PL222683B1 - Rekombinowane wirusy stowarzyszone z adenowirusem (AAV), sposoby ich wytwarzania, pakująca komórka gospodarza, kompozycja zawierająca wirus, zastosowanie wirusa, wyizolowane wirusy AAV, białka,sztuczne białka kapsydu, cząsteczki, komórki gospodarza, sposoby dostarczania transgenu, sposób identyfikacji serotypu, zestaw diagnostyczny, sposób izolacji nowych wirusów, rekombinowana komórka - Google Patents

Rekombinowane wirusy stowarzyszone z adenowirusem (AAV), sposoby ich wytwarzania, pakująca komórka gospodarza, kompozycja zawierająca wirus, zastosowanie wirusa, wyizolowane wirusy AAV, białka,sztuczne białka kapsydu, cząsteczki, komórki gospodarza, sposoby dostarczania transgenu, sposób identyfikacji serotypu, zestaw diagnostyczny, sposób izolacji nowych wirusów, rekombinowana komórka

Info

Publication number
PL222683B1
PL222683B1 PL409838A PL40983802A PL222683B1 PL 222683 B1 PL222683 B1 PL 222683B1 PL 409838 A PL409838 A PL 409838A PL 40983802 A PL40983802 A PL 40983802A PL 222683 B1 PL222683 B1 PL 222683B1
Authority
PL
Poland
Prior art keywords
seq
aav
sequences
capsid
sequence
Prior art date
Application number
PL409838A
Other languages
English (en)
Other versions
PL409838A1 (pl
Inventor
Guangping Gao
James M. Wilson
Mauricio Alvira
Original Assignee
Univ Pennsylvania
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=27502639&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=PL222683(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Univ Pennsylvania filed Critical Univ Pennsylvania
Publication of PL409838A1 publication Critical patent/PL409838A1/pl
Publication of PL222683B1 publication Critical patent/PL222683B1/pl

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
    • C07K14/01—DNA viruses
    • C07K14/015—Parvoviridae, e.g. feline panleukopenia virus, human parvovirus
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/177—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
    • A61K38/46—Hydrolases (3)
    • A61K38/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • A61K38/482—Serine endopeptidases (3.4.21)
    • A61K38/4846—Factor VII (3.4.21.21); Factor IX (3.4.21.22); Factor Xa (3.4.21.6); Factor XI (3.4.21.27); Factor XII (3.4.21.38)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • A61K48/005—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the 'active' part of the composition delivered, i.e. the nucleic acid delivered
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/06—Antipsoriatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/14—Drugs for disorders of the endocrine system of the thyroid hormones, e.g. T3, T4
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
    • C12N15/86—Viral vectors
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
    • C12N15/86—Viral vectors
    • C12N15/864—Parvoviral vectors, e.g. parvovirus, densovirus
    • C12N15/8645—Adeno-associated virus
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6813—Hybridisation assays
    • C12Q1/6816—Hybridisation assays characterised by the detection means
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/70—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving virus or bacteriophage
    • C12Q1/701—Specific hybridization probes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y304/00—Hydrolases acting on peptide bonds, i.e. peptidases (3.4)
    • C12Y304/21—Serine endopeptidases (3.4.21)
    • C12Y304/21022—Coagulation factor IXa (3.4.21.22)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2750/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssDNA viruses
    • C12N2750/00011—Details
    • C12N2750/14011—Parvoviridae
    • C12N2750/14111—Dependovirus, e.g. adenoassociated viruses
    • C12N2750/14121—Viruses as such, e.g. new isolates, mutants or their genomic sequences
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2750/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssDNA viruses
    • C12N2750/00011—Details
    • C12N2750/14011—Parvoviridae
    • C12N2750/14111—Dependovirus, e.g. adenoassociated viruses
    • C12N2750/14122—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2750/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssDNA viruses
    • C12N2750/00011—Details
    • C12N2750/14011—Parvoviridae
    • C12N2750/14111—Dependovirus, e.g. adenoassociated viruses
    • C12N2750/14141—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
    • C12N2750/14143—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2750/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssDNA viruses
    • C12N2750/00011—Details
    • C12N2750/14011—Parvoviridae
    • C12N2750/14111—Dependovirus, e.g. adenoassociated viruses
    • C12N2750/14151—Methods of production or purification of viral material
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2750/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssDNA viruses
    • C12N2750/00011—Details
    • C12N2750/14011—Parvoviridae
    • C12N2750/14111—Dependovirus, e.g. adenoassociated viruses
    • C12N2750/14151—Methods of production or purification of viral material
    • C12N2750/14152—Methods of production or purification of viral material relating to complementing cells and packaging systems for producing virus or viral particles
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2750/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssDNA viruses
    • C12N2750/00011—Details
    • C12N2750/14011—Parvoviridae
    • C12N2750/14111—Dependovirus, e.g. adenoassociated viruses
    • C12N2750/14161—Methods of inactivation or attenuation
    • C12N2750/14162—Methods of inactivation or attenuation by genetic engineering
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2750/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssDNA viruses
    • C12N2750/00011—Details
    • C12N2750/14011—Parvoviridae
    • C12N2750/14111—Dependovirus, e.g. adenoassociated viruses
    • C12N2750/14171—Demonstrated in vivo effect
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2830/00—Vector systems having a special element relevant for transcription
    • C12N2830/008—Vector systems having a special element relevant for transcription cell type or tissue specific enhancer/promoter combination
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2830/00—Vector systems having a special element relevant for transcription
    • C12N2830/48—Vector systems having a special element relevant for transcription regulating transport or export of RNA, e.g. RRE, PRE, WPRE, CTE
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2830/00—Vector systems having a special element relevant for transcription
    • C12N2830/80—Vector systems having a special element relevant for transcription from vertebrates
    • C12N2830/85—Vector systems having a special element relevant for transcription from vertebrates mammalian
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2830/00—Vector systems having a special element relevant for transcription
    • C12N2830/80—Vector systems having a special element relevant for transcription from vertebrates
    • C12N2830/90—Vector systems having a special element relevant for transcription from vertebrates avian
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/158—Expression markers

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)

