 WO2003077914에 기재된 바와 같이, AZD6244 또는 ARRY 142886으로도 공지되어 있다.
일부 실시양태에서, MEK 억제제는 AS703026, BIX 02189 또는 BIX 02188을 포함한다.
일부 실시양태에서, MEK 억제제는, 예를 들어 PCT 공개 번호 WO2000035436에 기재된 바와 같은 2-[(2-클로로-4-아이오도페닐)아미노]-N-(시클로프로필메톡시)-3,4-디플루오로-벤즈아미드 (또한 CI-1040 또는 PD184352로 공지됨)를 포함한다.
일부 실시양태에서, MEK 억제제는, 예를 들어 PCT 공개 번호 WO2002006213에 기재된 바와 같은 N-[(2R)-2,3-디히드록시프로폭시]-3,4-디플루오로-2-[(2-플루오로-4-아이오도페닐)아미노]-벤즈아미드 (PD0325901로도 공지됨)를 포함한다.
일부 실시양태에서, MEK 억제제는 독일 비아핀 게엠베하 운트 코., 카게로부터 입수가능한 2'-아미노-3'-메톡시플라본 (PD98059로도 공지됨)을 포함한다.
일부 실시양태에서, MEK 억제제는, 예를 들어 미국 특허 번호 2,779,780에 기재된 바와 같은 2,3-비스[아미노[(2-아미노페닐)티오]메틸렌]-부탄디니트릴 (또한 U0126으로 공지됨)을 포함한다.
일부 실시양태에서, MEK 억제제는 CAS 번호 1029872-29-4를 갖고 ACC 코포레이션으로부터 입수가능한 XL-518 (또한 GDC-0973으로 공지됨)을 포함한다.
일부 실시양태에서, MEK 억제제는 G-38963을 포함한다.
일부 실시양태에서, MEK 억제제는 G02443714 (AS703206으로도 공지됨)를 포함한다.
MEK 억제제의 추가의 예는 WO 2013/019906, WO 03/077914, WO 2005/121142, WO 2007/04415, WO 2008/024725 및 WO 2009/085983에 개시되어 있으며, 이들의 내용은 본원에 참조로 포함된다. MEK 억제제의 추가의 예는 2,3-비스[아미노[(2-아미노페닐)티오]메틸렌]-부탄디니트릴 (또한 U0126으로 공지되고, 미국 특허 번호 2,779,780에 기재됨); (3S,4R,5Z,8S,9S,11E)-14-(에틸아미노)-8,9,16-트리히드록시-3,4-디메틸-3,4,9,19-테트라히드로-1H-2-벤족사시클로테트라데신-1,7(8H)-디온](또한 E6201로 공지되고, PCT 공개 번호 WO2003076424에 기재됨); 베무라페닙 (PLX-4032, CAS 918504-65-1); (R)-3-(2,3-디히드록시프로필)-6-플루오로-5-(2-플루오로-4-아이오도페닐아미노)-8-메틸피리도[2,3-d]피리미딘-4,7(3H,8H)-디온 (TAK-733, CAS 1035555-63-5); 피마세르팁 (AS-703026, CAS 1204531-26-9); 2-(2-플루오로-4-아이오도페닐아미노)-N-(2-히드록시에톡시)-1,5-디메틸-6-옥소-1,6-디히드로피리딘-3-카르복스아미드 (AZD 8330); 및 3,4-디플루오로-2-[(2-플루오로-4-아이오도페닐)아미노]-N-(2-히드록시에톡시)-5-[(3-옥소-[1,2]옥사지난-2-일)메틸]벤즈아미드 (CH 4987655 또는 Ro 4987655)를 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 조합물은 RAF 억제제를 포함한다.
RAF 억제제는 베무라페닙 (또는 젤보라프 (Zelboraf)RegS, PLX-4032, CAS 918504-65-1), GDC-0879, PLX-4720 (시만시스 (Symansis)로부터 입수가능함), 다브라페닙 (또는 GSK2118436), LGX 818, CEP-32496, UI-152, RAF 265, 레고라페닙 (BAY 73-4506), CCT239065 또는 소라페닙 (또는 소라페닙 토실레이트 또는 넥사바르 (Nexavar)RegS)을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
일부 실시양태에서, RAF 억제제는 다브라페닙이다.
일부 실시양태에서, RAF 억제제는 LXH254이다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 조합물은 ERK 억제제를 포함한다.
ERK 억제제는 LTT462, 울릭세르티닙 (BVD-523), LY3214996, GDC-0994, KO-947 및 MK-8353을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
일부 실시양태에서, ERK 억제제는 LTT462이다. LTT462는 4-(3-아미노-6-((1S,3S,4S)-3-플루오로-4-히드록시시클로헥실)피라진-2-일)-N-((S)-1-(3-브로모-5-플루오로페닐)-2-(메틸아미노)에틸)-2-플루오로벤즈아미드이고, 하기 구조의 화합물이다:
Figure pct00395
LTT462의 제조는 PCT 특허 출원 공개 WO2015/066188에 기재되어 있다. LTT462는 세포외 신호-조절 키나제 1 및 2 (ERK 1/2)의 억제제이다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 조합물은 탁산, 빈카 알칼로이드, MEK 억제제, ERK 억제제 또는 RAF 억제제를 포함한다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 조합물은 MEK 억제제, ERK 억제제 및 RAF 억제제로부터 독립적으로 선택된 적어도 2종의 억제제를 포함한다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 조합물은 항-유사분열 약물을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 조합물은 탁산을 포함한다.
탁산은 도세탁셀, 파클리탁셀 또는 카바지탁셀을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 일부 실시양태에서, 탁산은 도세탁셀이다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 조합물은 빈카 알칼로이드를 포함한다.
빈카 알칼로이드는 빈크리스틴, 빈블라스틴 및 류로신을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 조합물은 토포이소머라제 억제제를 포함한다.
토포이소머라제 억제제는 토포테칸, 이리노테칸, 캄프토테신, 디플로모테칸, 라멜라린 D, 엘립티신, 에토포시드 (VP-16), 테니포시드, 독소루비신, 다우노루비신, 미톡산트론, 암사크린, 아우린트리카르복실산 및 HU-331을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
한 실시양태에서, 본원에 기재된 조합물은 인터류킨-1 베타 (IL-1β) 억제제를 포함한다. 일부 실시양태에서, IL-1β 억제제는 카나키누맙, 게보키주맙, 아나킨라 또는 릴로나셉트로부터 선택된다.
특정 실시양태에서, 본원에 기재된 조합물은 IL-15/IL-15Ra 복합체를 포함한다. 일부 실시양태에서, IL-15/IL-15Ra 복합체는 NIZ985 (노파르티스), ATL-803 (알토르(Altor)) 또는 CYP0150 (사이튠(Cytune))으로부터 선택된다.
특정 실시양태에서, 본원에 기재된 조합물은 마우스 이중 미세염색체 2 상동체 (MDM2) 억제제를 포함한다. MDM2의 인간 상동체는 또한 HDM2로도 공지되어 있다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 MDM2 억제제는 또한 HDM2 억제제로도 공지되어 있다. 일부 실시양태에서, MDM2 억제제는 HDM201 또는 CGM097로부터 선택된다.
한 실시양태에서, MDM2 억제제는 장애, 예를 들어 본원에 기재된 장애를 치료하기 위한 (S)-1-(4-클로로페닐)-7-이소프로폭시-6-메톡시-2-(4-(메틸((1r,4S)-4-(4-메틸-3-옥소피페라진-1-일)시클로헥실)메틸)아미노)페닐)-1,2-디히드로이소퀴놀린-3 (4H)-온 (또한 CGM097로도 공지됨) 또는 PCT 공개 번호 WO 2011/076786에 개시된 화합물을 포함한다. 한 실시양태에서, 본원에 개시된 치료제는 CGM097과 조합하여 사용된다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 조합물은 저메틸화제 (HMA)를 포함한다. 일부 실시양태에서, HMA는 데시타빈 또는 아자시티딘으로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 조합물은 글루코코르티코이드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 글루코코르티코이드는 덱사메타손이다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 조합물은 아스파라기나제를 포함한다.
특정 실시양태에서, 본원에 기재된 조합물은 Bcl2 패밀리의 임의의 생존촉진 단백질에 작용하는 억제제를 포함한다. 특정 실시양태에서, 본원에 기재된 조합물은 Bcl-2 억제제를 포함한다. 일부 실시양태에서, Bcl-2 억제제는 베네토클락스 (ABT-199로도 공지됨)이다:
Figure pct00396
한 실시양태에서, Bcl-2 억제제는 WO 2013/110890 및 WO 2015/011400에 기재된 화합물로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, Bcl-2 억제제는 나비토클락스 (ABT-263), ABT-737, BP1002, SPC2996, APG-1252, 오바토클락스 메실레이트 (GX15-070MS), PNT2258, Zn-d5, BGB-11417 또는 오블리메르센 (G3139)을 포함한다. 일부 실시양태에서, Bcl-2 억제제는 N-(4-히드록시페닐)-3-[6-[(3S)-3-(모르폴리노메틸)-3,4-디히드로-1H-이소퀴놀린-2-카르보닐]-1,3-벤조디옥솔-5-일]-N-페닐-5,6,7,8-테트라히드로인돌리진-1-카르복스아미드, 화합물 A1이다:
Figure pct00397
일부 실시양태에서, Bcl-2 억제제는 (S)-5-(5-클로로-2-(3-(모르폴리노메틸)-1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-2-카르보닐)페닐)-N-(5-시아노-1,2-디메틸-1H-피롤-3-일)-N-(4-히드록시페닐)-1,2-디메틸-1H-피롤-3-카르복스아미드), 화합물 A2이다:
Figure pct00398
한 실시양태에서, 본원에 개시된 항체-약물 접합체 또는 조합물은 생체내 암의 치료에 적합하다. 예를 들어, 조합물은 암성 종양의 성장을 억제하는데 사용될 수 있다. 조합물은 또한 본원의 장애를 치료하기 위한 표준 관리 치료 (예를 들어, 암 또는 감염성 장애의 경우), 백신 (예를 들어, 치료 암 백신), 세포 요법, 호르몬 요법 (예를 들어, 항에스트로겐 또는 항안드로겐을 사용함), 방사선 요법, 수술 또는 임의의 다른 치료제 또는 양식 중 1종 이상과 조합하여 사용될 수 있다. 예를 들어, 면역의 항원-특이적 증진을 달성하기 위해, 조합물은 관심 항원과 함께 투여될 수 있다. 본원에 개시된 조합물은 임의의 순서로 또는 동시에 투여될 수 있다.
추가의 실시양태
본 개시내용은 링커-약물 기, 항체-약물 접합체, 링커 기 및 접합 방법에 대한 하기 추가의 실시양태를 제공한다.
링커-약물 기
일부 실시양태에서, 본 발명의 링커-약물 기는 하기 화학식 (A')의 구조를 갖는 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염일 수 있다:
Figure pct00399
여기서:
R1은 반응성 기이고;
L1은 가교 스페이서이고;
Lp는 2가 펩티드 스페이서이고;
G-L2-A는 자기 희생적 스페이서이고;
R2는 친수성 모이어티이고;
L2는 결합, 메틸렌, 네오펜틸렌 또는 C2-C3알케닐렌이고;
A는 결합, -OC(=O)-*,
Figure pct00400
, -OC(=O)N(CH3)CH2CH2N(CH3)C(=O)-* 또는 -OC(=O)N(CH3)C(Ra)2C(Ra)2N(CH3)C(=O)-*이고, 여기서 각각의 Ra는 독립적으로 H, C1-C6알킬 및 C3-C8시클로알킬로부터 선택되고, A의 *는 D에 대한 부착 지점을 나타내고;
L3은 스페이서 모이어티이고;
D는 예를 들어 본원에 개시된 항체 약물 접합체 또는 면역접합체로부터 방출되는 경우에 Bcl-xL 단백질의 활성을 억제할 수 있는 약물 모이어티이다.
본 발명의 링커-약물 기의 특정 측면 및 예는 열거된 실시양태의 하기 목록에 제공된다. 각 실시양태에 명시된 특색은 다른 명시된 특색과 조합하여 본 발명의 추가 실시양태를 제공할 수 있는 것으로 인지될 것이다.
실시양태 1.
R1은 반응성 기이고;
L1은 가교 스페이서이고;
Lp는 2 내지 4개의 아미노산 잔기를 포함하는 2가 펩티드 스페이서이고;
G-L2-A는 자기 희생적 스페이서이고;
R2는 친수성 모이어티이고;
L2는 결합, 메틸렌, 네오펜틸렌 또는 C2-C3알케닐렌이고;
A는 결합, -OC(=O)-*,
Figure pct00401
, -OC(=O)N(CH3)CH2CH2N(CH3)C(=O)-* 또는 -OC(=O)N(CH3)C(Ra)2C(Ra)2N(CH3)C(=O)-*이고, 여기서 각각의 Ra는 독립적으로 H, C1-C6알킬 및 C3-C8시클로알킬로부터 선택되고, A의 *는 D에 대한 부착 지점을 나타내고;
L3은 스페이서 모이어티이고;
D는 본원에 정의된 바와 같은 약물 모이어티, 예를 들어 Bcl-xL 억제제인
화학식 (A')의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
실시양태 2.
R1은 반응성 기이고;
L1은 가교 스페이서이고;
Lp는 2 내지 4개의 아미노산 잔기를 포함하는 2가 펩티드 스페이서이고;
Figure pct00402
기는
Figure pct00403
로부터 선택되고, 여기서
Figure pct00404
의 *는 D (예를 들어, 약물 모이어티의 N 또는 O)에 대한 부착 지점을 나타내고,
Figure pct00405
의 ***는 Lp에 대한 부착 지점을 나타내고;
R2는 친수성 모이어티이고;
L2는 결합, 메틸렌, 네오펜틸렌 또는 C2-C3알케닐렌이고;
A는 결합, -OC(=O)-*,
Figure pct00406
, -OC(=O)N(CH3)CH2CH2N(CH3)C(=O)-* 또는 -OC(=O)N(CH3)C(Ra)2C(Ra)2N(CH3)C(=O)-*이고, 여기서 각각의 독립적으로 Ra는 H, C1-C6알킬 및 C3-C8시클로알킬로부터 선택되고, A의 *는 D에 대한 부착 지점을 나타내고;
L3은 스페이서 모이어티이고;
D는 본원에 정의된 바와 같은 약물 모이어티, 예를 들어 Bcl-xL 억제제인
화학식 (A')의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
실시양태 3. 하기 화학식 (B')의 구조를 갖는 화학식 (A')의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염:
Figure pct00407
여기서:
R1은 반응성 기이고;
L1은 가교 스페이서이고;
Lp는 2 내지 4개의 아미노산 잔기를 포함하는 2가 펩티드 스페이서이고;
R2는 친수성 모이어티이고;
A는 결합, -OC(=O)-*,
Figure pct00408
, -OC(=O)N(CH3)CH2CH2N(CH3)C(=O)-* 또는 -OC(=O)N(CH3)C(Ra)2C(Ra)2N(CH3)C(=O)-*이고, 여기서 각각의 Ra는 독립적으로 H, C1-C6알킬 및 C3-C8시클로알킬로부터 선택되고, A의 *는 D에 대한 부착 지점을 나타내고;
L3은 스페이서 모이어티이고;
D는 N를 포함하는 본원에 정의된 바와 같은 약물 모이어티이고, 여기서 D는 A에서 약물 모이어티의 N로의 직접 결합을 통해 A에 연결된다.
실시양태 4.
R1은
Figure pct00409
Figure pct00410
이고,
L1은 *-C(=O)(CH2)mO(CH2)m-**;
*-C(=O)((CH2)mO)t(CH2)n-**;
*-C(=O)(CH2)m-**;
*-C(=O)NH((CH2)mO)t(CH2)n-**;
*-C(=O)O(CH2)mSSC(R3)2(CH2)mC(=O)NR3(CH2)mNR3C(=O)(CH2)m-**;
*-C(=O)O(CH2)mC(=O)NH(CH2)m-**;
*-C(=O)(CH2)mNH(CH2)m-**; *-C(=O)(CH2)mNH(CH2)nC(=O)-**;
*-C(=O)(CH2)mX1(CH2)m-**; *-C(=O)((CH2)mO)t(CH2)nX1(CH2)n-**;
*-C(=O)(CH2)mNHC(=O)(CH2)n-**;
*-C(=O)((CH2)mO)t(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-**;
*-C(=O)(CH2)mNHC(=O)(CH2)nX1(CH2)n-**;
*-C(=O)((CH2)mO)t(CH2)nNHC(=O)(CH2)nX1(CH2)n-**;
*-C(=O)((CH2)mO)t(CH2)nC(=O)NH(CH2)m-**;
*-C(=O)(CH2)mC(R3)2-**; 또는
*-C(=O)(CH2)mC(=O)NH(CH2)m-**이고,
여기서 L1의 *는 Lp에 대한 부착 지점을 나타내고, L1의 **는 R1에 대한 부착 지점을 나타내고;
R2는 폴리에틸렌 글리콜, 폴리알킬렌 글리콜, 당, 올리고사카라이드, 폴리펩티드, 또는 1 내지 3개의 기로 치환된 C2-C6알킬로부터 선택되는 친수성 모이어티이고;
각각의 R3은 독립적으로 H 및 C1-C6알킬로부터 선택되고;
R4는 2-피리딜 또는 4-피리딜이고;
각각의 R5는 독립적으로 H, C1-C6알킬, F, Cl, 및 -OH로부터 선택되고;
각각의 R6은 독립적으로 H, C1-C6알킬, F, Cl, -NH2, -OCH3, -OCH2CH3, -N(CH3)2, -CN, -NO2 및 -OH로부터 선택되고;
각각의 R7은 독립적으로 H, C1-6알킬, 플루오로, -C(=O)OH로 치환된 벤질옥시, -C(=O)OH로 치환된 벤질, -C(=O)OH로 치환된 C1-4알콕시, 및 -C(=O)OH로 치환된 C1-4알킬로부터 선택되고;
X1은
Figure pct00412
이고;
각각의 m은 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 및 10으로부터 선택되고;
각각의 n은 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 및 10으로부터 선택되고;
각각의 t는 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 및 30으로부터 선택되고;
Lp는 글리신, 발린, 시트룰린, 리신, 이소류신, 페닐알라닌, 메티오닌, 아스파라긴, 프롤린, 알라닌, 류신, 트립토판 및 티로신으로부터 선택되는 아미노산 잔기를 포함하는 2가 펩티드 스페이서이고;
A는 결합, -OC(=O)-*,
Figure pct00413
, -OC(=O)N(CH3)CH2CH2N(CH3)C(=O)-* 또는 -OC(=O)N(CH3)C(Ra)2C(Ra)2N(CH3)C(=O)-*이고, 여기서 각각의 Ra는 독립적으로 H, C1-C6알킬 및 C3-C8시클로알킬로부터 선택되고, A의 *는 D에 대한 부착 지점을 나타내고;
L3은 구조
Figure pct00414
를 갖는 스페이서 모이어티이고,
여기서
W는 -CH2O-**, -CH2N(Rb)C(=O)O-**, -NHC(=O)C(Rb)2NHC(=O)O-**, -NHC(=O)C(Rb)2NH-**, -NHC(=O)C(Rb)2NHC(=O)-**, -CH2N(X-R2)C(=O)O-**, -C(=O)N(X-R2)-**, -CH2N(X-R2)C(=O)-**, -C(=O)NRb-**, -C(=O)NH-**, -CH2NRbC(=O)-**, -CH2NRbC(=O)NH-**, -CH2NRbC(=O)NRb-**, -NHC(=O)-**, -NHC(=O)O-**, -NHC(=O)NH-**, -OC(=O)NH-**, -S(O)2NH-**, -NHS(O)2-**, -C(=O)-, -C(=O)O-** 또는 -NH-이고, 여기서 각각의 Rb는 독립적으로 H, C1-C6알킬 또는 C3-C8시클로알킬로부터 선택되고, 여기서 W의 **는 X에 대한 부착 지점을 나타내고;
X는 결합, 트리아졸릴 또는 ***-CH2-트리아졸릴-*이고, 여기서 X의 ***는 W에 대한 부착 지점을 나타내고, X의 *는 R2에 대한 부착 지점을 나타내고;
L3의 *는 R2에 대한 부착 지점을 나타내고;
D는 N 또는 O를 포함하는 본원에 정의된 바와 같은 약물 모이어티이고, 여기서 D는 A에서 약물 모이어티의 N 또는 O로의 직접 결합을 통해 A에 연결되는 것인
화학식 (A')의 화합물 또는 실시양태 1 내지 3 중 어느 하나의 화합물, 또는 그의 제약상 허용되는 염.
실시양태 5.
R1은
Figure pct00415
이고;
L1은 *-C(=O)(CH2)mO(CH2)m-**; *-C(=O)((CH2)mO)t(CH2)n-**; *-C(=O)(CH2)m-**; 또는 *-C(=O)NH((CH2)mO)t(CH2)n-이고, 여기서 L1의 *는 Lp에 대한 부착 지점을 나타내고, L1의 **는 R1에 대한 부착 지점을 나타내고;
각각의 m은 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 및 10으로부터 선택되고;
각각의 n은 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 및 10으로부터 선택되고;
각각의 t는 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 및 30으로부터 선택되고;
Lp는
Figure pct00416
로부터 선택되는 2가 펩티드 스페이서이고, 여기서 Lp의 *는 L1에 대한 부착 지점을 나타내고, Lp의 **는 G의 -NH-기에 대한 부착 지점을 나타내고;
L3은 구조
Figure pct00417
를 갖는 스페이서 모이어티이고,
여기서
W는 -CH2O-**, -CH2N(Rb)C(=O)O-**, -NHC(=O)CH2NHC(=O)O-**, -NHC(=O)CH2NH-**, -NHC(=O)CH2NHC(=O)-**, -CH2N(X-R2)C(=O)O-**, -C(=O)N(X-R2)-**, -CH2N(X-R2)C(=O)-**, -C(=O)NRb-**, -C(=O)NH-**, -CH2NRbC(=O)-**, -CH2NRbC(=O)NH-**, -CH2NRbC(=O)NRb-**, -NHC(=O)-**, -NHC(=O)O-**, -NHC(=O)NH-**, -OC(=O)NH-**, -S(O)2NH-**, -NHS(O)2-**, -C(=O)-, -C(=O)O-** 또는 -NH-이고, 여기서 각각의 Rb는 독립적으로 H, C1-C6알킬 또는 C3-C8시클로알킬로부터 선택되고, 여기서 W의 **는 X에 대한 부착 지점을 나타내고;
X는 결합, 트리아졸릴 또는 ***-CH2-트리아졸릴-*이고, 여기서 X의 ***는 W에 대한 부착 지점을 나타내고, X의 *는 R2에 대한 부착 지점을 나타내고;
L3의 *는 R2에 대한 부착 지점을 나타내고;
R2는 폴리에틸렌 글리콜, 폴리알킬렌 글리콜, 당, 올리고사카라이드, 폴리펩티드, 1 내지 3개의
Figure pct00418
로 치환된 C2-C6알킬로부터 선택되는 친수성 모이어티이고;
A는 결합, -OC(=O)-*,
Figure pct00419
, -OC(=O)N(CH3)CH2CH2N(CH3)C(=O)-* 또는 -OC(=O)N(CH3)C(Ra)2C(Ra)2N(CH3)C(=O)-*이고, 여기서 각각의 Ra는 독립적으로 H, C1-C6알킬 및 C3-C8시클로알킬로부터 선택되고, A의 *는 D에 대한 부착 지점을 나타내고;
D는 N 또는 O를 포함하는 본원에 정의된 바와 같은 약물 모이어티이고, 여기서 D는 A에서 약물 모이어티의 N 또는 O로의 직접 결합을 통해 A에 연결되는 것인
화학식 (A')의 화합물 또는 실시양태 1 내지 4 중 어느 하나의 화합물, 또는 그의 제약상 허용되는 염.
실시양태 6.
R1은
Figure pct00420
이고;
L1은 *-C(=O)(CH2)mO(CH2)m-**; *-C(=O)((CH2)mO)t(CH2)n-**; *-C(=O)(CH2)m-**; 또는 *-C(=O)NH((CH2)mO)t(CH2)n-, 여기서 L1의 *는 Lp에 대한 부착 지점을 나타내고, L1의 **는 R1에 대한 부착 지점을 나타내고;
각각의 m은 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 및 10으로부터 선택되고;
각각의 n은 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 및 10으로부터 선택되고;
각각의 t는 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 및 30으로부터 선택되고;
Lp는
Figure pct00421
로부터 선택되는 2가 펩티드 스페이서이고, 여기서 Lp의 *는 L1에 대한 부착 지점을 나타내고, Lp의 **는 G의 -NH-기에 대한 부착 지점을 나타내고;
L3은 구조
Figure pct00422
를 갖는 스페이서 모이어티이고,
여기서
W는 -CH2O-**, -CH2N(Rb)C(=O)O-**, -NHC(=O)CH2NHC(=O)O-**, -CH2N(X-R2)C(=O)O-**, -C(=O)N(X-R2)-**, -CH2N(X-R2)C(=O)-**, -C(=O)NRb-**, -C(=O)NH-**, -CH2NRbC(=O)-**, -CH2NRbC(=O)NH-**, -CH2NRbC(=O)NRb-**, -NHC(=O)-**, -NHC(=O)O-**, -NHC(=O)NH-**, -OC(=O)NH-**, -S(O)2NH-**, -NHS(O)2-**, -C(=O)-, -C(=O)O-** 또는 -NH-이고, 여기서 각각의 Rb는 독립적으로 H, C1-C6알킬 또는 C3-C8시클로알킬로부터 선택되고, 여기서 W의 **는 X에 대한 부착 지점을 나타내고;
X는 결합, 트리아졸릴 또는 ***-CH2-트리아졸릴-*이고, 여기서 X의 ***는 W에 대한 부착 지점을 나타내고, X의 *는 R2에 대한 부착 지점을 나타내고;
L3의 *는 R2에 대한 부착 지점을 나타내고;
R2는 폴리에틸렌 글리콜, 폴리알킬렌 글리콜, 당, 올리고사카라이드, 폴리펩티드, 또는 1 내지 3개의
Figure pct00423
기로 치환된 C2-C6알킬로부터 선택되는 친수성 모이어티이고;
A는 결합, -OC(=O)-*,
Figure pct00424
, -OC(=O)N(CH3)CH2CH2N(CH3)C(=O)-* 또는 -OC(=O)N(CH3)C(Ra)2C(Ra)2N(CH3)C(=O)-*이고, 여기서 각각의 Ra는 독립적으로 H, C1-C6알킬 및 C3-C8시클로알킬로부터 선택되고, A의 *는 D에 대한 부착 지점을 나타내고;
D는 N 또는 O를 포함하는 본원에 정의된 바와 같은 약물 모이어티이고, 여기서 D는 A에서 약물 모이어티의 N 또는 O로의 직접 결합을 통해 A에 연결되는 것인
화학식 (A')의 화합물 또는 실시양태 1 내지 5 중 어느 하나의 화합물, 또는 그의 제약상 허용되는 염.
실시양태 7.
R1은
Figure pct00425
이고;
L1은 *-C(=O)(CH2)mO(CH2)m-**; *-C(=O)((CH2)mO)t(CH2)n-**; *-C(=O)(CH2)m-**; 또는 *-C(=O)NH((CH2)mO)t(CH2)n-, 여기서 L1의 *는 Lp에 대한 부착 지점을 나타내고, L1의 **는 R1에 대한 부착 지점을 나타내고;
각각의 m은 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 및 10으로부터 선택되고;
각각의 n은 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 및 10으로부터 선택되고;
각각의 t는 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 및 30으로부터 선택되고;
Lp는
Figure pct00426
로부터 선택되는 2가 펩티드 스페이서이고, 여기서 Lp의 *는 L1에 대한 부착 지점을 나타내고, Lp의 **는 G의 -NH-기에 대한 부착 지점을 나타내고;
L3은 구조
Figure pct00427
를 갖는 스페이서 모이어티이고,
여기서
W는 -CH2O-**, -CH2N(Rb)C(=O)O-**, -NHC(=O)CH2NHC(=O)O-**, -CH2N(X-R2)C(=O)O-**, -C(=O)N(X-R2)-**, -C(=O)NRb-**, -C(=O)NH-**, -CH2NRbC(=O)-**, -CH2NRbC(=O)NH-**, -CH2NRbC(=O)NRb-**, -NHC(=O)-**, -NHC(=O)O-**, 또는 -NHC(=O)NH-**이고, 여기서 각각의 Rb는 독립적으로 H, C1-C6알킬 또는 C3-C8시클로알킬로부터 선택되고, 여기서 W의 **는 X에 대한 부착 지점을 나타내고;
X는 결합, 트리아졸릴 또는 ***-CH2-트리아졸릴-*이고, 여기서 X의 ***는 W에 대한 부착 지점을 나타내고, X의 *는 R2에 대한 부착 지점을 나타내고;
L3의 *는 R2에 대한 부착 지점을 나타내고;
R2는 폴리에틸렌 글리콜, 폴리알킬렌 글리콜, 당, 올리고사카라이드, 폴리펩티드, 1 내지 3개의
Figure pct00428
로 치환된 C2-C6알킬로부터 선택되는 친수성 모이어티이고;
A는 결합 또는 -OC(=O)*이고, 여기서 *는 D에 대한 부착 지점을 나타내고;
D는 N 또는 O를 포함하는 본원에 정의된 바와 같은 약물 모이어티이고, 여기서 D는 A에서 약물 모이어티의 N 또는 O로의 직접 결합을 통해 A에 연결되는 것인
화학식 (A')의 화합물 또는 실시양태 1 내지 6 중 어느 하나의 화합물, 또는 그의 제약상 허용되는 염.
실시양태 8.
R1은
Figure pct00429
이고;
L1은 *-C(=O)(CH2)mO(CH2)m-**; *-C(=O)((CH2)mO)t(CH2)n-**; *-C(=O)(CH2)m-**; 또는 *-C(=O)NH((CH2)mO)t(CH2)n-, 여기서 L1의 *는 Lp에 대한 부착 지점을 나타내고, L1의 **는 R1에 대한 부착 지점을 나타내고;
각각의 m은 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 및 10으로부터 선택되고;
각각의 n은 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 및 10으로부터 선택되고;
각각의 t는 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 및 30으로부터 선택되고;
Lp는
Figure pct00430
로부터 선택되는 2가 펩티드 스페이서이고, 여기서 Lp의 *는 L1에 대한 부착 지점을 나타내고, Lp의 **는 G의 -NH-기에 대한 부착 지점을 나타내고;
L3은 구조
Figure pct00431
를 갖는 스페이서 모이어티이고,
여기서
W는 -CH2O-**, -CH2N(Rb)C(=O)O-**, -NHC(=O)CH2NHC(=O)O-**, -CH2N(X-R2)C(=O)O-**, 또는 -C(=O)N(X-R2)-**이고, 여기서 각각의 Rb는 독립적으로 H, C1-C6알킬 또는 C3-C8시클로알킬로부터 선택되고, 여기서 W의 **는 X에 대한 부착 지점을 나타내고;
X는 ***-CH2-트리아졸릴-*이고, 여기서 X의 ***는 W에 대한 부착 지점을 나타내고, X의 *는 R2에 대한 부착 지점을 나타내며;
L3의 *는 R2에 대한 부착 지점을 나타내고;
R2는 폴리에틸렌 글리콜, 폴리알킬렌 글리콜, 당, 올리고사카라이드, 폴리펩티드, 또는 1 내지 3개의
Figure pct00432
기로 치환된 C2-C6알킬로부터 선택되는 친수성 모이어티이고;
A는 결합 또는 -OC(=O)*이고, 여기서 *는 D에 대한 부착 지점을 나타내고;
D는 N 또는 O를 포함하는 본원에 정의된 바와 같은 약물 모이어티이고, 여기서 D는 A에서 약물 모이어티의 N 또는 O로의 직접 결합을 통해 A에 연결되는 것인
화학식 (A')의 화합물 또는 실시양태 1 내지 7 중 어느 하나의 화합물, 또는 그의 제약상 허용되는 염.
실시양태 9. R1은 표 8로부터 선택되는 반응성 기인 화학식 (A')의 화합물 또는 실시양태 1 내지 8 중 어느 하나의 화합물, 또는 그의 제약상 허용되는 염.
실시양태 10.
R1은
Figure pct00433
Figure pct00434
인 화학식 (A')의 화합물 또는 실시양태 1 내지 9 중 어느 하나의 화합물, 또는 그의 제약상 허용되는 염.
실시양태 11.
R1은
Figure pct00435
인 화학식 (A')의 화합물 또는 실시양태 1 내지 9 중 어느 하나의 화합물, 또는 그의 제약상 허용되는 염.
실시양태 12.
R1은
Figure pct00436
인 화학식 (A')의 화합물 또는 실시양태 1 내지 9 중 어느 하나의 화합물, 또는 그의 제약상 허용되는 염.
실시양태 13.
R1은
Figure pct00437
인 화학식 (A')의 화합물 또는 실시양태 1 내지 9 중 어느 하나의 화합물, 또는 그의 제약상 허용되는 염.
실시양태 14. R1은
Figure pct00438
인 화학식 (A')의 화합물 또는 실시양태 1 내지 9 중 어느 하나의 화합물, 또는 그의 제약상 허용되는 염.
실시양태 15. R1은 -ONH2인 화학식 (A')의 화합물 또는 실시양태 1 내지 9 중 어느 하나의 화합물, 또는 그의 제약상 허용되는 염.
실시양태 16. R1은
Figure pct00439
인 화학식 (A')의 화합물 또는 실시양태 1 내지 9 중 어느 하나의 화합물, 또는 그의 제약상 허용되는 염.
실시양태 17.
R1은
Figure pct00440
인 화학식 (A')의 화합물 또는 실시양태 1 내지 9 중 어느 하나의 화합물, 또는 그의 제약상 허용되는 염.
실시양태 18. 다음 구조를 갖는 화학식 (A')의 화합물 또는 실시양태 1 내지 9 중 어느 하나의 화합물, 또는 그의 제약상 허용되는 염.
Figure pct00441
여기서, R은 H, -CH3 또는 -CH2CH2C(=O)OH이다.
실시양태 19. 다음 구조를 갖는 화학식 (A')의 화합물 또는 실시양태 1 내지 9 중 어느 하나의 화합물, 또는 그의 제약상 허용되는 염.
Figure pct00442
여기서, R은 H, -CH3 또는 -CH2CH2C(=O)OH이다.
실시양태 20. 다음 구조를 갖는 화학식 (A')의 화합물 또는 실시양태 1 내지 9 중 어느 하나의 화합물, 또는 그의 제약상 허용되는 염.
Figure pct00443
여기서, R은 H, -CH3 또는 -CH2CH2C(=O)OH이다.
실시양태 21. 다음 구조를 갖는 화학식 (A')의 화합물 또는 실시양태 1 내지 9 중 어느 하나의 화합물, 또는 그의 제약상 허용되는 염.
Figure pct00444
여기서, 각각의 R은 독립적으로 H, -CH3 또는 -CH2CH2C(=O)OH로부터 선택된다.
실시양태 22. 다음 구조를 갖는 화학식 (A')의 화합물 또는 실시양태 1 내지 9 중 어느 하나의 화합물, 또는 그의 제약상 허용되는 염.
Figure pct00445
여기서, 각각의 R은 독립적으로 H, -CH3 또는 -CH2CH2C(=O)OH로부터 선택된다.
실시양태 23. 다음 구조를 갖는 화학식 (A')의 화합물 또는 실시양태 1 내지 9 중 어느 하나의 화합물, 또는 그의 제약상 허용되는 염.
Figure pct00446
여기서, Xa는 -CH2-, -OCH2-, -NHCH2- 또는 -NRCH2-이고, 각각의 R은 독립적으로 H, -CH3 또는 -CH2CH2C(=O)OH이다.
실시양태 24. 다음 구조를 갖는 화학식 (A')의 화합물 또는 실시양태 1 내지 9 중 어느 하나의 화합물, 또는 그의 제약상 허용되는 염.
Figure pct00447
여기서, R은 H, -CH3 또는 -CH2CH2C(=O)OH이다.
실시양태 25. 다음 구조를 갖는 화학식 (A')의 화합물 또는 실시양태 1 내지 9 중 어느 하나의 화합물, 또는 그의 제약상 허용되는 염.
Figure pct00448
여기서, Xb는 -CH2-, -OCH2-, -NHCH2- 또는 -NRCH2-이고, 각각의 R은 독립적으로 H, -CH3 또는 -CH2CH2C(=O)OH이다.
실시양태 26. 다음 구조를 갖는 화학식 (A')의 화합물 또는 실시양태 1 내지 9 중 어느 하나의 화합물, 또는 그의 제약상 허용되는 염.
Figure pct00449
실시양태 27. 다음 구조를 갖는 화학식 (A')의 화합물 또는 실시양태 1 내지 9 중 어느 하나의 화합물, 또는 그의 제약상 허용되는 염.
Figure pct00450
실시양태 28. 다음 구조를 갖는 화학식 (A')의 화합물 또는 실시양태 1 내지 9 중 어느 하나의 화합물, 또는 그의 제약상 허용되는 염.
Figure pct00451
실시양태 29. 다음 구조를 갖는 화학식 (A')의 화합물 또는 실시양태 1 내지 9 중 어느 하나의 화합물, 또는 그의 제약상 허용되는 염.
Figure pct00452
실시양태 30. 다음 구조를 갖는 화학식 (A')의 화합물 또는 실시양태 1 내지 9 중 어느 하나의 화합물, 또는 그의 제약상 허용되는 염.
Figure pct00453
실시양태 31. 다음 구조를 갖는 화학식 (A')의 화합물 또는 실시양태 1 내지 9 중 어느 하나의 화합물, 또는 그의 제약상 허용되는 염.
Figure pct00454
여기서 n은 2 내지 24의 정수이다.
실시양태 32. 표 B의 화합물의 구조를 갖는 화학식 (A')의 화합물 또는 실시양태 1 내지 9 중 어느 하나의 화합물, 또는 그의 제약상 허용되는 염.
실시양태 33. 하기 화학식 (C')의 구조를 갖는 화학식 (A')의 링커-약물 기의 링커.
Figure pct00455
여기서,
L1은 가교 스페이서이고;
Lp는 2가 펩티드 스페이서이고;
G-L2-A는 자기 희생적 스페이서이고;
R2는 친수성 모이어티이고;
L2는 결합, 메틸렌, 네오펜틸렌 또는 C2-C3알케닐렌이고;
A는 결합, -OC(=O)-*,
Figure pct00456
, -OC(=O)N(CH3)CH2CH2N(CH3)C(=O)-* 또는 -OC(=O)N(CH3)C(Ra)2C(Ra)2N(CH3)C(=O)-*이고, 여기서 각각의 Ra는 독립적으로 H, C1-C6알킬 및 C3-C8시클로알킬로부터 선택되고, A의 *는 D에 대한 부착 지점을 나타내고,
L3은 스페이서 모이어티이다.
실시양태 34.
L1은 가교 스페이서이고;
Lp는 2 내지 4개의 아미노산 잔기를 포함하는 2가 펩티드 스페이서이고;
G-L2-A는 자기 희생적 스페이서이고;
R2는 친수성 모이어티이고;
L2는 결합, 메틸렌, 네오펜틸렌 또는 C2-C3알케닐렌이고;
A는 결합, -OC(=O)-*,
Figure pct00457
, -OC(=O)N(CH3)CH2CH2N(CH3)C(=O)-* 또는 -OC(=O)N(CH3)C(Ra)2C(Ra)2N(CH3)C(=O)-*이고, 여기서 각각의 Ra는 독립적으로 H, C1-C6알킬 및 C3-C8시클로알킬로부터 선택되고, A의 *는 D에 대한 부착 지점을 나타내고,
L3은 스페이서 모이어티인
실시양태 33의 링커.
실시양태 35.
L1은 가교 스페이서이고;
Lp는 2 내지 4개의 아미노산 잔기를 포함하는 2가 펩티드 스페이서이고;
Figure pct00458
기는
Figure pct00459
로부터 선택되고, 여기서
Figure pct00460
의 *는 D (예를 들어, 약물 모이어티의 N 또는 O)에 대한 부착 지점을 나타내고,
Figure pct00461
의 ***는 Lp에 대한 부착 지점을 나타내고;
R2는 친수성 모이어티이고;
L2는 결합, 메틸렌, 네오펜틸렌 또는 C2-C3알케닐렌이고;
A는 결합, -OC(=O)-*,
Figure pct00462
, -OC(=O)N(CH3)CH2CH2N(CH3)C(=O)-* 또는 -OC(=O)N(CH3)C(Ra)2C(Ra)2N(CH3)C(=O)-*이고, 여기서 각각의 Ra는 독립적으로 H, C1-C6알킬 및 C3-C8시클로알킬로부터 선택되고, A의 *는 D에 대한 부착 지점을 나타내고,
L3은 스페이서 모이어티인
실시양태 33 또는 34의 링커.
실시양태 36.
L1은 *-C(=O)(CH2)mO(CH2)m-**; *-C(=O)((CH2)mO)t(CH2)n-**; *-C(=O)(CH2)m-**;
*-C(=O)NH((CH2)mO)t(CH2)n-**;
*-C(=O)O(CH2)mSSC(R3)2(CH2)mC(=O)NR3(CH2)mNR3C(=O)(CH2)m-**;
*-C(=O)O(CH2)mC(=O)NH(CH2)m-**; *-C(=O)(CH2)mNH(CH2)m-**;
*-C(=O)(CH2)mNH(CH2)nC(=O)-**; *-C(=O)(CH2)mX1(CH2)m-**;
*-C(=O)((CH2)mO)t(CH2)nX1(CH2)n-**; *-C(=O)(CH2)mNHC(=O)(CH2)n-**;
*-C(=O)((CH2)mO)t(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-**;
*-C(=O)(CH2)mNHC(=O)(CH2)nX1(CH2)n-**;
*-C(=O)((CH2)mO)t(CH2)nNHC(=O)(CH2)nX1(CH2)n-**;
*-C(=O)((CH2)mO)t(CH2)nC(=O)NH(CH2)m-**;
*-C(=O)(CH2)mC(R3)2-** 또는 *-C(=O)(CH2)mC(=O)NH(CH2)m-**이고, 여기서 L1의 *는 Lp에 대한 부착 지점을 나타내고;
R2는 폴리에틸렌 글리콜, 폴리알킬렌 글리콜, 당, 올리고사카라이드, 폴리펩티드, 또는 1 내지 3개의
Figure pct00463
기로 치환된 C2-C6알킬로부터 선택되는 친수성 모이어티이고;
각각의 R3은 독립적으로 H 및 C1-C6알킬로부터 선택되고;
X1은
Figure pct00464
이고;
각각의 m은 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 및 10으로부터 선택되고;
각각의 n은 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 및 10으로부터 선택되고;
각각의 t는 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 및 30으로부터 선택되고;
Lp는 글리신, 발린, 시트룰린, 리신, 이소류신, 페닐알라닌, 메티오닌, 아스파라긴, 프롤린, 알라닌, 류신, 트립토판 및 티로신으로부터 선택되는 아미노산 잔기를 포함하는 2가 펩티드 스페이서이고;
A는 결합, -OC(=O)-*,
Figure pct00465
, -OC(=O)N(CH3)CH2CH2N(CH3)C(=O)-* 또는 -OC(=O)N(CH3)C(Ra)2C(Ra)2N(CH3)C(=O)-*이고, 여기서 각각의 Ra는 독립적으로 H, C1-C6알킬 및 C3-C8시클로알킬로부터 선택되고, A의 *는 D에 대한 부착 지점을 나타내고;
L3은 구조
Figure pct00466
를 갖는 스페이서 모이어티이고,
여기서
W는 -CH2O-**, -CH2N(Rb)C(=O)O-**, -NHC(=O)C(Rb)2NHC(=O)O-**, -NHC(=O)C(Rb)2NH-**, -NHC(=O)C(Rb)2NHC(=O)-**, -CH2N(X-R2)C(=O)O-**, -C(=O)N(X-R2)-**, -CH2N(X-R2)C(=O)-**, -C(=O)NRb-**, -C(=O)NH-**, -CH2NRbC(=O)-**, -CH2NRbC(=O)NH-**, -CH2NRbC(=O)NRb-**, -NHC(=O)-**, -NHC(=O)O-**, -NHC(=O)NH-**, -OC(=O)NH-**, -S(O)2NH-**, -NHS(O)2-**, -C(=O)-, -C(=O)O-** 또는 -NH-이고, 여기서 각각의 Rb는 독립적으로 H, C1-C6알킬 또는 C3-C8시클로알킬로부터 선택되고, 여기서 W의 **는 X에 대한 부착 지점을 나타내고;
X는 결합, 트리아졸릴 또는 ***-CH2-트리아졸릴-*이고, 여기서 X의 ***는 W에 대한 부착 지점을 나타내고, X의 *는 R2에 대한 부착 지점을 나타내고;
L3의 *는 R2에 대한 부착 지점을 나타내는 것인
실시양태 33 내지 35 중 어느 하나의 링커.
실시양태 37.
L1은 *-C(=O)(CH2)mO(CH2)m-**; *-C(=O)((CH2)mO)t(CH2)n-**; *-C(=O)(CH2)m-**; 또는 *-C(=O)NH((CH2)mO)t(CH2)n-이고, 여기서 L1의 *는 Lp에 대한 부착 지점을 나타내고;
각각의 m은 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 및 10으로부터 선택되고;
각각의 n은 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 및 10으로부터 선택되고;
각각의 t는 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 및 30으로부터 선택되고;
Lp는
Figure pct00467
로부터 선택되는 2가 펩티드 스페이서이고, 여기서 Lp의 *는 L1에 대한 부착 지점을 나타내고;
L3은 구조
Figure pct00468
를 갖는 스페이서 모이어티이고,
여기서
W는 -CH2O-**, -CH2N(Rb)C(=O)O-**, -NHC(=O)CH2NHC(=O)O-**, -NHC(=O)CH2NH-**, -NHC(=O)CH2NHC(=O)-**, -CH2N(X-R2)C(=O)O-**, -C(=O)N(X-R2)-**, -CH2N(X-R2)C(=O)-**, -C(=O)NRb-**, -C(=O)NH-**, -CH2NRbC(=O)-**, -CH2NRbC(=O)NH-**, -CH2NRbC(=O)NRb-**, -NHC(=O)-**, -NHC(=O)O-**, -NHC(=O)NH-**, -OC(=O)NH-**, -S(O)2NH-**, -NHS(O)2-**, -C(=O)-, -C(=O)O-** 또는 -NH-로부터 선택되고, 여기서 각각의 Rb가 독립적으로 H, C1-C6알킬 또는 C3-C8시클로알킬로부터 선택되고, 여기서 W의 **는 X에 대한 부착 지점을 나타내고;
X는 결합, 트리아졸릴 또는 ***-CH2-트리아졸릴-*이고, 여기서 X의 ***는 W에 대한 부착 지점을 나타내고, X의 *는 R2에 대한 부착 지점을 나타내고;
L3의 *는 R2에 대한 부착 지점을 나타내고;
R2는 폴리에틸렌 글리콜, 폴리알킬렌 글리콜, 당, 올리고사카라이드, 폴리펩티드, 또는 1 내지 3개의
Figure pct00469
기로 치환된 C2-C6알킬로부터 선택되는 친수성 모이어티이고;
A는 결합, -OC(=O)-*,
Figure pct00470
, -OC(=O)N(CH3)CH2CH2N(CH3)C(=O)-* 또는 -OC(=O)N(CH3)C(Ra)2C(Ra)2N(CH3)C(=O)-*이고, 여기서 각각의 Ra는 독립적으로 H, C1-C6알킬 및 C3-C8시클로알킬로부터 선택되고, A의 *는 D에 대한 부착 지점을 나타내는 것인
실시양태 33 내지 36 중 어느 하나의 링커.
실시양태 38.
L1은 *-C(=O)(CH2)mO(CH2)m-**; *-C(=O)((CH2)mO)t(CH2)n-**; *-C(=O)(CH2)m-**; 또는 *-C(=O)NH((CH2)mO)t(CH2)n-이고, 여기서 L1의 *는 Lp에 대한 부착 지점을 나타내고;
각각의 m은 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 및 10으로부터 선택되고;
각각의 n은 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 및 10으로부터 선택되고;
각각의 t는 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 및 30으로부터 선택되고;
Lp는
Figure pct00471
로부터 선택되는 2가 펩티드 스페이서이고, 여기서 Lp의 *는 L1에 대한 부착 지점을 나타내고, Lp의 **는 G의 -NH-기에 대한 부착 지점을 나타내고;
L3은 구조
Figure pct00472
를 갖는 스페이서 모이어티이고,
여기서
W는 -CH2O-**, -CH2N(Rb)C(=O)O-**, -NHC(=O)CH2NHC(=O)O-**, -CH2N(X-R2)C(=O)O-**, -C(=O)N(X-R2)-**, -CH2N(X-R2)C(=O)-**, -C(=O)NRb-**, -C(=O)NH-**, -CH2NRbC(=O)-**, -CH2NRbC(=O)NH-**, -CH2NRbC(=O)NRb-**, -NHC(=O)-**, -NHC(=O)O-**, -NHC(=O)NH-**, -OC(=O)NH-**, -S(O)2NH-**, -NHS(O)2-**, -C(=O)-, -C(=O)O-** 또는 -NH-이고, 여기서 각각의 Rb는 독립적으로 H, C1-C6알킬 또는 C3-C8시클로알킬로부터 선택되고, 여기서 W의 **는 X에 대한 부착 지점을 나타내고;
X는 결합, 트리아졸릴 또는 ***-CH2-트리아졸릴-*이고, 여기서 X의 ***는 W에 대한 부착 지점을 나타내고, X의 *는 R2에 대한 부착 지점을 나타내고;
L3의 *는 R2에 대한 부착 지점을 나타내고;
R2는 폴리에틸렌 글리콜, 폴리알킬렌 글리콜, 당, 올리고사카라이드, 폴리펩티드, 또는 1 내지 3개의
Figure pct00473
기로 치환된 C2-C6알킬로부터 선택되는 친수성 모이어티이고;
A는 결합, -OC(=O)-*,
Figure pct00474
, -OC(=O)N(CH3)CH2CH2N(CH3)C(=O)-* 또는 -OC(=O)N(CH3)C(Ra)2C(Ra)2N(CH3)C(=O)-*이고, 여기서 각각의 Ra는 독립적으로 H, C1-C6알킬 및 C3-C8시클로알킬로부터 선택되고, A의 *는 D에 대한 부착 지점을 나타내는 것인
실시양태 33 내지 37 중 어느 하나의 링커.
실시양태 39.
L1은 *-C(=O)(CH2)mO(CH2)m-**; *-C(=O)((CH2)mO)t(CH2)n-**; *-C(=O)(CH2)m-**; 또는 *-C(=O)NH((CH2)mO)t(CH2)n-이고, 여기서 L1의 *는 Lp에 대한 부착 지점을 나타내고;
각각의 m은 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 및 10으로부터 선택되고;
각각의 n은 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 및 10으로부터 선택되고;
각각의 t는 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 및 30으로부터 선택되고;
Lp는
Figure pct00475
로부터 선택되는 2가 펩티드 스페이서이고, 여기서 Lp의 *는 L1에 대한 부착 지점을 나타내고;
L3은 구조
Figure pct00476
를 갖는 스페이서 모이어티이고,
여기서
W는 -CH2O-**, -CH2N(Rb)C(=O)O-**, -NHC(=O)CH2NHC(=O)O-**, -CH2N(X-R2)C(=O)O-**, -C(=O)N(X-R2)-**, -C(=O)NRb-**, -C(=O)NH-**, -CH2NRbC(=O)-**, -CH2NRbC(=O)NH-**, -CH2NRbC(=O)NRb-**, -NHC(=O)-**, -NHC(=O)O-**, 또는 -NHC(=O)NH-**이고, 여기서 각각의 Rb는 독립적으로 H, C1-C6알킬 또는 C3-C8시클로알킬로부터 선택되고, 여기서 W의 **는 X에 대한 부착 지점을 나타내고;
X는 결합, 트리아졸릴 또는 ***-CH2-트리아졸릴-*이고, 여기서 X의 ***는 W에 대한 부착 지점을 나타내고, X의 *는 R2에 대한 부착 지점을 나타내고;
L3의 *는 R2에 대한 부착 지점을 나타내고;
R2는 폴리에틸렌 글리콜, 폴리알킬렌 글리콜, 당, 올리고사카라이드, 폴리펩티드, 또는 1 내지 3개의
Figure pct00477
기로 치환된 C2-C6알킬로부터 선택되는 친수성 모이어티이고;
A는 결합 또는 -OC(=O)*이고, 여기서 *는 D에 대한 부착 지점을 나타내는 것인
실시양태 33 내지 38 중 어느 하나의 링커.
실시양태 40.
L1은 *-C(=O)(CH2)mO(CH2)m-**; *-C(=O)((CH2)mO)t(CH2)n-**; *-C(=O)(CH2)m-**; 또는 *-C(=O)NH((CH2)mO)t(CH2)n-이고, 여기서 L1의 *는 Lp에 대한 부착 지점을 나타내고;
각각의 m은 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 및 10으로부터 선택되고;
각각의 n은 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 및 10으로부터 선택되고;
각각의 t는 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 및 30으로부터 선택되고;
Lp는
Figure pct00478
로부터 선택된 2가 펩티드 스페이서이고, 여기서 Lp의 *는 L1에 대한 부착 지점을 나타내고;
L3은 구조
Figure pct00479
을 갖는 스페이서 모이어티이고,
여기서
W는 -CH2O-**, -CH2N(Rb)C(=O)O-**, -NHC(=O)CH2NHC(=O)O-**, -CH2N(X-R2)C(=O)O-**, 또는 -C(=O)N(X-R2)-**이고, 여기서 각각의 Rb는 독립적으로 H, C1-C6알킬 또는 C3-C8시클로알킬로부터 선택되고, W의 **는 X에 대한 부착 지점을 나타내고;
X는 ***-CH2-트리아졸릴-*이고, 여기서 X의 ***는 W에 대한 부착 지점을 나타내고, X의 *는 R2에 대한 부착 지점을 나타내고;
L3의 *는 R2에 대한 부착 지점을 나타내고;
R2는 폴리에틸렌 글리콜, 폴리알킬렌 글리콜, 당, 올리고사카라이드, 폴리펩티드 또는 1 내지 3개의
Figure pct00480
기로 치환된 C2-C6알킬로부터 선택된 친수성 모이어티이고;
A는 결합 또는 -OC(=O)*이고, 여기서 *는 D에 대한 부착 지점을 나타내는 것인
실시양태 33 내지 39 중 어느 하나의 링커.
실시양태 41.
하기 화학식 (D')의 구조를 갖는 화학식 (C')의 링커.
Figure pct00481
여기서
L1은 가교 스페이서이고;
Lp는 2가 펩티드 스페이서이고;
R2는 친수성 모이어티이고;
A는 결합, -OC(=O)-*,
Figure pct00482
, -OC(=O)N(CH3)CH2CH2N(CH3)C(=O)-* 또는 -OC(=O)N(CH3)C(Ra)2C(Ra)2N(CH3)C(=O)-*이고, 여기서 각각의 Ra는 독립적으로 H, C1-C6 알킬, 및 C3-C8 시클로알킬로부터 선택되고, A의 *는 D에 대한 부착 지점을 나타내고,
L3은 스페이서 모이어티이다.
실시양태 42.
L1은 가교 스페이서이고;
Lp는 2 내지 4개의 아미노산 잔기를 포함하는 2가 펩티드 스페이서이고;
R2는 친수성 모이어티이고;
A는 결합, -OC(=O)-*,
Figure pct00483
, -OC(=O)N(CH3)CH2CH2N(CH3)C(=O)-* 또는 -OC(=O)N(CH3)C(Ra)2C(Ra)2N(CH3)C(=O)-*이고, 여기서 각각의 Ra는 독립적으로 H, C1-C6 알킬, 및 C3-C8 시클로알킬로부터 선택되고, A의 *는 D에 대한 부착 지점을 나타내고,
L3은 스페이서 모이어티인
실시양태 41의 링커.
실시양태 43.
L1은 *-C(=O)(CH2)mO(CH2)m-**; *-C(=O)((CH2)mO)t(CH2)n-**; *-C(=O)(CH2)m-**; *-C(=O)NH((CH2)mO)t(CH2)n-**;
*-C(=O)O(CH2)mSSC(R3)2(CH2)mC(=O)NR3(CH2)mNR3C(=O)(CH2)m-**;
*-C(=O)O(CH2)mC(=O)NH(CH2)m-**; *-C(=O)(CH2)mNH(CH2)m-**;
*-C(=O)(CH2)mNH(CH2)nC(=O)-**; *-C(=O)(CH2)mX1(CH2)m-**;
*-C(=O)((CH2)mO)t(CH2)nX1(CH2)n-**; *-C(=O)(CH2)mNHC(=O)(CH2)n-**;
*-C(=O)((CH2)mO)t(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-**;
*-C(=O)(CH2)mNHC(=O)(CH2)nX1(CH2)n-**;
*-C(=O)((CH2)mO)t(CH2)nNHC(=O)(CH2)nX1(CH2)n-**;
*-C(=O)((CH2)mO)t(CH2)nC(=O)NH(CH2)m-**; *-C(=O)(CH2)mC(R3)2-** 또는
*-C(=O)(CH2)mC(=O)NH(CH2)m-**이고, 여기서 L1의 *는 Lp에 대한 부착 지점을 나타내고;
R2는 폴리에틸렌 글리콜, 폴리알킬렌 글리콜, 당, 올리고사카라이드, 폴리펩티드, 또는 1 내지 3개의
Figure pct00484
기로 치환된 C2-C6알킬로부터 선택되는 친수성 모이어티이고;
각각의 R3은 독립적으로 H 및 C1-C6알킬로부터 선택되고;
X1은
Figure pct00485
이고;
각각의 m은 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 및 10으로부터 선택되고;
각각의 n은 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 및 10으로부터 선택되고;
각각의 t는 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 및 30으로부터 선택되고;
Lp는 글리신, 발린, 시트룰린, 리신, 이소류신, 페닐알라닌, 메티오닌, 아스파라긴, 프롤린, 알라닌, 류신, 트립토판 및 티로신으로부터 선택되는 아미노산 잔기를 포함하는 2가 펩티드 스페이서이고;
A는 결합, -OC(=O)-*,
Figure pct00486
, -OC(=O)N(CH3)CH2CH2N(CH3)C(=O)-* 또는 -OC(=O)N(CH3)C(Ra)2C(Ra)2N(CH3)C(=O)-*이고, 여기서 각각의 Ra는 독립적으로 H, C1-C6알킬 및 C3-C8시클로알킬로부터 선택되고, A의 *는 D에 대한 부착 지점을 나타내고;
L3은 구조
Figure pct00487
를 갖는 스페이서 모이어티이고,
여기서
W는 -CH2O-**, -CH2N(Rb)C(=O)O-**, -NHC(=O)CH2NHC(=O)O-**, -CH2N(X-R2)C(=O)O-**, -C(=O)N(X-R2)-**, -CH2N(X-R2)C(=O)-**, -C(=O)NRb-**, -C(=O)NH-**, -CH2NRbC(=O)-**, -CH2NRbC(=O)NH-**, -CH2NRbC(=O)NRb-**, -NHC(=O)-**, -NHC(=O)O-**, -NHC(=O)NH-**, -OC(=O)NH-**, -S(O)2NH-**, -NHS(O)2-**, -C(=O)-, -C(=O)O-** 또는 -NH-이고, 여기서 각각의 Rb는 독립적으로 H, C1-C6알킬 또는 C3-C8시클로알킬로부터 선택되고, 여기서 W의 **는 X에 대한 부착 지점을 나타내고;
X는 결합, 트리아졸릴 또는 ***-CH2-트리아졸릴-*이고, 여기서 X의 ***는 W에 대한 부착 지점을 나타내고, X의 *는 R2에 대한 부착 지점을 나타내고;
L3의 *는 R2에 대한 부착 지점을 나타내는 것인
실시양태 41 또는 42의 링커.
실시양태 44.
L1은 *-C(=O)(CH2)mO(CH2)m-**; *-C(=O)((CH2)mO)t(CH2)n-**; *-C(=O)(CH2)m-**; 또는 *-C(=O)NH((CH2)mO)t(CH2)n-이고, 여기서 L1의 *는 Lp에 대한 부착 지점을 나타내고;
각각의 m은 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 및 10으로부터 선택되고;
각각의 n은 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 및 10으로부터 선택되고;
각각의 t는 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 및 30으로부터 선택되고;
Lp는
Figure pct00488
로부터 선택되는 2가 펩티드 스페이서이고, 여기서 Lp의 *는 L1에 대한 부착 지점을 나타내고, Lp의 **는 G의 -NH-기에 대한 부착 지점을 나타내고;
L3은 구조
Figure pct00489
를 갖는 스페이서 모이어티이고,
여기서
W는 -CH2O-**, -CH2N(Rb)C(=O)O-**, -NHC(=O)CH2NHC(=O)O-**, -CH2N(X-R2)C(=O)O-**, -C(=O)N(X-R2)-**, -CH2N(X-R2)C(=O)-**, -C(=O)NRb-**, -C(=O)NH-**, -CH2NRbC(=O)-**, -CH2NRbC(=O)NH-**, -CH2NRbC(=O)NRb-**, -NHC(=O)-**, -NHC(=O)O-**, -NHC(=O)NH-**, -OC(=O)NH-**, -S(O)2NH-**, -NHS(O)2-**, -C(=O)-, -C(=O)O-** 또는 -NH-이고, 여기서 각각의 Rb는 독립적으로 H, C1-C6알킬 또는 C3-C8시클로알킬로부터 선택되고, 여기서 W의 **는 X에 대한 부착 지점을 나타내고;
X는 결합, 트리아졸릴 또는 ***-CH2-트리아졸릴-*이고, 여기서 X의 ***는 W에 대한 부착 지점을 나타내고, X의 *는 R2에 대한 부착 지점을 나타내고;
L3의 *는 R2에 대한 부착 지점을 나타내고;
R2는 폴리에틸렌 글리콜, 폴리알킬렌 글리콜, 당, 올리고사카라이드, 폴리펩티드, 또는 1 내지 3개의
Figure pct00490
기로 치환된 C2-C6알킬로부터 선택되는 친수성 모이어티이고;
A는 결합, -OC(=O)-*,
Figure pct00491
, -OC(=O)N(CH3)CH2CH2N(CH3)C(=O)-* 또는 -OC(=O)N(CH3)C(Ra)2C(Ra)2N(CH3)C(=O)-*이고, 여기서 각각의 Ra는 독립적으로 H, C1-C6알킬 및 C3-C8시클로알킬로부터 선택되고, A의 *는 D에 대한 부착 지점을 나타내는 것인
실시양태 41 내지 43 중 어느 하나의 링커.
실시양태 45.
L1은 *-C(=O)(CH2)mO(CH2)m-**; *-C(=O)((CH2)mO)t(CH2)n-**; *-C(=O)(CH2)m-**; 또는 *-C(=O)NH((CH2)mO)t(CH2)n-이고, 여기서 L1의 *는 Lp에 대한 부착 지점을 나타내고;
각각의 m은 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 및 10으로부터 선택되고;
각각의 n은 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 및 10으로부터 선택되고;
각각의 t는 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 및 30으로부터 선택되고;
Lp는
Figure pct00492
로부터 선택되는 2가 펩티드 스페이서이고, 여기서 Lp의 *는 L1에 대한 부착 지점을 나타내고, Lp의 **는 G의 -NH-기에 대한 부착 지점을 나타내고;
L3은 구조
Figure pct00493
를 갖는 스페이서 모이어티이고,
여기서
W는 -CH2O-**, -CH2N(Rb)C(=O)O-**, -NHC(=O)CH2NHC(=O)O-**, -CH2N(X-R2)C(=O)O-**, -C(=O)N(X-R2)-**, -CH2N(X-R2)C(=O)-**, -C(=O)NRb-**, -C(=O)NH-**, -CH2NRbC(=O)-**, -CH2NRbC(=O)NH-**, -CH2NRbC(=O)NRb-**, -NHC(=O)-**, -NHC(=O)O-**, -NHC(=O)NH-**, -OC(=O)NH-**, -S(O)2NH-**, -NHS(O)2-**, -C(=O)-, -C(=O)O-** 또는 -NH-이고, 여기서 각각의 Rb는 독립적으로 H, C1-C6알킬 또는 C3-C8시클로알킬로부터 선택되고, 여기서 W의 **는 X에 대한 부착 지점을 나타내고;
X는 결합, 트리아졸릴 또는 ***-CH2-트리아졸릴-*이고, 여기서 X의 ***는 W에 대한 부착 지점을 나타내고, X의 *는 R2에 대한 부착 지점을 나타내고;
L3의 *는 R2에 대한 부착 지점을 나타내고;
R2는 폴리에틸렌 글리콜, 폴리알킬렌 글리콜, 당, 올리고사카라이드, 폴리펩티드, 또는 1 내지 3개의
Figure pct00494
기로 치환된 C2-C6알킬로부터 선택되는 친수성 모이어티이고;
A는 결합, -OC(=O)-*,
Figure pct00495
, -OC(=O)N(CH3)CH2CH2N(CH3)C(=O)-* 또는 -OC(=O)N(CH3)C(Ra)2C(Ra)2N(CH3)C(=O)-*이고, 여기서 각각의 Ra는 독립적으로 H, C1-C6알킬 및 C3-C8시클로알킬로부터 선택되고, A의 *는 D에 대한 부착 지점을 나타내는 것인
실시양태 41 내지 44 중 어느 하나의 링커.
실시양태 46.
L1은 *-C(=O)(CH2)mO(CH2)m-**; *-C(=O)((CH2)mO)t(CH2)n-**; *-C(=O)(CH2)m-**; 또는 *-C(=O)NH((CH2)mO)t(CH2)n-이고, 여기서 L1의 *는 Lp에 대한 부착 지점을 나타내고;
각각의 m은 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 및 10으로부터 선택되고;
각각의 n은 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 및 10으로부터 선택되고;
각각의 t는 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 및 30으로부터 선택되고;
Lp는
Figure pct00496
로부터 선택되는 2가 펩티드 스페이서이고, 여기서 Lp의 *는 L1에 대한 부착 지점을 나타내고, Lp의 **는 G의 -NH-기에 대한 부착 지점을 나타내고;
L3은 구조
Figure pct00497
를 갖는 스페이서 모이어티이고,
여기서
W는 -CH2O-**, -CH2N(Rb)C(=O)O-**, -NHC(=O)CH2NHC(=O)O-**, -CH2N(X-R2)C(=O)O-**, -C(=O)N(X-R2)-**, -C(=O)NRb-**, -C(=O)NH-**, -CH2NRbC(=O)-**, -CH2NRbC(=O)NH-**, -CH2NRbC(=O)NRb-**, -NHC(=O)-**, -NHC(=O)O-**, 또는 -NHC(=O)NH-**이고, 여기서 각각의 Rb는 독립적으로 H, C1-C6알킬 또는 C3-C8시클로알킬로부터 선택되고, 여기서 W의 **는 X에 대한 부착 지점을 나타내고;
X는 결합, 트리아졸릴 또는 ***-CH2-트리아졸릴-*이고, 여기서 X의 ***는 W에 대한 부착 지점을 나타내고, X의 *는 R2에 대한 부착 지점을 나타내고;
L3의 *는 R2에 대한 부착 지점을 나타내고;
R2는 폴리에틸렌 글리콜, 폴리알킬렌 글리콜, 당, 올리고사카라이드, 폴리펩티드, 또는 1 내지 3개의
Figure pct00498
기로 치환된 C2-C6알킬로부터 선택되는 친수성 모이어티이고;
A는 결합 또는 -OC(=O)*이고, 여기서 *는 D에 대한 부착 지점을 나타내는 것인
실시양태 41 내지 45 중 어느 하나의 링커.
실시양태 47.
L1은 *-C(=O)(CH2)mO(CH2)m-**; *-C(=O)((CH2)mO)t(CH2)n-**; *-C(=O)(CH2)m-**; 또는 *-C(=O)NH((CH2)mO)t(CH2)n-이고, 여기서 L1의 *는 Lp에 대한 부착 지점을 나타내고;
각각의 m은 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 및 10으로부터 선택되고;
각각의 n은 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 및 10으로부터 선택되고;
각각의 t는 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 및 30으로부터 선택되고;
Lp는
Figure pct00499
로부터 선택되는 2가 펩티드 스페이서이고, 여기서 Lp의 *는 L1에 대한 부착 지점을 나타내고, Lp의 **는 G의 -NH-기에 대한 부착 지점을 나타내고;
L3은 구조
Figure pct00500
를 갖는 스페이서 모이어티이고,
여기서
W는 -CH2O-**, -CH2N(Rb)C(=O)O-**, -NHC(=O)CH2NHC(=O)O-**, -CH2N(X-R2)C(=O)O-**, 또는 -C(=O)N(X-R2)-**이고, 여기서 각각의 Rb는 독립적으로 H, C1-C6알킬 또는 C3-C8시클로알킬로부터 선택되고, 여기서 W의 **는 X에 대한 부착 지점을 나타내고;
X는 ***-CH2-트리아졸릴-*이고, 여기서 X의 ***는 W에 대한 부착 지점을 나타내고, X의 *는 R2에 대한 부착 지점을 나타내며;
L3의 *는 R2에 대한 부착 지점을 나타내고;
R2는 폴리에틸렌 글리콜, 폴리알킬렌 글리콜, 당, 올리고사카라이드, 폴리펩티드, 또는 1 내지 3개의
Figure pct00501
기로 치환된 C2-C6알킬로부터 선택되는 친수성 모이어티이고;
A는 결합 또는 -OC(=O)*이고, 여기서 *는 D에 대한 부착 지점을 나타내는 것인
실시양태 41 내지 46 중 어느 하나의 링커.
실시양태 48. 하기 구조를 갖는 실시양태 33 내지 47 중 어느 하나의 링커:
Figure pct00502
여기서, R은 H, -CH3 또는 -CH2CH2C(=O)OH이다.
실시양태 49. 하기 구조를 갖는 실시양태 33 내지 47 중 어느 하나의 링커:
Figure pct00503
여기서, R은 H, -CH3 또는 -CH2CH2C(=O)OH이다.
실시양태 50. 하기 구조를 갖는 실시양태 33 내지 47 중 어느 하나의 링커:
Figure pct00504
여기서, R은 H, -CH3 또는 -CH2CH2C(=O)OH이다.
실시양태 51. 하기 구조를 갖는 실시양태 33 내지 47 중 어느 하나의 링커:
Figure pct00505
여기서, 각각의 R은 독립적으로 H, -CH3 또는 -CH2CH2C(=O)OH로부터 선택된다.
실시양태 52. 하기 구조를 갖는 실시양태 37 내지 47 중 어느 하나의 링커:
Figure pct00506
여기서, 각각의 R은 독립적으로 H, -CH3 또는 -CH2CH2C(=O)OH로부터 선택된다.
실시양태 53. 하기 구조를 갖는 실시양태 33 내지 47 중 어느 하나의 링커:
Figure pct00507
여기서, Xa는 -CH2-, -OCH2-, -NHCH2- 또는 -NRCH2-이고, 각각의 R은 독립적으로 H, -CH3 또는 -CH2CH2C(=O)OH이다.
실시양태 54. 하기 구조를 갖는 실시양태 33 내지 47 중 어느 하나의 링커:
Figure pct00508
여기서, R은 H, -CH3 또는 -CH2CH2C(=O)OH이다.
실시양태 55. 하기 구조를 갖는 실시양태 33 내지 47 중 어느 하나의 링커:
Figure pct00509
여기서, Xb는 -CH2-, -OCH2-, -NHCH2- 또는 -NRCH2-이고, 각각의 R은 독립적으로 H, -CH3 또는 -CH2CH2C(=O)OH이다.
실시양태 56. 하기 구조를 갖는 실시양태 33 내지 47 중 어느 하나의 링커:
Figure pct00510
실시양태 57. 하기 구조를 갖는 실시양태 33 내지 47 중 어느 하나의 링커:
Figure pct00511
실시양태 58. 하기 구조를 갖는 실시양태 37 내지 47 중 어느 하나의 링커:
Figure pct00512
실시양태 59. 하기 구조를 갖는 실시양태 33 내지 47 중 어느 하나의 링커:
Figure pct00513
실시양태 60. 하기 구조를 갖는 실시양태 33 내지 47 중 어느 하나의 링커:
Figure pct00514
실시양태 61. 하기 구조를 갖는 실시양태 33 내지 47 중 어느 하나의 링커:
Figure pct00515
여기서 n은 2 내지 24의 정수이다.
예시적 목적을 위해, 본원에 도시된 일반적 반응식은 본 발명의 화합물 뿐만 아니라 주요 중간체를 합성하기 위한 잠재적 경로를 제공한다. 개별 반응 단계의 보다 상세한 설명에 대해서는, 하기 실시예 섹션을 참조한다. 특정 출발 물질 및 시약이 하기 반응식에 도시되고 논의되지만, 다양한 유도체 및/또는 반응 조건을 제공하기 위해 다른 출발 물질 및 시약이 용이하게 대체될 수 있다. 또한, 하기 기재된 방법에 의해 제조된 많은 화합물은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 널리 공지된 통상적인 화학을 이용하여 본 개시내용의 관점에서 추가로 변형시킬 수 있다.
예로서, 화학식 (B')의 화합물에 대한 일반적 합성은 하기 반응식 1에 제시된다.
<반응식 1>
Figure pct00516
본 발명의 항체 약물 접합체
본 발명은 하나 이상의 친수성 모이어티를 포함하는 링커를 포함하는, 본원에서 면역접합체로도 지칭되는 항체 약물 접합체를 제공한다.
본 발명의 항체 약물 접합체는 하기 화학식 (E')의 구조를 갖는다.
Figure pct00517
여기서:
Ab는 항체 또는 그의 단편이고;
R100은 커플링 기이고;
L1은 가교 스페이서이고;
Lp는 2가 펩티드 스페이서이고;
G-L2-A는 자기 희생적 스페이서이고;
R2는 친수성 모이어티이고;
L2는 결합, 메틸렌, 네오펜틸렌 또는 C2-C3알케닐렌이고;
A는 결합, -OC(=O)-*,
Figure pct00518
, -OC(=O)N(CH3)CH2CH2N(CH3)C(=O)-* 또는 -OC(=O)N(CH3)C(Ra)2C(Ra)2N(CH3)C(=O)-*이고, 여기서 각각의 Ra는 독립적으로 H, C1-C6알킬 및 C3-C8시클로알킬로부터 선택되고, A의 *는 D에 대한 부착 지점을 나타내고;
L3은 스페이서 모이어티이고;
D는 본원에 정의된 바와 같은 약물 모이어티, 예를 들어 Bcl-xL 억제제이고, N을 포함할 수 있으며, 여기서 D는 A에서 약물 모이어티의 N으로의 직접 결합을 통해 A에 연결될 수 있고,
y는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 또는 16이다.
본 발명의 항체 약물 접합체의 특정 측면 및 예는 열거된 실시양태의 하기 목록에 제공된다. 각 실시양태에 명시된 특색은 다른 명시된 특색과 조합하여 본 발명의 추가 실시양태를 제공할 수 있는 것으로 인지될 것이다.
실시양태 62.
Ab는 항체 또는 그의 단편이고;
R100은 커플링 기이고;
L1은 가교 스페이서이고;
Lp는 2 내지 4개의 아미노산 잔기를 포함하는 2가 펩티드 스페이서이고;
G-L2-A는 자기 희생적 스페이서이고;
R2는 친수성 모이어티이고;
L2는 결합, 메틸렌, 네오펜틸렌 또는 C2-C3알케닐렌이고;
A는 결합, -OC(=O)-*,
Figure pct00519
, -OC(=O)N(CH3)CH2CH2N(CH3)C(=O)-* 또는 -OC(=O)N(CH3)C(Ra)2C(Ra)2N(CH3)C(=O)-*이고, 여기서 각각의 Ra는 독립적으로 H, C1-C6알킬 및 C3-C8시클로알킬로부터 선택되고, A의 *는 D에 대한 부착 지점을 나타내고;
L3은 스페이서 모이어티이고;
D는 본원에 정의된 바와 같은 약물 모이어티이고, 여기서 D는 A에서 D (예를 들어, 약물 모이어티의 N)로의 직접 결합을 통해 A에 연결되고,
y는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 또는 16인
화학식 (E')의 면역접합체.
실시양태 63.
Ab는 항체 또는 그의 단편이고;
R100은 커플링 기이고;
L1은 가교 스페이서이고;
Lp는 2 내지 4개의 아미노산 잔기를 포함하는 2가 펩티드 스페이서이고;
Figure pct00520
기는
Figure pct00521
로부터 선택되고, 여기서
Figure pct00522
의 *는 D (예를 들어, 약물 모이어티의 N 또는 O)에 대한 부착 지점을 나타내고,
Figure pct00523
의 ***는 Lp에 대한 부착 지점을 나타내고;
R2는 친수성 모이어티이고;
L2는 결합, 메틸렌, 네오펜틸렌 또는 C2-C3알케닐렌이고;
A는 결합, -OC(=O)-*,
Figure pct00524
, -OC(=O)N(CH3)CH2CH2N(CH3)C(=O)-* 또는 -OC(=O)N(CH3)C(Ra)2C(Ra)2N(CH3)C(=O)-*이고, 여기서 각각의 Ra는 독립적으로 H, C1-C6알킬 및 C3-C8시클로알킬로부터 선택되고, A의 *는 D에 대한 부착 지점을 나타내고;
L3은 스페이서 모이어티이고;
D는 N을 포함하는 본원에 정의된 바와 같은 약물 모이어티이고, 여기서 D는 A에서 약물 모이어티의 N으로의 직접 결합을 통해 A에 연결되고,
y가 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 또는 16인
화학식 (E')의 면역접합체 또는 실시양태 62.
실시양태 64. 하기 화학식 (F')의 구조를 갖는 화학식 (E')의 면역접합체 또는 실시양태 62 내지 63 중 어느 하나.
Figure pct00525
여기서:
Ab는 항체 또는 그의 단편이고;
R100은 커플링 기이고;
L1은 가교 스페이서이고;
Lp는 2 내지 4개의 아미노산 잔기를 포함하는 2가 펩티드 스페이서이고;
R2는 친수성 모이어티이고;
A는 결합, -OC(=O)-*,
Figure pct00526
, -OC(=O)N(CH3)CH2CH2N(CH3)C(=O)-* 또는 -OC(=O)N(CH3)C(Ra)2C(Ra)2N(CH3)C(=O)-*이고, 여기서 각각의 Ra는 독립적으로 H, C1-C6알킬 및 C3-C8시클로알킬로부터 선택되고, A의 *는 D에 대한 부착 지점을 나타내고;
L3은 스페이서 모이어티이고;
D는 N을 포함하는 본원에 정의된 바와 같은 약물 모이어티이고, 여기서 D는 A에서 약물 모이어티의 N으로의 직접 결합을 통해 A에 연결되고,
y는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 또는 16이다.
실시양태 65.
Ab는 항체 또는 그의 단편이고;
R100은
Figure pct00527
Figure pct00528
이고, 여기서 R100의 ***는 Ab에 대한 부착 지점을 나타내고;
L1은 *-C(=O)(CH2)mO(CH2)m-**; *-C(=O)((CH2)mO)t(CH2)n-**; *-C(=O)(CH2)m-**;
*-C(=O)NH((CH2)mO)t(CH2)n-**;
*-C(=O)O(CH2)mSSC(R3)2(CH2)mC(=O)NR3(CH2)mNR3C(=O)(CH2)m-**;
*-C(=O)O(CH2)mC(=O)NH(CH2)m-**; *-C(=O)(CH2)mNH(CH2)m-**;
*-C(=O)(CH2)mNH(CH2)nC(=O)-**; *-C(=O)(CH2)mX1(CH2)m-**;
*-C(=O)((CH2)mO)t(CH2)nX1(CH2)n-**; *-C(=O)(CH2)mNHC(=O)(CH2)n-**;
*-C(=O)((CH2)mO)t(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-**;
*-C(=O)(CH2)mNHC(=O)(CH2)nX1(CH2)n-**;
*-C(=O)((CH2)mO)t(CH2)nNHC(=O)(CH2)nX1(CH2)n-**;
*-C(=O)((CH2)mO)t(CH2)nC(=O)NH(CH2)m-**; *-C(=O)(CH2)mC(R3)2-** 또는
*-C(=O)(CH2)mC(=O)NH(CH2)m-**이고, 여기서 L1의 *는 Lp에 대한 부착 지점을 나타내고, L1의 **는 R100에 대한 부착 지점을 나타내고;
R2는 폴리에틸렌 글리콜, 폴리알킬렌 글리콜, 당, 올리고사카라이드, 폴리펩티드, 또는 1 내지 3개의
Figure pct00529
기로 치환된 C2-C6알킬로부터 선택되는 친수성 모이어티이고;
각각의 R3은 독립적으로 H 및 C1-C6알킬로부터 선택되고;
R4는 2-피리딜 또는 4-피리딜이고;
각각의 R5는 독립적으로 H, C1-C6알킬, F, Cl, 및 -OH로부터 선택되고;
각각의 R6은 독립적으로 H, C1-C6알킬, F, Cl, -NH2, -OCH3, -OCH2CH3, -N(CH3)2, -CN, -NO2 및 -OH로부터 선택되고;
각각의 R7은 독립적으로 H, C1-6알킬, 플루오로, -C(=O)OH로 치환된 벤질옥시, -C(=O)OH로 치환된 벤질, -C(=O)OH로 치환된 C1-4알콕시, 및 -C(=O)OH로 치환된 C1-4알킬로부터 선택되고;
X1은
Figure pct00530
이고;
각각의 m은 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 및 10으로부터 선택되고;
각각의 n은 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 및 10으로부터 선택되고;
각각의 t는 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 및 30으로부터 선택되고;
Lp는 발린, 시트룰린, 리신, 이소류신, 페닐알라닌, 메티오닌, 아스파라긴, 프롤린, 알라닌, 류신, 트립토판 및 티로신으로부터 선택되는 아미노산 잔기를 포함하는 2가 펩티드 스페이서이고;
A는 결합, -OC(=O)-*,
Figure pct00531
, -OC(=O)N(CH3)CH2CH2N(CH3)C(=O)-* 또는 -OC(=O)N(CH3)C(Ra)2C(Ra)2N(CH3)C(=O)-*이고, 여기서 각각의 Ra는 독립적으로 H, C1-C6알킬 및 C3-C8시클로알킬로부터 선택되고, A의 *는 D에 대한 부착 지점을 나타내고;
L3은 구조
Figure pct00532
를 갖는 스페이서 모이어티이고,
여기서
W는 -CH2O-**, -CH2N(Rb)C(=O)O-**, -NHC(=O)C(Rb)2NHC(=O)O-**, -NHC(=O)C(Rb)2NH-**, -NHC(=O)C(Rb)2NHC(=O)-**, -CH2N(X-R2)C(=O)O-**, -C(=O)N(X-R2)-**, -CH2N(X-R2)C(=O)-**, -C(=O)NRb-**, -C(=O)NH-**, -CH2NRbC(=O)-**, -CH2NRbC(=O)NH-**, -CH2NRbC(=O)NRb-**, -NHC(=O)-**, -NHC(=O)O-**, -NHC(=O)NH-**, -OC(=O)NH-**, -S(O)2NH-**, -NHS(O)2-**, -C(=O)-, -C(=O)O-** 또는 -NH-이고, 여기서 각각의 Rb는 독립적으로 H, C1-C6알킬 또는 C3-C8시클로알킬로부터 선택되고, 여기서 W의 **는 X에 대한 부착 지점을 나타내고;
X는 결합, 트리아졸릴 또는 ***-CH2-트리아졸릴-*이고, 여기서 X의 ***는 W에 대한 부착 지점을 나타내고, X의 *는 R2에 대한 부착 지점을 나타내고;
L3의 *는 R2에 대한 부착 지점을 나타내고;
D는 N을 포함하는 본원에 정의된 바와 같은 약물 모이어티이고, 여기서 D는 A에서 약물 모이어티의 N으로의 직접 결합을 통해 A에 연결되고,
y는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 또는 16인
화학식 (D')의 면역접합체 또는 실시양태 62 내지 64 중 어느 하나.
실시양태 66.
Ab는 항체 또는 그의 단편이고;
R100은
Figure pct00533
이고, 여기서 R100의 ***는 Ab에 대한 부착 지점을 나타내고;
L1은 *-C(=O)(CH2)mO(CH2)m-**; *-C(=O)((CH2)mO)t(CH2)n-**; *-C(=O)(CH2)m-**; 또는 *-C(=O)NH((CH2)mO)t(CH2)n-이고, 여기서 L1의 *는 Lp에 대한 부착 지점을 나타내고, L1의 **는 R100에 대한 부착 지점을 나타내고;
각각의 m은 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 및 10으로부터 선택되고;
각각의 n은 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 및 10으로부터 선택되고;
각각의 t는 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 및 30으로부터 선택되고;
Lp는
Figure pct00534
로부터 선택되는 2가 펩티드 스페이서이고, 여기서 Lp의 *는 L1에 대한 부착 지점을 나타내고, Lp의 **는 G의 -NH-기에 대한 부착 지점을 나타내고;
L3은 구조
Figure pct00535
를 갖는 스페이서 모이어티이고,
여기서
W는 -CH2O-**, -CH2N(Rb)C(=O)O-**, -NHC(=O)CH2NHC(=O)O-**, -NHC(=O)CH2NH-**, -NHC(=O)CH2NHC(=O)-**, -CH2N(X-R2)C(=O)O-**, -C(=O)N(X-R2)-**, -CH2N(X-R2)C(=O)-**, -C(=O)NRb-**, -C(=O)NH-**, -CH2NRbC(=O)-**, -CH2NRbC(=O)NH-**, -CH2NRbC(=O)NRb-**, -NHC(=O)-**, -NHC(=O)O-**, -NHC(=O)NH-**, -OC(=O)NH-**, -S(O)2NH-**, -NHS(O)2-**, -C(=O)-, -C(=O)O-** 또는 -NH-이고, 여기서 각각의 Rb는 독립적으로 H, C1-C6알킬 또는 C3-C8시클로알킬로부터 선택되고, 여기서 W의 **는 X에 대한 부착 지점을 나타내고;
X는 결합, 트리아졸릴 또는 ***-CH2-트리아졸릴-*이고, 여기서 X의 ***는 W에 대한 부착 지점을 나타내고, X의 *는 R2에 대한 부착 지점을 나타내고;
L3의 *는 R2에 대한 부착 지점을 나타내고;
R2는 폴리에틸렌 글리콜, 폴리알킬렌 글리콜, 당, 올리고사카라이드, 폴리펩티드, 또는 1 내지 3개의
Figure pct00536
기로 치환된 C2-C6알킬로부터 선택되는 친수성 모이어티이고;
A는 결합, -OC(=O)-*,
Figure pct00537
, -OC(=O)N(CH3)CH2CH2N(CH3)C(=O)-* 또는 -OC(=O)N(CH3)C(Ra)2C(Ra)2N(CH3)C(=O)-*이고, 여기서 각각의 Ra는 독립적으로 H, C1-C6알킬 및 C3-C8시클로알킬로부터 선택되고, A의 *는 D에 대한 부착 지점을 나타내고;
D는 N 또는 O를 포함하는 본원에 정의된 바와 같은 약물 모이어티이고, 여기서 D는 A에서 약물 모이어티의 N 또는 O로의 직접 결합을 통해 A에 연결되고,
y는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 또는 16인
화학식 (D')의 면역접합체 또는 실시양태 62 내지 65 중 어느 하나.
실시양태 67.
Ab는 항체 또는 그의 단편이고;
R100은
Figure pct00538
이고, 여기서 R100의 ***는 Ab에 대한 부착 지점을 나타내고;
L1은 *-C(=O)(CH2)mO(CH2)m-**; *-C(=O)((CH2)mO)t(CH2)n-**; *-C(=O)(CH2)m-**; 또는 *-C(=O)NH((CH2)mO)t(CH2)n-이고, 여기서 L1의 *는 Lp에 대한 부착 지점을 나타내고, L1의 **는 R100에 대한 부착 지점을 나타내고;
각각의 m은 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 및 10으로부터 선택되고;
각각의 n은 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 및 10으로부터 선택되고;
각각의 t는 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 및 30으로부터 선택되고;
Lp는
Figure pct00539
로부터 선택되는 2가 펩티드 스페이서이고, 여기서 Lp의 *는 L1에 대한 부착 지점을 나타내고, Lp의 **는 G의 -NH-기에 대한 부착 지점을 나타내고;
L3은 구조
Figure pct00540
를 갖는 스페이서 모이어티이고,
여기서
W는 -CH2O-**, -CH2N(Rb)C(=O)O-**, -NHC(=O)CH2NHC(=O)O-**, -CH2N(X-R2)C(=O)O-**, -C(=O)N(X-R2)-**, -CH2N(X-R2)C(=O)-**, -C(=O)NRb-**, -C(=O)NH-**, -CH2NRbC(=O)-**, -CH2NRbC(=O)NH-**, -CH2NRbC(=O)NRb-**, -NHC(=O)-**, -NHC(=O)O-**, -NHC(=O)NH-**, -OC(=O)NH-**, -S(O)2NH-**, -NHS(O)2-**, -C(=O)-, -C(=O)O-** 또는 -NH-이고, 여기서 각각의 Rb는 독립적으로 H, C1-C6알킬 또는 C3-C8시클로알킬로부터 선택되고, 여기서 W의 **는 X에 대한 부착 지점을 나타내고;
X는 결합, 트리아졸릴 또는 ***-CH2-트리아졸릴-*이고, 여기서 X의 ***는 W에 대한 부착 지점을 나타내고, X의 *는 R2에 대한 부착 지점을 나타내고;
L3의 *는 R2에 대한 부착 지점을 나타내고;
R2는 폴리에틸렌 글리콜, 폴리알킬렌 글리콜, 당, 올리고사카라이드, 폴리펩티드, 또는 1 내지 3개로 치환된 C2-C6알킬로부터 선택되는 친수성 모이어티이고;
A는 결합, -OC(=O)-*,
Figure pct00541
, -OC(=O)N(CH3)CH2CH2N(CH3)C(=O)-* 또는 -OC(=O)N(CH3)C(Ra)2C(Ra)2N(CH3)C(=O)-*이고, 여기서 각각의 Ra는 독립적으로 H, C1-C6알킬 및 C3-C8시클로알킬로부터 선택되고, A의 *는 D에 대한 부착 지점을 나타내고;
D는 N 또는 O를 포함하는 본원에 정의된 바와 같은 약물 모이어티이고, 여기서 D는 A에서 약물 모이어티의 N 또는 O로의 직접 결합을 통해 A에 연결되고,
y는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 또는 16인
화학식 (E')의 면역접합체 또는 실시양태 62 내지 66 중 어느 하나.
실시양태 68.
Ab는 항체 또는 그의 단편이고;
R100은
Figure pct00542
이고, 여기서 R100의 ***는 Ab에 대한 부착 지점을 나타내고;
L1은 *-C(=O)(CH2)mO(CH2)m-**; *-C(=O)((CH2)mO)t(CH2)n-**; *-C(=O)(CH2)m-**; 또는 *-C(=O)NH((CH2)mO)t(CH2)n-이고, 여기서 L1의 *는 Lp에 대한 부착 지점을 나타내고, L1의 **는 R100에 대한 부착 지점을 나타내고;
각각의 m은 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 및 10으로부터 선택되고;
각각의 n은 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 및 10으로부터 선택되고;
각각의 t는 독립적으로 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 및 30으로부터 선택되고;
Lp는
Figure pct00543
로부터 선택되는 2가 펩티드 스페이서이고, 여기서 Lp의 *는 L1에 대한 부착 지점을 나타내고, Lp의 **는 G의 -NH-기에 대한 부착 지점을 나타내고;
L3은 구조
Figure pct00544
를 갖는 스페이서 모이어티이고,
여기서
W는 -CH2O-**, -CH2N(Rb)C(=O)O-**, -NHC(=O)CH2NHC(=O)O-**, -CH2N(X-R2)C(=O)O-**, -C(=O)N(X-R2)-**, -C(=O)NRb-**, -C(=O)NH-**, -CH2NRbC(=O)-**, -CH2NRbC(=O)NH-**, -CH2NRbC(=O)NRb-**, -NHC(=O)-**, -NHC(=O)O-**, 또는 -NHC(=O)NH-**이고, 여기서 각각의 Rb는 독립적으로 H, C1-C6알킬 또는 C3-C8시클로알킬로부터 선택되고, 여기서 W의 **는 X에 대한 부착 지점을 나타내고;
X는 결합, 트리아졸릴 또는 ***-CH2-트리아졸릴-*이고, 여기서 X의 ***는 W에 대한 부착 지점을 나타내고, X의 *는 R2에 대한 부착 지점을 나타내고;
L3의 *는 R2에 대한 부착 지점을 나타내고;
R2는 폴리에틸렌 글리콜, 폴리알킬렌 글리콜, 당, 올리고사카라이드, 폴리펩티드, 또는 1 내지 3개의
Figure pct00545
기로 치환된 C2-C6알킬로부터 선택되는 친수성 모이어티이고;
A는 결합 또는 -OC(=O)*이고, 여기서 *는 D에 대한 부착 지점을 나타내고;
D는 N 또는 O를 포함하는 본원에 정의된 바와 같은 약물 모이어티이고, 여기서 D는 A에서 약물 모이어티의 N 또는 O로의 직접 결합을 통해 A에 연결되고,
y는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 또는 16인
화학식 (E')의 면역접합체 또는 실시양태 62 내지 67 중 어느 하나.
실시양태 69.
Ab는 항체 또는 그의 단편이고;
R100은
Figure pct00546
이고, 여기서 R100의 ***는 Ab에 대한 부착 지점을 나타내고;
L1은 *-C(=O)(CH2)mO(CH2)m-**; *-C(=O)((CH2)mO)t(CH2)n-**; *-C(=O)(CH2)m-**; 또는 *-C(=O)NH((CH2)mO)t(CH2)n-이고, 여기서 L1의 *는 Lp에 대한 부착 지점을 나타내고, L1의 **는 R100에 대한 부착 지점을 나타내고;
각각의 m은 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 및 10으로부터 선택되고;
각각의 n은 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 및 10으로부터 선택되고;
각각의 t는 독립적으로 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 및 30으로부터 선택되고;
Lp는
Figure pct00547
로부터 선택되는 2가 펩티드 스페이서이고, 여기서 Lp의 *는 L1에 대한 부착 지점을 나타내고, Lp의 **는 G의 -NH-기에 대한 부착 지점을 나타내고;
L3은 구조
Figure pct00548
를 갖는 스페이서 모이어티이고,
여기서
W는 -CH2O-**, -CH2N(Rb)C(=O)O-**, -NHC(=O)CH2NHC(=O)O-**, -CH2N(X-R2)C(=O)O-**, 또는 -C(=O)N(X-R2)-**이고, 여기서 각각의 Rb는 독립적으로 H, C1-C6알킬 또는 C3-C8시클로알킬로부터 선택되고, 여기서 W의 **는 X에 대한 부착 지점을 나타내고;
X는 ***-CH2-트리아졸릴-*이고, 여기서 X의 ***는 W에 대한 부착 지점을 나타내고, X의 *는 R2에 대한 부착 지점을 나타내며;
L3의 *는 R2에 대한 부착 지점을 나타내고;
R2는 폴리에틸렌 글리콜, 폴리알킬렌 글리콜, 당, 올리고사카라이드, 폴리펩티드, 또는 1 내지 3개의
Figure pct00549
기로 치환된 C2-C6알킬로부터 선택되는 친수성 모이어티이고;
A는 결합 또는 -OC(=O)*이고, 여기서 *는 D에 대한 부착 지점을 나타내고;
D는 N 또는 O를 포함하는 본원에 정의된 바와 같은 약물 모이어티이고, 여기서 D는 A에서 약물 모이어티의 N 또는 O로의 직접 결합을 통해 A에 연결되고,
y는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 또는 16인
화학식 (E')의 면역접합체 또는 실시양태 62 내지 68 중 어느 하나.
실시양태 70.
R100은
Figure pct00550
이고, 여기서 R100의 ***는 Ab에 대한 부착 지점을 나타내는 것인 화학식 (E')의 면역접합체 또는 실시양태 62 내지 65 중 어느 하나.
실시양태 71.
R100은
Figure pct00551
이고, 여기서 R100의 ***는 Ab에 대한 부착 지점을 나타내는 것인 화학식 (E')의 면역접합체 또는 실시양태 60 내지 63 중 어느 하나.
실시양태 72.
R100은
Figure pct00552
이고, 여기서 R100의 ***는 Ab에 대한 부착 지점을 나타내는 것인 화학식 (E')의 면역접합체 또는 실시양태 62 내지 65 중 어느 하나.
실시양태 73. 다음 구조를 갖는 화학식 (E')의 면역접합체 또는 실시양태 62 내지 72 중 어느 하나:
Figure pct00553
여기서, R은 H, -CH3 또는 -CH2CH2C(=O)OH이고, y는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 또는 16이다.
실시양태 74. 다음 구조를 갖는 화학식 (E')의 면역접합체 또는 실시양태 62 내지 72 중 어느 하나:
Figure pct00554
여기서, R은 H, -CH3 또는 -CH2CH2C(=O)OH이고, y는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 또는 16이다.
실시양태 75. 다음 구조를 갖는 화학식 (E')의 면역접합체 또는 실시양태 62 내지 72 중 어느 하나:
Figure pct00555
여기서, R은 H, -CH3 또는 -CH2CH2C(=O)OH이고, y는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 또는 16이다.
실시양태 76. 다음 구조를 갖는 화학식 (E')의 면역접합체 또는 실시양태 62 내지 72 중 어느 하나:
Figure pct00556
여기서, 각각의 R은 독립적으로 H, -CH3 또는 -CH2CH2C(=O)OH로부터 선택되고, y는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 또는 16이다.
실시양태 77. 다음 구조를 갖는 화학식 (E')의 면역접합체 또는 실시양태 62 내지 72 중 어느 하나:
Figure pct00557
여기서, 각각의 R은 독립적으로 H, -CH3 또는 -CH2CH2C(=O)OH로부터 선택되고, y는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 또는 16이다.
실시양태 78. 다음 구조를 갖는 화학식 (E')의 면역접합체 또는 실시양태 62 내지 72 중 어느 하나:
Figure pct00558
여기서, Xa는 -CH2-, -OCH2-, -NHCH2- 또는 -NRCH2-이고, 각각의 R은 독립적으로 H, -CH3 또는 -CH2CH2C(=O)OH이고, y는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 또는 16이다.
실시양태 79. 다음 구조를 갖는 화학식 (E')의 면역접합체 또는 실시양태 62 내지 72 중 어느 하나:
Figure pct00559
여기서, R은 H, -CH3 또는 -CH2CH2C(=O)OH이고, y는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 또는 16이다.
실시양태 80. 다음 구조를 갖는 화학식 (E')의 면역접합체 또는 실시양태 62 내지 72 중 어느 하나:
Figure pct00560
여기서, Xb는 -CH2-, -OCH2-, -NHCH2- 또는 -NRCH2-이고, 각각의 R은 독립적으로 H, -CH3 또는 -CH2CH2C(=O)OH이고, y는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 또는 16이다.
실시양태 81. 다음 구조를 갖는 화학식 (E')의 면역접합체 또는 실시양태 62 내지 72 중 어느 하나:
Figure pct00561
여기서, y는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 또는 16이다.
실시양태 82. 다음 구조를 갖는 화학식 (E')의 면역접합체 또는 실시양태 62 내지 72 중 어느 하나:
Figure pct00562
여기서, y는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 또는 16이다.
실시양태 83. 다음 구조를 갖는 화학식 (E')의 면역접합체 또는 실시양태 62 내지 72 중 어느 하나:
Figure pct00563
여기서, y는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 또는 16이다.
실시양태 84. 다음 구조를 갖는 화학식 (E')의 면역접합체 또는 실시양태 62 내지 72 중 어느 하나:
Figure pct00564
여기서, y는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 또는 16이다.
실시양태 85. 다음 구조를 갖는 화학식 (E')의 면역접합체 또는 실시양태 62 내지 72 중 어느 하나:
Figure pct00565
여기서, y는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 또는 16이다.
실시양태 86. 다음 구조를 갖는 화학식 (E')의 면역접합체 또는 실시양태 62 내지 72 중 어느 하나:
Figure pct00566
여기서, y는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 또는 16이다.
본 발명의 링커-약물 기, 링커 및 항체 약물 접합체의 특정 측면 및 예는 추가의 열거된 실시양태의 하기 목록에 제공된다. 각 실시양태에 명시된 특색은 다른 명시된 특색과 조합하여 본 발명의 추가 실시양태를 제공할 수 있는 것으로 인지될 것이다.
실시양태 87.
G는
Figure pct00567
이고, 여기서 G의 *는 L2에 대한 부착 지점을 나타내고, G의 **는 L3에 대한 부착 지점을 나타내고, G의 ***는 Lp에 대한 부착 지점을 나타내는 것인
화학식 (A')의 화합물 또는 실시양태 1 내지 2 중 어느 하나, 또는 그의 제약상 허용되는 염, 화학식 (C')의 링커 또는 실시양태 33 내지 40 중 어느 하나, 및 화학식 (E')의 면역접합체 또는 실시양태 62 내지 63 중 어느 하나.
실시양태 88.
G는
Figure pct00568
이고, 여기서 G의 *는 L2에 대한 부착 지점을 나타내고, G의 **는 L3에 대한 부착 지점을 나타내고, G의 ***는 Lp에 대한 부착 지점을 나타내는 것인
화학식 (A')의 화합물 또는 실시양태 1 내지 2 중 어느 하나, 또는 그의 제약상 허용되는 염, 화학식 (C')의 링커 또는 실시양태 33 내지 40 중 어느 하나, 및 화학식 (E')의 면역접합체 또는 실시양태 62 내지 63 중 어느 하나.
실시양태 89.
L1은 *-C(=O)(CH2)mO(CH2)m-**; *-C(=O)((CH2)mO)t(CH2)n-**; *-C(=O)(CH2)m-**;
*-C(=O)NH((CH2)mO)t(CH2)n-**;
*-C(=O)O(CH2)mSSC(R3)2(CH2)mC(=O)NR3(CH2)mNR3C(=O)(CH2)m-**;
*-C(=O)O(CH2)mC(=O)NH(CH2)m-**; *-C(=O)(CH2)mNH(CH2)m-**;
*-C(=O)(CH2)mNH(CH2)nC(=O)-**; *-C(=O)(CH2)mX1(CH2)m-**;
*-C(=O)((CH2)mO)t(CH2)nX1(CH2)n-**; *-C(=O)(CH2)mNHC(=O)(CH2)n-**;
*-C(=O)((CH2)mO)t(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-**; *-C(=O)(CH2)mNHC(=O)(CH2)nX1(CH2)n-**; *-C(=O)((CH2)mO)t(CH2)nNHC(=O)(CH2)nX1(CH2)n-**;
*-C(=O)((CH2)mO)t(CH2)nC(=O)NH(CH2)m-**; *-C(=O)(CH2)mC(R3)2-** 또는
*-C(=O)(CH2)mC(=O)NH(CH2)m-**이고, 여기서 L1의 *는 Lp에 대한 부착 지점을 나타내고, L1의 **는 존재하는 경우 R1에 대한 부착 지점을 나타내거나 또는 L1의 **는 존재하는 경우 R100에 대한 부착 지점을 나타내는 것인
화학식 (A')의 화합물 또는 실시양태 1 내지 17 중 어느 하나, 또는 그의 제약상 허용되는 염, 화학식 (C')의 링커 또는 실시양태 33 내지 47 중 어느 하나, 및 화학식 (E')의 면역접합체 또는 실시양태 62 내지 72 중 어느 하나.
실시양태 90.
L1은 *-C(=O)(CH2)mO(CH2)m-**; *-C(=O)((CH2)mO)t(CH2)n-**; *-C(=O)(CH2)m-**;
*-C(=O)NH((CH2)mO)t(CH2)n-**; *-C(=O)(CH2)mNH(CH2)m-**;
*-C(=O)(CH2)mNH(CH2)nC(=O)-**; *-C(=O)(CH2)mNHC(=O)(CH2)n-**;
*-C(=O)((CH2)mO)t(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-**;
*-C(=O)((CH2)mO)t(CH2)nC(=O)NH(CH2)m-**; *-C(=O)(CH2)mC(R3)2-** 또는 *-C(=O)(CH2)mC(=O)NH(CH2)m-**이고, 여기서 L1의 *는 Lp에 대한 부착 지점을 나타내고, L1의 **는 존재하는 경우 R1에 대한 부착 지점을 나타내거나 또는 L1의 **는 존재하는 경우 R100에 대한 부착 지점을 나타내는 것인
화학식 (A')의 화합물 또는 실시양태 1 내지 17 중 어느 하나, 또는 그의 제약상 허용되는 염, 화학식 (C')의 링커 또는 실시양태 33 내지 47 중 어느 하나, 및 화학식 (E')의 면역접합체 또는 실시양태 62 내지 72 중 어느 하나.
실시양태 91.
L1은 *-C(=O)(CH2)mO(CH2)m-**; *-C(=O)((CH2)mO)t(CH2)n-**; *-C(=O)(CH2)m-**;
*-C(=O)NH((CH2)mO)t(CH2)n-**; *-C(=O)(CH2)mNH(CH2)m-**; *-C(=O)(CH2)mNH(CH2)nC(=O)-**; 또는 *-C(=O)(CH2)mNHC(=O)(CH2)n-**이고, 여기서 L1의 *는 Lp에 대한 부착 지점을 나타내고, L1의 **는 존재하는 경우 R1에 대한 부착 지점을 나타내거나 또는 L1의 **는 존재하는 경우 R100에 대한 부착 지점을 나타내는 것인
화학식 (A')의 화합물 또는 실시양태 1 내지 17 중 어느 하나, 또는 그의 제약상 허용되는 염, 화학식 (C')의 링커 또는 실시양태 33 내지 47 중 어느 하나, 및 화학식 (E')의 면역접합체 또는 실시양태 62 내지 72 중 어느 하나.
실시양태 92.
L1은 *-C(=O)(CH2)mO(CH2)m-**; *-C(=O)((CH2)mO)t(CH2)n-**; *-C(=O)(CH2)m-** 또는 *-C(=O)NH((CH2)mO)t(CH2)n-**이고, 여기서 L1의 *는 Lp에 대한 부착 지점을 나타내고, L1의 **는 존재하는 경우 R1에 대한 부착 지점을 나타내거나 또는 L1의 **는 존재하는 경우 R100에 대한 부착 지점을 나타내는 것인
화학식 (A')의 화합물 또는 실시양태 1 내지 17 중 어느 하나, 또는 그의 제약상 허용되는 염, 화학식 (C')의 링커 또는 실시양태 33 내지 47 중 어느 하나, 및 화학식 (E')의 면역접합체 또는 실시양태 62 내지 72 중 어느 하나.
실시양태 93. L1은 *-C(=O)(CH2)mO(CH2)m-**이고, 여기서 L1의 *는 Lp에 대한 부착 지점을 나타내고, L1의 **는 존재하는 경우 R1에 대한 부착 지점을 나타내거나 또는 L1의 **는 존재하는 경우 R100에 대한 부착 지점을 나타내는 것인 화학식 (A')의 화합물 또는 실시양태 1 내지 17 중 어느 하나, 또는 그의 제약상 허용되는 염, 화학식 (C')의 링커 또는 실시양태 33 내지 47 중 어느 하나, 및 화학식 (E')의 면역접합체 또는 실시양태 62 내지 72 중 어느 하나.
실시양태 94. L1은 *-C(=O)((CH2)mO)t(CH2)n-**이고, 여기서 L1의 *는 Lp에 대한 부착 지점을 나타내고, L1의 **는 존재하는 경우 R1에 대한 부착 지점을 나타내거나 또는 L1의 **는 존재하는 경우 R100에 대한 부착 지점을 나타내는 것인 화학식 (A')의 화합물 또는 실시양태 1 내지 17 중 어느 하나, 또는 그의 제약상 허용되는 염, 화학식 (C')의 링커 또는 실시양태 33 내지 47 중 어느 하나, 및 화학식 (E')의 면역접합체 또는 실시양태 62 내지 72 중 어느 하나.
실시양태 95. L1은 *-C(=O)(CH2)m-**이고, 여기서 L1의 *는 Lp에 대한 부착 지점을 나타내고, L1의 **는 존재하는 경우 R1에 대한 부착 지점을 나타내거나 또는 L1의 **는 존재하는 경우 R100에 대한 부착 지점을 나타내는 것인 화학식 (A')의 화합물 또는 실시양태 1 내지 17 중 어느 하나, 또는 그의 제약상 허용되는 염, 화학식 (C')의 링커 또는 실시양태 33 내지 47 중 어느 하나, 및 화학식 (E')의 면역접합체 또는 실시양태 62 내지 72 중 어느 하나.
실시양태 96. L1은 *-C(=O)NH((CH2)mO)t(CH2)n-**이고, 여기서 L1의 *는 Lp에 대한 부착 지점을 나타내고, L1의 **는 존재하는 경우 R1에 대한 부착 지점을 나타내거나 또는 L1의 **는 존재하는 경우 R100에 대한 부착 지점을 나타내는 것인 화학식 (A')의 화합물 또는 실시양태 1 내지 17 중 어느 하나, 또는 그의 제약상 허용되는 염, 화학식 (C')의 링커 또는 실시양태 32 내지 46 중 어느 하나, 및 화학식 (E')의 면역접합체 또는 실시양태 60 내지 70 중 어느 하나.
실시양태 97. Lp는 효소적으로 절단가능한 2가 펩티드 스페이서인 화학식 (A')의 화합물 또는 실시양태 1 내지 17 중 어느 하나, 또는 그의 제약상 허용되는 염, 화학식 (C')의 링커 또는 실시양태 33 내지 47 중 어느 하나, 및 화학식 (E')의 면역접합체 또는 실시양태 62 내지 72 중 어느 하나, 또는 실시양태 84 내지 93 중 어느 하나.
실시양태 98. Lp는 글리신, 발린, 시트룰린, 리신, 이소류신, 페닐알라닌, 메티오닌, 아스파라긴, 프롤린, 알라닌, 류신, 트립토판 및 티로신으로부터 선택되는 아미노산 잔기를 포함하는 2가 펩티드 스페이서인 화학식 (A')의 화합물 또는 실시양태 1 내지 17 중 어느 하나, 또는 그의 제약상 허용되는 염, 화학식 (C')의 링커 또는 실시양태 32 내지 46 중 어느 하나, 및 화학식 (E')의 면역접합체 또는 실시양태 60 내지 70 중 어느 하나, 또는 실시양태 87 내지 97 중 어느 하나.
실시양태 99.
Lp는 2 내지 4개의 아미노산 잔기를 포함하는 2가 펩티드 스페이서인 화학식 (A')의 화합물 또는 실시양태 1 내지 17 중 어느 하나, 또는 그의 제약상 허용되는 염, 화학식 (C')의 링커 또는 실시양태 33 내지 47 중 어느 하나, 및 화학식 (E')의 면역접합체 또는 실시양태 62 내지 72 중 어느 하나, 또는 실시양태 87 내지 98 중 어느 하나.
실시양태 100.
Lp는 글리신, 발린, 시트룰린, 리신, 이소류신, 페닐알라닌, 메티오닌, 아스파라긴, 프롤린, 알라닌, 류신, 트립토판, 및 티로신으로부터 각각 독립적으로 선택된 2 내지 4개의 아미노산 잔기를 포함하는 2가 펩티드 스페이서인 화학식 (A')의 화합물 또는 실시양태 1 내지 17 중 어느 하나, 또는 그의 제약상 허용되는 염, 화학식 (C')의 링커 또는 실시양태 33 내지 47 중 어느 하나, 및 화학식 (E')의 면역접합체 또는 실시양태 62 내지 72 중 어느 하나, 또는 실시양태 87 내지 99 중 어느 하나.
실시양태 101.
Lp는
Figure pct00569
로부터 선택된 2가 펩티드 스페이서이며, 여기서 Lp의 *는 L1에 대한 부착 지점을 나타내고, Lp의 **는 화학식 (B')의 -NH- 기에 대한 부착 지점을 나타내거나 또는 Lp의 **는 화학식 (A')의 G에 대한 부착 지점을 나타내는 것인
화학식 (A')의 화합물 또는 실시양태 1 내지 17 중 어느 하나, 또는 그의 제약상 허용되는 염, 화학식 (C')의 링커 또는 실시양태 33 내지 47 중 어느 하나, 및 화학식 (E')의 면역접합체 또는 실시양태 62 내지 72 중 어느 하나, 또는 실시양태 87 내지 100 중 어느 하나.
실시양태 102.
Lp는
Figure pct00570
이며, 여기서 Lp의 *는 L1에 대한 부착 지점을 나타내고, Lp의 **는 화학식 (B')의 -NH-기에 대한 부착 지점을 나타내거나 또는 Lp의 **는 화학식 (A')의 G에 대한 부착 지점을 나타내는 것인
화학식 (A')의 화합물 또는 실시양태 1 내지 17 중 어느 하나, 또는 그의 제약상 허용되는 염, 화학식 (C')의 링커 또는 실시양태 33 내지 47 중 어느 하나, 및 화학식 (E')의 면역접합체 또는 실시양태 62 내지 72 중 어느 하나, 또는 실시양태 87 내지 101 중 어느 하나.
실시양태 103.
Lp는
Figure pct00571
이며, 여기서 Lp의 *는 L1에 대한 부착 지점을 나타내고, Lp의 **는 화학식 (B')의 -NH- 기에 대한 부착 지점을 나타내거나 또는 Lp의 **는 화학식 (A')의 G에 대한 부착 지점을 나타내는 것인
화학식 (A') 또는 실시양태 1 내지 17 중 어느 하나의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염, 화학식 (C')의 링커 또는 실시양태 33 내지 47 중 어느 하나, 및 화학식 (E')의 면역접합체 또는 실시양태 62 내지 72 중 어느 하나, 또는 실시양태 87 내지 101 중 어느 하나.
실시양태 104.
Lp는
Figure pct00572
이며, 여기서 Lp의 *는 L1에 대한 부착 지점을 나타내고, Lp의 **는 화학식 (B')의 -NH- 기에 대한 부착 지점을 나타내거나 또는 Lp의 **는 화학식 (A')의 G에 대한 부착 지점을 나타내는 것인
화학식 (A') 또는 실시양태 1 내지 17 중 어느 하나의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염, 화학식 (C')의 링커 또는 실시양태 33 내지 47 중 어느 하나, 및 화학식 (E')의 면역접합체 또는 실시양태 62 내지 72 중 어느 하나, 또는 실시양태 87 내지 101 중 어느 하나.
실시양태 105.
Lp는
Figure pct00573
이며, 여기서 Lp의 *는 L1에 대한 부착 지점을 나타내고, Lp의 **는 화학식 (B')의 -NH- 기에 대한 부착 지점을 나타내거나 또는 Lp의 **는 화학식 (A')의 G에 대한 부착 지점을 나타내는 것인
화학식 (A') 또는 실시양태 1 내지 17 중 어느 하나의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염, 화학식 (C')의 링커 또는 실시양태 33 내지 47 중 어느 하나, 및 화학식 (E')의 면역접합체 또는 실시양태 62 내지 72 중 어느 하나, 또는 실시양태 87 내지 101 중 어느 하나.
실시양태 106.
Lp는
Figure pct00574
이며, 여기서 Lp의 *는 L1에 대한 부착 지점을 나타내고, Lp의 **는 화학식 (B')의 -NH- 기에 대한 부착 지점을 나타내거나 또는 Lp의 **는 화학식 (A')의 G에 대한 부착 지점을 나타내는 것인
화학식 (A') 또는 실시양태 1 내지 17 중 어느 하나의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염, 화학식 (C')의 링커 또는 실시양태 33 내지 47 중 어느 하나, 및 화학식 (E')의 면역접합체 또는 실시양태 62 내지 72 중 어느 하나, 또는 실시양태 87 내지 101 중 어느 하나.
실시양태 107.
L2가 결합, 메틸렌, 또는 C2-C3알케닐렌인, 화학식 (A')의 화합물 또는 실시양태 1 내지 17 중 어느 하나, 또는 그의 제약상 허용되는 염, 화학식 (C')의 링커 또는 실시양태 33 내지 47 중 어느 하나, 및 화학식 (E')의 면역접합체 또는 실시양태 62 내지 72 중 어느 하나, 또는 실시양태 87 내지 106 중 어느 하나.
실시양태 108.
L2가 결합 또는 메틸렌인, 화학식 (A')의 화합물 또는 실시양태 1 내지 17 중 어느 하나, 또는 그의 제약상 허용되는 염, 화학식 (C')의 링커 또는 실시양태 33 내지 47 중 어느 하나, 및 화학식 (E')의 면역접합체 또는 실시양태 62 내지 72 중 어느 하나, 또는 실시양태 87 내지 107 중 어느 하나.
실시양태 109.
L2가 결합인, 화학식 (A')의 화합물 또는 실시양태 1 내지 17 중 어느 하나, 또는 그의 제약상 허용되는 염, 화학식 (C')의 링커 또는 실시양태 33 내지 47 중 어느 하나, 및 화학식 (E')의 면역접합체 또는 실시양태 62 내지 72 중 어느 하나, 또는 실시양태 87 내지 108 중 어느 하나.
실시양태 110.
L2가 메틸렌인, 화학식 (A')의 화합물 또는 실시양태 1 내지 17 중 어느 하나, 또는 그의 제약상 허용되는 염, 화학식 (C')의 링커 또는 실시양태 33 내지 47 중 어느 하나, 및 화학식 (E')의 면역접합체 또는 실시양태 62 내지 72 중 어느 하나, 또는 실시양태 87 내지 108 중 어느 하나.
실시양태 111.
A는 결합, -OC(=O)-, -OC(=O)N(CH3)CH2CH2N(CH3)C(=O)- 또는 -OC(=O)N(CH3)C(Ra)2C(Ra)2N(CH3)C(=O)-이고, 여기서 각각의 Ra는 독립적으로 H, C1-C6알킬 또는 C3-C8시클로알킬로부터 선택된 것인
화학식 (A')의 화합물 또는 실시양태 1 내지 30 중 어느 하나 또는 그의 제약상 허용되는 염, 화학식 (C')의 링커 또는 실시양태 33 내지 47 중 어느 하나, 및 화학식 (E')의 면역접합체 또는 실시양태 62 내지 85 중 어느 하나, 또는 실시양태 87 내지 110 중 어느 하나.
실시양태 112.
A가 결합 또는 -OC(=O)인, 화학식 (A')의 화합물 또는 실시양태 1 내지 32 중 어느 하나 또는 그의 제약상 허용되는 염, 화학식 (C')의 링커 또는 실시양태 33 내지 61 중 어느 하나, 및 화학식 (E')의 면역접합체또는 실시양태 62 내지 86 중 어느 하나, 또는 실시양태 87 내지 111 중 어느 하나.
실시양태 113.
A가 결합인, 화학식 (A')의 화합물 또는 실시양태 1 내지 32 중 어느 하나 또는 그의 제약상 허용되는 염, 화학식 (C')의 링커 또는 실시양태 33 내지 61 중 어느 하나, 및 화학식 (E')의 면역접합체 또는 실시양태 62 내지 86 중 어느 하나, 또는 실시양태 87 내지 112 중 어느 하나.
실시양태 114.
A가 -OC(=O)인, 화학식 (A')의 화합물 또는 실시양태 1 내지 32 중 어느 하나 또는 그의 제약상 허용되는 염, 화학식 (C')의 링커 또는 실시양태 33 내지 61 중 어느 하나, 및 화학식 (E')의 면역접합체 또는 실시양태 62 내지 86 중 어느 하나, 또는 실시양태 87 내지 112 중 어느 하나.
실시양태 115.
A는
Figure pct00575
인
화학식 (A')의 화합물 또는 실시양태 1 내지 32 중 어느 하나 또는 그의 제약상 허용되는 염, 화학식 (C')의 링커 또는 실시양태 33 내지 61 중 어느 하나, 및 화학식 (E')의 면역접합체 또는 실시양태 62 내지 86 중 어느 하나, 또는 실시양태 87 내지 110 중 어느 하나.
실시양태 116.
A는 -OC(=O)N(CH3)CH2CH2N(CH3)C(=O)- 또는 -OC(=O)N(CH3)C(Ra)2C(Ra)2N(CH3)C(=O)-이고, 여기서 각각의 Ra는 독립적으로 H, C1-C6알킬 또는 C3-C8시클로알킬로부터 선택되는 것인
화학식 (A')의 화합물 또는 실시양태 1 내지 32 중 어느 하나 또는 그의 제약상 허용되는 염, 화학식 (C')의 링커 또는 실시양태 33 내지 61 중 어느 하나, 및 화학식 (E')의 면역접합체 또는 실시양태 62 내지 85 중 어느 하나, 또는 실시양태 86 내지 110 중 어느 하나.
실시양태 117.
L3은 구조
Figure pct00576
를 갖는 스페이서 모이어티이고,
여기서
W는 -CH2O-**, -CH2N(Rb)C(=O)O-**, -NHC(=O)C(Rb)2NHC(=O)O-**, -NHC(=O)C(Rb)2NH-**, -NHC(=O)C(Rb)2NHC(=O)-**, -CH2N(X-R2)C(=O)O-**, -C(=O)N(X-R2)-**, -CH2N(X-R2)C(=O)-**, -C(=O)NRb-**, -C(=O)NH-**, -CH2NRbC(=O)-**, -CH2NRbC(=O)NH-**, -CH2NRbC(=O)NRb-**, -NHC(=O)-**, -NHC(=O)O-**, -NHC(=O)NH-**, -OC(=O)NH-**, -S(O)2NH-**, -NHS(O)2-**, -C(=O)-, -C(=O)O-** 또는 -NH-이고, 여기서 각각의 Rb는 독립적으로 H, C1-C6알킬 또는 C3-C8시클로알킬로부터 선택되고, 여기서 W의 **는 X에 대한 부착 지점을 나타내고;
X는 결합, 트리아졸릴 또는 ***-CH2-트리아졸릴-*이고, 여기서 X의 ***는 W에 대한 부착 지점을 나타내고, X의 *는 R2에 대한 부착 지점을 나타내고;
L3의 *는 R2에 대한 부착 지점을 나타내는 것인
화학식 (A')의 화합물 또는 실시양태 1 내지 17 중 어느 하나 또는 그의 제약상 허용되는 염, 화학식 (C')의 링커 또는 실시양태 33 내지 49 중 어느 하나, 및 화학식 (E')의 면역접합체 또는 실시양태 62 내지 72 중 어느 하나, 또는 실시양태 87 내지 116 중 어느 하나.
실시양태 118.
L3은 구조
Figure pct00577
를 갖는 스페이서 모이어티이고,
여기서
W는 -CH2O-**, -CH2N(Rb)C(=O)O-**, -NHC(=O)CH2NHC(=O)O-**, -NHC(=O)CH2NH-**, -NHC(=O)CH2NHC(=O)-**, -CH2N(X-R2)C(=O)O-**, -C(=O)N(X-R2)-**, -CH2N(X-R2)C(=O)-**, -C(=O)NRb-**, -C(=O)NH-**, -CH2NRbC(=O)-**, -CH2NRbC(=O)NH-**, -CH2NRbC(=O)NRb-**, -NHC(=O)-**, -NHC(=O)O-**, -NHC(=O)NH-**, -OC(=O)NH-**, -S(O)2NH-**, -NHS(O)2-**, -C(=O)-, -C(=O)O-** 또는 -NH-이고, 여기서 각각의 Rb는 독립적으로 H, C1-C6알킬 또는 C3-C8시클로알킬로부터 선택되고, 여기서 W의 **는 X에 대한 부착 지점을 나타내고;
X는 결합이고;
L3의 *는 R2에 대한 부착 지점을 나타내는 것인
화학식 (A')의 화합물 또는 실시양태 1 내지 17 중 어느 하나, 또는 그의 제약상 허용되는 염, 화학식 (C')의 링커 또는 실시양태 33 내지 47 중 어느 하나, 및 화학식 (E')의 면역접합체 또는 실시양태 62 내지 72 중 어느 하나, 또는 실시양태 87 내지 117 중 어느 하나.
실시양태 119.
L3은 구조
Figure pct00578
를 갖는 스페이서 모이어티이고,
여기서
W는 -CH2O-**, -CH2N(Rb)C(=O)O-**, -NHC(=O)CH2NHC(=O)O-**, -NHC(=O)CH2NH-**, -NHC(=O)CH2NHC(=O)-**, -CH2N(X-R2)C(=O)O-**, -C(=O)N(X-R2)-**, -CH2N(X-R2)C(=O)-**, -C(=O)NRb-**, -C(=O)NH-**, -CH2NRbC(=O)-**, -CH2NRbC(=O)NH-**, -CH2NRbC(=O)NRb-**, -NHC(=O)-**, -NHC(=O)O-**, -NHC(=O)NH-**, -OC(=O)NH-**, -S(O)2NH-**, -NHS(O)2-**, -C(=O)-, -C(=O)O-** 또는 -NH-이고, 여기서 각각의 Rb는 독립적으로 H, C1-C6알킬 또는 C3-C8시클로알킬로부터 선택되고, 여기서 W의 **는 X에 대한 부착 지점을 나타내고;
X는 트리아졸릴이고, 여기서 X의 ***는 W에 대한 부착 지점을 나타내고, X의 *는 R2에 대한 부착 지점을 나타내고;
L3의 *는 R2에 대한 부착 지점을 나타내는 것인
화학식 (A')의 화합물 또는 실시양태 1 내지 17 중 어느 하나, 또는 그의 제약상 허용되는 염, 화학식 (C')의 링커 또는 실시양태 33 내지 47 중 어느 하나, 및 화학식 (E')의 면역접합체 또는 실시양태 62 내지 72 중 어느 하나, 또는 실시양태 87 내지 118 중 어느 하나.
실시양태 120.
L3은 구조
Figure pct00579
를 갖는 스페이서 모이어티이고,
여기서
W는 -CH2O-**, -CH2N(Rb)C(=O)O-**, -NHC(=O)CH2NHC(=O)O-**, -NHC(=O)CH2NH-**, -NHC(=O)CH2NHC(=O)-**, -CH2N(X-R2)C(=O)O-**, -C(=O)N(X-R2)-**, -CH2N(X-R2)C(=O)-**, -C(=O)NRb-**, -C(=O)NH-**, -CH2NRbC(=O)-**, -CH2NRbC(=O)NH-**, -CH2NRbC(=O)NRb-**, -NHC(=O)-**, -NHC(=O)O-**, -NHC(=O)NH-**, -OC(=O)NH-**, -S(O)2NH-**, -NHS(O)2-**, -C(=O)-, -C(=O)O-** 또는 -NH-이고, 여기서 각각의 Rb는 독립적으로 H, C1-C6알킬 또는 C3-C8시클로알킬로부터 선택되고, 여기서 W의 **는 X에 대한 부착 지점을 나타내고;
X는 ***-CH2-트리아졸릴-*이고, 여기서 X의 ***는 W에 대한 부착 지점을 나타내고, X의 *는 R2에 대한 부착 지점을 나타내며;
L3의 *는 R2에 대한 부착 지점을 나타내는 것인
화학식 (A')의 화합물 또는 실시양태 1 내지 17 중 어느 하나, 또는 그의 제약상 허용되는 염, 화학식 (C')의 링커 또는 실시양태 33 내지 47 중 어느 하나, 및 화학식 (E')의 면역접합체 또는 실시양태 62 내지 72 중 어느 하나, 또는 실시양태 87 내지 118 중 어느 하나.
실시양태 121.
L3은 구조
Figure pct00580
를 갖는 스페이서 모이어티이고,
여기서
W는 -CH2O-**, -CH2N(Rb)C(=O)O-**, -NHC(=O)CH2NHC(=O)O-**, -CH2N(X-R2)C(=O)O-**, -C(=O)N(X-R2)-**이고, 여기서 각각의 Rb는 독립적으로 H, C1-C6알킬 또는 C3-C8시클로알킬로부터 선택되고, 여기서 W의 **는 X에 대한 부착 지점을 나타내고;
X는 결합, 트리아졸릴 또는 ***-CH2-트리아졸릴-*이고, 여기서 X의 ***는 W에 대한 부착 지점을 나타내고, X의 *는 R2에 대한 부착 지점을 나타내고;
L3의 *는 R2에 대한 부착 지점을 나타내는 것인
화학식 (A')의 화합물 또는 실시양태 1 내지 17 중 어느 하나, 또는 그의 제약상 허용되는 염, 화학식 (C')의 링커 또는 실시양태 33 내지 47 중 어느 하나, 및 화학식 (E')의 면역접합체 또는 실시양태 62 내지 72 중 어느 하나, 또는 실시양태 87 내지 118 중 어느 하나.
실시양태 122.
L3은 구조
Figure pct00581
를 갖는 스페이서 모이어티이고,
여기서
W는 -CH2O-**, -CH2N(Rb)C(=O)O-**, -NHC(=O)CH2NHC(=O)O-**, -CH2N(X-R2)C(=O)O-**, -C(=O)N(X-R2)-**이고, 여기서 각각의 Rb는 독립적으로 H, C1-C6알킬 또는 C3-C8시클로알킬로부터 선택되고, 여기서 W의 **는 X에 대한 부착 지점을 나타내고;
X는 결합이고;
L3의 *는 R2에 대한 부착 지점을 나타내는 것인
화학식 (A')의 화합물 또는 실시양태 1 내지 17 중 어느 하나, 또는 그의 제약상 허용되는 염, 화학식 (C')의 링커 또는 실시양태 33 내지 47 중 어느 하나, 및 화학식 (E')의 면역접합체 또는 실시양태 62 내지 72 중 어느 하나, 또는 실시양태 87 내지 118 중 어느 하나.
실시양태 123.
L3은 구조
Figure pct00582
를 갖는 스페이서 모이어티이고,
여기서
W는 -CH2O-**, -CH2N(Rb)C(=O)O-**, -NHC(=O)CH2NHC(=O)O-**, -CH2N(X-R2)C(=O)O-**, -C(=O)N(X-R2)-**이고, 여기서 각각의 Rb는 독립적으로 H, C1-C6알킬 또는 C3-C8시클로알킬로부터 선택되고, 여기서 W의 **는 X에 대한 부착 지점을 나타내고;
X는 트리아졸릴이고, 여기서 X의 ***는 W에 대한 부착 지점을 나타내고, X의 *는 R2에 대한 부착 지점을 나타내고;
L3의 *는 R2에 대한 부착 지점을 나타내는 것인
화학식 (A')의 화합물 또는 실시양태 1 내지 17 중 어느 하나, 또는 그의 제약상 허용되는 염, 화학식 (C')의 링커 또는 실시양태 33 내지 47 중 어느 하나, 및 화학식 (E')의 면역접합체 또는 실시양태 62 내지 72 중 어느 하나, 또는 실시양태 83 내지 118 중 어느 하나.
실시양태 124.
L3은 구조
Figure pct00583
를 갖는 스페이서 모이어티이고,
여기서
W는 -CH2O-**, -CH2N(Rb)C(=O)O-**, -NHC(=O)CH2NHC(=O)O-**, -CH2N(X-R2)C(=O)O-**, -C(=O)N(X-R2)-**이고, 여기서 각각의 Rb는 독립적으로 H, C1-C6알킬 또는 C3-C8시클로알킬로부터 선택되고, 여기서 W의 **는 X에 대한 부착 지점을 나타내고;
X는 ***-CH2-트리아졸릴-*이고, 여기서 X의 ***는 W에 대한 부착 지점을 나타내고, X의 *는 R2에 대한 부착 지점을 나타내며;
L3의 *는 R2에 대한 부착 지점을 나타내는 것인
화학식 (A')의 화합물 또는 실시양태 1 내지 17 중 어느 하나, 또는 그의 제약상 허용되는 염, 화학식 (C')의 링커 또는 실시양태 33 내지 47 중 어느 하나, 및 화학식 (E')의 면역접합체 또는 실시양태 62 내지 72 중 어느 하나, 또는 실시양태 87 내지 118 중 어느 하나.
실시양태 125. R2는 폴리에틸렌 글리콜, 폴리알킬렌 글리콜, 당, 올리고사카라이드, 폴리펩티드, 또는 1 내지 3개의
Figure pct00584
기로 치환된 C2-C6알킬로부터 선택되는 친수성 모이어티인 화학식 (A')의 화합물 또는 실시양태 1 내지 17 중 어느 하나, 또는 그의 제약상 허용되는 염, 화학식 (C')의 링커 또는 실시양태 33 내지 47 중 어느 하나, 및 화학식 (E')의 면역접합체 또는 실시양태 62 내지 72 중 어느 하나, 또는 실시양태 86 내지 124 중 어느 하나.
실시양태 126. R2는 당인 화학식 (A')의 화합물 또는 실시양태 1 내지 17 중 어느 하나, 또는 그의 제약상 허용되는 염, 화학식 (C')의 링커 또는 실시양태 33 내지 47 중 어느 하나, 및 화학식 (E')의 면역접합체 또는 실시양태 62 내지 72 중 어느 하나, 또는 실시양태 87 내지 125 중 어느 하나.
실시양태 127. R2는 올리고사카라이드인 화학식 (A')의 화합물 또는 실시양태 1 내지 17 중 어느 하나, 또는 그의 제약상 허용되는 염, 화학식 (C')의 링커 또는 실시양태 33 내지 47 중 어느 하나, 및 화학식 (E')의 면역접합체 또는 실시양태 62 내지 72 중 어느 하나, 또는 실시양태 87 내지 125 중 어느 하나.
실시양태 128. R2는 폴리펩티드인 화학식 (A')의 화합물 또는 실시양태 1 내지 17 중 어느 하나, 또는 그의 제약상 허용되는 염, 화학식 (C')의 링커 또는 실시양태 33 내지 47 중 어느 하나, 및 화학식 (E')의 면역접합체 또는 실시양태 62 내지 72 중 어느 하나, 또는 실시양태 87 내지 125 중 어느 하나.
실시양태 129. R2는 폴리알킬렌 글리콜인 화학식 (A')의 화합물 또는 실시양태 1 내지 17 중 어느 하나, 또는 그의 제약상 허용되는 염, 화학식 (C')의 링커 또는 실시양태 33 내지 47 중 어느 하나, 및 화학식 (E')의 면역접합체 또는 실시양태 62 내지 72 중 어느 하나, 또는 실시양태 87 내지 125 중 어느 하나.
실시양태 130. R2는 구조 -(O(CH2)m)tR'을 갖는 폴리알킬렌 글리콜이고, 여기서 R'은 OH, OCH3 또는 OCH2CH2C(=O)OH이고, m은 1-10이고, t는 4-40인 화학식 (A')의 화합물 또는 실시양태 1 내지 17 중 어느 하나, 또는 그의 제약상 허용되는 염, 화학식 (C')의 링커 또는 실시양태 33 내지 47 중 어느 하나, 및 화학식 (E')의 면역접합체 또는 실시양태 62 내지 72 중 어느 하나, 또는 실시양태 87 내지 125 중 어느 하나.
실시양태 131. R2는 구조 -((CH2)mO)tR"-를 갖는 폴리알킬렌 글리콜이고, 여기서 R"는 H, CH3 또는 CH2CH2C(=O)OH이고, m은 1-10이고, t는 4-40인 화학식 (A')의 화합물 또는 실시양태 1 내지 17 중 어느 하나, 또는 그의 제약상 허용되는 염, 화학식 (C')의 링커 또는 실시양태 33 내지 47 중 어느 하나, 및 화학식 (E')의 면역접합체 또는 실시양태 62 내지 72 중 어느 하나, 또는 실시양태 87 내지 125 중 어느 하나.
실시양태 132. R2는 폴리에틸렌 글리콜인 화학식 (A')의 화합물 또는 실시양태 1 내지 17 중 어느 하나, 또는 그의 제약상 허용되는 염, 화학식 (C')의 링커 또는 실시양태 33 내지 47 중 어느 하나, 및 화학식 (E')의 면역접합체 또는 실시양태 62 내지 72 중 어느 하나, 또는 실시양태 87 내지 125 중 어느 하나.
실시양태 133. R2는 구조 -(OCH2CH2)tR'을 갖는 폴리에틸렌 글리콜이고, 여기서 R'은 OH, OCH3 또는 OCH2CH2C(=O)OH이고, t는 4-40인 화학식 (A')의 화합물 또는 실시양태 1 내지 17 중 어느 하나, 또는 그의 제약상 허용되는 염, 화학식 (C')의 링커 또는 실시양태 33 내지 47 중 어느 하나, 및 화학식 (E')의 면역접합체 또는 실시양태 62 내지 72 중 어느 하나, 또는 실시양태 87 내지 125 중 어느 하나.
실시양태 134. R2는 구조 -(CH2CH2O)tR"-를 갖는 폴리에틸렌 글리콜이고, 여기서 R"은 H, CH3 또는 CH2CH2C(=O)OH이고, t는 4-40인 화학식 (A')의 화합물 또는 실시양태 1 내지 17 중 어느 하나, 또는 그의 제약상 허용되는 염, 화학식 (C')의 링커 또는 실시양태 33 내지 47 중 어느 하나, 및 화학식 (E')의 면역접합체 또는 실시양태 62 내지 72 중 어느 하나, 또는 실시양태 87 내지 125 중 어느 하나.
실시양태 135.
R2는
Figure pct00585
이고, 여기서 R2의 *는 X 또는 L3에 대한 부착 지점을 나타내는 것인
화학식 (A')의 화합물 또는 실시양태 1 내지 17 중 어느 하나, 또는 그의 제약상 허용되는 염, 화학식 (C')의 링커 또는 실시양태 33 내지 47 중 어느 하나, 및 화학식 (E')의 면역접합체 또는 실시양태 62 내지 72 중 어느 하나, 또는 실시양태 87 내지 125 중 어느 하나.
실시양태 136.
R2는
Figure pct00586
이고, 여기서 R2의 *는 X 또는 L3에 대한 부착 지점을 나타내는 것인
화학식 (A')의 화합물 또는 실시양태 1 내지 17 중 어느 하나, 또는 그의 제약상 허용되는 염, 화학식 (C')의 링커 또는 실시양태 33 내지 47 중 어느 하나, 및 화학식 (E')의 면역접합체 또는 실시양태 62 내지 72 중 어느 하나, 또는 실시양태 87 내지 125 중 어느 하나.
실시양태 137.
R2는
Figure pct00587
이고, 여기서 R2의 *는 X 또는 L3에 대한 부착 지점을 나타내는 것인
화학식 (A')의 화합물 또는 실시양태 1 내지 17 중 어느 하나, 또는 그의 제약상 허용되는 염, 화학식 (C')의 링커 또는 실시양태 33 내지 47 중 어느 하나, 및 화학식 (E')의 면역접합체 또는 실시양태 62 내지 72 중 어느 하나, 또는 실시양태 87 내지 125 중 어느 하나.
실시양태 138.
R2는
Figure pct00588
이고, 여기서 R2의 *는 X 또는 L3에 대한 부착 지점을 나타내는 것인
화학식 (A')의 화합물 또는 실시양태 1 내지 17 중 어느 하나, 또는 그의 제약상 허용되는 염, 화학식 (C')의 링커 또는 실시양태 33 내지 47 중 어느 하나, 및 화학식 (E')의 면역접합체 또는 실시양태 62 내지 72 중 어느 하나, 또는 실시양태 87 내지 125 중 어느 하나.
실시양태 139.
X1은
Figure pct00589
인
화학식 (A')의 화합물 또는 실시양태 1 내지 17 중 어느 하나, 또는 그의 제약상 허용되는 염, 화학식 (C')의 링커 또는 실시양태 33 내지 47 중 어느 하나, 및 화학식 (E')의 면역접합체 또는 실시양태 62 내지 72 중 어느 하나, 또는 실시양태 87 내지 138 중 어느 하나.
실시양태 140.
X1은
Figure pct00590
인
화학식 (A')의 화합물 또는 실시양태 1 내지 17 중 어느 하나, 또는 그의 제약상 허용되는 염, 화학식 (C')의 링커 또는 실시양태 33 내지 47 중 어느 하나, 및 화학식 (E')의 면역접합체 또는 실시양태 62 내지 72 중 어느 하나, 또는 실시양태 87 내지 138 중 어느 하나.
실시양태 141.
각각의 m은 독립적으로 1, 2, 3, 4 및 5로부터 선택되는 것인
화학식 (A')의 화합물 또는 실시양태 1 내지 17 중 어느 하나, 또는 그의 제약상 허용되는 염, 화학식 (C')의 링커 또는 실시양태 33 내지 47 중 어느 하나, 및 화학식 (E')의 면역접합체 또는 실시양태 62 내지 72 중 어느 하나, 또는 실시양태 87 내지 140 중 어느 하나.
실시양태 142.
각각의 m은 독립적으로 1, 2 및 3으로부터 선택되는 것인
화학식 (A')의 화합물 또는 실시양태 1 내지 17 중 어느 하나, 또는 그의 제약상 허용되는 염, 화학식 (C')의 링커 또는 실시양태 33 내지 47 중 어느 하나, 및 화학식 (E')의 면역접합체 또는 실시양태 62 내지 72 중 어느 하나, 또는 실시양태 87 내지 140 중 어느 하나.
실시양태 143.
각각의 n은 독립적으로 1, 2, 3, 4 및 5로부터 선택되는 것인 화학식 (A')의 화합물 또는 실시양태 1 내지 17 중 어느 하나, 또는 그의 제약상 허용되는 염, 화학식 (C')의 링커 또는 실시양태 33 내지 47 중 어느 하나, 및 화학식 (E')의 면역접합체 또는 실시양태 62 내지 72 중 어느 하나, 또는 실시양태 87 내지 142 중 어느 하나.
실시양태 144.
각각의 n은 독립적으로 1, 2 및 3으로부터 선택되는 것인 화학식 (A')의 화합물 또는 실시양태 1 내지 17 중 어느 하나, 또는 그의 제약상 허용되는 염, 화학식 (C')의 링커 또는 실시양태 33 내지 47 중 어느 하나, 및 화학식 (E')의 면역접합체 또는 실시양태 62 내지 72 중 어느 하나, 또는 실시양태 87 내지 142 중 어느 하나.
실시양태 145.
각각의 t는 독립적으로 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 및 30으로부터 선택되는 것인
화학식 (A')의 화합물 또는 실시양태 1 내지 17 중 어느 하나, 또는 그의 제약상 허용되는 염, 화학식 (C')의 링커 또는 실시양태 33 내지 47 중 어느 하나, 및 화학식 (E')의 면역접합체 또는 실시양태 62 내지 72 중 어느 하나, 또는 실시양태 87 내지 144 중 어느 하나.
실시양태 146.
각각의 t는 독립적으로 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 또는 25로부터 선택되는 것인
화학식 (A')의 화합물 또는 실시양태 1 내지 17 중 어느 하나, 또는 그의 제약상 허용되는 염, 화학식 (C')의 링커 또는 실시양태 33 내지 47 중 어느 하나, 및 화학식 (E')의 면역접합체 또는 실시양태 62 내지 72 중 어느 하나, 또는 실시양태 87 내지 144 중 어느 하나.
실시양태 147.
각각의 t는 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 및 18로부터 선택되는 것인
화학식 (A')의 화합물 또는 실시양태 1 내지 17 중 어느 하나, 또는 그의 제약상 허용되는 염, 화학식 (C')의 링커 또는 실시양태 33 내지 47 중 어느 하나, 및 화학식 (E')의 면역접합체 또는 실시양태 62 내지 72 중 어느 하나, 또는 실시양태 87 내지 144 중 어느 하나.
실시양태 148. y는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 또는 14인 화학식 (E')의 면역접합체 또는 실시양태 62 내지 72 중 어느 하나, 또는 실시양태 87 내지 147 중 어느 하나.
실시양태 149. y는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 또는 12인 화학식 (E')의 면역접합체 또는 실시양태 62 내지 72 중 어느 하나, 또는 실시양태 87 내지 147 중 어느 하나.
실시양태 150. y는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10인 화학식 (E')의 면역접합체 또는 실시양태 62 내지 72 중 어느 하나, 또는 실시양태 87 내지 147 중 어느 하나.
실시양태 151. y는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 또는 8인 화학식 (E')의 면역접합체 또는 실시양태 62 내지 72 중 어느 하나, 또는 실시양태 87 내지 147 중 어느 하나.
실시양태 152. y는 1, 2, 3, 4, 5 또는 6인 화학식 (E')의 면역접합체 또는 실시양태 62 내지 72 중 어느 하나, 또는 실시양태 87 내지 147 중 어느 하나.
실시양태 153. y는 1, 2, 3 또는 4인 화학식 (E')의 면역접합체 또는 실시양태 62 내지 72 중 어느 하나, 또는 실시양태 87 내지 147 중 어느 하나.
실시양태 154. y는 1 또는 2인 화학식 (E')의 면역접합체 또는 실시양태 62 내지 72 중 어느 하나, 또는 실시양태 87 내지 147 중 어느 하나.
실시양태 155. y는 2인 화학식 (E')의 면역접합체 또는 실시양태 62 내지 72 중 어느 하나, 또는 실시양태 87 내지 147 중 어느 하나.
실시양태 156. y는 4인 화학식 (E')의 면역접합체 또는 실시양태 62 내지 72 중 어느 하나, 또는 실시양태 87 내지 147 중 어느 하나.
실시양태 157. y는 6인 화학식 (E')의 면역접합체 또는 실시양태 62 내지 72 중 어느 하나, 또는 실시양태 87 내지 147 중 어느 하나.
실시양태 158. y는 8인 화학식 (E')의 면역접합체 또는 실시양태 62 내지 72 중 어느 하나, 또는 실시양태 87 내지 147 중 어느 하나.
실시양태 159. D는 면역접합체로부터 방출되는 경우 Bcl-xL 억제제인 화학식 (A')의 화합물 또는 실시양태 1 내지 31 중 어느 하나, 또는 그의 제약상 허용되는 염, 화학식 (E')의 면역접합체 또는 실시양태 62 내지 72 중 어느 하나, 또는 실시양태 87 내지 158 중 어느 하나.
다른 링커 기
본원에 개시된 Bcl-xL 억제제의 ADC 또는 면역접합체를 제조하는데 적합한 링커 기의 다른 예는 국제 출원 공개, 예컨대 WO2018200812, WO2017214456, WO2017214458, WO2017214462, WO2017214233, WO2017214282, WO2017214301, WO2017214322, WO2017214335, WO2017214339, WO2016094509, WO2016094517 및 WO2016094505에 개시된 것들을 포함하며, 이들 각각의 내용은 그 전문이 참조로 포함된다.
예를 들어, 본원에 개시된 Bcl-xL 억제제의 면역접합체는 다음으로부터 선택되는 링커-페이로드 ("-L-D") 구조를 가질 수 있다:
Figure pct00591
여기서:
Lc는 링커 성분이고, 각각의 Lc는 독립적으로 본원에 개시된 바와 같은 링커 성분으로부터 선택되고;
x는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 및 20으로부터 선택되는 정수이고;
y는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 및 20으로부터 선택되는 정수이고;
p는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 및 10으로부터 선택되는 정수이고;
D는 본원에 개시된 Bcl-xL 억제제이고;
각각의 절단 요소 (CE)는 자기-희생적 스페이서, 및 산-유도된 절단, 펩티다제-유도된 절단, 에스테라제-유도된 절단, 글리코시다제 유도된 절단, 포스포디에스테라제 유도된 절단, 포스파타제 유도된 절단, 프로테아제 유도된 절단, 리파제 유도된 절단 또는 디술피드 결합 절단으로부터 선택되는 절단에 감수성인 기로부터 독립적으로 선택된다.
일부 실시양태에서, L은 다음으로부터 선택되는 구조를 갖거나 또는 L은 다음으로부터 선택되는 구조적 구성요소를 포함한다:
Figure pct00592
Figure pct00593
Figure pct00594
일부 실시양태에서, Lc는 링커 성분이고, 각각의 Lc는 독립적으로
Figure pct00595
로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, 링커 L은 다음으로부터 선택되는 링커 성분을 포함하고:
-**C(=O)O(CH2)mNR11C(=O)(CH2)m-; -**C(=O)O(CH2)mNR11C(=O)(CH2)mO(CH2)m-;
-**C(=O)O(CH2)mNR11C(=O)X1aX2aC(=O)(CH2)m-;
-**C(=O)OC(R12)2(CH2)mNR11C(=O)X1aX2aC(=O)(CH2)m-;
-**C(=O)O(CH2)mNR11C(=O)X1aX2aC(=O)(CH2)mO(CH2)m-;
-**C(=O)O(CH2)mNR11C(=O)X1aX2aC(=O)(CH2)mO(CH2)mC(=O)-;
-**C(=O)O(CH2)mNR11C(=O)X4C(=O)NR11(CH2)mNR11C(=O)(CH2)mO(CH2)m-;
-**C(=O)O(CH2)mNR11C(=O)X5C(=O)(CH2)mNR11C(=O)(CH2)m-;
-**C(=O)X4C(=O)NR11(CH2)mNR11C(=O)(CH2)mO(CH2)m-;
-**C(=O)(CH2)mNR11C(=O)X1aX2aC(=O)(CH2)m-;
-**C(=O)O(CH2)mX6C(=O)X1aX2aC(=O)(CH2)m-;
-**C(=O)(CH2)mNR11C(=O)((CH2)mO)n(CH2)m-
-**C(=O)O(CH2)mX6C(=O)(CH2)m-; -**C(=O)O(CH2)mX6C(=O)(CH2)mO(CH2)m-;
-**C(=O)O(CH2)mX6C(=O)X1aX2aC(=O)(CH2)m-;
-**C(=O)O(CH2)mX6C(=O)X1aX2aC(=O)(CH2)mO(CH2)m-;
-**C(=O)O(CH2)mX6C(=O)X1aX2aC(=O)(CH2)mO(CH2)mC(=O)-;
-**C(=O)O(CH2)mX6C(=O)X4C(=O)NR11(CH2)mNR11C(=O)(CH2)mO(CH2)m-;
-**C(=O)X4C(=O)X6(CH2)mNR11C(=O)(CH2)mO(CH2)m-;
-**C(=O)(CH2)mX6C(=O)X1aX2aC(=O)(CH2)m-;
-**C(=O)O((CH2)mO)n(CH2)mNR11C(=O)X5C(=O)(CH2)m-;
-**C(=O)O((CH2)mO)n(CH2)mNR11C(=O)X5C(=O)(CH2)mNR11C(=O)(CH2)m-;
-**C(=O)O((CH2)mO)n(CH2)mNR11C(=O)X5C(=O)(CH2)mX3(CH2)m-;
-**C(=O)O((CH2)mO)n(CH2)mNR11C(=O)X5C(=O)((CH2)mO)n(CH2)m-;
-**C(=O)O((CH2)mO)n(CH2)mNR11C(=O)X5C(=O)((CH2)mO)n(CH2)mNR11C(=O)(CH2)m-;
-**C(=O)O((CH2)mO)n(CH2)mNR11C(=O)X5C(=O)((CH2)mO)n(CH2)mNR11C(=O)(CH2)mX3(CH2)m-;
-**C(=O)O((CH2)mO)n(CH2)mNR11C(=O))X5C(=O)((CH2)mO)n(CH2)mX3(CH2)m-;
-**C(=O)O((CH2)mO)n(CH2)mNR11C(=O)X5C(=O)(CH2)mNR11C(=O)((CH2)mO)n(CH2)m-;
-**C(=O)O((CH2)mO)n(CH2)mNR11C(=O)X5C(=O)(CH2)mNR11C(=O)((CH2)mO)n(CH2)mX3(CH2)m-;
-**C(=O)O((CH2)mO)n(CH2)mNR11C(=O)X5(CH2)mX3(CH2)m-;
-**C(=O)O((CH2)mO)n(CH2)mNR11C(=O)X5((CH2)mO)n(CH2)m-;
-**C(=O)O((CH2)mO)n(CH2)mNR11C(=O)X5((CH2)mO)n(CH2)mNR11C(=O)(CH2)m-;
-**C(=O)O((CH2)mO)n(CH2)mNR11C(=O)X5((CH2)mO)n(CH2)mNR11C(=O)(CH2)mX3(CH2)m-;
-**C(=O)O((CH2)mO)n(CH2)mNR11C(=O)X5((CH2)mO)n(CH2)mX3(CH2)m-;
-**C(=O)O((CH2)mO)n(CH2)mNR11C(=O)X5(CH2)mNR11((CH2)mO)n(CH2)m-;
-**C(=O)O((CH2)mO)n(CH2)mNR11C(=O)X5C(=O)(CH2)mNR11((CH2)mO)n(CH2)mX3(CH2)m-;
-**C(=O)O((CH2)mO)n(CH2)mNR11C(=O)X5(CH2)m-;
-**C(=O)O((CH2)mO)n(CH2)mNR11C(=O)X5C(=O)((CH2)mO)n(CH2)m-;
-**C(=O)O((CH2)mO)n(CH2)mNR11C(=O)X5(CH2)mX3(CH2)m-; -**C(=O)O(CH2)m-;
-**C(=O)O((CH2)mO)n(CH2)m-; -**C(=O)O(CH2)mNR11(CH2)m-;
-**C(=O)O(CH2)mNR11(CH2)mC(=O)X2aX1aC(=O)-;
-**C(=O)O(CH2)mX3(CH2)m-; -**C(=O)O((CH2)mO)n(CH2)mX3(CH2)m-;
-**C(=O)O((CH2)mO)n(CH2)mNR11C(=O)(CH2)m-; -**C(=O)O(CH2)mNR11C(=O(CH2)mX3(CH2)m-;
-**C(=O)O((CH2)mO)n(CH2)mNR11C(=O)(CH2)mX3(CH2)m-;
-**C(=O)O((CH2)mO)nX3(CH2)m-; -**C(=O)O((CH2)mO)n(CH2)mX3(CH2)m-;
-**C(=O)O((CH2)mO)n(CH2)mC(=O)NR11(CH2)m-; -**C(=O)O(CH2)mC(R12)2-;
-**C(=O)OCH2)mC(R12)2SS(CH2)mNR11C(=O)(CH2)m-, 및
-**C(=O)O(CH2)mC(=O)NR11(CH2)m- (여기서, **는 약물 모이어티 (D)에 대한 부착 지점을 나타내고, 다른 말단은 R100, 즉 본원에 기재된 바와 같은 커플링 기에 연결될 수 있음);
여기서:
X1a는
Figure pct00596
이고, 여기서 *는 X2a에 대한 부착 지점을 나타내고;
X2a는
Figure pct00597
로부터 선택되고; 여기서 *는 X1a에 대한 부착 지점을 나타내며;
X3은
Figure pct00598
이고;
X4는 -O(CH2)nSSC(R12)2(CH2)n- 또는 -(CH2)nC(R12)2SS(CH2)nO-이고;
X5는
Figure pct00599
이고, 여기서 **는 약물 모이어티를 향한 배향을 나타내고;
X6은
Figure pct00600
이고, 여기서 **는 약물 모이어티를 향한 배향을 나타내고;
각각의 R11은 독립적으로 H 및 C1-C6알킬로부터 선택되고;
각각의 R12는 독립적으로 H 및 C1-C6알킬로부터 선택되고;
각각의 m은 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 및 10으로부터 선택되고,
각각의 n은 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 및 18로부터 선택된다.
접합 방법
본 발명은 본 발명의 링커-약물 기를 항체 또는 항체 단편에 접합시켜 1개 이상의 친수성 모이어티를 갖는 링커를 포함하는 항체 약물 접합체를 생성하는 다양한 방법을 제공한다.
화학식 (E')의 항체 약물 접합체의 형성을 위한 일반적 반응식이 하기 반응식 2에 제시된다:
<반응식 2>
Figure pct00601
여기서, RG2는 상용성 R1 기와 반응하여 상응하는 R100 기를 형성하는 반응성 기이다 (이러한 기는 표 8 및 표 9에 예시됨). D, R1, L1, Lp, L2, L3, R2, A, G, Ab, y 및 R100은 본원에 정의된 바와 같다.
반응식 3은 화학식 (E')의 항체 약물 접합체의 형성을 위한 이러한 일반적 접근법을 추가로 예시하며, 여기서 항체는 R1 기 (본원에 정의된 바와 같음)와 반응하여 링커-약물 기를 R100 기 (본원에 정의된 바와 같음)를 통해 항체에 공유 부착시키는 반응성 기 (RG2)를 포함한다. 예시적 목적을 위해, 반응식 3만이 4개의 RG2 기를 갖는 항체를 나타낸다.
<반응식 3>
Figure pct00602
한 측면에서, 링커-약물 기는 항체 내의 변형된 시스테인 잔기를 통해 항체에 접합된다 (예를 들어 WO2014/124316 참조). 반응식 4는 항체 내의 조작된 시스테인 잔기로부터 생성된 유리 티올 기가 R1 기 (여기서, R1은 말레이미드임)와 반응하여 R100 기 (여기서, R100은 숙신이미드 고리임)를 통해 링커-약물 기를 항체에 공유 부착시키는 화학식 (E')의 항체 약물 접합체의 형성에 대한 이러한 접근법을 예시한다. 예시적 목적을 위해, 반응식 4만이 4개의 유리 티올 기를 갖는 항체를 나타낸다.
<반응식 4>
Figure pct00603
또 다른 측면에서, 링커-약물 기는 항체 내의 리신 잔기를 통해 항체에 접합된다. 반응식 5는 항체 내 리신 잔기로부터의 유리 아민 기가 R1 기 (여기서, R1은 NHS 에스테르, 펜타플루오로페닐 또는 테트라플루오로페닐임)와 반응하여 R100 기 (여기서, R100은 아미드임)를 통해 링커-약물 기를 항체에 공유 부착시키는 화학식 (E')의 항체 약물 접합체의 형성에 대한 이러한 접근법을 예시한다. 예시적 목적을 위해, 단지 반응식 5만이 4개의 아민 기를 갖는 항체를 나타낸다.
<반응식 5>
Figure pct00604
또 다른 측면에서, 링커-약물 기는 항체의 자연 발생 디술피드 가교에서의 옥심 가교의 형성을 통해 항체에 접합된다. 옥심 가교는 항체의 쇄간 디술피드 가교의 환원 및 1,3-디할로아세톤 (예를 들어, 1,3-디클로로아세톤)을 사용한 재-가교에 의해 케톤 가교를 초기에 생성함으로써 형성된다. 히드록실 아민을 포함하는 링커-약물 기와의 후속 반응은 이에 의해 링커-약물 기를 항체에 부착시키는 옥심 연결 (옥심 가교)을 형성한다 (예를 들어, WO2014/083505 참조). 반응식 6은 화학식 (E')의 항체 약물 접합체의 형성을 위한 이러한 접근법을 예시한다.
<반응식 6>
Figure pct00605
화학식 (F')의 항체 약물 접합체의 형성을 위한 일반적 반응식이 하기 반응식 7에 제시된다:
<반응식 7>
Figure pct00606
여기서, RG2는 상용성 R1 기와 반응하여 상응하는 R100 기를 형성하는 반응성 기이다 (이러한 기는 표 8 및 표 9에 예시됨). D, R1, L1, Lp, Ab, y 및 R100은 본원에 정의된 바와 같다.
반응식 8은 화학식 (F')의 항체 약물 접합체의 형성을 위한 이러한 일반적 접근법을 추가로 예시하며, 여기서 항체는 R1 기 (본원에 정의된 바와 같음)와 반응하여 R100 기 (본원에 정의된 바와 같음)를 통해 링커-약물 기를 항체에 공유 부착시키는 반응성 기 (RG2)를 포함한다. 예시적 목적을 위해, 반응식 8만이 4개의 RG2 기를 갖는 항체를 나타낸다.
<반응식 8>
Figure pct00607
한 측면에서, 링커-약물 기는 항체 내의 변형된 시스테인 잔기를 통해 항체에 접합된다 (예를 들어 WO2014/124316 참조). 반응식 9는 항체 내의 조작된 시스테인 잔기로부터 생성된 유리 티올 기가 R1 기 (여기서, R1은 말레이미드임)와 반응하여 R100 기 (여기서, R100은 숙신이미드 고리임)를 통해 링커-약물 기를 항체에 공유 부착시키는 화학식 (F')의 항체 약물 접합체의 형성에 대한 이러한 접근법을 예시한다. 예시적 목적을 위해, 반응식 9만이 4개의 유리 티올 기를 갖는 항체를 나타낸다.
<반응식 9>
Figure pct00608
또 다른 측면에서, 링커-약물 기는 항체 내의 리신 잔기를 통해 항체에 접합된다. 반응식 10은 항체 내의 리신 잔기로부터의 유리 아민 기가 R1 기 (여기서, R1은 NHS 에스테르, 펜타플루오로페닐 또는 테트라플루오로페닐임)와 반응하여 R100 기 (여기서, R100은 아미드임)를 통해 링커-약물 기를 항체에 공유 부착시키는 화학식 (F')의 항체 약물 접합체의 형성에 대한 이러한 접근법을 예시한다. 예시적 목적을 위해, 반응식 10만이 4개의 아민 기를 갖는 항체를 나타낸다.
<반응식 10>
Figure pct00609
또 다른 측면에서, 링커-약물 기는 항체의 자연 발생 디술피드 가교에서의 옥심 가교의 형성을 통해 항체에 접합된다. 옥심 가교는 항체의 쇄간 디술피드 가교의 환원 및 1,3-디할로아세톤 (예를 들어, 1,3-디클로로아세톤)을 사용한 재-가교에 의해 케톤 가교를 초기에 생성함으로써 형성된다. 히드록실 아민을 포함하는 링커-약물 기와의 후속 반응은 이에 의해 링커-약물 기를 항체에 부착시키는 옥심 연결 (옥심 가교)을 형성한다 (예를 들어, WO2014/083505 참조). 반응식 11은 화학식 (F')의 항체 약물 접합체의 형성을 위한 이러한 접근법을 예시한다.
<반응식 11>
Figure pct00610
또한, 본 발명의 항체 접합체를 평가하기 위한 분석 방법론의 일부 측면에 대한 프로토콜이 제공된다. 이러한 분석 방법론 및 결과는 접합체가 유리한 특성, 예를 들어 그를 보다 제조하기 쉽게, 환자에게 보다 투여하기 쉽게, 보다 효과적이게 및/또는 잠재적으로 환자에게 보다 안전하게 만들 특성을 갖는 것을 입증할 수 있다. 한 예는 크기 배제 크로마토그래피 (SEC)에 의한 분자 크기의 결정이고, 여기서 샘플 내의 목적하는 항체 종의 양은 샘플 내에 존재하는 고분자량 오염물 (예를 들어, 이량체, 다량체 또는 응집된 항체) 또는 저분자량 오염물 (예를 들어, 항체 단편, 분해 산물 또는 개별 항체 쇄)의 양에 비해 결정된다. 일반적으로, 예를 들어 응집체가 항체 샘플의 다른 특성, 예컨대 비제한적으로 클리어런스율, 면역원성 및 독성에 미치는 영향으로 인해 보다 많은 양의 단량체 및 보다 적은 양의 예를 들어 응집된 항체를 갖는 것이 바람직하다. 추가의 예는 소수성 상호작용 크로마토그래피 (HIC)에 의한 소수성의 결정이며, 여기서 샘플의 소수성은 공지된 특성의 표준 항체의 세트에 대해 평가된다. 일반적으로, 항체 샘플의 다른 특성, 예컨대 비제한적으로 응집, 시간 경과에 따른 응집, 표면에 대한 부착, 간독성, 클리어런스율 및 약동학적 노출에 대한 소수성의 영향으로 인해 낮은 소수성을 갖는 것이 바람직하다. 문헌 [Damle, N.K., Nat Biotechnol. 2008; 26(8):884-885]; [Singh, S.K., Pharm Res. 2015; 32(11):3541-71]을 참조한다. 소수성 상호작용 크로마토그래피에 의해 측정시, 보다 높은 소수성 지수 점수 (즉, HIC 칼럼으로부터의 보다 빠른 용리)는 접합체의 보다 낮은 소수성을 반영한다. 하기 실시예에 제시된 바와 같이, 대부분의 시험된 항체 접합체는 0.8 초과의 소수성 지수를 나타냈다. 일부 실시양태에서, 소수성 상호작용 크로마토그래피에 의한 결정시 0.8 이상의 소수성 지수를 갖는 항체 접합체가 제공된다.
<실시예>
하기 실시예는 본 개시내용의 예시적 실시양태를 제공한다. 관련 기술분야의 통상의 기술자는 본 개시내용의 취지 또는 범주를 변경시키지 않으면서 수행될 수 있는 수많은 변형 및 변경을 인식할 것이다. 이러한 변형 및 변화는 본 개시내용의 범주 내에 포괄된다. 제공된 실시예는 어떠한 방식으로도 본 개시내용을 제한하지 않는다.
실시예 1. Bcl-xL 페이로드의 합성 및 특징화
예시적인 페이로드를 본 실시예에 기재된 예시적인 방법을 사용하여 합성하였다. 상업적 공급원으로부터 수득된 모든 시약을 추가 정제 없이 사용하였다. 무수 용매를 상업적 공급원으로부터 입수하고, 추가 건조 없이 사용하였다.
칼럼 크로마토그래피: 자동화 플래쉬 칼럼 크로마토그래피는 이스코 콤비플래쉬 (CombiFlash)® Rf 200 또는 콤비플래쉬® Rf + 루멘™ 상에서 레디셉 (RediSep)® Rf 정상 실리카 플래쉬 칼럼 (35-70 μm, 60 Å), 레디셉 Rf 골드 (Gold)® 정상 실리카 고성능 칼럼 (20-40 μm, 60 Å), 레디셉® Rf 역상 C18 칼럼 (40-63 μm, 60 Å), 또는 레디셉 Rf 골드® 역상 C18 고성능 칼럼 (20-40 μm, 100 Å)을 사용하여 수행하였다.
TLC: 박층 크로마토그래피는 머크 타입 60 F254 실리카-겔로 코팅된 5 x 10 cm 플레이트로 수행하였다.
마이크로웨이브 반응: 마이크로웨이브 가열은 CEM 디스커버 (Discover)® SP, 또는 안톤 파르 (Anton Paar) 모노웨이브 마이크로웨이브 반응기를 사용하여 수행하였다.
NMR: 1H-NMR 측정은 용매로서 DMSO-d6 또는 CDCl3를 사용하여 브루커 아반스 (Bruker Avance) III 500 MHz 분광계, 브루커 아반스 III 400 MHz 분광계 또는 브루커 DPX-400 분광계 상에서 수행하였다. 1H NMR 데이터는 내부 표준으로서 용매의 잔류 피크 (DMSO-d6의 경우 2.50 ppm 및 CDCl3의 경우 7.26 ppm)를 사용하여 백만분율 (ppm)로 주어진 델타 값의 형태이다. 분할 패턴은 s (단일선), d (이중선), t (삼중선), q (사중선), quint (오중선), sept (칠중선), m (다중선), br s (넓은 단일선), dd (이중선의 이중선), td (이중선의 삼중선), dt (삼중선의 이중선), ddd (이중선의 이중선의 이중선)로서 지정된다.
분석용 LC-MS: 본 발명의 특정 화합물을 양이온 또는 음이온 전기분무 이온화 모드로 작동하는 애질런트 6140 사중극자 LC/MS를 사용하여 애질런트 HP1200 상에서 고성능 액체 크로마토그래피-질량 분광분석법 (HPLC-MS)에 의해 특징화하였다. 분자량 스캔 범위는 100 내지 1350이다. 210 nm 및 254 nm에서 평행 UV 검출을 수행하였다. 샘플을 5 μL 루프 주사와 함께 ACN 중 또는 THF/H2O (1 : 1) 중 1 mM 용액으로서 공급하였다. LCMS 분석을 2개의 기기 상에서 수행하였으며, 이들 중 하나는 염기성 용리액으로 작동시키고, 다른 하나는 산성 용리액으로 작동시켰다.
염기성 LCMS: 제미니 (Gemini)-NX, 3 μm, C18, 50 mm x 3.00 mm i.d. 칼럼, 23℃, 1 mL min-1의 유량, 5 mM 중탄산암모늄 (용매 A) 및 아세토니트릴 (용매 B) 사용, 100% 용매 A로부터 출발하여 다양한/특정 지속기간에 걸쳐 100% 용매 B에서 종료하는 구배.
산성 LCMS: 키나텍스 (KINATEX) XB-C18-100A, 2.6 μm, 50 mm*2.1 mm 칼럼, 40℃, 1 mL min-1의 유량, 아세토니트릴 중 0.02% v/v 수성 포름산 (용매 A) 및 0.02% v/v 포름산 (용매 B) 사용, 100% 용매 A로부터 출발하여 다양한/특정 지속기간에 걸쳐 100% 용매 B에서 종료하는 구배.
본 발명의 특정의 다른 화합물을 하기와 같은 구체적 명명된 방법 하에 HPLC-MS에 의해 특징화하였다. 이들 방법 모두에 대해, UV 검출은 230, 254 및 270 nm에서 다이오드 어레이 검출기에 의해 수행하였다. 샘플 주입 부피는 1 μL였다. HPLC-등급 용매를 사용하고, 하기 이동상의 유량 및 백분율 혼합물을 한정함으로써 구배 용리를 실행하였다:
용매 A: 10 mM 수성 포름산암모늄 + 0.04% (v/v) 포름산
용매 B: 아세토니트릴 + 5.3% (v/v) 용매 A + 0.04% (v/v) 포름산.
이들 명명된 방법에 대한 체류 시간 (RT)은 분으로 보고된다. 이온화는 양성 모드, 음성 모드 또는 양성-음성 스위칭 모드로 기록된다. 개별 방법에 대한 구체적인 세부사항은 하기와 같다.
LCMS-V-B 방법: ESI-APCI 다중모드 공급원을 갖는 애질런트 MSD 6140 단일 사중극자에 연결된 애질런트 1200 SL 시리즈 기기를 사용하거나 (방법 LCMS-V-B1 및 LCMS-V-B2) 또는 ESI-제트 스트림 공급원을 갖는 애질런트 TOF 6230에 연결된 애질런트 1290 인피니티 II 시리즈 기기를 사용함 (방법 LCMS-V-B1); 칼럼: 써모 아큐코어 2.6 μm, C18, 50 mm x 2.1 mm, 55℃. 방법 LCMS-V-B1 및 LCMS-V-B2에 대한 구배 세부사항을 하기 표에 나타내었다:
Figure pct00611
LCMS-V-C 방법: ESI-APCI 다중모드 공급원을 갖는 애질런트 MSD 6140 단일 사중극자에 연결된 애질런트 1200 SL 시리즈 기기를 사용함; 칼럼: 애질런트 조르박스 이클립스 플러스 3.5 μm, C18(2), 30 mm x 2.1 mm, 35℃. 방법 LCMS-V-C에 대한 구배 세부사항은 하기 표에 제시된다:
Figure pct00612
정제용 HPLC: 본 발명의 특정 화합물을 제미니-NX(Gemini-NX)® 10 μM C18, 250 mm x 50 mm i.d. 칼럼과 UV 다이오드 어레이 검출 (210 - 400 nm)을 사용하여 아르멘 스팟 액체 크로마토그래피 또는 텔레다인 (Teledyne) EZ 시스템 상에서 용리액으로서 25 mM 수성 NH4HCO3 용액 및 MeCN 또는 물 중 0.1% TFA 및 MeCN을 사용하여 118 mL min-1의 유량으로 구동시키면서 고성능 액체 크로마토그래피 (HPLC)에 의해 정제하였다.
본 발명의 특정의 다른 화합물을 하기와 같은 구체적 명명된 방법 하에 HPLC에 의해 정제하였다:
HPLC-V-A 방법: 이들을 워터스 프랙션링스 (FractionLynx) MS 자동정제 시스템 상에서 페노메넥스 (Phenomenex)로부터의 제미니 (Gemini)® 5 μm C18(2), 100 mm x 20 mm i.d. 칼럼과 UV 다이오드 어레이 검출 (210-400 nm) 및 질량-지정 수집을 사용하여 20 cm3min-1의 유량으로 구동시키면서 수행하였다. 질량 분광계는 150 내지 1000의 분자량 스캔 범위를 갖는, 양성 또는 음성 이온 전기분무 이온화 모드로 작동하는 워터스 마이크로매스 ZQ2000 분광계였다.
방법 HPLC-V-A1 (pH 4): 용매 A: 10 mM 수성 아세트산암모늄 + 0.08% (v/v) 포름산; 용매 B: 아세토니트릴 + 5% (v/v) 용매 A + 0.08% (v/v) 포름산
방법 HPLC-V-A2 (pH 9): 용매 A: 10 mM 수성 아세트산암모늄 + 0.08% (v/v) 진한 암모니아; 용매 B: 아세토니트릴 + 5% (v/v) 용매 A + 0.08% (v/v) 진한 암모니아
HPLC-V-B 방법: AccQPrep HP125 (텔레다인 이스코 (Teledyne ISCO)) 시스템 상에서 페노메넥스 (Phenomenex)로부터의 제미니 (Gemini)® NX 5 μm C18(2), 150 mm x 21.2 mm i.d. 칼럼과 UV (214 및 254 nm) 및 ELS 검출을 사용하여 20 cm3min-1의 유량으로 구동시키면서 수행하였다.
방법 HPLC-V-B1 (pH 4): 용매 A: 물 + 0.08% (v/v) 포름산; 용매 B: 아세토니트릴 + 0.08% (v/v) 포름산.
방법 HPLC-V-B2 (pH 9): 용매 A: 물 + 0.08% (v/v) 진한 암모니아; 용매 B: 아세토니트릴 + 0.08% (v/v) 진한 암모니아.
방법 HPLC-V-B3 (중성): 용매 A: 물; 용매 B: 아세토니트릴.
분석용 GC-MS: 조합 기체 크로마토그래피 및 저해상도 질량 분광측정법 (GC-MS)은 운반 기체로서의 헬륨 및 0.25 μm HP-5MS 코팅을 갖는 15 m x 0.25 mm 칼럼을 사용하여 애질런트 6850 기체 크로마토그래프 및 애질런트 5975C 질량 분광계 상에서 수행하였다. 이온 공급원: EI +, 70 eV, 230℃, 사중극자: 150℃, 계면: 300℃.
고해상도 MS: 고해상도 질량 스펙트럼은 양이온 모드의 제트 스트림 전기분무 이온 공급원이 장착된 애질런트 6230 비행 시간 질량 분광계 상에서 획득하였다. 0.5 μl의 주입을 애질런트 (Agilent) 1290 인피니티 (Infinity) HPLC 시스템을 사용하여 유량 1.5 ml/분 (물 및 아세토니트릴 중 5mM 포름산암모늄 구배 프로그램)으로 질량 분광계로 보냈다. 제트 스트림 파라미터: 건조 기체 (N2) 유량 및 온도: 각각 8.0 l/분 및 325℃; 네뷸라이저 기체 (N2) 압력: 30 psi; 모세관 전압: 3000 V; 시스 기체 유량 및 온도: 325℃ 및 10.0 l/분; TOFMS 파라미터: 프래그멘터 전압: 100 V; 스키머 전위: 60 V; OCT 1 RF Vpp:750 V. 풀-스캔 질량 스펙트럼을 995.6 ms/스펙트럼의 획득 속도로 m/z 범위 105-1700에 걸쳐 획득하고, 애질런트 매스헌터 B.04.00 소프트웨어에 의해 프로세싱하였다.
화학적 명명: IUPAC-선호 명칭은 마빈스케치 (MarvinSketch) 또는 엑셀용 제이켐 (JChem for Excel)(제이켐 버전 16.6.13 - 18.22.3) 내의 켐액손 (ChemAxon)의 스트럭쳐 투 네임 (Structure to Name) (s2n) 기능을 사용하거나, 또는 바이오비아 (Biovia)® 드로우 (Draw) 4.2에 의해 제공된 화학적 명명 기능을 사용하여 생성하였다.
약어
명명된 일반적 절차
하기는 후속 제조예에서 명칭으로 지칭되는 대표적인 실험 절차이다.
소노가시라 일반적 절차
