TW202208406A - 用於治療ｋｃｎｑ４相關性聽力損失之組成物及方法 - Google Patents

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Ｒ 黃
琳達 Ｂ 高托
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Abstract

本揭示案提供如下技術，該等技術包含能夠表現及/或抑制KCNQ4基因產物之多核苷酸。

Description

用於治療KCNQ4相關性聽力損失之組成物及方法
有多種聽力損失。一些聽力損失與一或多個基因有關。本揭示案提供關於KCNQ4相關性聽力損失之技術。
本揭示案認識到可經由例如置換、添加及/或抑制某些基因產物來治療聽力損失相關性疾病或病狀。本揭示案進一步提供參與耳細胞，例如內耳細胞，例如毛細胞之發育、功能及/或維持之基因產物可用於治療細胞損失，例如毛細胞損失相關性疾病或病狀。因此，本揭示案提供各種技術，包括用於製備、使用及/或投與組成物以表現參與內耳細胞，例如毛細胞之發育、功能及/或維持之基因產物的方法的技術。
本揭示案提供之技術亦包括該等組成物用於治療聽力損失或聽力損失相關性疾病或病狀之用途。在一些實施例中，基因產物可由KCNQ4基因或其特徵部分編碼。在一些實施例中，基因產物可為KCNQ4蛋白或其特徵部分。在一些實施例中，變體KCNQ4基因產物經抑制。在一些實施例中，本揭示案提供表現功能性KCNQ4之技術。在一些實施例中，本揭示案提供抑制KCNQ4變體之技術。在一些實施例中，本揭示案提供表現功能性KCNQ4且抑制KCNQ4變體之技術。
本揭示案進一步提供例如經由AAV粒子遞送病毒可用於投與組成物以表現參與內耳細胞之發育、功能及/或維持之基因產物，及/或用於治療聽力損失或聽力損失相關性疾病或病狀。如本文所述，AAV粒子包含(i) AAV多核苷酸構築體(例如重組AAV多核苷酸構築體)，及(ii)包含衣殼蛋白之衣殼。在一些實施例中，AAV多核苷酸構築體包含KCNQ4基因或其特徵部分。在一些實施例中，本文所述之AAV粒子稱為rAAV-KCNQ4或rAAV-KCNQ4粒子。在一些實施例中，本文所述之AAV粒子包含Anc80 AAV衣殼蛋白，且稱為rAAV Anc80-KCNQ4或rAAV Anc80-KCNQ4粒子。
本揭示案尤其提供一種構築體，該構築體包含與啟動子操作性連接之編碼序列，其中該編碼序列編碼Kv7.4蛋白。
本揭示案亦提供一種構築體，該構築體包含與啟動子操作性連接之編碼序列，其中該編碼序列編碼KCNQ4抑制性核酸，該KCNQ4抑制性核酸包含與KCNQ4基因互補之核苷酸序列。在一些實施例中，本文所述之AAV粒子稱為rAAV-KCNQ4抑制性RNA或rAAV-KCNQ4抑制性RNA粒子。在一些實施例中，本文所述之AAV粒子包含Anc80 AAV衣殼蛋白，且稱為rAAV Anc80-KCNQ4抑制性RNA或rAAV Anc80-KCNQ4抑制性RNA粒子。
在一些實施例中，編碼序列為KCNQ4基因。在一些實施例中，KCNQ4基因為靈長類動物KCNQ4基因。在一些實施例中，KCNQ4基因為人類KCNQ4基因。在一些實施例中，KCNQ4基因為鼠類(或小鼠) KCNQ4基因。
在一些實施例中，人類KCNQ4基因包含根據SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO: 2、SEQ ID NO: 3、SEQ ID NO: 4、SEQ ID NO: 5、SEQ ID NO: 6、SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO: 8、SEQ ID NO: 9、SEQ ID NO: 10、SEQ ID NO: 25、SEQ ID NO: 26、SEQ ID NO: 27、SEQ ID NO: 28、SEQ ID NO: 29、SEQ ID NO: 30或SEQ ID NO: 90之核酸序列。在一些實施例中，人類KCNQ4基因包含根據SEQ ID NO: 9或10之核酸序列。在一些實施例中，小鼠(或鼠類) KCNQ4基因包含根據SEQ ID NO: 91之核酸序列。
在一些實施例中，Kv7.4蛋白為靈長類動物Kv7.4蛋白。在一些實施例中，Kv7.4蛋白為人類Kv7.4蛋白。在一些實施例中，Kv7.4蛋白為小鼠Kv7.4蛋白。在一些實施例中，Kv7.4蛋白包含根據SEQ ID NO: 11、SEQ ID NO: 12、SEQ ID NO: 13或SEQ ID NO: 92之胺基酸序列。
在一些實施例中，啟動子為誘導型啟動子、組成型啟動子或組織特異性啟動子。在一些實施例中，啟動子為耳蝸毛細胞特異性啟動子。在一些實施例中，耳蝸毛細胞特異性啟動子為ATOH1啟動子、POU4F3啟動子、LHX3啟動子、MYO7A啟動子、MYO6啟動子、α9ACHR啟動子或α10ACHR啟動子。在一些實施例中，啟動子為CAG啟動子、CBA啟動子、smCBA啟動子、CMV啟動子或CB7啟動子。在一些實施例中，啟動子包含根據SEQ ID NO: 22、SEQ ID NO: 23、SEQ ID NO: 24、SEQ ID NO: 297、SEQ ID NO: 298、SEQ ID NO: 299、SEQ ID NO: 300、SEQ ID NO: 301、SEQ ID NO: 302、SEQ ID NO: 303、SEQ ID NO: 304、SEQ ID NO: 305、SEQ ID NO: 306、SEQ ID NO: 307、SEQ ID NO: 308、SEQ ID NO: 309及/或SEQ ID NO: 310之核酸序列。
在一些實施例中，本揭示案之構築體包含兩個AAV反向末端重複序列(ITR)，其中該兩個AAV ITR側接編碼序列及啟動子。在一些實施例中，兩個AAV ITR為或衍生自AAV2 ITR。在一些實施例中，兩個AAV ITR包含：(i)包含根據SEQ ID NO: 15之核酸序列的5' ITR及包含根據SEQ ID NO: 16之核酸序列的3' ITR。在一些實施例中，兩個AAV ITR包含：(i)包含根據SEQ ID NO: 19之核酸序列的5' ITR及包含根據SEQ ID NO: 20之核酸序列的3' ITR。在一些實施例中，構築體包含根據SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO: 2、SEQ ID NO: 3、SEQ ID NO: 4、SEQ ID NO: 5、SEQ ID NO: 6、SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO: 8、SEQ ID NO: 9、SEQ ID NO: 10、SEQ ID NO: 25、SEQ ID NO: 26、SEQ ID NO: 27、SEQ ID NO: 28、SEQ ID NO: 29、SEQ ID NO: 30或SEQ ID NO: 90之核酸序列。在一些實施例中，構築體包含根據SEQ ID NO: 1-41及/或42-70及/或96-97中之一或多者的核酸序列。
本揭示案亦提供一種構築體，該構築體包含與啟動子操作性連接之編碼序列，其中該編碼序列編碼KCNQ4抑制性核酸，該KCNQ4抑制性核酸包含與KCNQ4基因互補之核苷酸序列。在一些實施例中，KCNQ4抑制性核酸為miRNA、siRNA或shRNA。在一些實施例中，KCNQ4抑制性RNA包含根據SEQ ID NO: 42、SEQ ID NO: 43、SEQ ID NO: 44、SEQ ID NO: 45、SEQ ID NO: 46、SEQ ID NO: 47、SEQ ID NO: 48、SEQ ID NO: 49、SEQ ID NO: 50、SEQ ID NO: 51、SEQ ID NO: 52、SEQ ID NO: 53、SEQ ID NO: 54、SEQ ID NO: 55、SEQ ID NO: 56、SEQ ID NO: 57、SEQ ID NO: 58、SEQ ID NO: 59、SEQ ID NO: 60、SEQ ID NO: 61、SEQ ID NO: 62、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO: 64、SEQ ID NO: 65、SEQ ID NO: 66、SEQ ID NO: 67、SEQ ID NO: 68、SEQ ID NO: 69、SEQ ID NO: 70、SEQ ID NO: 96或SEQ ID NO: 97之序列。在一些實施例中，KCNQ4抑制性RNA為gRNA。在一些實施例中，KCNQ4抑制性RNA包含根據SEQ ID NO: 42、SEQ ID NO: 43、SEQ ID NO: 44、SEQ ID NO: 45、SEQ ID NO: 46、SEQ ID NO: 47、SEQ ID NO: 48之序列。在一些實施例中，啟動子為H1或U6啟動子。
在一些實施例中，將一或多種KCNQ4抑制性核酸工程改造至本文所述構築體之嵌合內含子中的miR支架靶向區域中。舉例而言，在一些實施例中，將一種、兩種、三種、四種、五種、六種、七種、八種、九種、十種或更多種KCNQ4抑制性核酸工程改造至本文所述構築體之嵌合內含子中的miR支架靶向區域中。在一些實施例中，將一或多種KCNQ4抑制性核酸工程改造至本文所述構築體之3' UTR中的miR支架靶向區域中。舉例而言，在一些實施例中，將一種、兩種、三種、四種、五種、六種、七種、八種、九種、十種或更多種KCNQ4抑制性核酸工程改造至本文所述構築體之3' UTR中的miR支架靶向區域中。
在一些實施例中，本揭示案提供一種包含抑制性核酸之構築體，其中該抑制性核酸為或包含以下中之一或多者：miR1-155；miR2-155；miR4-155；miR5-155；miR6-155；miR7-155 miR1-16；miR1-26；miR1-96；miR1-122；miR1-135；miR1-182；miR1-183；miR1-335；miR1-451，及/或選自由以下組成之群的miRNA：miR1-155；miR2-155；miR4-155；miR5-155；miR6-155；miR7-155；miR1-16；miR1-26；miR1-96；miR1-122；miR1-135；miR1-182；miR1-183；miR1-335；miR1-451及其組合。在一些實施例中，本揭示案提供包含抑制性核酸之構築體，其中該抑制性核酸為或包含miR2-26；mir6-26；及其組合中之一或多者。
在一些實施例中，本揭示案提供一種AAV粒子，其另外包含如本文所提供之構築體。在一些實施例中，AAV粒子另外包含AAV衣殼，其中該AAV衣殼為或衍生自AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、AAV-rh8、AAV-rh10、AAV-rh39、AAV-rh43或AAV Anc80衣殼。在一些實施例中，AAV衣殼為AAV Anc80衣殼。
在一些實施例中，本揭示案提供一種組成物，該組成物包含至少一種本文提供之構築體。在一些實施例中，組成物包含如本文所提供之AAV粒子。在一些實施例中，組成物之粒子另外包含AAV衣殼，其中該AAV衣殼為或衍生自AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、AAV-rh8、AAV-rh10、AAV-rh39、AAV-rh43或AAV Anc80衣殼。在一些實施例中，AAV粒子之AAV衣殼為AAV Anc80衣殼。在一些實施例中，組成物為醫藥組成物。在一些實施例中，組成物另外包含醫藥學上可接受之載劑。
本揭示案亦提供一種細胞。在一些實施例中，細胞包含一或多種如本文所提供之構築體、組成物及/或粒子。在一些實施例中，細胞為活體內 、離體 或活體外 細胞。在一些實施例中，細胞為哺乳動物細胞。在一些實施例中，哺乳動物細胞為人類細胞。在一些實施例中，使細胞永生化以產生穩定細胞株。在一些實施例中，人類細胞在個體之耳中。在一些實施例中，細胞具有內源KCNQ4基因之至少一種複本，該至少一種複本具有至少一種序列變化。在一些實施例中，至少一種序列變化產生功能喪失基因產物。
在一些實施例中，本揭示案提供一種細胞，該細胞包含與啟動子操作性連接之編碼序列，其中該編碼序列編碼Kv7.4蛋白。在一些實施例中，本揭示案提供一種細胞，該細胞包含與啟動子操作性連接之編碼序列，其中該編碼序列編碼功能喪失之KCNQ4變體基因產物。在一些實施例中，KCNQ4基因產物為Kv7.4蛋白。在一些該等實施例中，本揭示案提供包含一或多種細胞之細胞群，其中該群為或包含穩定細胞株。
在一些實施例中，內耳細胞為外毛細胞。在一些實施例中，內耳細胞在個體之耳中。在一些實施例中，內耳細胞為活體外 或離體 細胞。
本揭示案亦提供一種系統。在一些實施例中，系統包含至少一種如本文所提供之組成物。
本揭示案提供一種方法，該方法包含使內耳細胞與至少一種如本文所述之組成物接觸。
本揭示案提供一種系統、方法或套組，其包含圖32至圖35所述之裝置。
本揭示案提供一種方法，該方法包含使內耳細胞與如本文所提供之至少一種構築體以及包含AAV Rep基因、AAV Cap基因、AAV VA基因、AAV E2a基因及AAV E4基因的一或多種質體接觸。
在一些實施例中，內耳細胞為外毛細胞。在一些實施例中，內耳細胞在個體之耳中。在一些實施例中，內耳細胞為活體外 或離體 細胞。
本揭示案提供一種方法，該方法包含將如本文所提供之至少一種組成物引入個體之內耳中。在一些實施例中，將組成物引入個體之耳蝸中。在一些實施例中，經由圓窗膜注射引入組成物。
在一些實施例中，本揭示案之方法另外包含量測個體之聽力水準。在一些實施例中，藉由進行聽覺腦幹反應(ABR)測試來量測聽力水準。在一些實施例中，方法另外包含將個體之聽力水準與參考聽力水準比較。在一些實施例中，參考聽力水準為已公開或歷史參考聽力水準。在一些實施例中，在本文所提供之任何構築體之後量測個體之聽力水準，且參考聽力水準為在引入如本文所提供之任何構築體之前量測的個體之聽力水準。在一些實施例中，方法另外包含量測個體之KCNQ4基因產物之水準。在一些實施例中，在個體之內耳中量測KCNQ4基因產物之水準。在一些實施例中，在個體之耳蝸中量測KCNQ4基因產物之水準。在一些實施例中，方法另外包含將個體之KCNQ4基因產物之水準與參考KCNQ4基因產物水準比較。在一些實施例中，參考聽力水準為已公開或歷史參考KCNQ4基因產物水準。在一些實施例中，在引入如本文所提供之任何構築體之後量測個體之KCNQ4基因產物之水準，且參考KCNQ4基因產物水準為在引入如本文所提供之任何組成物之前量測的個體之KCNQ4基因產物水準。
本揭示案亦提供一種治療聽力損失之方法，該方法包含向有需要之個體投與本文所提供之至少一種組成物。在一些實施例中，本揭示案提供一種治療聽力損失之方法，該方法包含向有需要之個體投與如本文所提供之至少一種粒子。
在一些實施例中，本文所提供之任何構築體均可用於治療聽力損失。在一些實施例中，本文所提供之任何組成物均可用於治療聽力損失。在一些實施例中，本文所提供之任何粒子均可用於治療聽力損失。在一些實施例中，本揭示案提供一種如本文所提供之構築體用於製備治療聽力損失之藥物的用途。在一些實施例中，本揭示案提供一種如本文所提供之組成物用於製備治療聽力損失之藥物的用途。在一些實施例中，本揭示案提供一種如本文所提供之粒子用於製備治療聽力損失之藥物的用途。定義
本揭示案之範疇由隨附申請專利範圍界定，且不受本文所述之某些實施例之限制。閱讀本說明書之熟習此項技術者將知曉可等效於此類所述實施例或屬於申請專利範圍之範疇的各種修改形式。一般而言，除非另外明確指示，否則本文使用之術語根據其在此項技術中之已瞭解含義。某些術語之明確定義提供如下；在整個本說明書之特定情況下，此等及其他術語的含義將對於熟習此項技術者由上下文而顯而易見。
在申請專利範圍中使用序數術語諸如「第一」、「第二」、「第三」等修飾請求項要素本身並不意味著一請求項要素相對於另一者之任何優先權、優先或順序，或者執行方法之動作的時間順序，而僅用作標記來區分具有某一名稱之一請求項要素與具有相同名稱(但使用序數術語)之另一要素以區分請求項要素。
除非明確相反地指示，否則如本文所用之冠詞「一」應理解為包括複數指示物。除非上下文相反地指示或者自上下文明顯看出，否則若一個、超過一個或所有群成員存在於、用於給定產物或制程中或以其他方式與之相關，則認為在群之一或多個成員之間包括「或」的申請專利範圍或說明書為滿足的。在一些實施例中，群中精確的一個成員存在於、用於給定產物或制程中或以其他方式與之相關。在一些實施例中，超過一個或所有群成員存在於、用於給定產物或制程中或以其他方式與之相關。應瞭解，除非另外指示，或除非對於一般技術者顯而易見會出現矛盾或不一致，否則本揭示案涵蓋如下所有變化、組合及排列，其中一或多個所列請求項中之一或多個限制、要素、條款、描述性術語等引入附屬於同一基本請求項之另一請求項(或任何其他相關請求項)中。在要素以列表形式(例如以馬庫什群(Markush group)或類似格式)呈現之情況下，應瞭解，亦揭示要素之各亞群，且可自該群移除任何要素。應瞭解，通常，在將實施例或態樣稱為「包含」特定要素、特徵等之情況下，某些實施例或態樣「由此類要素、特徵等組成」或「基本上由此類要素、特徵等組成」。出於簡化之目的，彼等實施例並未在每種情況下以此處如此多之詞語特別闡述。亦應理解，可在申請專利範圍中明確排除任何實施例或態樣，而不管說明書中是否敘述該特定排除。
在整個本說明書中，每當多核苷酸或多肽由字母序列(例如在多核苷酸之情況下，A、C、G及T，其分別表示腺苷、胞苷、鳥苷及胸苷)表示時，此類多核苷酸或多肽自左至右以 5'至3'或N末端至C末端之順序呈現。
投藥 ：如本文所用，術語「投與」典型地指向個體或系統投與組成物以達成向個體或系統遞送藥劑。在一些實施例中，藥劑為組成物或包括在組成物中；在一些實施例中，藥劑經由組成物或其一或多種組分之代謝產生。一般技術者將知曉在適當情況下可用於投與個體例如人類之多種途徑。舉例而言，在一些實施例中，投與可為全身或局部投與。在一些實施例中，全身投與可為靜脈內投與。在一些實施例中，投與可為局部投與。局部投與可涉及經由如下方法遞送至耳蝸外淋巴，例如注射穿過圓窗膜或注射至鼓階中，中階注射穿過內淋巴、外淋巴及/或小管切開術後之內淋巴。在一些實施例中，投與可僅涉及單次劑量。在一些實施例中，投與可涉及施加固定次數之劑量。在一些實施例中，投與可涉及間歇性給藥(例如在時間上分開之複數次劑量)及/或定期(例如由共同時間間隔分開之個別劑量)給藥。在一些實施例中，投與可涉及連續給藥(例如灌注)至少所選時間段。
等位基因 ：如本文所用，術語「等位基因」指具有特定多形性基因組基因座之兩個或更多個現有遺傳變體之一。
改善 ： 如本文所用，術語「改善」指病態之預防、減少或減輕，或個體病態之改良。改善可包括但不要求疾病、病症或病狀之完全恢復或完全預防。
胺基酸 ： 在最廣泛意義上，如本文所用，術語「胺基酸」指可例如經由形成一或多個肽鍵併入多肽鏈中之任何化合物及/或物質。在一些實施例中，胺基酸具有一般結構，例如H2 N-C(H)(R)-COOH。在一些實施例中，胺基酸為天然存在之胺基酸。在一些實施例中，胺基酸為非天然胺基酸；在一些實施例中，胺基酸為D-胺基酸；在一些實施例中，胺基酸為L-胺基酸。「標準胺基酸」指天然存在之肽中常見之二十種標準L-胺基酸中之任一者。「非標準胺基酸」指除標準胺基酸以外之任何胺基酸，無論其為合成製備抑或自天然來源獲得。在一些實施例中，胺基酸，包括多肽中之羧基及/或胺基末端胺基酸可含有與上述一般結構相比之結構修飾。舉例而言，在一些實施例中，胺基酸可藉由相較於一般結構進行(例如胺基、羧酸基、一或多個質子及/或羥基之)甲基化、醯胺化、乙醯化、聚乙二醇化、糖基化、磷酸化及/或取代來修飾。在一些實施例中，該修飾可例如使含有經修飾胺基酸之多肽的循環半衰期相較於含有其他方面相同之未修飾胺基酸的多肽改變。在一些實施例中，相較於含有其他方面相同之未修飾胺基酸的多肽，該修飾未顯著改變含有經修飾胺基酸之多肽的相關活性。
大約或約 ：如本文所用，術語「大約」或「約」可應用於一或多個關注值，包括與所述參考值類似之值。在一些實施例中，除非另外陳述或者自上下文明顯看出，否則術語「大約」或「約」指落入所述參考值之±10% (大於或小於)內之值範圍(除非該數字超過可能值之100%)。舉例而言，在一些實施例中，術語「大約」或「約」可涵蓋在參考值之10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%、1%或更小內之值範圍。
相關 ： 如本文所用，術語「相關」在一者之存在、水準及/或形式與另一者相關的情況下，將兩個事件或實體描述為彼此「相關」。舉例而言，在特定實體(例如多肽、遺傳標記、代謝產物、微生物等)之存在、水準及/或形式與特定疾病、病症或病狀之發生及/或易感性相關(例如在相關群體中)的情況下，認為該實體與該疾病、病症或病狀相關。在一些實施例中，在兩個或多個實體直接或間接相互作用時，其在實體上彼此「相關」，使得其為及/或保持彼此實體接近的。在一些實施例中，彼此實體上相關之兩個或更多個實體彼此共價連接；在一些實施例中，彼此實體上相關之兩個或更多個實體彼此未共價連接，而是例如藉助於氫鍵、凡得瓦相互作用(van der Waals interaction)、疏水相互作用、磁性及其組合非共價相關。
生物學活性 ： 如本文所用，術語「生物學活性」指由關注藥劑或實體達成之可觀察到之生物學作用或結果。舉例而言，在一些實施例中，特異性結合相互作用為生物活性。在一些實施例中，生物路徑或事件之調節(例如誘導、增強或抑制)為生物活性。在一些實施例中，經由偵測由關注生物路徑或事件產生之直接或間接產物來評定生物活性之存在或程度。
特徵部分 ：如本文所用，術語「特徵部分」在最廣義上指物質之如下部分，其存在(或不存在)與該物質之特定特徵、屬性或活性相關。在一些實施例中，物質之特徵部分為在共有特定特徵、屬性或活性之給定物質及相關物質中發現，但在不共有特定特徵、屬性或活性之物質中未發現之部分。在一些實施例中，特徵部分與完整物質共有至少一種功能特徵。舉例而言，在一些實施例中，蛋白質或多肽之「特徵部分」為如下部分，其含有胺基酸之連續片段或胺基酸連續片段之集合，其一起為蛋白質或多肽之特徵。在一些實施例中，各該連續片段通常含有至少2、5、10、15、20、50或更多個胺基酸。一般而言，物質(例如蛋白質、抗體等)之特徵部分為如下部分，其除上文規定之序列及/或結構一致性與外，與相關完整物質共有至少一種功能特徵。在一些實施例中，特徵部分可為生物學活性部分。
特徵序列 ：如本文所用，術語「特徵序列」為如下序列，其在多肽或核酸家族之所有成員中發現，因此可由一般技術者用於定義該家族之成員。
特徵序列元件 ： 如本文所用，短語「特徵序列元件」指在聚合物中(例如在多肽或核酸中)發現之代表該聚合物之特徵部分的序列元件。在一些實施例中，特徵序列元件之存在與聚合物之特定活性或特性的存在或水準相關。在一些實施例中，特徵序列元件之存在(或不存在)將特定聚合物定義為該等聚合物之特定家族或群的成員(或不為成員)。特徵序列元件典型地包含至少兩個單體(例如胺基酸或核苷酸)。在一些實施例中，特徵序列元件包括至少2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、20、25、30、35、40、45、50個或更多個單體(例如連續連接之單體)。在一些實施例中，特徵序列元件包括由一或多個間隔區隔開之至少第一及第二連續單體片段，該等間隔區之長度在共有序列元件之聚合物上可變化或可不變化。
裂解 ：如本文所用，術語「裂解」指DNA中斷裂之產生。舉例而言，在一些實施例中，視可用於引起該斷裂之核酸酶的類型而定，裂解可指單股斷裂或雙股斷裂。
組合療法 ：如本文所用，術語「組合療法」指個體同時暴露於兩種或更多種治療方案(例如兩種或更多種治療劑)之彼等情況。在一些實施例中，可同時投與兩種或更多種藥劑。在一些實施例中，可依次投與兩種或更多種藥劑。在一些實施例中，可以重疊給藥方案投與兩種或更多種藥劑。
可比較 ：如本文所用，術語「可比較」指如下兩種或更多種藥劑、實體、情況、條件組、個體、群體等，其可彼此不一致，但足夠類似以允許在其間進行比較，使得熟習此項技術者可瞭解，可基於觀察到之差異或類似性合理地得出結論。在一些實施例中，可比較之藥劑組、實體、情況、條件組、個體、群體等藉由複數種大體上一致特徵及一種或少了變化特徵表徵。在上下文中，一般技術者應瞭解，在任何給定情況下，需要何程度之一致性能認為兩種或更多種該等藥劑、實體、情況、條件組、個體、群體等為可比較的。舉例而言，一般技術者應瞭解，當藥劑組、實體、情況、條件組、個體、群體等以足夠數量及類型之大體上一致特徵表徵以保證得出合理結論，即在不同情況組、刺激、藥劑、實體、情況、條件組、個體、群體等下或使用不同實體觀察到之結果或現象之差異由彼等特徵之變化引起或指示彼等特徵發生變化時，該等藥劑組、實體、情況、條件組、個體、群體等彼此為可比較的。
構築體： 如本文所用，術語「構築體」指包括能夠攜帶至少一種異源多核苷酸之多核苷酸的組成物。在一些實施例中，構築體可為質體、轉座子、黏接質體，人工染色體(例如人類人工染色體(HAC)、酵母人工染色體(YAC)、細菌人工染色體(BAC)或衍生自P1之人工染色體(PAC))或病毒構築體，以及任何Gateway® 質體。構築體可例如包括足夠表現用順式作用元件；其他表現用元件可由宿主靈長類動物細胞或在活體外 表現系統中提供。構築體可包括當與適當控制元件結合時能夠複製之任何遺傳元件(例如質體、轉座子、黏接質體、人工染色體或病毒構築體等)。因此，在一些實施例中，「構築體」可包括選殖及/或表現構築體及/或病毒構築體(例如腺相關病毒(AAV)構築體、腺病毒構築體、慢病毒構築體或逆轉錄病毒構築體)。
保守： 如本文所用，術語「保守」指描述保守胺基酸取代之情況，包括將胺基酸殘基用帶有具有類似化學特性(例如電荷或疏水性)之側鏈R基團的另一胺基酸殘基取代。一般而言，保守胺基酸取代不會大體上改變蛋白質之關注功能特性，例如受體結合配位體之能力。帶有具有類似化學特性之側鏈的胺基酸基團的實例包括：脂族側鏈，諸如甘胺酸(Gly，G)、丙胺酸(Ala，A)、纈胺酸(Val，V)、白胺酸(Leu，L)及異白胺酸(Ile，I)；脂族羥基側鏈，諸如絲胺酸(Ser，S)及蘇胺酸(Thr，T)；含醯胺之側鏈，諸如天冬醯胺(Asn，N)及麩醯胺酸(Gln，Q)；芳族側鏈，諸如苯丙胺酸(Phe，F)、酪胺酸(Tyr，Y)及色胺酸(Trp，W)；鹼性側鏈，諸如離胺酸(Lys，K)、精胺酸(Arg，R)及組胺酸(His，H)；酸性側鏈，諸如天冬胺酸(Asp，D)及麩胺酸(Glu，E)；及含硫側鏈，諸如半胱胺酸(Cys，C)及甲硫胺酸(Met，M)。保守胺基酸取代基包括，例如纈胺酸/白胺酸/異白胺酸(Val/Leu/Ile，V/L/I)、苯丙胺酸/酪胺酸(Phe/Tyr，F/Y)、離胺酸/精胺酸(Lys/Arg，K/R)、丙胺酸/纈胺酸(Ala/Val，A/V)、麩胺酸/天冬胺酸(Glu/Asp，E/D)及天冬醯胺/麩醯胺酸(Asn/Gln，N/Q)。在一些實施例中，保守胺基酸取代可為用丙胺酸取代蛋白質中之任何天然殘基，如例如丙胺酸掃描突變誘發中所用。在一些實施例中，進行保守取代，其在Gonnet等人, 1992, Science 256:1443-1445中揭示之PAM250對數似然矩陣中具有正值，該文獻以全文引用之方式併入本文中。在一些實施例中，取代為中度保守取代，其中該取代在PAM250對數似然矩陣中具有非負值。熟習此項技術者應瞭解，來自不同物種之相同蛋白質之間的不保守胺基酸的改變(例如取代、添加、缺失等)不太可對蛋白質之功能具有影響，因此，應選擇此等胺基酸進行突變。來自不同物種之相同蛋白質之間的保守胺基酸不應改變(例如缺失、添加、取代等)，因為此等突變更可引起蛋白質功能改變。
保守胺基酸取代
胺基酸 代碼 用如下置換
丙胺酸 A D-ala、Gly、Aib、β-Ala、Acp、L-Cys、D-Cys
精胺酸 R D-Arg、Lys、D-Lys、高-Arg、D-高-Arg、Met、Ile、D-Met、D-Ile、Orn、D-Orn
天冬醯胺 N D-Asn、Asp、D-Asp、Glu、D-Glu、Gln、D-Gln
天冬胺酸 D D-Asp、D-Asn、Asn、Glu、D-Glu、Gln、D-Gln
半胱胺酸 C D-Cys、S-Me-Cys、Met、D-Met、Thr、D-Thr
麩醯胺酸 Q D-Gln、Asn、D-Asn、Glu、D-Glu、Asp、D-Asp
麩胺酸 E D-Glu、D-Asp、Asp、Asn、D-Asn、Gln、D-Gln
甘胺酸 G Ala、D-Ala、Pro、D-Pro、Aib、β-Ala、Acp
異白胺酸 I D-Ile、Val、D-Val、AdaA、AdaG、Leu、D-Leu、Met、D-Met
白胺酸 L D-Leu、Val、D-Val、AdaA、AdaG、Leu、D-Leu、Met、D-Met
離胺酸 K D-Lys、Arg、D-Arg、高-Arg、D-高-Arg、Met、D-Met、Ile、D-Ile、Orn、D-Orn
甲硫胺酸 M D-Met、S-Me-Cys、Ile、D-Ile、Leu、D-Leu、Val、D-Val
苯丙胺酸 F D-Phe、Tyr、D-Thr、L-Dopa、His、D-His、Trp、D-Trp、反-3,4或5-苯基脯胺酸、AdaA、AdaG、順-3,4或5-苯基脯胺酸、Bpa、D-Bpa
脯胺酸 P D-Pro、L-I-噻唑啶-4-甲酸、D-或-L-1-噁唑啶-4-甲酸(Kauer, 美國專利第4,511,390號)
絲胺酸 S D-Ser、Thr、D-Thr、別-Thr、Met、D-Met、Met (O)、D-Met (O)、L-Cys、D-Cys
蘇胺酸 T D-Thr、Ser、D-Ser、別-Thr、Met、D-Met、Met (O)、D-Met (O)、Val、D-Val
酪胺酸 Y D-Tyr、Phe、D-Phe、L-Dopa、His、D-His
纈胺酸 V D-Val、Leu、D-Leu、Ile、D-Ile、Met、D-Met、AdaA、AdaG
對照 ：如本文所用，術語「對照」指「對照」之本領域理解之含義，其為與結果進行比較之標準。典型地，對照用於藉由分隔變數以便得出有關該等變數之結論來增強實驗中之完整性。在一些實施例中，對照為與測試反應或檢定同時進行以提供比較之反應或檢定。舉例而言，在一個實驗中，施加「測試」(亦即，正測試之變數)。在第二實驗中，未施加「對照」，即正測試之變數。在一些實施例中，對照為歷史對照(例如先前進行之測試或檢定或者先前已知之量或結果的歷史對照)。在一些實施例中，對照為或包含經印刷或以其他方式保存之記錄。在一些實施例中，對照為陽性對照。在一些實施例中，對照為陰性對照。
確定、量測、評價、評定、檢定 及 分析 ：如本文所用，術語「確定」、「量測」、「評價」、「評定」、「檢定」及「分析」可互換地用於指任何形式之量測，且包括確定要素是否存在。此等術語包括定量及/或定性確定。檢定可為相對或絕對的。舉例而言，在一些實施例中，「檢定……的存在」可為確定物質存在之量及/或確定其是否存在。
編輯： 如本文所用，術語「編輯」指藉由選擇性刪除特定核酸序列(例如基因組標靶序列)，經由使用外源核酸序列對新序列進行給定特定包括，或用外源核酸序列置換核酸序列來改變多核苷酸之核酸序列(例如野生型天然存在之核酸序列或已突變天然存在序列)的方法。在一些實施例中，該特定基因組標靶包括但不限於染色體區、粒線體DNA、基因、啟動子、開放閱讀框或任何核酸序列。
工程改造 ：一般而言，如本文所用，術語「工程改造」指藉由人手操作之態樣。舉例而言，若細胞或生物體已經操作而改變其遺傳資訊(例如先前不存在之新遺傳物質例如藉由轉型、配合、體細胞雜交、轉染、轉導或其他機制引入，或者先前存在之遺傳物質例如藉由取代或缺失突變，或通過配合方案改變或去除)，則認為該細胞或生物體經「工程改造」。如通常實踐且為此項技術者所理解，即使實際操作對先有實體進行，仍典型地將經工程改造多核苷酸或細胞之子代稱為「經工程改造」。
賦形劑 ：如本文所用，術語「賦形劑」指可包括在醫藥組成物中，例如以提供或有助於所要稠度或穩定作用之無活性(例如非治療性)試劑。在一些實施例中，合適醫藥賦形劑可包括例如澱粉、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明膠、麥芽、大米、麵粉、白堊、矽膠、硬脂酸鈉、單硬脂酸甘油酯、滑石粉、氯化鈉、脫脂奶、甘油、丙烯、乙二醇、水、乙醇等。
表現 ：如本文所用，術語核酸序列之「表現」指自核酸序列產生任何基因產物(例如轉錄物，例如mRNA，例如多肽等)。在一些實施例中，基因產物可為轉錄物。在一些實施例中，基因產物可為多肽。在一些實施例中，核酸序列之表現涉及以下中之一或多者：(1)自DNA序列產生RNA範本(例如藉由轉錄)；(2)加工RNA轉錄物(例如 藉由剪接、編輯、5'帽形成及/或3'末端形成)；(3)將RNA轉譯成多肽或蛋白質；及/或(4)對多肽或蛋白質進行轉譯後修飾。
功能性 ：如本文所用，術語「功能性」描述如下物質，其以使其展現其所表徵之特性及/或活性的形式存在。舉例而言，在一些實施例中，「功能性」生物分子為如下生物分子，其為使其展現其所表徵之特性及/或活性的形式。在一些該等實施例中，功能性生物分子相對於另一非功能性生物分子表徵，該另一生物分子因「非功能」形式不展現與「功能性」分子相同或等效之特性及/或活性而為非功能性的。生物分子可具有一種功能、兩種功能(亦即，雙功能)或多種功能(亦即，多功能)。
基因 ：如本文所用，術語「基因」指染色體中編碼基因產物(例如RNA產物，例如多肽產物)之DNA序列。在一些實施例中，基因包括編碼序列(亦即，編碼特定產物之序列)。在一些實施例中，基因包括非編碼序列。在一些特定實施例中，基因可包括編碼(例如外顯子)序列與非編碼(例如內含子)序列兩者。在一些實施例中，基因可包括一或多個調節序列(例如啟動子、增強子等)及/或例如可控製或影響基因表現之一或多個態樣(例如細胞類型特異性表現、誘導型表現等)的內含子序列。如本文所用，術語「基因」通常指核酸中編碼多肽或其片段之一部分；如一般技術者自上下文顯而易見，該術語可視情況涵蓋調節序列。該定義並非旨在排除將術語「基因」應用於非蛋白質編碼表現單元，而是要澄清，在大多數情況下，如本文中所用，該術語指編碼多肽之核酸。在一些實施例中，基因可編碼多肽，但該多肽可為非功能性的，例如相對於野生型基因，基因變體可編碼不以相同方式起作用或完全不起作用之多肽。在一些實施例中，基因可編碼轉錄物，在一些實施例中，該轉錄物可具有超過臨限水準之毒性。在一些實施例中，基因可編碼多肽，但該多肽可為非功能性的及/或可具有超過臨限水準之毒性。
基因組編輯系統 ：如本文所用，術語「基因組編輯系統」指具有DNA編輯活性之任何系統。DNA編輯活性可尤其包括在基因組中刪除、置換或插入DNA序列。在一些實施例中，基因組編輯系統包含RNA引導之DNA編輯活性。在一些實施例中，本揭示案之基因組編輯系統包括超過一個組件。在一些實施例中，基因組編輯系統包括至少兩種改適自天然存在CRISPR系統之組分：引導RNA (gRNA)及RNA引導之核酸酶。在某些實施例中，此兩個組分形成複合物，該複合物能夠與特定核酸序列締合且在該核酸序列內或周圍編輯DNA，例如藉由形成一或多個單股斷裂(SSB或切口)、雙股斷裂(DSB)及/或點突變。在一些實施例中，本揭示案之基因組編輯系統缺乏具有裂解活性之組分，但維持具有DNA結合活性之組分。在一些該等實施例中，本揭示案之基因組編輯系統包含用作DNA活性例如轉錄、轉譯等之抑製劑的組分。在一些實施例中，本揭示案之基因組編輯系統包含與調節劑融合以調節標靶DNA表現之組分。
基因組修飾 ：如本文所用，術語「基因組修飾」指在細胞之基因組區中進行的改變，該改變永久性地改變該細胞之基因組(例如內源性基因組)。在一些實施例中，該等改變為活體外 、離體 或活體內 改變。在一些實施例中，活生物體中之每個細胞均經修飾。在一些實施例中，僅特定細胞組，諸如特定器官中之細胞組經修飾。舉例而言，在一些實施例中，藉由缺失、取代或添加來自一或多個基因組區之一或多個核苷酸來修飾基因組。在一些實施例中，在幹細胞或未分化之細胞中進行基因組修飾。在一些該等實施例中，相對於修飾前之親代基因組，經基因組修飾之細胞或生物體之子代亦經基因組修飾。在一些實施例中，對成熟或有絲分裂後之細胞進行基因組修飾，使其不產生子代，因此除在特定細胞中以外，無基因組修飾傳播。
聽力損失 ：如本文所用，術語「聽力損失」可用於活生物體部分或完全不能聽見。在一些實施例中，聽力損失可為獲得性的。在一些實施例中，聽力損失可為遺傳性的。在一些實施例中，聽力損失可為遺傳的。在一些實施例中，聽力損失可由於疾病或創傷(例如身體創傷、用引起聽力損失之一或多種藥劑治療等)引起。在一些實施例中，聽力損失可由於一或多種已知遺傳原因及/或症候群。在一些實施例中，聽力損失可具有未知病因。在一些實施例中，藉由使用助聽器或其他治療可減輕或不可減輕聽力損失。
異源 ：如本文所用，術語「異源」可用於指與另一區域及/或另一分子相比，特定分子之一或多個區域。舉例而言，在一些實施例中，異源多肽域指多肽域並非天然地一起存在(例如於同一多肽中)之事實。舉例而言，在藉由人手產生之融合蛋白中，來自一種多肽之多肽域可與來自不同多肽之多肽域融合。在該融合蛋白中，認為兩個多肽域相對於彼此為「異源」的，因為其並非天然地一起存在。
一致性 ：如本文所用，術語「一致性」指聚合物分子之間，例如核酸分子(例如DNA分子及/或RNA分子)之間及/或多肽分子之間的整體相關性。在一些實施例中，若聚合物分子之序列至少25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或99%一致，則認為其彼此「大體上一致」。兩個核酸或多肽序列之一致性百分比之計算例如可藉由比對兩個序列以實現最佳比較目的來進行(例如可在第一及第二序列中之一者或兩者中引入空位以實現最佳比對目的，且出於比較目的，可忽略非一致序列)。在一些實施例中，出於比較目的比對之序列的長度為參考序列長度之至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95%或大體上100%；隨後比較相應位置處之核苷酸。當第一序列中之位置由與第二序列中之對應位置相同之殘基(例如核苷酸或胺基酸)佔據時，則兩個分子(亦即第一及第二)在該位置一致。兩個序列之間的一致性百分比為比較之兩個序列共有之相同位置的數量的函數，其中考慮了空位之數量及各空位之長度，需要引入此等空位以實現兩個序列之最佳比對。序列之比較及兩個序列之間的一致性百分比之確定可使用數學演算法來完成。舉例而言，可使用Meyers及Miller (CABIOS, 1989, 4: 11-17，其以全文引用之方式併入本文中)確定兩個核苷酸序列之間的一致性百分比，該文獻已併入ALIGN程式(2.0版)中。在一些實施例中，使用ALIGN程式進行之核酸序列比較使用PAM120權重殘基表、空位長度罰分12及空位罰分4。
抑制性核酸： 如本文所用，術語「抑制性核酸」指與標靶基因特異性雜交之核酸序列，所述標靶基因包括標靶DNA或RNA (例如標靶mRNA (例如鉀通道基因產物，例如鉀通道mRNA，例如KCNQ4 mRNA))。因此，在一些實施例中，抑制性核酸抑製標靶基因之表現及/或活性。在一些實施例中，抑制性核酸為短干擾RNA (siRNA)、短髮夾RNA (shRNA)、微小RNA (或「miRNA」)、反義寡核苷酸、引導RNA (gRNA)或核酶。在一些實施例中，抑制性核酸之長度為約10個核苷酸至約30個核苷酸(例如約10個核苷酸至約28個核苷酸、約10個核苷酸至約26個核苷酸、約10個核苷酸至約24個核苷酸、約10個核苷酸至約22個核苷酸、約10個核苷酸至約20個核苷酸、約10個核苷酸至約18個核苷酸、約10個核苷酸至約16個核苷酸、約10個核苷酸至約14個核苷酸、約10個核苷酸至約12個核苷酸、約12個核苷酸至約30個核苷酸、約12個核苷酸至約28個核苷酸、約12個核苷酸至約26個核苷酸、約12個核苷酸至約24個核苷酸、約12個核苷酸至約22個核苷酸、約12個核苷酸至約20個核苷酸、約12個核苷酸至約18個核苷酸、約12個核苷酸至約16個核苷酸、約12個核苷酸至約14個核苷酸、約16個核苷酸至約30個核苷酸、約16個核苷酸至約28個核苷酸、約16個核苷酸至約26個核苷酸、約16個核苷酸至約24個核苷酸、約16個核苷酸至約22個核苷酸、約16個核苷酸至約20個核苷酸、約16個核苷酸至約18個核苷酸、約18個核苷酸至約30個核苷酸、約18個核苷酸至約28個核苷酸、約18個核苷酸至約26個核苷酸、約18個核苷酸至約24個核苷酸、約18個核苷酸至約22個核苷酸、約18個核苷酸至約20個核苷酸、約20個核苷酸至約30個核苷酸、約20個核苷酸至約28個核苷酸、約20個核苷酸至約26個核苷酸、約20個核苷酸至約24個核苷酸、約20個核苷酸至約22個核苷酸、約22個核苷酸至約30個核苷酸、約22個核苷酸至約28個核苷酸、約22個核苷酸至約26個核苷酸、約22個核苷酸至約24個核苷酸、約24個核苷酸至約30個核苷酸、約24個核苷酸至約28個核苷酸、約24個核苷酸至約26個核苷酸、約26個核苷酸至約30個核苷酸、約26個核苷酸至約28個核苷酸、約28個核苷酸至約30個核苷酸或11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30個核苷酸)。在一些實施例中，抑制性核酸為靶向KCNQ4之抑制性RNA。在一些該等實施例中，抑制性KCNQ4 RNA與KCNQ4上之標靶特異性雜交。在一些該等實施例中，KCNQ4抑制性RNA包括，例如，抑制性核酸為短干擾RNA (siRNA)、短髮夾RNA (shRNA)、微小RNA (miRNA)、反義寡核苷酸、引導RNA (gRNA)或核酶。在一些實施例中，抑制性KCNQ4 RNA之雜交減少KCNQ4基因產物之表現。本文提供例示性KCNQ4抑制性RNA序列。
改良、增加、提高、抑製或減少 ：如本文所用，術語「改良」、「增加」、「提高」、「抑制」、「減少」或其語法等效物指示相對於基線或其他參考量測值之值。在一些實施例中，值在統計學上顯著不同於基線或其他參考量測值。在一些實施例中，適當參考量測值可為或包含在特定系統中(例如在單一個體中)，在不存在特定藥劑或治療(例如在特定藥劑或治療之前及/或之後)之其他方面可比較之條件下，或在適當可比較參考藥劑存在下獲得之量測值。在一些實施例中，適當參考量測值可為或包含在相關藥劑或治療存在下，在已知或預期以特定方式反應之可比較系統中獲得之量測值。在一些實施例中，適當參考為陰性參考；在一些實施例中，適當參考為陽性參考。
敲低 ：如本文所用，術語「敲低」指降低一或多種基因產物之表現。在一些實施例中，抑制性核酸達成敲低。在一些實施例中，本文所述之基因組編輯系統達成敲低。
敲除： 如本文所用，術語「敲除」指消除一或多種基因產物之表現。在一些實施例中，本文所述之基因組編輯系統達成敲除。
調節： 如本文所用，術語「調節」指相較於治療或化合物不存在下個體中之反應水準，及/或相較於其他方面一致但未治療個體中之反應水準，調節個體中反應水準可偵測之增加或減少。該術語涵蓋擾動及/或影響天然訊號或反應，從而在個體，較佳人類仲介導有益治療反應。
核酸酶 ：如本文所用，術語「核酸酶」指能夠裂解連接核酸分子中之核苷酸殘基的磷酸二酯鍵的試劑，例如蛋白質或小分子。在一些實施例中，核酸酶為蛋白質，例如可結合核酸分子且裂解連接該核酸分子內之核苷酸殘基的磷酸二酯鍵的酶。核酸酶可為裂解多核苷酸鏈內之磷酸二酯鍵的核酸內切酶，或裂解多核苷酸鏈末端處之磷酸二酯鍵的核酸外切酶。在一些實施例中，核酸酶為位點特異性核酸酶，其結合及/或裂解特定核苷酸序列內之特定磷酸二酯鍵，該特定核苷酸序列在本文中亦稱為「識別序列」、「核酸酶標靶位點」或「標靶位點」。在一些實施例中，核酸酶為RNA引導(亦即，RNA程式化)之核酸酶，其與具有與標靶位點互補之序列的RNA複合(例如結合)，從而提供核酸酶之序列特異性。在一些實施例中，核酸酶識別單股標靶位點，而在其他實施例中，核酸酶識別雙股標靶位點，例如雙股DNA標靶位點。諸多天然存在核酸酶，例如諸多天然存在DNA限制性核酸酶之標靶位點為熟習此項技術者所熟知。在諸多情況下，DNA核酸酶，諸如EcoRI、HindIII或BamHI，識別長度為4至10個鹼基對之回文雙股DNA標靶位點，並裂解標靶位點內特定位置處兩條DNA股中之每一者。一些核酸內切酶對稱地裂解雙股核酸標靶位點，亦即，在相同位置裂解兩條股，使得末端包含鹼基配對之核苷酸，在本文中亦稱為平末端。其他核酸內切酶不對稱地裂解雙股核酸標靶位點，亦即，在不同位置裂解每條股，使得末端包含不配對核苷酸。雙股DNA分子末端處之不配對核苷酸亦稱為「突出端」，例如視不配對核苷酸形成給定DNA股之5'末端抑或3'末端而定，稱為「5'-突出端」或「3'-突出端」。以不配對核苷酸封端之雙股DNA分子末端亦稱為黏性末端，因為其可「黏著」於包含互補不配對核苷酸之其他雙股DNA分子末端。核酸酶蛋白典型地包含介導蛋白與核酸受質之相互作用且在一些情況下特異性結合標靶位點的「結合域」，以及催化核酸主鏈內磷酸二酯鍵之裂解的「裂解域」。在一些實施例中，核酸酶蛋白可以單體形式結合且裂解核酸分子，而在其他實施例中，核酸酶蛋白必須二聚或多聚以裂解標靶核酸分子。天然存在核酸酶之結合域及裂解域，以及可融合以產生結合特定標靶位點之核酸酶的模組結合域及裂解域為熟習此項技術者所熟知。
核酸 ：如本文所用，術語「核酸」在其最廣意義上指併入或可併入寡核苷酸鏈中之任何化合物及/或物質。在一些實施例中，核酸為經由磷酸二酯鍵併入或可併入寡核苷酸鏈中之化合物及/或物質。如由上下文顯而易見，在一些實施例中，「核酸」指個別核酸殘基(例如核苷酸及/或核苷)；在一些實施例中，「核酸」指包含個別核酸殘基之寡核苷酸鏈。在一些實施例中，「核酸」為或包含RNA；在一些實施例中，「核酸」為或包含DNA。在一些實施例中，核酸為、包含一或多種天然核酸殘基或由該一或多種天然核酸殘基組成。在一些實施例中，核酸為、包含一或多種核酸類似物或由該一或多種核酸類似物組成。在一些實施例中，核酸類似物與核酸之不同之處在於其不使用磷酸二酯主鏈。或者或另外，在一些實施例中，核酸具有一或多個硫代磷酸酯及/或5'-N-亞磷醯胺鍵聯而非磷酸二酯鍵。在一些實施例中，核酸為、包含一或多種天然核苷(例如腺苷、胸苷、鳥苷、胞苷、尿苷、脫氧腺苷、脫氧胸苷、脫氧鳥苷及脫氧胞苷)或由該一或多種天然核苷組成。在一些實施例中，核酸為、包含一或多種核苷類似物(例如2-胺基腺苷、2-硫代胸苷、肌苷、吡咯並嘧啶、3-甲基腺苷、5-甲基胞苷、C-5丙炔基-胞苷、C-5丙炔基-尿苷、2-胺基腺苷、C5-溴尿苷、C5-氟尿苷、C5-碘尿苷、C5-丙炔基-尿苷、C5-丙炔基-胞苷、C5-甲基胞苷、2-胺基腺苷、7-去氮腺苷、7 -去氮鳥苷、8-側氧基腺苷、8-側氧基鳥苷、0(6)-甲基鳥嘌呤、2-硫代胞苷、甲基化鹼、插層鹼及其組合)或由該一或多種核苷類似物組成。在一些實施例中，相較於天然核酸中之核酸，核酸包含一或多個經修飾糖(例如2'-氟核糖、核糖、2'-去氧核糖、阿拉伯糖及己糖)。在一些實施例中，核酸具有編碼功能基因產物諸如RNA或蛋白質之核苷酸序列。在一些實施例中，核酸包括一或多個內含子。在一些實施例中，藉由以下中之一或多者製備核酸：自天然來源分離，藉由基於互補範本之聚合酶促合成(活體內 或活體外 )，在重組細胞或系統中再產生及化學合成。在一些實施例中，核酸長度為至少3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、20、225、250、275、300、325、350、375、400、425、450、475、500、600、700、800、900、1000、1500、2000、2500、3000、3500、4000、4500、5000個殘基或更多殘基。在一些實施例中，核酸部分或整個為單股；在一些實施例中，核酸部分或整個為雙股。在一些實施例中，核酸具有如下核苷酸序列，其包含編碼多肽或互補於編碼多肽之序列的至少一個元件。在一些實施例中，核酸具有酶活性。
操作性連接 ：如本文所用，指並置，其中所述組分處於使其可以其預期方式起作用之關係中。與功能元件「操作性連接」之控制元件以一定方式締合以使得功能元件之表現及/或活性在與控制元件相容之條件下實現。在一些實施例中，「操作性連接」之控制元件與關注編碼元件相連(例如共價連接)；在一些實施例中，控制元件反式地或以其他方式作用於關注功能元件。在一些實施例中，「操作性連接」指調節序列與異源核酸序列之間引起後者表現之功能性連接。舉例而言，當第一核酸序列與第二核酸序列處於功能關係時，第一核酸序列與第二核酸序列操作性連接。在一些實施例中，例如功能性連接可包括轉錄控制。舉例而言，若啟動子影響編碼序列之轉錄或表現，則該啟動子與編碼序列操作性連接。操作性連接之DNA序列可彼此相鄰，且例如在需要連接兩個蛋白編碼區之情況下，在同一閱讀框中。
醫藥組成物 ：如本文所用，術語「醫藥組成物」指如下組成物，其中將活性劑與一或多種醫藥學上可接受之載劑一起調配。在一些實施例中，活性劑以適用於在治療方案中投與之單位劑量存在，該單位劑量展示當向相關群體投與時達成預定治療效果之統計學上顯著之可能性。在一些實施例中，可將醫藥組成物特別調配成以固體或液體形式投與，包括如下形式，其經改適以用於例如投與例如可注射調配物，該可注射調配物為例如經設計以用於向耳道中投與之水性或非水性溶液或懸浮液或液滴。在一些實施例中，可將醫藥組成物調配成用於經由在特定器官或隔室中注射，例如直接向耳中注射或全身例如靜脈內注射來投與。在一些實施例中，調配物可為或包含浸液(水性或非水性溶液或懸浮液)、錠劑、大丸劑、粉末、顆粒、糊劑、膠囊、粉末等。在一些實施例中，活性劑可為或包含經分離、經純化或純化合物。
醫藥學上可接受 ：如本文所用，例如可用於指用於調配本文所揭示醫藥組成物之載劑、稀釋劑或賦形劑的術語「醫藥學上可接受」指載劑、稀釋劑或賦形劑與組成物之其他成分相容且對其接受者無害。
醫藥學上可接受之載劑 ：如本文所用，術語「醫藥學上可接受之載劑」指醫藥學上可接受之物質、組成物或媒劑，諸如液體或固體填充劑、稀釋劑、賦形劑或溶劑包封材料，其參與自一個器官或身體之一部分攜帶或轉運標的化合物至另一器官或身體之另一部分。各載劑必須在與調配物之其他成分相容且對患者無害之意義上為「可接受」的。可用作醫藥學上可接受之載劑的物質的一些實例包括：糖，諸如乳糖、葡萄糖及蔗糖；澱粉，諸如玉米澱粉及馬鈴薯澱粉；纖維素及其衍生物，諸如羧甲基纖維素鈉、乙基纖維素及乙酸纖維素；黃芪粉；麥芽；明膠；滑石；賦形劑，諸如可哥脂及栓劑蠟；油，諸如花生油、棉籽油、紅花油、芝麻油、橄欖油、玉米油及大豆油；二醇，諸如丙二醇；多元醇，諸如甘油、山梨糖醇、甘露糖醇及聚乙二醇；酯，諸如油酸乙酯及月桂酸乙酯；瓊脂；緩沖劑，諸如氫氧化鎂及氫氧化鋁；海藻酸；無熱原水；等滲鹽水；林格氏溶液(Ringer's solution)；乙醇；pH緩衝溶液；聚酯、聚碳酸酯及/或聚酸酐；以及醫藥調配物中使用之其他無毒性相容物質。
多肽 ： 如本文所用，術語「多肽」指典型地由肽鍵連接之殘基(例如胺基酸)的任何聚合物鏈。在一些實施例中，多肽具有天然存在之胺基酸序列。在一些實施例中，多肽具有天然不存在之胺基酸序列。在一些實施例中，多肽具有經工程改造之胺基酸序列，其中其經由人手操作設計及/或產生。在一些實施例中，多肽可包含天然胺基酸、非天然胺基酸或兩者，或者由其組成。在一些實施例中，多肽可在多肽之N末端、在多肽之C末端或其任何組合處包括一或多個側基或其他修飾，例如修飾或連接於一或多個胺基酸側鏈。在一些實施例中，該等側基或修飾可為乙醯化、醯胺化、脂化、甲基化、聚乙二醇化等，包括其組合。在一些實施例中，多肽可含有L-胺基酸、D-胺基酸或兩者，且可含有此項技術中已知之多種胺基酸修飾或類似物中之任一者。在一些實施例中，有用修飾可為或包括例如末端乙醯化、醯胺化、甲基化等。在一些實施例中，蛋白質可包含天然胺基酸、非天然胺基酸、合成胺基酸及其組合。術語「肽」通常用於指長度小於約100個胺基酸，小於約50個胺基酸，小於20個胺基酸或小於10個胺基酸之多肽。在一些實施例中，蛋白質為抗體、抗體片段、其生物學活性部分及/或其特徵部分。
多核苷酸 ： 如本文所用，術語「多核苷酸」指核酸之任何聚合物鏈。在一些實施例中，多核苷酸為或包含RNA；在一些實施例中，多核苷酸為或包含DNA。在一些實施例中，多核苷酸為、包含一或多種天然核酸殘基或由該一或多種天然核酸殘基組成。在一些實施例中，多核苷酸為、包含一或多種核酸類似物或由該一或多種核酸類似物組成。在一些實施例中，多核苷酸類似物與核酸之不同之處在於其不使用磷酸二酯主鏈。替代地或另外地，在一些實施例中，多核苷酸具有一或多個硫代磷酸酯及/或5'-N-亞磷醯胺鍵聯而非磷酸二酯鍵。在一些實施例中，多核苷酸為、包含一或多種天然核苷(例如腺苷、胸苷、鳥苷、胞苷、尿苷、脫氧腺苷、脫氧胸苷、脫氧鳥苷及脫氧胞苷)或由該一或多種天然核苷組成。在一些實施例中，多核苷酸為、包含一或多種核苷類似物(例如2-胺基腺苷、2-硫代胸苷、肌苷、吡咯並嘧啶、3-甲基腺苷、5-甲基胞苷、C-5丙炔基-胞苷、C-5丙炔基-尿苷、2-胺基腺苷、C5-溴尿苷、C5-氟尿苷、C5-碘尿苷、C5-丙炔基-尿苷、C5-丙炔基-胞苷、C5-甲基胞苷、2-胺基腺苷、7-去氮腺苷、7 -去氮鳥苷、8-側氧基腺苷、8-側氧基鳥苷、0(6)-甲基鳥嘌呤、2-硫代胞苷、甲基化鹼、插層鹼及其組合)或由該一或多種核苷類似物組成。在一些實施例中，相較於天然核酸中之多核苷酸，多核苷酸包含一或多個經修飾糖(例如2'-氟核糖、核糖、2'-去氧核糖、阿拉伯糖及己糖)。在一些實施例中，多核苷酸具有編碼功能基因產物諸如RNA或蛋白質之核苷酸序列。在一些實施例中，多核苷酸包括一或多個內含子。在一些實施例中，藉由以下中之一或多者製備多核苷酸：自天然來源分離，藉由基於互補範本之聚合酶促合成(活體內 或活體外 )，在重組細胞或系統中再產生及化學合成。在一些實施例中，多核苷酸長度為至少3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、20、225、250、275、300、325、350、375、400、425、450、475、500、600、700、800、900、1000、1500、2000、2500、3000、3500、4000、4500、5000個殘基或更多殘基。在一些實施例中，多核苷酸部分或整個為單股；在一些實施例中，多核苷酸部分或整個為雙股。在一些實施例中，多核苷酸具有如下核苷酸序列，其包含編碼多肽或為編碼多肽之序列的互補序列的至少一個元件。在一些實施例中，多核苷酸具有酶活性。
蛋白質 ： 如本文所用，術語「蛋白質」指多肽(亦即，由肽鍵彼此連接之至少兩個胺基酸之串)。蛋白質可包括胺基酸以外之部分(例如可為糖蛋白、蛋白聚糖等)及/或可以其他方式加工或修飾。一般技術者應瞭解，「蛋白質」可為由細胞產生之完整多肽鏈(具有或不具有訊號序列)，或者可為其特徵部分。一般技術者應瞭解，蛋白質有時可包括例如由一或多個二硫鍵連接或藉由其他方式締合之超過一條多肽鏈。
重組體 ：如本文所用，術語「重組」旨在指藉由重組方式設計、工程改造、製備、表現、產生、製造及/或分離之多肽，諸如使用轉染至宿主細胞中之重組表現構築體表現之多肽；自重組組合人類多肽文庫分離之多肽；自動物(例如小鼠、兔、綿羊、魚等)分離之多肽，該動物轉殖有或經操作以表現編碼及/或直接表現多肽或者其一或多種組分、部分、元件或域的基因或基因組分；及/或藉由任何其他方式製備、表現、產生或分離之多肽，該任何其他方式包括將所選核酸序列元件彼此剪接或連接，化學合成所選序列元件，及/或以其他方式產生編碼及/或指導多肽或者其一或多種組分、部分、元件或域之表現的核酸。在一些實施例中，在自然中發現該等所選序列元件中之一或多者。在一些實施例中，藉由電腦模擬 設計該等所選序列元件中之一或多者。在一些實施例中，一或多種該等所選序列元件來自已知序列元件之突變誘發(例如活體內 或活體外 )，該已知序列元件例如來自天然或合成來源，諸如關注源生物體(例如人類、小鼠等)之生殖系中。
參考 ：如本文所用，術語「參考」描述進行比較所相對之標準或對照。舉例而言，在一些實施例中，將關注藥劑、動物、個體、群體、樣品、序列或值與參考或對照藥劑、動物、個體、群體、樣品、序列或值比較。在一些實施例中，大體上與關注測試或確定同時測試及/或確定參考或對照。在一些實施例中，參考或對照為歷史參考或對照，視情況在有形介質中體現。典型地，熟習此項技術者應瞭解，參考或對照在與評定條件或情況可比較之條件或情況下確定或表徵。熟習此項技術者應瞭解何時存在足夠類似性來證明對特定可能參考或對照之依賴及/或與其之比較為合理的。在一些實施例中，參考為陰性參考；在一些實施例中，參考為陽性對照參考。
調節元件 ：如本文所用，術語「調節元件」或「調節序列」指以某種方式調節一或多個特定基因之表現的DNA非編碼區。在一些實施例中，該等基因與給定調節元件並列或「在其附近」。在一些實施例中，該等基因與給定調節元件相距極遠。在一些實施例中，調節元件損害或增強一或多個基因之轉錄。在一些實施例中，調節元件可位於所調節基因之順式位置。在一些實施例中，調節元件可位於所調節基因之反式位置。舉例而言，在一些實施例中，調節序列指如下核酸序列，其調節操作性連接於該調節序列之基因產物的表現。在一些該等實施例中，此序列可為增強子序列及調節基因產物表現之其他調節元件。
樣品 ：如本文所用，術語「樣品」典型地指獲自或衍生自關注來源之物質的等分試樣。在一些實施例中，關注來源為生物或環境來源。在一些實施例中，關注來源可為或包含細胞或生物體，諸如微生物(例如病毒)、植物或動物(例如人類)。在一些實施例中，關注來源為或包含生物組織或流體。在一些實施例中，生物組織或流體可為或包含羊水、水樣液、腹水、膽汁、骨髓、血液、乳汁、腦脊髓液、耵聹、乳糜、食糜、射出之精液、內淋巴液、分泌液、糞便、胃酸、胃液、淋巴液、黏液、心包液、外淋巴液、腹膜液、胸膜液、膿液、稀黏液、唾液、皮脂、精液、血清、包皮垢、痰、滑液、汗液、眼淚、尿液、陰道分泌物、玻璃體液、嘔吐物及/或其組合或組分。在一些實施例中，生物流體可為或包含細胞內流體、細胞外流體、血管內流體(血漿)、間質液、淋巴液及/或跨細胞液。在一些實施例中，生物流體可為或包含植物分泌液。在一些實施例中，可例如藉由以下獲得生物組織或樣品：抽吸、活檢(例如細針或組織活檢)、拭子(例如口、鼻、皮膚或陰道拭子)、刮擦、手術、洗滌或灌洗(例如支氣管肺泡、導管、鼻、眼、口、子宮、陰道或其他洗滌或灌洗)來獲得生物組織或樣品。在一些實施例中，生物樣品為或包含獲自個體之細胞。在一些實施例中，樣品為藉由任何合適方式直接自關注來源獲得的「初級樣品」。在一些實施例中，如自上下文顯而易見，術語「樣品」指藉由加工初級樣品(例如藉由去除初級樣品之一或多種組分及/或藉由向初級樣品中添加一或多種試劑)獲得之製劑。舉例而言，使用半透膜過濾。該「經加工樣品」可包含例如自樣品提取或藉由使初級樣品經受一或多種技術而獲得之核酸或蛋白質，該一或多種技術諸如核酸之擴增或逆轉錄、分離及/或純化某些組分等。
個體 ：如本文所用，術語「個體」指生物體，典型地為哺乳動物(例如人類，在一些實施例中包括產前人類形式)。在一些實施例中，個體罹患相關疾病、病症或病狀。在一些實施例中，個體易患疾病、病症或病狀。在一些實施例中，個體呈現疾病、病症或病狀之一或多種症狀或特徵。在一些實施例中，個體不呈現疾病、病症或病狀之任何症狀或特徵。在一些實施例中，個體為具有易患疾病、病症或病狀或者具有疾病、病症或病狀之風險所特有的一或多種特徵者。在一些實施例中，個體為患者。在一些實施例中，個體為投與及/或已投與診斷及/或療法之個體。
大體上 ：如本文所用，術語「大體上」指展現關注特徵或特性之全部或幾乎全部程度之定性條件。一般技術者應瞭解，生物及化學現像極少(若有)進行至完成及/或進行至完全或達成或避免絕對結果。因此，術語「大體上」在本文中用於捕獲諸多生物及化學現像中固有之潛在完全性喪失。
標靶位點 ：如本文所用，術語「標靶位點」指核酸中在結合之足夠條件存在下與結合分子，例如微小RNA、siRNA、引導RNA (「gRNA」)或引導RNA:Cas複合物結合之部分。在一些實施例中，包含標靶位點之核酸為雙股核酸。在一些實施例中，包含標靶位點之核酸為單股核酸。典型地，標靶位點包含與本文所述之結合分子，例如gRNA或gRNA:Cas複合物結合及/或由於該結合而裂解之核酸序列。在一些實施例中，標靶位點包含與如下DNA序列互補之核酸序列(本文中亦稱為標靶序列或原間隔子)，該DNA序列與本文所述gRNA之靶向序列(本文中亦稱為間隔子)結合。在一些實施例中，在RNA引導之核酸酶，例如CRISPR/Cas核酸酶之情況下，標靶位元點典型地包含與如下序列互補之核苷酸序列(本文中亦稱為標靶序列或原間隔子)，該序列包含在RNA可程式化核酸酶之gRNA (本文中亦稱為靶向序列或間隔子)中。在一些該等實施例中，標靶位點在與gRNA互補序列相鄰之3'末端或5'末端處另外包含原間隔子相鄰模體(PAM)。對於RNA引導之核酸酶Cas9，在一些實施例中，標靶序列可為16-24個鹼基對加上3-6個鹼基對之PAM (例如NNN，其中N表示任何核苷酸)。RNA引導之核酸酶，諸如Cas9之例示性PAM序列為熟習此項技術者所已知，且包括但不限於NNG、NGN、NAG、NGA、NGG、NGAG及NGCG，其中N表示任何核苷酸。此外，已描述來自不同物種之Cas9核酸酶，例如嗜熱鏈球菌(S. thermophilus )識別包含序列NGGNG之PAM，且來自 金黃色葡萄球菌(S. aureus )之Cas9識別包含序列NNGRRT之PAM。在一些實施例中，來自金黃色葡萄球菌 之Cas9識別包含序列NNNRRT之PAM。其他PAM序列為此項技術中所已知，包括但不限於NNAGAAW及NAAR (參見例如Esvelt及Wang, Molecular Systems Biology, 9:641 (2013)，該文獻以全文引用之方式併入本文中)。舉例而言，RNA引導之核酸酶，諸如Cas9之標靶位點可包含結構[Nz]-[PAM]，其中各N獨立地為任何核苷酸，且z為1至50之整數。在一些實施例中，z為至少2、至少3、至少4、至少5、至少6、至少7、至少8、至少9、至少10、至少11、至少12、至少13、至少14、至少15、至少16、至少17、至少18、至少19、至少20、至少25、至少30、至少35、至少40、至少45或至少50。在一些實施例中，z為5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50。在一些實施例中，Z為20。
治療 ：如本文所用，術語「治療」指療法之任何投與，其部分或完全減輕、改善、消除、逆轉、緩解、抑制特定疾病、病症及/或病狀之一或多種症狀、特徵及/或原因，延遲其發作，降低其嚴重程度及/或減少其發生。在一些實施例中，該治療可針對未展現相關疾病、病症及/或病狀之病徵之個體，及/或僅展現疾病、病症及/或病狀之早期病徵之個體。替代地或另外地，該治療可針對展現相關疾病、病症及/或病狀之一或多種確立病徵之個體。在一些實施例中，治療可針對已診斷為罹患相關疾病、病症及/或病狀之個體。在一些實施例中，治療可針對已知具有一或多種易感性因素之個體，該等易感性因素與給定疾病、病症及/或病狀在統計學上相關。
變體： 如本文所用，術語「變體」指物質，例如基因序列之一種形式，該形式在某種程度上不同於另一形式。為確定物質是否為變體，典型地選擇參考形式，且變體相對於該參考形式為不同的。在一些實施例中，變體可具有與野生型序列相同或不同(例如增加或減少)之活性或功能水準。舉例而言，在一些實施例中，若變體例如經密碼子最佳化以抵抗例如抑制性核酸例如miRNA降解，則其可具有相較於野生型序列改良之功能。該變體在本文中稱為功能增益變體。在一些實施例中，變體具有活性或功能之降低或消除，或者引起不良結果之活性改變(例如增加之電活性，其引起致使細胞死亡之慢性去極化)。該變體在本文中稱為功能喪失變體。舉例而言，在一些實施例中，KCNQ4基因序列為野生型序列，其編碼功能蛋白且存在於具有含有KCNQ4基因之基因組之物種的大多數成員中。在一些該等實施例中，功能增益變體可為如下KCNQ4之基因序列，相對於野生型KCNQ4基因序列，其含有一或多個核苷酸差異。在一些實施例中，功能增益變體為經密碼子最佳化之序列，其編碼與其相應野生型 (例如未密碼子最佳化)形式相比具有改良特性(例如不太易降解，例如不太易發生miRNA介導之降解)之轉錄物或多肽。在一些實施例中，功能喪失變體具有一或多個改變，從而產生相對於野生型轉錄物及/或多肽以某種方式具有缺陷(例如功能降低、無功能)之轉錄物或多肽。舉例而言，在一些實施例中，KCNQ4序列中之突變產生非功能性或以其他方式有缺陷之KCNQ4蛋白，其損害或阻止耳外毛細胞中含KCNQ4之鉀通道的功能。在一些該等實施例中，功能喪失變體之該等含KCNQ4通道引起外毛細胞之慢性去極化，因此引起細胞死亡。
相關申請案之交叉參考
本申請案主張2020年5月13日申請之美國申請案第63/024,488號之權益，該申請案之揭示內容藉此以全文引用之方式併入。 序列表
本申請案含有序列表，其已以ASCII格式電子提交，且藉此以全文引用之方式併入。該ASCII複本創建於2021年5月11日，名為2013615-0286_SL.txt，且大小為819,483個位元組。1. 聽力損失
一般而言，耳可描述為包括外耳、中耳、內耳、聽力(聽)神經及聽覺系統(當聲音自耳傳播至腦時其會對該聲音進行處理)。除偵測聲音，耳亦有助於維持平衡。因此，在一些實施例中，內耳病症可引起聽力損失、耳鳴、眩暈、失衡或其組合。
聽力損失可由於遺傳因素、環境因素或遺傳與環境因素之組合造成。所有患有耳鳴，即聽覺系統中有幻像噪音(鈴聲、嗡嗡聲、啁啾聲、哼哼聲或敲打聲)之人中約一半對某些聲音頻率及音量範圍過度敏感/耐受性降低，此稱為聽覺過敏(hyperacusis，亦拼寫為hyperacousis)。熟習此項技術者將知曉多種非症候群及症候群相關性聽力損失(例如分別為DFNB4及彭德萊症候群(Pendred syndrome))。聽力受損或損失之環境原因可包括例如某些藥物、出生之前或之後的特定感染及/或長時間段暴露於大噪音。在一些實施例中，聽力損失可由噪音、耳毒性劑、老年失聰、疾病、感染或影響耳特定部分之癌症引起。在一些實施例中，缺血性損傷可經由病理生理學機制引起聽力損失。在一些實施例中，固有異常，如在耳蝸解剖學或生理學中起重要作用之基因的先天突變，或支持細胞及/或毛細胞中之遺傳或解剖學變化可負責或引起聽力損失。
聽力損失及/或耳聾為最常見之人類感覺缺陷之一，且可由於多種原因而發生。在一些實施例中，個體可天生患有聽力損失或無聽力，而另一些人則可隨時間緩慢損失聽力。約3600萬名美國成人報告某種程度之聽力損失，且三分之一年齡大於60歲之人及一半年齡大於85歲之人經歷聽力損失。1000名兒童中約1.5名出生時患有重度聽力損失，且每1000名兒童中另有2至3名出生時患有部分聽力損失(Smith等人, 2005, Lancet 365:879-890，該文獻以全文引用之方式併入本文中)。此等病例中超過一半由遺傳原因造成的(Di Domenico等人, 2011, J. Cell. Physiol. 226:2494-2499，該文獻以全文引用之方式併入本文中)。
目前，聽力損失之治療由以下組成：對於輕度至嚴重損失，放大聽力，以及對於嚴重至重度損失，植入耳蝸(Kral及O'Donoghue, 2010, N. Engl. J. Med. 363:1438-1450，該文獻以全文引用之方式併入本文中)。當前研究均集中在耳蝸毛細胞再生上，其可用於最常見聽力損失形式，包括老年失聰、噪音損害、感染及耳毒性。仍需要可修復及/或減輕聽力問題之來源的有效治療，諸如基因療法。
在一些實施例中，非症候群性聽力損失及/或耳聾與其他病徵及症狀無關。在一些實施例中，症候群性聽力損失及/或耳聾與其他身體部分中之異常一起發生。遺傳性聽力損失及/或耳聾病例中大約70%至80%為非症候群性的；其餘病例通常由特定遺傳症候群引起。非症候群性耳聾及/或聽力損失可具有不同遺傳模式，且可在任何年齡發生。非症候群性耳聾及/或聽力損失之類型通常根據其遺傳模式來命名。舉例而言，體染色體顯性形式命名為DFNA，體染色體隱性形式命名為DFNB，且X連鎖形式命名為DFN。各類型亦按其首次描述之順序編號。舉例而言，DFNA1為非症候群性耳聾之第一種描述之體染色體顯性類型。
75%至80%之遺傳原因聽力損失及/或耳聾病例以體染色體隱性模式遺傳，此意謂各細胞中基因之兩個複本均具有突變。通常，患有體染色體隱性聽力損失及/或耳聾之個體的父母中之每一者均為突變基因之一個複本的攜帶者，但不受此種形式之聽力損失的影響。另外20%至25%之非症候群性聽力損失及/或耳聾病例為體染色體顯性的，此意謂各細胞中改變基因之一個複本足以引起耳聾及/或聽力損失。患有體染色體顯性耳聾及/或聽力損失之人最常自耳聾及/或患有聽力損失之父母中之一者遺傳基因之改變複本。1%至2%之耳聾及/或聽力損失病例展示X連鎖遺傳模式，此意謂負責該疾患之突變基因位於X染色體(兩個性染色體之一)上。患有X連鎖非症候群性聽力損失及/或耳聾之男性與遺傳相同基因突變之複本的女性相比，在生命早期傾向於產生更嚴重聽力損失。X連鎖遺傳之一特徵為父親不能將X連鎖性狀傳至其兒子。
在美國，少於1%之病例中發生由粒線體DNA變化引起之粒線體非症候群性耳聾。改變粒線體DNA自母親傳至其所有兒子及女兒。此類耳聾不遺傳自父親。症候群性及非症候群性耳聾及/或聽力損失之原因很複雜。研究者已鑑別出超過30種基因，該超過30種基因在改變時與症候群性及/或非症候群性耳聾及/或聽力損失相關，然而，此等基因中之一些尚未完全表徵。給定基因之不同突變可與耳聾及/或聽力損失之不同類型相關，且一些基因與症候群性耳聾及非症候群性耳聾及/或聽力損失兩者均相關。
在一些實施例中，耳聾及/或聽力損失可為傳導性(由耳道或中耳引起)、感覺神經性(由內耳或聽覺神經引起)或混合性的。在一些實施例中，非症候群性耳聾及/或聽力損失與由內耳結構受損引起之永久聽力損失(感覺神經性耳聾)相關。在一些實施例中，感覺神經性聽力損失可由於不良毛細胞功能所致。在一些實施例中，感覺神經性聽力受損涉及第八腦神經(前庭耳蝸神經)或聽覺腦區。在一些該等實施例中，僅腦聽覺中心受影響。在該情況下，可發生皮質性耳聾，其中可以正常臨限值聽到聲音，但所感知聲音之品質不良，無法理解語音。
中耳變化引起之聽力損失稱為傳導性聽力損失。非症候群性耳聾及/或聽力損失之一些形式涉及內耳區與中耳區兩者之變化，稱為混合型聽力損失。在兒童學習說話前存在之聽力損失及/或耳聾歸類為語前或先天性的。言語發育後發生之聽力損失及/或耳聾可歸類為語後的。與症候群性或非症候群性聽力損失有關之大多數體染色體隱性基因座會引起語前嚴重至重度聽力損失。
如熟習此項技術者所已知，毛細胞為脊椎動物耳之聽覺與前庭系統兩者之感覺受體。毛細胞偵測其環境中之運動，且在哺乳動物中，毛細胞位於柯蒂氏器官(organ of Corti)之耳蝸內。已知哺乳動物耳具有兩種類型之毛細胞——內毛細胞及外毛細胞。在一些實施例中，外毛細胞藉由毛細胞束之機械運動或毛細胞體之電驅動運動來放大低水準之音頻。在一些實施例中，內毛細胞將耳蝸液中之振動轉換成電訊號，聽覺神經將該等電訊號傳輸至腦。在一些實施例中，毛細胞在出生時可為異常的，或者在個體生命期間受損。在一些實施例中，外毛細胞可能夠再生。在一些實施例中，內毛細胞在患病或受傷後不能再生。在一些實施例中，感覺神經性聽力損失由於毛細胞中之異常所致。
如熟習此項技術者所已知，毛細胞並非孤立存在，且其功能由多種細胞支持，該等細胞可統稱為支持細胞。支持細胞可履行諸多功能，且包括許多細胞類型，包括但不限於亨森氏細胞(Hensen's cell)、狄特氏細胞(Deiters' cell)、柱狀細胞、克勞迪氏細胞(Claudius cell)、內指狀細胞及邊緣細胞。在一些實施例中，感覺神經性聽力損失由於支持細胞中之異常所致。在一些實施例中，支持細胞在出生時可為異常的，或者在個體生命期間受損。在一些實施例中，支持細胞可能夠再生。在一些實施例中，某些支持細胞可不能再生。2. KCNQ4 及聽力損失
典型地，人類KCNQ4基因具有4324個核酸鹼基且編碼具有695個胺基酸之蛋白質，該蛋白質之預計質量大約為77 kDa。人類KCNQ4基因具有14個外顯子，且位於1號染色體上。KCNQ4基因編碼Kv7.4，一種電壓閘控性鉀通道亞基，其形成同型四聚鉀通道。換言之，四個KCNQ4蛋白亞基形成單一電壓閘控鉀通道(Naito等人, 2013，該文獻以全文引用之形式併入本文中)。在一些實施例中，KCNQ4蛋白(Kv7.4)可為異聚通道之一部分，該異聚通道亦即包含Kv7.4及其他KCNQ蛋白例如KCNQ3之異四聚鉀通道。
在一些實施例中，KCNQ4基因產物中之一或多種突變可與聽力損失相關。在一些實施例中，在受KCNQ4介導之聽力損失影響的個體中不存在畸變產物耳聲發射(DPOAE)。
電壓閘控之鉀通道亞基Kv7.4為由aKCNQ4基因編碼之蛋白質，且通常在耳外毛細胞中表現最高。如熟習此項技術者所已知，OHC為非再生性細胞。Kv7.4通道有助於維持耳毛細胞中之靜止電位。舉例而言，Kv7.4在毛細胞底部中表現，此幫助維持毛細胞靜止電位(Kharkovets等人, 2006，該文獻以全文引用之方式併入本文中)，且在一些實施例中在OHC中之表現比在IHC中高大約8倍。
在不受任何特定理論束縛之情況下，本揭示案設想，除治療OHC之基因療法之外或作為該療法之替代，可使用基因療法來治療IHC。KCNQ4典型地以低水準在IHC中表現(例如相對於OHC)，且在一些實施例中，影響IHC中KCNQ4表現之基因療法可改良K+通道之功能。在一些該等實施例中，當使用基因療法治療有需要之個體的IHC而非OHC，或者除治療OHC外亦治療IHC時，通道傳導及/或聽力可改良。
在一些實施例中，離子通道中之缺陷或改變與耳聾相關。舉例而言，在一些實施例中，離子通道例如Kv7.4通道之基因產物中的改變可影響其功能。在一些實施例中，例如相較於包含由不具有一或多個突變之基因編碼之亞基的離子通道，KCNQ4基因產物中之一或多種突變可產生非功能性或功能降低之離子通道。在一些該等實施例中，其中在KCNQ4中存在一或多種變化(例如相對於野生型序列)，例如所得功能喪失之Kv7.4蛋白變體可產生非功能性或功能降低之通道。舉例而言，在一些實施例中，功能喪失之Kv7.4變體為拮抗鉀電流之離子通道或該離子通道之一部分。在一些該等實施例中，OHC經慢性去極化且最終死亡(Jung等人, 2018，該文獻以全文引用之方式併入本文中)。在一些實施例中，KCNQ4之一或多種基因產物中之變化與聽力損失相關。
在一些實施例中，KCNQ4介導之聽力損失為DFNA2。DFNA2為非症候群性聽力損失，其在KCNQ4基因組序列中作為常染色體顯性突變遺傳(此繼而影響毛細胞中Kv7.4之功能)。在一些實施例中，DFNA2非症候群性聽力損失表現為進行性及對稱性感覺神經性語後聽力受損；通常，不存在前庭受損。在一些該等實施例中，聽力損失為對稱性聽力損失，主要為高頻感覺神經性聽力損失(SNHL)。在一些該等實施例中，聽力損失為進行性的或最終在所有頻率上進展。
在不希望受任何特定理論束縛之情況下，在KCNQ4相關性聽力損失中，在較低年齡段，對於低頻音之聽力損失趨向於為輕度的，且對於高頻音之聽力損失趨向於為中度的。在較高年齡段，對於低頻音之聽力損失趨向於為中度的，且對於高頻音之聽力損失趨向於為重度的。在所有年齡段，聽力損失趨向於存在於高頻音下，很可能自出生開始即存在。在一些實施例中，具有KCNQ4突變之患者在大約十至四十歲之間經歷需要助聽器之聽力損失，且直至大約七十歲經歷在所有聽力頻率下嚴重至重度損失(對於聽力臨限值相對於聽力損失嚴重程度之一組例示性範圍表徵，參見例如表1)表 1.
嚴重程度 臨限值 (dB)
輕度 26-40 dB
中度 41-55 dB
中度-嚴重 56-70 dB
嚴重 71-90 dB
重度 90 dB
在不受任何特定理論束縛之情況下，本揭示案預期包括基因療法之技術在功能喪失KCNQ4變體之一或多個實例中可為有益的。舉例而言，在一些實施例中，基因療法包括投與恢復功能例如Kv7.4通道功能之功能增益KCNQ4變體(例如野生型，例如功能增益之KCNQ4)。在一些實施例中，向有需要之個體投與功能增益KCNQ4基因產物(例如野生型基因產物，例如經密碼子最佳化之基因產物)。
在一些實施例中，基因療法包括抑制與功能喪失KCNQ4變體相關之一或多種基因產物。在一些該等實施例中，抑制功能喪失KCNQ4變體可幫助恢復或預防聽力損失。舉例而言，在不受任何特定理論束縛之情況下，預期在一些實施例中，功能喪失KCNQ4變體基因產物編碼功能喪失Kv7.4變體。在一些該等實施例中，預期需要抑制該功能喪失Kv7.4變體。在一些實施例中，抑制減輕由功能喪失Kv7.4變體蛋白之積累引起的毒性或損害。在一些實施例中，使用基因療法抑制功能喪失KCNQ4變體基因產物(例如Kv7.4變體蛋白)。
在一些實施例中，投與基因療法以抑制功能喪失KCNQ4變體及/或表現功能增益KCNQ4基因產物(例如野生型基因產物，例如經密碼子最佳化之基因產物)。在一些該等實施例中，抑制及/或置換一或多種KCNQ4基因產物可減輕、減弱或恢復個體之聽力損失。舉例而言，本揭示案認識到，在一些實施例中，需要抑制功能喪失KCNQ4基因產物變體(例如mRNA，例如蛋白質)。在一些該等實施例中，抑制功能喪失KCNQ4基因產物變體可單獨發生，在功能增益KCNQ4基因產物(例如功能性Kv7.4蛋白，例如不會引起慢性去極化及細胞損傷或死亡之功能性離子通道)同時或之後發生。
在一些實施例中，使用單一構築體或超過一種構築體(例如包含達成功能喪失KCNQ4變異基因產物抑制之組分的一種構築體，以及包含達成功能增益KCNQ4基因產物表現之組分的另一構築體)完成抑制及/或置換。3. 組成物
本揭示案尤其提供組成物。在一些實施例中，組成物包含如本文所述之構築體。在一些實施例中，組成物包含如本文所述之一或多種構築體。在一些實施例中，組成物包含如本文所提供之複數種構築體。在一些實施例中，當組成物中包括超過一種構築體時，該等構築體彼此不同。
在一些實施例中，組成物包含編碼KCNQ4蛋白或其特徵部分之多核苷酸。在一些實施例中，組成物包含編碼抑制性分子，例如miRNA等之多核苷酸。在一些實施例中，組成物包含編碼KCNQ4蛋白或其特徵部分之至少一種多核苷酸，及編碼抑制性分子例如miRNA之至少一種多核苷酸。
在一些實施例中，組成物包含如本文所述之AAV粒子。在一些實施例中，組成物包含如本文所述之一或多種AAV粒子。在一些實施例中，組成物包含複數AAV粒子。在一些實施例中，當組成物中包括超過一種類型之AAV粒子時，該超過一種類型之AAV粒子各自為不同類型之粒子。
在一些實施例中，組成物包含細胞。
在一些實施例中，組成物為或包含醫藥組成物。 a. KCNQ4多核苷酸
本揭示案提供多核苷酸，例如包含KCNQ基因或其特徵部分之多核苷酸，以及如下組成物，該等組成物包含抑制性分子，例如KCNQ4基因或其特徵部分之標靶位元點的抑制物，例如miRNA等。本揭示案亦提供使用該等多核苷酸及/或組成物之方法。
在一些實施例中，本揭示案之多核苷酸可為或包含DNA或RNA。在一些實施例中，DNA可為基因組DNA或cDNA。在一些實施例中，RNA可為mRNA、miRNA、shRNA/siRNA、gRNA等。
在一些實施例中，多核苷酸包含KCNQ4基因之外顯子及/或內含子。
在一些實施例中，由包含KCNQ4基因或其特徵部分之多核苷酸表現基因產物。在一些實施例中，該多核苷酸之表現可使用一或多種控制元件(例如啟動子、增強子、剪接位點、聚腺苷酸化位點、轉譯起始位點等)。因此，在一些實施例中，本文提供之多核苷酸可包含一或多種控制元件。
在一些實施例中，KCNQ4基因為哺乳動物KCNQ4基因。在一些實施例中，KCNQ4基因為鼠類KCNQ4基因。例示性鼠類KCNQ4 cDNA序列為或包括SEQ ID NO: 91之序列。在一些實施例中，KCNQ4基因為靈長類動物KCNQ4基因。在一些實施例中，KCNQ4基因為人類KCNQ4基因。例示性人類KCNQ4 cDNA序列為或包括SEQ ID NO: 2之序列。例示性人類KCNQ4 cDNA序列為或包括SEQ ID NO: 90之序列。例示性人類KCNQ4基因組DNA序列可見於SEQ ID NO: 5中。例示性人類KCNQ4 cDNA序列，包括非轉譯區，為或包括SEQ ID NO: 6、7或8之序列。例示性人類KCNQ4 RNA序列可見於例如SEQ ID NO: 1中。例示性人類密碼子最佳化KCNA4序列 (例如經最佳化以抵抗gRNA結合及/或miRNA降解)可見於例如SEQ ID NO: 9或10中。
舉例而言，在一些實施例中，本揭示案描述已經密碼子最佳化以抵抗微小RNA之例示性構築體(例如例示性pITR-CMV.hKCNQ4codop_v2.mScarlet，SEQ ID NO: 255) 。在一些實施例中，本揭示案認識到外源提供編碼功能性(例如野生型，例如功能增益) KCNQ4基因產物之多核苷酸的一個挑戰為，在一些實施例中，其易受微小RNA (例如外源提供及/或內源miRNA)介導之降解的影響。在一些該等實施例中，本揭示案認識到，與非密碼子最佳化(亦即野生型) KCNQ4基因序列相比，可改變多核苷酸序列而不會實質性改變KCNQ4基因產物之多肽序列的密碼子最佳化可對微小RNA介導之降解具有更大抗性。在一些實施例中，包含經密碼子最佳化KCNQ4多核苷酸之構築體可與包含miRNA之構築體結合使用。在一些實施例中，該miRNA可用於敲低(或抑制)功能喪失KCNQ4變體。
作為另一實例，在一些實施例中，本揭示案描述例示性構築體，該等構築體可用於遞送gRNA以與本文所述CRISPR/Cas9介導之基因組編輯策略結合使用的。在一些實施例中，該等例示性構築體包含將SaCas9酶靶向至適當基因組位置之gRNA。在一些實施例中，除已經工程改造以抵抗SaCas9介導之基因沉默的 KCNQ4構築體 (例如例示性構築體pITR-CMV.hKCNQ4codop.U6-hsammu386Fw序列(SEQ ID NO: 269)或例示性pITR-CMV.hKCNQ4codop.U6-hsa408Rev序列(SEQ ID NOs: 270或273))外，該等例示性構築體還包含將SaCas9酶靶向至合適基因組位置之gRNA。
本揭示案認識到外源提供編碼功能性(例如野生型，例如功能增益) KCNQ4基因產物之多核苷酸的一個挑戰為，在一些實施例中，其易受微小RNA介導之降解(外源提供及/或內源miRNA)或gRNA干擾(例如經由gRNA結合)的影響。在一些該等實施例中，本揭示案認識到，與非密碼子最佳化(亦即野生型) KCNQ4基因序列相比，改變多核苷酸序列而不會實質性改變其所得多肽序列，例如KCNQ4基因產物之多肽序列的密碼子最佳化可對微小RNA介導之降解或對gRNA結合具有更大抗性。在一些實施例中，包含經密碼子最佳化KCNQ4多核苷酸之構築體可與包含miRNA之構築體結合使用，該miRNA可用於敲低(抑制)功能喪失KCNQ4變體。抵抗miRNA介導之降解或gRNA結合的例示性經密碼子最佳化序列可分別為或包含SEQ ID NO: 9或10或其部分。
KCNQ4基因之野生型序列中的變化可為或包含錯義或無義突變。在一些該等實施例中，所得Kv7.4蛋白為功能喪失變體(例如拮抗正常通道功能之蛋白)。在一些該等實施例中，KCNQ4之野生型序列中的改變可在如下個體的後代中引起聽力損失或使聽力損失之風險增加，該個體在KCNQ4基因之一個複本中具有至少一種改變。
KCNQ4介導之聽力損失以常染色體顯性方式傳播；亦即，KCNQ4之一個複本中之突變會引起聽力損失。已知KCNQ4中之多種等位基因變體，且迄今已鑑別出至少三十種不同的功能喪失KCNQ4突變，該等突變位於各種不同基因組區。在一些實施例中，野生型序列中之改變為外顯子序列中之改變。舉例而言，DVD (耳聾變化資料庫(Deafness Variation Database))中描述之三種最常見錯義突變為F182L (外顯子4)、V672M及S680F (外顯子14)。在一些實施例中，野生型序列中之改變為內含子序列中之改變。舉例而言，如熟習此項技術者所已知，在一些實施例中，內含子(剪接受體)突變引起DFNA2 (c.1044-1051del)或A349PfsX19。
本揭示案包括在一些實施例中可靶向KCNQ4基因產物，例如KCNQ4轉錄物，例如KCNQ4 mRNA (SEQ ID NO: NO:4)之技術。在一些實施例中，抑制性核酸分子或基因組編輯系統靶向SEQ ID NO: 1-10及/或25-30及/或90-91之核苷酸或其一部分。在一些實施例中，抑制性核酸分子或基因組編輯系統包含(i)與SEQ ID NO: 42-70或SEQ ID NO: 96-97中之任一者至少85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致之核苷酸序列(或其一部分)，及/或(ii)互補於與SEQ ID NO: 1-10及/或25-30及/或90-91中之任一者至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致之核苷酸序列的核苷酸序列(或其一部分)。
人類KCNQ4之胺基酸及核苷酸序列為此項技術中所已知，且可見於公共可獲得之資料庫，例如美國國家生物技術資訊中心(NCBI)參考序列(RefSeq)資料庫，其中將其分別以RefSeq登錄號NP_004691 (當前登錄.版本號NP_004691.2)及NM_004700 (當前登錄.版本號 NM_004700.4)列出(其中「胺基酸序列」指KCNQ4多肽之序列，且在本文中「核苷酸序列」指基因組DNA中呈現之KCNQ4 mRNA序列，應瞭解，實際mRNA核苷酸序列含有U而非T )。
人類KCNQ4基因已稱為NCBI Gene ID: 9132，且基因組KCNQ4序列具有RefSeq登錄號NG_008139 (當前登錄號.版本號NG_008139.3)。人類KCNQ4 mRNA之核苷酸序列如SEQ ID NO: 4所示。
在一些實施例中，KCNQ4核酸序列為經密碼子最佳化序列。在一些實施例中，經密碼子最佳化序列與野生型KCNQ4核酸序列或其任何已知功能性變體大約70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%、99.5%或99.9%類似，該變體能夠產生功能性基因產物。
本揭示案認識到對多核苷酸序列之某些改變將不會影響其表現或由該多核苷酸編碼之蛋白質。舉例而言，在一些實施例中，多核苷酸包含具有一或多種沉默突變之KCNQ4基因。在一些該等實施例中，本揭示案提供一種多核苷酸，其包含具有一或多種沉默突變之KCNQ4基因，例如具有不同於SEQ ID NO: 1-10及/或25-30及/或90-91之序列，但編碼與野生型或功能增益KCNQ4基因相同之胺基酸序列的KCNQ4基因。
在一些實施例中，本揭示案提供包含如下KCNQ4基因或基因產物之多核苷酸，該KCNQ4基因或基因產物具有不同於SEQ ID NO: 1-10及/或25-30及/或90-91中之任一者的序列，該序列編碼包括一或多種突變之胺基酸序列(例如與自功能性，例如野生型，例如功能增益(例如經密碼子最佳化) KCNQ4基因產生之胺基酸序列相比時的不同胺基酸序列)，其中該一或多種突變為保守胺基酸取代。
熟習此項技術者應瞭解，來自不同物種之相同蛋白質之間的不保守胺基酸的改變(例如取代、添加、缺失等)不太可對蛋白質之功能具有影響，因此，應選擇此等胺基酸進行突變。來自不同物種之相同蛋白質之間的保守胺基酸不應改變(例如缺失、添加、取代等)，因為此等突變更可引起蛋白質功能改變。
在一些實施例中，本揭示案提供包含如下KCNQ4基因之多核苷酸，該KCNQ4基因具有不同於SEQ ID NO: 1-10及/或25-30及/或90-91之序列，該序列編碼包括一或多種突變之胺基酸序列(例如與自功能性(例如野生型，例如功能增益，例如經密碼子最佳化) KCNQ4基因產生之胺基酸序列相比時的不同胺基酸序列)，其中該一或多種突變不在KCNQ4基因或所編碼Kv7.4蛋白之特徵部分內。
在一些實施例中，根據本揭示案之多核苷酸包含與SEQ ID NO: 1-10及/或25-30及/或90-91之序列至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%一致之KCNQ4基因或基因產物。
在一些實施例中，根據本揭示案之多核苷酸包含與SEQ ID NO: 1-10及/或25-30及/或90-91之序列一致之KCNQ4序列。熟習此項技術者應瞭解，本文揭示之序列可經最佳化或進一步加工(例如經密碼子最佳化)以在動物，例如哺乳動物，例如人類中達成增加或最佳表現。舉例而言，在一些實施例中，本揭示案之多核苷酸包含編碼KCNQ4之序列，該序列經密碼子最佳化以阻止例如gRNA或miRNA結合等。
作為非限制性實例，根據本揭示案之KCNQ4多核苷酸可為或包含以下中之一或多者：
例示性人類 KCNQ4 mRNA 序列 (SEQ ID NO: 1) gacaugugagcggcgcgcgccgguggcagguggaaaggcgagcggcauggagcgcguaauaagagaguuggagucggaaagagcagccccagucgccggggaagcgggaggucagugcgggcuccggcggcccccaggcuccgagcgcccgcccgcggccccggcccggccccuagcccccgccgcccgcgcccgccccgggucgccccucuggccccggguccgagccaugcgucucugagcgccccgagcgcgcccccgccccggaccgugcccgggccccggcgcccccagcccggcgccgcccauggccgaggcccccccgcgccgccucggccugggucccccgcccggggacgccccccgcgcggagcuaguggcgcucacggccgugcagagcgaacagggcgaggcgggcgggggcggcuccccgcgccgccucggccuccugggcagcccccugccgccgggcgcgccccucccugggccgggcuccggcucgggcuccgccugcggccagcgcuccucggccgcgcacaagcgcuaccgccgccugcagaacugggucuacaacgugcuggagcggccccgcggcugggccuucgucuaccacgucuucauauuuuugcuggucuucagcugccuggugcugucugugcuguccacuauccaggagcaccaggaacuugccaacgagugucuccucaucuuggaauucgugaugaucgugguuuucggcuuggaguacaucguccgggucugguccgccggaugcugcugccgcuaccgaggauggcagggucgcuuccgcuuugccagaaagcccuucugugucaucgacuucaucguguucguggccucgguggccgucaucgccgcggguacccagggcaacaucuucgccacguccgcgcugcgcagcaugcgcuuccugcagauccugcgcauggugcgcauggaccgccgcggcggcaccuggaagcugcugggcucaguggucuacgcgcauagcaaggagcugaucaccgccugguacaucggguuccuggugcucaucuucgccuccuuccuggucuaccuggcugagaaggacgccaacuccgacuucuccuccuacgccgacucgcucuggugggggacgauuacauugacaaccaucggcuauggugacaagacaccgcacacauggcugggcaggguccuggcugcuggcuucgccuuacugggcaucucuuucuuugcccugccugccggcauccuaggcuccggcuuugcccugaagguccaggagcagcaccggcagaagcacuucgagaagcggaggaugccggcagccaaccucauccaggcugccuggcgccuguacuccaccgauaugagccgggccuaccugacagccaccugguacuacuaugacaguauccucccauccuucagagagcuggcccucuuguuugagcacgugcaacgggcccgcaaugggggccuacggccccuggaggugcggcgggcgccgguacccgacggagcacccucccguuacccgcccguugccaccugccaccggccgggcagcaccuccuucugcccuggggaaagcagccggaugggcaucaaagaccgcauccgcaugggcagcucccagcggcggacggguccuuccaagcagcaucuggcaccuccaacaaugcccaccuccccaagcagcgagcaggugggugaggccaccagccccaccaaggugcaaaagagcuggagcuucaaugaccgcacccgcuuccgggcaucucugagacucaaaccccgcaccucugcugaggaugcccccucagaggaaguagcagaggagaagagcuaccagugugagcucacgguggacgacaucaugccugcugugaagacagucauccgcuccaucaggauucucaaguuccugguggccaaaaggaaauucaaggagacacugcgaccguacgacgugaaggacgucauugagcaguacucagcaggccaccuggacaugcugggccggaucaagagccugcaaacucggguggaccaaauugugggucgggggcccggggacaggaaggcccgggagaagggcgacaaggggcccuccgacgcggaggugguggaugaaaucagcaugaugggacgcguggucaagguggagaagcaggugcaguccaucgagcacaagcuggaccugcuguugggcuucuauucgcgcugccugcgcucuggcaccucggccagccugggcgccgugcaagugccgcuguucgaccccgacaucaccuccgacuaccacagcccuguggaccacgaggacaucuccgucuccgcacagacgcucagcaucucccgcucggucagcaccaacauggacugagggacuucucagaggcagggcagcacacggccagccccgcggccuggcgcuccgacugcccucugaggccuccggacuccucucguacuugaacucacucccucacggggagagagaccacacgcaguauugagcugccugagugggcgugguaccugcugugggugccagcgccccuuccccaccucaggagcgugagaugccaggucgcacagagggcagcagcagcggccgucccgcggccucugggccccccagugcccugcccacuccaucaaggcccuauguggcccaccuggcaggggcacagccccgggagugggagcgggcgcuggggcccugggcccugacccagcuuccagcuaugcaaggugaggucucuggcccacccuucggacacagcagggaagcccucccgccaaguccccgccccacuugggggugggccaaggugcccccacagguacccacaaagcacaggacccugccacaaggcagguggacaccauauaugcaaaccauguuaaauaugcaacuuuggggacccccauggggucucucugucccucccccauugggagcugggcccccagcaguagcuggucucaggcugcuuggccaccacccugucccuauucuuuggcuuaucacuccuuccccucccagcauggggccuguuucuccccugcccucuccuaagggcaaugccugggccuuucuucccauuugcaagugucagcucccaggggcucccuccuccugcuggguggccacuccccuccuuggcccuccagacaccacucauagucagcacagguuucuguauccuccccaaaacucccagacagugcuucguggacgaucgcacaaacauagccuuuuaguuucuccagacaggaagaaagccucucacacuuaaacaugcaaugacgugacacacuuggagacaugagugcagagccacucagccgcuccugggccucugcagcagaugccaguggacuggccuugcagggugacgaccacuaagaggaagacccccaacuccaucugagcaggagaaggagcuuugaaguaacccgagagcucuccaggccccacccagaccuuuacccgcuccccuucuucaagaagaucuccuccucucugguccaggagcccuaacccacugccucugccuguccccaagggcccgccuccgugucuccacagcacaacucgggcccaggccugacaccacuggagagaccccaggcccacuucuagccaggccugugccuuccuagucacucuaacucccagagagaauaagaaugcauguaauagcuauaccaaccgcgcauccggcuuucacaugcacugucuccccucccuccacaccccacuucuucacuucaauuggcagcgccacauccaggcgucagcccccauucacuccaggaacacuuucuuauccccaccccuuugcuccucuucugcaaagccaaugcagguggcaggaaggugagggguaguggaccaauggcaacccucugugggaacaaggggccgaggccacgcugccugcaucucgugcuggggaccugcaugcgccagcaccagggcuuggacuggaucuuacucaguccauggugcccagccucugccccaacaugcccucugcaugugaccgucaugcccuggauggagccacuccuggcucaccccaccugcacugcacuguccccagagagccaccccuccacccacucagagacagcuguggagagggccaggagaaugggauuacccuaugaccaaggagacaugggaagaagcccuccuuccuuccacgaucgagguuccgccaucaacucgguucucggauaugcaaguaccucacuuuguuaacuuauuaacuuauugguuucauuaaaguuuucaagagga；(來自RefSeq登錄號NM_004700.4，其中用U置換T；AUG起始密碼子為下劃線加粗斜體形式，在位置308處開始)。
例示性人類 KCNQ4 同種型 A cDNA 編碼序列 (SEQ ID NO: 2) ATGGCCGAGGCCCCCCCGCGCCGCCTCGGCCTGGGTCCCCCGCCCGGGGACGCCCCCCGCGCGGAGCTAGTGGCGCTCACGGCCGTGCAGAGCGAACAGGGCGAGGCGGGCGGGGGCGGCTCCCCGCGCCGCCTCGGCCTCCTGGGCAGCCCCCTGCCGCCGGGCGCGCCCCTCCCTGGGCCGGGCTCCGGCTCGGGCTCCGCCTGCGGCCAGCGCTCCTCGGCCGCGCACAAGCGCTACCGCCGCCTGCAGAACTGGGTCTACAACGTGCTGGAGCGGCCCCGCGGCTGGGCCTTCGTCTACCACGTCTTCATATTTTTGCTGGTCTTCAGCTGCCTGGTGCTGTCTGTGCTGTCCACTATCCAGGAGCACCAGGAACTTGCCAACGAGTGTCTCCTCATCTTGGAATTCGTGATGATCGTGGTTTTCGGCTTGGAGTACATCGTCCGGGTCTGGTCCGCCGGATGCTGCTGCCGCTACCGAGGATGGCAGGGTCGCTTCCGCTTTGCCAGAAAGCCCTTCTGTGTCATCGACTTCATCGTGTTCGTGGCCTCGGTGGCCGTCATCGCCGCGGGTACCCAGGGCAACATCTTCGCCACGTCCGCGCTGCGCAGCATGCGCTTCCTGCAGATCCTGCGCATGGTGCGCATGGACCGCCGCGGCGGCACCTGGAAGCTGCTGGGCTCAGTGGTCTACGCGCATAGCAAGGAGCTGATCACCGCCTGGTACATCGGGTTCCTGGTGCTCATCTTCGCCTCCTTCCTGGTCTACCTGGCTGAGAAGGACGCCAACTCCGACTTCTCCTCCTACGCCGACTCGCTCTGGTGGGGGACGATTACATTGACAACCATCGGCTATGGTGACAAGACACCGCACACATGGCTGGGCAGGGTCCTGGCTGCTGGCTTCGCCTTACTGGGCATCTCTTTCTTTGCCCTGCCTGCCGGCATCCTAGGCTCCGGCTTTGCCCTGAAGGTCCAGGAGCAGCACCGGCAGAAGCACTTCGAGAAGCGGAGGATGCCGGCAGCCAACCTCATCCAGGCTGCCTGGCGCCTGTACTCCACCGATATGAGCCGGGCCTACCTGACAGCCACCTGGTACTACTATGACAGTATCCTCCCATCCTTCAGAGAGCTGGCCCTCTTGTTTGAGCACGTGCAACGGGCCCGCAATGGGGGCCTACGGCCCCTGGAGGTGCGGCGGGCGCCGGTACCCGACGGAGCACCCTCCCGTTACCCGCCCGTTGCCACCTGCCACCGGCCGGGCAGCACCTCCTTCTGCCCTGGGGAAAGCAGCCGGATGGGCATCAAAGACCGCATCCGCATGGGCAGCTCCCAGCGGCGGACGGGTCCTTCCAAGCAGCATCTGGCACCTCCAACAATGCCCACCTCCCCAAGCAGCGAGCAGGTGGGTGAGGCCACCAGCCCCACCAAGGTGCAAAAGAGCTGGAGCTTCAATGACCGCACCCGCTTCCGGGCATCTCTGAGACTCAAACCCCGCACCTCTGCTGAGGATGCCCCCTCAGAGGAAGTAGCAGAGGAGAAGAGCTACCAGTGTGAGCTCACGGTGGACGACATCATGCCTGCTGTGAAGACAGTCATCCGCTCCATCAGGATTCTCAAGTTCCTGGTGGCCAAAAGGAAATTCAAGGAGACACTGCGACCGTACGACGTGAAGGACGTCATTGAGCAGTACTCAGCAGGCCACCTGGACATGCTGGGCCGGATCAAGAGCCTGCAAACTCGGGTGGACCAAATTGTGGGTCGGGGGCCCGGGGACAGGAAGGCCCGGGAGAAGGGCGACAAGGGGCCCTCCGACGCGGAGGTGGTGGATGAAATCAGCATGATGGGACGCGTGGTCAAGGTGGAGAAGCAGGTGCAGTCCATCGAGCACAAGCTGGACCTGCTGTTGGGCTTCTATTCGCGCTGCCTGCGCTCTGGCACCTCGGCCAGCCTGGGCGCCGTGCAAGTGCCGCTGTTCGACCCCGACATCACCTCCGACTACCACAGCCCTGTGGACCACGAGGACATCTCCGTCTCCGCACAGACGCTCAGCATCTCCCGCTCGGTCAGCACCAACATGGACTGA
例示性人類 KCNQ4 同種型 A cDNA 序列 ( 無終止密碼子 )(SEQ ID NO: 90) ATGGCCGAGGCCCCCCCGCGCCGCCTCGGCCTGGGTCCCCCGCCCGGGGACGCCCCCCGCGCGGAGCTAGTGGCGCTCACGGCCGTGCAGAGCGAACAGGGCGAGGCGGGCGGGGGCGGCTCCCCGCGCCGCCTCGGCCTCCTGGGCAGCCCCCTGCCGCCGGGCGCGCCCCTCCCTGGGCCGGGCTCCGGCTCGGGCTCCGCCTGCGGCCAGCGCTCCTCGGCCGCGCACAAGCGCTACCGCCGCCTGCAGAACTGGGTCTACAACGTGCTGGAGCGGCCCCGCGGCTGGGCCTTCGTCTACCACGTCTTCATATTTTTGCTGGTCTTCAGCTGCCTGGTGCTGTCTGTGCTGTCCACTATCCAGGAGCACCAGGAACTTGCCAACGAGTGTCTCCTCATCTTGGAATTCGTGATGATCGTGGTTTTCGGCTTGGAGTACATCGTCCGGGTCTGGTCCGCCGGATGCTGCTGCCGCTACCGAGGATGGCAGGGTCGCTTCCGCTTTGCCAGAAAGCCCTTCTGTGTCATCGACTTCATCGTGTTCGTGGCCTCGGTGGCCGTCATCGCCGCGGGTACCCAGGGCAACATCTTCGCCACGTCCGCGCTGCGCAGCATGCGCTTCCTGCAGATCCTGCGCATGGTGCGCATGGACCGCCGCGGCGGCACCTGGAAGCTGCTGGGCTCAGTGGTCTACGCGCATAGCAAGGAGCTGATCACCGCCTGGTACATCGGGTTCCTGGTGCTCATCTTCGCCTCCTTCCTGGTCTACCTGGCTGAGAAGGACGCCAACTCCGACTTCTCCTCCTACGCCGACTCGCTCTGGTGGGGGACGATTACATTGACAACCATCGGCTATGGTGACAAGACACCGCACACATGGCTGGGCAGGGTCCTGGCTGCTGGCTTCGCCTTACTGGGCATCTCTTTCTTTGCCCTGCCTGCCGGCATCCTAGGCTCCGGCTTTGCCCTGAAGGTCCAGGAGCAGCACCGGCAGAAGCACTTCGAGAAGCGGAGGATGCCGGCAGCCAACCTCATCCAGGCTGCCTGGCGCCTGTACTCCACCGATATGAGCCGGGCCTACCTGACAGCCACCTGGTACTACTATGACAGTATCCTCCCATCCTTCAGAGAGCTGGCCCTCTTGTTTGAGCACGTGCAACGGGCCCGCAATGGGGGCCTACGGCCCCTGGAGGTGCGGCGGGCGCCGGTACCCGACGGAGCACCCTCCCGTTACCCGCCCGTTGCCACCTGCCACCGGCCGGGCAGCACCTCCTTCTGCCCTGGGGAAAGCAGCCGGATGGGCATCAAAGACCGCATCCGCATGGGCAGCTCCCAGCGGCGGACGGGTCCTTCCAAGCAGCATCTGGCACCTCCAACAATGCCCACCTCCCCAAGCAGCGAGCAGGTGGGTGAGGCCACCAGCCCCACCAAGGTGCAAAAGAGCTGGAGCTTCAATGACCGCACCCGCTTCCGGGCATCTCTGAGACTCAAACCCCGCACCTCTGCTGAGGATGCCCCCTCAGAGGAAGTAGCAGAGGAGAAGAGCTACCAGTGTGAGCTCACGGTGGACGACATCATGCCTGCTGTGAAGACAGTCATCCGCTCCATCAGGATTCTCAAGTTCCTGGTGGCCAAAAGGAAATTCAAGGAGACACTGCGACCGTACGACGTGAAGGACGTCATTGAGCAGTACTCAGCAGGCCACCTGGACATGCTGGGCCGGATCAAGAGCCTGCAAACTCGGGTGGACCAAATTGTGGGTCGGGGGCCCGGGGACAGGAAGGCCCGGGAGAAGGGCGACAAGGGGCCCTCCGACGCGGAGGTGGTGGATGAAATCAGCATGATGGGACGCGTGGTCAAGGTGGAGAAGCAGGTGCAGTCCATCGAGCACAAGCTGGACCTGCTGTTGGGCTTCTATTCGCGCTGCCTGCGCTCTGGCACCTCGGCCAGCCTGGGCGCCGTGCAAGTGCCGCTGTTCGACCCCGACATCACCTCCGACTACCACAGCCCTGTGGACCACGAGGACATCTCCGTCTCCGCACAGACGCTCAGCATCTCCCGCTCGGTCAGCACCAACATGGAC
例示性人類 KCNQ4 同種型 B cDNA 編碼序列 (SEQ ID NO: 3) ATGGCCGAGGCCCCCCCGCGCCGCCTCGGCCTGGGTCCCCCGCCCGGGGACGCCCCCCGCGCGGAGCTAGTGGCGCTCACGGCCGTGCAGAGCGAACAGGGCGAGGCGGGCGGGGGCGGCTCCCCGCGCCGCCTCGGCCTCCTGGGCAGCCCCCTGCCGCCGGGCGCGCCCCTCCCTGGGCCGGGCTCCGGCTCGGGCTCCGCCTGCGGCCAGCGCTCCTCGGCCGCGCACAAGCGCTACCGCCGCCTGCAGAACTGGGTCTACAACGTGCTGGAGCGGCCCCGCGGCTGGGCCTTCGTCTACCACGTCTTCATATTTTTGCTGGTCTTCAGCTGCCTGGTGCTGTCTGTGCTGTCCACTATCCAGGAGCACCAGGAACTTGCCAACGAGTGTCTCCTCATCTTGGAATTCGTGATGATCGTGGTTTTCGGCTTGGAGTACATCGTCCGGGTCTGGTCCGCCGGATGCTGCTGCCGCTACCGAGGATGGCAGGGTCGCTTCCGCTTTGCCAGAAAGCCCTTCTGTGTCATCGACTTCATCGTGTTCGTGGCCTCGGTGGCCGTCATCGCCGCGGGTACCCAGGGCAACATCTTCGCCACGTCCGCGCTGCGCAGCATGCGCTTCCTGCAGATCCTGCGCATGGTGCGCATGGACCGCCGCGGCGGCACCTGGAAGCTGCTGGGCTCAGTGGTCTACGCGCATAGCAAGGAGCTGATCACCGCCTGGTACATCGGGTTCCTGGTGCTCATCTTCGCCTCCTTCCTGGTCTACCTGGCTGAGAAGGACGCCAACTCCGACTTCTCCTCCTACGCCGACTCGCTCTGGTGGGGGACGATTACATTGACAACCATCGGCTATGGTGACAAGACACCGCACACATGGCTGGGCAGGGTCCTGGCTGCTGGCTTCGCCTTACTGGGCATCTCTTTCTTTGCCCTGCCTGCCGGCATCCTAGGCTCCGGCTTTGCCCTGAAGGTCCAGGAGCAGCACCGGCAGAAGCACTTCGAGAAGCGGAGGATGCCGGCAGCCAACCTCATCCAGGCTGCCTGGCGCCTGTACTCCACCGATATGAGCCGGGCCTACCTGACAGCCACCTGGTACTACTATGACAGTATCCTCCCATCCTTCAGCAGCCGGATGGGCATCAAAGACCGCATCCGCATGGGCAGCTCCCAGCGGCGGACGGGTCCTTCCAAGCAGCATCTGGCACCTCCAACAATGCCCACCTCCCCAAGCAGCGAGCAGGTGGGTGAGGCCACCAGCCCCACCAAGGTGCAAAAGAGCTGGAGCTTCAATGACCGCACCCGCTTCCGGGCATCTCTGAGACTCAAACCCCGCACCTCTGCTGAGGATGCCCCCTCAGAGGAAGTAGCAGAGGAGAAGAGCTACCAGTGTGAGCTCACGGTGGACGACATCATGCCTGCTGTGAAGACAGTCATCCGCTCCATCAGGATTCTCAAGTTCCTGGTGGCCAAAAGGAAATTCAAGGAGACACTGCGACCGTACGACGTGAAGGACGTCATTGAGCAGTACTCAGCAGGCCACCTGGACATGCTGGGCCGGATCAAGAGCCTGCAAACTCGGGTGGACCAAATTGTGGGTCGGGGGCCCGGGGACAGGAAGGCCCGGGAGAAGGGCGACAAGGGGCCCTCCGACGCGGAGGTGGTGGATGAAATCAGCATGATGGGACGCGTGGTCAAGGTGGAGAAGCAGGTGCAGTCCATCGAGCACAAGCTGGACCTGCTGTTGGGCTTCTATTCGCGCTGCCTGCGCTCTGGCACCTCGGCCAGCCTGGGCGCCGTGCAAGTGCCGCTGTTCGACCCCGACATCACCTCCGACTACCACAGCCCTGTGGACCACGAGGACATCTCCGTCTCCGCACAGACGCTCAGCATCTCCCGCTCGGTCAGCACCAACATGGACTGA
例示性人類 KCNQ4 同種型 X1 cDNA 編碼序列 (SEQ ID NO: 4) ATGCCGGCAGCCAACCTCATCCAGGCTGCCTGGCGCCTGTACTCCACCGATATGAGCCGGGCCTACCTGACAGCCACCTGGTACTACTATGACAGTATCCTCCCATCCTTCAGAGAGCTGGCCCTCTTGTTTGAGCACGTGCAACGGGCCCGCAATGGGGGCCTACGGCCCCTGGAGGTGCGGCGGGCGCCGGTACCCGACGGAGCACCCTCCCGTTACCCGCCCGTTGCCACCTGCCACCGGCCGGGCAGCACCTCCTTCTGCCCTGGGGAAAGCAGCCGGATGGGCATCAAAGACCGCATCCGCATGGGCAGCTCCCAGCGGCGGACGGGTCCTTCCAAGCAGCATCTGGCACCTCCAACAATGCCCACCTCCCCAAGCAGCGAGCAGGTGGGTGAGGCCACCAGCCCCACCAAGGTGCAAAAGAGCTGGAGCTTCAATGACCGCACCCGCTTCCGGGCATCTCTGAGACTCAAACCCCGCACCTCTGCTGAGGATGCCCCCTCAGAGGAAGTAGCAGAGGAGAAGAGCTACCAGTGTGAGCTCACGGTGGACGACATCATGCCTGCTGTGAAGACAGTCATCCGCTCCATCAGGATTCTCAAGTTCCTGGTGGCCAAAAGGAAATTCAAGGAGACACTGCGACCGTACGACGTGAAGGACGTCATTGAGCAGTACTCAGCAGGCCACCTGGACATGCTGGGCCGGATCAAGAGCCTGCAAACTCGGGTGGACCAAATTGTGGGTCGGGGGCCCGGGGACAGGAAGGCCCGGGAGAAGGGCGACAAGGGGCCCTCCGACGCGGAGGTGGTGGATGAAATCAGCATGATGGGACGCGTGGTCAAGGTGGAGAAGCAGGTGCAGTCCATCGAGCACAAGCTGGACCTGCTGTTGGGCTTCTATTCGCGCTGCCTGCGCTCTGGCACCTCGGCCAGCCTGGGCGCCGTGCAAGTGCCGCTGTTCGACCCCGACATCACCTCCGACTACCACAGCCCTGTGGACCACGAGGACATCTCCGTCTCCGCACAGACGCTCAGCATCTCCCGCTCGGTCAGCACCAACATGGACTGA
例示性人類 KCNQ4 基因組 DNA 序列 (SEQ ID NO: 5) GCAGGACCACAGCACTGTTGCCTTCTGCATGGTCTTCCAGAGGTAGAGGTTAGAGGAAGGATCTTACAGGAAGAATCCTGAAGGCAGAGGAGGAGCCCTGCAAGAAGGGAGGGCTTTGACCTTCATTTCCACGCCCCTTTCTCCCTCTGTGTCTCCTCTGTGTGGGCCCCCTCCAGCCCTGAGGATCAATGGGGGTTCACTTTCACTGAGCTCAGCAACACTGCTCCCTCCCCACTTCCTGTGGCTCTGAGCTGACTGGCCTGCTTGGTCTAGGCTGGGGGCTGGTCAGTGCCACACCCAGATCTGGGGAAAAGAAATTCCTTGGCTGGCGAGGTGGCTCACGCCTGTAATCCCAGCACTTTGGGAGGCCAAGACGGGCGGATCAGGAGGTCAGGAGATCGAGACCATCCTGGCTAACACGGTGAAACCCCGTCTCTACTAAAAATACAAAAAAATTAGCCAGGCATGGTGGCGGGCGCCTGTAGTGCCAGCTACTTGGGAGGCTGAGGCAGGAGAATGGTGTGAACCCGGGAGGCAGAGCTTGCAGTGAGCCGAGATTGCGCCACTGCACTCCAGACTGGGCAACAGAGCGAGACTCCATCTCAAAAAAAAAAAAAAAAGGAAAAGAAAAAGAAATTCCTTGGGCCCCTCCAGCACCTCGTGGCCTAAGTCTCTTGTCCTTTCTGGGCTGCACAGGGAAAAGGAAGAAGGCCTTATCTTTCTCTCATGCTTCCTCCTGCTCTCAGTAGAGGTGGGTTCCCAAAGGTCAATAATGTGATGCCATCACCCCCTGAGCACTCTCCACTCCAATCCCCTCCTAGGAAGGCTTCCTAGATTGAGAAGAACTGCTAGGACCAGGGAATTCCCAGAGCATCTCCCTGCTCCACCTGAAACACGTACCTGAAGAGCAGTCAGACGAATGGGTCACGTGCGTACAGCCCCCTGCATGGTCTCTAACTTTTTCATGCATTATTGCATTCAGTGCTGATAGCCAGGGAAAGTGGGGAAGAGGTGGAGTGACTTGCCCAAGGTCCCCAGGTATTCCACAGGTGGAGCTAGGACTGGAAGCCCAGCCATGACTTGTAGTTTAGGGCTCTTTCTGCCCCTGGCACTGCCAGCCTCTCTGGATGCTGGTGCCTCCCACTTCACCCATCCTGGGTTCTCTCCTAGGGAGCCACAGCCTCTGCAGCATGCCCAGCCTCAGGGCCTGGCCAGGCTCCCTGTTTCTTATCAGGCCAAATTGGACCCTCCATCCTGGCATTCAAGTCCTCCTGCGTGCCCCTGGCTAAGCTTGCTCTTCCGAATGCTCTGTAACATTCTTCCCACACCAGTACACACACACACACACACACACACACACACACACACACACACATTAAAGCAGCACCTGAGTGAATTAACAGCCATACAAGGCAAGTCTCTTCACTGAGCCTCAGTCTTCTTGAGTGTAACATGGGACCGTGAACAGTATTACCGCACAAGGTTGTGGGGATGCTGAAATAGACAATGCAGGTAAAACATCCTGCATAAGGCTTAGGATTGACTGCAGGCCTCATTAATGGTAGCTGCAGGCATTATTGGTTGTACTTCTCTGCGTCTCTCCCAGTCCTCCCCACTCCTGTCCCCAAGAAAGCTCCCTCTGCCATTGCCTGTGGAGACTTCTCCCTCCTCTGAGCTCTAGCAACCCTTGGAGCTGTAAGAAAGCCCAGGGTCAGGTGGCTAGCAGGCAGAGAGATTTTAGGAGGCAAGTGAGTGGAACCCAGACCTCCTCGCCTCGATTCAACTAGCGCACTTCTGCTCCAAAGCTTTGTACACATTGGGGTGCTACCTTACAATTCTGTCGGTAAAAAGGATTCCATTGCTGATAAAGTCTAAAAATCACTGACTTAAACCACCCCACCTCTCACTCCAGGAAAGGAACCTGAGCCCTTGATTGACCTGGGGTCACAGTGGGAATCACTGACAGGCTTGAGCCTAGCCTGAGAGACCATAGTCCTAGCCACTTCCTGCCCTCCATCCTTTCAGACCTGGAAGTTTGATCCCTTGGCACGAGTAAGTTCTAGAGAACAAGGATTGGCCGTGTATGGTTATCCTCAGCTCCCAGCACCCAGTGCCCAGCCGGCAGGTGCCAGTCAGTGGAAAGCACAGGTCACAGTTCTGGGGGTCACCAATAGGCTGTGTAGACTTAGGTGAGTCCCTGTGCCTCTCAGAGCCTCAGCTGTCTCAAGCAAGCTGCTGCTCTCTGGCCCAAAAGGGACTGGGCCTGGCACACAGATGGCACTCAGCAAATGGAAGCACTCGCCCTCCCACCCTTCCTCTCAGTCAATACTTGCTCCATTGATGGCTGATGGGGACAGTGATGAATTACAGAAGATCTTGGAGCCCTGCCCACTTCTTGCACAGATGGGGAAACAAGTCCAGGGTGGGGAAGAGACTTGCCCAGGTGGGAGTGAGTCTTAGTGAGTGCGTCTGTCTCCTCAGTGGGGCAGGGAAGCTTTCGCAGTGTTACCAGGGTGGAGACAGGGCCTGGGGGTGGAAAGGAAACTGCTGAGGGTGGGGTCAGGGGAACAGGTGGGAGAGGGAAGGAGGAGGGTAGGGAACCACGGTGTCCAGTCCCCTCCAGCAGAGGGGCCAATTGAGGGAGCCTGAGACAGCTGTTTGCTCAGAAAAGTGTCTTAGTCACTAAAGGTTGTGGTGGGGAAAGTCCGTCCTCCCAGTCATGTCCTGGGAATCCGGATGGCGCAGGAAGGCCACCCGGTGACCCTAAGAGTGGCCACCTGTCCTCTCTGAACTGGACTTTCTCTTCTGGCCCTTCCACTCTTCCATGTGTACACATATGCCAAGTAAATTTGCTGTGGCCTCCTGGAACCATCTCCCCCATCCCTCTCACCCCTTAGGAAGAGTTCTGTGTCCCTCCATTACCCATACGCCCGCAGGAGAAACAGGCTTCTATGCCCTATGAAAGTCCTTCCTGAGATCTAACTTCCATCCCTCTAGCTGCAACCACAGTCTCTTTCCTCTTTCTGCTGCCTTTGAGCAGGTAATCTGGAGCTGGAGTTGGGAATGATGAGACACTCCCTGCAGTGAGGGCTCCTCACAAGGTGGGGAAGGGACCTTTGTAGTCCCCCAGCTGGGAAGAGAGCCATGGGATCCAGAGGTGATGCTGAGCTTGAAGATTAGATTTCCCAGAACAGACCCAGTTTCAGATATTCTGGGTGTTAAGGGCAACCTGAATTCAAATTCCATTTCTGCTACAGAACAAGAGCCTCAAAAAGACCCCCTAGAAACACCCCCAGGGCGCTTGCAACTGCTTTCCTGTGCACCTTTCATGTCCTAGACCTTAGTCCCATTTCCCAGGATCTATGATTGAGAAGAACCAGCCAGGCAGTTCCACAGAGGGAGGACAGTGCTGCATATTTTGGGGGTGCCATCTTCAGCTCATAGAGAGAAGATGGGTTAACTCAGCCCAGGCACCACATCCCTAGTGGGGCCTTGGGGTCCAGAAACTGTCCCCAGCTTCCAGTAGAGGATCCGGGCATAACCTGCCCTGGGGCACCCGGCTCTGGCCCTGGGCACACCTGGACCAGGAGCAGCAGAAGAGATTCAGGTCAGACCCCAGAGGGCACCCCCAGCTAGGCAGAGGGGAAAGGATCACTATGGGGTAGGGGTGTGGGCCGGTTGCCAAGCCCAGTTTAGGGACCCCACAGATCCCTGCAGCCCACGGCCCTGCCTCCCTCCCTCCCTCACTGGCGCTCAGCAGATCAATGCTGCCTTTGCTGACAGCTGAGAATCGAGCTCGCCTTCCCGCCCCTTCCCCCGCCCCTCCCGCTCGGCTTCGTCCCTCGAGATCCTCCCGGAGGAACCGGGAAGAGTTTGCTGCGGAAGGCTCACCCTGGGGCAGGGCCTGCGGAGGGAGCGGCTGGTGTGGCCGCAGCTTTCCGTGGAGGAAGAGGGAAAGAGGATCGGGAAACCCAAGTTACCAACCCTGTGCAGGGCCCAGGAGGGCTAAAGGAGAGGGACTGCCCCCTACAGCCAGAGAGATGGAGGTCGGGGACTAAGAAAAACTTTCCAGCTGGAGAGGGAATGCCCTGGGACAAAGTATCCCCTTTTCTGGCTGGGATTCTGTGGGCCTTGGGTAGGGGGTGTGTGTCCCCTCTAAGGCTGGCTTAGAGCTCATCTCCCAACACTCCATCTGCCCAAACCCAGTTCCCTGACCTGGGAGTGGGGCAGGGGAGCAGGCCCCTCCATCGGGGAGGATCCTCTTCTGGGCAGGGTGGCTCTTCCCCCATCACGATGAAGGGAAGCTCAGAGGTGGCAGTTGGTGGGAGAAAGACACACCCAGGCCCACTGTGTTCCACACACCCTGATGCTGCCTAGCAGCCCGTGGGCTCCAGGCCTTTCAGGTAAGAGCAGGACAACCGCCGCTGCCCACCCAGCCACACACAGCACTGGGCACACTTTAAGCACCCGCACCAGGCACACAGTGCTCGACCCCAACGGACACACCTCATCCCCTTCGGACTCCACCTCCACTTTCGCAGCCACCCACACCCGACCCATAACTCACACCTCACTGACTCCATCCCCGCACCTGGTAGACCCACAGCCACCCACCCTGCACACACAAGTAGACGCCGTTCCACCGGTCTACACCTAAACTCCACGGGACACTGCGTCCCTTCCCCTGCCGCCCGCGGCCACAACTCCACATTCCACTTTCCACAAGCACACACGAGGCGTCCCACCCCGGGCTGGCCTTCGGGGCCACACTGCCCCACGCAGCGGTGGACACCACTTGCACGCGTCCGGCTTCCCGGCCCCGCGCGCTGCCCCCGCCACGCGGTTCGGCCCAGGCACCAACTCGGCCGCCCGTGCGCCCTGCCCCGCCGCCTGCTCCGCGCGTTCCCTCCCTCCGCCTCGCCTCGCTTGCTCGCTCGCTCCCTCCCGATTTGGGAAGGCGGCCGCGGGGCGGGCGGGGGAGGGGCGGGGCGGGGGAGGGT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包括非轉譯區之例示性人類 KCNQ4 轉錄物變體 1 cDNA 序列 (SEQ ID NO: 6) GACATGTGAGCGGCGCGCGCCGGTGGCAGGTGGAAAGGCGAGCGGCATGGAGCGCGTAATAAGAGAGTTGGAGTCGGAAAGAGCAGCCCCAGTCGCCGGGGAAGCGGGAGGTCAGTGCGGGCTCCGGCGGCCCCCAGGCTCCGAGCGCCCGCCCGCGGCCCCGGCCCGGCCCCTAGCCCCCGCCGCCCGCGCCCGCCCCGGGTCGCCCCTCTGGCCCCGGGTCCGAGCCATGCGTCTCTGAGCGCCCCGAGCGCGCCCCCGCCCCGGACCGTGCCCGGGCCCCGGCGCCCCCAGCCCGGCGCCGCCCATGGCCGAGGCCCCCCCGCGCCGCCTCGGCCTGGGTCCCCCGCCCGGGGACGCCCCCCGCGCGGAGCTAGTGGCGCTCACGGCCGTGCAGAGCGAACAGGGCGAGGCGGGCGGGGGCGGCTCCCCGCGCCGCCTCGGCCTCCTGGGCAGCCCCCTGCCGCCGGGCGCGCCCCTCCCTGGGCCGGGCTCCGGCTCGGGCTCCGCCTGCGGCCAGCGCTCCTCGGCCGCGCACAAGCGCTACCGCCGCCTGCAGAACTGGGTCTACAACGTGCTGGAGCGGCCCCGCGGCTGGGCCTTCGTCTACCACGTCTTCATATTTTTGCTGGTCTTCAGCTGCCTGGTGCTGTCTGTGCTGTCCACTATCCAGGAGCACCAGGAACTTGCCAACGAGTGTCTCCTCATCTTGGAATTCGTGATGATCGTGGTTTTCGGCTTGGAGTACATCGTCCGGGTCTGGTCCGCCGGATGCTGCTGCCGCTACCGAGGATGGCAGGGTCGCTTCCGCTTTGCCAGAAAGCCCTTCTGTGTCATCGACTTCATCGTGTTCGTGGCCTCGGTGGCCGTCATCGCCGCGGGTACCCAGGGCAACATCTTCGCCACGTCCGCGCTGCGCAGCATGCGCTTCCTGCAGATCCTGCGCATGGTGCGCATGGACCGCCGCGGCGGCACCTGGAAGCTGCTGGGCTCAGTGGTCTACGCGCATAGCAAGGAGCTGATCACCGCCTGGTACATCGGGTTCCTGGTGCTCATCTTCGCCTCCTTCCTGGTCTACCTGGCTGAGAAGGACGCCAACTCCGACTTCTCCTCCTACGCCGACTCGCTCTGGTGGGGGACGATTACATTGACAACCATCGGCTATGGTGACAAGACACCGCACACATGGCTGGGCAGGGTCCTGGCTGCTGGCTTCGCCTTACTGGGCATCTCTTTCTTTGCCCTGCCTGCCGGCATCCTAGGCTCCGGCTTTGCCCTGAAGGTCCAGGAGCAGCACCGGCAGAAGCACTTCGAGAAGCGGAGGATGCCGGCAGCCAACCTCATCCAGGCTGCCTGGCGCCTGTACTCCACCGATATGAGCCGGGCCTACCTGACAGCCACCTGGTACTACTATGACAGTATCCTCCCATCCTTCAGAGAGCTGGCCCTCTTGTTTGAGCACGTGCAACGGGCCCGCAATGGGGGCCTACGGCCCCTGGAGGTGCGGCGGGCGCCGGTACCCGACGGAGCACCCTCCCGTTACCCGCCCGTTGCCACCTGCCACCGGCCGGGCAGCACCTCCTTCTGCCCTGGGGAAAGCAGCCGGATGGGCATCAAAGACCGCATCCGCATGGGCAGCTCCCAGCGGCGGACGGGTCCTTCCAAGCAGCATCTGGCACCTCCAACAATGCCCACCTCCCCAAGCAGCGAGCAGGTGGGTGAGGCCACCAGCCCCACCAAGGTGCAAAAGAGCTGGAGCTTCAATGACCGCACCCGCTTCCGGGCATCTCTGAGACTCAAACCCCGCACCTCTGCTGAGGATGCCCCCTCAGAGGAAGTAGCAGAGGAGAAGAGCTACCAGTGTGAGCTCACGGTGGACGACATCATGCCTGCTGTGAAGACAGTCATCCGCTCCATCAGGATTCTCAAGTTCCTGGTGGCCAAAAGGAAATTCAAGGAGACACTGCGACCGTACGACGTGAAGGACGTCATTGAGCAGTACTCAGCAGGCCACCTGGACATGCTGGGCCGGATCAAGAGCCTGCAAACTCGGGTGGACCAAATTGTGGGTCGGGGGCCCGGGGACAGGAAGGCCCGGGAGAAGGGCGACAAGGGGCCCTCCGACGCGGAGGTGGTGGATGAAATCAGCATGATGGGACGCGTGGTCAAGGTGGAGAAGCAGGTGCAGTCCATCGAGCACAAGCTGGACCTGCTGTTGGGCTTCTATTCGCGCTGCCTGCGCTCTGGCACCTCGGCCAGCCTGGGCGCCGTGCAAGTGCCGCTGTTCGACCCCGACATCACCTCCGACTACCACAGCCCTGTGGACCACGAGGACATCTCCGTCTCCGCACAGACGCTCAGCATCTCCCGCTCGGTCAGCACCAACATGGACTGAGGGACTTCTCAGAGGCAGGGCAGCACACGGCCAGCCCCGCGGCCTGGCGCTCCGACTGCCCTCTGAGGCCTCCGGACTCCTCTCGTACTTGAACTCACTCCCTCACGGGGAGAGAGACCACACGCAGTATTGAGCTGCCTGAGTGGGCGTGGTACCTGCTGTGGGTGCCAGCGCCCCTTCCCCACCTCAGGAGCGTGAGATGCCAGGTCGCACAGAGGGCAGCAGCAGCGGCCGTCCCGCGGCCTCTGGGCCCCCCAGTGCCCTGCCCACTCCATCAAGGCCCTATGTGGCCCACCTGGCAGGGGCACAGCCCCGGGAGTGGGAGCGGGCGCTGGGGCCCTGGGCCCTGACCCAGCTTCCAGCTATGCAAGGTGAGGTCTCTGGCCCACCCTTCGGACACAGCAGGGAAGCCCTCCCGCCAAGTCCCCGCCCCACTTGGGGGTGGGCCAAGGTGCCCCCACAGGTACCCACAAAGCACAGGACCCTGCCACAAGGCAGGTGGACACCATATATGCAAACCATGTTAAATATGCAACTTTGGGGACCCCCATGGGGTCTCTCTGTCCCTCCCCCATTGGGAGCTGGGCCCCCAGCAGTAGCTGGTCTCAGGCTGCTTGGCCACCACCCTGTCCCTATTCTTTGGCTTATCACTCCTTCCCCTCCCAGCATGGGGCCTGTTTCTCCCCTGCCCTCTCCTAAGGGCAATGCCTGGGCCTTTCTTCCCATTTGCAAGTGTCAGCTCCCAGGGGCTCCCTCCTCCTGCTGGGTGGCCACTCCCCTCCTTGGCCCTCCAGACACCACTCATAGTCAGCACAGGTTTCTGTATCCTCCCCAAAACTCCCAGACAGTGCTTCGTGGACGATCGCACAAACATAGCCTTTTAGTTTCTCCAGACAGGAAGAAAGCCTCTCACACTTAAACATGCAATGACGTGACACACTTGGAGACATGAGTGCAGAGCCACTCAGCCGCTCCTGGGCCTCTGCAGCAGATGCCAGTGGACTGGCCTTGCAGGGTGACGACCACTAAGAGGAAGACCCCCAACTCCATCTGAGCAGGAGAAGGAGCTTTGAAGTAACCCGAGAGCTCTCCAGGCCCCACCCAGACCTTTACCCGCTCCCCTTCTTCAAGAAGATCTCCTCCTCTCTGGTCCAGGAGCCCTAACCCACTGCCTCTGCCTGTCCCCAAGGGCCCGCCTCCGTGTCTCCACAGCACAACTCGGGCCCAGGCCTGACACCACTGGAGAGACCCCAGGCCCACTTCTAGCCAGGCCTGTGCCTTCCTAGTCACTCTAACTCCCAGAGAGAATAAGAATGCATGTAATAGCTATACCAACCGCGCATCCGGCTTTCACATGCACTGTCTCCCCTCCCTCCACACCCCACTTCTTCACTTCAATTGGCAGCGCCACATCCAGGCGTCAGCCCCCATTCACTCCAGGAACACTTTCTTATCCCCACCCCTTTGCTCCTCTTCTGCAAAGCCAATGCAGGTGGCAGGAAGGTGAGGGGTAGTGGACCAATGGCAACCCTCTGTGGGAACAAGGGGCCGAGGCCACGCTGCCTGCATCTCGTGCTGGGGACCTGCATGCGCCAGCACCAGGGCTTGGACTGGATCTTACTCAGTCCATGGTGCCCAGCCTCTGCCCCAACATGCCCTCTGCATGTGACCGTCATGCCCTGGATGGAGCCACTCCTGGCTCACCCCACCTGCACTGCACTGTCCCCAGAGAGCCACCCCTCCACCCACTCAGAGACAGCTGTGGAGAGGGCCAGGAGAATGGGATTACCCTATGACCAAGGAGACATGGGAAGAAGCCCTCCTTCCTTCCACGATCGAGGTTCCGCCATCAACTCGGTTCTCGGATATGCAAGTACCTCACTTTGTTAACTTATTAACTTATTGGTTTCATTAAAGTTTTCAAGAGGA
包括非轉譯區之例示性人類 KCNQ4 轉錄物變體 2 cDNA 序列 (SEQ ID NO: 7) GACATGTGAGCGGCGCGCGCCGGTGGCAGGTGGAAAGGCGAGCGGCATGGAGCGCGTAATAAGAGAGTTGGAGTCGGAAAGAGCAGCCCCAGTCGCCGGGGAAGCGGGAGGTCAGTGCGGGCTCCGGCGGCCCCCAGGCTCCGAGCGCCCGCCCGCGGCCCCGGCCCGGCCCCTAGCCCCCGCCGCCCGCGCCCGCCCCGGGTCGCCCCTCTGGCCCCGGGTCCGAGCCATGCGTCTCTGAGCGCCCCGAGCGCGCCCCCGCCCCGGACCGTGCCCGGGCCCCGGCGCCCCCAGCCCGGCGCCGCCCATGGCCGAGGCCCCCCCGCGCCGCCTCGGCCTGGGTCCCCCGCCCGGGGACGCCCCCCGCGCGGAGCTAGTGGCGCTCACGGCCGTGCAGAGCGAACAGGGCGAGGCGGGCGGGGGCGGCTCCCCGCGCCGCCTCGGCCTCCTGGGCAGCCCCCTGCCGCCGGGCGCGCCCCTCCCTGGGCCGGGCTCCGGCTCGGGCTCCGCCTGCGGCCAGCGCTCCTCGGCCGCGCACAAGCGCTACCGCCGCCTGCAGAACTGGGTCTACAACGTGCTGGAGCGGCCCCGCGGCTGGGCCTTCGTCTACCACGTCTTCATATTTTTGCTGGTCTTCAGCTGCCTGGTGCTGTCTGTGCTGTCCACTATCCAGGAGCACCAGGAACTTGCCAACGAGTGTCTCCTCATCTTGGAATTCGTGATGATCGTGGTTTTCGGCTTGGAGTACATCGTCCGGGTCTGGTCCGCCGGATGCTGCTGCCGCTACCGAGGATGGCAGGGTCGCTTCCGCTTTGCCAGAAAGCCCTTCTGTGTCATCGACTTCATCGTGTTCGTGGCCTCGGTGGCCGTCATCGCCGCGGGTACCCAGGGCAACATCTTCGCCACGTCCGCGCTGCGCAGCATGCGCTTCCTGCAGATCCTGCGCATGGTGCGCATGGACCGCCGCGGCGGCACCTGGAAGCTGCTGGGCTCAGTGGTCTACGCGCATAGCAAGGAGCTGATCACCGCCTGGTACATCGGGTTCCTGGTGCTCATCTTCGCCTCCTTCCTGGTCTACCTGGCTGAGAAGGACGCCAACTCCGACTTCTCCTCCTACGCCGACTCGCTCTGGTGGGGGACGATTACATTGACAACCATCGGCTATGGTGACAAGACACCGCACACATGGCTGGGCAGGGTCCTGGCTGCTGGCTTCGCCTTACTGGGCATCTCTTTCTTTGCCCTGCCTGCCGGCATCCTAGGCTCCGGCTTTGCCCTGAAGGTCCAGGAGCAGCACCGGCAGAAGCACTTCGAGAAGCGGAGGATGCCGGCAGCCAACCTCATCCAGGCTGCCTGGCGCCTGTACTCCACCGATATGAGCCGGGCCTACCTGACAGCCACCTGGTACTACTATGACAGTATCCTCCCATCCTTCAGCAGCCGGATGGGCATCAAAGACCGCATCCGCATGGGCAGCTCCCAGCGGCGGACGGGTCCTTCCAAGCAGCATCTGGCACCTCCAACAATGCCCACCTCCCCAAGCAGCGAGCAGGTGGGTGAGGCCACCAGCCCCACCAAGGTGCAAAAGAGCTGGAGCTTCAATGACCGCACCCGCTTCCGGGCATCTCTGAGACTCAAACCCCGCACCTCTGCTGAGGATGCCCCCTCAGAGGAAGTAGCAGAGGAGAAGAGCTACCAGTGTGAGCTCACGGTGGACGACATCATGCCTGCTGTGAAGACAGTCATCCGCTCCATCAGGATTCTCAAGTTCCTGGTGGCCAAAAGGAAATTCAAGGAGACACTGCGACCGTACGACGTGAAGGACGTCATTGAGCAGTACTCAGCAGGCCACCTGGACATGCTGGGCCGGATCAAGAGCCTGCAAACTCGGGTGGACCAAATTGTGGGTCGGGGGCCCGGGGACAGGAAGGCCCGGGAGAAGGGCGACAAGGGGCCCTCCGACGCGGAGGTGGTGGATGAAATCAGCATGATGGGACGCGTGGTCAAGGTGGAGAAGCAGGTGCAGTCCATCGAGCACAAGCTGGACCTGCTGTTGGGCTTCTATTCGCGCTGCCTGCGCTCTGGCACCTCGGCCAGCCTGGGCGCCGTGCAAGTGCCGCTGTTCGACCCCGACATCACCTCCGACTACCACAGCCCTGTGGACCACGAGGACATCTCCGTCTCCGCACAGACGCTCAGCATCTCCCGCTCGGTCAGCACCAACATGGACTGAGGGACTTCTCAGAGGCAGGGCAGCACACGGCCAGCCCCGCGGCCTGGCGCTCCGACTGCCCTCTGAGGCCTCCGGACTCCTCTCGTACTTGAACTCACTCCCTCACGGGGAGAGAGACCACACGCAGTATTGAGCTGCCTGAGTGGGCGTGGTACCTGCTGTGGGTGCCAGCGCCCCTTCCCCACCTCAGGAGCGTGAGATGCCAGGTCGCACAGAGGGCAGCAGCAGCGGCCGTCCCGCGGCCTCTGGGCCCCCCAGTGCCCTGCCCACTCCATCAAGGCCCTATGTGGCCCACCTGGCAGGGGCACAGCCCCGGGAGTGGGAGCGGGCGCTGGGGCCCTGGGCCCTGACCCAGCTTCCAGCTATGCAAGGTGAGGTCTCTGGCCCACCCTTCGGACACAGCAGGGAAGCCCTCCCGCCAAGTCCCCGCCCCACTTGGGGGTGGGCCAAGGTGCCCCCACAGGTACCCACAAAGCACAGGACCCTGCCACAAGGCAGGTGGACACCATATATGCAAACCATGTTAAATATGCAACTTTGGGGACCCCCATGGGGTCTCTCTGTCCCTCCCCCATTGGGAGCTGGGCCCCCAGCAGTAGCTGGTCTCAGGCTGCTTGGCCACCACCCTGTCCCTATTCTTTGGCTTATCACTCCTTCCCCTCCCAGCATGGGGCCTGTTTCTCCCCTGCCCTCTCCTAAGGGCAATGCCTGGGCCTTTCTTCCCATTTGCAAGTGTCAGCTCCCAGGGGCTCCCTCCTCCTGCTGGGTGGCCACTCCCCTCCTTGGCCCTCCAGACACCACTCATAGTCAGCACAGGTTTCTGTATCCTCCCCAAAACTCCCAGACAGTGCTTCGTGGACGATCGCACAAACATAGCCTTTTAGTTTCTCCAGACAGGAAGAAAGCCTCTCACACTTAAACATGCAATGACGTGACACACTTGGAGACATGAGTGCAGAGCCACTCAGCCGCTCCTGGGCCTCTGCAGCAGATGCCAGTGGACTGGCCTTGCAGGGTGACGACCACTAAGAGGAAGACCCCCAACTCCATCTGAGCAGGAGAAGGAGCTTTGAAGTAACCCGAGAGCTCTCCAGGCCCCACCCAGACCTTTACCCGCTCCCCTTCTTCAAGAAGATCTCCTCCTCTCTGGTCCAGGAGCCCTAACCCACTGCCTCTGCCTGTCCCCAAGGGCCCGCCTCCGTGTCTCCACAGCACAACTCGGGCCCAGGCCTGACACCACTGGAGAGACCCCAGGCCCACTTCTAGCCAGGCCTGTGCCTTCCTAGTCACTCTAACTCCCAGAGAGAATAAGAATGCATGTAATAGCTATACCAACCGCGCATCCGGCTTTCACATGCACTGTCTCCCCTCCCTCCACACCCCACTTCTTCACTTCAATTGGCAGCGCCACATCCAGGCGTCAGCCCCCATTCACTCCAGGAACACTTTCTTATCCCCACCCCTTTGCTCCTCTTCTGCAAAGCCAATGCAGGTGGCAGGAAGGTGAGGGGTAGTGGACCAATGGCAACCCTCTGTGGGAACAAGGGGCCGAGGCCACGCTGCCTGCATCTCGTGCTGGGGACCTGCATGCGCCAGCACCAGGGCTTGGACTGGATCTTACTCAGTCCATGGTGCCCAGCCTCTGCCCCAACATGCCCTCTGCATGTGACCGTCATGCCCTGGATGGAGCCACTCCTGGCTCACCCCACCTGCACTGCACTGTCCCCAGAGAGCCACCCCTCCACCCACTCAGAGACAGCTGTGGAGAGGGCCAGGAGAATGGGATTACCCTATGACCAAGGAGACATGGGAAGAAGCCCTCCTTCCTTCCACGATCGAGGTTCCGCCATCAACTCGGTTCTCGGATATGCAAGTACCTCACTTTGTTAACTTATTAACTTATTGGTTTCATTAAAGTTTTCAAGAGGA
包括非轉譯區之例示性人類 KCNQ4 轉錄物 X1 cDNA 序列 (SEQ ID NO: 8) GACCACTCGTACCACAAAGTGGGCAGCTGAGGAGCTGATCACCGCCTGGTACATCGGGTTCCTGGTGCTCATCTTCGCCTCCTTCCTGGTCTACCTGGCTGAGAAGGACGCCAACTCCGACTTCTCCTCCTACGCCGACTCGCTCTGGTGGGGGACGATTACATTGACAACCATCGGCTATGGTGACAAGACACCGCACACATGGCTGGGCAGGGTCCTGGCTGCTGGCTTCGCCTTACTGGGCATCTCTTTCTTTGCCCTGCCTGCCGGCATCCTAGGCTCCGGCTTTGCCCTGAAGGTCCAGGAGCAGCACCGGCAGAAGCACTTCGAGAAGCGGAGGATGCCGGCAGCCAACCTCATCCAGGCTGCCTGGCGCCTGTACTCCACCGATATGAGCCGGGCCTACCTGACAGCCACCTGGTACTACTATGACAGTATCCTCCCATCCTTCAGAGAGCTGGCCCTCTTGTTTGAGCACGTGCAACGGGCCCGCAATGGGGGCCTACGGCCCCTGGAGGTGCGGCGGGCGCCGGTACCCGACGGAGCACCCTCCCGTTACCCGCCCGTTGCCACCTGCCACCGGCCGGGCAGCACCTCCTTCTGCCCTGGGGAAAGCAGCCGGATGGGCATCAAAGACCGCATCCGCATGGGCAGCTCCCAGCGGCGGACGGGTCCTTCCAAGCAGCATCTGGCACCTCCAACAATGCCCACCTCCCCAAGCAGCGAGCAGGTGGGTGAGGCCACCAGCCCCACCAAGGTGCAAAAGAGCTGGAGCTTCAATGACCGCACCCGCTTCCGGGCATCTCTGAGACTCAAACCCCGCACCTCTGCTGAGGATGCCCCCTCAGAGGAAGTAGCAGAGGAGAAGAGCTACCAGTGTGAGCTCACGGTGGACGACATCATGCCTGCTGTGAAGACAGTCATCCGCTCCATCAGGATTCTCAAGTTCCTGGTGGCCAAAAGGAAATTCAAGGAGACACTGCGACCGTACGACGTGAAGGACGTCATTGAGCAGTACTCAGCAGGCCACCTGGACATGCTGGGCCGGATCAAGAGCCTGCAAACTCGGGTGGACCAAATTGTGGGTCGGGGGCCCGGGGACAGGAAGGCCCGGGAGAAGGGCGACAAGGGGCCCTCCGACGCGGAGGTGGTGGATGAAATCAGCATGATGGGACGCGTGGTCAAGGTGGAGAAGCAGGTGCAGTCCATCGAGCACAAGCTGGACCTGCTGTTGGGCTTCTATTCGCGCTGCCTGCGCTCTGGCACCTCGGCCAGCCTGGGCGCCGTGCAAGTGCCGCTGTTCGACCCCGACATCACCTCCGACTACCACAGCCCTGTGGACCACGAGGACATCTCCGTCTCCGCACAGACGCTCAGCATCTCCCGCTCGGTCAGCACCAACATGGACTGAGGGACTTCTCAGAGGCAGGGCAGCACACGGCCAGCCCCGCGGCCTGGCGCTCCGACTGCCCTCTGAGGCCTCCGGACTCCTCTCGTACTTGAACTCACTCCCTCACGGGGAGAGAGACCACACGCAGTATTGAGCTGCCTGAGTGGGCGTGGTACCTGCTGTGGGTGCCAGCGCCCCTTCCCCACCTCAGGAGCGTGAGATGCCAGGTCGCACAGAGGGCAGCAGCAGCGGCCGTCCCGCGGCCTCTGGGCCCCCCAGTGCCCTGCCCACTCCATCAAGGCCCTATGTGGCCCACCTGGCAGGGGCACAGCCCCGGGAGTGGGAGCGGGCGCTGGGGCCCTGGGCCCTGACCCAGCTTCCAGCTATGCAAGGTGAGGTCTCTGGCCCACCCTTCGGACACAGCAGGGAAGCCCTCCCGCCAAGTCCCCGCCCCACTTGGGGGTGGGCCAAGGTGCCCCCACAGGTACCCACAAAGCACAGGACCCTGCCACAAGGCAGGTGGACACCATATATGCAAACCATGTTAAATATGCAACTTTGGGGACCCCCATGGGGTCTCTCTGTCCCTCCCCCATTGGGAGCTGGGCCCCCAGCAGTAGCTGGTCTCAGGCTGCTTGGCCACCACCCTGTCCCTATTCTTTGGCTTATCACTCCTTCCCCTCCCAGCATGGGGCCTGTTTCTCCCCTGCCCTCTCCTAAGGGCAATGCCTGGGCCTTTCTTCCCATTTGCAAGTGTCAGCTCCCAGGGGCTCCCTCCTCCTGCTGGGTGGCCACTCCCCTCCTTGGCCCTCCAGACACCACTCATAGTCAGCACAGGTTTCTGTATCCTCCCCAAAACTCCCAGACAGTGCTTCGTGGACGATCGCACAAACATAGCCTTTTAGTTTCTCCAGACAGGAAGAAAGCCTCTCACACTTAAACATGCAATGACGTGACACACTTGGAGACATGAGTGCAGAGCCACTCAGCCGCTCCTGGGCCTCTGCAGCAGATGCCAGTGGACTGGCCTTGCAGGGTGACGACCACTAAGAGGAAGACCCCCAACTCCATCTGAGCAGGAGAAGGAGCTTTGAAGTAACCCGAGAGCTCTCCAGGCCCCACCCAGACCTTTACCCGCTCCCCTTCTTCAAGAAGATCTCCTCCTCTCTGGTCCAGGAGCCCTAACCCACTGCCTCTGCCTGTCCCCAAGGGCCCGCCTCCGTGTCTCCACAGCACAACTCGGGCCCAGGCCTGACACCACTGGAGAGACCCCAGGCCCACTTCTAGCCAGGCCTGTGCCTTCCTAGTCACTCTAACTCCCAGAGAGAATAAGAATGCATGTAATAGCTATACCAACCGCGCATCCGGCTTTCACATGCACTGTCTCCCCTCCCTCCACACCCCACTTCTTCACTTCAATTGGCAGCGCCACATCCAGGCGTCAGCCCCCATTCACTCCAGGAACACTTTCTTATCCCCACCCCTTTGCTCCTCTTCTGCAAAGCCAATGCAGGTGGCAGGAAGGTGAGGGGTAGTGGACCAATGGCAACCCTCTGTGGGAACAAGGGGCCGAGGCCACGCTGCCTGCATCTCGTGCTGGGGACCTGCATGCGCCAGCACCAGGGCTTGGACTGGATCTTACTCAGTCCATGGTGCCCAGCCTCTGCCCCAACATGCCCTCTGCATGTGACCGTCATGCCCTGGATGGAGCCACTCCTGGCTCACCCCACCTGCACTGCACTGTCCCCAGAGAGCCACCCCTCCACCCACTCAGAGACAGCTGTGGAGAGGGCCAGGAGAATGGGATTACCCTATGACCAAGGAGACATGGGAAGAAGCCCTCCTTCCTTCCACGATCGAGGTTCCGCCATCAACTCGGTTCTCGGATATGCAAGTACCTCACTTTGTTAACTTATTAACTTATTGGTTTCATTAAAGTTTTCAAGAGGAGGTGA
KCNQ4 ( 經密碼子最佳化；使 gRNA 結合達最小 )(SEQ ID NO: 9) ATGGCTGAAGCCCCTCCTAGAAGGCTTGGACTGGGACCTCCTCCTGGGGATGCTCCTAGAGCTGAACTGGTGGCTCTGACAGCCGTGCAGTCTGAACAAGGCGAAGCTGGTGGCGGCGGATCTCCACGTAGACTTGGACTGCTGGGAAGCCCTCTTCCTCCTGGTGCTCCACTTCCTGGACCTGGCAGTGGATCTGGATCTGCCTGTGGCCAGAGAAGCTCTGCCGCTCACAAGAGATACCGGCGGCTGCAGAACTGGGTGTACAACGTGCTGGAAAGACCCAGAGGCTGGGCCTTCGTGTACCACGTGTTCATCTTTCTGCTGGTGTTCAGCTGCCTGGTGCTGTCCGTGCTGAGCACCATCCAAGAACATCAAGAGCTGGCTAACGAGTGCCTGTTAATACTGGAGTTTGTGATGATTGTGGTGTTCGGCCTCGAGTACATCGTCCGCGTTTGGAGCGCCGGCTGCTGCTGCAGATATAGAGGTTGGCAAGGCAGATTCCGCTTCGCCAGAAAGCCCTTCTGCGTGATCGACTTCATCGTGTTCGTGGCCAGCGTGGCCGTGATTGCTGCTGGCACACAGGGCAACATCTTCGCCACAAGCGCCCTGCGGAGCATGCGGTTTCTGCAGATCCTGAGAATGGTCCGAATGGACAGAAGAGGCGGCACCTGGAAGCTGCTGGGCTCTGTGGTGTACGCCCACAGCAAAGAGCTGATCACCGCCTGGTACATCGGATTTCTGGTGCTGATCTTCGCCTCCTTCCTGGTGTACCTGGCCGAGAAGGACGCCAACAGCGACTTTAGCAGCTACGCCGACTCTCTTTGGTGGGGCACCATCACACTGACCACCATCGGCTACGGCGACAAGACCCCTCACACATGGCTGGGAAGAGTGCTGGCCGCTGGATTTGCTCTGCTGGGCATCAGCTTTTTCGCCCTGCCTGCCGGAATCCTCGGATCTGGCTTTGCCCTGAAGGTGCAAGAGCAGCACCGGCAGAAGCACTTCGAGAAGAGAAGAATGCCTGCCGCCAACCTGATTCAGGCCGCTTGGAGACTGTACAGCACCGACATGAGCAGAGCCTACCTGACCGCCACGTGGTATTATTACGACTCGATCCTGCCTAGCTTCCGCGAACTGGCCCTGCTGTTTGAGCATGTGCAGAGAGCCAGAAACGGCGGCCTCAGACCTCTGGAAGTTCGGAGAGCACCTGTGCCTGATGGCGCCCCTTCTAGATATCCTCCAGTGGCCACCTGTCACAGACCCGGCAGCACATCTTTTTGCCCTGGCGAGTCTAGCCGGATGGGCATCAAGGACAGAATCAGAATGGGCAGCAGCCAGCGGAGAACAGGCCCTTCTAAACAGCATCTGGCCCCTCCAACCATGCCTACAAGCCCTAGCTCTGAGCAAGTGGGCGAAGCCACCTCTCCTACCAAGGTGCAGAAGTCCTGGTCCTTCAACGACCGGACCAGATTCAGAGCCAGCCTGAGACTGAAGCCCAGAACCTCTGCCGAGGATGCCCCTTCTGAAGAGGTGGCCGAAGAGAAGTCCTACCAGTGCGAGCTGACCGTGGACGACATCATGCCAGCCGTGAAAACCGTGATACGGTCTATCCGGATCCTGAAGTTCCTGGTGGCCAAGCGGAAGTTCAAAGAGACACTGCGGCCCTACGACGTGAAGGACGTGATCGAGCAGTATTCTGCCGGCCACCTGGACATGCTGGGCAGAATCAAGAGCCTGCAGACCAGAGTGGACCAGATCGTTGGAAGAGGCCCAGGCGACAGAAAGGCCAGAGAGAAGGGCGATAAGGGCCCATCTGATGCCGAGGTTGTCGACGAGATATCAATGATGGGCAGAGTGGTCAAGGTGGAAAAACAGGTGCAGAGCATCGAGCACAAGCTGGACCTGCTGCTGGGATTCTACAGCCGGTGTCTGAGAAGCGGCACATCTGCATCTCTGGGCGCTGTGCAGGTCCCACTGTTCGACCCTGATATCACCAGCGACTATCACAGCCCCGTGGACCACGAGGACATCTCCGTTTCTGCTCAGACCCTGAGCATCAGCAGATCCGTGTCCACCAACATGGAC
KCNQ4 ( 經密碼子最佳化以抵抗 miRNA 介導之降解 )(SEQ ID NO: 10) ATGGCTGAAGCCCCTCCTAGAAGGCTTGGACTGGGACCTCCTCCTGGGGATGCTCCTAGAGCTGAACTGGTGGCTCTGACAGCCGTGCAGTCTGAACAAGGCGAAGCTGGTGGCGGCGGATCTCCACGTAGACTTGGACTGCTGGGAAGCCCTCTTCCTCCTGGTGCTCCACTTCCTGGACCTGGCAGTGGATCTGGATCTGCCTGTGGCCAGAGAAGCTCTGCCGCTCACAAGAGATACCGGCGGCTGCAGAACTGGGTGTACAACGTGCTGGAAAGACCCAGAGGCTGGGCCTTCGTGTACCACGTGTTCATCTTTCTGCTGGTGTTCAGCTGCCTGGTGCTGTCCGTGCTGAGCACCATCCAAGAACATCAAGAGCTGGCTAACGAGTGCCTGTTAATACTGGAGTTTGTGATGATTGTGGTGTTCGGCCTCGAGTACATCGTCCGCGTTTGGAGCGCCGGCTGCTGCTGCAGATATAGAGGTTGGCAAGGCAGATTCCGCTTCGCCAGAAAGCCCTTCTGCGTGATCGACTTCATCGTGTTCGTGGCCAGCGTGGCCGTGATTGCTGCTGGCACACAGGGCAACATCTTCGCCACAAGCGCCCTGCGGAGCATGCGGTTTCTGCAGATCCTGAGAATGGTCCGAATGGACAGAAGAGGCGGCACCTGGAAGCTGCTGGGCTCTGTGGTGTACGCCCACAGCAAAGAGCTGATCACCGCCTGGTACATCGGATTTCTGGTGCTGATCTTCGCCTCCTTCCTGGTGTACCTGGCCGAGAAGGACGCCAACAGCGACTTTAGCAGCTACGCCGACTCTCTTTGGTGGGGCACCATCACACTGACCACCATCGGCTACGGCGACAAGACCCCTCACACATGGCTGGGAAGAGTGCTGGCCGCTGGATTTGCTCTGCTGGGCATCAGCTTTTTCGCCCTGCCTGCCGGAATCCTCGGATCTGGCTTTGCCCTGAAGGTGCAAGAGCAGCATAGACAAAAGCATTTTGAAAAGAGAAGAATGCCTGCCGCCAACCTGATTCAGGCCGCTTGGAGACTGTACAGCACCGACATGAGCAGAGCCTACCTGACCGCCACGTGGTATTATTACGATTCGATCCTGCCTAGCTTCCGCGAACTGGCCCTGCTGTTTGAGCATGTGCAGAGAGCCAGAAACGGCGGCCTCAGACCTCTGGAAGTTCGGAGAGCACCTGTGCCTGATGGCGCCCCTTCTAGATATCCTCCAGTGGCCACCTGTCACAGACCCGGCAGCACATCTTTTTGCCCTGGCGAGTCTAGCCGGATGGGCATCAAGGACAGAATCAGAATGGGCAGCAGCCAGCGGAGAACAGGCCCTTCTAAACAGCATCTGGCCCCTCCAACCATGCCTACAAGCCCTAGCTCTGAGCAAGTGGGCGAAGCCACCTCTCCTACCAAGGTGCAGAAGTCCTGGTCCTTCAACGACCGGACCAGATTTAGAGCCAGCCTCCGGCTGAAGCCCAGAACCTCTGCCGAGGATGCCCCTTCTGAAGAGGTGGCCGAAGAGAAGTCCTACCAGTGCGAGCTGACCGTGGACGACATCATGCCAGCCGTGAAAACCGTGATAAGGTCTATACGCATCCTGAAGTTCCTGGTGGCCAAGCGGAAGTTCAAAGAGACACTGCGGCCCTACGACGTGAAGGACGTGATCGAGCAGTATTCTGCCGGCCACCTGGACATGCTGGGCAGAATCAAGAGCCTGCAGACCAGAGTGGACCAGATCGTTGGAAGAGGCCCAGGCGACAGAAAGGCCAGAGAGAAGGGCGATAAGGGCCCATCTGATGCCGAGGTTGTCGACGAGATATCAATGATGGGCAGAGTCGTGAAAGTCGAAAAACAGGTGCAGAGCATCGAGCACAAGCTGGACCTGCTGCTGGGATTCTACAGCCGGTGTCTGAGAAGCGGCACATCTGCATCTCTGGGCGCTGTGCAGGTCCCACTGTTCGATCCTGATATTACGAGCGATTATCACAGCCCCGTGGACCACGAGGACATCTCCGTTTCTGCTCAGACCCTGAGCATCAGCAGATCCGTGTCCACCAACATGGAC
例示性小鼠 KCNQ4成員 4 cDNA 編碼序列 (SEQ ID NO: 91) ATGGCCGAGGCCCCCCCGCGCCGCCTCGGCCTGGGCCCCCCGCCCGGGGACGCCCCCCGCGCGGAGTTGGTGGCGCTCACGGCCGTGCAGAGTGAACAGGGCGAGGCGGGCGGGGGCGGCTCTCCGCGTCGCCTCGGCCTTCTGGGCAGCCCCCTGCCGCCGGGCGCGCCCCTCCCTGGGCCGGGCTCCGGCTCGGGCTCCGCCTGCGGCGGCCAGCGCTCCTCCGCCGCGCAGAAGCGCTACCGCCGCCTGCAGAACTGGGTCTACAACGTGCTGGAGCGGCCCCGCGGGTGGGCCTTCGTCTACCACGTCTTCATATTTTTGCTAGTCTTCAGCTGCCTGGTGCTGTCTGTACTGTCCACCATCCAGGAGCACCAGGAACTTGCCAACGAGTGTCTCCTTATCTTGGAATTCGTGATGATTGTGGTCTTTGGCTTGGAGTATATAATCCGTGTCTGGTCGGCCGGATGCTGTTGTCGCTACAGAGGATGGCAGGGACGCTTTCGCTTCGCCAGGAAACCCTTCTGTGTCATCGACTTCATCGTGTTCGTGGCCTCGGTGGCAGTGATAGCTGCGGGCACACAAGGCAACATCTTTGCTACGTCCGCGTTGCGCAGTATGCGCTTCCTACAGATCCTGCGCATGGTGCGTATGGATCGCCGCGGTGGCACCTGGAAGCTGTTGGGATCCGTGGTCTATGCGCACAGTAAGGAGCTGATCACCGCCTGGTACATCGGGTTCCTGGTGCTCATCTTTGCCTCTTTCCTGGTCTACCTGGCTGAGAAGGATGCCAACTCTGACTTCTCCTCCTATGCCGACTCGCTCTGGTGGGGGACGATCACACTGACGACCATTGGCTATGGTGACAAGACGCCACATACATGGCTGGGCAGGGTTCTGGCTGCCGGCTTCGCCTTACTGGGCATCTCCTTCTTTGCCCTGCCTGCCGGCATCCTGGGCTCTGGCTTTGCCCTGAAGGTCCAGGAGCAGCACAGGCAGAAGCACTTTGAGAAGCGCAGGATGCCAGCAGCTAATCTCATCCAGGCTGCGTGGCGCCTGTACTCCACGGACACAAGCCGGGCCTATTTGACAGCCACCTGGTATTACTATGACAGCATTCTCCCATCTTTCAGAGAGCTGGCCCTCTTGTTTGAGCACATACAACGGGCCCGCAATGGGGGCTTACGGCCCCTGGAGGTGAGGCGGGCGCCAGTACCTGATGGAGCGCCCTCTCGCTACCCGCCCGTTGCCACCTGCCACCGGCCAGGCAGTGCCTCCTTCTGCCCTGGGGAAAGCAGCCGGATGGGCATCAAAGACCGAATCCGCATAAGCAGCTCCCAGAAGCGGACAGGCCCCTCCAAGCAGCATCTGGCCCCTCCGCCGATTCCCACCTCGCCAAGCAGTGAGCAGGTGGGCGAGGCATCCAGCCCCAGCAAGGTGCAGAAAAGCTGGAGCTTCAATGACCGCACCCGCTTCCGGGCCTCTCTAAGACTCAAGCCTCGCTGCTCTGCTGAGGAGGGCCCCTCAGAGGAAGTGGCCGAGGAGAAGAGCTACCAGTGTGAGCTTACGGTGGATGATGTCATGCCTGCTGTGAAGACGGTCATCCGTTCTGTCAGGATTCTGAAGTTCCTGGTAGCCAAAAGGAAATTCAAGGAGACGCTGCGGCCATATGATGTGAAGGATGTCATTGAGCAGTATTCAGCAGGACACCTGGACATGCTGGGACGAATCAAGAGCCTGCAAGCCCGGGTGGACCAAATTGTGGGTCGGGGCCCTGGGGACCGCAAGACTCGGGAGAAGGGCGATAAGGGTCCTTCAGACACGGAGGCAGTGGATGAAATCAGCATGATGGGGCGCGTAGTCAAGGTGGAAAAGCAGGTGCAGTCCATCGAACATAAGTTGGATCTGCTGCTGGGCTTCTACTCGCGCTGCCTCCGCTCTGGCACCTCGGCCAGCCTGGGCACTGTGCAAGTGCCGCTCTTCGACCCCGACATCACCTCGGACTACCACAGCCCTGTAGACCACGAGGACATCTCTGTCTCCGCACAGACGCTCAGCATCTCTCGCTCAGTCAGCACCAACATGGAC b. KCNQ4多肽
本揭示案尤其提供由KCNQ4基因或基因產物或其特徵部分編碼之多肽。在一些實施例中，KCNQ4基因為哺乳動物KCNQ4基因。在一些實施例中，KCNQ4基因為鼠類KCNQ4基因。在一些實施例中，KCNQ4基因為靈長類動物KCNQ4基因。在一些實施例中，KCNQ4基因為人類KCNQ4基因。
在一些實施例中，多肽包含Kv7.4蛋白或其特徵部分。在一些實施例中，Kv7.4蛋白或其特徵部分為哺乳動物Kv7.4蛋白或其特徵部分，例如靈長類動物Kv7.4蛋白或其特徵部分。在一些實施例中，Kv7.4蛋白或其特徵部分為人類Kv7.4蛋白或其特徵部分。
在一些實施例中，本文提供之多肽包含轉譯後修飾。在一些實施例中，本文提供之Kv7.4蛋白或其特徵部分包含轉譯後修飾。在一些實施例中，轉譯後修飾可包含但不限於糖基化(例如N連接之糖基化、O連接之糖基化)、磷酸化、乙醯化、醯胺化、羥基化、甲基化、泛素化、硫酸化及/或其組合。
作為非限制性實例，根據本揭示案之KCNQ4多肽可為或包含以下中之一或多者：
KCNQ4 例示性人類 KCNQ4 多肽同種型 A 序列 (SEQ ID NO: 11) MAEAPPRRLGLGPPPGDAPRAELVALTAVQSEQGEAGGGGSPRRLGLLGSPLPPGAPLPGPGSGSGSACGQRSSAAHKRYRRLQNWVYNVLERPRGWAFVYHVFIFLLVFSCLVLSVLSTIQEHQELANECLLILEFVMIVVFGLEYIVRVWSAGCCCRYRGWQGRFRFARKPFCVIDFIVFVASVAVIAAGTQGNIFATSALRSMRFLQILRMVRMDRRGGTWKLLGSVVYAHSKELITAWYIGFLVLIFASFLVYLAEKDANSDFSSYADSLWWGTITLTTIGYGDKTPHTWLGRVLAAGFALLGISFFALPAGILGSGFALKVQEQHRQKHFEKRRMPAANLIQAAWRLYSTDMSRAYLTATWYYYDSILPSFRELALLFEHVQRARNGGLRPLEVRRAPVPDGAPSRYPPVATCHRPGSTSFCPGESSRMGIKDRIRMGSSQRRTGPSKQHLAPPTMPTSPSSEQVGEATSPTKVQKSWSFNDRTRFRASLRLKPRTSAEDAPSEEVAEEKSYQCELTVDDIMPAVKTVIRSIRILKFLVAKRKFKETLRPYDVKDVIEQYSAGHLDMLGRIKSLQTRVDQIVGRGPGDRKAREKGDKGPSDAEVVDEISMMGRVVKVEKQVQSIEHKLDLLLGFYSRCLRSGTSASLGAVQVPLFDPDITSDYHSPVDHEDISVSAQTLSISRSVSTNMD
例示性人類 KCNQ4 多肽同種型 B 序列 (SEQ ID NO: 12) MAEAPPRRLGLGPPPGDAPRAELVALTAVQSEQGEAGGGGSPRRLGLLGSPLPPGAPLPGPGSGSGSACGQRSSAAHKRYRRLQNWVYNVLERPRGWAFVYHVFIFLLVFSCLVLSVLSTIQEHQELANECLLILEFVMIVVFGLEYIVRVWSAGCCCRYRGWQGRFRFARKPFCVIDFIVFVASVAVIAAGTQGNIFATSALRSMRFLQILRMVRMDRRGGTWKLLGSVVYAHSKELITAWYIGFLVLIFASFLVYLAEKDANSDFSSYADSLWWGTITLTTIGYGDKTPHTWLGRVLAAGFALLGISFFALPAGILGSGFALKVQEQHRQKHFEKRRMPAANLIQAAWRLYSTDMSRAYLTATWYYYDSILPSFSSRMGIKDRIRMGSSQRRTGPSKQHLAPPTMPTSPSSEQVGEATSPTKVQKSWSFNDRTRFRASLRLKPRTSAEDAPSEEVAEEKSYQCELTVDDIMPAVKTVIRSIRILKFLVAKRKFKETLRPYDVKDVIEQYSAGHLDMLGRIKSLQTRVDQIVGRGPGDRKAREKGDKGPSDAEVVDEISMMGRVVKVEKQVQSIEHKLDLLLGFYSRCLRSGTSASLGAVQVPLFDPDITSDYHSPVDHEDISVSAQTLSISRSVSTNMD
例示性人類 KCNQ4 多肽同種型 X1 序列 (SEQ ID NO: 13) MPAANLIQAAWRLYSTDMSRAYLTATWYYYDSILPSFRELALLFEHVQRARNGGLRPLEVRRAPVPDGAPSRYPPVATCHRPGSTSFCPGESSRMGIKDRIRMGSSQRRTGPSKQHLAPPTMPTSPSSEQVGEATSPTKVQKSWSFNDRTRFRASLRLKPRTSAEDAPSEEVAEEKSYQCELTVDDIMPAVKTVIRSIRILKFLVAKRKFKETLRPYDVKDVIEQYSAGHLDMLGRIKSLQTRVDQIVGRGPGDRKAREKGDKGPSDAEVVDEISMMGRVVKVEKQVQSIEHKLDLLLGFYSRCLRSGTSASLGAVQVPLFDPDITSDYHSPVDHEDISVSAQTLSISRSVSTNMD
例示性小鼠 KCNQ4 多肽成員 4 序列 (SEQ ID NO: 92) MAEAPPRRLGLGPPPGDAPRAELVALTAVQSEQGEAGGGGSPRRLGLLGSPLPPGAPLPGPGSGSGSACGGQRSSAAQKRYRRLQNWVYNVLERPRGWAFVYHVFIFLLVFSCLVLSVLSTIQEHQELANECLLILEFVMIVVFGLEYIIRVWSAGCCCRYRGWQGRFRFARKPFCVIDFIVFVASVAVIAAGTQGNIFATSALRSMRFLQILRMVRMDRRGGTWKLLGSVVYAHSKELITAWYIGFLVLIFASFLVYLAEKDANSDFSSYADSLWWGTITLTTIGYGDKTPHTWLGRVLAAGFALLGISFFALPAGILGSGFALKVQEQHRQKHFEKRRMPAANLIQAAWRLYSTDTSRAYLTATWYYYDSILPSFRELALLFEHIQRARNGGLRPLEVRRAPVPDGAPSRYPPVATCHRPGSASFCPGESSRMGIKDRIRISSSQKRTGPSKQHLAPPPIPTSPSSEQVGEASSPSKVQKSWSFNDRTRFRASLRLKPRCSAEEGPSEEVAEEKSYQCELTVDDVMPAVKTVIRSVRILKFLVAKRKFKETLRPYDVKDVIEQYSAGHLDMLGRIKSLQARVDQIVGRGPGDRKTREKGDKGPSDTEAVDEISMMGRVVKVEKQVQSIEHKLDLLLGFYSRCLRSGTSASLGTVQVPLFDPDITSDYHSPVDHEDISVSAQTLSISRSVSTNMD c. 構築體
本揭示案尤其提供如本文所述之一些多核苷酸為多核苷酸構築體。根據本揭示案之多核苷酸構築體包括此項技術中已知併有包含KCNQ4基因或其特徵部分之多核苷酸的所有物質，包括黏接質體、質體(例如裸質體或包含在脂質體中之質體)及病毒構築體(例如慢病毒、逆轉錄病毒、腺病毒及腺相關病毒構築體)。熟習此項技術者應能夠選擇合適構築體以及細胞來製備本文所述核酸中之任一者。在一些實施例中，構築體為質體(亦即，可在細胞內自主複製之環狀DNA分子)。在一些實施例中，構築體可為黏接質體(例如pWE或sCos系列)。
本文提供之載劑可具有不同大小。在一些實施例中，構築體為質體，且可包括為多達約1 kb、多達約2 kb、多達約3 kb、多達約4 kb、多達約5 kb、多達約6 kb、多達約7 kb、多達約8 kb、多達約9 kb、多達約10 kb、多達約11 kb、多達約12 kb、多達約13 kb、多達約14 kb或多達約15 kb之總長度。在一些實施例中，構築體為質體，且總長度可在約1 kb至約2 kb、約1 kb至約3 kb、約1 kb至約4 kb、約1 kb至約5 kb、約1 kb至約6 kb、約1 kb至約7 kb、約1 kb至約8 kb、約1 kb至約9 kb、約1 kb至約10 kb、約1 kb至約11 kb、約1 kb至約12 kb、約1 kb至約13 kb、約1 kb至約14 kb或約1 kb至約15 kb範圍內。
在一些實施例中，構築體為病毒構築體且核苷酸總數可為多達10 kb。在一些實施例中，病毒構築體之核苷酸總數可在以下之範圍內：約1 kb至約2 kb、1 kb至約3 kb、約1 kb至約4 kb、約1 kb至約5 kb、約1 kb至約6 kb、約1 kb至約7 kb、約1 kb至約8 kb、約1 kb至約9 kb、約1 kb至約10 kb、約2 kb至約3 kb、約2 kb至約4 kb、約2 kb至約5 kb、約2 kb至約6 kb、約2 kb至約7 kb、約2 kb至約8 kb、約2 kb至約9 kb、約2 kb至約10 kb、約3 kb至約4 kb、約3 kb至約5 kb、約3 kb至約6 kb、約3 kb至約7 kb、約3 kb至約8 kb、約3 kb至約9 kb、約3 kb至約10 kb、約4 kb至約5 kb、約4 kb至約6 kb、約4 kb至約7 kb、約4 kb至約8 kb、約4 kb至約9 kb、約4 kb至約10 kb、約5 kb至約6 kb、約5 kb至約7 kb、約5 kb至約8 kb、約5 kb至約9 kb、約5 kb至約10 kb、約6 kb至約7 kb、約6 kb至約8 kb、約6 kb至約9 kb、約6 kb至約10 kb、約7 kb至約8 kb、約7 kb至約9 kb、約7 kb至約10 kb、約8 kb至約9 kb、約8 kb至約10 kb或約9 kb至約10 kb。
在一些實施例中，構築體為腺相關病毒(AAV)構築體，且在單一構築體中可具有多達5 kb之核苷酸總數。在一些實施例中，AAV構築體可具有之核苷酸總數在以下之範圍內：約1 kb至約2 kb、1 kb至約3 kb、約1 kb至約4 kb、約1 kb至約5 kb、約2 kb至約3 kb、約2 kb至約4 kb、約2 kb至約5 kb、約3 kb至約4 kb、約3 kb至約5 kb、約4 kb至約5 kb。
在一些實施例中，構築體為慢病毒構築體且核苷酸總數可為多達8 kb。在一些實例中，慢病毒構築體之核苷酸總數可為約1 kb至約2 kb、約1 kb至約3 kb、約1 kb至約4 kb、約1 kb至約5 kb、約1 kb至約6 kb、約1 kb至約7 kb、約1 kb至約8 kb、約2 kb至約3 kb、約2 kb至約4 kb、約2 kb至約5 kb、約2 kb至約6 kb、約2 kb至約7 kb、約2 kb至約8 kb、約3 kb至約4 kb、約3 kb至約5 kb、約3 kb至約6 kb、約3 kb至約7 kb、約3 kb至約8 kb、約4 kb至約5 kb、約4 kb至約6 kb、約4 kb至約7 kb、約4 kb至約8 kb、約5 kb至約6 kb、約5 kb至約7 kb、約5 kb至約8 kb、約6 kb至約8kb、約6 kb至約7 kb或約7 kb至約8 kb。
在一些實施例中，構築體為腺病毒構築體且核苷酸總數可為多達8 kb。在一些實施例中，腺病毒構築體之核苷酸總數可在以下之範圍內：約1 kb至約2 kb、約1 kb至約3 kb、約1 kb至約4 kb、約1 kb至約5 kb、約1 kb至約6 kb、約1 kb至約7 kb、約1 kb至約8 kb、約2 kb至約3 kb、約2 kb至約4 kb、約2 kb至約5 kb、約2 kb至約6 kb、約2 kb至約7 kb、約2 kb至約8 kb、約3 kb至約4 kb、約3 kb至約5 kb、約3 kb至約6 kb、約3 kb至約7 kb、約3 kb至約8 kb、約4 kb至約5 kb、約4 kb至約6 kb、約4 kb至約7 kb、約4 kb至約8 kb、約5 kb至約6 kb、約5 kb至約7 kb、約5 kb至約8 kb、約6 kb至約7 kb、約6 kb至約8 kb或約7 kb至約8 kb。
本文所述構築體中之任一者可另外包括控制序列，例如選自以下之群的控制序列：轉錄起始序列、轉錄終止序列、啟動子序列、增強子序列、RNA剪接序列、聚腺苷酸化(polyA)、Kozak共有序列及/或可容納轉錄前或轉錄後調節及/或控制元件之其他非轉譯區。在一些實施例中，啟動子可為天然啟動子、組成型啟動子、誘導型啟動子及/或組織特異性啟動子。控制序列之非限制性實例描述於本文中。用於產生重組構築體之上述方法並非意欲為限制性的，且其他合適方法為熟練技術者所顯而易見。 d. 病毒構築體