Description

(12) OPIS PATENTOWY (19) PL (21) Numer zgłoszenia: 409838 (22) Data zgłoszenia: 12.11.2002 (62) Numer zgłoszenia, z którego nastąpiło wydzielenie:
373864 (86) Data i numer zgłoszenia międzynarodowego:
12.11.2002, PCT/US02/033629 (87) Data i numer publikacji zgłoszenia międzynarodowego:
22.05.2003, WO03/042397 (11) 222683 (13) B1 (51) Int.Cl.
C12Q 1/68 (2006.01) C12Q 1/70 (2006.01)
Rekombinowane wirusy stowarzyszone z adenowirusem (AAV), sposoby ich wytwarzania, pakująca komórka gospodarza, kompozycja zawierająca wirus, zastosowanie wirusa, wyizolowane wirusy AAV, białka,sztuczne białka kapsydu, cząsteczki, komórki gospodarza, sposoby dostarczania transgenu, sposób identyfikacji serotypu, zestaw diagnostyczny, sposób izolacji nowych wirusów, rekombinowana komórka
(30) Pierwszeństwo: (73) Uprawniony z patentu:
13.11.2001, US, 60/350,607 THE TRUSTEES OF THE UNIVERSITY
17.12.2001, US, 60/341,117 01.05.2002, US, 60/377,066 OF PENNSYLVANIA, Philadelphia, US
05.06.2002, US, 60/386,675 (72) Twórca(y) wynalazku:
GUANGPING GAO, Rosemont, US
(43) Zgłoszenie ogłoszono: JAMES M. WILSON, Gladwyne, US
19.09.2005 BUP 19/05 MAURICIO ALVIRA, Philadelphia, US
(45) O udzieleniu patentu ogłoszono: (74) Pełnomocnik:
31.08.2016 WUP 08/16 rzecz. pat. Janina Kossowska
PL 222 683 B1
Opis wynalazku
Przedmiotem wynalazku są rekombinowane wirusy stowarzyszone z adenowirusem (AAV), sposoby ich wytwarzania, pakująca komórka gospodarza, kompozycje zawierające wirus, zastosowanie wirusa, wyizolowane wirusy AAV, białka, sztuczne białka kapsydu, cząsteczki, komórki gospodarza, sposoby dostarczania transgenu, sposób identyfikacji serotypu, zestaw diagnostyczny, sposób izolacji nowych wirusów, rekombinowana komórka.
Wirus stowarzyszony z adenowirusem (AAV), należący do rodziny Parvowirusów, jest małym, pozbawionym otoczki ikozaedronalnym wirusem mającym genomy jednoniciowego liniowego DNA o wielkości od 4,7 kilozasad (kz) do 6 kz. AAV przypisano do rodzaju Dependovirus, gdyż wirusa tego odkryto jako zanieczyszczenie w oczyszczonych hodowlach adenowirusa. Cykl życiowy AAV obejmuje fazę latentną, w której genomy AAV po infekcji są integrowane w specyficzne miejsce w chromosomach gospodarza, oraz fazę zakaźną, w której po zakażeniu adenowirusem lub wirusem opryszczki zwykłej zintegrowane genomy są wycinane, replikowane i pakowane do zakaźnych wirusów. Właśc iwości braku patogeniczności, szerokiego zakresu gospodarzy infekcji, w tym komórek nie dzielących się, oraz potencjalna specyficzna co do miejsca integracja do chromosomu czynią AAV atrakcyjnym narzędziem przenoszenia genów.
Ostatnie badania sugerują, że wektory AAV mogą być korzystnymi nośnikami dla terapii gen owej. Dotychczas wyizolowano i dobrze scharakteryzowano 6 różnych serotypów AAV od czło wieka i naczelnych innych niż człowiek (NHP). Spośród nich, ludzki serotyp 2 jest pierwszym AAV opracowanym jako wektor do przenoszenia genów; stosowano go szeroko w doświadczeniach nad skutecznym przenoszeniem genów do różnych docelowych tkanek i modeli zwierzęcych. Trwają badania kliniczne doświadczalnego zastosowania wektorów opartych na AAV2 w modelach niektórych chorób ludzkich, w tym dla chorób takich, jak mukowiscydoza i hemofilia B.
Pożądane są oparte na AAV konstrukty do dostarczania genów.
Streszczenie wynalazku
Niniejszy wynalazek dotyczy rekombinowanego wirusa stowarzyszonego z adenowirusem (AAV) mającego kapsyd AAV8 składający się z białek vp1 ,vp2 i vp3, w którym białko vp1 ma sekwencję Sek. Id. Nr: 95 pełnej długości lub sekwencję aminokwasową, która w 95% lub więcej jest identyczną z sekwencją Sek. Id. Nr: 95 pełnej długości, ten kapsyd AAV8 mający upakowaną w nim sekwencję AAV5' odwróconego powtórzenia końcowego (ITR), heterologiczny gen funkcjonalnie połączony z sekwencjami regulatorowymi, które kierują jego ekspresją w komórce gospodarza i AAV3' ITR.
Korzystnie białko kapsydowe vp2 AAV ma sekwencję aminokwasów 138 do 738 Sek. Id. Nr: 95.
Korzystnie białko kapsydowe vp3 AAV ma sekwencję aminokwasów 203 do 738 Sek. Id. Nr: 95.
Korzystnie gen heterologiczny jest wybrany z grupy składającej się z sekwencji czynnika VIII, sekwencji alfa-1 antytrypsyny i sekwencji HIV.
Korzystnie elementy kontroli ekspresji obejmują promotor tkankowo-specyficzny, korzystniej promotor tkankowo specyficzny jest promotorem specyficznym dla wątroby.
W zakres wynalazku wchodzi rekombinowany wirus stowarzyszony z adenowirusem (AAV) mający kapsyd AAV8 składający się z białek vp1, vp2 i vp3, w którym białko vp1 ma sekwencję składającą się z aminokwasów Sek. Id. Nr: 95 pełnej długości, kapsyd AAV8 ma upakowany w nim minigen mający sekwencję AAV5' odwróconego powtórzenia końcowego (ITR) i gen homologiczny funkcjonalnie połączony z sekwencjami regulatorowymi, które kierują jego ekspresją w komórce gospodarza i AAV3' ITR.
Ponadto wynalazek dotyczy sposobu wytwarzania rekombinowanego wirusa stowarzyszonego z adenowirusem (AAV) obejmującym kapsyd AAV8, który obejmuje etapy hodowania komórki gospodarza zawierającej: (a) cząsteczkę kodującą kapsyd AAV8 obejmujący co najmniej białko kapsydu vp3 AAV8 mające sekwencję obejmującą aminokwasy 1 do 738 Sek. Id. Nr : 95; (b) funkcjonalny gen rep; (c) minigen obejmujący odwrócone powtórzenia końcowe (ITR) i transgen; i (d) geny kodujące wystarczające funkcje pomocnicze, aby pozwolić na upakowanie minigenu do białka kapsydu AAV.
Wynalazek dotyczy również pakującej komórki gospodarza przydatnej w wytwarzaniu wirusa stowarzyszonego z adenowirusem (AAV)8, która zawiera: cząsteczkę kodującą kapsyd AAV8 o Sek. Id. Nr: 95; minigen mający sekwencję AAV odwróconego powtórzenia końcowego i gen heterologiczny funkcjonalnie połączony z sekwencjami regulatorowymi, które kierują jego ekspresję w komórce gospodarza i funkcjonalny gen rep.
PL 222 683 B1
Korzystnie komórka w hodowli zawierającej wirus stowarzyszony z adenowirusem określonym powyżej.
W zakres wynalazku wchodzi również kompozycja zawierająca AAV określony powyżej i fizjologicznie kompatybilny nośnik.
Wynalazek dotyczy również zastosowania wirusa stowarzyszonego z adenowirusem (AAV) według wynalazku określonego powyżej w wytwarzaniu leku do dostarczania transgenu do komórki.
W zakres wynalazku wchodzi wyizolowany wirus stowarzyszony z adenowirusem (AAV), który obejmuje kapsyd AAV o sekwencji aminokwasowej wybrany z grupy składającej się z C1, SEKW. NR ID.: 60; C2, SEKW. NR ID.: 61; C5, SEKW. NR ID.: 62 ; A3.3, SEKW. NR ID.: 66; A3-7, SEKW. NR ID.: 67; A3-4, SEKW. NR ID.: 68; A3-5, SEKW. NR ID.: 69; 3.3b, SEK. NR ID.: 62; 223.4 SEKW. NR ID.: 73; 223-5, SEKW. NR ID.: 74; 223-10, SEKW. NR ID.: 75; 223-2, SEKW. NR ID.: 76; 223-7, SEKW. NR ID.:77; 223-6, SEKW. NR ID.: 78 ; 44-1, SEKW. NR ID.: 79; 44-5, SEKW.NR ID.: 80; 42-15, SEKW. NR ID.: 84; 42-8, SEKW. NR ID.: 85; 42-13, SEKW. NR ID.: 86; 42-3A, SEKW. NR ID.: 87; 42-4, SEKW. NR ID.: 88; 42-5A, SEKW. NR ID.: 89; 42-1B, SEKW. NR ID.: 90; 42-5B, SEKW. NR ID.: 91; 43-1, SEKW. NR ID.: 92; 43-12, SEKW. NR ID.: 93; 43-5, SEKW. NR ID.: 94; 43-21, SEKW. NR ID.: 96; 43-25, SEKW. NR ID.: 97; 43-20, SEKW. NR ID.: 99; 24.1, SEKW. NR ID.: 101; 42.2, SEKW. NR ID.: 102; 7.2, SEKW. NR ID.: 103; 27.3, SEKW. NR ID.: 104; 16,3, SEKW. NR ID.: 105; 42.10, SEKW. NR ID.: 106; 42-3B, SEKW. NR ID.: 107; 42-11, SEKW. NR ID.:108; F1, SEKW. NR ID.: 109; F5, SEKW. NR ID.: 110; F3, SEKW. NR ID.: 111; 42-6B, SEKW. NR ID.: 112 i 42-12, SEKW. NR ID.: 113.
Wynalazek dotyczy również sztucznego białka kapsydu wirusa stowarzyszonego z adenowirusem (AAV) obejmującego jeden lub więcej fragmentów białkowych według wynalazku określonych powyżej.
Ponadto wynalazek obejmuje rekombinowany wirus stowarzyszony z adenowirusem (AAV) obejmujący sztuczny kapsyd określony powyżej.
W zakres wynalazku wchodzi również cząsteczka obejmująca sekwencję kwasu nukleinowego kodującą białko według wynalazku określone powyżej.
Objęta wynalazkiem jest również cząsteczka obejmująca sekwencję kwasu nukleinowego kodującą białko kapsydu nowego serotypu wirusa stowarzyszonego z adenowirusem (AAV) o sekwencji aminokwasowej wybranej z grupy składającej się z:
C1, SEKW. NR ID.: 60; C2, SEKW. NR ID.: 61; C5, SEKW. NR ID.: 62; A3-3, SEKW. NR ID.: 66; A3-7, SEKW. NR ID.: 67; A3-4, SEKW. NR ID.: 68; A3-5, SEKW. NR ID.: 69; 3.3b, SEKW. NR ID.: 62, 223.4, SEKW. NR ID.: 73; 223-5, SEKW. NR ID.: 74; 223-10, SEKW. NR ID.: 75; 223-2, SEKW. NR ID.: 76; 223-7, SEKW. NR ID.: 77; 223-6, SEKW. NR ID.: 78; 44-1, SEKW. NR ID.: 79; 44-5, SEKW. NR ID.: 80; 42-15, SEKW. NR ID.: 84; 42-8, SEKW. NR ID.: 85; 42-13, SEKW. NR ID.: 86;
42- 3A, SEKW. NR ID.: 87; 42-4 SEKW. NR ID.: 88; 42-5A, SEKW. NR ID.: 89; 42-1B, SEKW. NR ID.: 90; 42-5B, SEKW. NR ID.: 91; 43-1 SEKW. NR ID.: 92; 43-12, SEKW. NR ID.: 93; 43-5, SEKW. NR ID.: 94 43-21, SEKW. NR ID.: 96; 43-25, SEKW. NR ID.: 97; 43-20, SEKW. NR ID.: 99; 24.1, SEKW. NR ID.: 101; 42.2, SEKW. NR ID.: 102; 7.2, SEKW. NR ID.: 103; 27.3, SEKW. NR ID.: 104; 16.3, SEKW. NR ID.: 105; 42.10, SEKW. NR ID.: 106; 42-3B, SEKW. NR ID.: 107; 42-11, SEKW. NR ID.: 108; F1, SEKW. NR ID.: 109; F5, SEKW. NR ID.: 110; F3, SEKW. NR ID.: 111; 42-63, SEKW. NR ID.: 112 i 42-12, SEKW. NR ID.: 113.
Wynalazek dotyczy też cząsteczki obejmującej sekwencję kwasu nukleinowego kodującą białko kapsydu nowego serotypu wirusa stowarzyszonego z adenowirusem (AAV) o sekwencji aminokwasowej wybranej z grupy składającej się z
AAV5, SEKW. NR ID.: 2; 42-2, SEKW. NR ID.: 9; 42-8, SEKW. NR ID.: 27; 42-15, SEKW. NR ID.: 28; 42-5b, SEKW. NR ID.: 29; 42-1b, SEKW. NR ID.: 30; 42-13, SEKW. NR ID.: 31; 42-3a, SEKW. NR ID.: 32; 42-4, SEKW. NR ID.: 33; 42-5a, SEKW. NR ID.: 34; 42-10, SEKW. NR ID.: 35; 42-3b, SEKW. NR ID.: 36; 42-11, SEKW. NR ID.: 37; 42-6b, SEKW. NR ID.: 38; 43-1, SEKW. NR ID.: 39;
43- 5, SEKW. NR ID.: 40; 43-12, SEKW. NR ID.: 41; 43-20, SEKW. NR ID.: 42; 43-21, SEKW. NR ID.: 43; 43-23, SEKW. NR ID.: 44; 43-25, SEKW. NR ID.: 45; 44.1, SEKW. NR ID.;46; 44.5, SEKW. NR ID.: 47; 223.10, SEKW. NR ID.: 48; 223.2, SEKW. NR ID.: 49; 223.4, SEKW. NR ID.: 50; 223.5, SEKW. NR ID.: 51; 223.6, SEKW. NR ID.: 52; 223.7, SEKW. NR ID.: 53; A3.4, SEKW. NR ID.: 54; A3.5, SEKW. NR ID.: 55; A3.7, SEKW. NR ID.: 56; A3.3, SEKW. NR ID.: 57; 42.12, SEKW, NR ID.: 58; 44.2, i SEKW. NR ID.: 59, AAV10, SEKW. NR ID.: 117; AAV11, SEKW. NR ID.: 118; AAV12, SEKW. NR ID.: 119; A3.1, SEKW. NR ID.: 120 i H6, SEKW. NR ID.: 25.
PL 222 683 B1
Ponadto wynalazek dotyczy cząsteczki obejmującej sekwencję kwasu nukleinowego kodującą białko kapsydu wirusa stowarzyszonego z adenowirusem, przy czym sekwencja kwasu nukleinowego wybrana jest z grupy złożonej z:
vp1, nt 825 do 3049; vp2, nt 1234 do 3049; vp3, nt 1434 do 3049; nt 468 do 3090; i nt 725 do 3090, przy czym numery nukleotydów pochodzą z AAV7, SEKW. NR ID.: 1 i odpowiadają sekwencjom w 42-2, SEKW. NR ID.: 9; 42-8, SEKW. NR ID.: 27; 42-15, SEKW. NR ID.: 28; 42-5b, SEKW. NR ID.: 29; 42-1b, SEKW. NR ID.: 30; 42-13, SEKW. NR ID.: 31; 42-3a, SEKW. NR ID.: 32; 42-4, SEKW. NR ID.: 33; 42-5a, SEKW. NR ID.: 34; 42-10, SEKW. NR ID.: 35; 42-3b, SEKW. NR ID.: 36, 42-11, SEKW. NR ID.: 37; 42-6b, SEKW. NR ID.: 38; 43-1, SEKW. NR ID.: 39; 43-5, SEKW. NR ID.: 40; 43-12, SEKW. NR ID.; 41; 43-21, SEKW. NR ID.: 42; 43-21, SEKW. NR ID.: 43; 43-23, SEKW. NR ID.: 44; 43-25, SEKW. NR ID.: 45; 44.1, SEKW. NR ID.: 46; 44.5, SEKW. NR ID.: 47; 223.10, SEKW. NR ID.: 48; 223.2, SEKW. NR ID.: 49; 223.4, SEKW. NR ID.: 50; 223.5, SEKW. NR ID.: 51; 223.6, SEKW. NR ID.: 52; 223.7, SEKW. NR ID.: 53; A3.4 SEKW. NR ID.: 54; A3.5, SEKW. NR ID.: 55; A3.7, SEKW. NR ID.: 56; A3.3, SEKW. NR ID.: 57; 42.12, SEKW. NR ID.: 58; 44.2 SEKW. NR ID.: 59; AAV10, SEKW. NR ID.;117; AAV11, SEKW. NR ID.: 118; AAV12, SEKW. NR ID.: 119; A3.1, SEKW. NR ID.: 120 i H6, SEKW. NR ID.: 25.
Korzystnie cząsteczka jest plazmidem.
Korzystnie cząsteczka obejmuje ponadto funkcjonalny gen rep AAV.
W zakres wynalazku wchodzi również sposób wytwarzania rekombinowanego wirusa stowarzyszonego z adenowirusami (AAV) obejmującego kapsyd serotypu AAV, który obejmuje etapy hodowania komórki gospodarza zawierającej: (a) cząsteczkę określoną powyżej, która koduje kapsyd wirusa stowarzyszonego z adenowirusem; (b) funkcjonalny gen rep; (c) minigen obejmujący odwrócone powtórzenia końcowe (ITR) AAV i transgen; i (d) wystarczające funkcje pomocnicze do upakowania minigenu do białka kapsydu AAV.
Wynalazek dotyczy również komórki gospodarza transfekowanej wirusem stowarzyszonym z adenowirusem według wynalazku lub cząsteczką według wynalazku określonymi powyżej.
W zakres wynalazku wchodzi też kompozycja obejmująca AAV według wynalazku określony powyżej i fizjologicznie kompatybilny nośnik.
Wynalazek dotyczy ponadto kompozycji obejmującej cząsteczkę według wynalazku określoną powyżej i fizjologicznie kompatybilny nośnik.
W zakres wynalazku wchodzi również sposób dostarczania transgenu do komórki, który obejmuje etap kontaktowania komórki z AAV według wynalazku określonym powyżej, przy czym rAAV obejmuje transgen.
Wynalazek dotyczy też sposobu identyfikacji serotypu sekwencji wirusa stowarzyszonego z adenowirusem (AAV) w próbce jako znanych lub nieznanych, który obejmuje etapy:
(a) uzyskania analizy trawienia enzymatycznego próbki zawierającej cząsteczki DNA obejmujące sekwencje AAV obejmujące całość lub część pozycji od 2886 do około 3143 AAV1, SEKW. NR ID.: 1, oraz odpowiadających im regionów w innych serotypach AAV; oraz (b) porównania analizy trawienia enzymatycznego próbki z analizą trawienia enzymatycznego odpowiadających regionów jednego lub więcej serotypów AAV, identyfikując tym samym sekwencje AAV w próbce jako pochodzące z jednego lub więcej serotypów AAV lub z nieznanego serotypu.
Korzystnie sekwencje AAV zostały uzyskane sposobem określonym powyżej.
Wynalazek dotyczy również zestawu diagnostycznego do wykrywania obecności nieznanego wirusa stowarzyszonego z adenowirusem (AAV) w próbce, który składa się z:
(a) pierwszego zestawu starterów, które specyficznie namnażają pierwszy region sekwencji kwasu nukleinowego AAV;
(b) ewentualnie drugiego zestawu starterów specyficznych dla drugiego regionu sekwencji kwasu nukleinowego, który obejmuje pierwszy region sekwencji AAV oraz sekwencje w kierunku 5' od pierwszego regionu tak, że uzyskiwane są sekwencje wydłużania 5' AAV, które przyłączają się do końca 5' sekwencji AAV amplifikowanych przez startery dla pierwszego regionu;
(c) ewentualnie trzeciego zestawu starterów specyficznych dla trzeciego regionu, który obe jmuje pierwszy region sekwencji AAV oraz sekwencje w kierunku 3' od pierwszego regionu tak, że
PL 222 683 B1 uzyskiwane są sekwencje wydłużania 3' AAV, które przyłączają się do końca 3' sekwencji AAV amplifikowanych przez startery dla pierwszego regionu;
przy czym każdy z tych regionów jest wyznaczony wcześniej w oparciu o dopasowanie sekwe ncji kwasu nukleinowego co najmniej dwóch serotypów AAV i każdy z tych regionów obejmuje sekwencje kwasu nukleinowego wysoce konserwatywne na odcinku co najmniej 18 par zasad na końcu 5', ewentualnie sekwencje zmienne pośrodku oraz sekwencje wysoce konserwatywne na odcinku co najmniej 18 par zasad na końcu 3' regionu sekwencji, względem sekwencji co najmniej dwóch dopasowanych serotypów AAV; a każdy z zestawów starterów składa się ze startera 5' i startera 3'.
W zakres wynalazku wchodzi też sposób izolacji nowych wirusów stowarzyszonych z adenowirusami (AAV) z komórki, który obejmuje etapy: (a) zakażenia komórki wirusem dostarczającym funkcji pomocniczych dla tego AAV; (b) izolacji zakaźnych klonów zawierających AAV; (c) sekwencjonowania wyizolowanych AAV; i (d) porównania sekwencji wyizolowanych AAV ze znanymi serotypami AAV, przy czym różnice w sekwencji wyizolowanego AAV i znanych serotypów AAV wskazują na obecność nowego AAV.
Korzystnie wirus ten jest adenowirusem, a korzystniej adenowirus pochodzi od człowieka lub naczelnego, innego niż człowiek.
Wynalazek dotyczy nowego serotypu wirusa stowarzyszonego z adenowirusem (AAV) zidentyfikowany sposobem według wynalazku określonym powyżej.
Ponadto wynalazek dotyczy wyizolowanego wirusa stowarzyszonego z adenowirusem (AAV) obejmującego kapsyd AAV o sekwencji aminokwasowej AAV7 aminokwasów 1 do 737 SEKW. NR ID.: 2.
Wynalazek dotyczy również białka obejmującego fragment białka kapsydu AAV, przy czym fragment wybrany jest z grupy złożonej z:
białka kapsydu vp2, aminokwasy (aa) 138 do 737; białka kapsydowe vp3, aa 203 do 737; i aa 1 do 184, aa 199 do 259; aa 274 do 446; aa 603 do 659; aa 670 do 706; aa 724 do 736; aa 185 do 198; aa 260 do 273; aa 447 do 477; aa 495 do 602; aa 660 do 669; i aa 707 do 723, a numeracja aminokwasów odpowiada kapsydowi AAV7 SEKW. NR ID.: 2.
W zakres wynalazku wchodzi również cząsteczka obejmująca sekwencję kwasu nukleinowego kodującą białko według wynalazku określone powyżej.
W zakres wynalazku wchodzi też sztuczne białko kapsydu wirusa stowarzyszonego z adenowirusem (AAV) obejmujące jeden lub więcej fragmentów białkowych według wynalazku określonych powyżej.
Ponadto wynalazek dotyczy zrekombinowanego wirusa stowarzyszonego z adenowirusem (AAV) obejmującego sztuczny kapsyd określony powyżej.
W zakres wynalazku wchodzi również cząsteczka obejmująca sekwencję kwasu nukleinowego kodującą białko według wynalazku określone powyżej.
Wynalazek dotyczy też cząsteczki obejmującej sekwencję kwasu nukleinowego kodującą białko kapsydu nowego serotypu wirusa stowarzyszonego z adenowirusem (AAV) o sekwencji aminokwasowej AAV7 obejmującej aminokwasy 1 do 737 SEKW. NR ID.: 2.
Ponadto wynalazek dotyczy cząsteczki obejmującej sekwencję kwasu nukleinowego kodującą białko kapsydu nowego serotypu wirusa stowarzyszonego z adenowirusem (AAV) o sekwencji aminokwasowej AAV7, SEKW. NR ID.: 1.
W zakres wynalazku wchodzi ponadto cząsteczka obejmująca sekwencję kwasu nukleinowego kodującą fragment białka kapsydu wirusa stowarzyszonego z adenowirusem, przy czym sekwencja kwasu nukleinowego wybrana jest z grupy złożonej z:
Vp1, nt 825 do 3049; vp2, nt 1234 do 3049; vp3, nt 1434 do 3049; nt 468 do 3090; i nt 725 do 3090, a numery nukleotydów pochodzą z AAV7, SEKW. NR ID.: 1.
Korzystnie cząsteczka jest plazmidem.
Korzystnie cząsteczka obejmuje ponadto funkcjonalny gen rep AAV.
Wynalazek dotyczy ponadto komórki gospodarza stransfekowanej wirusem stowarzyszonym z adenowirusem według wynalazku określonym powyżej lub cząsteczką według wynalazku określoną powyżej.
PL 222 683 B1
Ponadto w zakres wynalazku wchodzi kompozycja zawierająca AAV według wynalazku określony powyżej oraz dopuszczalny fizjologicznie nośnik.
Wynalazek dotyczy też kompozycji zawierającej cząsteczkę według wynalazku określoną pow yżej oraz dopuszczalny fizjologicznie nośnik.
Wynalazek dotyczy także sposobu dostarczania transgenu do komórki, który obejmuje etap kontaktowania komórki z AAV określonym powyżej, przy czym ten rAAV obejmuje transgen.
W zakres wynalazku wchodzi cząsteczka obejmująca heterologiczną sekwencję kwasu nukleinowego wirusa stowarzyszonego z adenowirusem (AAV) serotypu 7, przy czym sekwencja obejmuje:
nukleotydy (nt) 1 to 107 SEKW. NR ID.: 1; nt 107 do 2215 SEKW. NR ID.: 1; nt 334 do 2215 SEKW. NR ID.: 1; nt 2222 do 4435 SEKW. NR ID.: 1; nt 2633 do 4435 SEKW. NR ID.: 1; nt 2831 do 4435 SEKW. NR ID.: 1; i nt 4704 do 4721 SEKW. NR ID.: 1.
Wynalazek dotyczy też komórki gospodarza zawierające cząsteczkę określoną powyżej.
Ponadto w zakres wynalazku wchodzi cząsteczka kodująca białko rep wirusa stowarzyszonego z adenowirusem (AAV) serotypu 7 lub jego fragment, przy czym białko lub fragment są wybrane z grupy złożonej z:
aminokwasów (aa) 1 do 623, aa 1 do 171; aa 172 do 372, aa 373 do 444, i aa 445 do 623 SEKW. NR ID.: 3.
Wynalazek dotyczy też komórki gospodarza zawierającą cząsteczkę określoną powyżej.
Ponadto wynalazek dotyczy również wyizolowanego wirusa stowarzyszonego z adenowirusem (AAV) obejmującego kapsyd AAV8 o sekwencji aminokwasowej SEKW. NR ID.: 4 lub jej funkcjonalny fragment.
Korzystnie AAV ponadto zawiera minigen mający odwrócone powtórzenia końcowe AAV i gen heterologiczny funkcjonalnie połączony z sekwencjami regulatorowymi, które kierują jego ekspresją w komórce gospodarza.
Wynalazek dotyczy też białka kapsydu obejmującego białko kapsydu AAV8 wybrane z grupy składającej się z: AAV8vp1, AAV8vp2, AAV8vp3 i ich funkcjonalnych fragmentów.
Ponadto wynalazek dotyczy białka kapsydu stowarzyszonego z adenowirusem (AAV) obejm ującego jedno lub więcej białko kapsydu AAV8 określone powyżej.
W zakres wynalazku wchodzi wirus stowarzyszony z adenowirusem (AAV) obejmujący kapsyd AAV8 i minigen mający odwrócone powtórzenia końcowe AAV i gen heterologiczny funkcjonalnie połączony z sekwencjami regulatorowymi, które kierują jego ekspresją w komórce gospodarza.
Korzystnie kapsyd AAV8 ma sekwencję aminokwasową wybraną z SEKW. NR ID.: 4 i sekwencji o co najmniej 97% identyczności z SEKW. NR ID.: 4.
Wynalazek dotyczy też cząsteczki obejmującej sekwencję aminokwasową kodującą białko określone powyżej.
Korzystnie cząsteczka jest plazmidem.
Ponadto wynalazek dotyczy rekombinowanej komórki, która jest transfekowaną lub transform owaną cząsteczką określoną powyżej.
Korzystnie cząsteczka ta obejmuje ponadto funkcjonalny gen rep AAV z AAV2.
W zakres wynalazku wchodzi również sposób wytwarzania rekombinowanego wirusa stowarzyszonego z adenowirusem (AAV) obejmującego kapsyd serotypu AAV, znamienny tym, że obejmuje etapy hodowania komórki gospodarza zawierającej (a) cząsteczkę kodującą białko kapsydu AAV; (b) funkcjonalny gen rep; (c) minigen obejmujący odwrócone powtórzenia końcowe AAV (ITR) i transgen; i (d) sekwencje o wystarczającej funkcji pomocniczej do upakowania minigenu do białka kapsydu AAV, przy czym komórka gospodarza zawiera cząsteczkę określoną powyżej.
Ponadto wynalazek dotyczy komórki gospodarza transfekowanej wirusem stowarzyszonym z adenowirusem określonym powyżej.
W zakres wynalazku wchodzi również kompozycja zawierająca AAV określony powyżej i fizjologicznie kompatybilny nośnik.
Wynalazek dotyczy również Zastosowanie wirusa stowarzyszonego z adenowirusem określonego powyżej do wytwarzania leku do dostarczania transgenu do komórki.
PL 222 683 B1
W zakres wynalazku wchodzi sposób wytwarzania rekombinowanych wirusów stowarzyszonych z adenowirusem (AAV) obejmujących kapsyd serotypu AAV, który obejmuje etapy hodowania komórki gospodarza zawierającej: (a) cząsteczkę określoną powyżej kodującą kapsyd wirusa stowarzyszonego z adenowirusem; (b) funkcjonalny gen rep; (c) minigen obejmujący odwrócone powtórzenia końc owe (ITR) AAV oraz transgen; i (d) geny kodujące wystarczające funkcje pomocnicze pozwalające na upakowanie minigenu do białka kapsydu AAV.
W jednym z aspektów, wynalazek dostarcza nowego sposobu wykrywania i identyfikacji sekwencji AAV z komórkowych DNA różnych tkanek ludzkich i naczelnych innych niż człowiek (NHP) przy zastosowaniu analizy bioinformatycznej, opartej na PCR amplifikacji genów i techniki klonowania, w oparciu o naturę latencji i integracji AAV w nieobecności współzakażenia wirusem pomocniczym.
W innym aspekcie wynalazek dostarcza sposobu izolacji nowych sekwencji AAV wykrytych przy zastosowaniu opisanych powyżej sposobów według wynalazku. Wynalazek obejmuje ponadto sposoby wytwarzania wektorów opartych na tych nowych serotypach AAV, dla serologii i badań nad przen oszeniem genów w oparciu jedynie o dostępność sekwencji genów kapsydu i strukturę połączeń genów rep i cap.
W jeszcze innym aspekcie, wynalazek dostarcza nowego sposobu prowadzenia badań serologii, epidemiologii, biorozmieszczenia i sposobu przenoszenia, przy zastosowaniu odczynników według wynalazku, do których należą ogólne zestawy starterów/sond oraz ilościowy PCR w czasie rzeczywistym.
W jeszcze innym aspekcie, wynalazek dostarcza sposobu izolacji pełnych i zakaźnych genomów nowych serotypów AAV z DNA komórkowego różnego pochodzenia przy pomocy RACE i innych technik molekularnych.
W dalszym aspekcie, wynalazek dostarcza sposobu odzyskiwania nowych serotypów genomów AAV z linii komórkowych ludzkich i NHP przy pomocy adenowirusowych wirusów pomocniczych różnego pochodzenia.
W jeszcze dalszym aspekcie, wynalazek dostarcza nowych serotypów AAV, wektorów je zawierających i sposobów ich użycia.
Te i inne aspekty wynalazku będą oczywiste na podstawie następującego szczegółowego opisu wynalazku.
KRÓTKI OPIS RYSUNKÓW
Figury 1A do 1AAAR dostarczają uliniowania sekwencji nukleotydowych kodujących co najmniej białka cap serotypów AAV. Sekwencje pełnej długości obejmujące ITR, obszar rep oraz obszar kapsydu dostarczono dla nowego serotypu 7 AAV [SEKW. NR ID.: 1] oraz dla opublikowanego uprzednio AAV1 [SEKW. NR ID.: 6], AAV2 [SEKW. NR ID.: 7] i AAV3 [SEKW. NR ID.: 8]. Nowe serotypy AAV8 [SEKW. NR ID.: 4] i AAV9 [SEKW. NR ID.: 5] są przedmiotem równocześnie złożonych zgłoszeń. Do innych nowych klonów według wynalazku dostarczonych w tym uliniowaniu należą; 42-2 [SEKW. NR ID.: 9], 42-8 [SEKW. NR ID.: 27], 42-15 [SEKW. NR ID.: 28], 42-5b [SEKW. NR ID.: 29], 42-1b [SEKW. NR ID.: 30]; 42-13 [SEKW. NR ID.: 31], 42-3a [SEKW. NR ID.: 32], 42-4 [SEKW. NR ID.: 33], 42-5a [SEKW. NR ID.: 34], 42-10 [SEKW. NR ID.: 35], 42-3b [SEKW. NR ID.: 36], 42-11 [SEKW. NR ID.: 37], 42-6b [SEKW. NR ID.: 38], 43-1 [SEKW. NR ID.: 39], 43-5 [SEKW. NR ID.: 40], 43-12 [SEKW. NR ID.: 41], 43-20 [SEKW. NR ID.: 42], 43-21 [SEKW. NR ID.: 43], 43-23 [SEKW. NR ID.: 44], 43-25 [SEKW. NR ID.: 45], 44.1 [SEKW. NR ID.: 47], 44.5 [SEKW. NR ID.: 47], 223.10 [SEKW. NR ID.: 48], 223.2 [SEKW. NR ID.: 49], 223.4 [SEKW. NR ID.: 50], 223.5 [SEKW. NR ID.: 51], 223.6 [SEKW. NR ID.: 52], 223.7 [SEKW. NR ID.: 53], A3.4 [SEKW. NR ID.: 54], A3.5 [SEKW. NR ID.: 55], A3.7 [SEKW. NR ID.: 56], A3.3 [SEKW. NR ID.: 57],42.12 [SEKW. NR ID.: 58], 44.2 [SEKW. NR ID.: 59]. Sekwencje nukleotydowe charakterystycznych obszarów AAV10 [SEKW. NR ID.: 117], AAV11 [SEKW. NR ID.: 118] i AAV12 [SEKW. NR ID.: 119] dostarczono na tej figurze. Przedstawiono na niej krytyczne elementy struktury genomów AAV. Przerwy oznaczono kropkami. 3' ITR AAV1 [SEKW. NR ID.: 6] przedstawiono w tej samej konfiguracji, jak w opublikowanych sekwencjach. TRS oznacza końcowe miejsce rozdziału (terminal resolution site). Zauważmy, że AAV7 jest jedynym opisanym AAV wykorzystującym GTG jako kodon inicjacyjny VP3.
Figury 2A do 2F to dopasowanie sekwencji aminokwasowych białek kapsydu vp1 opublikowanych uprzednio serotypów AAV 1 [SEKW. NR ID.: 64], AAV2 [SEKW. NR ID.: 70], AAV3 [SEKW. NR ID.: 71], AAV4 [SEKW. NR ID.: 63], AAV5 [SEKW. NR ID.; 114], i AAV6 [SEKW. NR ID.: 65] oraz nowych sekwencji AAV według wynalazku, w tym: C1 [SEKW. NR ID.: 60], C2 [SEKW. NR ID.: 61], C5 [SEKW. NR ID.: 62], A3-3 [SEKW. NR ID.: 66], A3-7 [SEKW. NR ID.: 67], A3-4 [SEKW. NR ID.: 68],
PL 222 683 B1
A3-5 [SEKW. NR ID.: 69], 3.3b [SEKW. NR ID.: 62], 223.4 [SEKW. NR ID.: 73], 223-5 [SEKW. NR ID.: 74], 223-10 [SEKW. NR ID.: 75], 223-2 [SEKW. NR ID.: 76], 223-7 [SEKW. NR ID.: 77], 223-6 [SEKW. NR ID.; 78], 44-1 [SEKW. NR ID.; 79], 44-5 [SEKW. NR ID.: 80], 44-2 [SEKW. NR ID.: 81],
42- 15 [SEKW. NR ID.; 84], 42-8 [SEKW. NR ID.: 85], 42-13 [SEKW. NR ID.: 86], 42-3A [SEKW. NR ID.: 87], 42-4 [SEKW. NR ID.: 88],42-5A [SEKW. NR ID.: 89],42-1B [SEKW. NR ID.; 90], 42-5B [SEKW. NR ID.; 91], 43-1 [SEKW. NR ID.: 92], 43-12 [SEKW. NR ID.; 93], 43-5 [SEKW. NR ID.: 94],
43- 21 [SEKW. NR ID.: 96], 43-25 [SEKW. NR ID.: 97], 43-20 [SEKW. NR ID.; 99], 24.1 [SEKW. NR ID.: 101], 42.2 [SEKW. NR ID.: 102], 7.2 [SEKW. NR ID.; 103], 27.3 [SEKW. NR ID.: 104], 16.3 [SEKW. NR ID.: 105], 42.10 [SEKW. NR ID.: 106], 42-3B [SEKW. NR ID.: 107], 42-11 [SEKW. NR ID.: 108], F1 [SEKW. NR ID.; 109], F5 [SEKW. NR ID.; 110], F3 [SEKW. NR ID.: 111], 42-6B [SEKW. NR ID.: 112], 42-12 [SEKW. NR ID.: 113].
Nowe serotypy AAV8 [SEKW. NR ID.: 95] i AAV9 [SEKW. NR ID.: 100] są przedmiotem równocześnie złożonych wniosków patentowych.
Figury 3A do 3C dostarczają sekwencji aminokwasowych białek rep AAV7 [SEKW. NR ID.: 3].
SZCZEGÓŁOWY OPIS WYNALAZKU
W niniejszym wynalazku twórcy znaleźli sposób, który wykorzystuje zdolność wirusa stowarz yszonego z adenowirusem (AAV) do wniknięcia do jądra i, w nieobecności współzakażenia wirusem pomocniczym, integracji do DNA komórki i ustanowienia zakażenia latentnego. Sposób ten wykorzystuje strategię opartą o łańcuchową reakcję polimerazy (PCR) dla wykrywania, identyfikacji i/lub izolacji sekwencji AAV z DNA komórek człowieka i naczelnych innych niż człowiek, a także z innych źródeł. Korzystnie, sposób ten nadaje się też do wykrywania, identyfikacji i/lub izolacji innych zintegrowanych sekwencji wirusowych i niewirusowych tak, jak opisano to poniżej.
Wynalazek dostarcza ponadto sekwencji kwasów nukleinowych zidentyfikowanych zgodnie ze sposobami według wynalazku. Jednym z takich wirusów stowarzyszonych z adenowirusem jest nowy serotyp, nazwany tu serotypem 7 (AAV7). Do innych nowych serotypów dostarczonych tu należą AAV10, AAV11 i AAV12. Jeszcze inne nowe serotypy AAV zidentyfikowane zgodnie ze sposobami według tego wynalazku dostarczone są w niniejszym opisie. Patrz Rysunki i Lista sekwencji, które niniejszym są włączone przez referencję.
Dostarczone są także fragmenty tych sekwencji AAV. Wśród szczególnie pożądanych fragmentów AAV są białka cap, w tym vp1, vp2, vp3, regiony hiperzmienne, białka rep, w tym rep 78, rep 68, rep 52 i rep 40, oraz sekwencje kodujące te białka. Każdy z tych fragmentów może zostać z łatwością wykorzystany w szeregu systemów wektorowych i komórek gospodarza. Fragmenty takie mogą być wykorzystywane osobno, w połączeniu z innymi sekwencjami i fragmentami AAV, lub w połączeniu z innymi sekwencjami wirusowymi z AAV lub nie z AAV. W jednym szczególnie korzystnym wykonaniu, wektor zawiera sekwencje cap i/lub rep AAV według wynalazku.
Jak tu opisano, dostosowania wykonywane są przy zastosowaniu dowolnego z szeregu dostępnych publicznie lub w handlu programów do wielokrotnego dostosowania sekwencji takich, jak Clustal W, dostępny poprzez serwery Web w Internecie. Alternatywnie, stosowane są także narzędzia z pakietu Vector NTI. Znanych w technice jest także wiele algorytmów, które można zastosować do mierzenia identyczności sekwencji nukleotydowej, w tym zawartych w opisanych powyżej programach. W innym przykładzie, sekwencje polinukleotydowe mogą być porównywane przy pomocy Fasta, programu w GCG wersja 6.1. Fasta dostarcza dostosowań i procentowej identyczności sekwencji obszarów najlepszego zachodzenia pomiędzy sekwencją zapytania i przeszukiwaną. Przykładowo, procentowa identyczność sekwencji pomiędzy sekwencjami nukleotydowymi może być wyznaczona przy zastosowaniu Fasta z domyślnymi parametrami (długość słowa 6 i parametr NOPAM dla macierzy podobieństwa) tak, jak dostarczono je w GCG wersja 6.1, niniejszym włączonym przez referencję. Podobne programy dostępne są też dla sekwencji aminokwasowych, np. program Clustal X. Ogólnie, wszystkie te programy wykorzystywane są z ustawieniami domyślnymi, chociaż specjalista może w miarę potrzeby zmienić te ustawienia. Alternatywnie, specjalista może wykorzystać inny algorytm lub program komputerowy, który dostarcza przynajmniej stopnia identyczności dopasowania tak, jak dostarczone przez wspomniane algorytmy i programy.
Termin znacząca homologia lub znaczące podobieństwo w odniesieniu do kwasu nukleinowego lub jego fragmentu wskazuje, że przy optymalnym dostosowaniu z innym kwasem nukleinowym (lub jego nicią komplementarną) z odpowiednimi insercjami lub delecjami nukleotydowymi, występuje identyczność sekwencji nukleotydowej w co najmniej około 95 do 99% dopasowanych sekwencji. Korzystnie, homologia zachodzi na całej długości sekwencji, lub jej otwartej ramki odczytu, lub innego
PL 222 683 B1 odpowiedniego fragmentu, który ma długość co najmniej 15 nukleotydów. Przykłady odpowiednich dopasowań są tu opisane.
Termin znacząca homologia lub znaczące podobieństwo w odniesieniu do sekwencji aminokwasów lub jej fragmentu wskazuje, że przy optymalnym dopasowaniu z inną sekwencją aminokwasów z odpowiednimi insercjami lub delecjami aminokwasów, występuje identyczność sekwencji aminokwasowej w co najmniej około 95 do 99% dopasowanych sekwencji. Korzystnie, homologia zach odzi na całej długości sekwencji, lub jej białka, np. białka cap, białka rep, lub jej fragmentu, który ma długość co najmniej 8 aminokwasów, lub korzystniej, co najmniej 15 aminokwasów. Przykłady odpowiednich dopasowań są tu opisane.
Termin wysoce zachowywane oznacza co najmniej 80% identyczności, korzystnie co najmniej 90% identyczności, a korzystniej co najmniej 97% identyczności. Specjalista łatwo wyznaczy identyczność przy pomocy algorytmów i programów komputerowych znanych specjalistom.
Termin procentowa identyczność sekwencji lub identyczne w kontekście sekwencji kwasów nukleinowych odnosi się do pozycji w obu sekwencjach, które są takie same przy dopasowaniu dla maksymalnej zgodności. Długość porównywania sekwencji może obejmować całą długość genomu, całą długość sekwencji kodującej gen, lub, korzystnie, fragment o długości co najmniej 500 do 5000 nukleotydów. Może jednak także być pożądana identyczność pomiędzy mniejszymi fragmentami, np. co najmniej dziewięciu nukleotydów, zwykle co najmniej 20 do 24 nukleotydów, co najmniej 28 do 32 nukleotydów, co najmniej 36 lub więcej nukleotydów. Podobnie procentowa identyczność sekwencji może być łatwo wyznaczona dla sekwencji aminokwasowych, na całej długości białka, lub jego fragmentu. Odpowiednio, fragment ma długość co najmniej 8 aminokwasów i może dochodzić do około 700 aminokwasów. Przykłady odpowiednich fragmentów są tu opisane.
Sekwencje AAV i ich fragmenty są użyteczne w wytwarzaniu rAAV i są również przydatne jako wektory do dostarczania antysensu, wektory do terapii genowej lub wektory do szczepionek. Wynalazek dostarcza ponadto cząsteczek kwasów nukleinowych, wektorów do dostarczania genów i komórek gospodarza zawierających sekwencje AAV według wynalazku.
Jak tu opisano, wektory według wynalazku zawierające białka kapsydu AAV według wynalazku są szczególnie dogodne w zastosowaniach, w których przeciwciała neutralizujące zmniejszają sk uteczność wektorów opartych na innych serotypach AAV, oraz innych wektorów wirusowych. Wektory rAAV według wynalazku są szczególnie korzystne przy ponownym podawaniu rAAV i powtórnej terapii genowej.
Te i inne wykonania i korzyści wynalazku są opisane bardziej szczegółowo poniżej. W użytym w tym opisie i zastrzeżeniach znaczeniu, terminy obejmujący i zawierający i ich odmiany, włączają inne składniki, elementy, liczby całkowite, etapy i im podobne. Przeciwnie, termin złożone i jego odmiany wyłącza inne składniki, elementy, liczby całkowite, etapy i im podobne.
I. Sposoby według wynalazku
A. Wykrywanie sekwencji przez klonowanie molekularne
W jednym z aspektów, wynalazek dostarcza sposobów wykrywania i/lub identyfikacji docelowych sekwencji kwasu nukleinowego w próbce. Sposób ten jest szczególnie dogodny do wykrywania sekwencji wirusowych zintegrowanych do chromosomu komórki, np. między innymi wirusów stowarzyszonych z adenowirusem (AAV) i retrowirusów. Opis odnosi się do AAV, który stanowi tu przykład. Na podstawie tych informacji, specjalista może jednak łatwo przeprowadzić sposoby według wynalazku na retrowirusach [np. na wirusie białaczki kociej (FeLV), HTLVI i HTLYII] oraz lentiwirusach [np. ludzkim wirusie braku odporności (HIV), małpim wirusie braku odporności (SIV), kocim wirusie braku odporności (FIV), wirusie zakaźnej anemii koni i spumawirusie] i innych. Ponadto, sposób według wynalazku może być także zastosowany do wykrywania innych sekwencji wirusowych i niewirusowych, zintegrowanych, lub niezintegrowanych do genomu komórki gospodarza.
W użytym tu znaczeniu, próbką jest dowolne źródło zawierające kwasy nukleinowe, np. tkanka, hodowla tkankowa, komórki, hodowla komórek i płyny biologiczne, w tym między innymi, mocz i krew. Tymi sekwencjami kwasów nukleinowych mogą być DNA lub RNA z plazmidów, naturalny DNA lub RNA z dowolnego źródła, w tym bakterii, drożdży, wirusów i wyższych organizmów takich, jak rośliny lub zwierzęta. DNA lub RNA jest ekstrahowany z próbki przy zastosowaniu szeregu technik znan ych specjalistom takich, jak opisane przez Sambrooka, Molecular Cloning, A Laboratory Manual (New York: Cold Spring Harbor Laboratory). Źródło próbki i sposób, którego użyto do uzyskania kwasów nukleinowych do zastosowania sposobu według tego wynalazku, nie stanowią ograniczenia niniejszego
PL 222 683 B1 wynalazku. Ewentualnie, sposób według wynalazku może być przeprowadzony bezpośrednio na źródle DNA, lub na kwasach nukleinowych uzyskanych (np. wyekstrahowanych) ze źródła.
Sposób według wynalazku obejmuje poddanie próbki zawierającej DNA namnażaniu przez łańcuchową reakcję polimerazy (PCR) przy zastosowaniu pierwszego zestawu starterów specyficznych dla pierwszego obszaru dwuniciowych sekwencji kwasów nukleinowych, uzyskując tym samym namnożone sekwencje.
W użytym tu znaczeniu, każdy z obszarów jest wyznaczony w oparciu o dopasowanie sekwencji kwasów nukleinowych przynajmniej dwóch serotypów (np. AAV) lub szczepów (np. lentiwir usów), gdzie każdy z tych obszarów jest złożony z sekwencji posiadających 5' koniec wysoce zachowywany, środek korzystnie, lecz niekoniecznie zmienny, i 3' koniec, który jest wysoce zachowywany, przy czym każdy jest zachowywany lub zmienny w stosunku do sekwencji co najmniej dwóch dop asowanych serotypów AAV. Korzystnie, 5' i/lub 3' koniec jest wysoce zachowywany na odcinku co najmniej 9, a korzystniej, co najmniej 18 par zasad (bp). Jedna lub obie sekwencje na 5' lub 3' końcu mogą jednak być zachowywane na odcinku ponad 18 bp, ponad 25 bp, ponad 30 bp lub ponad 50 bp na 5' końcu. Nie ma wymagania co do zachowywanych sekwencji względem obszaru zmiennego, sekwencje te mogą być względnie zachowywane, lub wykazywać mniej niż 90, 80 lub 70% identyc zności pomiędzy dopasowanymi serotypami lub szczepami.
Każdy z obszarów może obejmować długość od około 100 bp do około 10 kilobaz. Jest jednak szczególnie pożądane, by jeden z tych obszarów był obszarem charakterystycznym, tzn. obszarem, który jest wystarczająco niepowtarzalny, by jednoznacznie zidentyfikować namnażaną sekwencję jako pochodzącą z docelowego źródła. Przykładowo, w jednym z wykonań, pierwszy obszar ma około 250 bp długości, i jest wystarczająco niepowtarzalny wśród znanych sekwencji AAV, że jednoznacznie identyfikuje namnażany obszar jako pochodzący z AAV. Ponadto, sekwencje zmienne w tym obszarze są wystarczająco niepowtarzalne, by można było je stosować do identyfikacji serotypu, z którego p ochodzą namnażane sekwencje. Po namnożeniu (a tym samym wykryciu), sekwencje mogą być zide ntyfikowane przez konwencjonalne trawienie enzymami restrykcyjnymi i porównanie z wzorami trawienia restrykcyjnego dla tego obszaru w AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, lub AAV6, lub w AAV7, AAV10, AAV11, AAV12, lub którymkolwiek z nowych serotypów zidentyfikowanych przez wynalazek, który jest wcześniej określony i dostarczony przez niniejszy wynalazek.
Przy dostarczonych tu wskazówkach specjalista z łatwością zidentyfikuje takie obszary wśród innych zintegrowanych wirusów by umożliwić łatwe wykrywanie i identyfikację takich sekwencji. Następnie można zaprojektować optymalny zestaw ogólnych starterów zlokalizowanych w wysoce zachowywanych końcach i zbadać go pod kątem wydajnego namnażania wybranego obszaru z próbek. Ten aspekt wynalazku można łatwo dostosować do zestawu diagnostycznego do wykrywania obecności sekwencji docelowych (np. AAV) i do identyfikacji serotypu AAV, przy zastosowaniu standardów, do których należą wzory restrykcyjne serotypów AAV opisane tu lub wyizolowane przy zastosowaniu opisanych tu technik. Przykładowo, szybką identyfikację, lub serotypowanie molekularne produktów PCR można osiągnąć przez trawienie produktów PCR i porównywanie wzorów restrykcyjnych.
Tak zatem, w jednym z wykonań, obszar charakterystyczny AAV obejmuje około bp 2800 do 3200 AAV1 [SEKW. NR ID.: 6] i odpowiednie pary zasad w AAV2, AAV3, AAV4, AAV5 i AAV6. Korzystniej, obszar ten obejmuje około 250 bp zlokalizowanych pomiędzy bp 2886 do około 3143 AAV1 [SEKW. NR ID.: 6] i odpowiednie pary zasad w AAV2 [SEKW. NR ID.: 7], AAV3 [SEKW. NR ID.: 8] i innych serotypach AAV. Patrz Rys. 1. Dla umożliwienia szybkiego wykrycia AAV w próbce wykorzystywane są startery specyficznie namnażające ten obszar charakterystyczny. Niniejszy wynalazek nie jest jednak ograniczony do konkretnych sekwencji zidentyfikowanych tu dla obszaru charakterystycznego AAV, gdyż specjalista może z łatwością zmienić ten obszar tak, by obejmował on krótszy fra gment, lub dłuższy fragment tego obszaru charakterystycznego.
Startery PCR wytwarzane są przy zastosowaniu technik znanych specjalistom. Każdy zestaw starterów PCR złożony jest ze startera 5' i startera 3'. Patrz np. cytowany tu Sambrook i wsp. Termin starter odnosi się do oligonukleotydu, który działa jako punkt inicjacji syntezy przy umieszczeniu w warunkach, w których indukowana jest synteza produktu wydłużania startera komplementarnego do nici kwasu nukleinowego. Starter korzystnie jest jednoniciowy. O ile jednak stosowany jest starter dwuniciowy, to jest on przed użyciem do wytworzenia produktów wydłużania traktowany dla rozdzielenia nici. Startery mogą mieć od około 15 do 25 nukleotydów, a korzystnie co najmniej 18 nukleotydów. Jednakże dla pewnych zastosowań wykorzystywane są krótsze nukleotydy, np. 7 do 15 nukleotydów.
PL 222 683 B1
Startery wybiera się tak, by były dostatecznie komplementarne do różnych nici każdej konkretnej namnażanej sekwencji by hybrydyzować z odpowiednimi nićmi. Sekwencja startera nie musi zatem dokładnie odzwierciedlać sekwencję namnażanego obszaru. Przykładowo, do 5' końca startera można dołączyć niekomplementarny fragment nukleotydowy, przy zachowaniu pełnej komplementarności z nicią pozostałej sekwencji startera. Alternatywnie, niekomplementarne zasady lub dłuższe sekwencje mogą być wplecione w starter, pod warunkiem że sekwencja startera ma wystarczającą komplementarność do sekwencji namnażanej nici by hybrydyzować z nią i tworzyć matrycę do syntezy produktu wydłużania drugiego startera.
Startery PCR dla obszaru charakterystycznego według wynalazku oparte są na wysoce zachowywanych sekwencjach dwóch lub więcej dopasowanych sekwencji (np. dwóch lub więcej serotypów AAV). Startery mogą uwzględniać niecałkowitą identyczność między dwoma lub więcej dopasowanymi serotypami AAV na końcu 5' lub w środku. Sekwencje na 3' końcu starterów odpowiadają jednak obszarowi dwóch lub więcej dopasowanych serotypów AAV, w którym występuje pełna identyczność na odcinku co najmniej pięciu, a korzystnie co najmniej dziewięciu par zasad, a korzystniej na odcinku co najmniej 18 par zasad na 3' końcu starterów. Koniec 3' starterów jest zatem złożony z sekwencji o 100% identyczności z uliniowanymi sekwencjami na długości co najmniej pięciu nukleotydów. Można jednak ewentualnie wykorzystać jeden, dwa lub więcej zdegenerowanych nukleotydów na 3' końcu startera.
Przykładowo, zestaw starterów dla charakterystycznego obszaru AAV zaprojektowano w oparciu o następujący unikatowy obszar w kapsydzie AAV. Starter 5' oparto na nukleotydach 2867-2891 AAV2 [SEKW. NR ID.: 7], 5'-GGTAATTCCTCCGGAAATTGGCATT-3'. Patrz Rys. 1. Starter 3' zaprojektowano w oparciu o nukleotydy 3096-3122 AAV2 [SEKW. NR ID.: 7], 5'-GACTCATCAACAACAACTGGGGATTC-3'. Specjalista mógłby jednak z łatwością zaprojektować startery w oparciu o odpowiedni obszar AAV1, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6 lub w oparciu o dostarczoną tu informację o AAV7, AAV10, AAV11, AAV12 lub inny nowy AAV według wynalazku. Ponadto, jeszcze inne zestawy starterów do namnażania tego obszaru charakterystycznego można łatwo zaprojektować przy zastosowaniu technik znanych specjalistom.
B. Izolacja sekwencji docelowych
Jak tu opisano, niniejszy wynalazek dostarcza pierwszego zestawu starterów, który specyficznie namnaża obszar charakterystyczny sekwencji docelowej, np. serotypu AAV, dla umożliwienia wykrycia celu. W sytuacji, gdy pożądane są dalsze sekwencje, np. gdy zidentyfikuje się nowy serotyp AAV, obszar charakterystyczny może być poszerzony. Wynalazek może zatem wykorzystywać ponadto jeden lub więcej dodatkowych zestawów starterów.
Odpowiednio, te zestawy starterów projektowane są tak, by obejmowały starter 5' albo 3' z pierwszego zestawu starterów i drugi starter unikatowy dla tego zestawu starterów tak, by zestaw starterów namnażał obszar położony w stronę 5' lub 3' obszaru charakterystycznego przyłączający się do końca 5' lub 3' obszaru charakterystycznego. Przykładowo, pierwszy zestaw starterów składa się ze startera 5' P1, i startera 3' P2 dla namnożenia obszaru charakterystycznego. W celu poszerzenia obszaru charakterystycznego na końcu 3' drugi zestaw starterów składa się ze startera P1 i startera 3' P4, i namnaża obszar charakterystyczny i ciągłe sekwencje poniżej obszaru charakterystycznego. W celu poszerzenia obszaru charakterystycznego na końcu 5' trzeci zestaw starterów składa się ze startera 5' P5 i startera P2 tak, że namnażany jest obszar charakterystyczny i ciągłe sekwencje pow yżej obszaru charakterystycznego. Te etapy wydłużania są powtarzane (lub wykonywane w tym samym czasie) w miarę potrzeby. Następnie produkty wyizolowane z tych etapów namnażania są łączone przy pomocy konwencjonalnych etapów dla wytworzenia wyizolowanej sekwencji o pożądanej długości.
Drugi i trzeci zestaw starterów projektuje się, podobnie jak dla zestawu starterów dla obszaru charakterystycznego tak, by namnożyć obszar posiadający wysoce zachowywane sekwencje wśród sekwencji dopasowanych. Odniesienie do terminu drugi lub trzeci zestaw starterów jest czynione jedynie dla celu dyskusji, bez względu na to, w jakiej kolejności startery te są dodawane do mieszaniny reakcyjnej albo wykorzystywane w namnażaniu. Obszar namnażany przez drugi zestaw starterów wybrany jest tak, by po namnożeniu jego 5' koniec łączył się z 3' końcem obszaru charakterystycznego. Podobnie, obszar namnażany przez trzeci zestaw starterów wybrany jest tak, by po namnożeniu jego 3' koniec łączył się z 5' końcem obszaru charakterystycznego. Można zaprojektować dodatkowe zestawy starterów tak, by namnażane przez nie obszary przyłączały się do 5' końca albo 3' końca produktów wydłużania utworzonych przez drugi lub trzeci zestaw starterów lub przez kolejne zestawy starterów.
PL 222 683 B1
Przykładowo, gdy sekwencją docelową jest AAV, pierwszy zestaw starterów (P1 i P2) jest stosowany do namnożenia obszaru charakterystycznego z próbki. W jednym pożądanym wykonaniu, ten obszar charakterystyczny leży w kapsydzie AAV. Drugi zestaw starterów (P1 i P4) wykorzystywany jest do wydłużenia 3' końca obszaru charakterystycznego do miejsca w sekwencji AAV, które znajduje się tuż przed 3' ITR AAV, tzn. dostarczając produkt wydłużania zawierający cały 3' koniec kapsydu AAV przy zastosowaniu obszaru charakterystycznego jako kotwicy. W jednym z wykonań starter P4 odpowiada nukleotydom 4435 do 4462 AAV2 [SEKW. NR ID.: 7] i odpowiadającym im sekwencjom w innych serotypach AAV.
Powoduje to namnożenie obszaru około 1,6 kb, który zawiera obszar charakterystyczny 0,25 kb. Trzeci zestaw starterów (P3 i P2) jest wykorzystywany do wydłużenia końca 5' obszaru charakterystycznego do miejsca w sekwencji AAV, które znajduje się na 3' końcu genów rep, tzn. dostarczając produkt wydłużania zawierający cały 5' koniec kapsydu AAV przy zastosowaniu obszaru charakterystycznego jako kotwicy. W jednym z wykonań starter P3 odpowiada nukleotydom 1384 do 1409 AAV2 [SEKW. NR ID.: 7] i odpowiadającym im sekwencjom w innych serotypach AAV. Powoduje to namnożenie obszaru około 1,7 kb, który zawiera obszar charakterystyczny 0,25 kb. Ewentualnie, stosowany jest czwarty zestaw starterów, dla dalszego wydłużenia produktu wydłużania zawierającego cały 5' koniec kapsydu AAV tak, by zawierał też sekwencje rep. W jednym z wykonań, starter P5 odpowiada nukleotydom 108 do 133 AAV2 [SEKW. NR ID.: 7] i odpowiadającym im sekwencjom w innych serotypach AAV i jest stosowany razem ze starterem P2.
Po zakończeniu pożądanej liczby etapów wydłużania, różne produkty wydłużania są łączone przy wykorzystaniu obszaru charakterystycznego jako kotwicy lub znacznika dla skonstruowania pełnej sekwencji. W dostarczonym tu przykładzie uzyskiwane są, sekwencje AAV zawierające przynajmniej pełny gen cap. Możliwe jest uzyskanie dłuższych sekwencji, zależnie od liczby przeprowadzonych etapów wydłużania.
Odpowiednio, produkty wydłużania składane są w pełną sekwencję AAV przy wykorzystaniu sposobów znanych specjalistom. Przykładowo, produkty wydłużania mogą być strawione Dra III, który przecina w miejscu DraIII zlokalizowanym w obszarze charakterystycznym, dostarczając fragmentów restrykcyjnych, które są ponownie ligowane dostarczając produktów zawierających (co najmniej) pełny gen cap AAV. Mogą jednak być też wykorzystane inne odpowiednie techniki składania produktów wydłużania w pełną sekwencję. Patrz, ogólnie, cytowany tu Sambrook i wsp.
Jako alternatywy dla opisanych powyżej wielu etapów wydłużania, inne wykonanie wynalazku dostarcza bezpośredniego namnażania fragmentu 3,1 kb pozwalające na wyizolowanie sekwencji cap pełnej długości. Dla bezpośredniego namnożenia pełnej długości fragmentu cap o wielkości 3,1 kb z DNA z tkanki NHP i krwi, zidentyfikowano w genomach AAV dwa inne wysoce zachowywane obszary do wykorzystania w amplifikacji PCR dużych fragmentów. Stosowany jest starter z obszarem zachowywanym zlokalizowanym w środku genu rep (AV1ns: 5'-GCTGCGTCAACTGGACCAATGAGAAC-3', nukleotydy SEKW. NR ID.: 6) w połączeniu ze starterem 3' zlokalizowanym w innym zachowywanym obszarze poniżej genu Cap (AV2cas: 5'-CGCAGAGACCAAAGTTCAACTGAAACGA-3', SEKW. NR ID.: 7) dla namnożenia sekwencji AAV zawierających pełnej długości cap AAV. Typowo, po namnożeniu produkty są klonowane i przeprowadzana jest analiza sekwencji z dokładnością > 99,9%. Przy zastosowaniu tego sposobu, wynalazcy wyizolowali co najmniej 50 klonów kaps ydu, które następnie scharakteryzowano. Wśród nich 37 klonów pochodziło z tkanek makaka rezusa (rh.1-rh.37), 6 klonów z makaków jawajskich (cy.1-cy.6), 2 klony z pawianów (bb.1 i bb.2) i 5 klonów z szympansów (ch.1-ch.5). Klony te zidentyfikowane są w innym miejscu tego opisu wraz z gatunkiem zwierzęcia, u którego zostały zidentyfikowane i tkankami zwierzęcia, w których zlokalizowane były te nowe sekwencje.
C. Alternatywny sposób izolacji nowych AAV
W innym aspekcie wynalazek dostarcza alternatywnego sposobu izolacji nowych AAV z komórki. Sposób ten obejmuje zakażenie komórki wektorem, który dostarcza funkcji wspomagających AAV, izolację zakaźnych klonów zawierających AAV, sekwencjonowanie wyizolowanych AAV, i porównanie sekwencji wyizolowanych AAV ze znanymi serotypami AAV, gdzie różnice w sekwencji wyizolowanego AAV i znanych serotypów AAV wskazują na obecność nowego AAV.
W jednym wykonaniu, wektor dostarczający funkcji wspomagających dostarcza niezbędnych funkcji adenowirusa, w tym np. E1a, E1b, E2a, E4ORF6. W jednym wykonaniu funkcje wspomagające dostarczane są przez adenowirusa. Adenowirus może być adenowirusem typu dzikiego i może pochodzić od człowieka lub nie od człowieka, korzystnie od naczelnego innego niż człowiek (NHP).
PL 222 683 B1
Sekwencje DNA szeregu typów adenowirusów dostępne są w Genbank, należy do nich typ Ad5 [numer dostępu Genbank M73260]. Sekwencje adenowirusa mogą być uzyskane z dowolnego znanego serotypu adenowirusa takiego, jak serotypy 2, 3, 4, 7, 12 i 40 i dalszych, w tym wszystkich zidentyfikowanych dotychczas typów ludzkich [patrz np. cytowany powyżej Horwitz]. Podobnie, adenowirusy, o których wiadomo, że zakażają zwierzęta inne, niż człowiek (np. szympansy) mogą być zastosowane w konstruktach wektorowych według tego wynalazku. Patrz np. Patent USA nr 6,083,716. Poza adenowirusami typu dzikiego, mogą być zastosowane wirusy zrekombinowane lub wektory niewirusowe (np. plazmidy, episomy itp.) niosące niezbędne funkcje wspomagające. Takie zrekombinowane wirusy są znane w technice i mogą być przygotowane zgodnie z opublikowanymi technikami. Patrz np. Patent USA nr 5,871,982 i Patent USA nr 6,251,677, które opisują hybrydowego wirusa Ad/AAV. Nie przewiduje się, by wybór typu adenowirusa ograniczał niniejszy wynalazek. Szereg szczepów aden owirusa dostępnych jest w American Type Culture Collection, Manassas, Virginia, lub na żądanie z różnych źródeł komercyjnych i publicznych. Ponadto, sekwencje wielu takich szczepów dostępne są w szeregu baz danych, w tym np. PubMed i GenBank.
W innej alternatywie, zakaźny AAV może być wyizolowany przy zastosowaniu techniki kroczenia po genomie (Siebert i wsp., 1995, Nucleic Acid Research, 23: 1087-1088, Friezner-Degen i wsp., 1986, J. Biol. Chem. 261: 6972-6985, BD Biosciences Clontech, Palo Alto, CA). Kroczenie po genomie szczególnie dobrze nadaje się do identyfikacji i izolacji sekwencji sąsiadujących z nowymi sekwencjami zidentyfikowanymi zgodnie ze sposobem według wynalazku. Przykładowo, technika ta może być przydatna do izolacji odwróconych końcowych powtórzeń (ITR) nowego serotypu AAV, w oparciu o sekwencje kapsydu i/lub rep nowego AAV zidentyfikowane przy zastosowaniu sposobów według wynalazku. Technika ta jest także przydatna w izolacji sekwencji sąsiadujących z innymi s ekwencjami AAV i nie-AAV zidentyfikowanymi i wyizolowanymi według niniejszego wynalazku.
Sposoby według wynalazku mogą z łatwością być wykorzystane do szeregu badań epidemiologicznych, badań biorozmieszczenia, śledzenia terapii genowej poprzez wektory AAV i wektory pochodzące z innych zintegrowanych wirusów. Sposoby te dobrze nadają się zatem do zastosowania w opakowanych zestawach do wykorzystania przez klinicystów, badaczy i epidemiologów
II. Zestaw diagnostyczny
W innym aspekcie wynalazek dostarcza zestawu diagnostycznego do wykrywania w próbce obecności znanych lub nieznanych wirusów stowarzyszonych z adenowirusem (AAV). Taki zestaw może zawierać pierwszy zestaw starterów PCR 5' i 3' specyficznych dla obszary charakterystycznego sekwencji nukleotydowej AAV. Alternatywnie, lub dodatkowo taki zestaw może zawierać pierwszy zestaw starterów PCR 5' i 3' specyficznych dla fragmentu 3,1 kb, który zawiera pełną sekwencję nukleotydową kapsydu AAV tu zidentyfikowaną (np. startery AV1ns i AV2cas). Ewentualnie zestaw według tego wynalazku może zawierać ponadto dwa lub więcej dodatkowych zestawów starterów 5' i 3' tak, jak tu opisano, i/lub sondy PCR. Te startery i sondy są stosowane według niniejszego wynalazku i namnażają obszary charakterystyczne każdego serotypu AAV, np. przy zastosowaniu ilościowego PGR.
Wynalazek dostarcza ponadto zestawu przydatnego do identyfikacji serotypu AAV wykrytego zgodnie ze sposobem według wynalazku i/lub do rozróżniania nowych AAV od znanych AAV. Taki zestaw może zawierać ponadto jeden lub więcej enzymów restrykcyjnych, standardów serotypów AAV dostarczających ich charakterystyczne analizy trawienia enzymami restrykcyjnymi i/lub środki do wyznaczania serotypu wykrytego AAV.
Ponadto, zestawy według wynalazku mogą zawierać instrukcje, kontrolę negatywną i/lub pozytywną, pojemniki, rozcieńczalniki i bufory do próbki, schematy wskaźnikowe do porównania charakterystyk, jednorazowe rękawiczki, instrukcje dekontaminacji, aplikatory lub pojemniki i zbiorniki do prz ygotowania próbki a także dowolne pożądane odczynniki, w tym podłoża, odczynniki do płukania i odczynniki do zatężania. Takie odczynniki mogą z łatwością być wybrane spośród opisanych tu odczynników i spośród konwencjonalnych odczynników do zatężania. W jednym pożądanym wykonaniu, odczynnik do płukania jest izotonicznym jałowym roztworem soli, który buforowano do pH fizjologicznego takim, jak roztwór soli buforowanej fosforanem (PBS); odczynnikiem do elucji jest PBS zawier ający 0,4 M NaCl oraz odczynniki i przyrządy do zatężania. Przykładowo, specjalista zauważy, że odczynniki takie, jak glikol polietylenowy (PEG) lub NH4SO4 mogą być przydatne, oraz przyrządy takie, jak filtry. Przykładowo, filtr z błoną 100 K zatęży rAAV.
Zestawy dostarczone przez niniejszy wynalazek są przydatne do przeprowadzania sposobów tu opisanych i do badania biorozmieszczenia, epidemiologii, sposobu przenoszenia nowych serotypów AAV u człowieka i NHP.
PL 222 683 B1
Sposoby i zestawy według niniejszego wynalazku umożliwiają zatem wykrycie, identyfikację i izolację docelowych sekwencji wirusowych, zwłaszcza zintegrowanych sekwencji wirusowych. Sposoby i zestawy są szczególnie przydatne do wykrywania, identyfikacji i izolacji sekwencji AAV, które mogą obejmować nowe serotypy AAV.
W jednym godnym uwagi przykładzie sposób według wynalazku ułatwił analizę przez wynala zców sklonowanych sekwencji AAV, która ujawniła heterogeniczność sekwencji prowirusowych pomiędzy sklonowanymi fragmentami z różnych zwierząt, różnych od znanych sześciu serotypów AAV, gdzie większość zmienności była zlokalizowana w nadzmiennych obszarach białka kapsydu. Zaskakujące zróżnicowanie sekwencji AAV zaobserwowano w klonach wyizolowanych ze źródeł pojedynczych tkanek takich, jak węzły chłonne od jednego osobnika rezusa.
Heterogeniczność tę najlepiej wyjaśnić przez obserwowaną ewolucję sekwencji AAV u pojedynczych zwierząt spowodowaną częściowo przez częstą rekombinację homologiczną pomiędzy ogran iczoną liczbą współzakażających wirusów rodzicielskich. Badania te sugerują ewolucję sekwencji szeroko rozpowszechnionego wirusa podczas naturalnej infekcji AAV, która przypuszczalnie prowadzi do utworzenia rojów quasi-gatunków, które różnią się od siebie ciągiem nadzmiennych obszarów kaps ydu. Jest to pierwszy przykład szybkiej ewolucji molekularnej wirusa DNA w sposób, który dotychczas uważano za ograniczony do wirusów RNA.
Dostarczone są sekwencje kilku nowych serotypów AAV zidentyfikowanych sposobem według wynalazku oraz charakterystyka tych serotypów.
III. Nowe serotypy AAV
A. Sekwencje nukleotydowe
Dostarczono sekwencje nukleotydowe nowych serotypów AAV zidentyfikowanych sposobami według wynalazku. Patrz SEKW. NR ID.: 1, 9-59 i 117-120, które są tu włączone przez referencję. Patrz też Rys. 1 i lista sekwencji.
Dla nowego serotypu AAV7 sekwencje pełnej długości, w tym 5' ITR AAV, kapsyd, rep i 3' ITR AAV dostarczono w SEKW. NR ID.: 1.
Dla innych nowych serotypów AAV według wynalazku dostarczono fragment około 3,1 kb wyizolowany zgodnie ze sposobem według wynalazku. Fragment ten zawiera sekwencje kodujące pełnej długości białko kapsydu i całość lub część sekwencji kodujących białko rep. Sekwencje te obejmują klony zidentyfikowane poniżej.
Dla jeszcze innych nowych serotypów AAV dostarczono obszar charakterystyczny kodujący białko kapsydu. Przykładowo, sekwencje nukleotydowe AAV10 według wynalazku obejmują przedstawione na Rys. 1 [patrz, SEKW. NR ID.: 117, która obejmuje 255 zasad]. Sekwencje nukleotydowe AAV11 według wynalazku obejmują sekwencje DNA przedstawione na Rys. 1 [patrz, SEKW. NR ID.: 118, która obejmuje 258 zasad].
Sekwencje nukleotydowe AAV12 według wynalazku obejmują sekwencje DNA przedstawione na Rys. 1 [patrz, SEKW. NR ID.: 119, która obejmuje 255 zasad]. Przy zastosowaniu opisanej powyżej metodologii, dalsze sekwencje AAV10, AAV11 i AAV12 mogą być łatwo zidentyfikowane i wykorzystane dla szeregu różnych celów, w tym opisanych tu dla AAV7 i innych nowych serotypów.
Rysunek 1 dostarcza sekwencje AAV od naczelnych innych niż człowiek (NHP) według wynalazku zgodnie z dotychczas opublikowanymi serotypami AAV, AAV1 [SEKW. NR ID.: 6], AAV2 [SEKW. NR ID.: 7] i AAV3 [SEKW. NR ID.: 8]. Te nowe sekwencje NHP obejmują dostarczone w następującej Tabeli 1, które są zidentyfikowane przez numer klonu:
T a b e l a 1
Sekwencja Cap AAV Klon numer Źródło
Gatunek Tkanka SEKW. NR ID. (DNA)
1 2 3 4 5
Rh.1 Klon 9 (AAV9) Rezus Serce 5
Rh.2 Klon 43.1 Rezus MLN 39
Rh.3 Klon 43.5 Rezus MLN 40
Rh.4 Klon 43.12 Rezus MLN 41
PL 222 683 B1 ciąg dalszy Tabeli 1
1 2 3 4 5
Rh.5 Klon 43.20 Rezus MLN 42
Rh.6 Klon 43.21 Rezus MLN 43
Rh.7 Klon 43.23 Rezus MLN 44
Rh.8 Klon 43.25 Rezus MLN 45
Rh.9 Klon 44.1 Rezus Wątroba 46
Rh.10 Klon 44.2 Rezus Wątroba 59
Rh.11 Klon 44.5 Rezus Wątroba 47
Rh.12 Klon 42.1B Rezus MLN 30
Rh.13 Klon 42.2 Rezus MLN 9
Rh.14 Klon 42.3A Rezus MLN 32
Rh.15 Klon 42.3B Rezus MLN 36
Rh.16 Klon 42.4 Rezus MLN 33
Rh.17 Klon 42.5A Rezus MLN 34
Rh.18 Klon 42.5B Rezus MLN 29
Rh.19 Klon 42.6B Rezus MLN 38
Rh.20 Klon 42.8 Rezus MLN 27
Rh.21 Klon 42.10 Rezus MLN 35
Rh.22 Klon 42.11 Rezus MLN 37
Rh.23 Klon 42.12 Rezus MLN 58
Rh.24 Klon 42.13 Rezus MLN 31
Rh.25 Klon 42.15 Rezus MLN 28
Rh.26 Klon 223.2 Rezus Wątroba 49
Rh.27 Klon 223.4 Rezus Wątroba 50
Rh.28 Klon 223.5 Rezus Wątroba 51
Rh.29 Klon 223.6 Rezus Wątroba 52
Rh.30 Klon 223.7 Rezus Wątroba 53
Rh.31 Klon 223.10 Rezus Wątroba 48
Rh.32 Klon C1 Rezus Śledziona, dwunastnica, nerka i wątroba 19
Rh.33 Klon C3 Rezus 20
Rh.34 Klon C5 Rezus 21
Rh.35 Klon F1 Rezus Wątroba 22
Rh.36 Klon F3 Rezus 23
Rh.37 Klon F5 Rezus 24
Cy.1 Klon 1.3 Makak Krew 14
Cy.2 Klon 13.3B Makak Krew 15
Cy.3 Klon 24.1 Makak Krew 16
Cy.4 Klon 27.3 Makak Krew 17
PL 222 683 B1 ciąg dalszy Tabeli 1
1 2 3 4 5
Cy.5 Klon 7.2 Makak Krew 18
Cy.6 Klon 16.3 Makak Krew 10
bb.1 Klon 29.3 Pawian Krew 11
bb.2 Klon 29.5 Pawian Krew 13
Ch.1 Klon A3.3 Szympans Krew 57
Ch.2 Klon A3.4 Szympans Krew 54
Ch.3 Klon A3.5 Szympans Krew 55
Ch.4 Klon A3.7 Szympans Krew 56
Nowy klon NHP sporządzono włączając fragmenty kapsydu dwóch adenowirusów szympansa do konstruktu AAV2 rep. Ten nowy klon, A3.1 nazwano też Ch.5 [SEKW. NR ID.: 20]. Ponadto, niniejszy wynalazek obejmuje dwie sekwencje ludzkiego AAV, nazwane H6 [SEKW. NR ID.: 25] i H2 [SEKW. NR ID.: 26].
Sekwencje kwasu nukleinowego AAV według wynalazku obejmują ponadto nić, która jest komplementarna do nici dostarczonych w sekwencjach dostarczonych na Rys. 1 i w Liście Sekwencji [SEKW. NR ID.: 1,9-59, 117-120], sekwencje kwasu nukleinowego, zarówno sekwencje RNA i cDNA odpowiadające sekwencjom dostarczonym na Rys. 1 i w Liście Sekwencji [SEKW. NR ID.: 1,9-59, 117-120] i ich nici komplementarne. Do sekwencji nukleotydowych według wynalazku włączone są także naturalne warianty i skonstruowane modyfikacje sekwencji z Rys. 1 i Listy Sekwencji [SEKW. NR ID.: 1,9-59, 117-120] i ich nici komplementarne. Do modyfikacji takich należą, przykładowo, znane w technice znaczniki, metylacja i podstawienie jednego lub więcej naturalnie występujących nukleotydów nukleotydem zdegenerowanym.
Do wynalazku włączone są ponadto sekwencje kwasu nukleinowego o homologii lub identyczności ponad 85%, korzystnie ponad 90%, a najkorzystniej przynajmniej 98 do 99% względem sekwencji według wynalazku, w tym Rys. 1 i Lista Sekwencji [SEKW. NR ID.: 1,9-59, 117-120]. Terminy te są stosowane zgodnie z podaną tu definicją.
Do wynalazku włączone są także fragmenty nowych sekwencji AAV zidentyfikowane opisanym tu sposobem. Odpowiednie fragmenty mają długość co najmniej 15 nukleotydów i obejmują fragmenty funkcjonalne, tzn. fragmenty, które mają znaczenie biologiczne. W jednym wykonaniu, fragmentami tymi są fragmenty nowych sekwencji z Rys. 1 i Listy Sekwencji [SEKW. NR ID.: 1,9-59, 117-120], ich nici komplementarne, i komplementarne do nich cDNA i RNA.
Przykłady odpowiednich fragmentów dostarczono z uwzględnieniem położenia tych fragmentów w AAV1, AAV2 lub AAV7. Jednakże, przy zastosowaniu dostarczonego tu dopasowania (uzyskanego przy pomocy programu Clustal W przy domyślnych ustawieniach) do tworzenia dopasowania z innymi nowymi serotypami według wynalazku, specjalista bez trudu zidentyfikuje dokładne pozycje nukleot ydowe kodonów start i stop dla pożądanych fragmentów.
Do przykładów odpowiednich fragmentów należą sekwencje kodujące trzy białka zmienne (vp) kapsydu AAV będące wariantami alternatywnego składania: vp1 [np. nt 825 do 3049 AAV7, SEKW. NR ID.: 1]; vp2 [np. nt 1234-3049 AAV7, SEKW. NR ID.: 1]; i vp3 [np. nt 1434-3049 AAV7, SEKW. NR ID.: 1]. Godne uwagi jest to, że AAV7 posiada nietypowy kodon start GTG. Za wyjątkiem kilku genów typu house-keeping, takiego kodonu start nie opisano dotychczas w wirusach DNA. Uważano, że kodony start vp1, vp2 i vp3 innych serotypów AAV są takie, by pozwolić mechanizmowi komórkowemu komórki gospodarza, w której przebywają, na wytworzenie vp1, vp2 i vp3 w stosunku odpowiednio 10%:10%:80%, by pozwolić na wydajne złożenie wirionu. Stwierdzono jednak, że wirion AAV7 składa się wydajnie, nawet z tym rzadkim kodonem start GTG. Wynalazcy przewidują zatem, że pożądana jest zmiana kodonu start vp3 innych serotypów AAV tak, by zawierały ten rzadki kodon start GTG, w celu ulepszenia wydajności pakowania, zmiany struktury wirionu i/lub zmiany położenia epitopów (np. epitopów dla przeciwciał neutralizujących) innych serotypów AAV. Kodony start mogą być zmienione przy pomocy konwencjonalnych technik, w tym np. mutagenezy ukierunkowanej. Niniejszy wynalazek obejmuje zatem zmienione wiriony AAV dowolnego wybranego serotypu, złożone z vp3, i/lub ewentualnie vp1 i/lub vp2 z kodonem start zamienionym na GTG.
PL 222 683 B1
Do innych odpowiednich fragmentów AAV należy fragment zawierający kodon start białka kapsydu AAV [np. nt 468 do 3090 AAV7, SEKW. NR ID.: 1, nt 725 do 3090, SEKW. NR ID: 1, i odpowiednie obszary innych serotypów AAV]. Jeszcze inne fragmenty AAV7 i innych nowych serotypów AAV zidentyfikowanych przy pomocy opisanych tu sposobów obejmują fragmenty kodujące białka rep, w tym rep78 [np. kodon inicjacyjny 334 z Rys. 1 dla AAV7], rep68 [kodon inicjacyjny 334 z Rys. 1 dla AAV7], rep52 [kodon inicjacyjny 1006 z Rys. 1 dla AAV7] i rep40 [kodon inicjacyjny 1006 z Rys. 1 dla AAV7]. Do innych interesujących fragmentów mogą należeć odwrócone końcowe powtórzenia ITR AAV 5' [nt 1 do 107 z Rys. 1 dla AAV7]; ITR AAV 3' [nt 4704 do 4721 z Rys. 1 dla AAV7]; sekwencje P19, sekwencje P40 AAV, miejsce wiązania rep i końcowe miejsce rozwiązania (TRS Terminal Resolute Site). Jeszcze inne odpowiednie fragmenty będą oczywiste dla specjalisty. Odpowiednie obszary w innych nowych serotypach według wynalazku mogą być łatwo wyznaczone przez odniesienie do Rysunku 1, lub przy zastosowaniu konwencjonalnych technik dopasowania z dostarczonymi tu sekwencjami.
Poza włączeniem sekwencji nukleotydowych dostarczonych na rysunkach i w Liście Sekwencji, niniejszy wynalazek obejmuje cząsteczki kwasów nukleinowych i sekwencje, które zaprojektowano do wyrażania sekwencji aminokwasowych, białek i peptydów serotypów AAV według wynalazku. Wynalazek obejmuje zatem sekwencje nukleotydowe, które kodują następujące nowe sekwencje aminokwasowe AAV: C1 [SEKW. NR ID.: 60], C2 [SEKW. NR ID.: 61], C5 [SEKW. NR ID.: 62], A3-3 [SEKW. NR ID.: 66], A3-7 [SEKW. NR ID.: 67], A3-4 [SEKW. NR ID.: 68], A3-5 [SEKW. NR ID.: 69], 3.3b [SEKW. NR ID.: 62], 223.4 [SEKW. NR ID.: 73], 223-5 [SEKW. NR ID.: 74], 223-10 [SEKW. NR ID.: 75], 223-2 [SEKW. NR ID.: 76], 223-7 [SEKW. NR ID.: 77], 223-6 [SEKW. NR ID.: 78], 44-1 [SEKW. NR ID.: 79], 44-5 [SEKW. NR ID.: 80], 44-2 [SEKW. NR ID.: 81], 42-15 [SEKW. NR ID.: 84], 42-8 [SEKW. NR ID.: 85], 42-13 [SEKW. NR ID.: 86], 42-3A [SEKW. NR ID.: 87], 42-4 [SEKW. NR ID.: 88], 42-5A [SEKW. NR ID.: 89], 42-1B [SEKW. NR ID.: 90],42-5B [SEKW. NR ID.: 91], 43-1 [SEKW. NR ID.: 92], 43-12 [SEKW. NR ID.: 93], 43-5 [SEKW. NR ID.: 94], 43-21 [SEKW. NR ID.: 96], 43-25 [SEKW. NR ID.: 97], 43-20 [SEKW. NR ID.: 99], 24.1 [SEKW. NR ID.: 101], 42.2 [SEKW. NR ID.: 102], 7.2 [SEKW. NR ID.: 103], 27.3 [SEKW. NR ID.: 104], 16.3 [SEKW. NR ID.: 105], 42.10 [SEKW. NR ID.: 106], 42-3B [SEKW. NR ID.: 107], 42-11 [SEKW. NR ID.: 108], F1 [SEKW. NR ID.: 109], F5 [SEKW. NR ID.: 110], F3 [SEKW. NR ID.: 111], 42-63 [SEKW. NR ID.: 112], i/lub 42-12 [SEKW. NR ID.: 113] oraz sztuczne serotypy AAV wytworzone przy pomocy tych sekwencji i/lub ich charakterystycznych fragmentów.
W użytym tu znaczeniu, sztuczne serotypy AAV obejmują, między innymi, AAV z białkiem kapsydu niewystępującym naturalnie. Taki sztuczny kapsyd może być wytworzony dowolną odpowiednią techniką przy wykorzystaniu nowej sekwencji AAV według wynalazku (np. fragmentu białka kapsydu vp1) w połączeniu z heterologicznymi sekwencjami, które można uzyskać z innego serotypu AAV (znanego lub nowego), nieciągłej części tego samego serotypu AAV, innego niż AAV źródła wirusowego, lub ze źródła nie będącego wirusem. Sztuczny serotyp AAV może być, między innymi, chim erycznym kapsydem AAV, zrekombinowanym kapsydem AAV lub humanizowanym kapsydem AAV.
B. Sekwencje aminokwasowe AAV, białka i peptydy
Wynalazek dostarcza białek i ich fragmentów, kodowanych przez sekwencje nukleotydowe zidentyfikowanych tu nowych serotypów AAV, w tym np. AAV7 [nt 825 do 3049 AAV7, SEKW. NR. ID.: 1] i inne dostarczone tu nowe serotypy. Białka kapsydu nowych serotypów według wynalazku, w tym: H6 [SEKW. NR ID.: 25], H2 [SEKW. NR ID.: 26], 42-2 [SEKW. NR ID.: 9], 42-8 [SEKW. NR ID.: 27], 42-15 [SEKW. NR ID.: 28], 42-5b [SEKW. NR ID.: 29], 42-1b [SEKW. NR ID.: 30], 42-13 [SEKW. NR ID.: 31], 42-3a [SEKW. NR ID.: 32], 42-4 [SEKW. NR ID.: 33], 42-5a [SEKW. NR ID.: 34], 42-10 [SEKW. NR ID.: 35], 42-3b [SEKW. NR ID.: 36], 42-11 [SEKW. NR ID.: 37], 42-6b [SEKW. NR ID.: 38], 43-1 [SEKW. NR ID.: 39], 43-5 [SEKW. NR ID.: 40], 43-12 [SEKW. NR ID.: 41], 43-20 [SEKW. NR ID.: 42], 43-21 [SEKW. NR ID.: 43], 43-23 [SEKW. NR ID.: 44], 43-25 [SEKW. NR ID.: 45], 44.1 [SEKW. NR ID.: 47], 44.5 [SEKW. NR ID.: 47], 223.10 [SEKW. NR ID.: 48], 223.2 [SEKW. NR ID.: 49], 223.4 [SEKW. NR ID.: 50], 223.5 [SEKW. NR ID.: 51], 223.6 [SEKW. NR ID.: 52], 223.7 [SEKW. NR ID.: 53], A3.4 [SEKW. NR ID.: 54], A3.5 [SEKW. NR ID.: 55], A3.7 [SEKW. NR ID.: 56], A3.3 [SEKW. NR ID.: 57], 42.12 [SEKW. NR ID.: 58], i 44.2 [SEKW. NR ID.: 59] mogą zatem być łatwo wytworzone przy zastosowaniu konwencjonalnych technik z otwartych ramek odczytu dostarczonych przez wymienione powyżej klony.
Wynalazek obejmuje ponadto serotypy AAV wytworzone przy zastosowaniu sekwencji nowych serotypów AAV według wynalazku, które są wytworzone przy zastosowaniu technik syntezy rekombinacji lub innych
PL 222 683 B1 znanych specjalistom. Wynalazek nie jest ograniczony do nowych sekwencji aminokwasowych AAV, peptydów i białek wyrażanych przez nowe sekwencje nukleotydowe AAV według wynalazku i obejm uje sekwencje aminokwasowe, peptydy i białka wytworzone innymi sposobami znanymi w technice, w tym np. przez syntezę chemiczną, przez inne techniki syntezy lub inne sposoby. Przykładowo, sekwencje każdej spośród C1 [SEKW. NR ID.: 60], C2 [SEKW. NR ID.: 61], C5 [SEKW. NR ID.: 62], A33 [SEKW. NR ID.: 66], A3-7 [SEKW. NR ID.: 67], A3-4 [SEKW. NR ID.: 68], A3-5 [SEKW. NR ID.: 69], 3.3b [SEKW. NR ID.: 62], 223.4 [SEKW. NR ID.: 73], 223-5 [SEKW. NR ID.: 74], 223-10 [SEKW. NR ID.: 75], 223-2 [SEKW. NR ID.: 76], 223-7 [SEKW. NR ID.: 77], 223-6 [SEKW. NR ID.: 78], 44-1 [SEKW. NR ID.: 79], 44-5 [SEKW. NR ID.: 80], 44-2 [SEKW. NR ID.: 81], 42-15 [SEKW. NR ID.: 84], 42-8 [SEKW. NR ID.: 85], 42-13 [SEKW. NR ID.: 86], 42-3A [SEKW. NR ID.: 87], 42-4 [SEKW. NR ID.: 88], 42-5A [SEKW. NR ID.: 89], 42-1B [SEKW. NR ID.: 90], 42-5B [SEKW. NR ID.: 91], 43-1 [SEKW. NR ID.: 92], 43-12 [SEKW. NR ID.: 93], 43-5 [SEKW. NR ID.: 94], 43-21 [SEKW. NR ID.: 96], 43-25 [SEKW. NR ID.: 97], 43-20 [SEKW. NR ID.: 99], 24.1 [SEKW. NR ID.: 101], 42.2 [SEKW. NR ID.: 102], 7.2 [SEKW. NR ID.: 103], 27.3 [SEKW. NR ID.: 104], 16.3 [SEKW. NR ID.: 105], 42.10 [SEKW. NR ID.: 106], 42-3B [SEKW. NR ID.: 107], 42-11 [SEKW. NR ID.: 108], F1 [SEKW. NR ID.: 109], F5 [SEKW. NR ID.: 110], F3 [SEKW. NR ID.: 111], 42-6B [SEKW. NR ID.: 112], i/lub 42-12 [SEKW. NR ID: 113] mogą być łatwo wytworzone przy zastosowaniu szeregu różnych technik.
Odpowiednie techniki wytwarzania są dobrze znane specjalistom. Patrz np. Sambrook i wsp., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press (Cold Spring Harbor, NY). Alternatywnie, peptydy mogą być też syntetyzowane przy pomocy dobrze znanych sposobów syntezy pept ydów w fazie stałej (Merrifield, J. Am. Chem. Soc., 85: 2149 (1962); Stewart i Young, Solid Phase Peptide Synthesis (Freeman, San Francisco, 1969) ss. 27-62). Te i inne odpowiednie sposoby wytwarzania są znane specjalistom i nie stanowią ograniczenia niniejszego wynalazku.
Do szczególnie pożądanych białek należą białka kapsydu AAV, które są kodowane przez zide ntyfikowane powyżej sekwencje nukleotydowe. Sekwencje wielu spośród białek kapsydu według wynalazku dostarczono w uliniowaniu na Rys. 2 i/lub w Liście Sekwencji, SEKW. NR ID.: 2 i 60 do 115, które są tu niniejszym włączone przez referencję. Kapsyd AAV składa się z trzech białek vp1, vp2 i vp3, które są wariantami alternatywnego składania. Pełnej długości sekwencja dostarczona na tych rysunkach to sekwencja vp1. Na podstawie numeracji kapsydu AAV7 [SEKW. NR ID.: 2], sekwencje vp2 obejmują aminokwasy 138-737 AAV7, zaś sekwencje vp3 obejmują aminokwasy 203-737 AAV7. Na podstawie tych informacji specjalista może bez trudu wyznaczyć położenie białek vp2 i vp3 dla innych nowych serotypów według wynalazku.
Do innych pożądanych białek i fragmentów białek kapsydu należą stałe i zmienne obszary, p ołożone pomiędzy obszarami nadzmiennymi (HPV) oraz sekwencje samych obszarów HPV. Algorytm opracowany dla wyznaczenia obszarów dywergencji sekwencji w AAV2 wykazał 12 obszarów nadzmiennych (HVR), z których 5 nakłada się, lub stanowi część czterech wcześniej opisanych obszarów zmiennych. [Chiorini i wsp., J. Virol, 73: 1309-19 (1999); Rutledge i wsp., J: Virol., 72; 309-319]. Przy zastosowaniu tego algorytmu i/lub opisanych tu technik dopasowania wyznaczane są HVR nowych serotypów AAV. Przykładowo, względem numeracji vp1 AAV2 [SEKW. NR ID.: 70], HVR zlokalizowane są następująco: HVR1, aa 146-152; HVR2, aa 182-186; HVR3, aa 262-264; HVR4, aa 381-383; HVR5, aa 450-474; HVR6, aa 490-495; HVR7, aa 500-504; HVR8, aa 514-522; HVR9, aa 534-555; HVR10, aa 581-594; HVR11, aa 658-667; i HVR12, aa 705-719. Przy zastosowaniu dopasowania, przygotowanego według konwencjonalnych sposobów, oraz dostarczonych tu nowych sekwencji [patrz, np. Rysunek 2], można łatwo wyznaczyć położenie HVR w nowych serotypach AAV według wynalazku. Przykładowo, przy wykorzystaniu Rysunku 2 można z łatwością stwierdzić, że dla AAV7 [SEKW. NR ID.: 2] HVR1 jest zlokalizowany w aa 146-152; HVR2 jest zlokalizowany w 182-187; HVR3 jest zlokalizowany w aa 263-266, HVR4 jest zlokalizowany w aa 383-385, HVR5 jest zlokalizowany w aa 451 -475; HVR6 jest zlokalizowany w aa 491 -496 of AAV7; HVR7 jest zlokalizowany w aa 501-505; HVR8 jest zlokalizowany w aa 513-521; HVR9 jest zlokalizowany w 533-554; HVR10 jest zlokalizowany w aa 583-596; HVR11 jest zlokalizowany w aa 660-669; HVR12 jest zlokalizowany w aa 707-721. Przy wykorzystaniu dostarczonej tu informacji z łatwością można wyznaczyć HVR dla innych nowych serotypów według wynalazku.
Dodatkowo zidentyfikowano w kapsydzie aminokwasowe kasety identyczności. Kasety te są szczególnie interesujące, gdyż są przydatne do konstruowania sztucznych serotypów, np. przez wymianę kasety HVR1 wybranego serotypu na kasetę HVR1 innego serotypu. Niektóre spośród tych kaset identyczności zaznaczono na Rys. 2. Patrz Rys. 2, gdzie dostarczono dopasowanie Clustal X,
PL 222 683 B1 zawierające umieszczoną pod sekwencjami linijkę, poczynając od pierwszej pozycji oznaczonej 1. Linia nad linijką jest wykorzystana do zaznaczenia silnie zachowywanych pozycji. Wykorzystywane są trzy znaki (*, :,.). * oznacza pozycje zawierające jeden, w pełni konserwowany aminokwas. oznacza, że grupa silna jest w pełni zachowywana. . oznacza, że grupa słabsza jest w pełni zachowywana. Są to grupy o dodatniej wartości występujące w macierzy Gonnet Pam250. Grupy silne zdefiniowane są przez silną wartość >0,5, zaś grupy słabe są zdefiniowane przez słabą wartość <0,5.
Dodatkowo, do przykładów innych odpowiednich fragmentów kapsydów AAV należą, według numeracji AAV2 [SEKW. NR ID.: 70], aa 24-42, aa 25-28; aa 81-85; aa 133-165; aa 134-165; aa 137-143; aa 154-156; aa 194-208; aa 261 -274; aa 262-274; aa 171 -173; aa 413-417; aa 449-478; aa 494-525; aa 534-571; aa 581 -601; aa 660-671; aa 709-723. Do jeszcze innych pożądanych fragmentów należą, przykładowo, dla AAV7 aminokwasy 1 do 184 SEKW. NR ID.: 2, aminokwasy 199 do 259; aminokwasy 274 do 446; aminokwasy 603 do 659; aminokwasy 670 do 706; aminokwasy 724 do 736; aa 185 do 198; aa 260 do 273; aa 447 do 477; aa 495 do 602; aa 660 do 669; i aa 707 do 723. Jeszcze inne pożądane fragmenty, według numeracji AAV7 [SEKW. NR ID.: 2], wybrane są z grupy złożonej z aa 185 do 198; aa 260 do 273; aa 447 to 477; aa 495 do 602; aa 660 do 669; i aa 707 do 723. Przy wykorzystaniu dostarczonego dopasowania wykonanego przy użyciu programu Clustal X przy domyślnych ustawieniach, lub przy zastosowaniu innego dostępnego w handlu lub public zne programu przy domyślnych ustawieniach specjalista bez trudu wyznaczy odpowiadające im fragmenty nowych kapsydów AAV według wynalazku.
Innymi pożądanymi białkami są białka rep AAV [aa 1 do 623 SEKW. NR ID.: 3 dla AAV7] i ich funkcjonalne fragmenty, w tym między innymi np. aa 1 do 171, aa 172 do 372, aa 373 do 444, aa 445 do 623 SEKW. NR ID.: 3. Odpowiednio, fragmenty takie mają przynajmniej 8 aminokwasów długości. Patrz Rys. 3. Porównywalne obszary mogą być zidentyfikowane we fragmentach innych nowych AAV według wynalazku przy pomocy technik opisanych tu i znanych w dziedzinie. Ponadto, fragmenty innej pożądanej długości mogą być łatwo wykorzystane. Fragmenty takie mogą być wytworzone przez rekombinację lub innymi odpowiednimi środkami, np. przez syntezę chemiczną.
Sekwencje, białka i fragmenty według wynalazku mogą być wytworzone dowolnymi odpowie dnimi środkami, w tym rekombinacją, syntezą chemiczną lub innymi środkami syntezy. Takie metody wytwarzania są znane specjalistom i nie stanowią ograniczenia niniejszego wynalazku.
IV. Wytwarzanie rAAV z nowymi kapsydami AAV
Wynalazek obejmuje nowe, dzikie serotypy AAV zidentyfikowane przez wynalazek, sekwencje, których to dzikich serotypów AAV są wolne od DNA i/lub materiału komórkowego, z którym te wirusy są połączone w naturze. W innym aspekcie, niniejszy wynalazek dostarcza cząsteczek, które wykorzystują nowe sekwencje AAV według wynalazku, w tym ich fragmenty, do wytwarzania cząsteczek przydatnych do dostarczania heterologicznych genów lub innych sekwencji kwasów nukleinowych do komórki docelowej.
Do cząsteczek według wynalazku zawierających sekwencje nowego serotypu AAV według wynalazku należą dowolne elementy genetyczne (wektory), które mogą być dostarczone do komórki gospodarza, np. nagi DNA, plazmid, fag, transpozon, kosmid, episom, białko w niewirusowym nośniku (np. nośniku lipidowym), wirus itp., które przenoszą niesione w nich sekwencje. Wybrany wektor może być dostarczony dowolnym odpowiednim sposobem, w tym przez transfekcję, elektroporację, dostarczenie liposomów, techniki fuzji błon, opłaszczone DNA kulki o dużej prędkości, infekcję wirusową i fuzję protoplastów. Sposoby wykorzystane do skonstruowania dowolnego wykonania wynalazku są znane specjalistom w dziedzinie manipulacji kwasami nukleinowymi i obejmują inżynierię genetyczną, inżynierię rekombinacyjną i techniki syntetyczne. Patrz, np. Sambrook i wsp., Molecular Cloning; A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, NY.
W jednym wykonaniu, wektory według wynalazku zawierają sekwencje kodujące nowy kapsyd AAV według wynalazku (np. kapsyd AAV7, kapsyd AAV 44-2 (rh.10), kapsyd AAV10, kapsyd AAV11, kapsyd AAV12), lub fragment jednego lub więcej z tych kapsydów. Alternatywnie, wektory mogą zawierać samo białko kapsydu lub jego fragment.
Ewentualnie, wektory według wynalazku mogą zawierać sekwencje kodujące białka rep AAV. Takie sekwencje rep mogą pochodzić z tego samego serotypu AAV, co dostarczający sekwencji cap. Alternatywnie, niniejszy wynalazek dostarcza wektorów, w których sekwencje rep pochodzą z serotypu AAV różniącego się od serotypu dostarczającego sekwencji cap. W jednym wykonaniu sekwencje rep i cap są wyrażane z różnych źródeł (np. oddzielnych wektorów, lub komórki gospodarza i wektora). W innym wykonaniu, te sekwencje rep są wyrażane z tego samego źródła, co sekwencje cap.
PL 222 683 B1
W tym wykonaniu, sekwencje rep mogą być połączone w ramce z sekwencjami cap innego serotypu AAV tworząc chimeryczny wektor AAV. Ewentualnie, wektory według wynalazku zawierają ponadto minigen obejmujący wybrany transgen otoczony ITR 5' AAV i ITR 3' AAV.
Tak więc, w jednym wykonaniu, opisane tu wektory zawierają sekwencje nukleotydowe kodujące pełny kasyd AAV, który może pochodzić z pojedynczego serotypu AAV (np. AAV7 lub innego nowego AAV). Alternatywnie, wektory te zawierają sekwencje kodujące sztuczne kapsydy, które zawi erają jeden lub więcej fragmentów kapsydu AAV7 (lub innego nowego AAV) połączone z białkami kapsydu heterologicznego AAV lub nie AAV (lub ich fragmentami). Te sztuczne białka kapsydu są wybrane z nieciągłych części kapsydu AAV7 (lub innego nowego AAV) lub z kapsydów innych serotypów AAV. Przykładowo, może być pożądana modyfikacja obszarów kodujących jeden lub więcej vp1 AAV, np. w jednym lub więcej obszarów nadzmiennych (tzn. HPV1-12), lub vp2 i/lub vp3. W innym przykładzie, może być pożądana zmiana kodonu start białka vp3 na GTG. Modyfikacje te mogą mieć na celu zwiększenie ekspresji, wydajności i/lub ulepszenie oczyszczania w wybranych systemach ekspresyjnych lub też inny pożądany cel (np. zmianę tropizmu lub zmianę epitopów dla przeciwciał neutralizujących).
Opisane tu wektory, np. plazmidowe, są przydatne w szeregu zastosowań, lecz szczególnie dobrze nadają się do wykorzystania do wytwarzania rAAV zawierającego kapsyd obejmujący sekwencje AAV lub jej fragment. Te wektory, obejmujące rAAV, ich elementy, konstrukcję i zastosowania są tu opisane szczegółowo.
W jednym aspekcie, wynalazek dostarcza sposobu wytwarzania kapsydu zrekombinowanego wirusa stowarzyszonego z adenowirusem (AAV) o serotypie AAV 7 (lub innego nowego AAV), lub jego części. Sposób taki obejmuje hodowanie komórki gospodarza zawierającej sekwencję kwasu nukleinowego kodującą białko kapsydu wirusa stowarzyszonego z adenowirusem (AAV) serotypu 7 (lub innego nowego AAV), lub jego fragment tak, jak tu zdefiniowano; funkcjonalny gen rep; minigen złożony, minimalnie, z odwróconych końcowych powtórzeń (ITR) AAV i transgenu; oraz odpowiednie funkcje pomocnicze dla umożliwienia pakowania minigenu do białka kapsydu AAV7 (lub innego nowego AAV).
Składniki wymagane w hodowli w komórce gospodarza do pakowania minigenu AAV do kaps ydu AAV mogą być dostarczone do komórki gospodarza in trans. Alternatywnie, dowolny jeden lub więcej z wymaganych składników (np. minigen, sekwencje rep, sekwencje cap, i/lub funkcje pomocnicze) może być dostarczony przez stabilną komórkę gospodarza, którą zmieniono tak, by zawierała jeden lub więcej wymaganych składników przy użyciu sposobów znanych specjalistom. Najodpowiedniej, taka stabilna komórka gospodarza będzie zawierać wymagany składnik (-i) pod kontrolą indukowalnego promotora. Wymagany składnik (-i) może jednak być pod kontrolą promotora konstytutywnego. Przykłady odpowiednich promotorów indukowalnych i konstytutywnych dostarczono tu przy dyskusji elementów regulacyjnych odpowiednich do zastosowania razem z transgenem. W jeszcze innej alternatywie, wybrana stabilna komórka gospodarza może zawierać wybrany składniki (-i) pod kontrolą promotora konstytutywnego i inny wybrany składnik (i) pod kontrolą jednego lub więcej indukowalnych promotorów. Przykładowo, stabilna komórka gospodarza może być wytworzona na podstawie komórek 293 (zawierających funkcje pomocnicze E1 pod kontrolą promotora konstytutywnego), lecz zawierających białka rep i/lub cap pod kontrolą promotorów indukowalnych. Jeszcze inne stabilne komórki gospodarza mogą być wytworzone przez specjalistę.
Minigen, sekwencje rep, sekwencje cap, i funkcje pomocnicze wymagane do wytworzenia rAAV według wynalazku mogą być dostarczone do pakującej komórki gospodarza w postaci dowolnego elementu genetycznego, który przenosi niesione w sobie sekwencje. Wybrany element genetyczny może być dostarczony dowolnym odpowiednim sposobem, w tym tu opisanymi. Sposoby zastosowane do skonstruowania dowolnego wykonania tego wynalazku są znane specjalistom w dziedzinie m anipulacji kwasami nukleinowymi i obejmują inżynierię genetyczną, inżynierię rekombinacyjną i techniki syntetyczne. Patrz, np. Sambrook i wsp., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, NY. Podobnie, sposoby wytwarzania wirionów rAAV są dobrze znane i wybór odpowiedniego sposobu nie stanowi ograniczenia niniejszego wynalazku, patrz, np. K. Fisher i wsp., J. Virol., 70: 520-532 (1993) i patent USA nr 5,478,745.
A. Minigen
Minigen składa się z, minimalnie, transgenu i jego sekwencji regulatorowych, oraz odwróconych końcowych powtórzeń 5' i 3' AAV (ITR). To ten minigen jest pakowany do białka kapsydowego i dostarczany do wybranej komórki gospodarza.
PL 222 683 B1
1. Transgen
Transgen jest to sekwencja nukleotydowa, heterologiczna względem sekwencji wektorowych otaczających transgen, która koduje polipeptyd, białko lub inny będący przedmiotem zainteresowania produkt. Kodująca sekwencja kwasu nukleinowego jest operacyjnie połączona ze składnikami regulatorowymi w sposób, który pozwala na transkrypcję transgenu i/lub wyrażanie w komórce gospodarza.
Skład sekwencji transgenu będzie zależał od zastosowania, do którego będzie przeznaczony uzyskany wektor. Przykładowo, jeden z typów sekwencji transgenu zawiera sekwencję reporterową, która po wyrażeniu wytwarza wykrywalny sygnał. Do takich sekwencji reporterowych należą, między innymi, sekwencje DNA kodujące β-laktamazę, β-galaktozydazę (lacZ), alkaliczną fosfatazę, kinazę tymidynową, zielone białko fluoryzujące (GFP), acetylotransferazę chloramfenikolu (CAT), lucyferazę, białka związane z błoną, w tym, przykładowo, CD2, CD4, CD8, białko hemaglutyniny wirusa grypy i inne dobrze znane w dziedzinie, dla których istnieją lub mogą być wytworzone konwencjonalnymi środkami skierowane przeciwko nim przeciwciała o wysokim powinowactwie, oraz białka fuzyjne obejmujące związane z błoną białko odpowiednio połączone z domeną znacznika antygenowego z, między innymi, hemaglutyniny lub Myc.
Te sekwencje kodujące, przy połączeniu z elementami regulatorowymi kontrolującymi ich ekspresję, dostarczają sygnały wykrywalne konwencjonalnymi środkami, w tym oznaczeniami enzym atycznymi, radiograficznymi, kolorymetrycznymi, fluorescencją lub innymi oznaczeniami spektrograficznymi, oznaczeniami sortowania komórek aktywowanego przez fluorescencję i oznaczeniami immunologicznymi, w tym immunoenzymatycznym (ELISA), radioimmunologicznym (RIA) i immunohistochemią. Przykładowo, gdy sekwencją znacznikową jest gen LacZ, obecność wektora niosącego sygnał jest wykrywana przez oznaczenia aktywności beta-galaktozydazy. Gdy transgenem jest zielone białko fluoryzujące lub lucyferaza, wektor niosący sygnał może być oznaczany wizualnie przez wytwarzanie barwy lub światła w luminometrze.
Jednakże, pożądanie, transgenem jest nieznacznikowa sekwencja kodująca produkt, który jest użyteczny w biologii i medycynie taki, jak białka, peptydy, RNA, enzymy lub RNA katalityczne. Do pożądanych cząsteczek RNA należą tRNA, dsRNA, rybosomalne RNA, katalityczne RNA i RNA ant ysensowne. Jednym z przykładów użytecznej sekwencji RNA jest sekwencja hamująca ekspresję docelowej sekwencji kwasu nukleinowego u leczonego zwierzęcia.
Transgen może być wykorzystany do poprawienia lub ulepszenia defektu genu, do których m ogą należeć defekty genów, w których prawidłowe geny są wyrażane na niższym, niż prawidłowy poziomie, lub defekty, w których nie jest wyrażany funkcjonalny produkt genu. Korzystny typ transgenu koduje białko lub polipeptyd terapeutyczny wyrażany w komórce gospodarza. Wynalazek obejmuje ponadto wykorzystanie wielu transgenów, np. do poprawienia lub złagodzenia defektu genowego powodowanego brakiem białka złożonego z wielu podjednostek. W pewnych sytuacjach osobny transgen może być zastosowany do kodowania każdej podjednostki białka, lub kodowania różnych pept ydów lub białek. Jest to pożądane, gdy wielkość DNA kodującego podjednostkę białkową jest duża, np. dla immunoglobuliny, czynnika wzrostu pochodzenia płytkowego lub białka dystrofiny. Aby komórka wytwarzała białko złożone z wielu podjednostek, infekuje się ją zrekombinowanym wirusem zawierającym każdą z różnych podjednostek. Alternatywnie, różne podjednostki białka mogą być kodowane przez ten sam transgen. W tym przypadku, pojedynczy transgen zawiera DNA kodujący każdą z podjednostek, gdzie DNA dla każdej z podjednostek jest oddzielony wewnętrznym miejscem przyłączenia rybosomu (IRES). Jest to pożądane, gdy wielkość DNA kodującego każdą z podjednostek jest niewielka, np. całkowita wielkość DNA kodującego podjednostki i IRES wynosi poniżej pięciu kilobaz. Jako alternatywę dla IRES, DNA można przedzielić sekwencjami kodującymi peptyd 2A, który sam się przecina w procesie post-translacyjnym. Patrz np., M. L. Donelly i wsp., J. Gen. Virol., 78 (pt 1): 13-21 (Styczeń 1997); Furler S. i wsp., Gene Ther., 8 (11): 864-873 (Czerwiec 2001); Klump H., i wsp., Gene Ther., 8(10): 811-817 (Maj 2001). Ten peptyd 2A jest znacząco mniejszy niż IRES, co czyni go szczególnie przydatnym w zastosowaniach, gdzie czynnikiem ograniczającym jest przestrzeń. Wybrany trans gen może jednak kodować dowolny czynny biologicznie produkt lub inny produkt, np. produkt pożądany w celu badań.
Odpowiednie transgeny mogą być bez trudu wybrane przez specjalistę. Wybór transgenu nie jest uważany za ograniczenie niniejszego wynalazku.
2. Elementy regulatorowe
Obok głównych elementów zidentyfikowanych powyżej dla minigenu, wektor zawiera także niezbędne konwencjonalne elementy kontrolne, które są operacyjnie połączone z transgenem w sposób
PL 222 683 B1 umożliwiający jego transkrypcję, translację i/lub ekspresję w komórce stransfekowanej wektorem plazmidowym lub zainfekowanej wirusem wytworzonym przez wynalazek. W użytym tu znaczeniu, operacyjnie połączone sekwencje obejmują zarówno sekwencje kontrolujące ekspresję ciągłe z będącym przedmiotem zainteresowania genem oraz sekwencje kontrolne działające in trans lub na odległość kontrolując będący przedmiotem zainteresowania gen.
Do sekwencji kontrolujących ekspresję należą odpowiednie sekwencje inicjacji transkrypcji, terminacji, promotorowe i wzmacniaczy; wydajne sygnały obróbki RNA takie, jak sygnały składania i poliadenylacji (poliA); sekwencje stabilizujące mRNA cytoplazmatyczne; sekwencje wzmacniające wydajność translacji (tzn. sekwencja najwyższej zgodności Kozak); sekwencje wzmacniające stabi lność białka; oraz, gdy jest to pożądane, sekwencje wzmacniające wydzielanie kodowanego produktu. Duża liczba sekwencji kontrolujących ekspresję, w tym promotorów natywnych, konstytutywnych, indukowalnych i/lub swoistych tkankowo jest znana w dziedzinie i może być wykorzystana.
Do przykładów promotorów konstytutywnych należą, między innymi, retrowirusowy promotor LTR wirusa mięsaka Rousa (RSV) (ewentualnie ze wzmacniaczem RSV), promotor cytomegalowirusa (CMV) (ewentualnie ze wzmacniaczem CMV) [patrz, np. Boshart i wsp., Cell, 41: 521-530 (1985)], promotor SV40, promotor reduktazy dihydrofolianowej, promotor β-aktyny, promotor kinazy fosfoglicerolowej (PGK) oraz promotor EF1a [Invitrogen].
Promotory indukowalne pozwalają na regulację ekspresji genów i mogą być regulowane przez związki dostarczane z zewnątrz, czynniki środowiskowe takie, jak temperatura, lub obecność konkretnego stanu fizjologicznego, np. fazy ostrej, konkretnego stanu różnicowania komórki, lub tylko w k omórkach dzielących się. Indukowalne promotory i indukowalne systemy dostępne są z wielu źródeł handlowych, w tym, między innymi, Invitrogen, Clontech i Ariad. Wiele innych systemów zostało opisanych i mogą one być łatwo wybrane przez specjalistę. Do przykładów indukowalnych promotorów regulowanych przez związki dostarczane z zewnątrz należą indukowany przez cynk promotor metalotioneiny (MT) owcy, indukowany przez deksametazon (Dex) promotor mysiego wirusa nowotworu sutka (MMTV), system promotora polimerazy T7 [WO 98/10088]; owadzi promotor ekdyzonu [No i wsp., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 93; 3346-3351 (1996)], system reprymowany przez tetracyklinę [Gossen i wsp., Proc. Natl. Acad Sci. USA, 89: 5547-5551 (1992)], system indukowany przez tetracyklinę [Gossen i wsp., Science, 268: 1766-1769 (1995), patrz też Harvey i wsp., Curr. Opin. Chem. Biol., 2: 512-518 (1998)], system indukowany przez RU486 [Wang i wsp., Nat. Biotach., 15: 239-243 (1997) i Wang i wsp., Gene Ther., 4: 432-441 (1997)] oraz system indukowany przez rapamycynę [Magari i wsp., J. Clin. Invest., 100: 2865-2872 (1997)]. Jeszcze innymi typami indukowalnych promotorów, które mogą być użyteczne w tym kontekście, są promotory regulowane przez specyficzny stan fizjologiczny, np. temperaturę, fazę ostrą, konkretny stan różnicowania komórki, lub tylko w komórkach dzielących się.
W innym wykonaniu użyty będzie natywny promotor transgenu. Natywny promotor może być korzystny gdy ekspresja transgenu musi naśladować ekspresję natywną. Natywny promotor może być użyty gdy ekspresja transgenu musi być regulowana czasowo lub rozwojowo, lub w sposób swoisty tkankowo, lub w odpowiedzi na konkretne bodźce transkrypcyjne. W dalszym wykonaniu, inne natywne elementy kontroli ekspresji takie, jak elementy wzmacniaczy, miejsca poliadenylacji lub sekwencje najwyższej zgodności Kozak mogą być także wykorzystane do naśladowania natywnej ekspresji.
Inne wykonanie transgenu obejmuje transgen operacyjnie połączony z promotorem swoistym tkankowo. Przykładowo, jeżeli pożądana jest ekspresja w mięśniu szkieletowym, zastosowany powinien być promotor aktywny w mięśniu. Należą do nich promotory genów kodujących szkieletową β-aktynę, lekki łańcuch 2A miozyny, dystrofinę, mięśniową kinazę kreatyny, a także syntetyczne promotory mięśniowe o aktywnościach wyższych, niż w naturalnie występujących promotorach (patrz Li i wsp., Nat. Biotech., 17: 241-245 (1999)). Przykłady promotorów swoistych tkankowo znane są dla wątroby (albumina, Miyatake i wsp., J. Virol., 71: 5124-32 (1997); rdzeniowy promotor wirusa zapalenia wątroby typu B, Sandig i wsp., Gene Ther., 3: 1002-9 (1996); alfa-fetoproteina (AFP), Arbuthnot i wsp., Hum. Gene Ther., 7: 1503-14 (1996)), osteokalcyna kości (Stein i wsp., Mol. Biol. Rep., 24: 185-96 (1997)); sialoproteina kości (Chen i wsp., J. Bone. Miner. Res., 11: 654-64 (1996)), limfocytów (CD2, Hansal i wsp., J. Immunol., 161: 1063-8 (1998); ciężki łańcuch immunoglobuliny; łańcuch a receptora komórek T), neuronów takie, jak promotor swoistej dla neuronów enolazy (NSE) (Andersen i wsp., Cell. Mol. Neurobiol., 13: 503-15 (1993)), genu lekkiego łańcucha neurofilamentu (Piccioli i wsp., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 88: 5611-5 (1991)), oraz swoistego dla neuronów genu vgf (Piccioli i wsp., Neuron, 15: 373-84 (1995)) i inne.
PL 222 683 B1
Ewentualnie, plazmidy niosące użyteczne terapeutycznie transgeny mogą także zawierać markery selekcyjne lub geny reporterowe, do których mogą należeć geny kodujące oporność na, między innymi, genetycynę, hygromycynę lub puromycynę. Takie selekcyjne geny reporterowe lub markerowe (korzystnie umieszczone poza odzyskiwanym sposobem według wynalazku genomem wirusowym) mogą być wykorzystane do sygnalizacji obecności plazmidów w komórkach bakterii, np. przez oporność na ampicylinę. Do innych składników plazmidu może należeć miejsce startu replikacji. Wybór tych i innych promotorów i elementów wektora jest konwencjonalny i dostępnych jest wiele takich sekwencji [patrz np., Sambrook i wsp., i cytowane tam referencje].
Połączenie transgenu, promotora/wzmacniacza, oraz ITR 5' i 3' dla ułatwienia jest tu nazywane minigenem. Według nauk tego wynalazku, projektowanie takiego minigenu może być przeprowadzone przy pomocy konwencjonalnych technik.
3. Dostarczenia minigenu do pakującej komórki gospodarza.
Minigen może być niesiony w dowolnym odpowiednim wektorze, np. plazmidzie, który jest d ostarczany do komórki gospodarza. Plazmidy użyteczne w tym wynalazku mogą być skonstruowane tak, by nadawały się do replikacji i, ewentualnie, integracji w komórkach prokariotycznych, komórkach ssaków lub w obu typach. Plazmidy te (lub inne wektory niosące 5' ITR AAV-heterologiczna cząsteczka-3' ITR) zawierają sekwencje umożliwiające replikację minigenu w eukariontach i/lub prokariontach oraz markery selekcyjne dla tych systemów. Do markerów selekcyjnych lub genów reporterowych należeć mogą geny kodujące oporność na, między innymi, genetycynę, hygromycynę lub puromycynę. Plazmidy mogą także zawierać pewne selekcyjne geny markerowe lub reporterowe, które można zastosować do sygnalizacji obecności wektorów w komórkach bakterii takie, jak oporność na ampicylinę. Do innych składników plazmidu może należeć miejsce startu replikacji oraz amplikon taki, jak system amplikonu wykorzystujący antygen jądrowy wirusa Epsteina Barra. Ten system amplikonu, lub inne podobne składniki amplikonu pozwalają na replikację episomalną w komórce w wysokiej liczbie kopii. Korzystnie, cząsteczka niosąca minigen jest transfekowana do komórki, gdzie może występować przejściowo. Alternatywnie, minigen (niosący 5' ITR AAV-heterologiczna cząsteczka-3' ITR) może być stabilnie zintegrowany do genomu komórki gospodarza, albo do chromosomu, albo jako episom. W niektórych wykonaniach minigen może być obecny w wielu kopiach, ewentualnie w postaci konk atamerów w układzie głowa do głowy, głowa do ogona lub ogon do ogona. Odpowiednie techniki tran sfekcji są znane i mogą łatwo być wykorzystane do dostarczenia minigenu do komórki gospodarza.
Ogólnie, przy dostarczaniu wektora obejmującego minigen przez transfekcję, wektor dostarczany jest w ilości od około 5 gg do około 100 gg DNA, a korzystnie około 10 do około 50 gg DNA do około 1 x 104 do około 1 x 1013 komórek, a korzystnie około 105 komórek. Względne stosunki ilości DNA wektora do komórek gospodarza mogą jednak być zmienione, biorąc pod uwagę takie czynniki, jak wybrany wektor, sposób dostarczenia i wybrane komórki gospodarza.
B. Sekwencje Rep i Cap
Poza minigenem, komórka gospodarza zawiera sekwencje kierujące wyrażaniem nowego białka kapsydu AAV (np. kapsydu AAV7 lub innego nowego AAV lub sztucznego białka kapsydu obejm ującego fragment jednego lub więcej tych kapsydów) w komórce gospodarza oraz sekwencje rep tego samego serotypu, co serotyp ITR AAV znajdujących się w minigenie. Sekwencje cap i rep AAV mogą być niezależnie uzyskane ze źródła AAV jak opisano powyżej i mogą być wprowadzane do komórki gospodarza dowolnym sposobem znanym specjaliście tak, jak opisano powyżej. Dodatkowo, przy pseudotypowaniu nowego kapsydu AAV według wynalazku, sekwencje kodujące każde z niezbędnych białek rep mogą być dostarczone przez ten sam serotyp AAV, lub sekwencje kodujące białka rep mogą być dostarczone przez inne serotypy AAV (np. AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6 lub jeden z nowych zidentyfikowanych tu serotypów). Przykładowo, sekwencje rep78/68 mogą pochodzić z AAV2, podczas gdy sekwencje rep52/40 mogą pochodzić z AAV1.
W jednym wykonaniu komórka gospodarza stabilnie zawiera białko kapsydu pod kontrolą odpowiedniego promotora takiego, jak opisane powyżej. Najkorzystniej, w tym wykonaniu, białko kaps ydu jest wyrażane pod kontrolą promotora indukowalnego. W innym wykonaniu, białko kapsydu jest dostarczane do komórki gospodarza in trans. Przy dostarczaniu do komórki gospodarza in trans, białka kapsydu mogą być dostarczane poprzez plazmid, który zawiera sekwencje niezbędne do kierowania ekspresją wybranego białka kapsydu w komórce gospodarza. Najkorzystniej, przy dostarczaniu do komórki gospodarza in trans, plazmid niosący białko kapsydu niesie też inne sekwencje wymagane do pakowania rAAV, np. sekwencje rep.
PL 222 683 B1
W innym wykonaniu komórka gospodarza stabilnie zawiera sekwencje rep pod kontrolą odpowiedniego promotora takiego, jak opisane powyżej. Najkorzystniej, w tym wykonaniu, niezbędne białka rep są wyrażane pod kontrolą promotora indukowalnego. W innym wykonaniu, białka rep są dostarczane do komórki gospodarza in trans. Przy dostarczaniu do komórki gospodarza in trans, białka rep mogą być dostarczane poprzez plazmid, który zawiera sekwencje niezbędne do kierowania ekspresją wybranych białek rep w komórce gospodarza. Najkorzystniej, przy dostarczaniu do komórki gospodarza in trans, plazmid niosący białko kapsydu niesie też inne sekwencje wymagane do pakowania rAAV, np. sekwencje rep i cap.
W jednym z wykonań, sekwencje rep i cap mogą być zatem transfekowane do komórki gospodarza na jednej cząsteczce kwasu nukleinowego i istnieć stabilnie w komórce w postaci episomu. W innym wykonaniu, sekwencje rep i cap są stabilnie zintegrowane z genomem komórki. W innym wykonaniu sekwencje rep i cap są przejściowo wyrażane w komórce gospodarza. Przykładowo, użyteczna w takiej transfekcji cząsteczka kwasu nukleinowego obejmuje, od 5' do 3', promotor, ewentualnie łącznik pomiędzy promotorem a początkiem sekwencji genu rep, sekwencję genu rep AAV oraz sekwencję genu cap AAV.
Ewentualnie, sekwencje rep i/lub cap mogą być dostarczone na wektorze zawierającym inne sekwencje DNA, które mają być wprowadzone do komórek gospodarza. Przykładowo, wektor może zawierać konstrukt rAAV obejmujący minigen. Wektor może obejmować jeden lub więcej genów kodujących funkcje pomocnicze, np. adenowirusowe białka E1, E2a i E4ORF6, oraz gen RNA VAI.
Korzystnie, promotor wykorzystany w tym konstrukcie może być dowolnym z konstytutywnych, indukowalnych lub natywnych promotorów znanych specjalistom lub omówionych powyżej. W jednym wykonaniu zastosowany jest promotor P5 AAV. Wybór AAV dostarczającego którejkolwiek z tych sekwencji nie ogranicza wynalazku.
W innym korzystnym wykonaniu, promotor rep jest promotorem indukowalnym, jak omówiono to powyżej w związku z elementami regulacyjnymi transgenu. Jednym z korzystnych promotorów do wyrażania rep jest promotor T7. Wektor obejmujący gen rep regulowany przez promotor T7 oraz gen cap jest transfekowany lub transformowany do komórki, która konstytutywnie albo indukowalnie wyraża polimerazę T7. Patrz WO 98/10088, opublikowany 12 marca 1998.
Łącznik jest ewentualnym elementem konstrukcji wektora. Łącznik jest to sekwencja DNA umieszczona pomiędzy promotorem a kodonem start ATG genu rep. Łącznik może mieć dowolny pożądany charakter; tzn. może być losową sekwencją nukleotydów, lub alternatywnie, może on kod ować produkt genu takiego, jak gen markerowy. Łącznik może zawierać geny, które typowo zawierają miejsca start/stop i poliA. Łącznik może być niekodującą sekwencją DNA z prokarionta lub eukarionta, powtarzalną sekwencją niekodującą, sekwencją kodującą bez sygnałów kontroli translacji lub sekwencją kodującą z sygnałami kontroli translacji. Dwoma przykładowymi źródłami sekwencji łącznika są sekwencje drabinki faga λ oraz sekwencje drabinki drożdży, dostępne w handlu, np. z Gibco lub Invitrogen. między innymi. Łącznik może mieć dowolną długość wystarczającą do obniżenia ekspresji produktów genów rep78 i rep8, pozostawiając ekspresję produktów genów rep52, rep40 oraz cap na normalnym poziomie. Długość łącznika może zatem wynosić od około 10 bp do około 10,0 kb, k orzystnie w zakresie od około 100 bp do około 8,0 kb. Dla zmniejszenia prawdopodobieństwa rekombinacji, łącznik korzystnie ma długość poniżej 2 kb, nie stanowi to jednak ograniczenia wynalazku.
Aczkolwiek cząsteczka(-i) dostarczające rep i cap mogą występować w komórce gospodarza przejściowo (tzn. przez transfekcję), korzystne jest by jedno lub więcej spośród białek rep i cap oraz promotor(-y) kontrolujący ich ekspresję były stabilnie wyrażane w komórce gospodarza, np. jako episom lub przez integrację do chromosomu komórki gospodarza.
Sposoby wykorzystane do konstruowania wykonań tego wynalazku są to konwencjonalne techniki inżynierii genetycznej lub inżynierii rekombinacyjnej takie, jak opisane w powyższych referencjach. Podczas, gdy ten opis dostarcza ilustrujących przykładów konkretnych konstruktów, przy wykorzystaniu dostarczonej tu informacji specjalista może wybrać i zaprojektować inne odpowiednie konstrukty stosując wybór łączników, promotorów P5 i innych elementów, w tym co najmniej jeden sygnał start i stop translacji, oraz ewentualny dodatek miejsc poliadenylacji.
W innym wykonaniu wynalazku, białko rep lub cap może być stabilnie dostarczane przez komórkę gospodarza.
C. Funkcje pomocnicze
Pakująca komórka gospodarza wymaga też funkcji pomocniczych dla pakowania rAAV według wynalazku. Ewentualnie, funkcje te mogą być dostarczane przez wirusa opryszczki. Najkorzystniej,
PL 222 683 B1 niezbędne funkcje pomocnicze są wszystkie dostarczane przez źródło adenowirusa pochodzącego od człowieka lub naczelnego innego niż człowiek takiego, jak opisane powyżej i/lub dostępne z szeregu źródeł, w tym American Type Culture Collection (ATCC), Manassas, VA (USA). W jednym obecnie korzystnym wykonaniu, komórce gospodarza dostarcza się /i/lub zawiera ona produkt genu Ela, produkt genu E1b, produkt genu E2a i/lub produkt genu E4 ORF6. Komórka gospodarza może zawierać inne geny adenowirusowe takie, jak RNA VAI, geny te nie są jednak niezbędne. W korzystnym wyk onaniu, żadne inne geny lub funkcje genów adenowirusa nie są obecne w komórce gospodarza.
Przez DNA adenowirusa wyrażający produkt genu Ela rozumie się dowolną sekwencję adenowirusa kodującą Ela lub funkcjonalną część Ela. DNA adenowirusa wyrażający produkt genu E2a oraz DNA adenowirusa wyrażający produkt genu E4 ORF6 są definiowane podobnie. Włączone są tu dowolne allele lub inne modyfikacje genu adenowirusa lub jego funkcjonalnej części. Modyfikacje takie mogą być celowo wprowadzone przy pomocy konwencjonalnych technik inżynierii genetycznej lub mutagenezy w celu wzmocnienia w jakiś sposób funkcji adenowirusa, lub mogą być jego naturalnie występującymi wariantami allelicznymi. Takie modyfikacje i sposoby manipulowania DNA dla uzysk ania tych funkcji genów adenowirusa są znane specjalistom.
Produkty genów adenowirusa E1a, E1b, E2a i/lub E4 ORF6, a także dowolne inne pożądane funkcje pomocnicze mogą być dostarczone przy zastosowaniu dowolnych środków pozwalających na ich wyrażanie w komórce. Każda z sekwencji kodujących te produkty może być na osobnym wektorze, lub też jeden lub więcej genów może być na tym samym wektorze. Wektorem może być dowolny wektor znany w dziedzinie lub ujawniony powyżej, w tym plazmid, kosmid i wirus. Wprowadzenie do k omórki gospodarza może być osiągnięte dowolnymi środkami znanymi w dziedzinie lub ujawnionymi powyżej, w tym między innymi, przez transfekcję, elektroporację, dostarczenie liposomów, techniki fuzji błon, opłaszczone DNA kulki o dużej prędkości, infekcję wirusową i fuzję protoplastów. Jeden lub więcej genów adenowirusa może być stabilnie zintegrowanych do genomu komórki gospodarza, stabilnie wyrażanych w postaci episomów, lub wyrażanych przejściowo. Wszystkie produkty genów mogą być wyrażane przejściowo, na episomie lub stabilnie wintegrowane, albo niektóre spośród produktów genów mogą być wyrażane stabilnie, podczas gdy inne wyrażane przejściowo. Ponadto, promotory każdego z genów adenowirusa mogą być wybrane niezależnie spośród promotorów, konstytutywnych, promotorów indukowalnych lub natywnych promotorów adenowirusowych. Promotory mogą być regulowane przez specyficzny stan fizjologiczny organizmu lub komórki (np. przez stan różnicowania lub w dzielących się lub będących w spoczynku komórkach) lub przez dodane z zewnątrz czynniki, przykładowo.
D. Komórki gospodarza i pakujące linie komórkowe
Sama komórka gospodarza może być wybrana spośród wszystkich organizmów biologicznych, w tym komórek prokariotycznych (np. bakteryjnych) i komórek eukariotycznych, w tym komórek owadów, komórek drożdży i komórek ssaków. Szczególnie pożądane komórki gospodarza wybrane są z dowolnego gatunku ssaka, w tym, między innymi, komórek takich, jak A549, WEHI, 3T3, 10T1/2, BHK, MDCK, COS 1, COS 7, BSC 1, BSC 40, BMT 10, VERO, WI38, HeLa, komórki 293 (które wyrażają funkcjonalne E1 adenowirusa), Saos, C2C12, komórki L, HT1080, HepG2 i pierwotne komórki fibroblastów, hepatocytów i mioblastów pochodzące od ssaków, w tym od człowieka, małpy, myszy, szczura, królika i chomika. Wybór gatunku ssaka dostarczającego komórek nie jest ograniczeniem wynalazku, nie jest nim też typ komórki ssaka, tzn. fibroblast, hepatocyt, komórka nowotworowa itp. Najbardziej pożądane komórki nie niosą żadnych genów adenowirusa poza E1, E2a i/lub E4 ORF6, ani nie zawierają żadnych innych genów wirusowych, które mogłyby spowodować rekombinację homologiczną lub zanieczyszczenie wirusem podczas wytwarzania rAAV; są one także zdolne do infekcji lub transfekcji DNA oraz wyrażania stransfekowanego DNA. W korzystnym wykonaniu, komórka gospodarza posiada rep i cap stabilnie transfekowane do komórki.
Jedną z komórek gospodarza użytecznych w niniejszym wynalazku jest komórka gospodarza stabilnie stransformowana sekwencjami kodującymi rep i cap, i która jest stransfekowana DNA adenowirusa E1, E2a i E4 ORF6 oraz konstruktem niosącym minigen tak, jak opisano powyżej. Podobnie, mogą być zastosowane komórki stabilnie wyrażające rep i/lub cap takie, jak B-50 (PCT/US98/19463), lub opisane w Patencie USA nr 5,658,785. Inna pożądana komórka gospodarza zawiera minimalny adenowirusowy DNA wystarczający do wyrażania E4 ORF6. Jeszcze inne linie komórkowe można skonstruować wykorzystując nowe sekwencje rep AAV i/lub nowe sekwencje cap AAV według wynalazku.
PL 222 683 B1
Przygotowanie komórki gospodarza według wynalazku obejmuje techniki takie, jak składanie wybranych sekwencji DNA. Składanie to można przeprowadzić przy zastosowaniu konwencjonalnych technik. Do technik tych należą takie, jak klonowanie cDNA i genomowe, które są dobrze znane i op isane w Sambrook i wsp., cytowanym powyżej, zastosowanie nakładających się sekwencji oligonukleotydowych genomów adenowirusa i genomów AAV, w połączeniu z łańcuchową reakcją polimerazy, sposoby syntetyczne i dowolne inne odpowiednie sposoby, które dostarczają pożądaną sekwencję nukleotydową.
Wprowadzanie cząsteczek (jak plazmidy i wirusy) do komórki gospodarza może także być dokonane przy zastosowaniu technik znanych specjaliście i omawianych w tym opisie. W korzystnym wykonaniu stosowane są standardowe techniki transfekcji, np. transfekcja CaPO4 lub elektroporacja, i/lub infekcja hybrydowymi wektorami adenowirus/AAV do linii komórkowych takich, jak ludzka zarodkowa linia komórek nerki HEK 293 (linia ludzkich komórek nerki zawierających funkcjonalny gen E1 adenowirusa dostarczający działających w układzie trans białek E1).
Te nowe oparte na AAV wektory, które są wytworzone przez specjalistę, są korzystne dla dostarczania genów do wybranych komórek gospodarza i pacjentów terapii genowej, gdyż nie odnaleziono w populacji ludzkiej przeciwciał neutralizujących przeciwko AAV7. Ponadto, początkowe bad ania wykazują brak przeciwciał neutralizujących w populacjach makaka i szympansa oraz mniej niż 15% reaktywności krzyżowej AAV7 u rezusów, gatunku, z którego wyizolowano ten serotyp. Specjal ista z łatwością może przygotować inne wektory wirusowe rAAV zawierające dostarczone tu białka kapsydu AAV7 przy zastosowaniu szeregu technik znanych specjalistom. Podobnie można przygotować jeszcze inne wektory wirusowe rAAV zawierające sekwencję AAV7 i kapsydy AAV innego serot ypu. Podobne korzyści związane są z użyciem wektorów opartych na innych nowych AAV według wynalazku.
Specjalista z łatwością zrozumie zatem, że sekwencje AAV7 według wynalazku mogą być z łatwością dostosowane do zastosowania w tych i innych systemach wektorów wirusowych do dostarczania genów in vitro, ex vivo lub in vivo. Podobnie, specjalista może łatwo wybrać inne fragmenty nowego genomu AAV według wynalazku do zastosowania w szeregu systemów wektorowych opartych na rAAV lub nie na rAAV. Do takich systemów wektorowych mogą między innymi należeć np. lentiwirusy, retrowirusy, wirusy ospy, wirusy krowianki i systemy adenowirusowe. Wybór tych systemów wektorowych nie stanowi ograniczenia niniejszego wynalazku.
Tak więc wynalazek dostarcza ponadto wektory wytworzone przy zastosowaniu sekwencji nukleotydowych i aminokwasowych nowych AAV według wynalazku. Wektory takie są użyteczne w szeregu zastosowań, w tym do dostarczania cząsteczek terapeutycznych i do stosowania w reżimach szczepień. Szczególnie pożądane do dostarczania cząsteczek terapeutycznych są zrekombinowane AAV zawierające kapsydy nowych AAV według wynalazku. Te, lub inne konstrukty wektorowe zawierające nowe sekwencje AAV według wynalazku mogą być stosowane w reżimach szczepień, np. do współdostarczania cytokiny, lub do dostarczania samego immunogenu.
V. Zrekombinowane wektory i ich zastosowania
Przy zastosowaniu opisanych tu technik specjalista może wytworzyć rAAV posiadający kapsyd nowego serotypu według wynalazku lub nowy kapsyd zawierający jeden lub więcej nowych fragmentów serotypu AAV zidentyfikowanego sposobem według wynalazku. W jednym wykonaniu, może być zastosowany pełnej długości kapsyd z pojedynczego serotypu, np. AAV7 [SEKW. NR. ID.: 2]. W innym wykonaniu można wytworzyć pełnej długości kapsyd zawierający jeden lub więcej fragmentów nowego serotypu według wynalazku połączonych w fazie z sekwencjami z innego wybranego serotypu AAV. Przykładowo, rAAV może zawierać jeden lub więcej nowych sekwencji obszarów nadzmiennych z serotypu AAV według wynalazku. Alternatywnie, unikatowe serotypy AAV według wynalazku mogą być zastosowane w konstruktach zawierających inne sekwencje wirusowe lub niewirusowe.
Specjalista z łatwością zauważy, że w jednym wykonaniu pewne serotypy według wynalazku będą szczególnie dobrze dostosowane do pewnych zastosowań. Przykładowo, wektory oparte na kapsydach AAV7 według wynalazku są szczególnie przydatne do stosowania w mięśniach, podczas gdy wektory oparte na kapsydach rh.10 (44-2) są szczególnie przydatne do stosowania w płucach. Zastosowania takich wektorów nie są w ten sposób ograniczone i specjalista może wykorzystać te wektory do dostarczania do innych typów komórek, tkanek lub narządów. Ponadto, wektory oparte na innych kapsydach według wynalazku mogą być stosowane do dostarczania do tych, lub innych komórek, tkanek lub narządów.
PL 222 683 B1
A. Dostarczanie transgenu
W innym aspekcie niniejszy wynalazek dostarcza sposobu dostarczania transgenu do gospodarza, który obejmuje transfekcję lub infekcję wybranej komórki gospodarza wektorem wytworzonym z sekwencji AAV według wynalazku. Sposoby dostarczania są dobrze znane specjalistom i nie stanowią ograniczenia niniejszego wynalazku.
W jednym pożądanym wykonaniu wynalazek dostarcza sposobu wprowadzania za pośrednictwem AAV transgenu do gospodarza. Sposób ten obejmuje transfekcję lub infekcję wybranej komórki gospodarza zrekombinowanym wektorem wirusowym zawierającym wybrany transgen pod kontrolą sekwencji kierujących ekspresją jego oraz białek kapsydu AAV.
Ewentualnie, próbka od gospodarza może być najpierw zbadana pod kątem obecności przeciwciał przeciwko wybranemu serotypowi AAV. Szereg różnych formatów oznaczeń do wykrywania przeciwciał neutralizujących jest dobrze znanych specjalistom. Wybór takiego oznaczenia nie stanowi ograniczenia niniejszego wynalazku. Patrz np. Fisher i wsp., Nature Med., 3 (3): 306-312 (marzec 1997) i W. C. Manning i wsp., Human Gene Therapy, 9: 477-485 (1 marzec,1998). Wyniki tego oznaczenia mogą być wykorzystane do wyznaczenia, który wektor AAV zawierający białka kapsydu konkretnego serotypu będzie korzystny do dostarczenia, np. na podstawie nieobecności przeciwciał neutralizujących swoistych wobec tego serotypu kapsydu.
W jednym aspekcie tego sposobu, dostarczenie wektora z wybranymi białkami kapsydu AAV może poprzedzać lub następować po dostarczeniu genu za pośrednictwem wektora z białkiem kapsydu AAV innego serotypu. Podobnie, dostarczenie wektora z innymi nowymi białkami kapsydu AAV według wynalazku może poprzedzać lub następować po dostarczeniu genu za pośrednictwem wektora z białkiem kapsydu AAV innego serotypu. Dostarczenie genów za pośrednictwem wektorów rAAV może zatem być zastosowane do wielokrotnego dostarczania genów do wybranej komórki gospodarza. Korzystnie, podawane później wektory rAAV niosą ten sam transgen, co pierwszy wektor rAAV, lecz podawane później wektory zawierają białka kapsydu serotypów różnych od tego z pierwszego wektora. Przykładowo, jeżeli pierwszy wektor posiada białka kapsydu AAV7 [SEKW. NR ID.: 2], podawane później wektory mogą posiadać białka kapsydu wybrane spośród innych serotypów, w tym AAV1, AAV2, AAV3A, AAV3B, AAV4, AAV6, AAV10, AAV11, i AAV12, lub którykolwiek z innych nowych kapsydów AAV zidentyfikowanych tu, w tym miedzy innymi: A3.1, H2, H6, C1, C2, C5, A3-3, A3-7, A3-4, A3-5, 3.3b, 223.4, 223-5, 223-10, 223-2, 223-7, 223-6, 44-1, 44-5, 44-2, 42-15, 42-8, 42-13, 42-3A, 42-4, 42-5A, 42-1B, 42-5B, 43-1, 43-12, 43-5, 43-21, 43-25, 43-20, 24.1, 42.2, 7.2, 27.3, 16.3, 42.10, 42-3B, 42-11, F1, F5, F3, 42-6B, i/lub 42-12.
Opisane powyżej zrekombinowane wektory mogą być dostarczone do komórek gospodarza zgodnie z opublikowanymi sposobami. rAAV, korzystnie zawieszony w zgodnym fizjologicznie nośniku, może być podany pacjentowi - człowiekowi lub ssakowi innemu niż człowiek. Odpowiednie nośniki mogą być łatwo wybrane przez specjalistę zgodnie ze wskazaniami ukierunkowania przeniesienia wirusa. Przykładowo, jednym z odpowiednich nośników jest sól fizjologiczna, która może być formułowana z szeregiem roztworów buforujących (np. sól fizjologiczna buforowana fosforanem). Do innych przykładowych nośników należą jałowy roztwór soli fizjologicznej, laktoza, sacharoza, fosforan wapnia, żelatyna, dekstran, agar, pektyna, olej z orzeszków ziemnych, olej sezamowy i woda. Wybór nośnika nie stanowi ograniczenia niniejszego wynalazku.
Ewentualnie, kompozycje według wynalazku mogą zawierać, poza rAAV i nośnikiem(-ami) inne konwencjonalne składniki farmaceutyczne takie, jak środki konserwujące lub chemiczne środki stabilizujące. Do odpowiednich przykładowych środków konserwujących należą chlorobutanol, sorbat potasu, kwas sorbinowy, dwutlenek siarki, galusan propylu, parabens, etylowanilina, gliceryna, fenol i parachlorofenol. Do odpowiednich chemicznych środków stabilizujących należą żelatyna i albumina.
Wektory wirusowe są podawane w ilościach wystarczających by stransfekować komórki i dostarczyć odpowiedniego poziomu przeniesienia i ekspresji genu dla uzyskania korzyści terapeutycznej bez szkodliwych skutków ubocznych lub z dopuszczalnymi medycznie skutkami fizjologicznymi, które mogą być wyznaczone przez specjalistę w dziedzinie medycyny. Do konwencjonalnych i dopuszczalnych farmaceutycznie dróg podawania należą, między innymi, bezpośrednie podanie do wybranego narządu (np. do żyły wrotnej do wątroby), doustne, inhalacja (w tym droga wewnątrznosowa i wewnątrztchawicza), dooczne, dożylne, domięśniowe, podskórne, śródskórne i inne pozajelitowe drogi podawania. Gdy jest to pożądane można łączyć różne drogi podawania.
Dawkowanie wektora wirusowego będzie zależeć głównie od czynników takich, jak leczone schorzenie, wiek, waga i zdrowie pacjenta i może zatem zmieniać się zależnie od pacjenta. Przykładowo,
PL 222 683 B1 skuteczne terapeutycznie dawkowanie wektora wirusowego u człowieka mieści się z reguły w przedziale od około 1 ml do około 100 ml roztworu zawierającego stężenia od około 1 x 109 do 1 x 1016 genomów wektora wirusowego. Korzystna dawka u człowieka może wynosić od około 1 x 1013 do około 1 x 1016 genomów AAV. Dawkowanie będzie dostosowane by zrównoważyć korzyść terapeutyczną i jakiekolwiek skutki uboczne, i dawkowanie to może zmieniać się w zależności od celu terapeutycznego, w którym stosowany jest zrekombinowany wektor. Poziom ekspresji transgenu może być śledzony w celu wyznaczenia częstości dawkowania uzyskanych wektorów wirusowych, korzystnie wektorów AAV zawierających minigen. Ewentualnie, reżimy dawkowania podobne do opisanych tu dla celów terapeutycznych mogą być stosowane do immunizacji przy zastosowaniu kompozycji w edług wynalazku.
Przykłady produktów terapeutycznych i produktów immunogennych do dostarczania wektorami zawierającymi AAV według wynalazku dostarczone są poniżej. Wektory te mogą być stosowane w szeregu różnych reżimów terapeutycznych lub szczepień tak, jak tu opisano. Dodatkowo, wektory te mogą być dostarczane w połączeniu z jednym lub więcej innych wektorów lub składników czynnych w pożądanym reżimie terapeutycznym i/lub szczepień.
B. Transgeny terapeutyczne
Do użytecznych produktów terapeutycznych kodowanych przez transgen należą hormony i czynniki wzrostu i różnicowania w tym, między innymi, insulina, glukagon, hormon wzrostu (GH), hormon przytarczycy (PTH), czynnik uwalniający hormon wzrostu (GRF), hormon folikulotropowy (FSH), hormon luteinizujący (LH), ludzka gonadotropina kosmówkowa (hCG), naczyniowo-śródbłonkowy czynnik wzrostu (VEGF), angiopoetyny, angiostatyna, czynnik stymulujący wzrost kolonii granulocytów i makrofagów (GCSF), erytropoetyna (EPO), czynnik wzrostu tkanki łącznej (CTGF), zasadowy czynnik wzrostu fibroblastów (bFGF), kwaśny czynnik wzrostu fibroblastów (aFGF), naskórkowy czynnik wzrostu (EGF), transformujący czynnik wzrostu a (TGFa), płytkowy czynnik wzrostu (PDGF), insulinopodobne czynniki wzrostu I i II (IGF-I i IGF-II), dowolny z nadrodziny transformujących czynników wzrostu β, w tym TGF3, aktywiny, inhibiny lub dowolne z białek morfogenezy kości (BMP) BMP 1-15, dowolny z rodziny czynników wzrostu i różnicowania (NDF) hereguliny/neureguliny/ARIA/neu, czynnik wzrostu nerwu (NGF), czynnik neutroficzny pochodzenia mózgowego (BDNF), neurotrofiny NT-3 i NT-4/5, rzęskowy czynnik neurotroficzny (CNTF), czynnik neutroficzny pochodzący z linii komórek gleju (GDNF), neurturyna, agrina, dowolny z rodziny semaforyn/kolapsyn, netryna-1 i netryna-2, czynnik wzrostu hepatocytów (HGF), efryny, noggina, sonic hedgehog i hydroksylaza tyrozynowa.
Do innych użytecznych produktów transgenu należą białka regulujące układ odpornościowy, w tym, między innymi, cytokiny i limfokiny takie, jak trombopoetyna (TPO), interleukiny (IL) IL-1 do IL-25 (w tym, IL-2, IL-4, IL-12 i IL-18), białko chemoatrakcji monocytów, czynnik hamujący białaczkę, czynnik stymulujący wzrost kolonii granulocytów i makrofagów, ligand Fas, czynnik martwicy nowotworów a i β, interferony a, β i γ, czynnik komórek macierzystych, ligand flk-2/flt3. Użyteczne są również produkty genów wytwarzane przez ludzki układ odpornościowy. Należą do nich, ale nie wyłącznie, immunoglobuliny IgG, IgM, IgA, IgD i IgE, chimeryczne immunoglobuliny, humanizowane przeciwciała, przeciwciała jednołańcuchowe, receptory limfocytów T, chimeryczne receptory limfocytów T, jednołańcuchowe receptory limfocytów T, cząsteczki MHC klasy I i II, a także skonstruowane metodami inżynierii immunoglobuliny i cząsteczki MHC. Do użytecznych produktów genów należą także białka regulujące dopełniacz takie, jak białka regulujące dopełniacz, białko kofaktora błonowego (MCP), czynnik przyspieszający rozpad (DAF), CR1, CF2 i CD59.