THF (5 mL/mmol) 중 1 당량의 아릴 할로게나이드, 2 당량의 아세틸렌, 0.05 당량의 Pd(PPh3)2Cl2, 0.05 당량의 CuI, 및 DIPA (1 mL/mmol)의 혼합물을 60℃에서 유지하였다. 적절한 전환에 도달한 후, 휘발성 물질을 감압 하에 제거하고, 조 중간체를 플래쉬 크로마토그래피에 의해 용리액으로서 헵탄/ EtOAc를 사용하여 정제하였다.
HFIP를 사용한 탈보호 일반적 절차
HFIP (10 mL/mmol) 중 기질을 압력 병에서 100-120℃에서 유지하였다. 적절한 전환에 도달한 후, 휘발성 물질을 감압 하에 제거하고, 조 중간체를 플래쉬 크로마토그래피에 의해 용리액으로서 헵탄/ EtOAc를 사용하여 정제하였다.
탈보호 및 가수분해 일반적 절차
MeCN (15 mL/mmol) 중 1 당량의 기질 및 100 당량의 HFxPyr의 혼합물을 60℃에서 교반하였다. 적절한 전환에 도달한 후, 휘발성 물질을 감압 하에 제거하고, 잔류물을 THF - 물 (30 mL/mmol)의 1:1 혼합물 중에 현탁시키고, 150 당량의 LiOH x H2O를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 교반하였다. 적절한 전환에 도달한 후, 휘발성 물질을 감압 하에 제거하고; 조 생성물을 플래쉬 크로마토그래피에 의해 용리액으로서 DCM 및 MeOH (1.2% NH3 함유)를 사용하여 정제하였다. 일부 대안적 절차에서, THF - 물의 1:1 혼합물을 1,4-디옥산 - 물의 1:1 혼합물로 대체하였다.
알킬화 일반적 절차
아세톤 (5 mL/mmol) 중 1 당량의 페놀/카르바메이트, 1-2 당량의 알킬 아이오다이드/브로마이드, 및 2-3 당량의 Cs2CO3의 혼합물을 페놀의 경우 실온에서, 카르바메이트의 경우 55℃에서 교반하였다. 적절한 전환에 도달한 후, 휘발성 물질을 감압 하에 제거하고, 조 중간체를 플래쉬 크로마토그래피 (예를 들어 용리액으로서 헵탄/ EtOAc 사용) 또는 역상 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하였다.
토실레이트를 사용한 알킬화 일반적 절차
오븐-건조된 바이알에 PTFE-코팅된 자기 교반 막대를 장착하고, MeCN (5 mL/mmol) 중에 현탁된 1 당량의 토실레이트 및 5 당량의 적절한 아민을 채웠다. 이어서 반응 혼합물을 50℃로 가온하고, 추가의 전환이 관찰되지 않을 때까지 그 온도에서 교반하였다. 반응 혼합물을 DCM으로 희석한 다음, 이것을 DCM 전처리된 실리카 겔 칼럼 상에 주입하였다. 이어서 이것을 플래쉬 크로마토그래피에 의해 용리액으로서 DCM 및 MeOH (1.2% NH3)를 사용하여 정제하였다.
부흐발트 일반적 절차 I
CyOH (5 mL/mmol) 중 1 당량의 클로로-기질, 2 당량의 1,3-벤조티아졸-2-아민, 0.1 당량의 Pd2(dba)3, 0.2 당량의 XantPhos 및 3 당량의 DIPEA의 혼합물을 140℃에서 유지하였다. 적절한 전환에 도달한 후, 반응 혼합물을 DCM (10 mL/mmol)으로 희석하고, 사전컨디셔닝된 실리카 겔 칼럼 상에 주입하고, 플래쉬 크로마토그래피 (예를 들어 용리액으로서 헵탄/ EtOAc 사용)를 통해 정제하였다.
부흐발트 일반적 절차 II
1,4-디옥산 (5 mL/mmol) 중에 현탁시킨 클로로 화합물, 2 당량의 1,3-벤조티아졸-2-아민, 10 mol%의 JosiPhos Pd (G3) 및 3 당량의 DIPE의 혼합물을 추가의 전환이 관찰되지 않을 때까지 환류 하에 교반하였다. 셀라이트를 반응 혼합물에 첨가하고, 휘발성 물질을 감압 하에 제거하였다. 이어서 이것을 120 g 실리카 겔 칼럼 상에서 플래쉬 크로마토그래피에 의해 용리액으로서 헵탄-EtOAc 또는 DCM-MeOH (1.2% NH3)를 사용하여 정제하였다.
부흐발트 일반적 절차 III
1,4-디옥산 (5 mL/mmol) 중 1 당량의 티아졸 아민, 1.2-1.5 당량의 (Z)-N-(6-클로로-4-메틸-피리다진-3-일)-3-(2-트리메틸실릴에톡시메틸)-1,3-벤조티아졸-2-이민, 3 당량의 Cs2CO3, 0.1 당량의 Pd2(dba)3, 0.2 당량의 XantPhos 및 3 당량의 DIPEA의 혼합물을 환류 하에 유지하였다. 적절한 전환에 도달한 후, 휘발성 물질을 감압 하에 제거하고, 조 중간체를 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하였다.
미츠노부 일반적 절차 I
톨루엔 (5 mL/mmol) 중 1 당량의 지방족 알콜, 1 당량의 카르바메이트/페놀 및 1 당량의 트리페닐포스핀의 혼합물에 1 당량의 디-tert-부틸 아조디카르복실레이트를 첨가하였다. 혼합물을 카르바메이트의 경우 50℃에서, 페놀의 경우 실온에서 교반하였다. 적절한 전환에 도달한 후, 휘발성 물질을 감압 하에 제거하고, 조 중간체를 플래쉬 크로마토그래피에 의해 용리액으로서 헵탄/ EtOAc를 사용하여 정제하였다.
미츠노부 일반적 절차 II
THF 또는 톨루엔 (5 mL/mmol) 중 1.0-1.5 당량의 지방족 알콜, 1 당량의 카르바메이트/페놀, 및 1-2 당량의 트리페닐포스핀의 혼합물에 1-3 당량의 디tert부틸 아조디카르복실레이트/디이소프로필 아조디카르복실레이트를 1 부분으로 첨가하였다. 필요한 경우, 혼합물을 카르바메이트의 경우 실온 또는 50℃에서, 페놀의 경우 실온에서 교반하였다. 적절한 전환에 도달한 후, 휘발성 물질을 감압 하에 제거하고, 조 중간체를 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하였다.
4급 염 탈보호 일반적 절차
적절한 4급 염의 THF (5 mL/mmol) 용액에 3 당량 TBAF를 첨가한 다음, 이것을 추가의 전환이 관찰되지 않을 때까지 실온에서 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 증발 건조시켰다. 건조 MeCN (15 mL/mmol) 중 1 당량의 탈실릴화 4급 염의 현탁액에 100 당량의 HF x Pyr을 첨가한 다음, 60℃에서 교반하였다. 적절한 전환에 도달한 후, 휘발성 물질을 감압 하에 제거하고, 잔류물을 THF - 물 (30 mL/mmol)의 1:1 혼합물 중에 현탁시키고, 150 당량의 LiOH x H2O를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 교반하였다. 적절한 전환에 도달한 후, 휘발성 물질을 감압 하에 제거하였다. 조 생성물을 플래쉬 크로마토그래피에 의해 용리액으로서 DCM 및 MeOH (1.2% NH3 함유)를 사용하여 정제하였다.
프로파르길 아민 제조 일반적 절차
오븐-건조된 바이알에 PTFE-코팅된 자기 교반 막대를 장착하고, 여기에 2 당량의 PPh3 및 2 당량의 이미다졸을 채운 다음, DCM (5 mL/mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물에 2 당량의 아이오딘을 조금씩 첨가한 다음, 실온에서 15분 동안 교반하였다. 생성된 혼합물에 1 당량의 적절한 알콜을 DCM 중에 용해시키고, 추가의 전환이 관찰되지 않을 때까지 실온에서 교반하였다. 생성된 아이오도 화합물에 20 당량의 적절한 아민을 첨가한 다음, 실온에서 30분 동안 교반하면서, 완전한 전환이 관찰되었다. 셀라이트를 반응 혼합물에 첨가하고, 휘발성 물질을 감압 하에 제거하였다. 이어서 이것을 플래쉬 크로마토그래피에 의해 DCM 및 MeOH (1.2% NH3) 용리액을 사용하여 정제하였다.
은 촉매된 프로파르길 아민 제조 일반적 절차
24 ml 바이알에 교반용 막대를 장착하고, 1 당량의 2-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-5-[3-(4-에티닐-2-플루오로-페녹시)프로필]티아졸-4-카르복실산, 20 당량의 파라포름알데히드/아세톤 및 20 당량의 적절한 아민을 충전하고, 추가의 전환이 관찰되지 않을 때까지 20 mol% 토실레이트의 존재 하에 80℃에서 건조 에탄올 (5 ml/mmol) 중에서 교반하였다. 셀라이트를 반응 혼합물에 첨가하고, 휘발성 물질을 감압 하에 제거하였다. 이어서 이것을 플래쉬 크로마토그래피에 의해 용리액으로서 DCM 및 MeOH (1.2% NH3)를 사용하여 정제하였다.
가수분해 일반적 절차
적절한 메틸 에스테르를 THF - 물 (5 mL/mmol)의 1:1 혼합물 중에 현탁시키고, 10 당량의 LiOH x H2O를 첨가하고, 혼합물을 50℃에서 교반하였다. 적절한 전환에 도달한 후, 휘발성 물질을 감압 하에 제거하고; 조 생성물을 플래쉬 크로마토그래피에 의해 용리액으로서 DCM 및 MeOH (1.2% NH3 함유)를 사용하여 정제하였다.
아민 치환 및 가수분해 일반적 절차 I
아세토니트릴 및 N-메틸-2-피롤리돈의 1:1 혼합물 (10 ml/mmol) 중 제조예 12 및 13 중 어느 것으로부터의 생성물에 적절한 아민 (3-10 당량)을 첨가하고, 반응 혼합물을 50℃에서 2-24시간 동안 교반하였다. 치환 생성물을 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 용리액으로서 DCM 및 MeOH을 사용함)에 의해 정제한 후, 생성물을 THF (10 ml/mmol) 중에 용해시키고, 물 (2 ml/mmol) 및 LiOHxH2O (3-5 당량)를 첨가하였다. 이어서 반응 혼합물을 20-40℃에서 1-4시간 동안 교반하였다. 가수분해된 생성물을 정제용 HPLC (용리액으로서 아세토니트릴 및 5mM 수성 NH4HCO3 용액을 사용함)에 의해 정제하여 목적 생성물을 수득하였다.
아민 치환 및 가수분해 일반적 절차 II
아세토니트릴 및 N-메틸-2-피롤리돈의 1:1 혼합물 (10 ml/mmol) 중 제조예 14_01로부터의 생성물에 적절한 아민 (3-10 당량)을 첨가하고, 혼합물을 50℃에서 2-24시간 동안 교반하였다. 실온에서 피리딘 중 70% HF (50-100 당량)를 첨가한 후, 혼합물을 4-18시간 동안 교반하였다. 치환 생성물을 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 용리액으로서 DCM 및 MeOH을 사용함)에 의해 정제한 후, 생성물을 THF (8 ml/mmol) 중에 용해시키고, 물 (2 ml/mmol) 및 LiOHxH2O (5 당량)를 첨가하고, 20-40℃에서 1-4시간 동안 교반하였다. 가수분해된 생성물을 정제용 HPLC (용리액으로서 아세토니트릴 및 5 mM 수성 NH4HCO3 용액을 사용함)에 의해 정제하여 목적 생성물을 수득하였다.
아민 치환 및 가수분해 일반적 절차 III
아세토니트릴 (13 ml/mmol) 중 제조예 13 또는 제조예 16으로부터의 생성물에 적절한 아민 (3 당량) 및 Na2CO3 (12 당량)를 첨가하고, 반응 혼합물을 마이크로웨이브 반응기에서 120℃에서 1.5-3시간 동안 교반하였다. KOH (3 당량)를 첨가한 후, 반응 혼합물을 120℃에서 0.75-1시간 동안 교반하였다. 가수분해된 생성물을 정제용 HPLC 또는 HILIC 크로마토그래피 (용리액으로서 아세토니트릴 및 5mM 수성 NH4HCO3 용액을 사용함)에 의해 정제하여 목적 생성물을 수득하였다.
알킬화, 탈보호 및 가수분해 일반적 절차
아세토니트릴 (3 mL/mmol) 중 3급 아민 (1 당량) 및 알킬화제 (10 당량)의 혼합물을 실온에서 교반하였다. 적절한 전환에 도달한 후, 휘발성 물질을 감압 하에 제거하고, 역상 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하고, 필요한 경우에, 달리 잔류물을 아세토니트릴 (3 mL/mmol) 중에 직접 용해시키고, HFxPyr (100 당량)을 첨가하고, 혼합물을 60℃에서 교반하였다. 적절한 전환에 도달한 후, 휘발성 물질을 감압 하에 제거하고, 잔류물을 1,4-디옥산 - 물의 1:1 혼합물 (10 mL/mmol) 중에 현탁시키고, LiOHxH2O (150 당량)를 첨가하고, 혼합물을 60℃에서 교반하였다. 목적 생성물로의 적절한 전환에 도달한 후, 휘발성 물질을 감압 하에 제거하고, 조 생성물을 역상 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하였다.
제조예 1a: 메틸 2-(tert-부톡시카르보닐아미노)-5-[3-(2-플루오로-4-아이오도-페녹시)프로필]티아졸-4-카르복실레이트
단계 A: 메틸 2-(tert-부톡시카르보닐아미노)-5-아이오도-티아졸-4-카르복실레이트
50.00 g 메틸 2-(tert-부톡시카르보닐아미노)티아졸-4-카르복실레이트 (193.55 mmol, 1 당량)를 600 mL 건조 MeCN 중에 현탁시켰다. 52.25 g N-아이오도 숙신이미드 (232.30 mmol,)를 첨가하고, 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다.
반응 혼합물을 포화 염수로 희석한 다음, 이것을 EtOAc로 추출하였다. 합한 유기 층을 1 M Na2S2O3에 이어서 염수로 다시 추출하였다. 이어서 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 감압 하에 농축시켰다. 조 생성물을 플래쉬 크로마토그래피에 의해 용리액으로서 헵탄을 사용하여 정제하여 목적 생성물 60 g (156 mmol, 80% 수율)을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 12.03/11.06 (br s), 3.78 (s, 3H), 1.47 (s, 9H); 13C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ ppm 153.8, 82.5, 77.7, 52.3, 28.3; HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C10H14IN2O4S에 대한 계산치: 384.9713; 실측치 384.9708.
단계 B: 메틸 2-(tert-부톡시카르보닐아미노)-5-(3-히드록시프로프-1-이닐)티아졸-4-카르복실레이트
500 mL 오븐-건조된 1구 둥근 바닥 플라스크에 PTFE-코팅된 자기 교반 막대를 장착하고, 환류 응축기를 장착하였다. 이것을 단계 A로부터의 생성물 9.6 g (25 mmol, 1 당량), 프로프-2-인-1-올 2.80 g (2.91 mL, 50 mmol, 2 당량) 및 DIPA 36.10 g (50 mL, 356.8 mmol, 14.27 당량)으로 충전한 다음, 건조 THF 125 mL을 첨가하고, 시스템을 아르곤으로 플러싱하였다. 불활성 분위기 하에 5분 동안 교반한 후, 549 mg Pd(PPh3)2Cl2 (1.25 mmol, 0.05 당량) 및 238 mg CuI (1.25 mmol, 0.05 당량)를 첨가하였다. 이어서 생성된 혼합물을 60℃로 가온하고, 추가의 전환이 관찰되지 않을 때까지 그 온도에서 교반하였다. 셀라이트를 반응 혼합물에 첨가하고, 휘발성 물질을 감압 하에 제거하였다. 이어서 이것을 플래쉬 크로마토그래피에 의해 용리액으로서 헵탄 및 EtOAc를 사용하여 정제하여 목적 생성물 7.30 g (23 mmol, 93% 수율)을 황색 고체로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 12.1 (br s, 1H), 5.45 (t, 1H), 4.36 (d, 2H), 3.79 (s, 3H), 1.48 (s, 9H); 13C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ ppm 12.1 (br s, 1H), 5.45 (t, 1H), 4.36 (d, 2H), 3.79 (s, 3H), 1.48 (s, 9H); HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C13H17N2O5S에 대한 계산치: 313.0852, 실측치 313.0866.
단계 C: 메틸 2-(tert-부톡시카르보닐아미노)-5-(3-히드록시프로필)티아졸-4-카르복실레이트
PTFE-코팅된 자기 교반 막대가 구비된 1 L 오븐-건조된 압력 병에 340 mL 에탄올 중 단계 B로부터의 생성물 44.75 g (143.3 mmol, 1 당량), 7.62 Pd/C (7.17 mmol, 0.05 당량)를 채운 다음, 수소화 시스템을 사용하여 질소 분위기 하에 두었다. 그 후, 이것을 4 bar H2 기체로 충전하고, 실온에서 밤새 교반하였다. 완전한 전환이 관찰되었지만, 올레핀 생성물만이 형성되었다. 촉매를 셀라이트 패드를 통해 여과한 후, 전체 절차를 5 mol%의 새로운 촉매로 반복하였다. 생성된 혼합물을 밤새 교반하여 완전한 전환을 얻었다. 셀라이트를 반응 혼합물에 첨가하고, 휘발성 물질을 감압 하에 제거하였다. 이어서 이것을 플래쉬 크로마토그래피 칼럼에 의해 용리액으로서 헵탄 및 EtOAc를 사용하여 정제하여 목적 생성물 31.9 g (101 mmol, 70.4% 수율)을 담황색 결정으로서 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6): δ ppm 11.61 (br s, 1H), 4.54 (t, 1H), 3.76 (s, 3H), 3.43 (m, 2H), 3.09 (t, 2H), 1.74 (m, 2H), 1.46 (s, 9H); 13C NMR (125 MHz, DMSO-d6) δ ppm 162.8, 143.1, 135.4, 60.3, 51.9, 34.5, 28.3, 23.4; HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C13H21N2O5S에 대한 계산치: 317.1165, 실측치 317.1164 (M+H).
단계 D: 메틸 2-(tert-부톡시카르보닐아미노)-5-[3-(2-플루오로-4-아이오도-페녹시)프로필]티아졸-4-카르복실레이트
PTFE-코팅된 교반용 자석 막대가 구비된 250 mL 오븐-건조된 1구 둥근 바닥 플라스크에 2-플루오로-4-아이오도-페놀 3.40 g (14 mmol, 1 당량), 단계 C로부터의 생성물 5.00 g (16 mmol, 1.1 당량) 및 건조 톨루엔 71 mL 중에 용해된 PPh3 4.10 g (16 mmol, 1.1 당량)을 채웠다. 질소 분위기 하에 5분 동안 교반한 후, 3.10 mL DIAD (3.20 g, 16 mmol, 1.1 당량)를 반응 혼합물을 가온하면서 1 부분으로 첨가하였다. 이어서 반응 혼합물을 50℃까지 가열하고, 반응이 완전한 전환에 도달하였을 때 그 온도에서 30분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 사전컨디셔닝된 실리카 겔 칼럼 상에 직접 주입한 다음, 이것을 플래쉬 크로마토그래피에 의해 용리액으로서 헵탄 및 EtOAc를 사용하여 정제하였다. 조 생성물을 MeOH로부터 결정화하여 목적 생성물 4.64 g (9.24 mmol, 66% 수율)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 11.64 (br s, 1H), 7.59 (dd, 1H), 7.45 (dd, 1H), 6.98 (t, 1H), 4.06 (t, 2H), 3.73 (s, 3H), 3.22 (t, 2H), 2.06 (m, 2H), 1.46 (s, 9H); 13C NMR (125 MHz, DMSO-d6) δ ppm 134, 124.9, 117.6, 68.2, 51.9, 30.5, 28.3, 23.2; HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C19H23N2O5FSI에 대한 계산치: 537.0350; 실측치 537.0348.
제조예 1c: 메틸 2-(tert-부톡시카르보닐아미노)-5-[3-[4-[3-(디메틸아미노)프로프-1-이닐]-2-플루오로-페녹시]프로필]티아졸-4-카르복실레이트
250 mL 오븐-건조된 1구 둥근 바닥 플라스크에 PTFE-코팅된 자기 교반 막대를 장착하고, 환류 응축기를 장착하였다. 여기에 5.36 g 제조예 1a (10 mmol, 1 당량), 1.66 g N,N-디메틸프로프-2-인-1-아민 (20 mmol, 2 당량) 및 20 mL DIPA (142.7 mmol, 14.27 당량)를 채운 다음, 50 mL 건조 THF를 첨가하고, 시스템을 아르곤으로 플러싱하였다. 불활성 분위기 하에 5분 동안 교반한 후, 220 mg Pd(PPh3)2Cl2 (0.5 mmol, 0.05 당량) 및 95 CuI (0.5 mmol, 0.05 당량)를 첨가하였다. 이어서 생성된 혼합물을 60℃로 가온하고, 추가의 전환이 관찰되지 않을 때까지 그 온도에서 교반하였다. 셀라이트를 반응 혼합물에 첨가하고, 휘발성 물질을 감압 하에 제거하였다. 이어서 이것을 플래쉬 크로마토그래피에 의해 용리액으로서 DCM 및 MeOH (1.2% NH3)를 사용하여 정제하여 목적 생성물 4.5 g (7.8 mmol, 78% 수율)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 11.66 (s, 1H), 7.29 (dd, 1H), 7.19 (m, 1H), 7.12 (t, 1H), 4.09 (t, 2H), 3.73 (s, 3H), 3.44 (s, 2H), 3.23 (t, 2H), 2.24 (s, 6H), 2.07 (m, 2H), 1.45 (s, 9H); 13C NMR (125 MHz, DMSO-d6) δ ppm 162.8, 147.3, 129, 119.2, 115.4, 84.3, 68, 51.9, 48.1, 44.2, 30.6, 28.3, 23.2; HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C24H31FN3O5S에 대한 계산치: 492.1962; 실측치 492.1956 (M+H).
제조예 2a: 3-(3,6-디클로로-5-메틸-피리다진-4-일)프로판-1-올
단계 A: [(펜트-4-인-1-일옥시)메틸]벤젠
오븐-건조된 플라스크에 THF (100 mL) 중 4-펜틴-1-올 (11.1 mL, 119 mmol, 1 당량)을 첨가하고, 용액을 0℃로 냉각시켰다. 수소화나트륨 (60% 분산액; 7.13 g, 178 mmol, 1.5 당량)을 조금씩 첨가하고, 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반되도록 한 후, 벤질 브로마이드 (15.6 mL, 131 mmol, 1.1 당량)를 적가하였다. 혼합물을 주위 온도로 가온되도록 하고, 16시간 동안 교반한 다음, 0℃로 냉각시키고, 포화 수성 염화암모늄 (30 mL)으로 켄칭하고, 물 (30 mL)로 희석하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트 (2 x 150 mL)로 추출하고, 합한 유기 추출물을 묽은 수성 수산화암모늄 (150 mL) 및 염수 (100 mL)로 연속적으로 세척하고, 건조 (황산마그네슘)시키고, 진공 하에 농축시켰다. 자동화 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (콤비플래쉬 Rf, 330 g 레디셉™ 실리카 카트리지)에 의해 이소-헵탄 중 0 - 10% 에틸 아세테이트의 구배로 용리시키면서 정제하여 목적 생성물을 황색 액체 (19.5 g, 112 mmol, 94%)로서 수득하였다. LC/MS (C12H14O) 175 [M+H]+; RT 1.28 (LCMS-V-B1). 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 7.37 - 7.32 (m, 4H), 7.31 - 7.27 (m, 1H), 4.52 (s, 2H), 3.58 (t, J = 6.1 Hz, 2H), 2.32 (td, J = 7.1, 2.6 Hz, 2H), 1.95 (t, J = 2.7 Hz, 1H), 1.83 (tt, J = 7.1, 6.2 Hz, 2H).
단계 B: [(헥스-4-인-1-일옥시)메틸]벤젠
오븐-건조된 플라스크에 단계 A로부터의 생성물 (19.5 g, 112 mmol, 1 당량) 및 테트라히드로푸란 (200 mL)을 첨가하고, 용액을 -78℃로 냉각시켰다. n-부틸리튬 (66.9 mL, 135 mmol, 1.2 당량)을 30분에 걸쳐 적가하고, 반응물을 1시간 동안 교반한 다음, 아이오도메탄 (10.5 mL, 168 mmol, 1.5 당량)을 적가하고, 혼합물을 0℃로 1시간에 걸쳐 가온되도록 하였다. 반응물을 포화 수성 염화암모늄 (40 mL)의 첨가에 의해 켄칭하고, 물 (40 mL)로 희석하고, 에틸 아세테이트 (3 x 100 mL)로 추출하고, 합한 유기 추출물을 2M 수성 티오황산나트륨 (200 mL) 및 염수 (200 mL)로 연속적으로 세척하고, 건조 (황산마그네슘)시키고, 진공 하에 농축시켰다. 자동화 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (콤비플래쉬 Rf, 330 g 레디셉™ 실리카 카트리지)에 의해 이소-헵탄 중 0 - 10% 에틸 아세테이트의 구배로 용리시키면서 정제하여 목적 생성물을 황색 액체 (19.2 g, 0.1 mol, 91%)로서 수득하였다. LC/MS (C13H16O) 189 [M+H]+; RT 1.34 (LCMS-V-B1). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.41 - 7.23 (m, 5H), 4.46 (s, 2H), 3.48 (t, J = 6.3 Hz, 2H), 2.23 - 2.14 (m, 2H), 1.72 (s, 3H), 1.70 - 1.65 (m, 2H).
단계 C: 4-[3-(벤질옥시)프로필]-3,6-디클로로-5-메틸피리다진
테트라히드로푸란 (30 mL) 중 3,6-디클로로-1,2,4,5-테트라진 (5 g, 33.1 mmol, 1 당량) 및 단계 B로부터의 생성물 (7.48 g, 39.8 mmol, 1.2 당량)의 용액을 밀봉된 플라스크에서 160℃에서 19시간 동안 가열하였다. 반응물을 주위 온도로 냉각되도록 한 다음, 진공 하에 농축시켰다. 자동화 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (콤비플래쉬 Rf, 220 g 레디셉™ 실리카 카트리지)에 의해 이소-헵탄 중 0 - 30% 에틸 아세테이트의 구배로 용리시키면서 정제하여 목적 생성물을 오렌지색 오일 (7.32 g, 23.5 mmol, 71%)로서 수득하였다. LC/MS (C15H16Cl2N2O) 311 [M+H]+; RT 1.35 (LCMS-V-B1). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.45 - 7.18 (m, 5H), 4.48 (s, 2H), 3.53 (t, J = 5.9 Hz, 2H), 2.96 - 2.83 (m, 2H), 2.42 (s, 3H), 1.88 - 1.69 (m, 2H).
단계 D: 3-(3,6-디클로로-5-메틸피리다진-4-일)프로판-1-올
디클로로메탄 (100 mL) 중 단계 C로부터의 생성물 (7.32 g, 23.5 mmol, 1 당량)의 냉각된 용액에 삼염화붕소 용액 (디클로로메탄 중 1 M; 58.8 mL, 58.8 mmol, 2.5 당량)을 적가하고, 혼합물을 주위 온도에서 1시간 동안 교반되도록 하였다. 반응물을 메탄올의 첨가에 의해 켄칭하고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 디클로로메탄 (100 mL)과 포화 수성 중탄산나트륨 (150 mL) 사이에 분배하고, 유기 상을 염수 (150 mL)로 세척하고, 건조 (황산마그네슘)시키고, 진공 하에 농축시켰다. 자동화 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (콤비플래쉬 Rf, 80 g 레디셉™ 실리카 카트리지)에 의해 이소-헵탄 중 0 - 80% 에틸 아세테이트의 구배로 용리시키면서 정제하여 목적 생성물을 황색 오일 (4.19 g, 19 mmol, 81%)로서 수득하였다. LC/MS (C8H10Cl2N2O) 221 [M+H]+; RT 0.84 (LCMS-V-B1). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 4.67 (t, J = 5.1 Hz, 1H), 3.49 (td, J = 6.0, 5.1 Hz, 2H), 2.91 - 2.80 (m, 2H), 2.43 (s, 3H), 1.72 - 1.59 (m, 2H).
제조예 3a: 메틸 2-(3-클로로-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일)-5-[3-(2-플루오로-4-아이오도-페녹시)프로필]티아졸-4-카르복실레이트
단계 A: 메틸 2-{[(tert-부톡시)카르보닐][3-(3,6-디클로로-5-메틸피리다진-4-일)프로필]아미노}-5-[3-(2-플루오로-4-아이오도페녹시)프로필]-1,3-티아졸-4-카르복실레이트
적절한 카르바메이트로서의 4.85 g 제조예 1a (9.04 mmol, 1 당량) 및 적절한 알콜로서의 2 g 제조예 2a (9.04 mmol, 1 당량)로부터 출발하여 미츠노부 일반적 절차 I을 사용하여 목적 생성물 4.6 g (69% 수율)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.56 (dd, 1H), 7.44 (dm, 1H), 7.08 (m, 2H), 6.96 (t, 1H), 4.05 (t, 2H), 3.75 (s, 3H), 3.21 (t, 2H), 2.82 (m, 2H), 2.4 (s, 3H), 2.06 (m, 2H), 1.88 (m, 2H), 1.48 (s, 9H); 13C NMR (125 MHz, DMSO-d6) δ ppm 162.7, 157.6, 156.7, 156.5/153.2, 152.2, 147, 142.1, 139.8, 134, 124.9, 117.6, 84, 82.4, 68.1, 52.1, 46.1, 30.4, 28.1, 27.5, 25.8, 23.1, 16.4; HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C27H31Cl2FIN4O5S에 대한 계산치: 739.0415, 실측치 739.0395.
단계 B: 메틸 2-[3-(3,6-디클로로-5-메틸-피리다진-4-일)프로필아미노]-5-[3-(2-플루오로-4-아이오도-페녹시)프로필]티아졸-4-카르복실레이트
적절한 카르바메이트로서의 단계 A로부터의 생성물로부터 출발하여 HFIPA를 사용한 탈보호 일반적 절차를 사용하여 목적 생성물 3.70 g (97% 수율)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.71 (t, 1 H), 7.59 (dd, 1 H), 7.44 (dm, 1 H), 6.96 (t, 1 H), 4.03 (t, 2 H), 3.7 (s, 3 H), 3.29 (m, 2 H), 3.11 (t, 2 H), 2.84 (m, 2 H), 2.39 (s, 3 H), 2 (m, 2 H), 1.76 (m, 2 H); 13C NMR (125 MHz, DMSO-d6) δ ppm 164.6, 163, 152.3, 147.1, 134.1, 124.8, 117.6, 82.4, 68.1, 51.9, 44, 30.7, 28, 26.9, 23.3, 16.4; HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C22H23Cl2FIN4O3S에 대한 계산치: 638.9891, 실측치 638.9888.
단계 C: 메틸 2-(3-클로로-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일)-5-[3-(2-플루오로-4-아이오도-페녹시)프로필]티아졸-4-카르복실레이트
단계 B로부터의 생성물 3 g (4.69 mmol, 1 당량) 및 탄산세슘 1.81 g (9.3853 mmol, 2 당량)의 현탁액을 건조 1,4-디옥산 25 mL 중에서 80℃에서 3시간 동안 교반하여 완전한 전환에 도달하였다. 반응 혼합물을 셀라이트로 직접 증발시킨 다음, 용리액으로서 DCM-MeOH를 사용하여 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물 2.67 g (94% 수율)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.57 (dd, 1H), 7.43 (dm, 1H), 6.97 (t, 1H), 4.23 (t, 2 H), 4.08 (t, 2 H), 3.77 (s, 3 H), 3.22 (t, 2 H), 2.86 (t, 2 H), 2.29 (s, 3 H), 2.08 (m, 2 H), 2.03 (m, 2 H); 13C NMR (125 MHz, DMSO-d6) δ ppm 163.1, 155.4, 152.2, 151.6, 151.2, 147, 142.5, 136, 134.8, 134, 128.9, 124.9, 117.6, 82.3, 68.4, 51.9, 46.3, 30.7, 24.2, 23, 19.7, 15.7; HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C22H22ClFIN4O3S에 대한 계산치: 603.0124, 실측치 603.0108.
제조예 3c: 2-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-5-[3-(4-에티닐-2-플루오로-페녹시)프로필]티아졸-4-카르복실산
단계 A: 메틸 2-(3-클로로-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일)-5-[3-[2-플루오로-4-(2-트리메틸실릴에티닐)페녹시]프로필]티아졸-4-카르복실레이트
250 mL 오븐-건조된 1구 둥근 바닥 플라스크에 PTFE-코팅된 자기 교반 막대를 장착하고, 환류 응축기를 장착하였다. 여기에 제조예 3a (8.29 mmol, 1 당량) 5 g, 에티닐 (트리메틸)실란 (16.58 mmol, 2 당량) 2.34 mL 및 DIPEA 10 mL을 채운 다음, 건조 THF 40 mL을 첨가하고, 시스템을 아르곤으로 플러싱하였다. 불활성 분위기 하에 5분 동안 교반한 후, 182 mg Pd(PPh3)2Cl2 (0.41 mmol, 0.05 당량) 및 79 mg (0.41 mmol, 0.05 당량)을 첨가하였다. 이어서 생성된 혼합물을 60℃로 가온하고, 그 온도에서 2시간 동안 교반하여 완전한 전환에 도달하였다. 셀라이트를 반응 혼합물에 첨가하고, 휘발성 물질을 감압 하에 제거하였다. 이어서 이것을 플래쉬 크로마토그래피에 의해 용리액으로서 헵탄-EtOAc를 사용하여 정제하여 목적 생성물 4.26 g (89% 수율)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.31 (dd, 1H), 7.23 (dn, 1H), 7.13 (t, 1H), 4.25 (t, 2H), 4.12 (t, 2H), 3.77 (s, 3H), 3.24 (t, 2H), 2.87 (t, 2H), 2.31 (s, 3H), 2.1 (m, 2H), 2.03 (m, 2H), 0.21 (s, 9H); 13C NMR (125 MHz, DMSO-d6) δ ppm 163.0, 155.3, 151.7, 151.3, 136.1, 129.4, 129.0, 119.4, 115.3, 104.6, 93.7, 68.2, 51.9, 46.3, 30.7, 24.1, 23.0, 19.7, 15.7, 0.4; HRMS-ESI (m/z): [M]+ C27H30ClFN4O3SSi에 대한 계산치: 572.1481, 실측치 572.1480.
단계 B: 메틸 2-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-5-[3-[2-플루오로-4-(2-트리메틸실릴에티닐)페녹시]프로필]티아졸-4-카르복실레이트
PTFE-코팅된 자기 교반 막대가 구비된 100 mL 오븐-건조된 1구 둥근 바닥 플라스크에 단계 A로부터의 생성물 4.25 g (7.4 mmol, 1.0 당량), 1,3-벤조티아졸-2-아민 2.23 g (14.8 mmol, 2.0 당량) 및 DIPEA 3.87 mL (2.87 mg, 22.2 mmol, 3.0 당량)를 채운 다음, 시클로헥산올 40 mL을 첨가하고, 시스템을 아르곤으로 플러싱하였다. 불활성 분위기 하에 5분 동안 교반한 후, 679 mg Pd2(dba)3 (0.74 mmol, 0.10 당량) 및 858 mg XantPhos (1.48 mmol, 0.20 당량)를 첨가하였다. 이어서 생성된 혼합물을 140℃로 가온하고, 그 온도에서 30분 동안 교반하여 완전한 전환에 도달하였다. 반응 혼합물을 DCM으로 희석하고, 전처리된 실리카 겔 칼럼 상에 직접 주입한 다음, 이것을 플래쉬 크로마토그래피에 의해 용리액으로서 헵탄 및 EtOAc를 사용하여 정제하였다. 순수한 분획을 합하고, 감압 하에 농축시켜 목적 생성물 3.90 g (77% 수율)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 12.27/10.91 (brs, 1H), 8.1-7.1 (brm, 4H), 7.34 (dd, 1H), 7.24 (dm, 1H), 7.16 (t, 1H), 4.25 (t, 2H), 4.15 (t, 2H), 3.78 (s, 3H), 3.28 (t, 2H), 2.87 (t, 2H), 2.34 (s, 3H), 2.13 (m, 2H), 2.04 (m, 2H), 0.19 (s, 9H); HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C34H36FN6O3S2Si에 대한 계산치: 687.2038, 실측치 687.2020.
단계 C: 2-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-5-[3-(4-에티닐-2-플루오로-페녹시)프로필]티아졸-4-카르복실산
10 mL 오븐-건조된 1구 둥근 바닥 플라스크에 PTFE-코팅된 자기 교반 막대를 장착하고, 환류 응축기를 장착하였다. 여기에 THF/H2O (4 : 1) 2.5 mL 중에 용해된 단계 B로부터의 생성물 343 mg (0.5 mmol, 1.0 당량)을 채웠다. 이어서 105 mg LiOH x H2O (2.50 mmol, 5.0 당량)를 첨가하고, 생성된 혼합물을 60℃로 가열하고, 이 온도에서 4시간 동안 교반하였다. 반응이 완전한 전환에 도달하였다. 셀라이트 겔을 반응 혼합물에 첨가하고, 휘발성 물질을 감압 하에 제거하였다. 이어서 이것을 플래쉬 크로마토그래피에 의해 용리액으로서 DCM 및 MeOH (1.2% NH3)를 사용하여 정제하여 표제 화합물 200 mg (66% 수율)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.88 (d, 1H), 7.49 (br., 1H), 7.37 (t, 1H), 7.36 (dd, 1H), 7.25 (dm, 1H), 7.19 (t, 1H), 7.16 (t, 1H), 4.27 (t, 2H), 4.15 (t, 2H), 4.11 (s, 1H), 3.27 (t, 2H), 2.87 (t, 2H), 2.33 (s, 3H), 2.14 (m, 2H), 2.04 (m, 2H); 13C NMR (125 MHz, DMSO-d6) δ ppm 164.2, 151.5, 147.9, 129.4, 126.5, 122.5, 122.3, 119.5, 115.5, 114.5, 82.9, 80.5, 68.5, 46.2, 31.0, 23.9, 23.1, 20.3, 12.9; HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C30H26FN6O3S2에 대한 계산치: 601.1486, 실측치 601.1498.
제조예 3d: 메틸 2-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-5-[3-[2-플루오로-4-(3-히드록시프로프-1-이닐)페녹시]프로필]티아졸-4-카르복실레이트
단계 A: 메틸 5-[3-[4-[3-[tert-부틸 (디메틸)실릴]옥시프로프-1-이닐]-2-플루오로-페녹시]프로필]-2-(3-클로로-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일)티아졸-4-카르복실레이트
적절한 아세틸렌으로서 4.00 g의 제조예 3a (6.63 mmol, 1.0 당량) 및 2.26 g의 tert-부틸-디메틸-프로프-2-인옥시-실란 (13.27 mmol, 2 당량)으로부터 출발하여 소노가시라 일반적 절차를 사용하여 2.80 g의 목적 생성물 (65% 수율)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.27 (dd, 1H), 7.19 (dd, 1H), 7.14 (t, 1H), 4.51 (s, 1H), 4.25 (m, 2H), 4.12 (t, 2H), 3.77 (s, 3H), 3.24 (t, 2H), 2.87 (t, 2H), 2.3 (s, 3H), 2.1 (quint., 2H), 2.03 (m, 2H), 0.88 (s, 9H), 0.12 (s, 6H); 13C NMR (125 MHz, DMSO-d6) δ ppm 163.0, 128.9, 119.1, 115.5, 68.3, 52.1, 51.9, 46.3, 30.7, 26.2, 24.2, 23.0, 19.7, 15.7, -4.6; HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C31H39ClFN4O4SSi에 대한 계산치: 645.2128, 실측치 645.2120.
단계 B: 메틸 2-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-5-[3-[4-[3-[tert-부틸 (디메틸)실릴]옥시프로프-1-이닐]-2-플루오로-페녹시]프로필]티아졸-4-카르복실레이트
단계 A로부터의 생성물 2.8 g (4.34 mmol, 1.0 당량) 및 1,3-벤조티아졸-2-아민 1.30 g (8.67 mmol, 2.0 당량)으로부터 출발하여 부흐발트 일반적 절차 II를 사용하여 목적 생성물 2.1 g (64% 수율)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 12.25/10.91 (brs 1H), 7.88 (br, 1H), 7.51 (br, 1H), 7.37 (t, 1H), 7.29 (dd, 1H), 7.2 (t, 1H), 7.2 (dd, 1H), 7.17 (t, 1H), 4.49 (s, 2H), 4.25 (t, 2H), 4.14 (t, 2H), 3.77 (s, 3H), 3.27 (t, 2H), 2.86 (t, 2H), 2.32 (s, 3H), 2.13 (qn, 2H), 2.04 (qn, 2H), 0.87 (s, 9H), 0.1 (s, 6H); 13C NMR (125 MHz, DMSO-d6) δ ppm 163.2, 155.7, 151.6, 148.5, 147.6, 141.5, 128.9, 127.6, 126.5, 122.5, 122.3, 119.1, 116.9, 115.5, 114.8, 88.2, 84, 68.4, 52.1, 51.9, 46.4, 31, 26.2, 24, 23.1, 20.4, 12.9, -4.6; HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C38H44FN6O4S2Si에 대한 계산치: 759.2613, 실측치 759.2609.
단계 C: 메틸 2-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-5-[3-[2-플루오로-4-(3-히드록시프로프-1-이닐)페녹시]프로필]티아졸-4-카르복실레이트
100 mL 오븐-건조된 1구 둥근 바닥 플라스크에 PTFE-코팅된 자기 교반 막대를 장착하고, 환류 응축기를 장착하였다. 이것을 15 mL THF 중에 용해시킨 단계 B로부터의 생성물 2.10 g (2.76 mmol, 1.0 당량)으로 충전시켰다. 이어서 TBAF 3.32 mL (3.32 mmol, 1.2 당량, THF 중 1 M)를 시린지를 통해 2분의 기간에 걸쳐 적가하고, 그 온도에서 30분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 NH4Cl로 켄칭한 다음, 셀라이트로 직접 증발시키고, 이것을 플래쉬 크로마토그래피에 의해 용리액으로서 헵탄-EtOAc를 사용하여 정제하여 목적 생성물 1.6 g (90% 수율)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 11.14 (brs, 1H), 7.83 (brd, 1H), 7.49 (brs, 1H), 7.36 (m, 1H), 7.24 (dd, 1H), 7.19 (m, 1H), 7.18 (dm, 1H), 7.15 (t, 1H), 5.08 (t, 1H), 4.28 (m, 2H), 4.27 (d, 2H), 4.17 (t, 2H), 3.8 (s, 3H), 3.29 (m, 2H), 2.89 (m, 2H), 2.35 (s, 3H), 2.15 (m, 2H), 2.07 (m, 2H); HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C32H30FN6O4S2에 대한 계산치: 645.1748, 실측치 645.1738.
제조예 3f: 에틸 2-{3-[(1,3-벤조티아졸-2-일)아미노]-4-메틸-5H,6H,7H,8H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일}-1,3-티아졸-4-카르복실레이트
단계 A: 에틸 2-[(헥스-4-인-1-일)아미노]-1,3-티아졸-4-카르복실레이트
아세토니트릴 (16 mL) 중 에틸 2-브로모-1,3-티아졸-4-카르복실레이트 (1.17 g, 4.97 mmol, 1 당량)의 용액에 헥스-4-인-1-아민 (725 mg, 7.46 mmol, 1.5 당량) 및 트리에틸아민 (1.04 mL, 7.46 mmol, 1.5 당량)을 첨가하고, 혼합물을 마이크로웨이브 조사 하에 150℃에서 4시간 동안 가열하였다. 반응물을 에틸 아세테이트와 염수 사이에 분배하고, 유기 상을 건조 (황산마그네슘)시키고, 진공 하에 농축시켰다. 자동화 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (콤비플래쉬 Rf, 40 g 레디셉™ 실리카 카트리지)에 의해 이소-헵탄 중 0 - 60% 에틸 아세테이트의 구배로 용리시키면서 정제하여 목적 생성물을 베이지색 고체 (741 mg, 2.94 mmol, 59%)로서 수득하였다. LC/MS (C12H16N2O2S) 253 [M+H]+; RT 2.32 (LCMS-V-C).
단계 B: 에틸 2-{3-클로로-4-메틸-5H,6H,7H,8H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일}-1,3-티아졸-4-카르복실레이트
테트라히드로푸란 (15 mL) 중 3,6-디클로로-1,2,4,5-테트라진 (443 mg, 2.94 mmol, 1 당량)의 용액에 단계 A로부터의 생성물 (741 mg, 2.94 mmol, 1 당량)을 첨가하고, 혼합물을 밀봉된 튜브에서 110℃에서 밤새 가열하였다. 반응물을 진공 하에 농축시키고, 잔류물을 메탄올로 연화처리하고, 여과하고, 진공 하에 건조시켜 목적 생성물을 베이지색 고체 (607 mg, 1.79 mmol, 61%)로서 수득하였다. LC/MS (C14H15ClN4O2S) 339 [M+H]+; RT 2.41 (LCMS-V-C). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.06 (s, 1H), 4.38 - 4.25 (m, 4H), 2.92 (t, J = 6.3 Hz, 2H), 2.34 (s, 3H), 2.14 - 2.01(m, 2H), 1.31 (t, J = 7.1 Hz, 3H).
단계 C: 에틸 2-{3-[(1,3-벤조티아졸-2-일)아미노]-4-메틸-5H,6H,7H,8H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일}-1,3-티아졸-4-카르복실레이트
오븐-건조된 마이크로웨이브 바이알에 단계 B로부터의 생성물 (607 mg, 1.79 mmol, 1 당량), 2-아미노벤조티아졸 (404 mg, 2.69 mmol, 1.5 당량)), XantPhos (207 mg, 0.36 mmol, 0.2 당량), 탄산세슘 (1.17 g, 3.58 mmol, 2 당량) 및 1,4-디옥산 (36 mL)을 첨가하고, 용기를 배기시키고, 질소로 플러싱한 다음, 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐 (0)(164 mg, 0.18 mmol, 0.1 당량)을 첨가하고, 혼합물을 질소 (10분)로 폭기한 다음, 마이크로웨이브 조사 하에 150℃에서 4시간 동안 가열하였다. 반응물을 에틸 아세테이트로 희석하고, 셀라이트를 통해 여과한 다음, 염수로 세척하고, 건조 (황산마그네슘)시키고, 진공 하에 농축시켰다. 자동화 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (콤비플래쉬 Rf, 24 g 레디셉™ 실리카 카트리지)에 의해 이소-헵탄 중 0 - 100% 에틸 아세테이트의 구배로 용리시키면서 정제하여 고체를 수득하였으며, 이것을 디에틸 에테르로 연화처리하고, 여과하고, 진공 하에 건조시켜 목적 생성물을 황색 고체 (329 mg, 0.73 mmol, 41%)로서 수득하였다. LC/MS (C21H20N6O2S2) 453 [M+H]+; RT 2.73 (LCMS-V-C). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.99 (br s + s, 2H), 7.65 (br s, 1H), 7.43 - 7.31 (m, 1H), 7.28 - 7.15 (m, 1H), 4.35 - 4.25 (m, 4H), 2.96 - 2.85 (m, 2H), 2.36 (s, 3H), 2.15 - 2.00 (m, 2H), 1.32 (t, J = 7.1 Hz, 3H).
제조예 3g: 에틸 5-(3-히드록시프로필)-2-(4-메틸-3-{[(2Z)-3-{[2-(트리메틸실릴)에톡시]메틸}-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-2-일리덴]아미노}-5H,6H,7H,8H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일)-1,3-티아졸-4-카르복실레이트
단계 A: 에틸 2-(4-메틸-3-{[(2Z)-3-{[2-(트리메틸실릴)에톡시]메틸}-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-2-일리덴]아미노}-5H,6H,7H,8H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일)-1,3-티아졸-4-카르복실레이트
디메틸포름아미드 (700 mL) 중 제조예 3f로부터의 생성물 (11.7 g, 25.8 mmol, 1 당량)의 용액에 N,N-디이소프로필에틸아민 (13.5 mL, 77.4 mmol, 3 당량)을 첨가하였다. 5분 후, 혼합물을 0℃로 냉각시키고, 4-(디메틸아미노)피리딘 (630 mg, 5.16 mmol, 0.2 당량) 및 2-(트리메틸실릴)에톡시메틸 클로라이드 (13.6 mL, 77.4 mmol, 3 당량)를 첨가하고, 혼합물을 주위 온도에서 밤새 교반하였다. 반응물을 진공 하에 농축시킨 다음, 디클로로메탄과 염수 사이에 분배하고, 유기 상을 건조 (황산마그네슘)시키고, 진공 하에 농축시켰다. 자동화 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (콤비플래쉬 Rf, 330 g 레디셉™ 실리카 카트리지)에 의해 이소-헵탄 중 0 - 40% 에틸 아세테이트의 구배로 용리시키면서 정제하여 목적 생성물을 황색 고체 (9.61 g, 16.5 mmol, 64%)로서 수득하였다. LC/MS (C27H34N6O3SiS2) 583 [M+H]+; RT 2.90 (LCMS-V-C). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.99 (s, 1H), 7.82 (dd, J = 7.7, 1.1 Hz, 1H), 7.49 - 7.38 (m, 2H), 7.28 - 7.19 (m, 1H), 5.86 (s, 2H), 4.38 - 4.23 (m, 4H), 3.77 - 3.67 (m, 2H), 2.89 (t, J = 6.2 Hz, 2H), 2.38 (s, 3H), 2.13 - 2.01 (m, 2H), 1.31 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 0.91 (dd, J = 8.5, 7.4 Hz, 2H), -0.11 (s, 9H).
단계 B: 에틸 5-브로모-2-(4-메틸-3-{[(2Z)-3-{[2-(트리메틸실릴)에톡시]메틸}-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-2-일리덴]아미노}-5H,6H,7H,8H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일)-1,3-티아졸-4-카르복실레이트
디클로로메탄 (400 mL) 중 단계 A의 생성물 (9.61 g, 16.5 mmol, 1 당량)의 용액에 N-브로모숙신이미드 (3.52 g, 19.8 mmol, 1.2 당량)를 첨가하고, 혼합물을 주위 온도에서 밤새 교반하였다. 반응물을 디클로로메탄과 물 사이에 분배하고, 유기 상을 염수로 세척하고, 건조 (PTFE 상 분리기)시키고, 진공 하에 농축시켰다. 자동화 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (콤비플래쉬 Rf, 220 g 레디셉™ 실리카 카트리지)에 의해 이소-헵탄 중 0 - 40% 에틸 아세테이트의 구배로 용리시키면서 정제하여 목적 생성물을 황색 고체 (9.66 g, 14.6 mmol, 89%)로서 수득하였다. LC/MS (C27H33BrN6O3SiS2) 663 [M+H]+; RT 3.13 (LCMS-V-C). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.84 (dd, J = 7.5, 1.1 Hz, 1H), 7.59 - 7.38 (m, 2H), 7.24 (ddd, J = 8.3, 6.7, 1.7 Hz, 1H), 5.85 (s, 2H), 4.37 - 4.23 (m, 4H), 3.72 (dd, J = 8.5, 7.4 Hz, 2H), 2.87 (t, J = 6.2 Hz, 2H), 2.38 (s, 3H), 2.13 - 2.00 (m, 2H), 1.32 (t, 3H), 0.95 - 0.81 (m, 2H), -0.12 (s, 9H).
단계 C: 에틸 5-[(1E)-3-[(tert-부틸디메틸실릴)옥시]프로프-1-엔-1-일]-2-(4-메틸-3-{[(2Z)-3-{[2-(트리메틸실릴)에톡시]메틸}-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-2-일리덴]아미노}-5H,6H,7H,8H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일)-1,3-티아졸-4-카르복실레이트
오븐-건조된 밀봉된 플라스크에 단계 B로부터의 생성물 (9.66 g, 14.6 mmol, 1 당량), (E)-3-(tert-부틸디메틸실릴옥시)프로펜-1-일-보론산 피나콜 에스테르 (5.74 mL, 17.5 mmol, 1.2 당량), 탄산칼륨 (6.05 g, 43.8 mmol, 3 당량), [1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센]디클로로팔라듐 (II)(1.19 g, 1.46 mmol, 0.1 당량), 테트라히드로푸란 (360 mL) 및 물 (120 mL)을 첨가하고, 혼합물을 질소 (10분)로 폭기한 다음, 120℃에서 2시간 동안 가열하였다. 반응물을 에틸 아세테이트와 물 사이에 분배하고, 유기 층을 염수로 세척하고, 건조 (황산마그네슘)시키고, 진공 하에 농축시켰다. 자동화 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (콤비플래쉬 Rf, 220 g 레디셉™ 실리카 카트리지)에 의해 이소-헵탄 중 0 - 30% 에틸 아세테이트의 구배로 용리시키면서 정제하여 목적 생성물을 황색 고체 (6.46 g, 8.58 mmol, 59%)로서 수득하였다. LC/MS (C36H52N6O4Si2S2) 753 [M+H]+; RT 1.62 (LCMS-V-B2). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.80 (dd, J = 7.6, 1.0 Hz, 1H), 7.51 - 7.38 (m, 3H), 7.24 (ddd, J = 8.3, 6.8, 1.8 Hz, 1H), 6.28 (dt, J = 16.0, 4.3 Hz, 1H), 5.85 (s, 2H), 4.37 (dd, J = 4.4, 2.1 Hz, 2H), 4.35 - 4.25 (m, 4H), 3.72 (dd, J = 8.5, 7.4 Hz, 2H), 2.88 (t, J = 6.3 Hz, 2H), 2.37 (s, 3H), 2.09 - 1.99 (m, 2H), 1.31 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 0.93 (s, 9H), 0.92 - 0.83 (m, 2H), 0.11 ((s, 6H), -0.11 (s, 9H).
단계 D: 에틸 5-{3-[(tert-부틸디메틸실릴)옥시]프로필}-2-(4-메틸-3-{[(2Z)-3-{[2-(트리메틸실릴)에톡시]메틸}-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-2-일리덴]아미노}-5H,6H,7H,8H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일)-1,3-티아졸-4-카르복실레이트
에틸 아세테이트 (300 mL) 중 단계 C로부터의 생성물 (6.46 g, 8.58 mmol, 1 당량)의 용액에 질소 분위기 하에 산화백금 (IV) (390 mg, 1.72 mmol, 0.2 당량)을 첨가하였다. 용기를 배기시키고, 질소 (x3)로 재충전한 다음, 배기시키고, 수소의 분위기 하에 두고, 주위 온도에서 3일 동안 진탕시켰다. 반응물을 셀라이트를 통해 여과하고, 에틸 아세테이트로 용리시키고, 진공 하에 농축시켜 목적 생성물을 갈색 검 (6.72 g, 8.9 mmol, >100%)으로서 수득하였다. LC/MS (C36H54N6O4Si2S2) 755 [M+H]+; RT 1.67 (LCMS-V-B2). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.76 (d, 1H), 7.48 - 7.35 (m, 2H), 7.24 (ddd, J = 8.2, 6.5, 1.9 Hz, 1H), 5.84 (s, 2H), 4.33 - 4.22 (m, 4H), 3.76 - 3.62 (m, 4H), 3.15 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 2.87 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 2.37 (s, 3H), 2.10 - 1.98 (m, 3H), 1.91 - 1.79 (m, 2H), 1.31 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 0.95 - 0.85 (m, 11H), 0.06 (s, 6H), -0.12 (s, 9H).
단계 E: 에틸 5-(3-히드록시프로필)-2-(4-메틸-3-{[(2Z)-3-{[2-(트리메틸실릴)에톡시]메틸}-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-2-일리덴]아미노}-5H,6H,7H,8H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일)-1,3-티아졸-4-카르복실레이트
1,4-디옥산 (400 mL) 중 단계 D로부터의 생성물 (6.72 g, 8.9 mmol, 1 당량)의 용액에 염산 (디옥산 중 4M; 67 mL, 267 mmol, 30 당량)을 첨가하고, 혼합물을 주위 온도에서 1시간 동안 교반하였다. 반응물을 0℃로 냉각시키고, 1N 수성 수산화나트륨 (300 mL)으로 중화시킨 다음, 에틸 아세테이트와 물 사이에 분배하고, 유기 상을 건조 (황산마그네슘)시키고, 진공 하에 농축시켰다. 자동화 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (콤비플래쉬 Rf, 120 g 레디셉™ 실리카 카트리지)에 의해 이소-헵탄 중 0 - 80% 에틸 아세테이트의 구배로 용리시키면서 정제하여 고체를 수득하였으며, 이것을 디에틸 에테르로 연화처리하고, 여과하고, 진공 하에 건조시켜 목적 생성물을 백색 고체 (3.87 g, 6.04 mmol, 68%)로서 수득하였다. LC/MS (C30H40N6O4SiS2) 641 [M+H]+; RT 2.80 (LCMS-V-C). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.83 (dd, J = 7.6, 1.1 Hz, 1H), 7.48 - 7.37 (m, 2H), 7.23 (ddd, J = 8.3, 6.7, 1.8 Hz, 1H), 5.85 (s, 2H), 4.56 (t, J = 5.1 Hz, 1H), 4.33 - 4.22 (m, 4H), 3.72 (dd, J = 8.6, 7.3 Hz, 2H), 3.48 (td, J = 6.3, 5.1 Hz, 2H), 3.17 - 3.08 (m, 2H), 2.88 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 2.38 (s, 3H), 2.11 - 1.99 (m, 2H), 1.87 - 1.75 (m, 2H), 1.31 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 0.96 - 0.86 (m, 2H), -0.11 (s, 9H).
제조예 4c: tert-부틸 N-[3-(3-플루오로-4-히드록시-페닐)프로프-2-이닐]-N-메틸-카르바메이트
적절한 페놀로서의 2-플루오로-4-아이오도-페놀 (42.0 mmol, 1 당량) 10.00 g 및 알킨으로서의 tert-부틸 N-메틸-N-프로프-2-이닐-카르바메이트 (63.1 mmol, 1.5 당량) 10.67 g으로부터 출발하여 소노가시라 일반적 절차를 사용하여 목적 생성물 10.8 g (92%)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 10.32 (s, 1 H), 7.22 (brd, 1H), 7.08 (dm, 1H), 6.92 (dd, 1H), 4.21 (s, 2H), 2.85 (s, 3H), 1.41 (s, 9H); 13C NMR (125 MHz, DMSO-d6) δ ppm 150.8, 146.4, 129.0, 119.6, 118.4, 113.2, 84.4, 82.7, 38.5, 33.8, 28.5; HRMS-ESI (m/z): [M-C4H8+H]+ C11H11FNO3에 대한 계산치: 224.0717, 실측치 224.0720.
제조예 7: tert-부틸-디페닐-[2-[[3,5-디메틸-7-[[5-메틸-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)피라졸-1-일]메틸]-1-아다만틸]옥시]에톡시]실란
단계 A: 3-브로모-5,7-디메틸아다만탄-1-카르복실산
브로민 (30.7 mL, 600 mmol, 5 당량) 중 철 (6.7 g, 120 mmol)을 0℃에서 1시간 동안 교반한 후, 3,5-디메틸아다만탄-1-카르복실산 (25 g, 1 당량)을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 2일 동안 교반하였다. EtOAc를 첨가한 후, 반응 혼합물을 0℃에서 티오황산나트륨의 포화 용액으로 조심스럽게 처리하고, 15분 동안 교반하였다. 셀라이트 패드를 통해 여과하고, EtOAc로 헹군 후, 유기 상을 분리하고, 티오황산나트륨의 포화 용액 및 염수로 세척하고, 건조시키고, 농축시켜 목적 생성물 (34.28 g, 74.6%)을 수득하였으며, 이것을 추가 정제 없이 사용하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 12.33 (br., 1H), 2.21 (s, 2H), 1.96/1.91 (d+d, 4H), 1.50/1.43 (d+d, 4H), 1.21/1.14 (dm+dm, 2H), 0.86 (s, 6H); 13C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ ppm 176.8, 66.8, 54.0, 48.7, 48.5, 45.7, 43.3, 35.5, 29.4; HRMS-ESI (m/z): [M-H]- C13H18BrO2에 대한 계산치: 285.0496; 실측치 285.0498.
단계 B: 3-브로모-5,7-디메틸-1-아다만틸-메탄올
THF (77.6 mL) 중 단계 A로부터의 생성물 (34.3 g, 119 mmol)에 THF 중 BH3-THF의 1 M 용액 (358 mL, 3 당량)을 천천히 첨가하고, 반응 혼합물을 18시간 동안 교반하였다. 메탄올을 첨가하고 30분 동안 교반한 후, 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 용리액으로서 헵탄 및 MTBE)에 의해 정제하여 목적 생성물 (16.19 g, 49.6%)을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 4.51 (t, 1H), 3.05 (d, 2H), 1.91 (s, 2H), 1.91 (s, 4H), 1.19/1.09 (d+d, 2H), 1.19/1.05 (d+d, 4H), 0.85 (s, 6H) 13C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ ppm 70.4, 68.9, 54.9, 49.8, 49.3, 43.8, 41.4, 35.7, 29.7; HRMS-ESI (m/z): [M-Br]- C13H21O에 대한 계산치: 193.1598 실측치: 193.1589.
단계 C: 1-[3-브로모-5,7-디메틸-1-아다만틸]메틸]피라졸
톨루엔 (178 mL) 중 단계 B로부터의 생성물 (16.19 g, 59.26 mmol) 및 1H-피라졸 (4.841 g, 1.2 당량)에 시아노메틸렌트리부틸포스포란 (18.64 mL, 1.2 당량)을 1 부분으로 첨가하고, 반응 혼합물을 90℃에서 2시간 동안 교반하였다. 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 용리액으로서 헵탄 및 MTBE)에 의해 정제하여 목적 생성물 (17.88 g, 93%)을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 7.63 (d, 1H), 7.43 (d, 1H), 6.23 (t, 1H), 3.90 (s, 2H), 1.92-1.02 (m, 12H), 0.83 (s, 6H); 13C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ ppm 139.0, 131.8, 105.2, 67.7, 61.4, 54.4/48.8/44.6, 50.4, 35.7, 29.6; HRMS-ESI (m/z): [M]+ C16H23BrN2에 대한 계산치: 322.1045 실측치: 322.1014.
단계 D: 5-메틸-1-[[-3-브로모-5,7-디메틸-1-아다만틸]메틸]피라졸
THF (277 mL) 중 단계 C로부터의 생성물 (17.88 g, 55.3 mmol)의 용액에 부틸리튬 (THF 중 2.5 M, 66 mL, 3 당량)을 -78℃에서 첨가한 다음, 1시간 후, 아이오도메탄 (17.2 mL, 5 당량)을 첨가하였다. 10분 후, 반응 혼합물을 NH4Cl의 포화 용액으로 켄칭하고, EtOAc로 추출하고, 합한 유기 층을 건조시키고, 농축시켜 목적 생성물 (18.7 g, 100%)을 수득하였으며, 이것을 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 7.31 (d, 1H), 6.00 (d, 1H), 3.79 (s, 2H), 2.23 (s, 3H), 2.01 (s, 2H), 1.89/1.85 (d+d, 4H), 1.23/1.15 (d+d, 4H), 1.16/1.05 (d+d, 2H), 0.83 (s, 6H); 13C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ ppm 139.2, 138.0, 105.2, 67.8, 57.8, 54.4, 50.6, 48.8, 44.8, 41.5, 35.7, 29.6, 11.8; HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C17H26BrN2에 대한 계산치: 337.1279 실측치: 337.1289.
단계 E: 2-[[-3,5-디메틸-7-[(5-메틸피라졸-1-일)메틸]-1-아다만틸]옥시]에탄올
단계 D로부터의 생성물 (18.7 g, 55.3 mmol), 에틸렌 글리콜 (123 mL, 40 당량) 및 DIPEA (48.2 mL, 5 당량)의 혼합물을 120℃에서 6시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 희석하고, EtOAc로 추출한 후, 합한 유기 층을 건조시키고, 농축시켜 목적 생성물 (18.5 g, 105%)을 수득하였으며, 이것을 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 7.29 (d, 1H), 5.99 (d, 1H), 4.45 (t, 1H), 3.78 (s, 2H), 3.39 (q, 2H), 3.32 (t, 2H), 2.23 (s, 3H), 1.34 (s, 2H), 1.27/1.21 (d+d, 4H), 1.13/1.07 (d+d, 4H), 1.04/0.97 (d+d, 2H), 0.84 (s, 6H); 13C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ ppm 139.0, 137.8, 105.1, 74.0, 62.1, 61.5, 58.5, 50.1, 47.0, 46.1, 43.3, 39.7, 33.5, 30.2, 11.9; HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C19H31N2O2에 대한 계산치: 319.2386 실측치: 319.2387.
단계 F: tert-부틸-디페닐-[2-[[-3,5-디메틸-7-[(5-메틸피라졸-1-일)메틸]-1-아다만틸]옥시]에톡시]실란
DCM (150 ml) 중 단계 E로부터의 생성물 (17.6 g, 55.3 mmol) 및 이미다졸 (5.65 g, 1.5 당량)의 혼합물에 tert-부틸-클로로-디페닐-실란 (18.6 g, 1.2 당량)을 첨가하고, 반응 혼합물을 1시간 동안 교반하였다. 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 용리액으로서 헵탄 및 MTBE)에 의해 정제하여 목적 생성물 (27.0 g, 87.8%)을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 7.72-7.34 (m, 10H), 7.29 (d, 1H), 5.99 (br., 1H), 3.78 (s, 2H), 3.67 (t, 2H), 3.44 (t, 2H), 2.21 (s, 3H), 1.33 (s, 2H), 1.26/1.18 (d+d, 4H), 1.12/1.06 (d+d, 4H), 1.03/0.96 (d+d, 2H), 0.98 (s, 9H), 0.82 (s, 6H); 13C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ ppm 139.0, 137.8, 105.1, 74.2, 64.4, 61.7, 58.5, 50.0, 46.9, 46.0, 43.4, 39.6, 33.5, 30.1, 27.1, 19.3, 11.9; HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C35H49N2O2Si에 대한 계산치: 557.3563 실측치: 557.3564.
단계 G: tert-부틸-디페닐-[2-[[3-[(4-아이오도-5-메틸-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸-1-아다만틸]옥시]에톡시]실란
DMF (243 mL) 중 단계 F로부터의 생성물 (27.0 g, 48.56 mmol)의 용액에 N-아이오도숙신이미드 (13.6 g, 1.25 당량)를 첨가하고, 반응 혼합물을 2시간 동안 교반하였다. 물로 희석한 후, 혼합물을 DCM으로 추출하였다. 합한 유기 층을 티오황산나트륨의 포화 용액 및 염수로 세척하고, 건조시키고, 농축시켜 목적 생성물 (30.1 g, 90%)을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 7.68-7.37 (m, 10H), 7.45 (s, 1H), 3.89 (s, 2H), 3.67 (t, 2H), 3.44 (t, 2H), 2.23 (s, 3H), 1.30 (s, 2H), 1.26/1.17 (d+d, 4H), 1.12/1.05 (d+d, 4H), 1.00/0.96 (d+d, 2H), 0.98 (s, 9H), 0.82 (s, 6H); 13C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ ppm 142.5, 140.8, 133.7, 64.4, 61.7, 60.3, 59.9, 49.9, 46.8, 45.9, 43.2, 39.7, 33.5, 30.1, 27.1, 19.3, 12.2; HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C35H48IN2O2Si에 대한 계산치: 683.2530 실측치: 683.2533.
단계 H: tert-부틸-디페닐-[2-[[3,5-디메틸-7-[[5-메틸-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)피라졸-1-일]메틸]-1-아다만틸]옥시]에톡시]실란
THF (128 mL) 중 단계 G로부터의 생성물 (17.5 g, 25.6 mmol)에 클로로 (이소프로필)마그네슘-LiCl (THF 중 1.3 M, 24 mL, 1.2 당량)을 0℃에서 첨가하고, 40분 동안 교반하고, 2-이소프로폭시-4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란 (15.7 mL, 3 당량)으로 처리하고, 반응 혼합물을 10분 동안 교반하였다. 포화 용액 NH4Cl로 희석하고, EtOAc로 추출한 후, 합한 유기 상을 농축시키고, 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 용리액으로서 헵탄 및 MTBE)에 의해 정제하여 목적 생성물 (15.2 g, 86.9%)을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 7.65 (dm, 4H), 7.47 (s, 1H), 7.45 (tm, 2H), 7.40 (tm, 4H), 3.80 (s, 2H), 3.66 (t, 2 H), 3.44 (t, 2H), 2.35 (s, 3H), 1.35-0.94 (m, 12H), 1.24 (s, 12H), 0.97 (s, 9H), 0.83 (s, 6H); 13C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ ppm 146.9, 144.3, 135.6, 130.2, 128.2, 104.7, 83.0, 74.2, 64.4, 61.7, 58.4, 30.1, 27.1, 25.2, 19.3, 12.0; HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C41H60BN2O4Si에 대한 계산치: 683.4415 실측치: 683.4423.
제조예 8: tert-부틸-[3-[3,5-디메틸-7-[[5-메틸-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)피라졸-1-일]메틸]-1-아다만틸]프로폭시]-디페닐-실란
단계 A: 1-[[3-알릴-5,7-디메틸-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸
THF (232 mL) 중 제조예 7의 단계 D의 생성물 (15.66 g, 46.43 mmol) 및 AgOTf (597 mg, 0.05 당량)에 THF 중 알릴-Mg-Cl의 2 M 용액 (46.4 mL, 2 당량)을 첨가하고, 반응 혼합물을 0.5시간 동안 교반하였다. NH4Cl의 포화 용액으로 켄칭하고 EtOAc로 추출한 후, 합한 유기 상을 농축시키고, 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 용리액으로서 헵탄 및 MTBE)에 의해 정제하여 목적 생성물 (11.32 g, 81.7%)을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 7.27 (d, 1H), 5.98 (m, 1H), 5.76 (m, 1H), 5.01/4.96 (dm+dm, 2H), 3.73 (s, 2H), 2.22 (s, 3H), 1.83 (d, 2H), 1.15-0.93 (m, 12H), 0.78 (s, 6H); 13C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ ppm 139.0, 137.7, 135.0, 117.7, 105.0, 59.0, 47.8, 44.2, 35.0, 31.8, 30.6, 11.9; HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C20H31N2에 대한 계산치: 299.2487 실측치: 299.2485.
단계 B: 3-[3,5-디메틸-7-[(5-메틸피라졸-1-일)메틸]-1-아다만틸]프로판-1-올
THF (85 mL) 중 단계 A의 생성물 (10.2 g, 34.17 mmol)에 THF 중 BH3-THF의 1 M 용액 (85.4 mL, 2 당량)을 첨가하고, 반응 혼합물을 1시간 동안 교반하였다. 0℃에서 NaOH의 10 M 용액 (24 mL, 7 당량) 및 과산화수소의 33% 용액 (73 mL, 25 당량)으로 처리한 후, 반응물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 이어서 이것을 수성 HCl 용액으로 켄칭하고, EtOAc로 추출하고, 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 용리액으로서 헵탄 및 MTBE)에 의해 정제하여 목적 생성물 (9.75 g, 90%)을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 7.28 (d, 1H), 5.98 (m, 1H), 4.33 (t, 1H), 3.73 (s, 2H), 3.32 (m, 2H), 2.22 (brs, 3H), 1.32 (m, 2H), 1.12-0.92 (m, 12H), 1.06 (m, 2H), 0.78 (s, 6H); 13C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ ppm 137.7, 105.0, 62.1, 59.1, 39.7, 30.7, 26.5, 11.9, HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C20H33N2O에 대한 계산치: 317.2593 실측치: 317.2590
단계 C: tert-부틸-[3-[3,5-디메틸-7-[(5-메틸피라졸-1-일)메틸]-1-아다만틸]프로폭시]-디페닐-실란
DCM (92 ml) 중 단계 B의 생성물 (9.75 g, 30.8 mmol) 및 이미다졸 (3.1 g, 1.5 당량)에 tert-부틸-클로로-디페닐-실란 (9.45 mL, 1.2 당량)을 첨가하고, 반응 혼합물을 1시간 동안 교반하였다. 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 용리액으로서 헵탄 및 MTBE)에 의해 정제하여 목적 생성물 (12.5 g, 73%)을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 7.63-7.39 (m, 10H), 7.27 (d, 1H), 5.98 (d, 1H), 3.72 (s, 2H), 3.59 (t, 2H), 2.21 (s, 3H), 1.42 (m, 2H), 1.1-0.92 (br., 12H), 1.09 (m, 2H), 0.98 (s, 9H), 0.77 (s, 6H); 13C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ ppm 137.7, 105.0, 64.8, 59.1, 39.3, 38.0, 34.2, 31.8, 30.6, 27.2, 26.1, 19.2, 11.9; HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C36H51N2OSi에 대한 계산치: 555.3771 실측치: 555.3770.
단계 D: tert-부틸-[3-[3-[(4-아이오도-5-메틸-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸-1-아다만틸]프로폭시]-디페닐-실란
DMF (112 mL) 중 단계 C의 생성물 (12.5 g, 22.54 mmol)에 N-아이오도숙신이미드 (6.34 g, 1.25 당량)를 첨가하고, 반응 혼합물을 2시간 동안 교반하였다. 티오황산나트륨의 포화 용액으로 켄칭하고 DCM으로 추출한 후, 합한 유기 상을 포화 티오황산나트륨 및 염수로 세척하고, 건조시키고, 증발시켜 목적 생성물 (16.3 g, 105%)을 수득하였다. LC/MS (C36H50IN2OSi) 681 [M+H]+.
단계 E: tert-부틸-[3-[3,5-디메틸-7-[[5-메틸-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)피라졸-1-일]메틸]-1-아다만틸]프로폭시]-디페닐-실란
THF (119 mL) 중 단계 D의 생성물 (16.25 g, 23.9 mmol)에 0℃에서 클로로 (이소프로필)마그네슘-LiCl (THF 중 1.3 M, 22 mL, 1.2 당량)을 첨가하고, 혼합물을 40분 동안 교반하고, 2-이소프로폭시-4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란 (14.6 mL, 3 당량)으로 처리하고, 10분 동안 교반하였다. 포화 용액 NH4Cl로 희석하고, EtOAc로 추출한 후, 합한 유기 상을 농축시키고, 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 용리액으로서 헵탄 및 MTBE)에 의해 정제하여 목적 생성물 (11.4 g, 70%)을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 7.59 (d, 4H), 7.46 (s, 1H), 7.45 (t, 2H), 7.43 (t, 4H), 3.74 (s, 2H), 3.59 (t, 2H), 2.35 (s, 3H), 1.41 (qn, 2H), 1.24 (s, 12H), 1.09 (m, 2H), 1.08 (s, 4H), 1.05 (s, 2H), 0.98 (s, 9H), 0.98 (s, 2H), 0.94 (s, 4H), 0.78 (s, 6H); 13C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ ppm 146.9, 144.2, 135.5, 133.8, 130.3, 128.3, 104.6, 83.0, 64.7, 64.7, 59.0, 50.6, 48.2, 46.5, 44.1, 39.2, 37.9, 31.8, 30.7, 27.2, 26.1, 25.2, 19.2, 12.0; HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C42H62BN2O3Si에 대한 계산치: 681.4623 실측치: 681.4631.
제조예 10: 메틸 3-브로모-6-[3-(3,6-디클로로-5-메틸-피리다진-4-l)프로필아미노]피리딘-2-카르복실레이트
단계 A: 메틸 6-[비스(tert-부톡시카르보닐)아미노]-3-브로모-피리딘-2-카르복실레이트
DCM (541 mL) 중 메틸 6-아미노-3-브로모-피리딘-2-카르복실레이트 (25.0 g, 108.2 mmol) 및 DMAP (1.3 g, 0.1 당량)에 0℃에서 Boc2O (59.0 g, 2.5 당량)를 첨가하고, 반응 혼합물을 2.5시간 동안 교반하였다. NaHCO3의 포화 용액을 첨가하고 DCM으로 추출한 후, 합한 유기 상을 건조시키고, 농축시켜 목적 생성물 (45.0 g, 72.3%)을 수득하였다. LC/MS (C17H23BrN2O6Na) 453 [M+Na]+.
단계 B: 메틸 3-브로모-6-(tert-부톡시카르보닐아미노)피리딘-2-카르복실레이트
DCM (370 mL) 중 단계 A로부터의 생성물 (42.7 g, 74.34 mmol)에 0℃에서 TFA (17.1 mL, 3 당량)를 첨가하고, 반응 혼합물을 18시간 동안 교반하였다. NaHCO3의 포화 용액 및 염수로 세척한 후, 합한 유기 상을 건조시키고, 농축시키고, 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 용리액으로서 헵탄 및 EtOAc)에 의해 정제하여 목적 생성물 (28.3 g, 115.2%)을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 10.29 (s, 1H), 8.11 (d, 1H), 7.88 (d, 1H), 3.87 (s, 3H), 1.46 (s, 9H) 13C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ ppm 165.6, 153.1, 151.8/148.3, 143.5, 116.3, 109.2, 53.2, 28.4. LC/MS (C12H15BrN2O4Na) 353 [M+Na]+.
단계 C: 메틸 3-브로모-6-[tert-부톡시카르보닐-[3-(3,6-디클로로-5-메틸-피리다진-4-일)프로필]아미노]피리딘-2-카르복실레이트
아세톤 (150 mL) 중 단계 B로부터의 생성물 (10.0 g, 30.1967 mmol)에 Cs2CO3 (29.5 g, 3 당량) 및 3,6-디클로로-4-(3-아이오도프로필)-5-메틸-피리다진 (9.9 g, 1 당량)을 첨가하고, 반응 혼합물을 18시간 동안 교반하였다. 물로 희석하고 EtOAc로 추출한 후, 합한 유기 상을 염수로 세척하고, 건조시키고, 농축시켜 목적 생성물 (17.5 g, 108%)을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 8.13 (d, 1H), 7.78 (d, 1H), 3.91 (t, 2H), 3.89 (s, 3H), 2.79 (m, 2H), 2.38 (s, 3H), 1.82 (m, 2H), 1.46 (s, 9H); 13C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ ppm 165.3, 157.6, 156.6, 153.2, 152.9, 147.2, 143.1, 142.2, 139.7, 122.6, 111.8, 82.2, 53.3, 46.4, 28.1, 27.7, 26.5, 16.3; HRMS-ESI (m/z): C20H23BrCl2N4NaO4에 대한 [M+Na]+계산치: 555.0177 실측치: 555.0172.
단계 D: 메틸 3-브로모-6-[3-(3,6-디클로로-5-메틸-피리다진-4-l)프로필아미노]피리딘-2-카르복실레이트
1,1,1,3,3,3-헥사플루오로이소프로판올 (330 mL) 중 단계 C로부터의 생성물 (17.5 g, 32.7 mmol)을 110℃에서 18시간 동안 교반하였다. 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 용리액으로서 헵탄 및 EtOAc)에 의해 정제하여 목적 생성물 (9.9 g, 70%)을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 7.63 (d, 1H), 7.22 (t, 1H), 6.57 (d, 1H), 3.83 (s, 3H), 3.30 (m, 2H), 2.83 (m, 2H), 2.37 (s, 3H), 1.74 (m, 2H) 13C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ ppm 166.5, 141.5, 112.6, 52.9, 40.9, 28.0, 27.0, 16.4.
제조예 11: (4-메톡시페닐)메틸 3-브로모-6-[3-(3,6-디클로로-5-메틸-피리다진-4-일)프로필아미노]피리딘-2-카르복실레이트
단계 A: 3-브로모-6-[3-(3,6-디클로로-5-메틸-피리다진-4-일)프로필아미노]피리딘-2-카르복실산
1,4-디옥산 (408 mL) 및 물 (82 mL) 중 제조예 10으로부터의 생성물 (35.39 g, 81.52 mmol) 및 LiOHxH2O (13.68 g, 4 당량)의 혼합물을 60℃에서 1시간 동안 교반하였다. HCl의 1 M 용액으로 켄칭하고 EtOAc로 추출한 후, 합한 유기 상을 건조시키고, 농축시키고, 플래쉬 크로마토그래피 (실리카 겔, 용리액으로서 DCM 및 MeOH 사용)에 의해 정제하여 목적 생성물 (27.74 g, 81%)을 수득하였다. LC/MS (C14H14BrCl2N4O2) 421 [M+H]+.
단계 B: (4-메톡시페닐)메틸 3-브로모-6-[3-(3,6-디클로로-5-메틸-피리다진-4-일)프로필아미노]피리딘-2-카르복실레이트
톨루엔 (660 mL) 및 THF (20 ml) 중 단계 A의 생성물 (27.7 g, 65.9 mmol), (4-메톡시페닐)메탄올 (16.4 mL, 2 당량) 및 PPh3 (34.6 g, 2 당량)에 디이소프로필 아조디카르복실레이트 (26 mL, 2 당량)를 적가하고, 반응 혼합물을 50℃에서 1시간 동안 교반하였다. 플래쉬 크로마토그래피 (실리카 겔, 용리액으로서 헵탄 및 EtOAc 사용)에 의해 정제하여 목적 생성물 (23.65 g, 66.4%)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 7.62 (d, 1H), 7.37 (dn, 2H), 7.21 (t, 1H), 6.91 (dm, 2H), 6.56 (d, 1H), 5.25 (s, 2H), 3.74 (s, 3H), 3.30 (q, 2H), 2.81 (m, 2H), 2.33 (s, 3H), 1.73 (m, 2H); 13C NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 165.9, 159.7, 157.6, 157.5, 156.8, 148.0, 142.7, 141.5, 139.7, 130.6, 127.8, 114.3, 112.6, 101.6, 67.0, 55.6, 40.9, 28.0, 27.1, 16.4; HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C22H22BrCl2N4O3에 대한 계산치: 539.0252, 실측치: 539.0246.
제조예 12: 메틸 6-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-3-[1-[[3,5-디메틸-7-[2-(p-톨릴술포닐옥시)에톡시]-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실레이트
단계 A: 메틸 6-[3-(3,6-디클로로-5-메틸-피리다진-4-일)프로필아미노]-3-[5-메틸-1-[[3-[2-[tert-부틸 (디페닐)실릴]옥시에톡시]-5,7-디메틸-1-아다만틸]메틸]피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실레이트
1,4-디옥산 (207 mL) 및 H2O (34.5 mL) 중 제조예 10으로부터의 생성물 (15.0 g, 34.55 mmol), 제조예 7로부터의 생성물 (30.7 g, 1.3 당량), Cs2CO3 (33.8 g, 3.0 당량) 및 Pd(AtaPhos)2Cl2 (1.53 g, 0.1 당량)의 혼합물을 80℃에서 1.5시간 동안 교반하였다. 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 용리액으로서 헵탄 및 EtOAc)에 의해 정제하여 목적 생성물 (18.5 g, 58%)을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 7.69-7.37 (m, 10H), 7.32 (d, 1H), 7.23 (s, 1H), 6.98 (t, 1H), 6.63 (d, 1H), 3.82 (s, 2H), 3.67 (t, 2H), 3.58 (s, 3H), 3.46 (t, 2H), 3.35 (m, 2H), 2.86 (m, 2H), 2.40 (s, 3H), 2.06 (s, 3H), 1.78 (m, 2H), 1.35 (s, 2H), 1.27/1.2 (m+m, 4H), 1.15/1.09 (m+m, 4H), 1.05/0.97 (m+m, 2H), 0.97 (s, 9H), 0.84 (s, 6H); HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C50H63Cl2N6O4Si에 대한 계산치: 909.4057 실측치: 909.4053.
단계 B: 메틸 6-(3-클로로-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일)-3-[5-메틸-1-[[3-[2-[tert-부틸 (디페닐)실릴]옥시에톡시]-5,7-디메틸-1-아다만틸]메틸]피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실레이트
1,4-디옥산 (102 mL) 중 단계 A로부터의 생성물 (18.5 g, 20.3 mmol), Cs2CO3 (13.2 g, 2 당량), DIPEA (7.1 mL, 2 당량) 및 Pd(Ataphos)2Cl2 (900 mg, 0.1 당량)의 혼합물을 110℃에서 18시간 동안 교반하였다. 여과하고 농축시킨 후, 잔류물을 DCM으로 녹이고, 물로 세척하고, 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 용리액으로서 DCM 및 EtOAc)에 의해 정제하여 목적 생성물 (12.6 g, 71%)을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 7.85 (d, 1H), 7.69 (d, 1H), 7.66 (dm, 4H), 7.47-7.36 (m, 6H), 7.38 (s, 1H), 3.97 (t, 2H), 3.87 (s, 2H), 3.68 (t, 2H), 3.66 (s, 3H), 3.47 (t, 2H), 2.87 (t, 2H), 2.30 (s, 3H), 2.14 (s, 3H), 1.99 (br., 2H), 1.38 (s, 2H), 1.32-0.96 (br., 10H), 0.98 (s, 9H), 0.85 (s, 6H); 13C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ ppm 139.9, 137.6, 120.5, 64.4, 61.7, 58.9, 52.3, 46.0, 43.4, 30.2, 27.1, 24.6, 21.0, 15.5, 10.9; HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C50H62ClN6O4Si에 대한 계산치: 873.4290 실측치: 873.4291.
단계 C: 메틸 6-(3-클로로-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일)-3-[1-[[3-(2-히드록시에톡시)-5,7-디메틸-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실레이트
THF (95 mL) 중 단계 B로부터의 생성물 (8.46 g, 9.68 mmol)에 0℃에서 THF 중 TBAF의 1 M 용액 (10.6 mL, 1.1 당량)을 첨가하고, 반응 혼합물을 2시간 동안 교반하였다. NH4Cl의 포화 용액으로 켄칭하고 EtOAc로 추출한 후, 합한 유기 상을 염수로 세척하고, 건조시키고, 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 용리액으로서 DCM 및 MeOH)에 의해 정제하여 목적 생성물 (5.38 g, 88%)을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 7.86 (d, 1H), 7.71 (d, 1H), 7.38 (s, 1H), 4.46 (t, 1H), 3.97 (t, 2H), 3.87 (s, 2H), 3.70 (s, 3H), 3.40 (m, 2H), 3.35 (t, 2H), 2.87 (t, 2H), 2.30 (s, 3H), 2.15 (s, 3H), 1.99 (m, 2H), 1.42-0.95 (m, 12H), 0.87 (s, 6H); HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C34H44ClN6O4에 대한 계산치: 635.3113 실측치: 635.3112.
단계 D: 메틸 6-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-3-[1-[[3-(2-히드록시에톡시)-5,7-디메틸-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실레이트
단계 C로부터의 생성물 3.7 g (5.78 mmol) 및 1,3-벤조티아졸-2-아민 1.74 g (2 당량)으로부터 출발하여 130℃에서 1시간 동안 부흐발트 일반적 절차 I을 사용하여 목적 생성물 3.1 g (72% 수율)을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 7.96 (d, 1H), 7.82 (br., 1H), 7.70 (d, 1H), 7.50 (br., 1H), 7.38 (s, 1H), 7.35 (t, 1H), 7.17 (t, 1H), 4.46 (br., 1H), 4.00 (t, 2H), 3.88 (s, 2H), 3.70 (s, 3H), 3.40 (brt., 2H), 3.35 (t, 2H), 2.86 (t, 2H), 2.32 (s, 3H), 2.16 (s, 3H), 2.03-1.94 (m, 2H), 1.42-0.96 (m, 12H), 0.87 (s, 6H); 13C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ ppm 139.8, 137.5, 126.4, 122.4, 122.1, 119.0, 62.1, 61.5, 59.0, 52.6, 45.4, 30.2, 24.3, 21.7, 12.6, 10.9; HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C41H49N8O4S에 대한 계산치: 749.3597 실측치: 749.3595.
단계 E: 메틸 6-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-3-[1-[[3,5-디메틸-7-[2-(p-톨릴술포닐옥시)에톡시]-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실레이트
DCM (50 mL) 중 단계 D로부터의 생성물 (3.85 g, 5.14 mmol) 및 트리에틸아민 (2.15 mL, 3 당량)에 p-톨릴술포닐 4-메틸벤젠술포네이트 (2.51 g, 1.5 당량)를 첨가하고, 반응 혼합물을 1시간 동안 교반하였다. 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 용리액으로서 헵탄 및 EtOAc)에 의해 정제하여 목적 생성물 (3.2 g, 69%)을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 7.96 (d, 1H), 7.81 (br., 1H), 7.77 (d, 2H), 7.70 (d, 1H), 7.50 (br., 1H), 7.46 (d, 2H), 7.39 (s, 1H), 7.35 (t, 1H), 7.17 (t, 1H), 4.06 (t, 2H), 4.00 (t, 2H), 3.85 (s, 2H), 3.69 (s, 3H), 3.49 (t, 2H), 2.86 (t, 2H), 2.40 (s, 3H), 2.32 (s, 3H), 2.15 (s, 3H), 1.99 (m, 2H), 1.32-0.93 (m, 12H), 0.84 (s, 6H); 13C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ ppm 139.8, 137.6, 130.6, 128.1, 126.4, 122.4, 122.1, 119, 71.5, 58.8, 58.4, 52.6, 45.4, 30.1, 24.3, 21.7, 21.6, 12.6, 10.9; HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C48H55N8O6S2에 대한 계산치: 903.3686 실측치: 903.3685.
제조예 13: (4-메톡시페닐)메틸 6-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-3-[1-[[3,5-디메틸-7-[3-(p-톨릴술포닐옥시)프로필]-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실레이트
단계 A: (4-메톡시페닐)메틸 3-[1-[[3-[3-[tert-부틸 (디페닐)실릴]옥시프로필]-5,7-디메틸-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]-6-[3-(3,6-디클로로-5-메틸-피리다진-4-일)프로필아미노]피리딘-2-카르복실레이트
1,4-디옥산 (41 mL) 및 H2O (6.8 mL) 중 제조예 11로부터의 생성물 (3.67 g, 6.79 mmol), 제조예 8로부터의 생성물 (5.09 g, 1.1 당량), Pd(AtaPhos)2Cl2 (301 mg, 0.1 당량) 및 Cs2CO3 (6.64 g, 3 당량)의 혼합물을 80℃에서 18시간 동안 교반하였다. 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 용리액으로서 헵탄 및 EtOAc)에 의해 정제하여 목적 생성물 (4.43 g, 64%)을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 7.62-7.38 (m, 10H), 7.32 (d, 1H), 7.26 (s, 1H), 7.10 (m, 2H), 6.98 (t, 1H), 6.83 (m, 2H), 6.63 (d, 1H), 4.98 (s, 2H), 3.74 (s, 2H), 3.70 (s, 3H), 3.58 (t, 2H), 3.35 (m, 2H), 2.84 (m, 2H), 2.34 (s, 3H), 2.02 (s, 3H), 1.77 (m, 2H), 1.43 (m, 2H), 1.18-0.85 (m, 12H), 1.09 (t, 2H), 0.97 (s, 9H), 0.77 (s, 6H); HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C58H71Cl2N6O4Si에 대한 계산치: 1013.4683 실측치: 1013.4683;
단계 B: (4-메톡시페닐)메틸 3-[1-[[3-[3-[tert-부틸 (디페닐)실릴]옥시프로필]-5,7-디메틸-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]-6-(3-클로로-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일)피리딘-2-카르복실레이트
1,4-디옥산 (22 mL) 중 단계 A로부터의 생성물 (4.43 g, 4.37 mmol), Cs2CO3 (2.84 g, 2 당량), DIPEA (1.5 mL, 2 당량) 및 Pd(Ataphos)2Cl2 (193 mg, 0.1 당량)의 혼합물을 110℃에서 18시간 동안 교반하였다. 물로 켄칭하고 EtOAc로 추출한 후, 합한 유기 상을 건조시키고, 농축시키고, 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 용리액으로서 DCM 및 EtOAc)에 의해 정제하여 목적 생성물 (2.83 g, 66%)을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 7.84 (d, 1H), 7.68 (d, 1H), 7.59 (d, 4H), 7.44 (t, 2H), 7.42 (t, 4H), 7.38 (s, 1H), 7.14 (d, 2H), 6.87 (d, 2H), 5.07 (s, 2H), 3.96 (t, 2H), 3.78 (s, 2H), 3.71 (s, 3H), 3.59 (t, 2H), 2.86 (t, 2H), 2.29 (s, 3H), 2.08 (s, 3H), 1.97 (qn, 2H), 1.43 (qn, 2H), 1.12 (s, 4H), 1.10 (s, 2H), 1.09 (t, 2H), 0.97 (s, 9H), 0.95 (s, 2H), 0.94/0.91 (d+d, 4H), 0.78 (s, 6H); 13C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ ppm 166.9, 159.6, 156.3, 153.6, 150.8, 147.7, 140.1, 137.5, 137.3, 136.0, 135.5, 133.8, 130.3, 130.1, 129.1, 128.3, 127.6, 123.1, 120.5, 115.5, 114.3, 66.8, 64.8, 64.8, 59.6, 55.6, 50.5, 48.1, 46.4, 46.0, 44.2, 39.3, 38.1, 31.7, 30.6, 27.2, 26.1, 24.6, 21.0, 19.3, 15.5, 10.9; HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C58H70ClN6O4Si에 대한 계산치: 977.4916 실측치: 977.4915.
단계 C: (4-메톡시페닐)메틸 6-(3-클로로-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일)-3-[1-[[3-(3-히드록시프로필)-5,7-디메틸-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실레이트
THF (95 mL) 중 단계 B로부터의 생성물 (2.83 g, 2.89 mmol)에 0℃에서 THF 중 TBAF의 1 M 용액 (3.2 mL, 1.1 당량)을 첨가하고, 반응 혼합물을 2시간 동안 교반하였다. NH4Cl의 포화 용액으로 켄칭하고 EtOAc로 추출한 후, 합한 유기 상을 염수로 세척하고, 건조시키고, 농축시키고, 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 용리액으로서 DCM 및 MeOH)에 의해 정제하여 목적 생성물 (2.21 g, 103%)을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 7.85 (d, 1H), 7.70 (d, 1H), 7.39 (s, 1H), 7.17 (d, 2H), 6.90 (d, 2H), 5.09 (s, 2H), 4.34 (t, 1H), 3.96 (t, 2H), 3.79 (s, 2H), 3.74 (s, 3H), 3.32 (q, 2H), 2.86 (t, 2H), 2.29 (s, 3H), 2.09 (s, 3H), 1.98 (qn, 2H), 1.34 (qn, 2H), 1.13 (s, 2H), 1.13 (s, 4H), 1.06 (t, 2H), 0.99/0.95 (d+d, 4H), 0.97 (s, 2H), 0.78 (s, 6H); 13C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ ppm 166.9, 159.7, 156.4, 153.6, 150.8, 147.7, 140.2, 137.5, 137.3, 136.0, 130.2, 129.1, 127.6, 123.1, 120.4, 115.5, 114.3, 66.8, 66.8, 62.1, 59.7, 55.6, 50.6, 48.2, 46.5, 46.0, 44.3, 39.7, 38.1, 31.8, 30.6, 26.5, 24.6, 21.0, 15.5, 10.9; HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C42H52ClN6O4에 대한 계산치: 739.3739 실측치: 739.3739.
단계 D: (4-메톡시페닐)메틸 6-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-3-[1-[[3-(3-히드록시프로필)-5,7-디메틸-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실레이트
시클로헥산올 (14 mL) 중 단계 C로부터의 생성물 (1.71 g, 2.31 mmol), 1,3-벤조티아졸-2-아민 (695 mg, 2 당량), Pd2dba3 (212 mg, 0.1 당량), XantPhos (268 mg, 0.2 당량) 및 DIPEA (1.2 mL, 3 당량)의 혼합물을 130℃에서 1시간 동안 교반하였다. 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 용리액으로서 헵탄, DCM 및 MeCN)에 의해 정제하여 목적 생성물 (1.25 g, 63%)을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 12.08/10.87 (brs/brs, 1H), 7.95 (d, 1H), 7.81 (br, 1H), 7.68 (d, 1H), 7.50 (br, 1H), 7.39 (s, 1H), 7.35 (t, 1H), 7.18 (d, 2H), 7.17 (t, 1H), 6.90 (d, 2H), 5.10 (s, 2H), 4.34 (t, 1H), 3.99 (t, 2H), 3.79 (s, 2H), 3.74 (s, 3H), 3.33 (q, 2H), 2.85 (t, 2H), 2.32 (s, 3H), 2.11 (s, 3H), 1.98 (qn, 2H), 1.34 (qn, 2H), 1.14 (s, 4H), 1.14 (s, 2H), 1.07 (t, 2H), 1.00/0.95 (d+d, 2H), 0.99/0.95 (d+d, 4H), 0.79 (s, 6H); 13C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ ppm 140.0, 137.6, 130.2, 126.4, 122.4, 122.0, 119.0, 114.3, 66.7, 62.1, 59.6, 55.6, 50.6, 48.2, 46.5, 45.4, 44.3, 39.7, 30.6, 26.5, 24.3, 21.7, 12.6, 11.0; HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C49H57N8O4S에 대한 계산치: 853.4223 실측치: 853.4229.
단계 E: (4-메톡시페닐)메틸 6-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-3-[1-[[3,5-디메틸-7-[3-(p-톨릴술포닐옥시)프로필]-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실레이트
DCM (15 mL) 중 단계 D로부터의 생성물 (1.25 g, 1.47 mmol) 및 트리에틸아민 (0.61 mL, 3 당량)에 p-톨릴술포닐 4-메틸벤젠술포네이트 (717 mg, 1.5 당량)를 첨가하고, 반응 혼합물을 1시간 동안 교반하였다. 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 용리액으로서 헵탄 및 EtOAc)에 의해 정제하여 목적 생성물 800 mg (54%)을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 7.95 (d, 1H), 7.88 (brs, 1H), 7.77 (m, 2H), 7.68 (d, 1H), 7.62 (brs, 1H), 7.47 (m, 2H), 7.39 (s, 1H), 7.35 (brs, 1H), 7.17 (brs, 1H), 7.10 (m, 2H), 6.90 (m, 2H), 5.09 (s, 2H), 4.00 (m, 2H), 3.98 (t, 2H), 3.77 (s, 2H), 3.74 (s, 3H), 2.85 (t, 2H), 2.40 (s, 3H), 2.32 (s, 3H), 2.09 (s, 3H), 1.98 (m, 2H), 1.45 (m, 2H), 1.17-0.8 (m, 12H), 0.98 (m, 2H), 0.77 (s, 6H); HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C56H63N8O6S2에 대한 계산치: 1007.4312 실측치: 1007.4318.
제조예 15: 에틸 2-(3-클로로-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일)-5-[3-(2-플루오로-4-아이오도-페녹시)프로필]티아졸-4-카르복실레이트
단계 A: 2-(3-클로로-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일)-5-[3-(2-플루오로-4-아이오도-페녹시)프로필]티아졸-4-카르복실산
1,4-디옥산 (408 mL) 및 물 (82 mL) 중 제조예 3a로부터의 생성물 (35.39 g, 81.52 mmol) 및 LiOHxH2O (4 당량)의 혼합물을 60℃에서 1시간 동안 교반하였다. HCl의 1 M 용액으로 켄칭하고 EtOAc로 추출한 후, 합한 유기 상을 건조시키고, 농축시키고, 플래쉬 크로마토그래피 (실리카 겔, 용리액으로서 DCM 및 MeOH 사용)에 의해 정제하여 목적 생성물 (27.7 g, 81%)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 7.56 (dd, 1H), 7.43 (brd., 1H), 6.96 (t, 1H), 4.18 (t, 2H), 4.05 (t, 2H), 3.28 (t, 2H), 2.84 (t, 2H), 2.29 (s, 3H), 2.07 (m, 2H), 1.97 (m, 2H); 13C NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 166.4, 154.8, 152.1, 151.8, 151.1, 147.1, 143.9, 135.7, 134.0, 133.8, 129.0, 124.9, 117.6, 82.3, 68.8, 46.3, 31.0, 24.0, 22.5, 19.8, 15.7; HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C21H20ClFIN4O3S에 대한 계산치: 588.9973 실측치: 588.9969.
단계 B: 에틸 2-(3-클로로-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일)-5-[3-(2-플루오로-4-아이오도-페녹시)프로필]티아졸-4-카르복실레이트
톨루엔 (660 mL) 및 THF (20 ml) 중 단계 A의 생성물 (27.7 g, 65.9 mmol), 에탄올 (2 당량) 및 PPh3 (2 당량)의 혼합물에 디이소프로필 아조디카르복실레이트 (2 당량)를 적가하고, 반응물을 50℃에서 1시간 동안 교반하였다. 플래쉬 크로마토그래피 (실리카 겔, 용리액으로서 헵탄 및 EtOAc 사용)에 의해 정제하여 목적 생성물 (23.65 g, 66.4%)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 7.59 (dd, 1H), 7.44 (dm, 1H), 6.98 (t, 1H), 4.29 (m, 2H), 4.25 (q, 2H), 4.08 (t, 2H), 3.24 (t, 2H), 2.89 (t, 2H), 2.32 (s, 3H), 2.09 (m, 2H), 2.04 (m, 2H), 1.28 (t, 3H); 13C NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 162.6, 155.4, 152.2, 151.7, 151.3, 147.0, 134.0, 124.9, 117.6, 82.4, 68.3, 60.7, 46.3, 30.8, 24.1, 23.1, 19.7, 15.7, 14.6; HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C23H24ClFIN4O3S에 대한 계산치: 617.0286, 실측치: 617.0282.
제조예 16: (4-메톡시페닐)메틸 6-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-3-[1-[[3,5-디메틸-7-[2-(p-톨릴술포닐옥시)에톡시]-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실레이트
단계 A: 3-[1-[[3-[2-[tert-부틸 (디페닐)실릴]옥시에톡시]-5,7-디메틸-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]-6-(3-클로로-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일)피리딘-2-카르복실산
THF 및 물의 4:1 혼합물 17 mL 중 제조예 12, 단계 B의 생성물 1.5 g (1.72 mmol), LiOH 290 mg (4 당량)의 혼합물을 60℃에서 교반하여 완전한 전환에 도달하였다. 반응물을 1M 수성 HCl 용액의 첨가에 의해 켄칭한 후, 혼합물을 EtOAc로 추출하고, 유기 상을 건조시키고, 농축시키고, 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 용리액으로서 DCM 및 MeOH 사용)에 의해 정제하여 목적 생성물 1.23 g (83%)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 13.11 (s, 1H), 7.80 (d, 1H), 7.66 (d, 4H), 7.65 (d, 1H), 7.44 (t, 2H), 7.41 (s, 1H), 7.40 (t, 4H), 3.99 (t, 2H), 3.86 (s, 2H), 3.68 (t, 2H), 3.47 (t, 2H), 2.87 (t, 2H), 2.29 (s, 3H), 2.17 (s, 3H), 1.99 (qn, 2H), 1.39 (s, 2H), 1.27/1.22 (d+d, 4H), 1.17/1.12 (d+d, 4H), 1.05/0.99 (d+d, 2H), 0.98 (s, 9H), 0.85 (s, 6H); 13C NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 168.5, 156.5, 153.2, 150.7, 148.9, 139.8, 137.7, 137.3, 136.0, 135.6, 133.8, 130.2, 129.0, 128.3, 122.1, 119.9, 115.7, 74.3, 64.4, 61.7, 59.0, 50.1, 46.9, 46.0, 46.0, 43.4, 39.7, 33.6, 30.2, 27.1, 24.6, 21.0, 19.2, 15.5, 11.1; HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C49H60ClN6O4Si에 대한 계산치: 859.4134 실측치: 859.4130.
단계 B: (4-메톡시페닐)메틸 3-[1-[[3-[2-[tert-부틸 (디페닐)실릴]옥시에톡시]-5,7-디메틸-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]-6-(3-클로로-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일)피리딘-2-카르복실레이트
톨루엔 7 mL 중 단계 A로부터의 생성물 1.23 g (1.43 mmol), (4-메톡시페닐)메탄올 0.35 mL (2 당량), PPh3 748 mg (2 당량)에 DIAD 0.56 mL (2 당량)를 적가하고, 혼합물을 완전한 전환까지 50℃에서 교반하였다. 생성물을 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 용리액으로서 DCM 및 EtOAc 사용)에 의해 정제하여 목적 생성물 1.11 g (79%)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 7.84 (d, 1H), 7.67 (d, 1H), 7.65 (d, 4H), 7.44 (t, 2H), 7.41 (s, 1H), 7.40 (t, 4H), 7.15 (d, 2H), 6.87 (d, 2H), 5.07 (s, 2H), 3.96 (t, 2H), 3.83 (s, 2H), 3.71 (s, 3H), 3.66 (t, 2H), 3.45 (t, 2H), 2.86 (t, 2H), 2.29 (s, 3H), 2.08 (s, 3H), 1.97 (qn, 2H), 1.38 (s, 2H), 1.25/1.18 (d+d, 4H), 1.18/1.12 (d+d, 4H), 1.01/0.93 (d+d, 2H), 0.97 (s, 9H), 0.82 (s, 6H); 13C NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 166.8, 159.7, 156.3, 153.6, 150.8, 147.7, 140.1, 137.6, 137.3, 136.0, 135.6, 133.8, 130.2, 130.2, 129.1, 128.2, 127.7, 123.0, 120.4, 115.6, 114.3, 74.2, 66.8, 64.4, 61.7, 59.3, 55.6, 49.9, 46.8, 46.0, 46.0, 43.3, 39.7, 33.6, 30.1, 27.1, 24.6, 21.0, 19.3, 15.5, 10.8; HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C57H68ClN6O5Si에 대한 계산치: 979.4709 실측치: 979.4710.
단계 C: (4-메톡시페닐)메틸 6-(3-클로로-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일)-3-[1-[[3-(2-히드록시에톡시)-5,7-디메틸-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실레이트
THF 470 mL 중 단계 B로부터의 생성물 45.4 g (46.3 mmol)에 THF 중 TBAF의 1 M 용액 51 mL (1.1 당량)를 첨가하고, 혼합물을 2시간 동안 교반하였다. 포화 NH4Cl 용액으로 켄칭한 후, 혼합물을 EtOAc로 추출하고, 유기 상을 건조시키고, 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 용리액으로서 DCM 및 MeOH 사용)에 의해 정제하여 목적 생성물 21.6 g (63%)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 7.85 (d, 1H), 7.70 (d, 1H), 7.39 (s, 1H), 7.18 (d, 2H), 6.90 (d, 2H), 5.10 (s, 2H), 4.45 (t, 1H), 3.96 (t, 2H), 3.84 (s, 2H), 3.74 (s, 3H), 3.40 (q, 2H), 3.33 (t, 2H), 2.86 (t, 2H), 2.29 (s, 3H), 2.09 (s, 3H), 1.98 (qn, 2H), 1.39 (s, 2H), 1.27/1.21 (d+d, 4H), 1.18/1.12 (d+d, 4H), 1.03/0.94 (d+d, 2H), 0.84 (s, 6H); 13C NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 166.8, 159.7, 156.3, 153.6, 150.8, 147.8, 140.2, 137.6, 137.3, 136, 130.2, 129.1, 127.7, 123.0, 120.4, 115.6, 114.3, 74.0, 66.8, 62.2, 61.5, 59.0, 55.6, 50.0, 46.9, 46.0, 46.0, 43.3, 39.7, 33.5, 30.1, 24.6, 21.0, 15.5, 10.9; HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C41H50ClN6O5에 대한 계산치: 741.3531 실측치: 741.3530.
단계 D: (4-메톡시페닐)메틸 6-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-3-[1-[[3-(2-히드록시에톡시)-5,7-디메틸-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실레이트
시클로헥산올 66 mL 중 단계 C로부터의 생성물 7.1 g (9.6 mmol), 1,3-벤조티아졸-2-아민 2.8 g (19 mmol), N-에틸-N-이소프로필-프로판-2-아민 4.8 mL (28 mmol), Pd2(dba)3 861 mg (0.94 mmol) 및 XantPhos 1.1 g (1.9 mmol)의 혼합물을 130℃에서 2시간 동안 교반하였다. 생성물을 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 용리액으로서 DCM 및 MeOH 사용)에 의해 정제하여 목적 생성물 5.71 g (63%)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 7.95 (d, 1H), 7.81 (brd, 1H), 7.69 (d, 1H), 7.49 (brs, 1H), 7.39 (s, 1H), 7.35 (m, 1H), 7.19 (m, 2H), 7.16 (m, 1H), 6.91 (m, 2H), 5.10 (s, 2H), 4.46 (t, 1H), 3.99 (m, 2H), 3.85 (s, 2H), 3.75 (s, 3H), 3.40 (m, 2H), 3.34 (t, 2H), 2.85 (t, 2H), 2.32 (s, 3H), 2.11 (s, 3H), 1.99 (m, 2H), 1.45-0.9 (m, 12H), 0.84 (s, 6H); HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C48H55N8O5S에 대한 계산치: 855.4016 실측치: 855.4011.
단계 E: (4-메톡시페닐)메틸 6-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-3-[1-[[3,5-디메틸-7-[2-(p-톨릴술포닐옥시)에톡시]-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실레이트
디클로로메탄 50 mL 중 단계 D로부터의 생성물 5.0 g (5.8 mmol)에 N,N-디에틸에탄아민 2.5 mL (3.1 당량) 및 p-톨릴술포닐 4-메틸벤젠술포네이트 2.9 g (1.5 당량)을 첨가한 다음, 혼합물을 18시간 동안 교반하였다. 생성물을 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 용리액으로서 DCM 및 EtOAc 사용)에 의해 정제하여 목적 생성물 2.95 g (50%)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 7.95 (d, 1H), 7.81 (brs, 1H), 7.76 (m, 2H), 7.45 (brs, 1H), 7.45 (m, 2H), 7.40 (s, 1H), 7.35 (m, 1H), 7.18 (m, 2H), 7.17 (m, 1H), 6.97 (d, 1H), 6.90 (m, 2H), 5.10 (s, 2H), 4.05 (m, 2H), 4.00 (m, 2H), 3.82 (s, 2H), 3.74 (s, 3H), 3.47 (m, 2H), 2.85 (m, 2H), 2.40 (s, 3H), 2.32 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.98 (m, 2H), 1.87-1.34 (m, 12H), 0.81 (s, 6H); HRMS-ESI (m/z): [M+Na]+ C55H61N8O7S2에 대한 계산치: 1009.4105 실측치: 1009.4102.
제조예 17: tert-부틸-[2-[[3-[[5-메틸-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)피라졸-1-일]메틸]-1-아다만틸]옥시]에톡시]-디페닐-실란
단계 A: (3-브로모-1-아다만틸)메탄올
THF (25 mL) 중 3-브로모아다만탄-1-카르복실산 (10.0 g, 38.6 mmol)에 THF 중 BH3-THF의 1 M 용액 (115 mL, 3 당량)을 천천히 첨가하고, 혼합물을 48시간 동안 교반하였다. 메탄올을 첨가하고 30분 동안 교반한 후, 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 용리액으로서 헵탄 및 MTBE)에 의해 정제하여 목적 생성물 (8.37 g, 88%)을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 4.50 (t, 1H), 3.02 (d, 2H), 2.28/2.21 (dm+dm, 4H), 2.11 (m, 2H), 2.07 (s, 2H), 1.66/1.56 (dm+dm, 2H), 1.48/1.39 (dm+dm, 4H); 13C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ ppm 70.9, 69.3, 51.3, 49.0, 40.6, 37.3, 35.1, 32.3.
단계 B: 1-[(3-브로모-1-아다만틸)메틸]피라졸
톨루엔 (100 mL) 중 단계 A로부터의 생성물 (8.37 g, 34.1 mmol), 1H-피라졸 (2.79 g, 1.2 당량)에 (시아노메틸렌)트리부틸포스포란 (10.7 mL, 1.2 당량)을 첨가하고, 반응 혼합물을 90℃에서 2시간 동안 교반하였다. 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 용리액으로서 헵탄 및 MTBE)에 의해 정제하여 목적 생성물 (8.50 g, 84%)을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 7.63 (dd, 1H), 7.43 (dd, 1H), 6.23 (t, 1H), 3.87 (s, 2H), 2.24/2.13 (m+m, 4H), 2.10 (m, 2H), 2.07 (s, 2H), 1.63/1.50 (m+m, 2H), 1.47/1.43 (m+m, 4H); 13C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ ppm 138.9, 131.7, 105.1, 68.0, 61.8, 51.8, 48.5, 39.8, 38.3, 34.6, 32.1; HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C14H20BrN2에 대한 계산치: 295.0810 실측치: 295.0804.
단계 C: 1-[(3-브로모-1-아다만틸)메틸]-5-메틸-피라졸
THF (30 mL) 중 단계 B로부터의 생성물 (1.70 g, 5.76 mmol)에 -78℃에서 부틸리튬 (THF 중 2.5 M, 12 mL, 5 당량)을 첨가하였다. 1시간 후, 아이오도메탄 (7.2 mL, 5 당량)을 혼합물에 첨가하였다. 10분 후, 반응 혼합물을 NH4Cl의 포화 용액으로 켄칭하고, EtOAc로 추출하고, 합한 유기 층을 건조시키고, 농축시켜 목적 생성물 (2.0 g, 112%)을 수득하였으며, 이것을 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 7.31 (d, 1H), 6.01 (d, 1H), 3.76 (s, 2H), 2.25/2.15 (d+d, 4H), 2.24 (s, 3H), 2.16 (s, 2H), 2.10 (m, 2H), 1.63/1.52 (d+d, 2H), 1.52/1.49 (d+d, 4H); 13C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ ppm 139.2, 138.0, 105.2, 68.2, 58.3, 52.1, 48.5, 40.5, 38.4, 34.5, 32.2, 11.8; HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ 계산치 C15H22BrN2: 309.0966 실측치: 309.0962.
단계 D: 2-[[3-[(5-메틸피라졸-1-일)메틸]-1-아다만틸]옥시]에탄올
단계 C로부터의 생성물 (2.00 g, 6.47 mmol), 에틸렌 글리콜 (14.4 mL, 40 당량), 및 DIPEA (5.6 mL, 5 당량)의 혼합물을 120℃에서 6시간 동안 교반하였다. 물로 희석하고 EtOAc로 추출한 후, 합한 유기 상을 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 용리액으로서 헵탄 및 MTBE)에 의해 정제하여 목적 생성물 (1.62 g, 86.6%)을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 7.28 (d, 1H), 5.99 (m, 1H), 4.46 (t, 1H), 3.75 (s, 2H), 3.40 (m, 2H), 3.32 (m, 2H), 2.23 (brs, 3H), 2.13 (m, 2H), 1.61/1.52 (m+m, 4H), 1.47/1.43 (m+m, 2H), 1.45 (s, 2H), 1.44-1.35 (m, 4H); 13C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ ppm 137.8, 105.1, 61.8, 61.5, 59.0, 44.6, 40.8, 39.6, 35.7, 30.0, 11.9; HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C17H27N2O2에 대한 계산치: 291.2073 실측치: 291.2069.
단계 E: tert-부틸-[2-[[3-[(5-메틸피라졸-1-일)메틸]-1-아다만틸]옥시]에톡시]-디페닐-실란
DCM (67 ml) 중 단계 D로부터의 생성물 (6.52 g, 22.5 mmol) 및 이미다졸 (2.29 g, 1.5 당량)에 tert-부틸-클로로-디페닐-실란 (6.9 mL, 1.2 당량)을 첨가하고, 반응 혼합물을 1시간 동안 교반하였다. 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 용리액으로서 헵탄 및 MTBE)에 의해 정제하여 목적 생성물 (11.0 g, 92.7%)을 수득하였다. LC/MS (C33H45N2O2Si) 529 [M+H]+.
단계 F: tert-부틸-[2-[[3-[(4-아이오도-5-메틸-피라졸-1-일)메틸]-1-아다만틸]옥시]에톡시]-디페닐-실란
DMF (105 mL) 중 단계 E로부터의 생성물 (11.0 g, 20.8 mmol)에 N-아이오도숙신이미드 (5.85 g, 1.25 당량)를 첨가하고, 반응 혼합물을 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 희석하고 DCM으로 추출한 후, 합한 유기 상을 포화 티오황산나트륨 및 염수로 세척하고, 건조시키고, 증발시켜 목적 생성물 (11.0 g, 81%)을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 7.70-7.36 (m, 10H), 7.44 (s, 1H), 3.86 (s, 2H), 3.67 (t, 2H), 3.45 (t, 2H), 2.24 (s, 3H), 2.12 (m, 2H), 1.66-1.32 (m, 12H), 0.98 (s, 9H) 13C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ ppm 142.4, 140.9, 64.4, 61.4, 60.4, 60.3, 30.0, 27.1, 12.2; HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C33H44IN2O2Si에 대한 계산치: 655.2217 실측치: 655.2217.
단계 G: tert-부틸-[2-[[3-[[5-메틸-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)피라졸-1-일]메틸]-1-아다만틸]옥시]에톡시]-디페닐-실란
THF (84 mL) 중 단계 F로부터의 생성물 (11.0 g, 16.8 mmol)에 0℃에서 클로로 (이소프로필)마그네슘-LiCl (THF 중 1.3 M, 17 mL, 1.2 당량)을 첨가하고, 반응 혼합물을 40분 동안 교반하고, 2-이소프로폭시-4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란 (10.3 mL, 3 당량)으로 처리하고, 10분 동안 교반하였다. 포화 용액 NH4Cl로 희석하고, EtOAc로 추출한 후, 합한 유기 상을 농축시키고, 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 용리액으로서 헵탄 및 MTBE)에 의해 정제하여 목적 생성물 (9.0 g, 82%)을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 7.66 (d, 4H), 7.47 (s, 1H), 7.45 (t, 2H), 7.40 (t, 4H), 3.77 (s, 2H), 3.67 (t, 2H), 3.44 (t, 2H), 2.36 (s, 3H), 2.11 (br, 2H), 1.60/1.48 (d+d, 4H), 1.44 (d, 2H), 1.44 (s, 2H), 1.40 (d, 4H), 1.23 (s, 12H), 0.97 (s, 9H); 13C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ ppm 146.9, 144.2, 133.8, 130.2, 128.3, 125.7, 104.6, 83.0, 72.5, 64.4, 61.4, 58.9, 44.6, 40.7, 39.6, 38.7, 35.6, 30.0, 27.1, 25.2, 19.3, 12.1; HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C39H56BN2O4Si에 대한 계산치: 655.4102 실측치: 655.4108.
제조예 18: (4-메톡시페닐)메틸 6-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-3-[5-메틸-1-[[3-[2-(p-톨릴술포닐옥시)에톡시]-1-아다만틸]메틸]피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실레이트
단계 A: (4-메톡시페닐)메틸 3-[1-[[3-[2-[tert-부틸 (디페닐)실릴]옥시에톡시]-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]-6-[3-(3,6-디클로로-5-메틸-피리다진-4-일)프로필아미노]피리딘-2-카르복실레이트
1,4-디옥산 (41 mL) 및 H2O (6.8 mL) 중 제조예 11로부터의 생성물 (3.67 g, 6.79 mmol), 제조예 17로부터의 생성물 (4.89 g, 1.1 당량), Pd(AtaPhos)2Cl2 (301 mg, 0.1 당량) 및 Cs2CO3 (6.64 g, 3 당량)의 혼합물을 80℃에서 12시간 동안 교반하였다. 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 용리액으로서 헵탄 및 EtOAc)에 의해 정제하여 목적 생성물 (3.0 g, 45%)을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 7.69-7.37 (m, 10H), 7.31 (d, 1H), 7.24 (s, 1H), 7.12 (m, 2H), 6.98 (t, 1H), 6.83 (m, 2H), 6.62 (d, 1H), 4.99 (s, 2H), 3.76 (s, 2H), 3.70 (s, 3H), 3.66 (t, 2H), 3.45 (t, 2H), 3.35 (m, 2H), 2.85 (m, 2H), 2.34 (s, 3H), 2.12 (m, 2H), 2.02 (s, 3H), 1.77 (m, 2H), 1.65-1.33 (m, 12H), 0.97 (s, 9H); HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ 계산치 C55H65Cl2N6O5Si: 987.4163 실측치: 987.4158.
단계 B: (4-메톡시페닐)메틸 3-[1-[[3-[2-[tert-부틸 (디페닐)실릴]옥시에톡시]-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]-6-(3-클로로-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일)피리딘-2-카르복실레이트
1,4-디옥산 (15 mL) 중 단계 A로부터의 생성물 (3.00 g, 3.00 mmol), Cs2CO3 (1.95 g, 2 당량), DIPEA (1.0 mL, 2 당량) 및 Pd(Ataphos)2Cl2 (212 mg, 0.1 당량)의 혼합물을 110℃에서 18시간 동안 교반하였다. 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 용리액으로서 DCM 및 MeOH)에 의해 정제하여 목적 생성물 (1.74 g, 60%)을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 7.84 (d, 1H), 7.68 (d, 1H), 7.68-7.37 (m, 10H), 7.36 (s, 1H), 7.16 (m, 2H), 6.87 (m, 2H), 5.08 (s, 2H), 3.96 (m, 2H), 3.81 (s, 2H), 3.72 (s, 3H), 3.67 (t, 2H), 3.46 (t, 2H), 2.87 (t, 2H), 2.29 (s, 3H), 2.13 (m, 2H), 2.09 (s, 3H), 1.98 (m, 2H), 1.65-1.37 (m, 12H), 0.97 (s, 9H); HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C55H64ClN6O5Si에 대한 계산치: 951.4396 실측치: 951.4397.
단계 C: (4-메톡시페닐)메틸 6-(3-클로로-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일)-3-[1-[[3-(2-히드록시에톡시)-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실레이트
THF (20 mL) 중 단계 B로부터의 생성물 (1.73 g, 1.82 mmol)에 0℃에서 THF 중 TBAF의 1 M 용액 (2.0 mL, 1.1 당량)을 첨가하고, 반응 혼합물을 2시간 동안 교반하였다. 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 용리액으로서 DCM 및 MeOH)에 의해 정제하여 목적 생성물 (1.06 g, 82%)을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 7.85 (d, 1H), 7.71 (d, 1H), 7.36 (s, 1H), 7.19 (m, 2H), 6.90 (m, 2H), 5.10 (s, 2H), 4.47 (t, 1H), 3.96 (m, 2H), 3.81 (s, 2H), 3.75 (s, 3H), 3.40 (m, 2H), 3.34 (t, 2H), 2.87 (t, 2H), 2.29 (s, 3H), 2.14 (m, 2H), 2.10 (s, 3H), 1.98 (m, 2H), 1.67-1.36 (m, 12H); HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C39H46ClN6O5에 대한 계산치: 713.3218 실측치: 713.3217.
단계 D: (4-메톡시페닐)메틸 6-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-3-[1-[[3-(2-히드록시에톡시)-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실레이트
시클로헥산올 (10 mL) 중 단계 C로부터의 생성물 (1.00 g, 1.40 mmol), 1,3-벤조티아졸-2-아민 (421 mg, 2 당량), Pd2(dba)3 (128 mg, 0.1 당량), XantPhos (162 mg, 0.2 당량) 및 DIPEA (0.72 mL, 3 당량)의 혼합물을 130℃에서 1시간 동안 교반하였다. 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 용리액으로서 헵탄에 이어서 DCM 및 MeOH)에 의해 정제하여 목적 생성물 (600 mg, 53%)을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 12.18/10.84 (brs/brs, 1H), 7.94 (d, 1H), 7.83 (br, 1H), 7.69 (d, 1H), 7.57 (br, 1H), 7.36 (s, 1H), 7.35 (brt, 1H), 7.20 (d, 2H), 7.17 (brt, 1H), 6.91 (d, 2H), 5.11 (s, 2H), 4.47 (brt, 1H), 4.00 (t, 2H), 3.81 (s, 2H), 3.75 (s, 3H), 3.41 (brq, 2H), 3.35 (t, 2H), 2.85 (t, 2H), 2.32 (s, 3H), 2.14 (m, 2H), 2.12 (s, 3H), 1.99 (qn, 2H), 1.62/1.53 (d+d, 4H), 1.53 (s, 2H), 1.49/1.44 (d+d, 2H), 1.44 (s, 4H); 13C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ ppm 139.9, 137.6, 130.1, 126.4, 122.4, 122.0, 118.9, 114.2, 66.7, 61.9, 61.5, 59.5, 55.6, 45.4, 44.7, 40.8, 39.5, 35.6, 30.1, 24.3, 21.7, 12.6, 10.8; HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C46H51N8O5S에 대한 계산치: 827.3703; 실측치: 827.3709.
단계 E: (4-메톡시페닐)메틸 6-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-3-[5-메틸-1-[[3-[2-(p-톨릴술포닐옥시)에톡시]-1-아다만틸]메틸]피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실레이트
디클로로메탄 (7 mL) 중 단계 D로부터의 생성물 (600 mg, 0.726 mmol) 및 N,N-디에틸에탄아민 (0.31 mL, 3 당량)에 p-톨릴술포닐 4-메틸벤젠술포네이트 (357 mg, 1.5 당량)를 첨가하고, 반응 혼합물을 18시간 동안 교반하였다. 플래쉬 크로마토그래피 (실리카 겔, 용리액으로서 DCM 및 MeOH 사용)에 의해 정제하여 목적 생성물 354 mg (50%)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 12.22/10.85 (brs/brs, 1H), 7.94 (d, 1H), 7.81 (br, 1H), 7.77 (d, 2H), 7.70 (d, 1H), 7.52 (br, 1H), 7.45 (d, 2H), 7.37 (s, 1H), 7.35 (t, 1H), 7.19 (d, 2H), 7.17 (t, 1H), 6.89 (d, 2H), 5.10 (s, 2H), 4.05 (t, 2 H), 4.00 (t, 2H), 3.79 (s, 2H), 3.74 (s, 3H), 3.49 (t, 2H), 2.86 (t, 2H), 2.40 (s, 3H), 2.32 (s, 3H), 2.11 (m, 2H), 2.11 (s, 3H), 1.99 (qn, 2H), 1.55-1.36 (m, 12H); 13C NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 139.9, 137.6, 130.5, 130.3, 128.1, 126.4, 122.4, 122.0, 118.9, 114.2, 71.4, 66.8, 59.4, 58.2, 55.6, 45.4, 30.0, 24.2, 21.6, 21.6, 12.6, 10.9; HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C53H57N8O7S2에 대한 계산치: 981.3792 실측치: 981.3795.
제조예 1b_01: 메틸 2-(tert-부톡시카르보닐아미노)-5-[3-[4-[3-[tert-부톡시카르보닐 (메틸)아미노]프로프-1-이닐]-2-플루오로-페녹시]프로필]티아졸-4-카르복실레이트
500 mL 오븐-건조된 1구 둥근 바닥 플라스크에 PTFE-코팅된 자기 교반 막대를 장착하고, 환류 응축기를 장착하였다. 여기에 제조예 1a 13.41 g (25 mmol, 1 당량), tert-부틸 N-메틸-N-프로프-2-이닐-카르바메이트 8.46 g (50 mmol, 2 당량) 및 DIPA 50 mL (36.10 g, 50 mL, 356.8 mmol, 14.27 당량)를 채운 다음, 건조 THF 125 mL을 첨가하고, 시스템을 아르곤으로 플러싱하였다. 불활성 분위기 하에 5분 동안 교반한 후, Pd(PPh3)2Cl2 (1.25 mmol, 0.05 당량) 549 mg 및 CuI (1.25 mmol, 0.05 당량) 238 mg를 첨가하였다. 이어서 생성된 혼합물을 60℃로 가온하고, 추가의 전환이 관찰되지 않을 때까지 그 온도에서 교반하였다. 셀라이트를 반응 혼합물에 첨가하고, 휘발성 물질을 감압 하에 제거하였다. 이어서 이것을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 용리액으로서 헵탄 및 EtOAc를 사용하여 정제하여 목적 생성물 10.5 g (18.2 mmol, 73%)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 11.65 (br s, 1H), 7.31 (br d, 1H), 7.21 (br d, 1H), 7.14 (t, 1H), 4.23 (s, 2H), 4.10 (t, 2H), 3.73 (s, 3H), 3.23 (t, 2H), 2.86 (s, 3H), 2.07 (m, 2H), 1.46/1.41 (s, 18H); 13C NMR (125 MHz, DMSO-d6) δ ppm 129.1, 119.2, 115.4, 68.1, 51.9, 38.6, 33.8, 30.5, 23.2; HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C28H37FN3O7S에 대한 계산치: 578.2331, 실측치 578.2331.
제조예 2a_01: 5-[tert-부틸 (디메틸)실릴]옥시-4-[tert-부틸 (디페닐)실릴]옥시-펜탄-1-올
단계 A: 펜트-4-에닐 벤조에이트
펜트-4-엔-1-올 (0.35 mol, 1 당량) 30.00 g 및 N,N-디에틸에탄아민 (0.42 mol, 1.2 당량) 58.5 mL을 DCM 200 mL 중에서 혼합한 다음, 0℃로 냉각시켰다. 벤조일 클로라이드 (0.42 mol, 1.2 당량) 48.5 mL을 불활성 분위기 하에 0℃에서 적하 깔때기를 통해 혼합물에 첨가하였다. 첨가한 후, 혼합물을 0℃에서 30분 동안 추가로 교반한 다음, 실온에서 계속 교반하였다. 혼합물을 DCM 100 mL로 희석한 다음, 유기 상을 각각 물, 1 M NaOH, 1 M HCl, 염수로 세척하였다. 유기 상을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시키고, 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 용리액으로서 헵탄 및 EtOAc를 사용하여 정제하여 목적 생성물 63.19 g (95%)을 무색 액체로서 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.97 (dd, 2H), 7.66 (t, 1H), 7.53 (t, 2H), 5.91-5.81 (m, 1H), 5.09-4.97 (m, 2H), 4.27 (t, 2H), 2.17 (q, 2H), 1.81 (qv, 2H); 13C NMR (125 MHz, DMSO-d6) δ ppm 166.2, 138.2, 133.8, 130.3, 129.6, 129.2, 115.8, 64.5, 30.1, 27.8; GC-MS-EI (m/z): [M]+ C12H14O2에 대한 계산치: 190.1, 실측치 190.
단계 B: 4,5-디히드록시펜틸 벤조에이트
단계 A로부터의 생성물 42.22 g (0.26 mol, 1.0 당량), 4-메틸-4-옥시도-모르폴린-4-윰 수화물 50.40 g (0.37 mol, 1.7 당량)을 2-메틸프로판-2-올 360 mL 및 물 40 mL 중에서 혼합한 다음, 테트라옥소오스뮴 6.57 g (2-메틸프로판-2-올 중 2.5 w%, 0.64 mmol, 0.002 당량)을 첨가하고, 혼합물을 60℃에서 24시간 동안 교반하였다. 완전한 전환이 관찰되었다. 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 1 M Na2S2O3를 첨가한 다음, 실온에서 추가로 10분 동안 교반하였다. DCM을 첨가하고, 유기 상을 분리하고, 각각 물, 염수로 세척하였다. 용액을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시키고, 용리액으로서 헵탄 및 EtOAc를 사용하여 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 목적 생성물 36.9 g (63%)을 백색 고체로서 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.99-7.50 (m, 5H), 4.50 (m, 2H), 4.28 (m, 2H), 3.45 (m, 1H), 3.30-3.24 (m+m, 2H), 1.85-1.72 (m+m, 2H), 1.59-1.33 (m+m, 2H); 13C NMR (125 MHz, DMSO-d6) δ ppm 166.2, 133.8-129.1, 71.2, 66.3, 65.5, 30.3, 25.2; HRMS-ESI (m/z): [M+Na]+ C12H16NaO4에 대한 계산치: 247.0941, 실측치 247.0941.
단계 C: 5-[tert-부틸 (디메틸)실릴]옥시-4-히드록시-펜틸]벤조에이트
단계 B로부터의 생성물 24.86 g (0.11 mol, 1 당량) 및 이미다졸 15.09 g (0.22 mol, 2 당량)을 N,N-디메틸포름아미드 120 mL 중에서 혼합한 다음, 불활성 분위기 하에 -20℃로 냉각시켰다. N,N-디메틸포름아미드 40 mL 중 tert-부틸-클로로-디메틸-실란 16.71 g (0.11 mol, 1 당량)을 30분의 기간에 걸쳐 느린 속도로 첨가하고, DCM 10 mL로 지지한 다음, 실온으로 가온되도록 두고, 추가로 계속 교반하였다. 완전한 전환이 관찰되었다. 진한 NH4Cl로 켄칭한 다음, 대부분의 휘발성 물질을 증발시켰다. EtOAc 및 물을 잔류물에 첨가하고, 유기 상을 분리한 다음, 물 및 염수로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시키고, 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 용리액으로서 헵탄 및 EtOAc를 사용하여 정제하여 목적 생성물 33.71 g (90%)을 무색 오일로서 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.95 (m, 2H), 7.66 (m, 1H), 7.52 (m, 2H), 4.58 (d, 1H), 4.29 (m, 2H), 3.51-3.35 (dd+dd, 2H), 3.48 (m, 1H), 1.86-1.74 (m+m, 2H), 1.67-1.34 (m+m, 2H), 0.83 (s, 9H), 0.01 (s, 6H); 13C NMR (125 MHz, DMSO-d6) δ ppm 166.2, 133.7, 130.4, 129.5, 129.2, 70.6, 67.7, 65.3, 30.2, 26.3, 24.9, -4.9.
단계 D: [5-[tert-부틸 (디메틸)실릴]옥시-4-[tert-부틸 (디페닐)실릴]옥시-펜틸]벤조에이트
단계 C로부터의 생성물 33.51 g (0.10 mol, 1 당량), 이미다졸 16.85 g (0.25 mol, 2.5 당량) 및 N,N-디메틸피리딘-4-아민 1.21 g (0.01, 0.1 당량)을 N,N-디메틸포름아미드 230 mL 중에서 혼합한 다음, tert-부틸-클로로-디페닐-실란 38 mL (0.15 mol, 1.5 당량)를 N,N-디메틸포름아미드 20 mL로 지지된 느린 속도로 첨가한 다음, 50℃에서 밤새 교반하였다. 완전한 전환이 관찰되었다. 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 진한 NH4Cl로 켄칭한 다음, 대부분의 휘발성 물질을 증발시켰다. EtOAc 및 물을 잔류물에 첨가하고, 유기 상을 분리한 다음, 물 및 염수로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시키고, 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 용리액으로서 헵탄 및 EtOAc를 사용하여 정제하여 목적 생성물 56.43 g (99%)을 무색 농후한 오일로서 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.91-7.37 (m, 15H), 4.17 (m, 2 H), 3.76 (m, 1 H), 3.45 (m, 2H), 1.72 (m, 2H), 1.66-1.57 (m+m, 2H), 0.99 (s, 9H), 0.74 (s, 9H), -0.12/-0.16 (s +s, 6H); 13C NMR (125 MHz, DMSO-d6) δ ppm 166.1, 136.0-128.0, 73.3, 66.0, 65.1, 30.3, 27.3, 26.1, 24.0, -5.1; HRMS-ESI (m/z): [M+Na]+ C34H48NaO4Si2에 대한 계산치: 599.2983, 실측치 599.2981.
단계 E: 5-[tert-부틸 (디메틸)실릴]옥시-4-[tert-부틸 (디페닐)실릴]옥시-펜탄-1-올
46.10 g의 단계 D로부터의 생성물 (0.08 mol, 1 당량)을 227 mL의 MeOH 및 117 mL의 THF에 용해시킨 다음, 85 mL의 물 중 12.79 g의 NaOH (0.32 mol, 4.0 당량)를 천천히 첨가하면서 혼합물을 얼음으로 냉각시켰다. 첨가 후, 혼합물을 완전한 전환이 관찰될 때까지 (약 4시간) 실온에서 교반되도록 하였다. EtOAc 및 물을 첨가한 다음, 분리하고, 유기 상을 염수로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시키고, 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 용리액으로서 헵탄 및 EtOAc를 사용하여 정제하여 목적 생성물 29.32 g (78%)을 무색 오일로서 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.65-7.37 (m, 10H), 4.34 (t, 1H), 3.71 (m, 1H), 3.42 (m, 2H), 3.26 (m, 2H), 1.52 (m, 2H), 1.42 (m, 2H), 0.99 (s, 9H), 0.77 (s, 9H), -0.13 (s, 6H); 13C NMR (125 MHz, DMSO-d6) δ ppm 135.8, 135.8, 134.3, 134.0, 130.3, 130.2, 128.2, 128.0, 74.0, 66.4, 61.4, 30.4, 28.3, 27.3, 26.2, -5.1; HRMS-ESI (m/z): [M+Na]+ C27H44NaO3Si2에 대한 계산치: 495.2721, 실측치 495.2706.
제조예 3a_01: 메틸 5-[3-[4-[3-[tert-부톡시카르보닐 (메틸)아미노]프로프-1-이닐]-2-플루오로-페녹시]프로필]-2-[[5-[tert-부틸 (디메틸)실릴]옥시-4-[tert-부틸 (디페닐)실릴]옥시-펜틸]아미노]티아졸-4-카르복실레이트
단계 A: 메틸 2-[tert-부톡시카르보닐-[5-[tert-부틸 (디메틸)실릴]옥시-4-[tert-부틸 (디페닐)실릴]옥시-펜틸]아미노]-5-[3-[4-[3-[tert-부톡시카르보닐 (메틸)아미노]프로프-1-이닐]-2-플루오로-페녹시]프로필]티아졸-4-카르복실레이트
적절한 카르바메이트로서의 제조예 1b_01 및 적절한 알콜로서의 제조예 2a_01로부터 출발하여 미츠노부 일반적 절차 II를 사용하여 목적 생성물 2.5 g (61%)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.60-7.33 (m, 10H), 7.28 (dd, 1H), 7.17 (m, 1H), 7.1 (t, 1H), 4.22 (s, 2H), 4.09 (t, 2H), 3.94 (m, 2H), 3.71 (s, 3H), 3.67 (m, 1H), 3.38 (m, 2H), 3.22 (t, 2H), 2.85 (s, 3H), 2.07 (m, 2H), 1.65 (m, 2H), 1.48 (m, 2H), 1.45/1.40 (s +s, 18H), 0.93 (s, 9H), 0.71 (s, 9H), -0.17/-0.22 (s +s, 6H); 13C NMR (125 MHz, DMSO-d6) δ ppm 147.4, 129, 119.3, 115.4, 85.1, 82.3, 73.3, 68.1, 65.6, 51.9, 46.5, 38.4, 33.8, 30.5, 30.5, 28.5/28, 27.2, 26.0, 23.1, 23.0, -5.3; HRMS-ESI (m/z): C55H79FN3O9SSi2에 대한 [M+H]+ 계산치: 1032.5054, 실측치 1032.5060.
단계 B: 메틸 5-[3-[4-[3-[tert-부톡시카르보닐 (메틸)아미노]프로프-1-이닐]-2-플루오로-페녹시]프로필]-2-[[5-[tert-부틸 (디메틸)실릴]옥시-4-[tert-부틸 (디페닐)실릴]옥시-펜틸]아미노]티아졸-4-카르복실레이트
적절한 카르바메이트로서의 단계 A로부터의 생성물로부터 출발하여 HFIP를 사용한 탈보호 일반적 절차를 사용하여 목적 생성물 1.2 g (53%)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.68-7.35 (m, 10H), 7.56 (t, 1H), 7.30 (d, 1H), 7.20 (d, 1H), 7.11 (t, 1H), 4.22 (br., 2H), 4.07 (t, 2H), 3.70 (m, 1H), 3.68 (s, 3H), 3.42/3.38 (dd+dd, 2H), 3.11 (t, 2H), 3.04 (brq., 2H), 2.86 (br., 3H), 1.99 (quint., 2H), 1.54 (m, 2H), 1.53/1.45 (m+m, 2H), 1.41 (s, 9H), 0.97 (s, 9H), 0.74 (s, 9H), -0.14/-0.18 (s +s, 6H); 13C NMR (125 MHz, DMSO-d6) δ ppm 164.6, 163.0, 154.9, 151.4, 147.5, 136.9, 136.0, 129.1, 119.3, 115.4, 114.8, 85.2, 82.3, 79.8, 73.6, 68.0, 66.2, 51.7, 44.7, 38.5, 33.8, 31.1, 30.6, 28.5, 27.2, 26.2, 24.3, 23.3, 19.4, 18.3, -5.2; HRMS-ESI (m/z): C50H71FN3O7SSi2에 대한 [M+H]+ 계산치: 932.4530, 실측치 932.4526.
제조예 3e_01: 에틸 5-(3-클로로프로필)-2-(메틸아미노)티아졸-4-카르복실레이트
에탄올 100 mL 중 메틸티오우레아 (25.0 mmol, 1 당량) 2.25 g의 현탁액을 0℃로 냉각시킨 다음, 에틸 3-브로모-6-클로로-2-옥소-헥사노에이트 (27.5 mmol, 1.1 당량) 7.46 g를 이 온도에서 적가하였다. 0℃에서 15분 동안 교반한 후, TEA (5.06 g, 50 mmol, 2 당량) 7 mL을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 완전한 전환이 관찰되었다. 휘발성 물질을 진공 하에 제거한 다음, 생성된 잔류물을 EtOAc와 물 사이에 분배하였다. 층을 분리한 다음, 유기 층을 물에 이어서 염수로 세척하였다. 합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 감압 하에 농축시켰다. 이어서 이것을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 용리액으로서 헵탄 및 EtOAc를 사용하여 정제하여 목적 생성물 5 g (76%)을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.55 (q, 1H), 4.21 (q, 2H), 3.65 (t, 2H), 3.09 (m, 2H), 2.78 (d, 3H), 1.98 (m, 2H), 1.26 (t, 3H); 13C NMR (125 MHz, DMSO-d6) δ ppm 165.6, 162.5, 137.4, 135.5, 60.5, 45.0, 34.1, 31.2, 24.4, 14.7; HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C10H16ClN2O2S에 대한 계산치: 263.0616, 실측치 263.0615.
제조예 3h_01: 메틸 5-[3-[4-[3-[tert-부톡시카르보닐 (메틸)아미노]프로프-1-이닐]-2-플루오로-페녹시]프로필]-2-[2-(2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)에틸아미노]티아졸-4-카르복실레이트
단계 A: 메틸 2-[tert-부톡시카르보닐-[2-(2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)에틸]아미노]-5-[3-(2-플루오로-4-아이오도-페녹시)프로필]티아졸-4-카르복실레이트
적절한 알콜로서 제조예 1a 2.68 g (5 mmol, 1 당량) 및 2-(2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)에탄올 1.46 g (1.42 mL, 10 mmol, 2 당량)으로부터 출발하여 미츠노부 일반적 절차 II를 사용하여 목적 생성물 2.8 g (84%)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.57 (dd, 1H), 7.44 (dm, 1H), 6.96 (t, 1H), 4.12/4.02 (m+m, 2H), 4.07 (m, 1H), 4.05 (t, 2H), 4.02/3.54 (dd+dd, 2H), 3.75 (s, 3H), 3.21 (t, 2H), 2.06 (m, 2H), 1.86/1.82 (m+m, 2H), 1.51 (s, 9H), 1.29 (s, 3H), 1.22 (s, 3H); 13C NMR (125 MHz, DMSO-d6) δ ppm 134.0, 124.9, 117.6, 73.8, 68.9, 68.1, 52.0, 44.0, 32.2, 30.5, 28.1, 27.3, 25.9, 23.1; HRMS-ESI (m/z): C26H35FIN2O7S에 대한 [M+H]+ 계산치: 665.1188, 실측치 665.1175.
단계 B: 메틸 2-[2-(2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)에틸아미노]-5-[3-(2-플루오로-4-아이오도-페녹시)프로필]티아졸-4-카르복실레이트
적절한 카르바메이트로서의 단계 A로부터의 생성물 2.5 g (3.80 mmol)으로부터 출발하여 HFIP를 사용한 탈보호 일반적 절차를 사용하여 목적 생성물 1.6 g (75%)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.6 (t, 1H), 7.59 (dd, 1H), 7.45 (dm, 1H), 6.97 (dd, 1H), 4.10 (m, 1H), 4.03 (t, 2H), 4.01/3.48 (dd+dd, 2H), 3.69 (s, 3H), 3.27/3.19 (m+m, 2H), 3.11 (t, 2H), 1.99 (m, 2H), 1.76/1.72 (m+m, 2H), 1.31 (s, 3H), 1.25 (s, 3 H); HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C21H27FIN2O5S에 대한 계산치: 565.0663, 실측치 565.0642.
단계 C: 메틸 5-[3-[4-[3-[tert-부톡시카르보닐 (메틸)아미노]프로프-1-이닐]-2-플루오로-페녹시]프로필]-2-[2-(2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)에틸아미노]티아졸-4-카르복실레이트
단계 B로부터의 생성물 400 mg (0.71 mmol, 1 당량) 및 적절한 아세틸렌으로서의 tert-부틸 N-메틸-N-프로프-2-이닐-카르바메이트 240 mg (1.42 mmol, 2 당량)으로부터 출발하여 소노가시라 일반적 절차를 사용하여 목적 생성물 300 mg (70%)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.60 (t, 1H), 7.31 (brd, 1H), 7.21 (dd, 1H), 7.13 (t, 1H), 4.23 (brs, 2H), 4.09 (m, 1H), 4.07 (t, 2H), 4.00/3.48 (dd+dd, 2H), 3.69 (s, 3H), 3.27/3.19 (m+m, 2H), 3.12 (t, 2H), 2.86 (brs, 3H), 2.00 (m, 2H), 1.74 (m, 2H), 1.41 (s, 9H), 1.31 (s, 3H), 1.25 (s, 3H); 13C NMR (125 MHz, DMSO-d6) δ ppm 164.5, 136.9, 136.4, 129.1, 119.3, 115.4, 85.2, 82.3, 73.8, 69.0, 68.0, 51.7, 41.4, 38.4, 33.8, 33.2, 30.6, 28.5, 27.3, 26.1, 23.3; HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C30H41FN3O7S에 대한 계산치: 606.2644, 실측치 606.2650.
제조예 3n_01: 메틸 5-[3-[4-[3-[tert-부톡시카르보닐 (메틸)아미노]프로프-1-이닐]-2-플루오로-페녹시]프로필]-2-[3-[tert-부틸 (디메틸)실릴]옥시프로필아미노]티아졸-4-카르복실레이트
단계 A: 메틸 2-[tert-부톡시카르보닐-[3-[tert-부틸 (디메틸)실릴]옥시프로필]아미노]-5-[3-[4-[3-[tert-부톡시카르보닐 (메틸)아미노]프로프-1-이닐]-2-플루오로-페녹시]프로필]티아졸-4-카르복실레이트