本揭示案提供為或包含病毒構築體之技術(例如組成物、方法等)。在一些實施例中，病毒構築體為腺病毒。在一些實施例中，病毒構築體是腺相關病毒(AAV)。在一些實施例中，病毒構築體亦可基於α病毒。α病毒包括辛德畢斯(Sindbis) (及VEEV)病毒、奧拉病毒(Aura virus)、巴班肯病毒(Babanki virus)、巴馬森林病毒(Barmah Forest virus)、貝巴魯病毒(Bebaru virus)、卡巴索病毒(Cabassou virus)、奇昆古尼亞病毒(Chikungunya virus)、東方馬腦炎病毒(Eastern equine encephalitis virus)、沼澤地病毒(Everglades virus)、摩根堡病毒(Fort Morgan virus)、蓋塔病毒(Getah virus)、高地J病毒(Highlands J virus)、克澤拉格齊病毒(Kyzylagach virus)、馬亞羅病毒(Mayaro virus)、Me Tri病毒、米德爾堡病毒(Middelburg virus)、莫斯達斯佩德拉斯病毒(Mosso das Pedras virus)、穆坎布病毒(Mucambo virus)、恩杜姆病毒(Ndumu virus)、奧-奈氏病毒(O'nyong-nyong virus)、皮春納病毒(Pixuna virus)、裡奧內格羅病毒(Rio Negro virus)、羅斯河病毒(Ross River virus)、鮭魚胰腺病病毒(Salmon pancreas disease virus)、塞姆利基森林病毒(Semliki Forest virus)、南方象海豹病毒(Southern elephant seal virus)、托納特病毒(Tonate virus)、特羅卡拉病毒(Trocara virus)、烏納病毒(Una virus)、委內瑞拉馬腦炎病毒(Venezuelan equine encephalitis virus)、西方馬腦炎病毒(Western equine encephalitis virus)及瓦塔羅病毒(Whataroa virus)。一般而言，該等病毒之基因組編碼可在宿主細胞之細胞質中轉譯的非結構性(例如複製子)及結構性蛋白(例如衣殼和包膜)。羅斯河病毒、辛德畢斯病毒、塞姆利基森林病毒(SFV)及委內瑞拉馬腦炎病毒(VEEV)均已用於開發病毒轉移構築體以用於轉殖基因遞送。假型病毒可藉由組合α病毒包膜糖蛋白及逆轉錄病毒衣殼形成。α病毒構築體之實例可見於美國公開案第20150050243號、第20090305344號及第20060177819號；構築體及其製備方法以全文引用之方式併入本文中。i AAV 構築體
本揭示案之重組AAV構築體(「rAAV」；參見例如Asokan等人, Mol. Ther. 20: 699-7080, 2012，該文獻以全文引用之方式併入本文中)典型地由以下構成：(i)轉殖基因或其一部分及調節序列，以及(ii)5'及3' AAV反向末端重複序列(ITR)。將此重組AAV構築體包裝至衣殼蛋白中且遞送至所選標靶細胞中。在一些實施例中，轉殖基因為與構築體序列異源之核酸序列(例如抑制性核酸序列)，其編碼關注多肽、蛋白、功能性RNA分子(例如miRNA、miRNA抑制子)或其他基因產物。核酸編碼序列以允許轉殖基因在標靶組織之細胞中轉錄、轉譯及/或表現的方式與調節組分操作性連接。在一些實施例中，將重組AAV構築體包裝至衣殼中以形成rAAV粒子，且遞送至所選標靶細胞(例如外毛細胞)中。
在一些實施例中，且rAAV構築體亦包含習知控制元件，該等控制元件與轉殖基因以允許該轉殖基因在經質體構築體轉染或用本揭示案產生之病毒感染之細胞中轉錄、轉譯及/或表現的方式操作性連接。
本揭示案所述之AAV構築體可包括本文所述之一或多種其他元件(例如調節元件，例如啟動子、polyA序列及IRES中之一或多者)。
獲得病毒構築體之方法為此項技術中所已知。舉例而言，為產生AAV構築體，方法典型地包括培養宿主細胞，該宿主細胞包含編碼AAV衣殼蛋白之核酸序列或其片段；功能性rep基因；重組AAV構築體，其包含AAV反向末端重複序列(ITR)及轉殖基因；及/或足夠輔助功能以允許將重組AAV構築體包裝至AAV衣殼蛋白中。
在一些實施例中，可以反式向宿主細胞提供在宿主細胞中培養以將AAV構築體包裝在AAV衣殼中之組分。替代地，可由穩定宿主細胞提供一或多種組分(例如重組AAV構築體、rep序列、cap序列及/或輔助功能)，該宿主細胞已使用熟習此項技術者已知之方法工程改造以含有一或多種該等組分。在一些實施例中，該穩定宿主細胞含有在誘導型啟動子控制下之該(該等)組分。在一些實施例中，該(該等)組分可處於組成型啟動子控制下。在一些實施例中，所選穩定宿主細胞可含有在組成型啟動子控制下之所選組分及在一或多種誘導型啟動子控制下之其他所選組分。舉例而言，可產生穩定宿主細胞，該宿主細胞衍生自HEK293細胞(其含有在組成型啟動子控制下之E1輔助功能)，但含有在誘導型啟動子控制下之rep及/或cap蛋白。其他穩定宿主細胞可由熟習此項技術者使用常規方法產生。
可使用任何合適遺傳元件(例如構築體)將產生本揭示案AAV所要之重組AAV構築體、rep序列、cap序列及輔助功能遞送至包裝宿主細胞。所選遺傳元件可藉由此項技術中已知，例如核酸操作熟練技術者已知之任何合適方法遞送，且包括遺傳工程改造、重組工程改造及合成技術(參見例如Sambrook等人, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, N.Y.，該文獻以全文引用之方式併入本文中)。類似地，產生AAV病毒粒子之方法為吾人所熟知，且任何合適方法均可用於本揭示案(參見例如K. Fisher等人, J. Virol., 70:520-532 (1993)及美國專利第5,478,745號，其中每一者以全文引用之方式併入本文中)。
在一些實施例中，重組AAV可使用三重轉染方法產生(例如如美國專利第6,001,650號中所述，該專利以全文引用之方式併入本文中)。在一些實施例中，藉由用待包裝至AAV粒子中之重組AAV構築體(包含轉殖基因)、AAV輔助功能構築體及輔助功能構築體轉染宿主細胞產生重組AAV。AAV輔助功能構築體編碼「AAV輔助功能」序列(亦即rep及cap)，該等序列以反式起作用以進行有效AAV複製及衣殼化。在一些實施例中，AAV輔助功能構築體支持有效AAV構築體產生而不會產生任何可偵測之野生型AAV病毒粒子(亦即，含有功能性rep及cap基因之AAV病毒粒子)。適用於本揭示案之構築體之非限制性實例包括pHLP19 (參見例如美國專利第6,001,650號，該專利以全文引用之方式併入本文中)及pRep6cap6構築體(參見例如美國專利第6,156,303號，該專利以全文引用之方式併入本文中)。輔助功能構築體編碼非AAV衍生病毒及/或AAV複製所依賴之細胞功能(亦即「協助工具」)的核苷酸序列。輔助功能可包括AAV複製所要之彼等功能，包括但不限於參與AAV基因轉錄之活化、階段特異性AAV mRNA剪接、AAV DNA複製、cap表現產物之合成及AAV衣殼組裝的彼等部分。病毒基輔助功能可源自任何已知輔助病毒，諸如腺病毒、皰疹病毒(除單純皰疹病毒1型之外)及牛痘病毒。
用於產生及分離適用於遞送至個體之AAV病毒構築體的其他方法描述於例如美國專利第7,790,449號；美國專利第7,282,199號；WO 2003/042397；WO 2005/033321、WO 2006/110689；及美國專利第7,588,772號中，其中每一者以全文引用之方式併入本文中。在一個系統中，用編碼側接ITR之轉殖基因的構築體及編碼rep及cap之構築體瞬時轉染生產細胞株。在另一系統中，用編碼ITR側接之轉殖基因的構築體瞬時轉染穩定提供rep及cap的包裝細胞株。在一些實施例中，在此等系統中之每一者中，響應於用輔助腺病毒或皰疹病毒感染產生AAV病毒粒子，且將AAV與污染性病毒分離。在一些實施例中，系統無需用輔助病毒感染即可回收AAV。熟習此項技術者應瞭解，在一些實施例中，輔助功能為或包含以下中之至少一者：例如腺病毒E1、E2a、VA及E4，或皰疹病毒UL5、UL8、UL52及UL29以及皰疹病毒聚合酶。在一些該等實施例中，輔助功能由給定系統反式提供或將其向給定系統提供。在一些該等實施例中，可藉由用編碼輔助功能之構築體瞬時轉染細胞來提供輔助功能。在一些實施例中，可將細胞工程改造以穩定含有編碼至少一種輔助功能之基因。在一些該等實施例中，其中細胞經穩定工程改造以含有編碼輔助功能之基因，可以轉錄或轉錄後水準控制輔助功能表現。ii. AAV 血清型
如本文所述，在一些實施例中，本揭示案之病毒構築體為腺相關病毒(AAV)構築體。AAV系統通常為此項技術中所熟知(例如參見Kelleher及Vos, Biotechniques, 17(6):1110-17 (1994)；Cotten等人, P.N.A.S. U.S.A., 89(13):6094-98 (1992)；Curiel, Nat Immun, 13(2-3):141-64 (1994)；Muzyczka, Curr Top Microbiol Immunol, 158:97-129 (1992)；及Asokan A等人, Mol. Ther., 20(4):699-708 (2012)，其中每一者以全文引用之方式併入本文中)。用於產生及使用AAV構築體之方法描述於例如美國專利第5,139,941號及第4,797,368號中，該等專利中之每一者以全文引用之方式併入本文中。已表徵數種AAV血清型，包括AAV1、AAV2、AAV3 (例如AAV3B)、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10及AAV11以及其變體。在一些實施例中，AAV構築體為AAV2/6、AAV2/8 或AAV2/9構築體(例如具有AAV2 ITR之AAV6、AAV8或AAV9血清型)。其他AAV構築體描述於例如Sharma等人, Brain Res Bull. 2010年2月15日; 81(2-3): 273中，該文獻以全文引用之方式併入本文中。一般而言，可使用任何AAV血清型遞送本文所述之轉殖基因。然而，已知血清型具有不同向性，例如其優先感染不同組織。在一些實施例中，AAV構築體為自互補AAV構築體。iii. 衣殼
在一些實施例中，將本揭示案之一或多種重組AAV構築體包裝至AAV2、3、4、5、6、7、8、9、10、rh8、rh10、rh39、rh43、AAV2.7m8、AAV8BP2或Anc80 血清型或其一或多種雜交體之衣殼中。在一些實施例中，衣殼來自祖先血清型。舉例而言，在一些實施例中，衣殼為Anc80衣殼(例如Anc80L65衣殼)。在一些實施例中，衣殼包含由SEQ ID NO: 14表示之多肽。在一些實施例中，衣殼包含與SEQ ID NO: 14之多肽具有至少85%、90%、95%、98%或99%序列一致性的多肽。
ITR及衣殼之任何組合可用於本揭示案之重組AAV構築體中，例如野生型或變體AAV2 ITR與Anc80衣殼、野生型或變體AAV2 ITR與AAV6衣殼等。在本揭示案之一些實施例中，rAAV粒子完全由AAV2組分構成(亦即，衣殼及ITR為AAV2血清型)。在本揭示案之一些實施例中，rAAV粒子為rAAV2/Anc80粒子，其包含Anc80衣殼(例如包含SEQ ID NO: 14之多肽)，該Anc80衣殼衣殼化具有野生型AAV2 ITR (例如SEQ ID NO: 15、16、17、18、19、20及/或21中之任一者)之核酸構築體，該等野生型AAV2 ITR側接包含KCNQ4編碼序列(例如SEQ IDNO: 1-10)之全部或特徵部分之構築體的一部分。在一些實施例中，ITR與SEQ ID NO: 15、16、17、18、19、20或21之ITR至少85%、90%、95%、98%或99%一致。
Anc80L65 衣殼 (SEQ ID NO: 14) MAADGYLPDWLEDNLSEGIREWWDLKPGAPKPKANQQKQDDGRGLVLPGYKYLGPFNGLDKGEPVNAADAAALEHDKAYDQQLKAGDNPYLRYNHADAEFQERLQEDTSFGGNLGRAVFQAKKRVLEPLGLVEEGAKTAPGKKRPVEQSPQEPDSSSGIGKKGQQPARKRLNFGQTGDSESVPDPQPLGEPPAAPSGVGSNTMAAGGGAPMADNNEGADGVGNASGNWHCDSTWLGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISSQSGGSTNDNTYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKKLNFKLFNIQVKEVTTNDGTTTIANNLTSTVQVFTDSEYQLPYVLGSAHQGCLPPFPADVFMIPQYGYLTLNNGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFQFSYTFEDVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLSRTQTTSGTAGNRTLQFSQAGPSSMANQAKNWLPGPCYRQQRVSKTTNQNNNSNFAWTGATKYHLNGRDSLVNPGPAMATHKDDEDKFFPMSGVLIFGKQGAGNSNVDLDNVMITNEEEIKTTNPVATEEYGTVATNLQSANTAPATGTVNSQGALPGMVWQDRDVYLQGPIWAKIPHTDGHFHPSPLMGGFGLKHPPPQILIKNTPVPANPPTTFSPAKFASFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEIQYTSNYNKSTNVDFAVDTNGVYSEPRPIGTRYLTRNLiv. 反向末端重複序列 (ITR)
構築體之AAV序列典型地包含順式作用性5'及3'反向末端重複序列(參見例如，B. J. Carter, 「Handbook of Parvoviruses」中, P. Tijsser編, CRC Press, 第155 168頁 (1990)，該文獻以全文引用之方式併入本文中)。在一些實施例中，ITR序列之長度為約145 nt。舉例而言，野生型AAV2 ITR之長度通常為約145 nt。較佳地，實質上將編碼ITR之整個序列用於給定分子中，但允許對此等序列進行某種程度之微小修飾。修飾ITR序列之能力在此項技術之技能範圍內。(參見例如，如下文章，諸如Sambrook等人, 「Molecular Cloning. A Laboratory Manual」, 第2版, Cold Spring Harbor Laboratory, New York (1989)；及K. Fisher等人, J Virol., 70:520 532 (1996)，其中每一者以全文引用之方式併入本文中)。本揭示案中使用之該分子之一實例為「順式作用」性構築體，該構築體包含編碼基因產物(例如KCNQ4基因產物)或其抑制性核酸(例如miRNA)之序列，其中該序列及其相關調節元件側接5'或「左」及3'或「右」 AAV ITR序列。5'及左標記指ITR序列相對於整個構築體在有義方向上自左至右讀取之位置。舉例而言，在一些實施例中，當以有義方向線性地描繪構築體時，5'或左ITR為最接近給定構築體之啟動子(與聚腺苷酸化序列相反)的ITR。3'及右標記指ITR序列相對於整個構築體在有義方向上自左至右讀取之位置。舉例而言，在一些實施例中，當以有義方向線性地描繪構築體時，3'或右ITR為最接近給定構築體之聚腺苷酸化序列(與啟動子相反)的ITR。如本文提供之ITR根據有義股，以5'至3'之順序描繪。因此，熟習此項技術者應瞭解，當自有義方向轉變為反義方向時，5'或「左」定向ITR亦可描繪為3'或「右」ITR。此外，熟習此項技術者完全能夠將給定有義ITR序列(例如5'/左AAV ITR)轉換成反義序列(例如3'/右ITR序列)。因此，基於已知AAV ITR，無論ITR是否已明確如此標記，熟習此項技術者在查看本文揭示之序列均時應瞭解，ITR為有義定向抑或反義定向，以及其沿構築體之「左」側抑或「右」側延伸。一般技術者應瞭解如何修飾給定ITR序列以用作5'/左或3'/右ITR或其反義形式。
AAV ITR序列可獲自任何已知AAV，包括目前鑑別之哺乳動物AAV類型。在一些實施例中，ITR為或包含145個核苷酸。在一些實施例中，ITR為野生型AAV2 ITR，例如SEQ ID NO: 15之5' ITR及SEQ ID NO: 16之3' ITR。在一些實施例中，ITR衍生自野生型AAV2 ITR，且包括一或多種修飾，例如此項技術中已知之截短、缺失、取代或插入。在一些實施例中，ITR包含少於145個核苷酸(例如SEQ ID NO: 19或20)，例如119、127、130、134或141個核苷酸(參見例如SEQ ID No: 17、18、19及20。舉例而言，在一些實施例中，ITR包含110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144或145個核苷酸。
5'/左AAV ITR序列之非限制性實例為SEQ ID NO: 17。3'/右AAV ITR序列之非限制性實例為SEQ ID NO: 18。在一些實施例中，構築體及/或本揭示案之構築體包含5'/左AAV ITR及/或3'/右AAV ITR。在一些實施例中，5'/左AAV ITR序列為SEQ ID NO: 16。在一些實施例中，3'/右AAV ITR序列為SEQ ID NO: 16。在一些實施例中，5'/左AAV ITR序列為SEQ ID NO: 15，且3'/右AAV ITR序列為SEQ ID NO: 16。在一些實施例中，ITR與由SEQ ID NO: 15、16、17、18或19表示之ITR至少85%、90%、95%、98%或99%一致。在一些實施例中，5'/左及3'/右AAV ITR (例如，SEQ ID NO: 15及16)側接包含KCNQ4基因產物(例如SEQ ID NO: 1-10)之全部或一部分的轉殖基因及/或構築體之一部分。
在一些實施例中，ITR序列與本文所揭示之任何ITR序列至少85%、90%、95%、98%或99%一致。作為非限制性實例，ITR序列可為或包含以下：
5'/ 左 AAV ITR (SEQ ID NO: 15) TTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCAAAGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCT
3'/ 右 AAV ITR (SEQ ID NO: 16) AGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAA
5'/ 左 AAV ITR (SEQ ID NO: 17) CCTGCAGGCAGCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTT
3'/ 右 AAV ITR (SEQ ID NO: 18) AGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGCTGCCTGCAGG
AAV ITR (SEQ ID NO: 19) CTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCT
AAV ITR (SEQ ID NO: 20) AGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAG
AAV ITR (SEQ ID NO: 21) TTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCAAAGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTv. 啟動子
啟動子之非限制性實例描述於本文中。啟動子之其他實例為此項技術中所已知。
在一些實施例中，構築體(例如rAAV構築體)包含啟動子。術語「啟動子」指由酶/蛋白質識別之可促進及/或起始操作性連接之基因(例如KCNQ4 基因或其抑制性核酸)的轉錄的DNA序列。在一些實施例中，編碼KCNQ4 基因產物(例如人類Kv7.4蛋白等)或其抑制性核酸(例如miRNA等)之構築體可包括啟動子及/或增強子。舉例而言，啟動子典型地指例如如下核苷酸序列，其與RNA聚合酶及/或任何相關因數結合，且可自其起始轉錄。因此，在一些實施例中，構築體(例如rAAV構築體)包含與本文所述非限制性實例啟動子之一操作性連接的啟動子。
在一些實施例中，啟動子為誘導型啟動子、組成型啟動子、哺乳動物細胞啟動子、病毒啟動子、嵌合啟動子、經工程改造啟動子、組織特異性啟動子或此項技術中已知啟動子之任何其他類型。在一些實施例中，啟動子為RNA聚合酶II啟動子，諸如哺乳動物RNA聚合酶II啟動子。在一些實施例中，啟動子為RNA聚合酶III啟動子，包括(但不限於) HI啟動子、人類U6啟動子、小鼠U6啟動子或豬U6啟動子。啟動子通常為能夠促進內耳細胞中之轉錄的啟動子。在一些實施例中，啟動子為耳蝸特異性啟動子或耳蝸定向啟動子。在一些實施例中，啟動子為毛細胞特異性啟動子或支持細胞特異性啟動子。
可在本文中使用此項技術中已知之多種啟動子。本文可使用之啟動子之非限制性實例包括：人類EFlα、人類巨細胞病毒(CMV) (美國專利第5,168,062號，該專利以全文引用之方式併入本文中)、人類泛素C (UBC)、小鼠磷酸甘油酸激酶1、多瘤腺病毒、猿猴病毒40 (SV40)、β-球蛋白、β­肌動蛋白、α-甲胎蛋白、γ-球蛋白、β-干擾素、γ-麩胺醯基轉移酶、小鼠乳房腫瘤病毒(MMTV)、勞斯肉瘤病毒、大鼠胰島素、甘油醛-3-磷酸脫氫酶、金屬硫蛋白II (MT II)、澱粉酶、組織蛋白酶、MI毒蕈鹼受體、逆轉錄病毒LTR (例如，人類T細胞白血病病毒HTLV)、AAV ITR、介白素-2、膠原酶、來源於血小板之生長因數、腺病毒5 E2、基質溶素、鼠類MX基因、葡萄糖調節蛋白(GRP78及GRP94)、α-2-巨球蛋白、波形蛋白、MHC I類基因H-2K b、HSP70、多育麴菌素、腫瘤壞死因子、甲狀腺刺激激素α基因、免疫球蛋白輕鏈、T細胞受體、HLA DQa及DQ、介白素-2受體、MHC II類、MHC II類HLA-DRa、肌肉肌酸激酶、前白蛋白(轉甲狀腺素蛋白)、彈性蛋白酶I、白蛋白基因、c-fos、c-HA-ras、神經細胞黏著分子(NCAM)、H2B (TH2B)組蛋白、大鼠生長激素、人類血清澱粉樣蛋白(SAA)、肌鈣蛋白I (TN I)、杜氏肌營養不良症、人類免疫缺陷病毒及長臂猿白血病病毒(GALV)啟動子。啟動子之其他實例為此項技術中所已知。參見例如Lodish, Molecular Cell Biology, Freeman and Company, New York 2007，該文獻以全文引用之方式併入本文中。在一些實施例中，啟動子為CMV立早啟動子。
在一些實施例中，啟動子為誘導型啟動子、哺乳動物細胞啟動子、病毒啟動子、嵌合啟動子、經工程改造啟動子、組成型啟動子、組織特異性啟動子或此項技術中已知啟動子之任何其他類型啟動子。
在一些實施例中，啟動子為RNA聚合酶II啟動子，諸如哺乳動物RNA聚合酶II啟動子。
在一些實施例中，啟動子為RNA聚合酶III啟動子(例如H1啟動子、U6啟動子(例如人類U6啟動子、小鼠U6啟動子、豬U6啟動子等)。
在一些實施例中，本揭示案之啟動子通常為能夠在耳蝸細胞，諸如毛細胞，例如IHC，例如OHC中起作用(亦即轉錄)之啟動子。
在一些實施例中，啟動子為耳蝸特異性啟動子或耳蝸定向啟動子。
此項技術中已知多種啟動子，其中任一者均可用於本文中。可在本文中使用之啟動子之非限制性實例包括：人類延伸因數1α-次單元(EF1a)(Liu等人, (2007) Exp. Mol. Med. 39(2): 170-175; 登錄號J04617.1；Gill等人,Gene Ther. 8(20):1539-1546, 2001；Xu等人, Human Gene Ther. 12(5):563-573, 2001；Xu等人, Gene Ther. 8:1323-1332；Ikeda等人,Gene Ther. 9:932-938, 2002；Gilham等人,J. Gene Med. 12(2):129-136, 2010，其中每一者以全文引用之方式併入本文中)、巨細胞病毒 (Xu等人, Human Gene Ther. 12(5):563-573, 2001；Xu等人, Gene Ther. 8:1323-1332；Gray等人,Human Gene Ther. 22:1143-1153, 2011，其中每一者以全文引用之方式併入本文中)、人類立早巨細胞病毒(CMV) (美國專利第5,168,062號，Liu等人, (2007) Exp. Mol. Med. 39(2): 170-175；登錄號X17403.1或KY490085.1，其中每一者以全文引用之方式併入本文中)、人類泛素C (UBC) (Gill等人,Gene Ther. 8(20):1539-1546, 2001；Qin等人,PLoS One 5(5):e10611, 2010，其中每一者以全文引用之方式併入本文中)、小鼠磷酸甘油酸激酶1、多瘤腺病毒、猿猴病毒40 (SV40)、β-球蛋白、β-肌動蛋白、α-甲胎蛋白、γ-球蛋白、β-干擾素、γ-麩胺醯基轉移酶、小鼠乳房腫瘤病毒(MMTV)、勞斯肉瘤病毒、大鼠胰島素、甘油醛-3-磷酸脫氫酶、金屬硫蛋白II (MT II)、澱粉酶、組織蛋白酶、MI毒蕈鹼受體、逆轉錄病毒LTR (例如，人類T細胞白血病病毒HTLV，其中每一者以全文引用之方式併入本文中)、AAV ITR、介白素-2、膠原酶、來源於血小板之生長因數、腺病毒5 E2、基質溶素、鼠類MX基因、葡萄糖調節蛋白(GRP78及GRP94)、α-2-巨球蛋白、波形蛋白、MHC I類基因H-2κ b、HSP70、多育麴菌素、腫瘤壞死因子、甲狀腺刺激激素α基因、免疫球蛋白輕鏈、T細胞受體、HLA DQα及DQβ、介白素-2受體、MHC II類、MHC II類HLA-DRα、肌肉肌酸激酶、前白蛋白(轉甲狀腺素蛋白)、彈性蛋白酶I、白蛋白基因、c-fos、c-HA-ras、神經細胞黏著分子(NCAM)、H2B (TH2B)組蛋白、大鼠生長激素、人類血清澱粉樣蛋白(SAA)、肌鈣蛋白I (TN I)、杜氏肌營養不良症、人類免疫缺陷病毒、長臂猿白血病病毒(GALV)啟動子、HNRPA2B1-CBX1之啟動子(UCOE)(Powell及Gray (2015) Discov. Med. 19(102): 49-57；Antoniou等人,Human Gene Ther. 24(4):363-374, 2013)、β-葡萄糖醛酸酶 (GUSB) (Husain等人,Gene Ther. 16:927-932, 2009)、雞β-肌動蛋白(CBA) (Liu等人, (2007) Exp. Mol. Med. 39(2): 170-175；Stone等人, (2005) Mol. Ther. 11(6): 843-848；Klein等人,Exp. Neurol. 176(1):66-74, 2002；Ohlfest等人,Blood 105:2691-2698, 2005；Gray等人,Human Gene Ther. 22:1143-1153, 2011，其中每一者以全文引用之方式併入本文中)、人類β-肌動蛋白啟動子(HBA) (登錄號Y00474.1)、鼠類肌球蛋白VIIA (musMyo7) (Boeda等人, (2001) Hum. Mol. Genet. 10(15): 1581-1589；登錄號AF384559.1，其中每一者以全文引用之方式併入本文中)、人類肌球蛋白VIIA (hsMyo7) (Boeda等人, (2001) Hum. Mol. Genet. 10(15): 1581-1589；登錄號NG_009086.1，其中每一者以全文引用之方式併入本文中)、鼠類聚(ADP-核糖)聚合酶2 (musPARP2) (Ame等人, (2001) J. Biol. Chem. 276(14): 11092-11099；登錄號AF191547.1，其中每一者以全文引用之方式併入本文中)、人類聚(ADP-核糖)聚合酶2 (hsPARP2) (Ame等人, (2001) J. Biol. Chem. 276(14): 11092-11099；登錄號X16612.1或AF479321.1，其中每一者以全文引用之方式併入本文中)、乙醯膽鹼受體ε次單元(AChε) (Duclert等人, (1993) PNAS 90(7): 3043-3047；登錄號S58221.1或CR933736.12，其中每一者以全文引用之方式併入本文中)、勞斯肉瘤病毒(RSV) (Liu等人, (2007) Exp. Mol. Med. 39(2): 170-175；登錄號M77786.1，其中每一者以全文引用之方式併入本文中)、(GFAP) (Liu等人, (2007) Exp. Mol. Med. 39(2): 170-175；Stone等人, (2005) Mol. Ther. 11(6): 843-848；登錄號NG_008401.1或M67446.1，其中每一者以全文引用之方式併入本文中)、hAAT (Van Linthout等人,Human Gene Ther. 13(7):829-840, 2002；Cunningham等人,Mol. Ther. 16(6):1081-1088, 2008，其中每一者以全文引用之方式併入本文中)及CBA雜合體(CBh) (Gray等人, (2011) Hum. Gen. Therapy 22: 1143-1153；登錄號KF926476.1或KC152483.1，其中每一者以全文引用之方式併入本文中)。啟動子之其他實例為此項技術中所已知。參見例如Lodish, Molecular Cell Biology, Freeman and Company, New York 2007。
在一些實施例中，啟動子為CMV立早啟動子。
在一些實施例中，啟動子為CAG啟動子或CAG/CBA啟動子。
在一些實施例中，啟動子為smCBA啟動子。
在一些實施例中，構築體或本揭示案之構築體包含CAG啟動子。在一些實施例中，CAG啟動子以5'至3'之順序包含SEQ ID NO: 22、23及24之核苷酸序列。在一些該等實施例中，CAG啟動子包含CMV早期增強子元件(例如SEQ ID NO: 22或SEQ ID NO: 298或SEQ ID NO: 299)、雞β肌動蛋白(CBA)基因序列(例如SEQ ID NO: 23)及來自兔β球蛋白基因之嵌合內含子/3'剪接序列(例如SEQ ID NO: 24)。在一些實施例中，啟動子與由SEQ ID NO: 22、23、24、300或301表示之CAG啟動子至少85%、90%、95%、98%或99%一致。
術語「組成型」啟動子指如下核苷酸序列，其在與編碼蛋白質(例如KCNQ4蛋白)或抑制性核酸(例如如本文所述)之核酸操作性連接時，在細胞中在大多數或所有生理學條件下使得自該核酸轉錄RNA。
組成型啟動子之實例包括但不限於逆轉錄病毒勞斯肉瘤病毒（RSV） LTR啟動子、巨細胞病毒（CMV）啟動子（參見例如Boshart等人,Cell 41:521-530, 1985，該文獻以全文引用之方式併入本文中）、SV40啟動子、二氫葉酸還原酶啟動子、β-肌動蛋白啟動子、磷酸甘油激酶（PGK）啟動子及EF1-α啟動子（Invitrogen）。
在一些實施例中，誘導型啟動子可調節基因表現，且可藉由以下調節：外源提供之化合物；環境因素，諸如溫度；或特定生理學狀態例如急性期之存在；細胞之特定功能或生物狀態，例如細胞之特定分化狀態；或僅在復製細胞中調節。誘導型啟動子及誘導型系統可獲自多種商業來源，包括(但不限於)Invitrogen、Clontech及Ariad。誘導型啟動子之其他實例為此項技術中所已知。
由外源提供之化合物調節的誘導型啟動子的實例包括鋅誘導型綿羊金屬硫蛋白(MT)啟動子、地塞米松(dexamethasone；Dex)誘導型小鼠乳房腫瘤病毒(MMTV)啟動子、T7聚合酶啟動子系統(WO 98/10088，該案以全文引用之方式併入本文中)；蛻皮激素昆蟲啟動子(No等人,Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 93:3346-3351, 1996，該文獻以全文引用之方式併入本文中)、四環素抑制系統(Gossen等人,Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 89:5547-5551, 1992，該文獻以全文引用之方式併入本文中)、四環素誘導系統(Gossen等人,Science 268:1766-1769, 1995，亦參見Harvey等人,Curr. Opin. Chem. Biol. 2:512-518, 1998，其中每一者以全文引用之方式併入本文中)、RU486誘導系統(Wang等人,Nat. Biotech. 15:239-243, 1997；及Wang等人,Gene Ther. 4:432-441, 1997，其中每一者以全文引用之方式併入本文中)及雷帕黴素(rapamycin)誘導系統(Magari等人,J. Clin. Invest. 100:2865-2872, 1997，該文獻以全文引用之方式併入本文中)。
在一些實施例中，調節序列賦予組織特異性基因表現能力。在一些情況下，組織特異性調節序列結合以組織特異性方式誘導轉錄之組織特異性轉錄因數。
術語「組織特異性」啟動子指僅在某些特定細胞類型及/或組織中具有活性之啟動子(例如，特定基因之轉錄僅在表現結合於組織特異性啟動子之轉錄調節及/或控制蛋白的細胞內發生)。
在一些實施例中，組織特異性啟動子為耳蝸特異性啟動子。在一些實施例中，組織特異性啟動子為耳蝸毛細胞特異性啟動子。耳蝸毛細胞特異性啟動子之非限制性實例包括但不限於：ATOH1啟動子、POU4F3啟動子、LHX3啟動子、MYO7A啟動子、MYO6啟動子、α9ACHR啟動子及α10ACHR啟動子。在一些實施例中，啟動子為耳蝸毛細胞特異性啟動子，諸如PRESTIN啟動子或ONCOMOD啟動子。參見例如Zheng等人, Nature 405:149-155, 2000；Tian等人, Dev. Dyn. 23 l: 199-203, 2004；及Ryan等人, Adv. Otorhinolaryngol. 66: 99-115, 2009，其中每一者以全文引用之方式併入本文中。
在一些實施例中，組織特異性啟動子為耳細胞特異性啟動子。在一些實施例中，組織特異性啟動子為內耳細胞特異性啟動子。內耳非感覺細胞特異性啟動子之非限制性實例包括但不限於：GJB2 、 GJB6 、 SLC26A4 、 TECTA、 DFNA5 、 COCH 、 NDP 、 SYN1 、 GFAP 、 PLP 、 TAK1 或SOX21 。在一些實施例中，耳蝸非感覺細胞特異性啟動子可為內耳支持細胞特異性啟動子。內耳支持細胞特異性啟動子之非限制性實例包括但不限於：SOX2 、 FGFR3 、 PROX1 、 GLAST1 、 LGR5 、 HES1 、 HES5 、 NOTCH1 、 JAG1 、 CDKN1A 、 CDKN1B 、 SOX10 、 P75 、 CD44 、 HEY2 、 LFNG 、 或S100b 。
在一些實施例中，所提供之AAV構築體包含選自CAG、CBA、CMV或CB7啟動子之啟動子序列。在本文所述治療組成物中任一者之一些實施例中，第一或唯一AAV構築體另外包括選自耳蝸及/或內耳特異性啟動子之至少一種啟動子序列。
在一些實施例中，啟動子序列與本文所揭示之任何啟動子序列至少85%、90%、95%、98%或99%一致。作為非限制性實例，根據本揭示案提供之啟動子序列可為或包含以下：
CMV 增強子 (SEQ ID NO: 22) GACATTGATTATTGACTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGACTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGG
CBA 基因序列 (SEQ ID NO: 23) GTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCG
CBA 啟動子 (SEQ ID NO: 297) GTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCG
CMV/CBA 增強子 / 啟動子 (SEQ ID NO: 298) GACATTGATTATTGACTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGACTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGGTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCG
CMV/CBA 增強子 / 啟動子 (SEQ ID NO: 299) GACATTGATTATTGACTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGACTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGGTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCG
CAG 增強子 / 啟動子 (SEQ ID NO: 300) GACATTGATTATTGACTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGACTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGGTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCGGGAGTCGCTGCGTTGCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCGCGCCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGGCTCTGACTGACCGCGTTACTCCCACAGGTGAGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCTTGGTTTAATGACGGCTCGTTTCTTTTCTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTAAAGGGCTCCGGGAGGGCCCTTTGTGCGGGGGGGAGCGGCTCGGGGGGTGCGTGCGTGTGTGTGTGCGTGGGGAGCGCCGCGTGCGGCCCGCGCTGCCCGGCGGCTGTGAGCGCTGCGGGCGCGGCGCGGGGCTTTGTGCGCTCCGCGTGTGCGCGAGGGGAGCGCGGCCGGGGGCGGTGCCCCGCGGTGCGGGGGGGCTGCGAGGGGAACAAAGGCTGCGTGCGGGGTGTGTGCGTGGGGGGGTGAGCAGGGGGTGTGGGCGCGGCGGTCGGGCTGTAACCCCCCCCTGCACCCCCCTCCCCGAGTTGCTGAGCACGGCCCGGCTTCGGGTGCGGGGCTCCGTGCGGGGCGTGGCGCGGGGCTCGCCGTGCCGGGCGGGGGGTGGCGGCAGGTGGGGGTGCCGGGCGGGGCGGGGCCGCCTCGGGCCGGGGAGGGCTCGGGGGAGGGGCGCGGCGGCCCCCGGAGCGCCGGCGGCTGTCGAGGCGCGGCGAGCCGCAGCCATTGCCTTTTATGGTAATCGTGCGAGAGGGCGCAGGGACTTCCTTTGTCCCAAATCTGTGCGGAGCCGAAATCTGGGAGGCGCCGCCGCACCCCCTCTAGCGGGCGCGGGGCGAAGCGGTGCGGCGCCGGCAGGAAGGAAATGGGCGGGGAGGGCCTTCGTGCGTCGCCGCGCCGCCGTCCCCTTCTCCCTCTCCAGCCTCGGGGCTGTCCGCGGGGGGACGGCTGCCTTCGGGGGGGACGGGGCAGGGCGGGGTTCGGCTTCTGGCGTGTGACCGGCGGCTCTAGAGCCTCTGCTAACCATGTTCATGCCTTCTTCTTTTTCCTACAG
CAG 增強子 / 啟動子 (SEQ ID NO: 301) GACATTGATTATTGACTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGACTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGGTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCGGGAGTCGCTGCGTTGCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCGCGCCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGGCTCTGACTGACCGCGTTACTCCCACAGGTGAGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCTTGGTTTAATGACGGCTCGTTTCTTTTCTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTAAAGGGCTCCGGGAGGGCCCTTTGTGCGGGGGGGAGCGGCTCGGGGGGTGCGTGCGTGTGTGTGTGCGTGGGGAGCGCCGCGTGCGGCCCGCGCTGCCCGGCGGCTGTGAGCGCTGCGGGCGCGGCGCGGGGCTTTGTGCGCTCCGCGTGTGCGCGAGGGGAGCGCGGCCGGGGGCGGTGCCCCGCGGTGCGGGGGGGCTGCGAGGGGAACAAAGGCTGCGTGCGGGGTGTGTGCGTGGGGGGGTGAGCAGGGGGTGTGGGCGCGGCGGTCGGGCTGTAACCCCCCCCTGCACCCCCCTCCCCGAGTTGCTGAGCACGGCCCGGCTTCGGGTGCGGGGCTCCGTGCGGGGCGTGGCGCGGGGCTCGCCGTGCCGGGCGGGGGGTGGCGGCAGGTGGGGGTGCCGGGCGGGGCGGGGCCGCCTCGGGCCGGGGAGGGCTCGGGGGAGGGGCGCGGCGGCCCCCGGAGCGCCGGCGGCTGTCGAGGCGCGGCGAGCCGCAGCCATTGCCTTTTATGGTAATCGTGCGAGAGGGCGCAGGGACTTCCTTTGTCCCAAATCTGTGCGGAGCCGAAATCTGGGAGGCGCCGCCGCACCCCCTCTAGCGGGCGCGGGGCGAAGCGGTGCGGCGCCGGCAGGAAGGAAATGGGCGGGGAGGGCCTTCGTGCGTCGCCGCGCCGCCGTCCCCTTCTCCCTCTCCAGCCTCGGGGCTGTCCGCGGGGGGACGGCTGCCTTCGGGGGGGACGGGGCAGGGCGGGGTTCGGCTTCTGGCGTGTGACCGGCGGCTCTAGAGCCTCTGCTAACCATGTTCATGCCTTCTTCTTTTTCCTACAG
嵌合內含子(SEQ ID NO: 24) GGAGTCGCTGCGTTGCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCGCGCCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGGCTCTGACTGACCGCGTTACTCCCACAGGTGAGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCTTGGTTTAATGACGGCTCGTTTCTTTTCTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTAAAGGGCTCCGGGAGGGCCCTTTGTGCGGGGGGGAGCGGCTCGGGGGGTGCGTGCGTGTGTGTGTGCGTGGGGAGCGCCGCGTGCGGCCCGCGCTGCCCGGCGGCTGTGAGCGCTGCGGGCGCGGCGCGGGGCTTTGTGCGCTCCGCGTGTGCGCGAGGGGAGCGCGGCCGGGGGCGGTGCCCCGCGGTGCGGGGGGGCTGCGAGGGGAACAAAGGCTGCGTGCGGGGTGTGTGCGTGGGGGGGTGAGCAGGGGGTGTGGGCGCGGCGGTCGGGCTGTAACCCCCCCCTGCACCCCCCTCCCCGAGTTGCTGAGCACGGCCCGGCTTCGGGTGCGGGGCTCCGTGCGGGGCGTGGCGCGGGGCTCGCCGTGCCGGGCGGGGGGTGGCGGCAGGTGGGGGTGCCGGGCGGGGCGGGGCCGCCTCGGGCCGGGGAGGGCTCGGGGGAGGGGCGCGGCGGCCCCCGGAGCGCCGGCGGCTGTCGAGGCGCGGCGAGCCGCAGCCATTGCCTTTTATGGTAATCGTGCGAGAGGGCGCAGGGACTTCCTTTGTCCCAAATCTGTGCGGAGCCGAAATCTGGGAGGCGCCGCCGCACCCCCTCTAGCGGGCGCGGGGCGAAGCGGTGCGGCGCCGGCAGGAAGGAAATGGGCGGGGAGGGCCTTCGTGCGTCGCCGCGCCGCCGTCCCCTTCTCCCTCTCCAGCCTCGGGGCTGTCCGCGGGGGGACGGCTGCCTTCGGGGGGGACGGGGCAGGGCGGGGTTCGGCTTCTGGCGTGTGACCGGCGGCTCTAGAGCCTCTGCTAACCATGTTCATGCCTTCTTCTTTTTCCTACAG
在某些實施例中，啟動子為如SEQ ID NO: 302所述之內源人類ATOH1 增強子-啟動子。在一些實施例中，增強子-啟動子序列與由SEQ ID NO: 302表示之增強子-啟動子序列至少85%、90%、95%、98%或99%一致。
人類 ATOH1 增強子 - 啟動子 (SEQ ID NO: 302) CTATGGAGTTTGCATAACAAACGTTTGGCAGCTCGCTCTCTTACACTCCATTAACAAGCTGTAACATATAGCTGCAGGTTGCTATAATCTCATTAATATTTTGGAAACTTGAATATTGAGTATTTCTGAGTGCTCATTCCCCATATGCCAGCCACTTCTGCCATGCTGACTGGTTCCTTTCTCTCCATTATTAGCAATTAGCTTCTTACCTTCCAAAGTCAGATCCAAGGTATCCAAGATACTAGCAAAGGAATCAACTATGTGTGCAAGTTAAGCATGCTTAATATCACCCAAACAAACAAAGAGGCAGCATTTCTTAAAGTAATGAAGATAGATAAATCGGGTTAGTCCTTTGCGACACTGCTGGTGCTTTCTAGAGTTTTATATATTTTAAGCAGCTTGCTTTATATTCTGTCTTTGCCTCCCACCCCACCAGCACTTTTATTTGTGGAGGGTTTTGGCTCGCCACACTTTGGGAAACTTATTTGATTTCACGGAGAGCTGAAGGAAGATCATTTTTGGCAACAGACAAGTTTAAACACGATTTCTATGGGACATTGCTAACTGGGGCCCCTAAGGAGAAAGGGGAAACTGAGCGGAGAATGGGTTAAATCCTTGGAAGCAGGGGAGAGGCAGGGGAGGAGAGAAGTCGGAGGAGTATAAAGAAAAGGACAGGAACCAAGAAGCGTGGGGGTGGTTTGCCGTAATGTGAGTGTTTCTTAATTAGAGAACGGTTGACAATAGAGGGTCTGGCAGAGGCTCCTGGCCGCGGTGCGGAGCGTCTGGAGCGGAGCACGCGCTGTCAGCTGGTGAGCGCACTCTCCTTTCAGGCAGCTCCCCGGGGAGCTGTGCGGCCACATTTAACACCATCATCACCCCTCCCCGGCCTCCTCAACCTCGGCCTCCTCCTCGTCGACAGCCTTCCTTGGCCCCCACCAGCAGAGCTCACAGTAGCGAGCGTCTCTCGCCGTCTCCCGCACTCGGCCGGGGCCTCTCTCCTCCCCCAGCTGCGCAGCGGGAGCCGCCACTGCCCACTGCACCTCCCAGCAACCAGCCCAGCACGCAAAGAAGCTGCGCAAAGTTAAAGCCAAGCAATGCCAAGGGGAGGGGAAGCTGGAGGCGGGCTTTGAGTGGCTTCTGGGCGCCTGGCGGGTCCAGAATCGCCCAGAGCCGCCCGCGGTCGTGCACATCTGACCCGAGTCAGCTTGGGCACCAGCCGAGAGCCGGCTCCGCACCGCTCCCGCACCCCAGCCGCCGGGGTGGTGACACACACCGGAGTCGAATTACAGCCCTGCAATTAACATATGAATCTGACGAATTTAAAAGAAGGAAAAAAAAAAAAAAACCTGAGCAGGCTTGGGAGTCCTCTGCACACAAGAACTTTTCTCGGGGTGTAAAAACTCTTTGATTGGCTGCTCGCACGCGCCTGCCCGCGCCCTCCATTGGCTGAGAAGACACGCGACCGGCGCGAGGAGGGGGTTGGGAGAGGAGCGGGGGGAGACTGAGTGGCGCGTGCCGCTTTTTAAAGGGGCGCAGCGCCTTCAGCAACCGGAGAAGCATAGTTGCACGCGACCTGGTGTGTGATCTCCGAGTGGGTGGGGGAGGGTCGAGGAGGGAAAAAAAAATAAGACGTTGCAGAAGAGACCCGGAAAGGGCCTTTTTTTTGGTTGAGCTGGTGTCCCAGTGCTGCCTCCGATCCTGAGCCTCCGAGCCTTTGCAGTGCAA
在某些實施例中，啟動子為如SEQ ID NO: 303或304所述之內源人類SLC26A4 立即啟動子。在某些實施例中，啟動子為如SEQ ID NO: 305、306或307所述之內源人類SLC26A4 增強子-啟動子。在一些實施例中，增強子-啟動子序列與由SEQ ID NO: 303、304、305、306或307表示之增強子-啟動子序列至少85%、90%、95%、98%或99%一致。在某些實施例中，啟動子為包含在SEQ ID NO: 305、306或307中之人類SLC26A4 內源增強子-啟動子序列。
人類 SLC26A4 立即啟動子 (SEQ ID NO: 303) CTGCCTTCTGAGAGCGCTATAAAGGCAGCGGAAGGGTAGTCCGCGGGGCATTCCGGGCGG
人類 SLC26A4 立即啟動子 (SEQ ID NO: 304) CTCTAGGCGGGCTCTGCTCTTCTTTAAGGAGTCCCACAGGGCCTGGCCCGCCCCTGACCT
人類 SLC26A4 增強子 - 啟動子 (SEQ ID NO: 305) TAAAGAGTTGTGAGTTGTGTAGGTGAGTTGCCATGGAGCTACAAATATGAGTTGATATTCTGAAATCCTAGACAGCCATCTCCAAGGTTAAGAAAAATCCTTATGCACTCACTTGCAAAGATATCCACAGCATGCTCTTAATGGAGAAAAACAAAGCCTTAGATCAAATATGTAAAGTAATTTTTAGTTTTTTGAAAAGGTATGTTTGGGCTATAGATAAATCTGTTCAAAAAACATGAGAGAAGATAATAATGGTTGAAAGGAGACACAGTGCTTGCCCTCAAGAAGTTTTTGTCTAGTGAGGGAGAGAGAACTTGTATGTAAATAAAATTGTGTTACTAAGGTAGATAGTGAGAAGTAACTTAAGAGAGGATCAGATAAGGTATTAAGAGAATACAGAAAAGGGTCTGGATTAATTCTGAACAGCATCAAAGAATGTTCTTGCAAGAGATAGTGTTTTCACCAGATCTTGAAGGTATGGATGAGGGTATACAGAGTGAGTATATTCAGATTCTACTTTAAAACAAATACTTTCCTCTGTTGTAGTGGAGTTGAGCTATACATCCAACAATAATGAAAAAATACACGCATATATACATATATGGAGAGAGATACATATTTTAGTACATGTAGCAATTGATTAATAAATGTACAGTTTAAGTCGCATGCAAAACCTTGGAGTGATAGCAAACTTCATTGTAGGATGTTTAGCAGCATCTCTGGTCTCTACTCACTAGATCCCAATAGCATCTCCCTAGGTGTGACAACCAAAAATGTCTCCAGGCATTGACCTCTGGAGGCAAAAAAAGCCCTTTATTAAGAACCAGTGGTATACATAAGTAAAACATACACAAGAGATTCCTCCCCTCTTCTCTGTATGTGAATAAAAATTGCAAAGTTCATGACCTGGATTTTCCTTTTAGGTTTCTTCTTTAGTGGTTCTTAACTTCATTGGGTGAAGTAAGCCTTTGAAGATCTGTTGAAAGCTGTTGACTCATTCACTTCTCAGGAAAACGCACATGCTGACTACCATTTCAGAGAATTTGCATCAGGGTTCTCTGGGGAGGAGTTCTGAGTTCTGTTTCCAGGAGCTCGTAGAATTGTCATGGTCTGCATATGCAAGGCAGGTGGATTACGGAAGGTTGATGTACAGAGGTCTGTATTTTGGAGCCTCTTCTGTATTTACTTCAGAACACTAACAATCAGGCGAGAATGTTCTGGTTTATCAAACCCTTCCTTCTGCCTTTCATCTTAACCATGCATTAGTTTTAACAAAGTTCATCCCAACAGAAGACAAAACACTGATGAGGTAGGATAGCTCCAGCTCCTCCTCCCTCTCTTCTAGTCTTGATTTCCATGTAGTCCAGTTTATTCCTTCCCTGATTGTCCAGGAGAATGAGAAAAAGAAAAAACAGAGTCTAGTGGGTAAGAAAGGGCCACCTGGACGGCTTGATTTGGATTGTGAAATAAAACACACACACATGCACACGTAGAATAAGTGGCTAAAATCTGAGTAAATCGTGAACTCTCTGTATCCTCCACCCATTGAATACTCCTAAAAGACTTTCTAGAAATTCAAGGACTTATTAATATAGAAACCTGGCCATTGTTCCTCTTCTCCTCCCCATGTGGTATGAGAGCACCTGTGGCAGGCTCCCAGAGACCACGGACCTCTTCCTCTAGGCGGGCTCTGCTCTTCTTTAAGGAGTCCCACAGGGCCTGGCCCGCCCCTGACCTCGCAACCCTTGAGATTAGTAACGGGATGAGTGAGGATCCGGGTGGCCCCTGCGTGGCAGCCAGTAAGAGTCTCAGCCTTCCCGGTTCGGGAAAGGGGAAGAATGCAGGAGGGGTAGGATTTCTTTCCTGATAGGATCGGTTGGGAAAGACCGCAGCCTGTGTGTGTCTTTCCCTTCGACCAAGGTGTCTGTTGCTCCGTAAATAAAACGTCCCACTGCCTTCTGAGAGCGCTATAAAGGCAGCGGAAGGGTAGTCCGCGGGGC
人類 SLC26A4 增強子 - 啟動子 (SEQ ID NO: 306) GGCTGCTCGGAAAACAGGACGAGGGGAGAGACTTGCTCAATAAGCTGAAAGTTCTGCCCCCGAGAGGGCTGCGACAGCTGCTGGAATGTGCCTGCAGCGTCCGCCTCTTGGGGACCCGCGGAGCGCGCCCTGACGGTTCCACGCCTGGCCCGGGGGTCTGCACCTCTCCTCCAGTGCGCACCTGGAGCTGCGTCCCGGGTCAGGTGCGGGGAGGGAGGGAATCTCAGTGTCCCCTTCCAGCCTTGCAAGCGCCTTTGGCCCCTGCCCCAGCCCCTCGGTTTGGGGGAGATTTCAGAACGCGGACAGCGCCCTGGCTGCGGGCCATAGGGGACTGGGTGGAACTCGGGAAGCCCCCAGAGCAGGGGCTTACTCGCTTCAAGTTTGGGGAACCCCGGGCAGCGGGTGCAGGCCACGAGACCCGAAGGTTCTCAGGTGCCCCCCTGCAGGCTGGCCGTGCGCGCCGTGGGGCGCTTGTCGCGAGCGCCGAGGGCTGCAGGACGCGGACCAGACTCGCGGTGCAGGGGGGCCTGGCTGCAGCTAACAGGTGATCCCGTTCTTTCTGTTCCTCGCTCTTCCCCTCCGATCGTCCTCGCTTACCGCGTGTCCTCCCTCCTCGCTGTCCTCTGGCTCGCAGGTCATGGCAGCGCCAGGCGGCAGGTCGGAGCCGCCGCAGCTCCCCGAGTACAGCTGCAGCTACATGGTGTCGCGGCCGGTCTACAGCGAGCTCGCTTTCCAGCAACAGCACGAGCGGCGCCTGCAGGAGCGCAAGACGCTGCGGGAGAGCCTGGCCAAGTGCTGCAGGTAGCGGCCGCGCGGGCCTGCGTAGAGAGAAGCGGAGCGGGGCGTCCACGCCTTGGGGAGGGAAGGGCGTCCCCAGCGGGCGAGAGTGGGGTGCGGGCGGCGGAGCCCCTGGGCGCCAGCTGCTTCTCCCAGAGGCCCGACTTTCGGTCTCCGGTCCTCCACGCCGCCCTTCTGGTGGGAGGGTGGCTCCATCAGTCTCGGGCCCGAAATGAACTTACCTGGGAAACTCGCCTTTGGGGAGAGTGGGTTCTAGGAGCCCCGTCTCTCTTTTTCCTCTCTGAAGGAAACTTGGAGTGCCTCTTGGGGTACAGTGGGTCCCTGTTGCCTTCTTGGGAGCTTGTTTAAATGAAATGAATAGGGAAACCCAGCTCTTGACCAGGAGGAGTCCTTGAAACACTCAAGCTAAGTAGGCGGGCTACCATTCAGTTAGAGACCAGGATGCAAGCTAGAACCCAGGGGAGCGCGGGGTGTGCCAAGTACTTCATCAGCAGGCTGTGGGACCCCTGGGGAAAGCCACCCTCAGTCTCTAAACCCAAACATGCCGTAACTAGATGTCACAAACATAAAGAAATTAGAGTTTCTAAAACCTTTCATTATAG
人類 SLC26A4增強子 - 啟動子 (SEQ ID NO: 307) CGGAAGGTTGATGTACAGAGGTCTGTATTTTGGAGCCTCTTCTGTATTTACTTCAGAACACTAACAATCAGGCGAGAATGTTCTGGTTTATCAAACCCTTCCTTCTGCCTTTCATCTTAACCATGCATTAGTTTTAACAAAGTTCATCCCAACAGAAGACAAAACACTGATGAGGTAGGATAGCTCCAGCTCCTCCTCCCTCTCTTCTAGTCTTGATTTCCATGTAGTCCAGTTTATTCCTTCCCTGATTGTCCAGGAGAATGAGAAAAAGAAAAAACAGAGTCTAGTGGGTAAGAAAGGGCCACCTGGACGGCTTGATTTGGATTGTGAAATAAAACACACACACATGCACACGTAGAATAAGTGGCTAAAATCTGAGTAAATCGTGAACTCTCTGTATCCTCCACCCATTGAATACTCCTAAAAGACTTTCTAGAAATTCAAGGACTTATTAATATAGAAACCTGGCCATTGTTCCTCTTCTCCTCCCCATGTGGTATGAGAGCACCTGTGGCAGGCTCCCAGAGACCACGGACCTCTTCCTCTAGGCGGGCTCTGCTCTTCTTTAAGGAGTCCCACAGGGCCTGGCCCGCCCCTGACCTCGCAACCCTTGAGATTAGTAACGGGATGAGTGAGGATCCGGGTGGCCCCTGCGTGGCAGCCAGTAAGAGTCTCAGCCTTCCCGGTTCGGGAAAGGGGAAGAATGCAGGAGGGGTAGGATTTCTTTCCTGATAGGATCGGTTGGGAAAGACCGCAGCCTGTGTGTGTCTTTCCCTTCGACCAAGGTGTCTGTTGCTCCGTAAATAAAACGTCCCACTGCCTTCTGAGAGCGCTATAAAGGCAGCGGAAGGGTAGTCCGCGGGGCATTCCGGGCGGGGCGCGAGCAGAGACAGGTGAGTT
在某些實施例中，啟動子為如SEQ ID NO: 308所述之人類 LGR5 增強子-啟動子。在一些實施例中，增強子-啟動子序列與由SEQ ID NO: 308之增強子-啟動子序列至少85%、90%、95%、98%或99%一致。在一些實施例中，啟動子為包含在SEQ ID NO: 308中之人類 LGR5 內源增強子-啟動子序列。
人類 LGR5 增強子 - 啟動子 (SEQ IDNO: 308) AGGGCTATTTGTACCTCAACGAGGGCTTCTCTCCAAGAAAGCCCTGAATCCTTTTCCTCCTTTTTCCTGCAGATTCACTATAGGACACTTTTTGAAGCAAGAGCATGCATTTTCCCCCTGGCGCTCTGCAGCGGTTCTCAGAGCCCAGTGTCACTCACATAGGTGGGACTGCTCTCAGTTCAGAGAGCGCTGGGACACTTAAGATGAAAAGTCCCTGGAAGTTAGCAAACAGCCATCTGTCACTCTGGCATCGATTTACTAAAAGTGACTTCTAGGGTATTCTAAACCACTTTTAAAAAACAAATGAGTCACTTCGACTTCCTCACCCCGCAAGAGATAGGAAGGCAGCAGTGGAGTGCTCGCTCAGGAGCTGTATTTGTTTAGCGATTAGCCTAGAGCTTTGATTTTAGGGCAAAAGCGAGCCAGACAGTGCGGCAGACGTAAGGATCAAAAAGGCCACCTATCATTCGCCGGGGACGCCTGCCTCCTTACCCTGATAACGTAACTATTTCTCTGCATAGGATTTTAGTTTTTGTGTTTTTGTTTTGTTTTATTCTGTTTAATCACTTCAAGTATCTCATCCATTATTTGAAGCGGGCTCGGAGGAAACGTGCCGCATCCTCCAGTCCTTGTGCGTCTGTTTAGGTCTCTCCGAAGCAGGTCCCTCTCGACTCTTAGATCTGGGTCTCCAGCACGCATGAAGGGGTAAGGGTGGGGGGGTCCCCTATTCCGGCGCGCGGCGTTGAGCACTGAATCTTCCAGGCGGAGGCTCAGTGGGAGCGCCGAGAACTCGCCAGTACCGCGCGCTGCCTGCTGCCTGCTGCCTCCCAGCCCAGGACTTGGGAAAGGAGGGAGGGGACAAGTGGAGGGAAAGTGGGGCCGGGCGGGGGGTGCCTGGGAAGCCAGGCTGCGCTGACGTCACTGGGCGCGCAATTCGGGCTGGAGCGCTTTAAAAAACGAGCGTGCAAGCAGAGATGCTGCTCCACACCGCTCAGGCCGCGAGCAGCAGCAAGGCGCACCGCCACTGTCGCCGCTGCAGCCAGGGCTGCTCCGAAGGCCGGCGTGGCGGCAACCGGCACCTCTGTCCCCGCCGCGCTTCTCCTCGCCGCCCACGCCGTGGGGTCAGGAACGCGGCGTCTGGCGCTGCAGACGCCCGCTGAGTTGCAGAAGCCCACGGAGCGGCGCCCGGCGCGCCACGGCCCGTAGCAGTCCGGTGCTGCTCTCCGCCCGCGTCCGGCTCGTGGCCCCCTACTTCGGGCACCGACCGGT
在某些實施例中，啟動子為如SEQ ID NO: 309所述之人類SYN1 增強子-啟動子。在一些實施例中，增強子-啟動子序列與由SEQ ID NO: 309之增強子-啟動子序列至少85%、90%、95%、98%或99%一致。在一些實施例中，啟動子為包含在SEQ ID NO: 309中之人類SYN1 內源增強子-啟動子序列。
人類 SYN1 增強子 - 啟動子 (SEQ ID NO: 309) TGCGTATGAGTGCAAGTGGGTTTTAGGACCAGGATGAGGCGGGGTGGGGGTGCCTACCTGACGACCGACCCCGACCCACTGGACAAGCACCCAACCCCCATTCCCCAAATTGCGCATCCCCTATCAGAGAGGGGGAGGGGAAACAGGATGCGGCGAGGCGCGTGCGCACTGCCAGCTTCAGCACCGCGGACAGTGCCTTCGCCCCCGCCTGGCGGCGCGCGCCACCGCCGCCTCAGCACTGAAGGCGCGCTGACGTCACTCGCCGGTCCCCCGCAAACTCCCCTTCCCGGCCACCTTGGTCGCGTCCGCGCCGCCGCCGGCCCAGCCGGACCGCACCACGCGAGGCGCGAGATAGGGGGGCACGGGCGCGACCATCTGCGCTGCGGCGCCGGCGACTCAGCGCTGCCTCAGTCTGCGGTGGGCAGCGGAGGAGTCGTGTCGTGCCTGAGAGCGCAGTCGAGAA
在某些實施例中，啟動子為如SEQ ID NO: 310所述之人類 GFAP 增強子-啟動子。在一些實施例中，增強子-啟動子序列與由SEQ ID NO: 310之增強子-啟動子序列至少85%、90%、95%、98%或99%一致。在一些實施例中，啟動子為包含在SEQ ID NO: 310中之人類 GFAP 內源增強子-啟動子序列。
人類 GFAP 增強子 - 啟動子 (SEQ ID NO: 310) CCCACCTCCCTCTCTGTGCTGGGACTCACAGAGGGAGACCTCAGGAGGCAGTCTGTCCATCACATGTCCAAATGCAGAGCATACCCTGGGCTGGGCGCAGTGGCGCACAACTGTAATTCCAGCACTTTGGGAGGCTGATGTGGAAGGATCACTTGAGCCCAGAAGTTCTAGACCAGCCTGGGCAACATGGCAAGACCCTATCTCTACAAAAAAAGTTAAAAAATCAGCCACGTGTGGTGACACACACCTGTAGTCCCAGCTATTCAGGAGGCTGAGGTGAGGGGATCACTTAAGGCTGGGAGGTTGAGGCTGCAGTGAGTCGTGGTTGCGCCACTGCACTCCAGCCTGGGCAACAGTGAGACCCTGTCTCAAAAGACAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAGAACATATCCTGGTGTGGAGTAGGGGACGCTGCTCTGACAGAGGCTCGGGGGCCTGAGCTGGCTCTGTGAGCTGGGGAGGAGGCAGACAGCCAGGCCTTGTCTGCAAGCAGACCTGGCAGCATTGGGCTGGCCGCCCCCCAGGGCCTCCTCTTCATGCCCAGTGAATGACTCACCTTGGCACAGACACAATGTTCGGGGTGGGCACAGTGCCTGCTTCCCGCCGCACCCCAGCCCCCCTCAAATGCCTTCCGAGAAGCCCATTGAGCAGGGGGCTTGCATTGCACCCCAGCCTGACAGCCTGGCATCTTGGGATAAAAGCAGCACAGCCCCCTAGGGGCTGCCCTTGCTGTGTGGCGCCACCGGCGGTGGAGAACAAGGCTCTATTCAGCCTGTGCCCAGGAAAGGGGATCAGGGGATGCCCAGGCATGGACAGTGGGTGGCAGGGGGGGAGAGGAGGGCTGTCTGCTTCCCAGAAGTCCAAGGACACAAATGGGTGAGGGGACTGGGCAGGGTTCTGACCCTGTGGGACCAGAGTGGAGGGCGTAGATGGACCTGAAGTCTCCAGGGACAACAGGGCCCAGGTCTCAGGCTCCTAGTTGGGCCCAGTGGCTCCAGCGTTTCCAAACCCATCCATCCCCAGAGGTTCTTCCCATCTCTCCAGGCTGATGTGTGGGAACTCGAGGAAATAAATCTCCAGTGGGAGACGGAGGGGTGGCCAGGGAAACGGGGCGCTGCAGGAATAAAGACGAGCCAGCACAGCCAGCTCATGTGTAACGGCTTTGTGGAGCTGTCAAGGCCTGGTCTCTGGGAGAGAGGCACAGGGAGGCCAGACAAGGAAGGGGTGACCTGGAGGGACAGATCCAGGGGCTAAAGTCCTGATAAGGCAAGAGAGTGCCGGCCCCCTCTTGCCCTATCAGGACCTCCACTGCCACATAGAGGCCATGATTGACCCTTAGACAAAGGGCTGGTGTCCAATCCCAGCCCCCAGCCCCAGAACTCCAGGGAATGAATGGGCAGAGAGCAGGAATGTGGGACATCTGTGTTCAAGGGAAGGACTCCAGGAGTCTGCTGGGAATGAGGCCTAGTAGGAAATGAGGTGGCCCTTGAGGGTACAGAACAGGTTCATTCTTCGCCAAATTCCCAGCACCTTGCAGGCACTTACAGCTGAGTGAGATAATGCCTGGGTTATGAAATCAAAAAGTTGGAAAGCAGGTCAGAGGTCATCTGGTACAGCCCTTCCTTCCCTTTTTTTTTTTTTTTTTTGTGAGACAAGGTCTCTCTCTGTTGCCCAGGCTGGAGTGGCGCAAACACAGCTCACTGCAGCCTCAACCTACTGGGCTCAAGCAATCCTCCAGCCTCAGCCTCCCAAAGTGCTGGGATTACAAGCATGAGCCACCCCACTCAGCCCTTTCCTTCCTTTTTAATTGATGCATAATAATTGTAAGTATTCATCATGGTCCAACCAACCCTTTCTTGACCCACCTTCCTAGAGAGAGGGTCCTCTTGCTTCAGCGGTCAGGGCCCCAGACCCATGGTCTGGCTCCAGGTACCACCTGCCTCATGCAGGAGTTGGCGTGCCCAGGAAGCTCTGCCTCTGGGCACAGTGACCTCAGTGGGGTGAGGGGAGCTCTCCCCATAGCTGGGCTGCGGCCCAACCCCACCCCCTCAGGCTATGCCAGGGGGTGTTGCCAGGGGCACCCGGGCATCGCCAGTCTAGCCCACTCCTTCATAAAGCCCTCGCATCCCAGGAGCGAGCAGAGCCAGAGCAGGTTGGAGAGGAGACGCATCACCTCCGCTGCTCGCvi. 增強子及 5' 帽
在一些情況下，構築體可包括啟動子序列及/或增強子序列。在一些實施例中，增強子為可增加編碼關注蛋白(例如KCNQ4蛋白)之核酸的轉錄水準的核苷酸序列。在一些實施例中，增強子序列(長度為50-1500個鹼基對)通常藉由為轉錄相關蛋白(例如轉錄因數)提供額外結合位點來增加轉錄水準。在一些實施例中，在內含子序列內發現增強子序列。與啟動子序列不同，增強子序列可在距轉錄起始位點更大之距離處起作用(例如，與啟動子相比)。增強子之非限制性實例包括RSV增強子、CMV增強子及SV40增強子。CMV增強子之實例描述於例如Boshart等人, Cell 41(2):521-530, 1985中，該文獻以全文引用之方式併入本文中。
如本文所述，5'帽(亦稱為RNA帽、RNA 7-甲基鳥苷帽或RNA m.sup.7G帽)為經修飾鳥嘌呤核苷酸，其在轉錄開始後不久添加至真核信使RNA之「前」端或5'端。在一些實施例中，5'帽由連接於第一轉錄核苷酸之末端基團組成。其存在對於由核糖體識別及避免受RNase影響至關重要。帽添加與轉錄相結合，且在轉錄同時發生，從而彼此影響。轉錄開始後不久，正合成之mRNA的5'末端由與RNA聚合酶締合之帽合成複合物結合。該酶複合物催化mRNA加帽所需之化學反應。合成以多步生化反應進行。可修飾加帽部分以調節mRNA之功能性，諸如其穩定性或轉譯效率。vii. 非轉譯區 (UTR)
在一些實施例中，本文所述之任何構築體可包括一或多個非轉譯區。在一些實施例中，構築體可包括5' UTR及/或3' UTR。在一些實施例中，若存在超過一個UTR，則UTR可來自單一基因或超過一種基因。
如熟習此項技術者所瞭解，基因之非轉譯區(UTR)經轉錄但不轉譯。在一些實施例中，5' UTR在轉錄起始位點處開始，且繼續至起始密碼子，但不包括起始密碼子。在一些實施例中，3' UTR在緊鄰終止密碼子後開始，且持續直至轉錄終止訊號為止。在不希望受任何特定理論限制之情況下，愈來愈多證據表明UTR在核酸分子之穩定性及轉譯中起調節作用。在一些實施例中，可將UTR之調節特徵併入本文所述之任何技術(例如構築體、組成物、套組或方法)中以例如增強KCNQ4蛋白之穩定性。
舉例而言，在一些實施例中，在本文所述之任何構築體中包括5' UTR。可使用5' UTR之非限制性實例來增強核酸分子諸如mRNA之表現，該等實例包括來自以下基因之彼等5' UTR：白蛋白、血清澱粉樣蛋白A、載脂蛋白A/B/E、轉鐵蛋白、α-甲胎蛋白、促紅細胞生成素及因數VIII。在一些實施例中，亦已知例如5' UTR形成參與伸長因數結合之二級結構。
在一些實施例中，來自由耳蝸中之細胞轉錄的mRNA的5' UTR可包括在本文所述之任何技術(例如構築體、組成物、套組及方法)中。
在一些實施例中，已知3' UTR中包埋有數段腺苷及尿苷。此等富含AU之印記在具有高翻轉率之基因中尤其普遍。根據富含AU之元件(ARE)的序列特徵及功能特性，其可分為三類(Chen等人,Mol. Cell. Biol. 15:5777-5788, 1995；Chen等人,Mol. Cell Biol. 15:2010-2018, 1995，其中每一者以全文引用之方式併入本文中)：I類ARE在富含U之區域內含有數個AUUUA模體之分散複本。舉例而言，c-Myc及MyoD mRNA含有I類ARE。II類ARE具有兩個或更多個重疊UUAUUUA(U/A) (U/A) 九聚物。GM-CSF及TNF-α mRNA為含有II類ARE之實例。III類ARE之定義不太明確。此等富含U之區域不含AUUUA模體。此類別之兩個經充分研究之實例為c-Jun及生肌蛋白mRNA。
已知大多數與ARE結合之蛋白質會使信使不穩定，而ELAV家族之成員(最尤其HuR)已證明可增加mRNA之穩定性。HuR結合於所有三種類別之ARE。將HuR特異性結合位元點工程改造至核酸分子之3' UTR中將引起HuR結合，從而活體內 穩定訊息。
在一些實施例中，3' UTR ARE之引入、移除或修飾可用於調節編碼KCNQ4蛋白(Kv7.4)之mRNA的穩定性。在其他實施例中，可移除或突變ARE以增加細胞內穩定性，因此增加KCNQ4蛋白(Kv7.4)之轉譯及產生。
在一些實施例中，UTR序列與本文所揭示之任何UTR序列(例如SEQ ID No: 25、26、27、28、29及/或30)至少85%、90%、95%、98%或99%一致。作為非限制性實例，非轉譯區可為或包含以下：
來自內源 KCNQ4 轉錄變體 1 之人類 5' UTR 序列 (SEQ ID NO: 25) GACATGTGAGCGGCGCGCGCCGGTGGCAGGTGGAAAGGCGAGCGGCATGGAGCGCGTAATAAGAGAGTTGGAGTCGGAAAGAGCAGCCCCAGTCGCCGGGGAAGCGGGAGGTCAGTGCGGGCTCCGGCGGCCCCCAGGCTCCGAGCGCCCGCCCGCGGCCCCGGCCCGGCCCCTAGCCCCCGCCGCCCGCGCCCGCCCCGGGTCGCCCCTCTGGCCCCGGGTCCGAGCCATGCGTCTCTGAGCGCCCCGAGCGCGCCCCCGCCCCGGACCGTGCCCGGGCCCCGGCGCCCCCAGCCCGGCGCCGCCC
來自內源 KCNQ4 轉錄變體 2 之人類 5' UTR 序列 (SEQ ID NO: 26) GACATGTGAGCGGCGCGCGCCGGTGGCAGGTGGAAAGGCGAGCGGCATGGAGCGCGTAATAAGAGAGTTGGAGTCGGAAAGAGCAGCCCCAGTCGCCGGGGAAGCGGGAGGTCAGTGCGGGCTCCGGCGGCCCCCAGGCTCCGAGCGCCCGCCCGCGGCCCCGGCCCGGCCCCTAGCCCCCGCCGCCCGCGCCCGCCCCGGGTCGCCCCTCTGGCCCCGGGTCCGAGCCATGCGTCTCTGAGCGCCCCGAGCGCGCCCCCGCCCCGGACCGTGCCCGGGCCCCGGCGCCCCCAGCCCGGCGCCGCCC
來自內源 KCNQ4 轉錄變體 X1 之人類 5' UTR 序列 (SEQ ID NO: 27) GACCACTCGTACCACAAAGTGGGCAGCTGAGGAGCTGATCACCGCCTGGTACATCGGGTTCCTGGTGCTCATCTTCGCCTCCTTCCTGGTCTACCTGGCTGAGAAGGACGCCAACTCCGACTTCTCCTCCTACGCCGACTCGCTCTGGTGGGGGACGATTACATTGACAACCATCGGCTATGGTGACAAGACACCGCACACATGGCTGGGCAGGGTCCTGGCTGCTGGCTTCGCCTTACTGGGCATCTCTTTCTTTGCCCTGCCTGCCGGCATCCTAGGCTCCGGCTTTGCCCTGAAGGTCCAGGAGCAGCACCGGCAGAAGCACTTCGAGAAGCGGAGG
來自內源 KCNQ4 轉錄變體 1 之人類 3' UTR 序列 (SEQ ID NO: 28) GGGACTTCTCAGAGGCAGGGCAGCACACGGCCAGCCCCGCGGCCTGGCGCTCCGACTGCCCTCTGAGGCCTCCGGACTCCTCTCGTACTTGAACTCACTCCCTCACGGGGAGAGAGACCACACGCAGTATTGAGCTGCCTGAGTGGGCGTGGTACCTGCTGTGGGTGCCAGCGCCCCTTCCCCACCTCAGGAGCGTGAGATGCCAGGTCGCACAGAGGGCAGCAGCAGCGGCCGTCCCGCGGCCTCTGGGCCCCCCAGTGCCCTGCCCACTCCATCAAGGCCCTATGTGGCCCACCTGGCAGGGGCACAGCCCCGGGAGTGGGAGCGGGCGCTGGGGCCCTGGGCCCTGACCCAGCTTCCAGCTATGCAAGGTGAGGTCTCTGGCCCACCCTTCGGACACAGCAGGGAAGCCCTCCCGCCAAGTCCCCGCCCCACTTGGGGGTGGGCCAAGGTGCCCCCACAGGTACCCACAAAGCACAGGACCCTGCCACAAGGCAGGTGGACACCATATATGCAAACCATGTTAAATATGCAACTTTGGGGACCCCCATGGGGTCTCTCTGTCCCTCCCCCATTGGGAGCTGGGCCCCCAGCAGTAGCTGGTCTCAGGCTGCTTGGCCACCACCCTGTCCCTATTCTTTGGCTTATCACTCCTTCCCCTCCCAGCATGGGGCCTGTTTCTCCCCTGCCCTCTCCTAAGGGCAATGCCTGGGCCTTTCTTCCCATTTGCAAGTGTCAGCTCCCAGGGGCTCCCTCCTCCTGCTGGGTGGCCACTCCCCTCCTTGGCCCTCCAGACACCACTCATAGTCAGCACAGGTTTCTGTATCCTCCCCAAAACTCCCAGACAGTGCTTCGTGGACGATCGCACAAACATAGCCTTTTAGTTTCTCCAGACAGGAAGAAAGCCTCTCACACTTAAACATGCAATGACGTGACACACTTGGAGACATGAGTGCAGAGCCACTCAGCCGCTCCTGGGCCTCTGCAGCAGATGCCAGTGGACTGGCCTTGCAGGGTGACGACCACTAAGAGGAAGACCCCCAACTCCATCTGAGCAGGAGAAGGAGCTTTGAAGTAACCCGAGAGCTCTCCAGGCCCCACCCAGACCTTTACCCGCTCCCCTTCTTCAAGAAGATCTCCTCCTCTCTGGTCCAGGAGCCCTAACCCACTGCCTCTGCCTGTCCCCAAGGGCCCGCCTCCGTGTCTCCACAGCACAACTCGGGCCCAGGCCTGACACCACTGGAGAGACCCCAGGCCCACTTCTAGCCAGGCCTGTGCCTTCCTAGTCACTCTAACTCCCAGAGAGAATAAGAATGCATGTAATAGCTATACCAACCGCGCATCCGGCTTTCACATGCACTGTCTCCCCTCCCTCCACACCCCACTTCTTCACTTCAATTGGCAGCGCCACATCCAGGCGTCAGCCCCCATTCACTCCAGGAACACTTTCTTATCCCCACCCCTTTGCTCCTCTTCTGCAAAGCCAATGCAGGTGGCAGGAAGGTGAGGGGTAGTGGACCAATGGCAACCCTCTGTGGGAACAAGGGGCCGAGGCCACGCTGCCTGCATCTCGTGCTGGGGACCTGCATGCGCCAGCACCAGGGCTTGGACTGGATCTTACTCAGTCCATGGTGCCCAGCCTCTGCCCCAACATGCCCTCTGCATGTGACCGTCATGCCCTGGATGGAGCCACTCCTGGCTCACCCCACCTGCACTGCACTGTCCCCAGAGAGCCACCCCTCCACCCACTCAGAGACAGCTGTGGAGAGGGCCAGGAGAATGGGATTACCCTATGACCAAGGAGACATGGGAAGAAGCCCTCCTTCCTTCCACGATCGAGGTTCCGCCATCAACTCGGTTCTCGGATATGCAAGTACCTCACTTTGTTAACTTATTAACTTATTGGTTTCATTAAAGTTTTCAAGAGGA
來自內源 KCNQ4 轉錄變體 2 之人類 3' UTR 序列 (SEQ ID NO: 29) GGGACTTCTCAGAGGCAGGGCAGCACACGGCCAGCCCCGCGGCCTGGCGCTCCGACTGCCCTCTGAGGCCTCCGGACTCCTCTCGTACTTGAACTCACTCCCTCACGGGGAGAGAGACCACACGCAGTATTGAGCTGCCTGAGTGGGCGTGGTACCTGCTGTGGGTGCCAGCGCCCCTTCCCCACCTCAGGAGCGTGAGATGCCAGGTCGCACAGAGGGCAGCAGCAGCGGCCGTCCCGCGGCCTCTGGGCCCCCCAGTGCCCTGCCCACTCCATCAAGGCCCTATGTGGCCCACCTGGCAGGGGCACAGCCCCGGGAGTGGGAGCGGGCGCTGGGGCCCTGGGCCCTGACCCAGCTTCCAGCTATGCAAGGTGAGGTCTCTGGCCCACCCTTCGGACACAGCAGGGAAGCCCTCCCGCCAAGTCCCCGCCCCACTTGGGGGTGGGCCAAGGTGCCCCCACAGGTACCCACAAAGCACAGGACCCTGCCACAAGGCAGGTGGACACCATATATGCAAACCATGTTAAATATGCAACTTTGGGGACCCCCATGGGGTCTCTCTGTCCCTCCCCCATTGGGAGCTGGGCCCCCAGCAGTAGCTGGTCTCAGGCTGCTTGGCCACCACCCTGTCCCTATTCTTTGGCTTATCACTCCTTCCCCTCCCAGCATGGGGCCTGTTTCTCCCCTGCCCTCTCCTAAGGGCAATGCCTGGGCCTTTCTTCCCATTTGCAAGTGTCAGCTCCCAGGGGCTCCCTCCTCCTGCTGGGTGGCCACTCCCCTCCTTGGCCCTCCAGACACCACTCATAGTCAGCACAGGTTTCTGTATCCTCCCCAAAACTCCCAGACAGTGCTTCGTGGACGATCGCACAAACATAGCCTTTTAGTTTCTCCAGACAGGAAGAAAGCCTCTCACACTTAAACATGCAATGACGTGACACACTTGGAGACATGAGTGCAGAGCCACTCAGCCGCTCCTGGGCCTCTGCAGCAGATGCCAGTGGACTGGCCTTGCAGGGTGACGACCACTAAGAGGAAGACCCCCAACTCCATCTGAGCAGGAGAAGGAGCTTTGAAGTAACCCGAGAGCTCTCCAGGCCCCACCCAGACCTTTACCCGCTCCCCTTCTTCAAGAAGATCTCCTCCTCTCTGGTCCAGGAGCCCTAACCCACTGCCTCTGCCTGTCCCCAAGGGCCCGCCTCCGTGTCTCCACAGCACAACTCGGGCCCAGGCCTGACACCACTGGAGAGACCCCAGGCCCACTTCTAGCCAGGCCTGTGCCTTCCTAGTCACTCTAACTCCCAGAGAGAATAAGAATGCATGTAATAGCTATACCAACCGCGCATCCGGCTTTCACATGCACTGTCTCCCCTCCCTCCACACCCCACTTCTTCACTTCAATTGGCAGCGCCACATCCAGGCGTCAGCCCCCATTCACTCCAGGAACACTTTCTTATCCCCACCCCTTTGCTCCTCTTCTGCAAAGCCAATGCAGGTGGCAGGAAGGTGAGGGGTAGTGGACCAATGGCAACCCTCTGTGGGAACAAGGGGCCGAGGCCACGCTGCCTGCATCTCGTGCTGGGGACCTGCATGCGCCAGCACCAGGGCTTGGACTGGATCTTACTCAGTCCATGGTGCCCAGCCTCTGCCCCAACATGCCCTCTGCATGTGACCGTCATGCCCTGGATGGAGCCACTCCTGGCTCACCCCACCTGCACTGCACTGTCCCCAGAGAGCCACCCCTCCACCCACTCAGAGACAGCTGTGGAGAGGGCCAGGAGAATGGGATTACCCTATGACCAAGGAGACATGGGAAGAAGCCCTCCTTCCTTCCACGATCGAGGTTCCGCCATCAACTCGGTTCTCGGATATGCAAGTACCTCACTTTGTTAACTTATTAACTTATTGGTTTCATTAAAGTTTTCAAGAGGA
來自內源 KCNQ4 轉錄變體 X1 之例示性人類 3' UTR 序列 (SEQ ID NO: 30) GGGACTTCTCAGAGGCAGGGCAGCACACGGCCAGCCCCGCGGCCTGGCGCTCCGACTGCCCTCTGAGGCCTCCGGACTCCTCTCGTACTTGAACTCACTCCCTCACGGGGAGAGAGACCACACGCAGTATTGAGCTGCCTGAGTGGGCGTGGTACCTGCTGTGGGTGCCAGCGCCCCTTCCCCACCTCAGGAGCGTGAGATGCCAGGTCGCACAGAGGGCAGCAGCAGCGGCCGTCCCGCGGCCTCTGGGCCCCCCAGTGCCCTGCCCACTCCATCAAGGCCCTATGTGGCCCACCTGGCAGGGGCACAGCCCCGGGAGTGGGAGCGGGCGCTGGGGCCCTGGGCCCTGACCCAGCTTCCAGCTATGCAAGGTGAGGTCTCTGGCCCACCCTTCGGACACAGCAGGGAAGCCCTCCCGCCAAGTCCCCGCCCCACTTGGGGGTGGGCCAAGGTGCCCCCACAGGTACCCACAAAGCACAGGACCCTGCCACAAGGCAGGTGGACACCATATATGCAAACCATGTTAAATATGCAACTTTGGGGACCCCCATGGGGTCTCTCTGTCCCTCCCCCATTGGGAGCTGGGCCCCCAGCAGTAGCTGGTCTCAGGCTGCTTGGCCACCACCCTGTCCCTATTCTTTGGCTTATCACTCCTTCCCCTCCCAGCATGGGGCCTGTTTCTCCCCTGCCCTCTCCTAAGGGCAATGCCTGGGCCTTTCTTCCCATTTGCAAGTGTCAGCTCCCAGGGGCTCCCTCCTCCTGCTGGGTGGCCACTCCCCTCCTTGGCCCTCCAGACACCACTCATAGTCAGCACAGGTTTCTGTATCCTCCCCAAAACTCCCAGACAGTGCTTCGTGGACGATCGCACAAACATAGCCTTTTAGTTTCTCCAGACAGGAAGAAAGCCTCTCACACTTAAACATGCAATGACGTGACACACTTGGAGACATGAGTGCAGAGCCACTCAGCCGCTCCTGGGCCTCTGCAGCAGATGCCAGTGGACTGGCCTTGCAGGGTGACGACCACTAAGAGGAAGACCCCCAACTCCATCTGAGCAGGAGAAGGAGCTTTGAAGTAACCCGAGAGCTCTCCAGGCCCCACCCAGACCTTTACCCGCTCCCCTTCTTCAAGAAGATCTCCTCCTCTCTGGTCCAGGAGCCCTAACCCACTGCCTCTGCCTGTCCCCAAGGGCCCGCCTCCGTGTCTCCACAGCACAACTCGGGCCCAGGCCTGACACCACTGGAGAGACCCCAGGCCCACTTCTAGCCAGGCCTGTGCCTTCCTAGTCACTCTAACTCCCAGAGAGAATAAGAATGCATGTAATAGCTATACCAACCGCGCATCCGGCTTTCACATGCACTGTCTCCCCTCCCTCCACACCCCACTTCTTCACTTCAATTGGCAGCGCCACATCCAGGCGTCAGCCCCCATTCACTCCAGGAACACTTTCTTATCCCCACCCCTTTGCTCCTCTTCTGCAAAGCCAATGCAGGTGGCAGGAAGGTGAGGGGTAGTGGACCAATGGCAACCCTCTGTGGGAACAAGGGGCCGAGGCCACGCTGCCTGCATCTCGTGCTGGGGACCTGCATGCGCCAGCACCAGGGCTTGGACTGGATCTTACTCAGTCCATGGTGCCCAGCCTCTGCCCCAACATGCCCTCTGCATGTGACCGTCATGCCCTGGATGGAGCCACTCCTGGCTCACCCCACCTGCACTGCACTGTCCCCAGAGAGCCACCCCTCCACCCACTCAGAGACAGCTGTGGAGAGGGCCAGGAGAATGGGATTACCCTATGACCAAGGAGACATGGGAAGAAGCCCTCCTTCCTTCCACGATCGAGGTTCCGCCATCAACTCGGTTCTCGGATATGCAAGTACCTCACTTTGTTAACTTATTAACTTATTGGTTTCATTAAAGTTTTCAAGAGGAGGTGAviii. Kozak 序列
在一些實施例中，本揭示案之構築體包含一或多個Kozak序列。在一些實施例中，天然5' UTR包括在轉譯起始中起作用之序列。舉例而言，在一些實施例中，其具有如Kozak序列之印記，通常已知其參與核糖體起始多種基因轉譯所用之過程。Kozak序列通常具有共有序列CCR(A/G)CCAUGG，其中R為起始密碼子(AUG)上游三個鹼基之嘌呤(A或G)，其後為另一「G」。在一些實施例中，Kozak序列可包括在合成或其他序列元件，諸如選殖位點中。ix. 內部核糖體進入位點 (IRES)
在一些實施例中，本揭示案之構築體包含一或多個多核苷酸內部核糖體進入位點(IRES)。舉例而言，在一些實施例中，本揭示案之構築體(例如編碼KCNQ4基因產物(例如人類Kv7.4蛋白等)之構築體可包括IRES。在一些實施例中，使用IRES序列自單一基因轉錄物產生超過一種多肽。在一些實施例中，IRES形成複雜二級結構，該二級結構允許緊鄰IRES所處位置下游之mRNA自任何位置發生轉譯起始(參見例如Pelletier及Sonenberg,Mol. Cell. Biol. 8(3):1103-1112, 1988，該文獻以全文引用之方式併入本文中)。
熟習此項技術者已知數種IRES序列，包括來自以下之彼等IRES序列，例如：足口病病毒(FMDV)、腦心肌炎病毒(EMCV)、人類鼻病毒(HRV)、蟋蟀麻痹病毒、人類免疫缺陷病毒(HIV)、A型肝炎病毒(HAV)、C型肝炎病毒(HCV)及脊髓灰質炎病毒(PV)。參見例如Alberts, Molecular Biology of the Cell, Garland Science, 2002；及Hellen等人,Genes Dev. 15(13):1593-612, 2001，其中每一者以全文引用之方式併入本文中。
在一些實施例中，併入編碼KCNQ4基因產物(例如人類Kv7.4蛋白等)或其抑制性核酸(例如miRNA等)之構築體中的IRES序列為足口病病毒(FMDV)。足口病病毒2A序列為一種小肽(長度為約18個胺基酸)，已展示其介導聚蛋白之裂解(Ryan, M D等人,EMBO 4:928-933, 1994；Mattion等人,J. Virology 70:8124-8127, 1996；Furler等人,Gene Therapy 8:864-873, 2001；及Halpin等人,Plant Journal 4:453-459, 1999，其中每一者以全文引用之方式併入本文中)。2A序列之裂解活性先前已在包括質體及基因療法構築體(AAV及逆轉錄病毒)之人工系統中展現(Ryan等人,EMBO 4:928-933, 1994；Mattion等人,J. Virology 70:8124-8127, 1996；Furler等人,Gene Therapy 8:864-873, 2001；及Halpin等人,Plant Journal 4:453-459, 1999；de Felipe等人,Gene Therapy 6:198-208, 1999；de Felipe等人,Human Gene Therapy 11:1921-1931, 2000；及Klump等人,Gene Therapy 8:811-817, 2001，其中每一者以全文引用之方式併入本文中)。x. tRNA 序列
在一些實施例中，本揭示案之構築體包含tRNA序列。舉例而言，在一些實施例中，tRNA序列可用於促進多重gRNA或shRNA/siRNA策略。舉例而言，在一些實施例中，tRNA可包括在包含至少2、3、4、5、6、7、8、9、10個gRNA；至少2、3、4、5、6、7、8、9、10個shRNA/siRNA等之構築體中(參見例如PNAS 2015, 112 (11) 3570-3575，該文獻以全文引用之方式併入本文中)。xi. 其他內含子序列
在一些實施例中，本揭示案之構築體包括一或多個內含子序列，該等內含子序列不包含UTR序列。在一些實施例中，可將非UTR序列併入5'或3' UTR中。在一些實施例中，可將內含子或內含子序列之部分併入本文所提供任何構築體、組成物、套組及方法中之多核苷酸的側接區域中。併入內含子序列可增加蛋白質產量以及mRNA水準。內含子可為來自KCNQ4基因之內含子，或可為來自異源基因之內含子，例如，雜交腺病毒/小鼠免疫球蛋白內含子(Yew等人,Human Gene Ter. 8(5):575-584, 1997，該文獻以全文引用之方式併入本文中)、SV40內含子(Ostedgaard等人,Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 102(8):2952-2957, 2005，該文獻以全文引用之方式併入本文中)、MVM內含子(Wu等人,Mol. Ther. 16(2):280-289, 2008，該文獻以全文引用之方式併入本文中)、因數IX截短內含子1 (Wu等人,Mol. Ther. 16(2):280-289, 2008；Kurachi等人,J. Biol. Chem. 270(10):5276-5281, 1995，其中每一者以全文引用之方式併入本文中)、嵌合 J-球蛋白剪接供體/免疫球蛋白重鏈剪接受體內含子(Wu等人,Mol. Ther. 16(2):280-289, 2008；Choi等人,Mol. Brain 7:17, 2014，其中每一者以全文引用之方式併入本文中)、SV40晚期剪接供體/剪接受體內含子(19S/16S)(Yew等人,Human Gene Ther. 8(5):575-584, 1997，該文獻以全文引用之方式併入本文中)、雜交腺病毒剪接供體/IgG剪接受體(Choi等人,Mol. Brain 7:17, 1991；Huang及Gorman,Mol. Cell Biol. 10(4):1805-1810, 1990，其中每一者以全文引用之方式併入本文中)。在一些實施例中，內含子序列與本文所揭示之任何內含子序列至少85%、90%、95%、98%或99%一致。
作為非限制性實例，根據本揭示案提供之內含子序列可為或包含以下：
SD 內含子 (SEQ ID NO: 31) GTAAGTATCAAGGTTACAAGACAGGTTTAAGGAGACCAATAGAAACTGGGCTTGTCGAGACAGAGAAGACTCTTGCGTTTCT
SA 內含子 (SEQ ID NO: 32) GATAGGCACCTATTGGTCTTACTGACATCCACTTTGCCTTTCTCTCCACAGxii. 聚腺苷酸化序列
在一些實施例中，本揭示案之構築體可包含至少一個poly(A)序列。大多數新生真核mRNA在其3'末端具有poly(A)尾，該尾在復雜過程期間添加，該過程包括初級轉錄本之裂解及所結合聚腺苷酸化反應(參見例如Proudfoot等人,Cell 108:501-512, 2002)。poly(A)尾賦予mRNA穩定性及可轉移性(參見例如Molecular Biology of the Cell, 第三版, B. Alberts等人, Garland Publishing, 1994)。在一些實施例中，poly(A)序列位於編碼KCNQ4基因產物或抑制性核酸分子之核酸序列的3'端。
在一些實施例中，聚腺苷酸化指聚腺苷醯基部分或其經修飾變體與信使RNA分子之共價連接。在真核生物中，大多數信使RNA (mRNA)分子在3'端聚腺苷酸化。在一些實施例中，3' poly(A)尾為經由聚腺苷酸聚合酶之酶促作用添加至前mRNA之腺嘌呤核苷酸之長序列(通常為數百個)。在較高級真核生物中，將poly(A)尾添加至含有特定序列即聚腺苷酸化訊號之轉錄本上。在一些實施例中，poly(A)尾及與其結合之蛋白輔助保護mRNA避免由核酸外切酶降解。熟習此項技術者應瞭解，聚腺苷酸化對於轉錄終止、mRNA自細胞核輸出及轉譯亦很重要。聚腺苷酸化在DNA轉錄為RNA後立即在細胞核中發生，但此外隨後亦可在細胞質中發生。轉錄終止後，經由與RNA聚合酶相關之核酸內切酶複合物之作用裂解mRNA鏈。裂解位點通常以在給定裂解位點附近存在鹼基序列AAUAAA為特徵。mRNA裂解後，將腺苷殘基添加至裂解位點之3'末端。
在一些實施例中，poly(A)訊號序列為觸發mRNA之核酸內切酶裂解及在裂解mRNA之3'末端添加一系列腺苷之序列。如本文所用，「poly(A)」部分指藉由聚腺苷酸化連接於mRNA之一系列腺苷。在本揭示案之一些實施例，諸如瞬時表現中，polyA為50至5000個(SEQ ID NO: 93)，較佳大於64個，更佳大於100個，最佳大於300或400個。可以化學或酶學方式修飾poly(A)序列，以調節mRNA功能，諸如定位、穩定性或轉譯效率。
可使用數種poly(A)訊號序列，包括衍生自以下之彼等poly(A)訊號序列：牛生長激素(bgh)(Woychik等人,Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 81(13):3944-3948, 1984；美國專利第5,122,458號；Yew等人,Human Gene Ther. 8(5):575-584, 1997；Xu等人,Human Gene Ther. 12(5):563-573, 2001；Xu等人,Gene Ther. 8:1323-1332, 2001；Wu等人,Mol. Ther. 16(2):280-289, 2008；Gray等人,Human Gene Ther. 22:1143-1153, 2011；Choi等人,Mol. Brain 7:17, 2014，其中每一者以全文引用之方式併入本文中)、小鼠-β-球蛋白、小鼠-α-球蛋白(Orkin等人,EMBO J. 4(2):453-456, 1985；Thein等人,Blood 71(2):313-319, 1988，其中每一者以全文引用之方式併入本文中)、人類膠原、多瘤病毒(Batt等人,Mol. Cell Biol. 15(9):4783-4790, 1995，其中每一者以全文引用之方式併入本文中)、 單純皰疹病毒胸苷激酶基因(HSV TK)、IgG重鏈基因聚腺苷酸化訊號(US 2006/0040354，該專利以全文引用之方式併入本文中)、人類生長激素(hGH)(Szymanski等人,Mol. Therapy 15(7):1340-1347, 2007；Ostegaard等人,Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 102(8):2952-2957, 2005，其中每一者以全文引用之方式併入本文中)、合成polyA (Levitt等人,Genes Dev. 3(7):1019-1025, 1989；Yew等人,Human Gene Ther. 8(5):575-584, 1997；Ostegaard等人,Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 102(8):2952-2957, 2005；Choi等人,Mol. Brain 7:17, 2014，其中每一者以全文引用之方式併入本文中)、HIV-1上游poly(A)增強子(Schambach等人,Mol. Ther. 15(6):1167-1173, 2007，其中每一者以全文引用之方式併入本文中)、腺病毒(L3)上游poly(A)增強子(Schambach等人,Mol. Ther. 15(6):1167-1173, 2007，該文獻以全文引用之方式併入本文中)、hTHGB上游poly(A)增強子(Schambach等人,Mol. Ther. 15(6):1167-1173, 2007)、hC2上游poly(A)增強子(Schambach等人,Mol. Ther. 15(6):1167-1173, 2007)、由SV40 poly(A)訊號序列諸如SV40晚期及早期poly(A)訊號序列組成之群(Schek等人,Mol. Cell Biol. 12(12):5386-5393, 1992；Choi等人,Mol. Brain 7:17, 2014；Schambach等人,Mol. Ther. 15(6):1167-1173, 2007，其中每一者以全文引用之方式併入本文中)。poly(A)訊號序列之非限制性實例包括SEQ ID NO: 33、34或35。
在一些實施例中，poly(A)訊號序列可為序列AATAAA。在一些實施例中，AATAAA序列可經與AATAAA具有同源性之能夠進行訊號傳導聚腺苷酸化之其他六核苷酸序列取代，該等序列包括ATTAAA、AGTAAA、CATAAA、TATAAA、GATAAA、ACTAAA、AATATA、AAGAAA、AATAAT、AAAAAA、AATGAA、AATCAA、AACAAA、AATCAA、AATAAC、AATAGA、AATTAA或AATAAG (參見例如WO 06/12414，該專利以全文引用之方式併入本文中)。
在一些實施例中，poly(A)訊號序列可為合成聚腺苷酸化位點(參見例如Promega之pCl-neo表現構築體，其基於Levitt等人,Genes Dev. 3(7):1019-1025, 1989，該文獻以全文引用之方式併入本文中)。在一些實施例中，poly(A)訊號序列為可溶性神經菌毛素-1 (sNRP)(AAATAAAATACGAAATG (SEQ ID NO: 94))的聚腺苷酸化訊號(參見例如，WO 05/073384，該專利以全文引用之方式併入本文中)。在一些實施例中，poly(A)序列為牛生長激素poly(A)序列。在一些該等實施例中，bGH poly(A)序列為或包含SEQ ID NO: 36。在一些實施例中，構築體或本揭示案之構築體包含由SEQ ID NO: 36表示之牛生長激素polyA序列。poly(A)訊號序列之其他實例為此項技術中所已知。
在一些實施例中，polyA序列與SEQ ID NO: 33、34、35或36之polyA序列至少85%、90%、95%、98%或99%一致。在一些實施例中，聚腺苷酸化序列與本文所揭示之任何聚腺苷酸化序列至少85%、90%、95%、98%或99%一致。
作為非限制性實例，聚腺苷酸化序列可為或包含以下：
Poly(A) 訊號序列 (SEQ ID NO: 33) gctgatcagcctcgactgtgccttctagttgccagccatctgttgtttgcccctcccccgtgccttccttgaccctggaaggtgccactcccactgtcctttcctaataaaatgaggaaattgcatcgcattgtctgagtaggtgtcattctattctggggggtggggtggggcaggacagcaagggggaggattgggaagacaatagcaggcatgctggggatgcggtgggctctatgg
Poly(A) 訊號序列 (SEQ ID NO: 34) AATAAAATATCTTTATTTTCATTACATCTGTGTGTTGGTTTTTTGTGTG
Poly(A) 訊號序列 (SEQ ID NO: 35) CGGCAATAAAAAGACAGAATAAAACGCACGGTGTTGGGTCGTTTGTTC
bGHpA (SEQ ID NO: 36) CTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTGGGCTCTATGGxiii. 其他調節序列
在一些實施例中，本揭示案之構築體可包括一或多個其他調節元件，例如土撥鼠肝炎病毒轉錄後調節元件(WPRE)，例如SEQ ID NO: 37。在一些實施例中，WPRE序列與由SEQ ID NO: 37表示之WPRE序列至少85%、90%、95%、98%或99%一致。在一些實施例中，調節元件影響例如構築體之編碼序列(例如編碼KCNQ4基因產物之序列)的表現。在一些實施例中，調節元件為WPRE。在一些該等實施例中，該調節元件增加或增強構築體中一或多種元件(例如KCNQ4基因產物)之表現。作為非限制性實例，調節序列可為或包含以下：
WPRE 元件 (SEQ ID NO: 37) AATCAACCTCTGGATTACAAAATTTGTGAAAGATTGACTGGTATTCTTAACTATGTTGCTCCTTTTACGCTATGTGGATACGCTGCTTTAATGCCTTTGTATCATGCTATTGCTTCCCGTATGGCTTTCATTTTCTCCTCCTTGTATAAATCCTGGTTGCTGTCTCTTTATGAGGAGTTGTGGCCCGTTGTCAGGCAACGTGGCGTGGTGTGCACTGTGTTTGCTGACGCAACCCCCACTGGTTGGGGCATTGCCACCACCTGTCAGCTCCTTTCCGGGACTTTCGCTTTCCCCCTCCCTATTGCCACGGCGGAACTCATCGCCGCCTGCCTTGCCCGCTGCTGGACAGGGGCTCGGCTGTTGGGCACTGACAATTCCGTGGTGTTGTCGGGGAAGCTGACGTCCTTTCCATGGCTGCTCGCCTGTGTTGCCACCTGGATTCTGCGCGGGACGTCCTTCTGCTACGTCCCTTCGGCCCTCAATCCAGCGGACCTTCCTTCCCGCGGCCTGCTGCCGGCTCTGCGGCCTCTTCCGCGTCTTCGCCTTCGCCCTCAGACGAGTCGGATCTCCCTTTGGGCCGCCTCCCCGCxiv. 去穩定域
本文提供之任何組成物(例如構築體)可視情況包括為或編碼去穩定域之序列。在一些實施例中，去穩定域為例如與缺乏穩定域之相同蛋白質相比，縮短包括去穩定域之蛋白質的活體內 或活體外 半衰期的胺基酸序列。舉例而言，在一些實施例中，去穩定域可引起靶向包括去穩定域之蛋白質以用於蛋白質體降解。去穩定域之非限制實例包括大腸桿菌(E. coli )二氫葉酸還原酶(DHFR)(Iwamoto等人, (2010) Chem. Biol. 17(9): 981-998，該文獻以全文引用之方式併入本文中)及FK-506結合蛋白(FKBP)(Wenlin等人, (2015) PLoS One 10(12): e0145783，該文獻以全文引用之方式併入本文中)之去穩定域。SEQ ID NO: 38為DHFR去穩定域之例示性胺基酸序列。在一些實施例中，降解序列與SEQ ID NO: 38之降解序列至少85%、90%、95%、98%或99%一致。去穩定域之其他實例為此項技術中已知。
在一些實施例中，本文提供之任何構築體可視情況包括降解序列，例如SEQ ID NO: 39之CL1降解序列。在一些實施例中，CL1降解序列與SEQ ID NO: 39之降解序列至少85%、90%、95%、98%或99%一致。
DHFR 去穩定域 (SEQ ID NO: 38) ISLIAALAVDHVIGMETVMPWNLPADLAWFKRNTLNKPVIMGRHTWESIGRPLPGRKNIILSSQPSTDDRVTWVKSVDEAIAACGDVPEIMVIGGGRVYEQFLPKAQKLYLTHIDAEVEGDTHFPDYEPDDWESVFSEFHDADAQNSHSYCFEILERR
CL1 (SEQ ID NO: 39) GCCTGCAAGAACTGGTTCAGCAGCCTGAGCCACTTCGTGATCCACCTGxv. 降解子域
在一些實施例中，本文提供之任何構築體可視情況包括蛋白質(例如Cas9蛋白)之C2H2鋅指「可控」降解子序列及/或可控去穩定域。SEQ ID NO: 40為C2H2鋅指降解子域之例示性胺基酸序列。
C2H2 鋅指降解子 (SEQ ID NO: 40) FQCNQCGASFTQKGNLLRHIKLHxvi. 報告序列或元件
本文提供之任何構築體可視情況包括編碼報告蛋白之序列(「報告序列」)。舉例而言，在一些實施例中，報告序列可為FLAG、eGFP、mScarlet、螢光素酶或其任何變體。在一些實施例中，報告序列在不干預之情況下即可可偵測地觀察到。在一些實施例中，可使用螢光、組織化學及/或轉錄物或蛋白質分析之組合偵測報告元件。報告序列之非限制性實例描述於本文中。報告序列之其他實例為此項技術中所已知。在一些實施例中，報告序列可用於驗證本文所述任何構築體之組織特異性靶向能力及組織特異性啟動子調節活性。
在一些實施例中，報告序列為FLAG標籤(例如3xFLAG標籤)。在一些實施例中，構築體或本揭示案之構築體可包含3XFLAG序列。在一些實施例中，藉由蛋白質結合或偵測檢定(例如 Western墨點、免疫組織化學、放射免疫檢定(RIA)、質譜)偵測報告基因(例如哺乳動物細胞(例如內耳細胞，例如耳蝸毛細胞或支援細胞)中帶有FLAG標籤之構築體)之存在。例示性3xFLAG標籤序列以SEQ ID NO: 41提供。
3xFLAG 標籤序列 (SEQ ID NO: 41) GGATCCCGGGCTGACTACAAAGACCATGACGGTGATTATAAAGATCATGACATCGACTACAAGGATGACGATGACAAGxvii. 其他序列
在一些實施例中，構築體或本揭示案之構築體可包含T2A元件或序列。在一些實施例中，本揭示案之構築體可包括一或多個選殖位點。在一些該等實施例中，在製備以用於投與個體之前，選殖位點可未完全去除。xviii. 單一構築體系統
在一些實施例中，本揭示案提供可包括單一構築體系統之組成物。在一些該等實施例中，單一構築體可遞送抑制性核酸及/或編碼KCNQ4之功能性(例如野生型或其他功能性，例如經密碼子最佳化)複本的核酸。在一些實施例中，構築體系統為或包含AAV構築體。在本文所述之一些實施例中，單一AAV構築體能夠在標靶細胞中表現全長KCNQ4信使RNA。在本文所述任何方法之一些實施例中，可向個體投與包括編碼功能性KCNQ4蛋白之序列(例如產生功能性KCNQ4蛋白之任何構築體)的單一構築體(例如本文所述之任何構築體)。xix. 多個構築體系統
在一些實施例中，本揭示案之構築體系統可包含超過一種構築體(例如雙重或三重構築體)以例如遞送本揭示案所提供之系統的各種組分(例如基因編輯系統及轉殖基因表現系統)。舉例而言，在一些實施例中，雙重構築體可包括兩種單獨AAV構築體，其各自包含不同組分或構築體(例如CRISPR/Cas9 組分及置換KCNQ4組分)。在一些實施例中，一種構築體(例如第一AAV構築體)可包含抑制性核酸(例如siRNA、微小RNA)，且第二構築體(例如第二AAV構築體)可包含編碼功能性KCNQ4 (例如野生型KCNQ4，例如經密碼子最佳化KCNQ4)之序列。在一些實施例中，雙重AAV構築體可包括兩種單獨AAV構築體，其各自包括不同或相同調節區或啟動子。在一些實施例中，各構築體包含特異於標靶，例如耳細胞，例如毛細胞，例如外毛細胞之調節元件及啟動子。
在一些實施例中，本揭示案提供包含多種構築體之技術。在一些該等實施例中，構築體可均為單一構築體類型(例如AAV)，或者超過一種類型(例如AAV、腺苷等)。在包含多種構築體之一些該等實施例中，各構築體包含由本揭示案提供之系統的組分，例如一種構築體包含抑制性核酸(例如KCNQ4 miRNA)，且另一種構築體包含編碼功能性KCNQ4之序列 (例如編碼功能性Kv7.4蛋白之野生型KCNQ4基因，例如編碼功能性Kv7.4蛋白之經密碼子最佳化KCNQ4基因等)。
在包含多種AAV構築體之一些實施例中，AAV構築體可具有相同或不同類型，例如相同或不同血清型。
在一些實施例中，本揭示案提供包含一或多種構築體以將治療基因或其一部分遞送至有需要之個體的組成物。舉例而言，在一些實施例中，個體基因組中之KCNQ4基因改變(例如經由取代、缺失、添加)。在一些該等實施例中，可向個體投與一或多種構築體。在一些該等實施例中，可投與一或多種構築體以(i)敲低變體(例如具有取代、添加或缺失)或無功能(例如功能喪失) KCNQ4及/或(ii)提供功能性KCNQ4。xx. 例示性構築體
在一些實施例中，本揭示案提供技術(例如包含基於AAV之構築體的組成物、系統、粒子。在一些實施例中，該等技術包含單一構築體。在一些實施例中，該等技術包含多種構築體。在一些實施例中，本揭示案提供包含多種AAV粒子之組成物或系統，該多種AAV粒子由單一構築體構成。在一些實施例中，單一構築體可遞送編碼KCNQ4基因之功能性(例如野生型或其他功能性，例如經密碼子最佳化)複本的多核苷酸。在一些實施例中，構築體為或包含rAAV構築體。在本文所述之一些實施例中，單一rAAV構築體能夠在標靶細胞(例如內耳細胞)中表現全長KCNQ4信使RNA或其特徵蛋白。在一些實施例中，單一構築體(例如本文所述構築體中之任一者)可包括編碼功能性KCNQ4蛋白之序列(例如產生功能性KCNQ4蛋白之任何構築體)。在一些實施例中，單一構築體(例如本文所述構築體中之任一者)可包括編碼功能性KCNQ4蛋白之序列(例如產生功能性KCNQ4蛋白之任何構築體)及視情況其他多肽序列(例如調節序列及/或報告序列)。在一些實施例中，單一構築體可遞送編碼功能性Cas9蛋白之多核苷酸。在一些實施例中，單一構築體可遞送編碼催化滅活Cas9蛋白的多核苷酸。在一些實施例中，單一構築體可遞送編碼任何數量miRNA、siRNA、shRNA、sgRNA及/或相關調節區之多核苷酸。
在一些實施例中，單一構築體組成物或系統可包含本文所述例示性構築體組分中之任一者或全部。在一些實施例中，例示性單一構築體由SEQ ID NO: 172-291表示。在一些實施例中，例示性單一構築體與由SEQ ID NO: 172–291表示之序列至少85%、90%、95%、98%或99%一致。熟習此項技術者應認識到，構築體可進行其他修飾，包括密碼子最佳化、引入新穎但功能上等效修飾(例如沉默突變)、添加報告序列及/或其他常規修飾。例示性構築體實施例 三十 (30) 種 miRNA 構築體序列
在一個實施例中，例示性構築體包含：由SEQ ID NO: 19例示之5' ITR；視情況存在之由SEQ ID NO: 155例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 22例示之CMV增強子；由SEQ ID NO: 101例示之CBA啟動子；由SEQ ID NO: 102例示之嵌合內含子，其中由SEQ ID NO: 104例示之微小RNA主鏈及KCNQ4靶向序列經工程改造至該嵌合內含子中；視情況存在之由SEQ ID NO: 156例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 103例示之eGFP編碼區；視情況存在之由SEQ ID NO: 157例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 104例示之微小RNA主鏈及KCNQ4靶向序列；視情況存在之由SEQ ID NO: 158例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 36例示之polyA位點；視情況存在之由SEQ ID NO: 159例示之選殖位點；及由SEQ ID NO: 20例示之3' ITR。
在一個實施例中，例示性構築體包含：由SEQ ID NO: 19例示之5' ITR；視情況存在之由SEQ ID NO: 155例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 22例示之CMV增強子；由SEQ ID NO: 101例示之CBA啟動子；由SEQ ID NO: 102例示之嵌合內含子，其中由SEQ ID NO: 105例示之微小RNA主鏈及KCNQ4靶向序列經工程改造至該嵌合內含子中；視情況存在之由SEQ ID NO: 156例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 103例示之eGFP編碼區；視情況存在之由SEQ ID NO: 157例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 105例示之微小RNA主鏈及KCNQ4靶向序列；視情況存在之由SEQ ID NO: 158例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 36例示之polyA位點；視情況存在之由SEQ ID NO: 159例示之選殖位點；及由SEQ ID NO: 20例示之3' ITR。
在一個實施例中，例示性構築體包含：由SEQ ID NO: 19例示之5' ITR；視情況存在之由SEQ ID NO: 155例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 22例示之CMV增強子；由SEQ ID NO: 101例示之CBA啟動子；由SEQ ID NO: 102例示之嵌合內含子，其中由SEQ ID NO: 106例示之微小RNA主鏈及KCNQ4靶向序列經工程改造至該嵌合內含子中；視情況存在之由SEQ ID NO: 156例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 103例示之eGFP編碼區；視情況存在之由SEQ ID NO: 157例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 106例示之微小RNA主鏈及KCNQ4靶向序列；視情況存在之由SEQ ID NO: 158例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 36例示之polyA位點；視情況存在之由SEQ ID NO: 159例示之選殖位點；及由SEQ ID NO: 20例示之3' ITR。
在一個實施例中，例示性構築體包含：由SEQ ID NO: 19例示之5' ITR；視情況存在之由SEQ ID NO: 155例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 22例示之CMV增強子；由SEQ ID NO: 101例示之CBA啟動子；由SEQ ID NO: 102例示之嵌合內含子，其中由SEQ ID NO: 104例示之微小RNA主鏈及KCNQ4靶向序列經工程改造至該嵌合內含子中；視情況存在之由SEQ ID NO: 156例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 103例示之eGFP編碼區；視情況存在之由SEQ ID NO: 157例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 107例示之微小RNA主鏈及KCNQ4靶向序列；視情況存在之由SEQ ID NO: 158例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 36例示之polyA位點；視情況存在之由SEQ ID NO: 159例示之選殖位點；及由SEQ ID NO: 20例示之3' ITR。
在一個實施例中，例示性構築體包含：由SEQ ID NO: 19例示之5' ITR；視情況存在之由SEQ ID NO: 155例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 22例示之CMV增強子；由SEQ ID NO: 101例示之CBA啟動子；由SEQ ID NO: 102例示之嵌合內含子，其中由SEQ ID NO: 105例示之微小RNA主鏈及KCNQ4靶向序列經工程改造至該嵌合內含子中；視情況存在之由SEQ ID NO: 156例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 103例示之eGFP編碼區；視情況存在之由SEQ ID NO: 157例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 108例示之微小RNA主鏈及KCNQ4靶向序列；視情況存在之由SEQ ID NO: 158例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 36例示之polyA位點；視情況存在之由SEQ ID NO: 159例示之選殖位點；及由SEQ ID NO: 20例示之3' ITR。
在一個實施例中，例示性構築體包含：由SEQ ID NO: 19例示之5' ITR；視情況存在之由SEQ ID NO: 155例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 22例示之CMV增強子；由SEQ ID NO: 101例示之CBA啟動子；由SEQ ID NO: 106例示之嵌合內含子，其中由SEQ ID NO: 104例示之微小RNA主鏈及KCNQ4靶向序列經工程改造至該嵌合內含子中；視情況存在之由SEQ ID NO: 156例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 103例示之eGFP編碼區；視情況存在之由SEQ ID NO: 157例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 109例示之微小RNA主鏈及KCNQ4靶向序列；視情況存在之由SEQ ID NO: 158例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 36例示之polyA位點；視情況存在之由SEQ ID NO: 159例示之選殖位點；及由SEQ ID NO: 20例示之3' ITR。
在一個實施例中，例示性構築體包含：由SEQ ID NO: 19例示之5' ITR；視情況存在之由SEQ ID NO: 155例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 22例示之CMV增強子；由SEQ ID NO: 101例示之CBA啟動子；由SEQ ID NO: 102例示之嵌合內含子，其中由SEQ ID NO: 104例示之微小RNA主鏈及KCNQ4靶向序列經工程改造至該嵌合內含子中；視情況存在之由SEQ ID NO: 156例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 103例示之eGFP編碼區；視情況存在之由SEQ ID NO: 157例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 110例示之微小RNA主鏈及KCNQ4靶向序列；視情況存在之由SEQ ID NO: 158例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 36例示之polyA位點；視情況存在之由SEQ ID NO: 159例示之選殖位點；及由SEQ ID NO: 20例示之3' ITR。
在一個實施例中，例示性構築體包含：由SEQ ID NO: 19例示之5' ITR；視情況存在之由SEQ ID NO: 155例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 22例示之CMV增強子；由SEQ ID NO: 101例示之CBA啟動子；由SEQ ID NO: 102例示之嵌合內含子，其中由SEQ ID NO: 105例示之微小RNA主鏈及KCNQ4靶向序列經工程改造至該嵌合內含子中；視情況存在之由SEQ ID NO: 156例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 103例示之eGFP編碼區；視情況存在之由SEQ ID NO: 157例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 111例示之微小RNA主鏈及KCNQ4靶向序列；視情況存在之由SEQ ID NO: 158例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 36例示之polyA位點；視情況存在之由SEQ ID NO: 159例示之選殖位點；及由SEQ ID NO: 20例示之3' ITR。
在一個實施例中，例示性構築體包含：由SEQ ID NO: 19例示之5' ITR；視情況存在之由SEQ ID NO: 155例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 22例示之CMV增強子；由SEQ ID NO: 101例示之CBA啟動子；由SEQ ID NO: 102例示之嵌合內含子，其中由SEQ ID NO: 106例示之微小RNA主鏈及KCNQ4靶向序列經工程改造至該嵌合內含子中；視情況存在之由SEQ ID NO: 156例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 103例示之eGFP編碼區；視情況存在之由SEQ ID NO: 157例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 112例示之微小RNA主鏈及KCNQ4靶向序列；視情況存在之由SEQ ID NO: 158例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 36例示之polyA位點；視情況存在之由SEQ ID NO: 159例示之選殖位點；及由SEQ ID NO: 20例示之3' ITR。
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在一個實施例中，例示性構築體包含：由SEQ ID NO: 19例示之5' ITR；視情況存在之由SEQ ID NO: 155例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 22例示之CMV增強子；由SEQ ID NO: 101例示之CBA啟動子；由SEQ ID NO: 102例示之嵌合內含子，其中由SEQ ID NO: 109例示之微小RNA主鏈及KCNQ4靶向序列經工程改造至該嵌合內含子中；視情況存在之由SEQ ID NO: 156例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 103例示之eGFP編碼區；視情況存在之由SEQ ID NO: 157例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 112例示之微小RNA主鏈及KCNQ4靶向序列；視情況存在之由SEQ ID NO: 158例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 36例示之polyA位點；視情況存在之由SEQ ID NO: 159例示之選殖位點；及由SEQ ID NO: 20例示之3' ITR。
在一個實施例中，例示性構築體包含：由SEQ ID NO: 19例示之5' ITR；視情況存在之由SEQ ID NO: 155例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 22例示之CMV增強子；由SEQ ID NO: 101例示之CBA啟動子；由SEQ ID NO: 102例示之嵌合內含子，其中由SEQ ID NO: 107例示之微小RNA主鏈及KCNQ4靶向序列經工程改造至該嵌合內含子中；視情況存在之由SEQ ID NO: 156例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 103例示之eGFP編碼區；視情況存在之由SEQ ID NO: 157例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 113例示之微小RNA主鏈及KCNQ4靶向序列；視情況存在之由SEQ ID NO: 158例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 36例示之polyA位點；視情況存在之由SEQ ID NO: 159例示之選殖位點；及由SEQ ID NO: 20例示之3' ITR。
在一個實施例中，例示性構築體包含：由SEQ ID NO: 19例示之5' ITR；視情況存在之由SEQ ID NO: 155例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 22例示之CMV增強子；由SEQ ID NO: 101例示之CBA啟動子；由SEQ ID NO: 102例示之嵌合內含子，其中由SEQ ID NO: 108例示之微小RNA主鏈及KCNQ4靶向序列經工程改造至該嵌合內含子中；視情況存在之由SEQ ID NO: 156例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 103例示之eGFP編碼區；視情況存在之由SEQ ID NO: 157例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 114例示之微小RNA主鏈及KCNQ4靶向序列；視情況存在之由SEQ ID NO: 158例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 36例示之polyA位點；視情況存在之由SEQ ID NO: 159例示之選殖位點；及由SEQ ID NO: 20例示之3' ITR。
在一個實施例中，例示性構築體包含：由SEQ ID NO: 19例示之5' ITR；視情況存在之由SEQ ID NO: 155例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 22例示之CMV增強子；由SEQ ID NO: 101例示之CBA啟動子；由SEQ ID NO: 102例示之嵌合內含子，其中由SEQ ID NO: 109例示之微小RNA主鏈及KCNQ4靶向序列經工程改造至該嵌合內含子中；視情況存在之由SEQ ID NO: 156例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 103例示之eGFP編碼區；視情況存在之由SEQ ID NO: 157例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 114例示之微小RNA主鏈及KCNQ4靶向序列；視情況存在之由SEQ ID NO: 158例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 36例示之polyA位點；視情況存在之由SEQ ID NO: 159例示之選殖位點；及由SEQ ID NO: 20例示之3' ITR。
在一個實施例中，例示性構築體包含：由SEQ ID NO: 19例示之5' ITR；視情況存在之由SEQ ID NO: 155例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 22例示之CMV增強子；由SEQ ID NO: 101例示之CBA啟動子；由SEQ ID NO: 102例示之嵌合內含子，其中由SEQ ID NO: 110例示之微小RNA主鏈及KCNQ4靶向序列經工程改造至該嵌合內含子中；視情況存在之由SEQ ID NO: 156例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 103例示之eGFP編碼區；視情況存在之由SEQ ID NO: 157例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 110例示之微小RNA主鏈及KCNQ4靶向序列；視情況存在之由SEQ ID NO: 158例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 36例示之polyA位點；視情況存在之由SEQ ID NO: 159例示之選殖位點；及由SEQ ID NO: 20例示之3' ITR。
在一個實施例中，例示性構築體包含：由SEQ ID NO: 19例示之5' ITR；視情況存在之由SEQ ID NO: 155例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 22例示之CMV增強子；由SEQ ID NO: 101例示之CBA啟動子；由SEQ ID NO: 102例示之嵌合內含子，其中由SEQ ID NO: 111例示之微小RNA主鏈及KCNQ4靶向序列經工程改造至該嵌合內含子中；視情況存在之由SEQ ID NO: 156例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 103例示之eGFP編碼區；視情況存在之由SEQ ID NO: 157例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 111例示之微小RNA主鏈及KCNQ4靶向序列；視情況存在之由SEQ ID NO: 158例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 36例示之polyA位點；視情況存在之由SEQ ID NO: 159例示之選殖位點；及由SEQ ID NO: 20例示之3' ITR。
在一個實施例中，例示性構築體包含：由SEQ ID NO: 19例示之5' ITR；視情況存在之由SEQ ID NO: 155例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 22例示之CMV增強子；由SEQ ID NO: 101例示之CBA啟動子；由SEQ ID NO: 102例示之嵌合內含子，其中由SEQ ID NO: 112例示之微小RNA主鏈及KCNQ4靶向序列經工程改造至該嵌合內含子中；視情況存在之由SEQ ID NO: 156例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 103例示之eGFP編碼區；視情況存在之由SEQ ID NO: 157例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 112例示之微小RNA主鏈及KCNQ4靶向序列；視情況存在之由SEQ ID NO: 158例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 36例示之polyA位點；視情況存在之由SEQ ID NO: 159例示之選殖位點；及由SEQ ID NO: 20例示之3' ITR。
在一個實施例中，例示性構築體包含：由SEQ ID NO: 19例示之5' ITR；視情況存在之由SEQ ID NO: 155例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 22例示之CMV增強子；由SEQ ID NO: 101例示之CBA啟動子；由SEQ ID NO: 102例示之嵌合內含子，其中由SEQ ID NO: 110例示之微小RNA主鏈及KCNQ4靶向序列經工程改造至該嵌合內含子中；視情況存在之由SEQ ID NO: 156例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 103例示之eGFP編碼區；視情況存在之由SEQ ID NO: 157例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 113例示之微小RNA主鏈及KCNQ4靶向序列；視情況存在之由SEQ ID NO: 158例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 36例示之polyA位點；視情況存在之由SEQ ID NO: 159例示之選殖位點；及由SEQ ID NO: 20例示之3' ITR。
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在一個實施例中，例示性構築體包含：由SEQ ID NO: 19例示之5' ITR；視情況存在之由SEQ ID NO: 155例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 22例示之CMV增強子；由SEQ ID NO: 101例示之CBA啟動子；由SEQ ID NO: 102例示之嵌合內含子，其中由SEQ ID NO: 112例示之微小RNA主鏈及KCNQ4靶向序列經工程改造至該嵌合內含子中；視情況存在之由SEQ ID NO: 156例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 103例示之eGFP編碼區；視情況存在之由SEQ ID NO: 157例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 115例示之微小RNA主鏈及KCNQ4靶向序列；視情況存在之由SEQ ID NO: 158例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 36例示之polyA位點；視情況存在之由SEQ ID NO: 159例示之選殖位點；及由SEQ ID NO: 20例示之3' ITR。
在一個實施例中，例示性構築體包含：由SEQ ID NO: 19例示之5' ITR；視情況存在之由SEQ ID NO: 155例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 22例示之CMV增強子；由SEQ ID NO: 101例示之CBA啟動子；由SEQ ID NO: 102例示之嵌合內含子，其中由SEQ ID NO: 113例示之微小RNA主鏈及KCNQ4靶向序列經工程改造至該嵌合內含子中；視情況存在之由SEQ ID NO: 156例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 103例示之eGFP編碼區；視情況存在之由SEQ ID NO: 157例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 113例示之微小RNA主鏈及KCNQ4靶向序列；視情況存在之由SEQ ID NO: 158例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 36例示之polyA位點；視情況存在之由SEQ ID NO: 159例示之選殖位點；及由SEQ ID NO: 20例示之3' ITR。
在一個實施例中，例示性構築體包含：由SEQ ID NO: 19例示之5' ITR；視情況存在之由SEQ ID NO: 155例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 22例示之CMV增強子；由SEQ ID NO: 101例示之CBA啟動子；由SEQ ID NO: 102例示之嵌合內含子，其中由SEQ ID NO: 114例示之微小RNA主鏈及KCNQ4靶向序列經工程改造至該嵌合內含子中；視情況存在之由SEQ ID NO: 156例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 103例示之eGFP編碼區；視情況存在之由SEQ ID NO: 157例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 114例示之微小RNA主鏈及KCNQ4靶向序列；視情況存在之由SEQ ID NO: 158例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 36例示之polyA位點；視情況存在之由SEQ ID NO: 159例示之選殖位點；及由SEQ ID NO: 20例示之3' ITR。
在一個實施例中，例示性構築體包含：由SEQ ID NO: 19例示之5' ITR；視情況存在之由SEQ ID NO: 155例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 22例示之CMV增強子；由SEQ ID NO: 101例示之CBA啟動子；由SEQ ID NO: 102例示之嵌合內含子，其中由SEQ ID NO: 115例示之微小RNA主鏈及KCNQ4靶向序列經工程改造至該嵌合內含子中；視情況存在之由SEQ ID NO: 156例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 103例示之eGFP編碼區；視情況存在之由SEQ ID NO: 157例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 115例示之微小RNA主鏈及KCNQ4靶向序列；視情況存在之由SEQ ID NO: 158例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 36例示之polyA位點；視情況存在之由SEQ ID NO: 159例示之選殖位點；及由SEQ ID NO: 20例示之3' ITR。二十 (20) 個 miRNA 構築體序列及背景 NNNNN 序列
在一個實施例中，例示性構築體包含：由SEQ ID NO: 19例示之5' ITR；視情況存在之由SEQ ID NO: 155例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 22例示之CMV增強子；由SEQ ID NO: 101例示之CBA啟動子；由SEQ ID NO: 102例示之嵌合內含子，其中由SEQ ID NO: 116例示之微小RNA主鏈及KCNQ4靶向序列經工程改造至該嵌合內含子中；視情況存在之由SEQ ID NO: 156例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 103例示之eGFP編碼區；視情況存在之由SEQ ID NO: 157例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 116例示之微小RNA主鏈及KCNQ4靶向序列；視情況存在之由SEQ ID NO: 158例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 36例示之polyA位點；視情況存在之由SEQ ID NO: 159例示之選殖位點；及由SEQ ID NO: 20例示之3' ITR。
在一個實施例中，例示性構築體包含：由SEQ ID NO: 19例示之5' ITR；視情況存在之由SEQ ID NO: 155例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 22例示之CMV增強子；由SEQ ID NO: 101例示之CBA啟動子；由SEQ ID NO: 102例示之嵌合內含子，其中由SEQ ID NO: 116例示之微小RNA主鏈及KCNQ4靶向序列經工程改造至該嵌合內含子中；視情況存在之由SEQ ID NO: 156例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 103例示之eGFP編碼區；視情況存在之由SEQ ID NO: 158例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 36例示之polyA位點；視情況存在之由SEQ ID NO: 159例示之選殖位點；及由SEQ ID NO: 20例示之3' ITR。
在一個實施例中，例示性構築體包含：由SEQ ID NO: 19例示之5' ITR；視情況存在之由SEQ ID NO: 155例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 22例示之CMV增強子；由SEQ ID NO: 24例示之CBA啟動子；由SEQ ID NO: 102例示之嵌合內含子；視情況存在之由SEQ ID NO: 156例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 103例示之eGFP編碼區；由SEQ ID NO: 134例示之微小RNA主鏈及KCNQ4靶向序列；視情況存在之由SEQ ID NO: 158例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 36例示之polyA位點；視情況存在之由SEQ ID NO: 159例示之選殖位點；及由SEQ ID NO: 20例示之3' ITR。
在一個實施例中，例示性構築體包含：由SEQ ID NO: 19例示之5' ITR；視情況存在之由SEQ ID NO: 155例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 22例示之CMV增強子；由SEQ ID NO: 101例示之CBA啟動子；由SEQ ID NO: 102例示之嵌合內含子，其中由SEQ ID NO: 117例示之微小RNA主鏈及KCNQ4靶向序列經工程改造至該嵌合內含子中；視情況存在之由SEQ ID NO: 156例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 103例示之eGFP編碼區；視情況存在之由SEQ ID NO: 157例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 117例示之微小RNA主鏈及KCNQ4靶向序列；視情況存在之由SEQ ID NO: 158例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 36例示之polyA位點；視情況存在之由SEQ ID NO: 159例示之選殖位點；及由SEQ ID NO: 20例示之3' ITR。
在一個實施例中，例示性構築體包含：由SEQ ID NO: 19例示之5' ITR；視情況存在之由SEQ ID NO: 155例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 22例示之CMV增強子；由SEQ ID NO: 101例示之CBA啟動子；由SEQ ID NO: 102例示之嵌合內含子，其中由SEQ ID NO: 118例示之微小RNA主鏈及KCNQ4靶向序列經工程改造至該嵌合內含子中；視情況存在之由SEQ ID NO: 156例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 103例示之eGFP編碼區；視情況存在之由SEQ ID NO: 157例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 118例示之微小RNA主鏈及KCNQ4靶向序列；視情況存在之由SEQ ID NO: 158例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 36例示之polyA位點；視情況存在之由SEQ ID NO: 159例示之選殖位點；及由SEQ ID NO: 20例示之3' ITR。
在一個實施例中，例示性構築體包含：由SEQ ID NO: 19例示之5' ITR；視情況存在之由SEQ ID NO: 155例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 22例示之CMV增強子；由SEQ ID NO: 101例示之CBA啟動子；由SEQ ID NO: 102例示之嵌合內含子，其中由SEQ ID NO: 119例示之微小RNA主鏈及KCNQ4靶向序列經工程改造至該嵌合內含子中；視情況存在之由SEQ ID NO: 156例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 103例示之eGFP編碼區；視情況存在之由SEQ ID NO: 157例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 119例示之微小RNA主鏈及KCNQ4靶向序列；視情況存在之由SEQ ID NO: 158例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 36例示之polyA位點；視情況存在之由SEQ ID NO: 159例示之選殖位點；及由SEQ ID NO: 20例示之3' ITR。
在一個實施例中，例示性構築體包含：由SEQ ID NO: 19例示之5' ITR；視情況存在之由SEQ ID NO: 155例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 22例示之CMV增強子；由SEQ ID NO: 101例示之CBA啟動子；由SEQ ID NO: 102例示之嵌合內含子，其中由SEQ ID NO: 120例示之微小RNA主鏈及KCNQ4靶向序列經工程改造至該嵌合內含子中；視情況存在之由SEQ ID NO: 156例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 103例示之eGFP編碼區；視情況存在之由SEQ ID NO: 157例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 120例示之微小RNA主鏈及KCNQ4靶向序列；視情況存在之由SEQ ID NO: 158例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 36例示之polyA位點；視情況存在之由SEQ ID NO: 159例示之選殖位點；及由SEQ ID NO: 20例示之3' ITR。
在一個實施例中，例示性構築體包含：由SEQ ID NO: 19例示之5' ITR；視情況存在之由SEQ ID NO: 155例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 22例示之CMV增強子；由SEQ ID NO: 101例示之CBA啟動子；由SEQ ID NO: 102例示之嵌合內含子，其中由SEQ ID NO: 121例示之微小RNA主鏈及KCNQ4靶向序列經工程改造至該嵌合內含子中；視情況存在之由SEQ ID NO: 156例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 103例示之eGFP編碼區；視情況存在之由SEQ ID NO: 157例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 121例示之微小RNA主鏈及KCNQ4靶向序列；視情況存在之由SEQ ID NO: 158例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 36例示之polyA位點；視情況存在之由SEQ ID NO: 159例示之選殖位點；及由SEQ ID NO: 20例示之3' ITR。
在一個實施例中，例示性構築體包含：由SEQ ID NO: 19例示之5' ITR；視情況存在之由SEQ ID NO: 155例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 22例示之CMV增強子；由SEQ ID NO: 101例示之CBA啟動子；由SEQ ID NO: 102例示之嵌合內含子，其中由SEQ ID NO: 122例示之微小RNA主鏈及KCNQ4靶向序列經工程改造至該嵌合內含子中；視情況存在之由SEQ ID NO: 156例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 103例示之eGFP編碼區；視情況存在之由SEQ ID NO: 157例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 122例示之微小RNA主鏈及KCNQ4靶向序列；視情況存在之由SEQ ID NO: 158例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 36例示之polyA位點；視情況存在之由SEQ ID NO: 159例示之選殖位點；及由SEQ ID NO: 20例示之3' ITR。
在一個實施例中，例示性構築體包含：由SEQ ID NO: 19例示之5' ITR；視情況存在之由SEQ ID NO: 155例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 22例示之CMV增強子；由SEQ ID NO: 101例示之CBA啟動子；由SEQ ID NO: 102例示之嵌合內含子，其中由SEQ ID NO: 123例示之微小RNA主鏈及KCNQ4靶向序列經工程改造至該嵌合內含子中；視情況存在之由SEQ ID NO: 156例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 103例示之eGFP編碼區；視情況存在之由SEQ ID NO: 157例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 123例示之微小RNA主鏈及KCNQ4靶向序列；視情況存在之由SEQ ID NO: 158例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 36例示之polyA位點；視情況存在之由SEQ ID NO: 159例示之選殖位點；及由SEQ ID NO: 20例示之3' ITR。
在一個實施例中，例示性構築體包含：由SEQ ID NO: 19例示之5' ITR；視情況存在之由SEQ ID NO: 155例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 22例示之CMV增強子；由SEQ ID NO: 101例示之CBA啟動子；由SEQ ID NO: 102例示之嵌合內含子，其中由SEQ ID NO: 124例示之微小RNA主鏈及KCNQ4靶向序列經工程改造至該嵌合內含子中；視情況存在之由SEQ ID NO: 156例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 103例示之eGFP編碼區；視情況存在之由SEQ ID NO: 157例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 124例示之微小RNA主鏈及KCNQ4靶向序列；視情況存在之由SEQ ID NO: 158例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 36例示之polyA位點；視情況存在之由SEQ ID NO: 159例示之選殖位點；及由SEQ ID NO: 20例示之3' ITR。
在一個實施例中，例示性構築體包含：由SEQ ID NO: 19例示之5' ITR；視情況存在之由SEQ ID NO: 155例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 22例示之CMV增強子；由SEQ ID NO: 101例示之CBA啟動子；由SEQ ID NO: 102例示之嵌合內含子，其中由SEQ ID NO: 125例示之微小RNA主鏈及KCNQ4靶向序列經工程改造至該嵌合內含子中；視情況存在之由SEQ ID NO: 156例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 103例示之eGFP編碼區；視情況存在之由SEQ ID NO: 157例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 125例示之微小RNA主鏈及KCNQ4靶向序列；視情況存在之由SEQ ID NO: 158例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 36例示之polyA位點；視情況存在之由SEQ ID NO: 159例示之選殖位點；及由SEQ ID NO: 20例示之3' ITR。
在一個實施例中，例示性構築體包含：由SEQ ID NO: 19例示之5' ITR；視情況存在之由SEQ ID NO: 155例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 22例示之CMV增強子；由SEQ ID NO: 101例示之CBA啟動子；由SEQ ID NO: 102例示之嵌合內含子，其中由SEQ ID NO: 126例示之微小RNA主鏈及KCNQ4靶向序列經工程改造至該嵌合內含子中；視情況存在之由SEQ ID NO: 156例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 103例示之eGFP編碼區；視情況存在之由SEQ ID NO: 157例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 126例示之微小RNA主鏈及KCNQ4靶向序列；視情況存在之由SEQ ID NO: 158例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 36例示之polyA位點；視情況存在之由SEQ ID NO: 159例示之選殖位點；及由SEQ ID NO: 20例示之3' ITR。
在一個實施例中，例示性構築體包含：由SEQ ID NO: 19例示之5' ITR；視情況存在之由SEQ ID NO: 155例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 22例示之CMV增強子；由SEQ ID NO: 101例示之CBA啟動子；由SEQ ID NO: 102例示之嵌合內含子，其中由SEQ ID NO: 127例示之微小RNA主鏈及KCNQ4靶向序列經工程改造至該嵌合內含子中；視情況存在之由SEQ ID NO: 156例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 103例示之eGFP編碼區；視情況存在之由SEQ ID NO: 157例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 127例示之微小RNA主鏈及KCNQ4靶向序列；視情況存在之由SEQ ID NO: 158例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 36例示之polyA位點；視情況存在之由SEQ ID NO: 159例示之選殖位點；及由SEQ ID NO: 20例示之3' ITR。
在一個實施例中，例示性構築體包含：由SEQ ID NO: 19例示之5' ITR；視情況存在之由SEQ ID NO: 155例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 22例示之CMV增強子；由SEQ ID NO: 101例示之CBA啟動子；由SEQ ID NO: 102例示之嵌合內含子，其中由SEQ ID NO: 128例示之微小RNA主鏈及KCNQ4靶向序列經工程改造至該嵌合內含子中；視情況存在之由SEQ ID NO: 156例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 103例示之eGFP編碼區；視情況存在之由SEQ ID NO: 157例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 128例示之微小RNA主鏈及KCNQ4靶向序列；視情況存在之由SEQ ID NO: 158例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 36例示之polyA位點；視情況存在之由SEQ ID NO: 159例示之選殖位點；及由SEQ ID NO: 20例示之3' ITR。
在一個實施例中，例示性構築體包含：由SEQ ID NO: 19例示之5' ITR；視情況存在之由SEQ ID NO: 155例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 22例示之CMV增強子；由SEQ ID NO: 101例示之CBA啟動子；由SEQ ID NO: 102例示之嵌合內含子，其中由SEQ ID NO: 129例示之微小RNA主鏈及KCNQ4靶向序列經工程改造至該嵌合內含子中；視情況存在之由SEQ ID NO: 156例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 103例示之eGFP編碼區；視情況存在之由SEQ ID NO: 157例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 129例示之微小RNA主鏈及KCNQ4靶向序列；視情況存在之由SEQ ID NO: 158例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 36例示之polyA位點；視情況存在之由SEQ ID NO: 159例示之選殖位點；及由SEQ ID NO: 20例示之3' ITR。
在一個實施例中，例示性構築體包含：由SEQ ID NO: 19例示之5' ITR；視情況存在之由SEQ ID NO: 155例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 22例示之CMV增強子；由SEQ ID NO: 101例示之CBA啟動子；由SEQ ID NO: 102例示之嵌合內含子，其中由SEQ ID NO: 130例示之微小RNA主鏈及KCNQ4靶向序列經工程改造至該嵌合內含子中；視情況存在之由SEQ ID NO: 156例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 103例示之eGFP編碼區；視情況存在之由SEQ ID NO: 157例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 130例示之微小RNA主鏈及KCNQ4靶向序列；視情況存在之由SEQ ID NO: 158例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 36例示之polyA位點；視情況存在之由SEQ ID NO: 159例示之選殖位點；及由SEQ ID NO: 20例示之3' ITR。
在一個實施例中，例示性構築體包含：由SEQ ID NO: 19例示之5' ITR；視情況存在之由SEQ ID NO: 155例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 22例示之CMV增強子；由SEQ ID NO: 101例示之CBA啟動子；由SEQ ID NO: 102例示之嵌合內含子，其中由SEQ ID NO: 131例示之微小RNA主鏈及KCNQ4靶向序列經工程改造至該嵌合內含子中；視情況存在之由SEQ ID NO: 156例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 103例示之eGFP編碼區；視情況存在之由SEQ ID NO: 157例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 131例示之微小RNA主鏈及KCNQ4靶向序列；視情況存在之由SEQ ID NO: 158例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 36例示之polyA位點；視情況存在之由SEQ ID NO: 159例示之選殖位點；及由SEQ ID NO: 20例示之3' ITR。
在一個實施例中，例示性構築體包含：由SEQ ID NO: 19例示之5' ITR；視情況存在之由SEQ ID NO: 155例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 22例示之CMV增強子；由SEQ ID NO: 101例示之CBA啟動子；由SEQ ID NO: 102例示之嵌合內含子，其中由SEQ ID NO: 132例示之微小RNA主鏈及KCNQ4靶向序列經工程改造至該嵌合內含子中；視情況存在之由SEQ ID NO: 156例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 103例示之eGFP編碼區；視情況存在之由SEQ ID NO: 157例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 132例示之微小RNA主鏈及KCNQ4靶向序列；視情況存在之由SEQ ID NO: 158例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 36例示之polyA位點；視情況存在之由SEQ ID NO: 159例示之選殖位點；及由SEQ ID NO: 20例示之3' ITR。
在一個實施例中，例示性構築體包含：由SEQ ID NO: 19例示之5' ITR；視情況存在之由SEQ ID NO: 155例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 22例示之CMV增強子；由SEQ ID NO: 101例示之CBA啟動子；由SEQ ID NO: 102例示之嵌合內含子，其中由SEQ ID NO: 133例示之微小RNA主鏈及KCNQ4靶向序列經工程改造至該嵌合內含子中；視情況存在之由SEQ ID NO: 156例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 103例示之eGFP編碼區；視情況存在之由SEQ ID NO: 157例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 133例示之微小RNA主鏈及KCNQ4靶向序列；視情況存在之由SEQ ID NO: 158例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 36例示之polyA位點；視情況存在之由SEQ ID NO: 159例示之選殖位點；及由SEQ ID NO: 20例示之3' ITR。
在一個實施例中，例示性構築體包含：由SEQ ID NO: 19例示之5' ITR；視情況存在之由SEQ ID NO: 155例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 22例示之CMV增強子；由SEQ ID NO: 101例示之CBA啟動子；由SEQ ID NO: 102例示之嵌合內含子，其中由SEQ ID NO: 133例示之微小RNA主鏈及KCNQ4靶向序列經工程改造至該嵌合內含子中；視情況存在之由SEQ ID NO: 156例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 103例示之eGFP編碼區；視情況存在之由SEQ ID NO: 157例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 133例示之微小RNA主鏈及KCNQ4靶向序列；視情況存在之由SEQ ID NO: 158例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 36例示之polyA位點；視情況存在之由SEQ ID NO: 159例示之選殖位點；及由SEQ ID NO: 20例示之3' ITR。
在一些實施例中，例示性構築體包含：由SEQ ID NO: 19例示之5' ITR；視情況存在之由SEQ ID NO: 155例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 22例示之CMV增強子；由SEQ ID NO: 101例示之CBA啟動子；由SEQ ID NO: 102例示之嵌合內含子，其中本文所述之微小RNA主鏈及KCNQ4靶向序列經工程改造至該嵌合內含子中；視情況存在之由SEQ ID NO: 156例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 103例示之eGFP編碼區；視情況存在之由SEQ ID NO: 157例示之選殖位點；本文所述之微小RNA主鏈及KCNQ4靶向序列；視情況存在之由SEQ ID NO: 158例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 36例示之polyA位點；視情況存在之由SEQ ID NO: 159例示之選殖位點；及由SEQ ID NO: 20例示之3' ITR。
在一個實施例中，例示性構築體包含：由SEQ ID NO: 19例示之5' ITR；視情況存在之由SEQ ID NO: 155例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 22例示之CMV增強子；由SEQ ID NO: 101例示之CBA啟動子；由SEQ ID NO: 102例示之嵌合內含子，其中本文所述之微小RNA主鏈及KCNQ4靶向序列經工程改造至該嵌合內含子中；視情況存在之由SEQ ID NO: 156例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 103例示之eGFP編碼區；視情況存在之由SEQ ID NO: 158例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 36例示之polyA位點；視情況存在之由SEQ ID NO: 159例示之選殖位點；及由SEQ ID NO: 20例示之3' ITR。
在一個實施例中，例示性構築體包含：由SEQ ID NO: 19例示之5' ITR；視情況存在之由SEQ ID NO: 155例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 22例示之CMV增強子；由SEQ ID NO: 24例示之CBA啟動子；由SEQ ID NO: 102例示之嵌合內含子；視情況存在之由SEQ ID NO: 156例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 103例示之eGFP編碼區；本文所述之微小RNA主鏈及KCNQ4靶向序列；視情況存在之由SEQ ID NO: 158例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 36例示之polyA位點；視情況存在之由SEQ ID NO: 159例示之選殖位點；及由SEQ ID NO: 20例示之3' ITR。
在一些實施例中，具有KCNQ4靶向序列之微小RNA主鏈在質體構築體內出現兩次。舉例而言，具有KCNQ4靶向序列之微小RNA主鏈可在EGFP編碼序列後之3'非轉譯區中出現一次。在一些實施例中，具有KCNQ4靶向序列之微小RNA主鏈在質體構築體中出現一次。舉例而言，具有KCNQ4靶向序列之微小RNA主鏈可在CAG啟動子區之內含子中出現。作為另一實例，具有KCNQ4靶向序列之微小RNA主鏈可在EGFP編碼序列後之3'非轉譯區中出現。具有 shRNA 序列的八 (8) 個螢光素酶及 GFP 敲低構築體
在一個實施例中，例示性構築體包含：由SEQ ID NO: 19例示之5' ITR；視情況存在之由SEQ ID NO: 160例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 98例示之CMV增強子；由SEQ ID NO: 99例示之CMV啟動子；視情況存在之由SEQ ID NO: 161例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 140例示之螢光素酶編碼序列；視情況存在之由SEQ ID NO: 162例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 141例示之T2A序列；由SEQ ID NO: 142例示之turboGFP編碼區；視情況存在之由SEQ ID NO: 163例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 143例示之SV40 poly(A)位點；視情況存在之由SEQ ID NO: 164例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 144例示之U6啟動子序列；本文所述之shRNA序列；由SEQ ID NO: 149例示之Pol III轉錄終止序列；視情況存在之由SEQ ID NO: 159例示之選殖位點；及由SEQ ID NO: 20例示之3' ITR。
在一個實施例中，例示性構築體包含：由SEQ ID NO: 19例示之5' ITR；視情況存在之由SEQ ID NO: 160例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 98例示之CMV增強子；由SEQ ID NO: 99例示之CMV啟動子；視情況存在之由SEQ ID NO: 161例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 140例示之螢光素酶編碼序列；視情況存在之由SEQ ID NO: 162例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 141例示之T2A序列；由SEQ ID NO: 142例示之turboGFP編碼區；視情況存在之由SEQ ID NO: 163例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 143例示之SV40 poly(A)位點；視情況存在之由SEQ ID NO: 164例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 144例示之U6啟動子序列；由SEQ ID NO: 48例示之shRNA序列；由SEQ ID NO: 149例示之Pol III轉錄終止序列；視情況存在之由SEQ ID NO: 159例示之選殖位點；及由SEQ ID NO: 20例示之3' ITR。
在一個實施例中，例示性構築體包含：由SEQ ID NO: 19例示之5' ITR；視情況存在之由SEQ ID NO: 160例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 98例示之CMV增強子；由SEQ ID NO: 99例示之CMV啟動子；視情況存在之由SEQ ID NO: 161例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 140例示之螢光素酶編碼序列；視情況存在之由SEQ ID NO: 162例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 141例示之T2A序列；由SEQ ID NO: 142例示之turboGFP編碼區；視情況存在之由SEQ ID NO: 163例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 143例示之SV40 poly(A)位點；視情況存在之由SEQ ID NO: 164例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 144例示之U6啟動子序列；由SEQ ID NO: 49例示之shRNA序列；由SEQ ID NO: 149例示之Pol III轉錄終止序列；視情況存在之由SEQ ID NO: 159例示之選殖位點；及由SEQ ID NO: 20例示之3' ITR。
在一個實施例中，例示性構築體包含：由SEQ ID NO: 19例示之5' ITR；視情況存在之由SEQ ID NO: 160例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 98例示之CMV增強子；由SEQ ID NO: 99例示之CMV啟動子；視情況存在之由SEQ ID NO: 161例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 140例示之螢光素酶編碼序列；視情況存在之由SEQ ID NO: 162例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 141例示之T2A序列；由SEQ ID NO: 142例示之turboGFP編碼區；視情況存在之由SEQ ID NO: 163例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 143例示之SV40 poly(A)位點；視情況存在之由SEQ ID NO: 164例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 144例示之U6啟動子序列；由SEQ ID NO: 50例示之shRNA序列；由SEQ ID NO: 149例示之Pol III轉錄終止序列；視情況存在之由SEQ ID NO: 159例示之選殖位點；及由SEQ ID NO: 20例示之3' ITR。