Do jeszcze innych użytecznych produktów genów należą dowolne spośród receptorów horm onów, czynników wzrostu, cytokin, limfokin, białek regulatorowych i białek układu odpornościowego. Wynalazek obejmuje receptory regulacji cholesterolu, w tym receptor lipoproteiny o małej gęstości (LDL), receptor lipoproteiny o wysokiej gęstości (HDL), receptor lipoproteiny o bardzo małej gęstości (VLDL) i receptor usuwający resztki. Wynalazek obejmuje także produkty genów takie, jak przedstawiciele nadrodziny receptorów hormonów sterydowych, w tym receptory glukokortykoidów i receptory estrogenów, receptory witaminy D i inne receptory jądrowe. Dodatkowo, do użytecznych produktów genów należą czynniki transkrypcyjne takie, jak jun, fos, max, mad, czynnik odpowiedzi na surowicę (SRF), AP-1, AP-2, myb, MyoD i miogenina, białka zawierające ETS-box, TFE3, E2F, ATF1, ATF2, ATF3, ATF4, ZF5, NFAT, CREB, HNF-4, C/EBP, SP1, białka wiążące motyw CCAAT, czynnik regulacji przez interferon (IRF-1), białko guza Wilmsa, białko wiążące ETS, STAT, białka wiążące motyw GATA, np. GATA-3 i rodzina forkhead białek z motywem uskrzydlonej helisy.
PL 222 683 B1
Do innych użytecznych produktów genów należą karbamoilo syntetaza I, transkarbamylaza ornitynowa, syntetaza argininobursztynianowa, liaza argininobursztynianowa, arginaza, hydrolaza fumaroilooctooctanowa, hydroksylaza fenyloalaninowa, alfa-1 antytrypsynowa, glukozo-6-fosfataza, deaminaza porfobilinogenowa, czynnik VIII, czynnik IX, syntaza beta-cystationu, dekarboksylaza rozgałęzionych ketokwasów, albumina, dehydrogenaza izowalerylo-CoA, karboksylaza propionylo-CoA, mutaza metylo-malonylo CoA, dehydrogenaza glutarylo CoA, insulina, beta-glukozydaza, karboksylaza pirogronianowa, fosforylaza wątrobowa, kinaza fosforylazowa, dekarboksylaza glicynowa, białko H, białko T, transbłonowy sekwencja regulatora mukowiscydozy (CFTR) i sekwencja cDNA dystrofiny. Do jeszcze innych użytecznych produktów genów należą enzymy takie, jakie mogą być przydatne w terapii zastępczej, która jest użyteczna w szeregu schorzeń wynikających z defektu aktywności enzymu. Przykładowo, enzymy zawierające mannozo-6-fosforan mogą być używane w leczeniu chorób magazynowania lizosomalnego (np. do odpowiednich genów należy kodujący β-glukuronidazę (GUSB)).
Do innych użytecznych produktów genów należą polipeptydy niewystępujące naturalnie takie, jak polipeptydy chimeryczne lub hybrydowe posiadające sekwencję aminokwasową niewystępującą naturalnie zawierającą insercje, delecje lub podstawienia aminokwasowe. Przykładowo, jednołańcuchowe wytworzone metodami inżynierii immunoglobuliny mogły by być użyteczne u niektórych pacje ntów mających obniżoną odporność. Inne typy sekwencji genów niewystępujących naturalnie obejmują cząsteczki antysensowne i katalityczne kwasy nukleinowe takie, jak rybozymy, które mogły by być zastosowane do zmniejszenia nadekspresji cząsteczki docelowej.
Zmniejszenie, i/lub regulacja ekspresji genu są szczególnie pożądane przy leczeniu schorzeń hiperproliferacyjnych cechujących się hiperproliferacją komórek tak, jak w chorobie nowotworowej i łuszczycy. Do polipeptydów docelowych należą te polipeptydy, które są wytwarzane wyłącznie lub na wyższym poziomie w komórkach hiperproliferujących w porównaniu z komórkami prawidłowymi. Do antygenów docelowych należą polipeptydy kodowane przez onkogeny takie, jak myb, myc, fyn i gen translokacji bcr/abl, ras, src, P53, neu, trk i EGRF. Poza produktami onkogenów jako antygenami d ocelowymi, do docelowych polipeptydów do reżimów leczenia przeciwnowotworowego i ochronnego należą regiony zmienne przeciwciał wytwarzanych przez chłoniaki limfocytów B oraz obszary zmienne receptorów T chłoniaków limfocytów T, które, w niektórych wykonaniach, są też stosowane jako antygeny docelowe w chorobach autoimmunologicznych. Jako polipeptydy docelowe mogą być użyte inne polipeptydy związane z nowotworami takie, jak polipeptydy, których podwyższony poziom stwierdzany jest w komórkach nowotworowych, jak polipeptyd rozpoznawany przez przeciwciało monoklonalne 17-1 A oraz polipeptydy wiążące kwasy foliowy.
Do innych odpowiednich polipeptydów i białek terapeutycznych należą te, które mogą być uż yteczne w leczeniu osobników cierpiących na choroby i schorzenia autoimmunologiczne nadając szeroką odpowiedź odporności ochronnej przeciwko celom związanym z odpowiedzią autoimmunologiczną, w tym receptorom komórkowym i komórkom wytwarzającym przeciwciała skierowane przeciwko swoim celom. Do chorób autoimmunologicznych, w których pośredniczą limfocyty T należą reumatoidalne zapalenie stawów (RA), stwardnienie rozsiane (MS), zespół Sjorgena, sarkoidoza, cukrzyca insulinozależna (IDDM), autoimmunologiczne zapalenie tarczycy (wole Hashimoto), reaktywne zapalenie stawów, zesztywniające zapalenie stawów kręgosłupa, twardzina skóry, zapalenie wielomięśniowe, zapalenie skórno-mięśniowe, łuszczyca, zapalenie naczyń, ziarniniak Wegenera, choroba Crohna i wrzodziejące zapalenie okrężnicy. Każda z tych chorób cechuje się występowaniem receptorów limfocytów T (TCR), które wiążą się z antygenami endogennymi i zapoczątkowują kaskadę zapa lną związaną z chorobą autoimmunologiczną.
C. Transgeny immunogenne
Alternatywnie lub dodatkowo, wektory według wynalazku mogą zawierać sekwencje AAV według wynalazku oraz transgen kodujący peptyd, polipeptyd lub białko wywołujące odpowiedź immunologiczną przeciwko wybranemu immunogenowi. Przykładowo, immunogeny mogą być wybrane sp ośród szeregu rodzin wirusów. Do przykładów pożądanych rodzin wirusów, przeciwko którym pożądana byłaby odpowiedź immunologiczna należą: rodzina pikornawirusów, która zawiera rodzaje rhinowirusów, odpowiedzialnych za około 50% przypadków przeziębienia, rodzaj enterowirusów, do którego należą poliowirusy, wirusy Coxsackie, echowirusy oraz enterowirusy ludzkie takie, jak wirus zapalenia wątroby typu A oraz rodzaj apthowirusów, które są odpowiedzialne za pryszczycę, głównie u zwierząt innych niż człowiek. W rodzinie pikornawirusów do antygenów docelowych należą VP1, VP2, VP3, VP4 i VPG. Inna rodzina wirusów obejmuje rodzinę kaliciwirusów, która obejmuje grupę wirusów Norwalk, które są istotnym czynnikiem sprawczym epidemicznego zapalenia żołądka i jelit. Jeszcze
PL 222 683 B1 inną rodziną wirusów pożądaną w zastosowaniu kierowania antygenów do indukowania odpowiedzi immunologicznej w ludzi i innych zwierząt jest rodzina togawirusów, do której należy rodzaj alfawirus, który obejmuje wirusy Sindbis, wirus RossRiver, wirusy zapalenia mózgu koni Wenezuelski, Wschodni i Zachodni, oraz rubiwirus, w tym wirus różyczki. Do rodziny flaviviridae należą wirusy denga, żółtej febry, japońskiego zapalenia mózgu, zapalenia mózgu St. Louis i wirusy kleszczowego zapalenia mózgu. Inne antygeny docelowe mogą być wytworzone z rodziny wirusa zapalenia wątroby typu C lub koronawirusów, która obejmuje szereg wirusów zwierząt innych niż człowiek takich, jak zakaźny wirus zapalenia oskrzeli (drobiu), wirus zapalenia żołądka i jelit świń, wirus hemaglutynacyjnego zapalenia mózgu i rdzenia świń, wirus zakaźnego zapalenia otrzewnej kotów, jelitowy koronawirus kotów, koronawirus psów oraz ludzkie koronawirusy dróg oddechowych, które mogą powodować przeziębienia i/lub zapalenie wątroby inne niż typu A, B lub C. W rodzinie koronawirusów do antygenów docelowych należą El (zwany również M lub białkiem macierzy), E2 (zwany również S lub białkiem iglicy), E3 (zwany również HE lub hemaglutyno-elterozą), glikoproteina (niewystępująca u wszystkich koronawirusów) lub N (nukleokapsyd). Jeszcze inne antygeny mogą być skierowane przeciwko rodzinie rhabdowirusów, do której należy rodzaj vesiculovirus (np. wirus pęcherzykowatego zapalenia jamy ustnej) oraz rodzaj lyssavirus (np. wścieklizny). W rodzinie rhabdowirusów odpowiednie antygeny mogą p ochodzić z białka G lub białka N. Rodzina filowirusów, do której należą wirusy gorączki krwotocznej takie, jak Marburg lub Ebola może być odpowiednim źródłem antygenów. Do rodziny paramyxowir usów należy wirus grypy rzekomej typu 1, wirus grypy rzekomej typu 3, wirus grypy rzekomej bydła typu 3, rubulawirus (wirus świnki), wirus grypy rzekomej typu 2, wirus grypy rzekomej typu 4, wirus choroby kurcząt Newcastle, wirus księgosuszu bydła, morbilliwirus, w tym wirus odry i nosówki psów oraz pneumowirus, w tym syncycjalny wirus oddechowy. Wirus grypy zaliczany jest do grupy orthomyxowirusów i jest odpowiednim źródłem antygenu (np. białko HA, białko N1). Do rodziny bunyawirusów należą rodzaje bunyawirus (zapalenie mózgu Kalifornia, La Crosse), phlebowirus (gorączka Rift Valley), hantawirus (puremala jest wirusem gorączki krwotocznej), nairowirus (choroba owiec Nairobi) i szereg niesklasyfikowanych bungawirusów. Rodzina arenawirusów dostarcza źródła antygenów przeciwko wirusowi LCM i gorączki Lassa. Do rodziny reowirusów należą rodzaje reowirus, rotawirus (powodujący ostre zapalenie żołądka i jelit u dzieci), orbiwirusy i cultiwirusy (gorączka kleszczowa Colorado, Lebombo (ludzie), zapalenie mózgu koni, niebieski język).
Do rodziny retrowirusów należy podrodzina onkowirusów, która obejmuje takie wirusy chorób ludzkich i weterynaryjnych, jak wirus białaczki kotów HTLVI i HTLVII, lentiwirusów (obejmująca ludzki wirus braku odporności (HIV), małpi wirus braku odporności (SIV), koci wirus braku odporności (FIV), wirus zakaźnej anemii koni i spumawirus). Dla HIV i SIV opisano wiele odpowiednich antygenów, które można łatwo wybrać. Do przykładów odpowiednich antygenów HIV i SIV należą, między innymi, białka gag, pol, Vif, Vpx, VPR, Env, Tat i Rev oraz różne ich fragmenty. Ponadto opisano wiele modyfikacji tych antygenów. Odpowiednie do tego celu antygeny są znane specjalistom. Przykładowo, można wybrać sekwencję kodującą, między innymi białkami, gag, pol, Vif i Vpr, Env, Tat i Rev. Patrz np. modyfikowane białko gag opisane w Patencie USA nr 5,972,596. Patrz też białka SIV i HIV opisane przez
D. H. Barouch i wsp. J. Virol., 75 (5): 2462-2467 (marzec 2001) i R. R. Amara, i wsp.. Science, 292: 69-74 (6 kwietnia 2001). Białka te lub ich podjednostki mogą być dostarczone same, lub w kombinacji za pośrednictwem osobnych wektorów lub na jednym wektorze.
Rodzina papovawirusów obejmuje podrodziny poliomawirusów (wirusy BKU i JCU) oraz podrodzinę papillomawirusów (związaną z nowotworami lub złośliwym rozwojem brodawczaków). Rodzina adenowirusów obejmuje wirusy (EX, AD7, ARD, O.B.) powodujące choroby dróg oddechowych i/lub zapalenie jelita. Do rodziny parvowirusów należą koci parworwirus (zapalenie jelita kotów), wirus e ukocytopenii kotów, psi parwowirus i parwowirus świń. Do rodziny herpeswirusów należy podrodzina alphaherpesvirinae obejmująca rodzaje simplexvirus (HSVI, HSVII), varicellovirus (wścieklizna rzekoma, półpasiec) oraz podrodzina betaherpesvirinae obejmująca rodzaj cytomegalowirus (HCMV, m uromegalovirus) i podrodzina gammaherpesvirinae obejmująca rodzaje lymphocryptovirus, EBV (chł oniak Burkitta), wirus zapalenia nosa i tchawicy, wirus choroby Mareka i rhadinovirus. Do rodziny pokswirusów należy podrodzina chordopoxvirinae obejmująca rodzaje orthopoxvirus (ospa (ospa prawdziwa) i krowianka (ospa bydlęca)), parapoxvirus, avipoxvirus, capripoxvirus, leporipoxvirus, suipoxvirus i podrodzina entomopoxvirinae. Do rodziny hepadnawirusów należy wirus zapalenia wątroby typu B. Jednym z niesklasyfikowanych wirusów, który może być odpowiednim źródłem antygenów jest wirus zapalenia wątroby delta. Do jeszcze innych źródeł wirusowych mogą należeć wirus zakaźnej
PL 222 683 B1 choroby kaletkowej ptaków i wirus zespołu oddechowego i rozrodczego świń. Do rodziny alfawirusów należy wirus zapalenia tętnicy koni i różne wirusy zapalenia mózgu.
Niniejszy wynalazek może także obejmować immunogeny użyteczne do immunizacji człowieka lub innego niż człowiek zwierzęcia przeciwko innym patogenom, w tym bakteriom, grzybom, mikroorganizmom pasożytniczym lub pasożytom wielokomórkowym zakażającym człowieka i inne kręgowce, lub komórkom nowotworowym lub guza. Do przykładów patogenów bakteryjnych należą patogenne gram-dodatnie ziarniaki, w tym pneumokoki, gronkowce i paciorkowce. Do patogennych gram-ujemnych ziarniaków należą meningokoki i gonokoki. Do patogennych jelitowych laseczek gram-ujemnych należą enterobacteriaceae; pseudomonas, acinetobacteria i eikenella; melioidoza; salm onella; shigella; pałeczki hemofilne; moraxella; H. ducreyi (powodująca wrzód weneryczny); pałeczka brucelozy; Francisella tularensis (powodująca tularemię); yersinia (pasteurella); streptobacillus moniliformis (zarazek gorączki ukąszenia szczura) i śrubowiec; do gram-dodatnich laseczek należą pałeczka listeriozy; włoskowiec różycy; Corynebacterium diphtheria (błonica); cholera; B. anthracis (wąglik); donovanoza (ziarniak pachwinowy); i bartonelloza. Do chorób wywoływanych przez patogenne bakterie beztlenowe należą tężec, botulizm, zakażenia innymi clostridiami; gruźlica; trąd i inne mykobakterie. Do chorób wywoływanych przez patogenne krętki należy kiła, krętkowica, frambezja, pinta i kiła endemiczna oraz leptospiroza. Do innych zakażeń wywoływanych przez wyższe bakterie patogenne i grzyby patogenne należą promienica; nocardioza; kryptokokoza, drożdżyca wywołana przez Blastomyces, histoplasmoza i kokcydioidomykoza; kandydoza, grzybica kropidlakowa, mukormykoza; sporotrychoza; parakokcydioidomykoza, petriellidioza, torulopsoza, mycetoma i chromoblastomikoza i grzybica skóry. Do zakażeń riketsjami należą dur plamisty, gorączka plamista Gór Skalistych, gorączka Q i zakażenie Rickettsia akari. Do przykładów zakażeń mikoplazmami i chlamydiami należą mikoplazma zapalenia płuc, ziarnica weneryczna pachwin, papuzica i okołoporodowe zakażenia chlamydiami. Do patogennych eukariontów należą patogenne pierwotniaki i robaki, zaś do wywoływanych przez nie zakażeń należą ameboza, malaria, leiszmanioza, trypanosomatoza, toksoplazmoza, Pneumocystis carinii, Trichans, Toxoplasma gondii, babeszjoza, lamblioza, włośnica, filarioza, schistosomatoza, zakażenia nicieniami, przywrami i tasiemcami.
Wiele spośród tych organizmów i/lub wytwarzanych przez nie toksyn zostało zidentyfikowane przez Centra Zwalczania Chorób Zakaźnych [Centers for Disease Control (CDC), Department of H eath and Human Services, USA] jako czynniki mające potenjalne zastosowanie w atakach biologicznych. Przykładowo, niektóre z tych czynników biologicznych obejmują Bacillus anthracis (wąglik), Clostridium botulinum i jego toksynę (botulizm), Yersinia pestis (dżuma), ospę prawdziwą, Francisella tularensis (tularemia) i wirusową gorączkę krwotoczną, z których wszystkie są obecnie zaliczane do czynników kategorii A; Coxiella burnetti (gorączka Q); Brucella species (bruceloza), Burkholderia mallei (nosacizna), Ricinus communis i jego toksyna (rycyna, toksyna rącznika), Clostridium perfringens i jego toksyna (toksyna epsilon), Staphylococcus species i ich toksyny (enterotoksyna B), z których wszystkie są obecnie zaliczane do kategorii B; oraz wirus Nipan i hantawirusy, które są obecnie zaliczane do kategorii C. Ponadto, inne organizmy, które są tak zaliczane lub zaliczane inaczej mogą być zidentyfikowane i/lub zastosowane w tym celu w przyszłości. Łatwo zauważyć, że wektory wirusowe i inne konstrukty tu opisane są użyteczne w dostarczaniu antygenów z tych organizmów, wirusów, ich toksyn lub innych produktów ubocznych, co zapobiegnie i/lub wyleczy zakażenie lub inne niepożądane reakcje na te czynniki biologiczne.
Podanie wektorów według wynalazku w celu dostarczenia immunogenów przeciwko zmiennemu obszarowi limfocytów T wywołuje odpowiedź immunologiczną, w tym CTL dla wyeliminowania tych limfocytów T. W reumatoidalnym zapaleniu stawów (RA) scharakteryzowano kilka konkretnych regionów zmiennych receptorów limfocytów T (TCR) związanych z chorobą. Do tych TCR należą V-3, V-14, V-17 i Va-17. Dostarczenie sekwencji kwasu nukleinowego kodującej przynajmniej jeden z tych polipeptydów wywoła zatem odpowiedź immunologiczną skierowaną przeciwko limfocytom T związanym z RA. W stwardnieniu rozsianym (MS) scharakteryzowano kilka konkretnych regionów zmiennych receptorów limfocytów T (TCR) związanych z chorobą. Do tych TCR należą V-7 i Va-10. Dostarczenie sekwencji kwasu nukleinowego kodującej przynajmniej jeden z tych polipeptydów wywoła zatem odpowiedź immunologiczną skierowaną przeciwko limfocytom T związanym z MS. W twardzinie skóry scharakteryzowano kilka konkretnych regionów zmiennych receptorów limfocytów T (TCR) związanych z chorobą. Do tych TCR należą V-6, V-8, V-14 i Va-16, Va-3C, Va-7, Va-14, Va-15, Va-16, Va-28 i Va-12. Dostarczenie sekwencji kwasu nukleinowego kodującej przynajmniej
PL 222 683 B1 jeden z tych polipeptydów wywoła zatem odpowiedź immunologiczną skierowaną przeciwko limfocytom T związanym z twardziną skóry.
Ewentualnie, wektory zawierające sekwencje AAV według wynalazku mogą być dostarczane w reżimie dawki podstawowej i dawki przypominającej. Szereg takich reżimów opisano w dziedzinie i można je łatwo wybierać. Patrz np., WO 00/11140, opublikowany 2 marca 2000, włączony przez referencję.
Takie reżimy dawki podstawowej i dawki przypominającej typowo obejmują podanie wektora opartego na DNA (np. plazmidu) dla przygotowania układu odpornościowego na drugie, przypominające podanie tradycyjnego antygenu takiego, jak białko lub zrekombinowany wirus niosący sekwencje kodujące taki antygen. W jednym wykonaniu wynalazek dostarcza sposobu zapoczątkowania i wzmocnienia odpowiedzi immunologicznej na wybrany antygen przez dostarczenie wektora plazmidowego DNA niosącego ten antygen, po czym przypomnienie, np. wektorem zawierającym sekwencje AAV według wynalazku.
W jednym wykonaniu reżim dawki podstawowej i dawki przypominającej obejmuje wyrażanie multiprotein z nośnika podstawowego i przypominającego. Patrz np., R.R. Amara, Science, 292: 69 -74 (6 kwietnia 2001), opisujący reżim multiproteinowy dla wyrażania podjednostek białkowych użyteczny do wytwarzania odpowiedzi immunologicznej przeciwko HIV i SIV. Przykładowo dawka podstawowa DNA może dostarczać Gag, Pol, Vif, VPX i Vpr oraz Env, Tat i Rev z pojedynczego transkryptu. Alternatywnie, dostarczane są Gag i Pol SIV oraz Env HIV-I.
Reżimy dawki podstawowej i dawki przypominającej nie są jednak ograniczone do immunizacji przeciwko HIV lub dostarczania tych antygenów. Przykładowo, dawka podstawowa może obejmować dostarczenie pierwszym szympansim wektorem według wynalazku oraz przypomnienie drugim wektorem szympansim, lub kompozycją zawierającą sam antygen w postaci białka. W jednym przykładzie reżim dawki podstawowej i dawki przypominającej może dostarczyć ochronną odpowiedź immunologiczną przeciwko wirusowi, bakterii lub innemu organizmowi, z którego pochodzi antygen. W innym pożądanym wykonaniu, reżim dawki podstawowej i dawki przypominającej dostarcza efektu terapeutycznego, który może być zmierzony przy pomocy konwencjonalnych oznaczeń wykrywających obecność schorzenia, przeciwko któremu stosowana jest terapia.
Szczepionka podstawowa może być podana w różnych miejscach ciała w sposób zależny od dawki, który zależy od antygenu, przeciwko któremu skierowana jest pożądana odpowiedź immunologiczna. Wynalazek nie jest ograniczany ilością lub miejscem wstrzyknięcia, ani nośnikiem farmaceutycznym. Etap podstawowy obejmuje raczej reżimy terapeutyczne obejmujące jedną dawkę lub da wkowanie co godzina, dzień, tydzień lub miesiąc lub rok. Przykładowo, ssaki mogą otrzymywać jeden lub dwa zastrzyki podstawowe zawierające od około 10 gg do około 50 gg plazmidu w nośniku. Korzystna ilość podstawowa lub dawkowanie kompozycji podstawowej szczepionki DNA wynosi od około 1 gg do 10000 gg szczepionki DNA. Dawki mogą się wahać od około 1 gg do 10000 gg DNA na kg masy ciała pacjenta. Ilość lub miejsce wstrzyknięcia są korzystnie wybierane zależnie od rodzaju i stanu szczepionego ssaka.
Jednostka dawkowania szczepionki DNA odpowiednia do dostarczenia antygenu ssakowi jest tu opisana. Szczepionka DNA jest przygotowywana do podania przez zawieszenie lub rozpuszczenie w farmaceutycznie lub fizjologicznie dopuszczalnym nośniku takim, jak izotoniczna sól, roztwór soli izotonicznych lub inne formuły, które będą oczywiste dla specjalisty w dziedzinie takiego podawania. Odpowiedni nośnik będzie oczywisty dla specjalisty i będzie w dużej części zależał od drogi podawania. Kompozycje według wynalazku mogą być podawane ssakowi zgodnie z opisanymi powyżej drogami, w formule przedłużonego uwalniania wykorzystującej ulegający biodegradacji bio-zgodny polimer lub przez podanie domiejscowe przy pomocy micelli, żeli i liposomów.
Ewentualnie, etap podstawowy według tego wynalazku obejmuje także podanie razem z kompozycją podstawowej szczepionki DNA odpowiedniej ilości adiuwanta takiego, jak tu zdefiniowane.
Korzystnie kompozycja przypominająca jest podawana około 2 do około 27 tygodni po podaniu podstawowej szczepionki DNA pacjentowi-ssakowi. Podawanie kompozycji przypominającej osiągane jest przez zastosowanie skutecznej ilości kompozycji szczepionki przypominającej zawierającej lub zdolnej do dostarczenia tego samego antygenu, co podawany przez podstawową szczepionkę DNA. Kompozycja przypominająca może składać się ze zrekombinowanego wektora wirusowego pochodzącego z tego samego źródła, lub z innego źródła. Alternatywnie, „kompozycja przypominająca m oże być kompozycją zawierającą ten sam antygen, który kodowany jest przez podstawową szczepionkę DNA, lecz w postaci białka lub peptydu, która to kompozycja indukuje odpowiedź immunologiczną
PL 222 683 B1 u gospodarza. W innym wykonaniu, kompozycja szczepionki przypominającej obejmuje kompozycję zawierającą sekwencję DNA kodującą antygen pod kontrolą sekwencji regulatorowej kierującej jego ekspresją w komórce ssaka, np. wektory takie, jak dobrze znane wektory bakteryjne lub wirusowe. Podstawowym wymogiem wobec szczepionki przypominającej jest to, by antygen kompozycji szczepionki był tym samym antygenem, lub antygenem reagującym krzyżowo, co antygen kodowany przez szczepionkę DNA.
Odpowiednio, wektory według wynalazku są także dobrze dostosowane do wykorzystania w reżimach wykorzystujących wektory inne niż AAV, a także białka, peptydy i/lub inne użyteczne biologicznie związki terapeutyczne lub immunogenne. Reżimy te są szczególnie dobrze przystosowane do dostarczania genów dla celów terapeutycznych i dla immunizacji, w tym odporności ochronnej. Zastosowania takie będą oczywiste dla specjalisty.
Ponadto, wektor według wynalazku dostarcza skutecznego nośnika transferu genów, który może dostarczać wybrany transgen do wybranej komórki gospodarza in vivo lub ex vivo, nawet gdy organizm posiada przeciwciała neutralizujące przeciwko jednemu lub więcej serotypom AAV. W jednym wykonaniu wektor (np. rAAV) oraz komórki są mieszane ex vivo; zainfekowane komórki są hodowane przy wykorzystaniu konwencjonalnych metod; zaś transdukowane komórki są ponownie wprowadzane do pacjenta. Ponadto, wektory według wynalazku mogą być także wykorzystane do wytwarzania pożądanego produktu genu in vitro. Dla wytwarzania in vitro pożądany produkt (np. białko) może być uzyskany z pożądanej hodowli po transfekcji komórek gospodarza rAAV zawierającym cząsteczkę kodującą pożądany produkt i hodowli komórek w warunkach pozwalających na ekspresję. Wyrażany produkt może następnie być oczyszczony i wyizolowany według potrzeby. Odpowiednie techniki transfekcji, hodowli komórek, oczyszczania i izolacji są znane specjalistom.
Następujące przykłady ilustrują kilka aspektów i wykonań wynalazku.
PRZYKŁADY
P r z y k ł a d 1:
Amplifikacje PCR, klonowanie i charakteryzacja nowych sekwencji AAV.
Tkanki naczelnych innych niż człowiek przeszukano pod kątem obecności sekwencji AAV przy pomocy metody PCR opartej na oligonukleotydach komplementarnych do wysoce zachowywanych obszarów znanych AAV. Odcinek sekwencji obejmujący pozycje od 2886 do 3143 AAV1 [SEKW. NR ID.: 6] wybrano jako amplikon PCR, w którym nadzmienny obszar białka kapsydu (Cap), który jest niepowtarzalny w każdym znanym serotypie AAV, nazwany tu obszarem charakterystycznym, jest otoczony przez zachowywane sekwencje. W dalszej analizie wykazano, że ten obszar charakterystyczny jest zlokalizowany pomiędzy zachowywanymi aminokwasami obejmującymi nadzmienny o bszar 3.
Wstępne badanie krwi obwodowej szeregu gatunków innych niż człowiek naczelnych ujawniło wykrywalne AAV u podgrupy zwierząt gatunków takich, jak rezusy, makaki jawajskie, szympansy i pawiany. Nie wykryto jednak sekwencji AAV u niektórych innych badanych gatunków, w tym makaków japońskich, lapunderów i sajmiri. Dokładniejszą analizę rozmieszczenia wektorów przeprowadzono w tkankach rezusów z kolonii University of Pennsylvania i Tulane odzyskanych po nekropsji. Uja wniła ona sekwencje AAV w szeregu różnych tkanek.
A. Namnażanie obszaru charakterystycznego AAV
Sekwencje DNA AAV1-6 i AAV wyizolowanych z osobników Goose i Duck dopasowano do siebie przy użyciu Clustal W z domyślnymi ustawieniami. Dopasowanie AAV1-6 i nowego AAV7 dostarczono na Rys. 1. Porównano podobieństwa sekwencji pomiędzy AAV.
W trakcie badania wynalazcy zidentyfikowali obszar 257 bp obejmujący pozycje 2886 do 3143 AAV1 [SEKW. NR ID.: 6] i odpowiadający mu obszar w genomach AAV2-6 [patrz Rys. 1]. Obszar ten jest położony w genie kapsydu AAV i posiada wysoce zachowywane sekwencje na 5' i 3'końcu oraz stosunkowo zmienną sekwencję pośrodku. Ponadto, obszar ten zawiera miejsce rozpoznawane przez enzym restrykcyjny DraIII (CACCACGTC, SEKW. NR ID.: 15). Wynalazcy stwierdzili, że obszar ten służy jako swoista charakterystyczna cecha każdego znanego typu DNA AAV. Innymi słowy, po reakcjach PGR, trawieniu endonukleazami specyficznymi dla każdego znanego serotypu i analizie elektroforezą w żelu, obszary te mogą być wykorzystane do ostatecznej identyfikacji namnożonego DNA jako pochodzącego z serotypu 1, 2, 3, 4, 5, 6 lub innego serotypu.
Startery zaprojektowano, skontrolowano i dokonano optymalizacji warunków PGR posługując się kontrolami DNA AAV1, 2 i 5. Startery oparto na sekwencji AAV2: starter 5', 1S: bp 2867-2891 AAV2 (SEKW. NR ID.: 7) i starter 3', 18as: bp 3095-3121 AAV2 (SEKW. NR ID.: 7).
PL 222 683 B1
Posługując się opisaną powyżej strategią przebadano DNA komórkowe z różnych tkanek, w tym krwi, mózgu, wątroby, płuca, jądra itd., z różnych rezusów. Wyniki ujawniły, że DNA z różnych tkanek tych małp dało silne amplifikacje PGR.
Dalsze analizy restrykcyjne produktów PGR wykazały, że namnożono je z sekwencji AAV innych od wszystkich opublikowanych sekwencji AAV.
Produkty PCR (wielkości około 255 bp) z DNA szeregu różnych tkanek małp sklonowano i zsekwencjonowano. Bioinformatyczne badanie tych nowych sekwencji AAV wykazało, że są to nowe sekwencje genu kapsydu AAV i są różne od siebie. Rys. 1 zawiera dopasowanie nowych obszarów charakterystycznych AAV z AAV10-12 [odpowiednio SEKW. NR ID.: 117, 118 i 119]. Analizę wielokrotnego dopasowania sekwencji przeprowadzono przy pomocy programu Clustal W (1.81). Procent identyczności sekwencji pomiędzy obszarami charakterystycznymi AAV 1-7 i AAV 10-12 podano poniżej.
T a b e l a 2.
Sekwencje do analizy
Sekwencja # Serotyp AAV Wielkość (bp)
1 AAV1 258
2 AAV2 255
3 AAV3 255
4 AAV4 246
5 AAV5 258
6 AAV6 258
7 AAV7 258
10 AAV10 255
11 AAV11 258
12 AAV12 255
T a b e l a 3.
Dopasowanie parami (procent identyczności)
AAV2 AAV3 AAV4 AAV5 AAV6 AAV7 AAV10 AAV11 AAV12
AAV1 90 90 81 76 97 91 93 94 93
AAV2 93 79 78 90 90 93 93 92
AAV3 80 76 90 92 92 92 92
AAV4 76 81 84 82 81 79
AAV5 75 78 79 79 76
AAV6 91 92 94 94
AAV7 94 92 92
AAV10 95 93
AAV11 94
Wyizolowano i zsekwencjonowano ponad 300 klonów zawierających sekwencje nowych serot ypów AAV obejmujące wybrany obszar 257 bp. Bioinformatyczna analiza tych ponad 300 klonów sugeruje, że ten obszar 257 bp jest krytyczny w roli dobrego znacznika lub sekwencji charakterystycznej dla szybkiej izolacji i identyfikacji nowego serotypu AAV.
B. Zastosowanie obszaru charakterystycznego do amplifikacji PCR
Obszar charakterystyczny 257 bp wykorzystano jako kotwicę PCR do wydłużenia amplifikacji w kierunku 5' w genomie dla pokrycia obszaru połączenia genów rep i cap (pozycje 1398 bp-3143 bp,
PL 222 683 B1
SEKW. NR ID.: 6) i w kierunki 3; w genomie dla uzyskania całej sekwencji genu cap (pozycje 2866 bp-4600 bp, SEKW. NR ID.: 6). Reakcje PCR przeprowadzono przy zastosowaniu standardowych warunków, w tym denaturacji w 95°C przez 0,5-1 min, przyłączania starterów w 60-65°C przez 0,5 -1 min i wydłużania w 72°C przez 1 min na kb, przy całkowitej liczbie cykli amplifikacji od 28 do 42.
Przy zastosowaniu dopasowanych sekwencji tak, jak opisano w punkcie A, zidentyfikowano dwa inne stosunkowo zachowywane obszary w sekwencji położonej w końcu 3' genów rep i po stronie 5' obszaru 257 bp oraz w sekwencji poniżej fragmentu 257 bp, lecz przez 3' ITR AAV. Zaprojektowano dwa nowe zestawy starterów i dokonano optymalizacji warunków PCR dla uzyskania całego kapsydu i części sekwencji rep z nowych serotypów AAV. Konkretniej, dla amplifikacji 5'; starterem 5', AV1Ns, był GCTGCGTCAACTGGACCAATGAGAAC [nt 1398-1423 AAV1 SEKW. NR ID.: 6] a starterem 3' był zidentyfikowany powyżej 18as. Dla amplifikacji 3', starterem 5' był zidentyfikowany powyżej 1 s, zaś starterem 3' był AV2Las, TCGTTTCAGTTGAACTTTGGTCTCTGCG [nt 4435-4462 AAV2 SEKW. NR ID.: 7].
W tych amplifikacjach PCR, obszar 257 bp użyto w charakterze kotwicy PCR i znacznika dla wytworzenia nakładających się fragmentów dla skonstruowania kompletnego genu kapsydu przez połączenie w miejscu DraIII w obszarze charakterystycznym po namnożeniu fragmentów wydłużania 5' i 3; uzyskanych tak, jak tu opisano. Konkretniej, dla wytworzenia całego genu cap AAV7 trzy produkty amplifikacji (a) sekwencje obszaru charakterystycznego; (b) sekwencje wydłużania 5'; i (c) s ekwencje wydłużania 3' wklonowano w szkielet plazmidu pCR4-Topo [Invitrogen] zgodnie z instrukcjami wytwórcy, następnie plazmidy strawiono DraIII i zrekombinowano dla odtworzenia pełnego genu cap.
W trakcie tych prac wyizolowano i przeanalizowano około 80% sekwencji kapsydów AAV7 i AAV8. Odkryto także nowy serotyp, AAV9, z osobnika małpy #2.
Przy wykorzystaniu opisanych powyżej warunków PCR, pozostałą część sekwencji genu rep AAV7 wyizolowano i sklonowane przy zastosowaniu starterów namnażających pozycje 108 bp do 1461 bp genomu AAV (obliczone na podstawie numeracji AAV2, SEKW. NR ID.: 7). Klon ten zsekwencjonowano dla skonstruowania pełnego genomu AAV7 bez ITR.
C. Bezpośrednia amplifikacja fragmentu Cap długości 3,1 kb
W celu bezpośredniego namnożenia pełnej długości fragmentu Cap 3,1 kb z DNA z tkanek i krwi NHP zidentyfikowano dwa inne wysoce zachowywane obszary w genomach AAV do wykorzystania w namnażaniu PCR dużych fragmentów. Wybrano starter w zachowywanym obszarze zlokalizowanym w środku genu rep (AV1ns: 5' GCTGCGTCAACTGGACCAATGAGAAC 3', nt 1398-1423 z SEKW. NR ID.: 6) w połączeniu ze starterem 3' zlokalizowanym w innym zachowywanym obszarze poniżej genu Cap (AV2cas: 5' CGCAGAGACCAAAGTTCAACTGAAACGA 3', SEKW. NR ID.: 7) dla namnożenia pełnej długości fragmentów cap. Produkty PCR klonowano systemem Topo według wskazań producenta (Invitrogen), zaś analiza sekwencji została przeprowadzona przez Qiagengen omics (Qiagengenomics, Seattle, WA) z dokładnością > 99,9%. W sumie wyizolowano i scharakteryzowano 50 klonów kapsydu. Wśród nich 37 klonów pochodziło z tkanek rezusa (rh.1-rh.37), 6 klonów z makaka jawajskiego (cy.1-cy.6), 2 klony z pawianów (bb.1 i bb.2) i 5 klonów z szympansów (ch.1-ch.5).
Aby wykluczyć możliwość, że zróżnicowanie sekwencji nowej rodziny AAV jest artefaktem PCR takim, jak składanie fragmentów genów w PCR przez wydłużania nakładających się fragmentów różnych niepełnych matryc DNA z fragmentami homologicznymi, lub wynikiem procesów rekombinacji w bakteriach, przeprowadzono serię doświadczeń w identycznych warunkach dla namnażania VP1 przy wykorzystaniu całkowitych DNA komórkowych. Najpierw zmieszano nienaruszone plazmidy AAV7 i AAV8 w równomolarnych stosunkach, po czym rozcieńczono je metodą seryjnych rozcieńczeń. Seryjnie rozcieńczone mieszaniny wykorzystano jako matryce dla namnażania PCR fragmentów VP1 o długości 3,1 kb przy zastosowaniu uniwersalnych starterów i identycznych warunków PCR, jak użyte do namnażania aby sprawdzić, czy nie powstają jakiekolwiek hybrydowe produkty PCR. Mieszaninę transformowano do bakterii i izolowano transformanty poszukując klonów hybrydowych, które mogły pochodzić z procesów rekombinacji w komórkach bakterii. W innym doświadczeniu przecieliśmy plazmidy AAV7 i AAV8 Msp I, Ava I i HaeI, które to wszystkie enzymy wielokrotnie tną oba genomy w różnych pozycjach, zmieszaliśmy trawienia w różnych zestawieniach i zastosowaliśmy do namnażania fragmentów VP1 w tych samych warunkach dla zbadania, czy jakiekolwiek produkty PCR mogą być wytworzone przez wydłużanie nakładających się sekwencji niepełnych sekwencji AAV. W innym doświadczeniu mieszaninę oczyszczonych z żelu fragmentów 5' 1,5 kb VP1 AAV7 i 3' 1,7 kb VP1 AAV8, które nakładają się w obszarze charakterystycznym rozcieńczono seryjnie i wykorzystano do
PL 222 683 B1 namnażania PCR w obecności lub nieobecności 200 ng DNA komórkowego wyizolowanego z linii komórek małpy, w której w analizie TaqMan nie wykryto sekwencji AAV. W żadnym z tych doświadczeń nie wykazano skutecznego wytwarzania nakładających się sekwencji przez PCR w warunkach namnażania Cap z genomowego DNA (dane nieprzedstawione). W celu dalszego potwierdzenia zaprojektowano 3 pary starterów zlokalizowanych w różnych HVR i specyficznych dla sekwencji wariantów klonu 42s z rezusa F953, w różnych zestawieniach dla namnożenia krótszych fragmentów z DNA krezkowego węzła chłonnego (MLN) z F593, z którego wyizolowano klon 42s. Wszystkie warianty sekwencji zidentyfikowane w pełnej długości klonach Cap odnaleziono w tych krótszych fragmentach (dane nieprzedstawione).
P r z y k ł a d 2:
Wirusy stowarzyszone z adenowirusami podlegają znaczącej ewolucji u naczelnych podczas naturalnych zakażeń
Analiza sekwencji wybranych izolatów AAV ujawniła zróżnicowanie w całym genomie, najbardziej skoncentrowane w obszarach nadzmiennych białek kapsydu. Dane epidemiologiczne wskazują, że wszystkie znane serotypy są endemiczne u naczelnych, aczkolwiek izolacja izolatów klinicznych była ograniczona do AAV2 i AAV3 z wymazów z odbytu i gardła ludzkich niemowląt oraz AAV5 z kłykciny kończystej człowieka. Z zakażeniami AAV nie związano żadnych znanych następstw klinicznych.
W próbie lepszego zrozumienia biologii AAV wykorzystano w charakterze modeli inne niż człowiek naczelne dla scharakteryzowania następstw naturalnych zakażeń. Tkanki z innych niż człowiek naczelnych badano pod kątem obecności sekwencji AAV przy wykorzystaniu sposobu PCR według wynalazku w oparciu o oligonukleotydy komplementarne do wysoce zachowywanych obszarów znanych AAV (patrz Przykład 1). Jako amplikon PCR wybrano ciąg sekwencji AAV obejmujący pozycje 2886 do 3143 AAV1 [SEKW. NR ID.: 6], w którym zachowywane sekwencje są flankowane przez obszar nadzmienny unikatowy dla każdego znanego serotypu AAV, nazwany tu obszarem charakterystycznym. Wstępne badanie krwi obwodowej szeregu gatunków innych niż człowiek naczelnych, w tym rezusów, makaków jawajskich, szympansów i pawianów ujawniło wykrywalne AAV u podgrupy zwierząt ze wszystkich gatunków. Dokładniejsza analiza rozmieszczenia wektora została przeprowadzona w tkankach rezusów kolonii University of Pennsylvania i Tulane pozyskanych po nekropsji. Ujawniło to sekwencje AAV w szeregu różnych tkanek.
Namnożone sekwencje charakterystyczne subklonowano do plazmidów i poddano pojedyncze transformanty analizie sekwencji. Ujawniła ona znaczącą zmienność w sekwencji nukleotydowej klonów pochodzących z różnych zwierząt. Zmienność w sekwencji charakterystycznej odnotowano także w klonach uzyskanych z pojedynczych zwierząt. Tkanki zebrane z dwóch zwierząt, u których zidentyf ikowano unikatowe sekwencje charakterystyczne (tzn. okrężnica z 98E044 i serce z 98E056) p oddano dalszej charakteryzacji przez wydłużenie sekwencji namnażanej w PCR przy pomocy oligonukleot ydów komplementarnych do wysoce zachowywanych sekwencji. W ten sposób odtworzono pełne sekwencje prowirusowe z genomów wirusa z obu tkanek tak, jak tu opisano. Prowirusy różnią się od innych znanych AAV, przy największym zróżnicowaniu sekwencji zaobserwowanym w obszarach genu Cap.
Przeprowadzono dodatkowe doświadczenia dla potwierdzenia, że sekwencje AAV rezydujące w tkance naczelnego innego niż człowiek stanowiły prowirusowe genomy zakaźnych wirusów, które można odzyskać tworząc wiriony.
DNA genomowy z tkanki wątroby zwierzęcia 98E056, w którym wykryto sekwencje charakterystyczne AAV8 strawiono endonukleazą, która nie posiada miejsca w sekwencji AAV i transfekowano do komórek 293 z plazmidem zawierającym pozbawiony E1 genom ludzkiego adenowirusa serotypu 5 jako źródłem funkcji pomocniczych. Uzyskany lizat pasażowano jednokrotnie w komórkach 293 a następnie odzyskano lizat i przeanalizowano pod kątem obecności białek Cap AAV przy pomocy szeroko reagującego poliklonalnego przeciwciała przeciwko białkom Cap oraz pod kątem obecności i ilości sekwencji DNA namnożonego PCR prowirusa, z którego pochodził AAV8. Transfekcja trawionego endonukleazą DNA serca oraz adenowirusowego plazmidu pomocniczego dała duże ilości wirusa AAV8, co wykazano wykrywając białka Cap analizą Western oraz wykazując obecność 104 genomów wektora AAV8 na komórkę 293. Z preparatu na dużą skalę przygotowano lizaty i oczyszczono AAV przez sedymentację w chlorku cezu. Oczyszczony preparat wykazywał obecność dwudziestościennych struktur o wielkości 26 nm wyglądających identycznie, jak struktury AAV serotypu 2. Transfekcja samym pomocniczym adenowirusem nie dała białek ani genomów AAV, co wyklucza kontaminację jako źródło odzyskanego AAV.
PL 222 683 B1
Dla dalszego scharakteryzowania między- i wewnątrzosobniczej zmienności sekwencji charakterystycznej AAV wybrane tkanki poddano wydłużonej PCR dla namnożenia pełnych otwartych ramek odczytu Cap.
Uzyskane fragmenty wklonowano w plazmidy bakteryjne i wyizolowano oraz w pełni zsekwencjonowano pojedyncze transformanty. Analiza ta obejmowała krezkowe węzły chłonne z trzech rezusów (Tulane/V223 - 6 klonów; Tulane/T612 - 7 klonów; Tulane/F953 - 14 klonów), wątrobę z dwóch rezusów (Tulane/V251 - 3 klony; Penn/00E033 - 3 klony), śledzionę z jednego rezusa (Penn/97E043 - 3 klony), serce z jednego rezusa (IHGT/98E046 - 1 klon), krew obwodową z jednego szympansa (New Iberia/X133 - 5 klonów), sześć makaków jawajskich (Charles River/A1378, A3099, A3442, A2821, A3242 - w sumie 6 klonów) i jednego pawiana (SFRB/8644 - 2 klony). Spośród 50 klonów zsekwencjonowanych z 15 różnych zwierząt, 30 uznano za niepowtarzające się na podstawie odnalezienia co najmniej 7 różnic aminokwasowych między nimi. Nie powtarzające się klony VP1 ponumerowano w kolejności izolacji, z prefiksem wskazującym gatunek innego niż człowiek naczelnego, z którego pochodziły. Związki strukturalne pomiędzy tymi 30 niepowtarzającymi się klonami oraz opisanymi wcześniej 8 serotypami AAV wyznaczono przy zastosowaniu programu SplitsTree [Huson,
D. H. SplitsTree: analyzing and visualizing evolutionary data. Bioinformatics 14, 68-73 (1998)] przy wykorzystaniu metody rozkładu dzielonego (split decomposition). Analiza przedstawia homoplazję pomiędzy grupami sekwencji w postaci przypominającej drzewo sieci, nie zaś w postaci rozdwajającego się drzewa. Korzyścią jest tu możliwość wykrycia zgrupowań, które są wynikiem konwergencji i przedstawienia związków filogenetycznych nawet, gdy są zaburzone przez zdarzenia równoległe. Dla wyjaśnienia ewolucji AAV konieczna będzie rozległa analiza filogenetyczna, podczas gdy tu zamiarem było jedynie pogrupowanie klonów według podobieństwa sekwencji.
W celu potwierdzenia, że nowe sekwencje VP1 pochodziły z zakaźnych genomów wirusowych DNA z tkanek o wysokiej zawartości DNA wirusowego strawiono endonukleazą, która nie powinna przecinać wewnątrz AAV i transfekowano do komórek 293, po czym zakażano je adenowirusem. Spowodowało to odzyskanie i namnożenie genomów AAV z DNA z tkanek dwóch różnych zwierząt (dane nieprzedstawione).
Sekwencje VP1 nowych AAV poddano dalszej charakteryzacji pod kątem charakteru i lokalizacji zmienności sekwencji aminokwasowej. Wykazano, że wszystkich 30 klonów VP1 różni się od siebie o ponad 1% sekwencji aminokwasowej po uliniowaniu i podsumowaniu zmienności w każdej pozycji. Algorytm opracowany dla wyznaczenia obszarów dywergencji sekwencji wykazał obecność 12 obszarów nadzmiennych (HVR), z których 5 nakłada się lub stanowi część 4 opisanych uprzednio obszarów zmiennych [Kotin, cytowane powyżej; Rutledge, cytowane powyżej]. Wierzchołki bliższe osi trzykrotnej zawierają większość zmienności (HVR5-10). Co ciekawe, pętle zlokalizowane na osi dwu- i pięciokrotnej także wykazują znaczną zmienność. HVR1 i 2 występują w N-końcowej części białka kapsydu, która nie jest rozwiązana w strukturze rentgenowskiej, co sugeruje, że N-koniec białka VP1 jest wystawiony na powierzchni wirionu.
W celu ilościowego oznaczenia sekwencji AAV z tkanek 21 rezusów zastosowano PCR w czasie rzeczywistym przy użyciu starterów i sond komplementarnych do wysoce zachowywanych obszarów Rep (jeden zestaw) i Cap (dwa zestawy) znanych AAV. Każdy punkt danych przedstawia analizę z DNA tkanki pojedynczego zwierzęcia. Potwierdziło to szeroki zakres występowania sekwencji AAV, chociaż rozmieszczenie ilościowe różniło się pomiędzy pojedynczymi osobnikami. Pochodzenie zwierząt i wcześniejsza historia leczenia nie wydawały się wpływać na rozmieszczenie sekwencji AAV u rezusów. Trzy różne zestawy starterów i sond zastosowane do ilościowego oznaczenia AAV dały zgodne wyniki. Najwyższe poziomy AAV niezmiennie znajdowano w krezkowych węzłach chłonnych, ze średnią 0,01 kopii na genom diploidalny dla 13 zwierząt z dodatnim wynikiem. Wątroba i śledziona także zawierały znaczną ilość DNA wirusa. Spotkano przypadki bardzo znacznej ilości AAV tak, jak w sercu rezusa 98E056, śledzionie rezusa 97E043 i wątrobie rezusa RQ4407, w których wykazano odpowiednio 1,5; 3 i 20 kopii sekwencji AAV na genom diploidalny. Stosunkowo niski poziom DNA wirusa odnotowano w mononukleocytach krwi obwodowej, co sugeruje, że wyniki dla tkanek nie są spowodowane obecnością resztkowych składników krwi (dane nieprzedstawione). Należy zauważyć, że sposób ten nie koniecznie wychwyci wszystkie AAV rezydujące u innych niż człowiek naczelnych, gdyż do wykrycia konieczna jest wysoka homologia zarówno do oligonukleotydów, jak i do sondy PCR czasu rzeczywistego. Tkanki zwierząt o wysokiej zawartości DNA AAV przeanalizowano ponadto pod kątem stanu molekularnego DNA przy pomocy technik hybrydyzacji DNA oraz jego rozmieszczenia w komórce przez hybrydyzację in situ.
PL 222 683 B1
Rodzaj zmienności sekwencji ujawniony w prowirusowych fragmentach AAV wyizolowanych z różnych zwierząt i tkanek tego samego zwierzęcia przypomina ewolucję zachodzącą u wielu wirusów RNA podczas pandemii, a nawet podczas zakażenia jednego osobnika. W niektórych sytuacjach ideę wirusa typu dzikiego zastąpiono występowaniem rojów quasi-gatunków ewoluujących w wyniku szybkiej replikacji i mutacji w obecności presji doboru. Jednym z przykładów jest zakażenie HIV, ew oluujące w odpowiedzi na presję immunologiczną i farmakologiczną. Do wysokiej częstości mutacji u wirusów RNA przyczynia się kilka mechanizmów, w tym niska wierność i brak zdolności korekcyjnych odwrotnej transkryptazy oraz rekombinacja niehomologiczna i homologiczna.
Dowody na powstawanie quasi-gatunków AAV zilustrowano w tych badaniach przez systematyczne sekwencjonowanie wielu sklonowanych fragmentów prowirusowych. W istocie nie można było odnaleźć dwóch identycznych sekwencji wśród wszystkich wydłużonych klonów wyizolowanych z różnych bądź z tego samego zwierzęcia. Istotnym mechanizmem dla tej ewolucji sekwencji wydaje się być wysoka częstość rekombinacji homologicznej pomiędzy bardziej ograniczoną liczbą wirusów rodzicielskich. Ostatecznym efektem jest częsta wymiana obszarów nadzmiennych białka Cap prowadząca do powstania szeregu chimer, które mogą mieć różny tropizm i swoistość serologiczną (tzn. zdolność do uniknięcia odpowiedzi immunologicznej zwłaszcza w odniesieniu do przeciwciał neutralizujących). Mechanizmy, przez które może zachodzić rekombinacja homologiczna nie są jasne. Jedną z możliwości jest to, że nici + i - różnych jednoniciowych genomów AAV łączą się podczas replikacji tak, jak opisano to przy wysokiej krotności zakażenia rekombinantami AAV. Nie jest jasne, czy inne mechanizmy przyczyniają się do ewolucji sekwencji w zakażeniach AAV. Ogólna częstość mutacji zachodzących podczas replikacji AAV wydaje się być stosunkowo niska a dane niw wskazują na to, by błędy replikacji pojawiały się często. Opisano jednak znaczne rearanżacje ge nomu AAV podczas zakażenia litycznego, prowadzące do powstania defektywnych cząstek przeszkadzających. Niezależnie od mechanizmów prowadzących do dywergencji sekwencji, z nielicznymi wyjątkami, struktury vp1 quasi-gatunku pozostają nietknięte, bez przesunięć ramki odczytu ani mutacji typu nonsens, co sugeruje wpływ doboru współzawodniczego wirusów o najkorzystniejszym profilu dopasowania na dynam ikę populacji.
Badania te mają implikacje dla kilku obszarów biologii i medycyny. Koncepcja szybkiej ewolucji wirusów, uprzednio uważana za własność wyłącznie wirusów RNA, powinna być uwzględniona dla wirusów DNA, które klasycznie charakteryzowano oznaczeniami serologicznymi. Istotnym będzie opracowanie dla parworwirusów nowego sposobu opisywania izolatów wirusowych, który obejmie złożoność ich struktury i biologii, podobnie jak w przypadku HIV, który dzielony jest na szerokie rodzin o podobnej strukturze i funkcji nazywane kładami. Alternatywną strategią jest kontynuacja podziału izolatów ze względu na swoistość serologiczną i opracowanie kryteriów opisu wariantów w obrębie grup serologicznych.
P r z y k ł a d 3:
Wektorologia zrekombinowanych genomów AAV wyposażonych w ITR AAV2 przy zastosowaniu chimerycznych plazmidów zawierających rep AAV2 i nowe geny cap AAV dla badań serologii i transferu genów w różnych modelach zwierzęcych.
Chimeryczne konstrukty pakujące tworzy się przez fuzję rep AAV2 z sekwencjami cap nowych serotypów AAV. Te chimeryczne konstrukty pakujące są stosowane początkowo do pseudotypowania zrekombinowanych genomów AAV niosących ITR AAV2 przez potrójną transfekcję w komórkach 293 przy wykorzystaniu plazmidu pomocniczego Ad5. Te pseudotypowane wektory są następnie stosow ane do zbadania działania w opartych na transdukcji badaniach serologicznych oraz do zbadania skuteczności transferu genów nowych serotypów AAV w różnych modelach zwierzęcych, w tym NHP i gryzoniach, przed wyizolowaniem całych i zakaźnych wirusów tych nowych serotypów.
A. pAAV2GFP
Plazmid AAV2 zawierający ITR AAV2 i zielone białko fluoryzujące wyrażane pod kontrolą promotora konstytutywnego. Plazmid ten zawiera następujące elementy: ITR AAV2, promotor CMV i sekwencje kodujące GFP.
B. Klonowanie plazmidu trans
Dla skonstruowania chimerycznego plazmidu trans do wytwarzania zrekombinowanych pseudotypowanych wektorów AAV7 plazmid p5E18 (Xiao i wsp., 1999, J. Virol 73: 3994-4003) częściowo strawiono XhoI w celu zlinearyzowania plazmidu jedynie w miejscu XhoI w pozycji 2169 bp. Końce po trawieniu XhoI następnie wypełniono i ponownie zligowano. Tak zmodyfikowany plazmid p5E18 strawiono w całkowitym trawieniu Xba I i Xho I dla usunięcia sekwencji genu cap i zastąpiono ją
PL 222 683 B1 wyizolowanym z plazmidu pCRAAV7 6-5+15-4 fragmentem Spe I/Xho I o długości 2267 bp zawierającym gen cap AAV7.
Uzyskany plazmid zawiera sekwencje rep AAV2 kodujące Rep78/68 pod kontrolą promotora P5 AAV2 oraz sekwencje rep AAV2 kodujące Rep52/40 pod kontrolą promotora P19 AAV2. Sekwencje kapsydu AAV7 są pod kontrolą promotora P40 7VAV7, zlokalizowanego w sekwencjach Rep. Plazmid zawiera ponadto 5' łącznik z ORF rep.
C. Wytwarzanie pseudotypowanego rAAV
Cząstki rAAV (wektor AAV2 w kapsydzie AAV7) są wytwarzane przy zastosowaniu metody wo lnej od adenowirusa. W skrócie, plazmid cis (plazmid pAAv2.1 lacZ zawierający IRT AAV) oraz plazmid trans pCRAAV7 6-5+15-4 (zawierający rep AAV2 i cap AAV7) oraz plazmid pomocniczy, były jednocześnie kotransfekowane do komórek 293 w stosunkach odpowiednio 1:1:2 przez strącanie fosforanem wapnia.
Do konstrukcji plazmidów pomocniczych pAd zakupiono plazmid pBG10 z Microbi x (Kanada). Fragment RsrII zawierający L2 i L3 usunięto z pBHG10 uzyskując pierwszy plazmid pomocniczy pAdAF13, plazmid AdAF1 skonstruowano klonując fragment Asp700/SalI z delecją PmeI/SgfI wyizolowany z pBHG10 do Bluescript. W pAdAF1 usunięte są MLP, L2, L2 i L3. Dalsze delecje fragmentu NruI o wielkości 2,3 kb a następnie fragmentu RsRII/NruI o wielkości 0,5 kb wytworzyły odpowiednio plazmidy pomocnicze pAdAF5 i pAdAF6. Plazmid pomocniczy nazwany pAF6 dostarcza niezbędnych funkcji pomocniczych E2A i E4 ORF6 niedostarczanych przez wyrażającą E1 komórkę pomocniczą, pozbawiony jest jednak adenowirusowych białek kapsydu i funkcjonalnych obszarów E1.
Typowo 50 gg DNA (cis:trans:pomocniczy) transfekowano do szalki hodowlanej o średnicy 150 mm. Komórki 293 zbierano 72 godziny po transfekcji, sonikowano i poddawano działaniu 0,5% deoksycholanu sodu (37°C przez 10 min.). Lizaty komórkowe poddawano następnie dwu rundom oczyszczania na gradiencie CsCl. Frakcje szczytowe zawierające wektory rAAV zbierano, łączono i dializowano wobec PBS.
P r z y k ł a d 4:
Stworzenie zakaźnych klonów niosących całe nowe serotypy AAV dla zbadania podstawowej wirusologii w liniach komórek pochodzących z człowieka i NHP oraz oszacowanie patogenezy nowych serotypów AAV u NHP i w innych modelach zwierzęcych.
Dla osiągnięcia tego celu zastosowano system kroczenia po genomie (genome walker) dla uzyskania sekwencji końcowych 5' i 3' (ITR) oraz pełnej konstrukcji klonów zawierających pełne genomy nowych serotypów AAV.
W skrócie, przy zastosowaniu dostępnego w handlu zestawu Universal Genome Walker [Clontech] DNA genomowe z tkanek małp lub linii komórkowych, w których pozytywnie zidentyfikowano obecność sekwencji AAV7 trawiono endonukleazami Dra I, EcoR V, Pvu II i Stu I i zligowano z adaptorem Genome Walker Adaptor, tworząc 4 osobne biblioteki systemu Genome Walker (Genome Walker Libraries, GWL). Wykorzystując DNA GWL jako matrycę AAV7 i przylegające sekwencje genomowe namnaża się przez PGR przy pomocy startera adapterowego 1 (AP1, dostarczony z zestawem) i swoistego dla AAV7 startera 1, po czym przez kolejny, zagnieżdżony PCR przy zastosowaniu startera adaptorowego 2 (AP2) i innego swoistego dla AAV7 startera 2, które to oba startery są wewnętrzne w stosunku do pierwszego zestawu starterów. Główne produkty PCR z zagnieżdżonego PCR są klonowane i charakteryzowane przez analizę sekwencji.
W tym doświadczeniu startery pokrywające 257 bp lub inny fragment charakterystyczny typ owego genomu AAV są stosowane do namnożenia w PCR DNA genomowych wyizolowanych z linii komórkowych pochodzących z człowieka i NHP dla scharakteryzowania ukrytych sekwencji AAV. Zidentyfikowane ukryte genomy AAV są odzyskiwane z dających pozytywny sygnał linii komórkowych przy zastosowaniu pomocniczych adenowirusów różnych gatunków i szczepów.
W celu wyizolowania zakaźnych klonów AAV z pochodzących z NHP linii komórkowych, pożądana linia jest uzyskiwana z ATCC i badana przez PCR dla zidentyfikowania amplikonu 257 bp, tzn. obszaru charakterystycznego według wynalazku, produkt PCR o długości 257 bp jest klonowany i poddawany identyfikacji serotypu przez analizę sekwencji. Dla linii komórkowych zawierających AAV7 komórki są zakażane SV-15, małpim adenowirusem zakupionym w ATCC, ludzkim Ad5, lub transfekowane plazmidem niosącym ludzkie geny Ad odpowiadające za funkcje pomocnicze dla AAV. 48 godzin po infekcji lub transfekcji komórki są zbierane i przygotowywany jest DNA Hirt do klonowania genomu AAV7 według Xiao i wsp., 1999, J. Virol, 73: 3994-4003.
PL 222 683 B1
P r z y k ł a d 5
Wytwarzanie wektorów AAV
Strategię pseudotypowania podobną do użytej w Przykładzie 3 dla AAV1/7 zastosowano do wytworzenia wektorów AAV2 pakowanych z białkami kapsydu AAV1, AAV5 i AAV8. W skrócie, zrekombinowane genomy AAV wyposażone w ITR AAV2 pakowano przez potrójną transfekcję komórek 293 plazmidem cis, adenowirusowym plazmidem pomocniczym i chimerycznym konstruktem pakującym, w którym gen rep AAV2 jest połączony z genami cap nowych serotypów AAV. Dla stworzenia chimerycznych konstruktów pakujących zniszczono miejsce Xho I w pozycji 3169 bp plazmidu p5E18 a zmodyfikowany plazmid strawiono Xba I i Xho I w całkowitym trawieniu dla usunięcia genu cap AAV2 i zastąpienia go fragmentem Spe I/Xho I długości 2267 zawierającym gen cap AAV8 [Xiao i wsp., 1999, J. Virol, 73: 3994-4003]. Podobną strategię klonowania zastosowano dla stworzenia chimerycznych plazmidów pakujących AAV2/1 i AAV2/5. Wszystkie zrekombinowane wektory oczyszczono standardową metodą sedymentacji w CsCl2, z wyjątkiem AAV2/2, który oczyszczono przez jednoetapową chromatografię na heparynie.
Miana kopii genomu (GC) wektorów AAV wyznaczono przez analizę TaqMan przy zastosowaniu sond i starterów rozpoznających obszar poli A SV40 tak, jak opisano uprzednio [Gao, G., i wsp., (2000) Hum Gene Ther 11,2079-91].
Wektory skonstruowano dla każdego serotypu dla szeregu badań in vitro i in vivo. Osiem różnych kaset transgenicznych włączono do wektorów i wytworzono zrekombinowane wirusy dla każdego serotypu. Odzyskiwanie wirusów, w oparciu o liczbę kopii genomu, podsumowano w Tabeli 4 poniżej. Wydajność uzyskania wektora była wysoka dla każdego serotypu bez powtarzalnych różnic między serotypami. Dane przedstawione w tablicy to średnia liczba kopii genomu z odchyleniem standardowym x 10 wielu serii produkcyjnych transfekcji 50 szalek (150 mm).
T a b e l a 4.
Wytwarzanie zrekombinowanych wektorów
AAV2/1 AAV2/2 AAV2/5 AAV2/7 AAV2/8
CMV LacZ 7,30 ± 4,33 (n = 9) 4,49 ± 2,89 (n = 6) 5,19 ± 5,19 (n = 8) 3,42 (n = 1) 0,87 (n = 1)
CMV EGFP 6,43 ± 2,42 (n = 2) 3,39 ± 2,42 (n = 2) 5,55 ± 6,49 (n = 4) 2,98 ± 2,66 (n = 2) 3,74 ± 3,88 (n = 2)
TBG LacZ 4,18 (n = 1) 0,23 (n = 1) 0,704 ± 0,43 (n = 2) 2,16 (n = 1) 0,532 (n = 1)
Alb A1AT 4,75 ± 0,75 (n = 2) 4,77 (n = 1) 4,09 (n = 1) 5,04 (n = 1) 2,02 (n = 1)
CB A1AT 0,567 (n = 1) 0,438 (n = 1) 2,82 (n = 1) 2,78 (n = 1) 0,816 ± 0,679 (n = 2)
TBG rgCG 8,51 ± 6,65 (n = 6) 3,47 ± 2,09 (n = 5) 5,26 ± 3,85 (n = 4) 6,52 ± 3,08 (n = 4) 1,83 ± 0,98 (n = 5)
CBG cFIX 1,24 ± 1,29 (n = 3) 0,63 ± 0,394 (n = 6) 3,74 ± 2,48 (n = 7) 4,05 (n = 1) 15,8 ± 15,0 (n = 5)
P r z y k ł a d 6
Serologiczna analiza pseudotypowanych wektorów
Myszom C57BL/6 wstrzyknięto domięśniowo wektory różnych serotypów AAVCBA1AT (5 x 1011 GC) i pobrano 34 dni później próbki surowicy. W celu aktywności neutralizującej i neutralizującej krz yżowo surowic względem każdego serotypu AAV surowice przebadano w oznaczeniu przeciwciał ne utralizujących opartym na transdukcji [Gao, G. P., i wsp., (1996) J Virol 70, 8934-43]. Konkretniej, obecność przeciwciał neutralizujących wyznaczono oznaczając zdolność surowicy do hamowania transdukcji komórek 84-31 przez wirusy reporterowe (AAVCMVEGFP) różnych serotypów. Konkretnie, wirus reporterowy AAVCMVEGFP każdego serotypu [przy krotności infekcji (MOI) prowadzącej do transdukcji 90% komórek wskaźnikowych] preinkubowano ze zinaktywowaną cieplnie surowicą ze zwierząt, które otrzymały różne serotypy AAV lub z myszy nie stykających się z antygenem (naiwnych). Po 1-godzinnej inkubacji w 37°C wirusy dodano do komórek 84-31 w płytkach 96-studzienkowych
PL 222 683 B1 na 48 lub 72 godziny, zależnie od serotypu wirusa. Ekspresję GFP mierzono przy pomocy FluoroImagin (Molecular Dynamics) i oznaczano ilościowo przy pomocy oprogramowania Image Quant. Miana przeciwciał neutralizujących podawano jako najwyższe rozcieńczenie surowicy, które hamowało transdukcję do mniej niż 50%.
Dostępność wektorów wyrażających GFP uprościła opracowanie oznaczenia przeciwciał neutralizujących opartego na hamowaniu transdukcji w permisywnej linii komórkowej (tzn. komórkach 293 stabilnie wyrażających E4 z Ad5). Surowice przeciwko wybranym serotypom AAV wytworzono przez domięśniowe wstrzyknięcie zrekombinowanych wirusów. Oznaczono neutralizację transdukcji AAV przez rozcieńczenia 1:20 i 1:80 surowic odpornościowych (patrz Tabela 5 poniżej). Surowice odpornościowe przeciwko AAV1, AAV2, AAV5 i AAV8 neutralizowały transdukcję serotypu, przeciwko któremu wytworzono surowicę odpornościową (AAV5 i AAV8 w mniejszym stopniu niż AAV1 i AAV2), lecz nie innego serotypu (tzn. nie było dowodów na neutralizację krzyżową, co sugeruje, że AAV8 jest w istocie unikatowym serotypem).
T a b e l a 5.
Analiza serologiczna nowych serotypów AAV
% infekcji komórek 84-31 wirusem AAVCMVEGFP
AAV2/1 AAV2/2 AAV2/5 AAV2/7 AAV2/8
rozcieńczenie surowicy rozcieńczenie surowicy rozcieńczenie surowicy rozcieńczenie surowicy rozcieńczenie surowicy
Surowice Wektor immunizu- jący 1:20 1:80 1:20 1:80 1:20 1:80 1:20 1:80 1:20 1:80
Grupa 1 AAV2/1 0 0 100 100 100 100 100 100 100 100
Grupa 2 AAV2/2 100 100 0 0 100 100 100 100 100 100
Grupa 3 AAV2/5 100 100 100 100 16,5 16,5 100 100 100 100
Grupa 4 AAV2/7 100 100 100 100 100 100 61,5 100 100 100
Grupa 5 AAV2/8 100 100 100 100 100 100 100 100 26,3 60
Surowice ludzkie od 52 zdrowych osobników przebadano pod kątem neutralizacji przeciwko wybranym serotypom. Żadna z próbek surowicy nie neutralizowała AAV2/7 i AAV2/8, podczas gdy wektory AAV2/2 i AAV2/1 były neutralizowane w odpowiednio 20% i 10% surowic. Frakcja połączonej ludzkiej IgG reprezentująca zbiór 60 000 pojedynczych próbek nie neutralizowała AAY2/7 i AAY2/8, podczas gdy wektory AAY2/2 i AAV2/1 były neutralizowane przy mianie surowicy wynoszącym odpowiednio 1/1280 i 1/640.
P r z y k ł a d 7
Badanie in vivo różnych serotypów wektorów AAV
W tym badaniu 7 zrekombinowanych genomów AAV: AAV2CBhA1AT, AAV2AlbhA1AT, AAV2CMVrhCG, AAV2TBGrhCG, AAV2TBGcFIX, AAV2CMVLacZ i AAV2TBGLacZ zapakowano z białkami kapsydu różnych serotypów. We wszystkich konstruktach kasety minigenu otoczono ITR AAV2. Jako genów reporterowych użyto cDNA antytrypsyny ludzkiej (A1AT) [Xiao, W., i wsp., (1999) J Virol 73, 3994-4003], podjednostki β gonadotropiny kosmówkowej rezusa (CG) [Zoltick, P. W. & Wilson, J. M. (2000) Mol Ther 2, 657-9], czynnika I X pas [Wang, L., i wsp., (1997) Proc Natl Acad Sci USA 94, 11563-6] i bakteryjnej β-galaktozydazy (tzn. LacZ). Dla transferu genów skierowanego do wątroby do kierowania ekspresją genów specyficznie w wątrobie użyto albo promotora mysiego genu albuminy (Alb) [Xiao, W. (1999), cytowane powyżej] albo promotora ludzkiego genu globuliny wiążącej hormon tarczycy (TBG) [Wang (1997), cytowane powyżej]. W transferze genów skierowanym do mięśni do kierowania ekspresją genów użyto albo wczesnego promotora cytomegalowirusa (CMV) albo promotora β-aktyny kurzej ze wzmacniaczem CMV (CB).
Dla transferu genów skierowanego do mięśni wektory wstrzykiwano do prawego przedniego mięśnia piszczelowego myszy NCR nagich lub C57BL/6 (Taconic, Germantown, NY) w wieku 4-6 tygodni. W badaniach transferu genów skierowanego do wątroby wektory wlewano do żyły wrotnej myszy NCR nagich lub C57BL/6 (Taconic, Germantown, NY) w wieku 7-9 tygodni. Próbki surowicy pobierano wewnątrzoczodołowo w różnych punktach czasowych po podaniu wektora. Tkanki mięśni
PL 222 683 B1 i wątroby pobrano ze zwierząt, które otrzymały wektory lacZ w różnych punktach czasowych dla uzyskania skrawków kriogennych i wybarwienia histochemicznego X gal. W doświadczeniu z ponownym podaniem myszy C56BL/6 początkowo otrzymały domięśniowo wektory AAV2/1, 2/2, 2/5, 2/7 i 2/8CBA1 At, po czym śledzono ekspresję genu A1 AT przez 7 tygodni. Następnie zwierzętom podano do żyły wrotnej AAV2/8TBGcFIX i badano ekspresję genu cFIX.
Dla ilościowego oznaczenia poziomów białek hA1AT, rhCG i CFIX przeprowadzono oznaczenia oparte na teście ELISA tak, jak opisano poprzednio [Gao, G. P., i wsp., (1996) J Virol, 8934-43; Zoltick, P. W. & Wilson, J. M. (2000) Mol Ther 2, 657-9; Wang, L., i wsp., Proc Natl Acad Sci USA 94, 11563-6]. Doświadczenia ukończono gdy zwierzęta poświęcono dla zebrania tkanek mięśni i wątroby do ekstrakcji DNA i ilościowej analizy liczby kopii genomu wektora obecnego w tkankach docelowych metodą TaqMan przy zastosowaniu tych samych zestawów starterów i sond, co przy miareczkowaniu preparatów wektora [Zhang, Y., i wsp., (2001) Mol Ther 3, 697-707].
Wydajność działania wektorów opartych na nowych serotypach zbadano w mysich modelach transferu genów skierowanego do mięśni i do wątroby i porównano z wektorami opartymi na znanych serotypach AAV1, AAV2 i AAV5. Wektory wyrażające białka wydzielane na zewnątrz komórki (alfa-antytrypsynę (A1AT) i gonadotropiny kosmówkowej (CG)) zastosowano do ilościowego oznaczenia względnych wydajności transdukcji pomiędzy różnymi serotypami poprzez analizę ELISA surowic. Rozmieszczenie komórkowe transdukcji wewnątrz narządu docelowego zbadano przy zastosowaniu wektorów wyrażających lacZ i histochemii X-gal.
Działanie wektorów AAV w mięśniu szkieletowym przeanalizowano po bezpośrednim wstrzyknięciu do przedniego mięśnia piszczelowego. Wektory zawierały ten sam genom oparty na AAV2 z promotorem najwcześniejszego genu CMV lub wzmocnionym CMV promotorem β-aktyny kierującym ekspresję transgenu. Wcześniejsze badania wykazały, że immunokompetentne myszy C57BL/6 wywołują humoralną odpowiedź immunologiczną przeciwko ludzkiemu białku A1AT wyrażanemu z wektorów AAV [ X iao, W., i wsp., (1999) J Virol 73, 3994-4003].
W każdym ze szczepów wektor AAV2/1 wytwarzał najwyższy poziom A1AT, zaś wektor AAV2/2 - najniższy, natomiast wektory AAV2/7 i AAV2/8 wykazywały pośrednie poziomy ekspresji. Szczytowy poziom CG 28 dni po wstrzyknięciu myszom nu/nu NCR wykazywał najwyższą wartość dla AAV2/7 a najniższą dla AAV2/2, przy pośrednich wartościach dla AAV2/8 i AAV2/1. Wstrzyknięcie wektorów AAV2/1 i AAV2/7 lacZ dawało ekspresję genu w miejscu wstrzyknięcia dla wszystkich włókien mięśniowych, przy czym znacząco mniej włókien dodatnich pod względem lacZ zaobserwowano dla wektorów AAV2/2 i AAV2/8. Dane te wskazują, że wydajność transdukcji wektorami AAV2/7 w mięśniu szkieletowym jest podobna do uzyskiwanej dla AAV2/1, który jest najwydajnieszy w mięśniu szkieletowym pośród opisanych wcześniej serotypów [Xiao, W. (1999), cytowane powyżej; Chao, H., i wsp., (2001) Mol Ther 4, 217-22; Chao, H., i wsp., (2000) Mol Ther 2, 619-23],
Podobne mysie modele wykorzystano do zbadania transferu genów skierowanego do wątroby. Identyczne dawki wektorów na podstawie liczby kopii genomu wlewano do żył wrotnych myszy, które następnie analizowano pod kątem ekspresji transgenu. Każdy wektor zawierał genom oparty na AAV2 wykorzystujący opisane uprzednio specyficzne dla wątroby promotory (tzn. promotor albuminy lub globuliny wiążącej hormon tarczycy) kierujące ekspresją transgenu. Konkretniej, kasety CMVCG i TBGCG użyto do transferu genów skierowanego odpowiednio do mięśni i wątroby. Poziomy rhCG ustalono w jednostkach względnych (RU x 10 ). Dane pochodziły z oznaczeń próbek surowicy zebranych w dniu 28 po podaniu wektora (4 zwierzęta na grupę). Jak przedstawiono w Tabeli 3, wpływ białek kapsydu na wydajność transdukcji wektorów AT1 AT u myszy nu/nu i C57BL/6 oraz wektorów CGG u myszy C57BL/6 był zgodny (patrz Tabela 6).
T a b e l a 6.
Ekspresja podjednostki β gonadotropiny kosmówkowej rezusa (rhCG)
Wektor Mięsień Wątroba
AAV2/1 4,5 ± 2,1 1,6 ± 1,0
AAV2 0,5 ± 0,1 0,7 ± 0,3
AAV2/5 ND* 4,8 ± 0,8
AAV2/7 14,2 ± 2,4 8,2 ± 4,3
AAV2/8 4,0 ± 0,7 76,0 ± 22,8
* Nie wyznaczone w tym doświadczeniu.
PL 222 683 B1
We wszystkich przypadkach wektory AAV2/8 dawały najwyższy poziom ekspresji transgenu, od 16 do 110 razy większy niż uzyskany dla wektorów AAV2/2; ekspresja z wektorów AAV2/5 i AAV2/7 miała wartość pośrednią, przy czym wyższą dla AAV2/7 niż AAV2/5. Analiza wybarwionych X-Gal skrawków wątroby zwierząt, które otrzymały odpowiednie wektory lacZ wykazała korelację pomiędzy liczbą transdukowanych komórek a ogólnym poziomem ekspresji transgenu. DNA wyizolowane z wątrób myszy C57BL/6, które otrzymały wektory A1AT przebadano pod kątem ilości DNA wektora przy zastosowaniu technologii PCR w czasie rzeczywistym.
Ilość DNA wektora znajdowanego w wątrobie 56 dni po wstrzyknięciu korelowała z poziomami ekspresji transgenu (patrz Tabela 7). Dla tego doświadczenia do PCR TaqMan zastosowano zestaw sondy i starterów rozpoznających obszar poliA SV40 genomu wektora. Przedstawione wartości są to średnie z odchyleniami standardowymi, zwierzęta poświęcono w dniu 56 dla pobrania tkanek wątroby do ekstrakcji DNA. Badania te wskazują, że AAV8 jest najwydajniejszym wektorem do skierowanego do wątroby transferu genów ze względu na zwiększoną liczbę transdukowanych hepatocytów.
T a b e l a 7
Analiza PCR w czasie rzeczywistym ilości wektorów AAV w wątrobie myszy nu/nu po wstrzyknięciu 1 x 1011 kopii genomu wektora
Wektory AAV/dawka Kopie genomu na komórkę
AAV2/1AlbA1AT 0,6 ± 0,36
AAV2AlbA1AT 0,003 ± 0,001
AAV2/5AlbA1AT 0,83 ± 0,64
AAV2/7AlbA1AT 2,2 ± 1,7
AAV2/8AlbA1AT 18 ± 11
Opisane powyżej dane serologiczne sugerują, że wektor AAV2/8 nie powinien być neutralizowany in vivo po immunizacji innymi serotypami. Myszy C57BL/6 otrzymały do żyły wrotnej zastrzyki wektora AAV2/8 wyrażającego czynnik IX psa (1011 kopii genomu) 56 dni po otrzymaniu domięśniowych zastrzyków wektorów A1AT różnych serotypów. Wysoki poziom ekspresji czynnika IX uzyskano 14 dni po wlewie AAV2/8 do zwierząt naiwnych (17 ± 2 μg/ml, n = 4), który nie różnił się znacząco od poziomu zaobserwowanego u zwierząt immunizowanych AAV2/1 (31 ± 23 μg/ml, n = 4), AAV2/2 (16 μg/ml, n = 2) i AAV2/7 (12 μg/ml, n = 2). Stanowi to przeciwieństwo sytuacji zaobserwowanej u zwierząt immunizowanych AAV2/8, którym wlano wektor AAV2/8 z czynnikiem IX, u których nie zaobserwowano wykrywalnego czynnika IX (<0,1 μg/ml, n = 4).
Oligonukleotydy komplementarne do zachowywanych obszarów genu cap namnażały sekwencje rezusów stanowiące unikatowe AAV. Identyczne sekwencje charakterystyczne cap odnaleziono w wielu tkankach rezusów pochodzących z co najmniej dwóch różnych kolonii. Pełnej długości otwart e ramki odczytu rep i cap wyizolowano i zsekwencjonowano z pojedynczych źródeł, jedynie otwarte ramki odczytu cap nowych AAV były niezbędne do zbadania ich potencjału jako wektorów, ponieważ wytworzono wektory z kapsydami AAV7 lub AAV8 wykorzystując ITR i rep z AAV2. Uprościło to także porównanie różnych wektorów, gdyż właściwy genom wektora jest identyczny w różnych serotypach wektora. W istocie wydajność uzyskiwania zrekombinowanych wektorów wytworzonych w tym podejściu nie wykazywała różnic dla różnych serotypów.
Wektory oparte na AAV7 i AAV8 wydają się być immunologicznie różne (tzn. nie są neutralizowane przez przeciwciała wytworzone przeciwko innym serotypom). Ponadto, surowice ludzkie nie neutralizują transdukcji przez wektory AAV7 i AAV8, co stanowi istotną przewagę nad obecnie opracowywanymi AAV pochodzącymi od ludzi, przeciwko którym u znaczącej części populacji ludzkiej występuje uprzednia odporność o charakterze neutralizującym [Chirmule, N., i wsp., (1999) Gene Ther 6, 1574-83].
Tropizm każdego z nowych wektorów jest korzystny dla zastosowań in vivo. Wektory AAV2/7 wydają się transdukować do mięśni szkieletowych równie wydajnie, jak AAV2/1, który jest serotypem nadającym najwyższy poziom transdukcji w mięśniu szkieletowym spośród zbadanych do tej pory AAV naczelnych [Xiao, W., cytowane powyżej; Chou (2001), cytowane powyżej i Chou (2000), cytowane powyżej]. Co ważne, AAV2/8 dostarcza istotnej przewagi w porównaniu z innymi serotypami w odniesieniu do transferu genów do wątroby, który dotychczas był stosunkowo zawodny w kategoriach ilości
PL 222 683 B1 stabilnie transdukowanych hepatocytów. AAV2/8 powtarzalnie osiągał 10 do 100-krotne ulepszenie wydajności transferu genów w porównaniu z innymi wektorami. Podstawa ulepszonej wydajności AAV2/8 jest niejasna, choć przypuszczalnie jest ona związana z pobieraniem przez inny receptor, który jest bardziej aktywny na bocznej podstawnej powierzchni hepatocytów. Ta ulepszona wydajność będzie bardzo przydatna w opracowywaniu skierowanego do wątroby transferu genów, gdzie liczba transdukowanych komórek jest krytyczna tak, jak przy schorzeniach cyklu mocznikowego i rodzinnej hipercholesterolemii.
Niniejszy wynalazek dostarcza zatem nowego podejścia do izolacji nowych AAV, opartego na odzyskiwaniu sekwencji genomowych przez PCR. Namnożone sekwencje były łatwo włączone do wektorów i przebadane na zwierzętach. Brak uprzedniej odporności przeciwko AAV7 i korzystny tropizm wektorów wobec mięśni wskazuje, że AAV7 jest odpowiedni do wykorzystania jako wektor w terapii genowej człowieka i innych zastosowaniach in vivo. Podobnie, brak uprzedniej odporności przeciwko serotypom AAV według wynalazku i ich tropizm czyni je użytecznymi do dostarczania cząsteczek terapeutycznych i innych użytecznych cząsteczek.
P r z y k ł a d 9
Badania tropizmu tkankowego
W projekcie schematu przeszukiwania funkcjonalnego nowych konstruktów AAV na szeroką skalę wybrano niespecyficzny względem tkanki i wysoce aktywny promotor CB (wzmocniony CMV promotor kurzej β-aktyny) do kierowania ekspresją łatwo wykrywanego i oznaczanego ilościowo genu - ludzkiego genu α-antytrypsyny. Tak więc dla każdego nowego klonu AAV potrzeba wykonać tylko jeden wektor do badania transferu genów skierowanego do trzech różnych tkanek: wątroby, płuca i mięśni, dla zbadania tropizmu tkankowego konkretnego konstruktu AAV. Następująca tabela podsumowuje dane uzyskane z 4 nowych wektorów AAV w badaniach tropizmu tkankowego (AAVCBA1AT), w których stwierdzono, że nowy klon kapsydu AAV - 44.2 jest bardzo silnym nośnikiem transferu genów we wszystkich 3 tkankach, ze szczególnie duża przewagą w tkance płuca. Tabela 8 przedstawia dane (w μg A1AT/mL surowicy) w 14 dniu badania.
T a b e l a 8
Wektor Tkanka docelowa
Płuco Wątroba Mięsień
AAV2/1 ND ND 45 ± 11
AAY2/5 0,6 ± 0,2 ND ND
AAV2/8 ND 84 ± 30 ND
AAV2/rh.2 (43.1) 14 ± 7 25 ± 7,4 35 ± 14
AAV2/rh.10 (44.2) 23 ± 6 53 + 19 46 ± 11
AAV2/rh.13 (42.2) 3,5 ± 2 2 ± 0,8 3,5 ± 1,7
AAV2/rh.21 (42.10) 3,1 ± 2 2 ± 1,4 4,3 ± 2
Dla potwierdzenia lepszego tropizmu AAV 44.2 w tkance płuca przeprowadzono kilka innych doświadczeń. Najpierw wektor AAV niosący minigen CC10hA1AT dla ekspresji specyficznie w płucach pseudotypowano kapsydami nowych AAV i podano zwierzętom pozbawionym odporności (nagie NCR) w takiej samej objętości (50 μl każdego z oryginalnych preparatów) przez wstrzyknięcie dotchawicze tak, jak przedstawiono w następującej tabeli. W Tabeli 9, 50 μl każdego oryginalnego preparatu na mysz, nagie NCR, granica wykrywalności >0,033 μg/ml, dzień 28.
T a b e l a 9
Wektor Całkowite GC w 50 μl wektora μ9 A1AT/ml dla 50 μl wektora μ9 A1AT/ml na 1 x 1011 wektora Względny transfer genu w porównaniu z rh.10 (klon 44.2)
1 2 3 4 5
2/1 3 x 1012 2, 60, 5 0,09 ± 0,02 2,2
2/2 5,5 x 1011 <0,03 <0,005 <0,1
PL 222 683 B1 ciąg dalszy Tabeli 9
1 2 3 4 5
2/5 3,6 x 1012 0,65 ± 0,16 0,02 ± 0,004 0,5
2/7 4,2 x 1012 1 ± 0,53 0,02+0,01 0,5
2/8 7,5 x 1011 0,9 ± 0,7 0,12 ± 0,09 2,9
2/ch.5 (A.3.1) 9 x 1012 1 ± 0,7 0,01 ± 0,008 0,24
2/rh.8 (43.25) 4,6 x 1012 26 ± 21 0,56 ± 0,46 13,7
2/rh.10 (44.2) 2,8 x 1012 115+38 4,1 ± 1,4 100
2/rh.13 (42.2) 6 x 1012 7,3 ± 0,8 0,12 ± 0,001 2,9
2/rh.21 (42.10) 2,4 x 1012 9 ± 0,9 0,38 ± 0,04 9,3
2/rh.22 (42.11) 2,6 x 1012 6 ± 0,4 0,23 ± 0,02 5,6
2/rh.24 (42.13) 1,1 x 1011 0,4 ± 0,3 0,4 ± 0,3 1
Wektory podano także zwierzętom immunokompetentnym (C51/6) w jednakowej liczbie kopii genomu (1 x 1011 GC) jak przedstawiono w Tabeli 10. (1 x 1011 GC na zwierzę, C57BL/6, dzień 14, granica wykrywalności >0,033 μg/ml).
T a b e l a 10
Wektor μ9 A1AT/ml na 1 x 1011 wektora Względny transfer genu w porównaniu z rh.10 (klon 4 4.2)
2/1 0,076 ± 0,031 2,6
2/2 0,1 ± 0,09 3,4
2/5 0,0840 ± 0,033 2,9
2/7 0,33 ± 0,01 11
2/8 1,92 ± 1,3 2,9
2/ch.5 (A.3.1) 0,048 ± 0,004 1,6
2/rh.8 (43.25) 1,7 ± 0,7 58
2/rh.10 (44.2) 2,93 ± 1,7 100
2/rh.13 (42.2) 0,45 ± 0,15 15
2/rh.21 (42.10) 0,86 ± 0,32 29
2/rh.22 (42.11) 0,38 ± 0,18 13
2/rh.24 (42.13) 0,3 ± 0,19 10
Dane z obu doświadczeń potwierdzają doskonały tropizm klonu 44.2 w transferze genów skierowanym do płuca.
Co ciekawe, skuteczność klonu 44.2 w transferze genów skierowanym do wątroby i mięśni była również znakomita, zbliżona do cechującej najskuteczniejszy w transdukcji do wątroby AAV8 i najsk uteczniejszy w transdukcji do mięśni AAV1, co sugeruje, że ten nowy AAV ma jakieś intrygujące znaczenie biologiczne.
W celu zbadania właściwości serologicznych tych nowych AAV, stworzono pseudotypowane wektory AAVGFP do immunizacji królików i transdukcji in vitro komórek 84-31 w obecności i nieobecności surowic odpornościowych przeciwko różnym kapsydom. Dane podsumowano poniżej:
PL 222 683 B1
T a b e l a 11a
Oznaczenia krzyżowych NAB w komórkach 8431 i koinfakcja adenowirusem (Adv) Infekcja w komórkach 8431 (koinfekowanych Adv) z:
Surowica królika immunizowanego: 109 GC 109 GC 109 GC 1010 GC
rh.13 rh.21 rh.22 rh.24
AAV2/42.2 AAV2/42.10 AAV2/42.11 AAV2/42.13
AAV2/1 1/20 1/20 1/20 brak NAB
AAV2/2 1/640 1/1280 1/5120 brak NAB
AAV2/5 brak NAB 1/40 1/160 brak NAB
AAV2/7 1/81920 1/81920 1/40960 1/640
AAV2/8 1/640 1/640 1/320 1/5120
Ch.5 AAV2/A3 1/20 1/160 1/640 1/640
rh.8 AAV2/43.25 1/20 1/20 1/20 1/320
rh.10 AAV2/44.2 brak NAB brak NAB brak NAB 1/5120
rh.13 AAV2/42.2 1/5120 1/5120 1/5120 brak NAB
rh.21 AAV2/42.10 1/5120 1/10240 1/5120 1/20
rh.22 AAV2/42.11 1/20480 1/20480 1/40960 brak NAB
rh.24 AAV2/43.13 brak NAB 1/20 1/20 1/5120
T a b ela 11b
Oznaczenie krzyżowych NAB w komórkach 8431 i koinfekcji Adv Infekcja w komórkach 8431 (koinfekowanych Adv) z:
Surowica królika immunizowanego 109 GC 109 GC 109 GC 109 GC 109 GC
rh.12 ch5 rh.8 rh.10 rh.20
AAV2/42.1B AAV2/A3 AAV2/43.25 AAV2/44.2 AAV2/42.8.2
AAV2/1 brak NAB 1/20480 brak NAB 1/80 ND
AAV2/2 1/20 brak NAB brak NAB brak NAB ND
AAV2/5 brak NAB 1/320 brak NAB brak NAB ND
AAV2/7 1/2560 1/640 1/60 1/81920 ND
AAV2/8 1/10240 1/2560 1/2560 1/81920 ND
ch. 5 AAV2/A3 1/1280 1/10240 ND 1/5120 1/320
rh. 8 AAV2/43.25 1/1280 ND 1/20400 1/5120 1/2560
rh.10 AAV2/4 4.2 1/5120 ND ND 1/5120 1/5120
rh.13 AAV2/42.2 1/20 ND ND brak NAB 1/320
rh.21 AAV2/42.10 1/20 ND ND 1/40 1/80
rh.22 AAV2/42.11 brak NAB ND ND ND brak NAB
rh.24 AAV2/43.13 1/5120 ND ND ND 1/2560
PL 222 683 B1
T a b e l a 12
Miano surowic królika Miano po dawce przypominającej
Wektor Miano d21
ch.5 AAV2/A3 1/10240 1/40960
rh.8 AAV2/43.25 1/20400 1/163840
rh.10 AAV2/44.2 1/10240 1/527680
rh.13 AAV2/42.2 1/5120 1/20960
rh.21 AAV2/42.10 1/20400 1/81920
rh.22 AAV2/42.11 1/40960 ND
rh.24 AAV2/43.13 1/5120 ND
T a b ela 13a
Infekcja w komórkach 8431 (koinfekowanych Adv) z GFP
109 GC/studzienkę 109 GC/studzienkę 109 GC/studzienkę 109 GC/studzienkę 109 GC/studzienkę 109 GC/studzienkę
ch. 5
AAV2/1 AAV2/2 AAV2/5 AAV2/7 AAV2/8 AAV2/A3
# GFU/ pole 128 >200 95 56 13 1
83 >200 65 54 11 1
T a b ela 13b
Infekcja w komórkach 8431 (koinfekowanych Adv) z GFP:
109 GC/stu- dzienkę 109 GC/stu- dzienkę 109 GC/stu- dzienkę 109 GC/stu- dzienkę 109 GC/stu- dzienkę 109 GC/stu- dzienkę 109 GC/stu- dzienkę
rh.8 rh.10 rh.13 rh.21 rh.22 rh.24 rh.12
AAV2/43.25 AAV2/44.2 AAV2/42.2 AAV2/42.10 AAV2/42.11 AAV2/42.13 AAV2/42.1B
# GFU/ pole 3 13 54 62 10 3 18
2 12 71 60 14 2 20
48 47 16 3 12
P r z y k ł a d 10
Mysi model rodzinnej hipercholesterolemii
Następujące doświadczenie wykazuje, że konstrukt AAV2/7 według wynalazku dostarcza receptor LDL i wyraża receptor LDL w ilości wystarczającej do zmniejszenia poziomu cholesterolu i trójglicerydów w osoczu w zwierzęcych modelach rodzinnej hipercholesterolemii.
A. Konstrukcja wektora
Wektory AAV pakowane kapsydami AAV7 lub AAV8 skonstruowano przy wykorzystaniu strategii pseudotypowania [Hildinger M, i wsp., J. Virol 2001; 75: 6199-6203]. Zrekombinowane genomy AAV z odwróconymi powtórzeniami końcowymi (ITR) AAV2 pakowano przez potrójną transfekcję k omórek 293 plazmidem cis, adenowirusowym plazmidem pomocniczym oraz chimerycznym konstruktem pakującym - fuzją kapsydów nowych serotypów AAV z genem rep AAV2. Chimeryczny plazmid pakujący skonstruowano tak, jak opisano poprzednio [Hildinger i wsp., cytowane powyżej]. Zrekombinowane wektory oczyszczono standardową metodą sedymentacji w CsCl2. Dla wyznaczenia wydajności przeprowadzono analizę TaqMan (Applied Biosystems) przy zastosowaniu sond i starterów rozpoznających obszar poli(A) SV40 wektorów [Gao GP, i wsp., Hum Gene Ther. 2000 10 października; 11 (15): 2079-91]. Uzyskane wektory wyrażają transgen pod kontrolą promotora ludzkiego genu globuliny wiążącej hormon tarczycy (TBG).
PL 222 683 B1
B. Zwierzęta
Myszy pozbawione receptora LDL w tle C57BL/6 zakupiono z Jackson Laboratory (Bay Harbor, ME, USA) i utrzymywano jako kolonię rozrodczą. Myszom dawano nieograniczony dostęp do wody i podano bogatą w tłuszcz dietę Western (wysoki % cholesterolu) począwszy od trzech tygodni przed infekcją. W dniu -7 oraz w dniu 0 pobrano krew przez skrwawienie zaoczodołowe i oznaczono profil lipidowy. Myszy losowo podzielono na siedem grup. Wektor wstrzyknięto do żyły wrotnej tak, jak opisano uprzednio [Chen SJ i wsp., Mol Therapy 2000; 2 (3), 256-261]. W skrócie, myszy znieczulono ketaminą i ksylazyną. Przeprowadzono laparotomię i odsłonięto żyłę wrotną. Przy pomocy igły 30 g wstrzyknięto odpowiednią dawkę wektora rozcieńczonego w 100 ul PBS bezpośrednio do żyły wrotnej. W miejscu wstrzyknięcia zastosowano ucisk by zapewnić zatrzymanie krwawienia. Ranę zamknięto i opatrzono a myszy starannie obserwowano kolejnego dnia. Cotygodniowe skrwawienia przeprowadzano począwszy od dnia 14 po skierowanym do wątroby transferze genów dla zmierzenia poziomu lipidów krwi. Dwa zwierzęta z każdej grupy poświęcono w punktach czasowych tygodnia 6 i tygodnia 12 po wstrzyknięciu wektora dla zbadania wielkości płytek miażdżycowych oraz ekspresji wektora. Pozostałe myszy poświęcono w tygodniu 20 dla zmierzenia płytek i wyznaczenia ekspresji transgenu.
T a b e l a 14
Wektor Dawka n
Grupa 1 AAV2/7-TBG-hLDLr 1 x 1012 gc 12
Grupa 2 AAV2/7-TBG-hLDLr 2 x 1011 gc 12
Grupa 3 AAV2/7-TBG-hLDLr 1 x 1011 gc 12
Grupa 4 AAV2/7-TBG-hLDLr 1 x 1012 gc 12
Grupa 5 AAV2/7-TBG-hLDLr 3 x 1011 gc 12
Grupa 6 AAV2/7-TBG-hLDLr 1 x 1011 gc 12
Grupa 7 AAV2/7-TBG-LacZ 1 x 1011 gc 16
C. Analiza lipoprotein osocza i funkcji wątroby
Próbki krwi pobrano ze splotu zaoczodołowego po 6 godzinnym okresie postu. Surowicę oddzielono od osocza przez wirowanie. Ilość lipoprotein osocza i transaminaz wątroby w surowicy wykryto przy zastosowaniu automatycznego analizatora chemii klinicznej (ACE, Schiapparelli Biosystems, Alpha Wassermann).
D. Wykrywanie ekspresji transgenu
Ekspresję receptora LDL oznaczano przez barwienie immunofluorescencyjne i analizę Western blot. Dla analizy Western blot zamrożoną tkankę wątroby homogenizowano buforem do lizy (20 mM Tris, pH 7,4, 130 mM NaCl, 1% Triton X 100, inhibitor proteazy (kompletny, pozbawiony EDTA, Roche, Mannheim, Niemcy). Stężenie białka wyznaczano przy pomocy zestawu Micro BCA Protein Assay Reagent Kit (Pierce, Rockford, IL). 40 μg białka rozdzielano na żelach 4-15% Tris-HCl Ready (Biorad, Hercules, CA) i przenoszono na filtr nitrocelulozowy (Invitrogen). Dla wytworzenia przeciwciał przeciwko receptorowi hLDL królikowi wstrzyknięto dożylnie preparat AdhLDL (1 x 10 GC). Cztery tygodnie później pozyskano surowicę królika i wykorzystano do analizy Western. Jako przeciwciało pierwszego rzędu wykorzystano rozcieńczenie 1:100 surowicy, po czym zastosowano skoniugowane z HRP IgG anty-królik i detekcję chemiluminescencyjną ECL (zestaw ECL Western Blot Detection Kit, Amersham, Arlington Heights, IL).
E. Immunocytochemia
Dla wyznaczenia ekspresji receptora LDL w zamrożonych skrawkach wątroby przeprowadzono analizę immunocytochemiczną. 10 um skrawki z kriostatu utrwalano w acetonie przez 5 minut albo pozostawiano nieutrwalone. Blokowanie uzyskiwano przez 1 godzinną inkubację z 10% surowicą k ozy. Skrawki inkubowano następnie przez godzinę z pierwszym przeciwciałem w temperaturze pokojowej. Królicze poliklonalne przeciwciało przeciwko ludzkiemu LDL (Biomedical Technologies Inc., Stoughton, MA) zostało użyte w rozcieńczeniu zgodnym z zaleceniami wytwórcy. Skrawki przepłukano PBS i inkubowano z rozcieńczonym 1:100 kozim przeciwciałem anty-królik skoniugowanym z fluoresceiną (Sigma, St. Louis, MO). Próbki ostatecznie badano pod mikroskopem fluorescencyjnym Nikon Microphot-FXA. We wszystkich przypadkach po inkubacji skrawki intensywnie płukano w PBS.
PL 222 683 B1
Na negatywne kontrole składały się preinkubacja w PBS, pominięcie pierwszego przeciwciała i zamiana pierwszego przeciwciała na dopasowane izotypowo przeciwciało kontrolne z nieimmunizowanej kontroli.
Wspomniane powyżej trzy typy kontroli przeprowadzono dla każdego z doświadczeń tego samego dnia.
F. Wydajność transferu genów
Tkankę wątroby pozyskano po poświęceniu myszy w wyznaczonych punktach czasowych. Tkankę błyskawicznie zamrożono w ciekłym azocie i przechowywano w -80°C do dalszej obróbki. DNA ekstrahowano z tkanki wątroby przy zastosowaniu zestawu QIAmp DNA Mini (QIAGEN GmbH, Niemcy) według protokołu wytwórcy. Liczbę kopii genomu wektorów AAV w tkance wątroby oznaczono przy zastosowaniu analizy TaqMan przy użyciu sond i starterów rozpoznających ogon poli(A) SV40 tak, jak opisano powyżej.
G. Pomiar płytek miażdżycowych
Dla ilościowego oznaczenia płytek miażdżycowych w aorcie myszy znieczulano (10% ketamina i ksylazyna, ip), otwierano klatkę piersiową i poddawano perfuzji lodowatym roztworem soli buforowanej fosforanem przez lewy przedsionek. Aortę następnie starannie pobierano, przecinano wzdłuż linii brzusznej od łuku aorty do tętnic udowych i utrwalano w formalinie. Bogate w lipidy płytki miażdżycowe wybarwiano Sudan IV (Sigma, Niemcy) i rozpinano aortę na płaskiej czarnej woskowej powierzchni. Obraz utrwalono kolorową kamerą wideo Sony DXC-960 MD. Obszar płytek oraz całkowitą powierzchnię aorty wyznaczono przy pomocy sytemu analizy obrazu Phase 3 Imaging Systems (Media Cybernetics).
H. Klirens I135 LDL
Zbadano dwa zwierzęta z każdej grupy doświadczalnej. Dawkę wyznakowanego I LDL (uprzejmie udostępnionego przez Dana Radera, U Penn) wlewano powoli przez żyłę ogonową w ciągu
125 sek (1 000 000 zliczeń I -LDL rozcieńczonych w 100 μl jałowego PBS na zwierzę). W punktach czasowych 3 min, 30 min, 1,5 godz., 3 godz., 6 godz. po wstrzyknięciu pobierano próbkę krwi przez splot zaoczodołowy. Osocze oddzielono od krwi i zliczono 10 μl osocza w liczniku gamma. Ostatecznie na podstawie danych klirensu lipoprotein obliczono ułamkowe tempo kataboliczne.
I. Oznaczenie akumulacji lipidów w wątrobie
Przeprowadzono barwienie czerwienią oleistą (Oil Red) zamrożonych skrawków wątroby dla wyznaczenia akumulacji lipidów. Zamrożone skrawki wątroby krótko przepłukano w destylowanej wodzie, po czym inkubowano przez 2 minuty w absolutnym glikolu propylenowym. Skrawki wybarwiano następnie w roztworze czerwieni oleistej (0,5% w glikolu propylenowym) przez 16 godzin, po czym barwiono kontrastowo roztworem hematoksyliny Mayera przez 30 sekund i osadzano w ogrzanym roztworze galaretki glicerynowej.
Dla ilościowego oznaczenia cholesterolu i zawartości trójglicerydów w wątrobie, skrawki wątroby homogenizowano i inkubowano w mieszaninie chloroform/metanol (2:1) przez noc. Po dodaniu 0,05% H2SO4 i odwirowaniu przez 10 minut zebrano dolną warstwę każdej próbki, podzielono na dwie porcje i wysuszono w atmosferze azotu. Do pomiaru cholesterolu wysuszone lipidy pierwszej porcji rozpuszczano w 1% Triton X-100 w chloroformie. Po rozpuszczeniu roztwór suszono w atmosferze azotu. Po rozpuszczeniu lipidów w ddH2O i inkubacji przez 30 minut w 37°C całkowite stężenie cholesterolu mierzono przy zastosowaniu zestawu Total Cholesterol Kit (Wako Diagnostics). Dla drugiej porcji wysuszone lipidy rozpuszczano w alkoholowym roztworze KOH i inkubowano w 60°C przez 30 minut. Następnie dodawano 1M MgCl2, po czym inkubowano lodzie przez 10 minut i wirowano przy 14 000 rpm przez 30 minut. Ostatecznie w nadsączu oznaczano trójglicerydy (Wako Diagnostics).
Wszystkie wektory pseudotypowane w kapsydzie AAV2/8 lub AAV2/7 obniżały całkowity cholesterol, LDL i trójglicerydy w porównaniu z kontrolą. Te wektory doświadczalne poprawiały także fenotyp hipercholesterolemii w sposób zależny od dawki, Obniżenie powierzchni płytek u myszy AAV2/8 i AAV2/7 zaobserwowano u leczonych myszy w pierwszym teście (2 miesiące) i obserwowano utrzymywanie się tego efektu przez cały czas trwania doświadczenia (6 miesięcy).
P r z y k ł a d 10
Ekspresja funkcjonalnego czynnika IX i poprawa hemofilii
A. Myszy z nokautem
Ekspresję funkcjonalnego czynnika IX psa (FIX) zbadano u myszy z hemofilią B. Skonstruowano wektory z kapsydami AAV1, AAV2, AAV5, AAV7 lub AAV8 dla dostarczenia konstruktu 5' ITR AAV2 - promotor specyficzny dla wątroby [LSP] - FIX psa - element post-regulacyjny wirusa zapale50
PL 222 683 B1 nia wątroby świstaka amerykańskiego (woodchuck hepatitis post-regulatory element - WPRE) - ITR 3' AAV2. Wektory skonstruowano tak, jak opisano to w Wang i wsp., Molecular Therapy 2:154-158, przy zastosowaniu odpowiednich kapsydów.
Myszy nokaut skonstruowano tak, jak opisano w Wang i wsp., 1997. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 94: 11563-11566. Model ten blisko naśladuje fenotypy hemofilii B u człowieka.
Wektory różnych serotypów (AAV1, AAV2, AAV5, AAV7 i AAV8) dostarczano w pojedynczym zastrzyku do żyły wrotnej do wątroby dorosłych myszy C57BL/6 cierpiących na hemofilię w dawce 1 x 1011 GC/mysz dla pięciu różnych serotypów, zaś jedna grupa otrzymała AAV8 w mniejszej dawce 1 x 1010 GC/mysz. Grupie kontrolnej wstrzyknięto 1 x 1011 GC AAV2/8 TBG LacZ3. Każda grupa składała się z 5-10 samców i samic myszy. Myszy skrwawiano co dwa tygodnie po podaniu wektorów.
1. ELISA
Stężenie FIX psa w osoczu myszy wyznaczano przy pomocy oznaczenia ELISA swoistego wobec czynnika IX psa, przeprowadzanego zasadniczo tak, jak opisano w Axelrod i wsp, 1990, Proc. Natl. Acad Sci. USA, 87: 5173-5177 z modyfikacjami. Jako pierwszego przeciwciała użyto przeciwciała owcy przeciwko czynnikowi I X psa (Enzyme Research Laboratories), zaś jako drugiego przeciwciała użyto przeciwciała królika przeciwko czynnikowi IX psa (Enzyme Research Laboratories). Począwszy od dwóch tygodni po wstrzyknięciu wykryto podwyższone poziomy cFIX w osoczu dla wszystkich wektorów doświadczalnych. Podwyższone poziomy utrzymywały się na poziomie terapeutycznym przez cały czas trwania doświadczenia, tzn. do 12 tygodni. Za poziom terapeutyczny uważa się 5% poziomu prawidłowego, czyli około 250 ng/mL.
Najwyższy poziom ekspresji zaobserwowano dla konstruktów AAV2/8 (przy 1011) i AAV2/7 z utrzymującym się ponadfizjologicznym poziomem cFIX (dziesięciokrotnie wyższym, niż poziom prawidłowy. Poziomy ekspresji dla AAV2/8 (1011) były w przybliżeniu dziesięciokrotnie większe, niż obserwowane dla AAV2/2 i AAV2/8 (10 ). Najniższy poziom ekspresji, choć ciągle w granicach poziomu terapeutycznego, zaobserwowano dla AAV2/5.
2. Oznaczenie czasu kaolinowo-kefalinowego (aPTT) in vitro
Aktywność funkcjonalnego czynnika IX w osoczu myszy z nokautem FIX wyznaczono przy pomocy oznaczenia czasu kaolinowo-kefalinowego (aPTT) in vitro. Próbki krwi myszy pobrano ze splotu zaoczodołowego do 1/10 objętości buforu cytrynianowego. Oznaczenie aPTT przeprowadzono tak, jak opisano to w Wang i wsp., 1997, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 94: 11563-11566.
Czasy krzepnięcia w aPTT w próbkach osocza wszystkich myszy, którym wstrzyknięto wektor były w prawidłowym zakresie (około 60 sek) przy pomiarze dwa tygodnie po wstrzyknięciu i utrzymywały się w prawidłowym, lub niższym niż prawidłowy zakresie przez czas trwania badań (12 tygodni).
Najniższy utrzymujący się czas krzepnięcia zaobserwowano u zwierząt otrzymujących AAV2/8 (1011) i AAV2/7. Do tygodnia 12 AAV2/2 również indukował czas krzepnięcia podobny do obserwowanego dla AAV2/8 i AAV2/7. Ten krótszy czas krzepnięcia nie był jednak obserwowany dla AAV2/2 przed tygodniem 12, podczas gdy obniżone czasy krzepnięcia (w zakresie 25-40 sek) obserwowano dla AAV2/8 i AAV2/7 począwszy od drugiego tygodnia.
Barwienie immunohistochemiczne tkanek wątroby pobranych od niektórych z leczonych myszy jest obecnie przeprowadzane. Około 70-80% hepatocytów wybarwia się dodatnio pod kątem FIX psa u myszy, której wstrzyknięto wektor AAV2/8.cFIX.
B. Psy cierpiące na hemofilię B
Psy mające mutację w domenie katalitycznej genu F.IX, która, w oparciu o badania modelowania, wydaje się destabilizować białko, cierpią na hemofilię B [Evans i wsp., 1989, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 86: 10095-10099]. Kolonię takich psów utrzymywano przez ponad dwadzieścia lat w University of North Carolina, Chapel Hill. Parametry hemostatyczne tych psów są dobrze opisane i obejmują brak antygenu osocza F.IX, czasy krzepnięcia całej krwi ponad 60 minut, podczas gdy u zdrowych psów wynoszą one 6-8 minut i przedłużony czas kaolinowo-kefalinowy 50-80 sekund, podczas gdy u zdrowych psów wynosi on 13-28 sekund. Psy te cierpią na nawracające samorzutne krwotoki. Typowo poważne epizody krwawienia są z sukcesem leczone pojedynczym dożylnym wlewem 10 ml/kg prawidłowego osocza psa; niekiedy dla powstrzymania krwawienia konieczne są powtórne wlewy.
Czterem psom wstrzyknięto do żyły wrotnej AAV.cFIX zgodnie z poniższym planem. Pierwszy pies otrzymał pojedynczy zastrzyk AAV2/2.cFIX w dawce 3,7 x 1011 kopii genomu (GC)/kg. Drugi pies otrzymuje pierwszy zastrzyk AAV2/2.cFIX (2,8 x 1011 GC/kg), po czym drugi zastrzyk AAV2/7.cFIX
PL 222 683 B1 (2,3 x 10 GC/kg) w dniu 1180. Trzeci pies otrzymuje pojedynczy zastrzyk AAV2/2.cFIX w dawce 4,6 x 1012 GC/kg. czwarty pies otrzymuje zastrzyk AAV2/2.cFIX (2,8 x 1012 GC/kg) oraz zastrzyk w dniu 995 AAV2/7.cFIX (5 x 1012 GC/kg).
Podbrzusze cierpiących na hemofilię psów jest chirurgicznie i aseptycznie otwierane pod ogó lnym znieczuleniem i pojedyncza dawka wektora jest podawana do żyły wrotnej. Zwierzęta są chronione przed krwotokiem w czasie około operacyjnym przez dożylne podanie prawidłowego osocza psa. Pies jest usypiany, intubowany dla uzyskania znieczulenia ogólnego, a podbrzusze golone i przygotowywane. Po otwarciu podbrzusza śledziona jest przesuwana w pole operacyjne. Lokalizowana jest żyła śledzionowa i umieszcza się luźno szew w pobliżu małego dystalnego nacięcia w żyle. Do żyły szybko wprowadza się igłę, przy czym luzuje szew i przewleka kaniulę 5F do miejsca w żyle w pobliżu odgałęzienia żyły wrotnej. Po zabezpieczeniu hemostazy i napełnieniu balonika cewnika do żyły wrotnej wlewa się około 5,0 ml wektora rozcieńczonego w PBS w czasie 5 minut. Następnie opróżnia się balonik, usuwa kaniulę i zabezpiecza hemostazę żylną. Następnie umieszcza się śledzionę z powrotem na miejscu, przyżega krwawiące naczynia i zamyka ranę operacyjną. Po dobrym zniesieniu operacji zwierzę jest ekstubowane. Próbki krwi analizuje się tak, jak opisano. [Wang i wsp., 2000, Molecular Therapy 2: 154-158]
Oczekiwane są wyniki wykazujące poprawę lub częściową poprawę dla AAV2/7.
Wszystkie publikacje cytowane w tym opisie są włączone tu przez referencję. Podczas, gdy wynalazek opisano w odniesieniu do szczególnie korzystnych wykonań, należy zauważyć, że modyfikacje mogą być wprowadzone bez odejścia od ducha wynalazku. Modyfikacje takie mają wejść w zakres zastrzeżeń.
PL 222 683 B1
Lista sekwencji <110> The Trustees of The University of Penn.sylvania Gao, Guangping Wilson, James H.
Alvira, Mauricio <120> Rekombinowane wirusy stowarzyszone z adenowirusem (AAV), sposoby ich wytwarzania, pakująca komórka gospodarza, kompozycja zawierająca wirus, zastosowanie wirusa, wyizolowane wirusy AAV, białka, sztuczne białka kapsydu, cząsteczki, komórki gospodarza, sposoby dostarczania transgenu, sposób identyfikacji serotypu, zestaw diagnostyczny, sposób izolacji nowych wirusów, rekombinowana komórka <I3C> ~2 3PC7 <15Q> US ĆO/35C,$O7 <1SI> 3GG1-11-12 <1£0 > US «0/34*,li/
<151> 200i-i2sl7
<1SO> <151> u 5 c G / 3 7 *7, G c £ 2002-05-01
< 15 G> <25 1> OS 60/386,673 2002-06-0;
<1SC>
<170> patencin version 3.1 <21G> 1 <21i> £721 < 212 > Diii.
<213> ssrctyp 7 wirasa stowarzysscnecc z adenowiruESts <£0G> 1 ctggccactc cctctatgcg cgctcgctcg ctcggcgccg cctgcggacc aaaggtccgc SG =gacggc=.ga actctgccct gccggcccca cccaccgagc gagcgcgcat «gaggg&gtg 12$ accaactcca tc&ctagggę tŁCcgcga&g cgcctcccac gctgccgcgt cagcgctęac ISO gcaaatcacg ccatagggga gtggtcctgt attaoctgtc acgtgagtgc ttttgcgaca 2£C· czhtgccaca ccacgtggcc £Cttc«ggta tatatggccg agcgagcgae caggatctcc 200 atttcaaccc caaastttga acgaccagcŁ accatgccgg gtttccscga gatccteatc ISO aacghgccgć gcgacctgga cgagcacctc ccgggcattt ctgactcgtt tgcgaactgg 420 gtggccgaga aggaatgggs cctgccccce gattccgaca cggatctgaa cctgsfccg&c 4 SC* caggcacccc tgaccgćggc cgagaagctg cagcgcgact ccctgctcca atggcgccgc S4C gtca.gt2.agg ccccggaggc cctgctctcfc gttcagttcg agaagggcga gagctacttc SCO tecccccacg ttctggcgga gaccacgggg gtcaagtcca cggcgctagg cegcttcczg 65G agtcaaattc gggagaagcc ggtccsg&cc acctaccgcg gggtcgagcc cacgetgccc '20
PL 222 683 B1 saccęsticę cggtgaccaa ęaogcgoaao gęcgccęgcę ęgggęaacas. gccagtggac 760 gagćcctEca tccccaacta cctcctgccc aaęjacccagc ccgaęctcca ętgggcęcęg 54C accaacacgg aęęaętatat aaęcgcgcgt ttgaacccgg ccgaacgcaa acegcccgtc 300
gcgcagcacc tgscccscęt cagccagacc C HGO * ^CŁCS “CcOSSCCCC 55G
-
s.s ttictg&cg cęcccgc.gsc ca5ctc5.eS a scctccgcęc cctac&fcgcs cctggcccgc 1020
Łęgctcgćgg Łcccggccst cscctcccsg ssgcsctgca tccscgecęs- c c c c w cc iOSC
gccsaęgcea ttctcggcgg csgcaaggtg cgcgtggacc aa&aetgcaa gtcgtccgcc isso cagatcgatc ccacccccct gatcgtcacc tccaacacca acatgtgcgc cgtgattgac 1620 gggaacagca ccaccttcga gcaccagcag ccgttgcagg accggatgtt caaatttgaa ±660 ctcacccgcc gtctggagca cgactttggc aaggtgscga agcaggaagt caaagagtCc 1740 ctccgctgęg ccegtgafcca cgtgaccgag gcggcgcatc agttctacgt cagaaagcgc ±600 ggagccagca aaagacccgc ccccgatgac gcggatataa gcgagcccaa gcgggcccgc 1660 ccctcagtcg cggatccatc gacgtcagac gcggaaggag ctccggtgga ctttgccgac ±520 aggtaccaaa acaaatgttc tcgtcacgcg ggcatgattc agatgctgtt tccctgcaaa ISEO
acgtgcgaga gaatgaatca gaatttcsae sttcgcttca cacacgggot cagsgsctct 2040
ccagagtgtt tccccggcgt gtcagaatct caaccggtcg tcagaaaaas. gacgtaccgę 2100
aaactcfcgcg cgattcatca cctgctgggg ccggcgcccg sgattgctcg ctcggcctgc 2160
gacctggtca acgtggacct ggacgactgc gcttccęacc cstcacccsc tcssaccscc 22 20
tatggctgcc gatggttatc ttccagattg gctcg&ggac aacctctctc acggcattcg 22 80
cgagtggtgg gacctęaaac ctggagcccc ęa.e.3_CCC55.e. CCCśSCCćCC 5c.5S.CC 5-CG 5 2340
csacggccgg ggtctggtgc ttcctggcta csectscctc ggacccttca acggactccs 2400
caagggggag cccgtcaacg cggcggacgc agcggccctc gagcaccaca aggcctacgs 2460
ccagcagctc aaagcgggtg acaatccgta cctgcggtst aaccacgccg acgccgagtt 2520
ccagcagcgt ctgca±gaag atacgtcatt cccgcgcg&g cagtcttcca 2580
ggccaagaag cgggttctcg aacctctcgg tctggttgag gaaggcgcts sgacggctcc 2640
PL 222 683 B1
agccgtcacc tcsgcgŁtcc cccgactcct ccacgggcat 2700
cggcaa.gaaa ggccsgcagc ccgccagaaa gagactcaat ttcggccaga ctggcgac~c 2760
S.G3.gtlC£QvC GCCGćtCCCCc aacctctcgg sgascctcca gcagcgccct ctagtgtcgg 2820
atctggtaca. gtgcctgcac gcggtggcgc accaafcggca cacaataacg saggtgccca 2830
cggagtgggt aaigcctcag gaaafcfcggca ttgcgafctcc acstggctgg gcgscagagt 2940
cattaccacc agcacccgaa ccizgggccct gcccaccfcac sacasccacc Łctacasgca 3000
aatctccagt gaaactgcag gtagtaccaa cgacaacacc tscctcggct acagcacccc 3 OSO
ctgggggtat tttgacttfcs. acagaćtccs. ctgccacttc tcaccscgtg actggcagcg 3120
acfccatcaac aacsactggg gaiSuccggcc caagasgctg cggćtcaagc tcttcaacat 3180
ccaggtcaag gaggtcacga cgaatgacgg cgttacgace atcgctaata accttaccaę 3240 cacgattcag gtattctcgg actcggaata ccagctgecg tacgtcctcg gctctgcgca 3300 ccagagctgc ctgcctccgt tcccggcgga cgtcttcatg attcctcagt acggctacct 3360 gactctcaac aategcagtc sgtctgtggg acgttcctcc ttctactgcc tggagtactt 3420 cccctctcag atgctgagaa cgggcaacaa ctttgagttc agctacagct tcgaggacgt 3480 gcctttccac agcagctacg cacacagcca gagcctogac cggctgatga atccectcat 3340 cgaccagtac ttgtactacc tggccagaac acagagtaac ccaggaggca cagctggcaa 3300 tcgggaactg cagttttace agggcgggcc tteaactatg gccgaacaag ccaagaattg 3560 gttacctgga ccttgcttcc ggcaacasag agtctccaaa aegctggatc aaaacaacaa 3720 cagcaacttt gettggactg gtgccaccaa atatcacctg aacggcagaa actcgttggt 3780 taatcccggc gtcgccatgg caactcacaa ggacgacgag gaccgctttt tcceatccag 3S40 cggagtcctg atttttggaa aaactggagc aactaacaaa actacattgg aaaatgtgtt 3300 aatgacaaat gaagaagaaa ttcgtcctac taatcctgta gccacggaag aatacgggst 3S6G agtcagcagc aactcacaag cggctaatac tgcagcccag acacaagctg tcaacaacca 4020 gggagcctta cctggcatgg tctggcagaa ccgggacgtg tacctgcagg gtcccatcfcg 4080 ggccaagatt cctcacacgg atggcaactt tcacccgtCt cctttgatgg gcggctttgg 4140 acttaaacat ccgcctcctc sgatcctgae caagaacact cccgttcccg ctaatcctcc 4200
agaggtgttt acccctgcca agtttgcttc □ttcstcaca cagtacagca ccggs.caa.gt 4250
cagcgtggaa atcgagcggg agctgcagaa ggaaaacagc aagcgctgga acccggagst 4320
tcagtacacc tccaactttg a a. a. a g c a c s. c tggtgtggac tttgccgttg acacccsggg 4380
tgtcfcactct gagcctcgcc ctattggeac tcgt tace tc acccgtaatc tgtaattgca 4440
tgttaafccaa taaaccggtt gattcgtttc agttgaactt tggtctcctg tgettettat 4500
cttatcggtt tccatagcaa ctggttacac attaactgct tgggtgcgct <z cscgafcaag 4560
PL 222 683 B1
aacactgacg tZ. C S.C CĆjCCjO i_ acccctagfcg atggagttgg ccactccctc fcatgcgcgct 4620
ogctcgctcg gtggggcctg cggsccaaag gtccgcagac ggcagagctc tgctctgccg 4630
gccccaccga gcgagccagc gcgcatagsg ggagtggcca a 4721
<210> 2 <211> 732 <212> ΡΚΤ <213s białko kapsydu serotypu 7 wirusa stowarzyszonego z adenowirusem <400> 2
Het Ala Ala Asp Gly Tyr ' Leu Pro ' ASO > Trp > Leu . Glu Asp i Asn. Leu . Ser
i 5 10 15
Glu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Asp Leu Lys Pro c-ly Ala , Prc i Lys Pro
20 25 30
Lys Ala Asn Gin Gin Lys Gin Asp Asn Gly Arg Gly Leu Val Leu Pro
35 40 45
Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Pile Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro
50 55 60
Val As 11 Ala Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp
65 70 75 80
Gin C-ln Leu Lys Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Arg Tyr Asn His Ala
85 90 95
Asp Ala Glu Phe Gin Glu Arg Leu Gin Glu Asp Thr Ser Phe Gly C-ly
100 105 110
Asn Leu Gly Arg Ala Val The Gin Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro
115 120 125
Leu Gly Leu Val Glu Glu Gly Ala Lys Thr Ala Pro Ala Lys Lys Arg
130 135 140
Pro Val Glu Pro Ser Pro Gin Arg Ser Pro Asp Ser Ser Thr Gly Ile
145 150 155 160
Gły Lys Lys Gly Gin Gin Pro Ala Arg Lys Arg Leu Asn Phe Gly Gin
165 170 175
Thr Gly Asp Ser Glu Ser Val Pro Asp Pro Gin Pro Leu Gly Glu Pro
180 185 190
Pro Ala Ala Pro Ser Ser Val Gly Ser Gly 1 Thr Val Ala Ais Gly < Gly
195 200 205
PL 222 683 B1
jly Ala 210 Pro Het Ala Asę Asn Asn 215 Glu Gly Ala Αξό 220 Gly Val Gly Asn
Ala Ser 225 Gly Asn Trp His 230 Cys Asn Ser Thr Tro 235 Leu Gly Asp Arg Val 240
Ile Thr Thr Ser Thr 245 Ara Thr Trp Ala Leu Pro 250 Thr Tyr Asn Asn 255 His
Leu Tyr Lys Glu lis 260 Ser Ser Glu Thr 265 Ala Gly Ser Thr .Asn 270 rlSD Asn
Thr Tyr Phe Gly Tyr Ser Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Asp Phe Asn Arg
275 280 285
Phe His Cys His Phe Ser Pro Arg Asp Trp Gin Arg Leu Ile Asn Asn 290 293 300
Asa Trp Gly Phe Arg Pro Lys Lys ueu Arg Phe Lys Leu Phe Asn Ile 305 310 315 320
Gin Val Lys Glu Val Thr Thr Asn Asp Gly Val Thr Thr Ile Ala Asn 325 330 325
Asn Leu Thr Ser Thr Ile Gin Val Phe Ser Asp Ser Glu Tyr Gin Leu 340 345 ' 350
Pro Tyr Val Leu Giy Ser Ala His Gin Gly Cya Leu Pro Pro Phe Pro 355 360 365
A.la Asp Val Phe Ket Ile Pro Gin Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn Asn 370 37Ξ ' 3S0
Gly Ser Gin Ser Val Gly Arg Ser Ser Phe Tyr Cys Leu C-lu Tyr Phe 3SS 390 335 400
Pro Ser Gin Met Leu Arg Thr Gly Asn Asn Phe Glu Phe Ser Tyr Ser 405 410 415
Phe Glu Asp val Pro Phe His Ser Ser Tyr Ala His Ser Gin Ser Leu 420 425 430
Asp Arg Leu Met Asn Pro Leu Ile Asp Gin. Tyr Leu Tyr Tyr Leu Ala 433 440 445
Arg Thr Gin Ser Asn Pro Gly Gly Thr Ala Gly Asn Arg Glu Leu Gin 450 455 460
Phe Tyr Gin Gly Gly Pro Ser Thr Mec Ala Glu Sin Ala Lys Asn Trp 455 470 475 490
PL 222 683 B1
3eu Pro Gly Pro Cys Phe Arg Gin Gin Arg Val Ser Lys Thr Leu Asp 485 4SC 455
Gin Asa Asn Asn Ser Asn Phe Ala Trp Thr Gly Ala Thr Lys Tyr His 500 503 SIO
Leu Asn Gly Arg Asn Ser Len Val Asn Pro Gly val Ala Ket Ala Thr 515 520 525
His Lys Asp Asp Glu Asp Arg Phe Phe Pro Ser Ser Gly Val Leu Ile 530 335 540
Phe Gly Lys Thr Gly Ala Thr Asn Lys Thr Thr teu Glu Asn Val Leu 545 550 535 560
Met Thr Asn Glu Glu. Glu Ile Arg Pro Thr Asn Pro Val Ala Thr Glu 5S5 570 575
Glu Tyr Gly Ile Val Ser Ser Asn Leu Gin Ala Ala A.sn Thr Ala Ala 580 585 530
Gin Thr Gin Val Val Asn Asn Gin Gly Ala Leu Pro Gly Met Val Trp 595 S00 SOS
Gin Asn Arg Asp Val Tyr Leu Gin Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile Pro SIO 613 620
His Thr Asp Gly Asn Phe His Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe Gly £25 630 635 640
Leu Lys His Pro Pro Pro Gin Ile Leu Ile Lys Asn. Thr Pro Val Pro 645 650 655
Ala Asn. Pro Pro Glu Val Phe Thr Pro Ala Lys Phe .Ala Ser Phe Ile 660 S65 670
Thr Gin Tyr Ser Thr Gly Gin Val Ser Val Glu Ile Glu Trp Glu Leu S75 680 685
Gin Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Ile Gin Tyr Thr Ser 690 695 700
Asn Phe Glu Lys Gin Thr Gly Val Asp Phe Ala Val Asp Ser Gin Gly 705 . 710 715 720
Val Tyr Ser Glu Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Asn 725 730 735
PL 222 683 B1 <210 3 <211> 623 <212 > PRT <213> rep bjafko serotypu 7 wirusa stowarzyszonego z adenowirusem <400 3
Met Pro Gly Phe Pyr Glu Ile Yal Ile Lys Yal Pro Ser Asp Leu Aso ί 5 1Ó *15
Glu His Leu Pro Gly Ile Ser Aso Ser Phe Yal Asn Trx> Val Ala Glu 20 25 '30
Lys Glu Trp Glu Leu Pro Pro Asp Ser Aso Met Asp Leu Asn Leu Ile 35 40 45
Glu Gin Ala gro Leu Tar Yal Ala Glu Lys Leu Gin Aro Asp 5ha 50 55 £0
Val Gin Srp Arg Arg Yal Ser Lys Ala Pro Glu Ala Leu Phe Phe Yal 55 70 75 50
Gin Phe Glu Lys Gly Glu Ser Tyr Fhe Kia Leu Kia Yal leu Val Glu 85 £Q £5
Thr Par Gly Yal Lys s
100
Ser Met Yal leu Gly Arę Phe Leu Ser Gin Ile 105 110 te? Glu Lys Leu Yal Gin Ihr Ile Tyr .Arę Gly Val Glu Pro Thr Leu 115 12 0 125
Pro Asn Tro Phe Ala Yal Thr Lys Thr Aro Asa Gly .Ala Gly Gly Glv 130 135 ’ ' 140
Asn Lys Val Yal Asp Glu Cys Tyr Ile Pro Asn Tyr leu Leu pro Lys 145 ISO 155 ISO
Tłir Gin Pro Glu Leu Gin Trp Ala Trp Thr Asn Met Glu Glu Tyr Ile 165 170 175
Ser Ala Cys Leu Asn Leu Ala Glu Arg Lys Arg Leu Yal Ala Gin His 130 185 ' 150
Leu Tar Kis Yal Ser Gin Tłir Gin Glu Gin Asn Lys Glu Asn Leu Asn 185 200 205
Pro Asn Ser Aso Ala Pro Val Ile Arg Ser lys Ihr Ser Ala Arg Tyr 210 215 220
Met Glu Leu Yal Gly Trp Leu Yal Asp Ar? Gly Ile ?hr Ser Glu Lys 225 230 ' ' 235 240
PL 222 683 B1
Gin Trp lla Gin Glu Asp Gin Ala Ser Tyr Ile Ser Ehe Asn Ala Ala 245 250 255 er Asn Ser Arg Ser Gin lis Lys Ala Ale Leu Asp Asn Ala Gly Lys 250 265 ’ 270 ' le Met Ala Leu Thr Lys Ser Ala Ero Asn Tyr Leu Lal Glv Pro Ser 275 2S0 ' 235 ’
Leu Ero Ala Asp Ile Lys Thr Asn Arg ile Tyr Arg Ile Leu Glu Leu 2S0 295 300
Asn Gly Tyr Asp Pro Ala Tyr Ala Gly Ser Val Phe Leu Gly Trp Ala 305 310 315 320
Gin Lys Lys Phe Gly Lys Arg Asn Thr Tle Trp Leu Phe Gly Pro Al 325 330 335
Thr Thr Gly Lys Thr Asn Tle Ala Glu Ala Tle Ala His Ala Val Pro 340 345 350
Pha Tyr Gly Cys Val Asn Trp Thr Asn Glu Asn Ehe Ero Phe Asn Aso 355 360 365
Cys Val Asą Lys Met Val Tle Trp Trp Glu Glu Gly Lys Met Thr Ala 370 375 380
Lys Val Val Glu Ser Ala nys Ala Tle Leu Gly Glv Ser Lvs Val Arg 385 330 395 ’ 400
Val Asp Gin Lys Cys Lys Ser Ser Ala Gin Ile Asp Ero Thr Pro Vel 405 410 415 rłe Val Thr Ser Asn Thr Asn Met Cys A.la Val Ile .Asp Gly Asn Ser 420 425 430
Thr Thr Ehe Glu His Gin Gin Ero Leu Gin As» Arg Met Ehe Lys Phe 435 440 445
Glu Leu Thr Arg Arg Leu Glu His As» Ehe Gly Lys Val Thr Lys Gin 450 455 ’ 460 '
Glu Val Lys Glu Ehe Phe Arg Trp Ala Ser Asp His Val Thr Glu Val 465 470 ’ 475 480
PL 222 683 B1
<210> 4 <211> 4393 <212> DHA <213> serotyp 3 wirusa stowarzyszonego z adenowirusem <4O0> 4
cagagaggga gtggccaact ccatcaccag gggtagcgcg aagcgcctcc cacgctgccg £0
cgtcagcgct gacgcaaatt acgtcatagg ggagtggtcc tgtattaget gtcacgtgsg 120
tgcttttgcg gcattttgcg acaccacgta gccatttgag gtatatatgg ccgagtgagc ISO
gagcaggatc tccattttga ccgcgaaatt tgaacgagca gcagccatgc cgggct tcta 240
cgagatcgtg atcaaggtgc cgagcgacct ggacgagcac ctgccgggca tctctgactc 300
gtttgtgaac taggtggccg agaaggaatg ggagctgccc ccggattctg acacggatcg 360
gaatctgatc gagcaggcac ccctgaccgt ggccgagaag ctgcagcgcg acttcctggt 420
ccaatggcgc cgcgtgagta aggecccgga ggccctcttc tttgttcagt tcgagaaggg 430
cgagagctac tttcacctgc acgttctggt cgsgaccscg ggggtcaagt ccatggtgct S40
aggccgcttc ctgagtcaga ttcgggaaaa gcttggtcca gaccatctac ccgcggggtc soo
gagccccacc ttgcccaact ggttcgcggt gaccaaagac gcggtaatgg cgccggcggg 560
PL 222 683 B1
ggggaacaag gtggCggacg cgagctgcag tgggcgtgga agtgctacat cccc&actac cCcctgccca agactcagcc 720 780
ctaacatgga ggagtstata agcgcgtgct tgaacctggc
cgagcgcaaa cggctcgtgg cgcagcacct gacccacgtc agccagacgc aggagcagaa 840
caaggagaat ctgaacccca attctgacgc gcccgtgatc aggtcaaaaa cctccgcgcg SOO
ctatatggag ctggtcgggt ggctggtgga ccggggcatc acctccgaga agcagtggat 960
ccaggaggac caggcctcgt acatctcctt caacgccgcc tccaactcgc ggtcccagat 1020
caaggccgcg ctggacaatg ccggcaagat c&tggcgctg accaaatccg cgcccgacta 1080
cctggtgggg ccctcgctgc ocgcggacat taoccagaac cgcatctacc gcatcctcgc 1140
tctcaacggc tacgaccctg cctacgccgg ctccgtcttt ctcggctggg cteagaaaaa 1200
gttcgggaaa cgcaacacca tctggctgtt tggacccgcc accaccggca agaccaacat 1260
tgcggaagcc atcgcccacg ccgtgccctt ctacggctgc gtcaaetgga ccaatgagaa 1320
ctttcccttc aatgattgeg tcgacaagat ggtgatctgg tgggaggagg gcaagatgac 1380
ggccaaggto gtggagtccg ccaaggccat tctcggcggc agcaaggtgc gcgtggacca 1440
aaagtgcaag tcgtcegccc agatcgaecc caeccccgtg atcgtcacct ccaacaccaa 1500
c&Łgtęiccjcc gtgfatttjaccj ggaacagcae caccttcgag caccagcago ctctccagga 1560
ccggatgttt aagttcgaac teaecegccg tctggagcac gactttggca aggtgacaaa 1620
gcaggaagte aaagagttct tccgctgggc cagtgatcac gtgaccgagg tggegcatga 1680
gttttacgtc agaaagggcg gagccagcaa aagacccgcc cccgatgacg cggataaaag 1740
cgagcccaag cgggcctgcc cctcagtcgc ggatccatcg acgtcagacg cggaaggagc 1800
tccggtggac tttgccgaca ggtaecaaaa caaatgeect cgtcacgcgg gcatgcttca 1860
gatgctgttt ccctgcaaaa cgtgcgagag aatgaatcag aatttcaaca ttegcttcac 1920
acacggggtc agagactgct cagagtgttt ccecggcgtg toagaatctc aaccggtcgt 1980
cagaaagagg acgtatcgga aactctgtgc gattcatcat ctgctggggc gggctcccga 2040
gattgcttgc tcggcctgcg atctggtcaa cgtggacctg gatgactgtg tttctgagca 2100
ataaatgact taaaccaggt atggctgccg atggttatct tccagattgg ctcgaggaca 2160
acctctctga gggcattcgc gagtggtggg cgctgaaacc tggagccceg aagcccaaag 2220
ccaaccagca aaagcaggac gacggccggg gtetggtgct tcctggctac aagtacctcg 2280
gaccettcaa cggactcgac aagggggage ccgtcaacgo ggcggacgca gcggccctcg 2340
agcacgacaa ggcctacgac cagcagctgc aggcgggtga caatccgtac ctgcggtata 2400
accacgccga cgccgagttt caggagcgtc tgcaagaaga taegtctttt gggggcaacc 2460
tcgggogagc agtcttoeag gccaagaagc gggttetcga acctetcggt ctggttgagg 2520
aaggcgctaa gacggctcct ggaaagaaga gaceggtaga gccatcaccc cagcgttcto 2580
PL 222 683 B1
zagacccctc tacgggcatc ggcsacasog crccaacagcc cgccaęaaaa sgactcsatt 2640
ctęrgtcagac tgącgactca cagccagccc csgaccctca scctctccsa gaacctccac 2700
cagcgccctc tggtgcggga Cl Lc.s.c=.Co.g tggctocscg coętęccgcc. ccaacggcag £ : 6 V
aC5.S teSCCS sggcgcccsc g g a c £ cgcj £ a gttcctcgga a aat tcgcac tgcgattcca 2520
catggctggg cgacagsgtc aćcaccacca gcacccCTaac ctgggccctg cccacctaca 2S30
acaaccaccc ctacaagcaa atctccaacg ggacatcggg aęgagccacc aacgacaaca 2340
cctacttcgg c Co.csgcs.cc ccc ucgggGiL attttgactt tccCSGHίΣ tC cactgccact 3000
ttcaccacg cgactgacag sgactcatca acaacaactg gcgaCtccgg cccaagsaac 3060
ccagcttcaa gctcttcaac atccaggtca aggagatcac gcagaatgaa ggcaccaaga 3120
ccatcgccaa taacctcacc agcaccatcc aggtgtttac ggacccggag taccagctgc 31S0
cgtacgttct cggctctgcc caccaggact gcctgcctcc gttcccggcg gacgtgttca 3240
tgattcccca gtacggctac ctaacactca acaacggtag tcaggccgtg ggacgctcct 33C0
ccttctactg cctggaafcac tttccttcgc agatgctgag ssccggcaac aacttccagt 3360
ttacttacac cttcgaggac gtgcctttcc acagcagcta cgcccacagc cagagcttgg 342 0
accggctgat gaatcctctg attgaccagt acctgtacta cttgtctcgg actcaaacaa 3490
caggaggcac ggcaaatacg cagactctgg gcttcagcca aggtgggcct aatacaatgg 3S40
ccaatcaggc aaagaactgg ctgccaggac cctgfctaccg ccaacaacgc gtcfccaacga 3600
caaccgggca aascaacaat agcaactttg cctggactoc fcgggaccaaa taccatctga 3650
atggaagaaa ttcattggct astectggca tcgcfcatggc aacacacaaa gacgacgaga 3720
agcgtttttt tcccagfcaac gggatcctga tttfctggcaa acaaaatgct gccagagaca 3780
atgcggatta cagcgstgtc atgctcacca gcgaggaaga aatcaaaacc actaaccctg 3840
tggctacaga ggaatacgat atcgtggcag ataacttgca gcagcaaaac acggctcctc 3500
aaattggaac tgccaacagc cagggggcct tacccggtat ggtctggcag aaccgggacg 3960
tgtacctgca gggtcccatc egggccaaga ttcctcacac ggacggcaac ttccacccgt 4020
ctccgctgat gggcggcttt ggcctgaaac atcctccgcc tcagatcctg atcaagaaca 4080
cgcctgtacc tgcggatcct ccgaccacct tcaaccagtc aaagctgaac tctttcatca 4140
cgcaatacag caccggacag gtcagcgtgg aaattgaatg ggagctgcag aaggaaaaca 4200
gcaagcgctg gaaccccgag atccagtaca cctccaacta ctacaaatct acaagtgtgg 4260
actttgctgt taatacagaa ggcgtgtact ctgaaccccg ccccattggc acccgttacc 4320
tcacccgtaa fcctgtaattg cctgttaatc aataaaccgg ttgatfccgtt tcagttgaac 4380
tttggtctct gcg 4393
PL 222 683 B1 <21C> 5 <211> 4385 <212 > DNA <213> serotyp 9 wirusa stowarzyszonego z adenowirusem <400> 5
cagagaggga gtggccaact ccstc^ctso gggtaatcgc gaagcgoctc ccacgctgcc 60
gcgfccagcgc tgacgtagat tacgtcatag gggagtggtc ctgtattagc tgtcacgtga 120
gtgcttttgc gacattttgc gacaccacat ggccatttga ggcatatatg gccgagtgag ISO
cgagcaggat ctccattttg accgcgaaat ttgaacgagc agcagccatg ccgggcttct 240
acgagattgt gatcaaggtg ccgagcgacc tggacgagca cctgccgggc atttctgact 3 CO
cttttgtgaa ctgggtggcc gagasggaat gggagctgcc cccggattct gacatggatc 3 60
ggaatctgat cgagcaggca cccctgaccg tggccgsgaa gctgcagcgc gacttcctgg 420
tccaatggcg ccgcgtgagt aaggccccgg aggccctctt ctttgttcag ttcgaaaagg 450
gcgagagcta ctttcacctg cacgttctgg tcgagaccac gggggtcaag tccatggtgc 540
caggccgctt cctgagtcag attcgggaga agctggtcca gaccatctac cgcgggatcg 500
agccgaccct gcccaactgg ttcgcggtga ccaagacgcg taatggcgcc ggcgggggga 660
acaaggtggt ggacgagtgc tacatcccca actacctcct gcccaagact cagcccgagc 720
tgcagtgggc gtggactaac atggaggagt atataagcgc gtgcttgaac ctggccgagc 730
gcaaacggct cgtggcgcag cacctgaccc acgtcagoca gscgcaggag cagaacaagg a 40
agaatctgaa ccccaattct gacgcgcccg tgatcaggtc aaaaacctcc gcgcgctaca 900
tggagctggt c993tggctg gtggaccggg gcaccaccto cgagaagcag tggatccagg 960
aggaccaggc ctcgtacatc tccttcaacg ccgcctccaa ctcgcggtcc cagatcaaag 1020
ccgcgctgga caatgccggc aagatcatgg cgctgaccaa atccgcgccc gactacctgg 1050
taggcccttc acttccggtg gacattacgc agaaccgcat ctsccgcatc ctgcagctca 1140
aoggctacga ccctgcctac gccggctccg tcttcctcgg ctgggcacaa aagaagttcg 1200
cgaaacgcsa caccatctgg ctgtttgggc cggccaccac gggaaagacc aacatcgcag 1260
aagccatfcgc ccacgccgtg cccttctacg gctgcgtcaa ctggaccaat gagaact ttc 1320
ccttcaacga ttgcgtcgac aagatggtga tctggtggga ggagggcaag atgacggcca 1390
aggtcgtgga gtccgccaag gcęattctcg gcggcagcaa ggtgcgcgtg gaccaaaagt 1440
gcaagtcgtc cgcccagafcc gaccccactc ccgtgatcat cacctccaac accaacatgt 1500
gcgccgtgafc taacgggaac agcaccaccfc tcaagcacca gcagcctctc caggaccgga 1550
tgtttaagtt cgaactcacc cgccgfcctgg agcacgaett tggcaaggtg acaaagcagg 1620
aagtcaaaga gttcttccgc tgggccagtg atcacgtgac c9a99t99c3 catgagtttt 1SS0
acgtcagaaa gggcggagcc agcaaaagac ccgcccccga tgacgcggat aaaagcgagc 1740
PL 222 683 B1
SDcttęcaaaC ctgcccctca gfccgcggatc catcgacgtc agacgcggas cgsgętccgg 1300
rggactctgc cgacaggtz&c caaaacaaat gttctcgtca cacgcgcatg cttcagatgc IE60
;gcttccctg csa&acgtgc gagagaatga atcagaattt caacatttgc ctcacacacg 1520
gggtcagaga ctgctcaaag tgcttccccg gcgtgtcaga a t cccasccg gtcgtcagaa 1980
agaggacgta tcggaaactc tgtgcgatte atcatctgct ggęgcęggct cccgagattg 2040
ctfcgctcggc ctgcgatctg gtcaacgtgg acctggatga ctgtgtttcfc gagcaataaa 2100
tgacttaaac caggtatgęc tgccgatcgt tstcttccag attggctcga ggacaacctc 2160
tctgagggca ttcgcgagtg gtgggcgctg aaacctggag ccccaaagcc caaagc caac 2220
cagcaaaagc aggacgacgg ccggggtcta gtgctćcctg gctacaagta cctcggsccc 2230
ttcsacggac tcgacaaggg ggagcccgtc aacgcggcgg acgcagcggc cctcgagcac 2340
ggcaaggccc acgaccagcs gctgeaggcg ggtgacaatc cgtacctgcg gtataaccac 2400 gccgscgccg agtttcagga gcgtctgcaa gaagatacgt cttttggggg caaccćcggg 2450 cgagcagtct tccaggccaa gaagcgggfct ctcgaacctc tcggtctggc tgaggaaggc 2520 gctaagacgg ctcctggaaa gaagageccg gtagagccat caccccagcg tfcctccagac 2580 tcctctacgg gcatcggcaa gaaaggccaa cagcccgcca gaaaaagact eaattttggt 2540 cagactggcg actcagagtc agttccacec ccfccaacctc tcggagaacc tccagcagcg 2700
ccctctggta tgggacctaa tacaatggct gcaggcggtg gcgcaccaat ggcagacaat 2760
aacgaaggcg ccgacggagt gggtaattcc tcgggaaatt ggcattgcga ttccacafcgg 2320
ctgggggacs gagtcatcac caccagcacc cgaacctggg cattgcccac ctacaacaac 2880
cacccccaca agcaaatctc caatggaaca tcgggaggaa gcaccaacga caacacctac 2940
tttggctaca gcaccccctg ggggtattut gactfccaaca gattccactg ccacttctca 3000
ccacgtgact ggcagcgact catcaacaac aactggggafc tccggccaaa gagactcaac 3060
Łtcaagctgt fccaacatcca ggtcaaggag gttacgacga acgaaggcac caagaccatc 3120
gccaataacc ttaccagcac cgtccaggtc tttacggacc cggagtacca gctaccgtac 3130
gtcctaggct ctgcccacca aggatgcctg ccaccgtttc ctgcagacgt cttcatggtt 3240
ectcagtacg gctacctgac gctcaacaac ggaagtcaag cgttaggacg ttcttctttc 3300
tactgtctgg aatacttccc ttcfccagatg ctgagaacca gcaacaactt tcagttcagc 3360
tacactttcg aggacgtacc Łttccacagc agctacgcac acagccagag tctagatcga 3420
ctgatgaecc ccctcatcga ccagtaccta tactaccfcgg tcagaacaca gacaactgga 34S0
actgggggaa ctcaaacttt ggcattcagc caagcaggcc ctagctcaat ggccaatcag 3540
gctagaaact gggtacccag gccttgctac cgfccagcagc gcgtctccac aaccaccaac 3600
caaaataaca acagcaactt tgcgCggacg ggagctgcta aattcaagct gaacgggaga 3660
PL 222 683 B1
gactcgctaa tgsatcctgg cgtggctatg gcatcgcaca aagacgacga ggaccgcttc 3720
tttccatcaa gtggcgttct catatttggc asgcaaggag ccgggaacga tggagtcgac 37S0
tacagccacg tgctgattac agatgaggaa gaaattaaaa ccaccaaccc tgtagccaca 3340
gaggaatacg gagcagtggc catcaacaac caggccgcta acacgcsggc gcaaactgga 3900
cttgtgcatą accagggagt tattcctggt atggtctggc agaaccggga cgtgtacctg 3960
cagggcccta tttgggctaa aatacctcac acagatggca actttcaccc gtctcctctg 4020
atgggtggat ttggactgaa aeacccacct Ccacagattc taattaaaaa tacaccagtg 4080
ccggcagacc ctcctcttac cttcaatcaa gccaagctga actctttcat cacgcagtac 4140
agcacgggac aagtcagcgt ggaaatcgag tgggagctgc agaaagaaaa cagcaagcgc 4200
fcggaatccag agatccagta tacttcaaac tactacaaat ctacaaatgt ggactttgct 4260
gtcaatacca aaggtgttta ctctgagcct cgccccattg gtactcgtta cctcacccgt 4320
aatttgtaat tgcctgttaa tcaataaacc ggttaattcg tttcagttga actttggtct 43 30
ctgcg 4385
<210> 6 <211? 4718 <212? DNA <213? serotyp 1 wirusa stowarzyszonego z adenowirusem <400? 6
ttgcccactc cctctctgcg cgctcgctcg ctcggtgggg cctgcggacc aaaggtccgc 60
agacggcaga gctctgctct gccggcccca ccgagcgagc gagcgcgcag agagggagtg 120
ggcaactcca tcactagggg taatcgcgaa gcgccfcccca cgctgccgcg tcagcgccga 180
cgtaaattac gtcatagggg agtggtcctg tattagctgt cacgtgagtg cttttgcgac 240
attttgcgac accacgtggc catttagggt atatatggcc gagtgagcga gcaggatctc 300
catcttgacc gcgaaatttg aacgagcagc agccatgccg ggcttctacg agatcgtgat 360
caaggtgccg agcgacctgg acgagcacct gccgggcatt tctgactcgt ttgtgagctg 420
ggtggccgag aaggaatggg agctgccccc ggattctgac atggatctga atctgattga 430
gcaggcaccc ctgaccgtgg ccgagaagct gcagcgcgac ttcctggtcc aatggcgccg 540
cgtgagtaag gccccggaga ccctcttctt cgttcagttc gagaagggcg agtcctactt 600
ccacctccat attctggtgg agaccacggg ggtcaaatcc atggtgctgg gccgctfcccfc 660
gagtcagatt agggacaagc tggtgcagac catcfcaccgc gggatcgagc cgaccctgcc 720
caactggttc gcggtgacca agacgcgtaa tggcgccgga ggggggaaca aggtggtgga 780
cgsgtgctac atccccaact acctcctgcc caagactcag cccgagctgc agtgggcgtg 340
gactaacatg gaggagtata taagcgcctg tttgaacctg gccgagcgca aacgactcgt 900
ggcgcagcac ctgacccacg tcagccagac ccaagagcag aacaaggaga atctgaaccc 960
PL 222 683 B1
casttetgsc gcccctgtcs £C-CgętC35S aaccŁc-ogcc cgctscatgg agctggtccg 1020
gaccggggcs. tcacctccgs gsa.gcs.gcęg aoccaggagc sccaggcctc 20 S0
atscećctcc ttcaacgccg cttccaactc gcggtcccag stcaacgccg cictggacsa 1140
ccccggessg stcatggcgc tgaccaaatc cacccccgac i: sec tęgi ag gccccgctcc 1200
ęcccccggac St t233SCCS sc cgcat ccs ccgcatcctg gag-ocgascg gccacgaacc 1260
tgccfcacgcc ggctccgtct ttctcggctg ggcccagaaa aggttcgcga s.gcgc aac ac 1320
catctggcig tttgggccgg ccsccacggg caagaccaac atcgcggaag ccatcgccca 1160
cgccgtgccc ttctacggct gcgtcaactg gaccaatgag aactttccct tca acgattg 1440
cgtcgacaag atggtgatcfc ggcgggsgga gggcaagatg acggccaagg tcg tggag tc 1500
cgccasggcc actctcggcg gcagcaaggt gcgcgtggac caaaagtgca agtcgtccgc 1560
ccagatcgac cccacccccg tgafccgtcac etccaaca.cc aacatgtgcg ccatgattga 1620
cgggsacagc accaccttcg sgcaceagcs. gccgttgcag gaccggatgt tcaaatttga 1630
actcacccgc cgtctggagc afcgactttgg caaggtgaca cLSOC SGCfSSCT icsssęrsS - *-· 1740
cttccgctgg gcgcaggatc scgtgaccga ggtggcgcst gagttctacg tcsgaasgcg 1800
tggagccaac aaaagacccg cccccaatga cgcggataaa agcgagcccs sgcogcccfcc 18 60
cccctcagtc gcggatccat cgacgtcaga cgcggaagga gctccggtgg actctgccga 1920
caggtaccaa aacaaatgtt ctcgtcacgc gggcatgctt cagatgctgt Łtccctgcaa isso
gacatgcgag £QS.a tosszc agaatttcaa catttgcttc acgcacgaga cgsgsgactg 2040
ttcagagtgc ttccccggcg tgtcagaatc tcaaccggtc gtcagaaaga ggacgtatcg 2100
gaaactctgt gccattcatc atctgctggg gcgggctccc gagattgctt gctcggccfcg 2160
cgatctggtc aacgtggacc tggatgactg tgtttctgag caataaatga cttsasccsg 2220
gtatggctgc cgatggttat cttccagatt ggctcgagca caacctctct gagcgcafctc 2280
gcgagtggfcg ggacttgaaa cctggagccc cgaagcccaa agccaaccag csaaagcagg 2340
acaaccgccg gggtctggtg cttcctggct acaagtacct cggacccttc ascggactcg 2400 acasgcggga acccgtcaac gcggcggacg cagcggccct cgagcacgac aaggcctacg 2460 accagcagct caaagcgggt gacaatccgt acctgcggta taaccacgcc gacgccgagt 2520 ttcaggagcg tctgcaagaa gatacgtctt ttgggggcaa cctcgggcga gcagtctfccc 2580 aggccaagaa gcgggttctc gaacctctcg gtctggttga ggaaggcgct aagacggcfcc 2540 ctggaaagaa acgtccggta gagcagtcgc cacaagagcc agactcctcc tcgggcatcg 2700 gcaagacagg ccagcagccc gctaaaaags gactcaattt tggtcagact ggegactcag 2760 agtcagtccc cgatccacaa cctctcggag aacctccagc aacccccgct gctgtaggac 2820 ctactacaat ggcttcaggc ggtggcgcac caatggcaga caataacgaa ggcgccgacg 2880
PL 222 683 B1
gagtgggtaa tgcctcagga aattggcatt gcgattccac atggctgggc gacagagtca 2940
tcaccaccag cacccgcacc fcgggccfctgc ccacctacaa taaccacctc ! fcacaagcaaa 3000
tctccagtgc ttcaacggag gccagcaacg acaaccacta cttcggctac agcaccccct 3060
gggggtattt tgattfccaac agatCccact gccacttttc accacgtgac tggcagcgac 3120
tcatcaacaa caattgggga ttccggccca agagactcaa cttcasiac tc ttcaacatcc 3130
aagtcaagga ggtcacgacg aatgatggcg tcacaaccat cgctaataac cttaccagca 3240
cggttcaagt cttctcggac tcggagtacc agcttccgta cgtcctcggc tctgcgcacc 3300
agggctgcct ccctccgttc ccggcggacg tgttcatgat tccgcaatac ggctacctga 3360
cgctcaacaa tggeagccaa gccgtgggac gttcatcctt ttactgcctg gaatatttcc 3420
cttcfccagat gctgagaacg ggcaacaact ttaccttcag ctacaccttt gaggaagtgc 3480
ctttccacaa cagctacgcg cacagccaga gcctggaccg gctgatgaat cctctcatcg 3640
accaatacct gtattacctg aacagaactc aaaatcagtc cggaagtgcc caaaacaagg 3600
acttgctgtt tagccgtggg tctccagctg gcatgtctgt tcagcccaaa aactggctac 3660
ctggaccctg ttstcggcag cagcgcgttt ctaaaacaaa aacagacaac aacaacagca 3720
attttacctg gactggtgct tcaaaatata acctcaatgg gcgtgaatcc atcatcaaec 3700
ctggcactgc tatggcctca cacaaagaca acgaagacaa gttctttccc atgagcggtg 3340
tcatgstttt tggaaaagag agcgccggag cttcaaacac tgcattggac aatgtcatga 3900
ttacagacga agaggaaatfc aaagccacta accctgtggc caccgaaaga tttgggaccg 3960
tggcagtcaa tttccagagc agcagcacag accctgcgac cggagatgtg catgctatgg 4020
gagcattacc tggcatggfcg tggcaagata gagacgtgfca cctgcagggt cccatttggg 4080
ccaaaattcc tcacacagaC ggacactttc acccgtctcc tcttatgggc ggctttggac 4140
tcaagaaccc gcctcctcag atcctcatca aaaacacgcc tgttccfcgcg aatcctccgg 4200
cggagttetc agctacaaag ttfcgcttcat tcatcaccca atactccaca ggacaagtga 4260
gtgtggaaat tgaatgggag ctgcagaaag aaaacagcaa gcgctggaafc cccg&agtgc 4320
agtacacatc caattatgca aaatctgcca acgttgattt tactgtggac aacaatggac 4330
ttfcatactga gcctcgcccc attggcaccc gttaccfctac ccgtcccctg taattacgtg 444 0
ttaatcaata aaccggttga ttcgtfctcag ttgaactttg gtctcctgtc cttcttatct 4500
tatcggttac catggttata gcttacacat taactgcttg gttgcgcttc gcgataaaag 4560
acfctacgfcca tcgggttacc cctagtgatg gagttgccca ctccctctct gcgcgctcgc 4620
tcgctcggtg gggcctacgg accaaaggtc cgcagacggc . agagcfcctgc tctgccggcc 4680
ccaccgagcg agcgagcgcg cagagaggga - gtgggcaa 4718
PL 222 683 B1
e210> 7 <21I> 4S7S <212> DNA <213> 3erotyp 2 wirusa stowarzy szonego s aćsnowiruBeni
<4O0> 7 tCggccactc cctctctgcg cgctcgctcg ctcactęagg ccgggcgacc asaggtcgcc 50
sgacgcccgg gctttgcccg ggcggcctca gtcagcgagc gagcgcgcag acagggagtg 120
gccaactcca tcactagggg ttcctggagg ggtggagtcg tgacgtgaat tscgucatag ISO
ggttagggag gtcctgtafct agaggtcacg tgagtgtttt gcgacatttt gcgacaccat 240
gtggtcacgc tgggtattta agcccgagtg agcacgcsgg gtctccattfc ucssccooca 300
ggtttgaacg cgcagccgcc atgccggggt tttacgagat tgtgactaag gtccccagcc 360
accttgacgg gcatctgccc ggcatttctg acagctttgt gaactgggżg gccgagaEgg 420 aatgggagtc gccgccagat tctgacatgg atctgaatct gattgagcag gcacccctga 430 ccgtggccga gaagctgcsg cgcgactttc tgacggaatg gcgccgtgtg agtaaggccc 540 cggaggccct tttctttgtg caatttgaga agggagagsg ctacttccac atgcacgtgc 600 tcgtggaaac caccggggtg aaatccatgg ttttgggacg tttcctgagt cagattcgcg 660 aaaaactgafc tcagagaatt taccgcggga tcgagccgac tttgccaaac tggttcgcgg 720 tcacaaagac eagaaatggc gccggaggcg ggaacaaggt ggtggatgag tgctacatcc 780 ccaattacfct gctccccaaa scccagcctg agctccagtg ggcgtggacfc astatggasc 840 agtatttaag cgccfcgtttg aatctcacgg agcgtaaacg gttggtggcg cagcatcfcga SOO egeacgtgtc gcsgacgcag gagcagaaca aagagaatca gaatcccaat tctgatgcgc S60 cggtgatcag atcaaaaact tcagccaggt acatggagct ggtcgggtgg ctcgtggaca 1020 aggggattac ctcggagaag cagtggatcc aggaggacca ggcctcatac atctccttca 1030 atgcggcctc caactcgcgg tcccaaatca aggctgcctt ggacaatgcg ggaaagatta 1140
cgagcctgac taaaaccgcc cccgaccacc tggtgggcca gcsgcccgtg gaggacattt 1200
ccagcaatcg gatttataąa atfcttggaac taaacgggta cgatccccaa tacgcggctt 1260
ccgtcfcttct gggatgggcc acgaaaaagt tcggcaagag gaacaccatc tggctgtttg 1320
ggcctgcaac taccgggaag accaacatcg cggaggccau agcccacact gtgcccttct 1330
acgggtgcgt aaactggacc aatgagaact ttcccttcaa cgactgtgtc gacaagatgg 1440