적절한 카르바메이트로서의 제조예 1b_01 (1 mmol, 1 당량) 577 mg 및 적절한 알콜로서의 3-[tert-부틸 (디메틸)실릴]옥시프로판-1-올 (2 mmol, 2 당량) 380 mg으로부터 출발하여 미츠노부 일반적 절차 II를 사용하여 목적 생성물 600 mg (80%)을 수득하였다.
단계 B: 메틸 5-[3-[4-[3-[tert-부톡시카르보닐 (메틸)아미노]프로프-1-이닐]-2-플루오로-페녹시]프로필]-2-[3-[tert-부틸 (디메틸)실릴]옥시프로필아미노]티아졸-4-카르복실레이트
적절한 카르바메이트로서의 단계 A로부터의 생성물로부터 출발하여 HFIP를 사용한 탈보호 일반적 절차를 사용하여 목적 생성물 310 mg (47%)을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.50 (t, 1H), 7.30 (d, 1H), 7.20 (d, 1H), 7.11 (t, 1H), 4.21 (bs, 2H), 4.05 (t, 2H), 3.62 (t, 2H), 3.67 (s, 3H), 3.19 (q, 2H), 3.10 (t, 2H), 2.84 (brs, 3H), 2.04-1.94 (m, 2H), 1.74-1.63 (m, 2H), 1.40 (s, 9H), 0.84 (s, 9H), 0.00 (s, 6H).
제조예 4a_01: N-(6-클로로-4-메틸-피리다진-3-일)-3-(2-트리메틸실릴에톡시메틸)-1,3-벤조티아졸-2-이민
단계 A: N-(6-클로로-4-메틸-피리다진-3-일)-1,3-벤조티아졸-2-아민
2 L 오븐-건조된 1구 둥근 바닥 플라스크에 PTFE-코팅된 자기 교반 막대를 장착하고, 환류 응축기를 장착하였다. 여기에 6-클로로-4-메틸-피리다진-3-아민 34.0 g (237 mmol, 1 당량), 2-클로로-1,3-벤조티아졸 34 mL (44.2 g, 260 mmol, 1.1 당량), DIPEA 124 mL (91.8 g, 710 mmol, 3 당량) 및 Cs2CO3 137 g (710 mmol, 3 당량)을 채운 다음, DMF 1 L을 첨가하고, 시스템을 아르곤으로 플러싱하였다. 불활성 분위기 하에 5분 동안 교반한 후, Pd2(dba)3 2.01 g (5.9 mmol, 0.025 당량) 및 XantPhos 6.85 g (11.8 mmol, 0.05 당량)을 첨가하였다. 이어서 생성된 혼합물을 75℃로 가온하고, 그 온도에서 4시간 동안 교반하여 완전한 전환에 도달하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각되도록 한 다음, 이것을 격렬히 교반하면서 물 3L에 부었다. 30분 후, 침전된 생성물을 여과에 의해 제거한 다음, 이것을 물로 2회 (2 x 2 L) 세척하였다. 생성물을 고진공 하에 밤새 건조시켰다. 건조된 조 생성물을 헵탄:Et2O (3 : 2) 1 L 중에서 30분 동안 교반한 다음, 여과하여 목적 생성물 64.5 g (98%)을 녹색 분말로서 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 11.96 (brs, 1H), 7.86 (d, 1H), 7.65 (s, 1H), 7.51 (d, 1H), 7.38 (t, 1H), 7.21 (t, 1H), 2.37 (s, 3H); 13C NMR (125 MHz, DMSO-d6) δ ppm 130.3, 129.5, 126.6, 122.8, 122.3, 17.2; HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C12H10ClN4S에 대한 계산치: 277.0309, 실측치 277.0305.
단계 B: N-(6-클로로-4-메틸-피리다진-3-일)-3-(2-트리메틸실릴에톡시메틸)-1,3-벤조티아졸-2-이민
PTFE-코팅된 자기 교반 막대가 구비된 2 L 오븐-건조된 1구 둥근 바닥 플라스크에 건조 DCM 1 L 중 단계 A로부터의 생성물 64.5 g (236 mmol, 1 당량), DIPEA 123 mL (9.16 g, 708 mmol, 3 당량), N,N-디메틸피리딘-4-아민 14.43 g (11.81 mmol, 0.05 당량)을 채우고, N2 하에 0℃로 냉각시켰다. 그리고 강력한 기계적 교반 동안 46.00 mL의 2-(클로로메톡시)에틸-트리메틸-실란 (43.32 g, 259 mmol, 1.1 eq.)을 5분 기간에 걸쳐 혼합물에 적가하였다. 반응이 완전한 전환에 도달하였을 때 이것을 0℃에서 30분 동안 교반하였다. 물 24.5 mL을 반응 혼합물에 첨가한 다음, 셀라이트를 반응 혼합물에 첨가하고, 휘발성 물질을 감압 하에 제거하였다. 이것을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 용리액으로서 헵탄 및 EtOAc를 사용하여 정제하여 목적 생성물 46.62 g (48%)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.85 (dm, 1H), 7.72 (q, 1H), 7.53 (dm, 1H), 7.47 (m, 1H), 7.29 (m, 1H), 5.89 (s, 2H), 3.70 (m, 2H), 2.39 (d, 3H), 0.90 (m, 2H), -0.12 (s, 9H); 13C NMR (125 MHz, DMSO-d6) δ ppm 159.5, 158.5, 150.0, 138.1, 137.4, 129.5, 127.4, 125.5, 123.8, 123.2, 112.4, 73.0, 66.8, 17.7, 17.1, -1.0; HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C18H24ClN4OSSi에 대한 계산치: 407.1123, 실측치 407.1120.
제조예 5a_01: 메틸 5-[3-[4-[3-[tert-부톡시카르보닐 (메틸)아미노]프로프-1-이닐]-2-플루오로-페녹시]프로필]-2-[[4-[tert-부틸 (디페닐)실릴]옥시-5-(p-톨릴술포닐옥시)펜틸]-[5-메틸-6-[(Z)-[3-(2-트리메틸실릴에톡시메틸)-1,3-벤조티아졸-2-일리덴]아미노]피리다진-3-일]아미노]티아졸-4-카르복실레이트
단계 A: 메틸 5-[3-[4-[3-[tert-부톡시카르보닐 (메틸)아미노]프로프-1-이닐]-2-플루오로-페녹시]프로필]-2-[[5-[tert-부틸 (디메틸)실릴]옥시-4-[tert-부틸 (디페닐실릴]옥시-펜틸]-[5-메틸-6-[(Z)-[3-(2-트리메틸실릴에톡시메틸)-1,3-벤조티아졸-2-일리덴]아미노]피리다진-3-일]아미노]티아졸-4-카르복실레이트
적절한 할라이드로서의 제조예 3a_01 12 g (13 mmol) 및 제조예 4a_01 6.30 g (15.6 mmol)으로부터 출발하여 부흐발트 일반적 절차 III을 사용하여 목적 생성물 14 g (83%)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.85-7.23 (m, 14H), 7.58 (s, 1H), 7.31 (t, 1H), 7.19 (m, 1H), 7.14 (t, 1H), 5.86 (s, 2H), 4.37 (t, 2H), 4.20 (s, 2H), 4.15 (t, 2H), 3.73 (s, 3H), 3.71 (t, 2H), 3.67 (m, 1H), 3.39 (m, 2H), 3.27 (t, 2H), 2.83 (s, 3H), 2.41 (s, 3H), 2.12 (m, 2H), 1.72 (m, 2H), 1.52 (m, 2H), 1.40 (s, 9H), 0.90 (t, 2H), 0.89 (s, 9H), 0.69 (s, 9H), -0.14 (s, 9H), -0.19/-0.23 (s +s, 6H); 13C NMR (125 MHz, DMSO-d6) δ ppm 147.5, 129.1, 119.3, 117.5, 115.4, 73.4, 72.3, 68.4, 66.8, 65.8, 51.8, 46.6, 38.5, 33.8, 31.0, 30.5, 28.5, 27.1, 26.1, 23.0, 22.6, 17.9, 17.8, -1.0, -5.3; HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C68H93FN7O8S2Si3에 대한 계산치: 1302.5813, 실측치 1302.5819.
단계 B: 메틸 5-[3-[4-[3-[tert-부톡시카르보닐 (메틸)아미노]프로프-1-이닐]-2-플루오로-페녹시]프로필]-2-[[4-[tert-부틸 (디페닐)실릴]옥시-5-히드록시-펜틸]-[5-메틸-6-[(Z)-[3-(2-트리메틸실릴에톡시메틸)-1,3-벤조티아졸-2-일리덴]아미노]피리다진-3-일]아미노]티아졸-4-카르복실레이트
100 mL 오븐-건조된 1구 둥근 바닥 플라스크에 PTFE-코팅된 자기 교반 막대를 장착하고, 환류 응축기를 장착하였다. 여기에 단계 A로부터의 생성물 1.40 g (1.1 mmol, 1 당량) 및 캄포르 술폰산 12 mg (0.054 mmol, 0.05 당량), DCM 5 mL 및 MeOH 1 mL을 채웠다. 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반하여 완전한 전환에 도달하였다. 반응 혼합물을 셀라이트로 직접 농축시킨 다음, 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 용리액으로서 헵탄 및 EtOAc를 사용하여 정제하여 목적 생성물 700 mg (55%)을 황색 고체로서 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.85-7.14 (m, 14H), 7.56 (s, 1H), 7.32 (dd, 1H), 7.20 (m, 1H), 7.15 (t, 1H), 5.86 (s, 2H), 4.56 (t, 1H), 4.33 (m, 2H), 4.20 (s, 2H), 4.15 (t, 2H), 3.74 (s, 3H), 3.72 (t, 2H), 3.65 (m, 1H), 3.27 (t, 2H), 3.27 (t, 2H), 2.83 (s, 3H), 2.41 (s, 3H), 2.13 (m, 2H), 1.73/1.64 (m+m, 2H), 1.52 (m, 2H), 1.40 (s, 9H), 0.90 (t, 2H), 0.86 (s, 9H), -0.13 (s, 9H); 13C NMR (125 MHz, DMSO-d6) δ ppm 154.9, 147.6, 129.1, 119.4, 117.5, 115.4, 82.4, 73.7, 72.9, 68.4, 66.8, 64.5, 51.9, 46.8, 38.5, 33.8, 31.0, 30.6, 28.5, 27.2, 23.1, 22.5, 17.9, 17.8, -1.0; HRMS-ESI (m/z): C62H79FN7O8S2Si2에 대한 [M+H]+ 계산치: 1188.4949, 실측치 1188.4938.
단계 C: 메틸 5-[3-[4-[3-[tert-부톡시카르보닐 (메틸)아미노]프로프-1-이닐]-2-플루오로-페녹시]프로필]-2-[[4-[tert-부틸 (디페닐)실릴]옥시-5-(p-톨릴술포닐옥시)펜틸]-[5-메틸-6-[(Z)-[3-(2-트리메틸실릴에톡시메틸)-1,3-벤조티아졸-2-일리덴]아미노]피리다진-3-일]아미노]티아졸-4-카르복실레이트
PTFE-코팅된 자기 교반 막대가 구비된 100 mL 오븐-건조된, 1구 둥근 바닥 플라스크에 단계 B로부터의 생성물 700 mg (0.58 mmol, 1 당량)을 채우고, N,N-디메틸-1-(p-톨릴술포닐)피리딘-1-윰-4-아민 클로라이드 907 mg (2.9 mmol, 5 당량; 예를 들어, 문헌 [Tetrahedron Lett. 2016, 57, 4620] 참조)을 DCM 35 mL 중에 용해시키고, 실온에서 밤새 교반하였다. 반응은 완전한 전환에 도달하였다. 반응 혼합물을 직접 셀라이트 상에서 농축시킨 다음, 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 용리액으로서 헵탄 및 EtOAc를 사용하여 정제하여 목적 생성물 450 mg (56%)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.88-7.23 (m, 14H), 7.58 (m, 2H), 7.53 (s, 1H), 7.31 (m, 2H), 7.31 (dd, 1H), 7.19 (m, 1H), 7.15 (t, 1H), 5.86 (s, 2H), 4.20 (s, 2H), 4.16 (t, 2H), 4.15 (t, 2H), 3.92 (m, 2H), 3.84 (m, 1H), 3.72 (t, 2H), 3.70 (s, 3H), 3.27 (t, 2H), 2.83 (s, 3H), 2.41 (s, 3H), 2.33 (s, 3H), 2.13 (m, 2H), 1.47 (m, 2H), 1.47 (m, 2H), 1.40 (s, 9H), 0.91 (t, 2H), 0.86 (s, 9H), -0.13 (s, 9H); 13C NMR (125 MHz, DMSO-d6) δ ppm 147.5, 145.3, 130.4, 129.1, 128.0, 119.3, 117.4, 115.5, 72.9, 72.6, 70.4, 68.4, 66.8, 51.8, 46.2, 38.6, 33.8, 31.0, 30.1, 28.5, 27.0, 23.1, 22.4, 21.5, 17.8, 17.8, -1.0; HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C69H85FN7O10S3Si2에 대한 계산치: 1342.5037, 실측치 1342.5039.
제조예 5g_01: 에틸 5-(3-아이오도프로필)-2-[메틸-[5-메틸-6-[(Z)-[3-(2-트리메틸실릴에톡시메틸)-1,3-벤조티아졸-2-일리덴]아미노]피리다진-3-일]아미노]티아졸-4-카르복실레이트
단계 A: 에틸 5-(3-클로로프로필)-2-[메틸-[5-메틸-6-[(Z)-[3-(2-트리메틸실릴에톡시메틸)-1,3-벤조티아졸-2-일리덴]아미노]피리다진-3-일]아미노]티아졸-4-카르복실레이트
적절한 할라이드로서의 제조예 3e_01 (12 mmol, 1.2 당량) 3.15 g 및 제조예 4a_01 (10 mmol, 1 당량) 4.07 g으로부터 출발하여 부흐발트 일반적 절차 III을 사용하여 목적 생성물 2.6 g (41%)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.84 (d, 1H), 7.65 (s, 1H), 7.45 (d, 1H), 7.43 (tm, 1H), 7.25 (tm, 1H), 5.85 (s, 2H), 4.30 (q, 2H), 3.77 (s, 3H), 3.71 (t, 2H), 3.71 (t, 2H), 3.22 (t, 2H), 2.48 (s, 3H), 2.10 (quin, 2H), 1.31 (t, 3H), 0.92 (t, 2H), -0.11 (s, 9H); 13C NMR (125 MHz, DMSO-d6) δ ppm 162.6, 157.4, 156.8, 155.1, 151.7, 140.5, 137.6, 137.1, 135.3, 125.6, 123.5, 123.2, 123.1, 117.6, 111.9, 72.9, 66.7, 60.7, 45.3, 35.4, 34.4, 24.3, 18.0, 17.8, 14.7, -1.0; HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C28H38ClN6O3S2Si에 대한 계산치: 633.1899, 실측치 633.1891.
단계 B: 에틸 5-(3-아이오도프로필)-2-[메틸-[5-메틸-6-[(Z)-[3-(2-트리메틸실릴에톡시메틸)-1,3-벤조티아졸-2-일리덴]아미노]피리다진-3-일]아미노]티아졸-4-카르복실레이트
100 mL 1구 둥근 바닥 플라스크에 PTFE-코팅된 자기 교반 막대를 장착하고, 환류 응축기를 장착하였다. 여기에 단계 A로부터의 생성물 2.6 g (4.10 mmol, 1 당량), NaI 1.23 g (8.2 mmol, 2 당량) 및 건조 아세톤 20 mL을 채웠다. 반응 혼합물을 60℃로 가온하고, 반응이 완전한 전환에 도달하였을 때 그 온도에서 3일 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물을 첨가하여 희석한 다음, 침전된 생성물을 여과에 의해 수집하고, 물로 세척한 다음, 고진공 하에 건조시켜 목적 생성물 2.5 g (84%)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 7.82 (d, 1H), 7.61 (s, 1H), 7.47-7.39 (m, 1H), 7.47-7.39 (m, 1H), 7.23 (t, 1H), 5.83 (s, 2H), 4.29 (q, 2H), 3.75 (s, 3H), 3.71 (t, 2H), 3.33 (t, 2H), 3.16 (t, 2H), 2.42 (s, 3H), 2.13 (quint., 2H), 1.33 (t, 3H), 0.91 (t, 2H), -0.12 (s, 9H); 13C NMR (125 MHz, DMSO-d6) δ ppm 162.6, 157.3, 156.7, 155.1, 151.6, 140.2, 137.6, 137.1, 135.2, 127.1, 125.4, 123.4, 123.2, 117.5, 111.9, 72.8, 66.7, 60.7, 35.2, 35.2, 27.6, 17.8, 17.8, 14.8, 7.8, -1.0; HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ 계산치 C28H38I N6O3S2Si: 725.1255, 실측치 725.1248.
제조예 5j_01: 에틸 5-(3-{2-플루오로-4-[3-(메틸아미노)프로프-1-인-1-일]페녹시}프로필)-2-[메틸 (5-메틸-6-{[(2Z)-3-{[2-(트리메틸실릴)에톡시]메틸}-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-2-일리덴]아미노}피리다진-3-일)아미노]-1,3-티아졸-4-카르복실레이트
단계 A: 에틸 5-{3-[4-(3-{[(tert-부톡시)카르보닐](메틸)아미노}프로프-1-인-1-일)-2-플루오로페녹시]프로필}-2-[메틸 (5-메틸-6-{[(2Z)-3-{[2-(트리메틸실릴)에톡시]메틸}-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-2-일리덴]아미노}피리다진-3-일)아미노]-1,3-티아졸-4-카르복실레이트
디메틸포름아미드 (50 mL) 중 제조예 5g_01로부터의 생성물 (1.75 g, 2.41 mmol, 1 당량)에 디메틸포름아미드 (10 mL) 중 제조예 6a_01로부터의 생성물 (877 mg, 3.14 mmol, 1.3 당량) 및 탄산세슘 (2.36 g, 7.24 mmol, 3 당량)을 첨가하고, 혼합물을 80℃에서 16시간 동안 가열하였다. 반응물을 진공 하에 농축시킨 다음, 에틸 아세테이트와 염수 사이에 분배하고, 유기 상을 건조 (황산마그네슘)시키고, 진공 하에 농축시켰다. 자동화 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (콤비플래쉬 Rf, 40 g 레디셉™ 실리카 카트리지)에 의해 이소-헵탄 중 0 - 50% 에틸 아세테이트의 구배로 용리시키면서 정제하여 목적 생성물을 황색 오일 (1.75 g, 2 mmol, 83%)로서 수득하였다. LC/MS (C43H54FN7O6SiS2) 876 [M+H]+; RT 1.46 (LCMS-V-B2). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.83 (dd, 1H), 7.65 (d, J = 1.1 Hz, 1H), 7.49 - 7.39 (m, 2H), 7.35 - 7.28 (m, 1H), 7.27 - 7.12 (m, 3H), 5.86 (s, 2H), 4.25 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 4.19 (s, 2H), 4.14 (t, J = 6.1 Hz, 2H), 3.77 (s, 3H), 3.76 - 3.68 (m, 2H), 3.26 (t, J = 7.7 Hz, 2H), 2.84 (s, 3H), 2.45 (s, 3H), 2.19 - 2.05 (m, 1H), 1.41 (s, 9H), 1.30 (t, 3H), 0.97 - 0.88 (m, 2H), -0.12 (s, 9H).
단계 B: 에틸 5-(3-{2-플루오로-4-[3-(메틸아미노)프로프-1-인-1-일]페녹시}프로필)-2-[메틸 (5-메틸-6-{[(2Z)-3-{[2-(트리메틸실릴)에톡시]메틸}-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-2-일리덴]아미노}피리다진-3-일)아미노]-1,3-티아졸-4-카르복실레이트
트리플루오로아세트산 (20 mL)을 디클로로메탄 (60 mL) 중 단계 A로부터의 생성물 (1.5 g, 1.71 mmol, 1 당량)의 교반 용액에 첨가하고, 혼합물을 주위 온도에서 5시간 동안 교반하였다. 반응물을 디클로로메탄으로 희석하고, 0℃로 냉각시키고, 2N 수성 수산화나트륨을 첨가하여 염기성화시켰다. 유기 상을 건조 (황산마그네슘)시키고, 진공 하에 농축시켰다. 디클로로메탄 중 0 - 10% 메탄올의 구배로 용리시키면서 자동화 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (콤비플래쉬 Rf, 40 g 레디셉™ 실리카 카트리지)에 의해 정제하여 목적 생성물을 황색 검 (329 mg, 0.42 mmol, 25%)으로서 수득하였다. LC/MS (C38H46FN7O4SiS2) 776 [M+H]+; RT 2.58 (LCMS-V-C). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.84 (dd, 1H), 7.67 (d, J = 1.0 Hz, 1H), 7.49 - 7.40 (m, 2H), 7.31 - 7.22 (m, 2H), 7.21 - 7.11 (m, 2H), 5.86 (s, 2H), 4.26 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 4.15 (t, J = 6.1 Hz, 2H), 3.76 (s, 3H), 3.76 - 3.67 (m, 2H), 3.45 (s, 2H), 3.33 - 3.22 (m, 2H), 2.46 (d, J = 1.0 Hz, 3H), 2.30 (s, 3H), 2.18 - 2.06 (m, 2H), 1.29 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 0.97 - 0.88 (m, 2H), -0.11 (s, 9H).
제조예 6a_01: tert-부틸 N-[3-(3-플루오로-4-히드록시-페닐)프로프-2-이닐]-N-메틸-카르바메이트
적절한 페놀로서의 2-플루오로-4-아이오도-페놀 (42.0 mmol, 1 당량) 10.00 g 및 알킨 반응물로서의 tert-부틸 N-메틸-N-프로프-2-이닐-카르바메이트 (63.1 mmol, 1.5 당량) 10.67 g으로부터 출발하여 소노가시라 일반적 절차를 사용하여 목적 생성물 10.8 g (92%)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 10.32 (s, 1 H), 7.22 (brd, 1H), 7.08 (dm, 1H), 6.92 (dd, 1H), 4.21 (s, 2H), 2.85 (s, 3H), 1.41 (s, 9H); 13C NMR (125 MHz, DMSO-d6) δ ppm 150.8, 146.4, 129.0, 119.6, 118.4, 113.2, 84.4, 82.7, 38.5, 33.8, 28.5; HRMS-ESI (m/z): [M-C4H8+H]+ C11H11FNO3에 대한 계산치: 224.0717, 실측치 224.0720.
제조예 6b_01: 4-[3-(디메틸아미노)프로프-1-이닐]-2-플루오로-페놀
적절한 페놀로서의 2-플루오로-4-아이오도-페놀 (42.0 mmol, 1 당량) 10.00 g 및 알킨 반응물로서의 N,N-디메틸프로프-2-인-1-아민 (63 mmol, 1.5 당량) 5.24 g으로부터 출발하여 소노가시라 일반적 절차를 사용하여 목적 생성물 7.30 g (90%)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.20 (dd, 1H), 7.07 (dm, 1H), 6.91 (m, 1H), 3.39 (m, 2H), 2.21 (m, 3H); 13C NMR (125 MHz, DMSO-d6) δ ppm 150.9, 146.2, 128.9, 119.5, 118.4, 113.6, 84.5, 84.2, 48.2, 44.3; HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C11H13FNO에 대한 계산치: 194.0976, 실측치 194.0981.
제조예 6f_01: 4-[3-(디메틸아미노)부트-1-이닐]-2-플루오로-페놀
단계 A: 4-(3-플루오로-4-트리이소프로필실릴옥시-페닐)부트-3-인-2-올
PTFE-코팅된 자기 교반 막대가 장착된 500 mL 오븐-건조된 1구 둥근 바닥 플라스크. 여기에 2-플루오로-4-아이오도-페놀 (20 mmol, 1 당량) 4.76 g 및 K2CO3 (40 mmol, 2 당량) 3.96 g를 채운 다음, 건조 MeCN 100 mL을 첨가하였다. 생성된 혼합물에 TIPSCl (4.62 g, 24 mmol, 1.2 당량) 5.13 mL을 실온에서 거의 격렬한 교반 하에 적가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하면서, 반응이 완전한 전환에 도달하였다. 반응 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과하여 고체 입자를 제거한 다음, 여과물에 부트-3-인-2-올 (2.81 g, 40 mmol, 2 당량) 3.10 mL 및 DIPA 20 mL을 첨가하고, 기체 유입구를 통해 질소 분위기 하에 두었다. Pd(PPh3)2Cl2 (1 mmol, 0.05 당량) 702 mg 및 CuI (1 mmol, 0.05 당량) 190 mg를 첨가한 후, 생성된 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하면서, 반응이 완전한 전환에 도달하였다. 셀라이트를 반응 혼합물에 첨가하고, 휘발성 물질을 감압 하에 제거하였다. 이어서 이것을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 용리액으로서 헵탄 및 EtOAc를 사용하여 정제하여 목적 생성물 6.2 g (92%)을 황색 오일로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.26 (dd, 1H), 7.12 (dm, 1H), 6.98 (t, 1H), 5.44 (d, 1H), 4.55 (m, 1H), 1.36 (d, 3H), 1.24 (sp, 1H), 1.05 (d, 18H); 13C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ ppm 153.2, 144.1, 128.8, 122.3, 119.6, 116.5, 93.4, 81.4, 57.1, 25.0, 18.0, 12.5; HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C19H30FO2Si에 대한 계산치: 337.1994, 실측치 337.1994.
단계 B: 4-(3-플루오로-4-트리이소프로필실릴옥시-페닐)-N,N-디메틸-부트-3-인-2-아민
적절한 알콜로서의 단계 A로부터의 생성물 644 mg (2 mmol, 1 당량) 및 N-메틸메탄아민 5 mL (10 mmol, 5 당량, MeOH 중 2 M 용액)로부터 출발하여, 계내 생성된 아이오딘에 의한 알킬화 일반적 절차를 사용하여 목적 생성물 360 mg (50%)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.28 (dd, 1H), 7.14 (dm, 1H), 6.97 (t, 1H), 3.67 (q, 1H), 2.19 (s, 6H), 1.27 (d, 3H), 1.25 (m, 3H), 1.05 (d, 18H); 13C NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 153.1, 144.0, 129.0, 122.3, 119.8, 116.6, 88.2, 84.1, 52.3, 41.3, 20.1, 18.0, 12.5; HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C21H35FNOSi에 대한 계산치: 364.2466, 실측치 364.2470.
단계 C: 4-[3-(디메틸아미노)부트-1-이닐]-2-플루오로-페놀
PTFE-코팅된 자기 교반 막대가 구비된 4 mL 오븐-건조된 바이알에 건조 THF 3.0 mL 중에 용해시킨 단계 B로부터의 생성물 200 mg (0.55 mmol, 1 당량)을 채운 다음, TBAF (THF 중 1 M, 0.66 mmol, 1.1 당량) 660 uL을 실온에서 적가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 15분 동안 교반하였으며, 이때 반응이 완전한 전환에 도달하였다. 반응 혼합물을 200 uL의 진한 NH4Cl의 첨가로 켄칭한 다음, 셀라이트를 반응 혼합물에 첨가하고, 휘발성 물질을 감압 하에 제거하였다. 이어서 이것을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 용리액으로서 DCM 및 MeOH (1.2% NH3)를 사용하여 정제하여 목적 생성물 80 mg (70%)을 수득하였다.
제조예 13_01: 메틸 3-브로모-6-(메틸아미노)피리딘-2-카르복실레이트
단계 A: 메틸 6-[비스(tert-부톡시카르보닐)아미노]-3-브로모-피리딘-2-카르복실레이트
DCM (541 mL) 중 메틸 6-아미노-3-브로모-피리딘-2-카르복실레이트 (25.0 g, 108.2 mmol) 및 DMAP (1.3 g, 0.1 당량)에 0℃에서 Boc2O (59.0 g, 2.5 당량)를 첨가하고, 반응 혼합물을 2.5시간 동안 교반하였다. NaHCO3의 포화 용액을 첨가하고 DCM으로 추출한 후, 합한 유기 상을 건조시키고, 농축시켜 목적 생성물 (45.0 g, 72.3%)을 수득하였다. LC/MS (C17H23BrN2O6Na) 453 [M+H]+.
단계 B: 메틸 3-브로모-6-(tert-부톡시카르보닐아미노)피리딘-2-카르복실레이트
DCM (370 mL) 중 단계 A로부터의 생성물 (42.7 g, 74.34 mmol)에 0℃에서 TFA (17.1 mL, 3 당량)를 첨가하고, 반응 혼합물을 18시간 동안 교반하였다. NaHCO3의 포화 용액 및 염수로 세척한 후, 합한 유기 상을 건조시키고, 농축시키고, 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 용리액으로서 헵탄 및 EtOAc)에 의해 정제하여 목적 생성물 (28.3 g, 115.2%)을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 10.29 (s, 1H), 8.11 (d, 1H), 7.88 (d, 1H), 3.87 (s, 3H), 1.46 (s, 9H) 13C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ ppm 165.6, 153.1, 151.8/148.3, 143.5, 116.3, 109.2, 53.2, 28.4. LC/MS (C12H15BrN2O4Na) 353 [M+H]+.
단계 C: 메틸 3-브로모-6-[tert-부톡시카르보닐 (메틸)아미노]피리딘-2-카르복실레이트
아세톤 (45 mL) 중 단계 B로부터의 생성물 (2.96 g, 8.93 mmol)에 Cs2CO3 (8.7 g, 3 당량) 및 아이오도메탄 (0.67 mL, 1.2 당량)을 첨가하고, 반응 혼합물을 3시간 동안 교반하였다. 물로 희석하고 EtOAc로 추출한 후, 합한 유기 상을 염수로 세척하고, 건조시키고, 농축시켜 목적 생성물 (3.5 g, 112%)을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 8.13 (d, 1H), 7.78 (d, 1H), 3.90 (s, 3H), 3.27 (s, 3H), 1.47 (s, 9H); 13C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ ppm 165.5, 153.6, 153.6, 147.5, 142.8, 122.5, 111.3, 82.0, 53.3, 34.3, 28.2; HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C13H18BrN2O4에 대한 계산치: 345.0450 실측치: 345.0429.
단계 D: 메틸 3-브로모-6-(메틸아미노)피리딘-2-카르복실레이트
1,1,1,3,3,3-헥사플루오로이소프로판올 (90 mL) 중 단계 C로부터의 생성물 (3.0 g, 8.9 mmol)을 100℃에서 18시간 동안 교반하였다. 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 용리액으로서 헵탄 및 EtOAc)에 의해 정제하여 목적 생성물 (2.1 g, 96%)을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 7.63 (d, 1H), 7.04 (q, 1H), 6.53 (d, 1H), 3.83 (s, 3H), 2.73 (d, 3H); 13C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ ppm 166.6, 158.2, 148.2, 141.3, 112.1, 101.3, 52.9, 28.3; HRMS-ESI (m/z): [M]+ C8H9BrN2O2에 대한 계산치: 243.9847 실측치: 243.9843.
제조예 14_01: 메틸 3-[1-[[3,5-디메틸-7-[2-(p-톨릴술포닐옥시)에톡시]-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]-6-[메틸-[5-메틸-6-[(Z)-[3-(2-트리메틸실릴에톡시메틸)-1,3-벤조티아졸-2-일리덴]아미노]피리다진-3-일]아미노]피리딘-2-카르복실레이트
단계 A: 메틸 3-[1-[[3-[2-[tert-부틸 (디페닐)실릴]옥시에톡시]-5,7-디메틸-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]-6-(메틸아미노)피리딘-2-카르복실레이트
1,4-디옥산 (51 mL) 및 물 (8.5 mL) 중 제조예 13_01로부터의 생성물 (2.07 g, 8.45 mmol), 제조예 7로부터의 생성물 (6.9 g, 1.2 당량), Cs2CO3 (8.26 g, 3 당량), 및 Pd(AtaPhos)2Cl2 (374 mg, 0.1 당량)의 혼합물을 80℃에서 1시간 동안 교반하였다. 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 용리액으로서 헵탄 및 EtOAc)에 의해 정제하여 목적 생성물 (4.5 g, 74%)을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 7.66 (dm, 4H), 7.47-7.38 (m, 6H), 7.31 (d, 1H), 7.23 (s, 1H), 6.78 (q, 1H), 6.59 (d, 1H), 3.82 (s, 2H), 3.67 (t, 2H), 3.58 (s, 3H), 3.46 (t, 2H), 2.77 (d, 3H), 2.06 (s, 3H), 1.35 (s, 2H), 1.27/1.20 (d+d, 4H), 1.14/1.09 (d+d, 4H), 1.05/0.97 (d+d, 2H), 0.98 (s, 9H), 0.84 (s, 6H); 13C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ ppm 140.1, 137.4, 135.6, 130.2/128.3, 109.8, 74.2, 64.4, 61.7, 58.9, 52.2, 50.0, 46.9, 46.0, 43.4, 39.8, 33.5, 30.1, 28.4, 27.1, 10.8; HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C43H57N4O4Si에 대한 계산치: 721.4149 실측치: 721.4148.
단계 B: 메틸 3-[1-[[3-[2-[tert-부틸 (디페닐)실릴]옥시에톡시]-5,7-디메틸-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]-6-[메틸-[5-메틸-6-[(Z)-[3-(2-트리메틸실릴에톡시메틸)-1,3-벤조티아졸-2-일리덴]아미노]피리다진-3-일]아미노]피리딘-2-카르복실레이트
18시간 동안 환류 하에 단계 A로부터의 생성물로부터 출발하여 부흐발트 일반적 절차 III을 사용하여 목적 생성물 4.7 g (86%)을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 7.78 (dm, 1H), 7.69-7.36 (m, 10H), 7.63 (q, 1H), 7.63 (d, 1H), 7.47 (dm, 1H), 7.44 (m, 1H), 7.35 (s, 1H), 7.31 (d, 1H), 7.24 (m, 1H), 5.86 (s, 2H), 3.86 (s, 2H), 3.72 (m, 2H), 3.67 (t, 2H), 3.64 (s, 3H), 3.61 (s, 3H), 3.46 (t, 2H), 2.36 (d, 3H), 2.13 (s, 3H), 1.40-0.94 (m, 12H), 0.97 (s, 9H), 0.92 (m, 2H), 0.85 (s, 6H), -0.11 (s, 9H); HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C61H79N8O5SSi2에 대한 계산치: 1091.5433 실측치: 1091.5426.
단계 C: 메틸 3-[1-[[3-(2-히드록시에톡시)-5,7-디메틸-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]-6-[메틸-[5-메틸-6-[(Z)-[3-(2-트리메틸실릴에톡시메틸)-1,3-벤조티아졸-2-일리덴]아미노]피리다진-3-일]아미노]피리딘-2-카르복실레이트
THF (9 mL) 중 단계 B로부터의 생성물 (1.0 g, 0.916 mmol)에 0℃에서 THF 중 TBAF의 1 M 용액 (1.0 mL, 1.1 당량)을 첨가하고, 반응 혼합물을 1시간 동안 교반하였다. NH4Cl의 포화 용액으로 켄칭하고 EtOAc로 추출한 후, 합한 유기 상을 건조시키고, 농축시키고, 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 용리액으로서 DCM 및 MeOH)에 의해 정제하여 목적 생성물 (752 mg, 96%)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 7.79 (dm, 1H), 7.66 (d, 1H), 7.64 (s, 1H), 7.47 (dm, 1H), 7.43 (m, 1H), 7.36 (s, 1H), 7.33 (d, 1H), 7.25 (m, 1H), 5.87 (s, 2H), 4.46 (t, 1H), 3.86 (s, 2H), 3.73 (m, 2H), 3.68 (s, 3H), 3.62 (s, 3H), 3.40 (m, 2H), 3.35 (t, 2H), 2.37 (s, 3H), 2.14 (s, 3H), 1.42-0.96 (m, 12H), 0.92 (m, 2H), 0.86 (s, 6H), -0.10 (s, 9H); HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C45H61N8O5SSi에 대한 계산치: 853.4255 실측치: 853.4256.
단계 D: 메틸 3-[1-[[3,5-디메틸-7-[2-(p-톨릴술포닐옥시)에톡시]-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]-6-[메틸-[5-메틸-6-[(Z)-[3-(2-트리메틸실릴에톡시메틸)-1,3-벤조티아졸-2-일리덴]아미노]피리다진-3-일]아미노]피리딘-2-카르복실레이트
DCM (4.4 mL) 중 단계 C로부터의 생성물 (752 mg, 0.88 mmol) 및 트리에틸아민 (0.5 mL, 4 당량)에 p-톨릴술포닐-4-메틸벤젠술포네이트 (575.4 mg, 1.76 mmol, 2 당량)를 첨가하고, 반응 혼합물을 1시간 동안 교반하였다. 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 용리액으로서 헵탄 및 EtOAc)에 의해 정제하여 목적 생성물 (722 mg, 81%)을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 7.79 (dm, 1H), 7.76 (dm, 2H), 7.68 (d, 1H), 7.64 (s, 1H), 7.47 (m, 1H), 7.46 (dm, 2H), 7.43 (td, 1H), 7.36 (s, 1H), 7.33 (d, 1H), 7.25 (td, 1H), 5.87 (s, 2H), 4.06 (m, 2H), 3.84 (s, 2H), 3.73 (t, 2H), 3.66 (s, 3H), 3.62 (s, 3H), 3.48 (m, 2H), 2.40 (s, 3H), 2.37 (s, 3H), 2.13 (s, 3H), 1.31-0.94 (m, 12H), 0.92 (t, 2H), 0.83 (s, 6H), -0.10 (s, 9H); 13C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ ppm 141.2, 137.5, 130.6, 128.1, 127.2, 123.4, 123.4, 123.1, 114.7, 112.0, 72.9, 71.5, 66.7, 58.8, 58.4, 52.6, 36.6, 30.1, 21.6, 17.8, 17.4, 10.8, -0.9; HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C52H67N8O7S2Si에 대한 계산치: 1007.4343 실측치: 1007.4344.
P1의 제조: 2-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-5-[3-[4-[3-(디메틸아미노)프로프-1-이닐]-2-플루오로-페녹시]프로필]티아졸-4-카르복실산
Figure pct00616
제조예 3d 및 적절한 아민으로서의 디메틸아민으로부터 출발하여 프로파르길 아민 제조 일반적 절차를 사용함. 이어서 적절한 메틸 에스테르로부터 출발하여 일반적 가수분해 절차로 목적 생성물을 수득하였다. HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C34H35FN7O3S2에 대한 계산치: 672.2221, 실측치 672.2205.
P2의 제조: 2-[[6-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-5-메틸-피리다진-3-일]-메틸-아미노]-5-[3-[4-[3-(디메틸아미노)프로프-1-이닐]-2-플루오로-페녹시]프로필]티아졸-4-카르복실산
Figure pct00617
단계 A: 에틸 5-[3-[4-[3-(디메틸아미노)프로프-1-이닐]-2-플루오로-페녹시]프로필]-2-[메틸-[5-메틸-6-[(Z)-[3-(2-트리메틸실릴에톡시메틸)-1,3-벤조티아졸-2-일리덴]아미노]피리다진-3-일]아미노]티아졸-4-카르복실레이트
제조예 5g_01 및 적절한 페놀로서의 제조예 6b_01로부터 출발하여 알킬화 일반적 절차를 사용하여 목적 생성물을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.84 (d, 1H), 7.67 (s, 1H), 7.47 (d, 1H), 7.44 (t, 1H), 7.33 (dd, 1H), 7.25 (t, 1H), 7.22 (dd, 1H), 7.16 (t, 1H), 5.86 (s, 2H), 4.26 (q, 2H), 4.15 (t, 2H), 3.77 (s, 3H), 3.72 (t, 2H), 3.49 (brs, 2H), 3.27 (t, 2H), 2.46 (s, 3H), 2.27 (s, 6H), 2.13 (qn, 2H), 1.29 (t, 3H), 0.92 (t, 2H), -0.11 (s, 9H); 13C NMR (125 MHz, DMSO-d6) δ ppm 129.0, 127.2, 123.5, 123.2, 119.2, 117.7, 115.5, 111.9, 72.8, 68.5, 66.7, 60.7, 48.2, 44.0, 35.3, 31.1, 23.2, 17.9, 17.8, 14.6, -0.9; HRMS-ESI (m/z): C39H49FN7O4S2Si에 대한 [M+H]+ 계산치: 790.3035, 실측치 790.3023.
단계 B: 2-[[6-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-5-메틸-피리다진-3-일]-메틸-아미노]-5-[3-[4-[3-(디메틸아미노)프로프-1-이닐]-2-플루오로-페녹시]프로필]티아졸-4-카르복실산
적절한 에틸 에스테르로서의 단계 A로부터의 생성물로부터 출발하여 탈보호 및 가수분해 일반적 절차를 사용하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C31H31FN7O3S2에 대한 계산치: 632.1908, 실측치 632.1913.
P3의 제조: 2-{3-[(1,3-벤조티아졸-2-일)아미노]-4-메틸-5H,6H,7H,8H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일}-5-(3-{2-플루오로-4-[3-(메틸아미노)프로프-1-인-1-일]페녹시}프로필)-1,3-티아졸-4-카르복실산
Figure pct00618
단계 A: 에틸 5-{3-[4-(3-{[(tert-부톡시)카르보닐](메틸)아미노}프로프-1-인-1-일)-2-플루오로페녹시]프로필}-2-(4-메틸-3-{[(2Z)-3-{[2-(트리메틸실릴)에톡시]메틸}-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-2-일리덴]아미노}-5H,6H,7H,8H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일)-1,3-티아졸-4-카르복실레이트
톨루엔 (15 mL) 중 제조예 3g로부터의 생성물 (500 mg, 0.78 mmol, 1 당량)의 용액에 제조예 4c로부터의 생성물 (327 mg, 1.17 mmol, 1.5 당량)에 이어서 트리페닐포스핀 (307 mg, 1.17 mmol, 1.5 당량) 및 디이소프로필 아조디카르복실레이트 (230 μL, 1.17 mmol, 1.5 당량)를 첨가하고, 혼합물을 환류 하에 밤새 가열하였다. 반응물을 디클로로메탄과 물 사이에 분배하고, 유기 상을 건조 (PTFE 상 분리기)시키고, 진공 하에 농축시켰다. 자동화 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (콤비플래쉬 Rf, 24 g 레디셉™ 실리카 카트리지)에 의해 이소-헵탄 중 0 - 50% 에틸 아세테이트의 구배로 용리시키면서 정제하여 목적 생성물을 회백색 발포체 (715 mg, 0.79 mmol, >100%)로서 수득하였다. LC/MS (C45H56FN7O6SiS2) 902 [M+H]+; RT 1.46 (LCMS-V-B2). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.82 (dt, J = 7.6, 0.9 Hz, 1H), 7.48 - 7.37 (m, 2H), 7.33 (d, J = 11.6 Hz, 1H), 7.28 - 7.13 (m, 3H), 5.84 (s, 2H), 4.32 - 4.17 (m, 6H), 4.15 (t, J = 6.1 Hz, 2H), 3.72 (dd, J = 8.5, 7.4 Hz, 2H), 3.27 (d, J = 15.4 Hz, 2H), 2.93 - 2.75 (m, 5H), 2.36 (s, 3H), 2.19 - 2.10 (m, 2H), 2.10 - 1.98 (m, 2H), 1.40 (s, 9H), 1.28 (t, 3H), 0.96 - 0.89 (m, 2H), -0.11 (s, 9H).
단계 B: 에틸 2-{3-[(1,3-벤조티아졸-2-일)아미노]-4-메틸-5H,6H,7H,8H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일}-5-(3-{2-플루오로-4-[3-(메틸아미노)프로프-1-인-1-일]페녹시}프로필)-1,3-티아졸-4-카르복실레이트
아세토니트릴 (17 mL) 중 단계 A로부터의 생성물 (1.67 g, 1.85 mmol, 1 당량)의 용액에 플루오린화수소-피리딘 (3.22 mL, 37 mmol, 20 당량)을 첨가하고, 혼합물을 60℃에서 2시간 동안 가열하였다. 반응물을 3:1 디클로로메탄/이소프로판올과 2N 수성 수산화나트륨 사이에 분배하고, 유기 상을 염수로 세척하고, 건조 (PTFE 상 분리기)시키고, 진공 하에 농축시켰다. 자동화 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (콤비플래쉬 Rf, 80 g 레디셉™ 실리카 카트리지)에 의해 디클로로메탄 중 0 - 7% 메탄올의 구배로 용리시키면서 정제하여 목적 생성물을 황색 고체 (1.02 g, 1.52 mmol, 82%)로서 수득하였다. LC/MS (C34H34FN7O3S2) 672 [M+H]+; RT 2.06 (LCMS-V-C). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.89 (dd, J = 7.8, 1.2 Hz, 1H), 7.50 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.38 (ddd, J = 8.2, 7.3, 1.2 Hz, 1H), 7.32 - 7.25 (m, 1H), 7.23 - 7.12 (m, 3H), 4.32 - 4.21 (m, 4H), 4.15 (t, J = 6.1 Hz, 2H), 3.45 (s, 2H), 3.32 - 3.23 (m, 2H), 2.89 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 2.35 (s, 3H), 2.31 (s, 3H), 2.20 - 2.10 (m, 2H), 2.09 - 1.97 (m, 2H), 1.30 (t, J = 7.1 Hz, 3H).
단계 C: 2-{3-[(1,3-벤조티아졸-2-일)아미노]-4-메틸-5H,6H,7H,8H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일}-5-(3-{2-플루오로-4-[3-(메틸아미노)프로프-1-인-1-일]페녹시}프로필)-1,3-티아졸-4-카르복실산
1,4-디옥산 (50 mL) 중 단계 B로부터의 생성물 (1.02 g, 1.52 mmol, 1 당량)의 용액에 수산화리튬 1수화물 (637 mg, 15.2 mmol, 10 당량)을 첨가하고, 혼합물을 110℃에서 밤새 가열하였다. 디클로로메탄 중 0 - 70% 0.7N 메탄올성 암모니아의 구배로 용리시키면서 자동화 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (콤비플래쉬 Rf, 80 g 레디셉™ 실리카 카트리지)에 의해 정제하여 고체를 수득하였으며, 이것을 아세토니트릴로 연화처리하고, 여과하고, 진공 하에 건조시켜 목적 생성물을 황색 고체 (657 mg, 1.02 mmol, 67%)로서 수득하였다. HRMS-ESI (m/z) [M+H]+ C32H31FN7O3S2에 대한 계산치: 644.1914, 실측치 644.1930.
P4의 제조: 3-[[5-[[6-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-5-메틸-피리다진-3-일]-[4-카르복시-5-[3-[2-플루오로-4-[3-(메틸아미노)프로프-1-이닐]페녹시]프로필]티아졸-2-일]아미노]-2-히드록시-펜틸]-디메틸-암모니오]프로판-1-술포네이트
Figure pct00619
단계 A: 메틸 5-[3-[4-[3-[tert-부톡시카르보닐 (메틸)아미노]프로프-1-이닐]-2-플루오로-페녹시]프로필]-2-[[4-[tert-부틸 (디페닐)실릴]옥시-5-(디메틸아미노)펜틸]-[5-메틸-6-[(Z)-[3-(2-트리메틸실릴에톡시메틸)-1,3-벤조티아졸-2-일리덴]아미노]피리다진-3-일]아미노]티아졸-4-카르복실레이트
제조예 5a_01 및 적절한 아민으로서의 N-메틸메탄아민으로부터 출발하여 토실레이트를 사용한 알킬화 일반적 절차를 사용하여 목적 생성물을 수득하였다.
HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C64H84FN8O7S2Si2에 대한 계산치: 1215.5421, 실측치 1215.5389.
단계 B: 3-[[5-[[6-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-5-메틸-피리다진-3-일]-[4-카르복시-5-[3-[2-플루오로-4-[3-(메틸아미노)프로프-1-이닐]페녹시]프로필]티아졸-2-일]아미노]-2-히드록시-펜틸]-디메틸-암모니오]프로판-1-술포네이트
단계 A로부터의 생성물을 MeCN (5 mL/mmol) 중에 현탁시킨 다음, 옥사티올란 2,2-디옥시드 (10 당량)를 첨가하고, 60℃에서 계속 교반하였다 (완전한 전환이 관찰되었다). 반응 혼합물을 농축시켰다. 3-[[5-[[5-[3-[4-[3-[tert-부톡시카르보닐 (메틸)아미노]프로프-1-이닐]-2-플루오로-페녹시]프로필]-4-메톡시카르보닐-티아졸-2-일]-[5-메틸-6-[(Z)-[3-(2-트리메틸실릴에톡시메틸)-1,3-벤조티아졸-2-일리덴]아미노]피리다진-3-일]아미노]-2-[tert-부틸 (디페닐)실릴]옥시-펜틸]-디메틸-암모니오]프로판-1-술포네이트 (LC-MS-ESI (m/z): [M+H]+ C67H90FN8O10S3Si2에 대한 계산치: 1337.5, 실측치 1337.6)를 함유하는 조 혼합물을 4급 염 탈보호 일반적 절차를 사용하여 직접 후속 반응으로 옮겨 목적 생성물을 수득하였다. HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C39H48FN8O7S3에 대한 계산치: 855.2787, 실측치 855.2786.
P5의 제조: 2-[[6-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-5-메틸-피리다진-3-일]-[4-히드록시-5-(트리메틸암모니오)펜틸]아미노]-5-[3-[2-플루오로-4-[3-(메틸아미노)프로프-1-이닐]페녹시]프로필]티아졸-4-카르복실레이트
Figure pct00620
단계 A: 메틸 5-[3-[4-[3-[tert-부톡시카르보닐 (메틸)아미노]프로프-1-이닐]-2-플루오로-페녹시]프로필]-2-[[4-[tert-부틸 (디페닐)실릴]옥시-5-(디메틸아미노)펜틸]-[5-메틸-6-[(Z)-[3-(2-트리메틸실릴에톡시메틸)-1,3-벤조티아졸-2-일리덴]아미노]피리다진-3-일]아미노]티아졸-4-카르복실레이트
제조예 5a_01 및 적절한 아민으로서의 N-메틸메탄아민으로부터 출발하여 토실레이트를 사용한 알킬화 일반적 절차를 사용하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C64H84FN8O7S2Si2에 대한 계산치: 1215.5421, 실측치 1215.5389.
단계 B: 2-[[6-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-5-메틸-피리다진-3-일]-[4-히드록시-5-(트리메틸암모니오)펜틸]아미노]-5-[3-[2-플루오로-4-[3-(메틸아미노)프로프-1-이닐]페녹시]프로필]티아졸-4-카르복실레이트
단계 A로부터의 생성물을 아세토니트릴 (4 mL/mmol) 및 N,N-디메틸포름아미드 (1 mL/mmol)의 혼합물 중에 용해시킨 다음, 아이오도메탄 (5 당량)을 첨가하고, 완전한 전환이 관찰될 때까지 (약 1시간) 실온에서 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시켰다. [5-[[5-[3-[4-[3-[tert-부톡시카르보닐 (메틸)아미노]프로프-1-이닐]-2-플루오로-페녹시]프로필]-4-메톡시카르보닐-티아졸-2-일]-[5-메틸-6-[(Z)-[3-(2-트리메틸실릴에톡시메틸)-1,3-벤조티아졸-2-일리덴]아미노]피리다진-3-일]아미노]-2-[tert-부틸 (디페닐)실릴]옥시-펜틸]-트리메틸-암모늄 (LC-MS-ESI (m/z): C65H86FN8O7S2Si2에 대한 [M]+ 계산치: 1229.6, 실측치 1229.4)을 함유하는 조 혼합물을 4급 염 탈보호 일반적 절차를 사용하여 후속 반응으로 옮겨 목적 생성물을 수득하였다. HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C37H44FN8O4S2에 대한 계산치: 747.2905, 실측치 747.2900.
P6의 제조: 2-[[6-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-5-메틸-피리다진-3-일]-[3-(디메틸아미노)프로필]아미노]-5-[3-[2-플루오로-4-[3-(메틸아미노)프로프-1-이닐]페녹시]프로필]티아졸-4-카르복실산
Figure pct00621
단계 A: 메틸 2-[tert-부톡시카르보닐-[3-(디메틸아미노)프로필]아미노]-5-[3-[4-[3-[tert-부톡시카르보닐 (메틸)아미노]프로프-1-이닐]-2-플루오로-페녹시]프로필]티아졸-4-카르복실레이트
제조예 1b_01 및 3-(디메틸아미노)프로판-1-올로부터 출발하여 미츠노부 일반적 절차 II를 사용하여 1.40 g (정량적, 샘플은 대략 35 n/n% DIAD-2H를 함유함)의 목적 생성물을 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.30 (dd, 1H), 7.21 (dm, 1H), 7.13 (t, 1H), 4.23 (s, 2H), 4.10 (t, 2H), 4.01 (t, 2H), 3.74 (s, 3H), 3.22 (t, 2H), 2.86 (s, 3H), 2.24 (t, 2H), 2.12 (s, 6H), 2.08 (m, 2H), 1.74 (m, 2H), 1.51/1.41 (s, 18H); HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C33H48FN4O7S에 대한 계산치: 663.3228, 실측치 663.3218.
단계 B: 메틸 5-[3-[4-[3-[tert-부톡시카르보닐 (메틸)아미노]프로프-1-이닐]-2-플루오로-페녹시]프로필]-2-[3-(디메틸아미노)프로필아미노]티아졸-4-카르복실레이트
단계 A로부터의 생성물로부터 출발하여 HFIP를 사용한 탈보호 일반적 절차를 사용하여 목적 생성물 0.95 g (80%)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.57 (t, 1H), 7.31 (d, 1H), 7.21 (d, 1H), 7.13 (t, 1H), 4.23 (br., 2H), 4.07 (t, 2H), 3.69 (s, 3H), 3.17 (q, 2H), 3.12 (t, 2H), 2.86 (br., 3H), 2.24 (t, 2H), 2.11 (s, 6H), 2.00 (quint., 2H), 1.63 (m, 2H), 1.41 (s, 9H); 13C NMR (125 MHz, DMSO-d6) δ ppm 129.1, 119.3, 115.4, 68, 57.0, 51.7, 45.6, 42.8, 38.6, 33.8, 30.6, 28.5, 27.0, 23.3; HRMS-ESI (m/z): C28H40FN4O5S에 대한 [M+H]+ 계산치: 563.2703, 실측치 563.2694.
단계 C: 메틸 5-[3-[4-[3-[tert-부톡시카르보닐 (메틸)아미노]프로프-1-이닐]-2-플루오로-페녹시]프로필]-2-[3-(디메틸아미노)프로필-[5-메틸-6-[(Z)-[3-(2-트리메틸실릴에톡시메틸)-1,3-벤조티아졸-2-일리덴]아미노]피리다진-3-일]아미노]티아졸-4-카르복실레이트
단계 B로부터의 생성물 및 제조예 4a_01로부터 출발하여 부흐발트 일반적 절차 III을 사용하여 목적 생성물 0.79 g (51%)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.84 (d, 1H), 7.73 (s, 1H), 7.46 (dd, 1H), 7.43 (td, 1H), 7.31 (brd., 1H), 7.25 (td, 1H), 7.21 (d, 1H), 7.16 (t, 1H), 5.86 (s, 2H), 4.35 (t, 2H), 4.20 (br., 2H), 4.15 (t, 2H), 3.76 (s, 3H), 3.72 (t, 2H), 3.27 (t, 2H), 2.84 (br., 3H), 2.45 (s, 3H), 2.32 (t, 2H), 2.18 (s, 6H), 2.13 (m, 2H), 1.86 (m, 2H), 1.40 (s, 9H), 0.92 (t, 2H), -0.11 (s, 9H); 13C NMR (125 MHz, DMSO-d6) δ ppm 129.1, 127.2, 123.4, 123.2, 119.3, 117.6, 115.4, 111.9, 72.8, 68.4, 66.7, 56.4, 51.9, 45.7, 45.5, 38.5, 33.8, 31.0, 28.5, 25.0, 23.1, 17.9, 17.8, -1.0; HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C46H62FN8O6S2Si에 대한 계산치: 933.3987, 실측치 933.3990.
단계 D: 2-[[6-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-5-메틸-피리다진-3-일]-[3-(디메틸아미노)프로필]아미노]-5-[3-[2-플루오로-4-[3-(메틸아미노)프로프-1-이닐]페녹시]프로필]티아졸-4-카르복실산
단계 C로부터의 생성물로부터 출발하여 탈보호 및 가수분해 일반적 절차를 사용하고 이어서 역상 정제용 크로마토그래피 (C18, 물 중 0.1% TFA: MeCN)를 통해 재정제하여 목적 생성물의 TFA-염을 수득하였다. HRMS-ESI (m/z): [M+2H]2+ C34H39FN8O3S2에 대한 계산치: 345.1280, 실측치 345.1265.
P7의 제조: 2-({6-[(1,3-벤조티아졸-2-일)아미노]-5-메틸피리다진-3-일}(메틸)아미노)-5-(3-{2-플루오로-4-[3-(메틸아미노)프로프-1-인-1-일]페녹시}프로필)-1,3-티아졸-4-카르복실산
Figure pct00622
단계 A: 에틸 2-({6-[(1,3-벤조티아졸-2-일)아미노]-5-메틸피리다진-3-일}(메틸)아미노)-5-(3-{2-플루오로-4-[3-(메틸아미노)프로프-1-인-1-일]페녹시}프로필)-1,3-티아졸-4-카르복실레이트
트리플루오로아세트산 (20 mL)을 디클로로메탄 (60 mL) 중 제조예 5j_01, 단계 A로부터의 생성물 (1.5 g, 1.71 mmol, 1 당량)의 교반 용액에 첨가하고, 혼합물을 주위 온도에서 밤새 교반하였다. 반응물을 디클로로메탄으로 희석하고, 0℃로 냉각시킨 다음, 2N 수성 수산화나트륨을 첨가하여 염기성화시키고, 유기 상을 건조 (황산마그네슘)시키고, 진공 하에 농축시켰다. 디클로로메탄 중 0 - 10% 메탄올의 구배로 용리시키면서 자동화 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (콤비플래쉬 Rf, 40 g 레디셉™ 실리카 카트리지)에 의해 정제하여 목적 생성물을 황색 고체 (361 mg, 0.56 mmol, 33%)로서 수득하였다. LC/MS (C32H32FN7O3S2) 646 [M+H]+; RT 1.98 (LCMS-V-C). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.91 (d, 1H), 7.68 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 7.53 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.39 (ddd, J = 8.2, 7.2, 1.3 Hz, 1H), 7.32 - 7.11 (m, 4H), 4.25 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 4.15 (t, J = 6.2 Hz, 2H), 3.77 (s, 3H), 3.46 (s, 2H), 3.27 (t, J = 7.7 Hz, 2H), 2.47 (d, J = 1.0 Hz, 3H), 2.31 (s, 3H), 2.19 - 2.07 (m, 2H), 2.23 (s, 1H), 1.30 (t, J = 7.1 Hz, 3H).
단계 B: 2-({6-[(1,3-벤조티아졸-2-일)아미노]-5-메틸피리다진-3-일}(메틸)아미노)-5-(3-{2-플루오로-4-[3-(메틸아미노)프로프-1-인-1-일]페녹시}프로필)-1,3-티아졸-4-카르복실산
1,4-디옥산 (15 mL) 중 단계 B로부터의 생성물 (361 mg, 0.56 mmol, 1 당량)의 용액에 수산화리튬 1수화물 (352 mg, 8.39 mmol, 15 당량)을 첨가하고, 혼합물을 밤새 100℃에서 가열하였다. 반응물을 주위 온도로 냉각되도록 하고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 물로 연화처리하고, 여과하고, 물에 이어서 디에틸 에테르로 세척하고, 진공 하에 건조시켜 목적 생성물을 황색 고체 (286 mg, 0.46 mmol, 83%)로서 [리튬 염으로서] 수득하였다. HRMS-ESI (m/z) [M+H]+ C30H29FN7O3S2에 대한 계산치: 618.1752, 실측치 618.1767.
P8의 제조: 2-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-5-[3-[2-플루오로-4-[3-(4-메틸피페라진-1-일)부트-1-이닐]페녹시]프로필]티아졸-4-카르복실산
Figure pct00623
단계 A: 메틸 2-(3-클로로-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일)-5-[3-[2-플루오로-4-[3-(4-메틸피페라진-1-일)부트-1-이닐]페녹시]프로필]티아졸-4-카르복실레이트
24 mL 오븐-건조된 바이알에 PTFE-코팅된 자기 교반 막대를 장착하고, 2.5 mL 건조 THF 중에 용해시킨 250 mg 1-메틸피페라진 (2.5 mmol, 5.0 당량)으로 채운 다음, 133 mg 3-브로모부트-1-인 (1.0 mmol, 2.0 당량)을 시린지를 통해 5분의 기간에 걸쳐 적가하고, 그 온도에서 30분 동안 교반하였다. 생성된 혼합물에 301 mg의 제조예 3a (0.50 mmol, 1.0 당량), 18.15 mg Pd(PPh3)2Cl2 (0.025 mmol, 0.05 당량) 및 4.76 CuI (0.025 mmol, 0.05 당량)를 첨가한 다음, 이것을 60℃로 가열하고, 그 온도에서 2시간 동안 교반하였다. 반응은 완전한 전환에 도달하였다. 셀라이트를 반응 혼합물에 첨가하고, 휘발성 물질을 감압 하에 제거하였다. 이어서 이것을 플래쉬 크로마토그래피에 의해 용리액으로서 DCM 및 MeOH (1.2% NH3)를 사용하여 정제하여 목적 생성물 300 mg (95% 수율)을 수득하였다.
단계 B: 메틸 2-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-5-[3-[2-플루오로-4-[3-(4-메틸피페라진-1-일)부트-1-이닐]페녹시]프로필]티아졸-4-카르복실레이트
단계 A로부터의 생성물 300 mg (0.47 mmol, 1.0 당량) 및 1,3-벤조티아졸-2-아민 140 mg (0.94 mmol, 2.0 당량)으로부터 출발하여 부흐발트 일반적 절차 II를 사용하여 목적 생성물 150 mg (42%)을 수득하였다.
단계 C: 2-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-5-[3-[2-플루오로-4-[3-(4-메틸피페라진-1-일)부트-1-이닐]페녹시]프로필]티아졸-4-카르복실산
적절한 메틸 에스테르로서 단계 B로부터의 생성물로부터 출발하여 가수분해 일반적 절차를 사용하여 목적 생성물을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.87 (d, 1H), 7.49 (d, 1H), 7.36 (t, 1H), 7.26 (dd, 1H), 7.2 (t, 1H), 7.16 (dd, 1H), 7.13 (t, 1H), 4.27 (t, 2H), 4.12 (t, 2H), 3.65 (q, 1H), 3.27 (t, 2H), 2.87 (t, 2H), 2.62-2.21 (brm, 8H), 2.14 (s, 3H), 2.13 (qn, 2H), 2.04 (qn, 2H), 1.33 (s, 3H), 1.25 (d, 3H); 13C NMR (125 MHz, DMSO-d6) δ ppm 164.3, 155.4, 151.5, 151.4, 148.6, 147.2, 145.1, 140.2, 136.3, 130.2, 129.0, 129.0, 127.6, 126.5, 122.5, 122.3, 119.2, 116.4, 115.5, 115.4, 88.4, 84.1, 68.5, 51.7, 46.3, 46.1, 31, 23.9, 23.0, 20.3, 19.6, 12.9; HRMS-ESI (m/z) [M+H]+ 계산치 C37H40FN8O3S2: 727.2649, 실측치 727.2630
P9의 제조: 2-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-5-[3-[2-플루오로-4-(3-피롤리딘-1-일프로프-1-이닐)페녹시]프로필]티아졸-4-카르복실산
Figure pct00624
단계 A: 메틸 2-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-5-[3-[2-플루오로-4-(3-피롤리딘-1-일프로프-1-이닐)페녹시]프로필]티아졸-4-카르복실레이트
적절한 프로파르길 알콜로서의 제조예 3d (0.40 mmol, 1당량) 258 mg 및 피롤리딘 (20 당량, 670 mg)으로부터 출발하여 프로파르길 아민 제조 일반적 절차를 사용하여 목적 생성물 120 mg (43%)을 수득하였다.
단계 B: 2-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-5-[3-[2-플루오로-4-(3-피롤리딘-1-일프로프-1-이닐)페녹시]프로필]티아졸-4-카르복실산
적절한 메틸 에스테르로서의 단계 A로부터의 생성물로부터 출발하여 가수분해 일반적 절차를 사용하여 목적 생성물을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.88 (d, 1H), 7.49 (d, 1H), 7.37 (t, 1H), 7.29 (dd, 1H), 7.2 (dd, 1H), 7.19 (t, 1H), 7.14 (t, 1H), 4.27 (t, 2H), 4.14 (t, 2H), 3.52 (s, 2H), 3.27 (t, 2H), 2.88 (t, 2H), 2.52 (t, 4H), 2.34 (s, 3H), 2.13 (qn, 2H), 2.04 (qn, 2H), 1.69 (t, 4H); 13C NMR (125 MHz, DMSO-d6) δ ppm 151.5, 151.4, 148.6, 147.3, 145.1, 140.1, 136.7, 130.2, 129.0, 129.0, 127.5, 126.5, 122.5, 122.3, 119.2, 116.5, 115.5, 115.4, 85.9, 83.3, 68.6, 52.3, 46.3, 43.3, 31.1, 23.8, 23.8, 23.0, 20.4, 12.9; HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C35H35FN7O3S2에 대한 계산치: 684.2221, 실측치 684.2209.
P10의 제조: 2-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-5-[3-[2-플루오로-4-[3-(4-메틸피페라진-1-일)프로프-1-이닐]페녹시]프로필]티아졸-4-카르복실산
Figure pct00625
단계 A: 메틸 2-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-5-[3-[2-플루오로-4-[3-(4-메틸피페라진-1-일)프로프-1-이닐]페녹시]프로필]티아졸-4-카르복실레이트
적절한 프로파르길 알콜로서의 제조예 3d 100 mg (0.155 mmol, 1당량) 및 1-메틸피페라진 (310.7 mg, 20 당량)으로부터 출발하여 프로파르길 아민 제조 일반적 절차를 사용하여 목적 생성물 150 mg (79%)을 수득하였다.
단계 B: 2-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-5-[3-[2-플루오로-4-[3-(4-메틸피페라진-1-일)프로프-1-이닐]페녹시]프로필]티아졸-4-카르복실산
적절한 메틸 에스테르로서의 단계 A로부터의 생성물로부터 출발하여 가수분해 일반적 절차를 사용하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C36H38FN8O3S2에 대한 계산치: 713.2486, 실측치 713.2474.
P11의 제조: 2-[[6-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-5-메틸-피리다진-3-일]-메틸-아미노]-5-[3-[4-[3-(디메틸아미노)부트-1-이닐]-2-플루오로-페녹시]프로필]티아졸-4-카르복실산
Figure pct00626
단계 A: 에틸 5-[3-[4-[3-(디메틸아미노)부트-1-이닐]-2-플루오로-페녹시]프로필]-2-[메틸-[5-메틸-6-[(Z)-[3-(2-트리메틸실릴에톡시메틸)-1,3-벤조티아졸-2-일리덴]아미노]피리다진-3-일]아미노]티아졸-4-카르복실레이트
제조예 5g_01 및 적절한 페놀로서의 제조예 6f_01로부터 출발하여 알킬화 일반적 절차를 사용하여 목적 생성물을 수득하였다.
단계 B: 2-[[6-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-5-메틸-피리다진-3-일]-메틸-아미노]-5-[3-[4-[3-(디메틸아미노)부트-1-이닐]-2-플루오로-페녹시]프로필]티아졸-4-카르복실산
적절한 에틸 에스테르로서의 단계 A로부터의 생성물로부터 출발하여 탈보호 및 가수분해 일반적 절차를 사용하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C32H33FN7O3S2에 대한 계산치: 646.2065, 실측치 646.2057.
P12의 제조: 2-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-5-[3-[4-[3-[2-(디메틸아미노)에틸아미노]프로프-1-이닐]-2-플루오로-페녹시]프로필]티아졸-4-카르복실산
Figure pct00627
단계 A: 메틸 5-[3-[4-[3-[tert-부톡시카르보닐-[2-(디메틸아미노)에틸]아미노]프로프-1-이닐]-2-플루오로-페녹시]프로필]-2-(3-클로로-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일)티아졸-4-카르복실레이트
1.00 g의 제조예 3a (1.66 mmol, 1 당량) 및 적절한 알킨으로서의 413 mg의 tert-부틸 N-[2-(디메틸아미노)에틸]-N-프로프-2-이닐-카르바메이트 (1.83 mmol, 1.1 당량)로부터 출발하여 소노가시라 일반적 절차를 사용하여 목적 생성물을 황색 고체로서 단리시켰다. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.30 (d, 1H), 7.21 (d, 1H), 7.15 (t, 1H), 4.27 (brt, 2H), 4.26 (t, 2H), 4.12 (t, 2H), 3.77 (s, 3H), 3.47 (brt, 2H), 3.26 (t, 2H), 2.89 (t, 2H), 2.82 (brs, 2H), 2.45 (brs, 6H), 2.32 (s, 3H), 2.11 (qn, 2H), 2.04 (qn, 2H), 1.43 (s, 9H); 13C NMR (125 MHz, DMSO-d6) δ ppm 163.1, 155.4, 151.8, 151.4, 151.4, 147.5, 142.4, 136.2, 135, 129.1, 129.1, 119.2, 115.5, 114.8, 82.3, 80.3, 68.3, 56.3, 52.0, 46.4, 46.4, 44.6, 43.1, 30.7, 28.5, 24.2, 23, 19.7, 15.7; HRMS-ESI (m/z): C34H43ClFN6O5S에 대한 [M+H]+ 계산치: 701.2683, 실측치 701.2678.
단계 B: 메틸 2-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-5-[3-[4-[3-[tert-부톡시카르보닐-[2-(디메틸아미노)에틸]아미노]프로프-1-이닐]-2-플루오로-페녹시]프로필]티아졸-4-카르복실레이트
단계 A로부터의 생성물 및 1,3-벤조티아졸-2-아민으로부터 출발하여 부흐발트 일반적 절차 II를 사용하여 목적 생성물을 수득하였다. LC-MS-ESI (m/z): [M+H]+ C41H48FN8O5S2에 대한 계산치: 815.3, 실측치 815.4.
단계 C: 2-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-5-[3-[4-[3-[2-(디메틸아미노)에틸아미노]프로프-1-이닐]-2-플루오로-페녹시]프로필]티아졸-4-카르복실산
단계 B로부터의 생성물로부터 출발하여 탈보호 및 가수분해 일반적 절차를 사용하고 이어서 역상 정제용 크로마토그래피 (C18, 물 중 25 mM NH4HCO3 : MeCN)를 통해 재정제하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C35H38FN8O3S2에 대한 계산치: 701.2487, 실측치 701.2483.
P13의 제조: 2-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-5-[3-[4-[3-[에틸 (메틸)아미노]프로프-1-이닐]-2-플루오로-페녹시]프로필]티아졸-4-카르복실산
Figure pct00628
제조예 3c, 알데히드로서의 파라포름알데히드 및 적절한 2급 아민으로서의 N-메틸에탄아민으로부터 출발하여 은 촉매된 프로파르길 아민 제조 일반적 절차를 사용하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C34H35FN7O3S2에 대한 계산치: 672.2221, 실측치 672.2206.
P14의 제조: 2-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-5-[3-[4-[3-(디에틸아미노)프로프-1-이닐]-2-플루오로-페녹시]프로필]티아졸-4-카르복실산
Figure pct00629
제조예 3c, 알데히드로서의 파라포름알데히드 및 적절한 2급 아민으로서의 디에틸 아민으로부터 출발하여 은 촉매된 프로파르길 아민 제조 일반적 절차를 사용하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C35H37FN7O3S2에 대한 계산치: 686.2377, 실측치 686.2386.
P15의 제조: 2-{3-[(1,3-벤조티아졸-2-일)아미노]-4-메틸-5H,6H,7H,8H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일}-5-(3-{4-[3-(4,4-디플루오로피페리딘-1-일)프로프-1-인-1-일]-2-플루오로페녹시}프로필)-1,3-티아졸-4-카르복실산
Figure pct00630
단계 A: 메틸 2-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-5-[3-[4-[3-(4,4-디플루오로-1-피페리딜)프로프-1-이닐]-2-플루오로-페녹시]프로필]티아졸-4-카르복실레이트
적절한 프로파르길 알콜로서의 제조예 3d (0.155 mmol, 1당량) 100 mg 및 4,4-디플루오로피페리딘 (20 당량)으로부터 출발하여 프로파르길 아민 제조 일반적 절차를 사용하여 목적 생성물 120 mg (72%)을 수득하였다.
단계 B: 2-{3-[(1,3-벤조티아졸-2-일)아미노]-4-메틸-5H,6H,7H,8H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일}-5-(3-{4-[3-(4,4-디플루오로피페리딘-1-일)프로프-1-인-1-일]-2-플루오로페녹시}프로필)-1,3-티아졸-4-카르복실산
적절한 메틸 에스테르로서의 단계 A로부터의 생성물로부터 출발하여 가수분해 일반적 절차를 사용하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ 계산치 C36H35F3N7O3S2: 734.2189, 실측치 734.2185.
P16의 제조: 2-{3-[(1,3-벤조티아졸-2-일)아미노]-4-메틸-6-[2-(메틸아미노)에톡시]-5H,6H,7H,8H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일}-5-(3-{4-[3-(디메틸아미노)프로프-1-인-1-일]-2-플루오로페녹시}프로필)-1,3-티아졸-4-카르복실산
Figure pct00631
단계 A: 4-메틸모르폴린-3-온
에탄올 (100 mL) 및 35% 수성 수산화나트륨 (6.25 mL) 중 2-(메틸아미노)에탄올 (5.32 mL, 66.6 mmol, 1 당량)의 용액을 15-20℃로 냉각시키고, 클로로아세틸 클로라이드 (13.3 mL, 166 mmol, 2.5 당량) 및 35% 수성 수산화나트륨 (22 mL)을 1시간에 걸쳐 격렬히 교반하면서 동시에 첨가하였다. 혼합물을 20분 동안 교반한 다음, 수성 염산으로 중화시키고, 디클로로메탄 (3 x 100 mL)으로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 물로 세척하고, 건조시키고 (PTFE 상 분리기), 진공 하에 농축시켰다. 자동화 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (콤비플래쉬 Rf, 80 g 레디셉™ 실리카 카트리지)에 의해 이소-헵탄 중 0 - 100% 에틸 아세테이트의 구배로 용리시키면서 정제하여 목적 생성물을 무색 오일 (4.4 g, 38.2 mmol, 58%)로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 4.00 (s, 2H), 3.84 - 3.78 (m, 2H), 3.36 - 3.29 (m, 2H), 2.86 (s, 3H).
단계 B: 2-(부트-2-인-1-일)-4-메틸모르폴린-3-온
-78℃로 냉각시킨 테트라히드로푸란 (130 mL) 중 디이소프로필아민 (6.45 mL, 45.9 mmol, 1.2 당량)의 용액에 n-부틸리튬 (헥산 중 2.06 M; 20.4 mL, 42 mmol, 1.1 당량)을 적가하였다. 1분 후, 테트라히드로푸란 (30 mL) 중 단계 A로부터의 생성물 (4.4 g, 38.2 mmol, 1 당량)의 용액을 적가하였다. 15분 후, 테트라히드로푸란 (15 mL) 중 1-브로모-2-부틴 (4.02 mL, 45.9 mmol, 1.2 당량)의 용액을 적가하고, 혼합물을 -78℃에서 1시간 동안 교반한 다음, 주위 온도로 가온되도록 하였다. 포화 수성 염화암모늄을 첨가하고, 혼합물을 에틸 아세테이트 (x3)로 추출하고, 합한 유기 추출물을 건조 (황산마그네슘)시키고, 진공 하에 농축시켰다. 자동화 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (콤비플래쉬 Rf, 80 g 레디셉™ 실리카 카트리지)에 의해 이소-헵탄 중 0 - 100% 에틸 아세테이트의 구배로 용리시키면서 정제하여 목적 생성물을 황색 오일 (5.15 g, 30.8 mmol, 81%)로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 4.09 (dd, J = 7.6, 3.5 Hz, 1H), 4.01 - 3.94 (m, 1H), 3.76 (ddd, J = 11.9, 10.0, 3.6 Hz, 1H), 3.52 - 3.41 (m, 1H), 3.26 - 3.18 (m, 1H), 2.86 (s, 3H), 2.67 - 2.58 (m, 1H), 2.57 - 2.44 (m, 1H), 1.73 (t, J = 2.6 Hz, 3H).
단계 C: 2-[2-(메틸아미노)에톡시]헥스-4-인산
메탄올 (110 mL) 중 단계 B로부터의 생성물 (3.25 g, 19.4 mmol, 1 당량)의 용액에 1M 수성 수산화리튬 (60.3 mL, 60.3 mmol, 3.1 당량)을 첨가하고, 혼합물을 환류 하에 밤새 가열하였다. 반응물을 진공 하에 농축시켜 목적 생성물을 오렌지색 검 (5.15 g, 27.8 mmol, 100%)으로서 수득하였으며, 이것을 직접 후속 단계에 추가 특징화 없이 사용하였다.
단계 D: 2-[2-({[(9H-플루오렌-9-일)메톡시]카르보닐}(메틸)아미노)에톡시]헥스-4-인산
1,4-디옥산 (45 mL) 및 물 (160 mL) 중 단계 C로부터의 생성물 (5.15 g, 27.8 mmol, 1 당량)의 용액에 탄산칼륨 (15.4 g, 111 mmol, 4 당량)을 0℃에서 첨가하고, 이어서 9H-플루오렌-9-일-메틸 클로로포르메이트 (7.19 g, 27.8 mmol, 1 당량)를 첨가하고, 혼합물을 주위 온도로 가온되도록 하고, 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 물과 에틸 아세테이트 사이에 분배하고, 수성 상을 수성 염산을 사용하여 pH 2-3으로 산성화시키고, 에틸 아세테이트 (3 x 300 mL)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 염수로 세척하고, 건조 (황산마그네슘)시키고, 진공 하에 농축시켰다. 자동화 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (콤비플래쉬 Rf, 120 g 레디셉™ 실리카 카트리지)에 의해 디클로로메탄 중 0 - 20% 메탄올의 구배로 용리시키면서 정제하여 목적 생성물을 암황색 검 (7.06 g, 17.3 mmol, 62%)으로서 수득하였다. LC/MS (C24H25NO5) 408 [M+H]+; RT 0.74 (LCMS-V-B2). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.90 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 7.65 (dd, J = 7.5, 1.1 Hz, 2H), 7.42 (td, J = 7.4, 3.0 Hz, 2H), 7.34 (td, J = 7.4, 1.3 Hz, 2H), 4.43 - 4.22 (m, 3H), 3.50 - 3.42 (m, 1H), 3.39 - 3.28 (m, 1H), 3.26 - 3.15 (m, 3H), 2.90 - 2.82 (m, 3H), 2.51 - 2.44 (m, 2H), 1.71 (dt, J = 13.8, 2.5 Hz, 3H).
단계 E: (9H-플루오렌-9-일)메틸 N-{2-[(1-히드록시헥스-4-인-2-일)옥시]에틸}-N-메틸카르바메이트
테트라히드로푸란 (120 mL) 중 단계 D로부터의 생성물 (7.06 g, 17.33 mmol, 1 당량)의 용액을 -10℃로 냉각시킨 다음, THF (40 mL) 중 트리에틸아민 (2.65 mL, 19.1 mmol, 1.1 당량) 및 이소부틸 클로로포르메이트 (2.7 mL, 20.8 mmol, 1.2 당량)를 적가하였다. 침전물을 여과에 의해 제거하고, 용액을 -10℃로 냉각시켰다. 물 (40 mL) 중 수소화붕소나트륨 (2.62 g, 69.3 mmol, 4 당량)을 적가하고, 혼합물을 -10℃에서 1시간 동안 교반하였다. 용액의 pH를 1N 수성 염산을 사용하여 pH 5로 조정한 다음, 포화 수성 중탄산나트륨을 사용하여 pH 10으로 조정하였다. 층을 분리하고, 유기 상을 물 (100 mL) 및 염수 (50 mL)로 연속적으로 세척하고, 건조 (황산마그네슘)시키고, 진공 하에 농축시켰다. 자동화 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (콤비플래쉬 Rf, 80 g 레디셉™ 실리카 카트리지)에 의해 이소-헵탄 중 0 - 100% 에틸 아세테이트의 구배로 용리시키면서 정제하여 목적 생성물을 무색 검 (4.64 g, 11.8 mmol, 68%)으로서 수득하였다. LC/MS (C24H27NO4) 394 [M+H]+; RT 0.77 (LCMS-V-B2). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.90 (d, J = 7.5 Hz, 2H), 7.65 (dt, J = 7.4, 0.9 Hz, 2H), 7.43 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 7.35 (td, J = 7.4, 1.2 Hz, 2H), 4.68 - 4.60 (m, 1H), 4.39 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 4.34 (d, J = 6.7 Hz, 1H), 4.28 (t, J = 6.4 Hz, 1H), 3.60 - 3.51 (m, 1H), 3.46 - 3.36 (m, 2H), 3.34 - 3.28 (m, 2H), 3.19 (dd, J = 16.6, 5.5 Hz, 2H), 2.84 (d, J = 10.8 Hz, 3H), 2.38 - 2.15 (m, 2H), 1.71 (t, J = 2.5 Hz, 3H).
단계 F: (9H-플루오렌-9-일)메틸 N-[2-({1-[(tert-부틸디페닐실릴)옥시]헥스-4-인-2-일}옥시)에틸]-N-메틸카르바메이트
디클로로메탄 (200 mL) 중 단계 E로부터의 생성물 (4.64 g, 11.8 mmol, 1 당량) 및 이미다졸 (1.56 mL, 23.6 mmol, 2 당량)의 냉각된 용액에 tert-부틸 (클로로)디페닐실란 (6.13 mL, 23.6 mmol, 2 당량)을 적가하고, 혼합물을 주위 온도로 가온되도록 하고, 밤새 교반하였다. 반응물을 2M 수성 염화암모늄으로 켄칭하고, 혼합물을 디클로로메탄 (3 x 200 mL)으로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 염수로 세척하고, 건조 (PTFE 상 분리기)시키고, 진공 하에 농축시켰다. 자동화 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (콤비플래쉬 Rf, 120 g 레디셉™ 실리카 카트리지)에 의해 이소-헵탄 중 0 - 25% 에틸 아세테이트의 구배로 용리시키면서 정제하여 목적 생성물을 무색 검 (5.86 g, 9.27 mmol, 79%)으로서 수득하였다. LC/MS (C40H45NO4Si) 632 [M+H]+; RT 1.38 (LCMS-V-B2). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.87 (dd, J = 20.0, 7.5 Hz, 2H), 7.67 - 7.56 (m, 6H), 7.53 - 7.39 (m, 7H), 7.39 - 7.22 (m, 3H), 4.38 (t, J = 4.8 Hz, 1H), 4.31 (s, 1H), 4.24 (t, J = 5.7 Hz, 1H), 3.73 - 3.61 (m, 1H), 3.60 - 3.44 (m, 2H), 3.34 - 3.29 (m, 2H), 3.29 - 3.18 (m, 1H), 3.16 - 3.06 (m, 1H), 2.81 (d, J = 14.1 Hz, 3H), 2.43 - 2.26 (m, 2H), 1.69 (t, J = 2.4 Hz, 3H), 0.98 (s, 9H).
단계 G: (9H-플루오렌-9-일)메틸 N-[2-({1-[(tert-부틸디페닐실릴)옥시]-3-(3,6-디클로로-5-메틸피리다진-4-일)프로판-2-일}옥시)에틸]-N-메틸카르바메이트
톨루엔 (130 mL) 중 단계 F로부터의 생성물 (5.86 g, 9.27 mmol, 1 당량) 및 3,6-디클로로-1,2,4,5-테트라진 (5.6 g, 37.1 mmol, 4 당량)의 용액을 밀봉된 플라스크에서 150℃에서 밤새 가열하였다. 반응물을 진공 하에 농축시키고, 자동화 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (콤비플래쉬 Rf, 120 g 레디셉™ 실리카 카트리지)에 의해 이소-헵탄 중 0 - 30% 에틸 아세테이트의 구배로 용리시키면서 정제하여 목적 생성물을 분홍색 발포체 (2.99 g, 3.97 mmol, 43%)로서 수득하였다. LC/MS (C42H45Cl2N3O4Si) 754 [M+H]+; RT 1.37 (LCMS-V-B2). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.90 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.78 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 7.68 - 7.59 (m, 5H), 7.57 - 7.50 (m, 1H), 7.47 - 7.41 (m, 6H), 7.45 - 7.37 (m, 1H), 7.36 - 7.28 (m, 2H), 7.23 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 4.30 (d, J = 5.7 Hz, 1H), 4.27 - 4.11 (m, 2H), 3.81 - 3.60 (m, 3H), 3.55 - 3.45 (m 1H), 3.20 - 2.98 (m, 4H), 2.89 - 2.77 (m, 1H), 2.58 (d, J = 23.0 Hz, 3H), 2.39 (d, J = 13.1 Hz, 3H), 1.01 (s, 9H).
단계 H: 4-{3-[(tert-부틸디페닐실릴)옥시]-2-[2-(메틸아미노)에톡시]프로필}-3,6-디클로로-5-메틸피리다진
아세토니트릴 (60 mL) 중 단계 G로부터의 생성물 (2.79 g, 3.7 mmol, 1 당량) 및 디에틸아민 (0.77 mL, 7.39 mmol, 2 당량)의 용액을 주위 온도에서 밤새 교반하였다. 물을 첨가하고, 혼합물을 에틸 아세테이트 (3 x 70 mL)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 염수 (100 mL)로 세척하고, 건조 (황산마그네슘)시키고, 진공 하에 농축시켰다. 자동화 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (콤비플래쉬 Rf, 40 g 레디셉™ 실리카 카트리지)에 의해 디클로로메탄 중 0 - 16% 메탄올의 구배로 용리시키면서 정제하여 목적 생성물을 오렌지색/분홍색 검 (1.9 g, 3.57 mmol, 96%)으로서 수득하였다. LC/MS (C27H35Cl2N3O2Si) 532 [M+H]+; RT 0.84 (LCMS-V-B2). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.69 - 7.62 (m, 4H), 7.54 - 7.41 (m, 6H), 3.83 - 3.60 (m, 3H), 3.42 - 3.36 (m, 1H), 3.16 - 2.97 (m, 3H), 2.45 (s, 3H), 2.39 - 2.23 (m, 2H), 2.06 (s, 3H), 1.02 (s, 9H).
단계 I: tert-부틸 N-[2-({1-[(tert-부틸디페닐실릴)옥시]-3-(3,6-디클로로-5-메틸피리다진-4-일)프로판-2-일}옥시)에틸]-N-메틸카르바메이트
디클로로메탄 (100 mL) 중 단계 H로부터의 생성물 (1.9 g, 3.57 mmol, 1 당량)의 용액에 디-tert-부틸 디카르보네이트 (1.53 mL, 7.14 mmol, 2 당량)에 이어서 트리에틸아민 (1.99 mL, 14.3 mmol, 4 당량)을 첨가하고, 혼합물을 주위 온도에서 4시간 동안 교반하였다. 반응물을 디클로로메탄과 물 사이에 분배하고, 수성 상을 pH 4로 산성화시키고, 디클로로메탄 (3 x 80 mL)으로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 염수로 세척하고, 건조 (PTFE 상 분리기)시키고, 진공 하에 농축시켰다. 자동화 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (콤비플래쉬 Rf, 40 g 레디셉™ 실리카 카트리지)에 의해 이소-헵탄 중 0 - 25% 에틸 아세테이트의 구배로 용리시키면서 정제하여 목적 생성물을 무색 검 (1.83 g, 2.9 mmol, 81%)으로서 수득하였다. LC/MS (C32H43Cl2N3O4Si) 532 [M-Boc+H]+; RT 1.33 (LCMS-V-B2). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.69 - 7.62 (m, 4H), 7.54 - 7.41 (m, 6H), 3.76 (qd, J = 10.7, 4.7 Hz, 2H), 3.66 (d, J = 5.5 Hz, 1H), 3.44 (q, J = 7.9, 6.3 Hz, 1H), 3.20 - 3.10 (m, 3H), 3.04 (dd, J = 14.0, 4.1 Hz, 2H), 2.58 (s, 3H), 2.44 (s, 3H), 1.31 (d, J = 22.6 Hz, 9H), 1.02 (s, 9H).
단계 J: tert-부틸 N-(2-{[1-(3,6-디클로로-5-메틸피리다진-4-일)-3-히드록시프로판-2-일]옥시}에틸)-N-메틸카르바메이트
테트라히드로푸란 (75 mL) 중 단계 I로부터의 생성물 (1.83 g, 2.9 mmol, 1 당량)의 용액을 0℃로 냉각시킨 후, 테트라부틸암모늄 플루오라이드 (테트라히드로푸란 중 1M; 2.9 mL, 2.9 mmol, 1 당량)를 첨가하고, 0℃에서 30분 동안 교반한 다음, 주위 온도에서 1시간 동안 교반하였다. 반응물을 디클로로메탄과 물 사이에 분배하고, 수성 상을 디클로로메탄 (x2)으로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 염수로 세척하고, 건조 (PTFE 상 분리기)시키고, 진공 하에 농축시켰다. 자동화 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (콤비플래쉬 Rf, 24 g 레디셉™ 실리카 카트리지)에 의해 이소-헵탄 중 0 - 100% 에틸 아세테이트의 구배로 용리시키면서 정제하여 목적 생성물을 연오렌지색 검 (0.73 g, 1.86 mmol, 64%)으로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 4.93 (t, J = 5.5 Hz, 1H), 3.62 - 3.44 (m, 4H), 3.23 (dt, J = 9.6, 6.0 Hz, 1H), 3.11 (d, J = 23.9 Hz, 2H), 3.02 (dd, J = 6.5, 2.0 Hz, 2H), 2.60 (d, J = 8.1 Hz, 3H), 2.45 (s, 3H), 1.35 (d, J = 13.0 Hz, 9H).
단계 K: 메틸 2-{[(tert-부톡시)카르보닐][2-(2-{[(tert-부톡시)카르보닐](메틸)아미노}에톡시)-3-(3,6-디클로로-5-메틸피리다진-4-일)프로필]아미노}-5-(3-{4-[3-(디메틸아미노)프로프-1-인-1-일]-2-플루오로페녹시}프로필)-1,3-티아졸-4-카르복실레이트
톨루엔 (20 mL) 중 단계 J로부터의 생성물 (125 mg, 0.32 mmol, 1 당량)의 용액에 제조예 1c로부터의 생성물 (171 mg, 0.35 mmol, 1.1 당량), 디-tert-부틸 아조디카르복실레이트 (146 mg, 0.63 mmol, 2 당량) 및 트리페닐포스핀 (166 mg, 0.63 mmol, 2 당량)을 첨가하고, 혼합물을 50℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응물을 디클로로메탄과 물 사이에 분배하고, 수성 상을 디클로로메탄 (x2)으로 추출하고, 합한 유기 추출물을 염수로 세척하고, 건조 (황산마그네슘)시키고, 진공 하에 농축시켰다. 자동화 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (콤비플래쉬 Rf, 12 g 레디셉™ 실리카 카트리지)에 의해 이소-헵탄 중 0 - 100% 에틸 아세테이트의 구배로 용리시키면서 정제하여 목적 생성물을 연황색 검 (282 mg, 0.32 mmol, 102%)으로서 수득하였다. LC/MS (C40H53Cl2FN6O8S) 867 [M+H]+; RT 0.97 (LCMS-V-B2). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.30 (dd, 1H), 7.23 - 7.17 (m, 1H), 7.12 (t, 1H), 4.29 (dd, J = 13.9, 5.7 Hz, 1H), 4.10 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 3.96 - 3.87 (m, 1H), 3.74 (s, 3H), 3.61 - 3.48 (m, 1H), 3.42 (s, 3H), 3.32 (s, 2H), 3.25 (dt, J = 7.1, 3.9 Hz, 3H), 3.16 - 2.99 (m, 2H), 2.97 - 2.89 (m, 1H), 2.58 (d, J = 11.6 Hz, 2H), 2.45 (s, 3H), 2.23 (s, 6H), 2.10 (t, J = 6.9 Hz, 2H), 1.52 (s, 9H), 1.31 (d, J = 39.6 Hz, 9H).
단계 L: 메틸 2-{[2-(2-{[(tert-부톡시)카르보닐](메틸)아미노}에톡시)-3-(3,6-디클로로-5-메틸피리다진-4-일)프로필]아미노}-5-(3-{4-[3-(디메틸아미노)프로프-1-인-1-일]-2-플루오로페녹시}프로필)-1,3-티아졸-4-카르복실레이트
1,1,1,3,3,3-헥사플루오로-2-프로판올 (2.5 mL, 23.7 mmol, 74.7 당량) 중 단계 K로부터의 생성물 (275 mg, 0.32 mmol, 1 당량)의 용액을 100℃에서 마이크로웨이브 조사 하에 60분 동안 가열하였다. 반응물을 진공 하에 농축시키고, 자동화 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (콤비플래쉬 Rf, 12 g 레디셉™ 실리카 카트리지)에 의해 디클로로메탄 중 0 - 7% 메탄올의 구배로 용리시키면서 정제하여 목적 생성물을 백색 고체 (154 mg, 0.2 mmol, 63%)로서 수득하였다. LC/MS (C35H45Cl2FN6O6S) 767 [M+H]+; RT 0.70 (LCMS-V-B2). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.83 (br s, 1H), 7.30 (dd, J = 11.9, 2.0 Hz, 1H), 7.24 - 7.17 (m, 1H), 7.12 (t, J = 8.7 Hz, 1H), 4.08 (t, J = 6.1 Hz, 2H), 3.82 (dt, J = 9.0, 4.5 Hz, 1H), 3.70 (s, 3H), 3.60 - 3.49 (m, 1H), 3.46 - 3.39 (m, 4H), 3.33 (s, 2H), 3.29 - 3.18 (m, 1H), 3.14 (t, 2H), 3.10 - 3.02 (m, 2H), 2.98 (dd, J = 13.9, 3.8 Hz, 1H), 2.64 - 2.53 (m, 2H), 2.44 (s, 3H), 2.23 (s, 6H), 2.07 - 1.95 (m, 2H), 1.32 (d, J = 30.8 Hz, 9H).
단계 M: 메틸 2-[6-(2-{[(tert-부톡시)카르보닐](메틸)아미노}에톡시)-3-클로로-4-메틸-5H,6H,7H,8H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-5-(3-{4-[3-(디메틸아미노)프로프-1-인-1-일]-2-플루오로페녹시}프로필)-1,3-티아졸-4-카르복실레이트
1,4-디옥산 (14 mL) 중 단계 L로부터의 생성물 (154 mg, 0.2 mmol, 1 당량)의 용액에 탄산세슘 (131 mg, 0.4 mmol, 2 당량), N,N-디이소프로필에틸아민 (0.07 mL, 0.4 mmol, 2 당량) 및 비스(디-tert-부틸 (4-디메틸아미노페닐)포스핀) 디클로로팔라듐 (II) (14.2 mg, 0.02 mmol, 0.1 당량)을 첨가하고, 혼합물을 80℃에서 45분 동안 가열하였다. 반응물을 디클로로메탄과 물 사이에 분배하고, 수성 상을 디클로로메탄 (x2)으로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 염수로 세척하고, 건조 (황산마그네슘)시키고, 진공 하에 농축시켰다. 자동화 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (콤비플래쉬 Rf, 12 g 레디셉™ 실리카 카트리지)에 의해 디클로로메탄 중 0 - 8% 메탄올의 구배로 용리시키면서 정제하여 목적 생성물을 크림색 고체 (136 mg, 0.19 mmol, 93%)로서 수득하였다. LC/MS (C35H44ClFN6O6S) 731 [M+H]+; RT 0.75 (LCMS-V-B2). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.31 (dt, J = 12.0, 1.9 Hz, 1H), 7.25 - 7.19 (m, 1H), 7.14 (t, 1H), 4.86 (dd, 1H), 4.25 (s, 1H), 4.13 (t, J = 6.2 Hz, 2H), 3.93 (d, J = 13.5 Hz, 1H), 3.78 (s, 3H), 3.56 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 3.42 (s, 3H), 3.32 (s, 2H), 3.30 - 3.23 (m, 2H), 3.21 - 3.09 (m, 2H), 3.08 - 3.00 (m, 1H), 2.58 - 2.52 (m, 1H), 2.34 (s, 3H), 2.23 (s, 6H), 2.12 (p, J = 6.7 Hz, 2H), 1.27 (d, J = 28.5 Hz, 9H).
단계 N: 메틸 2-{3-[(1,3-벤조티아졸-2-일)아미노]-6-(2-{[(tert-부톡시)카르보닐](메틸)아미노}에톡시)-4-메틸-5H,6H,7H,8H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일}-5-(3-{4-[3-(디메틸아미노)프로프-1-인-1-일]-2-플루오로페녹시}프로필)-1,3-티아졸-4-카르복실레이트
시클로헥산올 (4.5 mL) 중 단계 M으로부터의 생성물 (136 mg, 0.19 mmol, 1 당량)의 용액에 2-아미노벤조티아졸 (55.7 mg, 0.37 mmol, 2 당량) 및 N,N-디이소프로필에틸아민 (0.1 mL, 0.56 mmol, 3 당량)을 첨가하고, 혼합물을 질소 (10분)로 폭기하였다. Xantphos (21.5 mg, 0.04 mmol, 0.2 당량) 및 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐 (0) (17 mg, 0.02 mmol, 0.1 당량)을 첨가하고, 혼합물을 마이크로웨이브 조사 하에 140℃에서 1시간 동안 가열하였다. 반응물을 디클로로메탄과 물 사이에 분배하고, 수성 상을 디클로로메탄 (3 x 40 mL)으로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 염수로 세척하고, 건조 (PTFE 상 분리기)시키고, 진공 하에 농축시켰다. 역상 자동화 플래쉬 크로마토그래피 (콤비플래쉬 Rf, C18 15.5 g 골드 레디셉 칼럼)에 의해 물 중 5 - 95% 아세토니트릴의 구배로 용리시키면서 정제하여 목적 생성물을 황색 고체 (70.8 mg, 0.08 mmol, 45%)로서 수득하였다. LC/MS (C42H49FN8O6S2) 845 [M+H]+; RT 0.86 (LCMS-V-B2). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.52 (br s, 1H), 7.88 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.49 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.37 (ddd, J = 8.2, 7.3, 1.3 Hz, 1H), 7.31 (dd, J = 11.9, 1.9 Hz, 1H), 7.24 - 7.12 (m, 3H), 4.80 (dd, 1H), 4.22 (s, 1H), 4.15 (t, J = 6.2 Hz, 2H), 3.94 (d, J = 13.4 Hz, 1H), 3.78 (s, 3H), 3.56 (t, J = 5.7 Hz, 2H), 3.44 - 3.37 (m, 1H), 3.31 (s, 2H), 3.28 (d, 1H), 3.24 - 3.14 (m, 2H), 3.12 - 2.97 (m, 2H), 2.58 (d, J = 12.3 Hz, 3H), 2.33 (s, 3H), 2.19 (s, 6H), 2.14 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 1.27 (d, 9H).
단계 O: 메틸 2-{3-[(1,3-벤조티아졸-2-일)아미노]-4-메틸-6-[2-(메틸아미노)에톡시]-5H,6H,7H,8H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일}-5-(3-{4-[3-(디메틸아미노)프로프-1-인-1-일]-2-플루오로페녹시}프로필)-1,3-티아졸-4-카르복실레이트
디클로로메탄 (5 mL) 중 단계 N으로부터의 생성물 (70.8 mg, 0.08 mmol, 1 당량)의 용액에 트리플루오로아세트산 (1 mL)을 천천히 첨가하고, 혼합물을 주위 온도에서 1시간 동안 교반하였다. 반응물을 디클로로메탄과 포화 수성 중탄산나트륨 사이에 분배하고, 수성 상을 디클로로메탄 (3 x 30 mL)으로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 염수로 세척하고, 건조시키고 (PTFE 상 분리기), 진공 하에 농축시켜 목적 생성물을 밝은 황색 고체 (59.8 mg, 0.08 mmol, 96%)로서 수득하였다. LC/MS (C37H41FN8O4S2) 745 [M+H]+; RT 1.07 (LCMS-V-B1). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.88 (dd, J = 7.8, 1.2 Hz, 1H), 7.49 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.37 (ddd, J = 8.2, 7.2, 1.3 Hz, 1H), 7.32 (dd, J = 11.9, 1.9 Hz, 1H), 7.24 - 7.12 (m, 3H), 4.79 - 4.69 (m, 1H), 4.26 - 4.19 (m, 1H), 4.15 (t, J = 6.2 Hz, 2H), 4.03 (dd, J = 13.5, 2.4 Hz, 1H), 3.78 (s, 3H), 3.60 (t, J = 5.5 Hz, 2H), 3.39 (s, 2H), 3.32 - 3.27 (m, 2H), 3.15 (d, J = 14.6 Hz, 1H), 3.08 - 2.99 (m, 1H), 2.70 (t, J = 5.5 Hz, 2H), 2.38 (s, 3H), 2.29 (s, 3H), 2.22 (s, 6H), 2.17 - 2.08 (m, 2H).
단계 P: 2-{3-[(1,3-벤조티아졸-2-일)아미노]-4-메틸-6-[2-(메틸아미노)에톡시]-5H,6H,7H,8H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일}-5-(3-{4-[3-(디메틸아미노)프로프-1-인-1-일]-2-플루오로페녹시}프로필)-1,3-티아졸-4-카르복실산
1,4-디옥산 (2 mL) 중 단계 O로부터의 생성물 (59.8 mg, 0.08 mmol, 1 당량)의 용액에 1M 수성 수산화리튬 (0.24 mL, 0.24 mmol, 3 당량)을 첨가하고, 혼합물을 50℃에서 2시간 동안 가열하였다. 고체를 여과에 의해 수집하고, 진공 하에 건조시켜 목적 생성물을 밝은 황색 고체 (43 mg, 0.06 mmol, 73%)로서 리튬 염으로서 수득하였다. HRMS-ESI (m/z) [M+H]+ C36H40FN8O4S2에 대한 계산치: 731.2598, 실측치 731.2623.
P17의 제조: 2-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-5-[3-[2-플루오로-4-(3-피페라진-1-일프로프-1-이닐)페녹시]프로필]티아졸-4-카르복실산
Figure pct00632
단계 A: 2-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-5-[3-[4-[3-(4-tert-부톡시카르보닐피페라진-1-일)프로프-1-이닐]-2-플루오로-페녹시]프로필]티아졸-4-카르복실산
제조예 3c, 알데히드로서의 파라포름알데히드 및 적절한 2급 아민으로서의 tert-부틸 피페라진-1-카르복실레이트로부터 출발하여 은 촉매된 프로파르길 아민 제조 일반적 절차를 사용하여 목적 생성물을 수득하였다.
단계 B: 2-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-5-[3-[2-플루오로-4-(3-피페라진-1-일프로프-1-이닐)페녹시]프로필]티아졸-4-카르복실산
아세토니트릴 (4.3 mL) 중 단계 A로부터의 생성물 (207 mg, 0.25 mmol) 및 HFxPyr (2.5 mmol, 10 당량)의 혼합물을 60℃에서 2.5시간 동안 교반하였다. 생성물을 24 g 실리카 겔 칼럼 상에서 플래쉬 크로마토그래피에 의해 용리액으로서 DCM 및 MeOH (NH3)를 사용하여 정제하여 목적 생성물 143 mg (79%)을 수득하였다. HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C35H36FN8O3S2에 대한 계산치: 699.2330, 실측치 699.2322.
P18의 제조: 2-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-5-[3-[2-플루오로-4-[3-(1-피페리딜)프로프-1-이닐]페녹시]프로필]티아졸-4-카르복실산
Figure pct00633
단계 A: 메틸 2-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-5-[3-[2-플루오로-4-[3-(1-피페리딜)프로프-1-이닐]페녹시]프로필]티아졸-4-카르복실레이트
적절한 프로파르길 알콜로서의 제조예 3d 100 mg (0.155 mmol, 1당량) 및 피페리딘 (264.2 mg, 20 당량)으로부터 출발하여 프로파르길 아민 제조 일반적 절차를 사용하여 목적 생성물 55 mg (50%)을 수득하였다.
단계 B: 2-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-5-[3-[2-플루오로-4-[3-(1-피페리딜)프로프-1-이닐]페녹시]프로필]티아졸-4-카르복실산
적절한 메틸 에스테르로서 단계 A의 생성물로부터 출발하여 가수분해 일반적 절차를 사용하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C36H37FN7O3S2에 대한 계산치: 698.2377, 실측치 698.2373.
P19의 제조: 6-{3-[(1,3-벤조티아졸-2-일)아미노]-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일}-3-(1-{[3-(2-{[(3S)-3,4-디히드록시부틸]아미노}에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일]메틸}-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-카르복실산
Figure pct00634
제조예 12 및 적절한 아민으로서의 2-[(4S)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일]에탄아민으로부터 출발하여 아민 치환 및 가수분해 일반적 절차 I을 사용하여, 디히드록시 보호된 아민을 갖는 화합물을 수득하였다. 10% HCl 용액 (실온, 1시간)으로 가수분해하고, 정제용 HPLC (용리액으로서 아세토니트릴 및 5mM 수성 NH4HCO3 용액을 사용함)에 의해 정제하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C44H55N9O5에 대한 계산치: 822.4125, 실측치: 822.4120.
P20의 제조: 6-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-3-[1-[[3,5-디메틸-7-[2-(4-메틸피페라진-1-일)에톡시]-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실산
Figure pct00635
제조예 12 및 적절한 아민으로서의 1-메틸피페라진으로부터 출발하여 아민 치환 및 가수분해 일반적 절차 I을 사용하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS-ESI (m/z): [M+2H]2+ C45H58N10O3S에 대한 계산치: 409.2207, 실측치: 409.2208.
P21의 제조: 6-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-3-[1-[[3,5-디메틸-7-(2-피롤리딘-1-일에톡시)-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실산
Figure pct00636
제조예 12 및 적절한 아민으로서의 피롤리딘으로부터 출발하여 아민 치환 및 가수분해 일반적 절차 I을 사용하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C44H54N9O3S에 대한 계산치: 788,4070, 실측치: 788.4068.
P22의 제조: 6-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-3-[1-[[3-[2-(4-히드록시부틸아미노)에톡시]-5,7-디메틸-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실산
Figure pct00637
제조예 12 및 적절한 아민으로서의 4-아미노부탄-1-올로부터 출발하여 아민 치환 및 가수분해 일반적 절차 I을 사용하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C44H56N9O4S에 대한 계산치: 806.4176, 실측치: 806.4174.
P23의 제조: 6-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-3-[1-[[3-[2-[[3-히드록시-2-(히드록시메틸)프로필]아미노]에톡시]-5,7-디메틸-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실산
Figure pct00638
제조예 12 및 적절한 아민으로서의 (2,2-디메틸-1,3-디옥산-5-일)메탄아민으로부터 출발하여 아민 치환 및 가수분해 일반적 절차 I을 사용하여 디히드록시 보호된 아민을 갖는 화합물을 수득하였다. 10% HCl 용액 (실온, 1시간)으로 가수분해하고, 정제용 HPLC (용리액으로서 아세토니트릴 및 5mM 수성 NH4HCO3 용액을 사용함)에 의해 정제하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C44H56N9O5S에 대한 계산치: 822,4125, 실측치: 822.4099.
P24의 제조: 6-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-3-[1-[[3-[2-[[2-히드록시-1-(히드록시메틸)에틸]아미노]에톡시]-5,7-디메틸-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실산
Figure pct00639
제조예 12 및 적절한 아민으로서의 2-아미노프로판-1,3-디올로부터 출발하여 아민 치환 및 가수분해 일반적 절차 I을 사용하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C43H54N9O5S에 대한 계산치: 808.3969, 실측치: 808.3965.
P25의 제조: 6-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-3-[1-[[3-[2-(3-히드록시프로필아미노)에톡시]-5,7-디메틸-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실산
Figure pct00640
제조예 12 및 적절한 아민으로서의 3-아미노프로판-1-올로부터 출발하여 아민 치환 및 가수분해 일반적 절차 I을 사용하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C43H54N9O4S에 대한 계산치: 792.4019, 실측치: 792.4012.
P26의 제조: 6-[[6-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-5-메틸-피리다진-3-일]-메틸-아미노]-3-[1-[[3-[2-(3-히드록시프로필아미노)에톡시]-5,7-디메틸-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실산
Figure pct00641
제조예 14_01 및 적절한 아민으로서의 3-아미노프로판-1-올로부터 출발하여 아민 치환 및 가수분해 일반적 절차 II를 사용하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C41H52N9O4S에 대한 계산치: 766.3863, 실측치: 766.3860.
P27의 제조: 6-{3-[(1,3-벤조티아졸-2-일)아미노]-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일}-3-[1-({3-[2-(디메틸아미노)에톡시]-5,7-디메틸아다만탄-1-일}메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실산
Figure pct00642
제조예 12 및 적절한 아민으로서의 디메틸아민으로부터 출발하여 아민 치환 및 가수분해 일반적 절차 I을 사용하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C42H52N9O3S에 대한 계산치: 762.3914, 실측치: 762.3912.
P28의 제조: 2-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-5-[3-[4-[3-(디메틸아미노)프로프-1-이닐]페녹시]프로필]티아졸-4-카르복실산
Figure pct00643
단계 A: 4-[3-(디메틸아미노)프로프-1-이닐]페놀
4-아이오도페놀 10.0 g (45.45 mmol) 및 N,N-디메틸프로프-2-인-1-아민 4.91 g (1.3 당량)으로부터 출발하여 소노가시라 일반적 절차를 사용하여 목적 생성물 3.29 g (41%)을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 9.83 (brs, 1H), 7.25 (d, 2H), 6.74 (d,2H), 3.44 (s, 2H), 2.26 (s, 6H); LC/MS (C11H14NO) 176[M+H]+.
단계 B: 메틸 2-(tert-부톡시카르보닐아미노)-5-[3-[tert-부틸 (디페닐)실릴]옥시프로필]티아졸-4-카르복실레이트
DMF (973 mL) 중 제조예 1a, 단계 C의 생성물 (77.0 g, 243.7 mmol), 이미다졸 (33.14 g, 2 당량) 및 DMAP (1.49 g, 0.05 당량)에 tert-부틸 (클로로)디페닐실란 (93.5 mL, 1.5 당량)을 적가하고, 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 휘발성 물질을 제거한 후, 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 용리액으로서 헵탄 및 EtOAc 사용)에 의해 정제하여 목적 생성물 13.56 g (99%)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 11.63 (s, 1H), 7.60 (d, 4H), 7.45 (t, 2H), 7.42 (t, 4H), 3.74 (s, 3H), 3.67 (t, 2H), 3.20 (t, 2H), 1.87 (qn, 2H), 1.47 (s, 9H), 0.99 (s, 9H); 13C NMR (125 MHz, DMSO-d6) δ ppm 162.8, 156.0, 142.6, 135.6, 135.5, 133.5, 130.3, 128.3, 81.8, 62.9, 51.9, 34.0, 28.3, 27.1, 23.2, 19.2; HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C29H39N2O5SSi에 대한 계산치: 555.2349, 실측치: 555.2336.
단계 C: 메틸 2-[tert-부톡시카르보닐-[3-(3,6-디클로로-5-메틸-피리다진-4-일)프로필]아미노]-5-[3-[tert-부틸 (디페닐)실릴]옥시프로필]티아졸-4-카르복실레이트
단계 B로부터의 생성물 34.95 g (63 mmol) 및 적절한 아이오딘 화합물로서의 3,6-디클로로-4-(3-아이오도프로필)-5-메틸-피리다진 25.0 g (1.2 당량)으로부터 출발하여 알킬화 일반적 절차를 사용하여 목적 생성물 51.0 g (정량적 수율)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.63-7.37 (m, 10H), 4.09 (t, 2H), 3.75 (s, 3H), 3.67 (t, 2H), 3.20 (t, 2H), 2.82 (m, 2H), 2.40 (s, 3H), 1.87 (m, 2H), 1.87 (m, 2H), 1.50 (s, 9H), 0.97 (s, 9H); 13C NMR (125 MHz, DMSO-d6) δ ppm 62.9, 52.0, 46.1, 33.9, 28.1, 27.5, 27.1, 25.9, 23.8, 16.4; HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C37H47Cl2N4O5SSi에 대한 계산치: 757.2413, 실측치: 757.2395.
단계 D: 메틸 5-[3-[tert-부틸 (디페닐)실릴]옥시프로필]-2-[3-(3,6-디클로로-5-메틸-피리다진-4-일)프로필아미노]티아졸-4-카르복실레이트
단계 C로부터의 생성물 51.70 g (68 mmol)으로부터 출발하여 HFIP를 사용한 탈보호 일반적 절차를 사용하여 목적 생성물 36.32 g (81%)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.71 (t, 1H), 7.63-7.37 (m, 10H), 3.69 (s, 3H), 3.67 (t, 2H), 3.30 (m, 2H), 3.10 (t, 2H), 2.85 (m, 2H), 2.83 (s, 3H), 1.79 (m, 2H), 1.78 (m, 2H), 0.98 (s, 9H); 13C NMR (125 MHz, DMSO-d6) δ ppm 62.9, 51.7, 44.1, 34.2, 28.0, 27.1, 27.0, 23.4, 16.4; HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C32H39Cl2N4O3SSi에 대한 계산치: 657.1889, 실측치: 657.1875.
단계 E: 메틸 5-[3-[tert-부틸 (디페닐)실릴]옥시프로필]-2-(3-클로로-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일)티아졸-4-카르복실레이트
1,4-디옥산 (383 mL) 중 단계 D로부터의 생성물 36.0 g (54.7 mmol) 및 Cs2CO3 35.7 g (2 당량)의 혼합물을 90℃에서 18시간 동안 교반하였다. 물로 희석한 후, 침전된 고체를 여과하고, 디에틸에테르로 세척하고, 건조시켜 목적 생성물 34.0 g (99%)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.61 (d, 4H), 7.43 (t, 2H), 7.42 (t, 4H), 4.26 (t, 2H), 3.77 (s, 3H), 3.70 (t, 2H), 3.23 (t, 2H), 2.90 (t, 2H), 2.33 (s, 3H), 2.04 (qn, 2H), 1.90 (qn, 2H), 1.00 (s, 9H); 13C NMR (125 MHz, DMSO-d6) δ ppm 163.1, 155.3, 151.8, 151.4, 143.2, 136.2, 135.5, 134.7, 133.6, 130.3, 129.0, 128.3, 63.1, 51.9, 46.3, 34.1, 27.1, 24.2, 23.1, 19.8, 19.2, 15.7; HRMS-ESI (m/z): C32H38ClN4O3SSi에 대한 [M+H]+ 계산치: 621.2122, 실측치: 621.2097.
단계 F: 메틸 2-(3-클로로-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일)-5-(3-히드록시프로필)티아졸-4-카르복실레이트
THF (5 mL/mmol) 중 단계 E로부터의 생성물 23.36 g (37.6 mmol) 및 1 M TBAF 용액 45 mL (1.2 당량)의 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 휘발성 물질을 제거한 후, 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 용리액으로서 EtOAc 및 MeOH/NH3 사용)에 의해 정제하여 목적 생성물 12.88 g (89%)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 4.54 (br., 1H), 4.25 (m, 2H), 3.80 (s, 3H), 3.45 (t, 2H), 3.11 (m, 2H), 2.88 (t, 2H), 2.31 (s, 3H), 2.04 (m, 2H), 1.77 (m, 2H); 13C NMR (125 MHz, DMSO-d6) δ ppm 163.1, 155.2, 151.2, 143.8, 136.1, 134.5, 129.0, 60.5, 52.0, 46.3, 34.6, 24.2, 23.2, 19.7, 15.7; HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C16H20ClN4O3S에 대한 계산치: 383.0945, 실측치: 383.0937.
단계 G: 메틸 2-(3-클로로-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일)-5-[3-[4-[3-(디메틸아미노)프로프-1-이닐]페녹시]프로필]티아졸-4-카르복실레이트
THF (9 mL/mmol) 중 단계 F로부터의 생성물 0.65 g (1.2 당량) 및 4-[3-(디메틸아미노)프로프-1-이닐]페놀 250 mg (1.43 mmol)으로부터 출발하여 미츠노부 일반적 절차 I을 사용하여 목적 생성물 0.28 g (37%)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.34 (d, 2H), 6.91 (d, 2H), 4.26 (t, 2H), 4.03 (t, 2H), 3.78 (s, 3H), 3.40 (s, 2H), 3.25 (t, 2H), 2.88 (t, 2H), 2.31 (s, 3H), 2.22 (s, 6H), 2.08 (qn, 2H), 2.03 (qn, 2H); 13C NMR (125 MHz, DMSO-d6) δ ppm 163.1, 158.9, 155.3, 151.7, 151.3, 142.7, 136.2, 134.9, 133.3, 129.0, 115.2, 115.0, 85.2, 84.1, 67.1, 52.0, 48.3, 46.3, 44.3, 30.8, 24.1, 23.1, 19.7, 15.7; HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C27H31ClN5O3S에 대한 계산치: 540.1836, 실측치: 540.1834.
단계 H: 메틸 2-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-5-[3-[4-[3-(디메틸아미노)프로프-1-이닐]페녹시]프로필]티아졸-4-카르복실레이트
단계 G로부터의 생성물 0.27 g (0.5 mmol)으로부터 출발하여 부흐발트 일반적 절차 I을 사용하여 목적 생성물 0.29 g (89%)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.83 (dm, 1H), 7.50 (dm, 1H), 7.36 (m, 1H), 7.35 (m, 2H), 7.18 (m, 1H), 6.94 (m, 2H), 4.28 (m, 2H), 4.09 (t, 2H), 3.80 (s, 3H), 3.39 (s, 2H), 3.29 (t, 2H), 2.88 (t, 2H), 2.35 (s, 3H), 2.23 (s, 6H), 2.13 (m, 2H), 2.07 (m, 2H); HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C34H36N7O3S2에 대한 계산치: 654.2321, 실측치: 654.2322.
단계 I: 2-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-5-[3-[4-[3-(디메틸아미노)프로프-1-이닐]페녹시]프로필]티아졸-4-카르복실산
THF 및 물의 1:1 혼합물 (10 mL/mmol) 중 단계 H로부터의 생성물 (280 mg, 0.43 mmol)에 LiOHxH2O 90 mg (5 당량)을 첨가하고, 반응 혼합물을 50℃에서 18시간 동안 교반하였다. 휘발성 물질을 제거한 후, 역상 정제용 크로마토그래피 (C18, 용리액으로서 물 및 MeCN 중 0.1% TFA)에 의해 정제하여 목적 화합물 132 mg (48%)을 수득하였다. HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C33H34N7O3S2에 대한 계산치: 640.2165, 실측치: 640.2160.
P29의 제조: 6-[[6-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-5-메틸-피리다진-3-일]-메틸-아미노]-3-[1-[[3-[2-(3-메톡시프로필아미노)에톡시]-5,7-디메틸-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실산
Figure pct00644
제조예 14_01 및 적절한 아민으로서의 3-메톡시프로판-1-아민으로부터 출발하여 아민 치환 및 가수분해 일반적 절차 II을 사용하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C42H54N9O4S에 대한 계산치: 780.4019, 실측치: 780.4019.
P30의 제조:6-[{6-[(1,3-벤조티아졸-2-일)아미노]-5-메틸피리다진-3-일}(메틸)아미노]-3-[1-({3-[2-(디메틸아미노)에톡시]-5,7-디메틸아다만탄-1-일}메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실산
Figure pct00645
제조예 14_01 및 적절한 아민으로서의 디메틸아민으로부터 출발하여 아민 치환 및 가수분해 일반적 절차 II를 사용하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C40H50N9O3S에 대한 계산치: 736.3757, 실측치: 736.3751.
P31의 제조: 6-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-3-[1-[[3,5-디메틸-7-(2-피페라진-1-일에톡시)-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실산
Figure pct00646
제조예 12 및 적절한 아민으로서의 피페라진으로부터 출발하여 아민 치환 및 가수분해 일반적 절차 I을 사용하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C44H55N10O3S에 대한 계산치: 803.4179, 실측치: 803.4177.
P32의 제조: 6-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-3-[1-[[3-[2-(4-이소프로필피페라진-1-일)에톡시]-5,7-디메틸-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실산
Figure pct00647
제조예 12 및 적절한 아민으로서의 1-이소프로필피페라진으로부터 출발하여 아민 치환 및 가수분해 일반적 절차 I을 사용하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C47H61N10O3S에 대한 계산치: 845.4649, 실측치: 845.4646.
P33의 제조: 3-[1-[[3-[2-(아제판-1-일)에톡시]-5,7-디메틸-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]-6-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]피리딘-2-카르복실산
Figure pct00648
제조예 12 및 적절한 아민으로서의 아제판으로부터 출발하여 아민 치환 및 가수분해 일반적 절차 I을 사용하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C46H58N9O3S에 대한 계산치: 816.4383, 실측치: 816.4379.
P34의 제조: 2-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-5-[3-[4-[3-[[(3S)-3,4-디히드록시부틸]-메틸-아미노]프로프-1-이닐]-2-플루오로-페녹시]프로필]티아졸-4-카르복실산
Figure pct00649
단계 A: 2-[(4S)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일]에틸 4-메틸벤젠술포네이트
DCM 34 mL 중 2-[(4S)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일]에탄올 1.0 g (6.8 mmol) 및 트리에틸아민 3.8 mL (4 당량)에 0℃에서 p-톨릴술포닐 4-메틸벤젠술포네이트 4.5 g (2 당량)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 추가의 전환이 관찰되지 않을 때까지 교반하고, 농축시키고, 디이소프로필 에테르로 처리하였다. 이어서 침전된 염산 염을 여과하고, 모액을 농축시키고, 플래쉬 크로마토그래피 (실리카 겔, 용리액으로서 헵탄 및 EtOAc 사용)를 통해 정제하여 목적 생성물 1.6 g (81%)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 7.79 (dm, 2H), 7.49 (dm, 2H), 4.08 (m, 2H), 4.00 (m, 1H), 3.91/3.44 (dd+dd, 2H), 2.42 (s, 3H), 1.83/1.77 (m+m, 2H), 1.24/1.20 (s +s, 6H); 13C NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 132.7, 132.7, 130.7, 128.1, 108.6, 72.3, 68.7, 68.4, 32.9, 27.2/25.9, 21.6; HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C14H21O5S에 대한 계산치: 301.1110, 실측치: 301.1107.
단계 B: N-[2-[(4S)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일]에틸]프로프-2-인-1-아민
MeCN 127 mL 중 단계 A로부터의 생성물 (7.6 g, 25.3 mmol), 프로프-2-인-1-아민 (16 mL, 10 당량) 및 DIPEA (13.22 mL, 3 당량)의 혼합물을 50℃에서 16시간 동안 교반하였다. 농축시킨 후, DCM에 녹이고, 진한 NaHCO3 용액 및 염수로 추출하고, 합한 유기 층을 건조시키고, 농축시켜 목적 생성물 5.0 g (107%)을 수득하였으며, 이것을 추가 정제 없이 사용하였다. 1H NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 4.07 (m, 1H), 3.98/3.43 (dd+t, 2H), 3.28 (m, 2H), 3.05 (t, 1H), 2.62/2.55 (m+m, 2H), 2.23 (brs, 1H), 1.63/1.59 (m+m, 2H), 1.30 (s, 3H), 1.25 (s, 3H); 13C NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 108.2, 83.4, 74.6, 74.1, 69.2, 45.1, 37.8, 33.6, 27.3, 26.2; HRMS (EI)(m/z): [M]+ C10H17NO2에 대한 계산치: 183.1259, 실측치: 183.1260.
단계 C: N-[2-[(4S)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일]에틸]-N-메틸-프로프-2-인-1-아민
N,N-디메틸포름아미드 (14 mL) 중 단계 B로부터의 생성물 (500 mg, 2.73 mmol)에 0℃에서 수소화나트륨 (120 mg, 1.1 당량)을 조금씩 첨가하였다. 0℃에서 0.5시간 동안 교반한 후, 혼합물을 아이오도메탄 (0.17 mL, 1 당량)으로 처리하고, 실온에서 18시간 동안 교반하였다. NH4Cl 및 물의 포화 용액으로 켄칭한 후, 혼합물을 Et2O로 추출하였다. 합한 유기 상을 건조시키고, 농축시켜 목적 생성물 (362 mg, 67%)을 수득하였다. GC/MS (C11H19NO2) 197 [M+].
단계 D: 에틸 2-(3-클로로-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일)-5-[3-[4-[3-[2-[(4S)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일]에틸-메틸-아미노]프로프-1-이닐]-2-플루오로-페녹시]프로필]티아졸-4-카르복실레이트
제조예 15의 생성물 0.548 g (0.89 mmol) 및 적절한 아세틸렌으로서의 단계 C로부터의 생성물 350 mg (2 당량)으로부터 출발하여 소노가시라 일반적 절차를 사용하여 목적 생성물 510 mg (82%)을 수득하였다. LC/MS (C34H42ClFN5O5S) 686 [M+H]+.
단계 E: 에틸 2-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-5-[3-[4-[3-[2-[(4S)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일]에틸-메틸-아미노]프로프-1-이닐]-2-플루오로-페녹시]프로필]티아졸-4-카르복실레이트
단계 D로부터의 생성물 510 mg (0.52 mmol) 및 1,3-벤조티아졸-2-아민 234 mg (3 당량)으로부터 출발하여 부흐발트 일반적 절차 I을 사용하여 목적 생성물 200 mg (48%)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 7.88 (dm, 1H), 7.49 (brd, 1H), 7.37 (m, 1H), 7.3 (dd, 1H), 7.20 (dm, 1H), 7.19 (m, 1H), 7.16 (t, 1H), 4.26 (m, 2H), 4.25 (q, 2H), 4.14 (t, 2H), 4.04 (m, 1H), 3.98/3.45 (dd+dd, 2H), 3.46 (s, 2H), 3.28 (m, 2H), 2.87 (t, 2H), 2.45/2.39 (m+m, 2H), 2.34 (s, 3H), 2.21 (s, 3H), 2.13 (m, 2H), 2.04 (m, 2H), 1.63 (m, 2H), 1.29 (t, 3H), 1.29 (s, 3H), 1.24 (s, 3H); HRMS (ESI)(m/z): [M+H]+ C41H47FN7O5S2에 대한 계산치: 800.3064, 실측치: 800.3064.
단계 F: 2-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-5-[3-[4-[3-[[(3S)-3,4-디히드록시부틸]-메틸-아미노]프로프-1-이닐]-2-플루오로-페녹시]프로필]티아졸-4-카르복실산
THF/물 (1 : 1) 5 mL 중 단계 E로부터의 생성물 200 mg (0.25 mmol) 및 LiOHxH2O (5 당량) 53 mg의 혼합물을 60℃에서 18시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 진한 염화수소 0.125 mL (6 당량)로 처리하고 (pH = 2-3), 실온에서 교반한 다음, 60℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시켜 THF를 제거하고 동결건조시킨 후, 고체를 MeOH 중 6 N NH3 용액 중에 용해시키고, 역상 크로마토그래피 (용리액으로서 5 mM NH4HCO3 및 MeCN 사용)에 의해 정제하여 목적 생성물 47 mg (25%)을 수득하였다. HRMS (ESI)(m/z): [M+H]+ C36H39FN7O5S2에 대한 계산치: 732.2438, 실측치: 732.2441.
P35의 제조: 6-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-3-[1-[[3-[2-[2-히드록시에틸 (메틸)아미노]에톡시]-5,7-디메틸-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실산
Figure pct00650
제조예 12 및 적절한 아민으로서의 2-(메틸아미노)에탄올로부터 출발하여 아민 치환 및 가수분해 일반적 절차 I을 사용하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C43H54N9O4S에 대한 계산치: 792.4019, 실측치: 792.4019.
P36의 제조: 6-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-3-[1-[[3-[2-[3-메톡시프로필 (메틸)아미노]에톡시]-5,7-디메틸-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실산
Figure pct00651
제조예 12 및 적절한 아민으로서의 3-메톡시-N-메틸-프로판-1-아민으로부터 출발하여 아민 치환 및 가수분해 일반적 절차 I을 사용하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C45H58N9O4S에 대한 계산치: 820.4332, 실측치: 820.4328.
P37의 제조: 6-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-3-[1-[[3-[2-[4-히드록시부틸 (메틸)아미노]에톡시]-5,7-디메틸-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실산
Figure pct00652
제조예 12 및 적절한 아민으로서의 4-(메틸아미노)부탄-1-올로부터 출발하여 아민 치환 및 가수분해 일반적 절차 I을 사용하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C45H58N9O4S에 대한 계산치: 820.4332, 실측치: 820.4339.
P38의 제조: 6-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-3-[1-[[3,5-디메틸-7-[2-(1-피페리딜)에톡시]-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실산
Figure pct00653
제조예 12 및 적절한 아민으로서의 피페리딘으로부터 출발하여 아민 치환 및 가수분해 일반적 절차 I을 사용하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C45H56N9O3S에 대한 계산치: 802.4227, 실측치: 802.4223.
P39의 제조: 6-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-3-[1-[[3,5-디메틸-7-(2-모르폴리노에톡시)-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실산
Figure pct00654
제조예 12 및 적절한 아민으로서의 모르폴린으로부터 출발하여 아민 치환 및 가수분해 일반적 절차 I을 사용하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C44H54N9O4S에 대한 계산치: 804.4019, 실측치: 804.4012.
P40의 제조: 6-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-3-[1-[[3-[3-(3-히드록시프로필아미노)프로필]-5,7-디메틸-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실산
Figure pct00655
제조예 13 및 적절한 아민으로서의 3-아미노프로판-1-올로부터 출발하여 아민 치환 및 가수분해 일반적 절차 I을 사용하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C44H56N9O3S에 대한 계산치: 790.4227, 실측치: 790.4220.
P41의 제조: 6-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-3-[1-[[3,5-디메틸-7-(3-피롤리딘-1-일프로필)-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실산
Figure pct00656
제조예 13 및 적절한 아민으로서의 피롤리딘으로부터 출발하여 아민 치환 및 가수분해 일반적 절차 I을 사용하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C45H56N9O2S에 대한 계산치: 786.4278, 실측치: 786.4273.
P42의 제조: 3-[1-[[3,5-디메틸-7-(2-피롤리딘-1-일에톡시)-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]-6-[4-메틸-3-[(5-메틸-1,3-벤조티아졸-2-일)아미노]-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]피리딘-2-카르복실산
Figure pct00657
단계 A: 메틸 3-[1-[[3-(2-히드록시에톡시)-5,7-디메틸-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]-6-[4-메틸-3-[(5-메틸-1,3-벤조티아졸-2-일)아미노]-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]피리딘-2-카르복실레이트
제조예 12, 단계 C로부터의 생성물 140 mg (0.22 mmol) 및 5-메틸-1,3-벤조티아졸-2-아민 54.3 mg (1.5 당량)으로부터 출발하여 130℃에서 1.5시간 동안 부흐발트 일반적 절차 I을 사용하여 목적 생성물 126 mg (75%)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 12.08/10.89 (brs/brs, 1H), 7.95 (d, 1H), 7.69 (d, 1H), 7.67 (br, 1H), 7.38 (s, 1H), 7.30 (br, 1H), 7.00 (d, 1H), 4.46 (brs, 1H), 4.00 (t, 2H), 3.88 (s, 2H), 3.70 (s, 3H), 3.41 (t, 2H), 3.35 (t, 2H), 2.85 (t, 2H), 2.39 (s, 3H), 2.32 (s, 3H), 2.16 (s, 3H), 1.98 (qn, 2H), 1.39 (s, 2H), 1.30/1.25 (d+d, 4H), 1.18/1.12 (d+d, 4H), 1.08/1.02 (d+d, 2H), 0.87 (s, 6H); 13C NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 139.8, 137.5, 123.6, 121.6, 119.0, 62.1, 61.5, 59.0, 52.7, 50.1, 47.0, 46.0, 45.4, 43.3, 30.2, 24.3, 21.7, 21.6, 12.6, 10.9; HRMS-ESI (m/z): C42H51N8O4S에 대한 [M+H]+ 계산치: 763.3760, 실측치: 763.3754.
단계 B: 메틸 3-[1-[[3,5-디메틸-7-[2-(p-톨릴술포닐옥시)에톡시]-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]-6-[4-메틸-3-[(5-메틸-1,3-벤조티아졸-2-일)아미노]-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]피리딘-2-카르복실레이트
DCM (2 mL) 중 단계 A로부터의 생성물 (119 mg, 0.16 mmol) 및 트리에틸아민 (0.066 mL, 3 당량)에 p-톨릴술포닐 4-메틸벤젠술포네이트 (76 mg, 1.5 당량)를 첨가하고, 반응 혼합물을 1시간 동안 교반하였다. 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 용리액으로서 DCM 및 EtOAc)에 의해 정제하여 목적 생성물 (93 mg, 65%)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 12.17/10.83 (brs/brs, 1H), 7.95 (d, 1H), 7.77 (d, 2H), 7.7 (d, 1H), 7.69 (br, 1H), 7.46 (d, 2H), 7.42 (br, 1H), 7.39 (s, 1H), 7.00 (d, 1H), 4.07 (t, 2H), 4 (t, 2H), 3.96 (s, 3H), 3.85 (s, 2H), 3.49 (t, 2H), 2.85 (t, 2H), 2.40 (s, 3H), 2.39 (s, 3H), 2.32 (s, 3H), 2.15 (s, 3H), 1.99 (qn, 2H), 1.29 (s, 2H), 1.17/1.1 (d+d, 4H), 1.12/1.1 (d+d, 4H), 1.02/0.97 (d+d, 2H), 0.84 (s, 6H); 13C NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 139.8, 137.6, 130.6, 128.1, 123.6, 119.0, 71.5, 58.8, 58.4, 52.7, 49.9, 46.6, 45.9, 45.4, 43.0, 30.1, 24.3, 21.6, 21.6, 21.6, 12.6, 10.9; HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C49H57N8O6S2에 대한 계산치: 917.3842, 실측치: 917.3840.
단계 C: 3-[1-[[3,5-디메틸-7-(2-피롤리딘-1-일에톡시)-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]-6-[4-메틸-3-[(5-메틸-1,3-벤조티아졸-2-일)아미노]-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]피리딘-2-카르복실산
단계 B로부터의 생성물 및 적절한 아민으로서의 피롤리딘으로부터 출발하여 아민 치환 및 가수분해 일반적 절차 I을 사용하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C45H56N9O3S에 대한 계산치: 802.4227, 실측치: 802.4220.
P43의 제조: 3-[1-[[3,5-디메틸-7-(2-피롤리딘-1-일에톡시)-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]-6-[3-[(5-메톡시-1,3-벤조티아졸-2-일)아미노]-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]피리딘-2-카르복실산
Figure pct00658
단계 A: 메틸 3-[1-[[3-(2-히드록시에톡시)-5,7-디메틸-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]-6-[3-[(5-메톡시-1,3-벤조티아졸-2-일)아미노]-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]피리딘-2-카르복실레이트
제조예 12, 단계 C로부터의 생성물 140 mg (0.22 mmol) 및 5-메틸-1,3-벤조티아졸-2-아민 60 mg (1.5 당량)으로부터 출발하여 130℃에서 2.5시간 동안 부흐발트 일반적 절차 I을 사용하여 목적 생성물 129 mg (75%)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 7.95 (d, 1H), 7.69 (d, 1H), 7.67 (br., 1H), 7.38 (s, 1H), 7.02 (br., 1H), 6.80 (dd, 1H), 4.46 (br., 1H), 4.00 (t, 2H), 3.88 (s, 2H), 3.80 (s, 3H), 3.70 (s, 3H), 3.41 (t, 2H), 3.35 (t, 2H), 2.85 (t, 2H), 2.32 (s, 3H), 2.16 (s, 3H), 1.98 (m, 2H), 1.39 (s, 2H), 1.30/1.25 (d+d, 4H), 1.18/1.12 (d+d, 4H), 1.08/1 (d+d, 2H), 0.87 (s, 6H); 13C NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 139.8, 137.5, 122.6, 119.0, 110.5, 62.1, 61.5, 58.9, 55.8, 52.6, 50.1, 47.0, 46.0, 45.4, 43.3, 30.2, 24.3, 21.7, 12.6, 10.9; HRMS-ESI (m/z): C42H51N8O5S에 대한 [M+H]+ 계산치: 779.3703, 실측치: 779.3687.
단계 B: 메틸 3-[1-[[3,5-디메틸-7-[2-(p-톨릴술포닐옥시)에톡시]-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]-6-[3-[(5-메톡시-1,3-벤조티아졸-2-일)아미노]-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]피리딘-2-카르복실레이트
DCM (2 mL) 중 단계 A로부터의 생성물 (122 mg, 0.16 mmol) 및 트리에틸아민 (0.066 mL, 3 당량)에 p-톨릴술포닐 4-메틸벤젠술포네이트 (77 mg, 1.5 당량)를 첨가하고, 반응 혼합물을 1시간 동안 교반하였다. 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 용리액으로서 DCM 및 EtOAc)에 의해 정제하여 목적 생성물 (79 mg, 54%)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 12.17/10.83 (brs/brs, 1H), 7.95 (d, 1H), 7.77 (d, 2H), 7.72 (d, 1H), 7.67 (brd, 1H), 7.46 (d, 2H), 7.39 (s, 1H), 7.02 (br, 1H), 6.80 (d, 1H), 4.07 (t, 2H), 4.00 (t, 2H), 3.86 (s, 2H), 3.80 (s, 3H), 3.69 (s, 3H), 3.49 (t, 2H), 2.86 (t, 2H), 2.41 (s, 3H), 2.33 (s, 3H), 2.15 (s, 3H), 1.99 (qn, 2H), 1.29 (s, 2H), 1.17/1.1 (d+d, 4H), 1.12/1.10 (d+d, 4H), 1.02/0.97 (d+d, 2H), 0.84 (s, 6H); 13C NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 139.9, 137.6, 130.6, 128.1, 119.0, 110.6, 71.5, 58.8, 58.4, 55.9, 52.6, 49.9, 46.6, 45.9, 45.8, 43.0, 30.1, 24.3, 21.6, 21.6, 12.7, 10.9; HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ 계산치 C49H57N8O7S2: 933.3792, 실측치: 933.3794.
단계 C: 3-[1-[[3,5-디메틸-7-(2-피롤리딘-1-일에톡시)-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]-6-[3-[(5-메톡시-1,3-벤조티아졸-2-일)아미노]-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]피리딘-2-카르복실산
단계 B로부터의 생성물 및 적절한 아민으로서의 피롤리딘으로부터 출발하여 아민 치환 및 가수분해 일반적 절차 I을 사용하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C45H57N9O4S에 대한 계산치: 818.4176, 실측치: 818.4172.
P44의 제조: 2-[[6-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-5-메틸-피리다진-3-일]-(3,4-디히드록시부틸)아미노]-5-[3-[2-플루오로-4-[3-(메틸아미노)프로프-1-이닐]페녹시]프로필]티아졸-4-카르복실산
Figure pct00659
단계 A: 메틸 5-[3-[4-[3-[tert-부톡시카르보닐 (메틸)아미노]프로프-1-이닐]-2-플루오로-페녹시]프로필]-2-[2-(2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)에틸-[5-메틸-6-[(Z)-[3-(2-트리메틸실릴에톡시메틸)-1,3-벤조티아졸-2-일리덴]아미노]피리다진-3-일]아미노]티아졸-4-카르복실레이트
제조예 3h_01 (0.57 mmol, 1 당량) 350 mg 및 적절한 할라이드로서의 제조예 4a_01 (0.57 mmol, 1 당량) 235 mg으로부터 출발하여 부흐발트 일반적 절차 III을 사용하여 목적 생성물 490 mg (87%)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.84 (d, 1H), 7.68 (s, 1H), 7.47 (d, 1H), 7.44 (td, 1H), 7.32 (brd., 1H), 7.25 (td, 1H), 7.22 (d, 1H), 7.16 (t, 1H), 5.86 (s, 2H), 4.49/4.33 (m+m, 2H), 4.20 (br., 2H), 4.17 (m, 1H), 4.15 (t, 2H), 4.04/3.63 (dd+dd, 2H), 3.77 (s, 3H), 3.72 (t, 2H), 3.27 (t, 2H), 2.84 (br., 3H), 2.45 (s, 3H), 2.13 (m, 2H), 1.75 (m, 2H), 1.40 (s, 9H), 1.37/1.24 (s +s, 6H), 0.92 (t, 2H), -0.11 (s, 9H); 13C NMR (125 MHz, DMSO-d6) δ ppm 129.1, 127.2, 123.5, 123.2, 119.3, 117.5, 115.5, 112.0, 108.6, 73.7, 72.8, 68.9, 68.4, 66.7, 51.9, 44.4, 38.5, 33.8, 30.9, 28.5, 27.3/26.0, 23.3, 23.1, 17.9, 17.8, -1.0; HRMS-ESI (m/z): C48H63FN7O8S2Si에 대한 [M+H]+ 계산치: 976.3927, 실측치 976.3916.
단계 B: 2-[[6-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-5-메틸-피리다진-3-일]-(3,4-디히드록시부틸)아미노]-5-[3-[2-플루오로-4-[3-(메틸아미노)프로프-1-이닐]페녹시]프로필]티아졸-4-카르복실산
적절한 메틸 에스테르로서의 단계 A로부터의 생성물로부터 출발하여 탈보호 및 가수분해 일반적 절차를 사용하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C33H35FN7O5S2에 대한 계산치: 692.2120, 실측치 692.2114.
P45의 제조: 2-[[6-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-5-메틸-피리다진-3-일]-(3-히드록시프로필)아미노]-5-[3-[2-플루오로-4-[3-(메틸아미노)프로프-1-이닐]페녹시]프로필]티아졸-4-카르복실산
Figure pct00660
단계 A: 메틸 5-[3-[4-[3-[tert-부톡시카르보닐 (메틸)아미노]프로프-1-이닐]-2-플루오로-페녹시]프로필]-2-[3-[tert-부틸 (디메틸)실릴]옥시프로필-[5-메틸-6-[(Z)-[3-(2-트리메틸실릴에톡시메틸)-1,3-벤조티아졸-2-일리덴]아미노]피리다진-3-일]아미노]티아졸-4-카르복실레이트
적절한 할라이드로서의 제조예 3n_01 (0.46 mmol, 1 당량) 300 mg 및 제조예 4a_01 (0.46 mmol, 1 당량) 187 mg으로부터 출발하여 부흐발트 일반적 절차 III을 사용하여 목적 생성물 395 mg (83%)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.82 (dd, 1H), 7.60 (s, 1H), 7.44 (m, 1H), 7.44 (dd, 1H), 7.31 (dd, 1H), 7.24 (m, 1H), 7.20 (m, 1H), 7.15 (t, 1H), 5.84 (s, 2H), 4.39 (t, 2H), 4.20 (s, 2H), 4.14 (t, 2H), 3.76 (s, 3H), 3.70 (t, 2H), 3.70 (t, 2H), 3.25 (t, 2H), 2.84 (s, 3H), 2.42 (s, 3H), 2.11 (m, 2H), 1.91 (m, 2H), 1.40 (s, 9H), 0.91 (t, 2H), 0.85 (s, 9H), 0.01 (s, 6H), -0.12 (s, 9H); 13C NMR (125 MHz, DMSO-d6) δ ppm 162.2, 147.5, 137.6, 129.1, 127.2, 123.4, 123.2, 119.3, 117.5, 115.4, 112.0, 79.7, 72.8, 68.4, 66.7, 60.5, 51.9, 44.6, 38.1, 33.8, 30.9, 30.4, 28.6, 26.3, 23.1, 17.9, 17.8, -0.9, -5.0; HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C50H71FN7O7S2Si2에 대한 계산치: 1020.4373, 실측치 1020.4365.
단계 B: 2-[[6-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-5-메틸-피리다진-3-일]-(3-히드록시프로필)아미노]-5-[3-[2-플루오로-4-[3-(메틸아미노)프로프-1-이닐]페녹시]프로필]티아졸-4-카르복실산
적절한 메틸 에스테르로서의 단계 A로부터의 생성물로부터 출발하여 탈보호 및 가수분해 일반적 절차를 사용하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C32H33FN7O4S2에 대한 계산치: 662.2014, 실측치 662.2016.
P46의 제조: 2-[[6-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-5-메틸-피리다진-3-일]-(4,5-디히드록시펜틸)아미노]-5-[3-[2-플루오로-4-[3-(메틸아미노)프로프-1-이닐]페녹시]프로필]티아졸-4-카르복실산
Figure pct00661
적절한 메틸 에스테르로서의 제조예 5a_01, 단계 A로부터의 생성물로부터 출발하여 탈보호 및 가수분해 일반적 절차를 사용하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C34H37FN7O5S2에 대한 계산치: 706.2276, 실측치 706.2274.
P47의 제조: 6-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-3-[1-[[3-[2-(카르복시메틸아미노)에톡시]-5,7-디메틸-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실산
Figure pct00662
제조예 16 및 적절한 아민으로서의 메틸 2-아미노아세테이트, 염화수소 (1 : 1)로부터 출발하여 아민 치환 및 가수분해 일반적 절차 III을 사용하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C42H50N9O5S에 대한 계산치: 792.3656, 실측치: 792.3651.
P48의 제조: 6-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-3-[1-[[3-[2-[카르복시메틸 (메틸)아미노]에톡시]-5,7-디메틸-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실산
Figure pct00663
제조예 16및 적절한 아민으로서의 메틸 2-(메틸아미노)아세테이트, 염화수소 (1 : 1)로부터 출발하여 아민 치환 및 가수분해 일반적 절차 III을 사용하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C43H52N9O5S에 대한 계산치: 806.3812, 실측치: 806.3807.
P49의 제조: 6-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-3-[1-[[3-[3-[2-히드록시에틸 (메틸)아미노]프로필]-5,7-디메틸-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실산
Figure pct00664
제조예 13 및 적절한 아민으로서의 2-(메틸아미노)에탄올로부터 출발하여 아민 치환 및 가수분해 일반적 절차 I을 사용하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C44H56N9O3S에 대한 계산치: 790.4227, 실측치: 790.4227.