在一個實施例中，例示性構築體包含：由SEQ ID NO: 19例示之5' ITR；視情況存在之由SEQ ID NO: 160例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 98例示之CMV增強子；由SEQ ID NO: 99例示之CMV啟動子；視情況存在之由SEQ ID NO: 161例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 140例示之螢光素酶編碼序列；視情況存在之由SEQ ID NO: 162例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 141例示之T2A序列；由SEQ ID NO: 142例示之turboGFP編碼區；視情況存在之由SEQ ID NO: 163例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 143例示之SV40 poly(A)位點；視情況存在之由SEQ ID NO: 164例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 144例示之U6啟動子序列；由SEQ ID NO: 51例示之shRNA序列；由SEQ ID NO: 149例示之Pol III轉錄終止序列；視情況存在之由SEQ ID NO: 159例示之選殖位點；及由SEQ ID NO: 20例示之3' ITR。
在一個實施例中，例示性構築體包含：由SEQ ID NO: 19例示之5' ITR；視情況存在之由SEQ ID NO: 160例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 98例示之CMV增強子；由SEQ ID NO: 99例示之CMV啟動子；視情況存在之由SEQ ID NO: 161例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 140例示之螢光素酶編碼序列；視情況存在之由SEQ ID NO: 162例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 141例示之T2A序列；由SEQ ID NO: 142例示之turboGFP編碼區；視情況存在之由SEQ ID NO: 163例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 143例示之SV40 poly(A)位點；視情況存在之由SEQ ID NO: 164例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 144例示之U6啟動子序列；由SEQ ID NO: 52例示之shRNA序列；由SEQ ID NO: 149例示之Pol III轉錄終止序列；視情況存在之由SEQ ID NO: 159例示之選殖位點；及由SEQ ID NO: 20例示之3' ITR。
在一個實施例中，例示性構築體包含：由SEQ ID NO: 19例示之5' ITR；視情況存在之由SEQ ID NO: 160例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 98例示之CMV增強子；由SEQ ID NO: 99例示之CMV啟動子；視情況存在之由SEQ ID NO: 161例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 140例示之螢光素酶編碼序列；視情況存在之由SEQ ID NO: 162例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 141例示之T2A序列；由SEQ ID NO: 142例示之turboGFP編碼區；視情況存在之由SEQ ID NO: 163例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 143例示之SV40 poly(A)位點；視情況存在之由SEQ ID NO: 164例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 144例示之U6啟動子序列；由SEQ ID NO: 53例示之shRNA序列；由SEQ ID NO: 149例示之Pol III轉錄終止序列；視情況存在之由SEQ ID NO: 159例示之選殖位點；及由SEQ ID NO: 20例示之3' ITR。
在一個實施例中，例示性構築體包含：由SEQ ID NO: 19例示之5' ITR；視情況存在之由SEQ ID NO: 160例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 98例示之CMV增強子；由SEQ ID NO: 99例示之CMV啟動子；視情況存在之由SEQ ID NO: 161例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 140例示之螢光素酶編碼序列；視情況存在之由SEQ ID NO: 162例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 141例示之T2A序列；由SEQ ID NO: 142例示之turboGFP編碼區；視情況存在之由SEQ ID NO: 163例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 143例示之SV40 poly(A)位點；視情況存在之由SEQ ID NO: 164例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 144例示之U6啟動子序列；由SEQ ID NO: 54例示之shRNA序列；由SEQ ID NO: 149例示之Pol III轉錄終止序列；視情況存在之由SEQ ID NO: 159例示之選殖位點；及由SEQ ID NO: 20例示之3' ITR。
在一個實施例中，例示性構築體包含：由SEQ ID NO: 19例示之5' ITR；視情況存在之由SEQ ID NO: 160例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 98例示之CMV增強子；由SEQ ID NO: 99例示之CMV啟動子；視情況存在之由SEQ ID NO: 161例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 140例示之螢光素酶編碼序列；視情況存在之由SEQ ID NO: 162例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 141例示之T2A序列；由SEQ ID NO: 142例示之turboGFP編碼區；視情況存在之由SEQ ID NO: 163例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 143例示之SV40 poly(A)位點；視情況存在之由SEQ ID NO: 164例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 144例示之U6啟動子序列；由SEQ ID NO: 55例示之shRNA序列；由SEQ ID NO: 149例示之Pol III轉錄終止序列；視情況存在之由SEQ ID NO: 159例示之選殖位點；及由SEQ ID NO: 20例示之3' ITR。兩 (2) 個野生型 hKCNQ4 構築體序列
在一個實施例中，例示性構築體包含：由SEQ ID NO: 19例示之5' ITR；視情況存在之由SEQ ID NO: 160例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 98例示之CMV增強子；由SEQ ID NO: 99例示之CMV啟動子；視情況存在之由SEQ ID NO: 161例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 91例示之mKCNQ4野生型編碼序列；視情況存在之由SEQ ID NO: 165例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 145例示之3xFlag標籤序列；視情況存在之由SEQ ID NO: 162例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 141例示之T2A序列；由SEQ ID NO: 146例示之mScarlet編碼區；視情況存在之由SEQ ID NO: 166例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 36例示之bGHpoly(a)訊號；視情況存在之由SEQ ID NO: 159例示之選殖位點；及由SEQ ID NO: 18例示之3' ITR。
在一個實施例中，例示性構築體包含：由SEQ ID NO: 19例示之5' ITR；視情況存在之由SEQ ID NO: 160例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 98例示之CMV增強子；由SEQ ID NO: 99例示之CMV啟動子；視情況存在之由SEQ ID NO: 161例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 90例示之hKCNQ4野生型編碼序列；視情況存在之由SEQ ID NO: 165例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 145例示之3xFlag標籤序列；視情況存在之由SEQ ID NO: 162例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 141例示之T2A序列；由SEQ ID NO: 146例示之mScarlet編碼區；視情況存在之由SEQ ID NO: 166例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 36例示之bGHpoly(a)訊號；視情況存在之由SEQ ID NO: 159例示之選殖位點；及由SEQ ID NO: 18例示之3' ITR。五 (5) 個經密碼子最佳化 hKCNQ4 構築體序列
在一個實施例中，例示性構築體包含：由SEQ ID NO: 19例示之5' ITR；視情況存在之由SEQ ID NO: 160例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 98例示之CMV增強子；由SEQ ID NO: 99例示之CMV啟動子；視情況存在之由SEQ ID NO: 161例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 9例示之hKCNQ4經密碼子最佳化編碼序列；視情況存在之由SEQ ID NO: 165例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 145例示之3xFlag標籤序列；視情況存在之由SEQ ID NO: 162例示之選殖位點；  由SEQ ID NO: 141例示之T2A序列；由SEQ ID NO: 146例示之mScarlet編碼區；視情況存在之由SEQ ID NO: 166例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 36例示之bGHpoly(a)訊號；視情況存在之由SEQ ID NO: 159例示之選殖位點；及由SEQ ID NO: 20例示之3' ITR。
在一個實施例中，例示性構築體包含：由SEQ ID NO: 19例示之5' ITR；視情況存在之由SEQ ID NO: 160例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 98例示之CMV增強子；由SEQ ID NO: 99例示之CMV啟動子；視情況存在之由SEQ ID NO: 161例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 10例示之hKCNQ4經密碼子最佳化編碼序列；視情況存在之由SEQ ID NO: 165例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 145例示之3xFlag標籤序列；視情況存在之由SEQ ID NO: 162例示之選殖位點；  由SEQ ID NO: 141例示之T2A序列；由SEQ ID NO: 146例示之mScarlet編碼區；視情況存在之由SEQ ID NO: 166例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 36例示之bGHpoly(a)訊號；視情況存在之由SEQ ID NO: 159例示之選殖位點；及由SEQ ID NO: 20例示之3' ITR。
在一個實施例中，例示性構築體包含：由SEQ ID NO: 19例示之5' ITR；視情況存在之由SEQ ID NO: 160例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 98例示之CMV增強子；由SEQ ID NO: 100例示之CMV啟動子；視情況存在之由SEQ ID NO: 161例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 9例示之hKCNQ4經密碼子最佳化編碼序列；視情況存在之由SEQ ID NO: 166例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 36例示之bGHpoly(a)訊號；視情況存在之由SEQ ID NO: 164例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 144例示之U6啟動子序列；由SEQ ID NO: 42例示之引導RNA序列；由SEQ ID NO: 147例示之tcrRNA序列；由SEQ ID NO: 149例示之Pol III轉錄終止序列；視情況存在之由SEQ ID NO: 167例示之選殖位點；及由SEQ ID NO: 20例示之3' ITR。
在一個實施例中，例示性構築體包含：由SEQ ID NO: 19例示之5' ITR；視情況存在之由SEQ ID NO: 160例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 98例示之CMV增強子；由SEQ ID NO: 100例示之CMV啟動子；視情況存在之由SEQ ID NO: 161例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 9例示之hKCNQ4經密碼子最佳化編碼序列；視情況存在之由SEQ ID NO: 166例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 36例示之bGHpoly(a)訊號；視情況存在之由SEQ ID NO: 164例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 144例示之U6啟動子序列；由SEQ ID NO: 43例示之引導RNA序列；由SEQ ID NO: 147例示之tcrRNA序列；由SEQ ID NO: 149例示之Pol III轉錄終止序列；視情況存在之由SEQ ID NO: 167例示之選殖位點；及由SEQ ID NO: 20例示之3' ITR。
在一個實施例中，例示性構築體包含：由SEQ ID NO: 19例示之5' ITR；視情況存在之由SEQ ID NO: 160例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 98例示之CMV增強子；由SEQ ID NO: 100例示之CMV啟動子；視情況存在之由SEQ ID NO: 161例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 9例示之hKCNQ4經密碼子最佳化編碼序列；視情況存在之由SEQ ID NO: 166例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 36例示之bGHpoly(a)訊號；視情況存在之由SEQ ID NO: 164例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 144例示之U6啟動子序列；由SEQ ID NO: 150例示之引導RNA序列；由SEQ ID NO: 147例示之tcrRNA序列；由SEQ ID NO: 149例示之Pol III轉錄終止序列；視情況存在之由SEQ ID NO: 167例示之選殖位點；及由SEQ ID NO: 20例示之3' ITR四 (4) 個 Cas9 構築體序列
在一個實施例中，例示性構築體包含：由SEQ ID NO: 19例示之5' ITR；視情況存在之由SEQ ID NO: 155例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 98例示之CMV增強子；由SEQ ID NO: 99例示之CMV啟動子；視情況存在之由SEQ ID NO: 161例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 151例示之SV40核定位訊號；視情況存在之由SEQ ID NO: 168例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 152例示之催化失活saCas9編碼序列；視情況存在之由SEQ ID NO: 169例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 153例示之SV40核定位訊號；視情況存在之由SEQ ID NO: 166例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 143例示之SV40 poly(A)訊號序列；視情況存在之由SEQ ID NO: 159例示之選殖位點；及由SEQ ID NO: 20例示之3' ITR。
在一個實施例中，例示性構築體包含：由SEQ ID NO: 19例示之5' ITR；視情況存在之由SEQ ID NO: 155例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 99例示之CMV啟動子；視情況存在之由SEQ ID NO: 161例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 151例示之SV40核定位訊號；視情況存在之由SEQ ID NO: 168例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 152例示之催化失活saCas9編碼序列；視情況存在之由SEQ ID NO: 169例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 153例示之SV40核定位訊號；視情況存在之由SEQ ID NO: 166例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 143例示之SV40 poly(A)訊號序列；視情況存在之由SEQ ID NO: 159例示之選殖位點；及由SEQ ID NO: 20例示之3' ITR。
在一個實施例中，例示性構築體包含：由SEQ ID NO: 19例示之5' ITR；視情況存在之由SEQ ID NO: 155例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 98例示之CMV增強子；由SEQ ID NO: 99例示之CMV啟動子；視情況存在之由SEQ ID NO: 161例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 151例示之SV40核定位訊號；視情況存在之由SEQ ID NO: 168例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 154例示之催化活性saCas9編碼序列；視情況存在之由SEQ ID NO: 169例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 153例示之SV40核定位訊號；視情況存在之由SEQ ID NO: 166例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 143例示之SV40 poly(A)訊號序列；視情況存在之由SEQ ID NO: 159例示之選殖位點；及由SEQ ID NO: 20例示之3' ITR。
在一個實施例中，例示性構築體包含：由SEQ ID NO: 19例示之5' ITR；視情況存在之由SEQ ID NO: 155例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 99例示之CMV啟動子；視情況存在之由SEQ ID NO: 161例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 151例示之SV40核定位訊號；視情況存在之由SEQ ID NO: 168例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 154例示之經催化saCas9編碼序列；視情況存在之由SEQ ID NO: 169例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 153例示之SV40核定位訊號；視情況存在之由SEQ ID NO: 166例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 143例示之SV40 poly(A)訊號序列；視情況存在之由SEQ ID NO: 159例示之選殖位點；及由SEQ ID NO: 20例示之3' ITR。具有 eGFP 及 sgRNA 構築體序列之八 (8) 個 Cas9
在一個實施例中，例示性構築體包含：由SEQ ID NO: 19例示之5' ITR；視情況存在之由SEQ ID NO: 160例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 98例示之CMV增強子；由SEQ ID NO: 99例示之CMV啟動子；視情況存在之由SEQ ID NO: 161例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 151例示之SV40核定位訊號；視情況存在之由SEQ ID NO: 168例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 154例示之催化活性saCas9編碼序列；視情況存在之由SEQ ID NO: 169例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 153例示之SV40核定位訊號；視情況存在之由SEQ ID NO: 162例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 141例示之T2A序列；由SEQ ID NO: 142例示之turboGFP序列；視情況存在之由SEQ ID NO: 158例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 143例示之SV-40 poly(A)訊號序列；視情況存在之由SEQ ID NO: 164例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 144例示之U6啟動子序列；由SEQ ID NO: 43例示之引導RNA序列；由SEQ ID NO: 147例示之tcrRNA序列；由SEQ ID NO: 149例示之Pol III轉錄終止序列；視情況存在之由SEQ ID NO: 170例示之選殖位點；及由SEQ ID NO: 20例示之3' ITR。
在一個實施例中，例示性構築體包含：由SEQ ID NO: 19例示之5' ITR；視情況存在之由SEQ ID NO: 160例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 98例示之CMV增強子；由SEQ ID NO: 99例示之CMV啟動子；視情況存在之由SEQ ID NO: 161例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 151例示之SV40核定位訊號；視情況存在之由SEQ ID NO: 168例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 152例示之催化失活saCas9編碼序列；視情況存在之由SEQ ID NO: 169例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 153例示之SV40核定位訊號；視情況存在之由SEQ ID NO: 162例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 141例示之T2A序列；由SEQ ID NO: 142例示之turboGFP序列；視情況存在之由SEQ ID NO: 158例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 143例示之SV-40 poly(A)訊號序列；視情況存在之由SEQ ID NO: 164例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 144例示之U6啟動子序列；由SEQ ID NO: 43例示之引導RNA序列；由SEQ ID NO: 147例示之tcrRNA序列；由SEQ ID NO: 149例示之Pol III轉錄終止序列；視情況存在之由SEQ ID NO: 170例示之選殖位點；及由SEQ ID NO: 20例示之3' ITR。
在一個實施例中，例示性構築體包含：由SEQ ID NO: 19例示之5' ITR；視情況存在之由SEQ ID NO: 160例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 98例示之CMV增強子；由SEQ ID NO: 99例示之CMV啟動子；視情況存在之由SEQ ID NO: 161例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 151例示之SV40核定位訊號；視情況存在之由SEQ ID NO: 168例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 154例示之催化活性saCas9編碼序列；視情況存在之由SEQ ID NO: 169例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 153例示之SV40核定位訊號；視情況存在之由SEQ ID NO: 162例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 141例示之T2A序列；由SEQ ID NO: 142例示之turboGFP序列；視情況存在之由SEQ ID NO: 158例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 143例示之SV-40 poly(A)訊號序列；視情況存在之由SEQ ID NO: 164例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 144例示之U6啟動子序列；由SEQ ID NO: 42例示之引導RNA序列；由SEQ ID NO: 147例示之tcrRNA序列；由SEQ ID NO: 149例示之Pol III轉錄終止序列；視情況存在之由SEQ ID NO: 170例示之選殖位點；及由SEQ ID NO: 20例示之3' ITR。
在一個實施例中，例示性構築體包含：由SEQ ID NO: 19例示之5' ITR；視情況存在之由SEQ ID NO: 160例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 98例示之CMV增強子；由SEQ ID NO: 99例示之CMV啟動子；視情況存在之由SEQ ID NO: 161例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 151例示之SV40核定位訊號；視情況存在之由SEQ ID NO: 168例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 152例示之催化失活saCas9編碼序列；視情況存在之由SEQ ID NO: 169例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 153例示之SV40核定位訊號；視情況存在之由SEQ ID NO: 162例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 141例示之T2A序列；由SEQ ID NO: 142例示之turboGFP序列；視情況存在之由SEQ ID NO: 158例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 143例示之SV-40 poly(A)訊號序列；視情況存在之由SEQ ID NO: 164例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 144例示之U6啟動子序列；由SEQ ID NO: 42例示之引導RNA序列；由SEQ ID NO: 147例示之tcrRNA序列；由SEQ ID NO: 149例示之Pol III轉錄終止序列；視情況存在之由SEQ ID NO: 170例示之選殖位點；及由SEQ ID NO: 20例示之3' ITR。
在一個實施例中，例示性構築體包含：由SEQ ID NO: 19例示之5' ITR；視情況存在之由SEQ ID NO: 160例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 98例示之CMV增強子；由SEQ ID NO: 99例示之CMV啟動子；視情況存在之由SEQ ID NO: 161例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 151例示之SV40核定位訊號；視情況存在之由SEQ ID NO: 168例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 154例示之催化活性saCas9編碼序列；視情況存在之由SEQ ID NO: 169例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 153例示之SV40核定位訊號；視情況存在之由SEQ ID NO: 162例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 141例示之T2A序列；由SEQ ID NO: 142例示之turboGFP序列；視情況存在之由SEQ ID NO: 158例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 143例示之SV-40 poly(A)訊號序列；視情況存在之由SEQ ID NO: 164例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 144例示之U6啟動子序列；由SEQ ID NO: 44例示之引導RNA序列；由SEQ ID NO: 147例示之tcrRNA序列；由SEQ ID NO: 149例示之Pol III轉錄終止序列；視情況存在之由SEQ ID NO: 170例示之選殖位點；及由SEQ ID NO: 20例示之3' ITR。
在一個實施例中，例示性構築體包含：由SEQ ID NO: 19例示之5' ITR；視情況存在之由SEQ ID NO: 160例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 98例示之CMV增強子；由SEQ ID NO: 99例示之CMV啟動子；視情況存在之由SEQ ID NO: 161例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 151例示之SV40核定位訊號；視情況存在之由SEQ ID NO: 168例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 154例示之催化活性saCas9編碼序列；視情況存在之由SEQ ID NO: 169例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 153例示之SV40核定位訊號；視情況存在之由SEQ ID NO: 162例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 141例示之T2A序列；由SEQ ID NO: 142例示之turboGFP序列；視情況存在之由SEQ ID NO: 158例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 143例示之SV-40 poly(A)訊號序列；視情況存在之由SEQ ID NO: 164例示之選殖位點； 由SEQ ID NO: 144例示之U6啟動子序列；由SEQ ID NO: 45例示之引導RNA序列；由SEQ ID NO: 147例示之tcrRNA序列；由SEQ ID NO: 149例示之Pol III轉錄終止序列；視情況存在之由SEQ ID NO: 170例示之選殖位點；及由SEQ ID NO: 20例示之3' ITR。
在一個實施例中，例示性構築體包含：由SEQ ID NO: 19例示之5' ITR；視情況存在之由SEQ ID NO: 160例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 98例示之CMV增強子；由SEQ ID NO: 99例示之CMV啟動子；視情況存在之由SEQ ID NO: 161例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 151例示之SV40核定位訊號；視情況存在之由SEQ ID NO: 168例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 154例示之催化活性saCas9編碼序列；視情況存在之由SEQ ID NO: 169例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 153例示之SV40核定位訊號；視情況存在之由SEQ ID NO: 162例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 141例示之T2A序列；由SEQ ID NO: 142例示之turboGFP序列；視情況存在之由SEQ ID NO: 158例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 143例示之SV-40 poly(A)訊號序列；視情況存在之由SEQ ID NO: 164例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 144例示之U6啟動子序列；由SEQ ID NO: 46例示之引導RNA序列；由SEQ ID NO: 147例示之tcrRNA序列；由SEQ ID NO: 149例示之Pol III轉錄終止序列；視情況存在之由SEQ ID NO: 170例示之選殖位點；及由SEQ ID NO: 20例示之3' ITR。
在一個實施例中，例示性構築體包含：由SEQ ID NO: 19例示之5' ITR；視情況存在之由SEQ ID NO: 160例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 98例示之CMV增強子；由SEQ ID NO: 99例示之CMV啟動子；視情況存在之由SEQ ID NO: 161例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 151例示之SV40核定位訊號；視情況存在之由SEQ ID NO: 168例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 154例示之催化活性saCas9編碼序列；視情況存在之由SEQ ID NO: 169例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 153例示之SV40核定位訊號；視情況存在之由SEQ ID NO: 162例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 141例示之T2A序列；由SEQ ID NO: 142例示之turboGFP序列；視情況存在之由SEQ ID NO: 158例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 143例示之SV-40 poly(A)訊號序列；視情況存在之由SEQ ID NO: 164例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 144例示之U6啟動子序列；由SEQ ID NO: 47例示之引導RNA序列；由SEQ ID NO: 147例示之tcrRNA序列；由SEQ ID NO: 149例示之Pol III轉錄終止序列；視情況存在之由SEQ ID NO: 170例示之選殖位點；及由SEQ ID NO: 20例示之3' ITR。三 (3) 個 eGFP 及 sgRNA 構築體序列
在一個實施例中，例示性構築體包含：由SEQ ID NO: 19例示之5' ITR；視情況存在之由SEQ ID NO: 160例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 98例示之CMV增強子；由SEQ ID NO: 100例示之CMV啟動子；視情況存在之由SEQ ID NO: 161例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 142例示之turboGFP編碼序列；視情況存在之由SEQ ID NO: 166例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 36例示之bGHpoly(a)訊號；視情況存在之由SEQ ID NO: 164例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 144例示之U6啟動子序列；由SEQ ID NO: 42例示之引導RNA序列；由SEQ ID NO: 147例示之tcrRNA序列；由SEQ ID NO: 149例示之Pol III轉錄終止序列；視情況存在之由SEQ ID NO: 167例示之選殖位點；及由SEQ ID NO: 20例示之3' ITR。
在一個實施例中，例示性構築體包含：由SEQ ID NO: 19例示之5' ITR；視情況存在之由SEQ ID NO: 160例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 98例示之CMV增強子；由SEQ ID NO: 100例示之CMV啟動子；視情況存在之由SEQ ID NO: 161例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 142例示之turboGFP編碼序列；視情況存在之由SEQ ID NO: 166例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 36例示之bGHpoly(a)訊號；視情況存在之由SEQ ID NO: 164例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 144例示之U6啟動子序列；由SEQ ID NO: 43例示之引導RNA序列；由SEQ ID NO: 147例示之tcrRNA序列；由SEQ ID NO: 149例示之Pol III轉錄終止序列；視情況存在之由SEQ ID NO: 167例示之選殖位點；及由SEQ ID NO: 20例示之3' ITR。
在一個實施例中，例示性構築體包含：由SEQ ID NO: 19例示之5' ITR；視情況存在之由SEQ ID NO: 160例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 98例示之CMV增強子；由SEQ ID NO: 100例示之CMV啟動子；視情況存在之由SEQ ID NO: 161例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 142例示之turboGFP編碼序列；視情況存在之由SEQ ID NO: 166例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 36例示之bGHpoly(a)訊號；視情況存在之由SEQ ID NO: 164例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 144例示之U6啟動子序列；由SEQ ID NO: 150例示之引導RNA序列；由SEQ ID NO: 147例示之tcrRNA序列；由SEQ ID NO: 149例示之Pol III轉錄終止序列；視情況存在之由SEQ ID NO: 167例示之選殖位點；及由SEQ ID NO: 20例示之3' ITR。包含小鼠 KCNQ4 靶向序列之十 (10) 個 miRNA 構築體序列
在一個實施例中，例示性構築體包含：由SEQ ID NO: 19例示之5' ITR；視情況存在之由SEQ ID NO: 155例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 22例示之CMV增強子；由SEQ ID NO: 101例示之CBA啟動子；由SEQ ID NO: 102例示之嵌合內含子，其中由SEQ ID NO: 135例示之人類微小RNA主鏈及小鼠KCNQ4靶向序列經工程改造至該嵌合內含子中；視情況存在之由SEQ ID NO: 156例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 103例示之eGFP編碼區；視情況存在之由SEQ ID NO: 157例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 135例示之微小RNA主鏈及KCNQ4靶向序列；視情況存在之由SEQ ID NO: 158例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 36例示之polyA位點；視情況存在之由SEQ ID NO: 159例示之選殖位點；及由SEQ ID NO: 20例示之3' ITR。
在一個實施例中，例示性構築體包含：由SEQ ID NO: 19例示之5' ITR；視情況存在之由SEQ ID NO: 155例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 22例示之CMV增強子；由SEQ ID NO: 101例示之CBA啟動子；由SEQ ID NO: 102例示之嵌合內含子，其中由SEQ ID NO: 135例示之人類微小RNA主鏈及小鼠KCNQ4靶向序列經工程改造至該嵌合內含子中；視情況存在之由SEQ ID NO: 156例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 10例示之KCNQ4編碼區；視情況存在之由SEQ ID NO: 157例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 135例示之微小RNA主鏈及KCNQ4靶向序列；視情況存在之由SEQ ID NO: 158例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 36例示之polyA位點；視情況存在之由SEQ ID NO: 159例示之選殖位點；及由SEQ ID NO: 20例示之3' ITR。
在一個實施例中，例示性構築體包含：由SEQ ID NO: 19例示之5' ITR；視情況存在之由SEQ ID NO: 155例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 22例示之CMV增強子；由SEQ ID NO: 101例示之CBA啟動子；由SEQ ID NO: 102例示之嵌合內含子，其中由SEQ ID NO: 136例示之人類微小RNA主鏈及小鼠KCNQ4靶向序列經工程改造至該嵌合內含子中；視情況存在之由SEQ ID NO: 156例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 103例示之eGFP編碼區；視情況存在之由SEQ ID NO: 157例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 135例示之微小RNA主鏈及KCNQ4靶向序列；視情況存在之由SEQ ID NO: 158例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 36例示之polyA位點；視情況存在之由SEQ ID NO: 159例示之選殖位點；及由SEQ ID NO: 20例示之3' ITR。
在一個實施例中，例示性構築體包含：由SEQ ID NO: 19例示之5' ITR；視情況存在之由SEQ ID NO: 155例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 22例示之CMV增強子；由SEQ ID NO: 101例示之CBA啟動子；由SEQ ID NO: 102例示之嵌合內含子，其中由SEQ ID NO: 136例示之人類微小RNA主鏈及小鼠KCNQ4靶向序列經工程改造至該嵌合內含子中；視情況存在之由SEQ ID NO: 156例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 10例示之KCNQ4編碼區；視情況存在之由SEQ ID NO: 157例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 135例示之微小RNA主鏈及KCNQ4靶向序列；視情況存在之由SEQ ID NO: 158例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 36例示之polyA位點；視情況存在之由SEQ ID NO: 159例示之選殖位點；及由SEQ ID NO: 20例示之3' ITR。
在一個實施例中，例示性構築體包含：由SEQ ID NO: 19例示之5' ITR；視情況存在之由SEQ ID NO: 155例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 22例示之CMV增強子；由SEQ ID NO: 101例示之CBA啟動子；由SEQ ID NO: 102例示之嵌合內含子，其中由SEQ ID NO: 137例示之人類微小RNA主鏈及小鼠KCNQ4靶向序列經工程改造至該嵌合內含子中；視情況存在之由SEQ ID NO: 156例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 103例示之eGFP編碼區；視情況存在之由SEQ ID NO: 157例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 135例示之微小RNA主鏈及KCNQ4靶向序列；視情況存在之由SEQ ID NO: 158例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 36例示之polyA位點；視情況存在之由SEQ ID NO: 159例示之選殖位點；及由SEQ ID NO: 20例示之3' ITR。
在一個實施例中，例示性構築體包含：由SEQ ID NO: 19例示之5' ITR；視情況存在之由SEQ ID NO: 155例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 22例示之CMV增強子；由SEQ ID NO: 101例示之CBA啟動子；由SEQ ID NO: 102例示之嵌合內含子，其中由SEQ ID NO: 137例示之人類微小RNA主鏈及小鼠KCNQ4靶向序列經工程改造至該嵌合內含子中；視情況存在之由SEQ ID NO: 156例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 10例示之KCNQ4編碼區；視情況存在之由SEQ ID NO: 157例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 135例示之微小RNA主鏈及KCNQ4靶向序列；視情況存在之由SEQ ID NO: 158例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 36例示之polyA位點；視情況存在之由SEQ ID NO: 159例示之選殖位點；及由SEQ ID NO: 20例示之3' ITR。
在一個實施例中，例示性構築體包含：由SEQ ID NO: 19例示之5' ITR；視情況存在之由SEQ ID NO: 155例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 22例示之CMV增強子；由SEQ ID NO: 101例示之CBA啟動子；由SEQ ID NO: 102例示之嵌合內含子，其中由SEQ ID NO: 136例示之人類微小RNA主鏈及小鼠KCNQ4靶向序列經工程改造至該嵌合內含子中；視情況存在之由SEQ ID NO: 156例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 103例示之eGFP編碼區；視情況存在之由SEQ ID NO: 157例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 138例示之微小RNA主鏈及KCNQ4靶向序列的三個複本；視情況存在之由SEQ ID NO: 158例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 36例示之polyA位點；視情況存在之由SEQ ID NO: 159例示之選殖位點；及由SEQ ID NO: 18例示之3' ITR。
在一個實施例中，例示性構築體包含：由SEQ ID NO: 19例示之5' ITR；視情況存在之由SEQ ID NO: 155例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 22例示之CMV增強子；由SEQ ID NO: 101例示之CBA啟動子；由SEQ ID NO: 102例示之嵌合內含子，其中由SEQ ID NO: 139例示之人類微小RNA主鏈及小鼠KCNQ4靶向序列的三個複本經工程改造至該嵌合內含子中；視情況存在之由SEQ ID NO: 156例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 103例示之eGFP編碼區；視情況存在之由SEQ ID NO: 157例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 138例示之微小RNA主鏈及KCNQ4靶向序列的三個複本；視情況存在之由SEQ ID NO: 158例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 36例示之polyA位點；視情況存在之由SEQ ID NO: 159例示之選殖位點；及由SEQ ID NO: 18例示之3' ITR。
在一個實施例中，例示性構築體包含：由SEQ ID NO: 19例示之5' ITR；視情況存在之由SEQ ID NO: 155例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 22例示之CMV增強子；由SEQ ID NO: 101例示之CBA啟動子；由SEQ ID NO: 102例示之嵌合內含子，其中由SEQ ID NO: 136例示之人類微小RNA主鏈及小鼠KCNQ4靶向序列經工程改造至該嵌合內含子中；視情況存在之由SEQ ID NO: 156例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 10例示之KCNQ4編碼區；視情況存在之由SEQ ID NO: 157例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 138例示之微小RNA主鏈及KCNQ4靶向序列的三個複本；視情況存在之由SEQ ID NO: 158例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 36例示之polyA位點；視情況存在之由SEQ ID NO: 159例示之選殖位點；及由SEQ ID NO: 18例示之3' ITR。
在一個實施例中，例示性構築體包含：由SEQ ID NO: 19例示之5' ITR；視情況存在之由SEQ ID NO: 155例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 22例示之CMV增強子；由SEQ ID NO: 101例示之CBA啟動子；由SEQ ID NO: 102例示之嵌合內含子，其中由SEQ ID NO: 139例示之人類微小RNA主鏈及小鼠KCNQ4靶向序列的三個複本經工程改造至該嵌合內含子中；視情況存在之由SEQ ID NO: 156例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 10例示之KCNQ4編碼區；視情況存在之由SEQ ID NO: 157例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 138例示之微小RNA主鏈及KCNQ4靶向序列的三個複本；視情況存在之由SEQ ID NO: 158例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 36例示之polyA位點；視情況存在之由SEQ ID NO: 159例示之選殖位點；及由SEQ ID NO: 18例示之3' ITR。具有 sgRNA 構築體序列之兩 (2) 個經密碼子最佳化 KCNQ4
在一個實施例中，例示性構築體包含：由SEQ ID NO: 19例示之5' ITR；視情況存在之由SEQ ID NO: 155例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 22例示之CMV增強子；由SEQ ID NO: 101例示之雞B-肌動蛋白啟動子；由SEQ ID NO: 24例示之嵌合內含子；視情況存在之由SEQ ID NO: 156例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 9例示之KCNQ4編碼區；視情況存在之由SEQ ID NO: 221例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 36例示之bGH poly(A)訊號；由SEQ ID NO: 144例示之U6啟動子序列；由SEQ ID NO: 42例示之引導RNA序列；由SEQ ID NO: 147例示之tracrRNA序列；由SEQ ID NO: 149例示之Pol III轉錄終止序列；及由SEQ ID NO: 20例示之3' ITR。
在一個實施例中，例示性構築體包含：由SEQ ID NO: 19例示之5' ITR；視情況存在之由SEQ ID NO: 155例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 22例示之CMV增強子；由SEQ ID NO: 101例示之雞B-肌動蛋白啟動子；由SEQ ID NO: 24例示之嵌合內含子；視情況存在之由SEQ ID NO: 156例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 9例示之KCNQ4編碼區；視情況存在之由SEQ ID NO: 221例示之選殖位點；由SEQ ID NO: 36例示之bGH poly(A)訊號編碼區；由SEQ ID NO: 144例示之U6啟動子序列；由SEQ ID NO: 150例示之引導RNA序列；由SEQ ID NO: 147例示之tracrRNA序列；由SEQ ID NO: 149例示之Pol III轉錄終止序列；及由SEQ ID NO: 20例示之3' ITR。例示性構築體組分序列
例示性 AAV 5' ITR 序列 (SEQ ID NO: 19) CTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCT
例示性 AAV 3' ITR 序列 (SEQ ID NO: 20) AGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAG
例示性 CMV 增強子序列 (SEQ ID NO: 22) GACATTGATTATTGACTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGACTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGG
例示性 CMV 增強子序列 (SEQ ID NO: 98) CGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGAGTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATG
例示性 CMV 啟動子序列 (SEQ ID NO: 99) GTGATGCGGTTTTGGCAGTACATCAATGGGCGTGGATAGCGGTTTGACTCACGGGGATTTCCAAGTCTCCACCCCATTGACGTCAATGGGAGTTTGTTTTGGCACCAAAATCAACGGGACTTTCCAAAATGTCGTAACAACTCCGCCCCATTGACGCAAATGGGCGGTAGGCGTGTACGGTGGGAGGTCTATATAAGCAGAGCTCGTTTAGTGAACCGT
例示性 CMV 啟動子序列 (SEQ ID NO: 100) GTGATGCGGTTTTGGCAGTACATCAATGGGCGTGGATAGCGGTTTGACTCACGGGGATTTCCAAGTCTCCACCCCATTGACGTCAATGGGAGTTTGTTTTGGCACCAAAATCAACGGGACTTTCCAAAATGTCGTAACAACTCCGCCCCATTGACGCAAATGGGCGGTAGGCGTGTACGGTGGGAGGTCTATATAAGCAGAGCTCGTTTAGTGAACCGTCGTTTAGTGAACCGT
例示性雞 B- 肌動蛋白啟動子序列 (SEQ ID NO: 101) GTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCG
例示性雞 B- 肌動蛋白啟動子序列 (SEQ ID NO: 23) GTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCG
例示性 SV-40 嵌合內含子序列 (SEQ ID NO: 102) GGAGTCGCTGCGTTGCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCGCGCCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGGCTCTGACTGACCGCGTTACTCCCACAGGTGAGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCTTGGTTTAATGACGGCTCGTTTCTTTTCTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTAAAGGGCTCCGGGAGGGCCCTTTGTGCGGGGGGGAGCGGCTCGGGGGGTGCGTGCGTGTGTGTGTGCGTGGGGAGCGCCGCGTGCGGCCCGCGCTGCCCGGCGGCTGTGAGCGCTGCGGGCGCGGCGCGGGGCTTTGTGCGCTCCGCGTGTGCGCGAGGGGAGCGCGGCCGGGGGCGGTGCCCCGCGGTGCGGGGGGGCTGCGAGGGGAACAAAGGCTGCGTGCGGGGTGTGTGCGTGGGGGGGTGAGCAGGGGGTGTGGGCGCGGCGGTCGGGCTGTAACCCCCCCCTGCACCCCCCTCCCCGAGTTGCTGAGCACGGCCCGGCTTCGGGTGCGGGGCTCCGTGCGGGGCGTGGCGCGGGGCTCGCCGTGCCGGGCGGGGGGTGGCGGCAGGTGGGGGTGCCGGGCGGGGCGGGGCCGCCTCGGGCCGGGGAGGGCTCGGGGGAGGGGCGCGGCGGCCCCCGGAGCGCCGGCGTCTAGAGCCTCTGCTAACCATGTTCATGCCTTCTTCTTTTTCCTACAG
例示性 SV-40 嵌合內含子序列 (SEQ ID NO: 24) GGAGTCGCTGCGTTGCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCGCGCCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGGCTCTGACTGACCGCGTTACTCCCACAGGTGAGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCTTGGTTTAATGACGGCTCGTTTCTTTTCTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTAAAGGGCTCCGGGAGGGCCCTTTGTGCGGGGGGGAGCGGCTCGGGGGGTGCGTGCGTGTGTGTGTGCGTGGGGAGCGCCGCGTGCGGCCCGCGCTGCCCGGCGGCTGTGAGCGCTGCGGGCGCGGCGCGGGGCTTTGTGCGCTCCGCGTGTGCGCGAGGGGAGCGCGGCCGGGGGCGGTGCCCCGCGGTGCGGGGGGGCTGCGAGGGGAACAAAGGCTGCGTGCGGGGTGTGTGCGTGGGGGGGTGAGCAGGGGGTGTGGGCGCGGCGGTCGGGCTGTAACCCCCCCCTGCACCCCCCTCCCCGAGTTGCTGAGCACGGCCCGGCTTCGGGTGCGGGGCTCCGTGCGGGGCGTGGCGCGGGGCTCGCCGTGCCGGGCGGGGGGTGGCGGCAGGTGGGGGTGCCGGGCGGGGCGGGGCCGCCTCGGGCCGGGGAGGGCTCGGGGGAGGGGCGCGGCGGCCCCCGGAGCGCCGGCGGCTGTCGAGGCGCGGCGAGCCGCAGCCATTGCCTTTTATGGTAATCGTGCGAGAGGGCGCAGGGACTTCCTTTGTCCCAAATCTGTGCGGAGCCGAAATCTGGGAGGCGCCGCCGCACCCCCTCTAGCGGGCGCGGGGCGAAGCGGTGCGGCGCCGGCAGGAAGGAAATGGGCGGGGAGGGCCTTCGTGCGTCGCCGCGCCGCCGTCCCCTTCTCCCTCTCCAGCCTCGGGGCTGTCCGCGGGGGGACGGCTGCCTTCGGGGGGGACGGGGCAGGGCGGGGTTCGGCTTCTGGCGTGTGACCGGCGGCTCTAGAGCCTCTGCTAACCATGTTCATGCCTTCTTCTTTTTCCTACAG
例示性 EGFP 序列 (SEQ ID NO: 103) ATGGTGAGCAAGGGCGAGGAGCTGTTCACCGGGGTGGTGCCCATCCTGGTCGAGCTGGACGGCGACGTAAACGGCCACAAGTTCAGCGTGTCCGGCGAGGGCGAGGGCGATGCCACCTACGGCAAGCTGACCCTGAAGTTCATCTGCACCACCGGCAAGCTGCCCGTGCCCTGGCCCACCCTCGTGACCACCCTGACCTACGGCGTGCAGTGCTTCAGCCGCTACCCCGACCACATGAAGCAGCACGACTTCTTCAAGTCCGCCATGCCCGAAGGCTACGTCCAGGAGCGCACCATCTTCTTCAAGGACGACGGCAACTACAAGACCCGCGCCGAGGTGAAGTTCGAGGGCGACACCCTGGTGAACCGCATCGAGCTGAAGGGCATCGACTTCAAGGAGGACGGCAACATCCTGGGGCACAAGCTGGAGTACAACTACAACAGCCACAACGTCTATATCATGGCCGACAAGCAGAAGAACGGCATCAAGGTGAACTTCAAGATCCGCCACAACATCGAGGACGGCAGCGTGCAGCTCGCCGACCACTACCAGCAGAACACCCCCATCGGCGACGGCCCCGTGCTGCTGCCCGACAACCACTACCTGAGCACCCAGTCCGCCCTGAGCAAAGACCCCAACGAGAAGCGCGATCACATGGTCCTGCTGGAGTTCGTGACCGCCGCCGGGATCACTCTCGGCATGGACGAGCTGTACAAGTAA
例示性 bGH poly(A) 訊號序列 (SEQ ID NO: 36) CTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTGGGCTCTATGG
具有 KCNQ4 靶向 seq #2 序列之例示性微小 RNA-16 主鏈 (SEQ ID NO: 104) CATAGCTCTTATGATAGCAATGTCAGCAGTGCCTTTGAGTCTCAGAGATGCCCGGGTTAAGATTCTAAAATTATCACGGGTATTACTTGAGGCTCAGAAGTAAGGTTGACCATACTCTACAGTTGTG
具有 KCNQ4 靶向 seq #2 序列之例示性微小 RNA-26 主鏈 (SEQ ID NO: 105) GAGCAGGAGGACCAAGGCCCTGGCGAAGGCCGTGGCCTCGTTGAGTCTCAGAGATGCCCGGTGTGCAGGTCCCAATGGCCGGGTATTACTGAGATTCCACGGGGACGCGGGCCTGGACGCCGGCATCCGGGCTCAGGACCCCCCTC
具有 KCNQ4 靶向 seq #2 序列之例示性微小 RNA-96 主鏈 (SEQ ID NO: 106) GTGTCCCCAGAGAGCCCGCACCAGTGCCATCTGCTTGGCCGATTTGAGTCTCAGAGATGCCCggCTTGTGTCTCTCCGCTCTGAGCTGTCTGTCTCGAGGCTCATATGGGAAAAGCAGGACCCGCAGCTGCGTCCGCCTCCCCTGCAT
具有 KCNQ4 靶向 seq #4 序列之例示性 miRNA-16 主鏈 (SEQ ID NO: 107) CATAGCTCTTATGATAGCAATGTCAGCAGTGCCTTTCTCGAAGTGCTTCTGCCGGGTTAAGATTCTAAAATTATCACGGTAGAAACATCTTCGGGAGAAGTAAGGTTGACCATACTCTACAGTTGTG
具有 KCNQ4 靶向 seq #4 序列之例示性 miRNA-26 主鏈 (SEQ ID NO: 108) GAGCAGGAGGACCAAGGCCCTGGCGAAGGCCGTGGCCTCGTTCTCGAAGTGCTTCTGCCGGTGTGCAGGTCCCAATGGCCGGTAGAATCGTTTCGAGCACGGGGACGCGGGCCTGGACGCCGGCATCCGGGCTCAGGACCCCCCTC
具有 KCNQ4 靶向 seq #4 序列之例示性 miRNA-96 主鏈 (SEQ ID NO: 109) GTGTCCCCAGAGAGCCCGCACCAGTGCCATCTGCTTGGCCGATTTCTCGAAGTGCTTCTGCCGGCTTGTGTCTCTCCGCTCTGAGCTGTGAGGAGCTTTCGGGATATGGGAAAAGCAGGACCCGCAGCTGCGTCCGCCTCCCCTGCAT
具有 KCNQ4 靶向 seq #5 序列之例示性 miRNA-16 主鏈 (SEQ ID NO: 110) CATAGCTCTTATGATAGCAATGTCAGCAGTGCCTTTCTCCACCTTGACCACGCGTGTTAAGATTCTAAAATTATCTCGTGTGGTAAGTGGTGGAGAGAAGTAAGGTTGACCATACTCTACAGTTGTG
具有 KCNQ4 靶向 seq #5 序列之例示性 miRNA-26 主鏈 (SEQ ID NO: 111) GAGCAGGAGGACCAAGGCCCTGGCGAAGGCCGTGGCCTCGTTCTCCACCTTGACCACGCGTTGTGCAGGTCCCAATGGGCGTGTGGTAGAGGTGGAGCACGGGGACGCGGGCCTGGACGCCGGCATCCGGGCTCAGGACCCCCCTC
具有 KCNQ4 靶向 seq #5 序列之例示性 miRNA-96 主鏈 (SEQ ID NO: 112) GTGTCCCCAGAGAGCCCGCACCAGTGCCATCTGCTTGGCCGATTTCTCCACCTTGACCACGCGTCTTGTGTCTCTCCGCTCTGAGGTGACTGGTTGGGTGGAGATATGGGAAAAGCAGGACCCGCAGCTGCGTCCGCCTCCCCTGCAT
具有 KCNQ4 靶向 seq #6 序列之例示性 miRNA-16 主鏈 (SEQ ID NO: 113) CATAGCTCTTATGATAGCAATGTCAGCAGTGCCTATACTGTCATAGTAGTACCAGGTTAAGATTCTAAAATTATCATGGTACTAATGTTGGCAGTGTAAGTAAGGTTGACCATACTCTACAGTTGTG
具有 KCNQ4 靶向 seq #6 序列之例示性 miRNA-26 主鏈 (SEQ ID NO: 114) GAGCAGGAGGACCAAGGCCCTGGCGAAGGCCGTGGCCTCGATACTGTCATAGTAGTACCAGTGTGCAGGTCCCAATGGCTGGTACTAATGTGACAGTCTCGGGGACGCGGGCCTGGACGCCGGCATCCGGGCTCAGGACCCCCCTC
具有 KCNQ4 靶向 seq #6 序列之例示性 miRNA-96 主鏈 (SEQ ID NO: 115) GTGTCCCCAGAGAGCCCGCACCAGTGCCATCTGCTTGGCCGATATACTGTCATAGTAGTACCAGCTTGTGTCTCTCCGCTCTGAGCTGTCACTGCTTGACGGTAAATGGGAAAAGCAGGACCCGCAGCTGCGTCCGCCTCCCCTGCAT
具有 KCNQ4 靶向序列 #1 序列之例示性 miRNA-155 主鏈 (SEQ ID NO: 116) tcctctgagtgctgaaggcttgctgtaggctgtatgctgTTGAGAATCCTGATGGAGCgggtttttgcctccaactgacccGCTCATAGGATTCTCAAcagtgtatgatgcctgttactagcattcacatgga
具有 KCNQ4 靶向序列 #2 序列之例示性 miRNA-155 主鏈 (SEQ ID NO: 117) tcctctgagtgctgaaggcttgctgtaggctgtatgctgTTGAGTCTCAGAGATGCCCgggtttttgcctccaactgaCTCGGGATTCTGAGACTCAAcagtgtatgatgcctgttactagcattcacatgga
具有 KCNQ4 靶向序列 #2v2 序列之例示性 miRNA-155 主鏈 (SEQ ID NO: 118) tcctctgagtgctgaaggcttgctgtaggctgtatgctgTTGAGTCTCAGAGATGCCCgggtttttgcctccaactgaCTCGGGATTCTGAGATTCAAcagtgtatgatgcctgttactagcattcacatgga
具有 KCNQ4 靶向序列 #2v3 序列之例示性 miRNA-155 主鏈 (SEQ ID NO: 119) tcctctgagtgctgaaggcttgctgtaggctgtatgctgTTGAGTCTCAGAGATGCCCgggtttttgcctccaactgaCTCGGGATCCTGAGATTCAAcagtgtatgatgcctgttactagcattcacatgga
具有 KCNQ4 靶向序列 #2v4 序列之例示性 miRNA-155 主鏈 (SEQ ID NO: 120) tcctctgagtgctgaaggcttgctgtaggctgtatgctgTTGAGTCTCAGAGATGCCCggaagtttgcctccaactctTTCGGGATCCTGAGATTCAAcagtgtatgatgcctgttactagcattcacatgga
具有 KCNQ4 靶向序列 #4 序列之例示性 miRNA-155 主鏈 (SEQ ID NO: 121) tcctctgagtgctgaaggcttgctgtaggctgtatgctgTTCTCGAAGTGCTTCTGCCgggtttttgcctccaactgacTcGGCGAATACTTCGAGAAcagtgtatgatgcctgttactagcattcacatgga
具有 KCNQ4 靶向序列 #5 序列之例示性 miRNA-155 主鏈 (SEQ ID NO: 122) tcctctgagtgctgaaggcttgctgtaggctgtatgctgTTCTCCACCTTGACCACGCgtgtttttgcctccaactgacaTGTGGGTAAGGTGGAGAACAgtgtatgatgcctgttactagcattcacatgga
具有 KCNQ4 靶向序列 #6 序列之例示性 miRNA-155 主鏈 (SEQ ID NO: 123) tcctctgagtgctgaaggcttgctgtaggctgtatgctgATACTGTCATAGTAGTACCaggtttttgcctccaactgacctGGTCTATATGACAGTATCAgtgtatgatgcctgttactagcattcacatgga
具有 KCNQ4 靶向序列 #7 序列之例示性 miRNA-155 主鏈 (SEQ ID NO: 124) tcctctgagtgctgaaggcttgctgtaggctgtatgctgTAGTCGGAGGTGATGTCGGgggtttttgcctccaactgacTcCTGCATACCTTCGATTACAgtgtatgatgcctgttactagcattcacatgga
具有 KCNQ4 靶向序列 #1 序列之例示性 miRNA-16 主鏈 (SEQ ID NO: 125) CATAGCTCTTATGATAGCAATGTCAGCAGTGCCTTTGAGAATCCTGATGGAGCgggTTAAGATTCTAAAATTATCAcGCTCCATGAGTGATTCTCAGAAGTAAGGTTGACCATACTCTACAGTTGTG
具有 KCNQ4 靶向序列 #1 序列之例示性 miRNA-26 主鏈 (SEQ ID NO: 126) GAGCAGGAGGACCAAGGCCCTGGCGAAGGCCGTGGCCTCGTTGAGAATCCTGATGGAGCggTGTGCAGGTCCCAATGGccGCTCCATAAGGATTCTCCACGGGGACGCGGGCCTGGACGCCGGCATCCGGGCTCAGGACCCCCCTC
具有 KCNQ4 靶向序列 #1 序列之例示性 miRNA-96 主鏈 (SEQ ID NO: 127) GTGTCCCCAGAGAGCCCGCACCAGTGCCATCTGCTTGGCCGATTTGAGAATCCTGATGGAGCggCTTGTGTCTCTCCGCTCTGAGccGGGCCATCAGATTCTCATATGGGAAAAGCAGGACCCGCAGCTGCGTCCGCCTCCCCTGCAT
具有 KCNQ4 靶向序列 #1 序列之例示性 miRNA-122 主鏈 (SEQ ID NO: 128) TGAAGTTAACACCTTCGTGGCTACAGAGTTTCCTTAGCAGAGCTGTTGAGAATCCTGATGGAGCggGTGTCTAAACTATCccGCTCCATCcGGATTCTACATAGCTACTGCTAGGCAATCCTTCCCTCGATAAATGTCTTGGCATCG
具有 KCNQ4 靶向序列 #1 序列之例示性 miRNA-135 主鏈 (SEQ ID NO: 129) GCCGCTGGACCCCTCCACTCTGCTGTGGCCTTGAGAATCCTGATGGAGCggGATTGCTGTCCCAAACTCccGCTCCATCGGATTCTCAAGGCTACAGTGAGGGGCGAGCTCCTTCTCCTGC
具有 KCNQ4 靶向序列 #1 序列之例示性 miRNA-182 主鏈 (SEQ ID NO: 130) CTCCCCAGCTCCTGGGGGGAGCTGCTTGCCTCCCCCCGTTTTGAGAATCCTGATGGAGCggACTGGTGAGGTAACAGGATCCGCCGTCCATCTTTATTCTCACTATGGGGCGAGGACTCAGCCGGCACCCTGTGCACAGCCAGCGAGGG
具有 KCNQ4 靶向序列 #1 序列之例示性 miRNA-183 主鏈 (SEQ ID NO: 131) AGGGTCGGCAGGCCGCAGAGTGTGACTCCTGTTCTGTGTTTGAGAATCCTGATGGAGCggGTGAACAGTCTCAGTCccGCTCCCAGGAAATGGTCAAAAACAGAGCAGAGACAGATCCACGAGGGCCTCCGGAGCACCTT
具有 KCNQ4 靶向序列 #1 序列之例示性 miRNA-335 主鏈 (SEQ ID NO: 132) GAAACAGATTGGAAATGATTTGTTTTGAGCGGGGGTTGAGAATCCTGATGGAGCggGTTTGTCATAAACCccGCTCCCTCAGGATTCCCAACCTCCTCTCATTTGCTATATTCAATTAAGTAA
具有 KCNQ4 靶向序列 #1 序列之例示性 miRNA-451 主鏈 (SEQ ID NO: 133) TGACTGCCAGGGCACTTGGGAATGGCAAGGttgagaatcctgatggagcggattccatcaggattctcagtCTTGCTATACCCAGAAAACGTGCCAGGAAGA
具有 KCNQ4 靶向序列 #1v2 序列之例示性 miRNA-155 主鏈 (SEQ ID NO: 134) cctgcaggcgccggcgtcctctgagtgctgaaggcttgctgtaggctgtatgctgTTGAGAATCCTGATGGAGCgggtttttgcctccaactgacccGCTCATAGGATTCTCAAcagtgtatgatgcctgttactagcattcacatgga
具有小鼠 KCNQ4 靶向序列 #6 序列之例示性 miRNA-26 主鏈 (SEQ ID NO: 135) GAGCAGGAGGACCAAGGCCCTGGCGAAGGCCGTGGCCTCGATGCTGTCATAGTAATACCAGTGTGCAGGTCCCAATGGCTGGTATTAATGTGACAGTCTCGGGGACGCGGGCCTGGACGCCGGCATCCGGGCTCAGGACCCCCCTC
具有小鼠 KCNQ4 靶向序列 #2 序列之例示性微小 RNA-26 主鏈 (SEQ ID NO: 136) GAGCAGGAGGACCAAGGCCCTGGCGAAGGCCGTGGCCTCGTTGAGTCTTAGAGAGGCCCGGTGTGCAGGTCCCAATGGCCGGGTCTTACTGAGATTCCACGGGGACGCGGGCCTGGACGCCGGCATCCGGGCTCAGGACCCCCCTC
具有小鼠 KCNQ4 靶向序列 #5 序列之例示性 miRNA-26 主鏈 (SEQ ID NO: 137) GAGCAGGAGGACCAAGGCCCTGGCGAAGGCCGTGGCCTCGTTTTCCACCTTGACTACGCGCTGTGCAGGTCCCAATGGGCGTGTAGTAGAGGTGGAGCACGGGGACGCGGGCCTGGACGCCGGCATCCGGGCTCAGGACCCCCCTC
具有小鼠 KCNQ4 靶向序列 #6 序列之 miRNA-26 主鏈的例示性三個複本 (SEQ ID NO: 138) GTGGCCTCGATGCTGTCATAGTAATACCAGTGTGCAGGTCCCAATGGCTGGTATTAATGTGACAGTCTCGGGGACGCGCAATTGGGTGGCCTCGATGCTGTCATAGTAATACCAGTGTGCAGGTCCCAATGGCTGGTATTAATGTGACAGTCTCGGGGACGCGGGCGCGCCCGTGGCCTCGATGCTGTCATAGTAATACCAGTGTGCAGGTCCCAATGGCTGGTATTAATGTGACAGTCTCGGGGACGC
具有小鼠 KCNQ4 靶向序列 #2 序列之 miRNA-26 主鏈的例示性三個複本 (SEQ ID NO: 139) GTGGCCTCGTTGAGTCTTAGAGAGGCCCGGTGTGCAGGTCCCAATGGCCGGGTCTTACTGAGATTCCACGGGGACGCGGGATCCGGTGGCCTCGTTGAGTCTTAGAGAGGCCCGGTGTGCAGGTCCCAATGGCCGGGTCTTACTGAGATTCCACGGGGACGCGGGTACCCGTGGCCTCGTTGAGTCTTAGAGAGGCCCGGTGTGCAGGTCCCAATGGCCGGGTCTTACTGAGATTCCACGGGGACGC
例示性 U6shRNA-hKCNQ4-395 序列 (SEQ ID NO: 48) TCCTCATCTTGGAATTCGTGATGcgaaCATCACGAATTCCAAGATGAGGA
例示性 U6shRNA-hKCNQ4-909 序列 (SEQ ID NO: 49) CGCCTTACTGGGCATCTCTTTCTcgaaAGAAAGAGATGCCCAGTAAGGCG
例示性 U6shRNA-hKCNQ4-1095 序列 (SEQ ID NO: 50) CTGGTACTACTATGACAGTATcgaaATACTGTCATAGTAGTACCAG
例示性 U6shRNA-hKCNQ4-1531 序列 (SEQ ID NO: 51) AAGTAGCAGAGGAGAAGAGCTcgaaAGCTCTTCTCCTCTGCTACTT
例示性 U6shRNA-hKCNQ4-1593 序列 (SEQ ID NO: 52) AAGACAGTCATCCGCTCCATCcgaaGATGGAGCGGATGACTGTCTT
例示性 U6shRNA-hKCNQ4-1677 序列 (SEQ ID NO: 53) AAGGACGTCATTGAGCAGTACcgaaGTACTGCTCAATGACGTCCTT
例示性 U6shRNA-hKCNQ4-1721 序列 (SEQ ID NO: 54) GCCGGATCAAGAGCCTGCAAAcgaaTTTGCAGGCTCTTGATCCGGC
例示性 U6shRNA-hKCNQ4-395 序列 (SEQ ID NO: 55) GGTGGATGAAATCAGCATGATcgaaATCATGCTGATTTCATCCACC
例示性螢光素酶序列 (SEQ ID NO: 140) ATGGAAGATGCCAAAAACATTAAGAAGGGCCCAGCGCCATTCTACCCACTCGAAGACGGGACCGCCGGCGAGCAGCTGCACAAAGCCATGAAGCGCTACGCCCTGGTGCCCGGCACCATCGCCTTTACCGACGCACATATCGAGGTGGACATTACCTACGCCGAGTACTTCGAGATGAGCGTTCGGCTGGCAGAAGCTATGAAGCGCTATGGGCTGAATACAAACCATCGGATCGTGGTGTGCAGCGAGAATAGCTTGCAGTTCTTCATGCCCGTGTTGGGTGCCCTGTTCATCGGTGTGGCTGTGGCCCCAGCTAACGACATCTACAACGAGCGCGAGCTGCTGAACAGCATGGGCATCAGCCAGCCCACCGTCGTATTCGTGAGCAAGAAAGGGCTGCAAAAGATCCTCAACGTGCAAAAGAAGCTACCGATCATACAAAAGATCATCATCATGGATAGCAAGACCGACTACCAGGGCTTCCAAAGCATGTACACCTTCGTGACTTCCCATTTGCCACCCGGCTTCAACGAGTACGACTTCGTGCCCGAGAGCTTCGACCGGGACAAAACCATCGCCCTGATCATGAACAGTAGTGGCAGTACCGGATTGCCCAAGGGCGTAGCCCTACCGCACCGCACCGCTTGTGTCCGATTCAGTCATGCCCGCGACCCCATCTTCGGCAACCAGATCATCCCCGACACCGCTATCCTCAGCGTGGTGCCATTTCACCACGGCTTCGGCATGTTCACCACGCTGGGCTACTTGATCTGCGGCTTTCGGGTCGTGCTCATGTACCGCTTCGAGGAGGAGCTATTCTTGCGCAGCTTGCAAGACTATAAGATTCAATCTGCCCTGCTGGTGCCCACACTATTTAGCTTCTTCGCTAAGAGCACTCTCATCGACAAGTACGACCTAAGCAACTTGCACGAGATCGCCAGCGGCGGGGCGCCGCTCAGCAAGGAGGTAGGTGAGGCCGTGGCCAAACGCTTCCACCTACCAGGCATCCGCCAGGGCTACGGCCTGACAGAAACAACCAGCGCCATTCTGATCACCCCCGAAGGGGACGACAAGCCTGGCGCAGTAGGCAAGGTGGTGCCCTTCTTCGAGGCTAAGGTGGTGGACTTGGACACAGGTAAGACACTGGGTGTGAACCAGCGCGGCGAGCTGTGCGTCCGTGGCCCCATGATCATGAGCGGCTACGTTAACAACCCCGAGGCTACAAACGCTCTCATCGACAAGGACGGCTGGCTGCACAGCGGCGACATCGCCTACTGGGACGAGGACGAGCACTTCTTCATCGTGGACCGGCTGAAGAGCCTGATCAAATACAAGGGCTACCAGGTAGCCCCAGCCGAACTGGAGAGCATCCTGCTGCAACACCCCAACATCTTCGACGCCGGGGTCGCCGGCCTGCCCGACGACGATGCCGGCGAGCTGCCCGCCGCAGTCGTCGTGCTGGAACACGGTAAAACCATGACCGAGAAGGAGATCGTGGACTATGTGGCCAGCCAGGTTACAACCGCCAAGAAGCTGCGCGGTGGTGTTGTGTTCGTGGACGAGGTGCCTAAAGGACTGACCGGCAAGTTGGACGCCCGCAAGATCCGCGAGATTCTCATTAAGGCCAAGAAGGGCGGCAAGATCGCCGTG
例示性 T2A 序列 (SEQ ID NO: 141) GAGGGCAGAGGAAGTCTGCTAACATGCGGTGACGTCGAGGAGAATCCTGGCCCA
例示性 TurboGFP 序列 (SEQ ID NO: 142) ATGGAGAGCGACGAGAGCGGCCTGCCCGCCATGGAGATCGAGTGCCGCATCACCGGCACCCTGAACGGCGTGGAGTTCGAGCTGGTGGGCGGCGGAGAGGGCACCCCCGAGCAGGGCCGCATGACCAACAAGATGAAGAGCACCAAAGGCGCCCTGACCTTCAGCCCCTACCTGCTGAGCCACGTGATGGGCTACGGCTTCTACCACTTCGGCACCTACCCCAGCGGCTACGAGAACCCCTTCCTGCACGCCATCAACAACGGCGGCTACACCAACACCCGCATCGAGAAGTACGAGGACGGCGGCGTGCTGCACGTGAGCTTCAGCTACCGCTACGAGGCCGGCCGCGTGATCGGCGACTTCAAGGTGATGGGCACCGGCTTCCCCGAGGACAGCGTGATCTTCACCGACAAGATCATCCGCAGCAACGCCACCGTGGAGCACCTGCACCCCATGGGCGATAACGATCTGGATGGCAGCTTCACCCGCACCTTCAGCCTGCGCGACGGCGGCTACTACAGCTCCGTGGTGGACAGCCACATGCACTTCAAGAGCGCCATCCACCCCAGCATCCTGCAGAACGGGGGCCCCATGTTCGCCTTCCGCCGCGTGGAGGAGGATCACAGCAACACCGAGCTGGGCATCGTGGAGTACCAGCACGCCTTCAAGACCCCGGATGCAGATGCCGGTGAAGAATAA
例示性 SV40 poly(A) 訊號序列 (SEQ ID NO: 143) TAAGATACATTGATGAGTTTGGACAAACCACAACTAGAATGCAGTGAAAAAAATGCTTTATTTGTGAAATTTGTGATGCTATTGCTTTATTTGTAACCATTATAAGCTGCAATAAACAAGTT
例示性 U6 啟動子序列 (SEQ ID NO: 144) aaggtcgggcaggaagagggcctatttcccatgattccttcatatttgcatatacgatacaaggctgttagagagataattagaattaatttgactgtaaacacaaagatattagtacaaaatacgtgacgtagaaagtaataatttcttgggtagtttgcagttttaaaattatgttttaaaatggactatcatatgcttaccgtaacttgaaagtatttcgatttcttggctttatatatcttgtggaaaggacgaaacaccg
例示性 hKCNQ4 經密碼子最佳化序列 (SEQ ID NO: 9) ATGGCTGAAGCCCCTCCTAGAAGGCTTGGACTGGGACCTCCTCCTGGGGATGCTCCTAGAGCTGAACTGGTGGCTCTGACAGCCGTGCAGTCTGAACAAGGCGAAGCTGGTGGCGGCGGATCTCCACGTAGACTTGGACTGCTGGGAAGCCCTCTTCCTCCTGGTGCTCCACTTCCTGGACCTGGCAGTGGATCTGGATCTGCCTGTGGCCAGAGAAGCTCTGCCGCTCACAAGAGATACCGGCGGCTGCAGAACTGGGTGTACAACGTGCTGGAAAGACCCAGAGGCTGGGCCTTCGTGTACCACGTGTTCATCTTTCTGCTGGTGTTCAGCTGCCTGGTGCTGTCCGTGCTGAGCACCATCCAAGAACATCAAGAGCTGGCTAACGAGTGCCTGTTAATACTGGAGTTTGTGATGATTGTGGTGTTCGGCCTCGAGTACATCGTCCGCGTTTGGAGCGCCGGCTGCTGCTGCAGATATAGAGGTTGGCAAGGCAGATTCCGCTTCGCCAGAAAGCCCTTCTGCGTGATCGACTTCATCGTGTTCGTGGCCAGCGTGGCCGTGATTGCTGCTGGCACACAGGGCAACATCTTCGCCACAAGCGCCCTGCGGAGCATGCGGTTTCTGCAGATCCTGAGAATGGTCCGAATGGACAGAAGAGGCGGCACCTGGAAGCTGCTGGGCTCTGTGGTGTACGCCCACAGCAAAGAGCTGATCACCGCCTGGTACATCGGATTTCTGGTGCTGATCTTCGCCTCCTTCCTGGTGTACCTGGCCGAGAAGGACGCCAACAGCGACTTTAGCAGCTACGCCGACTCTCTTTGGTGGGGCACCATCACACTGACCACCATCGGCTACGGCGACAAGACCCCTCACACATGGCTGGGAAGAGTGCTGGCCGCTGGATTTGCTCTGCTGGGCATCAGCTTTTTCGCCCTGCCTGCCGGAATCCTCGGATCTGGCTTTGCCCTGAAGGTGCAAGAGCAGCACCGGCAGAAGCACTTCGAGAAGAGAAGAATGCCTGCCGCCAACCTGATTCAGGCCGCTTGGAGACTGTACAGCACCGACATGAGCAGAGCCTACCTGACCGCCACGTGGTATTATTACGACTCGATCCTGCCTAGCTTCCGCGAACTGGCCCTGCTGTTTGAGCATGTGCAGAGAGCCAGAAACGGCGGCCTCAGACCTCTGGAAGTTCGGAGAGCACCTGTGCCTGATGGCGCCCCTTCTAGATATCCTCCAGTGGCCACCTGTCACAGACCCGGCAGCACATCTTTTTGCCCTGGCGAGTCTAGCCGGATGGGCATCAAGGACAGAATCAGAATGGGCAGCAGCCAGCGGAGAACAGGCCCTTCTAAACAGCATCTGGCCCCTCCAACCATGCCTACAAGCCCTAGCTCTGAGCAAGTGGGCGAAGCCACCTCTCCTACCAAGGTGCAGAAGTCCTGGTCCTTCAACGACCGGACCAGATTCAGAGCCAGCCTGAGACTGAAGCCCAGAACCTCTGCCGAGGATGCCCCTTCTGAAGAGGTGGCCGAAGAGAAGTCCTACCAGTGCGAGCTGACCGTGGACGACATCATGCCAGCCGTGAAAACCGTGATACGGTCTATCCGGATCCTGAAGTTCCTGGTGGCCAAGCGGAAGTTCAAAGAGACACTGCGGCCCTACGACGTGAAGGACGTGATCGAGCAGTATTCTGCCGGCCACCTGGACATGCTGGGCAGAATCAAGAGCCTGCAGACCAGAGTGGACCAGATCGTTGGAAGAGGCCCAGGCGACAGAAAGGCCAGAGAGAAGGGCGATAAGGGCCCATCTGATGCCGAGGTTGTCGACGAGATATCAATGATGGGCAGAGTGGTCAAGGTGGAAAAACAGGTGCAGAGCATCGAGCACAAGCTGGACCTGCTGCTGGGATTCTACAGCCGGTGTCTGAGAAGCGGCACATCTGCATCTCTGGGCGCTGTGCAGGTCCCACTGTTCGACCCTGATATCACCAGCGACTATCACAGCCCCGTGGACCACGAGGACATCTCCGTTTCTGCTCAGACCCTGAGCATCAGCAGATCCGTGTCCACCAACATGGAC
例示性 3xFlag 序列 (SEQ ID NO: 145) GACTACAAAGACCATGACGGTGATTATAAAGATCATGACATCGACTACAAGGATGACGATGACAAG
例示性 mScarlet 序列 (SEQ ID NO: 146) ATGGTGAGCAAGGGCGAGGCAGTGATCAAGGAGTTCATGCGGTTCAAGGTGCACATGGAGGGCTCCATGAACGGCCACGAGTTCGAGATCGAGGGCGAGGGCGAGGGCCGCCCCTACGAGGGCACCCAGACCGCCAAGCTGAAGGTGACCAAGGGTGGCCCCCTGCCCTTCTCCTGGGACATCCTGTCCCCTCAGTTCATGTACGGCTCCAGGGCCTTCATCAAGCACCCCGCCGACATCCCCGACTACTATAAGCAGTCCTTCCCCGAGGGCTTCAAGTGGGAGCGCGTGATGAACTTCGAGGACGGCGGCGCCGTGACCGTGACCCAGGACACCTCCCTGGAGGACGGCACCCTGATCTACAAGGTGAAGCTCCGCGGCACCAACTTCCCTCCTGACGGCCCCGTAATGCAGAAGAAGACAATGGGCTGGGAAGCGTCCACCGAGCGGTTGTACCCCGAGGACGGCGTGCTGAAGGGCGACATTAAGATGGCCCTGCGCCTGAAGGACGGCGGCCGCTACCTGGCGGACTTCAAGACCACCTACAAGGCCAAGAAGCCCGTGCAGATGCCCGGCGCCTACAACGTCGACCGCAAGTTGGACATCACCTCCCACAACGAGGACTACACCGTGGTGGAACAGTACGAACGCTCCGAGGGCCGCCACTCCACCGGCGGCATGGACGAGCTGTACAAGTAA
例示性 hKCNQ4 經密碼子最佳化序列 (SEQ ID NO: 10) ATGGCTGAAGCCCCTCCTAGAAGGCTTGGACTGGGACCTCCTCCTGGGGATGCTCCTAGAGCTGAACTGGTGGCTCTGACAGCCGTGCAGTCTGAACAAGGCGAAGCTGGTGGCGGCGGATCTCCACGTAGACTTGGACTGCTGGGAAGCCCTCTTCCTCCTGGTGCTCCACTTCCTGGACCTGGCAGTGGATCTGGATCTGCCTGTGGCCAGAGAAGCTCTGCCGCTCACAAGAGATACCGGCGGCTGCAGAACTGGGTGTACAACGTGCTGGAAAGACCCAGAGGCTGGGCCTTCGTGTACCACGTGTTCATCTTTCTGCTGGTGTTCAGCTGCCTGGTGCTGTCCGTGCTGAGCACCATCCAAGAACATCAAGAGCTGGCTAACGAGTGCCTGTTAATACTGGAGTTTGTGATGATTGTGGTGTTCGGCCTCGAGTACATCGTCCGCGTTTGGAGCGCCGGCTGCTGCTGCAGATATAGAGGTTGGCAAGGCAGATTCCGCTTCGCCAGAAAGCCCTTCTGCGTGATCGACTTCATCGTGTTCGTGGCCAGCGTGGCCGTGATTGCTGCTGGCACACAGGGCAACATCTTCGCCACAAGCGCCCTGCGGAGCATGCGGTTTCTGCAGATCCTGAGAATGGTCCGAATGGACAGAAGAGGCGGCACCTGGAAGCTGCTGGGCTCTGTGGTGTACGCCCACAGCAAAGAGCTGATCACCGCCTGGTACATCGGATTTCTGGTGCTGATCTTCGCCTCCTTCCTGGTGTACCTGGCCGAGAAGGACGCCAACAGCGACTTTAGCAGCTACGCCGACTCTCTTTGGTGGGGCACCATCACACTGACCACCATCGGCTACGGCGACAAGACCCCTCACACATGGCTGGGAAGAGTGCTGGCCGCTGGATTTGCTCTGCTGGGCATCAGCTTTTTCGCCCTGCCTGCCGGAATCCTCGGATCTGGCTTTGCCCTGAAGGTGCAAGAGCAGCATAGACAAAAGCATTTTGAAAAGAGAAGAATGCCTGCCGCCAACCTGATTCAGGCCGCTTGGAGACTGTACAGCACCGACATGAGCAGAGCCTACCTGACCGCCACGTGGTATTATTACGATTCGATCCTGCCTAGCTTCCGCGAACTGGCCCTGCTGTTTGAGCATGTGCAGAGAGCCAGAAACGGCGGCCTCAGACCTCTGGAAGTTCGGAGAGCACCTGTGCCTGATGGCGCCCCTTCTAGATATCCTCCAGTGGCCACCTGTCACAGACCCGGCAGCACATCTTTTTGCCCTGGCGAGTCTAGCCGGATGGGCATCAAGGACAGAATCAGAATGGGCAGCAGCCAGCGGAGAACAGGCCCTTCTAAACAGCATCTGGCCCCTCCAACCATGCCTACAAGCCCTAGCTCTGAGCAAGTGGGCGAAGCCACCTCTCCTACCAAGGTGCAGAAGTCCTGGTCCTTCAACGACCGGACCAGATTTAGAGCCAGCCTCCGGCTGAAGCCCAGAACCTCTGCCGAGGATGCCCCTTCTGAAGAGGTGGCCGAAGAGAAGTCCTACCAGTGCGAGCTGACCGTGGACGACATCATGCCAGCCGTGAAAACCGTGATAAGGTCTATACGCATCCTGAAGTTCCTGGTGGCCAAGCGGAAGTTCAAAGAGACACTGCGGCCCTACGACGTGAAGGACGTGATCGAGCAGTATTCTGCCGGCCACCTGGACATGCTGGGCAGAATCAAGAGCCTGCAGACCAGAGTGGACCAGATCGTTGGAAGAGGCCCAGGCGACAGAAAGGCCAGAGAGAAGGGCGATAAGGGCCCATCTGATGCCGAGGTTGTCGACGAGATATCAATGATGGGCAGAGTCGTGAAAGTCGAAAAACAGGTGCAGAGCATCGAGCACAAGCTGGACCTGCTGCTGGGATTCTACAGCCGGTGTCTGAGAAGCGGCACATCTGCATCTCTGGGCGCTGTGCAGGTCCCACTGTTCGATCCTGATATTACGAGCGATTATCACAGCCCCGTGGACCACGAGGACATCTCCGTTTCTGCTCAGACCCTGAGCATCAGCAGATCCGTGTCCACCAACATGGAC
例示性引導 RNA hsammu386Fw 序列 (SEQ ID NO: 42) AGGAGCACCAGGAACTTGCCA
例示性 tracrRNA 序列 (SEQ ID NO: 147) GTTTAAGTACTCTGTGCTGGAAACAGCACAGAATCTACTTAAACAAGGCAAAATGCCGTGTTTATCTCGTCAACTTGTTGGCGAGA
例示性 U6shRNA-hKCNQ4-395 序列 (SEQ ID NO: 148) CTCCCCAGCTCCTGGGGGGAGCTGCTTGCCTCCCCCCGTTTTGAGAATCCTGATGGAGCggACTGGTGAGGTAACAGGATCCGCCGTCCATCTTTATTCTCACTATGGGGCGAGGACTCAGCCGGCACCCTGTGCACAGCCAGCGAGGG
例示性 Pol III 轉錄終止序列 (SEQ ID NO: 149) tttttt
例示性引導 RNA U6-hsa408Rev 序列 (SEQ ID NO: 43) AAGCCGAAAACCACGATCATC
例示性引導 RNA U6-mmu408Rev 序列 (SEQ ID NO: 150) AAGCCAAAGACCACAATCATC
例示性 SV-40 核定位訊號序列 (SEQ ID NO: 151) ATGGCCCCTAAGAAGAAGCGGAAAGTC
例示性催化失活 saCas9 編碼序列 (SEQ ID NO: 152) AAGCGGAACTATATCCTGGGCCTCGCCATCGGCATCACCAGCGTTGGCTACGGCATCATCGACTACGAGACACGGGACGTGATCGATGCCGGCGTGCGGCTGTTTAAAGAGGCCAACGTCGAGAACAACGAGGGCCGCAGATCTAAGAGAGGCGCCAGACGGCTGAAGCGGAGAAGAAGGCACAGAATCCAGAGAGTGAAGAAGCTGCTGTTCGACTACAACCTGCTGACCGACCACAGCGAGCTGAGCGGCATCAATCCTTACGAGGCCAGAGTGAAGGGCCTGAGCCAGAAGCTGAGCGAGGAAGAGTTTAGCGCCGCTCTGCTGCACCTGGCCAAGAGAAGAGGCGTGCACAACGTGAACGAGGTGGAAGAGGACACCGGCAACGAGCTGTCCACCAAAGAGCAGATCAGCCGGAACAGCAAGGCCCTGGAAGAGAAATACGTGGCCGAACTGCAGCTGGAACGGCTGAAAAAGGATGGCGAAGTGCGGGGCAGCATCAATCGGTTCAAGACCAGCGACTACGTGAAAGAAGCCAAACAGCTGCTGAAGGTGCAGAAGGCCTACCACCAGCTGGACCAGAGCTTCATCGACACCTACATCGACCTGCTGGAAACCCGGCGGACCTACTATGAAGGACCTGGCGAGGGAAGCCCCTTCGGCTGGAAGGACATCAAAGAATGGTACGAGATGCTGATGGGCCACTGCACCTACTTTCCCGAGGAACTGCGGAGCGTGAAGTACGCCTACAACGCCGACCTGTACAACGCCCTGAACGACCTGAACAACCTCGTGATCACCCGGGACGAGAACGAGAAGCTGGAATATTACGAGAAGTTCCAGATCATCGAGAACGTGTTCAAGCAGAAGAAGAAACCCACGCTGAAGCAGATCGCCAAAGAGATCCTGGTCAACGAGGAAGATATCAAGGGCTACAGAGTGACCAGCACCGGCAAGCCCGAGTTCACCAACCTGAAGGTGTACCACGACATCAAGGATATCACAGCCCGGAAAGAGATTATTGAGAACGCCGAGCTGCTGGACCAAATCGCCAAGATCCTGACCATCTACCAGAGCAGCGAGGACATCCAAGAGGAACTGACCAATCTGAACTCCGAGCTGACCCAAGAAGAGATCGAGCAGATCTCTAATCTGAAGGGGTACACCGGCACACACAACCTGAGCCTGAAGGCCATCAACCTGATCCTGGACGAGCTGTGGCACACCAACGACAACCAGATTGCCATCTTCAACAGGCTGAAGCTGGTGCCCAAGAAGGTGGACCTGTCTCAGCAGAAAGAAATCCCCACCACACTGGTGGACGACTTCATTCTGAGCCCCGTGGTCAAGAGGAGCTTCATCCAGAGCATCAAAGTGATCAACGCCATCATCAAGAAGTACGGGCTGCCCAACGATATCATCATCGAGCTGGCCCGCGAGAAGAACTCCAAGGACGCCCAGAAAATGATCAACGAGATGCAGAAGAGGAACCGCCAGACCAACGAGCGGATCGAGGAAATCATCCGGACCACCGGCAAAGAGAACGCCAAGTACCTGATCGAGAAGATCAAGCTGCACGACATGCAAGAGGGCAAGTGCCTGTACAGCCTGGAAGCCATTCCTCTGGAAGATCTGCTGAACAATCCCTTCAACTATGAGGTGGACCACATCATCCCCAGAAGCGTGTCCTTCGACAACAGCTTCAACAACAAGGTGCTCGTGAAGCAAGAGGAAGCCAGCAAGAAGGGCAACAGAACCCCATTCCAGTACCTGAGCAGCAGCGACAGCAAGATCAGCTACGAAACCTTCAAGAAGCACATCCTGAATCTGGCCAAAGGCAAGGGCAGAATCAGCAAGACCAAGAAAGAATACCTGCTCGAGGAACGGGACATCAACAGATTCAGCGTGCAGAAAGACTTCATCAATCGGAACCTGGTGGACACCAGATACGCCACCAGAGGCCTGATGAATCTGCTGCGGAGCTACTTCAGAGTGAACAATCTGGACGTGAAAGTCAAGTCCATCAACGGCGGCTTCACCAGCTTTCTGCGGCGGAAGTGGAAGTTCAAGAAAGAGCGGAACAAGGGCTATAAGCACCACGCCGAGGACGCCCTGATCATTGCCAACGCCGATTTCATCTTCAAAGAGTGGAAGAAACTGGACAAGGCCAAAAAAGTGATGGAAAACCAGATGTTCGAGGAAAAGCAGGCCGAGAGCATGCCCGAGATCGAAACCGAGCAAGAGTACAAAGAGATTTTCATCACGCCCCACCAGATCAAGCACATTAAGGACTTCAAGGACTACAAGTACAGCCACCGCGTGGACAAGAAGCCCAATAGAGAGCTGATTAACGACACCCTGTACTCTACCCGGAAGGACGACAAGGGCAATACCCTGATCGTCAACAACCTGAACGGCCTGTACGACAAGGACAACGACAAGCTCAAGAAGCTGATCAACAAGAGCCCCGAGAAACTGCTGATGTACCACCACGATCCTCAGACCTACCAGAAACTGAAGCTCATCATGGAACAGTACGGCGACGAGAAGAATCCCCTGTACAAGTACTACGAGGAAACCGGGAACTACCTGACCAAGTACTCCAAAAAGGACAATGGGCCCGTGATCAAGAAGATTAAGTATTACGGCAACAAGCTGAATGCCCACCTGGACATCACCGACGACTACCCCAACAGCAGAAACAAGGTGGTCAAGCTGTCCCTGAAGCCTTACAGATTCGACGTGTACCTGGACAACGGCGTGTACAAGTTCGTGACCGTGAAGAACCTGGACGTCATCAAAAAAGAAAACTACTACGAAGTCAACAGCAAGTGCTATGAGGAAGCCAAGAAACTCAAGAAAATCAGCAACCAGGCCGAGTTTATCGCCTCCTTCTACAACAACGATCTGATCAAGATCAACGGGGAGCTGTATAGAGTGATCGGCGTGAACAATGACCTGCTGAACCGGATCGAAGTGAACATGATCGACATCACCTACCGCGAGTACCTCGAGAACATGAACGATAAGCGGCCTCCACGGATCATTAAGACAATCGCCAGCAAGACGCAGAGCATTAAGAAGTACAGCACAGACATCCTGGGCAACCTGTACGAAGTGAAGTCTAAGAAGCACCCGCAGATTATCAAGAAAGGC
例示性 SV-40 核定位序列 (SEQ ID NO: 153) CCCAAGAAAAAACGGAAGGTT
例示性催化活性 saCas9 編碼序列 (SEQ ID NO: 154) AAGCGGAACTATATCCTGGGCCTCGACATCGGCATCACCAGCGTTGGCTACGGCATCATCGACTACGAGACACGGGACGTGATCGATGCCGGCGTGCGGCTGTTTAAAGAGGCCAACGTCGAGAACAACGAGGGCCGCAGATCTAAGAGAGGCGCCAGACGGCTGAAGCGGAGAAGAAGGCACAGAATCCAGAGAGTGAAGAAGCTGCTGTTCGACTACAACCTGCTGACCGACCACAGCGAGCTGAGCGGCATCAATCCTTACGAGGCCAGAGTGAAGGGCCTGAGCCAGAAGCTGAGCGAGGAAGAGTTTAGCGCCGCTCTGCTGCACCTGGCCAAGAGAAGAGGCGTGCACAACGTGAACGAGGTGGAAGAGGACACCGGCAACGAGCTGTCCACCAAAGAGCAGATCAGCCGGAACAGCAAGGCCCTGGAAGAGAAATACGTGGCCGAACTGCAGCTGGAACGGCTGAAAAAGGATGGCGAAGTGCGGGGCAGCATCAATCGGTTCAAGACCAGCGACTACGTGAAAGAAGCCAAACAGCTGCTGAAGGTGCAGAAGGCCTACCACCAGCTGGACCAGAGCTTCATCGACACCTACATCGACCTGCTGGAAACCCGGCGGACCTACTATGAAGGACCTGGCGAGGGAAGCCCCTTCGGCTGGAAGGACATCAAAGAATGGTACGAGATGCTGATGGGCCACTGCACCTACTTTCCCGAGGAACTGCGGAGCGTGAAGTACGCCTACAACGCCGACCTGTACAACGCCCTGAACGACCTGAACAACCTCGTGATCACCCGGGACGAGAACGAGAAGCTGGAATATTACGAGAAGTTCCAGATCATCGAGAACGTGTTCAAGCAGAAGAAGAAACCCACGCTGAAGCAGATCGCCAAAGAGATCCTGGTCAACGAGGAAGATATCAAGGGCTACAGAGTGACCAGCACCGGCAAGCCCGAGTTCACCAACCTGAAGGTGTACCACGACATCAAGGATATCACAGCCCGGAAAGAGATTATTGAGAACGCCGAGCTGCTGGACCAAATCGCCAAGATCCTGACCATCTACCAGAGCAGCGAGGACATCCAAGAGGAACTGACCAATCTGAACTCCGAGCTGACCCAAGAAGAGATCGAGCAGATCTCTAATCTGAAGGGGTACACCGGCACACACAACCTGAGCCTGAAGGCCATCAACCTGATCCTGGACGAGCTGTGGCACACCAACGACAACCAGATTGCCATCTTCAACAGGCTGAAGCTGGTGCCCAAGAAGGTGGACCTGTCTCAGCAGAAAGAAATCCCCACCACACTGGTGGACGACTTCATTCTGAGCCCCGTGGTCAAGAGGAGCTTCATCCAGAGCATCAAAGTGATCAACGCCATCATCAAGAAGTACGGGCTGCCCAACGATATCATCATCGAGCTGGCCCGCGAGAAGAACTCCAAGGACGCCCAGAAAATGATCAACGAGATGCAGAAGAGGAACCGCCAGACCAACGAGCGGATCGAGGAAATCATCCGGACCACCGGCAAAGAGAACGCCAAGTACCTGATCGAGAAGATCAAGCTGCACGACATGCAAGAGGGCAAGTGCCTGTACAGCCTGGAAGCCATTCCTCTGGAAGATCTGCTGAACAATCCCTTCAACTATGAGGTGGACCACATCATCCCCAGAAGCGTGTCCTTCGACAACAGCTTCAACAACAAGGTGCTCGTGAAGCAAGAGGAAAACAGCAAGAAGGGCAACAGAACCCCATTCCAGTACCTGAGCAGCAGCGACAGCAAGATCAGCTACGAAACCTTCAAGAAGCACATCCTGAATCTGGCCAAAGGCAAGGGCAGAATCAGCAAGACCAAGAAAGAATACCTGCTCGAGGAACGGGACATCAACAGATTCAGCGTGCAGAAAGACTTCATCAATCGGAACCTGGTGGACACCAGATACGCCACCAGAGGCCTGATGAATCTGCTGCGGAGCTACTTCAGAGTGAACAATCTGGACGTGAAAGTCAAGTCCATCAACGGCGGCTTCACCAGCTTTCTGCGGCGGAAGTGGAAGTTCAAGAAAGAGCGGAACAAGGGCTATAAGCACCACGCCGAGGACGCCCTGATCATTGCCAACGCCGATTTCATCTTCAAAGAGTGGAAGAAACTGGACAAGGCCAAAAAAGTGATGGAAAACCAGATGTTCGAGGAAAAGCAGGCCGAGAGCATGCCCGAGATCGAAACCGAGCAAGAGTACAAAGAGATTTTCATCACGCCCCACCAGATCAAGCACATTAAGGACTTCAAGGACTACAAGTACAGCCACCGCGTGGACAAGAAGCCCAATAGAGAGCTGATTAACGACACCCTGTACTCTACCCGGAAGGACGACAAGGGCAATACCCTGATCGTCAACAACCTGAACGGCCTGTACGACAAGGACAACGACAAGCTCAAGAAGCTGATCAACAAGAGCCCCGAGAAACTGCTGATGTACCACCACGATCCTCAGACCTACCAGAAACTGAAGCTCATCATGGAACAGTACGGCGACGAGAAGAATCCCCTGTACAAGTACTACGAGGAAACCGGGAACTACCTGACCAAGTACTCCAAAAAGGACAATGGGCCCGTGATCAAGAAGATTAAGTATTACGGCAACAAGCTGAATGCCCACCTGGACATCACCGACGACTACCCCAACAGCAGAAACAAGGTGGTCAAGCTGTCCCTGAAGCCTTACAGATTCGACGTGTACCTGGACAACGGCGTGTACAAGTTCGTGACCGTGAAGAACCTGGACGTCATCAAAAAAGAAAACTACTACGAAGTCAACAGCAAGTGCTATGAGGAAGCCAAGAAACTCAAGAAAATCAGCAACCAGGCCGAGTTTATCGCCTCCTTCTACAACAACGATCTGATCAAGATCAACGGGGAGCTGTATAGAGTGATCGGCGTGAACAATGACCTGCTGAACCGGATCGAAGTGAACATGATCGACATCACCTACCGCGAGTACCTCGAGAACATGAACGATAAGCGGCCTCCACGGATCATTAAGACAATCGCCAGCAAGACGCAGAGCATTAAGAAGTACAGCACAGACATCCTGGGCAACCTGTACGAAGTGAAGTCTAAGAAGCACCCGCAGATTATCAAGAAAGGC
例示性引導 RNA hsa233Fw 序列 (SEQ ID NO: 44) GCGCTACCGCCGCCTGCAGAA
例示性引導 RNA hsa447Fw 序列 (SEQ ID NO: 45) TTTCGGCTTGGAGTACATCGT
例示性引導 RNA hsa482Fw 序列 (SEQ ID NO: 46) CCGGATGCTGCTGCCGCTACC
例示性引導 RNA hsa4902Fw 序列 (SEQ ID NO: 47) TGCTGCCGCTACCGAGGATGG例示性構築體選殖位點
例示性選殖位點 A 序列 (SEQ ID NO: 155) GCGGCCGCACGCGT
例示性選殖位點 C 序列 (SEQ ID NO: 156) CTCCTGGGCAACGTGCTGGTTATTGTGACCGGTCGCTAGCCACC
例示性選殖位點 D 序列 (SEQ ID NO: 157) cctgcaggcgccggcg
例示性選殖位點 E 序列 (SEQ ID NO: 158) GAGCTCGCTGATCAGCCTCGA
例示性選殖位點 F 序列 (SEQ ID NO: 159) AAGCTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCT
例示性選殖位點 G 序列 (SEQ ID NO: 160) GCGGCCGCACGCGTCTAGATCCCATATATGGAGTTCCG
例示性選殖位點 H 序列 (SEQ ID NO: 161) cagatcgcctggagacgcACCGGTGCCACC
例示性選殖位點 I 序列 (SEQ ID NO: 162) GGCTCCGGA
例示性選殖位點 J 序列 (SEQ ID NO: 163) GAGCTCGCTGATCAGCCTCGA
例示性選殖位點 K 序列 (SEQ ID NO: 164) ttaatt
例示性選殖位點 L 序列 (SEQ ID NO: 165) GGATCCCGGGCT
例示性選殖位點 M 序列 (SEQ ID NO: 166) TAAGAGCTCGCTGATCAGCCTCGA
例示性選殖位點 N 序列 (SEQ ID NO: 167) ctaAAGCTTGAATTCAAGCTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCT
例示性選殖位點 O 序列 (SEQ ID NO: 168) GGCAGCGGC
例示性選殖位點 P 序列 (SEQ ID NO: 169) AGCGGCGCT
例示性選殖位點 Q 序列 (SEQ ID NO: 170) ctaAAGCTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCT
例示性選殖位點 R 序列 (SEQ ID NO: 171) TAATAAGAGCTCGCTGATCAGCCTCGA例示性 miRNA 構築體序列 ( 第 1 部分 )
例示性 pITR.CAG.miR2-16_EGFP 構築體序列 (SEQ ID NO: 172) CTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTGACATTGATTATTGACTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGACTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGGTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCGGGAGTCGCTGCGTTGCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCGCGCCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGGCTCTGACTGACCGCGTTACTCCCACAGGTGAGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCTTGGTTTAATGACGGCTCGTTTCTTTTCTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTAAAGGGCTCCGGGAGGGCCCTTTGTGCGGGGGGGAGCGGCTCGGGGGGTGCGTGCGTGTGTGTGTGCGTGGGGAGCGCCGCGTGCGGCCCGCGCTGCCCGGCGGCTGTGAGCGCTGCGGGCGCGGCGCGGGGCTTTGTGCGCTCCGCGTGTGCGCGAGGGGAGCGCGGCCGGGGGCGGTGCCCCGCGGTGCGGGGGGGCTGCGAGGGGAACAAAGGCTGCGTGCGGGGTGTGTGCGTGGGGGGGTGAGCAGGGGGTGTGGGCGCGGCGGTCGGGCTGTAACCCCCCCCTGCACCCCCCTCCCCGAGTTGCTGAGCACGGCCCGGCTTCGGGTGCGGGGCTCCGTGCGGGGCGTGGCGCGGGGCTCGCCGTGCCGGGCGGGGGGTGGCGGCAGGTGGGGGTGCCGGGCGGGGCGGGGCCGCCTCGGGCCGGGGAGGGCTCGGGGGAGGGGCGCGGCGGCCCCCGGAGCGCCGGCGCATAGCTCTTATGATAGCAATGTCAGCAGTGCCTTTGAGTCTCAGAGATGCCCGGGTTAAGATTCTAAAATTATCACGGGTATTACTTGAGGCTCAGAAGTAAGGTTGACCATACTCTACAGTTGTGTCTAGAGCCTCTGCTAACCATGTTCATGCCTTCTTCTTTTTCCTACAGCTCCTGGGCAACGTGCTGGTTATTGTGACCGGTCGCTAGCCACCATGGTGAGCAAGGGCGAGGAGCTGTTCACCGGGGTGGTGCCCATCCTGGTCGAGCTGGACGGCGACGTAAACGGCCACAAGTTCAGCGTGTCCGGCGAGGGCGAGGGCGATGCCACCTACGGCAAGCTGACCCTGAAGTTCATCTGCACCACCGGCAAGCTGCCCGTGCCCTGGCCCACCCTCGTGACCACCCTGACCTACGGCGTGCAGTGCTTCAGCCGCTACCCCGACCACATGAAGCAGCACGACTTCTTCAAGTCCGCCATGCCCGAAGGCTACGTCCAGGAGCGCACCATCTTCTTCAAGGACGACGGCAACTACAAGACCCGCGCCGAGGTGAAGTTCGAGGGCGACACCCTGGTGAACCGCATCGAGCTGAAGGGCATCGACTTCAAGGAGGACGGCAACATCCTGGGGCACAAGCTGGAGTACAACTACAACAGCCACAACGTCTATATCATGGCCGACAAGCAGAAGAACGGCATCAAGGTGAACTTCAAGATCCGCCACAACATCGAGGACGGCAGCGTGCAGCTCGCCGACCACTACCAGCAGAACACCCCCATCGGCGACGGCCCCGTGCTGCTGCCCGACAACCACTACCTGAGCACCCAGTCCGCCCTGAGCAAAGACCCCAACGAGAAGCGCGATCACATGGTCCTGCTGGAGTTCGTGACCGCCGCCGGGATCACTCTCGGCATGGACGAGCTGTACAAGTAAcctgcaggcgccggcgCATAGCTCTTATGATAGCAATGTCAGCAGTGCCTTTGAGTCTCAGAGATGCCCGGGTTAAGATTCTAAAATTATCACGGGTATTACTTGAGGCTCAGAAGTAAGGTTGACCATACTCTACAGTTGTGGAGCTCGCTGATCAGCCTCGACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTGGGCTCTATGGAAGCTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCTAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAG
例示性 pITR.CAG.miR2-26_EGFP 構築體序列 (SEQ ID NO: 173) CTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTGACATTGATTATTGACTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGACTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGGTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCGGGAGTCGCTGCGTTGCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCGCGCCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGGCTCTGACTGACCGCGTTACTCCCACAGGTGAGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCTTGGTTTAATGACGGCTCGTTTCTTTTCTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTAAAGGGCTCCGGGAGGGCCCTTTGTGCGGGGGGGAGCGGCTCGGGGGGTGCGTGCGTGTGTGTGTGCGTGGGGAGCGCCGCGTGCGGCCCGCGCTGCCCGGCGGCTGTGAGCGCTGCGGGCGCGGCGCGGGGCTTTGTGCGCTCCGCGTGTGCGCGAGGGGAGCGCGGCCGGGGGCGGTGCCCCGCGGTGCGGGGGGGCTGCGAGGGGAACAAAGGCTGCGTGCGGGGTGTGTGCGTGGGGGGGTGAGCAGGGGGTGTGGGCGCGGCGGTCGGGCTGTAACCCCCCCCTGCACCCCCCTCCCCGAGTTGCTGAGCACGGCCCGGCTTCGGGTGCGGGGCTCCGTGCGGGGCGTGGCGCGGGGCTCGCCGTGCCGGGCGGGGGGTGGCGGCAGGTGGGGGTGCCGGGCGGGGCGGGGCCGCCTCGGGCCGGGGAGGGCTCGGGGGAGGGGCGCGGCGGCCCCCGGAGCGCCGGCGGAGCAGGAGGACCAAGGCCCTGGCGAAGGCCGTGGCCTCGTTGAGTCTCAGAGATGCCCGGTGTGCAGGTCCCAATGGCCGGGTATTACTGAGATTCCACGGGGACGCGGGCCTGGACGCCGGCATCCGGGCTCAGGACCCCCCTCTCTAGAGCCTCTGCTAACCATGTTCATGCCTTCTTCTTTTTCCTACAGCTCCTGGGCAACGTGCTGGTTATTGTGACCGGTCGCTAGCCACCATGGTGAGCAAGGGCGAGGAGCTGTTCACCGGGGTGGTGCCCATCCTGGTCGAGCTGGACGGCGACGTAAACGGCCACAAGTTCAGCGTGTCCGGCGAGGGCGAGGGCGATGCCACCTACGGCAAGCTGACCCTGAAGTTCATCTGCACCACCGGCAAGCTGCCCGTGCCCTGGCCCACCCTCGTGACCACCCTGACCTACGGCGTGCAGTGCTTCAGCCGCTACCCCGACCACATGAAGCAGCACGACTTCTTCAAGTCCGCCATGCCCGAAGGCTACGTCCAGGAGCGCACCATCTTCTTCAAGGACGACGGCAACTACAAGACCCGCGCCGAGGTGAAGTTCGAGGGCGACACCCTGGTGAACCGCATCGAGCTGAAGGGCATCGACTTCAAGGAGGACGGCAACATCCTGGGGCACAAGCTGGAGTACAACTACAACAGCCACAACGTCTATATCATGGCCGACAAGCAGAAGAACGGCATCAAGGTGAACTTCAAGATCCGCCACAACATCGAGGACGGCAGCGTGCAGCTCGCCGACCACTACCAGCAGAACACCCCCATCGGCGACGGCCCCGTGCTGCTGCCCGACAACCACTACCTGAGCACCCAGTCCGCCCTGAGCAAAGACCCCAACGAGAAGCGCGATCACATGGTCCTGCTGGAGTTCGTGACCGCCGCCGGGATCACTCTCGGCATGGACGAGCTGTACAAGTAAcctgcaggcgccggcgGAGCAGGAGGACCAAGGCCCTGGCGAAGGCCGTGGCCTCGTTGAGTCTCAGAGATGCCCGGTGTGCAGGTCCCAATGGCCGGGTATTACTGAGATTCCACGGGGACGCGGGCCTGGACGCCGGCATCCGGGCTCAGGACCCCCCTCGAGCTCGCTGATCAGCCTCGACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTGGGCTCTATGGAAGCTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCTAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAG
例示性 pITR.CAG.miR2-96_EGFP 構築體序列 (SEQ ID NO: 174) CTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTGACATTGATTATTGACTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGACTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGGTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCGGGAGTCGCTGCGTTGCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCGCGCCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGGCTCTGACTGACCGCGTTACTCCCACAGGTGAGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCTTGGTTTAATGACGGCTCGTTTCTTTTCTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTAAAGGGCTCCGGGAGGGCCCTTTGTGCGGGGGGGAGCGGCTCGGGGGGTGCGTGCGTGTGTGTGTGCGTGGGGAGCGCCGCGTGCGGCCCGCGCTGCCCGGCGGCTGTGAGCGCTGCGGGCGCGGCGCGGGGCTTTGTGCGCTCCGCGTGTGCGCGAGGGGAGCGCGGCCGGGGGCGGTGCCCCGCGGTGCGGGGGGGCTGCGAGGGGAACAAAGGCTGCGTGCGGGGTGTGTGCGTGGGGGGGTGAGCAGGGGGTGTGGGCGCGGCGGTCGGGCTGTAACCCCCCCCTGCACCCCCCTCCCCGAGTTGCTGAGCACGGCCCGGCTTCGGGTGCGGGGCTCCGTGCGGGGCGTGGCGCGGGGCTCGCCGTGCCGGGCGGGGGGTGGCGGCAGGTGGGGGTGCCGGGCGGGGCGGGGCCGCCTCGGGCCGGGGAGGGCTCGGGGGAGGGGCGCGGCGGCCCCCGGAGCGCCGGCGGTGTCCCCAGAGAGCCCGCACCAGTGCCATCTGCTTGGCCGATTTGAGTCTCAGAGATGCCCggCTTGTGTCTCTCCGCTCTGAGCTGTCTGTCTCGAGGCTCATATGGGAAAAGCAGGACCCGCAGCTGCGTCCGCCTCCCCTGCATTCTAGAGCCTCTGCTAACCATGTTCATGCCTTCTTCTTTTTCCTACAGCTCCTGGGCAACGTGCTGGTTATTGTGACCGGTCGCTAGCCACCATGGTGAGCAAGGGCGAGGAGCTGTTCACCGGGGTGGTGCCCATCCTGGTCGAGCTGGACGGCGACGTAAACGGCCACAAGTTCAGCGTGTCCGGCGAGGGCGAGGGCGATGCCACCTACGGCAAGCTGACCCTGAAGTTCATCTGCACCACCGGCAAGCTGCCCGTGCCCTGGCCCACCCTCGTGACCACCCTGACCTACGGCGTGCAGTGCTTCAGCCGCTACCCCGACCACATGAAGCAGCACGACTTCTTCAAGTCCGCCATGCCCGAAGGCTACGTCCAGGAGCGCACCATCTTCTTCAAGGACGACGGCAACTACAAGACCCGCGCCGAGGTGAAGTTCGAGGGCGACACCCTGGTGAACCGCATCGAGCTGAAGGGCATCGACTTCAAGGAGGACGGCAACATCCTGGGGCACAAGCTGGAGTACAACTACAACAGCCACAACGTCTATATCATGGCCGACAAGCAGAAGAACGGCATCAAGGTGAACTTCAAGATCCGCCACAACATCGAGGACGGCAGCGTGCAGCTCGCCGACCACTACCAGCAGAACACCCCCATCGGCGACGGCCCCGTGCTGCTGCCCGACAACCACTACCTGAGCACCCAGTCCGCCCTGAGCAAAGACCCCAACGAGAAGCGCGATCACATGGTCCTGCTGGAGTTCGTGACCGCCGCCGGGATCACTCTCGGCATGGACGAGCTGTACAAGTAAcctgcaggcgccggcgGTGTCCCCAGAGAGCCCGCACCAGTGCCATCTGCTTGGCCGATTTGAGTCTCAGAGATGCCCggCTTGTGTCTCTCCGCTCTGAGCTGTCTGTCTCGAGGCTCATATGGGAAAAGCAGGACCCGCAGCTGCGTCCGCCTCCCCTGCATGAGCTCGCTGATCAGCCTCGACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTGGGCTCTATGGAAGCTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCTAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAG
例示性 pITR.CAG.miR2i_miR4u-16_EGFP 構築體序列 (SEQ ID NO: 175) CTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTGACATTGATTATTGACTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGACTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGGTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCGGGAGTCGCTGCGTTGCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCGCGCCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGGCTCTGACTGACCGCGTTACTCCCACAGGTGAGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCTTGGTTTAATGACGGCTCGTTTCTTTTCTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTAAAGGGCTCCGGGAGGGCCCTTTGTGCGGGGGGGAGCGGCTCGGGGGGTGCGTGCGTGTGTGTGTGCGTGGGGAGCGCCGCGTGCGGCCCGCGCTGCCCGGCGGCTGTGAGCGCTGCGGGCGCGGCGCGGGGCTTTGTGCGCTCCGCGTGTGCGCGAGGGGAGCGCGGCCGGGGGCGGTGCCCCGCGGTGCGGGGGGGCTGCGAGGGGAACAAAGGCTGCGTGCGGGGTGTGTGCGTGGGGGGGTGAGCAGGGGGTGTGGGCGCGGCGGTCGGGCTGTAACCCCCCCCTGCACCCCCCTCCCCGAGTTGCTGAGCACGGCCCGGCTTCGGGTGCGGGGCTCCGTGCGGGGCGTGGCGCGGGGCTCGCCGTGCCGGGCGGGGGGTGGCGGCAGGTGGGGGTGCCGGGCGGGGCGGGGCCGCCTCGGGCCGGGGAGGGCTCGGGGGAGGGGCGCGGCGGCCCCCGGAGCGCCGGCGCATAGCTCTTATGATAGCAATGTCAGCAGTGCCTTTGAGTCTCAGAGATGCCCGGGTTAAGATTCTAAAATTATCACGGGTATTACTTGAGGCTCAGAAGTAAGGTTGACCATACTCTACAGTTGTGTCTAGAGCCTCTGCTAACCATGTTCATGCCTTCTTCTTTTTCCTACAGCTCCTGGGCAACGTGCTGGTTATTGTGACCGGTCGCTAGCCACCATGGTGAGCAAGGGCGAGGAGCTGTTCACCGGGGTGGTGCCCATCCTGGTCGAGCTGGACGGCGACGTAAACGGCCACAAGTTCAGCGTGTCCGGCGAGGGCGAGGGCGATGCCACCTACGGCAAGCTGACCCTGAAGTTCATCTGCACCACCGGCAAGCTGCCCGTGCCCTGGCCCACCCTCGTGACCACCCTGACCTACGGCGTGCAGTGCTTCAGCCGCTACCCCGACCACATGAAGCAGCACGACTTCTTCAAGTCCGCCATGCCCGAAGGCTACGTCCAGGAGCGCACCATCTTCTTCAAGGACGACGGCAACTACAAGACCCGCGCCGAGGTGAAGTTCGAGGGCGACACCCTGGTGAACCGCATCGAGCTGAAGGGCATCGACTTCAAGGAGGACGGCAACATCCTGGGGCACAAGCTGGAGTACAACTACAACAGCCACAACGTCTATATCATGGCCGACAAGCAGAAGAACGGCATCAAGGTGAACTTCAAGATCCGCCACAACATCGAGGACGGCAGCGTGCAGCTCGCCGACCACTACCAGCAGAACACCCCCATCGGCGACGGCCCCGTGCTGCTGCCCGACAACCACTACCTGAGCACCCAGTCCGCCCTGAGCAAAGACCCCAACGAGAAGCGCGATCACATGGTCCTGCTGGAGTTCGTGACCGCCGCCGGGATCACTCTCGGCATGGACGAGCTGTACAAGTAAcctgcaggcgccggcgCATAGCTCTTATGATAGCAATGTCAGCAGTGCCTTTCTCGAAGTGCTTCTGCCGGGTTAAGATTCTAAAATTATCACGGTAGAAACATCTTCGGGAGAAGTAAGGTTGACCATACTCTACAGTTGTGGAGCTCGCTGATCAGCCTCGACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTGGGCTCTATGGAAGCTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCTAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAG
例示性 pITR.CAG.miR2i_miR4u-26_EGFP 構築體序列 (SEQ ID NO: 176) CTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTGACATTGATTATTGACTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGACTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGGTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCGGGAGTCGCTGCGTTGCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCGCGCCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGGCTCTGACTGACCGCGTTACTCCCACAGGTGAGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCTTGGTTTAATGACGGCTCGTTTCTTTTCTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTAAAGGGCTCCGGGAGGGCCCTTTGTGCGGGGGGGAGCGGCTCGGGGGGTGCGTGCGTGTGTGTGTGCGTGGGGAGCGCCGCGTGCGGCCCGCGCTGCCCGGCGGCTGTGAGCGCTGCGGGCGCGGCGCGGGGCTTTGTGCGCTCCGCGTGTGCGCGAGGGGAGCGCGGCCGGGGGCGGTGCCCCGCGGTGCGGGGGGGCTGCGAGGGGAACAAAGGCTGCGTGCGGGGTGTGTGCGTGGGGGGGTGAGCAGGGGGTGTGGGCGCGGCGGTCGGGCTGTAACCCCCCCCTGCACCCCCCTCCCCGAGTTGCTGAGCACGGCCCGGCTTCGGGTGCGGGGCTCCGTGCGGGGCGTGGCGCGGGGCTCGCCGTGCCGGGCGGGGGGTGGCGGCAGGTGGGGGTGCCGGGCGGGGCGGGGCCGCCTCGGGCCGGGGAGGGCTCGGGGGAGGGGCGCGGCGGCCCCCGGAGCGCCGGCGGAGCAGGAGGACCAAGGCCCTGGCGAAGGCCGTGGCCTCGTTGAGTCTCAGAGATGCCCGGTGTGCAGGTCCCAATGGCCGGGTATTACTGAGATTCCACGGGGACGCGGGCCTGGACGCCGGCATCCGGGCTCAGGACCCCCCTCTCTAGAGCCTCTGCTAACCATGTTCATGCCTTCTTCTTTTTCCTACAGCTCCTGGGCAACGTGCTGGTTATTGTGACCGGTCGCTAGCCACCATGGTGAGCAAGGGCGAGGAGCTGTTCACCGGGGTGGTGCCCATCCTGGTCGAGCTGGACGGCGACGTAAACGGCCACAAGTTCAGCGTGTCCGGCGAGGGCGAGGGCGATGCCACCTACGGCAAGCTGACCCTGAAGTTCATCTGCACCACCGGCAAGCTGCCCGTGCCCTGGCCCACCCTCGTGACCACCCTGACCTACGGCGTGCAGTGCTTCAGCCGCTACCCCGACCACATGAAGCAGCACGACTTCTTCAAGTCCGCCATGCCCGAAGGCTACGTCCAGGAGCGCACCATCTTCTTCAAGGACGACGGCAACTACAAGACCCGCGCCGAGGTGAAGTTCGAGGGCGACACCCTGGTGAACCGCATCGAGCTGAAGGGCATCGACTTCAAGGAGGACGGCAACATCCTGGGGCACAAGCTGGAGTACAACTACAACAGCCACAACGTCTATATCATGGCCGACAAGCAGAAGAACGGCATCAAGGTGAACTTCAAGATCCGCCACAACATCGAGGACGGCAGCGTGCAGCTCGCCGACCACTACCAGCAGAACACCCCCATCGGCGACGGCCCCGTGCTGCTGCCCGACAACCACTACCTGAGCACCCAGTCCGCCCTGAGCAAAGACCCCAACGAGAAGCGCGATCACATGGTCCTGCTGGAGTTCGTGACCGCCGCCGGGATCACTCTCGGCATGGACGAGCTGTACAAGTAAcctgcaggcgccggcgGAGCAGGAGGACCAAGGCCCTGGCGAAGGCCGTGGCCTCGTTCTCGAAGTGCTTCTGCCGGTGTGCAGGTCCCAATGGCCGGTAGAATCGTTTCGAGCACGGGGACGCGGGCCTGGACGCCGGCATCCGGGCTCAGGACCCCCCTCGAGCTCGCTGATCAGCCTCGACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTGGGCTCTATGGAAGCTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCTAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAG
例示性 pITR.CAG.miR2i_miR4u-96_EGFP 構築體序列 (SEQ ID NO: 177) CTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTGACATTGATTATTGACTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGACTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGGTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCGGGAGTCGCTGCGTTGCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCGCGCCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGGCTCTGACTGACCGCGTTACTCCCACAGGTGAGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCTTGGTTTAATGACGGCTCGTTTCTTTTCTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTAAAGGGCTCCGGGAGGGCCCTTTGTGCGGGGGGGAGCGGCTCGGGGGGTGCGTGCGTGTGTGTGTGCGTGGGGAGCGCCGCGTGCGGCCCGCGCTGCCCGGCGGCTGTGAGCGCTGCGGGCGCGGCGCGGGGCTTTGTGCGCTCCGCGTGTGCGCGAGGGGAGCGCGGCCGGGGGCGGTGCCCCGCGGTGCGGGGGGGCTGCGAGGGGAACAAAGGCTGCGTGCGGGGTGTGTGCGTGGGGGGGTGAGCAGGGGGTGTGGGCGCGGCGGTCGGGCTGTAACCCCCCCCTGCACCCCCCTCCCCGAGTTGCTGAGCACGGCCCGGCTTCGGGTGCGGGGCTCCGTGCGGGGCGTGGCGCGGGGCTCGCCGTGCCGGGCGGGGGGTGGCGGCAGGTGGGGGTGCCGGGCGGGGCGGGGCCGCCTCGGGCCGGGGAGGGCTCGGGGGAGGGGCGCGGCGGCCCCCGGAGCGCCGGCGGTGTCCCCAGAGAGCCCGCACCAGTGCCATCTGCTTGGCCGATTTGAGTCTCAGAGATGCCCggCTTGTGTCTCTCCGCTCTGAGCTGTCTGTCTCGAGGCTCATATGGGAAAAGCAGGACCCGCAGCTGCGTCCGCCTCCCCTGCATTCTAGAGCCTCTGCTAACCATGTTCATGCCTTCTTCTTTTTCCTACAGCTCCTGGGCAACGTGCTGGTTATTGTGACCGGTCGCTAGCCACCATGGTGAGCAAGGGCGAGGAGCTGTTCACCGGGGTGGTGCCCATCCTGGTCGAGCTGGACGGCGACGTAAACGGCCACAAGTTCAGCGTGTCCGGCGAGGGCGAGGGCGATGCCACCTACGGCAAGCTGACCCTGAAGTTCATCTGCACCACCGGCAAGCTGCCCGTGCCCTGGCCCACCCTCGTGACCACCCTGACCTACGGCGTGCAGTGCTTCAGCCGCTACCCCGACCACATGAAGCAGCACGACTTCTTCAAGTCCGCCATGCCCGAAGGCTACGTCCAGGAGCGCACCATCTTCTTCAAGGACGACGGCAACTACAAGACCCGCGCCGAGGTGAAGTTCGAGGGCGACACCCTGGTGAACCGCATCGAGCTGAAGGGCATCGACTTCAAGGAGGACGGCAACATCCTGGGGCACAAGCTGGAGTACAACTACAACAGCCACAACGTCTATATCATGGCCGACAAGCAGAAGAACGGCATCAAGGTGAACTTCAAGATCCGCCACAACATCGAGGACGGCAGCGTGCAGCTCGCCGACCACTACCAGCAGAACACCCCCATCGGCGACGGCCCCGTGCTGCTGCCCGACAACCACTACCTGAGCACCCAGTCCGCCCTGAGCAAAGACCCCAACGAGAAGCGCGATCACATGGTCCTGCTGGAGTTCGTGACCGCCGCCGGGATCACTCTCGGCATGGACGAGCTGTACAAGTAAcctgcaggcgccggcgGTGTCCCCAGAGAGCCCGCACCAGTGCCATCTGCTTGGCCGATTTCTCGAAGTGCTTCTGCCGGCTTGTGTCTCTCCGCTCTGAGCTGTGAGGAGCTTTCGGGATATGGGAAAAGCAGGACCCGCAGCTGCGTCCGCCTCCCCTGCATGAGCTCGCTGATCAGCCTCGACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTGGGCTCTATGGAAGCTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCTAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAG
例示性 pITR.CAG.miR2i_miR5u-16_EGFP 構築體序列 (SEQ ID NO: 178) CTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTGACATTGATTATTGACTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGACTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGGTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCGGGAGTCGCTGCGTTGCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCGCGCCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGGCTCTGACTGACCGCGTTACTCCCACAGGTGAGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCTTGGTTTAATGACGGCTCGTTTCTTTTCTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTAAAGGGCTCCGGGAGGGCCCTTTGTGCGGGGGGGAGCGGCTCGGGGGGTGCGTGCGTGTGTGTGTGCGTGGGGAGCGCCGCGTGCGGCCCGCGCTGCCCGGCGGCTGTGAGCGCTGCGGGCGCGGCGCGGGGCTTTGTGCGCTCCGCGTGTGCGCGAGGGGAGCGCGGCCGGGGGCGGTGCCCCGCGGTGCGGGGGGGCTGCGAGGGGAACAAAGGCTGCGTGCGGGGTGTGTGCGTGGGGGGGTGAGCAGGGGGTGTGGGCGCGGCGGTCGGGCTGTAACCCCCCCCTGCACCCCCCTCCCCGAGTTGCTGAGCACGGCCCGGCTTCGGGTGCGGGGCTCCGTGCGGGGCGTGGCGCGGGGCTCGCCGTGCCGGGCGGGGGGTGGCGGCAGGTGGGGGTGCCGGGCGGGGCGGGGCCGCCTCGGGCCGGGGAGGGCTCGGGGGAGGGGCGCGGCGGCCCCCGGAGCGCCGGCGCATAGCTCTTATGATAGCAATGTCAGCAGTGCCTTTGAGTCTCAGAGATGCCCGGGTTAAGATTCTAAAATTATCACGGGTATTACTTGAGGCTCAGAAGTAAGGTTGACCATACTCTACAGTTGTGTCTAGAGCCTCTGCTAACCATGTTCATGCCTTCTTCTTTTTCCTACAGCTCCTGGGCAACGTGCTGGTTATTGTGACCGGTCGCTAGCCACCATGGTGAGCAAGGGCGAGGAGCTGTTCACCGGGGTGGTGCCCATCCTGGTCGAGCTGGACGGCGACGTAAACGGCCACAAGTTCAGCGTGTCCGGCGAGGGCGAGGGCGATGCCACCTACGGCAAGCTGACCCTGAAGTTCATCTGCACCACCGGCAAGCTGCCCGTGCCCTGGCCCACCCTCGTGACCACCCTGACCTACGGCGTGCAGTGCTTCAGCCGCTACCCCGACCACATGAAGCAGCACGACTTCTTCAAGTCCGCCATGCCCGAAGGCTACGTCCAGGAGCGCACCATCTTCTTCAAGGACGACGGCAACTACAAGACCCGCGCCGAGGTGAAGTTCGAGGGCGACACCCTGGTGAACCGCATCGAGCTGAAGGGCATCGACTTCAAGGAGGACGGCAACATCCTGGGGCACAAGCTGGAGTACAACTACAACAGCCACAACGTCTATATCATGGCCGACAAGCAGAAGAACGGCATCAAGGTGAACTTCAAGATCCGCCACAACATCGAGGACGGCAGCGTGCAGCTCGCCGACCACTACCAGCAGAACACCCCCATCGGCGACGGCCCCGTGCTGCTGCCCGACAACCACTACCTGAGCACCCAGTCCGCCCTGAGCAAAGACCCCAACGAGAAGCGCGATCACATGGTCCTGCTGGAGTTCGTGACCGCCGCCGGGATCACTCTCGGCATGGACGAGCTGTACAAGTAAcctgcaggcgccggcgCATAGCTCTTATGATAGCAATGTCAGCAGTGCCTTTCTCCACCTTGACCACGCGTGTTAAGATTCTAAAATTATCTCGTGTGGTAAGTGGTGGAGAGAAGTAAGGTTGACCATACTCTACAGTTGTGGAGCTCGCTGATCAGCCTCGACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTGGGCTCTATGGAAGCTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCTAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAG
例示性 pITR.CAG.miR2i_miR5u-26_EGFP 構築體序列 (SEQ ID NO: 179) CTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTGACATTGATTATTGACTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGACTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGGTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCGGGAGTCGCTGCGTTGCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCGCGCCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGGCTCTGACTGACCGCGTTACTCCCACAGGTGAGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCTTGGTTTAATGACGGCTCGTTTCTTTTCTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTAAAGGGCTCCGGGAGGGCCCTTTGTGCGGGGGGGAGCGGCTCGGGGGGTGCGTGCGTGTGTGTGTGCGTGGGGAGCGCCGCGTGCGGCCCGCGCTGCCCGGCGGCTGTGAGCGCTGCGGGCGCGGCGCGGGGCTTTGTGCGCTCCGCGTGTGCGCGAGGGGAGCGCGGCCGGGGGCGGTGCCCCGCGGTGCGGGGGGGCTGCGAGGGGAACAAAGGCTGCGTGCGGGGTGTGTGCGTGGGGGGGTGAGCAGGGGGTGTGGGCGCGGCGGTCGGGCTGTAACCCCCCCCTGCACCCCCCTCCCCGAGTTGCTGAGCACGGCCCGGCTTCGGGTGCGGGGCTCCGTGCGGGGCGTGGCGCGGGGCTCGCCGTGCCGGGCGGGGGGTGGCGGCAGGTGGGGGTGCCGGGCGGGGCGGGGCCGCCTCGGGCCGGGGAGGGCTCGGGGGAGGGGCGCGGCGGCCCCCGGAGCGCCGGCGGAGCAGGAGGACCAAGGCCCTGGCGAAGGCCGTGGCCTCGTTGAGTCTCAGAGATGCCCGGTGTGCAGGTCCCAATGGCCGGGTATTACTGAGATTCCACGGGGACGCGGGCCTGGACGCCGGCATCCGGGCTCAGGACCCCCCTCTCTAGAGCCTCTGCTAACCATGTTCATGCCTTCTTCTTTTTCCTACAGCTCCTGGGCAACGTGCTGGTTATTGTGACCGGTCGCTAGCCACCATGGTGAGCAAGGGCGAGGAGCTGTTCACCGGGGTGGTGCCCATCCTGGTCGAGCTGGACGGCGACGTAAACGGCCACAAGTTCAGCGTGTCCGGCGAGGGCGAGGGCGATGCCACCTACGGCAAGCTGACCCTGAAGTTCATCTGCACCACCGGCAAGCTGCCCGTGCCCTGGCCCACCCTCGTGACCACCCTGACCTACGGCGTGCAGTGCTTCAGCCGCTACCCCGACCACATGAAGCAGCACGACTTCTTCAAGTCCGCCATGCCCGAAGGCTACGTCCAGGAGCGCACCATCTTCTTCAAGGACGACGGCAACTACAAGACCCGCGCCGAGGTGAAGTTCGAGGGCGACACCCTGGTGAACCGCATCGAGCTGAAGGGCATCGACTTCAAGGAGGACGGCAACATCCTGGGGCACAAGCTGGAGTACAACTACAACAGCCACAACGTCTATATCATGGCCGACAAGCAGAAGAACGGCATCAAGGTGAACTTCAAGATCCGCCACAACATCGAGGACGGCAGCGTGCAGCTCGCCGACCACTACCAGCAGAACACCCCCATCGGCGACGGCCCCGTGCTGCTGCCCGACAACCACTACCTGAGCACCCAGTCCGCCCTGAGCAAAGACCCCAACGAGAAGCGCGATCACATGGTCCTGCTGGAGTTCGTGACCGCCGCCGGGATCACTCTCGGCATGGACGAGCTGTACAAGTAAcctgcaggcgccggcgGAGCAGGAGGACCAAGGCCCTGGCGAAGGCCGTGGCCTCGTTCTCCACCTTGACCACGCGTTGTGCAGGTCCCAATGGGCGTGTGGTAGAGGTGGAGCACGGGGACGCGGGCCTGGACGCCGGCATCCGGGCTCAGGACCCCCCTCGAGCTCGCTGATCAGCCTCGACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTGGGCTCTATGGAAGCTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCTAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAG
例示性 pITR.CAG.miR2i_miR5u-96_EGFP 構築體序列 (SEQ ID NO: 180) CTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTGACATTGATTATTGACTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGACTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGGTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCGGGAGTCGCTGCGTTGCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCGCGCCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGGCTCTGACTGACCGCGTTACTCCCACAGGTGAGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCTTGGTTTAATGACGGCTCGTTTCTTTTCTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTAAAGGGCTCCGGGAGGGCCCTTTGTGCGGGGGGGAGCGGCTCGGGGGGTGCGTGCGTGTGTGTGTGCGTGGGGAGCGCCGCGTGCGGCCCGCGCTGCCCGGCGGCTGTGAGCGCTGCGGGCGCGGCGCGGGGCTTTGTGCGCTCCGCGTGTGCGCGAGGGGAGCGCGGCCGGGGGCGGTGCCCCGCGGTGCGGGGGGGCTGCGAGGGGAACAAAGGCTGCGTGCGGGGTGTGTGCGTGGGGGGGTGAGCAGGGGGTGTGGGCGCGGCGGTCGGGCTGTAACCCCCCCCTGCACCCCCCTCCCCGAGTTGCTGAGCACGGCCCGGCTTCGGGTGCGGGGCTCCGTGCGGGGCGTGGCGCGGGGCTCGCCGTGCCGGGCGGGGGGTGGCGGCAGGTGGGGGTGCCGGGCGGGGCGGGGCCGCCTCGGGCCGGGGAGGGCTCGGGGGAGGGGCGCGGCGGCCCCCGGAGCGCCGGCGGTGTCCCCAGAGAGCCCGCACCAGTGCCATCTGCTTGGCCGATTTGAGTCTCAGAGATGCCCggCTTGTGTCTCTCCGCTCTGAGCTGTCTGTCTCGAGGCTCATATGGGAAAAGCAGGACCCGCAGCTGCGTCCGCCTCCCCTGCATTCTAGAGCCTCTGCTAACCATGTTCATGCCTTCTTCTTTTTCCTACAGCTCCTGGGCAACGTGCTGGTTATTGTGACCGGTCGCTAGCCACCATGGTGAGCAAGGGCGAGGAGCTGTTCACCGGGGTGGTGCCCATCCTGGTCGAGCTGGACGGCGACGTAAACGGCCACAAGTTCAGCGTGTCCGGCGAGGGCGAGGGCGATGCCACCTACGGCAAGCTGACCCTGAAGTTCATCTGCACCACCGGCAAGCTGCCCGTGCCCTGGCCCACCCTCGTGACCACCCTGACCTACGGCGTGCAGTGCTTCAGCCGCTACCCCGACCACATGAAGCAGCACGACTTCTTCAAGTCCGCCATGCCCGAAGGCTACGTCCAGGAGCGCACCATCTTCTTCAAGGACGACGGCAACTACAAGACCCGCGCCGAGGTGAAGTTCGAGGGCGACACCCTGGTGAACCGCATCGAGCTGAAGGGCATCGACTTCAAGGAGGACGGCAACATCCTGGGGCACAAGCTGGAGTACAACTACAACAGCCACAACGTCTATATCATGGCCGACAAGCAGAAGAACGGCATCAAGGTGAACTTCAAGATCCGCCACAACATCGAGGACGGCAGCGTGCAGCTCGCCGACCACTACCAGCAGAACACCCCCATCGGCGACGGCCCCGTGCTGCTGCCCGACAACCACTACCTGAGCACCCAGTCCGCCCTGAGCAAAGACCCCAACGAGAAGCGCGATCACATGGTCCTGCTGGAGTTCGTGACCGCCGCCGGGATCACTCTCGGCATGGACGAGCTGTACAAGTAAcctgcaggcgccggcgGTGTCCCCAGAGAGCCCGCACCAGTGCCATCTGCTTGGCCGATTTCTCCACCTTGACCACGCGTCTTGTGTCTCTCCGCTCTGAGGTGACTGGTTGGGTGGAGATATGGGAAAAGCAGGACCCGCAGCTGCGTCCGCCTCCCCTGCATGAGCTCGCTGATCAGCCTCGACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTGGGCTCTATGGAAGCTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCTAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAG
例示性 pITR.CAG.miR2i_miR6u-16_EGFP 構築體序列 (SEQ ID NO: 181) CTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTGACATTGATTATTGACTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGACTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGGTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCGGGAGTCGCTGCGTTGCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCGCGCCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGGCTCTGACTGACCGCGTTACTCCCACAGGTGAGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCTTGGTTTAATGACGGCTCGTTTCTTTTCTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTAAAGGGCTCCGGGAGGGCCCTTTGTGCGGGGGGGAGCGGCTCGGGGGGTGCGTGCGTGTGTGTGTGCGTGGGGAGCGCCGCGTGCGGCCCGCGCTGCCCGGCGGCTGTGAGCGCTGCGGGCGCGGCGCGGGGCTTTGTGCGCTCCGCGTGTGCGCGAGGGGAGCGCGGCCGGGGGCGGTGCCCCGCGGTGCGGGGGGGCTGCGAGGGGAACAAAGGCTGCGTGCGGGGTGTGTGCGTGGGGGGGTGAGCAGGGGGTGTGGGCGCGGCGGTCGGGCTGTAACCCCCCCCTGCACCCCCCTCCCCGAGTTGCTGAGCACGGCCCGGCTTCGGGTGCGGGGCTCCGTGCGGGGCGTGGCGCGGGGCTCGCCGTGCCGGGCGGGGGGTGGCGGCAGGTGGGGGTGCCGGGCGGGGCGGGGCCGCCTCGGGCCGGGGAGGGCTCGGGGGAGGGGCGCGGCGGCCCCCGGAGCGCCGGCGCATAGCTCTTATGATAGCAATGTCAGCAGTGCCTTTGAGTCTCAGAGATGCCCGGGTTAAGATTCTAAAATTATCACGGGTATTACTTGAGGCTCAGAAGTAAGGTTGACCATACTCTACAGTTGTGTCTAGAGCCTCTGCTAACCATGTTCATGCCTTCTTCTTTTTCCTACAGCTCCTGGGCAACGTGCTGGTTATTGTGACCGGTCGCTAGCCACCATGGTGAGCAAGGGCGAGGAGCTGTTCACCGGGGTGGTGCCCATCCTGGTCGAGCTGGACGGCGACGTAAACGGCCACAAGTTCAGCGTGTCCGGCGAGGGCGAGGGCGATGCCACCTACGGCAAGCTGACCCTGAAGTTCATCTGCACCACCGGCAAGCTGCCCGTGCCCTGGCCCACCCTCGTGACCACCCTGACCTACGGCGTGCAGTGCTTCAGCCGCTACCCCGACCACATGAAGCAGCACGACTTCTTCAAGTCCGCCATGCCCGAAGGCTACGTCCAGGAGCGCACCATCTTCTTCAAGGACGACGGCAACTACAAGACCCGCGCCGAGGTGAAGTTCGAGGGCGACACCCTGGTGAACCGCATCGAGCTGAAGGGCATCGACTTCAAGGAGGACGGCAACATCCTGGGGCACAAGCTGGAGTACAACTACAACAGCCACAACGTCTATATCATGGCCGACAAGCAGAAGAACGGCATCAAGGTGAACTTCAAGATCCGCCACAACATCGAGGACGGCAGCGTGCAGCTCGCCGACCACTACCAGCAGAACACCCCCATCGGCGACGGCCCCGTGCTGCTGCCCGACAACCACTACCTGAGCACCCAGTCCGCCCTGAGCAAAGACCCCAACGAGAAGCGCGATCACATGGTCCTGCTGGAGTTCGTGACCGCCGCCGGGATCACTCTCGGCATGGACGAGCTGTACAAGTAAcctgcaggcgccggcgCATAGCTCTTATGATAGCAATGTCAGCAGTGCCTATACTGTCATAGTAGTACCAGGTTAAGATTCTAAAATTATCATGGTACTAATGTTGGCAGTGTAAGTAAGGTTGACCATACTCTACAGTTGTGGAGCTCGCTGATCAGCCTCGACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTGGGCTCTATGGAAGCTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCTAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAG
例示性 pITR.CAG.miR2i_miR6u-26_EGFP 構築體序列 (SEQ ID NO: 182) CTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTGACATTGATTATTGACTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGACTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGGTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCGGGAGTCGCTGCGTTGCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCGCGCCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGGCTCTGACTGACCGCGTTACTCCCACAGGTGAGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCTTGGTTTAATGACGGCTCGTTTCTTTTCTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTAAAGGGCTCCGGGAGGGCCCTTTGTGCGGGGGGGAGCGGCTCGGGGGGTGCGTGCGTGTGTGTGTGCGTGGGGAGCGCCGCGTGCGGCCCGCGCTGCCCGGCGGCTGTGAGCGCTGCGGGCGCGGCGCGGGGCTTTGTGCGCTCCGCGTGTGCGCGAGGGGAGCGCGGCCGGGGGCGGTGCCCCGCGGTGCGGGGGGGCTGCGAGGGGAACAAAGGCTGCGTGCGGGGTGTGTGCGTGGGGGGGTGAGCAGGGGGTGTGGGCGCGGCGGTCGGGCTGTAACCCCCCCCTGCACCCCCCTCCCCGAGTTGCTGAGCACGGCCCGGCTTCGGGTGCGGGGCTCCGTGCGGGGCGTGGCGCGGGGCTCGCCGTGCCGGGCGGGGGGTGGCGGCAGGTGGGGGTGCCGGGCGGGGCGGGGCCGCCTCGGGCCGGGGAGGGCTCGGGGGAGGGGCGCGGCGGCCCCCGGAGCGCCGGCGGAGCAGGAGGACCAAGGCCCTGGCGAAGGCCGTGGCCTCGTTGAGTCTCAGAGATGCCCGGTGTGCAGGTCCCAATGGCCGGGTATTACTGAGATTCCACGGGGACGCGGGCCTGGACGCCGGCATCCGGGCTCAGGACCCCCCTCTCTAGAGCCTCTGCTAACCATGTTCATGCCTTCTTCTTTTTCCTACAGCTCCTGGGCAACGTGCTGGTTATTGTGACCGGTCGCTAGCCACCATGGTGAGCAAGGGCGAGGAGCTGTTCACCGGGGTGGTGCCCATCCTGGTCGAGCTGGACGGCGACGTAAACGGCCACAAGTTCAGCGTGTCCGGCGAGGGCGAGGGCGATGCCACCTACGGCAAGCTGACCCTGAAGTTCATCTGCACCACCGGCAAGCTGCCCGTGCCCTGGCCCACCCTCGTGACCACCCTGACCTACGGCGTGCAGTGCTTCAGCCGCTACCCCGACCACATGAAGCAGCACGACTTCTTCAAGTCCGCCATGCCCGAAGGCTACGTCCAGGAGCGCACCATCTTCTTCAAGGACGACGGCAACTACAAGACCCGCGCCGAGGTGAAGTTCGAGGGCGACACCCTGGTGAACCGCATCGAGCTGAAGGGCATCGACTTCAAGGAGGACGGCAACATCCTGGGGCACAAGCTGGAGTACAACTACAACAGCCACAACGTCTATATCATGGCCGACAAGCAGAAGAACGGCATCAAGGTGAACTTCAAGATCCGCCACAACATCGAGGACGGCAGCGTGCAGCTCGCCGACCACTACCAGCAGAACACCCCCATCGGCGACGGCCCCGTGCTGCTGCCCGACAACCACTACCTGAGCACCCAGTCCGCCCTGAGCAAAGACCCCAACGAGAAGCGCGATCACATGGTCCTGCTGGAGTTCGTGACCGCCGCCGGGATCACTCTCGGCATGGACGAGCTGTACAAGTAAcctgcaggcgccggcgGAGCAGGAGGACCAAGGCCCTGGCGAAGGCCGTGGCCTCGATACTGTCATAGTAGTACCAGTGTGCAGGTCCCAATGGCTGGTACTAATGTGACAGTCTCGGGGACGCGGGCCTGGACGCCGGCATCCGGGCTCAGGACCCCCCTCGAGCTCGCTGATCAGCCTCGACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTGGGCTCTATGGAAGCTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCTAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAG
例示性 pITR.CAG.miR2i_miR6u-96_EGFP 構築體序列 (SEQ ID NO: 183) CTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTGACATTGATTATTGACTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGACTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGGTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCGGGAGTCGCTGCGTTGCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCGCGCCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGGCTCTGACTGACCGCGTTACTCCCACAGGTGAGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCTTGGTTTAATGACGGCTCGTTTCTTTTCTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTAAAGGGCTCCGGGAGGGCCCTTTGTGCGGGGGGGAGCGGCTCGGGGGGTGCGTGCGTGTGTGTGTGCGTGGGGAGCGCCGCGTGCGGCCCGCGCTGCCCGGCGGCTGTGAGCGCTGCGGGCGCGGCGCGGGGCTTTGTGCGCTCCGCGTGTGCGCGAGGGGAGCGCGGCCGGGGGCGGTGCCCCGCGGTGCGGGGGGGCTGCGAGGGGAACAAAGGCTGCGTGCGGGGTGTGTGCGTGGGGGGGTGAGCAGGGGGTGTGGGCGCGGCGGTCGGGCTGTAACCCCCCCCTGCACCCCCCTCCCCGAGTTGCTGAGCACGGCCCGGCTTCGGGTGCGGGGCTCCGTGCGGGGCGTGGCGCGGGGCTCGCCGTGCCGGGCGGGGGGTGGCGGCAGGTGGGGGTGCCGGGCGGGGCGGGGCCGCCTCGGGCCGGGGAGGGCTCGGGGGAGGGGCGCGGCGGCCCCCGGAGCGCCGGCGGTGTCCCCAGAGAGCCCGCACCAGTGCCATCTGCTTGGCCGATTTGAGTCTCAGAGATGCCCggCTTGTGTCTCTCCGCTCTGAGCTGTCTGTCTCGAGGCTCATATGGGAAAAGCAGGACCCGCAGCTGCGTCCGCCTCCCCTGCATTCTAGAGCCTCTGCTAACCATGTTCATGCCTTCTTCTTTTTCCTACAGCTCCTGGGCAACGTGCTGGTTATTGTGACCGGTCGCTAGCCACCATGGTGAGCAAGGGCGAGGAGCTGTTCACCGGGGTGGTGCCCATCCTGGTCGAGCTGGACGGCGACGTAAACGGCCACAAGTTCAGCGTGTCCGGCGAGGGCGAGGGCGATGCCACCTACGGCAAGCTGACCCTGAAGTTCATCTGCACCACCGGCAAGCTGCCCGTGCCCTGGCCCACCCTCGTGACCACCCTGACCTACGGCGTGCAGTGCTTCAGCCGCTACCCCGACCACATGAAGCAGCACGACTTCTTCAAGTCCGCCATGCCCGAAGGCTACGTCCAGGAGCGCACCATCTTCTTCAAGGACGACGGCAACTACAAGACCCGCGCCGAGGTGAAGTTCGAGGGCGACACCCTGGTGAACCGCATCGAGCTGAAGGGCATCGACTTCAAGGAGGACGGCAACATCCTGGGGCACAAGCTGGAGTACAACTACAACAGCCACAACGTCTATATCATGGCCGACAAGCAGAAGAACGGCATCAAGGTGAACTTCAAGATCCGCCACAACATCGAGGACGGCAGCGTGCAGCTCGCCGACCACTACCAGCAGAACACCCCCATCGGCGACGGCCCCGTGCTGCTGCCCGACAACCACTACCTGAGCACCCAGTCCGCCCTGAGCAAAGACCCCAACGAGAAGCGCGATCACATGGTCCTGCTGGAGTTCGTGACCGCCGCCGGGATCACTCTCGGCATGGACGAGCTGTACAAGTAAcctgcaggcgccggcgGTGTCCCCAGAGAGCCCGCACCAGTGCCATCTGCTTGGCCGATATACTGTCATAGTAGTACCAGCTTGTGTCTCTCCGCTCTGAGCTGTCACTGCTTGACGGTAAATGGGAAAAGCAGGACCCGCAGCTGCGTCCGCCTCCCCTGCATGAGCTCGCTGATCAGCCTCGACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTGGGCTCTATGGAAGCTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCTAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAG
例示性 pITR.CAG.miR4-16_EGFP 構築體序列 (SEQ ID NO: 184) CTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTGACATTGATTATTGACTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGACTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGGTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCGGGAGTCGCTGCGTTGCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCGCGCCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGGCTCTGACTGACCGCGTTACTCCCACAGGTGAGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCTTGGTTTAATGACGGCTCGTTTCTTTTCTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTAAAGGGCTCCGGGAGGGCCCTTTGTGCGGGGGGGAGCGGCTCGGGGGGTGCGTGCGTGTGTGTGTGCGTGGGGAGCGCCGCGTGCGGCCCGCGCTGCCCGGCGGCTGTGAGCGCTGCGGGCGCGGCGCGGGGCTTTGTGCGCTCCGCGTGTGCGCGAGGGGAGCGCGGCCGGGGGCGGTGCCCCGCGGTGCGGGGGGGCTGCGAGGGGAACAAAGGCTGCGTGCGGGGTGTGTGCGTGGGGGGGTGAGCAGGGGGTGTGGGCGCGGCGGTCGGGCTGTAACCCCCCCCTGCACCCCCCTCCCCGAGTTGCTGAGCACGGCCCGGCTTCGGGTGCGGGGCTCCGTGCGGGGCGTGGCGCGGGGCTCGCCGTGCCGGGCGGGGGGTGGCGGCAGGTGGGGGTGCCGGGCGGGGCGGGGCCGCCTCGGGCCGGGGAGGGCTCGGGGGAGGGGCGCGGCGGCCCCCGGAGCGCCGGCGCATAGCTCTTATGATAGCAATGTCAGCAGTGCCTTTCTCGAAGTGCTTCTGCCGGGTTAAGATTCTAAAATTATCACGGTAGAAACATCTTCGGGAGAAGTAAGGTTGACCATACTCTACAGTTGTGTCTAGAGCCTCTGCTAACCATGTTCATGCCTTCTTCTTTTTCCTACAGCTCCTGGGCAACGTGCTGGTTATTGTGACCGGTCGCTAGCCACCATGGTGAGCAAGGGCGAGGAGCTGTTCACCGGGGTGGTGCCCATCCTGGTCGAGCTGGACGGCGACGTAAACGGCCACAAGTTCAGCGTGTCCGGCGAGGGCGAGGGCGATGCCACCTACGGCAAGCTGACCCTGAAGTTCATCTGCACCACCGGCAAGCTGCCCGTGCCCTGGCCCACCCTCGTGACCACCCTGACCTACGGCGTGCAGTGCTTCAGCCGCTACCCCGACCACATGAAGCAGCACGACTTCTTCAAGTCCGCCATGCCCGAAGGCTACGTCCAGGAGCGCACCATCTTCTTCAAGGACGACGGCAACTACAAGACCCGCGCCGAGGTGAAGTTCGAGGGCGACACCCTGGTGAACCGCATCGAGCTGAAGGGCATCGACTTCAAGGAGGACGGCAACATCCTGGGGCACAAGCTGGAGTACAACTACAACAGCCACAACGTCTATATCATGGCCGACAAGCAGAAGAACGGCATCAAGGTGAACTTCAAGATCCGCCACAACATCGAGGACGGCAGCGTGCAGCTCGCCGACCACTACCAGCAGAACACCCCCATCGGCGACGGCCCCGTGCTGCTGCCCGACAACCACTACCTGAGCACCCAGTCCGCCCTGAGCAAAGACCCCAACGAGAAGCGCGATCACATGGTCCTGCTGGAGTTCGTGACCGCCGCCGGGATCACTCTCGGCATGGACGAGCTGTACAAGTAAcctgcaggcgccggcgCATAGCTCTTATGATAGCAATGTCAGCAGTGCCTTTCTCGAAGTGCTTCTGCCGGGTTAAGATTCTAAAATTATCACGGTAGAAACATCTTCGGGAGAAGTAAGGTTGACCATACTCTACAGTTGTGGAGCTCGCTGATCAGCCTCGACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTGGGCTCTATGGAAGCTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCTAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAG
例示性 pITR.CAG.miR4-26_EGFP 構築體序列 (SEQ ID NO: 185) CTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTGACATTGATTATTGACTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGACTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGGTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCGGGAGTCGCTGCGTTGCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCGCGCCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGGCTCTGACTGACCGCGTTACTCCCACAGGTGAGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCTTGGTTTAATGACGGCTCGTTTCTTTTCTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTAAAGGGCTCCGGGAGGGCCCTTTGTGCGGGGGGGAGCGGCTCGGGGGGTGCGTGCGTGTGTGTGTGCGTGGGGAGCGCCGCGTGCGGCCCGCGCTGCCCGGCGGCTGTGAGCGCTGCGGGCGCGGCGCGGGGCTTTGTGCGCTCCGCGTGTGCGCGAGGGGAGCGCGGCCGGGGGCGGTGCCCCGCGGTGCGGGGGGGCTGCGAGGGGAACAAAGGCTGCGTGCGGGGTGTGTGCGTGGGGGGGTGAGCAGGGGGTGTGGGCGCGGCGGTCGGGCTGTAACCCCCCCCTGCACCCCCCTCCCCGAGTTGCTGAGCACGGCCCGGCTTCGGGTGCGGGGCTCCGTGCGGGGCGTGGCGCGGGGCTCGCCGTGCCGGGCGGGGGGTGGCGGCAGGTGGGGGTGCCGGGCGGGGCGGGGCCGCCTCGGGCCGGGGAGGGCTCGGGGGAGGGGCGCGGCGGCCCCCGGAGCGCCGGCGGAGCAGGAGGACCAAGGCCCTGGCGAAGGCCGTGGCCTCGTTCTCGAAGTGCTTCTGCCGGTGTGCAGGTCCCAATGGCCGGTAGAATCGTTTCGAGCACGGGGACGCGGGCCTGGACGCCGGCATCCGGGCTCAGGACCCCCCTCTCTAGAGCCTCTGCTAACCATGTTCATGCCTTCTTCTTTTTCCTACAGCTCCTGGGCAACGTGCTGGTTATTGTGACCGGTCGCTAGCCACCATGGTGAGCAAGGGCGAGGAGCTGTTCACCGGGGTGGTGCCCATCCTGGTCGAGCTGGACGGCGACGTAAACGGCCACAAGTTCAGCGTGTCCGGCGAGGGCGAGGGCGATGCCACCTACGGCAAGCTGACCCTGAAGTTCATCTGCACCACCGGCAAGCTGCCCGTGCCCTGGCCCACCCTCGTGACCACCCTGACCTACGGCGTGCAGTGCTTCAGCCGCTACCCCGACCACATGAAGCAGCACGACTTCTTCAAGTCCGCCATGCCCGAAGGCTACGTCCAGGAGCGCACCATCTTCTTCAAGGACGACGGCAACTACAAGACCCGCGCCGAGGTGAAGTTCGAGGGCGACACCCTGGTGAACCGCATCGAGCTGAAGGGCATCGACTTCAAGGAGGACGGCAACATCCTGGGGCACAAGCTGGAGTACAACTACAACAGCCACAACGTCTATATCATGGCCGACAAGCAGAAGAACGGCATCAAGGTGAACTTCAAGATCCGCCACAACATCGAGGACGGCAGCGTGCAGCTCGCCGACCACTACCAGCAGAACACCCCCATCGGCGACGGCCCCGTGCTGCTGCCCGACAACCACTACCTGAGCACCCAGTCCGCCCTGAGCAAAGACCCCAACGAGAAGCGCGATCACATGGTCCTGCTGGAGTTCGTGACCGCCGCCGGGATCACTCTCGGCATGGACGAGCTGTACAAGTAAcctgcaggcgccggcgGAGCAGGAGGACCAAGGCCCTGGCGAAGGCCGTGGCCTCGTTCTCGAAGTGCTTCTGCCGGTGTGCAGGTCCCAATGGCCGGTAGAATCGTTTCGAGCACGGGGACGCGGGCCTGGACGCCGGCATCCGGGCTCAGGACCCCCCTCGAGCTCGCTGATCAGCCTCGACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTGGGCTCTATGGAAGCTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCTAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAG
例示性 pITR.CAG.miR4-96_EGFP 構築體序列 (SEQ ID NO: 186) CTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTGACATTGATTATTGACTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGACTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGGTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCGGGAGTCGCTGCGTTGCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCGCGCCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGGCTCTGACTGACCGCGTTACTCCCACAGGTGAGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCTTGGTTTAATGACGGCTCGTTTCTTTTCTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTAAAGGGCTCCGGGAGGGCCCTTTGTGCGGGGGGGAGCGGCTCGGGGGGTGCGTGCGTGTGTGTGTGCGTGGGGAGCGCCGCGTGCGGCCCGCGCTGCCCGGCGGCTGTGAGCGCTGCGGGCGCGGCGCGGGGCTTTGTGCGCTCCGCGTGTGCGCGAGGGGAGCGCGGCCGGGGGCGGTGCCCCGCGGTGCGGGGGGGCTGCGAGGGGAACAAAGGCTGCGTGCGGGGTGTGTGCGTGGGGGGGTGAGCAGGGGGTGTGGGCGCGGCGGTCGGGCTGTAACCCCCCCCTGCACCCCCCTCCCCGAGTTGCTGAGCACGGCCCGGCTTCGGGTGCGGGGCTCCGTGCGGGGCGTGGCGCGGGGCTCGCCGTGCCGGGCGGGGGGTGGCGGCAGGTGGGGGTGCCGGGCGGGGCGGGGCCGCCTCGGGCCGGGGAGGGCTCGGGGGAGGGGCGCGGCGGCCCCCGGAGCGCCGGCGGTGTCCCCAGAGAGCCCGCACCAGTGCCATCTGCTTGGCCGATTTCTCGAAGTGCTTCTGCCGGCTTGTGTCTCTCCGCTCTGAGCTGTGAGGAGCTTTCGGGATATGGGAAAAGCAGGACCCGCAGCTGCGTCCGCCTCCCCTGCATTCTAGAGCCTCTGCTAACCATGTTCATGCCTTCTTCTTTTTCCTACAGCTCCTGGGCAACGTGCTGGTTATTGTGACCGGTCGCTAGCCACCATGGTGAGCAAGGGCGAGGAGCTGTTCACCGGGGTGGTGCCCATCCTGGTCGAGCTGGACGGCGACGTAAACGGCCACAAGTTCAGCGTGTCCGGCGAGGGCGAGGGCGATGCCACCTACGGCAAGCTGACCCTGAAGTTCATCTGCACCACCGGCAAGCTGCCCGTGCCCTGGCCCACCCTCGTGACCACCCTGACCTACGGCGTGCAGTGCTTCAGCCGCTACCCCGACCACATGAAGCAGCACGACTTCTTCAAGTCCGCCATGCCCGAAGGCTACGTCCAGGAGCGCACCATCTTCTTCAAGGACGACGGCAACTACAAGACCCGCGCCGAGGTGAAGTTCGAGGGCGACACCCTGGTGAACCGCATCGAGCTGAAGGGCATCGACTTCAAGGAGGACGGCAACATCCTGGGGCACAAGCTGGAGTACAACTACAACAGCCACAACGTCTATATCATGGCCGACAAGCAGAAGAACGGCATCAAGGTGAACTTCAAGATCCGCCACAACATCGAGGACGGCAGCGTGCAGCTCGCCGACCACTACCAGCAGAACACCCCCATCGGCGACGGCCCCGTGCTGCTGCCCGACAACCACTACCTGAGCACCCAGTCCGCCCTGAGCAAAGACCCCAACGAGAAGCGCGATCACATGGTCCTGCTGGAGTTCGTGACCGCCGCCGGGATCACTCTCGGCATGGACGAGCTGTACAAGTAAcctgcaggcgccggcgGTGTCCCCAGAGAGCCCGCACCAGTGCCATCTGCTTGGCCGATTTCTCGAAGTGCTTCTGCCGGCTTGTGTCTCTCCGCTCTGAGCTGTGAGGAGCTTTCGGGATATGGGAAAAGCAGGACCCGCAGCTGCGTCCGCCTCCCCTGCATGAGCTCGCTGATCAGCCTCGACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTGGGCTCTATGGAAGCTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCTAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAG
例示性 pITR.CAG.miR4i_miR5u-16_EGFP 構築體序列 (SEQ ID NO: 187) CTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTGACATTGATTATTGACTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGACTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGGTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCGGGAGTCGCTGCGTTGCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCGCGCCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGGCTCTGACTGACCGCGTTACTCCCACAGGTGAGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCTTGGTTTAATGACGGCTCGTTTCTTTTCTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTAAAGGGCTCCGGGAGGGCCCTTTGTGCGGGGGGGAGCGGCTCGGGGGGTGCGTGCGTGTGTGTGTGCGTGGGGAGCGCCGCGTGCGGCCCGCGCTGCCCGGCGGCTGTGAGCGCTGCGGGCGCGGCGCGGGGCTTTGTGCGCTCCGCGTGTGCGCGAGGGGAGCGCGGCCGGGGGCGGTGCCCCGCGGTGCGGGGGGGCTGCGAGGGGAACAAAGGCTGCGTGCGGGGTGTGTGCGTGGGGGGGTGAGCAGGGGGTGTGGGCGCGGCGGTCGGGCTGTAACCCCCCCCTGCACCCCCCTCCCCGAGTTGCTGAGCACGGCCCGGCTTCGGGTGCGGGGCTCCGTGCGGGGCGTGGCGCGGGGCTCGCCGTGCCGGGCGGGGGGTGGCGGCAGGTGGGGGTGCCGGGCGGGGCGGGGCCGCCTCGGGCCGGGGAGGGCTCGGGGGAGGGGCGCGGCGGCCCCCGGAGCGCCGGCGCATAGCTCTTATGATAGCAATGTCAGCAGTGCCTTTCTCGAAGTGCTTCTGCCGGGTTAAGATTCTAAAATTATCACGGTAGAAACATCTTCGGGAGAAGTAAGGTTGACCATACTCTACAGTTGTGTCTAGAGCCTCTGCTAACCATGTTCATGCCTTCTTCTTTTTCCTACAGCTCCTGGGCAACGTGCTGGTTATTGTGACCGGTCGCTAGCCACCATGGTGAGCAAGGGCGAGGAGCTGTTCACCGGGGTGGTGCCCATCCTGGTCGAGCTGGACGGCGACGTAAACGGCCACAAGTTCAGCGTGTCCGGCGAGGGCGAGGGCGATGCCACCTACGGCAAGCTGACCCTGAAGTTCATCTGCACCACCGGCAAGCTGCCCGTGCCCTGGCCCACCCTCGTGACCACCCTGACCTACGGCGTGCAGTGCTTCAGCCGCTACCCCGACCACATGAAGCAGCACGACTTCTTCAAGTCCGCCATGCCCGAAGGCTACGTCCAGGAGCGCACCATCTTCTTCAAGGACGACGGCAACTACAAGACCCGCGCCGAGGTGAAGTTCGAGGGCGACACCCTGGTGAACCGCATCGAGCTGAAGGGCATCGACTTCAAGGAGGACGGCAACATCCTGGGGCACAAGCTGGAGTACAACTACAACAGCCACAACGTCTATATCATGGCCGACAAGCAGAAGAACGGCATCAAGGTGAACTTCAAGATCCGCCACAACATCGAGGACGGCAGCGTGCAGCTCGCCGACCACTACCAGCAGAACACCCCCATCGGCGACGGCCCCGTGCTGCTGCCCGACAACCACTACCTGAGCACCCAGTCCGCCCTGAGCAAAGACCCCAACGAGAAGCGCGATCACATGGTCCTGCTGGAGTTCGTGACCGCCGCCGGGATCACTCTCGGCATGGACGAGCTGTACAAGTAAcctgcaggcgccggcgCATAGCTCTTATGATAGCAATGTCAGCAGTGCCTTTCTCCACCTTGACCACGCGTGTTAAGATTCTAAAATTATCTCGTGTGGTAAGTGGTGGAGAGAAGTAAGGTTGACCATACTCTACAGTTGTGGAGCTCGCTGATCAGCCTCGACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTGGGCTCTATGGAAGCTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCTAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAG
例示性 pITR.CAG.miR4i_miR5u-26_EGFP 構築體序列 (SEQ ID NO: 188) CTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTGACATTGATTATTGACTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGACTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGGTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCGGGAGTCGCTGCGTTGCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCGCGCCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGGCTCTGACTGACCGCGTTACTCCCACAGGTGAGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCTTGGTTTAATGACGGCTCGTTTCTTTTCTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTAAAGGGCTCCGGGAGGGCCCTTTGTGCGGGGGGGAGCGGCTCGGGGGGTGCGTGCGTGTGTGTGTGCGTGGGGAGCGCCGCGTGCGGCCCGCGCTGCCCGGCGGCTGTGAGCGCTGCGGGCGCGGCGCGGGGCTTTGTGCGCTCCGCGTGTGCGCGAGGGGAGCGCGGCCGGGGGCGGTGCCCCGCGGTGCGGGGGGGCTGCGAGGGGAACAAAGGCTGCGTGCGGGGTGTGTGCGTGGGGGGGTGAGCAGGGGGTGTGGGCGCGGCGGTCGGGCTGTAACCCCCCCCTGCACCCCCCTCCCCGAGTTGCTGAGCACGGCCCGGCTTCGGGTGCGGGGCTCCGTGCGGGGCGTGGCGCGGGGCTCGCCGTGCCGGGCGGGGGGTGGCGGCAGGTGGGGGTGCCGGGCGGGGCGGGGCCGCCTCGGGCCGGGGAGGGCTCGGGGGAGGGGCGCGGCGGCCCCCGGAGCGCCGGCGGAGCAGGAGGACCAAGGCCCTGGCGAAGGCCGTGGCCTCGTTCTCGAAGTGCTTCTGCCGGTGTGCAGGTCCCAATGGCCGGTAGAATCGTTTCGAGCACGGGGACGCGGGCCTGGACGCCGGCATCCGGGCTCAGGACCCCCCTCTCTAGAGCCTCTGCTAACCATGTTCATGCCTTCTTCTTTTTCCTACAGCTCCTGGGCAACGTGCTGGTTATTGTGACCGGTCGCTAGCCACCATGGTGAGCAAGGGCGAGGAGCTGTTCACCGGGGTGGTGCCCATCCTGGTCGAGCTGGACGGCGACGTAAACGGCCACAAGTTCAGCGTGTCCGGCGAGGGCGAGGGCGATGCCACCTACGGCAAGCTGACCCTGAAGTTCATCTGCACCACCGGCAAGCTGCCCGTGCCCTGGCCCACCCTCGTGACCACCCTGACCTACGGCGTGCAGTGCTTCAGCCGCTACCCCGACCACATGAAGCAGCACGACTTCTTCAAGTCCGCCATGCCCGAAGGCTACGTCCAGGAGCGCACCATCTTCTTCAAGGACGACGGCAACTACAAGACCCGCGCCGAGGTGAAGTTCGAGGGCGACACCCTGGTGAACCGCATCGAGCTGAAGGGCATCGACTTCAAGGAGGACGGCAACATCCTGGGGCACAAGCTGGAGTACAACTACAACAGCCACAACGTCTATATCATGGCCGACAAGCAGAAGAACGGCATCAAGGTGAACTTCAAGATCCGCCACAACATCGAGGACGGCAGCGTGCAGCTCGCCGACCACTACCAGCAGAACACCCCCATCGGCGACGGCCCCGTGCTGCTGCCCGACAACCACTACCTGAGCACCCAGTCCGCCCTGAGCAAAGACCCCAACGAGAAGCGCGATCACATGGTCCTGCTGGAGTTCGTGACCGCCGCCGGGATCACTCTCGGCATGGACGAGCTGTACAAGTAAcctgcaggcgccggcgGAGCAGGAGGACCAAGGCCCTGGCGAAGGCCGTGGCCTCGTTCTCCACCTTGACCACGCGTTGTGCAGGTCCCAATGGGCGTGTGGTAGAGGTGGAGCACGGGGACGCGGGCCTGGACGCCGGCATCCGGGCTCAGGACCCCCCTCGAGCTCGCTGATCAGCCTCGACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTGGGCTCTATGGAAGCTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCTAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAG
例示性 pITR.CAG.miR4i_miR5u-96_EGFP 構築體序列 (SEQ ID NO: 189) CTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTGACATTGATTATTGACTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGACTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGGTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCGGGAGTCGCTGCGTTGCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCGCGCCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGGCTCTGACTGACCGCGTTACTCCCACAGGTGAGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCTTGGTTTAATGACGGCTCGTTTCTTTTCTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTAAAGGGCTCCGGGAGGGCCCTTTGTGCGGGGGGGAGCGGCTCGGGGGGTGCGTGCGTGTGTGTGTGCGTGGGGAGCGCCGCGTGCGGCCCGCGCTGCCCGGCGGCTGTGAGCGCTGCGGGCGCGGCGCGGGGCTTTGTGCGCTCCGCGTGTGCGCGAGGGGAGCGCGGCCGGGGGCGGTGCCCCGCGGTGCGGGGGGGCTGCGAGGGGAACAAAGGCTGCGTGCGGGGTGTGTGCGTGGGGGGGTGAGCAGGGGGTGTGGGCGCGGCGGTCGGGCTGTAACCCCCCCCTGCACCCCCCTCCCCGAGTTGCTGAGCACGGCCCGGCTTCGGGTGCGGGGCTCCGTGCGGGGCGTGGCGCGGGGCTCGCCGTGCCGGGCGGGGGGTGGCGGCAGGTGGGGGTGCCGGGCGGGGCGGGGCCGCCTCGGGCCGGGGAGGGCTCGGGGGAGGGGCGCGGCGGCCCCCGGAGCGCCGGCGGTGTCCCCAGAGAGCCCGCACCAGTGCCATCTGCTTGGCCGATTTCTCGAAGTGCTTCTGCCGGCTTGTGTCTCTCCGCTCTGAGCTGTGAGGAGCTTTCGGGATATGGGAAAAGCAGGACCCGCAGCTGCGTCCGCCTCCCCTGCATTCTAGAGCCTCTGCTAACCATGTTCATGCCTTCTTCTTTTTCCTACAGCTCCTGGGCAACGTGCTGGTTATTGTGACCGGTCGCTAGCCACCATGGTGAGCAAGGGCGAGGAGCTGTTCACCGGGGTGGTGCCCATCCTGGTCGAGCTGGACGGCGACGTAAACGGCCACAAGTTCAGCGTGTCCGGCGAGGGCGAGGGCGATGCCACCTACGGCAAGCTGACCCTGAAGTTCATCTGCACCACCGGCAAGCTGCCCGTGCCCTGGCCCACCCTCGTGACCACCCTGACCTACGGCGTGCAGTGCTTCAGCCGCTACCCCGACCACATGAAGCAGCACGACTTCTTCAAGTCCGCCATGCCCGAAGGCTACGTCCAGGAGCGCACCATCTTCTTCAAGGACGACGGCAACTACAAGACCCGCGCCGAGGTGAAGTTCGAGGGCGACACCCTGGTGAACCGCATCGAGCTGAAGGGCATCGACTTCAAGGAGGACGGCAACATCCTGGGGCACAAGCTGGAGTACAACTACAACAGCCACAACGTCTATATCATGGCCGACAAGCAGAAGAACGGCATCAAGGTGAACTTCAAGATCCGCCACAACATCGAGGACGGCAGCGTGCAGCTCGCCGACCACTACCAGCAGAACACCCCCATCGGCGACGGCCCCGTGCTGCTGCCCGACAACCACTACCTGAGCACCCAGTCCGCCCTGAGCAAAGACCCCAACGAGAAGCGCGATCACATGGTCCTGCTGGAGTTCGTGACCGCCGCCGGGATCACTCTCGGCATGGACGAGCTGTACAAGTAAcctgcaggcgccggcgGTGTCCCCAGAGAGCCCGCACCAGTGCCATCTGCTTGGCCGATTTCTCCACCTTGACCACGCGTCTTGTGTCTCTCCGCTCTGAGGTGACTGGTTGGGTGGAGATATGGGAAAAGCAGGACCCGCAGCTGCGTCCGCCTCCCCTGCATGAGCTCGCTGATCAGCCTCGACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTGGGCTCTATGGAAGCTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCTAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAG
例示性 pITR.CAG.miR4i_miR6u-16_EGFP 構築體序列 (SEQ ID NO: 190) CTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTGACATTGATTATTGACTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGACTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGGTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCGGGAGTCGCTGCGTTGCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCGCGCCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGGCTCTGACTGACCGCGTTACTCCCACAGGTGAGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCTTGGTTTAATGACGGCTCGTTTCTTTTCTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTAAAGGGCTCCGGGAGGGCCCTTTGTGCGGGGGGGAGCGGCTCGGGGGGTGCGTGCGTGTGTGTGTGCGTGGGGAGCGCCGCGTGCGGCCCGCGCTGCCCGGCGGCTGTGAGCGCTGCGGGCGCGGCGCGGGGCTTTGTGCGCTCCGCGTGTGCGCGAGGGGAGCGCGGCCGGGGGCGGTGCCCCGCGGTGCGGGGGGGCTGCGAGGGGAACAAAGGCTGCGTGCGGGGTGTGTGCGTGGGGGGGTGAGCAGGGGGTGTGGGCGCGGCGGTCGGGCTGTAACCCCCCCCTGCACCCCCCTCCCCGAGTTGCTGAGCACGGCCCGGCTTCGGGTGCGGGGCTCCGTGCGGGGCGTGGCGCGGGGCTCGCCGTGCCGGGCGGGGGGTGGCGGCAGGTGGGGGTGCCGGGCGGGGCGGGGCCGCCTCGGGCCGGGGAGGGCTCGGGGGAGGGGCGCGGCGGCCCCCGGAGCGCCGGCGCATAGCTCTTATGATAGCAATGTCAGCAGTGCCTTTCTCGAAGTGCTTCTGCCGGGTTAAGATTCTAAAATTATCACGGTAGAAACATCTTCGGGAGAAGTAAGGTTGACCATACTCTACAGTTGTGTCTAGAGCCTCTGCTAACCATGTTCATGCCTTCTTCTTTTTCCTACAGCTCCTGGGCAACGTGCTGGTTATTGTGACCGGTCGCTAGCCACCATGGTGAGCAAGGGCGAGGAGCTGTTCACCGGGGTGGTGCCCATCCTGGTCGAGCTGGACGGCGACGTAAACGGCCACAAGTTCAGCGTGTCCGGCGAGGGCGAGGGCGATGCCACCTACGGCAAGCTGACCCTGAAGTTCATCTGCACCACCGGCAAGCTGCCCGTGCCCTGGCCCACCCTCGTGACCACCCTGACCTACGGCGTGCAGTGCTTCAGCCGCTACCCCGACCACATGAAGCAGCACGACTTCTTCAAGTCCGCCATGCCCGAAGGCTACGTCCAGGAGCGCACCATCTTCTTCAAGGACGACGGCAACTACAAGACCCGCGCCGAGGTGAAGTTCGAGGGCGACACCCTGGTGAACCGCATCGAGCTGAAGGGCATCGACTTCAAGGAGGACGGCAACATCCTGGGGCACAAGCTGGAGTACAACTACAACAGCCACAACGTCTATATCATGGCCGACAAGCAGAAGAACGGCATCAAGGTGAACTTCAAGATCCGCCACAACATCGAGGACGGCAGCGTGCAGCTCGCCGACCACTACCAGCAGAACACCCCCATCGGCGACGGCCCCGTGCTGCTGCCCGACAACCACTACCTGAGCACCCAGTCCGCCCTGAGCAAAGACCCCAACGAGAAGCGCGATCACATGGTCCTGCTGGAGTTCGTGACCGCCGCCGGGATCACTCTCGGCATGGACGAGCTGTACAAGTAAcctgcaggcgccggcgCATAGCTCTTATGATAGCAATGTCAGCAGTGCCTATACTGTCATAGTAGTACCAGGTTAAGATTCTAAAATTATCATGGTACTAATGTTGGCAGTGTAAGTAAGGTTGACCATACTCTACAGTTGTGGAGCTCGCTGATCAGCCTCGACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTGGGCTCTATGGAAGCTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCTAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAG
例示性 pITR.CAG.miR4i_miR6u-26_EGFP 構築體序列 (SEQ ID NO: 191) CTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTGACATTGATTATTGACTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGACTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGGTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCGGGAGTCGCTGCGTTGCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCGCGCCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGGCTCTGACTGACCGCGTTACTCCCACAGGTGAGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCTTGGTTTAATGACGGCTCGTTTCTTTTCTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTAAAGGGCTCCGGGAGGGCCCTTTGTGCGGGGGGGAGCGGCTCGGGGGGTGCGTGCGTGTGTGTGTGCGTGGGGAGCGCCGCGTGCGGCCCGCGCTGCCCGGCGGCTGTGAGCGCTGCGGGCGCGGCGCGGGGCTTTGTGCGCTCCGCGTGTGCGCGAGGGGAGCGCGGCCGGGGGCGGTGCCCCGCGGTGCGGGGGGGCTGCGAGGGGAACAAAGGCTGCGTGCGGGGTGTGTGCGTGGGGGGGTGAGCAGGGGGTGTGGGCGCGGCGGTCGGGCTGTAACCCCCCCCTGCACCCCCCTCCCCGAGTTGCTGAGCACGGCCCGGCTTCGGGTGCGGGGCTCCGTGCGGGGCGTGGCGCGGGGCTCGCCGTGCCGGGCGGGGGGTGGCGGCAGGTGGGGGTGCCGGGCGGGGCGGGGCCGCCTCGGGCCGGGGAGGGCTCGGGGGAGGGGCGCGGCGGCCCCCGGAGCGCCGGCGGAGCAGGAGGACCAAGGCCCTGGCGAAGGCCGTGGCCTCGTTCTCGAAGTGCTTCTGCCGGTGTGCAGGTCCCAATGGCCGGTAGAATCGTTTCGAGCACGGGGACGCGGGCCTGGACGCCGGCATCCGGGCTCAGGACCCCCCTCTCTAGAGCCTCTGCTAACCATGTTCATGCCTTCTTCTTTTTCCTACAGCTCCTGGGCAACGTGCTGGTTATTGTGACCGGTCGCTAGCCACCATGGTGAGCAAGGGCGAGGAGCTGTTCACCGGGGTGGTGCCCATCCTGGTCGAGCTGGACGGCGACGTAAACGGCCACAAGTTCAGCGTGTCCGGCGAGGGCGAGGGCGATGCCACCTACGGCAAGCTGACCCTGAAGTTCATCTGCACCACCGGCAAGCTGCCCGTGCCCTGGCCCACCCTCGTGACCACCCTGACCTACGGCGTGCAGTGCTTCAGCCGCTACCCCGACCACATGAAGCAGCACGACTTCTTCAAGTCCGCCATGCCCGAAGGCTACGTCCAGGAGCGCACCATCTTCTTCAAGGACGACGGCAACTACAAGACCCGCGCCGAGGTGAAGTTCGAGGGCGACACCCTGGTGAACCGCATCGAGCTGAAGGGCATCGACTTCAAGGAGGACGGCAACATCCTGGGGCACAAGCTGGAGTACAACTACAACAGCCACAACGTCTATATCATGGCCGACAAGCAGAAGAACGGCATCAAGGTGAACTTCAAGATCCGCCACAACATCGAGGACGGCAGCGTGCAGCTCGCCGACCACTACCAGCAGAACACCCCCATCGGCGACGGCCCCGTGCTGCTGCCCGACAACCACTACCTGAGCACCCAGTCCGCCCTGAGCAAAGACCCCAACGAGAAGCGCGATCACATGGTCCTGCTGGAGTTCGTGACCGCCGCCGGGATCACTCTCGGCATGGACGAGCTGTACAAGTAAcctgcaggcgccggcgGAGCAGGAGGACCAAGGCCCTGGCGAAGGCCGTGGCCTCGATACTGTCATAGTAGTACCAGTGTGCAGGTCCCAATGGCTGGTACTAATGTGACAGTCTCGGGGACGCGGGCCTGGACGCCGGCATCCGGGCTCAGGACCCCCCTCGAGCTCGCTGATCAGCCTCGACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTGGGCTCTATGGAAGCTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCTAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAG
例示性 pITR.CAG.miR4i_miR6u-96_EGFP 構築體序列 (SEQ ID NO: 192) CTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTGACATTGATTATTGACTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGACTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGGTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCGGGAGTCGCTGCGTTGCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCGCGCCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGGCTCTGACTGACCGCGTTACTCCCACAGGTGAGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCTTGGTTTAATGACGGCTCGTTTCTTTTCTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTAAAGGGCTCCGGGAGGGCCCTTTGTGCGGGGGGGAGCGGCTCGGGGGGTGCGTGCGTGTGTGTGTGCGTGGGGAGCGCCGCGTGCGGCCCGCGCTGCCCGGCGGCTGTGAGCGCTGCGGGCGCGGCGCGGGGCTTTGTGCGCTCCGCGTGTGCGCGAGGGGAGCGCGGCCGGGGGCGGTGCCCCGCGGTGCGGGGGGGCTGCGAGGGGAACAAAGGCTGCGTGCGGGGTGTGTGCGTGGGGGGGTGAGCAGGGGGTGTGGGCGCGGCGGTCGGGCTGTAACCCCCCCCTGCACCCCCCTCCCCGAGTTGCTGAGCACGGCCCGGCTTCGGGTGCGGGGCTCCGTGCGGGGCGTGGCGCGGGGCTCGCCGTGCCGGGCGGGGGGTGGCGGCAGGTGGGGGTGCCGGGCGGGGCGGGGCCGCCTCGGGCCGGGGAGGGCTCGGGGGAGGGGCGCGGCGGCCCCCGGAGCGCCGGCGGTGTCCCCAGAGAGCCCGCACCAGTGCCATCTGCTTGGCCGATTTCTCGAAGTGCTTCTGCCGGCTTGTGTCTCTCCGCTCTGAGCTGTGAGGAGCTTTCGGGATATGGGAAAAGCAGGACCCGCAGCTGCGTCCGCCTCCCCTGCATTCTAGAGCCTCTGCTAACCATGTTCATGCCTTCTTCTTTTTCCTACAGCTCCTGGGCAACGTGCTGGTTATTGTGACCGGTCGCTAGCCACCATGGTGAGCAAGGGCGAGGAGCTGTTCACCGGGGTGGTGCCCATCCTGGTCGAGCTGGACGGCGACGTAAACGGCCACAAGTTCAGCGTGTCCGGCGAGGGCGAGGGCGATGCCACCTACGGCAAGCTGACCCTGAAGTTCATCTGCACCACCGGCAAGCTGCCCGTGCCCTGGCCCACCCTCGTGACCACCCTGACCTACGGCGTGCAGTGCTTCAGCCGCTACCCCGACCACATGAAGCAGCACGACTTCTTCAAGTCCGCCATGCCCGAAGGCTACGTCCAGGAGCGCACCATCTTCTTCAAGGACGACGGCAACTACAAGACCCGCGCCGAGGTGAAGTTCGAGGGCGACACCCTGGTGAACCGCATCGAGCTGAAGGGCATCGACTTCAAGGAGGACGGCAACATCCTGGGGCACAAGCTGGAGTACAACTACAACAGCCACAACGTCTATATCATGGCCGACAAGCAGAAGAACGGCATCAAGGTGAACTTCAAGATCCGCCACAACATCGAGGACGGCAGCGTGCAGCTCGCCGACCACTACCAGCAGAACACCCCCATCGGCGACGGCCCCGTGCTGCTGCCCGACAACCACTACCTGAGCACCCAGTCCGCCCTGAGCAAAGACCCCAACGAGAAGCGCGATCACATGGTCCTGCTGGAGTTCGTGACCGCCGCCGGGATCACTCTCGGCATGGACGAGCTGTACAAGTAAcctgcaggcgccggcgGTGTCCCCAGAGAGCCCGCACCAGTGCCATCTGCTTGGCCGATATACTGTCATAGTAGTACCAGCTTGTGTCTCTCCGCTCTGAGCTGTCACTGCTTGACGGTAAATGGGAAAAGCAGGACCCGCAGCTGCGTCCGCCTCCCCTGCATGAGCTCGCTGATCAGCCTCGACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTGGGCTCTATGGAAGCTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCTAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAG
例示性 pITR.CAG.miR5-16_EGFP 構築體序列 (SEQ ID NO: 193) CTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTGACATTGATTATTGACTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGACTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGGTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCGGGAGTCGCTGCGTTGCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCGCGCCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGGCTCTGACTGACCGCGTTACTCCCACAGGTGAGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCTTGGTTTAATGACGGCTCGTTTCTTTTCTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTAAAGGGCTCCGGGAGGGCCCTTTGTGCGGGGGGGAGCGGCTCGGGGGGTGCGTGCGTGTGTGTGTGCGTGGGGAGCGCCGCGTGCGGCCCGCGCTGCCCGGCGGCTGTGAGCGCTGCGGGCGCGGCGCGGGGCTTTGTGCGCTCCGCGTGTGCGCGAGGGGAGCGCGGCCGGGGGCGGTGCCCCGCGGTGCGGGGGGGCTGCGAGGGGAACAAAGGCTGCGTGCGGGGTGTGTGCGTGGGGGGGTGAGCAGGGGGTGTGGGCGCGGCGGTCGGGCTGTAACCCCCCCCTGCACCCCCCTCCCCGAGTTGCTGAGCACGGCCCGGCTTCGGGTGCGGGGCTCCGTGCGGGGCGTGGCGCGGGGCTCGCCGTGCCGGGCGGGGGGTGGCGGCAGGTGGGGGTGCCGGGCGGGGCGGGGCCGCCTCGGGCCGGGGAGGGCTCGGGGGAGGGGCGCGGCGGCCCCCGGAGCGCCGGCGCATAGCTCTTATGATAGCAATGTCAGCAGTGCCTTTCTCCACCTTGACCACGCGTGTTAAGATTCTAAAATTATCTCGTGTGGTAAGTGGTGGAGAGAAGTAAGGTTGACCATACTCTACAGTTGTGTCTAGAGCCTCTGCTAACCATGTTCATGCCTTCTTCTTTTTCCTACAGCTCCTGGGCAACGTGCTGGTTATTGTGACCGGTCGCTAGCCACCATGGTGAGCAAGGGCGAGGAGCTGTTCACCGGGGTGGTGCCCATCCTGGTCGAGCTGGACGGCGACGTAAACGGCCACAAGTTCAGCGTGTCCGGCGAGGGCGAGGGCGATGCCACCTACGGCAAGCTGACCCTGAAGTTCATCTGCACCACCGGCAAGCTGCCCGTGCCCTGGCCCACCCTCGTGACCACCCTGACCTACGGCGTGCAGTGCTTCAGCCGCTACCCCGACCACATGAAGCAGCACGACTTCTTCAAGTCCGCCATGCCCGAAGGCTACGTCCAGGAGCGCACCATCTTCTTCAAGGACGACGGCAACTACAAGACCCGCGCCGAGGTGAAGTTCGAGGGCGACACCCTGGTGAACCGCATCGAGCTGAAGGGCATCGACTTCAAGGAGGACGGCAACATCCTGGGGCACAAGCTGGAGTACAACTACAACAGCCACAACGTCTATATCATGGCCGACAAGCAGAAGAACGGCATCAAGGTGAACTTCAAGATCCGCCACAACATCGAGGACGGCAGCGTGCAGCTCGCCGACCACTACCAGCAGAACACCCCCATCGGCGACGGCCCCGTGCTGCTGCCCGACAACCACTACCTGAGCACCCAGTCCGCCCTGAGCAAAGACCCCAACGAGAAGCGCGATCACATGGTCCTGCTGGAGTTCGTGACCGCCGCCGGGATCACTCTCGGCATGGACGAGCTGTACAAGTAAcctgcaggcgccggcgCATAGCTCTTATGATAGCAATGTCAGCAGTGCCTTTCTCCACCTTGACCACGCGTGTTAAGATTCTAAAATTATCTCGTGTGGTAAGTGGTGGAGAGAAGTAAGGTTGACCATACTCTACAGTTGTGGAGCTCGCTGATCAGCCTCGACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTGGGCTCTATGGAAGCTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCTAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAG
例示性 pITR.CAG.miR5-26_EGFP 構築體序列 (SEQ ID NO: 194) CTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTGACATTGATTATTGACTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGACTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGGTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCGGGAGTCGCTGCGTTGCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCGCGCCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGGCTCTGACTGACCGCGTTACTCCCACAGGTGAGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCTTGGTTTAATGACGGCTCGTTTCTTTTCTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTAAAGGGCTCCGGGAGGGCCCTTTGTGCGGGGGGGAGCGGCTCGGGGGGTGCGTGCGTGTGTGTGTGCGTGGGGAGCGCCGCGTGCGGCCCGCGCTGCCCGGCGGCTGTGAGCGCTGCGGGCGCGGCGCGGGGCTTTGTGCGCTCCGCGTGTGCGCGAGGGGAGCGCGGCCGGGGGCGGTGCCCCGCGGTGCGGGGGGGCTGCGAGGGGAACAAAGGCTGCGTGCGGGGTGTGTGCGTGGGGGGGTGAGCAGGGGGTGTGGGCGCGGCGGTCGGGCTGTAACCCCCCCCTGCACCCCCCTCCCCGAGTTGCTGAGCACGGCCCGGCTTCGGGTGCGGGGCTCCGTGCGGGGCGTGGCGCGGGGCTCGCCGTGCCGGGCGGGGGGTGGCGGCAGGTGGGGGTGCCGGGCGGGGCGGGGCCGCCTCGGGCCGGGGAGGGCTCGGGGGAGGGGCGCGGCGGCCCCCGGAGCGCCGGCGGAGCAGGAGGACCAAGGCCCTGGCGAAGGCCGTGGCCTCGTTCTCCACCTTGACCACGCGTTGTGCAGGTCCCAATGGGCGTGTGGTAGAGGTGGAGCACGGGGACGCGGGCCTGGACGCCGGCATCCGGGCTCAGGACCCCCCTCTCTAGAGCCTCTGCTAACCATGTTCATGCCTTCTTCTTTTTCCTACAGCTCCTGGGCAACGTGCTGGTTATTGTGACCGGTCGCTAGCCACCATGGTGAGCAAGGGCGAGGAGCTGTTCACCGGGGTGGTGCCCATCCTGGTCGAGCTGGACGGCGACGTAAACGGCCACAAGTTCAGCGTGTCCGGCGAGGGCGAGGGCGATGCCACCTACGGCAAGCTGACCCTGAAGTTCATCTGCACCACCGGCAAGCTGCCCGTGCCCTGGCCCACCCTCGTGACCACCCTGACCTACGGCGTGCAGTGCTTCAGCCGCTACCCCGACCACATGAAGCAGCACGACTTCTTCAAGTCCGCCATGCCCGAAGGCTACGTCCAGGAGCGCACCATCTTCTTCAAGGACGACGGCAACTACAAGACCCGCGCCGAGGTGAAGTTCGAGGGCGACACCCTGGTGAACCGCATCGAGCTGAAGGGCATCGACTTCAAGGAGGACGGCAACATCCTGGGGCACAAGCTGGAGTACAACTACAACAGCCACAACGTCTATATCATGGCCGACAAGCAGAAGAACGGCATCAAGGTGAACTTCAAGATCCGCCACAACATCGAGGACGGCAGCGTGCAGCTCGCCGACCACTACCAGCAGAACACCCCCATCGGCGACGGCCCCGTGCTGCTGCCCGACAACCACTACCTGAGCACCCAGTCCGCCCTGAGCAAAGACCCCAACGAGAAGCGCGATCACATGGTCCTGCTGGAGTTCGTGACCGCCGCCGGGATCACTCTCGGCATGGACGAGCTGTACAAGTAAcctgcaggcgccggcgGAGCAGGAGGACCAAGGCCCTGGCGAAGGCCGTGGCCTCGTTCTCCACCTTGACCACGCGTTGTGCAGGTCCCAATGGGCGTGTGGTAGAGGTGGAGCACGGGGACGCGGGCCTGGACGCCGGCATCCGGGCTCAGGACCCCCCTCGAGCTCGCTGATCAGCCTCGACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTGGGCTCTATGGAAGCTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCTAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAG
例示性 pITR.CAG.miR5-96_EGFP 構築體序列 (SEQ ID NO: 195) CTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTGACATTGATTATTGACTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGACTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGGTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCGGGAGTCGCTGCGTTGCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCGCGCCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGGCTCTGACTGACCGCGTTACTCCCACAGGTGAGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCTTGGTTTAATGACGGCTCGTTTCTTTTCTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTAAAGGGCTCCGGGAGGGCCCTTTGTGCGGGGGGGAGCGGCTCGGGGGGTGCGTGCGTGTGTGTGTGCGTGGGGAGCGCCGCGTGCGGCCCGCGCTGCCCGGCGGCTGTGAGCGCTGCGGGCGCGGCGCGGGGCTTTGTGCGCTCCGCGTGTGCGCGAGGGGAGCGCGGCCGGGGGCGGTGCCCCGCGGTGCGGGGGGGCTGCGAGGGGAACAAAGGCTGCGTGCGGGGTGTGTGCGTGGGGGGGTGAGCAGGGGGTGTGGGCGCGGCGGTCGGGCTGTAACCCCCCCCTGCACCCCCCTCCCCGAGTTGCTGAGCACGGCCCGGCTTCGGGTGCGGGGCTCCGTGCGGGGCGTGGCGCGGGGCTCGCCGTGCCGGGCGGGGGGTGGCGGCAGGTGGGGGTGCCGGGCGGGGCGGGGCCGCCTCGGGCCGGGGAGGGCTCGGGGGAGGGGCGCGGCGGCCCCCGGAGCGCCGGCGGTGTCCCCAGAGAGCCCGCACCAGTGCCATCTGCTTGGCCGATTTCTCCACCTTGACCACGCGTCTTGTGTCTCTCCGCTCTGAGGTGACTGGTTGGGTGGAGATATGGGAAAAGCAGGACCCGCAGCTGCGTCCGCCTCCCCTGCATTCTAGAGCCTCTGCTAACCATGTTCATGCCTTCTTCTTTTTCCTACAGCTCCTGGGCAACGTGCTGGTTATTGTGACCGGTCGCTAGCCACCATGGTGAGCAAGGGCGAGGAGCTGTTCACCGGGGTGGTGCCCATCCTGGTCGAGCTGGACGGCGACGTAAACGGCCACAAGTTCAGCGTGTCCGGCGAGGGCGAGGGCGATGCCACCTACGGCAAGCTGACCCTGAAGTTCATCTGCACCACCGGCAAGCTGCCCGTGCCCTGGCCCACCCTCGTGACCACCCTGACCTACGGCGTGCAGTGCTTCAGCCGCTACCCCGACCACATGAAGCAGCACGACTTCTTCAAGTCCGCCATGCCCGAAGGCTACGTCCAGGAGCGCACCATCTTCTTCAAGGACGACGGCAACTACAAGACCCGCGCCGAGGTGAAGTTCGAGGGCGACACCCTGGTGAACCGCATCGAGCTGAAGGGCATCGACTTCAAGGAGGACGGCAACATCCTGGGGCACAAGCTGGAGTACAACTACAACAGCCACAACGTCTATATCATGGCCGACAAGCAGAAGAACGGCATCAAGGTGAACTTCAAGATCCGCCACAACATCGAGGACGGCAGCGTGCAGCTCGCCGACCACTACCAGCAGAACACCCCCATCGGCGACGGCCCCGTGCTGCTGCCCGACAACCACTACCTGAGCACCCAGTCCGCCCTGAGCAAAGACCCCAACGAGAAGCGCGATCACATGGTCCTGCTGGAGTTCGTGACCGCCGCCGGGATCACTCTCGGCATGGACGAGCTGTACAAGTAAcctgcaggcgccggcgGTGTCCCCAGAGAGCCCGCACCAGTGCCATCTGCTTGGCCGATTTCTCCACCTTGACCACGCGTCTTGTGTCTCTCCGCTCTGAGGTGACTGGTTGGGTGGAGATATGGGAAAAGCAGGACCCGCAGCTGCGTCCGCCTCCCCTGCATGAGCTCGCTGATCAGCCTCGACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTGGGCTCTATGGAAGCTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCTAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAG
例示性 pITR.CAG.miR5i_miR6u-16_EGFP 構築體序列 (SEQ ID NO: 196) CTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTGACATTGATTATTGACTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGACTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGGTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCGGGAGTCGCTGCGTTGCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCGCGCCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGGCTCTGACTGACCGCGTTACTCCCACAGGTGAGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCTTGGTTTAATGACGGCTCGTTTCTTTTCTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTAAAGGGCTCCGGGAGGGCCCTTTGTGCGGGGGGGAGCGGCTCGGGGGGTGCGTGCGTGTGTGTGTGCGTGGGGAGCGCCGCGTGCGGCCCGCGCTGCCCGGCGGCTGTGAGCGCTGCGGGCGCGGCGCGGGGCTTTGTGCGCTCCGCGTGTGCGCGAGGGGAGCGCGGCCGGGGGCGGTGCCCCGCGGTGCGGGGGGGCTGCGAGGGGAACAAAGGCTGCGTGCGGGGTGTGTGCGTGGGGGGGTGAGCAGGGGGTGTGGGCGCGGCGGTCGGGCTGTAACCCCCCCCTGCACCCCCCTCCCCGAGTTGCTGAGCACGGCCCGGCTTCGGGTGCGGGGCTCCGTGCGGGGCGTGGCGCGGGGCTCGCCGTGCCGGGCGGGGGGTGGCGGCAGGTGGGGGTGCCGGGCGGGGCGGGGCCGCCTCGGGCCGGGGAGGGCTCGGGGGAGGGGCGCGGCGGCCCCCGGAGCGCCGGCGCATAGCTCTTATGATAGCAATGTCAGCAGTGCCTTTCTCCACCTTGACCACGCGTGTTAAGATTCTAAAATTATCTCGTGTGGTAAGTGGTGGAGAGAAGTAAGGTTGACCATACTCTACAGTTGTGTCTAGAGCCTCTGCTAACCATGTTCATGCCTTCTTCTTTTTCCTACAGCTCCTGGGCAACGTGCTGGTTATTGTGACCGGTCGCTAGCCACCATGGTGAGCAAGGGCGAGGAGCTGTTCACCGGGGTGGTGCCCATCCTGGTCGAGCTGGACGGCGACGTAAACGGCCACAAGTTCAGCGTGTCCGGCGAGGGCGAGGGCGATGCCACCTACGGCAAGCTGACCCTGAAGTTCATCTGCACCACCGGCAAGCTGCCCGTGCCCTGGCCCACCCTCGTGACCACCCTGACCTACGGCGTGCAGTGCTTCAGCCGCTACCCCGACCACATGAAGCAGCACGACTTCTTCAAGTCCGCCATGCCCGAAGGCTACGTCCAGGAGCGCACCATCTTCTTCAAGGACGACGGCAACTACAAGACCCGCGCCGAGGTGAAGTTCGAGGGCGACACCCTGGTGAACCGCATCGAGCTGAAGGGCATCGACTTCAAGGAGGACGGCAACATCCTGGGGCACAAGCTGGAGTACAACTACAACAGCCACAACGTCTATATCATGGCCGACAAGCAGAAGAACGGCATCAAGGTGAACTTCAAGATCCGCCACAACATCGAGGACGGCAGCGTGCAGCTCGCCGACCACTACCAGCAGAACACCCCCATCGGCGACGGCCCCGTGCTGCTGCCCGACAACCACTACCTGAGCACCCAGTCCGCCCTGAGCAAAGACCCCAACGAGAAGCGCGATCACATGGTCCTGCTGGAGTTCGTGACCGCCGCCGGGATCACTCTCGGCATGGACGAGCTGTACAAGTAAcctgcaggcgccggcgCATAGCTCTTATGATAGCAATGTCAGCAGTGCCTATACTGTCATAGTAGTACCAGGTTAAGATTCTAAAATTATCATGGTACTAATGTTGGCAGTGTAAGTAAGGTTGACCATACTCTACAGTTGTGGAGCTCGCTGATCAGCCTCGACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTGGGCTCTATGGAAGCTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCTAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAG
例示性 pITR.CAG.miR5i_miR6u-26_EGFP 構築體序列 (SEQ ID NO: 197) CTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTGACATTGATTATTGACTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGACTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGGTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCGGGAGTCGCTGCGTTGCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCGCGCCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGGCTCTGACTGACCGCGTTACTCCCACAGGTGAGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCTTGGTTTAATGACGGCTCGTTTCTTTTCTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTAAAGGGCTCCGGGAGGGCCCTTTGTGCGGGGGGGAGCGGCTCGGGGGGTGCGTGCGTGTGTGTGTGCGTGGGGAGCGCCGCGTGCGGCCCGCGCTGCCCGGCGGCTGTGAGCGCTGCGGGCGCGGCGCGGGGCTTTGTGCGCTCCGCGTGTGCGCGAGGGGAGCGCGGCCGGGGGCGGTGCCCCGCGGTGCGGGGGGGCTGCGAGGGGAACAAAGGCTGCGTGCGGGGTGTGTGCGTGGGGGGGTGAGCAGGGGGTGTGGGCGCGGCGGTCGGGCTGTAACCCCCCCCTGCACCCCCCTCCCCGAGTTGCTGAGCACGGCCCGGCTTCGGGTGCGGGGCTCCGTGCGGGGCGTGGCGCGGGGCTCGCCGTGCCGGGCGGGGGGTGGCGGCAGGTGGGGGTGCCGGGCGGGGCGGGGCCGCCTCGGGCCGGGGAGGGCTCGGGGGAGGGGCGCGGCGGCCCCCGGAGCGCCGGCGGAGCAGGAGGACCAAGGCCCTGGCGAAGGCCGTGGCCTCGTTCTCCACCTTGACCACGCGTTGTGCAGGTCCCAATGGGCGTGTGGTAGAGGTGGAGCACGGGGACGCGGGCCTGGACGCCGGCATCCGGGCTCAGGACCCCCCTCTCTAGAGCCTCTGCTAACCATGTTCATGCCTTCTTCTTTTTCCTACAGCTCCTGGGCAACGTGCTGGTTATTGTGACCGGTCGCTAGCCACCATGGTGAGCAAGGGCGAGGAGCTGTTCACCGGGGTGGTGCCCATCCTGGTCGAGCTGGACGGCGACGTAAACGGCCACAAGTTCAGCGTGTCCGGCGAGGGCGAGGGCGATGCCACCTACGGCAAGCTGACCCTGAAGTTCATCTGCACCACCGGCAAGCTGCCCGTGCCCTGGCCCACCCTCGTGACCACCCTGACCTACGGCGTGCAGTGCTTCAGCCGCTACCCCGACCACATGAAGCAGCACGACTTCTTCAAGTCCGCCATGCCCGAAGGCTACGTCCAGGAGCGCACCATCTTCTTCAAGGACGACGGCAACTACAAGACCCGCGCCGAGGTGAAGTTCGAGGGCGACACCCTGGTGAACCGCATCGAGCTGAAGGGCATCGACTTCAAGGAGGACGGCAACATCCTGGGGCACAAGCTGGAGTACAACTACAACAGCCACAACGTCTATATCATGGCCGACAAGCAGAAGAACGGCATCAAGGTGAACTTCAAGATCCGCCACAACATCGAGGACGGCAGCGTGCAGCTCGCCGACCACTACCAGCAGAACACCCCCATCGGCGACGGCCCCGTGCTGCTGCCCGACAACCACTACCTGAGCACCCAGTCCGCCCTGAGCAAAGACCCCAACGAGAAGCGCGATCACATGGTCCTGCTGGAGTTCGTGACCGCCGCCGGGATCACTCTCGGCATGGACGAGCTGTACAAGTAAcctgcaggcgccggcgGAGCAGGAGGACCAAGGCCCTGGCGAAGGCCGTGGCCTCGATACTGTCATAGTAGTACCAGTGTGCAGGTCCCAATGGCTGGTACTAATGTGACAGTCTCGGGGACGCGGGCCTGGACGCCGGCATCCGGGCTCAGGACCCCCCTCGAGCTCGCTGATCAGCCTCGACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTGGGCTCTATGGAAGCTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCTAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAG
例示性 pITR.CAG.miR5i_miR6u-96_EGFP 構築體序列 (SEQ ID NO: 198) CTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTGACATTGATTATTGACTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGACTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGGTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCGGGAGTCGCTGCGTTGCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCGCGCCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGGCTCTGACTGACCGCGTTACTCCCACAGGTGAGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCTTGGTTTAATGACGGCTCGTTTCTTTTCTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTAAAGGGCTCCGGGAGGGCCCTTTGTGCGGGGGGGAGCGGCTCGGGGGGTGCGTGCGTGTGTGTGTGCGTGGGGAGCGCCGCGTGCGGCCCGCGCTGCCCGGCGGCTGTGAGCGCTGCGGGCGCGGCGCGGGGCTTTGTGCGCTCCGCGTGTGCGCGAGGGGAGCGCGGCCGGGGGCGGTGCCCCGCGGTGCGGGGGGGCTGCGAGGGGAACAAAGGCTGCGTGCGGGGTGTGTGCGTGGGGGGGTGAGCAGGGGGTGTGGGCGCGGCGGTCGGGCTGTAACCCCCCCCTGCACCCCCCTCCCCGAGTTGCTGAGCACGGCCCGGCTTCGGGTGCGGGGCTCCGTGCGGGGCGTGGCGCGGGGCTCGCCGTGCCGGGCGGGGGGTGGCGGCAGGTGGGGGTGCCGGGCGGGGCGGGGCCGCCTCGGGCCGGGGAGGGCTCGGGGGAGGGGCGCGGCGGCCCCCGGAGCGCCGGCGGTGTCCCCAGAGAGCCCGCACCAGTGCCATCTGCTTGGCCGATTTCTCCACCTTGACCACGCGTCTTGTGTCTCTCCGCTCTGAGGTGACTGGTTGGGTGGAGATATGGGAAAAGCAGGACCCGCAGCTGCGTCCGCCTCCCCTGCATTCTAGAGCCTCTGCTAACCATGTTCATGCCTTCTTCTTTTTCCTACAGCTCCTGGGCAACGTGCTGGTTATTGTGACCGGTCGCTAGCCACCATGGTGAGCAAGGGCGAGGAGCTGTTCACCGGGGTGGTGCCCATCCTGGTCGAGCTGGACGGCGACGTAAACGGCCACAAGTTCAGCGTGTCCGGCGAGGGCGAGGGCGATGCCACCTACGGCAAGCTGACCCTGAAGTTCATCTGCACCACCGGCAAGCTGCCCGTGCCCTGGCCCACCCTCGTGACCACCCTGACCTACGGCGTGCAGTGCTTCAGCCGCTACCCCGACCACATGAAGCAGCACGACTTCTTCAAGTCCGCCATGCCCGAAGGCTACGTCCAGGAGCGCACCATCTTCTTCAAGGACGACGGCAACTACAAGACCCGCGCCGAGGTGAAGTTCGAGGGCGACACCCTGGTGAACCGCATCGAGCTGAAGGGCATCGACTTCAAGGAGGACGGCAACATCCTGGGGCACAAGCTGGAGTACAACTACAACAGCCACAACGTCTATATCATGGCCGACAAGCAGAAGAACGGCATCAAGGTGAACTTCAAGATCCGCCACAACATCGAGGACGGCAGCGTGCAGCTCGCCGACCACTACCAGCAGAACACCCCCATCGGCGACGGCCCCGTGCTGCTGCCCGACAACCACTACCTGAGCACCCAGTCCGCCCTGAGCAAAGACCCCAACGAGAAGCGCGATCACATGGTCCTGCTGGAGTTCGTGACCGCCGCCGGGATCACTCTCGGCATGGACGAGCTGTACAAGTAAcctgcaggcgccggcgGTGTCCCCAGAGAGCCCGCACCAGTGCCATCTGCTTGGCCGATATACTGTCATAGTAGTACCAGCTTGTGTCTCTCCGCTCTGAGCTGTCACTGCTTGACGGTAAATGGGAAAAGCAGGACCCGCAGCTGCGTCCGCCTCCCCTGCATGAGCTCGCTGATCAGCCTCGACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTGGGCTCTATGGAAGCTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCTAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAG
例示性 pITR.CAG.miR6-16_EGFP 構築體序列 (SEQ ID NO: 199) CTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTGACATTGATTATTGACTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGACTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGGTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCGGGAGTCGCTGCGTTGCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCGCGCCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGGCTCTGACTGACCGCGTTACTCCCACAGGTGAGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCTTGGTTTAATGACGGCTCGTTTCTTTTCTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTAAAGGGCTCCGGGAGGGCCCTTTGTGCGGGGGGGAGCGGCTCGGGGGGTGCGTGCGTGTGTGTGTGCGTGGGGAGCGCCGCGTGCGGCCCGCGCTGCCCGGCGGCTGTGAGCGCTGCGGGCGCGGCGCGGGGCTTTGTGCGCTCCGCGTGTGCGCGAGGGGAGCGCGGCCGGGGGCGGTGCCCCGCGGTGCGGGGGGGCTGCGAGGGGAACAAAGGCTGCGTGCGGGGTGTGTGCGTGGGGGGGTGAGCAGGGGGTGTGGGCGCGGCGGTCGGGCTGTAACCCCCCCCTGCACCCCCCTCCCCGAGTTGCTGAGCACGGCCCGGCTTCGGGTGCGGGGCTCCGTGCGGGGCGTGGCGCGGGGCTCGCCGTGCCGGGCGGGGGGTGGCGGCAGGTGGGGGTGCCGGGCGGGGCGGGGCCGCCTCGGGCCGGGGAGGGCTCGGGGGAGGGGCGCGGCGGCCCCCGGAGCGCCGGCGCATAGCTCTTATGATAGCAATGTCAGCAGTGCCTATACTGTCATAGTAGTACCAGGTTAAGATTCTAAAATTATCATGGTACTAATGTTGGCAGTGTAAGTAAGGTTGACCATACTCTACAGTTGTGTCTAGAGCCTCTGCTAACCATGTTCATGCCTTCTTCTTTTTCCTACAGCTCCTGGGCAACGTGCTGGTTATTGTGACCGGTCGCTAGCCACCATGGTGAGCAAGGGCGAGGAGCTGTTCACCGGGGTGGTGCCCATCCTGGTCGAGCTGGACGGCGACGTAAACGGCCACAAGTTCAGCGTGTCCGGCGAGGGCGAGGGCGATGCCACCTACGGCAAGCTGACCCTGAAGTTCATCTGCACCACCGGCAAGCTGCCCGTGCCCTGGCCCACCCTCGTGACCACCCTGACCTACGGCGTGCAGTGCTTCAGCCGCTACCCCGACCACATGAAGCAGCACGACTTCTTCAAGTCCGCCATGCCCGAAGGCTACGTCCAGGAGCGCACCATCTTCTTCAAGGACGACGGCAACTACAAGACCCGCGCCGAGGTGAAGTTCGAGGGCGACACCCTGGTGAACCGCATCGAGCTGAAGGGCATCGACTTCAAGGAGGACGGCAACATCCTGGGGCACAAGCTGGAGTACAACTACAACAGCCACAACGTCTATATCATGGCCGACAAGCAGAAGAACGGCATCAAGGTGAACTTCAAGATCCGCCACAACATCGAGGACGGCAGCGTGCAGCTCGCCGACCACTACCAGCAGAACACCCCCATCGGCGACGGCCCCGTGCTGCTGCCCGACAACCACTACCTGAGCACCCAGTCCGCCCTGAGCAAAGACCCCAACGAGAAGCGCGATCACATGGTCCTGCTGGAGTTCGTGACCGCCGCCGGGATCACTCTCGGCATGGACGAGCTGTACAAGTAAcctgcaggcgccggcgCATAGCTCTTATGATAGCAATGTCAGCAGTGCCTATACTGTCATAGTAGTACCAGGTTAAGATTCTAAAATTATCATGGTACTAATGTTGGCAGTGTAAGTAAGGTTGACCATACTCTACAGTTGTGGAGCTCGCTGATCAGCCTCGACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTGGGCTCTATGGAAGCTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCTAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAG
例示性 pITR.CAG.miR6-26_EGFP 構築體序列 (SEQ ID NO: 200) CTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTGACATTGATTATTGACTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGACTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGGTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCGGGAGTCGCTGCGTTGCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCGCGCCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGGCTCTGACTGACCGCGTTACTCCCACAGGTGAGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCTTGGTTTAATGACGGCTCGTTTCTTTTCTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTAAAGGGCTCCGGGAGGGCCCTTTGTGCGGGGGGGAGCGGCTCGGGGGGTGCGTGCGTGTGTGTGTGCGTGGGGAGCGCCGCGTGCGGCCCGCGCTGCCCGGCGGCTGTGAGCGCTGCGGGCGCGGCGCGGGGCTTTGTGCGCTCCGCGTGTGCGCGAGGGGAGCGCGGCCGGGGGCGGTGCCCCGCGGTGCGGGGGGGCTGCGAGGGGAACAAAGGCTGCGTGCGGGGTGTGTGCGTGGGGGGGTGAGCAGGGGGTGTGGGCGCGGCGGTCGGGCTGTAACCCCCCCCTGCACCCCCCTCCCCGAGTTGCTGAGCACGGCCCGGCTTCGGGTGCGGGGCTCCGTGCGGGGCGTGGCGCGGGGCTCGCCGTGCCGGGCGGGGGGTGGCGGCAGGTGGGGGTGCCGGGCGGGGCGGGGCCGCCTCGGGCCGGGGAGGGCTCGGGGGAGGGGCGCGGCGGCCCCCGGAGCGCCGGCGGAGCAGGAGGACCAAGGCCCTGGCGAAGGCCGTGGCCTCGATACTGTCATAGTAGTACCAGTGTGCAGGTCCCAATGGCTGGTACTAATGTGACAGTCTCGGGGACGCGGGCCTGGACGCCGGCATCCGGGCTCAGGACCCCCCTCTCTAGAGCCTCTGCTAACCATGTTCATGCCTTCTTCTTTTTCCTACAGCTCCTGGGCAACGTGCTGGTTATTGTGACCGGTCGCTAGCCACCATGGTGAGCAAGGGCGAGGAGCTGTTCACCGGGGTGGTGCCCATCCTGGTCGAGCTGGACGGCGACGTAAACGGCCACAAGTTCAGCGTGTCCGGCGAGGGCGAGGGCGATGCCACCTACGGCAAGCTGACCCTGAAGTTCATCTGCACCACCGGCAAGCTGCCCGTGCCCTGGCCCACCCTCGTGACCACCCTGACCTACGGCGTGCAGTGCTTCAGCCGCTACCCCGACCACATGAAGCAGCACGACTTCTTCAAGTCCGCCATGCCCGAAGGCTACGTCCAGGAGCGCACCATCTTCTTCAAGGACGACGGCAACTACAAGACCCGCGCCGAGGTGAAGTTCGAGGGCGACACCCTGGTGAACCGCATCGAGCTGAAGGGCATCGACTTCAAGGAGGACGGCAACATCCTGGGGCACAAGCTGGAGTACAACTACAACAGCCACAACGTCTATATCATGGCCGACAAGCAGAAGAACGGCATCAAGGTGAACTTCAAGATCCGCCACAACATCGAGGACGGCAGCGTGCAGCTCGCCGACCACTACCAGCAGAACACCCCCATCGGCGACGGCCCCGTGCTGCTGCCCGACAACCACTACCTGAGCACCCAGTCCGCCCTGAGCAAAGACCCCAACGAGAAGCGCGATCACATGGTCCTGCTGGAGTTCGTGACCGCCGCCGGGATCACTCTCGGCATGGACGAGCTGTACAAGTAAcctgcaggcgccggcgGAGCAGGAGGACCAAGGCCCTGGCGAAGGCCGTGGCCTCGATACTGTCATAGTAGTACCAGTGTGCAGGTCCCAATGGCTGGTACTAATGTGACAGTCTCGGGGACGCGGGCCTGGACGCCGGCATCCGGGCTCAGGACCCCCCTCGAGCTCGCTGATCAGCCTCGACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTGGGCTCTATGGAAGCTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCTAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAG
例示性 pITR.CAG.miR6-96_EGFP 構築體序列 (SEQ ID NO: 201) CTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTGACATTGATTATTGACTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGACTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGGTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCGGGAGTCGCTGCGTTGCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCGCGCCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGGCTCTGACTGACCGCGTTACTCCCACAGGTGAGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCTTGGTTTAATGACGGCTCGTTTCTTTTCTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTAAAGGGCTCCGGGAGGGCCCTTTGTGCGGGGGGGAGCGGCTCGGGGGGTGCGTGCGTGTGTGTGTGCGTGGGGAGCGCCGCGTGCGGCCCGCGCTGCCCGGCGGCTGTGAGCGCTGCGGGCGCGGCGCGGGGCTTTGTGCGCTCCGCGTGTGCGCGAGGGGAGCGCGGCCGGGGGCGGTGCCCCGCGGTGCGGGGGGGCTGCGAGGGGAACAAAGGCTGCGTGCGGGGTGTGTGCGTGGGGGGGTGAGCAGGGGGTGTGGGCGCGGCGGTCGGGCTGTAACCCCCCCCTGCACCCCCCTCCCCGAGTTGCTGAGCACGGCCCGGCTTCGGGTGCGGGGCTCCGTGCGGGGCGTGGCGCGGGGCTCGCCGTGCCGGGCGGGGGGTGGCGGCAGGTGGGGGTGCCGGGCGGGGCGGGGCCGCCTCGGGCCGGGGAGGGCTCGGGGGAGGGGCGCGGCGGCCCCCGGAGCGCCGGCGGTGTCCCCAGAGAGCCCGCACCAGTGCCATCTGCTTGGCCGATATACTGTCATAGTAGTACCAGCTTGTGTCTCTCCGCTCTGAGCTGTCACTGCTTGACGGTAAATGGGAAAAGCAGGACCCGCAGCTGCGTCCGCCTCCCCTGCATTCTAGAGCCTCTGCTAACCATGTTCATGCCTTCTTCTTTTTCCTACAGCTCCTGGGCAACGTGCTGGTTATTGTGACCGGTCGCTAGCCACCATGGTGAGCAAGGGCGAGGAGCTGTTCACCGGGGTGGTGCCCATCCTGGTCGAGCTGGACGGCGACGTAAACGGCCACAAGTTCAGCGTGTCCGGCGAGGGCGAGGGCGATGCCACCTACGGCAAGCTGACCCTGAAGTTCATCTGCACCACCGGCAAGCTGCCCGTGCCCTGGCCCACCCTCGTGACCACCCTGACCTACGGCGTGCAGTGCTTCAGCCGCTACCCCGACCACATGAAGCAGCACGACTTCTTCAAGTCCGCCATGCCCGAAGGCTACGTCCAGGAGCGCACCATCTTCTTCAAGGACGACGGCAACTACAAGACCCGCGCCGAGGTGAAGTTCGAGGGCGACACCCTGGTGAACCGCATCGAGCTGAAGGGCATCGACTTCAAGGAGGACGGCAACATCCTGGGGCACAAGCTGGAGTACAACTACAACAGCCACAACGTCTATATCATGGCCGACAAGCAGAAGAACGGCATCAAGGTGAACTTCAAGATCCGCCACAACATCGAGGACGGCAGCGTGCAGCTCGCCGACCACTACCAGCAGAACACCCCCATCGGCGACGGCCCCGTGCTGCTGCCCGACAACCACTACCTGAGCACCCAGTCCGCCCTGAGCAAAGACCCCAACGAGAAGCGCGATCACATGGTCCTGCTGGAGTTCGTGACCGCCGCCGGGATCACTCTCGGCATGGACGAGCTGTACAAGTAAcctgcaggcgccggcgGTGTCCCCAGAGAGCCCGCACCAGTGCCATCTGCTTGGCCGATATACTGTCATAGTAGTACCAGCTTGTGTCTCTCCGCTCTGAGCTGTCACTGCTTGACGGTAAATGGGAAAAGCAGGACCCGCAGCTGCGTCCGCCTCCCCTGCATGAGCTCGCTGATCAGCCTCGACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTGGGCTCTATGGAAGCTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCTAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAG例示性 miRNA 構築體序列 ( 第 2 部分 )
例示性 pITR.CAG.miR1-155_EGFP 序列 (SEQ ID NO: 202) CTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTGACATTGATTATTGACTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGACTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGGTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCGGGAGTCGCTGCGTTGCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCGCGCCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGGCTCTGACTGACCGCGTTACTCCCACAGGTGAGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCTTGGTTTAATGACGGCTCGTTTCTTTTCTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTAAAGGGCTCCGGGAGGGCCCTTTGTGCGGGGGGGAGCGGCTCGGGGGGTGCGTGCGTGTGTGTGTGCGTGGGGAGCGCCGCGTGCGGCCCGCGCTGCCCGGCGGCTGTGAGCGCTGCGGGCGCGGCGCGGGGCTTTGTGCGCTCCGCGTGTGCGCGAGGGGAGCGCGGCCGGGGGCGGTGCCCCGCGGTGCGGGGGGGCTGCGAGGGGAACAAAGGCTGCGTGCGGGGTGTGTGCGTGGGGGGGTGAGCAGGGGGTGTGGGCGCGGCGGTCGGGCTGTAACCCCCCCCTGCACCCCCCTCCCCGAGTTGCTGAGCACGGCCCGGCTTCGGGTGCGGGGCTCCGTGCGGGGCGTGGCGCGGGGCTCGCCGTGCCGGGCGGGGGGTGGCGGCAGGTGGGGGTGCCGGGCGGGGCGGGGCCGCCTCGGGCCGGGGAGGGCTCGGGGGAGGGGCGCGGCGGCCCCCGGAGCGCCGGCGtcctctgagtgctgaaggcttgctgtaggctgtatgctgTTGAGAATCCTGATGGAGCgggtttttgcctccaactgacccGCTCATAGGATTCTCAAcagtgtatgatgcctgttactagcattcacatggaTCTAGAGCCTCTGCTAACCATGTTCATGCCTTCTTCTTTTTCCTACAGCTCCTGGGCAACGTGCTGGTTATTGTGACCGGTCGCTAGCCACCATGGTGAGCAAGGGCGAGGAGCTGTTCACCGGGGTGGTGCCCATCCTGGTCGAGCTGGACGGCGACGTAAACGGCCACAAGTTCAGCGTGTCCGGCGAGGGCGAGGGCGATGCCACCTACGGCAAGCTGACCCTGAAGTTCATCTGCACCACCGGCAAGCTGCCCGTGCCCTGGCCCACCCTCGTGACCACCCTGACCTACGGCGTGCAGTGCTTCAGCCGCTACCCCGACCACATGAAGCAGCACGACTTCTTCAAGTCCGCCATGCCCGAAGGCTACGTCCAGGAGCGCACCATCTTCTTCAAGGACGACGGCAACTACAAGACCCGCGCCGAGGTGAAGTTCGAGGGCGACACCCTGGTGAACCGCATCGAGCTGAAGGGCATCGACTTCAAGGAGGACGGCAACATCCTGGGGCACAAGCTGGAGTACAACTACAACAGCCACAACGTCTATATCATGGCCGACAAGCAGAAGAACGGCATCAAGGTGAACTTCAAGATCCGCCACAACATCGAGGACGGCAGCGTGCAGCTCGCCGACCACTACCAGCAGAACACCCCCATCGGCGACGGCCCCGTGCTGCTGCCCGACAACCACTACCTGAGCACCCAGTCCGCCCTGAGCAAAGACCCCAACGAGAAGCGCGATCACATGGTCCTGCTGGAGTTCGTGACCGCCGCCGGGATCACTCTCGGCATGGACGAGCTGTACAAGTAAcctgcaggcgccggcgtcctctgagtgctgaaggcttgctgtaggctgtatgctgTTGAGAATCCTGATGGAGCgggtttttgcctccaactgacccGCTCATAGGATTCTCAAcagtgtatgatgcctgttactagcattcacatggaGAGCTCGCTGATCAGCCTCGACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTGGGCTCTATGGAAGCTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCTAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAG
例示性 pITR.CAG.miR1i-155_EGFP 序列 (SEQ ID NO: 203) CTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTGACATTGATTATTGACTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGACTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGGTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCGGGAGTCGCTGCGTTGCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCGCGCCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGGCTCTGACTGACCGCGTTACTCCCACAGGTGAGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCTTGGTTTAATGACGGCTCGTTTCTTTTCTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTAAAGGGCTCCGGGAGGGCCCTTTGTGCGGGGGGGAGCGGCTCGGGGGGTGCGTGCGTGTGTGTGTGCGTGGGGAGCGCCGCGTGCGGCCCGCGCTGCCCGGCGGCTGTGAGCGCTGCGGGCGCGGCGCGGGGCTTTGTGCGCTCCGCGTGTGCGCGAGGGGAGCGCGGCCGGGGGCGGTGCCCCGCGGTGCGGGGGGGCTGCGAGGGGAACAAAGGCTGCGTGCGGGGTGTGTGCGTGGGGGGGTGAGCAGGGGGTGTGGGCGCGGCGGTCGGGCTGTAACCCCCCCCTGCACCCCCCTCCCCGAGTTGCTGAGCACGGCCCGGCTTCGGGTGCGGGGCTCCGTGCGGGGCGTGGCGCGGGGCTCGCCGTGCCGGGCGGGGGGTGGCGGCAGGTGGGGGTGCCGGGCGGGGCGGGGCCGCCTCGGGCCGGGGAGGGCTCGGGGGAGGGGCGCGGCGGCCCCCGGAGCGCCGGCGtcctctgagtgctgaaggcttgctgtaggctgtatgctgTTGAGAATCCTGATGGAGCgggtttttgcctccaactgacccGCTCATAGGATTCTCAAcagtgtatgatgcctgttactagcattcacatggaTCTAGAGCCTCTGCTAACCATGTTCATGCCTTCTTCTTTTTCCTACAGCTCCTGGGCAACGTGCTGGTTATTGTGACCGGTCGCTAGCCACCATGGTGAGCAAGGGCGAGGAGCTGTTCACCGGGGTGGTGCCCATCCTGGTCGAGCTGGACGGCGACGTAAACGGCCACAAGTTCAGCGTGTCCGGCGAGGGCGAGGGCGATGCCACCTACGGCAAGCTGACCCTGAAGTTCATCTGCACCACCGGCAAGCTGCCCGTGCCCTGGCCCACCCTCGTGACCACCCTGACCTACGGCGTGCAGTGCTTCAGCCGCTACCCCGACCACATGAAGCAGCACGACTTCTTCAAGTCCGCCATGCCCGAAGGCTACGTCCAGGAGCGCACCATCTTCTTCAAGGACGACGGCAACTACAAGACCCGCGCCGAGGTGAAGTTCGAGGGCGACACCCTGGTGAACCGCATCGAGCTGAAGGGCATCGACTTCAAGGAGGACGGCAACATCCTGGGGCACAAGCTGGAGTACAACTACAACAGCCACAACGTCTATATCATGGCCGACAAGCAGAAGAACGGCATCAAGGTGAACTTCAAGATCCGCCACAACATCGAGGACGGCAGCGTGCAGCTCGCCGACCACTACCAGCAGAACACCCCCATCGGCGACGGCCCCGTGCTGCTGCCCGACAACCACTACCTGAGCACCCAGTCCGCCCTGAGCAAAGACCCCAACGAGAAGCGCGATCACATGGTCCTGCTGGAGTTCGTGACCGCCGCCGGGATCACTCTCGGCATGGACGAGCTGTACAAGTAAGAGCTCGCTGATCAGCCTCGACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTGGGCTCTATGGAAGCTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCTAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAG
例示性 pITR.CAG.miR1u-155_EGFP 序列 (SEQ ID NO: 204) CTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTGACATTGATTATTGACTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGACTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGGTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCGGGAGTCGCTGCGTTGCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCGCGCCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGGCTCTGACTGACCGCGTTACTCCCACAGGTGAGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCTTGGTTTAATGACGGCTCGTTTCTTTTCTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTAAAGGGCTCCGGGAGGGCCCTTTGTGCGGGGGGGAGCGGCTCGGGGGGTGCGTGCGTGTGTGTGTGCGTGGGGAGCGCCGCGTGCGGCCCGCGCTGCCCGGCGGCTGTGAGCGCTGCGGGCGCGGCGCGGGGCTTTGTGCGCTCCGCGTGTGCGCGAGGGGAGCGCGGCCGGGGGCGGTGCCCCGCGGTGCGGGGGGGCTGCGAGGGGAACAAAGGCTGCGTGCGGGGTGTGTGCGTGGGGGGGTGAGCAGGGGGTGTGGGCGCGGCGGTCGGGCTGTAACCCCCCCCTGCACCCCCCTCCCCGAGTTGCTGAGCACGGCCCGGCTTCGGGTGCGGGGCTCCGTGCGGGGCGTGGCGCGGGGCTCGCCGTGCCGGGCGGGGGGTGGCGGCAGGTGGGGGTGCCGGGCGGGGCGGGGCCGCCTCGGGCCGGGGAGGGCTCGGGGGAGGGGCGCGGCGGCCCCCGGAGCGCCGGCGGCTGTCGAGGCGCGGCGAGCCGCAGCCATTGCCTTTTATGGTAATCGTGCGAGAGGGCGCAGGGACTTCCTTTGTCCCAAATCTGTGCGGAGCCGAAATCTGGGAGGCGCCGCCGCACCCCCTCTAGCGGGCGCGGGGCGAAGCGGTGCGGCGCCGGCAGGAAGGAAATGGGCGGGGAGGGCCTTCGTGCGTCGCCGCGCCGCCGTCCCCTTCTCCCTCTCCAGCCTCGGGGCTGTCCGCGGGGGGACGGCTGCCTTCGGGGGGGACGGGGCAGGGCGGGGTTCGGCTTCTGGCGTGTGACCGGCGGCTCTAGAGCCTCTGCTAACCATGTTCATGCCTTCTTCTTTTTCCTACAGCTCCTGGGCAACGTGCTGGTTATTGTGACCGGTCGCTAGCCACCATGGTGAGCAAGGGCGAGGAGCTGTTCACCGGGGTGGTGCCCATCCTGGTCGAGCTGGACGGCGACGTAAACGGCCACAAGTTCAGCGTGTCCGGCGAGGGCGAGGGCGATGCCACCTACGGCAAGCTGACCCTGAAGTTCATCTGCACCACCGGCAAGCTGCCCGTGCCCTGGCCCACCCTCGTGACCACCCTGACCTACGGCGTGCAGTGCTTCAGCCGCTACCCCGACCACATGAAGCAGCACGACTTCTTCAAGTCCGCCATGCCCGAAGGCTACGTCCAGGAGCGCACCATCTTCTTCAAGGACGACGGCAACTACAAGACCCGCGCCGAGGTGAAGTTCGAGGGCGACACCCTGGTGAACCGCATCGAGCTGAAGGGCATCGACTTCAAGGAGGACGGCAACATCCTGGGGCACAAGCTGGAGTACAACTACAACAGCCACAACGTCTATATCATGGCCGACAAGCAGAAGAACGGCATCAAGGTGAACTTCAAGATCCGCCACAACATCGAGGACGGCAGCGTGCAGCTCGCCGACCACTACCAGCAGAACACCCCCATCGGCGACGGCCCCGTGCTGCTGCCCGACAACCACTACCTGAGCACCCAGTCCGCCCTGAGCAAAGACCCCAACGAGAAGCGCGATCACATGGTCCTGCTGGAGTTCGTGACCGCCGCCGGGATCACTCTCGGCATGGACGAGCTGTACAAGTAAcctgcaggcgccggcgtcctctgagtgctgaaggcttgctgtaggctgtatgctgTTGAGAATCCTGATGGAGCgggtttttgcctccaactgacccGCTCATAGGATTCTCAAcagtgtatgatgcctgttactagcattcacatggaGAGCTCGCTGATCAGCCTCGACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTGGGCTCTATGGAAGCTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCTAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAG
例示性 pITR.CAG.miR2-155_EGFP 序列 (SEQ ID NO: 205) CTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTGACATTGATTATTGACTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGACTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGGTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCGGGAGTCGCTGCGTTGCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCGCGCCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGGCTCTGACTGACCGCGTTACTCCCACAGGTGAGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCTTGGTTTAATGACGGCTCGTTTCTTTTCTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTAAAGGGCTCCGGGAGGGCCCTTTGTGCGGGGGGGAGCGGCTCGGGGGGTGCGTGCGTGTGTGTGTGCGTGGGGAGCGCCGCGTGCGGCCCGCGCTGCCCGGCGGCTGTGAGCGCTGCGGGCGCGGCGCGGGGCTTTGTGCGCTCCGCGTGTGCGCGAGGGGAGCGCGGCCGGGGGCGGTGCCCCGCGGTGCGGGGGGGCTGCGAGGGGAACAAAGGCTGCGTGCGGGGTGTGTGCGTGGGGGGGTGAGCAGGGGGTGTGGGCGCGGCGGTCGGGCTGTAACCCCCCCCTGCACCCCCCTCCCCGAGTTGCTGAGCACGGCCCGGCTTCGGGTGCGGGGCTCCGTGCGGGGCGTGGCGCGGGGCTCGCCGTGCCGGGCGGGGGGTGGCGGCAGGTGGGGGTGCCGGGCGGGGCGGGGCCGCCTCGGGCCGGGGAGGGCTCGGGGGAGGGGCGCGGCGGCCCCCGGAGCGCCGGCGtcctctgagtgctgaaggcttgctgtaggctgtatgctgTTGAGTCTCAGAGATGCCCgggtttttgcctccaactgaCTCGGGATTCTGAGACTCAAcagtgtatgatgcctgttactagcattcacatggaTCTAGAGCCTCTGCTAACCATGTTCATGCCTTCTTCTTTTTCCTACAGCTCCTGGGCAACGTGCTGGTTATTGTGACCGGTCGCTAGCCACCATGGTGAGCAAGGGCGAGGAGCTGTTCACCGGGGTGGTGCCCATCCTGGTCGAGCTGGACGGCGACGTAAACGGCCACAAGTTCAGCGTGTCCGGCGAGGGCGAGGGCGATGCCACCTACGGCAAGCTGACCCTGAAGTTCATCTGCACCACCGGCAAGCTGCCCGTGCCCTGGCCCACCCTCGTGACCACCCTGACCTACGGCGTGCAGTGCTTCAGCCGCTACCCCGACCACATGAAGCAGCACGACTTCTTCAAGTCCGCCATGCCCGAAGGCTACGTCCAGGAGCGCACCATCTTCTTCAAGGACGACGGCAACTACAAGACCCGCGCCGAGGTGAAGTTCGAGGGCGACACCCTGGTGAACCGCATCGAGCTGAAGGGCATCGACTTCAAGGAGGACGGCAACATCCTGGGGCACAAGCTGGAGTACAACTACAACAGCCACAACGTCTATATCATGGCCGACAAGCAGAAGAACGGCATCAAGGTGAACTTCAAGATCCGCCACAACATCGAGGACGGCAGCGTGCAGCTCGCCGACCACTACCAGCAGAACACCCCCATCGGCGACGGCCCCGTGCTGCTGCCCGACAACCACTACCTGAGCACCCAGTCCGCCCTGAGCAAAGACCCCAACGAGAAGCGCGATCACATGGTCCTGCTGGAGTTCGTGACCGCCGCCGGGATCACTCTCGGCATGGACGAGCTGTACAAGTAAcctgcaggcgccggcgtcctctgagtgctgaaggcttgctgtaggctgtatgctgTTGAGTCTCAGAGATGCCCgggtttttgcctccaactgaCTCGGGATTCTGAGACTCAAcagtgtatgatgcctgttactagcattcacatggaGAGCTCGCTGATCAGCCTCGACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTGGGCTCTATGGAAGCTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCTAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAG
例示性 pITR.CAG.miR2v2-155_EGFP 序列 (SEQ ID NO: 206) CTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTGACATTGATTATTGACTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGACTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGGTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCGGGAGTCGCTGCGTTGCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCGCGCCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGGCTCTGACTGACCGCGTTACTCCCACAGGTGAGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCTTGGTTTAATGACGGCTCGTTTCTTTTCTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTAAAGGGCTCCGGGAGGGCCCTTTGTGCGGGGGGGAGCGGCTCGGGGGGTGCGTGCGTGTGTGTGTGCGTGGGGAGCGCCGCGTGCGGCCCGCGCTGCCCGGCGGCTGTGAGCGCTGCGGGCGCGGCGCGGGGCTTTGTGCGCTCCGCGTGTGCGCGAGGGGAGCGCGGCCGGGGGCGGTGCCCCGCGGTGCGGGGGGGCTGCGAGGGGAACAAAGGCTGCGTGCGGGGTGTGTGCGTGGGGGGGTGAGCAGGGGGTGTGGGCGCGGCGGTCGGGCTGTAACCCCCCCCTGCACCCCCCTCCCCGAGTTGCTGAGCACGGCCCGGCTTCGGGTGCGGGGCTCCGTGCGGGGCGTGGCGCGGGGCTCGCCGTGCCGGGCGGGGGGTGGCGGCAGGTGGGGGTGCCGGGCGGGGCGGGGCCGCCTCGGGCCGGGGAGGGCTCGGGGGAGGGGCGCGGCGGCCCCCGGAGCGCCGGCGtcctctgagtgctgaaggcttgctgtaggctgtatgctgTTGAGTCTCAGAGATGCCCgggtttttgcctccaactgaCTCGGGATTCTGAGATTCAAcagtgtatgatgcctgttactagcattcacatggaTCTAGAGCCTCTGCTAACCATGTTCATGCCTTCTTCTTTTTCCTACAGCTCCTGGGCAACGTGCTGGTTATTGTGACCGGTCGCTAGCCACCATGGTGAGCAAGGGCGAGGAGCTGTTCACCGGGGTGGTGCCCATCCTGGTCGAGCTGGACGGCGACGTAAACGGCCACAAGTTCAGCGTGTCCGGCGAGGGCGAGGGCGATGCCACCTACGGCAAGCTGACCCTGAAGTTCATCTGCACCACCGGCAAGCTGCCCGTGCCCTGGCCCACCCTCGTGACCACCCTGACCTACGGCGTGCAGTGCTTCAGCCGCTACCCCGACCACATGAAGCAGCACGACTTCTTCAAGTCCGCCATGCCCGAAGGCTACGTCCAGGAGCGCACCATCTTCTTCAAGGACGACGGCAACTACAAGACCCGCGCCGAGGTGAAGTTCGAGGGCGACACCCTGGTGAACCGCATCGAGCTGAAGGGCATCGACTTCAAGGAGGACGGCAACATCCTGGGGCACAAGCTGGAGTACAACTACAACAGCCACAACGTCTATATCATGGCCGACAAGCAGAAGAACGGCATCAAGGTGAACTTCAAGATCCGCCACAACATCGAGGACGGCAGCGTGCAGCTCGCCGACCACTACCAGCAGAACACCCCCATCGGCGACGGCCCCGTGCTGCTGCCCGACAACCACTACCTGAGCACCCAGTCCGCCCTGAGCAAAGACCCCAACGAGAAGCGCGATCACATGGTCCTGCTGGAGTTCGTGACCGCCGCCGGGATCACTCTCGGCATGGACGAGCTGTACAAGTAAcctgcaggcgccggcgtcctctgagtgctgaaggcttgctgtaggctgtatgctgTTGAGTCTCAGAGATGCCCgggtttttgcctccaactgaCTCGGGATTCTGAGATTCAAcagtgtatgatgcctgttactagcattcacatggaGAGCTCGCTGATCAGCCTCGACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTGGGCTCTATGGAAGCTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCTAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAG
例示性 pITR.CAG.miR2v3-155_EGFP 序列 (SEQ ID NO: 207) CTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTGACATTGATTATTGACTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGACTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGGTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCGGGAGTCGCTGCGTTGCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCGCGCCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGGCTCTGACTGACCGCGTTACTCCCACAGGTGAGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCTTGGTTTAATGACGGCTCGTTTCTTTTCTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTAAAGGGCTCCGGGAGGGCCCTTTGTGCGGGGGGGAGCGGCTCGGGGGGTGCGTGCGTGTGTGTGTGCGTGGGGAGCGCCGCGTGCGGCCCGCGCTGCCCGGCGGCTGTGAGCGCTGCGGGCGCGGCGCGGGGCTTTGTGCGCTCCGCGTGTGCGCGAGGGGAGCGCGGCCGGGGGCGGTGCCCCGCGGTGCGGGGGGGCTGCGAGGGGAACAAAGGCTGCGTGCGGGGTGTGTGCGTGGGGGGGTGAGCAGGGGGTGTGGGCGCGGCGGTCGGGCTGTAACCCCCCCCTGCACCCCCCTCCCCGAGTTGCTGAGCACGGCCCGGCTTCGGGTGCGGGGCTCCGTGCGGGGCGTGGCGCGGGGCTCGCCGTGCCGGGCGGGGGGTGGCGGCAGGTGGGGGTGCCGGGCGGGGCGGGGCCGCCTCGGGCCGGGGAGGGCTCGGGGGAGGGGCGCGGCGGCCCCCGGAGCGCCGGCGtcctctgagtgctgaaggcttgctgtaggctgtatgctgTTGAGTCTCAGAGATGCCCgggtttttgcctccaactgaCTCGGGATCCTGAGATTCAAcagtgtatgatgcctgttactagcattcacatggaTCTAGAGCCTCTGCTAACCATGTTCATGCCTTCTTCTTTTTCCTACAGCTCCTGGGCAACGTGCTGGTTATTGTGACCGGTCGCTAGCCACCATGGTGAGCAAGGGCGAGGAGCTGTTCACCGGGGTGGTGCCCATCCTGGTCGAGCTGGACGGCGACGTAAACGGCCACAAGTTCAGCGTGTCCGGCGAGGGCGAGGGCGATGCCACCTACGGCAAGCTGACCCTGAAGTTCATCTGCACCACCGGCAAGCTGCCCGTGCCCTGGCCCACCCTCGTGACCACCCTGACCTACGGCGTGCAGTGCTTCAGCCGCTACCCCGACCACATGAAGCAGCACGACTTCTTCAAGTCCGCCATGCCCGAAGGCTACGTCCAGGAGCGCACCATCTTCTTCAAGGACGACGGCAACTACAAGACCCGCGCCGAGGTGAAGTTCGAGGGCGACACCCTGGTGAACCGCATCGAGCTGAAGGGCATCGACTTCAAGGAGGACGGCAACATCCTGGGGCACAAGCTGGAGTACAACTACAACAGCCACAACGTCTATATCATGGCCGACAAGCAGAAGAACGGCATCAAGGTGAACTTCAAGATCCGCCACAACATCGAGGACGGCAGCGTGCAGCTCGCCGACCACTACCAGCAGAACACCCCCATCGGCGACGGCCCCGTGCTGCTGCCCGACAACCACTACCTGAGCACCCAGTCCGCCCTGAGCAAAGACCCCAACGAGAAGCGCGATCACATGGTCCTGCTGGAGTTCGTGACCGCCGCCGGGATCACTCTCGGCATGGACGAGCTGTACAAGTAAcctgcaggcgccggcgtcctctgagtgctgaaggcttgctgtaggctgtatgctgTTGAGTCTCAGAGATGCCCgggtttttgcctccaactgaCTCGGGATCCTGAGATTCAAcagtgtatgatgcctgttactagcattcacatggaGAGCTCGCTGATCAGCCTCGACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTGGGCTCTATGGAAGCTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCTAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAG
例示性 pITR.CAG.miR2v4-155_EGFP 序列 (SEQ ID NO: 208) CTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTGACATTGATTATTGACTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGACTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGGTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCGGGAGTCGCTGCGTTGCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCGCGCCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGGCTCTGACTGACCGCGTTACTCCCACAGGTGAGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCTTGGTTTAATGACGGCTCGTTTCTTTTCTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTAAAGGGCTCCGGGAGGGCCCTTTGTGCGGGGGGGAGCGGCTCGGGGGGTGCGTGCGTGTGTGTGTGCGTGGGGAGCGCCGCGTGCGGCCCGCGCTGCCCGGCGGCTGTGAGCGCTGCGGGCGCGGCGCGGGGCTTTGTGCGCTCCGCGTGTGCGCGAGGGGAGCGCGGCCGGGGGCGGTGCCCCGCGGTGCGGGGGGGCTGCGAGGGGAACAAAGGCTGCGTGCGGGGTGTGTGCGTGGGGGGGTGAGCAGGGGGTGTGGGCGCGGCGGTCGGGCTGTAACCCCCCCCTGCACCCCCCTCCCCGAGTTGCTGAGCACGGCCCGGCTTCGGGTGCGGGGCTCCGTGCGGGGCGTGGCGCGGGGCTCGCCGTGCCGGGCGGGGGGTGGCGGCAGGTGGGGGTGCCGGGCGGGGCGGGGCCGCCTCGGGCCGGGGAGGGCTCGGGGGAGGGGCGCGGCGGCCCCCGGAGCGCCGGCGtcctctgagtgctgaaggcttgctgtaggctgtatgctgTTGAGTCTCAGAGATGCCCggaagtttgcctccaactctTTCGGGATCCTGAGATTCAAcagtgtatgatgcctgttactagcattcacatggaTCTAGAGCCTCTGCTAACCATGTTCATGCCTTCTTCTTTTTCCTACAGCTCCTGGGCAACGTGCTGGTTATTGTGACCGGTCGCTAGCCACCATGGTGAGCAAGGGCGAGGAGCTGTTCACCGGGGTGGTGCCCATCCTGGTCGAGCTGGACGGCGACGTAAACGGCCACAAGTTCAGCGTGTCCGGCGAGGGCGAGGGCGATGCCACCTACGGCAAGCTGACCCTGAAGTTCATCTGCACCACCGGCAAGCTGCCCGTGCCCTGGCCCACCCTCGTGACCACCCTGACCTACGGCGTGCAGTGCTTCAGCCGCTACCCCGACCACATGAAGCAGCACGACTTCTTCAAGTCCGCCATGCCCGAAGGCTACGTCCAGGAGCGCACCATCTTCTTCAAGGACGACGGCAACTACAAGACCCGCGCCGAGGTGAAGTTCGAGGGCGACACCCTGGTGAACCGCATCGAGCTGAAGGGCATCGACTTCAAGGAGGACGGCAACATCCTGGGGCACAAGCTGGAGTACAACTACAACAGCCACAACGTCTATATCATGGCCGACAAGCAGAAGAACGGCATCAAGGTGAACTTCAAGATCCGCCACAACATCGAGGACGGCAGCGTGCAGCTCGCCGACCACTACCAGCAGAACACCCCCATCGGCGACGGCCCCGTGCTGCTGCCCGACAACCACTACCTGAGCACCCAGTCCGCCCTGAGCAAAGACCCCAACGAGAAGCGCGATCACATGGTCCTGCTGGAGTTCGTGACCGCCGCCGGGATCACTCTCGGCATGGACGAGCTGTACAAGTAAcctgcaggcgccggcgtcctctgagtgctgaaggcttgctgtaggctgtatgctgTTGAGTCTCAGAGATGCCCggaagtttgcctccaactctTTCGGGATCCTGAGATTCAAcagtgtatgatgcctgttactagcattcacatggaGAGCTCGCTGATCAGCCTCGACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTGGGCTCTATGGAAGCTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCTAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAG
例示性 pITR.CAG.miR4-155_EGFP 序列 (SEQ ID NO: 209) CTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTGACATTGATTATTGACTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGACTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGGTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCGGGAGTCGCTGCGTTGCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCGCGCCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGGCTCTGACTGACCGCGTTACTCCCACAGGTGAGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCTTGGTTTAATGACGGCTCGTTTCTTTTCTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTAAAGGGCTCCGGGAGGGCCCTTTGTGCGGGGGGGAGCGGCTCGGGGGGTGCGTGCGTGTGTGTGTGCGTGGGGAGCGCCGCGTGCGGCCCGCGCTGCCCGGCGGCTGTGAGCGCTGCGGGCGCGGCGCGGGGCTTTGTGCGCTCCGCGTGTGCGCGAGGGGAGCGCGGCCGGGGGCGGTGCCCCGCGGTGCGGGGGGGCTGCGAGGGGAACAAAGGCTGCGTGCGGGGTGTGTGCGTGGGGGGGTGAGCAGGGGGTGTGGGCGCGGCGGTCGGGCTGTAACCCCCCCCTGCACCCCCCTCCCCGAGTTGCTGAGCACGGCCCGGCTTCGGGTGCGGGGCTCCGTGCGGGGCGTGGCGCGGGGCTCGCCGTGCCGGGCGGGGGGTGGCGGCAGGTGGGGGTGCCGGGCGGGGCGGGGCCGCCTCGGGCCGGGGAGGGCTCGGGGGAGGGGCGCGGCGGCCCCCGGAGCGCCGGCGtcctctgagtgctgaaggcttgctgtaggctgtatgctgTTCTCGAAGTGCTTCTGCCgggtttttgcctccaactgacTcGGCGAATACTTCGAGAAcagtgtatgatgcctgttactagcattcacatggaTCTAGAGCCTCTGCTAACCATGTTCATGCCTTCTTCTTTTTCCTACAGCTCCTGGGCAACGTGCTGGTTATTGTGACCGGTCGCTAGCCACCATGGTGAGCAAGGGCGAGGAGCTGTTCACCGGGGTGGTGCCCATCCTGGTCGAGCTGGACGGCGACGTAAACGGCCACAAGTTCAGCGTGTCCGGCGAGGGCGAGGGCGATGCCACCTACGGCAAGCTGACCCTGAAGTTCATCTGCACCACCGGCAAGCTGCCCGTGCCCTGGCCCACCCTCGTGACCACCCTGACCTACGGCGTGCAGTGCTTCAGCCGCTACCCCGACCACATGAAGCAGCACGACTTCTTCAAGTCCGCCATGCCCGAAGGCTACGTCCAGGAGCGCACCATCTTCTTCAAGGACGACGGCAACTACAAGACCCGCGCCGAGGTGAAGTTCGAGGGCGACACCCTGGTGAACCGCATCGAGCTGAAGGGCATCGACTTCAAGGAGGACGGCAACATCCTGGGGCACAAGCTGGAGTACAACTACAACAGCCACAACGTCTATATCATGGCCGACAAGCAGAAGAACGGCATCAAGGTGAACTTCAAGATCCGCCACAACATCGAGGACGGCAGCGTGCAGCTCGCCGACCACTACCAGCAGAACACCCCCATCGGCGACGGCCCCGTGCTGCTGCCCGACAACCACTACCTGAGCACCCAGTCCGCCCTGAGCAAAGACCCCAACGAGAAGCGCGATCACATGGTCCTGCTGGAGTTCGTGACCGCCGCCGGGATCACTCTCGGCATGGACGAGCTGTACAAGTAAcctgcaggcgccggcgtcctctgagtgctgaaggcttgctgtaggctgtatgctgTTCTCGAAGTGCTTCTGCCgggtttttgcctccaactgacTcGGCGAATACTTCGAGAAcagtgtatgatgcctgttactagcattcacatggaGAGCTCGCTGATCAGCCTCGACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTGGGCTCTATGGAAGCTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCTAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAG
例示性 pITR.CAG.miR5-155_EGFP 序列 (SEQ ID NO: 210) CTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTGACATTGATTATTGACTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGACTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGGTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCGGGAGTCGCTGCGTTGCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCGCGCCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGGCTCTGACTGACCGCGTTACTCCCACAGGTGAGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCTTGGTTTAATGACGGCTCGTTTCTTTTCTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTAAAGGGCTCCGGGAGGGCCCTTTGTGCGGGGGGGAGCGGCTCGGGGGGTGCGTGCGTGTGTGTGTGCGTGGGGAGCGCCGCGTGCGGCCCGCGCTGCCCGGCGGCTGTGAGCGCTGCGGGCGCGGCGCGGGGCTTTGTGCGCTCCGCGTGTGCGCGAGGGGAGCGCGGCCGGGGGCGGTGCCCCGCGGTGCGGGGGGGCTGCGAGGGGAACAAAGGCTGCGTGCGGGGTGTGTGCGTGGGGGGGTGAGCAGGGGGTGTGGGCGCGGCGGTCGGGCTGTAACCCCCCCCTGCACCCCCCTCCCCGAGTTGCTGAGCACGGCCCGGCTTCGGGTGCGGGGCTCCGTGCGGGGCGTGGCGCGGGGCTCGCCGTGCCGGGCGGGGGGTGGCGGCAGGTGGGGGTGCCGGGCGGGGCGGGGCCGCCTCGGGCCGGGGAGGGCTCGGGGGAGGGGCGCGGCGGCCCCCGGAGCGCCGGCGtcctctgagtgctgaaggcttgctgtaggctgtatgctgTTCTCCACCTTGACCACGCgtgtttttgcctccaactgacaTGTGGGTAAGGTGGAGAACAgtgtatgatgcctgttactagcattcacatggaTCTAGAGCCTCTGCTAACCATGTTCATGCCTTCTTCTTTTTCCTACAGCTCCTGGGCAACGTGCTGGTTATTGTGACCGGTCGCTAGCCACCATGGTGAGCAAGGGCGAGGAGCTGTTCACCGGGGTGGTGCCCATCCTGGTCGAGCTGGACGGCGACGTAAACGGCCACAAGTTCAGCGTGTCCGGCGAGGGCGAGGGCGATGCCACCTACGGCAAGCTGACCCTGAAGTTCATCTGCACCACCGGCAAGCTGCCCGTGCCCTGGCCCACCCTCGTGACCACCCTGACCTACGGCGTGCAGTGCTTCAGCCGCTACCCCGACCACATGAAGCAGCACGACTTCTTCAAGTCCGCCATGCCCGAAGGCTACGTCCAGGAGCGCACCATCTTCTTCAAGGACGACGGCAACTACAAGACCCGCGCCGAGGTGAAGTTCGAGGGCGACACCCTGGTGAACCGCATCGAGCTGAAGGGCATCGACTTCAAGGAGGACGGCAACATCCTGGGGCACAAGCTGGAGTACAACTACAACAGCCACAACGTCTATATCATGGCCGACAAGCAGAAGAACGGCATCAAGGTGAACTTCAAGATCCGCCACAACATCGAGGACGGCAGCGTGCAGCTCGCCGACCACTACCAGCAGAACACCCCCATCGGCGACGGCCCCGTGCTGCTGCCCGACAACCACTACCTGAGCACCCAGTCCGCCCTGAGCAAAGACCCCAACGAGAAGCGCGATCACATGGTCCTGCTGGAGTTCGTGACCGCCGCCGGGATCACTCTCGGCATGGACGAGCTGTACAAGTAAcctgcaggcgccggcgtcctctgagtgctgaaggcttgctgtaggctgtatgctgTTCTCCACCTTGACCACGCgtgtttttgcctccaactgacaTGTGGGTAAGGTGGAGAACAgtgtatgatgcctgttactagcattcacatggaGAGCTCGCTGATCAGCCTCGACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTGGGCTCTATGGAAGCTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCTAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAG
例示性 pITR.CAG.miR6-155_EGFP 序列 (SEQ ID NO: 211) CTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTGACATTGATTATTGACTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGACTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGGTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCGGGAGTCGCTGCGTTGCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCGCGCCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGGCTCTGACTGACCGCGTTACTCCCACAGGTGAGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCTTGGTTTAATGACGGCTCGTTTCTTTTCTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTAAAGGGCTCCGGGAGGGCCCTTTGTGCGGGGGGGAGCGGCTCGGGGGGTGCGTGCGTGTGTGTGTGCGTGGGGAGCGCCGCGTGCGGCCCGCGCTGCCCGGCGGCTGTGAGCGCTGCGGGCGCGGCGCGGGGCTTTGTGCGCTCCGCGTGTGCGCGAGGGGAGCGCGGCCGGGGGCGGTGCCCCGCGGTGCGGGGGGGCTGCGAGGGGAACAAAGGCTGCGTGCGGGGTGTGTGCGTGGGGGGGTGAGCAGGGGGTGTGGGCGCGGCGGTCGGGCTGTAACCCCCCCCTGCACCCCCCTCCCCGAGTTGCTGAGCACGGCCCGGCTTCGGGTGCGGGGCTCCGTGCGGGGCGTGGCGCGGGGCTCGCCGTGCCGGGCGGGGGGTGGCGGCAGGTGGGGGTGCCGGGCGGGGCGGGGCCGCCTCGGGCCGGGGAGGGCTCGGGGGAGGGGCGCGGCGGCCCCCGGAGCGCCGGCGtcctctgagtgctgaaggcttgctgtaggctgtatgctgATACTGTCATAGTAGTACCaggtttttgcctccaactgacctGGTCTATATGACAGTATCAgtgtatgatgcctgttactagcattcacatggaTCTAGAGCCTCTGCTAACCATGTTCATGCCTTCTTCTTTTTCCTACAGCTCCTGGGCAACGTGCTGGTTATTGTGACCGGTCGCTAGCCACCATGGTGAGCAAGGGCGAGGAGCTGTTCACCGGGGTGGTGCCCATCCTGGTCGAGCTGGACGGCGACGTAAACGGCCACAAGTTCAGCGTGTCCGGCGAGGGCGAGGGCGATGCCACCTACGGCAAGCTGACCCTGAAGTTCATCTGCACCACCGGCAAGCTGCCCGTGCCCTGGCCCACCCTCGTGACCACCCTGACCTACGGCGTGCAGTGCTTCAGCCGCTACCCCGACCACATGAAGCAGCACGACTTCTTCAAGTCCGCCATGCCCGAAGGCTACGTCCAGGAGCGCACCATCTTCTTCAAGGACGACGGCAACTACAAGACCCGCGCCGAGGTGAAGTTCGAGGGCGACACCCTGGTGAACCGCATCGAGCTGAAGGGCATCGACTTCAAGGAGGACGGCAACATCCTGGGGCACAAGCTGGAGTACAACTACAACAGCCACAACGTCTATATCATGGCCGACAAGCAGAAGAACGGCATCAAGGTGAACTTCAAGATCCGCCACAACATCGAGGACGGCAGCGTGCAGCTCGCCGACCACTACCAGCAGAACACCCCCATCGGCGACGGCCCCGTGCTGCTGCCCGACAACCACTACCTGAGCACCCAGTCCGCCCTGAGCAAAGACCCCAACGAGAAGCGCGATCACATGGTCCTGCTGGAGTTCGTGACCGCCGCCGGGATCACTCTCGGCATGGACGAGCTGTACAAGTAAcctgcaggcgccggcgtcctctgagtgctgaaggcttgctgtaggctgtatgctgATACTGTCATAGTAGTACCaggtttttgcctccaactgacctGGTCTATATGACAGTATCAgtgtatgatgcctgttactagcattcacatggaGAGCTCGCTGATCAGCCTCGACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTGGGCTCTATGGAAGCTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCTAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAG
例示性 pITR.CAG.miR7-155_EGFP 序列 (SEQ ID NO: 212) CTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTGACATTGATTATTGACTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGACTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGGTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCGGGAGTCGCTGCGTTGCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCGCGCCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGGCTCTGACTGACCGCGTTACTCCCACAGGTGAGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCTTGGTTTAATGACGGCTCGTTTCTTTTCTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTAAAGGGCTCCGGGAGGGCCCTTTGTGCGGGGGGGAGCGGCTCGGGGGGTGCGTGCGTGTGTGTGTGCGTGGGGAGCGCCGCGTGCGGCCCGCGCTGCCCGGCGGCTGTGAGCGCTGCGGGCGCGGCGCGGGGCTTTGTGCGCTCCGCGTGTGCGCGAGGGGAGCGCGGCCGGGGGCGGTGCCCCGCGGTGCGGGGGGGCTGCGAGGGGAACAAAGGCTGCGTGCGGGGTGTGTGCGTGGGGGGGTGAGCAGGGGGTGTGGGCGCGGCGGTCGGGCTGTAACCCCCCCCTGCACCCCCCTCCCCGAGTTGCTGAGCACGGCCCGGCTTCGGGTGCGGGGCTCCGTGCGGGGCGTGGCGCGGGGCTCGCCGTGCCGGGCGGGGGGTGGCGGCAGGTGGGGGTGCCGGGCGGGGCGGGGCCGCCTCGGGCCGGGGAGGGCTCGGGGGAGGGGCGCGGCGGCCCCCGGAGCGCCGGCGtcctctgagtgctgaaggcttgctgtaggctgtatgctgTAGTCGGAGGTGATGTCGGgggtttttgcctccaactgacTcCTGCATACCTTCGATTACAgtgtatgatgcctgttactagcattcacatggaTCTAGAGCCTCTGCTAACCATGTTCATGCCTTCTTCTTTTTCCTACAGCTCCTGGGCAACGTGCTGGTTATTGTGACCGGTCGCTAGCCACCATGGTGAGCAAGGGCGAGGAGCTGTTCACCGGGGTGGTGCCCATCCTGGTCGAGCTGGACGGCGACGTAAACGGCCACAAGTTCAGCGTGTCCGGCGAGGGCGAGGGCGATGCCACCTACGGCAAGCTGACCCTGAAGTTCATCTGCACCACCGGCAAGCTGCCCGTGCCCTGGCCCACCCTCGTGACCACCCTGACCTACGGCGTGCAGTGCTTCAGCCGCTACCCCGACCACATGAAGCAGCACGACTTCTTCAAGTCCGCCATGCCCGAAGGCTACGTCCAGGAGCGCACCATCTTCTTCAAGGACGACGGCAACTACAAGACCCGCGCCGAGGTGAAGTTCGAGGGCGACACCCTGGTGAACCGCATCGAGCTGAAGGGCATCGACTTCAAGGAGGACGGCAACATCCTGGGGCACAAGCTGGAGTACAACTACAACAGCCACAACGTCTATATCATGGCCGACAAGCAGAAGAACGGCATCAAGGTGAACTTCAAGATCCGCCACAACATCGAGGACGGCAGCGTGCAGCTCGCCGACCACTACCAGCAGAACACCCCCATCGGCGACGGCCCCGTGCTGCTGCCCGACAACCACTACCTGAGCACCCAGTCCGCCCTGAGCAAAGACCCCAACGAGAAGCGCGATCACATGGTCCTGCTGGAGTTCGTGACCGCCGCCGGGATCACTCTCGGCATGGACGAGCTGTACAAGTAAcctgcaggcgccggcgtcctctgagtgctgaaggcttgctgtaggctgtatgctgTAGTCGGAGGTGATGTCGGgggtttttgcctccaactgacTcCTGCATACCTTCGATTACAgtgtatgatgcctgttactagcattcacatggaGAGCTCGCTGATCAGCCTCGACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTGGGCTCTATGGAAGCTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCTAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAG
例示性 pITR.CAG.miR1-16_EGFP 序列 (SEQ ID NO: 213) CTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTGACATTGATTATTGACTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGACTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGGTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCGGGAGTCGCTGCGTTGCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCGCGCCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGGCTCTGACTGACCGCGTTACTCCCACAGGTGAGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCTTGGTTTAATGACGGCTCGTTTCTTTTCTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTAAAGGGCTCCGGGAGGGCCCTTTGTGCGGGGGGGAGCGGCTCGGGGGGTGCGTGCGTGTGTGTGTGCGTGGGGAGCGCCGCGTGCGGCCCGCGCTGCCCGGCGGCTGTGAGCGCTGCGGGCGCGGCGCGGGGCTTTGTGCGCTCCGCGTGTGCGCGAGGGGAGCGCGGCCGGGGGCGGTGCCCCGCGGTGCGGGGGGGCTGCGAGGGGAACAAAGGCTGCGTGCGGGGTGTGTGCGTGGGGGGGTGAGCAGGGGGTGTGGGCGCGGCGGTCGGGCTGTAACCCCCCCCTGCACCCCCCTCCCCGAGTTGCTGAGCACGGCCCGGCTTCGGGTGCGGGGCTCCGTGCGGGGCGTGGCGCGGGGCTCGCCGTGCCGGGCGGGGGGTGGCGGCAGGTGGGGGTGCCGGGCGGGGCGGGGCCGCCTCGGGCCGGGGAGGGCTCGGGGGAGGGGCGCGGCGGCCCCCGGAGCGCCGGCGCATAGCTCTTATGATAGCAATGTCAGCAGTGCCTTTGAGAATCCTGATGGAGCgggTTAAGATTCTAAAATTATCAcGCTCCATGAGTGATTCTCAGAAGTAAGGTTGACCATACTCTACAGTTGTGTCTAGAGCCTCTGCTAACCATGTTCATGCCTTCTTCTTTTTCCTACAGCTCCTGGGCAACGTGCTGGTTATTGTGACCGGTCGCTAGCCACCATGGTGAGCAAGGGCGAGGAGCTGTTCACCGGGGTGGTGCCCATCCTGGTCGAGCTGGACGGCGACGTAAACGGCCACAAGTTCAGCGTGTCCGGCGAGGGCGAGGGCGATGCCACCTACGGCAAGCTGACCCTGAAGTTCATCTGCACCACCGGCAAGCTGCCCGTGCCCTGGCCCACCCTCGTGACCACCCTGACCTACGGCGTGCAGTGCTTCAGCCGCTACCCCGACCACATGAAGCAGCACGACTTCTTCAAGTCCGCCATGCCCGAAGGCTACGTCCAGGAGCGCACCATCTTCTTCAAGGACGACGGCAACTACAAGACCCGCGCCGAGGTGAAGTTCGAGGGCGACACCCTGGTGAACCGCATCGAGCTGAAGGGCATCGACTTCAAGGAGGACGGCAACATCCTGGGGCACAAGCTGGAGTACAACTACAACAGCCACAACGTCTATATCATGGCCGACAAGCAGAAGAACGGCATCAAGGTGAACTTCAAGATCCGCCACAACATCGAGGACGGCAGCGTGCAGCTCGCCGACCACTACCAGCAGAACACCCCCATCGGCGACGGCCCCGTGCTGCTGCCCGACAACCACTACCTGAGCACCCAGTCCGCCCTGAGCAAAGACCCCAACGAGAAGCGCGATCACATGGTCCTGCTGGAGTTCGTGACCGCCGCCGGGATCACTCTCGGCATGGACGAGCTGTACAAGTAAcctgcaggcgccggcgCATAGCTCTTATGATAGCAATGTCAGCAGTGCCTTTGAGAATCCTGATGGAGCgggTTAAGATTCTAAAATTATCAcGCTCCATGAGTGATTCTCAGAAGTAAGGTTGACCATACTCTACAGTTGTGGAGCTCGCTGATCAGCCTCGACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTGGGCTCTATGGAAGCTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCTAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAG
例示性 pITR.CAG.miR1-26_EGFP 序列 (SEQ ID NO: 214) CTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTGACATTGATTATTGACTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGACTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGGTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCGGGAGTCGCTGCGTTGCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCGCGCCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGGCTCTGACTGACCGCGTTACTCCCACAGGTGAGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCTTGGTTTAATGACGGCTCGTTTCTTTTCTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTAAAGGGCTCCGGGAGGGCCCTTTGTGCGGGGGGGAGCGGCTCGGGGGGTGCGTGCGTGTGTGTGTGCGTGGGGAGCGCCGCGTGCGGCCCGCGCTGCCCGGCGGCTGTGAGCGCTGCGGGCGCGGCGCGGGGCTTTGTGCGCTCCGCGTGTGCGCGAGGGGAGCGCGGCCGGGGGCGGTGCCCCGCGGTGCGGGGGGGCTGCGAGGGGAACAAAGGCTGCGTGCGGGGTGTGTGCGTGGGGGGGTGAGCAGGGGGTGTGGGCGCGGCGGTCGGGCTGTAACCCCCCCCTGCACCCCCCTCCCCGAGTTGCTGAGCACGGCCCGGCTTCGGGTGCGGGGCTCCGTGCGGGGCGTGGCGCGGGGCTCGCCGTGCCGGGCGGGGGGTGGCGGCAGGTGGGGGTGCCGGGCGGGGCGGGGCCGCCTCGGGCCGGGGAGGGCTCGGGGGAGGGGCGCGGCGGCCCCCGGAGCGCCGGCGGAGCAGGAGGACCAAGGCCCTGGCGAAGGCCGTGGCCTCGTTGAGAATCCTGATGGAGCggTGTGCAGGTCCCAATGGccGCTCCATAAGGATTCTCCACGGGGACGCGGGCCTGGACGCCGGCATCCGGGCTCAGGACCCCCCTCTCTAGAGCCTCTGCTAACCATGTTCATGCCTTCTTCTTTTTCCTACAGCTCCTGGGCAACGTGCTGGTTATTGTGACCGGTCGCTAGCCACCATGGTGAGCAAGGGCGAGGAGCTGTTCACCGGGGTGGTGCCCATCCTGGTCGAGCTGGACGGCGACGTAAACGGCCACAAGTTCAGCGTGTCCGGCGAGGGCGAGGGCGATGCCACCTACGGCAAGCTGACCCTGAAGTTCATCTGCACCACCGGCAAGCTGCCCGTGCCCTGGCCCACCCTCGTGACCACCCTGACCTACGGCGTGCAGTGCTTCAGCCGCTACCCCGACCACATGAAGCAGCACGACTTCTTCAAGTCCGCCATGCCCGAAGGCTACGTCCAGGAGCGCACCATCTTCTTCAAGGACGACGGCAACTACAAGACCCGCGCCGAGGTGAAGTTCGAGGGCGACACCCTGGTGAACCGCATCGAGCTGAAGGGCATCGACTTCAAGGAGGACGGCAACATCCTGGGGCACAAGCTGGAGTACAACTACAACAGCCACAACGTCTATATCATGGCCGACAAGCAGAAGAACGGCATCAAGGTGAACTTCAAGATCCGCCACAACATCGAGGACGGCAGCGTGCAGCTCGCCGACCACTACCAGCAGAACACCCCCATCGGCGACGGCCCCGTGCTGCTGCCCGACAACCACTACCTGAGCACCCAGTCCGCCCTGAGCAAAGACCCCAACGAGAAGCGCGATCACATGGTCCTGCTGGAGTTCGTGACCGCCGCCGGGATCACTCTCGGCATGGACGAGCTGTACAAGTAAcctgcaggcgccggcgGAGCAGGAGGACCAAGGCCCTGGCGAAGGCCGTGGCCTCGTTGAGAATCCTGATGGAGCggTGTGCAGGTCCCAATGGccGCTCCATAAGGATTCTCCACGGGGACGCGGGCCTGGACGCCGGCATCCGGGCTCAGGACCCCCCTCGAGCTCGCTGATCAGCCTCGACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTGGGCTCTATGGAAGCTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCTAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAG
例示性 pITR.CAG.miR1-96_EGFP 序列 (SEQ ID NO: 215) CTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTGACATTGATTATTGACTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGACTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGGTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCGGGAGTCGCTGCGTTGCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCGCGCCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGGCTCTGACTGACCGCGTTACTCCCACAGGTGAGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCTTGGTTTAATGACGGCTCGTTTCTTTTCTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTAAAGGGCTCCGGGAGGGCCCTTTGTGCGGGGGGGAGCGGCTCGGGGGGTGCGTGCGTGTGTGTGTGCGTGGGGAGCGCCGCGTGCGGCCCGCGCTGCCCGGCGGCTGTGAGCGCTGCGGGCGCGGCGCGGGGCTTTGTGCGCTCCGCGTGTGCGCGAGGGGAGCGCGGCCGGGGGCGGTGCCCCGCGGTGCGGGGGGGCTGCGAGGGGAACAAAGGCTGCGTGCGGGGTGTGTGCGTGGGGGGGTGAGCAGGGGGTGTGGGCGCGGCGGTCGGGCTGTAACCCCCCCCTGCACCCCCCTCCCCGAGTTGCTGAGCACGGCCCGGCTTCGGGTGCGGGGCTCCGTGCGGGGCGTGGCGCGGGGCTCGCCGTGCCGGGCGGGGGGTGGCGGCAGGTGGGGGTGCCGGGCGGGGCGGGGCCGCCTCGGGCCGGGGAGGGCTCGGGGGAGGGGCGCGGCGGCCCCCGGAGCGCCGGCGGTGTCCCCAGAGAGCCCGCACCAGTGCCATCTGCTTGGCCGATTTGAGAATCCTGATGGAGCggCTTGTGTCTCTCCGCTCTGAGccGGGCCATCAGATTCTCATATGGGAAAAGCAGGACCCGCAGCTGCGTCCGCCTCCCCTGCATTCTAGAGCCTCTGCTAACCATGTTCATGCCTTCTTCTTTTTCCTACAGCTCCTGGGCAACGTGCTGGTTATTGTGACCGGTCGCTAGCCACCATGGTGAGCAAGGGCGAGGAGCTGTTCACCGGGGTGGTGCCCATCCTGGTCGAGCTGGACGGCGACGTAAACGGCCACAAGTTCAGCGTGTCCGGCGAGGGCGAGGGCGATGCCACCTACGGCAAGCTGACCCTGAAGTTCATCTGCACCACCGGCAAGCTGCCCGTGCCCTGGCCCACCCTCGTGACCACCCTGACCTACGGCGTGCAGTGCTTCAGCCGCTACCCCGACCACATGAAGCAGCACGACTTCTTCAAGTCCGCCATGCCCGAAGGCTACGTCCAGGAGCGCACCATCTTCTTCAAGGACGACGGCAACTACAAGACCCGCGCCGAGGTGAAGTTCGAGGGCGACACCCTGGTGAACCGCATCGAGCTGAAGGGCATCGACTTCAAGGAGGACGGCAACATCCTGGGGCACAAGCTGGAGTACAACTACAACAGCCACAACGTCTATATCATGGCCGACAAGCAGAAGAACGGCATCAAGGTGAACTTCAAGATCCGCCACAACATCGAGGACGGCAGCGTGCAGCTCGCCGACCACTACCAGCAGAACACCCCCATCGGCGACGGCCCCGTGCTGCTGCCCGACAACCACTACCTGAGCACCCAGTCCGCCCTGAGCAAAGACCCCAACGAGAAGCGCGATCACATGGTCCTGCTGGAGTTCGTGACCGCCGCCGGGATCACTCTCGGCATGGACGAGCTGTACAAGTAAcctgcaggcgccggcgGTGTCCCCAGAGAGCCCGCACCAGTGCCATCTGCTTGGCCGATTTGAGAATCCTGATGGAGCggCTTGTGTCTCTCCGCTCTGAGccGGGCCATCAGATTCTCATATGGGAAAAGCAGGACCCGCAGCTGCGTCCGCCTCCCCTGCATGAGCTCGCTGATCAGCCTCGACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTGGGCTCTATGGAAGCTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCTAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAG
例示性 pITR.CAG.miR1-122_EGFP 序列 (SEQ ID NO: 216) CTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTGACATTGATTATTGACTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGACTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGGTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCGGGAGTCGCTGCGTTGCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCGCGCCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGGCTCTGACTGACCGCGTTACTCCCACAGGTGAGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCTTGGTTTAATGACGGCTCGTTTCTTTTCTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTAAAGGGCTCCGGGAGGGCCCTTTGTGCGGGGGGGAGCGGCTCGGGGGGTGCGTGCGTGTGTGTGTGCGTGGGGAGCGCCGCGTGCGGCCCGCGCTGCCCGGCGGCTGTGAGCGCTGCGGGCGCGGCGCGGGGCTTTGTGCGCTCCGCGTGTGCGCGAGGGGAGCGCGGCCGGGGGCGGTGCCCCGCGGTGCGGGGGGGCTGCGAGGGGAACAAAGGCTGCGTGCGGGGTGTGTGCGTGGGGGGGTGAGCAGGGGGTGTGGGCGCGGCGGTCGGGCTGTAACCCCCCCCTGCACCCCCCTCCCCGAGTTGCTGAGCACGGCCCGGCTTCGGGTGCGGGGCTCCGTGCGGGGCGTGGCGCGGGGCTCGCCGTGCCGGGCGGGGGGTGGCGGCAGGTGGGGGTGCCGGGCGGGGCGGGGCCGCCTCGGGCCGGGGAGGGCTCGGGGGAGGGGCGCGGCGGCCCCCGGAGCGCCGGCGTGAAGTTAACACCTTCGTGGCTACAGAGTTTCCTTAGCAGAGCTGTTGAGAATCCTGATGGAGCggGTGTCTAAACTATCccGCTCCATCcGGATTCTACATAGCTACTGCTAGGCAATCCTTCCCTCGATAAATGTCTTGGCATCGTCTAGAGCCTCTGCTAACCATGTTCATGCCTTCTTCTTTTTCCTACAGCTCCTGGGCAACGTGCTGGTTATTGTGACCGGTCGCTAGCCACCATGGTGAGCAAGGGCGAGGAGCTGTTCACCGGGGTGGTGCCCATCCTGGTCGAGCTGGACGGCGACGTAAACGGCCACAAGTTCAGCGTGTCCGGCGAGGGCGAGGGCGATGCCACCTACGGCAAGCTGACCCTGAAGTTCATCTGCACCACCGGCAAGCTGCCCGTGCCCTGGCCCACCCTCGTGACCACCCTGACCTACGGCGTGCAGTGCTTCAGCCGCTACCCCGACCACATGAAGCAGCACGACTTCTTCAAGTCCGCCATGCCCGAAGGCTACGTCCAGGAGCGCACCATCTTCTTCAAGGACGACGGCAACTACAAGACCCGCGCCGAGGTGAAGTTCGAGGGCGACACCCTGGTGAACCGCATCGAGCTGAAGGGCATCGACTTCAAGGAGGACGGCAACATCCTGGGGCACAAGCTGGAGTACAACTACAACAGCCACAACGTCTATATCATGGCCGACAAGCAGAAGAACGGCATCAAGGTGAACTTCAAGATCCGCCACAACATCGAGGACGGCAGCGTGCAGCTCGCCGACCACTACCAGCAGAACACCCCCATCGGCGACGGCCCCGTGCTGCTGCCCGACAACCACTACCTGAGCACCCAGTCCGCCCTGAGCAAAGACCCCAACGAGAAGCGCGATCACATGGTCCTGCTGGAGTTCGTGACCGCCGCCGGGATCACTCTCGGCATGGACGAGCTGTACAAGTAAcctgcaggcgccggcgTGAAGTTAACACCTTCGTGGCTACAGAGTTTCCTTAGCAGAGCTGTTGAGAATCCTGATGGAGCggGTGTCTAAACTATCccGCTCCATCcGGATTCTACATAGCTACTGCTAGGCAATCCTTCCCTCGATAAATGTCTTGGCATCGGAGCTCGCTGATCAGCCTCGACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTGGGCTCTATGGAAGCTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCTAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAG
例示性 pITR.CAG.miR1-135_EGFP 序列 (SEQ ID NO: 217) CTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTGACATTGATTATTGACTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGACTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGGTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCGGGAGTCGCTGCGTTGCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCGCGCCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGGCTCTGACTGACCGCGTTACTCCCACAGGTGAGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCTTGGTTTAATGACGGCTCGTTTCTTTTCTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTAAAGGGCTCCGGGAGGGCCCTTTGTGCGGGGGGGAGCGGCTCGGGGGGTGCGTGCGTGTGTGTGTGCGTGGGGAGCGCCGCGTGCGGCCCGCGCTGCCCGGCGGCTGTGAGCGCTGCGGGCGCGGCGCGGGGCTTTGTGCGCTCCGCGTGTGCGCGAGGGGAGCGCGGCCGGGGGCGGTGCCCCGCGGTGCGGGGGGGCTGCGAGGGGAACAAAGGCTGCGTGCGGGGTGTGTGCGTGGGGGGGTGAGCAGGGGGTGTGGGCGCGGCGGTCGGGCTGTAACCCCCCCCTGCACCCCCCTCCCCGAGTTGCTGAGCACGGCCCGGCTTCGGGTGCGGGGCTCCGTGCGGGGCGTGGCGCGGGGCTCGCCGTGCCGGGCGGGGGGTGGCGGCAGGTGGGGGTGCCGGGCGGGGCGGGGCCGCCTCGGGCCGGGGAGGGCTCGGGGGAGGGGCGCGGCGGCCCCCGGAGCGCCGGCGGCCGCTGGACCCCTCCACTCTGCTGTGGCCTTGAGAATCCTGATGGAGCggGATTGCTGTCCCAAACTCccGCTCCATCGGATTCTCAAGGCTACAGTGAGGGGCGAGCTCCTTCTCCTGCTCTAGAGCCTCTGCTAACCATGTTCATGCCTTCTTCTTTTTCCTACAGCTCCTGGGCAACGTGCTGGTTATTGTGACCGGTCGCTAGCCACCATGGTGAGCAAGGGCGAGGAGCTGTTCACCGGGGTGGTGCCCATCCTGGTCGAGCTGGACGGCGACGTAAACGGCCACAAGTTCAGCGTGTCCGGCGAGGGCGAGGGCGATGCCACCTACGGCAAGCTGACCCTGAAGTTCATCTGCACCACCGGCAAGCTGCCCGTGCCCTGGCCCACCCTCGTGACCACCCTGACCTACGGCGTGCAGTGCTTCAGCCGCTACCCCGACCACATGAAGCAGCACGACTTCTTCAAGTCCGCCATGCCCGAAGGCTACGTCCAGGAGCGCACCATCTTCTTCAAGGACGACGGCAACTACAAGACCCGCGCCGAGGTGAAGTTCGAGGGCGACACCCTGGTGAACCGCATCGAGCTGAAGGGCATCGACTTCAAGGAGGACGGCAACATCCTGGGGCACAAGCTGGAGTACAACTACAACAGCCACAACGTCTATATCATGGCCGACAAGCAGAAGAACGGCATCAAGGTGAACTTCAAGATCCGCCACAACATCGAGGACGGCAGCGTGCAGCTCGCCGACCACTACCAGCAGAACACCCCCATCGGCGACGGCCCCGTGCTGCTGCCCGACAACCACTACCTGAGCACCCAGTCCGCCCTGAGCAAAGACCCCAACGAGAAGCGCGATCACATGGTCCTGCTGGAGTTCGTGACCGCCGCCGGGATCACTCTCGGCATGGACGAGCTGTACAAGTAAcctgcaggcgccggcgGCCGCTGGACCCCTCCACTCTGCTGTGGCCTTGAGAATCCTGATGGAGCggGATTGCTGTCCCAAACTCccGCTCCATCGGATTCTCAAGGCTACAGTGAGGGGCGAGCTCCTTCTCCTGCGAGCTCGCTGATCAGCCTCGACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTGGGCTCTATGGAAGCTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCTAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAG
例示性 pITR.CAG.miR1-182_EGFP 序列 (SEQ ID NO: 218) CTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTGACATTGATTATTGACTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGACTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGGTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCGGGAGTCGCTGCGTTGCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCGCGCCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGGCTCTGACTGACCGCGTTACTCCCACAGGTGAGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCTTGGTTTAATGACGGCTCGTTTCTTTTCTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTAAAGGGCTCCGGGAGGGCCCTTTGTGCGGGGGGGAGCGGCTCGGGGGGTGCGTGCGTGTGTGTGTGCGTGGGGAGCGCCGCGTGCGGCCCGCGCTGCCCGGCGGCTGTGAGCGCTGCGGGCGCGGCGCGGGGCTTTGTGCGCTCCGCGTGTGCGCGAGGGGAGCGCGGCCGGGGGCGGTGCCCCGCGGTGCGGGGGGGCTGCGAGGGGAACAAAGGCTGCGTGCGGGGTGTGTGCGTGGGGGGGTGAGCAGGGGGTGTGGGCGCGGCGGTCGGGCTGTAACCCCCCCCTGCACCCCCCTCCCCGAGTTGCTGAGCACGGCCCGGCTTCGGGTGCGGGGCTCCGTGCGGGGCGTGGCGCGGGGCTCGCCGTGCCGGGCGGGGGGTGGCGGCAGGTGGGGGTGCCGGGCGGGGCGGGGCCGCCTCGGGCCGGGGAGGGCTCGGGGGAGGGGCGCGGCGGCCCCCGGAGCGCCGGCGCTCCCCAGCTCCTGGGGGGAGCTGCTTGCCTCCCCCCGTTTTGAGAATCCTGATGGAGCggACTGGTGAGGTAACAGGATCCGCCGTCCATCTTTATTCTCACTATGGGGCGAGGACTCAGCCGGCACCCTGTGCACAGCCAGCGAGGGTCTAGAGCCTCTGCTAACCATGTTCATGCCTTCTTCTTTTTCCTACAGCTCCTGGGCAACGTGCTGGTTATTGTGACCGGTCGCTAGCCACCATGGTGAGCAAGGGCGAGGAGCTGTTCACCGGGGTGGTGCCCATCCTGGTCGAGCTGGACGGCGACGTAAACGGCCACAAGTTCAGCGTGTCCGGCGAGGGCGAGGGCGATGCCACCTACGGCAAGCTGACCCTGAAGTTCATCTGCACCACCGGCAAGCTGCCCGTGCCCTGGCCCACCCTCGTGACCACCCTGACCTACGGCGTGCAGTGCTTCAGCCGCTACCCCGACCACATGAAGCAGCACGACTTCTTCAAGTCCGCCATGCCCGAAGGCTACGTCCAGGAGCGCACCATCTTCTTCAAGGACGACGGCAACTACAAGACCCGCGCCGAGGTGAAGTTCGAGGGCGACACCCTGGTGAACCGCATCGAGCTGAAGGGCATCGACTTCAAGGAGGACGGCAACATCCTGGGGCACAAGCTGGAGTACAACTACAACAGCCACAACGTCTATATCATGGCCGACAAGCAGAAGAACGGCATCAAGGTGAACTTCAAGATCCGCCACAACATCGAGGACGGCAGCGTGCAGCTCGCCGACCACTACCAGCAGAACACCCCCATCGGCGACGGCCCCGTGCTGCTGCCCGACAACCACTACCTGAGCACCCAGTCCGCCCTGAGCAAAGACCCCAACGAGAAGCGCGATCACATGGTCCTGCTGGAGTTCGTGACCGCCGCCGGGATCACTCTCGGCATGGACGAGCTGTACAAGTAAcctgcaggcgccggcgCTCCCCAGCTCCTGGGGGGAGCTGCTTGCCTCCCCCCGTTTTGAGAATCCTGATGGAGCggACTGGTGAGGTAACAGGATCCGCCGTCCATCTTTATTCTCACTATGGGGCGAGGACTCAGCCGGCACCCTGTGCACAGCCAGCGAGGGGAGCTCGCTGATCAGCCTCGACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTGGGCTCTATGGAAGCTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCTAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAG
例示性 pITR.CAG.miR1-183_EGFP 序列 (SEQ ID NO: 219) CTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTGACATTGATTATTGACTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGACTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGGTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCGGGAGTCGCTGCGTTGCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCGCGCCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGGCTCTGACTGACCGCGTTACTCCCACAGGTGAGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCTTGGTTTAATGACGGCTCGTTTCTTTTCTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTAAAGGGCTCCGGGAGGGCCCTTTGTGCGGGGGGGAGCGGCTCGGGGGGTGCGTGCGTGTGTGTGTGCGTGGGGAGCGCCGCGTGCGGCCCGCGCTGCCCGGCGGCTGTGAGCGCTGCGGGCGCGGCGCGGGGCTTTGTGCGCTCCGCGTGTGCGCGAGGGGAGCGCGGCCGGGGGCGGTGCCCCGCGGTGCGGGGGGGCTGCGAGGGGAACAAAGGCTGCGTGCGGGGTGTGTGCGTGGGGGGGTGAGCAGGGGGTGTGGGCGCGGCGGTCGGGCTGTAACCCCCCCCTGCACCCCCCTCCCCGAGTTGCTGAGCACGGCCCGGCTTCGGGTGCGGGGCTCCGTGCGGGGCGTGGCGCGGGGCTCGCCGTGCCGGGCGGGGGGTGGCGGCAGGTGGGGGTGCCGGGCGGGGCGGGGCCGCCTCGGGCCGGGGAGGGCTCGGGGGAGGGGCGCGGCGGCCCCCGGAGCGCCGGCGAGGGTCGGCAGGCCGCAGAGTGTGACTCCTGTTCTGTGTTTGAGAATCCTGATGGAGCggGTGAACAGTCTCAGTCccGCTCCCAGGAAATGGTCAAAAACAGAGCAGAGACAGATCCACGAGGGCCTCCGGAGCACCTTTCTAGAGCCTCTGCTAACCATGTTCATGCCTTCTTCTTTTTCCTACAGCTCCTGGGCAACGTGCTGGTTATTGTGACCGGTCGCTAGCCACCATGGTGAGCAAGGGCGAGGAGCTGTTCACCGGGGTGGTGCCCATCCTGGTCGAGCTGGACGGCGACGTAAACGGCCACAAGTTCAGCGTGTCCGGCGAGGGCGAGGGCGATGCCACCTACGGCAAGCTGACCCTGAAGTTCATCTGCACCACCGGCAAGCTGCCCGTGCCCTGGCCCACCCTCGTGACCACCCTGACCTACGGCGTGCAGTGCTTCAGCCGCTACCCCGACCACATGAAGCAGCACGACTTCTTCAAGTCCGCCATGCCCGAAGGCTACGTCCAGGAGCGCACCATCTTCTTCAAGGACGACGGCAACTACAAGACCCGCGCCGAGGTGAAGTTCGAGGGCGACACCCTGGTGAACCGCATCGAGCTGAAGGGCATCGACTTCAAGGAGGACGGCAACATCCTGGGGCACAAGCTGGAGTACAACTACAACAGCCACAACGTCTATATCATGGCCGACAAGCAGAAGAACGGCATCAAGGTGAACTTCAAGATCCGCCACAACATCGAGGACGGCAGCGTGCAGCTCGCCGACCACTACCAGCAGAACACCCCCATCGGCGACGGCCCCGTGCTGCTGCCCGACAACCACTACCTGAGCACCCAGTCCGCCCTGAGCAAAGACCCCAACGAGAAGCGCGATCACATGGTCCTGCTGGAGTTCGTGACCGCCGCCGGGATCACTCTCGGCATGGACGAGCTGTACAAGTAAcctgcaggcgccggcgAGGGTCGGCAGGCCGCAGAGTGTGACTCCTGTTCTGTGTTTGAGAATCCTGATGGAGCggGTGAACAGTCTCAGTCccGCTCCCAGGAAATGGTCAAAAACAGAGCAGAGACAGATCCACGAGGGCCTCCGGAGCACCTTGAGCTCGCTGATCAGCCTCGACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTGGGCTCTATGGAAGCTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCTAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAG
例示性 pITR.CAG.miR1-335_EGFP 序列 (SEQ ID NO: 220) CTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTGACATTGATTATTGACTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGACTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGGTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCGGGAGTCGCTGCGTTGCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCGCGCCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGGCTCTGACTGACCGCGTTACTCCCACAGGTGAGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCTTGGTTTAATGACGGCTCGTTTCTTTTCTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTAAAGGGCTCCGGGAGGGCCCTTTGTGCGGGGGGGAGCGGCTCGGGGGGTGCGTGCGTGTGTGTGTGCGTGGGGAGCGCCGCGTGCGGCCCGCGCTGCCCGGCGGCTGTGAGCGCTGCGGGCGCGGCGCGGGGCTTTGTGCGCTCCGCGTGTGCGCGAGGGGAGCGCGGCCGGGGGCGGTGCCCCGCGGTGCGGGGGGGCTGCGAGGGGAACAAAGGCTGCGTGCGGGGTGTGTGCGTGGGGGGGTGAGCAGGGGGTGTGGGCGCGGCGGTCGGGCTGTAACCCCCCCCTGCACCCCCCTCCCCGAGTTGCTGAGCACGGCCCGGCTTCGGGTGCGGGGCTCCGTGCGGGGCGTGGCGCGGGGCTCGCCGTGCCGGGCGGGGGGTGGCGGCAGGTGGGGGTGCCGGGCGGGGCGGGGCCGCCTCGGGCCGGGGAGGGCTCGGGGGAGGGGCGCGGCGGCCCCCGGAGCGCCGGCGGAAACAGATTGGAAATGATTTGTTTTGAGCGGGGGTTGAGAATCCTGATGGAGCggGTTTGTCATAAACCccGCTCCCTCAGGATTCCCAACCTCCTCTCATTTGCTATATTCAATTAAGTAATCTAGAGCCTCTGCTAACCATGTTCATGCCTTCTTCTTTTTCCTACAGCTCCTGGGCAACGTGCTGGTTATTGTGACCGGTCGCTAGCCACCATGGTGAGCAAGGGCGAGGAGCTGTTCACCGGGGTGGTGCCCATCCTGGTCGAGCTGGACGGCGACGTAAACGGCCACAAGTTCAGCGTGTCCGGCGAGGGCGAGGGCGATGCCACCTACGGCAAGCTGACCCTGAAGTTCATCTGCACCACCGGCAAGCTGCCCGTGCCCTGGCCCACCCTCGTGACCACCCTGACCTACGGCGTGCAGTGCTTCAGCCGCTACCCCGACCACATGAAGCAGCACGACTTCTTCAAGTCCGCCATGCCCGAAGGCTACGTCCAGGAGCGCACCATCTTCTTCAAGGACGACGGCAACTACAAGACCCGCGCCGAGGTGAAGTTCGAGGGCGACACCCTGGTGAACCGCATCGAGCTGAAGGGCATCGACTTCAAGGAGGACGGCAACATCCTGGGGCACAAGCTGGAGTACAACTACAACAGCCACAACGTCTATATCATGGCCGACAAGCAGAAGAACGGCATCAAGGTGAACTTCAAGATCCGCCACAACATCGAGGACGGCAGCGTGCAGCTCGCCGACCACTACCAGCAGAACACCCCCATCGGCGACGGCCCCGTGCTGCTGCCCGACAACCACTACCTGAGCACCCAGTCCGCCCTGAGCAAAGACCCCAACGAGAAGCGCGATCACATGGTCCTGCTGGAGTTCGTGACCGCCGCCGGGATCACTCTCGGCATGGACGAGCTGTACAAGTAAcctgcaggcgccggcgGAAACAGATTGGAAATGATTTGTTTTGAGCGGGGGTTGAGAATCCTGATGGAGCggGTTTGTCATAAACCccGCTCCCTCAGGATTCCCAACCTCCTCTCATTTGCTATATTCAATTAAGTAAGAGCTCGCTGATCAGCCTCGACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTGGGCTCTATGGAAGCTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCTAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAG
例示性 pITR.CAG.miR1-451_EGFP 序列 (SEQ ID NO: 221) CTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTGACATTGATTATTGACTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGACTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGGTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCGGGAGTCGCTGCGTTGCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCGCGCCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGGCTCTGACTGACCGCGTTACTCCCACAGGTGAGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCTTGGTTTAATGACGGCTCGTTTCTTTTCTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTAAAGGGCTCCGGGAGGGCCCTTTGTGCGGGGGGGAGCGGCTCGGGGGGTGCGTGCGTGTGTGTGTGCGTGGGGAGCGCCGCGTGCGGCCCGCGCTGCCCGGCGGCTGTGAGCGCTGCGGGCGCGGCGCGGGGCTTTGTGCGCTCCGCGTGTGCGCGAGGGGAGCGCGGCCGGGGGCGGTGCCCCGCGGTGCGGGGGGGCTGCGAGGGGAACAAAGGCTGCGTGCGGGGTGTGTGCGTGGGGGGGTGAGCAGGGGGTGTGGGCGCGGCGGTCGGGCTGTAACCCCCCCCTGCACCCCCCTCCCCGAGTTGCTGAGCACGGCCCGGCTTCGGGTGCGGGGCTCCGTGCGGGGCGTGGCGCGGGGCTCGCCGTGCCGGGCGGGGGGTGGCGGCAGGTGGGGGTGCCGGGCGGGGCGGGGCCGCCTCGGGCCGGGGAGGGCTCGGGGGAGGGGCGCGGCGGCCCCCGGAGCGCCGGCGTGACTGCCAGGGCACTTGGGAATGGCAAGGttgagaatcctgatggagcggattccatcaggattctcagtCTTGCTATACCCAGAAAACGTGCCAGGAAGATCTAGAGCCTCTGCTAACCATGTTCATGCCTTCTTCTTTTTCCTACAGCTCCTGGGCAACGTGCTGGTTATTGTGACCGGTCGCTAGCCACCATGGTGAGCAAGGGCGAGGAGCTGTTCACCGGGGTGGTGCCCATCCTGGTCGAGCTGGACGGCGACGTAAACGGCCACAAGTTCAGCGTGTCCGGCGAGGGCGAGGGCGATGCCACCTACGGCAAGCTGACCCTGAAGTTCATCTGCACCACCGGCAAGCTGCCCGTGCCCTGGCCCACCCTCGTGACCACCCTGACCTACGGCGTGCAGTGCTTCAGCCGCTACCCCGACCACATGAAGCAGCACGACTTCTTCAAGTCCGCCATGCCCGAAGGCTACGTCCAGGAGCGCACCATCTTCTTCAAGGACGACGGCAACTACAAGACCCGCGCCGAGGTGAAGTTCGAGGGCGACACCCTGGTGAACCGCATCGAGCTGAAGGGCATCGACTTCAAGGAGGACGGCAACATCCTGGGGCACAAGCTGGAGTACAACTACAACAGCCACAACGTCTATATCATGGCCGACAAGCAGAAGAACGGCATCAAGGTGAACTTCAAGATCCGCCACAACATCGAGGACGGCAGCGTGCAGCTCGCCGACCACTACCAGCAGAACACCCCCATCGGCGACGGCCCCGTGCTGCTGCCCGACAACCACTACCTGAGCACCCAGTCCGCCCTGAGCAAAGACCCCAACGAGAAGCGCGATCACATGGTCCTGCTGGAGTTCGTGACCGCCGCCGGGATCACTCTCGGCATGGACGAGCTGTACAAGTAAcctgcaggcgccggcgTGACTGCCAGGGCACTTGGGAATGGCAAGGttgagaatcctgatggagcggattccatcaggattctcagtCTTGCTATACCCAGAAAACGTGCCAGGAAGAGAGCTCGCTGATCAGCCTCGACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTGGGCTCTATGGAAGCTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCTAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAG
例示性 pITR.CAG.miR_2NNNNN_eGFP 序列 (SEQ ID NO: 222) CTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTGACATTGATTATTGACTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGACTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGGTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCGGGAGTCGCTGCGTTGCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCGCGCCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGGCTCTGACTGACCGCGTTACTCCCACAGGTGAGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCTTGGTTTAATGACGGCTCGTTTCTTTTCTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTAAAGGGCTCCGGGAGGGCCCTTTGTGCGGGGGGGAGCGGCTCGGGGGGTGCGTGCGTGTGTGTGTGCGTGGGGAGCGCCGCGTGCGGCCCGCGCTGCCCGGCGGCTGTGAGCGCTGCGGGCGCGGCGCGGGGCTTTGTGCGCTCCGCGTGTGCGCGAGGGGAGCGCGGCCGGGGGCGGTGCCCCGCGGTGCGGGGGGGCTGCGAGGGGAACAAAGGCTGCGTGCGGGGTGTGTGCGTGGGGGGGTGAGCAGGGGGTGTGGGCGCGGCGGTCGGGCTGTAACCCCCCCCTGCACCCCCCTCCCCGAGTTGCTGAGCACGGCCCGGCTTCGGGTGCGGGGCTCCGTGCGGGGCGTGGCGCGGGGCTCGCCGTGCCGGGCGGGGGGTGGCGGCAGGTGGGGGTGCCGGGCGGGGCGGGGCCGCCTCGGGCCGGGGAGGGCTCGGGGGAGGGGCGCGGCGGCCCCCGGAGCGCCGGCGNNNNNTCTAGAGCCTCTGCTAACCATGTTCATGCCTTCTTCTTTTTCCTACAGCTCCTGGGCAACGTGCTGGTTATTGTGACCGGTCGCTAGCCACCATGGTGAGCAAGGGCGAGGAGCTGTTCACCGGGGTGGTGCCCATCCTGGTCGAGCTGGACGGCGACGTAAACGGCCACAAGTTCAGCGTGTCCGGCGAGGGCGAGGGCGATGCCACCTACGGCAAGCTGACCCTGAAGTTCATCTGCACCACCGGCAAGCTGCCCGTGCCCTGGCCCACCCTCGTGACCACCCTGACCTACGGCGTGCAGTGCTTCAGCCGCTACCCCGACCACATGAAGCAGCACGACTTCTTCAAGTCCGCCATGCCCGAAGGCTACGTCCAGGAGCGCACCATCTTCTTCAAGGACGACGGCAACTACAAGACCCGCGCCGAGGTGAAGTTCGAGGGCGACACCCTGGTGAACCGCATCGAGCTGAAGGGCATCGACTTCAAGGAGGACGGCAACATCCTGGGGCACAAGCTGGAGTACAACTACAACAGCCACAACGTCTATATCATGGCCGACAAGCAGAAGAACGGCATCAAGGTGAACTTCAAGATCCGCCACAACATCGAGGACGGCAGCGTGCAGCTCGCCGACCACTACCAGCAGAACACCCCCATCGGCGACGGCCCCGTGCTGCTGCCCGACAACCACTACCTGAGCACCCAGTCCGCCCTGAGCAAAGACCCCAACGAGAAGCGCGATCACATGGTCCTGCTGGAGTTCGTGACCGCCGCCGGGATCACTCTCGGCATGGACGAGCTGTACAAGTAAcctgcaggcgccggcgNNNNNGAGCTCGCTGATCAGCCTCGACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTGGGCTCTATGGAAGCTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCTAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAG
例示性 pITR.CAG.miR_5'NNNNN_eGFP 序列 (SEQ ID NO: 223) CTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTGACATTGATTATTGACTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGACTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGGTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCGGGAGTCGCTGCGTTGCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCGCGCCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGGCTCTGACTGACCGCGTTACTCCCACAGGTGAGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCTTGGTTTAATGACGGCTCGTTTCTTTTCTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTAAAGGGCTCCGGGAGGGCCCTTTGTGCGGGGGGGAGCGGCTCGGGGGGTGCGTGCGTGTGTGTGTGCGTGGGGAGCGCCGCGTGCGGCCCGCGCTGCCCGGCGGCTGTGAGCGCTGCGGGCGCGGCGCGGGGCTTTGTGCGCTCCGCGTGTGCGCGAGGGGAGCGCGGCCGGGGGCGGTGCCCCGCGGTGCGGGGGGGCTGCGAGGGGAACAAAGGCTGCGTGCGGGGTGTGTGCGTGGGGGGGTGAGCAGGGGGTGTGGGCGCGGCGGTCGGGCTGTAACCCCCCCCTGCACCCCCCTCCCCGAGTTGCTGAGCACGGCCCGGCTTCGGGTGCGGGGCTCCGTGCGGGGCGTGGCGCGGGGCTCGCCGTGCCGGGCGGGGGGTGGCGGCAGGTGGGGGTGCCGGGCGGGGCGGGGCCGCCTCGGGCCGGGGAGGGCTCGGGGGAGGGGCGCGGCGGCCCCCGGAGCGCCGGCGNNNNNTCTAGAGCCTCTGCTAACCATGTTCATGCCTTCTTCTTTTTCCTACAGCTCCTGGGCAACGTGCTGGTTATTGTGACCGGTCGCTAGCCACCATGGTGAGCAAGGGCGAGGAGCTGTTCACCGGGGTGGTGCCCATCCTGGTCGAGCTGGACGGCGACGTAAACGGCCACAAGTTCAGCGTGTCCGGCGAGGGCGAGGGCGATGCCACCTACGGCAAGCTGACCCTGAAGTTCATCTGCACCACCGGCAAGCTGCCCGTGCCCTGGCCCACCCTCGTGACCACCCTGACCTACGGCGTGCAGTGCTTCAGCCGCTACCCCGACCACATGAAGCAGCACGACTTCTTCAAGTCCGCCATGCCCGAAGGCTACGTCCAGGAGCGCACCATCTTCTTCAAGGACGACGGCAACTACAAGACCCGCGCCGAGGTGAAGTTCGAGGGCGACACCCTGGTGAACCGCATCGAGCTGAAGGGCATCGACTTCAAGGAGGACGGCAACATCCTGGGGCACAAGCTGGAGTACAACTACAACAGCCACAACGTCTATATCATGGCCGACAAGCAGAAGAACGGCATCAAGGTGAACTTCAAGATCCGCCACAACATCGAGGACGGCAGCGTGCAGCTCGCCGACCACTACCAGCAGAACACCCCCATCGGCGACGGCCCCGTGCTGCTGCCCGACAACCACTACCTGAGCACCCAGTCCGCCCTGAGCAAAGACCCCAACGAGAAGCGCGATCACATGGTCCTGCTGGAGTTCGTGACCGCCGCCGGGATCACTCTCGGCATGGACGAGCTGTACAAGTAAGAGCTCGCTGATCAGCCTCGACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTGGGCTCTATGGAAGCTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCTAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAG
例示性 pITR.CAG.miR_3'NNNNN_eGFP 序列 (SEQ ID NO: 224) CTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTGACATTGATTATTGACTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGACTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGGTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCGGGAGTCGCTGCGTTGCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCGCGCCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGGCTCTGACTGACCGCGTTACTCCCACAGGTGAGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCTTGGTTTAATGACGGCTCGTTTCTTTTCTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTAAAGGGCTCCGGGAGGGCCCTTTGTGCGGGGGGGAGCGGCTCGGGGGGTGCGTGCGTGTGTGTGTGCGTGGGGAGCGCCGCGTGCGGCCCGCGCTGCCCGGCGGCTGTGAGCGCTGCGGGCGCGGCGCGGGGCTTTGTGCGCTCCGCGTGTGCGCGAGGGGAGCGCGGCCGGGGGCGGTGCCCCGCGGTGCGGGGGGGCTGCGAGGGGAACAAAGGCTGCGTGCGGGGTGTGTGCGTGGGGGGGTGAGCAGGGGGTGTGGGCGCGGCGGTCGGGCTGTAACCCCCCCCTGCACCCCCCTCCCCGAGTTGCTGAGCACGGCCCGGCTTCGGGTGCGGGGCTCCGTGCGGGGCGTGGCGCGGGGCTCGCCGTGCCGGGCGGGGGGTGGCGGCAGGTGGGGGTGCCGGGCGGGGCGGGGCCGCCTCGGGCCGGGGAGGGCTCGGGGGAGGGGCGCGGCGGCCCCCGGAGCGCCGGCGGCTGTCGAGGCGCGGCGAGCCGCAGCCATTGCCTTTTATGGTAATCGTGCGAGAGGGCGCAGGGACTTCCTTTGTCCCAAATCTGTGCGGAGCCGAAATCTGGGAGGCGCCGCCGCACCCCCTCTAGCGGGCGCGGGGCGAAGCGGTGCGGCGCCGGCAGGAAGGAAATGGGCGGGGAGGGCCTTCGTGCGTCGCCGCGCCGCCGTCCCCTTCTCCCTCTCCAGCCTCGGGGCTGTCCGCGGGGGGACGGCTGCCTTCGGGGGGGACGGGGCAGGGCGGGGTTCGGCTTCTGGCGTGTGACCGGCGGCTCTAGAGCCTCTGCTAACCATGTTCATGCCTTCTTCTTTTTCCTACAGCTCCTGGGCAACGTGCTGGTTATTGTGACCGGTCGCTAGCCACCATGGTGAGCAAGGGCGAGGAGCTGTTCACCGGGGTGGTGCCCATCCTGGTCGAGCTGGACGGCGACGTAAACGGCCACAAGTTCAGCGTGTCCGGCGAGGGCGAGGGCGATGCCACCTACGGCAAGCTGACCCTGAAGTTCATCTGCACCACCGGCAAGCTGCCCGTGCCCTGGCCCACCCTCGTGACCACCCTGACCTACGGCGTGCAGTGCTTCAGCCGCTACCCCGACCACATGAAGCAGCACGACTTCTTCAAGTCCGCCATGCCCGAAGGCTACGTCCAGGAGCGCACCATCTTCTTCAAGGACGACGGCAACTACAAGACCCGCGCCGAGGTGAAGTTCGAGGGCGACACCCTGGTGAACCGCATCGAGCTGAAGGGCATCGACTTCAAGGAGGACGGCAACATCCTGGGGCACAAGCTGGAGTACAACTACAACAGCCACAACGTCTATATCATGGCCGACAAGCAGAAGAACGGCATCAAGGTGAACTTCAAGATCCGCCACAACATCGAGGACGGCAGCGTGCAGCTCGCCGACCACTACCAGCAGAACACCCCCATCGGCGACGGCCCCGTGCTGCTGCCCGACAACCACTACCTGAGCACCCAGTCCGCCCTGAGCAAAGACCCCAACGAGAAGCGCGATCACATGGTCCTGCTGGAGTTCGTGACCGCCGCCGGGATCACTCTCGGCATGGACGAGCTGTACAAGTAANNNNNGAGCTCGCTGATCAGCCTCGACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTGGGCTCTATGGAAGCTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCTAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAG例示性 miRNA 構築體序列 ( 第 3 部分 )
例示性 pITR.CAG.miR1-155_EGFP 序列 (SEQ ID NO: 225) CCTGCAGGCAGCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTGACATTGATTATTGACTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGACTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGGTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCGGGAGTCGCTGCGTTGCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCGCGCCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGGCTCTGACTGACCGCGTTACTCCCACAGGTGAGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCTTGGTTTAATGACGGCTCGTTTCTTTTCTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTAAAGGGCTCCGGGAGGGCCCTTTGTGCGGGGGGGAGCGGCTCGGGGGGTGCGTGCGTGTGTGTGTGCGTGGGGAGCGCCGCGTGCGGCCCGCGCTGCCCGGCGGCTGTGAGCGCTGCGGGCGCGGCGCGGGGCTTTGTGCGCTCCGCGTGTGCGCGAGGGGAGCGCGGCCGGGGGCGGTGCCCCGCGGTGCGGGGGGGCTGCGAGGGGAACAAAGGCTGCGTGCGGGGTGTGTGCGTGGGGGGGTGAGCAGGGGGTGTGGGCGCGGCGGTCGGGCTGTAACCCCCCCCTGCACCCCCCTCCCCGAGTTGCTGAGCACGGCCCGGCTTCGGGTGCGGGGCTCCGTGCGGGGCGTGGCGCGGGGCTCGCCGTGCCGGGCGGGGGGTGGCGGCAGGTGGGGGTGCCGGGCGGGGCGGGGCCGCCTCGGGCCGGGGAGGGCTCGGGGGAGGGGCGCGGCGGCCCCCGGAGCGCCGGCGtcctctgagtgctgaaggcttgctgtaggctgtatgctgTTGAGAATCCTGATGGAGCgg gtttttgcctccaactga c ccGCTCATAGGATTCTCAA cagtgtatgatgcctgttactagcattcacatgga TCTAGAGCCTCTGCTAACCATGTTCATGCCTTCTTCTTTTTCCTACAGCTCCTGGGCAACGTGCTGGTTATTGTGACCGGTCGCTAGCCACCATGGTGAGCAAGGGCGAGGAGCTGTTCACCGGGGTGGTGCCCATCCTGGTCGAGCTGGACGGCGACGTAAACGGCCACAAGTTCAGCGTGTCCGGCGAGGGCGAGGGCGATGCCACCTACGGCAAGCTGACCCTGAAGTTCATCTGCACCACCGGCAAGCTGCCCGTGCCCTGGCCCACCCTCGTGACCACCCTGACCTACGGCGTGCAGTGCTTCAGCCGCTACCCCGACCACATGAAGCAGCACGACTTCTTCAAGTCCGCCATGCCCGAAGGCTACGTCCAGGAGCGCACCATCTTCTTCAAGGACGACGGCAACTACAAGACCCGCGCCGAGGTGAAGTTCGAGGGCGACACCCTGGTGAACCGCATCGAGCTGAAGGGCATCGACTTCAAGGAGGACGGCAACATCCTGGGGCACAAGCTGGAGTACAACTACAACAGCCACAACGTCTATATCATGGCCGACAAGCAGAAGAACGGCATCAAGGTGAACTTCAAGATCCGCCACAACATCGAGGACGGCAGCGTGCAGCTCGCCGACCACTACCAGCAGAACACCCCCATCGGCGACGGCCCCGTGCTGCTGCCCGACAACCACTACCTGAGCACCCAGTCCGCCCTGAGCAAAGACCCCAACGAGAAGCGCGATCACATGGTCCTGCTGGAGTTCGTGACCGCCGCCGGGATCACTCTCGGCATGGACGAGCTGTACAAGTAAcctgcaggcgccggcgtcctctgagtgctgaaggcttgctgtaggctgtatgctgTTGAGAATCCTGATGGAGCgg gtttttgcctccaactga c ccGCTCATAGGATTCTCAA cagtgtatgatgcctgttactagcattcacatgga GAGCTCGCTGATCAGCCTCGACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTGGGCTCTATGGAAGCTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCTAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAG
例示性 pITR.CAG.miR1i-155_EGFP 序列 (SEQ ID NO: 226) CCTGCAGGCAGCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTGACATTGATTATTGACTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGACTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGGTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCGGGAGTCGCTGCGTTGCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCGCGCCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGGCTCTGACTGACCGCGTTACTCCCACAGGTGAGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCTTGGTTTAATGACGGCTCGTTTCTTTTCTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTAAAGGGCTCCGGGAGGGCCCTTTGTGCGGGGGGGAGCGGCTCGGGGGGTGCGTGCGTGTGTGTGTGCGTGGGGAGCGCCGCGTGCGGCCCGCGCTGCCCGGCGGCTGTGAGCGCTGCGGGCGCGGCGCGGGGCTTTGTGCGCTCCGCGTGTGCGCGAGGGGAGCGCGGCCGGGGGCGGTGCCCCGCGGTGCGGGGGGGCTGCGAGGGGAACAAAGGCTGCGTGCGGGGTGTGTGCGTGGGGGGGTGAGCAGGGGGTGTGGGCGCGGCGGTCGGGCTGTAACCCCCCCCTGCACCCCCCTCCCCGAGTTGCTGAGCACGGCCCGGCTTCGGGTGCGGGGCTCCGTGCGGGGCGTGGCGCGGGGCTCGCCGTGCCGGGCGGGGGGTGGCGGCAGGTGGGGGTGCCGGGCGGGGCGGGGCCGCCTCGGGCCGGGGAGGGCTCGGGGGAGGGGCGCGGCGGCCCCCGGAGCGCCGGCGtcctctgagtgctgaaggcttgctgtaggctgtatgctgTTGAGAATCCTGATGGAGCgg gtttttgcctccaactga c ccGCTCATAGGATTCTCAA cagtgtatgatgcctgttactagcattcacatgga TCTAGAGCCTCTGCTAACCATGTTCATGCCTTCTTCTTTTTCCTACAGCTCCTGGGCAACGTGCTGGTTATTGTGACCGGTCGCTAGCCACCATGGTGAGCAAGGGCGAGGAGCTGTTCACCGGGGTGGTGCCCATCCTGGTCGAGCTGGACGGCGACGTAAACGGCCACAAGTTCAGCGTGTCCGGCGAGGGCGAGGGCGATGCCACCTACGGCAAGCTGACCCTGAAGTTCATCTGCACCACCGGCAAGCTGCCCGTGCCCTGGCCCACCCTCGTGACCACCCTGACCTACGGCGTGCAGTGCTTCAGCCGCTACCCCGACCACATGAAGCAGCACGACTTCTTCAAGTCCGCCATGCCCGAAGGCTACGTCCAGGAGCGCACCATCTTCTTCAAGGACGACGGCAACTACAAGACCCGCGCCGAGGTGAAGTTCGAGGGCGACACCCTGGTGAACCGCATCGAGCTGAAGGGCATCGACTTCAAGGAGGACGGCAACATCCTGGGGCACAAGCTGGAGTACAACTACAACAGCCACAACGTCTATATCATGGCCGACAAGCAGAAGAACGGCATCAAGGTGAACTTCAAGATCCGCCACAACATCGAGGACGGCAGCGTGCAGCTCGCCGACCACTACCAGCAGAACACCCCCATCGGCGACGGCCCCGTGCTGCTGCCCGACAACCACTACCTGAGCACCCAGTCCGCCCTGAGCAAAGACCCCAACGAGAAGCGCGATCACATGGTCCTGCTGGAGTTCGTGACCGCCGCCGGGATCACTCTCGGCATGGACGAGCTGTACAAGTAAGAGCTCGCTGATCAGCCTCGACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTGGGCTCTATGGAAGCTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCTAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAG
例示性 pITR.CAG.miR1u-155_EGFP 序列 (SEQ ID NO: 227) CCTGCAGGCAGCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTGACATTGATTATTGACTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGACTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGGTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCGGGAGTCGCTGCGTTGCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCGCGCCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGGCTCTGACTGACCGCGTTACTCCCACAGGTGAGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCTTGGTTTAATGACGGCTCGTTTCTTTTCTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTAAAGGGCTCCGGGAGGGCCCTTTGTGCGGGGGGGAGCGGCTCGGGGGGTGCGTGCGTGTGTGTGTGCGTGGGGAGCGCCGCGTGCGGCCCGCGCTGCCCGGCGGCTGTGAGCGCTGCGGGCGCGGCGCGGGGCTTTGTGCGCTCCGCGTGTGCGCGAGGGGAGCGCGGCCGGGGGCGGTGCCCCGCGGTGCGGGGGGGCTGCGAGGGGAACAAAGGCTGCGTGCGGGGTGTGTGCGTGGGGGGGTGAGCAGGGGGTGTGGGCGCGGCGGTCGGGCTGTAACCCCCCCCTGCACCCCCCTCCCCGAGTTGCTGAGCACGGCCCGGCTTCGGGTGCGGGGCTCCGTGCGGGGCGTGGCGCGGGGCTCGCCGTGCCGGGCGGGGGGTGGCGGCAGGTGGGGGTGCCGGGCGGGGCGGGGCCGCCTCGGGCCGGGGAGGGCTCGGGGGAGGGGCGCGGCGGCCCCCGGAGCGCCGGCGGCTGTCGAGGCGCGGCGAGCCGCAGCCATTGCCTTTTATGGTAATCGTGCGAGAGGGCGCAGGGACTTCCTTTGTCCCAAATCTGTGCGGAGCCGAAATCTGGGAGGCGCCGCCGCACCCCCTCTAGCGGGCGCGGGGCGAAGCGGTGCGGCGCCGGCAGGAAGGAAATGGGCGGGGAGGGCCTTCGTGCGTCGCCGCGCCGCCGTCCCCTTCTCCCTCTCCAGCCTCGGGGCTGTCCGCGGGGGGACGGCTGCCTTCGGGGGGGACGGGGCAGGGCGGGGTTCGGCTTCTGGCGTGTGACCGGCGGCTCTAGAGCCTCTGCTAACCATGTTCATGCCTTCTTCTTTTTCCTACAGCTCCTGGGCAACGTGCTGGTTATTGTGACCGGTCGCTAGCCACCATGGTGAGCAAGGGCGAGGAGCTGTTCACCGGGGTGGTGCCCATCCTGGTCGAGCTGGACGGCGACGTAAACGGCCACAAGTTCAGCGTGTCCGGCGAGGGCGAGGGCGATGCCACCTACGGCAAGCTGACCCTGAAGTTCATCTGCACCACCGGCAAGCTGCCCGTGCCCTGGCCCACCCTCGTGACCACCCTGACCTACGGCGTGCAGTGCTTCAGCCGCTACCCCGACCACATGAAGCAGCACGACTTCTTCAAGTCCGCCATGCCCGAAGGCTACGTCCAGGAGCGCACCATCTTCTTCAAGGACGACGGCAACTACAAGACCCGCGCCGAGGTGAAGTTCGAGGGCGACACCCTGGTGAACCGCATCGAGCTGAAGGGCATCGACTTCAAGGAGGACGGCAACATCCTGGGGCACAAGCTGGAGTACAACTACAACAGCCACAACGTCTATATCATGGCCGACAAGCAGAAGAACGGCATCAAGGTGAACTTCAAGATCCGCCACAACATCGAGGACGGCAGCGTGCAGCTCGCCGACCACTACCAGCAGAACACCCCCATCGGCGACGGCCCCGTGCTGCTGCCCGACAACCACTACCTGAGCACCCAGTCCGCCCTGAGCAAAGACCCCAACGAGAAGCGCGATCACATGGTCCTGCTGGAGTTCGTGACCGCCGCCGGGATCACTCTCGGCATGGACGAGCTGTACAAGTAAcctgcaggcgccggcgtcctctgagtgctgaaggcttgctgtaggctgtatgctgTTGAGAATCCTGATGGAGCgg gtttttgcctccaactga c ccGCTCATAGGATTCTCAA cagtgtatgatgcctgttactagcattcacatgga GAGCTCGCTGATCAGCCTCGACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTGGGCTCTATGGAAGCTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCTAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAG
例示性 pITR.CAG.miR2-155_EGFP 序列 (SEQ ID NO: 228) CCTGCAGGCAGCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTGACATTGATTATTGACTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGACTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGGTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCGGGAGTCGCTGCGTTGCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCGCGCCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGGCTCTGACTGACCGCGTTACTCCCACAGGTGAGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCTTGGTTTAATGACGGCTCGTTTCTTTTCTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTAAAGGGCTCCGGGAGGGCCCTTTGTGCGGGGGGGAGCGGCTCGGGGGGTGCGTGCGTGTGTGTGTGCGTGGGGAGCGCCGCGTGCGGCCCGCGCTGCCCGGCGGCTGTGAGCGCTGCGGGCGCGGCGCGGGGCTTTGTGCGCTCCGCGTGTGCGCGAGGGGAGCGCGGCCGGGGGCGGTGCCCCGCGGTGCGGGGGGGCTGCGAGGGGAACAAAGGCTGCGTGCGGGGTGTGTGCGTGGGGGGGTGAGCAGGGGGTGTGGGCGCGGCGGTCGGGCTGTAACCCCCCCCTGCACCCCCCTCCCCGAGTTGCTGAGCACGGCCCGGCTTCGGGTGCGGGGCTCCGTGCGGGGCGTGGCGCGGGGCTCGCCGTGCCGGGCGGGGGGTGGCGGCAGGTGGGGGTGCCGGGCGGGGCGGGGCCGCCTCGGGCCGGGGAGGGCTCGGGGGAGGGGCGCGGCGGCCCCCGGAGCGCCGGCGtcctctgagtgctgaaggcttgctgtaggctgtatgctgTTGAGTCTCAGAGATGCCCgg gtttttgcctccaactgaCTCGGGATTCTGAGACTCAA cagtgtatgatgcctgttactagcattcacatgga TCTAGAGCCTCTGCTAACCATGTTCATGCCTTCTTCTTTTTCCTACAGCTCCTGGGCAACGTGCTGGTTATTGTGACCGGTCGCTAGCCACCATGGTGAGCAAGGGCGAGGAGCTGTTCACCGGGGTGGTGCCCATCCTGGTCGAGCTGGACGGCGACGTAAACGGCCACAAGTTCAGCGTGTCCGGCGAGGGCGAGGGCGATGCCACCTACGGCAAGCTGACCCTGAAGTTCATCTGCACCACCGGCAAGCTGCCCGTGCCCTGGCCCACCCTCGTGACCACCCTGACCTACGGCGTGCAGTGCTTCAGCCGCTACCCCGACCACATGAAGCAGCACGACTTCTTCAAGTCCGCCATGCCCGAAGGCTACGTCCAGGAGCGCACCATCTTCTTCAAGGACGACGGCAACTACAAGACCCGCGCCGAGGTGAAGTTCGAGGGCGACACCCTGGTGAACCGCATCGAGCTGAAGGGCATCGACTTCAAGGAGGACGGCAACATCCTGGGGCACAAGCTGGAGTACAACTACAACAGCCACAACGTCTATATCATGGCCGACAAGCAGAAGAACGGCATCAAGGTGAACTTCAAGATCCGCCACAACATCGAGGACGGCAGCGTGCAGCTCGCCGACCACTACCAGCAGAACACCCCCATCGGCGACGGCCCCGTGCTGCTGCCCGACAACCACTACCTGAGCACCCAGTCCGCCCTGAGCAAAGACCCCAACGAGAAGCGCGATCACATGGTCCTGCTGGAGTTCGTGACCGCCGCCGGGATCACTCTCGGCATGGACGAGCTGTACAAGTAAcctgcaggcgccggcgtcctctgagtgctgaaggcttgctgtaggctgtatgctgTTGAGTCTCAGAGATGCCCgg gtttttgcctccaactgaCTCGGGATTCTGAGACTCAA cagtgtatgatgcctgttactagcattcacatgga GAGCTCGCTGATCAGCCTCGACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTGGGCTCTATGGAAGCTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCTAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAG
例示性 pITR.CAG.miR2v2-155_EGFP 序列 (SEQ ID NO: 229) CCTGCAGGCAGCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTGACATTGATTATTGACTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGACTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGGTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCGGGAGTCGCTGCGTTGCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCGCGCCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGGCTCTGACTGACCGCGTTACTCCCACAGGTGAGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCTTGGTTTAATGACGGCTCGTTTCTTTTCTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTAAAGGGCTCCGGGAGGGCCCTTTGTGCGGGGGGGAGCGGCTCGGGGGGTGCGTGCGTGTGTGTGTGCGTGGGGAGCGCCGCGTGCGGCCCGCGCTGCCCGGCGGCTGTGAGCGCTGCGGGCGCGGCGCGGGGCTTTGTGCGCTCCGCGTGTGCGCGAGGGGAGCGCGGCCGGGGGCGGTGCCCCGCGGTGCGGGGGGGCTGCGAGGGGAACAAAGGCTGCGTGCGGGGTGTGTGCGTGGGGGGGTGAGCAGGGGGTGTGGGCGCGGCGGTCGGGCTGTAACCCCCCCCTGCACCCCCCTCCCCGAGTTGCTGAGCACGGCCCGGCTTCGGGTGCGGGGCTCCGTGCGGGGCGTGGCGCGGGGCTCGCCGTGCCGGGCGGGGGGTGGCGGCAGGTGGGGGTGCCGGGCGGGGCGGGGCCGCCTCGGGCCGGGGAGGGCTCGGGGGAGGGGCGCGGCGGCCCCCGGAGCGCCGGCGtcctctgagtgctgaaggcttgctgtaggctgtatgctgTTGAGTCTCAGAGATGCCCgg gtttttgcctccaactgaCTCGGGATTCTGAGATTCAA cagtgtatgatgcctgttactagcattcacatgga TCTAGAGCCTCTGCTAACCATGTTCATGCCTTCTTCTTTTTCCTACAGCTCCTGGGCAACGTGCTGGTTATTGTGACCGGTCGCTAGCCACCATGGTGAGCAAGGGCGAGGAGCTGTTCACCGGGGTGGTGCCCATCCTGGTCGAGCTGGACGGCGACGTAAACGGCCACAAGTTCAGCGTGTCCGGCGAGGGCGAGGGCGATGCCACCTACGGCAAGCTGACCCTGAAGTTCATCTGCACCACCGGCAAGCTGCCCGTGCCCTGGCCCACCCTCGTGACCACCCTGACCTACGGCGTGCAGTGCTTCAGCCGCTACCCCGACCACATGAAGCAGCACGACTTCTTCAAGTCCGCCATGCCCGAAGGCTACGTCCAGGAGCGCACCATCTTCTTCAAGGACGACGGCAACTACAAGACCCGCGCCGAGGTGAAGTTCGAGGGCGACACCCTGGTGAACCGCATCGAGCTGAAGGGCATCGACTTCAAGGAGGACGGCAACATCCTGGGGCACAAGCTGGAGTACAACTACAACAGCCACAACGTCTATATCATGGCCGACAAGCAGAAGAACGGCATCAAGGTGAACTTCAAGATCCGCCACAACATCGAGGACGGCAGCGTGCAGCTCGCCGACCACTACCAGCAGAACACCCCCATCGGCGACGGCCCCGTGCTGCTGCCCGACAACCACTACCTGAGCACCCAGTCCGCCCTGAGCAAAGACCCCAACGAGAAGCGCGATCACATGGTCCTGCTGGAGTTCGTGACCGCCGCCGGGATCACTCTCGGCATGGACGAGCTGTACAAGTAAcctgcaggcgccggcgtcctctgagtgctgaaggcttgctgtaggctgtatgctgTTGAGTCTCAGAGATGCCCgg gtttttgcctccaactgaCTCGGGATTCTGAGATTCAA cagtgtatgatgcctgttactagcattcacatgga GAGCTCGCTGATCAGCCTCGACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTGGGCTCTATGGAAGCTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCTAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAG
例示性 pITR.CAG.miR2v3-155_EGFP 序列 (SEQ ID NO: 230) CCTGCAGGCAGCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTGACATTGATTATTGACTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGACTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGGTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCGGGAGTCGCTGCGTTGCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCGCGCCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGGCTCTGACTGACCGCGTTACTCCCACAGGTGAGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCTTGGTTTAATGACGGCTCGTTTCTTTTCTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTAAAGGGCTCCGGGAGGGCCCTTTGTGCGGGGGGGAGCGGCTCGGGGGGTGCGTGCGTGTGTGTGTGCGTGGGGAGCGCCGCGTGCGGCCCGCGCTGCCCGGCGGCTGTGAGCGCTGCGGGCGCGGCGCGGGGCTTTGTGCGCTCCGCGTGTGCGCGAGGGGAGCGCGGCCGGGGGCGGTGCCCCGCGGTGCGGGGGGGCTGCGAGGGGAACAAAGGCTGCGTGCGGGGTGTGTGCGTGGGGGGGTGAGCAGGGGGTGTGGGCGCGGCGGTCGGGCTGTAACCCCCCCCTGCACCCCCCTCCCCGAGTTGCTGAGCACGGCCCGGCTTCGGGTGCGGGGCTCCGTGCGGGGCGTGGCGCGGGGCTCGCCGTGCCGGGCGGGGGGTGGCGGCAGGTGGGGGTGCCGGGCGGGGCGGGGCCGCCTCGGGCCGGGGAGGGCTCGGGGGAGGGGCGCGGCGGCCCCCGGAGCGCCGGCGtcctctgagtgctgaaggcttgctgtaggctgtatgctgTTGAGTCTCAGAGATGCCCgg gtttttgcctccaactgaCTCGGGATCCTGAGATTCAA cagtgtatgatgcctgttactagcattcacatgga TCTAGAGCCTCTGCTAACCATGTTCATGCCTTCTTCTTTTTCCTACAGCTCCTGGGCAACGTGCTGGTTATTGTGACCGGTCGCTAGCCACCATGGTGAGCAAGGGCGAGGAGCTGTTCACCGGGGTGGTGCCCATCCTGGTCGAGCTGGACGGCGACGTAAACGGCCACAAGTTCAGCGTGTCCGGCGAGGGCGAGGGCGATGCCACCTACGGCAAGCTGACCCTGAAGTTCATCTGCACCACCGGCAAGCTGCCCGTGCCCTGGCCCACCCTCGTGACCACCCTGACCTACGGCGTGCAGTGCTTCAGCCGCTACCCCGACCACATGAAGCAGCACGACTTCTTCAAGTCCGCCATGCCCGAAGGCTACGTCCAGGAGCGCACCATCTTCTTCAAGGACGACGGCAACTACAAGACCCGCGCCGAGGTGAAGTTCGAGGGCGACACCCTGGTGAACCGCATCGAGCTGAAGGGCATCGACTTCAAGGAGGACGGCAACATCCTGGGGCACAAGCTGGAGTACAACTACAACAGCCACAACGTCTATATCATGGCCGACAAGCAGAAGAACGGCATCAAGGTGAACTTCAAGATCCGCCACAACATCGAGGACGGCAGCGTGCAGCTCGCCGACCACTACCAGCAGAACACCCCCATCGGCGACGGCCCCGTGCTGCTGCCCGACAACCACTACCTGAGCACCCAGTCCGCCCTGAGCAAAGACCCCAACGAGAAGCGCGATCACATGGTCCTGCTGGAGTTCGTGACCGCCGCCGGGATCACTCTCGGCATGGACGAGCTGTACAAGTAAcctgcaggcgccggcgtcctctgagtgctgaaggcttgctgtaggctgtatgctgTTGAGTCTCAGAGATGCCCgg gtttttgcctccaactgaCTCGGGATCCTGAGATTCAA cagtgtatgatgcctgttactagcattcacatgga GAGCTCGCTGATCAGCCTCGACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTGGGCTCTATGGAAGCTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCTAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAG
例示性 pITR.CAG.miR2v4-155_EGFP 序列 (SEQ ID NO: 231) CCTGCAGGCAGCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTGACATTGATTATTGACTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGACTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGGTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCGGGAGTCGCTGCGTTGCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCGCGCCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGGCTCTGACTGACCGCGTTACTCCCACAGGTGAGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCTTGGTTTAATGACGGCTCGTTTCTTTTCTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTAAAGGGCTCCGGGAGGGCCCTTTGTGCGGGGGGGAGCGGCTCGGGGGGTGCGTGCGTGTGTGTGTGCGTGGGGAGCGCCGCGTGCGGCCCGCGCTGCCCGGCGGCTGTGAGCGCTGCGGGCGCGGCGCGGGGCTTTGTGCGCTCCGCGTGTGCGCGAGGGGAGCGCGGCCGGGGGCGGTGCCCCGCGGTGCGGGGGGGCTGCGAGGGGAACAAAGGCTGCGTGCGGGGTGTGTGCGTGGGGGGGTGAGCAGGGGGTGTGGGCGCGGCGGTCGGGCTGTAACCCCCCCCTGCACCCCCCTCCCCGAGTTGCTGAGCACGGCCCGGCTTCGGGTGCGGGGCTCCGTGCGGGGCGTGGCGCGGGGCTCGCCGTGCCGGGCGGGGGGTGGCGGCAGGTGGGGGTGCCGGGCGGGGCGGGGCCGCCTCGGGCCGGGGAGGGCTCGGGGGAGGGGCGCGGCGGCCCCCGGAGCGCCGGCGtcctctgagtgctgaaggcttgctgtaggctgtatgctgTTGAGTCTCAGAGATGCCCggaag tttgcctccaactctTTCGGGATCCTGAGATTCAAca gtgtatgatgcctgttactagcattcacatgga TCTAGAGCCTCTGCTAACCATGTTCATGCCTTCTTCTTTTTCCTACAGCTCCTGGGCAACGTGCTGGTTATTGTGACCGGTCGCTAGCCACCATGGTGAGCAAGGGCGAGGAGCTGTTCACCGGGGTGGTGCCCATCCTGGTCGAGCTGGACGGCGACGTAAACGGCCACAAGTTCAGCGTGTCCGGCGAGGGCGAGGGCGATGCCACCTACGGCAAGCTGACCCTGAAGTTCATCTGCACCACCGGCAAGCTGCCCGTGCCCTGGCCCACCCTCGTGACCACCCTGACCTACGGCGTGCAGTGCTTCAGCCGCTACCCCGACCACATGAAGCAGCACGACTTCTTCAAGTCCGCCATGCCCGAAGGCTACGTCCAGGAGCGCACCATCTTCTTCAAGGACGACGGCAACTACAAGACCCGCGCCGAGGTGAAGTTCGAGGGCGACACCCTGGTGAACCGCATCGAGCTGAAGGGCATCGACTTCAAGGAGGACGGCAACATCCTGGGGCACAAGCTGGAGTACAACTACAACAGCCACAACGTCTATATCATGGCCGACAAGCAGAAGAACGGCATCAAGGTGAACTTCAAGATCCGCCACAACATCGAGGACGGCAGCGTGCAGCTCGCCGACCACTACCAGCAGAACACCCCCATCGGCGACGGCCCCGTGCTGCTGCCCGACAACCACTACCTGAGCACCCAGTCCGCCCTGAGCAAAGACCCCAACGAGAAGCGCGATCACATGGTCCTGCTGGAGTTCGTGACCGCCGCCGGGATCACTCTCGGCATGGACGAGCTGTACAAGTAAcctgcaggcgccggcgtcctctgagtgctgaaggcttgctgtaggctgtatgctgTTGAGTCTCAGAGATGCCCggaag tttgcctccaactctTTCGGGATCCTGAGATTCAAca gtgtatgatgcctgttactagcattcacatgga GAGCTCGCTGATCAGCCTCGACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTGGGCTCTATGGAAGCTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCTAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAG
例示性 pITR.CAG.miR4-155_EGFP 序列 (SEQ ID NO: 232) CCTGCAGGCAGCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTGACATTGATTATTGACTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGACTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGGTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCGGGAGTCGCTGCGTTGCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCGCGCCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGGCTCTGACTGACCGCGTTACTCCCACAGGTGAGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCTTGGTTTAATGACGGCTCGTTTCTTTTCTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTAAAGGGCTCCGGGAGGGCCCTTTGTGCGGGGGGGAGCGGCTCGGGGGGTGCGTGCGTGTGTGTGTGCGTGGGGAGCGCCGCGTGCGGCCCGCGCTGCCCGGCGGCTGTGAGCGCTGCGGGCGCGGCGCGGGGCTTTGTGCGCTCCGCGTGTGCGCGAGGGGAGCGCGGCCGGGGGCGGTGCCCCGCGGTGCGGGGGGGCTGCGAGGGGAACAAAGGCTGCGTGCGGGGTGTGTGCGTGGGGGGGTGAGCAGGGGGTGTGGGCGCGGCGGTCGGGCTGTAACCCCCCCCTGCACCCCCCTCCCCGAGTTGCTGAGCACGGCCCGGCTTCGGGTGCGGGGCTCCGTGCGGGGCGTGGCGCGGGGCTCGCCGTGCCGGGCGGGGGGTGGCGGCAGGTGGGGGTGCCGGGCGGGGCGGGGCCGCCTCGGGCCGGGGAGGGCTCGGGGGAGGGGCGCGGCGGCCCCCGGAGCGCCGGCGtcctctgagtgctgaaggcttgctgtaggctgtatgctgTTCTCGAAGTGCTTCTGCCgg gtttttgcctccaactgacTcGGCGAATACTTCGAGAAca gtgtatgatgcctgttactagcattcacatgga TCTAGAGCCTCTGCTAACCATGTTCATGCCTTCTTCTTTTTCCTACAGCTCCTGGGCAACGTGCTGGTTATTGTGACCGGTCGCTAGCCACCATGGTGAGCAAGGGCGAGGAGCTGTTCACCGGGGTGGTGCCCATCCTGGTCGAGCTGGACGGCGACGTAAACGGCCACAAGTTCAGCGTGTCCGGCGAGGGCGAGGGCGATGCCACCTACGGCAAGCTGACCCTGAAGTTCATCTGCACCACCGGCAAGCTGCCCGTGCCCTGGCCCACCCTCGTGACCACCCTGACCTACGGCGTGCAGTGCTTCAGCCGCTACCCCGACCACATGAAGCAGCACGACTTCTTCAAGTCCGCCATGCCCGAAGGCTACGTCCAGGAGCGCACCATCTTCTTCAAGGACGACGGCAACTACAAGACCCGCGCCGAGGTGAAGTTCGAGGGCGACACCCTGGTGAACCGCATCGAGCTGAAGGGCATCGACTTCAAGGAGGACGGCAACATCCTGGGGCACAAGCTGGAGTACAACTACAACAGCCACAACGTCTATATCATGGCCGACAAGCAGAAGAACGGCATCAAGGTGAACTTCAAGATCCGCCACAACATCGAGGACGGCAGCGTGCAGCTCGCCGACCACTACCAGCAGAACACCCCCATCGGCGACGGCCCCGTGCTGCTGCCCGACAACCACTACCTGAGCACCCAGTCCGCCCTGAGCAAAGACCCCAACGAGAAGCGCGATCACATGGTCCTGCTGGAGTTCGTGACCGCCGCCGGGATCACTCTCGGCATGGACGAGCTGTACAAGTAAcctgcaggcgccggcgtcctctgagtgctgaaggcttgctgtaggctgtatgctgTTCTCGAAGTGCTTCTGCCgg gtttttgcctccaactgacTcGGCGAATACTTCGAGAAca gtgtatgatgcctgttactagcattcacatgga GAGCTCGCTGATCAGCCTCGACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTGGGCTCTATGGAAGCTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCTAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAG
例示性 pITR.CAG.miR5-155_EGFP 序列 (SEQ ID NO: 233) CCTGCAGGCAGCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTGACATTGATTATTGACTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGACTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGGTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCGGGAGTCGCTGCGTTGCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCGCGCCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGGCTCTGACTGACCGCGTTACTCCCACAGGTGAGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCTTGGTTTAATGACGGCTCGTTTCTTTTCTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTAAAGGGCTCCGGGAGGGCCCTTTGTGCGGGGGGGAGCGGCTCGGGGGGTGCGTGCGTGTGTGTGTGCGTGGGGAGCGCCGCGTGCGGCCCGCGCTGCCCGGCGGCTGTGAGCGCTGCGGGCGCGGCGCGGGGCTTTGTGCGCTCCGCGTGTGCGCGAGGGGAGCGCGGCCGGGGGCGGTGCCCCGCGGTGCGGGGGGGCTGCGAGGGGAACAAAGGCTGCGTGCGGGGTGTGTGCGTGGGGGGGTGAGCAGGGGGTGTGGGCGCGGCGGTCGGGCTGTAACCCCCCCCTGCACCCCCCTCCCCGAGTTGCTGAGCACGGCCCGGCTTCGGGTGCGGGGCTCCGTGCGGGGCGTGGCGCGGGGCTCGCCGTGCCGGGCGGGGGGTGGCGGCAGGTGGGGGTGCCGGGCGGGGCGGGGCCGCCTCGGGCCGGGGAGGGCTCGGGGGAGGGGCGCGGCGGCCCCCGGAGCGCCGGCGtcctctgagtgctgaaggcttgctgtaggctgtatgctgTTCTCCACCTTGACCACGCgt gtttttgcctccaactgacaTGTGGGTAAGGTGGAGAA CAgtgtatgatgcctgttactagcattcacatgga TCTAGAGCCTCTGCTAACCATGTTCATGCCTTCTTCTTTTTCCTACAGCTCCTGGGCAACGTGCTGGTTATTGTGACCGGTCGCTAGCCACCATGGTGAGCAAGGGCGAGGAGCTGTTCACCGGGGTGGTGCCCATCCTGGTCGAGCTGGACGGCGACGTAAACGGCCACAAGTTCAGCGTGTCCGGCGAGGGCGAGGGCGATGCCACCTACGGCAAGCTGACCCTGAAGTTCATCTGCACCACCGGCAAGCTGCCCGTGCCCTGGCCCACCCTCGTGACCACCCTGACCTACGGCGTGCAGTGCTTCAGCCGCTACCCCGACCACATGAAGCAGCACGACTTCTTCAAGTCCGCCATGCCCGAAGGCTACGTCCAGGAGCGCACCATCTTCTTCAAGGACGACGGCAACTACAAGACCCGCGCCGAGGTGAAGTTCGAGGGCGACACCCTGGTGAACCGCATCGAGCTGAAGGGCATCGACTTCAAGGAGGACGGCAACATCCTGGGGCACAAGCTGGAGTACAACTACAACAGCCACAACGTCTATATCATGGCCGACAAGCAGAAGAACGGCATCAAGGTGAACTTCAAGATCCGCCACAACATCGAGGACGGCAGCGTGCAGCTCGCCGACCACTACCAGCAGAACACCCCCATCGGCGACGGCCCCGTGCTGCTGCCCGACAACCACTACCTGAGCACCCAGTCCGCCCTGAGCAAAGACCCCAACGAGAAGCGCGATCACATGGTCCTGCTGGAGTTCGTGACCGCCGCCGGGATCACTCTCGGCATGGACGAGCTGTACAAGTAAcctgcaggcgccggcgtcctctgagtgctgaaggcttgctgtaggctgtatgctgTTCTCCACCTTGACCACGCgt gtttttgcctccaactgacaTGTGGGTAAGGTGGAGAA CAgtgtatgatgcctgttactagcattcacatgga GAGCTCGCTGATCAGCCTCGACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTGGGCTCTATGGAAGCTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCTAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAG
例示性 pITR.CAG.miR6-155_EGFP 序列 (SEQ ID NO: 234) CCTGCAGGCAGCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTGACATTGATTATTGACTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGACTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGGTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCGGGAGTCGCTGCGTTGCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCGCGCCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGGCTCTGACTGACCGCGTTACTCCCACAGGTGAGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCTTGGTTTAATGACGGCTCGTTTCTTTTCTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTAAAGGGCTCCGGGAGGGCCCTTTGTGCGGGGGGGAGCGGCTCGGGGGGTGCGTGCGTGTGTGTGTGCGTGGGGAGCGCCGCGTGCGGCCCGCGCTGCCCGGCGGCTGTGAGCGCTGCGGGCGCGGCGCGGGGCTTTGTGCGCTCCGCGTGTGCGCGAGGGGAGCGCGGCCGGGGGCGGTGCCCCGCGGTGCGGGGGGGCTGCGAGGGGAACAAAGGCTGCGTGCGGGGTGTGTGCGTGGGGGGGTGAGCAGGGGGTGTGGGCGCGGCGGTCGGGCTGTAACCCCCCCCTGCACCCCCCTCCCCGAGTTGCTGAGCACGGCCCGGCTTCGGGTGCGGGGCTCCGTGCGGGGCGTGGCGCGGGGCTCGCCGTGCCGGGCGGGGGGTGGCGGCAGGTGGGGGTGCCGGGCGGGGCGGGGCCGCCTCGGGCCGGGGAGGGCTCGGGGGAGGGGCGCGGCGGCCCCCGGAGCGCCGGCGtcctctgagtgctgaaggcttgctgtaggctgtatgctgATACTGTCATAGTAGTACCag gtttttgcctccaactgacctGGTCTATATGACAGTAT CAgtgtatgatgcctgttactagcattcacatgga TCTAGAGCCTCTGCTAACCATGTTCATGCCTTCTTCTTTTTCCTACAGCTCCTGGGCAACGTGCTGGTTATTGTGACCGGTCGCTAGCCACCATGGTGAGCAAGGGCGAGGAGCTGTTCACCGGGGTGGTGCCCATCCTGGTCGAGCTGGACGGCGACGTAAACGGCCACAAGTTCAGCGTGTCCGGCGAGGGCGAGGGCGATGCCACCTACGGCAAGCTGACCCTGAAGTTCATCTGCACCACCGGCAAGCTGCCCGTGCCCTGGCCCACCCTCGTGACCACCCTGACCTACGGCGTGCAGTGCTTCAGCCGCTACCCCGACCACATGAAGCAGCACGACTTCTTCAAGTCCGCCATGCCCGAAGGCTACGTCCAGGAGCGCACCATCTTCTTCAAGGACGACGGCAACTACAAGACCCGCGCCGAGGTGAAGTTCGAGGGCGACACCCTGGTGAACCGCATCGAGCTGAAGGGCATCGACTTCAAGGAGGACGGCAACATCCTGGGGCACAAGCTGGAGTACAACTACAACAGCCACAACGTCTATATCATGGCCGACAAGCAGAAGAACGGCATCAAGGTGAACTTCAAGATCCGCCACAACATCGAGGACGGCAGCGTGCAGCTCGCCGACCACTACCAGCAGAACACCCCCATCGGCGACGGCCCCGTGCTGCTGCCCGACAACCACTACCTGAGCACCCAGTCCGCCCTGAGCAAAGACCCCAACGAGAAGCGCGATCACATGGTCCTGCTGGAGTTCGTGACCGCCGCCGGGATCACTCTCGGCATGGACGAGCTGTACAAGTAAcctgcaggcgccggcgtcctctgagtgctgaaggcttgctgtaggctgtatgctgATACTGTCATAGTAGTACCag gtttttgcctccaactgacctGGTCTATATGACAGTAT CAgtgtatgatgcctgttactagcattcacatgga GAGCTCGCTGATCAGCCTCGACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTGGGCTCTATGGAAGCTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCTAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAG
例示性 pITR.CAG.miR7-155_EGFP 序列 (SEQ ID NO: 235) CCTGCAGGCAGCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTGACATTGATTATTGACTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGACTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGGTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCGGGAGTCGCTGCGTTGCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCGCGCCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGGCTCTGACTGACCGCGTTACTCCCACAGGTGAGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCTTGGTTTAATGACGGCTCGTTTCTTTTCTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTAAAGGGCTCCGGGAGGGCCCTTTGTGCGGGGGGGAGCGGCTCGGGGGGTGCGTGCGTGTGTGTGTGCGTGGGGAGCGCCGCGTGCGGCCCGCGCTGCCCGGCGGCTGTGAGCGCTGCGGGCGCGGCGCGGGGCTTTGTGCGCTCCGCGTGTGCGCGAGGGGAGCGCGGCCGGGGGCGGTGCCCCGCGGTGCGGGGGGGCTGCGAGGGGAACAAAGGCTGCGTGCGGGGTGTGTGCGTGGGGGGGTGAGCAGGGGGTGTGGGCGCGGCGGTCGGGCTGTAACCCCCCCCTGCACCCCCCTCCCCGAGTTGCTGAGCACGGCCCGGCTTCGGGTGCGGGGCTCCGTGCGGGGCGTGGCGCGGGGCTCGCCGTGCCGGGCGGGGGGTGGCGGCAGGTGGGGGTGCCGGGCGGGGCGGGGCCGCCTCGGGCCGGGGAGGGCTCGGGGGAGGGGCGCGGCGGCCCCCGGAGCGCCGGCGtcctctgagtgctgaaggcttgctgtaggctgtatgctgTAGTCGGAGGTGATGTCGGgg gtttttgcctccaactgacTcCTGCATACCTTCGATTA CAgtgtatgatgcctgttactagcattcacatgga TCTAGAGCCTCTGCTAACCATGTTCATGCCTTCTTCTTTTTCCTACAGCTCCTGGGCAACGTGCTGGTTATTGTGACCGGTCGCTAGCCACCATGGTGAGCAAGGGCGAGGAGCTGTTCACCGGGGTGGTGCCCATCCTGGTCGAGCTGGACGGCGACGTAAACGGCCACAAGTTCAGCGTGTCCGGCGAGGGCGAGGGCGATGCCACCTACGGCAAGCTGACCCTGAAGTTCATCTGCACCACCGGCAAGCTGCCCGTGCCCTGGCCCACCCTCGTGACCACCCTGACCTACGGCGTGCAGTGCTTCAGCCGCTACCCCGACCACATGAAGCAGCACGACTTCTTCAAGTCCGCCATGCCCGAAGGCTACGTCCAGGAGCGCACCATCTTCTTCAAGGACGACGGCAACTACAAGACCCGCGCCGAGGTGAAGTTCGAGGGCGACACCCTGGTGAACCGCATCGAGCTGAAGGGCATCGACTTCAAGGAGGACGGCAACATCCTGGGGCACAAGCTGGAGTACAACTACAACAGCCACAACGTCTATATCATGGCCGACAAGCAGAAGAACGGCATCAAGGTGAACTTCAAGATCCGCCACAACATCGAGGACGGCAGCGTGCAGCTCGCCGACCACTACCAGCAGAACACCCCCATCGGCGACGGCCCCGTGCTGCTGCCCGACAACCACTACCTGAGCACCCAGTCCGCCCTGAGCAAAGACCCCAACGAGAAGCGCGATCACATGGTCCTGCTGGAGTTCGTGACCGCCGCCGGGATCACTCTCGGCATGGACGAGCTGTACAAGTAAcctgcaggcgccggcgtcctctgagtgctgaaggcttgctgtaggctgtatgctgTAGTCGGAGGTGATGTCGGgg gtttttgcctccaactgacTcCTGCATACCTTCGATTA CAgtgtatgatgcctgttactagcattcacatgga GAGCTCGCTGATCAGCCTCGACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTGGGCTCTATGGAAGCTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCTAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAG
例示性 pITR.CAG.miR1-16_EGFP 序列 (SEQ ID NO: 236) CCTGCAGGCAGCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTGACATTGATTATTGACTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGACTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGGTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCGGGAGTCGCTGCGTTGCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCGCGCCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGGCTCTGACTGACCGCGTTACTCCCACAGGTGAGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCTTGGTTTAATGACGGCTCGTTTCTTTTCTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTAAAGGGCTCCGGGAGGGCCCTTTGTGCGGGGGGGAGCGGCTCGGGGGGTGCGTGCGTGTGTGTGTGCGTGGGGAGCGCCGCGTGCGGCCCGCGCTGCCCGGCGGCTGTGAGCGCTGCGGGCGCGGCGCGGGGCTTTGTGCGCTCCGCGTGTGCGCGAGGGGAGCGCGGCCGGGGGCGGTGCCCCGCGGTGCGGGGGGGCTGCGAGGGGAACAAAGGCTGCGTGCGGGGTGTGTGCGTGGGGGGGTGAGCAGGGGGTGTGGGCGCGGCGGTCGGGCTGTAACCCCCCCCTGCACCCCCCTCCCCGAGTTGCTGAGCACGGCCCGGCTTCGGGTGCGGGGCTCCGTGCGGGGCGTGGCGCGGGGCTCGCCGTGCCGGGCGGGGGGTGGCGGCAGGTGGGGGTGCCGGGCGGGGCGGGGCCGCCTCGGGCCGGGGAGGGCTCGGGGGAGGGGCGCGGCGGCCCCCGGAGCGCCGGCGCATAGCTCTTATGATAGCAATGTCAGCAGTGCCTTTGAGAATCCTGATGGAGCgg gTTAAGATTCTAAAATTATCAcGCTCCATGAGTGATTCTCAGA AGTAAGGTTGACCATACTCTACAGTTGTG TCTAGAGCCTCTGCTAACCATGTTCATGCCTTCTTCTTTTTCCTACAGCTCCTGGGCAACGTGCTGGTTATTGTGACCGGTCGCTAGCCACCATGGTGAGCAAGGGCGAGGAGCTGTTCACCGGGGTGGTGCCCATCCTGGTCGAGCTGGACGGCGACGTAAACGGCCACAAGTTCAGCGTGTCCGGCGAGGGCGAGGGCGATGCCACCTACGGCAAGCTGACCCTGAAGTTCATCTGCACCACCGGCAAGCTGCCCGTGCCCTGGCCCACCCTCGTGACCACCCTGACCTACGGCGTGCAGTGCTTCAGCCGCTACCCCGACCACATGAAGCAGCACGACTTCTTCAAGTCCGCCATGCCCGAAGGCTACGTCCAGGAGCGCACCATCTTCTTCAAGGACGACGGCAACTACAAGACCCGCGCCGAGGTGAAGTTCGAGGGCGACACCCTGGTGAACCGCATCGAGCTGAAGGGCATCGACTTCAAGGAGGACGGCAACATCCTGGGGCACAAGCTGGAGTACAACTACAACAGCCACAACGTCTATATCATGGCCGACAAGCAGAAGAACGGCATCAAGGTGAACTTCAAGATCCGCCACAACATCGAGGACGGCAGCGTGCAGCTCGCCGACCACTACCAGCAGAACACCCCCATCGGCGACGGCCCCGTGCTGCTGCCCGACAACCACTACCTGAGCACCCAGTCCGCCCTGAGCAAAGACCCCAACGAGAAGCGCGATCACATGGTCCTGCTGGAGTTCGTGACCGCCGCCGGGATCACTCTCGGCATGGACGAGCTGTACAAGTAAcctgcaggcgccggcgCATAGCTCTTATGATAGCAATGTCAGCAGTGCCTTTGAGAATCCTGATGGAGCgg gTTAAGATTCTAAAATTATCAcGCTCCATGAGTGATTCTCAGA AGTAAGGTTGACCATACTCTACAGTTGTG GAGCTCGCTGATCAGCCTCGACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTGGGCTCTATGGAAGCTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCTAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAG
例示性 pITR.CAG.miR1-26_EGFP 序列 (SEQ ID NO: 237) CCTGCAGGCAGCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTGACATTGATTATTGACTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGACTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGGTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCGGGAGTCGCTGCGTTGCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCGCGCCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGGCTCTGACTGACCGCGTTACTCCCACAGGTGAGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCTTGGTTTAATGACGGCTCGTTTCTTTTCTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTAAAGGGCTCCGGGAGGGCCCTTTGTGCGGGGGGGAGCGGCTCGGGGGGTGCGTGCGTGTGTGTGTGCGTGGGGAGCGCCGCGTGCGGCCCGCGCTGCCCGGCGGCTGTGAGCGCTGCGGGCGCGGCGCGGGGCTTTGTGCGCTCCGCGTGTGCGCGAGGGGAGCGCGGCCGGGGGCGGTGCCCCGCGGTGCGGGGGGGCTGCGAGGGGAACAAAGGCTGCGTGCGGGGTGTGTGCGTGGGGGGGTGAGCAGGGGGTGTGGGCGCGGCGGTCGGGCTGTAACCCCCCCCTGCACCCCCCTCCCCGAGTTGCTGAGCACGGCCCGGCTTCGGGTGCGGGGCTCCGTGCGGGGCGTGGCGCGGGGCTCGCCGTGCCGGGCGGGGGGTGGCGGCAGGTGGGGGTGCCGGGCGGGGCGGGGCCGCCTCGGGCCGGGGAGGGCTCGGGGGAGGGGCGCGGCGGCCCCCGGAGCGCCGGCGGAGCAGGAGGACCAAGGCCCTGGCGAAGGCCGTGGCCTCGTTGAGAATCCTGATGGAGCgg TGTGCAGGTCCCAATGGccGCTCCATAAGGATTCTCCACG GGGACGCGGGCCTGGACGCCGGCATCCGGGCTCAGGACCCCCCTC TCTAGAGCCTCTGCTAACCATGTTCATGCCTTCTTCTTTTTCCTACAGCTCCTGGGCAACGTGCTGGTTATTGTGACCGGTCGCTAGCCACCATGGTGAGCAAGGGCGAGGAGCTGTTCACCGGGGTGGTGCCCATCCTGGTCGAGCTGGACGGCGACGTAAACGGCCACAAGTTCAGCGTGTCCGGCGAGGGCGAGGGCGATGCCACCTACGGCAAGCTGACCCTGAAGTTCATCTGCACCACCGGCAAGCTGCCCGTGCCCTGGCCCACCCTCGTGACCACCCTGACCTACGGCGTGCAGTGCTTCAGCCGCTACCCCGACCACATGAAGCAGCACGACTTCTTCAAGTCCGCCATGCCCGAAGGCTACGTCCAGGAGCGCACCATCTTCTTCAAGGACGACGGCAACTACAAGACCCGCGCCGAGGTGAAGTTCGAGGGCGACACCCTGGTGAACCGCATCGAGCTGAAGGGCATCGACTTCAAGGAGGACGGCAACATCCTGGGGCACAAGCTGGAGTACAACTACAACAGCCACAACGTCTATATCATGGCCGACAAGCAGAAGAACGGCATCAAGGTGAACTTCAAGATCCGCCACAACATCGAGGACGGCAGCGTGCAGCTCGCCGACCACTACCAGCAGAACACCCCCATCGGCGACGGCCCCGTGCTGCTGCCCGACAACCACTACCTGAGCACCCAGTCCGCCCTGAGCAAAGACCCCAACGAGAAGCGCGATCACATGGTCCTGCTGGAGTTCGTGACCGCCGCCGGGATCACTCTCGGCATGGACGAGCTGTACAAGTAAcctgcaggcgccggcgGAGCAGGAGGACCAAGGCCCTGGCGAAGGCCGTGGCCTCGTTGAGAATCCTGATGGAGCgg TGTGCAGGTCCCAATGGccGCTCCATAAGGATTCTCCACG GGGACGCGGGCCTGGACGCCGGCATCCGGGCTCAGGACCCCCCTC GAGCTCGCTGATCAGCCTCGACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTGGGCTCTATGGAAGCTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCTAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAG
例示性 pITR.CAG.miR1-96_EGFP 序列 (SEQ ID NO: 238) CCTGCAGGCAGCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTGACATTGATTATTGACTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGACTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGGTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCGGGAGTCGCTGCGTTGCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCGCGCCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGGCTCTGACTGACCGCGTTACTCCCACAGGTGAGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCTTGGTTTAATGACGGCTCGTTTCTTTTCTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTAAAGGGCTCCGGGAGGGCCCTTTGTGCGGGGGGGAGCGGCTCGGGGGGTGCGTGCGTGTGTGTGTGCGTGGGGAGCGCCGCGTGCGGCCCGCGCTGCCCGGCGGCTGTGAGCGCTGCGGGCGCGGCGCGGGGCTTTGTGCGCTCCGCGTGTGCGCGAGGGGAGCGCGGCCGGGGGCGGTGCCCCGCGGTGCGGGGGGGCTGCGAGGGGAACAAAGGCTGCGTGCGGGGTGTGTGCGTGGGGGGGTGAGCAGGGGGTGTGGGCGCGGCGGTCGGGCTGTAACCCCCCCCTGCACCCCCCTCCCCGAGTTGCTGAGCACGGCCCGGCTTCGGGTGCGGGGCTCCGTGCGGGGCGTGGCGCGGGGCTCGCCGTGCCGGGCGGGGGGTGGCGGCAGGTGGGGGTGCCGGGCGGGGCGGGGCCGCCTCGGGCCGGGGAGGGCTCGGGGGAGGGGCGCGGCGGCCCCCGGAGCGCCGGCGGTGTCCCCAGAGAGCCCGCACCAGTGCCATCTGCTTGGCCGATTTGAGAATCCTGATGGAGCgg CTTGTGTCTCTCCGCTCTGAGccGGGCCATCAGATTCTCATATG GGAAAAGCAGGACCCGCAGCTGCGTCCGCCTCCCCTGCAT TCTAGAGCCTCTGCTAACCATGTTCATGCCTTCTTCTTTTTCCTACAGCTCCTGGGCAACGTGCTGGTTATTGTGACCGGTCGCTAGCCACCATGGTGAGCAAGGGCGAGGAGCTGTTCACCGGGGTGGTGCCCATCCTGGTCGAGCTGGACGGCGACGTAAACGGCCACAAGTTCAGCGTGTCCGGCGAGGGCGAGGGCGATGCCACCTACGGCAAGCTGACCCTGAAGTTCATCTGCACCACCGGCAAGCTGCCCGTGCCCTGGCCCACCCTCGTGACCACCCTGACCTACGGCGTGCAGTGCTTCAGCCGCTACCCCGACCACATGAAGCAGCACGACTTCTTCAAGTCCGCCATGCCCGAAGGCTACGTCCAGGAGCGCACCATCTTCTTCAAGGACGACGGCAACTACAAGACCCGCGCCGAGGTGAAGTTCGAGGGCGACACCCTGGTGAACCGCATCGAGCTGAAGGGCATCGACTTCAAGGAGGACGGCAACATCCTGGGGCACAAGCTGGAGTACAACTACAACAGCCACAACGTCTATATCATGGCCGACAAGCAGAAGAACGGCATCAAGGTGAACTTCAAGATCCGCCACAACATCGAGGACGGCAGCGTGCAGCTCGCCGACCACTACCAGCAGAACACCCCCATCGGCGACGGCCCCGTGCTGCTGCCCGACAACCACTACCTGAGCACCCAGTCCGCCCTGAGCAAAGACCCCAACGAGAAGCGCGATCACATGGTCCTGCTGGAGTTCGTGACCGCCGCCGGGATCACTCTCGGCATGGACGAGCTGTACAAGTAAcctgcaggcgccggcgGTGTCCCCAGAGAGCCCGCACCAGTGCCATCTGCTTGGCCGATTTGAGAATCCTGATGGAGCgg CTTGTGTCTCTCCGCTCTGAGccGGGCCATCAGATTCTCATATG GGAAAAGCAGGACCCGCAGCTGCGTCCGCCTCCCCTGCAT GAGCTCGCTGATCAGCCTCGACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTGGGCTCTATGGAAGCTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCTAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAG
例示性 pITR.CAG.miR1-122_EGFP 序列 (SEQ ID NO: 239) CCTGCAGGCAGCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTGACATTGATTATTGACTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGACTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGGTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCGGGAGTCGCTGCGTTGCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCGCGCCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGGCTCTGACTGACCGCGTTACTCCCACAGGTGAGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCTTGGTTTAATGACGGCTCGTTTCTTTTCTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTAAAGGGCTCCGGGAGGGCCCTTTGTGCGGGGGGGAGCGGCTCGGGGGGTGCGTGCGTGTGTGTGTGCGTGGGGAGCGCCGCGTGCGGCCCGCGCTGCCCGGCGGCTGTGAGCGCTGCGGGCGCGGCGCGGGGCTTTGTGCGCTCCGCGTGTGCGCGAGGGGAGCGCGGCCGGGGGCGGTGCCCCGCGGTGCGGGGGGGCTGCGAGGGGAACAAAGGCTGCGTGCGGGGTGTGTGCGTGGGGGGGTGAGCAGGGGGTGTGGGCGCGGCGGTCGGGCTGTAACCCCCCCCTGCACCCCCCTCCCCGAGTTGCTGAGCACGGCCCGGCTTCGGGTGCGGGGCTCCGTGCGGGGCGTGGCGCGGGGCTCGCCGTGCCGGGCGGGGGGTGGCGGCAGGTGGGGGTGCCGGGCGGGGCGGGGCCGCCTCGGGCCGGGGAGGGCTCGGGGGAGGGGCGCGGCGGCCCCCGGAGCGCCGGCGTGAAGTTAACACCTTCGTGGCTACAGAGTTTCCTTAGCAGAGCTGTTGAGAATCCTGATGGAGCgg GTGTCTAAACTATCccGCTCCATCcGGATTCTACATA GCTACTGCTAGGCAATCCTTCCCTCGATAAATGTCTTGGCATCG TCTAGAGCCTCTGCTAACCATGTTCATGCCTTCTTCTTTTTCCTACAGCTCCTGGGCAACGTGCTGGTTATTGTGACCGGTCGCTAGCCACCATGGTGAGCAAGGGCGAGGAGCTGTTCACCGGGGTGGTGCCCATCCTGGTCGAGCTGGACGGCGACGTAAACGGCCACAAGTTCAGCGTGTCCGGCGAGGGCGAGGGCGATGCCACCTACGGCAAGCTGACCCTGAAGTTCATCTGCACCACCGGCAAGCTGCCCGTGCCCTGGCCCACCCTCGTGACCACCCTGACCTACGGCGTGCAGTGCTTCAGCCGCTACCCCGACCACATGAAGCAGCACGACTTCTTCAAGTCCGCCATGCCCGAAGGCTACGTCCAGGAGCGCACCATCTTCTTCAAGGACGACGGCAACTACAAGACCCGCGCCGAGGTGAAGTTCGAGGGCGACACCCTGGTGAACCGCATCGAGCTGAAGGGCATCGACTTCAAGGAGGACGGCAACATCCTGGGGCACAAGCTGGAGTACAACTACAACAGCCACAACGTCTATATCATGGCCGACAAGCAGAAGAACGGCATCAAGGTGAACTTCAAGATCCGCCACAACATCGAGGACGGCAGCGTGCAGCTCGCCGACCACTACCAGCAGAACACCCCCATCGGCGACGGCCCCGTGCTGCTGCCCGACAACCACTACCTGAGCACCCAGTCCGCCCTGAGCAAAGACCCCAACGAGAAGCGCGATCACATGGTCCTGCTGGAGTTCGTGACCGCCGCCGGGATCACTCTCGGCATGGACGAGCTGTACAAGTAAcctgcaggcgccggcgTGAAGTTAACACCTTCGTGGCTACAGAGTTTCCTTAGCAGAGCTGTTGAGAATCCTGATGGAGCgg GTGTCTAAACTATCccGCTCCATCcGGATTCTACATA GCTACTGCTAGGCAATCCTTCCCTCGATAAATGTCTTGGCATCG GAGCTCGCTGATCAGCCTCGACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTGGGCTCTATGGAAGCTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCTAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAG
例示性構築體名稱： pITR.CAG.miR1-135_EGFP 序列 (SEQ ID NO: 240) CCTGCAGGCAGCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTGACATTGATTATTGACTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGACTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGGTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCGGGAGTCGCTGCGTTGCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCGCGCCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGGCTCTGACTGACCGCGTTACTCCCACAGGTGAGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCTTGGTTTAATGACGGCTCGTTTCTTTTCTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTAAAGGGCTCCGGGAGGGCCCTTTGTGCGGGGGGGAGCGGCTCGGGGGGTGCGTGCGTGTGTGTGTGCGTGGGGAGCGCCGCGTGCGGCCCGCGCTGCCCGGCGGCTGTGAGCGCTGCGGGCGCGGCGCGGGGCTTTGTGCGCTCCGCGTGTGCGCGAGGGGAGCGCGGCCGGGGGCGGTGCCCCGCGGTGCGGGGGGGCTGCGAGGGGAACAAAGGCTGCGTGCGGGGTGTGTGCGTGGGGGGGTGAGCAGGGGGTGTGGGCGCGGCGGTCGGGCTGTAACCCCCCCCTGCACCCCCCTCCCCGAGTTGCTGAGCACGGCCCGGCTTCGGGTGCGGGGCTCCGTGCGGGGCGTGGCGCGGGGCTCGCCGTGCCGGGCGGGGGGTGGCGGCAGGTGGGGGTGCCGGGCGGGGCGGGGCCGCCTCGGGCCGGGGAGGGCTCGGGGGAGGGGCGCGGCGGCCCCCGGAGCGCCGGCGGCCGCTGGACCCCTCCACTCTGCTGTGGCCTTGAGAATCCTGATGGAGCgg GATTGCTGTCCCAAACTCccGCTCCATCGGATTCTCAAGG CTACAGTGAGGGGCGAGCTCCTTCTCCTGC TCTAGAGCCTCTGCTAACCATGTTCATGCCTTCTTCTTTTTCCTACAGCTCCTGGGCAACGTGCTGGTTATTGTGACCGGTCGCTAGCCACCATGGTGAGCAAGGGCGAGGAGCTGTTCACCGGGGTGGTGCCCATCCTGGTCGAGCTGGACGGCGACGTAAACGGCCACAAGTTCAGCGTGTCCGGCGAGGGCGAGGGCGATGCCACCTACGGCAAGCTGACCCTGAAGTTCATCTGCACCACCGGCAAGCTGCCCGTGCCCTGGCCCACCCTCGTGACCACCCTGACCTACGGCGTGCAGTGCTTCAGCCGCTACCCCGACCACATGAAGCAGCACGACTTCTTCAAGTCCGCCATGCCCGAAGGCTACGTCCAGGAGCGCACCATCTTCTTCAAGGACGACGGCAACTACAAGACCCGCGCCGAGGTGAAGTTCGAGGGCGACACCCTGGTGAACCGCATCGAGCTGAAGGGCATCGACTTCAAGGAGGACGGCAACATCCTGGGGCACAAGCTGGAGTACAACTACAACAGCCACAACGTCTATATCATGGCCGACAAGCAGAAGAACGGCATCAAGGTGAACTTCAAGATCCGCCACAACATCGAGGACGGCAGCGTGCAGCTCGCCGACCACTACCAGCAGAACACCCCCATCGGCGACGGCCCCGTGCTGCTGCCCGACAACCACTACCTGAGCACCCAGTCCGCCCTGAGCAAAGACCCCAACGAGAAGCGCGATCACATGGTCCTGCTGGAGTTCGTGACCGCCGCCGGGATCACTCTCGGCATGGACGAGCTGTACAAGTAAcctgcaggcgccggcgGCCGCTGGACCCCTCCACTCTGCTGTGGCCTTGAGAATCCTGATGGAGCgg GATTGCTGTCCCAAACTCccGCTCCATCGGATTCTCAAGG CTACAGTGAGGGGCGAGCTCCTTCTCCTGC GAGCTCGCTGATCAGCCTCGACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTGGGCTCTATGGAAGCTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCTAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAG
例示性 pITR.CAG.miR1-182_EGFP 序列 (SEQ ID NO: 241) CCTGCAGGCAGCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTGACATTGATTATTGACTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGACTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGGTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCGGGAGTCGCTGCGTTGCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCGCGCCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGGCTCTGACTGACCGCGTTACTCCCACAGGTGAGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCTTGGTTTAATGACGGCTCGTTTCTTTTCTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTAAAGGGCTCCGGGAGGGCCCTTTGTGCGGGGGGGAGCGGCTCGGGGGGTGCGTGCGTGTGTGTGTGCGTGGGGAGCGCCGCGTGCGGCCCGCGCTGCCCGGCGGCTGTGAGCGCTGCGGGCGCGGCGCGGGGCTTTGTGCGCTCCGCGTGTGCGCGAGGGGAGCGCGGCCGGGGGCGGTGCCCCGCGGTGCGGGGGGGCTGCGAGGGGAACAAAGGCTGCGTGCGGGGTGTGTGCGTGGGGGGGTGAGCAGGGGGTGTGGGCGCGGCGGTCGGGCTGTAACCCCCCCCTGCACCCCCCTCCCCGAGTTGCTGAGCACGGCCCGGCTTCGGGTGCGGGGCTCCGTGCGGGGCGTGGCGCGGGGCTCGCCGTGCCGGGCGGGGGGTGGCGGCAGGTGGGGGTGCCGGGCGGGGCGGGGCCGCCTCGGGCCGGGGAGGGCTCGGGGGAGGGGCGCGGCGGCCCCCGGAGCGCCGGCGCTCCCCAGCTCCTGGGGGGAGCTGCTTGCCTCCCCCCGTTTTGAGAATCCTGATGGAGCgg ACTGGTGAGGTAACAGGATCCGCCGTCCATCTTTATTCTCACTA TGGGGCGAGGACTCAGCCGGCACCCTGTGCACAGCCAGCGAGGG TCTAGAGCCTCTGCTAACCATGTTCATGCCTTCTTCTTTTTCCTACAGCTCCTGGGCAACGTGCTGGTTATTGTGACCGGTCGCTAGCCACCATGGTGAGCAAGGGCGAGGAGCTGTTCACCGGGGTGGTGCCCATCCTGGTCGAGCTGGACGGCGACGTAAACGGCCACAAGTTCAGCGTGTCCGGCGAGGGCGAGGGCGATGCCACCTACGGCAAGCTGACCCTGAAGTTCATCTGCACCACCGGCAAGCTGCCCGTGCCCTGGCCCACCCTCGTGACCACCCTGACCTACGGCGTGCAGTGCTTCAGCCGCTACCCCGACCACATGAAGCAGCACGACTTCTTCAAGTCCGCCATGCCCGAAGGCTACGTCCAGGAGCGCACCATCTTCTTCAAGGACGACGGCAACTACAAGACCCGCGCCGAGGTGAAGTTCGAGGGCGACACCCTGGTGAACCGCATCGAGCTGAAGGGCATCGACTTCAAGGAGGACGGCAACATCCTGGGGCACAAGCTGGAGTACAACTACAACAGCCACAACGTCTATATCATGGCCGACAAGCAGAAGAACGGCATCAAGGTGAACTTCAAGATCCGCCACAACATCGAGGACGGCAGCGTGCAGCTCGCCGACCACTACCAGCAGAACACCCCCATCGGCGACGGCCCCGTGCTGCTGCCCGACAACCACTACCTGAGCACCCAGTCCGCCCTGAGCAAAGACCCCAACGAGAAGCGCGATCACATGGTCCTGCTGGAGTTCGTGACCGCCGCCGGGATCACTCTCGGCATGGACGAGCTGTACAAGTAAcctgcaggcgccggcgCTCCCCAGCTCCTGGGGGGAGCTGCTTGCCTCCCCCCGTTTTGAGAATCCTGATGGAGCgg ACTGGTGAGGTAACAGGATCCGCCGTCCATCTTTATTCTCACTA TGGGGCGAGGACTCAGCCGGCACCCTGTGCACAGCCAGCGAGGG GAGCTCGCTGATCAGCCTCGACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTGGGCTCTATGGAAGCTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCTAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAG
例示性 pITR.CAG.miR1-183_EGFP 序列 (SEQ ID NO: 242) CCTGCAGGCAGCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTGACATTGATTATTGACTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGACTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGGTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCGGGAGTCGCTGCGTTGCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCGCGCCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGGCTCTGACTGACCGCGTTACTCCCACAGGTGAGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCTTGGTTTAATGACGGCTCGTTTCTTTTCTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTAAAGGGCTCCGGGAGGGCCCTTTGTGCGGGGGGGAGCGGCTCGGGGGGTGCGTGCGTGTGTGTGTGCGTGGGGAGCGCCGCGTGCGGCCCGCGCTGCCCGGCGGCTGTGAGCGCTGCGGGCGCGGCGCGGGGCTTTGTGCGCTCCGCGTGTGCGCGAGGGGAGCGCGGCCGGGGGCGGTGCCCCGCGGTGCGGGGGGGCTGCGAGGGGAACAAAGGCTGCGTGCGGGGTGTGTGCGTGGGGGGGTGAGCAGGGGGTGTGGGCGCGGCGGTCGGGCTGTAACCCCCCCCTGCACCCCCCTCCCCGAGTTGCTGAGCACGGCCCGGCTTCGGGTGCGGGGCTCCGTGCGGGGCGTGGCGCGGGGCTCGCCGTGCCGGGCGGGGGGTGGCGGCAGGTGGGGGTGCCGGGCGGGGCGGGGCCGCCTCGGGCCGGGGAGGGCTCGGGGGAGGGGCGCGGCGGCCCCCGGAGCGCCGGCGAGGGTCGGCAGGCCGCAGAGTGTGACTCCTGTTCTGTGTTTGAGAATCCTGATGGAGCgg GTGAACAGTCTCAGTCccGCTCCCAGGAAATGGTCAAAA ACAGAGCAGAGACAGATCCACGAGGGCCTCCGGAGCACCTT TCTAGAGCCTCTGCTAACCATGTTCATGCCTTCTTCTTTTTCCTACAGCTCCTGGGCAACGTGCTGGTTATTGTGACCGGTCGCTAGCCACCATGGTGAGCAAGGGCGAGGAGCTGTTCACCGGGGTGGTGCCCATCCTGGTCGAGCTGGACGGCGACGTAAACGGCCACAAGTTCAGCGTGTCCGGCGAGGGCGAGGGCGATGCCACCTACGGCAAGCTGACCCTGAAGTTCATCTGCACCACCGGCAAGCTGCCCGTGCCCTGGCCCACCCTCGTGACCACCCTGACCTACGGCGTGCAGTGCTTCAGCCGCTACCCCGACCACATGAAGCAGCACGACTTCTTCAAGTCCGCCATGCCCGAAGGCTACGTCCAGGAGCGCACCATCTTCTTCAAGGACGACGGCAACTACAAGACCCGCGCCGAGGTGAAGTTCGAGGGCGACACCCTGGTGAACCGCATCGAGCTGAAGGGCATCGACTTCAAGGAGGACGGCAACATCCTGGGGCACAAGCTGGAGTACAACTACAACAGCCACAACGTCTATATCATGGCCGACAAGCAGAAGAACGGCATCAAGGTGAACTTCAAGATCCGCCACAACATCGAGGACGGCAGCGTGCAGCTCGCCGACCACTACCAGCAGAACACCCCCATCGGCGACGGCCCCGTGCTGCTGCCCGACAACCACTACCTGAGCACCCAGTCCGCCCTGAGCAAAGACCCCAACGAGAAGCGCGATCACATGGTCCTGCTGGAGTTCGTGACCGCCGCCGGGATCACTCTCGGCATGGACGAGCTGTACAAGTAAcctgcaggcgccggcgAGGGTCGGCAGGCCGCAGAGTGTGACTCCTGTTCTGTGTTTGAGAATCCTGATGGAGCgg GTGAACAGTCTCAGTCccGCTCCCAGGAAATGGTCAAAA ACAGAGCAGAGACAGATCCACGAGGGCCTCCGGAGCACCTT GAGCTCGCTGATCAGCCTCGACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTGGGCTCTATGGAAGCTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCTAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAG
例示性 pITR.CAG.miR1-335_EGFP 序列 (SEQ ID NO: 243) CCTGCAGGCAGCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTGACATTGATTATTGACTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGACTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGGTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCGGGAGTCGCTGCGTTGCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCGCGCCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGGCTCTGACTGACCGCGTTACTCCCACAGGTGAGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCTTGGTTTAATGACGGCTCGTTTCTTTTCTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTAAAGGGCTCCGGGAGGGCCCTTTGTGCGGGGGGGAGCGGCTCGGGGGGTGCGTGCGTGTGTGTGTGCGTGGGGAGCGCCGCGTGCGGCCCGCGCTGCCCGGCGGCTGTGAGCGCTGCGGGCGCGGCGCGGGGCTTTGTGCGCTCCGCGTGTGCGCGAGGGGAGCGCGGCCGGGGGCGGTGCCCCGCGGTGCGGGGGGGCTGCGAGGGGAACAAAGGCTGCGTGCGGGGTGTGTGCGTGGGGGGGTGAGCAGGGGGTGTGGGCGCGGCGGTCGGGCTGTAACCCCCCCCTGCACCCCCCTCCCCGAGTTGCTGAGCACGGCCCGGCTTCGGGTGCGGGGCTCCGTGCGGGGCGTGGCGCGGGGCTCGCCGTGCCGGGCGGGGGGTGGCGGCAGGTGGGGGTGCCGGGCGGGGCGGGGCCGCCTCGGGCCGGGGAGGGCTCGGGGGAGGGGCGCGGCGGCCCCCGGAGCGCCGGCGGAAACAGATTGGAAATGATTTGTTTTGAGCGGGGGTTGAGAATCCTGATGGAGCgg GTTTGTCATAAACCccGCTCCCTCAGGATTCCCAACC TCCTCTCATTTGCTATATTCAATTAAGTAA TCTAGAGCCTCTGCTAACCATGTTCATGCCTTCTTCTTTTTCCTACAGCTCCTGGGCAACGTGCTGGTTATTGTGACCGGTCGCTAGCCACCATGGTGAGCAAGGGCGAGGAGCTGTTCACCGGGGTGGTGCCCATCCTGGTCGAGCTGGACGGCGACGTAAACGGCCACAAGTTCAGCGTGTCCGGCGAGGGCGAGGGCGATGCCACCTACGGCAAGCTGACCCTGAAGTTCATCTGCACCACCGGCAAGCTGCCCGTGCCCTGGCCCACCCTCGTGACCACCCTGACCTACGGCGTGCAGTGCTTCAGCCGCTACCCCGACCACATGAAGCAGCACGACTTCTTCAAGTCCGCCATGCCCGAAGGCTACGTCCAGGAGCGCACCATCTTCTTCAAGGACGACGGCAACTACAAGACCCGCGCCGAGGTGAAGTTCGAGGGCGACACCCTGGTGAACCGCATCGAGCTGAAGGGCATCGACTTCAAGGAGGACGGCAACATCCTGGGGCACAAGCTGGAGTACAACTACAACAGCCACAACGTCTATATCATGGCCGACAAGCAGAAGAACGGCATCAAGGTGAACTTCAAGATCCGCCACAACATCGAGGACGGCAGCGTGCAGCTCGCCGACCACTACCAGCAGAACACCCCCATCGGCGACGGCCCCGTGCTGCTGCCCGACAACCACTACCTGAGCACCCAGTCCGCCCTGAGCAAAGACCCCAACGAGAAGCGCGATCACATGGTCCTGCTGGAGTTCGTGACCGCCGCCGGGATCACTCTCGGCATGGACGAGCTGTACAAGTAAcctgcaggcgccggcgGAAACAGATTGGAAATGATTTGTTTTGAGCGGGGGTTGAGAATCCTGATGGAGCgg GTTTGTCATAAACCccGCTCCCTCAGGATTCCCAACC TCCTCTCATTTGCTATATTCAATTAAGTAA GAGCTCGCTGATCAGCCTCGACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTGGGCTCTATGGAAGCTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCTAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAG
例示性 pITR.CAG.miR1-451_EGFP 序列 (SEQ ID NO: 244) CCTGCAGGCAGCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTGACATTGATTATTGACTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGACTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGGTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCGGGAGTCGCTGCGTTGCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCGCGCCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGGCTCTGACTGACCGCGTTACTCCCACAGGTGAGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCTTGGTTTAATGACGGCTCGTTTCTTTTCTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTAAAGGGCTCCGGGAGGGCCCTTTGTGCGGGGGGGAGCGGCTCGGGGGGTGCGTGCGTGTGTGTGTGCGTGGGGAGCGCCGCGTGCGGCCCGCGCTGCCCGGCGGCTGTGAGCGCTGCGGGCGCGGCGCGGGGCTTTGTGCGCTCCGCGTGTGCGCGAGGGGAGCGCGGCCGGGGGCGGTGCCCCGCGGTGCGGGGGGGCTGCGAGGGGAACAAAGGCTGCGTGCGGGGTGTGTGCGTGGGGGGGTGAGCAGGGGGTGTGGGCGCGGCGGTCGGGCTGTAACCCCCCCCTGCACCCCCCTCCCCGAGTTGCTGAGCACGGCCCGGCTTCGGGTGCGGGGCTCCGTGCGGGGCGTGGCGCGGGGCTCGCCGTGCCGGGCGGGGGGTGGCGGCAGGTGGGGGTGCCGGGCGGGGCGGGGCCGCCTCGGGCCGGGGAGGGCTCGGGGGAGGGGCGCGGCGGCCCCCGGAGCGCCGGCGTGACTGCCAGGGCACTTGGGAATGGCAAGGTTGAGAATCCTGATGGAGCgg attccatcaggattctcagtCTTGCTATACCCAGAAAACGTGCCAGGAAGATCTAGAGCCTCTGCTAACCATGTTCATGCCTTCTTCTTTTTCCTACAGCTCCTGGGCAACGTGCTGGTTATTGTGACCGGTCGCTAGCCACCATGGTGAGCAAGGGCGAGGAGCTGTTCACCGGGGTGGTGCCCATCCTGGTCGAGCTGGACGGCGACGTAAACGGCCACAAGTTCAGCGTGTCCGGCGAGGGCGAGGGCGATGCCACCTACGGCAAGCTGACCCTGAAGTTCATCTGCACCACCGGCAAGCTGCCCGTGCCCTGGCCCACCCTCGTGACCACCCTGACCTACGGCGTGCAGTGCTTCAGCCGCTACCCCGACCACATGAAGCAGCACGACTTCTTCAAGTCCGCCATGCCCGAAGGCTACGTCCAGGAGCGCACCATCTTCTTCAAGGACGACGGCAACTACAAGACCCGCGCCGAGGTGAAGTTCGAGGGCGACACCCTGGTGAACCGCATCGAGCTGAAGGGCATCGACTTCAAGGAGGACGGCAACATCCTGGGGCACAAGCTGGAGTACAACTACAACAGCCACAACGTCTATATCATGGCCGACAAGCAGAAGAACGGCATCAAGGTGAACTTCAAGATCCGCCACAACATCGAGGACGGCAGCGTGCAGCTCGCCGACCACTACCAGCAGAACACCCCCATCGGCGACGGCCCCGTGCTGCTGCCCGACAACCACTACCTGAGCACCCAGTCCGCCCTGAGCAAAGACCCCAACGAGAAGCGCGATCACATGGTCCTGCTGGAGTTCGTGACCGCCGCCGGGATCACTCTCGGCATGGACGAGCTGTACAAGTAAcctgcaggcgccggcgTGACTGCCAGGGCACTTGGGAATGGCAAGGTTGAGAATCCTGATGGAGCgg attccatcaggattctcagtCTTGCTATACCCAGAAAACGTGCCAGGAAGAGAGCTCGCTGATCAGCCTCGACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTGGGCTCTATGGAAGCTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCTAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAG例示性 miRNA 構築體序列 ( 第 4 部分 )
例示性 pITR.CAG.mmu.miR6-26 EGFP (SEQ ID NO: 245) CTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTGACATTGATTATTGACTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGACTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGGTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCGGGAGTCGCTGCGTTGCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCGCGCCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGGCTCTGACTGACCGCGTTACTCCCACAGGTGAGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCTTGGTTTAATGACGGCTCGTTTCTTTTCTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTAAAGGGCTCCGGGAGGGCCCTTTGTGCGGGGGGGAGCGGCTCGGGGGGTGCGTGCGTGTGTGTGTGCGTGGGGAGCGCCGCGTGCGGCCCGCGCTGCCCGGCGGCTGTGAGCGCTGCGGGCGCGGCGCGGGGCTTTGTGCGCTCCGCGTGTGCGCGAGGGGAGCGCGGCCGGGGGCGGTGCCCCGCGGTGCGGGGGGGCTGCGAGGGGAACAAAGGCTGCGTGCGGGGTGTGTGCGTGGGGGGGTGAGCAGGGGGTGTGGGCGCGGCGGTCGGGCTGTAACCCCCCCCTGCACCCCCCTCCCCGAGTTGCTGAGCACGGCCCGGCTTCGGGTGCGGGGCTCCGTGCGGGGCGTGGCGCGGGGCTCGCCGTGCCGGGCGGGGGGTGGCGGCAGGTGGGGGTGCCGGGCGGGGCGGGGCCGCCTCGGGCCGGGGAGGGCTCGGGGGAGGGGCGCGGCGGCCCCCGGAGCGCCGGCGGAGCAGGAGGACCAAGGCCCTGGCGAAGGCCGTGGCCTCGATGCTGTCATAGTAATACCAGTGTGCAGGTCCCAATGGCTGGTATTAATGTGACAGTCTCGGGGACGCGGGCCTGGACGCCGGCATCCGGGCTCAGGACCCCCCTCTCTAGAGCCTCTGCTAACCATGTTCATGCCTTCTTCTTTTTCCTACAGCTCCTGGGCAACGTGCTGGTTATTGTGACCGGTCGCTAGCCACCATGGTGAGCAAGGGCGAGGAGCTGTTCACCGGGGTGGTGCCCATCCTGGTCGAGCTGGACGGCGACGTAAACGGCCACAAGTTCAGCGTGTCCGGCGAGGGCGAGGGCGATGCCACCTACGGCAAGCTGACCCTGAAGTTCATCTGCACCACCGGCAAGCTGCCCGTGCCCTGGCCCACCCTCGTGACCACCCTGACCTACGGCGTGCAGTGCTTCAGCCGCTACCCCGACCACATGAAGCAGCACGACTTCTTCAAGTCCGCCATGCCCGAAGGCTACGTCCAGGAGCGCACCATCTTCTTCAAGGACGACGGCAACTACAAGACCCGCGCCGAGGTGAAGTTCGAGGGCGACACCCTGGTGAACCGCATCGAGCTGAAGGGCATCGACTTCAAGGAGGACGGCAACATCCTGGGGCACAAGCTGGAGTACAACTACAACAGCCACAACGTCTATATCATGGCCGACAAGCAGAAGAACGGCATCAAGGTGAACTTCAAGATCCGCCACAACATCGAGGACGGCAGCGTGCAGCTCGCCGACCACTACCAGCAGAACACCCCCATCGGCGACGGCCCCGTGCTGCTGCCCGACAACCACTACCTGAGCACCCAGTCCGCCCTGAGCAAAGACCCCAACGAGAAGCGCGATCACATGGTCCTGCTGGAGTTCGTGACCGCCGCCGGGATCACTCTCGGCATGGACGAGCTGTACAAGTAAcctgcaggcgccggcgGAGCAGGAGGACCAAGGCCCTGGCGAAGGCCGTGGCCTCGATGCTGTCATAGTAATACCAGTGTGCAGGTCCCAATGGCTGGTATTAATGTGACAGTCTCGGGGACGCGGGCCTGGACGCCGGCATCCGGGCTCAGGACCCCCCTCGAGCTCGCTGATCAGCCTCGACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTGGGCTCTATGGAAGCTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCTAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAG
例示性 pITR.CAG.mmu.miR6-26_KCNQ4codop (SEQ ID NO: 246) CTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTGACATTGATTATTGACTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGACTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGGTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCGGGAGTCGCTGCGTTGCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCGCGCCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGGCTCTGACTGACCGCGTTACTCCCACAGGTGAGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCTTGGTTTAATGACGGCTCGTTTCTTTTCTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTAAAGGGCTCCGGGAGGGCCCTTTGTGCGGGGGGGAGCGGCTCGGGGGGTGCGTGCGTGTGTGTGTGCGTGGGGAGCGCCGCGTGCGGCCCGCGCTGCCCGGCGGCTGTGAGCGCTGCGGGCGCGGCGCGGGGCTTTGTGCGCTCCGCGTGTGCGCGAGGGGAGCGCGGCCGGGGGCGGTGCCCCGCGGTGCGGGGGGGCTGCGAGGGGAACAAAGGCTGCGTGCGGGGTGTGTGCGTGGGGGGGTGAGCAGGGGGTGTGGGCGCGGCGGTCGGGCTGTAACCCCCCCCTGCACCCCCCTCCCCGAGTTGCTGAGCACGGCCCGGCTTCGGGTGCGGGGCTCCGTGCGGGGCGTGGCGCGGGGCTCGCCGTGCCGGGCGGGGGGTGGCGGCAGGTGGGGGTGCCGGGCGGGGCGGGGCCGCCTCGGGCCGGGGAGGGCTCGGGGGAGGGGCGCGGCGGCCCCCGGAGCGCCGGCGGAGCAGGAGGACCAAGGCCCTGGCGAAGGCCGTGGCCTCGATGCTGTCATAGTAATACCAGTGTGCAGGTCCCAATGGCTGGTATTAATGTGACAGTCTCGGGGACGCGGGCCTGGACGCCGGCATCCGGGCTCAGGACCCCCCTCTCTAGAGCCTCTGCTAACCATGTTCATGCCTTCTTCTTTTTCCTACAGCTCCTGGGCAACGTGCTGGTTATTGTGACCGGTCGCTAGCCACCATGGCTGAAGCCCCTCCTAGAAGGCTTGGACTGGGACCTCCTCCTGGGGATGCTCCTAGAGCTGAACTGGTGGCTCTGACAGCCGTGCAGTCTGAACAAGGCGAAGCTGGTGGCGGCGGATCTCCACGTAGACTTGGACTGCTGGGAAGCCCTCTTCCTCCTGGTGCTCCACTTCCTGGACCTGGCAGTGGATCTGGATCTGCCTGTGGCCAGAGAAGCTCTGCCGCTCACAAGAGATACCGGCGGCTGCAGAACTGGGTGTACAACGTGCTGGAAAGACCCAGAGGCTGGGCCTTCGTGTACCACGTGTTCATCTTTCTGCTGGTGTTCAGCTGCCTGGTGCTGTCCGTGCTGAGCACCATCCAAGAACATCAAGAGCTGGCTAACGAGTGCCTGTTAATACTGGAGTTTGTGATGATTGTGGTGTTCGGCCTCGAGTACATCGTCCGCGTTTGGAGCGCCGGCTGCTGCTGCAGATATAGAGGTTGGCAAGGCAGATTCCGCTTCGCCAGAAAGCCCTTCTGCGTGATCGACTTCATCGTGTTCGTGGCCAGCGTGGCCGTGATTGCTGCTGGCACACAGGGCAACATCTTCGCCACAAGCGCCCTGCGGAGCATGCGGTTTCTGCAGATCCTGAGAATGGTCCGAATGGACAGAAGAGGCGGCACCTGGAAGCTGCTGGGCTCTGTGGTGTACGCCCACAGCAAAGAGCTGATCACCGCCTGGTACATCGGATTTCTGGTGCTGATCTTCGCCTCCTTCCTGGTGTACCTGGCCGAGAAGGACGCCAACAGCGACTTTAGCAGCTACGCCGACTCTCTTTGGTGGGGCACCATCACACTGACCACCATCGGCTACGGCGACAAGACCCCTCACACATGGCTGGGAAGAGTGCTGGCCGCTGGATTTGCTCTGCTGGGCATCAGCTTTTTCGCCCTGCCTGCCGGAATCCTCGGATCTGGCTTTGCCCTGAAGGTGCAAGAGCAGCATAGACAAAAGCATTTTGAAAAGAGAAGAATGCCTGCCGCCAACCTGATTCAGGCCGCTTGGAGACTGTACAGCACCGACATGAGCAGAGCCTACCTGACCGCCACGTGGTATTATTACGATTCGATCCTGCCTAGCTTCCGCGAACTGGCCCTGCTGTTTGAGCATGTGCAGAGAGCCAGAAACGGCGGCCTCAGACCTCTGGAAGTTCGGAGAGCACCTGTGCCTGATGGCGCCCCTTCTAGATATCCTCCAGTGGCCACCTGTCACAGACCCGGCAGCACATCTTTTTGCCCTGGCGAGTCTAGCCGGATGGGCATCAAGGACAGAATCAGAATGGGCAGCAGCCAGCGGAGAACAGGCCCTTCTAAACAGCATCTGGCCCCTCCAACCATGCCTACAAGCCCTAGCTCTGAGCAAGTGGGCGAAGCCACCTCTCCTACCAAGGTGCAGAAGTCCTGGTCCTTCAACGACCGGACCAGATTTAGAGCCAGCCTCCGGCTGAAGCCCAGAACCTCTGCCGAGGATGCCCCTTCTGAAGAGGTGGCCGAAGAGAAGTCCTACCAGTGCGAGCTGACCGTGGACGACATCATGCCAGCCGTGAAAACCGTGATAAGGTCTATACGCATCCTGAAGTTCCTGGTGGCCAAGCGGAAGTTCAAAGAGACACTGCGGCCCTACGACGTGAAGGACGTGATCGAGCAGTATTCTGCCGGCCACCTGGACATGCTGGGCAGAATCAAGAGCCTGCAGACCAGAGTGGACCAGATCGTTGGAAGAGGCCCAGGCGACAGAAAGGCCAGAGAGAAGGGCGATAAGGGCCCATCTGATGCCGAGGTTGTCGACGAGATATCAATGATGGGCAGAGTCGTGAAAGTCGAAAAACAGGTGCAGAGCATCGAGCACAAGCTGGACCTGCTGCTGGGATTCTACAGCCGGTGTCTGAGAAGCGGCACATCTGCATCTCTGGGCGCTGTGCAGGTCCCACTGTTCGATCCTGATATTACGAGCGATTATCACAGCCCCGTGGACCACGAGGACATCTCCGTTTCTGCTCAGACCCTGAGCATCAGCAGATCCGTGTCCACCAACATGGACTAAcctgcaggcgccggcgGAGCAGGAGGACCAAGGCCCTGGCGAAGGCCGTGGCCTCGATGCTGTCATAGTAATACCAGTGTGCAGGTCCCAATGGCTGGTATTAATGTGACAGTCTCGGGGACGCGGGCCTGGACGCCGGCATCCGGGCTCAGGACCCCCCTCGAGCTCGCTGATCAGCCTCGACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTGGGCTCTATGGAAGCTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCTAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAG
例示性 pITR.CAG.mmu.miR2i_miR6u-26_EGFP (SEQ ID NO: 247) CTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTGACATTGATTATTGACTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGACTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGGTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCGGGAGTCGCTGCGTTGCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCGCGCCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGGCTCTGACTGACCGCGTTACTCCCACAGGTGAGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCTTGGTTTAATGACGGCTCGTTTCTTTTCTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTAAAGGGCTCCGGGAGGGCCCTTTGTGCGGGGGGGAGCGGCTCGGGGGGTGCGTGCGTGTGTGTGTGCGTGGGGAGCGCCGCGTGCGGCCCGCGCTGCCCGGCGGCTGTGAGCGCTGCGGGCGCGGCGCGGGGCTTTGTGCGCTCCGCGTGTGCGCGAGGGGAGCGCGGCCGGGGGCGGTGCCCCGCGGTGCGGGGGGGCTGCGAGGGGAACAAAGGCTGCGTGCGGGGTGTGTGCGTGGGGGGGTGAGCAGGGGGTGTGGGCGCGGCGGTCGGGCTGTAACCCCCCCCTGCACCCCCCTCCCCGAGTTGCTGAGCACGGCCCGGCTTCGGGTGCGGGGCTCCGTGCGGGGCGTGGCGCGGGGCTCGCCGTGCCGGGCGGGGGGTGGCGGCAGGTGGGGGTGCCGGGCGGGGCGGGGCCGCCTCGGGCCGGGGAGGGCTCGGGGGAGGGGCGCGGCGGCCCCCGGAGCGCCGGCGGAGCAGGAGGACCAAGGCCCTGGCGAAGGCCGTGGCCTCGTTGAGTCTTAGAGAGGCCCGGTGTGCAGGTCCCAATGGCCGGGTCTTACTGAGATTCCACGGGGACGCGGGCCTGGACGCCGGCATCCGGGCTCAGGACCCCCCTCTCTAGAGCCTCTGCTAACCATGTTCATGCCTTCTTCTTTTTCCTACAGCTCCTGGGCAACGTGCTGGTTATTGTGACCGGTCGCTAGCCACCATGGTGAGCAAGGGCGAGGAGCTGTTCACCGGGGTGGTGCCCATCCTGGTCGAGCTGGACGGCGACGTAAACGGCCACAAGTTCAGCGTGTCCGGCGAGGGCGAGGGCGATGCCACCTACGGCAAGCTGACCCTGAAGTTCATCTGCACCACCGGCAAGCTGCCCGTGCCCTGGCCCACCCTCGTGACCACCCTGACCTACGGCGTGCAGTGCTTCAGCCGCTACCCCGACCACATGAAGCAGCACGACTTCTTCAAGTCCGCCATGCCCGAAGGCTACGTCCAGGAGCGCACCATCTTCTTCAAGGACGACGGCAACTACAAGACCCGCGCCGAGGTGAAGTTCGAGGGCGACACCCTGGTGAACCGCATCGAGCTGAAGGGCATCGACTTCAAGGAGGACGGCAACATCCTGGGGCACAAGCTGGAGTACAACTACAACAGCCACAACGTCTATATCATGGCCGACAAGCAGAAGAACGGCATCAAGGTGAACTTCAAGATCCGCCACAACATCGAGGACGGCAGCGTGCAGCTCGCCGACCACTACCAGCAGAACACCCCCATCGGCGACGGCCCCGTGCTGCTGCCCGACAACCACTACCTGAGCACCCAGTCCGCCCTGAGCAAAGACCCCAACGAGAAGCGCGATCACATGGTCCTGCTGGAGTTCGTGACCGCCGCCGGGATCACTCTCGGCATGGACGAGCTGTACAAGTAAcctgcaggcgccggcgGAGCAGGAGGACCAAGGCCCTGGCGAAGGCCGTGGCCTCGATGCTGTCATAGTAATACCAGTGTGCAGGTCCCAATGGCTGGTATTAATGTGACAGTCTCGGGGACGCGGGCCTGGACGCCGGCATCCGGGCTCAGGACCCCCCTCGAGCTCGCTGATCAGCCTCGACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTGGGCTCTATGGAAGCTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCTAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAG
例示性 pITR.CAG.mmu.miR2i_miR6u-26_KCNQ4codop (SEQ ID NO: 248) CTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTGACATTGATTATTGACTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGACTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGGTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCGGGAGTCGCTGCGTTGCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCGCGCCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGGCTCTGACTGACCGCGTTACTCCCACAGGTGAGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCTTGGTTTAATGACGGCTCGTTTCTTTTCTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTAAAGGGCTCCGGGAGGGCCCTTTGTGCGGGGGGGAGCGGCTCGGGGGGTGCGTGCGTGTGTGTGTGCGTGGGGAGCGCCGCGTGCGGCCCGCGCTGCCCGGCGGCTGTGAGCGCTGCGGGCGCGGCGCGGGGCTTTGTGCGCTCCGCGTGTGCGCGAGGGGAGCGCGGCCGGGGGCGGTGCCCCGCGGTGCGGGGGGGCTGCGAGGGGAACAAAGGCTGCGTGCGGGGTGTGTGCGTGGGGGGGTGAGCAGGGGGTGTGGGCGCGGCGGTCGGGCTGTAACCCCCCCCTGCACCCCCCTCCCCGAGTTGCTGAGCACGGCCCGGCTTCGGGTGCGGGGCTCCGTGCGGGGCGTGGCGCGGGGCTCGCCGTGCCGGGCGGGGGGTGGCGGCAGGTGGGGGTGCCGGGCGGGGCGGGGCCGCCTCGGGCCGGGGAGGGCTCGGGGGAGGGGCGCGGCGGCCCCCGGAGCGCCGGCGGAGCAGGAGGACCAAGGCCCTGGCGAAGGCCGTGGCCTCGTTGAGTCTTAGAGAGGCCCGGTGTGCAGGTCCCAATGGCCGGGTCTTACTGAGATTCCACGGGGACGCGGGCCTGGACGCCGGCATCCGGGCTCAGGACCCCCCTCTCTAGAGCCTCTGCTAACCATGTTCATGCCTTCTTCTTTTTCCTACAGCTCCTGGGCAACGTGCTGGTTATTGTGACCGGTCGCTAGCCACCATGGCTGAAGCCCCTCCTAGAAGGCTTGGACTGGGACCTCCTCCTGGGGATGCTCCTAGAGCTGAACTGGTGGCTCTGACAGCCGTGCAGTCTGAACAAGGCGAAGCTGGTGGCGGCGGATCTCCACGTAGACTTGGACTGCTGGGAAGCCCTCTTCCTCCTGGTGCTCCACTTCCTGGACCTGGCAGTGGATCTGGATCTGCCTGTGGCCAGAGAAGCTCTGCCGCTCACAAGAGATACCGGCGGCTGCAGAACTGGGTGTACAACGTGCTGGAAAGACCCAGAGGCTGGGCCTTCGTGTACCACGTGTTCATCTTTCTGCTGGTGTTCAGCTGCCTGGTGCTGTCCGTGCTGAGCACCATCCAAGAACATCAAGAGCTGGCTAACGAGTGCCTGTTAATACTGGAGTTTGTGATGATTGTGGTGTTCGGCCTCGAGTACATCGTCCGCGTTTGGAGCGCCGGCTGCTGCTGCAGATATAGAGGTTGGCAAGGCAGATTCCGCTTCGCCAGAAAGCCCTTCTGCGTGATCGACTTCATCGTGTTCGTGGCCAGCGTGGCCGTGATTGCTGCTGGCACACAGGGCAACATCTTCGCCACAAGCGCCCTGCGGAGCATGCGGTTTCTGCAGATCCTGAGAATGGTCCGAATGGACAGAAGAGGCGGCACCTGGAAGCTGCTGGGCTCTGTGGTGTACGCCCACAGCAAAGAGCTGATCACCGCCTGGTACATCGGATTTCTGGTGCTGATCTTCGCCTCCTTCCTGGTGTACCTGGCCGAGAAGGACGCCAACAGCGACTTTAGCAGCTACGCCGACTCTCTTTGGTGGGGCACCATCACACTGACCACCATCGGCTACGGCGACAAGACCCCTCACACATGGCTGGGAAGAGTGCTGGCCGCTGGATTTGCTCTGCTGGGCATCAGCTTTTTCGCCCTGCCTGCCGGAATCCTCGGATCTGGCTTTGCCCTGAAGGTGCAAGAGCAGCATAGACAAAAGCATTTTGAAAAGAGAAGAATGCCTGCCGCCAACCTGATTCAGGCCGCTTGGAGACTGTACAGCACCGACATGAGCAGAGCCTACCTGACCGCCACGTGGTATTATTACGATTCGATCCTGCCTAGCTTCCGCGAACTGGCCCTGCTGTTTGAGCATGTGCAGAGAGCCAGAAACGGCGGCCTCAGACCTCTGGAAGTTCGGAGAGCACCTGTGCCTGATGGCGCCCCTTCTAGATATCCTCCAGTGGCCACCTGTCACAGACCCGGCAGCACATCTTTTTGCCCTGGCGAGTCTAGCCGGATGGGCATCAAGGACAGAATCAGAATGGGCAGCAGCCAGCGGAGAACAGGCCCTTCTAAACAGCATCTGGCCCCTCCAACCATGCCTACAAGCCCTAGCTCTGAGCAAGTGGGCGAAGCCACCTCTCCTACCAAGGTGCAGAAGTCCTGGTCCTTCAACGACCGGACCAGATTTAGAGCCAGCCTCCGGCTGAAGCCCAGAACCTCTGCCGAGGATGCCCCTTCTGAAGAGGTGGCCGAAGAGAAGTCCTACCAGTGCGAGCTGACCGTGGACGACATCATGCCAGCCGTGAAAACCGTGATAAGGTCTATACGCATCCTGAAGTTCCTGGTGGCCAAGCGGAAGTTCAAAGAGACACTGCGGCCCTACGACGTGAAGGACGTGATCGAGCAGTATTCTGCCGGCCACCTGGACATGCTGGGCAGAATCAAGAGCCTGCAGACCAGAGTGGACCAGATCGTTGGAAGAGGCCCAGGCGACAGAAAGGCCAGAGAGAAGGGCGATAAGGGCCCATCTGATGCCGAGGTTGTCGACGAGATATCAATGATGGGCAGAGTCGTGAAAGTCGAAAAACAGGTGCAGAGCATCGAGCACAAGCTGGACCTGCTGCTGGGATTCTACAGCCGGTGTCTGAGAAGCGGCACATCTGCATCTCTGGGCGCTGTGCAGGTCCCACTGTTCGATCCTGATATTACGAGCGATTATCACAGCCCCGTGGACCACGAGGACATCTCCGTTTCTGCTCAGACCCTGAGCATCAGCAGATCCGTGTCCACCAACATGGACTAAcctgcaggcgccggcgGAGCAGGAGGACCAAGGCCCTGGCGAAGGCCGTGGCCTCGATGCTGTCATAGTAATACCAGTGTGCAGGTCCCAATGGCTGGTATTAATGTGACAGTCTCGGGGACGCGGGCCTGGACGCCGGCATCCGGGCTCAGGACCCCCCTCGAGCTCGCTGATCAGCCTCGACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTGGGCTCTATGGAAGCTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCTAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAG
例示性 pITR.CAG.mmu.miR5i_miR6u-26_EGFP (SEQ ID NO: 249) CTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTGACATTGATTATTGACTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGACTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGGTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCGGGAGTCGCTGCGTTGCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCGCGCCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGGCTCTGACTGACCGCGTTACTCCCACAGGTGAGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCTTGGTTTAATGACGGCTCGTTTCTTTTCTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTAAAGGGCTCCGGGAGGGCCCTTTGTGCGGGGGGGAGCGGCTCGGGGGGTGCGTGCGTGTGTGTGTGCGTGGGGAGCGCCGCGTGCGGCCCGCGCTGCCCGGCGGCTGTGAGCGCTGCGGGCGCGGCGCGGGGCTTTGTGCGCTCCGCGTGTGCGCGAGGGGAGCGCGGCCGGGGGCGGTGCCCCGCGGTGCGGGGGGGCTGCGAGGGGAACAAAGGCTGCGTGCGGGGTGTGTGCGTGGGGGGGTGAGCAGGGGGTGTGGGCGCGGCGGTCGGGCTGTAACCCCCCCCTGCACCCCCCTCCCCGAGTTGCTGAGCACGGCCCGGCTTCGGGTGCGGGGCTCCGTGCGGGGCGTGGCGCGGGGCTCGCCGTGCCGGGCGGGGGGTGGCGGCAGGTGGGGGTGCCGGGCGGGGCGGGGCCGCCTCGGGCCGGGGAGGGCTCGGGGGAGGGGCGCGGCGGCCCCCGGAGCGCCGGCGGAGCAGGAGGACCAAGGCCCTGGCGAAGGCCGTGGCCTCGTTTTCCACCTTGACTACGCGCTGTGCAGGTCCCAATGGGCGTGTAGTAGAGGTGGAGCACGGGGACGCGGGCCTGGACGCCGGCATCCGGGCTCAGGACCCCCCTCTCTAGAGCCTCTGCTAACCATGTTCATGCCTTCTTCTTTTTCCTACAGCTCCTGGGCAACGTGCTGGTTATTGTGACCGGTCGCTAGCCACCATGGTGAGCAAGGGCGAGGAGCTGTTCACCGGGGTGGTGCCCATCCTGGTCGAGCTGGACGGCGACGTAAACGGCCACAAGTTCAGCGTGTCCGGCGAGGGCGAGGGCGATGCCACCTACGGCAAGCTGACCCTGAAGTTCATCTGCACCACCGGCAAGCTGCCCGTGCCCTGGCCCACCCTCGTGACCACCCTGACCTACGGCGTGCAGTGCTTCAGCCGCTACCCCGACCACATGAAGCAGCACGACTTCTTCAAGTCCGCCATGCCCGAAGGCTACGTCCAGGAGCGCACCATCTTCTTCAAGGACGACGGCAACTACAAGACCCGCGCCGAGGTGAAGTTCGAGGGCGACACCCTGGTGAACCGCATCGAGCTGAAGGGCATCGACTTCAAGGAGGACGGCAACATCCTGGGGCACAAGCTGGAGTACAACTACAACAGCCACAACGTCTATATCATGGCCGACAAGCAGAAGAACGGCATCAAGGTGAACTTCAAGATCCGCCACAACATCGAGGACGGCAGCGTGCAGCTCGCCGACCACTACCAGCAGAACACCCCCATCGGCGACGGCCCCGTGCTGCTGCCCGACAACCACTACCTGAGCACCCAGTCCGCCCTGAGCAAAGACCCCAACGAGAAGCGCGATCACATGGTCCTGCTGGAGTTCGTGACCGCCGCCGGGATCACTCTCGGCATGGACGAGCTGTACAAGTAAcctgcaggcgccggcgGAGCAGGAGGACCAAGGCCCTGGCGAAGGCCGTGGCCTCGATGCTGTCATAGTAATACCAGTGTGCAGGTCCCAATGGCTGGTATTAATGTGACAGTCTCGGGGACGCGGGCCTGGACGCCGGCATCCGGGCTCAGGACCCCCCTCGAGCTCGCTGATCAGCCTCGACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTGGGCTCTATGGAAGCTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCTAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAG
例示性 pITR.CAG.mmu.miR5i_miR6u-26_KCNQ4codop (SEQ ID NO: 250) CTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTGACATTGATTATTGACTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGACTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGGTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCGGGAGTCGCTGCGTTGCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCGCGCCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGGCTCTGACTGACCGCGTTACTCCCACAGGTGAGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCTTGGTTTAATGACGGCTCGTTTCTTTTCTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTAAAGGGCTCCGGGAGGGCCCTTTGTGCGGGGGGGAGCGGCTCGGGGGGTGCGTGCGTGTGTGTGTGCGTGGGGAGCGCCGCGTGCGGCCCGCGCTGCCCGGCGGCTGTGAGCGCTGCGGGCGCGGCGCGGGGCTTTGTGCGCTCCGCGTGTGCGCGAGGGGAGCGCGGCCGGGGGCGGTGCCCCGCGGTGCGGGGGGGCTGCGAGGGGAACAAAGGCTGCGTGCGGGGTGTGTGCGTGGGGGGGTGAGCAGGGGGTGTGGGCGCGGCGGTCGGGCTGTAACCCCCCCCTGCACCCCCCTCCCCGAGTTGCTGAGCACGGCCCGGCTTCGGGTGCGGGGCTCCGTGCGGGGCGTGGCGCGGGGCTCGCCGTGCCGGGCGGGGGGTGGCGGCAGGTGGGGGTGCCGGGCGGGGCGGGGCCGCCTCGGGCCGGGGAGGGCTCGGGGGAGGGGCGCGGCGGCCCCCGGAGCGCCGGCGGAGCAGGAGGACCAAGGCCCTGGCGAAGGCCGTGGCCTCGTTTTCCACCTTGACTACGCGCTGTGCAGGTCCCAATGGGCGTGTAGTAGAGGTGGAGCACGGGGACGCGGGCCTGGACGCCGGCATCCGGGCTCAGGACCCCCCTCTCTAGAGCCTCTGCTAACCATGTTCATGCCTTCTTCTTTTTCCTACAGCTCCTGGGCAACGTGCTGGTTATTGTGACCGGTCGCTAGCCACCATGGCTGAAGCCCCTCCTAGAAGGCTTGGACTGGGACCTCCTCCTGGGGATGCTCCTAGAGCTGAACTGGTGGCTCTGACAGCCGTGCAGTCTGAACAAGGCGAAGCTGGTGGCGGCGGATCTCCACGTAGACTTGGACTGCTGGGAAGCCCTCTTCCTCCTGGTGCTCCACTTCCTGGACCTGGCAGTGGATCTGGATCTGCCTGTGGCCAGAGAAGCTCTGCCGCTCACAAGAGATACCGGCGGCTGCAGAACTGGGTGTACAACGTGCTGGAAAGACCCAGAGGCTGGGCCTTCGTGTACCACGTGTTCATCTTTCTGCTGGTGTTCAGCTGCCTGGTGCTGTCCGTGCTGAGCACCATCCAAGAACATCAAGAGCTGGCTAACGAGTGCCTGTTAATACTGGAGTTTGTGATGATTGTGGTGTTCGGCCTCGAGTACATCGTCCGCGTTTGGAGCGCCGGCTGCTGCTGCAGATATAGAGGTTGGCAAGGCAGATTCCGCTTCGCCAGAAAGCCCTTCTGCGTGATCGACTTCATCGTGTTCGTGGCCAGCGTGGCCGTGATTGCTGCTGGCACACAGGGCAACATCTTCGCCACAAGCGCCCTGCGGAGCATGCGGTTTCTGCAGATCCTGAGAATGGTCCGAATGGACAGAAGAGGCGGCACCTGGAAGCTGCTGGGCTCTGTGGTGTACGCCCACAGCAAAGAGCTGATCACCGCCTGGTACATCGGATTTCTGGTGCTGATCTTCGCCTCCTTCCTGGTGTACCTGGCCGAGAAGGACGCCAACAGCGACTTTAGCAGCTACGCCGACTCTCTTTGGTGGGGCACCATCACACTGACCACCATCGGCTACGGCGACAAGACCCCTCACACATGGCTGGGAAGAGTGCTGGCCGCTGGATTTGCTCTGCTGGGCATCAGCTTTTTCGCCCTGCCTGCCGGAATCCTCGGATCTGGCTTTGCCCTGAAGGTGCAAGAGCAGCATAGACAAAAGCATTTTGAAAAGAGAAGAATGCCTGCCGCCAACCTGATTCAGGCCGCTTGGAGACTGTACAGCACCGACATGAGCAGAGCCTACCTGACCGCCACGTGGTATTATTACGATTCGATCCTGCCTAGCTTCCGCGAACTGGCCCTGCTGTTTGAGCATGTGCAGAGAGCCAGAAACGGCGGCCTCAGACCTCTGGAAGTTCGGAGAGCACCTGTGCCTGATGGCGCCCCTTCTAGATATCCTCCAGTGGCCACCTGTCACAGACCCGGCAGCACATCTTTTTGCCCTGGCGAGTCTAGCCGGATGGGCATCAAGGACAGAATCAGAATGGGCAGCAGCCAGCGGAGAACAGGCCCTTCTAAACAGCATCTGGCCCCTCCAACCATGCCTACAAGCCCTAGCTCTGAGCAAGTGGGCGAAGCCACCTCTCCTACCAAGGTGCAGAAGTCCTGGTCCTTCAACGACCGGACCAGATTTAGAGCCAGCCTCCGGCTGAAGCCCAGAACCTCTGCCGAGGATGCCCCTTCTGAAGAGGTGGCCGAAGAGAAGTCCTACCAGTGCGAGCTGACCGTGGACGACATCATGCCAGCCGTGAAAACCGTGATAAGGTCTATACGCATCCTGAAGTTCCTGGTGGCCAAGCGGAAGTTCAAAGAGACACTGCGGCCCTACGACGTGAAGGACGTGATCGAGCAGTATTCTGCCGGCCACCTGGACATGCTGGGCAGAATCAAGAGCCTGCAGACCAGAGTGGACCAGATCGTTGGAAGAGGCCCAGGCGACAGAAAGGCCAGAGAGAAGGGCGATAAGGGCCCATCTGATGCCGAGGTTGTCGACGAGATATCAATGATGGGCAGAGTCGTGAAAGTCGAAAAACAGGTGCAGAGCATCGAGCACAAGCTGGACCTGCTGCTGGGATTCTACAGCCGGTGTCTGAGAAGCGGCACATCTGCATCTCTGGGCGCTGTGCAGGTCCCACTGTTCGATCCTGATATTACGAGCGATTATCACAGCCCCGTGGACCACGAGGACATCTCCGTTTCTGCTCAGACCCTGAGCATCAGCAGATCCGTGTCCACCAACATGGACTAAcctgcaggcgccggcgGAGCAGGAGGACCAAGGCCCTGGCGAAGGCCGTGGCCTCGATGCTGTCATAGTAATACCAGTGTGCAGGTCCCAATGGCTGGTATTAATGTGACAGTCTCGGGGACGCGGGCCTGGACGCCGGCATCCGGGCTCAGGACCCCCCTCGAGCTCGCTGATCAGCCTCGACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTGGGCTCTATGGAAGCTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCTAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAG
例示性 pITR-CAG.mmu.1xmiR2i_3xmiR6u-26_EGFP (SEQ ID NO: 251) CTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTGACATTGATTATTGACTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGACTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGGTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCGGGAGTCGCTGCGTTGCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCGCGCCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGGCTCTGACTGACCGCGTTACTCCCACAGGTGAGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCTTGGTTTAATGACGGCTCGTTTCTTTTCTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTAAAGGGCTCCGGGAGGGCCCTTTGTGCGGGGGGGAGCGGCTCGGGGGGTGCGTGCGTGTGTGTGTGCGTGGGGAGCGCCGCGTGCGGCCCGCGCTGCCCGGCGGCTGTGAGCGCTGCGGGCGCGGCGCGGGGCTTTGTGCGCTCCGCGTGTGCGCGAGGGGAGCGCGGCCGGGGGCGGTGCCCCGCGGTGCGGGGGGGCTGCGAGGGGAACAAAGGCTGCGTGCGGGGTGTGTGCGTGGGGGGGTGAGCAGGGGGTGTGGGCGCGGCGGTCGGGCTGTAACCCCCCCCTGCACCCCCCTCCCCGAGTTGCTGAGCACGGCCCGGCTTCGGGTGCGGGGCTCCGTGCGGGGCGTGGCGCGGGGCTCGCCGTGCCGGGCGGGGGGTGGCGGCAGGTGGGGGTGCCGGGCGGGGCGGGGCCGCCTCGGGCCGGGGAGGGCTCGGGGGAGGGGCGCGGCGGCCCCCGGAGCGCCGGCGGAGCAGGAGGACCAAGGCCCTGGCGAAGGCCGTGGCCTCGTTGAGTCTTAGAGAGGCCCGGTGTGCAGGTCCCAATGGCCGGGTCTTACTGAGATTCCACGGGGACGCGGGCCTGGACGCCGGCATCCGGGCTCAGGACCCCCCTCTCTAGAGCCTCTGCTAACCATGTTCATGCCTTCTTCTTTTTCCTACAGCTCCTGGGCAACGTGCTGGTTATTGTGACCGGTCGCTAGCCACCATGGTGAGCAAGGGCGAGGAGCTGTTCACCGGGGTGGTGCCCATCCTGGTCGAGCTGGACGGCGACGTAAACGGCCACAAGTTCAGCGTGTCCGGCGAGGGCGAGGGCGATGCCACCTACGGCAAGCTGACCCTGAAGTTCATCTGCACCACCGGCAAGCTGCCCGTGCCCTGGCCCACCCTCGTGACCACCCTGACCTACGGCGTGCAGTGCTTCAGCCGCTACCCCGACCACATGAAGCAGCACGACTTCTTCAAGTCCGCCATGCCCGAAGGCTACGTCCAGGAGCGCACCATCTTCTTCAAGGACGACGGCAACTACAAGACCCGCGCCGAGGTGAAGTTCGAGGGCGACACCCTGGTGAACCGCATCGAGCTGAAGGGCATCGACTTCAAGGAGGACGGCAACATCCTGGGGCACAAGCTGGAGTACAACTACAACAGCCACAACGTCTATATCATGGCCGACAAGCAGAAGAACGGCATCAAGGTGAACTTCAAGATCCGCCACAACATCGAGGACGGCAGCGTGCAGCTCGCCGACCACTACCAGCAGAACACCCCCATCGGCGACGGCCCCGTGCTGCTGCCCGACAACCACTACCTGAGCACCCAGTCCGCCCTGAGCAAAGACCCCAACGAGAAGCGCGATCACATGGTCCTGCTGGAGTTCGTGACCGCCGCCGGGATCACTCTCGGCATGGACGAGCTGTACAAGTAAcctgcaggcgccggcgGAGCAGGAGGACCAAGGCCCTGGCGAAGGCCGTGGCCTCGATGCTGTCATAGTAATACCAGTGTGCAGGTCCCAATGGCTGGTATTAATGTGACAGTCTCGGGGACGCGCAATTGGGTGGCCTCGATGCTGTCATAGTAATACCAGTGTGCAGGTCCCAATGGCTGGTATTAATGTGACAGTCTCGGGGACGCGGGCGCGCCCGTGGCCTCGATGCTGTCATAGTAATACCAGTGTGCAGGTCCCAATGGCTGGTATTAATGTGACAGTCTCGGGGACGCGGGCCTGGACGCCGGCATCCGGGCTCAGGACCCCCCTCGAGCTCGCTGATCAGCCTCGACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTGGGCTCTATGGAAGCTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCTAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGCTGCCTGCAGG
例示性 pITR-CAG.mmu.3xmiR2i_3xmiR6u-26_EGFP (SEQ ID NO: 252) CCTGCAGGCAGCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTGACATTGATTATTGACTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGACTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGGTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCGGGAGTCGCTGCGTTGCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCGCGCCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGGCTCTGACTGACCGCGTTACTCCCACAGGTGAGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCTTGGTTTAATGACGGCTCGTTTCTTTTCTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTAAAGGGCTCCGGGAGGGCCCTTTGTGCGGGGGGGAGCGGCTCGGGGGGTGCGTGCGTGTGTGTGTGCGTGGGGAGCGCCGCGTGCGGCCCGCGCTGCCCGGCGGCTGTGAGCGCTGCGGGCGCGGCGCGGGGCTTTGTGCGCTCCGCGTGTGCGCGAGGGGAGCGCGGCCGGGGGCGGTGCCCCGCGGTGCGGGGGGGCTGCGAGGGGAACAAAGGCTGCGTGCGGGGTGTGTGCGTGGGGGGGTGAGCAGGGGGTGTGGGCGCGGCGGTCGGGCTGTAACCCCCCCCTGCACCCCCCTCCCCGAGTTGCTGAGCACGGCCCGGCTTCGGGTGCGGGGCTCCGTGCGGGGCGTGGCGCGGGGCTCGCCGTGCCGGGCGGGGGGTGGCGGCAGGTGGGGGTGCCGGGCGGGGCGGGGCCGCCTCGGGCCGGGGAGGGCTCGGGGGAGGGGCGCGGCGGCCCCCGGAGCGCCGGCGGAGCAGGAGGACCAAGGCCCTGGCGAAGGCCGTGGCCTCGTTGAGTCTTAGAGAGGCCCGGTGTGCAGGTCCCAATGGCCGGGTCTTACTGAGATTCCACGGGGACGCGGGATCCGGTGGCCTCGTTGAGTCTTAGAGAGGCCCGGTGTGCAGGTCCCAATGGCCGGGTCTTACTGAGATTCCACGGGGACGCGGGTACCCGTGGCCTCGTTGAGTCTTAGAGAGGCCCGGTGTGCAGGTCCCAATGGCCGGGTCTTACTGAGATTCCACGGGGACGCGGGCCTGGACGCCGGCATCCGGGCTCAGGACCCCCCTCTCTAGAGCCTCTGCTAACCATGTTCATGCCTTCTTCTTTTTCCTACAGCTCCTGGGCAACGTGCTGGTTATTGTGACCGGTCGCTAGCCACCATGGTGAGCAAGGGCGAGGAGCTGTTCACCGGGGTGGTGCCCATCCTGGTCGAGCTGGACGGCGACGTAAACGGCCACAAGTTCAGCGTGTCCGGCGAGGGCGAGGGCGATGCCACCTACGGCAAGCTGACCCTGAAGTTCATCTGCACCACCGGCAAGCTGCCCGTGCCCTGGCCCACCCTCGTGACCACCCTGACCTACGGCGTGCAGTGCTTCAGCCGCTACCCCGACCACATGAAGCAGCACGACTTCTTCAAGTCCGCCATGCCCGAAGGCTACGTCCAGGAGCGCACCATCTTCTTCAAGGACGACGGCAACTACAAGACCCGCGCCGAGGTGAAGTTCGAGGGCGACACCCTGGTGAACCGCATCGAGCTGAAGGGCATCGACTTCAAGGAGGACGGCAACATCCTGGGGCACAAGCTGGAGTACAACTACAACAGCCACAACGTCTATATCATGGCCGACAAGCAGAAGAACGGCATCAAGGTGAACTTCAAGATCCGCCACAACATCGAGGACGGCAGCGTGCAGCTCGCCGACCACTACCAGCAGAACACCCCCATCGGCGACGGCCCCGTGCTGCTGCCCGACAACCACTACCTGAGCACCCAGTCCGCCCTGAGCAAAGACCCCAACGAGAAGCGCGATCACATGGTCCTGCTGGAGTTCGTGACCGCCGCCGGGATCACTCTCGGCATGGACGAGCTGTACAAGTAAcctgcaggcgccggcgGAGCAGGAGGACCAAGGCCCTGGCGAAGGCCGTGGCCTCGATGCTGTCATAGTAATACCAGTGTGCAGGTCCCAATGGCTGGTATTAATGTGACAGTCTCGGGGACGCGCAATTGGGTGGCCTCGATGCTGTCATAGTAATACCAGTGTGCAGGTCCCAATGGCTGGTATTAATGTGACAGTCTCGGGGACGCGGGCGCGCCCGTGGCCTCGATGCTGTCATAGTAATACCAGTGTGCAGGTCCCAATGGCTGGTATTAATGTGACAGTCTCGGGGACGCGGGCCTGGACGCCGGCATCCGGGCTCAGGACCCCCCTCGAGCTCGCTGATCAGCCTCGACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTGGGCTCTATGGAAGCTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCTAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGCTGCCTGCAGG
例示性 pITR-CAG.mmu.1xmiR2i_3xmiR6u-26_KCNQ4codop ( SEQ ID NO: 253) CTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTGACATTGATTATTGACTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGACTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGGTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCGGGAGTCGCTGCGTTGCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCGCGCCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGGCTCTGACTGACCGCGTTACTCCCACAGGTGAGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCTTGGTTTAATGACGGCTCGTTTCTTTTCTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTAAAGGGCTCCGGGAGGGCCCTTTGTGCGGGGGGGAGCGGCTCGGGGGGTGCGTGCGTGTGTGTGTGCGTGGGGAGCGCCGCGTGCGGCCCGCGCTGCCCGGCGGCTGTGAGCGCTGCGGGCGCGGCGCGGGGCTTTGTGCGCTCCGCGTGTGCGCGAGGGGAGCGCGGCCGGGGGCGGTGCCCCGCGGTGCGGGGGGGCTGCGAGGGGAACAAAGGCTGCGTGCGGGGTGTGTGCGTGGGGGGGTGAGCAGGGGGTGTGGGCGCGGCGGTCGGGCTGTAACCCCCCCCTGCACCCCCCTCCCCGAGTTGCTGAGCACGGCCCGGCTTCGGGTGCGGGGCTCCGTGCGGGGCGTGGCGCGGGGCTCGCCGTGCCGGGCGGGGGGTGGCGGCAGGTGGGGGTGCCGGGCGGGGCGGGGCCGCCTCGGGCCGGGGAGGGCTCGGGGGAGGGGCGCGGCGGCCCCCGGAGCGCCGGCGGAGCAGGAGGACCAAGGCCCTGGCGAAGGCCGTGGCCTCGTTGAGTCTTAGAGAGGCCCGGTGTGCAGGTCCCAATGGCCGGGTCTTACTGAGATTCCACGGGGACGCGGGCCTGGACGCCGGCATCCGGGCTCAGGACCCCCCTCTCTAGAGCCTCTGCTAACCATGTTCATGCCTTCTTCTTTTTCCTACAGCTCCTGGGCAACGTGCTGGTTATTGTGACCGGTCGCTAGCCACCATGGCTGAAGCCCCTCCTAGAAGGCTTGGACTGGGACCTCCTCCTGGGGATGCTCCTAGAGCTGAACTGGTGGCTCTGACAGCCGTGCAGTCTGAACAAGGCGAAGCTGGTGGCGGCGGATCTCCACGTAGACTTGGACTGCTGGGAAGCCCTCTTCCTCCTGGTGCTCCACTTCCTGGACCTGGCAGTGGATCTGGATCTGCCTGTGGCCAGAGAAGCTCTGCCGCTCACAAGAGATACCGGCGGCTGCAGAACTGGGTGTACAACGTGCTGGAAAGACCCAGAGGCTGGGCCTTCGTGTACCACGTGTTCATCTTTCTGCTGGTGTTCAGCTGCCTGGTGCTGTCCGTGCTGAGCACCATCCAAGAACATCAAGAGCTGGCTAACGAGTGCCTGTTAATACTGGAGTTTGTGATGATTGTGGTGTTCGGCCTCGAGTACATCGTCCGCGTTTGGAGCGCCGGCTGCTGCTGCAGATATAGAGGTTGGCAAGGCAGATTCCGCTTCGCCAGAAAGCCCTTCTGCGTGATCGACTTCATCGTGTTCGTGGCCAGCGTGGCCGTGATTGCTGCTGGCACACAGGGCAACATCTTCGCCACAAGCGCCCTGCGGAGCATGCGGTTTCTGCAGATCCTGAGAATGGTCCGAATGGACAGAAGAGGCGGCACCTGGAAGCTGCTGGGCTCTGTGGTGTACGCCCACAGCAAAGAGCTGATCACCGCCTGGTACATCGGATTTCTGGTGCTGATCTTCGCCTCCTTCCTGGTGTACCTGGCCGAGAAGGACGCCAACAGCGACTTTAGCAGCTACGCCGACTCTCTTTGGTGGGGCACCATCACACTGACCACCATCGGCTACGGCGACAAGACCCCTCACACATGGCTGGGAAGAGTGCTGGCCGCTGGATTTGCTCTGCTGGGCATCAGCTTTTTCGCCCTGCCTGCCGGAATCCTCGGATCTGGCTTTGCCCTGAAGGTGCAAGAGCAGCATAGACAAAAGCATTTTGAAAAGAGAAGAATGCCTGCCGCCAACCTGATTCAGGCCGCTTGGAGACTGTACAGCACCGACATGAGCAGAGCCTACCTGACCGCCACGTGGTATTATTACGATTCGATCCTGCCTAGCTTCCGCGAACTGGCCCTGCTGTTTGAGCATGTGCAGAGAGCCAGAAACGGCGGCCTCAGACCTCTGGAAGTTCGGAGAGCACCTGTGCCTGATGGCGCCCCTTCTAGATATCCTCCAGTGGCCACCTGTCACAGACCCGGCAGCACATCTTTTTGCCCTGGCGAGTCTAGCCGGATGGGCATCAAGGACAGAATCAGAATGGGCAGCAGCCAGCGGAGAACAGGCCCTTCTAAACAGCATCTGGCCCCTCCAACCATGCCTACAAGCCCTAGCTCTGAGCAAGTGGGCGAAGCCACCTCTCCTACCAAGGTGCAGAAGTCCTGGTCCTTCAACGACCGGACCAGATTTAGAGCCAGCCTCCGGCTGAAGCCCAGAACCTCTGCCGAGGATGCCCCTTCTGAAGAGGTGGCCGAAGAGAAGTCCTACCAGTGCGAGCTGACCGTGGACGACATCATGCCAGCCGTGAAAACCGTGATAAGGTCTATACGCATCCTGAAGTTCCTGGTGGCCAAGCGGAAGTTCAAAGAGACACTGCGGCCCTACGACGTGAAGGACGTGATCGAGCAGTATTCTGCCGGCCACCTGGACATGCTGGGCAGAATCAAGAGCCTGCAGACCAGAGTGGACCAGATCGTTGGAAGAGGCCCAGGCGACAGAAAGGCCAGAGAGAAGGGCGATAAGGGCCCATCTGATGCCGAGGTTGTCGACGAGATATCAATGATGGGCAGAGTCGTGAAAGTCGAAAAACAGGTGCAGAGCATCGAGCACAAGCTGGACCTGCTGCTGGGATTCTACAGCCGGTGTCTGAGAAGCGGCACATCTGCATCTCTGGGCGCTGTGCAGGTCCCACTGTTCGATCCTGATATTACGAGCGATTATCACAGCCCCGTGGACCACGAGGACATCTCCGTTTCTGCTCAGACCCTGAGCATCAGCAGATCCGTGTCCACCAACATGGACTAAcctgcaggcgccggcgGAGCAGGAGGACCAAGGCCCTGGCGAAGGCCGTGGCCTCGATGCTGTCATAGTAATACCAGTGTGCAGGTCCCAATGGCTGGTATTAATGTGACAGTCTCGGGGACGCGCAATTGGGTGGCCTCGATGCTGTCATAGTAATACCAGTGTGCAGGTCCCAATGGCTGGTATTAATGTGACAGTCTCGGGGACGCGGGCGCGCCCGTGGCCTCGATGCTGTCATAGTAATACCAGTGTGCAGGTCCCAATGGCTGGTATTAATGTGACAGTCTCGGGGACGCGGGCCTGGACGCCGGCATCCGGGCTCAGGACCCCCCTCGAGCTCGCTGATCAGCCTCGACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTGGGCTCTATGGAAGCTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCTAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGCTGCCTGCAGG
例示性 pITR-CAG.mmu.3xmiR2i_3xmiR6u-26_KCNQ4codop (SEQ ID NO: 254) CCTGCAGGCAGCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTGACATTGATTATTGACTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGACTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGGTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCGGGAGTCGCTGCGTTGCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCGCGCCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGGCTCTGACTGACCGCGTTACTCCCACAGGTGAGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCTTGGTTTAATGACGGCTCGTTTCTTTTCTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTAAAGGGCTCCGGGAGGGCCCTTTGTGCGGGGGGGAGCGGCTCGGGGGGTGCGTGCGTGTGTGTGTGCGTGGGGAGCGCCGCGTGCGGCCCGCGCTGCCCGGCGGCTGTGAGCGCTGCGGGCGCGGCGCGGGGCTTTGTGCGCTCCGCGTGTGCGCGAGGGGAGCGCGGCCGGGGGCGGTGCCCCGCGGTGCGGGGGGGCTGCGAGGGGAACAAAGGCTGCGTGCGGGGTGTGTGCGTGGGGGGGTGAGCAGGGGGTGTGGGCGCGGCGGTCGGGCTGTAACCCCCCCCTGCACCCCCCTCCCCGAGTTGCTGAGCACGGCCCGGCTTCGGGTGCGGGGCTCCGTGCGGGGCGTGGCGCGGGGCTCGCCGTGCCGGGCGGGGGGTGGCGGCAGGTGGGGGTGCCGGGCGGGGCGGGGCCGCCTCGGGCCGGGGAGGGCTCGGGGGAGGGGCGCGGCGGCCCCCGGAGCGCCGGCGGAGCAGGAGGACCAAGGCCCTGGCGAAGGCCGTGGCCTCGTTGAGTCTTAGAGAGGCCCGGTGTGCAGGTCCCAATGGCCGGGTCTTACTGAGATTCCACGGGGACGCGGGATCCGGTGGCCTCGTTGAGTCTTAGAGAGGCCCGGTGTGCAGGTCCCAATGGCCGGGTCTTACTGAGATTCCACGGGGACGCGGGTACCCGTGGCCTCGTTGAGTCTTAGAGAGGCCCGGTGTGCAGGTCCCAATGGCCGGGTCTTACTGAGATTCCACGGGGACGCGGGCCTGGACGCCGGCATCCGGGCTCAGGACCCCCCTCTCTAGAGCCTCTGCTAACCATGTTCATGCCTTCTTCTTTTTCCTACAGCTCCTGGGCAACGTGCTGGTTATTGTGACCGGTCGCTAGCCACCATGGCTGAAGCCCCTCCTAGAAGGCTTGGACTGGGACCTCCTCCTGGGGATGCTCCTAGAGCTGAACTGGTGGCTCTGACAGCCGTGCAGTCTGAACAAGGCGAAGCTGGTGGCGGCGGATCTCCACGTAGACTTGGACTGCTGGGAAGCCCTCTTCCTCCTGGTGCTCCACTTCCTGGACCTGGCAGTGGATCTGGATCTGCCTGTGGCCAGAGAAGCTCTGCCGCTCACAAGAGATACCGGCGGCTGCAGAACTGGGTGTACAACGTGCTGGAAAGACCCAGAGGCTGGGCCTTCGTGTACCACGTGTTCATCTTTCTGCTGGTGTTCAGCTGCCTGGTGCTGTCCGTGCTGAGCACCATCCAAGAACATCAAGAGCTGGCTAACGAGTGCCTGTTAATACTGGAGTTTGTGATGATTGTGGTGTTCGGCCTCGAGTACATCGTCCGCGTTTGGAGCGCCGGCTGCTGCTGCAGATATAGAGGTTGGCAAGGCAGATTCCGCTTCGCCAGAAAGCCCTTCTGCGTGATCGACTTCATCGTGTTCGTGGCCAGCGTGGCCGTGATTGCTGCTGGCACACAGGGCAACATCTTCGCCACAAGCGCCCTGCGGAGCATGCGGTTTCTGCAGATCCTGAGAATGGTCCGAATGGACAGAAGAGGCGGCACCTGGAAGCTGCTGGGCTCTGTGGTGTACGCCCACAGCAAAGAGCTGATCACCGCCTGGTACATCGGATTTCTGGTGCTGATCTTCGCCTCCTTCCTGGTGTACCTGGCCGAGAAGGACGCCAACAGCGACTTTAGCAGCTACGCCGACTCTCTTTGGTGGGGCACCATCACACTGACCACCATCGGCTACGGCGACAAGACCCCTCACACATGGCTGGGAAGAGTGCTGGCCGCTGGATTTGCTCTGCTGGGCATCAGCTTTTTCGCCCTGCCTGCCGGAATCCTCGGATCTGGCTTTGCCCTGAAGGTGCAAGAGCAGCATAGACAAAAGCATTTTGAAAAGAGAAGAATGCCTGCCGCCAACCTGATTCAGGCCGCTTGGAGACTGTACAGCACCGACATGAGCAGAGCCTACCTGACCGCCACGTGGTATTATTACGATTCGATCCTGCCTAGCTTCCGCGAACTGGCCCTGCTGTTTGAGCATGTGCAGAGAGCCAGAAACGGCGGCCTCAGACCTCTGGAAGTTCGGAGAGCACCTGTGCCTGATGGCGCCCCTTCTAGATATCCTCCAGTGGCCACCTGTCACAGACCCGGCAGCACATCTTTTTGCCCTGGCGAGTCTAGCCGGATGGGCATCAAGGACAGAATCAGAATGGGCAGCAGCCAGCGGAGAACAGGCCCTTCTAAACAGCATCTGGCCCCTCCAACCATGCCTACAAGCCCTAGCTCTGAGCAAGTGGGCGAAGCCACCTCTCCTACCAAGGTGCAGAAGTCCTGGTCCTTCAACGACCGGACCAGATTTAGAGCCAGCCTCCGGCTGAAGCCCAGAACCTCTGCCGAGGATGCCCCTTCTGAAGAGGTGGCCGAAGAGAAGTCCTACCAGTGCGAGCTGACCGTGGACGACATCATGCCAGCCGTGAAAACCGTGATAAGGTCTATACGCATCCTGAAGTTCCTGGTGGCCAAGCGGAAGTTCAAAGAGACACTGCGGCCCTACGACGTGAAGGACGTGATCGAGCAGTATTCTGCCGGCCACCTGGACATGCTGGGCAGAATCAAGAGCCTGCAGACCAGAGTGGACCAGATCGTTGGAAGAGGCCCAGGCGACAGAAAGGCCAGAGAGAAGGGCGATAAGGGCCCATCTGATGCCGAGGTTGTCGACGAGATATCAATGATGGGCAGAGTCGTGAAAGTCGAAAAACAGGTGCAGAGCATCGAGCACAAGCTGGACCTGCTGCTGGGATTCTACAGCCGGTGTCTGAGAAGCGGCACATCTGCATCTCTGGGCGCTGTGCAGGTCCCACTGTTCGATCCTGATATTACGAGCGATTATCACAGCCCCGTGGACCACGAGGACATCTCCGTTTCTGCTCAGACCCTGAGCATCAGCAGATCCGTGTCCACCAACATGGACTAAcctgcaggcgccggcgGAGCAGGAGGACCAAGGCCCTGGCGAAGGCCGTGGCCTCGATGCTGTCATAGTAATACCAGTGTGCAGGTCCCAATGGCTGGTATTAATGTGACAGTCTCGGGGACGCGCAATTGGGTGGCCTCGATGCTGTCATAGTAATACCAGTGTGCAGGTCCCAATGGCTGGTATTAATGTGACAGTCTCGGGGACGCGGGCGCGCCCGTGGCCTCGATGCTGTCATAGTAATACCAGTGTGCAGGTCCCAATGGCTGGTATTAATGTGACAGTCTCGGGGACGCGGGCCTGGACGCCGGCATCCGGGCTCAGGACCCCCCTCGAGCTCGCTGATCAGCCTCGACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTGGGCTCTATGGAAGCTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCTAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGCTGCCTGCAGG經密碼子最佳化以抵抗微小 RNA 構築體序列之例示性 hKCNQ4
例示性 pITR-CMV.hKCNQ4codop_v2.mScarlet 序列 (SEQ ID NO: 255) CCTGCAGGCAGCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTCTAGATCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGAGTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGTGATGCGGTTTTGGCAGTACATCAATGGGCGTGGATAGCGGTTTGACTCACGGGGATTTCCAAGTCTCCACCCCATTGACGTCAATGGGAGTTTGTTTTGGCACCAAAATCAACGGGACTTTCCAAAATGTCGTAACAACTCCGCCCCATTGACGCAAATGGGCGGTAGGCGTGTACGGTGGGAGGTCTATATAAGCAGAGCTCGTTTAGTGAACCGTcagatcgcctggagacgcACCGGTGCCACCATGGCTGAAGCCCCTCCTAGAAGGCTTGGACTGGGACCTCCTCCTGGGGATGCTCCTAGAGCTGAACTGGTGGCTCTGACAGCCGTGCAGTCTGAACAAGGCGAAGCTGGTGGCGGCGGATCTCCACGTAGACTTGGACTGCTGGGAAGCCCTCTTCCTCCTGGTGCTCCACTTCCTGGACCTGGCAGTGGATCTGGATCTGCCTGTGGCCAGAGAAGCTCTGCCGCTCACAAGAGATACCGGCGGCTGCAGAACTGGGTGTACAACGTGCTGGAAAGACCCAGAGGCTGGGCCTTCGTGTACCACGTGTTCATCTTTCTGCTGGTGTTCAGCTGCCTGGTGCTGTCCGTGCTGAGCACCATCCAAGAACATCAAGAGCTGGCTAACGAGTGCCTGTTAATACTGGAGTTTGTGATGATTGTGGTGTTCGGCCTCGAGTACATCGTCCGCGTTTGGAGCGCCGGCTGCTGCTGCAGATATAGAGGTTGGCAAGGCAGATTCCGCTTCGCCAGAAAGCCCTTCTGCGTGATCGACTTCATCGTGTTCGTGGCCAGCGTGGCCGTGATTGCTGCTGGCACACAGGGCAACATCTTCGCCACAAGCGCCCTGCGGAGCATGCGGTTTCTGCAGATCCTGAGAATGGTCCGAATGGACAGAAGAGGCGGCACCTGGAAGCTGCTGGGCTCTGTGGTGTACGCCCACAGCAAAGAGCTGATCACCGCCTGGTACATCGGATTTCTGGTGCTGATCTTCGCCTCCTTCCTGGTGTACCTGGCCGAGAAGGACGCCAACAGCGACTTTAGCAGCTACGCCGACTCTCTTTGGTGGGGCACCATCACACTGACCACCATCGGCTACGGCGACAAGACCCCTCACACATGGCTGGGAAGAGTGCTGGCCGCTGGATTTGCTCTGCTGGGCATCAGCTTTTTCGCCCTGCCTGCCGGAATCCTCGGATCTGGCTTTGCCCTGAAGGTGCAAGAGCAGCATAGACAAAAGCATTTTGAAAAGAGAAGAATGCCTGCCGCCAACCTGATTCAGGCCGCTTGGAGACTGTACAGCACCGACATGAGCAGAGCCTACCTGACCGCCACGTGGTATTATTACGATTCGATCCTGCCTAGCTTCCGCGAACTGGCCCTGCTGTTTGAGCATGTGCAGAGAGCCAGAAACGGCGGCCTCAGACCTCTGGAAGTTCGGAGAGCACCTGTGCCTGATGGCGCCCCTTCTAGATATCCTCCAGTGGCCACCTGTCACAGACCCGGCAGCACATCTTTTTGCCCTGGCGAGTCTAGCCGGATGGGCATCAAGGACAGAATCAGAATGGGCAGCAGCCAGCGGAGAACAGGCCCTTCTAAACAGCATCTGGCCCCTCCAACCATGCCTACAAGCCCTAGCTCTGAGCAAGTGGGCGAAGCCACCTCTCCTACCAAGGTGCAGAAGTCCTGGTCCTTCAACGACCGGACCAGATTTAGAGCCAGCCTCCGGCTGAAGCCCAGAACCTCTGCCGAGGATGCCCCTTCTGAAGAGGTGGCCGAAGAGAAGTCCTACCAGTGCGAGCTGACCGTGGACGACATCATGCCAGCCGTGAAAACCGTGATAAGGTCTATACGCATCCTGAAGTTCCTGGTGGCCAAGCGGAAGTTCAAAGAGACACTGCGGCCCTACGACGTGAAGGACGTGATCGAGCAGTATTCTGCCGGCCACCTGGACATGCTGGGCAGAATCAAGAGCCTGCAGACCAGAGTGGACCAGATCGTTGGAAGAGGCCCAGGCGACAGAAAGGCCAGAGAGAAGGGCGATAAGGGCCCATCTGATGCCGAGGTTGTCGACGAGATATCAATGATGGGCAGAGTCGTGAAAGTCGAAAAACAGGTGCAGAGCATCGAGCACAAGCTGGACCTGCTGCTGGGATTCTACAGCCGGTGTCTGAGAAGCGGCACATCTGCATCTCTGGGCGCTGTGCAGGTCCCACTGTTCGATCCTGATATTACGAGCGATTATCACAGCCCCGTGGACCACGAGGACATCTCCGTTTCTGCTCAGACCCTGAGCATCAGCAGATCCGTGTCCACCAACATGGACGGATCCCGGGCTGACTACAAAGACCATGACGGTGATTATAAAGATCATGACATCGACTACAAGGATGACGATGACAAGGGCTCCGGAGAGGGCAGAGGAAGTCTGCTAACATGCGGTGACGTCGAGGAGAATCCTGGCCCAATGGTGAGCAAGGGCGAGGCAGTGATCAAGGAGTTCATGCGGTTCAAGGTGCACATGGAGGGCTCCATGAACGGCCACGAGTTCGAGATCGAGGGCGAGGGCGAGGGCCGCCCCTACGAGGGCACCCAGACCGCCAAGCTGAAGGTGACCAAGGGTGGCCCCCTGCCCTTCTCCTGGGACATCCTGTCCCCTCAGTTCATGTACGGCTCCAGGGCCTTCATCAAGCACCCCGCCGACATCCCCGACTACTATAAGCAGTCCTTCCCCGAGGGCTTCAAGTGGGAGCGCGTGATGAACTTCGAGGACGGCGGCGCCGTGACCGTGACCCAGGACACCTCCCTGGAGGACGGCACCCTGATCTACAAGGTGAAGCTCCGCGGCACCAACTTCCCTCCTGACGGCCCCGTAATGCAGAAGAAGACAATGGGCTGGGAAGCGTCCACCGAGCGGTTGTACCCCGAGGACGGCGTGCTGAAGGGCGACATTAAGATGGCCCTGCGCCTGAAGGACGGCGGCCGCTACCTGGCGGACTTCAAGACCACCTACAAGGCCAAGAAGCCCGTGCAGATGCCCGGCGCCTACAACGTCGACCGCAAGTTGGACATCACCTCCCACAACGAGGACTACACCGTGGTGGAACAGTACGAACGCTCCGAGGGCCGCCACTCCACCGGCGGCATGGACGAGCTGTACAAGTAATAAGAGCTCGCTGATCAGCCTCGACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTGGGCTCTATGGAAGCTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCTAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGCTGCCTGCAGGGGCGCCTGATGCGGTATTTTCTCCTTACGCATCTGTGCGGTATTTCACACCGCATACGTCAAAGCAACCATAGTACGCGCCCTGTAGCGGCGCATTAAGCGCGGCGGGTGTGGTGGTTACGCGCAGCGTGACCGCTACACTTGCCAGCGCCCTAGCGCCCGCTCCTTTCGCTTTCTTCCCTTCCTTTCTCGCCACGTTCGCCGGCTTTCCCCGTCAAGCTCTAAATCGGGGGCTCCCTTTAGGGTTCCGATTTAGTGCTTTACGGCACCTCGACCCCAAAAAACTTGATTTGGGTGATGGTTCACGTAGTGGGCCATCGCCCTGATAGACGGTTTTTCGCCCTTTGACGTTGGAGTCCACGTTCTTTAATAGTGGACTCTTGTTCCAAACTGGAACAACACTCAACCCTATCTCGGGCTATTCTTTTGATTTATAAGGGATTTTGCCGATTTCGGCCTATTGGTTAAAAAATGAGCTGATTTAACAAAAATTTAACGCGAATTTTAACAAAATATTAACGTTTACAATTTTATGGTGCACTCTCAGTACAATCTGCTCTGATGCCGCATAGTTAAGCCAGCCCCGACACCCGCCAACACCCGCTGACGCGCCCTGACGGGCTTGTCTGCTCCCGGCATCCGCTTACAGACAAGCTGTGACCGTCTCCGGGAGCTGCATGTGTCAGAGGTTTTCACCGTCATCACCGAAACGCGCGAGACGAAAGGGCCTCGTGATACGCCTATTTTTATAGGTTAATGTCATGAACAATAAAACTGTCTGCTTACATAAACAGTAATACAAGGGGTGTTATGAGCCATATTCAACGGGAAACGTCGAGGCCGCGATTAAATTCCAACATGGATGCTGATTTATATGGGTATAAATGGGCTCGCGATAATGTCGGGCAATCAGGTGCGACAATCTATCGCTTGTATGGGAAGCCCGATGCGCCAGAGTTGTTTCTGAAACATGGCAAAGGTAGCGTTGCCAATGATGTTACAGATGAGATGGTCAGACTAAACTGGCTGACGGAATTTATGCCTCTTCCGACCATCAAGCATTTTATCCGTACTCCTGATGATGCATGGTTACTCACCACTGCGATCCCCGGAAAAACAGCATTCCAGGTATTAGAAGAATATCCTGATTCAGGTGAAAATATTGTTGATGCGCTGGCAGTGTTCCTGCGCCGGTTGCATTCGATTCCTGTTTGTAATTGTCCTTTTAACAGCGATCGCGTATTTCGTCTCGCTCAGGCGCAATCACGAATGAATAACGGTTTGGTTGATGCGAGTGATTTTGATGACGAGCGTAATGGCTGGCCTGTTGAACAAGTCTGGAAAGAAATGCATAAACTTTTGCCATTCTCACCGGATTCAGTCGTCACTCATGGTGATTTCTCACTTGATAACCTTATTTTTGACGAGGGGAAATTAATAGGTTGTATTGATGTTGGACGAGTCGGAATCGCAGACCGATACCAGGATCTTGCCATCCTATGGAACTGCCTCGGTGAGTTTTCTCCTTCATTACAGAAACGGCTTTTTCAAAAATATGGTATTGATAATCCTGATATGAATAAATTGCAGTTTCATTTGATGCTCGATGAGTTTTTCTAATCTCATGACCAAAATCCCTTAACGTGAGTTTTCGTTCCACTGAGCGTCAGACCCCGTAGAAAAGATCAAAGGATCTTCTTGAGATCCTTTTTTTCTGCGCGTAATCTGCTGCTTGCAAACAAAAAAACCACCGCTACCAGCGGTGGTTTGTTTGCCGGATCAAGAGCTACCAACTCTTTTTCCGAAGGTAACTGGCTTCAGCAGAGCGCAGATACCAAATACTGTCCTTCTAGTGTAGCCGTAGTTAGGCCACCACTTCAAGAACTCTGTAGCACCGCCTACATACCTCGCTCTGCTAATCCTGTTACCAGTGGCTGCTGCCAGTGGCGATAAGTCGTGTCTTACCGGGTTGGACTCAAGACGATAGTTACCGGATAAGGCGCAGCGGTCGGGCTGAACGGGGGGTTCGTGCACACAGCCCAGCTTGGAGCGAACGACCTACACCGAACTGAGATACCTACAGCGTGAGCTATGAGAAAGCGCCACGCTTCCCGAAGGGAGAAAGGCGGACAGGTATCCGGTAAGCGGCAGGGTCGGAACAGGAGAGCGCACGAGGGAGCTTCCAGGGGGAAACGCCTGGTATCTTTATAGTCCTGTCGGGTTTCGCCACCTCTGACTTGAGCGTCGATTTTTGTGATGCTCGTCAGGGGGGCGGAGCCTATGGAAAAACGCCAGCAACGCGGCCTTTTTACGGTTCCTGGCCTTTTGCTGGCCTTTTGCTCACATGT例示性野生型 KCNQ4 構築體序列
例示性 AAV2 ITR-CMV 增強子 -CMV 啟動子 - 人類 KCNQ4-3x FLAG-T2A-mScarlet-bGH poly(A) 訊號 -AAV2 ITR 序列 (SEQ ID NO: 256) CCTGCAGGCAGCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTCTAGATCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGAGTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGTGATGCGGTTTTGGCAGTACATCAATGGGCGTGGATAGCGGTTTGACTCACGGGGATTTCCAAGTCTCCACCCCATTGACGTCAATGGGAGTTTGTTTTGGCACCAAAATCAACGGGACTTTCCAAAATGTCGTAACAACTCCGCCCCATTGACGCAAATGGGCGGTAGGCGTGTACGGTGGGAGGTCTATATAAGCAGAGCTCGTTTAGTGAACCGTcagatcgcctggagacgcACCGGTGCCACCATGGCCGAGGCCCCCCCGCGCCGCCTCGGCCTGGGTCCCCCGCCCGGGGACGCCCCCCGCGCGGAGCTAGTGGCGCTCACGGCCGTGCAGAGCGAACAGGGCGAGGCGGGCGGGGGCGGCTCCCCGCGCCGCCTCGGCCTCCTGGGCAGCCCCCTGCCGCCGGGCGCGCCCCTCCCTGGGCCGGGCTCCGGCTCGGGCTCCGCCTGCGGCCAGCGCTCCTCGGCCGCGCACAAGCGCTACCGCCGCCTGCAGAACTGGGTCTACAACGTGCTGGAGCGGCCCCGCGGCTGGGCCTTCGTCTACCACGTCTTCATATTTTTGCTGGTCTTCAGCTGCCTGGTGCTGTCTGTGCTGTCCACTATCCAGGAGCACCAGGAACTTGCCAACGAGTGTCTCCTCATCTTGGAATTCGTGATGATCGTGGTTTTCGGCTTGGAGTACATCGTCCGGGTCTGGTCCGCCGGATGCTGCTGCCGCTACCGAGGATGGCAGGGTCGCTTCCGCTTTGCCAGAAAGCCCTTCTGTGTCATCGACTTCATCGTGTTCGTGGCCTCGGTGGCCGTCATCGCCGCGGGTACCCAGGGCAACATCTTCGCCACGTCCGCGCTGCGCAGCATGCGCTTCCTGCAGATCCTGCGCATGGTGCGCATGGACCGCCGCGGCGGCACCTGGAAGCTGCTGGGCTCAGTGGTCTACGCGCATAGCAAGGAGCTGATCACCGCCTGGTACATCGGGTTCCTGGTGCTCATCTTCGCCTCCTTCCTGGTCTACCTGGCTGAGAAGGACGCCAACTCCGACTTCTCCTCCTACGCCGACTCGCTCTGGTGGGGGACGATTACATTGACAACCATCGGCTATGGTGACAAGACACCGCACACATGGCTGGGCAGGGTCCTGGCTGCTGGCTTCGCCTTACTGGGCATCTCTTTCTTTGCCCTGCCTGCCGGCATCCTAGGCTCCGGCTTTGCCCTGAAGGTCCAGGAGCAGCACCGGCAGAAGCACTTCGAGAAGCGGAGGATGCCGGCAGCCAACCTCATCCAGGCTGCCTGGCGCCTGTACTCCACCGATATGAGCCGGGCCTACCTGACAGCCACCTGGTACTACTATGACAGTATCCTCCCATCCTTCAGAGAGCTGGCCCTCTTGTTTGAGCACGTGCAACGGGCCCGCAATGGGGGCCTACGGCCCCTGGAGGTGCGGCGGGCGCCGGTACCCGACGGAGCACCCTCCCGTTACCCGCCCGTTGCCACCTGCCACCGGCCGGGCAGCACCTCCTTCTGCCCTGGGGAAAGCAGCCGGATGGGCATCAAAGACCGCATCCGCATGGGCAGCTCCCAGCGGCGGACGGGTCCTTCCAAGCAGCATCTGGCACCTCCAACAATGCCCACCTCCCCAAGCAGCGAGCAGGTGGGTGAGGCCACCAGCCCCACCAAGGTGCAAAAGAGCTGGAGCTTCAATGACCGCACCCGCTTCCGGGCATCTCTGAGACTCAAACCCCGCACCTCTGCTGAGGATGCCCCCTCAGAGGAAGTAGCAGAGGAGAAGAGCTACCAGTGTGAGCTCACGGTGGACGACATCATGCCTGCTGTGAAGACAGTCATCCGCTCCATCAGGATTCTCAAGTTCCTGGTGGCCAAAAGGAAATTCAAGGAGACACTGCGACCGTACGACGTGAAGGACGTCATTGAGCAGTACTCAGCAGGCCACCTGGACATGCTGGGCCGGATCAAGAGCCTGCAAACTCGGGTGGACCAAATTGTGGGTCGGGGGCCCGGGGACAGGAAGGCCCGGGAGAAGGGCGACAAGGGGCCCTCCGACGCGGAGGTGGTGGATGAAATCAGCATGATGGGACGCGTGGTCAAGGTGGAGAAGCAGGTGCAGTCCATCGAGCACAAGCTGGACCTGCTGTTGGGCTTCTATTCGCGCTGCCTGCGCTCTGGCACCTCGGCCAGCCTGGGCGCCGTGCAAGTGCCGCTGTTCGACCCCGACATCACCTCCGACTACCACAGCCCTGTGGACCACGAGGACATCTCCGTCTCCGCACAGACGCTCAGCATCTCCCGCTCGGTCAGCACCAACATGGACGGATCCCGGGCTGACTACAAAGACCATGACGGTGATTATAAAGATCATGACATCGACTACAAGGATGACGATGACAAGGGCTCCGGAGAGGGCAGAGGAAGTCTGCTAACATGCGGTGACGTCGAGGAGAATCCTGGCCCAATGGTGAGCAAGGGCGAGGCAGTGATCAAGGAGTTCATGCGGTTCAAGGTGCACATGGAGGGCTCCATGAACGGCCACGAGTTCGAGATCGAGGGCGAGGGCGAGGGCCGCCCCTACGAGGGCACCCAGACCGCCAAGCTGAAGGTGACCAAGGGTGGCCCCCTGCCCTTCTCCTGGGACATCCTGTCCCCTCAGTTCATGTACGGCTCCAGGGCCTTCATCAAGCACCCCGCCGACATCCCCGACTACTATAAGCAGTCCTTCCCCGAGGGCTTCAAGTGGGAGCGCGTGATGAACTTCGAGGACGGCGGCGCCGTGACCGTGACCCAGGACACCTCCCTGGAGGACGGCACCCTGATCTACAAGGTGAAGCTCCGCGGCACCAACTTCCCTCCTGACGGCCCCGTAATGCAGAAGAAGACAATGGGCTGGGAAGCGTCCACCGAGCGGTTGTACCCCGAGGACGGCGTGCTGAAGGGCGACATTAAGATGGCCCTGCGCCTGAAGGACGGCGGCCGCTACCTGGCGGACTTCAAGACCACCTACAAGGCCAAGAAGCCCGTGCAGATGCCCGGCGCCTACAACGTCGACCGCAAGTTGGACATCACCTCCCACAACGAGGACTACACCGTGGTGGAACAGTACGAACGCTCCGAGGGCCGCCACTCCACCGGCGGCATGGACGAGCTGTACAAGTAATAAGAGCTCGCTGATCAGCCTCGACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTGGGCTCTATGGAAGCTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCTAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGCTGCCTGCAGG
例示性 AAV2 ITR-CMV 增強子 -CMV 啟動子 - 小鼠 KCNQ4-3x FLAG-T2A-mScarlet-bGH poly(A) 訊號 -AAV2 ITR 序列 (SEQ ID NO: 257) CCTGCAGGCAGCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTCTAGATCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGAGTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGTGATGCGGTTTTGGCAGTACATCAATGGGCGTGGATAGCGGTTTGACTCACGGGGATTTCCAAGTCTCCACCCCATTGACGTCAATGGGAGTTTGTTTTGGCACCAAAATCAACGGGACTTTCCAAAATGTCGTAACAACTCCGCCCCATTGACGCAAATGGGCGGTAGGCGTGTACGGTGGGAGGTCTATATAAGCAGAGCTCGTTTAGTGAACCGTcagatcgcctggagacgcACCGGTGCCACCATGGCCGAGGCCCCCCCGCGCCGCCTCGGCCTGGGCCCCCCGCCCGGGGACGCCCCCCGCGCGGAGTTGGTGGCGCTCACGGCCGTGCAGAGTGAACAGGGCGAGGCGGGCGGGGGCGGCTCTCCGCGTCGCCTCGGCCTTCTGGGCAGCCCCCTGCCGCCGGGCGCGCCCCTCCCTGGGCCGGGCTCCGGCTCGGGCTCCGCCTGCGGCGGCCAGCGCTCCTCCGCCGCGCAGAAGCGCTACCGCCGCCTGCAGAACTGGGTCTACAACGTGCTGGAGCGGCCCCGCGGGTGGGCCTTCGTCTACCACGTCTTCATATTTTTGCTAGTCTTCAGCTGCCTGGTGCTGTCTGTACTGTCCACCATCCAGGAGCACCAGGAACTTGCCAACGAGTGTCTCCTTATCTTGGAATTCGTGATGATTGTGGTCTTTGGCTTGGAGTATATAATCCGTGTCTGGTCGGCCGGATGCTGTTGTCGCTACAGAGGATGGCAGGGACGCTTTCGCTTCGCCAGGAAACCCTTCTGTGTCATCGACTTCATCGTGTTCGTGGCCTCGGTGGCAGTGATAGCTGCGGGCACACAAGGCAACATCTTTGCTACGTCCGCGTTGCGCAGTATGCGCTTCCTACAGATCCTGCGCATGGTGCGTATGGATCGCCGCGGTGGCACCTGGAAGCTGTTGGGATCCGTGGTCTATGCGCACAGTAAGGAGCTGATCACCGCCTGGTACATCGGGTTCCTGGTGCTCATCTTTGCCTCTTTCCTGGTCTACCTGGCTGAGAAGGATGCCAACTCTGACTTCTCCTCCTATGCCGACTCGCTCTGGTGGGGGACGATCACACTGACGACCATTGGCTATGGTGACAAGACGCCACATACATGGCTGGGCAGGGTTCTGGCTGCCGGCTTCGCCTTACTGGGCATCTCCTTCTTTGCCCTGCCTGCCGGCATCCTGGGCTCTGGCTTTGCCCTGAAGGTCCAGGAGCAGCACAGGCAGAAGCACTTTGAGAAGCGCAGGATGCCAGCAGCTAATCTCATCCAGGCTGCGTGGCGCCTGTACTCCACGGACACAAGCCGGGCCTATTTGACAGCCACCTGGTATTACTATGACAGCATTCTCCCATCTTTCAGAGAGCTGGCCCTCTTGTTTGAGCACATACAACGGGCCCGCAATGGGGGCTTACGGCCCCTGGAGGTGAGGCGGGCGCCAGTACCTGATGGAGCGCCCTCTCGCTACCCGCCCGTTGCCACCTGCCACCGGCCAGGCAGTGCCTCCTTCTGCCCTGGGGAAAGCAGCCGGATGGGCATCAAAGACCGAATCCGCATAAGCAGCTCCCAGAAGCGGACAGGCCCCTCCAAGCAGCATCTGGCCCCTCCGCCGATTCCCACCTCGCCAAGCAGTGAGCAGGTGGGCGAGGCATCCAGCCCCAGCAAGGTGCAGAAAAGCTGGAGCTTCAATGACCGCACCCGCTTCCGGGCCTCTCTAAGACTCAAGCCTCGCTGCTCTGCTGAGGAGGGCCCCTCAGAGGAAGTGGCCGAGGAGAAGAGCTACCAGTGTGAGCTTACGGTGGATGATGTCATGCCTGCTGTGAAGACGGTCATCCGTTCTGTCAGGATTCTGAAGTTCCTGGTAGCCAAAAGGAAATTCAAGGAGACGCTGCGGCCATATGATGTGAAGGATGTCATTGAGCAGTATTCAGCAGGACACCTGGACATGCTGGGACGAATCAAGAGCCTGCAAGCCCGGGTGGACCAAATTGTGGGTCGGGGCCCTGGGGACCGCAAGACTCGGGAGAAGGGCGATAAGGGTCCTTCAGACACGGAGGCAGTGGATGAAATCAGCATGATGGGGCGCGTAGTCAAGGTGGAAAAGCAGGTGCAGTCCATCGAACATAAGTTGGATCTGCTGCTGGGCTTCTACTCGCGCTGCCTCCGCTCTGGCACCTCGGCCAGCCTGGGCACTGTGCAAGTGCCGCTCTTCGACCCCGACATCACCTCGGACTACCACAGCCCTGTAGACCACGAGGACATCTCTGTCTCCGCACAGACGCTCAGCATCTCTCGCTCAGTCAGCACCAACATGGACGGATCCCGGGCTGACTACAAAGACCATGACGGTGATTATAAAGATCATGACATCGACTACAAGGATGACGATGACAAGGGCTCCGGAGAGGGCAGAGGAAGTCTGCTAACATGCGGTGACGTCGAGGAGAATCCTGGCCCAATGGTGAGCAAGGGCGAGGCAGTGATCAAGGAGTTCATGCGGTTCAAGGTGCACATGGAGGGCTCCATGAACGGCCACGAGTTCGAGATCGAGGGCGAGGGCGAGGGCCGCCCCTACGAGGGCACCCAGACCGCCAAGCTGAAGGTGACCAAGGGTGGCCCCCTGCCCTTCTCCTGGGACATCCTGTCCCCTCAGTTCATGTACGGCTCCAGGGCCTTCATCAAGCACCCCGCCGACATCCCCGACTACTATAAGCAGTCCTTCCCCGAGGGCTTCAAGTGGGAGCGCGTGATGAACTTCGAGGACGGCGGCGCCGTGACCGTGACCCAGGACACCTCCCTGGAGGACGGCACCCTGATCTACAAGGTGAAGCTCCGCGGCACCAACTTCCCTCCTGACGGCCCCGTAATGCAGAAGAAGACAATGGGCTGGGAAGCGTCCACCGAGCGGTTGTACCCCGAGGACGGCGTGCTGAAGGGCGACATTAAGATGGCCCTGCGCCTGAAGGACGGCGGCCGCTACCTGGCGGACTTCAAGACCACCTACAAGGCCAAGAAGCCCGTGCAGATGCCCGGCGCCTACAACGTCGACCGCAAGTTGGACATCACCTCCCACAACGAGGACTACACCGTGGTGGAACAGTACGAACGCTCCGAGGGCCGCCACTCCACCGGCGGCATGGACGAGCTGTACAAGTAATAAGAGCTCGCTGATCAGCCTCGACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTGGGCTCTATGGAAGCTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCTAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGCTGCCTGCAGG例示性 U6shRNA-hKCNQ4 構築體序列
不含特定 shRNA 序列之例示性 LucT2AGFP-U6shRNA-hKCNQ4 (SEQ ID NO: 258) CTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTCTAGATCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGAGTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGTGATGCGGTTTTGGCAGTACATCAATGGGCGTGGATAGCGGTTTGACTCACGGGGATTTCCAAGTCTCCACCCCATTGACGTCAATGGGAGTTTGTTTTGGCACCAAAATCAACGGGACTTTCCAAAATGTCGTAACAACTCCGCCCCATTGACGCAAATGGGCGGTAGGCGTGTACGGTGGGAGGTCTATATAAGCAGAGCTCGTTTAGTGAACCGTcagatcgcctggagacgcACCGGTGCCACCATGGAAGATGCCAAAAACATTAAGAAGGGCCCAGCGCCATTCTACCCACTCGAAGACGGGACCGCCGGCGAGCAGCTGCACAAAGCCATGAAGCGCTACGCCCTGGTGCCCGGCACCATCGCCTTTACCGACGCACATATCGAGGTGGACATTACCTACGCCGAGTACTTCGAGATGAGCGTTCGGCTGGCAGAAGCTATGAAGCGCTATGGGCTGAATACAAACCATCGGATCGTGGTGTGCAGCGAGAATAGCTTGCAGTTCTTCATGCCCGTGTTGGGTGCCCTGTTCATCGGTGTGGCTGTGGCCCCAGCTAACGACATCTACAACGAGCGCGAGCTGCTGAACAGCATGGGCATCAGCCAGCCCACCGTCGTATTCGTGAGCAAGAAAGGGCTGCAAAAGATCCTCAACGTGCAAAAGAAGCTACCGATCATACAAAAGATCATCATCATGGATAGCAAGACCGACTACCAGGGCTTCCAAAGCATGTACACCTTCGTGACTTCCCATTTGCCACCCGGCTTCAACGAGTACGACTTCGTGCCCGAGAGCTTCGACCGGGACAAAACCATCGCCCTGATCATGAACAGTAGTGGCAGTACCGGATTGCCCAAGGGCGTAGCCCTACCGCACCGCACCGCTTGTGTCCGATTCAGTCATGCCCGCGACCCCATCTTCGGCAACCAGATCATCCCCGACACCGCTATCCTCAGCGTGGTGCCATTTCACCACGGCTTCGGCATGTTCACCACGCTGGGCTACTTGATCTGCGGCTTTCGGGTCGTGCTCATGTACCGCTTCGAGGAGGAGCTATTCTTGCGCAGCTTGCAAGACTATAAGATTCAATCTGCCCTGCTGGTGCCCACACTATTTAGCTTCTTCGCTAAGAGCACTCTCATCGACAAGTACGACCTAAGCAACTTGCACGAGATCGCCAGCGGCGGGGCGCCGCTCAGCAAGGAGGTAGGTGAGGCCGTGGCCAAACGCTTCCACCTACCAGGCATCCGCCAGGGCTACGGCCTGACAGAAACAACCAGCGCCATTCTGATCACCCCCGAAGGGGACGACAAGCCTGGCGCAGTAGGCAAGGTGGTGCCCTTCTTCGAGGCTAAGGTGGTGGACTTGGACACAGGTAAGACACTGGGTGTGAACCAGCGCGGCGAGCTGTGCGTCCGTGGCCCCATGATCATGAGCGGCTACGTTAACAACCCCGAGGCTACAAACGCTCTCATCGACAAGGACGGCTGGCTGCACAGCGGCGACATCGCCTACTGGGACGAGGACGAGCACTTCTTCATCGTGGACCGGCTGAAGAGCCTGATCAAATACAAGGGCTACCAGGTAGCCCCAGCCGAACTGGAGAGCATCCTGCTGCAACACCCCAACATCTTCGACGCCGGGGTCGCCGGCCTGCCCGACGACGATGCCGGCGAGCTGCCCGCCGCAGTCGTCGTGCTGGAACACGGTAAAACCATGACCGAGAAGGAGATCGTGGACTATGTGGCCAGCCAGGTTACAACCGCCAAGAAGCTGCGCGGTGGTGTTGTGTTCGTGGACGAGGTGCCTAAAGGACTGACCGGCAAGTTGGACGCCCGCAAGATCCGCGAGATTCTCATTAAGGCCAAGAAGGGCGGCAAGATCGCCGTGGGCTCCGGAGAGGGCAGAGGAAGTCTGCTAACATGCGGTGACGTCGAGGAGAATCCTGGCCCAATGGAGAGCGACGAGAGCGGCCTGCCCGCCATGGAGATCGAGTGCCGCATCACCGGCACCCTGAACGGCGTGGAGTTCGAGCTGGTGGGCGGCGGAGAGGGCACCCCCGAGCAGGGCCGCATGACCAACAAGATGAAGAGCACCAAAGGCGCCCTGACCTTCAGCCCCTACCTGCTGAGCCACGTGATGGGCTACGGCTTCTACCACTTCGGCACCTACCCCAGCGGCTACGAGAACCCCTTCCTGCACGCCATCAACAACGGCGGCTACACCAACACCCGCATCGAGAAGTACGAGGACGGCGGCGTGCTGCACGTGAGCTTCAGCTACCGCTACGAGGCCGGCCGCGTGATCGGCGACTTCAAGGTGATGGGCACCGGCTTCCCCGAGGACAGCGTGATCTTCACCGACAAGATCATCCGCAGCAACGCCACCGTGGAGCACCTGCACCCCATGGGCGATAACGATCTGGATGGCAGCTTCACCCGCACCTTCAGCCTGCGCGACGGCGGCTACTACAGCTCCGTGGTGGACAGCCACATGCACTTCAAGAGCGCCATCCACCCCAGCATCCTGCAGAACGGGGGCCCCATGTTCGCCTTCCGCCGCGTGGAGGAGGATCACAGCAACACCGAGCTGGGCATCGTGGAGTACCAGCACGCCTTCAAGACCCCGGATGCAGATGCCGGTGAAGAATAAGAGCTCGCTGATCAGCCTCGATAAGATACATTGATGAGTTTGGACAAACCACAACTAGAATGCAGTGAAAAAAATGCTTTATTTGTGAAATTTGTGATGCTATTGCTTTATTTGTAACCATTATAAGCTGCAATAAACAAGTTttaattaaggtcgggcaggaagagggcctatttcccatgattccttcatatttgcatatacgatacaaggctgttagagagataattagaattaatttgactgtaaacacaaagatattagtacaaaatacgtgacgtagaaagtaataatttcttgggtagtttgcagttttaaaattatgttttaaaatggactatcatatgcttaccgtaacttgaaagtatttcgatttcttggctttatatatcttgtggaaaggacgaaacaccgNNNNNttttttAAGCTTTTTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCTAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAG
例示性 pITR.CMV.LucT2AGFP-U6shRNA-hKCNQ4-395 序列 (SEQ ID NO: 259) CTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTCTAGATCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGAGTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGTGATGCGGTTTTGGCAGTACATCAATGGGCGTGGATAGCGGTTTGACTCACGGGGATTTCCAAGTCTCCACCCCATTGACGTCAATGGGAGTTTGTTTTGGCACCAAAATCAACGGGACTTTCCAAAATGTCGTAACAACTCCGCCCCATTGACGCAAATGGGCGGTAGGCGTGTACGGTGGGAGGTCTATATAAGCAGAGCTCGTTTAGTGAACCGTcagatcgcctggagacgcACCGGTGCCACCATGGAAGATGCCAAAAACATTAAGAAGGGCCCAGCGCCATTCTACCCACTCGAAGACGGGACCGCCGGCGAGCAGCTGCACAAAGCCATGAAGCGCTACGCCCTGGTGCCCGGCACCATCGCCTTTACCGACGCACATATCGAGGTGGACATTACCTACGCCGAGTACTTCGAGATGAGCGTTCGGCTGGCAGAAGCTATGAAGCGCTATGGGCTGAATACAAACCATCGGATCGTGGTGTGCAGCGAGAATAGCTTGCAGTTCTTCATGCCCGTGTTGGGTGCCCTGTTCATCGGTGTGGCTGTGGCCCCAGCTAACGACATCTACAACGAGCGCGAGCTGCTGAACAGCATGGGCATCAGCCAGCCCACCGTCGTATTCGTGAGCAAGAAAGGGCTGCAAAAGATCCTCAACGTGCAAAAGAAGCTACCGATCATACAAAAGATCATCATCATGGATAGCAAGACCGACTACCAGGGCTTCCAAAGCATGTACACCTTCGTGACTTCCCATTTGCCACCCGGCTTCAACGAGTACGACTTCGTGCCCGAGAGCTTCGACCGGGACAAAACCATCGCCCTGATCATGAACAGTAGTGGCAGTACCGGATTGCCCAAGGGCGTAGCCCTACCGCACCGCACCGCTTGTGTCCGATTCAGTCATGCCCGCGACCCCATCTTCGGCAACCAGATCATCCCCGACACCGCTATCCTCAGCGTGGTGCCATTTCACCACGGCTTCGGCATGTTCACCACGCTGGGCTACTTGATCTGCGGCTTTCGGGTCGTGCTCATGTACCGCTTCGAGGAGGAGCTATTCTTGCGCAGCTTGCAAGACTATAAGATTCAATCTGCCCTGCTGGTGCCCACACTATTTAGCTTCTTCGCTAAGAGCACTCTCATCGACAAGTACGACCTAAGCAACTTGCACGAGATCGCCAGCGGCGGGGCGCCGCTCAGCAAGGAGGTAGGTGAGGCCGTGGCCAAACGCTTCCACCTACCAGGCATCCGCCAGGGCTACGGCCTGACAGAAACAACCAGCGCCATTCTGATCACCCCCGAAGGGGACGACAAGCCTGGCGCAGTAGGCAAGGTGGTGCCCTTCTTCGAGGCTAAGGTGGTGGACTTGGACACAGGTAAGACACTGGGTGTGAACCAGCGCGGCGAGCTGTGCGTCCGTGGCCCCATGATCATGAGCGGCTACGTTAACAACCCCGAGGCTACAAACGCTCTCATCGACAAGGACGGCTGGCTGCACAGCGGCGACATCGCCTACTGGGACGAGGACGAGCACTTCTTCATCGTGGACCGGCTGAAGAGCCTGATCAAATACAAGGGCTACCAGGTAGCCCCAGCCGAACTGGAGAGCATCCTGCTGCAACACCCCAACATCTTCGACGCCGGGGTCGCCGGCCTGCCCGACGACGATGCCGGCGAGCTGCCCGCCGCAGTCGTCGTGCTGGAACACGGTAAAACCATGACCGAGAAGGAGATCGTGGACTATGTGGCCAGCCAGGTTACAACCGCCAAGAAGCTGCGCGGTGGTGTTGTGTTCGTGGACGAGGTGCCTAAAGGACTGACCGGCAAGTTGGACGCCCGCAAGATCCGCGAGATTCTCATTAAGGCCAAGAAGGGCGGCAAGATCGCCGTGGGCTCCGGAGAGGGCAGAGGAAGTCTGCTAACATGCGGTGACGTCGAGGAGAATCCTGGCCCAATGGAGAGCGACGAGAGCGGCCTGCCCGCCATGGAGATCGAGTGCCGCATCACCGGCACCCTGAACGGCGTGGAGTTCGAGCTGGTGGGCGGCGGAGAGGGCACCCCCGAGCAGGGCCGCATGACCAACAAGATGAAGAGCACCAAAGGCGCCCTGACCTTCAGCCCCTACCTGCTGAGCCACGTGATGGGCTACGGCTTCTACCACTTCGGCACCTACCCCAGCGGCTACGAGAACCCCTTCCTGCACGCCATCAACAACGGCGGCTACACCAACACCCGCATCGAGAAGTACGAGGACGGCGGCGTGCTGCACGTGAGCTTCAGCTACCGCTACGAGGCCGGCCGCGTGATCGGCGACTTCAAGGTGATGGGCACCGGCTTCCCCGAGGACAGCGTGATCTTCACCGACAAGATCATCCGCAGCAACGCCACCGTGGAGCACCTGCACCCCATGGGCGATAACGATCTGGATGGCAGCTTCACCCGCACCTTCAGCCTGCGCGACGGCGGCTACTACAGCTCCGTGGTGGACAGCCACATGCACTTCAAGAGCGCCATCCACCCCAGCATCCTGCAGAACGGGGGCCCCATGTTCGCCTTCCGCCGCGTGGAGGAGGATCACAGCAACACCGAGCTGGGCATCGTGGAGTACCAGCACGCCTTCAAGACCCCGGATGCAGATGCCGGTGAAGAATAAGAGCTCGCTGATCAGCCTCGATAAGATACATTGATGAGTTTGGACAAACCACAACTAGAATGCAGTGAAAAAAATGCTTTATTTGTGAAATTTGTGATGCTATTGCTTTATTTGTAACCATTATAAGCTGCAATAAACAAGTTttaattaaggtcgggcaggaagagggcctatttcccatgattccttcatatttgcatatacgatacaaggctgttagagagataattagaattaatttgactgtaaacacaaagatattagtacaaaatacgtgacgtagaaagtaataatttcttgggtagtttgcagttttaaaattatgttttaaaatggactatcatatgcttaccgtaacttgaaagtatttcgatttcttggctttatatatcttgtggaaaggacgaaacaccgTCCTCATCTTGGAATTCGTGATGcgaaCATCACGAATTCCAAGATGAGGAttttttAAGCTTTTTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCTAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAG
例示性 pITR.CMV.LucT2AGFP-U6shRNA-hKCNQ4-909 序列 (SEQ ID NO: 260) CTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTCTAGATCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGAGTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGTGATGCGGTTTTGGCAGTACATCAATGGGCGTGGATAGCGGTTTGACTCACGGGGATTTCCAAGTCTCCACCCCATTGACGTCAATGGGAGTTTGTTTTGGCACCAAAATCAACGGGACTTTCCAAAATGTCGTAACAACTCCGCCCCATTGACGCAAATGGGCGGTAGGCGTGTACGGTGGGAGGTCTATATAAGCAGAGCTCGTTTAGTGAACCGTcagatcgcctggagacgcACCGGTGCCACCATGGAAGATGCCAAAAACATTAAGAAGGGCCCAGCGCCATTCTACCCACTCGAAGACGGGACCGCCGGCGAGCAGCTGCACAAAGCCATGAAGCGCTACGCCCTGGTGCCCGGCACCATCGCCTTTACCGACGCACATATCGAGGTGGACATTACCTACGCCGAGTACTTCGAGATGAGCGTTCGGCTGGCAGAAGCTATGAAGCGCTATGGGCTGAATACAAACCATCGGATCGTGGTGTGCAGCGAGAATAGCTTGCAGTTCTTCATGCCCGTGTTGGGTGCCCTGTTCATCGGTGTGGCTGTGGCCCCAGCTAACGACATCTACAACGAGCGCGAGCTGCTGAACAGCATGGGCATCAGCCAGCCCACCGTCGTATTCGTGAGCAAGAAAGGGCTGCAAAAGATCCTCAACGTGCAAAAGAAGCTACCGATCATACAAAAGATCATCATCATGGATAGCAAGACCGACTACCAGGGCTTCCAAAGCATGTACACCTTCGTGACTTCCCATTTGCCACCCGGCTTCAACGAGTACGACTTCGTGCCCGAGAGCTTCGACCGGGACAAAACCATCGCCCTGATCATGAACAGTAGTGGCAGTACCGGATTGCCCAAGGGCGTAGCCCTACCGCACCGCACCGCTTGTGTCCGATTCAGTCATGCCCGCGACCCCATCTTCGGCAACCAGATCATCCCCGACACCGCTATCCTCAGCGTGGTGCCATTTCACCACGGCTTCGGCATGTTCACCACGCTGGGCTACTTGATCTGCGGCTTTCGGGTCGTGCTCATGTACCGCTTCGAGGAGGAGCTATTCTTGCGCAGCTTGCAAGACTATAAGATTCAATCTGCCCTGCTGGTGCCCACACTATTTAGCTTCTTCGCTAAGAGCACTCTCATCGACAAGTACGACCTAAGCAACTTGCACGAGATCGCCAGCGGCGGGGCGCCGCTCAGCAAGGAGGTAGGTGAGGCCGTGGCCAAACGCTTCCACCTACCAGGCATCCGCCAGGGCTACGGCCTGACAGAAACAACCAGCGCCATTCTGATCACCCCCGAAGGGGACGACAAGCCTGGCGCAGTAGGCAAGGTGGTGCCCTTCTTCGAGGCTAAGGTGGTGGACTTGGACACAGGTAAGACACTGGGTGTGAACCAGCGCGGCGAGCTGTGCGTCCGTGGCCCCATGATCATGAGCGGCTACGTTAACAACCCCGAGGCTACAAACGCTCTCATCGACAAGGACGGCTGGCTGCACAGCGGCGACATCGCCTACTGGGACGAGGACGAGCACTTCTTCATCGTGGACCGGCTGAAGAGCCTGATCAAATACAAGGGCTACCAGGTAGCCCCAGCCGAACTGGAGAGCATCCTGCTGCAACACCCCAACATCTTCGACGCCGGGGTCGCCGGCCTGCCCGACGACGATGCCGGCGAGCTGCCCGCCGCAGTCGTCGTGCTGGAACACGGTAAAACCATGACCGAGAAGGAGATCGTGGACTATGTGGCCAGCCAGGTTACAACCGCCAAGAAGCTGCGCGGTGGTGTTGTGTTCGTGGACGAGGTGCCTAAAGGACTGACCGGCAAGTTGGACGCCCGCAAGATCCGCGAGATTCTCATTAAGGCCAAGAAGGGCGGCAAGATCGCCGTGGGCTCCGGAGAGGGCAGAGGAAGTCTGCTAACATGCGGTGACGTCGAGGAGAATCCTGGCCCAATGGAGAGCGACGAGAGCGGCCTGCCCGCCATGGAGATCGAGTGCCGCATCACCGGCACCCTGAACGGCGTGGAGTTCGAGCTGGTGGGCGGCGGAGAGGGCACCCCCGAGCAGGGCCGCATGACCAACAAGATGAAGAGCACCAAAGGCGCCCTGACCTTCAGCCCCTACCTGCTGAGCCACGTGATGGGCTACGGCTTCTACCACTTCGGCACCTACCCCAGCGGCTACGAGAACCCCTTCCTGCACGCCATCAACAACGGCGGCTACACCAACACCCGCATCGAGAAGTACGAGGACGGCGGCGTGCTGCACGTGAGCTTCAGCTACCGCTACGAGGCCGGCCGCGTGATCGGCGACTTCAAGGTGATGGGCACCGGCTTCCCCGAGGACAGCGTGATCTTCACCGACAAGATCATCCGCAGCAACGCCACCGTGGAGCACCTGCACCCCATGGGCGATAACGATCTGGATGGCAGCTTCACCCGCACCTTCAGCCTGCGCGACGGCGGCTACTACAGCTCCGTGGTGGACAGCCACATGCACTTCAAGAGCGCCATCCACCCCAGCATCCTGCAGAACGGGGGCCCCATGTTCGCCTTCCGCCGCGTGGAGGAGGATCACAGCAACACCGAGCTGGGCATCGTGGAGTACCAGCACGCCTTCAAGACCCCGGATGCAGATGCCGGTGAAGAATAAGAGCTCGCTGATCAGCCTCGATAAGATACATTGATGAGTTTGGACAAACCACAACTAGAATGCAGTGAAAAAAATGCTTTATTTGTGAAATTTGTGATGCTATTGCTTTATTTGTAACCATTATAAGCTGCAATAAACAAGTTttaattaaggtcgggcaggaagagggcctatttcccatgattccttcatatttgcatatacgatacaaggctgttagagagataattagaattaatttgactgtaaacacaaagatattagtacaaaatacgtgacgtagaaagtaataatttcttgggtagtttgcagttttaaaattatgttttaaaatggactatcatatgcttaccgtaacttgaaagtatttcgatttcttggctttatatatcttgtggaaaggacgaaacaccgCGCCTTACTGGGCATCTCTTTCTcgaaAGAAAGAGATGCCCAGTAAGGCGttttttAAGCTTTTTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCTAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAG
例示性 pITR.CMV.LucT2AGFP-U6shRNA-hKCNQ4-1095 序列 (SEQ ID NO: 261) CTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTCTAGATCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGAGTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGTGATGCGGTTTTGGCAGTACATCAATGGGCGTGGATAGCGGTTTGACTCACGGGGATTTCCAAGTCTCCACCCCATTGACGTCAATGGGAGTTTGTTTTGGCACCAAAATCAACGGGACTTTCCAAAATGTCGTAACAACTCCGCCCCATTGACGCAAATGGGCGGTAGGCGTGTACGGTGGGAGGTCTATATAAGCAGAGCTCGTTTAGTGAACCGTcagatcgcctggagacgcACCGGTGCCACCATGGAAGATGCCAAAAACATTAAGAAGGGCCCAGCGCCATTCTACCCACTCGAAGACGGGACCGCCGGCGAGCAGCTGCACAAAGCCATGAAGCGCTACGCCCTGGTGCCCGGCACCATCGCCTTTACCGACGCACATATCGAGGTGGACATTACCTACGCCGAGTACTTCGAGATGAGCGTTCGGCTGGCAGAAGCTATGAAGCGCTATGGGCTGAATACAAACCATCGGATCGTGGTGTGCAGCGAGAATAGCTTGCAGTTCTTCATGCCCGTGTTGGGTGCCCTGTTCATCGGTGTGGCTGTGGCCCCAGCTAACGACATCTACAACGAGCGCGAGCTGCTGAACAGCATGGGCATCAGCCAGCCCACCGTCGTATTCGTGAGCAAGAAAGGGCTGCAAAAGATCCTCAACGTGCAAAAGAAGCTACCGATCATACAAAAGATCATCATCATGGATAGCAAGACCGACTACCAGGGCTTCCAAAGCATGTACACCTTCGTGACTTCCCATTTGCCACCCGGCTTCAACGAGTACGACTTCGTGCCCGAGAGCTTCGACCGGGACAAAACCATCGCCCTGATCATGAACAGTAGTGGCAGTACCGGATTGCCCAAGGGCGTAGCCCTACCGCACCGCACCGCTTGTGTCCGATTCAGTCATGCCCGCGACCCCATCTTCGGCAACCAGATCATCCCCGACACCGCTATCCTCAGCGTGGTGCCATTTCACCACGGCTTCGGCATGTTCACCACGCTGGGCTACTTGATCTGCGGCTTTCGGGTCGTGCTCATGTACCGCTTCGAGGAGGAGCTATTCTTGCGCAGCTTGCAAGACTATAAGATTCAATCTGCCCTGCTGGTGCCCACACTATTTAGCTTCTTCGCTAAGAGCACTCTCATCGACAAGTACGACCTAAGCAACTTGCACGAGATCGCCAGCGGCGGGGCGCCGCTCAGCAAGGAGGTAGGTGAGGCCGTGGCCAAACGCTTCCACCTACCAGGCATCCGCCAGGGCTACGGCCTGACAGAAACAACCAGCGCCATTCTGATCACCCCCGAAGGGGACGACAAGCCTGGCGCAGTAGGCAAGGTGGTGCCCTTCTTCGAGGCTAAGGTGGTGGACTTGGACACAGGTAAGACACTGGGTGTGAACCAGCGCGGCGAGCTGTGCGTCCGTGGCCCCATGATCATGAGCGGCTACGTTAACAACCCCGAGGCTACAAACGCTCTCATCGACAAGGACGGCTGGCTGCACAGCGGCGACATCGCCTACTGGGACGAGGACGAGCACTTCTTCATCGTGGACCGGCTGAAGAGCCTGATCAAATACAAGGGCTACCAGGTAGCCCCAGCCGAACTGGAGAGCATCCTGCTGCAACACCCCAACATCTTCGACGCCGGGGTCGCCGGCCTGCCCGACGACGATGCCGGCGAGCTGCCCGCCGCAGTCGTCGTGCTGGAACACGGTAAAACCATGACCGAGAAGGAGATCGTGGACTATGTGGCCAGCCAGGTTACAACCGCCAAGAAGCTGCGCGGTGGTGTTGTGTTCGTGGACGAGGTGCCTAAAGGACTGACCGGCAAGTTGGACGCCCGCAAGATCCGCGAGATTCTCATTAAGGCCAAGAAGGGCGGCAAGATCGCCGTGGGCTCCGGAGAGGGCAGAGGAAGTCTGCTAACATGCGGTGACGTCGAGGAGAATCCTGGCCCAATGGAGAGCGACGAGAGCGGCCTGCCCGCCATGGAGATCGAGTGCCGCATCACCGGCACCCTGAACGGCGTGGAGTTCGAGCTGGTGGGCGGCGGAGAGGGCACCCCCGAGCAGGGCCGCATGACCAACAAGATGAAGAGCACCAAAGGCGCCCTGACCTTCAGCCCCTACCTGCTGAGCCACGTGATGGGCTACGGCTTCTACCACTTCGGCACCTACCCCAGCGGCTACGAGAACCCCTTCCTGCACGCCATCAACAACGGCGGCTACACCAACACCCGCATCGAGAAGTACGAGGACGGCGGCGTGCTGCACGTGAGCTTCAGCTACCGCTACGAGGCCGGCCGCGTGATCGGCGACTTCAAGGTGATGGGCACCGGCTTCCCCGAGGACAGCGTGATCTTCACCGACAAGATCATCCGCAGCAACGCCACCGTGGAGCACCTGCACCCCATGGGCGATAACGATCTGGATGGCAGCTTCACCCGCACCTTCAGCCTGCGCGACGGCGGCTACTACAGCTCCGTGGTGGACAGCCACATGCACTTCAAGAGCGCCATCCACCCCAGCATCCTGCAGAACGGGGGCCCCATGTTCGCCTTCCGCCGCGTGGAGGAGGATCACAGCAACACCGAGCTGGGCATCGTGGAGTACCAGCACGCCTTCAAGACCCCGGATGCAGATGCCGGTGAAGAATAAGAGCTCGCTGATCAGCCTCGATAAGATACATTGATGAGTTTGGACAAACCACAACTAGAATGCAGTGAAAAAAATGCTTTATTTGTGAAATTTGTGATGCTATTGCTTTATTTGTAACCATTATAAGCTGCAATAAACAAGTTttaattaaggtcgggcaggaagagggcctatttcccatgattccttcatatttgcatatacgatacaaggctgttagagagataattagaattaatttgactgtaaacacaaagatattagtacaaaatacgtgacgtagaaagtaataatttcttgggtagtttgcagttttaaaattatgttttaaaatggactatcatatgcttaccgtaacttgaaagtatttcgatttcttggctttatatatcttgtggaaaggacgaaacaccgCTGGTACTACTATGACAGTATcgaaATACTGTCATAGTAGTACCAGttttttAAGCTTTTTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCTAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAG
例示性 pITR.CMV.LucT2AGFP-U6shRNA-hKCNQ4-1531 序列 (SEQ ID NO: 262) CTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTCTAGATCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGAGTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGTGATGCGGTTTTGGCAGTACATCAATGGGCGTGGATAGCGGTTTGACTCACGGGGATTTCCAAGTCTCCACCCCATTGACGTCAATGGGAGTTTGTTTTGGCACCAAAATCAACGGGACTTTCCAAAATGTCGTAACAACTCCGCCCCATTGACGCAAATGGGCGGTAGGCGTGTACGGTGGGAGGTCTATATAAGCAGAGCTCGTTTAGTGAACCGTcagatcgcctggagacgcACCGGTGCCACCATGGAAGATGCCAAAAACATTAAGAAGGGCCCAGCGCCATTCTACCCACTCGAAGACGGGACCGCCGGCGAGCAGCTGCACAAAGCCATGAAGCGCTACGCCCTGGTGCCCGGCACCATCGCCTTTACCGACGCACATATCGAGGTGGACATTACCTACGCCGAGTACTTCGAGATGAGCGTTCGGCTGGCAGAAGCTATGAAGCGCTATGGGCTGAATACAAACCATCGGATCGTGGTGTGCAGCGAGAATAGCTTGCAGTTCTTCATGCCCGTGTTGGGTGCCCTGTTCATCGGTGTGGCTGTGGCCCCAGCTAACGACATCTACAACGAGCGCGAGCTGCTGAACAGCATGGGCATCAGCCAGCCCACCGTCGTATTCGTGAGCAAGAAAGGGCTGCAAAAGATCCTCAACGTGCAAAAGAAGCTACCGATCATACAAAAGATCATCATCATGGATAGCAAGACCGACTACCAGGGCTTCCAAAGCATGTACACCTTCGTGACTTCCCATTTGCCACCCGGCTTCAACGAGTACGACTTCGTGCCCGAGAGCTTCGACCGGGACAAAACCATCGCCCTGATCATGAACAGTAGTGGCAGTACCGGATTGCCCAAGGGCGTAGCCCTACCGCACCGCACCGCTTGTGTCCGATTCAGTCATGCCCGCGACCCCATCTTCGGCAACCAGATCATCCCCGACACCGCTATCCTCAGCGTGGTGCCATTTCACCACGGCTTCGGCATGTTCACCACGCTGGGCTACTTGATCTGCGGCTTTCGGGTCGTGCTCATGTACCGCTTCGAGGAGGAGCTATTCTTGCGCAGCTTGCAAGACTATAAGATTCAATCTGCCCTGCTGGTGCCCACACTATTTAGCTTCTTCGCTAAGAGCACTCTCATCGACAAGTACGACCTAAGCAACTTGCACGAGATCGCCAGCGGCGGGGCGCCGCTCAGCAAGGAGGTAGGTGAGGCCGTGGCCAAACGCTTCCACCTACCAGGCATCCGCCAGGGCTACGGCCTGACAGAAACAACCAGCGCCATTCTGATCACCCCCGAAGGGGACGACAAGCCTGGCGCAGTAGGCAAGGTGGTGCCCTTCTTCGAGGCTAAGGTGGTGGACTTGGACACAGGTAAGACACTGGGTGTGAACCAGCGCGGCGAGCTGTGCGTCCGTGGCCCCATGATCATGAGCGGCTACGTTAACAACCCCGAGGCTACAAACGCTCTCATCGACAAGGACGGCTGGCTGCACAGCGGCGACATCGCCTACTGGGACGAGGACGAGCACTTCTTCATCGTGGACCGGCTGAAGAGCCTGATCAAATACAAGGGCTACCAGGTAGCCCCAGCCGAACTGGAGAGCATCCTGCTGCAACACCCCAACATCTTCGACGCCGGGGTCGCCGGCCTGCCCGACGACGATGCCGGCGAGCTGCCCGCCGCAGTCGTCGTGCTGGAACACGGTAAAACCATGACCGAGAAGGAGATCGTGGACTATGTGGCCAGCCAGGTTACAACCGCCAAGAAGCTGCGCGGTGGTGTTGTGTTCGTGGACGAGGTGCCTAAAGGACTGACCGGCAAGTTGGACGCCCGCAAGATCCGCGAGATTCTCATTAAGGCCAAGAAGGGCGGCAAGATCGCCGTGGGCTCCGGAGAGGGCAGAGGAAGTCTGCTAACATGCGGTGACGTCGAGGAGAATCCTGGCCCAATGGAGAGCGACGAGAGCGGCCTGCCCGCCATGGAGATCGAGTGCCGCATCACCGGCACCCTGAACGGCGTGGAGTTCGAGCTGGTGGGCGGCGGAGAGGGCACCCCCGAGCAGGGCCGCATGACCAACAAGATGAAGAGCACCAAAGGCGCCCTGACCTTCAGCCCCTACCTGCTGAGCCACGTGATGGGCTACGGCTTCTACCACTTCGGCACCTACCCCAGCGGCTACGAGAACCCCTTCCTGCACGCCATCAACAACGGCGGCTACACCAACACCCGCATCGAGAAGTACGAGGACGGCGGCGTGCTGCACGTGAGCTTCAGCTACCGCTACGAGGCCGGCCGCGTGATCGGCGACTTCAAGGTGATGGGCACCGGCTTCCCCGAGGACAGCGTGATCTTCACCGACAAGATCATCCGCAGCAACGCCACCGTGGAGCACCTGCACCCCATGGGCGATAACGATCTGGATGGCAGCTTCACCCGCACCTTCAGCCTGCGCGACGGCGGCTACTACAGCTCCGTGGTGGACAGCCACATGCACTTCAAGAGCGCCATCCACCCCAGCATCCTGCAGAACGGGGGCCCCATGTTCGCCTTCCGCCGCGTGGAGGAGGATCACAGCAACACCGAGCTGGGCATCGTGGAGTACCAGCACGCCTTCAAGACCCCGGATGCAGATGCCGGTGAAGAATAAGAGCTCGCTGATCAGCCTCGATAAGATACATTGATGAGTTTGGACAAACCACAACTAGAATGCAGTGAAAAAAATGCTTTATTTGTGAAATTTGTGATGCTATTGCTTTATTTGTAACCATTATAAGCTGCAATAAACAAGTTttaattaaggtcgggcaggaagagggcctatttcccatgattccttcatatttgcatatacgatacaaggctgttagagagataattagaattaatttgactgtaaacacaaagatattagtacaaaatacgtgacgtagaaagtaataatttcttgggtagtttgcagttttaaaattatgttttaaaatggactatcatatgcttaccgtaacttgaaagtatttcgatttcttggctttatatatcttgtggaaaggacgaaacaccgAAGTAGCAGAGGAGAAGAGCTcgaaAGCTCTTCTCCTCTGCTACTTttttttAAGCTTTTTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCTAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAG
例示性 pITR.CMV.LucT2AGFP-U6shRNA-hKCNQ4-1593 序列 (SEQ ID NO: 263) CTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTCTAGATCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGAGTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGTGATGCGGTTTTGGCAGTACATCAATGGGCGTGGATAGCGGTTTGACTCACGGGGATTTCCAAGTCTCCACCCCATTGACGTCAATGGGAGTTTGTTTTGGCACCAAAATCAACGGGACTTTCCAAAATGTCGTAACAACTCCGCCCCATTGACGCAAATGGGCGGTAGGCGTGTACGGTGGGAGGTCTATATAAGCAGAGCTCGTTTAGTGAACCGTcagatcgcctggagacgcACCGGTGCCACCATGGAAGATGCCAAAAACATTAAGAAGGGCCCAGCGCCATTCTACCCACTCGAAGACGGGACCGCCGGCGAGCAGCTGCACAAAGCCATGAAGCGCTACGCCCTGGTGCCCGGCACCATCGCCTTTACCGACGCACATATCGAGGTGGACATTACCTACGCCGAGTACTTCGAGATGAGCGTTCGGCTGGCAGAAGCTATGAAGCGCTATGGGCTGAATACAAACCATCGGATCGTGGTGTGCAGCGAGAATAGCTTGCAGTTCTTCATGCCCGTGTTGGGTGCCCTGTTCATCGGTGTGGCTGTGGCCCCAGCTAACGACATCTACAACGAGCGCGAGCTGCTGAACAGCATGGGCATCAGCCAGCCCACCGTCGTATTCGTGAGCAAGAAAGGGCTGCAAAAGATCCTCAACGTGCAAAAGAAGCTACCGATCATACAAAAGATCATCATCATGGATAGCAAGACCGACTACCAGGGCTTCCAAAGCATGTACACCTTCGTGACTTCCCATTTGCCACCCGGCTTCAACGAGTACGACTTCGTGCCCGAGAGCTTCGACCGGGACAAAACCATCGCCCTGATCATGAACAGTAGTGGCAGTACCGGATTGCCCAAGGGCGTAGCCCTACCGCACCGCACCGCTTGTGTCCGATTCAGTCATGCCCGCGACCCCATCTTCGGCAACCAGATCATCCCCGACACCGCTATCCTCAGCGTGGTGCCATTTCACCACGGCTTCGGCATGTTCACCACGCTGGGCTACTTGATCTGCGGCTTTCGGGTCGTGCTCATGTACCGCTTCGAGGAGGAGCTATTCTTGCGCAGCTTGCAAGACTATAAGATTCAATCTGCCCTGCTGGTGCCCACACTATTTAGCTTCTTCGCTAAGAGCACTCTCATCGACAAGTACGACCTAAGCAACTTGCACGAGATCGCCAGCGGCGGGGCGCCGCTCAGCAAGGAGGTAGGTGAGGCCGTGGCCAAACGCTTCCACCTACCAGGCATCCGCCAGGGCTACGGCCTGACAGAAACAACCAGCGCCATTCTGATCACCCCCGAAGGGGACGACAAGCCTGGCGCAGTAGGCAAGGTGGTGCCCTTCTTCGAGGCTAAGGTGGTGGACTTGGACACAGGTAAGACACTGGGTGTGAACCAGCGCGGCGAGCTGTGCGTCCGTGGCCCCATGATCATGAGCGGCTACGTTAACAACCCCGAGGCTACAAACGCTCTCATCGACAAGGACGGCTGGCTGCACAGCGGCGACATCGCCTACTGGGACGAGGACGAGCACTTCTTCATCGTGGACCGGCTGAAGAGCCTGATCAAATACAAGGGCTACCAGGTAGCCCCAGCCGAACTGGAGAGCATCCTGCTGCAACACCCCAACATCTTCGACGCCGGGGTCGCCGGCCTGCCCGACGACGATGCCGGCGAGCTGCCCGCCGCAGTCGTCGTGCTGGAACACGGTAAAACCATGACCGAGAAGGAGATCGTGGACTATGTGGCCAGCCAGGTTACAACCGCCAAGAAGCTGCGCGGTGGTGTTGTGTTCGTGGACGAGGTGCCTAAAGGACTGACCGGCAAGTTGGACGCCCGCAAGATCCGCGAGATTCTCATTAAGGCCAAGAAGGGCGGCAAGATCGCCGTGGGCTCCGGAGAGGGCAGAGGAAGTCTGCTAACATGCGGTGACGTCGAGGAGAATCCTGGCCCAATGGAGAGCGACGAGAGCGGCCTGCCCGCCATGGAGATCGAGTGCCGCATCACCGGCACCCTGAACGGCGTGGAGTTCGAGCTGGTGGGCGGCGGAGAGGGCACCCCCGAGCAGGGCCGCATGACCAACAAGATGAAGAGCACCAAAGGCGCCCTGACCTTCAGCCCCTACCTGCTGAGCCACGTGATGGGCTACGGCTTCTACCACTTCGGCACCTACCCCAGCGGCTACGAGAACCCCTTCCTGCACGCCATCAACAACGGCGGCTACACCAACACCCGCATCGAGAAGTACGAGGACGGCGGCGTGCTGCACGTGAGCTTCAGCTACCGCTACGAGGCCGGCCGCGTGATCGGCGACTTCAAGGTGATGGGCACCGGCTTCCCCGAGGACAGCGTGATCTTCACCGACAAGATCATCCGCAGCAACGCCACCGTGGAGCACCTGCACCCCATGGGCGATAACGATCTGGATGGCAGCTTCACCCGCACCTTCAGCCTGCGCGACGGCGGCTACTACAGCTCCGTGGTGGACAGCCACATGCACTTCAAGAGCGCCATCCACCCCAGCATCCTGCAGAACGGGGGCCCCATGTTCGCCTTCCGCCGCGTGGAGGAGGATCACAGCAACACCGAGCTGGGCATCGTGGAGTACCAGCACGCCTTCAAGACCCCGGATGCAGATGCCGGTGAAGAATAAGAGCTCGCTGATCAGCCTCGATAAGATACATTGATGAGTTTGGACAAACCACAACTAGAATGCAGTGAAAAAAATGCTTTATTTGTGAAATTTGTGATGCTATTGCTTTATTTGTAACCATTATAAGCTGCAATAAACAAGTTttaattaaggtcgggcaggaagagggcctatttcccatgattccttcatatttgcatatacgatacaaggctgttagagagataattagaattaatttgactgtaaacacaaagatattagtacaaaatacgtgacgtagaaagtaataatttcttgggtagtttgcagttttaaaattatgttttaaaatggactatcatatgcttaccgtaacttgaaagtatttcgatttcttggctttatatatcttgtggaaaggacgaaacaccgAAGACAGTCATCCGCTCCATCcgaaGATGGAGCGGATGACTGTCTTttttttAAGCTTTTTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCTAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCA
例示性 pITR.CMV.LucT2AGFP-U6shRNA-hKCNQ4-1677 序列 (SEQ ID NO: 264) CTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTCTAGATCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGAGTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGTGATGCGGTTTTGGCAGTACATCAATGGGCGTGGATAGCGGTTTGACTCACGGGGATTTCCAAGTCTCCACCCCATTGACGTCAATGGGAGTTTGTTTTGGCACCAAAATCAACGGGACTTTCCAAAATGTCGTAACAACTCCGCCCCATTGACGCAAATGGGCGGTAGGCGTGTACGGTGGGAGGTCTATATAAGCAGAGCTCGTTTAGTGAACCGTcagatcgcctggagacgcACCGGTGCCACCATGGAAGATGCCAAAAACATTAAGAAGGGCCCAGCGCCATTCTACCCACTCGAAGACGGGACCGCCGGCGAGCAGCTGCACAAAGCCATGAAGCGCTACGCCCTGGTGCCCGGCACCATCGCCTTTACCGACGCACATATCGAGGTGGACATTACCTACGCCGAGTACTTCGAGATGAGCGTTCGGCTGGCAGAAGCTATGAAGCGCTATGGGCTGAATACAAACCATCGGATCGTGGTGTGCAGCGAGAATAGCTTGCAGTTCTTCATGCCCGTGTTGGGTGCCCTGTTCATCGGTGTGGCTGTGGCCCCAGCTAACGACATCTACAACGAGCGCGAGCTGCTGAACAGCATGGGCATCAGCCAGCCCACCGTCGTATTCGTGAGCAAGAAAGGGCTGCAAAAGATCCTCAACGTGCAAAAGAAGCTACCGATCATACAAAAGATCATCATCATGGATAGCAAGACCGACTACCAGGGCTTCCAAAGCATGTACACCTTCGTGACTTCCCATTTGCCACCCGGCTTCAACGAGTACGACTTCGTGCCCGAGAGCTTCGACCGGGACAAAACCATCGCCCTGATCATGAACAGTAGTGGCAGTACCGGATTGCCCAAGGGCGTAGCCCTACCGCACCGCACCGCTTGTGTCCGATTCAGTCATGCCCGCGACCCCATCTTCGGCAACCAGATCATCCCCGACACCGCTATCCTCAGCGTGGTGCCATTTCACCACGGCTTCGGCATGTTCACCACGCTGGGCTACTTGATCTGCGGCTTTCGGGTCGTGCTCATGTACCGCTTCGAGGAGGAGCTATTCTTGCGCAGCTTGCAAGACTATAAGATTCAATCTGCCCTGCTGGTGCCCACACTATTTAGCTTCTTCGCTAAGAGCACTCTCATCGACAAGTACGACCTAAGCAACTTGCACGAGATCGCCAGCGGCGGGGCGCCGCTCAGCAAGGAGGTAGGTGAGGCCGTGGCCAAACGCTTCCACCTACCAGGCATCCGCCAGGGCTACGGCCTGACAGAAACAACCAGCGCCATTCTGATCACCCCCGAAGGGGACGACAAGCCTGGCGCAGTAGGCAAGGTGGTGCCCTTCTTCGAGGCTAAGGTGGTGGACTTGGACACAGGTAAGACACTGGGTGTGAACCAGCGCGGCGAGCTGTGCGTCCGTGGCCCCATGATCATGAGCGGCTACGTTAACAACCCCGAGGCTACAAACGCTCTCATCGACAAGGACGGCTGGCTGCACAGCGGCGACATCGCCTACTGGGACGAGGACGAGCACTTCTTCATCGTGGACCGGCTGAAGAGCCTGATCAAATACAAGGGCTACCAGGTAGCCCCAGCCGAACTGGAGAGCATCCTGCTGCAACACCCCAACATCTTCGACGCCGGGGTCGCCGGCCTGCCCGACGACGATGCCGGCGAGCTGCCCGCCGCAGTCGTCGTGCTGGAACACGGTAAAACCATGACCGAGAAGGAGATCGTGGACTATGTGGCCAGCCAGGTTACAACCGCCAAGAAGCTGCGCGGTGGTGTTGTGTTCGTGGACGAGGTGCCTAAAGGACTGACCGGCAAGTTGGACGCCCGCAAGATCCGCGAGATTCTCATTAAGGCCAAGAAGGGCGGCAAGATCGCCGTGGGCTCCGGAGAGGGCAGAGGAAGTCTGCTAACATGCGGTGACGTCGAGGAGAATCCTGGCCCAATGGAGAGCGACGAGAGCGGCCTGCCCGCCATGGAGATCGAGTGCCGCATCACCGGCACCCTGAACGGCGTGGAGTTCGAGCTGGTGGGCGGCGGAGAGGGCACCCCCGAGCAGGGCCGCATGACCAACAAGATGAAGAGCACCAAAGGCGCCCTGACCTTCAGCCCCTACCTGCTGAGCCACGTGATGGGCTACGGCTTCTACCACTTCGGCACCTACCCCAGCGGCTACGAGAACCCCTTCCTGCACGCCATCAACAACGGCGGCTACACCAACACCCGCATCGAGAAGTACGAGGACGGCGGCGTGCTGCACGTGAGCTTCAGCTACCGCTACGAGGCCGGCCGCGTGATCGGCGACTTCAAGGTGATGGGCACCGGCTTCCCCGAGGACAGCGTGATCTTCACCGACAAGATCATCCGCAGCAACGCCACCGTGGAGCACCTGCACCCCATGGGCGATAACGATCTGGATGGCAGCTTCACCCGCACCTTCAGCCTGCGCGACGGCGGCTACTACAGCTCCGTGGTGGACAGCCACATGCACTTCAAGAGCGCCATCCACCCCAGCATCCTGCAGAACGGGGGCCCCATGTTCGCCTTCCGCCGCGTGGAGGAGGATCACAGCAACACCGAGCTGGGCATCGTGGAGTACCAGCACGCCTTCAAGACCCCGGATGCAGATGCCGGTGAAGAATAAGAGCTCGCTGATCAGCCTCGATAAGATACATTGATGAGTTTGGACAAACCACAACTAGAATGCAGTGAAAAAAATGCTTTATTTGTGAAATTTGTGATGCTATTGCTTTATTTGTAACCATTATAAGCTGCAATAAACAAGTTttaattaaggtcgggcaggaagagggcctatttcccatgattccttcatatttgcatatacgatacaaggctgttagagagataattagaattaatttgactgtaaacacaaagatattagtacaaaatacgtgacgtagaaagtaataatttcttgggtagtttgcagttttaaaattatgttttaaaatggactatcatatgcttaccgtaacttgaaagtatttcgatttcttggctttatatatcttgtggaaaggacgaaacaccgAAGGACGTCATTGAGCAGTACcgaaGTACTGCTCAATGACGTCCTTttttttAAGCTTTTTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCTAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAG
例示性 pITR.CMV.LucT2AGFP-U6shRNA-hKCNQ4-1721 序列 (SEQ ID NO: 265) CTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTCTAGATCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGAGTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGTGATGCGGTTTTGGCAGTACATCAATGGGCGTGGATAGCGGTTTGACTCACGGGGATTTCCAAGTCTCCACCCCATTGACGTCAATGGGAGTTTGTTTTGGCACCAAAATCAACGGGACTTTCCAAAATGTCGTAACAACTCCGCCCCATTGACGCAAATGGGCGGTAGGCGTGTACGGTGGGAGGTCTATATAAGCAGAGCTCGTTTAGTGAACCGTcagatcgcctggagacgcACCGGTGCCACCATGGAAGATGCCAAAAACATTAAGAAGGGCCCAGCGCCATTCTACCCACTCGAAGACGGGACCGCCGGCGAGCAGCTGCACAAAGCCATGAAGCGCTACGCCCTGGTGCCCGGCACCATCGCCTTTACCGACGCACATATCGAGGTGGACATTACCTACGCCGAGTACTTCGAGATGAGCGTTCGGCTGGCAGAAGCTATGAAGCGCTATGGGCTGAATACAAACCATCGGATCGTGGTGTGCAGCGAGAATAGCTTGCAGTTCTTCATGCCCGTGTTGGGTGCCCTGTTCATCGGTGTGGCTGTGGCCCCAGCTAACGACATCTACAACGAGCGCGAGCTGCTGAACAGCATGGGCATCAGCCAGCCCACCGTCGTATTCGTGAGCAAGAAAGGGCTGCAAAAGATCCTCAACGTGCAAAAGAAGCTACCGATCATACAAAAGATCATCATCATGGATAGCAAGACCGACTACCAGGGCTTCCAAAGCATGTACACCTTCGTGACTTCCCATTTGCCACCCGGCTTCAACGAGTACGACTTCGTGCCCGAGAGCTTCGACCGGGACAAAACCATCGCCCTGATCATGAACAGTAGTGGCAGTACCGGATTGCCCAAGGGCGTAGCCCTACCGCACCGCACCGCTTGTGTCCGATTCAGTCATGCCCGCGACCCCATCTTCGGCAACCAGATCATCCCCGACACCGCTATCCTCAGCGTGGTGCCATTTCACCACGGCTTCGGCATGTTCACCACGCTGGGCTACTTGATCTGCGGCTTTCGGGTCGTGCTCATGTACCGCTTCGAGGAGGAGCTATTCTTGCGCAGCTTGCAAGACTATAAGATTCAATCTGCCCTGCTGGTGCCCACACTATTTAGCTTCTTCGCTAAGAGCACTCTCATCGACAAGTACGACCTAAGCAACTTGCACGAGATCGCCAGCGGCGGGGCGCCGCTCAGCAAGGAGGTAGGTGAGGCCGTGGCCAAACGCTTCCACCTACCAGGCATCCGCCAGGGCTACGGCCTGACAGAAACAACCAGCGCCATTCTGATCACCCCCGAAGGGGACGACAAGCCTGGCGCAGTAGGCAAGGTGGTGCCCTTCTTCGAGGCTAAGGTGGTGGACTTGGACACAGGTAAGACACTGGGTGTGAACCAGCGCGGCGAGCTGTGCGTCCGTGGCCCCATGATCATGAGCGGCTACGTTAACAACCCCGAGGCTACAAACGCTCTCATCGACAAGGACGGCTGGCTGCACAGCGGCGACATCGCCTACTGGGACGAGGACGAGCACTTCTTCATCGTGGACCGGCTGAAGAGCCTGATCAAATACAAGGGCTACCAGGTAGCCCCAGCCGAACTGGAGAGCATCCTGCTGCAACACCCCAACATCTTCGACGCCGGGGTCGCCGGCCTGCCCGACGACGATGCCGGCGAGCTGCCCGCCGCAGTCGTCGTGCTGGAACACGGTAAAACCATGACCGAGAAGGAGATCGTGGACTATGTGGCCAGCCAGGTTACAACCGCCAAGAAGCTGCGCGGTGGTGTTGTGTTCGTGGACGAGGTGCCTAAAGGACTGACCGGCAAGTTGGACGCCCGCAAGATCCGCGAGATTCTCATTAAGGCCAAGAAGGGCGGCAAGATCGCCGTGGGCTCCGGAGAGGGCAGAGGAAGTCTGCTAACATGCGGTGACGTCGAGGAGAATCCTGGCCCAATGGAGAGCGACGAGAGCGGCCTGCCCGCCATGGAGATCGAGTGCCGCATCACCGGCACCCTGAACGGCGTGGAGTTCGAGCTGGTGGGCGGCGGAGAGGGCACCCCCGAGCAGGGCCGCATGACCAACAAGATGAAGAGCACCAAAGGCGCCCTGACCTTCAGCCCCTACCTGCTGAGCCACGTGATGGGCTACGGCTTCTACCACTTCGGCACCTACCCCAGCGGCTACGAGAACCCCTTCCTGCACGCCATCAACAACGGCGGCTACACCAACACCCGCATCGAGAAGTACGAGGACGGCGGCGTGCTGCACGTGAGCTTCAGCTACCGCTACGAGGCCGGCCGCGTGATCGGCGACTTCAAGGTGATGGGCACCGGCTTCCCCGAGGACAGCGTGATCTTCACCGACAAGATCATCCGCAGCAACGCCACCGTGGAGCACCTGCACCCCATGGGCGATAACGATCTGGATGGCAGCTTCACCCGCACCTTCAGCCTGCGCGACGGCGGCTACTACAGCTCCGTGGTGGACAGCCACATGCACTTCAAGAGCGCCATCCACCCCAGCATCCTGCAGAACGGGGGCCCCATGTTCGCCTTCCGCCGCGTGGAGGAGGATCACAGCAACACCGAGCTGGGCATCGTGGAGTACCAGCACGCCTTCAAGACCCCGGATGCAGATGCCGGTGAAGAATAAGAGCTCGCTGATCAGCCTCGATAAGATACATTGATGAGTTTGGACAAACCACAACTAGAATGCAGTGAAAAAAATGCTTTATTTGTGAAATTTGTGATGCTATTGCTTTATTTGTAACCATTATAAGCTGCAATAAACAAGTTttaattaaggtcgggcaggaagagggcctatttcccatgattccttcatatttgcatatacgatacaaggctgttagagagataattagaattaatttgactgtaaacacaaagatattagtacaaaatacgtgacgtagaaagtaataatttcttgggtagtttgcagttttaaaattatgttttaaaatggactatcatatgcttaccgtaacttgaaagtatttcgatttcttggctttatatatcttgtggaaaggacgaaacaccgGCCGGATCAAGAGCCTGCAAAcgaaTTTGCAGGCTCTTGATCCGGCttttttAAGCTTTTTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCTAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAG
例示性 pITR.CMV.LucT2AGFP-U6shRNA-hKCNQ4-1827 序列 (SEQ ID NO: 266) CTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTCTAGATCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGAGTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGTGATGCGGTTTTGGCAGTACATCAATGGGCGTGGATAGCGGTTTGACTCACGGGGATTTCCAAGTCTCCACCCCATTGACGTCAATGGGAGTTTGTTTTGGCACCAAAATCAACGGGACTTTCCAAAATGTCGTAACAACTCCGCCCCATTGACGCAAATGGGCGGTAGGCGTGTACGGTGGGAGGTCTATATAAGCAGAGCTCGTTTAGTGAACCGTcagatcgcctggagacgcACCGGTGCCACCATGGAAGATGCCAAAAACATTAAGAAGGGCCCAGCGCCATTCTACCCACTCGAAGACGGGACCGCCGGCGAGCAGCTGCACAAAGCCATGAAGCGCTACGCCCTGGTGCCCGGCACCATCGCCTTTACCGACGCACATATCGAGGTGGACATTACCTACGCCGAGTACTTCGAGATGAGCGTTCGGCTGGCAGAAGCTATGAAGCGCTATGGGCTGAATACAAACCATCGGATCGTGGTGTGCAGCGAGAATAGCTTGCAGTTCTTCATGCCCGTGTTGGGTGCCCTGTTCATCGGTGTGGCTGTGGCCCCAGCTAACGACATCTACAACGAGCGCGAGCTGCTGAACAGCATGGGCATCAGCCAGCCCACCGTCGTATTCGTGAGCAAGAAAGGGCTGCAAAAGATCCTCAACGTGCAAAAGAAGCTACCGATCATACAAAAGATCATCATCATGGATAGCAAGACCGACTACCAGGGCTTCCAAAGCATGTACACCTTCGTGACTTCCCATTTGCCACCCGGCTTCAACGAGTACGACTTCGTGCCCGAGAGCTTCGACCGGGACAAAACCATCGCCCTGATCATGAACAGTAGTGGCAGTACCGGATTGCCCAAGGGCGTAGCCCTACCGCACCGCACCGCTTGTGTCCGATTCAGTCATGCCCGCGACCCCATCTTCGGCAACCAGATCATCCCCGACACCGCTATCCTCAGCGTGGTGCCATTTCACCACGGCTTCGGCATGTTCACCACGCTGGGCTACTTGATCTGCGGCTTTCGGGTCGTGCTCATGTACCGCTTCGAGGAGGAGCTATTCTTGCGCAGCTTGCAAGACTATAAGATTCAATCTGCCCTGCTGGTGCCCACACTATTTAGCTTCTTCGCTAAGAGCACTCTCATCGACAAGTACGACCTAAGCAACTTGCACGAGATCGCCAGCGGCGGGGCGCCGCTCAGCAAGGAGGTAGGTGAGGCCGTGGCCAAACGCTTCCACCTACCAGGCATCCGCCAGGGCTACGGCCTGACAGAAACAACCAGCGCCATTCTGATCACCCCCGAAGGGGACGACAAGCCTGGCGCAGTAGGCAAGGTGGTGCCCTTCTTCGAGGCTAAGGTGGTGGACTTGGACACAGGTAAGACACTGGGTGTGAACCAGCGCGGCGAGCTGTGCGTCCGTGGCCCCATGATCATGAGCGGCTACGTTAACAACCCCGAGGCTACAAACGCTCTCATCGACAAGGACGGCTGGCTGCACAGCGGCGACATCGCCTACTGGGACGAGGACGAGCACTTCTTCATCGTGGACCGGCTGAAGAGCCTGATCAAATACAAGGGCTACCAGGTAGCCCCAGCCGAACTGGAGAGCATCCTGCTGCAACACCCCAACATCTTCGACGCCGGGGTCGCCGGCCTGCCCGACGACGATGCCGGCGAGCTGCCCGCCGCAGTCGTCGTGCTGGAACACGGTAAAACCATGACCGAGAAGGAGATCGTGGACTATGTGGCCAGCCAGGTTACAACCGCCAAGAAGCTGCGCGGTGGTGTTGTGTTCGTGGACGAGGTGCCTAAAGGACTGACCGGCAAGTTGGACGCCCGCAAGATCCGCGAGATTCTCATTAAGGCCAAGAAGGGCGGCAAGATCGCCGTGGGCTCCGGAGAGGGCAGAGGAAGTCTGCTAACATGCGGTGACGTCGAGGAGAATCCTGGCCCAATGGAGAGCGACGAGAGCGGCCTGCCCGCCATGGAGATCGAGTGCCGCATCACCGGCACCCTGAACGGCGTGGAGTTCGAGCTGGTGGGCGGCGGAGAGGGCACCCCCGAGCAGGGCCGCATGACCAACAAGATGAAGAGCACCAAAGGCGCCCTGACCTTCAGCCCCTACCTGCTGAGCCACGTGATGGGCTACGGCTTCTACCACTTCGGCACCTACCCCAGCGGCTACGAGAACCCCTTCCTGCACGCCATCAACAACGGCGGCTACACCAACACCCGCATCGAGAAGTACGAGGACGGCGGCGTGCTGCACGTGAGCTTCAGCTACCGCTACGAGGCCGGCCGCGTGATCGGCGACTTCAAGGTGATGGGCACCGGCTTCCCCGAGGACAGCGTGATCTTCACCGACAAGATCATCCGCAGCAACGCCACCGTGGAGCACCTGCACCCCATGGGCGATAACGATCTGGATGGCAGCTTCACCCGCACCTTCAGCCTGCGCGACGGCGGCTACTACAGCTCCGTGGTGGACAGCCACATGCACTTCAAGAGCGCCATCCACCCCAGCATCCTGCAGAACGGGGGCCCCATGTTCGCCTTCCGCCGCGTGGAGGAGGATCACAGCAACACCGAGCTGGGCATCGTGGAGTACCAGCACGCCTTCAAGACCCCGGATGCAGATGCCGGTGAAGAATAAGAGCTCGCTGATCAGCCTCGATAAGATACATTGATGAGTTTGGACAAACCACAACTAGAATGCAGTGAAAAAAATGCTTTATTTGTGAAATTTGTGATGCTATTGCTTTATTTGTAACCATTATAAGCTGCAATAAACAAGTTttaattaaggtcgggcaggaagagggcctatttcccatgattccttcatatttgcatatacgatacaaggctgttagagagataattagaattaatttgactgtaaacacaaagatattagtacaaaatacgtgacgtagaaagtaataatttcttgggtagtttgcagttttaaaattatgttttaaaatggactatcatatgcttaccgtaacttgaaagtatttcgatttcttggctttatatatcttgtggaaaggacgaaacaccgGGTGGATGAAATCAGCATGATcgaaATCATGCTGATTTCATCCACCttttttAAGCTTTTTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCTAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAG經密碼子最佳化以抵抗 CRISPR 之例示性 hKCNQ4 ，一些具有 sgRNA 構築體序列
例示性 pITR.CMV.hKCNQ4codop.mScarlet 序列 (SEQ ID NO: 267) CTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTCTAGATCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGAGTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGTGATGCGGTTTTGGCAGTACATCAATGGGCGTGGATAGCGGTTTGACTCACGGGGATTTCCAAGTCTCCACCCCATTGACGTCAATGGGAGTTTGTTTTGGCACCAAAATCAACGGGACTTTCCAAAATGTCGTAACAACTCCGCCCCATTGACGCAAATGGGCGGTAGGCGTGTACGGTGGGAGGTCTATATAAGCAGAGCTCGTTTAGTGAACCGTcagatcgcctggagacgcACCGGTGCCACCATGGCTGAAGCCCCTCCTAGAAGGCTTGGACTGGGACCTCCTCCTGGGGATGCTCCTAGAGCTGAACTGGTGGCTCTGACAGCCGTGCAGTCTGAACAAGGCGAAGCTGGTGGCGGCGGATCTCCACGTAGACTTGGACTGCTGGGAAGCCCTCTTCCTCCTGGTGCTCCACTTCCTGGACCTGGCAGTGGATCTGGATCTGCCTGTGGCCAGAGAAGCTCTGCCGCTCACAAGAGATACCGGCGGCTGCAGAACTGGGTGTACAACGTGCTGGAAAGACCCAGAGGCTGGGCCTTCGTGTACCACGTGTTCATCTTTCTGCTGGTGTTCAGCTGCCTGGTGCTGTCCGTGCTGAGCACCATCCAAGAACATCAAGAGCTGGCTAACGAGTGCCTGTTAATACTGGAGTTTGTGATGATTGTGGTGTTCGGCCTCGAGTACATCGTCCGCGTTTGGAGCGCCGGCTGCTGCTGCAGATATAGAGGTTGGCAAGGCAGATTCCGCTTCGCCAGAAAGCCCTTCTGCGTGATCGACTTCATCGTGTTCGTGGCCAGCGTGGCCGTGATTGCTGCTGGCACACAGGGCAACATCTTCGCCACAAGCGCCCTGCGGAGCATGCGGTTTCTGCAGATCCTGAGAATGGTCCGAATGGACAGAAGAGGCGGCACCTGGAAGCTGCTGGGCTCTGTGGTGTACGCCCACAGCAAAGAGCTGATCACCGCCTGGTACATCGGATTTCTGGTGCTGATCTTCGCCTCCTTCCTGGTGTACCTGGCCGAGAAGGACGCCAACAGCGACTTTAGCAGCTACGCCGACTCTCTTTGGTGGGGCACCATCACACTGACCACCATCGGCTACGGCGACAAGACCCCTCACACATGGCTGGGAAGAGTGCTGGCCGCTGGATTTGCTCTGCTGGGCATCAGCTTTTTCGCCCTGCCTGCCGGAATCCTCGGATCTGGCTTTGCCCTGAAGGTGCAAGAGCAGCACCGGCAGAAGCACTTCGAGAAGAGAAGAATGCCTGCCGCCAACCTGATTCAGGCCGCTTGGAGACTGTACAGCACCGACATGAGCAGAGCCTACCTGACCGCCACGTGGTATTATTACGACTCGATCCTGCCTAGCTTCCGCGAACTGGCCCTGCTGTTTGAGCATGTGCAGAGAGCCAGAAACGGCGGCCTCAGACCTCTGGAAGTTCGGAGAGCACCTGTGCCTGATGGCGCCCCTTCTAGATATCCTCCAGTGGCCACCTGTCACAGACCCGGCAGCACATCTTTTTGCCCTGGCGAGTCTAGCCGGATGGGCATCAAGGACAGAATCAGAATGGGCAGCAGCCAGCGGAGAACAGGCCCTTCTAAACAGCATCTGGCCCCTCCAACCATGCCTACAAGCCCTAGCTCTGAGCAAGTGGGCGAAGCCACCTCTCCTACCAAGGTGCAGAAGTCCTGGTCCTTCAACGACCGGACCAGATTCAGAGCCAGCCTGAGACTGAAGCCCAGAACCTCTGCCGAGGATGCCCCTTCTGAAGAGGTGGCCGAAGAGAAGTCCTACCAGTGCGAGCTGACCGTGGACGACATCATGCCAGCCGTGAAAACCGTGATACGGTCTATCCGGATCCTGAAGTTCCTGGTGGCCAAGCGGAAGTTCAAAGAGACACTGCGGCCCTACGACGTGAAGGACGTGATCGAGCAGTATTCTGCCGGCCACCTGGACATGCTGGGCAGAATCAAGAGCCTGCAGACCAGAGTGGACCAGATCGTTGGAAGAGGCCCAGGCGACAGAAAGGCCAGAGAGAAGGGCGATAAGGGCCCATCTGATGCCGAGGTTGTCGACGAGATATCAATGATGGGCAGAGTGGTCAAGGTGGAAAAACAGGTGCAGAGCATCGAGCACAAGCTGGACCTGCTGCTGGGATTCTACAGCCGGTGTCTGAGAAGCGGCACATCTGCATCTCTGGGCGCTGTGCAGGTCCCACTGTTCGACCCTGATATCACCAGCGACTATCACAGCCCCGTGGACCACGAGGACATCTCCGTTTCTGCTCAGACCCTGAGCATCAGCAGATCCGTGTCCACCAACATGGACGGATCCCGGGCTGACTACAAAGACCATGACGGTGATTATAAAGATCATGACATCGACTACAAGGATGACGATGACAAGGGCTCCGGAGAGGGCAGAGGAAGTCTGCTAACATGCGGTGACGTCGAGGAGAATCCTGGCCCAATGGTGAGCAAGGGCGAGGCAGTGATCAAGGAGTTCATGCGGTTCAAGGTGCACATGGAGGGCTCCATGAACGGCCACGAGTTCGAGATCGAGGGCGAGGGCGAGGGCCGCCCCTACGAGGGCACCCAGACCGCCAAGCTGAAGGTGACCAAGGGTGGCCCCCTGCCCTTCTCCTGGGACATCCTGTCCCCTCAGTTCATGTACGGCTCCAGGGCCTTCATCAAGCACCCCGCCGACATCCCCGACTACTATAAGCAGTCCTTCCCCGAGGGCTTCAAGTGGGAGCGCGTGATGAACTTCGAGGACGGCGGCGCCGTGACCGTGACCCAGGACACCTCCCTGGAGGACGGCACCCTGATCTACAAGGTGAAGCTCCGCGGCACCAACTTCCCTCCTGACGGCCCCGTAATGCAGAAGAAGACAATGGGCTGGGAAGCGTCCACCGAGCGGTTGTACCCCGAGGACGGCGTGCTGAAGGGCGACATTAAGATGGCCCTGCGCCTGAAGGACGGCGGCCGCTACCTGGCGGACTTCAAGACCACCTACAAGGCCAAGAAGCCCGTGCAGATGCCCGGCGCCTACAACGTCGACCGCAAGTTGGACATCACCTCCCACAACGAGGACTACACCGTGGTGGAACAGTACGAACGCTCCGAGGGCCGCCACTCCACCGGCGGCATGGACGAGCTGTACAAGTAATAAGAGCTCGCTGATCAGCCTCGACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTGGGCTCTATGGAAGCTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCTAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAG
例示性 pITR.CMV.hKCNQ4codop_v2.mScarlet 序列 (SEQ ID NO: 268) CTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTCTAGATCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGAGTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGTGATGCGGTTTTGGCAGTACATCAATGGGCGTGGATAGCGGTTTGACTCACGGGGATTTCCAAGTCTCCACCCCATTGACGTCAATGGGAGTTTGTTTTGGCACCAAAATCAACGGGACTTTCCAAAATGTCGTAACAACTCCGCCCCATTGACGCAAATGGGCGGTAGGCGTGTACGGTGGGAGGTCTATATAAGCAGAGCTCGTTTAGTGAACCGTcagatcgcctggagacgcACCGGTGCCACCATGGCTGAAGCCCCTCCTAGAAGGCTTGGACTGGGACCTCCTCCTGGGGATGCTCCTAGAGCTGAACTGGTGGCTCTGACAGCCGTGCAGTCTGAACAAGGCGAAGCTGGTGGCGGCGGATCTCCACGTAGACTTGGACTGCTGGGAAGCCCTCTTCCTCCTGGTGCTCCACTTCCTGGACCTGGCAGTGGATCTGGATCTGCCTGTGGCCAGAGAAGCTCTGCCGCTCACAAGAGATACCGGCGGCTGCAGAACTGGGTGTACAACGTGCTGGAAAGACCCAGAGGCTGGGCCTTCGTGTACCACGTGTTCATCTTTCTGCTGGTGTTCAGCTGCCTGGTGCTGTCCGTGCTGAGCACCATCCAAGAACATCAAGAGCTGGCTAACGAGTGCCTGTTAATACTGGAGTTTGTGATGATTGTGGTGTTCGGCCTCGAGTACATCGTCCGCGTTTGGAGCGCCGGCTGCTGCTGCAGATATAGAGGTTGGCAAGGCAGATTCCGCTTCGCCAGAAAGCCCTTCTGCGTGATCGACTTCATCGTGTTCGTGGCCAGCGTGGCCGTGATTGCTGCTGGCACACAGGGCAACATCTTCGCCACAAGCGCCCTGCGGAGCATGCGGTTTCTGCAGATCCTGAGAATGGTCCGAATGGACAGAAGAGGCGGCACCTGGAAGCTGCTGGGCTCTGTGGTGTACGCCCACAGCAAAGAGCTGATCACCGCCTGGTACATCGGATTTCTGGTGCTGATCTTCGCCTCCTTCCTGGTGTACCTGGCCGAGAAGGACGCCAACAGCGACTTTAGCAGCTACGCCGACTCTCTTTGGTGGGGCACCATCACACTGACCACCATCGGCTACGGCGACAAGACCCCTCACACATGGCTGGGAAGAGTGCTGGCCGCTGGATTTGCTCTGCTGGGCATCAGCTTTTTCGCCCTGCCTGCCGGAATCCTCGGATCTGGCTTTGCCCTGAAGGTGCAAGAGCAGCATAGACAAAAGCATTTTGAAAAGAGAAGAATGCCTGCCGCCAACCTGATTCAGGCCGCTTGGAGACTGTACAGCACCGACATGAGCAGAGCCTACCTGACCGCCACGTGGTATTATTACGATTCGATCCTGCCTAGCTTCCGCGAACTGGCCCTGCTGTTTGAGCATGTGCAGAGAGCCAGAAACGGCGGCCTCAGACCTCTGGAAGTTCGGAGAGCACCTGTGCCTGATGGCGCCCCTTCTAGATATCCTCCAGTGGCCACCTGTCACAGACCCGGCAGCACATCTTTTTGCCCTGGCGAGTCTAGCCGGATGGGCATCAAGGACAGAATCAGAATGGGCAGCAGCCAGCGGAGAACAGGCCCTTCTAAACAGCATCTGGCCCCTCCAACCATGCCTACAAGCCCTAGCTCTGAGCAAGTGGGCGAAGCCACCTCTCCTACCAAGGTGCAGAAGTCCTGGTCCTTCAACGACCGGACCAGATTTAGAGCCAGCCTCCGGCTGAAGCCCAGAACCTCTGCCGAGGATGCCCCTTCTGAAGAGGTGGCCGAAGAGAAGTCCTACCAGTGCGAGCTGACCGTGGACGACATCATGCCAGCCGTGAAAACCGTGATAAGGTCTATACGCATCCTGAAGTTCCTGGTGGCCAAGCGGAAGTTCAAAGAGACACTGCGGCCCTACGACGTGAAGGACGTGATCGAGCAGTATTCTGCCGGCCACCTGGACATGCTGGGCAGAATCAAGAGCCTGCAGACCAGAGTGGACCAGATCGTTGGAAGAGGCCCAGGCGACAGAAAGGCCAGAGAGAAGGGCGATAAGGGCCCATCTGATGCCGAGGTTGTCGACGAGATATCAATGATGGGCAGAGTCGTGAAAGTCGAAAAACAGGTGCAGAGCATCGAGCACAAGCTGGACCTGCTGCTGGGATTCTACAGCCGGTGTCTGAGAAGCGGCACATCTGCATCTCTGGGCGCTGTGCAGGTCCCACTGTTCGATCCTGATATTACGAGCGATTATCACAGCCCCGTGGACCACGAGGACATCTCCGTTTCTGCTCAGACCCTGAGCATCAGCAGATCCGTGTCCACCAACATGGACGGATCCCGGGCTGACTACAAAGACCATGACGGTGATTATAAAGATCATGACATCGACTACAAGGATGACGATGACAAGGGCTCCGGAGAGGGCAGAGGAAGTCTGCTAACATGCGGTGACGTCGAGGAGAATCCTGGCCCAATGGTGAGCAAGGGCGAGGCAGTGATCAAGGAGTTCATGCGGTTCAAGGTGCACATGGAGGGCTCCATGAACGGCCACGAGTTCGAGATCGAGGGCGAGGGCGAGGGCCGCCCCTACGAGGGCACCCAGACCGCCAAGCTGAAGGTGACCAAGGGTGGCCCCCTGCCCTTCTCCTGGGACATCCTGTCCCCTCAGTTCATGTACGGCTCCAGGGCCTTCATCAAGCACCCCGCCGACATCCCCGACTACTATAAGCAGTCCTTCCCCGAGGGCTTCAAGTGGGAGCGCGTGATGAACTTCGAGGACGGCGGCGCCGTGACCGTGACCCAGGACACCTCCCTGGAGGACGGCACCCTGATCTACAAGGTGAAGCTCCGCGGCACCAACTTCCCTCCTGACGGCCCCGTAATGCAGAAGAAGACAATGGGCTGGGAAGCGTCCACCGAGCGGTTGTACCCCGAGGACGGCGTGCTGAAGGGCGACATTAAGATGGCCCTGCGCCTGAAGGACGGCGGCCGCTACCTGGCGGACTTCAAGACCACCTACAAGGCCAAGAAGCCCGTGCAGATGCCCGGCGCCTACAACGTCGACCGCAAGTTGGACATCACCTCCCACAACGAGGACTACACCGTGGTGGAACAGTACGAACGCTCCGAGGGCCGCCACTCCACCGGCGGCATGGACGAGCTGTACAAGTAATAAGAGCTCGCTGATCAGCCTCGACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTGGGCTCTATGGAAGCTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCTAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAG
例示性 pITR-CMV.hKCNQ4codop.U6-hsammu386Fw 序列 (SEQ ID NO: 269) CTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTCTAGATCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGAGTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGTGATGCGGTTTTGGCAGTACATCAATGGGCGTGGATAGCGGTTTGACTCACGGGGATTTCCAAGTCTCCACCCCATTGACGTCAATGGGAGTTTGTTTTGGCACCAAAATCAACGGGACTTTCCAAAATGTCGTAACAACTCCGCCCCATTGACGCAAATGGGCGGTAGGCGTGTACGGTGGGAGGTCTATATAAGCAGAGCTCGTTTAGTGAACCGTCGTTTAGTGAACCGTcagatcgcctggagacgcACCGGTGCCACCATGGCTGAAGCCCCTCCTAGAAGGCTTGGACTGGGACCTCCTCCTGGGGATGCTCCTAGAGCTGAACTGGTGGCTCTGACAGCCGTGCAGTCTGAACAAGGCGAAGCTGGTGGCGGCGGATCTCCACGTAGACTTGGACTGCTGGGAAGCCCTCTTCCTCCTGGTGCTCCACTTCCTGGACCTGGCAGTGGATCTGGATCTGCCTGTGGCCAGAGAAGCTCTGCCGCTCACAAGAGATACCGGCGGCTGCAGAACTGGGTGTACAACGTGCTGGAAAGACCCAGAGGCTGGGCCTTCGTGTACCACGTGTTCATCTTTCTGCTGGTGTTCAGCTGCCTGGTGCTGTCCGTGCTGAGCACCATCCAAGAACATCAAGAGCTGGCTAACGAGTGCCTGTTAATACTGGAGTTTGTGATGATTGTGGTGTTCGGCCTCGAGTACATCGTCCGCGTTTGGAGCGCCGGCTGCTGCTGCAGATATAGAGGTTGGCAAGGCAGATTCCGCTTCGCCAGAAAGCCCTTCTGCGTGATCGACTTCATCGTGTTCGTGGCCAGCGTGGCCGTGATTGCTGCTGGCACACAGGGCAACATCTTCGCCACAAGCGCCCTGCGGAGCATGCGGTTTCTGCAGATCCTGAGAATGGTCCGAATGGACAGAAGAGGCGGCACCTGGAAGCTGCTGGGCTCTGTGGTGTACGCCCACAGCAAAGAGCTGATCACCGCCTGGTACATCGGATTTCTGGTGCTGATCTTCGCCTCCTTCCTGGTGTACCTGGCCGAGAAGGACGCCAACAGCGACTTTAGCAGCTACGCCGACTCTCTTTGGTGGGGCACCATCACACTGACCACCATCGGCTACGGCGACAAGACCCCTCACACATGGCTGGGAAGAGTGCTGGCCGCTGGATTTGCTCTGCTGGGCATCAGCTTTTTCGCCCTGCCTGCCGGAATCCTCGGATCTGGCTTTGCCCTGAAGGTGCAAGAGCAGCACCGGCAGAAGCACTTCGAGAAGAGAAGAATGCCTGCCGCCAACCTGATTCAGGCCGCTTGGAGACTGTACAGCACCGACATGAGCAGAGCCTACCTGACCGCCACGTGGTATTATTACGACTCGATCCTGCCTAGCTTCCGCGAACTGGCCCTGCTGTTTGAGCATGTGCAGAGAGCCAGAAACGGCGGCCTCAGACCTCTGGAAGTTCGGAGAGCACCTGTGCCTGATGGCGCCCCTTCTAGATATCCTCCAGTGGCCACCTGTCACAGACCCGGCAGCACATCTTTTTGCCCTGGCGAGTCTAGCCGGATGGGCATCAAGGACAGAATCAGAATGGGCAGCAGCCAGCGGAGAACAGGCCCTTCTAAACAGCATCTGGCCCCTCCAACCATGCCTACAAGCCCTAGCTCTGAGCAAGTGGGCGAAGCCACCTCTCCTACCAAGGTGCAGAAGTCCTGGTCCTTCAACGACCGGACCAGATTCAGAGCCAGCCTGAGACTGAAGCCCAGAACCTCTGCCGAGGATGCCCCTTCTGAAGAGGTGGCCGAAGAGAAGTCCTACCAGTGCGAGCTGACCGTGGACGACATCATGCCAGCCGTGAAAACCGTGATACGGTCTATCCGGATCCTGAAGTTCCTGGTGGCCAAGCGGAAGTTCAAAGAGACACTGCGGCCCTACGACGTGAAGGACGTGATCGAGCAGTATTCTGCCGGCCACCTGGACATGCTGGGCAGAATCAAGAGCCTGCAGACCAGAGTGGACCAGATCGTTGGAAGAGGCCCAGGCGACAGAAAGGCCAGAGAGAAGGGCGATAAGGGCCCATCTGATGCCGAGGTTGTCGACGAGATATCAATGATGGGCAGAGTGGTCAAGGTGGAAAAACAGGTGCAGAGCATCGAGCACAAGCTGGACCTGCTGCTGGGATTCTACAGCCGGTGTCTGAGAAGCGGCACATCTGCATCTCTGGGCGCTGTGCAGGTCCCACTGTTCGACCCTGATATCACCAGCGACTATCACAGCCCCGTGGACCACGAGGACATCTCCGTTTCTGCTCAGACCCTGAGCATCAGCAGATCCGTGTCCACCAACATGGACTAATAAGAGCTCGCTGATCAGCCTCGACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTGGGCTCTATGGttaattaaggtcgggcaggaagagggcctatttcccatgattccttcatatttgcatatacgatacaaggctgttagagagataattagaattaatttgactgtaaacacaaagatattagtacaaaatacgtgacgtagaaagtaataatttcttgggtagtttgcagttttaaaattatgttttaaaatggactatcatatgcttaccgtaacttgaaagtatttcgatttcttggctttatatatcttgtggaaaggacgaaacaccgAGGAGCACCAGGAACTTGCCAGTTTAAGTACTCTGTGCTGGAAACAGCACAGAATCTACTTAAACAAGGCAAAATGCCGTGTTTATCTCGTCAACTTGTTGGCGAGAttttttctaAAGCTTGAATTCAAGCTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCTAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAG
例示性 pITR-CMV.hKCNQ4codop.U6-hsa408Rev 序列 (SEQ ID NO: 270) CTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTCTAGATCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGAGTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGTGATGCGGTTTTGGCAGTACATCAATGGGCGTGGATAGCGGTTTGACTCACGGGGATTTCCAAGTCTCCACCCCATTGACGTCAATGGGAGTTTGTTTTGGCACCAAAATCAACGGGACTTTCCAAAATGTCGTAACAACTCCGCCCCATTGACGCAAATGGGCGGTAGGCGTGTACGGTGGGAGGTCTATATAAGCAGAGCTCGTTTAGTGAACCGTCGTTTAGTGAACCGTcagatcgcctggagacgcACCGGTGCCACCATGGCTGAAGCCCCTCCTAGAAGGCTTGGACTGGGACCTCCTCCTGGGGATGCTCCTAGAGCTGAACTGGTGGCTCTGACAGCCGTGCAGTCTGAACAAGGCGAAGCTGGTGGCGGCGGATCTCCACGTAGACTTGGACTGCTGGGAAGCCCTCTTCCTCCTGGTGCTCCACTTCCTGGACCTGGCAGTGGATCTGGATCTGCCTGTGGCCAGAGAAGCTCTGCCGCTCACAAGAGATACCGGCGGCTGCAGAACTGGGTGTACAACGTGCTGGAAAGACCCAGAGGCTGGGCCTTCGTGTACCACGTGTTCATCTTTCTGCTGGTGTTCAGCTGCCTGGTGCTGTCCGTGCTGAGCACCATCCAAGAACATCAAGAGCTGGCTAACGAGTGCCTGTTAATACTGGAGTTTGTGATGATTGTGGTGTTCGGCCTCGAGTACATCGTCCGCGTTTGGAGCGCCGGCTGCTGCTGCAGATATAGAGGTTGGCAAGGCAGATTCCGCTTCGCCAGAAAGCCCTTCTGCGTGATCGACTTCATCGTGTTCGTGGCCAGCGTGGCCGTGATTGCTGCTGGCACACAGGGCAACATCTTCGCCACAAGCGCCCTGCGGAGCATGCGGTTTCTGCAGATCCTGAGAATGGTCCGAATGGACAGAAGAGGCGGCACCTGGAAGCTGCTGGGCTCTGTGGTGTACGCCCACAGCAAAGAGCTGATCACCGCCTGGTACATCGGATTTCTGGTGCTGATCTTCGCCTCCTTCCTGGTGTACCTGGCCGAGAAGGACGCCAACAGCGACTTTAGCAGCTACGCCGACTCTCTTTGGTGGGGCACCATCACACTGACCACCATCGGCTACGGCGACAAGACCCCTCACACATGGCTGGGAAGAGTGCTGGCCGCTGGATTTGCTCTGCTGGGCATCAGCTTTTTCGCCCTGCCTGCCGGAATCCTCGGATCTGGCTTTGCCCTGAAGGTGCAAGAGCAGCACCGGCAGAAGCACTTCGAGAAGAGAAGAATGCCTGCCGCCAACCTGATTCAGGCCGCTTGGAGACTGTACAGCACCGACATGAGCAGAGCCTACCTGACCGCCACGTGGTATTATTACGACTCGATCCTGCCTAGCTTCCGCGAACTGGCCCTGCTGTTTGAGCATGTGCAGAGAGCCAGAAACGGCGGCCTCAGACCTCTGGAAGTTCGGAGAGCACCTGTGCCTGATGGCGCCCCTTCTAGATATCCTCCAGTGGCCACCTGTCACAGACCCGGCAGCACATCTTTTTGCCCTGGCGAGTCTAGCCGGATGGGCATCAAGGACAGAATCAGAATGGGCAGCAGCCAGCGGAGAACAGGCCCTTCTAAACAGCATCTGGCCCCTCCAACCATGCCTACAAGCCCTAGCTCTGAGCAAGTGGGCGAAGCCACCTCTCCTACCAAGGTGCAGAAGTCCTGGTCCTTCAACGACCGGACCAGATTCAGAGCCAGCCTGAGACTGAAGCCCAGAACCTCTGCCGAGGATGCCCCTTCTGAAGAGGTGGCCGAAGAGAAGTCCTACCAGTGCGAGCTGACCGTGGACGACATCATGCCAGCCGTGAAAACCGTGATACGGTCTATCCGGATCCTGAAGTTCCTGGTGGCCAAGCGGAAGTTCAAAGAGACACTGCGGCCCTACGACGTGAAGGACGTGATCGAGCAGTATTCTGCCGGCCACCTGGACATGCTGGGCAGAATCAAGAGCCTGCAGACCAGAGTGGACCAGATCGTTGGAAGAGGCCCAGGCGACAGAAAGGCCAGAGAGAAGGGCGATAAGGGCCCATCTGATGCCGAGGTTGTCGACGAGATATCAATGATGGGCAGAGTGGTCAAGGTGGAAAAACAGGTGCAGAGCATCGAGCACAAGCTGGACCTGCTGCTGGGATTCTACAGCCGGTGTCTGAGAAGCGGCACATCTGCATCTCTGGGCGCTGTGCAGGTCCCACTGTTCGACCCTGATATCACCAGCGACTATCACAGCCCCGTGGACCACGAGGACATCTCCGTTTCTGCTCAGACCCTGAGCATCAGCAGATCCGTGTCCACCAACATGGACTAATAAGAGCTCGCTGATCAGCCTCGACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTGGGCTCTATGGttaattaaggtcgggcaggaagagggcctatttcccatgattccttcatatttgcatatacgatacaaggctgttagagagataattagaattaatttgactgtaaacacaaagatattagtacaaaatacgtgacgtagaaagtaataatttcttgggtagtttgcagttttaaaattatgttttaaaatggactatcatatgcttaccgtaacttgaaagtatttcgatttcttggctttatatatcttgtggaaaggacgaaacaccgAAGCCGAAAACCACGATCATCGTTTAAGTACTCTGTGCTGGAAACAGCACAGAATCTACTTAAACAAGGCAAAATGCCGTGTTTATCTCGTCAACTTGTTGGCGAGAttttttctaAAGCTTGAATTCAAGCTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCTAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAG
例示性 pITR-CMV.hKCNQ4codop.U6-mmu408Rev 序列 (SEQ ID NO: 271) CTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTCTAGATCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGAGTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGTGATGCGGTTTTGGCAGTACATCAATGGGCGTGGATAGCGGTTTGACTCACGGGGATTTCCAAGTCTCCACCCCATTGACGTCAATGGGAGTTTGTTTTGGCACCAAAATCAACGGGACTTTCCAAAATGTCGTAACAACTCCGCCCCATTGACGCAAATGGGCGGTAGGCGTGTACGGTGGGAGGTCTATATAAGCAGAGCTCGTTTAGTGAACCGTCGTTTAGTGAACCGTcagatcgcctggagacgcACCGGTGCCACCATGGCTGAAGCCCCTCCTAGAAGGCTTGGACTGGGACCTCCTCCTGGGGATGCTCCTAGAGCTGAACTGGTGGCTCTGACAGCCGTGCAGTCTGAACAAGGCGAAGCTGGTGGCGGCGGATCTCCACGTAGACTTGGACTGCTGGGAAGCCCTCTTCCTCCTGGTGCTCCACTTCCTGGACCTGGCAGTGGATCTGGATCTGCCTGTGGCCAGAGAAGCTCTGCCGCTCACAAGAGATACCGGCGGCTGCAGAACTGGGTGTACAACGTGCTGGAAAGACCCAGAGGCTGGGCCTTCGTGTACCACGTGTTCATCTTTCTGCTGGTGTTCAGCTGCCTGGTGCTGTCCGTGCTGAGCACCATCCAAGAACATCAAGAGCTGGCTAACGAGTGCCTGTTAATACTGGAGTTTGTGATGATTGTGGTGTTCGGCCTCGAGTACATCGTCCGCGTTTGGAGCGCCGGCTGCTGCTGCAGATATAGAGGTTGGCAAGGCAGATTCCGCTTCGCCAGAAAGCCCTTCTGCGTGATCGACTTCATCGTGTTCGTGGCCAGCGTGGCCGTGATTGCTGCTGGCACACAGGGCAACATCTTCGCCACAAGCGCCCTGCGGAGCATGCGGTTTCTGCAGATCCTGAGAATGGTCCGAATGGACAGAAGAGGCGGCACCTGGAAGCTGCTGGGCTCTGTGGTGTACGCCCACAGCAAAGAGCTGATCACCGCCTGGTACATCGGATTTCTGGTGCTGATCTTCGCCTCCTTCCTGGTGTACCTGGCCGAGAAGGACGCCAACAGCGACTTTAGCAGCTACGCCGACTCTCTTTGGTGGGGCACCATCACACTGACCACCATCGGCTACGGCGACAAGACCCCTCACACATGGCTGGGAAGAGTGCTGGCCGCTGGATTTGCTCTGCTGGGCATCAGCTTTTTCGCCCTGCCTGCCGGAATCCTCGGATCTGGCTTTGCCCTGAAGGTGCAAGAGCAGCACCGGCAGAAGCACTTCGAGAAGAGAAGAATGCCTGCCGCCAACCTGATTCAGGCCGCTTGGAGACTGTACAGCACCGACATGAGCAGAGCCTACCTGACCGCCACGTGGTATTATTACGACTCGATCCTGCCTAGCTTCCGCGAACTGGCCCTGCTGTTTGAGCATGTGCAGAGAGCCAGAAACGGCGGCCTCAGACCTCTGGAAGTTCGGAGAGCACCTGTGCCTGATGGCGCCCCTTCTAGATATCCTCCAGTGGCCACCTGTCACAGACCCGGCAGCACATCTTTTTGCCCTGGCGAGTCTAGCCGGATGGGCATCAAGGACAGAATCAGAATGGGCAGCAGCCAGCGGAGAACAGGCCCTTCTAAACAGCATCTGGCCCCTCCAACCATGCCTACAAGCCCTAGCTCTGAGCAAGTGGGCGAAGCCACCTCTCCTACCAAGGTGCAGAAGTCCTGGTCCTTCAACGACCGGACCAGATTCAGAGCCAGCCTGAGACTGAAGCCCAGAACCTCTGCCGAGGATGCCCCTTCTGAAGAGGTGGCCGAAGAGAAGTCCTACCAGTGCGAGCTGACCGTGGACGACATCATGCCAGCCGTGAAAACCGTGATACGGTCTATCCGGATCCTGAAGTTCCTGGTGGCCAAGCGGAAGTTCAAAGAGACACTGCGGCCCTACGACGTGAAGGACGTGATCGAGCAGTATTCTGCCGGCCACCTGGACATGCTGGGCAGAATCAAGAGCCTGCAGACCAGAGTGGACCAGATCGTTGGAAGAGGCCCAGGCGACAGAAAGGCCAGAGAGAAGGGCGATAAGGGCCCATCTGATGCCGAGGTTGTCGACGAGATATCAATGATGGGCAGAGTGGTCAAGGTGGAAAAACAGGTGCAGAGCATCGAGCACAAGCTGGACCTGCTGCTGGGATTCTACAGCCGGTGTCTGAGAAGCGGCACATCTGCATCTCTGGGCGCTGTGCAGGTCCCACTGTTCGACCCTGATATCACCAGCGACTATCACAGCCCCGTGGACCACGAGGACATCTCCGTTTCTGCTCAGACCCTGAGCATCAGCAGATCCGTGTCCACCAACATGGACTAATAAGAGCTCGCTGATCAGCCTCGACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTGGGCTCTATGGttaattaaggtcgggcaggaagagggcctatttcccatgattccttcatatttgcatatacgatacaaggctgttagagagataattagaattaatttgactgtaaacacaaagatattagtacaaaatacgtgacgtagaaagtaataatttcttgggtagtttgcagttttaaaattatgttttaaaatggactatcatatgcttaccgtaacttgaaagtatttcgatttcttggctttatatatcttgtggaaaggacgaaacaccgAAGCCAAAGACCACAATCATCGTTTAAGTACTCTGTGCTGGAAACAGCACAGAATCTACTTAAACAAGGCAAAATGCCGTGTTTATCTCGTCAACTTGTTGGCGAGAttttttctaAAGCTTGAATTCAAGCTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCTAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAG
例示性 pITR-CMV.hKCNQ4codop.U6-hsammu386Fw 序列 (SEQ ID NO: 272) CCTGCAGGCAGCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTCTAGATCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGAGTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGTGATGCGGTTTTGGCAGTACATCAATGGGCGTGGATAGCGGTTTGACTCACGGGGATTTCCAAGTCTCCACCCCATTGACGTCAATGGGAGTTTGTTTTGGCACCAAAATCAACGGGACTTTCCAAAATGTCGTAACAACTCCGCCCCATTGACGCAAATGGGCGGTAGGCGTGTACGGTGGGAGGTCTATATAAGCAGAGCTCGTTTAGTGAACCGTCGTTTAGTGAACCGTcagatcgcctggagacgcACCGGTGCCACCATGGCTGAAGCCCCTCCTAGAAGGCTTGGACTGGGACCTCCTCCTGGGGATGCTCCTAGAGCTGAACTGGTGGCTCTGACAGCCGTGCAGTCTGAACAAGGCGAAGCTGGTGGCGGCGGATCTCCACGTAGACTTGGACTGCTGGGAAGCCCTCTTCCTCCTGGTGCTCCACTTCCTGGACCTGGCAGTGGATCTGGATCTGCCTGTGGCCAGAGAAGCTCTGCCGCTCACAAGAGATACCGGCGGCTGCAGAACTGGGTGTACAACGTGCTGGAAAGACCCAGAGGCTGGGCCTTCGTGTACCACGTGTTCATCTTTCTGCTGGTGTTCAGCTGCCTGGTGCTGTCCGTGCTGAGCACCATCCAAGAACATCAAGAGCTGGCTAACGAGTGCCTGTTAATACTGGAGTTTGTGATGATTGTGGTGTTCGGCCTCGAGTACATCGTCCGCGTTTGGAGCGCCGGCTGCTGCTGCAGATATAGAGGTTGGCAAGGCAGATTCCGCTTCGCCAGAAAGCCCTTCTGCGTGATCGACTTCATCGTGTTCGTGGCCAGCGTGGCCGTGATTGCTGCTGGCACACAGGGCAACATCTTCGCCACAAGCGCCCTGCGGAGCATGCGGTTTCTGCAGATCCTGAGAATGGTCCGAATGGACAGAAGAGGCGGCACCTGGAAGCTGCTGGGCTCTGTGGTGTACGCCCACAGCAAAGAGCTGATCACCGCCTGGTACATCGGATTTCTGGTGCTGATCTTCGCCTCCTTCCTGGTGTACCTGGCCGAGAAGGACGCCAACAGCGACTTTAGCAGCTACGCCGACTCTCTTTGGTGGGGCACCATCACACTGACCACCATCGGCTACGGCGACAAGACCCCTCACACATGGCTGGGAAGAGTGCTGGCCGCTGGATTTGCTCTGCTGGGCATCAGCTTTTTCGCCCTGCCTGCCGGAATCCTCGGATCTGGCTTTGCCCTGAAGGTGCAAGAGCAGCACCGGCAGAAGCACTTCGAGAAGAGAAGAATGCCTGCCGCCAACCTGATTCAGGCCGCTTGGAGACTGTACAGCACCGACATGAGCAGAGCCTACCTGACCGCCACGTGGTATTATTACGACTCGATCCTGCCTAGCTTCCGCGAACTGGCCCTGCTGTTTGAGCATGTGCAGAGAGCCAGAAACGGCGGCCTCAGACCTCTGGAAGTTCGGAGAGCACCTGTGCCTGATGGCGCCCCTTCTAGATATCCTCCAGTGGCCACCTGTCACAGACCCGGCAGCACATCTTTTTGCCCTGGCGAGTCTAGCCGGATGGGCATCAAGGACAGAATCAGAATGGGCAGCAGCCAGCGGAGAACAGGCCCTTCTAAACAGCATCTGGCCCCTCCAACCATGCCTACAAGCCCTAGCTCTGAGCAAGTGGGCGAAGCCACCTCTCCTACCAAGGTGCAGAAGTCCTGGTCCTTCAACGACCGGACCAGATTCAGAGCCAGCCTGAGACTGAAGCCCAGAACCTCTGCCGAGGATGCCCCTTCTGAAGAGGTGGCCGAAGAGAAGTCCTACCAGTGCGAGCTGACCGTGGACGACATCATGCCAGCCGTGAAAACCGTGATACGGTCTATCCGGATCCTGAAGTTCCTGGTGGCCAAGCGGAAGTTCAAAGAGACACTGCGGCCCTACGACGTGAAGGACGTGATCGAGCAGTATTCTGCCGGCCACCTGGACATGCTGGGCAGAATCAAGAGCCTGCAGACCAGAGTGGACCAGATCGTTGGAAGAGGCCCAGGCGACAGAAAGGCCAGAGAGAAGGGCGATAAGGGCCCATCTGATGCCGAGGTTGTCGACGAGATATCAATGATGGGCAGAGTGGTCAAGGTGGAAAAACAGGTGCAGAGCATCGAGCACAAGCTGGACCTGCTGCTGGGATTCTACAGCCGGTGTCTGAGAAGCGGCACATCTGCATCTCTGGGCGCTGTGCAGGTCCCACTGTTCGACCCTGATATCACCAGCGACTATCACAGCCCCGTGGACCACGAGGACATCTCCGTTTCTGCTCAGACCCTGAGCATCAGCAGATCCGTGTCCACCAACATGGACTAATAAGAGCTCGCTGATCAGCCTCGACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTGGGCTCTATGGttaattaaggtcgggcaggaagagggcctatttcccatgattccttcatatttgcatatacgatacaaggctgttagagagataattagaattaatttgactgtaaacacaaagatattagtacaaaatacgtgacgtagaaagtaataatttcttgggtagtttgcagttttaaaattatgttttaaaatggactatcatatgcttaccgtaacttgaaagtatttcgatttcttggctttatatatcttgtggaaaggacgaaacaccg 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GTTTAAGTACTCTGTGCTGGAAACAGCACAGAATCTACTTAAACAAGGCAAAATGCCGTGTTTATCTCGTCAACTTGTTGGCGAGAttttttctaAAGCTTGAATTCAAGCTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCTAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGCTGCCTGCAGGGGCGCCTGATGCGGTATTTTCTCCTTACGCATCTGTGCGGTATTTCACACCGCATACGTCAAAGCAACCATAGTACGCGCCCTGTAGCGGCGCATTAAGCGCGGCGGGTGTGGTGGTTACGCGCAGCGTGACCGCTACACTTGCCAGCGCCCTAGCGCCCGCTCCTTTCGCTTTCTTCCCTTCCTTTCTCGCCACGTTCGCCGGCTTTCCCCGTCAAGCTCTAAATCGGGGGCTCCCTTTAGGGTTCCGATTTAGTGCTTTACGGCACCTCGACCCCAAAAAACTTGATTTGGGTGATGGTTCACGTAGTGGGCCATCGCCCTGATAGACGGTTTTTCGCCCTTTGACGTTGGAGTCCACGTTCTTTAATAGTGGACTCTTGTTCCAAACTGGAACAACACTCAACCCTATCTCGGGCTATTCTTTTGATTTATAAGGGATTTTGCCGATTTCGGCCTATTGGTTAAAAAATGAGCTGATTTAACAAAAATTTAACGCGAATTTTAACAAAATATTAACGTTTACAATTTTATGGTGCACTCTCAGTACAATCTGCTCTGATGCCGCATAGTTAAGCCAGCCCCGACACCCGCCAACACCCGCTGACGCGCCCTGACGGGCTTGTCTGCTCCCGGCATCCGCTTACAGACAAGCTGTGACCGTCTCCGGGAGCTGCATGTGTCAGAGGTTTTCACCGTCATCACCGAAACGCGCGAGACGAAAGGGCCTCGTGATACGCCTATTTTTATAGGTTAATGTCATGAACAATAAAACTGTCTGCTTACATAAACAGTAATACAAGGGGTGTTATGAGCCATATTCAACGGGAAACGTCGAGGCCGCGATTAAATTCCAACATGGATGCTGATTTATATGGGTATAAATGGGCTCGCGATAATGTCGGGCAATCAGGTGCGACAATCTATCGCTTGTATGGGAAGCCCGATGCGCCAGAGTTGTTTCTGAAACATGGCAAAGGTAGCGTTGCCAATGATGTTACAGATGAGATGGTCAGACTAAACTGGCTGACGGAATTTATGCCTCTTCCGACCATCAAGCATTTTATCCGTACTCCTGATGATGCATGGTTACTCACCACTGCGATCCCCGGAAAAACAGCATTCCAGGTATTAGAAGAATATCCTGATTCAGGTGAAAATATTGTTGATGCGCTGGCAGTGTTCCTGCGCCGGTTGCATTCGATTCCTGTTTGTAATTGTCCTTTTAACAGCGATCGCGTATTTCGTCTCGCTCAGGCGCAATCACGAATGAATAACGGTTTGGTTGATGCGAGTGATTTTGATGACGAGCGTAATGGCTGGCCTGTTGAACAAGTCTGGAAAGAAATGCATAAACTTTTGCCATTCTCACCGGATTCAGTCGTCACTCATGGTGATTTCTCACTTGATAACCTTATTTTTGACGAGGGGAAATTAATAGGTTGTATTGATGTTGGACGAGTCGGAATCGCAGACCGATACCAGGATCTTGCCATCCTATGGAACTGCCTCGGTGAGTTTTCTCCTTCATTACAGAAACGGCTTTTTCAAAAATATGGTATTGATAATCCTGATATGAATAAATTGCAGTTTCATTTGATGCTCGATGAGTTTTTCTAATCTCATGACCAAAATCCCTTAACGTGAGTTTTCGTTCCACTGAGCGTCAGACCCCGTAGAAAAGATCAAAGGATCTTCTTGAGATCCTTTTTTTCTGCGCGTAATCTGCTGCTTGCAAACAAAAAAACCACCGCTACCAGCGGTGGTTTGTTTGCCGGATCAAGAGCTACCAACTCTTTTTCCGAAGGTAACTGGCTTCAGCAGAGCGCAGATACCAAATACTGTCCTTCTAGTGTAGCCGTAGTTAGGCCACCACTTCAAGAACTCTGTAGCACCGCCTACATACCTCGCTCTGCTAATCCTGTTACCAGTGGCTGCTGCCAGTGGCGATAAGTCGTGTCTTACCGGGTTGGACTCAAGACGATAGTTACCGGATAAGGCGCAGCGGTCGGGCTGAACGGGGGGTTCGTGCACACAGCCCAGCTTGGAGCGAACGACCTACACCGAACTGAGATACCTACAGCGTGAGCTATGAGAAAGCGCCACGCTTCCCGAAGGGAGAAAGGCGGACAGGTATCCGGTAAGCGGCAGGGTCGGAACAGGAGAGCGCACGAGGGAGCTTCCAGGGGGAAACGCCTGGTATCTTTATAGTCCTGTCGGGTTTCGCCACCTCTGACTTGAGCGTCGATTTTTGTGATGCTCGTCAGGGGGGCGGAGCCTATGGAAAAACGCCAGCAACGCGGCCTTTTTACGGTTCCTGGCCTTTTGCTGGCCTTTTGCTCACATGT
例示性 pITR-CMV.hKCNQ4codop.U6-hsa408Rev 序列 (SEQ ID NO: 273) CCTGCAGGCAGCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTCTAGATCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGAGTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGTGATGCGGTTTTGGCAGTACATCAATGGGCGTGGATAGCGGTTTGACTCACGGGGATTTCCAAGTCTCCACCCCATTGACGTCAATGGGAGTTTGTTTTGGCACCAAAATCAACGGGACTTTCCAAAATGTCGTAACAACTCCGCCCCATTGACGCAAATGGGCGGTAGGCGTGTACGGTGGGAGGTCTATATAAGCAGAGCTCGTTTAGTGAACCGTCGTTTAGTGAACCGTcagatcgcctggagacgcACCGGTGCCACCATGGCTGAAGCCCCTCCTAGAAGGCTTGGACTGGGACCTCCTCCTGGGGATGCTCCTAGAGCTGAACTGGTGGCTCTGACAGCCGTGCAGTCTGAACAAGGCGAAGCTGGTGGCGGCGGATCTCCACGTAGACTTGGACTGCTGGGAAGCCCTCTTCCTCCTGGTGCTCCACTTCCTGGACCTGGCAGTGGATCTGGATCTGCCTGTGGCCAGAGAAGCTCTGCCGCTCACAAGAGATACCGGCGGCTGCAGAACTGGGTGTACAACGTGCTGGAAAGACCCAGAGGCTGGGCCTTCGTGTACCACGTGTTCATCTTTCTGCTGGTGTTCAGCTGCCTGGTGCTGTCCGTGCTGAGCACCATCCAAGAACATCAAGAGCTGGCTAACGAGTGCCTGTTAATACTGGAGTTTGTGATGATTGTGGTGTTCGGCCTCGAGTACATCGTCCGCGTTTGGAGCGCCGGCTGCTGCTGCAGATATAGAGGTTGGCAAGGCAGATTCCGCTTCGCCAGAAAGCCCTTCTGCGTGATCGACTTCATCGTGTTCGTGGCCAGCGTGGCCGTGATTGCTGCTGGCACACAGGGCAACATCTTCGCCACAAGCGCCCTGCGGAGCATGCGGTTTCTGCAGATCCTGAGAATGGTCCGAATGGACAGAAGAGGCGGCACCTGGAAGCTGCTGGGCTCTGTGGTGTACGCCCACAGCAAAGAGCTGATCACCGCCTGGTACATCGGATTTCTGGTGCTGATCTTCGCCTCCTTCCTGGTGTACCTGGCCGAGAAGGACGCCAACAGCGACTTTAGCAGCTACGCCGACTCTCTTTGGTGGGGCACCATCACACTGACCACCATCGGCTACGGCGACAAGACCCCTCACACATGGCTGGGAAGAGTGCTGGCCGCTGGATTTGCTCTGCTGGGCATCAGCTTTTTCGCCCTGCCTGCCGGAATCCTCGGATCTGGCTTTGCCCTGAAGGTGCAAGAGCAGCACCGGCAGAAGCACTTCGAGAAGAGAAGAATGCCTGCCGCCAACCTGATTCAGGCCGCTTGGAGACTGTACAGCACCGACATGAGCAGAGCCTACCTGACCGCCACGTGGTATTATTACGACTCGATCCTGCCTAGCTTCCGCGAACTGGCCCTGCTGTTTGAGCATGTGCAGAGAGCCAGAAACGGCGGCCTCAGACCTCTGGAAGTTCGGAGAGCACCTGTGCCTGATGGCGCCCCTTCTAGATATCCTCCAGTGGCCACCTGTCACAGACCCGGCAGCACATCTTTTTGCCCTGGCGAGTCTAGCCGGATGGGCATCAAGGACAGAATCAGAATGGGCAGCAGCCAGCGGAGAACAGGCCCTTCTAAACAGCATCTGGCCCCTCCAACCATGCCTACAAGCCCTAGCTCTGAGCAAGTGGGCGAAGCCACCTCTCCTACCAAGGTGCAGAAGTCCTGGTCCTTCAACGACCGGACCAGATTCAGAGCCAGCCTGAGACTGAAGCCCAGAACCTCTGCCGAGGATGCCCCTTCTGAAGAGGTGGCCGAAGAGAAGTCCTACCAGTGCGAGCTGACCGTGGACGACATCATGCCAGCCGTGAAAACCGTGATACGGTCTATCCGGATCCTGAAGTTCCTGGTGGCCAAGCGGAAGTTCAAAGAGACACTGCGGCCCTACGACGTGAAGGACGTGATCGAGCAGTATTCTGCCGGCCACCTGGACATGCTGGGCAGAATCAAGAGCCTGCAGACCAGAGTGGACCAGATCGTTGGAAGAGGCCCAGGCGACAGAAAGGCCAGAGAGAAGGGCGATAAGGGCCCATCTGATGCCGAGGTTGTCGACGAGATATCAATGATGGGCAGAGTGGTCAAGGTGGAAAAACAGGTGCAGAGCATCGAGCACAAGCTGGACCTGCTGCTGGGATTCTACAGCCGGTGTCTGAGAAGCGGCACATCTGCATCTCTGGGCGCTGTGCAGGTCCCACTGTTCGACCCTGATATCACCAGCGACTATCACAGCCCCGTGGACCACGAGGACATCTCCGTTTCTGCTCAGACCCTGAGCATCAGCAGATCCGTGTCCACCAACATGGACTAATAAGAGCTCGCTGATCAGCCTCGACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTGGGCTCTATGGttaattaaggtcgggcaggaagagggcctatttcccatgattccttcatatttgcatatacgatacaaggctgttagagagataattagaattaatttgactgtaaacacaaagatattagtacaaaatacgtgacgtagaaagtaataatttcttgggtagtttgcagttttaaaattatgttttaaaatggactatcatatgcttaccgtaacttgaaagtatttcgatttcttggctttatatatcttgtggaaaggacgaaacaccgAAGCCGAAAACCACGATCATCGTTTAAGTACTCTGTGCTGGAAACAGCACAGAATCTACTTAAACAAGGCAAAATGCCGTGTTTATCTCGTCAACTTGTTGGCGAGAttttttctaAAGCTTGAATTCAAGCTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCTAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGCTGCCTGCAGGGGCGCCTGATGCGGTATTTTCTCCTTACGCATCTGTGCGGTATTTCACACCGCATACGTCAAAGCAACCATAGTACGCGCCCTGTAGCGGCGCATTAAGCGCGGCGGGTGTGGTGGTTACGCGCAGCGTGACCGCTACACTTGCCAGCGCCCTAGCGCCCGCTCCTTTCGCTTTCTTCCCTTCCTTTCTCGCCACGTTCGCCGGCTTTCCCCGTCAAGCTCTAAATCGGGGGCTCCCTTTAGGGTTCCGATTTAGTGCTTTACGGCACCTCGACCCCAAAAAACTTGATTTGGGTGATGGTTCACGTAGTGGGCCATCGCCCTGATAGACGGTTTTTCGCCCTTTGACGTTGGAGTCCACGTTCTTTAATAGTGGACTCTTGTTCCAAACTGGAACAACACTCAACCCTATCTCGGGCTATTCTTTTGATTTATAAGGGATTTTGCCGATTTCGGCCTATTGGTTAAAAAATGAGCTGATTTAACAAAAATTTAACGCGAATTTTAACAAAATATTAACGTTTACAATTTTATGGTGCACTCTCAGTACAATCTGCTCTGATGCCGCATAGTTAAGCCAGCCCCGACACCCGCCAACACCCGCTGACGCGCCCTGACGGGCTTGTCTGCTCCCGGCATCCGCTTACAGACAAGCTGTGACCGTCTCCGGGAGCTGCATGTGTCAGAGGTTTTCACCGTCATCACCGAAACGCGCGAGACGAAAGGGCCTCGTGATACGCCTATTTTTATAGGTTAATGTCATGAACAATAAAACTGTCTGCTTACATAAACAGTAATACAAGGGGTGTTATGAGCCATATTCAACGGGAAACGTCGAGGCCGCGATTAAATTCCAACATGGATGCTGATTTATATGGGTATAAATGGGCTCGCGATAATGTCGGGCAATCAGGTGCGACAATCTATCGCTTGTATGGGAAGCCCGATGCGCCAGAGTTGTTTCTGAAACATGGCAAAGGTAGCGTTGCCAATGATGTTACAGATGAGATGGTCAGACTAAACTGGCTGACGGAATTTATGCCTCTTCCGACCATCAAGCATTTTATCCGTACTCCTGATGATGCATGGTTACTCACCACTGCGATCCCCGGAAAAACAGCATTCCAGGTATTAGAAGAATATCCTGATTCAGGTGAAAATATTGTTGATGCGCTGGCAGTGTTCCTGCGCCGGTTGCATTCGATTCCTGTTTGTAATTGTCCTTTTAACAGCGATCGCGTATTTCGTCTCGCTCAGGCGCAATCACGAATGAATAACGGTTTGGTTGATGCGAGTGATTTTGATGACGAGCGTAATGGCTGGCCTGTTGAACAAGTCTGGAAAGAAATGCATAAACTTTTGCCATTCTCACCGGATTCAGTCGTCACTCATGGTGATTTCTCACTTGATAACCTTATTTTTGACGAGGGGAAATTAATAGGTTGTATTGATGTTGGACGAGTCGGAATCGCAGACCGATACCAGGATCTTGCCATCCTATGGAACTGCCTCGGTGAGTTTTCTCCTTCATTACAGAAACGGCTTTTTCAAAAATATGGTATTGATAATCCTGATATGAATAAATTGCAGTTTCATTTGATGCTCGATGAGTTTTTCTAATCTCATGACCAAAATCCCTTAACGTGAGTTTTCGTTCCACTGAGCGTCAGACCCCGTAGAAAAGATCAAAGGATCTTCTTGAGATCCTTTTTTTCTGCGCGTAATCTGCTGCTTGCAAACAAAAAAACCACCGCTACCAGCGGTGGTTTGTTTGCCGGATCAAGAGCTACCAACTCTTTTTCCGAAGGTAACTGGCTTCAGCAGAGCGCAGATACCAAATACTGTCCTTCTAGTGTAGCCGTAGTTAGGCCACCACTTCAAGAACTCTGTAGCACCGCCTACATACCTCGCTCTGCTAATCCTGTTACCAGTGGCTGCTGCCAGTGGCGATAAGTCGTGTCTTACCGGGTTGGACTCAAGACGATAGTTACCGGATAAGGCGCAGCGGTCGGGCTGAACGGGGGGTTCGTGCACACAGCCCAGCTTGGAGCGAACGACCTACACCGAACTGAGATACCTACAGCGTGAGCTATGAGAAAGCGCCACGCTTCCCGAAGGGAGAAAGGCGGACAGGTATCCGGTAAGCGGCAGGGTCGGAACAGGAGAGCGCACGAGGGAGCTTCCAGGGGGAAACGCCTGGTATCTTTATAGTCCTGTCGGGTTTCGCCACCTCTGACTTGAGCGTCGATTTTTGTGATGCTCGTCAGGGGGGCGGAGCCTATGGAAAAACGCCAGCAACGCGGCCTTTTTACGGTTCCTGGCCTTTTGCTGGCCTTTTGCTCACATGT
例示性 pITR-CAG.hKCNQ4codop.U6-hsammu386Fw 序列 (SEQ ID NO: 274) CTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTGACATTGATTATTGACTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGACTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGGTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCGGGAGTCGCTGCGTTGCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCGCGCCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGGCTCTGACTGACCGCGTTACTCCCACAGGTGAGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCTTGGTTTAATGACGGCTCGTTTCTTTTCTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTAAAGGGCTCCGGGAGGGCCCTTTGTGCGGGGGGGAGCGGCTCGGGGGGTGCGTGCGTGTGTGTGTGCGTGGGGAGCGCCGCGTGCGGCCCGCGCTGCCCGGCGGCTGTGAGCGCTGCGGGCGCGGCGCGGGGCTTTGTGCGCTCCGCGTGTGCGCGAGGGGAGCGCGGCCGGGGGCGGTGCCCCGCGGTGCGGGGGGGCTGCGAGGGGAACAAAGGCTGCGTGCGGGGTGTGTGCGTGGGGGGGTGAGCAGGGGGTGTGGGCGCGGCGGTCGGGCTGTAACCCCCCCCTGCACCCCCCTCCCCGAGTTGCTGAGCACGGCCCGGCTTCGGGTGCGGGGCTCCGTGCGGGGCGTGGCGCGGGGCTCGCCGTGCCGGGCGGGGGGTGGCGGCAGGTGGGGGTGCCGGGCGGGGCGGGGCCGCCTCGGGCCGGGGAGGGCTCGGGGGAGGGGCGCGGCGGCCCCCGGAGCGCCGGCGGCTGTCGAGGCGCGGCGAGCCGCAGCCATTGCCTTTTATGGTAATCGTGCGAGAGGGCGCAGGGACTTCCTTTGTCCCAAATCTGTGCGGAGCCGAAATCTGGGAGGCGCCGCCGCACCCCCTCTAGCGGGCGCGGGGCGAAGCGGTGCGGCGCCGGCAGGAAGGAAATGGGCGGGGAGGGCCTTCGTGCGTCGCCGCGCCGCCGTCCCCTTCTCCCTCTCCAGCCTCGGGGCTGTCCGCGGGGGGACGGCTGCCTTCGGGGGGGACGGGGCAGGGCGGGGTTCGGCTTCTGGCGTGTGACCGGCGGCTCTAGAGCCTCTGCTAACCATGTTCATGCCTTCTTCTTTTTCCTACAGCTCCTGGGCAACGTGCTGGTTATTGTGACCGGTCGCTAGCCACCATGGCTGAAGCCCCTCCTAGAAGGCTTGGACTGGGACCTCCTCCTGGGGATGCTCCTAGAGCTGAACTGGTGGCTCTGACAGCCGTGCAGTCTGAACAAGGCGAAGCTGGTGGCGGCGGATCTCCACGTAGACTTGGACTGCTGGGAAGCCCTCTTCCTCCTGGTGCTCCACTTCCTGGACCTGGCAGTGGATCTGGATCTGCCTGTGGCCAGAGAAGCTCTGCCGCTCACAAGAGATACCGGCGGCTGCAGAACTGGGTGTACAACGTGCTGGAAAGACCCAGAGGCTGGGCCTTCGTGTACCACGTGTTCATCTTTCTGCTGGTGTTCAGCTGCCTGGTGCTGTCCGTGCTGAGCACCATCCAAGAACATCAAGAGCTGGCTAACGAGTGCCTGTTAATACTGGAGTTTGTGATGATTGTGGTGTTCGGCCTCGAGTACATCGTCCGCGTTTGGAGCGCCGGCTGCTGCTGCAGATATAGAGGTTGGCAAGGCAGATTCCGCTTCGCCAGAAAGCCCTTCTGCGTGATCGACTTCATCGTGTTCGTGGCCAGCGTGGCCGTGATTGCTGCTGGCACACAGGGCAACATCTTCGCCACAAGCGCCCTGCGGAGCATGCGGTTTCTGCAGATCCTGAGAATGGTCCGAATGGACAGAAGAGGCGGCACCTGGAAGCTGCTGGGCTCTGTGGTGTACGCCCACAGCAAAGAGCTGATCACCGCCTGGTACATCGGATTTCTGGTGCTGATCTTCGCCTCCTTCCTGGTGTACCTGGCCGAGAAGGACGCCAACAGCGACTTTAGCAGCTACGCCGACTCTCTTTGGTGGGGCACCATCACACTGACCACCATCGGCTACGGCGACAAGACCCCTCACACATGGCTGGGAAGAGTGCTGGCCGCTGGATTTGCTCTGCTGGGCATCAGCTTTTTCGCCCTGCCTGCCGGAATCCTCGGATCTGGCTTTGCCCTGAAGGTGCAAGAGCAGCACCGGCAGAAGCACTTCGAGAAGAGAAGAATGCCTGCCGCCAACCTGATTCAGGCCGCTTGGAGACTGTACAGCACCGACATGAGCAGAGCCTACCTGACCGCCACGTGGTATTATTACGACTCGATCCTGCCTAGCTTCCGCGAACTGGCCCTGCTGTTTGAGCATGTGCAGAGAGCCAGAAACGGCGGCCTCAGACCTCTGGAAGTTCGGAGAGCACCTGTGCCTGATGGCGCCCCTTCTAGATATCCTCCAGTGGCCACCTGTCACAGACCCGGCAGCACATCTTTTTGCCCTGGCGAGTCTAGCCGGATGGGCATCAAGGACAGAATCAGAATGGGCAGCAGCCAGCGGAGAACAGGCCCTTCTAAACAGCATCTGGCCCCTCCAACCATGCCTACAAGCCCTAGCTCTGAGCAAGTGGGCGAAGCCACCTCTCCTACCAAGGTGCAGAAGTCCTGGTCCTTCAACGACCGGACCAGATTCAGAGCCAGCCTGAGACTGAAGCCCAGAACCTCTGCCGAGGATGCCCCTTCTGAAGAGGTGGCCGAAGAGAAGTCCTACCAGTGCGAGCTGACCGTGGACGACATCATGCCAGCCGTGAAAACCGTGATACGGTCTATCCGGATCCTGAAGTTCCTGGTGGCCAAGCGGAAGTTCAAAGAGACACTGCGGCCCTACGACGTGAAGGACGTGATCGAGCAGTATTCTGCCGGCCACCTGGACATGCTGGGCAGAATCAAGAGCCTGCAGACCAGAGTGGACCAGATCGTTGGAAGAGGCCCAGGCGACAGAAAGGCCAGAGAGAAGGGCGATAAGGGCCCATCTGATGCCGAGGTTGTCGACGAGATATCAATGATGGGCAGAGTGGTCAAGGTGGAAAAACAGGTGCAGAGCATCGAGCACAAGCTGGACCTGCTGCTGGGATTCTACAGCCGGTGTCTGAGAAGCGGCACATCTGCATCTCTGGGCGCTGTGCAGGTCCCACTGTTCGACCCTGATATCACCAGCGACTATCACAGCCCCGTGGACCACGAGGACATCTCCGTTTCTGCTCAGACCCTGAGCATCAGCAGATCCGTGTCCACCAACATGGACTAATAAGAGCTCGCTGATCAGCCTCGACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTGGGCTCTATGGttaattaaggtcgggcaggaagagggcctatttcccatgattccttcatatttgcatatacgatacaaggctgttagagagataattagaattaatttgactgtaaacacaaagatattagtacaaaatacgtgacgtagaaagtaataatttcttgggtagtttgcagttttaaaattatgttttaaaatggactatcatatgcttaccgtaacttgaaagtatttcgatttcttggctttatatatcttgtggaaaggacgaaacaccgAGGAGCACCAGGAACTTGCCAGTTTAAGTACTCTGTGCTGGAAACAGCACAGAATCTACTTAAACAAGGCAAAATGCCGTGTTTATCTCGTCAACTTGTTGGCGAGAttttttctaAAGCTTGAATTCAAGCTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCTAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAG
例示性 pITR-CAG.hKCNQ4codop.U6-mmu408Rev 序列 (SEQ ID NO: 275) CTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTGACATTGATTATTGACTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGACTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGGTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCGGGAGTCGCTGCGTTGCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCGCGCCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGGCTCTGACTGACCGCGTTACTCCCACAGGTGAGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCTTGGTTTAATGACGGCTCGTTTCTTTTCTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTAAAGGGCTCCGGGAGGGCCCTTTGTGCGGGGGGGAGCGGCTCGGGGGGTGCGTGCGTGTGTGTGTGCGTGGGGAGCGCCGCGTGCGGCCCGCGCTGCCCGGCGGCTGTGAGCGCTGCGGGCGCGGCGCGGGGCTTTGTGCGCTCCGCGTGTGCGCGAGGGGAGCGCGGCCGGGGGCGGTGCCCCGCGGTGCGGGGGGGCTGCGAGGGGAACAAAGGCTGCGTGCGGGGTGTGTGCGTGGGGGGGTGAGCAGGGGGTGTGGGCGCGGCGGTCGGGCTGTAACCCCCCCCTGCACCCCCCTCCCCGAGTTGCTGAGCACGGCCCGGCTTCGGGTGCGGGGCTCCGTGCGGGGCGTGGCGCGGGGCTCGCCGTGCCGGGCGGGGGGTGGCGGCAGGTGGGGGTGCCGGGCGGGGCGGGGCCGCCTCGGGCCGGGGAGGGCTCGGGGGAGGGGCGCGGCGGCCCCCGGAGCGCCGGCGGCTGTCGAGGCGCGGCGAGCCGCAGCCATTGCCTTTTATGGTAATCGTGCGAGAGGGCGCAGGGACTTCCTTTGTCCCAAATCTGTGCGGAGCCGAAATCTGGGAGGCGCCGCCGCACCCCCTCTAGCGGGCGCGGGGCGAAGCGGTGCGGCGCCGGCAGGAAGGAAATGGGCGGGGAGGGCCTTCGTGCGTCGCCGCGCCGCCGTCCCCTTCTCCCTCTCCAGCCTCGGGGCTGTCCGCGGGGGGACGGCTGCCTTCGGGGGGGACGGGGCAGGGCGGGGTTCGGCTTCTGGCGTGTGACCGGCGGCTCTAGAGCCTCTGCTAACCATGTTCATGCCTTCTTCTTTTTCCTACAGCTCCTGGGCAACGTGCTGGTTATTGTGACCGGTCGCTAGCCACCATGGCTGAAGCCCCTCCTAGAAGGCTTGGACTGGGACCTCCTCCTGGGGATGCTCCTAGAGCTGAACTGGTGGCTCTGACAGCCGTGCAGTCTGAACAAGGCGAAGCTGGTGGCGGCGGATCTCCACGTAGACTTGGACTGCTGGGAAGCCCTCTTCCTCCTGGTGCTCCACTTCCTGGACCTGGCAGTGGATCTGGATCTGCCTGTGGCCAGAGAAGCTCTGCCGCTCACAAGAGATACCGGCGGCTGCAGAACTGGGTGTACAACGTGCTGGAAAGACCCAGAGGCTGGGCCTTCGTGTACCACGTGTTCATCTTTCTGCTGGTGTTCAGCTGCCTGGTGCTGTCCGTGCTGAGCACCATCCAAGAACATCAAGAGCTGGCTAACGAGTGCCTGTTAATACTGGAGTTTGTGATGATTGTGGTGTTCGGCCTCGAGTACATCGTCCGCGTTTGGAGCGCCGGCTGCTGCTGCAGATATAGAGGTTGGCAAGGCAGATTCCGCTTCGCCAGAAAGCCCTTCTGCGTGATCGACTTCATCGTGTTCGTGGCCAGCGTGGCCGTGATTGCTGCTGGCACACAGGGCAACATCTTCGCCACAAGCGCCCTGCGGAGCATGCGGTTTCTGCAGATCCTGAGAATGGTCCGAATGGACAGAAGAGGCGGCACCTGGAAGCTGCTGGGCTCTGTGGTGTACGCCCACAGCAAAGAGCTGATCACCGCCTGGTACATCGGATTTCTGGTGCTGATCTTCGCCTCCTTCCTGGTGTACCTGGCCGAGAAGGACGCCAACAGCGACTTTAGCAGCTACGCCGACTCTCTTTGGTGGGGCACCATCACACTGACCACCATCGGCTACGGCGACAAGACCCCTCACACATGGCTGGGAAGAGTGCTGGCCGCTGGATTTGCTCTGCTGGGCATCAGCTTTTTCGCCCTGCCTGCCGGAATCCTCGGATCTGGCTTTGCCCTGAAGGTGCAAGAGCAGCACCGGCAGAAGCACTTCGAGAAGAGAAGAATGCCTGCCGCCAACCTGATTCAGGCCGCTTGGAGACTGTACAGCACCGACATGAGCAGAGCCTACCTGACCGCCACGTGGTATTATTACGACTCGATCCTGCCTAGCTTCCGCGAACTGGCCCTGCTGTTTGAGCATGTGCAGAGAGCCAGAAACGGCGGCCTCAGACCTCTGGAAGTTCGGAGAGCACCTGTGCCTGATGGCGCCCCTTCTAGATATCCTCCAGTGGCCACCTGTCACAGACCCGGCAGCACATCTTTTTGCCCTGGCGAGTCTAGCCGGATGGGCATCAAGGACAGAATCAGAATGGGCAGCAGCCAGCGGAGAACAGGCCCTTCTAAACAGCATCTGGCCCCTCCAACCATGCCTACAAGCCCTAGCTCTGAGCAAGTGGGCGAAGCCACCTCTCCTACCAAGGTGCAGAAGTCCTGGTCCTTCAACGACCGGACCAGATTCAGAGCCAGCCTGAGACTGAAGCCCAGAACCTCTGCCGAGGATGCCCCTTCTGAAGAGGTGGCCGAAGAGAAGTCCTACCAGTGCGAGCTGACCGTGGACGACATCATGCCAGCCGTGAAAACCGTGATACGGTCTATCCGGATCCTGAAGTTCCTGGTGGCCAAGCGGAAGTTCAAAGAGACACTGCGGCCCTACGACGTGAAGGACGTGATCGAGCAGTATTCTGCCGGCCACCTGGACATGCTGGGCAGAATCAAGAGCCTGCAGACCAGAGTGGACCAGATCGTTGGAAGAGGCCCAGGCGACAGAAAGGCCAGAGAGAAGGGCGATAAGGGCCCATCTGATGCCGAGGTTGTCGACGAGATATCAATGATGGGCAGAGTGGTCAAGGTGGAAAAACAGGTGCAGAGCATCGAGCACAAGCTGGACCTGCTGCTGGGATTCTACAGCCGGTGTCTGAGAAGCGGCACATCTGCATCTCTGGGCGCTGTGCAGGTCCCACTGTTCGACCCTGATATCACCAGCGACTATCACAGCCCCGTGGACCACGAGGACATCTCCGTTTCTGCTCAGACCCTGAGCATCAGCAGATCCGTGTCCACCAACATGGACTAATAAGAGCTCGCTGATCAGCCTCGACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTGGGCTCTATGGttaattaaggtcgggcaggaagagggcctatttcccatgattccttcatatttgcatatacgatacaaggctgttagagagataattagaattaatttgactgtaaacacaaagatattagtacaaaatacgtgacgtagaaagtaataatttcttgggtagtttgcagttttaaaattatgttttaaaatggactatcatatgcttaccgtaacttgaaagtatttcgatttcttggctttatatatcttgtggaaaggacgaaacaccgAAGCCAAAGACCACAATCATCGTTTAAGTACTCTGTGCTGGAAACAGCACAGAATCTACTTAAACAAGGCAAAATGCCGTGTTTATCTCGTCAACTTGTTGGCGAGAttttttctaAAGCTTGAATTCAAGCTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCTAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAG例示性基礎 Cas9 質體
例示性 pITR.CMVEnhProm-SaCas9_CRISPRi 序列 (SEQ ID NO: 276) CTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGAGTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGTGATGCGGTTTTGGCAGTACATCAATGGGCGTGGATAGCGGTTTGACTCACGGGGATTTCCAAGTCTCCACCCCATTGACGTCAATGGGAGTTTGTTTTGGCACCAAAATCAACGGGACTTTCCAAAATGTCGTAACAACTCCGCCCCATTGACGCAAATGGGCGGTAGGCGTGTACGGTGGGAGGTCTATATAAGCAGAGCTCGTTTAGTGAACCGTcagatcgcctggagacgcACCGGTGCCACCATGGCCCCTAAGAAGAAGCGGAAAGTCGGCAGCGGCAAGCGGAACTATATCCTGGGCCTCGCCATCGGCATCACCAGCGTTGGCTACGGCATCATCGACTACGAGACACGGGACGTGATCGATGCCGGCGTGCGGCTGTTTAAAGAGGCCAACGTCGAGAACAACGAGGGCCGCAGATCTAAGAGAGGCGCCAGACGGCTGAAGCGGAGAAGAAGGCACAGAATCCAGAGAGTGAAGAAGCTGCTGTTCGACTACAACCTGCTGACCGACCACAGCGAGCTGAGCGGCATCAATCCTTACGAGGCCAGAGTGAAGGGCCTGAGCCAGAAGCTGAGCGAGGAAGAGTTTAGCGCCGCTCTGCTGCACCTGGCCAAGAGAAGAGGCGTGCACAACGTGAACGAGGTGGAAGAGGACACCGGCAACGAGCTGTCCACCAAAGAGCAGATCAGCCGGAACAGCAAGGCCCTGGAAGAGAAATACGTGGCCGAACTGCAGCTGGAACGGCTGAAAAAGGATGGCGAAGTGCGGGGCAGCATCAATCGGTTCAAGACCAGCGACTACGTGAAAGAAGCCAAACAGCTGCTGAAGGTGCAGAAGGCCTACCACCAGCTGGACCAGAGCTTCATCGACACCTACATCGACCTGCTGGAAACCCGGCGGACCTACTATGAAGGACCTGGCGAGGGAAGCCCCTTCGGCTGGAAGGACATCAAAGAATGGTACGAGATGCTGATGGGCCACTGCACCTACTTTCCCGAGGAACTGCGGAGCGTGAAGTACGCCTACAACGCCGACCTGTACAACGCCCTGAACGACCTGAACAACCTCGTGATCACCCGGGACGAGAACGAGAAGCTGGAATATTACGAGAAGTTCCAGATCATCGAGAACGTGTTCAAGCAGAAGAAGAAACCCACGCTGAAGCAGATCGCCAAAGAGATCCTGGTCAACGAGGAAGATATCAAGGGCTACAGAGTGACCAGCACCGGCAAGCCCGAGTTCACCAACCTGAAGGTGTACCACGACATCAAGGATATCACAGCCCGGAAAGAGATTATTGAGAACGCCGAGCTGCTGGACCAAATCGCCAAGATCCTGACCATCTACCAGAGCAGCGAGGACATCCAAGAGGAACTGACCAATCTGAACTCCGAGCTGACCCAAGAAGAGATCGAGCAGATCTCTAATCTGAAGGGGTACACCGGCACACACAACCTGAGCCTGAAGGCCATCAACCTGATCCTGGACGAGCTGTGGCACACCAACGACAACCAGATTGCCATCTTCAACAGGCTGAAGCTGGTGCCCAAGAAGGTGGACCTGTCTCAGCAGAAAGAAATCCCCACCACACTGGTGGACGACTTCATTCTGAGCCCCGTGGTCAAGAGGAGCTTCATCCAGAGCATCAAAGTGATCAACGCCATCATCAAGAAGTACGGGCTGCCCAACGATATCATCATCGAGCTGGCCCGCGAGAAGAACTCCAAGGACGCCCAGAAAATGATCAACGAGATGCAGAAGAGGAACCGCCAGACCAACGAGCGGATCGAGGAAATCATCCGGACCACCGGCAAAGAGAACGCCAAGTACCTGATCGAGAAGATCAAGCTGCACGACATGCAAGAGGGCAAGTGCCTGTACAGCCTGGAAGCCATTCCTCTGGAAGATCTGCTGAACAATCCCTTCAACTATGAGGTGGACCACATCATCCCCAGAAGCGTGTCCTTCGACAACAGCTTCAACAACAAGGTGCTCGTGAAGCAAGAGGAAGCCAGCAAGAAGGGCAACAGAACCCCATTCCAGTACCTGAGCAGCAGCGACAGCAAGATCAGCTACGAAACCTTCAAGAAGCACATCCTGAATCTGGCCAAAGGCAAGGGCAGAATCAGCAAGACCAAGAAAGAATACCTGCTCGAGGAACGGGACATCAACAGATTCAGCGTGCAGAAAGACTTCATCAATCGGAACCTGGTGGACACCAGATACGCCACCAGAGGCCTGATGAATCTGCTGCGGAGCTACTTCAGAGTGAACAATCTGGACGTGAAAGTCAAGTCCATCAACGGCGGCTTCACCAGCTTTCTGCGGCGGAAGTGGAAGTTCAAGAAAGAGCGGAACAAGGGCTATAAGCACCACGCCGAGGACGCCCTGATCATTGCCAACGCCGATTTCATCTTCAAAGAGTGGAAGAAACTGGACAAGGCCAAAAAAGTGATGGAAAACCAGATGTTCGAGGAAAAGCAGGCCGAGAGCATGCCCGAGATCGAAACCGAGCAAGAGTACAAAGAGATTTTCATCACGCCCCACCAGATCAAGCACATTAAGGACTTCAAGGACTACAAGTACAGCCACCGCGTGGACAAGAAGCCCAATAGAGAGCTGATTAACGACACCCTGTACTCTACCCGGAAGGACGACAAGGGCAATACCCTGATCGTCAACAACCTGAACGGCCTGTACGACAAGGACAACGACAAGCTCAAGAAGCTGATCAACAAGAGCCCCGAGAAACTGCTGATGTACCACCACGATCCTCAGACCTACCAGAAACTGAAGCTCATCATGGAACAGTACGGCGACGAGAAGAATCCCCTGTACAAGTACTACGAGGAAACCGGGAACTACCTGACCAAGTACTCCAAAAAGGACAATGGGCCCGTGATCAAGAAGATTAAGTATTACGGCAACAAGCTGAATGCCCACCTGGACATCACCGACGACTACCCCAACAGCAGAAACAAGGTGGTCAAGCTGTCCCTGAAGCCTTACAGATTCGACGTGTACCTGGACAACGGCGTGTACAAGTTCGTGACCGTGAAGAACCTGGACGTCATCAAAAAAGAAAACTACTACGAAGTCAACAGCAAGTGCTATGAGGAAGCCAAGAAACTCAAGAAAATCAGCAACCAGGCCGAGTTTATCGCCTCCTTCTACAACAACGATCTGATCAAGATCAACGGGGAGCTGTATAGAGTGATCGGCGTGAACAATGACCTGCTGAACCGGATCGAAGTGAACATGATCGACATCACCTACCGCGAGTACCTCGAGAACATGAACGATAAGCGGCCTCCACGGATCATTAAGACAATCGCCAGCAAGACGCAGAGCATTAAGAAGTACAGCACAGACATCCTGGGCAACCTGTACGAAGTGAAGTCTAAGAAGCACCCGCAGATTATCAAGAAAGGCAGCGGCGCTCCCAAGAAAAAACGGAAGGTTTAAGAGCTCGCTGATCAGCCTCGATAAGATACATTGATGAGTTTGGACAAACCACAACTAGAATGCAGTGAAAAAAATGCTTTATTTGTGAAATTTGTGATGCTATTGCTTTATTTGTAACCATTATAAGCTGCAATAAACAAGTTAAGCTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCTAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAG
例示性 pITR.CMV-SaCas9_CRISPRi 序列 (SEQ ID NO: 277) CTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTGTGATGCGGTTTTGGCAGTACATCAATGGGCGTGGATAGCGGTTTGACTCACGGGGATTTCCAAGTCTCCACCCCATTGACGTCAATGGGAGTTTGTTTTGGCACCAAAATCAACGGGACTTTCCAAAATGTCGTAACAACTCCGCCCCATTGACGCAAATGGGCGGTAGGCGTGTACGGTGGGAGGTCTATATAAGCAGAGCTCGTTTAGTGAACCGTcagatcgcctggagacgcACCGGTGCCACCATGGCCCCTAAGAAGAAGCGGAAAGTCGGCAGCGGCAAGCGGAACTATATCCTGGGCCTCGCCATCGGCATCACCAGCGTTGGCTACGGCATCATCGACTACGAGACACGGGACGTGATCGATGCCGGCGTGCGGCTGTTTAAAGAGGCCAACGTCGAGAACAACGAGGGCCGCAGATCTAAGAGAGGCGCCAGACGGCTGAAGCGGAGAAGAAGGCACAGAATCCAGAGAGTGAAGAAGCTGCTGTTCGACTACAACCTGCTGACCGACCACAGCGAGCTGAGCGGCATCAATCCTTACGAGGCCAGAGTGAAGGGCCTGAGCCAGAAGCTGAGCGAGGAAGAGTTTAGCGCCGCTCTGCTGCACCTGGCCAAGAGAAGAGGCGTGCACAACGTGAACGAGGTGGAAGAGGACACCGGCAACGAGCTGTCCACCAAAGAGCAGATCAGCCGGAACAGCAAGGCCCTGGAAGAGAAATACGTGGCCGAACTGCAGCTGGAACGGCTGAAAAAGGATGGCGAAGTGCGGGGCAGCATCAATCGGTTCAAGACCAGCGACTACGTGAAAGAAGCCAAACAGCTGCTGAAGGTGCAGAAGGCCTACCACCAGCTGGACCAGAGCTTCATCGACACCTACATCGACCTGCTGGAAACCCGGCGGACCTACTATGAAGGACCTGGCGAGGGAAGCCCCTTCGGCTGGAAGGACATCAAAGAATGGTACGAGATGCTGATGGGCCACTGCACCTACTTTCCCGAGGAACTGCGGAGCGTGAAGTACGCCTACAACGCCGACCTGTACAACGCCCTGAACGACCTGAACAACCTCGTGATCACCCGGGACGAGAACGAGAAGCTGGAATATTACGAGAAGTTCCAGATCATCGAGAACGTGTTCAAGCAGAAGAAGAAACCCACGCTGAAGCAGATCGCCAAAGAGATCCTGGTCAACGAGGAAGATATCAAGGGCTACAGAGTGACCAGCACCGGCAAGCCCGAGTTCACCAACCTGAAGGTGTACCACGACATCAAGGATATCACAGCCCGGAAAGAGATTATTGAGAACGCCGAGCTGCTGGACCAAATCGCCAAGATCCTGACCATCTACCAGAGCAGCGAGGACATCCAAGAGGAACTGACCAATCTGAACTCCGAGCTGACCCAAGAAGAGATCGAGCAGATCTCTAATCTGAAGGGGTACACCGGCACACACAACCTGAGCCTGAAGGCCATCAACCTGATCCTGGACGAGCTGTGGCACACCAACGACAACCAGATTGCCATCTTCAACAGGCTGAAGCTGGTGCCCAAGAAGGTGGACCTGTCTCAGCAGAAAGAAATCCCCACCACACTGGTGGACGACTTCATTCTGAGCCCCGTGGTCAAGAGGAGCTTCATCCAGAGCATCAAAGTGATCAACGCCATCATCAAGAAGTACGGGCTGCCCAACGATATCATCATCGAGCTGGCCCGCGAGAAGAACTCCAAGGACGCCCAGAAAATGATCAACGAGATGCAGAAGAGGAACCGCCAGACCAACGAGCGGATCGAGGAAATCATCCGGACCACCGGCAAAGAGAACGCCAAGTACCTGATCGAGAAGATCAAGCTGCACGACATGCAAGAGGGCAAGTGCCTGTACAGCCTGGAAGCCATTCCTCTGGAAGATCTGCTGAACAATCCCTTCAACTATGAGGTGGACCACATCATCCCCAGAAGCGTGTCCTTCGACAACAGCTTCAACAACAAGGTGCTCGTGAAGCAAGAGGAAGCCAGCAAGAAGGGCAACAGAACCCCATTCCAGTACCTGAGCAGCAGCGACAGCAAGATCAGCTACGAAACCTTCAAGAAGCACATCCTGAATCTGGCCAAAGGCAAGGGCAGAATCAGCAAGACCAAGAAAGAATACCTGCTCGAGGAACGGGACATCAACAGATTCAGCGTGCAGAAAGACTTCATCAATCGGAACCTGGTGGACACCAGATACGCCACCAGAGGCCTGATGAATCTGCTGCGGAGCTACTTCAGAGTGAACAATCTGGACGTGAAAGTCAAGTCCATCAACGGCGGCTTCACCAGCTTTCTGCGGCGGAAGTGGAAGTTCAAGAAAGAGCGGAACAAGGGCTATAAGCACCACGCCGAGGACGCCCTGATCATTGCCAACGCCGATTTCATCTTCAAAGAGTGGAAGAAACTGGACAAGGCCAAAAAAGTGATGGAAAACCAGATGTTCGAGGAAAAGCAGGCCGAGAGCATGCCCGAGATCGAAACCGAGCAAGAGTACAAAGAGATTTTCATCACGCCCCACCAGATCAAGCACATTAAGGACTTCAAGGACTACAAGTACAGCCACCGCGTGGACAAGAAGCCCAATAGAGAGCTGATTAACGACACCCTGTACTCTACCCGGAAGGACGACAAGGGCAATACCCTGATCGTCAACAACCTGAACGGCCTGTACGACAAGGACAACGACAAGCTCAAGAAGCTGATCAACAAGAGCCCCGAGAAACTGCTGATGTACCACCACGATCCTCAGACCTACCAGAAACTGAAGCTCATCATGGAACAGTACGGCGACGAGAAGAATCCCCTGTACAAGTACTACGAGGAAACCGGGAACTACCTGACCAAGTACTCCAAAAAGGACAATGGGCCCGTGATCAAGAAGATTAAGTATTACGGCAACAAGCTGAATGCCCACCTGGACATCACCGACGACTACCCCAACAGCAGAAACAAGGTGGTCAAGCTGTCCCTGAAGCCTTACAGATTCGACGTGTACCTGGACAACGGCGTGTACAAGTTCGTGACCGTGAAGAACCTGGACGTCATCAAAAAAGAAAACTACTACGAAGTCAACAGCAAGTGCTATGAGGAAGCCAAGAAACTCAAGAAAATCAGCAACCAGGCCGAGTTTATCGCCTCCTTCTACAACAACGATCTGATCAAGATCAACGGGGAGCTGTATAGAGTGATCGGCGTGAACAATGACCTGCTGAACCGGATCGAAGTGAACATGATCGACATCACCTACCGCGAGTACCTCGAGAACATGAACGATAAGCGGCCTCCACGGATCATTAAGACAATCGCCAGCAAGACGCAGAGCATTAAGAAGTACAGCACAGACATCCTGGGCAACCTGTACGAAGTGAAGTCTAAGAAGCACCCGCAGATTATCAAGAAAGGCAGCGGCGCTCCCAAGAAAAAACGGAAGGTTTAAGAGCTCGCTGATCAGCCTCGATAAGATACATTGATGAGTTTGGACAAACCACAACTAGAATGCAGTGAAAAAAATGCTTTATTTGTGAAATTTGTGATGCTATTGCTTTATTTGTAACCATTATAAGCTGCAATAAACAAGTTAAGCTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCTAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAG
例示性 pITR.CMVEnhProm.SaCas9 序列 (SEQ ID NO: 278) CTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGAGTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGTGATGCGGTTTTGGCAGTACATCAATGGGCGTGGATAGCGGTTTGACTCACGGGGATTTCCAAGTCTCCACCCCATTGACGTCAATGGGAGTTTGTTTTGGCACCAAAATCAACGGGACTTTCCAAAATGTCGTAACAACTCCGCCCCATTGACGCAAATGGGCGGTAGGCGTGTACGGTGGGAGGTCTATATAAGCAGAGCTCGTTTAGTGAACCGTcagatcgcctggagacgcACCGGTGCCACCATGGCCCCTAAGAAGAAGCGGAAAGTCGGCAGCGGCAAGCGGAACTATATCCTGGGCCTCGACATCGGCATCACCAGCGTTGGCTACGGCATCATCGACTACGAGACACGGGACGTGATCGATGCCGGCGTGCGGCTGTTTAAAGAGGCCAACGTCGAGAACAACGAGGGCCGCAGATCTAAGAGAGGCGCCAGACGGCTGAAGCGGAGAAGAAGGCACAGAATCCAGAGAGTGAAGAAGCTGCTGTTCGACTACAACCTGCTGACCGACCACAGCGAGCTGAGCGGCATCAATCCTTACGAGGCCAGAGTGAAGGGCCTGAGCCAGAAGCTGAGCGAGGAAGAGTTTAGCGCCGCTCTGCTGCACCTGGCCAAGAGAAGAGGCGTGCACAACGTGAACGAGGTGGAAGAGGACACCGGCAACGAGCTGTCCACCAAAGAGCAGATCAGCCGGAACAGCAAGGCCCTGGAAGAGAAATACGTGGCCGAACTGCAGCTGGAACGGCTGAAAAAGGATGGCGAAGTGCGGGGCAGCATCAATCGGTTCAAGACCAGCGACTACGTGAAAGAAGCCAAACAGCTGCTGAAGGTGCAGAAGGCCTACCACCAGCTGGACCAGAGCTTCATCGACACCTACATCGACCTGCTGGAAACCCGGCGGACCTACTATGAAGGACCTGGCGAGGGAAGCCCCTTCGGCTGGAAGGACATCAAAGAATGGTACGAGATGCTGATGGGCCACTGCACCTACTTTCCCGAGGAACTGCGGAGCGTGAAGTACGCCTACAACGCCGACCTGTACAACGCCCTGAACGACCTGAACAACCTCGTGATCACCCGGGACGAGAACGAGAAGCTGGAATATTACGAGAAGTTCCAGATCATCGAGAACGTGTTCAAGCAGAAGAAGAAACCCACGCTGAAGCAGATCGCCAAAGAGATCCTGGTCAACGAGGAAGATATCAAGGGCTACAGAGTGACCAGCACCGGCAAGCCCGAGTTCACCAACCTGAAGGTGTACCACGACATCAAGGATATCACAGCCCGGAAAGAGATTATTGAGAACGCCGAGCTGCTGGACCAAATCGCCAAGATCCTGACCATCTACCAGAGCAGCGAGGACATCCAAGAGGAACTGACCAATCTGAACTCCGAGCTGACCCAAGAAGAGATCGAGCAGATCTCTAATCTGAAGGGGTACACCGGCACACACAACCTGAGCCTGAAGGCCATCAACCTGATCCTGGACGAGCTGTGGCACACCAACGACAACCAGATTGCCATCTTCAACAGGCTGAAGCTGGTGCCCAAGAAGGTGGACCTGTCTCAGCAGAAAGAAATCCCCACCACACTGGTGGACGACTTCATTCTGAGCCCCGTGGTCAAGAGGAGCTTCATCCAGAGCATCAAAGTGATCAACGCCATCATCAAGAAGTACGGGCTGCCCAACGATATCATCATCGAGCTGGCCCGCGAGAAGAACTCCAAGGACGCCCAGAAAATGATCAACGAGATGCAGAAGAGGAACCGCCAGACCAACGAGCGGATCGAGGAAATCATCCGGACCACCGGCAAAGAGAACGCCAAGTACCTGATCGAGAAGATCAAGCTGCACGACATGCAAGAGGGCAAGTGCCTGTACAGCCTGGAAGCCATTCCTCTGGAAGATCTGCTGAACAATCCCTTCAACTATGAGGTGGACCACATCATCCCCAGAAGCGTGTCCTTCGACAACAGCTTCAACAACAAGGTGCTCGTGAAGCAAGAGGAAAACAGCAAGAAGGGCAACAGAACCCCATTCCAGTACCTGAGCAGCAGCGACAGCAAGATCAGCTACGAAACCTTCAAGAAGCACATCCTGAATCTGGCCAAAGGCAAGGGCAGAATCAGCAAGACCAAGAAAGAATACCTGCTCGAGGAACGGGACATCAACAGATTCAGCGTGCAGAAAGACTTCATCAATCGGAACCTGGTGGACACCAGATACGCCACCAGAGGCCTGATGAATCTGCTGCGGAGCTACTTCAGAGTGAACAATCTGGACGTGAAAGTCAAGTCCATCAACGGCGGCTTCACCAGCTTTCTGCGGCGGAAGTGGAAGTTCAAGAAAGAGCGGAACAAGGGCTATAAGCACCACGCCGAGGACGCCCTGATCATTGCCAACGCCGATTTCATCTTCAAAGAGTGGAAGAAACTGGACAAGGCCAAAAAAGTGATGGAAAACCAGATGTTCGAGGAAAAGCAGGCCGAGAGCATGCCCGAGATCGAAACCGAGCAAGAGTACAAAGAGATTTTCATCACGCCCCACCAGATCAAGCACATTAAGGACTTCAAGGACTACAAGTACAGCCACCGCGTGGACAAGAAGCCCAATAGAGAGCTGATTAACGACACCCTGTACTCTACCCGGAAGGACGACAAGGGCAATACCCTGATCGTCAACAACCTGAACGGCCTGTACGACAAGGACAACGACAAGCTCAAGAAGCTGATCAACAAGAGCCCCGAGAAACTGCTGATGTACCACCACGATCCTCAGACCTACCAGAAACTGAAGCTCATCATGGAACAGTACGGCGACGAGAAGAATCCCCTGTACAAGTACTACGAGGAAACCGGGAACTACCTGACCAAGTACTCCAAAAAGGACAATGGGCCCGTGATCAAGAAGATTAAGTATTACGGCAACAAGCTGAATGCCCACCTGGACATCACCGACGACTACCCCAACAGCAGAAACAAGGTGGTCAAGCTGTCCCTGAAGCCTTACAGATTCGACGTGTACCTGGACAACGGCGTGTACAAGTTCGTGACCGTGAAGAACCTGGACGTCATCAAAAAAGAAAACTACTACGAAGTCAACAGCAAGTGCTATGAGGAAGCCAAGAAACTCAAGAAAATCAGCAACCAGGCCGAGTTTATCGCCTCCTTCTACAACAACGATCTGATCAAGATCAACGGGGAGCTGTATAGAGTGATCGGCGTGAACAATGACCTGCTGAACCGGATCGAAGTGAACATGATCGACATCACCTACCGCGAGTACCTCGAGAACATGAACGATAAGCGGCCTCCACGGATCATTAAGACAATCGCCAGCAAGACGCAGAGCATTAAGAAGTACAGCACAGACATCCTGGGCAACCTGTACGAAGTGAAGTCTAAGAAGCACCCGCAGATTATCAAGAAAGGCAGCGGCGCTCCCAAGAAAAAACGGAAGGTTTAAGAGCTCGCTGATCAGCCTCGATAAGATACATTGATGAGTTTGGACAAACCACAACTAGAATGCAGTGAAAAAAATGCTTTATTTGTGAAATTTGTGATGCTATTGCTTTATTTGTAACCATTATAAGCTGCAATAAACAAGTTAAGCTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCTAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAG
例示性 pITR.CMV.SaCas9 序列 (SEQ ID NO: 279) CTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTGTGATGCGGTTTTGGCAGTACATCAATGGGCGTGGATAGCGGTTTGACTCACGGGGATTTCCAAGTCTCCACCCCATTGACGTCAATGGGAGTTTGTTTTGGCACCAAAATCAACGGGACTTTCCAAAATGTCGTAACAACTCCGCCCCATTGACGCAAATGGGCGGTAGGCGTGTACGGTGGGAGGTCTATATAAGCAGAGCTCGTTTAGTGAACCGTcagatcgcctggagacgcACCGGTGCCACCATGGCCCCTAAGAAGAAGCGGAAAGTCGGCAGCGGCAAGCGGAACTATATCCTGGGCCTCGACATCGGCATCACCAGCGTTGGCTACGGCATCATCGACTACGAGACACGGGACGTGATCGATGCCGGCGTGCGGCTGTTTAAAGAGGCCAACGTCGAGAACAACGAGGGCCGCAGATCTAAGAGAGGCGCCAGACGGCTGAAGCGGAGAAGAAGGCACAGAATCCAGAGAGTGAAGAAGCTGCTGTTCGACTACAACCTGCTGACCGACCACAGCGAGCTGAGCGGCATCAATCCTTACGAGGCCAGAGTGAAGGGCCTGAGCCAGAAGCTGAGCGAGGAAGAGTTTAGCGCCGCTCTGCTGCACCTGGCCAAGAGAAGAGGCGTGCACAACGTGAACGAGGTGGAAGAGGACACCGGCAACGAGCTGTCCACCAAAGAGCAGATCAGCCGGAACAGCAAGGCCCTGGAAGAGAAATACGTGGCCGAACTGCAGCTGGAACGGCTGAAAAAGGATGGCGAAGTGCGGGGCAGCATCAATCGGTTCAAGACCAGCGACTACGTGAAAGAAGCCAAACAGCTGCTGAAGGTGCAGAAGGCCTACCACCAGCTGGACCAGAGCTTCATCGACACCTACATCGACCTGCTGGAAACCCGGCGGACCTACTATGAAGGACCTGGCGAGGGAAGCCCCTTCGGCTGGAAGGACATCAAAGAATGGTACGAGATGCTGATGGGCCACTGCACCTACTTTCCCGAGGAACTGCGGAGCGTGAAGTACGCCTACAACGCCGACCTGTACAACGCCCTGAACGACCTGAACAACCTCGTGATCACCCGGGACGAGAACGAGAAGCTGGAATATTACGAGAAGTTCCAGATCATCGAGAACGTGTTCAAGCAGAAGAAGAAACCCACGCTGAAGCAGATCGCCAAAGAGATCCTGGTCAACGAGGAAGATATCAAGGGCTACAGAGTGACCAGCACCGGCAAGCCCGAGTTCACCAACCTGAAGGTGTACCACGACATCAAGGATATCACAGCCCGGAAAGAGATTATTGAGAACGCCGAGCTGCTGGACCAAATCGCCAAGATCCTGACCATCTACCAGAGCAGCGAGGACATCCAAGAGGAACTGACCAATCTGAACTCCGAGCTGACCCAAGAAGAGATCGAGCAGATCTCTAATCTGAAGGGGTACACCGGCACACACAACCTGAGCCTGAAGGCCATCAACCTGATCCTGGACGAGCTGTGGCACACCAACGACAACCAGATTGCCATCTTCAACAGGCTGAAGCTGGTGCCCAAGAAGGTGGACCTGTCTCAGCAGAAAGAAATCCCCACCACACTGGTGGACGACTTCATTCTGAGCCCCGTGGTCAAGAGGAGCTTCATCCAGAGCATCAAAGTGATCAACGCCATCATCAAGAAGTACGGGCTGCCCAACGATATCATCATCGAGCTGGCCCGCGAGAAGAACTCCAAGGACGCCCAGAAAATGATCAACGAGATGCAGAAGAGGAACCGCCAGACCAACGAGCGGATCGAGGAAATCATCCGGACCACCGGCAAAGAGAACGCCAAGTACCTGATCGAGAAGATCAAGCTGCACGACATGCAAGAGGGCAAGTGCCTGTACAGCCTGGAAGCCATTCCTCTGGAAGATCTGCTGAACAATCCCTTCAACTATGAGGTGGACCACATCATCCCCAGAAGCGTGTCCTTCGACAACAGCTTCAACAACAAGGTGCTCGTGAAGCAAGAGGAAAACAGCAAGAAGGGCAACAGAACCCCATTCCAGTACCTGAGCAGCAGCGACAGCAAGATCAGCTACGAAACCTTCAAGAAGCACATCCTGAATCTGGCCAAAGGCAAGGGCAGAATCAGCAAGACCAAGAAAGAATACCTGCTCGAGGAACGGGACATCAACAGATTCAGCGTGCAGAAAGACTTCATCAATCGGAACCTGGTGGACACCAGATACGCCACCAGAGGCCTGATGAATCTGCTGCGGAGCTACTTCAGAGTGAACAATCTGGACGTGAAAGTCAAGTCCATCAACGGCGGCTTCACCAGCTTTCTGCGGCGGAAGTGGAAGTTCAAGAAAGAGCGGAACAAGGGCTATAAGCACCACGCCGAGGACGCCCTGATCATTGCCAACGCCGATTTCATCTTCAAAGAGTGGAAGAAACTGGACAAGGCCAAAAAAGTGATGGAAAACCAGATGTTCGAGGAAAAGCAGGCCGAGAGCATGCCCGAGATCGAAACCGAGCAAGAGTACAAAGAGATTTTCATCACGCCCCACCAGATCAAGCACATTAAGGACTTCAAGGACTACAAGTACAGCCACCGCGTGGACAAGAAGCCCAATAGAGAGCTGATTAACGACACCCTGTACTCTACCCGGAAGGACGACAAGGGCAATACCCTGATCGTCAACAACCTGAACGGCCTGTACGACAAGGACAACGACAAGCTCAAGAAGCTGATCAACAAGAGCCCCGAGAAACTGCTGATGTACCACCACGATCCTCAGACCTACCAGAAACTGAAGCTCATCATGGAACAGTACGGCGACGAGAAGAATCCCCTGTACAAGTACTACGAGGAAACCGGGAACTACCTGACCAAGTACTCCAAAAAGGACAATGGGCCCGTGATCAAGAAGATTAAGTATTACGGCAACAAGCTGAATGCCCACCTGGACATCACCGACGACTACCCCAACAGCAGAAACAAGGTGGTCAAGCTGTCCCTGAAGCCTTACAGATTCGACGTGTACCTGGACAACGGCGTGTACAAGTTCGTGACCGTGAAGAACCTGGACGTCATCAAAAAAGAAAACTACTACGAAGTCAACAGCAAGTGCTATGAGGAAGCCAAGAAACTCAAGAAAATCAGCAACCAGGCCGAGTTTATCGCCTCCTTCTACAACAACGATCTGATCAAGATCAACGGGGAGCTGTATAGAGTGATCGGCGTGAACAATGACCTGCTGAACCGGATCGAAGTGAACATGATCGACATCACCTACCGCGAGTACCTCGAGAACATGAACGATAAGCGGCCTCCACGGATCATTAAGACAATCGCCAGCAAGACGCAGAGCATTAAGAAGTACAGCACAGACATCCTGGGCAACCTGTACGAAGTGAAGTCTAAGAAGCACCCGCAGATTATCAAGAAAGGCAGCGGCGCTCCCAAGAAAAAACGGAAGGTTTAAGAGCTCGCTGATCAGCCTCGATAAGATACATTGATGAGTTTGGACAAACCACAACTAGAATGCAGTGAAAAAAATGCTTTATTTGTGAAATTTGTGATGCTATTGCTTTATTTGTAACCATTATAAGCTGCAATAAACAAGTTAAGCTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCTAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAG
例示性 pITR.CMVEnhProm-SaCas9_CRISPRi 序列 (SEQ ID NO: 280) CCTGCAGGCAGCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGAGTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGTGATGCGGTTTTGGCAGTACATCAATGGGCGTGGATAGCGGTTTGACTCACGGGGATTTCCAAGTCTCCACCCCATTGACGTCAATGGGAGTTTGTTTTGGCACCAAAATCAACGGGACTTTCCAAAATGTCGTAACAACTCCGCCCCATTGACGCAAATGGGCGGTAGGCGTGTACGGTGGGAGGTCTATATAAGCAGAGCTCGTTTAGTGAACCGTcagatcgcctggagacgcACCGGTGCCACCATGGCCCCTAAGAAGAAGCGGAAAGTCGGCAGCGGCAAGCGGAACTATATCCTGGGCCTCGCCATCGGCATCACCAGCGTTGGCTACGGCATCATCGACTACGAGACACGGGACGTGATCGATGCCGGCGTGCGGCTGTTTAAAGAGGCCAACGTCGAGAACAACGAGGGCCGCAGATCTAAGAGAGGCGCCAGACGGCTGAAGCGGAGAAGAAGGCACAGAATCCAGAGAGTGAAGAAGCTGCTGTTCGACTACAACCTGCTGACCGACCACAGCGAGCTGAGCGGCATCAATCCTTACGAGGCCAGAGTGAAGGGCCTGAGCCAGAAGCTGAGCGAGGAAGAGTTTAGCGCCGCTCTGCTGCACCTGGCCAAGAGAAGAGGCGTGCACAACGTGAACGAGGTGGAAGAGGACACCGGCAACGAGCTGTCCACCAAAGAGCAGATCAGCCGGAACAGCAAGGCCCTGGAAGAGAAATACGTGGCCGAACTGCAGCTGGAACGGCTGAAAAAGGATGGCGAAGTGCGGGGCAGCATCAATCGGTTCAAGACCAGCGACTACGTGAAAGAAGCCAAACAGCTGCTGAAGGTGCAGAAGGCCTACCACCAGCTGGACCAGAGCTTCATCGACACCTACATCGACCTGCTGGAAACCCGGCGGACCTACTATGAAGGACCTGGCGAGGGAAGCCCCTTCGGCTGGAAGGACATCAAAGAATGGTACGAGATGCTGATGGGCCACTGCACCTACTTTCCCGAGGAACTGCGGAGCGTGAAGTACGCCTACAACGCCGACCTGTACAACGCCCTGAACGACCTGAACAACCTCGTGATCACCCGGGACGAGAACGAGAAGCTGGAATATTACGAGAAGTTCCAGATCATCGAGAACGTGTTCAAGCAGAAGAAGAAACCCACGCTGAAGCAGATCGCCAAAGAGATCCTGGTCAACGAGGAAGATATCAAGGGCTACAGAGTGACCAGCACCGGCAAGCCCGAGTTCACCAACCTGAAGGTGTACCACGACATCAAGGATATCACAGCCCGGAAAGAGATTATTGAGAACGCCGAGCTGCTGGACCAAATCGCCAAGATCCTGACCATCTACCAGAGCAGCGAGGACATCCAAGAGGAACTGACCAATCTGAACTCCGAGCTGACCCAAGAAGAGATCGAGCAGATCTCTAATCTGAAGGGGTACACCGGCACACACAACCTGAGCCTGAAGGCCATCAACCTGATCCTGGACGAGCTGTGGCACACCAACGACAACCAGATTGCCATCTTCAACAGGCTGAAGCTGGTGCCCAAGAAGGTGGACCTGTCTCAGCAGAAAGAAATCCCCACCACACTGGTGGACGACTTCATTCTGAGCCCCGTGGTCAAGAGGAGCTTCATCCAGAGCATCAAAGTGATCAACGCCATCATCAAGAAGTACGGGCTGCCCAACGATATCATCATCGAGCTGGCCCGCGAGAAGAACTCCAAGGACGCCCAGAAAATGATCAACGAGATGCAGAAGAGGAACCGCCAGACCAACGAGCGGATCGAGGAAATCATCCGGACCACCGGCAAAGAGAACGCCAAGTACCTGATCGAGAAGATCAAGCTGCACGACATGCAAGAGGGCAAGTGCCTGTACAGCCTGGAAGCCATTCCTCTGGAAGATCTGCTGAACAATCCCTTCAACTATGAGGTGGACCACATCATCCCCAGAAGCGTGTCCTTCGACAACAGCTTCAACAACAAGGTGCTCGTGAAGCAAGAGGAAGCCAGCAAGAAGGGCAACAGAACCCCATTCCAGTACCTGAGCAGCAGCGACAGCAAGATCAGCTACGAAACCTTCAAGAAGCACATCCTGAATCTGGCCAAAGGCAAGGGCAGAATCAGCAAGACCAAGAAAGAATACCTGCTCGAGGAACGGGACATCAACAGATTCAGCGTGCAGAAAGACTTCATCAATCGGAACCTGGTGGACACCAGATACGCCACCAGAGGCCTGATGAATCTGCTGCGGAGCTACTTCAGAGTGAACAATCTGGACGTGAAAGTCAAGTCCATCAACGGCGGCTTCACCAGCTTTCTGCGGCGGAAGTGGAAGTTCAAGAAAGAGCGGAACAAGGGCTATAAGCACCACGCCGAGGACGCCCTGATCATTGCCAACGCCGATTTCATCTTCAAAGAGTGGAAGAAACTGGACAAGGCCAAAAAAGTGATGGAAAACCAGATGTTCGAGGAAAAGCAGGCCGAGAGCATGCCCGAGATCGAAACCGAGCAAGAGTACAAAGAGATTTTCATCACGCCCCACCAGATCAAGCACATTAAGGACTTCAAGGACTACAAGTACAGCCACCGCGTGGACAAGAAGCCCAATAGAGAGCTGATTAACGACACCCTGTACTCTACCCGGAAGGACGACAAGGGCAATACCCTGATCGTCAACAACCTGAACGGCCTGTACGACAAGGACAACGACAAGCTCAAGAAGCTGATCAACAAGAGCCCCGAGAAACTGCTGATGTACCACCACGATCCTCAGACCTACCAGAAACTGAAGCTCATCATGGAACAGTACGGCGACGAGAAGAATCCCCTGTACAAGTACTACGAGGAAACCGGGAACTACCTGACCAAGTACTCCAAAAAGGACAATGGGCCCGTGATCAAGAAGATTAAGTATTACGGCAACAAGCTGAATGCCCACCTGGACATCACCGACGACTACCCCAACAGCAGAAACAAGGTGGTCAAGCTGTCCCTGAAGCCTTACAGATTCGACGTGTACCTGGACAACGGCGTGTACAAGTTCGTGACCGTGAAGAACCTGGACGTCATCAAAAAAGAAAACTACTACGAAGTCAACAGCAAGTGCTATGAGGAAGCCAAGAAACTCAAGAAAATCAGCAACCAGGCCGAGTTTATCGCCTCCTTCTACAACAACGATCTGATCAAGATCAACGGGGAGCTGTATAGAGTGATCGGCGTGAACAATGACCTGCTGAACCGGATCGAAGTGAACATGATCGACATCACCTACCGCGAGTACCTCGAGAACATGAACGATAAGCGGCCTCCACGGATCATTAAGACAATCGCCAGCAAGACGCAGAGCATTAAGAAGTACAGCACAGACATCCTGGGCAACCTGTACGAAGTGAAGTCTAAGAAGCACCCGCAGATTATCAAGAAAGGCAGCGGCGCTCCCAAGAAAAAACGGAAGGTTTAAGAGCTCGCTGATCAGCCTCGATAAGATACATTGATGAGTTTGGACAAACCACAACTAGAATGCAGTGAAAAAAATGCTTTATTTGTGAAATTTGTGATGCTATTGCTTTATTTGTAACCATTATAAGCTGCAATAAACAAGTTAAGCTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCTAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGCTGCCTGCAGGGGCGCCTGATGCGGTATTTTCTCCTTACGCATCTGTGCGGTATTTCACACCGCATACGTCAAAGCAACCATAGTACGCGCCCTGTAGCGGCGCATTAAGCGCGGCGGGTGTGGTGGTTACGCGCAGCGTGACCGCTACACTTGCCAGCGCCCTAGCGCCCGCTCCTTTCGCTTTCTTCCCTTCCTTTCTCGCCACGTTCGCCGGCTTTCCCCGTCAAGCTCTAAATCGGGGGCTCCCTTTAGGGTTCCGATTTAGTGCTTTACGGCACCTCGACCCCAAAAAACTTGATTTGGGTGATGGTTCACGTAGTGGGCCATCGCCCTGATAGACGGTTTTTCGCCCTTTGACGTTGGAGTCCACGTTCTTTAATAGTGGACTCTTGTTCCAAACTGGAACAACACTCAACCCTATCTCGGGCTATTCTTTTGATTTATAAGGGATTTTGCCGATTTCGGCCTATTGGTTAAAAAATGAGCTGATTTAACAAAAATTTAACGCGAATTTTAACAAAATATTAACGTTTACAATTTTATGGTGCACTCTCAGTACAATCTGCTCTGATGCCGCATAGTTAAGCCAGCCCCGACACCCGCCAACACCCGCTGACGCGCCCTGACGGGCTTGTCTGCTCCCGGCATCCGCTTACAGACAAGCTGTGACCGTCTCCGGGAGCTGCATGTGTCAGAGGTTTTCACCGTCATCACCGAAACGCGCGAGACGAAAGGGCCTCGTGATACGCCTATTTTTATAGGTTAATGTCATGAACAATAAAACTGTCTGCTTACATAAACAGTAATACAAGGGGTGTTATGAGCCATATTCAACGGGAAACGTCGAGGCCGCGATTAAATTCCAACATGGATGCTGATTTATATGGGTATAAATGGGCTCGCGATAATGTCGGGCAATCAGGTGCGACAATCTATCGCTTGTATGGGAAGCCCGATGCGCCAGAGTTGTTTCTGAAACATGGCAAAGGTAGCGTTGCCAATGATGTTACAGATGAGATGGTCAGACTAAACTGGCTGACGGAATTTATGCCTCTTCCGACCATCAAGCATTTTATCCGTACTCCTGATGATGCATGGTTACTCACCACTGCGATCCCCGGAAAAACAGCATTCCAGGTATTAGAAGAATATCCTGATTCAGGTGAAAATATTGTTGATGCGCTGGCAGTGTTCCTGCGCCGGTTGCATTCGATTCCTGTTTGTAATTGTCCTTTTAACAGCGATCGCGTATTTCGTCTCGCTCAGGCGCAATCACGAATGAATAACGGTTTGGTTGATGCGAGTGATTTTGATGACGAGCGTAATGGCTGGCCTGTTGAACAAGTCTGGAAAGAAATGCATAAACTTTTGCCATTCTCACCGGATTCAGTCGTCACTCATGGTGATTTCTCACTTGATAACCTTATTTTTGACGAGGGGAAATTAATAGGTTGTATTGATGTTGGACGAGTCGGAATCGCAGACCGATACCAGGATCTTGCCATCCTATGGAACTGCCTCGGTGAGTTTTCTCCTTCATTACAGAAACGGCTTTTTCAAAAATATGGTATTGATAATCCTGATATGAATAAATTGCAGTTTCATTTGATGCTCGATGAGTTTTTCTAATCTCATGACCAAAATCCCTTAACGTGAGTTTTCGTTCCACTGAGCGTCAGACCCCGTAGAAAAGATCAAAGGATCTTCTTGAGATCCTTTTTTTCTGCGCGTAATCTGCTGCTTGCAAACAAAAAAACCACCGCTACCAGCGGTGGTTTGTTTGCCGGATCAAGAGCTACCAACTCTTTTTCCGAAGGTAACTGGCTTCAGCAGAGCGCAGATACCAAATACTGTCCTTCTAGTGTAGCCGTAGTTAGGCCACCACTTCAAGAACTCTGTAGCACCGCCTACATACCTCGCTCTGCTAATCCTGTTACCAGTGGCTGCTGCCAGTGGCGATAAGTCGTGTCTTACCGGGTTGGACTCAAGACGATAGTTACCGGATAAGGCGCAGCGGTCGGGCTGAACGGGGGGTTCGTGCACACAGCCCAGCTTGGAGCGAACGACCTACACCGAACTGAGATACCTACAGCGTGAGCTATGAGAAAGCGCCACGCTTCCCGAAGGGAGAAAGGCGGACAGGTATCCGGTAAGCGGCAGGGTCGGAACAGGAGAGCGCACGAGGGAGCTTCCAGGGGGAAACGCCTGGTATCTTTATAGTCCTGTCGGGTTTCGCCACCTCTGACTTGAGCGTCGATTTTTGTGATGCTCGTCAGGGGGGCGGAGCCTATGGAAAAACGCCAGCAACGCGGCCTTTTTACGGTTCCTGGCCTTTTGCTGGCCTTTTGCTCACATGT具有 GFP 及 sgRNA 質體之例示性 Cas9
例示性 pITR-CMV.SaCas9T2AGFP.U6-hsa408Rev 序列 (SEQ ID NO: 281) CTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTCTAGATCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGAGTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGTGATGCGGTTTTGGCAGTACATCAATGGGCGTGGATAGCGGTTTGACTCACGGGGATTTCCAAGTCTCCACCCCATTGACGTCAATGGGAGTTTGTTTTGGCACCAAAATCAACGGGACTTTCCAAAATGTCGTAACAACTCCGCCCCATTGACGCAAATGGGCGGTAGGCGTGTACGGTGGGAGGTCTATATAAGCAGAGCTCGTTTAGTGAACCGTcagatcgcctggagacgcACCGGTGCCACCATGGCCCCTAAGAAGAAGCGGAAAGTCGGCAGCGGCAAGCGGAACTATATCCTGGGCCTCGACATCGGCATCACCAGCGTTGGCTACGGCATCATCGACTACGAGACACGGGACGTGATCGATGCCGGCGTGCGGCTGTTTAAAGAGGCCAACGTCGAGAACAACGAGGGCCGCAGATCTAAGAGAGGCGCCAGACGGCTGAAGCGGAGAAGAAGGCACAGAATCCAGAGAGTGAAGAAGCTGCTGTTCGACTACAACCTGCTGACCGACCACAGCGAGCTGAGCGGCATCAATCCTTACGAGGCCAGAGTGAAGGGCCTGAGCCAGAAGCTGAGCGAGGAAGAGTTTAGCGCCGCTCTGCTGCACCTGGCCAAGAGAAGAGGCGTGCACAACGTGAACGAGGTGGAAGAGGACACCGGCAACGAGCTGTCCACCAAAGAGCAGATCAGCCGGAACAGCAAGGCCCTGGAAGAGAAATACGTGGCCGAACTGCAGCTGGAACGGCTGAAAAAGGATGGCGAAGTGCGGGGCAGCATCAATCGGTTCAAGACCAGCGACTACGTGAAAGAAGCCAAACAGCTGCTGAAGGTGCAGAAGGCCTACCACCAGCTGGACCAGAGCTTCATCGACACCTACATCGACCTGCTGGAAACCCGGCGGACCTACTATGAAGGACCTGGCGAGGGAAGCCCCTTCGGCTGGAAGGACATCAAAGAATGGTACGAGATGCTGATGGGCCACTGCACCTACTTTCCCGAGGAACTGCGGAGCGTGAAGTACGCCTACAACGCCGACCTGTACAACGCCCTGAACGACCTGAACAACCTCGTGATCACCCGGGACGAGAACGAGAAGCTGGAATATTACGAGAAGTTCCAGATCATCGAGAACGTGTTCAAGCAGAAGAAGAAACCCACGCTGAAGCAGATCGCCAAAGAGATCCTGGTCAACGAGGAAGATATCAAGGGCTACAGAGTGACCAGCACCGGCAAGCCCGAGTTCACCAACCTGAAGGTGTACCACGACATCAAGGATATCACAGCCCGGAAAGAGATTATTGAGAACGCCGAGCTGCTGGACCAAATCGCCAAGATCCTGACCATCTACCAGAGCAGCGAGGACATCCAAGAGGAACTGACCAATCTGAACTCCGAGCTGACCCAAGAAGAGATCGAGCAGATCTCTAATCTGAAGGGGTACACCGGCACACACAACCTGAGCCTGAAGGCCATCAACCTGATCCTGGACGAGCTGTGGCACACCAACGACAACCAGATTGCCATCTTCAACAGGCTGAAGCTGGTGCCCAAGAAGGTGGACCTGTCTCAGCAGAAAGAAATCCCCACCACACTGGTGGACGACTTCATTCTGAGCCCCGTGGTCAAGAGGAGCTTCATCCAGAGCATCAAAGTGATCAACGCCATCATCAAGAAGTACGGGCTGCCCAACGATATCATCATCGAGCTGGCCCGCGAGAAGAACTCCAAGGACGCCCAGAAAATGATCAACGAGATGCAGAAGAGGAACCGCCAGACCAACGAGCGGATCGAGGAAATCATCCGGACCACCGGCAAAGAGAACGCCAAGTACCTGATCGAGAAGATCAAGCTGCACGACATGCAAGAGGGCAAGTGCCTGTACAGCCTGGAAGCCATTCCTCTGGAAGATCTGCTGAACAATCCCTTCAACTATGAGGTGGACCACATCATCCCCAGAAGCGTGTCCTTCGACAACAGCTTCAACAACAAGGTGCTCGTGAAGCAAGAGGAAAACAGCAAGAAGGGCAACAGAACCCCATTCCAGTACCTGAGCAGCAGCGACAGCAAGATCAGCTACGAAACCTTCAAGAAGCACATCCTGAATCTGGCCAAAGGCAAGGGCAGAATCAGCAAGACCAAGAAAGAATACCTGCTCGAGGAACGGGACATCAACAGATTCAGCGTGCAGAAAGACTTCATCAATCGGAACCTGGTGGACACCAGATACGCCACCAGAGGCCTGATGAATCTGCTGCGGAGCTACTTCAGAGTGAACAATCTGGACGTGAAAGTCAAGTCCATCAACGGCGGCTTCACCAGCTTTCTGCGGCGGAAGTGGAAGTTCAAGAAAGAGCGGAACAAGGGCTATAAGCACCACGCCGAGGACGCCCTGATCATTGCCAACGCCGATTTCATCTTCAAAGAGTGGAAGAAACTGGACAAGGCCAAAAAAGTGATGGAAAACCAGATGTTCGAGGAAAAGCAGGCCGAGAGCATGCCCGAGATCGAAACCGAGCAAGAGTACAAAGAGATTTTCATCACGCCCCACCAGATCAAGCACATTAAGGACTTCAAGGACTACAAGTACAGCCACCGCGTGGACAAGAAGCCCAATAGAGAGCTGATTAACGACACCCTGTACTCTACCCGGAAGGACGACAAGGGCAATACCCTGATCGTCAACAACCTGAACGGCCTGTACGACAAGGACAACGACAAGCTCAAGAAGCTGATCAACAAGAGCCCCGAGAAACTGCTGATGTACCACCACGATCCTCAGACCTACCAGAAACTGAAGCTCATCATGGAACAGTACGGCGACGAGAAGAATCCCCTGTACAAGTACTACGAGGAAACCGGGAACTACCTGACCAAGTACTCCAAAAAGGACAATGGGCCCGTGATCAAGAAGATTAAGTATTACGGCAACAAGCTGAATGCCCACCTGGACATCACCGACGACTACCCCAACAGCAGAAACAAGGTGGTCAAGCTGTCCCTGAAGCCTTACAGATTCGACGTGTACCTGGACAACGGCGTGTACAAGTTCGTGACCGTGAAGAACCTGGACGTCATCAAAAAAGAAAACTACTACGAAGTCAACAGCAAGTGCTATGAGGAAGCCAAGAAACTCAAGAAAATCAGCAACCAGGCCGAGTTTATCGCCTCCTTCTACAACAACGATCTGATCAAGATCAACGGGGAGCTGTATAGAGTGATCGGCGTGAACAATGACCTGCTGAACCGGATCGAAGTGAACATGATCGACATCACCTACCGCGAGTACCTCGAGAACATGAACGATAAGCGGCCTCCACGGATCATTAAGACAATCGCCAGCAAGACGCAGAGCATTAAGAAGTACAGCACAGACATCCTGGGCAACCTGTACGAAGTGAAGTCTAAGAAGCACCCGCAGATTATCAAGAAAGGCAGCGGCGCTCCCAAGAAAAAACGGAAGGTTGGCTCCGGAGAGGGCAGAGGAAGTCTGCTAACATGCGGTGACGTCGAGGAGAATCCTGGCCCAATGGAGAGCGACGAGAGCGGCCTGCCCGCCATGGAGATCGAGTGCCGCATCACCGGCACCCTGAACGGCGTGGAGTTCGAGCTGGTGGGCGGCGGAGAGGGCACCCCCGAGCAGGGCCGCATGACCAACAAGATGAAGAGCACCAAAGGCGCCCTGACCTTCAGCCCCTACCTGCTGAGCCACGTGATGGGCTACGGCTTCTACCACTTCGGCACCTACCCCAGCGGCTACGAGAACCCCTTCCTGCACGCCATCAACAACGGCGGCTACACCAACACCCGCATCGAGAAGTACGAGGACGGCGGCGTGCTGCACGTGAGCTTCAGCTACCGCTACGAGGCCGGCCGCGTGATCGGCGACTTCAAGGTGATGGGCACCGGCTTCCCCGAGGACAGCGTGATCTTCACCGACAAGATCATCCGCAGCAACGCCACCGTGGAGCACCTGCACCCCATGGGCGATAACGATCTGGATGGCAGCTTCACCCGCACCTTCAGCCTGCGCGACGGCGGCTACTACAGCTCCGTGGTGGACAGCCACATGCACTTCAAGAGCGCCATCCACCCCAGCATCCTGCAGAACGGGGGCCCCATGTTCGCCTTCCGCCGCGTGGAGGAGGATCACAGCAACACCGAGCTGGGCATCGTGGAGTACCAGCACGCCTTCAAGACCCCGGATGCAGATGCCGGTGAAGAATAAGAGCTCGCTGATCAGCCTCGATAAGATACATTGATGAGTTTGGACAAACCACAACTAGAATGCAGTGAAAAAAATGCTTTATTTGTGAAATTTGTGATGCTATTGCTTTATTTGTAACCATTATAAGCTGCAATAAACAAGTTttaattaaggtcgggcaggaagagggcctatttcccatgattccttcatatttgcatatacgatacaaggctgttagagagataattagaattaatttgactgtaaacacaaagatattagtacaaaatacgtgacgtagaaagtaataatttcttgggtagt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例示性 pITR-CMV. 失活 SaCas9T2AGFP.U6-hsa408Rev 序列 (SEQ ID NO: 282) 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例示性 pITR-CMV.SaCas9T2AGFP.U6-hsammu386Fw 序列 (SEQ ID NO: 283) CTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTCTAGATCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGAGTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGTGATGCGGTTTTGGCAGTACATCAATGGGCGTGGATAGCGGTTTGACTCACGGGGATTTCCAAGTCTCCACCCCATTGACGTCAATGGGAGTTTGTTTTGGCACCAAAATCAACGGGACTTTCCAAAATGTCGTAACAACTCCGCCCCATTGACGCAAATGGGCGGTAGGCGTGTACGGTGGGAGGTCTATATAAGCAGAGCTCGTTTAGTGAACCGTcagatcgcctggagacgcACCGGTGCCACCATGGCCCCTAAGAAGAAGCGGAAAGTCGGCAGCGGCAAGCGGAACTATATCCTGGGCCTCGACATCGGCATCACCAGCGTTGGCTACGGCATCATCGACTACGAGACACGGGACGTGATCGATGCCGGCGTGCGGCTGTTTAAAGAGGCCAACGTCGAGAACAACGAGGGCCGCAGATCTAAGAGAGGCGCCAGACGGCTGAAGCGGAGAAGAAGGCACAGAATCCAGAGAGTGAAGAAGCTGCTGTTCGACTACAACCTGCTGACCGACCACAGCGAGCTGAGCGGCATCAATCCTTACGAGGCCAGAGTGAAGGGCCTGAGCCAGAAGCTGAGCGAGGAAGAGTTTAGCGCCGCTCTGCTGCACCTGGCCAAGAGAAGAGGCGTGCACAACGTGAACGAGGTGGAAGAGGACACCGGCAACGAGCTGTCCACCAAAGAGCAGATCAGCCGGAACAGCAAGGCCCTGGAAGAGAAATACGTGGCCGAACTGCAGCTGGAACGGCTGAAAAAGGATGGCGAAGTGCGGGGCAGCATCAATCGGTTCAAGACCAGCGACTACGTGAAAGAAGCCAAACAGCTGCTGAAGGTGCAGAAGGCCTACCACCAGCTGGACCAGAGCTTCATCGACACCTACATCGACCTGCTGGAAACCCGGCGGACCTACTATGAAGGACCTGGCGAGGGAAGCCCCTTCGGCTGGAAGGACATCAAAGAATGGTACGAGATGCTGATGGGCCACTGCACCTACTTTCCCGAGGAACTGCGGAGCGTGAAGTACGCCTACAACGCCGACCTGTACAACGCCCTGAACGACCTGAACAACCTCGTGATCACCCGGGACGAGAACGAGAAGCTGGAATATTACGAGAAGTTCCAGATCATCGAGAACGTGTTCAAGCAGAAGAAGAAACCCACGCTGAAGCAGATCGCCAAAGAGATCCTGGTCAACGAGGAAGATATCAAGGGCTACAGAGTGACCAGCACCGGCAAGCCCGAGTTCACCAACCTGAAGGTGTACCACGACATCAAGGATATCACAGCCCGGAAAGAGATTATTGAGAACGCCGAGCTGCTGGACCAAATCGCCAAGATCCTGACCATCTACCAGAGCAGCGAGGACATCCAAGAGGAACTGACCAATCTGAACTCCGAGCTGACCCAAGAAGAGATCGAGCAGATCTCTAATCTGAAGGGGTACACCGGCACACACAACCTGAGCCTGAAGGCCATCAACCTGATCCTGGACGAGCTGTGGCACACCAACGACAACCAGATTGCCATCTTCAACAGGCTGAAGCTGGTGCCCAAGAAGGTGGACCTGTCTCAGCAGAAAGAAATCCCCACCACACTGGTGGACGACTTCATTCTGAGCCCCGTGGTCAAGAGGAGCTTCATCCAGAGCATCAAAGTGATCAACGCCATCATCAAGAAGTACGGGCTGCCCAACGATATCATCATCGAGCTGGCCCGCGAGAAGAACTCCAAGGACGCCCAGAAAATGATCAACGAGATGCAGAAGAGGAACCGCCAGACCAACGAGCGGATCGAGGAAATCATCCGGACCACCGGCAAAGAGAACGCCAAGTACCTGATCGAGAAGATCAAGCTGCACGACATGCAAGAGGGCAAGTGCCTGTACAGCCTGGAAGCCATTCCTCTGGAAGATCTGCTGAACAATCCCTTCAACTATGAGGTGGACCACATCATCCCCAGAAGCGTGTCCTTCGACAACAGCTTCAACAACAAGGTGCTCGTGAAGCAAGAGGAAAACAGCAAGAAGGGCAACAGAACCCCATTCCAGTACCTGAGCAGCAGCGACAGCAAGATCAGCTACGAAACCTTCAAGAAGCACATCCTGAATCTGGCCAAAGGCAAGGGCAGAATCAGCAAGACCAAGAAAGAATACCTGCTCGAGGAACGGGACATCAACAGATTCAGCGTGCAGAAAGACTTCATCAATCGGAACCTGGTGGACACCAGATACGCCACCAGAGGCCTGATGAATCTGCTGCGGAGCTACTTCAGAGTGAACAATCTGGACGTGAAAGTCAAGTCCATCAACGGCGGCTTCACCAGCTTTCTGCGGCGGAAGTGGAAGTTCAAGAAAGAGCGGAACAAGGGCTATAAGCACCACGCCGAGGACGCCCTGATCATTGCCAACGCCGATTTCATCTTCAAAGAGTGGAAGAAACTGGACAAGGCCAAAAAAGTGATGGAAAACCAGATGTTCGAGGAAAAGCAGGCCGAGAGCATGCCCGAGATCGAAACCGAGCAAGAGTACAAAGAGATTTTCATCACGCCCCACCAGATCAAGCACATTAAGGACTTCAAGGACTACAAGTACAGCCACCGCGTGGACAAGAAGCCCAATAGAGAGCTGATTAACGACACCCTGTACTCTACCCGGAAGGACGACAAGGGCAATACCCTGATCGTCAACAACCTGAACGGCCTGTACGACAAGGACAACGACAAGCTCAAGAAGCTGATCAACAAGAGCCCCGAGAAACTGCTGATGTACCACCACGATCCTCAGACCTACCAGAAACTGAAGCTCATCATGGAACAGTACGGCGACGAGAAGAATCCCCTGTACAAGTACTACGAGGAAACCGGGAACTACCTGACCAAGTACTCCAAAAAGGACAATGGGCCCGTGATCAAGAAGATTAAGTATTACGGCAACAAGCTGAATGCCCACCTGGACATCACCGACGACTACCCCAACAGCAGAAACAAGGTGGTCAAGCTGTCCCTGAAGCCTTACAGATTCGACGTGTACCTGGACAACGGCGTGTACAAGTTCGTGACCGTGAAGAACCTGGACGTCATCAAAAAAGAAAACTACTACGAAGTCAACAGCAAGTGCTATGAGGAAGCCAAGAAACTCAAGAAAATCAGCAACCAGGCCGAGTTTATCGCCTCCTTCTACAACAACGATCTGATCAAGATCAACGGGGAGCTGTATAGAGTGATCGGCGTGAACAATGACCTGCTGAACCGGATCGAAGTGAACATGATCGACATCACCTACCGCGAGTACCTCGAGAACATGAACGATAAGCGGCCTCCACGGATCATTAAGACAATCGCCAGCAAGACGCAGAGCATTAAGAAGTACAGCACAGACATCCTGGGCAACCTGTACGAAGTGAAGTCTAAGAAGCACCCGCAGATTATCAAGAAAGGCAGCGGCGCTCCCAAGAAAAAACGGAAGGTTGGCTCCGGAGAGGGCAGAGGAAGTCTGCTAACATGCGGTGACGTCGAGGAGAATCCTGGCCCAATGGAGAGCGACGAGAGCGGCCTGCCCGCCATGGAGATCGAGTGCCGCATCACCGGCACCCTGAACGGCGTGGAGTTCGAGCTGGTGGGCGGCGGAGAGGGCACCCCCGAGCAGGGCCGCATGACCAACAAGATGAAGAGCACCAAAGGCGCCCTGACCTTCAGCCCCTACCTGCTGAGCCACGTGATGGGCTACGGCTTCTACCACTTCGGCACCTACCCCAGCGGCTACGAGAACCCCTTCCTGCACGCCATCAACAACGGCGGCTACACCAACACCCGCATCGAGAAGTACGAGGACGGCGGCGTGCTGCACGTGAGCTTCAGCTACCGCTACGAGGCCGGCCGCGTGATCGGCGACTTCAAGGTGATGGGCACCGGCTTCCCCGAGGACAGCGTGATCTTCACCGACAAGATCATCCGCAGCAACGCCACCGTGGAGCACCTGCACCCCATGGGCGATAACGATCTGGATGGCAGCTTCACCCGCACCTTCAGCCTGCGCGACGGCGGCTACTACAGCTCCGTGGTGGACAGCCACATGCACTTCAAGAGCGCCATCCACCCCAGCATCCTGCAGAACGGGGGCCCCATGTTCGCCTTCCGCCGCGTGGAGGAGGATCACAGCAACACCGAGCTGGGCATCGTGGAGTACCAGCACGCCTTCAAGACCCCGGATGCAGATGCCGGTGAAGAATAAGAGCTCGCTGATCAGCCTCGATAAGATACATTGATGAGTTTGGACAAACCACAACTAGAATGCAGTGAAAAAAATGCTTTATTTGTGAAATTTGTGATGCTATTGCTTTATTTGTAACCATTATAAGCTGCAATAAACAAGTTttaattaaggtcgggcaggaagagggcctatttcccatgattccttcatatttgcatatacgatacaaggctgttagagagataattagaattaatttgactgtaaacacaaagatattagtacaaaatacgtgacgtagaaagtaataatttcttgggtagtttgcagttttaaaattatgttttaaaatggactatcatatgcttaccgtaacttgaaagtatttcgatttcttggctttatatatcttgtggaaaggacgaaacaccgAGGAGCACCAGGAACTTGCCAGTTTAAGTACTCTGTGCTGGAAACAGCACAGAATCTACTTAAACAAGGCAAAATGCCGTGTTTATCTCGTCAACTTGTTGGCGAGAttttttctaAAGCTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCTAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAG
例示性 pITR-CMV. 失活 SaCas9T2AGFP.U6-hsammu386Fw 序列 (SEQ ID NO: 284) CTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTCTAGATCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGAGTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGTGATGCGGTTTTGGCAGTACATCAATGGGCGTGGATAGCGGTTTGACTCACGGGGATTTCCAAGTCTCCACCCCATTGACGTCAATGGGAGTTTGTTTTGGCACCAAAATCAACGGGACTTTCCAAAATGTCGTAACAACTCCGCCCCATTGACGCAAATGGGCGGTAGGCGTGTACGGTGGGAGGTCTATATAAGCAGAGCTCGTTTAGTGAACCGTcagatcgcctggagacgcACCGGTGCCACCATGGCCCCTAAGAAGAAGCGGAAAGTCGGCAGCGGCAAGCGGAACTATATCCTGGGCCTCGCCATCGGCATCACCAGCGTTGGCTACGGCATCATCGACTACGAGACACGGGACGTGATCGATGCCGGCGTGCGGCTGTTTAAAGAGGCCAACGTCGAGAACAACGAGGGCCGCAGATCTAAGAGAGGCGCCAGACGGCTGAAGCGGAGAAGAAGGCACAGAATCCAGAGAGTGAAGAAGCTGCTGTTCGACTACAACCTGCTGACCGACCACAGCGAGCTGAGCGGCATCAATCCTTACGAGGCCAGAGTGAAGGGCCTGAGCCAGAAGCTGAGCGAGGAAGAGTTTAGCGCCGCTCTGCTGCACCTGGCCAAGAGAAGAGGCGTGCACAACGTGAACGAGGTGGAAGAGGACACCGGCAACGAGCTGTCCACCAAAGAGCAGATCAGCCGGAACAGCAAGGCCCTGGAAGAGAAATACGTGGCCGAACTGCAGCTGGAACGGCTGAAAAAGGATGGCGAAGTGCGGGGCAGCATCAATCGGTTCAAGACCAGCGACTACGTGAAAGAAGCCAAACAGCTGCTGAAGGTGCAGAAGGCCTACCACCAGCTGGACCAGAGCTTCATCGACACCTACATCGACCTGCTGGAAACCCGGCGGACCTACTATGAAGGACCTGGCGAGGGAAGCCCCTTCGGCTGGAAGGACATCAAAGAATGGTACGAGATGCTGATGGGCCACTGCACCTACTTTCCCGAGGAACTGCGGAGCGTGAAGTACGCCTACAACGCCGACCTGTACAACGCCCTGAACGACCTGAACAACCTCGTGATCACCCGGGACGAGAACGAGAAGCTGGAATATTACGAGAAGTTCCAGATCATCGAGAACGTGTTCAAGCAGAAGAAGAAACCCACGCTGAAGCAGATCGCCAAAGAGATCCTGGTCAACGAGGAAGATATCAAGGGCTACAGAGTGACCAGCACCGGCAAGCCCGAGTTCACCAACCTGAAGGTGTACCACGACATCAAGGATATCACAGCCCGGAAAGAGATTATTGAGAACGCCGAGCTGCTGGACCAAATCGCCAAGATCCTGACCATCTACCAGAGCAGCGAGGACATCCAAGAGGAACTGACCAATCTGAACTCCGAGCTGACCCAAGAAGAGATCGAGCAGATCTCTAATCTGAAGGGGTACACCGGCACACACAACCTGAGCCTGAAGGCCATCAACCTGATCCTGGACGAGCTGTGGCACACCAACGACAACCAGATTGCCATCTTCAACAGGCTGAAGCTGGTGCCCAAGAAGGTGGACCTGTCTCAGCAGAAAGAAATCCCCACCACACTGGTGGACGACTTCATTCTGAGCCCCGTGGTCAAGAGGAGCTTCATCCAGAGCATCAAAGTGATCAACGCCATCATCAAGAAGTACGGGCTGCCCAACGATATCATCATCGAGCTGGCCCGCGAGAAGAACTCCAAGGACGCCCAGAAAATGATCAACGAGATGCAGAAGAGGAACCGCCAGACCAACGAGCGGATCGAGGAAATCATCCGGACCACCGGCAAAGAGAACGCCAAGTACCTGATCGAGAAGATCAAGCTGCACGACATGCAAGAGGGCAAGTGCCTGTACAGCCTGGAAGCCATTCCTCTGGAAGATCTGCTGAACAATCCCTTCAACTATGAGGTGGACCACATCATCCCCAGAAGCGTGTCCTTCGACAACAGCTTCAACAACAAGGTGCTCGTGAAGCAAGAGGAAGCCAGCAAGAAGGGCAACAGAACCCCATTCCAGTACCTGAGCAGCAGCGACAGCAAGATCAGCTACGAAACCTTCAAGAAGCACATCCTGAATCTGGCCAAAGGCAAGGGCAGAATCAGCAAGACCAAGAAAGAATACCTGCTCGAGGAACGGGACATCAACAGATTCAGCGTGCAGAAAGACTTCATCAATCGGAACCTGGTGGACACCAGATACGCCACCAGAGGCCTGATGAATCTGCTGCGGAGCTACTTCAGAGTGAACAATCTGGACGTGAAAGTCAAGTCCATCAACGGCGGCTTCACCAGCTTTCTGCGGCGGAAGTGGAAGTTCAAGAAAGAGCGGAACAAGGGCTATAAGCACCACGCCGAGGACGCCCTGATCATTGCCAACGCCGATTTCATCTTCAAAGAGTGGAAGAAACTGGACAAGGCCAAAAAAGTGATGGAAAACCAGATGTTCGAGGAAAAGCAGGCCGAGAGCATGCCCGAGATCGAAACCGAGCAAGAGTACAAAGAGATTTTCATCACGCCCCACCAGATCAAGCACATTAAGGACTTCAAGGACTACAAGTACAGCCACCGCGTGGACAAGAAGCCCAATAGAGAGCTGATTAACGACACCCTGTACTCTACCCGGAAGGACGACAAGGGCAATACCCTGATCGTCAACAACCTGAACGGCCTGTACGACAAGGACAACGACAAGCTCAAGAAGCTGATCAACAAGAGCCCCGAGAAACTGCTGATGTACCACCACGATCCTCAGACCTACCAGAAACTGAAGCTCATCATGGAACAGTACGGCGACGAGAAGAATCCCCTGTACAAGTACTACGAGGAAACCGGGAACTACCTGACCAAGTACTCCAAAAAGGACAATGGGCCCGTGATCAAGAAGATTAAGTATTACGGCAACAAGCTGAATGCCCACCTGGACATCACCGACGACTACCCCAACAGCAGAAACAAGGTGGTCAAGCTGTCCCTGAAGCCTTACAGATTCGACGTGTACCTGGACAACGGCGTGTACAAGTTCGTGACCGTGAAGAACCTGGACGTCATCAAAAAAGAAAACTACTACGAAGTCAACAGCAAGTGCTATGAGGAAGCCAAGAAACTCAAGAAAATCAGCAACCAGGCCGAGTTTATCGCCTCCTTCTACAACAACGATCTGATCAAGATCAACGGGGAGCTGTATAGAGTGATCGGCGTGAACAATGACCTGCTGAACCGGATCGAAGTGAACATGATCGACATCACCTACCGCGAGTACCTCGAGAACATGAACGATAAGCGGCCTCCACGGATCATTAAGACAATCGCCAGCAAGACGCAGAGCATTAAGAAGTACAGCACAGACATCCTGGGCAACCTGTACGAAGTGAAGTCTAAGAAGCACCCGCAGATTATCAAGAAAGGCAGCGGCGCTCCCAAGAAAAAACGGAAGGTTGGCTCCGGAGAGGGCAGAGGAAGTCTGCTAACATGCGGTGACGTCGAGGAGAATCCTGGCCCAATGGAGAGCGACGAGAGCGGCCTGCCCGCCATGGAGATCGAGTGCCGCATCACCGGCACCCTGAACGGCGTGGAGTTCGAGCTGGTGGGCGGCGGAGAGGGCACCCCCGAGCAGGGCCGCATGACCAACAAGATGAAGAGCACCAAAGGCGCCCTGACCTTCAGCCCCTACCTGCTGAGCCACGTGATGGGCTACGGCTTCTACCACTTCGGCACCTACCCCAGCGGCTACGAGAACCCCTTCCTGCACGCCATCAACAACGGCGGCTACACCAACACCCGCATCGAGAAGTACGAGGACGGCGGCGTGCTGCACGTGAGCTTCAGCTACCGCTACGAGGCCGGCCGCGTGATCGGCGACTTCAAGGTGATGGGCACCGGCTTCCCCGAGGACAGCGTGATCTTCACCGACAAGATCATCCGCAGCAACGCCACCGTGGAGCACCTGCACCCCATGGGCGATAACGATCTGGATGGCAGCTTCACCCGCACCTTCAGCCTGCGCGACGGCGGCTACTACAGCTCCGTGGTGGACAGCCACATGCACTTCAAGAGCGCCATCCACCCCAGCATCCTGCAGAACGGGGGCCCCATGTTCGCCTTCCGCCGCGTGGAGGAGGATCACAGCAACACCGAGCTGGGCATCGTGGAGTACCAGCACGCCTTCAAGACCCCGGATGCAGATGCCGGTGAAGAATAAGAGCTCGCTGATCAGCCTCGATAAGATACATTGATGAGTTTGGACAAACCACAACTAGAATGCAGTGAAAAAAATGCTTTATTTGTGAAATTTGTGATGCTATTGCTTTATTTGTAACCATTATAAGCTGCAATAAACAAGTTttaattaaggtcgggcaggaagagggcctatttcccatgattccttcatatttgcatatacgatacaaggctgttagagagataattagaattaatttgactgtaaacacaaagatattagtacaaaatacgtgacgtagaaagtaataatttcttgggtagt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例示性 pITR-CMV.SaCas9T2AGFP.U6-hsa233Fw 序列 (SEQ ID NO: 285) 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例示性 pITR-CMV.SaCas9T2AGFP.U6-hsa447Fw 序列 (SEQ ID NO: 286) 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ttgcagttttaaaattatgttttaaaatggactatcatatgcttaccgtaacttgaaagtatttcgatttcttggctttatatatcttgtggaaaggacgaaacaccgTTTCGGCTTGGAGTACATCGTGTTTAAGTACTCTGTGCTGGAAACAGCACAGAATCTACTTAAACAAGGCAAAATGCCGTGTTTATCTCGTCAACTTGTTGGCGAGAttttttctaAAGCTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCTAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAG
例示性 pITR-CMV.SaCas9T2AGFP.U6-hsa482Fw 序列 (SEQ ID NO: 287) 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ttgcagttttaaaattatgttttaaaatggactatcatatgcttaccgtaacttgaaagtatttcgatttcttggctttatatatcttgtggaaaggacgaaacaccgCCGGATGCTGCTGCCGCTACCGTTTAAGTACTCTGTGCTGGAAACAGCACAGAATCTACTTAAACAAGGCAAAATGCCGTGTTTATCTCGTCAACTTGTTGGCGAGAttttttctaAAGCTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCTAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAG
例示性 pITR-CMV.SaCas9T2AGFP.U6-hsa490Fw 序列 (SEQ ID NO: 288) CTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTCTAGATCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGAGTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGTGATGCGGTTTTGGCAGTACATCAATGGGCGTGGATAGCGGTTTGACTCACGGGGATTTCCAAGTCTCCACCCCATTGACGTCAATGGGAGTTTGTTTTGGCACCAAAATCAACGGGACTTTCCAAAATGTCGTAACAACTCCGCCCCATTGACGCAAATGGGCGGTAGGCGTGTACGGTGGGAGGTCTATATAAGCAGAGCTCGTTTAGTGAACCGTcagatcgcctggagacgcACCGGTGCCACCATGGCCCCTAAGAAGAAGCGGAAAGTCGGCAGCGGCAAGCGGAACTATATCCTGGGCCTCGACATCGGCATCACCAGCGTTGGCTACGGCATCATCGACTACGAGACACGGGACGTGATCGATGCCGGCGTGCGGCTGTTTAAAGAGGCCAACGTCGAGAACAACGAGGGCCGCAGATCTAAGAGAGGCGCCAGACGGCTGAAGCGGAGAAGAAGGCACAGAATCCAGAGAGTGAAGAAGCTGCTGTTCGACTACAACCTGCTGACCGACCACAGCGAGCTGAGCGGCATCAATCCTTACGAGGCCAGAGTGAAGGGCCTGAGCCAGAAGCTGAGCGAGGAAGAGTTTAGCGCCGCTCTGCTGCACCTGGCCAAGAGAAGAGGCGTGCACAACGTGAACGAGGTGGAAGAGGACACCGGCAACGAGCTGTCCACCAAAGAGCAGATCAGCCGGAACAGCAAGGCCCTGGAAGAGAAATACGTGGCCGAACTGCAGCTGGAACGGCTGAAAAAGGATGGCGAAGTGCGGGGCAGCATCAATCGGTTCAAGACCAGCGACTACGTGAAAGAAGCCAAACAGCTGCTGAAGGTGCAGAAGGCCTACCACCAGCTGGACCAGAGCTTCATCGACACCTACATCGACCTGCTGGAAACCCGGCGGACCTACTATGAAGGACCTGGCGAGGGAAGCCCCTTCGGCTGGAAGGACATCAAAGAATGGTACGAGATGCTGATGGGCCACTGCACCTACTTTCCCGAGGAACTGCGGAGCGTGAAGTACGCCTACAACGCCGACCTGTACAACGCCCTGAACGACCTGAACAACCTCGTGATCACCCGGGACGAGAACGAGAAGCTGGAATATTACGAGAAGTTCCAGATCATCGAGAACGTGTTCAAGCAGAAGAAGAAACCCACGCTGAAGCAGATCGCCAAAGAGATCCTGGTCAACGAGGAAGATATCAAGGGCTACAGAGTGACCAGCACCGGCAAGCCCGAGTTCACCAACCTGAAGGTGTACCACGACATCAAGGATATCACAGCCCGGAAAGAGATTATTGAGAACGCCGAGCTGCTGGACCAAATCGCCAAGATCCTGACCATCTACCAGAGCAGCGAGGACATCCAAGAGGAACTGACCAATCTGAACTCCGAGCTGACCCAAGAAGAGATCGAGCAGATCTCTAATCTGAAGGGGTACACCGGCACACACAACCTGAGCCTGAAGGCCATCAACCTGATCCTGGACGAGCTGTGGCACACCAACGACAACCAGATTGCCATCTTCAACAGGCTGAAGCTGGTGCCCAAGAAGGTGGACCTGTCTCAGCAGAAAGAAATCCCCACCACACTGGTGGACGACTTCATTCTGAGCCCCGTGGTCAAGAGGAGCTTCATCCAGAGCATCAAAGTGATCAACGCCATCATCAAGAAGTACGGGCTGCCCAACGATATCATCATCGAGCTGGCCCGCGAGAAGAACTCCAAGGACGCCCAGAAAATGATCAACGAGATGCAGAAGAGGAACCGCCAGACCAACGAGCGGATCGAGGAAATCATCCGGACCACCGGCAAAGAGAACGCCAAGTACCTGATCGAGAAGATCAAGCTGCACGACATGCAAGAGGGCAAGTGCCTGTACAGCCTGGAAGCCATTCCTCTGGAAGATCTGCTGAACAATCCCTTCAACTATGAGGTGGACCACATCATCCCCAGAAGCGTGTCCTTCGACAACAGCTTCAACAACAAGGTGCTCGTGAAGCAAGAGGAAAACAGCAAGAAGGGCAACAGAACCCCATTCCAGTACCTGAGCAGCAGCGACAGCAAGATCAGCTACGAAACCTTCAAGAAGCACATCCTGAATCTGGCCAAAGGCAAGGGCAGAATCAGCAAGACCAAGAAAGAATACCTGCTCGAGGAACGGGACATCAACAGATTCAGCGTGCAGAAAGACTTCATCAATCGGAACCTGGTGGACACCAGATACGCCACCAGAGGCCTGATGAATCTGCTGCGGAGCTACTTCAGAGTGAACAATCTGGACGTGAAAGTCAAGTCCATCAACGGCGGCTTCACCAGCTTTCTGCGGCGGAAGTGGAAGTTCAAGAAAGAGCGGAACAAGGGCTATAAGCACCACGCCGAGGACGCCCTGATCATTGCCAACGCCGATTTCATCTTCAAAGAGTGGAAGAAACTGGACAAGGCCAAAAAAGTGATGGAAAACCAGATGTTCGAGGAAAAGCAGGCCGAGAGCATGCCCGAGATCGAAACCGAGCAAGAGTACAAAGAGATTTTCATCACGCCCCACCAGATCAAGCACATTAAGGACTTCAAGGACTACAAGTACAGCCACCGCGTGGACAAGAAGCCCAATAGAGAGCTGATTAACGACACCCTGTACTCTACCCGGAAGGACGACAAGGGCAATACCCTGATCGTCAACAACCTGAACGGCCTGTACGACAAGGACAACGACAAGCTCAAGAAGCTGATCAACAAGAGCCCCGAGAAACTGCTGATGTACCACCACGATCCTCAGACCTACCAGAAACTGAAGCTCATCATGGAACAGTACGGCGACGAGAAGAATCCCCTGTACAAGTACTACGAGGAAACCGGGAACTACCTGACCAAGTACTCCAAAAAGGACAATGGGCCCGTGATCAAGAAGATTAAGTATTACGGCAACAAGCTGAATGCCCACCTGGACATCACCGACGACTACCCCAACAGCAGAAACAAGGTGGTCAAGCTGTCCCTGAAGCCTTACAGATTCGACGTGTACCTGGACAACGGCGTGTACAAGTTCGTGACCGTGAAGAACCTGGACGTCATCAAAAAAGAAAACTACTACGAAGTCAACAGCAAGTGCTATGAGGAAGCCAAGAAACTCAAGAAAATCAGCAACCAGGCCGAGTTTATCGCCTCCTTCTACAACAACGATCTGATCAAGATCAACGGGGAGCTGTATAGAGTGATCGGCGTGAACAATGACCTGCTGAACCGGATCGAAGTGAACATGATCGACATCACCTACCGCGAGTACCTCGAGAACATGAACGATAAGCGGCCTCCACGGATCATTAAGACAATCGCCAGCAAGACGCAGAGCATTAAGAAGTACAGCACAGACATCCTGGGCAACCTGTACGAAGTGAAGTCTAAGAAGCACCCGCAGATTATCAAGAAAGGCAGCGGCGCTCCCAAGAAAAAACGGAAGGTTGGCTCCGGAGAGGGCAGAGGAAGTCTGCTAACATGCGGTGACGTCGAGGAGAATCCTGGCCCAATGGAGAGCGACGAGAGCGGCCTGCCCGCCATGGAGATCGAGTGCCGCATCACCGGCACCCTGAACGGCGTGGAGTTCGAGCTGGTGGGCGGCGGAGAGGGCACCCCCGAGCAGGGCCGCATGACCAACAAGATGAAGAGCACCAAAGGCGCCCTGACCTTCAGCCCCTACCTGCTGAGCCACGTGATGGGCTACGGCTTCTACCACTTCGGCACCTACCCCAGCGGCTACGAGAACCCCTTCCTGCACGCCATCAACAACGGCGGCTACACCAACACCCGCATCGAGAAGTACGAGGACGGCGGCGTGCTGCACGTGAGCTTCAGCTACCGCTACGAGGCCGGCCGCGTGATCGGCGACTTCAAGGTGATGGGCACCGGCTTCCCCGAGGACAGCGTGATCTTCACCGACAAGATCATCCGCAGCAACGCCACCGTGGAGCACCTGCACCCCATGGGCGATAACGATCTGGATGGCAGCTTCACCCGCACCTTCAGCCTGCGCGACGGCGGCTACTACAGCTCCGTGGTGGACAGCCACATGCACTTCAAGAGCGCCATCCACCCCAGCATCCTGCAGAACGGGGGCCCCATGTTCGCCTTCCGCCGCGTGGAGGAGGATCACAGCAACACCGAGCTGGGCATCGTGGAGTACCAGCACGCCTTCAAGACCCCGGATGCAGATGCCGGTGAAGAATAAGAGCTCGCTGATCAGCCTCGATAAGATACATTGATGAGTTTGGACAAACCACAACTAGAATGCAGTGAAAAAAATGCTTTATTTGTGAAATTTGTGATGCTATTGCTTTATTTGTAACCATTATAAGCTGCAATAAACAAGTTttaattaaggtcgggcaggaagagggcctatttcccatgattccttcatatttgcatatacgatacaaggctgttagagagataattagaattaatttgactgtaaacacaaagatattagtacaaaatacgtgacgtagaaagtaataatttcttgggtagt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sgRNA 質體之例示性 eGFP
例示性 pITR.CMV.eGFP.U6-hsammu386Fw 序列 (SEQ ID NO: 289) CTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTCTAGATCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGAGTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGTGATGCGGTTTTGGCAGTACATCAATGGGCGTGGATAGCGGTTTGACTCACGGGGATTTCCAAGTCTCCACCCCATTGACGTCAATGGGAGTTTGTTTTGGCACCAAAATCAACGGGACTTTCCAAAATGTCGTAACAACTCCGCCCCATTGACGCAAATGGGCGGTAGGCGTGTACGGTGGGAGGTCTATATAAGCAGAGCTCGTTTAGTGAACCGTCGTTTAGTGAACCGTcagatcgcctggagacgcACCGGTGCCACCATGGTGAGCAAGGGCGAGGAGCTGTTCACCGGGGTGGTGCCCATCCTGGTCGAGCTGGACGGCGACGTAAACGGCCACAAGTTCAGCGTGTCCGGCGAGGGCGAGGGCGATGCCACCTACGGCAAGCTGACCCTGAAGTTCATCTGCACCACCGGCAAGCTGCCCGTGCCCTGGCCCACCCTCGTGACCACCCTGACCTACGGCGTGCAGTGCTTCAGCCGCTACCCCGACCACATGAAGCAGCACGACTTCTTCAAGTCCGCCATGCCCGAAGGCTACGTCCAGGAGCGCACCATCTTCTTCAAGGACGACGGCAACTACAAGACCCGCGCCGAGGTGAAGTTCGAGGGCGACACCCTGGTGAACCGCATCGAGCTGAAGGGCATCGACTTCAAGGAGGACGGCAACATCCTGGGGCACAAGCTGGAGTACAACTACAACAGCCACAACGTCTATATCATGGCCGACAAGCAGAAGAACGGCATCAAGGTGAACTTCAAGATCCGCCACAACATCGAGGACGGCAGCGTGCAGCTCGCCGACCACTACCAGCAGAACACCCCCATCGGCGACGGCCCCGTGCTGCTGCCCGACAACCACTACCTGAGCACCCAGTCCGCCCTGAGCAAAGACCCCAACGAGAAGCGCGATCACATGGTCCTGCTGGAGTTCGTGACCGCCGCCGGGATCACTCTCGGCATGGACGAGCTGTACAAGTAATAATAAGAGCTCGCTGATCAGCCTCGACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTGGGCTCTATGGttaattaaggtcgggcaggaagagggcctatttcccatgattccttcatatttgcatatacgatacaaggctgttagagagataattagaattaatttgactgtaaacacaaagatattagtacaaaatacgtgacgtagaaagtaataatttcttgggtagtttgcagttttaaaattatgttttaaaatggactatcatatgcttaccgtaacttgaaagtatttcgatttcttggctttatatatcttgtggaaaggacgaaacaccgAGGAGCACCAGGAACTTGCCAGTTTAAGTACTCTGTGCTGGAAACAGCACAGAATCTACTTAAACAAGGCAAAATGCCGTGTTTATCTCGTCAACTTGTTGGCGAGAttttttctaAAGCTTGAATTCAAGCTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCTAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAG
例示性 pITR.CMV.eGFP.U6-hsa408Rev 序列 (SEQ ID NO: 290) CTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTCTAGATCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGAGTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGTGATGCGGTTTTGGCAGTACATCAATGGGCGTGGATAGCGGTTTGACTCACGGGGATTTCCAAGTCTCCACCCCATTGACGTCAATGGGAGTTTGTTTTGGCACCAAAATCAACGGGACTTTCCAAAATGTCGTAACAACTCCGCCCCATTGACGCAAATGGGCGGTAGGCGTGTACGGTGGGAGGTCTATATAAGCAGAGCTCGTTTAGTGAACCGTCGTTTAGTGAACCGTcagatcgcctggagacgcACCGGTGCCACCATGGTGAGCAAGGGCGAGGAGCTGTTCACCGGGGTGGTGCCCATCCTGGTCGAGCTGGACGGCGACGTAAACGGCCACAAGTTCAGCGTGTCCGGCGAGGGCGAGGGCGATGCCACCTACGGCAAGCTGACCCTGAAGTTCATCTGCACCACCGGCAAGCTGCCCGTGCCCTGGCCCACCCTCGTGACCACCCTGACCTACGGCGTGCAGTGCTTCAGCCGCTACCCCGACCACATGAAGCAGCACGACTTCTTCAAGTCCGCCATGCCCGAAGGCTACGTCCAGGAGCGCACCATCTTCTTCAAGGACGACGGCAACTACAAGACCCGCGCCGAGGTGAAGTTCGAGGGCGACACCCTGGTGAACCGCATCGAGCTGAAGGGCATCGACTTCAAGGAGGACGGCAACATCCTGGGGCACAAGCTGGAGTACAACTACAACAGCCACAACGTCTATATCATGGCCGACAAGCAGAAGAACGGCATCAAGGTGAACTTCAAGATCCGCCACAACATCGAGGACGGCAGCGTGCAGCTCGCCGACCACTACCAGCAGAACACCCCCATCGGCGACGGCCCCGTGCTGCTGCCCGACAACCACTACCTGAGCACCCAGTCCGCCCTGAGCAAAGACCCCAACGAGAAGCGCGATCACATGGTCCTGCTGGAGTTCGTGACCGCCGCCGGGATCACTCTCGGCATGGACGAGCTGTACAAGTAATAATAAGAGCTCGCTGATCAGCCTCGACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTGGGCTCTATGGttaattaaggtcgggcaggaagagggcctatttcccatgattccttcatatttgcatatacgatacaaggctgttagagagataattagaattaatttgactgtaaacacaaagatattagtacaaaatacgtgacgtagaaagtaataatttcttgggtagtttgcagttttaaaattatgttttaaaatggactatcatatgcttaccgtaacttgaaagtatttcgatttcttggctttatatatcttgtggaaaggacgaaacaccgAAGCCGAAAACCACGATCATCGTTTAAGTACTCTGTGCTGGAAACAGCACAGAATCTACTTAAACAAGGCAAAATGCCGTGTTTATCTCGTCAACTTGTTGGCGAGAttttttctaAAGCTTGAATTCAAGCTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCTAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAG
例示性 pITR.CMV.eGFP.U6-mmu408Rev 序列 (SEQ ID NO: 291) CTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTCTAGATCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGAGTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGTGATGCGGTTTTGGCAGTACATCAATGGGCGTGGATAGCGGTTTGACTCACGGGGATTTCCAAGTCTCCACCCCATTGACGTCAATGGGAGTTTGTTTTGGCACCAAAATCAACGGGACTTTCCAAAATGTCGTAACAACTCCGCCCCATTGACGCAAATGGGCGGTAGGCGTGTACGGTGGGAGGTCTATATAAGCAGAGCTCGTTTAGTGAACCGTCGTTTAGTGAACCGTcagatcgcctggagacgcACCGGTGCCACCATGGTGAGCAAGGGCGAGGAGCTGTTCACCGGGGTGGTGCCCATCCTGGTCGAGCTGGACGGCGACGTAAACGGCCACAAGTTCAGCGTGTCCGGCGAGGGCGAGGGCGATGCCACCTACGGCAAGCTGACCCTGAAGTTCATCTGCACCACCGGCAAGCTGCCCGTGCCCTGGCCCACCCTCGTGACCACCCTGACCTACGGCGTGCAGTGCTTCAGCCGCTACCCCGACCACATGAAGCAGCACGACTTCTTCAAGTCCGCCATGCCCGAAGGCTACGTCCAGGAGCGCACCATCTTCTTCAAGGACGACGGCAACTACAAGACCCGCGCCGAGGTGAAGTTCGAGGGCGACACCCTGGTGAACCGCATCGAGCTGAAGGGCATCGACTTCAAGGAGGACGGCAACATCCTGGGGCACAAGCTGGAGTACAACTACAACAGCCACAACGTCTATATCATGGCCGACAAGCAGAAGAACGGCATCAAGGTGAACTTCAAGATCCGCCACAACATCGAGGACGGCAGCGTGCAGCTCGCCGACCACTACCAGCAGAACACCCCCATCGGCGACGGCCCCGTGCTGCTGCCCGACAACCACTACCTGAGCACCCAGTCCGCCCTGAGCAAAGACCCCAACGAGAAGCGCGATCACATGGTCCTGCTGGAGTTCGTGACCGCCGCCGGGATCACTCTCGGCATGGACGAGCTGTACAAGTAATAATAAGAGCTCGCTGATCAGCCTCGACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTGGGCTCTATGGttaattaaggtcgggcaggaagagggcctatttcccatgattccttcatatttgcatatacgatacaaggctgttagagagataattagaattaatttgactgtaaacacaaagatattagtacaaaatacgtgacgtagaaagtaataatttcttgggtagtttgcagttttaaaattatgttttaaaatggactatcatatgcttaccgtaacttgaaagtatttcgatttcttggctttatatatcttgtggaaaggacgaaacaccgAAGCCAAAGACCACAATCATCGTTTAAGTACTCTGTGCTGGAAACAGCACAGAATCTACTTAAACAAGGCAAAATGCCGTGTTTATCTCGTCAACTTGTTGGCGAGAttttttctaAAGCTTGAATTCAAGCTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCTAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGxxi. AAV 粒子
本揭示案尤其提供AAV粒子，其包含編碼本文所述之KCNQ4基因或其特徵部分及/或抑制性核酸序列的構築體，及本文所述之衣殼。在一些實施例中，AAV粒子可描述為具有血清型，其為構築體菌株(例如病毒組分例如ITR之血清型)及衣殼菌株之描述。舉例而言，在一些實施例中，AAV粒子可描述為AAV2，其中該粒子具有AAV2衣殼及包含特徵性AAV2反向末端重複序列(ITR)之構築體。在一些實施例中，AAV粒子可描述為假型，其中衣殼及構築體衍生自不同AAV菌株，例如AAV2/9指包含使用AAV2 ITR之構築體及AAV9衣殼的AAV粒子。在一些實施例中，AAV粒子描述為Anc80，其中粒子具有Anc80衣殼及AAV2 ITR。在一些實施例中，可例如如本文所提供描述構築體，而未在構築體之名稱中特別提及例如ITR之血清型；然而，熟習此項技術者藉由閱讀本揭示案將顯而易見給定構築體例如AAV2 ITR中存在何種類型之ITR。在一些實施例中，本揭示案之AAV粒子包含至少一種構築體，該構築體可為或包含本文所揭示之任何序列。 e. KCNQ4基因組編輯
在一些實施例中，基因組編輯系統靶向特定標靶位點內之核苷酸。在一些該等實施例中，標靶位點為或包含功能喪失之KCNQ4變體序列。
在一些實施例中，基因組編輯系統包含與KCNQ4基因產物中之標靶位點互補(例如與如下核苷酸序列互補，該核苷酸序列與SEQ ID NO: 1-10及/或25-30及/或90-91中任一者之一部分至少85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致)的核酸股或其特徵部分。在一些實施例中，標靶位點之長度可為15 – 30個核苷酸，例如長度為15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30個核苷酸，但亦涵蓋更短及更長之標靶位點。
在一些實施例中，基因組編輯系統包含如下核酸股，該核酸股包含與KCNQ4基因產物之至少6、7、8、9、10、11、12、13 14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30個連續核苷酸完全互補之區域。在一些實施例中，KCNQ基因產物為或包含SEQ ID NO: 1-10及/或25-30及/或90-91中之任一者或其特徵部分)。在一些實施例中，除人類KCNQ4外，該RNA引導之核酸酶系統能夠抑制一或多種非人類物種之KCNQ4，例如非人類靈長類動物KCNQ4，例如食蟹猴(Macaca fascicularis ) KCNQ4之表現。食蟹猴 KCNQ4基因已指定為NCBI Gene ID：102143586，且食蟹猴 KCNQ4之預測胺基酸及核苷酸序列分別以NCBI RefSeq登錄號XP_005543852及XM_005543795.2列出。
在一些實施例中，基因組編輯系統與如下標靶位點互補，在人類及食蟹猴 KCNQ4轉錄物中該標靶位點一致。在一些實施例中，基因組編輯系統與人類KCNQ4轉錄物之標靶位點互補，該標靶位點與食蟹猴 KCNQ4轉錄物中之序列相差1、2或3個核苷酸。應瞭解，靶向人類KCNQ4之基因組編輯系統亦可靶向非靈長類動物KCNQ4，例如大鼠或小鼠KCNQ4，尤其在靶向KCNQ4轉錄物之保守區時。i RNA 引導之核酸酶
根據本揭示案之RNA引導之核酸酶包括但不限於天然存在之2類CRISPR核酸酶諸如Cas9及Cpf1，以及自其衍生或獲得之其他核酸酶。在功能方面，RNA引導之核酸酶定義為如下彼等核酸酶：(a)與gRNA相互作用(例如複合)；及(b)與gRNA一起，與如下DNA之標靶區締合，且視情況裂解或修飾該標靶區，該標靶區包括(i)與gRNA之靶向域互補之序列，及視情況存在之(ii)稱為「原間隔子相鄰模體」或「PAM」之另一序列，該序列在本文中更詳細描述。
天然存在之CRISPR系統進化分為兩種類別及五種類型(Makarova等人, Nat Rev Microbiol. 2011年6月; 9(6): 467–477 (「Makarova」)，該文獻以全文引用之方式併入本文中)，且儘管本揭示案之基因組編輯系統可改適天然存在CRISPR系統之任何類型或類別之組分，但本文提供之實施例通常改適自2類及II型或V型CRISPR系統。涵蓋II型及V型之2類系統的特徵為相對大多域CRISPR蛋白(例如Cas9或Cpf1)及形成核糖核蛋白(RNP)複合物之一或多種gRNA (例如crRNA及視情況存在之tracrRNA)，該等複合物與特定基因座締合(亦即靶向該等特定基因座)且裂解該等特定基因座，該等特定基因組與crRNA之靶向(或間隔子)序列互補。根據本揭示案之基因組編輯系統類似地靶向且編輯細胞DNA序列，但與天然存在之CRISPR系統顯著不同。舉例而言，本文所述之單分子gRNA在自然界中不存在，且根據本揭示案之gRNA及CRISPR核酸酶均可併有任何數量之非天然存在修飾。
如本文所述，應注意，本揭示案之基因組編輯系統可靶向單一特異性核苷酸序列，或者可經由使用兩種或更多種gRNA靶向且能夠同時編輯兩個或更多個特異性核苷酸序列。在一些實施例中，使用多種gRNA稱為「多重化」。如本文所述，例如可採用多重化來靶向多個不相關關注標靶序列，或在單一標靶域內形成多個SSB或DSB，且在一些情況下，在該標靶域內產生特定編輯。舉例而言，Maeder等人之國際專利公開案第WO 2015/138510號，該案以全文引用之方式併入本文中；(「Maeder」)描述一種基因組編輯系統，該基因組編輯系統用於校正人類CEP290中之點突變(C.2991+1655A突變為G)以引起隱含剪接位點之產生，從而又減少或消除了該基因之功能。Maeder之基因組編輯系統使用靶向(亦即側接)點突變任一側之序列的兩種gRNA，且形成側接突變之DSB。此又促進包括突變之插入序列之缺失，從而消除隱含剪接位點且恢復正常基因功能。
作為另一實例，Cotta-Ramusino等人之WO 2016/073990 (「Cotta-Ramusino」)，該專利以全文引用之方式併入本文中。Cotta-Ramusino描述一種基因組編輯系統，該基因組編輯系統使用兩種gRNA與Cas9切口酶(一種形成單股切口之Cas9，諸如化膿性鏈球菌(S. pyogenes ) D10A)之組合，一種稱為「雙切口酶系統」之配置。Cotta-Ramusino之雙切口酶系統經組態在關注序列之相對股上形成兩個切口，該等切口由一或多個核苷酸抵消，該等切口組合產生具有突出端之雙股斷裂(在Cotta-Ramusino之情況下為5'，但3'突出端亦可行)。該突出端在一些情況下又可有利於同源性指導之修復事件。且，作為另一實例，Palestrant等人之WO 2015/070083，該專利以全文引用之方式併入本文中(「Palestrant「)描述靶向編碼Cas9之核苷酸序列的gRNA (稱為「調節RNA」)，該gRNA可包括在包含一或多種其他gRNA之基因組編輯系統中以允許Cas9之瞬時表現，否則Cas9可組成性表現，例如在一些病毒轉導細胞中。此等多重化應用旨在為例示性的而非限制性的，且熟習此項技術者應瞭解，多重化之其他應用通常與本文描述之基因組編輯系統相容。
在一些情況下，基因組編輯系統可形成雙股斷裂，該等雙股斷裂藉由細胞DNA雙股斷裂機制諸如NHEJ或HDR修復。此等機制描述於整個文獻中，例如Davis & Maizels, PNAS, 111(10):E924-932, 3月11日, 2014，該文獻以全文引用之方式併入本文中(「Davis」) (描述Alt-HDR)；Frit等人, DNA Repair 17(2014) 81-97，該文獻以全文引用之方式併入本文中(「Frit」) (描述Alt-NHEJ)；以及Iyama及Wilson III, DNA Repair (Amst.) 2013年8月; 12(8): 620-636，該文獻以全文引用之方式併入本文中(「Iyama」) (大體上描述典型HDR及NHEJ路徑)。
倘若基因組編輯系統藉由形成DSB進行操作，則該等系統視情況包括促進或有利於雙股斷裂修復之特定模式或特定修復結果的一或多種組分。舉例而言，Cotta-Ramusino亦描述添加有單股寡核苷酸「供體範本」之基因組編輯系統；將供體範本併入由基因組編輯系統裂解之細胞DNA之標靶區中，且可使標靶序列改變。
在一些實施例中，基因組編輯系統修飾標靶序列，或修飾標靶序列中或附近之基因表現，而不會引起單股或雙股斷裂。舉例而言，基因組編輯系統可包括CRISPR蛋白，該CRISPR蛋白與作用於DNA之功能域融合，從而修飾標靶序列或改變其表現。作為一個實例，CRISPR蛋白可連接於(例如融合於)胞苷去胺酶功能域，且可藉由產生靶向C-A取代來操作。例示性核酸酶/去胺酶融合描述於Komor等人, Nature 533, 420–424 (2016年5月19日) (「Komor」)中，該文獻以全文引用之方式併入本文中。在一些實施例中，基因組編輯系統可使用裂解失活(亦即「滅活」)核酸酶，諸如滅活Cas9 (dCas9)，且可藉由以下來操作：在細胞DNA之一或多個靶向區上形成穩定複合物，從而干擾涉及靶向區之功能，包括但不限於mRNA轉錄、染色質重塑等。在一些實施例中，基因組編輯系統可自失活以改良安全特徵，如線上公開(2018年12月6日)之Li等人, 「A Self-Deleting AAV-CRISPR System forIn vivo Editing」 Mol Ther Methods Clin Dev. 2019年3月15日; 12: 111–122所述，該文獻以全文引用之方式藉此併入。
如以下實例將說明，RNA引導之核酸酶可藉由其PAM特異性及裂解活性在廣義上定義，即使共有相同PAM特異性或裂解活性之個別RNA引導之核酸酶之間可存在變化。熟習此項技術者應瞭解，本揭示案之一些態樣係關於可使用具有某種PAM特異性及/或裂解活性之任何合適RNA引導之核酸酶來實施的系統、方法及組成物。因此，除非另外規定，否則術語RNA引導之核酸酶應理解為通用術語，而不限於RNA引導之核酸酶的任何特定類型(例如Cas9與Cpf1)、物種(例如化膿性鏈球菌 與金黃色葡萄球菌 等)或變化(例如全長與截短或分割形式；天然存在之PAM特異性與工程改造之PAM特異性等)。在一些實施例中， CRISPR/Cas衍生自II型CRISPR/Cas系統。在一些實施例中， CRISPR/Cas系統衍生自Cas9蛋白。Cas9蛋白可來自化膿性鏈球菌 （ Streptococcus pyogenes ）、嗜熱鏈球菌 (Streptococcus thermophilus) 、金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus )、空腸彎麴菌(Campylobacter jejuni )或其他物種。在一些實施例中，Cas9可包括：spCas9、Cpf1、CasY、CasX、saCas9或CjCas9。
在人類中投與細菌Cas9存在免疫原性問題。因此，開發如本文所述經密碼子最佳化之CRISPR系統以降低免疫原性很重要。此外，一些其他限制包括需要使用兩種構築體系統(而非單一構築體系統，諸如shRNA及miRNA方案中所用)，以及確定脫靶風險(例如即使使用dCas9來減少KCNQ4之表現，亦存在除KCNQ4外之其他標靶可受抑制)。
PAM序列之名稱取自其與「原間隔子」序列之順序關係，該「原間隔子」序列與gRNA靶向域(或「間隔子」)互補。PAM序列與原間隔子序列一起定義特定RNA引導之核酸酶/gRNA組合的標靶區或序列。
各種RNA引導之核酸酶可需要PAM與原間隔子之間的不同順序關係。一般而言，Cas9識別作為原間隔子之3'端的PAM序列。另一方面，Cpf1通常識別作為原間隔子之5'端的PAM序列。
除識別PAM及原間隔子之特定順序定向外，RNA引導之核酸酶亦可識別特定PAM序列。舉例而言，金黃色葡萄球菌 Cas9識別NNGRRT或NNGRRV之PAM序列，其中N殘基緊鄰gRNA靶向域識別之區域的3'端。化膿性鏈球菌 Cas9識別NGG PAM序列。且新兇手法蘭西斯菌 Cpf1識別 TTN PAM序列。已為多種RNA引導之核酸酶鑑別PAM序列，且Shmakov等人, 2015, Molecular Cell 60, 385–397, 2015年11月5日描述用於鑑別新型PAM序列之策略。亦應注意，經工程改造之RNA引導核酸酶的PAM特異性可不同於參考分子之PAM特異性(例如在經工程改造之RNA引導核酸酶之情況下，參考分子可為衍生出RNA引導之核酸酶的天然存在變體，或與經工程改造之RNA引導核酸酶具有最大胺基酸序列同源性的天然存在變體)。
除PAM特異性外，RNA引導之核酸酶亦可藉由其DNA裂解活性來表徵：天然存在之RNA引導核酸酶典型地在標靶核酸中形成DSB，但已產生僅產生SSB (如上所述，Ran及Hsu等人, Cell 154(6), 1380–1389, 2013年9月12日 (「Ran」)) 或完全不切割之經工程改造變體。CRISPR 融合蛋白
如本文所述，在一些實施例中，CRISPR核酸酶為包含一或多個異源蛋白域(例如約或超過約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10個或更多個除CRISPR核酸酶外之域)之融合蛋白的一部分。CRISPR核酸酶融合蛋白可包含任何其他蛋白序列，以及任何兩個域之間視情況存在之連接子序列。可與CRISPR核酸酶融合之蛋白域的實例包括但不限於抗原決定基標籤、報告基因序列及具有以下活性中之一或多者的蛋白域：甲基化酶活性、去甲基酶活性、轉錄活化活性、轉錄抑制活性、轉錄釋放因數活性、組蛋白修飾活性、RNA裂解活性及核酸結合活性。可形成包含CRISPR核酸酶之融合蛋白之一部分的其他域描述於US20110059502中，該專利以引用之方式併入本文中。在一些實施例中，使用經標記CRISPR核酸酶鑑別標靶序列之位置。在一些實施例中，將為融合蛋白之一部分的CRISPR核酸酶工程改造以如本文所述僅產生SSB。在一些實施例中，將為融合蛋白之一部分的CRISPR核酸酶工程改造以如本文所述完全不切割。CRISPR 變體
一般而言，RNA引導之核酸酶包含至少一個RNA識別及/或RNA結合域。RNA識別及/或RNA結合域與引導RNA相互作用。CRISPR/Cas蛋白亦可包含核酸酶域(亦即DNase或RNase域)、DNA結合域、解旋酶域、RNAse域、蛋白質-蛋白質相互作用域、二聚域以及其他域。RNA引導之核酸酶可經修飾以增加核酸結合親和力及/或特異性，改變酶促活性，及/或改變蛋白質之另一特性。在一些實施例中，融合蛋白中之CRISPR/Cas樣蛋白可衍生自野生型Cas9蛋白或其片段。在其他實施例中，CRISPR/Cas可衍生自經修飾Cas9蛋白。舉例而言，Cas9蛋白之胺基酸序列可經修飾以改變蛋白質之一或多種特性(例如核酸酶活性、親和力、穩定性等)。替代地，可自蛋白質中消除不參與RNA引導之裂解的Cas9蛋白之域，使得經修飾Cas9蛋白小於野生型Cas9蛋白。一般而言，Cas9蛋白包含至少兩個核酸酶(亦即DNase)域。舉例而言，Cas9蛋白可包含RuvC樣核酸酶域及HNH樣核酸酶域。RuvC及HNH域共同作用以切割單股而在DNA中產生雙股斷裂(Jinek等人, 2012, Science, 337:816-821,該文獻以全文引用之方式併入本文中)。
在一些實施例中，衍生自Cas9之蛋白可經修飾以僅包含一個功能性核酸酶域(RuvC樣或HNH樣核酸酶域)。舉例而言，衍生自Cas9之蛋白可經修飾以使得一個核酸酶域缺失或突變，從而使其不再具有功能(亦即，不存在核酸酶活性)。在一個核酸酶域失活之一些實施例中，衍生自Cas9之蛋白能夠將切口引入雙股核酸(該蛋白質稱為「切口酶」)中，但是不裂解雙鏈DNA。在上述實施例中之任一者中，任何或所有核酸酶域可使用熟知方法，諸如定點突變誘發、PCR介導之突變誘發及總基因合成以及此項技術中已知之其他方法，藉由一或多種缺失突變、插入突變及/或取代突變失活。
用於抑制基因表現之CRISPR/Cas9系統之一實例，CRISPRi，描述於美國公開案第US2014/0068797號，該案以全文引用之方式併入本文中。CRISPRi誘導永久基因破壞，其使用RNA引導之Cas9核酸內切酶引入DNA雙股斷裂，從而觸發易於出錯之修復路徑，以引起移碼突變。催化滅活Cas9缺乏核酸內切酶活性。當與gRNA共表現時，產生DNA識別複合物，其特異性干擾轉錄延伸、RNA聚合酶結合或轉錄因數結合。此CRISPRi系統有效抑制靶向基因之表現。ii. 引導 RNA (gRNA) gRNA 序列選擇
gRNA序列可特異於任何基因，諸如會影響(例如改善、改良、減弱、減輕)聽力損失之基因。在一些實施例中，基因編碼離子通道亞基。在一些該等實施例中，基因為KCNQ4。在一些實施例中，gRNA序列包括RNA序列、DNA序列、其組合(RNA-DNA組合序列)或具有合成核苷酸之序列。gRNA序列可為單分子或雙分子。在一個實施例中，gRNA序列包含單一引導RNA (sgRNA)。
在一些實施例中，gRNA序列特異於基因，且靶向該基因之Cas核酸內切酶誘導之雙股斷裂。gRNA之序列可在基因之基因座內。在一個實施例中，gRNA序列之長度為至少10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40個或更多個核苷酸。在一些實施例中，gRNA序列之長度為約18至約22個核苷酸。
如本文所述，在一些實施例中，在形成CRISPR複合物之情況下，「標靶序列」指引導序列經設計與之具有某種互補性之序列，其中標靶序列與引導序列之間的雜交促進CRISPR複合物之形成。不一定需要完全互補，只要存在足以引起雜交且促進CRISPR複合物形成之互補性即可。標靶序列可包含任何多核苷酸，諸如DNA或RNA多核苷酸。在一些實施例中，標靶序列位於細胞之核或細胞質中。在其他實施例中，標靶序列可在真核細胞之胞器例如粒線體或細胞核內。典型地，在內源CRISPR系統之情況下，CRISPR複合物(包含與標靶序列雜交且與一或多種Cas蛋白複合之引導序列)之形成使標靶序列中或附近(例如在約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、50個或更多個鹼基對內)之一或兩條股裂解。如標靶序列一般，認為不需要完全互補，只要其足以起作用即可。在一些實施例中，在最佳比對時，tracr序列沿tracr配對序列之長度具有至少 50%、60%、70%、80%、90%、95%或99%之序列互補性。
在一些實施例中，gRNA序列靶向KCNQ4基因。表 2.