tgatctggtg ggaggaggga aagatgaccg ccaaggtcge ggagtcggcc aaagccattc 1500
tc3ga3gaag caagatgcgc gfcggaccaga aatgcaagtc cfccggcccsg atagacccga 1560
ctcccgtgat cgtcacctcc aacaccaaca tgtgcgccgt gattgacggg aactcaacga 1620
ccttcgaaca ccagcagccg ttgcaagacc ggatgfctcaa atttgaactc acccgccgtc 1680
tggatcatga ctttgggaag gtcaccaage aggaagtcaa agactttttc cggtgggcaa 1740
PL 222 683 B1 aggatcacgt ggttgaggtg gagcatgaat tctacgtcaa aaagggtgga gccaagaaaa 1800 gacccgcccc cagtgacgca gafcataagtg agcccaaacg ggcgcgcgag tcagttgcgc 1860 agccatcgac gtcagacgcg gaagcttcga tcaactacgc sgacaggtac caaascaaat 1920 gttctcgtca cgtgggcatg aatctgatgc tgtttccctg cagacaatgc gagagaatga 1980 atcagaatfcc aaatatctgc ttcactcacg gacagaaaga ctgtttagag tgctttcccg 2040 tgtcagaatc tcsacccgtt tctgtcgtca aaaaggcgta tcagaaactg tgctacattc 2100 atcatatcat gggaaaggtg ccagacgctt gcactgcctg cgatctggtc aatgtggatt 2160 tggatgactg catctttgaa caataaatga tttaaatcag gtatggctgc cgatagttać 2220
cttccagatt ggctcgagga cactctctct gaaggaataa gacagtggtg gaagctcaaa 2230
cctggcccac caccaccaaa gcccgcagag cggcataagg acgacagcag gggtcttgtg 2340
cttcctgagt acaagtacct cggacccttc aacggactcg acaagggaga gccggtcaac 2400
gaggcagacg ccgeggccct cgagcacgta caaagcctac gaccggcagc tcgacagcgg 2460
agacaacccg tacctcaagt acaaccaegc cgacgcggag tttcaggagc gccttaaaga 2520
agatacgtct tttgggggca acctcggacg agcagfecttc caggcgaaaa agagggttct 2530
tgaacctctg ggcctggttg aggaacctgt taagacggct ccgggaaaaa agaggccggt 2640
agagcactct cctgtggagc cagactcctc ctcgggaacc ggaaaggcgg gccagcsgcc 2700
tgcaagaaaa agattgaatt ttggtcagac tggagacgca gactcagtac ctgaccccca 2760
gcctctcgga cagccaccag cagccccctc tggtctggga actaatacga tggctacagg 2320
cagtggcgca ccaatggcag acaataacga gggcgccgac ggagtgggta attcctccgg 2880
aaattggcat tgcgattcca catggatggg cgacagagtc atcaccscca gcacccgaac 2940
ctgggccctg cccacctaca acaaccacct ctacaaacaa atttccagcc aatcaggagc 3000
ctcgaacgac aatcactact ttggctacag caccccttgg gggtattttg acttcaacag 3060
attccactgc cactctfccac cacgtgactg gcaaagactc atcaacaaca actggggatt 3120
ccgacccaag agactcaact tcaagctctt taacattcaa gtcaaagagg tcacgcagaa 3180
tgacggtacg acgacgattg ccaataacct taccagcacg gttcaggtgt ttactgactc 3240
ggagtaccag ctcccgtacg tcctcggctc ggcgcatcaa ggatgcctcc cgccgttccc 3300
agcagacgtc ttcatggtgc cacagtatgg atacctcacc ctgaacaacg ggagtcaggc 3360
agtaggacgc tcttcatttt actgcctgga gtactttcct tctcagatgc tgcgtaccgg 3420
aaacaacttt accctcagct acacttttga ggacgttcct ttccacagca gctacgctca 3480 cagccagagt ctggaccgtc tcatgaatcc tctcatcgac cagtacctgt attacttgag 3540 cagaacaaac actccaagtg gaaccaccac gcagtcaagg cttcagtttt ctcaggccgg 3600 agcgagtgac attcgggacc agtctaggaa ctggcttcct ggaccctgtt accgccagca 3660
PL 222 683 B1
gcgagtatca aagscatctg ccgstsscse eaacagtgaa tact cgtcga ctggagctac 3720
caagtaceac cccaacggca csgsccctcc ggcgaatccg gccatggcaa gccacaagga 3750
cgatgaagaa aagttttttc cfccagagcgg ggttctcacc tttgggaagc aaggctcaga 3840
gaaaacaaat gtgaacattg aaaaggtcac gsttacagac gaagaggaaa tcggaacaac 3S00
caatcccgtg gctacggagc agtatggttc tgtatctacc aacctccaga gaggcaacag 3360
aeaagcagct accącagatg tcaacacaca aggegttctt ccaggcatgg tctggcagga 4020
cagagatgtg taccttcagg ggcccatctg ggcaaagatt ccacacacgg acggacattt 4GS0
tcacccctct cccctcatgg gcggattcgg acttaaacac cctcctccac agattctcat 4140
caagaacacc ccggtacctg egaatccttc gaccaccttc agtgcggcaa agtttgcttc 4200
cttcatcaca cagtactcca cgggacacgg tcagcgtgga gatcgagtgg gagctgcaga 1260
aggaaaacag caaacgctgg aatcccgaaa ttcagtacac ttccaactac aacaagtctg 4320
ctaatcgtgg acttaccgtg gatactaatg gcgtgtattc agagcctcgc cccattggca 4380
ccagatacct gactcgtaat ctgtaattgc ttgctaatca ataaaccgtt taattcgttt 4440
cagttgaact ttggtctctg cgtatttctt tcttatctag tttccatggc tacgtagata 4500
agtagcatgg cgggttaatc attaactaca aggaacccct agtgatggag ttggccactc 4560
cctctctgcg cgctcgctcg ctcactgagg ccgggcgacc aaaggtcgcc cgacgcccgg 4620
gctttgcccg ggcggcctea gtgagcgagc gagcgegcag agagggagtg gccaa 467S
<210> β <211> 4725 <212> DiTA <213> serotyp 3 wirusa stowarzyszonego z adenowirusert <4O0> 8
ttggccactc cctctatgcg cactcgcteg ctcggtgggg cctggcgacc aaaggtcgcc 60
agacggacgt gctttgcacg tccggcccca ccgagegagc gagtgcgcat agagggagtg 120
gccaactcca tcactagagg tatggcagtg acgtaacgcg aagcgcgcga agcgagacca 180
cgcctaccag ctgcgteagc agtcaggtga cccttttgcg acagtttgcg acaccacgtg 240
gccgctgagg gtatatattc tcgagtgagc gaaccaggag ctccattttg accgcgaaat 300
ttgaacgagc agcagccatg ccggggttct acgagattgt cctgaaggtc ecgagtgacc 3SQ
tggaegagcg cetgccgggc atttctaact cgtttgttaa ctgggtggcc gagaaggaat 420
gggacgtgcc gccggattct gacatggatc cgaatctgat tgagcaggca cccctgaccg 430
cggccgaaaa gcttcagcgc gagttcctgg tggagtggcg ccgcgtgagt aaggccccgg 540
aggccctctt ttttgtccag ttcgaaaagg gggagaccta cttccacctg cacgtgctga 600
ttgagaccat cggggtcaaa tccatggtgg tcggcogcta cgtgagccag attaaagaga 660
agctggtgac cegcatctac cgcggggtcg agccgcagcfc tccgaactgg ttcgcggtga 720
PL 222 683 B1 ccaaaacgcg aaatggcgcc gggggcggga acaaggtggt ggacgsctgc tacatcccca 780 actacccgct ccccaagacc cagcccgagc tccagtgggc gtggactaac atggaccagt 840 atttaagcgc ctgtttgaat ctcgcggagc ataaacggct ggtggcgcag catctgacgc 900 acgtgtcgca gacgcaggag cagaacaaag agaatcagaa ccccaattct gacgcgccgg 9S0 tcatcaggtc aaaaacctca gccaggcaca tggagctggt cgggtggctg gtggaccgcg 1020 ggatcacgtc agaaaagcaa tggattcagg aggaccaggc ctcgtacatc tccttcaacg 1030 ccgcctccaa ctcgcggtcc cagafccaagg ccgcgctgga caatgcctcc aagatcatga 1140 gcctgacaas gacggctccg gactacctgg tgggcagcaa cccgccggag gacattacca 1200 aaaatcggafe ctaccaaatc ctggagcfcga acgggtacga tccgcagcac gcggcctccg 1260
tcfc tcctggg ctgggcgcaa aagaagttcg ggaagaggaa caccacccgg ctcttCgggc 1320
cggccacgac gggtaaaacc aacatcgcgg aagccatcgc ccacgccgtg cccttctacg 1380
gctgcgfcaaa ctggaccaat gagaactttc cctfccaacga ttgcgtcgac aagatggtga 1440
tctggtggga ggagggcaag atgacggcca aggtcgtgga gagcgccaag gccattctgg 1500
gcggaagcaa ggtgcgcgtg gaccaaaagt gcaagtcatc ggcccagatc gaacccactc 15 60
ccgtgatcgt caectccaac accaacatgt gcgccgtgat Cgacgggaac agcaccacct 1620
tcgagcatca gcagccgctg ęaggaccgga tgttfcgaatt tgaacttacc cgccgtttgg 1630
accatgactt tgggaaggtc accaaacagg aagtaaagga ctttttccgg tgggcttccg 1740
atcacgtgac tgacgtggct catgagttct acgtcagaaa gggtggagct aagaaacgcc 1300
ccgcctccaa tgacgcggat gtsagcgagc caaaacggga gtgcacgtca cttgcgcagc 1360
cgacaacgtc agacgcggaa gcaccggcgg actacgcgga cagataccaa aacaaatgtt 1920
ctcgtcacgt gggcatgaat ctgatgcttt ttccctgtaa aacatgcgag agaatgaatc 1980
aaatttccaa tgtctgtttt acgcatggtc aaagagactg t9993aatgc ttccctggaa 2040
tgtcagaatc tcaacccgtt tctgtcgtca aaaagaagac ttatcagaaa ccgtgtccaa 2100
ttcaccatat cctgggaagg gcacccgaga ttgcctgttc ggcctgcgat ttggccaatg 2160
tggacttggs tgactgtgtt tctgageaat aaatgactta aaccaggtat ggcfcgetgac 2220
ggttatcttc cagattggct cgaggacaac ctttctgaag gcattcgtga gtggtgggct 2260
ctgaaacctg gagtccctca acccaaagcg aaccaacaac accaggacaa ccgtcggggt 2340
cttgtgcttc cgggttacaa atacctcgga cccggtaacg gactcgacaa aggagagccg 2400
gtcaacgagg cggacgcggc agccctcgaa cacgacaaag cttacgacca gcagctcaag 2460
gccggtgaca acccgtaccfc caagtacaac cacgccgacg ccgagtttca ggagcgtctt 2520
caagaagata cgtcttttgg gggcaacctt ggcagagcag tcttccaggc caaaaagagg 2Ξ30
atccttgagc ctcttggtct ggttgaggaa gcagctaaaa cggctcctgg aaagaagggg 2640
PL 222 683 B1
gctgtagafcc agtctcctca ggaaccggac tcatcacctg gcgttcgcaa atcgcccaaa 3700
Co-CJC C 7CZCCS aaaaaagact asatttcggt cagactggag actcagagtc agtcccagac 3760
cctcaaccfcc tcggagaacc accagcagcc cccacaagtt tgggatctaa tacaatggct 3320
tcaęgcgoŁg gcgcaccaat ggcagacaat aacgagggtc ccgatggaot ccctaactOC 2830
ccaggaaatt ggcategcga ttcccaatgg ctgggcgaca gagtcatcac caccagcacc 2940
agaacctggg ccctgcccac ttacaacaac catctctaca agcaaatctc cagccaatca 3000
ggagcttcaa acgacaacca ctactttggc tacagcaccc cfctgggggta ttfctgaettt 3060
aacagattcc actgccactt ctcaccacgt gactggcagc gactcatν&κ caacaactgg 3120
ggattccggc ccaagaaact cagcCtcaag ctcttcaaca tccaagttag =9399tcsc9 31S0
cagaacgatg gcacgacgac tattgccaat aaccttacca gcacggttca agtgtttacg 3240
gactcggagt atcagetcce gtacgtgctc gggtcggcgc accaaggctg tctccegccg 3300
fcctccagcgg acgtcttcat ggtccctcag tatggatacc tcaccctgaa caacggaagt 3360
caagcggtgg aacgctcatc cttttactge ctggagtact tcccttcgca gatgctaagg 3420 actggaaata acttccaatt cagctatacc ttcaaggatg taccttttca cagcagctac 3480 gctcacagcc agagtttgga tcgcttgafcg aatcetctta ttgatcagta tctgfcactsc 3540 ctgaacagaa cgcaaagaac aacctctgga acaaccaacc aatcacggct gctfctttagc 3600 caggctggęc ctcagtctat gtctttgcag gccagaaatt ggctacctgg gccctgctac 3660
cggcaacaga gacttfccaaa cactgctaac gacaacaaca acagtaactt tccttggaca 3720
gccrgccaaca aatatcatct caatagccgc gactcgctgg tgaatccagg accagctatg 3730
gccagtcaca aggacgatga agaaaaattt ttccctacgc acggcaatct aatatttggc 3840
aaagaaggga caacggcaag taacgcagaa ttagataatg taatgattac ggataaagaa 3900
gagattcgta ccaccaatcc tgtggcaaca gagcagtatg gaactgtggc aaafcaacttg 3960
cagagctcaa atacagctcc cacgactgga actgtcaatc atcagggggc cctacctggc 4020
atggtgtggc aagatcgtga cgtgtacctt caaggaccta tctgggcaaa aattcctcac 4080
acggatggac actttcatcc ttctcctctg atgggaggct ttggactgaa acatccgcct 4140
cctcaaatca tgatcaaaaa tactccggta ccggcaaatc ctccgacgac tttcagcccg 4200
gccaagtttg cttcatfctat cactcagtac tccactagac aggtcagcgt ggaaattgag 4260
tgggagctac agaaagaaaa cagcaaacgt tggaatccag agatccagta cacttccaac 4320
tacaacaagt ctgttaatgt ggactttaot gfcagacacta atggtgtfcta tagtgaacct 4380
cgccctattg gaacccggta tctcacacga aacctgtgaa tcctggttaa tcaataaacc 4440
gtttaattcg tttcagttga actttggctc ttgtgcactt ctttatcttt atcttgtttc 4500
catggctact gegtagataa gcagcggcct gcggcgcttg cgcttcgcgg tttacaactg 4560
PL 222 683 B1
cćggttaata tttaactctc gccatacctc Łagtgatgga gttggccact ccctctatgc 4620
gcactcgctc gctcggtggg gcctgccgac caaaggtcgc cagacggacg cgctttgcac 4680
gtccggcccc accgagcgag cgagtgcgca tagagggagt ggccaa 4726
<210> 9 <21ł> 3098 <212> DNA <213> nowy serotyp AAV, klon 42.2 <400> 9
gaattcgccc tttctacggc tgcgtcaact ggaccaatga gas.cttt.ccc ttcaacgatt 60
gcgtcgacaa gatggtgafcc tggtgggagg agagcaagat gacgcccaag gtcgtggagt 120
ccgccaaggc cattctcggc ggcagcaagg tgcacgtgga ccaaaagtgc aagtcfctccg ISO
cccagafccga tcccaccccc gtgatcgtca cttccaacac caacatgtgc gctgtgattg 240
acgggaacag caccaccttc gagcaccagc agccgttaca agaccggatg ttcaaatttg 300
aactcacccg ccgtctggag cacgactttg gcaaggtgac aaagcaggaa gtcaaagagt 360
tcttccgctg ggcgcaggat cacgtgacca sggtggcgca tgagttctac gtcagaaagg 420
gtggagccaa caagagaccc gcccccgatg acgcggataa aagcgagccc aagcaggcct 480
gcccctcagt cgcggatcca tcgacgtcag acgcggaagg agctccggtg gactttgccg 540
ćic&ggC 6.C cs aaacaaatgt tctcgtcacg cgggcatgct tcagatactg tttccctgca 600
agacatgcga gag aatgaat cagaatttca acatttgctt cacgcacgag accagagac t 660
gttcagaatg tttccccggc gtgtcagaat ctcaaccggt cgtcagaaag aggacgtatc 720 ggaaactctg tgccattcat catctgctgg ggcgggctcc cgagattgct tgctcggect 780 gcgatctggt caacgtggac ctggatgacc gtgtttctga gcaataaatg acttaaacca 840 ggtatggctg ccgatggtta tcttccagat tggctcgaaa acaacctctc tgagggcatt 900 cgcgagtggt gggacttgaa accfcggagcc ccgaaaccca aagccaacca gcaaaagcag 960 gacgacggcc ggggćctggt gcttcctggc tacaagfcacc tcggaccctt caacggactc 1020 gacaagggag agccggtcaa cgaggcagac gccgcggccc tcgagcacga caaggcctac 1080 gacaagęagc tcgagcaggg ggacaacccg tacctcaagt acaaccacgc cgacgccgag 1140 tttcaggagc gtcttcaaga agatacgtct tttgggggca acctcgggcg agcagtcttc 1200 caggccaaga agcgggttct cgaacctctc ggtctggttg aggaaggcgc taagacggct 1260 cctggaaaga agagacccat agaatccccc gactcctcca cgggcatcgg caagaaaggc 1320 cagcagcccg ctaaaaagaa gctcaacttt gggcagaetg gcgactcaga gtcagtgccc 1380 gacccccaac ctctcggaga acctcccgcc gcgccctcag gtctgggatc tggtacaatg 1440 gctgcaggcg gtggcgcacc aatggcagac aataacgaag gcgccgacgg agtgggtaat 1500
PL 222 683 B1
gcctccggaa attggcafctg cgattccaca togctgggcg acagagtcat caccaccagc 1560
acccgcacct gggccctgcc c&cctacaac aaccacctct acaagcagat atcaaotcac 1620
agcggggcta CC3.5CgSC3.3. ccacttcttc ggetacagca ccccctgggg ctattctgac 1630
atcaacagat tccactgcca cttcfccacca cgtgactggc agcgactcat caacaacaac 1740
-ggggattcc ggcecagaaa gctgcggttc aagttgttca acatccaggt caaggaggtc 1800
acgacgaacg acggcgttac gaccatcgct aataaectfca ocagcacgat tcaggtcttc 1860
tcggactcgg agfcaccaact gccgtacgtc ctcggctctg cgcaccaggg ctgcctccct 1920
ccgttccctg cggacgtgtt catgattcc t cagtacggat atctgactct aaacaaoggc 1930
agtcagtctg tgggacgttc ctccfctctac fcgcctggagt actttccttc tcagafcgctg 2040
agaacgggca ataactttca attcagctac acctttgagg aagtgccttt ccacagcagc 2100
tatgcgcaca gccagagcct ggaceggctg atgaatcccc tcatcgacca otacctgtac 2160
tacctggccc ggacccagag cactacgggg tccacaaggg agctgcagtt ccatcaggct 2220
gagcccaaca ccatggccga gcaatcaaag aactggctgc ccggaccctg ttatcggcag 22S0
cagagactgt caaaaaacat agacagcaac aacaacagta acfcttgcctg gaccggggcc 2340
actaaatacc atctgaatgg tagaaattca ttaa ccaacc cgggcgtagc catggccacc 2400
aacaaggacg scgaggacca gttctttccc atcaacggag tgctggtttt tggcgaaacg 2460 ggggctgcca acaagacaac gcfcggaaaac gtgctsatga ccagcgagga ggagatcaaa 2520 accaccaatc ccgtggctac agaagaatac ggtgtggtct ccagcaacct gcaatcgtct 2580 acggccggac cccagacaca gactgtcaac agccaggggg ctctgcccgg catggtctgg 2640 cagaaccggg acgtgtacct gcagggtccc atctgggcca aaattcctca cacggacggc 2700 aactttcacc cgtctcccct gatgggcgga tttggactca aacacccgcc tcctcaaatt 2760 ctcatcaaaa acaccccggt acctgctaat cctccagagg tgtttactcc tgccaagfctt 2320 gcctcattta tcacgcagta cagcaccggc caggtcagcg tggagatcga gtgggaactg 2330 cagaaagaaa acagcaaacg ctggaatcca gagattcagt acacctcsaa ttatgccaag 2540 tctaataatg tggaatttgc tgtcaacaac gaaggggttt atactgagcc tcgccccatt 3000 ggcacccgtt acctcacccg taacctgtaa ttgcctgtta atcaataaac cggttaattc 3060 gtttcagttg aactttggtc tctgegaagg gcgaattc 30S3 <210> 10 <211> 3093 <212> DNA <213> nowy serotyp AAV, klon 16.3 <400? 10 gaattcgccc ttcgcaaaga ccaaagttca actgaaacga atcaaccggt ttattgątta 60 acaagtaatt acaggttacg ggtaaggfcaa cgggtgccaa tggggcgagg ctcagtataa 120
PL 222 683 B1
accccttcgt tgttgacsgc aaattccaca ttattagact tggcataatt tgaggtgtac 180
tgaatctctg gattccagcg tttgetgttt tctttctgca gttcccactc gatctccacg 240
ctgacctggc cggtgctgta ctgcgtgata aatgaggcaa actaggcagg agtaaacacc 300
ccfcggaggat tagcaggtac cggggtgttt ttgatgagaa tttgaggagg cgggtgtttg 360
agtccaaatc cgcccateag gggagacggg tgaaagtfcgc cgtccgtgtg aggaattttg 420
gcccagatgg gaccctgcag gtacacgtcc cggfctctgcc agaccatgcc gggcagagcc 480
cectggctgt tgacagtctg tgtctggggt ccggccgtag acgattgcag gttgctggag 540
accacaccgt attcttctgt agccacggga ttggtggttt tgatctcctc ctcgctggcc 600
attagcacgt tttccagcgt egtcttgttg gcagcccccg ttttgccaaa aaccagcact 660
ccgttgatgg gaaagaactg gccctcgtcg tccttgttgg tggceatgge cacgcccggg 720
ttggttaatg aatttctacc attcagatgg tatttagtgg ccccggtcca ggcaaagtta 780
ctgttgttgt tgctgtctat gttttttgac agtctctgct gccgataaca gggfcccgggc 940
agccagttct ttgattgctc ggccatggtg fctgggcccag cctgatggaa ctgcagctcc 900
ettgtggacc ccgtagtgct ctgggtccgg gccaggtagt acaggtactg gtcgatgagg 960
ggattcatca gccggtccag gctctggctg tgcgcatage tgctgfcggaa aggcacttcc 1020
tcaaaggtgt agctgaattc aaagttattg cccgttctca gcatctgaga aggaaagtac ioao
tccaggcagt agaaggagga acgtcccata gacfcgactgc cgttgtttag agtcagatat 1140
ccgtactgag gaatcatgaa cacgtccgca gggaacggag ggaggcagcc cfcggtgcgca 1200
gagccgagga cgtacggcag ttggtactcc gagtccgaga agacctgaat cgtgctggta 1260
aggttattag cgatggtcgt aacgccgtcg ttcgtcgtga cctccttgac ctggatgttg 1320
aacaacttga accgcagctt tctgggccgg aatccccagt tgttgttgat gagfccgctgc 1380
cagtcacgtg gtgagaagtg gcagtggaat ctgttgaagt caaaatagcc ccagggggtg 1440
ctgtagccga agaagtggtfc gtcgttggta gccccgctct gacttgafcat ctgcttgtag 1500
aggtggttgt tgtaggtggg cagggcccag gtgcgggtgc tggtggtgat gactctgtcg 1560
cccagccatg tggaatcgca atgccaattt ccggaggcat tacccactcc gtcggcgcct 1620
tcgttattgt etgceattgg tgcgccaccg cctgcagcca ttgtaecaga tcccagacet 1680
gagggcgcgg cgggaggttc tccgagaggt tgggggtcgg gcactgactc tgagtcgcca 1740
gtctgcccaa agttgagect ctttttagcg ggctgctggc ctttcttgcc gatgcccgtg 1300
gaggagtcgg gggattctat gggtctcttc tttccaggag ccgtcttagc gccttcctca 1860
accagaccga gaggttcgag aacccgcttc ttggcctgga agacfcgctcg cccgaggtfcg 1920
cccccaaaag acgtatcttc ttgaagacgc tcctgaaact cagcgtcggc gtggttgtac 1980
ttgaggtacg ggttgtcccc ctgctcgagc tgcttgtcgt aggccttgtc gtgctcgagg 2040
PL 222 683 B1
gCCGcgccąt ccgcc tcętfc gacccgctct cccttgtcga gtccgttgaa gggtccgsgg 2100
tacfctgfcagc caggaagcac cagaccccgg ccgtcgtcct gcttttgctg gttgęctttg 2160
ggtttcgggg ctccagcfcfct caagtcccac cac tcgcgaa tgccctcsga gaggttgtcc 2220
tcgagccaat ctggaagata accatcggca gccatscctg gtttaagtca tttattgetc 2260
agaascacag tcatccaagt ccacgtucrac cagatcgcag gccgagcaag caatctcggg 2340
sgcccgcccc agcagatgat caatggcacB gagtt tccga tacgtcctct ttctgacaac 2400
cggttgagat tctgacacgc cggggaaaca ttctgaacag tctctggtcc cgtgcgtgaa 24 60
gcsaatgttg aaattctaat tcattctctc gcatgtcttg cagggasaca gcatctgaag 2520
ca tgcccgcg tgacgagaac atttgttttg gtacctgtcg gcaaagccca ccagagctcc 25S0
ttccgcgtct gacgtcgatg gstccgcgae tgaggggcag gcccgcttog gctcgctttt 2640
atccgcgtca tcgggggcgg gcctcttgtt ggctccaccc tttctgacgt agaactcatg 2700
cgccacctca atcacgtgat cctacgocoa gcggaagaac tcttfcgactt cctgctttgt 2760
caccttgcca aagtcctgct ccagacggcg ggtgagttca aatttgaaca tccggtcttg 2820
taacggctgc tggtgctcga aggtggtgct gttcccgtca atcacggcgc acatgttggt 2880
gttggaagtg acgatcacgg gggtsssatc gatctgggcg gacgacttgc acttttggtc 2940
cacgcgcacc ttgctgccgc cgagaatggc cttggcggac tccacgacct tggccgtcat 3000
cttgccctcc tcccaccaga tcaccatctt gtcgacgcaa tcgttgsagg gaaagttctc 3060
attggtccag ttgacgcagc cgtagsaagg gcgaattc 3038
<210> 11 <211> 3121 <212? D17A <213 > nowy serotyp AAV, klon 29.3 <400> n
gaattcgccc ttcgcagaga eeaaagttca actgaaacgs atcaaccagt ttatcgafcta 60
acaagcaatt acagattacg Sgtgaggtaa cgggtgccga tggggcgagg ctcagaataa 120
gtgccatctg tgttaacagc aaagtccaca ttfcgtagatt tgtagtagtt ggaagtgtat 130
tgaatctctg ggtfcccagcg tttgctgtfct tctttctgca gctcccattc aatttccacg 240
ctgacctgtc cggtgctgta ctgcgtgatg aaegacgcca gcttagcttg actgaaggta 3 00
gttggeggat ccgcgggaac aggtgtattc ttaatcagga tctgaggagg c999t?tttc 360
agtccaaagc cccccatcag cggcgaggga tgaaagtttc cgtccgtgtg aggaatcttg 420
gcccagatag gaccctgcag gtacacgtcc cggttctgcc agaccatgcc aggtaaggct 4S0
ccttgactgt tgacggccce tacaatagga gcggcgtttt gctgttgcag gttatcggcc 540
accacgccgt actgttctgt ggccactggg tfcggtggttt taatttcttc ctcactggtt 600
PL 222 683 B1
agcataacgc tgctatagtc cacgttgcct . tttccagctc : cctgtttccc aaacattaag 660
actccgctgg acggaaaaaa tcgctcttcg ! tcgtccttgt gggttgccat agcgacaccg 720
ggatttacca gagagtctct gccattcaga . tgatacttgg tggcaccggt ccaggcaaag 780
ttgctgttgt tattttgcga cagtgtcgtg gagacgcgtt gctgccggta gcagggcccg 840
ggtagccagt ttttggcctg agccgacatg ttattaagcc cggcctgaga aaatagcaac 900
tgctgagttc ctgcggtacc tccegtggac tgagtccgag acaggtagta caggtactgg 960
tcgatgaggg ggttcatcag ccggtccagg ctttggctgt gcgcgtagct gctgtgaaaa 1020
ggcacgtcct caaactggta gctgaactca aagttgttgc ccgttctcag catttgagaa 1080
ggaaagtact ccaggcagta gaaggaggaa cggcccacgg cctaactgcc attgttcaga 1140
gtcaggtacc cgtactgagg aatcatgaag acgtccgccg ggaacggagg caggcagccc 1200
tggcgcgcag agccgaggac gtacgggagc tggtattccg agtccgtaaa gacctgaatc 1260
gtgctggtaa ggttattggc gatggtcttg gtgccttcat tctgcgtgac ctccttgacc 1320
tggatgttga agagettgaa gttgagtcfcc ttgggccgga atccccagtt gttgttgatg 13 80
agtcg-tgcc agtcacgtgg tgagaagtgg cagtggaatc tgttaaagtc aaaataeccc 1440
cagggggtgc tgtagccgaa gtaggtgttg tcgttggcgc ttcctcccga agtcccgttg 1500
gagatttgct tgtagaggtg gttgttgtag gtggggaggg cccaggttcg ggtgctggtg 1560
gtgatgactc tgtcgcccag ccatgtggaa tcgcaatgcc aatttcctga ggaactacce 1620
actecgtcgg cgccttcgtt attgtctgcc attggagcgc caccgcctgc agccattgta 1680
ccagatccca gaccagaggg gcctgcgggg ggttctccga ttggttgagg gtcgggcact 1740
gactctgagt cgccagtctg cccaaagttg agtctctttt tcgcgggctg ctggccttfcc 1800
ttgccgatgc ccgtagtgga gtctggagaa cgctggggtg atggctctac cggtctcttc 1860
tttccaggag ccgtcttagc gccttcctca accagaccga gaggttcgag aacccgcttc 1920
ttggcctgga agactgctcg tccgaggttg cccccaaaag acgtatcttc ttgcagacgc 1980
tcctgaaact cggcgtcggc gtggttatac cgcaggtacg gattgtcacc egetttgage 2040
tgctggtcgt aggccttgtc gtgctcgagg gccgctgcgt ccgccgcgfct gacgggctcc 2100
cccttgtcga gtccgttgaa gggtccgagg tacttgtagc caggaagcac cagaccccgg 2160
ccgtcgtcct gcttttgctg gttggctttg ggcttcgggg ctccaggttt cagcgcccac 2220
cactcgcgaa tgccctcaga gaggttgtcc tcgagccaat ctggaagata accatcggca 2280
gccatacctg atctaaatca tttattgttc aaagatgcag tcatccaaat ccacattgac 2340
cagatcgcag gcagtgcaag cgtctggcac ctttcccatg . atatgatgaa tgtagcacag 2400
tttctgatac gcctttttga cgacagaaac gggttaagat i tcfcgacacgg < gaaagcactc 2460
taaacagtct ttctgtccgt gagtgaagca gatatttgaa i ttctgattca i ttctctcgca 2520
PL 222 683 B1
ctgtctgcag ggaaacsgca tcagattcat gcccacgfcgs cgagaacŁtfc tgatttggta 25S0
cctatccccg fcagttgatcg aagcttccgc gtctgscgtc gafcggctecg caactgactc 2540
gcgeacccgt ttgggctcac ttafcatctgc gtcactgcrgg gcgggtctfct tcttggctcc 2700
accctttttg acgtagaatt catgctccac cccaaccacg tgatcęfcttg cccaccggaa 2760
aaagtctttg acttcctgct tggtgacctt cccaaagtca tgatccagac ggcgggtgag 2320
ttcasatttg aacatccggt cfctgcaacgg ctgctggfcgt tcgaaggtcg ttgagttccc 2830
gtcaatcacg gcgcacatgt tggtgttgga agtgacgatc scgggagccg ggtctatctg 2940
ggccgaggac ttgcatttct ggtccacccg cacctcgctc cctccg-gaa tggctttggc 2C00
cgactccacg accttggcgg tcatcttccc cfccctcccac cagstcaccs tcttgtcgae 3060
acagtcgttg aagggaaagt tctcattggt ccagttgacg cagccgcaga agggcgaatt 3120
c 3121
<21Q> 12
<211> 3121
<2l2> DHA
<213 > nowy serotyp AAV, klon 23.4
<4O0> 12
gaattcgccc ttctacggct gcgtcaactg gaccaatgag aacfcttccct tcaacgactg 60
tgccgac aag atggtgatct ggtgggagga ggggaagatg accgccaagg tcgtggagfcc 120
ggccaaagcc attctcagag gaagcaaggt gcgcgtggac csgaaatgca agtcctcggc ISO
ccagatagac ccgacfccccg tgatcgtcac ctccaacacc aacatgtgcg ccgtgattga 240
cgggaactca acgaccttcg aacaccagca gccgttgcaa gaccggatgt tcaaatttga 300
actcacccgc ogtctggatc atgactttgg gaaggtcacc aagcaggaag tcaaagactt 360
tttceggtgg gcaaaggatc acgtggttga ggtggagcac gaattctacg tcaaaaaggg 420
tggacccaag aaaagacccg cccccagtga cgcagatata agtgagccca aacgggtgcg 430
cgagtcagtt gcgcagccat cgacgtcaga cgcggaagct tcgatcaact acgcagacag 540
gtaccaaaac aaatgttctc gtcacgcggg catgaatctg atgctgtttc cctgcagaca 600
atgcgtgaga atgaatcagą attcaaatat ctgcttcact cacggacaga aagactgttt 560
agagtgcttt cccgtgtcag satctcaacc cgtttctgtc gtcaaaaagg cgtatcagaa 720
actgtgctac attcatcata tcatgggaaa ggtgccaaac gcttgcactg cctgcgatct 780
ggtcgatgtg gatttggatg actgcatctt tgaacaataa atgatttaaa tcaggtatgg 340
ctgccgatgg ttatcttcca gattggctcg aggacaacct ctctgagggc attcgcgagt 900
ggtgggcgct gaaacctgga gccccgaagc ccaaagccaa ccagcaaasg caggacggcg 950 gccggggtct ggtgcttcct ggctacaagt acctcggacc cttcaacgga ctcgacaagg 1020 gggagcccgt caacacggcg gacgcagcgg ccctcgagca cgacaaggcc tacgaccagc 10S0
PL 222 683 B1
agctcaaagc gggtgacaat ccgtacctgc ggtataacca cgccgacgcc gagtttcagg 1140
agcgtctgca agaagatacg tcttfctcggg gcaacctcgg gcgagcagtc ttccaggcca 1200
agasgcgggt tctcgaacct ctcggtctag ttgaggaagg cgctaagacg gctcctggaa 1260
agaagagacc ggtagagcca tcaccccagc gttctccaga ctccfcctacg ggcatcggca 1320
agaaaggcca gcagcccgcg aaaaagagac tcaactttgg gcagactggc gactcagagc 1380
cagŁgcccga ccctcaacca atcggagaac cccccgcagg cccctctggt ctgggatctg 1440
gtacaafcggc tgcaggeggc ggcgctccaa tggcagacaa taacgaaggc gccgacggag 1500
tgggtagtfcc ctcaggaaat tggcattgcg attccacafcg gctgggcgac tgagtcatca 1560
ccaccagcac ccgaacctgg gccctcccca cctacaacaa ccacctctac aagcaaatct 1620
ccaacgggac ttcgggagga agcaccaacg acaacaccta cttcggctac agcaccccct 1680
gggggtattt tgact t taac agattccact gccactfcctc accacgtgac tggcagcgac 1740
tcatcaacaa caactgggga ttccggccca agagactcaa cttcaagctc ttcaacatcc 1800 aggtcaagga ggtcacgcag aatgaaggca ccaagaccat cgccaataac ctcaccagca 1860
cgafctcaggt ctttacggac tcggaatacc agctcccgta cgtcctcggc tctgcgcacc 1920
agggctgcct gcctccgttc ccggcggacg tcttcatgat tccfccagtac gggtacctga 1980
ctctgaacaa tggcagtcag gccgtgggcc gttcctcctt ctactgcctg gagtactttc 2040
cttctcaaat gccgagaacg ggcaacaact ttgagttcag ctaccagttt gaggacgtgc 2100
cttttcacag cagctacgcg cacagccaaa gcctagaccg gcfcgatgaac cccctcatcg 2160
accagtacct gtactacctg tctcggactc agtccacggg aggtaccgca ggaactcagc 2220
agttgctatt ttctcaggcc gggcctaata acatgfccggc tcaggccaaa aactggctac 22Θ0
ccgggccctg ctaccggcag taacgcgtct ccacgacact gtcgcaaaat aacaacagca 2340
actttgtctg gaccggtgcc accaagtatc atctgaatgg cagagactct ctggtagatc 2400
ccggtgtcgc tatggcaacc cacaaggacg acgaagagcg attttttccg tccagcggag 2460
tcataafcgtt tgggaaacag ggagctggaa aagacaacgt ggactatagc agcgtcatgc 2520
taaccagtga ggaagaaatt aaaaccacca acccagtggc cacagaacag tacggcgtgg 2580
tggccgataa cctgcaacag caaaacgccg cfccctattgt aggggccgtc aacagtcaag 2640
gagccttacc tggcatggtc tggcagaacc gggacgtgta cctgcagggt cctacctggg 2700
ccaagattcc tcacacggac ggaaactttc atccctcgcc gctgatggga ggctttgaac 2760
tgaaacaccc gcctcctcag afccctgatta agaatacacc tgttcccgcg gatcctccaa 2820
cfcaccttcag tcaagcfcaag ctggcgtcgt fccatcacgca gtacagcacc ggacaggfcca 2880
gcgtggaaat tgaatgggag ctgcaggaag aaaacagcaa acgctggaac ccagagattc 2940
aatacactfcc caactactac aaatctacaa atgtggactt tgctgttaac acagatggca 3000
PL 222 683 B1 cctsttctga gcctcgcccc atcggcaccc gtfcacctcac ccgtaatctg taattgcttg 3060 ttaatcaata aaccggttga ttcgfcttcsg ttgaactttg gtctctgcga sgggcgaatt 3120
C 3121 <210? 13 =211? 3121 <212? 52ΓΑ <213? ncwy ssrctyp AAV, klon 25.5 <400? 13 gaattcgccc ttcgcgagac caaagttcaa ctgaaacgaa tcaaccggtt tattgattaa 60 caagcaatta cagattacgg gtgaggtaac gggtgccgat ggggcgaggc tcagaataag 120 tgceatctgt gttaacagca aagtccacat ttgfcagattt gtagtagttg gaagtgtatt ISO gaatcttctgg gttccagcgt ttgctgtttt ctttctgcag ctcccattca atttccacgc 240 tgacctgtcc ggtgctgtac tgcgtgatga acgacgccag ctćagcttga ctgaaggtag 300 ttggaggatc cgcgggaaca ggtgtattct taatcaggat ctgaggaggc gggtgtttca 360 gtccaaagcc tcccatcagc ggcgagggat gaaagtttcc gtccgtgtga ggaatcttgg 420 cccagatagg accctgcagg tacacctccc ggttctgcca gaccatgcca ggtaaggctc ISO cttgactgtc gacggcccct acaataggag cggcgttttg ctgttgcagg ttatcggcca 340 ccacgccgta ctgttctgtg gccactgggt tggtggtttt aatttcttcc tcactggtta £00 gcataacgct gctatagtcc acgfctgtctt ttccagctcc ctgtttccca aaeattaaga SSO ctccgctgga cggaaaaaat cgctcttcgt cgtccttgcg ggttgccata gcgacacccg 720 gatttaccag agagtctctg ccattcagat gatacttggt ggcaccggtc caagcaaagt 730
tgctgttgtc attttgcgac agtgtcgtgg agacgcgttg ctgccggtag cacggcccgg 940
gtagccagtt tttggcctga gccgacatgfc tattaggccc ggcctgagaa aatagcaact 900
gctgagttcc tgccgtacct cccgtggact gsgtccgaga caggtagtac aggtactggt 960
cgatgagggg gttcatcagc cggtccaggc ttćggctgtg cgcgtagctg ctgtgaaaag 1020
ccacgtcctc saactggtag ctgaacfccaa agttgttgcc cgttctcagc atttgagaag 1050
gaaagtactc caggcsgtag aaggaggaac agcccacggc ctgactgcca ttgttcagag 1140
tcaggtaccc gtactgagga atcatgaaga cgtccgccgg gaacggaggc aggcagccct 1200
ggtgcgcaga gccgaggacg tacgggagct ggtaćtccga gtccgtaaag scctgaatcg 1260
tociscgtsag gttattggcg atggtcttgg tgccttcatt ctgcgtgacc tccttgaccfc 1320
ggatgttgaa gagcttgaag ttgaggctct tgggccggaa tccccagttg ttgttgatga 1360
gtcgctgcca gtcacgtggt gagaagtggc agtggaatct gttaaagtca aaataccccc 1440
agggggtgct gtagccgaag taggtgttgt cgttggtgct tcctcccgaa gtcccgttgg 1500
PL 222 683 B1
agattfcgctt □tagaggtgg ttgttgtagg tggggagggc ccaggttcgg [ gtgctggtgg 1560
tgatgactcc gtcgcccagc catgtggaat cgcaatgcca atttcctgag l gaactaccca 1620
ctccgtcggc gcctfccgtta ttgtctgcca ttggagcgcc accgcctgca . gceattgtae 1680
cagatcccag accagagggg cctgcggggg gttctccgat tggttgaggg tcgggcactg Π40
actctgagtc gccagtctgc ccaaagttga gtctcttttt cgcgggctgc tggcctttct 1800
tgccgatgcc cgtagaggag tctggagaac gctggagega tggctctacc ggtctcttct 1860
ttecaggagc cgtcttagcg ccttcctcaa ccagaccgag aggttcgaga acccgcttct 1920
tggcctggaa gactgctcgc ccgaggttgc ccccaaaaga cgtatcttct tgcagacgct 1980
cctgaaactc ggcgtcggcg tggttatacc gcaggtacgg attgtcaccc gctttgagct 2040
gctggtcgta ggccttgtcg tgctcgaggg ccgctgcgtc cgccgcgttg acgggctccc 2100
ccttgtcgag fcccgttgaag ggtccgaggt acttgtagcc aggaagcacc agaccccggc 2160
cgtcgtcctg cttttgctgg tfcggctttgg gcfctcggggc tccaggfcttc agcgcccacc 2220
actcgcgaat gccctcagag aggttgtcct cgagccaatc tggaagataa ccatcggcag 2280
ccataccfcga tttaaatcat ttattgttca aagatgcagt catccaaatc cacattgacc 2340
agategcagg cagtgcaagc gtctggcacc tttcccatga tatgatgaat gtagcacagt 2400
ttctgatacg cctttttgac gacsgaaacg ggttgagatt ctgacacggg aaagcactct 2460
aaacagtcct tctgtccgtg agtgaagcag atatttgaat tctgattcat tctctcgcat 2S20
tgtctgcagg gaaacagcat cagattcatg cccacgtgac gagaacattt gttttggtac 2580
ctgtctgcgt agttgatcga agcttccgcg fcctgacgtcg atggctgcgc aacfcgactcg 2640
cgcacccgtt tgggctcact tatatctgcg tcactggggg cgggtctttt cttggctcca 2700
ccctttttga cgtagaatcc atgctocacc tcaaccacgt gatcctttgc ccaccggaaa 2760
aagtctttga cttcctgctt ggtgaccttc ccaaagtcat gatccagacg gcgggtgagt 2S20
tcaaatttga acatccggtc ttgcaacggc tgctggtgtt cgaaggtcgt tgagttcccg 2880
tcaatcacgg cgcacatgtt ggtgttggag gtgacgatca cgggagtcgg gtctatctgg 2940
gccgaggact fcgcatttctg gtccacgcgc accttgcttc ctccgagaat ggctttggcc 3000
gactccacga ccttggcggt catcttcccc tcctcccacc agatcaccat cttgtcgaca 3060
cagtcgttga agggaaagtt ctcattggtc cagttgacgc agccgtagaa agggcgaatt 3120
C 3121 <210> 14 <211> 33.31 <212> DMA <213> nowy serotyp AAV, klon 1-3 <400> 14 gcggccgcga attcgccctt ggctgcgtca actggaccaa tgagaacttt cccttcaatg 60
PL 222 683 B1
attęcgtcga CHsg&fcgMC.g atctggtggg oęgs.cggcći2 gstcacggcc aaggtcgtgg 12 0
agŁccgccaa ągccattctc ggcggcagca acgtgcccgt ggaccaaaag tgcaagtcgt ISO
ccgcccagat cgacccca.ec cccgtgatcg tcacctccaa caccaacafcg tgcgccgtga 240
ttgacgggaa cagcaccacc ttcgagcacc agcagcctct cea.ggaccgg atgtttaagt 300
tcgaactcac ccgccghctc gagcacgach tt ggcaaggt gacaaagcag gaagtcaaag 360
agttcttccg ctgggccagt gatcacgtga ccgaggtggc gcacgaghth tacgtcagas 420
3.53 g j ocs. 3c c&gcaaaaga cccgcccccg atgacgcgga Laaaagcgag cccaagcggg 430
cc tccccc“c agtcgcggat ccatcgacgt cagacgcgga aggagctccg gtggactttg 540
ccgacsggta ccaaaacaaa tgttctcgcc acgcgggcat gcttcagatg ctotttccct 500 gcaaaacgtg cgagagaatg aatcggaatt tcaacatttg cttcacacac ggggtcagag 660 actgctcaga gtgtttCCCC ggcgtgtcag aatctcaacc ggtcgtcaga aagaggacgt 720 atcggaaact ccgtgcgatt catcatctgc tggggcgggc tcccgagact gcttgctcgg 730 cctgcgatct ggtcaacgtg gacctggatg actgtgtttc Łgagcsataa atgacttaaa 340 ccaggćatgg ctgccgatgg ttatcttcca gattggcfccg aggacaacct ctctgagggc 900
attcgcgagt ggtgggcgct gaaacctgga gccccgaagc CCEi2CCC2.ć CCo.CCći5.ćQ 350
eaggacgacg gccggggtct ggtgctccct ggetacaagt acctcggacc chtcaacgga 1020
ctcgacaagg gggagcccct caacgcggcg gacgcagcgg cccfccgagca cgacaaggct 1030
tacgaccagc agctgcaggc gggtgacaat ccgtacctgc gghataacca cgccgscgcc 1140
gagtttcagg agcgtctgca agaagatacg tcttttggcg acsacctcgg gcgagcagtc 1200
ttccaggcca agasgcgggc tctcgaacct ctcggtctgg ttgaggasgg cgctaagacg 1260
gctcctggaa agaagagacc ggtagagcca teaccccagc gttctccaga ctcctctacg 1320
ggcatcggca agaaaggcca acagcccgcc agaaaaagac tcaattttgg tcagactggc 1380
gactcagagt cagttccaga ccctcaacct ctcggsgaac ctccagcagc gccctctggt 1440
gtgggaccta atacaatggc tgcaggcggt ggcgcaccaa tggcagacaa taacgaaggc 1500
gccgacggag tgggtagttc ctcgggaaat tggcattgcg attccacatg gctgggegac 15 60
agagtcatca ccaccagcac ccgaacctgg gccctgccca cctacaacaa ccacctctac 1620
aagcaaatct ccaacgggac atcgggagga gccaccaacg acaacaccta cttcggctac 1630
agcaccccct gggggtattt tgactttaac agattccact gccacctttc accacgtgac 1740
cggcagcgac tcatcaacaa caactgggga ttccgaccca agagactcag cttcaagctc 1300 ttcaacatcc aggtcaagga ggtcacgcag aatgaaggca ccaagaccat cgccaataac 1860 ctcaccagca ccatccaggt gtttacggac tcggagtacc agctgccgta cgttetcggc 1920 tctgtccacc agggctgcct gcctccgttc ccggcggacg tgttcatgat Łccccagtac 1980
PL 222 683 B1
ggcfcaccfcaa . cacfccaacaa cggtagtcaa gccatgggac gctcctcctt ctactccctg 2040
gaatactttc ettegeagat gctgagaacc ggcaacaact tccagtttac ttacaccttc 2100
gaggacgtgc ctfctccacag cagctacgcc cacagctaga gcttggaccg gctgataaat 2160
cctctgattg accagtacct gtactacttg tctcggactc aaacaacagg aggcacggca 2220
aatacgcaga ctctgggcct cagccaaggt gggcctaata caatggccaa tcaggcaaag 2280
aactagctgc caggaccctg ttaccgccaa caacgcgtct caacgacaac cgggcaaaac 2340
aacaatagca actttgcctg gactgctggg accaaatacc atctgaatgg aagaaattca 2400
ttggctaatc ctggcatcgc tatggcaaca cacaaagacg acgaggagcg tttttttccc 24S0
agcaacggga tcctgatfctt tggcaaacaa aatgcfcgcca gagacaafcgc ggattacagc 2520
gatgtcatgc tcaccagcga ggaagaaafcc aaaaccacta acectgtggc tacagaggaa 2580
tacggtatcg tggcagataa cttgcagcag caaaacacgg ctcctcaaat tggaactgtc 2640
aacagccagg gggccttacc cggtatggtc tggcagaacc gggacgtgta cctgcagggt 2700
cccatctggg ccaagattcc tcacacggac ggcaaettcc acccgtctcc gctgatggge 27S0
ggctttggcc tgaaacatcc tccgcctcag atcctgatca agaaeacgcc tgtacctgcg 2820
gatcctccga ccaccttcaa ccagtcaaag ctgaactctt tcatcacgca atacagcacc 2380
agacaggtca gcgtggaaat fcgaatgggag ctgcagaagg aaaacagcaa gcgctggaac 2940
cocgagafc.ee agtacacctc caactacfcac aaatctataa gtgtggactt tgctgttaat 3000
acagasggcg tgtactctga accccgcccc attggcaccc gttacctcac ccgcaafcccg 3060
taattgcctg ttaatcaata aaccggttga ttcgtttcag ttgaacfcttg gtctctgcga 3120
agggcgaatt c 3131
<21Q> 15 <211> 3127 <212> DNA <213> nowy serotyp AAV, klon 13-3b <400> 15
gcggccgcga attcgccctt cgcagagacc aaagttcaac tgaaacgaat caaccggttt 60
attgattaac atgcaattac agatfcacggg tgaggtaacg agtgccaata gggcgaggct 120
cagagfcaaac accctggccg teaacggcaa agtccacace agtctgcfctt tcaaagfctgg 180
aggfcgtactg aatctccggg tcccagcgct tgctgtfcttc ctfcctgcagc tcccactcga 240
cttccacgct gacttgtccg gtgcfcgtact gtgtgatgaa cgaagcaaac ttggcaggag 300
taaacacctc cggaggatta gcgggaacgg gagtgttctt gateaggate tgaggaggcg 360
gatgtttaag tccaaagccg cccafccaaag gagacgggtg aaagttgcca tccgtgtgag 4 20
gaatcttggc ccagatggga ccctgcaggt acacgfccccg gttcfcgccag accatgccag 480
PL 222 683 B1
□tcsggcżcc ctggttgttg scsacctgtc tctgegcfcgc agtattaacc gcfctgfcaagt 540
ucctgcfcgsc tatcccgtat tcttcccfcgg cfcacaggafcfc agtaggacga atfctctfccfct □ 00
csttfcgtcat taacacattt tccaatgtag ttctgttagfc fcgctccagtt tfctccaaaaa 550
ccaggactcc gctggatggg aaaaagcggt cctcgtcgtc cttgtgagtt gccatggcga 720
cgccgggatc aaccaacgag tttctgccgfc fccacgtgafca tttggtggca ccagtccaag 780
caaagfctgcfc gttgttgttt tgatccagcg ttfctggagac cctttgttgc cggaagcagg 340
gcccaggcaa ccaactcttg gcttgttcgg ccstagtcga aggcccgccc tggtaaaac fc 900
gcagtfccccg attgccagct gtgccfcccfcc ggtcacfccfcg tgfctctggcc aggtagtaca 950
agtactggtc gatgagggga ttcatcagcc ggtccaggct ctggctgtgt gcgtagctgc ±020 igt994aagg cacgtcctcg aagctgfcagc tgaactcaaa gtcgttgccc gttctcagca lOSO tctgagaggg gaagtactcc aggcagtaga aggaggaacg tcccacagac tgactgccat 1140 tgttgagagt caggtagccg taccgaggaa tcataaagac gćccgccggg aacggaggca 1200 ggcaęccctg gtgcgcagag ecgaggacgt acggcagctg gtattccgag tccgagaata 12S0 cctgaatcgt gctggtaagg ttattagcga tggtcgtaac gccgEcattfl gtcgtgacct 1320 ccttgacctg gatattgaag agcttgaacc gcagcttctt gggccggaat ccccagttgt 1330 tgttgatgag tcgcfcgccag tcacgtggtg agaagtggca gtggaatctg ttaaagtcaa 1440 astsccccca gggggtgctg tagccgaagfc aggtgttgtc gttggtacta cctgcagttt 1500
cactggagst ttgctcgtag aggtggttgt tgtaggtggg csgggcccag gttcgggtgc 1560
tggtggtaat gactctgtcg cccegccatg tggaatcgca atgccaatfct cctgaggcat 1620
tacccactcc gtcggcacct tcgttattgt ctgccsttgg tgcgccaccg cctgcagcca 1680
ctgtaccaga tcccacacta gagggcgctg ctggaggttc tccgagaggt tcagggtcgg 1740
ggactgactc Łgagtcgcca gtctgaccga aattgagtct ctttctggcg ggctgctggc 1300
ccttcttgcc gatgcccgtg gaggagtcgg gggaacgctg sggtgacggc tctaccggtc 1860
tcttctttgc aggagccgtc ttagcgcctt cctcaaccag accgagaggt tcgagaaccc 1920
gcttcttggc ctggaagact gctcgcccga ggttgccccc aaatgacgta tcttcttgca 1980
gacgctcctg aaactcggcg tcggcgtggt tataccgcag gtacgggtcg tcacccgcat 2 040
tgagctgctg gtcgtaggcc ttgtcgtgct cgagggccgc fcgcgtccgcc gcgttgacgg 210G
gctccccctt gtcgagtccg ttgaagagtc cgaggtactt gtagccaaga agcaccagac 2160
cccggccgtt gtcctgcttt tgctggttgg ccttgggttt cggggctcca ggtttcaggt 2220
cccaccactc gcgaatgccc tcagagaggt tgtcctcgag ccaatctgga agataaccat 2280
cggcagccat acctgattta aatcatttat tcttcaaaga tgcagtcatc caaatccaca 2340
ttgaccagat cgcaggcagt gcaagcgtct ggcacctttc ccatgatatg atgaatgtag 2400
PL 222 683 B1
tac agtt tct gatacgcctt tttgacgaca gaaacgggtt tagattctga cacgggaaag 2460
cactctaaac agtctttctg tccgtgagtg aagcagatat ttgaactctg attcattctc 2520
tcgcattgtc tgcagggaaa cagcatcaga ttcatgccca cgtgacgaga acatttgttc 2580
tggtacctgt ctgcgtagtt gatcgaagct tccgcgtctg acgtcgatgg ctgcgcaact 264 0
gactcgcgca cccgtttggg ctcacttata tctgcgtcac tgggggcggg tctfcttcttg 2700
gctccaccct ttttgacgta gaattcatgc tccacctcaa ccacgtaatc ctttgcccac 2760
cggaaaaagt ctttgacttc ctgcttggtg accttcccaa agtcatgatc cagacggcgg 2820
gtgagttcaa atttgaacat ccggtcttgc aacggctact ggtgttcgaa ggtcgttgag 2880
ttcccgtcga tcacggcgca catgttggtg ttggagatga cgatcgcggg agtcgggtct 2910
atctgggccg aggacttgca tttctggtcc acgcgcacct tgcttcctcc gagaatggct 3000
ttggccgact ccacgacctt ggcggtcatc fctcccctcct cccaccagat caccatcttg 3060
tcgacacagt cgttgaaggg aaagfctctea ttggtccagt tgacgcagcc gtagaaaggg 3120
cgaattc 3127 <210? 16 <211? 3106 <212? DNA <213? nowy serotyp AW, klon 24-1 <400? 16
gcggccgcga attcgccctt cgcagagacc aaagttcaac tgaaacgaat caaccggttt 60
attgattaac aagtaattac aggttacggg tgaggtaacg ggtgccaatg gggogaggct 12 0
cagtataaac cccttcgttg ttgacagcaa attccacatt attagacttg gcataatttg 180
aggtgtactg aatctetgga ttccagcgtt tgctgttttc tttctgcagt tcccactcga 240
ćctccacgct gacctggccg gtgctgtact gcgtgataaa tgaggcaaac ttggcaggag 300
taaacacctc tggaggatta goaggtaccg gggtgttttt gatgagaatt tgaggaggcg 360
ggtgtttgag tccaaatccg cccatcaggg gagacgggtg aaagttgccg tccgtgtgag 420
gaattttggc ccagatgaga coctgcaggc acacgtcccg gttctgccag accaćgccgg 430
gcagagcccc ctggctgttg acagtctgtg tctggggtcc ggccgtagac gattgcaggt 540
tgctggagac cacaccgtat tcttctgtag ccacgggatt ggtggttttg atctcctcct 600
cgctggćcat tagcacgttt tccagcgttg tcttgtcggc agcccccgtt ttgccaaaaa S60
ccagcactcc gttgatggga aagaactggt cctcgtcgtc cttgttggtg gccatggcta 720
cgcccgggtt ggttaatgaa tttctaccat tcagatggta tttagtggcc ccggtccagg 780
caaagttact gttgttgttg ctgtctatgt tttttgacag tctctgctgc cgataacagg 340
gtccgggcag ccagttcttt gattgctcgg ccatggtgtt gggcccagcc tgafcggaact 900
gcagctccct tgfcggacccc gtagtgctct gggtccgggc caggtagtac aggtactggt 960
PL 222 683 B1
cgatgagggg atteateage cggtetaggc tctęgctgtg CeLCćLt 2Cj£^-S 1020
sagatgtaa ctgaatteaa age ta ctgee cgttctcsgc atctgagaag 1030
gaaagtactc caggcagtag aaggsggaac gtcccacaga ctgactgccg ttgtttagag 1140
tcagatatce gtactgagga atcatgaaca cgtccgcagg gaacggaggg aggcagccct 1200
ggfcgcgcaga gccgaggacg tacggcagtfc ggtscfcecga gtccgagaag accfcgaatcg 1260
tgctggtaag gttattagcg atggtcgtaa cgecgtcgtt cgtcgtgacc tccttgaccfc 1120
ggafcgttgaa csacfctgaac cgcagctttc tgggccggaa tccccagttg fctattgatga 1380
gtcgctgccs gtcacgtggt gagaagfcggc agtggaatct gttgaagtca aaatagcccc 1440
agggggtgct gfcagctgaag aagtggttgt cgttggtacc cccgctctga ettgatatet 1800
gcttgtagag gtggttgfctg taggtgggca gggcccaggt gcgggtgctg gtggtgatga 1560 ctctgtcgcc cagccatgtg gaatcccaat gccaattt.cc ggaggcatta cccactccgt 1S2O cggcgccttc gttattgtct gccattggtg cgccaccgcc tgcagccatt gtaccagatc 1680 ccagacctga gggcgcggcg ggaggttctc cgagaggttg ggggtcgggc actgactctg 1740 agtcgccagt ctgcccaaag ttgagcttct ttfctagcggg ctgctggcct ttcttgccga 1300 tgcccgtgga ggagtcgggg aatfcctatgg gtctcttctt tccsgaagcc gtettagcga 1860 cttcctcaac cagaccgaga ggttcgagaa cccgcttctt ggcctggaag actgctcgcc 1S20 caaggttgcc cccaaaaaac gtatcttctt gasgsegctc ctgaaactcg gcgtcggcgt 1980
ggttgtactt gaggtacggg ctgtccccct gcfccgagctg cttgtcgtag gccttgtcgc 2040
gctcgagggc cgcggcgtct gcctcgttga ccggctctcc cttgtcgagt ccgttgaagg 2100
gtctgaggta cttgtagcca ggaagcacca gaccccggcc gtcgtcctgc ttttgctggt 2160
tggctttggg tttcggggcc ccaggtttca agtcccacca ctcgcgaatg ccctcagaga 2220
ggttgtcctc gagccaatct ggaagataac catcggcagc catacctggt ttaagtcatt 2230
tategeteag aaacacagtc atccaggtcc acattgacca gatcgcaggc cgagcaagca 2340
atetegggag cccgccccag cagatgatga aeggcacaga gtttccgata cgtcctcttt 2400
ctgacgaccg gtfcgagattc tgacacgccg gggaaacatt cfcgaacagtc tctggtcccg 2460
cgcgtgaagc aaatgttaaa attetgatte actctctcgc atgtcttgca gggaaacagc 2520
atctgaagca tgcccgcgtg acgagaacat ttgttttggt acctgfccggc aaagtccacc 2530
ggagctcctt ccgcgtctga cgtcgatgga tfccgcgactg aggggcaggc ccgcttgggc 2640
tcgcttttat ccgcgfccatc ggsggcgggr ctcttgttgg ccccaccctt tctgacgtag 2700
aacccatgcg ccacetcggt cacgtgatcc tgcgcccagc ggaagaacct tttgacttcc 2760
tgcttcgtca ccttgccasa gttatgctcc agacggcggg tgggttcaaa tttgaacatc 2820
cggtcctgca acggctgctg gtgctcgaag gtggcgctgt tcccgtcaat cacggcgcac 2880
PL 222 683 B1
atgttggtgt tggaggtgac ggtcacgggg S^ggggtcga t cfcgggcgga cgacttgcac 2940
ttttggtcca cgcgcacctt gctgccgccg agaatggcct tggcggactc cacgaccttg 3000
gccctcatct tgccctcctc ccaccagatc accatcttgt cggcgcaatc gttgaaggga 3060
ęićLęi t CC ĆC S.Ł tggtccagtt gacgcagccg tagaaagggc gaactc 3105
<210> 17
<211> 3102
<212> DNA
<213> nowy serotyp AAV, klon 2
<400> 17
gcggccgcga attcgccctt cgcagagacc aaagttcaac tgaaacgaat caaccggttt 60
attgattaac aagtaattac aggttacggg tgaggtaacg ggtgccaatg gggcgaggct 120
cagtataaac cccttcgttg ttgacagoaa attccacatt attagacttg gcataatttg 180
aggtgtactg aatctctgga ttccagcgtt tgctgttttc tttctgcagt tcccactcga 240
tctccacgct gacctggccg gtgctgtact gcgtgataaa tgaggcaaac ttggcaggag 300
taaacacctc tggaggatta gcaggtaccg gggtgttttt gatgagaatt tgaggaggcg 3 60
ggtgtttgag tccaaatccg cccatcaggg gagacgggtg aaagttgccg tccgtgtgag 420
gaatttcggc ccagatggga ccctgcaggt acacgtcccg gttctgccag accatgccgg 480
gcagagcccc ctggctgttg acagtctgtg tccggggtcc ggccgtagac gattgcacgt 540
tgctggagac cacaccgtat tcttctgtag ccacgggatt ggtggttttg atctcctcct 600
cgctggtcat tagcacgttt tccagcgttg tcttgttggc agcccccgtt ttgccaaaaa 860
ccagcactcc gttgatggga aggaactggt cctcgtcgtc cttgttggfca gccatggcta 720
cgcccgggtt ggttaatgaa tttctaccat tcagatggta tttsgtggcc ccggtccagg 780
caaagttact gttgttgttg ctgtctatgt ttttfcgacag tctctgctgc cgataacagg 240
gtccgggcag ccagttcttt gattgctcgg ccacggtgtt gggcccagcc tgatggaact 900
gcagctccct tgtggacccc gtagtgctct gggtccgggc caggtagtac aggtactggt 950
cgatgagggg attoatcagc cggtccaggc tctggctgtg cgoatagctg ctgtggaaag 1020
gcacttcctc aaaggtgtag ctgaattcaa agttattgcc cgttctcagc atctgagasg 1080
gaaagtactc caggcagcag aaggaggaac gtcccacaga ctgactgccg ttgtttagaa 1140
tcagatatcc gtactgagga atcatgaaca cgtccgcagg gaacggaggg aggcagccct 1200
ggtgcgcaga gccgaggacg tacggcagtt ggtactdcga gtccgagaag acctgaatcg 1260
tgccggtaag gttattagcg atggtcgfcaa cgccgtcgtt cgtcgtgacc tccttgacct 1320
ggatgttgaa caacttgaac cgcagctttc tgggccggaa tccccagttg ttgttgatga 1380
gtcgctgcca gtcacgtggt gagaagtggc agtggaatct gttgaagtca aaatagcccc 1440
PL 222 683 B1
agggggtgct gtagccgaag aagv.ggctgt cgttggtagc cccgctctga cttgststct 1300
gcttgtagag gtggttgttg tacgtgggca gggcccaggt gcgggtgctg gfcggtgatga 1560
ctctgtcgcc cagccatgtg gastcgcaat gccaattccc ggaggcatta cccactccgt 1620
cggcgccttc gttsttgtct gccattggtg cgccaccgce tacagccatt gtaccaęatc 1650
ccagacctga gggcgcggcg ggaggttctc cgagaggttg gsggtcgggc actgactctg 1740
agtcgccagt ctgcccaaag ttgagcttct ttttagcggg ctgctggeet ttctfcgccga 1300
cgcccgtgga ggagtcgcgg gattctatgg gtctcttctt tccggaagcc gtcttagcgc 1360
cttcctcaac cagsccgaga ggttcgagaa cccgcttctt ggcctggaag actgctcgcc 1920
cgsggttgcc cccaasagac gtatcttctt gaagacgctc ctgaaactcg gcgtcggcgt 19S0
cgttgtactt gaggtacggg ttgtccccct gctcgagcfcg cttgtcgtag gccttgtcgt 2040
gctcgagggc cgcggcgfcct gcctcgttga ccggctctcc cttgtcgagt ccgttgaagg 2100 gtccgaggta cttgtagcca ggaagcacca gaccccggcc gtcgtcctgc ttttgctggt 2160 tggctttggg tttcggggct ceaggtttca agtcccacca ctcgcgaatg ccctcagaga 2220 ggttgtcctc gagccaafcct ggaagataac caecggcagc eatacctggt ttaagtcatt 2280 tattgctcag aaacacagtc atccaggtcc acgtfcgacca gatcgcaggc cgagcaagca 2340 atctcgggag cccgccccag cagatgatga afcggcacaga gtttccgata cgtcctcttt 2400 ctgacgaecg gfctgagattc tgacacgccg gggaaacatt ctgascagtc tctggtcccg 2460 tgcgtgaagc aaatgttgaa attctgattc attctctcgc atgtcttgca gggaaacagc 2S20 atctgaagca tgcccgcgtg acgagaacat ctgttttggt acctgtcggc aaagtccace 2580 ggagctcctt cegcgtctga cgtcgatgga tccgcgactg aggggcaagc ccgcttgggc 2640 tcgcttttat ccgcgtcatc gggggcgggt ctcttgttgg ctccaccctt tctgacgtag 2700 aactcatgcg ccacctcggt cacgtgatcc tgcgeecagc ggaagaactc tttgacttcc 2760 tgctttgtca ccttgceaaa gtcatgctcc agacggcggg tgagttcaaa tttgaacatc 2820 cggtcttgta acggctgctg gtgctcgaag gtggtgctgt tccegtcaat cacggcgcac 2880 atgttggtgt tgaaagtgac gatcacgggg gtgggatcga tctgggcgga cgacttgcac 2940 ttttggtcca cgcgcacctt gctgccgccg agaatggcct tggcggactc cacgaccttg 3000 gccgtcafcet tgccctcctc ccaccagatc accatcttgt cgacgcaatc gttgaaggga 2060 aagttctcat tggtccagtt gacgcagccg aagggcgaat tc 3102 e210> 18 <211> 3106 <212> DNA <213> nowy serotyp AAV, klon 7-2 <400> 18 gcggccgcga attcgccctt cgcagagacc aaagttcaac tgaaacgaat cagccggttt 60
PL 222 683 B1 attgattaac aagtaattac aggttacggg ćgaggtaacg ggtgccaatg gggcgaggct 120 cagtataaac cccttcgttg tfcgacagcaa attccacatt attagacttg gcataatttg 130 aggtgtactg aatctctgga ttccagcgtt tgctgfctttc tttctgcagt tcccactcga 240 tctccacgct gacctggccg gtgctgtact ccgtgataaa tgaggcaaac ttggcaggag 300 taaacacctc tggaggatta gcaggtaccg gggtgctttt gatgagaatc tgaggaggcg 360 ggtgtttgag tccaaatccg cccatcaggg gagacgggtg aaagttgccg tccgtgtgag 420 gaattttggc ccagatggga ccctgcaggt acacgtcccg gttctgccag accatgccgg 480 gcagagcccc ccggctgttg acagtctgtg tctggggtcc ggccgtagac gattgcaggt 540 tgctggagac cacaccgtat cettctgtag ccacgggatt ggtggttttg atctcctcct 600 cgctggtcat tagcacgttt tccagcgttg tcttgttggc agcccccgtt ttgccaaaaa 660 ccagcactcc gttgatggga aagaactggc cctcgtcgtc cttgttggtg gccatggcfca 720 cgcccgggtt ggttaatgaa tttctaccat tcagatggta tttagtggcc ccggtccagg 780 caaagttact gttgttgttg ctgtctatgfc tttttgacag tctctgctgc cgataactgg 840 gtccgggcag ccagttcttt gattgctcgg ccatggtgtt gggcccagcc tgatggaact 900 gcagctccct Łgtggacccc gtagfcgctct gggtccgggc caggtagtac aggtactggfc 960 cgatgagggg attcatcagc cggtccaggc fcctggctgfcg cgcafcagctg ctgtggaaag 1020 gcacttccfcc aaaggtgtag ctgaattcaa agttatcgcc cgttctcagc atctgagaag 1080 gaaagtactc caggcagtag aaggaggaac gtcccacaga ctgactgccg ttgtttagag 1140 tcagatafccc gtactgagga atcafcgaaca cgtccgcagg gaacggagag aggcagccct 1200 ggtgcgcaga gccgaggacg tacggcagtfc ggtactccga gtccgagaag acctgaafccg 1260 tgctggtaag gttattagcg atggtcgtaa cgccgtcgtt cgtcgtgacc tccttgacct 1320 ggatgttgaa caacttgaac cgcagctttc tgggccggaa tccccagttg ttgttgatga 1380 gtcgctgcca gtcacgtggt gagaagtggc agtggaatct gttgaagtca aaatagcccc 1440 agggggtgct gtagccgaag aagtggttgt cgttggtagc cccgctctga cttgatatct 1500 gcttgtagag gtggttgttg taggtgggca gggcccaggt gcgggtgctg gtggtgatga 1560 ctctgtcgcc cagccatgtg gaatcgcaat gccaatttcc ggaggcatta cccactccgt 1620 cggcgccttc gttattgtct gccattggtg cgccaccgcc tgcagccatt gtaccagatc 1680 ccagacctga gggcgcggcg ggaggttctc cgagaggttg ggggtcgggc actgactctg 1740 agtcgccagt ctgcccaaag ttgagcttct ctttagcggg cggctggccg ttcttgccga 1800 tgcccgtgga ggagtcgggg gattctatgg gtctcttctt tccaggagcc gtcfetagcgc 1860 cttcctcaac cagaccgaga ggttcgagaa cccgcttctt ggcctggaag actgctcgcc 1920 cgaggttgcc cccaaaagac gtatcttctt gaagacgctc ctgaaaefccg gcgtcggcgt 2980
PL 222 683 B1 ggttgtactt gaggtacęgg ttgtccccct gctcgagctg ctigtcgtag gccttgtcgt 2040 gctcgagggc cgcggcgtct gccfccgttga ccggctctcc cttgtcgagt ccgttgaagg 2100 gtccgaggta cctgtagcca ggaagcacca gaccccggcc gtcgtcctgc ttttgctggt 2160 tggctttggg tttcagggct ccaggtttca agtcccacca ctcgcgaatg ccctcagaga 2220 ggttgccctc gagccaatct ggaagataac catcggcacc catacctggt ttaagtcatt 2260 cattgcteag aaacacagtc atccaggtcc acgttggcca gatcgcaggc cgagcaagca 2340 atctcgggag cccgccccag cagatgatga atggcacaga gtttccgata cgtcctcttt 2400 cfcgacgaccg gttgagattc tgacacgecg gggaaacatt ctgaacagtc tctggtcccg 2460 tgcgtgaagc aaatgttgaa attctgattc aCCctctcgc atgccttgca ggggaacagc 2520 atctgaagca tgcccgcgtg acgaaaacat ttgttttggt acctgtcggc aaagtccacc 2580 ggagctcctt ccgcgtctga cgtcgatggs tccgcgactg aggggcaggc ccgcttgggc 2640 tcgcttfctat ccgcgtcatc gggggcgggt ctcttgttgg ctccaccctt tctgacgtag 2700 aactcatacg ccacctcggt cacgtgatcc tgcgcccagc ggaagaactc tttgacttcc 2760 cgctttgtca ccfctgccaaa gtcatgctcc agacggcggg tgagtccaaa tttgaacatc 2820 cggtcttgta acggctgctg gtgctcgaag gtggtgctgt tcccgtcaat cacggcgcac 2SS0 atgttggtgt tggaagtgac gatcacgggg gtgggatcga tetgggcgga egacttgcac 2S40 ttttggccca cgcgcacctt gctgccgccg agaatggcct tggcggactc cacgaccttg 3000
gccgtcatec tgccctcctc ccaccagatc accatcttgt cgacgcaatc ’ gttgaaggga 3060
aagfctctcat tggtccagtt gacgcagccg tagaaagggc gaat tc 3106
<210? 19 <211? 3105 <212 > DMA <213? nowy serotyp AAV, klon Cl <400? 19 gaattcgccc ttgctgcgtc aaetggaeca atgagaactt tcccttcaac gattgcgtcg 60
acaagatggt gatctggtgg gaggagggca agatgaccgc caaggtcgtg gagtccgcca 120
aggccattct gggcggaagc aaggtgcgcg tggaccaaaa gtgcaageca tcggcccaga 180
tcgaccccac gcccgtgatc gtcacctcca acaccaacat gtgcgccgtg atcgacggga 240
acagcaccac cttcgagcsc cagcagccgc tgcaggaccg catgttcaag ttcgagctca 300
cccgccgtct ggagcacgae tfctggcaagg tgaccaagoa agaagtcaaa gagtfccttcc 360
gctcggctca agatcacgtg actaaggtgg cgcatgagtt ctacgtcaga aagggcggag 420
ccaccaaaag acccgccccc agtgacgcgg atataagcga gcccaagcgg gcotgcccct 480
cagttgcgga gccatcgacg tcagacgcgg aagcaccggt ggactttgcg gacaggtacc 540
PL 222 683 B1
aaaacaaatg ŁtcŁcgtcac gcgggcatgc ttcagatgct gtttccctgc aagacatgcc SOO
agagaatgaa tcagaat ttc aacgtctgct tcacgcacgg ggtcagagac tgctcagagt 560
gcttccccgg cgcgtcagaa tctcaacccg tcgtcagaaa aaagacgtat cagaaactgt 720
gcgcgattca tcatctgctg aggcgggcac ccgagattgc gtgttcggcc cgcgatctcg 780
tcaacgtgga cttggatgac tgtgtttctg agcaataaat gacfctaaacc aggtatggct S40
gctgacggtt atcttccaga ttggctcgag gacaacctct ctgagggcat tcgcgagtgg 900
tgggacctaa aacctggagc ccccaagccc aaggccaacc agcagaagca ggacgacggc 960
cggggtctgg tgcttcctgg ctacaagtac ctcggaccct tcaacggact cgacaagggg 1020
gagcccgtca acgcggcgga cgcagcggcc ctcgagcacg acaaggccta cgaccagcsg 1080
ctcaaagcgg gtgacaatcc gtacctgcgg tataaccacg ccgacgccga gtttcaggag 1140
cgtctgcaag aagatacgtc ttttgggggc aaectcgggc gagcagtctt ccaggccaag 1200
aagagggtac tcgaaccfcct gggcctggtt gaagaaggtg ctaagacgge tcctggaaag 1260
aagagaccgt tagagtcacc acaagagccc gactcctcct caggaatcgg caaaaaaggc 1320
aaacaaccag ccaaaaagag actcaacttt gaagaggaca ctggagccgg agacggaccc 1380
cctgaaggat cagataccag egccatgtct tcagacattg aaatgcgtgc agcaccgggc 1440 ggaaatgctg tcgatgcggg acaaggttcc gatggagtgg gtaatgcctc gggtgattga 1500 cattgcgatt ccacctggtc tgagggcaag gtcacaacaa cctcgaccag aacctgggtc 1560 ttgcccacct acaacaacca cfctgfcaccfcg cggcteggaa caacatcaaa cagcaacacc 1620 tscaacggat tctccacccc ccggggatac tttgacttta acagattcca ctgtcactfcc 1660
tcaccacgtg actggcaaag actcatcaac aacaactggg gactacgacc aaaagccatg 1740
cgcgttaaaa tcttcaatat ccaagttaag gaggtcacaa cgtcgaacgg cgagactacg 1800
gtcgetaaca accttaccag cacggttcag atatttgcgg actcgtcgta tgagctcccg 1860
tacgtgatgg acgctggaca agagggaagt ctgtctcctt tccccaatga cgtcttcatg 1920
gtgcctcaat atggctactg tggcattgtg actggcgaaa atcagaacca gacggacaga 1930
aatgctttct actgcctgga gtattttcct tcacaaatgc tgagaactgg caataactct 2040
gaaatggcct acaactttgg gaaggtgccg ttccactcaa tgfcatgctta cagccagagc 2100
ccggacagac tgatgaatcc cctcctggac cagtacctgt ggcacttaca gtcgaccacc 2160
tctggagaga ctctgaatca aggcaatgca gcaaccacat ttggaaaaat caggagtgga 2220
gactttgcct tttacagaaa gaaetggctg cctgggcctt gtgttaaaca gcagagactc 2280
tcaaaaactg ccagtcaaaa ttacaagatt cctgccagcg ggggcaacgc tctgttaaag 2340
tatgacaccc actatacctt aaacaaccgc tggagcaaca tagcgcctgg acctccaatg 2400
gcaacagctg gaccttcaga tggggacttc agcaacgccc agctcatctt cectggacca 2460
PL 222 683 B1
ccactcaccg casacacaac sacctcagcs. aacaatctgt tgttćacatc sgaagaagaa 252C
atĆCCu§CC£ ccsacccsag £cacacggac G· V- UJ C C· agattgctca caataatcag 2530
aatgctacsa ctgctcccat aaccggcaac gtgactgeta tgggagtgct Ccccggcatg 2340
gcgtggcaaa acagagacat ttactaccsa gggccaacct gggccaagat cccacacgcg 2700
gacggacatt ttcatccttc accgccsatt 53~Τ5~ ~ “ -3 cactgaaaca tccgcctccc 2750’
cagatattta tC2tSe.5Cc.c ccccgtacct ccc^atcctg cgacaacctt caetgcsgcc 2320
agactggact ctttcatcac acaatscagc accggccagg tcgctgttca gattgaafcgg 23 S0
ąaastcgase aagaacgccc caaacgctgg aatcctgaag igcagtttac ttcaaactat 2940 gggsaccagfc ctcctatgoo gCgggctccc catacaaccg ggaagtatac agagccgcgg 3000 gttattggct ctcgttafctt gactaatcac ttgtaactgc ctagttaatc aataaaccgt 3060 gtgattcgtt tcagttgaac tttggtctct gcgaagggcg aattc 3105 <210? 20 <211> 3105 <212? DNA <213? nawy serotyp AAV, klon C3 <400? 20
gaattcgccc ttgctgcgtc aactggacca atgagaacfct tcccfctcaac gattgcgccg 50
acaagatęgt gatcfcggtgg gaggagggca agatgaccgc caaggtcgtg gagtccgcca 120
aggcc&ttcfc gggcggaagc aaggtgcgcg tggaccaaaa gtgcaagtca tcggcccaga 180
tcgsccccac gcccgtgatc gtcaccfccca acaccaacat gtgcgccgtg atcgacggga 240
acagcaccac cttcgagcac csgcagccgc tgcaggaccg catgL ccaag ttccagctca 300
cccgccgtct ggagcacgac tttggcaagg Łgaccaagca ggaagtcaaa gagttcttcc 350
gctgggctca ggatcacgtg accgaggtgg cgca.tgs.gtt ctacgtcaga aagageggag 420
ccaccaaaag acccgccccc agtgacgcgg atataagcga gcccsagcgg gcctgcccct 480
cagetgegga gccatcgacg tcagacgcgg aagcaccggt ggactttgcg gacaggfcacc S40
aaaacaaatg ttctcgtcac gcggcrcatgc tteagatget gt11ccctgc aagacatgcg 500
agagaatgaa tcagaatttc aacgtctgct tcacgcacgg ggtcagagac tgctcag&gt 560
gcttccccgg a ‘'ar a λ «* i* r1 a cgcgtcagaa tctcaacccg r™ CR Γ~ f C1 t^r^T r*ZTr*TZ*Z“ł Zł tcgtcagaaa saagacgtat cagaaactgt 720
— '-y v y cn_ t_ <— ct a llluc uy 935cgygccxc ccgagattgc gtgttcgccc tgegateteg 730
tcaacgtgga cttggatgac tgtgtttctg ageaatasat gacttaaa.cc aggtafcggct S40
gctgacggtt atcttccaga ttggctcgag gscaacctct ctgagggcafc tcgcgagtgg SOO
tgggacctga aacctggagc ccccaagctc aaggccaacc agcagaagca ggacgacggc S60
^5939tctgg tgcttcctag ctacsagcac ctcggaccct tccacggaet egacaagggg 1020
gagcccgtca aegegoegga cgcagcggcc ctcgagcacg acaaggccta cgaccagcag 1080
PL 222 683 B1 ctcaaagcgg atgacaatcc gtacctgcgg tataaccaca ccgacgccga gtttcagaag 1140 cgtctgcaag aagatacgtc ttttgggggc aacctcgggc gagcaatctc ccaggccaag 1200 aagagggtac tcgaaccact gggcctggtt gaagaaggtg cfcaagacggc tcctggaaag 1260 aagagaccgt tagagtcacc acaagagccc gactcctcct caggaatcgg caaaaaaggc 1320 aaacaaccag ccaaaaagag actcaacttt gaagaggaca etggagccgg agacggaccc 1380 cctgaagaat cagataccag cgcęatgtct tcagacattg aaatgcgtgc agcaccgggc 1440 ggaaatgctg fccaatgcggg acaaggttcc gatggagtgg gtaatgcctc gggtgattgg 1S00 cattgcgatt ccacctggtc tgagggcaag gtcacaacaa cctcgaccag aacctgggtc 1560 ttgcccscct acaacaacca cttgtacctg cggctcggaa caatatcaaa cagcaaca.cc 1620 tacaacggat tctccacccc ctggggatac tttgacttta acagattcca ctgtcacttc 1680 tcaccacgtg actggcaaag actcatcaac aacaactggg gactacgacc aaaagccatg 1740 cgcgttaaaa tcttcaatat ccaagttaag gaggtcacaa cgtcgaacgg cgagactacg 1300
gtcgctaata accttaccag cacggttcag atattfcgcgg actcgtcgta tgagctcccg 1360
tacgtgatgg acgctggaca agagggaagt ctgcctcctt tccccaatga cgtcttcatg 1920
gtgccteaat atggctactg tggcattgtg sctggcgasa atcagaacca gacggacaga 1980
aatgctttct actgcctgga gtattttcct tcacaaatgc tgagaactgg caataacttt 2040
gaaatggctt acaactttga gaaggtgccg ttccactcaa tgtatgctca cagccagagc 2100
ctggacagac tgatgaatcc cctcctggac cagtacctgt ggcacttaca gfccgaccacc 2160
tctggagaga ctctgaatca aggcaatgca gcaaccacat ttggaaaaat caggagtgga 2220
gactttgcct tttacagaaa gaactggctg cctgggcctt gtgttaaaca gcagsgattc 22B0
ccaaaaactg ccagtcaaaa ttacaagatt cctgccagcg ggggcaacgc tctgttaaag 2340
tatgacaccc actatacctt aaacaaccgc tggagcaaca tagcgcctgg acctccaatg 2400
gcaacagc tg gaccttcaga tggggacttc agcaacgccc agctcatctt cectggacca 246 0
tcagtcaccg gaaacacaac aacctcagca aacaatctgt tgtttacatc agaaggagaa 2520
attgctgcca ccaacccaag agacacagac atgtttggtc agattgctga caataatcag 2580
aatgctacaa ctgctcccat aaccggcaac gtgactgcta tgggagtgct tcctggcafcg 2640
gtgtggcaaa acagagacat ttactaccaa gggccaattt gggccaagat cccacacgcg 2700
gacggacatt ttcatccttc accgctaatt ggcggttttg gactgaaaca tccgcctccc 2760
cagatattta tcaaaaacac ccccgtacct gccaatcctg cgacaacctt cactgcagcc 2320
agagtggact ctttcatcac acaatacagc accggccagg tcgctgttca gattgaatgg 2880
gaaatcgaaa aggaacgctc caaacgccgg aatcctgaag tgcagtttac ttcaaactat 2940
gggaaccagfc cttcfcatgtt gtgggctccc gatacaactg ggaagtatac agagccgcgg 3000
PL 222 683 B1 gttattggct ctcgttaŁzfc gactaatcat fctgtaactgę ctagttaate aataaaccgt 3060 gtgattcgtt tcagttgaac tttggtctcfc gcgaagggcg aattc 3105
<210> 21
<211> 3105
<212> DNA
c213> nawy serotyp AAV, klon C5
<400» 21
gaattc :gccc ttcgcagaga eeaaagttca aatgaaacga atcacacggt ttattgatta 60
actaggcagt tacaaatgst cagtcaaata acgagagcca ataacccgcg actctgtaiza 120
cttcccagtt gtatcgggag cccscaacat agaagactgg ttcccacagt fefcgaagtaaa 180
otgcacttca ggattccagc gtttggagcg ttcctcttcg atttcccatt caatctgaac 240
agcgacctgg ccggtgctgt attgtgtgat gaaagagtcc actctagctg cagtgaaęgfc 300
cgtcgcagga taggcaggta cgggggtgct Łttgataaat atctgggaag gcggatgtfct 360
cagtccaaaa ccgccaatta gcggtgaagg atgaaaatgt ccgtccgcgt gtgggatctt 420
ggcccaaatt ggcccttggt agtaaatgtc tctgttttgc cacaccatgc caggaagcac 4S0
tcccatagca gtcacgttgc cggttatggg agcagttgta gcattctgst tafcfcgfccagc 540
aatctgacca aacatgtccg tgtctcttgg gttggtggca gcaatttctt cfctctgatgć 500
aaacaacaga ttgtttgctg aggttgttgt gtttccggtg actgatggtc cagggasaafc 650
gagctgggcg ttgctgaagt ccccstccga aggfcccsgct gttgccattg gaggfcccagg 720
cgctatgttg ctecagcggt tgtttaaggfc atagtgggtg tcatacttta acagagcgtt 730
gcccccgctg gcaggaatct tgtaattttg actggcagtc tttgagaatc tctgctgttt 240
aacacaaggc ccaggcagcc agttctttct gtaaaaęgca aagtctccac tcctgstttt 900
tccaaatgtg gttgctgcat tgcctfcgatt cagagtctct ccagaggtgg tcgactgtaa 960
gtgccacagg tactggtcca ggaggggatt catcagtccg tccaggctct ggctgtgagc 1020
atacattgag tggaacggca ccttctcasa gttgtasgcc gtttcaaagt tattgccagt 1030
tctcagcatt fcgtgaaggaa aatacfcccag acagtagaaa gcatttctgt ccgtctggtt 1140
ctgatcttcg ccagtcacaa tgccacagta gccatattga ggcaccatga agacgtcatt 1200
ggggaaagga ggcaaacttc cctcttgtcc agcgtccatc acgtacggga gctcatacga 1250
cgagtccgca aatatctgaa ccgtgctggt aaggttatta gcgaccgtag tctcgccgtt 1320
cgacgttgtg acctccttaa cttggatatt gaagatttta acgcgcatgg cttttggtcg 1330
fcagtccccag ttgttgttga tgagtctttg ccagtcacgt ggtgagaagt gacagfcggaa 1440
tctgttsaag tcaaagtatc cccagggggt ggaaaatccg ttgtaggtgt tgctgtttga 1500
tgttgttccg sgccgcaggt acaagtggtt gttgtaggtg ggcaagaccc aggttctggt 1550
cgaggttgtt gtgaccttgc cctcagacca ggtggaatcg caatgccaat cacccgaggc 162 0
PL 222 683 B1 attacccact ccafccggaac cttgtcccgc afccgacsgca tfctccgcccg gtgcfcgcacg 16S0 catttcaatg tctgaagaca tggcgctggt atctgatcct tcagggggtc cgtctccggc 1740 tccagtgtcc tcttcaaagt tgagtctctt tttggctggt tgtttgcctt ttttgccgat 1800 tcctgaggag gagucgggct cttgtggtga ctctaacggt ctcttcfcttc caggagccgt 1860 cttagcacct tcttcaacca ggcccagagg ttcgsgtacc ctcttcttgg cctggaagac 1320 tgctcgcccg aggttgcccc caaaagacgt atcttcttgc agacgctcct gaaactcggc 1980 gtcggcgfcgg ttataccgca ggtacggatt gtcacccgct ttgagctgct ggtcgtaggc 2040 ctfcgtcgtgc tcgagggcca ctgcgtccgc cgcgfctgacg ggctccccct tgtcgagtcc 2100 gttgaagggt ccgaggtacC cgtagccagg aagcaccaga ccccggccgt cgtcctgctt 2160
ctgctggttg gccttgggct tgggggctcc aggtttcagg tcccaccact cgcgaatgcc 2220
ctcagagagg ttgtcetcga gccaatctgg aagataaccg tcagcagcca tacctggttt 2280
aagtcatfcta ttgctcagaa acacagtcat ccaagtccac gttgacgaga tcgcaggccg 2340
aacacgcaat ctcgggtgcc cgccccagca gatgatgaat cgcgcacagt ttctgatacg 2400
tcttttttct gacgacgggt tgagattctg acgcgccggg gaagcactct gagcagtctc 2460
tgaccccgtg cgtgaagcag acgttgaaat tctgattcat tctctcgcat gtcttgcagg 2520
gaaacagcat ctgaagcatg cccgcgtgac gagaacattt gttttggtac ctgtccgcaa 2580
ggtccaccgg tgctfcccgcg tctgacgtcg atggctccgc aactgagggg caggcccgct 2640
tgggctcgct tatatccgcg tcactggggg cgggtctttt ggtggctccg ccctttctga 2700
cgtagaactc atgcgccacc tcagtcacgt gatcctgagc ccagcggaag aactctttga 2760
cttcctgctt ggtcaccttg ccaaagtcgt gctccagacg gcgggtgagc tcgaacttga 2820
acatgcggtc ctgcagcggc tgctggtgct cgaaggtggt gctgttcccg tcgatcacgg 2880
cgcacatgtt ggtgttggag gtgacgatca cgggcgtggg gtcgatctgg gccgatgact 2940
tgcacttttg gtccacgcgc accttgcttc cgcccagaat ggccttggcg gactccacga 3000
ccttggcggt catcttgccc tcctcccacc agatcaccat cttgtcgacg caatcgttga 3060
agggaaagtt ctcattggtc cagttgacgc agcaagggcg aattc 3105
<210> 22 <211> 1094 <212> DMA <213 > nowy serotyp AAV, klon FI <400> 22 gaatfccgccc ttgctgcgtc aactggacca agagaacttt ccctfccaacg atfcgcgtcga 60 caagatggtg atctggfcggg aggagggcaa gatgacggcc aaggtcgtgg agfcccgccaa 120 agccattctg ggcggaagca aggtgcgcgt cgaccaaaag tgcaagtcct cggcccagat 180
PL 222 683 B1
cę s t c cc sc c cccgtgafccg tcacctccaa caccaacatg tgccccgtga tcgacgggaa 240
CBCC5CCSCC ttcgagcacc agcagccgtt gcaggaccgg atgtteaaat ttgaactcac 300
ecgccgtctg gaacacgact ttggcaaggt gaccaagcag gaagtcaaag aattcttccg 3S0
ctgggctagt gatcacgtga ctgaggtgac gcatgagttc tacgtcagaa agggcggagc 420
csgcaasaga cccgcccccg atgacgcgga tataagcgag cccaagcggg cctgtccctc 480
agtcacggac ccatcgacgt cagacgcgga aggagctccg gtggectttg ccgacaggta 540
ccaaaacaaa tgttctcgtc acgcgggcat gcttcagatg ctgtttccct gcaaaacgtg 500
cgagagaatg aatcsgaatt tcaacatttg cttcacgcac agggtcagag actgtfcfcaga 550
atgtttcccc ggcętgtcag aatctcaacc ggtcgtcaga aaaaagacgt atcggaaget 720
gtgtgcgatt catcacctgc tggggccggc acccgagatt gcttgctcgg cctgcgacct 730
ggtcsscgtg gacctggacg actgtgtttc tgagcaataa atgacfctaaa ccgggtatgg 840
ctgccgatgg ttatcttcca gattggctco aggacaacct ctccgagggc attcgcgagt 900
ggtgggacct gaaacctgga gccccgaaac ccaaagccaa . ccagcaasag caggacgacg 360
gccggggtct ggtgcttcct ggctacaagt acctcggacc cttcaacgga ctcgacaagg 1020
gggagcccgt caacgcggcg gacgcagcgg ccctcgagca cgacaaggcc tacgaccagc 1080
agc fccaaagc gggtgacaat ccgtsectec ggtataacca cgccgacgcc gagttfccagg 1140
agcgtctgca agaagatacg tcatttgggg gcaacctcgg gcgagcagtc ttccaggcca 1200
agaagcgggt tctcgaacct ctcggtctgg ttgaggaagg cgctaagacg gctcctggaa 1260
agaagagacc catagactcc ccagactcct ccacgggcat cggcaaaaaa ggccagcagc 1320
ccgcfcaaaaa gaagcfccaat tttggtcaga ctggcgactc agagtcagtc cccgaccctc 1380
aacctcttgg agaacctcca gcagcgccct ctagtgtggg atćtggtaca atggctgcag 1440
gcggtggcgc accaatggca gaeaataacg aaggtgccga cggagtgggt aatgcctcag 1500
gaaattggca ttgcgattcc acatggctgg gcgacagagt catcaecaec agcaccagaa 1560
cctgggccct ccccacctac aacaaccacc tctacaagca satctccagc agcagctcag 1520
gagccaccaa tgacaaccac tacttcggct acagcacccc ctgggggtat tttgacttfca 1680
acagattcca ctgccacttc tcaccacgtg actggcagcg actcatcaac aacaactggg 1740
gactccggcc caagaagctg cagttcaagc tcttcaacat ccaggtcaag gaggtcacaa 1800
cgaatgacgg cgtcacgacc atcgctaata accttaccag cacggttcag gtcttctcgg 1360
acteggaata ccagctgccg tacgtcctcg gctctgcgca ccagggctgc ctgcctccgt 1920
tcccggcgga cgtcttcatg attcctcagt acggctacct gactctgaac aacggcagcc isaa
aatcggtggg ccgttcctcc ttctactgcc tggaatattt cccctctcaa atgctgagaa 2040
cgggcaacaa ctttgagttc agttacagct tcgaggacgt gcctttccac , agcagctacg 210 0
PL 222 683 B1
egcacagcca gagcctagac cggctgatga accctctcat cgaecagtac ctgtactacc 2160
tggcccggac ccagagcacc acgggttcca ccagggaact gcaatttcat caagctgggc 2220
ccaatactat ggccgagcag tcaaagaact ggctgcctgg accctgctat aggcaacagg 22S0
gactgtcaaa gaacttggac tttaacaaca acagcaattt tgcctggact gctgccacta 2340
aatattatet gaatggcaga aactctttga ccaatcctgg catteccatg gcaaccaaca 2400
aggatgacga ggaccagttc tttcccatca acggggtact ggtttttggc aagacgggag 24 60
ctgccaacaa aactacgctg gaaaacgttc tgatgaceag cgaggaggag atcaagacca 2520
ctaaccctgt ggcfcacagaa gaatacggtg tggtctccag caacctgcag ccgtctacag 2530
ccgggcctca atcacagact atcaacagce agggagcact gcctggcatg gtctggcage 2640
accgggacgt gtatctgcag ggtcccatct gggccaaaat tcctcacacg gatggcaact 2700
ttcacccgtc tcctctgatg ggcggttttg gactcaaaca cccgcctcca cagatcctga 2760
tcaaaaacac acetgtacct gctaatccte cggaggtgtt tactcctgcc aagtttgcct 2820
ccttcatcae gcagtacagc accggacaag tcagcgtgga aatcgagtgg gagotgeaga 2880
aagaaaacag caagcgctgg aatccagaaa ttcagtatac ttccaattat gceaagteta 2940
ataatgttga atttgetgtg aaccctgatg gtgtttatac tgagcctcgc cccattggca 3000
ctcgttacct cccccgtaat ctgtaattgc ttgttaatca ataaaccggt tgattcgttt 3060
cagttgaact ttggtofcctg cgaagggcga anto 3094
<210? 23 <211? 3095 <212? DNA <213? nowy serotyp AAV, klon. P3 <400? 23
gaattcgccc ttegeagaga ccaaagttca actgaaacga atcaac eggt ttattgatta 60
acaagcaatt acagattacg ggtgaggtaa cgagtgccaa tggggcgagg ctcagtataa 12 0
acaccatcag ggttcacagc aaattcaaca ttattagact tggcataatt ggaagtatac 180
taaatttctg ggttccagcg cttgctgttt tctttctgca gctcccactc gatttccacg 240
cfcgacttgtc cggfcgctgta ctgcgtgafcg aaggaggcaa acttggcagg agtaaacacc 300
tccggaggat tagcaggtac aggtgtgttt ttgatcagga tctgtggagg cgggtgtttg 360
agtccaaaac cgcccatcag aggagacggg tgaaagttgc catccgtgtg aggaattttg 420
gcccagatgg gaccctgcag atacacgtcc cggttctgcc agaccatgcc aggcagtgct 480
ccctggctgt tgatagtctg tgattgaggc ccggctgtag acgactgcag gttgctggag 540
accacaccgt attcttctgt agccacaggg ttagtggtct tgatctcctc ctcgctggtc 600
atcagaacgt tttccagcgt agttttgttg gcagetcccg tcttgccaaa aaccagtacc 660
PL 222 683 B1
ccęttgatgg g££sga£ctg gtcctcatca tcct-gttgg ttgccatgag satcccagca 720
ctggtcsasg aętttctgcc attcagatga tatttsgtgg csgce.gt.ccs. ggcasssctg 7S0
ctgttgttgt taaagtecaa gttctttgac agtctctgtt gcctatagca gggtccaggc 340
sgccsgttc t ttaactgctc ggccatagta ttgggcccag cttgatgaaa ttgcagttcc 900
ctcgtggas.c ccgtggtgct ctgggtccgg gccaggtagt scsggtactg gtcgatcaca 960
gggttcatca gccggtctag gctctggctg tgcgegtagc tgctgtggaa aggcscgtcc 1020
Lcgaagctgt asctga&ctc aaagttgttg cccgttctca gcetttgags ggggaaatac 1060
cccaggcagt agaaggaggc acggcccacc gafctggctgc cgttgtccag agtcaggtag 1140
ccgtactgag gza tc3tgaa gacgtccgc- gggaacggag ccaggcagcc ctggfcgcgca 1200
gaęrccgagga cgtscggcag ctggtattcc gagtccgaga agacctgaac cgtcctggta 1260
aggttattag cgatggtcgt gacgccgtca ttcgttgtga cctcctcgae ctggatgttg 1320
aggagctcga accgcagctt cttgggccgg aatccccagfc tgttgttgat gagtcgctgc 1330
cagtcscgtg gtgagaagtg gcagtggaat ctgttaaagt caaaataccc ccagggggtg 1440
ctgtagccga agtagtggtt gtcattggtg gctcctgagc tgctgctgga gatttgcttg 1500
tagaggtggt tgttgtaggt gcggagggcc caggttctgg tgctggtggt gatgactctc 1560
tcgcccagcc atgtggaatc gcaatgccaa tttcctgagg cattacccac tccgtcggca 1620
ccttcgtt&t tgtctgccat tggtgcgcca ccgcctgcag ccattgtacc agaecccaca 1680
ctagsgggcg ctgctggagg ttctccaaga ggttgagggt cggggactga ctctgagtcg 1740
ccagtctgac caaaattgag ctecttttta gcggcctgct ggcctttttt gccgatgccc 1300
gtggaggagt ctgaagagcc tatgggtctc ttctttccag gagccgtctt agcgccttcc 1360
tcaaccagac cgagaggttc gagaacccgc ttcttggcct ggaagactgc tcgcccgagg 1920
ttgcccccaa atgacgta cc ttcttgcaga cgcecctgaa actcggcgtc ggcgtggtta 1930
taccgcaggi acggattgtc acccgctttg agctgctggt cgtaggcctt gfccgtgctcg 2040
sgggccgctg cgtccgccgc gttgacgggc tcccccttgt cgagtccgtt gaagggtccg 2100
aggtacttgt agccaggaag caccagaccc cggccgtcgt cctgcttttg ctggttggct 2160
ttgggtttcg gggcfcccagg tttcaggtcc caccactcgc gaatgccctc aaagaggttg 2220
tcctcgagcc aatctggaag ataaccatcg gcagccatac ctggtfctaag Łcatttatfcg 22 50
ctcagaaaca cagtcgtcca ggtccacgtt gaccaggtcg caggccgagc aagcaatctc 2340
gggtgcccgc cccsgcsgat gatgaatcgc acacagcttc cgatacgtct: tttttcfcgac 2400 gaccggttga gattctgaca cgccggggaa acattctaaa cagtctctga ccccgtgcgt 2460 gaagcaaatg tfcgaaattct gactcattct ctcgcacgtt ttgcagggaa acagcscctg 2520 aagcatgccc gcgtgacgag aacatttgtt ttggfcscctg tcggcaaagt ccaccggagc 2580
PL 222 683 B1
tccttccgcg tctgacgtcg atęggtccgt cactgaggęa cgggcccgcc tgggctcgct 264G
tatatccgcg tcatcggggg cgggtctttt gctggctccg ccctttctga cgtagaactc 2700
atgcgtcacc tcagtcacgt gatcactagc ccagcggaag aactctttga ettcctgctt 2760
tgtcaccttg ccaaagtcgt gttccagacg gcgggfcgagt tcaaattfcga acatccggtc 2320
ctgcaaeggt tgctggtgct cgaaggtggt gctgttcccg tcgatcacgg cgcacatgtt 2680
ggtgteggag gtgacgatca cgggggtggg atcgatctgg gcggacgact tgcacttttg 2940
gtccacgcgc accttgctgc cgccgagaat ggccttggcg gactccacga ccttggccgt 3000
catcttgccc tcctcccacc agatcaccat cttgtcgacg caatcgttga agggaaagtt 3060
ctcattggtc cagttgacgc agcaagggcg aa ttc 3095
<210> 24 <211> 3095 <212> DNA <213> nowy serotyp AAV, klon F5 <400> 24
gaattcgccc ttcgcagaga ccaaagtfcca actgaaacga atcaaccggt ttattgatta 60
acaagcaatt acagattacg ggfcgaggtaa cgagtgccaa tggggcgagg ctcagtataa 120
acaccatcag ggttcacagc aaattcaaca ttattagact tggcataatt ggaagtatac ISO
tgaatttcća ggttccagcg cttgcfcgttt tctttctgca gctcccactc gatttccacg 240
ctgacttgtc cggtgctgta ctgcgtgatg aaggaggeaa acttggcagg agtaaacacc 300
tccggaggat tagcaggtac aggtgtgttt ttgatcagga tctgtggagg cgggtgttcg 360
agtccaaaac cgcccatcag aggagacggg tgaaagttgc catccgtgtg aggasttttg 420
gcccagatgg gaccctgcag atacacgtcc cggttctgcc agaccatgcc aggcagtgct 480
ccctggctgt tgatągtctg tgattgaggc ccggctgtag acgactgcag gttgctggag 540
aecacaccgt attcttctgt agccacaggg ttagtggtct tgatctcctc ctcgctggtc 600
atcagaacgt tttccagcgt agttttgttg gcagctcccg tcttgccaaa aaccagtacc 660
ccgttgatgg gaaagaacfcg gtccfccatca tccttgtfcgg ttgccatggg aatgccagga 720
ttggtcaaag agtttctgcp actcagatga tatttagtgg cagcagtcca ggcaaaattg 780
ctgttgttgt taaagtccaa gttctttgac agtctctgtt gcctatagca gggfcccaggc 34 0
agccagttct fcfcgactactc ggccafcagta ttgggcccag cttgatgaaa ttgcagttcc 900
ctggtggaac ccgtggtgct ctgggtccgg gccaggtagt acaggtactg gtcgatgaga 960
gggttcatca gccggtctag gctctggctg tgcgcgtagc tgctgtggaa aggcacgtcc 102 0
tcgaagętgt aactgaactc aaagttgttg cccgttctca gcatttgaga ggggaaatat 1080
tccaggcagt agaaggagga acggcccacc gattggctgc cgttgttcag agtcaggtag 1140
100
PL 222 683 B1
ccęfcactcsG gaatcatgaa gscgtccgcc ggcascggag gcaggcagcc ctggtgcgca 1200
Gsgccęscga cgtacggcag C L-GCJlc. llCC aęacctcasc cgtgctggta 1260
aggttattsg cgatggtcgt ęacceegfccs ttcgtfcgtga cctccttgac ctggatgttg 132 0
sagagcttga accgcagctt cttgggccgg aatccccagt tgttgttgat gagtcgctgc 1330
cagtcacęćg gtgagaagtg gcagtggaat cfcęttaaagt caaaataccc ccagggggtg 1440
£ tGt 5GC Cya agtagtggtt gtcattggtg gctccfcgagc tgcfcgctcga gatttgcttg 1500
cags.egtgst tgttgtaggt sgggagggcc cagcttctgg tgctggtgct gsLtgsctccg ISffO
tcgcccagcc atgtcgaatc gcaatgccaa tttcctgagg CattaceCSC tccgtcggca 1620
ccttcgttat tgtctgccgt tggtacgcca ccgcctgcag ccattgtacc agatccc&ca 1630
ctagagggcg ctgctggagg ttctccaaga ggttgagggt cggagaetga ctctgagtcg 1740
ccagtctgac caaaattgag cttcttttta gcgggctgct ggcctttttt gccgatgccc 1300
gtggagc5.9t ctggagagtc tatgggtctc tcctttccag gagccgtctt agcgccttcc 1360
tcaaccagac cgagaggttc gagaacccgc ttcttggcct ggaagactgc tcgcccgagg 1920
ttgcccccaa atgacgtatc ttcttgcagg cgctcctgaa actcggcgtc ggcgtggtta 1930 taccgcaggt acggsttgtc acccgctttg agctgctggt cgtaggcctt gtcgtgctcg 2040 agggccgctg cgtccgccgc gttgacgggc tcccecttgt cgagtccgtt gaagggtccg 2100 aggtacttgt agccaggaag caccagaccc cggccgtcgt ectgcttttg ctggttggcfc 2150 ttgggttccg gggctccagg tttcaggtcc caccactcgo gaatgccctc agagaggttg 2220 tcctcgagcc aatctggaag ataaccatcg gcagccatac ccggtfctaag ccatttattg 2230 ctcagaaaca cagtcgtcca ggcccacgtt gaccaggtcg caggccgagc aggcaatctc 2340 gggtgcccgc cccagcagat gatgaatcgc acacagcttc cgatacgtct tttttctgac 2400 gaccggttga gattctgaca cgccggggaa acattctaaa cagtctctga ccccgtgcgt 2460 gaagcaaatg ttgaaatfcct gattcattct ctcgcacgtt ttgcagggaa acagcatctg 2320 aagcatgccc gcgtggcgag aacatttgtt ttggtacctg tcggcaaagt ccaccggagc 2330 tccttccgeg tctgacgtcg ateggtccgt gactgaggga caggcccgct tgggctcgct 2540 tatatccgcg tcatcggggg cgggtctttt gcfcggcfcccg ccctttctga cgtagaactc 270C atgcgtcacc tcagtcacgt gatcacfcagc ccagcggaag aactctttga cttcctgctt 27S0 tgtcaccttg ccaaagtcgt gttccagacg gcgggtgagt tcaaatttga acatccggtc 2320 ctgcaacggc tgctggtgct cgaaggtggt gctgttcccg tcgatcacgg cgcgcatgtt 2330 ggtgttggag gtgacgatca cgggggtggg atcgatctgg gcggacgact tgcacttttg 2940 gtccacgcgc accttgctgc cgccgagaat ggccttggcg gactccacga ccttggccgt 3000 catcttgccc tcctcccacc agatcaccat cttgtcgacg caatcgttga agggaaagtt 3050
PL 222 683 B1
101 cfccsttcgtc cagttgacgc agcaagggcg aattc 3095 <210> 25 <211> 3142 <212> DMA <213> nowy serotyp AAV, klon K6 <400> 25
aaaacgacgg gccagtgatt gtaatacgac tcactataag gcgaaattejo aattagcggc 60
cgcgaattcg cctttcgcag agaccaaagt tcaactgaaa cgasttasac ggtttattga 120
tfcaacaagca attacagatt acgagtcagg tatctggtgc caatggggcg aggctctgaa ISO
tacacaccat tagtgcccac agtaaagtcc acattaacag acttgttgta gttggaagtg 240
tactgaafctt cgggattcca gcgtttgctg ttctccttct gcagctccca ctcgatctcc 300
acgctgacct gtcccgtgga atactgtgtg atgaaagaag caaacttggc agaactgaag 360
tttgtgggag gattggctgg aacgggagtg tttttgatca tgatctgagg aggcgggtgt 420
ttgagtccaa aacctcccat cagtggagaa ggatgaaagc gtccatcggt gtgaggaatc 480
ttggcccaaa tgggtccctg caggtacacg tctcgatcct gccacaccat accaggtaac 540
gctccttggt aattgacagt tccagtagtt ggaccagtgt ttgagttttg caaattattt 600
gacacagtcc cgtactgctc cgtaaccacg ggattggtgg ccctgatttc ttcttcatct 660
gtaatcatga cattttccaa atccgcgtcg tfcggcatttg ttcctfcgttt accaaatafcc 720
agggttccat gcatggggaa aaacttttct tcgfccatcct tgtgactggc catagctggt 730
cctggattaa ccaacgagtc ccggccattt agatgatacc ttgtagctgc agtccaggga 340
aagttcctgt tgttgttgtc gtttgcctgt tttgacagac gctgctgtct gtagcaaggt 300
ccaggcagcc agtttttage ttgaagagac atgttggttg gtccagcttg gctaaacagt 960
agccgagact gctgaagagt tccactattt gtttgtgtct tgttcagata atacaggtac 1020
tggtcgatca gaggattcat cagccgatcc agactctggc tgtgagcgta gctgctgtgg 1030
aaaggcacgt cttcaaaagt gtagctgaac tgaaagttgt ttccagtacg cagcatctga 1140
gaaggaaagt actccaggca gtaaaaggaa gagcgtccta ccgcctgact cccgttgttc 1200
agggtgaggt atccatactg tgggaccatg aagacgtccg ctggaaacgg cgggaggcat 1260
cctćgatgcg ccgagcccag gacgtacggg agctggtact ccgagtcagt aaacscctga 1320
accgtactgg taaggttatt ggcaatcgtc gtcgtaccgt cattctgegt gacctctttg 1380
acttgaatat taaagagctt gaagttgagt cttttgggcc ggaatccccg gttgttgttg 1440
acgagtcttt gccagtcacg tggtgaaaag tggcagtgga atctgttgaa gtcaaaatac 1500
ccccaggggg tgctgtagcc aaagtagtgg ttgtcgttgc tggctcctga ttggctggag 1560
atttgcttgt ag=ggtggtt gttgtatgtg ggcagggccc aggttcgggt gctggtggtg 1620
102
PL 222 683 B1
atgaccctst cęcc csgc cćl ttgggaatcg caatgccaat ttcccgagga attacccact 16 S0
ccahcggcsc cctcgttatt gtctcccatt ccfcgcgccac tgcctgtsgc eattgcagta 1740
3eŁ tJCCęięfSC tgctggtggc tgtccgagag gctgggggtc sggh-acggsg 1900
Lctacgtctc csgtctga.ee aaaatttaat ctttttcttg caggctgctg gcccgctCtt 1860
ccggttcccg aggaggsgtc tggctccaca ggagagtgcfc ctaccggcct cttttttccc 1920
ggagccgtct ta&cagccte ctcaaccagg cccagaggt t caagaaccct ctttttcgcc 1990
tggaagactg ctcgtccgag gttgccccca aaagacgtat ettctttsag gcgctcctga 2040 aactctgcgt cggcgtggtt gtacttgagg tacgggttgt ctccgctgtc gagctgccgg 2100 tcgtaggcct tgtcgtgctc gagggccgcg gcgtctgcct cgttgaccgg ctcccccttg 2160 icgagtccgt tgaagggtcc gaggtacttg tacccaggaa gcacaagacc cctgctgtcg 2220 tccttatgcc gctctgcggg ctttggtggt ggtgggccag gtttgagctt ccaccactgt 2280 cttattcctt cagagagagt gtcctcgagc caatctggaa gataaccatc ggcagccata 2340 cctgatttaa atcatttatt gttcagagat gcagtcatcc aaatccacat tgaccagatc 2400 gcaggcagtg caagcgtctg gcacctttcc catgatatga tgaatgtagc acagtttctg 2460 atacgccttt ttgacgacag aaacgggttg agattctgac acgggaaagc actctaaaca 2520
gtctetctgt ccgtgagtga agcagatatt tgaattctga ttcattctct cgcattgtct 2390
gcagggaaac agcatcagat tcatgcccac gtgacgagaa catt tgtttt ggtacctgtC 2640
cgcgtagttg atcgaagctt ccgcgtctga cgtcgatggc tgcgcaactg actcgcgcgc 2700
ccgtttgggc tcacttatat ctgcgtcact gggggcgggt cttttcttag ctccaccctt 2760
tttgacgtag aattcatgct ccacctcaac cacgtgatcc fcŁŁgccca.cc ggaaaaagtc 2S20
tttcacttcc tgcttggtga cctttccaaa gtcatgatcc agacggcggg taagttcaaa 2830
tttgaacatc cggtcttgca acggctgctg gtgctcgaag gfccgttgagt tcccgtcaat 2940
cacggcgcac atgttggtgt tggaggtgac gatcacggga gtcgggtcta tctgggccga 3000
ggacttgcat ttctggtcca cacgcacctt gcttcctcca agaatggc11 tggccgactc 3060
cacgaccttg gcggtcatct tcccctcctc ccaccagatc accatcttgt cgacgcaatg 3120
gćaaaaggaa agttctcatt gg
2142 <210? 26 <211? 3076 <212> DNA <213? nowy serotyp AAV, klon. H2 <400> 26 tgagaacttt cctttcaacg attgcgtcgg acaagatggt gatctggtgg gaggagggga 60 agatgaccgc caaggtcgtg gagtcggcca aagccattct tggaggaagc aaggtgcgtg 120
PL 222 683 B1
103
tggaccagaa atgcaagtcc tcggcccaga tagacccgac tcccgtgatc gtcacctcca ISO
aeaccaacat gtgcgccgtg attgacggga actcaacgac cttcgagcac cagcagccgt 240
tgcaagaccg gatgttcaaa tttgaactta cccgccgtcfc ggatcatgac tttggaaagg 300
tcaccaagca ggaagtgaaa gactttttcc ggtgggcaaa ggatcacgtg gttgaggtgg 360
agcatgaatt ctacgtcaaa aagggtggag ctaagaaaag acccgccccc agtgacgcag 420
atataagtga gcccaaacgg gcgcgcgagt cagttgcgca gccatcaacg tcagacgcgg 480
aagcttcgat caactacgcg gacaggtacc aaaaacaaat gttctcgtea cgtgascatg 540
aatctgatgc tgtttccctg cagacaatgc gagagaatga atcagaattc aaatatctgc 600
Ltcactcacg gacagaaaga ctgtttagag fcgctttcccg tgtcagaatc tcaacccgtt 660
tctgtcgtca aaaaggcgta tcagaaactg tgctacattc atcatatcafc gggaaaggtg 720
ccagacgctt gcactgcctg cgatctggtc aatgtggatt tggatgactg catctctgaa 780
caafcaaatga tttaaatcag gtatggctgc cgatggttat cctccagatt ggctcgagga 840
cactctctct gaagggataa gacagtggtg gaagctcaaa cctggcccac caccaccaaa 900
gcccgcagag cggcataagg acgacagcag gggtcttgtg cttcctgggć acaagtacct 960
cggacccttc aacggactcg acaaggggga gccggtcaac gaggcagacg ccgcggccct 1020
cgagcacgac aaggcctacg accggcagct cgacagcgga gacaacccgt acctcaagta 1080
caaccacgcc gacgcagagt fcfccaggagcg ccttaaagaa gatacgtctt ttgggggcaa 1140
cctcggacga gcagtcttcc aggcgaaaaa gagggttctt gaacctctgg gcctggttga 1200
ggaacctgtt aagacggctc cgggaaaaaa gaggccggta gagcactctc ctgtggagcc 1260
agactcetcc tcgggaaccg gaaaagcggg ccagcggcct gcaagaaaaa gattaaattt 1320
tggtcagact ggagacgcag actccgtacc tgacacccag cctctcggac agccaccagc 1380
agccccctct ggtctgggat ctactacaat ggctacaggc agtggcgcac caatggcaga 1440
caataacgag ggtgccgatg gagtgggtaa ttcctcagga aattggcatt gcgattccca 1500
atggctgggc gacagagtca tcaccaccag cacccgaacc tgggcccfcgc ccacatacaa 1560
caaccacctc tacaagcaaa tctccagcca atcaggagcc agcaacgaca accactactt 1620
tggctacagc accccctggg ggtafctttga cttcaacaga ttccactgcc acttttcacc 1680
acgtgactgg caaagactca tcaacaacaa ctggggatfcc cggcccaaaa gactcaactt 1740
caagctcttt aatattcaag ccaaagaggt cacgcagaat gacggtacga cgacgattgc 1800
caataacctt accagcacgg ttcaggtgtfc tactgactcg gagtaccagc tcccgtacgt 1860
cctgggctcg gcgcatcaag gafcgcctccc gccgtttcca gcggacgtct teatggtccc 192 0
acagtatgga tacctcaccc tgaacaacgg gagtcaggcg gtaggacgct cttcetttta 1980
ctgcctggag fcactttcctt ctcagatgct gcgtactgga aacaactttc agttcagcta 2040
104
PL 222 683 B1 zactttigaa ęacgtgcctt tccacaecag ctacgcocac agccagsgtc tggatcggct 2100 gafcgaatcet ctgatcgacc agcaccfcgfcs ttatctgaac aagacacaaa caaatagtgg 2150 aactcttcag cagtctcggc tactgtttag ccaagctgga ccaaccaaca tgtctcttca 2220 agctaaaaac tggctgcctg gaccttgcta cagacagcag cgtctgtcsa aacaggcaaa 22S0 caacaacaac aacageaact ttecctggac tgcsgctaca aagtatcatc taastggccg 2340 ggactcgttg gttaatccag gaccagctat ggccagtcac aaggatgacg aagaaaagtt 2400 tttccccatg catggsaccc tgatatttgg taaacaagga acaaatgcca acgacgcgga 2450 tttggaaaat gtcatgatta csgatgaaga agaaatcagg gccaccaatc ccgtggctac 2520 ggagcagtac gogactgćgt caaataattt gcaasactca aacaccggtc caactactgg 2580 aactgtcaat cgccaaggag cgttacctgg tatggtgtgg caggatcgag acgtgfcacct 2640
gcagggaccc atttgggcca sęrs t ύ cc t c a. caccgacgga cactttcatc cttctccact 2700
gatgggaggt tttggactca ascscccgcc tccfccagatc atgatcaaaa acactcccgt 2760
tccagccaat cctcccacaa actizcagctc Cgccaagttt gctfcctttca tcacacagta 2820
ttccacggga caggfccagcg Cgaacatcga gćgggagctg cagaaggsga acagcaaacg 2830
cfcggaatccc gaaattcagt acacfctccaa ctacaacaag tctgttaatg tggactttac 2540
aatggtgtgt attcagagcc fccgccccatt ggcaccagat acctgacteg 3000
taatctgtaa ttgcttgtta a t c c.at a a s. c cgtfctaattc gttfccagttg aactttggtc 3060
tctgcęaagg gcgaa 3075 <210> 27 <211> 3123 <212> DNA <213> 42.3 <400> 27
gaattcgccc tttctacggc tgcgtcaact ggaccaatga gaactttccc ttcaacaatt 60
gcgtcgacaa gatggtgatc tggtgggagg agggcaagat gacggccaag gtcgtggagfc 120
ccgccaaggc cattctcggc ggcagcaagg tgcgcgtgoa ccaaaagtgc aagtcttccg 180
cccagatcga tcccaccccc gtgatcgtca cttccaacac caacatgtgc gccgtgattg 240
aęgggsscag caccaccttc gagcaccagc agccgttaca agaccgcatg ttcaaatCtg 300
aactcacccg ccgtcfcggag cacgactttg gcaaggtgac aaagcaggaa gtcaaagagt 360
tcttccgctg ggcgcaggat cacgtgaccg aggtggcgca tgagttctac gtcagaaagg 420
gtggagecaa caagagaccc gcccccgatg acgcggataa aagcgegccc aagcgggcct 480
gcccctcagt cacggatcca tcgacgtcag acgcggaagg agctccggtg gactttgccg 540
acaggtacca aaacaaatgt tctcgtcacg cgggcatgct tcagatgctg tttcccfcgca 600
agacatgcga gagaatgaat cagaafcttca acatttgctt cacgcacggg accagagact 660
PL 222 683 B1
105 gttcagsatg tttccccggc gtgtcagaat ctcasccggfc cgtcagaaag aggacgtatc 720 ggaasctcta tgccattcat catctgctag ggcgggctcc cgagsttgct tgctcggcct 730 gcgatctggt caacgtggac ctggatgact gtgtttctga gcaataaatc acttaaacca 840 ggtatggctg ccgatagtta tcttecagat tgcctcgagg acaacctctc tgagggcatt 900 cgcgagtggt gggacttgaa acctggagce ccgaaaccca aagccaacca gcaaaagcag 960 gacgacggcc ggggtctggt gcttcccggc tacaagtacc tcggaccctt caacggactc 1020 gacaaggggg agcccgtcaa cgcggcggac gcagcggccc tcgagcacga caaggcctac 1050 gaccagcagc tcaaagcggg tgacaatccg tacctgcggt ataaccacgc cgacgccgag 1140 tttcaggagc gtctgcaaga agatacgtct tttgggggca acctcgggcg agcagtcttc 1200 caggccaaga agcgggttct cgaacctctc ggtctggttg aggaaggcgc taagacggct 1260 cctggaaaga agagaccggt agagccatca ccccagcgtt ctccagactc ctctacgggc 1320 atcggcaaga caggccagca gcccgcgaaa aagagactca actttgggca gactggcgac 1380
tcagagtcag tgcccgaccc tcasccaatc ggagaacccc ccgcaggccc ctctggtctg 1440
ggatctggta caatggctgc agacggtggc gctccaatgg cagacaataa cgaaggcgcc 1500
gacggagtgg gtagctcctc aggaaattgg cattgcgatt ccacatggct gggcgacaga 1560
gtcatcacca ccagcacccg aacctgggcc ctccccacct acaacaacca cctctacaag 1620
caaatctcca acgggacatc gggaggaagc accaacgaca acacctactt cggctacagc 16B0
accccctggg ggtattttga ctttaacaga ttccactgcc acttcecacc acgtgactgg 1740
cagcgactca tcaacaacaa ctggggattc cggcccaaga gactcaactt caagctcttc 1800
aacatccagg tcaaggaggt cacgcagaat gaaggcacca agaccatcgc caataacctt 1860
accagcacga ttcaggtctt tacggactcg gaataccagc tcccgtacgt cctcggctct 1920
gcgcaccagg gctgcctgce tccgttcccg gcggacgtct tcatgattcc tcagtacggg ISSO
tacctgactc tgaacaacgg cagtcaggcc gtgggccgtt cctccttcta ctgcctggag 2040
tactttcctt ctcaaatgct gagaacgggc aacaactttg agttcagcta ccagtttgag 2100
gacgtgcctt ttcacagcag ctacgcgcac agccaaagcc tggaccggct gatgaacccc 2160
ctcatcgacc agtacctgta ctacctgtct cggactcagt ccacgggagg taccgcagga 2220
actcagcagt tgctattttc tcaggccggg cctaataaca tgtcggctca ggccaaaaac 2280
tggctacccg ggccctgcta ccggcagcaa cgcgtctcca cgacactgtc gcaaaataac 2340
aacagcaact ttgcttggac cggtgccacc aagtatcatc tgaatggcag agactctctg 2400
gtaaatcccg gtgtcgctat ggcaacgcac aaggacgacg aagagcgatt ttttccatcc 2460
agcggagtct tgatgtttgg oaaacaggga gctggaaaag acaacgtgga ctatagcagc 2520
gttatgctaa ccagtgagga agaaatcaaa accaccaacc cagtggccac agaacagtac 2580
106
PL 222 683 B1
ggegtggtęg ccgataacct gcaacsgcaa aacgcccctc crattgtsgg ggccgtcaac 264 0
sgtcssggac ccfctacctgg catggtctgg c agaaccggg acgtctacct gcagggtcct 2700
sizccęgęccd Sgattcetca Cacggacggc asctttcaLc ctLcgccgct gatgggagcc 2750
ćtfcggactga ćscscccgcc t c c tc ag s. t c ctgactS-sga atacaccfcgt tcccgcggat 2320
cctccsacta ccttcagtca agccaagctg gcgtcgttca tcacgcagta cagcaccgga 2330 caggtcsgcg tggaaattga atgggagctg cagsaagaga acagcaagcg ctggaaccca 2940 gagsttcagt atacttccaa ctactacaaa ęctacaaatg tggactttgc tgtcaatact 3000 gagggtactt attcagagcc tcgccccatt ggcacccgtt acctcacccg tsacctgtaa 3060 ctgectgtta atcaataaac cggctaattc gtttcagttg aactttggtc tctgcgaagg 3120 gcgaattc 3128 <210> 28 <211> 33-28 <212> DNA <213> nowy serotyp AAV, klon 42.15 <400> 28
gaattcgccc tttctacggc tgcgtcaact ggaccaatga gaactttcec ttcaaccatt 60
gcgtcgacaa gatggtgatc tggtgggagg scggcHsgsfc gacggccsag gtcgtggagt 120
ccgccaaggc cattctcggc ggcagcaagg tgcgcgtgga ccassagtgc aagtcgtccg 130
cccagatcga ccccaccccc gtgatcgtca cctccaacsc caacstgtgc gccgtgattg 240
acęggaacag caccaccttc gagcaccagc agccgttgca gga.ccgga tg ttcaaaettg 300
aeCtC&CCCg ccgtccggag catgactttg gcaaggtgac aasgcaggaa gtcaaagagt 3 50
tcttccgctg ggcgcaggat cacgtgaccg aggtggcgca tgagćtctac gtcagaaagg 420
gfcggagccaa caagagaccc goccccgatg acgcggataa aagcgagccc aagcgggcct 480
gcccctcagt cgcggatcca tcgacgtcag acgcgaaagg agctccggtg gactttgccg 540
acaggcscca aaacaaatgt tctcgtcacg cgggcatgct tcagatgctg tttccctgca 600
agacatgcga gagaatgaat cagaatttca acatttgctt cacgcgcggg accagagact 660 gttcagaatg tttcccgggc gtgtcagaat ctcaaccggt cgtcagaaag aggacgtatc 720 ggaaactctg tgccattcafc catctgctgg gacgggctcc cgagattgct tgctcggcct 730 gcgatctggt caacgtggac ctggatgact gtgtttctga gcaataaatg acttaaacca 340
ggtatggctg ccgatggtta tcttccagat tggctcgagg acaacctcfcc tgagggcatt 900
cgcgsgtggt gggacttgas acctggagcc ccgaaaccca aagecaacca gcaaaagcag 550
gacgacggcc ggggtctggt gcttcctggc tacaagfcacc tcggacccfcfc caacggactc 1020
gacaaggggg agcccgtcaa cgcggcggac gcagcggccc tcgagcacga caaggcctac 1080
PL 222 683 B1
107
□accagcagc tcaaagcggg tgacaatccg tacctgcggt ataaeeacgc cgacgccgag 1140
tttcaggagc gtctgcaaga agatacgtct tttgggggca acctcgggcg agcagtcttc 1200
caggccaaga agcgggttct cgaacctctc ggtctggttg aggaaggcgc taagacggct 1260
cctggaaaga agagaccggt agagccatca ccccagcgtt ctccagactc ctctacgggc 1320
atcggcaaga caggccagca gcccgcgaaa aagagactca actttgggca gactggcgac 1360
tcagagtcag tgcccgaccc tcaaccaatc ggagaacccc ccgcaggccc ctctggtctg 1440
ggatctggta castgcctgc aggcgatggc gctccaatgg cagacaataa cgaaggcgcc 1500
gacggagtgg gtaattcctc aggaaattgg cattgcgact ccacatggct gggcgacaga 1560
gtcatcacca ccagcacccg aacctgggcc ctccccacct acascaaccs cctctacaag 1620
caaatctcca acgggacatc gggaggaagc HCCc ĆLCŁJĆLC £ acacctactt cggctacagc 1680
accccctggg ggtattttga ctttaacaga ttccactgcc acttcfccacc acgtgactgg 1740
cagcgactca tcaacaacaa ctggggattc cggcccaaga gactcaactt caagctcttc 1300
aacatccagg tcaaggaggt cacgcagaat gaaggcacca agaccatcgc caataacctt 1360
accagcacga ttcaggtctt tacggacccg gaataccagc tcccgtacgt cctcggctct 1920
gcgcaccagg gctgcccgcc tccgttcccg gcggacgtct tcatgattcc tcaatacggg 1930
taccfcgactc tgaacaacgg cagtcaggcc gtgggccgtt cctccttcta ctgcctggag 2040
tacfcttcctt ctcaaatgcg gagaacgggc aacaactttg agttcagcta ccagtttgag 2100
gacgtgccfct ttcacagcag ctacgcgcat agccaaagcc tggaccggct gatgaacccc 2160
ctcatcgacc agtaccfcgta ctacctgtct cggactcagt ccacgggagg taccgcagga 2220
actcagcagt tgctattttc tcaggccggg cctaataaca tgtcggctca gaccaaaaac 2280
tggctacccg ggccctgcta ccggcagcaa cgcgtctcca cgacactgtc gcaaaataac 2340
aacagcaact ttgcttggac cggtgccacc aagtatcatc tgaatggcag agactctctg 2400
gtaaatcccg gtgtcgctat ggcaacgcac aaggacgacg aagagcgatt Ctttccatcc 2460
agcggagtct tgatgtttgg gaaacaggga gctggaaaag acaacgtgga ctatagcagc 2520
gttatgctaa ccagtgagga agaaatcaaa accaccaacc cagtggccac agaacagtac 2530
sgcgtggtgg ccgataacct gcaacagcaa aacgccgctc ctattgtagg ggccgtcaac 2640
agtcaaggag ccttacctgg catggtctgg cagaaccggg acgtgtacct gcagggtcct 2700
atctgggcca agattcctca cacggacggc aactttcatc cttcgccgct gatgggaggc 2760
tttggactga aacacccgcc tcctcagatc ctgattaaga atacacctgt tcccgcggat 2320
cctccaacta ccttcagtca agccaagctg gcgtcgttca tcacgcagta cagcaccgga 28Θ0
caggtcagcg tggaaattga atgggagctg cagaaagaga acagcaagcg ctggaaccca 2940
gagattcagt atacttccaa ctactacaaa tctacaaatg tggactttgc tgtcaatact 3 000
108
PL 222 683 B1 gaggętactt attcagagcc tcgccccatt ggcacccgct acctcacccg fcaacefcataa 3060 ctgcctgtts atcaataaac cggttaattc gtttcagttg aactttggtc tctgcgaagg 3120 gcgaattc 3123 <210> 25 <211» 3197 <212» DMA <213» nowy serotyp ΑΆΥ, klon 42.5b <400» 29 gaatfccgccc tttctacggc tgcgteaact ggaccaatga gaactttccc ttcaacgatt 50 gcgtcąacaa gatggtgatc tggtgggagg agggcaagat gacggccaag gtcgtggact 120 ccgccaaggc cattctcggc ggcagcaagg tgcgcgtgga ccaaaagtgc aagtcgtccg 130 cccagatcga ccccaccccc gtgatcgtca cctccaacac caacatgtgc gccgtgattg 240 acgggaacag caccaccttc gagcaccagc agccgttaca agaccggatg fctcsaatttg 300 aactcacccg ccgtctggaa cacgactttg gcaaggtgac aaagcaggas gtcaaagagt 360 tcttccgctg ggcgcaggat cacgtgaccg aggtggcgca tgagtcctac gtcagaaagg 420 gfcggagccaa caagagaccc gcccccgatg acacggataa aagcgagccc aagcgggcct 450 gcccctcagt cgcggatcca tcgacgtcag acgcggaagg agctccggtg gaefcfctgccg 540 aoaggtacca aaacaaatgt tctcgtcacg cgggcatgct tcagatgctg tttccctgca 600 agacatgcga gagaatgaat cagaatttca acatttgctt cacgcacggg accagagact £60 gttcagaatg tttccccggc gtgtcagaat ctcaaccggt cgtcagaaag aggacctatc 720
ggaaactctg tgccattcat catctgctgg ggcgggctcc cgagattgct tgcfccggcct 780
gcgatcfcggfc caacgtggac ctggatgact atgtttctga gcaataaatg acttaaacca 840
ggtatggctg ccgatggtta tcttccagat tggctcgagg acaacctctc tgagggcatt 900
cgcgagtggt gggacttgaa acctggagcc ccgaaaccca aagccaacca gcaaaagcag 960
gacgacggcc ggggtctggt gcttccfcggc tacaagtacc tcggaccctt caacggactc 1020
gacaagggag agccggtcaa cgaggcagac gccgcggccc tcgagcacga caaggcctac 1030
gacaagcagc tcgagcaggg ggacaacccg tacctcaagt acaaccacgc cgacgccgag 1140
tttcaggagc gtcfctcaaga agatacgtct tttgggggca acctcgggcg agcagtcttc 1200
caggccaaga agcgggttct cgaacctctc ggtctggttg aggaaggcgc taagacggct 1260
cctggaaaga agagaccggfc agagccatca ccccagcgtt ctccagactc ctctacgggc 1320
atcggcaaga caggccagca gcccgcgaaa aagagactca a.ctttgggca gactggcgac 1330
tcagagtcag tgcccgaccc tcaaccaatc ggagaacccc ccgcaggccc ctctggtctg 1440
ggatctggta caatggctgc aggcggtggc gctccaatgg caaacaataa cgaaggcgcc 1500
gacggagtgg gtagttcctc aggaaattgg cattgcgatt ccacatggct gggcgacaga 1560
gtcatcacca ccagcacccg aacctgggcc ctccccacct acaacaacca cctctacaag 1620
PL 222 683 B1
109
caaatctcca acgggacatc gggaggaagc accaacgaca acacctactt cggctacagc 1660
accccctggg ggtattttga ctttaacaga ttccactgcc acttctcacc acgtgactgg 1740
cagcgactca tcaacaacaa ctggggattc cggcccaaga gactcaactt caagctcttc iaoo
aacatccagg tcaaggaggt cacgcagaat gaaggcacca agaccatcgc caataacctt 1860
accagcacga ttcaggtctt tacggactcg gaataccagc tcccgtacgt cctcggctct 1920
gcgcaccagg gctgcctgcc tccgttcccg gcggacgtct tcatgafctcc tcagtacggg 1980
Łacctgactc tgaacaacgg cagtcaggcc gtgggccgtt cctccttcta ctgcctggag 2040
tactttcctt ctcaaatgct gagaacgggc aacaactttg agttcagcta ccagtfctgag 2100
gacgtgcctt ttcacaacag ctacgcgcac agccaaagcc tggaccggct gatgaacccc 2160
ctcatcgacc agtacctgta ctacctgtct cggactcagt ccacgggagg taccgcagga 2220
actcagcagt tgctattttc tcaggccggg cctaataaca tgtcggctca ggccaaaaac 2280
tggctacccg ggccctgcta ccggcagcaa cgcgtctcca cgacactgtc gcaaaataac 2340
aacagcaact ttgcttggac cggtgccacc aagtatcatc tgaatggcag agactctctg 2400
gfcaaatcccg gtgfccgctat ggcaacgcac aaggacgacg aagagcgatt ttttccatcc 2460
ageggagtct taatgtttgg gaaacaggaa cctggaaaag acaacgtgga ctatagcagc 2520
gttatgctaa ccagtgagga agaaatcaaa accaccaacc cagtggccac agaacagtac 2580
ggcgtggtgg ccgataacct gcaacagcaa aacgccgctc ctatcgtagg ggccgtcaac 2640
agtcaaggag ccttacctgg catggtctgg cagaaccggg acgtgfcacct gcagggtcct 2700
atctgggcca agattcctca cacggacggc aactttcatc cttcgccgct gstgggaggc 2760
tttggactga aacacccgcc tcctcagatc ctgattaaga atacacctgt tcccgcggat 2820
cctccaacta ccttcagtca agccaagctg gcgtcgttca tcacgcagta cagcaccgga 2880
caggtcagcg tggaaattga atgggagctg cagaaagaga acagcaagcg ctggaaccca 2940
gagattcagt atacttccaa ctactacaaa tctacaaatg tggactttgc tgtcaatact 3000
gagggtactt attcagagcc tcgccccatt ggcacccgtt acctcacccg taacctgtaa 3060
ttgcctgtta atcaataaac cggttaattc gtttcagttg aactttggtc tctgcgaagg 3120
gcgaattcgt fctaaacctgc aggactagtc cctttagtga gggttaattc tgagcttggc 3180
gtaatcatgg gtcatag 3197
<210> 30 <211> 2501 <212> DHA <213> nowy serotyp AAV, klon 42.Ib <400> 30 gaattcgccc ttggctgcgt caactggacc aatgagaact ttcccttcaa cgattgcgtc 60
110
PL 222 683 B1
^gccgauggu uaccttccag attgccccga ggacaaccLc tctgagggca efccgcgagtg 300 gi-gg—acutg agacctggag cccccaaacc caaagccaac cagoaaaagc aggacgacgg 360 ocggggtctg gtgcttcctg gctacaagta cctcggaccc ttcaacggac tcgacaaggg 420 agagccggtc aacgaggcag acgccgcggc cctcgagcac gacaaggcct acgacaagca 480 gctcgagcag ggggacaacc cgtacctcaa gtacaaccac gccgacgccg agtttcagga 540 gcatcttcaa gaagatacgt cttttggggg caacctcggg cgagcagtct tccaggccaa 600 gaagcgggtt cfccgaacctc tcggtctggt tgaggaaggc gctaagacgg ctcctggaaa 660
gaagagaccc stagaatccc ccgactcctc cecgggcstc ggcsagaaag gccagcagcc 72 0
cgct3333Hg «gactcaact ttgggcagac tggcgactca gagtcagtgc ccgaccctca 7S0
accaatcgga gaaccccccg caggcccctc tggtctggga tctggcacaa tggctgcagg 840
cagtggcgct ccaatggcag acaataacga aggcgccgac ggagtgggta gttcctcagg 90 0
aaafctggcat tgcgattcca catggctggg cgacagagtc atcaccacca gcacccgaac 350
ctgggcectc cccacctacs acaaccaccc ctscaagcaa atctcc-acg ggacatcggg 1020
aggaagcacc aacgacaaca cctacttcgg ctacagcacc ccctgggggt attttgsctt 1080
taacagafctc cactgccact tctcaccacg tgactggcag cgactcatca acaacaactg 1140 gggatfcccgg cccaagagsc tcsacttcaa gctcttcaac atccaggtca aggaggtcac 1200
gcagaatgaa ggcaccaaga ccatcgccaa taaccctacc agcacgattc aggćctttac 1260
ggactcggaa fcaccagctcc catacgtcct cggctctgcc caccagggct gcctgcctcc 1320
gttcccagcg gscgtcttcs. tgattcctca gtacgggtac ctgactccga acaacggcag 1380
tcaggccgtg agccgttcct ccttctaccg cctggagtac tttccttctc aaatgccgag 144 0
aacaggcaac s.4ctttgsigt tcagctacca gttfcgaggac gtgccttttc acagcsgcta 1500
tgcgcacagc caaagcctgg accggctgat gaaccccctc atcgaccagt acctgtacta 1560
cctgtctcgg actcagtcca cggaaggtsc cgcaggsact cagcsgttgc tattttccca 1620
ggccgggcct aataac atgc cggctcaggc caaaaactgg ctacccgggc cctgctaccg 1530
gcagcaacgc gtctccacga cagtgccgca aaataacaac agcaactttg cttggaccgg 1740
tgccaccaag tatcatctga atggcagaga ctctctggta aatcccggtg tcgctatgac 1800
aacgcacaag ggcgacgsag agcgattttt tccatccagc ggagtcttga tgtttgggaa 1360
acagggsgct gg22aagaca acgtagacta tagcsgcgtt atgctaacca gtgaggaaga 1920
aatcaaaacc accsacccag tggccacaga acagtacggc gtggtggccg ataacctgca 1980
PL 222 683 B1
111
acagcaaaac gccgctccta ttgtaggggc cgtcaacagt caaggagcct tacctgccat 2040
ggtctggcag aaccgggacg tgtacctgca gggtcctatc tgggccaaga ttcctcacac 2100
ggacggcaac tttcatcctt cgccgctgat gggaggcttt ggactgaaac scccgccfccc 2160
tcagatcctg attaagaats cacctgttcc cgcggatcct ccaactacct tcagtcaagc 2220
caagctggcg tcgttcatca cgcagtacag caccggacag gtcagcgtgg aaatfcgaatg 2280
ggagctgcag aaagagaaca gcaagcgctg gaacccagag attcagfcata cttccaacta 2340
ctacaaatct acaaatgtgg actttgctgt caatactgag ggtacttatt cagagcctcg 2400
Gcccattggc acccgtcacc tcacccgtaa cctgtaattg cctgttaatc aataaaccgg 2460
fctgattcgtt tcagttgaac tttggtctca agggcgaatt c 2501
<210> 31 <211» 3113 <212> DNA <213> nowy serotyp AAV, klon 42.13 <400> 31
gaattcgccc tttctacggc tgcgtcaact ggaccaatga gaactttccc ttcaacgatt 60
gcgtcgacaa gatggtgatc tggtgggagg agggcaagat gacggccaag gtcgtggagt 120
ccgccaaggc cattctcggc ggcagcaagg tgcgcgtgga ccaaaagtgc aagtcgtccg 180
cccagatcga tcccaccccc gtgatcgtca cttccaacac caacatgtgc gccgtgattg 240
acgggaacag caccaccttc gaacaccagc agccgttaca agaccggatg ttcaaatttg 300
aactcacccg ccgtctggag eatgactttg gcaaggtgac aaagcaggaa gtcaaagagt 360
tcttccgctg ggcgcaggat cacgtgaccg aggtggcgca tgagttctac gtcagaaagg 420
gtggagccaa caagagaccc gcccccgatg acgcggataa aagcgagccc aagcgggcct 430
gcccctcagt cgcggatcca tcgacgtcag acgcggaagg agctccggtg gactttgccg 540
acaggtacca aaacaaatgt tctcgtcacg cgggcatgct teagatgetg tttccctgca 600
agacatgcga gagaatgaat cagaatttca acatttgctt cacgcacggg accagagact 660
gttcagaatg tttccccggc gtgtcagaat ctcaaccggt cgtcagaaag aggacgtatc 720
ggaaactctg tgccattcat catctgctgg ggcgggctcc egagattget tgctcggcct 730
gcgatctggt caacgtggac ctggatgact gtgtttctga gcaataaatg acttaaacca 840
ggtatggctg ccgatggtta tcttecagat tggctcgagg acaacctctc tgagggcatt 900
cgcgagtggt gggacttgaa acctggagcc ccgaaaccca aagccaacca gcaaaagcag 960
gacgacggcc ggggtctggt gcttcctggc tacaagtacc tcggaccctt caacggactc 1020
gacaaggggg agcccgtcaa cgcggcggac gcagcggccc tcgagcacga caaggcctac 1080
gaccagcagc tcaaagcggg tgacaatccg tacctgcggt ataaccacgc cgacgccgag 1140
tttcaggagc gtcttcaaga agatacgtct tttgggggca acctcgggcg ageagtette 1200
112
PL 222 683 B1 caggccaaga agcgggttct cgaacctctc ggtctggttg aggaaggcgc taagacggct 1260 cctggaaaga agagacccat agaatccccc cactcctcca cgggcatcgc caagaaacec 1320 cagcagcccg ctaaaaagaa gctcaactct gggcagactg gcgacfccaga gtcagtgccc 1380 gaccctcaac caatcggaga accccccgca ggccccfcctg gtctgggatc tggtacaatg 1440 gctgcsggcg gtggcgctcc aatggcagac aatsacgaag gcgccgacgg agtgggtagt 1500
ccctcaggas attggcattg cgattccaca tggctgggcg acagagtcat caccaccagc 1560
sccccaaccfc gggccctccc caccfcacaac aaccacctct acaagcaaat cfcccsacggg 1620
acatcgggag gaagcaccaa cgs.c££.csc c tacfcfccggcz scagcaccce ctgggggtac 1630
Σ-t tgS.C 111 a acagatfccca ctgccacttc tcaccacgfcg acfcergcagcc sctzcsucaac 1740
aacaactggg gattccggcc casgagactc aacttca&gc tcttcascat. ccaggtcaag 1800
gaggtcacgc c 03. £ lQ32 GO caceasgacc atcgccaata accttaccag cacgattcag 1860
gcctttacgg actcggaata ccagctcccg tacgtcctcg gctctgcgca ccagggctgc 1920 ctgcctccgt tcccggcgga cgtcttcatg attcctcagt acgggtacct gaetctgaac 1980 l
aacggcagtc aggccgtgga ccgttcctcc ttctactgcc tggagtactt tccttctcaa 2040 atgctgsgaa cgggcaaeaa ctttgagttc agctaccagt ttgagcacgt gcctfcttcac 2100 agcagctatg cccacagcca aagcctggac cggctgatga accccctcat cgaccagtac 2160 ctgtactacc tgtctcggac tcagtccacg ggaggtaccg caggaactca gcagttgcta 2220 ttfctctcsgg ccgggcctaa taacafcgtcg gctcaggcca aaaactggct acccgggccc 2230 tgctaccggc agcaacgcgt ctccacgacs gtgtcgcasa ataacaacag caactttgct 2340 tggaccggtg ccaccaagta tcatcfcgaat ggcagagact cfcctggtaaa tcccggtgtc 2400 gccatggcaa cgcacaaggg cgacgaagag cgattttttc catccagcgg agtcttgatg 2460
tttgggaaac agggagctgg aaaagacaac gtggactata gcagcgttat gctaaccagt 2520
gaggaagaaa tcaaaaccac caacccagtg gccacaeraac agtacggcgt ggtggccgat 2580
aacctgcaac agcaaaacgc cgctcctatt gtaggggccg tcaacagtca aggagcctta 2640
cctggcatgg tctggcagaa ccgggacgtg tacctgcagg gtcctatctg ggccaagatt 2700
cctcacacgg acggcaactt tcatccttcg ccgcfcgatgg gaggctttgg actgaaacac 2760
ccgcctcctc agatcctgat taagaatac a cctgttcccg cggatcctcc aactaccttc 2820
agtcaagcca agctggcgtc gttcatcacg cagtacagca ccggacaggt cagcgtggaa 2880
attgaatggg agctgcagaa agagaacagc aagcgctgga acccagagat tcagtatact 2940
tccaactact acaaafcctac aaatgtggac tttgctgtca atactgaggg tacttattca 3000
gagcctcgcc ccatcggcac ccgttacctc acccgtagcc tgtaattgcc tgttaatcaa 3060
taaaccggtt gattcgtttc agttaaactt tggtctctgc gaagggcgaa ttc 3113
PL 222 683 B1
113
<210> 32 <211> 3113 <212 > DNA <213 > nowy sarotyp A AV, klon 42 .3a
<400> 32 gaattcgccc tttctacggc tgcgtcaact ggaccaatga gaactttccc ttcaacgatt 60
gcgtcgacaa gatggtgatc tggtgggagg agggcaagat gacggccaag gtcgtggagt 120
ccgccaaggc cattctcggc ggcsgcaagg tgcgcgtgga ccaaaagtgc aagfccgtccg 180
cccagatcga tcccaccccc gtgatcgtca cttccaacac caacatgtgc gccgtgattg 240
acgggaacag caccaccttc gagcaccagc agccgttaca agaccggatg ttcaaatctg 300
aactcacccg eegtctggag catgactttg gcaaggtgac aaagcaggaa gtcaaagagt 360
tcttccgctg ggcgcaggat cacgtgaccg aggtggcgca tgagttctac gtcagaaagg 420
gtggagccaa caagagaccc gcccccgatg acgcggataa aagcgagccc aagcgggcct 430
gcccctcagt cgcggatcca tcgacgtcag acgcggaagg agctccggtg gactttgccg 540
acaggtacca aaacaaatgt tctcgtcacg cgggcatgct tcagatgctg cttccctgca 600
agacatgcga gagaatgaat cagaatttca gcatfctgctt cacgcacggg accagagact 6 6Q
gttcagaatg tttccccggc gtgtcagaat ctcaaccggt cgtcagaaag aggacgtatc 720
ggaaactctg tgccattcat catctgctgg ggcgggctcc cgagattgct tgctcggcct 780
gcgatctggt caacgtggac ctggatgact gtgtttctga gcaataaatg acttaaacca 840
ggtatggctg ccgatggtca tcttccagat tggctcgagg acaacctcćc tgagggcatt 900
cgcgagtggt gggacttgaa acctggagcc ccgaaaccca aagccaacca gcaaaagcag 960
gacgacggcc gaggtctggt gcttcctggc tacaagtacc tcggaccctt caacggactc 1020
gacaaggggg agcccgtcaa cgcggcggac gcagcggccc tcgagcacga caaggcctac 1080
gaccagcagc tcaaagcggg tgacaatccg tacctgcggt ataaccacgc cgacgccgag 1140
tttcaggagc gtcttcaaga agatacgtct tttgggggca acctcgggcg agcagtcttc 1200
caggccaaga agagggttct cgaacctctc ggtctggttg aggaaggcgc taagacggct 1260
cctggaaaga agagacccat agaatccccc gactcctcca cgggcatcgg caagaaaggc 1320
cagcagcccg ctaaaaagaa gctcaacttt gggcagactg gcgactcaga gfccagtgccc 1380
gaccctcaac caatcggaga accccccgca ggcccctctg gtctgggatc tggtacaatg 1440
gcfcgcaggcg gtggcgctcc aatggcagac aataacgaag gcgccgacgg agtgggtagt 1500
tcctcaggaa attggcattg cgattccaca tagctgggcg acagagtcat caccaccagc 1560
acccgaacct gggccctccc cacctacaac aaccacctct acaagcaaat ctccaacggg 1620
acatcgggag gaagcaccaa cgacaacacc tacttcggct acagcacccc ctgggggtat 1680
tttgacttta acagattcca ctgccacttc tcaccacgtg actggcagcg actcatcaac 1740
114
PL 222 683 B1 aacagctggg gattccggcc caagagactc aacttcaagc tcttcaacat ccaggtcaag 1800 gaggtcacgc agaatgaagg caccaagace atcgccaata accttaccag cacgattcag ISfiO gtctttacgg actcggaata ecagctcccg tacgtcctcg gctctgcgca ccagggctgc IS20 ctgcctccgt tcccggcgga cgtcttcatg attcctcagt acgggtacct gactctcaac 1980
s.acggcagtc aogccęrtggg ccgttcctcc ttctactgcc tggagtactt tccttctcaa 204 0
5tęcŁęa.gaa cgggcaacaa ctttgagttc agctaccagt ttgaggacgt gccttttcac 2100
sgcagctacg cgcacagcca aagcctggac cggctgatga acccecteat cgaccagtac 2160
□ tCrt&CfcŁCC Cctctcggac tcagtccacg ggaggtaccg caggaactca gcagttgcta 2220
ttttctcagg ccgggcctaa taacatgtcg gctcaggcca aaaactggct acccgggccc 2280
cgctaccggc agcaacgcgt ctccacgaca ctgtcgcaaa atsacaacag caactttgct 2340
tggaccggtg ccaccaagta tcatctgaat ggcagagact ctctggtaaa tcccggtgtc 2400
gctatggcaa cgcacaagga cgacgssgsg cgsttttttc catccagcgg agtcfctgatg 2460
tttgggaaae agggagctgg aaaagacaac gtggactata geagcgttat gctaaccagt 2520
gaggaagaaa tcaaaaccac caacccagtg gccacagaac agtacggcgt ggtggccgat 2580
aacctgcaac agcaaaacgc cgctcctatt gtagggcccg tcaacagtca aggagcctta 2640
cctggcatgg tccggcagaa ccgggacgtg tacetgcagg gtcctatctg ggccaagatt 2700
cctcacacgg acggcaactt tcatcettcg ccgctgatgg gaggctttgg actgaaacac 2760
ccgcctcctc agatcctgat caagaataca cctgttcccg cggatcctcc aactaccttc 2S20
agtcaagcca agctggcgtc gfctcatcacg cagtacagca ccggacaggt cagcgtggaa 2880
attgaatggg agctgcagaa agagaacagc aagcgctgga acccagagat tcagtatact 2940
tccaactact acaaatctac aaatgtggac tttgctgtca atactgaggg tacttattca 3000
gagcctcgpc ccattggcac cegfctacctc acccgtaacc tgtaattgcc tgttaatcaa 3060
tsaaccggtt aattcgcttc agttgaactt tggtctctgc .gaagggcgaa ttc 3113
<210s 33 <211> 2504 <212> DMA <213> nowy serotyp AAV, klon 42.4 <400> 33
gaattcgccc tttctacggc tgcgtcaact ggaccaatga gaactttccc ttcaacgatt 60
gcgtcgacaa gatggtgatc tggtgggagg agggcaagat gacggccaag gtcgtggagt 120
ccgccaaggc cattcatcat ctgctggggc gggctcccga gattgcttgc tcggcctgcg 180
atctggtcaa cgtggacctg gatgactgtg tttctgagca ataaatgact taaaccaggt 240
atggctgccg atggtfcatct tccagattgg ctcaaggaca acctctctga gggcattcgc 300
gagtggtggg acttgaaacc tggagccccg aaacccaaag ccaaccagca aasgcaggac 360
PL 222 683 B1
115
gacggccggg gtctggcgct tcctggctac aagtacctcg gaccettcaa cggactcgac 420
aagggagagc cggtcaacga ggcagacgcc gcggccctcg agcacgacaa ggcctacgac 480
aagcagctcg agcaggggga caacccgtac ctcaagtaca accacgccga cgccgagttt 540
caggagcgtc ttcaagaaga taegtctttt gggggcaacc tegggegage agtcttccag 500
gccaagaagc gggttetcga acctetcggt ctggttgagg aaggcgctaa gacggctcct 660
ggaaagaaga gacccataga atccccegac tcctccacgg gcatcggcaa. gaaaggccag 720
cagcccgcta aaaagaagct caactttggg cagsctggcg actcagagtc agtgcccgac 780
cctcaaccaa tcggagaa.cc ccccgcaggc ccctctggtc tgggatctgg tacaatggct 840
gcaggcggtg gcgctccaat ggcagacaat aacgaaggcg ccgacggagt gggtaatgcc 900
tccggaaatt ggeattgega ttccacatgg ctgggcgaca gagtcatcac caccagcacc 960
cgcacctggg ccctgcccac ctacaacaac cacctctaca ageagatate aagtcagagc 1020
ggggctacca acgacaacca cttcttcggc tacagcaccc cctggggcta ttttgacttc 1080
aacagafctcc actgccactt ctcatcacgt gactggcagc gacteateaa caacaactgg 1140
ggattccggc ccaagagact caacttcaag ctcttcaaca tccaggtcaa ggaggtcacg 1200
cagaatgaag gcaccaagac catcgccaat aaccttacca gcacgattca ggtctttacg 1260
gactcggaat accggctccc gtacgtcctc ggctctgcgc accagggctg cctgcctccg 1120
ttcccggcgg acgtcttcat gattcctcag tacgggtacc tgactctgaa caacggcagt 1380
caggccgtgg geegttcctc cttctactgc ctggagtact ttccttctca satgetgags 1440
acgggcaaca actttgagtt cagctaccag tttgaggacg tgccttttca cagcagctac 1SOO
gcgcacagcc aaagcctgga ccggctgatg aaccccctca tcgaccagta cctgtactac 1560
ctgfcctcgga ctcagtccac gggaggtacc gcaggaactc ageagttget attttctcag 1620
gccgggccta ataacatgfcc ggctcaggcc aaaaactggc tacccgggcc ctgctaccgg 1680
cagcaacgcg tctccacgac actgtcgcaa aataacaaca gcaactttgc ttggaccggt 1740
gccaccaagt atcatctgaa tggeagagac tctctggtaa atcccggtgt egetatggea 1800
acgcacaagg acgacgaaga gcgatttttt ccatccagcg gagtettgat gtttgggaaa 1860
cagggagcta gaaaagacaa cgtggactat ageagegtta tgctaaccag tgaggaagaa 1920
atcaaaacca ccaacccagt ggccacagaa cagtacggcg tggtggccga taacctgcaa 1980
cagcaaaacg ccgctcctafc tgtaggggcc gtcaacagtc aaggagcctt acctggcatg 2040
gtcfcggcaga accgggacgt gtacctgcag ggtcctatct gggccaagat tcctcacacg 2100
gacggcaact ttcatccttc gccgctgatg ggaggctttg gactgaaaca cccgcctcct 2160
cagatcctga ttaagaatac acctgttccc gcggatcctc caactacctfc cagtcaagcc 2220
aagccggcgt cgttcatcac gcagtacagc accggacagg tcagcgtgga aattgaafcgg 2280
116
PL 222 683 B1
gagctgcłcs 2340
zscasatcte CŁeStgtggs ctttgctgtc eStacugsgg gtacttattc agagcctcgc 2400
cccattggca cccgttscct cacccgtaac ctgtsatfegc ctgttaatca atassccgęt 2460
taattcgttt cagttgaact ttggtctctg cgaagcęcgs attc 2504
<210? 34 <211? 3106 <212? DNA <213? nowy serotyp AAV, klon 42.5a <400? 34
gaattcgccc ttctacggct gcgtcaactg gaccaatgag sactttccct tcaacgattg 60
cgccgacaag atggtgatct ggtgggagga gcgcaagatg acggccaagg tcgtggagtc 120
cgccaaggcc attctcggcg gcagcaaggt gcgcgtggac caaaagtgca agtcgtccgc ISO
ccagatcgac cccacccccg tgatcgtcac ctccaacacc aacatgtccc ccgtgattga 240
cgggaacagc accaccttcg agcaccagca gccgttgcag gaccggatgt tcaaatttga 300
actcacccgc cgtctggagc atgactttgg caaggcgaca aagcaggaag tcaaagagtt 360
cttccgctgg gcgcaggatc acgtgaccga ggtggcgcat gagttctacg tcagaaaggg 420
tggagccaac aagagaccca cccccgstga cgcggataaa sgcgagccca agcgggcc cg 480
cccctcagtc gcggafcccat cgacgtcaga cgcggasggsi gctccggtgg actttgccga 540
caggtaccaa aacaaatgtt ctcgtcacgc gggcatgctt cagatgctgt ttccctgcaa 600
aacatgcgag agaatgaatc ag aatttcaa catttgcttc a cgcacggga ccagagactg SSO
ttcagaatgt ttccccggcg tgtcagaatc tcaaccggtc gtcagaaaga ggacgtaccg 720
gaaactctgt gccsttcatc atctgctggg gcgggctccc gagattgctt gctcggcctg 760
cgatctggtc aacgtggacc tggatgactg tgtttctgag caataaatga cttaaaccag 840
gtatggctgc cgatggttat cttccagatt ggctcgagga caacctctct gagggcattc SCO
gcgagtggtg ggacttgaaa cctgcagccc cgaaacccaa agccaaccag caaaagcagg SSO
acgacggccg gggtctggtg cttcctggct acaagtacct cggacccttc aacggactcg 1020
acaagggaga gccggtcaac gaggcagacg ccgcggccct cgagcacgac aaggcctacg 3030
acaagcagct cgagcagggg gacaacccgt acctcaagta caaccacgcc gacgccgagt 1140
ttcaggagcg tcttcaagaa gatacgtctt ttgggggcaa cctcgggcga gcagtcttcc 1200
gggccaagaa gcgggttctc gaacctctcg gtctggttga ggaaggcgct aagacggctc 12 60
ctggaaagaa gagacccata gaatcccccg actcctccac gggcatcggc aagaaaggcc 13 20
agcagcccgc taaaaagaag ctcaactttg ggcagactgg cgactcagag tcagtgcccg 1380
acccccaacc tctcggagaa cctcccgccg cgccctcagg tctgggatct ggtacaatgg 1440
ctgcaggcag tggcgcacca atggcagaca afcaacgaagg cgccgacgga gtgggtaatg 1500
PL 222 683 B1
117
ccfcccgg&aa ttggeat Lgc gattccacat agcfcacyccrs cagagtcatc accaccagca 1560
cccgcacctg ggccctgccc acctacaaca accacctcta caaacagata Lcaagtcaga 1520
gcggggctac caacgacaac cacttcttcg gctacagcac cccctggggc tattttgact 1680
ccaacagatt ccactgccac Ltctcaccac gtgactggca gcgactcatc aacaacaacc 174 0
ggggattccg gcccagaaag ctgcggttca agttgttcaa catccaggtc aaggaggtca 1800
egaegaaega cggcgtts.cg SCCStcgct 5. 3.taaCC ttSC cagcacgatt caggtcfctcc 1860
cagactcgga gtaccaactg ccgtacgtcc Łcggctetac gcaccagggc Łgcctccctc 1920
cgttccctgc ggacgtgttc atgattcctc agtaeggata tctgactcta aacaacggca 1980
gtcagfcctgt gggacgttcc tccttctact gcctggagta ctttccttct cagatgctga 2040
gaacgggcaa taactttgaa ttcagctacc agtttgagga cgtgcccttt cacagcagct 2100
acgcgcacag ccaaagcctg gaccggctga tgaaccccct catcgaccag tacctgtact 2160
acctgtctcg gactcagtcc acgggaggta ccgcaggaac teageagttg ctattttctc 2220
aggccgggcc taataacatg teggeteagg ccaaaaactg gctacccggg ccctgctacc 2280
ggcagcaacg cgtctccacg acactgtcgc aaaataacaa cagcaacttt gcttggaccg 2340
gtgccaccaa gtatcatcfcg aatggcagag actctctggfc aaatcccggt gtcgctatgg 2400
caacgcacaa ggacgacgaa gagcgatttt ttccatccag cggagtcttg atgtfctggga 2460
aacagggagc tggaaaagac aacgtggact atagcsgcgt tatgctaacc agtgaggaag 2520
aaatcaaaac caccaaccca gtggccacag aacagtacgg cgtggtggcc gataacctgc 2580
aacagcaaaa cgccgctcct attgtagggg ccgtcaacag Łcaaggagcc ttacctggca 2640
tggcctggca gaaccgggac gtgtacctgc agggtcctat ctgggccaag attcctcaca 2700
cggacggcaa ctttcatcct tcgccgctga tgggaggctt tggactgaaa cacccgcctc 2760
ctcagatcct gattaagaat acacctgttc ccgcggatcc tccaactacc ttcagtcaag 2820
ccaagctggc gtcgttcatc acgcagtaca gcaccggaca ggtcagcgtg gaaattgaat 2880
gggagctgca gaaagagaac agcaagcgct ggaacccaga gatteagtat acttccaact 2940
acfcacaaafcc tacaaatgtg gactttgctg tcaatactga gggtacttat tcagagcctc 3000
gccccattgg cacccgttac ctcacccgta acctgtaatt gcctgttaat caataaaccg 3060
gttaattcgt ttcagttgaa ctttggtctc tgcgaagggc gaattc 3106
<210> 35 <211> 2489
<212> DNA
<213> nowy serotyp AAV, klon 42,10
<400> 35
gaattcgccc tttctacggc tgcgtcaact ggaccaatga gaactttccc ttcaacgatt 60
gcgtcgacaa gatggtgatc tggtgggagg agggcaagat gacggccaag gtcgtgaagt 120
118
PL 222 683 B1
ccsccssgge c a “ t c a cc s t ccgctggggc gggctcccga gsttgcttgc tcggcctgcg ISO
atctggtcaa cgtggs.cc tg gatgactgtg tttctgsgcs stssatgscc caaaccaggt 240
atggctgccg atggttatce ćccagattgg ctcgaggaca acctctctga gggeattege 300
gagtggtggg acttgaaacc tggagccccc aaacccaaag ccaaccagcs aaaacsggac 360
gacggccggg gtctggtgct tcctggctac aagtacctcg gacccttcas cggactcgac 420
aagggagagc cggtcaacga ggcagscgcc gcggccctcg agcacgacaa ggcctacgac 460
aagcagctcg agcaggggga caacccgtac ctcaagtaca aecacgeega egeegagttt = 40
cagaagcgtc ttcaagaaga tacgtctttt gagggcascc ćcgggcgagc agtcttccag 400
gccaagaagc gggttctcga acctctcggt ctggfctgagg aaggcgctaa gacggctcct 660 ggaaagaaga gacccataga atcccccgac tcctccacgg gcatcggcag gaaaggccag 720
cagcccgcfca aaaagaagct caactttggg cagactggcg i acfccagagtc agtgcccgac 730
cctcaaccaa tcggagaacc ccccgcaggc ccctctggfcc tgggatctgg tacaatggct 340
gcaggcggtg gcgctccaat ggcagacaat aacgaaggcg ccgacggagt gggtaatgcc 900
tccggaaatt ggeattgega ttccacatgg ctgggcgaca gagtcatcac caccagcacc 960
cgcaccfcggg ccctgcccac ctacaaeaac cacctctaca ageagatate aagtcagagc 1020
ggggctacca acgacascca cttcttcggc tacagcaccc cctggagcta ttttgacttc 1080
aaeagattcc actgoeactt ctcaccacgt gactggcagc gactcatcaa caacaactgg 1140
ggattccggc ccagaaagct gcggtfccaag ttgttcaaca tccaggtcaa ggaggtcacg 1200
acgaacgacg gcgttacgac catcgccaat aaccttacca gcacgattca ggtcttctcg 1260
gactcggagt accaactgcc gtacgtcctc ggctctgcgc accagggctg cctcccfcccg 1320
ttccctgcgg acgtgttcat gafctcctcag taeggatate tgactctaaa caacgacagt 1330
cagtetgtgg gacgttcctc cttctacfcgc ctggagtact ttccttctca gatgetgaga 1440
S-OS99C-4.ta acttfcgaatt cagctacacc tttgaggaag tgcctttcca cagcagctat 1S00
gcgcacagcc agagcctgga ccggccgatg aatcccctca tcgaccagta cctgfcactac 1560
ctggcccgga cccagagcac tacggggtcc acaaaggagc tgcagttcca tcaggctggg 1620
cccaacacca tggeegagea atcaaagaac cggctgcccg gaccctgtta teggeageag 1630
agactgtcaa aaaacataga cagcaacaac aacagtaact ttgcctggac cggggccact 1740
aaataccatc tgaatggtag a aa1t ca 11 a accaacccgg gcgtagccat ggccsccaac 1300
aaggacgacg aggaccagtt ctttcccatc aacgaagtgc tggtttetgg caaaacgggg 1860
gctgccaaca agacaacgct ggaaaacgtg ctaatgacca gcgaggagga gatcaaaacc 1920
accaatcccg tggctacaga aaaatacggt gtggtctcca gcaacctgca atcgtctacg igeo
gccggacccc agacacagao tgtcaacagc cagggggctc tgcccggcat ggtctggcag 2040
PL 222 683 B1
119
aaccgggacg tgtacctgca gggtcccatc tgggccaaaa ttcctcacac ggacggcaac 2100
cLtcscccgt ctcccctgat gggcgaattt ggactcasac acccgcctcc tcaaafctctc 2160
atcaaaaaca ccccggtacc tgctaatcct ccagaggtgt ttactcctgc caagtttgcc 2220
ccatttatca, cgcagtacag caccggccag gtcagcgtgg agatcgagtg ggaactgcag 2280
aaagaaaaca gcaaacgcfcg gaatccagsg attcagtaca cctcaaatta tgccaagtct 2340
aataatgtgg aatttgctgt caacaacgaa ggggtttata ctgagcctcg ccccattggc 2400
acccgttacc tcacccgtaa cctgtaattg cctgttaatc aataaaccgg ttaattcgtt 2460
tcagttgaac tttggtcaag ggcgaattc 2489
<210> 36
<211> 2495
<212> DNA
<213? nowy serotyp AAV, klon 42
<400> 36
gaattcgccc tttctacggc tgcgtcaact agaccaatga gaactttccc ttcaacgatt 60
gcgtcgacaa gatggtgatc bggtgggagg agggcaagat gacggccaag gtcgtggagt 120
ccgccaaggc cattcatcat ctgctggggc gggctcccga gattgcttgc tcggcctgcg 180
atctggtcaa cgtggacctg gatgactgtg fcttctgagca ataaatgact taaaccaggt 240
atggctgccg atggttatct tccagattgg ctcgaggaca acctctctga ogacattego 300
gagtggtggg acttgaaacc tggagccccg aaacccaaag ccaaccagca aaagcaggac 360
gacggccggg gtctggtgct ccctggctac aagtacctcg gacccttcaa cggactcgac 420
aagggagagc cggtcaacga ggcagacgcc gcggccctcg agcacgacaa ggcctacgac 480
aagcagctcg agcaggggga caacccgtac c t c a ag t a c a accacgccga egeegagttt 540
caggagcgtc ttcaagaaga tacgtctttt gggggcaacc tcgggcgagc agtcttccag 600
gccaagaagc gggttctcga acctctcggt ctggttgagg aaggcgctaa gacggctcct 660
ggaaagaaga gacccataga atcccccgac tcctccacgg gcatcggcaa gaaaggccag 720
cagcccgcta aaaagaagct caactttggg cagactggcg actcagagtc agtgcccgac 780
cctcaaccaa tcggagaacc ccccgcaggc ccctctggtc tgggatctgg tacaatggct 840
gcaggcggtg gcgctccaat ggcagacaat aacgaaggcg ccgacggagt gggtaatgcc 900
tccggaaatt ggcattgcga fctccacatgg ctgggcgaca gagfccatcac caccagcacc 960
cgcacctggg ccctgcccac ctacaacaac cacctctaca agcagatatc aagtcagagc 1020
ggggctacca acgacaacca cttcttcggc tacagcaccc cctggggct.a ttttgacttc ioao
aacagattcc actgccactt ctcaccacgt gactggcagc gactcatcaa caacaactgg 1140
ggattccggc ccagaaagct gcggttcaag ttgt tcaaca tccaggtcaa ggaggtcacg 1200
acgaacgacg gcgttacgac catcgctaat aaccttacca gcacgattca ggtcttctcg 1260
120
PL 222 683 B1
ęactccgagt sccasc uścc gŁacgtcctc ggctctgcgc accagggctg cctccctccg 1320
ztccctgcgg acgtgttcat gatccctcag Łacggacafce tgactetaaa caacggcagt 1380
CŁgtctgżgg acgggcaaŁa gacgttcccc actttgaatt cttctactgc cagctacacc ctggagtact tttgaggaag ttccttctca gatgctgaga tgcctttcca cagcagctst 1440 1500
gcgcscsgcc agagcctgga ccggctgstg aatcccc t ca tcgaccagts ccfcgtactac 1560
etggccegga cccagagcac tacggggtec acaagggagc tgcagttcca tcaggccggg 1620
cccaacacca tggccgagca atcaaacaac tggccgcccg gaccctgtta Łcggcsgcag 1380
agactgCcaa aaaacataga cageaaca&c accagtaact ttgcctggac cggggccact 1740
aaataccatc tgaatggtag aaattcatta accaacccgg gcgtagccat ggccaccaac 1SOO aaggacgacg aggaccagtt ctttcccatc aacagagtgc tggtttttcg eaaaacgggg 1860 gctgccaaca acacaacgct ggaaaacgta ctaatgacca gcgaggsgga gatcaaaacc 1920 accaatcccg tggctacaga acagtacagt gtggtctcca gcaacctgca atcgtctacg 1930
gccggacccc agacacagac tgtcaacagc cagggggctc tgcccggcat ggtctggcag 2040
aaccgggacg tgcacctgca gggtcccatc tgggccaaaa ttcctcacac ggacggcaac 2100
ttfccacccct C tCCCCuCSt. gggcggattt ggactcaaac acccgcctcc tcaaattctc 2160
stcssacscs ccccggtacc Łgctaatact ccagaggtgt ttaetcctgc eaagtttgcc 2220
tcatttatca cgcagCacsg caccggccag gtcagcgtgg agatcgagtg ggaactgcag 2230
S3.agaasaca. gcasacgctg gaatccagsg attcagtaca cctcaaatta tgccaagtct 2340
aafcaatgtgg aattŁgctgŁ caacaacgaa ggggtttata ctgagcctcg ccccattgac 2400
acccgttacc tcacccgtaa cctgtaattg cctgttaatc aataaaccgg ttaattcgtt 2460
tcagttgaac tttggcctct gcgaagggcg aattc 2495 <210» 37 <211» 3098 <212 > DNA.
<213» nowy serotyp AA.V, klon 42.11 <400> 37
gaattcgccc tttctacggc tgcgtcaact ggaccaatga gaactttccc ttcaacgatt 50
gcgtcgacaa gatggtgatc tggtgggagg agggcaagat gacggccaag gtcgtggagt 120
ccgccaaggc cattctcggc ggcagcaagg tgcgcgtgga ccaaaagtgc aagtcttccg 130
cccagatcga tcccaccccc gtgatcgtca cttccaacac csacatgtgc gcęgtgattg 240
acgggaacag caccaccttc gagcaccagc agccgttaca agaccggatg ttcaaatttg 300
aactcacccg ccgtctggag cacgactttg gcaaggtgac aaagcaggaa gtcaaagagt 360
tcttccgctg ggcgcaggat cacgtgacca aggtggcgea tgagttctac gtcagaaagg 420
gtggagccaa caagagaccc gcccccgatg acgcggataa aagcgagccc aagcaggcct 450
PL 222 683 B1
121 gcccctcagt cgcggatcca tcgacgtcag acgcggaaag agctccggtg gactttgccg 540 scaggtacca aaacaaatgt tcfccgtcacg cgggcatgct tcagatgctg tttccctgca 600 agacetgcga gagaatgaat cagaatttca acatttgctt cacgcacggg accggagact SSO gttcagaatg tttccccggc gtgtcagaat ctcsaccggt cgtcagasag aggacgtatc 720 ggs&actctg fcgccattcat catctgctgg ggcgggctcc cgagattgct tgctcgacct 730 gcgatctggt caacgtggac ctggatgacfc gtgfcttctga gcaataaatg acttaaacca 840 ggtatggctg ccgatggtta tcttccagat tggctcgagg acaacctctc tgagggcatc 900 cgcgagtggt gggacttgaa acctggagcc ccgaaaccca aagccaaccs gcaaaagcag 960 gacgacggcc ggggtctggt gcttcctggc tacaagtacc tcggaccctt caacggactc 1020 gacaagggag agccggtcaa cgcggcggac gcagcggccc tcgagcacga caaggcctac 1080 gaccagcagc tcaaagcggg tgacaatccg tacctgcggt ataaeeacgc cgacgccgag 1140
tttcaggagc gtctfccaaga agatacgtct tttgggggca acctcgggcg agcagtcttc 1200
caggccaaga agcgggttct cgaacctctc ggtctggttg aggaaggcgc taagacggct 1260
cctggaaaga agagacccat agaatccccc gactcctcca cgggcatcgg caagaaaggc 1320
cagcagcccg ctaaaaagaa gctcaacttt gggcagactg gcgactcaga gtcagtgccc 1380
gaccctcaac caatcggaga accccccgca ggccccectg gćctgggatc tggtacaatg 144 0
gctgcaggcg gtggcgctcc aatggcagac aataacgaag gcgccgacgg agtgggtaat 1600
gcctccggaa attggcattg cgattccaca tggctgggcg acagagtcat caccaccagc 1550
acccgcacct gggccctgcc cacctacaac aaccacctct acaagcagat atcaagtcag 1620
agcggggcta ccaacgacaa ccacttcttc ggctacagea ccccctgggg ctattttgac 1680
ttcaacagat tccactgcca cttctcacca cgtgactggc agcgactcat caacaacaac 1740
tggggattcc ggcecagaaa gctgcggttc aagttgttca acatccaggt caaggaggtc 1800
acgacgaacg acggcgttac gaccatcgct aataacctta ccagcacgat tcaggtcttc 1860
tcggactcgg agtaccaact gccgtacgtc ctcggctctg cgcaccaggg ctgcctccct 1920
ccgttccctg cggacgtgtt catgattcct cagtacggat atctgactct aaacaacggc 1980
agtcagtctg tgggacgttc ctccttctac tgcctggagt actttccttc tcagatgctg 2040
agaacgggca ataactttga attcagctac acctttgagg aagtgccttt ccacagcagc 2100
tatgcgcaca gccagagcct ggaceggctg atgaatcccc tcatcgacca gtacctgtac 2160
tacctggccc ggacccagag cactacgggg tccacaaggg agctgcagtt ccatcaggct 2220
gggcccaaca ccatggccga gcaatcaaag aactggctgc ccggaccctg ttatcggcgg 2280
cagagactgt caaaagacat agacagcaac aacaacagta actttgcctg gaccggggcc 2340
actaaatacc atctgaatgg tagaaattca ttaaccaacc cgggcgtagc catggccacc 2400
122
PL 222 683 B1
aacaaggacg acgagcseca gttctttccc atcaacggag tgctgętttt tęocaaascg 2960
9999-“9=^ acaagacaac gccggaaaac gtgctaatga ccaęcgagga ggagatcaaa 2320
accaccaatc ccgtggctac agaagaa tzac ggtgtggtcŁ ccagcaacct gcaatcgtct 2330
acggccggac cccagacHca gactgtcaac agccaggggg ctctgcccgg catggtctgg 2640
cagaaccggg aCGtgtSCCt gcagggtccc atctgggccs aaatccctca cacggacggc 2700
aaettteacc cgtctcccct gaćgggcgga tttggactca aacacccgcc tcctcaaatt 2760
ctcatcaaaa acaccccggt acctgcCast cctccagagg tgtttactcc tgccaagttt 2320
gcctcattta tcacgcsgta cagcaccggc caggtcagcg tggagatcga gtgggaactg 2930
cagaaagaga acagcaaacg ctggaatcca gagattcagt acacctcaaa ttatgccaag 2940
tctaataatg cggaaćttgc tgtcaacaac gasggggttt ataccgagcc tcgccccatt 3000
ggcacccgtfc acctcacccg taacctgtaa tfcacttgtta atcaataaac cggttgattc 3060
gtttcagttg aactttggtc tctgcgaagg gcgaattc 3093 <210> 3S <211> 3276 <212> DNA <213> nowy serotyp AAV, klon 42.6a <400» 33
gaattcgccc ttcgcagaga ccsaagttca S.C tgSSSCga afctaaccggt ttattgatta £0
acaggcaatt acaggttacg S9tSaggtaa cgggtgccaa tggggcgagg ctcagtataa 120
accccttcgt tgttgacagc aaattccaca ttattagact tggcataatt tgaggtgtac 180
tgaatctctg gattccagcg tttgetgttt tctttctgca gttcccactc gatctccacg 240
ctgacctggc cggtgctgta ctgcgtgata aatgaggcaa acttggcagg agtaaacacc 300
tctggaggat tagcaggtac cggggtgttt ttgatgagaa tttgaggagg cgggtgtttg 360
agtccaaatc cgtccatcag gggagacggg tgaaagttgc cgtccgtgtg aggaattttg 420
gcccagatgg gaccctgcag gtacacgtcc cggttctgcc agaccatgcc gggcagagcc 480
cectggctgt tgacagtctg tgtctggggt ccggccgtag acgattgcag gttgctggag 540
accacaccgt attcttctgt agccacggga ttggtggttt tgatctcctc ctcgctggcc 600
attagcacgt tttccagcgt tgtcttgttg gcagcccccg ttttgccaaa aaccagcact 6S0
ccgttgatgg gaaagaactg gtcctcgtcg tccttgttgg tggceatgge tacgcccggg 720
ttggttaatg aatttctacc attcagatgg tatttagtgg ccccggtcca ggcaaagtta 780
ctgttgttgt tgctgtctat gttttttgac agtctctgct gccgataaca gggtccgggc 340
agccagttct ttgattgctc ggccatggtg ttgggcccag cctgatggaa ctgcagctcc 900
ettgtggacc ccgtagtgct ctgggtccgg gccaggtagt acaggtactg gtcgatgagg 960
ggattcatca gccggtccag getctggcta tgcgcatage tgctgtggaa aggcacttcc 1020
PL 222 683 B1
123
tcaaaggtgt agctgaattc aaagttattg eccgttctca gcatctgaga aggaaagtac 1080
tccaggcagt agaaggagga acgtcccaca gactgsctgc cgttgtttag agtcagatafc 1140
ccgtactgag gaatcatgaa cacgtccgca cggaacggaa ggaggcagcc cfcggtgcgca 1200
gagccgagga cgtacggcag ttggtactcc gagtccgaga agacctgast cgtgctggta 1260
aggttattag cgatggtcgt aacgccgtcg tccgtcgtga cctccttgac ctggatgttg 1320
aacaacttga accgcagctt tctgggccgg aatccccagt tgttgttgat gagtcgctgc 1380
cagtcacgtg gtgagaagtg gcagtggaat ctgttaaagt caaaataccc ccagggggtg 1440
ctgfcagccga agtaggtgtt gtcgttggtg cttcctcccg atgtcccgtt ggagatttgc 1500
ttgtagaggt ggttgttgta ggfcsgggagg gcccaggttc gggtgctggt ggtgatgact 1560
ctgtcgccca gccatgtgga atcgcaatgc caatttcctg aggaactacc cactccgtcg 162C gcgccttcgt tattgtcfcgc cattggagcg ccaccgcctg cagccattgt accagatccc 1630 agaccagagg ggcctgcggg gggttctccg attggttgag ggtcgggcac tgactctgag 1740 tcgccagtct gcccaaagtt gagtctcttt ttcgcgggct gctggcctgt cttgccgatg 1S00 cccgtagagg agtctggaga acgctggggt gatggctcta ccggtctctt ctttccagga 1S60 gccgtcttag cgccttcctc aaccagaccg agaagttcga gaacccgctt cttggcctgg 1920 aagactgctc gcccgaggtt gcccccaaaa gacgtatctt cttgaagacg ctcctgaaac 1380 tcggcgtcgg cgtggttgta cttgaggtac gggttgtccc cctgctcgag ctgcttgtcg 2040 taggccttgt cgtgctcgag ggccgcggcg tctgcctcgt tgaccggctc tcccttgtcg 2100 agtccgttga agggtccgag gtacttgtag ccaggaagca ccagaccccg gccgtcgtcc 2160 tgcttttgct ggttggcttt gggtttcggg gctccaggtt tcaagtccca ccacecgcga 2220 atgccctcag agaggttgtc ctcgagccaa tctggaagat aaccatcggc agccatacct 2280 ggtttaagtc atttattgct cagaaacaca gtcatccagg tccacgttga ccagatcgcs 2340 ggccgagcaa gcaatctcgg gagcccgccc cagcagatga tgaatggcac agagtttccg 2400 atacgtcctc tttctgacga ccggttgaga ttctgacacg ccggggaaac attctgaaca 2460 gtctctggtc ccgtgcgtga agcaaatgtt gaaattctga ttcattctct cgcatgtctt 2520 gcaggga&ac agcatctgaa gcatgcccgc gtgacgagaa cacttgtttt ggtacctgtc 2580 ggcaaagtcc accggagctc cttccgcgtc tgacgtcgat ggatgcaaaa tgtcgcaaaa 2640 gcactcacgt gacagctaat acaggaccac tcccctatga cgtgatttac gŁcagcgcta 2700
Łgcccgcgtg acgagaacat ttgttttggt acctgtcggc aaagtccacc ggagctcctt 2760 ccgcgtctga cgtcgatgga tccgcgactg aggggcaggc ccgcttgggc tcgcfctttat 2820 ccgcgtcatc gggggcgggt ctcttgttgg ctccaccctt tctgacgtag aactcatgcg 2880 ccacctcggt cacgtgatcc tgcgcccagc ggaagaactc tttgacttcc tgctttgtca 2940 ccttgccaaa gtcatgctcc agacggcggg tgagttcaaa tttgaacatc cggtcctgca 3000
124
PL 222 683 B1
=cggctcctg ClCClCułcć gtggtgctgt 4ł r— z? «-1 <-· -CCC3vtaa.L cacggcgcac atgttggtgt 3060
zggasgtgac gatcacgggg gtgggatcga tctgggcgga agacttgcac ttttggtcca 3120
cgcgcacctt gc tgccgccg agaatggcct tggcggactc cacgaccttg gccgtcatct 3130
tgccctcctc ccaccagatc accatcttgt cgacgcaatc gt tgaaggga aagttctcat: 3240
tggtccagtt gacgcagccg tagaaaggge gaafctc 3275
<210> 39 <211? 3034 <212> DNA <213? 43.1 <400> 39
gaattcgccc tttctacggc tgc atcaact ggaccaatga gaactttccc ttcaacgatt 50
gcgtcgacaa gatggtgatc tggtgggagg agggcaagać gacggccaag gtcgtggagt 120
ccgccaaggc cattctcggc ggcagcaagg tgcgcgtgga ccaaaagtge aagtcgtccg ISO
cccagatcga ccccaccccc gtgatcgtca cctccaacac caacstgtgc gccgtgattg 240
acgggaacag caccaccttc gagcaccagc agccgttgca ggaccggatg ttcaagttcg 300
aactcacccg ccgtctggac cacgactttg gcaaggtgac caagcaggaa gtcaaagagt 3S0
tcttccgctg ggcgcaggat cacgtgaccg aggtggcgca tgagttctac gtcagaaagg 420
gcggagccag caaaagaecc gcccccgatg acgcggatat aagcgagccc aagcgggcct 430
gcccctcagt cgcggatcca tcgacgtcag acgcggaagg agctccggtg gactttgccg 540
acagg tac cs. aaacaaatgt tctcgtcacg cgggcatgct tcagatgctg tttccctgca SOG
aaacgtgcga gaaaatgast cagaatttca acatttgctt cacgcacggg gtcagagact 560
gctcagaatg tttccccggt gcatcagaat ctcaaccggt cgtcagaaaa aaaacgtatc 720
agaaactgtg tgccattcafc catctgctgg ggcgggcacc cgagattgct tgctcggcct 730
gcgatctggt caacgtggac ctggacgact gtgtttctga gcaataaatg acttaaacca 340
ggtatggctg ccgatggtta tcttccagat tggcttgagg acaacctctc tgagggcatt soo
cgcgagtggt gggacctgaa acctggagcc ccgaaaccca aagecaacca gcaaaagcag 960
gacgacggcc ggggtctggt gcttcctggc tacaagtacc tcggaccctt caacggactc 1020
gacaaggggg agcccgtcaa cgcggcggac gcagcggccc tcgagcacga caaggcctac 10S0
gaccagcagc tcaaagcggg tgacaatccg tacctgcggt ataaccacgc cgacgccgag 1140
tttcaggagc gtctgcaaga agatacgtct tttgggggca acctcgggcg ageagtette 1200
caggccaaga agcgggttct cgaacctctc ggtctggttg aggaaggcgc taagacggct 1260
cctggaaaga agagaccggt agagccatca cctcagcgtt cccccgactc ctccacgggc 1320
atcggcaaga aaggccscca gcccgcgaga aagagactga actttgagca gactggcgac 13S0
PL 222 683 B1
125
ccggagtcag tccccgaccc tcaaccaatc agagaaccac cc.gcaggccc ctctggtctg 1440
ggatctcgta caatggctgc aggcggtggc gctccaatgg cagacaataa cgaaggcgcc 1500
gacggagtog gtagfcfcectc aggaaattgg cattgcgatt ccacatggct gggcgacaga 1560
gtcatcacca ccagcacccg aacctgggcc ctgcccacct acaacaacca tctctacaag 1620
caaatctcca acgggacatc gggaggaagc actsacgaca acacctactt tggctacagc 1660