P50의 제조: 6-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-3-[1-[[3-[3-[3-메톡시프로필 (메틸)아미노]프로필]-5,7-디메틸-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실산
Figure pct00665
제조예 13 및 적절한 아민으로서의 3-메톡시-N-메틸-프로판-1-아민으로부터 출발하여 아민 치환 및 가수분해 일반적 절차 I을 사용하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C46H60N9O3S에 대한 계산치: 818.4540, 실측치: 818.4537.
P51의 제조: 6-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-3-[1-[[3-[3-(3-메톡시프로필아미노)프로필]-5,7-디메틸-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실산
Figure pct00666
제조예 13 및 적절한 아민으로서의 3-메톡시프로판-1-아민으로부터 출발하여 아민 치환 및 가수분해 일반적 절차 I을 사용하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C45H58N9O3S에 대한 계산치: 804.4383, 실측치: 804.4380.
P52의 제조: 3-[1-[[3-[3-(아제판-1-일)프로필]-5,7-디메틸-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]-6-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]피리딘-2-카르복실산
Figure pct00667
제조예 13 및 적절한 아민으로서의 아제판으로부터 출발하여 아민 치환 및 가수분해 일반적 절차 I을 사용하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C47H60N9O2S에 대한 계산치: 814.4591, 실측치: 814.4588.
P53의 제조: 6-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-3-[1-[[3-[3-(카르복시메틸아미노)프로필]-5,7-디메틸-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실산
Figure pct00668
제조예 13 및 적절한 아민으로서의 메틸 2-아미노아세테이트, 염화수소 (1 : 1)으로부터 출발하여 아민 치환 및 가수분해 일반적 절차 III을 사용하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C43H52N9O4S에 대한 계산치: 790.3863, 실측치: 790.3855.
P54의 제조: 6-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-3-[1-[[3-[3-(2-카르복시에틸아미노)프로필]-5,7-디메틸-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실산
Figure pct00669
제조예 13 및 적절한 아민으로서의 메틸 3-아미노프로파노에이트로부터 출발하여 아민 치환 및 가수분해 일반적 절차 III을 사용하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C44H54N9O4S에 대한 계산치: 804.4019, 실측치: 804.4015.
P55의 제조: 6-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-3-[1-[[3-[3-[카르복시메틸 (메틸)아미노]프로필]-5,7-디메틸-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실산
Figure pct00670
제조예 13 및 적절한 아민으로서의 메틸 2-(메틸아미노)아세테이트, 염화수소 (1 : 1)으로부터 출발하여 아민 치환 및 가수분해 일반적 절차 III을 사용하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C44H54N9O4S에 대한 계산치: 804.4019, 실측치: 804.4014.
P56의 제조: 6-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-3-[1-[[3-[3-[2-카르복시에틸 (메틸)아미노]프로필]-5,7-디메틸-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실산
Figure pct00671
제조예 13 및 적절한 아민으로서의 에틸 3-(메틸아미노)프로파노에이트, 염화수소 (1 : 1)으로부터 출발하여 아민 치환 및 가수분해 일반적 절차 III을 사용하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C45H56N9O4S에 대한 계산치: 818.4176, 실측치: 818.4167.
P57의 제조: 6-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-3-[1-[[3-[2-[3-카르복시프로필 (메틸)아미노]에톡시]-5,7-디메틸-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실산
Figure pct00672
제조예 16 및 적절한 아민으로서의 메틸 4-(메틸아미노)부타노에이트, 염화수소 (1 : 1)으로부터 출발하여 아민 치환 및 가수분해 일반적 절차 III을 사용하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C45H56N9O5S에 대한 계산치: 834.4125, 실측치: 834.4115.
P58의 제조: 6-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-3-[1-[[3-[3-[3-카르복시프로필 (메틸)아미노]프로필]-5,7-디메틸-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실산
Figure pct00673
제조예 13 및 적절한 아민으로서의 메틸 4-(메틸아미노)부타노에이트, 염화수소 (1 : 1)으로부터 출발하여 아민 치환 및 가수분해 일반적 절차 III을 사용하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C46H58N9O4S에 대한 계산치: 832.4332, 실측치: 832.4324.
P59의 제조: 2-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-5-[3-[2-플루오로-4-[3-(3-히드록시프로필아미노)프로프-1-이닐]페녹시]프로필]티아졸-4-카르복실산
Figure pct00674
단계 A: 3-[tert-부틸 (디메틸)실릴]옥시-N-프로프-2-이닐-프로판-1-아민
아세토니트릴 (15 mL) 중 0.70 mL (3.0 mmol)의 3-브로모프로폭시-tert-부틸-디메틸-실란, 1.9 mL (10 당량)의 프로파르길 아민 및 1.6 mL (3 당량)의 DIPEA의 혼합물을 추가의 전환이 관찰되지 않을 때까지 50℃에서 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시키고, DCM으로 희석하고, 포화 NaHCO3 및 염수로 추출하였다. 합한 유기 층을 건조시키고, 농축시켜 목적 생성물을 정량적 수율로 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 3.62 (t, 2H), 3.27 (d, 2H), 3.02 (t, 1H), 2.59 (t, 2H), 2.19 (brs, 1H), 1.57 (m, 2H), 0.86 (s, 9H), 0.02 (s, 6H); 13C NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 73.9, 61.5, 45.2, 37.9, 32.7, 26.3, -4.8; HRMS (EI)(m/z): [M-CH3]+ C11H22NOSi에 대한 계산치: 212.1471, 실측치: 212.1467.
단계 B: 에틸 5-[3-[4-[3-[3-[tert-부틸 (디메틸)실릴]옥시프로필아미노]프로프-1-이닐]-2-플루오로-페녹시]프로필]-2-(3-클로로-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일)티아졸-4-카르복실레이트
제조예 15의 생성물 1.0 g (1.64 mmol) 및 적절한 아세틸렌으로서의 단계 A로부터의 생성물 737 mg (2 당량)으로부터 출발하여 소노가시라 일반적 절차를 사용하여 목적 생성물 1.16 g (96%)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 45.2 (t, 2H), 7.24 (dd, 1H), 7.17 (dd, 1H), 7.14 (t, 1H), 4.27 (br., 2H), 4.25 (q, 2H), 4.12 (t, 2H), 3.65 (t, 2H), 3.6 (s, 2H), 3.25 (t, 2H), 2.89 (t, 2H), 2.32 (s, 3H), 2.11 (m, 2H), 2.04 (m, 2H), 1.63 (m, 2H), 1.28 (t, 3H), 0.84 (s, 9H), 0.02 (s, 6H); 13C NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 128.8, 119.1, 115.4, 68.3, 61.3, 60.7, 46.3, 45.2, 38.4, 32.4, 30.8, 26.3, 24.2, 23.1, 19.7, 15.7, 14.6, -4.8; HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C35H48ClFN5O4SSi에 대한 계산치: 716.2869, 실측치: 716.2868.
단계 C: 에틸 2-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-5-[3-[4-[3-[3-[tert-부틸 (디메틸)실릴]옥시프로필아미노]프로프-1-이닐]-2-플루오로-페녹시]프로필]티아졸-4-카르복실레이트
단계 B로부터의 생성물 1.16 g (1.57 mmol) 및 1,3-벤조티아졸-2-아민 730 mg (2 당량)으로부터 출발하여 부흐발트 일반적 절차 I을 사용하여 목적 생성물 598 mg (45%)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 7.87 (d, 1H), 7.49 (d, 1H), 7.37 (td, 1H), 7.25 (dd, 1H), 7.19 (t, 1H), 7.17 (t, 1H), 7.17 (m, 1H), 4.26 (br., 2H), 4.25 (q, 2H), 4.14 (t, 2H), 3.63 (t, 2H), 3.57 (s, 2H), 3.27 (t, 2H), 2.87 (t, 2H), 2.69 (t, 2H), 2.34 (s, 3H), 2.13 (m, 2H), 2.04 (m, 2H), 1.61 (m, 2H), 1.28 (t, 3H), 0.84 (s, 9H), 0.02 (s, 6H); 13C NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 128.9, 126.5, 122.5, 122.3, 119.1, 116.3, 115.5, 68.4, 61.3, 60.6, 46.3, 45.2, 38.4, 32.4, 31.1, 26.3, 23.9, 23.2, 20.3, 14.6, 12.9, -4.9; HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C42H53FN7O4S2Si에 대한 계산치: 830.3354, 실측치: 830.3347.
단계 D: 2-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-5-[3-[2-플루오로-4-[3-(3-히드록시프로필아미노)프로프-1-이닐]페녹시]프로필]티아졸-4-카르복실산
THF/물 (1 : 1) 7 mL 중 단계 C로부터의 생성물 590 mg (0.71 mmol) 및 LiOHxH2O 298 mg (10 당량)의 혼합물을 추가의 전환이 관찰되지 않을 때까지 60℃에서 교반하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 진한 염화수소 0.71 mL (12 당량)로 처리하고 (pH = 2-3), 추가의 전환이 관찰되지 않을 때까지 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시켜 THF를 제거하고 동결건조시킨 후, 고체를 MeOH 중 6N NH3 용액 중에 용해시키고, 역상 크로마토그래피 (25 mM NH4HCO3 및 MeCN을 용리액으로서 사용함)에 의해 정제하여 목적 생성물 100 mg (21%)을 수득하였다. HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C34H35FN7O4S2에 대한 계산치: 688.2176, 실측치: 688.2179.
P60의 제조: 6-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-3-[1-[[3-[2-[[(3S)-3,4-디히드록시부틸]아미노]에톡시]-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실산
Figure pct00675
아세토니트릴 (30 ml/mmol) 중 제조예 18로부터의 생성물 (0.066 mmol)에 2-[(4S)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일]에탄아민, 염화수소 (1 : 1)(3 당량)를 첨가하고, 반응 혼합물을 60℃에서 48시간 동안 교반하였다. KOH 용액 (5 당량)을 첨가한 후, 반응 혼합물을 60℃에서 1시간 동안 교반하였다. HCl 용액 (10 당량)을 첨가한 후, 반응 혼합물을 60℃에서 1시간 동안 교반하였다. 생성물을 정제용 HPLC 크로마토그래피 (용리액으로서 아세토니트릴 및 5mM 수성 NH4HCO3 용액을 사용함)에 의해 정제하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C42H52N9O5S에 대한 계산치: 794.3812, 실측치: 794.3807.
P61의 제조: 6-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-3-[5-메틸-1-[[3-(2-피롤리딘-1-일에톡시)-1-아다만틸]메틸]피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실산
Figure pct00676
제조예 18 및 적절한 아민으로서의 피롤리딘으로부터 출발하여 아민 치환 및 가수분해 일반적 절차 I을 사용하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C42H50N9O3S에 대한 계산치: 760.3757, 실측치: 760.3753.
P62의 제조: 6-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-3-[1-[[3-[2-[3-히드록시프로필 (메틸)아미노]에톡시]-5,7-디메틸-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실산
Figure pct00677
제조예 16 및 적절한 아민으로서 3-(메틸아미노)프로판-1-올로부터 출발하여 아민 치환 및 가수분해 일반적 절차 I을 사용하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS-ESI (m/z): [M+2H]2+ C44H56N9O4S에 대한 계산치: 403.7127, 실측치: 403.7126.
P63의 제조: 3-[1-[[3,5-디메틸-7-(2-피롤리딘-1-일에톡시)-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]-6-[3-[(5-플루오로-1,3-벤조티아졸-2-일)아미노]-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]피리딘-2-카르복실산
Figure pct00678
단계 A: (4-메톡시페닐)메틸 6-(3-클로로-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일)-3-[1-[[3,5-디메틸-7-[2-(p-톨릴술포닐옥시)에톡시]-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실레이트
디클로로메탄 2 mL 중 제조예 16, 단계 C 260 mg (0.35 mmol)에 N,N-디에틸에탄아민 0.5 mL (10 당량) 및 p-톨릴술포닐 4-메틸벤젠술포네이트 457 mg (4 당량)을 첨가한 다음, 혼합물을 0.5시간 동안 교반하였다. 생성물을 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 용리액으로서 DCM 및 EtOAc 사용)에 의해 정제하여 목적 생성물 259 mg (85%)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 7.85 (d, 1H), 7.76 (d, 2H), 7.71 (d, 1H), 7.45 (d, 2H), 7.40 (s, 1H), 7.16 (d, 2H), 6.89 (d, 2H), 5.09 (s, 2H), 4.05 (t, 2H), 3.96 (t, 2H), 3.81 (s, 2H), 3.74 (s, 3H), 3.46 (t, 2H), 2.87 (t, 2H), 2.40 (s, 3H), 2.29 (s, 3H), 2.08 (s, 3H), 1.98 (qn, 2H), 1.29 (s, 2H), 1.13/1.11 (d+d, 4H), 1.11/1.06 (d+d, 4H), 0.98/0.90 (d+d, 2H), 0.81 (s, 6H); 13C NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 140.1, 137.7, 130.6, 130.2, 128.2, 120.5, 114.3, 71.4, 66.8, 58.9, 58.4, 55.6, 49.8, 46.5, 46.0, 45.8, 42.9, 30.0, 24.6, 21.6, 21.0, 15.5, 10.8; HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C48H56ClN6O7S에 대한 계산치: 895.3620, 실측치: 895.3619.
단계 B: (4-메톡시페닐)메틸 6-(3-클로로-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일)-3-[1-[[3,5-디메틸-7-(2-피롤리딘-1-일에톡시)-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실레이트
3 mL 아세토니트릴 중 단계 A로부터의 생성물 259 mg (0.29 mmol)에 피롤리딘 (3 당량)을 첨가하고, 반응 혼합물을 55℃에서 18시간 동안 교반하였다. 생성물을 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 용리액으로서 DCM 및 MeOH 사용)에 의해 정제하여 목적 생성물 221 mg (98%)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 7.85 (d, 1H), 7.70 (d, 1H), 7.40 (s, 1H), 7.18 (m, 2H), 6.91 (m, 2H), 5.10 (s, 2H), 3.96 (m, 2H), 3.86 (s, 2H), 3.75 (s, 3H), 3.60-2.90 (brs, 6H), 3.59 (brt, 2H), 2.87 (t, 2H), 2.29 (s, 3H), 2.11 (s, 3H), 2.10-1.70 (brs, 4H), 1.98 (m, 2H), 1.48-0.94 (m, 12H), 0.86 (s, 6H); 13C NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 140.1, 137.7, 130.2, 120.5, 114.3, 66.8, 58.9, 56.9, 55.6, 46.0, 30.0, 24.6, 21.0, 15.5, 10.9; HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C45H57ClN7O4에 대한 계산치: 794.4161, 실측치: 794.4160.
단계 C: 3-[1-[[3,5-디메틸-7-(2-피롤리딘-1-일에톡시)-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]-6-[3-[(5-플루오로-1,3-벤조티아졸-2-일)아미노]-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]피리딘-2-카르복실산
부탄-2-올 2 mL 중 단계 B로부터의 생성물 0.22 g (0.28 mmol), 5-플루오로-1,3-벤조티아졸-2-아민 93.5 mg (2 당량), Pd2(dba)3 25 mg (0.1 당량), XantPhos 32 mg (0.2 당량) 및 DIPEA 0.14 mL (3 당량)의 혼합물을 마이크로웨이브 반응기에서 100℃에서 1시간 동안 유지하였다. 생성물을 칼럼 크로마토그래피 (용리액으로서 DCM/ MeOH 사용)에 의해 정제하여 커플링된 생성물을 수득하였으며, 이것을 아세토니트릴 2 mL 중 KOH 3 당량으로 50℃에서 18시간 동안 처리하였다. 가수분해된 생성물을 정제용 HPLC 크로마토그래피 (용리액으로서 아세토니트릴 및 5mM 수성 NH4HCO3 용액을 사용함)에 의해 정제하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C44H53FN9O3S에 대한 계산치: 806.3976, 실측치: 806.3971.
P64의 제조: 3-[1-[[3,5-디메틸-7-(2-피롤리딘-1-일에톡시)-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]-6-[4-메틸-3-[(6-메틸-1,3-벤조티아졸-2-일)아미노]-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]피리딘-2-카르복실산
Figure pct00679
단계 A: (4-메톡시페닐)메틸 3-[1-[[3-(2-히드록시에톡시)-5,7-디메틸-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]-6-[4-메틸-3-[(6-메틸-1,3-벤조티아졸-2-일)아미노]-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]피리딘-2-카르복실레이트
시클로헥산올 2.5 mL 중 제조예 16, 단계 C 250 mg (0.34 mmol), 6-메틸-1,3-벤조티아졸-2-아민 112 mg (2 당량), Pd2(dba)3 31 mg (0.1 당량), XantPhos 39 mg (0.2 당량) 및 DIPEA 0.17 mL (3 당량)의 혼합물을 130℃에서 2시간 동안 유지하였다. 생성물을 칼럼 크로마토그래피 (용리액으로서 DCM/ MeOH 사용)에 의해 정제하여 목적 생성물 206 mg (71%)을 수득하였다. 1H NMR (300 MHz, dmso-d6) δ ppm 7.93 (d, 1H), 7.69 (d, 1H), 7.62 (brs, 1H), 7.45 (brs, 1H), 7.39 (s, 1H), 7.19 (m, 2H), 7.16 (brd, 1H), 6.91 (m, 2H), 5.10 (s, 2H), 4.45 (brs, 1H), 3.99 (m, 2H), 3.85 (s, 2H), 3.75 (s, 3H), 3.40 (t, 2H), 3.34 (t, 2H), 2.85 (t, 2H), 2.37 (s, 3H), 2.31 (s, 3H), 2.11 (s, 3H), 1.98 (m, 2H), 1.43-0.9 (m, 12H), 0.84 (s, 6H); 13C NMR (300 MHz, dmso-d6) δ ppm 140.0, 137.6, 130.2, 127.5, 121.7, 118.9, 114.3, 66.7, 62.1, 61.5, 59.0, 55.6, 45.4, 30.1, 24.2, 21.7, 21.4, 12.6, 10.9; HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C49H57N8O5S에 대한 계산치: 869.4173, 실측치: 869.4167.
단계 B: (4-메톡시페닐)메틸 3-[1-[[3,5-디메틸-7-[2-(p-톨릴술포닐옥시)에톡시]-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]-6-[4-메틸-3-[(6-메틸-1,3-벤조티아졸-2-일)아미노]-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]피리딘-2-카르복실레이트
디클로로메탄 2 mL 중 단계 A로부터의 생성물 203 mg (0.23 mmol)에 N,N-디에틸에탄아민 0.16 mL (5 당량) 및 p-톨릴술포닐 4-메틸벤젠술포네이트 150 mg (2 당량)을 첨가한 다음, 혼합물을 18시간 동안 교반하였다. 생성물을 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 용리액으로서 DCM 및 EtOAc 사용)에 의해 정제하여 목적 생성물 84 mg (38%)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 10.74 (br., 1H), 7.94 (d, 1H), 7.76 (dm, 2H), 7.69 (d, 1H), 7.61 (br., 1H), 7.45 (dm, 2H), 7.44 (br., 1H), 7.40 (s, 1H), 7.18 (dm, 2H), 7.17 (brd., 1H), 6.90 (dm, 2H), 5.09 (s, 2H), 4.05 (t, 2H), 3.99 (t, 2H), 3.82 (s, 2H), 3.74 (s, 3H), 3.47 (t, 2H), 2.84 (t, 2H), 2.40 (s, 3H), 2.37 (brs., 3H), 2.31 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.98 (m, 2H), 1.35-0.87 (m, 12H), 0.81 (s, 6H); 13C NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 140.0, 137.7, 130.6, 130.1, 128.1, 127.5, 121.8, 118.9, 114.3, 71.5, 66.7, 58.9, 58.4, 55.6, 45.4, 30.0, 24.3, 21.6, 21.6, 21.4, 12.5, 10.9; HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C56H63N8O7S2에 대한 계산치: 1023.4261, 실측치: 1023.4265.
단계 C: 3-[1-[[3,5-디메틸-7-(2-피롤리딘-1-일에톡시)-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]-6-[4-메틸-3-[(6-메틸-1,3-벤조티아졸-2-일)아미노]-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]피리딘-2-카르복실산
아세토니트릴 1 mL 중 단계 B로부터의 생성물 84 mg (0.082 mmol)에 피롤리딘 (3 당량)을 첨가하고, 반응 혼합물을 55℃에서 18시간 동안 교반하였다. 5 당량의 KOH로 처리한 후, 혼합물을 55℃에서 1시간 동안 교반하고, 생성물을 정제용 HPLC 크로마토그래피 (용리액으로서 아세토니트릴 및 5mM 수성 NH4HCO3 용액을 사용함)에 의해 정제하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C45H56N9O3S에 대한 계산치: 802.4227, 실측치: 802.4227.
P65의 제조: 3-[1-[[3,5-디메틸-7-(2-피롤리딘-1-일에톡시)-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]-6-[3-[(6-플루오로-1,3-벤조티아졸-2-일)아미노]-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]피리딘-2-카르복실산
Figure pct00680
단계 A: (4-메톡시페닐)메틸 6-[3-[(6-플루오로-1,3-벤조티아졸-2-일)아미노]-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-3-[1-[[3-(2-히드록시에톡시)-5,7-디메틸-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실레이트
시클로헥산올 2.5 mL 중 제조예 16, 단계 C 250 mg (0.34 mmol), 6-플루오로-1,3-벤조티아졸-2-아민 114 mg (2 당량), Pd2(dba)3 31 mg (0.1 당량), XantPhos 39 mg (0.2 당량) 및 DIPEA 0.17 mL (3 당량)의 혼합물을 130℃에서 2시간 동안 유지하였다. 생성물을 칼럼 크로마토그래피 (용리액으로서 DCM/ MeOH 사용)에 의해 정제하여 목적 생성물 158 mg (55%)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 10.87 (brs, 1H), 7.94 (d, 1H), 7.77 (brd, 1H), 7.69 (d, 1H), 7.57 (brs, 1H), 7.39 (s, 1H), 7.20 (m, 1H), 7.19 (m, 2H), 6.91 (m, 2H), 5.10 (s, 2H), 4.45 (brs, 1H), 3.99 (m, 2H), 3.85 (s, 2H), 3.75 (s, 3H), 3.40 (t, 2H), 3.34 (t, 2H), 2.85 (t, 2H), 2.31 (s, 3H), 2.11 (s, 3H), 1.98 (m, 2H), 1.43-0.91 (m, 12H), 0.84 (s, 6H); 13C NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 140.0, 137.7, 130.2, 118.9, 114.3, 114.0, 108.4, 66.7, 62.1, 61.5, 59.0, 55.6, 45.4, 30.1, 24.3, 21.6, 12.5, 10.9; HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C48H54FN8O5S에 대한 계산치: 873.3922, 실측치: 873.3917.
단계 B: (4-메톡시페닐)메틸 3-[1-[[3,5-디메틸-7-[2-(p-톨릴술포닐옥시)에톡시]-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]-6-[3-[(6-플루오로-1,3-벤조티아졸-2-일)아미노]-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]피리딘-2-카르복실레이트
디클로로메탄 2 mL 중 단계 A로부터의 생성물 158 mg (0.23 mmol)에 N,N-디에틸에탄아민 0.125 mL (5 당량) 및 p-톨릴술포닐 4-메틸벤젠술포네이트 117 mg (2 당량)을 첨가한 다음, 혼합물을 18시간 동안 교반하였다. 생성물을 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 용리액으로서 DCM 및 EtOAc 사용)에 의해 정제하여 목적 생성물 71 mg (41%)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 10.88 (brs, 1H), 7.94 (d, 1H), 7.77 (br., 1H), 7.76 (dm, 2H), 7.69 (d, 1H), 7.59 (br., 1H), 7.45 (dm, 2H), 7.40 (s, 1H), 7.21 (t, 1H), 7.17 (dm, 2H), 6.90 (dm, 2H), 5.09 (s, 2H), 4.05 (t, 2H), 4.00 (m, 2H), 3.82 (s, 2H), 3.74 (s, 3H), 3.47 (t, 2H), 2.85 (t, 2H), 2.40 (s, 3H), 2.32 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.98 (m, 2H), 1.35-0.87 (m, 12H), 0.81 (s, 6H); 13C NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 140.0, 137.7, 130.6, 130.1, 128.1, 118.9, 114.3, 114.0, 108.4, 71.5, 66.7, 58.9, 58.4, 55.6, 45.4, 30.0, 24.3, 21.6, 21.6, 12.5, 10.9; HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C55H60FN8O7S2에 대한 계산치: 1027.4010, 실측치: 1027.4003.
단계 C: 3-[1-[[3,5-디메틸-7-(2-피롤리딘-1-일에톡시)-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]-6-[3-[(6-플루오로-1,3-벤조티아졸-2-일)아미노]-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]피리딘-2-카르복실산
아세토니트릴 1 mL 중 단계 B로부터의 생성물 71 mg (0.069 mmol)에 피롤리딘 (3 당량)을 첨가하고, 반응 혼합물을 55℃에서 18시간 동안 교반하였다. 5 당량의 KOH로 처리한 후, 혼합물을 55℃에서 1시간 동안 교반하고, 생성물을 정제용 HPLC 크로마토그래피 (용리액으로서 아세토니트릴 및 5 mM 수성 NH4HCO3 용액을 사용함)에 의해 정제하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C44H53FN9O3S에 대한 계산치: 806.3976, 실측치: 806.3969.
P66의 제조: 6-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-3-[1-[[3-[3-(디메틸아미노)프로필]-5,7-디메틸-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실산
Figure pct00681
제조예 13 및 적절한 아민으로서의 N-메틸메탄아민으로부터 출발하여 아민 치환 및 가수분해 일반적 절차 I을 사용하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C43H54N9O2S에 대한 계산치: 760.4121, 실측치: 760.4114.
P67의 제조: 6-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-3-[5-메틸-1-[[3-[2-(4-메틸피페라진-1-일)에톡시]-1-아다만틸]메틸]피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실산
Figure pct00682
제조예 18 및 적절한 아민으로서의 1-메틸피페라진으로부터 출발하여 아민 치환 및 가수분해 일반적 절차 I을 사용하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C43H53N10O3S에 대한 계산치: 789.4022, 실측치: 789.4014.
P68의 제조: 6-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-3-[1-[[3-[3-[3-히드록시프로필 (메틸)아미노]프로필]-5,7-디메틸-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실산
Figure pct00683
제조예 13 및 적절한 아민으로서의 3-(메틸아미노)프로판-1-올로부터 출발하여 아민 치환 및 가수분해 일반적 절차 I을 사용하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C45H58N9O3S에 대한 계산치: 804.4383, 실측치: 804.4375.
P69의 제조: 6-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-3-[1-[[3-[3-[[(3S)-3,4-디히드록시부틸]아미노]프로필]-5,7-디메틸-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실산
Figure pct00684
아세토니트릴 2 mL 중 제조예 13으로부터의 생성물 (0.074 mmol)에 2-[(4S)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일]에탄아민, 염화수소 (1 : 1)(4 당량)를 첨가하고, 반응 혼합물을 60℃에서 18시간 동안 교반하였다. KOH 용액 (5 당량)을 첨가한 후, 반응 혼합물을 60℃에서 1시간 동안 교반하였다. HCl 용액 (10 당량)을 첨가한 후, 반응 혼합물을 60℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. 생성물을 정제용 HPLC 크로마토그래피 (용리액으로서 아세토니트릴 및 5mM 수성 NH4HCO3 용액을 사용함)에 의해 정제하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C45H58N9O4S에 대한 계산치: 820.4332, 실측치: 820.4323.
P70의 제조: 6-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-3-[1-[[3-[2-[2-카르복시에틸 (메틸)아미노]에톡시]-5,7-디메틸-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실산
Figure pct00685
제조예 16 및 적절한 아민으로서의 에틸 3-(메틸아미노)프로파노에이트, 염화수소 (1 : 1)로부터 출발하여 아민 치환 및 가수분해 일반적 절차 III을 사용하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C44H54N9O5S에 대한 계산치: 820.3968, 실측치: 820.3962.
P71의 제조: 6-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-3-[1-[[3-[2-(2-카르복시에틸아미노)에톡시]-5,7-디메틸-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실산
Figure pct00686
제조예 16 및 적절한 아민으로서의 메틸 3-아미노프로파노에이트로부터 출발하여 아민 치환 및 가수분해 일반적 절차 III을 사용하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C43H52N9O5S에 대한 계산치: 806.3812, 실측치: 806.3793.
P72의 제조: 6-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-3-[1-[[3-[3-(4-히드록시부틸아미노)프로필]-5,7-디메틸-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실산
Figure pct00687
제조예 13 및 적절한 아민으로서의 4-아미노부탄-1-올로부터 출발하여 아민 치환 및 가수분해 일반적 절차 I을 사용하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C45H58N9O3S에 대한 계산치: 804.4383, 실측치: 804.4383.
P73의 제조: [6-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-3-[1-[[3,5-디메틸-7-(2-피롤리딘-1-일에톡시)-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]-2-피리딜]메탄올
Figure pct00688
단계 A: (4-메톡시페닐)메틸 6-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-3-[1-[[3,5-디메틸-7-(2-피롤리딘-1-일에톡시)-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실레이트
제조예 16 및 적절한 아민으로서의 피롤리딘으로부터 출발하여 가수분해 단계 없이 아민 치환 및 가수분해 일반적 절차 I을 사용하여 목적 생성물 190 mg를 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 7.95 (d, 1H), 7.81 (d, 1H), 7.68 (d, 1H), 7.50 (brd., 1H), 7.39 (s, 1H), 7.35 (t, 1H), 7.19 (dm, 2H), 7.16 (t, 1H), 6.91 (dm, 2H), 5.10 (s, 2H), 3.99 (t, 2H), 3.85 (s, 2H), 3.74 (s, 3H), 3.41 (t, 2H), 2.85 (t, 2H), 2.46 (t, 2H), 2.41 (br., 4H), 2.32 (s, 3H), 2.11 (s, 3H), 1.98 (m, 2H), 1.62 (m, 4H), 1.40 (s, 2H), 1.28/1.22 (d+d, 4H), 1.19/1.13 (d+d, 4H), 1.03/0.94 (d+d, 2H), 0.84 (s, 6H); 13C NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 140.0, 137.7, 130.2, 126.4, 122.4, 122.1, 118.9, 114.3, 66.7, 59.5, 59.0, 56.6, 55.6, 54.5, 50.0, 46.9, 46.0, 45.4, 43.2, 30.1, 24.3, 23.6, 21.7, 12.6, 10.9; HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C52H62N9O4S에 대한 계산치: 908.4645, 실측치: 908.4633.
단계 B: [6-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-3-[1-[[3,5-디메틸-7-(2-피롤리딘-1-일에톡시)-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]-2-피리딜]메탄올
테트라히드로푸란 4.2 mL 중 단계 A로부터의 생성물 190 mg (0.21 mmol)에 LiAlH4 24 mg (3 당량)을 첨가하고, 혼합물을 40분 동안 교반하였다. MeOH 중 0.1% TFA로 켄칭하고 여과한 후, 생성물을 정제용 HPLC (용리액으로서 MeCN 및 0.1% TFA 용액)에 의해 정제하여 목적 생성물 110 mg (67%)을 수득하였다. HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C44H56N9O2S에 대한 계산치: 774.4277, 실측치: 774.4269.
P74의 제조: [6-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-3-[1-[[3,5-디메틸-7-(2-피롤리딘-1-일에톡시)-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]-2-피리딜]-피롤리딘-1-일-메타논
Figure pct00689
DMF 0.5 mL 중 P21 50 mg (0.063 mmol), 피롤리딘 9.37 mg (2.1 당량), 및 DIPEA 0.032 mL (3 당량)에 HATU 36 mg (1.5 당량)을 0℃에서 첨가한 다음, 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물에 부은 후, 침전된 고체를 여과하고, 물로 세척하고, 건조시켰다. 생성물을 칼럼 크로마토그래피 (아미노 칼럼, 용리액으로서 DCM 및 MeOH 사용)에 의해 정제하여 목적 생성물 29 mg (65%)을 수득하였다. HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C48H61N10O2S에 대한 계산치: 841.4699, 실측치: 841.4698.
P75의 제조: 6-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-3-[1-[[3,5-디메틸-7-(2-피롤리딘-1-일에톡시)-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]-N-이소프로필-피리딘-2-카르복스아미드
Figure pct00690
DMF 0.5 mL 중 P21 50 mg (0.063 mmol), 프로판-2-아민 9.37 mg (2 당량), 및 DIPEA 0.032 mL (3 당량)에 HATU 36 mg (1.5 당량)을 0℃에서 첨가한 다음, 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물에 부은 후, 침전된 고체를 여과하고, 물로 세척하고, 건조시켰다. 생성물을 칼럼 크로마토그래피 (아미노 칼럼, 용리액으로서 DCM 및 MeOH을 사용함)에 의해 정제하여 목적 생성물 34 mg (76%)을 수득하였다. HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C47H61N10O2S에 대한 계산치: 829.4699, 실측치: 829.4694.
P76의 제조: 6-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-3-[1-[[3,5-디메틸-7-(2-피롤리딘-1-일에톡시)-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복스아미드
Figure pct00691
디옥산 0.5 mL 중 P21 50 mg (0.063 mmol) 및 tert-부톡시카르보닐 tert-부틸 카르보네이트 18 mg (1.3 당량)에 피리딘 0.006 mL을 첨가한 다음, 혼합물을 10분 동안 교반하였다. 혼합물을 NH4HCO3 6.5 mg (1.3 당량)으로 처리한 후, 반응물을 5일 동안 교반하였다. 생성물을 칼럼 크로마토그래피 (아미노 칼럼, 용리액으로서 DCM 및 MeOH 사용)에 의해 정제하여 목적 생성물 17 mg (47%)을 수득하였다. HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C44H55N10O2S에 대한 계산치: 787.4230, 실측치: 787.4226.
실시예 2. 페이로드 전구체의 합성 및 특징화
"PMB-보호된 페이로드"는 또한 링커/페이로드의 제조의 목적을 위해 고려되는 페이로드의 전구체로서 지칭된다.
전구체를 위한 제조예 A: (4-메톡시페닐)메틸 6-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-3-[1-[[3,5-디메틸-7-[2-(p-톨릴술포닐옥시)에톡시]-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실레이트
단계 A: (4-메톡시페닐)메틸 3-[1-[[3-[2-[tert-부틸 (디페닐)실릴]옥시에톡시]-5,7-디메틸-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]-6-[3-(3,6-디클로로-5-메틸-피리다진-4-일)프로필아미노]피리딘-2-카르복실레이트
1,4-디옥산 (109 mL) 및 H2O (18 mL) 중 제조예 11로부터의 생성물 (9.78 g, 18.1 mmol), 제조예 7로부터의 생성물 (13.6 g, 1.1 당량), Pd(AtaPhos)2Cl2 (801 mg, 0.1 당량) 및 Cs2CO3 (17.7 g, 3 당량)의 혼합물을 80℃에서 8시간 동안 교반하였다. 냉각된 반응물을 염수로 켄칭한 후, 혼합물을 EtOAc로 추출하고, 합한 유기 층을 건조시키고, 농축시켜 목적 생성물 (21.9 g, 119%)을 수득하였으며, 이것을 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 7.68-7.35 (m, 10H), 7.31 (d, 1H), 7.27 (s, 1H), 7.11 (dm, 2H), 6.98 (t, 1H), 6.83 (dm, 2H), 6.62 (d, 1H), 4.99 (s, 2H), 3.80 (s, 2H), 3.70 (s, 3H), 3.65 (t, 2H), 3.44 (t, 2H), 3.34 (q, 2H), 2.84 (m, 2H), 2.34 (s, 3H), 2.01 (s, 3H), 1.77 (m, 2H), 1.38-0.89 (m, 12H), 0.97 (s, 9H), 0.82 (s, 6H); 13C NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 140.4, 137.6, 130.1, 114.2, 110.3, 66.3, 64.4, 61.7, 59.0, 55.5, 40.9, 30.1, 28.1, 27.3, 27.1, 16.4, 10.8; HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C57H69Cl2N6O5Si에 대한 계산치: 1015.4475 실측치: 1015.4474.
단계 B: (4-메톡시페닐)메틸 3-[1-[[3-[2-[tert-부틸 (디페닐)실릴]옥시에톡시]-5,7-디메틸-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]-6-(3-클로로-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일)피리딘-2-카르복실레이트
1,4-디옥산 (108 mL) 중 단계 A로부터의 생성물 (21.9 g, 21.6 mmol), Cs2CO3 (14 g, 2 당량), DIPEA (7.5 mL, 2 당량) 및 Pd(Ataphos)2Cl2 (954 mg, 0.1 당량)의 혼합물을 110℃에서 18시간 동안 교반하였다. 물로 켄칭하고 EtOAc로 추출한 후, 합한 유기 상을 건조시키고, 농축시키고, 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 용리액으로서 DCM 및 EtOAc)에 의해 정제하여 목적 생성물 (8.4 g, 40%)을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 7.84 (d, 1H), 7.67 (d, 1H), 7.65 (d, 4H), 7.44 (t, 2H), 7.41 (s, 1H), 7.40 (t, 4H), 7.15 (d, 2H), 6.87 (d, 2H), 5.07 (s, 2H), 3.96 (t, 2H), 3.83 (s, 2H), 3.71 (s, 3H), 3.66 (t, 2H), 3.45 (t, 2H), 2.86 (t, 2H), 2.29 (s, 3H), 2.08 (s, 3H), 1.97 (qn, 2H), 1.38 (s, 2H), 1.25/1.18 (d+d, 4H), 1.18/1.12 (d+d, 4H), 1.01/0.93 (d+d, 2H), 0.97 (s, 9H), 0.82 (s, 6H); 13C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ ppm 166.8, 159.7, 156.3, 153.6, 150.8, 147.7, 140.1, 137.6, 137.3, 136.0, 135.6, 133.8, 130.2, 130.2, 129.1, 128.2, 127.7, 123.0, 120.4, 115.6, 114.3, 74.2, 66.8, 64.4, 61.7, 59.3, 55.6, 49.9, 46.8, 46.0, 46.0, 43.3, 39.7, 33.6, 30.1, 27.1, 24.6, 21.0, 19.3, 15.5, 10.8; HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C57H68ClN6O5Si에 대한 계산치: 979.4709 실측치: 979.4710.
단계 C: (4-메톡시페닐)메틸 6-(3-클로로-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일)-3-[1-[[3-(2-히드록시에톡시)-5,7-디메틸-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실레이트
THF (86 mL) 중 단계 B로부터의 생성물 (8.4 g, 8.6 mmol)에 0℃에서 THF 중 TBAF의 1 M 용액 (9.4 mL, 1.1 당량)을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 1.5시간 동안 교반하였다. NH4Cl의 포화 용액으로 켄칭하고 EtOAc로 추출한 후, 합한 유기 상을 염수로 세척하고, 건조시키고, 농축시키고, 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 용리액으로서 DCM 및 MeOH)에 의해 정제하여 목적 생성물 (4.7 g, 74%)을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 7.85 (d, 1H), 7.70 (d, 1H), 7.39 (s, 1H), 7.18 (d, 2H), 6.90 (d, 2H), 5.10 (s, 2H), 4.45 (t, 1H), 3.96 (t, 2H), 3.84 (s, 2H), 3.74 (s, 3H), 3.40 (q, 2H), 3.33 (t, 2H), 2.86 (t, 2H), 2.29 (s, 3H), 2.09 (s, 3H), 1.98 (qn, 2H), 1.39 (s, 2H), 1.27/1.21 (d+d, 4H), 1.18/1.12 (d+d, 4H), 1.03/0.94 (d+d, 2H), 0.84 (s, 6H); 13C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ ppm 166.8, 159.7, 156.3, 153.6, 150.8, 147.8, 140.2, 137.6, 137.3, 136.0, 130.2, 129.1, 127.7, 123.0, 120.4, 115.6, 114.3, 74.0, 66.8, 62.2, 61.5, 59.0, 55.6, 50.0, 46.9, 46.0, 46.0, 43.3, 39.7, 33.5, 30.1, 24.6, 21.0, 15.5, 10.9; HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C41H50ClN6O5에 대한 계산치: 741.3531 실측치: 741.3530.
단계 D: (4-메톡시페닐)메틸 6-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-3-[1-[[3-(2-히드록시에톡시)-5,7-디메틸-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실레이트
시클로헥산올 (38 mL) 중 단계 C로부터의 생성물 (4.7 g, 6.3 mmol), 1,3-벤조티아졸-2-아민 (1.9 g, 2 당량), Pd2dba3 (580 mg, 0.1 당량), XantPhos (730 mg, 0.2 당량) 및 DIPEA (3.3 mL, 3 당량)의 혼합물을 130℃에서 2시간 동안 교반하였다. 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 용리액으로서 헵탄, EtOAc 및 MeCN)에 의해 정제하여 목적 생성물 (3.83 g, 71%)을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 7.95 (d, 1H), 7.81 (brd, 1H), 7.69 (d, 1H), 7.49 (brs, 1H), 7.39 (s, 1H), 7.35 (m, 1H), 7.19 (m, 2H), 7.16 (m, 1H), 6.91 (m, 2H), 5.10 (s, 2H), 4.46 (t, 1H), 3.99 (m, 2H), 3.85 (s, 2H), 3.75 (s, 3H), 3.40 (m, 2H), 3.34 (t, 2H), 2.85 (t, 2H), 2.32 (s, 3H), 2.11 (s, 3H), 1.99 (m, 2H), 1.45-0.9 (m, 12H), 0.84 (s, 6H); HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C48H55N8O5S에 대한 계산치: 855.4016 실측치: 855.4011.
단계 E: (4-메톡시페닐)메틸 6-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-3-[1-[[3,5-디메틸-7-[2-(p-톨릴술포닐옥시)에톡시]-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실레이트
DCM (45 mL) 중 단계 D로부터의 생성물 (3.83 g, 4.48 mmol) 및 트리에틸아민 (1.87 mL, 3 당량)에 p-톨릴술포닐 4-메틸벤젠술포네이트 (2.19 g, 1.5 당량)를 첨가하고, 반응 혼합물을 2시간 동안 교반하였다. 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 용리액으로서 헵탄 및 EtOAc)에 의해 정제하여 목적 생성물 2.5 g (55%)을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 7.95 (d, 1H), 7.81 (brs, 1H), 7.76 (m, 2H), 7.45 (brs, 1H), 7.45 (m, 2H), 7.40 (s, 1H), 7.35 (m, 1H), 7.18 (m, 2H), 7.17 (m, 1H), 6.97 (d, 1H), 6.90 (m, 2H), 5.10 (s, 2H), 4.05 (m, 2H), 4.00 (m, 2H), 3.82 (s, 2H), 3.74 (s, 3H), 3.47 (m, 2H), 2.85 (m, 2H), 2.40 (s, 3H), 2.32 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.98 (m, 2H), 1.87-1.34 (m, 12H), 0.81 (s, 6H); HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C55H61N8O7S2에 대한 계산치: 1009.4104 실측치: 1009.4102.
아민 치환 절차 III
아세토니트릴 및 N-메틸-2-피롤리돈의 1:1 혼합물 (10 ml/mmol) 중 전구체를 위한 제조예 A로부터의 생성물에 적절한 아민 (3-10 당량)을 첨가하고, 반응 혼합물을 50℃에서 2-24시간 동안 교반하였다. 생성물을 정제용 역상 크로마토그래피에 의해 정제한 후, 목적 생성물을 수득하였다.
P37의 전구체: (4-메톡시페닐)메틸 6-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-3-[1-[[3-[2-[4-히드록시부틸 (메틸)아미노]에톡시]-5,7-디메틸-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실레이트
아민 치환 절차 III 및 4-(메틸아미노)부탄-1-올을 적절한 아민으로서 사용하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C53H66N9O5S에 대한 계산치: 940.4907 실측치 940.4906.
P36의 전구체: (4-메톡시페닐)메틸 6-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-3-[1-[[3-[2-[3-메톡시프로필 (메틸)아미노]에톡시]-5,7-디메틸-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실레이트
아민 치환 절차 III 및 3-메톡시-N-메틸-프로판-1-아민을 적절한 아민으로서 사용하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C53H66N9O5S에 대한 계산치: 940.4907 실측치 940.4904.
P35의 전구체: (4-메톡시페닐)메틸 6-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-3-[1-[[3-[2-[2-히드록시에틸 (메틸)아미노]에톡시]-5,7-디메틸-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실레이트
아민 치환 절차 III 및 2-(메틸아미노)에탄올을 적절한 아민으로서 사용하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C51H62N9O5S에 대한 계산치: 912.4594 실측치 912.4592.
P27의 전구체: (4-메톡시페닐)메틸 6-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-3-[1-[[3-[2-(디메틸아미노)에톡시]-5,7-디메틸-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실레이트
아민 치환 절차 III 및 디메틸아민을 적절한 아민으로서 사용하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C50H60N9O4S에 대한 계산치: 882.4489 실측치 882.4490.
P21의 전구체: (4-메톡시페닐)메틸 6-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-3-[1-[[3,5-디메틸-7-(2-피롤리딘-1-일에톡시)-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실레이트
아민 치환 절차 III 및 피롤리딘을 적절한 아민으로서 사용하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS-ESI (m/z): [M+2H]2+ C52H62N9O4S에 대한 계산치: 454.7362 실측치 454.7365.
P25의 전구체: (4-메톡시페닐)메틸 6-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-3-[1-[[3-[2-(3-히드록시프로필아미노)에톡시]-5,7-디메틸-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실레이트
아민 치환 절차 III 및 3-아미노프로판-1-올을 적절한 아민으로서 사용하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C51H62N9O5S에 대한 계산치: 912.4591, 실측치 912.4581.
P19의 전구체: (4-메톡시페닐)메틸 6-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-3-[1-[[3-[2-[2-[(4S)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일]에틸아미노]에톡시]-5,7-디메틸-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실레이트
아민 치환 절차 III 및 2-[(4S)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일]에탄아민을 적절한 아민으로서 사용하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS-ESI (m/z): [M+H]+ C55H68N9O6S에 대한 계산치: 982.5013, 실측치 982.5000.
실시예 3. 링커, 링커-페이로드 및 그의 전구체의 합성 및 특징화
예시적인 링커, 링커-페이로드, 및 그의 전구체를 본 실시예에 기재된 예시적인 방법을 사용하여 합성하였다.
약어:
화학적 명명
IUPAC-선호 명칭은 바이오비아® 드로우(Draw) 2018 (버전 18.1.NET)에 의해 제공된 화학적 명명 기능을 사용하여 생성하였다.
물질, 방법 및 일반적 절차:
상업적 공급원으로부터 수득된 모든 시약을 추가 정제 없이 사용하였다. 무수 용매를 상업적 공급원으로부터 입수하고, 추가 건조 없이 사용하였다. 플래쉬 크로마토그래피는 사전-패킹된 실리카-겔 카트리지 (마슈레-나겔 크로마본드 플래쉬(Macherey-Nagel Chromabond Flash))를 사용하여 콤비플래쉬 Rf (텔레다인 이스코) 상에서 수행하였다. 박층 크로마토그래피를 머크 유형 60 F254 실리카-겔로 코팅된 5 x 10 cm 플레이트로 수행하였다. 마이크로웨이브 가열을 CEM 디스커버(CEM Discover)® 기기에서 수행하였다.
1H-NMR 측정은 용매로서 DMSO-d6 또는 CDCl3을 사용하여 400 MHz 브루커 아반스 또는 500 MHz 아반스 네오 분광계 상에서 수행하였다. 1H NMR 데이터는 내부 표준으로서 용매의 잔류 피크 (DMSO-d6의 경우 2.50 ppm 및 CDCl3의 경우 7.26 ppm)를 사용하여 백만분율 (ppm)로 주어진 화학적 이동 값의 형태이다. 분할 패턴은 s (단일선), d (이중선), t (삼중선), q (사중선), quint (오중선), m (다중선), br s (넓은 단일선), br t (넓은 삼중선), dd (이중선의 이중선), td (이중선의 삼중선), dt (삼중선의 이중선), ddd (이중선의 이중선의 이중선)로서 지정된다. ATR 골든 게이트 장치 (SPECAC)가 장착된 브루커 텐서 27 상에서 IR 측정을 수행하였다. HRMS 측정은 LTQ 오르비트랩 벨로스 프로 질량 분광계 (써모피셔 사이언티픽(ThermoFisher Scientific)) 상에서 수행하였다. 샘플을 CH3CN/H2O (2/1:v/v) 중에 대략 0.01 내지 0.05 mg/mL의 농도 범위로 용해시키고, 0.1 mL/분의 유량으로 2 μL의 주입에 의해 공급원에 도입하였다. ESI 이온화 파라미터는 다음과 같았다: 3.5 kV 및 350℃ 전달 이온 모세관. 모든 스펙트럼은 락(lock) 질량을 사용하여 30,000 또는 60,000의 해상력으로 양이온 모드에서 획득하였다.
HRMS 측정은 LTQ 오르비트랩 벨로스 프로 질량 분광계 (써모피셔 사이언티픽 게엠베하, 독일 브레멘) 상에서 수행하였다. 샘플을 CH3CN/H2O (2/1:v/v) 중에 대략 0.01 내지 0.05 mg/mL의 농도 범위로 용해시키고, 0.1 mL/분의 유량으로 2 μL의 주입에 의해 공급원에 도입하였다. ESI 이온화 파라미터는 다음과 같았다: 3.5 kV 및 350℃ 전달 이온 모세관. 모든 스펙트럼은 락 질량을 사용하여 30,000 또는 60,000의 해상력으로 양이온 모드에서 획득하였다.
UPLC®-MS:
UPLC®-MS 데이터를 하기 파라미터를 갖는 기기를 사용하여 획득하였다 (표 10):
표 10. UPLC®-MS 파라미터
정제용-HPLC:
정제용-HPLC ("정제용-HPLC") 데이터를 하기 파라미터를 갖는 기기를 사용하여 획득하였다 (표 11):
표 11. 정제용-HPLC 파라미터
3가지 정제용-HPLC 방법을 사용하였다:
a. TFA 방법: 용매: A = 물 + 0.05% TFA, B = 아세토니트릴 + 0.05% TFA, 15 내지 30 CV 동안 5에서 100% B의 구배
b. NH4HCO3 방법: 용매: A = 물 + 0.02 M NH4HCO3, B = 아세토니트릴/물 80/20 + 0.02 M NH4HCO3, 15 내지 30 CV 동안 5에서 100% B의 구배
c. 중성 방법: 용매: A = 물, B = 아세토니트릴, 15 내지 30 CV 동안 5에서 100% B의 구배
순수한 화합물을 함유하는 모든 분획을 합하고, 직접 동결-건조시켜 화합물을 무정형 분말로서 수득하였다.
방법 A
Figure pct00696
단계 1: (2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5-디옥소피롤-1-일)에톡시]프로파노일아미노]-3-메틸-부타노일]아미노]-N-[4-(히드록시메틸)페닐]-5-우레이도-펜탄아미드
THF (42 mL) 중 3-[2-(2,5-디옥소피롤-1-일)에톡시]프로판산 (855 mg, 4.01 mmol)의 용액에 N,N'-디시클로헥실메탄디이민 (1.05 g, 5.08 mmol) 및 1-히드록시피롤리딘-2,5-디온 (510 mg, 4.43 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 20시간 동안 교반하였다. 침전물을 여과에 의해 제거하고, 여과물을 DMF (42 mL) 중 (2S)-2-[[(2S)-2-아미노-3-메틸-부타노일]아미노]-N-[4-(히드록시메틸)페닐]-5-우레이도-펜탄아미드 (1.27 g, 3.35 mmol)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 20시간 동안 교반하고, 디에틸 에테르 (250 mL)로 희석하였다. 고체를 여과에 의해 회수하여 (2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5-디옥소피롤-1-일)에톡시]프로파노일아미노]-3-메틸-부타노일]아미노]-N-[4-(히드록시메틸)페닐]-5-우레이도-펜탄아미드 (1.81 g)를 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, dmso-d6): δ 9.87 (s, 1H), 8.05 (d, 1H), 7.82 (d, 1H), 7.53 (d, 2H), 7.21 (d, 2H), 7.00 (s, 2H), 5.95 (t, 1H), 5.39 (s, 2H), 5.07 (t, 1H), 4.41 (d, 2H), 4.34-4.40 (m, 1H), 4.18-4.22 (m, 1H), 3.42-3.65 (m, 4H), 2.88-3.02 (m, 2H), 2.73 (s, 2H), 2.28-2.45 (m, 2H), 1.91-1.99 (m, 1H), 1.53-1.75 (m, 2H), 1.30-1.147 (m, 2H), 0.85 (d, 3H), 0.81 (d, 3H). 13C NMR (125 MHz, dmso-d6): δ 171.05, 170.83, 170.32, 170.09, 158.82, 137.49, 137.37, 134.50, 126.88, 118.81, 66.66, 66.53, 62.57, 57.49, 53.06, 36.74, 35.76, 30.51, 29.31, 26.79, 25.20, 19.16, 18.07. MS (ESI) m/z [M+H]+ = 575.2.
단계 2: (2S)-N-[4-(브로모메틸)페닐]-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5-디옥소피롤-1-일)에톡시]프로파노일아미노]-3-메틸-부타노일]아미노]-5-우레이도-펜탄아미드
THF (1 mL) 중 (2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5-디옥소피롤-1-일)에톡시]프로파노일아미노]-3-메틸-부타노일]아미노]-N-[4-(히드록시메틸)페닐]-5-우레이도-펜탄아미드 (37.2 mg, 65 μmol)의 용액에 아르곤 하에 0℃에서 삼브로민화인 (45 μL, 97 mmol)을 적가하였다. 반응물을 0℃에서 1시간 동안 교반하고, 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응의 진행에 이어서 UPLC-MS를 수행하였다: 분취물을 아세토니트릴 중 매우 과량의 모르폴린으로 처리한 후, 상응하는 모르폴린 부가물을 형성하였다. 반응물을 THF (3 mL)로 희석하고, NaHCO3의 포화 용액 2 방울을 첨가하여 켄칭하고, 실온에서 5분 동안 교반하고, 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하였다. 조 (2S)-N-[4-(브로모메틸)페닐]-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5-디옥소피롤-1-일)에톡시]프로파노일아미노]-3-메틸-부타노일]아미노]-5-우레이도-펜탄아미드 (45 mg)를 함유하는 잔류물을 즉시 후속 단계에 사용하였다. MS (ESI) m/z [M+H]+ = 662.62 (모르폴린 부가물).
단계 3: 링커 도입을 위한 일반적 절차
DMF (30 mL/mmol) 중 페이로드 (19.6 μmol)의 현탁액에 THF (50 mL/mmol) 및 DIPEA (3 당량) 중 단계 2의 생성물 (1.2 당량)의 용액을 첨가하였다. 반응물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 조 생성물을 엑스브리지® 칼럼 상의 반응 혼합물의 직접 침착에 의해 C18 역상 정제용 HPLC를 사용하고 TFA 방법을 사용하여 정제하여 목적 화합물을 수득하였다.
L9A-P27의 제조: 2-[[(5R,7S)-3-[[4-[6-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-2-카르복시-3-피리딜]-5-메틸-피라졸-1-일]메틸]-5,7-디메틸-1-아다만틸]옥시]에틸-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5-디옥소피롤-1-일)에톡시]프로파노일아미노]-3-메틸-부타노일]아미노]-5-우레이도-펜타노일]아미노]페닐]메틸]-디메틸-암모늄;2,2,2-트리플루오로아세테이트
방법 A 및 적절한 페이로드로서의 P27을 사용하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS (ESI) [M-CF3CO2]+=1318.6557 (δ=0.2 ppm)
L9A-P30의 제조: 2-[[(5RS,7SR)-3-[[4-[6-[[6-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-5-메틸-피리다진-3-일]-메틸-아미노]-2-카르복시-3-피리딜]-5-메틸-피라졸-1-일]메틸]-5,7-디메틸-1-아다만틸]옥시]에틸-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5-디옥소피롤-1-일)에톡시]프로파노일아미노]-3-메틸-부타노일]아미노]-5-우레이도-펜타노일]아미노]페닐]메틸]-디메틸-암모늄;2,2,2-트리플루오로아세트산
방법 A 및 적절한 페이로드로서의 P30을 사용하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS (ESI) [M-CF3CO2]+=1292.6386 (δ=-0.9 ppm).
L9A-P33의 제조: 6-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-3-[1-[[(5RS,7SR)-3-[2-[1-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5-디옥소피롤-1-일)에톡시]프로파노일아미노]-3-메틸-부타노일]아미노]-5-우레이도-펜타노일]아미노]페닐]메틸]아제판-1-윰-1-일]에톡시]-5,7-디메틸-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실산;2,2,2-트리플루오로아세트산
방법 A 및 적절한 페이로드로서의 P33을 사용하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS (ESI) [M-CF3CO2]+ 실측치 = 1372.7019 (δ = -0.3 ppm).
L9A-P32의 제조: 6-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-3-[1-[[(5RS,7SR)-3-[2-[4-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5-디옥소피롤-1-일)에톡시]프로파노일아미노]-3-메틸-부타노일]아미노]-5-우레이도-펜타노일]아미노]페닐]메틸]-4-이소프로필-피페라진-4-윰-1-일]에톡시]-5,7-디메틸-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실산;2,2,2-트리플루오로아세트산
방법 A 및 적절한 페이로드로서의 P32를 사용하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS (ESI) [M-CF3CO2]+=1401.7287 (δ = -0.1 ppm).
L9A-P38의 제조: 6-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-3-[1-[[(5RS,7SR)-3-[2-[1-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5-디옥소피롤-1-일)에톡시]프로파노일아미노]-3-메틸-부타노일]아미노]-5-우레이도-펜타노일]아미노]페닐]메틸]피페리딘-1-윰-1-일]에톡시]-5,7-디메틸-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실산;2,2,2-트리플루오로아세트산
방법 A 및 적절한 페이로드로서의 P38을 사용하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS (ESI) [M-CF3CO2]+=1358.6803 (δ = -4.7 ppm).
L9A-P39의 제조: 6-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-3-[1-[[(5SR,7RS)-3-[2-[4-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5-디옥소피롤-1-일)에톡시]프로파노일아미노]-3-메틸-부타노일]아미노]-5-우레이도-펜타노일]아미노]페닐]메틸]모르폴린-4-윰-4-일]에톡시]-5,7-디메틸-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실레이트;2,2,2-트리플루오로아세트산
방법 A 및 적절한 페이로드로서의 P39를 사용하여 목적 생성물을 수득하였다.
HRMS (ESI) [M+H]+ 실측치 = 1360.6634 (δ = -1.9 ppm).
L9A-P41의 제조: 6-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-3-[1-[[(5SR,7RS)-3-[3-[1-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5-디옥소피롤-1-일)에톡시]프로파노일아미노]-3-메틸-부타노일]아미노]-5-우레이도-펜타노일]아미노]페닐]메틸]피롤리딘-1-윰-1-일]프로필]-5,7-디메틸-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실산;2,2,2-트리플루오로아세트산
방법 A 및 적절한 페이로드로서의 P41을 사용하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS (ESI) [M-CF3CO2]+ 실측치 = 1342.6844 (δ = -5.5 ppm).
L9A-P42의 제조: 3-[1-[[(5RS,7SR)-3-[2-[1-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5-디옥소피롤-1-일)에톡시]프로파노일아미노]-3-메틸-부타노일]아미노]-5-우레이도-펜타노일]아미노]페닐]메틸]피롤리딘-1-윰-1-일]에톡시]-5,7-디메틸-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]-6-[4-메틸-3-[(5-메틸-1,3-벤조티아졸-2-일)아미노]-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]피리딘-2-카르복실산;2,2,2-트리플루오로아세트산
방법 A 및 적절한 페이로드로서의 P42를 사용하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS (ESI) [M-CF3CO2]+ 실측치 = 1358.6807 (δ = -4.4ppm).
방법 B
단계 1:
DMF (0.4 mL) 중 파라 메톡시 벤질 (PMB)-보호된 페이로드 (11.3 μmol)의 현탁액에 THF (0.2 mL) 및 DIPEA (9.8 μL, 56.7 μmol) 중 (2S)-N-[4-(브로모메틸)페닐]-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5-디옥소피롤-1-일)에톡시]프로파노일아미노]-3-메틸-부타노일]아미노]-5-우레이도-펜탄아미드 (12.4 mg, 13.6 μmol)의 용액을 첨가하였다. 반응물을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 조 생성물을 엑스브리지® 칼럼 상의 반응 혼합물의 직접 침착에 의해 C18 역상 정제용 HPLC를 사용하고 TFA 방법을 사용하여 정제하여 목적 화합물을 수득하였으며, 이것을 직접 단계 2에 사용하였다.
단계 2:
DCM (3.2 mL) 중 단계 1로부터의 생성물의 현탁액에 TFA (320 μL, 4.18 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 용매를 증발시키고, 잔류물을 DMF (500 μL) 중에 용해시켰다. 이 조 용액을 엑스브리지® 칼럼 상의 반응 혼합물의 직접 침착에 의해 C18 역상 정제용 HPLC를 사용하고 TFA 방법을 사용하여 정제하여 목적 생성물을 수득하였다.
L9A-P35의 제조: 2-[[(5RS,7SR)-3-[[4-[6-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-2-카르복시-3-피리딜]-5-메틸-피라졸-1-일]메틸]-5,7-디메틸-1-아다만틸]옥시]에틸-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5-디옥소피롤-1-일)에톡시]프로파노일아미노]-3-메틸-부타노일]아미노]-5-우레이도-펜타노일]아미노]페닐]메틸]-(2-히드록시에틸)-메틸-암모늄;2,2,2-트리플루오로아세트산
Figure pct00697
방법 B 및 적절한 PMB-보호된 페이로드로서의 P35의 전구체를 사용하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS (ESI) [M-CF3CO2]+ 실측치 = 1318.6531 (δ = -1.7 ppm).
L9A-P36의 제조: 2-[[(5RS,7SR)-3-[[4-[6-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-2-카르복시-3-피리딜]-5-메틸-피라졸-1-일]메틸]-5,7-디메틸-1-아다만틸]옥시]에틸-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5-디옥소피롤-1-일)에톡시]프로파노일아미노]-3-메틸-부타노일]아미노]-5-우레이도-펜타노일]아미노]페닐]메틸]-(3-메톡시프로필)-메틸-암모늄;2,2,2-트리플루오로아세트산
방법 B 및 적절한 PMB-보호된 페이로드로서의 P36의 전구체를 사용하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS (ESI) [M-CF3CO2]+ 실측치 = 1376.6930 (δ = -3.1 ppm).
L9A-P37의 제조: 2-[[(5SR,7RS)-3-[[4-[6-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-2-카르복시-3-피리딜]-5-메틸-피라졸-1-일]메틸]-5,7-디메틸-1-아다만틸]옥시]에틸-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5-디옥소피롤-1-일)에톡시]프로파노일아미노]-3-메틸-부타노일]아미노]-5-우레이도-펜타노일]아미노]페닐]메틸]-(4-히드록시부틸)-메틸-암모늄;2,2,2-트리플루오로아세트산
방법 B 및 적절한 PMB-보호된 페이로드로서의 P37의 전구체를 사용하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS (ESI) [M-CF3CO2]+ 실측치 = 1376.6918 (δ = -3.9 ppm).
방법 C
L9C-P19의 제조: 6-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-3-[1-[[(5SR,7RS)-3-[2-[[(3S)-3,4-디히드록시부틸]-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5-디옥소피롤-1-일)에톡시]프로파노일아미노]-3-메틸-부타노일]아미노]-5-우레이도-펜타노일]아미노]페닐]메톡시카르보닐]아미노]에톡시]-5,7-디메틸-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실산
Figure pct00698
단계 1: [4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5-디옥소피롤-1-일)에톡시]프로파노일아미노]-3-메틸-부타노일]아미노]-5-우레이도-펜타노일]아미노]페닐]메틸 (4-니트로페닐) 카르보네이트
건조 DMF 중 (2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5-디옥소피롤-1-일)에톡시]프로파노일아미노]-3-메틸-부타노일]아미노]-N-[4-(히드록시메틸)페닐]-5-우레이도-펜탄아미드 (방법 A, 단계 1로부터임)(580 mg; 1.0 mmol)의 용액에 DIPEA (0.5 mL; 3.025 mmol; 3 당량) 및 비스(4-니트로페닐)카르보네이트 (615 mg; 2.02 mmol; 2 당량)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 68시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 디에틸 에테르 (15 mL)로 희석하고, 고체를 여과하여 표제 화합물 (589 mg; 79%)을 수득하였다. 1H NMR (dmso-d6): 0.82 (d, 3H, J = 6.8 Hz), 0.85 (d, 3H, J = 6.8 Hz), 1.47-1.33 (m, 2H), 1.74-1.54 (m, 2H), 1.92 -2.00 (m, 1H), 2.32-2.45 (m, 2H), 2.90-3.06 (m, 2H), 3.49-3.46 (m, 2H), 3.60-3.52 (m, 4H), 4.21 (dd, 1H, J = 8.7 및 6.8 Hz), 4.39 (m, 1H), 5.24 (s, 2H), 5.39 (s, 2H), 5.96 (t, 1H, J = 5.6 Hz), 7.00 (s, 2H), 7.41 (d, 2H, J = 8.8 Hz), 7.57 (dd, 2H, J = 6.8 및 2.4 Hz), 7.65 (d, 2H, J = 8.4 Hz), 7.83 (d, 1H, J = 8.8 Hz), 8.10 (d, 1H, J = 7.6 Hz), 8.31 (dd, 2H, J = 6.8 및 2.4 Hz), 10.03 (s, 1H). LCMS 양성 모드 740.14 검출됨 (M+H+).
단계 2: 6-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-3-[1-[[(5SR,7RS)-3-[2-[[(3S)-3,4-디히드록시부틸]-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5-디옥소피롤-1-일)에톡시]프로파노일아미노]-3-메틸-부타노일]아미노]-5-우레이도-펜타노일]아미노]페닐]메톡시카르보닐]아미노]에톡시]-5,7-디메틸-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실산.
DMF (0.5 mL) 중 P19 (15 mg, 0.016 mmol)의 현탁액에 DIPEA (14 μL, 0.0801 mmol) 및 단계 1의 카르보네이트 (14.2 mg, 0.0192 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반하였다. 조 생성물을 엑스브리지® 칼럼 상의 반응 혼합물의 직접 침착에 의해 C18 역상 정제용 HPLC를 사용하고 TFA 방법을 사용하여 정제하여 표제 화합물 (6.9 mg, 수율 30%)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm (m, 2 H), (m, 4 H), (m, 10 H), (m, 2 H), 9.98 (s), 8.08 (d), 7.9 (d, 1 H), 7.82 (d), 7.8 (큰 피크, 1 H), 7.79 (큰NC, 1 H), 7.6 (m, 2 H), 7.49 (큰NC, 1 H), 7.43 (br s, 1 H), 7.37 (t, 1 H), 7.28 (d, 2 H), 7.19 (t, 1 H), 7 (s, 2 H), 5.97 (br s), 5.42 (큰 피크), 4.99 (s, 2 H), 4.38 (m, 1 H), 4.22 (t, 1 H), 4.03 (t, 2 H), 3.86 (m, 2 H), 3.57/3.46/3.28/3.21 (m, 6 H), 3.53 (m, 2 H), 3.42 (m, 2 H), 3.38 (m, 1 H), 3.01/2.94 (2m, 2 H), 2.89 (t, 2 H), 2.43/2.32 (2m, 2 H), 2.37 (s, 3 H), 2.2 (s, 3 H), 2.03 (m, 2 H), 1.95 (m, 1 H), 1.7/1.38 (2m, 2 H), 0.84 (m, 6 H), 0.84 (m, 6 H).13C NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 137.6, 135.5, 128.7, 126.8, 122.7, 122.1, 119.1, 118.4, 69.7, 66.9, 66.2, 58.9, 58.4, 58.3, 53.7, 50.5/47.1/43.5, 48.3/46, 46, 39, 36.9, 36.6, 32.8, 30.9, 30.5, 30, 27.7, 24.4, 21.3, 19.8, 13.5, 10.8. HRMS (ESI) [M+H]+ 실측치 = 1422.6688 (δ = 1.6 ppm).
L9C-P22의 제조: 6-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-3-[1-[[(5RS,7SR)-3-[2-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5-디옥소피롤-1-일)에톡시]프로파노일아미노]-3-메틸-부타노일]아미노]-5-우레이도-펜타노일]아미노]페닐]메톡시카르보닐-(4-히드록시부틸)아미노]에톡시]-5,7-디메틸-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실산;2,2,2-트리플루오로아세트산
방법 C 및 적절한 페이로드로서의 P22를 사용하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS (ESI) [M+H]+ 실측치 =1406.6728 (δ =1.0 ppm).
L9C-P23의 제조: 6-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-3-[1-[[(5SR,7RS)-3-[2-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5-디옥소피롤-1-일)에톡시]프로파노일아미노]-3-메틸-부타노일]아미노]-5-우레이도-펜타노일]아미노]페닐]메톡시카르보닐-[3-히드록시-2-(히드록시메틸)프로필]아미노]에톡시]-5,7-디메틸-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실산;2,2,2-트리플루오로아세트산
방법 C 및 적절한 페이로드로서의 P23을 사용하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS (ESI) [M+H]+ 실측치 = 1422.6670 (δ = 0.5 ppm).
L9C-P24의 제조: 6-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-3-[1-[[(5RS,7SR)-3-[2-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5-디옥소피롤-1-일)에톡시]프로파노일아미노]-3-메틸-부타노일]아미노]-5-우레이도-펜타노일]아미노]페닐]메톡시카르보닐-[2-히드록시-1-(히드록시메틸)에틸]아미노]에톡시]-5,7-디메틸-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실산;2,2,2-트리플루오로아세트산
방법 C 및 적절한 페이로드로서의 P24를 사용하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS (ESI) [M+H]+ 실측치 = 1408.6518 (δ = 0.8 ppm).
L9C-P25의 제조: 6-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-3-[1-[[(5SR,7RS)-3-[2-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5-디옥소피롤-1-일)에톡시]프로파노일아미노]-3-메틸-부타노일]아미노]-5-우레이도-펜타노일]아미노]페닐]메톡시카르보닐-(3-히드록시프로필)아미노]에톡시]-5,7-디메틸-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실산;2,2,2-트리플루오로아세트산
방법 C 및 적절한 페이로드로서의 P25를 사용하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS (ESI) [M+H]+ 실측치 =1366.6396 (δ =-0.4 ppm).
L9C-P26의 제조: 6-[[6-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-5-메틸-피리다진-3-일]-메틸-아미노]-3-[1-[[(5SR,7RS)-3-[2-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5-디옥소피롤-1-일)에톡시]프로파노일아미노]-3-메틸-부타노일]아미노]-5-우레이도-펜타노일]아미노]페닐]메톡시카르보닐-(3-히드록시프로필)아미노]에톡시]-5,7-디메틸-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실산;2,2,2-트리플루오로아세트산
방법 C 및 적절한 페이로드로서의 P26을 사용하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS (ESI) [M+H]+ 실측치 =1366.6396 (δ=-0.4 ppm).
L9C-P29의 제조: 6-[[6-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-5-메틸-피리다진-3-일]-메틸-아미노]-3-[1-[[(5RS,7SR)-3-[2-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5-디옥소피롤-1-일)에톡시]프로파노일아미노]-3-메틸-부타노일]아미노]-5-우레이도-펜타노일]아미노]페닐]메톡시카르보닐-(3-메톡시프로필)아미노]에톡시]-5,7-디메틸-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실산;2,2,2-트리플루오로아세트산
방법 C 및 적절한 페이로드로서의 P29를 사용하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS (ESI) [M+H]+ 실측치 =1380.6575 (δ = 1.2 ppm).
L9C-P31의 제조: 6-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-3-[1-[[(5RS,7SR)-3-[2-[4-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5-디옥소피롤-1-일)에톡시]프로파노일아미노]-3-메틸-부타노일]아미노]-5-우레이도-펜타노일]아미노]페닐]메톡시카르보닐]피페라진-1-일]에톡시]-5,7-디메틸-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실산;2,2,2-트리플루오로아세트산
방법 C 및 적절한 페이로드로서의 P31을 사용하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS (ESI) [M+H]+ 실측치 = 1403.6694 (δ = 1.7 ppm).
L9C-P40의 제조: 6-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-3-[1-[[(5RS,7SR)-3-[3-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5-디옥소피롤-1-일)에톡시]프로파노일아미노]-3-메틸-부타노일]아미노]-5-우레이도-펜타노일]아미노]페닐]메톡시카르보닐-(3-히드록시프로필)아미노]프로필]-5,7-디메틸-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실산;2,2,2-트리플루오로아세트산
방법 C 및 적절한 페이로드로서의 P40을 사용하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS (ESI) [M+H]+ 실측치 = 1390.6775 (δ = 0.7 ppm).
L9A-P43의 제조: 3-[1-[[(5RS,7SR)-3-[2-[1-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5-디옥소피롤-1-일)에톡시]프로파노일아미노]-3-메틸-부타노일]아미노]-5-우레이도-펜타노일]아미노]페닐]메틸]피롤리딘-1-윰-1-일]에톡시]-5,7-디메틸-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]-6-[3-[(5-메톡시-1,3-벤조티아졸-2-일)아미노]-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]피리딘-2-카르복실산;2,2,2-트리플루오로아세트산
방법 A 및 적절한 페이로드로서의 P43을 사용하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS (ESI) [M-CF3CO2]+ 실측치 = 1374.6754 (δ = -4.5 ppm).
방법 D
L9A-P20의 제조: 6-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-3-[1-[[(5RS,7SR)-3-[2-[4-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5-디옥소피롤-1-일)에톡시]프로파노일아미노]-3-메틸-부타노일]아미노]-5-우레이도-펜타노일]아미노]페닐]메틸]-4-메틸-피페라진-4-윰-1-일]에톡시]-5,7-디메틸-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실산;2,2,2-트리플루오로아세트산
Figure pct00699
단계 1: (2S)-N-[4-(클로로메틸)페닐]-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5-디옥소피롤-1-일)에톡시]프로파노일아미노]-3-메틸-부타노일]아미노]-5-우레이도-펜탄아미드
THF (8 ml) 중 SOCl2 (102 μL, 1.39 mmol)의 용액을 용액 A로서 제조하였다. THF (4 ml) 중 (2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5-디옥소피롤-1-일)에톡시]프로파노일아미노]-3-메틸-부타노일]아미노]-N-[4-(히드록시메틸)페닐]-5-우레이도-펜탄아미드 (방법 A, 단계 1로부터임) (100 mg, 0.174 mmol)의 용액을 용액 B로서 제조하였다. 이어서 500 μl의 용액 A를 10분마다 용액 B에 첨가하였다. 반응 후, 샘플에 모르폴린을 첨가한 후 UPLC-MS를 수행하였다. 반응이 완결된 후, 혼합물을 감압 하에 실온에서 증발시키고, 직접 후속 단계에 사용하였다 (105 mg, 0.177 mmol). 1H NMR (400 MHz, dmso-d6) δ ppm 10.00 (s, 1H), 8.10 (d, 1H), 7.85 (d, 1H), 7.60 (d, 2H), 7.35 (d, 2H), 7.00 (s, 2H), 6.05 (m, 1H), 5.25 (m, 2H), 4.70 (s, 2H), 4.40 (m, 1H), 4.20 (m, 1H), 3.65-3.40 (m, 6H), 3.00 (2m, 2H), 2.4/2.3 (2m, 2H), 2.00 (m, 1H), 1.7/1.6 (2m, 2H), 1.40 (2m, 2H), 0.80 (2d, 6H). IR: (ν cm-1) 3288, 1703, 1643. HR-ESI +: [M+H]+ = 실측치 593.2499 (δ = 2.4 ppm).
단계 2: 6-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-3-[1-[[(5RS,7SR)-3-[2-[4-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5-디옥소피롤-1-일)에톡시]프로파노일아미노]-3-메틸-부타노일]아미노]-5-우레이도-펜타노일]아미노]페닐]메틸]-4-메틸-피페라진-4-윰-1-일]에톡시]-5,7-디메틸-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실산;2,2,2-트리플루오로아세트산
DMF (0.5 mL) 중 P20 (15 mg, 14.4 μmol)의 용액에 단계 1로부터의 생성물 (14.6 mg, 17.2 μmol) 및 DIPEA (8 μL, 43.1 μmol)의 용액을 첨가하였다. 반응물을 80℃에서 18시간 동안 교반하였다. 조 생성물을 칼럼 상의 반응 혼합물의 직접 침착에 의해 C18 역상 정제용 HPLC를 사용하고 TFA 방법을 사용하여 정제하여 표제 화합물 (19.0 mg, 수율 96%)을 수득하였다. HRMS (ESI) [M]+ 실측치 = 1373.6974 (δ = -0.1 ppm).
L9A-P21의 제조: 6-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-3-[1-[[(5RS,7SR)-3-[2-[1-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5-디옥소피롤-1-일)에톡시]프로파노일아미노]-3-메틸-부타노일]아미노]-5-우레이도-펜타노일]아미노]페닐]메틸]피롤리딘-1-윰-1-일]에톡시]-5,7-디메틸-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실산;2,2,2-트리플루오로아세트산
방법 D 및 적절한 페이로드로서의 P21을 사용하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS (ESI) [M]+ 실측치 = 1344.6688 (δ = -1.7 ppm).
L9A-P2의 제조: 2-[[6-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-5-메틸-피리다진-3-일]-메틸-아미노]-5-[3-[4-[3-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5-디옥소피롤-1-일)에톡시]프로파노일아미노]-3-메틸-부타노일]아미노]-5-우레이도-펜타노일]아미노]페닐]메틸-디메틸-암모니오]프로프-1-이닐]-2-플루오로-페녹시]프로필]티아졸-4-카르복실레이트;2,2,2-트리플루오로아세트산
방법 A 및 적절한 페이로드로서의 P2를 사용하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS (ESI) [M+H]+=1188.4561 (δ=0.6 ppm).
L9A-P1의 제조: 3-[4-[3-[2-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-4-카르복시-티아졸-5-일]프로폭시]-3-플루오로-페닐]프로프-2-이닐-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5-디옥소피롤-1-일)에톡시]프로파노일아미노]-3-메틸-부타노일]아미노]-5-우레이도-펜타노일]아미노]페닐]메틸]-디메틸-암모늄;2,2,2-트리플루오로아세트산
방법 A 및 적절한 페이로드로서의 P1을 사용하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS (ESI) [M+H]+=1232.4802 (δ = -1.1 ppm).
L9A-P10의 제조: 2-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-5-[3-[4-[3-[4-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5-디옥소피롤-1-일)에톡시]프로파노일아미노]-3-메틸-부타노일]아미노]-5-우레이도-펜타노일]아미노]페닐]메틸]-4-메틸-피페라진-4-윰-1-일]프로프-1-이닐]-2-플루오로-페녹시]프로필]티아졸-4-카르복실레이트;2,2,2-트리플루오로아세트산
방법 A 및 적절한 페이로드로서의 P10을 사용하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS (ESI) [M+H]+ 실측치 = 1269.5176 (δ = 3.4 ppm).
L9A-P9의 제조: 2-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-5-[3-[4-[3-[1-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5-디옥소피롤-1-일)에톡시]프로파노일아미노]-3-메틸-부타노일]아미노]-5-우레이도-펜타노일]아미노]페닐]메틸]피롤리딘-1-윰-1-일]프로프-1-이닐]-2-플루오로-페녹시]프로필]티아졸-4-카르복실레이트;2,2,2-트리플루오로아세트산
방법 A 및 적절한 페이로드로서의 P9를 사용하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS (ESI) [M+H]+ 실측치 = 1240.4887 (δ =1.6 ppm).
L9A-P15의 제조: 2-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-5-[3-[4-[3-[1-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5-디옥소피롤-1-일)에톡시]프로파노일아미노]-3-메틸-부타노일]아미노]-5-우레이도-펜타노일]아미노]페닐]메틸]-4,4-디플루오로-피페리딘-1-윰-1-일]프로프-1-이닐]-2-플루오로-페녹시]프로필]티아졸-4-카르복실레이트;2,2,2-트리플루오로아세트산
방법 A 및 적절한 페이로드로서의 P15를 사용하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS (ESI) [M+H]+ 실측치 = 1290.4831 (δ = -0.3 ppm).
L9A-P18의 제조: 2-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-5-[3-[4-[3-[1-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5-디옥소피롤-1-일)에톡시]프로파노일아미노]-3-메틸-부타노일]아미노]-5-우레이도-펜타노일]아미노]페닐]메틸]피페리딘-1-윰-1-일]프로프-1-이닐]-2-플루오로-페녹시]프로필]티아졸-4-카르복실레이트; 2,2,2-트리플루오로아세트산
방법 A 및 적절한 페이로드로서의 P18을 사용하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS (ESI) [M+H]+ 실측치 = 1254.4990 (δ = -1.8 ppm).
L9A-P28의 제조: 3-[4-[3-[2-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-4-카르복시-티아졸-5-일]프로폭시]페닐]프로프-2-이닐-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5-디옥소피롤-1-일)에톡시]프로파노일아미노]-3-메틸-부타노일]아미노]-5-우레이도-펜타노일]아미노]페닐]메틸]-디메틸-암모늄; 2,2,2-트리플루오로아세트산
방법 A 및 적절한 페이로드로서의 P28을 사용하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS (ESI) [M-CF3CO2]+=1196.4827 (δ =1.9 ppm).
L9C-P16의 제조: 2-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-6-[2-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5-디옥소피롤-1-일)에톡시]프로파노일아미노]-3-메틸-부타노일]아미노]-5-우레이도-펜타노일]아미노]페닐]메톡시카르보닐-메틸-아미노]에톡시]-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-5-[3-[4-[3-(디메틸아미노)프로프-1-이닐]-2-플루오로-페녹시]프로필]티아졸-4-카르복실산
방법 C 및 적절한 페이로드로서의 P16을 사용하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS (ESI) [M+H]+ 실측치 = 1331.5131 (δ = -0.4 ppm).
L9C-P12의 제조: 2-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-5-[3-[4-[3-[2-(디메틸아미노)에틸-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5-디옥소피롤-1-일)에톡시]프로파노일아미노]-3-메틸-부타노일]아미노]-5-우레이도-펜타노일]아미노]페닐]메톡시카르보닐]아미노]프로프-1-이닐]-2-플루오로-페녹시]프로필]티아졸-4-카르복실산
방법 C 및 적절한 페이로드로서의 P12를 사용하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS (ESI) [M+H]+ 실측치 = 1301.5034 (δ = -0.3 ppm).
L9C-P44의 제조: 2-[[6-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-5-메틸-피리다진-3-일]-(3,4-디히드록시부틸)아미노]-5-[3-[4-[3-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5-디옥소피롤-1-일)에톡시]프로파노일아미노]-3-메틸-부타노일]아미노]-5-우레이도-펜타노일]아미노]페닐]메톡시카르보닐-메틸-아미노]프로프-1-이닐]-2-플루오로-페녹시]프로필]티아졸-4-카르복실산
방법 C 및 적절한 페이로드로서의 P44를 사용하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS (ESI) [M+H]+ 실측치 = 1262.4527 (δ =-0.1 ppm).
L9C-P45의 제조: 2-[[6-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-5-메틸-피리다진-3-일]-(3-히드록시프로필)아미노]-5-[3-[4-[3-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5-디옥소피롤-1-일)에톡시]프로파노일아미노]-3-메틸-부타노일]아미노]-5-우레이도-펜타노일]아미노]페닐]메톡시카르보닐-메틸-아미노]프로프-1-이닐]-2-플루오로-페녹시]프로필]티아졸-4-카르복실산
방법 C 및 적절한 페이로드로서의 P45를 사용하여, NH4HCO3 방법 (정제용 HPLC, 일반적 절차)에 기초한 정제 단계 후에 목적 생성물을 수득하였다. HRMS (ESI) [M+H]+ 실측치 = 1262.4527 (δ = 0.4 ppm).
L9C-P46의 제조: 2-[[6-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-5-메틸-피리다진-3-일]-(4,5-디히드록시펜틸)아미노]-5-[3-[4-[3-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5-디옥소피롤-1-일)에톡시]프로파노일아미노]-3-메틸-부타노일]아미노]-5-우레이도-펜타노일]아미노]페닐]메톡시카르보닐-메틸-아미노]프로프-1-이닐]-2-플루오로-페녹시]프로필]티아졸-4-카르복실산
방법 C 및 적절한 페이로드로서의 P46을 사용하여, NH4HCO3 방법 (정제용 HPLC, 일반적 절차)에 기초한 정제 단계 후에 목적 생성물을 수득하였다. HRMS (ESI) [M+H]+ = 1324.4903 (δ =-1.7 ppm).
L9C-P17의 제조: 2-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-5-[3-[4-[3-[4-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5-디옥소피롤-1-일)에톡시]프로파노일아미노]-3-메틸-부타노일]아미노]-5-우레이도-펜타노일]아미노]페닐]메톡시카르보닐]피페라진-1-일]프로프-1-이닐]-2-플루오로-페녹시]프로필]티아졸-4-카르복실산
방법 C 및 적절한 페이로드로서의 P17을 사용하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS (ESI) [M+H]+ 실측치 = 1299.4880 (δ =0.5 ppm).
L9A-P11의 제조: [3-[4-[3-[2-[[6-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-5-메틸-피리다진-3-일]-메틸-아미노]-4-카르복시-티아졸-5-일]프로폭시]-3-플루오로-페닐]-1-메틸-프로프-2-이닐]-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5-디옥소피롤-1-일)에톡시]프로파노일아미노]-3-메틸-부타노일]아미노]-5-우레이도-펜타노일]아미노]페닐]메틸]-디메틸-암모늄;2,2,2-트리플루오로아세트산
방법 A 및 적절한 페이로드로서의 P11을 사용하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS (ESI) [M+H]+ 실측치 = 1202.4722 (δ = 0.5 ppm).
L9A-P8의 제조: 2-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-5-[3-[4-[3-[4-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5-디옥소피롤-1-일)에톡시]프로파노일아미노]-3-메틸-부타노일]아미노]-5-우레이도-펜타노일]아미노]페닐]메틸]-4-메틸-피페라진-4-윰-1-일]부트-1-이닐]-2-플루오로-페녹시]프로필]티아졸-4-카르복실산;2,2,2-트리플루오로아세트산
방법 D 및 적절한 페이로드로서의 P8을 사용하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS (ESI) [M+H]+ 실측치 = 1 284.5343 (δ = -1.9 ppm).
L9A-P14의 제조: 2-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-5-[3-[4-[3-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5-디옥소피롤-1-일)에톡시]프로파노일아미노]-3-메틸-부타노일]아미노]-5-우레이도-펜타노일]아미노]페닐]메틸-디에틸-암모니오]프로프-1-이닐]-2-플루오로-페녹시]프로필]티아졸-4-카르복실레이트
방법 D 및 적절한 페이로드로서의 P14를 사용하여, NH4HCO3 방법 (정제용 HPLC, 일반적 절차)에 기초한 정제 단계 후에 목적 생성물을 수득하였다. HRMS (ESI) [M+H]+ 실측치 = 1242.5021 (δ = -0.2ppm).
L9A-P13의 제조: 2-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-5-[3-[4-[3-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5-디옥소피롤-1-일)에톡시]프로파노일아미노]-3-메틸-부타노일]아미노]-5-우레이도-펜타노일]아미노]페닐]메틸-에틸-메틸-암모니오]프로프-1-이닐]-2-플루오로-페녹시]프로필]티아졸-4-카르복실레이트
방법 D 및 적절한 페이로드로서의 P13을 사용하여, NH4HCO3 방법 (정제용 HPLC, 일반적 절차)에 기초한 정제 단계 후에 목적 생성물을 수득하였다. HRMS (ESI) [M+H]+ 실측치 = 1228.4855 (δ = -1.0 ppm).
L9A-P34의 제조: 3-[4-[3-[2-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-4-카르복시-티아졸-5-일]프로폭시]-3-플루오로-페닐]프로프-2-이닐-[(3S)-3,4-디히드록시부틸]-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5-디옥소피롤-1-일)에톡시]프로파노일아미노]-3-메틸-부타노일]아미노]-5-우레이도-펜타노일]아미노]페닐]메틸]-메틸-암모늄;2,2,2-트리플루오로아세트산
방법 D 및 적절한 페이로드로서의 P34를 사용하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS (ESI) [M-CF3CO2]+ 실측치 = 1288.5086 (δ = 0.6 ppm).
방법 F
L13A-P2의 제조: [4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-(2-아지도에톡시)에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로파노일아미노]-3-메틸-부타노일]아미노]프로파노일]아미노]페닐]메틸-[3-[4-[3-[2-[[6-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-5-메틸-피리다진-3-일]-메틸-아미노]-4-카르복시-티아졸-5-일]프로폭시]-3-플루오로-페닐]프로프-2-이닐]-디메틸-암모늄;2,2,2-트리플루오로아세테이트
Figure pct00700
단계 1: (2S)-2-[3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-(2-아지도에톡시)에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로파노일아미노]-N-[(1S)-2-[4-(히드록시메틸)아닐리노]-1-메틸-2-옥소-에틸]-3-메틸-부탄아미드
DMF (10 mL) 중 (2S)-2-아미노-N-[(1S)-2-[4-(히드록시메틸)아닐리노]-1-메틸-2-옥소-에틸]-3-메틸-부탄아미드 (900 mg, 3.07 μmol)의 현탁액에 DMF (10 mL) 중 3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-(2-아지도에톡시)에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로판산 (2.00 g, 3.07 mmol)의 용액, 분말로서의 EDC (650 mg, 3.38 mmol) 및 DIPEA (1.00 mL, 6.14 mmol)를 연속적으로 첨가하였다. 반응물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 조 생성물을 엑스브리지® 칼럼 상의 반응 혼합물의 직접 침착에 의해 C18 역상 정제용 HPLC를 사용하고 NH4HCO3 방법을 사용하여 정제하여 목적 생성물 (1.64 g, 1.78 mmol)을 수득하였다. IR: (ν cm-1) 3600-3200, 3287, 2106, 1668, 1630, 1100. 1H NMR (400 MHz, dmso-d6) δ ppm 9.82 (m, 1H), 8.14 (d, 1H), 7.87 (d, 1H), 7.54 (d, 2H), 7.23 (d, 2H), 5.08 (t, 1H), 4.43 (d, 2H), 4.39 (m, 1H), 4.20 (m, 1H), 3.65-3.44 (m, 48H), 3.39 (t, 2H), 2.5-2.3 (m, 2H), 1.97 (m, 1H), 1.31 (d, 3H), 0.87/0.84 (2d, 6H). HRMS (ESI) [M+H]+ 실측치: 919.5234 (δ = 3.4 ppm).
단계 2: (2S)-2-[3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-(2-아지도에톡시)에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로파노일아미노]-N-[(1S)-2-[4-(브로모메틸)아닐리노]-1-메틸-2-옥소-에틸]-3-메틸-부탄아미드
THF (5 mL) 중 단계 1로부터의 생성물 (72 mg, 7.83 μmol)의 용액에 0℃에서 THF 중 PBr3의 1M 용액 (157 μL, 157 μmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 및 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 AcOEt (5 mL)로 희석하고, NaHCO3의 포화 수용액 (0.5 mL)으로 처리하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 후속 단계에 추가 처리 없이 사용하였다. IR: (ν cm-1) 3700-3100, 1658, 2106. HRMS (ESI) [M+H]+ 실측치: 981.4390 (δ = 1.3 ppm).
단계 3: [4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-(2-아지도에톡시)에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로파노일아미노]-3-메틸-부타노일]아미노]프로파노일]아미노]페닐]메틸-[3-[4-[3-[2-[[6-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-5-메틸-피리다진-3-일]-메틸-아미노]-4-카르복시-티아졸-5-일]프로폭시]-3-플루오로-페닐]프로프-2-이닐]-디메틸-암모늄; 2,2,2-트리플루오로아세테이트
DMF (2 mL) 중 단계 2로부터의 생성물 (21 mg, 2.09 μmol)의 용액에 분말로서의 2-[[6-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-5-메틸-피리다진-3-일]-메틸-아미노]-5-[3-[4-[3-(디메틸아미노)프로프-1-이닐]-2-플루오로-페녹시]프로필]티아졸-4-카르복실산 (P2)(11.0 mg, 1.74 μmol) 및 DIPEA (8.6 μL, 5.22 μmol)를 연속적으로 첨가하였다. 반응물을 실온에서 8시간 동안 교반하였다. 조 생성물을 엑스브리지® 칼럼 상의 반응 혼합물의 직접 침착에 의해 C18 역상 정제용 HPLC를 사용하고 TFA 방법을 사용하여 정제하여 목적 생성물 (15 mg, 0.91 mmol)을 수득하였다. IR: (ν cm-1) 3400-3150, 2235, 2105, 1667. 1H NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 7.90 (dl, 1H), 7.76 (d, 2H), 7.68 (s, 1H), 7.58 (dd, 1H), 7.51 (m, 1H), 7.51 (d, 2H), 7.41 (m, 1H), 7.38 (t, 1H), 7.25 (m, 1H), 7.20 (t, 1H), 4.55 (s, 2H), 4.42 (s, 2H), 4.39 (m, 1H), 4.21 (m, 1H), 4.19 (t, 2H), 3.77 (s, 3H), 3.60 (m, 4H), 3.54/3.50 (m+m, 44H), 3.38 (t, 2H), 3.29 (m, 2H), 3.05 (s, 6H), 2.47 (s, 3H), 2.46/2.38 (m+m, 1+1H), 2.16 (quint, 2H), 1.96 (m, 1H), 1.32 (d, 3H), 0.88/0.84 (d+d, 3+3H). 13C NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 133.9, 129.7, 126.4, 122.6, 122.1, 120.0, 119.3, 118.1, 115.3, 70.5/70.1, 70.1/67.5, 68.7, 66.2, 57.8, 53.7, 50.6, 49.7, 49.5, 36.4, 35.3, 31.0, 30.9, 23.3, 19.5/18.6, 18.4, 17.7. 19F NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm -133.8. HRMS (ESI) [M+H]+ 실측치: 1532.6964 (δ = 0.6 ppm).
방법 G
L19C-P7의 제조: 5-[3-[4-[3-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[2-[2-(2-아지도에톡시)에톡시]에톡시]아세틸]아미노]-3-메틸-부타노일]아미노]프로파노일]아미노]페닐]메톡시카르보닐-메틸-아미노]프로프-1-이닐]-2-플루오로-페녹시]프로필]-2-[[6-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-5-메틸-피리다진-3-일]-메틸-아미노]티아졸-4-카르복실산
Figure pct00701
단계 1: [4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-(9H-플루오렌-9-일메톡시카르보닐아미노)-3-메틸-부타노일]아미노]프로파노일]아미노]페닐]메틸 (4-니트로페닐) 카르보네이트
THF (20 mL) 및 DCM (10 mL) 중 9H-플루오렌-9-일메틸 N-[(1S)-1-[[(1S)-2-[4-(히드록시메틸)아닐리노]-1-메틸-2-옥소-에틸]카르바모일]-2-메틸-프로필]카르바메이트 (5.0 g, 9.7 mmol)의 용액에 파라니트로페닐 클로로카르보네이트 (4.1 g, 20.1 mmol) 및 피리딘 (1.65 mL, 20.4 mmol)을 연속적으로 첨가하였다. 반응물을 실온에서 15시간 동안 교반하였다. 시트르산의 10% 수용액을 첨가하고, 반응 혼합물을 AcOEt로 2회 추출하였다. 유기 층을 염수로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시켰다. 진공 하에 증발시킨 후, 고체를 최소량의 AcOEt 중에 용해시키고, 에테르를 첨가하여 목적 화합물 (5.6 g, 8.22 mmol)을 침전시켰다. IR: (ν cm-1) 3350-3200, 1760;1690;1670;1630, 1523;1290. 1H NMR (400 MHz, dmso-d6) δ ppm 10.07 (m, 1 H), 8.31 (d, 2 H), 8.19 (d, 1 H), 7.89 (d, 2 H), 7.74 (t, 2 H), 7.64 (d, 2 H), 7.57 (d, 2 H), 7.41 (m, 2 H), 7.41 (d, 2 H), 7.4 (m, 1 H), 7.32 (t, 2 H), 5.24 (s, 2 H), 4.43 (m, 1 H), 4.36-4.19 (m, 3 H), 3.92 (dd, 1 H), 2 (m, 1 H), 1.32 (d, 3 H), 0.9/0.87 (2d, 6 H).
단계 2: 2-[[6-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-5-메틸-피리다진-3-일]-메틸-아미노]-5-[3-[4-[3-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-(9H-플루오렌-9-일메톡시카르보닐아미노)-3-메틸-부타노일]아미노]프로파노일]아미노]페닐]메톡시카르보닐-메틸-아미노]프로프-1-이닐]-2-플루오로-페녹시]프로필]티아졸-4-카르복실산
DMF (10 mL) 중 2-[[6-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-5-메틸-피리다진-3-일]-메틸-아미노]-5-[3-[2-플루오로-4-[3-(메틸아미노)프로프-1-이닐]페녹시]프로필]티아졸-4-카르복실산 (P7)(366.0 mg, 559 mmol)의 용액에 단계 1로부터의 생성물 (378 mg, 556 mmol) 및 DIPEA (368 μL, 2.22 mmol)를 연속적으로 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반한 다음, 증발 건조시켰다. 조 생성물을 실리카 겔 크로마토그래피 (DCM 중 메탄올의 구배)에 의해 정제하여 목적 화합물 (15.6 mg, 9.64 μmol)을 수득하였다.
단계 3: 5-[3-[4-[3-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-아미노-3-메틸-부타노일]아미노]프로파노일]아미노]페닐]메톡시카르보닐-메틸-아미노]프로프-1-이닐]-2-플루오로-페녹시]프로필]-2-[[6-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-5-메틸-피리다진-3-일]-메틸-아미노]티아졸-4-카르복실산
DMF (4 mL) 중 단계 2로부터의 생성물 (424 mg, 366 mmol)의 용액에 피페리딘 (90 μL, 914 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 증발 건조시킨 후, 조 생성물을 실리카 겔 크로마토그래피 (DCM 중 2% NH4OH를 함유하는 메탄올의 구배)에 의해 정제하여 목적 화합물을 수득하였다. IR: (ν cm-1) 3270, 3100-2400, 1680, 1520. 1H NMR (400 MHz, dmso-d6) δ ppm 10.58/10.2 (2*s, 1 H), 8.55/8.28 (2*s, 1 H), 7.9 (d, 1 H), 7.65 (s, 1 H), 7.62 (d, 2 H), 7.52 (d, 1 H), 7.39 (m, 1 H), 7.35-7 (질량비, 3 H), 7.32 (d, 2 H), 7.2 (m, 1 H), 5.05 (s, 2 H), 4.48 (m, 1 H), 4.26 (s, 2 H), 4.15 (t, 2 H), 3.71 (s, 3 H), 3.3 (t, 2 H), 3.03 (d, 1 H), 2.9 (s, 3 H), 2.45 (s, 3 H), 2.11 (quint, 2 H), 1.91 (m, 1 H), 1.4-0.7 (br s, 2 H), 1.32 (d, 3 H), 0.88/0.78 (2*d, 6 H). 19F NMR (400 MHz, dmso-d6) δ ppm -134.
단계 4: 5-[3-[4-[3-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[2-[2-(2-아지도에톡시)에톡시]에톡시]아세틸]아미노]-3-메틸-부타노일]아미노]프로파노일]아미노]페닐]메톡시카르보닐-메틸-아미노]프로프-1-이닐]-2-플루오로-페녹시]프로필]-2-[[6-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-5-메틸-피리다진-3-일]-메틸-아미노]티아졸-4-카르복실산
DMF (1 mL) 중 2-[2-[2-(2-아지도에톡시)에톡시]에톡시]아세트산 (58 mg, 249 μmol)의 용액에 TSTU (77 mg, 255 μmol) 및 DIPEA (190 μL, 1.12 mmol)를 연속적으로 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. DMF (1.5 mL) 중 단계 3으로부터의 생성물 (84 mg, 89.6 mmol)을 첨가한 후, 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 조 생성물을 엑스브리지® 칼럼 상의 반응 혼합물의 직접 침착에 의해 C18 역상 정제용 HPLC를 사용하고 NH4HCO3를 사용하여 정제하여 목적 화합물 (64 mg, 55.5 mmol)을 수득하였다. IR: (ν cm-1) 3700-2700, 2104, 1693/1656, 1227/1127. 1H NMR (400 MHz, dmso-d6) δ ppm 9.76 (s, 1H), 8.16 (dl, 1H), 7.83 (d, 1H), 7.62 (s, 1H), 7.56 (d, 2H), 7.51 (d, 1H), 7.36 (d, 1H), 7.35 (t, 1H), 7.29 (d, 2H), 7.24-7.08 (m, 3H), 7.18 (t, 1H), 5.04 (s, 2H), 4.44 (hept, 1H), 4.28 (dd, 1H), 4.26 (s, 2H), 4.16 (t, 2H), 3.94 (s, 2H), 3.75 (s, 3H), 3.58 (m, 10H), 3.35 (t, 2H), 3.27 (t, 2H), 2.91 (s, 3H), 2.45 (s, 3H), 2.13 (quint, 2H), 2.05 (m, 1H), 1.32 (d, 3H), 0.89/0.84 (2d, 6H). 19F NMR (400 MHz, dmso-d6) δ ppm -133.9. HRMS ESI [M+H]+ 실측치 1152.4207 (δ = 1.5 ppm).
L23C-P7의 제조: 5-[3-[4-[3-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[2-[2-(2-아지도에톡시)에톡시]에톡시]아세틸]아미노]-3-메틸-부타노일]아미노]-5-우레이도-펜타노일]아미노]페닐]메톡시카르보닐-메틸-아미노]프로프-1-이닐]-2-플루오로-페녹시]프로필]-2-[[6-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-5-메틸-피리다진-3-일]-메틸-아미노]티아졸-4-카르복실산
생성물을 방법 G에 따라 9H-플루오렌-9-일메틸 N-[(1S)-1-[[(1S)-2-[4-(히드록시메틸)아닐리노]-1-메틸-2-옥소-에틸]카르바모일]-2-메틸-프로필]카르바메이트를 9H-플루오렌-9-일메틸 N-[(1S)-1-[[(1S)-1-[[4-(히드록시메틸)페닐]카르바모일]-4-우레이도-부틸]카르바모일]-2-메틸-프로필]카르바메이트로 대체하여 수득하였다. IR: (ν cm-1) 3687-3060, 2104, 매우 넓음 - 1656, 1606, 1515, 754 및 725. 1H NMR (400 MHz, dmso-d6) δ ppm 7.90 (d, 1 H), 7.70 (br s, 1 H), 7.60 (d, 2 H), 7.50 (m, 2 H), 7.40 (t, 1 H), 7.30 (d+m, 3 H), 7.20 (t, 1 H), 7.15 (dd, 1 H), 5.45 (m, 2 H), 4.40 (m, 1 H), 4.30 (m, 1 H), 4.25 (s, 2 H), 4.15 (t, 2 H), 3.95 (s, 2 H), 3.80 (s, 3 H), 3.60/3.30 (2m, 12 H), 3.30 (m, 2 H), 3.00 (2m, 2 H), 2.90 (s, 3 H), 2.45 (s, 3 H), 2.15 (quint, 2 H), 2.00 (m, 1 H), 1.70/1.60 (2m, 2 H), 1.45/1.4 (2m, 2 H), 0.90/0.80 (2d, 6 H). 19F NMR (400 MHz, dmso-d6) δ ppm -134.2. HRMS ESI [M+H]+ 실측치 1238.4675 (δ = 0.4 ppm).
L110C-P7의 제조: 5-[3-[4-[3-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-(2-아지도에톡시)에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로파노일아미노]-3-메틸-부타노일]아미노]-5-우레이도-펜타노일]아미노]페닐]메톡시카르보닐-메틸-아미노]프로프-1-이닐]-2-플루오로-페녹시]프로필]-2-[[6-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-5-메틸-피리다진-3-일]-메틸-아미노]티아졸-4-카르복실산
생성물을 방법 G에 따라 9H-플루오렌-9-일메틸 N-[(1S)-1-[[(1S)-2-[4-(히드록시메틸)아닐리노]-1-메틸-2-옥소-에틸]카르바모일]-2-메틸-프로필]카르바메이트를 9H-플루오렌-9-일메틸 N-[(1S)-1-[[(1S)-1-[[4-(히드록시메틸)페닐]카르바모일]-4-우레이도-부틸]카르바모일]-2-메틸-프로필]카르바메이트로 대체하고 2-[2-[2-(2-아지도에톡시)에톡시]에톡시]아세트산을 3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-(2-아지도에톡시)에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로판산으로 대체하여 수득하였다.
IR: (ν cm-1) 3560-3063, 2100, 매우 넓음 - 1651, 1608, 1514, 756 및 725. 1H NMR (400 MHz, dmso-d6) δ ppm 7.9 (d, 1 H), 7.7 (br s, 1 H), 7.6 (d, 2 H), 7.5 (m, 1 H), 7.4 (t, 1 H), 7.4-7.1 (m, 3 H), 7.3 (d, 2 H), 7.2 (t, 1 H), 5.4 (m, 2 H), 4.4 (m, 1 H), 4.3 (s, 2 H), 4.25 (m, 1 H), 4.15 (t, 2 H), 3.8 (s, 3 H), 3.65-3.4 (m, 50 H), 3.3 (m, 2 H), 3 (2m, 2 H), 2.9 (s, 3 H), 2.45 (s, 3 H), 2.4 (m, 2 H), 2.1 (quint, 2 H), 2 (m, 1 H), 1.7/1.6 (2m, 2 H), 1.4 (2m, 2 H), 0.85 (2d, 6 H). 19F NMR (400 MHz, dmso-d6) δ ppm -134.4. HRMS (ESI) [M+H]+ 실측치 1648.7209 (δ = 1.4 ppm).
방법 H
L27C-P3의 제조: 2-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-5-[3-[4-[3-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5-디옥소피롤-1-일)에톡시]프로파노일아미노]-3-메틸-부탄이미도일]아미노]-5-우레이도-펜타노일]아미노]-2-술포-페닐]메톡시카르보닐-메틸-아미노]프로프-1-이닐]-2-플루오로-페녹시]프로필]티아졸-4-카르복실산
Figure pct00702
Figure pct00703
단계 1: 소듐;2-(히드록시메틸)-5-니트로-벤젠술포네이트
물 (336 mL) 중 소듐 5-니트로-2-[(E)-2-(4-니트로-2-술포-페닐)비닐]벤젠술포네이트 (25.0 g; 52.7 mmol)의 용액에 1.5시간 동안 오존의 스트림을 도입하였다. 반응이 완결된 후, 혼합물을 아르곤으로 30분 동안 퍼징하여 과량의 오존을 제거하였다. 이어서 탄산나트륨 (39.1 g; 7 당량) 및 수소화붕소나트륨 (3.99 g; 2 당량)을 첨가하고, 오렌지색 용액을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시켜 목적 화합물 (39.9 g; sup 100%)을 고체 (잔류 미량의 보어 염 함유)로서 수득하였다. 1H NMR (dmso): δ 4.99 (d, 2H, J = 3.6 Hz), 5.36 (t, 1H, J = 5.6 Hz), 7.83 (d, 1H, J = 8.4 Hz), 8.21 (d, 1H, J = 8.4 Hz), 8.45 (s, 1H).
단계 2: 소듐;5-아미노-2-(히드록시메틸)벤젠술포네이트
소듐 2-(히드록시메틸)-5-니트로-벤젠술포네이트 (26.9 g; 105 mmol)를 물 (403 mL) 중에 가용화시켰다. 이어서 반응 혼합물을 아르곤으로 플러싱하였다. 탄소 상 팔라듐 10% (2.65 g, 10 중량%)를 첨가한 다음, 흑색 현탁액을 아르곤에 이어서 수소로 플러싱하였다. 반응 혼합물을 수소 분위기 하에 실온에서 3.5일 동안 교반하였다. 셀라이트® 상에서 여과하고 물 및 메탄올로 세척한 후, 여과물을 농축 건조시키고, 톨루엔과 3회 공증발시켰다. 용리액으로서 에틸 아세테이트/메탄올 (90/10 → 70/30)을 사용하여 실리카 겔 상에서 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 목적 화합물 (14.29 g; 60%)을 수득하였다. 1H NMR (dmso): δ 4.52 (d, 2H, J = 5.2 Hz), 4.95 (t, 1H, J = 5.2 Hz), 5.04 (s, 2H), 6.42 (d, 1H, J = 7.6 Hz), 6.93 (d, 1H, J = 7.6 Hz), 7.03 (s, 1H).
단계 3: 소듐;5-[[(2S)-2-(9H-플루오렌-9-일메톡시카르보닐아미노)-5-우레이도-펜타노일]아미노]-2-(히드록시메틸)벤젠술포네이트
디메틸포름아미드 (32.5 mL) 중 Fmoc-L-Cit-OH (882 mg; 2.22 mmol)의 용액에 단계 2로부터의 생성물 (500 mg; 2.22 mmol), HBTU (1.01 g; 2.66 mmol) 및 DIPEA (917 μL; 5.55 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반한 다음, 농축 건조시키고, 물 (2 x 100 mL)과 공증발시켰다. 조 물질을 C18 상에서 칼럼 크로마토그래피에 의해 용리액으로서 아세토니트릴/물 2/8 → 8/2를 사용하여 정제하여 목적 화합물 (1.0 g; 63%)을 수득하였다. 1H NMR (dmso): δ 1.25-1.28 (m, 15H, DIPEA),1.36-1.72 (m, 4H), 2.92-3.03 (m, 2H), 3.11-3.18 (m, 2H, DIPEA), 3.5-3.65 (m, 2H, DIPEA), 4.30-4.12 (m, 4H), 4.74 (d, 2H, J = 4.4 Hz), 5.05 (t, 1H, J = 5.6 Hz), 5.37 (s, 2H), 5.97 (t, 1H, J = 4.8 Hz), 7.34-7.42 (m, 4H), 7.62-7.90 (m, 7H), 8.15 (s, 1H), 10.05 (s, 1H).
단계 4: 소듐;5-[[(2S)-2-아미노-5-우레이도-펜타노일]아미노]-2-(히드록시메틸)벤젠술포네이트
DMF (224 mL) 중 단계 3으로부터의 생성물 (11.2 g; 15.73 mmol)의 용액에 피페리딘 (3.1 mL; 2 당량)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반한 다음, 물 (400 mL)을 첨가하였다. 수성 층을 에틸 아세테이트 (2 x 300 mL) 및 디클로로메탄 (300 mL)으로 추출하였다. 탄산나트륨 (5.01 g;3 당량)을 수성 층에 첨가하고, 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 혼합물을 동결건조시켜 목적 화합물 (6.01 g; 100%로 추정됨)을 나트륨 염에 의해 오염된 고체로서 수득하였다. 1H NMR (dmso): δ 1.55-1.64 (m, 4H), 2.99-3.01 (m, 2H), 3.58 (m, 1H), 4.75 (s, 2H), 5.06 (s, 1H), 5.38 (s, 2H), 5.98 (t, 1H, J = 5.6 Hz), 7.38 (d, 1H, J = 8.4 Hz), 7.72 (dd, 1H, J = 8.4 & 2.4 Hz), 7.86 (d, 1H, J = 2.4 Hz,), 10.17 (s, 1H).
단계 5: 소듐;5-[[(2S)-2-[[(2S)-2-(9H-플루오렌-9-일메톡시카르보닐아미노)-3-메틸-부타노일]아미노]-5-우레이도-펜타노일]아미노]-2-(히드록시메틸)벤젠술포네이트
디메틸포름아미드 (150 mL) 중 단계 4로부터의 생성물 (6.01 g, 15.73 mmol)의 용액에 Fmoc-L-Val-OSu (6.85 g, 1 당량)를 첨가하였다. 용액을 실온에서 3시간 동안 교반한 다음, 반응 혼합물을 포화 탄산수소나트륨 (100 mL) 및 물 (100 mL)로 희석하고, 농축 건조시켰다. 잔류물을 실리카 겔에 의해 용리액으로서 에틸 아세테이트/메탄올 90/10 → 50/50을 사용하여 정제하여 목적 화합물 (4.44 g, 48%)을 수득하였다. 1H NMR (dmso): 0.85-0.90 (m, 6H), 1.31-1.76 (m, 4H), 1.95-2.06 (m, 1H), 2.91-3.05 (m, 2H), 3.95 (t, 1H, J = 8.4 Hz), 4.24-4.35 (m, 3H), 4.37-4.45 (m, 1H), 4.76 (d, 2H, J = 6 Hz), 5.07 (t, 1H, J = 6.4 Hz,), 5.40 (s, 2H), 6.03 (t, 1H, J = 5.6 Hz), 7.32-7.46 (m, 6H), 7.67 (d, 1H, J = 8 Hz), 7.76 (t, 2H, J = 7.2 Hz), 7.88-7.91 (m, 3H), 8.12 (d, 1H, J = 7.6 Hz), 10.08 (s, 1H). 13C NMR (dmso): 18.25, 19.24, 26.70, 29.56, 30.45, 39.50, 46.67, 53.17, 60.01, 60.96, 65.66, 117.85, 119.15, 120.05, 125.36, 127.06, 127.62, 128.09, 134.39, 136.79, 140.67, 143.89, 145.34, 156.08, 158.82, 170.37, 171.16. LCMS (2-100 ACN/H2O +0.1% AF): 93.85% 체류 시간 = 8.4분, 양성 모드: 682.15 검출 (MH+), 음성 모드: 680.17 검출 (MH-).
단계 6: 5-[[(2S)-2-[[(2S)-2-(9H-플루오렌-9-일메톡시카르보닐아미노)-3-메틸-부타노일]아미노]-5-우레이도-펜타노일]아미노]-2-[(4-니트로페녹시)카르보닐옥시메틸]벤젠술포네이트
DMF (6 mL) 중 단계 5로부터의 생성물 (450 mg, 0.64 mmol)의 용액에 DIPEA (1.34 mL, 7.67 mmol) 및 비스(4-니트로페닐)카르보네이트 (778 mg, 2.56 mmol)를 첨가하였다. 용액을 실온에서 2시간 동안 교반하고, 비스(4-니트로페닐)카르보네이트 (390 mg, 1.28 mmol)를 첨가하였다. 1시간 후, 용액을 감압 하에 농축시키고, 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (디클로로메탄 중 메탄올 및 아세트산의 구배)에 의해 정제하여 목적 화합물 (523 mg)을 수득하였다.
단계 7: 2-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-5-[3-[4-[3-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-(9H-플루오렌-9-일메톡시카르보닐아미노)-3-메틸-부탄이미도일]아미노]-5-우레이도-펜타노일]아미노]-2-술포-페닐]메톡시카르보닐-메틸-아미노]프로프-1-이닐]-2-플루오로-페녹시]프로필]티아졸-4-카르복실산
DMF (550 μL) 중 2-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-5-[3-[2-플루오로-4-[3-(메틸아미노)프로프-1-이닐]페녹시]프로필]티아졸-4-카르복실산 (P3)(70 mg, 109 μmol)의 용액에 DIPEA (0.19 mL, 1.39 mmol), 단계 6의 생성물 (111 mg, 131 μmol) 및 DIEPA (95 μL, 544 μmol)를 연속적으로 첨가하였다. 용액을 실온에서 15시간 동안 교반하고, 농축시켜 목적 화합물을 수득하였으며, 이를 임의의 추가 처리 없이 사용하였다.
단계 8: 5-[3-[4-[3-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-아미노-3-메틸-부탄이미도일]아미노]-5-우레이도-펜타노일]아미노]-2-술포-페닐]메톡시카르보닐-메틸-아미노]프로프-1-이닐]-2-플루오로-페녹시]프로필]-2-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]티아졸-4-카르복실산
디옥산 (1.1 mL) 중 단계 7로부터의 생성물 (147 mg, 109 μmol)의 용액에 물 (1.1 mL) 중 LiOHxH2O (13.7 mg, 326 μmol)의 용액을 첨가하였다. 용액을 실온에서 12시간 동안 교반하였다. HCl의 1 M 수용액을 pH 7이 될 때까지 첨가하였다. 반응 혼합물을 증발 건조시키고, 잔류물을 DCM으로 연화처리하였다. 침전물을 물 및 EtOH로 세척하여 목적 화합물 (120 mg)을 수득하였다.
단계 9: 2-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-5-[3-[4-[3-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5-디옥소피롤-1-일)에톡시]프로파노일아미노]-3-메틸-부탄이미도일]아미노]-5-우레이도-펜타노일]아미노]-2-술포-페닐]메톡시카르보닐-메틸-아미노]프로프-1-이닐]-2-플루오로-페녹시]프로필]티아졸-4-카르복실산
단계 8로부터의 생성물 (120 mg, 109 μL)의 용액에 (2,5-디옥소피롤리딘-1-일) 3-[2-(2,5-디옥소피롤-1-일)에톡시]프로파노에이트 (37.8 mg, 122 μmol) 및 DIPEA (38.5 μL, 221 μmol)를 연속적으로 첨가하였다. 용액을 실온에서 1.5시간 동안 교반하였다. 조 생성물을 엑스브리지® 칼럼 상의 반응 혼합물의 직접 침착에 의해 C18 역상 정제용 HPLC를 사용하고 TFA 방법을 사용하여 정제하여 목적 화합물 (9 mg)을 수득하였다. HRMS (ESI) [M+H]+ 1322.3831 (δ =-3.3 ppm).
방법 I
L27A-P1의 제조: 3-[4-[3-[2-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-4-카르복시-티아졸-5-일]프로폭시]-3-플루오로-페닐]프로프-2-이닐-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5-디옥소피롤-1-일)에톡시]프로파노일아미노]-3-메틸-부탄이미도일]아미노]-5-우레이도-펜타노일]아미노]-2-술포-페닐]메틸]-디메틸-암모늄;2,2,2-트리플루오로아세테이트
Figure pct00704
단계 1: 2-(클로로메틸)-5-[[(2S)-2-[[(2S)-2-(9H-플루오렌-9-일메톡시카르보닐아미노)-3-메틸-부타노일]아미노]-5-우레이도-펜타노일]아미노]벤젠술폰산
NMP (6 mL) 중 5-[[(2S)-2-[[(2S)-2-(9H-플루오렌-9-일메톡시카르보닐아미노)-3-메틸-부타노일]아미노]-5-우레이도-펜타노일]아미노]-2-(히드록시메틸)벤젠술포네이트 (300 mg, 426 μmol)의 용액에 NMP (1 mL) 중 SOCl2 (31 μL, 426 μmol)의 용액을 1시간에 걸쳐 7회 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 생성물을 오아시스 칼럼 상의 반응 혼합물의 직접 침착에 의해 C18 역상 정제용 HPLC를 사용하고 TFA 방법을 사용하여 정제하여 목적 생성물 (225mg)을 수득하였다. IR: (ν cm-1) 3600-2200, 1657, 1250-1100. 1H NMR (400 MHz, dmso-d6) δ ppm 10.15/8.1/7.42/6 (s +2d+m, 4 H), 7.9 (m, 3 H), 7.75 (m, 3 H), 7.42/7.31 (2m, 5 H), 5.23 (s, 2 H), 4.4 (m, 1 H), 4.3-4.2 (m, 3 H), 3.95 (dd, 1 H), 3 (m, 2 H), 2 (m, 1 H), 1.7/1.6 (2m, 2 H), 1.48/1.37 (2m, 2 H), 0.88 (2d, 6 H). HRMS (ESI) [M+H]+ 700.2199 (δ = -0.5 ppm).
단계 2: 3-[4-[3-[2-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-4-카르복시-티아졸-5-일]프로폭시]-3-플루오로-페닐]프로프-2-이닐-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-(9H-플루오렌-9-일메톡시카르보닐아미노)-3-메틸-부탄이미도일]아미노]-5-우레이도-펜타노일]아미노]-2-술포-페닐]메틸]-디메틸-암모늄;클로라이드
NMP (0.9 mL) 중 단계 1로부터의 생성물 (55.7 mg, 68.4 μmol)의 용액에 2-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-5-[3-[4-[3-(디메틸아미노)프로프-1-이닐]-2-플루오로-페녹시]프로필]티아졸-4-카르복실산 (P1)(30 mg, 45.6 μmol), DIEPA (63.6 μL, 365 μmol), 및 TBAI (13 mg, 36.5 μmol)를 연속적으로 첨가하였다. 반응 혼합물을 60℃에서 6시간 동안 교반하였다. 목적 화합물을 단계 3에서 용액으로서 직접 사용하였다.
단계 3: [4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-아미노-3-메틸-부타노일]아미노]-5-우레이도-펜타노일]아미노]-2-술포-페닐]메틸-[3-[4-[3-[2-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-4-카르복시-티아졸-5-일]프로폭시]-3-플루오로-페닐]프로프-2-이닐]-디메틸-암모늄
단계 2로부터의 생성물 (26.5 μmol)의 NMP 용액에 디에틸아민 (21.9 μL, 212 μmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 24시간 동안 교반하였다. 조 생성물을 오아시스 칼럼 상의 반응 혼합물의 직접 침착에 의해 C18 역상 정제용 HPLC를 사용하고 NH4HCO3 방법을 사용하여 정제하여 목적 생성물 (18 mg)을 수득하였다.
단계 4: 3-[4-[3-[2-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-4-카르복시-티아졸-5-일]프로폭시]-3-플루오로-페닐]프로프-2-이닐-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5-디옥소피롤-1-일)에톡시]프로파노일아미노]-3-메틸-부탄이미도일]아미노]-5-우레이도-펜타노일]아미노]-2-술포-페닐]메틸]-디메틸-암모늄;2,2,2-트리플루오로아세테이트
DMF (900 μL) 중 단계 3으로부터의 생성물 (20mg, 18.2 μmol)의 용액에 (2,5-디옥소피롤리딘-1-일) 3-[2-(2,5-디옥소피롤-1-일)에톡시]프로파노에이트 (8.5 mg, 27.3 μmol) 및 DIPEA (9.5 μL, 54.5 μmol)를 연속적으로 첨가하였다. 용액을 실온에서 1.5시간 동안 교반하였다. 조 생성물을 엑스브리지® 칼럼 상의 반응 혼합물의 직접 침착에 의해 C18 역상 정제용 HPLC를 사용하고 NH4HCO3방법을 사용하여 정제하여 표제 화합물 (15.7 mg)을 수득하였다. HRMS (ESI) [M+H]+ 1294.4278 δ = 1 ppm.
방법 J
L21A-P2의 제조: 3-[4-[3-[2-[[6-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-5-메틸-피리다진-3-일]-메틸-아미노]-4-카르복시-티아졸-5-일]프로폭시]-3-플루오로-페닐]프로프-2-이닐-[[2-[2-[(2S,3R,4R,5S,6S)-6-카르복시-3,4,5-트리히드록시-테트라히드로피란-2-일]에틸]-4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5-디옥소피롤-1-일)에톡시]프로파노일아미노]-3-메틸-부타노일]아미노]-5-우레이도-펜타노일]아미노]페닐]메틸]-디메틸-암모늄;2,2,2-트리플루오로아세테이트
Figure pct00705
Figure pct00706
단계 1: tert-부틸-[(2-아이오도-4-니트로-페닐)메톡시]-디메틸-실란
디클로로메탄 (300 mL) 중 (2-아이오도-4-니트로-페닐)메탄올 (172 g, 61.64 mmol)의 용액에 이미다졸 (5.04 g, 73.97 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 0℃로 냉각시킨 후, 디클로로메탄 (300 mL) 중 tert-부틸-클로로-디메틸-실란 (TBDMSCl)(11.15 g, 73.97 mmol)의 용액을 15분 내에 적가하였다. 실온에서 16시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 메탄올 (20 mL)로 켄칭하고, 농축 건조시켰다. 조 생성물을 실리카 겔 크로마토그래피 (시클로헥산 중 에틸 아세테이트의 구배)에 의해 정제하여 목적 생성물 (19.65 g)을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, dmso-d6): δ 8.57 (s, 1H), 8.31 (d, 1H), 7.66 (d, 1H), 4.67 (s, 2H), 0.92 (s, 9H), 0.14 (s, 6H).
단계 2: 메틸 (2S,3S,4R,5S,6S)-3,4,5-트리아세톡시-6-[2-[2-[[tert-부틸 (디메틸)실릴]옥시메틸]-5-니트로-페닐]에티닐]테트라히드로피란-2-카르복실레이트
DMF (55 mL) 중 단계 1로부터의 생성물 (3.0 g, 7.63 mmol)의 용액에 메틸 (2S,3S,4R,5S,6S)-3,4,5-트리아세톡시-6-에티닐-테트라히드로피란-2-카르복실레이트 (3.39 g, 9.92 mmol), DIPEA (5.80 mL, 35.09 mmol), 아이오딘화구리 (145 mg, 0.763 mmol) 및 디클로로-비스-(트리페닐포스핀)팔라듐 (II)(535 mg, 0.763 mmol)을 연속적으로 첨가하였다. 용액을 아르곤으로 플러싱하고, 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 물 (300 mL)로 희석한 후, 수성 층을 에틸 아세테이트 (2 x 300 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물 (2 x 300 mL)로 세척하고, 건조시키고, 여과하고, 농축 건조시켰다. 조 생성물을 실리카 겔 크로마토그래피 (시클로헥산 중 에틸 아세테이트의 구배)에 의해 정제하여 목적 생성물 (4.01 g)을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, dmso-d6): δ 8.32 (dd, 1H), 8.19 (d, 1H), 7.75 (d, 1H), 5.45 (t, 1H), 5.16 (t, 1H), 5.02-5.07 (m, 2H), 4.82 (s, 2H), 4.55 (d, 1H), 3.65 (s, 3H), 1.98-2.07 (m, 9H), 0.92 (m,9H), 0.14 (s, 6H).
단계 3: 메틸 (2S,3S,4R,5S,6S)-3,4,5-트리아세톡시-6-[2-[2-(히드록시메틸)-5-니트로-페닐]에티닐]테트라히드로피란-2-카르복실레이트
THF (48 mL) 및 물 (48 mL) 중 단계 2로부터의 생성물 (4.01 g, 6.60 mmol)의 용액에 아세트산 (193 mL, 3.36 mol)을 첨가하였다. 용액을 실온에서 2일 동안 교반한 다음, 물 (300 mL)로 희석하였다. 수성 층을 디클로로메탄 (2 x 300 mL)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 물 (2 x 300 mL) 및 탄산수소나트륨의 포화 수용액 (400 mL)으로 세척하고, 건조시키고, 여과하고, 농축 건조시켰다. 조 생성물을 실리카 겔 크로마토그래피 (시클로헥산 중 에틸 아세테이트의 구배)에 의해 정제하여 목적 생성물 (2.67 g)을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, dmso-d6): δ 8.29 (dd, 1H), 8.15 (d, 1H), 7.79 (d, 1H), 5.68 (t, 1H), 5.45 (t, 1H), 5.16 (t, 1H), 5.02-5.07 (m, 2H), 4.62 (d, 2H), 4.55 (d, 1H), 3.65 (s, 3H), 1.98-2.07 (m, 9H).
단계 4: 메틸 (2S,3S,4R,5S,6S)-3,4,5-트리아세톡시-6-[2-[5-아미노-2-(히드록시메틸)페닐]에틸]테트라히드로피란-2-카르복실레이트
THF (59 mL) 중 단계 3으로부터의 생성물 (2.67 g, 5.41 mmol)의 용액을 아르곤으로 플러싱하였다. 5% 건조 탄소 상 백금 (1.34 g, 50%w/w)을 첨가한 후, 반응 혼합물을 아르곤 및 H2로 연속적으로 플러싱한 다음, H2 분위기 (1 atm) 하에 실온에서 2일 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 셀라이트® 패드를 통해 여과하고, 에틸 아세테이트/메탄올 9/1의 용액 (500 mL)으로 세척하고, 농축 건조시켰다. 모든 순서 (탄소 상 백금 5% 건조 (1.34 g, 50% w/w)의 첨가, 실온에서 16시간 동안 H2 (1 atm) 하의 교반 및 셀라이트® 패드를 통한 여과 포함)를 반복하여 완전한 전환이 되게 하였다. 조 생성물을 실리카 겔 크로마토그래피 (시클로헥산 중 에틸 아세테이트의 구배)에 의해 정제하여 목적 생성물 (1.12 g)을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, dmso-d6): δ 6.93 (d, 1H). 6.67-6.33 (m, 2H), 5.30 (t, 1H), 4.96 (t, 1H), 4.88 (s, 2H), 4.81 (t, 1H), 4.61 (t, 1H), 4.39 (d, 1H), 4.29-4.24 (m, 2H), 3.78-3.72 (m, 1H), 3.65 (s, 3H), 2.65-2.54 (m, 2H), 2.07-1.98 (m, 9H), 1.79-1.68 (m, 1H), 1.63-1.52 (m, 1H).
단계 5: 메틸 (2S,3S,4R,5S,6S)-3,4,5-트리아세톡시-6-[2-[5-[[(2S)-2-(tert-부톡시카르보닐 아미노)-5-우레이도-펜타노일]아미노]-2-(히드록시메틸)페닐]에틸]테트라히드로피란-2-카르복실레이트
DMF (21 mL) 중 단계 4로부터의 생성물 (1.00 g, 2.14 mmol)의 용액에 (2S)-2-(tert-부톡시카르보닐아미노)-5-우레이도-펜탄산 (Boc-Cit-OH)(589 mg, 2.14 mmol), DIPEA (707 μl, 4.28 mmol) 및 HBTU (1.22 g, 3.21 mmol)를 연속적으로 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 72시간 동안 교반하였다. 물 (100 mL)로 희석하고 농축시킨 후, 조 생성물을 실리카 겔 크로마토그래피 (디클로로메탄 중 메탄올의 구배)에 의해 정제하여 목적 생성물 (1.05 g)을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, dmso-d6): δ 9.82 (s, 1H), 7.35-7.42 (m, 2H), 7.24 (d, 1H), 6.95 (d, 1H), 5.94 (t, 1H), 5.37 (s, 2H), 5.30 (t, 1H), 4.91-4.99 (m, 2H), 4.79 (t, 1H), 4.36-4.42 (m, 3H), 4.01-4.08 (m, 1H), 3.76 (t, 1H), 3.65 (s, 3H), 2.95-3.04 (m, 2H), 2.54-2.65 (m, 2H), 1.98-2.07 (m, 9H), 1.68-1.79 (m, 1H), 1.49-1.63 (m, 3H), 1.30-1.42 (m, 11H).
단계 6: 메틸 (2S,3S,4R,5S,6S)-3,4,5-트리아세톡시-6-[2-[5-[[(2S)-2-[[(2S)-2-(9H-플루오렌-9-일메톡시카르보닐아미노)-3-메틸-부타노일]아미노]-5-우레이도-펜타노일]아미노]-2-(히드록시메틸)페닐]에틸]테트라히드로피란-2-카르복실레이트
디클로로메탄 (7.5 mL) 중 단계 5로부터의 생성물 (950 mg, 1.31 mmol)의 용액에 0℃에서 트리플루오로아세트산 (1.9 mL, 25.6 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축 건조시키고, 톨루엔 (2 x 50 mL)과 공증발시켜 조 화합물을 수득하였다. DMF (13 mL) 중 상기 조 용액의 용액에 (2S)-2-(9H-플루오렌-9-일메톡시카르보닐아미노)-3-메틸-부탄산 (Fmoc-Val-OH)(467 mg, 1.38 mmol), DIPEA (867 μl, 5.24 mmol) 및 HBTU (845 mg, 2.23 mmol)를 연속적으로 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 탄산수소염의 포화 수용액 (20 mL)을 첨가하고, 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하고, 물 (100 mL)로 희석하고, 농축 건조시켰다. 조 생성물을 실리카 겔 크로마토그래피 (디클로로메탄 중 메탄올의 구배)에 이어서 역상 C18 크로마토그래피에 의해 중성 방법을 사용하여 정제하여 목적 생성물 (680 mg)을 수득하였다. LC-MS : MS (ESI) m/z [M+H]+ = 946.3. 1H NMR (400 MHz, dmso-d6): δ 9.90 (s, 1H). 8.07 (d, 2H), 7.89 (d, 2H), 7.74 (t, 2H), 7.44-7.38 (m, 3H), 7.36-7.28 (m, 3H), 7.24 (d, 1H), 5.94 (t, 1H), 5.37 (s, 2H), 5.30 (t, 1H), 4.99-4.92 (m, 2H), 4.79 (t, 1H), 4.42-4.36 (m, 4H), 4.32-4.19 (m, 3H), 3.94-3.90 (m, 1H), 3.76 (t, 1H), 3.65 (s, 3H), 2.99-2.94 (m, 2H), 2.65-2.54 (m, 2H), 2.07-1.98 (m, 10H), 1.70-1.55 (m, 4H), 1.46-1.36 (m, 2H), 0.89-0.84 (m, 6H). 13C NMR (100 MHz, dmso-d6): δ 171.19, 170.33, 169.58, 169.45, 169.27, 167.77, 158.81, 156.12, 143.89, 143.76, 140.69, 139.48, 137.54, 134.88, 128.44, 127.62, 127.06, 125.35, 120.08, 119.42, 116.65, 75.78, 74.61, 72.65, 71.20, 69.49, 65.68, 60.49, 60.10, 53.14, 52.40, 46.68, 32.32, 30.43, 29.54, 27.19, 26.77, 20.39, 20.34, 20.24, 19.22, 18.25.
단계 7: 메틸 (2S,3S,4R,5S,6S)-3,4,5-트리아세톡시-6-[2-[2-(브로모메틸)-5-[[(2S)-2-[[(2S)-2-(9H-플루오렌-9-일메톡시카르보닐아미노)-3-메틸-부타노일]아미노]-5-우레이도-펜타노일]아미노]페닐]에틸]테트라히드로피란-2-카르복실레이트
THF (8.2 mL) 중 단계 6으로부터의 생성물 (154 mg, 0.163 mmol)의 용액에 트리페닐포스핀 (85.4 mg, 0.326 mmol) 및 1-브로모피롤리딘-2,5-디온 (58.0 mg, 0.326 mmol)을 연속적으로 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 5시간 후, 트리페닐포스핀 (85.4 mg, 0.326 mmol) 및 1-브로모피롤리딘-2,5-디온 (58.0 mg, 0.326 mmol)을 혼합물에 첨가하고, 반응물을 실온에서 15시간 동안 교반하였다. 이와 같이 하여 수득한 조 생성물을 후속 단계에 사용하였다. UPLC-MS : MS (ESI) m/z [M+OMe-Br+H]+ = 960.7.
단계 8: 3-[4-[3-[2-[[6-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-5-메틸-피리다진-3-일]-메틸-아미노]-4-카르복시-티아졸-5-일]프로폭시]-3-플루오로-페닐]프로프-2-이닐-디메틸-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-(9H-플루오렌-9-일메톡시카르보닐아미노)-3-메틸-부타노일]아미노]-5-우레이도-펜타노일]아미노]-2-[2-[(2S,3S,4R,5S,6S)-3,4,5-트리아세톡시-6-메톡시카르보닐-테트라히드로피란-2-일]에틸]페닐]메틸]암모늄; 브로마이드
DMF (5 mL) 중 단계 7로부터의 생성물 (207.63 mg, 206 μmol)의 용액에 2-[[6-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-5-메틸-피리다진-3-일]-메틸-아미노]-5-[3-[4-[3-(디메틸아미노)프로프-1-이닐]-2-플루오로-페녹시]프로필]티아졸-4-카르복실산 (P2)(100 mg, 158 μmol) 및 DIPEA (135 μL, 792 μmol)를 연속적으로 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 조 생성물을 농축시키고, 후속 단계에 추가 처리 없이 사용하였다 (246 mg).
단계 9: 3-[4-[3-[2-[[6-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-5-메틸-피리다진-3-일]-메틸-아미노]-4-카르복시-티아졸-5-일]프로폭시]-3-플루오로-페닐]프로프-2-이닐-디메틸-[[2-[2-[(2S,3R,4R,5S,6S)-6-카르복시-3,4,5-트리히드록시-테트라히드로피란-2-일]에틸]-4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-아미노-3-메틸-부타노일]아미노]-5-우레이도-펜타노일]아미노]페닐]메틸]암모늄;2,2,2-트리플루오로아세테이트;2,2,2-트리플루오로아세트산
디옥산 (2.0 mL) 중 단계 8로부터의 생성물 (246 mg, 158 μmol)의 용액에 물 (2 ml) 중 수산화리튬 1수화물 (39.7 mg, 946 μmol)의 용액을 첨가하였다. 반응이 완결된 후, HCl의 1 M 수용액을 pH 6-7까지 첨가하였다. 조 생성물을 엑스브리지® 칼럼 상의 반응 혼합물의 직접 침착에 의해 C18 역상 정제용 HPLC를 사용하고 TFA 방법을 사용하여 정제하여 목적 화합물 (68 mg)을 수득하였다.
단계 10: 3-[4-[3-[2-[[6-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-5-메틸-피리다진-3-일]-메틸-아미노]-4-카르복시-티아졸-5-일]프로폭시]-3-플루오로-페닐]프로프-2-이닐-디메틸-[[2-[2-[(2S,3R,4R,5S,6S)-6-카르복시-3,4,5-트리히드록시-테트라히드로피란-2-일]에틸]-4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5-디옥소피롤-1-일)에톡시]프로파노일아미노]-3-메틸-부타노일]아미노]-5-우레이도-펜타노일]아미노]페닐]메틸]암모늄;2,2,2-트리플루오로아세테이트