序列編號 名稱 5'-gRNA 標靶序列 -3'
SEQ ID NO: 42 引導RNA # 386Fw aggagcaccaggaacttgcca
SEQ ID NO: 43 引導RNA # 408Rev    AAGCCGAAAACCACGATCATC
SEQ ID NO: 44 引導RNA # 233Fw GCGCTACCGCCGCCTGCAGAA
SEQ ID NO: 45 引導RNA # 447Fw TTTCGGCTTGGAGTACATCGT
SEQ ID NO: 46 引導RNA # 482Fw CCGGATGCTGCTGCCGCTACC
SEQ ID NO: 47 引導RNA # 490Fw TGCTGCCGCTACCGAGGATGG
gRNA 設計
先前已在如下文獻中描述用於選擇及驗證標靶序列之方法以及脫靶分析，例如Mali; Hsu; Fu等人, 2014 Nat biotechnol 32(3): 279-84，Heigwer等人, 2014 Nat methods 11(2):122-3；Bae等人 (2014) Bioinformatics 30(10): 1473-5；及Xiao A等人 (2014) Bioinformatics 30(8): 1180-1182，其每一者均以全文引用之方式併入本文中。作為非限制性實例，gRNA設計可涉及使用軟體工具來最佳化與使用者之標靶序列相對應的潛在標靶序列的選擇，例如以最小化基因組中之總脫靶活性。儘管脫靶活性不限於裂解，但可例如使用源自實驗之加權方案來預測各脫靶序列之裂解效率。此等及其他引導選擇方法詳細描述於Maeder及Cotta-Ramusino中。
舉例而言，可使用cas-offinder (Bae S, Park J, Kim J-S. Cas-OFFinder: a fast and versatile algorithm that searches for potential off-target sites of Cas9 RNA-guided endonucleases. Bioinformatics. 2014;30:1473–5，該文獻以全文引用之方式併入本文中)執行用於選擇及驗證標靶序列之方法以及脫靶分析。Cas-offinder為一種工具，其可快速鑑別基因組中與引導序列具有多達指定數量之錯配的所有序列。
作為另一實例，可執行用於對給定序列成為脫靶物之可能性評分的方法(例如在鑑別出候選標靶序列後)。例示性評分包括切割頻率確定(CFD)評分，如Doench JG, Fusi N, Sullender M, Hegde M, Vaimberg EW, Donovan KF等人, Optimized sgRNA design to maximize activity and minimize off-target effects of CRISPR-Cas9. Nat Biotechnol. 2016;34:184–91所述，該文獻以全文引用之方式併入本文中。gRNA 修飾
可經由併入某些修飾來改變gRNA之活性、穩定性或其他特徵。作為一個實例，瞬時表現或遞送之核酸可易於由例如細胞核酸酶降解。因此，本文所述之gRNA可含有可引入對核酸酶之穩定性的一或多種經修飾核苷或核苷酸。儘管不希望受理論束縛，但亦相信，本文所述之某些經修飾gRNA在引入細胞中時可展現出降低之先天免疫反應。熟習此項技術者將知曉在細胞，例如哺乳動物細胞中通常觀察到之響應於外源核酸，尤其病毒或細菌來源之外源核酸的某些細胞反應。可藉由本文提供之修飾來減少或完全消除該等反應，該等反應可包括誘導細胞因數表現及釋放以及細胞死亡。
本節中討論之某些例示性修飾可包括在gRNA序列內之任何位置處，包括但不限於其5'末端處或附近(例如在5'末端之1-10、1-5或1-2個核苷酸內) 及/或其3'末端處或附近(例如在3'末端之1-10、1-5或1-2個核苷酸內)。在一些情況下，修飾位於功能性模體內，諸如Cas9 gRNA之重複-抗重複雙鏈體、Cas9或Cpf1 gRNA之莖環結構及/或gRNA之靶向域。本文描述經修飾核鹼基之其他類型。 f. KCNQ4敲低
本揭示案提供如下技術(例如包含組成物)，其可在一些實施例中減少、抑製或以其他方式減少(「敲低」)一或多種基因產物之表現。舉例而言，在一些實施例中，本揭示案之技術可達成KCNQ4基因產物(例如KCNQ4基因、mRNA、蛋白等)之敲低。在一些實施例中，KCNQ4基因產物可為野生型KCNQ4，或者相對於野生型序列可具有一或多種突變，例如功能喪失KCNQ4變體。
在一些實施例中，使用一或多種抑制一或多種基因產物或產生基因產物之過程的技術來達成KCNQ4基因產物(例如KCNQ4基因、mRNA、蛋白等)之敲低。舉例而言，在一些實施例中，本揭示案提供包含如下組成物之技術，該等組成物為或包含抑制性核酸分子以敲低基因產物(例如KCNQ4基因產物)之表現。
在一些實施例中，抑制性核酸分子靶向KCNQ4基因產物內之核苷酸。
在一些實施例中，抑制性核酸分子包含與KCNQ4基因產物，例如KCNQ4 mRNA之標靶位點互補(例如與如下核苷酸序列互補，該核苷酸序列與 SEQ ID NO: 1-10及/或25-30及/或90-91之一部分至少85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致)的核酸股。在一些實施例中，標靶位點之長度可為15 – 30個核苷酸，例如長度為15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30個核苷酸，但亦涵蓋更短及更長之標靶位點。
在一些實施例中，抑制性核酸分子包含如下核酸股或其特徵部分，該核酸股包含與SEQ ID NO: 1-10或25-30或90-91中之任一者之至少6、7、8、9、10、11、12、13 14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30個連續核苷酸完全互補之區域。
在一些實施例中，除人類KCNQ4外，抑制性核酸分子能夠抑制一或多種非人類物種之KCNQ4基因產物，例如非人類靈長類動物KCNQ4，例如食蟹猴(Macaca fascicularis ) KCNQ4之表現。食蟹猴 KCNQ4基因已指定為NCBI Gene ID：102143586，且食蟹猴 KCNQ4之預測胺基酸及核苷酸序列分別以NCBI RefSeq登錄號XP_005543852.2及XM_005543795.2列出。在一些實施例中，抑制性RNA分子或基因組編輯系統與如下標靶部分互補，在人類及食蟹猴 KCNQ4轉錄物中該標靶部分一致。在一些實施例中，抑制性RNA分子與人類KCNQ4轉錄物之標靶位點互補，該標靶位點與食蟹猴 KCNQ4轉錄物中之序列相差1、2或3個核苷酸。應瞭解，抑制人類KCNQ4基因產物之表現的抑制性RNA分子亦可抑制非靈長類動物KCNQ4，例如大鼠或小鼠KCNQ4之表現，尤其在靶向KCNQ4轉錄物之保守區時。i 抑制性核酸分子
RNA干擾(RNAi)為序列特異性轉錄後基因沉默之過程，藉由該過程，例如與標靶基因座同源之雙股RNA (dsRNA)可使基因功能特異性失活(Hammond等人, Nature Genet. 2001; 2:110-119；Sharp, Genes Dev. 1999; 13:139-141)。舉例而言，靶向內含子-3XmiR、polyA-3XmiR或內含子-3XmiR與PolyA-3XmiR兩者之shRNA的位置定位降低PIZ血清水準 (相較於GFP對照之敲低%)(Mueller等人, 2012)。如本文所述，測試且評價miRNA之位置影響。在一些實施例中，dsRNA誘導之基因沉默可由藉由核糖核酸酶III裂解自較長dsRNA 產生之短雙股小干擾RNA (siRNA)介導(Bernstein等人, Nature 2001; 409:363-366及Elbashir等人, Genes Dev. 2001; 15:188-200)。在不受任何特定理論限制之情況下，認為RNAi介導之基因沉默經由序列特異性RNA降解發生，其中序列特異性藉由siRNA與標靶RNA中siRNA之互補序列的相互作用來確定(參見，例如Tuschl, Chem. Biochem. 2001; 2:239-245)。在一些實施例中，RNAi可涉及使用例如siRNA (Elbashir等人, Nature 2001; 411: 494-498，該文獻以全文引用之方式併入本文中)或具有向後折疊莖環結構之短髮夾RNA (shRNA)(Paddison等人, Genes Dev. 2002; 16: 948-958；Sui等人, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 2002; 99:5515-5520；Brummelkamp等人, Science 2002; 296:550-553；Paul等人, Nature Biotechnol. 2002; 20:505-508，其中每一者以全文引用之方式併入本文中)。
在一些實施例中，根據本揭示案，抑制性核酸分子基於患者設計。舉例而言，在一些實施例中，可對具有聽力損失史(例如父母患有聽力損失或具有聽力損失之症狀)或具有聽力損失風險之患者進行一或多種基因之一或多種變體(例如對樣品進行診斷性分析)(例如取代、添加、缺失等)的評價。在一些該等實施例中，鑑別之變體(例如突變)可為新穎的(亦即，文獻中先前未描述)，且抑制性核酸治療劑將根據特定患者之變體(例如突變)個性化。
在一些實施例中，抑制性核酸為短干擾RNA (siRNA)、短髮夾RNA (shRNA)、反義寡核苷酸或核酶中之一或多者。在一些實施例中，經由靶向如本文所述之KCNQ4序列的抑制性核酸來達成KCNQ4表現之敲低。在一些該等實施例中，靶向KCNQ4序列可為野生型及/或病原性KCNQ4變體基因產物。
在一些實施例中，本揭示案之抑制性核酸可用於減少KCNQ4基因產物(例如功能喪失KCNQ4變體基因產物)之表現。在一些該等實施例中，構築體編碼抑制性核酸，該抑制性核酸在一些實施例中可例如減少人類細胞(例如毛細胞，例如外毛細胞)中KCNQ4基因產物之表現。本文提供可減少例如人類細胞(例如毛細胞，例如外毛細胞)中之KCNQ4基因產物之表現的siRNA之非限制性實例。在一些實施例中，當使用抑制性核酸減少功能喪失KCNQ4變體基因產物之表現後，可使用另一(亦即非抑制性)核酸分子表現功能性KCNQ4蛋白。本揭示案認識到，在一些該等實施例中，預期野生型或其他功能性(例如經密碼子最佳化) KCNQ4基因產物可易受miRNA降解之影響。因此，在一些該等實施例中，用於表現功能性KCNQ4基因產物之KCNQ4序列可為經密碼子最佳化之KCNQ4序列。siRNA 或 shRNA
在一些實施例中，本揭示案提供抑制性核酸，例如經化學修飾siRNA或構築體驅動之短髮夾RNA (shRNA)之表現，該等shRNA隨後例如在細胞內裂解為siRNA。因此，熟習此項技術者應瞭解，出於序列目的，shRNA序列可與siRNA序列互換，且在本揭示案涉及siRNA之情況下，可使用shRNA序列，因為shRNA將裂解為siRNA。舉例而言，在一些實施例中，抑制性核酸可為各股中包括16-30個核苷酸，例如16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30個核苷酸的dsRNA (例如siRNA)，其中一條股與鉀通道(例如Kv7.4)編碼mRNA中之標靶區域大體上一致，例如至少80% (或更多，例如85%、90%、95%或100%) 一致，例如具有3、2、1或0個錯配之核苷酸，且另一條股與第一股互補。在一些實施例中，可使用此項技術中已知之方法，例如Dharmacon.com (參見siDESIGN CENTER)或可在網際網路之mpibpc.gwdg.de/abteilungen/100/105/sirna.html網站上獲得的「The siRNA User Guide」 (其以全文引用之方式併入本文中)設計dsRNA分子。在不受任何特定理論限制之情況下，本揭示案預期siRNA或shRNA以與熟習此項技術者已知之其他可用技術相比更可由細胞識別之方式更具「內源性」(例如無外來蛋白質)。因此，在一些實施例中，siRNA或shRNA與熟習此項技術者已知之其他技術相比具有較低免疫原性及/或具有較少脫靶DNA裂解風險。
細胞內自構築體表現siRNA雙鏈體以在細胞中達成長期標靶基因抑制之數種方法為此項技術中已知，例如包括使用哺乳動物Pol III啟動子系統之構築體(例如用以表現功能性雙股siRNA之H1或U6/snRNA啟動子系統(Tuschl, Nature Biotechnol., 20:440-448, 2002，該文獻以全文引用之方式併入本文中)；(Bagella等人, J. Cell. Physiol., 177:206–213, 1998；Lee等人, Nature Biotechnol., 20:500-505, 2002；Paul等人, Nature Biotechnol., 20:505-508, 2002；Yu等人, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 99(9):6047-6052, 2002；Sui等人, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 99(6):5515-5520, 2002，其中之每一者以全文引用之方式併入本文中))。由RNA Pol III進行之轉錄終止發生在DNA範本中四個連續T殘基之操作中，且可用於提供以特定序列終止siRNA轉錄之機制。siRNA與標靶基因之序列在5'-3'及3'-5'方向上互補，且給定siRNA之兩條股可在同一構築體中或在各別構築體中表現。由H1或U6 snRNA啟動子驅動且在細胞中表現之髮夾siRNA可抑制標靶基因表現(Bagella等人, 1998, 見上文；Lee等人, 2002, 見上文；Paul等人, 2002, 見上文；Yu等人, 2002, 見上文；Sui等人, 2002, 見上文)。
在一些實施例中，本揭示案之siRNA為雙股核酸雙鏈體(具有例如15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26或27個鹼基對)，其包含經退火互補單股核酸分子。在一些實施例中，siRNA為包含經退火互補單股RNA之短dsRNA。在一些實施例中，siRNA包含經退火RNA:DNA雙鏈體，其中雙鏈體之有義股為DNA分子，且同一雙鏈體之反義股為RNA分子。
在一些實施例中，具有雙鏈體之siRNA在雙鏈體之各股上包含2或3個核苷酸3'突出端。在一些實施例中，siRNA包含5'-磷酸及3'-羥基。
在一些實施例中，本揭示案之siRNA分子包括一或多種天然核鹼基及/或衍生自天然核鹼基之一或多種經修飾核鹼基。實例包括但不限於尿嘧啶、胸腺嘧啶、腺嘌呤、胞嘧啶及鳥嘌呤，其各別胺基經醯基保護基保護；2-氟尿嘧啶；2-氟胞嘧啶；5-溴尿嘧啶；5-碘尿嘧啶；2,6-二胺基嘌呤；氮雜胞嘧啶；嘧啶類似物(諸如假異胞嘧啶及假尿嘧啶)；以及其他經修飾核鹼基，諸如8-取代之嘌呤、黃嘌呤或次黃嘌呤(後兩者為天然降解產物)。例示性經修飾核鹼基揭示於以下中：Chiu及Rana, RNA, 2003, 9, 1034-1048，Limbach 等人, Nucleic Acids Research, 1994, 22, 2183-2196以及Revankar及Rao, Comprehensive Natural Products Chemistry, 第7卷, 313，其中每一者以全文引用之方式併入本文中。
經修飾核鹼基亦包括尺寸擴大之核鹼基，其中已添加一或多個芳基環，諸如苯環。Glen Research目錄(全球資訊網之glenresearch.com上可獲得); Krueger AT等人, Acc. Chem. Res., 2007, 40, 141-150；Kool, ET, Acc. Chem. Res., 2002, 35, 936-943；Benner S.A.等人, Nat. Rev. Genet., 2005, 6, 553-543；Romesberg, F.E.等人, Curr. Opin. Chem. Biol., 2003, 7, 723-733；Hirao, I., Curr. Opin. Chem. Biol., 2006, 10, 622-627中所述之核酸鹼基置換預期適用作本文所述之siRNA分子，其中每一者以原文引用之方式併入本文中。在一些實施例中，經修飾核鹼基亦涵蓋認為不為核鹼基而未其他部分之結構，諸如但不限於衍生自柯林或卟啉之環。衍生自卟啉之鹼基置換已描述於Morales-Rojas, H及Kool, ET, Org. Lett., 2002, 4, 4377-4380中，該文獻以全文引用之方式併入本文中。
在一些實施例中，經修飾核鹼基具有以下結構中之任一者，其視情況經取代：
Figure 02_image001
在一些實施例中，經修飾核鹼基為螢光核鹼基。例示性之該等螢光經修飾核鹼基包括菲、芘、茋、黃嘌呤、異黃喋呤、聯三苯、聯三噻吩、苯並聯三噻吩、香豆素、二氧四氫喋啶、系拴茋、苯並尿嘧啶及萘並尿嘧啶，如下所示：
Figure 02_image003
在一些實施例中，經修飾核鹼基未取代。在一些實施例中，經修飾核鹼基經取代。在一些實施例中，經修飾核鹼基經取代，使得其含有例如雜原子、烷基或者連接於螢光部分、生物素或抗生物素蛋白部分或其他蛋白質或肽之連接部分。在一些實施例中，經修飾核鹼基為「通用鹼基」，其在最經典意義上不為核鹼基，但其功能類似於核鹼基。該通用鹼基之一種代表性實例為3-硝基吡咯。
在一些實施例中，本文所述之siRNA分子包括併有經修飾核鹼基及/或共價結合於經修飾糖之核鹼基的核苷。併有經修飾核鹼基之核苷的一些實例包括4-乙醯基胞苷；5-(羧基羥基甲基)尿苷；2′-O -甲基胞苷；5-羧基甲基胺基甲基-2-硫尿苷；5-羧基甲基胺基甲基尿苷；二氫尿苷；2'-O -甲基假尿苷；β,D-半乳糖基辮苷(beta,D-galactosylqueosine)；2′-O -甲基鳥苷；N 6 -異戊烯基腺苷；1-甲基腺苷；1-甲基假尿苷；1-甲基鳥苷；l-甲基肌苷；2,2-二甲基鳥苷；2-甲基腺苷；2-甲基鳥苷；N 7 -甲基鳥苷；3-甲基-胞苷；5-甲基胞苷；5-羥基甲基胞苷；5-甲醯基胞嘧啶；5-羧基胞嘧啶；N 6 -甲基腺苷；7-甲基鳥苷；5-甲基胺基乙基尿苷；5-甲氧基胺基甲基-2-硫尿苷；β,D-甘露糖基辮苷；5-甲氧基羰基甲基尿苷；5-甲氧基尿苷；2-甲基硫基-N 6 -異戊烯基腺苷；N -((9-β,D-呋喃核糖基-2-甲基硫嘌呤-6-基)胺甲醯基)蘇胺酸；N -((9-β,D-呋喃核糖基嘌呤-6-基)-N -甲基胺甲醯基)蘇胺酸；尿苷-5-氧基乙酸甲酯；尿苷-5-氧基乙酸(v)；假尿苷；辮苷；2-硫胞苷；5-甲基-2-硫尿苷；2-硫尿苷；4-硫尿苷；5-甲基尿苷；2′-O -甲基-5-甲基尿苷；及2′-O -甲基尿苷。
在一些實施例中，核苷包括6'修飾之雙環核苷類似物，其在6′位具有(R )或(S )對掌性，且包括美國專利第7,399,845號中描述之類似物，該專利以全文引用之方式併入本文中。在其他實施例中，核苷包括5'修飾之雙環核苷類似物，其在5′位具有(R )或(S )對掌性，且包括美國公開案第20070287831號中描述之類似物，該專利以全文引用之方式併入本文中。在一些實施例中，核鹼基或經修飾核鹼基為5-溴尿嘧啶、5-碘尿嘧啶或2,6-二胺基嘌呤。在一些實施例中，藉由用螢光部分取代來修飾核鹼基或經修飾核鹼基。
製備經修飾核鹼基之方法描述於例如以下中：美國專利第3,687,808號；第4,845,205號；第5,130,30號；第5,134,066號；第5,175,273號；第5,367,066號；第5,432,272號；第5,457,187號；第5,457,191號；第5,459,255號；第5,484,908號；第5,502,177號；第5,525,711號；第5,552,540號；第5,587,469號；第5,594,121、5,596,091號；第5,614,617號；第5,681,941號；第5,750,692號；第6,015,886號；第6,147,200號；第6,166,197號；第6,222,025號；第6,235,887號；第6,380,368號；第6,528,640號；第6,639,062號；第6,617,438號；第7,045,610號；第7,427,672號；第7,495,088號，其中每一者以全文引用之方式併入本文中。
在一些實施例中，本文所述之siRNA分子包括一或多種經修飾核苷酸，其中其核苷酸中之磷酸基或連接磷與糖或經修飾糖之多個位置連接。作為非限制性實例，磷酸基或連接磷可與糖或經修飾糖之2'、3'、4'或5'羥基部分連接。本文中亦涵蓋併有如本文所述之經修飾核鹼基的核苷酸。
也可將其他經修飾糖併入siRNA分子內。在一些實施例中，經修飾糖在2'位含有一或多個取代基，該等取代基包括以下中之一或多者：–F；–CF3 、–CN、–N3 、–NO、–NO2 、–OR'、–SR'或–N(R')2 ，其中各R'獨立地如上文所定義且如本文所述；–O–(C1 –C10 烷基)、–S–(C1 –C10 烷基)、–NH–(C1 –C10 烷基)或–N(C1 –C10 烷基)2 ；–O–(C2 –C10 烯基)、–S–(C2 –C10 烯基)、–NH–(C2 –C10 烯基)或–N(C2 –C10 烯基)2 ；–O–(C2 –C10 炔基)、–S–(C2 –C10 炔基)、–NH–(C2 –C10 炔基)或–N(C2 –C10 炔基)2 ；或–O-(C1 –C10 烷撐基)–O-(C1 –C10 烷基)、–O–(C1 –C10 烷撐基)–NH–(C1 –C10 烷基)或–O–(C1 –C10 烷撐基)–NH(C1 –C10 烷基)2 、–NH–(C1 –C10 烷撐基)–O–(C1 –C10 烷基)或–N(C1 –C10 烷基)–(C1 –C10 烷撐基)–O–(C1 –C10 烷基)，其中烷基、烷撐基、烯基及炔基可經取代或未取代。取代基之實例包括且不限於–O(CH2 )n OCH3 及–O(CH2 )n NH2 ，其中n為1至約10、MOE、DMAOE、DMAEOE。本文亦涵蓋WO 2001/088198；及Martin等人, Helv. Chim. Acta, 1995, 78, 486-504中描述之經修飾糖，其中每一者以全文引用之方式併入本文中。在一些實施例中，經修飾糖包含一或多個選自以下之基團：經取代矽基、RNA裂解基團、報告基團、螢光標記、嵌入劑、用於改良核酸之藥物動力學特性的基團、用於改良核酸之藥效動力學特性的基團或者具有類似特性之其他取代基。在一些實施例中，在糖或經修飾糖之2'、3'、4'、5'或6'位中之一或多者處進行修飾，包括在糖之3'末端核苷酸上的3'位或5'末端核苷酸之5'位中。
在一些實施例中，核糖之2'-OH經取代基取代，該取代基包括以下中之一者：-H、–F；–CF3 、–CN、–N3 、–NO、–NO2 、–OR'、–SR'或–N(R')2 ，其中各R'獨立地如上文所定義且如本文所述；–O–(C1 –C10 烷基)、–S–(C1 –C10 烷基)、–NH–(C1 –C10 烷基)或–N(C1 –C10 烷基)2 ；–O–(C2 –C10 烯基)、–S–(C2 –C10 烯基)、–NH–(C2 –C10 烯基)或–N(C2 –C10 烯基)2 ；–O–(C2 –C10 炔基)、–S–(C2 –C10 炔基)、–NH–(C2 –C10 炔基)或–N(C2 –C10 炔基)2 ；或–O-(C1 –C10 烷撐基)–O-(C1 –C10 烷基)、–O–(C1 –C10 烷撐基)–NH–(C1 –C10 烷基)或–O–(C1 –C10 烷撐基)–NH(C1 –C10 烷基)2 、–NH–(C1 –C10 烷撐基)–O–(C1 –C10 烷基)或–N(C1 –C10 烷基)–(C1 –C10 烷撐基)–O–(C1 –C10 烷基)，其中烷基、烷撐基、烯基及炔基可經取代或未取代。在一些實施例中，2'-OH經-H取代(去氧核糖)。在一些實施例中，2'-OH經-F置換。在一些實施例中，2'-OH經–OR'置換。在一些實施例中，2'-OH經–OMe置換。在一些實施例中，2'-OH經–OCH2 CH2 OMe置換。
經修飾糖亦包括鎖核酸(LNA)。在一些實施例中，鎖核酸具有下示結構。指示以下結構之鎖核酸，其中Ba表示本文所述之核鹼基或經修飾核鹼基，且其中R2s 為-OCH2 C4'- 。
Figure 02_image005
在一些實施例中，經修飾糖為ENA，諸如在例如Seth等人, J Am Chem Soc. 2010年10月27日; 132(42): 14942–14950中所述之彼等ENA，該文獻以全文引用之方式併入本文中。在一些實施例中，經修飾糖為在XNA (異種核酸)中發現之任一者，例如阿拉伯糖、脫水己糖醇、蘇糖、2'氟阿拉伯糖或環己烯。
經修飾糖包括糖模擬物，諸如替代呋喃戊糖基糖之環丁基或環戊基部分(參見例如美國專利第4,981,957號；第5,118,800號；第5,319,080號；及第5,359,044號，其中每一者以全文引用之方式併入本文中)。涵蓋之一些經修飾糖包括如下糖，其中核糖環中之氧原子經氮、硫、硒或碳置換。在一些實施例中，經修飾糖為經修飾核糖，其中核糖環內之氧原子經氮置換，且其中氮視情況經烷基(例如甲基、乙基、異丙基等)取代。
經修飾糖之非限制性實例包括甘油，其形成甘油核酸(GNA)類似物。例示性GNA類似物描述於Zhang, R 等人, J. Am. Chem. Soc., 2008, 130, 5846-5847，該文獻以全文引用之方式併入本文中；亦參見Zhang L, 等人, J. Am. Chem. Soc., 2005, 127, 4174-4175及Tsai CH 等人, PNAS, 2007, 14598-14603中，其中每一者以全文引用之方式併入本文中。衍生自GNA之類似物的另一實例，即基於甲醯甘油之混合縮醛胺縮醛之可撓性核酸(FNA)，描述於以下中之每一者中：Joyce GF 等人, PNAS, 1987, 84, 4398-4402以及Heuberger BD及Switzer C, J. Am. Chem. Soc., 2008, 130, 412-413，其中每一者以全文引用之方式併入本文中。經修飾糖之其他非限制性實例包括六呱喃糖基(6'至4')、五呱喃糖基(4'至2')、五呱喃糖基(4'至3')或四呋喃糖基(3'至2')糖。
經修飾糖及糖模擬物可藉由此項技術中已知之方法製備，包括但不限於：A. Eschenmoser, Science (1999), 284:2118；M. Bohringer 等人, Helv. Chim. Acta (1992), 75:1416-1477；M. Egli 等人, J. Am. Chem. Soc. (2006), 128(33):10847-56；A. Eschenmoser Chemical Synthesis: Gnosis to Prognosis, C. Chatgilialoglu及V. Sniekus編, (Kluwer Academic, Netherlands, 1996), 第293頁；K.-U. Schoning 等人, Science (2000), 290:1347-1351；A. Eschenmoser 等人, Helv. Chim. Acta (1992), 75:218；J. Hunziker 等人, Helv. Chim. Acta (1993), 76:259；G. Otting 等人, Helv. Chim. Acta (1993), 76:2701；K. Groebke 等人, Helv. Chim. Acta (1998), 81:375；及A. Eschenmoser, Science (1999), 284:2118。對2'修飾之修飾可見於Verma, S.等人, Annu. Rev. Biochem. 1998, 67, 99-134及其中所有參考文獻中，其中每一者以全文引用之方式併入本文中。對核糖之特定修飾可見於以下參考文獻中： 2'-氟(Kawasaki等人, J. Med. Chem., 1993, 36, 831-841)、2'-MOE (Martin, P. Helv. Chim. Acta 1996, 79, 1930-1938)、「LNA」(Wengel, J. Acc. Chem. Res. 1999, 32, 301-310)；PCT公開案第WO2012/030683號，其中每一者以全文引用之方式併入本文中。
在一些實施例中，可將本文所述之siRNA以經退火雙鏈體siRNA形式引入標靶細胞中。在一些實施例中，將本文所述之siRNA以單股有義及反義核酸序列形式引入標靶細胞中，進入標靶細胞內之後，該等單股有義及反義核酸序列退火形成siRNA雙鏈體。替代地，siRNA之有義及反義股可由引入標靶細胞之表現構築體(諸如本文所述之表現構築體)編碼。在標靶細胞中表現後，轉錄之有義股及反義股可退火以再構成siRNA。
在一些實施例中，本文所述之siRNA分子可藉由此項技術中已知之標準方法例如藉由使用自動合成儀合成。在不受任何特定理論限制之情況下，藉由該等方法產生之RNA傾向於為高純度的且可有效退火形成siRNA雙鏈體。在一些實施例中，在化學合成之後，可將單股RNA分子去保護，退火以形成siRNA，且純化(例如藉由凝膠電泳或HPLC)。替代地，在一些實施例中，可使用標準程式自DNA範本活體外 轉錄RNA，例如攜帶一或多種RNA聚合酶啟動子序列(例如T7或SP6 RNA聚合酶啟動子序列)。使用T7 RNA聚合酶製備siRNA之方案為此項技術中所已知(參見例如Donze及Picard, Nucleic Acids Res. 2002; 30:e46；及Yu等人, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 2002; 99:6047-6052，其中每一者以全文引用之方式併入本文中)。在一些實施例中，有義及反義轉錄物可在兩個獨立反應中合成，隨後退火。在一些實施例中，可在單一反應中同時合成有義及反義轉錄物。
在一些實施例中，亦可藉由自引入細胞中之表現構築體轉錄RNA在細胞內形成siRNA分子(參見例如Yu等人, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 2002; 99:6047-6052，該文獻以全文引用之方式併入本文中)。舉例而言，在一些實施例中，用於活體內 產生siRNA分子之表現構築體可包括編碼如下序列之一或多種siRNA，該等序列操作性連接於正確轉錄siRNA編碼序列所必需之元件，包括例如啟動子元件及轉錄終止訊號。在一些實施例中，用於該等表現構築體之較佳啟動子可包括例如聚合酶-III啟動子，例如 聚合酶-III HI-RNA啟動子(參見例如Brummelkamp等人, Science 2002; 296:550-553，該文獻以全文引用之方式併入本文中)、U6聚合酶-III啟動子(參見例如Sui等人, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 2002；Paul等人, Nature Biotechnol. 2002; 20:505-508；及Yu等人, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 2002; 99:6047-6052，其中每一者以全文引用之方式併入本文中)。在一些實施例中，siRNA表現構築體可包含有利於選殖表現構築體之一或多個構築體序列。可使用之標準構築體包括例如pSilencer 2.0-U6構築體(Ambion Inc., Austin, Tex.)。
在一些實施例中，siRNA為或包含SEQ ID No: 48-55中任一者之核苷酸。在一些實施例中，siRNA包含具有與SEQ ID NO: 48-55中之任一者至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致的核苷酸序列(或其一部分)的成熟引導股。在一些實施例中，一部分之長度為15、16、17、18、19或20個核苷酸。在一些實施例中，siRNA包含具有如下核苷酸序列之成熟引導股，該核苷酸序列與SEQ ID NO: 48-55中任一者之核苷酸2-8 100%一致。
在一些實施例中，本揭示案提供shRNA序列，該等shRNA序列在引入細胞中時將裂解為siRNA。因此，作為非限制性實例，本揭示案之shRNA序列可為或包含SEQ ID NO: 48-55或本揭示案別處提供之序列。
以下shRNA序列中之每一者均以5'至3'之順序提供： TCCTCATCTTGGAATTCGTGATGCGAACATCACGAATTCCAAGATGAGGA (SEQ ID NO:48)； CGCCTTACTGGGCATCTCTTTCTCGAAAGAAAGAGATGCCCAGTAAGGCG-(SEQ ID NO: 49)； CTGGTACTACTATGACAGTATCGAAATACTGTCATAGTAGTACCAG (SEQ ID No: 50)； AAGTAGCAGAGGAGAAGAGCTCGAAAGCTCTTCTCCTCTGCTACTT (SEQ ID NO: 51)； AAGACAGTCATCCGCTCCATCCGAAGATGGAGCGGATGACTGTCTT (SEQ ID NO: 52)； AAGGACGTCATTGAGCAGTACCGAAGTACTGCTCAATGACGTCCTT  (SEQ ID NO: 53)； GCCGGATCAAGAGCCTGCAAACGAATTTGCAGGCTCTTGATCCGGC (SEQ ID NO: 54)； GGTGGATGAAATCAGCATGATCGAAATCATGCTGATTTCATCCACC  (SEQ ID NO: 55)；miRNA
本揭示案提供涉及或包含一或多種抑制性核酸分子之技術，該一或多種抑制性核酸分子諸如為、包含或編碼微小RNA之一或多種核苷酸序列。微小RNA (miRNA)為一類高度保守之小RNA分子，其在植物及動物之基因組中自DNA轉錄而來，但不會轉譯成蛋白質。如此項技術中已知，動物細胞表現具有大約22個核苷酸之一系列非編碼RNA，其稱為微小RNA (miRNA)，且可在動物發育期間將基因表現調節在轉錄後或轉譯水準。將miRNA自大約70個核苷酸之前驅RNA莖環切除。藉由用與標靶mRNA互補之miRNA序列取代miRNA前驅物之莖序列，可使用表現新穎miRNA之構築體產生siRNA，以起始針對哺乳動物細胞中特定mRNA標靶的RNAi (Zeng, Mol. Cell, 9:1327-1333, 2002)。在一些實施例中，當由含有聚合酶III啟動子之DNA構築體表現時，微小RNA設計之髮夾可使基因表現沉默(McManus, RNA 8:842-850, 2002)。
在一些實施例中，可合成miRNA且向個體局部或全身性投與，例如用於治療目的。在一些實施例中，miRNA可設計及/或合成為成熟分子或前驅物(例如pri-miRNA或pre-miRNA)。在一些實施例中，pre-miRNA包括相同長度(例如約15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25個核苷酸)之引導股及乘客股。在一些實施例中，pre-miRNA包括不同長度之引導股及乘客股(例如一條股為約19個核苷酸，且另一條股為約21個核苷酸)。在一些實施例中，miRNA可靶向內源mRNA之編碼區、5'非轉譯區及/或3'非轉譯區。在一些實施例中，miRNA包含引導股，該引導股包含具有與個體之內源mRNA互補之序列以足以與內源mRNA雜交且抑制其表現的核苷酸序列。
在一些實施例中，在抑制核酸方面，miRNA優於shRNA。舉例而言，shRNA需要高水準之表現，可阻塞Argonaut機器，非內源，且依賴於兩種啟動子。相比之下，在一些實施例中，預期miRNA比shRNA更具「內源性」，因此以與單一啟動子驅動之KCNQ4類似之水準表現。亦即，miRNA可為合成或天然存在的，且天然存在之miRNA存在於脊椎動物及無脊椎動物物種之細胞中。相比之下，迄今為止，尚未偵測到shRNA作為細胞之天然存在組分。在一些實施例中，miRNA具有低或無乘客股產生，可用於治療，及/或在神經元及毛細胞中表現。
本揭示案描述在一些實施例中，對給定mRNA之乘客股進行微小改變(例如一或多個取代)。在一些該等實施例中，進行該(該等)改變(例如取代)，以確保合成KCNQ4 miRNA具有與內源miRNA基因相同之二級結構。舉例而言，在一些構築體中，KCNQ miR1 hsa-3miR-335構築體73位之G可取代C來產生凸起(例如Pyr:Pur (G:U) 可取代Pyr:Pyr (C:U)鹼基配對)。在一些實施例中，一或多個該等鹼基改變(例如取代)可在合成miRNA中產生二級結構(例如凸起位置)，使得該二級結構與內源miRNA基因之二級結構類似或一致。一般技術者應瞭解，進行一或多種改變(例如取代)之準確位置(例如一或多種鹼基)將隨合成miRNA之準確序列而變化，且熟練技術者應瞭解與內源對應物相比，如何相對於合成構築體之序列修飾鹼基。
本揭示案亦認識到如下令人驚訝之發現，在一些實施例中，shRNA之相同序列之miRNA提供效率之意外提高。舉例而言，在一些實施例中，若將shRNA及miRNA設計用於給定標靶，則本揭示案提供如下驚人之發現，相較於相同序列之shRNA，miRNA有效得多(如藉由KD量測)。在一些實施例中，miRNA包含具有與SEQ ID NO: 56-70中之任一者至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致的核苷酸序列(或其一部分)的成熟引導股。在一些實施例中，一部分之長度為15、16、17、18、19或20個核苷酸。在一些實施例中，miRNA包含具有如下核苷酸序列之成熟引導股，該核苷酸序列與SEQ ID NO: 56-70中任一者之核苷酸2-8 100%一致。
以下miR序列中之每一者均以5'至3'之順序提供： miR1-155 (SEQ ID NO: 56) TTGAGAATCCTGATGGAGCgg miR2-155 (SEQ ID NO: 57) TTGAGTCTCAGAGATGCCC miR4-155 (SEQ ID NO: 58) TTCTCGAAGTGCTTCTGCCgg miR5-155 (SEQ ID NO: 59) TTCTCCACCTTGACCACGCgt miR6-155 (SEQ ID NO: 60) ATACTGTCATAGTAGTACCag miR7-155 (SEQ ID NO: 61) TAGTCGGAGGTGATGTCGGgg miR1-16 (SEQ ID NO: 62) TTGAGAATCCTGATGGAGCgg miR1-26 (SEQ ID NO: 63) TTGAGAATCCTGATGGAGCgg miR1-96 (SEQ ID NO: 64) TTGAGAATCCTGATGGAGCgg miR1-122 (SEQ ID NO: 65) TTGAGAATCCTGATGGAGCgg miR1-135 (SEQ ID NO: 66) TTGAGAATCCTGATGGAGCgg miR1-182 (SEQ ID NO: 67) TTGAGAATCCTGATGGAGCgg miR1-183 (SEQ ID NO: 68) TTGAGAATCCTGATGGAGCgg miR1-335 (SEQ ID NO: 69) TTGAGAATCCTGATGGAGCgg miR1-451 (SEQ ID NO: 70) TTGAGAATCCTGATGGAGCgg 小鼠miR2-26 (SEQ ID NO: 96) TTGAGTCTTAGAGAGGCCCGG 小鼠miR6-26 (SEQ ID NO: 97) ATGCTGTCATAGTAATACCAG
在一些實施例中，本揭示案提供用於選擇在耳內各種區室中表現之miRNA靶向序列的方法。舉例而言，螺旋神經節：miR-96、-182、-183、-15a、-30b、-99a、-18a、-124a、-194；螺旋緣：miR-96、-182、-193、-205；賴斯納氏膜(Reissner's membrane)：miR-205；邊緣細胞：miR-376a、-376b；螺旋韌帶：miR-205；支援細胞：miR-15a、-30b、-99a；毛細胞：miR-96、-182、-183、-15a、-30b、-99a、-18a、-140、194；基底膜：miR-205、-15a、-30b、-99a；內溝：miR-96、-182、-183。Ushakov 等人, 2013。如本文所述，考慮將miRNA支架miR-16、miR-26、miR-96 (毛細胞)、miR-122、miR-135、miR-155、miR-182 (毛細胞)、miR-183 (毛細胞)、miR-335及miR-451用於對KCNQ4表現之影響的初步測試。在一些實施例中，miRNA可包含或由以下組成： miR1-155；miR2-155；miR4-155；miR5-155；miR6-155；miR7-155；miR1-16；miR1-26；miR1-96；miR1-122；miR1-135；miR1-182；miR1-183；miR1-335；miR1-451。在一些實施例中，本揭示案之構築體可包含選自以下之一或多種miRNA：  miR1-155；miR2-155；miR4-155；miR5-155；miR6-155；miR7-166 miR1-16；miR1-26；miR1-96；miR1-122；miR1-135；miR1-182；miR1-183；miR1-335；miR1-451及其組合。反義核酸
在一些實施例中，抑制性核酸分子可為或包含反義核酸分子，例如其核苷酸序列與編碼鉀通道(例如KCNQ4)蛋白之mRNA之全部或一部分互補的核酸分子。在一些實施例中，反義核酸分子可對編碼鉀通道(例如KCNQ4)蛋白之核苷酸序列之編碼股的全部或一部分非編碼區為反義的。在一些實施例中，非編碼區(「5'及3'非轉譯區」)為側接編碼區且不轉譯為胺基酸之5'及3'序列。基於本文所揭示之序列，熟習此項技術者可容易地選擇及合成多種適當反義分子中之任一者以靶向本文所述之鉀通道(例如KCNQ4)基因。舉例而言，可製備「基因遊走(gene walk)」，其包含跨越一定核酸(例如鉀通道(例如KCNQ4) mRNA)長度之15-30個核苷酸的一系列寡核苷酸，繼而測試對ta基因表現之抑制。視情況，可在寡核苷酸之間留下5-10個核苷酸之空位，以減少合成及測試之寡核苷酸的數量。
在一些實施例中，反義寡核苷酸之長度可為例如約5、10、15、20、25、30、35、40、45或50個核苷酸或更長。熟習此項技術者將認識到，可使用各種不同化學方法合成反義寡核苷酸。核酶
在一些實施例中，抑制性核酸分子可為或包含核酶。如熟習此項技術者所已知，核酶為具有核糖核酸酶活性之催化性RNA分子。在一些實施例中，核酶可用作可控制之啟動子。在一些實施例中，核酶能夠裂解其具有互補區之單股核酸，諸如mRNA。因此，在一些實施方式中，核酶(例如鎚頭狀核酶(描述於Haselhoff及Gerlach, Nature, 334:585-591, 1988中，該文獻以全文引用之方式併入本文中))可用於催化裂解mRNA轉錄物，從而抑制由給定mRNA編碼之蛋白質的轉譯。設計及產生核酶之方法為此項技術中所已知(參見例如Scanlon, 1999, Therapeutic Applications of Ribozymes, Humana Press，該文獻以全文引用之方式併入本文中)。在一些實施例中，例如可基於KCNQ4基因產物cDNA之核苷酸序列(例如本文所述之任何例示性cDNA序列)來設計對KCNQ4基因產物mRNA具有特異性之核酶。舉例而言，可構建四膜蟲(Tetrahymena) L-19 IVS RNA之衍生物，其中活性位點之核苷酸序列與KCNQ4基因產物mRNA中欲裂解自核苷酸序列互補(Cech等人, 美國專利第4,987,071號；及Cech等人, 美國專利第5,116,742號，其中每一者均以全文引用之方式併入本文中)。替代地，可使用編碼KCNQ4基因產物蛋白之mRNA自RNA分子庫中選擇具有特定核糖核酸酶活性之催化性RNA(參見例如Bartel及Szostak, Science, 261:1411-1418, 1993，該文獻以全文引用之方式併入本文中)。 g. 醫藥組成物及套組
如本文所述，本揭示案之醫藥組成物可包括構築體。舉例而言，在一些實施例中，醫藥組成物可包含AAV構築體及/或AAV粒子。在一些該等實施例中，該等AAV粒子包含一或多種構築體，其包含核酸，例如一或複數種AAV構築體。舉例而言，本揭示案之醫藥組成物包含本文所述之，以及一或多種醫藥學上或生理學上可接受之載劑、稀釋劑或賦形劑。此類組成物可包含緩沖劑，諸如中性緩衝鹽水、磷酸鹽緩衝鹽水及其類似物；碳水化合物，諸如葡萄糖、甘露糖、蔗糖或聚葡萄糖；甘露糖醇；蛋白質；多肽或胺基酸，諸如甘胺酸；抗氧化劑；螯合劑，諸如EDTA或麩胱甘肽；佐劑(例如氫氧化鋁)；及防腐劑。在一些實施例中，本揭示案之組成物經調配以用於靜脈內投與。在一些實施例中，本揭示案之組成物經調配以用於耳蝸內投與。
在一些實施例中，本揭示案之治療組成物經調配以用於耳蝸內投與。在一些實施例中，治療組成物經調配以包含脂質奈米粒子、聚合物奈米粒子、小環DNA或CELiD DNA。
在一些實施例中，治療組成物經調配以包含合成外淋巴溶液。舉例而言，在一些實施例中，合成外淋巴溶液包括20-200 mM NaCl；1-5 mM KCl；0.1-10 mM CaCl2；1-10 mM葡萄糖；及2-50 mM HEPES，且pH為約6至約9。在一些實施例中，本文所述醫藥組成物中之任一者可另外包含促進本文所述之核酸或任何構築體進入哺乳動物細胞中之一或多種試劑(例如脂質體或陽離子脂質)。在一些實施例中，本文所述之任何構築體均可使用天然及/或合成聚合物調配。可包括在任何本文所述組成物中之聚合物的非限制性實例可包括(但不限於) DYNAMIC POLYCONJUGATE® (Arrowhead Research Corp., Pasadena, Calif.)、來自Mirus Bio (Madison, Wis.)及Roche Madison (Madison, Wis.)之調配物、PhaseRX聚合物調配物諸如但不限於SMARTT POLYMER TECHNOLOGY® (PhaseRX, Seattle, Wash.)、DMRI/DOPE、泊洛沙姆(poloxamer)、來自Vical (San Diego, Calif.)之VAXFECTIN®佐劑、殼聚糖、來自Calando Pharmaceuticals (Pasadena, Calif.)之環糊精、樹狀聚合物及聚(乳酸-共-乙醇酸)(PLGA)聚合物、RONDELTM (RNAi/寡核苷酸奈米粒子遞送)聚合物(Arrowhead Research Corporation, Pasadena, Calif.)及pH反應性共嵌段聚合物，諸如但不限於PhaseRX (Seattle, Wash.)產生之聚合物。諸多此等聚合物已在將寡核苷酸活體內 遞送至哺乳動物細胞中展現功效(參見例如deFougerolles, Human Gene Ther. 19:125-132, 2008；Rozema等人, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 104:12982-12887, 2007；Rozema等人, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 104:12982-12887, 2007；Hu-Lieskovan等人, Cancer Res. 65:8984-8982, 2005；Heidel等人, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 104:5715-5721, 2007，其中每一者均以全文引用之方式併入本文中)。任何本文所述組成物可為例如醫藥組成物。
在一些實施例中，組成物包括醫藥學上可接受之載劑(例如磷酸鹽緩衝鹽水、鹽水或抑菌水)。在調配後，可以與劑量調配物相容之方式且以該治療有效量來投與溶液。易於以多種劑型投與調配物，諸如可注射溶液、可注射凝膠、藥物釋放膠囊及其類似劑型。
本文所提供之組成物可例如經調配以與其預期投與途徑相容。預期投與途徑之非限制性實例為局部投與(例如耳蝸內投與)。
亦提供包括本文所述任何組成物之套組。在一些實施例中，套組可包括固體組成物(例如包括本文所述之至少一種構築體之凍乾組成物)及用於溶解凍乾組成物之液體。
在一些實施例中，套組可包括預裝載注射器，該預裝載注射器包括本文所述之任何組成物。
在一些實施例中，套組包括小瓶，該小瓶包含本文所述組成物中之任一者(例如調配成水性組成物，例如水性醫藥組成物)。
在一些實施例中，套組可包括用於進行本文所述方法中任一者之說明書。 h. 細胞
在一些實施例中，本揭示案提供包含本文所述之任何核酸、構築體(例如本文所述之至少兩種不同構築體)、組成物等的細胞(例如哺乳動物細胞，例如人類細胞，例如耳毛細胞，例如OHC、IHC等)。如熟習此項技術者應瞭解，可將本文所述之核酸及構築體引入任何細胞(例如哺乳動物細胞，例如人類細胞，例如耳毛細胞，例如OHC、IHC等)中。某些構築體及用於將構築體引入細胞中之方法之非限制性實例如本文所述。
在一些實施例中，細胞為人類細胞、小鼠細胞、豬細胞、兔細胞、狗細胞、大鼠細胞、綿羊細胞、貓細胞、馬細胞、非人類靈長類動物細胞或昆蟲細胞。在一些實施例中，細胞為耳蝸之特化細胞。在一些實施例中，細胞為耳蝸內毛細胞或耳蝸外毛細胞。在一些實施例中，細胞為耳蝸內毛細胞。在一些實施例中，細胞為耳蝸外毛細胞。
在一些實施例中，細胞為活體外 細胞。在一些實施例中，細胞為活體內 或離體 細胞。舉例而言，在一些實施例中，細胞存在於哺乳動物中。在一些實施例中，細胞(例如哺乳動物細胞)為獲自例如個體(例如哺乳動物)且離體 培養之自體細胞。
在一些實施例中，本揭示案提供之細胞為經轉染宿主細胞。在一些實施例中，轉染用於指細胞吸收外來DNA，且當已將外源DNA引入細胞膜內時，細胞已經「轉染」。多種轉染技術為此項技術中通常已知(參見例如Graham等人, (1973) Virology, 52:456；Sambrook等人, (1989) Molecular Cloning, a laboratory manual, Cold Spring Harbor Laboratories, New York, Davis等人, (1986) Basic Methods in Molecular Biology, Elsevier；及Chu等人, (1981) Gene 13:197，其中每一者以全文引用之方式併入本文中)。該等技術可用於將一或多種外源核酸，諸如核苷酸整合構築體及其他核酸分子引入合適宿主細胞中。
在一些實施例中，宿主細胞為哺乳動物細胞。宿主細胞可用作AAV輔助構築體、AAV小基因質體、輔助功能構築體及/或與重組AAV之產生相關的其他轉移DNA的受體。該術語包括已經轉染之原始細胞的後代。在一些實施例中，宿主細胞為已用外源DNA序列轉染之細胞。應理解，由於自然、偶然或故意突變，單一親代細胞之後代在形態或基因組或總DNA互補性上不一定與原始親代完全一致。4. 方法
本揭示案尤其提供方法。在一些實施例中，方法包含將如本文所述之組成物引入個體之內耳(例如耳蝸)中。舉例而言，本文提供如下方法，在一些實施例中，該等方法包括向個體(例如動物，例如哺乳動物，例如靈長類動物，例如人類)之內耳(例如耳蝸)投與治療有效量之本文所述之任何組成物。
在一些實施例中，本揭示案提供產生一或多種組成物及/或測試其組分之方法。在一些該等實施例中，組成物可用於治療患有聽力損失之個體。在一些實施例中，本揭示案提供遺傳修飾一或多種細胞之方法。在一些實施例中，本揭示案之方法，包括使用該等方法產生或投與之組成物，包括WO 2019/028246 A2、PCT/US2019/060324及PCT/US2019/060328中之彼等者，其中每一者均以全文引用之方式併入本文中。
舉例而言，在一些實施例中，除本文所述之例示性組成物外，圖 6 描繪可根據本揭示案使用之例示性miRNA構築體。此等序列及構築體可在細胞(例如人類細胞，例如HEK細胞，例如毛細胞，例如外毛細胞)中以單一及/或以多重形式測試(例如經由雙重轉染)。使用或可使用適當定性或定量技術，諸如PCR、(細胞之)免疫螢光及western墨點技術量測mRNA及蛋白質水準。如本文所述，例示性miRNA構築體可以質體(或構築體)形式遞送或經由本文所述之AAV組成物遞送。 a. 製備方法
在一些實施例中，藉由熟習此項技術者已知之任何方法製備病毒構築體。舉例而言，在一些實施例中，使用標準三重轉染系統(例如三個質體/構築體，其分別包含(i) rep/cap基因、(ii)輔助基因及(iii)有效載荷(例如miRNA、KCNQ4等)，例如四個質體/構築體等)製備病毒構築體，繼而進行標準分離及純化方法(例如CsCl梯度)。在一些該等實施例中，該等病毒製劑經調配以用於遞送至個體中。
本揭示案尤其提供製備基於AAV之構築體的方法。在一些實施例中，該等方法包括使用宿主細胞。在一些實施例中，宿主細胞為哺乳動物細胞。宿主細胞可用作AAV輔助構築體、AAV小基因質體、輔助功能構築體及/或與重組AAV之產生相關的其他轉移DNA的受體。該術語包括已經轉染之原始細胞的後代。因此，如本文所用之「宿主細胞」可指已用外源DNA序列轉染之細胞。應理解，由於自然、偶然或故意突變，單一親代細胞之後代在形態或基因組或總DNA互補性上不一定與原始親代完全一致。
用於產生及分離適用於遞送至個體之AAV病毒構築體的其他方法描述於例如美國專利第7,790,449號；美國專利第7,282,199號；WO 2003/042397；WO 2005/033321、WO 2006/110689；及美國專利第7,588,772號中，其中每一者以全文引用之方式併入本文中。在一個系統中，用編碼側接ITR之轉殖基因的構築體及編碼rep及cap之構築體瞬時轉染生產細胞株。在另一系統中，用編碼ITR側接之轉殖基因的構築體瞬時轉染穩定提供rep及cap的包裝細胞株。在此等系統中之每一者中，響應於用輔助腺病毒或皰疹病毒感染產生AAV病毒粒子，且將AAV與污染性病毒分離。亦藉由給定系統反式提供無需用輔助病毒感染即可恢復AAV輔助功能之其他系統(亦即腺病毒E1、E2a、VA及E4，或者皰疹病毒UL5、UL8、UL52及UL29，以及皰疹病毒聚合酶)。在該等系統中，輔助功能可藉由用編碼輔助功能之構築體瞬時轉染細胞來提供，或者 細胞可經工程改造以穩定含有編碼 輔助功能之基因， 該等基因之表現可控制在轉錄及/或轉錄後水準。
在另一實施例中，本揭示案提供一種系統，其中轉殖基因側接ITR，且藉由用基於昆蟲病毒(例如桿狀病毒)之構築體感染，將rep/cap基因引入昆蟲宿主細胞中。該等生產系統為此項技術中所已知(通常參見例如Zhang等人, 2009, Human Gene Therapy 20:922-929)。製備及使用此等及其他AAV生產系統之方法亦描述於美國專利第5,139,941號；第5,741,683號；第6,057,152號；第6,204,059號；第6,268,213號；第6,491,907號；第6,660,514號；第6,951,753號；第7,094,604號；第7,172,893號；第7,201,898號；第7,229,823號；及第7,439,065號中，其中每一者均以全文引用之方式併入本文中。 b. 治療方法
在一些實施例中，本揭示案之技術用於治療患有聽力損失或具有聽力損失風險之個體。舉例而言，在一些實施例中，個體患有歸因於KCNQ4基因之至少一種變體的常染色體顯性聽力損失。此項技術者應理解，KCNQ4基因中之諸多不同改變(例如取代、缺失、添加等)可引起聽力損失或具有引起聽力損失之風險。在一些該等實施例中，KCNQ4序列中之一或多種改變引起功能喪失KCNQ4基因變體。
在一些實施例中，可評價經歷聽力損失之個體，以確定是否可能存在可引起聽力損失之一或多種突變以及該一或多種突變可存在於何處。在一些該等實施例中，可評價KCNQ4基因產物(例如多核苷酸，例如多肽)或功能之狀態(例如經由蛋白質或測序分析)。在本文所述任何方法中之一些實施例中，個體可為哺乳動物。在一些實施例中，哺乳動物為囓齒動物、非人類靈長類動物或人類。在本文所述任何方法中之一些實施例中，個體為成人、青少年、少年、兒童、學步兒童、嬰兒、新生兒或胎兒。在本文所述任何方法之一些實施例中，個體為1-5、1-10、1-20、1-30、1-40、1-50、1-60、1-70、1-80、1-90、1-100、1-110、2-5、2-10、10-20、20-30、30-40、40-50、50-60、60-70、70-80、80-90、90-100、100-110、10-30、10-40、10-50、10-60、10-70、10-80、10-90、10-100、10-110、20-40、20-50、20-60、20-70、20-80、20-90、20-100、20-110、30-50、30-60、30-70、30-80、30-90、30-100、40-60、40-70、40-80、40-90、40-100、50-70、50-80、50-90、50-100、60-80、60-90、60-100、70-90、70-100、70-110、80-100、80-110或90-110歲。在一些實施例中，個體為1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11個月。在一些實施例中，個體為1、2、3、4、5週或更多週。在一些實施例中，個體為23至42孕週(亦即，具有胎齡之胎兒)。
在本文所述任何方法之一些實施例中，該等方法使有需要之個體的聽力(例如本文所述用於確定聽力改良之任何量度)改良至少10天、至少15天、至少20天、至少25天、至少30天、至少35天、至少40天、至少45天、至少50天、至少55天、至少60天、至少65天、至少70天、至少75天、至少80天、至少85天、至少100天、至少105天、至少110天、至少115天、至少120天、至少5個月、至少6個月、至少7個月、至少8個月、至少9個月、至少10個月、至少11個月或至少12個月。
在一些實施例中，個體(例如哺乳動物，例如人類)患有非症候群性感覺神經性聽力損失或具有產生該疾病之風險。在一些實施例中，個體(例如哺乳動物，例如人類)先前已鑑別為在KCNQ4基因中具有突變。在一些實施例中，個體(例如哺乳動物，例如人類)在KCNQ4基因中具有本文所述或在此項技術中已知與非症狀性感覺神經性聽力損失相關之任何突變。
在一些實施例中，個體(例如哺乳動物，例如人類)已鑑別為KCNQ4基因中之突變的攜帶者(例如經由遺傳測試)。在一些實施例中，個體(例如哺乳動物，例如人類)已鑑別為在KCNQ4基因中具有突變且已診斷患有非症狀性感覺神經性聽力損失。在一些實施例中，個體(例如哺乳動物，例如人類)已鑑別為患有非症候群性感覺神經性聽力損失。
在一些實施例中，個體(例如哺乳動物，例如人類)已鑑別為具有聽力損失之風險(例如具有成為基因突變，例如KCNQ4基因突變之攜帶者的風險)。在一些該等實施例中，個體(例如哺乳動物，例如人類)可具有例如聽力損失或聽力損失風險之某些風險因素(例如父母患有聽力損失或具有聽力損失之症狀)。在一些該等實施例中，個體(例如哺乳動物，例如人類)已鑑別為KCNQ4基因中之突變的攜帶者(例如經由遺傳測試)，該突變先前未經鑑別(亦即，不為KCNQ4基因序列之已公開已知變體)。在一些該等實施例中，所鑑別突變可為新穎的(亦即，先前未在文獻中描述)，且可根據特定個體(例如哺乳動物，例如人類)之一或多種突變個性化罹患或易患聽力損失之個體的治療方法。
在一些實施例中，可使用此項技術中已知之任何習知功能聽力測試在個體中確定非症狀性感覺神經性聽力損失的成功治療。功能聽力測試之非限制性實例為各種類型之聽力測定檢定(例如，純音測試、語音測試、中耳測試、聽覺腦幹反應及光聲發射)。 c. 增加KCNQ4表現之方法
本揭示案提供增加細胞(例如哺乳動物細胞)中之功能性(例如功能增益) KNCQ4基因產物(例如野生型KCNQ4，例如經密碼子最佳化之KCNQ4、Kv7.4蛋白)之表現的方法。在一些該等實施例中，該等方法包含將本文所述之任何組成物(例如編碼功能性KCNQ4，例如野生型KCNQ4，例如經密碼子最佳化之KCNQ4的構築體)引入細胞(例如哺乳動物細胞)中。在一些實施例中，引入為活體外 引入。在一些實施例中，引入為離體 引入。在一些實施例中，引入為活體內 引入。
在一些該等實施例中，細胞為哺乳動物細胞。在一些實施例中，哺乳動物細胞為耳蝸細胞。在一些實施例中，耳蝸細胞為毛細胞。在一些實施例中，耳蝸毛細胞為內毛細胞。在一些實施例中，耳蝸毛細胞為外毛細胞。在一些該等實施例中，哺乳動物細胞為人類細胞(例如人類耳蝸外毛細胞)。
用於將本文所述之任何組成物引入哺乳動物細胞中的方法為此項技術中所已知(例如，經由脂質轉染或經由使用病毒構築體，例如本文所述之任何病毒構築體)。在一些實施例中，例如與對照或與引入本文所述組成物之前KCNQ4基因產物之表現水準相比，確定KCNQ4基因產物(例如編碼功能性KCNQ4之基因產物)之表現的增加。在一些實施例中，KCNQ4變體基因產物(例如由於變體KCNQ4基因而產生之基因產物)之減少與功能性KCNQ4基因產物之增加同時或依序發生。 d. 減少內源KCNQ4之表現及/或置換內源KCNQ4的方法
本揭示案提供減少細胞(例如哺乳動物細胞)中內源KNCQ4基因產物(例如野生型KCNQ4，例如功能喪失KCNQ4變體)之表現，及/或用不同功能性(例如功能增益) KCNQ4 (例如經密碼子最佳化之KCNQ4)置換該內源KNCQ4基因產物的方法。在一些實施例中，如本文所述，內源KCNQ4可經密碼子最佳化形式置換，該密碼子最佳化形式已經工程改造以抵抗抑制性核酸介導之降解(例如miRNA介導之降解)。在一些該等實施例中，miRNA介導之降解歸因於內源及/或外源引入之miRNA。在本文所述之一些實施例中，基因組編輯策略可為或包含例如引入外源miRNA，且可在之前、之後或大體上同時包括用經密碼子最佳化之KCNQ4基因置換內源KCNQ4基因。
在一些該等實施例中，該等方法包含將本文所述之任何組成物(例如編碼功能性KCNQ4，例如野生型KCNQ4，例如經密碼子最佳化之KCNQ4的構築體)引入細胞(例如哺乳動物細胞)中。在一些實施例中，引入為活體外 引入。在一些實施例中，引入為離體 引入。在一些實施例中，引入為活體內 引入。
在一些該等實施例中，細胞為哺乳動物細胞。在一些實施例中，哺乳動物細胞為耳蝸細胞。在一些實施例中，耳蝸細胞為毛細胞。在一些實施例中，耳蝸毛細胞為內毛細胞。在一些實施例中，耳蝸毛細胞為外毛細胞。在一些該等實施例中，哺乳動物細胞為人類細胞(例如人類耳蝸外毛細胞)。
用於將本文所述之任何組成物引入哺乳動物細胞中的方法為此項技術中所已知(例如，經由脂質轉染或經由使用病毒構築體，例如本文所述之任何病毒構築體)。在一些實施例中，例如與對照或與引入本文所述組成物之前KCNQ4基因產物之表現水準相比，確定內源KCNQ4基因產物之表現的減少。在一些實施例中，內源KCNQ4基因產物之減少與經密碼子最佳化KCNQ4基因產物之增加同時或依序發生。 e. 減少功能喪失KCNQ4變體之表現的方法
本揭示案提供減少細胞(例如哺乳動物細胞)中功能喪失KNCQ4變體基因產物之表現的方法。在一些該等實施例中，該等方法包含將本文所述之任何組成物(例如抑制性核酸)引入細胞(例如哺乳動物細胞)中。在一些實施例中，引入為活體外 引入。在一些實施例中，引入為離體 引入。在一些實施例中，引入為活體內 引入。
在一些該等實施例中，細胞為哺乳動物細胞。在一些實施例中，哺乳動物細胞為耳蝸細胞。在一些實施例中，耳蝸細胞為毛細胞。在一些實施例中，耳蝸毛細胞為內毛細胞。在一些實施例中，耳蝸毛細胞為外毛細胞。在一些該等實施例中，哺乳動物細胞為人類細胞(例如人類耳蝸外毛細胞)。
用於將本文所述之任何組成物引入哺乳動物細胞中的方法為此項技術中所已知(例如，經由脂質轉染或使用病毒構築體，例如本文所述之任何病毒構築體)。例如與對照或與引入本文所述組成物之前KCNQ4變體基因產物之表現水準相比，確定KCNQ4變體基因產物之表現的減少。在一些實施例中，KCNQ4變體之減少與功能性KCNQ4之增加同時或依序發生。5. 投藥
本文提供尤其包含用於治療聽力損失(例如非症候群性感覺神經性聽力損失或症候群性感覺神經性聽力損失)之治療遞送系統的技術。在一些實施例中，本揭示案提供如下組成物，其為至少一種構築體，例如病毒構築體，例如AAV構築體之一部分或包含至少一種該構築體。在一些實施例中，本揭示案之抑制性核酸包括在至少一種構築體中或包含至少一種構築體。在一些該等實施例中，構築體為AAV構築體。在一些實施例中，使用AAV構築體將抑制性核酸遞送至一或多個細胞。在一些實施例中，抑制性核酸包括在至少一種構築體中或包含至少一種構築體。在一些該等實施例中，構築體為AAV構築體。在一些實施例中，使用AAV構築體將抑制性核酸遞送至一或多個細胞。在一些該等實施例中，構築體編碼抑制性核酸，該抑制性核酸在一些實施例中可減少鉀通道基因產物，例如鉀通道mRNA，例如KCNQ4 mRNA)之表現。在一些實施例中，單一構築體編碼超過一種抑制性核酸分子(例如超過一種miRNA靶向序列等)。在一些實施例中，單一構築體編碼2、3、4、5、6、7、8、9或10種抑制性核酸分子。
本文描述可減少細胞(例如人類細胞，例如外毛細胞)中鉀通道基因產物(例如蛋白質)之表現的siRNA的非限制性實例。如本文所述，在一些實施例中，個體先前已鑑別為具有功能喪失KCNQ4變體(例如具有如下序列變化之KCNQ4基因，該序列變化引起基因編碼之KCNQ4蛋白的表現及/或活性的缺陷，或者引起疾病之功能(例如DFNA2或鉀通道中之另一功能異常，例如引起死亡之慢性去極化)。在一些實施例中，在如本文提供之引入或投與步驟之前，確定個體俱有KCNQ4變體基因。在一些實施例中，治療方法包含偵測個體中KCNQ4基因之變化。在一些實施例中，治療方法包含將個體識別或診斷為患有非症狀性感覺神經性聽力損失。
如本文所述，本揭示案提供之技術(例如表現系統、抑制性RNA或基因組編輯系統等)可以多種方式實施(例如投與或遞送至細胞或個體)，且不同實施方法可適用於不同應用。舉例而言，在一些實施例中，使用本揭示案之技術增加基因之水準，減少基因之水準，及/或同時增加及減少某些基因或基因變體之水準。舉例而言，在一些實施例中，本揭示案之技術包括增加功能性KCNQ4基因產物之表現，減少功能喪失KCNQ4基因變體之表現，用KCNQ4基因產物之經密碼子最佳化形式置換功能性KCNQ4基因產物，或其增加及減少之任何組合。 a. 投與途徑
在一些實施例中，本揭示案提供各種投與途徑及投與用調配物。如熟習此項技術者所已知，適用於可注射用途之醫藥形式包括無菌水溶液或水性分散液及用於臨時製備無菌可注射溶液或分散液之無菌粉末。分散液亦可在甘油、液體聚乙二醇及其混合物中及在油中製備。
在普通儲存及使用條件下，此等製劑含有防腐劑以防止微生物生長。在許多情況下，該形式為無菌且流動的以易於進行注射。其必須在生產及儲存條件下穩定，且必須經保存以防止微生物諸如細菌及真菌之污染作用。在一些實施例中，載劑可為溶劑或分散介質，其含有例如水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇及液體聚乙二醇及其類似物)、其合適混合物及/或植物油。可例如藉由使用包衣諸如卵磷脂，在分散液之情況下藉由維持所需粒徑以及藉由使用表面活性劑來維持適當流動性。可藉由各種抗細菌劑及抗真菌劑來防止微生物之作用，例如對羥基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、山梨酸、硫柳汞及其類似物。在許多情況下，較佳包括等滲劑，例如糖或氯化鈉。
可藉由在組成物中使用延遲吸收之劑，例如單硬脂酸鋁及明膠，來延長可注射組成物之吸收。為投與可注射水溶液，例如若需要，可適當緩衝溶液，且首先用足夠鹽水或葡萄糖使液體稀釋劑等滲。此等特定水溶液特別適用於靜脈內、肌內、皮下及腹膜內投與。在此方面，熟習此項技術者已知可使用之無菌水性介質。舉例而言，可將一劑量溶解在1 ml等滲NaCl溶液中，且添加至1000 ml皮下灌注液中，或在建議之輸注部位注射(參見例如「Remington's Pharmaceutical Sciences」 第15版, 第1035-1038頁及第1570-1580頁，該文獻以全文引用之方式併入本文中)。視宿主之狀況而定必然發生劑量之一些變化。在任何情況下，負責投與者決定個別宿主之適當劑量。
在一些實施例中，藉由將所要量之活性rAAV視需要與本文列舉之各種其他成分一起併入適當溶劑中，繼而過濾滅菌來製備無菌可注射溶液。一般而言，藉由將各種經滅菌活性成分併入無菌媒劑中來製備分散液，該無菌媒劑含有基本分散介質及來自以上所列舉彼等成分之所要其他成分。在用於製備無菌可注射溶液之無菌粉末的情況下，在一些實施例中，較佳製備方法為真空乾燥及冷凍乾燥技術，該等技術自先前無菌過濾之溶液產生活性成分加任何其他所要成分之粉末。
在一些實施例中，本文所揭示之rAAV組成物亦可調配成中性或鹽形式。醫藥學上可接受之鹽包括酸加成鹽(與給定蛋白質之遊離胺基形成)，該等酸加成鹽係與無機酸諸如鹽酸或磷酸，或有機酸諸如乙酸、草酸、酒石酸、扁桃酸及其類似酸形成。與遊離羧基形成之鹽亦可衍生自無機鹼，諸如氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化銨、氫氧化鈣或氫氧化鐵，以及有機鹼，諸如異丙胺、三甲胺、組胺酸、普魯卡因(procaine)及其類似鹼。在調配後，以與劑量調配物相容之方式且以該治療有效量來投與溶液。該等調配物易於以多種劑型投與，諸如可注射溶液、可注射凝膠、藥物釋放膠囊及其類似劑型。
遞送媒劑諸如脂質體、奈米膠囊、微粒、微球、脂質體子、囊泡及其類似物可用於將本揭示案組成物引入合適宿主細胞中。詳言之，在一些實施例中，rAAV-構築體遞送之轉殖基因可經調配以用於以封裝在脂質粒子、脂質體、囊泡、奈米球或奈米粒子或其類似物中之形式遞送。
此類調配物對於引入本文所揭示之核酸或rAAV構築體之醫藥學上可接受之調配物可為較佳。脂質體之形成及用途為熟習此項技術者通常所已知。最近開發出具有改良血清穩定性及循環半衰期之脂質體(美國專利第5,741,516號，該專利以全文引用之方式併入本文中)。此外，已描述脂質體及脂質體樣製劑作為潛在藥物載劑之各種方法(美國專利第5,567,434號；第5,552,157號；第5,565,213號；第5,738,868號；及第5,795,587號，其中每一者以全文引用之方式併入本文中)。
脂質體已成功用於通常對藉由其他程式轉染具有抗性之多種細胞類型。此外，脂質體無病毒基遞送系統典型之DNA長度限制。脂質體有效用於將基因、藥物、放射治療劑、病毒、轉錄因數及變構效應子引入多種培養之細胞株及動物中。另外，已完成檢驗脂質體介導之藥物遞送之功效的數種成功臨床試驗。
脂質體由分散在水性介質中之磷脂形成，且自發形成多層同心雙層囊泡(亦稱為多層囊泡(MLV))。MLV之直徑通常為25 nm至4 Tm。MLV之音波處理形成直徑在大約200至500埃範圍內之小單層囊泡(SUV)，其在核心中含有水溶液。
替代地，可使用rAAV之奈米膠囊調配物。奈米膠囊通常可穩定且可再現之方式截留物質。為避免由於細胞內聚合物超載引起之副作用，應使用能夠在活體內 降解之聚合物設計此類超細粒子(大小為約0.1Tm)。預期使用滿足此等要求之可生物降解之聚烷基-氰基丙烯酸酯奈米粒子。
除上述遞送方法外，亦預期將以下技術作為將rAAV組成物遞送至宿主之替代方法。音波療法(亦即，超音波)已使用且在美國專利第5,656,016號中作為用於提高藥物滲透進入且穿過循環系統之速率及功效的裝置，該專利以全文引用之方式併入本文中。涵蓋之其他藥物遞送替代物為骨髓腔內注射(美國專利第5,779,708號，該專利以全文引用之方式併入本文中)、微晶片裝置(美國專利第5,797,898號，該專利以全文引用之方式併入本文中)、眼科調配物(Bourlais等人, 1998，該文獻以全文引用之方式併入本文中)、經皮基質(美國專利第5,770,219號及第5,783,208號，其中每一者以全文引用之方式併入本文中)及反饋控制之遞送(美國專利第5,697,899號，該專利以全文引用之方式併入本文中)。
在一些實施例中，本揭示案任何組成物之投與可以任何方便方式進行，包括藉由氣溶膠吸入、注射、攝入、轉輸、植入或移植。本文所述組成物可經動脈、皮下、皮內、結節內、髓內、肌內、藉由靜脈內(i.v.)注射或腹膜內向患者投與。在一些實施例中，本揭示案之核酸組成物藉由皮內或皮下注射向患者投與。在一些實施例中，本揭示案之核酸組成物藉由i.v.注射投與。 b. 給藥i rAAV-KCNQ4 抑制性 RNA
在一些實施例中，本文揭示之任何方法包含劑量遞增研究以評定患有聽力損失之個體(例如哺乳動物，例如人類，例如患者)中之安全性及耐受性。在一些實施例中，以本文揭示之給藥方案投與本文揭示之組成物，例如rAAV-KCNQ4抑制性RNA。在一些實施例中，給藥方案包含單側或雙側耳蝸內投與一定劑量，例如本文所述之劑量的本文所揭示組成物，例如rAAV-KCNQ4抑制性RNA。在一些實施例中，給藥方案包括以如下之體積遞送：每個耳蝸至少0.001 mL、0.005 mL、0.01 mL、至少0.02 mL、至少0.03 mL、至少0.04 mL、至少0.05 mL、至少0.06 mL、至少0.07 mL、至少0.08 mL、至少0.09 mL、至少0.10 mL、至少0.11 mL、至少0.12 mL、至少0.13 mL、至少0.14 mL、至少0.15 mL、至少0.16 mL、至少0.17 mL、至少0.18 mL、至少0.19 mL或至少0.20 mL。在一些實施例中，給藥方案包括以如下之體積遞送：每個耳蝸至多0.30 mL、至多0.25 mL、至多0.20 mL、至多0.15 mL、至多0.14 mL、至多0.13 mL、至多0.12 mL、至多0.11 mL、至多0.10 mL、至多0.09 mL、至多0.08 mL、至多0.07 mL、至多0.06 mL、至多0.05 mL、至多0.01 mL、至多0.005 mL或至多0.001 mL。在一些實施例中，給藥方案包括以如下之體積遞送：視群體而定，每個耳蝸約0.001 mL、0.005 mL、0.01 mL、0.05 mL、約0.06 mL、約0.07 mL、約0.08 mL、約0.09 mL、約0.10 mL、約0.11 mL、約0.12 mL、約0.13 mL、約0.14 mL或約0.15 mL。在一些實施例中，給藥方案包括以如下之體積遞送：每個耳蝸至少0.001 mL、0.005 mL、0.01 mL、至少0.02 mL、至少0.03 mL、至少0.04 mL、至少0.05 mL、至少0.06 mL、至少0.07 mL、至少0.08 mL、至少0.09 mL、至少0.10 mL、至少0.11 mL、至少0.12 mL、至少0.13 mL、至少0.14 mL、至少0.15 mL、至少0.16 mL、至少0.17 mL、至少0.18 mL、至少0.19 mL或至少0.20 mL。在一些實施例中，給藥方案包括以如下之體積遞送：每個耳蝸至多0.30 mL、至多0.25 mL、至多0.20 mL、至多0.15 mL、至多0.14 mL、至多0.13 mL、至多0.12 mL、至多0.11 mL、至多0.10 mL、至多0.09 mL、至多0.08 mL、至多0.07 mL、至多0.06 mL、至多0.05 mL、至多0.01 mL、至多0.005 mL或至多0.001 mL。在一些實施例中，給藥方案包括以如下之體積遞送：視群體而定，每個耳蝸約0.001 mL、約0.005 mL、約0.01 mL、0.05 mL、約0.06 mL、約0.07 mL、約0.08 mL、約0.09 mL、約0.10 mL、約0.11 mL、約0.12 mL、約0.13 mL、約0.14 mL或約0.15 mL。
在一些實施例中，本文揭示之方法評價經由耳蝸內注射向患有聽力損失之例如18至80歲之個體投與遞增劑量之本文所揭示組成物，例如rAAV-KCNQ4抑制性RNA的安全性及耐受性。
在一些實施例中，本文揭示之方法評價經由眼內注射向患有聽力損失之例如18至80歲之個體投與遞增劑量之本文所揭示組成物，例如rAAV-KCNQ4抑制性RNA的安全性及耐受性。
在一些實施例中，本文所揭示方法中之任一者包含評價本文所揭示組成物例如rAAV-KCNQ4抑制性RNA之安全性及耐受性。在一些實施例中，在隨機受控環境下(使用同時非干預觀察臂)進行本文所揭示組成物，例如rAAV-KCNQ4抑制性RNA治療聽力損失之功效的評價。
在一些實施例中，本文所揭示方法中之任一者包含評價本文所揭示組成物例如rAAV-KCNQ4抑制性RNA之安全性及耐受性。在一些實施例中，在隨機受控環境下(使用同時非干預觀察臂)進行本文所揭示組成物，例如rAAV-KCNQ4抑制性RNA治療視覺損失之功效的評價。iii. rAAV-KCNQ4
在一些實施例中，本文揭示之任何方法包含劑量遞增研究以評定患有聽力損失之個體(例如哺乳動物，例如人類，例如患者)中之安全性及耐受性。在一些實施例中，以本文揭示之給藥方案投與本文揭示之組成物，例如rAAV-KCNQ4。在一些實施例中，給藥方案包含單側或雙側耳蝸內投與一定劑量，例如本文所述之劑量的本文所揭示組成物，例如rAAV-KCNQ4。在一些實施例中，給藥方案包括以如下之體積遞送：每個耳蝸至少0.001 mL、0.005 mL、0.01 mL、至少0.02 mL、至少0.03 mL、至少0.04 mL、至少0.05 mL、至少0.06 mL、至少0.07 mL、至少0.08 mL、至少0.09 mL、至少0.10 mL、至少0.11 mL、至少0.12 mL、至少0.13 mL、至少0.14 mL、至少0.15 mL、至少0.16 mL、至少0.17 mL、至少0.18 mL、至少0.19 mL或至少0.20 mL。在一些實施例中，給藥方案包括以如下之體積遞送：每個耳蝸至多0.30 mL、至多0.25 mL、至多0.20 mL、至多0.15 mL、至多0.14 mL、至多0.13 mL、至多0.12 mL、至多0.11 mL、至多0.10 mL、至多0.09 mL、至多0.08 mL、至多0.07 mL、至多0.06 mL、至多0.05 mL、至多0.01 mL、至多0.005 mL或至多0.001 mL。在一些實施例中，給藥方案包括以如下之體積遞送：視群體而定，每個耳蝸約0.001 mL、0.005 mL、0.01 mL、0.05 mL、約0.06 mL、約0.07 mL、約0.08 mL、約0.09 mL、約0.10 mL、約0.11 mL、約0.12 mL、約0.13 mL、約0.14 mL或約0.15 mL。在一些實施例中，給藥方案包括以如下之體積遞送：每個耳蝸至少0.001 mL、0.005 mL、0.01 mL、至少0.02 mL、至少0.03 mL、至少0.04 mL、至少0.05 mL、至少0.06 mL、至少0.07 mL、至少0.08 mL、至少0.09 mL、至少0.10 mL、至少0.11 mL、至少0.12 mL、至少0.13 mL、至少0.14 mL、至少0.15 mL、至少0.16 mL、至少0.17 mL、至少0.18 mL、至少0.19 mL或至少0.20 mL。在一些實施例中，給藥方案包括以如下之體積遞送：每個耳蝸至多0.30 mL、至多0.25 mL、至多0.20 mL、至多0.15 mL、至多0.14 mL、至多0.13 mL、至多0.12 mL、至多0.11 mL、至多0.10 mL、至多0.09 mL、至多0.08 mL、至多0.07 mL、至多0.06 mL、至多0.05 mL、至多0.01 mL、至多0.005 mL或至多0.001 mL。在一些實施例中，給藥方案包括以如下之體積遞送：視群體而定，每個耳蝸約0.001 mL、約0.005 mL、約0.01 mL、0.05 mL、約0.06 mL、約0.07 mL、約0.08 mL、約0.09 mL、約0.10 mL、約0.11 mL、約0.12 mL、約0.13 mL、約0.14 mL或約0.15 mL。
在一些實施例中，本文揭示之方法評價經由耳蝸內注射向患有聽力損失之例如18至80歲之個體投與遞增劑量之本文所揭示組成物，例如rAAV-KCNQ4的安全性及耐受性。
在一些實施例中，本文揭示之方法評價經由眼內注射向患有聽力損失之例如18至80歲之個體投與遞增劑量之本文所揭示組成物，例如rAAV-KCNQ4的安全性及耐受性。
在一些實施例中，本文所揭示方法中之任一者包含評價本文所揭示組成物例如rAAV-KCNQ4之安全性及耐受性。在一些實施例中，在隨機受控環境下(使用同時非干預觀察臂)進行本文所揭示組成物，例如rAAV-KCNQ4治療聽力損失之功效的評價。
在一些實施例中，本文所揭示方法中之任一者包含評價本文所揭示組成物例如rAAV-KCNQ4之安全性及耐受性。在一些實施例中，在隨機受控環境下(使用同時非干預觀察臂)進行本文所揭示組成物，例如rAAV-KCNQ4治療視覺損失之功效的評價。 6. 遞送策略  a. 抑制性RNA或基因組編輯系統之基於核酸之遞送
在一些實施例中，對編碼本文所述之CRISPR核酸酶及gRNA組分(視情況與一或多種其他組分一起)之一或多種核酸實施基因組編輯系統。在一些實施例中，基因組編輯系統以包含該等核酸之一或多種構築體，例如病毒構築體，諸如腺相關病毒形式實施；且在一些實施例中，基因組編輯系統以前述任一者之組合的形式實施。根據本文闡述之原理操作的其他或經修改實施對於熟習此項技術者顯而易見，且在本揭示案之範疇內。
在一個非限制性實施例中，構築體驅動基因組編輯系統之表現。此項技術包含多種可用於本發明之合適構築體。欲使用之構築體適合在真核細胞中復製及視情況整合。典型構築體含有可用於調節所要核酸序列之表現的轉錄及轉譯終止子、起始序列及啟動子。本發明之構築體亦可用於核酸標準基因遞送方案。用於基因遞送之方法為此項技術中所已知(美國專利第5,399,346號、第5,580,859號及第5,589,466號，該等專利以全文引用之方式併入本文中)。
當特異於標靶基因之引導核酸序列及Cas核酸內切酶引入細胞中且形成使Cas核酸內切酶能夠在標靶基因處引入雙股斷裂之複合物時，會發生CRISPR/Cas基因破壞。在一些實施例中，CRISPR系統包含表現構築體，諸如但不限於pAd5F35-CRISPR構築體。在其他實施例中，Cas表現構築體誘導Cas9核酸內切酶之表現。亦可使用其他核酸內切酶，包括但不限於Cpf1、T7、Cas3、Cas8a、Cas8b、Cas10d、Cse1、Csy1、Csn2、Cas4、Cas10、Csm2、Cmr5、Fok1、此項技術中已知之其他核酸酶以及其任何組合。
在一些實施例中，誘導Cas表現構築體包含使細胞暴露於活化Cas表現構築體中之誘導型啟動子的試劑。在該等實施例中，Cas表現構築體包括誘導型啟動子，諸如可藉由暴露於抗生素(例如藉由四環素或四環素之衍生物，例如多西環素(doxycycline))誘導之啟動子。然而，應瞭解，可使用其他誘導型啟動子。誘導劑可為引起誘導型啟動子之誘導的選擇性條件(例如暴露於試劑，例如抗生素)。此引起Cas表現構築體之表現。
在其他實施例中，將驅動CRISPR系統之一或多種元件之表現的一或多種構築體引入宿主細胞中，使得CRISPR系統之元件的表現指導一或多個標靶位點處CRISPR複合物之形成。舉例而言，Cas酶，即一種連接於tracr配對序列之引導序列，及tracr序列可各自操作性連接於各別構築體上之各別調節元件。替代地，可將自相同或不同調節元件表現之兩種或更多種元件組合在單一構築體中，其中一或多種其他構築體提供CRISPR系統中不包括在第一構築體中之任何組分。可以任何合適方向配置組合在單一構築體中之CRISPR系統元件，諸如一個元件位於第二元件之5'端(「上游」)或3'端(「下游」)。一個元件之編碼序列可位於第二元件編碼序列之相同或相對股上，且以相同或相對方向定向。在一些實施例中，單一啟動子驅動以下之表現：編碼CRISPR酶之轉錄物，以及引導序列、tracr配對序列(視情況操作性連接於引導序列)及包埋在一或多個內含子序列中之tracr序列(例如每一者在不同內含子中，兩者或更多者在至少一個內含子中，或均在單一內含子中)中之一或多者。 b. 基因組修飾系統及/或轉殖基因之病毒遞送
在一些實施例中，可以病毒構築體，例如AAV構築體之形式向細胞提供構築體。在一些實施例中，基因組編輯系統使用包含該等核酸之一或多種構築體，例如病毒構築體，諸如腺相關病毒實施；且在一些實施例中，基因組編輯系統以前述任一者之組合的形式實施。在一些實施例中，使用病毒構築體投與轉殖基因，例如編碼KCNQ4 (例如功能性KCNQ4)之基因。病毒構築體技術為此項技術中所熟知，且例如描述於Sambrook等人 (第4版, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, New York, 2012，其以全文引用之方式併入本文中) 以及其他病毒學及分子生物學手冊中。可用作構築體之病毒包括但不限於逆轉錄病毒、腺病毒、腺相關病毒、皰疹病毒、辛德畢斯病毒、γ逆轉錄病毒及慢病毒。一般而言，合適構築體含有在至少一種生物體中起作用之複制起點、啟動子序列、便利限制性核酸內切酶位點及一或多種可選標記(例如WO 01/96584；WO 01/29058；及美國專利第6,326,193號，其中每一者以全文引用之方式併入本文中)。在一些實施例中，本揭示案提供遞送方法，該等方法包含投與包含抑制KCNQ4變體基因產物之一或多種組分的一或多種構築體，及/或包含表現外源KCNQ4 (例如功能性KCNQ4，例如野生型KCNQ4，例如經密碼子最佳化之KCNQ4)之一或多種組分的一或多種構築體。在不受任何特定理論限制之情況下，在病毒遞送組分以抑制KCNQ4變體且表現功能性KCNQ4之實施例中，功能性KCNQ4經密碼子最佳化以抵抗可存在於及/或引入組分所遞送之細胞或個體中的KCNQ4抑制性組分(例如抑制性核酸，例如miRNA)的影響。 7. 裝置及外科方法
本揭示案尤其提供在一些實施例中可用於治療耳聾及其他聽力相關疾病、病症及病狀之技術(例如系統、方法、裝置等)。此類技術之實例亦包括在例如WO2017223193及WO2019084145中，該等文獻中之每一者均以全文引用之方式併入本文中。在一些實施例中，例如本揭示案提供用於治療聽力損失(例如非症候群性感覺神經性聽力損失或症候群性感覺神經性聽力損失)之治療遞送系統。在一些該等實施例中，治療遞送系統可包括：(i)能夠在個體內耳之圓窗膜中產生一或複數個切口的醫療裝置，以及(ii)有效劑量之組成物(例如本文所述之任何組成物)。在一些實施例中，醫療裝置包括複數個微針。
AAV構築體能夠在內耳之標靶細胞中構成全長聽覺多肽信使RNA。在一些實施例中，本揭示案提供用於進行外科方法的手段，該方法包括以下步驟：向需要其之人類個體耳蝸內投與有效劑量之本揭示案之治療組成物。治療組成物能夠藉由使用醫療裝置來投與，該醫療裝置包括：a)用於在圓窗膜中產生一個或複數個切口之構件，及b)有效劑量之治療組成物。
本揭示案尤其提供用於治療(例如預防、逆轉、緩解、減弱)聽力損失之外科方法。在一個態樣中，方法包括如下步驟：向人類個體之耳蝸中在第一切口點處引入第一切口；及耳蝸內投與有效劑量之本文所提供之治療組成物(例如本文所述之任何組成物)。在一個實施例中，在第一切口點向個體投與治療組成物(例如本文所述之任何組成物)。在一些實施例中，在第一切口中或經由第一切口向個體投與治療組成物。在一個實施例中，在耳蝸卵圓窗膜中或經由耳蝸卵圓窗膜向個體投與治療組成物。在一個實施例中，在耳蝸圓窗膜中或經由耳蝸圓窗膜向個體投與治療組成物。
舉例而言，在一些實施例中，使用能夠在圓窗膜中產生複數個切口之醫療裝置來投與治療組成物。在一些實施例中，醫療裝置包括複數個微針。在一些實施例中，醫療裝置包括複數個微針，該複數個微針包括大致圓形第一外觀，其中各微針包括至少約10微米之直徑。在一些實施例中，醫療裝置包括基座及/或能夠容納治療組成物之儲器。在一些實施例中，醫療裝置包括複數個空心微針，該複數個空心微針分別包括能夠轉移治療組成物之內腔。在一些實施例中，醫療裝置包括用於產生至少部分真空之構件。 a. 引入耳蝸中之方法
本揭示案尤其提供將治療有效量之本文所述任何組成物或系統引入哺乳動物(例如人類)耳蝸中之方法。亦提供增加哺乳動物(例如人類)耳蝸中之細胞(例如毛細胞，例如外毛細胞)中功能性KCNQ4蛋白(例如可為功能性鉀通道之一部分的KCNQ4蛋白，該功能性鉀通道例如不會產生慢性去極化細胞，例如外毛細胞之鉀通道)之表現的方法，該等方法包括將治療有效量之本文所述之任何組成物引入個體之耳蝸中。
亦提供治療鑑別為具有缺陷(亦即非功能性) KCNQ4基因產物之個體(例如人類)的非症候群性感覺神經性聽力損失的方法。在一些該等實施例中，方法包括向個體之耳蝸投與治療有效量之本文所述之任何組成物。在一些實施例中，投與可包括投與一或多種組成物(例如一種組成物包含抑制性核酸，且另一組成物包含編碼功能性KCNQ4之構築體；例如一種組成物包含編碼功能性KCNQ4之構築體，且另一組成物包含生長因數或維持耳毛細胞健康之其他試劑等)。在一些實施例中，治療方法可另外包含向個體投與耳蝸植入物(例如與向個體投與本文所述之任何組成物大體上同時)。
在一些實施例中，治療方法包含投與兩次或更多次劑量之本文所述之任何組成物。在一些該等實施例中，將組成物引入或投與哺乳動物或個體之耳蝸。在一些實施例中，治療方法包含向個體之耳蝸中引入或投與第一劑量之組成物，在引入或投與第一劑量後評定個體之聽力功能，及若發現個體在正常範圍內不具有聽力功能(例如如使用此項技術中已知之任何聽力測試所確定)，則向個體之耳蝸中再投與至少一次劑量之組成物。
在一些實施例中，治療方法包含耳蝸內投與。在本文所述任何方法之一些該等實施例中，經由使用醫療裝置(例如，本文所述之任何例示性醫療裝置)來投與組成物。在一些實施例中，可如本文所述或此項技術中已知進行耳蝸內投與。舉例而言，在一些實施例中，可使用以下外科技術向耳蝸中投與或引入組成物：首先使用0度2.5-mm剛性內窺鏡進行可視化，清除外耳道，且使用圓刀鋒利地劃定約5-mm鼓膜瓣。隨後抬高鼓膜瓣，且向後進入中耳。鑑別且分割鼓索神經，且使用刮匙移除小骨，從而暴露圓窗膜。為增加所投與或引入組成物之頂端分佈，可使用外科雷射在卵圓窗中開2-mm之小窗，以允許在組成物之跨圓窗膜輸注期間進行外淋巴排出。隨後裝填微輸注裝置，且帶入外科區。操縱裝置至圓窗，且將尖端安放在骨圓窗懸垂物內，以允許微針穿透膜。將踏板接合以允許進行組成物之經計量穩定輸注。隨後撤出裝置，且用明膠泡沫貼片密封圓窗及鐙骨底板。熟習此項技術者應瞭解，亦可使用耳蝸內投與之其他變化或方法。在一些實施例中，可如本文所述使用任何該等可接受方法來遞送一或多種組成物及/或治療一或多個個體。
在一些實施例中，在圖 32 至圖 35 中描述用於本文所揭示方法中之任一者的例示性裝置。圖 35 說明用於將流體遞送至內耳之例示性裝置10。裝置10包括滾花手柄12及遠端手柄黏著件14 (例如環氧樹脂，諸如Loctite 4014)，該遠端手柄黏著件14與可伸縮海波管(hypotube)針支撐件24耦接。滾花手柄12 (或手柄部分)可包括滾花特徵及/或凹槽以增強抓握。滾花手柄12 (或手柄部分)可為約5 mm至約15 mm厚，或約5 mm至約12 mm厚，或約6 mm至約10 mm厚，或約6 mm至約9 mm厚，或約7 mm至約8 mm厚。滾花手柄12 (或手柄部分)可中空，使得在使用期間流體可通過裝置10。裝置10亦可包括在滾花手柄12近端18處之近端手柄黏著件16、在裝置10遠端20處具有止動件28 (如圖 33 中所示)之針頭子組件26 (如圖 33 中所示)及應變消除特徵22。應變消除特徵22可由Santoprene材料、Pebax材料、聚胺酯材料、聚矽氧材料、耐綸材料及/或熱塑性彈性體構成。可伸縮海波管針支撐件24圍繞且支撐置於其中之彎針38 (如圖 33 所示)。
仍參考圖 32 ，止動件28可由熱塑性材料或塑膠聚合物(諸如UV固化之聚合物)以及其他合適材料構成，且可用於防止彎針38在耳道中插入太遠(例如以防止彎針38插入側壁或其他內耳結構中)。裝置10亦可包括置於滾花手柄12與遠端手柄黏著件14之間的錐形部分23，該錐形部分23與可伸縮海波管針支撐件24耦接。滾花手柄12 (或手柄部分)可包括在手柄部分12之遠端處的錐形部分23。裝置10亦可包括與裝置10之近端16流體連接之管道36，且用作將裝置與上游組件(例如泵、注射器，及/或在一些實施例中，可耦接於控制系統及/或電源(未示)之上游組件)連接之流體入口管線。在一些實施例中，彎針38(如圖 33 中所示)自遠端20延伸穿過可伸縮海波管針支撐件24，穿過錐形部分23，穿過滾花手柄12，且穿過應變消除特徵22，且直接流體連接於管道36。在其他實施例中，彎針38與滾花手柄之中空內部流體連接(例如經由可伸縮海波管針支撐件24)，該中空內部又在近端16處與管道36流體連接。在彎針38未完全延伸通過裝置10之內部的實施例中，接觸面積(例如在重疊之嵌套海波管42之間)、公差及/或介面組件之間的密封劑必須足以防止治療流體溢出裝置10 (該裝置10在相對較低之壓力(例如約1帕斯卡(Pascal)至約50 Pa，或約2 Pa至約20 Pa，或約3 Pa至約10 Pa)下操作)。
圖 33 說明根據本文所揭示實施例之態樣的彎針子組件26的側視圖。彎針子組件26包括具有彎曲部分32之針38。彎針子組件26亦可包括耦接於彎曲部分32之止動件28。彎曲部分32包括在裝置10之遠端20處之成角度尖端34，以用於刺穿耳之膜(例如RWM)。針38、彎曲部分32及成角度頂部34中空的以使得流體可在其中流過。彎曲部分32之角46 (如圖 35 中所示)可變化。止動件28之幾何形狀可為圓柱形、盤形、環形、圓頂形及/或其他合適形狀。止動件28可模製在彎曲部分32上之適當位置。舉例而言，可使用黏著件或壓縮配合使止動件28同心圍繞彎曲部分32定位。黏著件之實例包括UV固化黏著件(諸如Dymax 203A-CTH-F-T)、彈性體黏著件、熱固性黏著件(諸如環氧樹脂或聚胺酯)或乳液黏著件(諸如聚乙酸乙烯酯)。止動件28同心地裝配在彎曲部分32周圍，使得成角度尖端34以期望插入深度插入耳中。彎針38可使用增量成形以及其他合適技術自直針形成。
圖 34 說明用於將流體遞送至內耳之例示性裝置10之透視圖。管道36可為約1300 mm (圖 34 中之尺寸11)至約1600 mm長，或約1400 mm至約1500 mm，或約1430 mm至約1450 mm。應變釋放特徵22可為約25 mm至約30 mm長(圖 34 中之尺寸15)，或約20 mm至約35 mm長。手柄12的長度可為約155.4mm (圖 34 中之尺寸13)長，或為約150 mm至約160 mm，或為約140 mm至約170 mm。可伸縮海波管針支撐件24可具有兩個或更多個嵌套海波管，例如三個嵌套海波管42A、42B及42C，或四個嵌套海波管42A、42B、42C及42D。海波管42A、42B、42C及尖端組件26之總長度(圖 34 中之尺寸17)可為約25 mm至約45 mm，或約30 mm至約40 mm，或約35 mm。另外，可伸縮海波管針支撐件24之長度可為約36 mm，或約25 mm至約45 mm，或約30 mm至約40 mm。三個嵌套海波管42A、42B及42C之長度可分別為3.5 mm、8.0 mm及19.8 mm，加或減約20%。可伸縮海波管針支撐件24之最內嵌套海波管(或最窄部分)可同心地置於針38周圍。
圖 35 說明根據本文所揭示實施例之態樣與裝置10之遠端20耦接之彎針子組件26的透視圖。如圖 35 所示，彎針子組件26可包括耦接於彎曲部分32之針38。在其他實施例中，彎針38可為單一針(例如直針，其隨後彎曲以使其包括期望角度46)。針38可為33號針，或者可包括約32至約34或約31至35之規格。在更細規格下，必須注意確保管道36不扭結或損壞。針38可附接於手柄12，以將針38安全且準確地放置於內耳中。如圖 35 所示，彎針子組件26亦可包括置於彎曲部分32周圍之止動件28。圖 35 亦展示彎曲部分32可包括成角度尖端34，以用於 刺穿耳之膜(例如RWM)。另外，止動件28之高度48可為約0.5 mm，或約0.4 mm至約0.6 mm，或約0.3 mm至約0.7 mm。彎曲部分32之長度52可為約1.45 mm，或約1.35 mm至約1.55 mm，或約1.2 mm至約1.7 mm。在其他實施例中，彎曲部分32可具有大於2.0 mm之長度，以使得止動件28之遠端與成角度尖端34的遠端之間的距離為約0.5 mm至約1.7 mm，或約0.6 mm至約1.5 mm，或約0.7 mm至約1.3 mm，或約0.8 mm至約1.2 mm。圖 35 說明止動件28之幾何形狀可為圓柱形、盤形及/或圓頂形。一般技術者應瞭解，可使用其他幾何形狀。
在一些實施例中，如本文所揭示之遞送方法包含用於內耳細胞轉導之合成AAV衣殼(例如AAV Anc80)，及/或用於直接向耳蝸靶向遞送之裝置。在某些實施例中，本揭示案提供適用於內耳細胞轉導之方法及組成物。
在本文所述方法中任一者之一些實施例中，在耳蝸卵圓窗膜中或經由耳蝸卵圓窗膜向個體投與治療組成物。在本文所述方法中任一者之一些實施例中，在耳蝸圓窗膜中或經由耳蝸圓窗膜向個體投與本文所述組成物中之任一者。在本文所述方法中任一者之一些實施例中，使用能夠在圓窗膜中產生複數個切口之醫療裝置來投與組成物。在一些實施例中，醫療裝置包括複數個微針。在一些實施例中，醫療裝置包括複數個微針，該複數個微針包括大致圓形第一外觀，其中各微針之直徑為至少約10微米。在一些實施例中，醫療裝置包括基座及/或能夠容納組成物之儲器。在一些實施例中，醫療裝置包括複數個空心微針，該複數個空心微針分別包括能夠轉移組成物之內腔。在一些實施例中，醫療裝置包括用於產生至少部分真空之構件。
在一些實施例中，本文亦揭示一種無菌一次性使用遞送裝置，其用於耳蝸內投與以將本文揭示之組成物，例如rAAV-KCNQ4，例如rAAV-KCNQ4抑制性RNA穿過鐙骨底板中安置有排放口之圓窗膜遞送至內耳之外淋巴液。在一些實施例中，在此耳蝸內投與方法中，本文所揭示之組成物，例如rAAV-KCNQ4，例如rAAV-KCNQ4抑制性RNA，可通過圓窗膜投與至鼓階中，其中在卵圓窗內之鐙骨底板中具有排放口，使得組成物灌注穿過鼓階，隨後經由蝸孔處之連接穿過前庭階，且沿流路到達鐙骨底板(圖 29A 至圖 29B )。 9. 評估聽力損失及恢復  a. 聽覺測試
在一些實施例中，使用聽覺腦幹反應量測值(ABR)確定聽力功能。在一些實施例中，藉由量測畸變產物耳聲發射(DPOAE)來測試聽力。在一些該等實施例中，自個體之一隻或兩隻耳獲得量測值。在一些該等實施例中，將記錄與同一個體之先前記錄及/或該等反應量測之已知臨限值比較，該等臨限值用於定義例如聽力損失與定義為正常聽力之可接受聽力範圍。在一些實施例中，個體在接受任何治療之前記錄ABR及/或DPOAE量測值。在一些實施例中，用本文所述之一或多種技術治療之個體在治療後與治療前相比，ABR及/或DPOAE量測值改良。在一些實施例中，ABR及/或DPOAE量測值在投與治療後且以治療後之規則隨訪間隔獲得。
在一些實施例中，聽力功能使用語音模式識別來確定，或由語音治療師確定聽力功能。在一些實施例中，藉由純音測試來確定聽力功能。在一些實施例中，藉由骨傳導測試來確定聽力功能。在一些實施例中，藉由聽覺反射測試來確定聽力功能。在一些實施例中，藉由鼓室測量法來確定聽力功能。在一些實施例中，藉由此項技術中已知的聽力分析的任何組合來確定聽力功能。在一些該等實施例中，量測值整體獲得，及/或自個體之一隻或兩隻耳獲得。在一些該等實施例中，將記錄及/或專業分析與同一個體之先前記錄及/或分析及/或該等反應量測之已知臨限值比較，該等臨限值用於定義例如聽力損失與定義為正常聽力之可接受聽力範圍。在一些實施例中，個體進行語音模式識別、純音測試、骨傳導測試、聽覺反射測試及/或鼓室測量法量測值及/或在接受任何治療之前進行之分析。
在一些實施例中，用本文所述之一或多種技術治療之個體在治療後與治療前相比，語音模式識別、純音測試、骨傳導測試、聽覺反射測試及/或鼓室測量法量測值改良。在一些實施例中，語音模式識別、純音測試、骨傳導測試、聽覺反射測試及/或鼓室測量法量測值在投與治療後且以治療後之規則隨訪間隔獲得。 b. 偵測或表徵之方法
偵測KCNQ4之表現及/或活性的方法為此項技術中所已知。在一些實施例中，可直接偵測KCNQ4蛋白之表現水準(例如偵測KCNQ4蛋白，偵測KCNQ4 mRNA等)。可用於直接偵測KCNQ4之表現及/或活性的技術的非限制性實例包括：例如即時PCR、Western墨點、免疫沈澱、免疫組織化學或免疫螢光。在一些實施例中，可間接偵測KCNQ4蛋白之表現(例如經由功能聽力測試、ABR、DPOAE等)。
在一些實施例中，可在投與如本文所述之任何藥劑(例如組成物，例如包含構築體之組成物等)之前及之後評價組織樣品(例如包含一或多種毛細胞，例如包含一或多種毛細胞)之毛細胞形態。在一些該等實施例中，可進行標準免疫組織化學或組織學分析。在一些實施例中，若活體外 或離體 使用細胞，則可進行其他免疫細胞化學或免疫組織化學分析。在一些實施例中，可對來自個體或活體外 細胞群之一或多種樣品進行一或多種蛋白或轉錄物的一或多種檢定(例如western墨點、ELISA、聚合酶鏈反應)。
本揭示案藉由提及以下實驗實例進一步詳細描述。提供此等實例僅出於說明之目的，且除非另有說明，否則不欲構成限制。因此，本揭示案絕不應視為限於以下實例，而應視為涵蓋由於本文提供之教導而變得顯而易見的任何及所有變化。
舉例而言，根據本揭示案，亦可使用其他檢定，包括本文實例部分中描述之彼等檢定以及此項技術中已知之彼等檢定。實例 實例 1 ： shRNA 介導之 KCNQ4 敲低
本實例展現可使用shRNA及量測人類細胞中之KCNQ4表現的報告構築體來達成KCNQ4之敲低(圖 2 ；亦參見圖 4 (頂部))。圖
在HEK293細胞中測試以下shRNA構築體及KCNQ4構築體：sh395、sh909、sh1095、sh1531、sh1593、sh1677、sh1721及sh1827 (參見圖 3 )。在HEK293細胞中測試以下構築體作為陽性對照(例如作為可達成之KCNQ4之最大敲低的參考)：SaCas9 + sgRNA 447Fw + KCNQ4 (泳道11)。在HEK293細胞中測試shVEGF構築體(靶向VEGF)及KCNQ4構築體作為陰性對照(泳道10)。另外，在HEK293細胞中僅測試KCNQ4構築體作為陰性對照(泳道12)。圖 3 展示與對照(泳道10及12)相比，用或不用例示性shRNA介導之敲低(泳道2-9)及CRISPR介導之敲低(泳道11)處理的HEK293細胞中KCNQ4之表現水準(N=4個生物重複樣)。在本實例中，KCNQ4之表現水準由sh1827及sgRNA 447Fw降低得最多。圖 11 及圖 12 各自展示用shRNA構築體中之每一者以及空shRNA構築體(「模擬物」)敲低之功效。使用定量PCR量測KCNQ4之水準，將該水準用GAPDH標準化。量測兩個獨立生物重複樣(圖 11 及圖 12 )，其中每一者每種條件具有三個生物重複樣。實例 2 ： miR 介導之 KCNQ4 敲低
本實例描述用於miR介導之KCNQ4敲低的組成物的設計。另外， 本實例展現使用本文所述之組成物及方法在人類細胞中進行的miR介導之KCNQ4敲低。實例 2.1 ： miRNA 構築體設計及方法
使用iDesigner設計八種抑制KCNQ4表現之miRNA靶向構築體(參見圖 5 )。圖 30 所示之序列1、2及4-7的最高脫靶物如圖 31 中所呈現。
如本文所述，將miRNA KCNQ4靶向序列(基於圖 30 中所呈現之KCNQ4靶向序列)工程改造成多種miRNA支架中，且評價KCNQ4敲低效率(參見圖 2 、圖 4 、圖 7 至圖 9 )。詳言之，使用KCNQ4-mScarlet敲低報告基因檢定(圖 7 )、螢光素酶報告基因檢定(圖 8 及圖 13 )及FLIPR檢定來評定本文所述之微小RNA構築體及組成物之KCNQ4敲低效率。實例 2.2 ：結果
在一個實驗中，使HEK293細胞與對照或靶向KCNQ4之十五種不同miRNA構築體之一接觸，且使用如本文所述之螢光素酶報告基因檢定評價(參見圖 14A 至圖 14B )。詳言之，測試miR-155支架內之六種人類KCNQ4靶向序列[miR1-155 (SEQ ID NO: 56)、miR2-155 (SEQ ID NO: 57)、miR4-155 (SEQ ID NO: 58)、miR5-155 (SEQ ID NO: 59)、miR6-155 (SEQ ID NO: 60)、miR7-155 (SEQ ID NO: 61)]及具有miR1靶向序列之九種微小RNA支架[miR1-16 (SEQ ID NO: 62)、miR1-26 (SEQ ID NO: 63)、miR1-96 (SEQ ID NO: 64)、miR1-122 (SEQ ID NO: 65)、miR1-135 (SEQ ID NO: 66)、miR1-182 (SEQ ID NO: 67)、miR1-183 (SEQ ID NO: 68)、miR1-335 (SEQ ID NO: 69)、miR1-451 (SEQ ID NO: 70)]的 KCNQ4敲低效率(參見圖 14A 至圖 14B )。轉染後24及48小時捕獲免疫螢光影像，且收穫細胞以如製造商之方案(Promega)所述進行Dual-Glo螢光素酶報告基因檢定。在標準發光儀中，自板之頂部每孔量測發光10秒。
在此等構築體中，展現有效KCNQ4敲低之支架包括miR-26、miR-16、miR-96、miR-135b及miR-155(參見圖 14A 至圖 14B )。此等miR中之每一者中剩餘的KCNQ4之水準為約9.8% (miR-26)；11.4% (miR-16)；13.0% (miR-96)；14.1% (miR-135b)；及14.7% (miR-155)。此等資料亦展示，在所測試之構築體中，展現有效KCNQ4敲低之KCNQ4靶向序列分別為RNAi_ID6 (SEQ ID NO: 76)、RNAi_ID4 (SEQ ID NO: 74)、RNAi_ID5 (SEQ ID NO: 75)、RNAi_ID2 (SEQ ID NO: 72)及RNAi_ID1 (SEQ ID NO: 71)。每種條件下剩餘之KCNQ4水準為RNAi_ID6 (17.7%)；RNAi_ID4 (20.9%)；RNAi_ID5 (23.7%)；RNAi_ID2 (25.3%)；及RNAi_ID1 (27.4%)。
此等結果令人驚訝地展示，例如基於miR之構築體相對於shRNA展現大體上增加之效率(如藉由KCNQ4敲低所量測)。舉例而言，當比較shRNA1095構築體(SEQ ID NO: 50)與miR6構築體(SEQ ID NO: 211)(其中每一者均包含KCNQ4靶向序列CTGGTACTACTATGACAGTAT)之KCNQ4敲低效率時，相較於shRNA構築體，miR6構築體之效率增加(參見例如圖 3 相對於圖 14A 至圖 14B )。
亦使用雙重螢光素酶報告基因檢定評價使用三十三種miRNA組成物組進行的miR介導之KCNQ4敲低(參見表 3 )。用600 ng例示性人類微小RNA質體DNA或對照CAG.GFP質體DNA及400 ng雙重螢光素酶報告DNA轉染HEK細胞(以4x104 個細胞/孔接種)。轉染後兩天，遵循標準方案操作雙重螢光素酶檢定(Promega)，且在標準板讀取器上讀取螢光素酶訊號。圖 15 展示根據螢火蟲螢光素酶訊號標準化，隨後根據CAG.EGFP對照質體標準化之海腎螢光素酶訊號(N=4；亦參見表 3 )。用微小RNA質體觀察到各種KCNQ4敲低水準，其在幾乎無敲低至接近80%敲低之範圍內(參見圖 15 )。表 3 ：使用本文所述之支架及靶向序列進行的miR介導之KCNQ4敲低的結果。
MIRNA ID 平均值 標準差 標準誤差
CAG.EGFP CAG 100.0% 0 0
miR2i_miR5u-26** 30 21.4% 7.7% 3.8%
miR6-26** 20 28.0% 6.3% 3.1%
miR2i_miR5u-16** 24 30.1% 2.2% 1.1%
miR5i_miR6u-26** 34 30.2% 7.7% 3.8%
miR4i_miR6u-26** 33 32.3% 9.2% 4.6%
miR2i_miR6u-26** 31 33.4% 9.3% 4.6%
miR4i_miR5u-26** 32 34.2% 6.1% 3.1%
miR1-26 22 35.9% 4.6% 2.3%
miR2-26** 11 36.9% 14.7% 7.4%
miR4i_miR6u-96** 5 38.3% 8.9% 4.5%
miR2i_miR6u-96 3 39.0% 5.3% 2.7%
miR2i_miR4u-26 29 39.9% 7.5% 3.8%
miR4i_miR5u-16 26 40.3% 8.4% 4.2%
miR2-16 10 42.0% 21.7% 10.9%
miR5i_miR6u-96 6 42.2% 11.2% 5.6%
miR2-96 12 43.6% 4.9% 2.5%
miR6-96 21 45.0% 10.9% 5.5%
miR2i_miR4u-16 23 45.1% 8.7% 4.3%
miR1-16 7 45.6% 7.7% 3.9%
miR5-26 17 46.7% 9.9% 5.0%
miR4-16 13 47.0% 11.4% 5.7%
miR5i_miR6u-16 28 47.6% 21.2% 10.6%
miR4-26 14 48.2% 8.2% 4.1%
miR4i_miR6u-16 27 48.3% 9.6% 4.8%
miR1-96 8 48.6% 19.9% 10.0%
miR5-16 16 51.4% 12.4% 6.2%
miR2i_miR6u-16 25 55.8% 14.8% 7.4%
miR6-16 19 57.4% 19.2% 9.6%
miR2i_miR5u-96 2 65.1% 14.4% 7.2%
miR5-96 18 73.5% 22.3% 11.1%
miR4i_miR5u-96 4 74.4% 9.9% 5.0%
miR2i_miR4u-96 1 85.5% 24.2% 12.1%
miR4-96 15 105.3% 42.0% 17.3%
**展現殘餘KCNQ4報告基因活性在21.4-38.3%範圍內之微小RNA質體。
亦使用脫靶報告基因檢定評價使用本文所述之構築體及組成物進行的miRNA介導之KCNQ4敲低(參見圖 16 )。用600 ng人類微小RNA質體DNA或對照CAG.GFP質體DNA及400 ng雙重螢光素酶脫靶報告DNA轉染HEK細胞(以4x104 個細胞/孔接種)。測試十一種微小RNA質體(參見圖 16 ，其中x軸上之數值對應於表 3 「ID」欄中之數值)。轉染後兩天，遵循標準方案操作雙重螢光素酶檢定(Promega)，且在標準板讀取器上讀取螢光素酶訊號。圖 16 展示十一種miR構築體之根據螢火蟲螢光素酶訊號標準化，隨後根據CAG.EGFP對照構築體標準化的海腎螢光素酶訊號(N=4)。如圖 16 中可見，一些miR構築體產生較多脫靶報告基因敲低，此表明脫靶效應之可能性更大，且可排除彼等質體。對於展示大於75%訊號(小於25%敲低)之構築體，考慮本文所述之其他實驗。
亦使用乘客報告基因檢定評定使用本文所述之構築體及組成物進行的miRNA介導之KCNQ4敲低(參見圖 17 )。用600 ng人類微小RNA質體DNA或對照CAG.GFP質體DNA及400 ng雙重螢光素酶乘客報告DNA轉染HEK細胞(以4x104 個細胞/孔接種)。測試十一種微小RNA質體(參見圖 17 ，其中x軸上之數值對應於表 3 「ID」欄中之數值)。轉染後兩天，遵循標準方案操作雙重螢光素酶檢定(Promega)，且在標準板讀取器上讀取螢光素酶訊號。圖 17 展示根據螢火蟲螢光素酶訊號標準化，隨後根據CAG.EGFP對照構築體標準化的海腎螢光素酶訊號。如圖 17 所示，一些miRNA構築體引起乘客報告基因之較多敲低，此表明自彼等微小RNA構築體更頻繁地產生乘客股。對於展示大於75%訊號(小於25%敲低)之構築體，考慮本文所述之其他實驗。
亦使用經密碼子最佳化之KCNQ4報告基因檢定評價使用本文所述之構築體及組成物進行的miRNA介導之KCNQ4敲低(參見圖 18 )。用600 ng人類微小RNA質體DNA或對照CAG.GFP質體DNA及400 ng雙重螢光素酶KCNQ4經密碼子最佳化之報告DNA轉染HEK細胞(以4x104 個細胞/孔接種)。測試十一種微小RNA質體(參見圖 18 ，其中x軸上之數值對應於表 3 「ID」欄中之數值)。轉染後兩天，遵循標準方案操作雙重螢光素酶檢定(Promega)，且在標準板讀取器上讀取螢光素酶訊號。圖 18 展示根據螢火蟲螢光素酶訊號標準化，隨後根據CAG.EGFP對照質體標準化的海腎螢光素酶(N=4)。觀察到一些miR構築體產生較多KCNQ4經密碼子修飾報告基因敲低。對於展示大於75%訊號(小於25%敲低)之miR構築體，考慮本文所述之其他實驗。
亦使用經密碼子最佳化之KCNQ4 30-mer引導報告基因檢定評價使用本文所述之構築體及組成物進行的miRNA介導之KCNQ4敲低(參見圖 19 )。用600 ng人類微小RNA質體DNA或對照CAG.GFP質體DNA及400 ng雙重螢光素酶KCNQ4 30-mer報告DNA轉染HEK細胞(以4x104 個細胞/孔接種)。測試十一種微小RNA質體(參見圖 19 ，其中x軸上之數值對應於表 3 「ID」欄中之數值)。轉染後兩天，遵循標準方案操作雙重螢光素酶檢定(Promega)，且在標準板讀取器上讀取螢光素酶訊號。圖 19 展示根據螢火蟲螢光素酶訊號標準化，隨後根據CAG.EGFP對照質體標準化的海腎螢光素酶(N=4)。由於許多質體具有兩種不同微小RNA，故針對其特異性30-mer報告基因測試各構築體，以評定給定質體中每種微小RNA之敲低功效。出乎意料地，一些構築體展示在同一質體中一種微小RNA之敲低比另一微小RNA更有效。
亦使用經密碼子最佳化之KCNQ4報告基因檢定評價使用本文所述之構築體及組成物進行的miRNA介導之KCNQ4敲低(參見圖 20 )。用600 ng小鼠微小RNA質體DNA或對照CAG.GFP質體DNA及400 ng雙重螢光素酶報告DNA轉染HEK細胞(以4x104 個細胞/孔接種) 。測試十一種微小RNA質體(參見圖 20 ，其中x軸上之數值對應於表 3 「ID」欄中之數值)。轉染後兩天，遵循標準方案操作雙重螢光素酶檢定(Promega)，且在標準板讀取器上讀取螢光素酶訊號。圖 20 展示根據螢火蟲螢光素酶訊號標準化，隨後根據CAG.EGFP對照構築體標準化的海腎螢光素酶(N=3)。在含有GFP及含有經密碼子修飾KCNQ4之微小RNA構築體之間觀察到類似敲低水準。
亦在HEK細胞中評價由miRNA構築體及包含人類KCNQ4靶向序列之組成物進行的KCNQ4之活體外 敲低(參見圖 21 及圖 22 )。用600 ng人類微小RNA質體DNA或對照CAG.GFP質體DNA及400 ng人類野生型KCNQ4-mScarlet報告DNA轉染HEK細胞(以1.5x105 個細胞/孔接種)。測試四種微小RNA構築體(參見圖 2 1，N=3)。轉染後三天，對細胞進行螢光成像(參見圖 2 1，N=3)，隨後收穫以進行western墨點分析(圖 22 ， N=3)。相較於CAG.GFP對照構築體，用不同微小RNA構築體觀察到KCNQ4-mScarlet訊號降低。在不希望受任何理論限制之情況下，本實例表明本文所述之miR構築體引起微小RNA介導之KCNQ4敲低。
亦在HEK細胞中評價由miRNA構築體及包含小鼠KCNQ4靶向序列之組成物進行的KCNQ4之活體外 敲低(參見圖 23 及圖 24 )。用600 ng小鼠微小RNA質體DNA或對照CAG.GFP質體DNA及400 ng小鼠KCNQ4-mScarlet報告DNA轉染HEK細胞(以1.5x105 個細胞/孔接種)。測試三種微小RNA構築體(參見圖 23 ，N=3)。轉染後三天，對細胞進行螢光成像(圖 23 ，N=3) ，隨後收穫以進行western墨點分析(圖 24 ，N=3)。相較於CAG.GFP對照構築體，用不同微小RNA構築體觀察到KCNQ4-mScarlet訊號降低。在不希望受任何理論限制之情況下，本實例表明本文所述之miR構築體引起微小RNA介導之KCNQ4敲低。
亦使用KCNQ4報告基因檢定評價AAVAnc80-mmumiR KCNQ4敲低構築體及包含小鼠KCNQ4靶向序列之組成物(參見圖 25 及圖 26 )。將HEK細胞(4x104 個細胞/孔) 用AAVAnc80-mmumiR敲低載體以MOI 3 (1E5 vg/個細胞、 4E5 vg/個細胞及1E6 vg/個細胞) 或用AAVAnc80-CAG.EGFP對照載體以MOI 3 (1E5 vg/個細胞、 4E5 vg/個細胞及1E6 vg/個細胞) 轉導，隨後用400 ng螢光素酶報告質體轉染。經由標準方案轉導後72小時進行雙重螢光素酶檢定(Promega)。圖 25 展示根據螢火蟲螢光素酶訊號標準化，隨後根據AAVAnc80-CAG.EGFP載體標準化之海腎螢光素酶訊號。將雙重螢光素酶檢定之前細胞之螢光影像展示於其各別直方圖下方(參見圖 26 )。對於所有載體，觀察到隨著載體MOI增加產生之雙重螢光素酶KCNQ4報告基因之劑量依賴性敲低。
亦評價使用本文所述之miRNA構築體及組成物獲得的對KCNQ4通道電導之影響(參見圖 27 )。將穩定表現人類KCNQ4之CHO細胞用不同量之人類微小RNA質體DNA電穿孔(質體劑量以DNA之微克數計)。藉由添加無濃度-0.01、0.03、0.1、0.3、1、3、10、30及100 μM之氟吡汀(flupirtine)(KCNQ4促效劑)進行FLIPR檢定，每種濃度N = 4個孔。添加氟吡汀後，經由鉈通量檢定(鉀離子替代物)量測螢光發射。圖 27 展示不同治療條件之最大相對光單位(RLU)。觀察到隨著微小RNA質體之質體劑量增加產生的劑量依賴性敲低作用，此藉由相較於經CAG.GFP處理細胞，經微小RNA處理細胞中經活化KCNQ4之RLU較低指示。
亦評價使用本文所述之小鼠AAVAnc80-mmumiR-GFP構築體及組成物在HEK細胞中進行的小鼠KCNQ4之活體外 敲除(參見圖 28 )。將HEK細胞(1.5x105 個細胞/孔) 用小鼠KCNQ4-mScarlet報告質體(「CM」指經密碼子最佳化之KCNQ4序列)轉染，然後24 h後用小鼠AAVAnc80-mmumiR-GFP載體轉導，且在轉導後72 h收穫以用於western蛋白分析。觀察到來自AAVAnc80-mmumiR-KCNQ4CM載體(泳道12及泳道15)之經密碼子修飾KCNQ4蛋白的表現。重要地，在用AAVAnc80-mmumiR-GFP載體處理後觀察到小鼠KCNQ4水準敲低(例如將泳道3(對照)與泳道6及9比較)。實例 3 ：表現 WT KCNQ4 及功能喪失 KCNQ4 變體之穩定人類細胞株的產生
本實例試圖克服在藉由western墨點分析或定量PCR檢定時，HEK293細胞以幾乎不可偵測之水準表現KCNQ4的問題。為解決此問題，本實例描述產生表現野生型KCNQ4及功能喪失KCNQ4變體之穩定人類細胞株。穩定人類細胞株可藉由敲入(例如使用CRISPR技術，例如自具有功能喪失突變之患者獲得細胞等)野生型KCNQ4及功能喪失KCNQ4變體產生，每一者均具有不同可偵測(例如可視化)報告系統，諸如本揭示案提供之報告系統。野生型KCNQ4為天然野生型序列或經密碼子最佳化之序列(以抵抗miRNA介導之降解)。經工程改造之人類細胞株可用於多種目的，諸如篩選用於有效KCNQ4敲低之人類質體及病毒，諸如本揭示案中描述之彼等者。另外，經工程改造之人類細胞株可用於量測根據本揭示案處理之前及之後的K+電流。實例 4 ：小鼠中 KCNQ4 之敲低
本實例描述改良小鼠之聽力的KCNQ4敲低策略。將野生型(+/+)、雜合(Dn/+)及純合(Dn/Dn) 小鼠組各自在表 4 及如下所示之四種條件中之一者中測試：(1)投與+/+及Dn/+小鼠本文所述之eGFP及miRNA構築體(第1組)；(2)僅投與+/+小鼠eGFP(轉導)，且投與Dn/+及Dn/Dn小鼠本文所述之KCNQ及miRNA構築體；(3)僅投與Dn/+及Dn/Dn 小鼠KCNQ構築體(用於增強KCNQ表現)；及(4)不向小鼠投與任何構築體(陰性對照)。先前已描述Dn轉殖基因(雜合及純合)小鼠(參見Kharkovets等人, Mice with altered KCNQ4+ channels implicate sensory outer hair cells in human progressive deafness, EMBO, 2006；該文獻以全文引用之方式併入本文中)。
如熟習此項技術者應瞭解，「Kharkovets等人」之小鼠基於 C57BL/6 背景，該背景在Cdh23基因中具有(自然發生之自發)點突變，此會引起年齡相關性聽力損失。本實例描述在基於C57BL/6之Dn轉殖基因小鼠與回交至另一背景(例如FVB)之小鼠兩者中進行的研究，該另一背景不具有Cdh23突變，使得在老年小鼠中之實驗不會因任何 Cdh23介導之聽力損失而混淆。可使用包含AAV2 ITR之基於AAV之構築體來遞送miRNA，且可用包含Anc80之衣殼將病毒粒子衣殼化。表 4 ： KCNQ4敲低策略
基因型 第 1 組 第 2 組 第 3 組 第 4 組
+/+ eGFP +微小RNA 僅eGFP(轉導)
Dn/+ eGFP +微小RNA KCNQ4 +微小RNA 僅KCNQ4 (增強) 未注射
Dn/Dn KCNQ4 +微小RNA 僅KCNQ4 (增強) 未注射
在此研究中，在特定時間點將miRNA或對照構築體注射至小鼠中。注射後2-4週可進行外毛細胞(OHC)及組織學分析。聽覺腦幹反應(ABR)量測值可在注射後兩週開始量測，且以6-12週之間隔持續進行。將miRNA或對照構築體投與至斷奶或幼年(例如P21、P30、P36等)小鼠或成年(P42、P60等)小鼠。在此，在P21或P30向小鼠注射。使用外毛細胞(OHC)記錄及組織學分析，在注射後大約3週進行第一聽覺讀出。對P30時注射之小鼠在12週、24週、30週及42週齡時進行聽覺腦幹反應量測，且對P21時注射之小鼠在P50、P112及P160天齡時進行聽覺腦幹反應量測。實例 5 ： HEK 細胞中 KCNQ4 之置換及敲低
本實例描述一種靶向策略，該策略使用SaCas9/gRNA策略敲除兩種KCNQ4等位基因，且用經密碼子最佳化之KCNQ4置換野生型KCNQ4( 圖 9 )。本實例亦描述經由Western墨點及定量PCR進行之HEK細胞中KCNQ4敲低的活體外 分析。
圖 10 展示一種western墨點，其展現在HEK細胞中SaCas9/gRNA之轉導顯著降低KCNQ4。用SaCas9及KCNQ4 DNA轉染以下引導物，以確定敲低效率：sg233Fw (泳道2)、sg386Fw (泳道3)、sg408Rev (泳道4)、sg447Fw(泳道5)、sg482Fw (泳道6)及sg490Fw (泳道7)。使用未轉染之對照(泳道8)、sgVEGF (靶向VEGF)(泳道9)及β-肌動蛋白表現(泳道2-9)作為對照。基於TIDE、western墨點及免疫螢光分析(資料未示)，sgRNA 386Fw及sgRNA 408Rev抑制KNCQ4表現之能力高於測試之其他sgRNA。為擴展及/或改良迄今獲得之結果，可使用失活Cas9及小鼠sgRNA序列在3T3細胞中進行類似實驗。
本實例亦描述使用AAV遞送CRISPR/Cas9 (AAV-CRISPR)。首先，可活體外 設計且表徵數種構築體，對雙重轉染之細胞使用TIDE、定量及western墨點分析以確定DNA及RNA敲低之程度。可使用以下例示性構築體：CMV.dCas9；CMV.SaCas9；Hsa KCNQ4codop.U6-386Fw (n=3，在HEK中)；Hsa KCNQ4codop.U6-408Rev (n=3，在HEK中)；Mmu KCNQ4codop.U6-386Fw (n=1，隨後外植體)；Mmu KCNQ4codop.U6-408Rev (n=1，隨後外植體)；Hsa eGFP.U6-386Fw (n=3，在HEK中)；Hsa eGFP.U6-408Rev (n=3，在HEK中)；Mmu eGFP.U6-386Fw (n=1，隨後外植體)；Mmu eGFP.U6-408Rev (n=1，隨後外植體)。分別設計及表徵dCas9.U6 gRNA (人類)，且使用相同方法分析。
可將基於Anc80之構築體用於sgRNA構築體。使用eGFP病毒在野生型小鼠耳蝸外植體、人類細胞或HEK細胞中測試AAV-CRISPR構築體效率，以確定無置換情況下內源KCNQ4之敲低。使用各種檢定，諸如IHC、定量及/或western墨點分析評價KCNQ4之敲低。亦可測試AAV2衣殼。
本實例亦描述小鼠AAV-CRISPR實驗 (N=24)。在遞送AAV-CRISPR後21天及30天時，處死小鼠且可進行失活Cas9、Myo7a (內毛細胞及外毛細胞中)及KCNQ4分析(例如IHC分析)實例 6 ： KCNQ4 介導之聽力損失的治療
本實例描述一種靶向策略，其敲除兩種KCNQ4等位基因以消除任何KCNQ4變體，且同時或依序投與編碼經密碼子最佳化KCNQ4之組成物。使用miRNA或SaCas9/gRNA 策略達成此敲低。本實例亦使用經由Western墨點及定量PCR進行的HEK細胞中KCNQ4敲低之活體外 檢定作為預處理或品質控制檢定，以確定方法之功效。
向具有至少一種所鑑別之功能喪失KCNQ4變體基因的個體投與組成物。個體之基因組KCNQ4基因經抑制，且達成所投與之經密碼子最佳化野生型KCNQ4之表現。可在投與前及投與後，進行聽力測試(例如ABR、DPOAE)。
可使用基於Anc80或基於AAV2之粒子來遞送所有構築體(例如miRNA、CRISPR/Cas9、外源經密碼子最佳化KCNQ4)。實例 7 ：適用於向內耳遞送組成物之裝置描述
本實例涉及適用於將rAAV粒子遞送至內耳之裝置。使用專用微導管將包含rAAV粒子之組成物遞送至個體之耳蝸，該專用微導管經設計以用於穩定且安全地穿透圓窗膜(RWM)。微導管經成形以使得執行遞送程式之外科醫生可經由外耳道進入中耳腔且使微導管之末端與RWM接觸。該微導管之遠端可包括直徑為約10微米至約1,000微米之至少一個微針，其在RWM中產生穿孔，該等穿孔足以允許所述rAAV粒子(例如包含本揭示案之rAAV構築體)以不損害內耳之速率(例如生理學上可接受之速率，例如大約30 µL/min至大約90 µL/min之速率)進入鼓階之耳蝸外淋巴，但足夠小而無需手術修復即可癒合。以指定力價(例如大約1x1012 至5x1013 vg/mL)向微導管中位於微針近端之其餘部分裝載AAV粒子/人工外淋巴調配物。將微導管之近端與微操作器連接，從而允許精確地低體積輸注大約30 µL至大約100 µL。 實例8：人類臨床實例
患者診斷為具有功能喪失之KCNQ4基因變體。抑制性核酸經設計以靶向功能喪失之KCNQ4基因變體。將患者全身麻醉。外科醫生自外耳道接近鼓膜，在外耳道之下邊緣與鼓膜相遇處產生小切口，且將鼓膜抬為瓣狀以暴露中耳空間。使用外科雷射在鐙骨底板中產生小開口(約2 mm)。隨後，外科醫生用微導管穿透圓窗膜，該微導管裝載有在人工外淋巴中製備的基於AAV之構築體之混合物的溶液，力價為1e13 vg/mL，該等構築體各自包含KCNQ4或外源經密碼子最佳化KCNQ4之抑制性核酸。將微導管連接於微操作器，該微操作器以約1 uL/min之速率輸注約20 uL混合物。在完成輸注後，外科醫生撤出微導管，且用凝膠泡沫貼片修補鐙骨底板及RWM中之孔。該程式以置換鼓膜瓣隨後允許患者退出且自麻醉恢復結束。 實例9：母體血液之非侵入性產前測試以偵測KCNQ4突變
將母體血液樣品(20-40 mL)收集至無細胞DNA管中。藉由2,000 g離心20分鐘，隨後3,220 g離心30分鐘之雙重離心方案，自各樣品分離至少7 mL血漿，其中在第一次旋轉後轉移上清液。使用QIAGEN QIAmp循環核酸套組自7-20 mL血漿分離cfDNA，且在45 µL TE緩衝液中溶離。自第一次離心後獲得之膚色血球層分離純母體基因體DNA。
藉由組合用於選擇具有最小化之探針-探針相互作用可能性之探針的檢定的熱力學模型化與前述擴增方法(Stiller等人. 2009Genome Res 19(10):1843-1848，該文獻以全文引用之方式併入本文中)，可達成11,000個檢定之多重化。使用11,000個標靶特異性檢定將母體cfDNA及母體基因體DNA樣品預擴增15個循環，且使用嵌套引子將等分試樣轉移至具有15個循環之第二PCR反應中。藉由在第三輪12個循環之PCR中添加條形碼標籤來製備測序用樣品。標靶包括對應於已知引起KCNQ4功能喪失之KCNQ4中超過30種突變的SNP，及/或覆蓋KCNQ4之所有外顯子的序列以偵測任何目前未知但具有潛在病原性(例如功能喪失)之變體。隨後使用Illumina HiSeq測序儀對擴增子進行測序。使用市售軟體進行基因體序列比對。實施例
實施例1. 一種構築體，該構築體包含與啟動子操作性連接之編碼序列，其中該編碼序列編碼Kv7.4蛋白。
實施例2. 如實施例1之構築體，其中該編碼序列為KCNQ4基因。
實施例3. 如實施例2之構築體，其中該KCNQ4基因為靈長類動物KCNQ4基因。
實施例4. 如實施例2或3之構築體，其中該KCNQ4基因為人類KCNQ4基因。
實施例5.如實施例4之構築體，其中該人類KCNQ4基因包含根據SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO: 2、SEQ ID NO: 3、SEQ ID NO: 4、SEQ ID NO: 5、SEQ ID NO: 6、SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO: 8、SEQ ID NO: 9、SEQ ID NO: 10、SEQ ID NO: 25、SEQ ID NO: 26、SEQ ID NO: 27、SEQ ID NO: 28、SEQ ID NO: 29、SEQ ID NO: 30或SEQ ID NO: 90之核酸序列。
實施例6. 如實施例4或5之構築體，其中該人類KCNQ4基因包含根據SEQ ID NO: 9或10之核酸序列。
實施例7. 如實施例1之構築體，其中該Kv7.4蛋白為靈長類動物Kv7.4蛋白。
實施例8. 如實施例1或7之構築體，其中該Kv7.4蛋白為人類Kv7.4蛋白。
實施例9. 如實施例8之構築體，其中該Kv7.4蛋白包含根據SEQ ID NO: 11、SEQ ID NO: 12或SEQ ID NO: 13之胺基酸序列。
實施例10. 如請求項1至9中任一項之構築體，其中該啟動子為誘導型啟動子、組成型啟動子或組織特異性啟動子。
實施例11. 如實施例1-10中任一項之構築體，其中該啟動子為耳蝸毛細胞特異性啟動子。
實施例12. 如實施例11之構築體，其中該耳蝸毛細胞特異性啟動子為ATOH1啟動子、POU4F3啟動子、LHX3啟動子、MYO7A啟動子、MYO6啟動子、α9ACHR啟動子或αl0ACHR啟動子。
實施例13. 如實施例1-10中任一項之構築體，其中該啟動子為CAG啟動子、CBA啟動子、smCBA啟動子、CMV啟動子或CB7啟動子。
實施例14. 如實施例13之構築體，其中該啟動子包含根據SEQ ID NO: 22、SEQ ID NO: 23、SEQ ID NO: 24、SEQ ID NO: 297、SEQ ID NO: 298、SEQ ID NO: 299、SEQ ID NO: 300、SEQ ID NO: 301、SEQ ID NO: 302、SEQ ID NO: 303、SEQ ID NO: 304、SEQ ID NO: 305、SEQ ID NO: 306、SEQ ID NO: 307、SEQ ID NO: 308、SEQ ID NO: 309及/或SEQ ID NO: 310之核酸序列。
實施例15. 如實施例1-14中任一項之構築體，其另外包含兩個AAV反向末端重複序列(ITR)，其中該兩個AAV ITR側接該編碼序列及該啟動子。
實施例16. 如實施例15之構築體，其中該兩個AAV ITR為或衍生自AAV2 ITR。
實施例17. 如實施例15之構築體，其中該兩個AAV ITR包含：(i)包含根據SEQ ID NO: 15之核酸序列的5' ITR及包含根據SEQ ID NO: 16之核酸序列的3' ITR；或(ii)包含根據SEQ ID NO: 19之核酸序列的5' ITR及包含根據SEQ ID NO: 20之核酸序列的3' ITR。
實施例18. 如實施例1之構築體，其中該構築體包含根據SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO: 2、SEQ ID NO: 3、SEQ ID NO: 4、SEQ ID NO: 5、SEQ ID NO: 6、SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO: 8、SEQ ID NO: 9、SEQ ID NO: 10、SEQ ID NO: 25、SEQ ID NO: 26、SEQ ID NO: 27、SEQ ID NO: 28、SEQ ID NO: 29、SEQ ID NO: 30、SEQ ID NO: 90或SEQ ID NO: 91之核酸序列。
實施例19. 如實施例1之構築體，其中該構築體包含根據SEQ ID NO: 1-41及/或42-70及/或96-97中之一或多者的核酸序列。
實施例20. 一種構築體，該構築體包含與啟動子操作性連接之編碼序列，其中該編碼序列編碼KCNQ4抑制性核酸，該KCNQ4抑制性核酸包含與KCNQ4基因互補之核苷酸序列。
實施例21. 如實施例20之構築體，其中該KCNQ4抑制性核酸為miRNA、siRNA或shRNA。
實施例22. 如實施例20或21之構築體，其中該KCNQ4抑制性RNA包含根據SEQ ID NO: 42、SEQ ID NO: 43、SEQ ID NO: 44、SEQ ID NO: 45、SEQ ID NO: 46、SEQ ID NO: 47、SEQ ID NO: 48、SEQ ID NO: 49、SEQ ID NO: 50、SEQ ID NO: 51、SEQ ID NO: 52、SEQ ID NO: 53、SEQ ID NO: 54、SEQ ID NO: 55、SEQ ID NO: 56、SEQ ID NO: 57、SEQ ID NO: 58、SEQ ID NO: 59、SEQ ID NO: 60、SEQ ID NO: 61、SEQ ID NO: 62、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO: 64、SEQ ID NO: 65、SEQ ID NO: 66、SEQ ID NO: 67、SEQ ID NO: 68、SEQ ID NO: 69、SEQ ID NO: 70、SEQ ID NO: 96或SEQ ID NO: 97之序列。
實施例23. 如實施例20之構築體，其中該KCNQ4抑制性RNA為gRNA。
實施例24. 如實施例20或23之構築體，其中該KCNQ4抑制性RNA包含根據SEQ ID NO: 42、SEQ ID NO: 43、SEQ ID NO: 44、SEQ ID NO: 45、SEQ ID NO: 46、SEQ ID NO: 47、SEQ ID NO: 48之序列。
實施例25. 如實施例20之構築體，其中該KCNQ4基因為靈長類動物KCNQ4基因。
實施例26. 如實施例20或25之構築體，其中該KCNQ4基因為人類KCNQ4基因。
實施例27. 如實施例26之構築體，其中該人類KCNQ4基因包含根據SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO: 2、SEQ ID NO: 3、SEQ ID NO: 4、SEQ ID NO: 5、SEQ ID NO: 6、SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO: 8、SEQ ID NO: 9、SEQ ID NO: 10、SEQ ID NO: 25、SEQ ID NO: 26、SEQ ID NO: 27、SEQ ID NO: 28、SEQ ID NO: 29、SEQ ID NO: 30或SEQ ID NO: 90之核酸序列。
實施例28. 如請求項20至27中任一項之構築體，其中該啟動子為誘導型啟動子、組成型啟動子或組織特異性啟動子。
實施例29. 如實施例20-28中任一項之構築體，其中該啟動子為耳蝸毛細胞特異性啟動子。
實施例30. 如實施例29之構築體，其中該耳蝸毛細胞特異性啟動子為ATOH1啟動子、POU4F3啟動子、LHX3啟動子、MYO7A啟動子、MYO6啟動子、α9ACHR啟動子或αl0ACHR啟動子。
實施例31. 如實施例20-28中任一項之構築體，其中該啟動子為H1或U6啟動子。
實施例32. 如實施例31之構築體，其中該啟動子包含根據SEQ ID NO: 22、SEQ ID NO: 23、SEQ ID NO: 24、SEQ ID NO: 297、SEQ ID NO: 298、SEQ ID NO: 299、SEQ ID NO: 300、SEQ ID NO: 301、SEQ ID NO: 302、SEQ ID NO: 303、SEQ ID NO: 304、SEQ ID NO: 305、SEQ ID NO: 306、SEQ ID NO: 307、SEQ ID NO: 308、SEQ ID NO: 309及/或SEQ ID NO: 310之核酸序列。
實施例33. 如實施例20-32中任一項之構築體，其另外包含兩個AAV反向末端重複序列(ITR)，其中該兩個AAV ITR側接該編碼序列及該啟動子。
實施例34. 如實施例33之構築體，其中該兩個AAV ITR為或衍生自AAV2 ITR。
實施例35. 如實施例33之構築體，其中該兩個AAV ITR包含： (i)包含根據SEQ ID NO: 15之核酸序列的5' ITR及包含根據SEQ ID NO: 16之核酸序列的3' ITR；或(ii)包含根據SEQ ID NO: 19之核酸序列的5' ITR及包含根據SEQ ID NO: 20之核酸序列的3' ITR。
實施例36. 如實施例1之構築體，其中該構築體包含根據SEQ ID NO: 1-10中任一者之核酸序列。
實施例37. 如實施例1之構築體，其中該構築體包含根據SEQ ID NO: 25-30或90-91中任一者之核酸序列。
實施例38. 一種AAV粒子，其包含如實施例1-19中任一項之構築體。
實施例39. 一種AAV粒子，其包含如實施例20-37中任一項之構築體。
實施例40. 如實施例38或39之AAV粒子，該AAV粒子另外包含AAV衣殼，其中該AAV衣殼為或衍生自AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、AAV-rh8、AAV-rh10、AAV-rh39、AAV-rh43或AAV Anc80衣殼。
實施例41. 如實施例40之AAV粒子，其中該AAV衣殼為AAV Anc80衣殼。
實施例42. 一種組成物，其包含：(i)如實施例1-19中任一項之構築體；(ii)如實施例20-37中任一項之構築體；或(iii)其組合。
實施例43. 一種組成物，其包含如實施例38-41中任一項之AAV粒子。
實施例44. 一種組成物，其包含：(i)如實施例38之AAV粒子；及(ii)如實施例39之AAV粒子；或(iii)其組合。
實施例45. 如實施例44之組成物，其中(i)、(ii)或兩者之該AAV粒子另外包含AAV衣殼，其中該AAV衣殼為或衍生自AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、AAV-rh8、AAV-rh10、AAV-rh39、AAV-rh43或AAV Anc80衣殼。
實施例46. 如實施例44之組成物，其中(i)、(ii)或兩者之該AAV粒子的AAV衣殼為AAV Anc80衣殼。
實施例47. 如實施例42-46中任一項之組成物，其中該組成物為醫藥組成物。
實施例48. 如實施例47之組成物，其另外包含醫藥學上可接受之載劑。
實施例49. 一種細胞，其包含如實施例42-48中任一項之組成物。
實施例50. 如實施例50之細胞，其中該細胞為活體內 、離體 或活體外 細胞。
實施例51. 如實施例49或50之細胞，其中該細胞為哺乳動物細胞。
實施例52. 如實施例51之細胞，其中該哺乳動物細胞為人類細胞。
實施例53. 如實施例52之細胞，其中使該細胞永生化以產生穩定細胞株。
實施例54. 如實施例52之細胞，其中該人類細胞在個體之耳中。
實施例55. 如實施例52之細胞，其中內源KCNQ4基因之至少一種複本具有至少一種序列變化。
實施例56. 如實施例55之細胞，其中該至少一種序列變化引起功能喪失之基因產物。
實施例57. 一種系統，其包含如實施例42-48中任一項之組成物。
實施例58. 一種方法，其包含使內耳細胞與如實施例42-48中任一項之組成物接觸。
實施例59. 如實施例58之方法，其中該內耳細胞為外毛細胞。
實施例60. 如實施例58或59之方法，其中該內耳細胞在個體之耳中。
實施例61. 如實施例58或59之方法，其中該內耳細胞為活體外 或離體 細胞。
實施例62. 一種方法，其包含使細胞與以下接觸：(i) 如實施例1-38中任一項之構築體；及(ii)包含AAV Rep基因、AAV Cap基因、AAV VA基因、AAV E2a基因及AAV E4基因之一或多種質體。
實施例63. 如實施例62之方法，其中該細胞為內耳細胞。
實施例64. 如實施例63之方法，其中該內耳細胞為外毛細胞。
實施例65. 如實施例63之方法，其中該內耳細胞在個體之耳中。
實施例66. 如實施例58或59之方法，其中該內耳細胞為活體外 或離體 細胞。
實施例67. 一種方法，其包含將如實施例42-48中任一項之組成物引入個體之內耳中。
實施例68. 如實施例67之方法，其中將該組成物引入該個體之耳蝸中。
實施例69. 如實施例67或68之方法，其中經由圓窗膜注射引入該組成物。
實施例70. 如實施例60、65或67-69中任一項之方法，其另外包含量測該個體之聽力水準。
實施例71. 如實施例70之方法，藉由進行聽覺腦幹反應(ABR)測試來量測聽力水準。
實施例72. 如實施例70或71之方法，其另外包含將該個體之聽力水準與參考聽力水準比較。
實施例73. 如實施例72之方法，其中該參考聽力水準為已公開或歷史參考聽力水準。
實施例74. 如實施例73之方法，其中該個體之聽力水準在引入如實施例1-19中任一項之構築體之後量測，且該參考聽力水準為在引入如實施例1-19中任一項之構築體之前量測的該個體之聽力水準。
實施例75. 如實施例58-74中任一項之方法，其另外包含量測個體之KCNQ4基因產物之水準。
實施例76. 如實施例75之方法，其中在該個體之內耳中量測該KCNQ4基因產物之水準。
實施例77. 如實施例75之方法，其中在該個體之耳蝸中量測該KCNQ4基因產物之水準。
實施例78. 如實施例58-77中任一項之方法，其另外包含將該個體之KCNQ4基因產物之水準與參考KCNQ4基因產物水準比較。
實施例79. 如實施例78之方法，其中該參考聽力水準為已公開或歷史參考KCNQ4基因產物水準。
實施例80. 如實施例75之方法，其中該個體之KCNQ4基因產物水準在引入如實施例1-37中任一項之構築體之後量測，且該參考KCNQ4基因產物水準為在引入如實施例1-37中任一項之組成物之前量測的該個體之KCNQ4基因產物水準。
實施例81. 一種治療聽力損失之方法，其包含向有需要之個體投與如實施例42-48中任一項之組成物。
實施例82. 一種治療聽力損失之方法，其包含向有需要之個體投與如實施例38-41中任一項之粒子。
實施例83. 如實施例1-37中任一項之構築體，其用於治療聽力損失。
實施例84. 如實施例42-48中任一項之組成物，其用於治療聽力損失。
實施例85. 如實施例38-41中任一項之粒子，其用於治療聽力損失。
實施例86. 一種如實施例1-37中任一項之構築體的用途，其用於製備治療聽力損失之藥物。
實施例87. 一種如實施例42-48中任一項之組成物的用途，其用於製備治療聽力損失之藥物。
實施例88. 一種如實施例38-41中任一項之粒子的用途，其用於製備治療聽力損失之藥物。
實施例89. 一種細胞，該細胞包含與啟動子操作性連接之編碼序列，其中該編碼序列編碼Kv7.4蛋白。
實施例90. 一種細胞，該細胞包含與啟動子操作性連接之編碼序列，其中該編碼序列編碼功能喪失之KCNQ4變體基因產物。
實施例91. 一種包含一或多種如實施例89之細胞的細胞群體，其中該群體為或包含穩定細胞株。
實施例92. 如實施例75-80中任一項之方法，其中該KCNQ4基因產物為Kv7.4蛋白。
實施例93. 一種包含抑制性核酸之構築體，其中該抑制性核酸為或包含以下中之一或多者：miR1-155；miR2-155；miR4-155；miR5-155；miR6-155；miR7-155 miR1-16；miR1-26；miR1-96；miR1-122；miR1-135；miR1-182；miR1-183；miR1-335；miR1-451。
實施例94. 一種miRNA，其選自由以下組成之群： miR1-155；miR2-155；miR4-155；miR5-155；miR6-155；miR7-155；miR1-16；miR1-26；miR1-96；miR1-122；miR1-135；miR1-182；miR1-183；miR1-335；miR1-451及其組合。
實施例95. 一種套組，其包含如實施例1至94中任一項之組成物。
實施例96. 如實施例95之套組，其中該組成物預裝載在裝置中。
實施例97. 如實施例96之套組，其中該裝置為微導管。
實施例98. 如實施例97之套組，其中該微導管經成形以使得其可經由外耳道進入中耳腔且使該微導管之末端與RWM接觸。
實施例99. 如實施例97或98之套組，其中該微導管之遠端包含至少一個直徑為10至1,000微米之微針。
實施例100. 如實施例95-99中任一項之套組，其另外包含裝置。
實施例101. 如實施例100之套組，其中該裝置為圖 32 至圖 35 中所述之裝置，或本文所述之裝置。
實施例102. 如實施例101之套組，其中該裝置包含針，該針包含彎曲部分及成角度尖端。等效物
應瞭解，已使用之詞語為描述性而非限制性詞語，且在較寬泛態樣中不背離本發明之真實範圍及精神的情況下可在隨附申請專利範圍之範圍內進行改變。
儘管已以一定長度且以關於數個所述實施例之一定特定性描述本發明，但預期不應將本發明限於任何此類特例或實施例或任何特定實施例，而是應當參考隨附申請專利範圍來解釋，以便鑑於先前技術提供此類申請專利範圍之最寬泛可解釋，從而有效涵蓋本發明之預期範圍。
應瞭解，儘管已結合本揭示案之詳細描述描述本揭示案，但前述描述意欲說明而非限制本揭示案之範圍，本揭示案之範圍由隨附申請專利範圍之範圍界定。其他態樣、優點及修改在以下申請專利範圍之範圍內。
本文提及之所有出版物、專利申請案、專利及其他參考文獻皆以全文引用之方式併入。在衝突之情況下，以本說明書(包括定義)為準。另外，章節標題、材料、方法及實例僅為說明性的，且不欲為限制性的。
10:裝置 11:管道尺寸 12:滾花手柄 13:手柄尺寸 14:遠端手柄黏著件 15:應變釋放特徵尺寸 16:近端手柄黏著件 17:海波管及尖端組件之總尺寸 18:裝置之近端處 20:裝置之遠端處 22:應變消除特徵; 應變釋放特徵 23:錐形部分 24:可伸縮海波管針支撐件 26:彎針子組件 28:止動件 32:彎曲部分 34:成角度頂部; 成角度尖端 36:管道 38:針 42A:海波管 42B:海波管 42C:海波管 46:彎曲部分之角度 48:止動件之高度 52:彎曲部分之長度
圖 1 展示KCNQ4基因中外顯子之整體示意圖，且列出已知引起聽力損失之某些例示性突變。圖 2 展示根據本揭示案之一實施例使用至少一種構築體之例示性抑制性RNA敲低策略。圖 3 展示用或不用例示性shRNA介導之敲低處理的HEK293細胞中KCNQ4之表現水準。圖 4 展示用於KCNQ4敲低之例示性shRNA及miRNA構築體。圖 5 展示用於抑制KCNQ4表現之八種miRNA靶向構築體之例示性設計。圖 6 描繪呈現例示性miRNA構築體之示意圖，該等miRNA構築體用於選擇在耳內各種區室中表現之miRNA靶向序列。圖 7 展示根據本揭示案之一實施例，用於KCNQ4敲低之例示性miR構築體及報告基因系統的示意圖。在該報告基因系統中，若miRNA與KCNQ4-mScarlet mRNA結合，則發生mRNA裂解，且報告基因不會產生可偵測訊號(mScarlet)，從而證明有效KCNQ4敲低。相反地，若miRNA不與KCNQ4-mScarlet mRNA結合，則不會發生裂解，且產生可偵測訊號(mScarlet)，從而證明KCNQ4表現(亦即無敲低)。圖 8 展示根據本揭示案之一實施例使用螢光素酶報告基因檢定進行的例示性miR介導之敲低(miR1-155)。圖8分別以出現順序揭示SEQ ID NO 292-296。圖 9 展示根據本揭示案之一實施例，用於KCNQ4敲低之例示性CRISPR基構築體及報告基因系統的示意圖。圖 10 展示CRISPR介導之敲低後HEK細胞中KCNQ4之表現水準(N=3個生物重複樣)。圖 11 展示量測shRNA介導之敲低後HEK細胞中KCNQ4之mRNA表現水準的例示性檢定的結果(每種條件N=3個生物重複樣)。圖 12 展示量測shRNA介導之敲低後HEK細胞中KCNQ4之mRNA表現水準的例示性檢定的結果(每種條件N=3個生物重複樣)。圖 13 展示根據本揭示案之一實施例，用於KCNQ4敲低之例示性miR基構築體、報告基因系統及檢定的示意圖。圖 14A 至圖 14B 展示當評價例示性支架及靶向序列且在評價後評定KCNQ4水準時獲得之結果。圖 15 展示當使用例示性支架及靶向序列且評定KCNQ4水準時獲得之結果。圖 16 展示當使用例示性脫靶報告基因檢定評價例示性支架及靶向序列時獲得之結果。圖 17 展示當使用例示性乘客報告基因檢定評價例示性支架及靶向序列時獲得之結果。圖 18 展示當使用例示性支架及靶向序列且評定KCNQ4水準時獲得之結果。圖 19 展示當使用例示性支架及靶向序列且評定KCNQ4水準時獲得之結果。圖 20 展示當使用例示性支架及靶向序列且評定KCNQ4水準時獲得之結果。圖 21 展示藉由本文所述之例示性支架及靶向序列進行的KCNQ4之活體外 敲低。圖 22 展示描繪western墨點之影像以評定使用本文所述之例示性支架及靶向序列進行的KCNQ4之活體外敲低。圖 23 展示藉由本文所述之例示性支架及靶向序列進行的KCNQ4之活體外 敲低。圖 24 展示描繪western墨點之影像以評定使用本文所述之例示性支架及靶向序列進行的KCNQ4之活體外 敲低。圖 25 展示當評價例示性支架及靶向序列且在評價後評定KCNQ4水準時獲得之結果。圖 26 展示用例示性AAVAnc80-CAG.EGFP構築體以MOI 3轉導之HEK細胞的影像。圖 27 展示當使用例示性支架及靶向序列且評定KCNQ4通道電導水準時獲得之結果。圖 28 展示描繪western墨點之影像以評定使用本文所述之例示性支架及靶向序列進行的KCNQ4之活體外 敲低。圖 29A 至圖 29B 為如本文所述之投與方法的示意圖。圖 29A 包括如本文所述之遞送裝置的影像。所示遞送裝置旨在用於穿過圓窗膜耳蝸內投與注射流體，其帶有止動件(綠色)以引導插入深度。圖 29B 包括展示注射流體預期穿過鼓階流至前庭階(經由耳蝸頂點處蝸孔處之連通)，隨後穿過位於卵圓窗內遞送裝置之鐙骨底板中的排放口流出耳蝸的影像(Talei 2019，該文獻以全文引用之方式併入本文中)。圖 30 描繪可根據本揭示案使用之用於抑制KCNQ4表現之七種miRNA靶向構築體。圖 31 描繪可根據本揭示案使用之用於抑制KCNQ4表現之七種miRNA靶向構築體的脫靶物。圖 32 說明根據本揭示案之態樣用於將流體遞送至內耳之裝置的透視圖。圖 33 說明根據本揭示案之態樣之彎針子組件的側視圖。圖 34 說明根據本揭示案之態樣用於將流體遞送至內耳之裝置的透視圖。圖 35 說明根據本揭示案之態樣與裝置之遠端耦接之彎針子組件的透視圖。
Figure 12_A0101_SEQ_0001
Figure 12_A0101_SEQ_0002
Figure 12_A0101_SEQ_0003
Figure 12_A0101_SEQ_0004
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Claims (102)

  1. 一種構築體，該構築體包含與啟動子操作性連接之編碼序列，其中該編碼序列編碼Kv7.4蛋白。
  2. 如請求項1之構築體，其中該編碼序列為KCNQ4基因。
  3. 如請求項2之構築體，其中該KCNQ4基因為靈長類動物KCNQ4基因。
  4. 如請求項2或3之構築體，其中該KCNQ4基因為人類KCNQ4基因。
  5. 如請求項4之構築體，其中該人類KCNQ4基因包含根據SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO: 2、SEQ ID NO: 3、SEQ ID NO: 4、SEQ ID NO: 5、SEQ ID NO: 6、SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO: 8、SEQ ID NO: 9、SEQ ID NO: 10、SEQ ID NO: 25、SEQ ID NO: 26、SEQ ID NO: 27、SEQ ID NO: 28、SEQ ID NO: 29、SEQ ID NO: 30或SEQ ID NO: 90之核酸序列。
  6. 如請求項4或5之構築體，其中該人類KCNQ4基因包含根據SEQ ID NO: 9或10之核酸序列。
  7. 如請求項1之構築體，其中該Kv7.4蛋白為靈長類動物Kv7.4蛋白。
  8. 如請求項1或7之構築體，其中該Kv7.4蛋白為人類Kv7.4蛋白。
  9. 如請求項8之構築體，其中該Kv7.4蛋白包含根據SEQ ID NO: 11、SEQ ID NO: 12或SEQ ID NO: 13之胺基酸序列。
  10. 如請求項1至9中任一項之構築體，其中該啟動子為誘導型啟動子、組成型啟動子或組織特異性啟動子。
  11. 如請求項1至10中任一項之構築體，其中該啟動子為耳蝸毛細胞特異性啟動子。
  12. 如請求項11之構築體，其中該耳蝸毛細胞特異性啟動子為ATOH1啟動子、POU4F3啟動子、LHX3啟動子、MYO7A啟動子、MYO6啟動子、α9ACHR啟動子或αl0ACHR啟動子。
  13. 如請求項1至10中任一項之構築體，其中該啟動子為CAG啟動子、CBA啟動子、smCBA啟動子、CMV啟動子或CB7啟動子。
  14. 如請求項13之構築體，其中該啟動子包含根據SEQ ID NO: 22、SEQ ID NO: 23、SEQ ID NO: 24、SEQ ID NO: 297、SEQ ID NO: 298、SEQ ID NO: 299、SEQ ID NO: 300、SEQ ID NO: 301、SEQ ID NO: 302、SEQ ID NO: 303、SEQ ID NO: 304、SEQ ID NO: 305、SEQ ID NO: 306、SEQ ID NO: 307、SEQ ID NO: 308、SEQ ID NO: 309及/或SEQ ID NO: 310之核酸序列。
  15. 如請求項1至14中任一項之構築體，其另外包含兩個AAV反向末端重複序列(ITR)，其中該兩個AAV ITR側接該編碼序列及該啟動子。
  16. 如請求項15之構築體，其中該兩個AAV ITR為或衍生自AAV2 ITR。
  17. 如請求項15之構築體，其中該兩個AAV ITR包含： (i)    包含根據SEQ ID NO: 15之核酸序列的5' ITR及包含根據SEQ ID NO: 16之核酸序列的3' ITR；或 (ii)   包含根據SEQ ID NO: 19之核酸序列的5' ITR及包含根據SEQ ID NO: 20之核酸序列的3' ITR。
  18. 如請求項1之構築體，其中該構築體包含根據SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO: 2、SEQ ID NO: 3、SEQ ID NO: 4、SEQ ID NO: 5、SEQ ID NO: 6、SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO: 8、SEQ ID NO: 9、SEQ ID NO: 10、SEQ ID NO: 25、SEQ ID NO: 26、SEQ ID NO: 27、SEQ ID NO: 28、SEQ ID NO: 29、SEQ ID NO: 30、SEQ ID NO: 90或SEQ ID NO: 91之核酸序列。
  19. 如請求項1之構築體，其中該構築體包含根據SEQ ID NO: 1-41及/或42-70及/或96-97中之一或多者的核酸序列。
  20. 一種構築體，該構築體包含與啟動子操作性連接之編碼序列，其中該編碼序列編碼KCNQ4抑制性核酸，該KCNQ4抑制性核酸包含與KCNQ4基因互補之核苷酸序列。
  21. 如請求項20之構築體，其中該KCNQ4抑制性核酸為miRNA、siRNA或shRNA。
  22. 如請求項20或21之構築體，其中該KCNQ4抑制性RNA包含根據SEQ ID NO: 42、SEQ ID NO: 43、SEQ ID NO: 44、SEQ ID NO: 45、SEQ ID NO: 46、SEQ ID NO: 47、SEQ ID NO: 48、SEQ ID NO: 49、SEQ ID NO: 50、SEQ ID NO: 51、SEQ ID NO: 52、SEQ ID NO: 53、SEQ ID NO: 54、SEQ ID NO: 55、SEQ ID NO: 56、SEQ ID NO: 57、SEQ ID NO: 58、SEQ ID NO: 59、SEQ ID NO: 60、SEQ ID NO: 61、SEQ ID NO: 62、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO: 64、SEQ ID NO: 65、SEQ ID NO: 66、SEQ ID NO: 67、SEQ ID NO: 68、SEQ ID NO: 69、SEQ ID NO: 70、SEQ ID NO: 96或SEQ ID NO: 97之序列。
  23. 如請求項20之構築體，其中該KCNQ4抑制性RNA為gRNA。
  24. 如請求項20或23之構築體，其中該KCNQ4抑制性RNA包含根據SEQ ID NO: 42、SEQ ID NO: 43、SEQ ID NO: 44、SEQ ID NO: 45、SEQ ID NO: 46、SEQ ID NO: 47、SEQ ID NO: 48之序列。
  25. 如請求項20之構築體，其中該KCNQ4基因為靈長類動物KCNQ4基因。
  26. 如請求項20或25之構築體，其中該KCNQ4基因為人類KCNQ4基因。
  27. 如請求項26之構築體，其中該人類KCNQ4基因包含根據SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO: 2、SEQ ID NO: 3、SEQ ID NO: 4、SEQ ID NO: 5、SEQ ID NO: 6、SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO: 8、SEQ ID NO: 9、SEQ ID NO: 10、SEQ ID NO: 25、SEQ ID NO: 26、SEQ ID NO: 27、SEQ ID NO: 28、SEQ ID NO: 29、SEQ ID NO: 30或SEQ ID NO: 90之核酸序列。
  28. 如請求項20至27中任一項之構築體，其中該啟動子為誘導型啟動子、組成型啟動子或組織特異性啟動子。
  29. 如請求項20至28中任一項之構築體，其中該啟動子為耳蝸毛細胞特異性啟動子。
  30. 如請求項29之構築體，其中該耳蝸毛細胞特異性啟動子為ATOH1啟動子、POU4F3啟動子、LHX3啟動子、MYO7A啟動子、MYO6啟動子、α9ACHR啟動子或αl0ACHR啟動子。
  31. 如請求項20至28中任一項之構築體，其中該啟動子為H1或U6啟動子。
  32. 如請求項31之構築體，其中該啟動子包含根據SEQ ID NO: 22、SEQ ID NO: 23、SEQ ID NO: 24、SEQ ID NO: 297、SEQ ID NO: 298、SEQ ID NO: 299、SEQ ID NO: 300、SEQ ID NO: 301、SEQ ID NO: 302、SEQ ID NO: 303、SEQ ID NO: 304、SEQ ID NO: 305、SEQ ID NO: 306、SEQ ID NO: 307、SEQ ID NO: 308、SEQ ID NO: 309及/或SEQ ID NO: 310之核酸序列。
  33. 如請求項20至32中任一項之構築體，其另外包含兩個AAV反向末端重複序列(ITR)，其中該兩個AAV ITR側接該編碼序列及該啟動子。
  34. 如請求項33之構築體，其中該兩個AAV ITR為或衍生自AAV2 ITR。
  35. 如請求項33之構築體，其中該兩個AAV ITR包含： (i)    包含根據SEQ ID NO: 15之核酸序列的5' ITR及包含根據SEQ ID NO: 16之核酸序列的3' ITR；或 (ii)   包含根據SEQ ID NO: 19之核酸序列的5' ITR及包含根據SEQ ID NO: 20之核酸序列的3' ITR。
  36. 如請求項1之構築體，其中該構築體包含根據SEQ ID NO: 1-10中任一者之核酸序列。
  37. 如請求項1之構築體，其中該構築體包含根據SEQ ID NO: 25-30或90-91中任一者之核酸序列。
  38. 一種AAV粒子，其包含如請求項1至19中任一項之構築體。
  39. 一種AAV粒子，其包含如請求項20至37中任一項之構築體。
  40. 如請求項38或39之AAV粒子，該AAV粒子另外包含AAV衣殼，其中該AAV衣殼為或衍生自AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、AAV-rh8、AAV-rh10、AAV-rh39、AAV-rh43或AAV Anc80衣殼。
  41. 如請求項40之AAV粒子，其中該AAV衣殼為AAV Anc80衣殼。
  42. 一種組成物，其包含： (i)    如請求項1至19中任一項之構築體； (ii)   如請求項20至37中任一項之構築體；或 (iii)  其組合。
  43. 一種組成物，其包含如請求項38至41中任一項之AAV粒子。
  44. 一種組成物，其包含： (i)      如請求項38之AAV粒子； (ii)   如請求項39之AAV粒子；或 (iii)  其組合。
  45. 如請求項44之組成物，其中(i)、(ii)或兩者之該AAV粒子另外包含AAV衣殼，其中該AAV衣殼為或衍生自AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、AAV-rh8、AAV-rh10、AAV-rh39、AAV-rh43或AAV Anc80衣殼。
  46. 如請求項44之組成物，其中(i)、(ii)或兩者之該AAV粒子的AAV衣殼為AAV Anc80衣殼。
  47. 如請求項42至46中任一項之組成物，其中該組成物為醫藥組成物。
  48. 如請求項47之組成物，其另外包含醫藥學上可接受之載劑。
  49. 一種細胞，其包含如請求項42至48中任一項之組成物。
  50. 如請求項49之細胞，其中該細胞為活體內 、離體 或活體外 細胞。
  51. 如請求項49或50之細胞，其中該細胞為哺乳動物細胞。
  52. 如請求項51之細胞，其中該哺乳動物細胞為人類細胞。
  53. 如請求項52之細胞，其中使該細胞永生化以產生穩定細胞株。
  54. 如請求項52之細胞，其中該人類細胞在個體之耳中。
  55. 如請求項52之細胞，其中內源KCNQ4基因之至少一種複本具有至少一種序列變化。
  56. 如請求項55之細胞，其中該至少一種序列變化引起功能喪失之基因產物。
  57. 一種系統，其包含如請求項42至48中任一項之組成物。
  58. 一種方法，其包含使內耳細胞與如請求項42至48中任一項之組成物接觸。
  59. 如請求項58之方法，其中該內耳細胞為外毛細胞。
  60. 如請求項58或59之方法，其中該內耳細胞在個體之耳中。
  61. 如請求項58或59之方法，其中該內耳細胞為活體外 或離體 細胞。
  62. 一種方法，其包含使細胞與以下接觸： (i)    如請求項1至38中任一項之構築體；及 (ii)   或多種質體，其包含AAV Rep基因、AAV Cap基因、AAV VA基因、AAV E2a基因及AAV E4基因。
  63. 如請求項62之方法，其中該細胞為內耳細胞。
  64. 如請求項63之方法，其中該內耳細胞為外毛細胞。
  65. 如請求項63之方法，其中該內耳細胞在個體之耳中。
  66. 如請求項58或59之方法，其中該內耳細胞為活體外 或離體 細胞。
  67. 一種方法，其包含將如請求項42至48中任一項之組成物引入個體之內耳中。
  68. 如請求項67之方法，其中將該組成物引入該個體之耳蝸中。
  69. 如請求項67或68之方法，其中經由圓窗膜注射引入該組成物。
  70. 如請求項60、65或67至69中任一項之方法，其另外包含量測該個體之聽力水準。
  71. 如請求項70之方法，藉由進行聽覺腦幹反應(ABR)測試來量測聽力水準。
  72. 如請求項70或71之方法，其另外包含將該個體之聽力水準與參考聽力水準比較。
  73. 如請求項72之方法，其中該參考聽力水準為已公開或歷史參考聽力水準。
  74. 如請求項73之方法，其中該個體之聽力水準在引入如請求項1至19中任一項之構築體之後量測，且該參考聽力水準為在引入如請求項1至19中任一項之構築體之前量測的該個體之聽力水準。
  75. 如請求項58至74中任一項之方法，其另外包含量測個體之KCNQ4基因產物之水準。
  76. 如請求項75之方法，其中在該個體之內耳中量測該KCNQ4基因產物之水準。
  77. 如請求項75之方法，其中在該個體之耳蝸中量測該KCNQ4基因產物之水準。
  78. 如請求項58至77中任一項之方法，其另外包含將該個體之KCNQ4基因產物之水準與參考KCNQ4基因產物水準比較。
  79. 如請求項78之方法，其中該參考聽力水準為已公開或歷史參考KCNQ4基因產物水準。
  80. 如請求項75之方法，其中該個體之KCNQ4基因產物水準在引入如請求項1至37中任一項之構築體之後量測，且該參考KCNQ4基因產物水準為在引入如請求項1至37中任一項之組成物之前量測的該個體之KCNQ4基因產物水準。
  81. 一種治療聽力損失之方法，其包含向有需要之個體投與如請求項42至48中任一項之組成物。
  82. 一種治療聽力損失之方法，其包含向有需要之個體投與如請求項38至41中任一項之粒子。
  83. 如請求項1至37中任一項之構築體，其用於治療聽力損失。
  84. 如請求項42至48中任一項之組成物，其用於治療聽力損失。
  85. 如請求項38至41中任一項之粒子，其用於治療聽力損失。
  86. 一種如請求項1至37中任一項之構築體的用途，其用於製備治療聽力損失之藥物。
  87. 一種如請求項42至48中任一項之組成物的用途，其用於製備治療聽力損失之藥物。
  88. 一種如請求項38至41中任一項之粒子的用途，其用於製備治療聽力損失之藥物。
  89. 一種細胞，該細胞包含與啟動子操作性連接之編碼序列，其中該編碼序列編碼Kv7.4蛋白。
  90. 一種細胞，該細胞包含與啟動子操作性連接之編碼序列，其中該編碼序列編碼功能喪失之KCNQ4變體基因產物。
  91. 一種包含一或多種如請求項89之細胞的細胞群體，其中該群體為或包含穩定細胞株。
  92. 如請求項75至80中任一項之方法，其中該KCNQ4基因產物為Kv7.4蛋白。
  93. 一種包含抑制性核酸之構築體，其中該抑制性核酸為或包含以下中之一或多者：miR1-155；miR2-155；miR4-155；miR5-155；miR6-155；miR7-155；miR1-16；miR1-26；miR1-96；miR1-122；miR1-135；miR1-182；miR1-183；miR1-335；miR1-451。
  94. 一種miRNA，其選自由以下組成之群： miR1-155；miR2-155；miR4-155；miR5-155；miR6-155；miR7-155；miR1-16；miR1-26；miR1-96；miR1-122；miR1-135；miR1-182；miR1-183；miR1-335；miR1-451及其組合。
  95. 一種套組，其包含如請求項1至94中任一項之組成物。
  96. 如請求項95之套組，其中該組成物預裝載在裝置中。
  97. 如請求項96之套組，其中該裝置為微導管。
  98. 如請求項97之套組，其中該微導管經成形以使得其可經由外耳道進入中耳腔且使該微導管之末端與RWM接觸。
  99. 如請求項97或98之套組，其中該微導管之遠端包含至少一個直徑為10微米至1,000微米之微針。
  100. 如請求項95至99中任一項之套組，其另外包含裝置。
  101. 如請求項100之套組，其中該裝置為圖 32 至圖 35 中所述之裝置，或本文所述之裝置。
  102. 如請求項101之套組，其中該裝置包含針，該針包含彎曲部分及成角度尖端。
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