accccctggg ggtattttga ctteaacaga ttccactgcc acttctcacc acgtgactgg 1740
cagcgactca tcaacaataa ctggggattc cggcccaaga gactcaactt caagctcttc 1800
aacatccagg tcaaggaggt cacgcagaat gaaggcacca agaccatcgc caataacctt 1860
accagcacga ttcaggtgtt tacggactcg gaataccagc tcccgtacgt ccccggctct 1920
ccgcaccagg gctgcctccc tccgttcccg gcggacgtct tcatgattcc tcagtacggg 1980
tatctgaccc fcaaacaatgg cagtcaggct gtgggccgtt cctccttcta etgcctggaa 2040
tacttccctt ctcaaatgct gaggacgggc aacaactttg aattcagcta caccttcgag 2100
gacgtgcctt tccacagcag ctacgcgcac agccagagcc tggaccggct gatgaaccct 2150
ctcatcgacc agtacctgta ttacttatcc agaactcagt ccacaggagg aactcaaggt 2220
actcagcaat tgtfcattttc tcaagccggg cccgcaaaca tgtcggctca ggccaagaac 2280
tggctacctg gaccgtgtta ccgtcagcaa cgagtttcca cgacactgtc gcaaaacaac 2340
aacagcaatt ttgcttggac cggtgccacc aagtatcacc tgaatggcag agactccctg 2400
gttaatcccg gcgttgccat ggctacccac aaggacgacg aggagcgctt cttcccgtca 2460
agcggagttc taatgtttgg caagcagggg gctggaaaag acaatgtgga ctacagcagc 2520
gtgatgctca ccagcgaaga agaaattaaa actactaacc cagtggctac agagcagtat 2580
ggtgtggtgg cagacaacct gcagcagacc aacggagctc ccattgtggg aactgtcaac 2640
agccaggggg ccttacctgg tatggtctgg caaaaccggg acgtgtacct gcagggcccc 2700
atctgggcca aaattectca cacggacggc aactttcatc cttcgccgct gatgggaggc 2760
tttggactga aacacccgcc tcctcagatc ctggtgaaaa acactcctgt tcctgcggat 2820
cctccgacca ccttcagcca ggccaagctg gcttctttta tcacgcagta cagcaccgga 2880
caggtcagcg tggaaatcga atgggagctg cagaaagaaa acagcaagcg ctggaaccca 2940
gagattcagt atacttccaa ctactacaaa tctacaaatg tggactttgc tgtcaatact 3000
gagggtactt attcagagcc tcgccccatt ggcactcgtt atctcacccg taacctgtaa 3060
ttgcttgtta atcaataaac cggt 3084
<210? 40 <211? 2370 <212? DNA <213? nowy serotyp AAV, klon 43.6 <40Q? 40
126
PL 222 683 B1
gaattcgccc tCtctacggc tgcgtcaact ggaccaatęs gaactttccc ttcaacgatt £0
gcgtcgacaa gatggtgatc tggtcggsgg agggcaagat gaccgccaag gtcgtggagt 120
ccgccaaggc cattctcggo ggcagcaacg tgegcgtgga ccaassgtgc aagtcgtccg 130
cccagatcga ccccaccccc gtgatcctca cctccaacac caacatgtgc gccgtgattg 240
acgggaacag caccsccttc gsgcaccsgc agccgttgcs ggaccgcatg ttcaagtfccg 300
aactcacccg ccgtctggag cacgactttg gcasggtgac caagcaggaa gtcaaagagt 36G
tcttccgctg ggcgcaggst cacgtgaccg sggtggcgca tgagttctac gtcagsaaag 420
gcggagccag caaaagaccc gcccccgatg acgcggatat aagcgagccc aagcgggcct 43 0
gcccctcagt cgcggatcca tcgacgtcag acgcggaagg agctccggtg gactttgccg 54 0
acaggtacca aaacaaatgt tctcgtcacg cgggcatgct tcagacgctg tttccctgca 500
aaacgtgcga gagaatgaat cagaatttca acatttgctt cacgcacggg gtcagagact 660
gctcagaatg tttccccggt acatcagaat ctcaaccggt : cgtcagaaas i aaaacgtatc 720
agaaactgtg tgccattcat catctgctgg agcgggcacc : cgagattgct tgctcggcct 730
gcgatctggt caacgtggac ctggacgact gtgtttctga . gcaataaatg acttaaacca 340
cgtatggctg ccgatggtta tcttceagat tggcttgagg acaacctctc tgagggcatt soo
cgcgagtggt gggacctgaa acctggagcc ccgaaaccca aagccaacca gcaaaagcag 950
gacgacggcc ggggtctggt gcttcctggc t acaagtacc tcggaccctt caacggactc 1020
gacaaggggg agcccgtcaa cgcggcggac geagcggccc tcgagcacga caaggccfcac 1080
gaccagcagc tcaaagcggg tgacaatccg tacctgcggt ataaccacgc cgacgccgag 1140
tttcaggage gtetgcaaga agatacgtct tttgggggca acctcgggcg agcagtcttc 1200
caggccaaga agcgggttct cgaacctctc ggtctggttg aggaaggcgc taagacggct 1260
cctggaaaga agagaccggt agsgccatca cctcagcgtt cccccgactc ctccacgggc 1320
atcggcaaga aaggccacca gcccgcgaga aagagactga actttgggca gactggcgac 1380
ccggagtcag tccccgaccc tcaaccaatc ggagaaccac cageaggccc ctctggtctg 1440
ggatctggta caatggctgc aggcggtggc gctCCaatgg cagacaataa cgaaggcgcc ISOO
gacggagtgg gtagttcctc aggaaattgg cattgcgatt ccacatggct gggcgacaga 1560
gtcatcacca ccagcacccg aacetgggcc ctgcccacct acaacaacca tetctacaag 1620
caaatctcca acgggacatc gggaggaagc actaacgaca acacctactt tggctacagc 1680
accccctggg ggtatfcfctga cttcaacaga ttccactgcc acttctcacc acgtgactgg 1740
cagcgactca tcaacaataa ctggagattc cggcccaaga gactcaactt caagctcttc 1300
aacatccagg tcaaggaggt cacgcagaat gaaggcacca agaccatcgc caataacctt 1860
accagcacga ttcaggtgtt tacggactcg gaafcaccagc tcccgtacgt cctcggctct 1920
gcgcaccagg gctgcctccc tccgttcccg ; gcggacgtct tcatgattcc tcagtacggg 1980
PL 222 683 B1
127
tatctgaccc taaacaatgg cagtcaggct Stęjijijccgtt cctccttcta ctgcctggaa 2040
tacttccctt ctcaaatgct gaggacgagc aacaactttg aattcagcta caccttcgag 2100
gacgtgcctt tccacagcag ctacgcgcac agccagagcc tggaccggct gatgaaccct 2160
ctcatcgacc agtacctgta ttacttatcc agaactcagt ccacaggagg aactcaaggt 2220
actcagcaat tgttattttc Łcaagccggg C C C CJC £5 ac 3. tgtyggctea ggccaagaac 2280
tggctacctg gaccgtgtta ccatcagcaa cgagtttcca cgacactgtc gcaaaacaac 2340
aacagcaatt ttgctggacc ggtgccacca 2370
<210> 41 <211> 3123 <212> DNA <213» 43.12 <400» 41
gaattcgccc ttggctgcgt caactggacc aatgagaact ttcccttcaa caattgcgtc 60
gacaagatgg tgatctggtg ggaggagggc aagatgacgg ccaaggtcgt ggagtccgcc 120
aaggccattc tcggcggcag caaggtgcgc gtggaccaaa agtgcaagtc gtccgcccag 180
atcgacccca cccccgtgat cgtcacctcc aacaccaaca tgtgcgccgt gattgacggg 240
aacagcacca ccttcgagca ccagcagccg ttgcaggacc ggatgttcaa gttcgaactc 300
acccgccgtc tggagcacga ctttggcaag gtgaccaagc aggaagtcaa agagttcttc 360
cgctgggcgc aggatcacgt gaccgagatg gcgcatgagt tctacgtcag aaagggcgga 420
gccagcaaaa gacccgcccc cgatgacgcg gatataagcg agcccaagcg ggcctgcccc 480
tcagtcgcgg atccatcgac gtcagacgcg gaaggagctc cggtggactt tgccgacagg 540
taccaaaaca aatgttctcg tcacgcgggc atgctccaga tgctgtttcc ctgcaaaacg 600
tgcgagagaa tgaatcagaa tttcaacatt tgcttcacgc acggggtcag agactgctca 660
gaatgtttcc ccggtgcatc agaatctcaa ccggtcgtca gaaaaaaaac gtatcagaaa 720
ctgtgtgcca ttcatcatct gctggggcgg gcacccgaga ttgcttgctc ggcctgcgat 730
ctggtcaacg tggacctgga cgactgtgtt tctgagcaat aaatgactta aaccaggtat 840
ggctgccgat ggttatcttc cagattggct tgaggacaac ctctctgagg gcattcgcga 900
gtggtgggac ctgaaacctg gagccccgaa acccaaagcc aaccagcaaa agcaggacga 960
cggccggggt ctggtgctte ctggctacaa gtacctcgga cccttcaacg gactcgacaa 1020
gggggagccc gtcaacgcgg cggacgcagc ggccctcgag cacgacaagg cctacgacca 1080
gcagctcaaa gcgggtgsca atccgtacct gcggtataac cacgccgacg ccgagtttca 1140
ggagcgtctg caagaagata cgtcttttgg gggcaacctc Efggcgagcag tcttccaggc 1200
caagaagcgg gttctcgaac ctctcggtct ggttgaggaa ggcgctaaga cggctcctgg 1260
128
PL 222 683 B1
aaagasgaga ccggtagsgc catcacctca ccgttceccc gactcctcca cgggcatcgg 1323
caagaaaggc caccagcccg cgagaaagag ECŁCRSCttu gggcagaetg gegaefcegga 1380
gtcagtcccc tggtacaatg gaccctcaac caatcggaga gctgcaggcg gtggcgctcc sccaceagcs. aatggcagac ggcccctcfcg gtctgggatc aataacgaag gcgccgacgg 1.443 1500
agtgggcsgt tcctcaggaa attggcattg cgattccaca tggctgggcg acagagtcat ±550
cac c cC cag c acccgaacct gggccctgcc cacctacaac aaccatctct acaagcaaat 1630
ctccaacggg acatcgggag gaagcactaa cgacaacacc tactttggct acagcacccc 1680
ctgggggtat tttgacttca acagattcca ctgccacttc tcaccacgtg actggcagcg 1740
actcatcaac aacaactggg gattccggcc caagagactc aacttcaagc tcttcaacat 1900
ccaggccaag gaggccacgc agaafcgaagg caccaagace atcgccaata accttaccag 1360
cacgattcag gtgtttacgg actcggaata ecagctcccg tacgtcctcg gctctgcgca 1920
ccagggctgc ctccctccgt tcccggcgga cgtcttcatg attcctcagt acgagtatct 1980
gaccctaaac aatggcagtc aggctgtggg ccgttcctcc ttctactgcc cggaatactt 2040
cccttctcaa atgctgaggs cgggcaacaa ctttgaattc agctacacct tcgaggacgt 2100
gcctttccac agcagctacg cgcacagcca gagcctggac cggctgatga accctctcat 2160
cgaccagtac ctgtattact tafcccagaac tcagtccaca ggaggaactc aaggtactca 2220
gcaattgtta ttttctcaag ccgggcccge aaacatgtcg gctcaggcca agaactggct 2230
acctggaccg tgttaccgtc agcsacgagt ttccacgaca ctgtcgcaaa acaacaacag 2340
caattttgct tggaccggtg ccaccaagta tcacctgaat ggcagagact ccctggttaa 2400
tcccggcgtt gccatggcta cccacaagga cgacgaggag cgcttcttcc cgtcaagegg 2460
agttctaatg tttggcaagc agggggctgg aaaagacaat atggactaca gcagcgtgat 2520
gctcaccagc gaagaagaaa ttaaaactac taacccagtg gctacagagc agtatggtgt 2580
ggtggcagac aacctgcagc agaccaacgg agctcccatt gtgagaactg tcaacagcca 2640
gggggcctta cctggtatgg tctggcaaaa ccgggacgtg tacetgcagg gccccatctg 2700
ggccaaaatt cctcacacgg acggcaactt tcatcettcg ccgctgatgg gaggctttgg 2760
actgaaacac ccgcctcctc agatcctggt gaaaaacacfc cctgttcctg cggatcctcc 2320
gaccaccttc agccaggcca agctggcttc ttttatcacg cagtacagca ccggacaggt 2380
cagcgtggaa atcgaatggg agctgcagaa agaaaacagc aagcgctgga acccagagat 2540
tcagtatact tccaactact acaaatctac aaatgtggac tttgctgtca ata.CtgcLCjgCf 3000
tacttattca gagcctcgcc ccattggcac tcgttatctc acccgtaatc tgtaattgct 3060
tgttaatcaa taaaccggtt aattcgtttc agttgaactt tggtctctgc gaagggcgaa 3120
3123
PL 222 683 B1
129 <210> 42 <211> 3122 <212> DNA <213> 43.20
<400? 42 gaattcgccc : tttctacggc tgcgtcaact : ggaccaatga , gaactttccc : ttcaacgatt 60
gcgtcgacaa gatggtgatc tggtgggagg ' agggcaagat gacggccaag gtcgtggagt 120
ccgccaaggc cattctcggc ggcagcaagg tgcgtgtgga ccaaaagtge aagtcttccg 180
cccagatcga tcccaccccc gtgatcgtca cctccaacac caacatgtgc gccgtgattg 240
acgggaacag cgccaccttc gagcaccagc agccgttgca ggaccggatg ttcaaatttg 300
aactcacccg ccgtctggag catgactttg gcaaggtgac gaagcaggaa gtcaaagagt 360
tcttccgctg ggcgcaggat cacgtgaccg aggtggcgca tgagttccac gtcagaaagg 420
gtggagccaa caagagaccc gcccccgatg acgcggatat aagcgagccc aagcgggcct 460
gcccctcagt cgcggatcca tcgacgtcag acgcggaagg agctccggtg gactttgccg 540
acaggtacca aaacaaatgt tctcgtcacg cgggcatgct tcagatgctg tttccctgca 600
agacatgcga gagaatgaafc cagaatttca acatttgctt cacgcacggg accagagact 660
gttcagaatg tttccccggc gtgtcagaat ctcaaccggt cgtcagaaag aggacgtatc 720
ggaaactctg tgcgattcat catctgctgg ggcgggctcc cgagattgct tgctcggcct 780
gcgatctggt caacgtggac ctggatgact gtgtttctga gcaataaatg acttaaacca 840
ggtatggctg ccgatggtta tcttccagat tggctcgagg acaacctctc tgagggcatt 900
cgcgagtggt gggacttgaa acctggagcc ccgaaaccca aagecaacca gcaaaagcag 960
gacgacggcc ggggtctggt gcttcctggc tacaagtacc tcggaccctt caacggactc 1020
gacaaggggg agcccgtcaa cgcggcggac gcagcggccc tcgagcacga caaagcctac 1080
gaccagcagc tcaaagcggg tgacaatccg tacctgcggt ataatcacgc cgacgccgag 1140
ttfccaggagc gtctgcaaga agatacgtct tttgggggca acctcgggcg ageagtette 1200
caggccaaga agcgggttct cgaacctctc ggtctggttg aggaaggcgc taagacggct 1260
cctggaaaga agagactggt agagcagtcg ccacaagagc cagactcctc ctcgggcatc 1320
ggcaagacag gccagcagcc cgctaaaaag agactcaatt ttggtcagac tggcgactca 1380
gagtcagtcc ccgacccaca acctctcgga gaacctccag cagccccctc aggtctggga 1440
cctaatacaa tggcttcagg cggtggcgct ccaatggcag acaataacga aggcgccgac 1500
ggagtgggta attcctcggg aaattggcat tgcgattcca catggctggg ggacagagtc 1560
atcaccacca gcacccgaac ctgggccctg cccacctaca acaaccacct ctacaagcaa 1620
atctccaacg gcacctcggg aggaagcacc aacgacaaca cctattttgg ctacagcacc 1680
ccctgggggt attttgactt caacagattc cactgtcact tttcaccacg tgactggcaa 1740
130
PL 222 683 B1
CCJctCfcCStCK. aCłnCścCi_G ggcattccgc cccaaaagac tcaacttcaa gctgttcaac 7800
atccaggtca a$gs.®.gtcac gscgaacgaa ggcaccaaga ccatcgccaa ~aatetcacc 1860
agcaccgtgc aggtctttac ngec tcggag taccagttac cgtacgtgct aggatccgct 1S20
caccagggat gtctgcctcc gttcccggcg gacgtcttca ccgttcctca gtacggctat 1SS0
ttaactttaa acaatggaag ęcaagccctg ggacattccfc ccttctactg tctggagtat 2040
i. ^.cccat cgc agatgctgag aaccggcaac aactttcagt teagctacac cttcgaggac 3100
gtgcctttcc acagcagcta cgcgcacagc cagagcctgo acaggctgat gaatcccctc 2 ISO
atcgaccagt acctgtacta cctggtcaga acgcaaacga ctggaactgg sgggacgcag 2220
actctggcat tcagccasgc gggtcctagc tcaatggcea accaggctag aaattgggtg 2260
cccggacctt gctaccggca gcagcgcgtc tccacgacaa ccaaccagaa caacaacagc 2340 sactttgcct ggacgcrgagc tgccaagttt aagctgaacg gccgaaactc tctaatgaat 2400 ccgggcgfcgg caatggcttc ccacaaggat gacgacgacc gcttcttccc ttcgagcggg 2460 gtcctgattt ttggcaagca aggagccggg aacgatggag tggattacag ccaagtgctg 2520 attacagatg aggaagaaat caaggctacc aaccccgtgg ccacagaaga atatggagca 2580 gtggccatca acaaccaggc cgccaatacg caggcgcaga ccggactcgt gcacaaccag 2640 ggggtgattc ccggcatggt gtggcagaat agagacgtgt acctgcaggg tcccatctgg 2700 gccaaaattc ctcacacgga eggeaacttt cacccgtctc ccctgatggg cggctttgga 2760 ctgaagcacc cgcctcctca aattctcatc aagaacacac cggttccagc ggacccgccg 2620 cttaccttca accaggccaa gctgaactct tccatcacgc agcacagcac cggacaggtc 2880 agcgtggaaa tcgagtggga gctgcagaaa gaaaacagca aacgctggas tccagagatt 2940 caatacactt ccaactacta caaatctaca aatgtggact ttgctgtcaa cacggaagga 3000 gtttatagcg agcctcgccc cattggcacc cgttacctca cccgcaacct gtaattacat 3060 gttaatcaat aaaccggtta attcgcttca gttgaacttt ggtctctgcg aagggcgaat 3120 tc 3722 <210> 43 <211> 3117 <212» DNA <213» 43.21 <400» 43
gaattcgccc ttggctgcgt caactggacc aataagaact tfccccttcaa cgattgcgtc 60
gacaagatgg tgatctggtg ggaggagggc aagatgacgg ccaaagtcgt ggagtccgcc 120
aaggccatfcc tcggcggcag caaggtgcgt gtggaccaaa agtgcaagtc ttccgcccag 180
atcgatccca cccccgtgat cgtcacctcc aacaccaaca tgtgcgccgt gattgacggg 240
aacagcacca ccttcgagca ccagcagccg ttgcaggacc ggatgttcaa atttgaactc 300
PL 222 683 B1
131 acccgccgtc tggagcatga ctttggcaag gtgacgaagc aggaagtcaa agagttcttc 360 cgctgggcgc aggatcacgt gaccgaggtg gcgcafcgagt tccacgtcag aaagggtgga 420 gccaacaaga gacccgcccc cgatgacgcg gatataagcg agcccaagcg ggcctgcccc 430
tcagtcgcgg atccatcgac gtcagacgcg [ gaaggagctc cggtggactt : tgccgacagg 540
taccaaaaca aatgttctcg fccacgcgggc atgetteaga tgctgtttcc ctgcsagaca 600
tgcgagagaa tgaatcagaa tttcaacatt tgcttcacgc acgggaccag agactgttca 660
gaatgtttcc ccggcgtgtc agaatctcaa ccggtcgtca gaaagaggac gtatcggaaa 720
ctctgtgcga ttcatcatct gcfcggggcgg gctcccgaga ttgcttgctc ggcctgcgat 780
ctggtcaacg tggacetgga tgactgtgtt tctgagcaat aaatgaetta aaccaggtat 840
ggcfcgccgat ggttatcttc cagattggct cgaggacaac ctctctgagg geattegega 900
gtggtgggac ttgaaacctg gagccccgaa acccaaagcc aaccagcaaa agcaggacga 960
cggccggggt ctggtgctcc ctggctacaa gtacctcgga tccttcaacg gactcgaeaa 1020
gggggagccc gtcaacgcgg cggacgcagc ggccctcgag cacgacaaag cctacgacca 1080
gcagctcaaa gcgggtgaca atccgtacct gcggtataat cacgccgacg ccgagtttca 1140
ggagcgtctg caagaagata cgtcttfctgg gggcaacctc gggcgagcag tcttccagge 1200
caagaagcgg gttctcgaac ctctcggtct ggttgaggaa ggcgctaaga cggctcctgg 1260
aaagaagaga ccggtagagc agtcgccaca agagccagac tcctccćcgg gcatcggcaa 1320
gacaggccag cagcccgcta aaaagagact caattttggt cagactggcg actcagagtc 1380
agtccccgac ccacaaccfcc tcggagaacc tccagcagcc ccctcaggtc tgggacctaa 1440
tacaatggct tcaggcggtg gcgctccaat ggcagacaat aacgaaggcg ccgacggagt 1500
gggtaattcc tcgggaaatt ggeattgega ttccacatgg ctgggggaca gagtcatcac 1560
caccagcacc cgaacctggg ccctgcccac ctacaaeaac cacctctaca agcaaatctc 1620
caacggcacc tcgggaggaa gcaccaacga caacacctat tttggctaca gcaccccctg 1680
ggggtatttt gacttcaaca gafctccactg tcacttttca ccacgtgact ggcaacgact 1740
catcaacaac aattggggat tccggcccaa aagactcaac ttcaagctgt teaacatcca 1800
ggtcaaggaa gtcacgaega acgaaggcac caagaccatc gccaacaatc tcaccagcac 1860
cgtgcgggtc tttacggact cggagtacca gttaccgtac gtgctaggat ccgctcacca 1920
gggatgtctg cctccgttcc cggcggacgt cttcatggtt cctcagtacg gctatttaac 1980
tttaaacaat ggaagccaag ccctgggacg ttcctccttc tactgtctgg agtatttccc 2040
atcgcagatg ctgagaaccg gcaacaactt teagtteage tacaccttcg aggacgtgcc 2100
tttccacagc agctacgcgc acagccagag cctggacagg ctgatgaatc ccctcatcga 2160
ccagtacetg fcacfcacctgg tcagaacgca aacgactgga actggaggga cgcagactct 2220
132
PL 222 683 B1 tgcafctcagc caagcgggtc cCagctcaat ggccaaceag gctagssatfc gggtgcccgg 2250 ccttgctac cggcagcagc gcgtctccac gacaaccaac cagagcaaca acagcasctt 2340
-gcctggacg ggagetgcca agtttaagct gaacggccga gactctctaa taaatccggg 2400 catggcaatg gcttcccaca sggatgacga cgaccgcttc fctcccttcgs geggggtcct 2460
gatttttggc aagcaaggag ccgggaacga tggagtggat tacagccaag iZCfCuGeeuHC 2520
agatgaggaa gaaatcaagg ctaccaaccc cgtggecaca gaagaatstg gagcagtggc 25S0
catcaacaac caggccgcca atacgcaggc gcagaccgga ctcgtgcaca accagggggt 2640
gafctcccggc atggtgtggc agaatagaga cgtgtacctg cagagtccca tctgggccaa 2700
satz fccc tcac acggacggca actttcaccc gtctcccctg atgggcggct ttggactgaa 2760
gcacccgcct cctcaaattc tcatcaagaa cacaccggtt ccagcggacc cgccgcttac 2S20
cttcaaccag gccaagctga actctttcat cacgcagtac agcaccggac aggtcagcgt 2680
ggaa&izcgag tgggagctgc 5^55503333 cagcaaacgc tggaatccag agattcaata 2 940
cacttccaac tactacaaat ctacaaatgt ggactttgct gtcaacacgg aaggagttta 3000
tagcgagcct cgccccattg acacccgtta cctcacccgc aacctgtaat tacatgttaa 3060
tcaataaacc ggttaattcg ttteagfctga actfctggtct ctgccaaggg cgaattc 3117
<210? 44 <221? 3121 <212? DNA <213? 43.23 <400? 44 gaattcgccc ttctacggct gcgtcaactg gaccaatgag aactttccct tcaacgattg 60 cgtcgacaag atggtgatct ggtgggagga gggcaagatg acggccaagg tcgtggagtc 120 cgccaaggcc attcfccggcg gcagcaaggt gcgtgtggac caaaagtgca agtcttccgc i.8o ccagatcgat cccacccccg tgatcgtcac ctccaacacc aacatgtgcg ccgtgattga 240 cgggaacagc accaccttcg agcaccagca gccgttgcag gsccggatgt tcaaatttga 300 actcacccgc cgtctggagc atgactttgg caaggtgacg aagcaggaag tcaaagagtt 360 cttccgctgg gcgcaggatc aęgtgaccga ggtggcgcat gagttccacg tcagaaaggg 420 tggcgccaac aagagacccg cccccgatga cgcggatata agcgagccca agcgggcctg 480 cccctcagtc gcggatccat cgacgtcaga cacggaagga gctccggtgg actttgccga S40 caggtaccaa aacaaatgtt ctcgtcacgc gggcatgctt cagatgctgt ttccctgcaa SOO gacatgcgag agaatgaatc agaatttcaa catttgcttc acgcacggga ccagagactg 660 ttcagaafcgfc ttccccggcg tgtcagaatc tcaaccggtc gtcagaaaga ggacgtatcg 720 gaaactctgt gcgattcstc atctgctggg gcgggctccc gagatfcgctt gctcggcctg 760
PL 222 683 B1
133
cgatctggtc aacgtggacc tggatgactg tgtttctgag caataaatga cttaaaccag S40
gtatggctgc cgatggttat cttccagatt ggctcgagga caacctctct gagggcattc 900
gcgagtggtg ggacttgaaa cctggagccc cgaaacccaa agccaaccag caaaagcagg 960
acgacggccg gggtctggtg cttcctggct acaagtacct cggacccttc aacggactcg 1020
acaaggggga gcccgtcaac gcggcggacg cagcggccct cgagcacgac aaagcctacg 1080
accagcagct caaagcgggt gacaatccgt acctgcggta taatcacgcc gacgccgagt 1140
ttcaggagcg tctgcaagaa gatacgtcct ttgggggcaa cctcgggcga gcagtcttcc 1200
aggccaagaa gcgggttctc gaacctctcg gtctggttga ggaaggcgct aagacggctc 12 60
ctggaaagaa gagaccggta gagcagtcgc cacaagagcc agactcctcc tcgggcatcg 1320
gcaagacagg ccagcagccc gctaaaaaga gactcaattt tggtcagacć ggcgactcag 1300
agtcagtccc cgacccacaa cctctcggag aacctccagc agccccctca ggtctgggac 1440
ctaatacaat ggcttcaggc ggtggcgctc caatggcaga caataacgaa ggcgccgacg 1500
gagtgggtaa ttcctcggga aattggcatt gcgattccac atggctgggg gacagagtca 1560
tcaccaccag cacccgaacc tgggccctgc ccacctacaa caaccacctc tacaagcaaa 1620
tctccaacgg cacctcggga ggaagcacca acgacaacac ctattttggc tacagcaccc 1690
cctgggggta ttttgacttc aacagattcc actgtcactt ttcaccacgt gactggcaac 1740
gactcatcaa caacaattgg ggattccggc ccaaaagact eaacttcaag ctgttcaaca 1800
tccaggtcaa ggaagtcacg acgaacgaag gcaccaagac catcgccaat aatctcacca 1960
gcaccgtgca ggtctttacg gacttggagt accagttacc gtacgtgcta ggatccgctc 1920
accagggatg tctgcctccg ttcccggcgg acgtcttcat ggttcctcag tacggctatt 1980
taactttaaa caatggaagc caagccctgg gacgttcctc cttctactgt ctggagtatt 2040
tcccatcgca gatgccgaga accggcaaca actttcagtt cagctacacc ttcgaggacg 2100
tgcctttcca cagcagctac gcgcacagcc agagcctgga caggctgacg aatcccctca 2160
tcgaccagta cctgtactac ctggtcagaa cgcaaacgac tggaactgga gggacgcaga 2220
ctctggcatt cagccaagcg ggtcctagct caatggccaa ccaggctaga aattgggtgc 2280
ccggaccttg ctaccggcag cagcgcgtct ccacgacaac caaccagaac aacaacagca 2340
actttgcctg gacgggagct gccaagttta agctgaacgg ccgagactct ctaatgaatc 2400
cgggcgtggc aatggcttcc cacaaggatg acgacgaccg cttcttccct tcgagcgggg 2460
tcctgatttt tggcaagcaa ggagccggga acgatggagt ggattacagc caagtgctga 2520
ttacagatga ggaagsaatc aaggctacca accccgtggc cacagaagaa tatggagcag 25Θ0
tggccatcaa caaccaggcc gccaatacgc aggcgcagac cggactcgtg cacaaccagg 2640
gggtgattcc cggcatggtg tggcagaata gagacgtgta cctgcagggt cccatctggg 2700
134
PL 222 683 B1
C C 56.3.Ξ Z ZCC tcacacggac ggeaactttc ^.cccg t c v cc cctgatgggc ggctttcgac 27S0
egasgcaccc gcctcctcaa attctcatca agaacacacc 2320
ggctccagcg gacccgccgc
ztacctfccaa ccaggccaag ctgaactctt tcatcacgca gtacagcacc ggacaggtca 2880
gcgtggaaat cgagtgggag ctgcagaaag aaaacagc£a acgcfcggaafc ccagagattc 2340
aatacacttc caactactac aaatctacaa atgtggactt tgctgtcaac acggaaggag 3000
tttatagcga, gcctcgcccc attggeacce g~tacctcac ccgcaacctg tasttacatg 3080
z tss ”cdc ca aaccggttaa ttcgtfcfccag ttgaactttg gtctctgcęa agggcgaatt 3120
3121
<210> 45
<211> 3122
<212> DNA
<213> 43 .25
<400> 45
gctcttccgccc tttctacggc tgcgtcaact ggaccaatga gaactttccc ttcaacgatt 50
gcgtcgacaa gatggtgatc tsstgągagg agggcaagat gacggccaag gtcgtggagt 12 0
ccgccaaggc cattctcggc ggcagcaagg tgcgtgtgga ccaaaagtgc aagtcttccg ISO
cccagatcga tcccaccccc gtgatcgtca c ctccaacac caacatgtgc gccgtgattg 240
acgggaacag caccaccttc gagcaccagc agccgttaca ggaccggatg ttcaaatttg 300
aactcacccg ccgtctggag eatgactttg gcaaggtgac gaagcaggaa ctcaaagggt 350
tcttccgctg ggcgcaggat cacgtgaccg aggtggcgca tgagttccac gtgcgagccc 420
aagcgggcct gcccctcagt cgcggatcca tcgacgtcag accagaaagg gtggagccaa 48C
caagagaccc gcccccgatg aegeggatat aagcggaagg agctccggtg gactttgccg 540
acaggtacca aaacaaatgt tctcgtcacg cgggcatgct teagatgetg tttccctgca 600
agacatgcga gagaatgaat cagaatttca acatttgctt cacgcacggg acc agagac fc 660
gttcagaatg tttccccggc gtgtcagaat ctcaaccggt cgtcagaaag aggacgtatc 720
ggaaactctg tgccattcat catctgctgg ggcgggctcc egagattget tgctcggcct 730
gcgatctggt caacgtggac ctggatgact gtgtttctga gcaataaatg acttaaacca 840
ggtatggctg ccgatggtta tcttecagat tggctcgagg acaacctctc tsagggcatt soo
cgcgagtggt gggacttgaa acctggagcc ccgaaaccca aagccaacca gcaaaagcag 950
gacgacggcc ggggtctggt gcttcctggc tacaagtacc tcggaccctt caacggactc 3020
gacaaggggg agcccgtcaa cgcggcggac gcagcggccc tcgagcacga caaagcctac 1080
gaccagcagc tcaaagcggg tgacaatccg tacctgcggt ataatcacgc cgacgccgag 1140
tttcaggagc gtctgcaaga agatacgtct tttgggggca acctcgggcg ageagtette 1200
caggccasga agcgggttct cgaacctctc ggtctggttg aggaaggcgc taagacggct 1260
PL 222 683 B1
135
cctggaaaga sgagaccggt agagcagtcg ccacaagagc cagactcctc ctcgggcatc 1320
ggcaagacag gccagcagcc cgctsaaaag agactcaatt ttggtcagac tggcaactca 13 80
gagtcagtcc cctaatacaa ccgacccaca tggcttcagg acctctcgga cggtggcgct gaacctccag ccaatggcag cagccccctc acaataacga aggfcctggga aggcgccgac 1440 1500
ggagtgggta attcctcggg aaattggcat tgcgattcca catggctggg ggacagagtc 15 60
atcaccacca gcacccgaac ctgggccctg cccacctaca acaaccacct ctacąagcaa 16 20
ątctccaacg gcacctcggg aggaagca.ce aacgacaaca cctattttgg ctacagcacc 1680
CCCtgggggt attttgactt caacagattc cactgtcact tttcaccacg tgactggcaa 1740
cgactcatca acaacaattg gggattccgg cccaaaagac tcaacttcaa gctgttcaac 1800
atccaggtca aggaagtcac gacgaacgaa ggcaccaaga ccatcgccaa taatetcacc 18 60
agcaccgtgc aggtctttac ggactcggag taccagttac cgtacgtgct aggatccgct 1920
caccagggat gtctgcctcc gttcccggcg gacgtcttca tggttcctca gtacggctat 1980
ttaactttaa acaatggaag ccaagccctg ggacgttcct ccttctactg tctggagtat 2040
ttcccatcgc agatgctgag aaccggcaac aactttcagt tcagctacac cttcgaggac 2100
gtgcctttcc acagcagcta cgcgcacagc cagagcctgg acaggctgat gaatcccctc 2160
atcgaccagt acctgfcacta cctggtcaga acgcaaacga cćggaactgg agggacgcag 2220
actctggcat tcagccaagc gggtcctagc tcaatggcca accaggctag aaattgggfcg 2280
cccggacctt gctaccagca gcagcgcgtc tccacgacaa ccaaccagaa caacaacagc 23 40
aactttgcct ggacgggagc tgccaagttt aagctgaacg gccgagactc tctaatgaat 2400
ccgggcgtgg caatggcttc ccacaaggat gacgacgacc gcttcttccc ttcgagcggg 2460
gtcctgattt ttggcaagca aggagccggg aacgatggag tggattacag ccaagtgctg 2520
attacagatg aggaagaaat caaggctacc aaccccgtgg ccacagaaga atatggagca 2580
gtggccatca acaaccaggc cgccaatacg caggcgcaga ccggactcgt gcacaaccag 2640
ggggtgattc ccggcatggt gtggcagaat agagacgegt acctgcaggg fccccatctgg 2700
gccaaaattc ctcacacgga cggcaacttt cacccgtctc ccctgatggg cggctttgga 2760
ctgaagcacc cgcctcctca aattctcatc aagaacacac cggttccagc ggacccgccg 2820
cttaccttca accaggccaa gctgaactct ttcatcacgc agtacagcac cggacaggtc 2880
agcgtggaaa tcgagtggga gctgcagaaa gaaaacagca aacgctggaa tccagagatt 2 940
caatacactt ccaactacta caaatctaca aatgtggact ttgctgtcaa cacggagggg 3.000
gtttatagcg agcctcgccc cattggcacc cgttacctca cccgcaacct gtaattacat 3060
gttaatcaat aaaccggtta attcgtttca gttgaactet ggtctctgcg aagggcgaat 3120
3122
136
PL 222 683 B1 <210> 46 <211> 3128 <212> DNA <213> 44.1 <400> 46
gaattcgccc tttctacggc tgcgtcaact ggaccaatga gaactttccc ttcaacgatt 60
gcgtcgacaa gatgttgatc tggtaggagg agggcaagat gacggccaag gtcgtggagt 120
ccgccaaggc cattctcggc ggcagcassg tccgcgtgca ccaaaagtgc aagccgtccg ISO
cccagatcga ccccaccccc gtgatcgtca cctccaacac c aaca tg tac gccgtgattg 240
acgggaacag caccaccttc gagcaccagc agccgttgcg ggaccggatg ttcaagtttg 300
aactcacccg ccgtctggag cacgaccttg gcaaggtgac aaagcaggaa gtcagagagt 360
rcttccgctg ggcgcaggat cacgtgaccg aggtggcgca cgagttctac gtcagaaagg 420
gtggagccaa caagagaccc gcccccgatg acgcggataa aagcgagccc aagcgggcct 480
gcccctcagt cgcggatcca tcgacgtcag acgcggaagg agctccggtg gactttgccg 540
acaggfcacca aaacaaatgt tctcgtcacg cgggcatgct tcagatgctg tttccctgea SOO aaacatgcga gagaatgaat cagaatttca acatttgctt cacgcacggg accagagact 660 gttcagaatg tttccccggc gtgtcagaat ctcaaccggt cgtcagaaaa aagacgtatc 720
ggaaactccg tgcgattcat catctgctgg ggcgggcacc cgagattgct tgctcggcct 780
gcgatctggt caacgtggac ctagatgact gtgtttctga gcaataaatg acttaaacca 840
ggt atggctg ccgatggtta tcttccagat tggctcgagg acaacctctc tgagggcatt 900
cgcgagtggt gggacttgaa acctggagcc ccgaaaccca aagccaacca gcaaaagcag 950
gacgacggcc ggggtctggt gcttcctggc tacaagtacc tcggaccctt caacggactc 1020
gacaaggggg agcccgtcaa cgcggcggac gcagcggccc tcgagcacga caaggcctac ioao
gaccagcagc tcaaagcggg tgacaatccg tacctgcggt ataaccacgc cgacgccgag 1140
tttcaggagc gtctgcaaga agatacgtct tttgggggca acctcgggcg agcagtcttc 1200
caggccaaga agcgggttct cgaacctctc ggtctggttg aggaaggcgc taagacggct 1260
cctggaaaga agagaccggt agagccatca ccccagcgtt ctccagactc ctctacgggc 1320
atcggcaaga aaggccagca gcccgcgaaa aagagactca actttgggca gactggcgac 1380
tcagaatcag tgcccgaccc tcaaccaatc ggagaacccc ccgcaggccc etctggtctg 1440
ggatctggta caatggctgc aggcggtggc gctccaatgg cagacaataa cgaaggcgcc 1S00
gacggagtgg gtagttcctc aggaaattgg cattgcgatt ccacatggct gggcgacaga 1560
gtcatcacca ccagcacccg aacctgggcc ctccccacct acaacaacca cctctacaag 1620
caaatctcca acgggacttc gggaggaage accaacgaca scacctactt cggctacagc 1680
accccctggg ggtattttga ctttaacaga ttccactgcc acttctcacc acgtgactgg 1740
PL 222 683 B1
137
ca.gcga.ctc a tcaacaacaa ctggggattc cggcccaaga . gactcaactc . caagctcttc 1500
aacafcccagg tcaaggaggt cacgcagaat gaaggcacca agaccatcgc caataacctt 1860
accagcacga ttcaggtctt tacggactcg gaataccagc tcccgtacgt cctcggctct 1920
gcgcaccagg gctgcctgcc tccgttcccg gcggacgfcct tcatgattcc tcagtacggg 1990
taccfcgactc tgaacaatgg cagtcaggcc gtgagccgtt cctccttcta ctgcctggag 2 04 0
4- *— 4- t LlUUULI- ctcaaatgct gagaacgggc aacaactttg agtteageta ccagtttgag 2100
gacgtgcctt ttcacagcag ctacgcgcac agccaaagcc tggaccggct gatgaacccc 2160
ctcatcgacc agtacctgta ctacctgtct cggactcagt ccacgggagg taccgcagga 2220
actcagcagt tgctattttc tcaggccggg cctaataaca tgtcggctca ggccaaaaac 2290
tggctacccg ggccctgcta ccggcaacaa cgcgtctcca cgacactgtc gcaaaataac 2340
aacagcaact gtaaatcccg gtgtcgctat ggcaacccac aaggacgacg aagagegatt 2400
ćtgcctggac cggtgccacc aaatatcatc tgaatggcag agactctctg ttttccgtcc 2460
agcggagtct taatgtttgg gaaacaggga gctggaaaag acaacgtgga etatageage 2520
gttatgctaa ccagtgagga agaaattaaa accaccaacc cagtggccac ggaacagtac 2580
ggcgtggtgg ccgataacct gcaacagcaa aacgccgctc ctattgtagg ggccgtcaac 2640
agtcaaggag ccttacctgg catggtctgg cagaaccggg acgtgtacct gcagggtcct 2700
atctgggcca agattcctca cacggacgga aactttcatc cctcgccgct gatgggaggc 2760
tttggactga aacacccgcc tcctcagatc ctgattaaga atacacctgt tcccgcggat 2820
cctccaacta ccttcagtca agctaagctg gcgtcgttca tcacgcagta cagcaccgga 2850
caggtcagcg tggaaattga atgggagctg cagaaagaaa acagcaaacg ctggaaccca 2940
gagattcaat acacttccas ctactacaaa tctacaaatg tggaettege tgttaacaca 3000
gatggcactt attctgagcc tcgccccatt ggcacccgtt acctcacccg taatctgtaa 3060
ttgctcgtta atcaataaac cggttgattc gtttcagttg aactttggtc tctgcgaagg 3120
gcgaattc 3128
<210> 47 <211> 3128 <212> DNA <213> 44.5
<400> 47 gaattcgccc tttctacggc tgcgteaact ggaccaatga gaactttccc ttcaacgatt 60
gcgtcgacaa gatggtgatc tggtgggagg agggcaagat gacggccaag gtcgtggagt 120
ccgccaaggc cattctcggc ggcagcaaag tgcgcgtgga ccaaaagtgc aagtcgtccg 180
cccagatcga ccccaccccc gtgatcgtca cctccaacac i caacatgtgc i gccgtgattg 240
acgggaacag caccaccttc gagcaccagc . ageegttgea ggaccggatg i ttcaagtttg 300
138
PL 222 683 B1
ssctcscccg ccgtctggag cacgactttg ocasggtasc saagcaggaa gtcsgsgagt. 3S0
-ct-ccgctg agcgcaggst cacgtgaccg ^ggtggcgea cgagttctac gtcagaaagg 420
gtagsgccaa caagagaccc gcccccgatg acgcggataa aagcgagccc aagcgggcct 4S0
gcccctcagfc cgcggatcca tcgacgtcag acgcggaagg agctccggtg gactttgccg 540
acaggtacca aaacaaatgt tctcgtcacg cgggcatgct tcagatcctg tttccctgca 500
s a sc «, tg cgs. gagaatgaat cagaatttca acatttgctt cacgcacggg accagagact 650
gttcagaatg tttccccggc gtgtcagaat ctcaaccggt tgtcagaaaa aagacgtatc 720
ggaaactctg tgccattcat catctgctgg ggcgggcacc cgagattgct tgctcggcct 780
gcgatctggt caacgtggac ctagatgact gtgtttctga gcaataaatg acttaaacca 340
ggtatggctg ccgatggtta tcttceagat tggctcgagg acaacctctc tgagggcatt 500
cgcgagtggt gggacttgaa acctggagcc ccgaaaccca aagccaacca gcaaaagcag 960
gacgacggcc ggggtctggt gcttcctggc tacaagtacc tcggaccctt caacggactc 1020
gacaaggggg agcccgtcaa cgcggcggac gcagcggcct tcgagcacga caaggcct&c 1030 gaccagcagc tcaaagcggg tgacaatccg tacctgcggt ataaccacgc cgacgccgag 1140 tttcaggage gtetgcaaga agatacgtct tttgggggca acctcgggcg agcagtcttc 1200 caggccaaga agcgggttct cgaacctctc ggtctggttg aggaaggcgc taagacggct 1260 cctggaaaga agagaccggt agagccatca ccccagcgtt ctccagsctc ctctacgggc 1320 atcggcaaga aaggccacca gcccgcgaaa aagagactca actttgggca gactggcgac 1360
—cegegtceg tgcccgaccc tcaaccaatc ggagaacccc ccgcaggccc ctctggtctg 1440
ggatctggta caatggctgc aggcggtggc gctccaatgg cagacaataa cgaaggcgcc 1500
gacggagtgg gtagttcctc aggaaattgg cattgcgatt ccacatggct gggcgacaga 1560
gtcatcacca ccagcacccg aacetgggcc ctccccacct acaacaacca cctctacaag 1620
caaatctcca acgggacttc gggaggaagc accaacgaca acacctactt cggctacagc 1680
accccctggg ggtattttga ctttaacaga ttccactgcc acttctcacc acgtgactgg 1740
cagcgactca tcaacaacaa ctggggattc cggcccaaga gacccaactt caagctcttc 1800
aacatccagg tcaaggaggt cacgcagaat gaaggcacca agaccatcgc caataacctt 1860
accagcacga tfccaggtctt tacggactcg gaataccagc tcccgtacgt cctcggctct 1520
gcgcaccagg gctgcctgcc tccgttcccg gcggacgtct tcatgattcc tcagtacggg 1930
tacctgactc tgaacaatgg cagtcaggcc gtgggccgtt cctccttcta ctgcctggag 2040
tactttcctt ctcaaatgct gagaacgggc aacaactttg agttcagcfca ccagtttgag 2100
gacgtgcctt ttcacagcag ctacgcgcac agccaaagcc tggaccggct gatgaacccc 2160
ctcatcgacc agtacetgta ctacctgtct cggactcagt ccacgggagg taccgcagga 2220
acteageagt tgctattttc tcaggccggg cctaataaca tgtcggcŁca · ggccaaaaac 2280
PL 222 683 B1
139
cggctacccg ggccctgcta ccggcagcaa cgcgtctcca cgacactgtc gcaaaataac 2340
aacagcaact ttgectggac cggtgccacc aagtatcatc tgaatggcag agactctctg 2400
gtaaatcccg gtgtcgctat ggcaacccac aaggacgacg aagagcgatt ttttccgtcc 2460
agcggagtct taatgtttgg gaaacaggga gctggaaaag acaacgtgga ctatagcagc 2520
gttatgctaa ccagtgagga agaaattaaa accaccaacc <aSt29CC3C agaacagtac 2580
ggcgtggtgg ccgataacct acaacagcaa aacgccgctc ctattgtagg ggccgtcaac 2640
agtcaaagag ccttacctgg catggtctgg cagaaccggg acgtgtacct gcagggtcct 2700
atctgggcca agattcctca cacggacgga aactttcatc cctcgccgct gatgggaggc 2760
tćtggactga aacacccgcc tcctcagatc ctgattaaga atacacctgt tcccgcggat 2820
cctccaacta ccttcagtca agctaagctg gcgtcgttca tcacgcagta cagcaccgga 2880
caggtcagcg tggaaattga atgggagctg cagaaagaaa acagcaaacg ctggaaccca 2940
gagattcaat acacttccaa ctactacaaa tctacaaatg tggactttgc tgttaacaca 3000
gatggcactt attctgagcc tcgccccatt ggcacccgtt acctcacccg fcaatctgtaa 3060
ttgcttgtta atcaataaac cggttgattc gtttcagttg aactttggtc tctgcgaagg 3120
gcgaattc 3128
<210? 48 <211? 1933 <212? DNA <213? nowy serotyp AAV, klon 223 .10
<220>
<221? cecha dowolna <222? (1302). ¢1302)
<223? może być a, c, g lub t
<400? 48 caaggcctac gaccagcagc tcaaagcggg tgacaatccg tacctgcggt ataaccacgc 60
cgacgccgag ttfccaggagc gtcttcaaga agatacgtct tttgggggca acctcgggcg 120
ageagtette caggccaaaa agcgggttct cgaacctctt ggtctggttg agacgccagc 180
taagacggca cctggaaaga agcgaccggt agactcgcca gactccacct cgggcatcgg 240
caagaaaggc cagcagcccg cgaaaaagag actcaacttt gggcagactg gcgactcaga 300 gtcagtcccc gaccctcaac caatcggaga accaccagca ggcccctctg gtctgggatc 360 tggtacaatg gctgcaggcg gtggcgcacc aatggctgac aataacgagg gcgccgacgg 420 agtgggtaat gcctcaggaa attggcattg cgattccaca tggctgggcg acagagtcat 480 caccaccagc acccgaacct gggccctgcc cacctacaac aaccacctct acaagcaaat 540 ctccagtcag tcagcaggga gcaccaacga taacgtctat ttcggctaca gcaccccctg 600 ggggtatttt gacttcaaca gattccattg ccacttctca ccacgtgact ggcagcgact 660
140
PL 222 683 B1
Z 5.CC35.CΞΞ.-Ζ aactggggat tccggcccas gaagctcaac ttcaagctct tcaacatcca 72 0
C7CT U C ćićięCicLCJ gtcacgacga atgacggcgt cacaaccatc gctaataacc ttaccagcac 730
ggfctcsggtc ttttcggact cggaatatca sctgccętsc ctccL.cggct ccccncacca 340
gggctgc ctg cctccgttcc cggcagacgt Qt”Cctgc tC ccgcagtacg gatacctgac 900
cctgaacaat ggcagccaat cggtaggccg ttcctccttc tactgcctgg agtactfctcc 960
ctc ccagatg ctgagaacgg gcaacaactt cacctttagc tacaccttcg aggacgtgec 102 0
tttccacagc agctacgcgc acagccagag tctggaccgg ctgatgaatc ccctcatcga 1 OSO
csagtacctg tactacttgg ccagaacaca gagcaacgca ggaggtactg ctggcaatcg 1140
ggaactgcag ttttatcagg gcggacctac caccatggcc gaacaagcaa agaactggct 1200
gcccggacct tgcttccggc aacagagagt atccaagacg ctggatcaaa ataacaacag 1260
csactttgcc tggactggtg ccacsaaata ccatttaaat gnaagaaatt cattggttaa 1320
tcccggtgtc gccatggcaa cccacaagga cgacgaggaa cgcttcttcc cttcgagcgg 1380
agttctaatt ttfcggcaaaa ctggagcagc taataaaact acattagaaa acgtgctcat 1440
gacaaatgaa gaagaaattc gtcctaccaa cccggtagct accgaggaat acgggattgt 1500
aagcagcaac ttgcaggcgg ctagcaccgc agcccagaca caagfctatta acaaccaggg 1560
agccttacct ggcatggtct ggcagaaccg ggacgtgtac cfcgcaaggtc ccatttggcc 1620
eaagatfccct cscscggacg gcaactttca cccgtctcct ctaatgagtg gctttggact 1630
gaaacacccg cctccccaga tcctgatcaa aaacacaccg gtacctgcta atcctccaga 1740
agtgtttact cctgccaagt ttgcttcctt catcacgcag tacagcaccg ggcaagtcag 1600
cgttgagatc gagtgggagc tgcagssaga gaacagcaag cgctggaacc cagagattca 1360
gtacacctcc aactttgsca aacagactgg agtggacttt gctgttgaca gccagggtgt 1920
ttactcfcgag cct 1933
<210? 49 <211? 1933 <212? DłTA <213? nowy serotyp AAV, klon 223.2 <400? 49
caaggcctac gaccagcagc tcaaagcggg tgacaatccg tacctgcggt ataaeeacgc 60
cgacgccgag tttcaggagt gtcttcaaga agatacgtct tttgggggca acctcgggcg 120
agcagtcttc caggccaaaa agcgggttct cgaacctctt ggtctggttg agacgccagc ISO
taagacggca cctggaaaga agcgaccggt agactcgcca gactccacct cgggcatcgg 240
caagaaaggc cagcagcccg cgaaaaagag actcaacttt gggcagactg gcgactcaga 300
□tcagtcccc gaccctcaac caatcggaga accaccagca ggcccctctg gtctggaatc 360
PL 222 683 B1
141
tggtacaatg gttgcaggcg gtggcgcacc aatggctgac aatascgagg gcgccgacgg 420
agtgggtaat gcctcaggaa attggcattg cgattccaca tggctgggcg acagagtcat 430
caccaccagc acccgaacct gggccctgcc cacctacaac aaccacctct acaagcaaat 540
ctccagtcag tcagcaggga gcaccaacga taacgtctat ttcggcfcaca gcaccccctg 600
ggggtatttt gacttcaaca gattccattg ccacttctca ccacgtgact ggcagcgact 660
tatcaacaac aactggggat tccggcccaa gaagctcaac ttcaagctct tcaacatcca 720
ggtcaaggag gtcacgacga atgacggtgt cacaaccatc gctaataacc ttaccagcac 700
ggfcteaggtc ttttcggact cggaatatca actgccgtac gtcctcggct ccgcgcacca 340
gggctgcctg cctccgttcc cggcagacgt gttcatgatt ccgcagtacg gatacctgac 900
tctgaacaat ggcagccaat cggtaggccg ttcctccttc tactgcctgg agtactttcc 960
ttctcagatg ctgagaacgg gcaacaactfc cacctttagc tacaccttcg aggacgtgcc 1020
tttccacagc agctacgcgc acagccagag tctggaccgg ctgatgaatc ccctcatcga 1080
ccagtaccfcg tactacttgg ccagaacaca gagcaacgca ggaggtactg ctggcaatcg 1140
ggaactgcag ttttatcagg gcggacctac caccatggcc gaacaagcaa agaactggct 1200
gcccggacct tgcttccggc aacagagagt atccaagacg ctggatcaaa ataacaacag 1260
caactttgcc tggactggtg ccacaaaata ccatttaaat ggaagaaatt cafctggttaa 1320
tcccggtgtc gccatggcaa cccacaagga cgacgaggaa cgcttctccc cttcgagcgg 1380
agttctaatt tttggcaaaa ctggagcagc taataaaact acattagaaa acgtgctcat 1440
gacaaatgaa gaagaaattc gtcctaccaa cccggtagct accgaggaat acgggattgt 1500
aagcagcaac ttgcaggcgg ctagcaccgc agcccagaca caagttgtta acaaccaggg 1560
agccttacct ggcatggtct ggeagaaccg ggacgtgtac ctgcaaggtc ccatttgggc 1620
caagattcct cacacggacg gcaactttca cccgtctcct ctaatgggtg gctttggact 1600
gaaacacccg cctccccaga tcctgatcaa aaacacgccg gtacctgcta atcctceaga 1740
agtgtttact cctgccaagt ttgcttcctt catcacgcag tacagcaccg ggcaagtcag 1800
cgttgagatc gagtgggagc tgcagaaaga gaacagcaag cgctggaacc cagagattca 1860
gtacacctcc aactttgaca aacagactgg agtggacttt gctgttgaca gccagggtgt 192 0
ttactctgag cct 1933
<210> SO <211> 1933
<212> <213> DNA ' nowy serotyp AAV, klon 223.4
<400» 50
caaggcctac gaccagcagc tcaaagcggg tgacaatccg tacctgcggt ataaccacgc 60
cgacgccgag tttcaggagc gtcttcaaga agatacgtct tttgggggca acctcgggcg 120
142
PL 222 683 B1
ageagtette caggccaaaa agcgggttct cg a&c ete fc1 ggtctggttg agacgccagc 160
z eŁiŁgacęgc a cctggaaaga agcgaccggt agacccgcca gactccacct cgggcafccgg 240
caagaaaggc eagcagcccg cgaaaaagag actcaacttt gggcagactg gcgactcaga 300
gccagtcccc gaccctcaac caatcggaga accaccagca ggcccctetg gtctgggatc 3 60
tggtacaatg gctgcaggcg gtggcgcacc aatggctgac aataacgaeg ęcgccgacgg 420
agtgggtaat gcctcaggaa attggcattg cgattccaca cggctgggcg acagagtcat 430
caccaccagc acccgaacct gggccctgcc cacctacaac aaccacctct acaagcaaat 540
ctccagtcag tcagcaggga gcaccaacga taacgtctat ttcggctaca gcaccccctg 60G
ggggt.att.ut gacttcaaca gattccattg ccactectca ccacgtgact ggcagcgact 66G
catcaaeaac aactggggat tccggcccaa gaagctcaac ttcaagctćt tcaacatcca 720
ggtcaaggag gtcacgacga atgacggcgt cacsaccstc gctaataacc ttaccagcac 780
ggttcaggtc ttttcggact cggaatatca actgccglsc gtcctcggct ccgcgcacca 340
gggctgcctg cctccgttcc cggcagacgt gttcatgafcfc ccgcagtacg gatacctgac 900
tctgaacaat ggcagccaat cggtaggccg ttcctcctfcc tactgectgg agtacttfccc 960
ttctcagatg ctgagaacgg gcaacaactt cacctttagc tacaccttcg aggacgtgcc 1020
tttccacagc agctacgcgc acagccagag tctgggccgg ctgatgaatc ccctcatcga 1030
c c «g t cctg tactacttag ccagsacaca gagcaacgca ggaggtactg ctggcaatcg 1140
ggaactgcag ttttatcagg gcggscctac caccatagcc gaacaagcaa agaactggct 1200
gcccgaacct tgcttccggc aacagagagt atccaagacg ctggatcaaa ataacaacag 1260
ca&ctttgcc? ccacsaasta cc a 111 aaa t ggaagaaatt cattggttaa 1320
ccccggtgtc gccatggcaa cccacaagga cgacgaggaa cgcttcttcc cttcgagcgg 1380
agttctaatt fc ttggcaaaa ctggagcagc taataaaact acattagaaa acgtgctcat 1440
g&caaSttg&a gaagaaattc gtcccaccaa cccggtagct accgaggaat acgggattgt 1500
aagcagcaac ttgcaggcgg ctagcaccgc agcccagaca caagttgtta acaaccaggg 1560
agccttacct ggcatggtct ggcagaaccg ggacgtgtac ctgcasggtc ccatttgggc 1320
caagattcet cacacggacg gcaactttca cccgtctcct etaatgggtg gctteggact 1660
gaaacacccg cctccccaga tcctgatcaa aaacacaccg gtacctgcta atcctccaga 1740
agtgtttact cctgccaagt ttgcttcctt catcacgcag tacagcaccg ggcaagtcag 1800
cgttgagatc gaatgggagc tgcagaaaga gaacagcaag cgctggaacc cagagattca 1860
gtacaćetcc aactttgaca aacagactgg agtggacttt gctgttgaca gccagggtgt 1920
ttactctgag cct 1933
<210> 51 <211> 1933
PL 222 683 B1
143 <212> DNA <213> nowy serotyp AAV, klon 223.S <400> 51
caaggcctac gaccagcagc tcaaagcggg tgacaatccg tacctgcggt ataaccacgc 60
cgacgccgag tttcaggagc gtcttcaaga agatacgtct tttgggggca acctcgggcg 120
ageagtette caggccaaaa agcgggttct cgaacctctt ggtctggttg agacgccagc 180
taagacggca cctggaaaga agcgaccggt agactcgcca gactccacct cgggcatcgg 240
caagaaaggc cagcagcccg cgaaaaagag actcaacttt gggcagactg gcgactcaga 300
gccagtcccc gaccctcaac caatcggaga accaccagca ggcccctctg gtctgggatc 360
tggtacaatg gctgcaggcg gtggcgcacc aatggctgac aataacgagg gcgccgacgg 420
agtgggtaat gcctcaggaa attggcattg cgattccaca cggctgggcg acagagtcat 480
caccaccagc acccgaacct gggccctgcc cacctacaac aaccacctct acaagcaaat 540
ctccagtcag tcagcaggga gcaccaacga taacgtctat ttcggctaca gcaccccctg 600
ggggtatttt gacttcaaca gattccattg ccacttctca ccacgtgact ggcagcgact 660
tatcaacaac aactggggat tccggcccaa gaagctcaac ttcaagctct tcaacatcca 720
ggtcaaggag gtcacgacga atgacggcgt cacaaccatc getaataace ttaccagcac 780
ggttcaggtc ttttcggact cggaatatca actgccgtac gtcctcggct ccgcgcacca 840
gggctgcctg cctccgttcc cggcagacgt gtteatgatt ccgcagtacg gatacctgac 900
tctgaacaat ggcagccaat cggtaggccg ttcctccttc tactgcctgg agtactttcc 960
ttctcaaatg ctgagaacgg gcaacaactt cacctttagc tacaccttcg aggacgtgcc 1020
Łttccacagc agctacgcgc acagccagag tctS9Scc99 ctgatgaatc ccctcatcga 1080
ccagtacctg tactacttgg ccagaacaca gagcaacgea ggaggtactg ctggcaatcg 1140
ggaactgcag ttttatcagg gcggacctac caccatggcc gaacaagcaa agaactggct 1200
gcccggacct tgcttccggc aacagagagt atccaagacg ctggatcaaa ataacaacag 1260
caactttgcc tggactggtg ccacaaaata ccatttaaat ggaagaaatt cattggttaa 1320
tcccggtgtc gccatggcaa cccacaagga cgacgaggaa cgcttcttcc cttcgagcgg 1380
agttctaatt tttggcaaaa ctggagcagc taataaaact acattagaaa acgtgctcat 1440
gacaaatgaa gaagaaattc gtcctaccaa cccggtagct accgaggaat acgggattgt 1500
aagcagcaac ttgcaggcgg ctagcaccgc agcccagaca caagttgtta acaaccaggg 1560
agccttacct ggcatggtct ggcagaaccg ggacgtgtac ctgcaaggtc ccatttgggc 1620
caagattcct cacacggacg gcaactttca cccgtctcct ctaatgggtg gctttggact 1680
gaaacacccg cctccccaga tcctgatcaa aaacacaccg gtacctgcta atcctccaga 1740
agtgtttact cctgccaagt ttgcttcctt catcacgcag tacagcacca ggcaagtcag 1800
cgttgagatc gaatgggagc tijcagaaaga gaacagcaag cgctggaacc cagagattea 1860
144
PL 222 683 B1
atscscctcc asLCfcfcfcą&ea aacaoactacr aaćacscttt actctfcoaea occsaacfcirr 1520
- -
rtactctgag cct 1533
<210> 52
<211> 1933
<212> DMA
<213> nowy serotyp AAV, klon 223.6
<400> 52
caaggcctac gaccagcagc tcaaagcggg tgacaatccg tacctgcggt ataaccacgc 60
cgacgc cgag tttcaggagc gtcttcaaga agatscgtct tttgggggca acctcgggcg 120
agcactl· cfctc caggccaaaa agcgggttct cgaacctctt ggtctggttg agacgccagc ISO
taagacggca cctggaaaga agcgaccggt agactcgcca gactccacct cgggcatcgg 240
•caagaaaggc cagcagcccg cgaaaaagag actcaacttt gggcagactg gcgactcaga 300
gtcagtcccc gaccctcaac caatcggaga accaccagca ggcccctctg gtctgggatc 360
tggtacaatg gctgcaggcg gtggcgcacc aatggctgac aatagcgagg gcgccgacgg 42 0
agtaggtaat gccfccaggaa attggcattg cgattccaca tagctgggcg acagagtcat 4B0
caccaccagc acccgaacct gggccctgcc cacctacaac aaccacctct acaagcaaat 540
ctccagtcag tcagcaggga gcaccaacga taacgtetat ttcggctaca gcaccccctg 600
ggggtatttt gacttcaaca gattccattg ccacttctca ccacgtgact ggcaacgact 650
tatcaacaac aactggggat tccggcccaa gaagctc aac ttcaagctct teaacatcca 72 0
ggtcaaggag gtcacgaega acgacggtgt cacaaccatc gctaataace ttaccagcac 780
gattcaggtc ttttcggact cggaatatca actgccgtac gtcctcggct ccgcgcacca 340
gggctgcctg cctccgttcc cggcagacgt gtteatgatt ccgcagtacg gatacctgac 900
tctgaacaat ggcagccaat cggtaggccg ttcctccttc tactgcctgg agtactttcc 96C
ttctcagatg ctgagaaccg gcaacaactt cacctttagc tacaccttcg aggacgtgcc 1020
tttccacagc agctacgcgc acagccagag tctggaccgg ctgatgaatc ccctcatcga 1080
ccagtacetg tactacttgg ccagaacaca gagcaacgca ggaggtactg ctggcaatcg 1140
ggaactgcag tettateagg gcggacctac caccatggcc caacsagcas agaactggct 1200
gcccggacct tgcttccggc aacagagagt atccaagacg ctggatcaaa ataacaacag 1260
caactttgcc tggactggtg ccacaaaata ccatttaaat ggaagaaatt cattggttaa 1320 ccccggtgtc gccatggcaa cccacaagga cgacgaggaa cgcttcttcc cttcgaacgg 1380 agttctaatt tttggcaaaa ctggagcagc taataaaact acattagaaa acgtgctcat 1440 gacaaatgaa gaagaaattc gtcctaccaa cccggtagct accgaggaat acgggattgt 1500 aagcagcaac ttgcaggcgg ctagcaccgc agcccagaca caagttgtta acaaccaggg 1560 agcctfcacct ggcatggtct ggcagaaccg ggacgtgtac ctgcaaggtc ccatttgggc 1620
PL 222 683 B1
145
ceagattcct cacacggacg gcaact tcca cccgtctcct ctaatgggtg gctttggact 16S0
gaaacacccg cctccccaga tcctgatcaa aaaeacaccg gtscctgcta atcctccaga 1740
agtgtfctacC cctgccaagc ttgcttcctt catcacgcag tacagcaccg ggcaagtcag 1S00
cgttgagate gagtgggsgc tccagaaaga gaacagcaag cgctggaacc cagagattca iaso
gtacacctcc aacfcfctgaca ascagaetcg agfcggacttt gctgttgsca gccagggtgt 1920
ttactctgag cct 1933
<210» 53 <211» 1933 <212» DNA <213» nowy serotyp AAV, klon 223.7 <400» 53
caaggcctac gaccagcagc tcaaagcggg tgacaatccg tacctgcggt ataaccacgc 60
cgacgccgag tttcaggsgc gtcttcaaga agatacgtct tttgggggca acctcgggcg 120
agcagtcttc caggccaaaa «gcgggttct cgaacctctt ggtctggttg agacgccagc iao
taagacggca cctggaaaga agcgaccggt agactcgcca gactccacct cgggcatcgg 240
caagaaaggc cagcagcccg cgaaaaagag actcaacttt gggcagactg gcgacteaga 300
gtcagtcccc gaccctcaac caatcggaga accaccagca ggcccctctg gtctgggatc 3 60
tggtacaatg actgcaggcg gtggcgcacc aatggctgac sataacgagg gcgccgacgg 420
agtgggtaat gcctcaggaa attggcattg cgattccaca tęgctgggcg acagagtcat 480
caccaccagc acccgaacct gggccctgcc cacctacaac aaccacctct acaagcaaat 540
ctccagtcag tcagcaggga gcaccaacga taacgtctat ttcggctacs gcaccccctg 600
ggggtatttt gacttcaaca gattccattg ccacttctca ccacgtgact ggcagcgact 660
eatcaacaac aactggggat tccggcccaa gaagctcaac ttcaagctct tcaacatcca 720
ggtcaaggag gtcacgacga afcgacggcgt cacaaccatc gctaataacc ttaccagcac 780
ggttcaggtc ttttcggacc cggaatatca actgccgtac gtcctcggct ccgcgcacca 340
gggctgcctg cctccgttec cggcagacgt gttcatgatt ccgcagtacg gatacctgac 900
tctgaacaat ggcagccaat cggtaggccg ttcctccttc tactgcctgg aatactttcc 960
ttctcagatg ctgagaacgg gcaacaactt cacctttagc tacaccttcg aggacgtgcc 1020
tttccacagc agctacgcgc acagccagag tctggaccgg ctgatgaatc ccctcatcga 1080
ccagtacctg tactacttgg ccagaacaca gagcaacgca ggaggtactg ctggcaatcg 1140
ggaactgcag ttttatcagg gcggacctac caccatggcc gaacaagcaa agaactggct 1200
gcccggacct tgcttccggc aacagagagt atccaagacg ctggatćaaa ataacaacag 1260
caactttgcc tggactggtg ccacaaaata ccatttaaat ggaagaaatt cattggttaa 1320
146
PL 222 683 B1
^cccęotgtc cccstggess cccacssęgs cgscgaggsa cgcttcttcc cttcgagcgg 1330
agttctaafct tttggcsass ctggagcagc taataaaact scattagaas scgtgctzcsfc 1440
gacaaatgaa gaagaaattc gtcctaccaa cccggtagct sccgaggaac scgggstfcgt 1500
SSO Cc ssc tuocsęgcgg cfcsgcaccgc agcccagaca caagttgfcta acsaccaggg 1560
dOCC 11_ SCC V- ggoatggtct agcagaaccg ggscgtgtac ctgeaaggtc ccatttgggc 1620
uCCt cscacaascg gcaao C L Ł*_ s cccgtctcct ctaatgggtg gc utk,gg«cŁ 1680
gaaacacccg cctccccaga tcctgatcaa aaacacaccg gtacctgcta stcceccaga 1740 agtgtttact cctgccaaga ttgcttcctc cateacgcag tacagcaccg ggcaagtcag 1300 cgttgagatc gagtaggagc tgcagaaaga gaacagcaag cgctggaacc cagagattca 1360 gtacacctcc aacttCgaca aacagacegg agtggacttt gctgttgaca gccagggtgt 1920 ttactctgag ccc 1933 <210? 54 <211? 3123 <212? DNA <213? nowy Serotyp AAV, klon A3.4 <400? 54
gaattcgccc tttctacggc tgcgtcaact ggaccaatga aaactttccc ttcaacgatt 60
gcgtcgacaa gatggtgatc tggtgggagg agggaaagat gaccgccaag atcgtggaat 120
ctgccaaagc cattctgggt ggaagcaagg ttcgtgtgga ccagaaatge aagtcttcgg 180
cccagatcga cccgactccg gtgattgtca cctctaacac caacatgtgc gccgtgattg 240
acggaaactc gaccaccttc gagcaccagc agccgttgca agaccggatg ttcaaatttg 300
aacttacccg cegtttggat catgactttg ggaaggtcac caagcaggaa gtcaaagact 360
ttttccggtg ggctcaagat cacgtgactg aggtggagca tgagttctac gtcaaaaagg 420
gtggagccaa gaaaaggccc gcccccgatg atgfcatatat aaatgagccc aagcgggcgc 480
gcgagtcact tgcgcagcca tcgacgtcag acgcggaagc ttcgatasac tacgcgggca 540
ggtaccaaaa caaatgttct cgtcacgtgg gcatgaatct gatgctgttt ccctgtcgac 600
aatgcgaaag aatgaatcag aattcaaata tctgcttcac acacgggcaa aaagactgtt 560
Łggaatgctt tcccgtgtca gaatctcaac ccgtttctgt cgtcagaaaa acgtatcaga 720
aactttgtta cattcatcat atcatgggaa aagaaccaga cgcctgcact gcctgcgacc 780
tggtaaatgt ggacttggat gactgtattt ctgagcaata aatgacttaa atcaggtatg 840
gctgctgacg gttatcttcc agattggctc gaggacactc tctctgaagg aatcagacag 900
tggtggaaoc tcaaacctgg cecaccaccg ccgaaaccta accaacaaca ccgggacgac 960
agtaggggtc ttgtgcttcc tgggtacaag tacctcggac ccttcaacgg actcgacaaa 1020
ggagagccgg tcaacgaggc agacgccgcg gccctcgagc i acgacaaagc ctacgaccac 1080
PL 222 683 B1
147 cagctcaagc aaggggacaa cccgtacctc aaatacaacc acgcagacac tgsatttcag 1140 gagcgtcttc aagaagatac gtctttcggg ggcsacctcg ggcgagcagt cttccaggcc 1200 aaaaagaggg tactcgagcc tcttggtctg gttgaggaag ctgttaagac ggctcctgga 1260 aaaaagagsc ctatagagca gtctcctgca gaaccggact cttcctcggg catcggcgaa 1320 tcaggccagc agcccgctaa gaaaagactc aattttggtc agactggcga cacagagtca 1380 gtcccagacc ctcaaccaat cggagaaccc cccgcagccc cctctggtgt gggatctaat 1440 acaatggctt caggcggtgg ggcaccaatg gcagacgata acgaaggcgc cgacggagtg 1500 ggtaattcct cgggaaattg gcattgcgat tccacatgga tgggcgacag agttatcacc 1560 accagcacaa gaacctgggc cctccccacc tacaataatc acctctacaa gcaaatctcc 1520
agcaaatcgg gagccaccaa cgacaaccac tacttcggct acagcacccc ctgggggtat 1530
tttgacttta acagattcca ctgtcacttc tcaccacgtg actggcagcg actcatcaac 1740
aacaactggg gatttagacc caagaaactc aatttcaagc tcttcaacat ccaagtcaag 1800
gaggtcacgc agaatgatgg aaccacgacc atcgccaata accttaccag cacggtgcag 1860
gtcttcacag actctgagta ccagctgccc tacgtcctcg gttcggctca ccagggctgc 1320
cttccgccgt tcccagcaga cgtcttcatg attcctcagt acggctacct gactctgaac 1980
aatggcagcc aagcggtagg acgttcttca ttctactgtc tagagtattt tccctctcag 2040
atgctgagga cgggaaacaa cttcaccttc agctacactt ttgaagacgt gcctttccac 2100
agcagctacg cgcacagcca gagtctggat cggctgatga atcctctcat Cgaccagtac 2160
ctgtattacc tgagcaaaac tcagggtaca agtggaacaa cgcagcaatc gagactgcag 2220
ttcagccaag ctgggcctag ctccatggct cagcaggcca aaaactggct accgggaccc 2280
agctaccgac agcagcgaat gtctaagacg gctaatgaca acaacaacag tgaatttgcfc 2340
tggactgcag ccaccaaata ttacctgaat ggaagaaatt ctctggtcaa tcccgggccc 2400
ccaatggcca gtcacaagga cgatgaggaa aagtatttcc ccatgcacgg aaatctcatc 2460
tttggaaaac aaggcacagg aactaccaat gtggacattg aatcagtgct tattacagac 2520
gaagaagaaa tcagaacaac taatcctgtg gctacagaac aatacggaca ggttgccacc 2580
aaccatcaga gtcaggacac cacagcttcc tatggaagtg tggacagcca gggaatctta 2S40
cctggaatgg tgtggcagga ccgcgatgtc tatcttcaag gtcccatttg ggccaaaact 2700
cctcacacgg acgg&cactt tcatccttct ccgctcatgg gaggctttgg actgaaacac 2760
cctcctcccc agatcctgat caaaaacaca cctgtgccag cgaatcccgc gaccactttc 2820
actcctggaa agtttgcttc gttcattacc cagtattcca ccggacaggt cagcgtggaa 2880
atagagtggg agctgcagaa agaaaacagc aaacgctgga acccagaaat tcagtacacc 2940
tccaactaca acaagtcggt gaatgtggag tttaccgtgg acgcaaacgg tgtttattct 3000
gaaccccgcc ctattggeac tcgttacctt acccggaact tgtaatttcc tgttaatgaa 3060
148
PL 222 683 B1 taaaccęatt tatgegtttc agttgaactt tggtctctgc gaagggcgaa ttcgcggccg 3120 tta 3123 <210> 55 <211> 3113 <212? DNA <213? nowy serotyp AAV, klon A3.5 <400> 55 gaattcgccc tttctacggc tgcgtcaact ggaccaatga aaactttccc ttcaacgatt 50
gcgtcgacaa gatggtgatc tggtgggagg agggaaagat gaccgccaag gtcgtggaat 120
ctgccaaagc cattctgggt ggaagcaagg ttcgtgtgga ccagaaatgc aagtcttcgg 180
cccagatcga cccgactccg gtgattgtca cctctaacac caacatgtgc gccgtgattg 240
acggaaactc gaecaccttc gagcaccagc agccgttgca agaccggatg ttcaaatttg 300
aacttacccg ccgtttggat catgactttg ggaaggtcac caagcaggaa gtcaaagact 360
ttttccggtg ggctcaagat cacgtgaccg aggtggagca tgagttctac gtcaaaaagg 420
gtggagccaa gaaaaggccc gcccccgatg atgtatatat aaatgagccc aagcgggcgc 480
gcgagtcagt tgcgcagcca tcgacgtcag acgcggaagc ttcgataaac tacgcggaca 540
ggtaecaaaa caaatgttct agtcacgtgg gcatgaatct gatgctgtfct ccctgtcgac 600
aatgcgaaag aatgaatcaa aattcaaata tctgcttcsc acacgggcaa aaaaactgtt 860
tggaatgctt tcccgtgtca gaatctcaac ccgttcctgt cgtcagaaaa acgtatcaga 720
aactttgtta cattcatcat atcatgggaa aagtaccaga cgcctgcact gcctgcgacc 780
tggtaaatgt ggecttggat gactgtattt ctgagcaata aatgacttaa atcaggtatg 340
gctgctgacg gttatcttcc agattggctc gaggacactc tctctgaagg aatcagacag 900
tggtggaagc tcaaacctgg cccaccaccg ccgaaaccta accaacaaca ccgggacgac 960
agtaggggtc ttgtgcttcc tgggtacaag tacctcggac ccttcaacgg actcgacaaa 1020
ggagagccgg tcaacgaggc agacgccgcg gccctcgagc scgacaaagc ctacgaccac 1080
cagctcaagc aaggggacaa cccgtacctc aaatacaacc acgcggacgc tgaatttcag 1140
gagcgtcttc aagaagatac gtctttcggg ggcaacctcg ggcaagcagt cttccaggcc 1200
aaaaagaggg tactcgagcc tcttggtctg gttgaggaag ctgttaagac ggctcctgga 1260
aaaaagagac ctatagagca gtctcctgca gaaccggact cttcctcggg catcggcaaa 1320
tcąggccagc agcccgctaa gaaaagactc aattttggtc agactggcga cacagagtca 1380
gtcccagacc ctcaaccaat cggagaaccc cccgcagccc cctctggtgt gggatctaat 1440
acaatggctt caggcggtgg ggcaccaatg gcagacaata acgaaggcgc cgacggagta 1500
ggtaattcct cgggaaattg gcattgcgat tccacatgga tgggcgacag agttatcacc 1560
accagcacaa gaacctgggc cctccccacc tacaataatc acctctacaa gcaaatctcc 1620
PL 222 683 B1
149 agcgasfccgg gagccaccaa cgacaaccac tacttcggct acagcacccc ctgggggtat 1680 tttgacttta acagattcca ctgtcacttc tcaccacgtg actggcagcg actcatcaat 1740 aacaactggg gatttagacc caagaaactc aatttcaagc tcttcaacat ccaagtcaag 1800 gaggtcacgc agaatgatgg aaccacgacc atcgccaata accttaccag cacggtgcag 1860 gtcttcacag actctgagta ccagctgccc tacgtcctcg gttcggctca ccagggctgc 1920 cttccgccgt tcccagcaga cgtcttcatg attcctcagt acggctactt gactctgasc 1980 aatggcagcc aagcggtagg acgttcttca ttctactgtc tagagtattt tccctctcag 2040
atgctgaggą <=S93aaacaa cttcaccttc agctacactt ttgaagacgt gcctttccac 2100
agcagctacg cgcacagcca gagtctggat cggctgatga atcctctcat tgaccagfcac 2160
ctgtattacc tgagcaaaac tcagggtaca agtggaacaa cgcagcaatc gagactgcag 2220
ttcaaccaag ctgggcetag ctccatggct cagcaggcca aaaactggct accgggaccc 2280
agctaccgac agcagcgaat gtctaagacg gctaatgaca acascaacag tgaatttgct 2340
tggactgcag ccaccaaata ttacccgaat ggaagaaatt ctctggtcaa tcccgggccc 2400
ccaatggcca gtcacaagga cgatgaggaa aagtatttce ccatgcacgg aaatctcatc 2460
tttggaaaac aaggcacagg aactaccaat gtggacattg aatcagtgct tattacagac 2520
gaagaagaaa tcagaacgac taatcctatg gctacagaac aatacggaca ggttgccacc 2580
aaccgtcaga gtcagaacac cacagcttcc tatggaagtg tggacagcca gggaatctta 2640
cctggaatgg tgtggcagga ccgcgatgtc tatcttcaag gtcccatttg ggccaaaact 2700
cctcacacgg acggacactt tcatccttct ccgctcatgg gaggctttgg actgaaacac 2760
cctcctcccc agatcctgat caaaaacaca cctgtgccag cgaatcccgc gaccactttc 2820
actcctggaa agtttgcttc gttcattacc cagtattcca ccggacaggt cagcgtggaa 2880
atagagtggg agcfcgcagaa agaaaacagc aaacgctgga acccggaaat tcagtacacc 2 940
tccaactaca acaagtcggt gaatgtggag tttaccgtgg acgcaaacgg tgtttattct 3000
gaaccccgcc ctattggcac tcgttacctt acccggaact tgtaatttcc tgttaatgaa 3060
taaaccgatt tatgcgtttc agttgaactt tggtctctgc gaagggcgaa ttc 3113
<210? 56 <211? 3122 <212» DNA <213? nowy serotyp AAV, klon A3.7 <400> 56 agcggccgcg aattcgccct ttctacggct gcgtcaactg gaccaatgaa aactttccct 60 tcaacgattg cgtcgacaag atggtgatct ggtgggagga gggaaagatg accgccaagg 120 tc9tggaatc tgccaaagcc attctgggtg gaagcaaggt tcgtgtggac cagaaatgca 180
150
PL 222 683 B1 ggtcttcggc ccagatcgac ccgactccgg tgattgtcac ctctaacacc aacatgtgcg 240 ccgtgactga cggaaactcg accaccttcg agcaccagca gccgttgcaa gaccggatgt 300 ccaaatttga acttacccgc cgtttggate atgactttgg gasggtcacc aagcaggaag 360 tcaasgactt fcttccggtgg gctcaagatc acgtgactga ggtggagcat gagttctacg 420 tcaaaaaggg tggagccaag aa&aggcccg cccccgatga tgtatatata aatgagccca 4S0 agcgggcgcg cgagtcagtt gcgcagccat cgacgtcaga cgcggaagct tcgataaacfc 340 acgcagacag gtaccaaaac aaatgctctc gfccacgtggg catgaacctg atgctgttfcc 600 cctgtcgaca atgcgaaaga atgaaCcaga attcaaatat ctgcttcaca cacgggcaaa =60 aagactgttt ggaatgcttt cccgtgtcag aatctcaacc cgtttctgtc gtcagaaaaa 720 cgtatcagaa aetttgttac attcatcata tcatgggaaa sgtaccagac gcctgcactg 780 cctgcgacct ggtaaatgtg gacttggatg actgtatttc tgagcaataa atgacttaaa 340 ccaggtatgg ctactgacgg ttatcttcca gattggctcg aggacactet ctctgaagga 900 atcagacagt ggtggaagct caaacctggc ccaccaccgc cgaaacctaa ccaacaacac 950 c299ac9aca gtaggggtct tgtgcttcct gggtacaagt acctcggacc cttcaacaga 1020
ctcgacaaag gagagccggt caacgaggca gacgccgcgg ccctcgagca cgacaaagcc 1050
tacgaccacc agctcaagca aggggacaac ccgtacctca aauacaacca cgcggscget 1140
gaatttcagg agcgtcttca agaagatacg tctćtcgggg gcaacctcgg gcgagcagtc 1200
ttccaggcca aaaagagggt actcgagcct cttggtctgg ttgaggaagc tgttaagacg 1250
gctcctggaa aaaagagacc tatagagcag tctcctgcag aaccggactc ttcctcgggc 1320
atcggcaaat caggccagca gcccgctaag aaaag&ctca attttggtca gactggcgac 1360
acagagtcag tcccagaccc tcaaccaafcc ggagaacccc ccgcagcccc ctetggtgtg 1440
ggatctaata caatggcttc sggcggtggg ccaccaatgg Cagacaataa cgaaggcgcc 1500
gacggagtcg gtaattcctc gggaaattgg cattgcgatt ccacatggat gggcgacaca 1560
gttatcacca ccagcacaag aacetgggcc ctccccacct acaataatcg cctctacaag 1620
caaatctcca gegaatcggg agccaccaac gacaaccsct acttcggcta cagcaccccc 1680
tgggggtatt ttgactttaa cagattccac tgtcacttct eaccacgtgs ctggcagcga 1740
ctcatcaaca acaactgggg atttagaccc aagaaactca atttcaagct cttcaacatc 1300
caagtcaagg aggtcacgca gaatgatgga accacgacca tcgccaataa ccttaccagc 1860
acggtgcagg tcfctcacaga ctctgagtac cagctgccct acgtcctcgg ttcggctcac 1920
cagagctgcc ttccgccgtt cccagcagac gtcttcatga ttcctcagta cggctacttg 1930
actctgaaca atggcagcca agcggtagga cgttcttcat tctactgtct agagtatttt 2040
ccctctcaga tgctgaggac gggaaacaac ttcaccfcfcca gctacacttt tgaagacgtg 2100 cctttccaca gcagctacge gcacagccag agfcctggafcc ggctgatgaa tcctctcatt 2160
PL 222 683 B1
151 gaccagtacc tgtattacct gagcaaaact cagggtacaa gtggaacaac gcagcaatcg 2220 agactgcagt tcagccaagc tgggcctagc tccatggctc agcaggccaa aaactggcta 2280 ccgggaccca gctaccgaca gcagcgaatg tctaagacgg ctaatgacaa caacaacagt 2340 gaatttgctt ggactgcagc caccaaatat tacctgsatg gaagaaattc tctggtcaat 2400 cccgggcccc caatggccag tcacaaggac gatgaggaaa agtatttccc catgcacgga 2460 aatctcatct ttggaaaaca aggcacagga actaccaata tggacattga atcagtgctt 2520 attacagacg aagaagaaat cagaacaact aatcctgtgg ctacagaaca atacggacag 2580 gttgccacca accatcagag Ccagaacacc acagcttcct atggaagtgt ggacagccag 2640 ggaatcttac ctggaatggt gtggcaggac cgcgatgtct atcttcaagg tcccatttgg 2700 gccaaaactc ctcacacgga cggacacttt catccttctc cgctcatgag aggctttgga 2760
etgaaacacc ctcctcccca gatcctgatc aaaaacacac ctgtgccagc gaatcccgcg 2820
accactttca ctcctggaaa gtttgcttcg ttcattaccc agtattccac cggacaggtc 2880
agcgtggaaa bagagtggga gctgcagaaa gaaaacagca aacgctggaa cccagaaatt 2940
cagtacacct ccaactacaa caagtcggtg aatgtggagt ttaccgtgga cgcaaacggt 3000
gtttattctg aaccccgccc tattggcact cgttacctta cccggaactt gtaatttcct 3060
crtt 3SC53. t aaaccgattt atgcgtttca gttgaacttt ggtcectgcg aagggcgaac 3120
3122 <210> 57 <211> 3123
<212 > DłTA <213> nowy serotyp AAV# klon A3 .3
<400> 57 gaattcgccc tttctacggc tgcgtcaact ggaccaatga aaactttccc ttcaacgatt 60
gcgtcgacaa gatggtgatc tggtgggagg agggaaagat gaccgccaag gtcgtggaat 120
ctgccaaagc cattctgggt ggaggcaagg ttcgtgtgga ccagaaatgc aagtcttcgg 180
cccagatcga cccgactccg gtgatcgtca cctctaacac caacatgtgc gccgtgattg 240
acggaaactc gaccaccttc gagcaccagc agccgttgca agaccggatg ttcaaatttg 300
aacttacccg ccgtttggat catgactttg ggaaggtcae caagcaggaa gtcaaagact 360
ttttccggtg ggctcaagat cacgtgactg aggtggcgca tgagttctac gtcaaaaaga 420
gtggagccaa gaaaaggccc gcccccgatg atgtatatat aaatgagccc aagcgggcgc 4E0
gcgagtcagt tgcgcagcca tcgacgtcag acgcggaagc ttcgataaac tacgcggaca 540
ggtaccaaaa caaatgttct cgtcacgtgg gcatgaatct gatgctgttt ccctgtcgac 600
aatgcgaaag aatgaatcag aattcaaata tctgcttcac acacgggcaa aaagactgtt □ 6 0
152
PL 222 683 B1
720 ~εο
tggtsaatct ęgacttggat gactgtattt ctgagcaata aatgacttaa atcaggtatg 340 gctgctgacg gttatcttcc agattggctc aaggacactc tctctgaaag aatcagacag 900 cggtggaagc tcaaacctgg cccaccaccg ccgaaaccta secaacaaca ccgggacgac 560 agtaggggtc tegtgcttcc tgggtacaag tacctcggac ccttcaacgg actcgacaaa 1020 ggagagccgg tcaacgaggc agacgccgcg gccctcgagc acgacaaagc ctacgaccac loso cagctcaagc aaggggacaa cccgtacctc aaatacaacc acgcggacgc tgaatttcag 1140 gagcgtcttc aagaagatac gtctttcggg ggcaacctcg ggcgagcagt cttccaggcc 1200 aaaaagaggg tactcgagcc tcttggtcta gttgaęgaag ctgttaagac ggctcctgga 12S0 aaaaagagac ctatagagca gtctcctgca gaaccggact cttcctcggg catcggeaaa 1320 tcaggccagc agcccgctaa gaaaaaactc aactttggtc agactggcga cacagagtca 1330
gtcccaggcc ctcaaccaat cggagaaccc cecgcagecc cctctggtgt gggatctaat 1440
acaatggctt caggcggtgg ggcaecaata gcagacaata acgaaggcgc cgacggaatg 1300
ggtaattcct cgggaasttg gcattgcgat tccacatgga tgggcgacag agttatcacc 1550
accagcacaa gaacctgggc cctccccacc tacaataatc acctctacaa gcaaatctcc 1620
agcgaatcgg gagccaccaa cgacaaccac tscttcggct acagcacccc ctgggggtat 1680
tttgacttta acagattcca ctgtcacttc tcaccacgtg actggcagcg actcatcaac 1740
aacaactggg gatttagacc caagaaactc aatttcaagc tcttcaacat ccaagtcaag 1300
gaggtcacgc agaatgatgg aaccacgacc atcgccaata accttaccag cgcggtgcag 1860
gtcttcacag actctgagta ccagctgccc tacgtcctcg gttcggctca ccagggctgc 1920
cttccgccgt tcccagcaga cgtcttcatg attcctcagt acggctactt gaetctgaac 1980
aatggcagcc aagcggtagg acgtfccttcs ttctactgtc tagagtattt tccctctcag 2040
atgctgagga cgggaaacaa cttcaccttc agctacactt ttgaagacgc gcctttccac 2100
agcagctacg egcacagcca gagtctggat cggctgatga atcctntcat tgaccagtac 2160
ctgtattacc tgagcaaaac tcagggtaca aatggaacaa cgcagcaatc gagactgcag 2220
ttcagccaag ctgggcctag ctccatggct cagcaggcca aaaactggct accgggaccc 2230
agctaccgac agcagcgaać gtctaagacg gctaatgaca acaacaacag tgaatttgct 2340
tggactgcag ccaccaaata ttacctgaat ggaagaaatt ctctggtcaa tcccgggccc 2400 ccagtggcca gtcacaagga cgatgaggaa aagtatttcc ccatgcacgg aaatctcatc 2460 bttggaaaac aaggcacagg aactaccaat gtggacattg aatcagtgct tattacagac 2S20 gaagaagaaa tcagaacaac taatcctgtg gctacagaac aatacggaca ggttgccacc 2580 aaccatcaga gtcagaacac cacagcttcc tatggaagtg tggacagcca gggaatctta 2640
PL 222 683 B1
153
cctggaatgg tgtggcagga ccgcgatgtc tatcttcaag gtcccatttg ggccaaaact 2700
cctcacacgg acggacact t tcatccttct ccgctcatgg gaggctttgg actgaaacsc 2760
cctcctcccc agatcctgat caaaaacaca cctgtgccag cgaatcccgc gaccactttc 2320
actcctggaa agtttgcttc gttcattacc cagtattcca cctgacaggt cagcgtggaa 2830
atagagtggg agctgcagaa agaaaacagc aaacgctgga acccagaaat tcagtacacc 2940
tccaactaca acaagtcggt gaatgtggag tttaccgtgg acgcaaacgg fcgtttattct 3000
gaaccccgcc ctattggcac tcgttacctt acccggaact tgtaatttcc tgttaatgaa 3060
taagccgatt tatgcgtttc agttgaactt tggtctctgc gaagggcgaa ttcgtttaaa 3120
cct 3123 <210> 53 <211> 2969 <212> DNA <213> 42.12 <40Q> 58
gaattcgccc tttctacggc tgcgtcaact ggaccaatga gaactttccc ttcaacgatt 60
gcgtcgacaa gatggtgatc tggtgggagg agggcaagat gacggccaag gtcgtggagt 120
ccgccaaggc cattctcggc ggcagcaagg tgcgcgtgga ccaaaagtgc aagtcgtccg 180
cccagatcga ccccaccccc gtgatcgtca cctccaacac caacatgtgc gccgtgattg 240
acgggaacag caccaccttc gagcaccagc agccgttaca agaccggatg ttcaaatttg 300
aactcacccg ccgtctggag cacgactttg gcaaggtgac aaagcaggaa gtcaaagagt 360
tcttccgctg ggcgcaggat cacgtgaccg aggtggcgca tgagttctac gtcagaaagg 420
gtggagccaa caagagaccc gcccccgatg acgcggataa aagcgagccc aagcgggcct 4S0
gcccctcagt cgcggatcca tcgacgtcag acgcggaagg agctccggtg gactttgccg S40
acaggtacca aaacaaatgt tctcgtcacg cgggcatgct teagatgetg tttccctgca 600
agacatgcga gagaatgaat cagaatttca acatttgctt cacgcacggg accagagact 660
gttcagaatg tttccccggc gtgtcagaat ctcaaccggt cgtcagaaag aggacgtatc 7 20
ggaaactctg tgccattcat catctgctgg ggcgggctcc egagattget tgctcggcct 7S0
gcgatctggt caacgtggac ctggatgact gtgtttctga gcaataaatg acttaaacca 340
ggtatggctg ccgatggtta tcttecagat tggctcgagg acaacctctc tgagggcatc 900
cgcgagtggt gggacttgaa acctggagcc ccgaaaccca aagccaacca gcaaaagcag 960
gacgacggcc ggggtctggt gcttcctggc tacaagtacc tcggaccctt caacggactc 1020
gacaagggag agccggtcaa cgaggcagac gccgcggccc tcgagcacga caaggcctac 1080
gacaagcagc tcgagcaggg ggacaacccg tacctcaagt acaaccacge cgacgccgag 1140
154
PL 222 683 B1 tttcaggagc gtcttcaaga agatacgtct tttgggggca acctcgggcg ageagtette 1200 caggccaaga agcgggttct cgaacctctc ggtctggttg aggaaggcgc taagacggct 1260
cctggaaaga agagaccggt agagccatca ccccagcgtt ctccagactc ctctacgggc 1320
atcggcaaga cscgccagca gcccgcgaaa sagagactcs actttgagca gactggcgac 1330
ecagagtcag tgcccgaccc tcaaccaatc ggagaacccc ccgcaggccc c v c i»g g u· c l. g 1440
ggatctggta caatggctgc aggcggtggc gctccaatgg cagacaataa cgaaggcgcc 1500
gacggagtgg gfcagttcctc aggaaattgg cattgcgatt ccacatggct gggegacaga 1560
gtcatcacca ccagcscccg aacctgggcc ctccccacct acaacaacca cctct&caag 1620
caaatctcca Hcgggacatc ggęsggazgc accaacgaca acacctactt cggctacagc 1630
accccctggg ggtafctttga ctttaacaga ttccactgcc acttctcacc acgtgactgg 1740
cagcgactca tcaacaacaa ctggggattc cggcccsaga gactcaactt caagctcttc 1800
aacatccagg tcaaggaggt cacgcagaat gaaggcacca agaccatcgc caataacctt 1860
accagcacga ttcaggtctt tacggactcg gaataccagc tcccgtacgt cctcggctct 1920
gcgcaccagg gctgcctgcc tccgttcccg gcggacgtct tcatgattcc tcagtacggg 1930
tacctgactc tgaacaacgg cagtcaggcc gtgggccgtt cctccttcta ctgcctggag 2040
aactttectt ctcaaatgct gagaacgggc aacaactttg agtteageta ceagtttgsg 2100
gacgtgcctt ttcacagcag ctacgcgcac agccaaagcc tggaccgęct gacgaacccc 2160
ctcatcgacc agtacctgta etacctggcc cggacccaga gcactscggg gtccacaagg 2220
gggctgcagt tccatcaggc tgggcccaac accatggccg agcaatcaaa gaactggctg 2280
cccggaccct gttateggea gcagagactg tcaaaaaaca tagacagcaa caacaacagt 2340
aactttgcct ggaccggggc cactaaatac catctaaatg gtagaaactc attaaccaac 2400
ccgggcgtag ccatggccac caacaaggac gacgaggacc agtŁetttec catcaacgga 2460
gtgctggttt ttggcaaaac gggagctgcc aacaagacaa cgctggaaaa cgtgctaatg 2 520
accagcgagg aggagatcaa aaccaccaat cccgtggcta cagaagaata cggtatggtc 2580
tccagcaacc tgcaatcgtc taeggeegga ccccagacac agactgtcaa cagccagggg 2 640
gctctgcccg gcatggtctg gcagaaccgg gacgtgtacc tgcagggtec catctgggcc 2700
aaeattcctc acacggacgg caactttcac ccgtctcccc tgatgggcgg atttggactc 2 760
aaacaccegc ctcctcaaat tctcatcaag tatacttcca actactacaa atctacaaat 2820
gtggactttg ctgtcaatac tgagggtact tatteagage ctcgccccat tggcacccgt 2830
tacctcaccc gtaacctgta attgcctgtt aatcaataaa ccggttaatt cgtttcaget 2940
gaactttggt ctctgcgaag ggcgaattc 2969 <210> 59 <211> 3129
PL 222 683 B1
155
<212? DNA
<213? 44 . i
<400? 59
gaattcgccc tttctacggc tgcgtcaact ggaccaatga gaactttccc ttcaacgatt 60
gcgtcgacaa gatggtgatc tggtgggagg agggcaagat gacggccaag gtcgtggagt 120
ccgccaaggc cattctcggc ggcagcaaag tgcgcgtgga ccaaaagtgc aagtcgtccg iso
cccagatcga ccccaccccc gtgatcgtca cctccaacac caacatgtgc gccgtgattg 240
acgggaacag caccaccttc gagcaccagc agccgttgca ggaccggatg ttcaagtttg 300
aacfccacccg ccgtctggag cacgactttg gcaaggtgac aaagcaggaa gtcagagagt 360
tcttccgctg ggcgcaggat cacgtgaccg aggtggcgca cgagttctac gtcagaaagg 420
gtggagccaa caagagaccc gcccccgatg acgcggataa aagcgagccc aagcgggcct 480
gcccctcagt cgcggatcca tcgacgtcag acgcggaagg agctccggtg gactttgccg 540
acaggtacca aaacaaatgt tctcgtcacg cgggcatgct tcagatgctg tttccctgca 600
aaacatgcga gagaatgaat cagaatttca acatttgctt cacgcacggg accagagact 660
gttcagaatg tttccccggc gtgtcagaat ctcaaccggt cgtcagaaaa aagacgtatc 720
ggaaactctg tgcgattcat catctgctgg gggęgggcac ccgagattgc ttgctcggcc 780
tgcgatctgg tcaacgtgga cctagatgac tgtgtttctg agcaataaat gacttaaacc 840
aggtatggct gccgatggtt atcttccaga ttggctcgag gacaacctct ctgagggcat 900
tcgcgagtgg tgggacttga aacctggagc cccgaaaccc aaagccaacc agcaaaagca 960
ggacgacggc cggggtctgg tgcttcctgg ctacaagtac ctcggaccct tcaacggact 1020
cgacaagggg gagcccgtca acgcggcgga cgcagcggcc ctcgagcacg acaaggccta 1080
cgaccagcag ctcaaagcgg gtgacaatcc gtacctgcgg tataaccacg ccgacgccga 1140
gtttcaggag cgtctgcaag aagatacgtc ttttgggggc aacctcgggc gagcagtctt 1200
ccaggccaag aagcgggttc tcgaacctct cggtctggtt gaggaaggcg ctaagacggc 1260
fccctggaaag aagagaccgg tagagccatc accccagcgt tctccagact cctctacggg 1320
catcggcaag aaaggccagc agcccgcgaa aaagagactc aactttgggc agactggcga 1380
ctcagagtca gtgcccgacc ctcaaccaat cggagaaccc cccgcaggcc cctctggtct 1440
gggatctggt aeaatggctg caggcggtgg cgctccaatg gcagacaata acgaaggcgc 1500
cgacggagtg ggtagttcct caggaaattg gcattgcgat tccacatggc tgggcgacag 1560
agtcatcacc accagcaccc gaacctgggc cctccccacc tacaacaacc acctctacaa 1620
gcaaatctcc aacgggactt cgggaggaag caccaacgac aacacctact tcggctacag 1680
caccccctgg gggtattttg actttaacag attccactgc cacttctcac cacgtgactg 1740
gcagcgactc atcaacaaca actggggatt ccggcccaag agactcaacfc tcaagctctt 1800
caacatccag gtcaaggagg tcacgcagaa tgaaggcacc aagaccatcg ccaataacct 1860
156
PL 222 683 B1
raccagcacg attcaggtct tcacggactc ggas taccao ctcccgtacg ccctcggctc 1920
rgcgcaccag ggctccctgc ctccgttccc ggcggacgtc ttcatgattc ctcagtacgg 1960
gtaecfcgact ctaaacaatg gcaęrtcaggc cgtgggccgt tcctccttct actgectgga 2040
gtactttcct tctcaaatgc tgagaacggg caacaacttt gagttcagct accagtttga 2100
ggacgtgcct tttcacagca gctacgcgca cagccaaagc ctggaccggc tgatgaaccc 2160
cctcatcgac cagtacctgt actacctgtc tcggactcag tccacgggag gtaccgcagg 2220
aactcegoag ttgctatttt ctcaggccgg gcctaataac atgtcggctc aggccaaaaa 2280
ctggctaccc gggccctgct accggcagca acgcgtctcc acgacactgt cgcaaaataa 2340
caacagcaac tttgcctgga ccggtgccac caagtatcat ctgaatgaca gagactctct 2400
ggtaaatccc ggtgtcgcta tggcaaccca caaggacgac gaagagcgat tttttcegtc 2460
cagcggagtc ttaatgtttg ggaaacaggg agetggaaaa aacaacgtgg actatagcag 2520
cgttatgcta accagtgagg aagaaattaa aaccaccaac ccaatggcca cagaacagta 2530
cggcgtggtg gccgataacc tgcaacagca aaacgccgct cctattgtag gggcegtcaa 2640
cagtcaagga gccttacctg gcatggtctg gcagaaccgg gacgtgtacc tgcagggtcc 2700
tatctgggcc aagattcctc acacggacgg aaactttcst ccctcgccgc tgatgggagg 2760
ctttggactg aaacacccgc ctcctcagat cctgattaag aatacacctg ttcccgcgaa 2820
tcctecaact acctteagtc aagctaagct ggcgtcgttc atcacgcagt acagcaccgg 2630
acaggtcagc gtggaaattg astgggagct gcagaaagaa aacagcaaac gctggaaccc 2940
agagattcaa tacacttcca actactacaa atctacaaat gtggactttg ctgttaacac 3000
agatggcsct tattctgagc ctcgccccat cggcacccgt tacctcaccc gtaatctgta 3060
accgcttgtt aatcaataaa ccggttgatt cgtttcagtt gaactttggt ctctgcgaag 312 0
ggcgaattc 3129
<210? 50 <211? 733 <212? PRT <213? białko kapsydu serotypu AAV, klon C1VP1 <400? 60
Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser
S 10 15
Glu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Asp Leu Lys Pro Gly Ala Pro Lys Pro
25 30
Lys Ala A.sn Gin Gin Lys Gin Asp Asp Gly Arg Gly Leu Val Leu Pro 35 40 45
PL 222 683 B1
157
Gly Tyr Łys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro 50 55 60
Val Asn Ala Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp 65 70 75 30
Gin Gin Leu Lys Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Arg Tyr Asn His Ala 65 90 95
Asp Ala Glu Phe Gin Glu Arg Leu Gin Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly 100 105 110
Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gin Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro 115 120 125
Leu Gly Leu Val Glu Glu Gly Ala Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg 13 0 135 140
Pro L&u Glu Ser Pro Gin Glu Pro Asp Ser Ser Ser Gly Ile Gly Lys 145 150 155 160
Lys Gly Lys Gin. Pro Ala Lys Lys Arg Leu Asn Phe Glu Glu Asp Thr 165 170 175
Gly Ala Gly Asp Gly Pro Pro Glu Gly Ser Asp Thr Ser Ala Net Ser 130 105 190
Ser Asp Ile Glu Met Arg Ala Ala Pro Gly Gly Asn Ala Val Asp Ala 195 200 205
Gly Gin Gly Ser Asp Gly Val Gly Asn Ala Ser Gly Asp Trp His Cys 210 215 220
Asp Ser Thr Trp Ser Glu Gly Lys Val Thr Thr Thr Ser Thr Arg Thr 225 230 235 240
Trp Val Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His Leu Tyr Leu Arg Leu. Gly Thr 245 250 255
Thr Ser Asn Ser Asn Thr Tyr Asn Gly Phe Ser Thr Pro Trp Gly Tyr 260 265 270
Phe Asp Phe Asn Arg Phe His Cys His Phe Ser Pro Arg Asp Trp Gin 275 280 285
Arg Leu Ile Asn Asn Asn Trp Gly Leu Arg Pro Lys Ala Met Arg Val 290 295 300
158
PL 222 683 B1
Lys ile Phe Asn Ile Gin Val Lys Glu Val Thr Thr Ser Asr. Gly Glu 305 310 315 320 ‘Ar Thr Val Ala Asn Asa Leu Thr Ser Thr Tal Gin Ile Phe Ala Asp 325 330 335
Ser Ser Tyr Siu Leu Pro Tyr Vai Met Asp Ala Gly Gin Glu Gly Ser 340 345 350
Leu Ser Pro Phe Pro Asn Asp Val Phe Het Val Pro Gin Tyr Gly Tyr 355 3S0 365
Cys Gly Ile Tal Thr Gly Glu Asn Gin Asn Gin Thr Asp Arg Asa Ala 370 375 360
Phe Tyr Cys Leu C-lu Tyr Phe Pro Ser Gin. Met Leu Arg Thr Gly Asn 38S 390 395 i00
Asn Phe Glu Met Ala Tyr Asn phe Gly Lys Val Pro Phe His Ser Met 405 410 415
Tyr Ala Tyr Ser Gin Ser Pro Asp Arg Leu Met Asn Pro Leu Leu Asp 420 425 430
Gin Tyr Leu Trp His Leu Gin Ser Thr Thr Ser Gly Glu Thr Leu Asn 435 440 445
Gin Gly Asn Ala Ala Thr Thr Pac Gly Lys Ile Arg Ser Gly Asp Phe 450 455 460
Ala Phe Tyr Arg Lys Asn Trp Leu Pro Gly Pro Cys Val Lys Gin Gin 465 470 475 480
Arg Leu Ser Lys Thr Ala Ser Gin Asn Tyr Lys Ile Pro Ala Ser Gly 4S5 490 495
Gly A3n Ala Leu Leu Lys Tyr Asp Thr His Tyr Thr Leu Asn Asn A.rg 500 505 510
Trp Ser Asn Ile Ala Pro Gly pro Pro Met Ala Thr Ala Gly Pro Ser E1S S20 525
Asp Gly Asp Phe Ser Asn Ala Gin Leu Ile Phe Pro Gly Pro Ser val 530 S3S 540
Thr Gly Asn Thr Thr Thr Ser Ala Asn Asn Leu Leu Phe Thr Ser Glu 545 S50 555 560
PL 222 683 B1
159
Glu Glu Ile Ala Ala Thr Asn Pro Arg Asp Thr Asn Met Phe Gly Gin 565 570 * 575
Ile Ala Asp Asa Asn Gin Asn Ala Thr Thr Ala Pro Ile Thr Gly Asn 530 585 590
Val Thr Ala Met Gly Val Leu Pro Gly Met Val Trp Gin Asn Arg Asp 595 600 605
Ile Tyr Tyr Gin Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile Pro His Ala Asp Gly 610 615 620
His Phe His Pro Ser Pro Leu Ile Gly Gly Phe Gly Leu Lys His Pro 625 630 635 640
Pro Fro Gin Ile Phe Ile Lys Asn Thr Pro Val Pro Ala Asn Pro Ala 643 650 655
Thr Thr Phe Thr Ala Ala Arg Val Asp Ser Phe Ile Thr Gin Tyr Ser 660 665 670
Thr Gly Gin Val Ala Val Gin Ile Glu Trp Glu Ile Glu Lys Glu Arg 675 680 S85
Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Val Gin Phe Thr Ser Asn Tyr Gly Asn 690 695 700
Gin ser Ser Met Leu Trp Ala Pro Asp Thr Thr Gly Lys Tyr Thr Glu 705 710 71S 720
Pro Arg Val Ile Gly Ser Arg Tyr Leu Thr Asn His Leu 725 730
<210? <211? <212? <213? SI 733 PRT białko kapsydu serotypu AAV, klon C2VP1
<400? 61
Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser
10 15
Glu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Asp Leu Lys Pro Gly Ala Pro Lys Leu 20 25 30
Lys Ala Asn Gin Gin Lys Gin Asp Asp Gly Arg Gly Leu Val Len Pro 35 40 45
Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe His Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro
160
PL 222 683 B1
Ais Ais Asp Ais Ais Ais Licu Glu His Asd Lys —,· s τ·νν Α^·ρ □ 5 70 7 5 η π
31η Gin Leu Lys Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Arg Tvr Asn His Ala
S5 30 ;g
Asp Ala Glu Phe Gin Glu Arg Leu Gin Glu As? Thr Ser Phe Glv Gly Ιθθ 1-05 llo len T,.
su Gly Arg Ala Val Phe Gin Ala Lys Lys Aro Val I 115 120 125 eu Glu Pro aeu C-ly Leu Yal Glu Glu C-ly Ala Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg 130 135 i40 - - '
Pro Leu Glu Ser Pro Gin Glu Pro Asp Ser Ser Si 145 150 155 r Gly Ile Gly Lys 160
Lys Gly Lys Gin Pro Ala Lys Lys Arg Leu Asn Phe Glu Glu Aso Thr
165
170
175
C-ly Ala Gly Asp Gly Pro Pro Glu Gly Ser ISO 185
Asp Thr Ser Ala Ket Ser 190
Ser Asp Ile Glu Het Arg Ala Ala Pro Gly Gly Asn Ala Yal Aso Ala 195 200 205
Gly Gin Gly Ser Asp Gly Yal Gly Asn Ala Ser Gly Asn Trn His Cys 210 215 220 ’ '
Asp Ser Thr Trp Ser Glu Gly Lys Yal Thr Thr Thr Ser Thr A<g Th
22S
230
240 irp Yal Leu Pro Thr Tyr Asn A.sn His Leu Tyr Leu Arg Leu Gly Thr 245 250 2S5
Thr Ser Asn Ssr Asn Thr Tyr Asn C-ly Phe Ser Thr Pro Trp Gly Tyr 250 265 270
Phe Asp Phe Asn Arg Phe His Cys His Phe Ser Pro Arg Asp Trp Gin 275 260 285
Arg Leu Ile Asn Asn Asn Trp Gly Leu Arg Pro Lys Ala Met Arg Val 290 295 300
Lys Llo Phe Asn ile Gin Val Lys Glu Yal Thr Thr Ser Asn Gly Glu 305 310 315 320
PL 222 683 B1
161
Thr Thr Vai Ala Asn Asn Leu Thr Ser Thr Val Gin Tle Phe Ala Asp 325 330 335
Ser Ser Tyr Glu Leu Pro Tyr Val Met Asp Ala Gly Gin Glu Gly Ser 340 345 350
Leu Pro Pro Phe Pro Asn Asp Yal Phe Met Val Pro Gin Tyr Gly Tyr 355 3S0 365
Cys Gly Ile Val Thr Gly Glu Asn Gin Asn Gin Thr Asp Arg Asn Ala 370 375 380
Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe Pro Ser Gin Met Leu Arg Thr Gly Asn 3SS 390 395 400
Asn Phe Glu Met Ala Tyr Asn Phe Glu Lys Val Pro Phe His Ser Met 405 410 415
Tyr Ala His Ser Gin Ser Leu Asp Arg Leu Met Asn Pro Leu Leu Asp 420 425 430
Gin Tyr Leu Trp His Leu Gin Ser Thr Thr Ser Gly Glu Thr Leu Asn ' 435 440 445
Gin Gly Asn Ala Ala Thr Thr Phe Gly Lys Ile Arg Ser Gly Asp Phe 450 455 460
Ala Phe Tyr Arg Lys Asn Trp Leu Pro Gly Pro Cys Val Lys Gin Gin 465 470 475 480
Arg Phe Ser Lys Thr Ala Ser Gin Asn Tyr Lys Tle Pro Ala Ser Gly ' 435 490 495
Gly Asn Ala Leu Leu Lys Tyr Asp Thr His Tyr Thr Leu Asn Asn Arg 500 505 SIO
Trp Ser Asn Ile Ala Pro Gly Pro Pro Met Ala Thr Ala Gly Pro ser 515 520 525
Asp C-ly Asp Phe Ser Asn Ala Gin Leu Ile Phe Pro Gly Pro Ser Val 530 535 540
Thr Gly Asn Thr Thr Thr Ser Ala Asn Asn Leu Leu Phe Thr Ser Glu 545 550 555 550
Gly Glu Ile Ala Ala Thr Asn Pro Arg Asp Thr Asp Met Phe Gly C-ln 565 570 575
162
PL 222 683 B1
520 585 390
Tai Thr Ala Met Glv Val Leu Pro Glv Met Val Tm Gin Asn Arg Asp SS5 600 505 le Tyr Tyr Gin Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile Pro His Ala Asp GL SIO 515 = 20
His ?he His Pro Ser Pro Leu ile Gly Gly Phe Gly Leu Lys His Pro 525 =30 335 540
Pro Pro Gin Ile Phe Ile Lys Asn Thr Pro fal Pro Ala Asn Pro Ala 645 * SSO 555
Thr Thr ?he Thr Ala Ala Arg fal Asp Ser Pha Ile Thr Gin Tyr ser 560 665 670
Thr Gly Gin Val Ala Val Gin Ile Glu Trp C-lu Ile Glu Lys Glu Arg 675 6S0 6S5
Ser Lys Arg Arg Asn Pro Glu Val Gin Phe Thr Ser Asn Tyr Gly Asn. 590 6S5 700
Gin Ser Ser Mat Leu Trp Ala Pro Aso Thr Thr Gly Lys Tyr Thr Glu
705 710 Ser Arg Tyr Leu Thr 730 715 Asn His Leu 720
Pro Arg Val Ile Gly 725
<210? 62 <211? 733 <212? PST <213? białko kapsydu serotypu AAV, klon C5VP1®2
<400? 62
Met Ala Ala 1 Asp Gly 5 Tyr Leu Pro Asp Trp 1C Leu Glu Asp Asn Łeu ser 15
Glu Gly Ile Arg Glu 20 Trp Trp Asp Leu 25 Lys Pro Gly Ala Pro 30 Lys Pro
Lys Ala Asn 35 Gin Gin Lys Gin Asp Asp 40 Gly Arg Gly Leu 45 Val Leu Pro
Gly Tyr Glu 50 Tyr Leu Gly Pro 55 Phe Asn Gly Leu Asp Lys 60 Gly Glu Pro
'Zal Asn Ala Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu Hi s Asp Łys Ais Tyr Asp
PL 222 683 B1
163
5 5 70 7 5 80
Gin Gir. Leu Lys Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Arg TV27 Asn His Ala
85 90 a c
Asp Ala Glu Phe Gin Glu Arg Leu Gin Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly
100 105 110
Asn Leu Gly Arg Ala val Phe Gin Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro
115 120 125
Leu Gly Leu Val Glu Glu Gly Ala Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg 130 135 140
Pro Leu Glu Ser Pro Gin Glu Pro Asp Ser Ser Ser Gly Ile Gly Lvs 145 150 155 160
Lys Gly Lys Gin Pro Ala Lys Lys Arg Leu Asn Phe Glu Glu Asp Thr 165 170 175
Gly Ala Gly Asp Gly Pro Pro Glu Gly Ser Asp Thr Ser Ala Met Ser 1B0 185 190
Ser Asp Ile Glu Met Arg Ala Ala Pro Gly Gly Asn Ala Val Asp Ala 195 200 205
Gly C-ln Gly Ser .Asp Gly Val Gly Asn Ala Ser Gly Asp Trp His Cys 210 215 220
Asp Ser Thr Trp Ser Glu Gly Lys Val Thr Thr Thr Ser Thr Arg Thr 225 230 235 240
Trp Val Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His Leu Tyr Leu Arg Leu Gly Thr 245 250 255
Thr Ser Asn Ser Asn Thr Tyr Asn Gly Phe Ser Thr Pro Trp Gly Tyr 260 265 270
Phe Asp Phe Asn Arg Phe His Cys His Phe Ser Pro Arg Asp Trp Gin 275 280 205
Arg Leu Ile Asn Asn Asn Trp Gly Leu Arg Pro Lys Ala Met Arg Val 290 295 300
Lys Ile Phe Asn Ile Gin Val Lys Glu Val Thr Thr Ser Asn Gly Glu 305 310 315 320
Thr Thr Val Ala Asn Asn Leu Thr Ser Thr Val Gin Ile Phe Ala Asp 325 330 335
164
PL 222 683 B1
Ser Ser Tyr Glu Leu Pro Tyr Val Met Asp Ala Gly Gin Glu Gly Ser 340 345 350
Leu Pro Prc Phe Prc Asn Aso Val Phe Met Val Pro Gin Tvr Gly Tvi
355
Cys Gly Ile Val Thr Gly Glu Asn Gin Asn Gin Thr Asp Arg Asn Ais 370 373 380
Phe Tyr Cys Leu Glu Tvr Phe Pro Ser Gin Met Leu Arg Thr Gly -Asn 335 390 395 400
Asn Phe Glu Thr Ala Tyr Asn Phe 405
Glu Lys Val Prc Phe Kis Ser Met 410 415
Tyr Ala His Ser Gin Ser Leu Asp Gly Leu Met Asn Pro Leu Leu Asp 420 425 430
Gin Tyr Lsu Trp His Leu Gin Ser Thr Thr Ser Gly Glu Thr Leu Asn 435 440 445
Gly Asn Ala Ala Thr Thr Phe Gly Lys Ile Arg Ser Gly Asp Phe 450 455 460
Ala Phe Tyr Arg Lys Asn Trp Leu Pro Gly Pro Cys Vał Lys Gin Gin 465 470 475 480
Arg Phe Ser Lys Thr Ala Ser Gin Asn Tyr Lys Ile 485 490
Pro Ala Ser Gly 495
Gly Asn Ala Leu Leu Lys Tyr Asp Thr His Tyr Thr Leu Asn Asn Arg SOO SOS 510
Irp Ser Asn Ile Ala Pro Gly Pro Pro Met Ala Thr Ala Gly Pro Ser 51S S20 525
Asp Gly A.sp Phe Ser Asn Ala Gin Leu Ile Phe Pro Gly Pro Ser Val 530 535 540
Thr Gly Asn Thr Thr Thr Ser Ala Asn Asn Leu Leu Phe Thr Ser Glu 545 550 555 560 ilu Glu Ile Ala Ala Thr Asn Pro Arg Asp Thr Asp Met Phe Gly Gin 565 . S70 575
Ile Ala Asp Asn Asn Gin Asn Ala Thr Thr Ala Pro Ile Thr Gly Asn 580 585 SSO
PL 222 683 B1
165
Val Thr Ala Met Gly Val Leu Pro Gly Met Val Trp Gin Asn Arg Asp 595 600 605
Ile Tyr Tyr Gin Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile Pro His Ala Asp Gly 610 615 620
His Phe His Pro Ser Pro Leu Ile Gly Gly Phe Gly Leu Lys His Pro 62Ξ 630 S3S 640
Pra Pro Gin Tle Phe Ile Lys Asn Thr Pro Val Pro Ala Tyr Pro Ala
645 650 655
Thr Thr Phe Thr Ala Ala Arg Val Asp Ser Phe Ile Thr Gin Tyr Ser
660 665 670
Thr Gly Gin Val Ala Val Gin Ile Glu Trp Glu Ile Glu Lys Glu Arg
675 680 685
Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu val Gin Phe Thr ser Asn Cys Gly Asn
690 695 700
Gin Ser Ser Met Leu Trp Ala Pro A.sp Thr Thr Gly Lys Tyr Thr Glu
705 710 715 720
Pro Arg Val ile Gly Ser Arg Tyr Leu Thr Asn His Leu
725 730 <210> 63 <211> 734 <212> PRT <213> capsid protein of AAV serotype, clone AAV4VP1 <400> 63
Met Thr Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser Glu
1 5 10 15
Gly Val A.rg Glu Trp Trp Ala Leu Gin Pro Gly Ala Pro Lys Pro Lys
20 25 30
Ala Asn Gin Gin His Gin Asp Asn Ala Arg Gly Leu Val Leu Pro Gly
35 40 45
Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Gly Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro Val
50 55 60
Asn Ala Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp Gin
6Ξ 70 75 80
Gin Leu Lys Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Lys Tyr Asn His Ala Asp
166
PL 222 683 B1
PL 222 683 B1
167
Leu Pro Pro Phe Pro Asn Asp Val Phe Met Val Pro Gin Tyr Gly Tyr 355 360 365
Cys Gly Leu Val Thr Gly Asn Thr Ser Gin Gin Gin Thr Asp Arg Asn 370 37S 330
Ala Plis Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe Pro Ser Gin . Met Leu Arg Thr Gly
365 390 395 400
.Asn Asn Phe Glu Ile Thr Tyr Ser Phe Glu Lys Val Pro Phe His Ser
405 410 415
Met Tyr Ala His Ser Gin Ser Leu Asp Arg Lau Met Asn Pro Leu Ile
420 425 430
Asp Gin Tyr Leu Trp Gly Leu Gin Ser Thr Thr Thr C-ly Thr Thr Leu
435 440 445
Asn Ala Gly Thr Ala Thr Thr Asn Phe Thr Lys Leu Arg Pro Thr Asn
450 455 460
Phe Ser Asn Phe Lys Lys Asn Trp Leu Pro Gly Pro Ser Ile Lys Gin
465 470 475 480
Gin Gly Phe Ser Lys Thr A.la Asn Gin Asn Tyr Lys Ile Pro Ala Thr
485 490 495
Gly Ser Asp Ser Leu Ile Lys Tyr Glu Thr His Ser Thr Leu Asp Gly
' 500 SOS SIO
Arg Trp Ser Ala Leu Thr Pro Gly Pro Pro Met Ala Thr Ala Gly Pro
515 520 525
Ala Asp Ser Lys Phe Ser Asn Ser Gin Leu Ile Phe Ala Gly Pro Lys
530 535 540
Gin Asn Gly Asn Thr Ala Thr Val Pro Gly Thr Leu Ile Phe Thr Ser
545 550 S55 560
Glu Glu Glu Leu Ala Ala Thr Asn Ala Thr Asp Thr Asp Met Trp Gly
SSS 570 S75
Asn Leu Pro Gly Gly Asp Gin Ser Asn Ser Asn Leu Pro Thr Val Asp
580 585 590
Arg Łsu Thr Ala Leu Gly Ala Pal Pro Gly Met Val Trp Gin A.sn Arg
595 600 605
168
PL 222 683 B1
PL 222 683 B1
169
100 105 110
Asn Leu Gly Arg Ala Yal Phe Gin Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro
115 120 125
Leu Gly Leu Yal Glu Glu Gly Ala Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg
13 0 13 5 140
Pro Yal Glu Gin Ser Pro Gin Glu Pro Asp Ser Ser Ser Gly Ile Gly
145 ISO 155 160
Lys Thr Gly Gin Gin Pro Ala Lys Lys Arg Leu Asn Pha Gly Gin Thr
165 170 175
Gly Asp Ser Glu Ser Val Pro Asp Pro Gin Pro Leu Gly Glu Pro Pro 180 185 190
Ala Thr Pro Ala Ala Val Gly Pro Thr Thr Met Ala Ser Gly Gly Gly 195 200 205
Ala Pro Met Ala Asp Asn Asn Glu Gly Ala Asp Gly Val Gly Asn Ala 210 215 220
Ser Gly Asn Trp His Cys Asp Ser Thr Trp Leu Gly Asp Arg Yal Ile 225 210 235 240
Thr Thr Ser Thr Arg Thr Trp Ala Leu Pro Thr Tyr Asn A.sn His Leu 245 250 255
Tyr Lys Gin Ile Ser Ser Ala Ser Thr Gly .Ala Ser Asn Asp Asn His 260 265 270
Tyr Phe Gly Tyr Ser Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Asp Phe Asn Arg Phe 275 280 235
His Cys His Phe Ser Pro Arg A.sp Trp Gin Arg Leu Ile Asn Asn Asn 290 295 300
Trp Gly Phe Arg Pro Lys Arg Leu Asn Phe Lys Leu Phe Asn Ile Gin 305 310 315 320
Val Lys Glu Val Thr Thr Asn Asp Gly Yal Thr Thr Ile Ala Asn Asn 325 330 335
Leu Thr Ser Thr Val Gin Val Phe Ser Asp Ser Glu Tyr Gin Leu Pro 340 345 350
Tyr Val Leu Gly Ser Ala His Gin Gly Cys Leu Pro Pro Phe Pro Ala 355 360 365
170
PL 222 683 B1
PL 222 683 B1
171
Thr Asp Gly His Phe His Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe Gly Leu 625 630 635 640
Lys Asn Pro Pro Pro Gin Ile Leu Ile Lys Asn Thr Pro Val Pro Ala 645 650 655
Asn Pro Pro Ala Glu Phe Ser Ala Thr Lys Phe Ala Ser Phe Ile Thr 660 665 670
Gin Tyr Ser Thr C-Iy Gin Val Ser Val Glu. ile Glu Trp Giu Leu Gin 675 680 685
Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Val Gin Tyr Thr Ser Asn 690 695 700
Tyr Ala Lys Ser Ala Asn Val Asp Phe Thr Val Asp Asn Asn Gly Leu 705 710 715 720
Tyr Thr Glu Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Pro Leu 725 730 735
<210? <211? < 212 ? <213? 65 736 PRT białko kapsydu serotypu AAV, klon AAV6VP1
<400? 65
ί-let Ala . Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser
10 15
Glu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Asp Leu Lys Pro Gly Ala Pro Lys Pro 20 25 30
Lys Ala Asn Gin Gin Lys Gin Asp Asp Gly Arg Gly Leu Val Leu Pro 35 40 45
Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro 50 55 60
Val Asn Ala Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp 65 70 75 30
Gin Gin Leu Lys Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Arg Tyr Asn His Ala 85 90 95
Asp A.la Glu Phe Gin Glu Arg Leu Gin Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly 100 105 110
Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gin Ala Lys Lys Arg Val leu Glu Pro
172
PL 222 683 B1
0
Vai siu Glu 31v Ala Łve Thr Ais uvs lvs
Pro Val Glu Gic Ser Pro Gin Glu Pro 145 150
Ser Ser Se 155 ly Ile Gly ISO
Lys thr Gly Gin Gin Prc Ala Lys lys Arg Leu Asn Phe 170
Iły Gin Thr 175
31y Asp Ser Glu ISO sr Vai Pro Asp Prc Gin Pro Leu Gly Glu Pro Pro 135 190
Ala Thr Pro Ala Ala Tal Gly Pro Thr Thr Met Ala Ser Gly Gly Gly 195 200 205
-Ala Pro Met A.la Asp Asn Asn Glu Gly .Ala Aso Gly Val Gly Asn Ala 210 215 220
Ser Gly Asn Trp His Cys Asp Se 22Ξ ‘ ' 230
Ihr Trp Leu Gly Asp Arg Val Ile 235 240 thr Thr Ser Thr Arg Thr Trp 245
Ala Leu Pro Thr Tyr Asn Asn Kis Leu 250 255 'yr Lys Gin ile Ser Ser .Ala Ser Thr Gly Ala Ser Asn Asp A.sn His 260 265 270
Tyr Phe Gly Tyr Ser Thr Pro Trp Gly Tyr Pha Asp phe Asn Arg Phe 275 230 285
His Cys His Phe Ser Pro Arg A.sp Trp Gin Arę Leu Iła Asn Asn Asn 290 293 300 trp Gly Phe Arg Pro Lys .Arg Leu Asn Phe Lys Leu Phe Asn Ile Gin 305 310 315 320
Tal Lys Glu Val Thr Thr Asn .Asp Gly Val Thr Thr ile .Ala Asn Asn 325 330 335 leu Thr Ser Thr Val Gin Val Phe Ser Asp Ser Glu Tyr Gin Leu Pro 340 345 350
Tyr Val Leu Gly Ser Ala His Gin Gly Cys Leu Pro Pro Phe Pro Ala 355 360 365
Asp Val Phe Met Ile Pro Gin Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn Asn Gly 370 375 3S0
PL 222 683 B1
173
Ser Gin Ala Val Gly Arg Ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe Pro
385 390 39S 400
Ser Gin Met Leu Arg Thr Gly Asn Asn Phe Thr Phe Ser Tyr Thr Phe
405 410 415
Glu Asp Val Pro Phe His Ser Ser Tyr Ala His Ser Gin Ser Leu Asp 420 425 430
Arg Leu Met Asn Pro Leu Ile Asp C-ln Tyr Leu Tyr Tyr Leu Asn Arg 435 440 445
Thr Gin Asn Gin Ser Gly Ser Ala Gin Asn Lys Asp Leu Leu Phe Ser 450 455 450
Arg Gly Ser Pro Ala Gly Met Ser Val Gin Pro Łys Asn Trp Leu Pro 465 470 475 480
Gly Pro cys Tyr Arg Gin Gin Arg Val Ser Lys Thr Lys Thr Asp Asn 485 490 495
Asn Asn Ser Asn Phe Thr Trp Thr Gly Ala Ser Lys Tyr Asn Leu Asn SOO 505 510
Gly Arg Glu Ser Ile ile Asn Pro Gly Thr Ala Met A.la Ser His Lys 515 520 ' 525
Asp Asp Lys Asp Lys Phe Phe Pro Met Ser Gly Val Met Ile Phe Gly 530 535 540
Lys Glu Ser Ala Gly Ala Ser Asn Thr A.la Leu Asp A.sn Val Met Ile 545 550 555 560
Thr Asp Glu Glu Glu Ile Lys Ala Thr Asn Pro Val Ala Thr Glu Arg 565 570 575
Phe Gly Thr Val Ala Val Asn Leu Gin Ser Ser Ser Thr Asp Pro Ala Ξ80 585 590
Thr Gly Asp Val His Val Met Gly Ala Leu Pro Gly Met Val Trp Gin 595 600 605
Asp Arg Asp Val Tyr Leu Gin Gly Pro Ile Trp A.la Lys Ile Pro His 610 615 620
Thr Asp Gly His Phe His Pro Ser Pro Leu Het Gly Gly Phe Gly Leu 625 630 635 640
174
PL 222 683 B1
Pro Pro ro Gin 54 5 ιΠΙ ΡΖΌ Vs3. ?2f0 A15.
550
Asn Pro Pro Ala Glu Phe Ser Ala Thr Lys Phe Ala Ser Phe Ile 5S0 665 570
3±n Tyr Ser 57 5
31y Gin Vsl Ser Val Gli 6S0
Le Glu Trp Glu Leu Gli 6S5
Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Val Gin Tyr Thr Ser Asi SSO 695 700
Tyr Ala Lys Ser Ala Asn Val Asp Phe Thr Val Asp Asn Asn Gly Leu ”05 710 715 720
Tyr Thr Glu Pro Arg Pro Tle Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Pro Leo 725 730 735 <210> 65 <211> 735 <212> PRT <213> białko kapsydu serotypu AAV, klon A3.3 <400> S6
Met .Ala .Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Thr Leu Ser
3lu Gly Ile Arg Gin Trp Trp Lys Leu Lys Pro Gly Pro Pro Pro Pro 20 25 30
Lys Pro Asn Gin Gin His Arg Asp Asp Ser Arg Gly Leu Val Leu Pro 35 40 45
Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro 50 55 60
7al Asn Glu Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu Kis Asp Lys Ala Tyr Asp 65 70 75 S0
His Gin Leu Lys Gin Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Lys Tyr Asn His Ala 35 90 95
Asp Ala Glu Phe Gin Glu Arg Leu Gin Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly 100 105 110
Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gin A.la Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro 115 120 125
PL 222 683 B1
175 :u Gly Leu fal Glu Glu Ala fal Lvs Thr Ala Pro Gly Łys Lys Arg 130 135 140
Pro Ile Glu Gin Ser Pro Ala C-lu Pro Asp Ser Ser Ser Gly Ile Gly 145 150 155 ISO
Lys Ser C-ly Gin Gin Pro Ala Lys Lys Arg Leu Asn Phe Gly Gin Thr 165 170 175
Gly Asp Thr Glu Ser fal Pro Gly Pro Gin Pro Ile Gly Glu Pro Pro 180 185 190
Ala Ala Pro Ser Gly fal Gly Ser Asn Thr Met Ala Ser Gly Gly Gly 195 200 205
Ala Pro Met Ala Asp Asn Asn Glu Gly Ala Asp Gly Val Gly Asn Ser 210 215 ’ 220
Ser Gly Asn Trp His Cys Asp Ser Thr Trp Met Gly Asp Arg Val Ile 225 230 235 ‘ 240
Thr Thr Ser Thr Arg Thr Trp Ala Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His Leu 245 250 255
Tyr nys Gin Ile Ser Ser Glu Ser Gly A.la Thr Asn Asp Asn His Tyr 260 265 270
Phe Gly Tyr Ser Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Asp Phe Asn Arg Phe His 275 280 265
Cys His Phe Ser Pro Arg Asp Trp Gin Arg Leu Ile Asn Asn Asn Trp 290 255 300
Gly Phe Arg Pro Lys Lys Leu Asn Phe Lys Leu Phe Asn Ile Gin fal 305 310 315 320
Lys Glu fal Thr Gin Asn Asp Gly Thr Thr Thr Ile Ala Asn Asn Leu 325 330 335
Thr Ser Ala Val Gin fal Phe Thr Asp Ser Glu Tyr Gin. Leu Pro Tyr 340 345 350 fal Leu Gly Ser Ala His Gin Gly Cys Leu Pro Pro Phe Pro Ala Asp 355 3S0 365 fal Phe Met Ile Pro Gin Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn Asn Gly Ser 370 375 380
176
PL 222 683 B1
PL 222 683 B1
177
His Pro Pro Pro Gin Ile Leu Ile Lys Asn Thr pro Val Pro Ala Asn 645 650 555
Pro Ala Thr Thr Phe Thr Pro Gly Lys Phe Ala Ser Phe Ile Thr Gin 660 655 670
Tyr Ser Thr Gly Gin Val Ser Val Glu Ile Glu Trp Glu Leu Gin Lys 675 680 635
Glu Asn Ser Lys Arg Trp Aan Pro Glu Ile Gin Tyr Thr Ser Asn Tyr 690 695 700
Asn Lys Ser Val Asn Val Glu Phe Thr Val Asp Ala Asn Gly Val Tyr 705 710 715 720
Ser Glu Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Asn Leu
725 730 735
<210? 67
<211? 73 5
<212? PRT
<213? białko kapsydu serotypu AAV, klon A3.7
<400? 67
Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Thr Leu Ser
1 5 10 15
Glu Gly Ile Arg Gin Trp Trp Lys Leu Lys Pro Gly Pro Pro Pro Pro
20 25 30
Lys Pro Asn Gin Gin His Arg Asp Asp Ser Arg Gly Leu Val Leu Pro
35 40 45
Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe A.sn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro
50 55 60
Val Asn Glu Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr A.sp
65 70 75 80
His Gin. Leu Lys Gin Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Lys Tyr Asn His Ala
85 90 95
Asp Ala Glu Phe Gin Glu Arg Leu Gin Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly
100 105 110
Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gin Ala Lys Lys Arg Val Łeu Glu Pro
115 120 125
Leu Gly Leu Val Glu Glu Ala Val Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg
178
PL 222 683 B1
PL 222 683 B1
179
Gin Met Leu Arg Thr Gly Asn Asn Phe Thr Phe Ser Tyr Thr Phe Glu 405 iio ' 4is
Asp Tal Pro Phe His Ser Ser Tyr Ala His Ser Gin Ser Leu Asp Arg 420 425 430 '
Leu Met Asn Pro Leu Tle Asp Gin Tyr Leu Tyr Tyr Leu Ser Lys Thr 435 440 445
Gin Gly Thr Ser Gly Thr Thr Gin Gir. Ser Arg Leu Gin Phe Ser Gin 450 455 460
Ala Gly Pro Ser Ser Met Ala Gin Gin Ala Lys Asn Trp Leu Pro Gly 465 470 475 ' 480
Pro Ser Tyr Arg Gin Gin Arg Met Ser Lys Thr Ala Asn Asp Asn Asn 485 490 495
Asn Ser Glu Phe Ala Trp Thr Ala Ala Thr Lys Tyr Tyr Leu Asn Gly 500 505 510
Arg Asn Ser Leu Val Asn Pro Gly Pro Pro Met Ala Ser His Lys Asp 515 520 525 .sp Glu Glu Lys Tyr Phe Pro Met His Gly Asn Leu Ile Phe Gly Lys 530 535 540
Gin Gly Thr Gly Thr Thr Asn Val Asp Ile Glu Ser Val Leu Ile Thr =45 550 555 560
Asp Glu Glu Glu Ile Arg Thr Thr Asn Pro Val Ala Thr Glu Gin Tyr 565 570 S75
Gly Gin Val Ala Thr Asn His Gin Ser Gin Asn Thr Thr Ala Ser Tyr 5B0 585 590
Gly Ser Val Asp Ser Gin Gly Ile Leu Pro Gly Met Val Trp Gin Asp 595 600 605
Arg Asp Val Tyr Leu Gin Gly Pro Ile Trp Ala Lys Thr Pro His Thr 610 615 620
Asp Gly His Phe His Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe Gly Leu Lys 625 630 635 640
His Pro Pro Pro Gin Ile Leu Ile Lys Asn Thr Pro Val Pro Ala Asn 645 650 655
180
PL 222 683 B1 hr Thr Phe Thr 560 ne
570 ?vt Ser Thr Glv Gin Yal Ser Yal Git 575 530 ile Glu Trp Glu Leu Gin Lys 535
Ilu A.sn Ssr 590
Lys Arg Trp Asn Pro Glu Ile Gin Tyr Thr ssr Asn Tyr 5S5 700
Asn Lys Ssr Ysl Asn Yal Glu Phe Thr Yal Asa Ala Asn Gly Yal Tyr 70S 710 715 720
Ser Glu Pro Arg Pro Ile Gly Thr .Arg Tyr Leu Thr Arg Asn Leu 725 730 735
<210> 56
<211s 735
<212> PP.T
<213> białko kapsydu serotypu AAY, klon A3.4
<400> 68
Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Th: z Leu Ser
Glu Gly Ile Arg Gin Trą Trp Lys Leu Lys Pro Gly Pro Pro Pro Pro 20 25 30
Lys Pro Asn Gin Gin His Arg Asp Asp Ser Arg Gly Leu Yal Leu Pro 25 40 45
Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro 50 55 6θ
Yal Asn Glu A.la Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp 65 70 75 30
His Gin Leu Lys GLii Gly Asp A.sn Pro Tyr Leu Lys Tyr A.sn His A.la 33 90 95 isp Ala Glu Phe Gin Glu Arg Leu Gin Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly 100 105 110
Asn Leu Gly Arg A.la Yal Phe Gin Ala Lys Lys Arg Yal Leu Glu Pro 115 120 125 leu Gly Leu Yal Glu Glu Ala Yal Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys .Ara 130 135 140
Pro Ile Glu Gin Ser Pro Ala Glu Pro Asp Ser Ser Ser Gly Ile Gly
PL 222 683 B1
181
14 5 150 155 160
Glu Ser Gly Gin Gin Pro .Ala Lys Lys Arg Leu A.sn Phe Gly Gin Thr
165 170 175
Gly Asp Thr Glu Ser Val Pro Asp Pro Gin Pro Ile Gly Glu Pro Pro
160 185 190
Ala Ala Pro Ser Gly Val Gly Ser Asn Thr Het Ala Ser Gly Gły Gly
195 200 205
Ala Pro Met Ala Asp Asp Asn Glu Gly Ala Asp Gly Val Gly Asn Ser
210 215 220
Ser Gly Asn Trp His Cys Asp Ser Thr Trp Met Gly Asp Arg Val Ile
225 230 235 240
Thr Thr Ser Thr Arg Thr Trp Ala Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His Leu 245 250 2S5
Tyr Lys Gin Ile Ser Ser Glu Ser Gly Ala Thr Asn Asp Asn His Tyr 260 265 270
Phe Gly Tyr Ser Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Asp Phe .Asn Arg Phe His 275 230 2S5
Cys His Phe Ser Pro Arg Asp Trp Gin Arg Leu Ile Asn Asn Asn Trp 290 295 300
Gly Phe Arg Pro Lys Lys Leu Asn Phe Lys Leu Phe A.sn Ile Gin Val 305 310 315 320
Lys Glu Val Thr Gin Asn Asp Gly Thr Thr Thr Ile Ala Asn Asn Leu 325 330 335
Thr Ser Thr Val Gin Val Phe Thr Asp Ser Glu Tyr Gin Leu Pro Tyr 340 345 350
Val Leu Gly Ser Ala His Gin Gly Cys Leu Pro Pro Phe Pro Ala Asp 355 360 365
Val Phe Met Ile Pro Gin Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn Asn Gly Ser 370 375 380
Gin Ala Val Gly Arg Ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe Pro Ser 385 390 395 400
Gin Met Leu Arg Thr Gly Asn Asn Phe Thr Phe Ser Tyr Thr Phe Glu 405 410 415
182
PL 222 683 B1
Asn fal ?ro Phs His Ser Ser Tvr Ala His Ser Gin Ser Leu Asn Arg i2S
430
Leu Het Asn Pro Leu Ile Asp Gin Tyr Leu Tyr Tyr Leu Ser Lys Thr 435 440 445
3ln Gly Thr Ser Glv Thr 450
Thr Gin Gin Ssr Arg Leu Gin Phe Ser Gin 455 450
Ala Gly Pro Ser Ser Met Ala Gin Gin Ala Lys Asn Trp Leu Pro Gly 465 470 475 4S0
Pro Ser Tyr Arg Gin Gin Arg Met Ser Lys Thr Ala Asn Asp .Asn Asn 4S5 490 495
Asn Ser Glu Phe Ala Trp Thr Ala Ala Thr Lys Tyr Tyr Leu Asn Gly 500 505 ' ' 510
Arg A.sn Ser Leu fal A.sn Pro Gly Pro Pro Met A.la Ser His Lys Asp 515 520 525
Asp Glu Glu Lys Tyr Phe Pro Met His Gly Asn Leu Ile Phe Gly Lys 530 535 540
Gin Gly Thr Gly Thr Thr Asn fal Aso Ile Glu Ser fal Leu Ile Thr 545 550 555 5S0
Asp Glu Glu Glu Ile Arg Thr Thr Asn Pro fal Ala Thr Glu Gin Tyr 5 65 570 575
Gly Gin fal Ala Thr Asn His Gin Ser Gin Asp Thr Thr Ala Ser Tyr 580 585 590
Gly Ser fal Asp Ser Gin Gly Ile Leu Pro Gly Met fal Trp Gin Asp 595 SOO 605
Arg Asp fal Tyr Leu Gin Gly Pro Ile Trp Ala Lys Thr Pro His Thr 610 615 620
Asp Gly His Phe His Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe Gly Leu Lys 625 630 635 640
His Pro Pro Pro Gin Ile Leu Ile Lys Asn Thr Pro fal Pro Ala A.sn 645 650 655
Pro Ala Thr Thr Phe Thr Pro Gly Lys Phe Ala Ser Phe Ile Thr Gin 660 665 670
PL 222 683 B1
183
Tyr Ssr Thr Gly Gin Val Ser Val Glu Ile Glu Trp Glu Leu Gin Cys 675 630 685
Glu Asn. Ser Lys Arg Trp Asn Fro Glu Ile Gin Tyr Thr Ser Asn Tyr 650 655 700
Asn Lys Ser Val Asn Val Glu Phe Thr Val Asp Ala Asn Gly Val Tyr 705 710 715 720
Ser Glu Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Asn Leu 725 730 735
<210> <211> <212> <213> 69 735 PRT białko kapsydu serotypu AAV, klon A3.S
<400> 69
Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Thr Leu Ser
S 10 15
Glu Gly Ile Arg Gin Trp Trp Lys Leu Lys Pro Gly Pro Pro Pro Pro 20 25 30
Lys Pro Asn Gin Gin His Arg Asp Asp Ser Arg Gly Leu Val Leu Pro 35 40 45
Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro 50 55 60
Val Asn Glu Ala A.sp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp 65 70 75 30
His Gin Leu Lys Gin Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Lys Tyr Asn His Ala 35 90 95
Asp Ala Glu Phe Gin Glu Arg Leu Gin Glu Asp Thr ser Phe Gly Gly 100 105 110
Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gin Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro 115 120 125
Leu Gly Leu Val Glu Glu Ala Val Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg 130 135 140
Pro Ile Glu Gin Ser Pro Ala Glu Pro Asp Ser Ser Ser Gly Ile Gly 145 150 155 160
Lys Ser Gly Gin Gin Pro Ala Lys Lys Arg Leu Asn Phe Gly Gin Thr
184
PL 222 683 B1
15 5 17 G j. i 3
Gly Asp Thr Glu Ser Val Pro Aso ?ro Glzl· Pro Ile Gly Glu Pro Pro
ISO 105 150
Al a Ala Pro Ser Gly Val Gly Ser Asn Thr Met Ala Ser Gly Gly Gly
1SS 200 205
Ais Pro Mafc 210 Ala Aso Asn Asn 215 Glu Gly Ala Aso Glv 220 Vsl Gly Asn Ser
Ser Gly Asn Trp Eis Cys Asp Ser Thr “ro Met Gly Asp Arg Val X ZS
225 230 235 240
Thr Thr Ser Thr Arg Thr Trp Ala Leu Pro Thr Tyr Asn Asn Kis Leu 245 2EC 255
Tyr Lys Gin Ile Ser Ser Glu Ser Gly Ala Thr .Asn Asp Asn Kis Tyr 260 265 270
Phe Gly Tyr Ser Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Asp Phe Asn Arg Phe Kis 275 230 2S5
Cys His Phe Ser Pro Arg Asp Trp Gin. Arg Leu Ile A.sn Asn. Asn Trp 2S0 295 300
Gly Phe Arg Pro Lys Lys Leu Asr. Phe Lys Leu Phe Asn Ile Gin Val 305 310 315 320
Lys Glu Tal Thr Gin Asn Asp Gly Thr Thr Thr Ile Ala Asn Asn Leu ' 325 * 330 235
Thr Ser Thr Val Gin Val Phe Thr Asp Ser Glu Tyr Gin Leu Pro Tyr 340 345 350
Val Leu Gly Ser Ala Kis Gin Gly Cys Leu Pro Pro Phe Pro .Ala Asp 355 360 365
Val Phe Met Ile Pro C-ln Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn Asn Gly Ser 370 375 380
Gin Ala Val Gly Arg Ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe Pro Ser 385 350 395 400
Gin Met Leu Arg Thr Gly Asn Asn Phe Thr Phe Ser Tyr Thr Phe Glu 405 410 415
Asp Val Pro Phe Kis Ser Ser Tyr Ala Kis Ser Gin Ser Leu Asp Arg 420 425 430
PL 222 683 B1
185
Leu Met Asn Pro Leu Tle Asp Gin Tyr Leu Tyr Tyr Lsu Ser Lys Thr 435 440 445
Gin Gly Thr Ser Gly Thr Thr Gin Gin Ser Arg Leu Gin Phe Asn Gin 450 455 460
Ala Gly Pro Ser Ser Met Ala Gin Gin Ala Lys Asn Trp Leu Pro Gly 465 470 475 460
Pro Ser Tyr Arg Gin Gin Arg Met Ser Lys Thr Ala Asn Asp Asn Asn 485 490 495
Asn Ser Glu Phe Ala Trp Thr Ala Ala Thr Lys Tyr Tyr Pro Asn Gly 500 505 510
Arg Asn Ser Leu Val Asn Pro Gly Pro Pro Met Ala Ser Kis Lys Asp 515 520 525
Asp Glu Glu Lys Tyr Phe Pro Ket His Gly Asn Leu Ile Phe Gly Lys 530 535 540
Gin Gly Thr Gly Thr Thr Asn Val Asp Ile Glu Sar Val Leu Ile Thr 545 550 555 560
Asp C-lu Glu Glu Ile Arg Thr Thr Asn Pro Val Ala Thr Glu Gin Tyr 565 570 575
Gly Gin Vai Ala Thr Asn Arg Gin Ser Gin Asn Thr Thr Ala ser Tyr 580 585 590
Gly Ser Val Asp Ser Gin Gly Ile Leu Pro Gly Met Val Trp Gin Asp 595 600 605
Arg Asp Val Tyr Leu Gin Gly Pro Ile Trp Ala Lys Thr Pro His Thr 610 615 620
Asp Gly His Phe His Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe Gly Leu Lys 625 630 635 640
His Pro Pro Pro Gin Ile Leu Ile Lys Asn Thr Pro Val Pro Ala Asn 645 650 655
Pro Ala Thr Thr Phe Thr Pro Gly Lys Phe Ala Ser Phe Ile Thr Gin 660 665 670
Tyr Ser Thr Gly Gin Val Ser Val Glu Ile Glu Trp Glu Leu Gin Lys 675 680 685
186
PL 222 683 B1
PL 222 683 B1
187
SO 135 ISO
Ala Ala Pro Ser C-ly Leu Gly Thr Asn Thr Met Ala Thr Gly Ser Gly 195 200 205
Ala Pro Met Ala .Asp Asn Asn Glu Gly Ala Asp Gly Val Gly Asn Ser 210 215 220
Ser Gly Asn Trp His Cys Asp Ser Thr Trp Met Gly Asp Arg Val Ile 225 230 235 240
Thr Thr Ser Thr Arg Thr Trp Ala Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His Leu 245 250 255
Tyr Lys Gin Tle Ser Ser Gin Ser Gly A.la Ser Asn Asp Asn His Tyr 260 255 270
Phe Gly Tyr Ser Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Asp Phe Asn Arg Phe His 27S 2Θ0 235
Cys His Phe Ser Pro Arg Asp Trp Gin Arg Leu Ile Asn Asn Asn Trp 290 295 300
Gly Phe Arg Pro Lys Arg Leu Asn Phe Lys Leu Phe Asn Ile Gin fal 305 310 315 320
Lys Glu Val Thr Gin Asn Asp Gly Thr Thr Thr Ile Ala Asn Asn Leu 325 330 335
Thr Ser Thr Val Gin Val Fhe Thr Asp Ser Glu Tyr Gin Leu Pro Tyr 340 345 350 fal Leu Gly Ser Ala His Gin Gly Cys Leu Pro Pro Phe Pro Ala A.sp 355 360 365 fal Phe Met Val Pro Gin Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn A.sn Gly Ser 370 375 3S0
Gin A.la Val Gly Arg Ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe Pro Ser 385 390 395 400
Gin Met Leu Arg Thr Gly A.sn Asn Phe Thr Phe Ser Tyr Thr Phe Glu 405 410 415
Asp fal Pro Phe His Ser Ser Tyr Ala His Ser Gin Ser Leu Asp Arg 420 425 430
188
PL 222 683 B1
Ul f,'J
PL 222 683 B1
189
Glu Asn Ser Łys Arg Trp Asn Pro Glu Ile Gin Tyr Thr Ser Asn Tyr 6S0 6S5 700
Asn Lys Ser Val Asn Val A.sp Phe Thr Val Asp Thr Asn Gly Val Tyr 705 710 715 720
Ser Glu Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Asn Leu 725 730 735
<210> <211> <212> <213> 71 736 PRT białko kapsydu serotypu AAV, klon AAV3
<400> 71
Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser
10 15
Glu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Ala Leu Lys Pro Gly Val Pro Sin Pro 20 25 30
Lys Ala Asn Gin Gin His Gin Asp Asn Arg Arg Gly Leu Val Leu Pro 35 40 45
Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Gly Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro 50 55 S0
Val Asn Glu Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu Kis Asp Lys Ala Tyr Asp
65 70 75 80
Gin Gin Leu Lys Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Lys Tyr Asn His Ala
85 90 95
Asp Ala Glu Phe Gin Glu Arg Leu Gin Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly
100 10 5 110
Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gin Ala Lys Lys Arg Ile Leu Glu Pro
115 120 125
Leu Giy Leu Val Glu Glu Ala Ala Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Gly
130 135 140
Ala Val Asp Gin Ser Pro Gin Glu Pro Asp Ser Ser Ser Gly Val Gly
14 5 150 155 160
Lys Ser Gly Lys Gin Pro Ala Arg Lys Arg Leu Asn Phe Gly Gin Thr
165 170 175
Gly Asp Ser Glu Ser Val Pro Asp Pro Gin Pro Leu Gly Glu Pro Pro
190
PL 222 683 B1
ł.n Jd
PL 222 683 B1
191
192
PL 222 683 B1
PL 222 683 B1
193
5xs Gys Asp Set 33 fi
7?.r Thr ter Thr Arę Thr Trę Ais leu pro Thr Tvr .As?. A.sn Kis
245 ' 230 ’ 233
Tyr Glu Gin Ha Ser Sar Gic Thr Ala Gly Ser Thr Asn Aso Asa 260 2S5 27C ’
Thr Tyr Ehe Gly Tyr Ser Ihr Ero Irp Gly Tyr Ehe Asa Shs Asn Arg 273 2S0 ' ' 2ES
His Cys His Jhe OSO
Sar Ero Arę Asp Trp Gin Arę 2S5 ' 300
Asn Tm GIv Sh 303 te Arg Ero lys lvs leu □ 10 ' '
Ly® Lsu ?hs· Asn ±1$ 315 320
Gin Vai lys Glu. Vai Thr Ihr Asn A.sp Glv Vai Thr I 325 33Ó hr Ile Ala Asn 3 35
Asn leu Ihr Ser Thr Ile Gin val Ehe Ser Asn ser Gic Ivr Gir. lsu 340 345 350
Ero Tyr 7al lec Gly Ser Ale Krs Gin. Glv cvs leu Ero Ero The 3rc
Ala .Asp V-?.l El 370
Met Ile Pro Gin Tyr Gly itr lsu Tar lec .Asn .Asn 375 ' ’ ’ 380
Gly Ser Gla S< 385
Zal Gly Arg Ser Ser phe Tyr Cys lec Glu Tyr Ehe 330 355 400
Prc ser Gin Met Leu Arg Ihr Gly Asa Asn Phe Glu Ehe Ser Tyr Ser 405 410 413
Pha Glu A.sp Val Pro Phe His Ser Ser Tyr Aie His Sar Gin Ser Le 420 425 ‘ 430
A.sp Arg leli Met A.sn Pro lsu Tle Asp Gin Tyr leu Tyr Tyr lsu Ale 433 440 ‘ ' 445 '
-Arg Thr Gin Sar Asa Pro Gly Gly Thr .Ala. Gly Asn Ara Glu leu Gin 430 ' 455 4S0
194
PL 222 683 B1
PL 222 683 B1
195
196
PL 222 683 B1
Hi® C!*s His Fhe Ser Fro Arr 210 215
220 ?25 ' i 30
Sile Lys LSU :j= Asa iis Gm 235 240
250 235 su Thr Ser Thr fal Gin fal ;h xe Ssr A.sn Se 2Ś5 :yr Gir. lei Pro 270 łv2 fal Leu Gly Se 275 ' r Ala Ełs Gin Gly Cys Leu Sra Pro Phe Pro Al 250 235
As? fel phe Het Ile Pro Gin Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu As As £lv 2S0 255 * * 300 '
Per Gir. Ser fal Gly Arę Ssr Ssr Pas Tyr Cys Leu Glu Tyr Phs Sra Ϊ03 310 315 ’ 320 ;a“ Gin Met Leu Arę Thr Gly A.sn Asa Phe Thr Phe Ssr T 323 ‘ 330 vr Thr £hs 533
Piu A.s? fal Pro Phe his Ser Ser Tvr A.ls His Ser Gir. Ser Leu Giv 340 345 3=0
Arr Leu Mat Asn Pro Leu lis Asp Gin Tyr Leu Tyr Tur Leu Ale Ara
360
Thr Gin Ser Ass Ale Gly Glv Thr Ale C-ly Asa Arę Glu Leu Gin Phe 370 275 360
Tyr Gin Gly Gly Pro Thr Thr Met Ale Glu Gin A.la Lys Asn Tr? Leu 385 290 295 ‘ ąog ?ro Gly Pro Cys Phe Arg sin sin Arę val ser Lys Thr Leu A.sn Gin
405
410
A.sn Asn A.sn Ser Asn Phe Ala Trp Thr c-ly Ala Thr Lvs Tyr His Leu 420 423 ‘ 430
A.sn Gly Axg A.sn Str Leu fal A.sn Pro Gly fal Ale Mat Ala Thr his 435 440 445
Lys A.sp Asp Siu Glu Arę Phe Phe Pro Ser Str Gly Val Leu Ile fhe 450 455 460
PL 222 683 B1
197
G-Χν Lvs Thr Glv Ais 4 65 '
Ala Asn Lys 470
Thr Leu Glu Asa Val Leu Met 475 4SC
Aje Glu Glu Glu Ile Arę Ero Thr Asn Ero Val Ais 485 450
Ehr Glu Glu 4 85
Eyr Gly ule Val Sar Sar A, 500 sz leu Gin .Ala Ala ser Thr Ala Ala Gir 505 510 'hr Gin v'al Val Asn A.sn Gin Gly Ala Leu Ero Gly Ket Vai Trp Gin 515 520 ' 525
Asn Arę A.sa Val Tvr Leu Gin GlV Pro Ile 530 535
Trp Ala Lys Ile Ero ais * 540 ’
Thr Asp Gly Asn Phe His Sto Ser 545 550
Pro Leu Mat Gly Gly Phe Gly Lau 555 ' ’ 550
Lys His Pro Ero Ero Gin Ile Leu Lla Lys Asn Thr Pro Val Pro Ala 565 570 575 Ł.sn Pro Pro Glu Val Phi 580
Thr Ero Ala Lvs Ehe Ala Ser Phe ula Th 595 590
Gin Tyr Ser Thr Gly Gin Val Ser Vai Glu Ile Glu Trp Glu Leu Gin 5S5 ' 600 605 jVS Glu A.sn Sar SIO ys Arę Trp A.sn. ' 615
Pro Glu Ile Gir. Tyr Thr Ser Asr 620
Phe A.sp Lys Gin Thr Gly Vai A.sp Phs Ala Val A.sn Ser Gin. Gly Val 625 630 ’ 835 ’ 640
Tyr Ser Glu Fro
<210> 74
<211> ¢44
<212> BRT
<2L3> capsid protein of AAV serotype, clone 223.5
<400> 74
Lys Ala ; Tyr Asp Gin Gin Leu Lys Ala Gly Aso A.sn Ero Tyr Leu Arę
Tyr Asn His A.la Asp Ala Glu Ehe Gin Glu Arg Leu Gin Glu Asp Thr 20 25 30 ser Phe Gly Gly A.sn Lau Gly A.rg Ala Val Phe Gin Ala Lys Lys Arg 35 ' 40 45
198
PL 222 683 B1
PL 222 683 B1
199
Asp Yal Pile Mst lis Pro Gin Tyr GIv Tyr Leu Thr Lsu .Asn Asn Gly
230
295
300
Ser Gin Ser Yal Gly .Arg Ser Ser Phe Tyr Cys Lsu Glu Tyr Phe Pro
5
3IC
315
320
Ser Gin Met Leu Arg Thr Gly Asn Asn Phe Thr Phe Ser Tyr Thr Phe 325 330 335
Glu Asp Yal pro Phe Kis Ser Ser Tyr Ala Kis Ser Gin Ser Leu Gly 340 345 350
Arg Leu Mst Asn. Pro Leu Ile Asp Gin Tyr Leu Tyr Tyr Leu Ala 355 360 365
Thr Gin Ssr Asn Ala Gly Gly Thr Ala Gly Asn Arg Glu Leu Gin Phe 370 375 3S0
Tyr Gin Gly Gly Pro Thr Thr Met Ala Glu Gla Ala Lys Asn Trp Leu 385 390 395 400
Pro Gly Pro Cys Phe Arg Gin Gin Arg Yal Ser Lys Thr Leu Asp Gin 405 410 415
Isn Asn Asn Ser Asn Phe Ala Trp Thr Gly Ala Thr Lys Tyr His Li 420 425 430
Asn Gly Arg Asn Ser Leu Yal Asn pro C-ly Val Ala Met Ala Thr His 435 440 445
7jys Asp Asp Glu Glu Arg Phe Phe Pro Ser Ser Gly Val Leu Ile Phs 450 455 460
Gly Lys Thr Gly Ala Ala Asn Lys Thr Thr Leu Glu Asn Val Leu Met 465 470 475 4S0
Thr A.sn Glu Glu Glu Ile Arg Pro Thr Asn Pro Yal A.la Thr Glu Glu 485 4S0 455 lyr Gly Ile Yal Ser Ser Asn Leu Gin A.la Ala Ser Thr A.la Ala Gin 500 505 510
Thr Gin Val Yal .Asn Asn Gin Gly Ala Leu Pro C-ly Met Yal Trp Gin 515 520 525
A.sn Arg Asp Val Tyr Leu Gin Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile Pro His 530 535 540
200
PL 222 683 B1
Thr Asp Gly Asn Phe His Pro Ser Pro Leu Met Gly c-ly Phe Glv Leu 545 550 555 :ys His Pro Pro Pro Gin Ile Leu Ile Lys Asa Thr Pro ’7al Pro Ala 565 57(3 575
Asn Pro Pro Glu val Phe Thr Pro Ala Lys Phe Ala Ser Phe Ile Thr 550 535 So0
Gin Tyr Ser Thr Gly Gin Val Ser Val Glu rle Glu Trp Glu Leu Gin 595 600 £05
Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu ile Gin Tyr Thr Ser Asn 610 61S 620
Phe Asp Lys Gin Thr Gly Val Asp Phe Ala Val Asp Ser Gin Gly Val 625 630 635 640
Tyr Ser Glu Pro
<210? 75
<211? 644
<212? PRT
<213? biał ko k apsy OLU S erotypu AAV, kio n 22 3.10
<220?
<221? cech. a do> woln a
<222? (434 ) . . (· 434)
<223? rttołe być do w olnytn aminok wase nt
<4 00? 75
Lys Ala Tyr Asp Gin Gin Leu Lys Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Arg
1 5 10 15
Tyr Asn His Ala Asp Ala Glu Phe Gin Glu Arg Leu Gin Glu Asp Thr
20 25 30
Ser Phe Gly Gly Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gin A.la Lys Lys Arg
35 40 45
Val Leu Glu Pro Leu Gly Leu Val Glu Thr Pro Ala Lys Thr Ala Pro
SS 60
Gly Lys Lys Arg Pro Val Asp Ser Pro Asp Ser Thr Ser Gly Ile Gly 65 70 75 80
Lys Lys Giy Gin Gin Pro Ala Lys Lys Arg Leu Asn Phe Gly Gin Thr 85 90 35
PL 222 683 B1
201
202
PL 222 683 B1
Arg Leu Met Asn Pro Leu Ile Asp Gin Tyr Leu T/r Tyr Leu Ala A.rg 355 3S0 365
Thr Gin Ser Asn. Ala Gly Gly Thr Ala Gly Asn Arg Glu Leu Gin Phe 370 37Ξ 3S0
Tyr Gin Gly Gly Pro Thr Ti 3 S5 3 90 ir Met Ala Glu Gin Ala Lys Asn Trp Leu 395 400
Pro Gly Pro Cys Phe A.rg Gin Gin Arg Val Ser Lys Thr neu Asp Gin 405 410 415
Asr. Asn Asn Ser Asn Phe Ala Trp Thr Gly Ala Thr Lys Tyr His Leu 420 425 430
Asn Xaa Arg Asn Ser Leu Val Asn Pro Gly Val Ala Met Ala Thr His 435 440 445
Lys .Asp Asp Glu Glu Arg Phe Phe Pro Ser Ser Gly Val Leu Ile Phe 450 455 460
Gly Lys Thr Gly Ala Ala Asn Lys Thr 465 470
Tur Leu Glu Asn Tal Leu Elet 475 480
Ihr Asn Glu Glu Glu Ile Arg Pro Thr Asn Pro Tal Ala Thr Glu Glu 485 490 495
Iyr Gly Ile Val Ser Ser Asn Leu Gin Ala Ala Ser Thr Ala Ala Gin 5 0 G 505 51C
Thr Gin Val Val Asn Asn Gin Gly Ala Leu Pro Gly Met Val Trp Gin 515 520 525
Asn Arg Asp Val Tyr Leu Gin Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile Pro His 530 535 540
Thr .Asp Gly Asn Phe Kis Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe Gly Leu 545 550 555 550
Lys His Pro Pro Pro Gin Ile Leu ile Lys Asn Thr Pro Val Pro Ala 565 570 575
Asn Pro Pro Glu Val Phe Thr Ero Ala Lys Phe Ala Ser Phe Ile Thr 590 595 590
31n Tyr Ser Thr Gly Gin Val Ser Val Glu Ile Glu Trp Glu Leu Gin 555 SOO SOS
PL 222 683 B1
203
Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Ile Gin Tyr Thr Ser Asn SIO 615 £20
Phe Asp Lys Gin Thr Gly Val Asp Phe Ala Val Asp Ser Gin Gly Val 625 630 635 640
Tyr Ser Glu Pro <210> 76 <211> 644 <212» PRT <213> białko kapsydu serotypu AAV, klon 223.2
<400> 76 Tyr Asp Gin Gin Leu Lys Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Arg
Lys 1 Ala
5 10 1S
Tyr Asn His Ala 20 Asp Ala Glu Phe Gin Glu Cys 25 Leu Gin Glu Asp 30 Thr
Ser Phe Gly Gly 35 Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe 40 Gin Ala Lys Lys 45 Arg
Val Leu 50 Glu Pro Leu Gly Leu 55 Val Glu Thr Pro Ala Lys Thr Ala 60 Pro
Gly 65 Lys Lys Arg Pro Val Asp 70 Ser Pro Asp Ser 75 Thr ser Gly Ile Gly 80
Lys Lys Gly Gin Gin Pro Ala 85 Lys Lys Arg Leu 90 Asn Phe Gly Gin 95 Thr
Gly Asp Ser Glu 100 Ser Val Pro Asp Pro Gin Pro 10S Ile Gly Glu Pro 110 Pro
Ala Gly Pro Ser 115 Gly Leu Gly Ser Gly Thr Met 120 Val Ala Gly Gly 125 Gly
Ala Pro 130 Met Ala Asp Asn Asn 135 Glu Gly Ala Asp Gly Val Gly Asn 140 Ala
Ser 14 5 Gly Asn Trp His Cys Asp 150 Ser Thr Trp Leu 155 Gly Asp Arg Val Ile 160
Thr Thr Ser Thr Arg Thr Trp 165 Ala Leu Pro Thr 170 Tyr Asn Asn His 175 Leu
Tyr Lys Gin Ile Ser Ser Gin Ser Ala Gly Ser Thr Asn Asp Asn Val
204
PL 222 683 B1
SO 135 ISO yr Phe Gly Tyr Ssr Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Asp Phe Asn Arg Phe 135 200 205 iis Cys Kis Phe Ser Pro Arg Asp Trp Gin Arg Leu Ile Asn Asn Asn 210 215 220
Trp Gly Phe Arg Pro Lys Lys Leu Asn Phe Lys Leu Phe Asn Ile Gin 225 230 235 240
Yal Lys Glu Yal Thr 245 Thr Asn Asp Gly Yal 250 Thr Thr ’ Ile Ala Asn 255 Asn
Leu Thr Ser Thr Yal 260 C-ln Val Phe Ser Asp 265 Ser Glu Tyr Gin Leu 270 Pro
Tyr Val Leu 275 Gly Ser Ala His Gin Gly Cys 280 Leu Pro Pro Phe Pro 235 Ala
Asp Val 290 Phs Met Ile Pro Gin Tyr Gly Tyr 295 Leu Thr 300 Leu Asn Asn Gly
Ser 30S Gin Ser Yal Gly Arg 310 Ser Ser Phe Tyr Cys Leu 315 Glu Tyr Phe Pro 320
Ssr Gin Met Leu Arg 325 Thr Gly Asn Asn Phe 330 Thr Phs Ser Tyr Thr 335 Phe
Glu Asp Val Pro Phe 340 His Ser Ser Tyr Ala 345 Kis Ser Gin Ser Leu 350 Asp
Arg Leu Met 355 Asn Pro Leu Ile Asp Gin Tyr 360 Leu Tyr Tyr Leu Ala 365 Arg
Thr* Gin 370 Ser Asn Ala Gly Gly Thr Ala Gly 375 Asn Arg 380 Glu Leu Gin Phe
Tyr 385 Gin Gly Gly Pro Thr 390 Thr Met Ala Glu Gin Ala 395 Lys Asn Trp Leu 400
Pro Gly Pro Cys Phe 405 Arg Gin Gin Arg Val 410 Ser Lys Thr Leu Asp 415 Gin
Asn Asn Asn Ser Asn. 420 Phe Ala Trp Thr Gly 425 Ala Thr Lys Tyr His 430 Leu
Asn C-ly Arg Asn Ser Leu Yal Asn Pro Gly Yal Ala Met Ala Thr His
135 440 445
PL 222 683 B1
205
Lys Asp 450 Asp Glu Glu Arg Phe 455 Ser Pro Ser Ser Gly 460 Val Leu Ile Phe
Gly 465 Lys Thr Gly Ala Ala 470 Asn Lys Thr Thr Leu 475 Glu Asn Val Leu Met 480
Thr Asn Glu Glu Glu 485 Ile Arg Pro Thr Asn 490 Pro val Ala Thr Glu 4 95 Glu
Tyr Gly Ile Val 500 Ser Ser Asn Leu Gin 505 Ala Ala Sar Thr Ala SIO Ala Gin
Thr Gin Val 515 Val Asn Asn Gin Gly 520 Ala Leu Pro Gly J-let 525 Val Trp Gin
Asn Arg Asp Val Tyr Leu Gin Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile Pro His
530 535 540
Thr Asp Gly Asn Phe His Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe Gly Leu 545 550 555 SSO
Lys His Pro Pro Pro Gin Ile Leu Ile lys Asn Thr Pro Val Pro Ala 565 570 575
Asn Pro Pro Glu Val Phe Thr Pro Ala Lys Phe Ala Ser Phe Ile Thr 560 585 590
Gin Tyr Ser 595 Thr Gly Gin Val Ser 600 Val Glu Ile Glu Trp 605 Glu Leu Gin
Lys Glu 610 Asn Ser Lys Arg Trp 615 Asn Pro Glu Ile Gin 620 Tyr Thr Ser Asn
Phe 625 Asp Lys Gin Thr Gly 630 Val Asp Phe Ala Val 63 5 Asp Ser Gin Gly Val 640
Tyr ser Glu Pro
<210? <211> <212> <213? 77 644 PRT białko kapsydu serotypu AAV, klon 223.7
<400? 77
Lys Ala Tyr Asp Gin Gin Leu Lys Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Arg
1 5 10 15
206
PL 222 683 B1 .Ala Asp Ala Glu Phe Gin Glu Arę 20 25 ueil Gin Giu Asp Thr 30
Ser Phe Gly Gly Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gin Ala Lys Lys Arg 35 40 45
Val Leu Glu Pro Leu Gly Leu Val Glu Thr Pro Ala Lys Thr Ala Pro 50 55 60
Gly Lys Lys Arg Pro Val Asp Ser Pro Asp Ser Thr Ser Gly Ile Gly 55 70 73 30
Lys Lys Gly Gin Gin Pro Ala Lys Lys Arg Leu Asn Phe Gly Gin Thr 35 90 95
Giy Asp Ssr Glu ser Val Pro Asp Pro Gin Pro Ile Gly Glu Pro Prc ±00 105 110
Ala Gly Pro Ser Gly Leu Gly Ser Gly Thr Met Ala Ala Gly Gly Gly 115 120 125
A.la Pro Met Ala Asp Asn Asn Glu Gly Ala A.sp Gly Val Gly Asn Ala 130 135 140
Ser Gly Asn Trp His Cys Asp Ser Thr Trp Leu Gly Asp Arg Val Ile 145 150 155 ISO
Thr Thr Ser Thr Arg Thr Trp Ala Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His Leu 165 170 175
Tyr Lys Gin Ile Ser Ser Gin Ser Ala Gly Ser Thr Asn Asp Asn Val 180 185 190
Tyr Phe Gly Tyr Ser Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Asp Phe Asn Arg Phe 195 200 205
His Cys His Phe Ser Pro Arg Asp Trp Gin Arg Leu Ile A.sn Asn Asn 210 215 220
Trp Gly Phe Arg Pro Lys Lys Łeu A.sn Phe Lys Leu Phe Asn Ile Gin 225 ’ 230 235 240
7al Lys Glu Val Thr Thr Asn Asp Gly Val Thr Thr Ile Ala Asn Asn 245 250 255
Leu Thr Ser Thr Val Gin Val Phe Ser Asp Pro Glu Tyr Gin Leu Pro 260 255 270
PL 222 683 B1
207
208
PL 222 683 B1
Asn Arg Asp Vai Tyr Leu Gin Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile Pro Kis 530 535 540
Thr Asp Gly Asn Phe His Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe Gly Leu 345 550 555 560
Lys Eis Pro Pro Pro Gin Ile Leu Ile Lys Asn Thr Pro Val Pro Ala S6S 570 575
Asn Pro Pro Glu Val Phe Thr Pro Ala Lys Ile Ala Ser Phe Ile Thr SSO 585 550
Gin Tyr Ser Thr Gly Gin Val Ser Val Glu Ile Glu Trp Glu Leu Gin 595 600 505
Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Ile Gin Tyr Thr Ser Asn 610 615 620
Phe Asp Lys Gin Thr Gly Val Asp Phe Ala Val Asp Ser Gin Gly Val 625 630 635 640
Tyr Ser Glu Pro <210» 78 <211» 644 <212» PRT <213» białko kapsydu serotypu AAV, klon 223.6 <400» 78
Lys Ala Tyr Aep Gin Gin Leu Lys Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Arg 15 10 15
Tyr Asn His Ala Asp Ala Glu Phe Gin Glu Arg Leu Gin Glu Asp Thr 20 2Ξ 30
Ser Phe Gly Gly Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gin Ala Lys Lys Arg 35 40 45
Val Leu Glu Pro Leu Gly Leu Val Glu Thr Pro Ala Lys Thr Ala Pro 50 55 60
Gly Lys Lys Arg Pro Val Asp Ser Pro Asp Ser Thr Ser Gly Ile Gly 65 70 75 80
Lys Lys Gly Gin Gin Pro Ala Lys Lys Arg Leu Asn Phe Gly Gin Thr 85 90 35
Gly Asp Ser Glu Ser Val Pro Asp pro Gin Pro Ile Gly Glu Pro Pro
PL 222 683 B1
209
110
100
105
Ala Gly Pro Ser Gly Leu Gly Ser Gly Thr Met Ala Ala Gly Gly Gly 11S 120 125
Ala Pro Met Ala Asp Asn Ser Glu Gly Ala Asp Gly Val Gly Asn Ala 130 135 140
Ser Gly Asn Trp His Cys Asp Ser Thr Trp Leu Gly Asp Arg Val Ile 145 ISO 155 160
Thr Thr Ser Thr Arg Thr Trp Ala Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His Leu 165 170 175
Tyr Lys Gin Ile Ser Ser Gin Ser Ala Gly Ser Thr Asn Asp Asn Val ' 130 185 190
Tyr Phe Gly Tyr Sar Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Asp Phe Asn Arg Phe ’ 195 200 205
His Cys His Phe Ser Pro Arg Asp Trp Gin Arg Leu Ile Asn Asn Asn 210 215 220
Trp Gly Phe Arg Pro Lys Lys Leu Asn Phe Lys Leu Phe Asn Ile Gin 225 230 235 240
Val Lys Glu Val Thr Thr Asn Asp Gly Val Thr Thr Ile Ala Asn Asn 245 250 255
Leu Thr Ser Thr Val Gin Val Phe Ser Asp Ser Glu Tyr Gin Leu Pro 260 265 270
Tyr Val Leu Gly Ser Ala His Gin Gly Cys Leu Pro Pro Phe Pro Ala 275 280 285
Asp Val Phe Met Ile Pro Gin Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn Asn Gly * 290 295 300
Ser Gin Ser Val Gly Arg Ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe Pro 305 310 315 320
Ser Gin Het Leu Arg Thr Gly Asn Asn Phe Thr Phe Ser Tyr Thr Phe 325 330 33S
Glu Asp Val Pro Phe His Ser Ser Tyr Ala His Ser Gin Ser Leu Asp 340 345 350
Ara Leu Met Asn Pro Leu Ile Asp Gin Tyr Leu Tyr Tyr Leu Ala Arg
210
PL 222 683 B1
355 36 0 36 5
Thr Gin ser A.S !l Ala nu. Gly Thr Ala Gly Asn Arg Glu Leu Gin Phe
370 375 330
Tyr* Gin Gly Gly Pro Thr Thr Met Ala Glu Gin Ala L-ys Asn Trp Leu
3S5 3 90 3S5 400
Pro Gly Fro Cys Fhe Arg Gin Gin Arg fal Ser Lys Thr Leu Asp Gin
405 410 415
ASM Asn A.sil Ser As n Phe Ala Trp Thr Gly Ala Thr Lys Tyr His Lsu
420 425 430
Asn Gly Arg Asn Ser Leu fal Asn Pro Gly fal Ala Met Ala Thr His
435 440 245
Lys Asp Asp Glu Glu Arg phe Phe Pro Ser Ser Glv fal Leu Ile Phe 450 455 460
Gly Lys Thr Gly Ala Ala Asn Lys Thr Thr Leu Glu Asn Val Leu Met 465 470 475 430
Thr Asn C-lu Glu Glu ile Arg Pro Thr Asn Pro fal Ala Thr Glu Glu 4 S 5 d $0 05
Tyr Gly Ile fal Ser Ser Asn Leu Gin Ala Ala Ser Thr Ala Ala Gin 500 505 510
Thr Gin fal fal Asn Asn Gin Gly Ala Leu Pro C-ly Met fal Trp Gin 515 520 525
Asn Arg Asp fal Tyr Leu Gin Gly Pro Tle Trp Ala Lys He Pro His 530 535 540
Thr Asp Gly Asn Phe His Fro Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe Gly Leu 545 550 555 560
Lys His Pro Pro Pro Gin Ile Leu Ile Lys Asn Thr Pro fal Pro Ala 565 570 575
Asa Pro Pro Glu fal Phe Thr Pro Ala Lys Leu Ala Ser Phe Ile Thr 580 595 5S0
Gin Tyr Ser Thr Gly Gin fal Ser fal Glu Ile Glu Trp Glu Leu Gin 595 600 605
Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Ile Gin Tyr Thr Ser Asn 610 615 620
PL 222 683 B1
211
Phe Asp Lys Gin Thr Gly Val Asp Phe Ala Val Asp Ser Gin Gly Val
625 630 635 640
Tyr Ser Glu Pro
<210> 79
<211> 738
<212> PET
<213? białko kapsydu serotypu AAV, klon 44.1
<400> 79
Met Ala 1 Ala Asp Gly Tyr Leu 5 Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser
10 15
Glu Gly Ile Arg 20 Glu Trp Trp Asp Leu 25 Lys Pro Gly Ala Pro Lys Pro 30
Lys Ala Asn Gin 35 Gin Lys Gin Asp Asp 40 Gly Arg Gly Leu Val Leu Pro 45
Gly Tyr 50 Lys Tyr Leu Gly Pro 55 Phe Asn Gly Leu Asp 60 Lys Gly Glu Pro
Val Asn 65 Ala Ala Asp Ala Ala 70 Ala Leu Glu His Asp 75 Lys Ala Tyr Asp 80
Gin Gin Leu Lys Ala Gly Asp 85 Asn Pro Tyr Leu Arg 90 Tyr Asn His Ala 95
Asp Ala Glu Phe 100 Gin Glu Arg Leu Gin 105 Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly 110
Asn Leu Gly Arg 11S Ala Val Phe Gin Ala 120 Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro 125
Leu Gly 130 Leu Val Glu Glu Gly 133 Ala Lys Thr Ala Pro 140 Gly Lys Lys Arg
pro Val 145 Glu Pro Ser Pro Gin 150 Arg Ser Pro Asp Ser 155 Ser Thr Gly Ile 160
Gly Lys Lys Gly Gin Gin Pro 165 Ala Lys Lys Arg Leu 170 Asn Phe Gly Gin 175
Thr Gly Asp Ser 180 Glu Ser Val Pro Asp 185 Pro Gin Pro Ile Gly Glu Pro 190
Pro Ala Gly Pro Ser Gly Leu Gly Ser Gly Thr Met Ala Ala Gly Gly
212
PL 222 683 B1
2C0 205
Gly Ala Pro Met Ala Asp Asn Asn Glu Gly Ala Asp Gly Val Gly Ser 210 215 220
Ser Ser Gly Asn Trp His Cys Asp Ser Thr Trp Leu Gly Asp Arg Val 225 230 23= 240 le Thr Thr Ser Thr Arg Thr Trp Ala Leu Pro Thr Tyr Asn Asn Kis 245 250 255
Leu Tyr Lys Gin Ile Ser Asn Gly Thr Ser Gly Gly Ser Thr Asn Asp 260 265 270
Asn Thr Tyr Phe Gly Tyr Ser Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Asp Phe Asn 27S 230 285
Arg Phe His Cys His Phe Ser Pro Arg Asp Trp Gin Arg Leu Ile Asn 290 295 300
Asn Asn Trp Gly Phe Arg Pro Lys Arg Leu Asn Phe Lys Leu Phe Asn 305 310 315 220
Ile Gin Val Lys Glu Val Thr Gin Asn Glu Gly Thr Lys Thr Ile Ala 325 330 335
Asn Asn Leu Thr Ser Thr Ile Gin Val Phe Thr Asp Ser Glu Tyr Gin 340 345 350
Leu Pro Tyr Val Leu Gly Ser Ala His Gin Gly Cys Leu Pro Pro Phe 355 360 3S5
Pro Ala Asp Val Phe Met Ile Pro Gin Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu .Asn 370 375 380
Asn Gly Ser Gin Ala Val Gly Arg Ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr 335 390 395 400
Phe Pro Ser Gin Met Leu A.rg Thr Gly Asn Asn Phe Glu Phe Ser Tyr 405 410 415
Gin Phe Glu Asp Val Pro Phe His Ser Ser Tyr Ala His Ser Gin Ser 420 425 430
Leu Asp .Arg Leu Het Asn Pro Leu Ile Asp Gin Tyr Leu Tyr Tyr Leu 435 440 445
PL 222 683 B1
213
Ser Arg Thr Gin Ser Thr Gly Gly 450 455
Thr Ala Gly Thr Gin Gin Leu Leu 460
Phe Ser Gin Ala Gly Pro Asn Asn 465 470
Met Ser Ala Gin Ala Lys Asn Trp 475 4S0
Leu Pro Gly Pro Cys Tyr Arg Gin 485
Gin Arg Val Ser Thr Thr Leu Ser 490 495
Gin Asn Asn Asn Ser Asn Phe Ala 500
Trp Thr C-ly Ala Thr Lys Tyr His 505 510
Leu Asn Gly Arg Asp Ser Leu Val 515 520
Asn Pro Gly Val Ala Met Ala Thr 525
His Lys Asp Asp Glu Glu Arg Phe 530 535
Phe Pro Ser Ser Gly Val Leu Met 540
Phe Gly Lys Gin Gly Ala Gly Lys 545 550
Asp Asn Ual Asp Tyr Ser Ser Val 555 560
Met Leu Thr Ser Glu Glu Glu Ile 565
Lys Thr Thr Asn Pro Val Ala Thr 570 575
Glu Gin Tyr Gly Val Tal Ala Asp 580
Asn Leu Gin Gin Gin Asn Ala Ala 585 590
Pro Ile Val Gly Ala Ual Asn. Ser 595 600
Gin Gly Ala Leu Pro Gly Met Ual 60 5
Trp Gin Asn Arg Asp Val Tyr Leu 610 615
Gin Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile 620
Pro His Thr Asp Gly Asn Phe His 625 630
Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe 635 640
Gly Leu Lys His Pro Pro Pro Gin 645
Ile Leu Ile Lys Asn Thr Pro Ual 650 65Ξ
Pro Ala Asp Pro Pro Thr Thr Phe 660
Ser Gin Ala Lys Leu Ala Ser Phe 66S 670
Ile Thr Gin Tyr Ser Thr Gly Gin 675 6S0
Val Ser Val Glu Ile Glu Trp Glu 685
Leu Gin Lys Glu Asn Ser Lys Arg 690 695
Trp Asn Pro Glu Ile Gin Tyr Thr 700