DMF (1.2 mL) 중 단계 9로부터의 생성물 (30 mg, 21.0 μmol)의 용액에 DMF (500 μL) 및 DIPEA (18.3 μL, 105 μmol) 중 (2,5-디옥소피롤리딘-1-일) 3-[2-(2,5-디옥소피롤-1-일)에톡시]프로파노에이트 (12.8 mg, 41.3 μmol)의 용액을 연속적으로 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 조 생성물을 엑스브리지® 칼럼 상의 반응 혼합물의 직접 침착에 의해 C18 역상 정제용 HPLC를 사용하고 TFA 방법을 사용하여 정제하여 표제 화합물 (6.5 mg)을 수득하였다. HRMS (ESI) [M-CF3COO]+ 실측치 = 1392.5197 (δ = 0.7 ppm).
L106A-P2의 제조: 3-[4-[3-[2-[[6-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-5-메틸-피리다진-3-일]-메틸-아미노]-4-카르복시-티아졸-5-일]프로폭시]-3-플루오로-페닐]프로프-2-이닐-[[2-[2-[(2S,3R,4R,5S,6S)-6-카르복시-3,4,5-트리히드록시-테트라히드로피란-2-일]에틸]-4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5-디옥소피롤-1-일)에톡시]프로파노일아미노]-3-메틸-부타노일]아미노]프로파노일]아미노]페닐]메틸]-디메틸-암모늄;2,2,2-트리플루오로아세테이트
Figure pct00707
단계 1: 메틸 (3S,4R,5S,6S)-3,4,5-트리아세톡시-6-[2-[2-(브로모메틸)-5-[[(2S)-2-[[(2S)-2-(9H-플루오렌-9-일메톡시카르보닐아미노)-3-메틸-부타노일]아미노]프로파노일]아미노]페닐]에틸]테트라히드로피란-2-카르복실레이트
THF (14 mL) 중 메틸 (3S,4R,5S,6S)-3,4,5-트리아세톡시-6-[2-[5-[[(2S)-2-[[(2S)-2-(9H-플루오렌-9-일메톡시카르보닐아미노)-3-메틸-부타노일]아미노]프로파노일]아미노]-2-(히드록시메틸)페닐]에틸]테트라히드로피란-2-카르복실레이트 (L106C-P7, 단계 16의 제조)(255 mg, 297 μmol)의 용액에 트리페닐포스핀 (234 mg, 890 μmol) 및 N-브로모숙신이미드 (158 mg, 890 μmol)를 연속적으로 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 15시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 후속 단계에 어떠한 처리도 없이 사용하였다.
단계 2: 3-[4-[3-[2-[[6-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-5-메틸-피리다진-3-일]-메틸-아미노]-4-카르복시-티아졸-5-일]프로폭시]-3-플루오로-페닐]프로프-2-이닐-디메틸-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-(9H-플루오렌-9-일메톡시카르보닐아미노)-3-메틸-부타노일]아미노]프로파노일]아미노]-2-[2-[(2S,3S,4R,5S,6S)-3,4,5-트리아세톡시-6-메톡시카르보닐-테트라히드로피란-2-일]에틸]페닐]메틸]암모늄;브로마이드
THF 중 단계 1로부터의 생성물 (297 μmol)의 현탁액에 DMF (3 mL) 및 DIPEA (116 μL, 665 μmol) 중 2-[[6-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-5-메틸-피리다진-3-일]-메틸-아미노]-5-[3-[4-[3-(디메틸아미노)프로프-1-이닐]-2-플루오로-페녹시]프로필]티아졸-4-카르복실산 (P2)(140 mg, 222 μmol)의 용액을 연속적으로 첨가하였다. 반응물을 실온에서 60시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 증발 건조시키고, 후속 단계에 후처리 없이 사용하였다.
단계 3: 3-[4-[3-[2-[[6-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-5-메틸-피리다진-3-일]-메틸-아미노]-4-카르복시-티아졸-5-일]프로폭시]-3-플루오로-페닐]프로프-2-이닐-디메틸-[[2-[2-[(2S,3R,4R,5S,6S)-6-카르복시-3,4,5-트리히드록시-테트라히드로피란-2-일]에틸]-4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-아미노-3-메틸-부타노일]아미노]프로파노일]아미노]페닐]메틸]암모늄;2,2,2-트리플루오로아세테이트;2,2,2-트리플루오로아세트산
디옥산 (2 mL) 중 단계 2로부터의 생성물 (222 μmol)의 용액에 물 (2 mL) 중 LiOH.H2O (218 mg, 5.20 mmol)의 용액을 첨가하였다. 용액을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. HCl의 1 M 수용액을 pH 6-7까지 첨가하였다. 반응 혼합물을 증발 건조시키고, 조 생성물을 C18 역상 정제용 HPLC를 사용하여 엑스브리지® 칼럼 상의 반응 혼합물의 직접 침착에 의해 TFA 방법을 사용하여 정제하여 목적 화합물 (112 mg)을 수득하였다. IR: (ν cm-1) 3500-2500, 2237, 1667, 1197/1180/1130. 1H NMR (400/500 MHz, dmso-d6) δ ppm 12.55 (m), 10.35 (s), 8.65 (d), 8.1 (큰 피크), 7.89 (d, 1 H), 7.67 (s, 1 H), 7.66 (dd, 1 H), 7.53 (df, 1 H), 7.48 (m, 1 H), 7.4 (m, 1 H), 7.38 (m, 1 H), 7.27 (m, 1 H), 7.24 (t, 1 H), 7.2 (dd, 1 H), 7.19 (m, 1 H), 5.3-4.7 (ml), 4.64/4.54 (2d, 2 H), 4.51 (br s, 2 H), 4.5 (m, 1 H), 4.2 (t, 2 H), 3.78 (s, 3 H), 3.6 (m, 1 H), 3.5 (d, 1 H), 3.32 (t, 1 H), 3.28 (t, 1 H), 3.11 (t, 1 H), 3.1-2.9 (m, 4 H), 3.02 (br s, 6 H), 2.98 (m, 1 H), 2.48 (s, 3 H), 2.2-1.5 (m, 5 H), 1.38 (d, 3 H), 0.98 (d, 6 H).
단계 4: 3-[4-[3-[2-[[6-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-5-메틸-피리다진-3-일]-메틸-아미노]-4-카르복시-티아졸-5-일]프로폭시]-3-플루오로-페닐]프로프-2-이닐-디메틸-[[2-[2-[(2S,3R,4R,5S,6S)-6-카르복시-3,4,5-트리히드록시-테트라히드로피란-2-일]에틸]-4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5-디옥소피롤-1-일)에톡시]프로파노일아미노]-3-메틸-부타노일]아미노]프로파노일]아미노]페닐]메틸]암모늄; 2,2,2-트리플루오로아세테이트
DMF (2.25 mL) 중 용액 중 단계 3으로부터의 생성물 (60mg, 44.8 μmol)의 용액에 (2,5-디옥소피롤리딘-1-일) 3-[2-(2,5-디옥소피롤-1-일)에톡시]프로파노에이트 (20.9 mg, 67.2 μmol) 및 DIPEA (23.4 μL, 134 μmol)를 연속적으로 첨가하였다. 용액을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 조 생성물을 엑스브리지® 칼럼 상의 반응 혼합물의 직접 침착에 의해 C18 역상 정제용 HPLC를 사용하고 TFA 방법을 사용하여 정제하여 목적 생성물 (28.5 mg)을 수득하였다. IR: (ν cm-1) 3600-3100, 2800-2200, 2234, 1705+1687+1614, 1537. 1H NMR (400 MHz, dmso-d6) δ ppm 12.5 (m, 2H), 10.5/8.20/7.90 (s +2d, 3H), 7.80 (d, 1H), 7.68 (2s, 2H), 7.60-7.40 (m, 4H), 7.40 (m, 2H), 7.20 (2t, 2H), 7.00 (s, 2H), 5.20-5.00 (m, 3H), 4.62/4.53 (2d, 2H), 4.50 (s, 2H), 4.38 (t, 1H), 4.20 (t, 4H), 3.80(s, 3H), 3.60-3.00 (m, 10H), 3.02 (2s, 6H), 2.81 (m, 2H), 2.45 (s, 3H), 2.42/2.30 (2t, 4H), 2.15 (m, 2H), 2.00 (m, 1H), 1.95 (m, 2H), 1.30 (d, 3H), 0.89/0.82 (2d, 6H). HRMS (ESI) [M-CF3CO2]+=1306.4715 (δ =0.6 ppm).
L106C-P7의 제조: 2-[[6-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-5-메틸-피리다진-3-일]-메틸-아미노]-5-[3-[4-[3-[[2-[2-[(2S,3R,4R,5S,6S)-6-카르복시-3,4,5-트리히드록시-테트라히드로피란-2-일]에틸]-4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5-디옥소피롤-1-일)에톡시]프로파노일아미노]-3-메틸-부타노일]아미노]프로파노일]아미노]페닐]메톡시카르보닐-메틸-아미노]프로프-1-이닐]-2-플루오로-페녹시]프로필]티아졸-4-카르복실산
Figure pct00708
Figure pct00709
Figure pct00710
단계 1: 2-아이오도-4-니트로-벤조산
아세토니트릴 (280 mL) 중 2-아미노-4-니트로-벤조산 (10.0 g, 54.90 mmol)의 용액에 p-톨루엔술폰산 1수화물 (32.0 g, 168.2 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 15분 동안 교반한 다음, 물 (140 mL) 중 아질산나트륨 (8.00 g, 115.9 mmol) 및 아이오딘화칼륨 (24.0 g, 144.6 mmol)을 함유하는 용액을 15분 내에 적가하였다. 반응 혼합물을 19시간 동안 교반하였다. 반응이 완결된 후, 혼합물을 티오황산나트륨 (13.02 g, 82.36 mmol)으로 켄칭하고, 염화수소 3 M의 수용액 (25 mL)으로 산성화시켰다. 수성 층을 에틸 아세테이트 (2 x 250 mL)로 추출하고, 합한 유기 층을 염화수소의 1 M 수용액 (100 mL)으로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 디클로로메탄 (1 L)에 녹이고, HCl의 1 M 수용액 (100 mL)으로 세척하였다. 유기 층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 목적 생성물 (15.0 g)을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, dmso-d6): δ 13.8 (br s, 1H), 8.64 (s, 1H), 8.27 (d, 1H), 7.86 (d, 1H).
단계 2: (2-아이오도-4-니트로-페닐)메탄올
THF (70 mL) 중 단계 1로부터의 생성물 (5.0 g, 17.06 mmol)의 용액에 THF 중 보란의 1 M 용액 (85 mL, 85 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 65℃에서 4시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 메탄올 (200 mL)을 첨가하여 켄칭하였다. 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하고, 농축 건조시켰다. 조 생성물을 실리카 겔 크로마토그래피 (시클로헥산 중 에틸 아세테이트의 구배)에 의해 정제하여 목적 생성물 (3.38 g)을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, dmso-d6): δ 8.54 (d, 1H), 8.29 (dd, 1H), 7.70 (d, 1H), 5.82 (t, 1H), 4.47 (d, 2H).
단계 3: (4-아미노-2-아이오도-페닐)메탄올
에탄올 (100 mL) 및 물 (25 mL) 중 단계 2로부터의 생성물 (3.70 g, 13.26 mmol)의 용액에 철 (3.70 g, 66.25 mmol) 및 염화암모늄 (800 mg, 14.96 mmol)을 연속적으로 첨가하였다. 반응 혼합물을 80℃에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 셀라이트® 상에서 여과하고, 에탄올로 세척하고, 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 에틸 아세테이트 (100 mL)에 녹이고, 탄산수소나트륨의 포화 용액 (100 mL)으로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축 건조시켜 목적 생성물 (2.48 g)을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, dmso-d6): δ 7.02-7.10 (m, 2H), 6.57 (d, 1H), 5.16 (s, 2H), 4.97 (t, 1H), 4.28 (d, 2H).
단계 4: 4-[[tert-부틸 (디메틸)실릴]옥시메틸]-3-아이오도-아닐린
디클로로메탄 (150 mL) 중 단계 3으로부터의 생성물 (3.51 g, 13.37 mmol)의 용액에 이미다졸 (0.95 g, 13.95 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 0℃로 냉각시키고, 디클로로메탄 (150 mL) 중 tert-부틸-클로로-디메틸-실란 (2.40 mL, 13.85 mmol)의 용액을 15분에 걸쳐 적가하였다. 실온에서 16시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 메탄올 (20 mL)로 켄칭하고, 농축시켰다. 조 생성물을 실리카 겔 크로마토그래피 (시클로헥산 중 에틸 아세테이트의 구배)에 의해 정제하여 목적 생성물 (3.64 g75%)을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, dmso-d6): δ 7.05 (s, 1H), 7.03 (d, 1H), 6.55 (d, 1H), 5.24 (s, 2H), 4.46 (s, 2H), 0.88 (s, 9H), 0.06 (s, 6H).
단계 5: (2S)-2-[[(2S)-2-(9H-플루오렌-9-일메톡시카르보닐아미노)-3-메틸-부타노일]아미노]프로판산
물 (90 mL) 중 (2S)-2-아미노프로판산 (3.22 g, 36.09 mmol)의 용액에 탄산나트륨 (7.29 g, 68.74 mmol) 및 디메톡시에탄 (90 mL) 중 (2,5-디옥소피롤리딘-1-일)(2S)-2-(9H-플루오렌-9-일메톡시카르보닐아미노)-3-메틸-부타노에이트 (15.0 g, 34.37 mmol)의 용액을 연속적으로 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 염화수소의 1 M 수용액을 사용하여 pH=1까지 반응물을 산성화시킨 후, 수성 층을 에틸 아세테이트 (3 x 500 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 건조시키고, 농축시키고, 디에틸 에테르 (50 mL)로 연화처리하여 목적 생성물 (11.25 g)을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, dmso-d6) δ 12.48 (s, 1H), 8.21 (d, 1H), 7.89 (d, 2H), 7.72-7.79 (m, 2H), 7.28-7.46 (m, 5H), 4.15-4.32 (m, 4H), 3.90 (t, 1H), 1.90-2.02 (m, 1H), 1.28 (d, 3H), 0.86-0.90 (m, 6H).
단계 6: 9H-플루오렌-9-일메틸 N-[(1S)-1-[[(1S)-2-[4-[[tert-부틸 (디메틸)실릴]옥시메틸]-3-아이오도-아닐리노]-1-메틸-2-옥소-에틸]카르바모일]-2-메틸-프로필]카르바메이트
디클로로메탄 (18 mL) 및 메탄올 (18 mL) 중 단계 5로부터의 생성물 (1.50 g, 3.65 mmol)의 용액에 단계 4로부터의 생성물 (1.33 g, 3.65 mmol) 및 에틸 2-에톡시-2H-퀴놀린-1-카르복실레이트 (EEDQ)(1.36 g, 5.48 mmol)를 연속적으로 첨가하였다. 현탁액을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 농축시킨 후, 조 생성물을 실리카 겔 크로마토그래피 (시클로헥산 중 에틸 아세테이트의 구배)에 이어서 C18 크로마토그래피 (물 중 메탄올의 구배)에 의해 정제하여 목적 생성물 (1.18 g)을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, dmso-d6): δ 10.05 (s, 1H). 8.16-8.24 (m, 2H), 7.88 (d, 2H), 7.71-7.77 (m, 2H), 7.55 (d, 1H), 7.37-7.48 (m, 3H), 7.27-7.37 (m, 3H), 4.56 (s, 2H), 4.38 (t, 1H), 4.18-4.33 (m, 3H), 3.91 (t, 1H), 2.08-2.20 (m, 1H), 1.30 (d, 3H), 0.83-0.95 (m, 15H), 0.06 (s, 6H).
단계 7: (3R,4S,5R,6R)-3,4,5-트리벤질옥시-6-(벤질옥시메틸)테트라히드로피란-2-온
DMSO (120 mL) 중 (3R,4S,5R,6R)-3,4,5-트리벤질옥시-6-(벤질옥시메틸)테트라히드로피란-2-올 (30.0 g, 55.49 mmol)의 현탁액을 실온에서 30분 동안 교반하고, 실온에서 아세트산 무수물 (90 mL)로 15분에 걸쳐 적가 처리하였다. 용액을 16시간 동안 교반하고, 0℃로 냉각시키고, 염화수소의 1 M 수용액 (100 mL)으로 처리하였다. 반응 혼합물을 실온에서 20분 동안 교반하고, 아세트산을 증발시켰다. 생성된 잔류물을 물 (200 mL) 및 에틸 아세테이트 (200 mL)로 희석하였다. 수성 층을 에틸 아세테이트 (2 x 200 mL)로 추출하고, 합한 유기 층을 물 (2 x 500 mL) 및 탄산수소나트륨의 포화 용액 (2 x 500 mL)으로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시키고, 실리카 겔 크로마토그래피 (시클로헥산 중 에틸 아세테이트의 구배)에 의해 정제하여 목적 생성물 (25.05 g)을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, dmso-d6): δ 7.19-7.39 (m, 20H), 4.85 (d, 1H), 4.57-4.72 (m, 5H), 4.46-4.56 (m, 3H), 4.36 (d, 1H), 3.98-4.05 (m, 1H), 3.84-3.92 (m, 1H), 3.65-3.76 (m, 2H).
단계 8: (3R,4S,5R,6R)-3,4,5-트리벤질옥시-6-(벤질옥시메틸)-2-(2-트리메틸실릴에티닐)테트라히드로피란-2-올
THF (325 mL) 중 트리메틸실릴아세틸렌 (24 mL, 168.6 mmol)의 용액에 헥산 중 부틸리튬의 2.5 M 용액 (59.41 mL, 148.5 mmol)을 -78℃에서 20분 내에 첨가하였다. 용액을 -78℃에서 45분 동안 교반하고, 0℃에서 45분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 -78℃로 냉각시키고, THF (325 mL) 중 단계 7로부터의 생성물 (25.0 g, 46.41 mmol)의 용액을 45분에 걸쳐 적가하였다. 반응 혼합물을 이 온도에서 4시간 동안 교반하고, 물 (200 mL)로 켄칭하였다. 수성 층을 에틸 아세테이트 (2 x 200 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축 건조시켜 목적 생성물 (29.56 g)을 비 4/6의 2종의 부분입체이성질체의 혼합물로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, dmso-d6): δ 7.13-7.43 (m, 20H), 4.87-4.99 (m, 1H), 4.65-4.83 (m, 4H), 3.43-3.57 (m, 3H), 3.70-3.85 (m, 2H), 3.55-3.68 (m, 3H), 3.43-3.53 (m, 2H), 0.11-0.22 (m, 9H).
단계 9: 트리메틸-[2-[(2S,3S,4R,5R,6R)-3,4,5-트리벤질옥시-6-(벤질옥시메틸)테트라히드로피란-2-일]에티닐]실란
아세토니트릴 (83 mL) 및 디클로로메탄 (193 mL) 중 단계 8로부터의 생성물 (29.56 g, 46.42 mmol)의 용액에 아세토니트릴/디클로로메탄 (37 mL/18 mL)의 혼합물 중 트리에틸실란 (44.98 mL, 278.5 mmol)의 용액을 20분 내에 첨가하고, 아세토니트릴 (37 mL) 중 삼플루오린화붕소 디에틸 에테레이트 (23.53 mL, 185.7 mmol)의 용액을 30분 내에 -15℃에서 첨가하였다. 용액을 동일한 온도에서 5시간 동안 교반하고, 물 (500 mL)로 희석하였다. 수성 층을 에틸 아세테이트 (2 x 500 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축 건조시켜 목적 생성물 (28.82 g)을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, dmso-d6): δ 7.10-7.44 (m, 20H), 4.93 (d, 1H), 4.67-4.86 (m, 4H), 4.43-4.57 (m, 3H), 4.16-4.28 (m, 1H), 3.42-3.68 (m, 6H), 0.15 (s, 9H).
단계 10: (2R,3R,4R,5S,6S)-3,4,5-트리벤질옥시-2-(벤질옥시메틸)-6-에티닐-테트라히드로피란
메탄올 (1.12 L) 및 디클로로메탄 (240 mL) 중 단계 9로부터의 생성물 (28.80 g, 46.39 mmol)의 용액에 수산화나트륨의 1 M 수용액 (80 mL)을 첨가하였다. 용액을 실온에서 1시간 동안 교반하고, 염화수소의 1 M 수용액을 사용하여 pH = 1까지 산성화시키고, 물 (500 mL)로 희석하였다. 메탄올을 증발시키고, 수성 층을 에틸 아세테이트 (2 x 1 L)로 추출하였다. 합한 유기 층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시키고, 실리카 겔 크로마토그래피 (시클로헥산 중 에틸 아세테이트의 구배)에 의해 정제하여 목적 생성물 (20.00 g)을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, dmso-d6): δ 3.42-3.67 (m, 7H), 4.17 (d, 1H), 4.44-4.56 (m, 3H), 4.67-4.86 (m, 4H), 4.90 (d, 1H), 7.15-7.40 (m, 20H).
단계 11: (2S,3R,4R,5S,6R)-2-에티닐-6-(히드록시메틸)테트라히드로피란-3,4,5-트리올
에탄티올 (400 mL) 중 단계 10으로부터의 생성물 (20.00 g, 36.45 mmol)의 용액에 삼플루오린화붕소 디에틸 에테레이트 (147.8 mL, 1166 mmol)를 실온에서 5분에 걸쳐 적가하였다. 용액을 실온에서 16시간 동안 교반하고, 0℃로 냉각시키고, 차아염소산나트륨의 포화 수용액을 함유하는 기체 트랩을 장착하고, 탄산수소나트륨의 포화 수용액 (500 mL)으로 0℃에서 1시간 내에 적가 처리하였다. 농축 건조시킨 후, 조 생성물을 실리카 겔 크로마토그래피 (디클로로메탄 중 메탄올의 구배)에 의해 정제하여 목적 생성물 (4.05 g)을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, dmso-d6): δ 5.28 (d, 1H), 4.99 (d, 1H), 4.91 (d, 1H), 4.52 (t, 1H), 3.77 (d, 1H), 3.60-3.69 (m, 1H), 3.35-3.43 (m, 1H), 3.32 (s, 1H), 2.97-3.13 (m, 4H).
단계 12: 메틸 (2S,3S,4R,5R,6S)-6-에티닐-3,4,5-트리히드록시-테트라히드로피란-2-카르복실레이트
탄산수소나트륨의 포화 수용액 (81 mL) 및 THF (81 mL) 중 단계 11로부터의 생성물 (4.05 g, 21.52 mmol)의 용액에 (2,2,6,6-테트라메틸피페리딘-1-일)옥실 (TEMPO)(168 mg, 1.08 mmol)을 첨가하였다. 현탁액을 0℃로 냉각시키고, 1,3-디브로모-5,5-디메틸-이미다졸리딘-2,4-디온 (12.31 g, 43.04 mmol)을 30분 내에 조금씩 첨가하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 4시간 동안 교반하고, 메탄올 (40 mL)의 첨가로 켄칭하였다. 이 온도에서 30분 동안 교반한 후, 탄산칼륨의 포화 수용액 (10 mL) 및 디클로로메탄 (100 mL)을 첨가하였다. 유기 층을 물 (2 x 200 mL)로 추출한 후, 합한 수성 층을 염화수소의 3M 수용액을 사용하여 pH = 1이 될 때까지 산성화시키고, 농축 건조시켰다. 잔류물을 메탄올 (100 mL) 및 염화수소의 3M 수용액 (20 mL)에 녹였다. 혼합물을 농축시키고, 메탄올 (4 x 100 mL)과 수회 공증발시켰다. 조 생성물을 실리카 겔 크로마토그래피 (디클로로메탄 세륨 현상제 중 메탄올의 구배)에 의해 정제하여 목적 생성물 (3.00 g)을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, dmso-d6): δ 5.46 (d, 1H), 5.32 (d, 1H), 5.18 (d, 1H), 3.93-4.00 (m, 1H), 3.75 (dd, 1H), 3.65 (s, 3H), 3.40-3.44 (m, 1H), 3.31 (s, 1H), 3.09-3.19 (m, 2H).
단계 13: 메틸 (2S,3S,4R,5S,6S)-3,4,5-트리아세톡시-6-에티닐-테트라히드로피란-2-카르복실레이트
DMF (37.5 mL) 및 피리딘 (12.5 mL) 중 단계 12로부터의 생성물 (3.00 g, 13.88 mmol)의 용액에 N,N-디메틸피리딘-4-아민 (DMAP)(84.8 mg, 0.693 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 0℃로 냉각시키고, 아세트산 무수물 (20.0 mL, 213 mmol)로 5분에 걸쳐 적가 처리하였다. 용액을 실온에서 3시간 동안 교반하고, 염화수소의 1 M 수용액 (200 mL)으로 희석하였다. 수성 층을 에틸 아세테이트 (2 x 200 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염화수소의 1M 수용액 (2 x 200 mL) 및 탄산칼륨의 포화 수용액 (200 mL)으로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시키고, 실리카 겔 크로마토그래피 (시클로헥산 세륨 현상제 중 에틸 아세테이트의 구배)에 의해 정제하여 목적 생성물 (4.60 g)을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, dmso-d6): δ 5.33 (t, 1H), 4.93-5.01 (m, 2H), 4.70 (d, 1H), 4.44 (d, 1H), 3.67 (s, 1H), 3.64 (s, 3H), 2.02 (s, 3H), 1.94-2.01 (m, 6H).
단계 14: 메틸 (2S,3S,4R,5S,6S)-3,4,5-트리아세톡시-6-[2-[2-[[tert-부틸 (디메틸)실릴]옥시메틸]-5-[[(2S)-2-[[(2S)-2-(9H-플루오렌-9-일메톡시카르보닐아미노)-3-메틸-부타노일]아미노]프로파노일]아미노]페닐]에티닐]테트라히드로피란-2-카르복실레이트
DMF (7.3 mL) 중 단계 13으로부터의 생성물 (496 mg, 1.45 mmol)의 용액에 단계 6으로부터의 생성물 (730 mg, 0.966 mmol), DIPEA (738 μL, 4.47 mmol), 아이오딘화구리 (18.4 mg, 96.6 mmol), 및 디클로로-비스-(트리페닐포스핀)팔라듐 (II)(67.8 mg, 96.6 mmol)을 연속적으로 첨가하였다. 용액을 아르곤으로 플러싱하고, 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 물 (100 mL)로 희석한 후, 수성 층을 에틸 아세테이트 (2 x 100 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물 (2 x 200 mL) 및 염화암모늄의 포화 수용액 (2 x 200 mL)으로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시키고, 실리카 겔 크로마토그래피 (시클로헥산 중 에틸 아세테이트의 구배)에 의해 정제하여 목적 생성물 (782 mg)을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, dmso-d6): δ 10.09 (s, 1H). 8.20 (d, 1H), 7.89 (d, 2H), 7.70-7.78 (m, 3H), 7.55 (d, 1H), 7.32-7.46 (m, 4H), 7.27-7.32 (m, 2H), 5.41 (t, 1H), 4.96-5.14 (m, 3H), 4.67 (s, 2H), 4.51 (d, 1H), 4.36-4.44 (m, 1H), 4.16-4.32 (m, 3H), 3.88-3.95 (m, 1H), 3.64 (s, 3H), 1.94-2.07 (m, 10H), 1.30 (d, 3H), 0.84-0.93 (m, 15H), 0.08 (s, 6H).
단계 15: 메틸 (3S,4R,5S,6S)-3,4,5-트리아세톡시-6-[2-[2-[[tert-부틸 (디메틸)실릴]옥시메틸]-5-[[(2S)-2-[[(2S)-2-(9H-플루오렌-9-일메톡시카르보닐아미노)-3-메틸-부타노일]아미노]프로파노일]아미노]페닐]에틸]테트라히드로피란-2-카르복실레이트
THF (15 mL) 중 단계 14로부터의 생성물 (750 mg, 0.773 mmol)의 용액을 아르곤으로 플러싱하고, 탄소 상 건조 백금 5% (75 mg, 50%w/w)로 처리하고, 아르곤 및 H2로 연속적으로 플러싱하고, H2 분위기 (1 atm) 하에 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 셀라이트® 패드를 통해 여과하고, THF로 세척하고, 농축 건조시켰다. 완전한 순서 (탄소 상 건조 백금 5% (75 mg, 50%w/w)의 첨가, 실온에서 16시간 동안 H2 분위기 (1 atm) 하의 교반, 및 셀라이트® 패드를 통한 여과 포함)를 4회 더 수행하였다. 조 생성물을 실리카 겔 크로마토그래피 (시클로헥산 중 에틸 아세테이트의 구배)에 의해 정제하여 목적 생성물 (470 mg)을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, dmso-d6): δ 9.90 (s, 1H), 8.16 (d, 1H), 7.89 (d, 2H), 7.70-7.78 (m, 2H), 7.37-7.49 (m, 4H), 7.27-7.32 (m, 3H), 7.23 (d, 1H), 5.29 (t, 1H), 4.95 (t, 1H), 4.78 (t, 1H), 4.60 (s, 2H), 4.34-4.44 (m, 2H), 4.16-4.32 (m, 3H), 3.88-3.95 (m, 1H), 3.72-3.79 (m, 1H), 3.64 (s, 3H), 2.69-2.78 (m, 1H), 2.50-2.60 (m, 1H), 1.92-2.03 (m, 10H), 1.55-1.75 (m, 2H), 1.30 (d, 3H), 0.84-0.93 (m, 15H), 0.05 (s, 6H).
단계 16: 메틸 (3S,4R,5S,6S)-3,4,5-트리아세톡시-6-[2-[5-[[(2S)-2-[[(2S)-2-(9H-플루오렌-9-일메톡시카르보닐아미노)-3-메틸-부타노일]아미노]프로파노일]아미노]-2-(히드록시메틸)페닐]에틸]테트라히드로피란-2-카르복실레이트
THF (540 μL) 및 물 (540 μL) 중 단계 15로부터의 생성물 (470 mg, 0.483 mmol)의 용액에 아세트산 (1.6 mL, 28.28 mmol)을 첨가하였다. 용액을 실온에서 16시간 동안 교반하고, 물 (100 mL)로 희석하였다. 수성 층을 에틸 아세테이트 (2 x 100 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물 (2 x 200 mL) 및 탄산수소나트륨의 포화 수용액 (200 mL)으로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시키고, 실리카 겔 크로마토그래피 (시클로헥산 중 에틸 아세테이트의 구배)에 의해 정제하여 목적 생성물 (354 mg)을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, dmso-d6): δ 9.87 (s, 1H), 8.16 (d, 1H), 7.89 (d, 2H), 7.70-7.78 (m, 2H), 7.37-7.50 (m, 4H), 7.27-7.37 (m, 3H), 7.25 (d, 1H), 5.29 (t, 1H), 4.91-4.98 (m, 2H), 4.78 (t, 1H), 4.34-4.44 (m, 4H), 4.16-4.32 (m, 3H), 3.88-3.95 (m, 1H), 3.72-3.79 (m, 1H), 3.64 (s, 3H), 2.64-2.73 (m, 1H), 2.50-2.60 (m, 1H), 1.92-2.03 (m, 10H), 1.69-1.79 (m, 1H), 1.52-1.65 (m, 1H), 1.30 (d, 3H), 0.84-0.93 (m, 6H).
단계 17: 메틸 (3S,4R,5S,6S)-3,4,5-트리아세톡시-6-[2-[5-[[(2S)-2-[[(2S)-2-(9H-플루오렌-9-일메톡시카르보닐아미노)-3-메틸-부타노일]아미노]프로파노일]아미노]-2-[(4-니트로페녹시)카르보닐옥시메틸]페닐]에틸]테트라히드로피란-2-카르복실레이트
THF (7.75 mL) 중 단계 16으로부터의 생성물 (310 mg, 0.361 mmol)의 용액에 피리딘 (146 μL, 1.80 mmol) 및 4-니트로페닐 클로로카르보네이트 (182 mg, 0.901 mmol)를 연속적으로 첨가하였다. 현탁액을 실온에서 16시간 동안 교반하고, 농축시키고, 실리카 겔 크로마토그래피 (디클로로메탄 중 에틸 아세테이트의 구배)에 의해 정제하여 목적 생성물 (257 mg)을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, dmso-d6): δ 10.04 (s, 1H), 8.31 (d, 2H), 8.20 (d, 1H), 7.89 (d, 2H), 7.66-7.78 (m, 2H), 7.56 (d, 2H), 7.28-7.52 (m, 8H), 5.31 (t, 1H), 5.25 (s, 2H), 4.96 (t, 1H), 4.79 (t, 1H), 4.40 (d, 2H), 4.16-4.32 (m, 3H), 3.88-3.95 (m, 1H), 3.74-3.83 (m, 1H), 3.61 (s, 3H), 2.74-2.84 (m, 1H), 2.60-2.71 (m, 1H), 1.90-2.03 (m, 10H), 1.72-1.83 (m, 1H), 1.58-1.71 (m, 1H), 1.30 (d, 3H), 0.82-0.94 (m, 6H). LC-MS: MS (ESI) m/z [M+Na]+ = 1047.6.
단계 18: 2-[[6-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-5-메틸-피리다진-3-일]-메틸-아미노]-5-[3-[2-플루오로-4-[3-[메틸-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-아미노-3-메틸-부타노일]아미노]프로파노일]아미노]-2-[2-[(2S,3S,4R,5S,6S)-3,4,5-트리아세톡시-6-메톡시카르보닐-테트라히드로피란-2-일]에틸]페닐]메톡시카르보닐]아미노]프로프-1-이닐]페녹시]프로필]티아졸-4-카르복실산
DMF (1.5 mL) 중 단계 17로부터의 생성물 (130 mg, 127 μmol)의 용액에 DMF (1.5 mL) 및 DIPEA (83 μL, 502 μmol) 중 2-[[6-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-5-메틸-피리다진-3-일]-메틸-아미노]-5-[3-[2-플루오로-4-[3-(메틸아미노)프로프-1-이닐]페녹시]프로필]티아졸-4-카르복실산 (P7)(101 mg, 168 μmol)의 용액을 연속적으로 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 조 생성물을 엑스브리지® 칼럼 상의 반응 혼합물의 직접 침착에 의해 C18 역상 정제용 HPLC를 사용하고 NH4HCO3방법을 사용하여 정제하여 목적 생성물 (80 mg)을 수득하였다.
단계 19: 2-[[6-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-5-메틸-피리다진-3-일]-메틸-아미노]-5-[3-[2-플루오로-4-[3-[메틸-[[2-[2-[(2S,3R,4R,5S,6S)-6-카르복시-3,4,5-트리히드록시-테트라히드로피란-2-일]에틸]-4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-아미노-3-메틸-부타노일]아미노]프로파노일]아미노]페닐]메톡시카르보닐]아미노]프로프-1-이닐]페녹시]프로필]티아졸-4-카르복실산
DMF (2.0 mL) 중 단계 18로부터의 생성물 (80mg, 62.4 μmol)의 용액에 물 (500 μL) 중 수산화리튬 1수화물 (31.5 mg, 750 μmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 조 생성물을 엑스브리지® 칼럼 상의 반응 혼합물의 직접 침착에 의해 C18 역상 정제용 HPLC를 사용하고 NH4HCO3 방법을 사용하여 정제하여 목적 생성물 (25 mg)을 수득하였다.
단계 20: 2-[[6-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-5-메틸-피리다진-3-일]-메틸-아미노]-5-[3-[2-플루오로-4-[3-[메틸-[[2-[2-[(2S,3R,4R,5S,6S)-6-카르복시-3,4,5-트리히드록시-테트라히드로피란-2-일]에틸]-4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5-디옥소피롤-1-일)에톡시]프로파노일아미노]-3-메틸-부타노일]아미노]프로파노일]아미노]페닐]메톡시카르보닐]아미노]프로프-1-이닐]페녹시]프로필]티아졸-4-카르복실산
DMF (1mL) 중 단계 19로부터의 생성물 (25mg, 21.9 μmol)의 용액에 (2,5-디옥소피롤리딘-1-일) 3-[2-(2,5-디옥소피롤-1-일)에톡시]프로파노에이트 (11.1 mg, 32.9 μmol) 및 DIPEA (5.4 μL, 32.9 μmol)를 연속적으로 첨가하였다. 용액을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 조 생성물을 엑스브리지® 칼럼 상의 반응 혼합물의 직접 침착에 의해 C18 역상 정제용 HPLC를 사용하고 TFA 방법을 사용하여 정제하여 목적 생성물 (5 mg)을 수득하였다. HRMS (ESI) [M+H]+ 실측치 = 1336.4453 (δ = 0.3ppm).
L108A-P2의 제조: 3-[4-[3-[2-[[6-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-5-메틸-피리다진-3-일]-메틸-아미노]-4-카르복시-티아졸-5-일]프로폭시]-3-플루오로-페닐]프로프-2-이닐-[[4-[(2S,3R,4S,5S,6S)-6-카르복시-3,4,5-트리히드록시-테트라히드로피란-2-일]옥시-3-[3-[3-[2-(2,5-디옥소피롤-1-일)에톡시]프로파노일아미노]프로파노일아미노]페닐]메틸]-디메틸-암모늄;2,2,2-트리플루오로아세테이트
Figure pct00711
Figure pct00712
단계 1: 에틸 2-[(6-클로로-5-메틸-피리다진-3-일)-메틸-아미노]-5-(3-클로로프로필)티아졸-4-카르복실레이트
0℃로 냉각시킨 THF (600 mL) 중 에틸 5-(3-클로로프로필)-2-(메틸아미노)티아졸-4-카르복실레이트 (제조예 3e_01로부터임, 15.44 g, 58.5 mmol)의 용액에 NaH (오일 중 60%)(2.8 g, 70.6 mmol)를 0℃에서 0.5시간에 걸쳐 여러 부분으로 첨가하였다. 현탁액을 0℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. 이어서 이 현탁액에 0℃에서 THF (200 mL) 중 3,6-디클로로-4-메틸-피리다진 (23.0 g, 141 mmol)의 용액을 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 15시간 동안 교반하고, 0℃로 냉각시킨 다음, 물 (25 mL)을 천천히 첨가하였다. 수성 층을 AcOEt로 3회 추출하고, 유기 층을 MgSO4 상에서 건조시켰다. 조 생성물을 실리카 겔 크로마토그래피 (석유 에테르 중 AcOEt의 구배)에 의해 정제하여 목적 생성물 (7.0 g, 18.0 μmol)을 수득하였다. IR: (ν cm-1) 3450, 1698, 1203. 1H NMR (400 MHz, dmso-d6) δ ppm 7.81 (s, 1 H), 4.3 (quad, 2 H), 3.78 (s, 3 H), 3.31 (t, 2 H), 3.2 (m, 2 H), 2.4 (s, 3 H), 2.12 (quint, 2 H), 1.31 (t, 3 H).
단계 2: 에틸 2-[(6-클로로-5-메틸-피리다진-3-일)-메틸-아미노]-5-(3-아이오도프로필)티아졸-4-카르복실레이트
아세톤 (120 mL) 중 단계 1로부터의 생성물 (7.0 g, 18.0 mmol)의 용액에 아이오딘화나트륨 (27 g, 178 mmol)을 첨가하고, 현탁액을 환류 (60℃) 하에 15시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시킨 후, 침전물을 여과하고, 아세톤으로 세척하고, 여과물을 증발 건조시켰다. 생성된 황색 고체를 에테르로 연화처리하고, 여과하고, 오산화인 (P2O5) 상에서 35℃에서 48시간 동안 건조시켜 목적 생성물 (7.6 g, 15.8 mmol)을 갈색 고체로서 수득하였다. IR: (ν cm-1) 1703, 1591. 1H NMR (400 MHz, dmso-d6) δ ppm 7.82 (df, 1 H), 7.28 (dd, 1 H), 7.2 (dd, 1 H), 7.13 (t, 1 H), 4.26 (q, 2 H), 4.12 (t, 2 H), 3.77 (s, 3 H), 3.41 (s, 2 H), 3.26 (t, 2 H), 2.42 (s, 3 H), 2.22 (s, 6 H), 2.11 (m, 2 H), 1.29 (t, 3 H).
단계 3: 에틸 2-[(6-클로로-5-메틸-피리다진-3-일)-메틸-아미노]-5-[3-[4-[3-(디메틸아미노)프로프-1-이닐]-2-플루오로-페녹시]프로필]티아졸-4-카르복실레이트
THF (400 mL) 중 단계 2로부터의 생성물 (3.5 g, 7.28 mmol)의 용액에 THF (100 mL) 및 탄산세슘 (Cs2CO3)(4.73 g, 8.74 mmol) 중 4-[3-(디메틸아미노)프로프-1-이닐]-2-플루오로-페놀 (제조예 6b_01로부터임, 1.74 g, 8.74 mmol)의 용액을 연속적으로 첨가하였다. 반응 혼합물을 환류 (70℃) 하에 15시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 물 (100 mL)에 붓고, AcOEt로 3회 추출하였다. 유기 층을 염수로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 증발 건조시켰다. 조 생성물을 실리카 겔 크로마토그래피 (DCM 중 메탄올의 구배)에 의해 정제하여 목적 생성물 (2.40 g, 4.39 mmol)을 수득하였다. IR: (ν cm-1) 1698, 1H NMR (400/500 MHz, dmso-d6) δ ppm 7.8 (s, 1 H), 4.3 (quad, 2 H), 3.8 (s, 3 H), 3.7 (t, 2 H), 3.2 (m, 2 H), 2.4 (s, 3 H), 2.1 (quint, 2 H), 1.3 (t, 3 H).
단계 4: 에틸 2-[[6-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-5-메틸-피리다진-3-일]-메틸-아미노]-5-[3-[4-[3-(디메틸아미노)프로프-1-이닐]-2-플루오로-페녹시]프로필]티아졸-4-카르복실레이트
NMP (10 mL) 중 단계 3으로부터의 생성물 (961 mg, 1.76 mmol) 및 1,3-벤조티아졸-2-아민 (317 mg, 2.11 mmol)의 아르곤으로 포화된 용액에 4,5-비스(디페닐포스피노)-9,9-디메틸크산텐 (Xantphos)(509 mg, 0.88 mmol) 및 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐 (0)(Pd2(dba)3)(12.9 mg, 0.044 mmol)을 연속적으로 첨가하였다. 반응 혼합물을 다시 아르곤으로 15분 동안 포화시키고, DIEPA (1 mL, 5.28 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 150℃에서 15시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 물을 첨가하고, 수성 상을 DCM으로 수회 추출하였다. 유기 상을 수집하고, 염수로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 증발 건조시켰다. 조 생성물을 실리카 겔 크로마토그래피 (DCM 중 메탄올의 구배)에 의해 정제하여 목적 화합물 (540 mg, 0.818 mmol)을 수득하였다. IR: (ν cm-1) 3700-2300, 1706. 1H NMR (400 MHz, dmso-d6) δ ppm 11.55 (m, 1 H), 7.91 (d, 1 H), 7.68 (s, 1 H), 7.53 (d, 1 H), 7.39 (m, 1 H), 7.3 (dd, 1 H), 7.26-7.13 (m, 3 H), 4.26 (q, 2 H), 4.15 (t, 2 H), 3.77 (s, 3 H), 3.4 (s, 2 H), 3.27 (m, 2 H), 2.46 (s, 3 H), 2.21 (s, 6 H).
단계 5: 3-[4-[3-[2-[[6-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-5-메틸-피리다진-3-일]-메틸-아미노]-4-카르복시-티아졸-5-일]프로폭시]-3-플루오로-페닐]프로프-2-이닐-[[3-[3-(9H-플루오렌-9-일메톡시카르보닐아미노)프로파노일아미노]-4-[(2S,3R,4S,5S,6S)-3,4,5-트리아세톡시-6-메톡시카르보닐-테트라히드로피란-2-일]옥시-페닐]메틸]-디메틸-암모늄
DMF (2 mL) 중 단계 4로부터의 생성물 (75 mg, 0.119 mmol)의 용액에 DIPEA (40 μL, 0.237 mmol) 및 메틸 (2S,3S,4S,5R,6S)-3,4,5-트리아세톡시-6-[4-(브로모메틸)-2-[3-(9H-플루오렌-9-일메톡시카르보닐아미노)프로파노일아미노]페녹시]테트라히드로피란-2-카르복실레이트 (WO2017096311A1, 128 mg, 0.158 mmol)를 첨가하고, 반응물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 조 생성물을 엑스브리지® 칼럼 상의 반응 혼합물의 직접 침착에 의해 C18 역상 정제용 HPLC를 사용하고 TFA 방법을 사용하여 정제하여 목적 화합물 (88 mg, 51% 수율)을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, dmso-d6) δ ppm 8.9/8.2/7.35 (2s +m, 3 H), 7.9-7.2 (m, 11 H), 7.88 (d, 2 H), 7.68 (d, 2 H), 7.4/7.3 (2t, 4 H), 5.7 (d, 1 H), 5.52 (t, 1 H), 5.21 (t, 1 H), 5.1 (t, 1 H), 4.78 (d, 1 H), 4.52/4.4 (2s, 4 H), 4.3-4.15 (m, 7 H), 3.78 (s, 3 H), 3.62 (s, 3 H), 3.3 (m, 4 H), 3.08 (s, 6 H), 2.55 (m, 2 H), 2.48 (s, 3 H), 2.15 (m, 2 H), 2.01 (3s, 9 H), 1.3 (t, 3 H). LCMS m/z = 660.
단계 6: [3-(3-아미노프로파노일아미노)-4-[(2S,3R,4S,5S,6S)-6-카르복시-3,4,5-트리히드록시-테트라히드로피란-2-일]옥시-페닐]메틸-[3-[4-[3-[2-[[6-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-5-메틸-피리다진-3-일]-메틸-아미노]-4-카르복시-티아졸-5-일]프로폭시]-3-플루오로-페닐]프로프-2-이닐]-디메틸-암모늄
MeOH (4 mL) 중 단계 5의 생성물 (85 mg, 0.06 mmol)의 용액에 LiOH 2수화물 (64 mg, 1.53 mmol)을 첨가하고, 반응물을 실온에서 5시간 동안 교반하였다. 조 생성물을 포라팩®에 의해 용리액으로서 NH3/MeOH 7N을 사용하여 정제하여 목적 화합물 (55 mg, 91% 수율)을 수득하였다.
단계 7: 3-[4-[3-[2-[[6-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-5-메틸-피리다진-3-일]-메틸-아미노]-4-카르복시-티아졸-5-일]프로폭시]-3-플루오로-페닐]프로프-2-이닐-[[4-[(2S,3R,4S,5S,6S)-6-카르복시-3,4,5-트리히드록시-테트라히드로피란-2-일]옥시-3-[3-[3-[2-(2,5-디옥소피롤-1-일)에톡시]프로파노일아미노]프로파노일아미노]페닐]메틸]-디메틸-암모늄;2,2,2-트리플루오로아세테이트
DMF (6 mL) 중 단계 6의 생성물 (50mg, 0.05 mmol)의 용액에 DIPEA (30 μL, 0.179 mmol) 및 (2,5-디옥소피롤리딘-1-일) 3-[2-(2,5-디옥소피롤-1-일)에톡시]프로파노에이트 (28 mg, 0.09 mmol)를 연속적으로 첨가하였다. 용액을 실온에서 1.5시간 동안 교반하였다. 조 생성물을 엑스브리지® 칼럼 상의 반응 혼합물의 직접 침착에 의해 C18 역상 정제용 HPLC를 사용하고 TFA 방법을 사용하여 정제하여 목적 생성물 (15 mg, 20% 수율)을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, dmso-d6) δ ppm 8.4 (br s, 1 H), 7.9 (m, 1 H), 7.7 (br s, 1 H), 7.6 (dd, 1 H), 7.5 (dl, 1 H), 7.45 (dl, 1 H), 7.4 (td, 1 H), 7.25 (m, 3 H), 7.2 (t, 1 H), 7 (s, 2 H), 5 (d, 1 H), 4.55/4.4 (2 br s, 4 H), 4.2 (t, 2 H), 4 (d, 1 H), 3.8 (s, 3 H), 3.55 (2t, 4 H), 3.45 (m, 2 H), 3.45/3.4 (2m, 3 H), 3.35 (m, 2 H), 3.3 (t, 2 H), 3.1 (br s, 6 H), 2.6 (t, 2 H), 2.45 (s, 3 H), 2.15 (t, 2 H), 2.15 (quint, 2 H). 19F NMR (400 MHz, dmso-d6) δ ppm -133.8. HRMS (ESI) [M-CF3CO2]+ 실측치 = 1195.3690 (δ = 2.5 ppm)
L107C-P7의 제조: 2-[[6-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-5-메틸-피리다진-3-일]-메틸-아미노]-5-[3-[4-[3-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-[3-(2,5-디옥소피롤-1-일)프로파노일아미노]에톡시]프로파노일아미노]-3-메틸-부타노일]아미노]프로파노일]아미노]페닐]메톡시카르보닐-메틸-아미노]프로프-1-이닐]-2-플루오로-페녹시]프로필]티아졸-4-카르복실산
생성물을 방법 G에 따라 2-[2-[2-(2-아지도에톡시)에톡시]에톡시]아세트산을 3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-(2-아지도에톡시)에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로판산으로 대체함으로써 합성하였다. 1H NMR (400 MHz, dmso-d6) δ ppm 12.55 (br s, 1 H), 11.5-10.8 (diffus, 1 H), 9.92 (s, 1 H), 8.16 (d, 1 H), 7.99 (t, 1 H), 7.9 (diffus, 1 H), 7.86 (d, 1 H), 7.67 (br s, 1 H), 7.64 (diffus, 1 H), 7.58 (d, 2 H), 7.38/7.2 (2m, 3 H), 7.35 (m, 1 H), 7.32 (d, 2 H), 7.15 (t, 1 H), 7 (s, 2 H), 5.03 (s, 2 H), 4.39 (quint, 1 H), 4.28 (s, 2 H), 4.2 (dd, 1 H), 4.15 (t, 2 H), 3.77 (s, 3 H), 3.59 (t, 4 H), 3.5 (m, 44 H), 3.36 (t, 2 H), 3.28 (t, 2 H), 3.14 (quad, 2 H), 2.9 (s, 3 H), 2.49 (s, 3 H), 2.45/2.33 (2t, 4 H), 2.13 (quint, 2 H), 1.96 (oct, 1 H), 1.3 (d, 3 H), 0.87/0.83 (2d, 6 H). HRMS (ESI) [M+H]+ 실측치 = 1 687.7071 (δ = 0).
L107A-P2의 제조: 3-[4-[3-[2-[[6-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-5-메틸-피리다진-3-일]-메틸-아미노]-4-카르복시-티아졸-5-일]프로폭시]-3-플루오로-페닐]프로프-2-이닐-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-[3-(2,5-디옥소피롤-1-일)프로파노일아미노]에톡시]프로파노일아미노]-3-메틸-부타노일]아미노]프로파노일]아미노]페닐]메틸]-디메틸-암모늄;2,2,2-트리플루오로아세테이트
목적 생성물을 방법 A를 사용하여 수득하였다. (2S)-2-아미노-N-[(1S)-2-[4-(히드록시메틸)아닐리노]-1-메틸-2-옥소-에틸]-3-메틸-부탄아미드 및 (2,5-디옥소피롤리딘-1-일) 3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[3-(2,5-디옥소피롤-1-일)프로파노일아미노]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로파노에이트를 단계 1에서 사용하고, P2를 단계 3에서 적절한 페이로드로서 사용하였다. 1H NMR (400 MHz, dmso-d6) δ ppm 10.2 (s), 8.23 (d), 7.99 (t), 7.89 (큰 피크, 1 H), 7.85 (d), 7.76 (d, 2 H), 7.67 (s, 1 H), 7.56 (d, 1 H), 7.5 (d, 2 H), 7.4 (t, 1 H), 7.38 (m, 2 H), 7.24 (t, 1 H), 7.2 (t, 1 H), 6.99 (s, 2 H), 4.55 (s, 2 H), 4.41 (s, 2 H), 4.39 (m, 1 H), 4.2 (m, 1 H), 4.19 (m, 2 H), 3.77 (s, 3 H), 3.65-3.33 (m, 24 H), 3.59 (m, 2 H), 3.29 (t, 2 H), 3.14 (quad, 2 H), 3.05 (s, 6 H), 2.46 (s, 3 H), 2.39 (m, 2 H), 2.33 (t, 2 H), 2.15 (m, 2 H), 1.96 (m, 1 H), 1.32 (d, 3 H), 0.89/0.84 (2d, 6 H). 13C NMR (400 MHz, dmso-d6) δ ppm 134.7, 134.2, 126, 122.9, 122.2, 119.8, 119.7, 119.4, 118.3, 115.5, 70.4/69.2/67.2, 69, 66.8, 58.1, 53.9, 49.9, 49.9/40.4, 39, 36.4, 35.4, 34.6, 34.6, 31.1, 31.1, 23.6, 20.1, 18.2, 18.1. HRMS (ESI) [M+H]+ 실측치 = 1 657.7339 (δ = 0.4).
L9C-P59의 제조: 2-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-5-[3-[4-[3-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5-디옥소피롤-1-일)에톡시]프로파노일아미노]-3-메틸-부타노일]아미노]-5-우레이도-펜타노일]아미노]페닐]메톡시카르보닐-(3-히드록시프로필)아미노]프로프-1-이닐]-2-플루오로-페녹시]프로필]티아졸-4-카르복실산
방법 C 및 적절한 페이로드로서의 P59를 사용하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS (ESI) [M+H]+ 실측치 = 1288.4656 (δ = -4.5 ppm).
L9C-P3의 제조: 2-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-5-[3-[4-[3-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5-디옥소피롤-1-일)에톡시]프로파노일아미노]-3-메틸-부타노일]아미노]-5-우레이도-펜타노일]아미노]페닐]메톡시카르보닐-메틸-아미노]프로프-1-이닐]-2-플루오로-페녹시]프로필]티아졸-4-카르복실산
방법 C 및 적절한 페이로드로서의 P3을 사용하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS (ESI) [M+H]+ 실측치 = 1244.4473 (δ = 1.7 ppm).
L9C-P60의 제조: 6-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-3-[1-[[(5SR,7RS)-3-[2-[[(3S)-3,4-디히드록시부틸]-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5-디옥소피롤-1-일)에톡시]프로파노일아미노]-3-메틸-부타노일]아미노]-5-우레이도-펜타노일]아미노]페닐]메톡시카르보닐]아미노]에톡시]-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실산
방법 C 및 적절한 페이로드로서의 P60을 사용하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS (ESI) [M+H]+ 실측치 = 1394.6300 (δ = -3.6 ppm).
L9A-P61의 제조: 6-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-3-[1-[[(5RS,7SR)-3-[2-[1-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5-디옥소피롤-1-일)에톡시]프로파노일아미노]-3-메틸-부타노일]아미노]-5-우레이도-펜타노일]아미노]페닐]메틸]피롤리딘-1-윰-1-일]에톡시]-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실산; 2,2,2-트리플루오로아세테이트
방법 A 및 적절한 페이로드로서의 P61을 사용하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS (ESI) [M]+ 실측치 = 1316.6347 (δ = -3.8 ppm).
L9A-P62의 제조: 2-[[(5RS,7SR)-3-[[4-[6-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-2-카르복시-3-피리딜]-5-메틸-피라졸-1-일]메틸]-5,7-디메틸-1-아다만틸]옥시]에틸-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5-디옥소피롤-1-일)에톡시]프로파노일아미노]-3-메틸-부타노일]아미노]-5-우레이도-펜타노일]아미노]페닐]메틸]-(3-히드록시프로필)-메틸-암모늄; 2,2,2-트리플루오로아세테이트
방법 B 및 P62를 적절한 페이로드로서 사용하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS (ESI) [M]+ 실측치 = 1362.6748 (δ = -5.0 ppm).
L9A-P63의 제조: 3-[1-[[(5SR,7RS)-3-[2-[1-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5-디옥소피롤-1-일)에톡시]프로파노일아미노]-3-메틸-부타노일]아미노]-5-우레이도-펜타노일]아미노]페닐]메틸]피롤리딘-1-윰-1-일]에톡시]-5,7-디메틸-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]-6-[3-[(5-플루오로-1,3-벤조티아졸-2-일)아미노]-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]피리딘-2-카르복실산; 2,2,2-트리플루오로아세테이트
방법 A 및 적절한 페이로드로서의 P63을 사용하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS (ESI) [M]+ 실측치 = 1362.6585 (δ = -2.3 ppm).
L9A-P64의 제조: 3-[1-[[(5RS,7SR)-3-[2-[1-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5-디옥소피롤-1-일)에톡시]프로파노일아미노]-3-메틸-부타노일]아미노]-5-우레이도-펜타노일]아미노]페닐]메틸]피롤리딘-1-윰-1-일]에톡시]-5,7-디메틸-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]-6-[4-메틸-3-[(6-메틸-1,3-벤조티아졸-2-일)아미노]-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]피리딘-2-카르복실산; 2,2,2-트리플루오로아세테이트
방법 A 및 적절한 페이로드로서의 P64를 사용하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS (ESI) [M]+ 실측치 = 1358.6809 (δ = -4.3 ppm).
L9A-P65의 제조: 3-[1-[[(5SR,7RS)-3-[2-[1-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5-디옥소피롤-1-일)에톡시]프로파노일아미노]-3-메틸-부타노일]아미노]-5-우레이도-펜타노일]아미노]페닐]메틸]피롤리딘-1-윰-1-일]에톡시]-5,7-디메틸-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]-6-[3-[(6-플루오로-1,3-벤조티아졸-2-일)아미노]-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]피리딘-2-카르복실산; 2,2,2-트리플루오로아세테이트
방법 A 및 적절한 페이로드로서의 P65를 사용하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS (ESI) [M]+ 실측치 = 1362.6557 (δ = -4.3 ppm).
L9A-P66의 제조: 3-[(5RS,7SR)-3-[[4-[6-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-2-카르복시-3-피리딜]-5-메틸-피라졸-1-일]메틸]-5,7-디메틸-1-아다만틸]프로필-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5-디옥소피롤-1-일)에톡시]프로파노일아미노]-3-메틸-부타노일]아미노]-5-우레이도-펜타노일]아미노]페닐]메틸]-디메틸-암모늄; 2,2,2-트리플루오로아세테이트
방법 A 및 적절한 페이로드로서의 P66을 사용하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS (ESI) [M]+ 실측치 = 1316.6703 (δ = -4.4 ppm).
L9A-P67의 제조: 6-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-3-[1-[[(5RS,7SR)-3-[2-[4-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5-디옥소피롤-1-일)에톡시]프로파노일아미노]-3-메틸-부타노일]아미노]-5-우레이도-펜타노일]아미노]페닐]메틸]-4-메틸-피페라진-4-윰-1-일]에톡시]-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실산; 2,2,2-트리플루오로아세테이트
방법 A 및 적절한 페이로드로서의 P67을 사용하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS (ESI) [M]+ 실측치 = 1345.6582 (δ = -6.0 ppm).
L9A-P68의 제조: 3-[(5RS,7SR)-3-[[4-[6-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-2-카르복시-3-피리딜]-5-메틸-피라졸-1-일]메틸]-5,7-디메틸-1-아다만틸]프로필-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5-디옥소피롤-1-일)에톡시]프로파노일아미노]-3-메틸-부타노일]아미노]-5-우레이도-펜타노일]아미노]페닐]메틸]-(3-히드록시프로필)-메틸-암모늄; 2,2,2-트리플루오로아세테이트
방법 A 및 적절한 페이로드로서의 P68을 사용하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS (ESI) [M]+ 실측치 = 1360.6941 (δ = -6.0 ppm).
L9C-P69의 제조: 6-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-3-[1-[[(5RS,7SR)-3-[3-[[(3S)-3,4-디히드록시부틸]-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5-디옥소피롤-1-일)에톡시]프로파노일아미노]-3-메틸-부타노일]아미노]-5-우레이도-펜타노일]아미노]페닐]메톡시카르보닐]아미노]프로필]-5,7-디메틸-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실산
방법 C 및 적절한 페이로드로서의 P69를 사용하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS (ESI) [M+H]+ 실측치 = 1420.6913 (δ = 3.0 ppm).
L9A-P48의 제조: 2-[[(5SR,7RS)-3-[[4-[6-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-2-카르복시-3-피리딜]-5-메틸-피라졸-1-일]메틸]-5,7-디메틸-1-아다만틸]옥시]에틸-(카르복시메틸)-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5-디옥소피롤-1-일)에톡시]프로파노일아미노]-3-메틸-부타노일]아미노]-5-우레이도-펜타노일]아미노]페닐]메틸]-메틸-암모늄; 2,2,2-트리플루오로아세테이트
방법 A 및 적절한 페이로드로서의 P48을 사용하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS (ESI) [M]+ 실측치 = 1362.6399 (δ = -3.9 ppm).
L9A-P70의 제조: 2-[[(5RS,7SR)-3-[[4-[6-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-2-카르복시-3-피리딜]-5-메틸-피라졸-1-일]메틸]-5,7-디메틸-1-아다만틸]옥시]에틸-(2-카르복시에틸)-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5-디옥소피롤-1-일)에톡시]프로파노일아미노]-3-메틸-부타노일]아미노]-5-우레이도-펜타노일]아미노]페닐]메틸]-메틸-암모늄; 2,2,2-트리플루오로아세테이트
방법 A 및 적절한 페이로드로서의 P70을 사용하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS (ESI) [M]+ 실측치 = 1376.6548 (δ = -4.4 ppm).
L9C-P71의 제조: 6-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-3-[1-[[(5SR,7RS)-3-[2-[2-카르복시에틸-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5-디옥소피롤-1-일)에톡시]프로파노일아미노]-3-메틸-부타노일]아미노]-5-우레이도-펜타노일]아미노]페닐]메톡시카르보닐]아미노]에톡시]-5,7-디메틸-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실산
방법 C 및 적절한 페이로드로서의 P71을 사용하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS (ESI) [M+H]+ 실측치 = 1406.6280 (δ = -5.0 ppm).
L9C-P72의 제조: 6-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-3-[1-[[(5RS,7SR)-3-[3-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5-디옥소피롤-1-일)에톡시]프로파노일아미노]-3-메틸-부타노일]아미노]-5-우레이도-펜타노일]아미노]페닐]메톡시카르보닐-(4-히드록시부틸)아미노]프로필]-5,7-디메틸-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실산
방법 C 및 적절한 페이로드로서의 P72를 사용하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS (ESI) [M+H]+ 계산치 = 1404.6927
L9A-P49의 제조: 3-[(5SR,7RS)-3-[[4-[6-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-2-카르복시-3-피리딜]-5-메틸-피라졸-1-일]메틸]-5,7-디메틸-1-아다만틸]프로필-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5-디옥소피롤-1-일)에톡시]프로파노일아미노]-3-메틸-부타노일]아미노]-5-우레이도-펜타노일]아미노]페닐]메틸]-(2-히드록시에틸)-메틸-암모늄; 2,2,2-트리플루오로아세테이트
방법 A 및 적절한 페이로드로서의 P49를 사용하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS (ESI) [M]+ 실측치 = 1346.6794 (δ = -5.4 ppm).
L9C-P51의 제조: 6-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-3-[1-[[(5SR,7RS)-3-[3-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5-디옥소피롤-1-일)에톡시]프로파노일아미노]-3-메틸-부타노일]아미노]-5-우레이도-펜타노일]아미노]페닐]메톡시카르보닐-(3-메톡시프로필)아미노]프로필]-5,7-디메틸-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실산
방법 C 및 적절한 페이로드로서의 P51을 사용하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS (ESI) [M+H]+ 실측치 = 1404.6889 (δ = -2.3 ppm).
L9A-P50의 제조: 3-[(5SR,7RS)-3-[[4-[6-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-2-카르복시-3-피리딜]-5-메틸-피라졸-1-일]메틸]-5,7-디메틸-1-아다만틸]프로필-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5-디옥소피롤-1-일)에톡시]프로파노일아미노]-3-메틸-부타노일]아미노]-5-우레이도-펜타노일]아미노]페닐]메틸]-(3-메톡시프로필)-메틸-암모늄; 2,2,2-트리플루오로아세테이트
방법 A 및 적절한 페이로드로서의 P50을 사용하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS (ESI) [M]+ 실측치 = 1374.7111 (δ = -5.0 ppm).
L9A-P52의 제조: 6-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-3-[1-[[(5RS,7SR)-3-[3-[1-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5-디옥소피롤-1-일)에톡시]프로파노일아미노]-3-메틸-부타노일]아미노]-5-우레이도-펜타노일]아미노]페닐]메틸]아제판-1-윰-1-일]프로필]-5,7-디메틸-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실산; 2,2,2-트리플루오로아세테이트
방법 A 및 적절한 페이로드로서의 P52를 사용하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS (ESI) [M]+ 실측치 = 1370.7281 (δ = 3.7 ppm).
L9C-P53의 제조: 6-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-3-[1-[[(5SR,7RS)-3-[3-[카르복시메틸-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5-디옥소피롤-1-일)에톡시]프로파노일아미노]-3-메틸-부타노일]아미노]-5-우레이도-펜타노일]아미노]페닐]메톡시카르보닐]아미노]프로필]-5,7-디메틸-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실산
방법 C 및 적절한 페이로드로서의 P53을 사용하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS (ESI) [M+H]+ 실측치 = 1390.6301 (δ = -7.2 ppm).
L9A-P55의 제조: 3-[(5RS,7SR)-3-[[4-[6-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-2-카르복시-3-피리딜]-5-메틸-피라졸-1-일]메틸]-5,7-디메틸-1-아다만틸]프로필-(카르복시메틸)-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5-디옥소피롤-1-일)에톡시]프로파노일아미노]-3-메틸-부타노일]아미노]-5-우레이도-펜타노일]아미노]페닐]메틸]-메틸-암모늄; 2,2,2-트리플루오로아세테이트
방법 A 및 적절한 페이로드로서의 P55를 사용하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS (ESI) [M]+ 실측치 = 1360.6561 (δ = -7.2 ppm).
L9C-P54의 제조: 6-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-3-[1-[[(5SR,7RS)-3-[3-[2-카르복시에틸-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5-디옥소피롤-1-일)에톡시]프로파노일아미노]-3-메틸-부타노일]아미노]-5-우레이도-펜타노일]아미노]페닐]메톡시카르보닐]아미노]프로필]-5,7-디메틸-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실산
방법 C 및 적절한 페이로드로서의 P54를 사용하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS (ESI) [M+H]+ 실측치 = 1404.6464 (δ = -6.7 ppm).
L9C-P47의 제조: 6-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-3-[1-[[(5SR,7RS)-3-[2-[카르복시메틸-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5-디옥소피롤-1-일)에톡시]프로파노일아미노]-3-메틸-부타노일]아미노]-5-우레이도-펜타노일]아미노]페닐]메톡시카르보닐]아미노]에톡시]-5,7-디메틸-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실산
방법 C 및 적절한 페이로드로서의 P47을 사용하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS (ESI) [M+H]+ 실측치 = 1392.6186 (δ = -0.6 ppm).
L9A-P56의 제조: 3-[(5RS,7SR)-3-[[4-[6-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-2-카르복시-3-피리딜]-5-메틸-피라졸-1-일]메틸]-5,7-디메틸-1-아다만틸]프로필-(2-카르복시에틸)-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5-디옥소피롤-1-일)에톡시]프로파노일아미노]-3-메틸-부타노일]아미노]-5-우레이도-펜타노일]아미노]페닐]메틸]-메틸-암모늄; 2,2,2-트리플루오로아세테이트
방법 A 및 적절한 페이로드로서의 P56을 사용하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS (ESI) [M]+ 실측치 = 1374.6740 (δ = -5.5 ppm).
L9A-P58의 제조: 3-[(5RS,7SR)-3-[[4-[6-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-2-카르복시-3-피리딜]-5-메틸-피라졸-1-일]메틸]-5,7-디메틸-1-아다만틸]프로필-(3-카르복시프로필)-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5-디옥소피롤-1-일)에톡시]프로파노일아미노]-3-메틸-부타노일]아미노]-5-우레이도-펜타노일]아미노]페닐]메틸]-메틸-암모늄; 2,2,2-트리플루오로아세테이트
방법 A 및 적절한 페이로드로서의 P58을 사용하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS (ESI) [M]+ 실측치 = 1388.6891 (δ = -5.9 ppm).
L9A-P57의 제조: 2-[[(5SR,7RS)-3-[[4-[6-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-2-카르복시-3-피리딜]-5-메틸-피라졸-1-일]메틸]-5,7-디메틸-1-아다만틸]옥시]에틸-(3-카르복시프로필)-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5-디옥소피롤-1-일)에톡시]프로파노일아미노]-3-메틸-부타노일]아미노]-5-우레이도-펜타노일]아미노]페닐]메틸]-메틸-암모늄; 2,2,2-트리플루오로아세테이트
방법 A 및 적절한 페이로드로서의 P57을 사용하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS (ESI) [M]+ 실측치 = 1390.6692 (δ = -5.3 ppm).
L9A-P73의 제조: (2S)-N-[4-[[1-[2-[[3-[[4-[6-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-2-(히드록시메틸)-3-피리딜]-5-메틸-피라졸-1-일]메틸]-5,7-디메틸-1-아다만틸]옥시]에틸]피롤리딘-1-윰-1-일]메틸]페닐]-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5-디옥소피롤-1-일)에톡시]프로파노일아미노]-3-메틸-부타노일]아미노]-5-우레이도-펜탄아미드; 2,2,2-트리플루오로아세테이트
방법 B 및 P73을 적절한 페이로드로서 사용하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS (ESI) [M]+ 실측치 = 1330.6754 (δ =-12.3 ppm).
L9A-P74의 제조: (2S)-N-[4-[[1-[2-[[3-[[4-[6-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-2-(피롤리딘-1-카르보닐)-3-피리딜]-5-메틸-피라졸-1-일]메틸]-5,7-디메틸-1-아다만틸]옥시]에틸]피롤리딘-1-윰-1-일]메틸]페닐]-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5-디옥소피롤-1-일)에톡시]프로파노일아미노]-3-메틸-부타노일]아미노]-5-우레이도-펜탄아미드; 2,2,2-트리플루오로아세테이트
방법 B 및 P74를 적절한 페이로드로서 사용하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS (ESI) [M]+ 실측치 = 1397.7343 (δ =0.2 ppm).
L9A-P75의 제조: 6-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-3-[1-[[3-[2-[1-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5-디옥소피롤-1-일)에톡시]프로파노일아미노]-3-메틸-부타노일]아미노]-5-우레이도-펜타노일]아미노]페닐]메틸]피롤리딘-1-윰-1-일]에톡시]-5,7-디메틸-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]-N-이소프로필-피리딘-2-카르복스아미드; 2,2,2-트리플루오로아세테이트
방법 B 및 P75를 적절한 페이로드로서 사용하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS (ESI) [M]+ 실측치 = 1385.7328 (δ = -0.8 ppm).
L9A-P76의 제조: 6-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-3-[1-[[3-[2-[1-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5-디옥소피롤-1-일)에톡시]프로파노일아미노]-3-메틸-부타노일]아미노]-5-우레이도-펜타노일]아미노]페닐]메틸]피롤리딘-1-윰-1-일]에톡시]-5,7-디메틸-1-아다만틸]메틸]-5-메틸-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복스아미드; 2,2,2-트리플루오로아세테이트
방법 B 및 적절한 페이로드로서의 P76을 사용하여 목적 생성물을 수득하였다. HRMS (ESI) [M]+ 실측치 = 1343.6874 (δ =0.3 ppm).
L112A-P1의 제조: 3-[4-[3-[2-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-4-카르복시-티아졸-5-일]프로폭시]-3-플루오로-페닐]프로프-2-이닐-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5-디옥소피롤-1-일)에톡시]프로파노일아미노]-3-메틸-부타노일]아미노]-5-우레이도-펜타노일]아미노]-2-[3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-(2-메톡시에톡시)에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로필]페닐]메틸]-디메틸-암모늄; 2,2,2-트리플루오로아세테이트
단계 A: 9H-플루오렌-9-일메틸 N-[(1S)-1-[[(1S)-1-[[4-(히드록시메틸)-3-[3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-(2-메톡시에톡시)에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로필]페닐]카르바모일]-4-우레이도-부틸]카르바모일]-2-메틸-프로필]카르바메이트
표제 화합물을 출발 물질로서 2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-(2-메톡시에톡시)에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에탄올을 사용하여 WO2020/236817A2, L26-P1의 제조에 기재된 실험 절차에 따라 합성하였다. 1H NMR (400 MHz, dmso-d6): δ 9.88 (s, 1H), 8.07 (d, 1H), 7.89 (d, 2H), 7.72-7.76 (m, 2H), 7.37-7.45 (m, 5H), 7.30-7.34 (m, 2H), 7.25 (d, 1H), 5.95 (t, 1H), 5.38 (s, 2H), 4.95 (t, 1H), 4.45 (d, 2H), 4.38-4.42 (m, 1H), 4.20-4.32 (m, 3H), 3.90-3.94 (m,1H), 3.45-3.55 (m, 94H), 3.38-3.43 (m, 4H), 3.23 (s, 3H), 2.89-3.03 (m, 2H), 2.56-2.62 (m, 2H), 1.94-2.04 (m, 1H), 1.54-1.76 (m, 4H), 1.29-1.49 (m, 2H), 0.84-0.89 (m, 6H). UPLC-MS: MS (ESI)m/z [M/2 + Na]+ 실측치 = 888.
단계 B: 9H-플루오렌-9-일메틸 N-[(1S)-1-[[(1S)-1-[[4-(클로로메틸)-3-[3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-(2-메톡시에톡시)에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로필]페닐]카르바모일]-4-우레이도-부틸]카르바모일]-2-메틸-프로필]카르바메이트
THF (0.7 ml) 중 단계 A로부터의 생성물 (50 mg, 0.0288 mmol)에, 출발 물질이 관찰되지 않을 때까지 등가량의 티오닐 클로라이드 (THF 중 0.35 M 용액)를 10분마다 첨가하였다. 혼합물을 농축시키고, 조 생성물을 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다.
단계 C: 9H-플루오렌-9-일메틸 N-[(1S)-1-[[(1S)-1-[[4-(아이오도메틸)-3-[3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-(2-메톡시에톡시)에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로필]페닐]카르바모일]-4-우레이도-부틸]카르바모일]-2-메틸-프로필]카르바메이트
부탄-2-온 (30 mL/mmol) 중 단계 B로부터의 생성물 (44 mg, 0.025mmol) 및 아이오딘화나트륨 (2 당량)의 혼합물을 5시간 동안 교반한 후, 반응물을 농축시키고, 조 생성물을 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다.
단계 D: 3-[4-[3-[2-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-4-카르복시-티아졸-5-일]프로폭시]-3-플루오로-페닐]프로프-2-이닐-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-(9H-플루오렌-9-일메톡시카르보닐아미노)-3-메틸-부타노일]아미노]-5-우레이도-펜타노일]아미노]-2-[3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-(2-메톡시에톡시)에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로필]페닐]메틸]-디메틸-암모늄
DMF (0.7 mL) 중 페이로드 P1 (15 mg, 0.023 mmol), 단계 C로부터의 생성물 (46.18 mg, 0.025 mmol) 및 DIPEA (5 당량)의 혼합물을 44시간 동안 교반한 후, 조 생성물을 농축시키고, 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다.
단계 E: [4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-아미노-3-메틸-부타노일]아미노]-5-우레이도-펜타노일]아미노]-2-[3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-(2-메톡시에톡시)에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로필]페닐]메틸-[3-[4-[3-[2-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-4-카르복시-티아졸-5-일]프로폭시]-3-플루오로-페닐]프로프-2-이닐]-디메틸-암모늄
DMF (0.7 mL) 중 단계 D로부터의 생성물 (54 mg, 0.023 mmol) 및 N-에틸에탄아민 (10 당량)의 혼합물을 1시간 동안 교반한 후, 조 생성물을 정제용 HPLC에 의해 정제하여 목적 화합물 (22 mg)을 수득하였다. UPLC-MS: MS (ESI) m/z [(M +2)/2]실측치 = 1075.
단계 F: 3-[4-[3-[2-[3-(1,3-벤조티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로-5H-피리도[2,3-c]피리다진-8-일]-4-카르복시-티아졸-5-일]프로폭시]-3-플루오로-페닐]프로프-2-이닐-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5-디옥소피롤-1-일)에톡시]프로파노일아미노]-3-메틸-부타노일]아미노]-5-우레이도-펜타노일]아미노]-2-[3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-(2-메톡시에톡시)에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로필]페닐]메틸]-디메틸-암모늄;2,2-트리플루오로아세테이트
DMF (0.3 mL) 중 단계 E로부터의 생성물 (22 mg, 0.0097 mmol), DIEA (2 당량) 및 (2,5-디옥소피롤리딘-1-일) 3-[2-(2,5-디옥소피롤-1-일)에톡시]프로파노에이트 (1.1 당량)의 혼합물을 15시간 동안 교반한 후, 조 생성물을 정제용 HPLC를 사용하고 TFA 방법을 사용하여 정제하여 L112A-P1 (5.5 mg)을 수득하였다. HR-ESI +: m/z [M-CF3COO]+ 실측치 = 2344.
실시예 4. 추가의 링커, 링커-페이로드 및 그의 전구체의 합성 및 특징화.
예시적인 링커, 링커-페이로드, 및 그의 전구체를 본 실시예에 기재된 예시적인 방법을 사용하여 합성하였다.
2-(브로모메틸)-4-니트로벤조산의 합성
Figure pct00713
CCl4 (3000 mL) 중 2-메틸-4-니트로벤조산 (300 g, 1.5371 mol)의 교반 용액에 실온에서 NBS (300.93 g, 1.6908 mol) 및 AIBN (37.86 g, 0.2305 mol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 80℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 TLC 분석에 의해 모니터링하였다. 반응 혼합물을 포화 NaHCO3 용액 (2 L)으로 희석하고, 에틸 아세테이트 (2 x 2 L)로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 조 화합물을 실리카 겔 상에서 칼럼 크로마토그래피에 의해 용리액으로서 석유-에테르 중 에틸 아세테이트 2-3%를 사용하여 정제하고, 2-(브로모메틸)-4-니트로벤조산을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 8.35 (d, J=2.0 Hz, 1H), 8.20 (q, J=8.8, 2.4 Hz, 1H), 8.12 (d, J=8.8 Hz, 1H), 4.97 (s, 2H), 4.00 (s, 3H).
4-니트로-2-((프로프-2-인-1-일옥시)메틸)벤조산의 합성
Figure pct00714
MeCN (5000 mL) 중 2-(브로모메틸)-4-니트로벤조산 (250 g, 0.9122 mol)의 혼합물에 실온에서 프로프-2-인-1-올 (255.68 g, 265.50 mL, 4.5609 mol, d=0.963 g/mL) 및 Cs2CO3 (743.03 g, 2.2805 mol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 80℃로 16시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과하고, 에틸 아세테이트 (2 L)로 세척하였다. 여과물을 감압 하에 농축시켰다. 수득한 조 화합물에 포화 NaHCO3 용액 (1 L)을 첨가하고, 수성 층을 2N HCl (2 L)을 사용하여 pH 2로 산성화시켰다. 여과 진공 건조 후 4-니트로-2-((프로프-2-인-1-일옥시)메틸)벤조산을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO): δ 13.61 (brs, 1H), 8.37 (d, J=2.4 Hz, 1H), 8.23 (dd, J=2.4, 8.4 Hz, 1H), 8.10 (d, J=8.8 Hz, 1H), 4.95 (s, 2H), 4.37 (d, J=2.4 Hz, 2H), 3.52 (t, J=2.4 Hz, 1H)
메틸 4-니트로-2-((프로프-2-인-1-일옥시)메틸)벤조에이트의 합성
Figure pct00715
MeOH (1300 mL) 중 4-니트로-2-((프로프-2-인-1-일옥시)메틸)벤조산 (130 g, 0.5527 mol)의 교반 용액에 SOCl2 (526.08 g, 320.78 mL, 4.4219 mol, d=1.64 g/mL)를 0℃에서 천천히 첨가하였다. 반응을 70℃에서 4시간 동안 교반하였다. 반응 용매를 감압 하에 증발시켰다. 수득된 잔류물을 에틸 아세테이트 (1000 mL) 중에 용해시키고, 포화 NaHCO3 (600 mL), 물 (500 mL) 및 염수 용액 (500 mL)으로 세척하였다. 분리된 유기 층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 증발시켜 메틸 4-니트로-2-((프로프-2-인-1-일옥시)메틸)벤조에이트를 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 8.56 (t, J=0.8 Hz, 1H), 8.18 - 8.09 (m, 2H), 5.03 (s, 2H), 4.35 (d, J=2.4 Hz, 2H), 3.96 (s, 3H), 2.49 (t, J=2.4 Hz, 1H).
메틸 4-아미노-2-((프로프-2-인-1-일옥시)메틸)벤조에이트의 합성
Figure pct00716
EtOH (1100 mL) 및 H2O (550 mL)의 혼합물 중 메틸 4-니트로-2-((프로프-2-인-1-일옥시)메틸)벤조에이트 (110 g, 0.4414 mol)의 용액에 실온에서 Fe 분말 (197.21 g, 3.5310 mol) 및 NH4Cl (188.88 g, 3.5310 mol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 80℃에서 16시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 셀라이트®를 통해 여과하고, 에틸 아세테이트 (2 L)로 세척하였다. 여과물을 감압 하에 부피의 절반까지 농축시켰다. 잔류물에, 에틸 아세테이트 (1.5 L)를 첨가하고, 2개의 층을 분리하고, 수성 층을 에틸 아세테이트 (2 L)로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였다. SiO2 칼럼 크로마토그래피 (석유-에테르 중 에틸 아세테이트 15-20%)에 의해 정제하여 메틸 4-아미노-2-((프로프-2-인-1-일옥시)메틸)벤조에이트를 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.67 (d, J=8.8 Hz, 1H), 6.78 (t, J=1.6 Hz, 1H), 6.48 (q, J=8.4, 2.4 Hz, 1H), 4.79 (s, 2H), 4.25 (d, J=2.4 Hz, 2H), 3.70 (d, J=4.0 Hz, 3H), 3.42 (t, J=2.4 Hz, 1H).
(4-아미노-2-((프로프-2-인-1-일옥시)메틸)페닐)메탄올의 합성
Figure pct00717
THF (1000 mL)의 교반 용액에 LiAlH4 (THF 중 1 M)(21.23 g, 798.2 mmol, 798.2 mL)를 0℃에서 천천히 첨가하였다. THF (800 mL) 중 메틸 4-아미노-2-((프로프-2-인-1-일옥시)메틸)벤조에이트 (70 g, 319.3 mmol)의 용액을 0℃에서 천천히 첨가하였다. 반응물을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 0℃로 냉각시킨 다음, 물 (22 mL)을 매우 천천히 첨가하고, 이어서 20% NaOH (22 mL) 및 물 (66 mL)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반하였다. 무수 황산나트륨을 첨가하여 과량의 물을 흡수시켰다. 혼합물을 셀라이트®를 통해 여과하였다. 필터 케이크를 에틸 아세테이트 (1000 mL) 및 10% MeOH/DCM (500 mL)으로 세척하였다. 여과물을 감압 하에 농축시켰다. 생성된 조 화합물을 SiO2 칼럼 크로마토그래피 (용리액으로서 석유-에테르 중 에틸 아세테이트 35-40%)에 의해 정제하여 (4-아미노-2-((프로프-2-인-1-일옥시)메틸)페닐)메탄올을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 6.98 (d, J=8.0 Hz, 1H), 6.56 (d, J=2.4 Hz, 1H), 6.43 (dd, J=2.4, 8.0 Hz, 1H), 4.98 (s, 2H), 4.64 (t, J=5.2 Hz, 1H), 4.47 (s, 2H), 4.34 (d, J=5.6 Hz, 2H), 4.15 (d, J=2.4 Hz, 2H), 3.46 (t, J=2.4 Hz, 1H).
(9H-플루오렌-9-일)메틸 (S)-(1-((4-(히드록시메틸)-3-((프로프-2-인-1-일옥시)메틸)페닐)아미노)-1-옥소-5-우레이도펜탄-2-일)카르바메이트의 합성
Figure pct00718
DMF (10 mL) 중 (4-아미노-2-((프로프-2-인-1-일옥시)메틸)페닐)메탄올 (1.92 g, 10.04 mmol, 1.0 당량), (9H-플루오렌-9-일)메틸 (S)-(1-아미노-1-옥소-5-우레이도펜탄-2-일)카르바메이트 (3.99 g, 10.04 mmol, 1.0 당량), 및 (1-[비스(디메틸아미노)메틸렌]-1H-1,2,3-트리아졸로[4,5-b]피리디늄 3-옥시드 헥사플루오로포스페이트 (4.20 g, 11.04 mmol, 1.1 당량)의 용액에 N,N-디이소프로필에틸아민 (2.62 mL, 15.06 mmol, 1.5 당량)을 첨가하였다. 주위 온도에서 1시간 동안 교반한 후, 혼합물을 물 (200 mL)에 부었다. 생성된 고체를 여과하고, 물로 헹구고, 진공 하에 건조시켜 (9H-플루오렌-9-일)메틸 (S)-(1-((4-(히드록시메틸)-3-((프로프-2-인-1-일옥시)메틸)페닐)아미노)-1-옥소-5-우레이도펜탄-2-일)카르바메이트를 수득하였다. LCMS: MH+=571.5; Rt=0.93분 (2분 산성 방법).
(S)-2-아미노-N-(4-(히드록시메틸)-3-((프로프-2-인-1-일옥시)메틸)페닐)-5-우레이도펜탄아미드의 합성
Figure pct00719
(9H-플루오렌-9-일)메틸 (S)-(1-((4-(히드록시메틸)-3-((프로프-2-인-1-일옥시)메틸)페닐)아미노)-1-옥소-5-우레이도펜탄-2-일)카르바메이트 (6.08 g, 10.65 mmol, 1.0 당량)에 디메틸아민 (THF 중 2 M, 21.31 mL, 42.62 mmol, 4 당량)을 첨가하였다. 주위 온도에서 1.5시간 동안 교반한 후, 상청액을 형성된 검-유사 잔류물로부터 경사분리하였다. 잔류물을 에테르 (3 x 50 mL)로 연화처리하고, 생성된 고체를 여과하고, 에테르로 세척하고, 진공 하에 건조시켰다. (S)-2-아미노-N-(4-(히드록시메틸)-3-((프로프-2-인-1-일옥시)메틸)페닐)-5-우레이도펜탄아미드를 수득하였다. LCMS: MH+ 349.3; Rt=0.42분 (2분 산성 방법).
tert-부틸 ((S)-1-(((S)-1-((4-(히드록시메틸)-3-((프로프-2-인-1-일옥시)메틸)페닐)아미노)-1-옥소-5-우레이도펜탄-2-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바메이트의 합성
Figure pct00720
DMF (10 mL) 중 (S)-2-아미노-N-(4-(히드록시메틸)-3-((프로프-2-인-1-일옥시)메틸)페닐)-5-우레이도펜탄아미드 (3.50 g, 10.04 mmol, 1.0 당량), (tert-부톡시카르보닐)-L-발린 (2.62 g, 12.05 mmol, 1.2 당량), 및 (1-[비스(디메틸아미노)메틸렌]-1H-1,2,3-트리아졸로[4,5-b]피리디늄 3-옥시드 헥사플루오로포스페이트 (4.58 g, 12.05 mmol, 1.2 당량)의 용액에 N,N-디이소프로필에틸아민 (3.50 mL, 20.08 mmol, 2.0 당량)을 첨가하였다. 주위 온도에서 2시간 동안 교반한 후, 혼합물을 물 (200 mL)에 붓고, 생성된 현탁액을 EtOAc (3 x 100 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 진공 하에 농축시켰다. 이스코 SiO2 크로마토그래피 (0-20% 메탄올/디클로로메탄)에 의한 정제 후에, tert-부틸 ((S)-1-(((S)-1-((4-(히드록시메틸)-3-((프로프-2-인-1-일옥시)메틸)페닐)아미노)-1-옥소-5-우레이도펜탄-2-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바메이트를 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.00 (s, 1H), 7.96 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.55 (dq, J = 4.9, 2.2 Hz, 2H, 아릴), 7.32 (d, J = 8.9 Hz, 1H, 아릴), 6.76 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 5.95 (t, J = 5.8 Hz, 1H), 5.38 (s, 2H), 5.01 (t, J = 5.5 Hz, 1H), 4.54 (s, 2H), 4.45 (dd, J = 25.2, 5.3 Hz, 3H), 4.20 (d, J = 2.4 Hz, 2H), 3.83 (dd, J = 8.9, 6.7 Hz, 1H), 3.49 (t, J = 2.4 Hz, 1H), 2.97 (dh, J = 26.0, 6.5 Hz, 2H), 1.96 (h, J = 6.6 Hz, 1H), 1.74 - 1.50 (m, 2H), 1.39 (m, 11H), 0.84 (dd, J = 16.2, 6.7 Hz, 6H). LCMS: M+Na 570.5; Rt=0.79분 (2분 산성 방법).
tert-부틸 ((S)-1-(((S)-1-((4-(클로로메틸)-3-((프로프-2-인-1-일옥시)메틸)페닐)아미노)-1-옥소-5-우레이도펜탄-2-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바메이트의 합성
Figure pct00721
0℃에서 아세토니트릴 (13.3 mL) 중 tert-부틸 ((S)-1-(((S)-1-((4-(히드록시메틸)-3-((프로프-2-인-1-일옥시)메틸)페닐)아미노)-1-옥소-5-우레이도펜탄-2-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바메이트 (2.00 그램, 3.65 mmol, 1.0 당량)의 용액에 티오닐 클로라이드 (0.53 mL, 7.30 mmol, 2.0 당량)를 첨가하였다. 빙조에서 1시간 동안 교반한 후, 용액을 물 (40 mL)로 희석하고, 생성된 백색 침전물을 여과, 공기 건조에 의해 수집하고, 고진공 하에 건조시켜 tert-부틸 ((S)-1-(((S)-1-((4-(클로로메틸)-3-((프로프-2-인-1-일옥시)메틸)페닐)아미노)-1-옥소-5-우레이도펜탄-2-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바메이트를 수득하였다. LCMS: M+Na 588.5; Rt=2.17분 (5분 산성 방법).
2-(((tert-부틸디페닐실릴)옥시)메틸)-5-니트로벤조산의 합성
Figure pct00722
MeOH (1000 mL) 중 6-니트로이소벤조푸란-1(3H)-온 (90 g, 502.43 mmol, 1.00 당량)의 용액에 H2O (150 mL) 중 KOH (28.19 g, 502.43 mmol, 1.00 당량)를 첨가하였다. 갈색 혼합물을 25℃에서 1.5시간 동안 교반하였다. 갈색 혼합물을 감압 하에 농축시켜 잔류물을 수득하고, DCM (2000 mL) 중에 용해시켰다. 혼합물에 tert-부틸디페닐클로로실란 (296.91 g, 1.08 mol, 277.49 mL, 2.15 당량) 및 이미다졸 (171.03 g, 2.51 mol, 5.00 당량)을 첨가하고, 25℃에서 12시간 동안 교반하였다. 혼합물을 감압 하에 농축시켜 잔류물을 수득하였다. 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (석유 에테르/에틸 아세테이트=1/0, 1/1)에 의해 정제하고, 2-(((tert-부틸디페닐실릴)옥시)메틸)-5-니트로벤조산을 백색 고체로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d4) δ ppm 1.13 (s, 9 H) 5.26 (s, 2 H) 7.34 - 7.48 (m, 6 H) 7.68 (br d, J=8 Hz, 4 H) 8.24 (br d, J=8 Hz, 1 H) 8.46 (br d, J=8 Hz, 1 H) 8.74 (s, 1 H).
(2-(((tert-부틸디페닐실릴)옥시)메틸)-5-니트로페닐)메탄올의 합성
Figure pct00723
THF (205 mL) 중 2-(((tert-부틸디페닐실릴)옥시)메틸)-5-니트로벤조산 (41 g, 94.14 mmol, 1 당량)의 혼합물에 BH3를 첨가하였다. THF (1 M, 470.68 mL, 5 당량). 황색 혼합물을 60℃에서 2시간 동안 교반하였다. 혼합물에 MeOH (400mL)를 첨가하고, 감압 하에 농축시켜 잔류물을 수득하였다. 이어서 H2O (200mL) 및 DCM (300mL)을 첨가하고, DCM (3 x200 mL)으로 추출하고, 염수 (300mL)로 세척하고, 무수 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 잔류물을 수득하였다. 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (석유 에테르/에틸 아세테이트=1/0, 1/1)에 의해 정제하였다. (2-(((tert-부틸디페닐실릴)옥시)메틸)-5-니트로페닐)메탄올을 백색 고체로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d4) δ ppm 1.10 (s, 9 H) 4.58 (s, 2 H) 4.89 (s, 2 H) 7.32 - 7.51 (m, 6 H) 7.68 (dd, J=8, 1.38 Hz, 4 H) 7.76 (d, J=8 Hz, 1 H) 8.15 (dd, J=8 2.26 Hz, 1 H) 8.30 (d, J=2 Hz, 1 H).
2-(((tert-부틸디페닐실릴)옥시)메틸)-5-니트로벤즈알데히드의 합성
Figure pct00724
DCM (450 mL) 중 (2-(((tert-부틸디페닐실릴)옥시)메틸)-5-니트로페닐)메탄올 (34 g, 80.65 mmol, 1 당량)의 용액에 MnO2 (56.09 g, 645.22 mmol, 8 당량)를 첨가하였다. 흑색 혼합물을 25℃에서 36시간 동안 교반하였다. 혼합물에 MeOH (400mL)를 첨가하고, 감압 하에 농축시켜 잔류물을 수득하였다. 이어서 H2O (200mL) 및 DCM (300mL)을 첨가하고, DCM (3 x200 mL)으로 추출하고, 염수 (300mL)로 세척하고, 무수 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 잔류물을 수득하였다. 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (CH2Cl2=100%)에 의해 정제하였다. 2-(((tert-부틸디페닐실릴)옥시)메틸)-5-니트로벤즈알데히드를 백색 고체로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ ppm 1.14 (s, 9 H) 5.26 (s, 2 H) 7.34 - 7.53 (m, 6 H) 7.60 - 7.73 (m, 4 H) 8.13 (d, J=8 Hz, 1 H) 8.48 (dd, J=8, 2.51 Hz, 1 H) 8.67 (d, J=2 Hz, 1 H) 10.16 (s, 1 H).
N-(2-(((tert-부틸디페닐실릴)옥시)메틸)-5-니트로벤질)프로프-2-인-1-아민의 합성
Figure pct00725
DCM (130 mL) 중 2-(((tert-부틸디페닐실릴)옥시)메틸)-5-니트로벤즈알데히드 (12.6 g, 30.03 mmol, 1 당량)의 용액에 프로프-2-인-1-아민 (4.14 g, 75.08 mmol, 4.81 mL, 2.5 당량) 및 MgSO4 (36.15 g, 300.33 mmol, 10 당량)를 첨가한 다음, 현탁액 혼합물을 25℃에서 24시간 동안 교반하였다. 약간의 반응 용액을 취하고 NaBH4로 처리하면, TLC는 하나의 새로운 스팟이 형성되었음을 나타내었다. 반응 혼합물을 여과하고, 감압 하에 농축시켜 잔류물을 수득하였다. (E)-N-[[2-[[tert-부틸 (디페닐)실릴]옥시메틸]-5-니트로-페닐]메틸]프로프-2-인-1-이민을 황색 고체로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ ppm 1.11 (s, 9 H) 2.48 (t, J=2.38 Hz, 1 H) 4.52 (t, J=2.13 Hz, 2 H) 5.09 (s, 2 H) 7.35 - 7.49 (m, 6 H) 7.63 - 7.72 (m, 4 H) 7.79 (d, J=8.53 Hz, 1 H) 8.25 (dd, J=8.53, 2.51 Hz, 1 H) 8.68 (d, J=2.26 Hz, 1 H) 8.84 (t, J=1.88 Hz, 1 H).
(E)-N-[[2-[[tert-부틸 (디페닐)실릴]옥시메틸]-5-니트로-페닐]메틸]프로프-2-인-1-이민 (12 g, 26.28 mmol, 1 당량)을 MeOH (100 mL) 및 THF (50 mL) 중에 용해시킨 다음, NaBH4 (1.49 g, 39.42 mmol, 1.5 당량)를 첨가하고, 황색 혼합물을 -20℃에서 2시간 동안 교반하였다. LCMS는 목적 화합물이 검출되었음을 나타내었다. 반응 혼합물을 -20℃에서 MeOH (200 mL)의 첨가에 의해 켄칭한 다음, 감압 하에 농축시켜 잔류물을 수득하였다. 잔류물을 EtOAc (500 mL)로 용해시키고, 염수 (150 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 잔류물을 수득하였다. 잔류물을 플래쉬 실리카 겔 크로마토그래피 (용리액: 0-10% 에틸 아세테이트/석유 에테르 구배)에 의해 정제하였다. N-(2-(((tert-부틸디페닐실릴)옥시)메틸)-5-니트로벤질)프로프-2-인-1-아민을 연황색 오일로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ ppm 1.12 (s, 9 H) 2.13 (t, J=2.38 Hz, 1 H) 3.33 (d, J=2.51 Hz, 2 H) 3.80 (s, 2 H) 4.93 (s, 2 H) 7.36 - 7.49 (m, 6 H) 7.69 (dd, J=7.91, 1.38 Hz, 4 H) 7.77 (d, J=8.53 Hz, 1 H) 8.16 (dd, J=8.41, 2.38 Hz, 1 H) 8.24 (d, J=2.26 Hz, 1 H).
(9H-플루오렌-9-일)메틸 (2-(((tert-부틸디페닐실릴)옥시)메틸)-5-니트로벤질)(프로프-2-인-1-일)카르바메이트의 합성
Figure pct00726
디옥산 (90 mL) 중 N-(2-(((tert-부틸디페닐실릴)옥시)메틸)-5-니트로벤질)프로프-2-인-1-아민 (9 g, 19.62 mmol, 1 당량) 및 Fmoc-OSu (7.28 g, 21.59 mmol, 1.1 당량)의 용액에 포화 NaHCO3 (90 mL)를 첨가하고, 백색 현탁액을 20℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 H2O (150 mL)로 희석하고, EtOAc (150 mL x 2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (200 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 잔류물을 수득하였다. 잔류물을 플래쉬 실리카 겔 크로마토그래피 (용리액: 0-30% 에틸 아세테이트/석유 에테르)에 의해 정제하였다. (9H-플루오렌-9-일)메틸 (2-(((tert-부틸디페닐실릴)옥시)메틸)-5-니트로벤질)(프로프-2-인-1-일)카르바메이트 (7.7 g, 11.08 mmol, 56.48% 수율, 98% 순도)를 백색 고체로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ ppm 1.12 (s, 9 H) 2.17 (br d, J=14.31 Hz, 1 H) 3.87 - 4.97 (m, 9 H) 6.98 - 8.28 (m, 21 H).
(9H-플루오렌-9-일)메틸 (5-아미노-2-(((tert-부틸디페닐실릴)옥시)메틸)벤질)(프로프-2-인-1-일)카르바메이트의 합성
Figure pct00727
10% AcOH/CH2Cl2 (100 mL) 중 (9H-플루오렌-9-일)메틸 (2-(((tert-부틸디페닐실릴)옥시)메틸)-5-니트로벤질)(프로프-2-인-1-일)카르바메이트 (5.0 g, 7.34 mmol, 1.0 당량)의 빙조 냉각된 용액에 Zn (7.20 g, 110 mmol, 15 당량)을 첨가하였다. 빙조를 제거하고, 생성된 혼합물을 2시간 동안 교반하였으며, 이 때 이것을 셀라이트® 패드를 통해 여과하였다. 휘발성 물질을 진공 하에 제거하고, 잔류물을 EtOAc 중에 용해시키고, NaHCO3(포화), NaCl(포화)로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시키고, 이스코 SiO2 크로마토그래피 (0-75% EtOAc/헵탄) 후에 (9H-플루오렌-9-일)메틸 (5-아미노-2-(((tert-부틸디페닐실릴)옥시)메틸)벤질)(프로프-2-인-1-일)카르바메이트를 수득하였다. LCMS: MH+=651.6; Rt=3.77분 (5분 산성 방법).
(9H-플루오렌-9-일)메틸 (5-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(((tert-부틸디페닐실릴)옥시)메틸)벤질)(프로프-2-인-1-일)카르바메이트의 합성
Figure pct00728
CH2Cl2 (40 mL) 중 (9H-플루오렌-9-일)메틸 (5-아미노-2-(((tert-부틸디페닐실릴)옥시)메틸)벤질)(프로프-2-인-1-일)카르바메이트 (2.99 g, 4.59 mmol, 1.0 당량) 및 (S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄산 (1.72 g, 4.59 mmol, 1.0 당량)에 에틸 2-에톡시퀴놀린-1(2H)-카르복실레이트 (2.27 g, 9.18 mmol, 2.0 당량)를 첨가하였다. 10분 동안 교반한 후, MeOH (1 mL)를 첨가하고, 용액은 균질해졌다. 반응물을 16시간 동안 교반하고, 휘발성 물질을 진공 하에 제거하고, 이스코 SiO2 크로마토그래피 (0-15% MeOH/CH2Cl2)에 의한 정제 후에 (9H-플루오렌-9-일)메틸 (5-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(((tert-부틸디페닐실릴)옥시)메틸)벤질)(프로프-2-인-1-일)카르바메이트를 수득하였다. LCMS: MH+=1008.8; Rt=3.77분 (5분 산성 방법).
프로프-2-인-1-일 (5-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(((tert-부틸디페닐실릴)옥시)메틸)벤질)(프로프-2-인-1-일)카르바메이트의 합성
Figure pct00729
(9H-플루오렌-9-일)메틸 (5-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(((tert-부틸디페닐실릴)옥시)메틸)벤질)(프로프-2-인-1-일)카르바메이트 (1.60 g, 1.588 mmol, 1.0 당량)에 MeOH 중 2M 디메틸아민 (30 mL, 60 mmol, 37 당량) 및 THF (10 mL)를 첨가하였다. 3시간 동안 정치한 후, 휘발성 물질을 진공 하에 제거하고, 잔류물을 Et2O로 연화처리하여 FMOC 탈보호 부산물을 제거하였다. 생성된 고체에 CH2Cl2 (16 mL) 및 피리딘 (4 mL)을 첨가하고, 불균질 용액에 프로파르길 클로로포르메이트 (155 uL, 1.588 mmol, 1.0 당량)를 첨가하였다. 30분 동안 교반한 후, 추가의 프로파르길 클로로포르메이트 (155 uL, 1.588 mmol, 1.0 당량)를 첨가하였다. 추가로 20분 동안 교반한 후, MeOH (1 mL)를 첨가하여 잔류 클로로포르메이트를 켄칭하고, 휘발성 물질을 진공 하에 제거하였다. 이스코 SiO2 크로마토그래피에 의한 정제 시 (0-15% MeOH/CH2Cl2)프로프-2-인-1-일 (5-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(((tert-부틸디페닐실릴)옥시)메틸)벤질)(프로프-2-인-1-일)카르바메이트를 수득하였다. LCMS: MH+=867.8; Rt=3.40분 (5분 산성 방법).
프로프-2-인-1-일 (5-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(히드록시메틸)벤질)(프로프-2-인-1-일)카르바메이트의 합성
Figure pct00730
THF (7.5 mL) 중 프로프-2-인-1-일 (5-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(((tert-부틸디페닐실릴)옥시)메틸)벤질)(프로프-2-인-1-일)카르바메이트 (984 mg, 1.135 mmol, 1.0 당량)의 용액에 THF 중 1.0 M TBAF (2.27 mL, 2.27 mmol, 2.0 당량)를 첨가하였다. 6시간 동안 정치시킨 후, 휘발성 물질을 진공 하에 제거하고, 잔류물을 이스코 SiO2 크로마토그래피 (0-40% MeOH/CH2Cl2)에 의해 정제하고, 프로프-2-인-1-일 (5-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(히드록시메틸)벤질)(프로프-2-인-1-일)카르바메이트를 수득하였다. LCMS: MH+=629.6; Rt=1.74분 (5분 산성 방법).
프로프-2-인-1-일 (5-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(클로로메틸)벤질)(프로프-2-인-1-일)카르바메이트의 합성
Figure pct00731
CH2Cl2 (10 mL) 중 프로프-2-인-1-일 (5-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(히드록시메틸)벤질)(프로프-2-인-1-일)카르바메이트 (205 mg, 0.326 mmol, 1.0 당량)에 피리딘 (158 uL, 1.96 mmol, 5 당량)을 첨가하였다. 불균질 혼합물을 0℃ 빙조에서 냉각시키고, 티오닐 클로라이드 (71 uL, 0.98 mmol, 3 당량)를 첨가하였다. 빙조에서 3시간 동안 교반한 후, 반응물을 직접 이스코 SiO2 크로마토그래피 (0-30% MeOH/CH2Cl2)에 의해 정제하고, 프로프-2-인-1-일 (5-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(클로로메틸)벤질)(프로프-2-인-1-일)카르바메이트를 수득하였다. LCMS: MH+=647.6; Rt=2.54분 (5분 산성 방법).
2-(히드록시메틸)-N-메틸-5-니트로벤즈아미드의 합성
Figure pct00732
MeOH (1500 mL) 중 6-니트로이소벤조푸란-1(3H)-온 (500 g, 2.79 mol)의 교반 현탁액에 MeNH2 (3.00 kg, 29.94 mol, 600 mL, 31.0% 순도)를 25℃에서 첨가하고, 1시간 동안 교반하였다. 고체를 여과하고, 물로 2회 (600 mL) 세척하고, 고진공 하에 건조시켜 잔류물을 수득하였다. 생성물 2-(히드록시메틸)-N-메틸-5-니트로벤즈아미드를 백색 고체로서 수득하였다. LCMS: Rt = 0.537분, MS m/z = 193.2. 1H NMR: 400 MHz DMSO δ 8.57 (br d, J = 4.4 Hz, 1H), 8.31 (dd, J = 2.4, 8.6 Hz, 1H), 8.21 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.86 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 5.54 (t, J = 5.6 Hz, 1H), 4.72 (d, J = 5.5 Hz, 2H), 2.78 (d, J = 4.4 Hz, 3H).
(2-((메틸아미노)메틸)-4-니트로페닐)메탄올의 합성
Figure pct00733
THF (5000 mL) 중 2-(히드록시메틸)-N-메틸-5-니트로벤즈아미드 (560 g, 2.66 mol)의 용액을 0℃로 냉각시킨 다음, BH3-Me2S (506 g, 6.66 mol)(THF 중 2.0 M)를 60분 동안 적가하고, 70℃로 5시간 동안 가열하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되었음을 나타내었다. 완결된 후, 메탄올 중 4M HCl (1200 mL)을 반응 혼합물에 0℃에서 첨가하고, 65℃에서 8시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 0℃로 냉각시키고, 고체를 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 생성물 (2-((메틸아미노)메틸)-4-니트로페닐)메탄올 (520 g)을 백색 고체로서 수득하였다. LCMS: Rt = 0.742분, MS m/z = 197.1 [M+H]+. 1H NMR: 400 MHz DMSO δ 9.25 (br s, 2H), 8.37 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.14 (dd, J = 2.4, 8.5 Hz, 1H), 7.63 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 5.72 (br s, 1H), 4.65 (s, 2H), 4.15 (br s, 2H), 2.55 - 2.45 (m, 3H)
1-(2-(((tert-부틸디페닐실릴)옥시)메틸)-5-니트로페닐)-N-메틸메탄아민의 합성
Figure pct00734
DCM (2600 mL) 중 (2-((메틸아미노)메틸)-4-니트로페닐)메탄올 (520 g, 2.65 mol) 및 이미다졸 (721 g, 10.6 mol)의 용액을 0℃로 냉각시키고, TBDPS-CL (1.09 kg, 3.98 mol, 1.02 L)을 적가하고, 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 빙냉수 (1000 mL)에 붓고, 에틸 아세테이트로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 증발시켜 조 생성물을 수득하였다. 조 생성물을 실리카 겔 상에서 크로마토그래피에 의해 에틸 아세테이트: 석유 에테르 (10/1에서 1)로 용리시키면서 정제하여 잔류물을 수득하였다. 생성물 1-(2-(((tert-부틸디페닐실릴)옥시)메틸)-5-니트로페닐)-N-메틸메탄아민을 황색 액체로서 수득하였다. LCMS: 생성물: Rt = 0.910분, MS m/z = 435.2 [M+H]+. 1H NMR: 400 MHz CDCl3 δ 8.23 (d, J=2.4 Hz, 1H), 8.15 (dd, J=2.4, 8.4 Hz, 1H), 7.76 (d, J=8.4 Hz, 1H), 7.71 - 7.66 (m, 4H), 7.50 - 7.37 (m, 6H), 4.88 (s, 2H), 3.65 (s, 2H), 2.39 (s, 3H), 1.12 (s, 9H)
(9H-플루오렌-9-일)메틸 (2-(((tert-부틸디페닐실릴)옥시)메틸)-5-니트로벤질)(메틸)카르바메이트의 합성
Figure pct00735
THF (4000 mL) 중 1-(2-(((tert-부틸디페닐실릴)옥시)메틸)-5-니트로페닐)-N-메틸메탄아민 (400 g, 920.3 mmol)의 용액에 Fmoc-OSu (341.5 g, 1.01 mol) 및 Et3N (186.2 g, 1.84 mol, 256.2 mL)을 첨가하고, 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 물 (1600 mL)에 붓고, 에틸 아세테이트 (1000 mL x 2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 증발시켜 조 생성물을 수득하였다. 조 생성물을 실리카 겔 상에서 크로마토그래피에 의해 석유 에테르: 에틸 아세테이트 (1/0에서 1/1)로 용리시키면서 정제하여 (9H-플루오렌-9-일)메틸 (2-(((tert-부틸디페닐실릴)옥시)메틸)-5-니트로벤질)(메틸)카르바메이트를 백색 고체로서 수득하였다. LCMS: Rt = 0.931분, MS m/z = 657.2 [M+H]+. 1H NMR: EW16000-26-P1A, 400 MHz CDCl3 δ 8.21 - 7.96 (m, 1H), 7.87 - 7.68 (m, 3H), 7.68 - 7.62 (m, 4H), 7.62 - 7.47 (m, 2H), 7.47 - 7.28 (m, 9H), 7.26 - 7.05 (m, 2H), 4.81 (br s, 1H), 4.62 - 4.37 (m, 4H), 4.31 - 4.19 (m, 1H), 4.08 - 3.95 (m, 1H), 2.87 (br d, J = 5.2 Hz, 3H), 1.12 (s, 9H).
(9H-플루오렌-9-일)메틸 (5-아미노-2-(((tert-부틸디페닐실릴)옥시)메틸)벤질)(메틸)카르바메이트의 합성
Figure pct00736
MeOH (90 mL) 및 EtOAc (30 mL) 중 (9H-플루오렌-9-일)메틸 (2-(((tert-부틸디페닐실릴)옥시)메틸)-5-니트로벤질)(메틸)카르바메이트 (3.0 g, 4.57 mmol, 1.0 당량)의 용액을 탈기하고, 3원 스톱콕을 통해 N2 풍선으로 퍼징하였다. 탈기/N2 퍼징을 2x 반복한 후, 10% Pd/C 데구사 유형 (0.486 g, 0.457 mmol, 0.1 당량)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 탈기하고, 3원 스톱콕을 통해 2 H2의 풍선으로 퍼징하였다. 탈기/H2 퍼징을 2x 반복한 후, 반응물을 H2의 풍선 압력 하에 4시간 동안 교반하였다. 반응물을 탈기하고, N2로 퍼징하고, MeOH로 추가로 용리시키면서 셀라이트 패드를 통해 여과하였다. 휘발성 물질을 진공 하에 제거하고 고진공 하에 펌핑한 후 (9H-플루오렌-9-일)메틸 (5-아미노-2-(((tert-부틸디페닐실릴)옥시)메틸)벤질)(메틸)카르바메이트를 수득하였다. LCMS: MH+=627.7; Rt=1.59분 (2분 산성 방법).
(9H-플루오렌-9-일)메틸 (5-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(((tert-부틸디페닐실릴)옥시)메틸)벤질)(메틸)카르바메이트의 합성
Figure pct00737
2:1 CH2Cl2/MeOH (60 mL) 중 (9H-플루오렌-9-일)메틸 (5-아미노-2-(((tert-부틸디페닐실릴)옥시)메틸)벤질)(메틸)카르바메이트 (2.86 g, 4.56 mmol, 1.0 당량) 및 (S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄산 (1.71 g, 4.56 mmol, 1.0 당량)에 에틸 2-에톡시퀴놀린-1(2H)-카르복실레이트 (2.256 g, 9.12 mmol, 2.0 당량)를 첨가하였다. 균질 용액을 16시간 동안 교반하였으며, 이 때 추가의 (S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄산 (0.340 g, 0.2 당량) 및 에틸 2-에톡시퀴놀린-1(2H)-카르복실레이트 (0.452 g, 0.4 당량)를 첨가하여 반응을 완결시켰다. 추가로 5시간 동안 교반한 후, 휘발성 물질을 진공 하에 제거하고, 이스코 SiO2 크로마토그래피 (0-5% MeOH/CH2Cl2)에 의한 정제 후에 (9H-플루오렌-9-일)메틸 (5-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(((tert-부틸디페닐실릴)옥시)메틸)벤질)(메틸)카르바메이트를 수득하였다. LCMS: MH+=984.1; Rt=1.54분 (2분 산성 방법).
프로프-2-인-1-일 (5-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(((tert-부틸디페닐실릴)옥시)메틸)벤질)(메틸)카르바메이트의 합성
Figure pct00738
THF (10 mL) 중 (9H-플루오렌-9-일)메틸 (5-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(((tert-부틸디페닐실릴)옥시)메틸)벤질)(메틸)카르바메이트 (2.05 g, 2.085 mmol, 1.0 당량)에 MeOH 중 2.0 M 디메틸 아민 (10.42 mL, 20.85 mmol, 10 당량)을 첨가하였다. 16시간 동안 교반한 후, 휘발성 물질을 진공 하에 제거하였다. 잔류물을 CH2Cl2 (20 mL) 중에 용해시키고, DIEA (0.533 mL, 4.17 mmol, 2 당량) 및 프로파르길 클로로포르메이트 (0.264 mL, 2.71 mmol, 1.3 당량)를 첨가하였다. 실온에서 16시간 동안 교반한 후, 반응물을 CH2Cl2 (20 mL)로 희석하고, NaHCO3 (포화), NaCl(포화)로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시키고, 이스코 SiO2 크로마토그래피 (0-15% MeOH/CH2Cl2)에 의해 정제하여 프로프-2-인-1-일 (5-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(((tert-부틸디페닐실릴)옥시)메틸)벤질)(메틸)카르바메이트를 수득하였다. LCMS: MH+=843.8; Rt=1.35분 (2분 산성 방법).
프로프-2-인-1-일 (5-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(히드록시메틸)벤질)(메틸)카르바메이트의 합성
Figure pct00739
THF (10.0 mL) 중 프로프-2-인-1-일 (5-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(((tert-부틸디페닐실릴)옥시)메틸)벤질)(메틸)카르바메이트 (1.6 g, 1.90 mmol, 1.0 당량)의 0℃ 용액에 THF 중 1.0 M TBAF (3.80 mL, 3.80 mmol, 2.0 당량)를 첨가하였다. 실온으로 가온하고 16시간 동안 교반한 후, 휘발성 물질을 진공 하에 제거하고, 잔류물을 EtOAc 중에 용해시키고, NaHCO3(포화), NaCl(포화)로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시키고, 잔류물을 이스코 SiO2 크로마토그래피 (0-30% MeOH/CH2Cl2)에 의해 정제하여 프로프-2-인-1-일 (5-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(히드록시메틸)벤질)(메틸)카르바메이트를 수득하였다. LCMS: MH+=605.7; Rt=0.81분 (2분 산성 방법).
프로프-2-인-1-일 (5-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(클로로메틸)벤질)(메틸)카르바메이트의 합성
Figure pct00740
CH2Cl2 (10 mL) 중 프로프-2-인-1-일 (5-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(히드록시메틸)벤질)(메틸)카르바메이트 (350 mg, 0.579 mmol, 1.0 당량)에 피리딘 (0.278 mL, 3.47 mmol, 6 당량)을 첨가하였다. 불균질 혼합물을 0℃ 빙조 및 티오닐 클로라이드 (0.126 mL, 1.73 mmol, 3 당량)에서 냉각시켰다. 빙조에서 3시간 동안 교반한 후, 반응물을 이스코 SiO2 크로마토그래피 (0-30% MeOH/CH2Cl2)에 의해 정제하고, 프로프-2-인-1-일 (5-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(클로로메틸)벤질)(프로프-2-인-1-일)카르바메이트를 수득하였다. LCMS: MH+=623.7; Rt=2.19분 (5분 산성 방법).
(9H-플루오렌-9-일)메틸 (5-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(히드록시메틸)벤질)(메틸)카르바메이트의 합성
Figure pct00741
THF (20 mL) 중에 용해시킨 (9H-플루오렌-9-일)메틸 (5-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(((tert-부틸디페닐실릴)옥시)메틸)벤질)(메틸)카르바메이트 (2.6 g, 2.64 mmol, 1.0 당량)에 아세트산 (0.757 mL, 13.22 mmol, 5.0 당량) 및 THF 중 1.0 M TBAF (2.91 mL, 2.91 mmol, 1.1 당량)를 첨가하였다. 용액을 72시간 동안 교반하고, 이 때 휘발성 물질을 진공 하에 제거하였다. 이스코 SiO2 크로마토그래피에 의한 정제 후 (0-30% MeOH/CH2Cl2)(9H-플루오렌-9-일)메틸 (5-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(히드록시메틸)벤질)(메틸)카르바메이트를 수득하였다. LCMS: MH+=745.5; Rt=1.07분 (2분 산성 방법).
(9H-플루오렌-9-일)메틸 (5-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(클로로메틸)벤질)(메틸)카르바메이트의 합성
Figure pct00742
THF (20 mL) 중 (9H-플루오렌-9-일)메틸 (5-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(히드록시메틸)벤질)(메틸)카르바메이트 (1.0 그램, 1.342 mmol)에 NaHCO3 (677 mg, 8.05 mmol)(6 당량)을 첨가한 다음, 빙수조에서 0℃로 냉각시킨 다음, 티오닐 클로라이드 (0.245 mL, 3.36 mmol)(2.5 당량)를 천천히 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 15분 동안 교반한 다음, 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응물을 EtOAc와 NaHCO3 (포화) 사이에 분배하고, 분리하고, NaCl (포화)로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 휘발성 물질을 진공 하에 제거하였다. 잔류물을 이스코 SiO2 크로마토그래피 (0-30% iPrOH/CH2Cl2)에 의해 정제하여 (9H-플루오렌-9-일)메틸 (5-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(클로로메틸)벤질)(메틸)카르바메이트를 수득하였다. LCMS: MH+=763.2; Rt=1.18분 (2분 산성 방법).
일반적 절차 1
프로프-2-인-1-일 (5-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-((((4-니트로페녹시)카르보닐)옥시)메틸)벤질)(메틸)카르바메이트의 합성
Figure pct00743
DMF (2 mL) 중 프로프-2-인-1-일 (5-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(히드록시메틸)벤질)(메틸)카르바메이트 (249 mg, 0.412 mmol) 및 비스(4-니트로페닐)카르보네이트 (356 mg, 1.24 mmol, 3.0 당량)의 용액을 균질해질 때까지 와류시키고, 16시간 동안 정치시켰다. 용액을 DMSO (6 mL)로 희석하고, RP-HPLC 이스코 골드 크로마토그래피 (10-100% MeCN/H2O, 개질제 없음)에 의해 정제하였다. 동결건조 시, 프로프-2-인-1-일 (5-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-((((4-니트로페녹시)카르보닐)옥시)메틸)벤질)(메틸)카르바메이트를 수득하였다. LC/MS MH+=770.7, Rt=2.45분 (5분 산성 방법).
tert-부틸 ((S)-1-(((S)-1-((4-(히드록시메틸)페닐)아미노)-1-옥소-5-우레이도펜탄-2-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바메이트의 합성
Figure pct00744
DCM (4.0 mL) 중 (4-아미노페닐)메탄올 (450.0 mg, 3.65 mmol) 및 (S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄산 (1368.0 mg, 3.65 mmol, 1.0 당량)의 현탁액에 EEDQ (2259.0 mg, 9.13 mmol, 2.5 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반한 후, 반응물을 이스코 SiO2 크로마토그래피 (0-30% MeOH/CH2Cl2)에 의해 정제하고, tert-부틸 ((S)-1-(((S)-1-((4-(히드록시메틸)페닐)아미노)-1-옥소-5-우레이도펜탄-2-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바메이트를 수득하였다. LC/MS MH+=480.6, Rt=0.75분 (2분 산성 방법). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.97 (s, 1H), 7.96 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.60 - 7.48 (m, 2H), 7.29 - 7.19 (m, 2H), 6.76 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 5.96 (t, J = 5.8 Hz, 1H), 5.40 (s, 2H), 5.09 (t, J = 5.7 Hz, 1H), 4.43 (d, J = 5.7 Hz, 3H), 3.83 (dd, J = 8.9, 6.7 Hz, 1H), 2.98 (dp, J = 30.3, 6.6 Hz, 2H), 1.95 (p, J = 6.7 Hz, 1H), 1.80 - 1.54 (m, 2H), 1.38 (s, 11H), 0.84 (dd, J = 15.9, 6.8 Hz, 6H).
tert-부틸 ((S)-1-(((S)-1-((4-(클로로메틸)페닐)아미노)-1-옥소-5-우레이도펜탄-2-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바메이트의 합성
Figure pct00745
DCM (20.0 mL) 중 tert-부틸 ((S)-1-(((S)-1-((4-(히드록시메틸)페닐)아미노)-1-옥소-5-우레이도펜탄-2-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바메이트 (500.0 mg, 1.043 mmol)에 피리딘 (0.506 mL, 6.26 mmol, 6.0 당량)을 첨가하였다. 불균질 혼합물을 0℃ 빙조에서 냉각시키고, 티오닐 클로라이드 (0.228 mL, 3.13 mmol, 3 당량)를 첨가하였다. 빙조에서 4시간 동안 교반한 후, 혼합물을 실온으로 15분 동안 가온하였다. 반응물을 이스코 SiO2 크로마토그래피 (0-30% MeOH/CH2Cl2)에 의해 정제하고, tert-부틸 ((S)-1-(((S)-1-((4-(클로로메틸)페닐)아미노)-1-옥소-5-우레이도펜탄-2-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바메이트를 수득하였다. LC/MS MH+=498.1, Rt=2.02분 (5분 산성 방법).
(9H-플루오렌-9-일)메틸 (5-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-((((4-니트로페녹시)카르보닐)옥시)메틸)벤질)(메틸)카르바메이트의 합성
Figure pct00746
일반적 절차 1에 따라 (9H-플루오렌-9-일)메틸 (5-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(히드록시메틸)벤질)(메틸)카르바메이트 (100.0 mg, 0.134 mmol)를 사용하여, (9H-플루오렌-9-일)메틸 (5-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-((((4-니트로페녹시)카르보닐)옥시)메틸)벤질)(메틸)카르바메이트를 수득하였다. LC/MS MH+=910.5, Rt=1.24분 (2분 산성 방법). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.19 (s, 1H), 8.26 (s, 2H), 8.00 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.93 - 7.58 (m, 4H), 7.42 (td, J = 33.3, 32.9, 13.8 Hz, 9H), 7.14 (s, 1H), 6.72 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 6.01 (s, 1H), 5.27 (d, J = 23.7 Hz, 2H), 4.58 (s, 2H), 4.48 - 4.13 (m, 4H), 3.89 - 3.78 (m, 1H), 2.92 (t, J = 35.0 Hz, 5H), 2.00 - 1.86 (m, 1H), 1.54 (s, 3H), 1.37 (m, 11H, Boc 포함), 0.82 (dd, J = 15.4, 6.7 Hz, 6H).
(9H-플루오렌-9-일)메틸 ((S)-1-(((S)-1-((4-(히드록시메틸)-3-((프로프-2-인-1-일옥시)메틸)페닐)아미노)-1-옥소-5-우레이도펜탄-2-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바메이트의 합성
Figure pct00747
DMF (10.0 mL) 중 (S)-2-아미노-N-(4-(히드록시메틸)-3-((프로프-2-인-1-일옥시)메틸)페닐)-5-우레이도펜탄아미드 (3.64 g, 10.45 mmol), (S)-2-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)아미노)-3-메틸부탄산 (3.55 g, 10.54 mmol, 1.0 당량) 및 1-((디메틸아미노)(디메틸이미노)메틸)-1H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-b]피리딘 3-옥시드 헥사플루오로포스페이트 (V)(3.97 g, 10.54 mmol, 1.0 당량)의 용액에 DIPEA (3.64 mL, 20.90 mmol, 2.0 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 45분 동안 교반하였다. 100 mL 물로 희석하고, 5분 동안 교반하였다. 침전물을 여과하고, 이를 감압 하에 건조시켰다. 건조시킨 후, (9H-플루오렌-9-일)메틸 ((S)-1-(((S)-1-((4-(히드록시메틸)-3-((프로프-2-인-1-일옥시)메틸)페닐)아미노)-1-옥소-5-우레이도펜탄-2-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바메이트를 수득하였다. LC/MS MH+=670.3, Rt=0.96분 (2분 산성 방법).
(9H-플루오렌-9-일)메틸 ((S)-3-메틸-1-(((S)-1-((4-((((4-니트로페녹시)카르보닐)옥시)메틸)-3-((프로프-2-인-1-일옥시)메틸)페닐)아미노)-1-옥소-5-우레이도펜탄-2-일)아미노)-1-옥소부탄-2-일)카르바메이트의 합성
Figure pct00748
일반적 절차 1에 따라 (9H-플루오렌-9-일)메틸 ((S)-1-(((S)-1-((4-(히드록시메틸)-3-((프로프-2-인-1-일옥시)메틸)페닐)아미노)-1-옥소-5-우레이도펜탄-2-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바메이트 (200.0 mg, 0.299 mmol)를 사용하여, (9H-플루오렌-9-일)메틸 ((S)-3-메틸-1-(((S)-1-((4-((((4-니트로페녹시)카르보닐)옥시)메틸)-3-((프로프-2-인-1-일옥시)메틸)페닐)아미노)-1-옥소-5-우레이도펜탄-2-일)아미노)-1-옥소부탄-2-일)카르바메이트를 수득하였다. LC/MS MH+= 835.7, Rt=1.19분 (2분 산성 방법).
tert-부틸 ((R)-3-메틸-1-(((R)-1-((4-((((4-니트로페녹시)카르보닐)옥시)메틸)-3-((프로프-2-인-1-일옥시)메틸)페닐)아미노)-1-옥소-5-우레이도펜탄-2-일)아미노)-1-옥소부탄-2-일)카르바메이트의 합성
Figure pct00749
일반적 절차 1에 따라 tert-부틸 ((S)-1-(((S)-1-((4-(히드록시메틸)-3-((프로프-2-인-1-일옥시)메틸)페닐)아미노)-1-옥소-5-우레이도펜탄-2-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바메이트 (200.0 mg, 0.365 mmol)를 사용하여, tert-부틸 ((R)-3-메틸-1-(((R)-1-((4-((((4-니트로페녹시)카르보닐)옥시)메틸)-3-((프로프-2-인-1-일옥시)메틸)페닐)아미노)-1-옥소-5-우레이도펜탄-2-일)아미노)-1-옥소부탄-2-일)카르바메이트를 수득하였다. LC/MS MH+=713.6, Rt=1.08분 (2분 산성 방법).
프로프-2-인-1-일 5-((S)-2-((S)-2-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(히드록시메틸)벤질 (메틸)카르바메이트의 합성
Figure pct00750
0℃에서 DCM (1.0 mL) 중 프로프-2-인-1-일 5-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(히드록시메틸)벤질 (메틸)카르바메이트 (48.0 mg, 0.079 mmol)의 용액에 TFA (0.2 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 이 온도에서 1시간 동안 교반하였다. 그 후, 용매를 진공 하에 제거하였다. 잔류물을 DMF (1.0 mL) 중에 용해시키고, 이어서 DIPEA (0.138 mL, 0.794 mmol, 10 당량) 및 (9H-플루오렌-9-일)메틸 (2,5-디옥소피롤리딘-1-일) 카르보네이트 (40.2 mg, 0.119 mmol, 1.5 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반하였다. 반응물을 RP-HPLC 이스코 골드 크로마토그래피 (0-100% MeCN/H2O, 개질제 없음)에 의해 정제하였다. 동결건조 시, 프로프-2-인-1-일 5-((S)-2-((S)-2-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(히드록시메틸)벤질 (메틸)카르바메이트를 수득하였다. LC/MS MH+=727.3, Rt=2.28분 (5분 산성 방법). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.01 (s, 1H), 8.09 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.89 (d, 2H), 7.74 (t, J = 8.2 Hz, 2H), 7.62 (s, 1H), 7.45 - 7.36 (m, 3H), 7.35 - 7.15 (m, 4H), 5.95 (t, J = 5.9 Hz, 1H), 5.36 (s, 2H), 5.03 (s, 1H), 4.70 (d, J = 14.8 Hz, 2H), 4.54 - 4.36 (m, 5H), 4.35 - 4.19 (m, 3H), 3.96 - 3.87 (m, 1H), 3.50 (d, J = 26.0 Hz, 1H), 2.97 (dp, J = 20.1, 6.6 Hz, 2H), 2.82 (s, 3H), 1.98 (q, J = 6.8 Hz, 1H), 1.73 - 1.50 (m, 2H), 1.51 - 1.30 (m, 2H), 0.86 (dd, J = 10.2, 6.7 Hz, 6H).
프로프-2-인-1-일 5-((S)-2-((S)-2-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-((((4-니트로페녹시)카르보닐)옥시)메틸)벤질 (메틸)카르바메이트의 합성
Figure pct00751
프로프-2-인-1-일 5-((S)-2-((S)-2-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(히드록시메틸)벤질 (메틸)카르바메이트 (77.6 mg, 0.107 mmol)를 사용하여 일반적 절차 1에 따라, 프로프-2-인-1-일 5-((S)-2-((S)-2-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-((((4-니트로페녹시)카르보닐)옥시)메틸)벤질 (메틸)카르바메이트를 수득하였다. LC/MS MH+= 892.4, Rt=1.14분 (2분 산성 방법).
프로프-2-인-1-일 5-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-((((4-니트로페녹시)카르보닐)옥시)메틸)벤질 (프로프-2-인-1-일)카르바메이트의 합성
Figure pct00752
프로프-2-인-1-일 5-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(히드록시메틸)벤질 (프로프-2-인-1-일)카르바메이트 (250.0 mg, 0.398 mmol)를 사용하여 일반적 절차 1에 따라, 프로프-2-인-1-일 5-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-((((4-니트로페녹시)카르보닐)옥시)메틸)벤질 (프로프-2-인-1-일)카르바메이트를 수득하였다. LC/MS MH+= 794.9, Rt=1.07분 (2분 산성 방법).
프로프-2-인-1-일 2-(((tert-부틸디페닐실릴)옥시)메틸)-5-니트로벤질 (프로프-2-인-1-일)카르바메이트의 합성
Figure pct00753
DCM (10.0 mL) 중 N-(2-(((tert-부틸디페닐실릴)옥시)메틸)-5-니트로벤질)프로프-2-인-1-아민 (1.348 g, 2.94 mmol)의 용액에 피리딘 (2.0 mL)에 이어서 프로프-2-인-1-일 카르보노클로리데이트 (0.574 mL, 5.88 mmol, 2.0 당량)를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하였다. 반응물을 MeOH로 켄칭하고, CH2Cl2 (20 mL)로 희석한 다음, 물, NaCl(포화)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시키고, 이스코 SiO2 크로마토그래피 (0-50% EtOAc/헵탄)에 의해 정제하여, 프로프-2-인-1-일 2-(((tert-부틸디페닐실릴)옥시)메틸)-5-니트로벤질 (프로프-2-인-1-일)카르바메이트를 수득하였다. LC/MS MH+= 541.6, Rt=1.47분 (2분 산성 방법). 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 8.18 (dd, J = 8.4, 2.4 Hz, 1H, Ar), 8.10 (d, J = 2.3 Hz, 1H, Ar), 7.72 - 7.63 (m, 4H, Ph), 7.54 - 7.35 (m, 7H, Ph + Ar), 4.86 (s, 2H), 4.80 - 4.53 (m, 4H), 4.02 (d, J = 22.3 Hz, 2H), 2.76 (d, J = 4.7 Hz, 1H), 2.17 (t, J = 2.4 Hz, 1H), 1.13 (d, J = 3.1 Hz, 9H).
프로프-2-인-1-일 5-아미노-2-(((tert-부틸디페닐실릴)옥시)메틸)벤질 (프로프-2-인-1-일)카르바메이트의 합성
Figure pct00754
0℃에서 DCM (9.0 mL) 및 AcOH (1.0 mL) 중 프로프-2-인-1-일 2-(((tert-부틸디페닐실릴)옥시)메틸)-5-니트로벤질 (프로프-2-인-1-일)카르바메이트 (1.66 g, 2.07 mmol)의 용액에 아연 (3.01 g, 46.1 mmol, 15.0 당량)을 첨가하고, 혼합물을 이 온도에서 40분 동안 교반하였다. 반응물을 셀라이트를 통해 여과하고, DCM으로 헹구었다. 여과물을 NaHCO3 (포화), 물 및 NaCl(포화)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시키고, 이스코 SiO2 크로마토그래피 (0-100% EtOAc/헵탄)에 의해 정제하여, 프로프-2-인-1-일 5-아미노-2-(((tert-부틸디페닐실릴)옥시)메틸)벤질 (프로프-2-인-1-일)카르바메이트를 수득하였다. LC/MS M+Na = 533.2, Rt=1.35분 (2분 산성 방법).
프로프-2-인-1-일 5-((S)-2-((S)-2-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(((tert-부틸디페닐실릴)옥시)메틸)벤질 (프로프-2-인-1-일)카르바메이트의 합성
Figure pct00755
DCM (10.0 mL) 및 MeOH (5.0 mL) 중에 프로프-2-인-1-일 5-아미노-2-(((tert-부틸디페닐실릴)옥시)메틸)벤질 (프로프-2-인-1-일)카르바메이트 (1.19 g, 2.33 mmol) 및 (S)-2-((S)-2-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄산 (1.157 g, 2.33 mmol, 1.0 당량)을 현탁시키고, EEDQ (0.691 g, 2.80 mmol, 1.2 당량)를 첨가하고, 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 용매를 진공 하에 제거하고, 잔류물을 DMSO (3.0 mL) 중에 용해시키고, RP-HPLC 이스코 골드 크로마토그래피 (0-100% MeCN/H2O, 0.05% TFA 개질제)에 의해 정제하였다. 동결건조 시, 프로프-2-인-1-일 5-((S)-2-((S)-2-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(((tert-부틸디페닐실릴)옥시)메틸)벤질 (프로프-2-인-1-일)카르바메이트를 수득하였다. LC/MS M+H= 990.0, Rt=1.47분 (2분 산성 방법).
프로프-2-인-1-일 5-((S)-2-((S)-2-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(히드록시메틸)벤질 (프로프-2-인-1-일)카르바메이트의 합성
Figure pct00756
THF (5.0 mL) 중 프로프-2-인-1-일 5-((S)-2-((S)-2-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(((tert-부틸디페닐실릴)옥시)메틸)벤질 (프로프-2-인-1-일)카르바메이트 (732.0 mg, 0.740 mmol)의 용액에 아세트산 (0.127 mL, 2.220 mmol, 3.0 당량) 및 THF 중 1.0 M TBAF (1.48 mL, 1.480 mmol, 2.0 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 20시간 동안 교반하였다. LCMS는 약간의 출발 물질이 남아있음을 나타내었다. THF 중 1.0 M TBAF (0.75 mL, 0.750 mmol, 1.0 당량)를 첨가하고, 실온에서 20시간 동안 교반하였다. 용매를 진공 하에 제거하고, 물질을 이스코 SiO2 크로마토그래피 (0-50% MeOH/CH2Cl2)에 의해 정제하고, 프로프-2-인-1-일 5-((S)-2-((S)-2-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(히드록시메틸)벤질 (프로프-2-인-1-일)카르바메이트를 수득하였다. LC/MS M+H= 751.6, Rt=0.99분 (2분 산성 방법).
프로프-2-인-1-일 5-((S)-2-((S)-2-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-((((4-니트로페녹시)카르보닐)옥시)메틸)벤질 (프로프-2-인-1-일)카르바메이트의 합성
Figure pct00757
프로프-2-인-1-일 5-((S)-2-((S)-2-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(히드록시메틸)벤질 (프로프-2-인-1-일)카르바메이트 (556.0 mg, 0.740 mmol)를 사용하여 일반적 절차 1에 따라, 프로프-2-인-1-일 5-((S)-2-((S)-2-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-((((4-니트로페녹시)카르보닐)옥시)메틸)벤질 (프로프-2-인-1-일)카르바메이트를 수득하였다. LC/MS M+H= 916.8, Rt=1.16분 (2분 산성 방법).
(S)-2-((S)-2-아미노-3-메틸부탄아미도)-N-(4-(히드록시메틸)페닐)-5-우레이도펜탄아미드의 합성
Figure pct00758
tert-부틸 ((S)-1-(((S)-1-((4-(히드록시메틸)페닐)아미노)-1-옥소-5-우레이도펜탄-2-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바메이트 (2.00 g, 4.17 mmol)를 사용하여 하기 기재된 일반적 절차 4에 따라, (S)-2-((S)-2-아미노-3-메틸부탄아미도)-N-(4-(히드록시메틸)페닐)-5-우레이도펜탄아미드를 수득하였다. LC/MS M+H= 380.6, Rt=0.40분 (2분 산성 방법).
(S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-N-(4-(히드록시메틸)페닐)-5-우레이도펜탄아미드의 합성
Figure pct00759
2,5-디옥소피롤리딘-1-일 3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로파노에이트 (100.0 mg, 0.322 mmol) 및 (S)-2-((S)-2-아미노-3-메틸부탄아미도)-N-(4-(히드록시메틸)페닐)-5-우레이도펜탄아미드 (175.0 mg, 0.355 mmol, 1.1 당량)를 사용하여 하기 기재된 일반적 절차 5에 따라, (S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-N-(4-(히드록시메틸)페닐)-5-우레이도펜탄아미드를 수득하였다. LC/MS M+H= 575.4, Rt=0.61분 (2분 염기성 방법).
4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질 (4-니트로페닐) 카르보네이트의 합성
Figure pct00760
(S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-N-(4-(히드록시메틸)페닐)-5-우레이도펜탄아미드 (126.0 mg, 0.219 mmol)를 사용하여 일반적 절차 1에 따라, 4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질 (4-니트로페닐) 카르보네이트를 수득하였다. LC/MS M+H= 575.4, Rt=0.61분 (2분 염기성 방법).
tert-부틸 ((S)-3-메틸-1-(((S)-1-((4-((((4-니트로페녹시)카르보닐)옥시)메틸)페닐)아미노)-1-옥소-5-우레이도펜탄-2-일)아미노)-1-옥소부탄-2-일)카르바메이트의 합성
Figure pct00761
일반적 절차 1에 따라 tert-부틸 ((S)-1-(((S)-1-((4-(히드록시메틸)페닐)아미노)-1-옥소-5-우레이도펜탄-2-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바메이트 (200.0 mg, 0.417 mmol)를 사용하여, tert-부틸 ((S)-3-메틸-1-(((S)-1-((4-((((4-니트로페녹시)카르보닐)옥시)메틸)페닐)아미노)-1-옥소-5-우레이도펜탄-2-일)아미노)-1-옥소부탄-2-일)카르바메이트를 수득하였다. LC/MS M+H= 645.5, Rt=1.02분 (2분 산성 방법).
일반적 절차 2
2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-2-카르복시피리딘-3-일)-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)옥시)-N-(4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-((메틸아미노)메틸)벤질)-N,N-디메틸에탄-1-아미늄의 합성
Figure pct00762
DMSO (1 mL) 중 6-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-3-(1-(((1r,3s,5R,7S)-3-(2-(디메틸아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피콜린산 (25 mg, 0.033 mmol), (9H-플루오렌-9-일)메틸 (5-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(클로로메틸)벤질)(메틸)카르바메이트 (25 mg, 0.033 mmol, 1.0 당량) 및 TBAI (12 mg, 0.033 mmol, 1.0 당량)의 현탁액에 DIPEA (0.03 mL, 0.164 mmol, 5.0 당량)를 첨가하고, 실온에서 16시간 동안 교반하였다. THF 중 2.0 M 디메틸아민 (0.164 mL, 0.328 mmol, 10 당량)을 첨가하였다. 1.5시간 동안 정치한 후, 용액을 RP-HPLC 이스코 골드 크로마토그래피 (10-100% MeCN/H2O, 0.1% TFA 개질제)에 의해 정제하였다. 동결건조 시, 2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-2-카르복시피리딘-3-일)-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)옥시)-N-(4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-((메틸아미노)메틸)벤질)-N,N-디메틸에탄-1-아미늄을 수득하였다. HRMS: M+= 1266.3000; Rt=1.85분 (5분 산성 방법).
일반적 절차 3
2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-2-카르복시피리딘-3-일)-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)옥시)-N-(4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(80-카르복시-2-메틸-3-옥소-6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42,45,48,51,54,57,60,63,66,69,72,75,78-펜타코사옥사-2-아자옥타콘틸)벤질)-N,N-디메틸에탄-1-아미늄의 합성
Figure pct00763
DMF (0.5 mL) 중 2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-2-카르복시피리딘-3-일)-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)옥시)-N-(4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-((메틸아미노)메틸)벤질)-N,N-디메틸에탄-1-아미늄 (42 mg, 0.027 mmol) 및 79-((2,5-디옥소피롤리딘-1-일)옥시)-79-옥소-4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43,46,49,52,55,58,61,64,67,70,73,76-펜타코사옥사노나헵타콘탄산 (42 mg, 0.032 mmol, 1.2 당량)의 용액에 DIPEA (0.023 mL, 0.133 mmol, 5.0 당량)를 첨가하고, 실온에서 5시간 동안 교반하였다. DMSO (2 mL)를 첨가하고, 용액을 RP-HPLC 이스코 골드 크로마토그래피 (10-100% MeCN/H2O, 0.1% TFA 개질제)에 의해 정제하였다. 동결건조 시, 2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-2-카르복시피리딘-3-일)-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)옥시)-N-(4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(80-카르복시-2-메틸-3-옥소-6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42,45,48,51,54,57,60,63,66,69,72,75,78-펜타코사옥사-2-아자옥타콘틸)벤질)-N,N-디메틸에탄-1-아미늄을 수득하였다. HRMS: M+= 2465.7800; Rt=2.15분 (5분 산성 방법).
일반적 절차 4
N-(4-((S)-2-((S)-2-아미노-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(80-카르복시-2-메틸-3-옥소-6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42,45,48,51,54,57,60,63,66,69,72,75,78-펜타코사옥사-2-아자옥타콘틸)벤질)-2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-2-카르복시피리딘-3-일)-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)옥시)-N,N-디메틸에탄-1-아미늄의 합성
Figure pct00764
빙조에서 0℃에서 CH2Cl2 (0.75 mL) 중 2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-2-카르복시피리딘-3-일)-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)옥시)-N-(4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(80-카르복시-2-메틸-3-옥소-6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42,45,48,51,54,57,60,63,66,69,72,75,78-펜타코사옥사-2-아자옥타콘틸)벤질)-N,N-디메틸에탄-1-아미늄 (28 mg, 0.011 mmol)의 용액에 트리플루오로아세트산 (0.25 mL)을 첨가하였다. 혼합물을 빙조에서 1시간 동안 교반하였으며, 이 때 휘발성 물질을 진공 하에 제거하였다. DMSO (1.5 mL)를 첨가하고, 용액을 RP-HPLC 이스코 골드 크로마토그래피 (10-100% MeCN/H2O, 0.1% TFA 개질제)에 의해 정제하였다. 동결건조 시, N-(4-((S)-2-((S)-2-아미노-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(80-카르복시-2-메틸-3-옥소-6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42,45,48,51,54,57,60,63,66,69,72,75,78-펜타코사옥사-2-아자옥타콘틸)벤질)-2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-2-카르복시피리딘-3-일)-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)옥시)-N,N-디메틸에탄-1-아미늄을 수득하였다. HRMS: M+= 2367.3101; Rt=1.86분 (5분 산성 방법). 이 일반적 절차를 위해, 일부 경우에 아민을 RP-HPLC 정제 없이 그대로 사용하였다.
일반적 절차 5
2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-2-카르복시피리딘-3-일)-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)옥시)-N-(2-(80-카르복시-2-메틸-3-옥소-6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42,45,48,51,54,57,60,63,66,69,72,75,78-펜타코사옥사-2-아자옥타콘틸)-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)-N,N-디메틸에탄-1-아미늄 (L11A-P27)의 합성