214
PL 222 683 B1
3er Asa Tyr Tyr Lys Ser Thr Asn fal Asp Phe Ala fal Asn Thr Asp 705 710 715 720
Giy Thr Tyr Ser Glu Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg 725 730 735
Asn Leu <210> 80 <211> 733 <212? PRT =213> białko kapsydu serotypu AAV, klon 44.5 <400? 90
Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser 15 10 15
Glu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Asp Leu Lys Pro Gly Ala Pro Lys Pro 20 25 30
Lys Ala Asn Gin Gin Lys Gin Asp Asp Gly Arg Gly Leu Val Leu Pro 35 40 45
Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro 50 55 ¢0
Val Asn Ala Ala Asp Ala Ala .Ala Leu Glu His Asp Lys A.la Tyr Asp 65 70 75 SO*
Gin Gin Leu Lys Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Arg Tyr Asn His Ala 85 50 95
Asp Ala Glu Phe Gin Glu Arg Leu Gin Glu Aso Thr Ser Phe Gly Gly 100 105 ’ 110 '
Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gin Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro 115 120 125
Leu Gly Leu fal Glu Glu Gly Ala Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg 130 135 140
Pro Val Glu Pro Ser Pro Gin Arg Ser Pro Asp Ser Ser Thr Gly Ile 145 150 155 160
Gly Lys Lys Gly Gin Gin Pro Ala Lys Lya Arg Leu Asn Phe Gly Gin 165 170 175
Thr Gly Asp Ser Glu Ser fal Pro Asp Pro Gin Pro Ile Gly Glu Pro
PL 222 683 B1
215
180 185 190
Pro Ala Gly Pro Ser Gly Leu Gly Ser Gly Thr Met Ala Ala Gly Gly
195 200 205
Gly Ala Pro Met Ala Asp Asn Asn Glu Gly Ala Asp Gly Val Gly Ser
210 215 220
Ser Ser Gly Asn Trp His Cys Asp Ser Thr Trp Leu Gly Asp Arg Val
225 230 235 240
Ile Thr Thr Ser Thr Arg Thr Trp Al 3 Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His
245 250 255
Leu Tvr Lys Gin Ile Ser Asn Gly Thr Ser Gly Gly Ser Thr Asn Asp
260 26S 270
Asn Thr Tyr Phe Gly Tyr Ser Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Asp Phe Asn
275 280 285
Arg Phe His Cys His Phe Ser Pro Arg Asp Trp Gin Arg Leu Ile Asn
290 295 300
Asn Trp Gly Ργιξ Arg Pro Lys Arg Pro Asn Phe Lys Leu Phe Asn
305 310 315 320
Ile Gin Val Lys Glu Val Thr Gin Asn Glu Gly Thr Lys Thr Ile Ala 325 330 335
A.sn Asn Leu Thr Ser Thr Ile Gin Val Phe Thr Asp Ser Glu Tyr Gin 340 345 350
Leu Pro Tyr Val Leu Gly Ser Ala His Gin Gly Cys Leu Pro Pro Phe 35S 360 365.
Pro Ala Asp Val Phe Met Ile Pro Gin Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn 370 375 380
Asn Gly Ser Gin Ala Val Gly Arg Ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr 385 390 395 400
Phe Pro ser Gin Met Leu Arg Thr Gly Asn Asn Phe Glu Phe Ser Tyr 405 410 415
Gin Phe Glu Asp Val Pro Phe Hie Ser Ser Tyr Ala His Ser Gin Ser 420 425 430
Leu Asp Arg Leu Met Asn Pro Leu Ile Asp Gin Tyr Leu Tyr Tyr Leu 435 440 445
216
PL 222 683 B1
Se z* Ara 450 Ser Trir Gly 455 Gly Thr Ala Gly Thr 460 Gin Leu Leu
Phe 4oS Ser Gin Ala Gly Pro 470 Asn Asn Met Ser Ala Gin 475 Ais Lys Asn Trp 480
Leu Pro Giy Pro Cys 485 Tvr Arg Gin C-ln Arg 430 Val Ser Thr Thr Leu 495 Ser
3 In Asn Asn Asn 500 Ser Asn ?łt£ Ala Trp Thr 505 Gly Ala Thr Lys 510 Tyr His
Leu Asn Gly Arg 515 Asp Ser Leu Val 520 Asn Pro Gly Val Ala 525 Met Ala Thr
His Lys 530 Asp Asp Glu Glu Arg 535 Phe Phe Pro Ser Ser S40 Giy Val Leu Met
Phe Gly Lys Gin Gly kis Gly Lys Asp Asn Val Asp Tyr Ser Ser Val 545 550 555 S60
Met L— Thr Ser Glu 565 Glu Glu Ile Lys Thr 570 Thr Asn Pro Val Ala Thr 575
Olu Gin Tyr Gly Val Val Ala Asp Asn Leu Gin Gla C-In Asn A-l a Ala
580 585 590
Pro Ile Val Gly Ala Val Asn Ser Gin Gly Ala Leu Pro Gly Met Val
5SS 600 605
Trp Gin Asn Arg Asp Val Tyr Leu Gin Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile 610 615 620
Pro 525 His Thr Asp Gly Asn 630 Phe His Pro Ser Pro Leu Met 635 Gly Gly Phe 640
Gly Leu Lys His Pro Pro Pro Gin Ile Leu Ile Lys Asn Thr Pro Val
645 650 655
Pro Ala Asp Pro Pro Thr Thr Phe ser Gin Ala Lys Leu Ala Ser Phe
660 665 670
ile Thr Gin Tyr Ser Thr Gly Gin Val Ser Val Glu Ile Glu Trp Glu
675 530 685
Leu Gin Lys Glu Asn Ser Lys Aro Trp Asn Pro Glu Ile Gin Tyr Thr
690 695 700
PL 222 683 B1
217
Ser 705 “_sn Tyr Tyr Lys Ser 710 Thr Asn Val Asp Phe 715 Ala Val Asn Thr Asp 720
Gly Thr Tyr Ser Glu Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg
725 730 735
Asn Leu
<210? 81
<211? 738
<212? PRT
<213? białko kapsydu s< erotypu . AAV, klon 44 .2
<400? 81
Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser
1 5 10 15
Glu Gly Ile Glu Trp Trp Asp Leu Lys Pro Gly Ala Pro Lys Pro
20 25 30
Lys Ala Asn Gin Gin Lys Gin Asp Asp Gly Arg Gly Leu Val Leu Pro
35 40 45
Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro
56 ss 60
Val Asn Ala Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His A.sp Lys Ala Tyr Asp
o 5 70 75 80
Gin Gin Leu Lys Ala Gly Asp A.sn Prc Tyr Leu Arg Tyr Asn His Ala
85 90 95
Asp Ala Glu Phe Gin Glu Arg Leu Gin Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly
100 105 110
Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gin Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro
115 120 125
Leu Gly Leu Val Glu Glu Gly Ala Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg
130 135 14 0
Pro val Glu Pro Ser Pro Gin Arg Ser Pro Asp Ser Ser Thr Gly Ile
14 5 150 1SS 150
Gly Lys Lys Gly Gin Gin Pro Ala Lys Lys Arg Leu Asn Phe Gly Gin
165 17 0 175
Thr Gly Asp Ser Glu Ser Val Pro Asp Pro Gin Pro ile Gly Glu Pro
180 18Ξ 190
218
PL 222 683 B1 lv Pro Ser Glv Leu Glv Ser Gly Tar Het Ala Ale Gxy GIv
200
20;
Gly Ale Pro Nsć Ala Asp Asn Asn Glu Gly Ala Asp Gly Val Gly Ser 210 215 220
Ser Ser Gly Asn 225
Trp His Cys Asp Ser 2 30 tor Trp Leu Gly Asp Arg Val 235 240
Ile Thr Thr Ser Thr Arg Thr Trp Ala Leu Pro Thr Tyr Asn Asn Kis 245 250 255 su Tyr Lys Gin Ile Ser Asn Gly Thr Ser Gly Gly Ser Thr Asn Asp 250 265 270
Asn Thr Tyr Phe Gly Tyr Ser Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Asp Phe Asn 275 280 285 .Arg Phe His Cys His Phe Ser Pro Arg Asp Trp Gin Arg Leu Ile Asn 290 295 300
Asn Asn Trp Gly Phe Arg Pro Lys Arg Leu Asn Phe Lys Leu Phe Asn 305 310 315 320
He Gin Val Lys Glu Val Thr Gin Asn Glu Gly Thr Lys Thr Ile .Ala 325 330 333
Asn Asn Leu Thr Ser Thr Ile Gin Val Phe Thr Asp Ser Glu Tyr Gin 340 345 350
Leu Pro Tyr Val Leu Gly Ser Ala His Gin Gly Cys Leu Pro Pro Phe 355 350 365
Pro Ala Asp Val Phe Het Ile Pro Gin Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn 370 375 380
Asn Gly Ser Gir. Ala Val Gly Arg Ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr 385 390 395 400
Phe Pro Ser Gin Met Leu Arg Thr Gly Asn Asn Phe Glu Phe Ser Tyr 405 410 415
Gin. Phe Glu Asp Val Pro Phe His Ser Ser Tyr Ala His Ser Gin Ser 420 425 430
Leu Asp Arg Leu Met Asn Pro Leu Ile Asp Gin Tyr Leu Tyr Tyr Leu 435 440 445
PL 222 683 B1
219
Ser Arg Thr Gin Ser Thr Gly Gly Thr Ala Gly Thr Gin Gin Leu Leu 450 455 460
Phe Ser Gin Ala Gly Pro Asn Asn Met Ser Ala Gin Ala Lys Asn Trp 465 470 475 480
Leu Pro Gly Pro Cys Tyr Arg Gin Gin. Arg Val Ser Thr Thr Leu Ser 4B5 490 495
Gin Asn Asn Asn Ser Asn Phe Ala Trp Thr Gly Ala Thr Lys Tyr His 500 505 510
Leu Asn Gly Arg Asp Ser Leu Val Asn Pro Gly fal Ala Met Ala Thr 515 520 525
His Lys Asp Asp Glu Glu Arg Phe Phe Pro Ser Ser Gly Val Leu Met 530 535 540
Phe Gly Lys Gin Gly Ala Gly Lys Asp Asn fal Asp Tyr Ser Ser Val 545 550 555 560
Met Leu Thr Ser Glu Glu Glu Ile Lys Thr Thr Asn Pro fal Ala Thr 565 570 575
Glu Gin Tyr Gly Val fal Ala Asp Asn Leu Gin Gin Gin Asn Ala Ala S80 535 590
Pro Ile Val Gly Ala fal Asn Ser Gin Gly Ala Leu Pro Gly Met fal 59S 600 605
Trp Gin Asn Arg Asp Val Tyr Leu Gin Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile 610 615 620
Pro His Thr Asp Gly Asn Phe His Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe 625 630 635 640
Gly Leu Lys His Pro Pro Pro Gin Ile Leu Ile Lys Asn Thr Pro fal 645 650 655
Pro Ala Asp Pro Pro Thr Thr Phe Ser Gin Ala Lys Leu Ala Ser Phe 660 665 670
Ile Thr Gin Tyr Ser Thr Gly Gin fal Ser Val Glu Ile Glu Trp Glu 675 690 685
Leu Gin Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Ile Gin Tyr Thr 690 695 700
220
PL 222 683 B1
PL 222 683 B1
221
ISO 185 190
Pro Ala Gly Pro Ser Gly Leu Gly Ser Gly Thr Met Ala Ala Gly Gly
195 200 205
Gly Ala Pro Met Ala Asp Asn Asn Glu Gly Ala Asp Gly Ual Gly Ser
210 215 220
Ser Ser Gly Asn Trp His Cys Asp Ser Thr Trp Leu Gly Asp Arg Val
225 230 235 240
Ile Thr Thr Ser Thr Arg Thr Trp Ala Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His
245 250 255
Leu Tyr Lys Gin Ile Ser Asn Gly Thr Ser Gly Gly Ser Thr Asn Asp
260 26Ξ 270
Asn Thr Tyr Phe Gly Tyr Ser Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Asp Phe Asn
275 280 285
Arg Phe His Cys His Phe Ser Pro Arg Asp Trp Gin Arg Leu Ile Asn
290 295 300
Asn Asn Trp Gly Phe Arg Pro Lys Arg Leu Asn Phe Lys Leu Phe Asn
305 310 315 320
Ile Gin Val Lys Glu Val Thr Gin Asn. Glu Gly Thr Lys Thr Ile A.la
325 330 335
Asn Asn Leu Thr Ser Thr Ile Gin Val Phe Thr Asp Ser Glu Tyr Gin
340 345 350
Leu Pro Tyr Val Leu Gly Ser Ala Arg Gin Gly Cys Leu Pro Pro Phe
355 360 365
Pro Ala Asp Val Phe Met Ile Pro Gin Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn
370 375 380
Asn Gly Ser Gin Ala Val Gly Arg Ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr
355 390 395 400
Phe Pro Ser i Gin Met Leu Arg Thr Gly Asn Asn Phe Glu Phe Ser Tyr
405 410 415
Gin Phe Glu Asp Val Pro Phe His Ser Ser Tyr Ala His Ser Gin Ser
42 0 425 430
Leu Asp Arg Leu Met Asn Pro Leu Ile Asp Gin Tyr Leu Tyr Tyr Leu
435 440 445
222
PL 222 683 B1
Ser Arg Thr Gin Ser Thr Gly Glv Thr 450 455
Ais C-ly Thr Gin C-ln Leu Li 460 ?he Ser Gin Ala Gly Pro Asn Asn Met Ser 465 470
Ala Gin Ala Lys A.sn Trp 175 4S0
Leu Pro Gly Pro Cys Tyr Arg Gin Gin Arg fal Ser Thr Thr Łeu Ser 405 430 435
Gin Asn Asn Asn Ser Asn Phe Ala Trp Thr Gly Ala Thr Lys Tyr His 500 505 SIO
Leu Asn Gly Arg Asp Ser Leu Val Asn Pro Gly Val Ala Met Ala Thr 515 520 525
His Lys Asp Asp Glu Glu Arg Phe Phe Pro Ser Ser Gly Val Leu Met 530 535 540
Phe Gly Lys Gin Gly Ala Giy Lys Gly Asn fal Asp Tyr Ser Ser fal 545 550 355 560
Met Leu Thr Ser Glu Glu Glu ile Lys Thr Thr A.sn Pro fal Ala Thr 565 570 573
Glu Gin Tyr Gly fal fal Ala Asp Asn Leu Gin C-ln Gin Asn Ala Ala 5S0 585 550
Pro Ile fal Gly Ala fal Asn Ser Gin Gly Ala Leu Pro Gly Met fal 595 600 505
Trp Gin Asn Arg Asp Val Tyr Leu Gin Gly Pro Ile Trp A.la Lys Ile 610 615 620
Pro His Thr Asp Gly Asn Phe His Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe 625 630 635 640
Gly Leu Lys His Pro Pro Pro Gin Ile Leu Ile Lys Asn Thr Pro fal 645 650 655
Pro Ala Asp Pro Pro Thr Thr Phe Ser Gin Ala Lys Leu Ala Ser Phe 560 665 670
Ele Thr Gin Tyr Ser Thr Gly Gin fal Ser fal Glu Ile Glu Trp Glu 675 600 535
Leu Gin Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Ile Gin Tyr Thr 690 695 700
PL 222 683 B1
223
Ser Asn Tyr Tyr Lys Ser Thr Asn Val Asp Phe Ala Val Asn Thr Asp
705 710 715 720
Gly Thr Tyr Ser Glu Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg 725 730 735
Asn Leu <210? 83 <211? 738 <212> PRT <213> białko kapsydu serotypu AAV, klon 29.5VP1 <400? 83
Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser 15 10 15
Glu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Ala Leu Lys Pro Gly Ala Pro Lys Pro 20 25 30
Lys Ala Asn Gin Gin Lys Gin Asp Asp Gly Arg Gly Leu Val Leu Pro 35 40 45
Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro 50 SE ' 60
Val Asn Ala Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp lys Ala Tyr Aso 65 70 75 80*
Gin Gin Leu Lys Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Arg Tyr Asn His Ala 85 90 95
Asp Ala Glu Phe Gin Glu Arg Leu Gin Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly
100 105 110
Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gin Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro 115 120 125
Leu Gly Leu Val Glu Glu Gly Ala Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg 130 135 140 - - Pro Val Glu Pro Ser Pro Gin Arg Ser Pro Asp ser Ser Thr Gly Ile 145 150 155 ISO
Gly Lys Lys Gly Gin Gin Pro Ala Lys Lys Arg Leu Asn Phe Gly Gin
165 170 175
Thr Gly Asp Ser Glu Ser Val Pro Asp Pro Gin Pro Ile Gly Glu Pro
224
PL 222 683 B1
185 190 'ro Ala Gly Pro Sar Gly Leu Gly Ser Gly Thr Met Ala Ala Gly Gly 195 200 203
Gly Ala Pro Met Ala Asp Asn. Asn Glu Gly Ala Asp Gly ¥ał Gly Ser 210 215 220
Ser Ser Glv Asn Trp Kis Cys Asp Ser Thr Trp Leu Gly Asp Gly Val 225 230 235 240
Ile Thr Thr Ser Thr Arg Thr Trp Ala Leu Fro Thr Tyr Asn Asn Kis 245 250 255
Leu Tyr Lys Gin Ile Ser Asn Gly Thr Ser Gly Gly Ser Thr Asn Asp 260 265 270
Asn Thr Tyr Phe Gly Tyr Ser Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Asp Phe Asn 275 2S0 285
Arg Ehe His Cys Kia Fhe Ser Pro Arg Asp Trp Gin Arg Leu Ile Asn 290 295 300
Asn Asn Trp Gly Phe Arg Pro Lys Ser Leu Asn Phe Lys Leu Phe Asn 305 310 315 320
Ile Gin Val Lys Glu Val Thr Gin Asn Glu Gly Thr Lys Thr Ile Ala 32S 330 335
Asn A.sn Leu Thr Ser Thr Ile Gin Val Phe Thr Asp Ser Glu Tyr Gltl 340 345 350
Leu pro Tyr Val Leu Gly Ser Ala His Gin Gly Cys Leu Pro Pro Phe 355 360 365
Pro Ala Asp Val Phe Met Ile Pro Gin Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn 370 375 380
Asn Gly Ser Gin Ala val Gly Arg Ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr 385 390 395 400
Phe Pro Ser Gin Mat Leu Arg Thr Gly Asn Asn Phe Glu Phe Ser Tyr 405 410 415
Gin Phe Glu Asp Val Pro Phe His Ser Ser Tyr Ala His Ser Gltl Ser 420 425 430
PL 222 683 B1
225
Leu Asp Arg Leu Met Asn Pro Leu Ile Asp Gin Tyr Leu Tyr Tyr Leu 435 440 445
Ser Arg Thr Gin Ser Thr Gly Gly Thr Ala Gly Thr Gin Gin Leu Leu 450 455 ago
Phe Ser Gin Ala Gly Pro Asn Asn Met Ser Ala Gin Ala Lys Asn Trp 465 470 475 480
Leu Pro Gly Pro Cys Tyr Arg Gin Gin Arg Val Ser Thr Thr Leu Ser 485 490 495
Gin Asn Asp Asn Ser Asn Phe Ala Trp Thr Gly Ala Thr Lys Tyr His 500 SOS 510
Leu Asn Gly Arg Asp Ser Leu Val Asn Pro Gly Val Ala Met Ala Thr 515 520 . 525
His Lys Asp Asp Glu Glu Arg Phe Phe Pro Ser Ser Gly Val Leu Met 530 535 540
Phe Gly Lys Gin Gly Ala Gly Lys Asp Asn. fal Asp Tyr Ser Ser Val 545 550 555 560
Met Leu Thr Ser Glu Glu Glu Ile Lys Thr Thr Asn Pro Val Ala Thr 5S5 570 575
Glu Gin Tyr Gly fal Val Ala Asp Asn Leu Gin Gin Gin Asn Ala Ala 5S0 535 590
Pro Ile Val Gly Ala Val Asn Ser Gin Gly Ala Leu Pro Gly Met Val £95 600 605
Trp Gin Asn Arg Asp Val Tyr Leu Gin Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile 610 615 620
Pro His Thr Asp Gly Asn Phe His Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe 625 630 635 640
Gly Leu Lys His Pro Pro Pro Gin ile Leu Ile Lys Asn Thr Pro Val 645 650 655
Pro Ala Asp Pro Pro Thr Thr Phe Ser Gin Ala Lys Leu Ala Ser Phe 660 665 670
Ile Thr Gin Tyr Ser Thr Gly Gin Val Ser Val Glu Ile Glu Trp Glu 675 680 685
226
PL 222 683 B1
Leu Gin Lys Glu Asn Ser Łys Arg Trp Asn Pro Glu Ile Gin Tyr Thr □90 595 700
Ser Asn Tyr Tyr Lys Ser Thr Asn fal Asp Phe Ala fal Asn Thr Asp 705 710 715 720
Gly Thr Tyr Ser Glu Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg 725 730 735
Asn Leu <210? 34 <211? 738 <212? PRT <213? białko kapsydu serotypu AAV, klon 42.15 <400? 84
Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Łeu Glu Asp Asn Leu Ser 15 10 15
Glu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Asp Leu Lys Pro C-ly Ala Pro Lys Pro 20 25 30
Lys Ala Asn Gin Gin Lys Gin Asp Asp Gly Arg Gly Leu fal Leu Pro 35 40 45
Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro 50 55 ' S0* fal Asn Ala Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp 65 70 75 80
Gin Gin Leu Lys Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Arg Tyr Asn His Ala 85 90 95
A.sp Ala Glu Phe Gin Glu Arg Leu Gin Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly 100 105 110
Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gin Ala Lys Łys Arg fal Leu Glu Pro lis 120 125
Leu Gly Leu fal Glu Glu Gly Ala Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg 130 135 140
Pro fal Glu Pro Ser Pro Gin Arg Ser Pro Asp Ser Ser Thr Gly Ile 145 150 155 ISO
Gly Lys Thr Gly Gin Gin Pro Ala Lys Lys Arg Leu Asn Phe Gly Gin
PL 222 683 B1
227
228
PL 222 683 B1
420 =u As? Arg Leu Met Asn Pro Leu Ile Asp Gin Tyr Leu Tyr Tyr Leu 435 440 445
Ser Arg Thr Gin Ser Thr Gly Gly Thr Ala Gly Thr Gin Gin Leu Leu 450 455 460 ?he Ser Gin Ala Gly Pro Asn Asn Met Ser Ala Gin Ala Lys Asn Tm 155 470 475 ' 430
Leu Pro Gly Pro Cys Tyr Arg Gin Gin Arg Val Ser Thr Thr Leu Ser 485 490 495
31n Asn Asn Asn Ser Asn Phe Ala Trp Thr Gly Ala Thr Lvs Tyr His 500 505 510
Leu Asn Gly Arg Asp Ser Leu Val Asn Pro Gly Val Ala Met Ala Thr 515 520 525
His Lys Asp Asp Glu Glu Arg Phe Phe Pro Ser Ser Gly Val Leu Met 530 535 540
Phe Gly Lys Gin Gly Ala Gly Lys Asp Asn Val Asp Tyr Ser Ser Val 545 SSO 555 SSO
Met Leu Thr Ser Glu Glu Glu Ile Lys Thr Thr A.sn Pro Val A!a Thr 565 570 575
Glu Gin Tyr Gly Val Val Ala Asp Asn Leu Gin Gin Gin Asn Ala Ala 580 585 590
Pro Ile Val Gly Ala Val Asn Ser Gin Gly Ala Leu Pro Gly Met Val 595 600 SOS
Trp Gin Asn Arg Asp Val Tyr Leu Gin Gly Ero Ile Trp Ala Lys Ile 610 615 ' 620
Pro His Thr Asp Gly Asn Phe His Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe S25 630 535 640
Gly Leu Lys His Pro Pro Pro Gin Ile Leu Ile Lys Asn Thr Pro Val 645 650 655
Pro Ala Asp Pro Pro Thr Thr Phe Ser Gin Ala Lys Leu Ala Ser Phe 660 665 670
Ile Thr Gin Tyr Ser Thr Gly Gin Val Ser Val Glu Ile Glu Trp Glu
PL 222 683 B1
229
67s 600 685
Leu Gin Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Ile Gin Tyr Thr
690 695 700
Ser Asn Tyr Tyr Lys Ser Thr Asn Val Asp Phe Ala val Asn Thr Glu
705 710 715 720
Gly Thr Tyr Ser Glu Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg
725 730 735 .Asn Leu <2X0> 85 <211> 738 <212> PRT
<213> : białko kapsydu serotypu AAV, klon 42 .8
<400> 85
Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser
1 5 10 15
Glu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Asp Leu Lys Pro Gly Ala Pro Lys Pro
20 25 30
Lys Ala Asn Gin Gin. Lys Gin Asp Asp Gly Arg Gly Leu Val Leu Pro
35 40 45
Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro
50 55 60
Val Asn Ala Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp
65 70 75 80
Gin Gin Leu Lys Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Arg Tyr Asn His Ala
85 90 95
Asp Ala Glu Phe Gin Glu Arg Leu Gin GlU Asp Thr Ser Phe Gly Gly
100 105 110
Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gin Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro
115 120 125
Leu Gly Leu Val Glu Glu Gly Ala Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg
130 135 140
Pro Val Glu Pro Ser Pro Gin Arg Ser Pro Asp Ser Ser Thr Gly Ile
145 15 0 155 160
230
PL 222 683 B1
Gin
165
Gin Pro Ala
Ł-y a nrg 17 0
Phe Glv 175
Thr Gly Asp Ser Glu Ser Vsl Pro Asp Pro Gin Pro Ile Gly Glu Fro 180 185 150
Pro Ala Gly Pro Ser Gly Leu Gly Ser Gly Thr Met Ala Ala Gly Gly 195 200 205
Gly Ala Pro Met Ala Asp Asn Asn Glu Gly Ala Asp Gly Val Gly Ser 210 215 220
Ser Ser Gly Asn Trp His Cys Asp Ser Thr Trp Leu Gly Asp Arg Val 225 230 23S 240
Ile Thr Thr Ser Thr Arg Thr Trp Ala Leu Pro Thr Tyr Asn Asn Kis 245 250 255
Leu Tyr Lys Gin Ile Ser Asn Gly Thr Ser Gly Gly Ser Thr Asn A.sp 260 265 270
Asn Thr Tyr Phe Gly Tyr Ser Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Asp Pha Asn 275 280 285
Arg Phe His Cy3 His Phe Ser Pro Arg Asp Trp Gin A.rg Leu Ile Asn 290 295 300
Asn Asn Trp Gly Phe Arg Pro Lys Arg· Leu Asn Phe Lys Leu Phe A.sn 305 310 31S 320
Ile Gin Val Lys Glu Val Thr Gin Asn Glu Gly Thr Lys Thr Ile Ala 325 330 335
Asn Asn Leu Thr ser Thr Ile Gin Val Phe Thr Asp Ser Glu Tyr Gin 340 345 350
Leu Pro Tyr Val Leu Gly Ser Ala Kis Gin Gly Cys Leu Pro Pro Phe 355 360 365
Pro Ala Asp Val Phe Met Ile Pro Gin Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn 370 375 380 sti Gly Ser Gin Ala Val Gly Arg Ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr 85 390 395 400
Phe pro Ser Gin Met Leu Arg Thr Gly A.sn Asn Phe Glu Phe Ser Tyr 405 410 415
PL 222 683 B1
231
232
PL 222 683 B1 e Thr Sin Tyr Ser Thr Gly Gin Val Ser Vsl Glu Ile Glu Trp Glu 575 SSO 635 .eu Gin Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Ile Gin Tyr Thr óSO 695 “oo
Ser Asn Tyr Tyr Lys Ser Thr Asn Val Asp Phe Ala Val Asn Thr Glu 705 710 715 720
Gly Thr Tyr Ser Glu Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg '25 730 735
Asn Leu
<210> 36
<211> 733
<212? PRT
<213> białko kapsydu serotypu AAV, klon 42.13
<400> 36
Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser
» 10 15
Glu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Asp Leu Lys Pro Gly Ala Pro Lys Pro 20 25 30
Lys Ala Asn Gin Gin Lys Gin Asp Asp Gly Arg Gly Leu Val Leu Pro 35 40 45
Gly Tyr Łys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro 50 55 60
Val Asn Ala A.la Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Aso S5 70 75 30*
Gin Gin Leu Lys Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Arg Tyr Asn His Ala 35 50 95
Asp Ala Glu Phe Gin Glu Arg Leu Gin Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly 100 105 110
Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gin Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro 115 120 125
Leu Gly Leu Val Glu Glu Gly Ala Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg 130 135 140 '
Pro rle Glu Ser Pro Asp Ser Ser Thr Gly Ile Gly Lys Lys Gly Gin
PL 222 683 B1
233
145 150 155 160
Gin Pro Ala Lys Lys Lys Leu Asn Phe Gly Gin Thr Gly Asp Ser Glu 165 170 173
Ser Val Pro Asp Pro Gin Pro Ile Gly Glu Pro Pro Ala Gly Pro Ser 180 185 190
Gly Leu Gly Ser Gly Thr Met Ala Ala Gly Gly Gly Ala Pro Met Ala 195 200 205
Asp Asn Asn Glu Gly Ala Asp Gly fal Gly Ser Ser Ser Gly Asn Trp 210 215 220
His Cys Asp Ser Thr Trp Leu Gly Asp Arg fal Ile Thr Thr Ser Thr 225 230 235 240
Arg Thr Tro Ala Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His Leu Tyr Lys Gin ile 245 250 255
Ser Asn Gly Thr Ser Gly Gly Ser Thr Asn Asp Asn Thr Tyr Phe Gly 260 265 270
Tyr Ser Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Asp Phe Asn Arg Phe His Cys His 275 280 285
Phe Ser Pro Arg Asp Trp Gin Arg Leu Ile Asn Asn Asn Trp Gly Phe 290 295 300
Arg Pro Lys Arg Łeu Asn Phe Lys Leu Phe Asn Ile Gin Val Lys Glu 305 310 315 320 val Thr Gin Asn Glu Gly Thr Lys Thr Ile Ala Asn Asn Leu Thr Ser 32S 330 335
Thr Ile Gin fal Phe Thr Asp Ser Glu Tyr Gin Leu Pro Tyr fal Leu 340 345 350
Gly Ser Ala His Gin Gly Cys Leu Pro Pro Phe Pro Ala Asp Val Phe 355 360 365
Met Ile Pro Gin Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn Asn Gly Ser Gin Ala 370 375 380 fal Gly Arg Ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe Pro Ser Gin Met 385 390 395 400
Leu Arg Thr Gly Asn Asn Phe Glu Phe Ser Tyr Gin Phe Glu Asp fal
234
PL 222 683 B1
405 410 415
Pro Phe His Ser 420 Ssr Tyr Ala His Ser 425 Gin Ser Leu As? Arg 430 Leu Met
Asn Pro Leu 435 Ile Asp Gin Tyr Leu 440 Tyr Tyr Leu Sar Arg 445 Thr Gin Ser
Thr Gly 450 Gly Thr Ais. Gly mu-. £111. 455 Gin Gin Leu Leu Fhe 460 Ser Gin Ais Gly
?ro 465 Asn Asn Met Ser Ala 470 Gin Ala Lys Asn Trp Leu 475 Pro Gly Pro Cys 480
Tyr Arg Gin Gin Arg fal Ser Thr Thr fal Ser Gin Asn Asn Asn Ser 485 490 495
Asn Phe Ala Trp Thr Gly Ala Thr Lys Tyr His Łeu Asn Gly Arg Asp 500 505 510
Ser Leu fal Asn Pro Gly fal Ala Met Ala Thr His Lys Gly Asp Glu 515 520 525
Glu Arg Phe Phe Pro Ser Ser Gly fal Leu Met Phe Gly Lys Gin Gly 530 535 540
Ala Gly Łys Asp .Asn fal Asp Tyr Ser Ser fal Met Leu Thr Ssr Glu 545 550 555 550
Glu Glu Ile Lys Thr Thr Asn Pro Val Ala Thr Glu Gin Tyr Gly fal 565 570 575 fal A.la Asp Asn Leu Gin Gin Gin Asn Ala Ala Pro Ile Val Gly A.la 580 535 590 fal Asn Ser Gin Gly Ala Leu Pro Gly Met fal Trp Gin A.sn Arg Asp 595 600 605 fal Tyr Leu Gin Gly Pro Ile Trp Ala Lys ile Pro His Thr Asp Gly SIO 615 620 sn Phe His Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe Gly Leu Łys His Pro 25 630 535 640
Pro Pro Gin Ile Leu Ile Lys Asn Thr Pro fal Pro Ala Asp Pro Pro 645 650 655
Thr Thr Phe Ser Sin Ala Lys Leu Ala Ser Phe Ile Thr Gin Tyr Ser 660 665 670
PL 222 683 B1
235
Thr Gly Gin 675 Val Ser Val Glu Ile SSO Glu Trp Glu Leu Gin sas Lys Glu Asn
Ser Lys 690 Arg Trp Asn Pro Glu 695 Ile Gin Tyr Thr Ser 700 Asn Tyr Tyr Lys
Ser 705 Thr Asn Val Asp Phe 710 Ala Val Asn Thr Glu 715 Gly Thr Tyr Ser Glu 720
Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Ser Leu
725 730
<210> 87
<211> 733
<212» PRT
<213> białko kapsydu serotypu AAV, klon 42.3Ά
<400> 87
Met Ala Ala Asp Gly His Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser
10 1S
Glu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Asp Leu Lys Pro Gly Ala Pro Lys Pro 20 25 30
Lys Ala Asn Gin Gin Lys Gin Asp Asp Gly Arg Gly Leu Val Leu Pro 35 40 45
Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro 50 55 60
Val Asn Ala Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp S5 70 75 80
Gin Gin Leu Lys Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Arg Tyr Asn His Ala 85 90 95
Asp Ala Glu Phe Gin Glu Arg Leu Gin Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly 100 105 110
Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gin Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro 115 120 125
Leu Gly Leu Val Glu Glu Gly Ala Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg 130 135 140 ' ~
Pro Ile Glu Ser Pro Asp Ser Ser Thr Gly Ile Gly Lys Lys Gly Gin 145 150 15S 160
Gin Pro Ala Lys Lys Lys Leu Asn Phe Gly Gin Thr Gly Asp Ser Glu
236
PL 222 683 B1
170 175
Ser Tal Pro Asp Pro Gin Pro Ile Gly Glu Pro Pro Ala Gly Pro Ser ISO 185 190
Gly Leu C-ly Ser Gly Thr Met Ala Ala Gly Gly Gly Ala Pro Met Ala 195 200 ' 205
Asp Asn A.sn Glu Gly Ala Asp Gly Tal Gly Ser Ser Ser Gly Asn Trp 210 215 220 '
His Cys Asp Ser Thr Trp Leu Gly Asp Arg Val Ile Thr Thr Ser Thr 225 230 235 240
Arg Thr Trp Ala Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His Leu Tyr Lys Gin Ile 245 250 255
Ser Asn Gly Thr Ser Gly Gly Ser Thr Asn Asp Asn Thr Tyr Phe Gly 260 2Ó5 * 270
Tyr Ser Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Asp Phe Asn Arg Phe Kis Cys His 275 290 285
Phe Ser Pro Arg Asp Trp Gin .Arg Leu Ile Asn Asn Ser Trp Gly Phe 250 295 300 ~ ‘
Arg Pro Lys Arg Leu A.sn Phe Lys Leu Phe Asn Ile Gin Val Lys Glu 305 310 315 320
Tal Thr Gin Asn Glu Gly Thr Lys Thr Ile Ala Asn Asn Leu Thr Ser 325 330 335
Thr Ile Gin Val Phe Thr Asp Ser Glu Tyr Gin Leu Pro Tyr Val Leu 340 345 350
Gly Ser .Ala His Gin Gly Cys Leu Pro Pro Phe Pro A.la A.sp Val Phe 355 360 365
Met Ile Pro Gin Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn Asn Gly Ser Gin Ala 370 375 330
Val Gly Arg Ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe Pro Ser Gin Met 335 390 395 400
Leu Arg Thr Gly Asn Asn Phe Glu Phe Ser Tyr Gin phe Glu Asp val 405 410 415
Pro Phe His Ser Ser Tyr Ala His Ser Gin Ser Leu Asp Arg Leu Met
PL 222 683 B1
237
238
PL 222 683 B1
Ser Lys Arg Trę Asn Pro Glu Ile Gin Tyr Thr Ser Asn Tyr Tyr Lys 690 595 7Ό0
Ser rhr Asn fal Asp Phe Ala Val Asn Thr Glu Gly Thr Tyr Ser C-lu 705 710 715 ' 720
Pro Arg Pro Ile Gly Thr 725
Arg Tyr Leu Thr Arg Asn Leu 730
<210> 33
<211> 731
<212> PRT
<213> bia;
<400> 33
Met Ala Ali
<213? białko kapsydu serotypu ŁAV, klon 42.4
3lu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Asp Leu Lys Pro Gly Ala Pro Lys Pro 20 25 30
Lys Ala Asn Gin Gin Lys Gin Asp Asn Gly Arg Gly Leu fal Leu =ro 3 5 40 45
Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro 50 55 so fal A.sn Glu Ala Asp Ala Ala A.la Leu Glu His i.o Lys Ala Tyr Asp 65 70 75 ' go*
Lys Gin Leu Glu C-ln Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Lys Tyr Asn His Ala 85 90 95
Asp Ala Glu Phe Gin Glu Arg Leu Gin Glu A.sp Thr Ser Phe Gly Gly 100 105 no
Asn Leu Gly Arg Ala fal Phe Gin Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro 115 120 125
Leu Gly Leu fal Glu Glu Gly Ala Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg 130 135 140
Pro Ile Glu Ser Pro Asp Ser Ser Thr Gly Ile Gly Lys Lys Gly Gin 145 ISO 155 160
Gin Pro Ala Lys Lys Lys Leu Asn Phe Gly Gin Thr Gly Asp Ser Glu 163 170 175
PL 222 683 B1
239
240
PL 222 683 B1
Leu Ile Aso Gla Tvr Leu Tyr Tyr Leu Ser Arg Thr Gin Ser Thr Gly 435 ' 440 445 ' ly Thr Ala Gly Thr Gin Gin Leu Leu Phe Ser Gin Ala Giy Pro Asn 450 455 460
Asn Met Ser Ala Gin Ala Lys Asn Trp Leu Pro Gly Pro Cys Tyr Arg 465 470 475 430
Gin Gin Arg Vał Ser Thr Thr Leu Ser Gla Asn Asn Asn Ser Asn Phe 485 490 495
Ala Trp Thr Gly Ala Thr Lys Tyr His Leu Asn Gly Arg Asp Ser Leu 500 SOS 510
Val Asn Pro Gly Val Ala Het Ala Thr His Lys Asp Asp Glu Glu Arg 515 520 525
Phe Pha Pro Ser Ser Gly Val Leu Met Phe Gly Lys Gin Gly Ala Gly 530 535 540
Lys Asp Asn Val Asp Tyr Ser Ser Val Met Leu Thr Ser Glu Glu Glu 545 550 S5S SSO
Ile Lys Thr Thr Asn Pro Val Ala Thr Glu Gin Tyr Gly Val 7al Ala 565 570 375
Asp Asn Leu Gin Gin Gin Asn Ala Ala Pro Ile Val Gly Ala Val Asn 580 585 SSO
Ser Gin Gly Ala Leu Pro Gly Met Val Trp Gin Asn Arg Asp Val Tyr 595 600 505
Leu Gin Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile Pro His Thr Asp Gly Asn Phe SIO 615 620
His Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe Gly Leu Lys His Pro Pro Pro 625 530 635 640
Gin Ile Leu Ile Lys Asn Thr Pro Val Pro Ala Asp Pro Pro Thr Thr 545 650 65S
Phe Ser Gin Ala Lys pro Ala Ser Phe Ile Thr Gin Tyr Ser Thr Gly 660 565 670
Gin Val Ser Tal Glu Ile Glu Trp Glu Leu Gin Lys Glu Asn Ser Lys 675 680 685
PL 222 683 B1
241
Arg Trp Asn Pro 690 Glu Ile Gin Tyr 695 Thr Ser Asn Tyr Tyr 700 Lys Ser Thr
Asn Val Asp Ehe Ala Val Asn Thr Glu Gly Thr Tyr Ser Glu Pro Arg
705 710 715 720
Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Asn Leu
725 730
<210? 89
<2il> 731
<212? PRT
<213? białko kapsydu serotypu AAV, klon 42.5A
<400? 89
Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser
1 5 10 15
Glu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Asp Leu Lys Pro Gly Ala Pro Lys Pro
20 25 30
Lys Ala Asn Gin Gin Lys Gin Asp Asp Gly Arg Gly Leu Val Leu Pro
35 40 45
Gly Tyr Lys T?yr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro
50 55 60
Val Asn Glu Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp
65 ' 70 75 80
Lys Gin Leu Glu Gin Gly Asp Asn Pro Tyr LSU Lys Tyr Asn His Ala
85 90 95
Asp Ala Glu Phe Gin Glu Arg Lau Gin Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly
100 105 110
Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Arg Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro
115 120 125
Leu Gly Leu Val Glu Glu Gly Ala Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg
130 135 14 0
Pro Ile Glu Ser Pro Asp Ser Ser Thr Gly Ile Gly Lys Lys Gly Gin
145 150 155 160
Gin Pro Ala Lys Lys Lys Leu Asn Phe Gly Gin Thr Gly Asp Ser Glu
165 170 175
Ser Val Pro Asp Pro Gin Pro Leu Gly Glu Pro Pro Ala . Ala Pro Ser
242
PL 222 683 B1
ISO Ι3Ξ 190
Gly Leu Gly Ser Gly Thr Met Ala Ala Gly C-ly Gly Ala Pro Met Ala
195 200 205
Asu Asn. Asn Glu Gly Ala Asp Gly Val Gly Asn Ala Ser Gly Asn Trp
210 215 220
His Cys Asp Ser Thr Trp Leu Gly Asp Arg Yal Ile Thr Thr Ser Thr
22Ξ 230 235 240
Arg Thr Trp Ala Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His Leu Tyr Lys Gin Ile
245 250 2S5
Ser Ser Gin Ser Gly Ala Thr Asn Asp Asn His Phe Phe Gly Tyr Ser 260 265 270
Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Asp Phe Asn Arg Phe Eis Cys His Phe Ser 275 280 285
Pro Arg Asp Trp Gin Arg Leu Ile Asn Asn Asn Arg Gly Phe Arg Pro 290 295 300
Arg Lys leu Arg Phe Lys Leu Phe Asn Ile Gin Val Lys Glu Val Thr 305 310 315 320
Thr Asn Asp Gly Yal Thr Thr Ile Ala Asn Asa Leu Thr Ser Thr Ile 325 330 335
Gin Val Phe Ser Asp Ser Glu Tyr Gin Leu Pro Tyr Yal Leu Gly Ser 340 345 350 ’
Ala His Gin Gly Cys Leu Pro Pro Phe Pro Ala Asp Yal Phe Met Ile 355 360 3S5
Pro Gin Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn Asn Gly Ser Gin Ser Val Gly 370 375 380
Arg Ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe Pro Ser Gin Met Leu Arg 385 390 395 łOO
Thr Gly Asn A.sn Phe Glu Phe Ser Tyr Gin Phe Glu Asp Val Pro Phe 405 410 415
His Ser Ser Tyr Ala His Ser Gin Ser Leu Asp Arg Leu Met Asn Pro 420 425 430
Leu Tle Asp Gin Tyr Leu Tyr Tyr Leu Ser Arg Thr Gin Ser Thr Gly 435 440 445
PL 222 683 B1
243
Gly Thr Ala Gly Thr Gin Gin Leu Leu Phe Ser Gin Ala Gly Pro Asn 450 455 460
Asn Met Ser Ala Gin Ala Lys Asn Trp Leu Pro Gly Pro Cys Tyr Arg 465 470 475 4S0
Gin Gin Arg Val Ser Thr Thr Leu Ser Gin Asn Asn Asn Ser Asn Phe 485 490 495
Ala Trp Thr Gly Ala Thr Lys Tyr His Leu Asn Gly Arg Asp Ser Leu 500 505 510
Val Asn Pro Gly Val Ala Met Ala Thr His Lys Asp Asp Glu Glu Arg 515 520 525
Phe Phe Fro Ser Ser Gly Val Leu Met Phe Gly Lys Gin Gly Ala Gly 530 535 540
Lye Asp Asn Val Asp Tyr Ser Ser Val Met Leu Thr Ser Glu Glu Glu 545 550 555 560
Ile Lys Thr Thr Asn Pro Val A.la Thr Glu Gin Tyr Gly Val Ual Ala 565 570 575
Asp Asn Leu Gin Gin Gin Asn Ala Ala Pro Ile Ual Gly Ala Val Asn ' 580 585 590
Ser Gin Gly Ala Leu Pro Gly Met Ala Trp Gin Asn Arg Asp Val Tyr 595 600 SOS
Leu Gin Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile Pro His Thr Asp Gly Asn Phe 610 615 620
His Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe Gly Leu Lys His Pro Pro Pro 625 630 635 640
Gin Ile Leu Ile Lys Asn Thr Pro Val Pro Ala Asp Pro Pro Thr Thr 645 650 655
Phe Ser Gin Ala Lys Leu Ala Ser Phe Ile Thr Gin Tyr Ser Thr Gly 660 665 670
Gin Val Ser Ual Glu Ile Glu Trp Glu Leu Gin Lys Glu Asn Ser Lys 675 630 685
Arg Trp Asn Pro Glu Ile Gin Tyr Thr Ser Asn Tyr Tyr Lys Ser Thr 690 695 700
244
PL 222 683 B1
Asn Val Aso Phe Ala Val Asn Thr Glu Gly Thr Tyr Ser Glu Pro Arg 705 710 715 720
Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Asn Leu 725 730
<210> <211> <212> <213> 90 733 ?ST białko kapsydu serotypu AAV, klon 42.13
<400> 90
Met Al .a Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn. Leu Ser
10 15
Glu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Asp Leu Arg Pro Gly Ala Pro Lys Pro 20 25 30
Lys Ala Asn Gin Gin Lys Gin Asp Asp Gly Arg Gly Leu Val Leu Pro 35 40 45
Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly La u Asp Lys Gly Glu Pro 50 55 60
Tal Asn Glu Ala Asp Ala Ala Ala Lsu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp 55 70 75 SO*
Lys Gin Leu Glu Gin Gly Asp A.sn Pro Tyr Leu Lys Tyr Asa His Ala 35 90 95
Asp Ala Glu Phe C-ln Glu A.rg Leu Gin Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly 100 105 110 ’
Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gin Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro 115 120 125
Leu Gly Leu Val Glu Glu Gly Ala Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg 130 135 140 pro Ile Glu Ser Pro Asp Ser Ser Thr Gly Ile Gly Lys Lys Gly Gin 145 150 155 160
Gin Pro Ala Lys Lys Arg Leu Asn Phe Gly Gin Thr Gly Asp Ser Glu 165 170 175
Ser Val Pro Asp Pro Gin Pro Ile Gly Glu Pro Pro A.la Gly Pro Ser ISO 165 ISO
Gly Leu Gly Ser Gly Thr Met Ala Ala Gly Gly Gly Ala Pro Met Ala
PL 222 683 B1
245
193 200
Asp Asn Asn Glu Gly Ala Asp Gly
210 215
His Cys Asp Ser Thr Trp Leu Gly
225 230
Arg Thr Trp Ala Leu Pro Thr Tyr
245
Ser Asn Gly Thr Ser Gly Gly Ser 260
Tyr Ser Thr Pro Trp Gly Tyr Phe 275 280
Phe Ser Pro Arg Asp Trp Gin Arg 290 295
205
fal Gly Ser Ser Ser Gly Asn Trp
220
Asp Arg Val Ile Thr Thr Ser Thr
235 240
Asn Asn His Leu Tyr Lys Gin Ile
250 255
Thr Asn Asp Asn Thr Tyr Phe Gly
26S 270
ASO Phe Asn Arg Phe His Cys His
285
Leu Ile Asn Asn Asn Trp Gly Phe
300
Arg Pro Lys Arg Leu Asn Phe Lys 305 310
Leu Phe Asn Ile Gin Val Lys Glu 315 320 fal Thr Gin Asn Glu Gly Thr Lys 325
Thr ile Ala Asn Asn Leu Thr Ser 330 335
Thr Ile Gin fal Phe Thr Asp Ser 340
Glu Tyr Gin Leu Pro Tyr fal Leu 345 350
Gly Ser Ala His Gin Gly Cys Leu 355 360
Pro Pro Phe Pro Ala Asp Val Phe 365
Met ile Pro Gin Tyr Gly Tyr Leu 370 375
Thr Leu Asa Asn Gly Ser Gin Ala 380 fal Gly Arg Ser Ser Phe Tyr Cys 385 390
Leu Glu Tyr Phe Pro Ser Gin Met 395 400
Leu Arg Thr Gly Asn Asn Phe Glu 405
Phe Ser Tyr Gin Phe Glu Asp fal 410 415
Pro Phe His Ser Ser Tyr Ala His 420
Ser Gin Ser Leu Asp Arg Leu Mat 425 430
Asn Pro Leu Ile Asp Gin Tyr Leu 435 440
Tyr Tyr Leu Ser Arg Thr Gin Ser 445
Thr Gly Gly Thr Ala Gly Thr Gin 450 455
Gin Leu Leu Phe Ser Gin Ala Gly 460
246
PL 222 683 B1
Pro Asn Asn Met Ser Ala Gin Ala Lys Asn Trp Leu Pro Gly Pro cys 465 470 475 4S0
Tyr Arg Gin Gin Arg fal Ser Thr Thr fal Ser Gin Asn Asn Asn Ser 4S5 450 435
Asn Phe Ala Trp Thr Gly Ala Thr Lys Tyr His Łeu Asn Gly Arg Asp 500 505 510
Ser Leu fal Asn Pro Gly fal Ala Met Ala Thr His Lys Gly Asp Glu 515 * 520 525
Glu Arg Phe Phe Pro Ser Ser Gly fal Leu tMec Phe Gly Lys Gin Gly 530 535 540
Ala Gly Lys Asp Asn fal Asp Tyr Ser Ser fal Met Leu Thr Ser Glu 545 SSO 555 560
Glu Glu Ile Lys Thr Thr Asn Pro Val Ala Thr Glu Gin Tyr Gly fal 565 570 575 fal Ala Asp Asn Leu Gin Gin Gin A.sn Ala Ala Pro ile Val Gly Ala 5S0 535 530 fal Asn Ser Gin Gly Ala Leu Pro Gly Met fal Trp Gin Asn Arg Asp 335 600 605 fal Tyr Leu Gin Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile Pro His Thr Asp Gly 610 615 620
Asn Phe His Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe Giy Leu Lys His Pro 625 630 535 640
Pro Pro Gin Ile Leu Ile Lys A.sn Thr Pro fal Pro Ala Asp Pro Pro 645 650 655
Thr Thr Phe Ser Gin A.la Lys Leu A.la Ser Phe Ile Thr Gin Tyr Ser 660 665 670
Thr Gly Cln fal Ser fal Glu Ile Glu Trp Glu Leu Gin Lys Glu Asn 675 680 535
Ser Lys Arg Trp A.sn Pro Glu Ile Gin Tyr Thr Ser Asn Tyr Tyr Lys 590 695 700
Ser Thr Asn Val Asp Phe Ala Val Asn Thr Glu Gly Thr Tyr Ser Glu 705 710 715 720
PL 222 683 B1
247
Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Asn Leu 725 730 <210? 91 <211» 73S <212» PRT <213» białko kapsydu serotypu AAV, klon 42.5B
<400» 91 Leu Pro Asp Trp 10 Leu. Glu Asp Asn Leu 15 Ser
Met 1 Ala Ala Asp Gly 5 Tyr
Glu Gly Ile Arg Glu 20 Trp Trp Asp Leu 25 Lys Pro Gly Ala Pro 30 Lys Pro
Lys Ala Asn 35 Gin Gin Lys Gin Asp 40 Asp Gly Arg Gly Leu 45 Val Leu Pro
Gly Tyr 50 Lys Tyr Leu Gly Pro Phe 55 Asn Gly Leu Asp 60 Lys Gly Glu Pro
Val 55 Asn Glu Ala Asp Ala 70 Ala Ala Leu Glu His 75 Asp Lys Ala Tyr Asp SO
Lys Gin Leu Glu Gin as Gly Asp Asn Pro Tyr 90 Leu Lys Tyr Asn His 95 Ala
Asp Ala Glu Phe Gin 100 Glu Arg Leu Gin 105 Glu Asp Thr Ser Phe 110 Gly Gly
Asn Leu Gly 115 Arg Ala Val Phe Gin 120 Ala Lys Lys Arg Val 125 Leu Glu Pro
Leu Gly 130 Leu val Glu Glu C-ly Ala 135 Lys Thr Ala Pro 140 Gly Lys Lys Arg
Pro 145 Val Glu Pro Ser Pro 150 Gin Arg Ser Pro Asp 155 Ser Ser Thr Gly Ile 160
Gly Lys Thr Gly Gin 165 Gin Pro Ala Lys Lys 170 Arg Leu Asn Phe Gly 175 Gin
Thr Giy Asp Ser Glu ISO Ser Va1 Pro Asp 18S Pro Gin Pro Ile Gly 190 Glu Pro
Pro Ala Gly 195 Pro ser Gly Leu Gly 200 Ser Gly Thr Met Ala 205 Ala Gly Gly
Gly Ala 210 Pro Met Ala Asp Asn Asn 215 Glu Gly Ala Asp 220 Gly Val Gly Ser
Ser Ser Gly Asn Trp His Cys Asp Ser Thr Trp Leu Gly Asp Arg val
248
PL 222 683 B1
230 235 240
Thr Thr Ser Thr Arg Thr Trp Ala Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His
24 5 250 255
Tyr Lys Gin Ile Ser AS Π Gly Thr Ser Gly Ser Thr Asn Asę
260 265 270
Thr Tyr Phe Gly Tyr Ser Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Asp Phe Asn
275 280 2SS
Phe His Cys His Phe Ser Fro Arg Asp Trp Gin Arg Leu Ile Asn
2 90 295 300
Asn Trp Gly Phe Arg Pro Lys Arg Leu Asn Phe Lys Leu Phe Asn
305 310 315 320
Ile Gin Ual Lys Glu Val Thr Gin Asn Glu Gly Thr Lys Thr Ile Ala 323 330 * 335
Asn Asn Leu Thr Ser Thr Ile Gin Val Fhe Thr Asp Ser Glu Tyr Gin 340 345 350
Leu Pro Tyr Val Leu Gly Ser Ala His Gin Gly Cys Leu Pro Pro Phe 355 360 365
Pro Ala Asp Val Phe Met Ile Pro Gin Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn 370 375 ' 330
Asn Gly Ser Gin Ala Ual Gly Arg Ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr 385 330 395 400
Phe Pro Ser Gin. Met Leu Arg Thr Gly Asn Asn Phe Glu Phe Ser Tyr 405 410 415
Gin Phe Glu Asp Val Pro Phe His Ser Ser Tyr Ala Kis Ser Gin Ser 420 425 430
Leu Asp Arg Leu Met A.sn pro Leu Ile Asp Gin Tyr Leu Tyr Tyr Leu 435 440 445
Ser Arg Thr Gin Ser Thr Gly Gly Thr Ala C-ly Thr Gin Gin Leu Leu 450 435 460
Phe Ser Gin. Ala Gly Pro Asn Asn Met Ser Ala Gin Ala Lys Asn Trp 465 470 475 430
Leu Pro Gly Pro Cys Tyr Arg Gin Gin Arg Val Ser Thr Thr Leu Ser 485 430 493
PL 222 683 B1
249
250
PL 222 683 B1 <210? 32 <211? 728 <212? ?RT <213? białko kapsydu serotypu AAV, klon 43.1 <400? 92
Mat Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn. Leu Ser 15 10 15 lu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Asp Leu Lys Pro Gly Ala Pro Lys Pro 20 25 30
Lys Ala Asn Gin Gin Lys Gin Asp Asp Gly Arg Gly Leu Val Leu Pro 35 40 45
Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro 50 55 60 ' '
Val Asn Ala Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp 65 70 75 8θ
Gin Gin Leu Lys Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Arg Tyr Asn His A.la 85 90 95
Asp Ala Glu Phe Gin Glu Arg Leu Gin Glu A_sp Thr Ser Phe Gly Gly 100 105 110
Asn. ueu Gly Arg A.la Val Phe Gin Ala Lys Lys Arg Val Leu. Glu Pro 115 120 125
Leu Gly Leu Val Glu Glu Gly Ala Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg 130 135 140
Pro Val Glu Pro Ser Pro Gin Arg Ser Pro Asp Ser Ser Thr Gly Ile 145 150 155 160
Glv Lys Lys Gly His Gin Pro Ala Arg Lys Arg Leu Asn Phe Gly Gin 163 170 175
Thr Gly Asp Ser Glu Ser Val Pro Asp Pro Gin Pro Ile Gly Glu Pro 130 135 190
Pro Ala Gly Pro Ser Gly Leu Gly Ser Gly Thr Met Ala Ala Gly Gly 193 200 205
Gly Ala Pro Met Ala Asp Asn Asn Glu Gly Ala Asp Gly Val Gly Ser 210 215 220
Ser Ser Gly Asn Trp His Cys Asp Ser Thr Trp Leu Gly Asp Arg Val 225 230 235 240
PL 222 683 B1
251 ile Thr Thr Ser Thr Arg Thr Trp 245
Leu Tyr Lys Gin Ile Ser Asn Gly 260
Ala Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His 250 255
Thr Ser Gly Gly Ser Thr Asn Aso 265 270
Asn Thr Tyr Phe Gly Tyr Ser Thr 275 280
Arg Phe His Cys His Phe Ser Pro 290 295
Pro Trp Gly Tyr Phe Asp Phe Asn 285
Arg Asp Trp Gin Arg Leu Ile Asn 300
Asn Asn Trp Gly Phe Arg Pro Lys 305 110
Arg Leu Asn Phe Lys Leu Phe Asn 313 320
Ile Gin Val Lys Glu Val Thr Gin 325
Asn Glu Gly Thr Lys Thr Ile Ala 330 335
Asn Asn Leu Thr Ser Thr Ile Gin 340
Val Phe Thr Asp Ser Glu Tyr Gin 343 350
Leu Pro Tyr Val Pro Gly Sar Ala 355 360
His Gin Gly Cys Leu Pro Pro Phe 365
Pro Ala Asp Val Phe Met Tle Pro 370 375
Gin Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn 380
Asn Gly Ser Gin Ala Val Gly Arg 385 390
Ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr 39S 400
Phe Pro Ser Gin Met Leu Arg Thr 405
Gly Asn Asn Phe Glu Phe Ser Tyr 410 415
Thr Phe Glu Asp Val Pro Phe His 420
Ser Ser Tyr Ala His Ser Gin Ser 425 430
Leu Asp Arg Leu Met Asn Pro Leu 435 440
Ile Asp Gin Tyr Leu Tyr Tyr Leu 445
Ser Arg Thr Gin Ser Thr Gly Gly 450 455
Thr Gin Gly Thr Gin Gin Leu Leu 4 60
Phe Ser Gin Ala Gly Pro Ala Asn 465 470
Met Ser Ala Gin Ala Lys Asn Trp 475 480
Leu Pro Gly Pro Cys Tyr Arg Gin 485
Gin Asn Asn Asn Ser Asn Phe Ala
Gin Arg Val Ser Thr Thr Leu Ser 490 495
Trp Thr Gly Ala Thr Lys Tyr His
252
PL 222 683 B1
5 00 505 ?I0
leu Asn C-ly 515 Arg Asp ser Leu Vai 520 Asn Pro Glv fal Ala 525 Met Ala Thr
His Lys 530 Asp Asp Glu Glu Arg 535 Ph.2 Phe Pro Ser Ser Gly 540 Val Leu Met
Phe Gly Lys Gin Gly Ala 550 Gly Lys Asp Asn fal 555 Asp Tyr Ser Ser fal 560
Met Leu Thr Ser Glu 5 65 Glu Glu Ile Lys Thr Thr 570 Asn pro fal Ala 375 Thr
Glu Gin Tyr Gly 580 Val fal Ala Asp Asn 585 Leu Gin Gin Thr Asn 590 Gly Ala
Pro Ile Val Gly Thr Val Asn Ser Gin Gly Ala Leu Pro Gly Met Val S95 SOO SOS
Trp Gin Asn. Arg Asp Val Tyr Leu Gin Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile SIO 615 620 '
Pro His Thr Asp Gly Asn Phe His Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe 625 630 635 640
Gly Leu Lys His Pro Pro Pro Gin Ile Leu Val Lys Asn Thr Pro Val 645 650 655
Pro Ala Asp Pro Pro Thr Thr Phe Ser Gin Ala Lys Leu A.la Ser Phe 660 665 670
Ile Thr Gin Tyr Ser Thr Gly Gin Val Ser fal Glu ile Glu Trp Glu 675 600 635
Leu Gin Lys Glu A.sn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Ile Gin Tyr Thr 690 695 700
Ser Asn Tyr Tyr Lys Ser Thr Asn fal Asp Phe Ala fal Asn Thr Glu 705 710 715 720
Gly Thr Tyr Ser Glu Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr 725 730
Leu Thr Arg 735
A.sn Leu <210? 93 <211? 733 <212? PET
PL 222 683 B1
253
254
PL 222 683 B1
Ile Thr Thr Ser Thr 245 Arg Thr Trn Ala Leu 250 Pro Thr Tyr Asn Asn 255 His
Leu Tyr Lys Gin 260 Ile Ser Asn Gly Thr 265 Ser Gly Gi V Ser Thr 270 Asn Asp
Asn Thr Tyr 275 Phe Gly Tyr Ser Thr 280 Pro Trp Gly Tyr Phe 2S5 Asp Phe Asn
Arg Phe 290 His Cys His Phe Ser 295 Pro Arg Asp Trp Gin 300 Arg Leu Ile Asn
Asn Asn Trp Gly Phe Arg Pro Lys Arg Leu Asn Phe Lys Leu Phe Asn
305 310 315 320
Ile Gin Yal Lys Glu Val Thr Gin Asn Glu Gly Thr Lys Thr Ile Ala 325 330 335
Asn Asn Leu Thr Ser Thr Ile Gin Yal Phe Thr Asp ser Glu Tyr Gin 340 345 350
Leu Pro Tyr Yal Leu Gly Ser Ala His Gin Gly Cys Leu Pro Pro Phe 355 360 365
Pro Ala Asu Val Phe Met Ile Pro Gin Tyr Gly Tyr Leu Thr Lsu Asn 370 375 330
Asn Gly Ser Gin Ala Yal Gly Arg Ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr 335 390 395 400
Phe Pro Ser Gin Met Leu Arg Thr Gly Asn Asn Phe Glu Phe Ser Tyr 405 410 415
Thr Phe Glu Asp Yal Pro Phe Kis Ser Ser Tyr Ala His Ser Gin Ser 420 425 430
Leu Asp Arg Leu Met Asn Pro Leu Ile Asp Gin Tyr Leu Tyr Tyr Leu 435 440 445
Ser Arg Thr Gin Ser Thr Gly Gly Thr Gin Gly Thr Gin Gin Leu Leu 450 455 460
Phe Ser Gin Ala Gly Pro Ala Asn Met Ser Ala Gin Ala Lys Asn Trp 465 470 475 480
Leu Pro Gly Pro Cys Tyr Arg Gin Gin Arg Yal Ser Thr Thr Leu Ser 485 490 495
PL 222 683 B1
255
256
PL 222 683 B1
<21C> 34
<21I> 7 3 S
<2I2> PRT
<213> białko kapsydu serotypu AAV, klon 43.5
<400> 34
Met Al a Ala Asp Gly Tyr Leu pro Aso Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser
15
Glu Gly 11ε Arg Glu Trp Trp Asp Leu Lys Pro C-ly Ala Pro Lys Pro 20 25 30
Lys Ala Asn Gin Gin Lys Gin. Asp Asp Gly Arg C-ly Leu Val Leu Fro 35 40 45
Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro 50 55 50
7al Asn Ala Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu Kis Asp Lys Ala Tyr Aso 55 70 75 80
Gin Gin Leu Lys Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Arg Tyr Asn His Ala 85 90 95
Asp Ala Glu Phe Gin Glu Arg Leu Gin Glu Asp Thr Sar Phe Gly Gly 4.00 105 110
Asn Leu Gly .Ara Ala Val Phe Gin Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro 115 120 125
Leu Gly Leu Val Glu Glu Gly Ala Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg 130 135 140
Pro Val Glu Pro Ser Pro Gin Arg Ser Pro Asp Ser Ser Thr Gly Ile 145 150 155 160
Gly Lys Lys Gly His Gin Pro Ala Arg Lys Arg Leu Asr. Phe Gly Gin 165 170 175
Thr Gly Asp Ser Glu Ser Val Pro A.sp Pro Gin Pro Ile Gly Glu Pro ISO 185 ISO
Pro Ala C-ly Fro Ser Gly Leu Gly Ser Gly Thr Met Ala Ala Gly Gly 195 200 205
Gly Ala Pro Met A.la Asp Asn Asn Glu Gly Ala Asp Gly Val Gly Ser 210 215 220
3sr Ser Gly Asn Trp His Cys Asp Ser Thr Trp Leu Gly Asp Arg Val 225 230 235 240
PL 222 683 B1
257
258
PL 222 683 B1
Gin Asn Asn Asn Ser Asn Phe Ala Trp Thr Gly Ala Thr Lvs Τ'/r His 500 505 510 ‘
Leu Asn Gly Arg Asą Ser Leu Val Asn Pro Gly Val Ala Met Ala Thr 5X5 520 525
His Lys Asp Asp Glu Glu Arg Phe Phe Pro Ser Ser Gly Val Leu Met 530 535 540
Phs Gly Lys C-ln Gly Ala Gly Lys Asp Asn Val Asp Tyr Ser Ser Val 545 550 555 5S0
Met Leu Thr Ser Glu Glu Glu Ile Lys Thr Thr Asn Pro Val Ala Thr 565 570 575
Glu Gin Tyr Gly Val Val Ala Asp Asn Leu Gin Gin Thr Asn Gly Ala 580 585 590
Pro He val Gly Thr Val Asn Ser Gin Gly Ala Leu Pro Gly Met '/al 595 500 605
Trp Gin Asn Arg Asp Val Tyr Leu Gin Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile SIO 615 620
Pro His Thr Asp Gly Asn Phe Kis Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe 625 530 635 640
Gly Leu Lys His Pro Pro Pro Gin Ile Leu Val Lys Asn Thr Pro Val 645 650 655
Pro Ala Asp Pro Pro Thr Thr Phe Ser Gin Ala Lys Leu Ala Ser Phe 660 665 670
Ile Thr Gin Tyr Ser Thr Gly Gin Val Ser Val Glu Ile Glu Tm Glu 675 680 685 '
Leu Gin Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Prc Glu Ile Gin Tyr Thr 550 695 700 ’
Ser Asn Tyr Tyr Lys Ser Thr Asn Val Asp Phe Ala Val Asn Thr Glu 705 710 715 720
Gly Thr Tyr Ser Glu Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg 725 733 735
Asn Leu
PL 222 683 B1
259 <210? 95 <211? 733 <212? PRT <213? białko kapsydu serotypu AAV, klon AAVS <400? 95
Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser 15 10 15
Glu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Ala Leu Lys Pro Gly Ala Pro Lys Pro 20 25 30
Lys Ala Asn Gin. Gin Lys Gin Asp Asp Gly Arg Gly Leu Val Leu Pro 35 40 45
Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro 50 55 S0 fal Asn Ala Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp 65 70 75 80
Gin Gin Leu Gin Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Arg Tyr Asn His Ala 85 90 95
Asp Ala Glu Phe Gin Glu Arg Leu Gin Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly 100 105 110
Asn Leu Gly Arg Ala fal Phe Gin Ala Lys Lys Arg fal Leu Glu Pro 115 120 125
Leu Gly Leu fal Glu Glu Gly Ala Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg 130 13E 140
Pro fal Glu Pro Ser pro Gin Arg Ser Pro Asp Ser Ser Thr Gly Ile 145 150 155 160
Gly Lys Lys Gly Gin Gin Pro Ala Arg Lys Arg Leu Asn Phe Gly Gin 165 170 175
Thr Gly Asp ser Glu Ser fal Pro Asp Pro Gin Pro Leu Gly Glu Pro 180 185 190
Pro Ala Ala Pro Ser Gly fal Gly Pro Asn Thr Met Ala Ala Gly Gly 195 200 205
Gly Ala Pro Met Ala Asp Asn Asn Glu Gly Ala Asp Gly fal Gly Ser 210 215 220
Ser Ser Gly Asn Trp His Cys Asp Ser Thr Trp Leu Gly Asp Arg Val
260
PL 222 683 B1
230 235 240 le Thr Thr Ser Thr Arg Thr Trp Ala Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His 245 250 255 >eu Tyr Lys Gin Ile Ser Asn Gly Thr Ser Gly Gly Ala Thr Asn Asp 2S0 265 270
Asn Thr Tyr Phe Gly Tyr Ser Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Asp Phe Asn 275 280 235
Arg Phe His Cys His Phe Ser Pro Arg Asp Trp Gin Arg Leu Ile Asn 290 295 300
Asn Asn Trp Gly Phe Arg Pro Lys Arg Leu Ser Phe Lys Leu Phe Asn 305 310 315 320
Ile Gin Val Lys Glu Val Thr Gin Asn Glu Gly Thr Lys Thr Ile Ala 325 330 335
Asn Asn Leu Thr Ser Thr Ile Gin Val Phe Thr Asp Ser Glu Tyr C-ln 340 345 350
Leu Pro Tyr Val Leu Gly Ser Ala His Gin Gly Cys Leu Pro Pro Phe 355 350 365
Pro Ala Asp Val Phe Met Ile Pro Gin Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn 370 375 3S0
Asn Gly Ser Gin A.la Val Gly Arg Ser ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr 335 390 395 400
Phe Pro Ser Gin Met Leu Arg Thr Gly Asn Asn Phe Gin Phe Thr Tyr 405 410 415
Thr Phe Glu Asp Val Pro Phe His Ser Ser Tyr Ala Hia Ser Gin Ser 420 425 430
Leu Asp Arg Leu Met Asn Pro Leu Ile Asp Gin Tyr Leu Tyr Tyr Leu 435 440 445
Ser Arg Thr Gin Thr Thr Gly Gly Thr A.la Asn Thr Gin Thr Leu Gly 450 455 460
Phe Ser Gin Gly Gly Pro Asn Thr Met Ala Asn Gin Ala Lys A.sn Trp 465 470 475 430
PL 222 683 B1
261
262
PL 222 683 B1
Asn Leu <210» 96 <211> 736 <212» ??.T <213> białko kapsydu serotypu AAU, klon 43.21 <400» 96
Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser 15 10 15
Glu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Asp Leu Lys Pro Gly Ala Pro Lys Pro 20 *25 30
Lys Ala Asn Gin Gin Lys Gin Asp Asp Gly Arg Gly Leu Val Leu Pro
35 40 45
Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro
50 55 60
Ual Asn Ala Al a Asp Ala Ala Ala Leu C-lu His Asp Lys Ala Tyr Asp
65 70 75 ao
c-m Gin Leu Lys Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Arg Tyr A-Sn. His Ala
35 30 95
Asp Ala Glu Phe Gin Glu Arg Leu Gin Glu Asp Thr Ser Pha Gly Gly
100 105 110
Asn Leu Gly Arg A.la Ual phe Gir. Ala Lys Lys Arg Ual Leu Glu Fro
115 120 125
Leu Gly Leu Val Glu Glu Gly Ala Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg
130 135 140
Pro Ual Glu Gin Ser Pro Gin Glu Pro Asp Ser Ser Ser Gly Ile Gly
145 150 155 160
Lys Thr Gly Gin Gin Pro Ala Lys Lys Arg Leu Asn Phe Gly Gin Thr
165 170 175
Gly Asp Ser Glu Ser Ual Pro Asp Pro Gin Pro Leu Gly Glu Pro Pro 130 195 190
Ala Ala Pro Ser Gly Leu Gly Pro Asn Thr Met Ala Ser Gly Gly Gly 195 200 205
PL 222 683 B1
263
Ala Pro Met Ala 210
Asp Asn Asn Glu Giy Ala A.sp Gly Val Gly Asn Ser 215 220
Ser Gly Asn Trp 225
His Cys Asp Ser Thr Trp 230
Leu Gly Asp Arg Val Ile 235 240
Thr Thr Ser Thr
Arg Thr Trp Ala Leu Pro 245 250
Thr Tyr Asn Asn His Leu 255
Tyr Lys Gin Ile 260
Ser Asn Gly Thr Ser Gly 2S5
Gly Ser Thr Asn Asp Asn 270
Thr Tyr Phe Gly 275
Tyr Ser Thr Pro Trp Gly 280
Tyr Phe Asp Phe Asn Arg 285
Phe His Cys His 2 90
Phe Ser Pro Arg Asp Trp 2 95
Gin Arg Leu Ile Asn Asn 300
Asn Trp Gly Phe 305
Arg Pro Lys Arg Leu Asn 310
Phe Lys Leu Phe Asn Ile 315 320
Gin fal Lys Glu
Val Thr Thr Asn Glu Gly 325 330
Thr Lys Thr Ile Ala Asn 335
Asn Łeu Thr Ser 340
Thr fal Arg fal Phe Thr 345
Asp Ser Glu Tyr Gin Leu 350
Pro Tyr fal Leu 355
Gly Ser Ala His Gin Gly 360
Cys Leu Pro Pro Phe Pro 365
Ala Asp Val Phe 370
Met Val Pro Gin Tyr Gly 375
Tyr Leu Thr Leu Asn Asn 380
Gly Ser Gin Ala 3SS
Leu Gly Arg Ser Ser Phe 390
Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe 395 400
Pro Ser Gin Met
Leu Arg Thr Gly Asn Asn 405 410
Phe Gin Phe Ser Tyr Thr 415
Phe Glu Asp Val 420
Pro Phe His Ser Ser Tyr 425
Ala Hio Ser Gin Ser Leu 430
Asp Arg Leu Met 435
Asn Pro Leu Ile Asp Gin 440
Tyr Leu Tyr Tyr Leu Val 445
Arg Thr Gin Thr 450
Thr Gly Thr Gly Gly Thr 455
Gin Thr Leu Ala Phe Ser 460
264
PL 222 683 B1
Gin 455 Ala Gly Pro Ser Ser 470 Met Ala Asn Gin Αλ,μ 475 Arg Asn Trp Vsl Pro 480
Gly Pro Cys Tyr Arg Gin 4 35 C-ln Arg Val Ser 490 Thr Thr Thr Asn Gin 495 Ser
Asn Asn Ser Asn 500 Phe Ala Trp Thr Gly Ala 505 Ala Lys Phe Lys 510 Leu Asn
Gly Arg Asp 515 Ser Leu Met Asn ?ro 520 Gly fal Ala Met Ala 525 Ser His Lys
Asp Asp 530 Asp Asp Arg Phe Phe 535 Pro Ser Ser Gly Val Leu 540 Ile Phe Gly
Lys Gin Gly Ala Gly Asn Asp Gly Val Asp Tyr Ser Gin Val Leu Ile
545 550 555 560
Thr Asp Glu Glu Glu Ile Lys Ala Thr Asn Pro fal Ala Thr Glu Glu * 565 570 575
Tyr Gly Ala fal Ala Ile Asa Asn. Gin Ala Ala Asn Thr Gin Ala Gin 580 585 590
Thr Gly Leu fal His Asn Gin Gly Val Ile Pro Gly Met fal Trp Gin 595 600 605 .sn Arg Asp fal Tyr Leu Gin Gly Pro Ile Trp Ala lys Ile Pro His 610 615 620
Thr Asp Gly Asn. Phe His Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe Gly Leu 625 530 535 640
Lys His Pro Pro Pro Gin Ile Leu Ile Lys Asn Thr Pro Val Pro Ala 645 650 6Ξ5
Asp Pro Pro Leu Thr Phe Asn Gin Ala Lys Leu Asn Ser Phe Ile Thr 560 6SS 570
Gin Tyr Ser Thr Gly Gin fal Ser fal Glu Ile Glu Trp Glu Leu Gin 675 630 685
Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Ile Gin Tyr Thr ser Asn 690 695 700
Tyr Tyr Lys Ser Thr Asn Val Asp Phe Ala fal A3n Thr Glu Gly fal 705 710 715 720
PL 222 683 B1
265
Tyr Ser Glu Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Asn Leu ’ 725 730 735 <210> 97 <211> 736 <212> PRT <213> białko kapsydu serotypu AAV, klon 43.25 <400» 97
Met 1 Ala Ala Asp Gly 5 Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser
10 15
Glu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Asp Leu Lys Pro Gly Ala Pro Lys Pro
20 25 30
Lys Ala Asn Gin Gin Lys Gin Asp Asp Gly Arg Gly Leu Val Leu Pro
35 40 45
Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro
50 55 60
Val Asn Ala Ala Asp Ala Ala ^4 1. Leu Glu Kis Asp Lys Ala Tyr Asp
65 70 75 30
Gin Gin Leu Lys Ala Gly Asp rrSil Pro Tyr Leu Arg Tyr Asr. His Ala
85 90 95
Asp Ala Glu Phe Gin Glu Arg Leu Gin Glu Asp Thr ser Phe Gly Gly
100 105 110
Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gin Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro
115 120 125
Leu Gly Leu Val Glu Glu Gly Ala Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg
130 135 140
Pro Val Glu Gin Ser Pro Gin Glu Pro Asp ser Ser ser Gly Ile Gly
145 ISO 155 160
Lys Thr Gly Gin Gin Pro Al a Lys Lys Arg Leu Asn Phe Gly Gin Thr
165 170 175
Gly Asp Ser Glu Ser Val Pro Asp Pro Gin Pro Leu Gly Glu Pro Pro
180 135 190
Ala Ala Pro Ser Gly Leu Gly Pro Asn Thr Met Ala Ser Gly Gly Gly
195 200 205
Ala Pro Met Ala Asp Asn Asn Glu Gly Ala Asp Gly Val Gly Asn Ser
210 215 220
266
PL 222 683 B1
Ser Gly Asn Trp His Cys Asp Ser Thr Trp Leu Gly Asp Arę Val Tle 225 ’ ' 230 235 210
Thr Thr Ser Thr Arg Thr Trp Ale Leu Prc Thr Tyr Asn Asn His Leu 245 250 255
Tyr Lys Gin. Tle Ser Asn. Gly Thr Ser Gly Gly Ser Thr Asn Asp Asn 250 255 270
Thr Tyr Phe Gly Tyr Ser Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Asp Fhe Asn Arg 275 2S0 2S5
Phe His Cys His Phe Ser Pro Arg Asp Trp Gin Arg Leu Tle Asn Asn. 290 295 300
Asn Trp Gly Phe Arg Pro Lys Arg Lau Asn Phe Lys Leu Phe Asn Tle 30S 310 315 320
Gin Val Lys Glu Val Thr Thr Asn Glu Gly Thr Lys Thr ±le Ala Asn ’ 32S 330 335 .su Leu Thr Ser Thr Val Gin Val Phe Thr Asp Ser Glu Tyr Gin Leu 340 345 350
Pro Tyr Val Leu Gly Ser Ala His Gin Gly Cys Leu Pro Pro Phe Pro 355 350 365
Ala A.sp Val Phe Met Val Pro Gin Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn Asn 370 375 380 □ly Ser Gin Ala Leu Gly Arg Ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe 385 390 395 400
Pro Ser Gin Met Leu Arg Thr Gly Asn Asn. Phe Gin Phe Ser Tyr Thr 405 410 415
Phe Glu Asp Val Pro Phe His Ser Ser Tyr Ala His Ser Gin Ser Leu 420 425 430
Asd Arg Leu Met Asn Pro Leu Tle Aep Gin Tyr Leu Tyr Tyr Leu 7al 435 440 445
Arg Thr Gin Thr Thr Gly Thr Gly Gly Thr Gin Thr Leu Ala Phe Ser 450 453 460
Gin Ala Gly Pro Ser Ser Met Ala Asn Gin Ala Arg Asn Trp Val Pro 465 470 475 430
PL 222 683 B1
267
Gly Pro Cys Tyr Arg Gin Gin Arg Val Ser Thr Thr Thr Asn. Gin Asn 435 490 495
Asn Asn Ser Asn Phe Ala Trp Thr Gly Ala Ala Lys Phe Lys Leu Asn 500 505 510
Gly Arg Aso Ser Leu Met Asn Pro Gly Val Ala Met Ala Ser His Lys
515 520 525
Asp Aso Aso Aso 53 0 Arg Phe Phe Pro Ser Ser Giy Val Leu Ile Phe Gly 535 540
Lys Gin Gly Ala 545 Gly Asn Asp Gly Val Asp Tyr Ser Gin Val Leu Ile 550 555 560
Thr Asp Glu Glu Glu Ile Lys Ala Thr Asn Pro Vał Ala Thr Glu Glu 565 570 575
Tyr Gly Ala Val 580 Ala Ile Asn Asn Gin Ala Ala Asn Thr Gin Ala Gin 585 590
Thr Gly Leu Vał 5 95 His Asn Gin Gly Vai Ile Pro Gly Mat Val Trp Gin 600 SOS
Asn Arg Asp Val SIO Tyr Leu Gin Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile Pro His 615 620
Thr Asp Gly Asn 625 Phe His Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe Gly Leu 630 635 640
Lys His Pro Pro Pro Gin Ile Leu Ile Lys Asn Thr Pro Val Pro Ala 645 650 655
Asp Pro Pro Leu 650 Thr Phe Asn Gin Ala Łys Leu Asn Ser Phe Ile Thr 665 670
Gin Tyr Ser Thr 675 Gly Gin Val Ser Val Glu Ile Glu Trp Glu Leu Gin 680 685
Lys Glu Asn Ser 690 Lys Arg Trp Asn Pro Glu Ile Gin Tyr Thr Ser Asn 695 700
Tyr Tyr Lys Ser Thr Asn Val Asp Phe Ala Val Asn Thr Glu Gly Val
705 710 715 720
Tyr Ser Glu Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Asn Leu
725 730 735
268
PL 222 683 B1
<210> <211> <212? <213? 93 736 PRT białko kapsydu serotypu AAV, klon 43.23
<4 0 0? 93
Met Al a Al?. Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser
15
Glu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Asp Leu Lys Pro Gly Ala Pro Lys Pro 20 25 30
Lys Ala Asn Gin Gin Lys Gin Asp Asp Gly Arg Gly Leu Val Leu Pro 35 40 45
Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro 50 55 50
Val Asn Ala Ala Asp .Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp 65 70 75 30
Gin C-ln Leu Lys Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Arg Tyr Asn His Ala 35 90 95
Asp Ala Glu Phe Gin Glu Arg Leu Gin Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly 100 105 110
Asn Leu Gly Arg Ala Val Pha Gin Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro 115 120 125
Leu Gly Leu Val Glu Glu Gly Ala Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg 130 135 140
Pro Val Glu Gin Ser Pro Gin Glu Pro Asp Ser Ser Ser Gly Ile Gly 145 150 155 160
Lys Thr Gly Gin Gin Pro Ala Lys Lys Arg Leu Asn Phe Gly Gin Thr ' 165 170 ±75
Gly Asp Ser Glu Ser ’7al Pro Asp Pro Gin Pro Leu Gly Glu Pro Pro ISO 135 130
Ala Ala Pro Ser Gly Leu Gly Pro Asn Thr Het Ala Ser Gly Gly Gly 195 200 205
Ala Pro Met Ala Asp Asn Asn Glu Gly Ala Asp Gly Val Gly Asn Ser 210 215 220
PL 222 683 B1
269
Ser
225
Thr
Tyr
Thr
Phe
Asn
SOS
Gin
Asn
Pro
Ala
Gly
385
Pro
Phe
Asp
Arg
Gin
465
270
PL 222 683 B1
Gly Pro Cys Tyr Arg 485 c-ln Gin Arg Val Ser 490 Thr Thr Thr Asn Gin 495 Asn
Asn Asn Ser Asn Phe Ala Trp Thr Gly Ala Ala Lys Phe Lys Leu Asn
5 00 505 510
Gly Arg Asp Ser Leu Mat Asn Pro Gly Val Ala Met Ala Ser His Lys
515 520 525
Asp Asp Asę Asp Arg Phe Phe Pro Ser Ser Gly Leu Ile Phe Gly
530 ο 3 5 540
Lys Gin Giy ala Gly Asn Asp Gly Val Asp Tyr Ser Gin Val Leu Ile 545 550 555 5S0
Thr Asp Glu Glu Glu Tle Lys Ala Thr Asn Pro Vał Ala Thr Glu Glu 565 570 575
Tyr Gly Ala Val Ala Ile Asn Asn Gin Ala Ala Asn Thr Gin Ala Gin 580 5S5 590
Thr Gly Leu Val His Asn Gin Gly Val Ile Pro Gly Met Val Trp Gin 595 600 605
Asn Arg Asn Val Tyr Leu Gin Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile Pro Kis 610 613 620
Thr Asp Gly Asn Phe His Pro Ser Pro Leu Mat C-ly Gly Phe Gly Leu 625 ’ 630 635 640
Lys His Pro Pro Pro Gin Ile Leu Ile Lys A.sn Thr Pro Val Pro A.la 645 650 655
A.sp Pro Pro Leu Thr Phe Asn Gin Ala Lys Leu Asn Ser Phe Ile Thr 660 665 670
Gin Tyr Ser Thr Gly Gin Val Ser Val Glu Ile Glu Trp Glu Leu Gin 675 630 635
Lys Glu A.sn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Ile Gin Tyr Thr Ser Asn 690 695 700
Tyr Tyr Lys Ser Thr Asn Val Asp Phe Ala Val Asn Thr Glu Gly Val 705 710 715 720
Tyr Ser Glu Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Asn Leu 725 730 735
PL 222 683 B1
271 <210? 99 <211? 736 <212? PRT <213? białko kapsydu serotypu AAf, klon 43.20 <400? 99
Ket Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn. Leu Ser 15 10 15
Glu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Asp Leu Lys Pro Gly Ala Pro Lys Pro 20 25 30
Lys Ala Asn Gin Gin Lys Gin Asp Asp Gly Arg Gly Leu fal Leu Pro 35 40 45
Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro 50 55 60 fal Asn. Ala Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp 65 70 75 ' 80*
Gin Gin Leu Lys Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Arg -Tyr Asn His Ala 85 90 95
Asp Ala Glu Phe Gin Glu Arg Leu Gin Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly 100 105 110
Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gin Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro 115 120 125
Leu Gly Leu Val Glu Glu Gly Ala Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg 130 135 140
Leu Val Glu Gin Ser pro Gin Glu Pro Asp Ser Ser Ser Gly Ile Gly 145 150 155 160
Lys Thr Gly Gin Gin Pro Ala Lys Lys Arg Leu Asn Phe Gly Gin Thr 165 170 175
Gly Asp Ser Glu Ser fal Pro Asp Pro Gin Pro Leu Gly Glu Pro Pro 180 185 190
Ala Ala Pro Ser Gly Leu Gly Pro Asn Thr Met Ala Ser Gly Gly Gly 195 200 205
Ala Pro Met Ala Asp Asn A.sn Glu Gly Ala Asp Gly fal Gly Asn Ser 210 215 220
272
PL 222 683 B1
Ser 225 Gly Asn Trp Kis Cys 230 Asp Ser Thr Trp Leu 235 Gly Asp Arg Val Ile 540
Thr Thr Ser Thr Arg 245 Thr Trp Ala Leu Pro 250 Thr Tyr Asn Asn His 255 Leu
Tyr Lys Gin Tle 260 Ser Asn Gly Thr Ser 265 Gly Gly Ser Thr Asn 270 Asp Asn
Thr Tvi* Phe 275 Gly Tyr Ser Thr Pro 2S0 Trp Gly Tyr Phe Asp 285 Phe Asn Arg
Phe His 250 Cys His Phe Ser Pro 295 Arg Asp Trp Gin Arg 300 Leu Ile Asn Asn
Asn Trp Gly Phe Arg Pro Lys Arg Leu Asn Phe Lys Leu Phe Asn. Ile
305 310 315 320
Gin Val Lys Glu Val Thr Thr Asn Glu Gly Thr Lys Thr Ile Ala Asn 325 330 335
Asn Lau Thr Ser Thr Val Gin Val Phe Thr Asp Ser Glu Tyr Gin Leu 340 345 350
Pro Tyr Val Leu Gly Ser Ala Kis Gin Gly Cys Leu Pro Pro Pha Pro 355 350 3SS
Ala Aso Val Phe Thr Tal Pro Gin Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn A.sn 370 375 380
Gly Ser Gin Ala Leu Gly .Arg ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe 385 390 395 400
Pro Ser Gin Ket Leu Arg Thr Gly Asn Asn Phe C-ln Phe Ser Tyr Thr 405 410 415
Phe Glu Asp Val Pro Phe His Ser Ser Tyr Ala His Ser Gin Ser Leu 420 425 430
Aso Arg Leu Met Asn Pro Leu Ile Asp Gin Tyr Leu Tyr Tyr Leu Val 435 440 445
Arg Thr Gin Thr Thr Gly Thr Gly Gly Thr Gin Thr Leu Ala Phe Ser 450 455 460
Gin Ala Gly Pro Ser Ser Met Ala Asn Gin Ala Arg Asn Trp Val Pro 465 470 475 430
PL 222 683 B1
273
Gly Pro Cys Tyr Arg Gin Gir. Arg Val Ser Thr Thr Thr Asn Gin Asn 435 490 495
Asn Asn Ser Asn Phe Ala Trp Thr Gly Ala Ala Lys Phe Lys Leu Asn 500 505 510
Gly Arg Asp Ser Leu Met Asn Pro Gly Val Ala Met Ala Ser His Lys 515 520 525
Asp Asp Asp Asp Arg Phe Phe Pro Ser Ser Gly Val Leu Ile Phe Gly 510 535 540 ‘
Lys Gin Gly Ala Gly Asn Asp Gly Val Asp Tyr Ser Gin Val Leu Ile 545 550 5SS S60
Thr Asp Glu Glu Glu Ile Lys Ala Thr Asn Pro Val Ala Thr Glu Glu S6S 570 S75
Tyr Gly Ala Yal Ala Ile Asn Asn Gin Ala Ala Asn Thr Gin Ala Gin 530 S8S 590
Thr Gly Leu Yal His Asn Gin Gly Val Ile Pro Gly Met Val Trp Gin 595 SOO SOS
Asn Arg Asp Yal Tyr Leu Gin Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile Pro His SIO 615 620
Thr Asp Gly Asn Phe His Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe Gly Leu 62S 630 635 640
Lys His Pro Pro Pro Gin Ile Leu Ile Lys Asn Thr Pro Yal Pro Ala 645 650 655
Asp Pro Pro Leu Thr Phe Asn Gin Ala Lys Leu Asn Ser Phe Ile Thr 660 665 670
Gin Tyr Ser Thr Gly Gin Val Ser Yal Glu Ile Glu Trp Glu Leu Gin 675 630 685
Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Ile Gin Tyr Thr Ser Asn S90 695 700
Tyr Tyr Lys Ser Thr Asn Val Asp Phe Ala Val Asn Thr Glu Gly Yal 705 710 715 720
Tyr Ser Glu Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg 725 730 '
Asn
735
Leu
274
PL 222 683 B1
<210? 100
<211? 736
<212? PKT
<213? białko kapsydu serotypu AAV, klon AAfS
<400? 100
Met Al a Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser
10 15
Glu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Asp Leu Lys Pro Gly Ala Pro Lys Fro 20 25 30
Lys Ala Asn Gin Gin Lys Gin Asp Asp Gly Arg Gly Leu fal Leu Pro 35 40 45
Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro 50 55 60 fal Asn Ala A.la Aep Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp 65 70 75 60
Gin Gin Leu Lys Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Arg Tyr Asn His Ala 35 90 95
Asp Ala Glu Phs Gin Glu Arg Leu Gin Glu Asn Thr Ser Phe Gly Gl' 100 105 110
Asn Leu Gly .Arg Ala fal Phe Gin Ala Lys Lys Arg fal Leu Glu Pro 115 120 125
Leu Gly Leu fal Glu Glu Gly Ala Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg 130 135 140
Fro fal Glu Gin Ser Fro Gin Glu Pro Aep Ser Ser Ser Gly Ile Gly 145 150 155 160
Lys Ser Gly Gin Gin Pro Ala Łys Lys Arg Leu Asn Phe Gly Gin Thr 165 170 175
Gly Asp Ser Glu Ser fal Pro Asp Pro Gin Pro Leu Gly Glu Pro Pro 180 185 190
Glu Ala Pro Ser Gly Leu Gly Pro Asn Thr i4et Ala Ser Gly Gly Gly 1S5 200 205
Ala Pro Ket Ala Asp Asn Asn Glu Gly Ala Asp Gly fal Gly Asn Ser 210 215 220
Ser Gly Asn Trp His Cys Asp Ser Thr Trp Leu Gly Asp Arg Val Ile 225 230 235 240
PL 222 683 B1
275
Thr Thr Ser Thr Arg 245 Thr Trp Ala Leu Pro 250 Thr Tyr Asn Asn His 255 Leu
Tyr Lys Gin Tle 260 Ser Asn Gly Thr Ser 265 Gly Gly Ser Thr Asn 270 Asp Asn
Thr Tyr Phe 275 C-ly Tyr Ser Thr Pro 200 Trp Gly Tyr Phe Asp 235 Phe Asn Arg
Phe His 290 Cys His Phe Ser Pro 295 Arg Asp Trp C-ln Arg 300 Leu Ile Asn Asn
Asn 305 Trp Gly Phe Arg Pro 310 Lys Arg Leu Asn Phe 315 Lys Leu Phe Asn Ile 320
Gin Ual Lys Glu Val 325 Thr Thr Asn Glu Gly 330 Thr Lys Thr Ile Ala 335 Asn
Asn Leu Thr Ser Thr Val Gin Ual Phe Thr Asp Ser Glu Tyr Gin Leu
340 345 350
Pro Tyr Ual Leu Gly Ser Ala Kis Gin Gly Cys Leu Pro Pro Phe Pro 355 360 365
Ala Asp Val Phe Met Val Pro Gin Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn Asn 370 375 380
Gly Ser Gin Ala Leu Gly Arg Sar Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe 305 390 395 400
Pro Ser Gin Met Leu Arg Thr Gly Asn Asn Phe Gin Phe Ser Tyr Thr 405 4L0 415
Phe Glu Asp Val Pro Phe His Ser Ser Tyr Ala His Ser Gin Ser Leu 420 425 430
Asp Arg Leu Met Asn Pro Leu Ile Asp Gin Tyr Leu Tyr Tyr Leu Ual 435 440 44Ξ
Arg Thr Gin Thr Thr Gly Thr Gly Gly Thr Gin Thr Leu Ala Phe Ser 450 455 460
Gin Ala Gly Pro Ser Ser Met Ala A.sn Gin. Ala Arg A.sn Trp Val Pro 465 470 475 480
Gly Pro Cys Tyr Arg Gin Gin Arg Val Ser Thr Thr Thr Asn Gin Asn 485 490 495
276
PL 222 683 B1 =n Asn Sar Asn Phe Ais 500
Thr Gly Ala Ala Lys Phe Lys Leu Ast 505 SIO
Gly Arg Asp Ser Leu Mat Asn Pro Gly Val Ala Met Ala Ssr His Lys
SIS 520 525
Asp Asp Glu Asp Arg Phe Phe Pro Ser Ser Gly Val Leu Ile Phe Glj 530 535 540
Lys Gin Gly Ala Gly Asn Asp Gly fal Asn Tyr Ssr Gin Val Leu Ile 545 550 555 560
Thr Asp Glu Glu Glu Ile Lys Ala Thr Asn Pro Val Ala Thr Glu Glu 565 570 575
Tyr Gly Ala fal Ala ile Asn Asn Gin Ala Ala Asn Thr sin Ala Gin 580 535 550 rhr Gly Leu fal His Asn Gin Gly fal Ile Pro Gly Met fal Trp Gin 595 600 SOS
A.sn Arg Asn fal Tyr Leu Gin Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile Pro His 610 SIS 620
Thr Asp Gly Asn Phe Eis Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe Gly Leu 525 530 635 640 lys His Pro Pro Pro Gin Ile Leu Ile Lys Asn Thr Pro fal Pro Ala 545 S50 655
Asp Pro Pro Leu Thr Phe Asn Gin Ala Lys Leu Asn Ser Phs Ile Thr 660 665 670
Gin Tyr Ser Thr Gly Gin fal Ser fal Glu Ile Glu Trp Glu Leu Gin 675 630 585 lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Ile Glu Tyr Thr Ser Asn 690 695 700
Tyr Tyr Lys Ser Thr Asn fal Asp Phe Ala fal Asn Thr Glu Gly fal 705 710 715 720 iyr Ser Glu Pro Arg Ero Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr R.rg Asn Leu 725 730 735
<210? 101
<211> 728
<212> PRT
PL 222 683 B1
277
<213> <400> Met Ala i Glu Gly białko kapsydu serotypu AAV, klon 24 Trp Leu 10 . i Glu Asp Asn Leu Ser Pro
101 Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Leu 25
5 Glu Trp Trp Asp Gly Ala Pro 30 15 Lys
Ile Arg 20 Lys Pro
Łys Ala Asn 35 Gin Gin Lys Gin Asp 40 Asp Gly Arg Gly Leu 45 Val Leu Pro
Gly Tyr 50 Lys Tyr Leu Arg pro 55 Phe Asn Gly Leu Asp 60 Lys Gly Glu Pro
Val 65 Asn Glu Ala Asp Ala 70 Ala Ala Leu Glu His 75 Asp Lys Ala Tyr Asp 30
Lys Gin Leu Glu Gin 85 C-ly Asp Asn Pro Tyr 90 Leu Lys Tyr Asn His 95 Ala
Asp Ala Glu Phe 100 Gin Glu Arg Leu Gin 105 Glu Asp Thr Ser Phe 110 Gly Gly
Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gin Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro 11S 120 125
Leu Gly Leu val Glu Glu Val Ala Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg 130 135 140 ~
Pro Ile Glu Ser Pro Asp Ser Ser Thr Gly Ile Gly Lys Lys Gly Gin 145 ISO 155 ‘ 160
Gin Pro Ala Lys Lys Lys Leu Asn Phe Gly Gin Thr Gly Asp Ser Glu 165 170 . 175
Ser Val Pro Asp Pro Gin Pro Leu Gly Glu Pro Pro Ala Ala Pro Ser 180 135 190
Gly Leu Gly Ser Gly Thr Met Ala Ala Gly Gly Gly Ala Pro Met Ala 19S 200 205
Asp Asn Asn Glu Gly Ala Asp Gly Val Gly Asn Ala Ser Gly Asn Trp 210 215 220
Kis Cys Asp Ser Thr Trp Leu Gly Asp Arg Val Ile Thr Thr Ser Thr 22S 230 235 240
Arg Thr Trp Ala Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His Leu Tyr Lys Gin Ile 245 250 255
278
PL 222 683 B1
Ser Ser Gin Ser Gly Ala Thr Asn Asp Asn Kis Phe Fhe Ser Tyr Ser 260 265 270
Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Aap Fhe Asn Arg Phe His Cys Kis Phe Ser 275 280 285
Pro Arg Asp Trp Gin Arg L-au Ile Asn Asn Asa Trp Gly Phe Arg Fro 290 295 300
Arg Lys Leu Arg Fhe Lys Leu Phe Asn Tle Gin 'Zal Lys Glu Val Thr 305 310 315 320
Thr Asn Asp Gly Val Thr Thr Ile Ala Asn Asn Leu Thr Ser Thr Ile 32S 330 335
Gin val Phe ser Asp ser Glu Tyr Gin Leu Fro Tyr Val Leu Gly Ser 340 345 350
Ala His Gin Gly Cys Leu Pro Pro Phs Pro Ala Asp Val Phe Het Ile 355 360 355
Pro Gir. Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn Asn Gly Ser Gin Ser Val Gly 370 375 330 '
Arg Ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe Pro Ser Gin Met Leu Ara 3S5 390 355 400 r Gly Asn Asn Phe C-lu Fhe Ser Tyr Thr Phe Glu Glu Val Pro Phe 405 410 415
His Ser Ser Tyr Val His Ser Sin Ser Leu Asp Arg Leu Met Asn Pro 420 425 430
Leu Ile Asp Gin Tyr Leu Tyr Tyr Leu Ala Arg Thr Gin Ser Thr Thr 435 440 445
Gly Ser 450 Thr Arg Glu Leu Gin Phe His Gin A.la Gly Pro Asn Thr Met
455 450
Ala Glu Gin Ser Lys Asn Trp Leu Pro Gly Pro Cys Tyr Arg Gin Gin
4S5 470 475 430
Arg Leu Ser Lys Asn Ile Asp Ser Asn Asn Asn Ser Asn Phe A.la Trp
465 490 495
Thr Gly Ala Thr Lys Tyr His Leu Asn Gly Arg Asn Ser Leu Thr Asn
500 505 510
PL 222 683 B1
279
Pro Gly Yal Ala Mst Ala Thr Asn Lys Asp Asp Glu Asp Gin Phe Phe 515 520 525
Pro Ile Asn Gly Val Leu Val Phe Gly Lys Thr Gly Ala Ala Asn Lys 530 535 540
Thr Thr Leu Glu Asn Yal Leu Met Thr Ser Glu Glu Glu Ile Lys Thr 545 550 555 560
Thr Asn Pro Yal Ala Thr Glu Glu Tyr Gly Val Yal Ser Ser Asn Leu 565 570 575
Gin Ser Ser Thr Ala Gly Pro Gin Thr Gin Thr Yal Asn Ser Gin Gly 580 585 590
Ala Leu Pro Gly Met Val Trp Gin Asn Arg Asp Val Cys Leu Gin Gly Ξ9Ξ SOO 605
Pro Ile Trp Ala Lys Ile Pro His Thr Asp Gly Asn Phe His Pro Ser 610 615 620
Pro Leu Met Gly Gly Phe Gly Leu Lys His Pro Pro Pro Gin Ile Leu 625 630 635 640
Ile Lys Asn Thr Pro Val Pro Ala Asn Pro Pro Glu Val Phe Thr Pro 645 650 655
Ala Lys Phs Ala Ser Phe Ile Thr Gin Tyr Ser Thr Gly Gin Yal Ser 660 665 670
Yal Glu Ile Glu Trp Glu Leu Gin Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn 675 680 685
Pro Glu Ile Gin Tyr Thr Ser Asn Tyr Ala Lys Ser Asn Asn Yal Glu 690 695 700
Phe Ala Yal Asn Asn Glu Gly Yal Tyr Thr Glu Pro Arg Pro Ile Gly 705 710 715 720
Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Asn Leu 725 <210? 102 <211> 728 <212? PRT <213? białko kapsydu serotypu AAV, klon 42.2REAL <400? 102
280
PL 222 683 B1
Het Ala Ala Asp Gly Tyr Lsu Pro Asp Trp Leu Glu Asp .-.se Leu Ser I = 10 15
Glu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Asp Leu Lys Pro Gly Ala Pro Lys Pro 20 ' 25 30
Lys Ala Asa Gin Gin Lys Gin Asp Asp Gly Arg Gly Leu Val Leu Pro 35 40 ' 45
31y Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro 50 SS go
Val Asn Glu Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Aso 65 70 75 80*
Lys Gin Leu Glu Gin Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Lys Tyr Asn Kis Ala 35 90 95
Asp Ala Glu Phe Gin Glu Arg Leu Gin Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly 100 105 110
Asn ueu Gly Arg Ala Val Phe Gin Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro 115 120 125
Lau Gly Leu Val Glu Glu Gly Ala Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg 130 135 140 ’
Pro Ile Glu Ser Pro Asp ser Ser Thr Gly Ile Gly Lys Lys Gly Gin 145 ISO 155 ' ISO
Gin Pro Ala Lys Lys Lys Lau Asn Phe Gly Gin Thr Gly A.sp Ser Glu 165 170 175
Ser Val Pro Asp Pro Gin Pro Leu Gly Glu Pro Pro Ala Ala Pro Ser 130 135 190
Gły Leu Gly Ser Gly Thr Met Ala Ala Gly Gly Gly Ala Pro Met Ala 195 200 205
Asp Asn Asn Glu Gly Ala Asp Gly Ual Gly Asn Ala Ser Gly Asn Trp 210 215 220
Kis Cys Asp Sar Thr Trp Leu Gly Asp Arg Val Ile Thr Thr Ser Thr 225 230 235 240
Arg Thr Trp Ala Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His Leu Tyr Lys Gin Ile 245 250 255
PL 222 683 B1
281
Ser Ser Gin Ser Gly Ala Thr Asn 260
Asp Asn His Phe Phe Gly Tyr Ser 265 270
Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Asp Phe 275 280
Asn Arg Phe His Cys His Phe Ser 285
Fro Arg Asp Trp Gin Arg Leu Ile 290 295
Asn Asn Asn Trp Gly Phe Arg Pro 300
Arg Lys Leu Arg Phe Lys Leu Phe 305 310
Asn Ile Gin Val Lys Glu Val Thr 315 320
Thr Asn Asp Gly Val Thr Thr Ile 325
Ala Asn Asn Leu Thr Ser Thr Ile 330 335
Gin Val Phe Ser Asp Ser Glu Tyr 340
Gin Leu Pro Tyr Val Leu Gly Ser 345 350
Ala His Gin Gly Cys Leu Pro Pro 355 360
Phe Pro Ala Asp Val Phe Het Ile 365
Pro Gin Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu 370 375
Asn Asn Gly Ser Gin Ser Val Gly 380
Arg Ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu 385 390
Tyr Phe Pro Ser Gin Met Leu Arg 395 400
Thr Gly Asn Asn Phe Glu Phs Ser 4 05
Tyr Thr Phe Glu Glu fal Pro Phe 410 415
His Ser Ser Tyr Ala His Ser Gin 420
Ser Leu Asp Arg Leu Met Asn Pro 425 430
Leu Ile Asp Gin Tyr Leu Tyr Tyr 435 440
Leu Ala Arg Thr Gin Ser Thr Thr 445
Gly Ser Thr Arg Glu Leu Gin Phe 450 455
His Gin Ala Gly Pro Asn Thr Met 460
Ala Glu Gin Ser Lys Asn Trp Leu 465 470
Pro Gly Pro Cys Tyr Arg Gin Gin 475 480
Arg Leu Ser Lys Asn Ile Asp Ser 485
Asn Asn Asn Ser Asn Phe Ala Trp 490 495
Thr Gly Ala Thr Lys Tyr His Leu 500
Asn Gly Arg Asn Ser Leu Thr Asn 505 510
282
PL 222 683 B1
Pro C-ly- fal Ala Met Ala Thr Asn Lys Asp Asp Glu Aso Gin Phe Phe 315 520 525
Pro Ile Asn Gly Val Leu fal Phe Gly Glu Thr Gly Ala Ala Asn Lys 530 535 540
Thr Thr LeU Glu Asn fal Leu Mec Thr Ser Glu Glu Glu Ile Lys Thr 545 550 555 ' 530
Thr Asn Pro fal Ala Thr Glu Glu Tyr Gly Val Val Ser Ser Asn Leu 535 570 575
Gin Ser Ser Thr Ala Gly Pro Gin Thr Gin Thr Val Asn Ser Gin Gly 560 SSS 590
A_la Leu Pro Gly Met fal Trp Gin Asn Arg A.sp fal Tyr Leu Gin Gly 595 500 505
Pro ile Trp Ala Lys Ile Pro His Thr Asp Gly Asn Phe His Pro Ser 610 615 620
Pro Leu Mat Gly Gly Phe Gly Leu Lys His Pro Pro Pro Gin Ile Leu 625 530 63? 540
Ile Lys Asn Thr Pro fal Pro Ala Asn. Pro Pro Glu fal Phe Thr Pro 645 650 655
Ala Lys Phe Ala Ser Phe Ile Thr Gin Tyr Ser Thr Gly Gin fal Ssr 560 665 570 fal Glu Ile Glu Trp Glu Leu Gin Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn 675 660 635
Pro Glu Ile Gin Tyr Thr Ser Asn Tyr Ala Lys Ser Asn Asn fal Glu 690 595 700
Phe Ala fal Asn Asn Glu Gly Val Tyr Thr Glu Pro Arg Pro Ile Gly 705 710 715 720
Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Asn Leu 725 <210? 103 <211? 72Θ <212> PRT <213? białko kapsydu serotypu AAf, klon 7.2VP1 <400> 103
PL 222 683 B1
283
Met Ala Ala Aso Gly Tyr 5 Leu Pro .Asp Trp Leu Glu Gly Asn Leu Ser
10 15
Glu Gly Ile Arg 20 Glu Trp Trp Asp Leu 25 Lys Pro Gly Ala Pro Lys 30 Pro
Lys Ala Asn Gin 35 Gin Lys Gin Asp 40 Asp Gly Arg Gly Leu Val Leu 45 Pro
Gly Tyr Arg Tyr 50 Leu Gly Pro Phe 55 Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu 60 Pro
Val □ S Asn Glu Ala Asp Ala 70 Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr 75 Asp 80
Lys Gin Leu Glu Gin Gly 85 Asp Asn Pro Tyr 90 Leu Lys Tyr Asn His 95 Ala
Asp Ala Glu Phe 100 Gin Glu Arg Leu Gin 105 Glu Asp Thr Ser Phe Gly 110 Gly
Asn Leu Gly Arg 115 Ala Yal Phe Gin 120 Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu ’ 125 Pro
Leu Gly Leu Yal 130 Glu GlU Gly Ala 135 Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys 14 0 Arg
Pro 145 Ile Glu Ser Pro Asp 150 Ser Ser Thr Gly Ile Gly Lys Asn Gly 155 Gin 160
Pro Pro Ala Lys Lys Lys 165 Leu Asn phe Gly 170 Gin Thr Gly Asp Ser 175 Glu
Ser Yal Pro Asp 180 Pro Gin Pro Leu Gly 185 Glu Pro Pro Ala Ala Pro 190 Ser
Gly Leu Gly Ser 195 Gly Thr Met Ala 200 Ala Gly Gly Gly Ala Pro Met 205 Ala
Asp Asn Asn Glu 210 Gly Ala Asp Gly 215 Yal Gly Asn Ala Ser Gly Asn 220 Trp
His 225 Cys Asp Ser Thr Trp 230 Leu Gly Asp Arg Val Ile Thr Thr Ser 235 Thr 240
Arg Thr Trp Ala Leu Pro 245 Thr Tyr Asn Asn 250 His Leu Tyr Lys Gin 255 Ile
Ser Ser Gin Ser Gly Ala Thr Asn Asp Asn His Phe Phe Gly Tyr Ser
2S0 265 270
284
PL 222 683 B1
Thr Pro Tro Glv Tyr Phe Asp Phe Asn Arg Phe His Cys His Phe Ser 27*5 * 280 2S5
Pro Arg Asp Trp Gin Arg Leu Ile Asn Asn Asn Trp Gly Phe Arg Pro 290 295 300
Arg Lys Leu Arg Phe Lys Leu Phe Asn Ile Gin val Lys Glu Val Thr 305 ' 310 315 * 320
Thr Asn Asp Gly Val Thr Thr Ile Ala Asn Asn Leu Thr Ser Thr Ile 325 330 335
Gin Val Phe Ser Asp Ser Glu Tyr Gin Leu Pro Tyr Val Leu Gly Ser 340 345 350
Ala His Gin Gly Cys Leu Pro Pro Phe Pro Ala Asp Val Phe Met Ile 355 360 365
Pro Gin Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn Asn Gly Ser Gin Ser Val Gly 370 375 380
Arg Ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe Pro Ser Gin Met Leu Arg 385 330 ’ 395 400
Thr Gly Asp Asn Phe Glu Pha ser Tyr Thr Phe Glu Glu Val Pro Phe ’ * 405 410 415
Kis Ser Ser Tyr Ala His Ser Gin Ser Leu Asp Arg Leu Met Asn Pro 420 425 430
Leu Ile Asp Gin Tyr Leu Tyr Tyr Leu Ala Arg Thr Gin Ser Thr Thr 435 440 445
Gly Ser Thr Arg Glu Leu Gin Phe His Gin Ala Gly Pro Asn Thr Met 450 455 460
Ala Glu Gin Ser Lys Asn Trp Lau Pro Gly Pro Cys Tyr Arg Gin Gin 465 470 475 480
A.rg Leu Ser Lys Asn Ile Asp Ser Asn Asn Asn Ser Asn Phe Ala Trp 485 490 495
Thr Gly Ala Thr Lys Tyr His Leu Asn Gly Arg Asn Ser Leu Thr Asn 500 505 510
Pro Gly Val Ala Met Ala Thr Asn Lys Asp Asp Glu Asp Gin Phe Phe 515 520 525
PL 222 683 B1
285
Pro Ile Asr. 530 Gly Val Leu Val 535 Phe Gly Lys Thr Gly Ala Ala 540 Asn Lys
Thr Thr Leu Glu Asn Val Leu Met Thr Ser Glu Glu Glu Ile Lys Thr
545 550 555 560
Thr Asn Pro Val Ala Thr Glu Glu Tyr Gly Vał Val Ser Ser Asn Leu
565 S70 575
Gin Ser Ser Thr Ala Gly Pro Gir. Thr Gin Thr Val Asn Ser Gin Gly
sao 585 590
Ala Leu Pro Gly Met Val Trp Gin Asn Arg Asp Val Tyr Leu Gin Gly
59S 600 605
Pro Ile Trp Ala Lys Ile Pro His Thr Asp Gly Asn Phe His Pro Ser
610 615 62 0
Pro Leu Met Gly Gly Phe Gly Leu Lys His Pro Pro Pro Gin Ile Leu
625 630 635 640
Ile Lys Asn Thr Pro Val Pro Ala Asn Pro Pro Glu Val Phe Thr Pro
645 650 655
Ala Lys Phe Ala Ser Phe Ile Thr Gin Tyr Ser Thr Gly Gin Val Ser
660 665 670
Val Glu Ile Glu Trp Glu Leu Gin Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn
675 660 665
Pro Glu Ile Gltl Tyr Thr Ser Asn Tyr Ala Lys Ser Asn Asn Val Glu
690 695 700
Phe Ala Val Asn A.sn Glu Gly Val Tyr Thr Glu Pro Arg Pro Ile Gly
705 710 715 720
Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Asn Leu
725
<210» 104
<211> 728
<212» PRT
<213» . białko kapsydu serotypu AAV, klon l 27. 3VP1
<400» 104
Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser
1 5 10 15
286
PL 222 683 B1
Glu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Asp Leu Lys Pro Gly A.la Pro Lys Pro 20 25 30
Lys Ala Asn Gin Gin Lys Gin Asp Asp Gly Arg Gly Leu Val Leu Pro ' 35 4ΰ ’ 45
Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro 50 55 60
Val r.sr. Glu Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Aso Lys Ala Tvr Aso S5 70 75 30
Lys Gin Leu Glu Gin Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Lys Tyr Asn His A.la 85 90 95
Asp Ala Glu Phe Gin Glu Arg Leu Gir. Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly 100 105 110
Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gin Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro 115 120 ’ 125
Leu Gly Leu Val C-lu Glu Gly .Ala Lys Thr Ala Ser Gly Lys Lys Arg 130 135 140
Pro Ile Glu Ser Fro Asp Ser Ser Thr Gly Ile Gly Lys Lys Gly Gin 145 150 155 160
Gin Pro Ala Lys Lys Lys Leu A.sn Fhe Gly Gin Thr Gly Asp Ser Glu 16Ξ 170 175
Ser Val Pro Asp Pro Gin Pro Leu Gly Glu Pro Pro Ala Ala Pro Ser 180 185 190
Gly Leu Gly Ser Gly Thr Met Ala Ala Gly Gly Gly Ala Pro Met Ala 193 200 205
Asp Asn Asn Glu Gly Ala Asp Gly Val Gly Asn Ala Ser Gly Asn Trp 210 215 220
His Cys Asp Ser Thr Trp Leu Gly Asp Arg Val Ile Thr Thr Ser Thr 225 230 235 24G
Arg Thr Tm A.la Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His Leu Tyr Lys Gin Ila 245 250 255
Ser Ser Gin Ser Gly Ala Thr A.sn Asp Asn His Phe Phe Gly Tyr Ser 260 265 270
PL 222 683 B1
287
Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Asp Phe Asn Arg Phe His Cys His Phe Ser
275 280 285
Pro Arg Asp Trp Gin Arg Leu Ile Asn Asn Asn Trp Gly Phe Arg Pro
290 295 300
Arg Lys Leu Arg Phe Lys Leu Phe Asn Ile Gin Val Lys Glu fal Thr
305 310 31S 320
Thr Asn Asp Gly Val Thr Thr Ile Ala Asn Asn Leu Thr Ser Thr Ile
325 330 335
Gin Val Phe Ser Asp Ser Glu Tyr Gin Leu Pro Tyr Val Leu Gly Ser
340 345 350
Ala His Gin Gly Cys Leu Pro Pro Phe Pro Ala Asp Val Phe Met Ile
35S 360 365
Pro Gin Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn Asn Gly Ser Gin Ser fal Gly
370 375 380
Arg ser Ser Phe Cys Cys Leu Glu Tyr Phe Pro Ser Gin Met Leu Arg
385 350 395 400
Thr Gly Asn Asn Phe Glu Phe Ser Tyr Thr Phe Glu Glu Val Pro Phe
405 410 415
His Ser Sar Tyr Ala His Ss— Gin Ser Leu Asp Arg Leu Met Asn Pro
420 425 430
Leu Ile Asp Gin Tyr Leu Tyr Tyr Leu Ala Arg Thr Gin Ser Thr Thr
435 440 445
Gly Ser Thr Arg Glu Leu Gin Phe His Gin Ala Gly Pro Asn Thr fal
450 455 460
Ala Glu Gin Ser Lys Asn Trp Leu Pro Gly Pro Cys Tyr Arg Gin Gin
465 470 475 480
Arg Leu Ser Lys Asn Ile Asp Ser Asn Asn Asn Ser Asn Phe Ala Trp
485 490 495
Thr Gly Ala Thr Lys Tyr His Leu Asn Gly Arg Asn Ser Leu Thr Asn
500 505 SIO
Pro Gly Val Ala Met Ala Thr Asn Lys Asp Asp Glu Asp Gin Phe Leu
515 520 525
288
PL 222 683 B1
Pro Ile Asa Sly Ual Leu Ual Phe Gly Lys Thr Gly Ala Ala Asn Lys 530 535 540
Thr Thr Leu Glu Asa Ual Leu Met Thr Ser Glu Glu Glu Ile Lys Thr 545 550 555 560
Thr Asn pro Ual Ala Thr Glu Glu Tyr Gly Ual Val Ser Ser Asn Leu 365 570 575
Gin Ser Ser Thr Ala Gly Pro Arg Thr Gin Thr Val Asn Ser Gin Gly 590 335 590
Ala Leu Pro Gly Met Ual Trp Gin Asn Arg Asp Ual Tyr Leu Gin Gly 595 600 605
Pro Ile Trp Ala Glu Ile Pro His Thr Asp Gly Asn Phe His Pro Ser 610 SIS 620
Pro Leu Mec Gly Gly Phe Gly Leu Lys His Pro Pro Pro Gin Ile Leu 625 630 635 640
Ile Lys Asn Thr Pro Ual Pro Ala A.sn Pro Pro Glu Ual Phe Thr Pro 545 650 655
Ala Lys Phe Ala Sar Phe Ile Thr Gin Tyr Ser Thr Gly Gin Ual Ser 660 665 670
Ual Glu Ile Glu Trp Glu Leu Gin Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn 675 630 6S5
Pro Glu Ile Gin Tyr Thr Ser Asn Tyr A.la Lys Ser Asn Asn Ual Glu 590 695 700
Phe Ala Ual Asn Asn Glu Gly Val Tyr Thr Glu Pro Arg Pro Ile Gly 705 710 715 720
Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Asn Leu 725 <210» 105 <211> 723 <212> PRT <213» białko kapsydu serotypu AAU, klon 16.3VP1 <400» 105
Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Sar 15 10 15
PL 222 683 B1
289
Glu Gly Ile Arg Glu 20 Trp Trp Asp Leu Lys 25 Pro Gly Ala Pro 30 Lys Pro
Lys Ala Asn Gin Gin Lys Gin Asp Asp Gly Arg Gly Leu Val Leu Pro
35 40 45
Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro
50 55 6Q~
Val Asn Glu Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp
65 70 75 80
Lys Gin Leu Glu Gin Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Łys Tyr Asn His Ala
85 90 95
Asp Ala Glu Phe Gin Glu Arg Leu Gin Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly
100 105 110
Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gin Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro
115 120 125
Leu Gly Leu Val Glu Glu Gly Ala Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg
130 13 5 140
Pro Ile Glu Ser Pro Asp Ser Ser Thr Gly Ile Gly Lys Lys Gly Gin
145 150 155 160
Gin Pro Ala Lys Lys Lys Leu Asn Phe Gly Gin Thr Giy Asp Ser GlU
165 170 175
Ser val Pro Asp Pro Gin Pro Leu Gly Glu Pro Pro Ala Ala Pro Ser
180 185 190
Gly Leu Gly Ser Gly Thr Met Ala Ala Gly Gly Gly Ala Pro Met Ala
195 200 205
Asp Asn Asn Glu Gly Ala Asp Gly Val Gly Asn Ala Ser Gly Asn Trp
210 215 220
His Cys Asp Ser Thr Trp Leu Gly Asp Arg Val Ile Thr Thr Ser Thr
22 5 230 235 240
Arg Thr Trp Ala Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His Leu Tyr Lys Gin ile
245 250 2S5
Ser Ser Gin Ser Gly Ala Thr Asn Asp Asn His Phe Phe Gly Tyr Ser
260 265 270
Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Asp Phe Asn Arg Phe His Cys His Phe Ser
275 280 285
290
PL 222 683 B1
Pro Arg Asp Trp Gin Arg Leu Ile Asn Asn Asn Trp Gly Phe Arg Prc 290 295 300
Arg Lys Lsu Arg Phe Lys Leu Phe Asn Ile Gin Vsl Lys Glu Val Thr 305 310 315 320
Thr Asn Asp Gly Ual Thr Thr Ile Ala Asn Asn Leu Thr Ser Thr Ile 325 330 335
Gin Val Phe Ser Asp Ser Glu Tyr Gin Leu Pro Tyr Val Leu Gly Ser 340 345 350
Ala Kis Gin Gly Cys Leu Pro Pro Phe Pro Ala Asp Val Phe Met Ile 355 360 365
Pro Gin Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn Asn Gly Ser Gin Ser Met Gly 370 375 380
Arg Ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe Pro Ser Gin Met Leu Arg 385 390 393 400
Thr Gly Asn Asn Phe Glu Phe Ser Tyr Thr Phe Glu Glu Val Pro Phe 4G5 410 415
Kis Ser Ser Tyr Ala His Ser Gin Ser Leu Asp Arg Leu Met Asn Pro 420 425 430
Leu Ile A.sp Gin Tyr Leu Tyr Tyr Leu Ala Arg Thr Gin Ser Thr Thr 435 440 445
Gly Ser Thr Arg Glu Leu Gin Phe Kis Gin Ala Gly Pro Asn Thr Met 450 455 460
Ala Glu Gin Ser Lys Asn Trp Leu Pro Gly pro Cys Tyr Arg Gin Gin 465 470 475 480
Arg Leu Ser Lys Asn Ile Asp Ser Asn Asn Asn Ser Asn Phe Ala Trp 485 490 495
Thr Gly Ala Thr Lys Tyr Kis Leu Asn Gly Arg Asn Ser Leu Thr A.sn 500 505 510
Pro Gly Vał Ala Met Ala Thr Asn Lys Asp Asp Glu Gly Gin Phe Phe 515 520 525
Pro Ile Asn Gly Val Leu Val Phe Gly Lys Thr Gly Ala Ala Asn Lys 530 535 540
PL 222 683 B1
291
Thr Thr Leu Glu Asn Val Leu Met Thr Ser Glu Glu Glu Ile Lys Thr 545 550 555 560
Thr Asn Pro Val Ala Thr Glu Glu Tyr Gly Val Val Ser Ser Asn Leu 555 S70 575
Gin Ser Ser Thr Ala Gly Pro Gin Thr Gin Thr Val Asn Ser Gin Gly S80 585 590
Ala Leu Pro Gly Met Val Trp Gin Asn Arg Asp Val Tyr Leu Gin Gly 595 600 SOS
Pro Ile Trp Ala Lys Ile Pro His Thr Asp Gly Asn Phe His Pro Ser 610 515 620
Pro Leu Met Gly Gly Phe Gly Leu Lys His Pro Pro Pro Gin Ile Leu 625 630 635 640
Ile Lys Asn Thr Pro Pal Pro Ala Asn Pro Pro Gly Val Phe Thr Pro 645 650 655
Ala Leu Phe Ala Ser Phe Ile Thr Gin Tyr Ser Thr Gly Gin Val Ser 660 665 670
Val Glu Ile Glu Trp Glu Leu Gin Lys Glu Asn Ser Lys Arg Tm Asn 675 580 685 '
Pro Glu Ile Gin Tyr Thr Sar Asn Tyr Ala Lys Ser Asn Asn Val Glu 690 695 700
Phe Ala Val Asn Asn Glu Gly Val Tyr Thr Glu Pro Arg Pro Ile Gly 705 710 715 720
Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Asn Leu 725 <210> 106 <211> 728 <212> PRT <213> białko kapsydu serotypu AAV, klon 42.10 <400> 106
Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser 15 io 15
Glu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Asp Leu Lys Pro Gly Ala Pro Lys Pro 20 25 30
292
PL 222 683 B1
Ala Asn Gin C-ln Lys Gin Asp Asp Gly Arg Gly Leu Ual Lau Pro 35 40 45
Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro 50 55 50
Ual Asn Glu Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp 65 70 75 30
Lys Gin Leu C-lu Gin Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Lys Tyr Asn His Ala 35 30 95
Asp Ala Glu Phe Gin Glu Arg Leu Gin Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly 100 105 110
Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gin Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro 115 120 135
Leu Gly Leu Ual Glu Glu Gly Ala Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg 130 135 140
Pro Ile Glu Ser Pro Asp Ser Ser Thr Gly Ile Gly Arg Lys Gly Gin 14S 150 155 160
Gin Pro A.la Lys Lys Lys Leu Asn Phe Gly Gin Thr Gly Asp Ser Glu 165 170 175
Ssr Ual Pro Asp Pro Gin Pro Ile Gly Glu Pro Pro Ala Gly Pro Ser ISO 135 190
Gly Leu Gly Ser Gly Thr Met Ala Ala Gly Gly Gly Ala Pro Met Ala 195 200 205
Asp Asn A.sn C-lu Gly Ala Asp Gly Val Gly Asn Ala Ser Gly Asn Trp 210 215 220
His Cys Asp Ser Thr Trp Leu Gly Asp Arg Ual Ile Thr Thr Ser Thr 225 230 235 240
Aro Thr Trn Ala Leu Pro Thr Tyr Asn Asn Kis Leu Tyr Lys Gin Ile 24S 250 255
Ser Ser Gin Ser Gly Ala Thr Asn Asp Asn Kis Phe Phe Gly Tyr Ser 260 265 270
Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Asp Phe Asn Arg Phe His Cys His Phe Ser 275 280 2a5
PL 222 683 B1
293
Pro
Arg
305
Thr
Gin
Ala
Pro
Arg
335
Thr
His
Leu
Gly
Ala
465
Arg
Thr pro
Pro
Arg Asp Trp Gin Arg Leu Ile Asn Asn Asn Trp Gly Phe Arg Pro 290 295 300
Lys Leu Arg Phe Lys Leu Phe Asn Ile Gin Val Lys Glu Val Thr 310 315 320
Asn Asp Gly Val Thr Thr Ile Ala Asn Asn. Leu Thr Ser Thr Ile 325 330 335
Val Phe Ser Asp Ser Glu Tyr Gin Leu Pro Tyr Val Leu Gly Ser 340 345 350
His Gin Gly Cys Leu Pro Pro Phe Pro Ala Asp Val Phe Met Ile 355 360 365
Gin Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn Asn Gly Ser Gin Ser Val Gly 370 375 330
Ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe Pro Ser Gin Net Leu Arg 390 395 400
Gly Aen Asn Phe Glu Phe Ser Tyr Thr Phe Glu Glu Val Pro Phe 405 410 415
Ser Ser Tyr Ala Kis Ser Gin Ser Leu Asp Arg Leu Met Asn Pro 420 425 430
Ile Asp Gin Tyr Leu Tyr Tyr Leu Ala Arg Thr Gin Ser Thr Thr 435 440 445
Ser Thr Arg Glu Leu Gin Phe His Gin Ala Gly Pro Asn Thr Met 450 455 460
Glu Gin Ser Lys Asn Trp Leu Pro Gly Pro Cys Tyr Arg Gin Gin 470 475 430
Leu Ser Lys Asn Ile Asp Ser Asn Asn Asn Ser Asn Phe Ala Trp 485 490 495
Gly Ala Thr Lys Tyr His Leu Asn. Gly Arg Asn Ser Leu Thr Asn 500 505 510
Gly val Ala Met Ala Thr Asn Lys Asp Asp Glu Asp Gin Phe Phe SIS S20 525
Ile Asn Gly Val Leu Val Phe Gly Lys Thr Gly Ala Ala Asn Lys 530 535 540
294
PL 222 683 B1
Thr Thr Leu Glu Asn ’7al Lau Met Thr Sar Glu Glu Glu Ile Lys Thr
545 550 553 550 ?hr Asn Pro Val Ala Thr C-lu Glu Tyr Gly Val Val Ser Sar Asn Leu
565 570 573
Gin Ser Ser Thr Ala Gly Pro Gin Thr Gin Thr Val Asn Sar Gin Gly 580 595 SSO
Ala Leu Pro Gly Met Val Trp Gin Asn A.rg Asp Val Tyr Leu Gin Gly 595 500 £05
Pro Ile Trp Ala Lys Ile Pro His Thr Asp Gly Asn Phe His Pro Ser 610 615 620
Pro Leu Met Gly Gly Phe Gly Leu Lys His Pro Pro Pro Gin Ile Leu 625 ' 530 635 640
Ile Lys Asn Thr Pro Val Pro Ala Asn Pro Pro Glu Val Phe Thr Pro 545 550 S55
Ala Lys Pha Ala Ssr Phe lis Thr Gin Tyr Sar Thr Gly Gin Val Ser SSO 665 670 'Zal Glu He Glu Trp Glu Leu Gin Lye Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn 675 680 635
Pro Glu Ile Gin Tyr Thr Ser Asn Tyr Ala Lys Ser Asn Asn Val Glu 630 6S5 700
Phe Ala Val Asn A.sn Glu Gly Val Tyr Thr Glu Pro Arg Pro Ile Gly 705 710 715 720
Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Asn Leu 725 <210? 107 <211> 72a <212> PRT <213> białko kapsydu serotypu AAV, klon 42.33 <400? 107
Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser 15 10 15
Glu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Asp Leu Lys Pro Gly Ala Pro Lys Pro ‘ 20 25 30
PL 222 683 B1
295
Lys Ala Asn Gin Gin Lys Gin Asp Asp Gly Arg Gly Leu Yal Leu Pro 35 40 45
Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro 50 55 * 60
Yal Asn Glu Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp 65 70 75 80
Lys Gin Leu Glu Gin Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Lys Tyr Asn His Ala 85 90 95
Asp Ala Glu Phe Gin Glu Arg Leu Gin Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly 100 105 110
Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gin Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro 115 120 125
Leu Gly Leu Val Glu Glu Gly Ala Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg 130 135 140
Pro Ile Glu Ser Pro Asp Ser Ser Thr Gly Ile Gly Lys Lys Gly Gin 145 150 155 160
Gin Pro Ala Lys Lys Lys Leu Asn Phe Gly Gin Thr Gly Asp Ser Glu 16S 170 175
Ser Yal Pro Asp Pro Gin Pro Ile Gly Glu Pro Pro Ala Gly Pro Ser 180 185 190
Glv Leu Gly Ser Gly Thr Met Ala Ala Gly Gly Gly Ala pro Met Ala 195 200 205
Asp Asn Asn Glu Gly Ala Asp Gly Val Gly Asn Ala Ser Gly Asn Trp 210 215 220
His Cys Asp Ser Thr Trp Leu Gly Asp Arg Val Ile Thr Thr Ser Thr 22S 230 235 240
Arg Thr Trp Ala Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His Leu Tyr Lys Gin Ile 245 250 255
Ser Ser Gin Ser Gly Ala Thr Asn Asp Asn His Phe Phe Gly Tyr Ser 260 265 270
Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Asp Phe Asn Arg Phe His Cys His Phe Ser 275 280 285
296
PL 222 683 B1
Pro Arg Asp rs Gin Arg Leu 295 le Asa Asn Asn Trą Gly Phe Arg Pro 300
Arg Lys Leu Arg Phe Lys Leu Phe Asn. ile Gir. Val Lys Glu Val Thr
305 310 315 320
Thr Asn Asp Gly Val Thr Thr Ile Ala Asn Asn Leu Thr Ser Thr Ile
325 330 33S
Gin Val Phe Ser Asp Ser Glu Tyr Gin Leu Pro Tyr Val Leu Gly Se 340 345 350
Ala Kis Gin. Gly Cys Leu Pro Pro Phe Pro Ala Asp Val Phe Met Ile 355 360 365
Pro Gic Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn Asn Gly Ser Gin Ser Val Gly 370 375 380
Arg Ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe Pro Ser Gin Met Leu Arg 385 390 395 400
Thr Gly Asn Asn Phe Glu Phe Ser Tyr Thr Phe Glu Glu Val Pro Phe 405 410 415
His Ser Ser Tyr Ala Eis Ser Gin Ser Leu .Asp Arg Lsu Met Asn Fro 420 42S 430
Leu Ile Asp Gin Tyr Leu Tyr Tyr Leu Ala Arg Thr Gin Ser Thr Thi 435 440 445
Gly Ser Thr Arg Glu Leu Gin. Phe his Gin Ala Gly Pro Aan Thr Met 450 455 460
Ala Glu Gin Ser Lys Asn Trp Leu Pro Gly Pro Cys Tyr Arg Gin Gin 465 470 475 480
Arg Leu Ser Lys Asn Ile Asp Ser Asn Asn Thr Ser Asn Phe Ala Trp 435 490 495
Thr Gly Ala Thr Lys Tyr His Leu Asn Gly Arg Asn Ser Leu Thr Asn 500 505 510
Pro Gly Val Ala Met Ala Thr Asn Lys Asp Asp Glu Asp Gin Phe Phe 515 520 525
Pro Ile A.sn Gly Val Leu Val Phe Gly Lys Thr C-ly Ala Ala Asn Lys 530 53 5 54 0
Thr Thr Leu Glu Asn Vsl Leu Met Thr Ser Glu Glu Glu Ile Lys Thr
PL 222 683 B1
297
54 5 550 555 560
Thr Asn Pro Ual Ala Thr Glu C-ln Tyr Gly Val Val Ser Ser Asn Leu
565 570 575
Gin Ser Sar Thr Ala Gly Pro Gin Thr Gin Thr Val Asn Ser Gin Gly
580 585 590
Ala Leu Pro Gly Met Val Trp Gin Asn Arg Asp Val Tyr Leu Gin Gly
S95 600 605
Pro Ile Trp Ala Lys Ile Pro His Thr Asp Gly Asn Phe His Pro Ser
610 615 620
Pro Leu Met Gly Gly Phe Gly Leu Lys His Pro Pro Pro Gin Ile Leu
625 630 635 640
Ile Lys Asn Thr Pro Val Pro Ala Asn Pro Pro Glu Val Phe Thr Pro
645 650 655
Ala Lys Phe Ala Ser Phe Ile Thr Gin Tyr Ser Thr Gly Gin Val Ser
660 665 670
Val Glu Ile Glu Trp Glu Leu Gin Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn
675 680 685
Pro Glu Ile Gin Tyr Thr Ser Asn Tyr Ala Lys Ser Asn Asn Ual Glu
690 695 700
Phe Ala Val Asn. Asn Glu Gly Ual Tyr Thr Glu Pro Arg Pro Ile Gly
705 710 715 720
Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Asn Leu
725 <210» 108 <211» 728 <212» PRT <213» białko kapsydu serotypu RAV, klon 42.11 <400» 108 .
Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro A.sp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser 15 10 15
Glu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Asp Leu Lya Pro Gly Ala Pro Lys Pro 20 25 30
Lys Ala Asn Gin Gin Lys Gin Asp Asp Gly Arg Gly Leu Val Leu Pro 35 40 45
298
PL 222 683 B1
Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn C-ly Leu Asp Lys c-ly C-lu pro 50 55 S0
Val Asn Ala Ala Asp Ala Ala Ala Lsu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp 65 70 75 80
Sin. Gin Leu Lys Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Arg Tyr Asn Els Ala 35 90 55
Asp Ala Glu Phe Gin. Glu Arg Leu Gin Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly 100 105 110
Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gin Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro 115 120 ' ' 125
Leu Gly Leu Val Glu Glu Gly Ala Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg 130 135 140
Pro Ile Glu Ser Pro Asp Ser Ser Thr Gly Ile Gly Lys Lys Gly Gin 145 150 155 160
Gin Pro Ala Lys Lys Lys Leu Asn Phe Gly Gin Thr Gly Asp Ser Glu 165 170 175
Ser Val Pro Asp Pro Gin Pro Ile Gly Glu Pro Pro Ala Gly Pro Ser ISO 135 190
Gly Leu Gly Ser Gly Thr Ket Ala Ala Gly Gly Gly Ala Pro Met Ala 195 200 205
Asp Asn Asn Glu Gly Ala Asp Gly Val Gly Asn Ala Ser Gly Asn Trp 210 215 220
His Cys Asp Ser Thr Trp Leu Gly Asp Arg Val Ile Thr Thr Ser Thr 225 230 235 240
Arg Thr Trp Ala Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His Leu Tyr Lys Gin ±le 245 250 255
Ser Ser Gin Ser Gly Ala Thr Asn Asp Asn His Phe Phe Gly Tyr Ser 260 265 270
Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Asp Phe Asn Arg Phe His Cys His Phe Ser 275 230 235
Pro Arg Asp Trp Gin Arg Leu Ile Asn Asn Asn. Trp Gly Phe Arg Pro 290 295 300
PL 222 683 B1
299
Arg Lys Leu Arg Phe Lys Leu. Phe Asn Ile Gin Yal uys Glu Val Thr 305 310 315 320
Thr Asn Asp Gly Yal Thr Thr Ile Ala Asn Asn Leu Thr Ser Thr Ile 32S 330 335
Gin Val Phe Ser Asp Ser Glu Tyr Gin Leu Pro Tyr Yal Leu Gly Ser 340 345 350
A.la His Gin Gly Cys Leu Pro Pro Phe Pro Ala Asp Val Phe Met Ile 355 360 365
Pro Gin Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn Asn Gly Ser Gin ser Val Gly 370 375 380
Arg Ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe Pro Ser Gin Met Leu Arg 385 390 395 400
Thr Gly Asn Asn Phe Glu Phe Ser Tyr Thr Phe Glu Glu Yal Pro Phe 405 410 415
His Ser Ser Tyr Ala His ser Gin Ser Leu Asp Arg Leu Met Asn Pro 420 425 430
Leu Ile Asp Gin Tyr Leu Tyr Tyr Leu Ala Arg Thr Gin Ser Thr Thr 43S 440 445
Gly Ser Thr Arg Glu Leu Gin Phe His Gin Ala Gly Pro Asn Thr Met 450 455 460
Ala Glu Gin Ser Lys Asn Trp Leu Pro Gly Pro Cys Tyr Arg Arg Gin 465 470 475 480
Arg Leu Ser Lys Asp Ile Asp Ser Asn Asn Asn Ser Asn Phe Ala Trp 485 490 495
Thr Gly Ala Thr Lys Tyr His Leu Asn Gly Arg Asn Ser Leu Thr Asn 500 505 510
Pro Gly Val Ala Met Ala Thr Asn Lys Asp Asp Glu Asp Gin Phe Phe 515 520 525
Pro Ile Asn Gly Yal Leu Val Phe Gly Lys Thr Gly Ala Ala Asn Lys 530 535 540
Thr Thr Leu Glu Asn Val Leu Met Thr Ser Glu Glu Glu Ile Lys Thr 545 550 555 560
300
PL 222 683 B1
Thr Asn Pro Val Ala Thr Glu Glu Tyr Gly 7al v'al Ser Ser Asn Leu 565 570 575
Gin Ser Ser Thr Ala Gly Pro Gin Thr Gin Thr Val Asn Ser Gin Gly 5S0 3S5 590
A.la Leu Pro C-ly Met Val Trp Gin Asn Arg Asp Val Tyr Leu Gir. Gly 595 600 605
Pro ile Trp Ala Lys ile Pro His Thr A.sp Gly Asn Phe His Pro Ssr SIO 615 520
Pro Leu Met Gly Gly Phe Gly Leu Lys Kis Pro Pro Prc Gin Ile Leu 625 630 635 5ąq
Ile Lys Asn Thr Pro Val Pro Ala Asn Pro Pro Glu Val Phe Thr Pro 645 650 655
Ala Lys Phe Ala Ser Phe Ile Thr Gin Tyr Ser Thr Gly Gin Val Ser 660 S65 S7D
Val Glu Ile Glu Trp Glu Leu Gin Lys Glu Asn Sar Lys Arg Trp Asn o7? 630 665
Pro Glu Ile Gin Tyr Thr Ser Asn Tyr Ala Lys Ser .Asn Asn Val Glu 690 695 700
Phe Ala Val Asn Asn Glu Gly Val Tyr Thr Glu Pro Arg Pro Ile Gly 705 710 715 ” 720
Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Asn Leu 725
<210? <211> <212> <213> 109 729 PP.T białko kapsydu serotypu AAV, klon P1VP1
<400? 109
Met A.1 a Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser
10 15
Glu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Asp Leu Lys Pro Gly Ala Pro Lys Pro 20 25 30
Lys Ala Asn Gin Gin Lys Gin Asp Asp Gly Arg Gly Leu Val Leu Pro 35 40 45
PL 222 683 B1
301
Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asa Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro 50 55 60* ~ ’
Val Asn Ala Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp
S5 70 75 80
Gin Gin Leu Lys Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Arg Tyr Asn His Ala
90 95
Asp Ala Glu Phe Gin Glu Arg Leu Gin Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly 100 105 no
Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gin. Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro 115 120 125
Leu Gly Leu Val Glu Glu Gly Ala Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg 130 135 140
Pro ile Asp Ser Pro Asp Ser Ser Thr Gly Ile Gly Lys Lys Gly Gin 145 150 155 160
Gin Pro Ala Lys Lys Lys Leu Asn Phe Gly Gin Thr Gly Asp Ser Glu 165 170 175
Ser Val Pro Asp Pro Gin Pro Leu Gly Glu Pro Pro Ala Ala Pro Ser 180 185 190
Ser Val Gly Ser Gly Thr Met Ala Ala Gly Gly Gly Ala Pro Met Ala 195 200 205
Asp Asn Asn Glu Gly Ala Asp Gly Val Gly Asn Ala Ser Gly Asn Trp 210 21S 220 '
His Cys Asp Ser Thr Trp Leu Gly Asp Arg Val Ile Thr Thr Ser Thr 225 230 235 240
Arg Thr Trp Ala Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His Leu Tyr Lys Gin Ile 245 250 255
Ser Ser Ser Ser ser Gly Ala Thr Asn Asp Asn His Tyr Phe Gly Tyr 260 265 270
Ser Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Asp Phe Asn Arg Phe His Cys His Phe 275 280 285
Ser Pro Arg Asp Trp Gin Arg Leu Ile Asn Asn Asn Trp Gly Phe Arg 290 295 300 * *
Pro Lys Lys Leu Arg Phe Lys Leu Phe Asn Ile Gin Val Lys Glu Val 305 310 315 320
302
PL 222 683 B1
Thr Thr Asn Asp Gly Val Thr Thr Ile Ala Asn Asn Leu Thr Ser Th 325 330 335
Tal Gin Val Phs Ser Asp Ser Glu Tyr Gin Leu Prc Tyr Val Leu Gl· 340 345 350
Ser Ala His Gin Gly Cys Leu Pro Pro Phe Pro Ala Asp Val Phs Met 355 360 365 ile Pro Gin Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn Asn Gly Ser Gin Ser VaJ 370 375 380
Gly Arg Ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe Pro Ser Gin Met Leu 385 390 395 400
Arg Thr Gly Asn Asn Phe Glu Phe Ser Tyr Ser Phe Glu Asp Val Pro 405 410 415
Phe Kis Ser Ser Tyr Ala His Ser Gin Ser Leu Asp Arg Leu Met Asn 420 425 430
Pro Leu Ile Asp Gin Tyr Leu Tyr Tyr Leu Ala Arg Thr Gin Ser Thr 435 440 445
Thr Gly Ser Thr Arg Glu Leu Gin Phe His Gin Ala Gly Pro Asn Thr 450 455 460
Met P.la Glu Gin Ser Lys Asn Trp Leu Pro Gly Pro Cys Tyr Arg Gin 465 470 475 4S0
Gin Gly Leu Ser Lys Asn Leu Asp phe Asn Asn Asn Ser Asn Phe Ala 485 490 495
Trp Thr Ala Ala Thr Lys Tyr His Leu Asn Gly Arg Asn Ser Leu Thr 500 505 510
Asn Pro Gly Ile Pro Met Ala Thr Asn Lys Asp Asp Glu Asp Gin Phe 515 520 525
Phe Pro Ile A.sn Gly Val Leu Val Phe Gly Lys Thr Gly Ala Ala Asn 530 53S 540
Lys Thr Thr Leu Glu Asn Val Leu Met Thr ser Glu Glu Glu Ile Lys 545 550 355 560
Thr Thr Asn Pro Val Ala Thr Glu Glu Tyr Gly Val Val Ser Ser Aan 565 570 575
PL 222 683 B1
303
Leu Gin Pro Ser Thr Ala Gly Pro Gin Ser Gin Thr Ile Asn Ser Gin 580 585 590
Gly Ala Leu Pro Gly Met Val Trp Gin Asn Arg Asp Val Tyr Leu Gin 595 SOO 605
Gly Pro xle Trp Ala Lys Ile Pro His Thr Asp Gly Asn Phe Kis Pro SIO 615 620
Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe Gly Leu Lys His Pro Pro Pro Gin Ile 625 630 635 640
Leu Ile Lys Asn Thr Pro Val Pro Ala Asn Pro Pro Glu Val Phe Thr 645 650 655
Pro Ala Lys Phe Ala Ser Phe Ile Thr Gin Tyr Ser Thr Gly Gin Yal 660 665 670
Ser Yal Glu Ile Glu Trp Glu Leu Gin Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp 675 680 685
Asn Pro Glu Ile Gin Tyr Thr Ser Asn Tyr Ala Lys Ser Asn Asn Val 690 695 700
Glu Phe Ala Yal Asn Pro Asp Gly Val Tyr Thr Glu Pro Arg Pro Ile 70S 710 715 720
Gly Thr Arg Tyr Leu Pro Arg Asn Leu 725
<210> 110 klon FSVP1@3
<211? <212? <213> 729 PRT białko kapsydu serotypu AAV,
<400> 110
Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser
10 15
Glu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Asp Leu Lys Pro Gly Ala Pro Lys Pro 20 25 30
Lys Ala Asn Gin Gin Lys Gin Asp A.sp Gly Arg Gly Leu Val Leu Pro 35 40 45
Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro 50 55 60
304
PL 222 683 B1
fal 65 Asn j-L-Ł 5- Ala Asp Ala 70 Ala Ala Leu Glu His 75 Asp Lys Ala Tyr Asp 30
Gin C-ln Ueu Lys Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Arg Tyr Asn His Ala
85 90 95
Asp Ala Glu Phe Gin Glu Arg Leu Gin Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly
100 105 110
Asn. Leu Gly Arg Ala Val Phe Gin Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro
115 120 125
Leu Gly Leu fal Glu Glu Gly Ala Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg
130 135 14 0
Pro Ile Asp Ser Pro Asp Ser Ser Thr Gly Ile Gly Lys Lys Gly Gin
145 ISO 155 160
Gin Pro Ala Lys Łys Lys Leu Asn Phe Gly Gin Thr Gly Asp Ser Glu 165 170 175
Ser Val Pro Asp Pro Gin Pro Leu Gly Glu Pro Pro Ala Ala Pro Ser 180 185 150
Ser fal Gly Ser Gly Thr Met Ala Ala Gly Gly Gly Ala Pro Thr Ala 195 200 205
Asp Asn Asn Glu Gly Ala Asp Gly fal Gly Asn Ala Ser Gly Asn Trp 210 215 220
His Cys Asp Ser Thr Trp Leu Gly Asp Arg fal Ile Thr Thr Ser Thr 225 230 235 240
Arg Thr Trp Ala Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His Leu Tyr Lys Gin Ile 245 250 255
Ser Ser Ser Ser Ser Gly Ala Thr Asn Asp Asn His Tyr Phe Gly Tyr 260 265 270
Ser Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Asp Phe Asn Arg Phe His Cys His Phe 275 280 285
Ser Pro Arg Asp Trp Gin Arg Leu Ile Asn Asn A.sn Trp Gly Phe Arg 290 295 300
Pro Lys Lys Leu A.rg Phe Lys Leu Phe A.sn Ile Gin Val Lys Glu fal 305 310 315 320
Thr Thr Asn Asp Gly Val Thr Thr Ile Ala Asn Asn Leu Thr Ser Thr 325 330 335
PL 222 683 B1
305
306
PL 222 683 B1
3lv Ala Leu Fro Gly Met val Tro c-ln Asn Arg Ast Val
Arg asp vai Tyr Leu Gin 50 5
500
Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile Pro Kis Thr Asp Gly Asn Phe His Pro 510 615 £20
Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe Gly Leu Glu His Pro Pro pro Gin Ile □ 25 630 635 540
Leu ile Lys Asn Thr Pro Val Pro Ala Asn Pro Pro Glu Val Phe Thr 645 650 655
Pro Ala Lys Phe Ala Ser Phe Ile Thr Gin Tyr Ser Thr Gly Gin Vał 660 665 670
Ser Val Glu Ile Glu Trp Glu Len Gin Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp 675 680 635
Asn Pro Glu Ile Gin Tyr Thr Ser Asn Tyr Ala Lys Ser Asn Asn Val 690 695 700
Glu Phe Ala Val Asn Pro Asp Gly Val Tyr Thr Glu Pro Arg Pro Ile 705 710 715 720
Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Asn Leu 72S <210> Ul <211> 729 <212> PRT <213> białko kapsydu serotypu AAV, klon F3VP1 <400> 111
Met A.la Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser
5 10 ' 15
Glu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Asp Leu Lys Pro Gly Ala Pro Lys Pro 20 25 30
Lys Ala Asn Gin Gin Lys Gin Asp Asp Gly Arg Gly Leu Val Leu Pro 35 40 45
Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu A.sp Lys Gly Glu Pro 50 55 60
Val Asn Ala Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His A.sp Lys A.la Tyr A.sp 55 70 75 30
PL 222 683 B1
307
308
PL 222 683 B1
Val Gin Val Phe Ser Asp Ser Glu Tyr Gin Leu Pro Tyr Val Leu Gly 340 345 350 ’
Ser Ala His Gin Gly Cys Leu Pro Pro Phe Pro Ala Asp Val Phe Met 355 360 365
Ile Pro Gin Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asp Asn Gly Ser Gin Ser Val 370 375 330
Gly Arg Ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe Pro Ser Gin Met Leu 335 390 395 400
Arg Thr C-ly Asn Asn Phe Glu Phe Ser Tyr Ser Phe Glu Asp Val Pro 405 410 415
Phe His Ser Ser Tyr Ala His Ser Gin Ser Leu Asp Arg Leu Met Asn 420 425 430
Pro Leu Ile Asp Gin Tyr Leu Tyr Tyr Leu Ala Arg Thr Gin Ser Thr 435 440 445
Thr Gly Ser Thr Arg Glu Leu Gin Phe His Gin Ala Gly Pro Asn Thr 450 455 460
Met Ala Glu Gin Ser Lys Asn Trp Leu Ero Gly Pro Cys Tyr Arg Gin 465 470 475 4S0
Gin Arg Leu Ser Lys Asn Leu A.sp Phe Asn Asn Asn Ser Asn Phe Ala 435 490 495
Trp Thr Ala Ala Thr Lys Tyr His Leu Asn Gly Arg Asn Ser Leu Thr 500 505 510
Asn Pro Gly Ile Ero Met Ala Thr Asn Lys Asp Asp Glu Asp Gin Phe 515 520 525
Phe Pro Ile Asn Gly Val Leu Ual Phe Gly Lys Thr Gly Ala Ala Asn 530 535 540
Lys Thr Thr Leu Glu Asn Val Leu Met Thr Ser Glu Glu Glu Ile Lys 545 550 S5S 560
Thr Thr Asn Pro Val Ala Thr Glu Glu Tyr Gly Val 7al Ser Ser Asn 565 370 575
Leu Gin Ser Ser Thr Ala Gly Pro Gin Ser Gin Thr Ile Asn Ser Gin
580
535
590
PL 222 683 B1
309
Gly Ala LeU Pro Gly Mat Val Trp Gin Asn Arg Asp Val Tyr Leu Gin
595 600 605
Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile Pro Eis Thr Asp Gly Asn Phe His Pro
610 615 620
Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe Gly Leu Lys His Pro Pro Pro Gin Ile
625 63 0 635 640
LeU Ile Lys Asn. Thr Pro Val Pro Ala Asn Pro Pro Glu Val Phe Thr
645 650 655
Pro Ala Lys Phe Ala Ser Phe Ile Thr Gin Tyr Ser Thr Gly Gin Val
660 665 670
Ser Val Glu Ile Glu Trp Glu Leu Glil Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp
675 680 635
Asn Pro Glu Ile Gin Tyr Thr Ser Asn Tyr Ala Lys Ser Asn A.sn Val
690 695 700
Glu Phe Ala Val Asn Pro Asp Gly Val Tyr Thr Glu Pro Arg Pro Ile
705 710 715 720
Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Asn Leu
725 <210» 112 <211» 735 <212» PRT
<213» białko kapsydu serotypu AAV, klon 42 . 6B
<400» 112
Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser
1 S 10 15
Glu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Asp Leu Lys Pro Gly Ala pro Lys Pro
20 25 30
Lys Ala Asn Gin Gin Lys Gin Asp Asp Gly Arg Gly Leu Val Leu Pro
35 40 45
Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Łeu Asp Lys Gly Glu Pro
50 55 60
Val Asn Glu Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp
70 75 80
310
PL 222 683 B1
Lys Gin Leu Glu Gin Gly Asę Asn Pro Tyr Leu Lys Tyr Asn His Ala 35 90 95
Asp Ala Glu Phe Gin Glu Arg Leu Gin Glu Aso Thr Ser Phe Gly G1 100 105 ’ 110
Asn Leu Gly Arg Ala fal Phe Gin Ala Lys Lys Arg fal Leu Glu Pro 115 120 125
Leu Giy Leu Val Glu Glu Gly Ala Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg 130 135 140
Pro fal Glu Pro Ser Pro Gin Arg Ser Pro Asp Ser Ser Thr Gly Ile 145 150 155 160
Gly Lys Thr Gly Gin Gin Pro Ala Lys Lys Arg Leu Asn Phe Gly Gin.
165 170 175
Thr Gly Asp Ser Glu Ser Val Pro Asp Pro Gin Pro Ile Gly Glu Pro 180 185 190
Pro Ala Gly Pro Ser Gly Leu Gly Ser Gly Thr Met Ala Ala Gly Gly 195 200 205
Gly Ala Pro Met Ala A.sp Asn Asn Glu Gly Ala Asp Gly fal Gly Ser 210 215 220
Ser Ser Gly Asn Trp His Cys Asp Ser Thr Trp Leu Gly Asp Arg fal 225 230 235 ’ 240
Ile Thr Thr Ser Thr Arg Thr Trp Ala Leu Pro Thr Tyr Asn Asn Eis 245 2S0 255
Leu Tyr Lys Gin Ile Ser Asn Gly Thr Ser Gly Gly Ser Thr Asn Asd 260 265 270 '
Asn Thr Tyr Phe Gly Tyr Ser Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Asp Phe Asn 275 280 235
Arg Phe His Cys His Phe Ser Pro Arg A.sp Trp Gin Arg Leu Tle Asn 290 295 300
Asn Asn Trp Gly Phe Arg Pro Arg Lys Leu Arg Phe Lys Leu Phe Asn 305 310 315 320
Ile Gin Val Lys Glu Val Thr Thr Asp Asp Gly fal Thr Thr Ile Ala 325 330 335
PL 222 683 B1
311
Asn Asn Leu Thr Ser Thr Ile Gin Val Phe Ser Aso Ser Glu Tyr Gin 340 345 350
Leu Pro Tyr Val Leu Gly Ssr Ala His Gin Gly Cys Leu Pro Pro Phe 355 360 365
Pro Ala Asp Val Phe Met Ile Pro Gin Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn 370 37S 330
Asn Gly Ser Gin Ser Val Gly Arg Ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr 385 390 355 400
Phe Pro Ser Gin Met Leu Arg Thr Gly Asn Asn Phe Glu Phe Ser Tyr 405 410 415
Thr Phe Glu Glu Val Pro Phe His Ser Ser Tyr Ala His Ser Gin Ser 420 425 430
Leu Asp Arg Leu Met Asn Pro Leu Ile Asp Gin Tyr Leu Tyr Tyr Leu 435 440 445
Ala Arg Thr Gin Ser Thr Thr Gly Ser Thr Arg Glu Leu Gin Phe His 450 455 460
Gin Ala Gly Pro Asn Thr Met Ala Glu Gin Ser Lys Asn Trp Leu Pro 465 470 475 480
Gly Pro Cys Tyr Arg Gin Gin Arg Leu Ser Lys Asn Ile Asp Ser Asn 485 450 495
Asn Asn Ser Asn Phe Ala Trp Thr Gly Ala Thr Lys Tyr His Leu Asn 500 505 510
Gly Arg Asn Ser Leu Thr Asn Pro Gly Val Ala Met Ala Thr Asn Lys 515 520 525
Asp Asp Glu Asp Gin Phe Phe Pro Ile Asn Gly Val Leu Val Phe Gly 530 535 540
Lys Thr Gly Ala Ala Asn Lys Thr Thr Leu Glu Asn Val Leu Met Thr £45 550 555 560
Ser Glu Glu Glu Ile Lys Thr Thr Asn Pro Va.l Ala Thr Glu Glu Tyr 565 570 575
Gly Val Val Ser Ser Asn Leu Gin Ser Ser Thr Ala Gly Pro Gin Thr S80 585 590
312
PL 222 683 B1
Gin Thr Val Asn Ssr Gin Gly Ala Leu Pro Gly Met Val Trp Gin Asn 595 SOO 505
Arg Asp Val Tyr Lsu Gin Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile Pro His Thr 510 615 620
Asp Gly Asn Phe His Pro Ser Pro Leu Met Asp Gly Phe Gly Leu Lys 325 630 635 640
His Pro Pro Pro Gin Tle Leu Tle Lys Asn Thr Pro Val Pro Ala Asn 645 650 655
Pro Pro Glu Val Phe Thr Pro Ala Lys Phe Ala Ser Phe ile Thr Gin 660 665 670
Tyr Ser Thr Gly Gin Val Ser Val Glu Ile Glu Trp Glu Lsu Gin Lys 67S 680 685
Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu ile Gin Tyr Thr Ser Asn Tyr 590 695 700
Ala 705 Lys Ser Asn Asn Val 710 Glu Phe Ala Val Asn Asn 715 Glu Gly Val Tyr 720
Thr Glu Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr .Arg Asn Leu
725 730 735
<210? 113
<211? 635
<212? PRT
<213? białko kapsydu serotypu AAV, klon 42.12
<400? 113
Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser
1 5 10 15
Glu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Asp Leu Lys Pro Gly Ala Pro Lys Pro
20 25 30
Lys Ala Asn Gin Gin Lys Gin Asp Asp Gly Arg Gly Leu Val Leu Pro
35 40 45
Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro
50 S5 60
Val Asn Glu Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu Hia Asp Lys Ala Tyr Asp
65 70 75 80
Lys Gin Leu Glu Gin Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Lys Tyr Asn His Ala
35 90 35
PL 222 683 B1
313
Asp Ala Glu Phe Gin G-lu Arg Leu Gin Glu Asp .Thr Ser Phe Gly Gly 100 1OS 110
Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gin Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro 115 120 125
Leu Gly Leu Val Glu Glu Gly Ala Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg 130 135 140
Pro Val Glu Pro Ser Pro Gin Arg Ser Pro Asp Ser Ser Thr Gly Ile 145 150 155 160
Gly Lys Thr Gly Gin Gin Pro Ala Lys Lys Arg Leu Asn Phe Gly Gin 165 170 175
Thr Gly Asp Ser Glu Ser Val Pro Asp Pro Gin Pro Ile Gly Glu Pro 180 185 190
Pro Ala Gly Pro Ser Gly Leu Gly Ser Gly Thr Mst Ala Ala Gly Gly 195 200 205
Gly Ala Pro Met Ala Asp Asn Asn Glu Gly Ala Asp Gly Val Gly Ser 210 215 220
Ser Ssr Gly Asn Trp Kis Cys Asp Ser Thr Trp Leu Gly Asp Arg Val 225 230 235 240
Ile Thr Thr Ser Thr Arg Thr Trp Ala Leu Pro Thr Tyr Asn Asn Kis 245 250 255
Leu Tyr Lys Gin Ile Ser Asn Gly Thr Ser Gly Gly Ser Thr Asn Asp 260 265 270
Asn Thr Tyr Phe Gly Tyr Ser Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Asp Phe Asn 275 280 265
Arg Phe Kis Cys His Phe Ser Pro Arg Asp Trp Gin Arg Leu Ile Asn 290 295 300
Asn Asn Trp Gly Phe Arg Pro Lys Arg Leu Asn Phe Lys Leu Phe Asn 305 310 315 320
Ile Gin val Lys Glu Val Thr Gin Asn Glu Gly Thr Lys Thr Ile Ala 325 330 335
Asn Asn Leu Thr Ser Thr Ile Gin Val Phe Thr Asp Ser Glu Tyr Gin 340 345 350
314
PL 222 683 B1
-jeu Pro Tyr Val Leu Gly Ser Ala His Gin Gly Cys Leu Pro Pro Phe 355 360 3S5
Pro Ala Asp fal Phe Met Ile Pro Gin Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn 370 375 3S0
Asn Gly Ser Gin Ala fal Gly Arg ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tvr 335 390 395 40Q
Phe Pro Ser Gin Mat Leu Arg Thr Gly Asn Asn Phe Glu Phe Ser Tyr 405 410 415
Gin Phe Glu Asp fal Pro Phe His Sar Ser Tyr Ala His Ser Gin Ser 420 425 430
Łeu Asp Arg Leu Thr Asn Pro Leu ile Asp Gin Tyr Leu Tyr Tyr Leu 435 440 445
Ala Arg Thr Gin Ser Thr Thr Gly Ser Thr Arg Gly Leu Gin Phe His 450 455 460
Gin Ala Gly Pro .Asn Thr Met Ala Glu Gin Ser Lys Asn Trp Leu Pro 465 470 475 4S0
Gly Pro Cys Tyr Arg Gin Gin Arg Łeu Ser Lys Asn Ile Asp Ser Asn 485 490 ’ 495 .sn Asn Ser Asn Phe Ala Trp Thr Gly Ala Thr Lys Tyr His Leu Asn 500 505 510
Gly Arg Asn Ser Leu Thr Asn Pro Gly fal Ala Met Ala Thr Asn Lys 535 520 525
Asp Asp Glu Asp Gin Phe Phe Pro Ile Asn Gly fal Leu fal Phe Gly 530 535 540
Lys Thr Gly Ala Ala Asn Lys Thr Thr Leu Glu Asn Val Leu Met Thr 545 550 555 560
Ser Glu Glu Glu Ile Lys Thr Thr Asn Pro Val Ala Thr Glu Glu Tyr 565 570 575
Gly Val Val Ser Ser Asn Leu Gin Ser Ser Thr Ala Gly Pro Gin Thr 580 585 590
Gin Thr fal Asn Ser Gin Gly Ala Leu Pro Gly Met fal Trp Gin Asn 595 600 605
PL 222 683 B1
315
Arg Asp Val Tyr Leu Gin Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile Pro His Thr
SIO 615 620
Αερ Gly Asn Phe His Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe Gly Leu Lys
625 630 635 640
His Pro Pro Pro Gin Ile Łeu Ile Lys Tyr Thr Ser Asn Tyr Tyr Lys
645 6S0 655
Ser Thr Asn Val Asp Phe Ala Val Asn Thr Glu Gly Thr Tyr Ser Glu
660 66 5 670
Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Asn Leu
675 680 685 <210> 114 <211» 724 <212> PRT
<213> białko kapsydu serotypu AAV, klon AA75CAP
<400> Met Ser 1 114
Phe Val Asp 5 His Pro Pro Asp Trp 10 Leu Glu Glu Val Gly Glu 15
Gly Leu Arg Glu 20 Phe Leu Gly Leu Glu 25 Ala Gly Pro Pro Lys 30 Pro Lys
Pro Asn Gin 35 Gin His Gin Asp Gin Ala 40 Arg Gly Leu Val 45 Leu Pro Gly
Tyr Asn 50 Tyr Leu Gly Pro Gly A_sn Gly 55 Leu Asp Arg Gly 60 Glu Pro Val
Asn Arg 65 Ala Asp Glu Val 70 Ala Arg Glu His Asp 75 Ile Ser Tyr Asn Glu 80
Gin Leu Glu Ala Gly 85 Asp Asn Pro Tyr Leu 90 Lys Tyr Asn His Ala Asp 95
Ala Glu Phe Gin 100 GlU Lys Leu Ala Asp 105 Asp Thr Ser Phe Giy 110 Gly Asn
Leu Gly Lys 115 Ala Val Phe Gin Ala Lys 120 Lys Arg Val Leu 125 Glu Pro Phe
Gly Leu 130 Val Glu Glu Gly Ala Lys Thr 135 Ala Pro Thr Gly 14 0 Lys Arg Ile
316
PL 222 683 B1
Asp Asp His Phe Pro Lys Arg Lys Łys Ala Arg rhr Glu Glu Asp Ser 14? 150 155 ISO
Lys Pro Ssr Thr Ser Ser Asp Ala Glu Ala Gly Pro Ser Gly Ser Gin 165 170 175
Gin Leu Gin Ile Pro Ala Gin Pro Ala Ser Ser Leu Gly Ala Asp Thr ISO 165 ISO
Met Ser Ala Gly Gly Gly Gly Pro Leu Gly Asp Asn Asn Gin Gly Al 195 200 205 .sp Gly val Gly Asn Ala Ser Gly Asp Trp His Cys Asp Ser Thr Trp 210 215 220
Met Gly Asp Arg fal fal Thr Lys Ser Thr Arg Thr Trp Val Leu Pro 225 230 235 240
Ser Tyr Asn Asn His Gin Tyr Arg Glu Ile Lys Sar Gly Ser fal Asp 245 250 255
Gly Ser Asn Ala Asn Ala Tyr Phe Gly Tyr Ser Thr Pro Trp Gly Tyr 260 265 270
Phs Asp Fhe Asn Arg Phs His Ser His Trp Ser pro Arg Asp Trp Gin 275 280 235
Arg Leu Ile Asn Asn Tyr Trp Gly Phe Arg Pro Arg Ser Leu Arg fal 290 295 300
Lys Ile Phe A.sn Ile Gin fal Łys Glu fal Thr fal Gin Asp Ser Thr 30Ξ 310 315 320
Thr Thr Ile Ala Asn Asn Leu Thr Ser Thr fal Gin fal Phe Thr Asp 325 330 335
Asp Asp Tyr Gin Leu Pro Tyr fal fal Gly Asn Gly Thr Glu Gly Cys 340 345 350
Leu Pro Ala Phe Pro Pro Gin Val Phe Thr Leu Pro Gin Tyr Gly Tyr 355 360 355 la Thr Leu Asn Arg Asp Asn Thr Glu Asn Pro Thr Glu Arg Ser Ser 370 375 3S0
Phe Phe Cys Leu Glu Tyr Phe Pro Ser Lys Met Leu Arg Thr Gly Asn 385 390 395 400
PL 222 683 B1
317
318
PL 222 683 B1
Ser Phe Ile Thr Gin Tyr Ser Thr Gly Gin Yal Thr Yal Glu Met Glu 560 665 570
Trp Glu Leu Lys Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Ile Gin 675 6S0 6S5
Tyr Thr Asn Asn Tyr Asn Asp Pro Gin Phe Yal Asp Phe Ala Pro .Asp 690 595 700 ‘
Ser Thr Gly Glu Tyr Arg Thr Thr Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu 703 710 715 720
Thr Arg Pro Leu <210? 115 <211? 9 <212? DBA <213? miejsce enzymu restrykcyjnego Dralll <400? 115 caccacgtc <210? 116 <211? 26 <212? DNA <213? AY2cas <400? 115 cgcagagacc aaagttcaac tgaaacga <210? 117 <211? 255 <212? DNA <213? serotyp 10 wirusa stowarzyszonego z adenowirusem <400? 117
ggtaattcct ccggaaattg gcattgcgat tccacatggc tgggcgacag agtcatcacc 60
acc&gcaccc gaacctgggt cctgcccacc tacaacaacc acatctacaa gcaaatctcc 120
agcgagacag gagccaccaa cgacaaccac tacttcggct acagcacccc ctgggggtat 180
Łttgacttta acagattcca ctgccacttt tcaccacgtg actggcagcg actcatcaac 240
aacaactggg gąttc 2S5
<210? 113
<211? 258
<212? DNA
<213? serotyp 11 wirusa stowarzyszonego z adenowirusem
<400? 118
ggtaattcct ccggaaattg gcattgcgat tccacatggc tgggcgacag agtcatcacc 50
PL 222 683 B1
319
accagcaccc gaacctgggc cctgccaacc tacaacaacc acctctacaa acaaatctcc 120
agcgctfccaa cgggggccag caacgacaac cactactttg gctacagcac cccctggggg 180
tattttgact ttaacagatt ccactgccac ttctcaccac gtgactggca gcgactcatc 240
aacaacaact ggggattc 258
<210» 119 <211> 255 <212» DNA <213> serotyp 12 wirusa stowarzyszonego z adenowirusem <400> 119
ggtaattcct ccggaaatcg gcattgcgat tccacatggc tgggcgaccg agtcattacc 60
accagcaccc ggacttgggc cctgcccacc tacaacaacc acctctacaa gcaaatctcc 120
agccaatcgg gtgccaccaa cgacaaccac tacttcggct acagcacccc ttgggggtat 180
tttgatttca acagattcca ctgccatttc tcaccacgtg actggcagcg actcatcaac 240
aacaactggg gattc 255
<210> 120 <211> 2205
<212? DNA <213> serotyp wirusa stowarzyszonego z adenowirusem, ! klon A3.lvpl
<400> 120 atggctgccg atggttatct tccagattgg ctcgaggaca ctctetetga aggaatcaga 50
cagtggtgga agctcaaacc tggcccacca ccgccgaaac cfcaaccaaca acaccgggac 12 0
aacagtaggg gtcttgtgct tcctgggtac aagtacctcg gacccttcaa cggactcgac 180
aaaggagagc cggtcaacga ggcagacgcc gcggccctcg agcacgacaa agcctacgac 240
caccagctca agcaagggga caacccgtac otcaaataca accacgcgga cgctgaattt 300
caggagcgtc ttcaagaaga tacgtctttc gggggcaacc Łcgggcgagc agtcttccag 360
gccaaaaaga gggtactcga gcctcttggt ctggttgagg aagctgttaa gacggctcct 42 0
ggaaaaaaga gacctataga gcagtctcct gcagaaccgg actcttcctc gggcatcggc 480
aaatcaggcc agcagcccgc taagaaaaga ctcaattttg gtcagactgg cgacacagag 540
tcagtcccag accctcaacc aatcggagaa ccccccgcag ccccctctgg tgtgggatct 600
aatacaatgg cttcaggcgg t5ra99cacca atggcagaca ataacgaagg cgccgacgga 660
gtgggtaatt cctcgggaaa ttggcattgc gattccacat ggatgggcga cagagttatc 720
accaccagca caagaacctg ggccctcccc acctacaata atcacctcta Caagcaaatc 780
tccagcgaat cgggagccac caacgacaac cactacttcg gctacagcac cccctggggg 840
tattttgact ttaacagatt ccactgtcac ttctcaccac gtgactggca gcgactcatc 900
320
PL 222 683 B1
caggtcttca cagactctga gtaccagctg ccctacgtcc tcggttcggc tcaccagggc 1080
cgccttccgc cgttcccagc agacgtcttc atgattcctc agtacggcta ettgactetg 1140
aacaatggca gccaagcggt aggacgttct tcattctact gtctagagta ttttccctct 1200
cagatgctga ggacgggaaa caacttcacc ttcagctaca cttttgaaga cgtgcctttc 1260
cacaacagct aegcgcacag ccagagtctg gatccgctga tgaatcctct cattgaccag 1320
tacctgtatt acctgagcaa aactcagggt acaagtggaa caacgcagca ategagaefcg 1330
cagttcagcc aagctgggcc tagctccatg geteageagg ccaaaaactg gctaccggga 1440
cccagctacc gacagcagcg aatgtctaag acggctaatg aaaacaacaa cagtgaattt 1500
gettggactg cagccaccaa atattacctg aatggaagaa attctetggt caatcccggg 1560
cccccaatgg ccagtcaaaa ggacgatgag gaaaagtatt tccccatgca cggaaatctc 1620
atctttggaa aacaaggcac aggaactacc aatgfcggaca ttgaatcagt gcttattaca 1680
gacgaagaag aaatcagaac aactaatcct gtggctacag aacaatacgg acaggttgcc 1740 accaaccatc agagtcagaa caccacagct tcctatggaa gtgtggacag ccagggsacc 1600 ttacctggaa tggtgtggca ggaccgcgat gtctatcttc aaggtcccat ttgggccaaa 1860 actcctcaca cggacggaca ctttcatcct tctccgctca tgggaggctt tggactgaaa 1920 caccctcctc cccagatcct gatcaaaaac acacctgtgc cagcgaafccc cgcgaccact 19SO tteactcctg gaaagtttgc ctcgttcatt acccagtatt ccaccggaca ggtcagcgtg 2C4O gaaatagagt gggagctgca gaaagaaaac agcaaacgct ggaacccaga aattcagtac 2100 acctccaact acaacaagtc ggtgaatgtg gagtttaccg tggacgcaaa cggtgttfcat 2160 tctgaacccc gccctattgg cactcgttac cttacccgga acttg 22 OS
PL 222 683 B1