Figure pct00765
DMF (0.5 mL) 중 N-(4-((S)-2-((S)-2-아미노-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(80-카르복시-2-메틸-3-옥소-6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42,45,48,51,54,57,60,63,66,69,72,75,78-펜타코사옥사-2-아자옥타콘틸)벤질)-2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-2-카르복시피리딘-3-일)-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)옥시)-N,N-디메틸에탄-1-아미늄 (10.0 mg, 0.004 mmol) 및 2,5-디옥소피롤리딘-1-일 3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로파노에이트 (1.4 mg, 0.005 mmol, 1.2 당량)의 용액에 DIPEA (6.7 μL, 0.039 mmol, 10.0 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 3.5시간 동안 교반하였다. DMSO (1.5 mL)를 첨가하고, 용액을 RP-HPLC 이스코 골드 크로마토그래피 (10-100% MeCN/H2O, 0.1% TFA 개질제)에 의해 정제하였다. 동결건조 시, 2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-2-카르복시피리딘-3-일)-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)옥시)-N-(2-(80-카르복시-2-메틸-3-옥소-6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42,45,48,51,54,57,60,63,66,69,72,75,78-펜타코사옥사-2-아자옥타콘틸)-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)-N,N-디메틸에탄-1-아미늄을 수득하였다. HRMS: M+= 2562.3401; Rt=2.04분 (5분 산성 방법).
1-(2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-2-(((4-메톡시벤질)옥시)카르보닐)피리딘-3-일)-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)옥시)에틸)-1-(4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-((메틸아미노)메틸)벤질)피롤리딘-1-윰의 합성
Figure pct00766
일반적 절차 2에 따라 4-메톡시벤질 6-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-3-(1-(((1r,3R,5S,7s)-3,5-디메틸-7-(2-(피롤리딘-1-일)에톡시)아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피콜리네이트 (30.0 mg, 0.033 mmol) 및 (9H-플루오렌-9-일)메틸 (5-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(클로로메틸)벤질)(메틸)카르바메이트 (25.2 mg, 0.033 mmol, 1.0 당량)를 사용하여, 1-(2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-2-(((4-메톡시벤질)옥시)카르보닐)피리딘-3-일)-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)옥시)에틸)-1-(4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-((메틸아미노)메틸)벤질)피롤리딘-1-윰을 수득하였다. HRMS: M+= 1412.7600; Rt=2.22분 (5분 산성 방법).
1-(2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-2-(((4-메톡시벤질)옥시)카르보닐)피리딘-3-일)-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)옥시)에틸)-1-(4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(80-카르복시-2-메틸-3-옥소-6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42,45,48,51,54,57,60,63,66,69,72,75,78-펜타코사옥사-2-아자옥타콘틸)벤질)피롤리딘-1-윰의 합성
Figure pct00767
일반적 절차 3에 따라 1-(2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-2-(((4-메톡시벤질)옥시)카르보닐)피리딘-3-일)-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)옥시)에틸)-1-(4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-((메틸아미노)메틸)벤질)피롤리딘-1-윰 (42.0 mg, 0.026 mmol) 및 79-((2,5-디옥소피롤리딘-1-일)옥시)-79-옥소-4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43,46,49,52,55,58,61,64,67,70,73,76-펜타코사옥사노나헵타콘탄산 (40.4 mg, 0.031 mmol, 1.2 당량)을 사용하여 1-(2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-2-(((4-메톡시벤질)옥시)카르보닐)피리딘-3-일)-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)옥시)에틸)-1-(4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(80-카르복시-2-메틸-3-옥소-6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42,45,48,51,54,57,60,63,66,69,72,75,78-펜타코사옥사-2-아자옥타콘틸)벤질)피롤리딘-1-윰을 수득하였다. HRMS: M+= 2613.4199; Rt=2.38분 (5분 산성 방법).
1-(4-((S)-2-((S)-2-아미노-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(80-카르복시-2-메틸-3-옥소-6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42,45,48,51,54,57,60,63,66,69,72,75,78-펜타코사옥사-2-아자옥타콘틸)벤질)-1-(2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-2-카르복시피리딘-3-일)-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)옥시)에틸)피롤리딘-1-윰의 합성
Figure pct00768
1-(2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-2-(((4-메톡시벤질)옥시)카르보닐)피리딘-3-일)-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)옥시)에틸)-1-(4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(80-카르복시-2-메틸-3-옥소-6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42,45,48,51,54,57,60,63,66,69,72,75,78-펜타코사옥사-2-아자옥타콘틸)벤질)피롤리딘-1-윰 (68.0 mg, 0.26 mmol)을 사용하여 일반적 절차 4에 따라, 1-(4-((S)-2-((S)-2-아미노-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(80-카르복시-2-메틸-3-옥소-6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42,45,48,51,54,57,60,63,66,69,72,75,78-펜타코사옥사-2-아자옥타콘틸)벤질)-1-(2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-2-카르복시피리딘-3-일)-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)옥시)에틸)피롤리딘-1-윰을 수득하였다. HRMS: M+= 2393.3301; Rt=1.85분 (5분 산성 방법).
1-(2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-2-카르복시피리딘-3-일)-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)옥시)에틸)-1-(2-(80-카르복시-2-메틸-3-옥소-6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42,45,48,51,54,57,60,63,66,69,72,75,78-펜타코사옥사-2-아자옥타콘틸)-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)피롤리딘-1-윰 (L11A-P21)의 합성
Figure pct00769
1-(4-((S)-2-((S)-2-아미노-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(80-카르복시-2-메틸-3-옥소-6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42,45,48,51,54,57,60,63,66,69,72,75,78-펜타코사옥사-2-아자옥타콘틸)벤질)-1-(2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-2-카르복시피리딘-3-일)-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)옥시)에틸)피롤리딘-1-윰 (26.1 mg, 0.011 mmol) 및 2,5-디옥소피롤리딘-1-일 3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로파노에이트 (5.1 mg, 0.016 mmol, 1.5 당량)를 사용하여 일반적 절차 5에 따라, 1-(2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-2-카르복시피리딘-3-일)-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)옥시)에틸)-1-(2-(80-카르복시-2-메틸-3-옥소-6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42,45,48,51,54,57,60,63,66,69,72,75,78-펜타코사옥사-2-아자옥타콘틸)-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)피롤리딘-1-윰을 수득하였다. HRMS: M+= 2588.3899; Rt=2.05분 (5분 산성 방법).
일반적 절차 6
3-(4-(3-(2-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-4-카르복시티아졸-5-일)프로폭시)-3-플루오로페닐)-N-(4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-((프로프-2-인-1-일옥시)메틸)벤질)-N,N-디메틸프로프-2-인-1-아미늄의 합성
Figure pct00770
DMSO (2.0 ml) 중 2-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-5-(3-(4-(3-(디메틸아미노)프로프-1-인-1-일)-2-플루오로페녹시)프로필)티아졸-4-카르복실산 (75.0 mg, 0.114 mmol) 및 tert-부틸 ((S)-1-(((S)-1-((4-(클로로메틸)-3-((프로프-2-인-1-일옥시)메틸)페닐)아미노)-1-옥소-5-우레이도펜탄-2-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바메이트 (103.0 mg, 0.182 mmol, 1.6 당량)의 현탁액에 TBAI (67.4 mg, 0.182 mmol, 1.6 당량) 및 DIPEA (0.16 mL, 0.912 mmol, 9.0 당량)를 첨가하였다. 혼합물이 용액이 되었고, 이를 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 그 후, 용액을 RP-HPLC 이스코 골드 크로마토그래피 (10-70% MeCN/H2O, 0.1% TFA 개질제)에 의해 정제하였다. 동결건조 시, 3-(4-(3-(2-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-4-카르복시티아졸-5-일)프로폭시)-3-플루오로페닐)-N-(4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-((프로프-2-인-1-일옥시)메틸)벤질)-N,N-디메틸프로프-2-인-1-아미늄을 수득하였다. LCMS: M+= 1187.6; Rt=0.93분 (2분 산성 방법).
일반적 절차 7
N-(2-(((1-(2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사펜타코산-25-일)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)메틸)-4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)-3-(4-(3-(2-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-4-카르복시티아졸-5-일)프로폭시)-3-플루오로페닐)-N,N-디메틸프로프-2-인-1-아미늄의 합성
Figure pct00771
3-(4-(3-(2-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-4-카르복시티아졸-5-일)프로폭시)-3-플루오로페닐)-N-(4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-((프로프-2-인-1-일옥시)메틸)벤질)-N,N-디메틸프로프-2-인-1-아미늄 (50.0 mg, 0.042 mmol), 25-아지도-2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사펜타코산 (34.5 mg, 0.084 mmol, 2.0 당량), 소듐 (R)-2-((S)-1,2-디히드록시에틸)-4-히드록시-5-옥소-2,5-디히드로푸란-3-올레이트 (12.5 mg, 0.63 mmol, 1.5 당량) 및 황산구리 (II) 5수화물 (2.1 mg, 0.008 mmol, 0.2 당량)이 들은 플라스크를 밀봉하고, 배기시키고/ N2로 3회 퍼징하고, tert.-부탄올 (5.0 mL) 및 물 (0.5 mL)을 시린지를 통해 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. DMSO (1 mL)를 첨가하고, 용액을 RP-HPLC 이스코 골드 크로마토그래피 (0-100% MeCN/H2O, 0.1% TFA 개질제)에 의해 정제하였다. 동결건조 시, N-(2-(((1-(2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사펜타코산-25-일)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)메틸)-4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)-3-(4-(3-(2-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-4-카르복시티아졸-5-일)프로폭시)-3-플루오로페닐)-N,N-디메틸프로프-2-인-1-아미늄을 수득하였다. HRMS: M+= 1596.7531; Rt=1.18분 (2분 산성 방법). 이 일반적 절차를 위해, 일부 경우에 tert.-부탄올 대신에, DMF 또는 DMSO를 사용하였다.
N-(2-(((1-(2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사펜타코산-25-일)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)메틸)-4-((S)-2-((S)-2-아미노-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)-3-(4-(3-(2-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-4-카르복시티아졸-5-일)프로폭시)-3-플루오로페닐)-N,N-디메틸프로프-2-인-1-아미늄의 합성
Figure pct00772
일반적 절차 4에 따라 N-(2-(((1-(2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사펜타코산-25-일)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)메틸)-4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)-3-(4-(3-(2-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-4-카르복시티아졸-5-일)프로폭시)-3-플루오로페닐)-N,N-디메틸프로프-2-인-1-아미늄 (30.0 mg, 0.019 mmol)을 사용하여, N-(2-(((1-(2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사펜타코산-25-일)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)메틸)-4-((S)-2-((S)-2-아미노-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)-3-(4-(3-(2-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-4-카르복시티아졸-5-일)프로폭시)-3-플루오로페닐)-N,N-디메틸프로프-2-인-1-아미늄을 수득하였다. LCMS: M+= 1497.2; Rt=1.94분 (5분 산성 방법).
N-(2-(((1-(2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사펜타코산-25-일)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)메틸)-4-((R)-2-((R)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)-3-(4-(3-(2-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-4-카르복시티아졸-5-일)프로폭시)-3-플루오로페닐)-N,N-디메틸프로프-2-인-1-아미늄 (L8A-P1)의 합성
Figure pct00773
N-(2-(((1-(2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사펜타코산-25-일)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)메틸)-4-((S)-2-((S)-2-아미노-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)-3-(4-(3-(2-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-4-카르복시티아졸-5-일)프로폭시)-3-플루오로페닐)-N,N-디메틸프로프-2-인-1-아미늄 (24.0 mg, 0.016 mmol)을 사용하여 일반적 절차 5에 따라, N-(2-(((1-(2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사펜타코산-25-일)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)메틸)-4-((R)-2-((R)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)-3-(4-(3-(2-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-4-카르복시티아졸-5-일)프로폭시)-3-플루오로페닐)-N,N-디메틸프로프-2-인-1-아미늄을 수득하였다. HRMS: M+= 1691.7500; Rt=4.35분 (5분 산성 방법).
3-(4-(3-(2-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-4-카르복시티아졸-5-일)프로폭시)-3-플루오로페닐)-N-(4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(((1-(26-카르복시-3,6,9,12,15,18,21,24-옥타옥사헥사코실)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)메틸)벤질)-N,N-디메틸프로프-2-인-1-아미늄의 합성
Figure pct00774
일반적 절차 7에 따라 3-(4-(3-(2-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-4-카르복시티아졸-5-일)프로폭시)-3-플루오로페닐)-N-(4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-((프로프-2-인-1-일옥시)메틸)벤질)-N,N-디메틸프로프-2-인-1-아미늄 (50.0 mg, 0.042 mmol) 및 1-아지도-3,6,9,12,15,18,21,24-옥타옥사헵타코산-27-산 (39.4 mg, 0.084 mmol, 2.0 당량)을 사용하여, 3-(4-(3-(2-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-4-카르복시티아졸-5-일)프로폭시)-3-플루오로페닐)-N-(4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(((1-(26-카르복시-3,6,9,12,15,18,21,24-옥타옥사헥사코실)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)메틸)벤질)-N,N-디메틸프로프-2-인-1-아미늄을 수득하였다. LCMS: 1/2M+= 828.1; Rt=0.71분 (2분 산성 방법).
일반적 절차 8
3-(4-(3-(2-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-4-카르복시티아졸-5-일)프로폭시)-3-플루오로페닐)-N-(2-(((1-(26-카르복시-3,6,9,12,15,18,21,24-옥타옥사헥사코실)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)메틸)-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)-N,N-디메틸프로프-2-인-1-아미늄 (L7A-P1)의 합성
Figure pct00775
DCM/TFA (3:1, 2.6 mL) 중 3-(4-(3-(2-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-4-카르복시티아졸-5-일)프로폭시)-3-플루오로페닐)-N-(4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(((1-(26-카르복시-3,6,9,12,15,18,21,24-옥타옥사헥사코실)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)메틸)벤질)-N,N-디메틸프로프-2-인-1-아미늄 (32.2 mg, 0.019 mmol)의 용액을 0℃로 냉각시키고, 이 온도에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 감압 하에 증발시켜 조 탈-Boc 중간체를 수득한 후, 조 물질을 DMF (0.5 mL) 중에 용해시키고, 이어서 2,5-디옥소피롤리딘-1-일 3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로파노에이트 (12.1 mg, 0.039 mmol, 2.0 당량) 및 DIPEA (0.1 mL, 0.584 mmol, 30.0 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하였다. 용액을 RP-HPLC 이스코 골드 크로마토그래피 (0-100% MeCN/H2O, 0.1% TFA 개질제)에 의해 정제하였다. 동결건조 시, 3-(4-(3-(2-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-4-카르복시티아졸-5-일)프로폭시)-3-플루오로페닐)-N-(2-(((1-(26-카르복시-3,6,9,12,15,18,21,24-옥타옥사헥사코실)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)메틸)-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)-N,N-디메틸프로프-2-인-1-아미늄을 수득하였다. HRMS: M+= 1749.7400; Rt=2.51분 (5분 산성 방법).
N-(4-((S)-2-((S)-2-아미노-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-((프로프-2-인-1-일옥시)메틸)벤질)-3-(4-(3-(2-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-4-카르복시티아졸-5-일)프로폭시)-3-플루오로페닐)-N,N-디메틸프로프-2-인-1-아미늄의 합성
Figure pct00776
일반적 절차 4에 따라 3-(4-(3-(2-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-4-카르복시티아졸-5-일)프로폭시)-3-플루오로페닐)-N-(4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-((프로프-2-인-1-일옥시)메틸)벤질)-N,N-디메틸프로프-2-인-1-아미늄 (263.0 mg, 0.221 mmol)을 사용하여, N-(4-((S)-2-((S)-2-아미노-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-((프로프-2-인-1-일옥시)메틸)벤질)-3-(4-(3-(2-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-4-카르복시티아졸-5-일)프로폭시)-3-플루오로페닐)-N,N-디메틸프로프-2-인-1-아미늄을 수득하였다. HRMS: M+= 1087.2700; Rt=1.85분 (5분 산성 방법).
3-(4-(3-(2-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-4-카르복시티아졸-5-일)프로폭시)-3-플루오로페닐)-N-(4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-((프로프-2-인-1-일옥시)메틸)벤질)-N,N-디메틸프로프-2-인-1-아미늄의 합성
Figure pct00777
N-(4-((S)-2-((S)-2-아미노-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-((프로프-2-인-1-일옥시)메틸)벤질)-3-(4-(3-(2-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-4-카르복시티아졸-5-일)프로폭시)-3-플루오로페닐)-N,N-디메틸프로프-2-인-1-아미늄 (77.0 mg, 0.050 mmol) 및 2,5-디옥소피롤리딘-1-일 3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로파노에이트 (23.2 mg, 0.075 mmol, 1.5 당량)를 사용하여 일반적 절차 5에 따라, 3-(4-(3-(2-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-4-카르복시티아졸-5-일)프로폭시)-3-플루오로페닐)-N-(4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-((프로프-2-인-1-일옥시)메틸)벤질)-N,N-디메틸프로프-2-인-1-아미늄을 수득하였다. HRMS: M+= 1282.4800; Rt=2.15분 (5분 산성 방법).
3-(4-(3-(2-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-4-카르복시티아졸-5-일)프로폭시)-3-플루오로페닐)-N-(2-(((1-(74-카르복시-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42,45,48,51,54,57,60,63,66,69,72-테트라코사옥사테트라헵타콘틸)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)메틸)-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)-N,N-디메틸프로프-2-인-1-아미늄 (L109A-P1)의 합성
Figure pct00778
일반적 절차 7에 따라 3-(4-(3-(2-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-4-카르복시티아졸-5-일)프로폭시)-3-플루오로페닐)-N-(4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-((프로프-2-인-1-일옥시)메틸)벤질)-N,N-디메틸프로프-2-인-1-아미늄 (51.8 mg, 0.037 mmol) 및 1-아지도-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42,45,48,51,54,57,60,63,66,69,72-테트라코사옥사펜타헵타콘탄-75-산 (87.0 mg, 0.074 mmol, 2.0 당량)을 사용하여 3-(4-(3-(2-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-4-카르복시티아졸-5-일)프로폭시)-3-플루오로페닐)-N-(2-(((1-(74-카르복시-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42,45,48,51,54,57,60,63,66,69,72-테트라코사옥사테트라헵타콘틸)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)메틸)-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)-N,N-디메틸프로프-2-인-1-아미늄을 수득하였다. HRMS: M+= 2453.8899; Rt=2.17분 (5분 산성 방법).
3-(4-(3-(2-((6-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-5-메틸피리다진-3-일)(메틸)아미노)-4-카르복시티아졸-5-일)프로폭시)-3-플루오로페닐)-N-(4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-((프로프-2-인-1-일옥시)메틸)벤질)-N,N-디메틸프로프-2-인-1-아미늄의 합성
Figure pct00779
일반적 절차 6에 따라 2-((6-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-5-메틸피리다진-3-일)(메틸)아미노)-5-(3-(4-(3-(디메틸아미노)프로프-1-인-1-일)-2-플루오로페녹시)프로필)티아졸-4-카르복실산 (50.0 mg, 0.079 mmol) 및 tert-부틸 ((S)-1-(((S)-1-((4-(클로로메틸)-3-((프로프-2-인-1-일옥시)메틸)페닐)아미노)-1-옥소-5-우레이도펜탄-2-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바메이트 (71.7 mg, 0.127 mmol, 1.6 당량)를 사용하여, 3-(4-(3-(2-((6-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-5-메틸피리다진-3-일)(메틸)아미노)-4-카르복시티아졸-5-일)프로폭시)-3-플루오로페닐)-N-(4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-((프로프-2-인-1-일옥시)메틸)벤질)-N,N-디메틸프로프-2-인-1-아미늄을 수득하였다. LCMS: M+= 1162.2; Rt=0.94분 (2분 염기성 방법).
3-(4-(3-(2-((6-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-5-메틸피리다진-3-일)(메틸)아미노)-4-카르복시티아졸-5-일)프로폭시)-3-플루오로페닐)-N-(4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(((1-(26-카르복시-3,6,9,12,15,18,21,24-옥타옥사헥사코실)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)메틸)벤질)-N,N-디메틸프로프-2-인-1-아미늄의 합성
Figure pct00780
일반적 절차 7에 따라 3-(4-(3-(2-((6-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-5-메틸피리다진-3-일)(메틸)아미노)-4-카르복시티아졸-5-일)프로폭시)-3-플루오로페닐)-N-(4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-((프로프-2-인-1-일옥시)메틸)벤질)-N,N-디메틸프로프-2-인-1-아미늄 (40.0 mg, 0.034 mmol) 및 1-아지도-3,6,9,12,15,18,21,24-옥타옥사헵타코산-27-산 (25.8 mg, 0.055 mmol, 1.6 당량)을 사용하여, 3-(4-(3-(2-((6-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-5-메틸피리다진-3-일)(메틸)아미노)-4-카르복시티아졸-5-일)프로폭시)-3-플루오로페닐)-N-(4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(((1-(26-카르복시-3,6,9,12,15,18,21,24-옥타옥사헥사코실)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)메틸)벤질)-N,N-디메틸프로프-2-인-1-아미늄을 수득하였다. LCMS: M/2+= 815.4; Rt=0.99분 (2분 산성 방법).
3-(4-(3-(2-((6-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-5-메틸피리다진-3-일)(메틸)아미노)-4-카르복시티아졸-5-일)프로폭시)-3-플루오로페닐)-N-(2-(((1-(26-카르복시-3,6,9,12,15,18,21,24-옥타옥사헥사코실)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)메틸)-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)-N,N-디메틸프로프-2-인-1-아미늄 (L7A-P2)의 합성
Figure pct00781
일반적 절차 8에 따라 3-(4-(3-(2-((6-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-5-메틸피리다진-3-일)(메틸)아미노)-4-카르복시티아졸-5-일)프로폭시)-3-플루오로페닐)-N-(4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(((1-(26-카르복시-3,6,9,12,15,18,21,24-옥타옥사헥사코실)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)메틸)벤질)-N,N-디메틸프로프-2-인-1-아미늄 (37.0 mg, 0.023 mmol) 및 2,5-디옥소피롤리딘-1-일 3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로파노에이트 (10.6 mg, 0.034 mmol, 1.5 당량)를 사용하여 3-(4-(3-(2-((6-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-5-메틸피리다진-3-일)(메틸)아미노)-4-카르복시티아졸-5-일)프로폭시)-3-플루오로페닐)-N-(2-(((1-(26-카르복시-3,6,9,12,15,18,21,24-옥타옥사헥사코실)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)메틸)-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)-N,N-디메틸프로프-2-인-1-아미늄을 수득하였다. LCMS: M-= 1722.9; Rt=0.91분 (2분 산성 방법).
3-(4-(3-(2-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-4-카르복시티아졸-5-일)프로폭시)-3-플루오로페닐)-N-(4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-((메틸 ((프로프-2-인-1-일옥시)카르보닐)아미노)메틸)벤질)-N,N-디메틸프로프-2-인-1-아미늄의 합성
Figure pct00782
일반적 절차 6에 따라 2-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-5-(3-(4-(3-(디메틸아미노)프로프-1-인-1-일)-2-플루오로페녹시)프로필)티아졸-4-카르복실산 (118.0 mg, 0.170 mmol) 및 프로프-2-인-1-일 5-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(클로로메틸)벤질 (메틸)카르바메이트 (127.0 mg, 0.204 mmol, 1.2 당량)를 사용하여, 3-(4-(3-(2-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-4-카르복시티아졸-5-일)프로폭시)-3-플루오로페닐)-N-(4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-((메틸 ((프로프-2-인-1-일옥시)카르보닐)아미노)메틸)벤질)-N,N-디메틸프로프-2-인-1-아미늄을 수득하였다. HRMS: M+= 1244.5100; Rt=2.42분 (5분 산성 방법).
3-(4-(3-(2-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-4-카르복시티아졸-5-일)프로폭시)-3-플루오로페닐)-N-(4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-((메틸 ((프로프-2-인-1-일옥시)카르보닐)아미노)메틸)벤질)-N,N-디메틸프로프-2-인-1-아미늄의 합성
Figure pct00783
일반적 절차 8에 따라 3-(4-(3-(2-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-4-카르복시티아졸-5-일)프로폭시)-3-플루오로페닐)-N-(4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-((메틸 ((프로프-2-인-1-일옥시)카르보닐)아미노)메틸)벤질)-N,N-디메틸프로프-2-인-1-아미늄 (65.0 mg, 0.052 mmol) 및 2,5-디옥소피롤리딘-1-일 3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로파노에이트 (32.4 mg, 0.104 mmol, 2.0 당량)를 사용하여, 3-(4-(3-(2-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-4-카르복시티아졸-5-일)프로폭시)-3-플루오로페닐)-N-(4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-((메틸 ((프로프-2-인-1-일옥시)카르보닐)아미노)메틸)벤질)-N,N-디메틸프로프-2-인-1-아미늄을 수득하였다. LCMS: M+= 1341.1; Rt=2.20분 (5분 산성 방법).
3-(4-(3-(2-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-4-카르복시티아졸-5-일)프로폭시)-3-플루오로페닐)-N-(2-(((((1-(26-카르복시-3,6,9,12,15,18,21,24-옥타옥사헥사코실)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)카르보닐)(메틸)아미노)메틸)-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)-N,N-디메틸프로프-2-인-1-아미늄 (L3A-P1)의 합성
Figure pct00784
일반적 절차 7에 따라 3-(4-(3-(2-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-4-카르복시티아졸-5-일)프로폭시)-3-플루오로페닐)-N-(4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-((메틸 ((프로프-2-인-1-일옥시)카르보닐)아미노)메틸)벤질)-N,N-디메틸프로프-2-인-1-아미늄 (65.0 mg, 0.049 mmol) 및 1-아지도-3,6,9,12,15,18,21,24-옥타옥사헵타코산-27-산 (45.4 mg, 0.097 mmol, 2.0 당량)을 사용하여 3-(4-(3-(2-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-4-카르복시티아졸-5-일)프로폭시)-3-플루오로페닐)-N-(2-(((((1-(26-카르복시-3,6,9,12,15,18,21,24-옥타옥사헥사코실)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)카르보닐)(메틸)아미노)메틸)-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)-N,N-디메틸프로프-2-인-1-아미늄을 수득하였다. HRMS: M+= 1806.7700; Rt=2.05분 (5분 산성 방법).
N-(2-(((((1-(2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사펜타코산-25-일)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)카르보닐)(메틸)아미노)메틸)-4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)-3-(4-(3-(2-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-4-카르복시티아졸-5-일)프로폭시)-3-플루오로페닐)-N,N-디메틸프로프-2-인-1-아미늄의 합성
Figure pct00785
일반적 절차 7에 따라 3-(4-(3-(2-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-4-카르복시티아졸-5-일)프로폭시)-3-플루오로페닐)-N-(4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-((메틸 ((프로프-2-인-1-일옥시)카르보닐)아미노)메틸)벤질)-N,N-디메틸프로프-2-인-1-아미늄 (36.0 mg, 0.029 mmol) 및 25-아지도-2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사펜타코산 (23.7 mg, 0.058 mmol, 2.0 당량)을 사용하여, N-(2-(((((1-(2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사펜타코산-25-일)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)카르보닐)(메틸)아미노)메틸)-4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)-3-(4-(3-(2-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-4-카르복시티아졸-5-일)프로폭시)-3-플루오로페닐)-N,N-디메틸프로프-2-인-1-아미늄을 수득하였다. HRMS: M+= 1653.7500; Rt=2.29분 (5분 산성 방법).
N-(2-(((((1-(2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사펜타코산-25-일)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)카르보닐)(메틸)아미노)메틸)-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)-3-(4-(3-(2-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-4-카르복시티아졸-5-일)프로폭시)-3-플루오로페닐)-N,N-디메틸프로프-2-인-1-아미늄 (L4A-P1)의 합성
Figure pct00786
일반적 절차 8에 따라 N-(2-(((((1-(2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사펜타코산-25-일)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)카르보닐)(메틸)아미노)메틸)-4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)-3-(4-(3-(2-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-4-카르복시티아졸-5-일)프로폭시)-3-플루오로페닐)-N,N-디메틸프로프-2-인-1-아미늄 (19.6 mg, 0.012 mmol) 및 2,5-디옥소피롤리딘-1-일 3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로파노에이트 (7.4 mg, 0.024 mmol, 2.0 당량)를 사용하여, N-(2-(((((1-(2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사펜타코산-25-일)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)카르보닐)(메틸)아미노)메틸)-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)-3-(4-(3-(2-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-4-카르복시티아졸-5-일)프로폭시)-3-플루오로페닐)-N,N-디메틸프로프-2-인-1-아미늄을 수득하였다. HRMS: M+= 1748.7600; Rt=2.15분 (5분 산성 방법).
3-(4-(3-(2-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-4-카르복시티아졸-5-일)프로폭시)-3-플루오로페닐)-N-(4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-((프로프-2-인-1-일 ((프로프-2-인-1-일옥시)카르보닐)아미노)메틸)벤질)-N,N-디메틸프로프-2-인-1-아미늄의 합성
Figure pct00787
일반적 절차 6에 따라 2-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-5-(3-(4-(3-(디메틸아미노)프로프-1-인-1-일)-2-플루오로페녹시)프로필)티아졸-4-카르복실산 (50.0 mg, 0.076 mmol) 및 프로프-2-인-1-일 5-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(클로로메틸)벤질 (프로프-2-인-1-일)카르바메이트 (73.8 mg, 0.114 mmol, 1.5 당량)를 사용하여, 3-(4-(3-(2-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-4-카르복시티아졸-5-일)프로폭시)-3-플루오로페닐)-N-(4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-((프로프-2-인-1-일 ((프로프-2-인-1-일옥시)카르보닐)아미노)메틸)벤질)-N,N-디메틸프로프-2-인-1-아미늄을 수득하였다. LCMS: M+= 1269.2; Rt=2.24분 (5분 염기성 방법).
3-(4-(3-(2-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-4-카르복시티아졸-5-일)프로폭시)-3-플루오로페닐)-N-(4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-((프로프-2-인-1-일 ((프로프-2-인-1-일옥시)카르보닐)아미노)메틸)벤질)-N,N-디메틸프로프-2-인-1-아미늄의 합성
Figure pct00788
일반적 절차 8에 따라 3-(4-(3-(2-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-4-카르복시티아졸-5-일)프로폭시)-3-플루오로페닐)-N-(4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-((프로프-2-인-1-일 ((프로프-2-인-1-일옥시)카르보닐)아미노)메틸)벤질)-N,N-디메틸프로프-2-인-1-아미늄 (45.9 mg, 0.036 mmol) 및 2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일 3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로파노에이트 (22.3 mg, 0.072 mmol, 2.0 당량)를 사용하여, 3-(4-(3-(2-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-4-카르복시티아졸-5-일)프로폭시)-3-플루오로페닐)-N-(4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-((프로프-2-인-1-일 ((프로프-2-인-1-일옥시)카르보닐)아미노)메틸)벤질)-N,N-디메틸프로프-2-인-1-아미늄을 수득하였다. HRMS: M+= 1363.5100; Rt=2.26분 (5분 산성 방법).
N-(2-(((((1-(2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사펜타코산-25-일)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)카르보닐)((1-(2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사펜타코산-25-일)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메틸)아미노)메틸)-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)-3-(4-(3-(2-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-4-카르복시티아졸-5-일)프로폭시)-3-플루오로페닐)-N,N-디메틸프로프-2-인-1-아미늄 (L1A-P1)의 합성
Figure pct00789
일반적 절차 7에 따라 3-(4-(3-(2-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-4-카르복시티아졸-5-일)프로폭시)-3-플루오로페닐)-N-(4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-((프로프-2-인-1-일 ((프로프-2-인-1-일옥시)카르보닐)아미노)메틸)벤질)-N,N-디메틸프로프-2-인-1-아미늄 (21.9 mg, 0.016 mmol) 및 1-아지도-3,6,9,12,15,18,21,24-옥타옥사헥사코산 (51.0 mg, 0.120 mmol, 7.5 당량)을 사용하여, N-(2-(((((1-(2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사펜타코산-25-일)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)카르보닐)((1-(2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사펜타코산-25-일)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메틸)아미노)메틸)-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)-3-(4-(3-(2-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-4-카르복시티아졸-5-일)프로폭시)-3-플루오로페닐)-N,N-디메틸프로프-2-인-1-아미늄을 수득하였다. HRMS: M+= 2181.9800; Rt=2.31분 (5분 산성 방법).
3-(4-(3-(2-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-4-카르복시티아졸-5-일)프로폭시)-3-플루오로페닐)-N-(2-(((((1-(26-카르복시-3,6,9,12,15,18,21,24-옥타옥사헥사코실)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)카르보닐)((1-(26-카르복시-3,6,9,12,15,18,21,24-옥타옥사헥사코실)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메틸)아미노)메틸)-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)-N,N-디메틸프로프-2-인-1-아미늄 (L10A-P1)의 합성
Figure pct00790
일반적 절차 7에 따라 3-(4-(3-(2-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-4-카르복시티아졸-5-일)프로폭시)-3-플루오로페닐)-N-(4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-((프로프-2-인-1-일 ((프로프-2-인-1-일옥시)카르보닐)아미노)메틸)벤질)-N,N-디메틸프로프-2-인-1-아미늄 (20.0 mg, 0.015 mmol) 및 1-아지도-3,6,9,12,15,18,21,24-옥타옥사헵타코산-27-산 (51.4 mg, 0.110 mmol, 7.5 당량)을 사용하여 3-(4-(3-(2-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-4-카르복시티아졸-5-일)프로폭시)-3-플루오로페닐)-N-(2-(((((1-(26-카르복시-3,6,9,12,15,18,21,24-옥타옥사헥사코실)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)카르보닐)((1-(26-카르복시-3,6,9,12,15,18,21,24-옥타옥사헥사코실)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메틸)아미노)메틸)-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)-N,N-디메틸프로프-2-인-1-아미늄을 수득하였다. HRMS: M+= 2298.0100; Rt=2.44분 (5분 산성 방법).
2-((6-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-5-메틸피리다진-3-일)(메틸)아미노)-5-(3-(4-(3-((4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-((프로프-2-인-1-일 ((프로프-2-인-1-일옥시)카르보닐)아미노)메틸)벤질)디메틸암모니오)프로프-1-인-1-일)-2-플루오로페녹시)프로필)티아졸-4-카르복실레이트의 합성
Figure pct00791
일반적 절차 6에 따라 2-((6-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-5-메틸피리다진-3-일)(메틸)아미노)-5-(3-(4-(3-(디메틸아미노)프로프-1-인-1-일)-2-플루오로페녹시)프로필)티아졸-4-카르복실산 (50.0 mg, 0.079 mmol) 및 프로프-2-인-1-일 5-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(클로로메틸)벤질 (프로프-2-인-1-일)카르바메이트 (61.5 mg, 0.095 mmol, 1.2 당량)를 사용하여, 2-((6-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-5-메틸피리다진-3-일)(메틸)아미노)-5-(3-(4-(3-((4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-((프로프-2-인-1-일 ((프로프-2-인-1-일옥시)카르보닐)아미노)메틸)벤질)디메틸암모니오)프로프-1-인-1-일)-2-플루오로페녹시)프로필)티아졸-4-카르복실레이트를 수득하였다. LCMS: M+= 1243.2; Rt=2.27분 (5분 산성 방법).
3-(4-(3-(2-((6-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-5-메틸피리다진-3-일)(메틸)아미노)-4-카르복시티아졸-5-일)프로폭시)-3-플루오로페닐)-N-(4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(((((1-(26-카르복시-3,6,9,12,15,18,21,24-옥타옥사헥사코실)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)카르보닐)((1-(26-카르복시-3,6,9,12,15,18,21,24-옥타옥사헥사코실)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메틸)아미노)메틸)벤질)-N,N-디메틸프로프-2-인-1-아미늄의 합성
Figure pct00792
일반적 절차 7에 따라 3-(4-(3-(2-((6-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-5-메틸피리다진-3-일)(메틸)아미노)-4-카르복시티아졸-5-일)프로폭시)-3-플루오로페닐)-N-(4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-((프로프-2-인-1-일 ((프로프-2-인-1-일옥시)카르보닐)아미노)메틸)벤질)-N,N-디메틸프로프-2-인-1-아미늄 (21.8 mg, 0.018 mmol) 및 1-아지도-3,6,9,12,15,18,21,24-옥타옥사헵타코산-27-산 (32.8 mg, 0.070 mmol, 4.0 당량)을 사용하여 3-(4-(3-(2-((6-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-5-메틸피리다진-3-일)(메틸)아미노)-4-카르복시티아졸-5-일)프로폭시)-3-플루오로페닐)-N-(4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(((((1-(26-카르복시-3,6,9,12,15,18,21,24-옥타옥사헥사코실)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)카르보닐)((1-(26-카르복시-3,6,9,12,15,18,21,24-옥타옥사헥사코실)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메틸)아미노)메틸)벤질)-N,N-디메틸프로프-2-인-1-아미늄을 수득하였다. HRMS: M+= 2176.8301; Rt=2.25분 (5분 산성 방법).
3-(4-(3-(2-((6-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-5-메틸피리다진-3-일)(메틸)아미노)-4-카르복시티아졸-5-일)프로폭시)-3-플루오로페닐)-N-(2-(((((1-(26-카르복시-3,6,9,12,15,18,21,24-옥타옥사헥사코실)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)카르보닐)((1-(26-카르복시-3,6,9,12,15,18,21,24-옥타옥사헥사코실)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메틸)아미노)메틸)-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)-N,N-디메틸프로프-2-인-1-아미늄 (L10A-P2)의 합성
Figure pct00793
일반적 절차 8에 따라 3-(4-(3-(2-((6-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-5-메틸피리다진-3-일)(메틸)아미노)-4-카르복시티아졸-5-일)프로폭시)-3-플루오로페닐)-N-(4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(((((1-(26-카르복시-3,6,9,12,15,18,21,24-옥타옥사헥사코실)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)카르보닐)((1-(26-카르복시-3,6,9,12,15,18,21,24-옥타옥사헥사코실)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메틸)아미노)메틸)벤질)-N,N-디메틸프로프-2-인-1-아미늄 (17.8 mg, 0.008 mmol) 및 2,5-디옥소피롤리딘-1-일 3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로파노에이트 (10.2 mg, 0.033 mmol, 4.0 당량)를 사용하여 3-(4-(3-(2-((6-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-5-메틸피리다진-3-일)(메틸)아미노)-4-카르복시티아졸-5-일)프로폭시)-3-플루오로페닐)-N-(2-(((((1-(26-카르복시-3,6,9,12,15,18,21,24-옥타옥사헥사코실)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)카르보닐)((1-(26-카르복시-3,6,9,12,15,18,21,24-옥타옥사헥사코실)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메틸)아미노)메틸)-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)-N,N-디메틸프로프-2-인-1-아미늄을 수득하였다. HRMS: M+= 2271.8186; Rt=2.12분 (5분 산성 방법).
N-(2-(((((1-(2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사펜타코산-25-일)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)카르보닐)((1-(2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사펜타코산-25-일)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메틸)아미노)메틸)-4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)-3-(4-(3-(2-((6-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-5-메틸피리다진-3-일)(메틸)아미노)-4-카르복시티아졸-5-일)프로폭시)-3-플루오로페닐)-N,N-디메틸프로프-2-인-1-아미늄의 합성
Figure pct00794
일반적 절차 7에 따라 3-(4-(3-(2-((6-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-5-메틸피리다진-3-일)(메틸)아미노)-4-카르복시티아졸-5-일)프로폭시)-3-플루오로페닐)-N-(4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-((프로프-2-인-1-일 ((프로프-2-인-1-일옥시)카르보닐)아미노)메틸)벤질)-N,N-디메틸프로프-2-인-1-아미늄 (22.6 mg, 0.018 mmol) 및 25-아지도-2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사펜타코산 (29.8 mg, 0.073 mmol, 4.0 당량)을 사용하여, N-(2-(((((1-(2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사펜타코산-25-일)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)카르보닐)((1-(2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사펜타코산-25-일)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메틸)아미노)메틸)-4-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)-3-(4-(3-(2-((6-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-5-메틸피리다진-3-일)(메틸)아미노)-4-카르복시티아졸-5-일)프로폭시)-3-플루오로페닐)-N,N-디메틸프로프-2-인-1-아미늄을 수득하였다. LCMS: M/2+= 1032.3; Rt=2.25분 (5분 산성 방법).
N-(2-(((((1-(2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사펜타코산-25-일)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)카르보닐)((1-(2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사펜타코산-25-일)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메틸)아미노)메틸)-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)-3-(4-(3-(2-((6-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-5-메틸피리다진-3-일)(메틸)아미노)-4-카르복시티아졸-5-일)프로폭시)-3-플루오로페닐)-N,N-디메틸프로프-2-인-1-아미늄 (L1A-P2)의 합성
Figure pct00795
일반적 절차 8에 따라 N-(2-(((((1-(2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사펜타코산-25-일)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)카르보닐)((1-(2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사펜타코산-25-일)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메틸)아미노)메틸)-4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)-3-(4-(3-(2-((6-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-5-메틸피리다진-3-일)(메틸)아미노)-4-카르복시티아졸-5-일)프로폭시)-3-플루오로페닐)-N,N-디메틸프로프-2-인-1-아미늄 (23.0 mg, 0.011 mmol) 및 2,5-디옥소피롤리딘-1-일 3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로파노에이트 (10.4 mg, 0.033 mmol, 3.0 당량)를 사용하여, N-(2-(((((1-(2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사펜타코산-25-일)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)카르보닐)((1-(2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사펜타코산-25-일)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메틸)아미노)메틸)-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)-3-(4-(3-(2-((6-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-5-메틸피리다진-3-일)(메틸)아미노)-4-카르복시티아졸-5-일)프로폭시)-3-플루오로페닐)-N,N-디메틸프로프-2-인-1-아미늄을 수득하였다. HRMS: M+= 2155.8176; Rt=2.23분 (5분 산성 방법).
3-(4-(3-(2-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-4-카르복시티아졸-5-일)프로폭시)-3-플루오로페닐)-N-(4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)-N,N-디메틸프로프-2-인-1-아미늄의 합성
Figure pct00796
일반적 절차 6에 따라 2-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-5-(3-(4-(3-(디메틸아미노)프로프-1-인-1-일)-2-플루오로페녹시)프로필)티아졸-4-카르복실산 (21.5 mg, 0.033 mmol) 및 tert-부틸 ((S)-1-(((S)-1-((4-(클로로메틸)페닐)아미노)-1-옥소-5-우레이도펜탄-2-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바메이트 (21.2 mg, 0.042 mmol, 1.3 당량)를 사용하여, 3-(4-(3-(2-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-4-카르복시티아졸-5-일)프로폭시)-3-플루오로페닐)-N-(4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)-N,N-디메틸프로프-2-인-1-아미늄을 수득하였다. LCMS: M+= 1119.3; Rt=2.15분 (5분 산성 방법).
3-(4-(3-(2-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-4-카르복시티아졸-5-일)프로폭시)-3-플루오로페닐)-N-(4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)-N,N-디메틸프로프-2-인-1-아미늄 (L9A-P1)의 합성
Figure pct00797
일반적 절차 8에 따라 3-(4-(3-(2-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-4-카르복시티아졸-5-일)프로폭시)-3-플루오로페닐)-N-(4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)-N,N-디메틸프로프-2-인-1-아미늄 (36.6 mg, 0.033 mmol) 및 2,5-디옥소피롤리딘-1-일 3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로파노에이트 (20.3 mg, 0.065 mmol, 2.0 당량)를 사용하여, 3-(4-(3-(2-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-4-카르복시티아졸-5-일)프로폭시)-3-플루오로페닐)-N-(4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)-N,N-디메틸프로프-2-인-1-아미늄을 수득하였다. HRMS: M+= 1214.4700; Rt=2.10분 (5분 산성 방법).
3-(4-(3-(2-((6-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-5-메틸피리다진-3-일)(메틸)아미노)-4-카르복시티아졸-5-일)프로폭시)-3-플루오로페닐)-N-(4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)-N,N-디메틸프로프-2-인-1-아미늄의 합성
Figure pct00798
일반적 절차 6에 따라 2-((6-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-5-메틸피리다진-3-일)(메틸)아미노)-5-(3-(4-(3-(디메틸아미노)프로프-1-인-1-일)-2-플루오로페녹시)프로필)티아졸-4-카르복실산 (25.0 mg, 0.040 mmol) 및 tert-부틸 ((S)-1-(((S)-1-((4-(클로로메틸)페닐)아미노)-1-옥소-5-우레이도펜탄-2-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바메이트 (25.6 mg, 0.051 mmol, 1.3 당량)를 사용하여, 3-(4-(3-(2-((6-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-5-메틸피리다진-3-일)(메틸)아미노)-4-카르복시티아졸-5-일)프로폭시)-3-플루오로페닐)-N-(4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)-N,N-디메틸프로프-2-인-1-아미늄을 수득하였다. LCMS: M+= 1094.1; Rt=2.14분 (5분 산성 방법).
3-(4-(3-(2-((6-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-5-메틸피리다진-3-일)(메틸)아미노)-4-카르복시티아졸-5-일)프로폭시)-3-플루오로페닐)-N-(4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)-N,N-디메틸프로프-2-인-1-아미늄 (L9A-P2)의 합성
Figure pct00799
일반적 절차 8에 따라 3-(4-(3-(2-((6-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-5-메틸피리다진-3-일)(메틸)아미노)-4-카르복시티아졸-5-일)프로폭시)-3-플루오로페닐)-N-(4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)-N,N-디메틸프로프-2-인-1-아미늄 (31.6 mg, 0.029 mmol) 및 2,5-디옥소피롤리딘-1-일 3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로파노에이트 (26.9 mg, 0.087 mmol, 3.0 당량)를 사용하여, 3-(4-(3-(2-((6-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-5-메틸피리다진-3-일)(메틸)아미노)-4-카르복시티아졸-5-일)프로폭시)-3-플루오로페닐)-N-(4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)-N,N-디메틸프로프-2-인-1-아미늄을 수득하였다. HRMS: M+= 1188.4500; Rt=2.07분 (5분 산성 방법).
일반적 절차 9
4-메톡시벤질 6-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-3-(1-(((1r,3s,5R,7S)-3-(2-((((4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-((메틸아미노)메틸)벤질)옥시)카르보닐)(3-히드록시프로필)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피콜리네이트의 합성
Figure pct00800
DMF (1.0 mL) 중 4-메톡시벤질 6-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-3-(1-(((1r,3s,5R,7S)-3-(2-((3-히드록시프로필)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피콜리네이트 (30.0 mg, 0.033 mmol) 및 (9H-플루오렌-9-일)메틸 (5-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-((((4-니트로페녹시)카르보닐)옥시)메틸)벤질)(메틸)카르바메이트 (35.9 mg, 0.039 mmol, 1.2 당량)의 용액에 DIPEA (0.03 mL, 0.164 mmol, 5.0 당량)를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 카르바메이트 형성 후, THF 중 2M 디메틸아민 (0.164 mL, 0.329 mmol, 1.0 당량)을 첨가하고, 혼합물을 1.5시간 동안 교반하였다. DMSO (2.0 mL)를 첨가하고, 용액을 RP-HPLC 이스코 골드 크로마토그래피 (10-100% MeCN/H2O, 0.1% TFA 개질제)에 의해 정제하였다. 동결건조 시, 4-메톡시벤질 6-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-3-(1-(((1r,3s,5R,7S)-3-(2-((((4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-((메틸아미노)메틸)벤질)옥시)카르보닐)(3-히드록시프로필)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피콜리네이트를 수득하였다. HRMS: M+= 1460.7500; Rt=2.31분 (5분 산성 방법).
1-(2-((((2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-2-(((4-메톡시벤질)옥시)카르보닐)피리딘-3-일)-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)옥시)에틸)(3-히드록시프로필)카르바모일)옥시)메틸)-5-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)페닐)-2-메틸-3-옥소-6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42,45,48,51,54,57,60,63,66,69,72,75,78-펜타코사옥사-2-아자헤녹타콘탄-81-산의 합성
Figure pct00801
일반적 절차 3에 따라 4-메톡시벤질 6-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-3-(1-(((1r,3s,5R,7S)-3-(2-((((4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-((메틸아미노)메틸)벤질)옥시)카르보닐)(3-히드록시프로필)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피콜리네이트 (32.0 mg, 0.022 mmol) 및 79-((2,5-디옥소피롤리딘-1-일)옥시)-79-옥소-4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43,46,49,52,55,58,61,64,67,70,73,76-펜타코사옥사노나헵타콘탄산 (43.3 mg, 0.033 mmol, 1.5 당량)을 사용하여 1-(2-((((2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-2-(((4-메톡시벤질)옥시)카르보닐)피리딘-3-일)-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)옥시)에틸)(3-히드록시프로필)카르바모일)옥시)메틸)-5-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)페닐)-2-메틸-3-옥소-6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42,45,48,51,54,57,60,63,66,69,72,75,78-펜타코사옥사-2-아자헤녹타콘탄-81-산을 수득하였다. HRMS: M-H+2Na = 2705.3601; Rt=2.63분 (5분 산성 방법).
3-(1-(((1r,3s,5R,7S)-3-(2-((((4-((S)-2-((S)-2-아미노-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(80-카르복시-2-메틸-3-옥소-6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42,45,48,51,54,57,60,63,66,69,72,75,78-펜타코사옥사-2-아자옥타콘틸)벤질)옥시)카르보닐)(3-히드록시프로필)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)-6-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)피콜린산의 합성
Figure pct00802
1-(2-((((2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-2-(((4-메톡시벤질)옥시)카르보닐)피리딘-3-일)-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)옥시)에틸)(3-히드록시프로필)카르바모일)옥시)메틸)-5-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)페닐)-2-메틸-3-옥소-6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42,45,48,51,54,57,60,63,66,69,72,75,78-펜타코사옥사-2-아자헤녹타콘탄-81-산 (35.1 mg, 0.013 mmol)을 사용하여 일반적 절차 4에 따라, 3-(1-(((1r,3s,5R,7S)-3-(2-((((4-((S)-2-((S)-2-아미노-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(80-카르복시-2-메틸-3-옥소-6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42,45,48,51,54,57,60,63,66,69,72,75,78-펜타코사옥사-2-아자옥타콘틸)벤질)옥시)카르보닐)(3-히드록시프로필)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)-6-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)피콜린산을 수득하였다. HRMS: M-H+2Na = 2485.2700; Rt=2.02분 (5분 산성 방법).
6-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-3-(1-(((1r,3s,5R,7S)-3-(2-((((2-(80-카르복시-2-메틸-3-옥소-6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42,45,48,51,54,57,60,63,66,69,72,75,78-펜타코사옥사-2-아자옥타콘틸)-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)옥시)카르보닐)(3-히드록시프로필)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피콜린산 (L11C-P25)의 합성
Figure pct00803
일반적 절차 5에 따라 3-(1-(((1r,3s,5R,7S)-3-(2-((((4-((S)-2-((S)-2-아미노-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(80-카르복시-2-메틸-3-옥소-6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42,45,48,51,54,57,60,63,66,69,72,75,78-펜타코사옥사-2-아자옥타콘틸)벤질)옥시)카르보닐)(3-히드록시프로필)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)-6-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)피콜린산 (17.3 mg, 0.007 mmol) 및 2,5-디옥소피롤리딘-1-일 3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로파노에이트 (2.6 mg, 0.009 mmol, 1.2 당량)를 사용하여 6-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-3-(1-(((1r,3s,5R,7S)-3-(2-((((2-(80-카르복시-2-메틸-3-옥소-6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42,45,48,51,54,57,60,63,66,69,72,75,78-펜타코사옥사-2-아자옥타콘틸)-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)옥시)카르보닐)(3-히드록시프로필)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피콜린산을 수득하였다. HRMS: M+H= 2636.3701; Rt=1.73분 (5분 산성 방법).
6-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-3-(1-(((1S,3s,5R,7S)-3-(2-((((4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-((메틸아미노)메틸)벤질)옥시)카르보닐)(2-((S)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)에틸)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피콜린산의 합성
Figure pct00804
일반적 절차 9에 따라 6-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-3-(1-(((1S,3s,5R,7S)-3-(2-((2-((S)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)에틸)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피콜린산 (24.0 mg, 0.028 mmol) 및 (9H-플루오렌-9-일)메틸 (5-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-((((4-니트로페녹시)카르보닐)옥시)메틸)벤질)(메틸)카르바메이트 (27.9 mg, 0.031 mmol, 1.1 당량)를 사용하여 6-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-3-(1-(((1S,3s,5R,7S)-3-(2-((((4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-((메틸아미노)메틸)벤질)옥시)카르보닐)(2-((S)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)에틸)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피콜린산을 수득하였다. HRMS: M+H= 1410.7300; Rt=2.24분 (5분 산성 방법).
6-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-3-(1-(((1S,3s,5R,7S)-3-(2-((((4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(80-카르복시-2-메틸-3-옥소-6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42,45,48,51,54,57,60,63,66,69,72,75,78-펜타코사옥사-2-아자옥타콘틸)벤질)옥시)카르보닐)(2-((S)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)에틸)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피콜린산의 합성
Figure pct00805
일반적 절차 3에 따라 6-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-3-(1-(((1S,3s,5R,7S)-3-(2-((((4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-((메틸아미노)메틸)벤질)옥시)카르보닐)(2-((S)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)에틸)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피콜린산 (19.0 mg, 0.012 mmol) 및 79-((2,5-디옥소피롤리딘-1-일)옥시)-79-옥소-4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43,46,49,52,55,58,61,64,67,70,73,76-펜타코사옥사노나헵타콘탄산 (24.6 mg, 0.019 mmol, 1.5 당량)을 사용하여 6-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-3-(1-(((1S,3s,5R,7S)-3-(2-((((4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(80-카르복시-2-메틸-3-옥소-6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42,45,48,51,54,57,60,63,66,69,72,75,78-펜타코사옥사-2-아자옥타콘틸)벤질)옥시)카르보닐)(2-((S)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)에틸)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피콜린산을 수득하였다. HRMS: M-H+2Na = 2655.3701; Rt=2.59분 (5분 산성 방법).
3-(1-(((1S,3s,5R,7S)-3-(2-((((4-((S)-2-((S)-2-아미노-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(80-카르복시-2-메틸-3-옥소-6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42,45,48,51,54,57,60,63,66,69,72,75,78-펜타코사옥사-2-아자옥타콘틸)벤질)옥시)카르보닐)((S)-3,4-디히드록시부틸)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)-6-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)피콜린산의 합성
Figure pct00806
6-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-3-(1-(((1S,3s,5R,7S)-3-(2-((((4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(80-카르복시-2-메틸-3-옥소-6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42,45,48,51,54,57,60,63,66,69,72,75,78-펜타코사옥사-2-아자옥타콘틸)벤질)옥시)카르보닐)(2-((S)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)에틸)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피콜린산 (28.4 mg, 0.011 mmol)을 사용하여 일반적 절차 4에 따라, 3-(1-(((1S,3s,5R,7S)-3-(2-((((4-((S)-2-((S)-2-아미노-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(80-카르복시-2-메틸-3-옥소-6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42,45,48,51,54,57,60,63,66,69,72,75,78-펜타코사옥사-2-아자옥타콘틸)벤질)옥시)카르보닐)((S)-3,4-디히드록시부틸)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)-6-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)피콜린산을 수득하였다. HRMS: M+H = 2471.3301; Rt=1.97분 (5분 산성 방법).
6-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-3-(1-(((1S,3s,5R,7S)-3-(2-((((2-(80-카르복시-2-메틸-3-옥소-6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42,45,48,51,54,57,60,63,66,69,72,75,78-펜타코사옥사-2-아자옥타콘틸)-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)옥시)카르보닐)((S)-3,4-디히드록시부틸)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피콜린산 (L11C-P19)의 합성
Figure pct00807
일반적 절차 5에 따라 3-(1-(((1S,3s,5R,7S)-3-(2-((((4-((S)-2-((S)-2-아미노-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(80-카르복시-2-메틸-3-옥소-6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42,45,48,51,54,57,60,63,66,69,72,75,78-펜타코사옥사-2-아자옥타콘틸)벤질)옥시)카르보닐)((S)-3,4-디히드록시부틸)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)-6-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)피콜린산 (35.6 mg, 0.014 mmol) 및 2,5-디옥소피롤리딘-1-일 3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로파노에이트 (10.7 mg, 0.034 mmol, 2.5 당량)를 사용하여, 6-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-3-(1-(((1S,3s,5R,7S)-3-(2-((((2-(80-카르복시-2-메틸-3-옥소-6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42,45,48,51,54,57,60,63,66,69,72,75,78-펜타코사옥사-2-아자옥타콘틸)-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)옥시)카르보닐)((S)-3,4-디히드록시부틸)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피콜린산을 수득하였다. HRMS: M+H = 2666.3701; Rt=2.19분 (5분 산성 방법).
5-(3-(4-(3-((((4-((S)-2-((S)-2-아미노-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-((프로프-2-인-1-일옥시)메틸)벤질)옥시)카르보닐)(메틸)아미노)프로프-1-인-1-일)-2-플루오로페녹시)프로필)-2-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)티아졸-4-카르복실산의 합성
Figure pct00808
일반적 절차 9에 따라 2-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-5-(3-(2-플루오로-4-(3-(메틸아미노)프로프-1-인-1-일)페녹시)프로필)티아졸-4-카르복실산 (40.0 mg, 0.062 mmol) 및 (9H-플루오렌-9-일)메틸 ((S)-3-메틸-1-(((S)-1-((4-((((4-니트로페녹시)카르보닐)옥시)메틸)-3-((프로프-2-인-1-일옥시)메틸)페닐)아미노)-1-옥소-5-우레이도펜탄-2-일)아미노)-1-옥소부탄-2-일)카르바메이트 (57.1 mg, 0.068 mmol, 1.1 당량)를 사용하여, 5-(3-(4-(3-((((4-((S)-2-((S)-2-아미노-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-((프로프-2-인-1-일옥시)메틸)벤질)옥시)카르보닐)(메틸)아미노)프로프-1-인-1-일)-2-플루오로페녹시)프로필)-2-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)티아졸-4-카르복실산을 수득하였다. LCMS: M+H = 1117.8; Rt=0.84분 (2분 산성 방법).
5-(3-(4-(3-((((4-((S)-2-((S)-2-아미노-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(((1-(26-카르복시-3,6,9,12,15,18,21,24-옥타옥사헥사코실)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)메틸)벤질)옥시)카르보닐)(메틸)아미노)프로프-1-인-1-일)-2-플루오로페녹시)프로필)-2-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)티아졸-4-카르복실산의 합성
Figure pct00809
일반적 절차 7에 따라 5-(3-(4-(3-((((4-((S)-2-((S)-2-아미노-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-((프로프-2-인-1-일옥시)메틸)벤질)옥시)카르보닐)(메틸)아미노)프로프-1-인-1-일)-2-플루오로페녹시)프로필)-2-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)티아졸-4-카르복실산 (18.2 mg, 0.016 mmol) 및 1-아지도-3,6,9,12,15,18,21,24-옥타옥사헵타코산-27-산 (9.1 mg, 0.020 mmol, 1.2 당량)을 사용하여, 5-(3-(4-(3-((((4-((S)-2-((S)-2-아미노-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(((1-(26-카르복시-3,6,9,12,15,18,21,24-옥타옥사헥사코실)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)메틸)벤질)옥시)카르보닐)(메틸)아미노)프로프-1-인-1-일)-2-플루오로페녹시)프로필)-2-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)티아졸-4-카르복실산을 수득하였다. LCMS: M/2+H = 793.1; Rt=1.17분 (2분 산성 방법).
2-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-5-(3-(4-(3-((((2-(((1-(26-카르복시-3,6,9,12,15,18,21,24-옥타옥사헥사코실)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)메틸)-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)옥시)카르보닐)(메틸)아미노)프로프-1-인-1-일)-2-플루오로페녹시)프로필)티아졸-4-카르복실산 (L7C-P3)의 합성
Figure pct00810
일반적 절차 5에 따라 5-(3-(4-(3-((((4-((S)-2-((S)-2-아미노-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(((1-(26-카르복시-3,6,9,12,15,18,21,24-옥타옥사헥사코실)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)메틸)벤질)옥시)카르보닐)(메틸)아미노)프로프-1-인-1-일)-2-플루오로페녹시)프로필)-2-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)티아졸-4-카르복실산 (10.5 mg, 0.007 mmol) 및 2,5-디옥소피롤리딘-1-일 3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로파노에이트 (2.5 mg, 0.08 mmol, 1.2 당량)를 사용하여, 2-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-5-(3-(4-(3-((((2-(((1-(26-카르복시-3,6,9,12,15,18,21,24-옥타옥사헥사코실)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)메틸)-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)옥시)카르보닐)(메틸)아미노)프로프-1-인-1-일)-2-플루오로페녹시)프로필)티아졸-4-카르복실산을 수득하였다. LCMS: M/2+H = 891.2; Rt=2.56분 (5분 산성 방법).
일반적 절차 10
2-((6-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-5-메틸피리다진-3-일)(3-(디메틸아미노)프로필)아미노)-5-(3-(4-(3-((((4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-((프로프-2-인-1-일옥시)메틸)벤질)옥시)카르보닐)(메틸)아미노)프로프-1-인-1-일)-2-플루오로페녹시)프로필)티아졸-4-카르복실산의 합성
Figure pct00811
DMF (1.0 mL) 중 2-((6-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-5-메틸피리다진-3-일)(3-(디메틸아미노)프로필)아미노)-5-(3-(2-플루오로-4-(3-(메틸아미노)프로프-1-인-1-일)페녹시)프로필)티아졸-4-카르복실산 (30.0 mg, 0.039 mmol) 및 tert-부틸 ((R)-3-메틸-1-(((R)-1-((4-((((4-니트로페녹시)카르보닐)옥시)메틸)-3-((프로프-2-인-1-일옥시)메틸)페닐)아미노)-1-옥소-5-우레이도펜탄-2-일)아미노)-1-옥소부탄-2-일)카르바메이트 (36.5 mg, 0.051 mmol, 1.3 당량)의 용액에 DIPEA (0.034 mL, 0.197 mmol, 5.0 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. DMSO (1.0 mL)를 첨가하고, 용액을 RP-HPLC 이스코 골드 크로마토그래피 (0-100% MeCN/H2O, 0.1% TFA 개질제)에 의해 정제하였다. 동결건조 시, 2-((6-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-5-메틸피리다진-3-일)(3-(디메틸아미노)프로필)아미노)-5-(3-(4-(3-((((4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-((프로프-2-인-1-일옥시)메틸)벤질)옥시)카르보닐)(메틸)아미노)프로프-1-인-1-일)-2-플루오로페녹시)프로필)티아졸-4-카르복실산을 수득하였다. HRMS: M+H = 1262.5100; Rt=2.47분 (5분 산성 방법).
2-((6-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-5-메틸피리다진-3-일)(3-(디메틸아미노)프로필)아미노)-5-(3-(4-(3-((((4-((S)-2-((R)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-((프로프-2-인-1-일옥시)메틸)벤질)옥시)카르보닐)(메틸)아미노)프로프-1-인-1-일)-2-플루오로페녹시)프로필)티아졸-4-카르복실산의 합성
Figure pct00812
2-((6-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-5-메틸피리다진-3-일)(3-(디메틸아미노)프로필)아미노)-5-(3-(4-(3-((((4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-((프로프-2-인-1-일옥시)메틸)벤질)옥시)카르보닐)(메틸)아미노)프로프-1-인-1-일)-2-플루오로페녹시)프로필)티아졸-4-카르복실산 (40.0 mg, 0.032 mmol) 및 2,5-디옥소피롤리딘-1-일 3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로파노에이트 (11.8 mg, 0.038 mmol, 1.2 당량)를 사용하여 일반적 절차 8에 따라, 2-((6-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-5-메틸피리다진-3-일)(3-(디메틸아미노)프로필)아미노)-5-(3-(4-(3-((((4-((S)-2-((R)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-((프로프-2-인-1-일옥시)메틸)벤질)옥시)카르보닐)(메틸)아미노)프로프-1-인-1-일)-2-플루오로페녹시)프로필)티아졸-4-카르복실산을 수득하였다. HRMS: M+H = 1357.5262; Rt=1.16분 (2분 산성 방법).
2-((6-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-5-메틸피리다진-3-일)(3-(디메틸아미노)프로필)아미노)-5-(3-(4-(3-((((2-(((1-(26-카르복시-3,6,9,12,15,18,21,24-옥타옥사헥사코실)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)메틸)-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)옥시)카르보닐)(메틸)아미노)프로프-1-인-1-일)-2-플루오로페녹시)프로필)티아졸-4-카르복실산 (L7C-P6)의 합성
Figure pct00813
2-((6-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-5-메틸피리다진-3-일)(3-(디메틸아미노)프로필)아미노)-5-(3-(4-(3-((((4-((S)-2-((R)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-((프로프-2-인-1-일옥시)메틸)벤질)옥시)카르보닐)(메틸)아미노)프로프-1-인-1-일)-2-플루오로페녹시)프로필)티아졸-4-카르복실산 (10.0 mg, 0.008 mmol) 및 1-아지도-3,6,9,12,15,18,21,24-옥타옥사헵타코산-27-산 (6.9 mg, 0.015 mmol, 2.0 당량)을 사용하여 일반적 절차 7에 따라, 2-((6-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-5-메틸피리다진-3-일)(3-(디메틸아미노)프로필)아미노)-5-(3-(4-(3-((((2-(((1-(26-카르복시-3,6,9,12,15,18,21,24-옥타옥사헥사코실)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)메틸)-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)옥시)카르보닐)(메틸)아미노)프로프-1-인-1-일)-2-플루오로페녹시)프로필)티아졸-4-카르복실산을 수득하였다. HRMS: M+H = 1824.7700; Rt=2.19분 (5분 산성 방법).
2-((6-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-5-메틸피리다진-3-일)(메틸)아미노)-5-(3-(4-(3-((((4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-((프로프-2-인-1-일옥시)메틸)벤질)옥시)카르보닐)(메틸)아미노)프로프-1-인-1-일)-2-플루오로페녹시)프로필)티아졸-4-카르복실산의 합성
Figure pct00814
일반적 절차 10에 따라 2-((6-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-5-메틸피리다진-3-일)(메틸)아미노)-5-(3-(2-플루오로-4-(3-(메틸아미노)프로프-1-인-1-일)페녹시)프로필)티아졸-4-카르복실산 (50.0 mg, 0.081 mmol) 및 tert-부틸 ((S)-3-메틸-1-(((S)-1-((4-((((4-니트로페녹시)카르보닐)옥시)메틸)-3-((프로프-2-인-1-일옥시)메틸)페닐)아미노)-1-옥소-5-우레이도펜탄-2-일)아미노)-1-옥소부탄-2-일)카르바메이트 (57.7 mg, 0.081 mmol, 1.0 당량)를 사용하여, 2-((6-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-5-메틸피리다진-3-일)(메틸)아미노)-5-(3-(4-(3-((((4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-((프로프-2-인-1-일옥시)메틸)벤질)옥시)카르보닐)(메틸)아미노)프로프-1-인-1-일)-2-플루오로페녹시)프로필)티아졸-4-카르복실산을 수득하였다. LCMS: M+H = 1192.2; Rt=0.88분 (2분 염기성 방법).
2-((6-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-5-메틸피리다진-3-일)(메틸)아미노)-5-(3-(4-(3-((((4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(((1-(26-카르복시-3,6,9,12,15,18,21,24-옥타옥사헥사코실)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)메틸)벤질)옥시)카르보닐)(메틸)아미노)프로프-1-인-1-일)-2-플루오로페녹시)프로필)티아졸-4-카르복실산의 합성
Figure pct00815
2-((6-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-5-메틸피리다진-3-일)(메틸)아미노)-5-(3-(4-(3-((((4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-((프로프-2-인-1-일옥시)메틸)벤질)옥시)카르보닐)(메틸)아미노)프로프-1-인-1-일)-2-플루오로페녹시)프로필)티아졸-4-카르복실산 (38.0 mg, 0.032 mmol) 및 1-아지도-3,6,9,12,15,18,21,24-옥타옥사헵타코산-27-산 (23.9 mg, 0.051 mmol, 1.6 당량)을 사용하여 일반적 절차 7에 따라, 2-((6-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-5-메틸피리다진-3-일)(메틸)아미노)-5-(3-(4-(3-((((4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(((1-(26-카르복시-3,6,9,12,15,18,21,24-옥타옥사헥사코실)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)메틸)벤질)옥시)카르보닐)(메틸)아미노)프로프-1-인-1-일)-2-플루오로페녹시)프로필)티아졸-4-카르복실산을 수득하였다. LCMS: M/2+H = 830.6; Rt=0.73분 (2분 염기성 방법).
2-((6-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-5-메틸피리다진-3-일)(메틸)아미노)-5-(3-(4-(3-((((2-(((1-(26-카르복시-3,6,9,12,15,18,21,24-옥타옥사헥사코실)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)메틸)-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)옥시)카르보닐)(메틸)아미노)프로프-1-인-1-일)-2-플루오로페녹시)프로필)티아졸-4-카르복실산 (L7C-P7)의 합성
Figure pct00816
2-((6-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-5-메틸피리다진-3-일)(메틸)아미노)-5-(3-(4-(3-((((4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(((1-(26-카르복시-3,6,9,12,15,18,21,24-옥타옥사헥사코실)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)메틸)벤질)옥시)카르보닐)(메틸)아미노)프로프-1-인-1-일)-2-플루오로페녹시)프로필)티아졸-4-카르복실산 (25.0 mg, 0.015 mmol) 및 2,5-디옥소피롤리딘-1-일 3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로파노에이트 (7.0 mg, 0.023 mmol, 1.5 당량)를 사용하여 일반적 절차 8에 따라, 2-((6-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-5-메틸피리다진-3-일)(메틸)아미노)-5-(3-(4-(3-((((2-(((1-(26-카르복시-3,6,9,12,15,18,21,24-옥타옥사헥사코실)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)메틸)-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)옥시)카르보닐)(메틸)아미노)프로프-1-인-1-일)-2-플루오로페녹시)프로필)티아졸-4-카르복실산을 수득하였다. LCMS: M/2+H = 877.9; Rt=1.07분 (2분 산성 방법).
5-(3-(4-(3-((((2-(((1-(2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사펜타코산-25-일)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)메틸)-4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)옥시)카르보닐)(메틸)아미노)프로프-1-인-1-일)-2-플루오로페녹시)프로필)-2-((6-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-5-메틸피리다진-3-일)(메틸)아미노)티아졸-4-카르복실산의 합성
Figure pct00817
2-((6-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-5-메틸피리다진-3-일)(메틸)아미노)-5-(3-(4-(3-((((4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-((프로프-2-인-1-일옥시)메틸)벤질)옥시)카르보닐)(메틸)아미노)프로프-1-인-1-일)-2-플루오로페녹시)프로필)티아졸-4-카르복실산 (45.0 mg, 0.038 mmol) 및 25-아지도-2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사펜타코산 (21.7 mg, 0.053 mmol, 1.4 당량)을 사용하여 일반적 절차 7에 따라, 5-(3-(4-(3-((((2-(((1-(2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사펜타코산-25-일)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)메틸)-4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)옥시)카르보닐)(메틸)아미노)프로프-1-인-1-일)-2-플루오로페녹시)프로필)-2-((6-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-5-메틸피리다진-3-일)(메틸)아미노)티아졸-4-카르복실산을 수득하였다. LCMS: M/2+H = 800.9; Rt=1.14분 (2분 산성 방법).
5-(3-(4-(3-((((2-(((1-(2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사펜타코산-25-일)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)메틸)-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)옥시)카르보닐)(메틸)아미노)프로프-1-인-1-일)-2-플루오로페녹시)프로필)-2-((6-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-5-메틸피리다진-3-일)(메틸)아미노)티아졸-4-카르복실산 (L8C-P7)의 합성
Figure pct00818
일반적 절차 8에 따라 5-(3-(4-(3-((((2-(((1-(2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사펜타코산-25-일)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)메틸)-4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)옥시)카르보닐)(메틸)아미노)프로프-1-인-1-일)-2-플루오로페녹시)프로필)-2-((6-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-5-메틸피리다진-3-일)(메틸)아미노)티아졸-4-카르복실산 (49.0 mg, 0.031 mmol) 및 2,5-디옥소피롤리딘-1-일 3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로파노에이트 (14.3 mg, 0.046 mmol, 1.5 당량)를 사용하여 5-(3-(4-(3-((((2-(((1-(2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사펜타코산-25-일)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)메틸)-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)옥시)카르보닐)(메틸)아미노)프로프-1-인-1-일)-2-플루오로페녹시)프로필)-2-((6-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-5-메틸피리다진-3-일)(메틸)아미노)티아졸-4-카르복실산을 수득하였다. LCMS: M/2+H = 848.6; Rt=1.08분 (2분 산성 방법).
5-(3-(4-(3-((((4-((S)-2-((S)-2-아미노-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-((메틸 ((프로프-2-인-1-일옥시)카르보닐)아미노)메틸)벤질)옥시)카르보닐)(메틸)아미노)프로프-1-인-1-일)-2-플루오로페녹시)프로필)-2-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)티아졸-4-카르복실산의 합성
Figure pct00819
프로프-2-인-1-일 5-((S)-2-((S)-2-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-((((4-니트로페녹시)카르보닐)옥시)메틸)벤질 (메틸)카르바메이트 (72.0 mg, 0.081 mmol) 및 2-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-5-(3-(2-플루오로-4-(3-(메틸아미노)프로프-1-인-1-일)페녹시)프로필)티아졸-4-카르복실산 (52.0 mg, 0.081 mmol, 1.0 당량)을 사용하여 일반적 절차 9에 따라, 5-(3-(4-(3-((((4-((S)-2-((S)-2-아미노-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-((메틸 ((프로프-2-인-1-일옥시)카르보닐)아미노)메틸)벤질)옥시)카르보닐)(메틸)아미노)프로프-1-인-1-일)-2-플루오로페녹시)프로필)-2-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)티아졸-4-카르복실산을 수득하였다. LCMS: M+H = 1174.3; Rt=1.12분 (2분 산성 방법).
5-(3-(4-(3-((((2-(((((1-(2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사펜타코산-25-일)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)카르보닐)(메틸)아미노)메틸)-4-((S)-2-((S)-2-아미노-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)옥시)카르보닐)(메틸)아미노)프로프-1-인-1-일)-2-플루오로페녹시)프로필)-2-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)티아졸-4-카르복실산의 합성
Figure pct00820
일반적 절차 7에 따라 5-(3-(4-(3-((((4-((S)-2-((S)-2-아미노-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-((메틸 ((프로프-2-인-1-일옥시)카르보닐)아미노)메틸)벤질)옥시)카르보닐)(메틸)아미노)프로프-1-인-1-일)-2-플루오로페녹시)프로필)-2-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)티아졸-4-카르복실산 (22.0 mg, 0.019 mmol) 및 25-아지도-2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사펜타코산 (23.0 mg, 0.056 mmol, 3.0 당량)을 사용하여, 5-(3-(4-(3-((((2-(((((1-(2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사펜타코산-25-일)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)카르보닐)(메틸)아미노)메틸)-4-((S)-2-((S)-2-아미노-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)옥시)카르보닐)(메틸)아미노)프로프-1-인-1-일)-2-플루오로페녹시)프로필)-2-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)티아졸-4-카르복실산을 수득하였다. HRMS: M+H = 1583.8199; Rt=2.30분 (5분 산성 방법).
5-(3-(4-(3-((((2-(((((1-(2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사펜타코산-25-일)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)카르보닐)(메틸)아미노)메틸)-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)옥시)카르보닐)(메틸)아미노)프로프-1-인-1-일)-2-플루오로페녹시)프로필)-2-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)티아졸-4-카르복실산 (L8C-P3)의 합성
Figure pct00821
일반적 절차 5에 따라 5-(3-(4-(3-((((2-(((((1-(2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사펜타코산-25-일)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)카르보닐)(메틸)아미노)메틸)-4-((S)-2-((S)-2-아미노-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)옥시)카르보닐)(메틸)아미노)프로프-1-인-1-일)-2-플루오로페녹시)프로필)-2-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)티아졸-4-카르복실산 (12.3 mg, 0.008 mmol) 및 2,5-디옥소피롤리딘-1-일 3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로파노에이트 (4.8 mg, 0.016 mmol, 2.0 당량)를 사용하여, 5-(3-(4-(3-((((2-(((((1-(2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사펜타코산-25-일)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)카르보닐)(메틸)아미노)메틸)-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)옥시)카르보닐)(메틸)아미노)프로프-1-인-1-일)-2-플루오로페녹시)프로필)-2-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)티아졸-4-카르복실산을 수득하였다. HRMS: M+H = 1778.6500; Rt=2.67분 (5분 산성 방법).
5-(3-(4-(3-((((4-((S)-2-((S)-2-아미노-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(((((1-(26-카르복시-3,6,9,12,15,18,21,24-옥타옥사헥사코실)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)카르보닐)(메틸)아미노)메틸)벤질)옥시)카르보닐)(메틸)아미노)프로프-1-인-1-일)-2-플루오로페녹시)프로필)-2-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)티아졸-4-카르복실산의 합성
Figure pct00822
일반적 절차 7에 따라 5-(3-(4-(3-((((4-((S)-2-((S)-2-아미노-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-((메틸 ((프로프-2-인-1-일옥시)카르보닐)아미노)메틸)벤질)옥시)카르보닐)(메틸)아미노)프로프-1-인-1-일)-2-플루오로페녹시)프로필)-2-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)티아졸-4-카르복실산 (20.0 mg, 0.017 mmol) 및 1-아지도-3,6,9,12,15,18,21,24-옥타옥사헵타코산-27-산 (23.9 mg, 0.051 mmol, 3.0 당량)을 사용하여, 5-(3-(4-(3-((((4-((S)-2-((S)-2-아미노-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(((((1-(26-카르복시-3,6,9,12,15,18,21,24-옥타옥사헥사코실)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)카르보닐)(메틸)아미노)메틸)벤질)옥시)카르보닐)(메틸)아미노)프로프-1-인-1-일)-2-플루오로페녹시)프로필)-2-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)티아졸-4-카르복실산을 수득하였다. HRMS: M+H = 1641.8900; Rt=2.24분 (5분 산성 방법).
2-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-5-(3-(4-(3-((((2-(((((1-(26-카르복시-3,6,9,12,15,18,21,24-옥타옥사헥사코실)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)카르보닐)(메틸)아미노)메틸)-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)옥시)카르보닐)(메틸)아미노)프로프-1-인-1-일)-2-플루오로페녹시)프로필)티아졸-4-카르복실산 (L3C-P3)의 합성
Figure pct00823
일반적 절차 5에 따라 5-(3-(4-(3-((((4-((S)-2-((S)-2-아미노-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(((((1-(26-카르복시-3,6,9,12,15,18,21,24-옥타옥사헥사코실)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)카르보닐)(메틸)아미노)메틸)벤질)옥시)카르보닐)(메틸)아미노)프로프-1-인-1-일)-2-플루오로페녹시)프로필)-2-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)티아졸-4-카르복실산 (5.5 mg, 0.003 mmol) 및 2,5-디옥소피롤리딘-1-일 3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로파노에이트 (2.1 mg, 0.007 mmol, 2.0 당량)를 사용하여, 2-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-5-(3-(4-(3-((((2-(((((1-(26-카르복시-3,6,9,12,15,18,21,24-옥타옥사헥사코실)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)카르보닐)(메틸)아미노)메틸)-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)옥시)카르보닐)(메틸)아미노)프로프-1-인-1-일)-2-플루오로페녹시)프로필)티아졸-4-카르복실산을 수득하였다. HRMS: M+H = 1837.6300; Rt=2.61분 (5분 산성 방법).
5-((5-(3-(4-(3-((((4-((S)-2-((S)-2-아미노-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-((메틸 ((프로프-2-인-1-일옥시)카르보닐)아미노)메틸)벤질)옥시)카르보닐)(메틸)아미노)프로프-1-인-1-일)-2-플루오로페녹시)프로필)-4-카르복시티아졸-2-일)(6-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-5-메틸피리다진-3-일)아미노)-2-히드록시-N,N-디메틸-N-(3-술포프로필)펜탄-1-아미늄의 합성
Figure pct00824
일반적 절차 9에 따라 프로프-2-인-1-일 (5-((S)-2-((S)-2-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-((((4-니트로페녹시)카르보닐)옥시)메틸)벤질)(메틸)카르바메이트 (30.0 mg, 0.034 mmol) 및 5-((6-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-5-메틸피리다진-3-일)(4-카르복시-5-(3-(2-플루오로-4-(3-(메틸아미노)프로프-1-인-1-일)페녹시)프로필)티아졸-2-일)아미노)-2-히드록시-N,N-디메틸-N-(3-술포프로필)펜탄-1-아미늄 (28.8 mg, 0.034 mmol, 1.0 당량)을 사용하여, 5-((5-(3-(4-(3-((((4-((S)-2-((S)-2-아미노-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-((메틸 ((프로프-2-인-1-일옥시)카르보닐)아미노)메틸)벤질)옥시)카르보닐)(메틸)아미노)프로프-1-인-1-일)-2-플루오로페녹시)프로필)-4-카르복시티아졸-2-일)(6-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-5-메틸피리다진-3-일)아미노)-2-히드록시-N,N-디메틸-N-(3-술포프로필)펜탄-1-아미늄을 수득하였다. LCMS: M+H = 1387.1; Rt=0.98분 (2분 산성 방법).
5-((6-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-5-메틸피리다진-3-일)(4-카르복시-5-(3-(4-(3-((((4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-((메틸 ((프로프-2-인-1-일옥시)카르보닐)아미노)메틸)벤질)옥시)카르보닐)(메틸)아미노)프로프-1-인-1-일)-2-플루오로페녹시)프로필)티아졸-2-일)아미노)-2-히드록시-N,N-디메틸-N-(3-술포프로필)펜탄-1-아미늄의 합성
Figure pct00825
일반적 절차 5에 따라 5-((5-(3-(4-(3-((((4-((S)-2-((S)-2-아미노-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-((메틸 ((프로프-2-인-1-일옥시)카르보닐)아미노)메틸)벤질)옥시)카르보닐)(메틸)아미노)프로프-1-인-1-일)-2-플루오로페녹시)프로필)-4-카르복시티아졸-2-일)(6-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-5-메틸피리다진-3-일)아미노)-2-히드록시-N,N-디메틸-N-(3-술포프로필)펜탄-1-아미늄 (35.6 mg, 0.026 mmol) 및 2,5-디옥소피롤리딘-1-일 3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로파노에이트 (12.0 mg, 0.039 mmol, 1.5 당량)를 사용하여 5-((6-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-5-메틸피리다진-3-일)(4-카르복시-5-(3-(4-(3-((((4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-((메틸 ((프로프-2-인-1-일옥시)카르보닐)아미노)메틸)벤질)옥시)카르보닐)(메틸)아미노)프로프-1-인-1-일)-2-플루오로페녹시)프로필)티아졸-2-일)아미노)-2-히드록시-N,N-디메틸-N-(3-술포프로필)펜탄-1-아미늄을 수득하였다. LCMS: M/2+H = 791.2; Rt=1.01분 (2분 산성 방법).
5-((6-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-5-메틸피리다진-3-일)(4-카르복시-5-(3-(4-(3-((((2-(((((1-(26-카르복시-3,6,9,12,15,18,21,24-옥타옥사헥사코실)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)카르보닐)(메틸)아미노)메틸)-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)옥시)카르보닐)(메틸)아미노)프로프-1-인-1-일)-2-플루오로페녹시)프로필)티아졸-2-일)아미노)-2-히드록시-N,N-디메틸-N-(3-술포프로필)펜탄-1-아미늄 (L3C-P4)의 합성
Figure pct00826
일반적 절차 7에 따라 5-((6-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-5-메틸피리다진-3-일)(4-카르복시-5-(3-(4-(3-((((4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-((메틸 ((프로프-2-인-1-일옥시)카르보닐)아미노)메틸)벤질)옥시)카르보닐)(메틸)아미노)프로프-1-인-1-일)-2-플루오로페녹시)프로필)티아졸-2-일)아미노)-2-히드록시-N,N-디메틸-N-(3-술포프로필)펜탄-1-아미늄 (23.0 mg, 0.015 mmol) 및 1-아지도-3,6,9,12,15,18,21,24-옥타옥사헵타코산-27-산 (20.4 mg, 0.044 mmol, 3.0 당량)을 사용하여 5-((6-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-5-메틸피리다진-3-일)(4-카르복시-5-(3-(4-(3-((((2-(((((1-(26-카르복시-3,6,9,12,15,18,21,24-옥타옥사헥사코실)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)카르보닐)(메틸)아미노)메틸)-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)옥시)카르보닐)(메틸)아미노)프로프-1-인-1-일)-2-플루오로페녹시)프로필)티아졸-2-일)아미노)-2-히드록시-N,N-디메틸-N-(3-술포프로필)펜탄-1-아미늄을 수득하였다. HRMS: M+H = 2047.8101; Rt=2.24분 (5분 산성 방법).
2-((6-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-5-메틸피리다진-3-일)(4-히드록시-5-(트리메틸암모니오)펜틸)아미노)-5-(3-(4-(3-((((4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-((메틸 ((프로프-2-인-1-일옥시)카르보닐)아미노)메틸)벤질)옥시)카르보닐)(메틸)아미노)프로프-1-인-1-일)-2-플루오로페녹시)프로필)티아졸-4-카르복실레이트의 합성
Figure pct00827
일반적 절차 10에 따라 2-((6-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-5-메틸피리다진-3-일)(4-히드록시-5-(트리메틸암모니오)펜틸)아미노)-5-(3-(2-플루오로-4-(3-(메틸아미노)프로프-1-인-1-일)페녹시)프로필)티아졸-4-카르복실레이트 (40.0 mg, 0.054 mmol) 및 프로프-2-인-1-일 5-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-((((4-니트로페녹시)카르보닐)옥시)메틸)벤질 (메틸)카르바메이트 (41.2 mg, 0.054 mmol, 1.0 당량)를 사용하여, 2-((6-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-5-메틸피리다진-3-일)(4-히드록시-5-(트리메틸암모니오)펜틸)아미노)-5-(3-(4-(3-((((4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-((메틸 ((프로프-2-인-1-일옥시)카르보닐)아미노)메틸)벤질)옥시)카르보닐)(메틸)아미노)프로프-1-인-1-일)-2-플루오로페녹시)프로필)티아졸-4-카르복실레이트를 수득하였다. LCMS: M+H = 1378.1; Rt=1.11분 (2분 산성 방법).
2-((6-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-5-메틸피리다진-3-일)(4-히드록시-5-(트리메틸암모니오)펜틸)아미노)-5-(3-(4-(3-((((4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(((((1-(26-카르복시-3,6,9,12,15,18,21,24-옥타옥사헥사코실)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)카르보닐)(메틸)아미노)메틸)벤질)옥시)카르보닐)(메틸)아미노)프로프-1-인-1-일)-2-플루오로페녹시)프로필)티아졸-4-카르복실레이트의 합성
Figure pct00828
2-((6-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-5-메틸피리다진-3-일)(4-히드록시-5-(트리메틸암모니오)펜틸)아미노)-5-(3-(4-(3-((((4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-((메틸 ((프로프-2-인-1-일옥시)카르보닐)아미노)메틸)벤질)옥시)카르보닐)(메틸)아미노)프로프-1-인-1-일)-2-플루오로페녹시)프로필)티아졸-4-카르복실레이트 (67.0 mg, 0.049 mmol) 및 1-아지도-3,6,9,12,15,18,21,24-옥타옥사헵타코산-27-산 (34.1 mg, 0.073 mmol, 1.5 당량)을 사용하여 일반적 절차 7에 따라, 2-((6-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-5-메틸피리다진-3-일)(4-히드록시-5-(트리메틸암모니오)펜틸)아미노)-5-(3-(4-(3-((((4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(((((1-(26-카르복시-3,6,9,12,15,18,21,24-옥타옥사헥사코실)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)카르보닐)(메틸)아미노)메틸)벤질)옥시)카르보닐)(메틸)아미노)프로프-1-인-1-일)-2-플루오로페녹시)프로필)티아졸-4-카르복실레이트를 수득하였다. LCMS: M/2+H = 923.6; Rt=1.06분 (2분 산성 방법).
5-(3-(4-(3-((((4-((S)-2-((S)-2-아미노-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(((((1-(26-카르복시-3,6,9,12,15,18,21,24-옥타옥사헥사코실)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)카르보닐)(메틸)아미노)메틸)벤질)옥시)카르보닐)(메틸)아미노)프로프-1-인-1-일)-2-플루오로페녹시)프로필)-2-((6-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-5-메틸피리다진-3-일)(4-히드록시-5-(트리메틸암모니오)펜틸)아미노)티아졸-4-카르복실레이트의 합성
Figure pct00829
2-((6-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-5-메틸피리다진-3-일)(4-히드록시-5-(트리메틸암모니오)펜틸)아미노)-5-(3-(4-(3-((((4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(((((1-(26-카르복시-3,6,9,12,15,18,21,24-옥타옥사헥사코실)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)카르보닐)(메틸)아미노)메틸)벤질)옥시)카르보닐)(메틸)아미노)프로프-1-인-1-일)-2-플루오로페녹시)프로필)티아졸-4-카르복실레이트 (53.7 mg, 0.029 mmol)를 사용하여 일반적 절차 4에 따라, 5-(3-(4-(3-((((4-((S)-2-((S)-2-아미노-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(((((1-(26-카르복시-3,6,9,12,15,18,21,24-옥타옥사헥사코실)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)카르보닐)(메틸)아미노)메틸)벤질)옥시)카르보닐)(메틸)아미노)프로프-1-인-1-일)-2-플루오로페녹시)프로필)-2-((6-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-5-메틸피리다진-3-일)(4-히드록시-5-(트리메틸암모니오)펜틸)아미노)티아졸-4-카르복실레이트를 수득하였다. LCMS: M/2+H = 873.5; Rt=1.03분 (2분 산성 방법).
5-((6-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-5-메틸피리다진-3-일)(4-카르복시-5-(3-(4-(3-((((2-(((((1-(26-카르복시-3,6,9,12,15,18,21,24-옥타옥사헥사코실)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)카르보닐)(메틸)아미노)메틸)-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)옥시)카르보닐)(메틸)아미노)프로프-1-인-1-일)-2-플루오로페녹시)프로필)티아졸-2-일)아미노)-2-히드록시-N,N,N-트리메틸펜탄-1-아미늄 (L3C-P5)의 합성
Figure pct00830
일반적 절차 5에 따라 5-(3-(4-(3-((((4-((S)-2-((S)-2-아미노-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(((((1-(26-카르복시-3,6,9,12,15,18,21,24-옥타옥사헥사코실)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)카르보닐)(메틸)아미노)메틸)벤질)옥시)카르보닐)(메틸)아미노)프로프-1-인-1-일)-2-플루오로페녹시)프로필)-2-((6-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-5-메틸피리다진-3-일)(4-히드록시-5-(트리메틸암모니오)펜틸)아미노)티아졸-4-카르복실레이트 (50.8 mg, 0.029 mmol) 및 2,5-디옥소피롤리딘-1-일 3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로파노에이트 (13.6 mg, 0.044 mmol, 1.5 당량)를 사용하여, 5-((6-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-5-메틸피리다진-3-일)(4-카르복시-5-(3-(4-(3-((((2-(((((1-(26-카르복시-3,6,9,12,15,18,21,24-옥타옥사헥사코실)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)카르보닐)(메틸)아미노)메틸)-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)옥시)카르보닐)(메틸)아미노)프로프-1-인-1-일)-2-플루오로페녹시)프로필)티아졸-2-일)아미노)-2-히드록시-N,N,N-트리메틸펜탄-1-아미늄을 수득하였다. HRMS: M+H = 1939.8199; Rt=2.17분 (5분 산성 방법).
2-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-5-(3-(4-(3-((((4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-((프로프-2-인-1-일 ((프로프-2-인-1-일옥시)카르보닐)아미노)메틸)벤질)옥시)카르보닐)(메틸)아미노)프로프-1-인-1-일)-2-플루오로페녹시)프로필)티아졸-4-카르복실산의 합성
Figure pct00831
일반적 절차 10에 따라 프로프-2-인-1-일 5-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-((((4-니트로페녹시)카르보닐)옥시)메틸)벤질 (프로프-2-인-1-일)카르바메이트 (49.3 mg, 0.062 mmol) 및 2-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-5-(3-(2-플루오로-4-(3-(메틸아미노)프로프-1-인-1-일)페녹시)프로필)티아졸-4-카르복실산 (40.0 mg, 0.062 mmol, 1.0 당량)을 사용하여, 2-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-5-(3-(4-(3-((((4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-((프로프-2-인-1-일 ((프로프-2-인-1-일옥시)카르보닐)아미노)메틸)벤질)옥시)카르보닐)(메틸)아미노)프로프-1-인-1-일)-2-플루오로페녹시)프로필)티아졸-4-카르복실산을 수득하였다. LCMS: M+H = 1297.0; Rt=1.28분 (2분 산성 방법).
5-(3-(4-(3-((((2-(((((1-(2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사펜타코산-25-일)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)카르보닐)((1-(2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사펜타코산-25-일)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메틸)아미노)메틸)-4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)옥시)카르보닐)(메틸)아미노)프로프-1-인-1-일)-2-플루오로페녹시)프로필)-2-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)티아졸-4-카르복실산의 합성
Figure pct00832
일반적 절차 7에 따라 2-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-5-(3-(4-(3-((((4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-((프로프-2-인-1-일 ((프로프-2-인-1-일옥시)카르보닐)아미노)메틸)벤질)옥시)카르보닐)(메틸)아미노)프로프-1-인-1-일)-2-플루오로페녹시)프로필)티아졸-4-카르복실산 (49.0 mg, 0.038 mmol) 및 25-아지도-2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사펜타코산 (34.0 mg, 0.083 mmol, 2.2 당량)을 사용하여, 5-(3-(4-(3-((((2-(((((1-(2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사펜타코산-25-일)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)카르보닐)((1-(2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사펜타코산-25-일)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메틸)아미노)메틸)-4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)옥시)카르보닐)(메틸)아미노)프로프-1-인-1-일)-2-플루오로페녹시)프로필)-2-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)티아졸-4-카르복실산을 수득하였다. LCMS: M/2+H = 1059.4; Rt=1.16분 (2분 산성 방법).
5-(3-(4-(3-((((2-(((((1-(2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사펜타코산-25-일)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)카르보닐)((1-(2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사펜타코산-25-일)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메틸)아미노)메틸)-4-((S)-2-((S)-2-아미노-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)옥시)카르보닐)(메틸)아미노)프로프-1-인-1-일)-2-플루오로페녹시)프로필)-2-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)티아졸-4-카르복실산의 합성
Figure pct00833
일반적 절차 4에 따라 5-(3-(4-(3-((((2-(((((1-(2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사펜타코산-25-일)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)카르보닐)((1-(2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사펜타코산-25-일)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메틸)아미노)메틸)-4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)옥시)카르보닐)(메틸)아미노)프로프-1-인-1-일)-2-플루오로페녹시)프로필)-2-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)티아졸-4-카르복실산 (80.0 mg, 0.038 mmol)을 사용하여, 5-(3-(4-(3-((((2-(((((1-(2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사펜타코산-25-일)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)카르보닐)((1-(2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사펜타코산-25-일)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메틸)아미노)메틸)-4-((S)-2-((S)-2-아미노-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)옥시)카르보닐)(메틸)아미노)프로프-1-인-1-일)-2-플루오로페녹시)프로필)-2-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)티아졸-4-카르복실산을 수득하였다. LCMS: M/2+H = 1009.2; Rt=1.14분 (2분 산성 방법).
5-(3-(4-(3-((((2-(((((1-(2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사펜타코산-25-일)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)카르보닐)((1-(2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사펜타코산-25-일)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메틸)아미노)메틸)-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)옥시)카르보닐)(메틸)아미노)프로프-1-인-1-일)-2-플루오로페녹시)프로필)-2-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)티아졸-4-카르복실산 (L1C-P3)의 합성
Figure pct00834
일반적 절차 5에 따라 5-(3-(4-(3-((((2-(((((1-(2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사펜타코산-25-일)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)카르보닐)((1-(2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사펜타코산-25-일)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메틸)아미노)메틸)-4-((S)-2-((S)-2-아미노-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)옥시)카르보닐)(메틸)아미노)프로프-1-인-1-일)-2-플루오로페녹시)프로필)-2-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)티아졸-4-카르복실산 (76.0 mg, 0.038 mmol) 및 2,5-디옥소피롤리딘-1-일 3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로파노에이트 (23.4 mg, 0.075 mmol, 2.0 당량)를 사용하여 5-(3-(4-(3-((((2-(((((1-(2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사펜타코산-25-일)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)카르보닐)((1-(2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사펜타코산-25-일)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메틸)아미노)메틸)-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)옥시)카르보닐)(메틸)아미노)프로프-1-인-1-일)-2-플루오로페녹시)프로필)-2-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)티아졸-4-카르복실산을 수득하였다. HRMS: M+H = 2211.9700; Rt=2.56분 (5분 산성 방법).
5-(3-(4-(3-((((4-((S)-2-((S)-2-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-((프로프-2-인-1-일 ((프로프-2-인-1-일옥시)카르보닐)아미노)메틸)벤질)옥시)카르보닐)(메틸)아미노)프로프-1-인-1-일)-2-플루오로페녹시)프로필)-2-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)티아졸-4-카르복실산의 합성
Figure pct00835
일반적 절차 10에 따라 프로프-2-인-1-일 5-((S)-2-((S)-2-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-((((4-니트로페녹시)카르보닐)옥시)메틸)벤질 (프로프-2-인-1-일)카르바메이트 (56.9 mg, 0.062 mmol) 및 2-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-5-(3-(2-플루오로-4-(3-(메틸아미노)프로프-1-인-1-일)페녹시)프로필)티아졸-4-카르복실산 (40.0 mg, 0.062 mmol, 1.0 당량)을 사용하여, 5-(3-(4-(3-((((4-((S)-2-((S)-2-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-((프로프-2-인-1-일 ((프로프-2-인-1-일옥시)카르보닐)아미노)메틸)벤질)옥시)카르보닐)(메틸)아미노)프로프-1-인-1-일)-2-플루오로페녹시)프로필)-2-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)티아졸-4-카르복실산을 수득하였다. LCMS: M+H = 1422.6; Rt=1.33분 (2분 산성 방법).
5-(3-(4-(3-((((4-((S)-2-((S)-2-아미노-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-((프로프-2-인-1-일 ((프로프-2-인-1-일옥시)카르보닐)아미노)메틸)벤질)옥시)카르보닐)(메틸)아미노)프로프-1-인-1-일)-2-플루오로페녹시)프로필)-2-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)티아졸-4-카르복실산의 합성
Figure pct00836
THF 중 2.0 M 디메틸아민 (3.1 mL, 6.20 mmol, 100.0 당량) 중 5-(3-(4-(3-((((4-((S)-2-((S)-2-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-((프로프-2-인-1-일 ((프로프-2-인-1-일옥시)카르보닐)아미노)메틸)벤질)옥시)카르보닐)(메틸)아미노)프로프-1-인-1-일)-2-플루오로페녹시)프로필)-2-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)티아졸-4-카르복실산 (88.0 mg, 0.062 mmol)의 용액을 실온에서 80분 동안 교반하였다. 용매를 진공 하에 제거하고, 잔류물을 DMSO (1.0 mL) 중에 희석하고, RP-HPLC 이스코 골드 크로마토그래피 (0-100% MeCN/H2O, 0.05% TFA 개질제)에 의해 정제하였다. 동결건조 시, 5-(3-(4-(3-((((4-((S)-2-((S)-2-아미노-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-((프로프-2-인-1-일 ((프로프-2-인-1-일옥시)카르보닐)아미노)메틸)벤질)옥시)카르보닐)(메틸)아미노)프로프-1-인-1-일)-2-플루오로페녹시)프로필)-2-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)티아졸-4-카르복실산을 수득하였다. LCMS: M+H = 1199.2; Rt=1.06분 (2분 산성 방법).
5-(3-(4-(3-((((4-((S)-2-((S)-2-아미노-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(((((1-(26-카르복시-3,6,9,12,15,18,21,24-옥타옥사헥사코실)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)카르보닐)((1-(26-카르복시-3,6,9,12,15,18,21,24-옥타옥사헥사코실)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메틸)아미노)메틸)벤질)옥시)카르보닐)(메틸)아미노)프로프-1-인-1-일)-2-플루오로페녹시)프로필)-2-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)티아졸-4-카르복실산의 합성
Figure pct00837
일반적 절차 7에 따라 5-(3-(4-(3-((((4-((S)-2-((S)-2-아미노-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-((프로프-2-인-1-일 ((프로프-2-인-1-일옥시)카르보닐)아미노)메틸)벤질)옥시)카르보닐)(메틸)아미노)프로프-1-인-1-일)-2-플루오로페녹시)프로필)-2-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)티아졸-4-카르복실산 (20.8 mg, 0.017 mmol) 및 1-아지도-3,6,9,12,15,18,21,24-옥타옥사헵타코산-27-산 (17.9 mg, 0.038 mmol, 2.2 당량)을 사용하여, 5-(3-(4-(3-((((4-((S)-2-((S)-2-아미노-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(((((1-(26-카르복시-3,6,9,12,15,18,21,24-옥타옥사헥사코실)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)카르보닐)((1-(26-카르복시-3,6,9,12,15,18,21,24-옥타옥사헥사코실)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메틸)아미노)메틸)벤질)옥시)카르보닐)(메틸)아미노)프로프-1-인-1-일)-2-플루오로페녹시)프로필)-2-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)티아졸-4-카르복실산을 수득하였다. LCMS: M/2+H = 1068.2; Rt=0.99분 (2분 산성 방법).
2-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-5-(3-(4-(3-((((2-(((((1-(26-카르복시-3,6,9,12,15,18,21,24-옥타옥사헥사코실)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)카르보닐)((1-(26-카르복시-3,6,9,12,15,18,21,24-옥타옥사헥사코실)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메틸)아미노)메틸)-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)옥시)카르보닐)(메틸)아미노)프로프-1-인-1-일)-2-플루오로페녹시)프로필)티아졸-4-카르복실산 (L10C-P3)의 합성
Figure pct00838
일반적 절차 5에 따라 5-(3-(4-(3-((((4-((S)-2-((S)-2-아미노-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(((((1-(26-카르복시-3,6,9,12,15,18,21,24-옥타옥사헥사코실)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)카르보닐)((1-(26-카르복시-3,6,9,12,15,18,21,24-옥타옥사헥사코실)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메틸)아미노)메틸)벤질)옥시)카르보닐)(메틸)아미노)프로프-1-인-1-일)-2-플루오로페녹시)프로필)-2-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)티아졸-4-카르복실산 (36.3 mg, 0.017 mmol) 및 2,5-디옥소피롤리딘-1-일 3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로파노에이트 (5.3 mg, 0.017 mmol, 1.0 당량)를 사용하여, 2-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-5-(3-(4-(3-((((2-(((((1-(26-카르복시-3,6,9,12,15,18,21,24-옥타옥사헥사코실)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)카르보닐)((1-(26-카르복시-3,6,9,12,15,18,21,24-옥타옥사헥사코실)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메틸)아미노)메틸)-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)옥시)카르보닐)(메틸)아미노)프로프-1-인-1-일)-2-플루오로페녹시)프로필)티아졸-4-카르복실산을 수득하였다. HRMS: M+H = 2327.9800; Rt=2.45분 (5분 산성 방법).
5-((6-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-5-메틸피리다진-3-일)(4-카르복시-5-(3-(4-(3-((((4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)옥시)카르보닐)(메틸)아미노)프로프-1-인-1-일)-2-플루오로페녹시)프로필)티아졸-2-일)아미노)-2-히드록시-N,N-디메틸-N-(3-술포프로필)펜탄-1-아미늄 (L9C-P4)의 합성
Figure pct00839
일반적 절차 10에 따라 4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질 (4-니트로페닐) 카르보네이트 (20.0 mg, 0.027 mmol) 및 5-((6-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-5-메틸피리다진-3-일)(4-카르복시-5-(3-(2-플루오로-4-(3-(메틸아미노)프로프-1-인-1-일)페녹시)프로필)티아졸-2-일)아미노)-2-히드록시-N,N-디메틸-N-(3-술포프로필)펜탄-1-아미늄 (23.1 mg, 0.027 mmol, 1.0 당량)을 사용하여, 5-((6-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-5-메틸피리다진-3-일)(4-카르복시-5-(3-(4-(3-((((4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)옥시)카르보닐)(메틸)아미노)프로프-1-인-1-일)-2-플루오로페녹시)프로필)티아졸-2-일)아미노)-2-히드록시-N,N-디메틸-N-(3-술포프로필)펜탄-1-아미늄을 수득하였다. HRMS: M+H = 1455.5300; Rt=2.31분 (5분 산성 방법).
2-((6-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-5-메틸피리다진-3-일)(4-히드록시-5-(트리메틸암모니오)펜틸)아미노)-5-(3-(4-(3-((((4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)옥시)카르보닐)(메틸)아미노)프로프-1-인-1-일)-2-플루오로페녹시)프로필)티아졸-4-카르복실레이트의 합성
Figure pct00840
일반적 절차 10에 따라 2-((6-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-5-메틸피리다진-3-일)(4-히드록시-5-(트리메틸암모니오)펜틸)아미노)-5-(3-(2-플루오로-4-(3-(메틸아미노)프로프-1-인-1-일)페녹시)프로필)티아졸-4-카르복실레이트 (40.0 mg, 0.054 mmol) 및 tert-부틸 ((S)-3-메틸-1-(((S)-1-((4-((((4-니트로페녹시)카르보닐)옥시)메틸)페닐)아미노)-1-옥소-5-우레이도펜탄-2-일)아미노)-1-옥소부탄-2-일)카르바메이트 (34.5 mg, 0.054 mmol, 1.0 당량)를 사용하여, 2-((6-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-5-메틸피리다진-3-일)(4-히드록시-5-(트리메틸암모니오)펜틸)아미노)-5-(3-(4-(3-((((4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)옥시)카르보닐)(메틸)아미노)프로프-1-인-1-일)-2-플루오로페녹시)프로필)티아졸-4-카르복실레이트를 수득하였다. LCMS: M+H = 1253.8; Rt=1.11분 (2분 산성 방법).
5-(3-(4-(3-((((4-((S)-2-((S)-2-아미노-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)옥시)카르보닐)(메틸)아미노)프로프-1-인-1-일)-2-플루오로페녹시)프로필)-2-((6-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-5-메틸피리다진-3-일)(4-히드록시-5-(트리메틸암모니오)펜틸)아미노)티아졸-4-카르복실레이트의 합성
Figure pct00841
2-((6-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-5-메틸피리다진-3-일)(4-히드록시-5-(트리메틸암모니오)펜틸)아미노)-5-(3-(4-(3-((((4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)옥시)카르보닐)(메틸)아미노)프로프-1-인-1-일)-2-플루오로페녹시)프로필)티아졸-4-카르복실레이트 (64.8 mg, 0.052 mmol)를 사용하여 일반적 절차 4에 따라, 5-(3-(4-(3-((((4-((S)-2-((S)-2-아미노-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)옥시)카르보닐)(메틸)아미노)프로프-1-인-1-일)-2-플루오로페녹시)프로필)-2-((6-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-5-메틸피리다진-3-일)(4-히드록시-5-(트리메틸암모니오)펜틸)아미노)티아졸-4-카르복실레이트를 수득하였다. LCMS: M/2+H = 576.6; Rt=0.99분 (2분 산성 방법).