Claims (42)

Zastrzeżenia patentowe
1. Rekombinowany wirus stowarzyszony z adenowirusem (AAV) mający kapsyd AAV8 składający się z białek vp1,vp2 i vp3, w którym białko vp1 ma sekwencję Sek. Id. Nr: 95 pełnej długości lub sekwencję aminokwasową, która w 95% lub więcej jest identyczną z sekwencją Sek. Id. Nr: 95 pełnej długości, ten kapsyd AAV8 mający upakowaną w nim sekwencję AAV 5' odwróconego powtórzenia końcowego (ITR), heterologiczny gen funkcjonalnie połączony z sekwencjami regulatorowymi, które kierują jego ekspresją w komórce gospodarza i AAV3' ITR.
2. Wirus AAV według zastrz. 1, znamienny tym, że białko kapsydowe vp2 AAV ma sekwencję aminokwasów 138 do 738 Sek. Id. Nr: 95.
3. Wirus AAV według zastrz. 1, znamienny tym, że białko kapsydowe vp3 AAV ma sekwencję aminokwasów 203 do 738 Sek. Id. Nr: 95.
4 3_23 ..................................................
43__25 ..................................................
44_1 ..................................................
44 5 ..................................................
223 Tt) ..................................................
223_2 ..................................................
223 4 ..................................................
223_5 ..................................................
223_6 ..................................................
223_7 ..................................................
A3_4 ..................................................
A3_5 ..................................................
A3_7 ..................................................
A3_3 ..................................................
42_12 ..................................................
AAV1 TTGCCCACTC CCTCTCTGCG CGCTCGCTCG CTCGGTGGGG CCTGCGGACC AAV2 TTGGCCACTC CCTCTCTGCG CGCTCGCTCG CTCACTGAGG CCGGGCGACC AAV3 TTGGCCACTC CCTCTATGCG CACTCGCTCG CTCGGTGGGG CCTGGCGACC
AAV8 ..................................................
AAV9 ..................................................
AAV7 TTGGCCACTC CCTCTATGCG CGCTCGCTCG CTCGGTGGGG CCTGCGGACC
44 2 ..................................................
PL 222 683 B1
327
328
PL 222 683 B1
PL 222 683 B1
329
330
PL 222 683 B1
PL 222 683 B1
331
332
PL 222 683 B1
CCATTTTGAC
42 6b
43_12 43 20 43 21
43_23 43_2 5 44 1 44* 5 223_10 223 2
223_4 223 5
223_6 223 7
42_lb 42 13
42_3a
42_4
42_5a 4 2_l0 42_3b 42 11
A3 5
A3 7
A3 3
4. Wirus AAV według zastrz. 1, znamienny tym, że gen heterologiczny jest wybrany z grupy składającej się z sekwencji czynnika VIII, sekwencji alfa-1 antytrypsyny i sekwencji HIV.
5. Wirus AAV według zastrz. 1, znamienny tym, że elementy kontroli ekspresji obejmują promotor tkankowo-specyficzny.
6. AAV według zastrz. 5, znamienny tym, że promotor tkankowo-specyficzny jest promotorem specyficznym dla wątroby.
7. Rekombinowany wirus stowarzyszony z adenowirusem (AAV) mający kapsyd AAV8 składający się z białek vp1 ,vp2 i vp3, w którym białko vp1 ma sekwencję składającą się z aminokwasów Sek. Id. Nr: 95 pełnej długości, kapsyd AAV8 ma upakowany w nim minigen mający sekwencję AAV5' odwróconego powtórzenia końcowego (ITR) i gen homologiczny funkcjonalnie połączony z sekwencjami regulatorowymi, które kierują jego ekspresją w komórce gospodarza i AAV3' ITR.
8. Sposób wytwarzania rekombinowanego wirusa stowarzyszonego z adenowirusem (AAV) obejmującym kapsyd AAV8, znamienny tym, że obejmuje etapy hodowania komórki gospodarza zawierającej: (a) cząsteczkę kodującą kapsyd AAV8 obejmujący co najmniej białko kapsydu vp3 AAV8 mające sekwencję obejmującą aminokwasy 1 do 738 Sek. Id. Nr: 95; (b) funkcjonalny gen rep; (c) minigen obejmujący odwrócone powtórzenia końcowe (ITR) i transgen; i (d) geny kodujące wystarczające funkcje pomocnicze, aby pozwolić na upakowanie minigenu do białka kapsydu AAV.
9. Pakująca komórka gospodarza przydatna w wytwarzaniu wirusa stowarzyszonego z adenowirusem (AAV)8, zawierająca: cząsteczkę kodującą kapsyd AAV8 o Sek. Id. Nr: 95; minigen mający sekwencję AAV odwróconego powtórzenia końcowego i gen heterologiczny funkcjonalnie połączony z sekwencjami regulatorowymi, które kierują jego ekspresję w komórce gospodarza i funkcjonalny gen rep.
10. Komórka gospodarza w hodowli zawierającej wirus stowarzyszony z adenowirusem określony w zastrz. 1-7.
11. Kompozycja zawierająca AAV określony w zastrz. 1-7 i fizjologicznie kompatybilny nośnik.
12. Zastosowanie wirusa stowarzyszonego z adenowirusem (AAV) określonego w zastrz. 1-7 w wytwarzaniu leku do dostarczania transgenu do komórki.
13. Wyizolowany wirus stowarzyszony z adenowirusem (AAV), znamienny tym, że obejmuje kapsyd AAV o sekwencji aminokwasowej wybranej z grupy składającej się z:
C1, SEKW. NR ID.: 60; C2, SEKW. NR ID.: 61; C5, SEKW. NR ID.: 62 ; A3.3, SEKW. NR ID.: 66; A3-7, SEKW. NR ID.: 67; A3-4, SEKW. NR ID.: 68; A3-5, SEKW. NR ID.: 69; 3.3b, SEK. NR ID.: 62; 223.4 SEKW. NR ID.: 73; 223-5, SEKW. NR ID.: 74; 223-10, SEKW. NR ID.: 75; 223-2, SEKW. NR ID.: 76; 223-7, SEKW. NR ID.:77; 223-6, SEKW. NR ID.: 78 ; 44-1, SEKW. NR ID.: 79; 44-5, SEKW.NR ID.: 80; 42-15, SEKW. NR ID.: 84; 42-8, SEKW. NR ID.: 85; 42-13, SEKW. NR ID.: 86; 42-3A, SEKW. NR ID.: 87; 42-4, SEKW. NR ID.: 88; 42-5A, SEKW. NR ID.: 89; 42-1B, SEKW. NR ID.: 90; 42-5B, SEKW. NR ID.: 91; 43-1, SEKW. NR ID.: 92; 43-12, SEKW. NR ID.: 93; 43-5, SEKW. NR ID.: 94; 43-21, SEKW. NR ID.: 96; 43-25, SEKW. NR ID.: 97; 43-20, SEKW. NR ID.: 99; 24.1, SEKW. NR ID.: 101; 42.2, SEKW. NR ID.: 102; 7.2, SEK. NR ID.: 103; 27.3, SEK.NR ID.: 104; 16,3, SEK. NR ID.: 105; 42.10, SEKW. NR ID.: 106; 42-3B, SEKW. NR ID.: 107; 42-11, SEKW. NR ID.:108; F1, SEK. NR ID.: 109; F5, SEK. NR ID.: 110; F3, SEKW. NR ID.: 111; 42-6B, SEKW. NR ID.: 112 i 42-12, SEKW. NR ID.: 113.
14. Białko obejmujące fragment białka kapsydu AAV, znamienne tym, że fragment wybrany jest z grupy składającej się z:
białka kapsydu vp2, aminokwasy (aa) 138 do 737; białka kapsydu vp3, aminokwasy (aa) 203 do 737;
322
PL 222 683 B1 regionu hiperzmiennego (HVR) od 1 do 12: aa 146 do 152; aa 182 do 187; aa 262 do 264; aa 263 do 266; aa 381 do 383; aa 383 do 385; aa 450 do 474; aa 451 do 475; aa 452 do 475; aa 490 do 495; aa 491 do 496; aa 500 do 504; aa 501 do 505; aa 514 do 522; aa 533 do 554; aa 534 do 555; aa 581 do 594; aa 583 do 596; aa 658 do 667; aa 660 do 669 i aa 705 do 719; aa 707 do 772;
aa 24-42, aa 25-28; aa 81-85; aa 133 do 165; aa 134-165; aa 137 do 143; aa 154 do 156; aa 194 do 208; aa 261 do 274; aa 262 do 274; aa 171 do 173; aa 413 do 417; aa 449 do 478; aa 494 do 525; aa 534 do 571; aa 581 do 601; aa 660 do 671; aa 709 do 723; i aa 1 do 184, aa 199 do 259; aa 274 do 446; aa 603 do 659; aa 670 do 706; aa 724 do 736; aa 185 do 198; aa 260 do 273; aa 447 do 477; aa 495 do 602; aa 660 do 669; i aa 707 do 723, przy czym numeracja aminokwasów odpowiada kapsydowi AAV7 SEKW. NR ID.: 2, oraz odpowiadających regionów w kapsydzie C1, SEKW. NR ID.: 60; C2, SEKW. NR ID.: 61; C5, SEKW. NR ID.: 62; A3-3, SEKW. NR ID.: 66; A3-7, SEKW. NR ID.: 67; A3-4, SEKW. NR ID.: 68; A3-5, SEKW. NR ID.: 69; 3.3b, SEKW. NR ID.: 62, 223.4, SEKW. NR ID.: 73; 223-5, SEKW. NR ID.: 74; 223-10, SEKW. NR ID.: 75; 223-2, SEKW. NR ID.: 76; 223-7, SEKW. NR ID.: 77; 223-6, SEKW. NR ID.: 78; 44-1, SEKW. NR ID.: 79; 44-5, SEKW. NR ID.: 80; 42-15, SEKW. NR ID.: 84; 42-8, SEKW. NR ID.: 85; 42-13, SEKW. NR ID.: 86; 42-3A, SEKW. NR ID.: 87; 42-4 SEKW. NR ID.: 88; 42-5A, SEKW. NR ID.: 89; 42-1B, SEKW. NR ID.: 90; 42-5B, SEKW. NR ID.: 91; 43-1 SEKW. NR ID.: 92; 43-12, SEKW. NR ID.: 93; 43-5, SEKW. NR ID.: 94 43-21, SEKW. NR ID.: 96; 43-25, SEKW. NR ID.: 97;
43-20, SEKW. NR ID.: 99; 24.1, SEKW. NR ID.: 101; 42.2, SEKW. NR ID.: 102; 7.2, SEKW. NR ID.:
103; 27.3, SEKW. NR ID.: 104; 16.3, SEKW. NR ID.: 105; 42.10, SEKW. NR ID.: 106; 42-3B, SEKW. NR ID.: 107; 42-11, SEKW. NR ID.: 108; F1, SEKW. NR ID.: 109; F5, SEKW. NR ID.: 110; F3, SEKW.
NR ID.: 111; 42-63, SEKW. NR ID.: 112 i 42-12, SEKW. NR ID.: 113.
15. Sztuczne białko kapsydu wirusa stowarzyszonego z adenowirusem (AAV) obejmujące jeden lub więcej fragmentów białkowych określonych w zastrz. 14.
16. Rekombinowany wirus stowarzyszony z adenowirusem (AAV) obejmujący sztuczny kapsyd określony w zastrz. 15.
17. Cząsteczka obejmująca sekwencję kwasu nukleinowego kodującą białko określone w zastrz. 14 do 15.
18. Cząsteczka obejmująca sekwencję kwasu nukleinowego kodującą białko kapsydu nowego serotypu wirusa stowarzyszonego z adenowirusem (AAV) o sekwencji aminokwasowej wybranej z grupy składającej się z:
C1, SEKW. NR ID.: 60; C2, SEKW. NR ID.: 61; C5, SEKW. NR ID.: 62 ; A3.3, SEKW. NR ID.: 66; A3-7, SEKW. NR ID.: 67; A3-4, SEKW. NR ID.: 68; A3-5, SEKW. NR ID.: 69; 3.3b, SEK. NR ID.: 62; 223.4 SEKW. NR ID.: 73; 223-5, SEKW. NR ID.: 74; 223-10, SEKW. NR ID.: 75; 223-2, SEKW. NR ID.: 76; 223-7, SEKW. NR ID.:77; 223-6, SEKW. NR ID.: 78 ; 44-1, SEKW. NR ID.: 79; 44-5, SEKW.NR ID.: 80; 42-15, SEKW. NR ID.: 84; 42-8, SEKW. NR ID.: 85; 42-13, SEKW. NR ID.: 86; 42-3A, SEKW. NR ID.: 87; 42-4, SEKW. NR ID.: 88; 42-5A, SEKW. NR ID.: 89; 42-1B, SEKW. NR ID.: 90; 42-5B, SEKW. NR ID.: 91; 43-1, SEKW. NR ID.: 92; 43-12, SEKW. NR ID.: 93; 43-5, SEKW. NR ID.: 94; 43-21, SEKW. NR ID.: 96; 43-25, SEKW. NR ID.: 97; 43-20, SEKW. NR ID.: 99; 24.1, SEKW. NR ID.: 101; 42.2, SEKW. NR ID.: 102; 7.2, SEKW. NR ID.: 103; 27.3, SEKW.NR ID.: 104; 16,3, SEKW. NR ID.: 105; 42.10, SEKW. NR ID.: 106; 42-3B, SEKW. NR ID.: 107; 42-11, SEKW. NR ID.:108; F1, SEKW. NR ID.: 109; F5, SEKW. NR ID.: 110; F3, SEKW. NR ID.: 111; 42-6B, SEKW. NR ID.: 112 i 42-12, SEKW. NR ID.: 113.
19. Cząsteczka obejmująca sekwencję kwasu nukleinowego kodującą białko kapsydu nowego serotypu wirusa stowarzyszonego z adenowirusem (AAV) o sekwencji aminokwasowej wybranej z grupy składającej się z AAV5, SEKW. NR ID.: 2; 42-2, SEKW. NR ID.: 9; 42-8, SEKW. NR ID.: 27;
42- 15, SEKW. NR ID.: 28; 42-5b, SEKW. NR ID.: 29; 42-1b, SEKW. NR ID.: 30; 42-13, SEKW. NR ID.: 31; 42-3a, SEKW. NR ID.: 32; 42-4, SEKW. NR ID.: 33; 42-5a, SEKW. NR ID.: 34; 42-10, SEKW. NR ID.: 35; 42-3b, SEKW. NR ID.: 36; 42-11, SEKW. NR ID.: 37; 42-6b, SEKW. NR ID.: 38;
43- 1, SEKW. NR ID.: 39; 43-5, SEKW. NR ID.: 40; 43-12, SEKW. NR ID.: 41; 43-20, SEKW. NR ID.: 42; 43-21, SEKW. NR ID.: 43; 43-23, SEKW. NR ID.: 44; 43-25, SEKW. NR ID.: 45; 44.1, SEKW. NR ID.;46; 44.5, SEKW. NR ID.: 47; 223.10, SEKW. NR ID.: 48; 223.2, SEKW. NR ID.: 49; 223.4, SEKW. NR ID.: 50; 223.5, SEKW. NR ID.: 51; 223.6, SEKW. NR ID.: 52; 223.7, SEKW. NR ID.: 53; A3.4, SEKW. NR ID.: 54; A3.5, SEKW. NR ID.: 55; A3.7, SEKW. NR ID.: 56; A3.3, SEKW. NR ID.: 57; 42.12, SEKW, NR ID.: 58; 44.2, i SEKW. NR ID.: 59, AAV10, SEKW. NR ID.: 117; AAV11, SEKW. NR ID.: 118; AAV12, SEKW. NR ID.: 119; A3.1, SEKW. NR ID.: 120 i H6, SEKW. NR ID.: 25.
PL 222 683 B1
323
20. Cząsteczka obejmująca sekwencję kwasu nukleinowego kodującą białko kapsydu wirusa stowarzyszonego z adenowirusem, znamienna tym, że sekwencja kwasu nukleinowego wybrana jest z grupy złożonej z:
vp1, nt 825 do 3049; vp2, nt 1234 do 3049; vp3, nt 1434 do 3049; nt 468 do 3090; i nt 725 do 3090, przy czym numery nukleotydów pochodzą z AAV7, SEKW. NR ID.: 1 i odpowiadają sekwencjom w 42-2, SEKW. NR ID.: 9; 42-8, SEKW. NR ID.: 27; 42-15, SEKW. NR ID.: 28; 42-5b, SEKW. NR ID.: 29; 42-1b, SEKW. NR ID.: 30; 42-13, SEKW. NR ID.: 31; 42-3a, SEKW. NR ID.: 32; 42-4, SEKW. NR ID.: 33; 42-5a, SEKW. NR ID.: 34; 42-10, SEKW. NR ID.: 35; 42-3b, SEKW. NR ID.: 36, 42-11, SEKW. NR ID.: 37; 42-6b, SEKW. NR ID.: 38; 43-1, SEKW. NR ID.: 39; 43-5, SEKW. NR ID.: 40; 43-12, SEKW. NR ID.; 41; 43-21, SEKW. NR ID.: 42; 43-21, SEKW. NR ID.: 43; 43-23, SEKW. NR ID.: 44; 43-25, SEKW. NR ID.: 45; 44.1, SEKW. NR ID.: 46; 44.5, SEKW. NR ID.: 47; 223.10, SEKW. NR ID.: 48; 223.2, SEKW. NR ID.: 49; 223.4, SEKW. NR ID.: 50; 223.5, SEKW. NR ID.: 51; 223.6, SEKW. NR ID.: 52; 223.7, SEKW. NR ID.: 53; A3.4 SEKW. NR ID.: 54; A3.5, SEKW. NR ID.: 55; A3.7, SEKW. NR ID.: 56; A3.3, SEKW. NR ID.: 57; 42.12, SEKW. NR ID.: 58; 44.2, SEKW. NR ID.: 59; AAV10, SEKW. NR ID.;117; AAV11, SEKW. NR ID.: 118; AAV12, SEKW. NR ID.: 119; A3.1, SEKW. NR ID.: 120 i H6, SEKW. NR ID.: 25.
21. Cząsteczka według zastrz. 17 do 20, znamienna tym, że jest plazmidem.
22. Cząsteczka według zastrz. 17 do 21, znamienna tym, że obejmuje ponadto funkcjonalny gen rep AAV.
23. Sposób wytwarzania rekombinowanego wirusa stowarzyszonego z adenowirusami (AAV) obejmującego kapsyd serotypu AAV, znamienny tym, że obejmuje etapy hodowania komórki gospodarza zawierającej: (a) cząsteczkę określoną w zastrz. 17 do 22, która koduje kapsyd wirusa stowarzyszonego z adenowirusem; (b) funkcjonalny gen rep; (c) minigen obejmujący odwrócone powtórzenia końcowe (ITR) AAV i transgen; i (d) wystarczające funkcje pomocnicze do upakowania minigenu do białka kapsydu AAV.
24. Komórka gospodarza transfekowana wirusem stowarzyszonym z adenowirusem określonym w zastrz.13 lub cząsteczką określoną w zastrz. 17 do 22.
25. Kompozycja, znamienna tym, że obejmuje AAV określony w zastrz. 13 i fizjologicznie kompatybilny nośnik.
26. Kompozycja, znamienna tym, że obejmuje cząsteczkę określoną w zastrz. 17 do 22 i fizjologicznie kompatybilny nośnik.
27. Sposób dostarczania transgenu do komórki, znamienny tym, że obejmuje etap kontaktowania komórki z AAV określonym w zastrz. 13, przy czym rAAV obejmuje transgen.
28. Sposób identyfikacji serotypu sekwencji wirusa stowarzyszonego z adenowirusem (AAV) w próbce jako znanych lub nieznanych, znamienny tym, że obejmuje etapy:
(a) uzyskania analizy trawienia enzymatycznego próbki zawierającej cząsteczki DNA obejmujące sekwencje AAV obejmujące całość lub część pozycji od 2886 do około 3143 AAV1, SEKW. NR ID.: 1, oraz odpowiadających im regionów w innych serotypach AAV; oraz (b) porównania analizy trawienia enzymatycznego próbki z analizą trawienia enzymatycznego odpowiadających regionów jednego lub więcej serotypów AAV, identyfikując tym samym sekwencje AAV w próbce jako pochodzące z jednego lub więcej serotypów AAV lub z nieznanego serotypu.
29. Sposób według zastrz. 28, znamienny tym, że sekwencje AAV zostały uzyskane sposobem określonym w zastrz. 28.
30. Zestaw diagnostyczny do wykrywania obecności nieznanego wirusa stowarzyszonego z adenowirusem (AAV) w próbce, znamienny tym, że składa się (a) pierwszego zestawu starterów, które specyficznie namnażają pierwszy region sekwencji kwasu nukleinowego AAV;
(b) ewentualnie drugiego zestawu starterów specyficznych dla drugiego regionu sekwencji kwasu nukleinowego, który obejmuje pierwszy region sekwencji AAV oraz sekwencje w kierunku 5' od pierwszego regionu tak, że uzyskiwane są sekwencje wydłużania 5' AAV, które przyłączają się do końca 5' sekwencji AAV amplifikowanych przez startery dla pierwszego regionu;
324
PL 222 683 B1 (c) ewentualnie trzeciego zestawu starterów specyficznych dla trzeciego regionu, który obejm uje pierwszy region sekwencji AAV oraz sekwencje w kierunku 3' od pierwszego regionu tak, że uzyskiwane są sekwencje wydłużania 3' AAV, które przyłączają się do końca 3' sekwencji AAV amplifikowanych przez startery dla pierwszego regionu;
przy czym każdy z tych regionów jest wyznaczony wcześniej w oparciu o dopasowanie sekwencji kwasu nukleinowego co najmniej dwóch serotypów AAV i każdy z tych regionów obejmuje sekwencje kwasu nukleinowego wysoce konserwatywne na odcinku co najmniej 18 par zasad na końcu 5', ewentualnie sekwencje zmienne pośrodku oraz sekwencje wysoce konserwatywne na odcinku co najmniej 18 par zasad na końcu 3' regionu sekwencji, względem sekwencji co najmniej dwóch dopasowanych serotypów AAV; a każdy z zestawów starterów składa się ze startera 5' i startera 3'.
31. Sposób izolacji nowych wirusów stowarzyszonych z adenowirusami (AAV) z komórki, znamienny tym, że obejmuje etapy: (a) zakażenia komórki wirusem dostarczającym funkcji pomocniczych dla tego AAV; (b) izolacji zakaźnych klonów zawierających AAV; (c) sekwencjonowania wyizolowanych AAV; i (d) porównania sekwencji wyizolowanych AAV ze znanymi serotypami AAV, przy czym różnice w sekwencji wyizolowanego AAV i znanych serotypów AAV wskazują na obecność nowego AAV.
32. Sposób według zastrz. 31, znamienny tym, że wirus ten jest adenowirusem.
33. Sposób według zastrz. 32, znamienny tym, że ten adenowirus pochodzi od człowieka lub naczelnego, innego niż człowiek.
34. Nowy serotyp wirusa stowarzyszonego z adenowirusem (AAV) zidentyfikowany sposobem określonym w zastrz. 31.
35. Wyizolowany wirus stowarzyszony z adenowirusem (AAV) obejmujący kapsyd AAV o sekwencji aminokwasowej AAV7 aminokwasów 1 do 737 SEKW. NR ID.: 2.
36. Białko obejmujące fragment białka kapsydu AAV, znamienne tym, że fragment wybrany jest z grupy złożonej z:
białka kapsydu vp2, aminokwasy (aa) 138 do 737; białka kapsydowe vp3, aa 203 do 737; i aa 1 do 184, aa 199 do 259; aa 274 do 446; aa 603 do 659; aa 670 do 706; aa 724 do 736; aa 185 do 198; aa 260 do 273; aa 447 do 477; aa 495 do 602; aa 660 do 669; i aa 707 do 723, przy czym numeracja aminokwasów odpowiada kapsydowi AAV7 SEKW. NR ID.: 2.
37. Sztuczne białko kapsydu wirusa stowarzyszonego z adenowirusem (AAV) obejmujące jeden lub więcej fragmentów białkowych określonych w zastrz. 36.
38. Zrekombinowany wirus stowarzyszony z adenowirusem (AAV) obejmujący sztuczny kapsyd określony w zastrz. 37.
39. Cząsteczka obejmująca sekwencję kwasu nukleinowego kodującą białko określone w zastrz. 36 i 37.
40. Cząsteczka obejmująca sekwencję kwasu nukleinowego kodującą białko kapsydu nowego serotypu wirusa stowarzyszonego z adenowirusem (AAV) o sekwencji aminokwasowej AAV7, aminokwasów 1 do 737 SEKW. NR ID.: 2.
41. Cząsteczka obejmująca sekwencję kwasu nukleinowego kodującą białko kapsydu nowego serotypu wirusa stowarzyszonego z adenowirusem (AAV) o sekwencji aminokwasowej AAV7, SEKW. NR ID.: 1.
42. Cząsteczka obejmująca sekwencję kwasu nukleinowego kodującą fragment białka kapsydu wirusa stowarzyszonego z adenowirusem, znamienna tym, że sekwencja kwasu nukleinowego wybrana jest z grupy złożonej z:
vp1, nt 825 do 3049; vp2, nt 1234 do 3049; vp3, nt 1434 do 3049; nt 468 do 3090; i nt 725 do 3090, przy czym numery nukleotydów pochodzą z AAV7, SEKW. NR ID.: 1.
43. Cząsteczka według zastrz. 37 albo zastrz. 39-41 lub 42, znamienna tym, że jest plazmidem.
44. Cząsteczka według zastrz. 37 albo zastrz. 39-41 lub 42, znamienna tym, że obejmuje ponadto funkcjonalny gen rep AAV.
PL 222 683 B1
325
45. Komórka gospodarza transfekowana wirusem stowarzyszonym z adenowirusem określonym w zastrz. 35 lub cząsteczką określoną w zastrz. 37 lub zastrz. 39-41 lub 42.
46. Kompozycja zawierająca AAV określony w zastrz. 35 lub zastrz. 38 oraz dopuszczalny fizjologicznie nośnik.
47. Kompozycja zawierająca cząsteczkę określoną w zastrz. 37 lub zastrz. 39-41, lub 42 oraz dopuszczalny fizjologicznie nośnik.
48. Sposób dostarczania transgenu do komórki, znamienny tym, że obejmuje etap kontaktowania komórki z AAV określonym w zastrz. 35 lub zastrz. 38, przy czym ten rAAV obejmuje transgen.
49. Cząsteczka obejmująca heterologiczną sekwencję kwasu nukleinowego wirusa stowarzyszonego z adenowirusem (AAV) serotypu 7, znamienna tym, że sekwencja obejmuje:
nukleotydy (nt) 1 to 107 SEKW. NR ID.: 1; nt 107 do 2215 SEKW. NR ID.: 1; nt 334 do 2215 SEKW. NR ID.: 1; nt 2222 do 4435 SEKW. NR ID.: 1; nt 2633 do 4435 SEKW. NR ID.: 1; nt 2831 do 4435 SEKW. NR ID.: 1; i nt 4704 do 4721 SEKW. NR ID.: 1.
50. Cząsteczka kodująca białko rep wirusa stowarzyszonego z adenowirusem (AAV) serotypu 7 lub jego fragment, znamienna tym, że białko lub fragment są wybrane z grupy złożonej z: aminokwasów (aa) 1 do 623, aa 1 do 171; aa 172 do 372, aa 373 do 444, i aa 445 do 623 SEKW. NR ID.: 3.
51. Komórka gospodarza zawierająca cząsteczkę określoną w zastrz. 49 lub 50.
52. Wyizolowany wirus stowarzyszony z adenowirusem (AAV) obejmujący kapsyd AAV8 o sekwencji aminokwasowej SEKW. NR ID.: 4 lub jej funkcjonalny fragment.
53. Wyizolowany AAV według zastrz. 52, znamienny tym, że AAV ponadto zawiera minigen mający odwrócone powtórzenia końcowe AAV i gen heterologiczny funkcjonalnie połączony z sekwencjami regulatorowymi, które kierują jego ekspresją w komórce gospodarza.
54. Białko kapsydu obejmujące białko kapsydu AAV8 wybrane z grupy składającej się z: AAV8vp1, AAV8vp2, AAV8vp3 i ich funkcjonalnych fragmentów.
55. Sztuczne białko kapsydu stowarzyszonego z adenowirusem (AAV), znamienne tym, że obejmuje jedno lub więcej białko kapsydu AAV8 określone w zastrz. 54.
56. Wirus stowarzyszony z adenowirusem (AAV) obejmujący kapsyd AAV8 i minigen mający odwrócone powtórzenia końcowe AAV i gen heterologiczny funkcjonalnie połączony z sekwencjami regulatorowymi, które kierują jego ekspresją w komórce gospodarza.
57. AAV według zastrz. 56, znamienny tym, że kapsyd AAV8 ma sekwencję aminokwasową wybraną z SEKW. NR ID.: 4 i sekwencji o co najmniej 97% identyczności z SEKW. NR ID.: 4.
58. Cząsteczka obejmująca sekwencję aminokwasową kodującą biało określone w zastrz. 54.
59. Rekombinowana komórka, znamienna tym, że jest transfekowaną lub transformowaną cząsteczką określoną w zastrz. 58.
60. Rekombinowana komórka według zastrz. 59, znamienna tym, że ponadto obejmuje funkcjonalny gen rep AAV z AAV2.
61. Cząsteczka według zastrz. 58, znamienna tym, że jest plazmidem.
62. Sposób wytwarzania rekombinowanego wirusa stowarzyszonego z adenowirusem (AAV) obejmującego kapsyd serotypu AAV, znamienny tym, że obejmuje etapy hodowania komórki gospodarza zawierającej (a) cząsteczkę kodującą białko kapsydu AAV; (b) funkcjonalny gen rep; (c) minigen obejmujący odwrócone powtórzenia końcowe AAV (ITR) i transgen; i (d) sekwencje o wystarczającej funkcji pomocniczej do upakowania minigenu do białka kapsydu AAV, przy czym komórka gospodarza zawiera cząsteczkę określoną w zastrz. 58.
63 Komórka gospodarza transfekowana wirusem stowarzyszonym z adenowirusem określonym w zastrz. 52, 53, 56 lub 57.
64. Kompozycja, znamienna tym, że zawiera AAV określony w zastrz. 52, 53, 56 lub 57 i fizjologicznie kompatybilny nośnik.
65. Sposób dostarczania transgenu do komórki, znamienny tym, że obejmuje etap kontaktowania komórki z AAV określonym w zastrz. 53, 56 lub 57.
66. Zastosowanie wirusa stowarzyszonego z adenowirusem określonego w zastrz. 53, 56 lub 57 do wytwarzania leku do dostarczania transgenu do komórki.
326
PL 222 683 B1
67. Sposób wytwarzania rekombinowanych wirusów stowarzyszonych z adenowirusem (AAV) obejmujących kapsyd serotypu AAV, znamienny tym, że obejmuje etapy hodowania komórki gospodarza zawierającej: (a) cząsteczkę określoną w zastrz. 37 lub zastrz. 39-41 lub 42 kodującą kapsyd wirusa stowarzyszonego z adenowirusem; (b) funkcjonalny gen rep; (c) minigen obejmujący odwróc one powtórzenia końcowe (ITR) AAV oraz transgen; i (d) geny kodujące wystarczające funkcje pomocnicze pozwalające na upakowanie minigenu do białka kapsydu AAV.
Rysunki
I 50
42 2 ..................................................
42~S ..................................................
42_I3 ..................................................
42__5b ..................................................
42 łb ..................................................
42JL3 ..................................................
42_3a ..................................................
42 4 ,.. . '.............................................
42 5s ..................................................
42_1C ..................................................
42 3b ..................................................
42_li ...................................................
42 Sb ..................................................
43 1 ..................................................
43_5 ..................................................
43JL2 ..................................................
43~20 ..................................................
43 21 ..................................................
42 12
AAV1
TGAACGAGCA
GCAGCCATGC
CCATTTTGAC
CGCGAAATT
CGGGCTTCTA
AAV2
GCGGGAGGTT
TGAACGCGCA
GCCGCCATGC
CCATTTTGAA
CGGGGTTTTA
GCAGCCATGC
AAV3
CCATTTTGAC
CGCGAAATT
TGAACGAGCA
PL409838A 2001-11-13 2002-11-12 Rekombinowane wirusy stowarzyszone z adenowirusem (AAV), sposoby ich wytwarzania, pakująca komórka gospodarza, kompozycja zawierająca wirus, zastosowanie wirusa, wyizolowane wirusy AAV, białka,sztuczne białka kapsydu, cząsteczki, komórki gospodarza, sposoby dostarczania transgenu, sposób identyfikacji serotypu, zestaw diagnostyczny, sposób izolacji nowych wirusów, rekombinowana komórka PL222683B1 (pl)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US35060701P 2001-11-13 2001-11-13
US34111701P 2001-12-17 2001-12-17
US37706602P 2002-05-01 2002-05-01
US38667502P 2002-06-05 2002-06-05