5-((6-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-5-메틸피리다진-3-일)(4-카르복시-5-(3-(4-(3-((((4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)옥시)카르보닐)(메틸)아미노)프로프-1-인-1-일)-2-플루오로페녹시)프로필)티아졸-2-일)아미노)-2-히드록시-N,N,N-트리메틸펜탄-1-아미늄 (L9C-P5)의 합성
Figure pct00842
일반적 절차 5에 따라 5-(3-(4-(3-((((4-((S)-2-((S)-2-아미노-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)옥시)카르보닐)(메틸)아미노)프로프-1-인-1-일)-2-플루오로페녹시)프로필)-2-((6-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-5-메틸피리다진-3-일)(4-히드록시-5-(트리메틸암모니오)펜틸)아미노)티아졸-4-카르복실레이트 (59.0 mg, 0.051 mmol) 및 2,5-디옥소피롤리딘-1-일 3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로파노에이트 (19.1 mg, 0.061 mmol, 1.2 당량)를 사용하여, 5-((6-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-5-메틸피리다진-3-일)(4-카르복시-5-(3-(4-(3-((((4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)옥시)카르보닐)(메틸)아미노)프로프-1-인-1-일)-2-플루오로페녹시)프로필)티아졸-2-일)아미노)-2-히드록시-N,N,N-트리메틸펜탄-1-아미늄을 수득하였다. HRMS: M+H = 1347.5300; Rt=2.23분 (5분 산성 방법).
1-(2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-2-(((4-메톡시벤질)옥시)카르보닐)피리딘-3-일)-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)옥시)에틸)-1-(4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(75-메틸-74-옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50,53,56,59,62,65,68,71-테트라코사옥사-75-아자헥사헵타콘탄-76-일)벤질)피롤리딘-1-윰의 합성
Figure pct00843
일반적 절차 3에 따라 1-(2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-2-(((4-메톡시벤질)옥시)카르보닐)피리딘-3-일)-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)옥시)에틸)-1-(4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-((메틸아미노)메틸)벤질)피롤리딘-1-윰 (40 mg, 0.028 mmol) 및 2,5-디옥소피롤리딘-1-일 2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50,53,56,59,62,65,68,71-테트라코사옥사테트라헵타콘탄-74-오에이트 (51.5 mg, 0.042 mmol, 1.5 당량)를 사용하여 1-(2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-2-(((4-메톡시벤질)옥시)카르보닐)피리딘-3-일)-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)옥시)에틸)-1-(4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(75-메틸-74-옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50,53,56,59,62,65,68,71-테트라코사옥사-75-아자헥사헵타콘탄-76-일)벤질)피롤리딘-1-윰을 수득하였다. HRMS: M+= 2511.4099; Rt=2.44분 (5분 산성 방법).
1-(4-((S)-2-((S)-2-아미노-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(75-메틸-74-옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50,53,56,59,62,65,68,71-테트라코사옥사-75-아자헥사헵타콘탄-76-일)벤질)-1-(2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-2-카르복시피리딘-3-일)-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)옥시)에틸)피롤리딘-1-윰의 합성
Figure pct00844
1-(2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-2-(((4-메톡시벤질)옥시)카르보닐)피리딘-3-일)-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)옥시)에틸)-1-(4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(75-메틸-74-옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50,53,56,59,62,65,68,71-테트라코사옥사-75-아자헥사헵타콘탄-76-일)벤질)피롤리딘-1-윰 (50 mg, 0.0199 mmol)을 사용하여 일반적 절차 4에 따라, 1-(4-((S)-2-((S)-2-아미노-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(75-메틸-74-옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50,53,56,59,62,65,68,71-테트라코사옥사-75-아자헥사헵타콘탄-76-일)벤질)-1-(2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-2-카르복시피리딘-3-일)-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)옥시)에틸)피롤리딘-1-윰을 수득하였다. HRMS: M+= 2291.3101; Rt=1.93분 (5분 산성 방법).
1-(2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-2-카르복시피리딘-3-일)-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)옥시)에틸)-1-(4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(75-메틸-74-옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50,53,56,59,62,65,68,71-테트라코사옥사-75-아자헥사헵타콘탄-76-일)벤질)피롤리딘-1-윰 (L30A-P21)의 합성
Figure pct00845
1-(4-((S)-2-((S)-2-아미노-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(75-메틸-74-옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50,53,56,59,62,65,68,71-테트라코사옥사-75-아자헥사헵타콘탄-76-일)벤질)-1-(2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-2-카르복시피리딘-3-일)-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)옥시)에틸)피롤리딘-1-윰 (37 mg, 0.015 mmol) 및 2,5-디옥소피롤리딘-1-일 3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로파노에이트 (11.4 mg, 0.0367 mmol, 2.5 당량)를 사용하여 일반적 절차 5에 따라, 1-(2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-2-카르복시피리딘-3-일)-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)옥시)에틸)-1-(4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(75-메틸-74-옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50,53,56,59,62,65,68,71-테트라코사옥사-75-아자헥사헵타콘탄-76-일)벤질)피롤리딘-1-윰을 수득하였다. HRMS: M+= 2486.3301; Rt=2.14분 (5분 산성 방법).
1-(2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-2-(((4-메톡시벤질)옥시)카르보닐)피리딘-3-일)-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)옥시)에틸)-1-(4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,44,44-펜타데카메틸-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42-테트라데카옥소-43-옥사-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38-트리데카아자펜타테트라콘틸)벤질)피롤리딘-1-윰의 합성
Figure pct00846
일반적 절차 3에 따라 1-(2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-2-(((4-메톡시벤질)옥시)카르보닐)피리딘-3-일)-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)옥시)에틸)-1-(4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-((메틸아미노)메틸)벤질)피롤리딘-1-윰 (35 mg, 0.021 mmol) 및 3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,42,42-테트라데카메틸-4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40-트리데카옥소-41-옥사-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36-도데카아자트리테트라콘탄산 (21.9 mg, 0.021 mmol, 1.0 당량)을 사용하여 1-(2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-2-(((4-메톡시벤질)옥시)카르보닐)피리딘-3-일)-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)옥시)에틸)-1-(4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,44,44-펜타데카메틸-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42-테트라데카옥소-43-옥사-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38-트리데카아자펜타테트라콘틸)벤질)피롤리딘-1-윰을 수득하였다. HRMS: [(M +)+H+]+2/2=1211.6500; Rt=2.31분 (5분 산성 방법).
1-(2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-2-카르복시피리딘-3-일)-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)옥시)에틸)-1-(2-(41-카르복시-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38-트리데카메틸-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39-트리데카옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38-트리데카아자헨테트라콘틸)-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)피롤리딘-1-윰 (L35A-P21)의 합성
Figure pct00847
1-(2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-2-(((4-메톡시벤질)옥시)카르보닐)피리딘-3-일)-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)옥시)에틸)-1-(4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,44,44-펜타데카메틸-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42-테트라데카옥소-43-옥사-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38-트리데카아자펜타테트라콘틸)벤질)피롤리딘-1-윰 (24 mg, 0.0095 mmol)을 사용하여 일반적 절차 4에 따른 다음, 일반적 절차 5에 따라 2,5-디옥소피롤리딘-1-일 3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로파노에이트 (5.9 mg, 0.019 mmol, 2 당량)를 사용하여 조 생성물을 취하고, 1-(2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-2-카르복시피리딘-3-일)-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)옥시)에틸)-1-(2-(41-카르복시-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38-트리데카메틸-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39-트리데카옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38-트리데카아자헨테트라콘틸)-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)피롤리딘-1-윰을 수득하였다. HRMS: M+= 2340.1699; Rt=1.87분 (5분 산성 방법).
1-(2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-2-(((4-메톡시벤질)옥시)카르보닐)피리딘-3-일)-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)옥시)에틸)-1-(4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50,53,56,62,62-헤니코사메틸-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42,45,48,51,54,57,60-이코사옥소-61-옥사-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50,53,56-노나데카아자트리헥사콘틸)벤질)피롤리딘-1-윰의 합성
Figure pct00848
일반적 절차 3에 따라 1-(2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-2-(((4-메톡시벤질)옥시)카르보닐)피리딘-3-일)-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)옥시)에틸)-1-(4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-((메틸아미노)메틸)벤질)피롤리딘-1-윰 (47 mg, 0.0286 mmol) 및 3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42,45,48,51,54,60,60-이코사메틸-4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43,46,49,52,55,58-노나데카옥소-59-옥사-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42,45,48,51,54-옥타데카아자헨헥사콘탄산 (41.6 mg, 0.0286 mmol, 1.0 당량)을 사용하여 1-(2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-2-(((4-메톡시벤질)옥시)카르보닐)피리딘-3-일)-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)옥시)에틸)-1-(4-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50,53,56,62,62-헤니코사메틸-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42,45,48,51,54,57,60-이코사옥소-61-옥사-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50,53,56-노나데카아자트리헥사콘틸)벤질)피롤리딘-1-윰을 수득하였다. HRMS: M+= 2487.5400; Rt=2.26분 (5분 산성 방법).
1-(4-((S)-2-((S)-2-아미노-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(59-카르복시-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50,53,56-노나데카메틸-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42,45,48,51,54,57-노나데카옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50,53,56-노나데카아자노나펜타콘틸)벤질)-1-(2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-2-카르복시피리딘-3-일)-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)옥시)에틸)피롤리딘-1-윰의 합성
Figure pct00849
1-(2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-2-(((4-메톡시벤질)옥시)카르보닐)피리딘-3-일)-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)옥시)에틸)-1-(4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50,53,56,62,62-헤니코사메틸-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42,45,48,51,54,57,60-이코사옥소-61-옥사-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50,53,56-노나데카아자트리헥사콘틸)벤질)피롤리딘-1-윰 (46 mg, 0.0155 mmol), 1-(4-((S)-2-((S)-2-아미노-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(59-카르복시-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50,53,56-노나데카메틸-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42,45,48,51,54,57-노나데카옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50,53,56-노나데카아자노나펜타콘틸)벤질)-1-(2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-2-카르복시피리딘-3-일)-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)옥시)에틸)피롤리딘-1-윰을 사용하여 일반적 절차 4에 따라 수득하였다. HRMS: M+= 2571.3401; Rt=1.60분 (5분 산성 방법).
1-(2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-2-카르복시피리딘-3-일)-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)옥시)에틸)-1-(2-(59-카르복시-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50,53,56-노나데카메틸-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42,45,48,51,54,57-노나데카옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50,53,56-노나데카아자노나펜타콘틸)-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)피롤리딘-1-윰 (L36A-P21)의 합성
Figure pct00850
1-(4-((S)-2-((S)-2-아미노-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(59-카르복시-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50,53,56-노나데카메틸-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42,45,48,51,54,57-노나데카옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50,53,56-노나데카아자노나펜타콘틸)벤질)-1-(2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-2-카르복시피리딘-3-일)-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)옥시)에틸)피롤리딘-1-윰 (17.0 mg, 0.0055 mmol) 및 2,5-디옥소피롤리딘-1-일 3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로파노에이트 (2.4 mg, 0.0076 mmol, 1.4 당량)를 사용하여 일반적 절차 5에 따라, 1-(2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-2-카르복시피리딘-3-일)-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)옥시)에틸)-1-(2-(59-카르복시-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50,53,56-노나데카메틸-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42,45,48,51,54,57-노나데카옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50,53,56-노나데카아자노나펜타콘틸)-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)피롤리딘-1-윰을 수득하였다. HRMS: M+= 2766.3899; Rt=1.82분 (5분 산성 방법).
1-(2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-2-(((4-메톡시벤질)옥시)카르보닐)피리딘-3-일)-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)옥시)에틸)-1-(4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50,53,56,59,62,65,68,71,74,80,80-헵타코사메틸-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42,45,48,51,54,57,60,63,66,69,72,75,78-헥사코사옥소-79-옥사-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50,53,56,59,62,65,68,71,74-펜타코사아자헤녹타콘틸)벤질)피롤리딘-1-윰의 합성
Figure pct00851
일반적 절차 3에 따라 1-(2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-2-(((4-메톡시벤질)옥시)카르보닐)피리딘-3-일)-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)옥시)에틸)-1-(4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-((메틸아미노)메틸)벤질)피롤리딘-1-윰 (40 mg, 0.028 mmol) 및 3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42,45,48,51,54,57,60,63,66,69,72,78,78-헥사코사메틸-4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43,46,49,52,55,58,61,64,67,70,73,76-펜타코사옥소-77-옥사-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42,45,48,51,54,57,60,63,66,69,72-테트라코사아자노나헵타콘탄산 (58.5 mg, 0.031 mmol, 1.1 당량), 1-(2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-2-(((4-메톡시벤질)옥시)카르보닐)피리딘-3-일)-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)옥시)에틸)-1-(4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50,53,56,59,62,65,68,71,74,80,80-헵타코사메틸-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42,45,48,51,54,57,60,63,66,69,72,75,78-헥사코사옥소-79-옥사-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50,53,56,59,62,65,68,71,74-펜타코사아자헤녹타콘틸)벤질)피롤리딘-1-윰을 수득하였다. HRMS: M+= 3273.7500; Rt=2.24분 (5분 산성 방법).
1-(4-((S)-2-((S)-2-아미노-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(77-카르복시-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50,53,56,59,62,65,68,71,74-펜타코사메틸-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42,45,48,51,54,57,60,63,66,69,72,75-펜타코사옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50,53,56,59,62,65,68,71,74-펜타코사아자헵타헵타콘틸)벤질)-1-(2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-2-카르복시피리딘-3-일)-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)옥시)에틸)피롤리딘-1-윰의 합성
Figure pct00852
1-(2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-2-(((4-메톡시벤질)옥시)카르보닐)피리딘-3-일)-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)옥시)에틸)-1-(4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50,53,56,59,62,65,68,71,74,80,80-헵타코사메틸-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42,45,48,51,54,57,60,63,66,69,72,75,78-헥사코사옥소-79-옥사-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50,53,56,59,62,65,68,71,74-펜타코사아자헤녹타콘틸)벤질)피롤리딘-1-윰 (20 mg, 0.0063 mmol)을 사용하여 일반적 절차 4에 따라, 1-(4-((S)-2-((S)-2-아미노-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(77-카르복시-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50,53,56,59,62,65,68,71,74-펜타코사메틸-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42,45,48,51,54,57,60,63,66,69,72,75-펜타코사옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50,53,56,59,62,65,68,71,74-펜타코사아자헵타콘틸)벤질)-1-(2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-2-카르복시피리딘-3-일)-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)옥시)에틸)피롤리딘-1-윰을 수득하였다. HRMS: M+= 2997.6001; Rt=1.65분 (5분 산성 방법).
1-(2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-2-카르복시피리딘-3-일)-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)옥시)에틸)-1-(2-(77-카르복시-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50,53,56,59,62,65,68,71,74-펜타코사메틸-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42,45,48,51,54,57,60,63,66,69,72,75-펜타코사옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50,53,56,59,62,65,68,71,74-펜타코사아자헵타헵타콘틸)-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)피롤리딘-1-윰 (L37A-P21)의 합성
Figure pct00853
1-(4-((S)-2-((S)-2-아미노-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(77-카르복시-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50,53,56,59,62,65,68,71,74-펜타코사메틸-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42,45,48,51,54,57,60,63,66,69,72,75-펜타코사옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50,53,56,59,62,65,68,71,74-펜타코사아자헵타콘틸)벤질)-1-(2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-2-카르복시피리딘-3-일)-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)옥시)에틸)피롤리딘-1-윰 (35 mg, 0.011 mmol) 및 2,5-디옥소피롤리딘-1-일 3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로파노에이트 (4.7 mg, 0.015 mmol, 1.4 당량)를 사용하여 일반적 절차 5에 따라, 1-(2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-2-카르복시피리딘-3-일)-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)옥시)에틸)-1-(2-(77-카르복시-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50,53,56,59,62,65,68,71,74-펜타코사메틸-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42,45,48,51,54,57,60,63,66,69,72,75-펜타코사옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50,53,56,59,62,65,68,71,74-펜타코사아자헵타콘틸)-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)피롤리딘-1-윰을 수득하였다. HRMS: M+= 3192.6399; Rt=1.86분 (5분 산성 방법).
1-(2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-2-(((4-메톡시벤질)옥시)카르보닐)피리딘-3-일)-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)옥시)에틸)-1-(4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38-트리데카메틸-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39-트리데카옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38-트리데카아자테트라콘틸)벤질)피롤리딘-1-윰의 합성
Figure pct00854
일반적 절차 3에 따라 1-(2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-2-(((4-메톡시벤질)옥시)카르보닐)피리딘-3-일)-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)옥시)에틸)-1-(4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-((메틸아미노)메틸)벤질)피롤리딘-1-윰 (70 mg, 0.043 mmol) 및 3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36-도데카메틸-4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37-도데카옥소-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36-도데카아자옥타트리아콘탄산 (38.9 mg, 0.043 mmol, 1.0 당량)을 사용하여 1-(2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-2-(((4-메톡시벤질)옥시)카르보닐)피리딘-3-일)-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)옥시)에틸)-1-(4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38-트리데카메틸-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39-트리데카옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38-트리데카아자테트라콘틸)벤질)피롤리딘-1-윰을 수득하였다. HRMS: M+= 2307.2300; Rt=2.20분 (5분 산성 방법).
1-(2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-2-카르복시피리딘-3-일)-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)옥시)에틸)-1-(4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38-트리데카메틸-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39-트리데카옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38-트리데카아자테트라콘틸)벤질)피롤리딘-1-윰 (L38A-P21)의 합성
Figure pct00855
1-(2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-2-(((4-메톡시벤질)옥시)카르보닐)피리딘-3-일)-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)옥시)에틸)-1-(4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38-트리데카메틸-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39-트리데카옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38-트리데카아자테트라콘틸)벤질)피롤리딘-1-윰 (67 mg, 0.029 mmol)을 사용하여 일반적 절차 4에 따른 다음, 조 반응 생성물을 취하고, 일반적 절차 5에 따라 2,5-디옥소피롤리딘-1-일 3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로파노에이트 (13.5 mg, 0.044 mmol, 1.5 당량)를 사용하여 1-(2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-2-카르복시피리딘-3-일)-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)옥시)에틸)-1-(4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38-트리데카메틸-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39-트리데카옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38-트리데카아자테트라콘틸)벤질)피롤리딘-1-윰을 수득하였다. HRMS: M+= 2282.2500; Rt=1.89분 (5분 산성 방법).
1-(2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-2-(((4-메톡시벤질)옥시)카르보닐)피리딘-3-일)-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)옥시)에틸)-1-(4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(78-카르복시-2-메틸-3-옥소-7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43,46,49,52,55,58,61,64,67,70,73,76-테트라코사옥사-2,4-디아자옥타헵타콘틸)벤질)피롤리딘-1-윰의 합성
Figure pct00856
DMF (1 mL) 중 1-아미노-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42,45,48,51,54,57,60,63,66,69,72-테트라코사옥사펜타헵타콘탄-75-산 (67 mg, 0.059 mmol, 1.28 당량), 비스(4-니트로페닐) 카르보네이트 (17 mg, 0.057 mmol, 1.25 당량), 및 DIPEA (48 μL, 0.28 mmol, 6.0 당량))의 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였으며, 이 때 1-(2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-2-(((4-메톡시벤질)옥시)카르보닐)피리딘-3-일)-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)옥시)에틸)-1-(4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-((메틸아미노)메틸)벤질)피롤리딘-1-윰 (65 mg, 0.046 mmol, 1.0 당량) 및 추가의 DIEA (80 uL, 0.46 mmol, 10 당량)를 첨가하였다. 1시간 동안 교반한 후, 용액을 DMSO (2.5 mL)로 희석하고, RP-HPLC에 의해 정제하였다. 동결건조 후, 1-(2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-2-(((4-메톡시벤질)옥시)카르보닐)피리딘-3-일)-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)옥시)에틸)-1-(4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(78-카르복시-2-메틸-3-옥소-7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43,46,49,52,55,58,61,64,67,70,73,76-테트라코사옥사-2,4-디아자옥타헵타콘틸)벤질)피롤리딘-1-윰을 수득하였다. HRMS: M+= 2584.4399; Rt=2.39분 (5분 산성 방법).
1-(4-((S)-2-((S)-2-아미노-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(78-카르복시-2-메틸-3-옥소-7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43,46,49,52,55,58,61,64,67,70,73,76-테트라코사옥사-2,4-디아자옥타헵타콘틸)벤질)-1-(2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-2-카르복시피리딘-3-일)-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)옥시)에틸)피롤리딘-1-윰의 합성
Figure pct00857
1-(2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-2-(((4-메톡시벤질)옥시)카르보닐)피리딘-3-일)-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)옥시)에틸)-1-(4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(78-카르복시-2-메틸-3-옥소-7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43,46,49,52,55,58,61,64,67,70,73,76-테트라코사옥사-2,4-디아자옥타헵타콘틸)벤질)피롤리딘-1-윰 (58 mg, 0.021 mmol)을 사용하여 일반적 절차 4에 따라, 1-(4-((S)-2-((S)-2-아미노-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(78-카르복시-2-메틸-3-옥소-7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43,46,49,52,55,58,61,64,67,70,73,76-테트라코사옥사-2,4-디아자옥타헵타콘틸)벤질)-1-(2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-2-카르복시피리딘-3-일)-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)옥시)에틸)피롤리딘-1-윰을 수득하였다. HRMS: [(M +)+H+)]+2/2= 1183.1700; Rt=1.88분 (5분 산성 방법).
1-(2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-2-카르복시피리딘-3-일)-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)옥시)에틸)-1-(2-(78-카르복시-2-메틸-3-옥소-7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43,46,49,52,55,58,61,64,67,70,73,76-테트라코사옥사-2,4-디아자옥타헵타콘틸)-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)피롤리딘-1-윰 (L42A-P21)의 합성
Figure pct00858
1-(4-((S)-2-((S)-2-아미노-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(78-카르복시-2-메틸-3-옥소-7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43,46,49,52,55,58,61,64,67,70,73,76-테트라코사옥사-2,4-디아자옥타헵타콘틸)벤질)-1-(2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-2-카르복시피리딘-3-일)-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)옥시)에틸)피롤리딘-1-윰 (61 mg, 0.024 mmol) 및 2,5-디옥소피롤리딘-1-일 3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로파노에이트 (10.2 mg, 0.033 mmol, 1.4 당량)를 사용하여 일반적 절차 5에 따라, 1-(2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-2-카르복시피리딘-3-일)-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)옥시)에틸)-1-(2-(78-카르복시-2-메틸-3-옥소-7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43,46,49,52,55,58,61,64,67,70,73,76-테트라코사옥사-2,4-디아자옥타헵타콘틸)-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)피롤리딘-1-윰을 수득하였다. HRMS: M+= 2559.3701; Rt=2.07분 (5분 산성 방법).
1-(2-((((2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-2-(((4-메톡시벤질)옥시)카르보닐)피리딘-3-일)-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)옥시)에틸)(3-히드록시프로필)카르바모일)옥시)메틸)-5-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)페닐)-2-메틸-3-옥소-7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43,46,49,52,55,58,61,64,67,70,73,76-테트라코사옥사-2,4-디아자노나헵타콘탄-79-산의 합성
Figure pct00859
DMF (1 mL) 중 1-아미노-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42,45,48,51,54,57,60,63,66,69,72-테트라코사옥사펜타헵타콘탄-75-산 (45.9 mg, 0.040 mmol, 1.3 당량), 비스(4-니트로페닐) 카르보네이트 (12 mg, 0.0394 mmol, 1.28 당량), 및 DIPEA (32 μL, 0.184 mmol, 6.0 당량))의 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였으며, 이 때 1-(2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-2-(((4-메톡시벤질)옥시)카르보닐)피리딘-3-일)-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)옥시)에틸)-1-(4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-((메틸아미노)메틸)벤질)피롤리딘-1-윰 (50 mg, 0.0308 mmol, 1.0 당량) 및 추가의 DIEA (53.7 uL, 0.308 mmol, 10 당량)를 첨가하였다. 1시간 동안 교반한 후, 용액을 DMSO (2.5 mL)로 희석하고, RP-HPLC에 의해 정제하였다. 동결건조 후, 1-(2-((((2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-2-(((4-메톡시벤질)옥시)카르보닐)피리딘-3-일)-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)옥시)에틸)(3-히드록시프로필)카르바모일)옥시)메틸)-5-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)페닐)-2-메틸-3-옥소-7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43,46,49,52,55,58,61,64,67,70,73,76-테트라코사옥사-2,4-디아자노나헵타콘탄-79-산을 수득하였다. HRMS: (M +2H+)+2/2= 1316.7200; Rt=2.64분 (5분 산성 방법).
3-(1-(((1r,3s,5R,7S)-3-(2-((((4-((S)-2-((S)-2-아미노-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(78-카르복시-2-메틸-3-옥소-7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43,46,49,52,55,58,61,64,67,70,73,76-테트라코사옥사-2,4-디아자옥타헵타콘틸)벤질)옥시)카르보닐)(3-히드록시프로필)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)-6-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)피콜린산의 합성
Figure pct00860
1-(2-((((2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-2-(((4-메톡시벤질)옥시)카르보닐)피리딘-3-일)-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)옥시)에틸)(3-히드록시프로필)카르바모일)옥시)메틸)-5-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)페닐)-2-메틸-3-옥소-7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43,46,49,52,55,58,61,64,67,70,73,76-테트라코사옥사-2,4-디아자노나헵타콘탄-79-산 (39 mg, 0.014 mmol)을 사용하여 일반적 절차 4에 따라, 3-(1-(((1r,3s,5R,7S)-3-(2-((((4-((S)-2-((S)-2-아미노-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(78-카르복시-2-메틸-3-옥소-7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43,46,49,52,55,58,61,64,67,70,73,76-테트라코사옥사-2,4-디아자옥타헵타콘틸)벤질)옥시)카르보닐)(3-히드록시프로필)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)-6-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)피콜린산을 수득하였다. 일반적 절차 4를 변형시켜 1급 히드록실 상에 형성된 소량의 TFA 에스테르를 클리핑하였다. TFA/CH2Cl2의 농축 시, 잔류물을 DMSO (1 mL) 중에 용해시키고, DIEA (125 uL, 50 당량)를 첨가하고, 이어서 MeOH (1 mL)를 첨가하였다. 1시간 동안 정치시킨 후, 에스테르를 클리핑하고, 용액을 정제하였다. HRMS: MH+= 2412.3101; Rt=2.03분 (5분 산성 방법).
6-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-3-(1-(((1r,3s,5R,7S)-3-(2-((((2-(78-카르복시-2-메틸-3-옥소-7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43,46,49,52,55,58,61,64,67,70,73,76-테트라코사옥사-2,4-디아자옥타헵타콘틸)-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)옥시)카르보닐)(3-히드록시프로필)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피콜린산 (L42C-P25)의 합성
Figure pct00861
일반적 절차 5에 따라 3-(1-(((1r,3s,5R,7S)-3-(2-((((4-((S)-2-((S)-2-아미노-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(78-카르복시-2-메틸-3-옥소-7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43,46,49,52,55,58,61,64,67,70,73,76-테트라코사옥사-2,4-디아자옥타헵타콘틸)벤질)옥시)카르보닐)(3-히드록시프로필)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)-6-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)피콜린산 (26 mg, 0.010 mmol) 및 2,5-디옥소피롤리딘-1-일 3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로파노에이트 (4.0 mg, 0.013 mmol, 1.25 당량)를 사용하여, 6-(3-(벤조[d]티아졸-2-일아미노)-4-메틸-6,7-디히드로피리도[2,3-c]피리다진-8(5H)-일)-3-(1-(((1r,3s,5R,7S)-3-(2-((((2-(78-카르복시-2-메틸-3-옥소-7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43,46,49,52,55,58,61,64,67,70,73,76-테트라코사옥사-2,4-디아자옥타헵타콘틸)-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)옥시)카르보닐)(3-히드록시프로필)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피콜린산을 수득하였다. HRMS: MH+= 2607.3601; Rt=2.27분 (5분 산성 방법).
하기 화합물을 L38A-P21에 대해 기재된 것과 유사한 절차를 이용하여 제조하였다:
HRMS: M+= 2708.3999; Rt=1.85분 (5분 산성 방법).
Figure pct00863
HRMS: M+= 3134.6201; Rt=1.81분 (5분 산성 방법).
하기 화합물을 상기 기재된 것과 유사한 절차를 이용하여 제조할 수 있었다:
L11A-P1, L11A-P21, L11A-P27, L11C-P19, L11C-P25, L30A-P1, L30C-P19, L30A-P21, L30C-P25, L30A-P27, L35A-P1, L35C-P19, L35A-P21, L35C-P25, L35A-P27, L36A-P1, L36C-P19, L36A-P21, L36C-P25, L36A-P27, L37A-P1, L37C-P19, L37A-P21, L37C-P25, L37A-P27, L38A-P1, L38C-P19, L38A-P21, L38C-P25, L38A-P27, L39A-P1, L39C-P19, L39A-P21, L39C-P25, L39A-P27, L40A-P1, L40C-P19, L40A-P21, L40C-P25, L40A-P27, L42A-P1, L42C-P19, L42A-P21, L42C-P25, L42A-P27, L67A-P1, L67C-P19, L67A-P21, L67C-P25, L67A-P27, L100A-P1, L100C-P19, L100A-P21, L100C-P25, L100A-P27, L103A-P1, L103C-P19, L103A-P21, L103C-P25, L103A-P27, L111A-P1, L111C-P19, L111A-P21, L111C-P25, 및 L111A-P2. 화합물의 구조를 표 B에 나타내었다.
실시예 5. Bcl-xL 억제제 ADC의 합성 및 특징화
예시적인 항체-약물 접합체 (ADC)를 하기 기재된 예시적인 방법을 사용하여 합성하였다.
약어:
물질 및 방법: ADC BCL-xL의 접합 및 분석 특징화
항체 설명
예시적인 항체-약물 접합체 (ADC)를 하기 기재된 예시적인 방법을 사용하여 합성하였다. 예시적인 ADC의 제조에 사용된 항체 세툭시맙 (항-EGFR), 항-CD7, 항-CD7 DANAPA, 항-닭 리소자임 DANAPA, 밀라투주맙 (항-CD74), 항-CD38, 항-CD48 DANAPA 및 트라스투주맙 (항-Her2)은 각각 약어 Ab C, Ab D, Ab E, Ab F, Ab G, Ab H, Ab I 및 Ab T에 의해 정의되었다 (표 12). 표 12의 항체 서열은 인터넷 go.drugbank.com/drugs/DB00002, 국제 출원 공개 WO2018/098306, 및 미국 특허 번호 US6870034B2 (그 전문이 참조로 포함됨)에 개시되어 있다.
표 12: 예시된 ADC의 합성에 사용된 항체
Figure pct00865
2개의 부위-특이적 생체접합을 예시된 ADC의 합성에 이용하였다. 항체 C, D, E, F, G, H 및 I에 중쇄 내부에 혼입된 시스테인 돌연변이를 부여하고, 방법 M1, M2, M3 및 M4에 의해 말레이미드 기를 통해 링커-페이로드를 접합시키는 데 사용하였다 (도 1).
박테리아 트랜스글루타미나제 (BTG)-반응성 글루타민이 부여된 항체 T를 문헌 [Innate Pharma 2013 (presentation at ADC Summit, San Francisco, California, Oct. 15, 2013.)], WO2017059160A1 및 WO2016144608A1에 기재된 바와 같이 아민 함유 시클로옥틴 BCN으로 특이적으로 관능화시켰다. 이들 변형은 하기 방법 M5를 사용하여 기재된 아지드 함유 전구체의 접합을 가능하게 하였다 (도 2).
접합
부위-특이적 시스테인 접합을 위한 일반적 항체 제조:
접합은 5 mg 항체 범위에서 수행하였다. mAb를 바이오라드 크기의 일회용 칼럼 내에서 30분 동안 혼합함으로써 PBS 중의 10 mg Ab 대 1 ml 수지의 비로 rmp 단백질 A 수지 (지이 헬스케어(GE Healthcare)) 상에 결합시켰다. 반응성 시스테인을 탈차단하기 위해, 시스테인 히드로클로라이드 1수화물을 20 mM의 최종 농도로 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반한 후, 수지를 진공 매니폴드 상에서 5 x 50 CV의 PBS로 세척하였다. 이어서 수지를 250 nM의 CuCl2를 함유하는 동일한 부피의 PBS 중에 재현탁시키고, 1.5시간 동안 인큐베이션하였다. 이어서 접합 방법 M1, 2, 3 및 4를 링커-페이로드의 부착에 사용하였다.
접합 방법 M1:
단백질 A에 부착된 재-산화된 항체를 진공 매니폴드 상에서 5 x 50 CV의 PBS로 세척하고, 동일한 수지 부피의 PBS 중에 재현탁시켰다. 혼합물에 10배 몰 과량의 링커-페이로드의 20 mM 용액 및 동일한 부피의 DMSO를 첨가하였다. 반응물을 실온에서 2시간 동안 인큐베이션하였다. 접합을 모니터링하기 위해, 수지 슬러리 20 μl을 제거하고, 원심분리하고, 상청액을 제거한 후, 수지를 항체 용리 완충제 (써모 피셔 사이언티픽) 40 μl로 용리시키고, PRLP-s에 의해 분석하였다. 수지를 5 x 50 CV의 PBS로 진공 매니폴드 상에서 세척함으로써 과량의 링커-페이로드를 제거한 후에, ADC를 단백질 A로부터 항체 용리 완충제로 용리하고, 0.1 CV의 1 M 트리스 완충제 용액 (pH 9.0)으로 중화시켰다. 방법 M1에 의해 예시된 ADC를 SEC 칼럼 하이로드 (HiLoad)® 26/600 슈퍼덱스(Superdex)® 200 정제용 등급에 의해 PBS 중 20% DMA로 정제하였다.
접합 방법 M2:
단백질 A에 부착된 재-산화된 항체를 진공 매니폴드 상에서 5 x 50 CV의 PBS로 세척하고, 동일한 수지 부피의 PBS 중에 재현탁시켰다. 혼합물에 10배 몰 과량의 링커-페이로드의 20 mM 용액 및 동등 부피의 DMSO를 첨가하였다. 반응물을 실온에서 2시간 동안 인큐베이션하였다. 접합을 모니터링하기 위해, 수지 슬러리 20 μl을 제거하고, 원심분리하고, 상청액을 제거한 후, 수지를 항체 용리 완충제 (써모 피셔 사이언티픽) 40 μl로 용리시키고, PRLP-s에 의해 분석하였다. 수지를 5 x 50 CV의 PBS로 진공 매니폴드 상에서 세척함으로써 과량의 링커-페이로드를 제거한 후, ADC를 단백질 A로부터 항체 용리 완충제로 용리하고, 0.1 CV의 1 M 트리스 완충제 용액 (pH 9.0)으로 중화시켰다.
접합 방법 M3:
재-산화된 항체를 5 x 50 CV의 PBS로 세척하고, 단백질 A로부터 4 CV의 항체 용리 완충제 (써모 피셔 사이언티픽)로 용리시켰다. 비바스핀(Vivaspin) 20, 50KD, PES (사르토리우스 스테딤(Sartorius Stedim), VS2031)를 사용하여 PBS 중에서 완충제 교환한 후, DMF 및 10배 몰 과량의 20 mM 링커-페이로드 용액을 mAb에 첨가하여 배지 중 최종 용매 백분율이 20%가 되도록 하였다. 반응물을 실온에서 18시간 동안 교반하였다. 혼합물을 20분 동안 원심분리하고 (+4℃에서 14000 G), PBS 중 20% DMA로 SEC 칼럼 하이로드 (HiLoad)® 26/600 슈퍼덱스® 200 정제용 등급에 의해 정제하였다.
접합 방법 M4:
재-산화된 항체를 5 x 50 CV의 PBS로 세척하고, 단백질 A로부터 4 CV의 항체 용리 완충제 (써모 피셔 사이언티픽)로 용리시켰다. 비바스핀 20, 50KD, PES (사르토리우스 스테딤, VS2031)를 사용하여 PBS 중에서 완충제 교환한 후, DMF 및 10배 몰 과량의 20 mM 링커-페이로드 용액을 mAb에 첨가하여 배지 중 최종 용매 백분율이 20%가 되도록 하였다. 반응물을 실온에서 18시간 동안 교반하였다. 과량의 L/P를 제거하기 위해, 접합체를 슬러리 내의 5% 이하의 최종 용매 백분율로 PBS 중의 5 mg Ab 대 500 μl 수지의 비로 rmp 단백질 A 수지 (지이 헬스케어)에 결합시켰다. PBS 용액 중 5% DMF (5 x 50 CV)를 사용한 세척 단계에 이어서 PBS 중 제2 세척 단계 (5 x 50CV) 후에, 접합체를 항체 용리 완충제를 사용하여 단백질 A로부터 용리하고, pH 9.0의 0.1 CV의 1 M 트리스 완충제 용액을 사용하여 중화시켰다.
방법 M1, M2, M3, 및 M4로 합성된 모든 예시된 ADC를 PBS 1X pH 7.4 (시그마 라이프 사이언스 (Sigma Life Science), P3813, 10PAK) 중에서 투석 (써모 피셔 (Thermo Fisher), 88254)에 의해 완충제 교환하고, 비바스핀 20, 50KD, PES (사르토리우스 스테딤, VS2031)를 사용하여 농축시키고, 0.2 μm 멸균 PES 필터, 25mm (와트만(Whatmann), G896-2502)를 통해 멸균 여과하고, 4℃에서 저장하였다. 이들을 단량체 백분율의 결정을 위한 분석용 크기 배제 크로마토그래피 슈퍼덱스 200 인크리즈(Superdex 200 Increase) 5/150 GL (지이 헬스케어, 28990945) 및 약물-대-항체 비 (DAR) 결정을 위한 LC-MS에 의해 특징화하였다. 접합을 모니터링하기 위해, 애질런트 PLRP-S 칼럼 4000A 5 um, 4.6 x 50 mm 칼럼 (완충제 A 물, 0.1% TFA, 완충제 B 아세토니트릴, 0.1% TFA, 80℃에서 유지된 칼럼, 유량 1.5 ml/분)을 사용하는 역상 크로마토그래피를 사용하였다.
부위-특이적 트랜스글루타미나제 접합을 위한 일반적 절차:
부위-특이적 트랜스글루타미나제 접합을 항체의 Fc 영역에 존재하는 글루타민이 상기 기재된 바와 같은 4개의 BCN 링커를 갖는 박테리아 트랜스글루타미나제에 의해 관능화된 항체 트라스투주맙 상에서 수행하였다.
접합 방법 M5:
접합은 5 mg 항체 범위에서 수행하였다. Ab 용액에 DMA에 이어서 10배 몰 과량의 링커-워헤드 페이로드 용액 (PG/DMA 중 5 mM)을 첨가하여 20%의 배지 중 최종 용매 백분율을 유도하였다. 반응물을 실온에서 64 rpm으로 18시간 동안 교반하였다. 이어서 이 용액을 10배 몰 과량의 DBCO-함유 텐타겔 수지 (0.1-0.2 mmol/g, 이리스 바이오테크, CS-0477.0500)와 함께 6시간 동안 인큐베이션하여 과량의 링커-페이로드를 제거하였다. 용액을 20분 동안 원심분리하고 (4℃에서 14000 G), 상청액을 하이로드 26/600 슈퍼덱스 200 pg (지이 헬스케어, 28989336) SEC 크로마토그래피 칼럼 상에 로딩하였다. ADC를 PBS 중 20% DMA (시그마 라이프 사이언스, P3813, 10PAK)에 이어서 PBS 1X pH 7.4 (시그마 라이프 사이언스, P3813, 10PAK) 중 2 사이클의 투석 (16 및 4시간)으로 정제하였다. 접합체를 비바스핀 20, 50KD, PES (사르토리우스 스테딤, VS2031)를 사용하여 농축시키고, 0.2 μm 멸균 PES 필터, 25mm (와트만, G896-2502)를 통해 멸균 여과하고, 4℃에서 저장하였다.
방법 M5로 합성된 모든 예시된 ADC를 단량체 백분율의 결정을 위한 분석용 크기 배제 크로마토그래피 슈퍼덱스 200 인크리즈 5/150 GL (지이 헬스케어, 28990945) 및 DAR 결정을 위한 LC-MS에 의해 특징화하였다.
접합을 모니터링하기 위해, 토소 (TOSOH) Tskgel 부틸-NPR 칼럼 2.5 μm 4.6 x 35 mm (완충제 A 1.5 M (NH4)2SO4 2-/ 25 mM KH2PO4 pH 7.0; 완충제 B 25 mM KH2PO4/20% iPrOH pH 7.0, 21℃에서 유지된 칼럼, 유량 0.6 ml/분)를 사용하는 HIC 크로마토그래피를 사용하였다.
특징화
LC-MS 일반적 방법론
예시적인 ADC의 약물-대-항체 비 (DAR)를 하기 방법 (즉, LC-I, LC-II, LC-III, LC-IV 및 LC-V) 중 하나로 질량 분광측정법과 하이픈으로 연결된 액체 크로마토그래피 (LC-MS)에 의해 결정하였다. LC-I, LC-II, LC-III 및 LC-IV 방법의 경우, 이동상 A는 정제된 MS 등급 물 (바이오솔브 (Biosolve), 프랑스 디에우즈, 00232141B1BS)이고, 이동상 B는 MS 등급 아세토니트릴 (바이오솔브, 프랑스 디에우즈, 0001204101BS)이고, 이동상 D는 1%의 FA가 보충된 정제된 MS 등급 물 (허니웰 (Honeywell)/플루카 (Fluka), 로마니아 부케라스트, 56302)이었다. 0.1% FA 이동상 조성을 유지하기 위해 이동상 D를 10%로 고정시켰다. 대안적으로, LC-IV 방법의 경우, 이동상 A는 밀리-큐 (Milli-Q)® 시스템으로 수득된 초순수였고, 이동상 B는 0.1%의 FA (피셔 케미칼 (Fisher Chemical): A117-50-50ML)로 보충된 MS 등급 아세토니트릴 (바이오솔브, 프랑스 디에우즈, 0001204101BS)이었다. LC-V 방법의 경우, 이동상 A는 밀리-큐® 시스템으로 수득된 초순수였고, 이동상 B는 0.1%의 DFA (워터스 (Waters), 186009201)로 보충된 MS 등급 아세토니트릴 (바이오솔브, 프랑스 디에우즈, 0001204101BS)이었다. 칼럼 온도를 80℃로 설정하였다. 평균 DAR을 결정하기 위해 모든 합성된 ADC에 대해 일반적 MS 방법을 최적화하였다 (표 13).
LC-I: ADC를 매스프렙 마이크로 탈염 칼럼 (2.1 x 5.0 mm, 워터스, 프랑스 생- 퀸틴-엔-이벨린, 186004032) 상에 로딩하였다. 무손상 질량 분석을 위해, 탈염 단계를 0.5 mL/분의 유량으로 5% 이동상 B에서 0.5분 동안 수행하였다. 용리 단계는 0.2 mL/분의 유량으로 5% B에서 0.5분 → 85% B에서 2.0분의 구배로 수행하였다. 2회의 세척 단계를 0.5 mL/분의 유량으로 5% B에서 85% B로 2.1분에서 2.7분으로 및 2.8분에서 3.4분으로 설정하였다. 최종적으로, 컨디셔닝 단계를 3.5분에 0.5분 동안 5% B (0.5 mL/분)에서 사용하였다. 환원 조건에서의 ADC 분석을 위해, 탈염 단계를 0.5분 동안 5% B에서 0.2 mL/분의 유량으로 수행하였다. 이어서 용리 단계를 0.2 mL/분의 유량으로 10% B에서 0.51분 → 50% B에서 7.61분의 구배로 시작하였다. 8.0분에 상 B는 90%였고, 유량은 0.5mL/분이었다. 2회의 세척 단계를 8.1분에서 8.6분 및 8.7분에서 9.2분에 5% B → 90% B (0.5 mL/분)로 설정하였다. 마지막으로, 컨디셔닝 단계를 9.3분에 0.5 mL/분의 유량으로 5% B에서 0.5분 동안 수행하였다.
LC-II: ADC를 MabPac RP 칼럼 (2.1 x 100mm, 4 μm, 써모 사이언티픽, 일리노이주 록포드, 088647) 상에 로딩하였다. 무손상 및 환원 조건 둘 다에서의 분석을 위해, 탈염 단계를 0.4 mL/분의 유량으로 20% B에서 1.4분 동안 수행하였다. 이어서 용리 단계를 0.3 mL/분의 유량으로 20% B에서 1.5분 → 70% B에서 11.5분의 구배로 수행하였다. 세척 단계를 0.5 mL/분의 유량으로 90% B에서 11.75분에서 13.75분으로 설정하였다. 마지막으로, 컨디셔닝 단계를 14.0분에 0.4 mL/분의 유량으로 20% B에서 1.0분 동안 사용하였다.
LC-III: ADC를 바이오리솔브 RP mAb 폴리페닐, 칼럼 450A, 2.7 μm, 2.1*150mm (워터스, 프랑스 생- 퀸틴-엔-이벨린, 186008946) 상에 로딩하였다. 무손상 및 환원 조건 둘 다에서의 분석을 위해, 탈염 단계를 0.6 mL/분의 유량으로 20%의 B에서 1.5분 동안 수행하였다. 용리 단계는 0.6 mL/분의 유량으로 20% B에서 1.5분 → 50% B에서 16.5분의 구배로 수행하였다. 세척 단계를 0.6 mL/분의 유량으로 90% B에서 16.8분에서 18.8분으로 설정하였다. 마지막으로, 컨디셔닝 단계를 19.1분에 0.6 mL/분의 유량으로 20% B에서 1.9분 동안 사용하였다 (총 실행 시간=21분).
LC-IV (80% 상 A (물/0.1% AF), 20% 상 B (아세토니트릴/0.1%AF)): ADC를 바이오리솔브 RP mAb 폴리페닐, 칼럼 450A, 2.7 μm, 2.1*150mm (워터스, 프랑스 생- 퀸틴-엔-이벨린, 186008946) 상에 로딩하였다. 무손상 및 환원 조건 둘 다에서의 분석을 위해, 탈염 단계를 0.6 mL/분의 유량으로 20%의 B에서 1.5분 동안 수행하였다. 용리 단계는 0.6 mL/분의 유량으로 20% B에서 1.5분 → 50% B에서 16.5분의 구배로 수행하였다. 세척 단계를 0.6 mL/분의 유량으로 100% B에서 16.8분에서 18.8분으로 설정하였다. 마지막으로, 컨디셔닝 단계를 19.2분에 0.6 mL/분의 유량으로 20% B에서 1.8분 동안 사용하였다 (총 실행 시간=21분).
LC-V (80% 상 A (물/0.1% DFA), 20% 상 B (아세토니트릴/0.1%DFA)): ADC를 바이오리솔브 RP mAb 폴리페닐, 칼럼 450A, 2.7 μm, 2.1*150mm (워터스, 프랑스 생- 퀸틴-엔-이벨린, 186008946) 상에 로딩하였다. 무손상 및 환원 조건 둘 다에서의 분석을 위해, 탈염 단계를 0.6 mL/분의 유량으로 20%의 B에서 1.5분 동안 수행하였다. 용리 단계는 0.6 mL/분의 유량으로 20% B에서 1.5분 → 50% B에서 16.5분의 구배로 수행하였다. 세척 단계를 0.6 mL/분의 유량으로 100% B에서 16.8분에서 18.8분으로 설정하였다. 마지막으로, 컨디셔닝 단계를 19.2분에 0.6 mL/분의 유량으로 20% B에서 1.8분 동안 사용하였다 (총 실행 시간=21분).
LC-MS 분석은 제보 G2 XS Q-TOF ESI 질량 분광계 (워터스, 영국 맨체스터)와 하이픈으로 연결된 워터스 UPLC H-클래스 바이오 크로마토그래피 시스템을 사용하여 수행하였다. ADC를 무손상 조건 (예비 처리 없음)에서, 또는 PNGase F 효소 (뉴잉글랜드 바이오랩스 (New England Biolabs)®, P0705L)를 사용하는 탈글리코실화 단계로 또는 5 mM (최종 농도)의 디티오트레이톨 DTT (써모 사이언티픽 (Thermo Scientific), 일리노이주 록포드, 20291)로의 환원 후에 분석하였다. 후속적으로, 처리된 ADC를 상기 언급된 LC-I, LC-II, LC-III, LC-IV 또는 LC-V 중 하나를 사용하여 분석하였다 (표 13). 분석물의 전기분무-이온화 비행 시간 질량 스펙트럼을 매스링스 (MassLynx)™ 획득 소프트웨어 (워터스, 영국 맨체스터)를 사용하여 획득하였다. 이어서 추출된 강도 대 m/z 스펙트럼을 매스링스 (MassLynx)™ 소프트웨어의 최대 엔트로피 (MaxEnt1) 방법을 사용하여 디컨볼루션하여 처리에 따라 각각의 무손상 항체 종 또는 각각의 환원된 항체 단편의 질량을 결정하였다. 최종적으로, DAR은 비접합 및 접합된 주어진 종 (mAb 또는 회합된 단편)의 적분된 MS (총 이온 전류) 또는 UV (280 nm) 피크 면적을 합함으로써 디컨볼루션된 스펙트럼 또는 UV 크로마토그램으로부터 결정하였다. UV 크로마토그램에 의한 DAR 결정을 위해, 각각의 종의 상대 면적 백분율에 부착된 약물의 수를 곱하였다. 모든 종의 합산된 가중 면적을 총 상대 면적 백분율의 합계로 나누고, 결과는 전체 ADC에 대한 최종 평균 DAR 값의 추정을 생성하였다. 디컨볼루션된 스펙트럼에 의한 DAR 결정을 위해, 확인된 각각의 종의 백분율을 디컨볼루션된 스펙트럼으로부터의 강도 피크 값에 의해 계산하였다. 수득된 백분율에 부착된 약물의 수를 곱하였다. 합산된 결과는 전체 ADC에 대한 최종 평균 DAR 값의 추정을 생성하였다.
크기 배제 크로마토그래피: 접합체의 단량체 백분율을 측정함으로써 각각의 ADC를 품질 제어하기 위해 크기 배제 크로마토그래피 (SEC)를 수행하였다. 분석 칼럼 슈퍼덱스 200 인크리즈 5/150 GL (지이 헬스케어, 28990945) 상에서 등용매 조건 100% PBS pH 7.4 (시그마 라이프 사이언스, P3813, 10PAK), 유량 0.45 ml/분으로 12분 동안 수행하였다. 접합체 샘플의 % 응집체 분획을 280 nm에서의 피크 면적 흡광도에 기초하여 정량화하였다. 계산은 280 nm에서의 고분자량 용리액을, 고분자량 용리액 및 단량체 용리액의 동일한 파장에서의 피크 면적 흡광도의 합으로 나눈 비에 100을 곱한 것에 기초하였다.
결과
예시적인 ADC의 특징화를 표 13에 요약한다 (커플링, LC-MS 방법, DAR, 응집 상태, ADC 안정성 및 수율). 평균 DAR 값을 상기 LC-MS 방법을 사용하여 결정하고, 응집체의 백분율을 ADC의 품질 제어 동안 및 안정성 연구 (37℃에서 168시간 동안 인큐베이션) 후에 크기 배제 크로마토그래피 (SEC)에 의해 측정하였다.
표 13: ADC 분석 특징화 및 커플링 방법론
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Figure pct00868
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실시예 6. EGFR1 CysMab ADC의 합성 및 특징화
약물 물질 중간체 (DSi) 제조 (Re-ox 물질)
10 mg/ml의 200 mg의 EGFR1 CysMab (1.36 μM)를 20 ml의 침강된 RMP 단백질 A 수지 (GE 라이프사이언시스, 17513803)와 함께 인큐베이션하고, 15분 동안 교반하였다. 시스테인 HCl 1수화물을 20 mM의 최종 농도로 첨가하고, 실온에서 30분 동안 교반하면서 인큐베이션하여 반응성 시스테인이 탈차단되도록 하였다. 수지를 진공 매니폴드 상에서 50 칼럼 부피의 PBS로 신속하게 세척하였다. 이어서 수지를 250 nM CuCl2를 함유하는 동등 부피 PBS 중에 재현탁시켰다. 항체 쇄간 디술피드의 재형성을 시점을 취함으로써 모니터링하였다. 각각의 시점에, 25 μL의 수지 슬러리를 제거하고, 1 μL의 20 mM MC-valcit-MMAE를 첨가하고, 튜브를 수회 플리킹하였다. 수지를 스핀 다운시키고, 상청액을 제거한 다음, 50 μL 항체 용리 완충제 (써모)로 용리시켰다. 수지를 펠릿화하고, 상청액을 애질런트 PLRP-S 4000A 5 um, 4.6 x 50mm 칼럼 (완충제 A는 물, 0.1% TFA, 완충제 B 아세토니트릴, 0.1% TFA, 80℃에서 유지된 칼럼, 유량 1.5 ml/분; 구배 0분 - 30%B, 5분 - 45%B, 6.5분 - 100%B, 8분 - 100%B, 10분 - 30%)을 사용하여 역상 크로마토그래피에 의해 분석하였다. CuCl2 첨가 60분 후, 진공 매니폴드 상에서 50 칼럼 부피의 PBS로 세척함으로써 CuCl2를 제거한 다음, 20 ml의 PBS를 첨가하여 재현탁시키고, 중력에 의해 배수시켰다. 항체를 100 ml 항체 용리 완충제 (써모 사이언티픽, 21004)로 용리시킨 다음, 1X PBS pH 7.2로 완충제 교환하였다. 이어서 물질을 아미콘 울트라-15, 50KDa, 재생 셀룰로스 (밀리포어 (Millipore), (UFC)0905024)를 사용하는 원심 농축기를 사용하여 6.6 mg/ml로 농축시키고, 5 mg 분취물로 분취하고, 액체 질소 중에서 급속 동결시키고, 사용될 때까지 -80℃에서 저장하였다.
약물 물질 중간체 (DSi)(Re-ox 물질)를 사용하는 접합 방법
EGFR-L11C-P19의 제조
EGFR (EGFR1 CysMab로도 표지됨) DSi 항체 (2.0 mg, 1X PBS 완충제 용액 중 7.3 mg/ml 용액 274 μl, 0.013 μmol, 1.0 당량)의 용액에 DMSO (20 uL) 및 L11C-P19 (DMSO 중 20 mM 용액 5.28 μl, 0.106 μmol, 8.0 당량)를 첨가하였다. 총 DMSO 양은 </= 10%였다. 생성된 혼합물을 400 rpm에서 주위 온도에서 2시간 동안 진탕시키고, 이 때 혼합물을 초원심분리 (4 ml 아미콘 30 kD 컷오프 막 필터, 샘플을 1X PBS 완충제로 4 ml 총 부피로 희석한 다음, 7500 x g에서 10분 동안 원심분리, 6회 반복)에 의해 정제하였다. 1X PBS 완충제로 5.0 mg/ml로 희석한 후, EGFR-L11C-P19를 수득하였다 (1.9 mg, 0.012 μmol, 90%). 하기 분석을 수행하였다: 퍼센트 단량체를 결정하기 위한 분석용 크기-배제 크로마토그래피 (SEC), DAR을 결정하기 위한 환원된 분취물 (MS)의 질량 분광분석법, 및 항체의 흡광 계수 및 분자량을 이용하여 A280에 의해 결정된 단백질 농도. HRMS 데이터 (단백질 방법)는 부착된 HC+2 링커 페이로드에 대해 58050의 질량을 나타내었고, DAR은 4.0이었다. SEC는 280 nm에서의 고분자량 피크 흡광도의 면적과 단량체 ADC에 대한 피크 흡광도의 면적의 비교에 의해 결정 시 1.0% 응집을 나타내었다. 주: 일부 경우에, 접합 반응물을 단백질 A 방법에 이어서 초원심분리를 사용한 1X PBS 완충제 교환을 통해 정제하였다.
상기 기재된 DSi (Re-ox 물질)를 사용하는 접합 방법에 따라, 하기 접합체를 제조하였다:
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실시예 7. 다중-표적 시험관내 검정을 위한 BCL-xL 억제제 ADC의 합성
항체의 발현 및 정제
표 14는 본원에 개시된 항체 약물 접합체를 합성하는 데 사용된 항체를 열거한다. 항체 중쇄 서열을 본원에 개시된 링커-페이로드에의 접합을 용이하게 하기 위해 E152 및 S375 위치 (EU 넘버링에 따름)에서 시스테인 돌연변이를 포함하도록 변형시켰다. 표 14의 특정의 예시적인 항체 서열은 국제 출원 공개, 예컨대 WO2016/179257, WO2011/097627, WO2017/214282, WO2017/214301, WO2017/214233, WO2013/126810, WO2008/056833, WO2020/236817, 및 WO2017/214335에 개시되어 있으며, 이들은 그 전문이 참조로 포함된다.
표 14: 항체 서열
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Figure pct00884
표 14에 열거된 항체의 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 발현 벡터를 폴리에틸렌이민을 사용하여 현탁액 HEK293 세포 내로 형질감염시키고, 전형적으로 5일 동안 배양하였다. 배양 상청액을 원심분리에 의해 수확하고, 여과하고, 항체를 단백질 A 친화성 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 필요한 경우에, 응집체를 크기 배제 크로마토그래피에 의해 제거하였다. 친화성 크로마토그래피 후의 항체 순도를 분석용 크기 배제 크로마토그래피에 의해 결정하였고, 이는 >98% 단량체였다. 항체를 포스페이트 완충 염수 pH 7.2 중에서 완충시켰다.
접합 생성 (L109A-P1): 12.5 mg의 각각의 항체 (0.085μmol, 1.0 당량)를 1.25 ml의 침강된 RMP 단백질 A 수지 (지이 라이프사이언시스(GE Lifesciences), 17513803)와 함께 인큐베이션하고, 15분 동안 교반하였다. 시스테인 HCl 1수화물을 20 mM의 최종 농도로 첨가하고, 실온에서 30분 동안 교반하면서 인큐베이션하여 반응성 시스테인이 탈차단되도록 하였다. 수지를 진공 매니폴드 상에서 50 칼럼 부피의 PBS로 신속하게 세척하였다. 이어서, 수지를 250 nM CuCl2를 함유하는 동등 부피 PBS 중에 재현탁시켰다. 항체 쇄간 디술피드의 재형성을 시점을 취함으로써 모니터링하였다. 각각의 시점에, 25μL의 수지 슬러리를 제거하고, 1μL의 20 mM MC-valcit-PAB-MMAE를 첨가하고, 튜브를 수회 플리킹하였다. 수지를 스핀 다운시키고, 상청액을 제거한 다음, 50μL 항체 용리 완충제 (써모 사이언티픽, 21004)로 용리시켰다. 수지를 펠릿화하고, 상청액을 애질런트 PLRP-S 4000A 5um, 4.6x50mm 칼럼 (완충제 A는 물, 0.1% TFA, 완충제 B 아세토니트릴, 0.1% TFA, 칼럼은 80℃에서 유지됨, 유량 1.5 ml/분; 구배 0분 - 30%B, 5분 - 45%B, 6.5분 - 100%B, 8분 - 100%B, 10분 - 30%)을 사용하여 역상 크로마토그래피에 의해 분석하였다. CuCl2 첨가 90분 후, 진공 매니폴드 상에서 50 칼럼 부피의 PBS로 세척함으로써 CuCl2를 제거한 다음, 1.25 ml의 PBS를 첨가하여 재현탁시켰다. 상기 수지 및 항체의 슬러리에, 각각의 링커-페이로드 (DMSO 중 20 mM 용액 42μl, 1.63μmol, 10 당량)을 첨가하였다. 이어서, 생성된 혼합물을 주위 온도에서 3시간 동안 인큐베이션하였다. 이어서, 수지를 50 칼럼 부피의 PBS로 세척하였다. ADC를 항체 용리 완충제 (써모 사이언티픽, 21004)를 사용하여 수지로부터 용리시켰다. 이어서, ADC를 둘베코 PBS pH 7.2 (하이클론(Hyclone) SH30028.03)에서의 투석에 의해 1X PBS (20X PBS, 테크노바(Teknova)P0191)로 완충제 교환하였다. 이어서, 물질을 아미콘 울트라-15, 50KDa, 재생 셀룰로스 (밀리포어, UFC0905024)를 사용하는 원심 농축기를 사용하여 >3 mg/ml로 농축시키고, 0.22μm 멸균 PVDF 필터, 25mm (밀라포어, SLGV013SL)를 통해 멸균 여과하고, 4℃에서 저장하였다. 하기 분석을 수행하였다: 퍼센트 단량체를 결정하기 위한 분석용 크기-배제 크로마토그래피 (SEC), DAR을 결정하기 위한 질량 분광분석법 (MS), 내독소 로드를 결정하기 위한 LAL 시험, 및 항체의 흡광 계수 및 분자량을 이용하여 A280에 의해 결정된 단백질 농도. HRMS 데이터 (단백질 방법)는 중쇄+2 종의 우세한 질량을 나타내었고, ~4.0의 DAR을 DAR1 DAR2 및 DAR3 종에 대한 피크의 MS 강도를 비교함으로써 계산하였다. SEC는 210 및 280 nm에서의 고분자량 피크 흡광도의 면적과 단량체 ADC에 대한 피크 흡광도의 면적의 비교에 의해 결정 시 1.8% 응집을 나타내었다.
일반적 방법론: 예시적인 ADC의 약물-대-항체 비 (DAR)를 하기 방법에 따라 액체 크로마토그래피-질량 분광측정법 (LC/MS)에 의해 결정하였다. 모든 LC 방법에 대해, 이동상 A는 정제된 MS 등급 물 (허니웰(Honeywell), LC015-1)이었고, 이동상 B는 MS 등급 80% 이소프로판올 (허니웰 LC323-1): 20% 아세토니트릴 (허니웰, LC015-1), LC323-1) (1%의 포름산 (FA) (써모 사이언티픽 (Thermo Scientific), 85178)으로 보충됨)이었다. 칼럼 온도를 80℃로 설정하였다. 일반적 MS 방법은 합성된 모든 ADC에 대해 최적화되었다. 분석에 사용된 칼럼은 애질런트 PLRP-S 4000 A; 2.1x150mm, 8um (애질런트, PL1912-3803)였다. 사용된 유량은 0.3 ml/분이었다. 사용된 구배는 액퀴티 바이오 H-클래스 사원 UPLC (워터스) 상에서 0-0.75분 95%A, 0.76-1.9분 75%A, 1.91-11.0분 50%A, 11.01-11.50 10%A, 11.51-13.50분 95%A, 13.51-18분 95%A였다. MS 시스템은 제보 (Xevo) G2-XS QToF ESI 질량 분광계 (워터스(Waters))였고, 데이터를 1.5-11분으로부터 획득하고, 질량은 15000-80000 달톤 사이에서 분석되었다. DAR은 비접합된 및 접합된 주어진 종 (mAb 또는 회합된 단편)의 적분된 MS (총 이온 전류) 또는 UV (280 nm) 피크 면적을 합하여 디컨볼루션된 스펙트럼 또는 UV 크로마토그램으로부터 결정하였고, 각각의 면적에 부착된 약물의 수를 곱하여 가중하였다. 합산된 가중 면적을 총 면적의 합으로 나누고, 결과는 전체 ADC에 대한 최종 평균 DAR 값을 산출하였다.
크기 배제 크로마토그래피 (SEC)를 수행하여 ADC의 품질 및 정제 후의 응집 백분율 (%)을 결정하였다. 분석은 분석 칼럼 슈퍼덱스 200 인크리즈 5/150 GL (지이 헬스케어, 28990945) 상에서 등용매 조건 100% PBS pH 7.2 ((하이클론 SH30028.03)), 유량 0.45 ml/분에서 8분 동안 수행하였다. ADC 샘플의 % 응집체 분획을 280 nm에서의 피크 면적 흡광도에 기초하여 정량화하였다. 계산은 280 nm에서의 고분자량 용리액을 고분자량 용리액 및 단량체 용리액의 동일한 파장에서의 피크 면적 흡광도의 합으로 나눈 비에 100%를 곱한 것에 기초하였다. 데이터는 와이어트(Wyatt) 미니DAWN 광 산란 및 트레오스(Treos) 굴절률 검출기가 장착된 애질런트 바이오-이너트(Agilent Bio-Inert) 1260 HPLC (와이어트 테크놀로지스(Wyatt Technologies), 캘리포니아주 산타 바바라) 상에서 획득하였다.
모든 예시된 ADC를 단량체 백분율의 결정을 위한 분석용 크기 배제 크로마토그래피 슈퍼덱스 200 인크리즈 5/150 GL (지이 헬스케어, 28990945) 및 DAR 결정을 위한 LC-MS에 의해 특징화하였다. 평균 DAR 값을 상기 LC/MS 방법을 사용하여 결정하고, 응집 백분율을 상기 SEC 방법을 사용하여 결정하였다 (표 15).
표 15: 시험관내 스크리닝에 사용된 ADC의 약물-항체 비
Figure pct00885
항-CD74 BCLxL L11C-P25 접합체의 제조
항-CD74 BCLxL L11C-P25 접합체를 제조하기 위해, 10 mg/ml의 5 mg의 항-CD74 항체 VHmil x VK1aNQ (34 nmol)를 0.5 ml의 침강된 RMP 단백질 A 수지 (지이 라이프사이언시스, 17513803)와 함께 인큐베이션하고, 15분 동안 교반하였다. 시스테인 HCl 1수화물을 20 mM의 최종 농도로 첨가하고, 실온에서 30분 동안 교반하면서 인큐베이션하여 반응성 시스테인이 탈차단되도록 하였다. 수지를 진공 매니폴드 상에서 20 칼럼 부피의 PBS로 신속하게 세척하였다. 이어서 수지를 250 nM CuCl2를 함유하는 동일한 부피의 PBS 중에 재현탁시켰다. 항체 쇄간 디술피드의 재형성을 시점을 취함으로써 모니터링하였다. 각각의 시점에, 25 μL의 수지 슬러리를 제거하고, 1 μL의 20 mM MC-valcit-MMAE를 첨가하고, 튜브를 수회 플리킹하였다. 수지를 스핀 다운시키고, 상청액을 제거한 다음, 50 μL 항체 용리 완충제 (써모피셔 사이언티픽 21004)로 용리시켰다. 수지를 펠릿화하고, 상청액을 애질런트 PLRP-S 4000A 5 um, 4.6 x 50mm 칼럼 (완충제 A는 물, 0.1% TFA, 완충제 B 아세토니트릴, 0.1% TFA, 80℃에서 유지된 칼럼, 유량 1.5 ml/분; 구배 0분 - 30%B, 5분 - 45%B, 6.5분 - 100%B, 8분 - 100%B, 10분 - 30%)을 사용하여 역상 크로마토그래피에 의해 분석하였다. Ab/수지 슬러리에 CuCl2를 첨가한 후 65분에, 이를 진공 매니폴드 상에서 20 칼럼 부피의 PBS로 세척함으로써 제거한 다음, 1 ml의 PBS를 첨가하여 재현탁시켰다. DMSO를 10% (v/v)의 최종 농도로 첨가한 다음, 10 당량의 L11C-P25 (DMSO 중 20 mM)를 첨가하였다. DMSO를 10% (v/v)의 최종 농도로 첨가하였다. 링커-페이로드를 실온에서 적어도 90분 동안 인큐베이션하였다. 수지를 20 칼럼 부피의 PBS pH 7.2로 세척함으로써 과량의 링커-페이로드를 세척하였다. 항체를 5 ml 항체 용리 완충제로 용리시킨 다음, 투석에 의해 1X PBS pH 7.2로 완충제 교환하였다. 이어서 물질을 아미콘 울트라-15, 50KDa, 재생 셀룰로스 (밀리포어, UFC0905024)를 사용하는 원심 농축기를 사용하여 3.8 mg/ml로 1 ml로 농축시키고, 액체 질소 중에서 급속 동결시키고, 사용될 때까지 -80℃에서 저장하였다.
하기 분석을 수행하였다: 퍼센트 단량체를 결정하기 위한 분석용 크기-배제 크로마토그래피 (SEC), DAR을 결정하기 위한 질량 분광분석법 (MS), 항체의 흡광 계수 및 분자량을 이용하여 A280에 의해 결정된 단백질 농도 및 내독소 로드를 결정하기 위한 LAL 시험. HRMS 데이터 (단백질 방법)는 중쇄의 우세한 질량이 55898 da이며, DAR1 DAR2 및 DAR3 종에 대한 피크의 MS 강도를 비교함으로써 계산된 바와 같은 4.0의 DAR을 제공함을 나타내었다. SEC는 210 및 280 nm에서의 고분자량 피크 흡광도의 면적과 단량체 ADC에 대한 피크 흡광도의 면적의 비교에 의해 결정 시 </= 2% 응집을 나타내었다.
항-CD74 BCLxL L11A-P21 접합체의 제조.
항-CD74 BCLxL L11A-P21 접합체를 제조하기 위해, 10 mg/ml의 5 mg의 항-CD74 항체 VHmil x VK1aNQ (34 nmol)를 0.5 ml의 침강된 RMP 단백질 A 수지 (지이 라이프사이언시스, 17513803)와 함께 인큐베이션하고, 15분 동안 교반하였다. 시스테인 HCl 1수화물을 20 mM의 최종 농도로 첨가하고, 실온에서 30분 동안 교반하면서 인큐베이션하여 반응성 시스테인이 탈차단되도록 하였다. 수지를 진공 매니폴드 상에서 20 칼럼 부피의 PBS로 신속하게 세척하였다. 이어서 수지를 250 nM CuCl2를 함유하는 동등 부피 PBS 중에 재현탁시켰다. 항체 쇄간 디술피드의 재형성을 시점을 취함으로써 모니터링하였다. 각각의 시점에, 25 μL의 수지 슬러리를 제거하고, 1 μL의 20 mM MC-valcit-MMAE를 첨가하고, 튜브를 수회 플리킹하였다. 수지를 스핀 다운시키고, 상청액을 제거한 다음, 50 μL 항체 용리 완충제 (써모피셔 사이언티픽 21004)로 용리시켰다. 수지를 펠릿화하고, 상청액을 애질런트 PLRP-S 4000A 5 um, 4.6 x 50mm 칼럼 (완충제 A는 물, 0.1% TFA, 완충제 B 아세토니트릴, 0.1% TFA, 80℃에서 유지된 칼럼, 유량 1.5 ml/분; 구배 0분 - 30%B, 5분 - 45%B, 6.5분 - 100%B, 8분 - 100%B, 10분 - 30%)을 사용하여 역상 크로마토그래피에 의해 분석하였다. Ab/수지 슬러리에 CuCl2를 첨가한 후 65분에, 이를 진공 매니폴드 상에서 20 칼럼 부피의 PBS로 세척함으로써 제거한 다음, 1 ml의 PBS를 첨가하여 재현탁시켰다. DMSO를 10% (v/v)의 최종 농도로 첨가한 다음, 10 당량의 L11A-P21 (DMSO 중 20 mM)을 첨가하였다. DMSO를 10% (v/v)의 최종 농도로 첨가하였다. 링커-페이로드를 실온에서 적어도 90분 동안 인큐베이션하였다. 수지를 20 칼럼 부피의 PBS pH 7.2로 세척함으로써 과량의 링커-페이로드를 세척하였다. 항체를 5 ml 항체 용리 완충제로 용리시킨 다음, 투석에 의해 1X PBS pH 7.2로 완충제 교환하였다. 이어서 물질을 아미콘 울트라-15, 50KDa, 재생 셀룰로스 (밀리포어, UFC0905024)를 사용하는 원심 농축기를 사용하여 3.5 mg/ml로 1 ml로 농축시키고, 액체 질소 중에서 급속 동결시키고, 사용될 때까지 -80℃에서 저장하였다.
하기 분석을 수행하였다: 퍼센트 단량체를 결정하기 위한 분석용 크기-배제 크로마토그래피 (SEC), DAR을 결정하기 위한 질량 분광분석법 (MS), 항체의 흡광 계수 및 분자량을 이용하여 A280에 의해 결정된 단백질 농도 및 내독소 로드를 결정하기 위한 LAL 시험. HRMS 데이터 (단백질 방법)는 중쇄의 우세한 질량이 55802 da이며, 이는 DAR1 DAR2 및 DAR3 종에 대한 피크의 MS 강도를 비교함으로써 계산된 바와 같은 4.0의 DAR을 제공한다는 것을 나타내었다. SEC는 210 및 280 nm에서의 고분자량 피크 흡광도의 면적과 단량체 ADC에 대한 피크 흡광도의 면적의 비교에 의해 결정 시 </= 2.9% 응집을 나타내었다.
실시예 8. 항-CD7-, 항-EGFR- 및 항-HER2- BCL-xLi ADC의 시험관내 평가
ALL-SIL 세포주 (CTG 72h)에서의 항-CD7-BCL-xLi ADC 및 페이로드의 시험관내 활성:
도 3 및 표 16에 제시된 바와 같이, 페이로드 및 항-CD7-BCL-xLi ADC는 CTG 검정에서 ALL-SIL 세포의 생존율의 용량 의존성 감소를 유도하였다.
DND-41 세포주 (CTG 72h)에서의 항-CD7-BCLxLi ADC 및 페이로드의 시험관내 활성:
ALL-SIL 세포를 20% 열 불활성화된 태아 소 혈청, 페니실린 (100 IU/ml), 스트렙토마이신 (100 μg/ml) 및 L-글루타민 (2 mM)으로 보충된 RPMI에서 배양하였다. 세포주를 5% CO2를 함유하는 가습 분위기에서 37℃에서 배양하였다. 세포를 96 웰 투명 바닥 플레이트 (96 웰 투명-바닥, 백색, 코닝 참조 3903)에 시딩하고, 페이로드 또는 ADC에 72시간 동안 노출시켰다 (연속 희석; 각각 9개 농도, 삼중). 세포 생존율에 대한 페이로드 또는 ADC의 효과를, 37℃/5% CO2에서 3일 인큐베이션 후에 75 μL 시약/웰로 셀타이터글로를 사용하여 세포 ATP 수준의 정량화에 의해 평가하였다. 모든 조건을 삼중으로 시험하였다. 발광을 다목적 플레이트 판독기 상에서 정량화하였다. IC50을 표준 4-파라미터 곡선 피팅을 사용하여 계산하였다. IC50은 CTG 신호가 대조군에 대해 측정된 것의 50%로 감소되는 화합물 농도로서 정의된다. 각각의 실험을 적어도 2회 수행하였고, 결과는 재현가능하였다.
DND-41 세포를 10% 열 불활성화 태아 소 혈청, 페니실린 (100 IU/ml), 스트렙토마이신 (100 μg/ml) 및 L-글루타민 (2 mM)으로 보충된 RPMI에서 배양하였다. 세포주를 5% CO2를 함유하는 가습 분위기 하에 37℃에서 배양하였다. 세포를 96 웰 투명 바닥 플레이트 (96 웰 투명-바닥, 백색, 코닝 참조 3903)에 시딩하고, 페이로드 또는 ADC에 72시간 동안 노출시켰다 (연속 희석; 각각 9개 농도, 삼중). 세포 생존율에 대한 페이로드 또는 ADC의 효과를, 37℃/5% CO2에서의 인큐베이션 3일 후에 75 μL 시약/웰로 셀타이터글로를 사용한 세포 ATP 수준의 정량화에 의해 평가하였다. 모든 조건을 삼중으로 시험하였다. 발광을 다목적 플레이트 판독기 상에서 정량화하였다. IC50을 표준 4-파라미터 곡선 피팅을 사용하여 계산하였다. IC50은 CTG 신호가 대조군에 대해 측정된 것의 50%로 감소되는 화합물 농도로서 정의된다. 각각의 실험을 적어도 2회 수행하였고, 결과는 재현가능하였다.
도 4 및 표 16에 제시된 바와 같이, 페이로드 및 항-CD7-BCLxLi ADC는 CTG 검정에서 DND-41 세포의 생존율의 용량 의존성 감소를 유도하였다.
표 16
Figure pct00886
H1650 세포주 (3D, CTG 120h)에서의 항-EGFR-BCL-xLi ADC 및 페이로드의 시험관내 활성:
H1650 세포를 10% 열 불활성화 태아 소 혈청, 페니실린 (100 IU/ml), 스트렙토마이신 (100 μg/ml) 및 L-글루타민 (2 mM)으로 보충된 RPMI에서 배양하였다. 세포주를 5% CO2를 함유하는 가습 분위기 하에 37℃에서 배양하였다. 세포를 96 마이크로웰 둥근 바닥 플레이트 (96 마이크로웰 로우 어태치먼트 플레이트, 코스타 참조물 7007)에 시딩하고, 페이로드 또는 ADC에 120시간 동안 노출시켰다 (연속 희석; 각각 9개 농도, 이중). 세포 생존율에 대한 페이로드 또는 ADC의 효과를, 37℃/5% CO2에서의 인큐베이션 5일 후에 75 μL 시약/웰로 셀타이터글로를 사용하여 세포 ATP 수준의 정량화에 의해 평가하였다. 모든 조건을 이중으로 시험하였다. 발광을 다목적 플레이트 판독기 상에서 정량화하였다. IC50을 표준 4-파라미터 곡선 피팅을 사용하여 계산하였다. IC50은 CTG 신호가 대조군에 대해 측정된 것의 50%로 감소되는 화합물 농도로서 정의된다. 각각의 실험을 적어도 2회 수행하였고, 결과는 재현가능하였다.
도 5a 및 5b 및 표 17에 제시된 바와 같이, 페이로드 및 항-EGFR-BCLxLi ADC는 CTG 검정에서 H1650 세포의 생존율의 용량 의존성 감소를 유도하였다.
표 17
Figure pct00887
Figure pct00888
Figure pct00889
Figure pct00890
ND = 시험되지 않음
CTG 검정을 사용한 HCC1569 세포 생존율에서의 단일 작용제로서 및 파클리탁셀과 조합된 항-HER2-Bclxli ADC의 효과
HCC1569 세포를 10% 열 불활성화 태아 소 혈청, 페니실린 (100 IU/ml), 스트렙토마이신 (100 μg/ml) 및 L-글루타민 (2 mM)으로 보충된 RPMI에서 배양하였다. 세포주를 5% CO2를 함유하는 가습 분위기 하에 37℃에서 배양하였다. HCC1569 세포를 96 마이크로웰 (투명-바닥, 백색, 코닝 참조 3903)에 시딩하고, 10nM의 파클리탁셀의 부재 또는 존재 하에 ADC 또는 상응하는 페이로드에 120시간 동안 노출시켰다 (5배 연속 희석; 각각 9개 농도, 삼중). 세포 생존율에 대한 ADC의 효과를 75 μL 시약/웰로 셀타이터글로를 사용한 세포 ATP 수준의 정량화에 의해 37℃/5% CO2에서의 인큐베이션 5일 후에 평가하였다. 모든 조건을 삼중으로 시험하였다. 발광을 다목적 플레이트 판독기 상에서 정량화하였다. IC50을 표준 4-파라미터 곡선 피팅을 사용하여 계산하였다. IC50은 CTG 신호가 대조군에 대해 측정된 것의 50%로 감소되는 화합물 농도로서 정의된다. 각각의 실험을 적어도 2회 수행하였고, 결과는 재현가능하였다.
도 6 및 표 18에 제시된 바와 같이, 모든 페이로드 및 항-HER2-Bclxli ADC는 CTG 검정에서 HCC1569 세포의 생존율의 용량 의존적 감소를 유도하였다. 흥미롭게도, 페이로드 및 ADC의 활성은 10 nM의 파클리탁셀과 조합되었을 때 유의하게 개선되었지만, 이들 세포를 단일 작용제로서 또는 파클리탁셀과 조합된 상응하는 네이키드 항체로 처리한 후에는 유의한 효과가 관찰되지 않았다.
표 18
Figure pct00891
실시예 9. 혈액 악성종양 세포주에서의 Bcl-xLi 페이로드 및 항-CD7-, 항-CD74-, 항-CD38 및 항-CD48- Bcl-xLi ADC의 시험관내 평가
세포주를 5% CO2를 함유하는 가습 분위기 하에 37℃에서 상기 기재된 배지에서 배양하였다. 세포를 96 웰 투명 바닥 플레이트 (96 웰 투명-바닥, 백색, 코닝 참조 3903)에 시딩하고, 페이로드 또는 ADC에 단일 작용제로 또는 빈크리스틴, ABT-199 또는 화합물 A2와의 1/1 조합물로 72시간 동안 노출시켰다 (연속 희석; 각각 9개 농도, 삼중). 세포 생존율에 대한 페이로드 또는 ADC의 효과를 37℃/5% CO2에서의 인큐베이션 3일 후에 75 μL 시약/웰로 셀타이터-글로 (CellTiter-Glo) 시약 (프로메가 (Promega) 참조 번호: G7571)을 사용하여 세포 ATP 수준의 정량화에 의해 평가하였다. 모든 조건을 삼중으로 시험하였다. 발광을 다목적 플레이트 판독기 상에서 정량화하였다. IC50을 표준 4-파라미터 곡선 피팅을 사용하여 계산하였다. IC50은 CTG 신호가 대조군에 대해 측정된 것의 50%로 감소되는 화합물 농도로서 정의된다. 각각의 실험을 적어도 2회 수행하였고, 결과는 재현가능하였다.
배양 배지:
● MM1S 및 LOUCY: RPMI 1640 + 글루타맥스 배지 (깁코 #61870), 10% FBS (두체르 #500105Y1 배치 S18367S1810), 1% 페니실린-스트렙토마이신 (깁코 #15140), 1% Hepes (깁코 #15630)
● HPB-ALL 및 ALL-SIL: RPMI 1640 + 글루타맥스 배지 (깁코 #61870), 20% FBS (두체르 #500105Y1 배치 S18367S1810), 1% 페니실린-스트렙토마이신 (깁코 #15140), 1% Hepes (깁코 #15630)
● SUDHL8: RPMI 1640 + 글루타맥스 배지 (깁코 #61870), 20% FBS (판 바이오테크 #P30-1302), 1% 페니실린-스트렙토마이신 (깁코 #15140), 1% Hepes (깁코 #15630)
플레이팅 조건:
● SUDHL8: 96-웰 플레이트에 72시간 동안 375000개 세포/mL의 75 μL/웰
● MM1S: 96-웰 플레이트에 72시간 동안 300000개 세포/mL의 75 μL/웰
● ALL-SILL: 96-웰 플레이트에 72시간 동안 375000개 세포/mL의 75 μL/웰
● LOUCY: 96-웰 플레이트에 72시간 동안 375000개 세포/mL의 75 μL/웰
● HPB-ALL: 96-웰 플레이트에 72시간 동안 300000개 세포/mL의 75 μL/웰
도 7a, 7b, 7c 및 7d 및 표 19 및 20에 제시된 바와 같이, 페이로드 및 ADC는 시험된 세포주의 생존율의 용량 의존성 감소를 유도하였다. 흥미롭게도, 페이로드 또는 ADC의 활성은 빈크리스틴, ABT-199 또는 화합물 A2와 조합되는 경우에 빈번하게 개선되었다.
표 19
Figure pct00892
Figure pct00893
Figure pct00894
표 20
Figure pct00895
Figure pct00896
실시예 10. NCI-H1650 세포주에서의 BCL-xL 항체 약물 접합체의 시험관내 평가
BCL-xL 항체 약물 접합체를 NCI-H1650: (RPMI-1640 + 10% FBS에서 배양된 ATCC 번호 CRL-5883)에서 내인성 암 세포주에 대해 시험하였다. 하나의 표적을 평가하였다: EGFR.
세포 증식 및 생존의 억제
세포 증식 및 생존을 억제하는 BCL-xL 항체 약물 접합체의 능력을 프로메가 셀타이터-글로® 증식 검정을 사용하여 평가하였다.
세포주를 조직 배양 인큐베이터에서 5% CO2, 37℃에서 그의 성장에 최적인 배지에서 배양하였다. 증식 검정을 위한 시딩 전에, 세포를 검정 적어도 2일 전에 분할하여 최적 성장 밀도를 보장하였다. 시딩 당일에, 0.25% 트립신을 사용하여 부착 세포를 조직 배양 플라스크로부터 들어올렸다. 세포 생존율 및 세포 밀도를 세포 계수기 (비-셀(Vi-Cell) XR 세포 생존율 분석기, 베크만 쿨터)를 사용하여 결정하였다. 85% 초과의 생존율을 갖는 세포를 검정을 위해 시딩하였다.
NCI-H1650 세포주를 흑색의 투명한 둥근 바닥 384-웰 초저 부착 구상체 마이크로플레이트 (코닝 (Corning) cat. #3830)에 시딩하였다. 세포를 45 uL의 표준 성장 배지 중에 웰당 3,000개 세포의 밀도로 시딩하였다. 플레이트를 원심분리기에서 5분 동안 1,000 RPM으로 회전시켰다. 플레이트를 5% CO2, 37℃에서 72시간 동안 조직 배양 인큐베이터에서 인큐베이션하였다. 투여일에, EGFR 표적화 BCL-xL ADC를 표준 성장 배지에서 10X로 제조하였다. 이어서 제조된 약물 처리를 세포에 첨가하여 최종 농도 0.0005 - 500 nM 및 웰당 최종 부피 50 μL을 생성하였다. 각각의 약물 농도를 4중으로 시험하였다. 플레이트를 조직 배양 인큐베이터에서 5% CO2, 37℃에서 5일 동안 인큐베이션하였다.
세포를 용해시키고 총 아데노신 트리포스페이트 (ATP) 함량을 측정하는 시약인 셀타이터 글로® 3D 세포 생존율 검정 기질 (프로메가, cat# G9681) 40 μL의 첨가를 통해 세포 생존율을 평가하였다. 웰을 완전히 혼합하고, 플레이트를 실온에서 30분 동안 인큐베이션하여 발광 신호를 안정화시킨 후, 발광 판독기 (엔비전 멀티라벨 플레이트 리더, 퍼킨엘머)를 사용하여 판독하였다.
약물 처리의 효과를 평가하기 위해, 비처리 세포를 함유하는 웰로부터의 발광 카운트 (100% 생존율)를 사용하여 처리된 샘플을 정규화하였다. 가변 기울기 모델을 적용하여 그래프패드 프리즘 (GraphPad PRISM) 버전 7.02 소프트웨어에서 비선형 회귀 곡선을 데이터에 피팅하였다. IC50 및 Amax 값을 생성된 곡선으로부터 외삽하였다. 세포 성장 또는 생존의 50%를 억제하는 데 요구되는 처리 농도 (IC50)를 표 21에 요약된 시험된 세포주의 대표적인 IC50 값으로 계산하였다.
대표적인 암 세포주는 0.055 - 100+ nM 활성 범위의 IC50 값으로 EGFR을 표적화하는 BCL-xL ADC에 감수성인 것으로 나타났다. L11A-P21, L11A-P27, L11C-P19 및 L11C-P25는 NCI-H1650 세포주 상에서 시험된 가장 강력한 BCL-xL ADC 중 하나였다. 이들 연구는 BCL-xL ADC가 EGFR을 발현하는 암 세포주 상에서 세포 증식을 억제할 수 있었음을 나타낸다.
표 21: EGFR1 BCL-xL ADC (IC50)
실시예 11. 암 세포주에서의 EGFR BCLxL ADC의 시험관내 평가
BCL-xL 항체 약물 접합체를 NCI-H1650 (RPMI-1640 + 10% FBS에서 배양된 ATCC 번호 CRL-5883)에서 하나의 내인성 암 세포주에 대해 시험하였다. 하나의 표적을 평가하였다: EGFR.
세포 증식 및 생존의 억제
세포 증식 및 생존을 억제하는 BCL-xL 항체 약물 접합체의 능력을 프로메가 셀타이터-글로® 증식 검정을 사용하여 평가하였다.
세포주를 조직 배양 인큐베이터에서 5% CO2, 37℃에서 그의 성장에 최적인 배지에서 배양하였다. 증식 검정을 위한 시딩 전에, 세포를 검정 적어도 2일 전에 분할하여 최적 성장 밀도를 보장하였다. 시딩 당일에, 0.25% 트립신을 사용하여 부착 세포를 조직 배양 플라스크로부터 들어올렸다. 세포 생존율 및 세포 밀도를 세포 계수기 (비-셀 XR 세포 생존율 분석기, 베크만 쿨터)를 사용하여 결정하였다. 85% 초과의 생존율을 갖는 세포를 검정을 위해 시딩하였다.
NCI-H1650 세포주를 흑색의 투명한 둥근 바닥 384-웰 초저 부착 구상체 마이크로플레이트 (코닝 (Corning) cat. #3830)에 시딩하였다. 세포를 45 μL의 표준 성장 배지 중에 웰당 3,000개 세포의 밀도로 시딩하였다. 플레이트를 원심분리기에서 5분 동안 1,000 RPM으로 회전시켰다. 플레이트를 조직 배양 인큐베이터에서 5% CO2, 37℃에서 72시간 동안 인큐베이션하였다. 투여일에, EGFR 표적화 BCL-xL ADC를 표준 성장 배지에서 10X로 제조하였다. 이어서 제조된 약물 처리를 세포에 첨가하여 0.0025 - 50 nM의 최종 농도 및 웰당 50 μL의 최종 부피를 생성하였다. 각각의 약물 농도를 4중으로 시험하였다. 플레이트를 조직 배양 인큐베이터에서 5% CO2, 37℃에서 5일 동안 인큐베이션하였다.
세포를 용해시키고 총 아데노신 트리포스페이트 (ATP) 함량을 측정하는 시약인 셀타이터 글로® 3D 세포 생존율 검정 기질 (프로메가, cat# G9681) 40 μL의 첨가를 통해 세포 생존율을 평가하였다. 웰을 완전히 혼합하고, 플레이트를 실온에서 30분 동안 인큐베이션하여 발광 신호를 안정화시킨 후, 발광 판독기 (엔비전 멀티라벨 플레이트 리더, 퍼킨엘머)를 사용하여 판독하였다.
약물 처리의 효과를 평가하기 위해, 비처리 세포를 함유하는 웰로부터의 발광 카운트 (100% 생존율)를 사용하여 처리된 샘플을 정규화하였다. 가변 기울기 모델을 적용하여 그래프패드 프리즘 (GraphPad PRISM) 버전 7.02 소프트웨어에서 비선형 회귀 곡선을 데이터에 피팅하였다. IC50 및 Amax 값을 생성된 곡선으로부터 외삽하였다. 세포 성장 또는 생존의 50%를 억제하는 데 요구되는 처리 농도 (IC50)를 표 22에 요약된 시험된 세포주의 대표적인 IC50 값으로 계산하였다.
대표적인 암 세포주는 0.042 - 0.069 nM 활성 범위의 IC50 값으로 EGFR을 표적화하는 BCL-xL 억제제 ADC에 감수성인 것으로 나타났다. 시험된 모든 9종의 ADC는 NCI-H1650 세포주 모델에 대해 동등한 효력을 입증하였다. 이들 연구는 BCL-xL ADC가 EGFR을 발현하는 암 세포주 상에서 세포 증식을 억제할 수 있었음을 나타낸다.
표 22: EGFR1 BCL-xL 억제제 ADC 시험관내 활성
실시예 12. 암 세포주의 패널에서의 시험관내 ADC 활성의 평가
항체 약물 접합체를 ATCC (아메리칸 타입 컬쳐 콜렉션)로부터 수득된 암 세포주 또는 환자 이종이식편 모델로부터 유래된 세포주에 대해 시험하였다. 세포를 조직 배양 인큐베이터에서 5% CO2, 37℃에서 그의 성장에 최적인 배지에서 배양하였다. 증식 검정을 위한 시딩 전에, 세포를 검정 적어도 2일 전에 분할하여 최적 성장 밀도를 보장하였다. 시딩일에, 세포를 0.25% 트립신을 사용하여 조직 배양 플라스크로부터 들어올렸다. 세포 생존율 및 세포 밀도를 세포 계수기 (비-셀 XR 세포 생존율 분석기, 베크만 쿨터)를 사용하여 결정하였다. 85% 초과의 생존율을 갖는 세포를 백색 투명 바닥 384-웰 플레이트 (그라이너 (Greiner) cat #781098)에 50 μL의 표준 성장 배지 중 웰당 1000개 세포의 밀도로 시딩하였다. 플레이트를 조직 배양 인큐베이터에서 37℃에서 밤새 인큐베이션하였다.
ADC를 표준 포스페이트 완충 용액 중에서 목적하는 농도로 제조하였다. 각각의 ADC에 대해 일련의 10개의 희석물을 제조하였다. 이어서 제조된 약물 처리를 세포에 첨가하여 0.000005 - 300 nM의 최종 농도를 생성하였다. 음향 전달 장치 (에코555, 베크만 쿨터)를 사용하여 ADC를 세포에 첨가하였다. 각각의 처리를 삼중 검정 플레이트에서 시험하였다. 플레이트를 37℃에서 밤새 또는 5일 동안 조직 배양 인큐베이터에서 인큐베이션하였다. 세포 증식 및 생존을 억제하는 ADC의 능력을 프로메가 셀타이터-글로® 증식 검정을 사용하여 평가하였다. 플레이트를 실온에서 20분 동안 인큐베이션하여 발광 신호를 안정화시킨 후, 다중모드 플레이트 판독기 (페라스타, BMG)를 사용하여 판독하였다. 비처리 세포의 발광 카운트를 시딩 다음 날 (제0일 판독), 및 처리 5일 후 (제5일 판독)에 취하였다. 비처리 세포의 제5일 판독치를 제0일 판독치와 비교하였다. 인큐베이션 기간 동안 적어도 1회의 세포 배가를 갖는 검정이 유효한 것으로 간주되었다. 약물 처리의 효과를 평가하기 위해, 비처리 세포를 함유하는 웰로부터의 발광 카운트 (100% 생존율)를 사용하여 처리된 샘플을 정규화하였다. 세포 성장 또는 생존의 50%를 억제하는 데 요구되는 처리 농도 (GI50)를 4 파라미터 로지스틱 회귀 방정식을 사용하여 계산하였다. 시험 결과를 하기 표 23, 24 및 25에 나타내었다.
표 23
Figure pct00899
Figure pct00900
Figure pct00901
Figure pct00902
표 24
Figure pct00903
Figure pct00904
Figure pct00905
Figure pct00906
표 25
Figure pct00907
Figure pct00908
Figure pct00909
Figure pct00910
실시예 13. 암 세포주의 패널에서 조합 파트너를 사용한 시험관내 ADC 활성의 평가
IgG, B7H3, CD56, DLK1, DLL3, EpCAM 및 SEZ6을 표적화하는 항체 약물 접합체 (ADC)를 ATCC (아메리칸 타입 컬쳐 콜렉션 (American Type Culture Collection))로부터 또는 다른 상업적 세포주 판매업체로부터 수득된 암 세포주 (corl279, ncih1436, ncih146, ncih211, ncih524)에 대해 시험하였다. 세포를 조직 배양 인큐베이터에서 5% CO2, 37℃에서 그의 성장에 최적인 배지에서 배양하였다. 증식 검정을 위한 시딩 전에, 세포를 검정 적어도 2일 전에 분할하여 최적 성장 밀도를 보장하였다. 시딩일에, 세포를 0.25% 트립신을 사용하여 조직 배양 플라스크로부터 들어올렸다. 세포 생존율 및 세포 밀도를 세포 계수기 (비-셀 XR 세포 생존율 분석기, 베크만 쿨터)를 사용하여 결정하였다. 85% 초과의 생존율을 갖는 세포를 백색 투명 바닥 384-웰 플레이트 (그라이너 (Greiner) cat #781098)에 50 μL의 표준 성장 배지 중 웰당 1000개 세포의 밀도로 시딩하였다. 플레이트를 조직 배양 인큐베이터에서 37℃에서 밤새 인큐베이션하였다.
ADC를 표준 포스페이트 완충 용액 중에서 목적하는 농도로 제조하였다. 각각의 ADC에 대해 일련의 10개의 희석물을 제조하였다. 이어서 제조된 약물 처리를 세포에 첨가하여 300 nM 내지 0.015 nM의 최종 농도를 생성하였다. 조합 파트너 (베네토클락스 및 토포테칸)를 고정된 농도로 첨가하였다. 음향 전달 장치 (에코525, 에코550, 베크만 쿨터)를 사용하여 ADC 또는 조합 파트너를 세포에 첨가하였다. 각각의 처리를 삼중 검정 플레이트에서 시험하였다. 플레이트를 37℃에서 밤새 또는 5일 동안 조직 배양 인큐베이터에서 인큐베이션하였다. 세포 증식 및 생존을 억제하는 ADC의 능력을 프로메가 셀타이터-글로® 증식 검정을 사용하여 평가하였다. 플레이트를 실온에서 20분 동안 인큐베이션하여 발광 신호를 안정화시킨 후, 다중모드 플레이트 판독기 (페라스타, BMG)를 사용하여 판독하였다. 비처리 세포의 발광 카운트를 시딩 다음 날 (제0일 판독), 및 처리 5일 후 (제5일 판독)에 취하였다. 비처리 세포의 제5일 판독치를 제0일 판독치와 비교하였다. 인큐베이션 기간 동안 적어도 1회의 세포 배가를 갖는 검정이 유효한 것으로 간주되었다. 약물 처리의 효과를 평가하기 위해, 비처리 세포를 함유하는 웰로부터의 발광 카운트 (100% 생존율)를 사용하여 처리된 샘플을 정규화하였다. 세포 성장 또는 생존의 50%를 억제하는 데 요구되는 처리 농도 (GI50)를 4 파라미터 로지스틱 회귀 방정식을 사용하여 계산하였다. 시험 결과를 표 26-29에 나타내었다.
표 26
Figure pct00911
표 27
Figure pct00912
표 28
Figure pct00913
표 29
Figure pct00914
실시예 14. 암 세포주에서 EGFR-AbA-L109A-P1과 MAP 키나제 경로의 억제제의 시험관내 조합 활성의 평가
EGFR-AbA-L109A-P1 항체 약물 접합체를 ATCC (아메리칸 타입 컬쳐 콜렉션 (American Type Culture Collection))로부터 수득된 암 세포주 또는 대안적 세포주 판매업체 (KCLB, 한국)에 대해 시험하였다. 세포를 조직 배양 인큐베이터에서 5% CO2, 37℃에서 그의 성장에 최적인 배지에서 배양하였다. 증식 검정을 위한 시딩 전에, 세포를 검정 적어도 2일 전에 분할하여 최적 성장 밀도를 보장하였다. 시딩일에, 세포를 0.25% 트립신을 사용하여 조직 배양 플라스크로부터 들어올렸다. 세포 생존율 및 세포 밀도를 세포 계수기 (비-셀 XR 세포 생존율 분석기, 베크만 쿨터)를 사용하여 결정하였다. 85% 초과의 생존율을 갖는 세포를 백색 투명 바닥 384-웰 플레이트 (그라이너 (Greiner) cat #781098)에 50 μL의 표준 성장 배지 중 웰당 1000개 세포의 밀도로 시딩하였다. 플레이트를 조직 배양 인큐베이터에서 37℃에서 밤새 인큐베이션하였다.
EGFR-AbA-L109A-P1 (KJ32-26EA) 및 조합 파트너 화합물을 각각의 희석제 중에서 1000X로 제조하였다. 조합 파트너는 LTT462, 트라메티닙, 및 LXH254를 포함하였다. 이전에 결정된 세포 증식 IC50을 중심으로 하여 각각의 화합물에 대해 일련의 7 내지 10개의 희석물을 제조하였다. 연속 희석된 EGFR-Aba-L109A-P1을 각각의 파트너 화합물의 연속 희석물과 조합함으로써 용량 매트릭스를 생성하였다. 음향 전달 장치 (에코555, 베크만 쿨터 (Beckman Coulter))를 사용하여 각각의 희석물 50 nL을 세포에 첨가하여, 0 - 10 μM 범위의 최종 농도를 생성하였다. 각각의 화합물을 또한 정규화 목적을 위해 단일 작용제 또는 혼합물로서 시험하였다. 각각의 처리를 반복 검정 플레이트에서 시험하였다.
플레이트를 37℃에서 밤새 또는 5일 동안 조직 배양 인큐베이터에서 인큐베이션하였다. ADC 및 파트너 화합물이 세포 증식 및 생존을 억제하는 능력을 프로메가 셀타이터-글로® 증식 검정을 사용하여 평가하였다. 플레이트를 실온에서 20분 동안 인큐베이션하여 발광 신호를 안정화시킨 후, 다중모드 플레이트 판독기 (페라스타, BMG)를 사용하여 판독하였다. 비처리 세포의 발광 카운트를 시딩 다음 날 (제0일 판독), 및 처리 5일 후 (제5일 판독)에 취하였다. 비처리 세포의 제5일 판독치를 제0일 판독치와 비교하였다. 인큐베이션 기간 동안 적어도 1회의 세포 배가를 갖는 검정이 유효한 것으로 간주되었다. 약물 처리의 효과를 평가하기 위해, 비처리 세포를 함유하는 웰로부터의 발광 카운트 (100% 생존율)를 사용하여 처리된 샘플을 정규화하였다. 퍼센트 억제 및 성장 억제를 성장 5일 후에 비처리 세포에 대한 상대 반응으로서 계산하였다. 둘 다의 정규화된 데이터세트를 S자형 반응 모델을 사용하여 피팅하고, 조합 효과 (SS)를 문헌 [Lehar et al. Nature Biotechnology (2009), 27(7), 659-666]에 기재된 바와 같이 로에베 용량 상가작용 모델에 대한 활성의 합계로서 측정하였다. 결과를 도 8a 및 도 8b에 나타내었다. 도 8a 및 8b에 제시된 바와 같이, EGFR-AbA-L109A-P1 Bcl-xli ADC는 HPAF-II, Panc 03.27, 및 SNU-601 세포에서 생존율의 용량 의존적 감소를 유도하였다. EGFR-AbA-L109A-P1 ADC의 활성은 트라메티닙 및 MAP 키나제 경로의 다른 억제제와 조합되었을 때 유의하게 개선되었다.
실시예 15. 마우스에서 H1650 인간 비소세포 폐 암종 (NSCLC) 모델에 대한 도세탁셀과 조합된 EGFR2-Bcl-xL 억제제-ADC의 생체내 효능
EGFR2-L109A-P1 ADC의 효능을 도세탁셀과의 조합 처리 후 생체내 H1650, 비소세포 폐 암종 (NSCLC) 모델에서 평가하였다.
방법
항-EGFR2 CysMab DANAPA-L11A-P27 및 항-EGFR2 CysMab DANAPA-L109A-P1 ADC의 합성
25 mg의 항체 (0.17 μmol, 1.0 당량)를 2.5 ml의 침강된 RMP 단백질 A 수지 (지이 라이프사이언시스, 17513803)와 함께 인큐베이션하고, 15분 동안 교반하였다. 시스테인 HCl 1수화물을 20 mM의 최종 농도로 첨가하고, 실온에서 30분 동안 교반하면서 인큐베이션하여 반응성 시스테인이 탈차단되도록 하였다. 수지를 진공 매니폴드 상에서 50 칼럼 부피의 PBS로 신속하게 세척하였다. 이어서 수지를 250 nM CuCl2를 함유하는 동등 부피 PBS 중에 재현탁시켰다. 항체 쇄간 디술피드의 재형성을 시점을 취함으로써 모니터링하였다. 각각의 시점에, 25 μL의 수지 슬러리를 제거하고, 1 μL의 20 mM MC-valcit-PAB-MMAE를 첨가하고, 튜브를 수회 플리킹하였다. 수지를 스핀 다운시키고, 상청액을 제거한 다음, 50 μL 항체 용리 완충제 (써모 사이언티픽, 21004)로 용리시켰다. 수지를 펠릿화하고, 상청액을 애질런트 PLRP-S 4000A 5 um, 4.6 x 50mm 칼럼 (완충제 A는 물, 0.1% TFA, 완충제 B 아세토니트릴, 0.1% TFA, 80℃에서 유지된 칼럼, 유량 1.5 ml/분; 구배 0분 - 30%B, 5분 - 45%B, 6.5분 - 100%B, 8분 - 100%B, 10분 - 30%)을 사용하여 역상 크로마토그래피에 의해 분석하였다. CuCl2의 첨가 90분 후에, 진공 매니폴드 상에서 50 칼럼 부피의 PBS로 세척함으로써 CuCl2를 제거한 다음, 2.5 ml의 PBS를 첨가하여 재현탁시켰다. 수지 및 항체의 이 슬러리에 각각의 링커-페이로드 (DMSO 중 20 mM 용액 102 μl, 1.63 μmol, 12 당량)를 첨가하였다. 이어서 생성된 혼합물을 주위 온도에서 3시간 동안 인큐베이션하였다. 이어서 수지를 50 칼럼 부피의 PBS로 세척하였다. ADC를 항체 용리 완충제 (써모 사이언티픽, 21004)를 사용하여 수지로부터 용리시켰다. 이어서 ADC를 투석에 의해 1X PBS (20X PBS, 테크노바 (Teknova)P0191)로 완충제 교환하고, 응집체를 제거하기 위해 둘베코 PBS pH 7.2 (하이클론 (Hyclone) SH30028.03) 중에서 용리시키는 정제용 크기 배제 크로마토그래피를 하이로드 (HiLoad) 16/600 슈퍼덱스 200 pg (지이 헬스케어, 28989335)을 사용하여 수행하였다. 이어서 물질을 아미콘 울트라-15, 50KDa, 재생 셀룰로스 (밀리포어, UFC0905024)를 사용하는 원심 농축기를 사용하여 4.5 mg/ml로 농축시키고, 0.22 μm 멸균 PVDF 필터, 25mm (밀라포어, SLGV013SL)를 통해 멸균 여과하고, 4℃에서 저장하였다. 최종 수율은 17.1 mg (0.114 μmol)이었다. 하기 분석을 수행하였다: 퍼센트 단량체를 결정하기 위한 분석용 크기-배제 크로마토그래피 (SEC), DAR을 결정하기 위한 질량 분광분석법 (MS), 항체의 흡광 계수 및 분자량을 이용하여 A280에 의해 결정된 단백질 농도 및 내독소 로드를 결정하기 위한 LAL 시험. HRMS 데이터 (단백질 방법)는 중쇄+2 종의 우세한 질량을 나타내었고, ~4.0의 DAR을 DAR1 DAR2 및 DAR3 종에 대한 피크의 MS 강도를 비교함으로써 계산하였다. SEC는 210 및 280 nm에서의 고분자량 피크 흡광도의 면적과 단량체 ADC에 대한 피크 흡광도의 면적의 비교에 의해 결정 시 1.8% 응집을 나타내었다.
일반적 방법론 (1): 예시적인 ADC의 약물-대-항체 비 (DAR)를 하기 방법에 따라 액체 크로마토그래피-질량 분광측정법 (LC/MS)에 의해 결정하였다. 모든 LC 방법에 대해, 이동상 A는 정제된 MS 등급 물 (허니웰 (Honeywell), (LC015-1)이었고, 이동상 B는 MS 등급 80% 이소프로판올 (허니웰 LC323-1): 20% 아세토니트릴 (허니웰, LC015-1), LC323-1) (1%의 포름산 (FA)(써모 사이언티픽 (Thermo Scientific), 85178)으로 보충됨)이었다. 칼럼 온도를 80℃로 설정하였다. 일반적 MS 방법은 합성된 모든 ADC에 대해 최적화되었다. 분석에 사용된 칼럼은 애질런트 PLRP-S 4000 A; 2.1 x 150mm, 8 um (애질런트, PL1912-3803)였다. 사용된 유량은 0.3 ml/분이었다. 사용된 구배는 액퀴티 바이오 H-클래스 사원 UPLC (워터스) 상에서 0-0.75분 95%A, 0.76 -1.9분 75%A, 1.91-11.0분 50%A, 11.01-11.50 10%A, 11.51-13.50분 95%A,13.51-18분 95%A였다. MS 시스템은 제보 (Xevo) G2-XS QToF ESI 질량 분광계 (워터스 (Waters))였고, 데이터를 1.5-11분으로부터 획득하고, 질량을 15000-80000 달톤 사이에서 분석하였다. DAR은 비접합된 및 접합된 주어진 종 (mAb 또는 회합된 단편)의 적분된 MS (총 이온 전류) 또는 UV (280 nm) 피크 면적을 합하여 디컨볼루션된 스펙트럼 또는 UV 크로마토그램으로부터 결정하였고, 각각의 면적에 부착된 약물의 수를 곱하여 가중하였다. 합산된, 가중된 면적을 총 면적의 합으로 나누고, 결과는 전체 ADC에 대한 최종 평균 DAR 값을 생성하였다.
크기 배제 크로마토그래피 (SEC)(1)를 수행하여 ADC의 품질 및 정제 후의 응집 백분율 (%)을 결정하였다. 분석은 분석 칼럼 슈퍼덱스 200 인크리즈 5/150 GL (지이 헬스케어, 28990945) 상에서 8분 동안 등용매 조건 100% PBS pH 7.2 ((하이클론 SH30028.03)), 유량 0.45 ml/분에서 수행하였다. ADC 샘플의 % 응집체 분획을 280 nm에서의 피크 면적 흡광도에 기초하여 정량화하였다. 계산은 280 nm에서의 고분자량 용리액을, 고분자량 용리액 및 단량체 용리액의 동일한 파장에서의 피크 면적 흡광도의 합으로 나눈 비에 100%를 곱한 것에 기초하였다. 데이터는 와이어트 (Wyatt) 미니DAWN 광 산란 및 트레오스 (Treos) 굴절률 검출기가 장착된 애질런트 바이오-이너트 (Agilent Bio-Inert) 1260 HPLC (와이어트 테크놀로지스, 캘리포니아주 산타 바바라) 상에서 획득하였다.
모든 예시된 ADC를 단량체 백분율의 결정을 위한 분석용 크기 배제 크로마토그래피 슈퍼덱스 200 인크리즈 5/150 GL (지이 헬스케어, 28990945) 및 DAR 결정을 위한 LC-MS에 의해 특징화하였다. 평균 DAR 값은 상기 LC/MS 방법 (LC/MS I)을 사용하여 결정하였고, 응집 백분율은 상기 SEC 방법 (SEC I)을 사용하여 결정하였다.
생체내 시험
H1650 세포를 10% FCS (바이오콘셉트 엘티디. 아미메드 (BioConcept Ltd. Amimed), #2-01F30-I), 2 mM L-글루타민 (바이오콘셉트 엘티디. 아미메드, #5-10K00-H) 및 1mM 피루브산나트륨 (바이오콘셉트 엘티디. 아미메드, #5-60F00-H), 10 mM HEPES (깁코 (Gibco) #11560496) 및 D-글루코스 1.25 g/500mL 배지 (깁코, # A24940-01)로 보충된 RPMI1640 (바이오콘셉트 엘티디. 아미메드, #1-41F01-I) 중에서 공기 중 5% CO2의 분위기 하에 37℃에서 배양하였다. H1650 이종이식편을 확립하기 위해, 세포를 수거하고, HBSS (깁코, #14175)/매트리겔 (코닝 #354234)(1:1 v/v) 중에 재현탁시킨 후, 5 x 106개의 세포를 함유하는 100 μL을 암컷 SCID 마우스 (타코닉, 유럽)의 옆구리에 피하로 주사하였다. 종양 성장을 세포 접종 후에 정기적으로 모니터링하고, 동물을 약 150 mm3의 평균 종양 부피를 갖는 처리군 (n = 6)으로 무작위화하였다. 대조군 및 EGFR2 CysMab DANAPA-L109A-P1-ADC를 도 9에 나타낸 바와 같이 투여하였다. ADC를 30 mg/kg으로 치료의 시작 시에 1회 정맥내로 (i.v.) 투여하고, 그와 조합하여, 7.5 mg/kg 도세탁셀 (젠티바 (Zentiva): 1ml/20mg)을 ADC 후 24시간에 1회 i.v. 투여하였다. 용량을 개별 마우스 체중에 대해 조정하였다. i.v. 용량 부피는 10 ml/kg이었고, 각각의 ADC를 물 중 0.9% (w/v) NaCl 중에 용해시키고, 도세탁셀 원액을 투여 전에 5% (w/v) 멸균 글루코스 용액으로 적절한 농도로 희석하였다.
처리 개시 후 제21일 및 제28일의 종양 부피 데이터를 일원 ANOVA 사후 터키 다중 비교 검정 (인디고 소프트웨어)을 사용하여 비히클 대조군 및 EGFR-Bcl-xLi (L109A-P1) ADC에 대한 통계적 차이에 대해 분석하였다. 결과는 평균 ± SEM으로 제시된다.
효능의 척도로서 %T/C 값을 하기에 따라 제21일에 계산하였다:
(Δ처리된 종양 부피/Δ대조군 종양 부피)*100
종양 퇴행을 하기에 따라 계산하였다:
-(Δ처리된 종양 부피/시작 시 처리된 종양 부피)*100
여기서, Δ종양 부피는 평가일의 평균 종양 부피에서 실험 시작 시의 평균 종양 부피를 뺀 것을 나타낸다.
결과: 효능 및 내약성
도세탁셀 (7.5 mg/kg)과 조합된 7.5 mg/kg의 EGFR2 CysMab DANAPA-L109A-P1 ADC는 제21일에 비히클 대조군과 비교하여 H1650 종양의 성장을 유의하게 (p<0.05) 감소시켰다 (도 9 및 표 30). 처리 개시 후 제28일에, EGFR2 CysMab DANAPA-L109A-P1-ADC는 도세탁셀과 조합된 이소형 IgG CysMab DANAPA-L109A-P1 ADC보다 유의하게 (p<0.05) 더 큰 종양 성장 억제를 유도하였다 (도 9 및 표 30). 모든 치료 스케줄은 체중 변화에 기초하여 잘 허용되었다 (도 10).
표 30: 도세탁셀과 조합된 EGFR2-CysMab DANAPA-L109A-P1-ADC의 항종양 효과의 요약. 델타 종양 부피 및 T/C% 값을 제21일에 계산하고, 평균으로서 제시한다. 제21일 (vs 비히클 대조군) 및 제21일 및 제28일 (vs IgG CysMab DANAPA-L109A-P1 ADC + 도세탁셀)에서의 통계적 분석을 일원 ANOVA 사후 터키 다중 비교 검정 (인디고 인라이프 (Indigo InLife), 팁코 스팟파이어에서의 결과 분석)을 사용하여 수행하였다.
Figure pct00915
N/A, 적용가능하지 않음
실시예 16: 마우스에서 H1650 인간 비소세포 폐 암종 (NSCLC) 모델에 대한 상이한 링커 페이로드를 갖는 EGFR1-Bcl-xL 억제제-ADC의 생체내 효능
상이한 링커 페이로드 (L11A-P21, L11A-P27, L11C-P19, L11C-P25 및 L109A-P1)를 갖는 5종의 EGFR-Bcl-xL 억제제 (Bcl-xLi) ADC의 효능을 H1650, 비소세포 폐 암종 (NSCLC) 모델에서 도세탁셀을 사용한 조합 처리에 의해 생체내 평가하였다. EGFR 항체는 또한 EGFR1 CysMab로서 표지된다 (실시예 6 참조).
방법
H1650 세포를 10% FCS (바이오콘셉트 엘티디. 아미메드 (BioConcept Ltd. Amimed), #2-01F30-I), 2 mM L-글루타민 (바이오콘셉트 엘티디. 아미메드, #5-10K00-H) 및 1mM 피루브산나트륨 (바이오콘셉트 엘티디. 아미메드, #5-60F00-H), 10 mM HEPES (깁코 #11560496) 및 D-글루코스 1.25 g/500mL 배지 (깁코, # A24940-01)로 보충된 RPMI1640 (바이오콘셉트 엘티디. 아미메드) 중에서 공기 중 5% CO2의 분위기 하에 37℃에서 배양하였다. H1650 이종이식편을 확립하기 위해, 세포를 수거하고, HBSS (깁코, #14175)/매트리겔 (코닝 #354234) 중에 재현탁시킨 후, 5 x 106개의 세포를 함유하는 100 μL을 암컷 SCID 마우스 (타코닉, 유럽)의 옆구리에 피하로 주사하였다. 종양 성장을 세포 접종 후에 정기적으로 모니터링하고, 동물을 약 150 mm3의 평균 종양 부피를 갖는 처리군 (n = 7)으로 무작위화하였다. 대조군 및 상이한 링커 페이로드 (L11A-P21, L11A-P27, L11C-P19, L11C-P25 및 L109A-P1)를 갖는 다양한 EGFR-Bcl-xLi ADC를 도 11에 나타낸 바와 같이 투여하였다. ADC를 7.5 mg/kg으로 치료 시작 시에 1회 정맥내로 (i.v.) 투여하고, 그와 조합하여, 7.5 mg/kg 도세탁셀 (젠티바 (Zentiva): 1ml/20mg)을 ADC 후 24시간에 1회 i.v. 투여하였다. 용량을 개별 마우스 체중에 대해 조정하였다. i.v. 용량 부피는 10 ml/kg이었고, 각각의 ADC를 PBS (바이오콘셉트 리미티드, 아미메드, #3-05F29-I) 중에 용해시키고, 도세탁셀 원액을 투여 전에 5% (w/v) 멸균 글루코스 용액 (브라운, #19029)으로 적절한 농도로 희석하였다.
처리 개시 후 제21일 및 제46일의 종양 부피 데이터를 일원 ANOVA 사후 터키 다중 비교 검정 (인디고 소프트웨어)을 사용하여 비히클 대조군 및 EGFR-Bcl-xLi (L109A-P1) ADC에 대한 통계적 차이에 대해 분석하였다. 결과는 도 11 및 표 31에서 평균 ± SEM으로 제시된다.
효능의 척도로서, %T/C 값을 하기에 따라 제21일에 계산하였다:
(Δ처리된 종양 부피/Δ대조군 종양 부피)*100
종양 퇴행을 하기에 따라 계산하였다:
-(Δ처리된 종양 부피/시작 시 처리된 종양 부피)*100
여기서, Δ종양 부피는 평가일의 평균 종양 부피에서 실험 시작 시의 평균 종양 부피를 뺀 것을 나타낸다.
결과: 효능 및 내약성
도세탁셀 (7.5 mg/kg)과 조합된 7.5 mg/kg의 모든 ADC는 제21일에 비히클 대조군과 비교하여 H1650 종양의 성장을 유의하게 (p<0.05) 감소시켰다 (도 11 및 표 31). EGFR-L11A-P21로의 처리 개시 후 제21일 및 제46일에, EGFR-L11C-P19 및 EGFR-L11C-P25 종양 성장이 도세탁셀과 조합된 EGFR-L109A-P1로의 처리에 비교하여 유의하게 감소되었다 (도 11 및 표 31). 모든 치료 스케줄은 체중 변화에 기초하여 잘 허용되었다 (도 12).
표 31: 도세탁셀과 조합된 상이한 링커 페이로드를 갖는 EGFR-Bcl-xLi-ADC의 항종양 효과의 요약. 델타 종양 부피 및 T/C% 값을 제21일에 계산하고, 평균으로서 제시한다. 제21일 (vs 비히클 대조군) 및 제21일 및 제46일 (vs EGFR-L109A-P1)에서의 통계적 분석을 일원 ANOVA 사후 터키 다중 비교 검정; 팁코 스팟파이어에서의 인디고 인라이프 결과 분석을 사용하여 수행하였다.
Figure pct00916
실시예 17. EBC-1 세포에서의 EpCAM ADC의 생체내 시험
EBC-1 세포를 10% FBS (HI-FBS #134K19, Tet-무함유)로 보충된 DMEM (깁코 11965-084) 중에서 37℃ (5% CO2의 분위기)에서 배양하였다. 0.25% 트립신 (깁코 25200-056)으로의 처리를 계대배양에 사용하였다. EBC-1 이종이식편을 확립하기 위해, 세포를 수거하고, 포스페이트 완충 염수 및 매트리겔의 1:1 v/v 혼합물에 재현탁시켰다. 150 μL의 부피 중 총 5 x 106개의 세포를 암컷 누드 마우스 (찰스 리버 (Charles River), 미국)의 옆구리에 피하로 주사하였다. 종양 성장을 세포 접종 후에 정기적으로 모니터링하고, 동물을 약 210 mm3의 평균 종양 부피를 갖는 처리군 (n = 8)으로 무작위화하였다. EpCAM-DANAPA-L11C-P25 ADC, 3207-DANAPA-L11C-P25 이소형 대조군 ADC, 및 EpCAM-DANAPA CysMab 대조군 항체를 모두 도 13에 지시된 바와 같이 파클리탁셀 (LC 래보러토리즈, 매사추세츠주 워번, Cat#: P-9600)과 조합하여 투여하였다. ADC 및 CysMab 항체를 30 mg/kg으로 치료 시작 시에 1회 정맥내로 (i.v.) 투여하였다. 파클리탁셀을 ADC 또는 CysMab 투여 24시간 후에 12.5 mg/kg으로 1회 i.v. 투여하였다. 모든 시약은 개별 마우스 체중에 기초하여 10 mL/kg으로 투여하였다. ADC 및 CysMab를 처리일에 PBS 중 3 mg/mL로 제제화하였다. 파클리탁셀을 50% 에탄올 + 50% 크레모포르 EL (콜리포르 EL) 중에 6 mg/mL의 농도로 재구성한 다음, 치료일에 투여 전에 멸균 염수를 사용하여 1.25 mg/mL로 추가로 희석하였다.
종양 부피 데이터를 EpCAM-DANAPA-L11C-P25 ADC + 파클리탁셀 조합 군에 대한 통계적 차이에 대해 분석하였다. 독립시편 양측 T-검정을 사용하여 군 사이의 비교를 수행하였다.
효능의 척도로서, %T/C 값을 하기 식에 따라 계산하였다:
(Δ처리된 종양 부피/Δ대조군 종양 부피)*100.
종양 퇴행을 하기 식에 따라 계산하였다:
-(Δ처리된 종양 부피/시작 시 처리된 종양 부피)*100.
Δ종양 부피는 측정일의 평균 종양 부피에서 치료 시작시의 평균 종양 부피를 뺀 것을 나타낸다. 상기 명시된 Δ종양 부피 대조군 값은 비히클 군에서의 평균 종양 부피 변화를 지칭한다. 결과를 평균 ± SEM으로서 표 32에 제시한다.
결과: 효능 및 내약성
12.5 mg/kg의 파클리탁셀과 조합하여 30 mg/kg으로 투여된 EpCAM-DANAPA-L11C-P25 ADC는 비히클 및 도세탁셀 단독 군과 비교하여 EBC-1 종양의 성장을 유의하게 (p<0.05) 감소시켰다. 이 ADC는 또한 파클리탁셀과 조합되는 경우에 3207-DANAPA-L11C-P25 이소형 대조군 ADC, 및 EpCAM-DANAPA CysMab 대조군 항체보다 유의하게 더 큰 항종양 활성을 가졌다. EpCAM-DANAPA-L11C-P25는 파클리탁셀과 조합하여 종양 퇴행을 유도하여, 제1 용량 후 제32일에 4/8 동물에서 완전 반응을 유도하였다. 그러나, EpCAM-DANAPA-L11C-P25 ADC 단독은 또한 종양 퇴행을 유도할 수 있었다. 반응의 깊이는 파클리탁셀과의 조합에 의해 달성된 것보다 약간 더 작았지만, 차이는 통계적으로 유의하지 않았다 (p=0.168). 모든 치료는 제1 용량 후에 계산된 퍼센트 체중 변화에 기초하여 잘 허용되었다 (도 14).
표 32. 파클리탁셀과 조합된 EpCAM-DANAPA-L11C-P25 ADC의 항종양 활성의 요약. 모든 Δ종양 부피, %T/C, 및 %퇴행 값은 하기 명시된 처리 후 일수에 수집된 종양 측정치를 기준으로 하여 평균으로서 제시된다. T/C 및 회귀 값을 방법에 명시된 식을 사용하여 계산하였다. 완전 반응자는 명시된 날짜까지 0 mm3로 퇴행한 종양을 갖는 동물로서 확인되었다. 독립시편 양측 T-검정을 사용하여 각각의 처리군을 EpCAM-DANAPA-L11C-P25 ADC + 파클리탁셀 조합군과 비교함으로써 통계적 분석을 수행하였다.
Figure pct00917
N/A, 적용가능하지 않음
실시예 18. 정맥내 (IV) 투여 후 ALL-SIL T-세포 급성 림프모구성 백혈병 이종이식편에서의 여러 CD7-표적화 ADC의 생체내 치료 효과
포스페이트-완충 염수 (PBS) 중에 제제화된 여러 CD7-표적화 ADC의 생체내 치료 효과를 ALL-SIL T-세포 급성 림프모구성 백혈병 이종이식편에서 정맥내 (IV) 투여 후에 결정하였다.
물질 및 방법
DSMZ로부터 수득된 ALL-SIL 세포를 20% FBS로 보충된 RPMI에서 배양하였다. 세포를 100% 매트리겔 (비디 바이오사이언시스) 중에 재현탁시키고, 5 x 106개 세포를 함유하는 0.1ml을 Jax에 의해 제공된 암컷 NSG 마우스의 우측 측복부 내로 피하로 접종하였다. 종양이 적절한 부피에 도달하였을 때, 마우스를 이지 스타트 소프트웨어를 사용하여 군당 6마리의 동물로 무작위화하였다. IgG1 DANAPA-L9A-P21, Ab D DANAPA_L9A-P1, Ab D DANAPA_L9A-P21, Ab D DANAPA_L9C-P25, Ab D DANAPA_L9A-P33 및 Ab D DANAPA_L9C-P40 (2.5 및/또는 7.5 mg/kg)을 PBS 중에서 1회 IV 주사하였다. 마우스 체중을 주 3회 모니터링하고, 종양 크기를 전자 캘리퍼를 사용하여 측정하였다. 종양 부피를 하기 식을 사용하여 최소 및 최대 종양 직경을 측정함으로써 추정하였다: (최소 직경)2(최대 직경)/2. 제17일에 종양 성장 억제를 하기 식을 사용하여 계산하였다:
Figure pct00918
Dx에서의 DTV (델타 종양 부피)는, Dx에서의 TV - 무작위화 시의 TV로 계산하였다.
종양 부피가 2000 mm3를 초과하는 제1 측정에서 또는 동물 건강 악화의 제1 징후에서 마우스를 희생시켰다. 모든 실험은 서비어 리서치 인스티튜트 (IdRS) 윤리 위원회에 의한 승인 후에 2018년에 시행 중인 프랑스 규정에 따라 수행하였다. NSG 마우스를 기관 가이드라인에 따라 유지하였다.
결과
ALL-SIL 이종이식편에 대한 여러 항-CD7 ADC의 효능을 도 15에 예시한다. 처리는 종양 세포 접종 7일 후에 시작하였다 (중앙 크기: 240 mm3). IgG1 DANAPA-L9A-P21 (비-표적화 ADC Fc 침묵), Ab D DANAPA_L9A-P1, Ab D DANAPA_L9A-P21, Ab D DANAPA_L9C-P25, Ab D DANAPA_L9A-P33 및 Ab D DANAPA_L9C-P40 (CD7-표적화 ADC Fc 침묵)을 2.5 및/또는 7.5 mg/kg으로 1회 IV 투여하였다.
도 15 및 표 33에 도시된 바와 같이, 비-표적화 ADC Fc 침묵은 종양 성장에 대해 효과가 없었고, 제17일에 -101.72%의 종양 성장 억제 (%TGI)를 가졌다. 대조적으로, 모든 CD7-표적화 ADC는 완전하고 장기-지속되는 종양 퇴행을 유도하였으며, d17에 %TGI는 108.59 내지 124.37% 범위였다 (비처리 대조군과 비교하여 p ≤ 0.001). 치료로 인한 임상적으로 관련된 체중 감소 또는 다른 임상 징후는 관찰되지 않았다 (도 16).
표 33: IgG1 DANAPA-L9A-P21, Ab D DANAPA_L9A-P1, Ab D DANAPA_L9A-P21, Ab D DANAPA_L9C-P25, Ab D DANAPA_L9A-P33 및 Ab D DANAPA_L9C-P40 (2.5 및/또는 7.5 mg/kg, IV 1회 투여, n=6)으로 처리 시 ALL-SIL 종양 성장 억제
Figure pct00919
SEQUENCE LISTING <110> NOVARTIS AG LES LABORATOIRES SERVIER <120> BCL-XL INHIBITOR ANTIBODY-DRUG CONJUGATES AND METHODS OF USE THEREOF <130> 132043-00420 <140> <141> <150> 63/117,763 <151> 2020-11-24 <160> 234 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 1 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Asn Tyr 20 25 30 Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Ala Thr Tyr Arg Gly His Ser Asp Thr Tyr Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Ala Ile Tyr Asn Gly Tyr Asp Val Leu Asp Asn Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 2 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial 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90 95 Asp Pro Pro Ala Pro Phe Thr Pro Ser Pro Leu Pro Arg Leu Ala Asn 100 105 110 Gln Asp Ser Arg Pro Val Phe Thr Ser Pro Thr Pro Ala Met Ala Ala 115 120 125 Val Pro Thr Gln Pro Gln Ser Lys Glu Gly Pro Trp Ser Pro Glu Ser 130 135 140 Glu Ser Pro Met Leu Arg Ile Thr Ala Pro Leu Pro Pro Gly Pro Ser 145 150 155 160 Met Ala Val Pro Thr Leu Gly Pro Gly Glu Ile Ala Ser Thr Thr Pro 165 170 175 Pro Ser Arg Ala Trp Thr Pro Thr Gln Glu Gly Pro Gly Asp Met Gly 180 185 190 Arg Pro Trp Val Ala Glu Val Val Ser Gln Gly Ala Gly Ile Gly Ile 195 200 205 Gln Gly Thr Ile Thr Ser Ser Thr Ala Ser Gly Asp Asp Glu Glu Thr 210 215 220 Thr Thr Thr Thr Thr Ile Ile Thr Thr Thr Ile Thr Thr Val Gln Thr 225 230 235 240 Pro Gly Pro Cys Ser Trp Asn Phe Ser Gly Pro Glu Gly Ser Leu Asp 245 250 255 Ser Pro Thr Asp Leu Ser Ser Pro Thr Asp Val Gly Leu Asp Cys Phe 260 265 270 Phe Tyr Ile Ser Val Tyr Pro Gly Tyr Gly Val Glu Ile Lys Val Gln 275 280 285 Asn Ile Ser Leu Arg Glu Gly Glu Thr Val Thr Val Glu Gly Leu Gly 290 295 300 Gly Pro Asp Pro Leu Pro Leu Ala Asn Gln Ser Phe Leu Leu Arg Gly 305 310 315 320 Gln Val Ile Arg Ser Pro Thr His Gln Ala Ala Leu Arg Phe Gln Ser 325 330 335 Leu Pro Pro Pro Ala Gly Pro Gly Thr Phe His Phe His Tyr Gln Ala 340 345 350 Tyr Leu Leu Ser Cys His Phe Pro Arg Arg Pro Ala Tyr Gly Asp Val 355 360 365 Thr Val Thr Ser Leu His Pro Gly Gly Ser Ala Arg Phe His Cys Ala 370 375 380 Thr Gly Tyr Gln Leu Lys Gly Ala Arg His Leu Thr Cys Leu Asn Ala 385 390 395 400 Thr Gln Pro Phe Trp Asp Ser Lys Glu Pro Val Cys Ile Ala Ala Cys 405 410 415 Gly Gly Val Ile Arg Asn Ala Thr Thr Gly Arg Ile Val Ser Pro Gly 420 425 430 Phe Pro Gly Asn Tyr Ser Asn Asn Leu Thr Cys His Trp Leu Leu Glu 435 440 445 Ala Pro Glu Gly Gln Arg Leu His Leu His Phe Glu Lys Val Ser Leu 450 455 460 Ala Glu Asp Asp Asp Arg Leu Ile Ile Arg Asn Gly Asp Asn Val Glu 465 470 475 480 Ala Pro Pro Val Tyr Asp Ser Tyr Glu Val Glu Tyr Leu Pro Ile Glu 485 490 495 Gly Leu Leu Ser Ser Gly Lys His Phe Phe Val Glu Leu Ser Thr Asp 500 505 510 Ser Ser Gly Ala Ala Ala Gly Met Ala Leu Arg Tyr Glu Ala Phe Gln 515 520 525 Gln Gly His Cys Tyr Glu Pro Phe Val Lys Tyr Gly Asn Phe Ser Ser 530 535 540 Ser Thr Pro Thr Tyr Pro Val Gly Thr Thr Val Glu Phe Ser Cys Asp 545 550 555 560 Pro Gly Tyr Thr Leu Glu Gln Gly Ser Ile Ile Ile Glu Cys Val Asp 565 570 575 Pro His Asp Pro Gln Trp Asn Glu Thr Glu Pro Ala Cys Arg Ala Val 580 585 590 Cys Ser Gly Glu Ile Thr Asp Ser Ala Gly Val Val Leu Ser Pro Asn 595 600 605 Trp Pro Glu Pro Tyr Gly Arg Gly Gln Asp Cys Ile Trp Gly Val His 610 615 620 Val Glu Glu Asp Lys Arg Ile Met Leu Asp Ile Arg Val Leu Arg Ile 625 630 635 640 Gly Pro Gly Asp Val Leu Thr Phe Tyr Asp Gly Asp Asp Leu Thr Ala 645 650 655 Arg Val Leu Gly Gln Tyr Ser Gly Pro Arg Ser His Phe Lys Leu Phe 660 665 670 Thr Ser Met Ala Asp Val Thr Ile Gln Phe Gln Ser Asp Pro Gly Thr 675 680 685 Ser Val Leu Gly Tyr Gln Gln Gly Phe Val Ile His Phe Phe Glu Val 690 695 700 Pro Arg Asn Asp Thr Cys Pro Glu Leu Pro Glu Ile Pro Asn Gly Trp 705 710 715 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Ala Ile Phe Leu Pro Leu Val Ala Met Val Leu Leu Val Gly Gly Val 930 935 940 Tyr Phe Tyr Phe Ser Arg Leu Gln Gly Lys Ser Ser Leu Gln Leu Pro 945 950 955 960 Arg Pro Arg Pro Arg Pro Tyr Asn Arg Ile Thr Ile Glu Ser Ala Phe 965 970 975 Asp Asn Pro Thr Tyr Glu Thr Gly Ser Leu Ser Phe Ala Gly Asp Glu 980 985 990 Arg Ile <210> 232 <211> 858 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 232 Met Leu Gln Thr Lys Asp Leu Ile Trp Thr Leu Phe Phe Leu Gly Thr 1 5 10 15 Ala Val Ser Leu Gln Val Asp Ile Val Pro Ser Gln Gly Glu Ile Ser 20 25 30 Val Gly Glu Ser Lys Phe Phe Leu Cys Gln Val Ala Gly Asp Ala Lys 35 40 45 Asp Lys Asp Ile Ser Trp Phe Ser Pro Asn Gly Glu Lys Leu Thr Pro 50 55 60 Asn Gln Gln Arg Ile Ser Val Val Trp Asn Asp Asp Ser Ser Ser Thr 65 70 75 80 Leu Thr Ile Tyr Asn Ala Asn Ile Asp Asp Ala Gly Ile Tyr Lys Cys 85 90 95 Val Val Thr Gly Glu Asp Gly Ser Glu Ser Glu Ala Thr Val Asn Val 100 105 110 Lys Ile Phe Gln Lys Leu Met Phe Lys Asn Ala Pro Thr Pro Gln Glu 115 120 125 Phe Arg Glu Gly Glu Asp Ala Val Ile Val Cys Asp Val Val Ser Ser 130 135 140 Leu Pro Pro Thr Ile Ile Trp Lys His Lys Gly Arg Asp Val Ile Leu 145 150 155 160 Lys Lys Asp Val Arg Phe Ile Val Leu Ser Asn Asn Tyr Leu Gln Ile 165 170 175 Arg Gly Ile Lys Lys Thr Asp Glu Gly Thr Tyr Arg Cys Glu Gly Arg 180 185 190 Ile Leu Ala Arg Gly Glu Ile Asn Phe Lys Asp Ile Gln Val Ile Val 195 200 205 Asn Val Pro Pro Thr Ile Gln Ala Arg Gln Asn Ile Val Asn Ala Thr 210 215 220 Ala Asn Leu Gly Gln Ser Val Thr Leu Val Cys Asp Ala Glu Gly Phe 225 230 235 240 Pro Glu Pro Thr Met Ser Trp Thr Lys Asp Gly Glu Gln Ile Glu Gln 245 250 255 Glu Glu Asp Asp Glu Lys Tyr Ile Phe Ser Asp Asp Ser Ser Gln Leu 260 265 270 Thr Ile Lys Lys Val Asp Lys Asn Asp Glu Ala Glu Tyr Ile Cys Ile 275 280 285 Ala Glu Asn Lys Ala Gly Glu Gln Asp Ala Thr Ile His Leu Lys Val 290 295 300 Phe Ala Lys Pro Lys Ile Thr Tyr Val Glu Asn Gln Thr Ala Met Glu 305 310 315 320 Leu Glu Glu Gln Val Thr Leu Thr Cys Glu Ala Ser Gly Asp Pro Ile 325 330 335 Pro Ser Ile Thr Trp Arg Thr Ser Thr Arg Asn Ile Ser Ser Glu Glu 340 345 350 Lys Ala Ser Trp Thr Arg Pro Glu Lys Gln Glu Thr Leu Asp Gly His 355 360 365 Met Val Val Arg Ser His Ala Arg Val Ser Ser Leu Thr Leu Lys Ser 370 375 380 Ile Gln Tyr Thr Asp Ala Gly Glu Tyr Ile Cys Thr Ala Ser Asn Thr 385 390 395 400 Ile Gly Gln Asp Ser Gln Ser Met Tyr Leu Glu Val Gln Tyr Ala Pro 405 410 415 Lys Leu Gln Gly Pro Val Ala Val Tyr Thr Trp Glu Gly Asn Gln Val 420 425 430 Asn Ile Thr Cys Glu Val Phe Ala Tyr Pro Ser Ala Thr Ile Ser Trp 435 440 445 Phe Arg Asp Gly Gln Leu Leu Pro Ser Ser Asn Tyr Ser Asn Ile Lys 450 455 460 Ile Tyr Asn Thr Pro Ser Ala Ser Tyr Leu Glu Val Thr Pro Asp Ser 465 470 475 480 Glu Asn Asp Phe Gly Asn Tyr Asn Cys Thr Ala Val Asn Arg Ile Gly 485 490 495 Gln Glu Ser Leu Glu Phe Ile Leu Val Gln Ala Asp Thr Pro Ser Ser 500 505 510 Pro Ser Ile Asp Gln Val Glu Pro Tyr Ser Ser Thr Ala Gln Val Gln 515 520 525 Phe Asp Glu Pro Glu Ala Thr Gly Gly Val Pro Ile Leu Lys Tyr Lys 530 535 540 Ala Glu Trp Arg Ala Val Gly Glu Glu Val Trp His Ser Lys Trp Tyr 545 550 555 560 Asp Ala Lys Glu Ala Ser Met Glu Gly Ile Val Thr Ile Val Gly Leu 565 570 575 Lys Pro Glu Thr Thr Tyr Ala Val Arg Leu Ala Ala Leu Asn Gly Lys 580 585 590 Gly Leu Gly Glu Ile Ser Ala Ala Ser Glu Phe Lys Thr Gln Pro Val 595 600 605 Gln Gly Glu Pro Ser Ala Pro Lys Leu Glu Gly Gln Met Gly Glu Asp 610 615 620 Gly Asn Ser Ile Lys Val Asn Leu Ile Lys Gln Asp Asp Gly Gly Ser 625 630 635 640 Pro Ile Arg His Tyr Leu Val Arg Tyr Arg Ala Leu Ser Ser Glu Trp 645 650 655 Lys Pro Glu Ile Arg Leu Pro Ser Gly Ser Asp His Val Met Leu Lys 660 665 670 Ser Leu Asp Trp Asn Ala Glu Tyr Glu Val Tyr Val Val Ala Glu Asn 675 680 685 Gln Gln Gly Lys Ser Lys Ala Ala His Phe Val Phe Arg Thr Ser Ala 690 695 700 Gln Pro Thr Ala Ile Pro Ala Asn Gly Ser Pro Thr Ser Gly Leu Ser 705 710 715 720 Thr Gly Ala Ile Val Gly Ile Leu Ile Val Ile Phe Val Leu Leu Leu 725 730 735 Val Val Val Asp Ile Thr Cys Tyr Phe Leu Asn Lys Cys Gly Leu Phe 740 745 750 Met Cys Ile Ala Val Asn Leu Cys Gly Lys Ala Gly Pro Gly Ala Lys 755 760 765 Gly Lys Asp Met Glu Glu Gly Lys Ala Ala Phe Ser Lys Asp Glu Ser 770 775 780 Lys Glu Pro Ile Val Glu Val Arg Thr Glu Glu Glu Arg Thr Pro Asn 785 790 795 800 His Asp Gly Gly Lys His Thr Glu Pro Asn Glu Thr Thr Pro Leu Thr 805 810 815 Glu Pro Glu Lys Gly Pro Val Glu Ala Lys Pro Glu Cys Gln Glu Thr 820 825 830 Glu Thr Lys Pro Ala Pro Ala Glu Val Lys Thr Val Pro Asn Asp Ala 835 840 845 Thr Gln Thr Lys Glu Asn Glu Ser Lys Ala 850 855 <210> 233 <211> 618 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 233 Met Val Ser Pro Arg Met Ser Gly Leu Leu Ser Gln Thr Val Ile Leu 1 5 10 15 Ala Leu Ile Phe Leu Pro Gln Thr Arg Pro Ala Gly Val Phe Glu Leu 20 25 30 Gln Ile His Ser Phe Gly Pro Gly Pro Gly Pro Gly Ala Pro Arg Ser 35 40 45 Pro Cys Ser Ala Arg Leu Pro Cys Arg Leu Phe Phe Arg Val Cys Leu 50 55 60 Lys Pro Gly Leu Ser Glu Glu Ala Ala Glu Ser Pro Cys Ala Leu Gly 65 70 75 80 Ala Ala Leu Ser Ala Arg Gly Pro Val Tyr Thr Glu Gln Pro Gly Ala 85 90 95 Pro Ala Pro Asp Leu Pro Leu Pro Asp Gly Leu Leu Gln Val Pro Phe 100 105 110 Arg Asp Ala Trp Pro Gly Thr Phe Ser Phe Ile Ile Glu Thr Trp Arg 115 120 125 Glu Glu Leu Gly Asp Gln Ile Gly Gly Pro Ala Trp Ser Leu Leu Ala 130 135 140 Arg Val Ala Gly Arg Arg Arg Leu Ala Ala Gly Gly Pro Trp Ala Arg 145 150 155 160 Asp Ile Gln Arg Ala Gly Ala Trp Glu Leu Arg Phe Ser Tyr Arg Ala 165 170 175 Arg Cys Glu Pro Pro Ala Val Gly Thr Ala Cys Thr Arg Leu Cys Arg 180 185 190 Pro Arg Ser Ala Pro Ser Arg Cys Gly Pro Gly Leu Arg Pro Cys Ala 195 200 205 Pro Leu Glu Asp Glu Cys Glu Ala Pro Leu Val Cys Arg Ala Gly Cys 210 215 220 Ser Pro Glu His Gly Phe Cys Glu Gln Pro Gly Glu Cys Arg Cys Leu 225 230 235 240 Glu Gly Trp Thr Gly Pro Leu Cys Thr Val Pro Val Ser Thr Ser Ser 245 250 255 Cys Leu Ser Pro Arg Gly Pro Ser Ser Ala Thr Thr Gly Cys Leu Val 260 265 270 Pro Gly Pro Gly Pro Cys Asp Gly Asn Pro Cys Ala Asn Gly Gly Ser 275 280 285 Cys Ser Glu Thr Pro Arg Ser Phe Glu Cys Thr Cys Pro Arg Gly Phe 290 295 300 Tyr Gly Leu Arg Cys Glu Val Ser Gly Val Thr Cys Ala Asp Gly Pro 305 310 315 320 Cys Phe Asn Gly Gly Leu Cys Val Gly Gly Ala Asp Pro Asp Ser Ala 325 330 335 Tyr Ile Cys His Cys Pro Pro Gly Phe Gln Gly Ser Asn Cys Glu Lys 340 345 350 Arg Val Asp Arg Cys Ser Leu Gln Pro Cys Arg Asn Gly Gly Leu Cys 355 360 365 Leu Asp Leu Gly His Ala Leu Arg Cys Arg Cys Arg Ala Gly Phe Ala 370 375 380 Gly Pro Arg Cys Glu His Asp Leu Asp Asp Cys Ala Gly Arg Ala Cys 385 390 395 400 Ala Asn Gly Gly Thr Cys Val Glu Gly Gly Gly Ala His Arg Cys Ser 405 410 415 Cys Ala Leu Gly Phe Gly Gly Arg Asp Cys Arg Glu Arg Ala Asp Pro 420 425 430 Cys Ala Ala Arg Pro Cys Ala His Gly Gly Arg Cys Tyr Ala His Phe 435 440 445 Ser Gly Leu Val Cys Ala Cys Ala Pro Gly Tyr Met Gly Ala Arg Cys 450 455 460 Glu Phe Pro Val His Pro Asp Gly Ala Ser Ala Leu Pro Ala Ala Pro 465 470 475 480 Pro Gly Leu Arg Pro Gly Asp Pro Gln Arg Tyr Leu Leu Pro Pro Ala 485 490 495 Leu Gly Leu Leu Val Ala Ala Gly Val Ala Gly Ala Ala Leu Leu Leu 500 505 510 Val His Val Arg Arg Arg Gly His Ser Gln Asp Ala Gly Ser Arg Leu 515 520 525 Leu Ala Gly Thr Pro Glu Pro Ser Val His Ala Leu Pro Asp Ala Leu 530 535 540 Asn Asn Leu Arg Thr Gln Glu Gly Ser Gly Asp Gly Pro Ser Ser Ser 545 550 555 560 Val Asp Trp Asn Arg Pro Glu Asp Val Asp Pro Gln Gly Ile Tyr Val 565 570 575 Ile Ser Ala Pro Ser Ile Tyr Ala Arg Glu Val Ala Thr Pro Leu Phe 580 585 590 Pro Pro Leu His Thr Gly Arg Ala Gly Gln Arg Gln His Leu Leu Phe 595 600 605 Pro Tyr Pro Ser Ser Ile Leu Ser Val Lys 610 615 <210> 234 <211> 383 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 234 Met Thr Ala Thr Glu Ala Leu Leu Arg Val Leu Leu Leu Leu Leu Ala 1 5 10 15 Phe Gly His Ser Thr Tyr Gly Ala Glu Cys Phe Pro Ala Cys Asn Pro 20 25 30 Gln Asn Gly Phe Cys Glu Asp Asp Asn Val Cys Arg Cys Gln Pro Gly 35 40 45 Trp Gln Gly Pro Leu Cys Asp Gln Cys Val Thr Ser Pro Gly Cys Leu 50 55 60 His Gly Leu Cys Gly Glu Pro Gly Gln Cys Ile Cys Thr Asp Gly Trp 65 70 75 80 Asp Gly Glu Leu Cys Asp Arg Asp Val Arg Ala Cys Ser Ser Ala Pro 85 90 95 Cys Ala Asn Asn Arg Thr Cys Val Ser Leu Asp Asp Gly Leu Tyr Glu 100 105 110 Cys Ser Cys Ala Pro Gly Tyr Ser Gly Lys Asp Cys Gln Lys Lys Asp 115 120 125 Gly Pro Cys Val Ile Asn Gly Ser Pro Cys Gln His Gly Gly Thr Cys 130 135 140 Val Asp Asp Glu Gly Arg Ala Ser His Ala Ser Cys Leu Cys Pro Pro 145 150 155 160 Gly Phe Ser Gly Asn Phe Cys Glu Ile Val Ala Asn Ser Cys Thr Pro 165 170 175 Asn Pro Cys Glu Asn Asp Gly Val Cys Thr Asp Ile Gly Gly Asp Phe 180 185 190 Arg Cys Arg Cys Pro Ala Gly Phe Ile Asp Lys Thr Cys Ser Arg Pro 195 200 205 Val Thr Asn Cys Ala Ser Ser Pro Cys Gln Asn Gly Gly Thr Cys Leu 210 215 220 Gln His Thr Gln Val Ser Tyr Glu Cys Leu Cys Lys Pro Glu Phe Thr 225 230 235 240 Gly Leu Thr Cys Val Lys Lys Arg Ala Leu Ser Pro Gln Gln Val Thr 245 250 255 Arg Leu Pro Ser Gly Tyr Gly Leu Ala Tyr Arg Leu Thr Pro Gly Val 260 265 270 His Glu Leu Pro Val Gln Gln Pro Glu His Arg Ile Leu Lys Val Ser 275 280 285 Met Lys Glu Leu Asn Lys Lys Thr Pro Leu Leu Thr Glu Gly Gln Ala 290 295 300 Ile Cys Phe Thr Ile Leu Gly Val Leu Thr Ser Leu Val Val Leu Gly 305 310 315 320 Thr Val Gly Ile Val Phe Leu Asn Lys Cys Glu Thr Trp Val Ser Asn 325 330 335 Leu Arg Tyr Asn His Met Leu Arg Lys Lys Lys Asn Leu Leu Leu Gln 340 345 350 Tyr Asn Ser Gly Glu Asp Leu Ala Val Asn Ile Ile Phe Pro Glu Lys 355 360 365 Ile Asp Met Thr Thr Phe Ser Lys Glu Ala Gly Asp Glu Glu Ile 370 375 380