Publications (2)

Publication Number Publication Date
PL409838A1 PL409838A1 (pl) 2015-07-20
PL222683B1 true PL222683B1 (pl) 2016-08-31

Family

ID=27502639

Family Applications (4)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PL409838A PL222683B1 (pl) 2001-11-13 2002-11-12 Rekombinowane wirusy stowarzyszone z adenowirusem (AAV), sposoby ich wytwarzania, pakująca komórka gospodarza, kompozycja zawierająca wirus, zastosowanie wirusa, wyizolowane wirusy AAV, białka,sztuczne białka kapsydu, cząsteczki, komórki gospodarza, sposoby dostarczania transgenu, sposób identyfikacji serotypu, zestaw diagnostyczny, sposób izolacji nowych wirusów, rekombinowana komórka
PL404537A PL221877B1 (pl) 2001-11-13 2002-11-12 Wirus stowarzyszony z adenowirusem, kompozycja, wyizolowane białko kapsydu, wyizolowane lub syntetyczne cząsteczki kwasu nukleinowego, sposób wytwarzania rekombinowanego wirusa, komórka gospodarza
PL397823A PL220644B1 (pl) 2001-11-13 2002-11-12 Wirus stowarzyszony z adenowirusem (AAV), kompozycja, wyizolowane białko kapsydowe, wyizolowane lub syntetyczne cząsteczki kwasu nukleinowego, sposób wytwarzania zrekombinowanego wirusa, komórka gospodarza
PL373864A PL217623B1 (pl) 2001-11-13 2002-11-12 Sposób wykrywania sekwencji wirusa stowarzyszonego z adenowirusem (AAV) w próbce

Family Applications After (3)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PL404537A PL221877B1 (pl) 2001-11-13 2002-11-12 Wirus stowarzyszony z adenowirusem, kompozycja, wyizolowane białko kapsydu, wyizolowane lub syntetyczne cząsteczki kwasu nukleinowego, sposób wytwarzania rekombinowanego wirusa, komórka gospodarza
PL397823A PL220644B1 (pl) 2001-11-13 2002-11-12 Wirus stowarzyszony z adenowirusem (AAV), kompozycja, wyizolowane białko kapsydowe, wyizolowane lub syntetyczne cząsteczki kwasu nukleinowego, sposób wytwarzania zrekombinowanego wirusa, komórka gospodarza
PL373864A PL217623B1 (pl) 2001-11-13 2002-11-12 Sposób wykrywania sekwencji wirusa stowarzyszonego z adenowirusem (AAV) w próbce

Country Status (22)

Country Link
US (15) US20030138772A1 (pl)
EP (4) EP1310571B1 (pl)
JP (6) JP4677187B2 (pl)
KR (2) KR101015854B1 (pl)
CN (6) CN103555677B (pl)
AT (2) ATE520707T1 (pl)
AU (1) AU2002361573B2 (pl)
BR (3) BR122016004944B8 (pl)
CA (6) CA3066428C (pl)
DE (1) DE60209193T2 (pl)
DK (1) DK1310571T3 (pl)
ES (3) ES2258601T3 (pl)
HU (2) HU229379B1 (pl)
IL (11) IL161827A0 (pl)
MX (3) MX346493B (pl)
NO (4) NO334379B1 (pl)
NZ (7) NZ532635A (pl)
PH (2) PH12014501487A1 (pl)
PL (4) PL222683B1 (pl)
SG (5) SG157224A1 (pl)
WO (1) WO2003042397A2 (pl)
ZA (1) ZA200403360B (pl)

Families Citing this family (638)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0932694A2 (en) 1996-09-11 1999-08-04 THE UNITED STATES GOVERNMENT as represented by THE DEPARTMENT OF HEALTH AND HUMAN SERVICES Aav4 vector and uses thereof
DE69939169D1 (de) 1998-05-28 2008-09-04 Us Gov Health & Human Serv Aav5 vektoren und deren verwendung
WO2004060278A2 (en) 2002-12-06 2004-07-22 Isis Pharmaceuticals, Inc. Methods for rapid identification of pathogens in humans and animals
US7226739B2 (en) 2001-03-02 2007-06-05 Isis Pharmaceuticals, Inc Methods for rapid detection and identification of bioagents in epidemiological and forensic investigations
US7666588B2 (en) 2001-03-02 2010-02-23 Ibis Biosciences, Inc. Methods for rapid forensic analysis of mitochondrial DNA and characterization of mitochondrial DNA heteroplasmy
US7718354B2 (en) 2001-03-02 2010-05-18 Ibis Biosciences, Inc. Methods for rapid identification of pathogens in humans and animals
US20040121309A1 (en) 2002-12-06 2004-06-24 Ecker David J. Methods for rapid detection and identification of bioagents in blood, bodily fluids, and bodily tissues
US20030027135A1 (en) 2001-03-02 2003-02-06 Ecker David J. Method for rapid detection and identification of bioagents
US7217510B2 (en) 2001-06-26 2007-05-15 Isis Pharmaceuticals, Inc. Methods for providing bacterial bioagent characterizing information
US8073627B2 (en) 2001-06-26 2011-12-06 Ibis Biosciences, Inc. System for indentification of pathogens
CN103555677B (zh) 2001-11-13 2018-01-30 宾夕法尼亚大学托管会 检测和/或鉴定腺伴随病毒(aav)序列以及分离所鉴定的新型序列的方法
PT2573170T (pt) * 2001-12-17 2018-03-26 Univ Pennsylvania Sequências de um vírus adenoassociado (aav) de serotipo 9, vetor contendo as mesmas, e suas utilizações
WO2003052051A2 (en) 2001-12-17 2003-06-26 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Adeno-associated virus (aav) serotype 8 sequences
CA2426283C (en) 2002-04-29 2006-06-27 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Method for direct rescue and amplification of integrated viruses from cellular dna of tissues
US7419817B2 (en) 2002-05-17 2008-09-02 The United States Of America As Represented By The Secretary Department Of Health And Human Services, Nih. Scalable purification of AAV2, AAV4 or AAV5 using ion-exchange chromatography
AU2003265855A1 (en) * 2002-08-28 2004-03-19 University Of Florida Modified aav
US8046171B2 (en) 2003-04-18 2011-10-25 Ibis Biosciences, Inc. Methods and apparatus for genetic evaluation
US8057993B2 (en) 2003-04-26 2011-11-15 Ibis Biosciences, Inc. Methods for identification of coronaviruses
US8158354B2 (en) 2003-05-13 2012-04-17 Ibis Biosciences, Inc. Methods for rapid purification of nucleic acids for subsequent analysis by mass spectrometry by solution capture
US7964343B2 (en) 2003-05-13 2011-06-21 Ibis Biosciences, Inc. Method for rapid purification of nucleic acids for subsequent analysis by mass spectrometry by solution capture
WO2005017101A2 (en) 2003-05-19 2005-02-24 THE GOVERNMENT OF THE UNITED STATES OF AMERICA, as represented by THE SECRETARY, DEPARTMENT OF HEALTH & HUMAN SERVICES, NATIONAL INSTITUTES OF HEALTH Avian adenoassociated virus (aaav) and uses thereof
JP2007524386A (ja) 2003-06-19 2007-08-30 アビジェン， インコーポレイテッド 減少した免疫反応性を有するａａｖビリオン、およびその使用
US9233131B2 (en) 2003-06-30 2016-01-12 The Regents Of The University Of California Mutant adeno-associated virus virions and methods of use thereof
US9441244B2 (en) 2003-06-30 2016-09-13 The Regents Of The University Of California Mutant adeno-associated virus virions and methods of use thereof
AU2010201278B2 (en) * 2003-09-01 2012-11-15 Academisch Medisch Centrum AAV vectors for in vivo gene therapy of rheumatoid arthritis
US8529885B2 (en) * 2003-09-01 2013-09-10 Academisch Medisch Centrum AAV vectors for in vivo gene therapy of rheumatoid arthritis
US8097416B2 (en) 2003-09-11 2012-01-17 Ibis Biosciences, Inc. Methods for identification of sepsis-causing bacteria
US8546082B2 (en) 2003-09-11 2013-10-01 Ibis Biosciences, Inc. Methods for identification of sepsis-causing bacteria
US8288523B2 (en) 2003-09-11 2012-10-16 Ibis Biosciences, Inc. Compositions for use in identification of bacteria
DK3211085T3 (da) * 2003-09-30 2021-06-21 Univ Pennsylvania Klader af adeno-associeret virus (aav), sekvenser, vektorer indeholdende disse og anvendelser deraf
AU2011250849B2 (en) * 2003-09-30 2013-09-12 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Adeno-associated virus (AAV) clades, sequences, vectors containing same, and uses therefor
WO2005056807A2 (en) 2003-12-04 2005-06-23 The Government Of The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services, National Institutes Of Health Bovine adeno-associated viral (baav) vector and uses thereof
US7666592B2 (en) 2004-02-18 2010-02-23 Ibis Biosciences, Inc. Methods for concurrent identification and quantification of an unknown bioagent
US8119336B2 (en) 2004-03-03 2012-02-21 Ibis Biosciences, Inc. Compositions for use in identification of alphaviruses
EP1742657B1 (en) 2004-04-28 2013-11-06 The Trustees of The University of Pennsylvania Immunization regimen with e4-deleted adenovirus prime and e1-deleted adenovirus boost
ES2361000T3 (es) 2004-04-28 2011-06-13 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Suministro secuencial de moléculas inmunogénicas mediante administraciones de un adenovirus y de un virus adeno-asociado.
EP2458619B1 (en) 2004-05-24 2017-08-02 Ibis Biosciences, Inc. Mass spectrometry with selective ion filtration by digital thresholding
US20050266411A1 (en) 2004-05-25 2005-12-01 Hofstadler Steven A Methods for rapid forensic analysis of mitochondrial DNA
US7811753B2 (en) 2004-07-14 2010-10-12 Ibis Biosciences, Inc. Methods for repairing degraded DNA
EP1771571A2 (en) * 2004-07-30 2007-04-11 Targeted Genetics Corporation Recombinant aav based vaccine methods
US7309589B2 (en) * 2004-08-20 2007-12-18 Vironix Llc Sensitive detection of bacteria by improved nested polymerase chain reaction targeting the 16S ribosomal RNA gene and identification of bacterial species by amplicon sequencing
WO2006135400A2 (en) 2004-08-24 2006-12-21 Isis Pharmaceuticals, Inc. Methods for rapid identification of recombinant organisms
EP1804781A1 (en) * 2004-10-05 2007-07-11 Merz Pharma GmbH & Co.KGaA Novel cyclic and acyclic propenones for treating cns disorders
US8084207B2 (en) 2005-03-03 2011-12-27 Ibis Bioscience, Inc. Compositions for use in identification of papillomavirus
US8182992B2 (en) 2005-03-03 2012-05-22 Ibis Biosciences, Inc. Compositions for use in identification of adventitious viruses
US8999678B2 (en) * 2005-04-07 2015-04-07 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Method of increasing the function of an AAV vector
WO2006119432A2 (en) * 2005-04-29 2006-11-09 The Government Of The U.S.A., As Rep. By The Sec., Dept. Of Health & Human Services Isolation, cloning and characterization of new adeno-associated virus (aav) serotypes
EP1904655A2 (en) 2005-07-21 2008-04-02 Isis Pharmaceuticals, Inc. Methods for rapid identification and quantitation of nucleic acid variants
WO2007100397A2 (en) * 2005-11-28 2007-09-07 Isis Pharmaceuticals, Inc. Compositions for use in identification of adventitious contaminant viruses
US7588772B2 (en) 2006-03-30 2009-09-15 Board Of Trustees Of The Leland Stamford Junior University AAV capsid library and AAV capsid proteins
EP2018421B1 (en) 2006-04-28 2012-12-19 The Trustees of the University of Pennsylvania Scalable production method for aav
EP2044199B1 (en) * 2006-07-25 2012-11-14 Celladon Corporation Extended antegrade epicardial coronary infusion of adeno-associated viral vectors comprising serca2a for gene therapy
EP2064332B1 (en) 2006-09-14 2012-07-18 Ibis Biosciences, Inc. Targeted whole genome amplification method for identification of pathogens
JP5680304B2 (ja) 2007-02-23 2015-03-04 アイビス バイオサイエンシズ インコーポレイティッド 迅速な法医学的ｄｎａ分析法
EP2623605B1 (en) * 2007-04-09 2018-11-28 University of Florida Research Foundation, Inc. RAAV vector compositions having tyrosine-modified capsid proteins and methods for use
US9611302B2 (en) 2007-04-09 2017-04-04 University Of Florida Research Foundation, Inc. High-transduction-efficiency RAAV vectors, compositions, and methods of use
US9725485B2 (en) 2012-05-15 2017-08-08 University Of Florida Research Foundation, Inc. AAV vectors with high transduction efficiency and uses thereof for gene therapy
US9598724B2 (en) 2007-06-01 2017-03-21 Ibis Biosciences, Inc. Methods and compositions for multiple displacement amplification of nucleic acids
EP2058401A1 (en) * 2007-10-05 2009-05-13 Genethon Widespread gene delivery to motor neurons using peripheral injection of AAV vectors
CN102159713A (zh) 2008-05-20 2011-08-17 Eos神经科学公司 用于递送光敏蛋白的载体和使用方法
US9217155B2 (en) 2008-05-28 2015-12-22 University Of Massachusetts Isolation of novel AAV'S and uses thereof
WO2010033625A1 (en) 2008-09-16 2010-03-25 Ibis Biosciences, Inc. Microplate handling systems and related computer program products and methods
EP2347254A2 (en) 2008-09-16 2011-07-27 Ibis Biosciences, Inc. Sample processing units, systems, and related methods
WO2010033599A2 (en) 2008-09-16 2010-03-25 Ibis Biosciences, Inc. Mixing cartridges, mixing stations, and related kits, systems, and methods
EP2396803A4 (en) 2009-02-12 2016-10-26 Ibis Biosciences Inc IONIZATION PROBE ASSEMBLIES
ES2724122T3 (es) 2009-04-30 2019-09-06 Univ Pennsylvania Composiciones para dirigir células de las vías respiratorias de conducción que comprenden construcciones de virus adenoasociado
WO2010138263A2 (en) 2009-05-28 2010-12-02 University Of Massachusetts Novel aav 's and uses thereof
WO2010143761A1 (ko) * 2009-06-12 2010-12-16 (주)바이오니아 미지시료 내 감염성 미생물을 신속하게 검출하는 방법
EP2454000A4 (en) 2009-07-17 2016-08-10 Ibis Biosciences Inc SYSTEMS FOR IDENTIFYING BIOLOGICAL SUBSTANCES
US8950604B2 (en) 2009-07-17 2015-02-10 Ibis Biosciences, Inc. Lift and mount apparatus
US20120244127A1 (en) 2009-10-01 2012-09-27 The Trustees Of The University Of Pennsylvania AAV Vectors Expressing SEC10 for Treating Kidney Damage
US9890408B2 (en) 2009-10-15 2018-02-13 Ibis Biosciences, Inc. Multiple displacement amplification
SG10201908848RA (en) 2010-03-29 2019-10-30 Univ Pennsylvania Pharmacologically induced transgene ablation system
US9315825B2 (en) 2010-03-29 2016-04-19 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Pharmacologically induced transgene ablation system
DK2826860T3 (en) 2010-04-23 2018-12-03 Univ Massachusetts CNS targeting AAV vectors and methods for their use
CA2833905C (en) 2010-04-23 2019-09-10 University Of Massachusetts Multicistronic expression constructs
EP2561075B1 (en) 2010-04-23 2018-06-27 University of Massachusetts Aav-based treatment of cholesterol-related disorders
US9309534B2 (en) 2010-07-12 2016-04-12 Universidad Autonoma De Barcelona Gene therapy composition for use in diabetes treatment
US8663624B2 (en) 2010-10-06 2014-03-04 The Regents Of The University Of California Adeno-associated virus virions with variant capsid and methods of use thereof
EP2699688A1 (en) 2011-04-20 2014-02-26 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Regimens and compositions for aav-mediated passive immunization of airborne pathogens
EP3318634A1 (en) 2011-04-21 2018-05-09 University of Massachusetts Raav-based compositions and methods for treating diseases involving dominant-negative or gain of function mutations
DK4005603T3 (da) 2011-04-22 2024-11-25 Univ California Adeno-associerede virus-virioner med variant kapsid og fremgangsmåder til anvendelse heraf
US9169299B2 (en) 2011-08-24 2015-10-27 The Board Of Trustees Of The Leleand Stanford Junior University AAV capsid proteins for nucleic acid transfer
US20130136729A1 (en) * 2011-11-11 2013-05-30 University of Virginia Patent Foundation, d/b/a University of Virginia Licensing & Ventures Group Compositions and methods for targeting and treating diseases and injuries using adeno-associated virus vectors
WO2013123503A1 (en) 2012-02-17 2013-08-22 The Children's Hospital Of Philadelphia Aav vector compositions and methods for gene transfer to cells, organs and tissues
US10093947B2 (en) * 2012-02-28 2018-10-09 Cornell University AAV-directed persistent expression of an anti-nicotine antibody gene for smoking cessation
US10004811B2 (en) * 2012-04-13 2018-06-26 Cornell University Development of a highly efficient second generation nicotine-conjugate vaccine to treat nicotine addiction
US10294281B2 (en) 2012-05-15 2019-05-21 University Of Florida Research Foundation, Incorporated High-transduction-efficiency rAAV vectors, compositions, and methods of use
US12358954B2 (en) 2012-05-15 2025-07-15 University Of Florida Research Foundation, Incorporated Capsid-modified rAAV vector compositions and methods therefor
EP2692868A1 (en) 2012-08-02 2014-02-05 Universitat Autònoma De Barcelona Adeno-associated viral (AAV) vectors useful for transducing adipose tissue
US9567376B2 (en) 2013-02-08 2017-02-14 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Enhanced AAV-mediated gene transfer for retinal therapies
DK2956477T4 (da) 2013-02-15 2024-04-15 Bioverativ Therapeutics Inc Optimeret faktor viii-gen
US8957044B2 (en) 2013-03-01 2015-02-17 Wake Forest University Health Sciences Systemic gene replacement therapy for treatment of X-linked myotubular myopathy (XLMTM)
SG10201707319UA (en) 2013-03-15 2017-10-30 Univ Pennsylvania Compositions and methods for treating mpsi
US9719106B2 (en) 2013-04-29 2017-08-01 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Tissue preferential codon modified expression cassettes, vectors containing same, and uses thereof
CA2907799A1 (en) 2013-05-31 2014-12-04 The Regents Of The University Of California Adeno-associated virus variants and methods of use thereof
CA3209883A1 (en) 2013-07-22 2015-01-29 The Children's Hospital Of Philadelphia Variant aav and compositions, methods and uses for gene transfer to cells, organs and tissues
HUE052814T2 (hu) 2014-01-31 2021-05-28 Temple Univ Of The Commonwealth System A szívelégtelenség terápiájához célfehérjeként alkamazott BAG3
GB201403684D0 (en) 2014-03-03 2014-04-16 King S College London Vector
US10072251B2 (en) 2014-02-19 2018-09-11 University Of Massachusetts Recombinant AAVS having useful transcytosis properties
WO2015138357A2 (en) 2014-03-09 2015-09-17 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Compositions useful in treatment of otc deficency
ES3042252T3 (en) 2014-03-17 2025-11-19 Adverum Biotechnologies Inc Compositions and methods for enhanced gene expression in cone cells
AU2015231294B2 (en) 2014-03-18 2020-10-29 University Of Massachusetts rAAV-based compositions and methods for treating amyotrophic lateral sclerosis
EP3628334B1 (en) 2014-03-21 2023-06-28 Genzyme Corporation Gene therapy for retinitis pigmentosa
EP2933335A1 (en) 2014-04-18 2015-10-21 Genethon A method of treating peripheral neuropathies and motor neuron diseases
WO2015164723A1 (en) 2014-04-25 2015-10-29 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Methods and compositions for treating metastatic breast cancer and other cancers in the brain
WO2015164786A1 (en) 2014-04-25 2015-10-29 University Of Massachusetts Recombinant aav vectors useful for reducing immunity against transgene products
US11555059B2 (en) 2014-04-25 2023-01-17 The Trustees Of The University Of Pennsylvania LDLR variants and their use in compositions for reducing cholesterol levels
DK3142750T3 (da) 2014-05-13 2020-09-14 Univ Pennsylvania Sammensætninger omfattende aav, som udtrykker dobbelt-antistofkonstrukter og anvendelser deraf
WO2015187825A2 (en) 2014-06-03 2015-12-10 University Of Massachusetts Compositions and methods for modulating dysferlin expression
WO2015191508A1 (en) 2014-06-09 2015-12-17 Voyager Therapeutics, Inc. Chimeric capsids
EP2960336A1 (en) 2014-06-27 2015-12-30 Genethon Efficient systemic treatment of dystrophic muscle pathologies
US11008561B2 (en) 2014-06-30 2021-05-18 Bioverativ Therapeutics Inc. Optimized factor IX gene
CN107074805B (zh) 2014-07-03 2021-02-26 德州大学系统董事会 用于治疗疾病的gls1抑制剂
EP4012035B1 (en) 2014-09-16 2024-11-06 Genzyme Corporation Adeno-associated viral vectors for treating myocilin (myoc) glaucoma
WO2016044478A1 (en) 2014-09-16 2016-03-24 Genzyme Corporation Adeno-associated viral vectors for treating myocilin (myoc) glaucoma
WO2016054554A1 (en) 2014-10-03 2016-04-07 University Of Massachusetts Heterologous targeting peptide grafted aavs
EP3795580A1 (en) 2014-10-03 2021-03-24 University of Massachusetts High efficiency library-identified aav vectors
WO2016065001A1 (en) 2014-10-21 2016-04-28 University Of Massachusetts Recombinant aav variants and uses thereof
CN112553229A (zh) 2014-11-05 2021-03-26 沃雅戈治疗公司 用于治疗帕金森病的aadc多核苷酸
RU2020108189A (ru) 2014-11-14 2020-03-11 Вояджер Терапьютикс, Инк. Композиции и способы лечения бокового амиотрофического склероза (als)
MX2017006217A (es) 2014-11-14 2018-05-02 Voyager Therapeutics Inc Polinucleotidos moduladores.
EP3230441A4 (en) 2014-12-12 2018-10-03 Voyager Therapeutics, Inc. Compositions and methods for the production of scaav
EP3242945B1 (en) 2015-01-07 2021-09-01 Universitat Autònoma de Barcelona Single-vector gene construct comprising insulin and glucokinase genes
WO2016115503A1 (en) 2015-01-16 2016-07-21 Voyager Therapeutics, Inc. Central nervous system targeting polynucleotides
IL296391B2 (en) 2015-01-20 2024-06-01 Genzyme Corp Analytical ultracentrifugation for characterization of recombinant viral particles
US20180030096A1 (en) 2015-02-03 2018-02-01 University Of Florida Research Foundation, Inc. Recombinant aav1, aav5, and aav6 capsid mutants and uses thereof
JP6929791B2 (ja) 2015-02-09 2021-09-01 デューク ユニバーシティ エピゲノム編集のための組成物および方法
NZ772772A (en) 2015-02-10 2024-12-20 Genzyme Corp Enhanced delivery of viral particles to the striatum and cortex
SG11201706444TA (en) 2015-02-10 2017-09-28 Genzyme Corp VARIANT RNAi
US10584321B2 (en) 2015-02-13 2020-03-10 University Of Massachusetts Compositions and methods for transient delivery of nucleases
CN114480502A (zh) 2015-03-02 2022-05-13 阿德夫拉姆生物技术股份有限公司 用于将多核苷酸玻璃体内递送到视网膜视锥的组合物和方法
JP2018509164A (ja) 2015-03-10 2018-04-05 ザ・トラスティーズ・オブ・コロンビア・ユニバーシティ・イン・ザ・シティ・オブ・ニューヨーク 組換えＧｌｕｔ１アデノ随伴ウイルスベクターコンストラクトおよびＧｌｕｔ１発現を回復させる方法
WO2016154344A1 (en) 2015-03-24 2016-09-29 The Regents Of The University Of California Adeno-associated virus variants and methods of use thereof
TWI707951B (zh) 2015-04-08 2020-10-21 美商健臻公司 過大腺相關載體之製造
EP4491733A3 (en) 2015-04-23 2025-03-26 University of Massachusetts Modulation of aav vector transgene expression
CA3021949C (en) 2015-04-24 2023-10-17 University Of Massachusetts Modified aav constructs and uses thereof
EP3288594B1 (en) 2015-04-27 2022-06-29 The Trustees of The University of Pennsylvania Dual aav vector system for crispr/cas9 mediated correction of human disease
GB201508026D0 (en) 2015-05-11 2015-06-24 Ucl Business Plc Capsid
US11535665B2 (en) 2015-05-13 2022-12-27 The Trustees Of The University Of Pennsylvania AAV-mediated expression of anti-influenza antibodies and methods of use thereof
WO2016186772A2 (en) 2015-05-16 2016-11-24 Genzyme Corporation Gene editing of deep intronic mutations
HUE068603T2 (hu) 2015-06-23 2025-01-28 Childrens Hospital Philadelphia Módosított IX-es faktor, valamint készítmények, eljárások és alkalmazások sejtekbe, szervekbe és szövetekbe történõ géntranszferhez
US10676735B2 (en) 2015-07-22 2020-06-09 Duke University High-throughput screening of regulatory element function with epigenome editing technologies
AU2016302335B2 (en) 2015-08-06 2022-08-04 The Trustees Of The University Of Pennsylvania GLP-1 and use thereof in compositions for treating metabolic diseases
CN108351350B (zh) 2015-08-25 2022-02-18 杜克大学 使用rna指导型内切核酸酶改善基因组工程特异性的组合物和方法
CN108137664B (zh) 2015-08-31 2021-11-26 宾夕法尼亚州大学信托人 用于治疗伴侣动物的aav-epo
US10988519B2 (en) 2015-09-24 2021-04-27 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Composition and method for treating complement-mediated disease
JP7064214B2 (ja) 2015-09-28 2022-05-10 ザ・ユニヴァーシティ・オヴ・ノース・キャロライナ・アト・チャペル・ヒル 抗体回避性ウイルスベクターのための方法および組成物
WO2017062750A1 (en) 2015-10-09 2017-04-13 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Compositions and methods useful in treating stargardt's disease and other ocular disorders
US11970710B2 (en) 2015-10-13 2024-04-30 Duke University Genome engineering with Type I CRISPR systems in eukaryotic cells
WO2017070525A1 (en) 2015-10-22 2017-04-27 University Of Massachusetts Methods and compositions for treating metabolic imbalance in neurodegenerative disease
US11426469B2 (en) 2015-10-22 2022-08-30 University Of Massachusetts Prostate-targeting adeno-associated virus serotype vectors
WO2017075335A1 (en) 2015-10-28 2017-05-04 Voyager Therapeutics, Inc. Regulatable expression using adeno-associated virus (aav)
CA3003435A1 (en) 2015-10-28 2017-05-04 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Intrathecal administration of adeno-associated-viral vectors for gene therapy
HK1254836A1 (zh) 2015-10-30 2019-07-26 Nbe-Therapeutics Ag 抗-ror1抗体
AU2016362477A1 (en) 2015-12-02 2018-06-14 Voyager Therapeutics, Inc. Assays for the detection of AAV neutralizing antibodies
FR3044926B1 (fr) 2015-12-09 2020-01-31 Genethon Outils de therapie genique efficaces pour le saut de l'exon 53 de la dystrophine
US11015173B2 (en) 2015-12-11 2021-05-25 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Scalable purification method for AAV1
WO2017100676A1 (en) 2015-12-11 2017-06-15 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Scalable purification method for aav8
US11098286B2 (en) 2015-12-11 2021-08-24 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Scalable purification method for AAV9
EP3387118B1 (en) 2015-12-11 2022-04-06 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Scalable purification method for aavrh10
CA3008142A1 (en) 2015-12-11 2017-06-15 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Gene therapy for treating familial hypercholesterolemia
JP7057281B2 (ja) 2015-12-14 2022-04-19 ザ・トラステイーズ・オブ・ザ・ユニバーシテイ・オブ・ペンシルベニア 眼疾患のための遺伝子療法
JP7061067B2 (ja) 2015-12-14 2022-04-27 ザ・トラステイーズ・オブ・ザ・ユニバーシテイ・オブ・ペンシルベニア クリグラー・ナジャー症候群の処置のための組成物
CA3008268A1 (en) 2015-12-15 2017-06-22 Genzyme Corporation Adeno-associated viral vectors for treating mucolipidosis type ii
BR112018012660B1 (pt) 2015-12-22 2023-12-19 Board Of Regents, The University Of Texas System Sal, solvato, ou polimorfo de um composto; polimorfo de composto sólido; composição; e uso de um sal, solvato ou polimorfo
MX2018008926A (es) 2016-01-20 2019-01-10 Scripps Research Inst Composiciones de anticuerpo contra ror1 y métodos relacionados.
KR20180118659A (ko) 2016-02-01 2018-10-31 바이오버라티브 테라퓨틱스 인크. 최적화된 viii 인자 유전자
EP3411059A4 (en) * 2016-02-02 2019-10-16 University Of Massachusetts METHOD FOR INCREASING THE EFFECTIVENESS OF THE SYSTEMIC DELIVERY OF AVV GENES TO THE CENTRAL NERVOUS SYSTEM
WO2017136500A1 (en) 2016-02-03 2017-08-10 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Gene therapy for treating mucopolysaccharidosis type i
EP3413928B1 (en) 2016-02-12 2022-04-20 University of Massachusetts Anti-angiogenic mirna therapeutics for inhibiting corneal neovascularization
US10729789B2 (en) * 2016-03-01 2020-08-04 University Of Virginia Patent Foundation Compositions and methods for adeno-associated virus mediated gene expression in myofibroblast-like cells
US11207426B2 (en) 2016-04-05 2021-12-28 University Of Massachusetts Compositions and methods for selective inhibition of grainyhead-like protein expression
WO2017180587A2 (en) 2016-04-11 2017-10-19 Obsidian Therapeutics, Inc. Regulated biocircuit systems
US20190127713A1 (en) 2016-04-13 2019-05-02 Duke University Crispr/cas9-based repressors for silencing gene targets in vivo and methods of use
AU2017248656B2 (en) * 2016-04-15 2023-07-27 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Novel AAV8 mutant capsids and compositions containing same
WO2017181113A1 (en) 2016-04-15 2017-10-19 The Trustees Of The University Of Pennsyvania Gene therapy for treating mucopolysaccharidosis type ii
WO2017181105A1 (en) 2016-04-15 2017-10-19 University Of Massachusetts Methods and compositions for treating metabolic imbalance
WO2017180857A1 (en) 2016-04-15 2017-10-19 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Gene therapy for treating hemophilia a
WO2017180861A1 (en) 2016-04-15 2017-10-19 The Trustees Of The University Of Pennsulvania Gene therapy for treating hemophilia b
IL322403A (en) 2016-04-15 2025-09-01 Univ Pennsylvania Preparations for the treatment of wet age-related macular degeneration
US11401527B2 (en) 2016-04-17 2022-08-02 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Compositions and methods useful for prophylaxis of organophosphates
US11299751B2 (en) 2016-04-29 2022-04-12 Voyager Therapeutics, Inc. Compositions for the treatment of disease
EP3448874A4 (en) 2016-04-29 2020-04-22 Voyager Therapeutics, Inc. COMPOSITIONS FOR TREATING A DISEASE
GB201608046D0 (en) * 2016-05-09 2016-06-22 Cambridge Entpr Ltd And Syndey Children S Hospitals Network Randwick And Westmead Incorporating The Treatment of complement-mediated disorders
CN116333057A (zh) 2016-05-13 2023-06-27 4D分子治疗有限公司 腺相关病毒变体衣壳和其使用方法
AU2017267665C1 (en) 2016-05-18 2023-10-05 Voyager Therapeutics, Inc. Modulatory polynucleotides
BR112018073472A2 (pt) 2016-05-18 2019-08-27 Voyager Therapeutics, Inc. composições e métodos de tratamento da doença de huntington
CN109313018B (zh) * 2016-06-08 2021-12-10 索尼公司 成像控制装置和方法、以及车辆
WO2017218852A1 (en) 2016-06-15 2017-12-21 University Of Massachusetts Recombinant adeno-associated viruses for delivering gene editing molecules to embryonic cells
KR20190096329A (ko) 2016-07-05 2019-08-19 유니버시티 오브 매사추세츠 녹내장에서 신경보호 요법으로서 sfasl의 aav2-매개된 유전자 전달
KR102526506B1 (ko) 2016-07-08 2023-05-03 더 트러스티스 오브 더 유니버시티 오브 펜실베니아 Rdh12가 연루된 장애 및 질환의 치료를 위한 방법 및 조성물
EP4275747A3 (en) 2016-07-19 2024-01-24 Duke University Therapeutic applications of cpf1-based genome editing
WO2018022511A1 (en) 2016-07-25 2018-02-01 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Compositions comprising a lecithin cholesterol acyltransferase variant and uses thereof
IL263801B2 (en) 2016-07-26 2024-01-01 Biomarin Pharm Inc Novel adeno-associated virus capsid proteins
CA3029833A1 (en) 2016-07-29 2018-02-01 The Regents Of The University Of California Adeno-associated virus virions with variant capsid and methods of use thereof
US11698377B2 (en) 2016-08-15 2023-07-11 Genzyme Corporation Methods for detecting AAV
AU2017313917B2 (en) 2016-08-18 2023-12-21 The Regents Of The University Of California CRISPR-Cas genome engineering via a modular AAV delivery system
WO2018044933A1 (en) 2016-08-30 2018-03-08 The Regents Of The University Of California Methods for biomedical targeting and delivery and devices and systems for practicing the same
US10457940B2 (en) 2016-09-22 2019-10-29 University Of Massachusetts AAV treatment of Huntington's disease
EP3518985A4 (en) 2016-09-29 2020-08-05 University of Florida Research Foundation, Incorporated AAVRH.10 VARIANTS WITH HOST ANTIBODY EXHAUST CAPACITIES AND MODIFIED TISSUE TARGETING PROPERTIES
US11578340B2 (en) 2016-10-13 2023-02-14 University Of Massachusetts AAV capsid designs
AU2017345470B2 (en) 2016-10-19 2023-08-03 Adverum Biotechnologies, Inc. Modified AAV capsids and uses thereof
EP3548065B1 (en) 2016-12-01 2022-11-09 INSERM - Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Pharmaceutical compositions for the treatment of retinal degenerative diseases
WO2018112225A1 (en) * 2016-12-14 2018-06-21 The J. David Gladstone Institutes Methods and compositions for generating a deletion library and for identifying a defective interfering particle (dip)
EP3562494A4 (en) 2016-12-30 2020-08-19 The Trustees Of The University Of Pennsylvania GENE THERAPY FOR THE TREATMENT OF PHENYLKETONURIS
KR20190106990A (ko) 2017-01-20 2019-09-18 유니버시티 오브 피츠버그-오브 더 커먼웰쓰 시스템 오브 하이어 에듀케이션 제대혈 이식(ucbt) 및 증가된 갈락토세레브로시다아제(galc) 발현을 이용한 크라베병의 치료
KR20250022877A (ko) 2017-01-31 2025-02-17 리젠엑스바이오 인크. 완전히-인간 글리코실화된 인간 알파-l-이두로니다아제(idua)를 이용한 뮤코다당증 1형의 치료
KR20190118163A (ko) 2017-02-20 2019-10-17 더 트러스티스 오브 더 유니버시티 오브 펜실바니아 가족성 고콜레스테롤혈증을 치료하기 위한 유전자 요법
JOP20190200A1 (ar) 2017-02-28 2019-08-27 Univ Pennsylvania تركيبات نافعة في معالجة ضمور العضل النخاعي
US10786568B2 (en) 2017-02-28 2020-09-29 The Trustees Of The University Of Pennsylvania AAV mediated influenza vaccines
SI3589730T1 (sl) 2017-02-28 2024-04-30 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Adeno-povezan virus (AAV) clade F vektor in njihova uporaba
CN119752819A (zh) 2017-03-01 2025-04-04 宾夕法尼亚州立大学托管会 用于眼部病症的基因疗法
WO2018158397A1 (en) 2017-03-02 2018-09-07 Genethon Method for removing anti-aav antibodies from a blood-derived composition
JP7341900B2 (ja) 2017-03-03 2023-09-11 オブシディアン セラピューティクス， インコーポレイテッド 免疫療法のためのｃｄ１９組成物及び方法
AU2018226857B2 (en) 2017-03-03 2025-01-02 Obsidian Therapeutics, Inc. Compositions and methods for immunotherapy
CN118360335A (zh) 2017-04-05 2024-07-19 马萨诸塞大学 小基因治疗
US11499154B2 (en) 2017-04-10 2022-11-15 Genethon Antisense targeting dynamin 2 and use for the treatment of centronuclear myopathies and neuropathies
WO2018191666A1 (en) 2017-04-14 2018-10-18 Regenxbio Inc. Treatment of mucopolysaccharidosis ii with recombinant human iduronate-2 sulfatase (ids) produced by human neural or glial cells
US11879133B2 (en) 2017-04-24 2024-01-23 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Gene therapy for ocular disorders
CN111108198A (zh) 2017-05-05 2020-05-05 沃雅戈治疗公司 治疗亨廷顿病的组合物和方法
CA3061652A1 (en) 2017-05-05 2018-11-08 Voyager Therapeutics, Inc. Compositions and methods of treating amyotrophic lateral sclerosis (als)
EP3622073A4 (en) 2017-05-09 2021-01-06 University of Massachusetts METHOD FOR TREATMENT OF AMYOTROPHIC LATERAL SCLEROSIS (ALS)
IL316926A (en) 2017-05-11 2025-01-01 Univ Pennsylvania Gene therapy for neuronal ceroid lipofuscinosis
CA3099990A1 (en) 2017-05-12 2018-11-15 University Of Massachusetts Viral vector production
CN108103058A (zh) * 2017-05-12 2018-06-01 北京五加和分子医学研究所有限公司 一种i型糖尿病的基因治疗药物
IL306098A (en) 2017-05-24 2023-11-01 Univ Barcelona Autonoma Viral expression vectors containing the coding sequence for FIBROBLAST GROWTH FACTOR 21 (FGF21)
CA3098592A1 (en) 2017-05-31 2018-12-06 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Gene therapy for treating peroxisomal disorders
BR112019025732A2 (pt) 2017-06-06 2020-06-30 University Of Massachusetts vetores de aav auto-reguladores para expressão segura de mecp2 na síndrome de rett
WO2018232149A1 (en) 2017-06-14 2018-12-20 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Gene therapy for ocular disorders
US10693918B2 (en) 2017-06-15 2020-06-23 Palo Alto Networks, Inc. Radio access technology based security in service provider networks
US10708306B2 (en) 2017-06-15 2020-07-07 Palo Alto Networks, Inc. Mobile user identity and/or SIM-based IoT identity and application identity based security enforcement in service provider networks
US10812532B2 (en) 2017-06-15 2020-10-20 Palo Alto Networks, Inc. Security for cellular internet of things in mobile networks
JOP20190269A1 (ar) 2017-06-15 2019-11-20 Voyager Therapeutics Inc بولي نوكليوتيدات aadc لعلاج مرض باركنسون
US11050789B2 (en) 2017-06-15 2021-06-29 Palo Alto Networks, Inc. Location based security in service provider networks
US10721272B2 (en) 2017-06-15 2020-07-21 Palo Alto Networks, Inc. Mobile equipment identity and/or IOT equipment identity and application identity based security enforcement in service provider networks
US10834136B2 (en) 2017-06-15 2020-11-10 Palo Alto Networks, Inc. Access point name and application identity based security enforcement in service provider networks
EP4302768A3 (en) * 2017-06-22 2024-05-01 Board Of Regents, The University Of Texas System Methods for producing regulatory immune cells and uses thereof
BR112019019015A2 (pt) 2017-06-30 2020-04-14 Univ California vírions de vírus adeno-associado com capsídeos variantes e seus métodos de uso
AU2018298133A1 (en) 2017-07-06 2020-01-23 The Trustees Of The University Of Pennsylvania AAV9-mediated gene therapy for treating mucopolysaccharidosis type I
PL3648783T3 (pl) 2017-07-07 2024-11-18 Genethon Nowe polinukleotydy kodujące ludzkie białko fkrp
CN111132626B (zh) 2017-07-17 2024-01-30 沃雅戈治疗公司 轨迹阵列引导系统
WO2019028306A2 (en) 2017-08-03 2019-02-07 Voyager Therapeutics, Inc. COMPOSITIONS AND METHODS FOR ADMINISTRATION OF ADENO-ASSOCIATED VIRUSES
EP3665193A1 (en) 2017-08-07 2020-06-17 NBE Therapeutics AG Anthracycline-based antibody drug conjugates having high in vivo tolerability
EP3676373A4 (en) * 2017-08-28 2021-06-09 The Regents of The University of California Adeno-associated virus capsid variants and methods of use thereof
BR112020005436B1 (pt) 2017-09-20 2022-08-02 4D Molecular Therapeutics Inc Proteína do capsídeo de variante do vírus adenoassociado, virion do aav recombinante (raav) infeccioso, composições, composições farmacêuticas e usos de virion de raav ou de composições farmacêuticas
JP7397488B2 (ja) 2017-09-22 2023-12-13 ユニバーシティ オブ マサチューセッツ Ｓｏｄ１二重発現ベクターおよびその使用
WO2019060662A1 (en) 2017-09-22 2019-03-28 The Trustees Of The University Of Pennsylvania GENE THERAPY FOR THE TREATMENT OF MUCOPOLYSACCHARIDOSE TYPE II
MY205041A (en) 2017-09-22 2024-09-29 Genzyme Corp Variant rnai
AU2018338728B2 (en) 2017-09-29 2025-01-02 Centre National De La Recherche Scientifique (Cnrs) Rescue of central and peripheral neurological phenotype of Friedreich's Ataxia by intravenous delivery
WO2019070891A1 (en) * 2017-10-03 2019-04-11 Prevail Therapeutics, Inc. GENE THERAPIES FOR LYSOSOMAL DISORDERS
US12441998B2 (en) 2017-10-12 2025-10-14 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York SLC2A1 lncRNA as a biologic and related treatments and methods
CN111479924B (zh) 2017-10-16 2024-06-14 沃雅戈治疗公司 肌萎缩性侧索硬化症(als)的治疗
US20200237799A1 (en) 2017-10-16 2020-07-30 Voyager Therapeutics, Inc. Treatment of amyotrophic lateral sclerosis (als)
CN111727201A (zh) 2017-10-18 2020-09-29 再生生物股份有限公司 完全人源翻译后修饰的抗体治疗剂
CA3079565A1 (en) 2017-10-18 2019-04-25 Regenxbio Inc. Treatment of ocular diseases and metastatic colon cancer with human post-translationally modified vegf-trap
US10722487B2 (en) 2017-10-18 2020-07-28 Board Of Regents, The University Of Texas System Glutaminase inhibitor therapy
FI3717636T3 (fi) 2017-11-27 2023-06-01 4D Molecular Therapeutics Inc Adenoassosioidun viruksen kapsidivariantteja ja käyttö angiogeneesin estämisessä
CN111989396A (zh) 2017-11-30 2020-11-24 宾夕法尼亚州大学信托人 用于iiib型粘多糖贮积病的基因疗法
JP7389744B2 (ja) 2017-11-30 2023-11-30 ザ・トラステイーズ・オブ・ザ・ユニバーシテイ・オブ・ペンシルベニア ムコ多糖症ｉｉｉａ型のための遺伝子療法
BR112020012336A2 (pt) 2017-12-19 2021-03-30 Akouos, Inc. Administração de anticorpos terapêuticos mediada por aav para o ouvido interno
US10610606B2 (en) 2018-02-01 2020-04-07 Homology Medicines, Inc. Adeno-associated virus compositions for PAH gene transfer and methods of use thereof
US20190256867A1 (en) 2018-02-01 2019-08-22 Homology Medicines, Inc. Adeno-associated virus compositions for restoring pah gene function and methods of use thereof
CN112041437A (zh) 2018-02-19 2020-12-04 同源药物公司 用于恢复f8基因功能的腺相关病毒组合物和其使用方法
US12558434B2 (en) 2018-02-20 2026-02-24 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Compositions for treatment of wet age-related macular degeneration
MX2020008932A (es) 2018-02-27 2020-10-01 Univ Pennsylvania Novedosos vectores de virus adenoasociado (aav), vectores de aav que tienen una desamidacion reducida de la capside y usos de estos.
WO2019173434A1 (en) 2018-03-06 2019-09-12 Voyager Therapeutics, Inc. Insect cell manufactured partial self-complementary aav genomes
KR20200135433A (ko) 2018-03-23 2020-12-02 유니버시티 오브 매사추세츠 골 장애 치료를 위한 유전자 치료제
MX2020010464A (es) 2018-04-03 2021-01-29 Vectores de virus que evitan anticuerpos.
US12091435B2 (en) 2018-04-03 2024-09-17 Ginkgo Bioworks, Inc. Antibody-evading virus vectors
JP7425738B2 (ja) 2018-04-03 2024-01-31 ギンコ バイオワークス インコーポレイテッド 眼組織を標的とするウイルスベクター
US12054724B2 (en) 2018-04-10 2024-08-06 President And Fellows Of Harvard College AAV vectors encoding clarin-1 or GJB2 and uses thereof
EP3781677A4 (en) 2018-04-16 2022-01-19 University of Massachusetts COMPOSITIONS AND METHODS FOR IMPROVED GENE EDITTING
US12460226B2 (en) 2018-04-16 2025-11-04 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Compositions and methods for treating duchenne muscular dystrophy
CA3096293A1 (en) 2018-04-27 2019-10-31 Rocket Pharmaceuticals, Ltd. Gene therapy for cns degeneration
US11472848B2 (en) 2018-04-27 2022-10-18 University Of Massachusetts AAV capsids identified by in vivo library selection
US20210231560A1 (en) 2018-04-29 2021-07-29 Regenxbio Inc. Systems and methods of spectrophotometry for the determination of genome content, capsid content and full/empty ratios of adeno-associated virus particles
CA3098565A1 (en) 2018-04-29 2019-11-07 Claire G. ZHANG Scalable clarification process for recombinant aav production
US20210207168A1 (en) 2018-05-08 2021-07-08 Rutgers, The State University Of New Jersey Aav-compatible laminin-linker polymerization proteins
JP2021522811A (ja) 2018-05-09 2021-09-02 ビオマリン プハルマセウトイカル インコーポレイテッド フェニルケトン尿症の治療方法
TW202005978A (zh) 2018-05-14 2020-02-01 美商拜奧馬林製藥公司 新穎肝靶向腺相關病毒載體
AU2019268330A1 (en) 2018-05-15 2020-11-26 Voyager Therapeutics, Inc. Compositions and methods for the treatment of Parkinson's disease
TW202015742A (zh) 2018-05-15 2020-05-01 美商航海家醫療公司 投遞腺相關病毒（ａａｖ）之組成物和方法
EP3793686A1 (en) 2018-05-16 2021-03-24 Voyager Therapeutics, Inc. Aav serotypes for brain specific payload delivery
WO2019222444A2 (en) 2018-05-16 2019-11-21 Voyager Therapeutics, Inc. Directed evolution
US12163129B2 (en) 2018-06-08 2024-12-10 University Of Massachusetts Antisense oligonucleotides to restore dysferlin protein expression in dysferlinopathy patient cells
US20220403001A1 (en) 2018-06-12 2022-12-22 Obsidian Therapeutics, Inc. Pde5 derived regulatory constructs and methods of use in immunotherapy
US12060567B2 (en) 2018-06-13 2024-08-13 Voyager Therapeutics, Inc. Engineered untranslated regions (UTR) for AAV production
KR102930150B1 (ko) 2018-06-14 2026-02-25 리젠엑스바이오 인크. 재조합 aav 생성을 위한 음이온 교환 크로마토그래피
US20210254103A1 (en) 2018-07-02 2021-08-19 Voyager Therapeutics, Inc. Treatment of amyotrophic lateral sclerosis and disorders associated with the spinal cord
GB201811368D0 (en) 2018-07-11 2018-08-29 Ucb Biopharma Sprl Antibody
CN112512596B (zh) 2018-07-12 2025-12-12 火箭制药有限公司 治疗danon病的基因治疗载体
AU2019304569B2 (en) 2018-07-17 2023-07-06 Helixmith Co., Ltd Treatment of neuropathy with DNA constructs expressing IGF-1 isoforms
MX2021000810A (es) 2018-07-24 2021-04-28 Voyager Therapeutics Inc Sistemas y metodos para producir formulaciones de terapia genetica.
US12188040B2 (en) * 2018-07-30 2025-01-07 Gene Therapy Research Institution Co., Ltd. Method for enhancing gene expression using AAV vector
MX2021001395A (es) 2018-08-03 2021-08-11 Genzyme Corp Arni variante contra alfa-sinucleína.
EP3833745A1 (en) 2018-08-10 2021-06-16 REGENXBIO Inc. Scalable method for recombinant aav production
KR20210102870A (ko) 2018-08-30 2021-08-20 테나야 테라퓨틱스, 인코포레이티드 미오카르딘 및 ascl1을 사용한 심장 세포 재프로그래밍
CA3113470A1 (en) 2018-09-28 2020-04-02 President And Fellows Of Harvard College Mutant reverse tetracycline transactivators for expression of genes
CN113453702A (zh) 2018-09-28 2021-09-28 哈佛大学的校长及成员们 细胞重编程以逆转衰老并促进组织和组织再生
EP3856762A1 (en) 2018-09-28 2021-08-04 Voyager Therapeutics, Inc. Frataxin expression constructs having engineered promoters and methods of use thereof
US12274733B2 (en) 2018-09-28 2025-04-15 President And Fellows Of Harvard College Cellular reprogramming to reverse aging and promote organ and tissue regeneration
JP7534290B2 (ja) 2018-10-01 2024-08-14 ザ・トラステイーズ・オブ・ザ・ユニバーシテイ・オブ・ペンシルベニア Ｇｍ１ガングリオシドーシスの治療に有用な組成物
JP2022513318A (ja) 2018-10-01 2022-02-07 ウルトラジェニックス ファーマシューティカル インコーポレイテッド プロピオン酸血症を処置するための遺伝子治療
TW202035689A (zh) 2018-10-04 2020-10-01 美商航海家醫療公司 測量病毒載體粒子的效價及強度之方法
WO2020072844A1 (en) 2018-10-05 2020-04-09 Voyager Therapeutics, Inc. Engineered nucleic acid constructs encoding aav production proteins
EP4461814A3 (en) 2018-10-12 2025-02-26 Genzyme Corporation Generation of improved human pah for treatment of severe pku by liver-directed gene replacement therapy
WO2020077165A1 (en) 2018-10-12 2020-04-16 Voyager Therapeutics, Inc. Compositions and methods for delivery of aav
CN112912518A (zh) 2018-10-15 2021-06-04 再生生物股份有限公司 用于测量复制缺陷型病毒载体和病毒的感染性的方法
CN113166781A (zh) 2018-10-15 2021-07-23 沃雅戈治疗公司 在杆状病毒/Sf9系统中大规模生产rAAV的表达载体
UY38407A (es) 2018-10-15 2020-05-29 Novartis Ag Anticuerpos estabilizadores de trem2
CA3116334A1 (en) 2018-10-22 2020-04-30 University Of Rochester Genome editing by directed non-homologous dna insertion using a retroviral integrase-cas9 fusion protein
EP3870600A1 (en) 2018-10-24 2021-09-01 Obsidian Therapeutics, Inc. Er tunable protein regulation
EP3880255A1 (en) 2018-11-16 2021-09-22 Astellas Pharma Inc. Method for treating muscular dystrophy by targeting utrophin gene
WO2020102645A1 (en) * 2018-11-16 2020-05-22 Asklepios Biopharmaceutical, Inc. Therapeutic adeno-associated virus for treating pompe disease
EP3887522A1 (en) 2018-11-29 2021-10-06 University of Massachusetts Modulation of sptlc1 via recombinant adeno-associated vectors
WO2020140007A1 (en) 2018-12-28 2020-07-02 University Of Rochester Gene therapy for best1 dominant mutations
PL3906066T3 (pl) 2019-01-04 2024-09-02 Ultragenyx Pharmaceutical Inc. Konstrukty do terapii genowej do leczenia choroby wilsona
BR112021013715A2 (pt) 2019-01-14 2021-09-21 University Of Rochester Proteína de fusão, molécula de ácido nucleico, métodos para modular a clivagem, a poliadenilação, ou ambas, de um transcrito de rna, para visualizar rna nuclear e para diminuir o número de rna nuclear ou para clivar rna nuclear, e, uso da proteína de fusão
EP3911410A1 (en) 2019-01-18 2021-11-24 Voyager Therapeutics, Inc. Methods and systems for producing aav particles
KR20210130158A (ko) 2019-01-31 2021-10-29 오레곤 헬스 앤드 사이언스 유니버시티 Aav 캡시드의 전사 의존적 유도 진화를 사용하는 방법
US20220054655A1 (en) 2019-02-22 2022-02-24 University Of Massachusetts Oxr1 gene therapy
BR112021015817A2 (pt) 2019-02-22 2021-10-13 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Vírus adeno-associado recombinante para tratamento de neurodegeneração com início na idade adulta associado a grn
BR112021016501A2 (pt) 2019-02-25 2021-10-26 Novartis Ag Composições e métodos para tratar distrofia cristalina de bietti
CN113710693B (zh) 2019-02-25 2025-07-15 马萨诸塞大学 Dna结合结构域反式激活因子及其用途
US20220154211A1 (en) 2019-02-25 2022-05-19 Novartis Ag Compositions and methods to treat bietti crystalline dystrophy
TW202045728A (zh) 2019-02-26 2020-12-16 賓州大學委員會 用於治療克拉培氏病之組成物
WO2020176747A1 (en) 2019-02-28 2020-09-03 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Adeno-associated virus vectors for the delivery of therapeutics
JP7637060B2 (ja) 2019-03-04 2025-02-27 ザ・トラステイーズ・オブ・ザ・ユニバーシテイ・オブ・ペンシルベニア Ａｋｔ経路を標的とする神経保護遺伝子療法
JP7698583B2 (ja) 2019-03-21 2025-06-25 ギンコ バイオワークス インコーポレイテッド 組換えアデノ随伴ウイルスベクター
JP7635139B2 (ja) 2019-03-25 2025-02-25 ジェネトン オーバーラップａａｖベクターを使用する大きいサイズのクアシジストロフィンの産生
SG11202110607WA (en) 2019-04-01 2021-10-28 Tenaya Therapeutics Inc Adeno-associated virus with engineered capsid
EP3946467A1 (en) 2019-04-03 2022-02-09 REGENXBIO Inc. Gene therapy for eye pathologies
TW202102526A (zh) 2019-04-04 2021-01-16 美商銳進科斯生物股份有限公司 重組腺相關病毒及其用途
DK3953483T3 (da) 2019-04-11 2023-12-18 Regenxbio Inc Fremgangsmåder til størrelseskromatografi til karakterisering af sammensætninger af rekombinant adeno-associeret virus
US12553036B2 (en) 2019-04-12 2026-02-17 University Of Massachusetts GM3 synthase vectors and uses thereof
AU2020258483A1 (en) 2019-04-17 2021-11-11 Evox Therapeutics, Ltd. Compositions of exosomes and AAV
JP7630443B2 (ja) 2019-04-19 2025-02-17 レジェンクスバイオ インコーポレーテッド アデノ随伴ウイルスベクター製剤及び方法
CA3137135A1 (en) 2019-04-19 2020-10-22 University Of Massachusetts Gene therapies for stargardt disease (abca4)
WO2020219868A1 (en) 2019-04-24 2020-10-29 Regenxbio Inc. Fully-human post-translationally modified antibody therapeutics
WO2020219990A1 (en) 2019-04-26 2020-10-29 President And Fellows Of Harvard College Aav vectors encoding mini-pcdh15 and uses thereof
US20220243225A1 (en) 2019-04-29 2022-08-04 Voyager Therapeutics, Inc. SYSTEMS AND METHODS FOR PRODUCING BACULOVIRAL INFECTED INSECT CELLS (BIICs) IN BIOREACTORS
US12516351B2 (en) * 2019-04-29 2026-01-06 The Trustees Of The University Of Pennsylvania AAV capsids and compositions containing same
AU2020270421A1 (en) 2019-05-03 2021-11-18 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Compositions useful in treatment of metachromatic leukodystrophy
EP3966227A1 (en) 2019-05-07 2022-03-16 Voyager Therapeutics, Inc. Compositions and methods for the vectored augmentation of protein destruction, expression and/or regulation
WO2020236815A1 (en) 2019-05-20 2020-11-26 University Of Massachusetts Minigene therapy
PH12021552887A1 (en) * 2019-05-24 2022-09-05 Regeneron Pharma Modified viral particles and uses thereof
PH12021552592A1 (en) 2019-05-28 2022-06-20 Modalis Therapeutics Corp Method for treating muscular dystrophy by targeting dmpk gene
EP3987024A4 (en) 2019-06-20 2023-11-01 University Of Massachusetts COMPOSITIONS AND METHODS FOR ENHANCED GENOMIC EDITING
EP3994253A1 (en) 2019-07-02 2022-05-11 M6P Therapeutics (Switzerland) LLC Vector compositions and methods of using same for treatment of lysosomal storage disorders
CA3137622A1 (en) 2019-07-10 2021-01-14 Masonic Medical Research Institute Vgll4 with ucp-1 cis-regulatory element and method of use thereof
US20220251567A1 (en) 2019-07-10 2022-08-11 Inserm (Institut National De La Santè Et De La Recherche Médicale) Methods for the treatment of epilepsy
JP7654626B2 (ja) 2019-07-11 2025-04-01 サントル ナショナル ドゥ ラ ルシェルシュ シアンティフィック 化学修飾型アデノ随伴ウイルス
EP3997226A1 (en) 2019-07-11 2022-05-18 Tenaya Therapeutics, Inc. Cardiac cell reprogramming with micrornas and other factors
US10653731B1 (en) * 2019-07-15 2020-05-19 Vigene Biosciences Inc. Recombinantly-modified adeno-associated virus (rAAV) having improved packaging efficiency
US10557149B1 (en) * 2019-07-15 2020-02-11 Vigene Biosciences, Inc. Recombinantly-modified adeno-associated virus helper vectors and their use to improve the packaging efficiency of recombinantly-modified adeno-associated virus
JP2022544015A (ja) 2019-07-23 2022-10-17 ユニバーシティ オブ ロチェスター ＣＲＩＳＰＲ－Ｃａｓでの標的化されたＲＮＡ切断
US20220396806A1 (en) 2019-07-26 2022-12-15 Akouos, Inc. Methods of treating hearing loss using a secreted target protein
US20230042103A1 (en) 2019-07-26 2023-02-09 Regenxbio Inc. Engineered nucleic acid regulatory element and methods of uses thereof
WO2021030125A1 (en) 2019-08-09 2021-02-18 Voyager Therapeutics, Inc. Cell culture medium for use in producing gene therapy products in bioreactors
WO2021030764A1 (en) * 2019-08-14 2021-02-18 University Of Florida Research Foundation, Incorporated Aav capsid variants for gene therapy
EP4022070A1 (en) 2019-08-26 2022-07-06 Voyager Therapeutics, Inc. Controlled expression of viral proteins
CN114502197A (zh) 2019-08-26 2022-05-13 再生生物股份有限公司 用全人经翻译后修饰的抗VEGF Fab治疗糖尿病性视网膜病变
KR20220070443A (ko) 2019-08-27 2022-05-31 버텍스 파마슈티칼스 인코포레이티드 반복성 dna와 연관된 장애의 치료용 조성물 및 방법
US20220333133A1 (en) 2019-09-03 2022-10-20 Voyager Therapeutics, Inc. Vectorized editing of nucleic acids to correct overt mutations
WO2021046451A1 (en) 2019-09-06 2021-03-11 Obsidian Therapeutics, Inc. Compositions and methods for dhfr tunable protein regulation
AU2020346062A1 (en) 2019-09-13 2022-03-24 Rutgers, The State University Of New Jersey AAV-compatible laminin-linker polymerization proteins
JP7651562B2 (ja) 2019-09-19 2025-03-26 ジェネトン Ｆｋｒｐの心毒性を軽減する遺伝子治療発現系
WO2021062092A1 (en) 2019-09-26 2021-04-01 Massachusetts Institute Of Technology Trans-activated functional rna by strand displacement and uses thereof
WO2021062096A1 (en) 2019-09-26 2021-04-01 Massachusetts Institute Of Technology Microrna-based logic gates and uses thereof
TW202126284A (zh) 2019-09-30 2021-07-16 美商百歐維拉提夫治療公司 慢病毒載體配製物
WO2021067598A1 (en) 2019-10-04 2021-04-08 Ultragenyx Pharmaceutical Inc. Methods for improved therapeutic use of recombinant aav
US20240108669A1 (en) 2019-10-07 2024-04-04 Regenxbio Inc. Adeno-associated virus vector pharmaceutical composition and methods
US20230121437A1 (en) 2019-10-15 2023-04-20 University Of Massachusetts Rna editor-enhanced rna trans-splicing
EP4045664A1 (en) * 2019-10-16 2022-08-24 Wuxi Apptec (Shanghai) Co., Ltd. A novel aav variant
IL292297A (en) 2019-10-17 2022-06-01 Stridebio Inc Adeno-associated viral vectors for treatment of niemann-pick disease type c
CA3161154A1 (en) 2019-11-14 2021-05-20 Biomarin Pharmaceutical Inc. Treatment of hereditary angioedema with liver-specific gene therapy vectors
US20230016983A1 (en) 2019-11-19 2023-01-19 lNSERM (INSTITUT NATIONAL DE LA SANTÉ ET DE LA RECHERCHE MÉDICALE) Antisense oligonucleotides and thier use for the treatment of cancer
EP4065596A2 (en) * 2019-11-28 2022-10-05 RegenxBio Inc. Microdystrophin gene therapy constructs and uses thereof
IL293684A (en) 2019-12-10 2022-08-01 Takeda Pharmaceuticals Co Adeno associated virus vectors for the treatment of hunter disease
KR20220128632A (ko) 2019-12-31 2022-09-21 스완바이오 테라퓨틱스 리미티드 개선된 aav-abcd1 구축물 및 부신백질이영양증 (ald) 및/또는 부신척수신경병증 (amn)의 치료 또는 예방을 위한 용도
TW202140791A (zh) 2020-01-13 2021-11-01 美商霍蒙拉奇醫藥公司 治療苯酮尿症之方法
BR112022014563A2 (pt) 2020-01-22 2022-09-13 Regenxbio Inc Método para tratamento de um sujeito humano diagnosticado com mucopolissacaridose i (mps i)
EP4096631A1 (en) 2020-01-29 2022-12-07 RegenxBio Inc. Treatment of mucopolysaccharidosis ii with recombinant human iduronate-2-sulfatase (ids) produced by human neural or glial cells
EP4097238A1 (en) 2020-01-29 2022-12-07 REGENXBIO Inc. Treatment of mucopolysaccharidosis iva
JP2023512071A (ja) 2020-01-30 2023-03-23 ウモジャ バイオファーマ， インコーポレイテッド 二特異性形質導入エンハンサー
CA3165057A1 (en) 2020-02-02 2021-08-05 James M. Wilson Compositions useful for treating gm1 gangliosidosis
US20230073250A1 (en) 2020-02-07 2023-03-09 University Of Rochester Ribozyme-mediated RNA Assembly and Expression
US20230078498A1 (en) 2020-02-07 2023-03-16 University Of Rochester Targeted Translation of RNA with CRISPR-Cas13 to Enhance Protein Synthesis
EP4103724A1 (en) 2020-02-14 2022-12-21 Ultragenyx Pharmaceutical Inc. Gene therapy for treating cdkl5 deficiency disorder
US20230089312A1 (en) 2020-02-25 2023-03-23 University Of Massachusetts Inducible single aav system and uses thereof
TW202142554A (zh) * 2020-02-25 2021-11-16 澳洲兒童醫學研究所 腺相關病毒蛋白殼多肽及載體
CN115552022A (zh) 2020-03-02 2022-12-30 特纳亚治疗股份有限公司 由心肌细胞表达的微rna控制的基因载体
US20240218367A1 (en) 2020-03-27 2024-07-04 University Of Rochester Targeted Destruction of Viral RNA by CRISPR-Cas13
WO2021195525A1 (en) 2020-03-27 2021-09-30 University Of Rochester Crispr-cas13 crrna arrays
CA3175034A1 (en) 2020-03-27 2021-09-30 UCB Biopharma SRL Autonomous knob domain peptides
TW202204377A (zh) 2020-03-31 2022-02-01 麻州大學 蛋白殼變體及其用途
WO2021202532A1 (en) 2020-03-31 2021-10-07 Ultragenyx Pharmaceutical Inc. Gene therapy for treating propionic acidemia
AR122409A1 (es) 2020-04-03 2022-09-07 Biomarin Pharm Inc Tratamiento de la fenilcetonuria con aav y formulaciones terapéuticas
US20230226223A1 (en) 2020-04-10 2023-07-20 Sola Biosciences Llc Compositions and Methods for the Treatment of Protein Aggregation Disorders
EP4135841A1 (en) 2020-04-15 2023-02-22 Voyager Therapeutics, Inc. Tau binding compounds
BR112022021134A2 (pt) 2020-04-20 2023-02-14 Tenaya Therapeutics Inc Vírus adeno-associado com capsídeo projetado
AU2021265088A1 (en) 2020-04-28 2022-11-03 Sola Biosciences Llc Compositions and methods for the treatment of TDP-43 proteinopathies
BR112022021786A2 (pt) 2020-05-12 2023-01-17 Univ Pennsylvania Composições úteis em tratamento de doença de krabbe
EP4162059A1 (en) 2020-05-12 2023-04-12 The Trustees of The University of Pennsylvania Compositions for drg-specific reduction of transgene expression
TW202208406A (zh) 2020-05-13 2022-03-01 美商阿科奧斯公司 用於治療ｋｃｎｑ４相關性聽力損失之組成物及方法
IL298128A (en) 2020-05-13 2023-01-01 Akouos Inc Compositions and methods for treating slc26a4-associated hearing loss
WO2021230385A1 (en) 2020-05-15 2021-11-18 Astellas Pharma Inc. Method for treating muscular dystrophy by targeting utrophin gene
TW202208632A (zh) 2020-05-27 2022-03-01 美商同源醫藥公司 用於恢復ｐａｈ基因功能的腺相關病毒組成物及其使用方法
WO2021247995A2 (en) 2020-06-04 2021-12-09 Voyager Therapeutics, Inc. Compositions and methods of treating neuropathic pain
CA3183251A1 (en) 2020-06-05 2021-12-09 Sola Biosciences Llc Compositions and methods for the treatment of synucleinopathies
IL299167A (en) 2020-06-17 2023-02-01 Univ Pennsylvania Compositions and methods for treating patients with gene therapy
WO2021255245A2 (en) 2020-06-19 2021-12-23 Genethon Gene therapy expression system allowing an adequate expression in the muscles and in the heart of sgcg
WO2021262963A1 (en) 2020-06-24 2021-12-30 Bioverativ Therapeutics Inc. Methods for the removal of free factor viii from preparations of lentiviral vectors modified to express said protein
CN116194587A (zh) 2020-07-10 2023-05-30 吉尼松公司 一种新的肌肉特异性启动子
WO2022011262A1 (en) 2020-07-10 2022-01-13 Inserm (Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale) Methods and compositions for treating epilepsy
BR112023000578A2 (pt) 2020-07-13 2023-05-09 Univ Pennsylvania Composições úteis para tratamento de doença de charcot-marie-tooth
EP4182455A1 (en) 2020-07-15 2023-05-24 University of Rochester Targeted rna cleavage with dcasl3-rnase fusion proteins
WO2022017630A1 (en) 2020-07-23 2022-01-27 Ucl Business Ltd GENE THERAPY VECTOR FOR eEF1A2 AND USES THEREOF
WO2022026409A1 (en) 2020-07-27 2022-02-03 Voyager Therapeutics, Inc. Compositions and methods for the treatment of neurological disorders related to glucosylceramidase beta deficiency
US20230285596A1 (en) 2020-07-27 2023-09-14 Voyager Therapeutics, Inc Compositions and methods for the treatment of niemann-pick type c1 disease
WO2022032153A1 (en) 2020-08-06 2022-02-10 Voyager Therapeutics, Inc. Cell culture medium for use in producing gene therapy products in bioreactors
KR20230042754A (ko) 2020-08-07 2023-03-29 아미쿠스 세라퓨틱스, 인코포레이티드 소포 표적화 단백질 및 이의 용도
CA3185267A1 (en) 2020-08-07 2022-02-10 Spacecraft Seven, Llc Plakophilin-2 (pkp2) gene therapy using aav vector
CN114075610B (zh) * 2020-08-11 2023-11-17 北京荷塘生华医疗科技有限公司 检测野生型腺相关病毒的通用引物及其应用
CA3188956A1 (en) 2020-08-14 2022-02-17 James M. Wilson Novel aav capsids and compositions containing same
CA3189878A1 (en) 2020-08-19 2022-02-24 Colin O'BANION Adeno-associated virus vectors for treatment of rett syndrome
GB202013194D0 (en) 2020-08-24 2020-10-07 Combigene Ab Gene therapy for lipodystrophy
EP4200429A1 (en) 2020-08-24 2023-06-28 The Trustees of The University of Pennsylvania Viral vectors encoding glp-1 receptor agonist fusions and uses thereof in treating metabolic diseases
IL300622A (en) 2020-08-26 2023-04-01 Univ Pennsylvania Recombinant adeno-associated virus for the treatment of adult-onset GRN-related neurodegeneration
WO2022056000A1 (en) 2020-09-09 2022-03-17 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Compositions and methods for treatment of duchenne muscular dystrophy
JP2023540960A (ja) 2020-09-10 2023-09-27 ルートビヒ－マキシミリアンズ－ウニベルジテート ミュンヘン 操作されたａａｖベクター
US12129287B2 (en) 2020-09-14 2024-10-29 President And Fellows Of Harvard College Recombinant adeno associated virus encoding clarin-1 and uses thereof
WO2022060915A1 (en) 2020-09-15 2022-03-24 Regenxbio Inc. Vectorized lanadelumab and administration thereof
EP4214242A1 (en) 2020-09-15 2023-07-26 RegenxBio Inc. Vectorized antibodies for anti-viral therapy
US20230383278A1 (en) 2020-09-18 2023-11-30 The United States Of America,As Represented By The Secretary,Department Of Health And Human Services Novel adeno-associated viral (aav) vectors to treat hereditary methylmalonic acidemia (mma) caused by methylmalonyl-coa mutase (mmut) deficiency
US11401531B2 (en) 2020-09-24 2022-08-02 University Of Massachusetts AAV vectors encoding NF1 and uses thereof
JP2023544165A (ja) 2020-10-01 2023-10-20 ジェンザイム・コーポレーション 肝臓に向けられた遺伝子補充療法によってｐｋｕを処置するためのヒトｐａｈ発現カセット
US20240024508A1 (en) 2020-10-07 2024-01-25 Regenxbio Inc. Formulations for suprachoroidal administration such as high viscosity formulations
WO2022076591A1 (en) 2020-10-07 2022-04-14 Regenxbio Inc. Formulations for suprachoroidal administration such as formulations with aggregate formation
MX2023003699A (es) 2020-10-07 2023-04-21 Regenxbio Inc Virus adenoasociados para el suministro ocular de genoterapia.
IL301947A (en) 2020-10-07 2023-06-01 Regenxbio Inc Formulations for suprachoroidal administration such as gel formulations
WO2022076750A2 (en) 2020-10-07 2022-04-14 Regenxbio Inc. Recombinant adeno-associated viruses for cns or muscle delivery
KR20230083287A (ko) 2020-10-07 2023-06-09 리젠엑스바이오 인크. Cln2 질환의 안구 징후에 대한 유전자 요법
AU2021356684A1 (en) 2020-10-09 2023-05-11 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Compositions and methods for treatment of fabry disease
US11781156B2 (en) 2020-10-09 2023-10-10 Tenaya Therapeutics, Inc. Plakophillin-2 gene therapy methods and compositions
CN115698304A (zh) 2020-10-09 2023-02-03 特纳亚治疗股份有限公司 亲斑蛋白-2基因疗法的方法和组合物
US20230383313A1 (en) 2020-10-18 2023-11-30 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Improved adeno-associated virus (aav) vector and uses therefor
WO2022094157A1 (en) 2020-10-28 2022-05-05 Regenxbio Inc. Vectorized anti-cgrp and anti-cgrpr antibodies and administration thereof
TW202233841A (zh) 2020-10-28 2022-09-01 美商銳進科斯生物股份有限公司 用於眼適應症之載體化抗ＴＮＦ－α抗體
WO2022094078A1 (en) 2020-10-28 2022-05-05 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Compositions useful in treatment of rett syndrome
CN116457373A (zh) 2020-10-29 2023-07-18 再生生物股份有限公司 用于眼部适应症的载体化TNF-α拮抗剂
EP4236974A2 (en) 2020-10-29 2023-09-06 RegenxBio Inc. Vectorized factor xii antibodies and administration thereof
WO2022098933A1 (en) 2020-11-06 2022-05-12 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Compositions and methods for treatment of dm1 with slucas9 and sacas9
CN112322791B (zh) * 2020-11-27 2023-10-27 福建省农业科学院畜牧兽医研究所 一种新型鸭依赖属病毒环介导等温扩增检测引物组及试剂盒
EP4256065A2 (en) 2020-12-01 2023-10-11 The Trustees of The University of Pennsylvania Novel compositions with tissue-specific targeting motifs and compositions containing same
AU2021391433A1 (en) 2020-12-01 2023-06-22 Akouos, Inc. Anti-vegf antibody constructs and related methods for treating vestibular schwannoma associated symptoms
KR20230128001A (ko) 2020-12-01 2023-09-01 더 트러스티스 오브 더 유니버시티 오브 펜실베니아 엔젤만 증후군의 치료를 위한 조성물 및 이의 용도
KR20230120128A (ko) 2020-12-16 2023-08-16 리젠엑스바이오 인크. 재조합 바이러스 입자의 생산 방법
JP2024500786A (ja) 2020-12-29 2024-01-10 アコーオス インコーポレイテッド Ｃｌｒｎ１関連難聴及び／または視力低下を治療するための組成物及び方法
TW202241943A (zh) 2020-12-29 2022-11-01 美商銳進科斯生物股份有限公司 Tau特異性抗體基因療法組合物、方法及其用途
CN116981697A (zh) 2021-01-14 2023-10-31 森迪生物科学公司 可分泌有效载荷调节
CA3205209A1 (en) 2021-01-21 2022-07-28 Regenxbio Inc. Improved production of recombinant polypeptides and viruses
WO2022159722A1 (en) 2021-01-22 2022-07-28 University Of Massachusetts Use of novel mirna-binding site cassettes for antigen-presenting cell detargeting of transgene expression by raav gene therapy vectors
US20240141375A1 (en) 2021-01-27 2024-05-02 Umoja Biopharma, Inc. Lentivirus for generating cells expressing anti-cd19 chimeric antigen receptor
EP4284335A1 (en) 2021-02-01 2023-12-06 RegenxBio Inc. Gene therapy for neuronal ceroid lipofuscinoses
WO2022173605A2 (en) 2021-02-10 2022-08-18 Regenxbio Inc. Treatment of mucopolysaccharidosis ii with recombinant human iduronate-2-sulfatase (ids)
GB202101958D0 (en) 2021-02-12 2021-03-31 Ucl Business Ltd Gene therapy for dopamine transporter deficiency syndrome
AR124981A1 (es) 2021-02-26 2023-05-24 Takeda Pharmaceuticals Co Composición y métodos para el tratamiento de la enfermedad de fabry
WO2022182959A1 (en) 2021-02-26 2022-09-01 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Compositions and methods for treatment of myotonic dystrophy type 1 with crispr/slucas9
TW202302848A (zh) 2021-02-26 2023-01-16 美商維泰克斯製藥公司 以crispr/sacas9治療第1型肌強直性營養不良之組合物及方法
EP4301768A2 (en) 2021-03-03 2024-01-10 Voyager Therapeutics, Inc. Controlled expression of viral proteins
US20240141378A1 (en) 2021-03-03 2024-05-02 Voyager Therapeutics, Inc. Controlled expression of viral proteins
US20240159718A1 (en) 2021-03-22 2024-05-16 Genzyme Corporation Size exclusion chromatography analysis of empty and full aav capsids
WO2022204476A1 (en) 2021-03-26 2022-09-29 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Nucleotide editing to reframe dmd transcripts by base editing and prime editing
MX2023012052A (es) 2021-04-12 2024-03-15 Univ Pennsylvania Composiciones útiles para tratar la atrofia muscular espinal y bulbar (sbma).
EP4334334A1 (en) 2021-04-23 2024-03-13 The Trustees of The University of Pennsylvania Novel compositions with brain-specific targeting motifs and compositions containing same
AU2022261125A1 (en) 2021-04-23 2023-11-23 University Of Rochester Genome editing by directed non-homologous dna insertion using a retroviral integrase-cas fusion protein and methods of treatment
EP4330409A4 (en) 2021-04-26 2025-04-09 University of Massachusetts GENE THERAPIES FOR STARGARDT'S DISEASE (ABCA4)
WO2022229851A1 (en) 2021-04-26 2022-11-03 Crispr Therapeutics Ag Compositions and methods for using slucas9 scaffold sequences
EP4329821A1 (en) 2021-04-26 2024-03-06 RegenxBio Inc. Microdystrophin gene therapy administration for treatment of dystrophinopathies
US20240218397A1 (en) 2021-05-04 2024-07-04 Regenxbio Inc. Novel aav vectors and methods and uses thereof
WO2022234519A1 (en) 2021-05-05 2022-11-10 Crispr Therapeutics Ag Compositions and methods for using sacas9 scaffold sequences
US20240358857A1 (en) 2021-05-11 2024-10-31 Regenxbio Inc. Treatment of duchenne muscular dystrophy and combinations thereof
WO2022272296A2 (en) 2021-06-25 2022-12-29 Homology Medicines, Inc. Adeno-associated virus packaging systems
EP4363437A1 (en) 2021-07-01 2024-05-08 Amicus Therapeutics, Inc. Neurotensin variants and tagged proteins comprising neurotensin or sortilin propeptide
US20240316102A1 (en) 2021-07-01 2024-09-26 Indapta Therapeutics, Inc. Engineered natural killer (nk) cells and related methods
JP2024523707A (ja) 2021-07-08 2024-06-28 テナヤ セラピューティクス， インコーポレイテッド 遺伝子治療のための最適化された発現カセット
WO2023004331A1 (en) 2021-07-19 2023-01-26 New York University Auf1 combination therapies for treatment of muscle degenerative disease
AU2022318664A1 (en) 2021-07-30 2024-02-29 Tune Therapeutics, Inc. Compositions and methods for modulating expression of methyl-cpg binding protein 2 (mecp2)
WO2023010133A2 (en) 2021-07-30 2023-02-02 Tune Therapeutics, Inc. Compositions and methods for modulating expression of frataxin (fxn)
WO2023018637A1 (en) 2021-08-09 2023-02-16 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Gene editing of regulatory elements
WO2023019226A1 (en) 2021-08-11 2023-02-16 Sana Biotechnology, Inc. Genetically modified cells for allogeneic cell therapy
AU2022325955A1 (en) 2021-08-11 2024-02-08 Sana Biotechnology, Inc. Genetically modified cells for allogeneic cell therapy to reduce instant blood mediated inflammatory reactions
KR20240073006A (ko) 2021-08-11 2024-05-24 사나 바이오테크놀로지, 인크. 동종이계 세포 요법을 위한 유전자 변형된 1차 세포
AU2022325231A1 (en) 2021-08-11 2024-02-08 Sana Biotechnology, Inc. Genetically modified cells for allogeneic cell therapy to reduce complement-mediated inflammatory reactions
EP4396237A4 (en) 2021-08-31 2025-11-19 Scout Bio Inc Antigen-binding molecules and their uses
WO2023039444A2 (en) 2021-09-08 2023-03-16 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Precise excisions of portions of exon 51 for treatment of duchenne muscular dystrophy
AU2022356427A1 (en) 2021-09-30 2024-05-09 Akouos, Inc. Compositions and methods for treating kcnq4-associated hearing loss
TW202332472A (zh) 2021-10-01 2023-08-16 美商拜奧馬林製藥公司 利用ａａｖ基因療法載體進行之遺傳性血管水腫治療及治療性調配物
US20240384298A1 (en) 2021-10-02 2024-11-21 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Novel aav capsids and compositions containing same
WO2023060113A1 (en) 2021-10-05 2023-04-13 Regenxbio Inc. Compositions and methods for recombinant aav production
CN118202060A (zh) 2021-10-05 2024-06-14 再生生物股份有限公司 用于重组aav生产的组合物和方法
WO2023060272A2 (en) 2021-10-07 2023-04-13 Regenxbio Inc. Recombinant adeno-associated viruses for cns tropic delivery
US20250001006A1 (en) 2021-10-07 2025-01-02 Regenxbio Inc. Recombinant adeno-associated viruses for targeted delivery
US20250042958A1 (en) 2021-10-08 2025-02-06 Sola Biosciences Llc Compositions and methods for the treatment of proteopathies
EP4413023A1 (en) 2021-10-08 2024-08-14 SOLA Biosciences LLC Compositions and methods for the treatment of p53-mediated cancers
IL311786A (en) 2021-10-21 2024-05-01 Vertex Pharma hypoimmune cells
WO2023077092A1 (en) 2021-10-28 2023-05-04 Regenxbio Inc. Engineered nucleic acid regulatory elements and methods and uses thereof
US20250295807A1 (en) 2021-11-15 2025-09-25 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Compositions for drg-specific reduction of transgene expression
EP4437113A1 (en) 2021-11-23 2024-10-02 University of Massachusetts Gene therapy for spinal muscular atrophy
WO2023102442A1 (en) 2021-11-30 2023-06-08 Jaguar Gene Therapy, Llc Gene therapy methods for treatment of diabetes
WO2023102517A1 (en) 2021-12-02 2023-06-08 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Compositions and methods for treatment of fabry disease
MX2024007301A (es) 2021-12-17 2024-06-26 Tafalgie Therapeutics Peptidos y metodos para usar en el tratamiento del dolor.
AU2022423978A1 (en) 2021-12-28 2024-07-18 Chengdu Origen Biotechnology Co., Ltd. Modified aav capsid protein and use thereof
WO2023133593A2 (en) * 2022-01-10 2023-07-13 University Of Florida Research Foundation, Incorporated Aav5 capsid variants
US20250177495A1 (en) 2022-01-10 2025-06-05 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Compositions useful in treatment of metachromatic leukodystrophy
EP4463135A2 (en) 2022-01-10 2024-11-20 Sana Biotechnology, Inc. Methods of ex vivo dosing and administration of lipid particles or viral vectors and related systems and uses
AR128239A1 (es) 2022-01-10 2024-04-10 Univ Pennsylvania Composiciones y métodos útiles para el tratamiento de trastornos mediados por c9orf72
EP4215614A1 (en) 2022-01-24 2023-07-26 Dynacure Combination therapy for dystrophin-related diseases
KR20240137067A (ko) 2022-01-25 2024-09-19 더 트러스티스 오브 더 유니버시티 오브 펜실베니아 개선된 심장 형질도입 및 간의 탈표적화를 위한 aav 캡시드
EP4473097A1 (en) 2022-02-02 2024-12-11 Sana Biotechnology, Inc. Methods of repeat dosing and administration of lipid particles or viral vectors and related systems and uses
CA3243517A1 (en) 2022-02-02 2023-08-10 Akouos, Inc. Anti-VEGF Antibody Constructions and Related Methods for the Treatment of Symptoms Associated with Acoustic Neuroma
WO2023154693A1 (en) 2022-02-08 2023-08-17 Voyager Therapeutics, Inc. Aav capsid variants and uses thereof
AU2023220128A1 (en) 2022-02-17 2024-08-22 Sana Biotechnology, Inc. Engineered cd47 proteins and uses thereof
WO2023156530A1 (en) 2022-02-17 2023-08-24 Lysogene Gene therapy for neurodegenerative diseases
WO2023172926A1 (en) 2022-03-08 2023-09-14 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Precise excisions of portions of exons for treatment of duchenne muscular dystrophy
EP4490292A1 (en) 2022-03-08 2025-01-15 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Precise excisions of portions of exon 44, 50, and 53 for treatment of duchenne muscular dystrophy
WO2023173123A1 (en) 2022-03-11 2023-09-14 Sana Biotechnology, Inc. Genetically modified cells and compositions and uses thereof
EP4493226A1 (en) 2022-03-13 2025-01-22 RegenxBio Inc. Modified muscle-specific promoters
US20250213727A1 (en) 2022-03-25 2025-07-03 Regenxbio Inc. Dominant-negative tumor necrosis factor alpha adeno-associated virus gene therapy
EP4504950A1 (en) 2022-04-01 2025-02-12 Takeda Pharmaceutical Company Limited Gene therapy for diseases with cns manifestations
CN119317645A (zh) 2022-04-06 2025-01-14 宾夕法尼亚州大学信托人 用于治疗her2阳性转移性乳腺癌及其他癌症的组合物和方法
WO2023196851A1 (en) 2022-04-06 2023-10-12 President And Fellows Of Harvard College Reversing aging of the central nervous system
CN119234040A (zh) 2022-04-06 2024-12-31 建新公司 Dm-1肌强直性营养不良的靶向基因疗法
TW202345913A (zh) 2022-04-06 2023-12-01 美商銳進科斯生物股份有限公司 用於脈絡膜上投與之調配物諸如凝膠調配物
TW202404651A (zh) 2022-04-06 2024-02-01 美商銳進科斯生物股份有限公司 用於脈絡膜上投與之調配物諸如形成聚集體之調配物
WO2023196892A1 (en) 2022-04-06 2023-10-12 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Passive immunization with anti- aav neutralizing antibodies to prevent off-target transduction of intrathecally delivered aav vectors
CA3247507A1 (en) 2022-04-06 2023-10-12 Regenxbio Inc. PHARMACEUTICAL COMPOSITION COMPRISING A RECOMMENDED ADENO-ASSOCIATED VIRUS (AAV) VECTOR WITH AN EXPRESSION CASSETTE ENCODED BY A TRANSGENE FOR SUPRACHOROID ADMINISTRATION
JP2025513835A (ja) 2022-04-11 2025-04-30 サントル ナショナル ドゥ ラ ルシェルシュ シアンティフィック 化学修飾型アデノ随伴ウイルス
EP4508062A1 (en) 2022-04-11 2025-02-19 Tenaya Therapeutics, Inc. Adeno-associated virus with engineered capsid
KR20250005214A (ko) 2022-04-13 2025-01-09 우니버시타트 아우토노마 데 바르셀로나 클로토 단백질을 발현시키는 유전자 요법을 통한 신경근 질환의 치료
WO2023201277A1 (en) 2022-04-14 2023-10-19 Regenxbio Inc. Recombinant adeno-associated viruses for cns tropic delivery
EP4507741A1 (en) 2022-04-14 2025-02-19 RegenxBio Inc. Gene therapy for treating an ocular disease
CA3249261A1 (en) 2022-04-18 2023-10-26 Vertex Pharmaceuticals Incorporated COMPOSITIONS AND PROCESSES TO IMPROVE ADENE-ASSOCIATED VIRUS (AAV) THERAPY AND REDUCE AAV TROPISM TO THE LIVER
US20250288697A1 (en) 2022-05-03 2025-09-18 Regenxbio Inc. Vectorized anti-tnf-alpha inhibitors for ocular indications
TW202400803A (zh) 2022-05-03 2024-01-01 美商銳進科斯生物股份有限公司 載體化抗補體抗體與補體劑及其投與
CA3255627A1 (en) 2022-05-06 2023-11-09 Novartis Ag NEW VP2 FUSION POLYPEPTIDES OF RECOMBINANT AAV
AR129441A1 (es) 2022-05-25 2024-08-28 Tafalgie Therapeutics Péptidos y métodos para el tratamiento del dolor
WO2023239627A2 (en) 2022-06-08 2023-12-14 Regenxbio Inc. Methods for recombinant aav production
WO2023240236A1 (en) 2022-06-10 2023-12-14 Voyager Therapeutics, Inc. Compositions and methods for the treatment of spinal muscular atrophy related disorders
EP4544051A2 (en) 2022-06-24 2025-04-30 Tune Therapeutics, Inc. Compositions, systems, and methods for reducing low-density lipoprotein through targeted gene repression
WO2024006770A1 (en) * 2022-06-27 2024-01-04 Astellas Gene Therapies, Inc. Compositions and methods for the treatment of myotonic dystrophies
TW202417467A (zh) 2022-06-28 2024-05-01 美商航海家醫療公司 Ａａｖ蛋白殼變異體及其用途
CA3259982A1 (en) 2022-06-30 2024-01-04 Indapta Therapeutics, Inc. COMBINATION OF MODIFIED NATURAL KILLER (NK) CELLS AND ANTIBODY THERAPY AND ASSOCIATED METHODS
AR129843A1 (es) 2022-07-06 2024-10-02 Voyager Therapeutics Inc Variantes de la cápside de aav y usos de estas
CA3261865A1 (en) 2022-07-12 2024-01-18 Tune Therapeutics, Inc. TARGETED TRANSCRIPTIONAL ACTIVATION COMPOSITIONS, SYSTEMS AND METHODS
WO2024020352A1 (en) 2022-07-18 2024-01-25 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Tandem guide rnas (tg-rnas) and their use in genome editing
EP4558149A1 (en) 2022-07-21 2025-05-28 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Methods and compositions for treating chronic pain disorders
WO2024026377A1 (en) 2022-07-27 2024-02-01 Sana Biotechnology, Inc. Methods of transduction using a viral vector and inhibitors of antiviral restriction factors
CN115354049A (zh) * 2022-07-29 2022-11-18 中国科学院深圳先进技术研究院 一种基因递送系统在将目的基因经静脉注射递送至肝脏的应用
US20260055144A1 (en) 2022-08-24 2026-02-26 Regenxbio Inc. Recombinant adeno-associated viruses and uses thereof
TW202413648A (zh) 2022-08-25 2024-04-01 日商武田藥品工業股份有限公司 用於治療法布立氏病（ｆａｂｒｙ ｄｉｓｅａｓｅ）之組合物及方法
WO2024054983A1 (en) 2022-09-08 2024-03-14 Voyager Therapeutics, Inc. Controlled expression of viral proteins
TW202421788A (zh) 2022-09-22 2024-06-01 美商拜奧馬林製藥公司 用ａａｖ基因療法載體治療致心律不整性心肌病
TW202417631A (zh) 2022-09-22 2024-05-01 美商拜奧馬林製藥公司 用ａａｖ基因治療載體治療心肌病
US20260034250A1 (en) 2022-09-30 2026-02-05 Regenxbio Inc. Treatment of ocular diseases with recombinant viral vectors encoding anti-vegf fab
WO2024081746A2 (en) 2022-10-11 2024-04-18 Regenxbio Inc. Engineered nucleic acid regulatory elements and methods and uses thereof
WO2024105638A1 (en) 2022-11-18 2024-05-23 Jcr Pharmaceuticals Co., Ltd. Recombinant aav vectors and methods for treatment of hunter syndrome
WO2024130070A2 (en) 2022-12-17 2024-06-20 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Recombinant aav capsids with cardiac- and skeletal muscle- specific targeting motifs and uses thereof
KR20250135916A (ko) 2022-12-17 2025-09-15 더 트러스티스 오브 더 유니버시티 오브 펜실베니아 심장 및 골격근 특이적 표적화 모티프를 갖는 재조합 aav 돌연변이체 벡터 및 이를 포함하는 조성물
IT202200026595A1 (it) 2022-12-22 2024-06-22 Fond Telethon Ets Nuovi inibitori di regolatori epigenetici
WO2024146935A1 (en) 2023-01-06 2024-07-11 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Intravenous administration of antisense oligonucleotides for the treatment of pain
US12252518B2 (en) 2023-01-06 2025-03-18 Life Biosciences, Inc. Methods of treating non-arteritic anterior ischemic optic neuropathy
WO2024151541A1 (en) 2023-01-09 2024-07-18 Sana Biotechnology, Inc. Type-1 diabetes autoimmune mouse
JP2026504074A (ja) 2023-01-12 2026-02-03 ナント・ユニヴェルシテ 化学修飾されたアデノ随伴ウイルス
WO2024163678A2 (en) 2023-02-01 2024-08-08 Tune Therapeutics, Inc. Fusion proteins and systems for targeted activation of frataxin (fxn) and related methods
WO2024163683A2 (en) 2023-02-01 2024-08-08 Tune Therapeutics, Inc. Systems, compositions, and methods for modulating expression of methyl-cpg binding protein 2 (mecp2) and x-inactive specific transcript (xist)
WO2024163012A1 (en) 2023-02-02 2024-08-08 Voyager Therapeutics, Inc. Compositions and methods for the treatment of neurological disorders related to glucosylceramidase beta deficiency
CN121195072A (zh) 2023-02-03 2025-12-23 詹森药业有限公司 用于帕金森病的基因治疗载体
GB202302480D0 (en) 2023-02-22 2023-04-05 Drishti Discoveries Ltd shRNA for the treatment of disease
CN116286988A (zh) * 2023-03-03 2023-06-23 西咸新区沣厚原创医药科技有限公司 一种稳定表达冠状病毒3cl蛋白酶的腺相关病毒体系、动物模型及构建方法和应用
WO2024192281A2 (en) 2023-03-15 2024-09-19 Regenxbio Inc. Exon skipping gene therapy constructs, vectors and uses thereof
WO2024196855A2 (en) 2023-03-17 2024-09-26 University Of Rochester Ribozyme-mediated rna assembly and expression
WO2024211780A1 (en) 2023-04-07 2024-10-10 Regenxbio Inc. Compositions and methods for recombinant aav production
WO2024215653A1 (en) 2023-04-10 2024-10-17 Tenaya Therapeutics, Inc. Guide rnas, vectors, and virions for targeting mutations in the pln gene
WO2024215655A1 (en) 2023-04-10 2024-10-17 Tenaya Therapeutics, Inc. Cardioprotective bag3 therapies
WO2024216244A2 (en) 2023-04-13 2024-10-17 Regenxbio Inc. Targeting aav capsids, methods of manufacturing and using same
CN116622908B (zh) * 2023-04-13 2024-02-06 武汉珈创生物技术股份有限公司 快速检测野生型腺相关病毒的引物探针、试剂盒及方法和应用
TW202509211A (zh) 2023-04-26 2025-03-01 法商賽諾菲公司 宿主細胞系以及鑑定和使用該等宿主細胞系之方法
WO2024228938A1 (en) * 2023-05-01 2024-11-07 St. Jude Children's Research Hospital, Inc. Modified aav p5 promoter for improved vector titer and purity
EP4704867A1 (en) 2023-05-03 2026-03-11 Sana Biotechnology, Inc. Methods of dosing and administration of engineered islet cells
CN121399470A (zh) 2023-05-03 2026-01-23 马尼福尔德生物技术有限公司 用于高通量蛋白质递送、筛选和检测的方法和组合物
WO2024233529A2 (en) 2023-05-07 2024-11-14 Regenxbio Inc. Compositions and methods for recombinant aav production
EP4709406A2 (en) 2023-05-11 2026-03-18 University Hospitals Cleveland Medical Center Anxiolytic therapy
WO2024233791A1 (en) 2023-05-11 2024-11-14 Seelos Therapeutics, Inc. Methods of treating neurodegenerative disorders
AU2024271004A1 (en) 2023-05-16 2026-01-15 Regenxbio Inc. Vectorized anti-complement antibodies and administration thereof
WO2024238859A1 (en) 2023-05-16 2024-11-21 Regenxbio Inc. Vectorized c5 inhibitor agents and administration thereof
WO2024238853A1 (en) 2023-05-16 2024-11-21 Regenxbio Inc. Adeno-associated viruses for ocular delivery of gene therapy
WO2024243236A2 (en) 2023-05-22 2024-11-28 Sana Biotechnology, Inc. Methods of delivery of islet cells and related methods
WO2024241176A1 (en) 2023-05-24 2024-11-28 Jcr Pharmaceuticals Co., Ltd. Recombinant aav vectors and methods for treatment of diseases with central nervous system disorders
CN121358869A (zh) 2023-05-25 2026-01-16 朱诺治疗学股份有限公司 Aav纯化方法
WO2024258961A1 (en) 2023-06-12 2024-12-19 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Aav gene therapy for mucopolysaccharidosis iiib
TW202516019A (zh) 2023-06-29 2025-04-16 賓州大學委員會 具中樞神經系統靶向模體的突變aav及含有其之組成物
WO2025008406A1 (en) 2023-07-04 2025-01-09 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Antisense oligonucleotides and their use for the treatment of cancer
WO2025017168A1 (en) 2023-07-19 2025-01-23 Genethon Novel optimized utrophin micro-genes
WO2025017169A1 (en) 2023-07-20 2025-01-23 Genethon Novel mididystrophins
WO2025035143A1 (en) 2023-08-10 2025-02-13 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Compositions and methods for treatment of spinal muscular atrophy
WO2025038430A1 (en) 2023-08-16 2025-02-20 Voyager Therapeutics, Inc. Aav capsid variants and uses thereof
WO2025072604A1 (en) 2023-09-28 2025-04-03 University Of Rochester Rna-editing gene therapy approaches for treating myotonic dystrophy type 1 (dm1)
WO2025075963A1 (en) 2023-10-02 2025-04-10 Regenxbio Inc. Methods and formulations for treating mucopolysaccharidosis ii-associated hearing loss with recombinant human iduronate-2-sulfatase
WO2025080780A1 (en) 2023-10-10 2025-04-17 University Of Rochester Delivery and expression of prime editing crispr systems
WO2025090962A1 (en) 2023-10-25 2025-05-01 Regenxbio Inc. Compositions and methods for recombinant aav production
WO2025090858A1 (en) 2023-10-27 2025-05-01 Biogen Ma Inc. Methods for identifying aav capsid variants with desired characteristics
WO2025102034A1 (en) 2023-11-10 2025-05-15 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Gene therapy for barth syndrome
WO2025106374A1 (en) 2023-11-13 2025-05-22 Juno Therapeutics, Inc. Aav production method
WO2025106661A1 (en) 2023-11-14 2025-05-22 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Compositions with cardiac and skeletal musclespecific targeting motifs and uses thereof
WO2025108407A2 (en) 2023-11-23 2025-05-30 Neuexcell Therapeutics (Suzhou) Co., Ltd. Gene therapy compositions and methods for treating glioma
WO2025113676A1 (en) 2023-11-29 2025-06-05 Neuexcell Therapeutics (Suzhou) Co., Ltd. Compositions and methods for treating stroke in primates
WO2025128817A1 (en) 2023-12-15 2025-06-19 Genzyme Corporation Artificial micrornas targeting tau
WO2025129157A1 (en) 2023-12-15 2025-06-19 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Gene therapy for treatment of canavan disease
WO2025137219A1 (en) 2023-12-21 2025-06-26 Voyager Therapeutics, Inc. Compositions and methods for the treatment of disorders related to dystrophia myotonica protein kinase
WO2025147436A1 (en) 2024-01-03 2025-07-10 Voyager Therapeutics, Inc. Aav capsid variants and uses thereof
TW202548014A (zh) 2024-01-26 2025-12-16 美商健臻公司 靶向亨丁頓舞蹈症之人工ｍｉｃｒｏｒｎａ
WO2025160429A1 (en) 2024-01-26 2025-07-31 Genzyme Corporation Artificial micrornas targeting snca
WO2025179007A1 (en) * 2024-02-21 2025-08-28 The Regents Of The University Of California Adeno-associated virus compositions and methods of use thereof for human cells
TW202548022A (zh) 2024-03-03 2025-12-16 美商帕西奇生物公司 用於治療神經退化性病症之重組腺相關病毒
WO2025217214A2 (en) 2024-04-08 2025-10-16 Regenxbio Inc. Recombinant adeno-associated viruses and uses thereof
TW202548025A (zh) 2024-04-08 2025-12-16 美商銳進科斯生物股份有限公司 載體化抗補體抗體與補體劑及其投與
WO2025214477A1 (en) 2024-04-12 2025-10-16 Skyline Therapeutics (Shanghai) Co., Ltd. Treatment of genetic cardiomyopathies with aav gene therapy vectors
CN118459608B (zh) * 2024-04-26 2025-01-24 泰州博莱得利生物科技有限公司 犬细小病毒特异性免疫制剂、制备方法和应用
WO2025237990A1 (en) 2024-05-14 2025-11-20 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Antisense oligonucleotides and their use for the treatment of pulmonary fibrosis
WO2026006341A1 (en) 2024-06-24 2026-01-02 Regenxbio Inc. Microdystrophin gene therapy administration for treatment of dystrophinopathies
CN118460614B (zh) * 2024-07-05 2025-03-11 凌意(杭州)生物科技有限公司 一种腺相关病毒Cap蛋白的表达框
WO2026035687A1 (en) 2024-08-05 2026-02-12 University Of Rochester Compositions and methods for stitchr-mediated full-length scn5a expression in vivo
WO2026055342A1 (en) 2024-09-04 2026-03-12 Arsenal Biosciences, Inc. Synthetic pathway activators
CN120249230B (zh) * 2025-06-05 2025-11-07 鼐济医药科技(杭州)有限公司 一种用于同时生产多种重组腺相关病毒的方法
CN121142059B (zh) * 2025-11-17 2026-02-17 吉林农业大学 一种基于dia质谱技术评估微塑料神经毒性的方法及系统

Family Cites Families (70)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB8929110D0 (en) * 1989-12-22 1990-02-28 3I Res Expl Ltd Polypeptides and dna encoding therefor
US5449616A (en) 1990-05-23 1995-09-12 University Of Iowa Research Foundation Nucleic acid encoding dystrophin-associated protein
US5173414A (en) * 1990-10-30 1992-12-22 Applied Immune Sciences, Inc. Production of recombinant adeno-associated virus vectors
CA2046745A1 (en) 1991-07-10 1993-01-11 Isaac Neuman Article including a container containing at least one precious stone
US6174666B1 (en) 1992-03-27 2001-01-16 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Method of eliminating inhibitory/instability regions from mRNA
US5478745A (en) 1992-12-04 1995-12-26 University Of Pittsburgh Recombinant viral vector system
US5658785A (en) 1994-06-06 1997-08-19 Children's Hospital, Inc. Adeno-associated virus materials and methods
US6204059B1 (en) 1994-06-30 2001-03-20 University Of Pittsburgh AAV capsid vehicles for molecular transfer
US5856152A (en) * 1994-10-28 1999-01-05 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Hybrid adenovirus-AAV vector and methods of use therefor
US6001650A (en) * 1995-08-03 1999-12-14 Avigen, Inc. High-efficiency wild-type-free AAV helper functions
CA2230758A1 (en) * 1995-09-08 1997-03-13 Genzyme Corporation Improved aav vectors for gene therapy
ATE264398T1 (de) * 1995-12-01 2004-04-15 Crucell Holland Bv Regulierte expression von proteinen in stabil transformierten säugetierzellen
US20020037867A1 (en) * 1999-02-26 2002-03-28 James M. Wilson Method for recombinant adeno-associated virus-directed gene therapy
US5866552A (en) * 1996-09-06 1999-02-02 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Method for expressing a gene in the absence of an immune response
AU4255397A (en) 1996-09-06 1998-03-26 Trustees Of The University Of Pennsylvania, The Chimpanzee adenovirus vectors
EP0950111A1 (en) 1996-09-06 1999-10-20 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Methods using cre-lox for production of recombinant adeno-associated viruses
EP0931158A1 (en) 1996-09-06 1999-07-28 The Trustees Of The University Of Pennsylvania An inducible method for production of recombinant adeno-associated viruses utilizing t7 polymerase
CN1233291A (zh) * 1996-09-06 1999-10-27 宾西法尼亚大学托管会 重组腺伴随病毒定向基因治疗的方法
EP0932694A2 (en) * 1996-09-11 1999-08-04 THE UNITED STATES GOVERNMENT as represented by THE DEPARTMENT OF HEALTH AND HUMAN SERVICES Aav4 vector and uses thereof
EP0938578B1 (en) * 1996-12-05 2004-02-04 Crucell Holland B.V. Genetic modification of primate hemopoietic repopulating stem cells
US6039942A (en) * 1996-12-20 2000-03-21 Novo Nordick A/S Phytase polypeptides
US6156303A (en) 1997-06-11 2000-12-05 University Of Washington Adeno-associated virus (AAV) isolates and AAV vectors derived therefrom
US6251677B1 (en) 1997-08-25 2001-06-26 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Hybrid adenovirus-AAV virus and methods of use thereof
CA2303768C (en) * 1997-09-19 2009-11-24 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Methods and vector constructs useful for production of recombinant aav
EP1015619A1 (en) * 1997-09-19 2000-07-05 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Methods and cell line useful for production of recombinant adeno-associated viruses
WO1999015677A1 (en) 1997-09-19 1999-04-01 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Method for gene transfer using bcl2 and compositions useful therein
US6953690B1 (en) 1998-03-20 2005-10-11 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Compositions and methods for helper-free production of recombinant adeno-associated viruses
DE69922934T2 (de) 1998-03-20 2005-12-08 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Zusammensetzungen und Verfahren zur helfer-freien Herstellung von rekombinanten Adeno-assoziierten Viren
DE69939169D1 (de) 1998-05-28 2008-09-04 Us Gov Health & Human Serv Aav5 vektoren und deren verwendung
WO2000011140A1 (en) 1998-08-20 2000-03-02 The Wistar Institute Of Anatomy And Biology Methods of augmenting mucosal immunity through systemic priming and mucosal boosting
US6759237B1 (en) * 1998-11-05 2004-07-06 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Adeno-associated virus serotype 1 nucleic acid sequences, vectors and host cells containing same
PT1127150E (pt) * 1998-11-05 2007-08-22 Univ Pennsylvania ''sequências de ácido nucleico do vírus adeno associado do serotipo 1, vectores e células hospedeiras que as contêm''
US6387368B1 (en) * 1999-02-08 2002-05-14 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Hybrid adenovirus-AAV virus and methods of use thereof
JP4693244B2 (ja) * 1999-03-18 2011-06-01 ザ・トラステイーズ・オブ・ザ・ユニバーシテイ・オブ・ペンシルベニア 組換えアデノ随伴ウイルスのヘルパー無しの生産のための組成物および方法
AU2409200A (en) 1999-06-02 2000-12-28 Trustees Of The University Of Pennsylvania, The Compositions and methods useful for production of recombinant viruses which require helper viruses
AU781478B2 (en) * 1999-08-20 2005-05-26 Johns Hopkins University School Of Medicine, The Methods and compositions for the construction and use of fusion libraries
US6365394B1 (en) * 1999-09-29 2002-04-02 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Cell lines and constructs useful in production of E1-deleted adenoviruses in absence of replication competent adenovirus
EP1218035A2 (en) * 1999-09-29 2002-07-03 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Rapid peg-modification of viral vectors
WO2001040455A2 (en) 1999-12-03 2001-06-07 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Compositions and methods for increasing packaging and yields of recombinant adenoviruses using multiple packaging signals
US6821512B1 (en) 1999-12-03 2004-11-23 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Compositions and methods for increasing packaging and yield of recombinant adenoviruses using multiple packaging signals
US20020045264A1 (en) * 2000-03-14 2002-04-18 During Matthew J. Production of chimeric capsid vectors
US6468524B1 (en) * 2000-03-22 2002-10-22 The United States Of America, As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services AAV4 vector and uses thereof
US6855314B1 (en) 2000-03-22 2005-02-15 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services AAV5 vector for transducing brain cells and lung cells
JP2004514407A (ja) 2000-04-28 2004-05-20 ザ・トラステイーズ・オブ・ザ・ユニバーシテイ・オブ・ペンシルベニア 異種キャプシド中にシュードタイピングされたａａｖ５キャプシドおよびａａｖ５ベクターを含む組換えａａｖベクター
JP2004520812A (ja) * 2000-08-30 2004-07-15 ハプロゲン・エルエルシー 対立遺伝子を決定するための方法
US7749492B2 (en) 2001-01-05 2010-07-06 Nationwide Children's Hospital, Inc. AAV vectors and methods
US20020159978A1 (en) * 2001-02-06 2002-10-31 James Allen Muscle-directed gene transfer by use of recombinant AAV-1 and AAV-6 virions
CN103555677B (zh) 2001-11-13 2018-01-30 宾夕法尼亚大学托管会 检测和/或鉴定腺伴随病毒(aav)序列以及分离所鉴定的新型序列的方法
WO2003052051A2 (en) * 2001-12-17 2003-06-26 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Adeno-associated virus (aav) serotype 8 sequences
PT2573170T (pt) 2001-12-17 2018-03-26 Univ Pennsylvania Sequências de um vírus adenoassociado (aav) de serotipo 9, vetor contendo as mesmas, e suas utilizações
AU2002367943A1 (en) 2001-12-18 2003-12-22 University Of North Carolina At Chapel Hill Improved reagents and methods for producing parvoviruses
WO2003088899A2 (en) * 2002-04-05 2003-10-30 The Children's Hospital Of Philadelphia Methods for the production of chimeric adeno-associated virus (aav) vectors, compositions of chimeric aav vectors, and methods of use thereof
CA2426283C (en) * 2002-04-29 2006-06-27 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Method for direct rescue and amplification of integrated viruses from cellular dna of tissues
JP2007524386A (ja) 2003-06-19 2007-08-30 アビジェン， インコーポレイテッド 減少した免疫反応性を有するａａｖビリオン、およびその使用
DK3211085T3 (da) * 2003-09-30 2021-06-21 Univ Pennsylvania Klader af adeno-associeret virus (aav), sekvenser, vektorer indeholdende disse og anvendelser deraf
WO2006039218A2 (en) 2004-09-30 2006-04-13 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Perfusion circuit and use therein in targeted delivery of macromolecules
US8999678B2 (en) 2005-04-07 2015-04-07 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Method of increasing the function of an AAV vector
US7788045B2 (en) 2005-09-01 2010-08-31 Meditasks, Llc Systems and method for homeostatic blood states
EP2018421B1 (en) 2006-04-28 2012-12-19 The Trustees of the University of Pennsylvania Scalable production method for aav
JP2009102988A (ja) 2007-10-19 2009-05-14 Toyota Motor Corp 内燃機関の燃料噴射装置
US8236527B2 (en) 2008-03-14 2012-08-07 Humanzyme Limited Recombinant production of authentic human proteins using human cell expression systems
US20090280103A1 (en) 2008-04-04 2009-11-12 Martin Flueck Regulation of muscle repair
US8729041B2 (en) 2008-12-03 2014-05-20 The Johns Hopkins University Compositions and methods for treating hepatic neoplasia
DK2826860T3 (en) 2010-04-23 2018-12-03 Univ Massachusetts CNS targeting AAV vectors and methods for their use
DK2731470T3 (da) 2011-07-15 2017-11-20 Kaercher Gmbh & Co Kg Alfred Rotationsbørste og fejemaskine med en rotationsbørste
US9434928B2 (en) 2011-11-23 2016-09-06 Nationwide Children's Hospital, Inc. Recombinant adeno-associated virus delivery of alpha-sarcoglycan polynucleotides
WO2013123503A1 (en) 2012-02-17 2013-08-22 The Children's Hospital Of Philadelphia Aav vector compositions and methods for gene transfer to cells, organs and tissues
WO2013170078A1 (en) 2012-05-09 2013-11-14 Oregon Health & Science University Adeno associated virus plasmids and vectors
US9819463B2 (en) 2016-02-18 2017-11-14 Huawei Technologies Co., Ltd. Method and apparatus for transmitting data in a wireless communication system
SI3589730T1 (sl) 2017-02-28 2024-04-30 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Adeno-povezan virus (AAV) clade F vektor in njihova uporaba

Also Published As

Publication number Publication date
CA2864537A1 (en) 2003-05-22
US10308958B2 (en) 2019-06-04
SG10201506627PA (en) 2015-10-29
NZ548094A (en) 2008-07-31
KR101014207B1 (ko) 2011-02-14
HUP0600229A3 (en) 2010-01-28
NO336468B1 (no) 2015-08-31
CN105671005B (zh) 2020-09-15
US8524446B2 (en) 2013-09-03
CN103589692A (zh) 2014-02-19
PH12014501487B1 (en) 2015-12-07
CA2756866C (en) 2017-06-06
BR122016004546B8 (pt) 2021-07-27
PL409838A1 (pl) 2015-07-20
SG168422A1 (en) 2011-02-28
IL193525A0 (en) 2009-02-11
CA2756866A1 (en) 2003-05-22
EP1456419A4 (en) 2005-11-09
IL227866A0 (en) 2013-09-30
NO336801B1 (no) 2015-11-02
CN103555678B (zh) 2018-02-09
BR122016004944B8 (pt) 2021-07-27
JP2013013414A (ja) 2013-01-24
HU230406B1 (hu) 2016-04-28
CN102181480A (zh) 2011-09-14
NO20042183L (no) 2004-07-14
JP5969547B2 (ja) 2016-08-17
US11034977B2 (en) 2021-06-15
HK1068925A1 (en) 2005-05-06
IL213810A (en) 2014-08-31
DK1310571T3 (da) 2006-06-19
US20200087684A1 (en) 2020-03-19
CN102181480B (zh) 2016-01-27
KR101015854B1 (ko) 2011-02-23
NZ591012A (en) 2012-06-29
US20110263027A1 (en) 2011-10-27
NZ600121A (en) 2013-12-20
WO2003042397A3 (en) 2004-02-05
EP2338900A1 (en) 2011-06-29
KR20050058234A (ko) 2005-06-16
BR122016004944B1 (pt) 2016-11-22
EP1456419A2 (en) 2004-09-15
JP5140627B2 (ja) 2013-02-06
IL213810A0 (en) 2011-07-31
JP5669795B2 (ja) 2015-02-18
NO20140988L (no) 2004-07-14
CN103555677A (zh) 2014-02-05
DE60209193T2 (de) 2006-09-28
JP3958191B2 (ja) 2007-08-15
BRPI0214119B1 (pt) 2016-09-27
CA2945734C (en) 2020-02-25
US11034976B2 (en) 2021-06-15
US10544432B2 (en) 2020-01-28
CA3159060C (en) 2023-05-16
SG10202108118RA (en) 2021-08-30
EP1310571A2 (en) 2003-05-14
ATE317916T1 (de) 2006-03-15
NZ532635A (en) 2007-05-31
EP1310571B1 (en) 2006-02-15
PL397823A1 (pl) 2012-07-16
US20220213501A1 (en) 2022-07-07
US20190024117A1 (en) 2019-01-24
CA2945734A1 (en) 2003-05-22
BR122016004546B1 (pt) 2016-11-29
US20180030479A1 (en) 2018-02-01
ATE520707T1 (de) 2011-09-15
US11041171B2 (en) 2021-06-22
ZA200403360B (en) 2005-04-26
IL161827A (en) 2009-11-18
CA3066428C (en) 2022-05-24
ES2439515T3 (es) 2014-01-23
HK1056198A1 (en) 2004-02-06
US20130045186A1 (en) 2013-02-21
IL233391A (en) 2016-12-29
PL217623B1 (pl) 2014-08-29
KR20100029134A (ko) 2010-03-15
IL258545A (en) 2018-06-28
CA2915124C (en) 2018-08-14
CA2915124A1 (en) 2003-05-22
IL234063A0 (en) 2014-09-30
IL221602A (en) 2015-09-24
EP2341068A1 (en) 2011-07-06
BRPI0214119B8 (pt) 2021-05-25
IL227866A (en) 2015-11-30
PL221877B1 (pl) 2016-06-30
PH12014501487A1 (en) 2015-12-07
US10508286B2 (en) 2019-12-17
US20170240921A1 (en) 2017-08-24
MXPA04004600A (es) 2004-08-13
US10041090B2 (en) 2018-08-07
NO338362B1 (no) 2016-08-15
CN103555676B (zh) 2016-08-31
JP2016136953A (ja) 2016-08-04
ES2455126T3 (es) 2014-04-14
BR0214119A (pt) 2005-06-28
US10526617B2 (en) 2020-01-07
PL373864A1 (pl) 2005-09-19
CA2864537C (en) 2016-11-29
US20160097040A1 (en) 2016-04-07
CA3066428A1 (en) 2003-05-22
IL270065B2 (en) 2023-10-01
WO2003042397A2 (en) 2003-05-22
PL404537A1 (pl) 2014-02-17
AU2002361573B2 (en) 2008-06-12
CA2406745C (en) 2006-01-10
NO20131359L (no) 2004-07-14
NZ578982A (en) 2011-03-31
US8906675B2 (en) 2014-12-09
CA3159060A1 (en) 2003-05-22
NO20150196L (no) 2004-07-14
JP6212142B2 (ja) 2017-10-11
US20200080109A1 (en) 2020-03-12
US20200131534A1 (en) 2020-04-30
US20110151434A1 (en) 2011-06-23
JP2014239680A (ja) 2014-12-25
IL248724B (en) 2018-04-30
CA2465868A1 (en) 2003-05-22
IL270065A (pl) 2019-12-31
DE60209193D1 (de) 2006-04-20
US11377669B2 (en) 2022-07-05
IL233391A0 (en) 2014-08-31
PL220644B1 (pl) 2015-11-30
PH12016502583A1 (en) 2017-10-18
CA2465868C (en) 2017-02-28
NZ618298A (en) 2015-04-24
JP2005525086A (ja) 2005-08-25
IL221602A0 (en) 2012-10-31
CN103555676A (zh) 2014-02-05
IL161827A0 (en) 2005-11-20
JP2009195237A (ja) 2009-09-03
IL258545B (en) 2019-11-28
IL234063A (en) 2017-06-29
HU229379B1 (en) 2013-11-28
IL270065B1 (en) 2023-06-01
CN103589692B (zh) 2018-07-24
EP2341068B1 (en) 2013-09-25
HUP0600229A2 (en) 2006-06-28
MX346493B (es) 2017-03-21
JP4677187B2 (ja) 2011-04-27
JP2003235562A (ja) 2003-08-26
EP1310571A3 (en) 2003-08-13
SG157224A1 (en) 2009-12-29
CN103555678A (zh) 2014-02-05
US9790472B2 (en) 2017-10-17
NO334379B1 (no) 2014-02-24
SG10201912509RA (en) 2020-02-27
MX359371B (es) 2018-09-25
CA2406745A1 (en) 2003-05-13
EP2338900B1 (en) 2014-01-01
ES2258601T3 (es) 2006-09-01
IL248724A0 (en) 2017-01-31
US20170298388A1 (en) 2017-10-19
CN105671005A (zh) 2016-06-15
IL193525A (en) 2014-08-31
US20030138772A1 (en) 2003-07-24
US20210285012A1 (en) 2021-09-16
CN103555677B (zh) 2018-01-30
EP1456419B1 (en) 2011-08-17
US11499167B2 (en) 2022-11-15
US20220025401A1 (en) 2022-01-27
NZ564506A (en) 2009-09-25

Similar Documents

Publication Publication Date Title
PL222683B1 (pl) Rekombinowane wirusy stowarzyszone z adenowirusem (AAV), sposoby ich wytwarzania, pakująca komórka gospodarza, kompozycja zawierająca wirus, zastosowanie wirusa, wyizolowane wirusy AAV, białka,sztuczne białka kapsydu, cząsteczki, komórki gospodarza, sposoby dostarczania transgenu, sposób identyfikacji serotypu, zestaw diagnostyczny, sposób izolacji nowych wirusów, rekombinowana komórka
CN1856576B (zh) 腺伴随病毒(aav)进化支、序列、含有这些序列的载体及它们的应用
AU2020201242B2 (en) ADENO-ASSOCIATED VIRUS cy.5 (AAVcy.5) SEQUENCES AND RECOMBINANT AAVs COMPRISING SAME
CN101426935B (zh) 检测和/或鉴定腺伴随病毒(aav)序列以及分离所鉴定的新型序列的方法
CA2465868E (en) A method of detecting and/or identifying adeno-associated virus (aav) sequences and isolating novel sequences identified thereby
HK40042488A (en) A method of detecting and/or identifying adeno-associated virus (aav) sequences and isolating novel sequences identified thereby
HU230093B1 (hu) Eljárás adeno-asszociált vírus(AAV)szekvenciák detektálására és/vagy azonosítására, és az azzal azonosított új szekvenciák izolálására