Claims (96)

  1. 하기 화학식 (1)의 항체-약물 접합체:
    Figure pct00920

    여기서:
    Ab는 항체 또는 그의 항원-결합 단편이고;
    L은 Ab를 D에 공유 부착시키는 링커이고;
    p는 1 내지 16의 정수이고;
    D는 링커 L에 공유 부착된 하기 화학식 (I) 또는 화학식 (II)의 Bcl-xL 억제제 화합물:
    Figure pct00921

    또는 거울상이성질체, 부분입체이성질체 및/또는 상기 중 어느 하나의 제약상 허용되는 염, 여기서
    ◆ R1 및 R2는 서로 독립적으로 수소; 히드록실 또는 C1-C6알콕시 기에 의해 임의로 치환된 선형 또는 분지형 C1-C6알킬; C3-C6시클로알킬; 트리플루오로메틸; 선형 또는 분지형 C1-C6알킬렌-헤테로시클로알킬로부터 선택된 기를 나타내고, 여기서 헤테로시클로알킬 기는 선형 또는 분지형 C1-C6알킬 기에 의해 임의로 치환되거나;
    또는 R1 및 R2는 이들을 보유하는 탄소 원자와 함께 C3-C6시클로알킬렌 기를 형성하고,
    ◆ R3은 수소; C3-C6시클로알킬; 선형 또는 분지형 C1-C6알킬; -X1-NRaRb; -X1-N+RaRbRc; -X1-O-Rc; -X1-COORc; -X1-PO(OH)2; -X1-SO2(OH); -X1-N3 및
    Figure pct00922
    로부터 선택된 기를 나타내고;
    ◆ Ra 및 Rb는 서로 독립적으로 수소; 헤테로시클로알킬; -SO2-페닐 (여기서, 페닐은 선형 또는 분지형 C1-C6알킬에 의해 치환될 수 있음); 1 또는 2개의 히드록실 기에 의해 임의로 치환된 선형 또는 분지형 C1-C6알킬; C1-C6알킬렌-SO2OH; C1-C6알킬렌-SO2O-; C1-C6알킬렌-COOH; C1-C6알킬렌-PO(OH)2; C1-C6알킬렌-NRdRe; C1-C6알킬렌-N+RdReRf; C1-C6알킬렌-페닐 (여기서, 페닐은 C1-C6알콕시 기에 의해 치환될 수 있음); 기
    Figure pct00923
    로부터 선택된 기를 나타내거나
    또는 Ra 및 Rb는 이들을 보유하는 질소 원자와 함께 사이클 B1을 형성하거나;
    또는 Ra, Rb 및 Rc는 이들을 보유하는 질소 원자와 함께 가교된 C3-C8헤테로시클로알킬을 형성하고,
    ◆ Rc, Rd, Re, Rf는 서로 독립적으로 수소 또는 선형 또는 분지형 C1-C6알킬 기를 나타내거나,
    또는 Rd 및 Re는 이들을 보유하는 질소 원자와 함께 사이클 B2를 형성하거나,
    또는 Rd, Re 및 Rf는 이들을 보유하는 질소 원자와 함께 가교된 C3-C8헤테로시클로알킬을 형성하고,
    ◆ Het1은
    Figure pct00924
    로부터 선택된 기를 나타내고
    ◆ Het2는
    Figure pct00925
    로부터 선택된 기를 나타내고
    ◆ A1은 -NH-, -N(C1-C3알킬), O, S 또는 Se이고,
    ◆ A2는 N, CH 또는 C(R5)이고,
    ◆ G는 -C(O)ORG3, -C(O)NRG1RG2, -C(O)RG2, -NRG1C(O)RG2, -NRG1C(O)NRG1RG2, -OC(O)NRG1RG2, -NRG1C(O)ORG3, -C(=NORG1)NRG1RG2, -NRG1C(=NCN)NRG1RG2, -NRG1S(O)2NRG1RG2, -S(O)2RG3, -S(O)2NRG1RG2, -NRG1S(O)2RG2, -NRG1C(=NRG2)NRG1RG2, -C(=S)NRG1RG2, -C(=NRG1)NRG1RG2, 히드록실 기에 의해 임의로 치환된 C1-C6알킬, 할로겐, -NO2 및 -CN으로 이루어진 군으로부터 선택되고
    여기서
    - RG1 및 RG2는 각 경우에 각각 독립적으로, 수소, 1 내지 3개의 할로겐 원자에 의해 임의로 치환된 C1-C6알킬, C2-C6알케닐, C2-C6알키닐, C3-C6시클로알킬, 페닐 및 -(CH2)1-4-페닐로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    - RG3은 1 내지 3개의 할로겐 원자에 의해 임의로 치환된 C1-C6알킬, C2-C6알케닐, C2-C6알키닐, C3-C6시클로알킬, 페닐 및 -(CH2)1-4-페닐로 이루어진 군으로부터 선택되거나; 또는
    RG1 및 RG2는 각각이 부착되어 있는 원자와 함께 조합되어 C3-C8헤테로시클로알킬을 형성하거나; 또는 대안적으로, G는
    Figure pct00926
    로 이루어진 군으로부터 선택되고
    여기서 RG4는 수소, 1 내지 3개의 할로겐 원자에 의해 임의로 치환된 C1-C6알킬, C2-C6알케닐, C2-C6알키닐 및 C3-C6시클로알킬로부터 선택되고,
    ◆ R4는 수소, 플루오린, 염소 또는 브로민 원자, 메틸, 히드록실 또는 메톡시 기를 나타내고,
    ◆ R5는 1 내지 3개의 할로겐 원자에 의해 임의로 치환된 C1-C6알킬; C2-C6알케닐; C2-C6알키닐; 할로겐 또는 -CN으로부터 선택된 기를 나타내고,
    ◆ R6은
    수소;
    -C2-C6알케닐;
    -X2-O-R7;
    Figure pct00927
    ;
    -X2-NSO2-R7;
    -C=C(R9)-Y1-O-R7;
    C3-C6시클로알킬;
    히드록실 기에 의해 임의로 치환된 C3-C6헤테로시클로알킬;
    C3-C6시클로알킬렌-Y2-R7;
    C3-C6헤테로시클로알킬렌-Y2-R7 기,
    선형 또는 분지형 C1-C6알킬 기에 의해 임의로 치환된 헤테로아릴렌-R7 기
    로부터 선택된 기를 나타내고,
    ◆ R7은 선형 또는 분지형 C1-C6알킬 기; (C3-C6)시클로알킬렌-R8; 또는
    Figure pct00928
    로부터 선택된 기를 나타내고
    여기서 Cy는 C3-C8시클로알킬을 나타내고,
    ◆ R8은 수소; 선형 또는 분지형 C1-C6알킬, -NR'aR'b; -NR'a-CO-OR'c; -NR'a-CO-R'c; -N+R'aR'bR'c; -O-R'c; -NH-X'2-N+R'aR'bR'c; -O-X'2-NR'aR'b, -X'2-NR'aR'b, -NR'c-X'2-N3 및 로부터 선택된 기를 나타내고,
    ◆ R9는 선형 또는 분지형 C1-C6알킬, 트리플루오로메틸, 히드록실, 할로겐, C1-C6알콕시로부터 선택된 기를 나타내고,
    ◆ R10은 수소, 플루오린, 염소, 브로민, -CF3 및 메틸로부터 선택된 기를 나타내고,
    ◆ R11은 수소, C1-C3알킬렌-R8, -O-C1-C3알킬렌-R8, -CO-NRhRi 및 -CH=CH-C1-C4알킬렌-NRhRi, -CH=CH-CHO, C3-C8시클로알킬렌-CH2-R8, C3-C8헤테로시클로알킬렌-CH2-R8로부터 선택된 기를 나타내고,
    ◆ R12 및 R13은 서로 독립적으로 수소 원자 또는 메틸 기를 나타내고,
    ◆ R14 및 R15는 서로 독립적으로 수소 또는 메틸 기를 나타내거나, 또는 R14 및 R15는 이들을 보유하는 탄소 원자와 함께 시클로헥실을 형성하고,
    ◆ Rh 및 Ri는 서로 독립적으로 수소 또는 선형 또는 분지형 C1-C6알킬 기를 나타내고,
    ◆ X1 및 X2는 서로 독립적으로, 트리플루오로메틸, 히드록실, 할로겐, C1-C6알콕시로부터 선택된 1 또는 2개의 기에 의해 임의로 치환된 선형 또는 분지형 C1-C6알킬렌 기를 나타내고,
    ◆ X'2는 선형 또는 분지형 C1-C6알킬렌을 나타내고,
    ◆ R'a 및 R'b는 서로 독립적으로 수소; 헤테로시클로알킬; -SO2-페닐 (여기서, 페닐은 선형 또는 분지형 C1-C6알킬에 의해 치환될 수 있음); 1 또는 2개의 히드록실 또는 C1-C6알콕시 기에 의해 임의로 치환된 선형 또는 분지형 C1-C6알킬; C1-C6알킬렌-SO2OH; C1-C6알킬렌-SO2O-; C1-C6알킬렌-COOH; C1-C6알킬렌-PO(OH)2; C1-C6알킬렌-NR'dR'e; C1-C6알킬렌-N+R'dR'eR'f; C1-C6알킬렌-O-C1-C6알킬렌-OH; C1-C6알킬렌-페닐 (여기서, 페닐은 히드록실 또는 C1-C6알콕시 기에 의해 치환될 수 있음); 기
    Figure pct00930
    로부터 선택된 기를 나타내거나
    또는 R'a 및 R'b는 이들을 보유하는 질소 원자와 함께 사이클 B3을 형성하거나,
    또는 R'a, R'b 및 R'c는 이들을 보유하는 질소 원자와 함께 가교된 C3-C8헤테로시클로알킬을 형성하고,
    ◆ R'c, R'd, R'e, R'f는 서로 독립적으로 수소 또는 선형 또는 분지형 C1-C6알킬 기를 나타내거나,
    또는 R'd 및 R'e는 이들을 보유하는 질소 원자와 함께 사이클 B4를 형성하거나,
    또는 R'd, R'e 및 R'f는 이들을 보유하는 질소 원자와 함께 가교된 C3-C8헤테로시클로알킬을 형성하고,
    ◆ Y1은 선형 또는 분지형 C1-C4알킬렌을 나타내고,
    ◆ Y2는 결합, -O-, -O-CH2-, -O-CO-, -O-SO2-, -CH2-, -CH2-O, -CH2-CO-, -CH2-SO2-, -C2H5-, -CO-, -CO-O-, -CO-CH2-, -CO-NH-CH2-, -SO2-, -SO2-CH2-, -NH-CO-, -NH-SO2-를 나타내고,
    ◆ m=0, 1 또는 2이고,
    ◆ p=1, 2, 3 또는 4이고,
    ◆ B1, B2, B3 및 B4는 서로 독립적으로 C3-C8헤테로시클로알킬 기를 나타내고, 상기 기는 (i) 모노- 또는 비-시클릭 기일 수 있고, 여기서 비시클릭 기는 융합된, 가교된 또는 스피로 고리계를 포함하고, (ii) 질소 원자 이외에, 산소, 황 및 질소로부터 독립적으로 선택된 1 또는 2개의 헤테로 원자를 함유할 수 있고, (iii) 플루오린, 브로민, 염소, 선형 또는 분지형 C1-C6알킬, 히드록실, -NH2, 옥소 또는 피페리디닐로부터 선택된 1 또는 2개의 기에 의해 치환될 수 있고,
    여기서 R3 및 R8 기 중 1개는, 존재하는 경우에, 링커에 공유 부착되고, 여기서 원자의 원자가는 그에 결합된 1개 이상의 치환기에 의해 초과되지 않음;
    또는
    Figure pct00931

    또는 거울상이성질체, 부분입체이성질체 및/또는 상기 중 어느 하나의 제약상 허용되는 염이고, 여기서
    ◆ n=0, 1 또는 2이고,
    ◆ ------는 단일 또는 이중 결합을 나타내고,
    ◆ A4 및 A5는 서로 독립적으로 탄소 또는 질소 원자를 나타내고,
    ◆ Z1은 결합, -N(R)- 또는 -O-를 나타내고, 여기서 R은 수소 또는 선형 또는 분지형 C1-C6알킬을 나타내고,
    ◆ R1은 수소; 히드록실 또는 C1-C6알콕시 기로 임의로 치환된 선형 또는 분지형 C1-C6알킬; C3-C6시클로알킬; 트리플루오로메틸; 선형 또는 분지형 C1-C6알킬렌-헤테로시클로알킬 (여기서, 헤테로시클로알킬 기는 선형 또는 분지형 C1-C6알킬 기로 임의로 치환됨)로부터 선택된 기를 나타내고;
    ◆ R2는 수소 또는 메틸을 나타내고;
    ◆ R3은 수소; 선형 또는 분지형 C1-C4알킬; -X1-NRaRb; -X1-N+RaRbRc; -X1-O-Rc; -X1-COORc; -X1-PO(OH)2; -X1-SO2(OH); -X1-N3 및 로부터 선택된 기를 나타내고;
    ◆ Ra 및 Rb는 서로 독립적으로 수소; 헤테로시클로알킬; -SO2-페닐 (여기서, 페닐은 선형 또는 분지형 C1-C6알킬에 의해 치환될 수 있음); 1 또는 2개의 히드록실 기에 의해 임의로 치환된 선형 또는 분지형 C1-C6알킬; C1-C6알킬렌-SO2OH; C1-C6알킬렌-SO2O-; C1-C6알킬렌-COOH; C1-C6알킬렌-PO(OH)2; C1-C6알킬렌-NRdRe; C1-C6알킬렌-N+RdReRf; C1-C6알킬렌-페닐 (여기서, 페닐은 C1-C6알콕시 기에 의해 치환될 수 있음); 기
    Figure pct00933
    로부터 선택된 기를 나타내거나;
    또는 Ra 및 Rb는 이들을 보유하는 질소 원자와 함께 사이클 B1을 형성하거나;
    또는 Ra, Rb 및 Rc는 이들을 보유하는 질소 원자와 함께 가교된 C3-C8헤테로시클로알킬을 형성하고,
    ◆ Rc, Rd, Re, Rf는 서로 독립적으로 수소 또는 선형 또는 분지형 C1-C6알킬 기를 나타내거나,
    또는 Rd 및 Re는 이들을 보유하는 질소 원자와 함께 사이클 B2를 형성하거나,
    또는 Rd, Re 및 Rf는 이들을 보유하는 질소 원자와 함께 가교된 C3-C8헤테로시클로알킬을 형성하고,
    ◆ Het1은
    Figure pct00934
    로부터 선택된 기를 나타내고,
    ◆ Het2는
    Figure pct00935
    로부터 선택된 기를 나타내고,
    ◆ A1은 -NH-, -N(C1-C3알킬), O, S 또는 Se이고,
    ◆ A2는 N, CH 또는 C(R5)이고,
    ◆ G는 -C(O)ORG3, -C(O)NRG1RG2, -C(O)RG2, -NRG1C(O)RG2, -NRG1C(O)NRG1RG2, -OC(O)NRG1RG2, -NRG1C(O)ORG3, -C(=NORG1)NRG1RG2, -NRG1C(=NCN)NRG1RG2, -NRG1S(O)2NRG1RG2, -S(O)2RG3, -S(O)2NRG1RG2, -NRG1S(O)2RG2, -NRG1C(=NRG2)NRG1RG2, -C(=S)NRG1RG2, -C(=NRG1)NRG1RG2, 히드록실 기에 의해 임의로 치환된 C1-C6알킬, 할로겐, -NO2 및 -CN으로 이루어진 군으로부터 선택되고, 여기서
    - RG1 및 RG2는 각 경우에 각각 독립적으로, 수소, 1 내지 3개의 할로겐 원자에 의해 임의로 치환된 C1-C6알킬, C2-C6알케닐, C2-C6알키닐, C3-C6시클로알킬, 페닐 및 -(CH2)1-4-페닐로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    - RG3은 1 내지 3개의 할로겐 원자에 의해 임의로 치환된 C1-C6알킬, C2-C6알케닐, C2-C6알키닐, C3-C6시클로알킬, 페닐 및 -(CH2)1-4-페닐로 이루어진 군으로부터 선택되거나; 또는
    RG1 및 RG2는 각각이 부착되어 있는 원자와 함께 조합되어 C3-C8헤테로시클로알킬을 형성하거나; 또는 대안적으로, G는
    Figure pct00936
    로 이루어진 군으로부터 선택되고
    여기서 RG4는 수소, 1 내지 3개의 할로겐 원자에 의해 임의로 치환된 C1-C6알킬, C2-C6알케닐, C2-C6알키닐 및 C3-C6시클로알킬로부터 선택되고,
    ◆ R4는 수소, 플루오린, 염소 또는 브로민 원자, 메틸, 히드록실 또는 메톡시 기를 나타내고,
    ◆ R5는 1 내지 3개의 할로겐 원자에 의해 임의로 치환된 C1-C6알킬; C2-C6알케닐; C2-C6알키닐; 할로겐 또는 -CN으로부터 선택된 기를 나타내고,
    ◆ R6은
    수소;
    -C2-C6알케닐;
    -X2-O-R7;
    Figure pct00937
    ;
    -X2-NSO2-R7;
    -C=C(R9)-Y1-O-R7;
    C3-C6시클로알킬;
    히드록실 기에 의해 임의로 치환된 C3-C6헤테로시클로알킬;
    C3-C6시클로알킬렌-Y2-R7;
    C3-C6헤테로시클로알킬렌-Y2-R7 기,
    선형 또는 분지형 C1-C6알킬 기에 의해 임의로 치환된 헤테로아릴렌-R7 기
    로부터 선택된 기를 나타내고,
    ◆ R7은 선형 또는 분지형 C1-C6알킬 기; (C3-C6)시클로알킬렌-R8; 또는
    Figure pct00938
    로부터 선택된 기를 나타내고
    여기서 Cy는 C3-C8시클로알킬을 나타내고,
    ◆ R8은 수소; 선형 또는 분지형 C1-C6알킬, -NR'aR'b; -NR'a-CO-OR'c; -NR'a-CO-R'c; -N+R'aR'bR'c; -O-R'c; -NH-X'2-N+R'aR'bR'c; -O-X'2-NR'aR'b, -X'2-NR'aR'b, -NR'c-X'2-N3 및
    Figure pct00939
    로부터 선택된 기를 나타내고;
    ◆ R9는 선형 또는 분지형 C1-C6알킬, 트리플루오로메틸, 히드록실, 할로겐, C1-C6알콕시로부터 선택된 기를 나타내고,
    ◆ R10은 수소, 플루오린, 염소, 브로민, -CF3 및 메틸로부터 선택된 기를 나타내고,
    ◆ R11은 수소, 할로겐, C1-C3알킬렌-R8, -O-C1-C3알킬렌-R8, -CO-NRhRi 및 -CH=CH-C1-C4알킬렌-NRhRi, -CH=CH-CHO, C3-C8시클로알킬렌-CH2-R8, C3-C8헤테로시클로알킬렌-CH2-R8로부터 선택된 기를 나타내고,
    ◆ R12 및 R13은 서로 독립적으로 수소 원자 또는 메틸 기를 나타내고,
    ◆ R14 및 R15는 서로 독립적으로 수소 또는 메틸 기를 나타내거나, 또는 R14 및 R15는 이들을 보유하는 탄소 원자와 함께 시클로헥실을 형성하고,
    ◆ Rh 및 Ri는 서로 독립적으로 수소 또는 선형 또는 분지형 C1-C6알킬 기를 나타내고,
    ◆ X1은 트리플루오로메틸, 히드록실, 할로겐, C1-C6알콕시로부터 선택된 1 또는 2개의 기에 의해 임의로 치환된 선형 또는 분지형 C1-C4알킬렌 기를 나타내고,
    ◆ X2는 트리플루오로메틸, 히드록실, 할로겐, C1-C6알콕시로부터 선택된 1 또는 2개의 기에 의해 임의로 치환된 선형 또는 분지형 C1-C6알킬렌 기를 나타내고,
    ◆ X'2는 선형 또는 분지형 C1-C6알킬렌을 나타내고,
    ◆ R'a 및 R'b는 서로 독립적으로 수소; 헤테로시클로알킬; -SO2-페닐 (여기서, 페닐은 선형 또는 분지형 C1-C6알킬에 의해 치환될 수 있음); 1 또는 2개의 히드록실 또는 C1-C6알콕시 기에 의해 임의로 치환된 선형 또는 분지형 C1-C6알킬; C1-C6알킬렌-SO2OH; C1-C6알킬렌-SO2O-; C1-C6알킬렌-COOH; C1-C6알킬렌-PO(OH)2; C1-C6알킬렌-NR'dR'e; C1-C6알킬렌-N+R'dR'eR'f; C1-C6알킬렌-O-C1-C6알킬렌-OH; C1-C6알킬렌-페닐 (여기서, 페닐은 히드록실 또는 C1-C6알콕시 기에 의해 치환될 수 있음); 기
    Figure pct00940
    로부터 선택된 기를 나타내거나,
    또는 R'a 및 R'b는 이들을 보유하는 질소 원자와 함께 사이클 B3을 형성하거나,
    또는 R'a, R'b 및 R'c는 이들을 보유하는 질소 원자와 함께 가교된 C3-C8헤테로시클로알킬을 형성하고,
    ◆ R'c, R'd, R'e, R'f는 서로 독립적으로 수소 또는 선형 또는 분지형 C1-C6알킬 기를 나타내거나,
    또는 R'd 및 R'e는 이들을 보유하는 질소 원자와 함께 사이클 B4를 형성하거나,
    또는 R'd, R'e 및 R'f는 이들을 보유하는 질소 원자와 함께 가교된 C3-C8헤테로시클로알킬을 형성하고,
    ◆ Y1은 선형 또는 분지형 C1-C4알킬렌을 나타내고,
    ◆ Y2는 결합, -O-, -O-CH2-, -O-CO-, -O-SO2-, -CH2-, -CH2-O, -CH2-CO-, -CH2-SO2-, -C2H5-, -CO-, -CO-O-, -CO-CH2-, -CO-NH-CH2-, -SO2-, -SO2-CH2-, -NH-CO-, -NH-SO2-를 나타내고,
    ◆ m=0, 1 또는 2이고,
    ◆ p=1, 2, 3 또는 4이고,
    ◆ B1, B2, B3 및 B4는 서로 독립적으로 C3-C8헤테로시클로알킬 기를 나타내고, 상기 기는 (i) 모노- 또는 비-시클릭 기일 수 있고, 여기서 비시클릭 기는 융합된, 가교된 또는 스피로 고리계를 포함하고, (ii) 질소 원자 이외에, 산소, 황 및 질소로부터 독립적으로 선택된 1 또는 2개의 헤테로 원자를 함유할 수 있고, (iii) 플루오린, 브로민, 염소, 선형 또는 분지형 C1-C6알킬, 히드록실, -NH2, 옥소 또는 피페리디닐로부터 선택된 1 또는 2개의 기에 의해 치환될 수 있고,
    여기서 R3 및 R8 기 중 1개는, 존재하는 경우에, 링커에 공유 부착되고, 여기서 원자의 원자가는 그에 결합된 1개 이상의 치환기에 의해 초과되지 않는다.
  2. 제1항에 있어서, p가 1 내지 6 또는 2 내지 4의 정수이거나, 또는 p가 2 또는 4이거나; 또는 p가 액체 크로마토그래피-질량 분광측정법 (LC-MS)에 의해 결정되는 것인 항체-약물 접합체.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, L이
    부착 기;
    적어도 1개의 가교 스페이서 기; 및
    적어도 1개의 절단가능한 기, 임의로 피로포스페이트 기 및/또는 자기-희생적 기를 포함하는 적어도 1개의 절단가능한 기
    를 포함하는 것인 항체-약물 접합체.
  4. 제3항에 있어서, -(L-D)가 하기 화학식 (A)를 갖는 것인 항체-약물 접합체:
    Figure pct00941

    여기서
    R1은 부착 기이고;
    L1은 가교 스페이서 기이고;
    E는 절단가능한 기이다.
  5. 제3항 또는 제4항에 있어서, 절단가능한 기가 피로포스페이트 기를 포함하거나 또는 절단가능한 기가
    Figure pct00942
    을 포함하는 것인 항체-약물 접합체.
  6. 제3항 또는 제4항에 있어서, 가교 스페이서 기가
    (i) 폴리옥시에틸렌 (PEG) 기;
    (ii) PEG1, PEG2, PEG3, PEG4, PEG5, PEG6, PEG7, PEG8, PEG9, PEG10, PEG11, PEG12, PEG13, PEG14, 및 PEG15로부터 선택된 PEG 기;
    (iii) -CO-CH2-CH2-PEG12- 기;
    (iv) 부타노일, 펜타노일, 헥사노일, 헵타노일 또는 옥타노일 기; 또는
    (v) 헥사노일 기
    를 포함하는 것인 항체-약물 접합체.
  7. 제6항에 있어서, (i) 부착 기가 말레이미드 기, 티올 기, 시클로옥틴 기 및 아지도 기로부터 선택된 적어도 1개의 반응성 기로부터 형성되고; 임의로 여기서
    a) 말레이미드 기는 구조
    Figure pct00943
    를 갖거나;
    b) 아지도 기는 구조 -N=N+=N-를 갖거나;
    c) 시클로옥틴 기는 구조
    Figure pct00944
    을 갖고, 여기서
    Figure pct00945
    이 항체에 대한 결합이거나; 또는
    d) 시클로옥틴 기는 구조
    Figure pct00946
    를 갖고, 여기서
    Figure pct00947
    은 항체에 대한 결합이거나; 또는
    (ii) 부착 기는
    Figure pct00948
    를 포함하는 화학식을 갖고, 여기서
    Figure pct00949
    은 항체에 대한 결합인
    항체-약물 접합체.
  8. 제7항에 있어서, 항체가 하기로부터 선택된 부착 기에 의해 링커 (L)에 연결되는 것인 항체-약물 접합체:
    Figure pct00950

    여기서
    Figure pct00951
    은 항체에 대한 결합이고,
    Figure pct00952
    은 가교 스페이서 기에 대한 결합이다.
  9. 제8항에 있어서, 가교 스페이서 기가 -CO-CH2-CH2-PEG12-인 항체-약물 접합체.
  10. 제8항 또는 제9항에 있어서, 가교 스페이서 기가 절단가능한 기에 연결되고; 임의로 절단가능한 기가 -피로포스페이트-CH2-CH2-NH2-인 항체-약물 접합체.
  11. 제8항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 절단가능한 기가 Bcl-xL 억제제 (D)에 연결된 것인 항체-약물 접합체.
  12. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 링커가
    부착 기,
    적어도 1개의 가교 스페이서 기,
    펩티드 기, 및
    적어도 1개의 절단가능한 기
    를 포함하는 것인 항체-약물 접합체.
  13. 제12항에 있어서, -(L-D)가 하기 화학식 (B)를 갖는 것인 항체-약물 접합체:
    Figure pct00953

    여기서
    R1은 부착 기이고;
    L1은 가교 스페이서이고;
    Lp는 1 내지 6개의 아미노산 잔기를 포함하는 펩티드 기이거나, 또는 Lp는
    기
    Figure pct00954
    를 포함하고;
    E는 절단가능한 기이고,
    L2는 가교 스페이서이고;
    m은 0 또는 1이고;
    D는 Bcl-xL 억제제이다.
  14. 제12항 또는 제13항에 있어서, (i) 부착 기가 말레이미드 기, 티올 기, 시클로옥틴 기 및/또는 아지도 기를 포함하는 적어도 1개의 반응성 기로부터 형성되고, 임의로 여기서
    a) 말레이미드 기는 구조
    Figure pct00955
    를 갖거나;
    b) 아지도 기는 구조 -N=N+=N-를 갖거나;
    c) 시클로옥틴 기는 구조
    Figure pct00956
    을 갖고, 여기서
    Figure pct00957
    이 항체에 대한 결합이거나; 또는
    (ii) 부착 기는
    Figure pct00958
    를 포함하는 화학식을 갖고, 여기서
    Figure pct00959
    은 항체에 대한 결합인
    항체-약물 접합체.
  15. 제12항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서,
    (i) 적어도 1개의 가교 스페이서는 PEG 기를 포함하고, 임의로 PEG 기가 PEG1, PEG2, PEG3, PEG4, PEG5, PEG6, PEG7, PEG8, PEG9, PEG10, PEG11, PEG12, PEG13, PEG14, 및 PEG15로부터 선택되거나; 또는
    (ii) 적어도 1개의 가교 스페이서는 *-C(O)-CH2-CH2-PEG1-**, *-C(O)-CH2-PEG3-**, *-C(O)-CH2-CH2-PEG12**, *-NH-CH2-CH2-PEG1-**, 폴리히드록시알킬 기, *-C(O)-N(CH3)-CH2-CH2-N(CH3)-C(O)-**, 및 *-C(O)-CH2-CH2-PEG12-NH-C(O)CH2-CH2-**로부터 선택되고, 여기서 **는 적어도 1개의 가교 스페이서가 부착 기에 직접 또는 간접 부착되는 지점을 나타내고, *는 적어도 1개의 가교 스페이서가 펩티드 기에 직접 또는 간접 부착되는 지점을 나타내는 것인
    항체-약물 접합체.
  16. 제12항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, L1은 *-C(O)-CH2-CH2-PEG1-**, *-C(O)-CH2-PEG3-**, *-C(O)-CH2-CH2-PEG12**, *-NH-CH2-CH2-PEG1-**, 및 폴리히드록시알킬 기로부터 선택되고, 여기서 **는 R1에 대한 L1의 직접 또는 간접 부착 지점을 나타내고, *는 Lp에 대한 L1의 직접 또는 간접 부착 지점을 나타내는 것인 항체-약물 접합체.
  17. 제12항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, m이 1이고, L2는 -C(O)-N(CH3)-CH2-CH2-N(CH3)-C(O)-인 항체-약물 접합체.
  18. 제12항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서,
    (i) 펩티드 기는 1 내지 6, 1 내지 4, 1 내지 3 또는 1 내지 2개의 아미노산 잔기를 포함하고, 임의로 아미노산 잔기는 L-글리신 (Gly), L-발린 (Val), L-시트룰린 (Cit), L-시스테산 (술포-Ala), L-리신 (Lys), L-이소류신 (Ile), L-페닐알라닌 (Phe), L-메티오닌 (Met), L-아스파라긴 (Asn), L-프롤린 (Pro), L-알라닌 (Ala), L-류신 (Leu), L-트립토판 (Trp), 및 L-티로신 (Tyr)으로부터 선택되고;
    (ii) 펩티드 기는 Val-Cit, Val-Ala, Val-Lys, 및/또는 술포-Ala-Val-Ala를 포함하고;
    (iii) 펩티드 기는
    Figure pct00960
    로부터 선택되는 것인
    항체-약물 접합체.
  19. 제12항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, (i) 절단가능한 기가 피로포스페이트 및/또는 자기-희생적 기를 포함하거나; (ii) 절단가능한 기가 자기-희생적 기를 포함하거나; 또는 (iii) 절단가능한 기가 파라-아미노벤질-카르바메이트, 파라-아미노벤질-암모늄, 파라-아미노-(술포)벤질-암모늄, 파라-아미노-(술포)벤질-카르바메이트, 파라-아미노-(알콕시-PEG-알킬)벤질-카르바메이트, 파라-아미노-(폴리히드록시카르복시테트라히드로피라닐)알킬-벤질-카르바메이트, 또는 파라-아미노-(폴리히드록시카르복시테트라히드로피라닐)알킬-벤질-암모늄을 포함하는 자기-희생적 기를 포함하는 것인 항체-약물 접합체.
  20. 제13항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, m이 0 또는 1이거나 또는 m이 1이고, 가교 스페이서는
    Figure pct00961
    을 포함하는 것인 항체-약물 접합체.
  21. 제13항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, -(L-D)가 하기로부터 선택된 화합물로부터 형성된 것인 항체-약물 접합체:
    Figure pct00962

    Figure pct00963

    Figure pct00964

    Figure pct00965

    Figure pct00966
    .
  22. 제13항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, -(L-D)가 하기로부터 선택된 화학식을 포함하는 것인 항체-약물 접합체:
    Figure pct00967

    Figure pct00968

    Figure pct00969

    Figure pct00970

    Figure pct00971

    Figure pct00972

    Figure pct00973

    Figure pct00974

    여기서
    Figure pct00975
    은 항체에 대한 결합이다.
  23. 제1항 또는 제2항에 있어서, -(L-D)가 하기 화학식 (C)를 갖는 것인 항체-약물 접합체:
    Figure pct00976

    여기서
    R1은 부착 기이고;
    L1은 가교 스페이서이고;
    Lp는 1 내지 6개의 아미노산을 포함하는 펩티드 기이고;
    D는 Bcl-xL 억제제이고;
    G1-L2-A는 자기 희생적 스페이서이고;
    L2는 결합, 메틸렌, 네오펜틸렌 또는 C2-C3 알케닐렌이고;
    A는 결합, -OC(=O)-*,
    Figure pct00977
    , -OC(=O)N(CH3)CH2CH2N(CH3)C(=O)-* 또는 -OC(=O)N(CH3)C(Ra)2C(Ra)2N(CH3)C(=O)-*이고,
    여기서 각각의 Ra는 독립적으로 H, C1-C6 알킬, 및 C3-C8 시클로알킬로부터 선택되고, A의 *는 D에 대한 부착 지점을 나타내고;
    L3은 스페이서 모이어티이고;
    R2는 친수성 모이어티이다.
  24. 제23항에 있어서, -(L-D)가 하기 화학식 (D)를 갖는 것인 항체-약물 접합체 또는 그의 제약상 허용되는 염:
    Figure pct00978

    여기서
    R1은 부착 기이고;
    L1은 가교 스페이서이고;
    Lp는 1 내지 6개의 아미노산을 포함하는 펩티드 기이고;
    A는 결합, -OC(=O)-*,
    Figure pct00979
    , -OC(=O)N(CH3)CH2CH2N(CH3)C(=O)-* 또는 -OC(=O)N(CH3)C(Ra)2C(Ra)2N(CH3)C(=O)-*이고,
    여기서 각각의 Ra는 독립적으로 H, C1-C6 알킬, 및 C3-C8 시클로알킬로부터 선택되고, A의 *는 D에 대한 부착 지점을 나타내고;
    L3은 스페이서 모이어티이고;
    R2는 친수성 모이어티이다.
  25. 제23항 또는 제24항에 있어서,
    (1) L1은
    Figure pct00980
    , 또는 *-CH(OH)CH(OH)CH(OH)CH(OH)-**를 포함하고, 여기서 각각의 n은 1 내지 12의 정수이고, 여기서 L1의 *는 Lp에 대한 직접 또는 간접 부착 지점을 나타내고, L1의 **는 R1에 대한 직접 또는 간접 부착 지점을 나타내고;
    (2) L1은
    Figure pct00981
    이고, n은 1 내지 12의 정수이거나, 또는 n은 1 또는 n은 12이고, 여기서 L1의 *는 Lp에 대한 직접 또는 간접 부착 지점을 나타내고, L1의 **는 R1에 대한 직접 또는 간접 부착 지점을 나타내고;
    (3) L1은
    Figure pct00982
    이고, n은 1 내지 12의 정수이고, 여기서 L1의 *는 Lp에 대한 직접 또는 간접 부착 지점을 나타내고, L1의 **는 R1에 대한 직접 또는 간접 부착 지점을 나타내고;
    (4) L1은
    Figure pct00983
    을 포함하고, 여기서 L1의 *는 Lp에 대한 직접 또는 간접 부착 지점을 나타내고, L1의 **는 R1에 대한 직접 또는 간접 부착 지점을 나타내고;
    (5) L1은
    *-C(=O)(CH2)mO(CH2)m-**; *-C(=O)((CH2)mO)t(CH2)n-**; *-C(=O)(CH2)m-**;
    *-C(=O)NH((CH2)mO)t(CH2)n-**;
    *-C(=O)O(CH2)mSSC(R3)2(CH2)mC(=O)NR3(CH2)mNR3C(=O)(CH2)m-**;
    *-C(=O)O(CH2)mC(=O)NH(CH2)m-**; *-C(=O)(CH2)mNH(CH2)m-**;
    *-C(=O)(CH2)mNH(CH2)nC(=O)-**; *-C(=O)(CH2)mX1(CH2)m-**;
    *-C(=O)((CH2)mO)t(CH2)nX1(CH2)n-**; *-C(=O)(CH2)mNHC(=O)(CH2)n-**;
    *-C(=O)((CH2)mO)t(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-**;
    *-C(=O)(CH2)mNHC(=O)(CH2)nX1(CH2)n-**;
    *-C(=O)((CH2)mO)t(CH2)nNHC(=O)(CH2)nX1(CH2)n-**;
    *-C(=O)((CH2)mO)t(CH2)nC(=O)NH(CH2)m-**; *-C(=O)(CH2)mC(R3)2-** 또는 *-C(=O)(CH2)mC(=O)NH(CH2)m-**
    를 포함하는 가교 스페이서이고, 여기서, L1의 *는 Lp에 대한 직접 또는 간접 부착 지점을 나타내고, L1의 **는 R1에 대한 직접 또는 간접 부착 지점을 나타내고,
    X1은
    Figure pct00984
    이고;
    각각의 m은 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 및 10으로부터 선택되고;
    각각의 n은 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 및 10으로부터 선택되고;
    각각의 t는 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 및 30으로부터 선택되고;
    각각의 R3은 독립적으로 H 및 C1-C6알킬로부터 선택되는 것인
    항체-약물 접합체.
  26. 제23항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, R2가 폴리에틸렌 글리콜, 폴리알킬렌 글리콜, 폴리올, 폴리사르코신, 당, 올리고사카라이드, 폴리펩티드, 1 내지 3개의
    Figure pct00985
    로 치환된 C2-C6알킬, 또는 -OC(=O)NHS(O)2NHCH2CH2OCH3, -NHC(=O)C1-4알킬렌-P(O)(OCH2CH3)2 및 -COOH 기로부터 독립적으로 선택된 1 내지 2개의 치환기로 치환된 C2-C6알킬을 포함하는 친수성 모이어티인 항체-약물 접합체.
  27. 제23항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, R2가
    Figure pct00986
    (여기서, n은 1 내지 6의 정수임),
    Figure pct00987
    인 항체-약물 접합체.
  28. 제23항 또는 제24항에 있어서, 친수성 모이어티는
    (i) 하기 모이어티를 갖는 폴리사르코신:
    Figure pct00988
    (여기서 n은 3 내지 25의 정수이고; R은 H, -CH3 또는 -CH2CH2C(=O)OH임); 또는
    (ii) 화학식
    Figure pct00989
    의 폴리에틸렌 글리콜 (여기서, R은 H, -CH3, CH2CH2NHC(=O)ORa, -CH2CH2NHC(=O)Ra 또는 -CH2CH2C(=O)ORa이고, R'는 OH, -OCH3, -CH2CH2NHC(=O)ORa, -CH2CH2NHC(=O)Ra 또는 -OCH2CH2C(=O)ORa이고, 여기서 Ra는 H, 또는 OH 또는 C1-4 알콕실로 임의로 치환된 C1-4 알킬이고, m 및 n은 각각 독립적으로 2 내지 25의 정수임)
    을 포함하는 것인 항체-약물 접합체.
  29. 제23항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, 친수성 모이어티가
    Figure pct00990
    을 포함하는 것인 항체-약물 접합체.
  30. 제23항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서,
    (i) L3은 구조
    Figure pct00991
    을 갖는 스페이서 모이어티이고,
    여기서
    W는 -CH2-, -CH2O-, -CH2N(Rb)C(=O)O-, -NHC(=O)C(Rb)2NHC(=O)O-, -NHC(=O)C(Rb)2NH-, -NHC(=O)C(Rb)2NHC(=O)-, -CH2N(X-R2)C(=O)O-, -C(=O)N(X-R2)-, -CH2N(X-R2)C(=O)-, -C(=O)NRb-, -C(=O)NH-, -CH2N Rb C(=O)-, -CH2NRb C(=O)NH-, -CH2NRbC(=O)NRb-, -NHC(=O)-, -NHC(=O)O-, -NHC(=O)NH-, -OC(=O)NH-, -S(O)2NH-, -NHS(O)2-, -C(=O)-, -C(=O)O- 또는 -NH-이고, 여기서 각각의 Rb는 독립적으로 H, C1-C6알킬, 및 C3-C8시클로알킬로부터 선택되고;
    X는 결합, 트리아졸릴, 또는 -CH2-트리아졸릴-이고,
    여기서 X는 R2에 연결되거나; 또는
    (ii) L3은 구조
    Figure pct00992
    을 갖는 스페이서 모이어티이고,
    여기서
    W는 -CH2-, -CH2O-, -CH2N(Rb)C(=O)O-, -NHC(=O)C(Rb)2NHC(=O)O-, -NHC(=O)C(Rb)2NH-, -NHC(=O)C(Rb)2NHC(=O)-, -CH2N(X-R2)C(=O)O-, -C(=O)N(X-R2)-, -CH2N(X-R2)C(=O)-, -C(=O)NRb-, -C(=O)NH-, -CH2NRbC(=O)-, -CH2NRbC(=O)NH-, -CH2NRbC(=O)NRb-, -NHC(=O)-, -NHC(=O)O-, -NHC(=O)NH-, -OC(=O)NH-, -S(O)2NH-, -NHS(O)2-, -C(=O)-, -C(=O)O- 또는 -NH-이고, 여기서 각각의 Rb는 독립적으로 H, C1-C6알킬, 및 C3-C8시클로알킬로부터 선택되고;
    X는 -CH2-트리아졸릴-C1-4 알킬렌-OC(O)NHS(O)2NH-, -C4-6 시클로알킬렌-OC(O)NHS(O)2NH-, -(CH2CH2O)n-C(O)NHS(O)2NH-, -(CH2CH2O)n-C(O)NHS(O)2NH-(CH2CH2O)n-, -CH2-트리아졸릴-C1-4 알킬렌-OC(O)NHS(O)2NH-(CH2CH2O)n-, -C4-6시클로알킬렌-OC(O)NHS(O)2NH-(CH2CH2O)n-이고, 여기서 각각의 n은 독립적으로 1, 2, 또는 3이고, 여기서 X는 R2에 연결되는 것인
    항체-약물 접합체.
  31. 제3항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서, 부착 기가 적어도 하나의 반응성 기를 포함하는 반응에 의해 형성되는 것인 항체-약물 접합체.
  32. 제3항 내지 제31항 중 어느 한 항에 있어서, 부착 기는
    링커에 부착된 제1 반응성 기, 및
    항체에 부착되거나 항체의 아미노산 잔기인 제2 반응성 기
    를 반응시킴으로써 형성되고
    여기서 임의로
    (i) 반응성 기 중 적어도 1개는
    티올,
    말레이미드,
    할로아세트아미드,
    아지드,
    알킨,
    시클로옥텐,
    트리아릴 포스핀,
    옥사노보르나디엔,
    시클로옥틴,
    디아릴 테트라진,
    모노아릴 테트라진,
    노르보르넨,
    알데히드,
    히드록실아민,
    히드라진,
    NH2-NH-C(=O)-,
    케톤,
    비닐 술폰,
    아지리딘,
    아미노산 잔기,
    Figure pct00993

    Figure pct00994
    를 포함하고;
    여기서
    각각의 R3은 독립적으로 H 및 C1-C6알킬로부터 선택되고;
    각각의 R4는 2-피리딜 또는 4-피리딜이고;
    각각의 R5는 독립적으로 H, C1-C6알킬, F, Cl, 및 -OH로부터 선택되고;
    각각의 R6은 독립적으로 H, C1-C6알킬, F, Cl, -NH2, -OCH3, -OCH2CH3, -N(CH3)2, -CN, -NO2 및 -OH로부터 선택되고;
    각각의 R7은 독립적으로 H, C1-6알킬, 플루오로, -C(=O)OH로 치환된 벤질옥시, -C(=O)OH로 치환된 벤질, -C(=O)OH로 치환된 C1-4알콕시, 및 -C(=O)OH로 치환된 C1-4알킬로부터 선택되고/거나;
    (ii) 제1 반응성 기 및 제2 반응성 기는
    티올 및 말레이미드,
    티올 및 할로아세트아미드,
    티올 및 비닐 술폰,
    티올 및 아지리딘,
    아지드 및 알킨,
    아지드 및 시클로옥틴,
    아지드 및 시클로옥텐,
    아지드 및 트리아릴 포스핀,
    아지드 및 옥사노보르나디엔,
    디아릴 테트라진 및 시클로옥텐,
    모노아릴 테트라진 및 논보르넨,
    알데히드 및 히드록실아민,
    알데히드 및 히드라진,
    알데히드 및 NH2-NH-C(=O)-,
    케톤 및 히드록실아민,
    케톤 및 히드라진,
    케톤 및 NH2-NH-C(=O)-,
    히드록실아민 및
    Figure pct00995
    ,
    아민 및
    Figure pct00996
    , 또는
    CoA 또는 CoA 유사체 및 세린 잔기
    를 포함하는 것인
    항체-약물 접합체.
  33. 제3항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서, 부착 기가 하기로부터 선택된 기를 포함하는 것인 항체-약물 접합체:
    Figure pct00997

    Figure pct00998

    Figure pct00999

    Figure pct01000

    Figure pct01001

    여기서
    R32는 H, C1-4 알킬, 페닐, 피리미딘 또는 피리딘이고;
    R35는 H, C1-6알킬, 페닐, 또는 1 내지 3개의 -OH 기로 치환된 C1-4알킬이고;
    각각의 R7은 독립적으로 H, C1-6 알킬, 플루오로, -C(=O)OH로 치환된 벤질옥시, -C(=O)OH로 치환된 벤질, -C(=O)OH로 치환된 C1-4알콕시 및 -C(=O)OH로 치환된 C1-4알킬로부터 선택되고;
    R37은 독립적으로 H, 페닐 및 피리딘으로부터 선택되고;
    q는 0, 1, 2 또는 3이고;
    R8은 H 또는 메틸이고;
    R9는 H, -CH3 또는 페닐이다.
  34. 제23항 내지 제33항 중 어느 한 항에 있어서, 펩티드 기가 1 내지 4개 또는 1 내지 3개 또는 1 또는 2개의 아미노산 잔기를 포함하고, 임의로 아미노산 잔기가 L-글리신 (Gly), L-발린 (Val), L-시트룰린 (Cit), L-시스테산 (술포-Ala), L-리신 (Lys), L-이소류신 (Ile), L-페닐알라닌 (Phe), L-메티오닌 (Met), L-아스파라긴 (Asn), L-프롤린 (Pro), L-알라닌 (Ala), L-류신 (Leu), L-트립토판 (Trp), 및 L-티로신 (Tyr)으로부터 선택되는 것인 항체-약물 접합체.
  35. 제23항 내지 제33항 중 어느 한 항에 있어서, 펩티드 기가 Val-Cit, Phe-Lys, Val-Ala, Val-Lys, Leu-Cit, 술포-Ala-Val, 및/또는 술포-Ala-Val-Ala를 포함하는 것인 항체-약물 접합체.
  36. 제23항 내지 제35항 중 어느 한 항에 있어서, Lp가
    Figure pct01002
    로부터 선택되는 것인 항체-약물 접합체.
  37. 제23항 내지 제36항 중 어느 한 항에 있어서, -(L-D)는 하기 화학식의 화합물을 포함하거나 또는 그로부터 형성되는 것인 항체-약물 접합체:
    (1)
    Figure pct01003
    (여기서
    R은 H, -CH3 또는 -CH2CH2C(=O)OH이고;
    A는 결합, -OC(=O)-*,
    Figure pct01004
    , -OC(=O)N(CH3)CH2CH2N(CH3)C(=O)-* 또는 -OC(=O)N(CH3)C(Ra)2C(Ra)2N(CH3)C(=O)-*이고,
    여기서 각각의 Ra는 독립적으로 H, C1-C6 알킬, 및 C3-C8 시클로알킬로부터 선택되고, A의 *는 D에 대한 부착 지점을 나타내고;
    D는 Bcl-xL 억제제임);
    (2)
    Figure pct01005
    (여기서
    R은 H, -CH3 또는 -CH2CH2C(=O)OH이고;
    A는 결합, -OC(=O)-*,
    Figure pct01006
    , -OC(=O)N(CH3)CH2CH2N(CH3)C(=O)-* 또는 -OC(=O)N(CH3)C(Ra)2C(Ra)2N(CH3)C(=O)-*이고,
    여기서 각각의 Ra는 독립적으로 H, C1-C6 알킬, 및 C3-C8 시클로알킬로부터 선택되고, A의 *는 D에 대한 부착 지점을 나타내고;
    D는 Bcl-xL 억제제임);
    (3)
    Figure pct01007
    (여기서
    R은 H, -CH3 또는 -CH2CH2C(=O)OH이고;
    A는 결합, -OC(=O)-*,
    Figure pct01008
    , -OC(=O)N(CH3)CH2CH2N(CH3)C(=O)-* 또는 -OC(=O)N(CH3)C(Ra)2C(Ra)2N(CH3)C(=O)-*이고,
    여기서 각각의 Ra는 독립적으로 H, C1-C6 알킬, 및 C3-C8 시클로알킬로부터 선택되고, A의 *는 D에 대한 부착 지점을 나타내고;
    D는 Bcl-xL 억제제임);
    (4)
    Figure pct01009
    (여기서
    각각의 R은 독립적으로 H, -CH3, 및 -CH2CH2C(=O)OH로부터 선택되고;
    A는 결합, -OC(=O)-*,
    Figure pct01010
    , -OC(=O)N(CH3)CH2CH2N(CH3)C(=O)-* 또는 -OC(=O)N(CH3)C(Ra)2C(Ra)2N(CH3)C(=O)-*이고,
    여기서 각각의 Ra는 독립적으로 H, C1-C6 알킬, 및 C3-C8 시클로알킬로부터 선택되고, A의 *는 D에 대한 부착 지점을 나타내고;
    D는 Bcl-xL 억제제임);
    (5)
    Figure pct01011
    (여기서
    각각의 R은 독립적으로 H, -CH3, 및 -CH2CH2C(=O)OH로부터 선택되고;
    A는 결합, -OC(=O)-*,
    Figure pct01012
    , -OC(=O)N(CH3)CH2CH2N(CH3)C(=O)-* 또는 -OC(=O)N(CH3)C(Ra)2C(Ra)2N(CH3)C(=O)-*이고,
    여기서 각각의 Ra는 독립적으로 H, C1-C6 알킬, 및 C3-C8 시클로알킬로부터 선택되고, A의 *는 D에 대한 부착 지점을 나타내고;
    D는 Bcl-xL 억제제임);
    (6)
    Figure pct01013
    (여기서
    Xa는 -CH2-, -OCH2-, -NHCH2- 또는 -NRCH2-이고, 각각의 R은 독립적으로 H, -CH3 또는 -CH2CH2C(=O)OH이고;
    A는 결합, -OC(=O)-*,
    Figure pct01014
    , -OC(=O)N(CH3)CH2CH2N(CH3)C(=O)-* 또는 -OC(=O)N(CH3)C(Ra)2C(Ra)2N(CH3)C(=O)-*이고,
    여기서 각각의 Ra는 독립적으로 H, C1-C6 알킬, 및 C3-C8 시클로알킬로부터 선택되고, A의 *는 D에 대한 부착 지점을 나타내고;
    D는 Bcl-xL 억제제임);
    (7)
    Figure pct01015
    (여기서
    R은 H, -CH3 또는 -CH2CH2C(=O)OH이고;
    A는 결합, -OC(=O)-*,
    Figure pct01016
    , -OC(=O)N(CH3)CH2CH2N(CH3)C(=O)-* 또는 -OC(=O)N(CH3)C(Ra)2C(Ra)2N(CH3)C(=O)-*이고,
    여기서 각각의 Ra는 독립적으로 H, C1-C6 알킬, 및 C3-C8 시클로알킬로부터 선택되고, A의 *는 D에 대한 부착 지점을 나타내고;
    D는 Bcl-xL 억제제임);
    (8)
    Figure pct01017
    (여기서
    Xb는 -CH2-, -OCH2-, -NHCH2- 또는 -NRCH2-이고, 각각의 R은 독립적으로 H, -CH3 또는 -CH2CH2C(=O)OH이고;
    A는 결합, -OC(=O)-*,
    Figure pct01018
    , -OC(=O)N(CH3)CH2CH2N(CH3)C(=O)-* 또는 -OC(=O)N(CH3)C(Ra)2C(Ra)2N(CH3)C(=O)-*이고,
    여기서 각각의 Ra는 독립적으로 H, C1-C6 알킬, 및 C3-C8 시클로알킬로부터 선택되고, A의 *는 D에 대한 부착 지점을 나타내고;
    D는 Bcl-xL 억제제임);
    (9)
    Figure pct01019
    (여기서
    A는 결합, -OC(=O)-*,
    Figure pct01020
    , -OC(=O)N(CH3)CH2CH2N(CH3)C(=O)-* 또는 -OC(=O)N(CH3)C(Ra)2C(Ra)2N(CH3)C(=O)-*이고,
    여기서 각각의 Ra는 독립적으로 H, C1-C6 알킬, 및 C3-C8 시클로알킬로부터 선택되고, A의 *는 D에 대한 부착 지점을 나타내고;
    D는 Bcl-xL 억제제임);
    (10)
    Figure pct01021
    (여기서
    A는 결합, -OC(=O)-*,
    Figure pct01022
    , -OC(=O)N(CH3)CH2CH2N(CH3)C(=O)-* 또는 -OC(=O)N(CH3)C(Ra)2C(Ra)2N(CH3)C(=O)-*이고,
    여기서 각각의 Ra는 독립적으로 H, C1-C6 알킬, 및 C3-C8 시클로알킬로부터 선택되고, A의 *는 D에 대한 부착 지점을 나타내고;
    D는 Bcl-xL 억제제임);
    (11)
    Figure pct01023
    (여기서
    A는 결합, -OC(=O)-*,
    Figure pct01024
    , -OC(=O)N(CH3)CH2CH2N(CH3)C(=O)-* 또는 -OC(=O)N(CH3)C(Ra)2C(Ra)2N(CH3)C(=O)-*이고,
    여기서 각각의 Ra는 독립적으로 H, C1-C6 알킬, 및 C3-C8 시클로알킬로부터 선택되고, A의 *는 D에 대한 부착 지점을 나타내고;
    D는 Bcl-xL 억제제임);
    (12)
    Figure pct01025
    (여기서
    A는 결합, -OC(=O)-*,
    Figure pct01026
    , -OC(=O)N(CH3)CH2CH2N(CH3)C(=O)-* 또는 -OC(=O)N(CH3)C(Ra)2C(Ra)2N(CH3)C(=O)-*이고,
    여기서 각각의 Ra는 독립적으로 H, C1-C6 알킬, 및 C3-C8 시클로알킬로부터 선택되고, A의 *는 D에 대한 부착 지점을 나타내고;
    D는 Bcl-xL 억제제임);
    (13)
    Figure pct01027
    (여기서
    A는 결합, -OC(=O)-*,
    Figure pct01028
    , -OC(=O)N(CH3)CH2CH2N(CH3)C(=O)-* 또는 -OC(=O)N(CH3)C(Ra)2C(Ra)2N(CH3)C(=O)-*이고,
    여기서 각각의 Ra는 독립적으로 H, C1-C6 알킬, 및 C3-C8 시클로알킬로부터 선택되고, A의 *는 D에 대한 부착 지점을 나타내고;
    D는 Bcl-xL 억제제임);
    (14)
    Figure pct01029
    (여기서
    A는 결합, -OC(=O)-*,
    Figure pct01030
    , -OC(=O)N(CH3)CH2CH2N(CH3)C(=O)-* 또는 -OC(=O)N(CH3)C(Ra)2C(Ra)2N(CH3)C(=O)-*이고,
    여기서 각각의 Ra는 독립적으로 H, C1-C6 알킬, 및 C3-C8 시클로알킬로부터 선택되고, A의 *는 D에 대한 부착 지점을 나타내고;
    D는 Bcl-xL 억제제임);
    (15)
    Figure pct01031
    (여기서
    A는 결합, -OC(=O)-*,
    Figure pct01032
    , -OC(=O)N(CH3)CH2CH2N(CH3)C(=O)-* 또는 -OC(=O)N(CH3)C(Ra)2C(Ra)2N(CH3)C(=O)-*이고,
    여기서 각각의 Ra는 독립적으로 H, C1-C6 알킬, 및 C3-C8 시클로알킬로부터 선택되고, A의 *는 D에 대한 부착 지점을 나타내고;
    D는 Bcl-xL 억제제임); 또는
    (16)
    Figure pct01033
    (여기서
    각각의 R은 독립적으로 H, -CH3 또는 -CH2CH2C(=O)OH이고;
    A는 결합, -OC(=O)-*,
    Figure pct01034
    , -OC(=O)N(CH3)CH2CH2N(CH3)C(=O)-* 또는 -OC(=O)N(CH3)C(Ra)2C(Ra)2N(CH3)C(=O)-*이고,
    여기서 각각의 Ra는 독립적으로 H, C1-C6 알킬, 및 C3-C8 시클로알킬로부터 선택되고, A의 *는 D에 대한 부착 지점을 나타내고;
    D는 Bcl-xL 억제제임); 또는
    (17)
    Figure pct01035
    (여기서
    각각의 R은 독립적으로 H, -CH3 또는 -CH2CH2C(=O)OH이고;
    A는 결합, -OC(=O)-*,
    Figure pct01036
    , -OC(=O)N(CH3)CH2CH2N(CH3)C(=O)-* 또는 -OC(=O)N(CH3)C(Ra)2C(Ra)2N(CH3)C(=O)-*이고,
    여기서 각각의 Ra는 독립적으로 H, C1-C6 알킬, 및 C3-C8 시클로알킬로부터 선택되고, A의 *는 D에 대한 부착 지점을 나타내고;
    n은 2 내지 24의 정수이고;
    D는 Bcl-xL 억제제임); 또는
    (18)
    Figure pct01037
    (여기서
    A는 결합, -OC(=O)-*,
    Figure pct01038
    , -OC(=O)N(CH3)CH2CH2N(CH3)C(=O)-* 또는 -OC(=O)N(CH3)C(Ra)2C(Ra)2N(CH3)C(=O)-*이고,
    여기서 각각의 Ra는 독립적으로 H, C1-C6 알킬, 및 C3-C8 시클로알킬로부터 선택되고, A의 *는 D에 대한 부착 지점을 나타내고;
    D는 Bcl-xL 억제제임).
  38. 제23항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서, A가 결합이고/거나 R이 -CH3 또는 -CH2CH2COOH인 항체-약물 접합체.
  39. 제23항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서, A가 -OC(=O)-*이고/거나 R이 -CH3 또는 -CH2CH2COOH인 항체-약물 접합체.
  40. 제23항 내지 제39항 중 어느 한 항에 있어서, -(L-D)가 하기로부터 선택된 화합물로부터 형성된 것인 항체-약물 접합체.
    Figure pct01039

    Figure pct01040

    Figure pct01041

    Figure pct01042

    Figure pct01043

    Figure pct01044

    Figure pct01045

    Figure pct01046

    Figure pct01047

    Figure pct01048

    Figure pct01049

    Figure pct01050

    Figure pct01051

    Figure pct01052

    Figure pct01053

    Figure pct01054
  41. 제1항 내지 제40항 중 어느 한 항에 있어서, D가 하기 화학식 (I)의 화합물 또는 거울상이성질체, 부분입체이성질체 및/또는 상기 중 어느 하나의 제약상 허용되는 염을 포함하는 것인 항체-약물 접합체:
    Figure pct01055

    여기서
    ◆ R1 및 R2는 서로 독립적으로 수소; 히드록실 또는 C1-C6알콕시 기에 의해 임의로 치환된 선형 또는 분지형 C1-C6알킬; C3-C6시클로알킬; 트리플루오로메틸; 선형 또는 분지형 C1-C6알킬렌-헤테로시클로알킬로부터 선택된 기를 나타내고, 여기서 헤테로시클로알킬 기는 선형 또는 분지형 C1-C6알킬 기에 의해 임의로 치환되거나;
    또는 R1 및 R2는 이들을 보유하는 탄소 원자와 함께 C3-C6시클로알킬렌 기를 형성하고,
    ◆ R3은 수소; C3-C6시클로알킬; 선형 또는 분지형 C1-C6알킬; -X1-NRaRb; -X1-N+RaRbRc; -X1-O-Rc; -X1-COORc; -X1-PO(OH)2; -X1-SO2(OH); -X1-N3 및 로부터 선택된 기를 나타내고;
    ◆ Ra 및 Rb는 서로 독립적으로 수소; 헤테로시클로알킬; -SO2-페닐 (여기서, 페닐은 선형 또는 분지형 C1-C6알킬에 의해 치환될 수 있음); 1 또는 2개의 히드록실 기에 의해 임의로 치환된 선형 또는 분지형 C1-C6알킬; C1-C6알킬렌-SO2OH; C1-C6알킬렌-SO2O-; C1-C6알킬렌-COOH; C1-C6알킬렌-PO(OH)2; C1-C6알킬렌-NRdRe; C1-C6알킬렌-N+RdReRf; C1-C6알킬렌-페닐 (여기서, 페닐은 C1-C6알콕시 기에 의해 치환될 수 있음); 기 로부터 선택된 기를 나타내거나;
    또는 Ra 및 Rb는 이들을 보유하는 질소 원자와 함께 사이클 B1을 형성하거나;
    또는 Ra, Rb 및 Rc는 이들을 보유하는 질소 원자와 함께 가교된 C3-C8헤테로시클로알킬을 형성하고,
    ◆ Rc, Rd, Re, Rf는 서로 독립적으로 수소 또는 선형 또는 분지형 C1-C6알킬 기를 나타내거나,
    또는 Rd 및 Re는 이들을 보유하는 질소 원자와 함께 사이클 B2를 형성하거나,
    또는 Rd, Re 및 Rf는 이들을 보유하는 질소 원자와 함께 가교된 C3-C8헤테로시클로알킬을 형성하고,
    ◆ Het1은
    Figure pct01058
    로부터 선택된 기를 나타내고,
    ◆ Het2는
    Figure pct01059
    로부터 선택된 기를 나타내고,
    ◆ A1은 -NH-, -N(C1-C3알킬), O, S 또는 Se이고,
    ◆ A2는 N, CH 또는 C(R5)이고,
    ◆ G는 -C(O)ORG3, -C(O)NRG1RG2, -C(O)RG2, -NRG1C(O)RG2, -NRG1C(O)NRG1RG2, -OC(O)NRG1RG2, -NRG1C(O)ORG3, -C(=NORG1)NRG1RG2, -NRG1C(=NCN)NRG1RG2, -NRG1S(O)2NRG1RG2, -S(O)2RG3, -S(O)2NRG1RG2, -NRG1S(O)2RG2, -NRG1C(=NRG2)NRG1RG2, -C(=S)NRG1RG2, -C(=NRG1)NRG1RG2, 히드록실 기에 의해 임의로 치환된 C1-C6알킬, 할로겐, -NO2 및 -CN으로 이루어진 군으로부터 선택되고, 여기서
    - RG1 및 RG2는 각 경우에 각각 독립적으로, 수소, 1 내지 3개의 할로겐 원자에 의해 임의로 치환된 C1-C6알킬, C2-C6알케닐, C2-C6알키닐, C3-C6시클로알킬, 페닐 및 -(CH2)1-4-페닐로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    - RG3은 1 내지 3개의 할로겐 원자에 의해 임의로 치환된 C1-C6알킬, C2-C6알케닐, C2-C6알키닐, C3-C6시클로알킬, 페닐 및 -(CH2)1-4-페닐로 이루어진 군으로부터 선택되거나; 또는
    RG1 및 RG2는 각각이 부착되어 있는 원자와 함께 조합되어 C3-C8헤테로시클로알킬을 형성하거나; 또는 대안적으로, G는
    Figure pct01060
    로 이루어진 군으로부터 선택되고, 여기서 RG4는 수소, 1 내지 3개의 할로겐 원자에 의해 임의로 치환된 C1-C6알킬, C2-C6알케닐, C2-C6알키닐 및 C3-C6시클로알킬로부터 선택되고,
    ◆ R4는 수소, 플루오린, 염소 또는 브로민 원자, 메틸, 히드록실 또는 메톡시 기를 나타내고,
    ◆ R5는 1 내지 3개의 할로겐 원자에 의해 임의로 치환된 C1-C6알킬; C2-C6알케닐; C2-C6알키닐; 할로겐 또는 -CN으로부터 선택된 기를 나타내고,
    ◆ R6은
    수소;
    -C2-C6알케닐;
    -X2-O-R7;
    Figure pct01061
    ;
    -X2-NSO2-R7;
    -C=C(R9)-Y1-O-R7;
    C3-C6시클로알킬;
    히드록실 기에 의해 임의로 치환된 C3-C6헤테로시클로알킬;
    C3-C6시클로알킬렌-Y2-R7;
    C3-C6헤테로시클로알킬렌-Y2-R7 기,
    선형 또는 분지형 C1-C6알킬 기에 의해 임의로 치환된 헤테로아릴렌-R7 기
    로부터 선택된 기를 나타내고,
    ◆ R7은 선형 또는 분지형 C1-C6알킬 기; (C3-C6)시클로알킬렌-R8; 또는
    Figure pct01062
    로부터 선택된 기를 나타내고;
    여기서 Cy는 C3-C8시클로알킬을 나타내고,
    ◆ R8은 수소; 선형 또는 분지형 C1-C6알킬, -NR'aR'b; -NR'a-CO-OR'c; -NR'a-CO-R'c; -N+R'aR'bR'c; -O-R'c; -NH-X'2-N+R'aR'bR'c; -O-X'2-NR'aR'b, -X'2-NR'aR'b, -NR'c-X'2-N3 및 로부터 선택된 기를 나타내고;
    ◆ R9는 선형 또는 분지형 C1-C6알킬, 트리플루오로메틸, 히드록실, 할로겐, C1-C6알콕시로부터 선택된 기를 나타내고,
    ◆ R10은 수소, 플루오린, 염소, 브로민, -CF3 및 메틸로부터 선택된 기를 나타내고,
    ◆ R11은 수소, C1-C3알킬렌-R8, -O-C1-C3알킬렌-R8, -CO-NRhRi 및 -CH=CH-C1-C4알킬렌-NRhRi, -CH=CH-CHO, C3-C8시클로알킬렌-CH2-R8, C3-C8헤테로시클로알킬렌-CH2-R8로부터 선택된 기를 나타내고,
    ◆ R12 및 R13은 서로 독립적으로 수소 원자 또는 메틸 기를 나타내고,
    ◆ R14 및 R15는 서로 독립적으로 수소 또는 메틸 기를 나타내거나, 또는 R14 및 R15는 이들을 보유하는 탄소 원자와 함께 시클로헥실을 형성하고,
    ◆ Rh 및 Ri는 서로 독립적으로 수소 또는 선형 또는 분지형 C1-C6알킬 기를 나타내고,
    ◆ X1 및 X2는 서로 독립적으로, 트리플루오로메틸, 히드록실, 할로겐, C1-C6알콕시로부터 선택된 1 또는 2개의 기에 의해 임의로 치환된 선형 또는 분지형 C1-C6알킬렌 기를 나타내고,
    ◆ X'2는 선형 또는 분지형 C1-C6알킬렌을 나타내고,
    ◆ R'a 및 R'b는 서로 독립적으로 수소; 헤테로시클로알킬; -SO2-페닐 (여기서, 페닐은 선형 또는 분지형 C1-C6알킬에 의해 치환될 수 있음); 1 또는 2개의 히드록실 또는 C1-C6알콕시 기에 의해 임의로 치환된 선형 또는 분지형 C1-C6알킬; C1-C6알킬렌-SO2OH; C1-C6알킬렌-SO2O-; C1-C6알킬렌-COOH; C1-C6알킬렌-PO(OH)2; C1-C6알킬렌-NR'dR'e; C1-C6알킬렌-N+R'dR'eR'f; C1-C6알킬렌-O-C1-C6알킬렌-OH; C1-C6알킬렌-페닐 (여기서, 페닐은 히드록실 또는 C1-C6알콕시 기에 의해 치환될 수 있음); 기 로부터 선택된 기를 나타내거나;
    또는 R'a 및 R'b는 이들을 보유하는 질소 원자와 함께 사이클 B3을 형성하거나,
    또는 R'a, R'b 및 R'c는 이들을 보유하는 질소 원자와 함께 가교된 C3-C8헤테로시클로알킬을 형성하고,
    ◆ R'c, R'd, R'e, R'f는 서로 독립적으로 수소 또는 선형 또는 분지형 C1-C6알킬 기를 나타내거나,
    또는 R'd 및 R'e는 이들을 보유하는 질소 원자와 함께 사이클 B4를 형성하거나,
    또는 R'd, R'e 및 R'f는 이들을 보유하는 질소 원자와 함께 가교된 C3-C8헤테로시클로알킬을 형성하고,
    ◆ Y1은 선형 또는 분지형 C1-C4알킬렌을 나타내고,
    ◆ Y2는 결합, -O-, -O-CH2-, -O-CO-, -O-SO2-, -CH2-, -CH2-O, -CH2-CO-, -CH2-SO2-, -C2H5-, -CO-, -CO-O-, -CO-CH2-, -CO-NH-CH2-, -SO2-, -SO2-CH2-, -NH-CO-, -NH-SO2-를 나타내고,
    ◆ m=0, 1 또는 2이고,
    ◆ p=1, 2, 3 또는 4이고,
    ◆ B1, B2, B3 및 B4는 서로 독립적으로 C3-C8헤테로시클로알킬 기를 나타내고, 상기 기는 (i) 모노- 또는 비-시클릭 기일 수 있고, 여기서 비시클릭 기는 융합된, 가교된 또는 스피로 고리계를 포함하고, (ii) 질소 원자 이외에, 산소, 황 및 질소로부터 독립적으로 선택된 1 또는 2개의 헤테로 원자를 함유할 수 있고, (iii) 플루오린, 브로민, 염소, 선형 또는 분지형 C1-C6알킬, 히드록실, -NH2, 옥소 또는 피페리디닐로부터 선택된 1 또는 2개의 기에 의해 치환될 수 있고,
    여기서 R3 및 R8 기 중 1개는, 존재하는 경우에, 링커에 공유 부착되고, 여기서 원자의 원자가는 그에 결합된 1개 이상의 치환기에 의해 초과되지 않는다.
  42. 제41항에 있어서, R1이 선형 또는 분지형 C1-6알킬이고, R2는 H인 항체-약물 접합체.
  43. 제1항 내지 제40항 중 어느 한 항에 있어서, D가 하기 화학식 (II)의 화합물 또는 거울상이성질체, 부분입체이성질체 및/또는 상기 중 어느 하나의 제약상 허용되는 염을 포함하는 것인 항체-약물 접합체:
    Figure pct01065

    여기서
    ◆ n=0, 1 또는 2이고,
    ◆ ------는 단일 또는 이중 결합을 나타내고,
    ◆ A4 및 A5는 서로 독립적으로 탄소 또는 질소 원자를 나타내고,
    ◆ Z1은 결합, -N(R)- 또는 -O-를 나타내고, 여기서 R은 수소 또는 선형 또는 분지형 C1-C6알킬을 나타내고,
    ◆ R1은 수소; 히드록실 또는 C1-C6알콕시 기로 임의로 치환된 선형 또는 분지형 C1-C6알킬; C3-C6시클로알킬; 트리플루오로메틸; 선형 또는 분지형 C1-C6알킬렌-헤테로시클로알킬 (여기서, 헤테로시클로알킬 기는 선형 또는 분지형 C1-C6알킬 기로 임의로 치환됨)로부터 선택된 기를 나타내고;
    ◆ R2는 수소 또는 메틸을 나타내고;
    ◆ R3은 수소; 선형 또는 분지형 C1-C4알킬; -X1-NRaRb; -X1-N+RaRbRc; -X1-O-Rc; -X1-COORc; -X1-PO(OH)2; -X1-SO2(OH); -X1-N3 및 로부터 선택된 기를 나타내고;
    ◆ Ra 및 Rb는 서로 독립적으로 수소; 헤테로시클로알킬; -SO2-페닐 (여기서, 페닐은 선형 또는 분지형 C1-C6알킬에 의해 치환될 수 있음); 1 또는 2개의 히드록실 기에 의해 임의로 치환된 선형 또는 분지형 C1-C6알킬; C1-C6알킬렌-SO2OH; C1-C6알킬렌-SO2O-; C1-C6알킬렌-COOH; C1-C6알킬렌-PO(OH)2; C1-C6알킬렌-NRdRe; C1-C6알킬렌-N+RdReRf; C1-C6알킬렌-페닐 (여기서, 페닐은 C1-C6알콕시 기에 의해 치환될 수 있음); 기 로부터 선택된 기를 나타내거나;
    또는 Ra 및 Rb는 이들을 보유하는 질소 원자와 함께 사이클 B1을 형성하거나;
    또는 Ra, Rb 및 Rc는 이들을 보유하는 질소 원자와 함께 가교된 C3-C8헤테로시클로알킬을 형성하고,
    ◆ Rc, Rd, Re, Rf는 서로 독립적으로 수소 또는 선형 또는 분지형 C1-C6알킬 기를 나타내거나,
    또는 Rd 및 Re는 이들을 보유하는 질소 원자와 함께 사이클 B2를 형성하거나,
    또는 Rd, Re 및 Rf는 이들을 보유하는 질소 원자와 함께 가교된 C3-C8헤테로시클로알킬을 형성하고,
    ◆ Het1은
    Figure pct01068
    로부터 선택된 기를 나타내고,
    ◆ Het2는
    Figure pct01069
    로부터 선택된 기를 나타내고,
    ◆ A1은 -NH-, -N(C1-C3알킬), O, S 또는 Se이고,
    ◆ A2는 N, CH 또는 C(R5)이고,
    ◆ G는 -C(O)ORG3, -C(O)NRG1RG2, -C(O)RG2, -NRG1C(O)RG2, -NRG1C(O)NRG1RG2, -OC(O)NRG1RG2, -NRG1C(O)ORG3, -C(=NORG1)NRG1RG2, -NRG1C(=NCN)NRG1RG2, -NRG1S(O)2NRG1RG2, -S(O)2RG3, -S(O)2NRG1RG2, -NRG1S(O)2RG2, -NRG1C(=NRG2)NRG1RG2, -C(=S)NRG1RG2, -C(=NRG1)NRG1RG2, 히드록실 기에 의해 임의로 치환된 C1-C6알킬, 할로겐, -NO2 및 CN로 이루어진 군으로부터 선택되고, 여기서
    - RG1 및 RG2는 각 경우에 각각 독립적으로, 수소, 1 내지 3개의 할로겐 원자에 의해 임의로 치환된 C1-C6알킬, C2-C6알케닐, C2-C6알키닐, C3-C6시클로알킬, 페닐 및 -(CH2)1-4-페닐로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    - RG3은 1 내지 3개의 할로겐 원자에 의해 임의로 치환된 C1-C6알킬, C2-C6알케닐, C2-C6알키닐, C3-C6시클로알킬, 페닐 및 -(CH2)1-4-페닐로 이루어진 군으로부터 선택되거나; 또는
    RG1 및 RG2는 각각이 부착되어 있는 원자와 함께 조합되어 C3-C8헤테로시클로알킬을 형성하거나; 또는 대안적으로, G는
    Figure pct01070
    로 이루어진 군으로부터 선택되고
    여기서 RG4는 수소, 1 내지 3개의 할로겐 원자에 의해 임의로 치환된 C1-C6알킬, C2-C6알케닐, C2-C6알키닐 및 C3-C6시클로알킬로부터 선택되고,
    ◆ R4는 수소, 플루오린, 염소 또는 브로민 원자, 메틸, 히드록실 또는 메톡시 기를 나타내고,
    ◆ R5는 1 내지 3개의 할로겐 원자에 의해 임의로 치환된 C1-C6알킬; C2-C6알케닐; C2-C6알키닐; 할로겐 또는 -CN으로부터 선택된 기를 나타내고,
    ◆ R6은
    수소;
    -C2-C6알케닐;
    -X2-O-R7;
    Figure pct01071
    ;
    -X2-NSO2-R7;
    -C=C(R9)-Y1-O-R7;
    C3-C6시클로알킬;
    히드록실 기에 의해 임의로 치환된 C3-C6헤테로시클로알킬;
    C3-C6시클로알킬렌-Y2-R7;
    C3-C6헤테로시클로알킬렌-Y2-R7 기,
    선형 또는 분지형 C1-C6알킬 기에 의해 임의로 치환된 헤테로아릴렌-R7 기
    로부터 선택된 기를 나타내고,
    ◆ R7은 선형 또는 분지형 C1-C6알킬 기; (C3-C6)시클로알킬렌-R8; 또는
    Figure pct01072
    로부터 선택된 기를 나타내고;
    여기서 Cy는 C3-C8시클로알킬을 나타내고,
    ◆ R8은 수소; 선형 또는 분지형 C1-C6알킬, -NR'aR'b; -NR'a-CO-OR'c; -NR'a-CO-R'c; -N+R'aR'bR'c; -O-R'c; -NH-X'2-N+R'aR'bR'c; -O-X'2-NR'aR'b, -X'2-NR'aR'b, -NR'c-X'2-N3 및 로부터 선택된 기를 나타내고;
    ◆ R9는 선형 또는 분지형 C1-C6알킬, 트리플루오로메틸, 히드록실, 할로겐, C1-C6알콕시로부터 선택된 기를 나타내고,
    ◆ R10은 수소, 플루오린, 염소, 브로민, -CF3 및 메틸로부터 선택된 기를 나타내고,
    ◆ R11은 수소, 할로겐, C1-C3알킬렌-R8, -O-C1-C3알킬렌-R8, -CO-NRhRi 및 -CH=CH-C1-C4알킬렌-NRhRi, -CH=CH-CHO, C3-C8시클로알킬렌-CH2-R8, C3-C8헤테로시클로알킬렌-CH2-R8로부터 선택된 기를 나타내고,
    ◆ R12 및 R13은 서로 독립적으로 수소 원자 또는 메틸 기를 나타내고,
    ◆ R14 및 R15는 서로 독립적으로 수소 또는 메틸 기를 나타내거나, 또는 R14 및 R15는 이들을 보유하는 탄소 원자와 함께 시클로헥실을 형성하고,
    ◆ Rh 및 Ri는 서로 독립적으로 수소 또는 선형 또는 분지형 C1-C6알킬 기를 나타내고,
    ◆ X1은 트리플루오로메틸, 히드록실, 할로겐, C1-C6알콕시로부터 선택된 1 또는 2개의 기에 의해 임의로 치환된 선형 또는 분지형 C1-C4알킬렌 기를 나타내고,
    ◆ X2는 트리플루오로메틸, 히드록실, 할로겐, C1-C6알콕시로부터 선택된 1 또는 2개의 기에 의해 임의로 치환된 선형 또는 분지형 C1-C6알킬렌 기를 나타내고,
    ◆ X'2는 선형 또는 분지형 C1-C6알킬렌을 나타내고,
    ◆ R'a 및 R'b는 서로 독립적으로 수소; 헤테로시클로알킬; -SO2-페닐 (여기서, 페닐은 선형 또는 분지형 C1-C6알킬에 의해 치환될 수 있음); 1 또는 2개의 히드록실 또는 C1-C6알콕시 기에 의해 임의로 치환된 선형 또는 분지형 C1-C6알킬; C1-C6알킬렌-SO2OH; C1-C6알킬렌-SO2O-; C1-C6알킬렌-COOH; C1-C6알킬렌-PO(OH)2; C1-C6알킬렌-NR'dR'e; C1-C6알킬렌-N+R'dR'eR'f; C1-C6알킬렌-O-C1-C6알킬렌-OH; C1-C6알킬렌-페닐 (여기서, 페닐은 히드록실 또는 C1-C6알콕시 기에 의해 치환될 수 있음); 기 로부터 선택된 기를 나타내거나;
    또는 R'a 및 R'b는 이들을 보유하는 질소 원자와 함께 사이클 B3을 형성하거나,
    또는 R'a, R'b 및 R'c는 이들을 보유하는 질소 원자와 함께 가교된 C3-C8헤테로시클로알킬을 형성하고,
    ◆ R'c, R'd, R'e, R'f는 서로 독립적으로 수소 또는 선형 또는 분지형 C1-C6알킬 기를 나타내거나,
    또는 R'd 및 R'e는 이들을 보유하는 질소 원자와 함께 사이클 B4를 형성하거나,
    또는 R'd, R'e 및 R'f는 이들을 보유하는 질소 원자와 함께 가교된 C3-C8헤테로시클로알킬을 형성하고,
    ◆ Y1은 선형 또는 분지형 C1-C4알킬렌을 나타내고,
    ◆ Y2는 결합, -O-, -O-CH2-, -O-CO-, -O-SO2-, -CH2-, -CH2-O, -CH2-CO-, -CH2-SO2-, -C2H5-, -CO-, -CO-O-, -CO-CH2-, -CO-NH-CH2-, -SO2-, -SO2-CH2-, -NH-CO-, -NH-SO2-를 나타내고,
    ◆ m=0, 1 또는 2이고,
    ◆ p=1, 2, 3 또는 4이고,
    ◆ B1, B2, B3 및 B4는 서로 독립적으로 C3-C8헤테로시클로알킬 기를 나타내고, 상기 기는 (i) 모노- 또는 비-시클릭 기일 수 있고, 여기서 비시클릭 기는 융합된, 가교된 또는 스피로 고리계를 포함하고, (ii) 질소 원자 이외에, 산소, 황 및 질소로부터 독립적으로 선택된 1 또는 2개의 헤테로 원자를 함유할 수 있고, (iii) 플루오린, 브로민, 염소, 선형 또는 분지형 C1-C6알킬, 히드록실, -NH2, 옥소 또는 피페리디닐로부터 선택된 1 또는 2개의 기에 의해 치환될 수 있고,
    여기서 R3 및 R8 기 중 1개는, 존재하는 경우에, 링커에 공유 부착되고, 여기서 원자의 원자가는 그에 결합된 1개 이상의 치환기에 의해 초과되지 않는다.
  44. 제43항에 있어서, A1 및 A5가 둘 다 질소 원자를 나타내고, R1가 선형 또는 분지형 C1-6알킬이고; R2가 H이고; n이 1이고; ------는 단일 결합을 나타내는 것인 항체-약물 접합체.
  45. 제1항 내지 제44항 중 어느 한 항에 있어서, G가 -C(O)ORG3, -C(O)NRG1RG2, -C(O)RG2, -NRG1C(O)RG2, -NRG1C(O)NRG1RG2, -OC(O)NRG1RG2, -NRG1C(O)ORG3, -C(=NORG1)NRG1RG2, -NRG1C(=NCN)NRG1RG2, -NRG1S(O)2NRG1RG2, -S(O)2RG3, -S(O)2NRG1RG2, -NRG1S(O)2RG2, -NRG1C(=NRG2)NRG1RG2, -C(=S)NRG1RG2, -C(=NRG1)NRG1RG2, 할로겐, -NO2, 및 -CN으로 이루어진 군으로부터 선택되고, 여기서
    - RG1 및 RG2는 각 경우에 각각 독립적으로, 수소, 1 내지 3개의 할로겐 원자에 의해 임의로 치환된 C1-C6알킬, C2-C6알케닐, C2-C6알키닐, C3-C6시클로알킬, 페닐 및 -(CH2)1-4-페닐로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    - RG3은 1 내지 3개의 할로겐 원자에 의해 임의로 치환된 C1-C6알킬, C2-C6알케닐, C2-C6알키닐, C3-C6시클로알킬, 페닐 및 -(CH2)1-4-페닐로 이루어진 군으로부터 선택되거나; 또는
    RG1 및 RG2는 각각이 부착되어 있는 원자와 함께 조합되어 C3-C8헤테로시클로알킬을 형성하거나; 또는 대안적으로, G는
    Figure pct01075
    로 이루어진 군으로부터 선택되고
    여기서 RG4는 1 내지 3개의 할로겐 원자에 의해 임의로 치환된 C1-C6알킬, C2-C6알케닐, C2-C6알키닐 및 C3-C6시클로알킬로부터 선택되는 것인
    항체-약물 접합체.
  46. 제1항 내지 제40항 중 어느 한 항에 있어서, D가 하기 화학식 (IA) 또는 (IIA)의 화합물 또는 거울상이성질체, 부분입체이성질체 및/또는 상기 중 어느 하나의 제약상 허용되는 염을 포함하는 것인 항체-약물 접합체:
    Figure pct01076

    여기서
    ◆ Z1은 결합 또는 -O-를 나타내고,
    ◆ R3은 수소; C3-C6시클로알킬; 선형 또는 분지형 C1-C6알킬; -X1-NRaRb; -X1-N+RaRbRc; 및 -X1-O-Rc로부터 선택된 기를 나타내고,
    ◆ Ra 및 Rb는 서로 독립적으로 수소; 1 또는 2개의 히드록실 기에 의해 임의로 치환된 선형 또는 분지형 C1-C6알킬; 및 C1-C6알킬렌-SO2O-로부터 선택된 기를 나타내고,
    ◆ Rc는 수소 또는 선형 또는 분지형 C1-C6알킬 기를 나타내고,
    ◆ Het2는
    Figure pct01077
    로부터 선택된 기를 나타내고,
    ◆ A1은 -NH-, -N(C1-C3알킬), O, S 또는 Se이고,
    ◆ A2는 N, CH 또는 C(R5)이고,
    ◆ G는
    -C(O)OH, -C(O)ORG3, -C(O)NRG1RG2, -C(O)RG2, -NRG1C(O)RG2, -NRG1C(O)NRG1RG2, -OC(O)NRG1RG2, -NRG1C(O)ORG3, -C(=NORG1)NRG1RG2, -NRG1C(=NCN)NRG1RG2, -NRG1S(O)2NRG1RG2, -S(O)2RG3, -S(O)2NRG1RG2, -NRG1S(O)2RG2, -NRG1C(=NRG2)NRG1RG2, -C(=S)NRG1RG2, -C(=NRG1)NRG1RG2, 히드록실 기에 의해 임의로 치환된 C1-C6알킬, 할로겐, -NO2 및 -CN으로 이루어진 군으로부터 선택되고, 여기서
    - RG1 및 RG2는 각 경우에 각각 독립적으로, 수소, 및 1 내지 3개의 할로겐 원자에 의해 임의로 치환된 C1-C6알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    - RG3은 1 내지 3개의 할로겐 원자에 의해 임의로 치환된 C1-C6알킬이거나; 또는
    RG1 및 RG2는 각각이 부착되어 있는 원자와 함께 조합되어 C3-C8헤테로시클로알킬을 형성하고;
    ◆ R4는 수소, 플루오린, 염소 또는 브로민 원자, 메틸, 히드록실 또는 메톡시 기를 나타내고,
    ◆ R5는 1 내지 3개의 할로겐 원자에 의해 임의로 치환된 C1-C6알킬; 할로겐 또는 -CN으로부터 선택된 기를 나타내고,
    ◆ R6은
    -X2-O-R7; 및
    선형 또는 분지형 C1-C6알킬 기에 의해 임의로 치환된 헤테로아릴렌-R7 기
    로부터 선택된 기를 나타내고,
    ◆ R7은 선형 또는 분지형 C1-C6알킬 기; (C3-C6)시클로알킬렌-R8; 또는
    Figure pct01078
    로부터 선택된 기를 나타내고
    여기서 Cy는 C3-C8시클로알킬을 나타내고,
    ◆ R8은 수소; 선형 또는 분지형 C1-C6알킬, -NR'aR'b; -NR'a-CO-OR'c; -NR'a-CO-R'c; -N+R'aR'bR'c; -O-R'c; -NH-X'2-N+R'aR'bR'c; -O-X'2-NR'aR'b; -X'2-NR'aR'b: -NR'c-X'2-N3 및 로부터 선택된 기를 나타내고;
    ◆ R10은 수소, 플루오린, 염소, 브로민, -CF3 및 메틸로부터 선택된 기를 나타내고,
    ◆ R11은 수소, C1-C3알킬렌-R8, -O-C1-C3알킬렌-R8, -CO-NRhRi 및 -CH=CH-C1-C4알킬렌-NRhRi, -CH=CH-CHO, C3-C8시클로알킬렌-CH2-R8, C3-C8헤테로시클로알킬렌-CH2-R8로부터 선택된 기를 나타내고,
    ◆ R12 및 R13은 서로 독립적으로 수소 원자 또는 메틸 기를 나타내고,
    ◆ R14 및 R15는 서로 독립적으로 수소 또는 메틸 기를 나타내거나, 또는 R14 및 R15는 이들을 보유하는 탄소 원자와 함께 시클로헥실을 형성하고,
    ◆ Rh 및 Ri는 서로 독립적으로 수소 또는 선형 또는 분지형 C1-C6알킬 기를 나타내고,
    ◆ X1 및 X2는 서로 독립적으로, 트리플루오로메틸, 히드록실, 할로겐, C1-C6알콕시로부터 선택된 1 또는 2개의 기에 의해 임의로 치환된 선형 또는 분지형 C1-C6알킬렌 기를 나타내고,
    ◆ X'2는 선형 또는 분지형 C1-C6알킬렌을 나타내고,
    ◆ R'a 및 R'b는 서로 독립적으로 수소; 헤테로시클로알킬; -SO2-페닐 (여기서, 페닐은 선형 또는 분지형 C1-C6알킬에 의해 치환될 수 있음); 1 또는 2개의 히드록실 또는 C1-C6알콕시 기에 의해 임의로 치환된 선형 또는 분지형 C1-C6알킬; C1-C6알킬렌-SO2OH; C1-C6알킬렌-SO2O-; C1-C6알킬렌-COOH; C1-C6알킬렌-PO(OH)2; C1-C6알킬렌-NR'dR'e; C1-C6알킬렌-N+R'dR'eR'f; C1-C6알킬렌-O-C1-C6알킬렌-OH; C1-C6알킬렌-페닐 (여기서, 페닐은 히드록실 또는 C1-C6알콕시 기에 의해 치환될 수 있음); 기 로부터 선택된 기를 나타내거나;
    또는 R'a 및 R'b는 이들을 보유하는 질소 원자와 함께 사이클 B3을 형성하거나,
    또는 R'a, R'b 및 R'c는 이들을 보유하는 질소 원자와 함께 가교된 C3-C8헤테로시클로알킬을 형성하고,
    ◆ R'c, R'd, R'e, R'f는 서로 독립적으로 수소 또는 선형 또는 분지형 C1-C6알킬 기를 나타내거나,
    또는 R'd 및 R'e는 이들을 보유하는 질소 원자와 함께 사이클 B4를 형성하거나,
    또는 R'd, R'e 및 R'f는 이들을 보유하는 질소 원자와 함께 가교된 C3-C8헤테로시클로알킬을 형성하고,
    ◆ m=0, 1 또는 2이고,
    ◆ p=1, 2, 3 또는 4이고,
    ◆ B3 및 B4는 서로 독립적으로 C3-C8헤테로시클로알킬 기를 나타내고, 상기 기는 (i) 모노- 또는 비-시클릭 기일 수 있고, 여기서 비시클릭 기는 융합된, 가교된 또는 스피로 고리계를 포함하고, (ii) 질소 원자 이외에, 산소, 황 및 질소로부터 독립적으로 선택된 1 또는 2개의 헤테로 원자를 함유할 수 있고, (iii) 플루오린, 브로민, 염소, 선형 또는 분지형 C1-C6알킬, 히드록실, -NH2, 옥소 또는 피페리디닐로부터 선택된 1 또는 2개의 기에 의해 치환될 수 있다.
  47. 제46항에 있어서, G가 -C(O)OH, -C(O)ORG3, -C(O)NRG1RG2, -C(O)RG2, -NRG1C(O)RG2, -NRG1C(O)NRG1RG2, -OC(O)NRG1RG2, -NRG1C(O)ORG3, -C(=NORG1)NRG1RG2, -NRG1C(=NCN)NRG1RG2, -NRG1S(O)2NRG1RG2, -S(O)2RG3, -S(O)2NRG1RG2, -NRG1S(O)2RG2, -NRG1C(=NRG2)NRG1RG2, -C(=S)NRG1RG2, -C(=NRG1)NRG1RG2, 할로겐, -NO2, 및 -CN으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 항체-약물 접합체.
  48. 제1항 내지 제47항 중 어느 한 항에 있어서,
    R7은 선형 또는 분지형 C1-C6알킬 기; (C3-C6)시클로알킬렌-R8; 또는
    Figure pct01081
    로부터 선택된 기를 나타내고
    여기서 Cy는 C3-C8시클로알킬을 나타내는 것인
    항체-약물 접합체.
  49. 제1항 내지 제47항 중 어느 한 항에 있어서,
    R7이
    Figure pct01082
    로부터 선택된 기를 나타내는 것인 항체-약물 접합체.
  50. 제1항 내지 제40항 중 어느 한 항에 있어서, D가 하기 화학식 (IB), (IC), (IIB) 또는 (IIC)의 화합물 또는 거울상이성질체, 부분입체이성질체 및/또는 상기 중 어느 하나의 제약상 허용되는 염을 포함하는 것인 항체-약물 접합체:
    Figure pct01083

    Figure pct01084

    여기서
    ◆ 화학식 (IB) 또는 (IC)에서, R3은 수소; 선형 또는 분지형 C1-C6알킬; -X1-NRaRb; -X1-N+RaRbRc; 및 -X1-O-Rc로부터 선택된 기를 나타내고;
    화학식 (IIB) 또는 (IIC)에서, Z1은 결합을 나타내고, R3은 수소를 나타내거나; 또는 Z1은 -O-를 나타내고, R3은 -X1-NRaRb를 나타내고,
    ◆ Ra 및 Rb는 서로 독립적으로 수소; 1 또는 2개의 히드록실 기에 의해 임의로 치환된 선형 또는 분지형 C1-C6알킬; 및 C1-C6알킬렌-SO2O-로부터 선택된 기를 나타내고,
    ◆ Rc는 수소 또는 선형 또는 분지형 C1-C6알킬 기를 나타내고,
    ◆ R6은 -X2-O-R7, 또는 선형 또는 분지형 C1-C6알킬 기에 의해 임의로 치환된 헤테로아릴렌-R7 기를 나타내고,
    ◆ R7은
    Figure pct01085
    로부터 선택된 기를 나타내고,
    ◆ R8은 -NR'aR'b; -O-X'2-NR'aR'b; 및 -X'2-NR'aR'b로부터 선택된 기를 나타내고,
    ◆ R10은 플루오린을 나타내고,
    ◆ R12 및 R13은 서로 독립적으로 수소 원자 또는 메틸 기를 나타내고,
    ◆ R14 및 R15는 서로 독립적으로 수소 또는 메틸 기를 나타내고,
    ◆ X1 및 X2는 서로 독립적으로, 트리플루오로메틸, 히드록실, 할로겐, C1-C6알콕시로부터 선택된 1 또는 2개의 기에 의해 임의로 치환된 선형 또는 분지형 C1-C6알킬렌 기를 나타내고,
    ◆ X'2는 선형 또는 분지형 C1-C6알킬렌을 나타내고,
    ◆ R'a 및 R'b는 서로 독립적으로 수소; 1 또는 2개의 히드록실 또는 C1-C6알콕시 기에 의해 임의로 치환된 선형 또는 분지형 C1-C6알킬; C1-C6알킬렌-NR'dR'e로부터 선택된 기를 나타내거나;
    또는 R'a 및 R'b는 이들을 보유하는 질소 원자와 함께 사이클 B3을 형성하고,
    ◆ R'd, R'e는 서로 독립적으로 수소 또는 선형 또는 분지형 C1-C6알킬 기를 나타내고,
    ◆ B3은 C3-C8헤테로시클로알킬 기를 나타내고, 상기 기는 (i) 모노- 또는 비-시클릭 기일 수 있고, 여기서 비시클릭 기는 융합된, 가교된 또는 스피로 고리계를 포함하고, (ii) 질소 원자 이외에, 산소 및 질소로부터 독립적으로 선택된 1 또는 2개의 헤테로 원자를 함유할 수 있고, (iii) 플루오린, 브로민, 염소, 선형 또는 분지형 C1-C6알킬, 히드록실, 및 옥소로부터 선택된 1 또는 2개의 기에 의해 치환될 수 있다.
  51. 제1항 내지 제50항 중 어느 한 항에 있어서, R7이 하기 기를 나타내는 것인 항체-약물 접합체.
    Figure pct01086
  52. 제1항 내지 제50항 중 어느 한 항에 있어서, R7이
    Figure pct01087
    로부터 선택된 기를 나타내는 것인 항체-약물 접합체.
  53. 제41항 내지 제52항 중 어느 한 항에 있어서, R8이 하기로부터 선택된 기를 나타내는 것인 항체-약물 접합체.
    Figure pct01088

    여기서
    Figure pct01089
    은 링커에 대한 결합을 나타낸다.
  54. 제41항 내지 제53항 중 어느 한 항에 있어서, B3이 피롤리디닐 기, 피페리디닐 기, 피페라지닐 기, 모르폴리닐 기, 아제파닐 기 및 4,4-디플루오로피페리딘-1-일 기로부터 선택된 C3-C8헤테로시클로알킬 기를 나타내는 것인 항체-약물 접합체.
  55. 제1항 내지 제40항 중 어느 한 항에 있어서, D가 L에 부착된 하기 중 어느 하나 또는 거울상이성질체, 부분입체이성질체 및/또는 상기 중 어느 하나의 제약상 허용되는 염을 나타내는 것인 항체-약물 접합체.
    Figure pct01090

    Figure pct01091

    Figure pct01092

    Figure pct01093

    Figure pct01094

    Figure pct01095

    Figure pct01096

    Figure pct01097

    Figure pct01098

    Figure pct01099

    Figure pct01100

    Figure pct01101
  56. 제1항 내지 제40항 중 어느 한 항에 있어서, D가 표 A2로부터 선택된 화학식으로 나타내어진 기를 포함하는 것인 항체-약물 접합체.
  57. 제1항 내지 제40항 중 어느 한 항에 있어서, -(L-D)가 표 B의 화합물 또는 거울상이성질체, 부분입체이성질체 및/또는 상기 중 임의의 것의 제약상 허용되는 염으로부터 형성되는 것인 항체-약물 접합체.
  58. 제1항 내지 제57항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 항원-결합 단편이 암 세포 상의 표적 항원에 결합하는 것인 항체-약물 접합체.
  59. 제58항에 있어서,
    (i) 표적 항원은 BCMA, CD33, HER2, CD38, CD48, CD79b, PCAD, CD74, CD138, SLAMF7, CD123, CLL1, FLT3, CD7, CKIT, CD56, SEZ6, DLL3, DLK1, B7-H3, EGFR, CD71, EPCAM, FOLR1, ENPP3, MET, AXL, SLC34A2, 넥틴4, TROP2, LIV1, CD46, MSLN, F3, MUC16, SLC39A6, TFRC, TACSTD2, 및 GPNMB로부터 선택되거나;
    (ii) 표적 항원은 EGFR, CD7, HER2, EPCAM, FOLR1, ENPP3, MET, AXL, SLC34A2, 넥틴4, MSLN, F3, MUC16, SLC39A6, TFRC, TACSTD2, 및 GPNMB로부터 선택되거나; 또는
    (iii) 표적 항원은 EGFR, CD7, 또는 HER2인
    항체-약물 접합체.
  60. 제1항 내지 제59항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 항원-결합 단편이 항-EGFR 항체 또는 항원-결합 단편인 항체-약물 접합체.
  61. 제60항에 있어서, 항-EGFR 항체 또는 항원-결합 단편이
    (a) 서열식별번호: 92의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 93의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
    (b) 서열식별번호: 124의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 125의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역
    을 포함하는 것인 항체-약물 접합체.
  62. 제1항 내지 제59항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 항원-결합 단편이 항-CD7 항체 또는 항원-결합 단편인 항체-약물 접합체.
  63. 제62항에 있어서, 항-CD7 항체가
    서열식별번호: 143의 중쇄 아미노산 서열 및 서열식별번호: 144의 경쇄 아미노산 서열
    을 포함하는 것인 항체-약물 접합체.
  64. 제1항 내지 제59항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 항원-결합 단편이 항-HER2 항체 또는 항원-결합 단편인 항체-약물 접합체.
  65. 제64항에 있어서,
    (a) 항체 또는 항원-결합 단편은 서열식별번호: 39 (HCDR1), 서열식별번호: 40 (HCDR2) 및 서열식별번호: 41 (HCDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 3개의 중쇄 상보성 결정 영역 (HCDR); 및 서열식별번호: 42 (LCDR1), 서열식별번호: 43 (LCDR2) 및 서열식별번호: 44 (LCDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 3개의 경쇄 상보성 결정 영역 (LCDR)을 포함하고/거나;
    (b) 항체 또는 항원-결합 단편은 서열식별번호: 9의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 10의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 것인
    항체-약물 접합체.
  66. 제64항 또는 제65항에 있어서,
    (a) 항체 또는 항원-결합 단편은 IgG1 중쇄 불변 도메인 또는 변형된 IgG1 중쇄 불변 도메인을 포함하고, 임의로 IgG1 중쇄 불변 도메인은 위치 297에서 글루타민 (Q)을 포함하거나 또는 IgG1 중쇄 불변 도메인은 위치 297에서 세린 (S)을 포함하고/거나;
    (b) 항체 또는 항원-결합 단편은 Ig 카파 경쇄 불변 도메인을 포함하는 것인
    항체-약물 접합체.
  67. 제1항 내지 제66항 중 어느 한 항의 항체-약물 접합체의 다중 카피를 포함하는 조성물이며, 여기서 조성물 중 항체-약물 접합체의 평균 p는 약 2 내지 약 16, 예를 들어 약 2 내지 약 8, 예를 들어 약 2 내지 약 4인 조성물.
  68. 제1항 내지 제64항 중 어느 한 항의 항체-약물 접합체 또는 제67항의 조성물, 및 제약상 허용되는 담체를 포함하는 제약 조성물.
  69. 암을 갖거나 갖는 것으로 의심되는 대상체에게 치료 유효량의 제1항 내지 제66항 중 어느 한 항의 항체-약물 접합체, 제67항의 조성물, 또는 제68항의 제약 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 암을 갖거나 갖는 것으로 의심되는 대상체를 치료하는 방법.
  70. 제69항에 있어서, 암이 표적 항원을 발현하는 것인 방법.
  71. 제69항 또는 제70항에 있어서, 암이 종양 또는 혈액암이고, 임의로 암이 유방암, 다발성 골수종, 형질 세포 골수종, 백혈병, 림프종, 육종, 위암, 급성 골수성 백혈병, 방광암, 뇌암, 골수암, 자궁경부암, 만성 림프구성 백혈병, 결장직장암, 식도암, 간세포성암, 급성 림프모구성 백혈병을 포함한 림프모구성 백혈병, 여포성 림프종, T-세포 또는 B-세포 기원의 림프성 악성종양, 흑색종, 골수 백혈병, 골수종, 구강암, 난소암, 비소세포 폐암, 전립선암, 소세포 폐암, 비장암 또는 두경부암인 방법.
  72. 대상체에게 치료 유효량의 제1항 내지 제66항 중 어느 한 항의 항체-약물 접합체, 제65항의 조성물, 또는 제66항의 제약 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 종양의 성장을 감소시키거나 억제하는 방법.
  73. 제72항에 있어서, 종양이 표적 항원을 발현하는 것인 방법.
  74. 제72항 또는 제73항에 있어서, 종양이 유방암, 위암, 방광암, 뇌암, 자궁경부암, 결장직장암, 식도암, 간세포성암, 흑색종, 구강암, 난소암, 비소세포 폐암, 전립선암, 소세포 폐암 또는 비장암인 방법.
  75. 대상체에게 치료 유효량의 제1항 내지 제66항 중 어느 한 항의 항체-약물 접합체, 제67항의 조성물, 또는 제68항의 제약 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 혈액암을 감소시키거나 억제하는 방법.
  76. 제75항에 있어서, 혈액암이 표적 항원을 발현하는 것인 방법.
  77. 제75항 또는 제76항에 있어서, 혈액암이 만성 림프구성 백혈병 (CLL), 여포성 림프종, 외투 세포 림프종, 미만성 대 B-세포 림프종, 급성 림프모구성 백혈병 (ALL), 급성 골수성 백혈병 (AML), 만성 림프구성 백혈병 (CLL), 만성 골수 백혈병 (CML), 만성 골수단핵구성 백혈병 (CMML), 급성 단핵구성 백혈병 (AMoL), 호지킨 림프종, 비-호지킨 림프종 또는 골수이형성증 증후군 (MDS)인 방법.
  78. 제72항 내지 제77항 중 어느 한 항에 있어서, 항체-약물 접합체, 조성물, 또는 제약 조성물의 투여는 종양의 성장 또는 혈액암을 적어도 약 10%, 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95% 또는 적어도 약 99%만큼 감소시키거나 또는 억제하는 것인 방법.
  79. 대상체에게 치료 유효량의 제1항 내지 제66항 중 어느 한 항의 항체-약물 접합체, 제67항의 조성물, 또는 제68항의 제약 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 암 세포 집단의 확장을 감소시키거나 둔화시키는 방법.
  80. 제79항에 있어서, 암 세포 집단이 표적 항원을 발현하는 것인 방법.
  81. 제79항 또는 제80항에 있어서, 암 세포 집단이 종양 또는 혈액암으로부터의 것이고, 임의로 여기서 암 세포 집단은 유방암, 다발성 골수종, 형질 세포 골수종, 백혈병, 림프종, 육종, 위암, 급성 골수성 백혈병, 방광암, 뇌암, 골수암, 자궁경부암, 만성 림프구성 백혈병, 결장직장암, 식도암, 간세포성암, 급성 림프모구성 백혈병을 포함한 림프모구성 백혈병, 여포성 림프종, T-세포 또는 B-세포 기원의 림프성 악성종양, 흑색종, 골수 백혈병, 골수종, 구강암, 난소암, 비소세포 폐암, 전립선암, 소세포 폐암, 비장암 또는 두경부암으로부터의 것인 방법.
  82. 제79항 내지 제81항 중 어느 한 항에 있어서, 항체-약물 접합체, 조성물 또는 제약 조성물의 투여는 적어도 약 10%, 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 또는 적어도 약 99%만큼 암 세포 집단을 감소시키거나 또는 암 세포 집단의 확장을 둔화시키는 것인 방법.
  83. 제69항 내지 제82항 중 어느 한 항에 있어서, 항체-약물 접합체가 단독요법으로서 투여되는 것인 방법.
  84. 제69항 내지 제82항 중 어느 한 항에 있어서, 항체-약물 접합체가 또 다른 치료제 또는 방사선 요법에 보조적으로 투여되는 것인 방법.
  85. 제84항에 있어서, 항체-약물 접합체가 종양 세포를 1종 이상의 추가의 치료제 및/또는 방사선 요법에 대해 감작화시키는 데 효과적인 양으로 투여되는 것인 방법.
  86. 제69항 내지 제82항 중 어느 한 항에 있어서, 이를 필요로 하는 대상체에게 적어도 1종의 추가의 치료제를 투여하는 것을 추가로 포함하는 방법.
  87. 제86항에 있어서, 1종의 추가의 치료제가 Bcl-2 억제제, 탁산, 빈카 알칼로이드, MEK 억제제, ERK 억제제, 토포이소머라제 억제제 또는 RAF 억제제인 방법.
  88. 제86항에 있어서, 1종의 추가의 치료제가 베네토클락스, 화합물 A2, 빈크리스틴, 토포테칸, 도세탁셀, 파클리탁셀, LTT463, 트라메티닙 및 LXH254로부터 선택되는 것인 방법.
  89. Bcl-xL을 발현하는 세포를, 항체 약물 접합체가 세포에 결합하는 조건 하에 세포에 결합할 수 있는 제1항 내지 제66항 중 어느 한 항의 항체-약물 접합체와 접촉시키는 것을 포함하는, Bcl-xL을 발현하는 세포에서 Bcl-xL 활성을 억제하는 방법.
  90. 암을 갖거나 갖는 것으로 의심되는 대상체로부터의 생물학적 샘플을 제공하는 단계; 샘플을 항체-약물 접합체와 접촉시키는 단계; 샘플에서 암 세포에 대한 항체-약물 접합체의 결합을 검출하는 단계를 포함하는, 암을 갖거나 갖는 것으로 의심되는 대상체가 제1항 내지 제66항 중 어느 한 항의 항체-약물 접합체, 제67항의 조성물 또는 제68항의 제약 조성물로의 치료에 반응성일지 여부를 결정하는 방법.
  91. 제90항에 있어서, 샘플 내의 암 세포가 표적 항원을 발현하는 것인 방법.
  92. 제90항 또는 제91항에 있어서, 암이 표적 항원을 발현하는 것인 방법.
  93. 제90항 내지 제92항 중 어느 한 항에 있어서, 암이 종양 또는 혈액암이고, 임의로 암이 유방암, 다발성 골수종, 형질 세포 골수종, 백혈병, 림프종, 육종, 위암, 급성 골수성 백혈병, 방광암, 뇌암, 골수암, 자궁경부암, 만성 림프구성 백혈병, 결장직장암, 식도암, 간세포성암, 급성 림프모구성 백혈병을 포함한 림프모구성 백혈병, 여포성 림프종, T-세포 또는 B-세포 기원의 림프성 악성종양, 흑색종, 골수 백혈병, 골수종, 구강암, 난소암, 비소세포 폐암, 전립선암, 소세포 폐암, 비장암 또는 두경부암인 방법.
  94. 제90항 또는 제91항에 있어서, 샘플이 조직 생검 샘플, 혈액 샘플 또는 골수 샘플인 방법.
  95. 제70항 내지 제94항 중 어느 한 항에 있어서,
    (i) 표적 항원은 BCMA, CD33, HER2, CD38, CD48, CD79b, PCAD, CD74, CD138, SLAMF7, CD123, CLL1, FLT3, CD7, CKIT, CD56, SEZ6, DLL3, DLK1, B7-H3, EGFR, CD71, EPCAM, FOLR1, ENPP3, MET, AXL, SLC34A2, 넥틴4, TROP2, LIV1, CD46, MSLN, F3, MUC16, SLC39A6, TFRC, TACSTD2, 및 GPNMB로부터 선택되거나;
    (ii) 표적 항원은 EGFR, CD7, HER2, EPCAM, FOLR1, ENPP3, MET, AXL, SLC34A2, 넥틴4, MSLN, F3, MUC16, SLC39A6, TFRC, TACSTD2, 및 GPNMB로부터 선택되거나; 또는
    (iii) 표적 항원은 EGFR, CD7, 및 HER2로부터 선택되는 것인
    방법.
  96. 항체 또는 항원-결합 단편을 Bcl-xL 억제제에 연결된 절단가능한 링커와 접합을 허용하는 조건 하에 반응시키는 것을 포함하는, 제1항 내지 제67항 중 어느 한 항의 항체-약물 접합체를 생산하는 방법.
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